ES2975413T3 - Secuencias de serotipo 8 de virus adenoasociado (AAV), vectores que las contienen y usos de las mismas - Google Patents
Secuencias de serotipo 8 de virus adenoasociado (AAV), vectores que las contienen y usos de las mismas Download PDFInfo
- Publication number
- ES2975413T3 ES2975413T3 ES18212719T ES18212719T ES2975413T3 ES 2975413 T3 ES2975413 T3 ES 2975413T3 ES 18212719 T ES18212719 T ES 18212719T ES 18212719 T ES18212719 T ES 18212719T ES 2975413 T3 ES2975413 T3 ES 2975413T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- aav
- protein
- aav8
- factor
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims abstract description 180
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 title claims abstract description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 192
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 46
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 136
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 68
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 68
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims description 58
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims description 58
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 claims description 54
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 45
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 41
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 41
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 41
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 32
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 claims description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 25
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 24
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 claims description 22
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 claims description 22
- -1 nogin Proteins 0.000 claims description 22
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 21
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 20
- 230000006870 function Effects 0.000 claims description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 15
- 102000007981 Ornithine carbamoyltransferase Human genes 0.000 claims description 14
- 101710198224 Ornithine carbamoyltransferase, mitochondrial Proteins 0.000 claims description 14
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 14
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 14
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 13
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 11
- 102100024640 Low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 claims description 10
- 102400000058 Neuregulin-1 Human genes 0.000 claims description 10
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 9
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 claims description 9
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 claims description 9
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 9
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 claims description 7
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 claims description 7
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 7
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 claims description 7
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 claims description 7
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 claims description 7
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 claims description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 7
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 claims description 7
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims description 6
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 claims description 6
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 claims description 6
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 claims description 6
- 108010039419 Connective Tissue Growth Factor Proteins 0.000 claims description 6
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims description 6
- 102000003971 Fibroblast Growth Factor 1 Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000386 Fibroblast Growth Factor 1 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 claims description 6
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 claims description 6
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 claims description 6
- 102100033295 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 claims description 6
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims description 6
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 6
- 108010051696 Growth Hormone Proteins 0.000 claims description 6
- 239000000095 Growth Hormone-Releasing Hormone Substances 0.000 claims description 6
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 claims description 6
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 claims description 6
- 102000009151 Luteinizing Hormone Human genes 0.000 claims description 6
- 108010073521 Luteinizing Hormone Proteins 0.000 claims description 6
- 102000050019 Membrane Cofactor Human genes 0.000 claims description 6
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 claims description 6
- 108010042291 Serum Response Factor Proteins 0.000 claims description 6
- 102100022831 Somatoliberin Human genes 0.000 claims description 6
- 101710142969 Somatoliberin Proteins 0.000 claims description 6
- 102100038803 Somatotropin Human genes 0.000 claims description 6
- 108010073929 Vascular Endothelial Growth Factor A Proteins 0.000 claims description 6
- 102000005789 Vascular Endothelial Growth Factors Human genes 0.000 claims description 6
- 108010019530 Vascular Endothelial Growth Factors Proteins 0.000 claims description 6
- 229940077737 brain-derived neurotrophic factor Drugs 0.000 claims description 6
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims description 6
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims description 6
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 claims description 6
- 239000000122 growth hormone Substances 0.000 claims description 6
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 claims description 6
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims description 6
- 229940040129 luteinizing hormone Drugs 0.000 claims description 6
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 claims description 6
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 claims description 6
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 claims description 6
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 5
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 claims description 5
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 claims description 5
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 5
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 claims description 5
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 5
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 claims description 5
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 claims description 5
- 108090001117 Insulin-Like Growth Factor II Proteins 0.000 claims description 5
- 102000048143 Insulin-Like Growth Factor II Human genes 0.000 claims description 5
- 101710146216 Membrane cofactor protein Proteins 0.000 claims description 5
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 claims description 5
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 5
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 5
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 5
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 5
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 5
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 claims description 5
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 claims description 4
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 claims description 4
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 101150079978 AGRN gene Proteins 0.000 claims description 3
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 claims description 3
- 102100040026 Agrin Human genes 0.000 claims description 3
- 108700019743 Agrin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010080691 Alcohol O-acetyltransferase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000009840 Angiopoietins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010009906 Angiopoietins Proteins 0.000 claims description 3
- 102400000068 Angiostatin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010079709 Angiostatins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004452 Arginase Human genes 0.000 claims description 3
- 108700024123 Arginases Proteins 0.000 claims description 3
- 102100022002 CD59 glycoprotein Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000489 Carboxy-Lyases Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004031 Carboxy-Lyases Human genes 0.000 claims description 3
- 102100023580 Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-4 Human genes 0.000 claims description 3
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 claims description 3
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 claims description 3
- 108090000079 Glucocorticoid Receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 102000003638 Glucose-6-Phosphatase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010086800 Glucose-6-Phosphatase Proteins 0.000 claims description 3
- 108010015451 Glutaryl-CoA Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 3
- 102100028603 Glutaryl-CoA dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 3
- 102000004327 Glycine dehydrogenase (decarboxylating) Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000826 Glycine dehydrogenase (decarboxylating) Proteins 0.000 claims description 3
- 102000003693 Hedgehog Proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000031 Hedgehog Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 101000897400 Homo sapiens CD59 glycoprotein Proteins 0.000 claims description 3
- 101000974934 Homo sapiens Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-2 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000905743 Homo sapiens Cyclic AMP-dependent transcription factor ATF-4 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000997829 Homo sapiens Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 claims description 3
- 101000837845 Homo sapiens Transcription factor E3 Proteins 0.000 claims description 3
- 101000837829 Homo sapiens Transcription factor IIIA Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims description 3
- 108010056651 Hydroxymethylbilane synthase Proteins 0.000 claims description 3
- 108010004250 Inhibins Proteins 0.000 claims description 3
- 102000002746 Inhibins Human genes 0.000 claims description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 3
- 108010013792 Isovaleryl-CoA Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025392 Isovaleryl-CoA dehydrogenase, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 3
- 102000004058 Leukemia inhibitory factor Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000581 Leukemia inhibitory factor Proteins 0.000 claims description 3
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 claims description 3
- 101150078498 MYB gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102000019010 Methylmalonyl-CoA Mutase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010051862 Methylmalonyl-CoA mutase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000014962 Monocyte Chemoattractant Proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010064136 Monocyte Chemoattractant Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102100032970 Myogenin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010056785 Myogenin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010074223 Netrin-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102000009065 Netrin-1 Human genes 0.000 claims description 3
- 102000014413 Neuregulin Human genes 0.000 claims description 3
- 108050003475 Neuregulin Proteins 0.000 claims description 3
- 102100033857 Neurotrophin-4 Human genes 0.000 claims description 3
- 102100021584 Neurturin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010015406 Neurturin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010069013 Phenylalanine Hydroxylase Proteins 0.000 claims description 3
- 102100038223 Phenylalanine-4-hydroxylase Human genes 0.000 claims description 3
- 102000014750 Phosphorylase Kinase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010064071 Phosphorylase Kinase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 claims description 3
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 claims description 3
- 102100034391 Porphobilinogen deaminase Human genes 0.000 claims description 3
- 101100368917 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) taz1 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 102000014105 Semaphorin Human genes 0.000 claims description 3
- 108050003978 Semaphorin Proteins 0.000 claims description 3
- 102000013008 Semaphorin-3A Human genes 0.000 claims description 3
- 108010090319 Semaphorin-3A Proteins 0.000 claims description 3
- 101001062859 Sus scrofa Fatty acid-binding protein, adipocyte Proteins 0.000 claims description 3
- 102100033130 T-box transcription factor T Human genes 0.000 claims description 3
- 101710086566 T-box transcription factor T Proteins 0.000 claims description 3
- 101150109894 TGFA gene Proteins 0.000 claims description 3
- 101001023030 Toxoplasma gondii Myosin-D Proteins 0.000 claims description 3
- 108010018242 Transcription Factor AP-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100028507 Transcription factor E3 Human genes 0.000 claims description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 3
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 claims description 3
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 claims description 3
- 108091000117 Tyrosine 3-Monooxygenase Proteins 0.000 claims description 3
- 102000048218 Tyrosine 3-monooxygenases Human genes 0.000 claims description 3
- 102100022748 Wilms tumor protein Human genes 0.000 claims description 3
- 101710127857 Wilms tumor protein Proteins 0.000 claims description 3
- 239000000488 activin Substances 0.000 claims description 3
- 102000015395 alpha 1-Antitrypsin Human genes 0.000 claims description 3
- 108010050122 alpha 1-Antitrypsin Proteins 0.000 claims description 3
- 229940024142 alpha 1-antitrypsin Drugs 0.000 claims description 3
- FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N aspergillomarasmine B Natural products OC(=O)CNC(C(O)=O)CNC(C(O)=O)CC(O)=O FZCSTZYAHCUGEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 claims description 3
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 claims description 3
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 claims description 3
- 102000012803 ephrin Human genes 0.000 claims description 3
- 108060002566 ephrin Proteins 0.000 claims description 3
- 108010038795 estrogen receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 108700014844 flt3 ligand Proteins 0.000 claims description 3
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 claims description 3
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 claims description 3
- 239000000893 inhibin Substances 0.000 claims description 3
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 claims description 3
- 230000000921 morphogenic effect Effects 0.000 claims description 3
- 108010081726 netrin-2 Proteins 0.000 claims description 3
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 claims description 3
- 108010055837 phosphocarrier protein HPr Proteins 0.000 claims description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 claims description 3
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 claims description 3
- 102000009310 vitamin D receptors Human genes 0.000 claims description 3
- 108050000156 vitamin D receptors Proteins 0.000 claims description 3
- 102100033417 Glucocorticoid receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 108010085747 Methylmalonyl-CoA Decarboxylase Proteins 0.000 claims description 2
- FZRKAZHKEDOPNN-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide anion Chemical compound O=[N-] FZRKAZHKEDOPNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 208000000599 Ornithine Carbamoyltransferase Deficiency Disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000035903 Ornithine transcarbamylase deficiency Diseases 0.000 claims description 2
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 claims description 2
- 201000011278 ornithine carbamoyltransferase deficiency Diseases 0.000 claims description 2
- 102000015225 Connective Tissue Growth Factor Human genes 0.000 claims 2
- 108091054729 IRF family Proteins 0.000 claims 2
- 102000016854 Interferon Regulatory Factors Human genes 0.000 claims 2
- 102100022056 Serum response factor Human genes 0.000 claims 2
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 claims 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 claims 1
- 102100038595 Estrogen receptor Human genes 0.000 claims 1
- 102100026818 Inhibin beta E chain Human genes 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 21
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 21
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 abstract description 5
- 238000013519 translation Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract description 2
- 239000013647 rAAV8 vector Substances 0.000 abstract 1
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 description 138
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 48
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 44
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 44
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 44
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 43
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 40
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 39
- 239000000047 product Substances 0.000 description 32
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 27
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 25
- 108090000765 processed proteins & peptides Chemical group 0.000 description 25
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 24
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 22
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 20
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 18
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 17
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 15
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 14
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 14
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 13
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 13
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 12
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 12
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 12
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 12
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 12
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 12
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 12
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 12
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 11
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 11
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 10
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 9
- 239000013608 rAAV vector Substances 0.000 description 9
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 9
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 9
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 8
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 8
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 8
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 8
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 8
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 8
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 8
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 8
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 8
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 7
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 7
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 7
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 7
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 6
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 6
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 6
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 6
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 5
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 5
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 5
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 5
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 5
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 5
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 5
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 4
- 208000002267 Anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis Diseases 0.000 description 4
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 4
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 4
- 102100031168 CCN family member 2 Human genes 0.000 description 4
- 101150044789 Cap gene Proteins 0.000 description 4
- 102000053642 Catalytic RNA Human genes 0.000 description 4
- 108090000994 Catalytic RNA Proteins 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108090000890 Interferon regulatory factor 1 Proteins 0.000 description 4
- 102000004289 Interferon regulatory factor 1 Human genes 0.000 description 4
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 4
- 101710087110 ORF6 protein Proteins 0.000 description 4
- 102000004446 Serum Response Factor Human genes 0.000 description 4
- 101710095001 Uncharacterized protein in nifU 5'region Proteins 0.000 description 4
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 4
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 4
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 4
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N puromycin Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1C[C@H](N)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)[C@H](N2C3=NC=NC(=C3N=C2)N(C)C)O[C@@H]1CO RXWNCPJZOCPEPQ-NVWDDTSBSA-N 0.000 description 4
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 108091092562 ribozyme Proteins 0.000 description 4
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000202702 Adeno-associated virus - 3 Species 0.000 description 3
- 241000710929 Alphavirus Species 0.000 description 3
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 101710197658 Capsid protein VP1 Proteins 0.000 description 3
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 3
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 3
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 241000714474 Rous sarcoma virus Species 0.000 description 3
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 3
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 3
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 3
- AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N Thyrolar Chemical class IC1=CC(C[C@H](N)C(O)=O)=CC(I)=C1OC1=CC=C(O)C(I)=C1 AUYYCJSJGJYCDS-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 3
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 3
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003463 hyperproliferative effect Effects 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 3
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 3
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 3
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 239000005495 thyroid hormone Substances 0.000 description 3
- 229940036555 thyroid hormone Drugs 0.000 description 3
- 230000005100 tissue tropism Effects 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 3
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 2
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 2
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 description 2
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 description 2
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 description 2
- 241001164823 Adeno-associated virus - 7 Species 0.000 description 2
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 description 2
- 241000712891 Arenavirus Species 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 208000003508 Botulism Diseases 0.000 description 2
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 2
- 206010006500 Brucellosis Diseases 0.000 description 2
- 206010069747 Burkholderia mallei infection Diseases 0.000 description 2
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 2
- 206010061041 Chlamydial infection Diseases 0.000 description 2
- 108010035563 Chloramphenicol O-acetyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 241000193155 Clostridium botulinum Species 0.000 description 2
- 241000193468 Clostridium perfringens Species 0.000 description 2
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 2
- 241001445332 Coxiella <snail> Species 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- 208000006825 Eastern Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 201000005804 Eastern equine encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 206010014587 Encephalitis eastern equine Diseases 0.000 description 2
- 206010014611 Encephalitis venezuelan equine Diseases 0.000 description 2
- 206010014614 Encephalitis western equine Diseases 0.000 description 2
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 2
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 2
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108050004280 Epsilon toxin Proteins 0.000 description 2
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 2
- 241000206602 Eukaryota Species 0.000 description 2
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 2
- 241000711950 Filoviridae Species 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000589602 Francisella tularensis Species 0.000 description 2
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 2
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 2
- 201000003641 Glanders Diseases 0.000 description 2
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 2
- 206010018693 Granuloma inguinale Diseases 0.000 description 2
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 description 2
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 102100036705 Interleukin-23 subunit alpha Human genes 0.000 description 2
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 2
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 2
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 description 2
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 description 2
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 101150007210 ORF6 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 241000713112 Orthobunyavirus Species 0.000 description 2
- 241000150452 Orthohantavirus Species 0.000 description 2
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 2
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 2
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 2
- 206010035148 Plague Diseases 0.000 description 2
- ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N Propyl gallate Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ZTHYODDOHIVTJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 description 2
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 2
- 206010037151 Psittacosis Diseases 0.000 description 2
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 2
- 206010037688 Q fever Diseases 0.000 description 2
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 2
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 2
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical compound O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 2
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 2
- 208000034784 Tularaemia Diseases 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 108010062497 VLDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 2
- 208000002687 Venezuelan Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 201000009145 Venezuelan equine encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 208000005466 Western Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 2
- 201000005806 Western equine encephalitis Diseases 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 102000013529 alpha-Fetoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 2
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical class [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- ILRYLPWNYFXEMH-UHFFFAOYSA-N cystathionine Chemical compound OC(=O)C(N)CCSCC(N)C(O)=O ILRYLPWNYFXEMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 102000015694 estrogen receptors Human genes 0.000 description 2
- CBOQJANXLMLOSS-UHFFFAOYSA-N ethyl vanillin Chemical compound CCOC1=CC(C=O)=CC=C1O CBOQJANXLMLOSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 229940118764 francisella tularensis Drugs 0.000 description 2
- 238000002695 general anesthesia Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000023597 hemostasis Effects 0.000 description 2
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000006372 lipid accumulation Effects 0.000 description 2
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 2
- 230000034217 membrane fusion Effects 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 201000000901 ornithosis Diseases 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 108010079892 phosphoglycerol kinase Proteins 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 229950010131 puromycin Drugs 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 208000006379 syphilis Diseases 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 2
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 2
- 208000035408 type 1 diabetes mellitus 1 Diseases 0.000 description 2
- 206010061393 typhus Diseases 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- 235000001892 vitamin D2 Nutrition 0.000 description 2
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 2
- UBWXUGDQUBIEIZ-UHFFFAOYSA-N (13-methyl-3-oxo-2,6,7,8,9,10,11,12,14,15,16,17-dodecahydro-1h-cyclopenta[a]phenanthren-17-yl) 3-phenylpropanoate Chemical compound CC12CCC(C3CCC(=O)C=C3CC3)C3C1CCC2OC(=O)CCC1=CC=CC=C1 UBWXUGDQUBIEIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 1
- CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 2,4-Hexadienoic acid, potassium salt (1:1), (2E,4E)- Chemical compound [K+].CC=CC=CC([O-])=O CHHHXKFHOYLYRE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 4-chlorophenol Chemical compound OC1=CC=C(Cl)C=C1 WXNZTHHGJRFXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 101100524319 Adeno-associated virus 2 (isolate Srivastava/1982) Rep52 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100524324 Adeno-associated virus 2 (isolate Srivastava/1982) Rep78 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010024878 Adenovirus E1A Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010087905 Adenovirus E1B Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010057856 Adenovirus E2 Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000700587 Alphaherpesvirinae Species 0.000 description 1
- 208000004881 Amebiasis Diseases 0.000 description 1
- 206010001980 Amoebiasis Diseases 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710189 Aphthovirus Species 0.000 description 1
- 206010003267 Arthritis reactive Diseases 0.000 description 1
- 201000002909 Aspergillosis Diseases 0.000 description 1
- 208000036641 Aspergillus infections Diseases 0.000 description 1
- 241000711404 Avian avulavirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000700663 Avipoxvirus Species 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000035 BCA protein assay Methods 0.000 description 1
- 206010044583 Bartonella Infections Diseases 0.000 description 1
- 102100026031 Beta-glucuronidase Human genes 0.000 description 1
- 241000701021 Betaherpesvirinae Species 0.000 description 1
- 206010005098 Blastomycosis Diseases 0.000 description 1
- 241000712005 Bovine respirovirus 3 Species 0.000 description 1
- 206010069748 Burkholderia pseudomallei infection Diseases 0.000 description 1
- 208000008889 California Encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- 241000711506 Canine coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000701931 Canine parvovirus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700664 Capripoxvirus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000242722 Cestoda Species 0.000 description 1
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 1
- 241001647378 Chlamydia psittaci Species 0.000 description 1
- 206010008631 Cholera Diseases 0.000 description 1
- 206010008803 Chromoblastomycosis Diseases 0.000 description 1
- 208000015116 Chromomycosis Diseases 0.000 description 1
- 241001112696 Clostridia Species 0.000 description 1
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 1
- 208000009802 Colorado tick fever Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091028732 Concatemer Proteins 0.000 description 1
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 241000709687 Coxsackievirus Species 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 201000007336 Cryptococcosis Diseases 0.000 description 1
- 241000221204 Cryptococcus neoformans Species 0.000 description 1
- 241000223936 Cryptosporidium parvum Species 0.000 description 1
- NBSCHQHZLSJFNQ-QTVWNMPRSA-N D-Mannose-6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 241000710829 Dengue virus group Species 0.000 description 1
- 206010012504 Dermatophytosis Diseases 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 108090000204 Dipeptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 201000011001 Ebola Hemorrhagic Fever Diseases 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- 241001466953 Echovirus Species 0.000 description 1
- 241000588877 Eikenella Species 0.000 description 1
- 206010014596 Encephalitis Japanese B Diseases 0.000 description 1
- 206010014584 Encephalitis california Diseases 0.000 description 1
- 206010014612 Encephalitis viral Diseases 0.000 description 1
- 206010053025 Endemic syphilis Diseases 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000700572 Entomopoxvirinae Species 0.000 description 1
- 206010066919 Epidemic polyarthritis Diseases 0.000 description 1
- 108010008655 Epstein-Barr Virus Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 208000000832 Equine Encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710803 Equine arteritis virus Species 0.000 description 1
- 241000713730 Equine infectious anemia virus Species 0.000 description 1
- 241000186810 Erysipelothrix rhusiopathiae Species 0.000 description 1
- 241000725579 Feline coronavirus Species 0.000 description 1
- 241000713800 Feline immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000711475 Feline infectious peritonitis virus Species 0.000 description 1
- 241000714165 Feline leukemia virus Species 0.000 description 1
- 241000701915 Feline panleukopenia virus Species 0.000 description 1
- 241000701925 Feline parvovirus Species 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 201000006353 Filariasis Diseases 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700042658 GAP-43 Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 241000701047 Gallid alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 101001066288 Gallus gallus GATA-binding factor 3 Proteins 0.000 description 1
- 241000701046 Gammaherpesvirinae Species 0.000 description 1
- 102000003676 Glucocorticoid Receptors Human genes 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 1
- 206010072579 Granulomatosis with polyangiitis Diseases 0.000 description 1
- 241000606790 Haemophilus Species 0.000 description 1
- 206010061192 Haemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 208000030836 Hashimoto thyroiditis Diseases 0.000 description 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000724709 Hepatitis delta virus Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 208000007514 Herpes zoster Diseases 0.000 description 1
- 201000002563 Histoplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 101150068639 Hnf4a gene Proteins 0.000 description 1
- 101000933465 Homo sapiens Beta-glucuronidase Proteins 0.000 description 1
- 101000979333 Homo sapiens Neurofilament light polypeptide Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 241001455657 Human betaherpesvirus 6A Species 0.000 description 1
- 241001455656 Human betaherpesvirus 6B Species 0.000 description 1
- 241000701041 Human betaherpesvirus 7 Species 0.000 description 1
- 241001207270 Human enterovirus Species 0.000 description 1
- 241001502974 Human gammaherpesvirus 8 Species 0.000 description 1
- 241000726041 Human respirovirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000712003 Human respirovirus 3 Species 0.000 description 1
- 241001559187 Human rubulavirus 2 Species 0.000 description 1
- 241001559186 Human rubulavirus 4 Species 0.000 description 1
- 208000000563 Hyperlipoproteinemia Type II Diseases 0.000 description 1
- 101150108210 IX gene Proteins 0.000 description 1
- 108700002232 Immediate-Early Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 208000028547 Inborn Urea Cycle disease Diseases 0.000 description 1
- 241000711450 Infectious bronchitis virus Species 0.000 description 1
- 241000702626 Infectious bursal disease virus Species 0.000 description 1
- 102000016921 Integrin-Binding Sialoprotein Human genes 0.000 description 1
- 108010028750 Integrin-Binding Sialoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 description 1
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 201000005807 Japanese encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710843 Japanese encephalitis virus group Species 0.000 description 1
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 1
- 201000009908 La Crosse encephalitis Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 206010023927 Lassa fever Diseases 0.000 description 1
- 208000004554 Leishmaniasis Diseases 0.000 description 1
- 241000700563 Leporipoxvirus Species 0.000 description 1
- 206010024229 Leprosy Diseases 0.000 description 1
- 206010024238 Leptospirosis Diseases 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 241000701043 Lymphocryptovirus Species 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 208000015439 Lysosomal storage disease Diseases 0.000 description 1
- 241000711828 Lyssavirus Species 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 108010059343 MM Form Creatine Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241001115401 Marburgvirus Species 0.000 description 1
- 241000283923 Marmota monax Species 0.000 description 1
- 101710085938 Matrix protein Proteins 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 108700031312 Membrane Cofactor Proteins 0.000 description 1
- 101710127721 Membrane protein Proteins 0.000 description 1
- 241001460074 Microsporum distortum Species 0.000 description 1
- 241000588621 Moraxella Species 0.000 description 1
- 241000712045 Morbillivirus Species 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 241000711386 Mumps virus Species 0.000 description 1
- 241000701034 Muromegalovirus Species 0.000 description 1
- 101000930477 Mus musculus Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000041810 Mycetoma Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 208000001572 Mycoplasma Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010028470 Mycoplasma infections Diseases 0.000 description 1
- 102100026057 Myosin regulatory light chain 2, atrial isoform Human genes 0.000 description 1
- 101710098224 Myosin regulatory light chain 2, atrial isoform Proteins 0.000 description 1
- 208000006007 Nairobi Sheep Disease Diseases 0.000 description 1
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 102100029268 Neurotrophin-3 Human genes 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010029443 Nocardia Infections Diseases 0.000 description 1
- 206010029444 Nocardiosis Diseases 0.000 description 1
- 108091092724 Noncoding DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020005497 Nuclear hormone receptor Proteins 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000702259 Orbivirus Species 0.000 description 1
- 241000150218 Orthonairovirus Species 0.000 description 1
- 241000700629 Orthopoxvirus Species 0.000 description 1
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 1
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241000700639 Parapoxvirus Species 0.000 description 1
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000713137 Phlebovirus Species 0.000 description 1
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 description 1
- 208000004842 Pinta Diseases 0.000 description 1
- 241000233872 Pneumocystis carinii Species 0.000 description 1
- 241000711902 Pneumovirus Species 0.000 description 1
- 108091036407 Polyadenylation Proteins 0.000 description 1
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 1
- 241000156302 Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus Species 0.000 description 1
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 1
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 description 1
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 1
- 108010001267 Protein Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102000002067 Protein Subunits Human genes 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 101710185720 Putative ethidium bromide resistance protein Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000725643 Respiratory syncytial virus Species 0.000 description 1
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 108010039491 Ricin Proteins 0.000 description 1
- 240000000528 Ricinus communis Species 0.000 description 1
- 235000004443 Ricinus communis Nutrition 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- 241000606723 Rickettsia akari Species 0.000 description 1
- 241000606651 Rickettsiales Species 0.000 description 1
- 201000004282 Rickettsialpox Diseases 0.000 description 1
- 208000000705 Rift Valley Fever Diseases 0.000 description 1
- 208000006257 Rinderpest Diseases 0.000 description 1
- 206010039207 Rocky Mountain Spotted Fever Diseases 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000710942 Ross River virus Species 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 241000710801 Rubivirus Species 0.000 description 1
- 241001533467 Rubulavirus Species 0.000 description 1
- 101150000107 SCAP gene Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000021386 Sjogren Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010072170 Skin wound Diseases 0.000 description 1
- 208000001203 Smallpox Diseases 0.000 description 1
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 1
- 241000605008 Spirillum Species 0.000 description 1
- 206010041736 Sporotrichosis Diseases 0.000 description 1
- 206010041896 St. Louis Encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 241000710888 St. Louis encephalitis virus Species 0.000 description 1
- 241000295644 Staphylococcaceae Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241001478880 Streptobacillus moniliformis Species 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000700568 Suipoxvirus Species 0.000 description 1
- 208000002847 Surgical Wound Diseases 0.000 description 1
- 206010042971 T-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 208000002474 Tinea Diseases 0.000 description 1
- 241000223997 Toxoplasma gondii Species 0.000 description 1
- 201000005485 Toxoplasmosis Diseases 0.000 description 1
- 101000693961 Trachemys scripta 68 kDa serum albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000003929 Transaminases Human genes 0.000 description 1
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 108010009583 Transforming Growth Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000009618 Transforming Growth Factors Human genes 0.000 description 1
- 241000242541 Trematoda Species 0.000 description 1
- 241000869417 Trematodes Species 0.000 description 1
- 206010044608 Trichiniasis Diseases 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 206010045261 Type IIa hyperlipidaemia Diseases 0.000 description 1
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 1
- 101150004676 VGF gene Proteins 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 241000701067 Varicellovirus Species 0.000 description 1
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 description 1
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 1
- 241000711970 Vesiculovirus Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 208000028227 Viral hemorrhagic fever Diseases 0.000 description 1
- 235000021068 Western diet Nutrition 0.000 description 1
- 208000003152 Yellow Fever Diseases 0.000 description 1
- 241000120645 Yellow fever virus group Species 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606834 [Haemophilus] ducreyi Species 0.000 description 1
- 201000007691 actinomycosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000012873 acute gastroenteritis Diseases 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 210000002376 aorta thoracic Anatomy 0.000 description 1
- 238000002820 assay format Methods 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 201000008680 babesiosis Diseases 0.000 description 1
- 229940065181 bacillus anthracis Drugs 0.000 description 1
- 206010004145 bartonellosis Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 102000006635 beta-lactamase Human genes 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 208000003836 bluetongue Diseases 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 208000014058 canine distemper Diseases 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001925 catabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 208000003796 chancre Diseases 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229940015047 chorionic gonadotropin Drugs 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 239000012645 endogenous antigen Substances 0.000 description 1
- 108010048367 enhanced green fluorescent protein Proteins 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002641 enzyme replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000010502 episomal replication Effects 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940073505 ethyl vanillin Drugs 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000001386 familial hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 210000001105 femoral artery Anatomy 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 229940014144 folate Drugs 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 201000006592 giardiasis Diseases 0.000 description 1
- 229960005150 glycerol Drugs 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 description 1
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000003284 homeostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000008348 humoral response Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 238000002991 immunohistochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000003960 inflammatory cascade Effects 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 150000004715 keto acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000002350 laparotomy Methods 0.000 description 1
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000007449 liver function test Methods 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000001581 lymphogranuloma venereum Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 238000007726 management method Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 201000004015 melioidosis Diseases 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000000329 molecular dynamics simulation Methods 0.000 description 1
- 238000009126 molecular therapy Methods 0.000 description 1
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 1
- 102000006255 nuclear receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004017 nuclear receptors Proteins 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 208000003154 papilloma Diseases 0.000 description 1
- 229940090668 parachlorophenol Drugs 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000009984 peri-natal effect Effects 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 208000011079 pinta disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 description 1
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 1
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 1
- 230000001323 posttranslational effect Effects 0.000 description 1
- 235000010241 potassium sorbate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004302 potassium sorbate Substances 0.000 description 1
- 229940069338 potassium sorbate Drugs 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000473 propyl gallate Substances 0.000 description 1
- 229940075579 propyl gallate Drugs 0.000 description 1
- 235000010388 propyl gallate Nutrition 0.000 description 1
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000014493 regulation of gene expression Effects 0.000 description 1
- 101150066583 rep gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 description 1
- 108010078070 scavenger receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000014452 scavenger receptors Human genes 0.000 description 1
- 201000004409 schistosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000955 splenic vein Anatomy 0.000 description 1
- 102000005969 steroid hormone receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003113 steroid hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229940044609 sulfur dioxide Drugs 0.000 description 1
- 235000010269 sulphur dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 241001147422 tick-borne encephalitis virus group Species 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 208000003982 trichinellosis Diseases 0.000 description 1
- 201000007588 trichinosis Diseases 0.000 description 1
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000002311 trypanosomiasis Diseases 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 241000724775 unclassified viruses Species 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 208000030954 urea cycle disease Diseases 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 201000006266 variola major Diseases 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- 201000002498 viral encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 201000009482 yaws Diseases 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
- A61K35/761—Adenovirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/45—Transferases (2)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
- A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
- C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/864—Parvoviral vectors, e.g. parvovirus, densovirus
- C12N15/8645—Adeno-associated virus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1003—Transferases (2.) transferring one-carbon groups (2.1)
- C12N9/1018—Carboxy- and carbamoyl transferases (2.1.3)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/644—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21021—Coagulation factor VIIa (3.4.21.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
- C12N2750/14152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/48—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating transport or export of RNA, e.g. RRE, PRE, WPRE, CTE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/80—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates
- C12N2830/85—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates mammalian
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y201/00—Transferases transferring one-carbon groups (2.1)
- C12Y201/03—Carboxy- and carbamoyltransferases (2.1.3)
- C12Y201/03003—Ornithine carbamoyltransferase (2.1.3.3)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pulmonology (AREA)
Abstract
Se proporcionan secuencias de un virus adenoasociado de serotipo 8 y vectores y células huésped que contienen estas secuencias. También se describen métodos para usar dichas células huésped y vectores en la producción de partículas de rAAV. También se proporciona la administración de genes terapéuticos e inmunogénicos mediada por rAAV8. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Secuencias de serotipo 8 de virus adenoasociado (AAV), vectores que las contienen y usos de las mismas
Antecedentes de la invención
Un virus adenoasociado (AAV), un miembro de la familiaParvovirus,es un pequeño virus icosaédrico, sin envoltura, con genomas de ADN lineal de cadena simple de 4,7 kilobases (kb) a 6 kb. El AAV se asigna al géneroDependovirus,debido a que el virus fue descubierto como contaminante en reservas de adenovirus purificadas. El ciclo de vida del AAV incluye una fase latente en la que, tras la infección, los genomas de AAV son el sitio específicamente integrado en cromosomas hospedadores, y una fase infecciosa en la que, tras la infección, ya sea por virus del herpes simple o por adenovirus, los genomas integrados se rescatan, se replican y se empaquetan posteriormente en virus infecciosos. Las propiedades de no patogenicidad, la amplia gama de infectividad de hospedador, incluyendo las células que no se dividen, y la posible integración cromosómica específica del sitio, hacen que el AAV sea una herramienta atractiva para la transferencia de genes.
Recientes estudios sugieren que los vectores de AAV pueden ser el vehículo preferido para la administración de genes. Hasta ahora, se han aislado 6 serotipos diferentes, y bien caracterizados, de AAV, a partir de seres humanos o primates no humanos (PNH). Entre estos, el serotipo 2 humano es el primer AAV que se desarrolló como un vector de transferencia de genes; dicho serotipo se ha usado mucho en experimentos eficaces de transferencia de genes en diferentes tejidos y modelos animales diana. Se están realizando ensayos clínicos de la aplicación experimental de los vectores basados en AAV2 en algunos modelos de enfermedad humana, e incluyen enfermedades tales como fibrosis quística y hemofilia B.
Lo que es deseable son construcciones basadas en AAV para la administración de genes.
Sumario de la invención
En un aspecto, la invención proporciona nuevos vectores de AAV y composiciones que contienen estos vectores y usos de los mismos. Ventajosamente, estas composiciones son particularmente muy adecuadas para su uso en composiciones que requieren la readministración de AAVr para fines terapéuticos o profilácticos.
En un aspecto, la invención proporciona un vector de virus adenoasociado (AAV) que comprende una cápside de AAV que comprende al menos una proteína de cápside vp3 del AAV8 codificada por los nucleótidos 2730 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma, teniendo dicha cápside empaquetado en su interior un minigén que tiene repeticiones terminales invertidas de AAV y un gen heterólogo unido operativamente a secuencias reguladoras que dirigen su expresión en una célula hospedadora. La cápside de AAV puede comprender además al menos una proteína de cápside vp2 del AAV (a) que comprenda los aminoácidos 138 a 738 de la SEQ ID NO: 2 o (b) codificada por los nucleótidos 2532 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma. Como alternativa, la cápside de AAV puede comprender además al menos una proteína de cápside vp1 del AAV8 (a) que comprenda los aminoácidos 1 a 738 de la SEQ ID NO:2 o (b) codificada por los nucleótidos 2121 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma.
En otro aspecto, la invención proporciona un vector de virus adenoasociado (AAV) que comprende una cápside de AAV que comprende al menos una proteína de cápside vp1 del AAV8 (a) que comprende los aminoácidos 1 a 738 de SEQ ID<n>O: 2 (AAV8) o (b) codificada por los nucleótidos 2121 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma, teniendo dicha cápside empaquetado en su interior un minigén que tiene repeticiones terminales invertidas de AAV y un gen heterólogo unido operativamente a secuencias reguladoras que dirigen su expresión en una célula hospedadora.
Las cápsides de AAV del primer o segundo aspecto pueden comprender además una proteína codificada por una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en: vp1, nt 2121 a 4337; vp2, nt 2532 a 4337; y vp3, nt 2730 a 4337; en donde los números de nucleótidos son de AAV8, SEQ ID NO: 1 (AAV8). En una realización, el AAV se produce de forma recombinante. En una realización, las repeticiones terminales invertidas proceden de un AAV distinto del AAV8, proporcionando así un AAV pseudotipado. En una realización, los elementos de control de la expresión comprenden un promotor específico del tejido. En una realización preferida, el promotor específico del tejido es un promotor específico del hígado.
En el presente documento, también se proporciona un método para generar un virus adenoasociado recombinante (AAV) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 que comprende una cápside de serotipo AAV, que comprende las etapas de cultivar una célula hospedadora que contiene: (i) una molécula que codifica una cápside de AAV que comprende al menos una proteína de cápside vp1 del AAV8 (a) que comprende los aminoácidos 1 a 738 de la SEQ ID NO: 2 (AAV8) o (b) codificada por los nucleótidos 2121 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma; (ii) un genrepfuncional; (iii) un minigén que comprende repeticiones terminales invertidas (ITR) de AAV y un gen heterólogo; y (iv) suficientes funciones auxiliares para permitir el empaquetamiento del minigén en la proteína de cápside de AAV. En una realización, la molécula que codifica una cápside de AAV comprende al menos una proteína de cápside vp2 del AAV8 (a) que comprende los aminoácidos 138 a 738 de la SEQ ID NO: 2 o (b) codificada por los nucleótidos 2532 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma. En una realización, la molécula que codifica una cápside de AAV comprende además al menos una proteína de cápside vp3 del AAV8 (a) que comprende los aminoácidos 204 a 738 de la SEQ ID NO: 2 o (b) codificada por los nucleótidos 2730 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma. En una realización, el genrepfuncional codifica una proteína rep del AAV8 o un fragmento de la misma seleccionado del grupo que consiste en: aa 1 a 625; aa 1 a 102; aa 103 a 140; aa 141 a 173; aa 174 a 226; aa 227 a 275; aa 276 a 374; aa 375 a 383; aa 384 a 446; aa 447 a 542; aa 543 a 555; y aa 556 a 625, de la SEQ ID NO: 3.
También se proporciona una célula hospedadora de empaquetamiento útil para generar un virus adenoasociado (AAV) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, conteniendo dicha célula hospedadora: una molécula que codifica una proteína de cápside de AAV que tiene una proteína de cápside vp3 del AAV8 codificada por los nucleótidos 2730 a 4337 de la s Eq ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos idéntica al menos en un 99 %; un minigén que tiene repeticiones terminales invertidas de AAV y un gen heterólogo unido operativamente a secuencias reguladoras que dirigen su expresión en una célula hospedadora; y un genrepfuncional.
Se proporciona además una célula hospedadora en cultivo que contiene un virus adenoasociado de acuerdo con el primer o segundo aspecto.
Se incluye además en la invención una composición que comprende al menos un AAV de acuerdo con el primer o segundo aspecto y un portador fisiológicamente compatible.
Los AAV y las composiciones de acuerdo con la invención pueden ser para usar en la administración de un gen heterólogo a una célula.
En una realización, el gen heterólogo se selecciona del grupo que consiste en una secuencia de Factor VIII y una secuencia de alfa-1 antitripsina. Preferiblemente, el gen heterólogo es una secuencia de Factor VIII. En otra realización, el gen heterólogo codifica el Factor IX. En una de estas realizaciones, el AAV se utiliza para el tratamiento de la hemofilia. En otra realización, el gen heterólogo codifica una inmunoglobulina, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo monocatenario. En otra realización, el gen heterólogo codifica una ornitina transcarbamilasa (OTC). En una de estas realizaciones, el AAV se utiliza en el tratamiento de la deficiencia de OTC. En otra realización, el gen heterólogo codifica un receptor de lipoproteínas de baja densidad (LDLr). En una de estas realizaciones, el AAV se utiliza en el tratamiento de la hipercolesterolemia.
En otras realizaciones, el gen heterólogo codifica insulina, glucagón, hormona del crecimiento (GH), hormona paratiroidea (PTH), factor de liberación de la hormona del crecimiento (GRF), hormona foliculoestimulante (FSH), hormona luteinizante (LH), gonadotropina coriónica humana (hCG), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), una angiopoyetina, una angiostatina, factor estimulante de colonias de granulocitos (GCSF), eritropoyetina (EPO), factor de crecimiento del tejido conectivo (CTGF), factor básico de crecimiento de fibroblastos (bFGF), factor ácido de crecimiento de fibroblastos (aFGF), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF), factor de crecimiento de la insulina I (IGF-I) y factor de crecimiento de la insulina II (IGF-II), TGFa, una activina, una inhibina, proteínas morfogénicas óseas (BMP) 1 a 15, un factor de diferenciación de heregluina/neuregulina/ARIA/neu (NDF), factor de crecimiento nervioso (NGF), factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), neurotrofina NT3, neurotrofina NT-4/5, factor neurotrófico ciliar (CNTF), factor neurotrófico derivado de estirpe celular glial (GDNF), neurturina, agrina, una semaforina/colapsina, netrina-1, netrina- 2, factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), una efrina, nogina, erizo sónico, tirosina hidroxilasa, interleucinas (IL) 1 a 18, proteína quimioatrayente de monocitos, factor inhibidor de la leucemia, factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos, ligando Fas, factores de necrosis tumoral a y p, interferones a, p y y, factor de células madre, ligando flk-2/flt3, una proteína reguladora del complemento, proteína de cofactor de membrana (MCP), factor acelerador de putrefacción (DAF), CR1, CF2, CD59, una hormona, un factor de crecimiento, una citocina, una linfocina, un receptor de glucocorticoides, un receptor de estrógenos, un receptor de vitamina D, jun, fos, max, mad, factor de respuesta sérica (SRF), AP-1, AP2, myb, MyoD, miogenina, una proteína que contiene la caja ETS, TFE3, E2F, ATF1, ATF2, ATF3, ATF4, ZF5, NFAT, C<r>EB,<h>N<f>-4, C/E<b>P, SP1, una proteína de unión a la caja CCAAT, factor de regulación del interferón (IRF-1), proteína del tumor de Wilms, una proteína de unión a la caja ETS, STAT, una proteína de unión a la caja GATA, una proteína de hélice alada de la familia forkhead, carbamoil sintetasa I, ornitina transcarbamilasa, arginosuccinato sintetasa, argino-succinato liasa, arginasa, fumariltacetato hidrolasa, fenilalanina hidroxilasa, glucosa-6-fosfatasa, porfobilinógeno desaminasa, cistatión beta-sintasa, cetoamidas de cadena ramificada descarboxilasa, albúmina, isovaleril-coA deshidrogenasa, propionil COA carboxilasa, metil malonil COA mutasa, glutaril COA deshidrogenasa, beta-glucosidasa, piruvato carboxilato, fosforilasa hepática, fosforilasa cinasa, glicina descarboxilasa, proteína H, proteína T, una secuencia del regulador transmembrana de la fibrosis quística (CFTR) o una secuencia de ADNc de la distrofina.
Estos y otros aspectos de la invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción detallada de la invención.
Breve descripción de los dibujos
Las Fig. 1A a 1C son las secuencias de ácido nucleico de las regiones rep y cap del VAA8 [SEQ ID NO: 1]. Las Fig. 2A a 2C son las secuencias de aminoácidos de la proteína vp1 de la cápside del VAA8 [SEQ ID NO: 2], proporcionada en alineamiento con la vp1 de las secuencias publicadas del VAA2 [SEQ ID NO: 4], VAA1 [SEQ ID NO: 5] y VAA3 [SEQ ID NO: 6], y los serotipos de VAA recientemente identificados, VAA7 [SEQ ID NO: 8] y VAA9 [SEQ ID NO: 7]. El alineamiento se realizó usando el programa Clustal W, usando el número de VAA2 como referencia. El subrayado y la negrita en la secuencia inferior del alineamiento indican casetes de identidad. Los puntos en el alineamiento indican que faltan aminoácidos en las posiciones en el alineamiento en comparación con la VP1 del VAA2.
Las Fig. 3A a 3C son las secuencias de aminoácidos de las proteínas rep del VAA8 [SEQ ID NO: 3].
Descripción detallada de la invención
La invención proporciona vectores de AAV que comprenden una proteína de cápside de un serotipo de AAV novedoso, AAV8 codificado por ácidos nucleicos de AAV8 como se define en las reivindicaciones. Entre los fragmentos de AAV8, se encuentran las proteínas de cápside, incluidas la vp1, vp2, vp3 y las regiones hipervariable, las proteínas rep, incluidas rep 78, rep 68, rep 52 y rep 40, y las secuencias que codifican estas proteínas. Dichos fragmentos pueden utilizarse junto con otras secuencias o fragmentos de AAV8, o junto con elementos de otras secuencias víricas de AAV o que no son de AAV. Un vector puede contener las secuencias de cap y rep del AAV8.
Las secuencias de AAV8 y los fragmentos definidos de las mismas son útiles en la producción de rAAV, y también son útiles como vectores de administración no codificantes, vectores genoterapéuticos o vectores de vacunas. La invención proporciona rAAV, vectores de administración de genes y células hospedadoras que contienen las secuencias de AAV8 definidas en las reivindicaciones
Los alineamientos se realizan usando cualquiera de una diversidad de Programas de Alineamiento de Secuencias Múltiples disponibles pública o comercialmente, tal como el programa “Clustal W”, accesible a través de Servidores Web en internet. Como alternativa, también se utilizan los programas utilitarios de Vector NTI. También hay diversos algoritmos conocidos en la técnica que pueden utilizarse para medir la identidad de las secuencias de nucleótidos, incluyendo los contenidos en los programas descritos anteriormente. En otro ejemplo, las secuencias de polinucleótidos pueden compararse usando Fasta, un programa en GCG versión 6.1. Fasta proporciona alineamientos y porcentajes de identidad de secuencia de las regiones de mejor solapamiento entre las secuencias de consulta y de búsqueda. Por ejemplo, el porcentaje de identidad de secuencia entre las secuencias de ácido nucleico puede determinarse usando Fasta con sus parámetros por defecto (un tamaño de palabra de 6 y el factor NOPAM para la matriz de puntuación), como se proporciona en el programa GCG versión 6.1. Para las secuencias de aminoácidos se dispone de programas similares, por ejemplo, el programa “Clustal X”. Generalmente, en configuraciones por defecto se utiliza cualquiera de estos programas, aunque si fuera necesario un experto en la materia puede modificar estas configuraciones. Como alternativa, un experto en la materia puede utilizar otro algoritmo o programa informático que proporcione al menos el nivel de identidad o alineamiento como lo proporcionan los algoritmos y programas a los que se hace referencia.
La expresión “homología sustancial” o “similitud sustancial”, cuando se hace referencia a un ácido nucleico, o a un fragmento del mismo, indica que, cuando se alinea óptimamente con inserciones o deleciones nucleotídicas apropiadas con otro ácido nucleico (o con su cadena complementaria), hay una identidad de secuencia de nucleótidos en al menos el 99 % de las secuencias alineadas. Preferentemente, la homología es sobre la secuencia de longitud completa, o sobre una fase de lectura abierta de la misma. En el presente documento, se describen fragmentos específicos.
La expresión “homología sustancial” o “similitud sustancial”, cuando se hace referencia a aminoácidos o a fragmentos de los mismos, indica que, cuando se alinea óptimamente con inserciones o deleciones aminoacídicas apropiadas con otros aminoácidos (o con su cadena complementaria), hay una identidad de secuencia de aminoácidos en al menos aproximadamente de 95 a 99 % de las secuencias alineadas. Preferentemente, la homología es sobre la secuencia de longitud completa, o sobre una proteína de la misma, por ejemplo, una proteína cap, una proteína rep, o un fragmento definido de la misma. En el presente documento, se describen fragmentos específicos.
Por la expresión “altamente conservada” se entiende una identidad de al menos 80 %, preferentemente una identidad de al menos 90 %, y más preferentemente, una identidad por encima de 97 %. El experto en la materia determina fácilmente la identidad recurriendo a algoritmos y a programas informáticos conocidos por los expertos en la materia.
La expresión “porcentaje de identidad de secuencia” o el término “idéntico/a” en el contexto de secuencias de ácido nucleico se refiere a los restos que son iguales en las dos secuencias cuando se alinean para obtener una correspondencia máxima. La longitud de la comparación de la identidad de secuencia puede ser sobre la longitud completa del genoma o la longitud completa de una secuencia génica codificante. De igual manera, “porcentaje de identidad de secuencia”, puede determinarse fácilmente para secuencias de aminoácidos, sobre la longitud completa de una proteína, o uno de sus fragmentos. Lo adecuado es que un fragmento sea de al menos 8 aminoácidos de longitud, y puede ser de hasta aproximadamente 700 aminoácidos. En el presente documento, se describen ejemplos de fragmentos adecuados.
Como se describe en el presente documento, los vectores de AAVr de la invención que contienen las proteínas de cápside de AAV descritas en el presente documento son particularmente muy adecuadas para su uso en aplicaciones en las que los anticuerpos neutralizantes disminuyen la efectividad de otros vectores basados en serotipos del AAV, así como de otros vectores víricos. Los vectores de AAVr de la invención son particularmente ventajosas en la readministración de AAVr y la genoterapia repetida.
Estas y otras realizaciones y ventajas de la invención se describen con más detalle más adelante. Como se usa a lo largo de esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones, la expresión “que comprende” incluye otros componentes, elementos, números enteros, etapas y similares. Por el contrario, la expresión “que consiste” y sus variantes, excluye otros componentes, elementos, números enteros, etapas y similares.
I. Secuencias de serotipo 8 del AAV
A. Secuencias de ácido nucleico (se describen pero no se reivindican en el presente documento)
Las secuencias de ácido nucleico de AAV8 incluyen las secuencias de ADN de la Fig. 1 [SEQ ID NO: 1], que consta de 4393 nucleótidos. Las secuencias de ácido nucleico de AAV8 engloban además la cadena que es complementaria a la Fig. 1 [SEQ ID NO: 1], así como las secuencias de ARN y ADNc correspondientes a la Fig. 1 [SEQ ID NO: 1] y su cadena complementaria. También se incluyen en las secuencias de ácido nucleico variantes naturales y modificaciones diseñadas por ingeniería genética de la Fig. 1 [SEQ ID NO: 1] y su cadena complementaria. Dichas modificaciones incluyen, por ejemplo, marcadores que se conocen en la técnica, metilación, y sustitución de uno o más de los nucleótidos de origen natural con un nucleótido degenerado.
Otras secuencias de ácido nucleico para usar en la invención son al menos un 99 % idénticas u homólogas a la Fig. 1 [SEQ ID NO: 1].
También se divulgan fragmentos de la Fig. 1 [SEQ ID NO: 1], su cadena complementaria, el ADNc y ARN complementario a estos. Dichas secuencias de ácido nucleico incluyen las secuencias que codifican las tres proteínas variables (vp) de la cápside de AAV8 que son variantes de corte y empalme alternativas: la vp1 [nt 2121 a 4337 de la Fig. 1, SEQ ID NO: 1]; la vp2 [nt 2532 a 4337 de la Fig. 1, SEQ ID NO: 1]; y la vp 3 [nt 2730 a 4337 de la Fig. 1, SEQ ID NO: 1]. Otros fragmentos adecuados de la Fig.1 [SEQ ID NO: 1], incluyen el fragmento que contiene el codón de inicio para la proteína de cápside de AAV8 y los fragmentos que codifican las regiones hipervariables de la proteína de cápside vp1 , que se describen en el presente documento.
Otros fragmentos adicionales incluyen los que codifican las proteínas rep, incluyendorep78 [codón de iniciación localizado en el nt 227 de la Fig. 1, SEQ ID NO: 1],rep68 [codón de iniciación localizado en el nt 227 de la Fig. 1, SEQ ID NO: 1],rep52 [codón de iniciación localizado en el nt 905 de la Fig. 1, SEQ ID NO: 1] yrep40 [codón de iniciación localizado en el nt 905 de la Fig. 1, SEQ ID NO:1]. Otros fragmentos de interés pueden incluir las repeticiones terminales invertidas del AAV8 que pueden identificarse mediante los métodos descritos en el presente documento, secuencias P 19 de AAV, secuencias P40 de AAV8, el sitio de unión a rep y el sitio de resolución terminal (SRT). Para los expertos en la materia serán fácilmente obvios otros fragmentos adecuados adicionales.
Por tanto, la invención utiliza secuencias de ácido nucleico que codifican las siguientes secuencias de aminoácidos nuevas de AAV generadas usando estas secuencias y/o fragmentos únicos de las mismas, como se define en las reivindicaciones.
Como se usa en el presente documento, los serotipos de AAV artificiales incluyen, sin limitación, AAV con una proteína de cápside de origen no natural. Dicha cápside artificial puede generarse mediante cualquier técnica adecuada, usando una secuencia de AAV nueva descrita en el presente documento (por ejemplo, un fragmento de una proteína de cápside vp1 ) en combinación con secuencias heterólogas que pueden obtenerse a partir de otro serotipo de AAV (conocido o nuevo), de partes no contiguas del mismo serotipo de AAV, de una fuente vírica que no es de AAV, o de una fuente no vírica. Un serotipo de AAV artificial puede ser, sin limitación, una cápside de AAV quimérica, una cápside de AAV recombinante, o una cápside de AAV “humanizada”.
B. Secuencias de aminoácidos, proteínas y péptidos de AAV8
La invención proporciona además vectores de AAV que comprenden una cápside de AAV como se define en las reivindicaciones, que comprende proteínas y fragmentos definidos de las mismas que están codificados por los ácidos nucleicos del AAV8 como se define en las reivindicaciones. Los serotipos de AAV codificados por los ácidos nucleicos de AAVr definidos en las reivindicaciones pueden generarse utilizando secuencias del nuevo serotipo de AAV, que se generan mediante técnicas sintéticas, recombinantes u otras técnicas conocidas por los expertos en la materia.
Los expertos en la materia conocen bien técnicas de producción adecuadas. Véase, por ejemplo, Sambrooket al,“Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Press (Cold Spring Harbor, NY). Como alternativa, también pueden sintetizarse péptidos mediante los métodos bien conocidos de síntesis peptídica en fase sólida (Merrifield,J. Am. Chem. Soc.,85: 2149 (1962); Stewart y Young, “Solid Phase Peptide Synthesis” (Freeman, San Francisco, 1969) pág. 27-62). Estos y otros métodos de producción adecuados se encuentran dentro del conocimiento del experto en la materia.
La cápside de AAV está compuesta por tres proteínas, la vp1, la vp2 y la vp3, que son variantes de corte y empalme alternativas. La secuencia de longitud completa proporcionada en la figura 2 es la de la vp1. Las proteínas de cápside de AAV8 incluyen la vp1 [aa 1 a 738 de S<e>Q ID NO: 2], la vp2 [aa 138 a 738 de<s>E<q>ID<n>O: 2] y la vp3 [aa 204 a 738 de SEQ ID NO: 2] y sus fragmentos funcionales. Otros fragmentos deseables de la proteína de cápside incluyen las regiones constantes y variables, localizadas entre regiones hipervariables (HPV). Otros fragmentos deseables de la proteína de cápside incluyen las propias HPV.
Un algoritmo desarrollado para determinar áreas de divergencia de secuencia en AAV2 ha dado lugar a 12 regiones hipervariables (RHV), de las cuales 5 solapan o son parte de las cuatro regiones variables previamente descritas [Chioriniet al, J. Virol,73: 1309-19 (1999); Rutledgeet al, J. Virol.,72: 309-319] Usando ese algoritmo y/o las técnicas de alineamiento descritas en el presente documento, se determinan las RHV de los nuevos serotipos de AAV. Por ejemplo, con respecto al número de la vp1 de AAV2 [SEQ ID NO: 4], la RHV se localiza de la siguiente manera: RHV1, aa 146-152; RHV2, aa 182-186; RHV3, aa 262-264; RHV4, aa 381 -383; RHV5, aa 450-474; RHV6, aa 490-495; RHV7, aa 500-504; RHV8, aa 514-522; RHV9, aa 534-555; RHV10, aa 581 -594; RHV11, aa 658-667 y RHV12, aa 705-719. Usando el alineamiento proporcionado en el presente documento realizado usando el programa Clustal X con parámetros por defecto, o usando otros programas de alineamiento comercial o públicamente disponibles con parámetros por defecto, un experto en la materia puede determinar fácilmente fragmentos correspondientes de las nueva cápsides de AAV.
Otros fragmentos deseables de la proteína de cápside de AAV8 incluyen los aminoácidos 1 a 184 de SEQ ID NO: 2, los aminoácidos 199 a 259; los aminoácidos 274 a 446; los aminoácidos 603 a 659; los aminoácidos 670 a 706; los aminoácidos 724 a 736 de SEQ ID NO: 2; los aa 185 - 198; los aa 260-273; los aa 447-477; los aa 495-602; los aa 660-669 y los aa 707-723. Además, como ejemplos de otros fragmentos adecuados de cápsides de AAV se incluyen, con respecto a la numeración de AAV2 [SEQ ID NO: 4], los aa 24 - 42, los aa 25 - 28; los aa 81 - 85; los aa 133-165; los aa 134 - 165; los aa 137-143; los aa 154-156; los aa 194-208; los aa 261 -274; los aa 262-274; los aa 171-173; los aa 413-417; los aa 449-478; los aa 494-525; los aa 534-571; los aa 581-601; los aa 660-671 y los aa 709-723. Incluso otros fragmentos deseables incluyen, por ejemplo, en AAV7, los aminoácidos 1 a 184 de SEQ ID NO: 2, los aminoácidos 199 a 259; los aminoácidos 274 a 446; los aminoácidos 603 a 659; los aminoácidos 670 a 706; los aminoácidos 724 a 736; los aa 185 a 198; los aa 260 a 273; los aa 447 a 477; los aa 495 a 602; los aa 660 a 669 y los aa 707 a 723. Usando el alineamiento proporcionado en el presente documento realizado usando el programa Clustal X con parámetros por defecto, o usando otros programas de alineamiento comercial o públicamente disponibles con parámetros por defecto, un experto en la materia puede determinar fácilmente fragmentos correspondientes de las nuevas cápsides de AAV.
Otras proteínas deseables más de AAV8 incluyen las proteínas rep, que incluyen rep68/78 y rep40/52 [localizadas dentro del aa 1 a 625 de SEQ ID NO: 3]. Como fragmentos adecuados de las proteínas rep pueden incluirse el aa 1 a 102; aa 103 a 140; aa 141 a 173; aa 174 a 226; aa 227 a 275; aa 276 a 374; aa 375 a 383; aa 384 a 446; aa 447 a 542; aa 543 a 555; aa 556 a 625, de SEQ ID NO: 3.
Dichos fragmentos pueden producirse de una manera recombinante o mediante otros medios adecuados, por ejemplo, síntesis química. También se describen en el presente documento otras secuencias de AAV8 que se identifican usando la información de secuencias proporcionada en el presente documento. Por ejemplo, dadas las secuencias de AAV8 proporcionadas en el presente documento, el AAV8 infeccioso puede aislarse usando tecnología del paseo genómico (Siebertet al.,1995,Nucleic Acid Research,23: 1087-1088, Friezner-Degenet al.,1986,J. Biol. Chem.261: 6972-6985, BD Biosciences Clontech, Palo Alto, CA). El paseo genómico es particularmente muy adecuado para identificar y aislar las secuencias adyacentes a las nuevas secuencias identificadas de acuerdo con el método descrito en el presente documento. Esta técnica es también útil para el aislamiento de repeticiones terminales invertidas (ITR) del nuevo serotipo AAV8, basándose en las nuevas secuencias de cápside y rep del AAV descritas en el presente documento.
Las secuencias, las proteínas y los fragmentos definidos descritos en el presente documento pueden producirse mediante cualquier medio adecuado, incluyendo la producción recombinante, la síntesis química, u otros medios sintéticos. Dichos métodos de producción se encuentran dentro del conocimiento del experto en la materia, y no son una limitación de la presente invención.
IV. Producción de AAVr con cápsides de AAV8
La invención incluye nuevos AAV8 de tipo silvestre, cuyas secuencias carecen de ADN y/o de material celular con estos virus que están asociados en la naturaleza. En otro aspecto, la presente invención proporciona moléculas que utilizan las nuevas secuencias de AAV de la invención, incluyendo fragmentos de las mismas, para la producción de moléculas útiles en la administración de un gen heterólogo u otras secuencias de ácido nucleico a una célula diana.
En otro aspecto, la presente invención proporciona moléculas que utilizan las secuencias de AAV8 como se reivindican, incluyendo fragmentos definidos de las mismas, para la producción de vectores de AAVr útiles en la administración de un gen heterólogo a una célula diana.
Estas moléculas que contienen secuencias de AAV8 incluyen cualquier elemento genético (vector) que puede administrarse a una célula hospedadora, por ejemplo, ADN desnudo, un plásmido, fago, transposón, cósmido, episoma, una proteína en un vehículo de administración no vírico (por ejemplo, un transportador basado en lípidos), virus, etc., que transfieren las secuencias que llevan en su interior. El vector seleccionado puede administrarse mediante cualquier método adecuado, incluyendo transfección, electroporación, administración de liposomas, técnicas de fusión de membrana, gránulos recubiertos a alta velocidad con ADN, infección vírica y fusión de protoplastos. Los métodos usados para construir cualquier realización de la presente invención son conocidos por expertos en la manipulación de ácido nucleico e incluyen modificación por ingeniería genética, modificación por ingeniería genética recombinante y técnicas sintéticas. Véase, por ejemplo, Sambrooket al,“Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY.
Los vectores de la invención contienen, como mínimo, secuencias que codifican una proteína de cápside vp1 o vp3 del AAV8 como se define en las reivindicaciones. Opcionalmente, dichos vectores pueden contener proteínas tanto cap como rep de AAV. En los vectores en los que se proporcionan tantocapcomorepde AAV, las secuencias derepde AAV y decapde AAV pueden ser de origen AAV8. Como alternativa, la presente invención proporciona vectores en los que las secuencias derepson de un serotipo de AAV que difiere del que proporciona las secuencias decap.Las secuencias derepycapse pueden expresar a partir de fuentes separadas (por ejemplo, vectores, o una célula hospedadora y un vector distintos). Los vectores de la invención contienen además un minigén que comprende un transgén seleccionado unido operativamente a secuencias reguladoras que dirigen su expresión en una célula hospedadora, que está flanqueado por una ITR de AAV en 5' y una ITR de AAV en 3'.
Los ácidos nucleicos recombinantes descritos en el presente documento contienen secuencias de ácido nucleico que codifican una cápside de AAV intacta que comprende al menos una proteína de cápside vp1 o vp3 del AAV8 como se define en las reivindicaciones que puede ser de un solo serotipo de AAV (AAV8). Dicha cápside puede comprender los aminoácidos 1 a 738 de SEQ ID NO: 2. Como alternativa, estos ácidos nucleicos recombinantes contienen secuencias que codifican una proteína de cápside que comprende una o más de las regiones de cápside de AAV8 seleccionadas de la vp2 y/o vp3, o de la vp1, de SEQ ID NO: 2. En otro ejemplo, puede ser deseable modificar el codón de inicio de la proteína vp3 por g Tg . Como alternativa, el AAVr puede contener una o más de las regiones hipervariables de la proteína de cápside de serotipo 8 de AAV que se identifican en el presente documento, incluyendo, aa 185 - 198; aa 260-273; aa 447-477; aa 495-602; aa 660-669; y aa 707-723 de la cápside de AAV8. Véase, la SEQ ID NO: 2. Estas modificaciones pueden realizarse para aumentar la expresión, el rendimiento y/o mejorar la purificación en los sistemas de expresión seleccionados, o para otro fin deseado (por ejemplo, cambiar el tropismo o modificar epítopos de anticuerpos neutralizantes).
Los vectores descritos en el presente documento, por ejemplo, un plásmido, son útiles para diversos fines, pero son particularmente muy adecuados para su uso en la producción de un AAVr como se define en las reivindicaciones. Estos vectores, incluyendo AAVr, sus elementos, construcción y usos se describen con detalle en el presente documento.
En un aspecto, la invención proporciona un método de generación de un virus adenoasociado (AAV) recombinante como se define en las reivindicaciones.
Los componentes necesarios para cultivar en la célula hospedadora para empaquetar un minigén de AAV en una cápside de AAV pueden proporcionarse a la célula hospedadora entrans.Como alternativa, uno cualquiera o más de los componentes necesarios (por ejemplo, minigén, secuencias derep,secuenciascapy/o funciones auxiliares) pueden proporcionarse mediante una célula hospedadora estable que se ha modificado por ingeniería genética para contener uno o más de los componentes necesarios usando métodos conocidos por los expertos en la materia. Más adecuadamente, dicha célula hospedadora estable contendrá uno o más componentes necesarios bajo el control de un promotor inducible. Sin embargo, el componente, o los componentes necesarios, pueden estar bajo el control de un promotor constitutivo. En el presente documento se proporcionan ejemplos de promotores inducibles y constitutivos adecuados en la exposición de elementos reguladores adecuados para su uso con el transgén. En otra alternativa más, una célula hospedadora estable seleccionada puede contener uno o más componentes seleccionados bajo el control de un promotor constitutivo u otro componente o componentes seleccionados bajo el control de uno o más promotores inducibles. Por ejemplo, puede generarse una célula hospedadora estable que derive de células 293 (que contenga funciones auxiliares E1 bajo el control de un promotor constitutivo), pero que contiene las proteínas rep y/o cap bajo el control de promotores inducibles. Un experto en la materia puede generar incluso otras células hospedadoras estables.
El minigén, las secuencias derep,las secuenciascap,y las funciones auxiliares necesarias para la producción del AAVr de la invención, pueden administrase a la célula hospedadora de empaquetamiento en forma de cualquier elemento genético que transfiera las secuencias que el mismo porta. El elemento genético seleccionado puede administrarse mediante cualquier método adecuado, incluyendo los descritos en el presente documento. Los expertos en manipulación de ácido nucleico conocen métodos que se utilizan para construir cualquier realización de la presente invención e incluyen ingeniería genética, ingeniería recombinante y técnicas sintéticas. Véase, por ejemplo, Sambrooketal,“Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY. De manera similar, los métodos de generación de viriones de AAVr son muy conocidos. Véase, por ejemplo, K. Fisheret al, J. Virol.,70: 520-532 (1993) y la patente de EE.UU. n.25.478.745.
A menos que se especifique otra cosa, las ITR de AAV, y otros componentes de AAV seleccionados descritos en el presente documento, pueden seleccionarse fácilmente a partir de cualquier serotipo de AAV, incluyendo, sin limitación, los AAV1, AAV2 , AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AA<v>7, AAV9 y el nuevo serotipo de la invención, el<a>A<v>8. Estas ITR u otros componentes de AAV pueden aislarse fácilmente usando técnicas disponibles para los expertos en la materia a partir de un serotipo de AAV. Dicho AAV puede aislarse u obtenerse de fuentes académicas, comerciales o públicas (por ejemplo, la Colección Americana de Cultivos Tipo, Manassas, VA). Como alternativa, las secuencias de AAV pueden obtenerse a través de medios sintéticos o de otros medios adecuados en referencia a secuencias publicadas, tales como las disponibles en la bibliografía o en bases de datos tales como, por ejemplo, GenBank, PubMed, o similares.
A. El minigén
El minigén está compuesto, como mínimo, por un transgén y sus secuencias reguladoras, y por repeticiones terminales invertidas (ITR) 5' y 3' de AAV. En una realización deseable, se usan las ITR del serotipo 2 de AAV. Sin embargo, pueden seleccionarse ITR de otros serotipos adecuados. Este minigén es el que se empaqueta en una proteína de cápside y se suministra a una célula hospedadora seleccionada.
1. El transgén
Un transgén es una secuencia de ácido nucleico, heteróloga respecto a las secuencias de vector que flanquean el transgén que codifica un polipéptido, una proteína u otro producto de interés. La secuencia codificante de ácido nucleico está unida operativamente a componentes reguladores de una manera tal que permite la transcripción, traducción y/o expresión de transgén en una célula hospedadora.
La composición de la secuencia transgénica dependerá del uso que deba darse al vector resultante. Por ejemplo, un tipo de secuencia transgénica incluye una secuencia indicadora, que con su expresión produce una señal detectable. Dichas secuencias indicadoras incluyen, sin limitación, secuencias de ADN que codifican p-lactamasa, p-galactosidasa (LacZ), fosfatasa alcalina, timidina quinasa, proteína fluorescente verde (GFP), cloranfenicol acetiltransferasa (CAT), luciferasa, proteínas unidas por membrana incluyendo, por ejemplo, CD2, CD4, CD8, la proteína de hemaglutinina de la gripe y otras bien conocidas en la técnica, respecto a las que pueden existir o producirse anticuerpos de alta afinidad dirigidos a las mismas con medios convencionales, y proteínas de fusión que comprenden una proteína unida por membrana fusionada apropiadamente con un dominio de etiqueta de antígeno procedente, entre otros, de hemaglutinina o de Myc.
Estas secuencias codificantes, cuando se asocian a elementos reguladores que activan su expresión, proporcionan señales detectables por medios convencionales, incluyendo ensayos enzimáticos, radiográficos, colorimétricos, de fluorescencia u otros espectrográficos, ensayos de clasificación de célula activada por fluorescencia y ensayos inmunológicos, incluyendo el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), el radioinmunoensayo (RIA) y la inmunohistoquímica. Por ejemplo, cuando la secuencia marcadora es el gen LacZ, la presencia del vector portador de la señal se detecta mediante ensayos con respecto a la actividad de la beta-galactosidasa. Cuando el transgén es la proteína verde fluorescente o la luciferasa, el vector portador de la señal puede medirse visualmente en un luminómetro mediante la producción de color o de luz.
Sin embargo, deseablemente, el transgén es una secuencia no marcadora que codifica un producto que es útil en biología y medicina, tales como proteínas, péptidos, ARN, enzimas, o ARN catalíticos. Las moléculas de ARN deseables incluyen ARNt, ARNbc, ARN ribosómico, ARN catalíticos y ARN no codificante. Un ejemplo de una secuencia de ARN útil es una secuencia que extingue la expresión de una secuencia de ácido nucleico diana en el animal tratado.
El transgén puede usarse para corregir o mejorar insuficiencias génicas, que pueden incluir insuficiencias en las que los genes normales se expresan a niveles menores que los normales o insuficiencias en las que el producto génico funcional no se expresa. Un tipo preferido de secuencia transgénica codifica una proteína o un polipéptido terapéuticos que se expresan en una célula hospedadora. se pueden usar múltiples transgenes, por ejemplo, para corregir o mejorar un defecto génico causado por una proteína multi-subunidad. En determinadas situaciones, puede usarse un transgén diferente para codificar cada subunidad de una proteína, o codificar diferentes péptidos o proteínas. Esto es deseable cuando el tamaño del ADN que codifica la subunidad de la proteína es grande, por ejemplo, para una inmunoglobulina, el factor de crecimiento derivado de plaquetas o una proteína distrofina. Para que la célula produzca la proteína multi-subunidad, una célula se infecta con el virus recombinante que contiene cada una de las diferentes subunidades. Como alternativa, las diferentes subunidades de una proteína pueden codificarse con el mismo transgén. En este caso, un solo transgén incluye el ADN que codifica cada una de la subunidades, estando el ADN para cada subunidad separado mediante un sitio de entrada de ribozima interna (IRES). Esto es deseable cuando el tamaño del ADN que codifica cada una de las subunidades es pequeño, por ejemplo el tamaño total del ADN que codifica las subunidades y los IRES es menor de cinco kilobases. Como una alternativa a un IRES, el ADN puede separarse mediante secuencias que codifican un péptido 2A, que se autoescinde en un evento posterior a la traducción. Véase, por ejemplo, M. L. Donnelly,et al, J. Gen. Virol.,78(Pt 1 ): 13-21 (enero 1997); Furler, S.,et al, Gene Ther.,8(11 ): 864-873 (junio de 2001); Klump H.,et al., Gene Ther.,8(10): 811-817 (mayo 2001). Este péptido 2A es significativamente más pequeño que un IRES, lo que hace que sea muy adecuado para su uso cuando el espacio es un factor limitante. Sin embargo, el transgén seleccionado puede codificar cualquier producto biológicamente activo, u otro producto, por ejemplo, un producto deseable para su estudio.
Un experto en la materia puede seleccionar fácilmente transgenes adecuados. La selección del transgén no se considera una limitación de esta invención.
2. Elementos reguladores
Además a los elementos principales identificados anteriormente para el minigén, el vector incluye también elementos de control convencionales que están unidos operativamente al transgén de una manera que permiten su transcripción, traducción y/o expresión en una célula transfectada con el vector plasmídico o se infectan con el virus producido mediante la invención. Como se utiliza en la presente memoria, secuencias “unidas operativamente” incluyen tanto secuencias de control de expresión que son contiguas con el gen de interés como secuencias de control de expresión que actúan entranso a una distancia para controlar el gen de interés.
Las secuencias de control de expresión incluyen secuencias de transcripción, iniciación, promotoras y potenciadoras apropiadas; señales de procesamiento eficiente de ARN tal como señales de corte y empalme y poliadenilación (poliA); secuencias que estabilizan el ARNm citoplasmático; secuencias que potencian la eficiencia de la traducción (es decir, secuencias consenso de Kozak); secuencias que potencian la estabilidad de la proteína; y cuando se desee, secuencias que potencian la secreción del producto codificado. En la técnica se conoce y puede utilizarse un gran número de secuencias de control de expresión, incluyendo las promotoras que son naturales, constitutivas, inducibles y/o específicas del tejido.
Como ejemplos de promotores constitutivos se incluyen, sin limitación, el promotor LTR del virus del sarcoma de Rous (RSV) retrovírico (opcionalmente con el potenciador de RSV), el promotor de citomegalovirus (CMV) (opcionalmente con el potenciador de CMV) [véase, por ejemplo, Boshartet al., Cell,41: 521-530 (1985)], el promotor SV40, el promotor de dihidrofolato reductasa, el promotor de p-actina, el promotor de fosfoglicerol quinasa (PGK), y el promotor de EF1 [Invitrogen]. Los promotores inducibles permiten la regulación de la expresión génica y pueden regularse mediante compuestos suministrados exógenamente, mediante factores ambientales tales como la temperatura, o por la presencia de un estado fisiológico específico, como por ejemplo, fase aguda, un estado de diferenciación particular de la célula o en células replicantes solamente. Los promotores inducibles y los sistemas inducibles se pueden obtener de una diversidad de fuentes comerciales, incluyendo, sin limitación, Invitrogen, Clontech y Ariad. Se han descrito muchos otros sistemas, y un experto en la materia puede seleccionarlos fácilmente. Como ejemplos de promotores inducibles regulados por compuestos suministrados exógenamente se incluyen el promotor de metalotioneína (MT) de oveja inducible por cinc, el promotor del virus de tumor de mama de ratón (MMTV) inducible por dexametasona (Dex), el sistema promotor de polimerasa T7 [publicación de patente internacional n.°. WO 98/10088]; el promotor de insecto de ecdisoma [Noet al., Proc. Natl. Acad. Sci.EE.U., 93: 3346-3351 (1996)], el sistema reprimible por tetraciclina [Gossenet al., Proc. Natl. Acad. Sci.EE.UU. 89: 5547-5551 (1992)], el sistema inducible por tetraciclina [Gossenet al., Science,268: 1766-1769 (1995), véase también Harveyet al., Curr. Opin. Chem. Biol.,2: 512-518 (1998)], el sistema inducible por RU486 [Wanget al., Nat. Biotech.,15: 239243 (1997) y Wanget al., Gene Ther.,4: 432-441 (1997)] y el sistema inducible por rapamicina [Magariet al., J. Clin. Invest.,100: 2865-2872 (1997)]. Otros tipos de promotores inducibles que pueden ser útiles en este contexto son aquellos que se regulan mediante un estado fisiológico específico, por ejemplo, la temperatura, una fase aguda, un estado de diferenciación particular de la célula o en células replicantes solamente.
Se puede usar el promotor natural para el transgén. El promotor natural puede ser el preferido cuando se desea que la expresión del transgén mimetice la expresión natural. El promotor natural puede usarse cuando la expresión del transgén debe regularse temporalmente o durante el desarrollo, o de una manera específica del tejido, o en respuesta a estímulos de la transcripción específicos. También se pueden usar otros elementos naturales de control de expresión, tales como elementos potenciadores, sitios de poliadenilación o secuencias consenso de Kozak, para mimetizar la expresión natural.
El transgén puede incluir un gen unido operativamente a un promotor específico del tejido. Por ejemplo, si se desea expresión en el músculo esquelético, se deberá usar un promotor activo en el músculo. Esto incluye los promotores procedentes de genes que codifican la p-actina esquelética, la cadena ligera 2A de miosina, la distrofina, la creatina quinasa de músculo, así como promotores de músculo sintéticos con actividades más altas que las de los promotores que se producen de forma natural (véase Liet al., Nat. Biotech.17: 241-245 (1999)). Ejemplos de promotores que son específicos del tejido son conocidos para el hígado (albúmina, Miyatakeet al., J. Virol.,71: 5124-32 (1997); promotor de núcleo del virus de la hepatitis B, Sandiget al., Gene Ther.,3: 1002-9 (1996); alfafetoproteína (AFP), Arbunthnotet al., Hum. Gene Ther.,7: 1503-14 (1996)), osteocalcina ósea (Steinet al., Mol. Biol. Rep.,24: 185-96 (1997)); sialoproteína ósea (Chenet al., J. Bone Miner. Res.,11: 654-64 (1996)), linfocitos (CD2, Hansalet al., J. Immunol.,161: 1063-8 (1998); cadena pesada de inmunoglobulina; cadena receptora de linfocito T), promotor neuronal tal como promotor de enolasa específica de neurona (NSE) (Andersenet al., Cell Mol. Neurobiol.,13: 503-15 (1993)), gen de cadena ligera de neurofilamento (Piccioliet al., Proc. Natl. Acad. Sci.EE.UU., 88: 5611-5 (1991)), y el gen vgf específico de neurona (Piccioliet al., Neuron,15: 373-84 (1995)), entre otros.
Opcionalmente, los plásmidos portadores de transgenes terapéuticamente útiles pueden incluir también genes marcadores o indicadores seleccionables que pueden incluir secuencias que codifican resistencia a geneticina, higromicina o puromicina, entre otros. Dichos genes marcadores o indicadores seleccionables (situados preferentemente fuera del genoma vírico que va a rescatarse mediante el método de la invención) pueden usarse para indicar la presencia de los plásmidos en las células bacterianas, tal como por resistencia a la ampicilina. Otros componentes del plásmido pueden incluir un origen de replicación. La selección de estos y otros promotores y elementos de vector, se hace de manera convencional y muchas de esas secuencias están disponibles [véase, por ejemplo, Sambrooket al.,y las referencias citadas en la misma].
La combinación del transgén, de promotor/potenciador, y de las ITR 3' y 5', se menciona como “minigén” por facilidad de referencia en la presente memoria. El diseño de dicho minigén puede realizarse recurriendo a técnicas convencionales.
3. Administración del minigén a una célula hospedadora de empaquetamiento
El minigén puede ser portado sobre cualquier vector adecuado, por ejemplo, un plásmido, que se administre a una célula hospedadora. Los plásmidos útiles en la presente invención pueden estar diseñados de manera que sean adecuados para replicación y, opcionalmente, para la integración en células procariotas, en células de mamíferos, o en ambas. Estos plásmidos (u otros vectores portadores de la ITR 5' de AAV - molécula heteróloga - ITR 3' de AAV) contienen secuencias que permiten la replicación del minigén en marcadores eucariotas y/o procariotas y de selección para esos sistemas. Los genes marcadores o indicadores seleccionables pueden incluir secuencias que codifican la resistencia a la geneticina, a la higromicina o a la puromicina, entre otras. Los plásmidos pueden contener también ciertos genes indicadores o marcadores seleccionables que pueden usarse para indicar la presencia del vector en células bacterianas, tal como por resistencia a ampicilina. Otros componentes del plásmido pueden incluir un origen de replicación y un amplicón, tal como el sistema de amplicón que emplea el antígeno nuclear del virus de Epstein Barr. Este sistema de amplicón, u otros componentes de amplicón similares, permiten una replicación episómica de alta copia en las células. Preferentemente, la molécula que porta el minigén se transfecta en la célula, donde puede existir de manera transitoria. Como alternativa, el minigén (que porta la ITR 5' de AAV - molécula heteróloga - ITR 3' de AAV), puede estar integrado de forma estable en el genoma de la célula hospedadora, ya sea cromosómicamente o como un episoma. En algunas realizaciones, el minigén puede estar presente en múltiples copias, opcionalmente en concatámeros de cabeza con cabeza, cabeza con cola, o cola con cola. Las técnicas de transfección adecuadas son conocidas y pueden utilizarse fácilmente para administrar el minigén a la célula hospedadora.
En general, cuando el vector que comprende el minigén se suministra por transfección, el vector se suministra en una cantidad de aproximadamente 5 pg a aproximadamente 100 pg de ADN, de aproximadamente 10 pg a aproximadamente 50 pg de ADN, en aproximadamente 1 x 104 células a aproximadamente 1 x 1013 células, o en aproximadamente 1 x 105 células. Sin embargo, las cantidades relativas de ADN de vector en células hospedadoras puede ajustarlas un experto en la materia, teniendo en cuenta factores tales como el vector seleccionado, el método de suministro y las células hospedadoras seleccionadas.
B. Secuencias derepycap
Además del minigén, la célula hospedadora contiene las secuencias que activan la expresión de la proteína de cápside de AAV8 (o una proteína de cápside que comprende un fragmento de la cápside de AAV8) en la célula hospedadora y secuencias derepdel mismo serotipo que el serotipo de las ITR de AAV encontradas en el minigén, o de un serotipo de complementación cruzada. Las secuencias decapyrepde AAV pueden obtenerse, de forma independiente, a partir de una fuente de AAV como se ha descrito anteriormente, y pueden introducirse en la célula hospedadora de cualquier manera conocida por un experto en la materia, como se ha descrito anteriormente. Además, cuando se seudotipifica un vector de AAV en una cápside de AAV9, las secuencias que codifican cada una de las proteínas rep esenciales pueden administrarse mediante AAV 8, o las secuencias que codifican las proteínas rep pueden administrarse por diferentes serotipos de AAV, por ejemplo, AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6). Por ejemplo, las secuencias de rep78/68 pueden proceder del AAV2, mientras que las secuencias derep52/40 pueden proceder del AAV8.
En una realización, la célula hospedadora contiene de forma estable la proteína de cápside bajo el control de un promotor adecuado, tal como los que se han descrito con anterioridad. Más deseablemente, en esta realización, la proteína de cápside se expresa bajo el control de un promotor inducible. En otra realización, la proteína de cápside se suministra a la célula hospedadora entrans.Cuando se suministra a la célula hospedadora entrans,la proteína de cápside puede administrarse por medio de un plásmido que contiene las secuencias necesarias para dirigir la expresión de la proteína de cápside seleccionada en la célula hospedadora. Más deseablemente, cuando se administra a la célula hospedadora entrans,el plásmido que porta la proteína de cápside porta también otras secuencias necesarias para empaquetar el AAVr, por ejemplo, las secuencias derep.
En otra realización, la célula hospedadora contiene de forma estable las secuencias derepbajo el control de un promotor adecuado, tal como los que se han descrito anteriormente. De manera más deseable, en esta realización, las proteínas rep esenciales se expresan bajo el control de un promotor inducible. En otra realización, las proteínas rep se administran a la célula hospedadora entrans.Cuando se suministran a la célula hospedadora entrans,las proteínas rep pueden administrarse por medio de un plásmido que contiene las secuencias necesarias para dirigir la expresión de las proteínas rep seleccionadas en la célula hospedadora. Más deseablemente, cuando se administran a la célula hospedadora entrans,el plásmido que porta la proteína de cápside porta también otras secuencias necesarias para empaquetar el AAVr, por ejemplo, las secuencias derepycap.
Por tanto, en una realización, las secuencias derepycappueden transfectarse en la célula hospedadora en una sola molécula de ácido nucleico y existir de manera estable en las células como un episoma. En otra realización, las secuencias derepycapestán integradas de manera estable en el cromosoma de la célula. Otra realización tiene las secuencias derepycapexpresadas de manera transitoria en la célula hospedadora. Por ejemplo, una molécula de ácido nucleico útil para dicha transfección comprende, desde el extremo 5' al extremo 3', un promotor, un espaciador opcional intercalado entre el promotor y el sitio de inicio de la secuencia del genrep,una secuencia del genrepde AAV, y una secuencia del gencapde AAV.
Opcionalmente, las secuencias derepy/ocappueden administrarse en un vector que contiene otras secuencias de ADN que van a introducirse en las células hospedadoras. Por ejemplo, el vector puede contener la construcción de AAVr que comprende el minigén. El vector puede comprender uno o más de los genes que codifican las funciones auxiliares, por ejemplo, las proteínas adenovíricas E1, E2a y E4ORF6, y el gen para ARN de VAI.
Preferentemente, el promotor utilizado en esta construcción puede ser cualquiera de los promotores constitutivos, inducibles o naturales conocidos por el experto en la materia o como se ha expuesto anteriormente. En una realización, se emplea una secuencia de promotor P5 de AAV.
En otra realización preferida, el promotor pararepes un promotor inducible, tal como los que se han expuesto anteriormente en relación con los elementos reguladores de transgén. Un promotor preferido para expresión derepes el promotor de T7. El vector que comprende el genrepregulado por el promotor de T7 y el gencap,se transfecta o transforma en una célula que expresa, ya sea de manera constitutiva o ya sea de manera inducible, la polimerasa de T7. Véase el documento w O 98/10099, publicado el 12 de Marzo de 1998.
El espaciador es un elemento opcional en el diseño del vector. El espaciador es una secuencia de ADN intercalada entre el promotor y el sitio de inicio ATG de genrep.El espaciador puede tener cualquier diseño deseado; es decir, puede ser una secuencia aleatoria de nucleótidos, o como alternativa, puede codificar un producto génico, tal como un gen marcador. El espaciador puede contener genes que incorporen normalmente sitios de inicio/terminación y poliA. El espaciador puede ser una secuencia de ADN no codificante, procedente de una procariota o eucariota, una secuencia no codificante repetitiva, una secuencia codificante sin controles de la transcripción, o una secuencia codificante con controles de la transcripción. Dos ejemplos de fuentes de secuencias espaciadoras son las secuencias escalera de fago o las secuencias escalera de levadura, que están disponibles en el comercio, por ejemplo, en Gibco o Invitrogen, entre otros. El espaciador puede tener un tamaño cualquiera suficiente para reducir la expresión de los productos génicosrep78y rep68, dejando los productos génicos rep52, rep40 ycapexpresados a niveles normales. La longitud del espaciador puede variar, por lo tanto, de aproximadamente 10 pb a aproximadamente 10,0 kpb, con preferencia en el intervalo de aproximadamente 100 pb a aproximadamente 8,0 kbp. Para reducir la posibilidad de recombinación, el espaciador tiene preferentemente una longitud menor de 2 kbp.
Aunque la(s) molécula(s) que proporciona(n)repycappueden existir en la célula hospedadora de manera transitoria (es decir, mediante transfección), se prefiere que una o ambas proteínasrepycapy el (los) promotor(es) que controla(n) su expresión esté(n) expresado(s) de forma estable en la célula hospedadora, por ejemplo, como un episoma o mediante la integración en el cromosoma de la célula hospedadora. Los métodos empleados para construir las realizaciones de la presente invención son técnicas convencionales de ingeniería genética o de ingeniería recombinante tales como las descritas en las referencias anteriores. Mientras que la presente memoria descriptiva proporciona ejemplos ilustrativos de construcciones específicas, usando la información proporcionada en la presente memoria, un experto en la materia puede seleccionar y diseñar otras construcciones adecuadas, usando una elección de espaciadores, promotores P5 y otros elementos, incluyendo al menos una señal de inicio y terminación de la traducción, y la adición opcional de sitios de poliadenilación.
Una célula hospedadora puede proporcionar la proteína rep o cap de forma estable.
C. Las funciones auxiliares
La célula hospedadora de empaquetamiento también necesita funciones auxiliares para empaquetar el AAVr de la invención. Opcionalmente, esas funciones puede suministrarlas un virus del herpes. Más deseablemente, las funciones auxiliares necesarias se proporcionan, cada una de ellas, a partir de una fuente de adenovirus de primate humano o no humano, tal como las que se han descrito con anterioridad y/o están disponibles a partir de una diversidad de fuentes, incluyendo la colección americana de cultivos tipo (ATCC), Manassas, VA (US). En una realización preferida actualmente, la célula hospedadora se dota de y/o contiene un producto de gen E1a, un producto de gen E1b, un producto de gen E2a, y/o un producto de gen E4 ORF6. La célula hospedadora puede contener otros genes adenovíricos tal como ARN de VAI, pero esos genes no se necesitan. Como alternativa, no hay ningún otro gen de adenovirus o funciones de gen presentes en la célula hospedadora.
Por “ADN adenovírico que expresa el producto de gen E1a”, se entiende cualquier secuencia de adenovirus que codifique E1a o cualquier porción de E1 a funcional. El ADN adenovírico que expresa el producto de gen E2a y el ADN adenovírico que expresa los productos génicos E4 ORF6 se definen de forma similar. También se incluye cualquiera de los alelos u otras modificaciones del gen adenovírico o de la porción funcional del mismo. Dichas modificaciones pueden introducirse deliberadamente recurriendo a técnicas mutagénicas o de ingeniería genética convencionales para potenciar la función adenovírica de alguna manera, así como las variantes alélicas de las mismas que se producen de forma natural. Los expertos en la materia conocen dichas modificaciones y métodos para manipular ADN para conseguir esas funciones de gen de adenovirus.
Los productos génicos E1a, E1b, E2a y/o E4ORF6 de adenovirus, así como cualquiera de otras funciones auxiliares deseadas, pueden proporcionarse usando cualquier medio que permita su expresión en una célula. Cada una de las secuencias que codifican esos productos puede estar en un vector distinto, o uno o más genes pueden estar en el mismo vector. El vector puede ser cualquier vector conocido en la técnica o desvelado anteriormente, incluyendo los plásmidos, cósmidos y virus. La introducción del vector en la célula hospedadora puede realizarse con cualquier medio conocido en la técnica o desvelado anteriormente, incluyendo transfección, infección, electroporación, suministro de liposoma, técnicas de fusión de membrana, gránulos recubiertos de ADN a alta velocidad, infección vírica y fusión de protoplasto, entre otros. Uno o más de los genes adenovíricos pueden estar integrados de forma estable en el genoma de la célula hospedadora, expresados de forma estable como episomas o expresados de forma transitoria. Todos los productos génicos pueden estar expresados de forma transitoria, en un episoma o integrados de forma estable, o algunos de los productos génicos pueden estar expresados de forma estable mientras otros están expresados de forma transitoria. Además, el promotor para cada uno de los genes adenovíricos puede seleccionarse independientemente a partir de un promotor constitutivo, un promotor inducible o un promotor adenovírico natural. Los promotores pueden estar regulados por un estado fisiológico específico del organismo o de la célula (es decir, por el estado de diferenciación o en células replicantes o quiescentes) o por factores añadidos exógenamente, por ejemplo.
D. Células hospedadoras y estirpes celulares de empaquetamiento
La propia célula hospedadora puede seleccionarse a partir de cualquier organismo biológico, incluyendo las células procariotas (por ejemplo, bacterianas) y células eucariotas, incluyendo células de insecto, células de levadura y células de mamífero. Las células hospedadoras particularmente deseables se seleccionan de entre cualquier especie de mamífero, incluyendo, sin limitación, células tales como A549, WEHI, 3T3, 10T1/2, BHK, MDCK, COS 1, COS 7, BSC 1, BSC 40, BMT 10, VERO, WI38, HeLa, células 293 (que expresan E1 adenovírico funcional), Saos, C2C12, células L, HT1080, HepG2, y fibroblasto primario, hepatocito y células de mioblastos derivadas de mamíferos incluyendo el ser humano, el mono, el ratón, la rata, el conejo y el hámster. La célula de mamífero puede ser un fibroblasto, un hepatocito, una célula tumoral, etc. Los requisitos para la célula utilizada son que no porte ningún gen de adenovirus distinto de E1, E2a y/o E4 ORF6; que no contenga ningún otro gen de virus que pudiera dar como resultado la recombinación homologa de un virus contaminante durante la producción de AAVr; y que sea capaz de realizar la infección o transfección del ADN y la expresión del ADN transfectado. La célula hospedadora puede ser una que tienerepycaptransfectadas de manera estable en la célula.
Una célula hospedadora útil en la presente invención es una célula hospedadora transformada de manera estable con las secuencias que codifican rep y cap, y que se transfecta con el ADN de E1, E2a, E4 ORF6 de adenovirus y una construcción portadora del minigén como se ha descrito anteriormente. Las estirpes celulares de expresión derepy/ocapestables, tales como la B-50 (PCT/US98/19463), o las descritas en la patente de EE.UU. n.° 5.658.785, también pueden emplearse de forma similar. Otra célula hospedadora deseable contiene el mínimo ADN adenovírico que sea suficiente para expresar E4 ORF6. Incluso pueden construirse otras líneas celulares usando las secuencias derepde AAV y/ocapde AAV.
La preparación de una célula hospedadora de acuerdo con la presente invención implica técnicas tales como el ensamblaje de secuencias de ADN seleccionadas. Este ensamblaje puede llevarse a cabo utilizando técnicas convencionales. Dichas técnicas incluyen clonación genómica y de ADNc, muy conocidas y descritas en Sambrook et al., mencionado anteriormente, el uso de secuencias oligonucleotídicas solapantes de los genomas de adenovirus y de AAV, combinado con reacción en cadena de la polimerasa, métodos sintéticos, y cualesquier otro método adecuado que proporcione la secuencia nucleotídica deseada.
La introducción de las moléculas (como plásmidos o virus) en la célula hospedadora también puede llevarse a cabo usando técnicas conocidas por los expertos en la materia y comentadas a lo largo de la memoria descriptiva. Se pueden usar técnicas de transfección convencionales, por ejemplo, transfección con CaPO4 o electroporación y/o infección por vectores híbridos de adenovirus/AAV en estirpes celulares tales como la estirpe celular de riñón embrionario humano HEK 293 (una estirpe celular de riñón humano que contiene genes E1 de adenovirus funcional, que proporciona proteínas E1 que actúan entrans).
Los vectores basados en AAV8 generados por un experto en la materia son beneficiosos para la administración de genes a células hospedadoras seleccionadas y a pacientes con genoterapia, ya que no se han encontrado anticuerpos neutralizantes contra AAV8 en la población humana. Un experto en la materia puede preparar fácilmente otros vectores víricos de AAVr que contengan las proteínas de la cápside de AAV8 proporcionadas en el presente documento usando diversas técnicas conocidas por los expertos en la materia.
Un experto en la materia comprenderá fácilmente que los vectores de AAV de la invención pueden adaptarse fácilmente para su uso en la administración de genesin vitro, ex vivooin vivo.
Por lo tanto, la invención proporciona además vectores generados usando las secuencias de ácido nucleico y de aminoácidos del nuevo AAV. Dichos vectores son útiles para una diversidad de fines, incluyendo la administración de moléculas terapéuticas y el uso en regímenes de vacuna. Estos pueden usarse en regímenes de vacuna, por ejemplo para la administración conjunto de una citocina o para la administración del propio inmunógeno.
V. Virus recombinantes y usos de los mismos
Usando las técnicas descritas en el presente documento, un experto en la materia puede generar un AAVr que tenga una cápside de un serotipo 8 de la invención, o que tenga una cápside que contenga uno o más fragmentos de AAV8 como se define en las reivindicaciones. En una realización, se puede utilizar una cápside de longitud completa de AAV8 [SEQ ID NO: 2]. En otra realización, puede generarse una cápside de longitud completa que contenga uno o más fragmentos de AAV8 fusionados en fase con secuencias de otro serotipo de AAV seleccionado, o de partes heterólogas de AAV8. Opcionalmente, un virus recombinante puede portar secuencias derepde AAV8 que codifiquen una o más de las proteínas rep de AAV8.
A. Administración de virus
En otro aspecto, la presente invención proporciona un virus adenoasociado (AAV) o una composición como se define en las reivindicaciones para usar en la administración de un gen heterólogo a una célula. Los métodos de administración son bien conocidos por los expertos en la materia.
Opcionalmente, en primer lugar, una muestra del hospedador puede someterse a ensayo para determinar la presencia de anticuerpos contra un serotipo de AAV seleccionado. Los expertos en la materia conocen una diversidad de formatos de ensayo para detectar anticuerpos neutralizantes. La selección de un ensayo de ese tipo no es una limitación de la presente invención. Véase, por ejemplo, Fisheret al., Nature Med.,3(3): 306-312 (marzo de 1997), y W.C. Manninget al., Human Gene Therapy,9: 477-485 (1 de Marzo de 1998). Los resultados de este ensayo pueden usarse para determinar qué vector de AAV que contiene proteínas de cápside de un serotipo particular se prefiere para la administración, por ejemplo, mediante la ausencia de anticuerpos neutralizantes específicos para ese serotipo de cápside.
En un aspecto de este método, la administración del vector con proteínas de cápside de AAV8 de la invención puede preceder o seguir a la administración de un gen por medio de un vector con una proteína de cápside de AAV de diferente serotipo. Por tanto, la administración génica a través de vectores de AAVr puede usarse para repetir la administración génica a una célula hospedadora seleccionada. Deseablemente, los vectores de AAVr administrados posteriormente portan el mismo transgén que el primer vector de AAVr, pero los vectores administrados posteriormente contienen proteínas de cápside de serotipos que difieren del primer vector. Por ejemplo, si un primer vector tiene proteínas de cápside de AAV8, los vectores administrados posteriormente pueden tener proteínas de cápside seleccionadas de entre otros serotipos.
Los vectores recombinantes descritos anteriormente pueden administrarse a células hospedadoras de acuerdo con métodos publicados. El AAVr, suspendido preferentemente en un vehículo fisiológicamente compatible, puede administrarse a un paciente mamífero humano o no humano. Los vehículos adecuados pueden seleccionarse fácilmente por un experto en la materia en vista de la indicación para la que se dirija el virus de transferencia. Por ejemplo, un vehículo adecuado incluye solución salina, que puede formularse con una diversidad de soluciones tampón (por ejemplo, solución salina tamponada con fosfato). Otros vehículos ilustrativos incluyen solución salina estéril, lactosa, sacarosa, fosfato de calcio, gelatina, dextrano, agar, pectina, aceite de cacahuete, aceite de sésamo y agua.
Opcionalmente, las composiciones de la invención pueden contener, además del AAVr y de uno o más vehículos, otros ingredientes farmacéuticos convencionales, tal como conservantes o estabilizadores químicos. Los ejemplos adecuados de conservantes incluyen clorobutanol, sorbato de potasio, ácido sórbico, dióxido de azufre, propil galato, parabenos, etil vanilina, glicerina, fenol, y paraclorofenol. Los estabilizadores químicos adecuados incluyen gelatina y albúmina.
Los vectores se administran en cantidades suficientes para transfectar las células y para proporcionar niveles suficientes de transferencia y expresión génica para proporcionar un beneficio terapéutico sin efectos adversos indebidos, o con efectos fisiológicos médicamente aceptables, que pueden ser determinados por los expertos en Medicina. Las vías de administración convencionales y farmacéuticamente aceptables incluyen, aunque sin limitación, la administración directa a un órgano (por ejemplo, el hígado o el pulmón), administración oral, por inhalación, intratraqueal, intraocular, intravenosa, intramuscular, subcutánea, intradérmica, y otras vías de administración parentales. Si se desea, las vías de administración pueden combinarse.
Las dosis de vector vírico dependerán principalmente de factores tales como la afección que vaya a tratarse, el peso y el estado de salud del paciente, y por lo tanto, pueden variar entre los pacientes. Por ejemplo, una dosis humana terapéuticamente eficaz de vector vírico está, por lo general, comprendida en el intervalo de aproximadamente 1 ml a aproximadamente 100 ml de solución que contiene concentraciones de aproximadamente 1 x 109 a 1 x 1016 genomas de vector vírico. Una dosis humana preferida puede ser de aproximadamente 1 x 1013 a 1 x 1016 genomas de AAV. Las dosis se ajustarán para equilibrar el beneficio terapéutico frente a cualquier efecto secundario, y dichas dosis pueden variar dependiendo de la aplicación terapéutica para la que se emplee el vector recombinante. Los niveles de expresión del transgén pueden monitorizarse para determinar la frecuencia de dosificación resultante en vectores víricos, con preferencia vectores de AAV que contienen el minigén. Opcionalmente, se pueden utilizar regímenes de dosificación similares a los descritos con fines terapéuticos, para inmunización, usando las composiciones de la invención.
A continuación, se proporcionan ejemplos de productos terapéuticos e inmunogénicos para su administración mediante los vectores de la invención que contienen AAV8. Estos vectores pueden usarse para una diversidad de regímenes terapéuticos y de vacuna, como se describe en la presente memoria. Además, estos vectores pueden administrarse en combinación con uno o más de otros vectores o principios activos en un régimen terapéutico y/o de vacuna deseado.
B. Transgenes terapéuticos
Los productos terapéuticos útiles codificados por el transgén incluyen hormonas y factores de crecimiento y de diferenciación incluyendo, aunque sin limitación, insulina, glucagón, hormona del crecimiento (GH), hormona paratiroidea (PTH), factor de liberación de hormona de crecimiento (GRF), hormona de estimulación de folículo (FSH), hormona luteinizante (LH), gonadotropina coriónica humana (hCG), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), angiopoyetina, angiostatina, factor de estimulación de colonias de granulocitos (GCSF), eritropoyetina (EPO), factor de crecimiento de tejido conectivo (CTGF), factor de crecimiento de fibroblasto básico (bFGF), factor de crecimiento de fibroblasto ácido (aFGF), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), factores I y II de crecimiento de Insulina (IGF-I e IGF.II), uno cualquiera de la superfamilia a de factor de crecimiento de transformación, incluyendo TGFa, activinas, inhibinas, o cualquiera de las proteínas morfogénicas óseas (BMP), las BMP 1-15, uno cualquiera de la familia de factores de crecimiento de herreglulina/neurregulina/ARIA/factor de diferenciación neu (NDF), factor de crecimiento nervioso (NGF), factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), neurotrofinas NT-3 y NT-4/5, factor neurotrófico ciliar (CNTF), factor neurotrófico derivado de estirpe celular glial (GDNF), neurturina, agrina, uno cualquiera de la familia de semaforinas/colapsinas, netrina-1 y netrina-2, factor de crecimiento de hepatocito (HGF), efrina, nogina, erizo sónico y tirosina hidroxilasa.
Otros productos de transgén útiles incluyen proteínas que regulan el sistema inmunitario incluyendo, sin limitación, citocinas y linfocinas, tales como la trombopoyetina (TPO), interleucinas (IL), IL-1 a IL-18, proteína quimioatrayente de monocito, factor inhibidor de leucemia, factor de estimulación de colonias de granulocitos y macrófagos, ligando Fas, factores a y p de necrosis tumoral, interferones a, p e<y>, factor de células madre, ligando flk-2/flt3. Los productos génicos producidos por el sistema inmunitario son también útiles en la invención. Éstos incluyen, sin limitación, inmunoglobulinas IgG, IgM, IgA, IgD e IgE, inmunoglobulinas quiméricas, anticuerpos humanizados, anticuerpos de cadena simple, receptores de linfocitos T, receptores de linfocitos T quiméricos, receptores de linfocitos T de cadena simple, moléculas de MHC de clase I y de clase II, así como inmunoglobulinas de diseño y moléculas de MHC. Los productos génicos útiles incluyen también proteínas reguladoras de complemento tales como proteínas reguladoras de complemento, proteína de cofactor de membrana (MCP), factor acelerador de putrefacción (DAF), CR1, CF2 y CD59.
Otros productos génicos útiles adicionales incluyen uno cualquiera de los receptores para hormonas, factores de crecimiento, citocinas, linfocinas, proteínas reguladoras y proteínas del sistema inmunitario, por ejemplo, receptores para la regulación del colesterol, incluyendo el receptor de lipoproteína de baja densidad (LDL), el receptor de lipoproteína de alta densidad (HDL), el receptor de lipoproteína de muy baja densidad (VLDL), el receptor de necrófago, miembros de la superfamilia del receptor de hormona esteroidea, incluyendo los receptores de glucocorticoides y los receptores de estrógeno, receptores de vitamina D y otros receptores nucleares. Además, los productos génicos útiles incluyen factores de transcripción tales comojun, fos,max, mad, factor de respuesta de suero (SRF), AP-1, AP2, myb, MyoD y miogenina, proteínas que contienen caja ETS, TFE3, E2F, ATF1, ATF2, ATF3, ATF4, AF5, NFAT, C<r>E<b>, HNF-4, c/EBP, SP1, proteínas de unión a caja CCAAT, factor de regulación de interferón (IRF-1), proteína de tumor de Wilms, por ejemplo, proteína de unión a ETS, STAT, proteínas de unión a caja GATA, por ejemplo, GATA-3, y la familia forkhead de proteínas de hélice aladas.
Otros productos génicos útiles incluyen carbamoil sintetasa I, ornitina transcarbamilasa, arginosuccinato sintetasa, arginosuccinato liasa, arginasa, fumarilacetato hidrolasa, fenilalanina hidroxilasa, alfa-1 antitripsina, glucosa-6-fosfatasa, porfobilinógeno desaminasa, factor VIII, factor IX, cistationa beta-sintasa, cetoácido descarboxilasa de cadena ramificada, albúmina, isovaleril-coA deshidrogenasa, pripionil CoA carboxilasa, metil malonil CoA mutasa, glutaril CoA deshidrogenasa, insulina, beta-glucosidasa, piruvirato carboxilato, fosforilasa hepática, fosforilasa quinasa, glicina descarboxilasa, proteína H, proteína T, una secuencia reguladora de transmembrana de fibrosis cística (CFTR), y una secuencia de ADNc de distrofina. Incluso otros productos génicos adicionales incluyen enzimas tales que puedan ser útiles en terapia de reemplazo enzimático, que es útil en una diversidad de afecciones que se producen por una actividad enzimática insuficiente. Por ejemplo, las enzimas que contienen manosa-6- fosfato pueden utilizarse en terapias para enfermedades de almacenamiento lisosómico (por ejemplo, un gen adecuado incluye el que codifica la p-glucoronidasa (GUSB)).
Otros productos génicos útiles incluyen los polipéptidos de origen no natural, tal como los polipéptidos quiméricos o híbridos que tienen una secuencia de aminoácidos de origen no natural que contiene inserciones, supresiones o sustituciones de aminoácido. Por ejemplo, las inmunoglobulinas de diseño de cadena simple, podrían ser útiles en determinados pacientes inmunocomprometidos. Otros tipos de secuencias génicas de origen no natural, incluyen moléculas no codificantes y ácidos nucleicos catalíticos, tal como ribozimas, que podrían usarse para reducir la sobreexpresión de una diana.
La reducción y/o la modulación de la expresión de un gen es particularmente deseable para el tratamiento de afecciones hiperproliferativas caracterizadas por células hiperproliferativas, como son los cánceres y la psoriasis. Los polipéptidos diana incluyen los polipéptidos que se producen exclusivamente, o a niveles más altos, en células hiperproliferativas en comparación con células normales. Los antígenos diana incluyen polipéptidos codificados por oncogenes tales como myb, myc, fyn, y el gen de translocación bcr/abl, ras, src, P53, neu, trk y EGRF. Además a los productos de oncogén como antígenos diana, los polipéptidos diana para tratamientos contra el cáncer y regímenes protectores incluyen regiones variables de anticuerpos formados por linfomas de linfocito B y regiones variables de receptores de linfocito T de linfomas de linfocito T que, en algunas realizaciones, se usan también como antígenos diana para enfermedad autoinmunitaria. Otros polipéptidos asociados a tumor pueden usarse como polipéptidos diana tal como los polipéptidos que se encuentran a niveles más altos en células tumorales incluyendo el polipéptido reconocido por el anticuerpo monoclonal 17-1A y los polipéptidos de unión a folato.
Otros polipéptidos y proteínas terapéuticos adecuados incluyen los que pueden ser útiles para el tratamiento de individuos que padecen enfermedades y trastornos autoinmunitarios, que confieren una amplia respuesta inmunoprotectora frente a dianas que están asociadas a autoinmunidad incluyendo los receptores celulares y las células que producen anticuerpos “autodirigidos”. Las enfermedades autoinmunitarias mediadas por linfocitos T incluyen la artritis reumatoide (AR), esclerosis múltiple (EM), síndrome de Sjogren, sarcoidosis, diabetes mellitus dependiente de insulina (IDDM), tiroiditis autoinmunitaria, artritis reactiva, espondilitis anquilosante, escleroderma, polimiositis, dermatomiositis, psoriasis, vasculitis, granulomatosis de Wegener, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa. Cada una de esas enfermedades se caracteriza por receptores de linfocito T (TCR) que se unen a antígenos endógenos e inician la cascada inflamatoria asociada a enfermedades autoinmunitarias.
C. Transgenes inmunogénicos
Como alternativa, o además, los vectores de AAVr de la invención pueden contener un transgén que codifique un péptido, un polipéptido o una proteína que induzca una respuesta inmunitaria contra un inmunógeno seleccionado. Por ejemplo, pueden seleccionarse inmunógenos de una diversidad de familias de virus. Como ejemplos de familias de virus deseables frente a las que podría ser deseable una respuesta inmunitaria se incluyen la familiapicornavirus,que incluye los géneros rinovirus, que son responsables de aproximadamente el 50 % de los casos de resfriado común; los géneros enterovirus, que incluyen los poliovirus, coxsackievirus, ecovirus y enterovirus humanos tales como el virus de la hepatitis A; y los géneros aftovirus, que son responsables de las enfermedades de pie y boca, principalmente en animales no humanos. Dentro de la familia de los virus picomavirus, los antígenos diana incluyen las VP1, VP2, VP3, VP4 y VPG. Otras familias de virus incluyen la familia de los calcivirus que abarca el grupo de virus de Norwalk, que son un importante agente causante de gastroenteritis epidémica. Otra familia deseable más para su uso en antígenos de direccionamiento para inducir respuestas inmunitarias en animales humanos y no humanos es la familia togavirus, que incluye los géneros alfavirus, que incluyen el virus de Sindbis, el virus del río Ross, y la encefalitis equina Venezolana, oriental y occidental, y los rubivirus, incluyendo el virus de la rubeola. La familia flaviviridae incluye el dengue, la fiebre amarilla, la encefalitis japonesa, la encefalitis de St. Louis y los virus de la encefalitis transmitida por garrapatas. Otros antígenos diana pueden generarse a partir del virus la hepatitis C o de la familia coronavirus, que incluye un número de virus no humanos tales como el virus de la bronquitis infecciosa (aves de corral), el virus gastroentérico transmisible porcino (cerdo), el virus de la encefalomielitis de hemaglutinante porcina (cerdo), el virus de la peritonitis infecciosa felina (gato), el coronavirus entérico felino (gato), el coronavirus canino (perro) y los coronavirus respiratorios humanos, que pueden causar el resfriado común y/o la hepatitis no A, B o C. Dentro de la familia de coronavirus, los antígenos diana incluyen el E1 (también denominado M o proteína de matriz), E2 (también denominado S o proteína Spike), E3 (también denominado HE o hemaglutina-elterosa), glicoproteína (no presente en todos los coronavirus) o N (nucleocápside). Incluso otros antígenos pueden estar dirigidos contra la familia rabdovirus, que incluye los géneros vesiculovirus (por ejemplo, el virus de la estomatitis vesicular) y los géneros lisavirus (por ejemplo, rabias). Dentro de la familia rabdovirus se pueden obtener antígenos adecuados a partir de la proteína G o de la proteína N. La familia filoviridae, que incluye virus de fiebre hemorrágica tales como los virus de Marburg y de Ébola, puede ser una fuente adecuada de antígenos. La familia paramixovirus incluye el virus paragripal de tipo 1, el virus de paragripal de tipo 3, el virus de paragripal bovino de tipo 3, el rubulavirus (virus de las paperas, virus paragripal de tipo 2, virus paragripal de tipo 4, virus de la enfermedad de Newcastle (pollos), peste bovina, morbilivirus, que incluye el sarampión y el moquillo canino, y neumovirus, que incluye el virus sincitial respiratorio. El virus de la gripe se clasifica dentro de la familia ortomixovirus y es una fuente adecuada de antígeno (por ejemplo, la proteína H<a>, la proteína N1). La familia bunyavirus incluye los géneros bunyavirus (encefalitis de California, La Crosse), flebovirus (fiebre del Valle de Rift), hantavirus (el puremala es un virus de la fiebre hemahagin), nairovirus (enfermedad de la oveja de Nairobi) y varios bungavirus no asignados. La familia arenavirus proporciona una fuente de antígenos frente a LCM y al virus de la fiebre de Lassa. La familia reovirus incluye los géneros reovirus, rotavirus (que causa gastroenteritis aguda en niños), orbivirus y cultivirus (fiebre de la garrapata de Colorado, Lebombo (humanos), encefalitis equina, lengua azul). La familia retrovirus incluye la subfamilia oncorivirinal que abarca enfermedades humanas y veterinarias tales como el virus de la leucemia felina, HTLVI y HTLVII, lentivirinal (que incluye el VIH, el virus de la inmunodeficiencia del simio, el virus de la inmunodeficiencia felina, el virus de la anemia infecciosa equina y espumavirinal). La familia papovavirus incluye la subfamilia poliomavirus (virus BKU y JCU) y la subfamilia papilomavirus (asociados a cánceres o progresión maligna de papiloma). La familia adenovirus incluye virus (EX, AD7, ARD, O.B.) que causan enfermedad respiratoria y/o enteritis. La familia parvovirus incluye el parvovirus felino (enteritis felina), panleucopeniavirus felino, parvovirus canino y parvovirus porcino. La familia herpesvirus incluye la subfamilia alfaherpesvirinae, que abarca los géneros simplexvirus (HSVI, HSVII), varicellovirus (pseudorrabias, varicela zóster) y la subfamilia betaherpesvirinae, que incluye los géneros citomegalovirus (HCMV, muromegalovirus) y la subfamilia betaherpesvirinae, que incluye los géneros citomegalovirus (HCMV, muromegalovirus) y la subfamilia gammaherpesvirinae, que incluye los géneros linfocriptovirus, EBV (linfoma de Burkitss), herpesvirus humano 6A, 6B y 7, herpesvirus asociado a sarcoma de Kaposi y herpesvirus cercopitecino (virus B), rinotraqueitis infecciosa, virus de la enfermedad de Marek y radinovirus. La familia poxvirus incluye la subfamilia cordopoxvirinae, que abarca los géneros ortopoxvirus (Viruela mayor (Viruela) y Vaccinia (Viruela vacuna)), parapoxvirus, avipoxvirus, capripoxvirus, leporipoxvirus, suipoxvirus, y la subfamilia entomopoxvirinae. La familia hepadnavirus incluye el virus de la hepatitis B. Un virus no clasificado que puede ser una fuente adecuada de antígeno es el virus de la hepatitis delta. Otro virus que es una fuente de antígeno es el virus Nipan. Otras fuentes de virus más pueden incluir el virus de la enfermedad bursal infecciosa aviar y el virus del síndrome respiratorio y reproductivo porcino. La familia alfavirus incluye el virus de arteritis equina y varios virus de encefalitis.
Otros inmunógenos que son útiles para inmunizar un animal humano o no humano frente a otros patógenos incluyen bacterias, hongos, microorganismos parásitos o parásitos multicelulares que infectan vertebrados humanos y no humanos, o procedentes de células cancerígenas o de células tumorales. Los ejemplos de patógenos bacterianos incluyen los cocos patógenos Gram positivos incluyendo los neumococos; estafilococos (y las toxinas producidas por los mismos, por ejemplo, la enterotoxina B); y, estreptococos. Los cocos patógenos Gram negativos incluyen los meningococos; gonococos. Los bacilos entéricos patógenos gramnegativos incluyen enterobacteriáceas; seudomonas, acinetobacterias y eikenella; melioidosis; salmonella; shigella; hemófilos; moraxella;H. ducreyi(que causa el chancro); especies deBrucella(brucelosis);Francisella tularensis(que causa la tularemia);Yersinia pestis(plaga), y otra yersinia(pasteurella); Streptobacillus moniliformisyspirillum; bacilos grampositivos que incluyenListeria monocytogenes; Erysipelothrix rhusiopathiae; Corynebacterium diphteria(difteria); cólera;B. anthracis(ántrax); donovanosis (granuloma inguinal); y, bartonelosis. Las enfermedades causadas por bacterias anaerobias patógenas incluyen el tétano; botulismo(Clostridium botulimumy su toxina);Clostridium perfringensy su toxina épsilon; otras clostridias; tuberculosis; lepra, y otras micobacterias. Las enfermedades espiroquetales patógenas incluyen la sífilis; trepanomatosos; sífilis pián, pinta y endémica; y, leptoespirosis. Otras infecciones causadas por bacterias patógenas y por hongos patógenos superiores incluyen muermo(Burkolderia mallei);actinomicosis; nocardiosis; criptococosis, blastomicosis, histoplasmosis y coccidiyodomicosis; candidiasis, aspergilosis, y mucomicosis; esporotricosis; paracoccidiyodomicosis, petriellidiosis, torulopsosis, micetoma y cromomicosis; y dermatofitosis. Las infecciones rickettsianas incluyen la fiebre del tifus, la fiebre maculosa de las Montañas Rocosas, la fiebre Q(Coxiella burnetti)y Rickettsialpox. Ejemplos de micoplasma e infecciones clamidiales incluyen: infecciones porMycoplasma pneumoniae;linfogranuloma venéreo; psitacosis; e infecciones clamidiales perinatales. Los eucariotas patógenos abarcan protozoos y helmintos patógenos y las infecciones producidas por los mismos incluyen: amebiasis; malaria; leishmaniosis; tripanosomiasis; toxoplasmosis; infecciones porPneumocystis carinii; Trichans; Toxoplasma gondii;babesiosis; giardasis; triquinosis; filariasis; esquistosomiasis; nematodos, trematodos o fasciolas; e infecciones por cestodos (tenia).
Muchos de esos organismos y/o de las toxinas producidas por los mismos han sido identificados en los Centros de Control de Enfermedades [(CDCE), Departamento de Salud y de Servicios Humanos, USA], como agentes que tienen un posible uso en ataques biológicos. Por ejemplo, algunos de esos agentes biológicos incluyen elBacillus anthracis(ántrax), elClostridium botulinumy su toxina (botulismo),Yersinia pestis(plaga),Variola major(viruela),Francisella tularensis(tularemia), y las fiebres hemorrágicas víricas [filovirus (por ejemplo Ébola, Marburg] y arenavirus [por ejemplo, Lassa, Machupo]), todos ellos actualmente clasificados como Agentes de Categoría A;Coxiella burnetti(fiebre Q); especies deBrucella(brucelosis),Burkolderia mallit(muermo),Burkliolderia pseudomallei(meloidosis),Ricinus communisy su toxina (toxina ricina),Clostridium perfringensy su toxina (toxina épsilon), especies de estafilococos y sus toxinas (enterotoxina B),Chlamydia psittaci(psitacosis), ataques a la seguridad del agua (por ejemplo,Vibrio cholerae, Cryptosporidium parvum),fiebre del tifus(Rickettsia powazekii)yencefalitis vírica (alfavirus, por ejemplo, encefalitis equina Venezolana; encefalitis equina oriental; encefalitis equina occidental), todos ellos actualmente clasificados como agentes de Categoría B; y virus Nipan y hantavirus, que están actualmente clasificados como agentes de Categoría C. Además, otros organismos, que están clasificados de ese modo o clasificados de forma diferente, pueden identificarse y/o usados para tal propósito en el futuro. Se comprenderá fácilmente que los vectores víricos y otras construcciones descritas en la presente memoria son útiles para la administración de antígenos a partir de esos organismos, virus, sus toxinas u otros subproductos, que impedirán y/o tratarán la infección u otras reacciones adversas con esos agentes biológicos.
La administración de los vectores de AAVr de la invención para administrar inmunógenos frente a la región variable de los linfocitos T provoca una respuesta inmunitaria que incluye CTL para eliminar esos linfocitos T. En la artritis reumatoide (AR), se han caracterizado varias regiones variables específicas de TCR que están implicadas en la enfermedad. Estas TCR incluyen V-3, V-14, V-17 y V-17. De ese modo, la administración de una secuencia de ácido nucleico que codifique al menos uno de esos polipéptidos provocará una respuesta inmunitaria que se dirigirá a los linfocitos T que participan en la AR. En la esclerosis múltiple (EM), se han caracterizado varias regiones variables específicas de TCR que están involucradas en la enfermedad. Estas TCR incluyen V-7 y V-10. De este modo, la administración de una secuencia de ácido nucleico que codifica al menos uno de esos polipéptidos provocará una respuesta inmunitaria que se dirigirá a linfocitos T que participan en la EM. En la escleroderma, se han caracterizado varias regiones variables específicas de TCR que están involucradas en la enfermedad. Estas TCR incluyen V-6, V-8, V-14 y V-16, V-3C, V7, V-14, V-15, V-16, V-28 y V-12. De ese modo, la administración de una molécula de ácido nucleico que codifica al menos uno de esos polipéptidos proporcionará una respuesta inmunitaria que se dirigirá a linfocitos T que participan en la escleroderma.
Por tanto, un vector vírico recombinante derivado de AAVr de la invención proporciona un vehículo eficaz de transferencia génica que puede suministrarin vivooex vivoun transgén seleccionado a una célula hospedadora seleccionada, incluso cuando el organismo tiene anticuerpos neutralizantes respecto a uno o más serotipos de AAV. El AAVr y las células se pueden mezclarex vivo;las células infectadas se cultivan usando metodologías convencionales; y las células transducidas se vuelven a infundir en el paciente.
Estas composiciones son particularmente muy adecuadas para la administración de genes a efectos terapéuticos y para inmunización, incluyendo la inducción de inmunidad protectora. Además, las composiciones de la invención también pueden usarse para la producción de un producto génico deseadoin vitro.Para la producciónin vitro,un producto deseado (por ejemplo, una proteína) puede obtenerse a partir de un cultivo deseado tras la transfección de células hospedadoras con un AAVr que contenga la molécula que codifique el producto deseado y cultivando el cultivo celular en condiciones que permitan la expresión. El producto expresado puede purificarse y aislarse después, según se desee. Las técnicas adecuadas de transfección, cultivo celular, purificación y aislamiento, son muy conocidas por los expertos en la materia.
Los siguientes ejemplos ilustran diversos aspectos y realizaciones de la invención.
Ejemplos
Ejemplo 1: Producción de genomas víricos de AAV8 recombinante dotados de ITR de AAV2
Se generaron construcciones de empaquetamiento quimérico fusionando secuencias de rep de AAV2 con secuencias cap de nuevos serotipos de AAV. Estas construcciones de empaquetamiento quimérico se usan, inicialmente, para el pseudotipificado de genomas de AAV recombinante que son portadores de las ITR de AAV2 por transfección triple de células 293 usando el plásmido auxiliar Ad5. Estos vectores pseudotipificados se usan para evaluar el comportamiento en estudios serológicos basados en transducción y para evaluar la eficacia de la transferencia génica de nuevos serotipos de AAV en diferentes modelos animales, incluyendo PNH y roedores, antes de que los virus intactos e infecciosos de estos nuevos serotipos se aíslen.
A.pAAV2GFP
El plásmido de AAV2 que contiene las ITR de AAV2 y la proteína fluorescente verde se expresó bajo el control de un promotor constitutivo. Este plásmido contiene los siguientes elementos: las ITR de AAV2, un promotor de CMV y las secuencias codificantes de la GFP.
B.Clonación del plásmido entrans
Para construir el plásmido quimérico entranspara la producción de vectores de AAV8 pseudotipificados recombinantes, el plásmido p5E18 (Xiaoet al.1999,J. Virol73: 3994-4003) se dirigió parcialmente con Xho I para linealizar el plásmido en el sitio Xho I en la posición de 3169 pb solamente. Los extremos cortan Xho I donde después se cargan y vuelven a ligarse. Este plásmido p5E18 modificado se restringió con Xba I y Xho I en una digestión completa para retirar la secuencia génica cap de AAV2 y se reemplazó con un fragmento Spe I/Xho I de 2267 pb que contenía el gen cap de AAV8 que se aisló del plásmido pCRAAV86-5+15-4.
El plásmido resultante contiene las secuencias de rep de AAV2 para Rep78/68 bajo el control del promotor P5 de AAV2 y las secuencias de rep de AAV2 para Rep52/40 bajo el control del promotor P 19 de AAV2. Las secuencias de la cápside de AAV9 están bajo el control del promotor P40 de AAV2, que se ubica dentro de las secuencias de rep. Este plásmido contiene además un espaciador en dirección 5' de la ORF de rep.
Como alternativa, puede construirse un plásmido similar que utilice las secuencias de rep de AAV8 y las secuencias promotoras de AAV8 natural. Este plásmido se usó después para la producción de AAVr8, como se describe en el presente documento.
C. Producción de AAVrpseudotipificado
Las partículas de AAVr (vector de AAV2 en la cápside de AAV8) se generan usando un método sin adenovirus. En resumen, el plásmido encis(plásmido pAAV2.1 lacZ que contiene las ITR de AAV2) y el plásmido entranspCRAAV8 6-5+15-4 (que contiene rep de AAV2 y cap de AAV8) y el plásmido auxiliar, respectivamente, se cotransfectaron simultáneamente en células 293 en una proporción de 1:1:2 mediante precipitación con fosfato de calcio.
Para la construcción de los plásmidos auxiliares pAd, el plásmido pBG10 se adquirió en Microbix (Canadá). Un fragmento RsrII que contenía L2 y L3 se suprimió de pBHG10, dando como resultado el primer plásmido auxiliar, pAdA F13. El plásmido AdF1 se construyó clonando al fragmento Asp700/Sall con la supresión Pmel/Sgfl, aislando de pBHG10, en Bluescript. MLP, L2, L2 y L3 se suprimieron en el plásmido pAdAF1. Supresiones adicionales de un fragmento Nrul de 2,3 kb y posteriormente, un fragmento RsrII/Nrul de 0,5 kb generó los plásmidos auxiliares pAdAF5 y pAdAF6, respectivamente. El plásmido auxiliar, denominado pAF6, proporciona las funciones auxiliares esenciales de la ORF6 de E2 y E4 no proporcionadas por la célula auxiliar que expresa E1 , pero se suprime de las proteínas de la cápside adenovírica y regiones E1 funcionales).
Por lo general, se transfectaron 50 mg de ADN (cis:trans:auxiliar) sobre una placa de cultivo tisular de 150 mm. Las células 293 se recogieron 72 horas después de la transfección, se sometieron a ultrasonidos y se trataron con desoxicolato sódico al 0,5 % (37 0C durante 10 min). Después, los lisados celulares se sometieron a dos series de gradiente con CsCl. Se recogieron las fracciones máximas que contenían el vector AAVr, se agruparon y se sometieron a diálisis frente a PBS.
Ejemplo 2 - Evaluación de vectores con cápsides de AAV8
Los vectores basados en AAV1 (2/1), AAV5 (2/5) y AAV2 (2/2) se desarrollaron esencialmente como se describe para AAV8 en el Ejemplo 1. Se determinaron títulos de copias de genoma (CG) de vectores de AAV por análisis TaqMan usando sondas y cebadores que se dirigen a la región poli A del SV40 como se describe previamente [Gao, G.,et al.,(2000)Hum Gene Ther11, 2079-91]. Se recuperaron viriones recombinantes por sedimentación con CsCÍ2 en todos los casos excepto en el AAV2/2, que se purificó mediante cromatografía con heparina.
Los vectores se construyeron para cada serotipo para diversos estudiosin vitroein vivo.Se incorporaron ocho casetes transgénicos diferentes en los vectores y se produjeron viriones recombinantes para cada serotipo. La recuperación de virus, basándose en copias de genoma, se resume en la Tabla 1. Los resultados de los vectores fueron altos para cada serotipo sin diferencias notables entre los serotipos. Los datos presentados en la tabla son resultados promedio de copias de genoma con una desviación típica x 1013 de lotes de producción múltiples de 50 transfecciones por placa (150 mm).
Tabla 1. Producción de vectores recombinantes
AAV2/1 AAV2/2 AAV2/5 AAV2/8
LacZ del CMV 7,30 ± 4,33 (n = 5,19 ± 5,190 (n =
9) 4,49 ± 2,89 (n = 6) 0,87 (n = 1)
8)
EGFP del CMV 6,43 ± 2,42 (n =
2) 3,39 ± 2,42 (n = 2) 5,55 ± 6,49 (n = 4) 3,74 ± 3,88 (n = 2) LacZ de TBG 4,18 0,704 ± 0,43 (n =
(n = 1 ) 0,23 (n = 1) 0,532 (n = 1)
2)
4,67 ± 0,75 (n =
A1AT de Alb 2) 4,77 (n = 1) 4,09 (n = 1) 2,02 (n = 1 )
A1AT de CB 0,567 (n = 1)0,438 (n = 1) 2,82 (n = 1 ) 0,816 ± 0,679 (n = 2) rhCG del CMV 8,78 ± 2,37 (n = 1,43 ± 1 ,18 (n = 2) 1,63 ± 1,15 (n = 3) 1,32 ± 0,87 (n = 3)
7)
8,51 ± 6,65 (n =
rhCG del TBG 6 3,47 ± 2,09 (n = 5) 5,26 ± 3,85 (n = 4) 1,83 ± 0,98 (n = 5)
)
1,24 ± 1,29 (n =
cFIX de TBG 3) 0,63 ± 0,394 (n = 6) 3,74 ± 2,48 (n = 7) 15,8 ± 15,0 (n = 5)
Ejemplo 3 - Análisis serológico de vectores pseudotipificados
Ratones C57BL/6 recibieron una inyección de vectores de diferentes serotipos de vectores AAVCBA1AT por vía intramuscular (5 x 1011 CG) y se recogieron muestras de suero 34 días después. Para analizar la actividad neutralizante y neutralizante en cruzado de los sueros de cada serotipo de AAV, los sueros se analizaron en un ensayo de anticuerpos neutralizantes basado en transducción [Gao, G. P.,et al.,(1996)J Virol70, 8934-43]. Más específicamente, la presencia de anticuerpos neutralizantes se determinó evaluando la capacidad del suero para inhibir la transducción de células 84-31 por virus indicadores (AAVCMVEGFP) de diferentes serotipos. Específicamente, se preincubó el virus indicador AAVCMVEGFP de cada serotipo [a una multiplicidad de infección (MOI) que conduce a una transducción del 90 % de células indicadoras] con suero termoinactivado de animales que recibieron diferentes serotipos de AAV o de ratones sin tratamiento previo. Después de 1 hora de incubación a 37 °C, se añadieron los virus a células 84-31 en placas de 96 pocillos durante 48 o 72 horas, dependiendo del serotipo del virus. La expresión de la GFP se midió con Fluorolmagin (Molecular Dynamics) y se cuantificó con el programa informático Image Quant. Los títulos de los anticuerpos neutralizantes se mostraron como la dilución en suero más alta que inhibía la transducción a menos de 50 %.
La disponibilidad de los vectores que expresaban la GFP simplificó el desarrollo de un ensayo para anticuerpos neutralizantes que se basó en la inhibición de la transducción en una estirpe celular permisiva (es decir, células 293 que expresan de manera estable E4 de Ad5). Se generaron sueros para seleccionar serotipos de AAV por inyección intramuscular de los virus recombinantes. Se evaluó la neutralización de la transducción de AAV con diluciones de 1:20 y 1:80 de los antisueros (Tabla 2). Los antisueros contra AAV1, AAV2, AAV5 y AAV8 neutralizaron la transducción del serotipo contra el que se generó el antisuero (AAV5 y AVV8 a un menor grado que AAV1 y AAV2) pero no la del otro serotipo (es decir, no hubo pruebas de neutralización en cruzado, lo que sugiere que AAV8 es un serotipo verdaderamente único).
Tabla^ 2: Análisis seroló ico de nuevos seroti os de AAV
Los sueros humanos de 52 sujetos normales se exploraron para determinar la neutralización contra serotipos seleccionados. Se descubrió que ninguna muestra de suero neutralizaba al vector AAV2/8 mientras que los vectores AAV2/2 y AAV2/1 se neutralizaron en el 20 % y 10 % de los sueros, respectivamente. Una fracción de IgG agrupada humana, que representaba un conjunto de 60.000 muestras individuales, no neutralizó al vector AAV2/8, mientras que los vectores AAV2/2 y AAV2/1 se neutralizaron a títulos de suero iguales a 1/1280 y 1/640, respectivamente.
Ejemplo 4 - Evaluaciónin vivode diferentes serotipos de vectores de AAV
En este estudio, 7 genomas de AAV recombinante, AAV2CBhA1AT, AAV2AlbhA1AT, AAV2CMVrhCG, AAV2TBGrhCG, Aa V2TBGcFIX, AAV2CMVLacZ y AAV2TBGLacZ se empaquetaron con proteínas de cápside de diferentes serotipos. En las 7 construcciones, los casetes de minigén se flanquearon con las ITR de AAV2. Como genes indicadores se usaron los ADNc de la a-antitripsina humana (A1AT), [Xiao, W.,et al.,(1999)J Virol73, 3994-4003] las subunidades p de la hormona coriogonadotrópica (GC) de mono rhesus Zoltick, P. W. y Wilson, J. M. (2000)Mol Ther2,657-9] el factor IX canino[Wang, L.,et al.,(1997)Proc Natl Acad SciEE.UU. 94, 11563-6] y genes de la p-galactosidasa bacteriana (es decir, Lac Z). Para la transferencia de genes dirigida al hígado, se usó bien el promotor del gen de la albúmina (Alb) de ratón [Xiao, W. (1999), citado anteriormente] o el promotor humano del gen la globulina que se une a la hormona tiroidea (TBG) [Wang (1997), citado anteriormente] para conducir la expresión específica de hígado de genes indicadores. En los experimentos de transferencia génica dirigida al músculo, se empleó bien el promotor temprano de citomegalovirus (CMV) o el promotor de la p-actina de pollo con potenciador de CMV (CB) para dirigir la expresión de los indicadores.
Para la transferencia génica dirigida al músculo, se inyectaron vectores en la tibia derecha anterior de ratones desnudos NCR o C57BL/6 de 4-6 semanas de vida (Taconic, Germantown, NY) a una dosis de 1 x 1011 copias de genoma (CG) por animal. En los estudios de transferencia génica dirigida a hígado, los vectores se infundieron por vía intraportal en ratones desnudos NCR o C57BL/6 de 7-9 semanas de vida (Taconic, Germantown, NY), también a una dosis de 1 x 1011 copias de genoma (CG) por animal. Se recogieron muestras de suero por vía intraorbital a diferentes momentos después de la administración del vector. Los tejidos de músculo e hígado se recogieron en diferentes momentos para la criosección y tinción histoquímica con Xgal de animales que recibieron los vectores lacZ. Para el experimento de readministración, ratones C56BL/6 recibieron inicialmente los vectores AAV2/1,2/2, 2/5, 2/7 y 2/8CBA1AT por vía intramuscular y seguido de expresión del gen A1A7 durante 7 semanas. Después los animales se trataron con AAV2/8TBGcFIX por vía intraportal y se estudiaron para determinar la expresión del gen cFIX.
Para cuantificar los niveles en suero de las proteínas hA1 At, rhCG y cFIX, se realizaron ensayos basados en ELISA como se ha descrito anteriormente [Gao, G. P.,et al.,(1996)J Virol70, 8934-43; Zoltick, P. W. y Wilson,J. M.(2000)Mol Ther2 , 657-9; Wang, L.,et al., Proc Natl Acad SciE<e>.UU. 94, 11563-6]. Estos experimentos finalizaron cuando los animales se sacrificaron para extraer tejidos de músculo e hígado para la extracción de ADN y para realizar análisis cuantitativos de copias genoma de vectores presentes en tejidos diana, por TaqMan, usando el mismo conjunto de cebadores y sonda que en la titulación de las preparaciones del vector [Zhang, Y.,et al.,(2001)Mol Ther3, 697- 707].
El comportamiento de los vectores basado en los nuevos serotipos se evaluó en modelos murinos de transferencia génica dirigida a músculo e hígado y se comparó con los vectores basados en los serotipos conocidos AAV1, AAV2 y AAVS. Los vectores que expresaban proteínas secretadas (A1AT y CG Tabla 3) se usaron para cuantificar eficacias de transducción relativas entre diferentes serotipos a través de análisis ELISA de sueros. La distribución celular de la transducción dentro del órgano diana se evaluó usando vectores que expresaban lacZ e histoquímica con X-gal.
El comportamiento de los vectores de AAV en el músculo esquelético se analizó después de inyección directa en los músculos anteriores de la tibia. Los vectores que contenían el mismo genoma basado en AAV2 con el gen temprano inmediato de CMV o un promotor de p-actina potenciado del CMV conducían la expresión del transgén. Estudios previos indican que los ratones C57BL/6 inmunocompetentes suscitaron respuestas humorales limitadas contra la proteína A1AT humana cuando se expresaba a partir de vectores de AAV [Xiao, W.,et al.,(1999)J Virol73, 3994- 4003].
En cada cepa, el vector AAV2/1 produjo los niveles más altos de A1AT y el vector AAV2/2 los más bajos, siendo los vectores AAV2/8 los que mostraban niveles de expresión intermedios. Los niveles máximos de CG 28 días después de inyección de ratones NCR nu/nu mostraron los niveles más altos de AAV2/7 y los más bajos de AAV2/2 con AAV2/8 y AAV2/1 entre ellos. La inyección de vectores lacZ de AAV2/1 produjo una expresión génica en los sitios de inyección en todas las fibras musculares, observándose sustancialmente menos fibras positivas en lacZ con los vectores AAV2/2 y AAV 2/8.
Se usaron modelos murinos similares para evaluar la transferencia génica dirigida al hígado. Se infundieron dosis idénticas de vector basadas en copias de genoma en las venas porta de ratones que se analizaron posteriormente para determinar la expresión del transgén. Cada vector contenía un genoma basado en AAV2 usando los promotores específicos de hígado descritos anteriormente (es decir, albúmina o globulina de unión a la hormona tiroidea) para conducir la expresión del transgén. Más particularmente, los casetes del minigén CMVCG y TBGCG se usaron para la transferencia génica dirigida a músculo e hígado respectivamente. Los niveles de rhCG se definieron como unidades relativas (Ur x 103). Los datos eran del ensayo de muestras de suero recogidas el día 28, después de la administración del vector (4 animales por grupo). Como se muestra en la Tabla 4, el impacto de las proteínas de cápside sobre la eficacia de la transducción de los vectores A1AT en ratones nu/nu y C57BL/6 y de vectores CG en ratones C57BL/6 era notable, es decir, AAV2/8 es el más eficaz para el pseudotipo para la transferencia génica dirigida a hígado.
Tabla 3. Expresión de la unidad p de la gonadotropina coriónica de mono rhesus (rhCG) en músculo e hígado de ratón.
Vector Músculo Hígado
AAV2/1 4,5 ± 2,1 1,6 ± 1,0
AAV2 0,5 ± 0,1 0,7 ± 0,3
AAV2/5 ND* 4,8 ± 0,8 ;AAV2/8 4,0 ± 0,7 76,0 ± 22,8 ;* No determinado en este experimento
En todos los casos, los vectores AAV2/8 produjeron los niveles más altos de expresión de transgén que variaban de 16 a 110 más de lo que se obtuvo con los vectores AAV2/2; la expresión de AAV2/5 fue intermedia. El análisis de secciones de hígado teñidas con X-Gal de animales que recibieron los vectores lacZ correspondientes mostró una correlación entre el número de células transducidas y los niveles totales de la expresión del transgén. Los ADN extraídos de hígados de ratones C57BL/6 que recibieron los vectores A1AT se analizaron con respecto a la abundancia del ADN del vector usando tecnología de PCR en tiempo real.
La cantidad de ADN de vector encontrada en el hígado 56 días después de la inyección se correlacionaba con los niveles de expresión de transgén (Tabla 4). Para este experimento, se usó un conjunto de sonda y cebadores que se dirigía a la región poliA del SV40 del genoma del vector para PCR TaqMan. Los valores que se muestran son las medias de tres animales individuales con desviaciones típicas. Los animales se sacrificaron el día 56 para extraer los tejidos de hígado para la extracción del ADN. Estos estudios indican que AAV8 es el vector más eficaz para la transferencia génica dirigida al hígado debido a un mayor número de hepatocitos transducidos.
Tabla 4. Análisis de PCR en tiempo real para determinar la abundancia de vectores AAV en hígado de ______________ ratones nu/nu tras la inyección de 1 x 1011 copias de genoma de vector______________ Vectores de Copias de genoma por célula
AAV/Dosis
AAV2/1AIbA1AT 0,6 ± 0,36
AAV2AIbA1AT 0,003 ± 0,001 AAV2/5AIbA1AT 0,83 ± 0,64
AAV2/8AIbA1AT 18 ± 11
Los datos serológicos descritos anteriormente sugieren que el vector AAV2/8 no debe neutralizarsein vivotras la inmunización con los otros serotipos. Los ratones C57BL/6 recibieron inyecciones intraportales de vector AAV2/8 que expresaba el factor IX canino (1011 copias de genoma) 56 días después de que recibieran inyecciones intramusculares de vectores A1AT de diferentes serotipos. Se obtuvieron niveles de expresión del factor IX altos 14 días después de la infusión de AAV2/8 en animales sin tratar (17 ± 2 pg/ml, N = 4) que no eran significativamente diferentes a los observados en animales inmunizados con AAV2/1 (31 ± 23 pg/ml, N = 4) y AAV2/2 (16 pg/ml, N = 2). Esto contrasta con lo observado en animales inmunizados con AAV2/8 que se infundieron con el vector AAV2/8 que expresaba el factor IX en los que no se observó factor IX detectable (< 0,1 pg/ml, N = 4).
Oligonucleótidos en regiones conservadas del gencapamplificaron secuencias de monos rhesus que representaron AAV únicos. Se descubrieron secuencias de identificación de cap idénticas en tejidos múltiples de monos rhesus procedentes de al menos dos colonias diferentes. Se aislaron fases de lectura abierta de rep y cap de longitud completa y se secuenciaron de fuentes sencillas. Solamente las fases de lectura abierta de cap de los nuevos AAV eran necesarias para evaluar su potencial como vectores, porque los vectores con las cápsides de AAV8 se generaron usando las ITR y rep de AAV2. Esto también simplificó la comparación de diferentes vectores dado que el genoma del vector real es idéntico entre diferentes serotipos vector. De hecho, los rendimientos de vectores recombinantes generados usando esta estrategia no difieren entre serotipos.
Los vectores basados en AAV8 parecen ser inmunológicamente distintos (es decir, no son neutralizados por anticuerpos generados contra otros serotipos). Además, los sueros de seres humanos no neutralizan la transducción de vectores AAV8, que es una ventaja sustancial sobre los AAV procedentes de ser humano actualmente en desarrollo para los que una proporción significativa de la población humana tiene inmunidad preexistente que es neutralizante [Chirmule, N.,et al.,(1999)Gene Ther6, 1574-83].
El tropismo del nuevo vector es favorable para aplicacionesin vivo.Cabe destacar que el AAV2/8 proporciona una ventaja sustancial frente a los otros serotipos en cuanto a eficacia de la transferencia génica al hígado que hasta ahora había sido relativamente decepcionante en términos de los números de hepatocitos transducidos de manera estable. AAV2/8 consiguió consecuentemente una mejora multiplicada por de 10 a 100 veces en la eficacia de la transferencia génica en comparación con los otros vectores. La base de la eficacia mejorada de AAV2/8 es ambigua, aunque se supone que se debe a la captación mediante un receptor diferente que es más activo en la superficie basolateral de los hepatocitos. Esta eficacia mejorada será bastante útil en el desarrollo de la transferencia génica dirigida al hígado cuando el número de células transducidas es de importancia fundamental, tal como en trastornos del ciclo de la urea e hipercolesterolemia familiar.
Por tanto, la ausencia de inmunidad preexistente contra AAV8 y el tropismo favorable de los vectores para el hígado indican que los vectores con proteínas de cápside AAV8 son adecuados para su uso como vectores en genoterapia humana y en otras aplicacionesin vivo.
Ejemplo 5 - Estudios de tropismo tisular
En el diseño de un esquema de exploración funcional de alto rendimiento para nuevas construcciones de AAV, se seleccionó un promotor muy activo y no específico de tejido, el promotor CB (promotor de p-actina de pollo potenciado por CMV) para conducir un gen indicador fácilmente detectable y cuantificable, el gen de la a-antitripsina humana. Por tanto únicamente se necesita preparar un vector para cada nuevo clon de AAV para estudios de transferencia génica que se dirigen a 3 tejidos diferentes, hígado, pulmón y músculo para explorar el tropismo tisular de una construcción de AAV particular. La siguiente tabla resume datos generados de nuevos vectores de AAV en estudios de tropismo tisular (AAVCBA1AT). La Tabla 5 indica datos obtenidos (en pg de A1AT/ml de suero) el día 14 del estudio.
Tabla 5
Se proporcionaron vectores de AAV que portaban el minigén CCIOhAIAT para la expresión específica en pulmón que se pseudotipificaron con cápsides de nuevos AAV a animales inmunodeficientes (desnudos NCR) en igual volumen (cada una de las preparaciones originales sin dilución de 50 pl) mediante inyecciones intratraqueales como se proporciona en la siguiente tabla. Los vectores también se administraron a animales inmunocompetentes (C57BL/6) en iguales copias de genoma (1 x 1011CG) como se muestra en la Tabla 6. (1 x 1011CG por animal, C57BL/6, día 14, límite de detección > 0,033 pg/ml). Como se muestra, AAV8 es el mejor transductor en hígado.
Tabla 6
Ejemplo 6 - Modelo de hipercolesterolemia
Para evaluar además el efecto de la expresión transgénica mediada por AAVr por las construcciones AAV2/8 de la invención, se realizó un estudio adicional.
A. Construcción del vector
Se construyeron vectores de AAV empaquetados con proteínas de cápside de AAV8 usando una estrategia de pseudotipificado [Hildinger M,et al., J. Viro!2001; 75: 6199-6203]. Se empaquetaron genomas de AAV recombinante con repeticiones terminales invertidas (ITR) de AAV2 mediante triple transfección de células 293 con el plásmido encis, el plásmido auxiliar de adenovirus y una construcción de empaquetamiento quimérica, una fusión de las cápsides de los nuevos serotipos de AAV con el gen rep de AAV2. El plásmido de empaquetamiento quimérico se construyó como se ha descrito anteriormente [Hildingeret al,citado anteriormente]. Los vectores recombinantes se purificaron mediante el método de sedimentación convencional con CsCl2. Para determinar el rendimiento, se realizó análisis TaqMan (Applied Biosystems) usando sondas y cebadores que se dirigían a la región poli(A) del SV40 de los vectores [Gao GP,et al., Hum Gene Ther.10 de octubre de 2000; 11(15):2079-91]. Los vectores resultantes expresan el transgén bajo el control del promotor del gen de la globulina que se une a la hormona tiroidea (TBG) humana.
B.Animales
Se adquirieron ratones deficientes en cuanto al receptor de LDL con antecedentes de C57B1/6 procedentes del laboratorio Jackson (Bar Harbor, ME, EEUU) y se mantuvieron como una colonia en reproducción. Los ratones tuvieron acceso ilimitado a agua y obtuvieron una dieta Western rica en grasa (alto % de colesterol) comenzando tres semanas antes de la inyección del vector. El día -7, así como el día 0, se obtuvo sangre mediante extracciones retroorbitales y se evaluó el perfil lipídico. Los ratones se dividieron al azar en siete grupos. El vector se inyectó mediante una inyección intraportal como se ha descrito previamente ([Chen S. J.et al., Mol Therapy2000; 2(3), 256-261]. Resumiendo, los ratones se anestesiaron con quetamina y xilazina. Se realizó una laparotomía y se expuso la vena porta. Usando una aguja de calibre 30, se inyectó la dosis apropiada de vector diluida en 100 pl de PBS directamente en la vena porta. Se aplicó presión al sitio de inyección para garantizar que se detenía el sangrado. La herida de la piel se cerró y se cubrió, y los ratones se monitorizaron detenidamente al día siguiente. Se realizaron extracciones semanales comenzando el día 14 después de la transferencia génica dirigida al hígado para medir los lípidos en sangre. Se sacrificaron dos animales de cada grupo en momentos de la semana 6 y semana 12 después de la inyección del vector para examinar el tamaño de la placa aterosclerótica, así como la expresión del receptor. Los ratones restantes se sacrificaron a la semana 20 para la medición de las placas y la determinación de la expresión del transgén.
Vector Dosis N
Grupo 1 AAV2/8-TBG-hLDLr 1 x 1012 cg 12
Grupo 2 AAV2/8-TBG-hLDLr 3 x 1011 cg 12
Grupo 3 AAV2/8-TBG-hLDLr 1 x 1011 cg 12
C. Lipoproteína en suero y análisis de la función hepática
Se obtuvieron muestras de sangre de los plexos retroorbitales después de un período de ayunas de 6 horas. El suero se separó del plasma por centrifugación. La cantidad de lipoproteínas plasmáticas y de transaminasas hepáticas en el suero se detectó usando un analizador químico clínico automatizado (ACE, Schiapparelli Biosystems, Alpha Wassermann).
D. Detección de la expresión transgénica
La expresión de receptor de LDL se evaluó mediante tinción con inmunofluorescencia y transferencia de Western. Para la transferencia de Western se homogeneizó tejido hepático congelado con tampón de lisis (Tris 20 mM, pH 7,4, NaCl 130 mM, Triton X 100 al 1 %, inhibidor completo de proteinasa, sin EDTA, Roche, Mannheim, Alemania). La concentración de proteínas se determinó usando el Kit Micro BCA Protein Assay Reagent (Pierce, Rockford, IL). Se resolvieron 40 pg de proteína en Geles Ready Tris-HCl al 4-15 % (Biorad, Hercules, CA) y se transfirieron a una membrana de nitrocelulosa (Invitrogen). Para generar anticuerpos contra el receptor de hLDL, un conejo recibió una inyección intravenosa de preparación de AdhLDLr (1 x 1013 cg). Cuatro semanas después, se obtuvo el suero del conejo y se usó para la Transferencia de Western. Se usó una dilución de 1 :100 del suero como un anticuerpo primario seguido por un anti-IgG de conejo conjugado con HRP y detección quimioluminiscente de ECL (Kit de Detección de Transferencia de Western ECL, Amersham, Arlington Heights, IL).
D. Inmunohistoquímica
Para la determinación de la expresión del receptor de LDL se realizaron análisis inmunohistoquímicos en secciones de hígado congeladas. Secciones crioestáticas de 10 um se fijaron en acetona durante 5 minutos o no se fijaron. El bloqueo se obtuvo mediante un período de incubación de 1 hora con 10 % de suero de cabra. Después, las secciones se incubaron durante una hora con el anticuerpo primario a temperatura ambiente. Se usó un anticuerpo policlonal de conejo contra LDL humano (Biomedical Technologies Inc., Stoughton, MA) siguiendo las instrucciones del fabricante. Las secciones se lavaron con PBS y se incubaron con anticuerpo contra IgG de conejo con fluoresceína diluido a 1:100 (Sigma, St. Louis, MO). Los especímenes se examinaron finalmente al microscopio de fluorescencia, Nikon Microphot F-XA. En todos los casos, tras cada incubación se realizó un lavado exhaustivo con PBS. Los controles negativos consistían en una preincubación con PBS, omisión del anticuerpo primario y sustitución del anticuerpo primario por un anticuerpo control no inmunitario del mismo isotipo. Los tres tipos de controles mencionados anteriormente se realizaron para cada experimento el mismo día.
E. Eficacia de la transferencia génica
Se obtuvo tejido de hígado después de sacrificar los ratones en los momentos indicados. El tejido se congeló inmediatamente en nitrógeno líquido y se conservó a -80 °C hasta procesamiento posterior. El ADN se extrajo del tejido de hígado usando un Mini Kit de ADN QlAamp (QIAGEN GmbH, Alemania) de acuerdo con el protocolo del fabricante. Las copias de genoma de vectores AAV en el tejido de hígado se evaluaron usando análisis Taqman usando sondas y cebadores contra la cola poli(A) de SV40 como se ha descrito anteriormente.
F. Medición de las placas ateroscleróticas
Para la cuantificación de las placas ateroscleróticas en las aortas de ratón, los ratones se anestesiaron (quetamina y xilazina al 10 %, i.p.), el tórax abierto y el sistema arterial se perfundió con solución salina tamponada con fosfato enfriada con hielo a través del ventrículo izquierdo. Después, se extrajo la aorta con cuidado, se deslizó a lo largo de la línea media ventral desde el arco aórtico hacia abajo de las arterias femorales y se fijó en formalina. Las placas ateroscleróticas ricas en lípidos se tiñeron con Sudan IV (Sigma, Alemania) y la aorta se sujetó en horizontal en una superficie de cera negra. La imagen se capturó con una cámara de video de color Sony DXC-960 MD. El área de la placa así como la superficie aórtica completa se determinaron usando el sistema Phase 3 Imaging (Media Cybernetics).
G. Eliminación de LDL marcado con I123
<Se ensayaron dos animales por grupo experimental. Se infundió un bolo de LDL marcado con I>125<(proporcionado>generosamente por Dan Rader, Upenn) lentamente a través de la vena de la cola durante un período de 30<segundos (1.000.000 de recuentos de LDL-[I>125<] diluido en 100 pl de PBS estéril/animal). En los momentos de 3>min, 30 min, 1,5 h, 3 h, 6 h después de la inyección, se obtuvo una muestra de sangre mediante el plexo retroorbital. El plasma se separó de la sangre completa y se contaron 10 pl de plasma en el contador gamma. Finalmente se calculó la tasa catabólica fraccional a partir de los datos de eliminación de lipoproteína.
H. Evaluación de la acumulación de lípidos en el hígado
Se realizó tinción con Oil Red de secciones de hígado congeladas para determinar la acumulación de lípidos. Las secciones de hígado congeladas se aclararon brevemente en agua destilada, seguido de una incubación de 2 minutos en propilenglicol absoluto. Las secciones se tiñeron después en solución de Oil Red (0,5 % en propilenglicol) durante 16 horas, seguido de la tinción por contraste con solución de hematoxilina de Mayer durante 30 segundos y se montaron en una solución gelatinosa de glicerina caliente.
Para la cuantificación del contenido de colesterol y triglicérido hepático, las secciones de hígado se homogeneizaron y se incubaron en cloroformo/metanol (2 :1 ) durante noche. Después de añadir H<2>SO<4>al 0,05 % y de centrifugar durante 10 minutos, la capa inferior de cada muestra se recogió, se dividió en dos alícuotas y se secó con nitrógeno. Para la medición de colesterol, los lípidos secos de la primera alícuota se disolvieron en Triton X-100 al 1 % en cloroformo. Una vez disueltos, la solución se secó con nitrógeno. Después de disolver los lípidos en ddH<2>O e incubar durante 30 minutos a 37 °C, la concentración de colesterol total se midió usando un Kit de Colesterol Total (Wako Diagnostics). Para la segunda alícuota los lípidos secos se disolvieron en KOH alcohólico y se incubaron a 60 °C durante 30 minutos. Después se añadió MgCl<2>1 M, seguido de incubación en hielo durante 10 minutos y centrifugación a 14.000 rpm durante 30 minutos. Finalmente, el sobrenadante se evaluó con respecto a los triglicéridos (Wako Diagnostics).
Todos los vectores pseudotipificados en una cápside de AAV2/8 redujeron el colesterol total, el LDL y los triglicéridos en comparación con el control. Estos vectores de ensayo también corrigieron el fenotipo de hipercolesterolemia de una manera dependiente de la dosis. Se observó una reducción en el área de las placas para los ratones tratados con AAV2/8 en los ratones tratados en el primer ensayo (2 meses) y se observó que el efecto persistía durante todo el experimento (6 meses).
Ejemplo 7 - Expresión del factor IX funcional y corrección de la hemofilia
A.ratones nuligénicos
La expresión del factor IX (FIX) canino funcional se evaluó en ratones con hemofilia B. Se construyeron vectores con cápsides de AAV1, AAV2, AAV5 o AAV8 para administrar la ITR en dirección 5' del AAV2 - el promotor específico de hígado [LPS] - el FIX canino - el elemento post-regulador de la hepatitis de la marmota (WPRE) - la ITR en 3' del AAV2. Los vectores se construyeron como se describe en Wanget al.,2000,Molecular Therapy2: 154-158), usando las cápsides apropiadas.
Se generaron ratones nuligénicos como se describe en Wanget al,1997.Proc. Natl. Acad. Sci.EE.UU. 94: 1156311566. Este modelo imita fielmente los fenotipos de la hemofilia B en el ser humano.
Los vectores de diferentes serotipos se administraron como una sola inyección intraportal en el hígado de ratones adultos C57B1/6 hemofílicos a una dosis de 1 x 1011 CG/ratón para los cinco serotipos diferentes y también se administró un segundo vector de AAV8 a 1 x 1010 CG/ratón. Se inyectaron al grupo de control 1 x 1011 CG de LacZ3 con TBG en AAV2/8. Cada grupo contenía 5-10 ratones macho y hembra. La sangre de los ratones se extrajo cada dos semanas después de la administración del vector.
1. ELISA
La concentración del FIX canino en el plasma de ratón se determinó mediante un ensayo ELISA específico para el factor IX canino, realizado esencialmente como se describe en Axelrolet al.,1990,Proc. Natl. Acad. Sci.EE.UU., 87: 5173-5177 con modificaciones. Se usó anti-factor IX canino de oveja (Enzyme Research Laboratories) como anticuerpo primario y anti-factor IX canino de conejo (Enzyme Research Laboratories) como anticuerpo secundario. Comenzando a las dos semanas después de la inyección, se detectaron niveles en plasma aumentados de cFIX en todos los vectores de ensayo. Los niveles aumentados se mantuvieron a niveles terapéuticos a lo largo del experimento, es decir, hasta 12 semanas. Se consideró que los niveles terapéuticos constituían un 5 % de los niveles normales, es decir, aproximadamente 250 ng/ml.
Los niveles de expresión más altos se observaron para el AAV2/8 (a 1011), con niveles cFIX superfisiológicos sostenidos (diez veces más altos que los niveles normales). Los niveles de expresión para AAV2/8 (1011) resultaron ser aproximadamente 10 veces más altos que los observados para AAV2/2 y AAV2/8 (1010). Los niveles de expresión más bajos, aunque aún por encima del intervalo terapéutico, se observaron para AAV2/5.
2.Ensayo in vitro de tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPa)
La actividad del factor IX funcional en plasma de los ratones nuligénicos para FIX se determinó mediante un ensayoin vitrode tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPa). Se recogieron muestras de sangre de ratón del plexo retroorbital en un volumen de 1/10 de tampón citrato. El ensayo de TTPa se realizó como describen Wanget al,1997,Proc. Natl. Acad. Sci.EE.UU. 94: 11563-11566.
Los tiempos de coagulación mediante el TTPa en muestras de plasma de todos los ratones inyectados con el vector, estaban dentro del intervalo normal (aproximadamente 60 s) cuando se midieron dos semanas después de la inyección, y los tiempos de coagulación se mantuvieron en el intervalo normal o más corto que el intervalo normal a lo largo del estudio (12 semanas).
Se observaron tiempos de coagulación mantenidos más bajos en los animales que recibieron AAV2/8 (1011). A la semana 12, el AAV2/2 también indujo tiempos de coagulación similares a los de AAV2/8. Sin embargo, este tiempo de coagulación más bajo no se observó para AAV2/2 hasta la semana 12, mientras que se observaron tiempos de coagulación más bajos (en el Intervalo de 25 a 40 ) para AAV2/8 comenzando a la semana dos.
La tinción inmunohistoquímica de los tejidos del hígado extraídos de algunos de los ratones tratados se realiza del modo habitual. Aproximadamente el 70-80 % de los hepatocitos se tiñeron positivos para el FIX canino en el ratón inyectado con el vector AAV2/8.cFIX.
B.Perros con hemofilia B
Los perros que tienen una mutación puntual en el dominio catalítico del gen F.IX que, basándose en estudios de modelización, parece volver inestable a la proteína, padecen hemofilia B [Evanset al,1989,Proc. Natl. Acad. Sci.EE.UU., 86: 10095-10099). Durante más de dos décadas, se ha mantenido una colonia de estos perros en la Universidad de Carolina del Norte, Chapel Hill. Los parámetros homeostáticos de estos perros se describen bien y se incluye la ausencia de antígeno F.IX en plasma, tiempos de coagulación de sangre entera en exceso de 60 minutos, mientras que en los perros normales es de 6-8 minutos, y tiempo de tromboplastina parcial activado prolongado, de 50-80 segundos, mientras que en los perros normales es de 13-28 segundos. Estos perros experimentan hemorragias espontáneas recurrentes. Por lo general, los episodios de sangrado significativos se controlaron satisfactoriamente a través de una infusión intravenosa simple de 10 ml/kg de plasma canino normal; ocasionalmente, se requieren infusiones repetidas para controlar el sangrado.
Cuatro perros recibieron mediante inyección intraportal VAA.cFIX de acuerdo con el siguiente programa. Un primer perro recibió una sola inyección de VAA2/2.cFIX a una dosis de 3,7 x 1011 copias de genoma (CG)/kg y se sacrificó el día 665 debido a una hemorragia espinal grave. Un segundo perro recibió una primera inyección de VAA2/2.cFIX (2,8 x 1011CG/kg), seguido de una segunda inyección de VAA2/2.cFIX (2,3 x 1013 CG/kg) el día 1180. Un tercer perro recibió una sola inyección de VAA2/2.cFIX a una dosis de 4,6 x 1012 CG/kg. El cuarto perro recibió una inyección de VAA2/2.cFIX (2,8 x 1012CG/kg) y una inyección el día 995 de VAA2/8.cFIX (5 x 1012 CG/kg).
El abdomen de los perros con hemofilia se abrió aséptica y quirúrgicamente con anestesia general y se administró una sola infusión de vector en la vena porta. Los animales se protegieron de la hemorragia en el período perioperatorio mediante administración intravenosa de plasma canino normal. El perro se sedó, se entubó para inducir la anestesia general, y se rasuró el abdomen y se preparó. Después de abrir el abdomen, se extirpó el bazo en el campo operativo. Se localizó la vena esplénica y se colocó una sutura holgada próxima a la incisión distal pequeña en la vena. Rápidamente, se introdujo en la vena un globo de catéter, después se aflojó la sutura y se enroscó una cánula de 5 F en una localización intravenosa cerca de la vena porta roscada en una localización intravenosa cerca de la bifurcación de la vena porta. Después, se aseguró la hemostasis y se infló el globo del catéter, aproximadamente 5,0 ml de vector diluido en PBS se infundió en la vena porta durante un intervalo de 5 minutos. Después de la infusión del vector se infundieron 5,0 ml de solución salina. A continuación se desinfló el globo, se extrajo la cánula y se aseguró la hemostasis venosa. Después, se reemplazó el bazo, se cauterizaron los vasos sangrantes y se cerró la herida quirúrgica. El tubo se extrajo del animal que había tolerado bien el procedimiento quirúrgico. Las muestras de sangre se analizaron como se describe. [Wanget al.,2000,Molecular Therapy2: 154-158].
Los resultados se resumen en la siguiente tabla. El perro hembra C51, pesaba 13,6 kg y tenía 6,5 meses de vida en el momento de la primera inyección. El perro macho C52, pesaba 17,6 kg y tenía 6,5 meses de vida en la primera inyección; y 17,2 kg y 45,2 meses en la segunda inyección. El perro macho C55, tenía un peso de 19,0 kg y 12,0 meses en la primera inyección. El perro hembra D39 pesada 5,0 kg y tenía 2,8 meses en la primera inyección; 22,6 kg y 35,4 meses de vida en el momento de la segunda inyección. En la tabla, CG se refiere a las copias de genoma de los vectores de AAV. El TCST, fue mayor de 60 minutos (excepto en C52 que fue de 42 minutos) antes de la inyección. El TTPa inicial para C51 fue = 98,4 s, para C52 = 97,7 s; para C55 = 145,1 s y para D39 = 97,8 s. Los sangrados después del tratamiento eran episodios de sangrado espontáneos que se producían en perros con hemofilia B después del tratamiento con el vector de AAV que requerían tratamiento con infusión de plasma.
1.Tiempo de coagulación de sangre total (TCST)
El TCST después de inyección con los vectores AAV2/2 era algo variable, oscilando de aproximadamente 6,5 min a 30 min. El TCST para un perro normal es de 6-12 min. Se observaron descensos bruscos en el TCST inmediatamente después de la inyección de los vectores AAV2/8 o AAV2/5. También se observó un descenso brusco en el perro C55 inyectado con AAV2 (d2 = 9 min), y para C51 y C52, los puntos de datos iniciales para el TCST no se comprobaron. Se piensa que el descenso brusco se debe a la infusión de plasma de perro antes y después de la cirugía. El TCST es un ensayo muy sensible a nivel bajo de FIX, no es muy sensible a nivel real de FIX (elTTPaes más relevante).
2.Ensayo de TTPa
Los tiempos de coagulación mediante unTTPaen muestras de plasma de todos los perros inyectados con vectores fueron variables durante los primeros aproximadamente 700 días, momento en el que los tiempos de coagulación se igualaron al intervalo normal (40 - 60 s, perro normal: 24-32 s). Se observó un descenso brusco en el intervalo normal después de cada una de las segundas inyecciones (AAV2/8 o AAV2/5). Aunque los tiempos de coagulación no se mantuvieron en el intervalo normal, los tiempos de coagulación se redujeron a niveles por debajo de los observados antes de la segunda inyección.
ElTTPaen perros normales era de 24-32 s y en los perros con hemofilia B era de 80-106 segundos. Para los perros C51 y C52, que recibieron una dosis baja de vector AAV2.cFIX, elTTPapromedio después del tratamiento permaneció a 77,5 y 81,5 segundos, sin diferencia significativa con respectos a los perros con hemofilia B sin tratamiento. Una dosis mayor de AAV2 mejoró elTTPapromedio a 59,1 y 46,4 segundos, respectivamente para el perro D39 y el C55. Después del tratamiento con AAV2/5, elTTPapromedio para el perro C52 mejoró significativamente de 81,5 a 41,9 segundos. Y para el perro D39, después del tratamiento con AAV2/8, elTTPapromedio mejora desde 59,1 segundos.
3. ELISA del factor IX canino
Los niveles del cFIX resultaron ser detectables después del primer conjunto de inyecciones, aunque por debajo de los niveles terapéuticos. Después de la inyección de AAV2/8 y AAV2/5, los niveles de cFIX se dispararon en el intervalo terapéutico y después se igualaron dentro del intervalo terapéutico (lo normal es de 5 pg/ml en plasma, el nivel terapéutico es el 5 % del nivel normal que es de 250 ng/ml).
Las tres primeras semanas de TCST, el TTPa y el antígeno cFIX se vieron afectados por la infusión del plasma de perro antes y después de la cirugía. Es complicado llegar a la conclusión de que el descenso del tiempo de coagulación o el aumento del nivel de antígeno cFIX se deba al vector o a la infusión de plasma durante las 3 primeras semanas. Sin embargo, es interesante observar que se produce un aumento rápido y drástico del antígeno cFIX después de la inyección del vector 2/5 y 2/8. Esto es único para los perros inyectados con AAV2/5 y 2/8, y podría atribuirse a los vectores AAV2/5 y 2/8, más que a la infusión de plasma de perro normal, ya que todos los perros recibieron una cantidad similar de infusión de plasma de perro normal para la cirugía. Tres días después de la inyección de AAV2/8, el nivel de cFIX en el plasma del perro D39 alcanzó 9,5 pg/ml y ascendió a 10,4 pg/ml el día 6, tanto como el doble del nivel normal (5 pg/ml). El nivel de cFIX disminuyó gradualmente al promedio de 817 ng/ml (C52, AAV2/5) y de 657 ng/ml (D39, AAV2/8). En el perro C52, 3 días después de la inyección del vector AAV2/5, el nivel de cFIX alcanzó 2,6pg/ml y ascendió a 4,6 pg/ml el día 7. En el perro C55, que recibió el vector AAV2 a una dosis similar a la del perro D39 inyectado con AAV2/8, ascendió solo a 2,2 pg/ml el día 3, disminuyendo gradualmente después y se mantuvo al 5 % del nivel normal de cFIX.
Las dosis del vector que recibió el perro C55 (AAV2, 4,6 x 102 CG/kg) y la segunda inyección en el perro D39 (AAV2/8, 5 x 1012CG/kg) eran muy parecidas. Sin embargo, los niveles de expresión de cFIX aumentados en D39 por el vector AAV2/8 (promedio 657-34 = 623 ng/ml, 12,5 % del nivel normal) eran 2,5 veces más altos que los de C55 (promedio 259 ng/ml, 5 % del nivel normal). Esto sugiere que AAV2/8 es 2,5 veces más fuerte que AAV2 en perros inyectados por vía intraportal con una dosis similar de vectores. Y en el mismo perro D39, la segunda inyección de dosis dos veces mayores de AAV2/8 aumentó drásticamente el nivel de cFIX del 0,7 % al 13,1 %, 18,7 veces más alto que la primera inyección. Y en C52, la segunda inyección de 2,3 x 1013 CG/ml de vector AAV2/5 dio como resultado un promedio de 817 ng/ml (16,3 % del nivel normal) de cFIX en el plasma. Esto era solo ligeramente más alto (1,3 veces) que el nivel de cFIX aumentado en D39 mediante AAV2/8 (promedio de 623 ng/ml, 12,5 % del nivel normal). Sin embargo, la dosis de AAV2/5 inyectada en el perro C52 fue 4,6 veces más alta que la dosis de AAV2/8 inyectado en el perro D39. Esto sugiere que el vector AAV2/8 también es más fuerte que el vector AAV2/5 en perros.
La primera inyección de vectores AAV2 no bloqueó el éxito de la transducción con los vectores AAV2/5 y AAV2/8 después de la segunda inyección en perros. La readministración usando un serotipo diferente de vector de AAV puede usarse como una estrategia para tratar animales o seres humanos que previamente se han expuesto a AAV2 o que se han tratado con vectores de AAV2.
Ejemplo 8 - Modelo de ratón de trastorno enzimático de hígado
El vector AAV2/8 generado como se describe en el presente documento se estudió para determinar su eficacia en la transferencia del gen enzimático hepático ornitina transcarbamilasa (OTC) en un modelo animal aceptado de insuficiencia de OTC [X. Yeet al, Pediatric Research,41(4): 527-534 (1997); X. Yeet al, J. Biol. Chem.,271(7): 3639-3646 (febrero de1996)]. Los resultados de este experimento (datos no mostrados) demuestran que se observó que un vector de AAV2/8 de la invención, que portaba el gen de la ornitina transcarbamilasa (OTC), corregía la insuficiencia de OTC.
Aunque la invención se ha descrito con referencia a realizaciones particularmente preferidas, se apreciará que pueden realizarse modificaciones dentro del alcance de las reivindicaciones.
Claims (29)
1. Un vector de virus adenoasociado (AAV) que comprende una cápside de AAV que comprende al menos una proteína de cápside vp3 del AAV8 codificada por los nucleótidos 2730 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma, teniendo dicha cápside empaquetado en su interior un minigén que tiene repeticiones terminales invertidas de AAV y un gen heterólogo unido operativamente a secuencias reguladoras que dirigen su expresión en una célula hospedadora.
2. El AAV de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la cápside de AAV comprende al menos una proteína de cápside vp2 de AAV (a) que comprende los aminoácidos 138 a 738 de la SEQ ID NO: 2 o (b) codificada por los nucleótidos 2532 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma.
3. El AAV de acuerdo con la reivindicación 1, en donde la cápside de AAV comprende al menos una proteína de cápside vp1 del AAV8 (a) que comprende los aminoácidos 1 a 738 de la SEQ ID NO: 2 o (b) codificada por los nucleótidos 2121 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma.
4. Un vector de virus adenoasociado (AAV) que comprende una cápside de AAV que comprende al menos una proteína de cápside vp1 del AAV8 (a) que comprende los aminoácidos 1 a 738 de la SEQ ID NO: 2 (AAV8) o (b) codificada por los nucleótidos 2121 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma, teniendo dicha cápside empaquetado en su interior un minigén que tiene repeticiones terminales invertidas de AAV y un gen heterólogo unido operativamente a secuencias reguladoras que dirigen su expresión en una célula hospedadora.
5. El AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde la cápside de AAV comprende una proteína codificada por una secuencia de ácido nucleico seleccionada del grupo que consiste en:
vp1, nt 2121 a 4337;
vp2, nt 2532 a 4337; y
vp3, nt 2730 a 4337;
en donde los números de nucleótidos son de AAV8, SEQ ID NO: 1 (AAV8).
6. El AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el AAV se produce de forma recombinante.
7. El AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, en donde las repeticiones terminales invertidas son de un AAV distinto del AAV8, proporcionando así un AAV pseudotipado.
8. El AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde los elementos de control de la expresión comprenden un promotor específico del tejido.
9. El AAV de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el promotor específico del tejido es un promotor específico del hígado.
10. Un método para generar un virus adenoasociado recombinante (AAV) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 que comprende una cápside de serotipo de AAV que comprende las etapas de cultivar una célula hospedadora que contiene: (i) una molécula que codifica una cápside de AAV que comprende al menos una proteína de cápside vp1 del AAV8 (a) que comprende los aminoácidos 1 a 738 de la SEQ ID NO: 2 (AAV8) o (b) codificada por los nucleótidos 2121 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma; (ii) un genrepfuncional; (iii) un minigén que comprende repeticiones terminales invertidas (ITR) de AAV y un gen heterólogo; y (iv) suficientes funciones auxiliares para permitir el empaquetamiento del minigén en la proteína de cápside de AAV.
11. El método para generar un virus adenoasociado recombinante (AAV) de acuerdo con la reivindicación 10, en donde la molécula que codifica una cápside de AAV comprende al menos una proteína de cápside vp2 del AAV8 (a) que comprende los aminoácidos 138 a 738 de la SEQ ID NO: 2 o (b) codificada por los nucleótidos 2532 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma.
12. El método para generar un virus adenoasociado recombinante (AAV) de acuerdo con la reivindicación 10 u 11, en donde la molécula que codifica una cápside de AAV comprende al menos una proteína de cápside vp3 del AAV8 (a) que comprende los aminoácidos 204 a 738 de la SEQ ID NO: 2 o (b) codificada por los nucleótidos 2730 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos al menos un 99 % idéntica a la misma.13
13. El método de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 10 a 12, en donde el genrepfuncional codifica una proteína rep del AAV8 o un fragmento de la misma seleccionado del grupo que consiste en:
de aa 1 a 625; de aa 1 a 102; de aa 103 a 140; de aa 141 a 173; de aa 174 a 226; de aa 227 a 275; de aa 276 a 374; de aa 375 a 383; de aa 384 a 446; de aa 447 a 542; de aa 543 a 555; y de aa 556 a 625, de la SEQ ID NO: 3.
14. Una célula hospedadora de empaquetamiento útil para generar un virus adenoasociado (AAV) de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, conteniendo dicha célula hospedadora: una molécula que codifica una proteína de cápside de AAV que tiene una proteína de cápside vp3 del AAV8 codificada por los nucleótidos 2730 a 4337 de la SEQ ID NO: 1 o una secuencia de nucleótidos idéntica en al menos un 99 % a la misma; un minigén que tiene repeticiones terminales invertidas de AAV y un gen heterólogo unido operativamente a secuencias reguladoras que dirigen su expresión en una célula hospedadora; y un genrepfuncional.
15. Una célula hospedadora en cultivo que contiene un virus adenoasociado de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.
16. Una composición que comprende al menos un AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5 a 9 y un portador fisiológicamente compatible.
17. Una composición que comprende al menos un vector de virus adenoasociado (AAV) de acuerdo con la reivindicación 1 y un portador fisiológicamente compatible.
18. Una composición que comprende al menos un vector de virus adenoasociado (AAV) de acuerdo con la reivindicación 4 y un portador fisiológicamente compatible.
19. Un virus adenoasociado (AAV) de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 o una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18, para usar en el suministro de un gen heterólogo a una célula.
20. El AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 o el AAV para el uso de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el gen heterólogo se selecciona del grupo que consiste en una secuencia de Factor VIII y una secuencia de alfa-1 antitripsina.
21. El AAV, una composición de acuerdo con la reivindicación 20 o el AAV para el uso de acuerdo con la reivindicación 20, en donde el gen heterólogo es una secuencia de Factor VIII.
22. El AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 o el AAV para el uso de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el gen heterólogo codifica el Factor IX.
23. El AAV, la composición o el AAV para el uso de acuerdo con la reivindicación 22, en donde el gen heterólogo codifica el Factor IX y el AAV es para usar en el tratamiento de la hemofilia.
24. El AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 o el AAV para el uso de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el gen heterólogo codifica una inmunoglobulina, un anticuerpo quimérico, un anticuerpo humanizado o un anticuerpo monocatenario.
25. El AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 o el AAV para el uso de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el gen heterólogo codifica una ornitina transcarbamilasa (OTC).
26. El AAV, la composición o el AAV para el uso de acuerdo con la reivindicación 25, en donde el gen heterólogo codifica una OTC y el AAV es para usar en el tratamiento de la deficiencia de OTC.
27. El AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 o el AAV para el uso de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el gen heterólogo codifica un receptor de lipoproteínas de baja densidad (LDLr).
28. El AAV, la composición o el AAV para el uso de acuerdo con la reivindicación 27, en donde el gen heterólogo codifica un receptor de lipoproteínas de baja densidad (LDLr) y el AAV es para usar en el tratamiento de la hipercolesterolemia.
29. El AAV de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9, una composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 16 a 18 o el AAV para el uso de acuerdo con la reivindicación 19, en donde el gen heterólogo codifica insulina, glucagón, hormona del crecimiento (GH), hormona paratiroidea (PTH), factor de liberación de la hormona del crecimiento (GRF), hormona foliculoestimulante (FSH), hormona luteinizante (LH), gonadotropina coriónica humana (hCG), factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), una angiopoyetina, una angiostatina, factor estimulante de colonias de granulocitos (GCSF), eritropoyetina (EPO), factor de crecimiento del tejido conectivo (CTGF), factor básico de crecimiento de fibroblastos (bFGF), factor ácido de crecimiento de fibroblastos (aFGF), factor de crecimiento epidérmico (EGF), factor de crecimiento derivado de las plaquetas (PDGF), factor de crecimiento de la insulina I (IGF-I) y factor de crecimiento de la insulina II (IGF-II), TGFa, una activina, una inhibina, proteínas morfogénicas óseas (BMP) 1 a 15, un factor de diferenciación de heregluina/neuregulina/ARIA/neu (NDF), factor de crecimiento nervioso (NGF), factor neurotrófico derivado del cerebro (BDNF), neurotrofina NT3, neurotrofina NT-4/5, factor neurotrófico ciliar (CNTF), factor neurotrófico derivado de estirpe celular glial (GDNF), neurturina, agrina, una semaforina/colapsina, netrina-1, netrina- 2, factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), una efrina, nogina, erizo sónico, tirosina hidroxilasa, interleucinas (IL) 1 a 18, proteína quimioatrayente de monocitos, factor inhibidor de la leucemia, factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos, ligando Fas, factores de necrosis tumoral a y p, interferones a, p y<y>, factor de células madre, ligando flk-2/flt3, una proteína reguladora del complemento, proteína de cofactor de membrana (MCP), factor acelerador de putrefacción (DAF), CR1, CF2, CD59, una hormona, un factor de crecimiento, una citocina, una linfocina, un receptor de glucocorticoides, un receptor de estrógenos, un receptor de vitamina D, jun, fos, max, mad, factor de respuesta sérica (SRF), AP-1, AP2, myb, MyoD, miogenina, una proteína que contiene la caja ETS, TFE3, E2F, ATF1, ATF2, ATF3, ATF4, ZF5, NFAT, Cr EB, h Nf -4, C/Eb P, SP1, una proteína de unión a la caja CCAAT, factor de regulación del interferón (IRF-1), proteína del tumor de Wilms, una proteína de unión a la caja ETS, STAT, una proteína de unión a la caja GATA, una proteína de hélice alada de la familia forkhead, carbamoil sintetasa I, ornitina transcarbamilasa, arginosuccinato sintetasa, argino-succinato liasa, arginasa, fumariltacetato hidrolasa, fenilalanina hidroxilasa, glucosa-6-fosfatasa, porfobilinógeno desaminasa, cistatión beta-sintasa, cetoamidas de cadena ramificada descarboxilasa, albúmina, isovaleril-coA deshidrogenasa, propionil COA carboxilasa, metil malonil COA mutasa, glutaril COA deshidrogenasa, beta-glucosidasa, piruvato carboxilato, fosforilasa hepática, fosforilasa cinasa, glicina descarboxilasa, proteína H, proteína T, una secuencia del regulador transmembrana de la fibrosis quística (CFTR) o una secuencia de ADNc de la distrofina.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US34115101P | 2001-12-17 | 2001-12-17 | |
US37713302P | 2002-05-01 | 2002-05-01 | |
US38612202P | 2002-06-05 | 2002-06-05 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
ES2975413T3 true ES2975413T3 (es) | 2024-07-05 |
Family
ID=27407443
Family Applications (3)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES10189725T Expired - Lifetime ES2717377T3 (es) | 2001-12-17 | 2002-11-12 | Secuencias de serotipo 8 de virus adeno-asociado (AAV), vectores que las contienen y usos de las mismas |
ES18212719T Expired - Lifetime ES2975413T3 (es) | 2001-12-17 | 2002-11-12 | Secuencias de serotipo 8 de virus adenoasociado (AAV), vectores que las contienen y usos de las mismas |
ES02795539.2T Expired - Lifetime ES2602352T3 (es) | 2001-12-17 | 2002-11-12 | Secuencias de serotipo 8 de virus adenoasociado (VAA), vectores que las contienen y usos de las mismas |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES10189725T Expired - Lifetime ES2717377T3 (es) | 2001-12-17 | 2002-11-12 | Secuencias de serotipo 8 de virus adeno-asociado (AAV), vectores que las contienen y usos de las mismas |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
ES02795539.2T Expired - Lifetime ES2602352T3 (es) | 2001-12-17 | 2002-11-12 | Secuencias de serotipo 8 de virus adenoasociado (VAA), vectores que las contienen y usos de las mismas |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (15) | US7282199B2 (es) |
EP (3) | EP1453547B1 (es) |
JP (2) | JP4810062B2 (es) |
AU (1) | AU2002360291A1 (es) |
CA (1) | CA2469785C (es) |
CY (2) | CY1120162T1 (es) |
DK (2) | DK1453547T3 (es) |
ES (3) | ES2717377T3 (es) |
FI (1) | FI3517134T3 (es) |
PT (2) | PT1453547T (es) |
WO (1) | WO2003052051A2 (es) |
Families Citing this family (414)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0932694A2 (en) | 1996-09-11 | 1999-08-04 | THE UNITED STATES GOVERNMENT as represented by THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Aav4 vector and uses thereof |
WO1999061601A2 (en) * | 1998-05-28 | 1999-12-02 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Aav5 vector and uses thereof |
JP2004538005A (ja) | 2001-08-08 | 2004-12-24 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | シアル酸に結合するタンパク質を有するウイルスベクターの精製法 |
NZ532635A (en) | 2001-11-13 | 2007-05-31 | Univ Pennsylvania | A method of identifying unknown adeno-associated virus (AAV) sequences and a kit for the method |
AU2013202568B2 (en) * | 2001-11-13 | 2015-09-17 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus rh.8 (AAVrh.8) sequences and recombinant AAVs comprising same |
PT1453547T (pt) | 2001-12-17 | 2016-12-28 | Univ Pennsylvania | Sequências do vírus adeno-associado (aav) do serotipo 8, vetores contendo as mesmas, e utilizações destas |
AU2002359284A1 (en) * | 2001-12-17 | 2003-06-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus (aav) serotype 9 sequences, vectors containing same, and uses therefor |
US7419817B2 (en) * | 2002-05-17 | 2008-09-02 | The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services, Nih. | Scalable purification of AAV2, AAV4 or AAV5 using ion-exchange chromatography |
AU2003304396A1 (en) * | 2002-06-28 | 2005-02-25 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Raav compositions and methods for delivery of human factor vii polypeptides and treatment of hemophilia a |
WO2004108922A2 (en) * | 2003-04-25 | 2004-12-16 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Use of aav comprising a capsid protein from aav7 or aav8 for the delivery of genes encoding apoprotein a or e genes to the liver |
US8927269B2 (en) | 2003-05-19 | 2015-01-06 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Avian adenoassociated virus and uses thereof |
WO2004110483A1 (en) * | 2003-05-31 | 2004-12-23 | Yiyou Chen | Method and composition of a novel vaccine design for the prevention and treatment of sars |
US7186699B2 (en) * | 2003-06-03 | 2007-03-06 | Cell Genesys, Inc. | Method for treating cancer by vector-mediated delivery of one or more anti-angiogenic or pro-apoptotic genes |
DK2292780T3 (en) | 2003-09-30 | 2017-12-04 | Univ Pennsylvania | Clades and sequences of adeno-associated virus (AAV), vectors containing them, and uses thereof |
WO2005049850A2 (en) | 2003-11-14 | 2005-06-02 | University Of Washington | Compositions and methods for systemic nucleic acid sequence delivery |
WO2005056807A2 (en) | 2003-12-04 | 2005-06-23 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, National Institutes Of Health | Bovine adeno-associated viral (baav) vector and uses thereof |
WO2005077333A2 (en) * | 2004-02-10 | 2005-08-25 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Gel-based delivery of recombinant adeno-associated virus vectors |
DE602005026269D1 (de) | 2004-04-28 | 2011-03-24 | Univ Pennsylvania | Sequenzielle freisetzung immunogener moleküle über adenoviren und adeno-assoziierte viren vermittelte abgaben |
CA2563500C (en) | 2004-04-28 | 2016-06-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Immunization regimen with e4-deleted adenovirus prime and e1-deleted adenovirus boost |
CA2567741A1 (en) * | 2004-05-25 | 2006-03-30 | Chimeracore, Inc. | Self-assembling nanoparticle drug delivery system |
US20080188431A1 (en) * | 2004-09-08 | 2008-08-07 | Chiorini John A | Transcytosis of Adeno-Associated Viruses |
WO2006119432A2 (en) * | 2005-04-29 | 2006-11-09 | The Government Of The U.S.A., As Rep. By The Sec., Dept. Of Health & Human Services | Isolation, cloning and characterization of new adeno-associated virus (aav) serotypes |
EP1879624B1 (en) | 2005-05-02 | 2011-09-21 | Genzyme Corporation | Gene therapy for neurometabolic disorders |
ES2394482T3 (es) * | 2005-05-02 | 2013-02-01 | Genzyme Corporation | Terapia génica para trastornos de la médula espinal |
EP2007795B1 (en) * | 2006-03-30 | 2016-11-16 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Aav capsid proteins |
ATE460922T1 (de) * | 2006-04-07 | 2010-04-15 | Chimeros Inc | Zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von b-zellen-malignomen |
CN101528916B (zh) | 2006-04-28 | 2013-09-04 | 宾夕法尼亚大学托管会 | 规模可调的aav生产方法 |
JP2009535339A (ja) * | 2006-04-28 | 2009-10-01 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | 低下されたキャプシド免疫原性を有する改変aavベクターおよびその使用 |
US20090226525A1 (en) * | 2007-04-09 | 2009-09-10 | Chimeros Inc. | Self-assembling nanoparticle drug delivery system |
US9217155B2 (en) * | 2008-05-28 | 2015-12-22 | University Of Massachusetts | Isolation of novel AAV'S and uses thereof |
US8263601B2 (en) | 2009-02-27 | 2012-09-11 | Concert Pharmaceuticals, Inc. | Deuterium substituted xanthine derivatives |
WO2010120874A2 (en) | 2009-04-14 | 2010-10-21 | Chimeros, Inc. | Chimeric therapeutics, compositions, and methods for using same |
US8734809B2 (en) | 2009-05-28 | 2014-05-27 | University Of Massachusetts | AAV's and uses thereof |
WO2011032100A1 (en) | 2009-09-11 | 2011-03-17 | Government Of The U.S.A., As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Inhibitors of kshv vil6 and human il6 |
WO2011041502A1 (en) | 2009-10-01 | 2011-04-07 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Aav vectors expressing sec1o for treating kidney damage |
SG183929A1 (en) | 2010-03-29 | 2012-10-30 | Univ Pennsylvania | Pharmacologically induced transgene ablation system |
US9315825B2 (en) | 2010-03-29 | 2016-04-19 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Pharmacologically induced transgene ablation system |
WO2011133901A2 (en) | 2010-04-23 | 2011-10-27 | University Of Massachusetts | Aav-based treatment of cholesterol-related disorders |
CA3050894C (en) | 2010-04-23 | 2022-10-18 | University Of Massachusetts | Multicistronic expression constructs |
EP2826860B1 (en) | 2010-04-23 | 2018-08-22 | University of Massachusetts | CNS targeting AAV vectors and methods of use thereof |
WO2012007458A1 (en) | 2010-07-12 | 2012-01-19 | Universidad Autónoma De Barcelona | Gene therapy composition for use in diabetes treatment |
US8853377B2 (en) * | 2010-11-30 | 2014-10-07 | Shire Human Genetic Therapies, Inc. | mRNA for use in treatment of human genetic diseases |
EP2675484B1 (en) | 2011-02-14 | 2018-05-30 | The Children's Hospital of Philadelphia | Improved aav8 vector with enhanced functional activity and methods of use thereof |
EP3699286A1 (en) | 2011-04-20 | 2020-08-26 | The Trustees of the University of Pennsylvania | Regimens and compositions for aav-mediated passive immunization of airborne pathogens |
CA2834619A1 (en) | 2011-04-29 | 2012-11-01 | Selecta Biosciences, Inc. | Controlled release of immunosuppressants from synthetic nanocarriers |
CA2847888A1 (en) | 2011-09-09 | 2013-03-14 | Biomed Realty, L.P. | Methods and compositions for controlling assembly of viral proteins |
CN110777124A (zh) | 2011-10-27 | 2020-02-11 | 威尔斯达眼科制剂公司 | 编码视杆细胞来源的视锥细胞活力因子的载体 |
US9434928B2 (en) | 2011-11-23 | 2016-09-06 | Nationwide Children's Hospital, Inc. | Recombinant adeno-associated virus delivery of alpha-sarcoglycan polynucleotides |
WO2013123094A2 (en) * | 2012-02-14 | 2013-08-22 | The Regents Of The University Of California | Systemic delivery and regulated expression of paracrine genes for cardiovascular diseases and other conditions |
JP5926580B2 (ja) | 2012-03-01 | 2016-05-25 | ユー・ディー・シー アイルランド リミテッド | 有機電界発光素子、有機電界発光素子用材料、並びに、該素子を用いた発光装置、表示装置、照明装置及び該素子に用いられる化合物 |
EP2872183B1 (en) | 2012-07-11 | 2018-09-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Aav-mediated gene therapy for rpgr x-linked retinal degeneration |
EP2692868A1 (en) | 2012-08-02 | 2014-02-05 | Universitat Autònoma De Barcelona | Adeno-associated viral (AAV) vectors useful for transducing adipose tissue |
AU2013323270B2 (en) * | 2012-09-28 | 2017-09-28 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | AAV vectors targeted to oligodendrocytes |
US10266845B2 (en) | 2013-02-08 | 2019-04-23 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Enhanced AAV-mediated gene transfer for retinal therapies |
EP2954051B1 (en) | 2013-02-08 | 2019-03-27 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Modified aav8 capsid for gene transfer for retinal therapies |
FI2956477T4 (fi) | 2013-02-15 | 2024-04-24 | Bioverativ Therapeutics Inc | Optimoitu tekijä viii:n geeni |
US8957044B2 (en) | 2013-03-01 | 2015-02-17 | Wake Forest University Health Sciences | Systemic gene replacement therapy for treatment of X-linked myotubular myopathy (XLMTM) |
MX2015012739A (es) * | 2013-03-15 | 2016-02-19 | Univ Pennsylvania | Composiciones y metodos para tratar la mucopolisacaridosis tipo 1. |
KR102413498B1 (ko) | 2013-04-20 | 2022-06-24 | 더 리서치 인스티튜트 앳 네이션와이드 칠드런스 하스피탈 | 엑손 2-표적 U7snRNA 폴리뉴클레오티드 작제물의 재조합형 아데노 부속 바이러스 전달 |
WO2015012924A2 (en) | 2013-04-29 | 2015-01-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Tissue preferential codon modified expression cassettes, vectors containing same, and use thereof |
HUE047996T2 (hu) * | 2013-07-22 | 2020-05-28 | Childrens Hospital Philadelphia | AAV variáns és készítmények, eljárások és alkalmazások sejtekbe, szervekbe és szövetekbe történõ géntranszferhez |
AU2015217208B2 (en) * | 2014-02-11 | 2018-08-30 | The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate | CRISPR enabled multiplexed genome engineering |
GB201403684D0 (en) | 2014-03-03 | 2014-04-16 | King S College London | Vector |
US9890365B2 (en) | 2014-03-09 | 2018-02-13 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions useful in treatment of ornithine transcarbamylase (OTC) deficiency |
EP2933335A1 (en) | 2014-04-18 | 2015-10-21 | Genethon | A method of treating peripheral neuropathies and motor neuron diseases |
WO2015164723A1 (en) | 2014-04-25 | 2015-10-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and compositions for treating metastatic breast cancer and other cancers in the brain |
BR112016024379A2 (pt) | 2014-04-25 | 2017-10-10 | Univ Pennsylvania | variantes ldlr e seu uso em composições para reduzir os níveis de colesterol |
CA2947614C (en) | 2014-05-13 | 2023-10-03 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions comprising aav expressing dual antibody constructs and uses thereof |
WO2015191508A1 (en) | 2014-06-09 | 2015-12-17 | Voyager Therapeutics, Inc. | Chimeric capsids |
EP2960336A1 (en) | 2014-06-27 | 2015-12-30 | Genethon | Efficient systemic treatment of dystrophic muscle pathologies |
EP3160478A4 (en) | 2014-06-30 | 2018-05-16 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Optimized factor ix gene |
EP2975116B1 (en) * | 2014-07-16 | 2019-08-21 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin | Tgif2-induced reprogramming of hepatic cells to pancreatic progenitor cells and medical uses thereof |
WO2016025339A2 (en) | 2014-08-09 | 2016-02-18 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Methods and materials for activating an internal ribosome entry site in exon 5 of the dmd gene |
US10046064B2 (en) | 2014-09-07 | 2018-08-14 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions for attenuating exon skipping anti-viral transfer vector immune responses |
EP3194430A1 (en) * | 2014-09-16 | 2017-07-26 | Universitat Autònoma De Barcelona | Adeno-associated viral vectors for the gene therapy of metabolic diseases |
US10370432B2 (en) | 2014-10-03 | 2019-08-06 | University Of Massachusetts | Heterologous targeting peptide grafted AAVS |
EP3200830B1 (en) * | 2014-10-03 | 2020-09-09 | University of Massachusetts | High efficiency library-identified aav vectors |
BR112017007737A2 (pt) | 2014-10-21 | 2018-01-30 | Univ Massachusetts | variantes de aav recombinantes e usos das mesmas |
CN107106689A (zh) | 2014-11-05 | 2017-08-29 | 沃雅戈治疗公司 | 用于治疗帕金森病的aadc多核苷酸 |
SG11201703419UA (en) | 2014-11-14 | 2017-05-30 | Voyager Therapeutics Inc | Modulatory polynucleotides |
MX2017006216A (es) | 2014-11-14 | 2018-08-29 | Voyager Therapeutics Inc | Composiciones y métodos para tratar la esclerosis lateral amiotrófica (ela). |
EP3230441A4 (en) | 2014-12-12 | 2018-10-03 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the production of scaav |
CA2967468A1 (en) | 2014-12-16 | 2016-06-23 | Board Of Regents Of The University Of Nebraska | Gene therapy for juvenile batten disease |
EP3242945B1 (en) | 2015-01-07 | 2021-09-01 | Universitat Autònoma de Barcelona | Single-vector gene construct comprising insulin and glucokinase genes |
EP3632923A1 (en) | 2015-01-16 | 2020-04-08 | Voyager Therapeutics, Inc. | Central nervous system targeting polynucleotides |
WO2016130600A2 (en) | 2015-02-09 | 2016-08-18 | Duke University | Compositions and methods for epigenome editing |
WO2016131009A1 (en) | 2015-02-13 | 2016-08-18 | University Of Massachusetts | Compositions and methods for transient delivery of nucleases |
WO2016168728A2 (en) | 2015-04-16 | 2016-10-20 | Emory University | Recombinant promoters and vectors for protein expression in liver and use thereof |
CA3021949C (en) | 2015-04-24 | 2023-10-17 | University Of Massachusetts | Modified aav constructs and uses thereof |
WO2016176191A1 (en) | 2015-04-27 | 2016-11-03 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Dual aav vector system for crispr/cas9 mediated correction of human disease |
GB201508026D0 (en) | 2015-05-11 | 2015-06-24 | Ucl Business Plc | Capsid |
EA201792500A1 (ru) | 2015-05-13 | 2018-04-30 | Дзе Трастиз Оф Дзе Юниверсити Оф Пенсильвания | Aav-опосредованная экспрессия антител против гриппа и способы их использования |
EP3313991B1 (en) | 2015-06-23 | 2024-07-17 | The Children's Hospital of Philadelphia | Modified factor ix, and compositions, methods and uses for gene transfer to cells, organs and tissues |
WO2017015637A1 (en) | 2015-07-22 | 2017-01-26 | Duke University | High-throughput screening of regulatory element function with epigenome editing technologies |
AU2016302335B2 (en) | 2015-08-06 | 2022-08-04 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | GLP-1 and use thereof in compositions for treating metabolic diseases |
MX2018002339A (es) | 2015-08-25 | 2018-12-19 | Univ Duke | Composiciones y metodos de mejora de la especificidad en ingenieria genomica usando endonucleasas guiadas por arn. |
AU2016315699B2 (en) | 2015-08-31 | 2021-09-09 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | AAV-EPO for treating companion animals |
IL296929A (en) | 2015-09-24 | 2022-12-01 | Univ Pennsylvania | A preparation and method for the treatment of a complement-mediated disease |
IL292830B2 (en) | 2015-09-28 | 2023-06-01 | Univ Florida | Methods and compositions for stealth virus antibody vectors |
WO2017062750A1 (en) | 2015-10-09 | 2017-04-13 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods useful in treating stargardt's disease and other ocular disorders |
US11970710B2 (en) | 2015-10-13 | 2024-04-30 | Duke University | Genome engineering with Type I CRISPR systems in eukaryotic cells |
WO2017066764A2 (en) | 2015-10-16 | 2017-04-20 | William Marsh Rice University | Modification of n-terminal region of capsid proteins for enhanced properties of adeno-associated viruses |
US11253576B2 (en) | 2015-10-22 | 2022-02-22 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for treating metabolic imbalance in neurodegenerative disease |
US11426469B2 (en) | 2015-10-22 | 2022-08-30 | University Of Massachusetts | Prostate-targeting adeno-associated virus serotype vectors |
EP3368054A4 (en) | 2015-10-28 | 2019-07-03 | Voyager Therapeutics, Inc. | REGULATORY EXPRESSION USING THE ADENO-ASSOCIATED VIRUS (AAV) |
US11135313B2 (en) | 2015-10-28 | 2021-10-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Intrathecal administration of adeno-associated-viral vectors for gene therapy |
JP6695426B2 (ja) | 2015-11-13 | 2020-05-20 | バクスアルタ インコーポレイテッド | 組換えfviii変異型をコードする血友病a遺伝子治療用高発現ウイルスベクター |
CN108884145B (zh) | 2015-11-13 | 2023-08-22 | 武田药品工业株式会社 | 用于血友病a的基因治疗的具有增加的表达的编码重组fviii变体的病毒载体 |
EP3384035A4 (en) * | 2015-12-02 | 2019-08-07 | Voyager Therapeutics, Inc. | ASSAYS FOR DETECTION OF NEUTRALIZING ANTIBODIES OF VAA |
US10385320B2 (en) | 2015-12-02 | 2019-08-20 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Recombinant adeno-associated virus capsids with enhanced human skeletal muscle tropism |
US10406244B2 (en) | 2015-12-02 | 2019-09-10 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | AAV vectors with expanded packaging capacity |
FR3044926B1 (fr) * | 2015-12-09 | 2020-01-31 | Genethon | Outils de therapie genique efficaces pour le saut de l'exon 53 de la dystrophine |
US11015173B2 (en) | 2015-12-11 | 2021-05-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Scalable purification method for AAV1 |
ES2918998T3 (es) | 2015-12-11 | 2022-07-21 | Univ Pennsylvania | Método de purificación escalable para AAVrh10 |
EP3387138B1 (en) | 2015-12-11 | 2022-01-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Scalable purification method for aav9 |
EP3387117B1 (en) | 2015-12-11 | 2022-11-23 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Scalable purification method for aav8 |
IL303850A (en) * | 2015-12-11 | 2023-08-01 | Univ Pennsylvania | Gene therapy for the treatment of familial hypercholesterolemia |
US11241506B2 (en) | 2015-12-14 | 2022-02-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Composition for treatment of Crigler-Najjar syndrome |
CN109069668B (zh) | 2015-12-14 | 2023-04-18 | 宾夕法尼亚州大学信托人 | 用于眼病的基因疗法 |
PL3411478T3 (pl) | 2016-02-01 | 2022-10-03 | Bioverativ Therapeutics Inc. | Geny zoptymalizowanego czynnika VIII |
CA3011939A1 (en) | 2016-02-02 | 2017-08-10 | University Of Massachusetts | Method to enhance the efficiency of systemic aav gene delivery to the central nervous system |
JP7360241B2 (ja) | 2016-02-03 | 2023-10-12 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | ムコ多糖症i型を治療するための遺伝子治療 |
JP6947739B2 (ja) | 2016-02-16 | 2021-10-13 | ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー | 既存のヒト中和抗体に対して耐性である新規組換えアデノ随伴ウイルスカプシド |
IL262056B2 (en) | 2016-04-02 | 2023-10-01 | Res Inst Nationwide Childrens Hospital | The U6 precursor system is optimized for tissue-specific expression |
MA45477A (fr) | 2016-04-15 | 2019-02-20 | Res Inst Nationwide Childrens Hospital | Administration à vecteurs de virus adéno-associé de microarn-29 et micro-dystrophine pour traiter la dystrophie musculaire |
US11413356B2 (en) | 2016-04-15 | 2022-08-16 | University Of Massachusetts | Methods and compositions for treating metabolic imbalance |
EP3452104A1 (en) | 2016-04-15 | 2019-03-13 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type ii |
EP3443108A4 (en) * | 2016-04-15 | 2019-11-20 | The Trustees of The University of Pennsylvania | NOVEL MUTANT CAPSIDS OF AAV8 AND COMPOSITIONS CONTAINING SAME |
JP7046828B2 (ja) * | 2016-04-15 | 2022-04-04 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | 滲出型加齢性黄斑変性の治療のための組成物 |
WO2017180857A1 (en) | 2016-04-15 | 2017-10-19 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Gene therapy for treating hemophilia a |
US11401527B2 (en) | 2016-04-17 | 2022-08-02 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods useful for prophylaxis of organophosphates |
US11299751B2 (en) | 2016-04-29 | 2022-04-12 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions for the treatment of disease |
US11326182B2 (en) | 2016-04-29 | 2022-05-10 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions for the treatment of disease |
RU2725286C2 (ru) | 2016-05-13 | 2020-06-30 | 4Д Молекьюлар Терапьютикс Инк. | Варианты капсидов аденоассоциированного вируса и способы их применения |
KR102392236B1 (ko) | 2016-05-18 | 2022-05-03 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | 조절성 폴리뉴클레오티드 |
SG11201809643UA (en) | 2016-05-18 | 2018-12-28 | Voyager Therapeutics Inc | Compositions and methods of treating huntington's disease |
US11882815B2 (en) | 2016-06-15 | 2024-01-30 | University Of Massachusetts | Recombinant adeno-associated viruses for delivering gene editing molecules to embryonic cells |
WO2018005445A1 (en) * | 2016-06-27 | 2018-01-04 | The Broad Institute, Inc. | Compositions and methods for detecting and treating diabetes |
RU2764920C2 (ru) | 2016-07-08 | 2022-01-24 | Зе Трастис Оф Зе Юниверсити Оф Пенсильвания | Способы и композиции для лечения нарушений и заболеваний, связанных с rdh12 |
US11883470B2 (en) | 2016-07-25 | 2024-01-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions comprising a lecithin cholesterol acyltransferase variant and uses thereof |
AU2017313917B2 (en) | 2016-08-18 | 2023-12-21 | The Regents Of The University Of California | CRISPR-Cas genome engineering via a modular AAV delivery system |
EP3831281A1 (en) | 2016-08-30 | 2021-06-09 | The Regents of The University of California | Methods for biomedical targeting and delivery and devices and systems for practicing the same |
KR20190075964A (ko) | 2016-10-13 | 2019-07-01 | 유니버시티 오브 매사추세츠 | Aav 캡시드 설계 |
ES2931960T3 (es) | 2016-12-01 | 2023-01-05 | Inst Nat Sante Rech Med | Composiciones farmacéuticas para el tratamiento de enfermedades degenerativas retinianas |
JP7128190B2 (ja) * | 2016-12-30 | 2022-08-30 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | ウィルソン病を処置するための遺伝子療法 |
EP3562494A4 (en) * | 2016-12-30 | 2020-08-19 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | GENE THERAPY FOR TREATMENT OF PHENYLKETONURIA |
KR20240015743A (ko) | 2017-01-07 | 2024-02-05 | 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. | 합성 나노담체에 커플링된 면역억제제의 패턴화된 투여 |
US11535866B2 (en) | 2017-02-01 | 2022-12-27 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Gene therapy for treating citrullenemia |
KR20190118163A (ko) | 2017-02-20 | 2019-10-17 | 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 | 가족성 고콜레스테롤혈증을 치료하기 위한 유전자 요법 |
JOP20190200A1 (ar) | 2017-02-28 | 2019-08-27 | Univ Pennsylvania | تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي |
SG10201913833PA (en) | 2017-02-28 | 2020-03-30 | Univ Pennsylvania | Influenza vaccines based on aav vectors |
SI3589730T1 (sl) | 2017-02-28 | 2024-04-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-povezan virus (AAV) clade F vektor in njihova uporaba |
RU2019130004A (ru) | 2017-03-01 | 2021-04-01 | Зе Трастис Оф Зе Юниверсити Оф Пеннсильвания | Генная терапия при глазных заболеваниях |
JP7162021B2 (ja) | 2017-03-17 | 2022-10-27 | ニューカッスル ユニバーシティ | 筋ジストロフィーを治療するためのマイクロジストロフィン断片のアデノ随伴ウイルスベクター送達 |
HUE062476T2 (hu) | 2017-03-17 | 2023-11-28 | Res Inst Nationwide Childrens Hospital | Izomspecifikus mikrodisztrofin adenoasszociáltvírus-vektor által történõ bejuttatása izomdisztrófia kezelésére |
WO2018176103A1 (en) | 2017-03-30 | 2018-10-04 | The University Of Queensland | "chimeric molecules and uses thereof" |
US11499154B2 (en) | 2017-04-10 | 2022-11-15 | Genethon | Antisense targeting dynamin 2 and use for the treatment of centronuclear myopathies and neuropathies |
IL269892B2 (en) | 2017-04-14 | 2024-04-01 | Regenxbio Inc | Treatment for mucopolysaccharidosis 2 with the help of recombinant human iduronate-2 suplatase (ids) produced by human neuron or glial cells |
US11680254B2 (en) | 2017-04-21 | 2023-06-20 | Precision Biosciences, Inc. | Engineered meganucleases specific for recognition sequences in the PCSK9 gene |
WO2018200542A1 (en) | 2017-04-24 | 2018-11-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Gene therapy for ocular disorders |
EP3619308A4 (en) | 2017-05-05 | 2021-01-27 | Voyager Therapeutics, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT FOR HUNTINGTON'S MORBUS |
CA3061652A1 (en) | 2017-05-05 | 2018-11-08 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als) |
CA3063204A1 (en) | 2017-05-09 | 2018-11-15 | Emory University | Clotting factor variants and their use |
SG10201912401QA (en) | 2017-05-11 | 2020-02-27 | Univ Pennsylvania | Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinoses |
EP3624856B1 (en) | 2017-05-17 | 2024-04-03 | The General Hospital Corporation | Gene therapy for tuberous sclerosis |
KR102386890B1 (ko) | 2017-05-22 | 2022-04-15 | 다케다 야쿠힌 고교 가부시키가이샤 | B형 혈우병 유전자 요법을 위한 증가된 발현을 가지는 재조합 fix 변이체를 암호화하는 바이러스 벡터 |
US11793887B2 (en) | 2017-05-31 | 2023-10-24 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Gene therapy for treating peroxisomal disorders |
US11827898B2 (en) | 2017-06-14 | 2023-11-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Gene therapy for ocular disorders |
JOP20190269A1 (ar) | 2017-06-15 | 2019-11-20 | Voyager Therapeutics Inc | بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون |
KR20240063170A (ko) | 2017-07-06 | 2024-05-09 | 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 | I형 점액다당류증을 치료하기 위한 유전자 요법 |
FI3648783T3 (fi) | 2017-07-07 | 2024-09-10 | Genethon | Uudet polynukleotidit, jotka koodaavat ihmisen FKRP-proteiinia |
JP7229989B2 (ja) | 2017-07-17 | 2023-02-28 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 軌道アレイガイドシステム |
KR20200044793A (ko) | 2017-08-03 | 2020-04-29 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | Aav의 전달을 위한 조성물 및 방법 |
EP4400174A2 (en) | 2017-09-01 | 2024-07-17 | The Francis Crick Institute Limited | Immunoregulatory molecules and uses therefor |
BR112020005436B1 (pt) | 2017-09-20 | 2022-08-02 | 4D Molecular Therapeutics Inc | Proteína do capsídeo de variante do vírus adenoassociado, virion do aav recombinante (raav) infeccioso, composições, composições farmacêuticas e usos de virion de raav ou de composições farmacêuticas |
EP3684938A1 (en) | 2017-09-22 | 2020-07-29 | The Trustees of the University of Pennsylvania | Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type ii |
BR112020007157A2 (pt) | 2017-10-13 | 2020-09-24 | Selecta Biosciences, Inc. | métodos e composições para a atenuação de respostas de igm antivetor de transferência viral |
WO2019079242A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS) |
JP7502991B2 (ja) | 2017-10-16 | 2024-06-19 | ボイジャー セラピューティクス インコーポレイテッド | 筋萎縮性側索硬化症(als)の治療 |
EP3697915A4 (en) | 2017-10-18 | 2021-12-08 | Research Institute at Nationwide Children's Hospital | ADENO-ASSOCIATED VIRUS VECTOR ADMINISTRATION OF MUSCLE SPECIFIC MICRODYSTROPHIN FOR THE TREATMENT OF MUSCLE DYSTROPHY |
MX2020003945A (es) | 2017-10-18 | 2020-11-09 | Regenxbio Inc | Tratamiento de enfermedades oculares y cancer de colon metastasico con vegf-trap humano modificado post-traduccionalmente . |
MX2020003888A (es) | 2017-10-18 | 2020-11-06 | Regenxbio Inc | Anticuerpos terapeuticos postraduccionalmente modificados completamente humanos. |
WO2019079755A1 (en) | 2017-10-20 | 2019-04-25 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | METHODS AND MATERIALS FOR NT-3 GENE THERAPY |
PT3717636T (pt) | 2017-11-27 | 2023-05-30 | 4D Molecular Therapeutics Inc | Cápsides variantes de vírus adeno-associado e utilização para inibir a angiogénese |
MX2020005673A (es) | 2017-11-30 | 2020-12-03 | Univ Pennsylvania | Terapia génica para mucopolisacaridosis iiib. |
BR112020010735A2 (pt) | 2017-11-30 | 2020-11-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | terapia genética para mucopolissacaridose iii a |
EP3727468A4 (en) | 2017-12-19 | 2021-09-22 | Akouos, Inc. | AAV-MEDIATED DELIVERY OF THERAPEUTIC ANTIBODIES TO THE INNER EAR |
US20210277365A1 (en) | 2018-01-17 | 2021-09-09 | Adrenas Therapeutics, Inc. | Adeno-associated virus gene therapy for 21-hydroxylase deficiency |
AU2019215152A1 (en) * | 2018-02-01 | 2020-08-20 | Homology Medicines, Inc. | Adeno-associated virus compositions for restoring PAH gene function and methods of use thereof |
US10610606B2 (en) | 2018-02-01 | 2020-04-07 | Homology Medicines, Inc. | Adeno-associated virus compositions for PAH gene transfer and methods of use thereof |
CN112041437A (zh) | 2018-02-19 | 2020-12-04 | 同源药物公司 | 用于恢复f8基因功能的腺相关病毒组合物和其使用方法 |
CN112384204B (zh) | 2018-02-26 | 2023-03-14 | 安托瑞斯公司 | 致耐受性脂质体及其使用方法 |
WO2019183605A1 (en) * | 2018-03-23 | 2019-09-26 | University Of Massachusetts | Gene therapeutics for treating bone disorders |
US11608510B2 (en) | 2018-03-30 | 2023-03-21 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Recombinant adeno-associated virus capsids with enhanced human pancreatic tropism |
BR112020020195A2 (pt) | 2018-04-03 | 2021-01-19 | Stridebio, Inc. | Vetores de vírus com evasão de anticorpos |
SG11202009452WA (en) | 2018-04-03 | 2020-10-29 | Stridebio Inc | Antibody-evading virus vectors |
CA3098565A1 (en) | 2018-04-29 | 2019-11-07 | Claire G. ZHANG | Scalable clarification process for recombinant aav production |
CA3098566A1 (en) | 2018-04-29 | 2019-11-07 | Zhuchun WU | Systems and methods of spectrophotometry for the determination of genome content, capsid content and full/empty ratios of adeno-associated virus particles |
EP3802807A1 (en) | 2018-06-05 | 2021-04-14 | Lifeedit, Inc. | Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use |
WO2019241486A1 (en) | 2018-06-13 | 2019-12-19 | Voyager Therapeutics, Inc. | Engineered 5' untranslated regions (5' utr) for aav production |
WO2019241535A2 (en) | 2018-06-14 | 2019-12-19 | Regenxbio Inc. | Anion exchange chromatography for recombinant aav production |
JP2021527657A (ja) | 2018-06-18 | 2021-10-14 | リサーチ インスティチュート アット ネイションワイド チルドレンズ ホスピタル | 筋ジストロフィーを治療するための筋肉特異的マイクロジストロフィンのアデノ随伴ウイルスベクターデリバリー |
GB201811368D0 (en) | 2018-07-11 | 2018-08-29 | Ucb Biopharma Sprl | Antibody |
US20200038462A1 (en) | 2018-07-16 | 2020-02-06 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions of otc constructs and vectors |
KR20210034015A (ko) | 2018-07-16 | 2021-03-29 | 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. | Mma 구축물 및 벡터의 방법 및 조성물 |
TW202006141A (zh) | 2018-07-16 | 2020-02-01 | 美商巴克斯歐塔公司 | 使用編碼具有增加表現的重組fviii變異體之病毒載體的a型血友病之基因療法 |
JP7413629B2 (ja) | 2018-07-17 | 2024-01-16 | ヘリックスミス カンパニー, リミテッド | Igf-1異型体を発現させるdnaコンストラクトを用いた神経病症の治療 |
CA3107462A1 (en) | 2018-07-24 | 2020-01-30 | Voyager Therapeutics, Inc. | Systems and methods for producing gene therapy formulations |
JP2021533757A (ja) | 2018-08-10 | 2021-12-09 | リジェネクスバイオ インコーポレイテッド | 組換えaav生成のためのスケーラブルな方法 |
AU2019328270A1 (en) | 2018-08-29 | 2021-03-25 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Products and methods for inhibition of expression of mutant GARS protein |
JP7450945B2 (ja) | 2018-08-30 | 2024-03-18 | テナヤ セラピューティクス, インコーポレイテッド | ミオカルディンおよびascl1を用いた心細胞リプログラミング |
EP3861113A1 (en) | 2018-10-04 | 2021-08-11 | Voyager Therapeutics, Inc. | Methods for measuring the titer and potency of viral vector particles |
SG11202103425YA (en) | 2018-10-05 | 2021-05-28 | Voyager Therapeutics Inc | Engineered nucleic acid constructs encoding aav production proteins |
JP2022514112A (ja) | 2018-10-15 | 2022-02-09 | リジェネクスバイオ インコーポレイテッド | 複製欠損型ウイルスベクター及びウイルスの感染性を測定するための方法 |
UY38407A (es) | 2018-10-15 | 2020-05-29 | Novartis Ag | Anticuerpos estabilizadores de trem2 |
EP3867389A1 (en) | 2018-10-15 | 2021-08-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | Expression vectors for large-scale production of raav in the baculovirus/sf9 system |
CA3116334A1 (en) | 2018-10-22 | 2020-04-30 | University Of Rochester | Genome editing by directed non-homologous dna insertion using a retroviral integrase-cas9 fusion protein |
BR112021012665A2 (pt) | 2018-12-27 | 2021-11-03 | Lifeedit Therapeutics Inc | Polipeptídeos úteis para edição de genes e métodos de uso |
WO2020140007A1 (en) | 2018-12-28 | 2020-07-02 | University Of Rochester | Gene therapy for best1 dominant mutations |
US20220106592A1 (en) | 2018-12-31 | 2022-04-07 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | DUX4 RNA Silencing Using RNA Targeting CRISPR-CAS13b |
DK3906066T5 (da) | 2019-01-04 | 2024-08-05 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc | Geneterapikonstruktioner til behandling af wilsons sygdom |
WO2020150287A1 (en) | 2019-01-14 | 2020-07-23 | University Of Rochester | Targeted nuclear rna cleavage and polyadenylation with crispr-cas |
EA202191977A1 (ru) | 2019-01-16 | 2021-12-15 | Баксалта Инкорпорейтед | Вирусные векторы, кодирующие рекомбинантные варианты fviii с повышенной экспрессией для генной терапии гемофилии а |
CN109628490A (zh) * | 2019-01-26 | 2019-04-16 | 青岛农业大学 | 一种预防犬瘟热的shRNA重组腺相关病毒 |
US20230193315A1 (en) | 2019-01-31 | 2023-06-22 | Oregon Health & Science University | Methods for using transcription-dependent directed evolution of aav capsids |
CN113677801A (zh) | 2019-02-25 | 2021-11-19 | 诺华股份有限公司 | 治疗bietti晶体营养不良的组合物和方法 |
JP2022520875A (ja) | 2019-02-25 | 2022-04-01 | ノバルティス アーゲー | Biettiクリスタリン網膜症を治療するための組成物及び方法 |
AR118465A1 (es) | 2019-03-21 | 2021-10-06 | Stridebio Inc | Vectores de virus adenoasociados recombinantes |
CN113677697B (zh) | 2019-03-25 | 2024-06-04 | 吉尼松公司 | 使用重叠的aav载体生产大型拟抗肌萎缩蛋白 |
AU2020253462A1 (en) | 2019-04-03 | 2021-10-28 | Regenxbio Inc. | Gene therapy for eye pathologies |
TW202102526A (zh) | 2019-04-04 | 2021-01-16 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | 重組腺相關病毒及其用途 |
HUE064411T2 (hu) | 2019-04-11 | 2024-03-28 | Regenxbio Inc | Méretkizárásos kromatográfiás módszerek rekombináns adeno-asszociált víruskészítmények jellemzésére |
US20220143115A1 (en) | 2019-04-19 | 2022-05-12 | Regenxbio Inc. | Adeno-Associated Virus Vector Formulations and Methods |
TW202106708A (zh) | 2019-04-24 | 2021-02-16 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | 全人類轉譯後修飾之抗體治療劑 |
CN114126666A (zh) | 2019-04-28 | 2022-03-01 | 西莱克塔生物科技公司 | 用于治疗针对病毒转移载体具有预先存在的免疫力的对象的方法 |
JP2022534741A (ja) | 2019-05-28 | 2022-08-03 | セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド | 減弱化された抗ウイルス導入ベクター免疫応答のための方法および組成物 |
US20220380800A1 (en) | 2019-07-02 | 2022-12-01 | M6P Therapeutics (Switzerland) Llc | Vector compositions and methods of using same for treatment of lysosomal storage disorders |
WO2021005223A1 (en) | 2019-07-10 | 2021-01-14 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Methods for the treatment of epilepsy |
EP3997226A1 (en) | 2019-07-11 | 2022-05-18 | Tenaya Therapeutics, Inc. | Cardiac cell reprogramming with micrornas and other factors |
US10801042B1 (en) | 2019-07-15 | 2020-10-13 | Vigene Biosciences, Inc. | Use of ion concentrations to increase the packaging efficiency of recombinant adeno-associated virus |
US10557149B1 (en) | 2019-07-15 | 2020-02-11 | Vigene Biosciences, Inc. | Recombinantly-modified adeno-associated virus helper vectors and their use to improve the packaging efficiency of recombinantly-modified adeno-associated virus |
US10653731B1 (en) | 2019-07-15 | 2020-05-19 | Vigene Biosciences Inc. | Recombinantly-modified adeno-associated virus (rAAV) having improved packaging efficiency |
EP4004206A1 (en) | 2019-07-23 | 2022-06-01 | University of Rochester | Targeted rna cleavage with crispr-cas |
WO2021021661A1 (en) | 2019-07-26 | 2021-02-04 | Regenxbio Inc. | Engineered nucleic acid regulatory element and methods of uses thereof |
EP4007814A1 (en) | 2019-07-26 | 2022-06-08 | Akouos, Inc. | Methods of treating hearing loss using a secreted target protein |
RU2751592C2 (ru) * | 2019-08-22 | 2021-07-15 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Анабион" | Выделенный модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 5 серотипа (AAV5), капсид и вектор на его основе |
AU2020336314A1 (en) | 2019-08-26 | 2022-04-07 | Regenxbio Inc. | Treatment of diabetic retinopathy with fully-human post-translationally modified anti-VEGF Fab |
WO2021053124A1 (en) | 2019-09-19 | 2021-03-25 | Genethon | Gene therapy expression system alleviating cardiac toxicity of fkrp |
JP2022550435A (ja) | 2019-10-04 | 2022-12-01 | ウルトラジェニックス ファーマシューティカル インコーポレイテッド | 組換えaavの改善された治療的使用のための方法 |
WO2021071835A1 (en) | 2019-10-07 | 2021-04-15 | Regenxbio Inc. | Adeno-associated virus vector pharmaceutical composition and methods |
AU2020361533A1 (en) | 2019-10-08 | 2022-04-28 | Trustees Of Boston College | Proteins containing multiple, different unnatural amino acids and methods of making and using such proteins |
TW202128736A (zh) | 2019-10-17 | 2021-08-01 | 美商史崔德生物公司 | 用於治療c型尼曼—匹克病之腺相關病毒載體 |
WO2021077101A1 (en) | 2019-10-18 | 2021-04-22 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Materials and methods for the treatment of disorders associated mutations in the irf2bpl gene |
EP4055030A4 (en) * | 2019-11-08 | 2024-05-22 | President And Fellows Of Harvard College | VIRAL CAPSID POLYPEPTIDES |
WO2021099394A1 (en) | 2019-11-19 | 2021-05-27 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of cancer |
MX2022006188A (es) * | 2019-11-22 | 2022-08-22 | Childrens Hospital Philadelphia | Variantes del vector viral adenoasociado. |
US20230211018A1 (en) | 2019-11-22 | 2023-07-06 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Materials and methods for treatment of disorders associated with the ighmbp2 gene |
KR20220107222A (ko) | 2019-11-28 | 2022-08-02 | 리젠엑스바이오 인크. | 마이크로디스트로핀 유전자 치료 작제물 및 이의 용도 |
US11981912B2 (en) | 2019-12-10 | 2024-05-14 | Takeda Pharma ceutical Company Limited | Adeno associated virus vectors for the treatment of hunter disease |
CA3165469A1 (en) | 2019-12-20 | 2021-06-24 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Optimized gene therapy for targeting muscle in muscle diseases |
TW202140791A (zh) | 2020-01-13 | 2021-11-01 | 美商霍蒙拉奇醫藥公司 | 治療苯酮尿症之方法 |
US20230059395A1 (en) | 2020-01-22 | 2023-02-23 | Regenxbio Inc. | Treatment of mucopolysaccharidosis i with fully-human glycosylated human alpha-l-iduronidase (idua) |
TW202142695A (zh) | 2020-01-29 | 2021-11-16 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | 用人類神經或神經膠質細胞產生之重組人類艾杜糖醛酸—2—硫酸酯酶(ids)對ii型黏多糖病之治療 |
CA3168251A1 (en) | 2020-01-29 | 2021-08-05 | Regenxbio Inc. | Treatment of mucopolysaccharidosis iva |
WO2021158964A1 (en) | 2020-02-07 | 2021-08-12 | University Of Rochester | Ribozyme-mediated rna assembly and expression |
US20230078498A1 (en) | 2020-02-07 | 2023-03-16 | University Of Rochester | Targeted Translation of RNA with CRISPR-Cas13 to Enhance Protein Synthesis |
US20230054144A1 (en) | 2020-02-14 | 2023-02-23 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc. | Gene therapy for treating cdkl5 deficiency disorder |
CN115552022A (zh) | 2020-03-02 | 2022-12-30 | 特纳亚治疗股份有限公司 | 由心肌细胞表达的微rna控制的基因载体 |
US20230085724A1 (en) | 2020-03-05 | 2023-03-23 | Neotx Therapeutics Ltd. | Methods and compositions for treating cancer with immune cells |
EP4121544A1 (en) | 2020-03-19 | 2023-01-25 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc. | Compositions and methods for reducing reverse packaging of cap and rep sequences in recombinant aav |
US20240218367A1 (en) | 2020-03-27 | 2024-07-04 | University Of Rochester | Targeted Destruction of Viral RNA by CRISPR-Cas13 |
KR20220160069A (ko) | 2020-03-27 | 2022-12-05 | 유씨비 바이오파마 에스알엘 | 자율적 노브 도메인 펩티드 |
JP2023519344A (ja) | 2020-03-27 | 2023-05-10 | ユニバーシティ オブ ロチェスター | CRISPR-Cas13 crRNAアレイ |
EP4127189A1 (en) | 2020-03-31 | 2023-02-08 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc. | Gene therapy for treating propionic acidemia |
WO2021207636A2 (en) | 2020-04-10 | 2021-10-14 | Sola Biosciences Llc | Compositions and methods for the treatment of protein aggregation disorders |
EP4138929A1 (en) | 2020-04-24 | 2023-03-01 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) | Methods for preventing induction of immune responses to the transduced cells expressing a transgene product after ocular gene therapy |
TW202208626A (zh) | 2020-04-24 | 2022-03-01 | 美商生命編輯公司 | Rna引導核酸酶及其活性片段與變體,以及使用方法 |
JP2023524414A (ja) | 2020-04-28 | 2023-06-12 | ソラ・バイオサイエンシズ・エルエルシー | Tdp-43プロテイノパチーの処置のための組成物および方法 |
CN115485291A (zh) | 2020-04-29 | 2022-12-16 | 百时美施贵宝公司 | 具血影蛋白融合结构域的微型化抗肌萎缩蛋白及其用途 |
KR20230010670A (ko) | 2020-05-12 | 2023-01-19 | 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 | 이식유전자 발현의 drg-특이적 감소를 위한 조성물 |
WO2021231538A2 (en) | 2020-05-13 | 2021-11-18 | Akouos, Inc. | Compositions and methods for treating kcnq4-associated hearing loss |
CN116801911A (zh) | 2020-05-13 | 2023-09-22 | 阿库斯股份有限公司 | 用于治疗slc26a4相关听力损失的组合物和方法 |
WO2021236908A2 (en) | 2020-05-20 | 2021-11-25 | Biomarin Pharmaceutical Inc. | Use of regulatory proteins for the production of adeno-associated virus |
TW202208632A (zh) | 2020-05-27 | 2022-03-01 | 美商同源醫藥公司 | 用於恢復pah基因功能的腺相關病毒組成物及其使用方法 |
WO2021248038A1 (en) | 2020-06-05 | 2021-12-09 | Sola Biosciences Llc | Compositions and methods for the treatment of synucleinopathies |
WO2021257595A1 (en) | 2020-06-15 | 2021-12-23 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Adeno-associated virus vector delivery for muscular dystrophies |
CN115968302A (zh) | 2020-06-17 | 2023-04-14 | 宾夕法尼亚州大学信托人 | 用于治疗基因疗法患者的组合物和方法 |
US20230256117A1 (en) | 2020-06-19 | 2023-08-17 | Genethon | Gene therapy expression system allowing an adequate expression in the muscles and in the heart of sgcg |
CA3184923A1 (en) | 2020-07-10 | 2022-01-13 | William LOSTAL | A novel muscle-specific promoter |
AU2021305665A1 (en) | 2020-07-10 | 2023-02-23 | Centre National De La Recherche Scientifique | Methods and compositions for treating epilepsy |
AU2021309645A1 (en) | 2020-07-13 | 2023-02-09 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions useful for treatment of charcot-marie-tooth disease |
JP2023534464A (ja) | 2020-07-15 | 2023-08-09 | ユニバーシティ オブ ロチェスター | dCas13-RNase融合タンパク質による標的RNAの切断 |
KR20230054840A (ko) | 2020-07-30 | 2023-04-25 | 셰이프 테라퓨틱스 인코포레이티드 | rAAV 비리온의 유도 생산을 위한 안정화된 세포주 |
CA3188956A1 (en) | 2020-08-14 | 2022-02-17 | James M. Wilson | Novel aav capsids and compositions containing same |
JP2023543125A (ja) | 2020-08-24 | 2023-10-13 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | Glp-1受容体アゴニスト融合物をコードするウイルスベクター及び代謝性疾患の治療におけるその使用 |
WO2022060916A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Regenxbio Inc. | Vectorized antibodies for anti-viral therapy |
WO2022060915A1 (en) | 2020-09-15 | 2022-03-24 | Regenxbio Inc. | Vectorized lanadelumab and administration thereof |
US20230357795A1 (en) | 2020-09-15 | 2023-11-09 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Aav-mediated homology-independent targeted integration gene editing for correction of diverse dmd mutations in patients with muscular dystrophy |
US20230383278A1 (en) | 2020-09-18 | 2023-11-30 | The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services | Novel adeno-associated viral (aav) vectors to treat hereditary methylmalonic acidemia (mma) caused by methylmalonyl-coa mutase (mmut) deficiency |
AU2021349277A1 (en) | 2020-09-28 | 2023-05-11 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Products and methods for treating muscular dystrophy |
US20220098615A1 (en) | 2020-09-30 | 2022-03-31 | NGGT, Inc. | Dual functional expression vectors and methods of use thereof |
AU2021358964A1 (en) | 2020-10-07 | 2023-05-25 | Regenxbio Inc. | Formulations for suprachoroidal administration such as formulations with aggregate formation |
EP4225926A1 (en) | 2020-10-07 | 2023-08-16 | RegenxBio Inc. | Gene therapy for ocular manifestations of cln2 disease |
MX2023004035A (es) | 2020-10-07 | 2023-07-05 | Regenxbio Inc | Formulaciones para la administración supracoroidea tales como formulaciones de viscosidad alta. |
WO2022076750A2 (en) | 2020-10-07 | 2022-04-14 | Regenxbio Inc. | Recombinant adeno-associated viruses for cns or muscle delivery |
CA3194861A1 (en) | 2020-10-07 | 2022-04-14 | Regenxbio Inc. | Formulations for suprachoroidal administration such as gel formulations |
WO2022076711A2 (en) | 2020-10-07 | 2022-04-14 | Regenxbio Inc. | Adeno-associated viruses for ocular delivery of gene therapy |
US11781156B2 (en) | 2020-10-09 | 2023-10-10 | Tenaya Therapeutics, Inc. | Plakophillin-2 gene therapy methods and compositions |
TW202229560A (zh) | 2020-10-09 | 2022-08-01 | 賓州大學委員會 | 治療法布瑞氏症之組成物及方法 |
WO2022094157A1 (en) | 2020-10-28 | 2022-05-05 | Regenxbio Inc. | Vectorized anti-cgrp and anti-cgrpr antibodies and administration thereof |
AU2021371307A1 (en) | 2020-10-28 | 2023-06-01 | Regenxbio, Inc. | VECTORIZED ANTI-TNF-α ANTIBODIES FOR OCULAR INDICATIONS |
AU2021369833A1 (en) | 2020-10-29 | 2023-06-08 | Regenxbio Inc. | Vectorized tnf-alpha antagonists for ocular indications |
TW202233844A (zh) | 2020-10-29 | 2022-09-01 | 賓州大學委員會 | Aav衣殼及含有其之組成物 |
US20230390418A1 (en) | 2020-10-29 | 2023-12-07 | Regenxbio Inc. | Vectorized factor xii antibodies and administration thereof |
JP2023548067A (ja) | 2020-11-02 | 2023-11-15 | バイオマリン ファーマシューティカル インコーポレイテッド | アデノ随伴ウイルスを濃縮するためのプロセス |
JP2023551279A (ja) | 2020-11-30 | 2023-12-07 | リサーチ インスティチュート アット ネイションワイド チルドレンズ ホスピタル | 顔面肩甲上腕筋ジストロフィー(fshd)を治療するための組成物及び方法 |
KR20230117179A (ko) | 2020-12-01 | 2023-08-07 | 아카우오스, 인크. | 청신경초종 연관 증상을 치료하기 위한 항-vegf 항체작제물 및 관련된 방법 |
IL303236A (en) | 2020-12-01 | 2023-07-01 | Univ Pennsylvania | New compounds with specific tissue-targeting motifs and preparations containing them |
AU2021392642A1 (en) | 2020-12-01 | 2023-06-22 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and uses thereof for treatment of angelman syndrome |
WO2022122733A1 (en) | 2020-12-08 | 2022-06-16 | Genethon | New gene therapy for the treatment of duchenne muscular dystrophy |
EP4263841A1 (en) | 2020-12-16 | 2023-10-25 | REGENXBIO Inc. | Method of producing a recombinant adeno-associated virus particle |
WO2022147087A1 (en) | 2020-12-29 | 2022-07-07 | Regenxbio Inc. | Tau-specific antibody gene therapy compositions, methods and uses thereof |
MX2023007800A (es) | 2020-12-29 | 2023-07-11 | Akouos Inc | Composiciones y metodos para tratar la perdida de audicion y/o la perdida de vision asociada a clrn1. |
JP2024502115A (ja) | 2021-01-05 | 2024-01-17 | セレクタ バイオサイエンシーズ インコーポレーテッド | ウイルスベクター投薬プロトコル |
US20240084329A1 (en) | 2021-01-21 | 2024-03-14 | Regenxbio Inc. | Improved production of recombinant polypeptides and viruses |
CA3209471A1 (en) | 2021-01-27 | 2022-08-04 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Materials and methods for the treatment of lysosomal acid lipase deficiency (lal-d) |
AU2022214429A1 (en) | 2021-02-01 | 2023-09-14 | Regenxbio Inc. | Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinoses |
WO2022169922A1 (en) | 2021-02-03 | 2022-08-11 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Compositions and methods for treating disease associated with dux4 overexpression |
EP4291249A2 (en) | 2021-02-10 | 2023-12-20 | RegenxBio Inc. | Treatment of mucopolysaccharidosis ii with recombinant human iduronate-2-sulfatase (ids) |
TW202302855A (zh) | 2021-02-26 | 2023-01-16 | 日商武田藥品工業股份有限公司 | 用於治療法布瑞氏症之組成物及方法 |
US20240254509A1 (en) | 2021-03-04 | 2024-08-01 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Products and methods for treatment of dystrophin-based myopathies using crispr-cas9 to correct dmd exon duplications |
WO2022198038A1 (en) | 2021-03-19 | 2022-09-22 | Adrenas Therapeutics, Inc. | Gene therapies for 21-hydroxylase deficiency |
US20240191258A1 (en) | 2021-04-12 | 2024-06-13 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions useful for treating spinal and bulbar muscular atrophy (sbma) |
CA3216711A1 (en) | 2021-04-13 | 2022-10-20 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Recombinant adeno-associated virus encoding methyl-cpg binding protein 2 for treating pitt hopkins syndrome via intrathecal delivery |
JP2024515720A (ja) | 2021-04-23 | 2024-04-10 | リサーチ インスティチュート アット ネイションワイド チルドレンズ ホスピタル | 筋ジストロフィーを治療するための製品及び方法 |
WO2022226296A2 (en) | 2021-04-23 | 2022-10-27 | University Of Rochester | Genome editing by directed non-homologous dna insertion using a retroviral integrase-cas fusion protein and methods of treatment |
MX2023012513A (es) | 2021-04-23 | 2023-12-15 | Univ Pennsylvania | Nuevas composiciones con motivos selectivos para el cerebro y composiciones que las contienen. |
WO2022232141A1 (en) | 2021-04-26 | 2022-11-03 | Regenxbio Inc. | Microdystrophin gene therapy administration for treatment of dystrophinopathies |
WO2022232267A1 (en) | 2021-04-27 | 2022-11-03 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Porcine-derived adeno-associated virus capsids and uses thereof |
WO2022229703A2 (en) | 2021-04-30 | 2022-11-03 | Takeda Pharmaceutical Company, Ltd. | New aav8 based immune escaping variants |
WO2022229702A2 (en) | 2021-04-30 | 2022-11-03 | Takeda Pharmaceutical Company, Ltd. | Aav8 capsid variants with enhanced liver targeting |
WO2022235614A2 (en) | 2021-05-04 | 2022-11-10 | Regenxbio Inc. | Novel aav vectors and methods and uses thereof |
WO2022241030A1 (en) | 2021-05-11 | 2022-11-17 | Regenxbio Inc. | Treatment of duchenne muscular dystrophy and combinations thereof |
MX2023013561A (es) | 2021-05-17 | 2024-02-12 | Sarepta Therapeutics Inc | Produccion de vectores de aav recombinantes para tratamiento de distrofia muscular. |
EP4108263A3 (en) | 2021-06-02 | 2023-03-22 | Research Institute at Nationwide Children's Hospital | Recombinant adeno-associated virus products and methods for treating limb girdle muscular dystrophy 2a |
WO2022272297A1 (en) * | 2021-06-25 | 2022-12-29 | Oxford Biomedica Solutions Llc | Adeno-associated virus packaging systems |
EP4366757A1 (en) | 2021-07-07 | 2024-05-15 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Synergistic combination of rdcfv2 and rdcvf2l for the treatment of tauopathies |
AR126407A1 (es) | 2021-07-08 | 2023-10-11 | Tenaya Therapeutics Inc | Casetes de expresión optimizada para genoterapia |
AU2022313258A1 (en) | 2021-07-19 | 2024-02-08 | New York University | Auf1 combination therapies for treatment of muscle degenerative disease |
CN118159656A (zh) | 2021-08-11 | 2024-06-07 | 坚固生物科技公司 | 肌营养不良的治疗 |
AR126839A1 (es) * | 2021-08-20 | 2023-11-22 | Llc «Anabion» | Proteína de la cápside vp1 modificada aislada del virus adeno-asociado de serotipo 9 (aav9), cápside y vector basado en esta |
AR126840A1 (es) * | 2021-08-20 | 2023-11-22 | Llc «Anabion» | Proteína de la cápside vp1 modificada aislada del virus adeno-asociado de serotipo 5 (aav5), cápside y vector basado en esta |
WO2023034880A2 (en) | 2021-08-31 | 2023-03-09 | Scout Bio, Inc. | Antigen-binding molecules and uses thereof |
AU2022356427A1 (en) | 2021-09-30 | 2024-05-09 | Akouos, Inc. | Compositions and methods for treating kcnq4-associated hearing loss |
EP4409010A1 (en) | 2021-10-02 | 2024-08-07 | The Trustees of The University of Pennsylvania | Novel aav capsids and compositions containing same |
CN118202060A (zh) | 2021-10-05 | 2024-06-14 | 再生生物股份有限公司 | 用于重组aav生产的组合物和方法 |
WO2023060113A1 (en) | 2021-10-05 | 2023-04-13 | Regenxbio Inc. | Compositions and methods for recombinant aav production |
WO2023060215A1 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Products and methods for myelin protein zero silencing and treating cmt1b disease |
WO2023060269A1 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Regenxbio Inc. | Recombinant adeno-associated viruses for targeted delivery |
WO2023060272A2 (en) | 2021-10-07 | 2023-04-13 | Regenxbio Inc. | Recombinant adeno-associated viruses for cns tropic delivery |
WO2023060221A2 (en) | 2021-10-08 | 2023-04-13 | Sola Biosciences Llc | Compositions and methods for the treatment of proteopathies |
WO2023060248A1 (en) | 2021-10-08 | 2023-04-13 | Sola Biosciences Llc | Compositions and methods for the treatment of p53-mediated cancers |
WO2023064350A1 (en) | 2021-10-12 | 2023-04-20 | Selecta Biosciences, Inc. | Viral vector dosing protocols |
CA3235145A1 (en) | 2021-10-12 | 2023-04-20 | Bridgebio Gene Therapy Llc | Methods and compositions for treating leukodystrophies |
US20230141563A1 (en) | 2021-10-12 | 2023-05-11 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions for attenuating anti-viral transfer vector igm responses |
JP2023059858A (ja) | 2021-10-15 | 2023-04-27 | リサーチ インスティチュート アット ネイションワイド チルドレンズ ホスピタル | 自己相補的アデノ随伴ウイルスベクター及び筋ジストロフィーの治療におけるその使用 |
EP4423285A1 (en) | 2021-10-28 | 2024-09-04 | RegenxBio Inc. | Engineered nucleic acid regulatory elements and methods and uses thereof |
WO2023086615A1 (en) | 2021-11-14 | 2023-05-19 | Selecta Biosciences, Inc. | Multiple dosing with viral vectors |
WO2023087019A2 (en) | 2021-11-15 | 2023-05-19 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions for drg-specific reduction of transgene expression |
JP2023081369A (ja) | 2021-11-30 | 2023-06-09 | リサーチ インスティチュート アット ネイションワイド チルドレンズ ホスピタル | 自己相補的アデノ随伴ウイルスベクター及び筋ジストロフィーの治療におけるその使用 |
WO2023102517A1 (en) | 2021-12-02 | 2023-06-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for treatment of fabry disease |
WO2023122669A1 (en) | 2021-12-21 | 2023-06-29 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Materials and methods for the treatment of limb girdle muscular dystrophy |
KR20240116840A (ko) | 2021-12-28 | 2024-07-30 | 청두 오리젠 바이오테크놀로지 씨오., 엘티디. | 변형된 aav 캡시드 단백질 및 이의 용도 |
WO2023133574A1 (en) | 2022-01-10 | 2023-07-13 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods useful for treatment of c9orf72-mediated disorders |
AU2023208961A1 (en) | 2022-01-24 | 2024-09-12 | LifeEDIT Therapeutics, Inc. | Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use |
EP4215614A1 (en) | 2022-01-24 | 2023-07-26 | Dynacure | Combination therapy for dystrophin-related diseases |
TW202342525A (zh) | 2022-02-02 | 2023-11-01 | 美商阿科奧斯公司 | 用於治療前庭神經鞘瘤相關症狀之抗vegf抗體構築體及相關方法 |
WO2023168400A2 (en) | 2022-03-03 | 2023-09-07 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Materials and methods for the treatment of eif2b5 mutations and diseases resulting therefrom |
US20230357437A1 (en) | 2022-03-09 | 2023-11-09 | Selecta Biosciences, Inc. | Immunosuppressants in combination with anti-igm agents and related dosing |
TW202346590A (zh) | 2022-03-13 | 2023-12-01 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | 經修飾之肌肉特異性啟動子 |
WO2023182476A1 (ja) * | 2022-03-25 | 2023-09-28 | 学校法人自治医科大学 | アデノ随伴ウイルス(aav)ベクターの効率の良い産生システム |
WO2023183623A1 (en) | 2022-03-25 | 2023-09-28 | Regenxbio Inc. | Dominant-negative tumor necrosis factor alpha adeno-associated virus gene therapy |
WO2023187728A1 (en) | 2022-04-01 | 2023-10-05 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Gene therapy for diseases with cns manifestations |
WO2023196873A1 (en) | 2022-04-06 | 2023-10-12 | Regenxbio Inc. | Pharmaceutical composition comprising a recombinant adeno-associated virus vector with an expression cassette encoding a transgene forsuprachoidal administration |
TW202404651A (zh) | 2022-04-06 | 2024-02-01 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | 用於脈絡膜上投與之調配物諸如形成聚集體之調配物 |
TW202345913A (zh) | 2022-04-06 | 2023-12-01 | 美商銳進科斯生物股份有限公司 | 用於脈絡膜上投與之調配物諸如凝膠調配物 |
WO2023196892A1 (en) | 2022-04-06 | 2023-10-12 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Passive immunization with anti- aav neutralizing antibodies to prevent off-target transduction of intrathecally delivered aav vectors |
TW202404993A (zh) | 2022-04-11 | 2024-02-01 | 美商特納亞治療股份有限公司 | 具經工程化蛋白殼之腺相關病毒 |
WO2023201277A1 (en) | 2022-04-14 | 2023-10-19 | Regenxbio Inc. | Recombinant adeno-associated viruses for cns tropic delivery |
WO2023201308A1 (en) | 2022-04-14 | 2023-10-19 | Regenxbio Inc. | Gene therapy for treating an ocular disease |
WO2023205610A2 (en) | 2022-04-18 | 2023-10-26 | Regenxbio Inc. | Hybrid aav capsids |
AR129215A1 (es) | 2022-05-03 | 2024-07-31 | Regenxbio Inc | Anticuerpos anti-complemento y agentes del complemento vectorizados y administración de estos |
WO2023215807A1 (en) | 2022-05-03 | 2023-11-09 | Regenxbio Inc. | VECTORIZED ANTI-TNF-α INHIBITORS FOR OCULAR INDICATIONS |
WO2023214346A1 (en) | 2022-05-06 | 2023-11-09 | Novartis Ag | Novel recombinant aav vp2 fusion polypeptides |
WO2023240177A1 (en) | 2022-06-08 | 2023-12-14 | Research Instiitute At Nationwide Children's Hospital | Products and methods for treating diseases or conditions associated with mutant or pathogenic kcnq3 expression |
WO2023239627A2 (en) | 2022-06-08 | 2023-12-14 | Regenxbio Inc. | Methods for recombinant aav production |
WO2024015966A2 (en) | 2022-07-15 | 2024-01-18 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Recombinant aav having aav clade d and clade e capsids and compositions containing same |
WO2024017990A1 (en) | 2022-07-21 | 2024-01-25 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Methods and compositions for treating chronic pain disorders |
US20240148841A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-05-09 | Selecta Biosciences Inc. | Compositions and methods related to immunoglobulin proteases and fusions thereof |
WO2024033901A1 (en) | 2022-08-12 | 2024-02-15 | LifeEDIT Therapeutics, Inc. | Rna-guided nucleases and active fragments and variants thereof and methods of use |
WO2024044725A2 (en) | 2022-08-24 | 2024-02-29 | Regenxbio Inc. | Recombinant adeno-associated viruses and uses thereof |
WO2024042485A1 (en) | 2022-08-25 | 2024-02-29 | Takeda Pharmaceutical Company Limited | Composition for use in the treatment of fabry disease |
TW202417631A (zh) | 2022-09-22 | 2024-05-01 | 美商拜奧馬林製藥公司 | 用aav基因治療載體治療心肌病 |
TW202421788A (zh) | 2022-09-22 | 2024-06-01 | 美商拜奧馬林製藥公司 | 用aav基因療法載體治療致心律不整性心肌病 |
WO2024064913A1 (en) | 2022-09-23 | 2024-03-28 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Recombinant aav vectors for treating muscular dystrophy |
WO2024073669A1 (en) | 2022-09-30 | 2024-04-04 | Regenxbio Inc. | Treatment of ocular diseases with recombinant viral vectors encoding anti-vegf fab |
WO2024081706A1 (en) | 2022-10-11 | 2024-04-18 | Research Institute At Nationwide Children's Hospital | Adeno-associated virus delivery to treat spinal muscular atrophy with respiratory distress type 1 (smard1) and charcot-marie-tooth type 2s (cmt2s) |
WO2024081746A2 (en) | 2022-10-11 | 2024-04-18 | Regenxbio Inc. | Engineered nucleic acid regulatory elements and methods and uses thereof |
WO2024105638A1 (en) | 2022-11-18 | 2024-05-23 | Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. | Recombinant aav vectors and methods for treatment of hunter syndrome |
WO2024130067A2 (en) | 2022-12-17 | 2024-06-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Recombinant aav mutant vectors with cardiac and skeletal muscle-specific targeting motifs and compositions containing same |
WO2024130070A2 (en) | 2022-12-17 | 2024-06-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Recombinant aav capsids with cardiac- and skeletal muscle- specific targeting motifs and uses thereof |
WO2024146935A1 (en) | 2023-01-06 | 2024-07-11 | Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale | Intravenous administration of antisense oligonucleotides for the treatment of pain |
WO2024163560A1 (en) | 2023-02-01 | 2024-08-08 | Sarepta Therapeutics, Inc. | Raav production methods |
WO2024168358A1 (en) | 2023-02-10 | 2024-08-15 | Expression Therapeutics, Llc | Lentiviral system |
Family Cites Families (48)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5478745A (en) | 1992-12-04 | 1995-12-26 | University Of Pittsburgh | Recombinant viral vector system |
US5658785A (en) | 1994-06-06 | 1997-08-19 | Children's Hospital, Inc. | Adeno-associated virus materials and methods |
US6204059B1 (en) | 1994-06-30 | 2001-03-20 | University Of Pittsburgh | AAV capsid vehicles for molecular transfer |
US5856152A (en) | 1994-10-28 | 1999-01-05 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Hybrid adenovirus-AAV vector and methods of use therefor |
US5652224A (en) * | 1995-02-24 | 1997-07-29 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and compositions for gene therapy for the treatment of defects in lipoprotein metabolism |
US5866552A (en) * | 1996-09-06 | 1999-02-02 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Method for expressing a gene in the absence of an immune response |
ATE465267T1 (de) | 1996-09-06 | 2010-05-15 | Univ Pennsylvania | Rekombinante aav zur herstellung eines medikaments für die gentherapie von muskelzellen |
US20020037867A1 (en) | 1999-02-26 | 2002-03-28 | James M. Wilson | Method for recombinant adeno-associated virus-directed gene therapy |
IL128736A0 (en) * | 1996-09-06 | 2000-01-31 | Univ Pennsylvania | Methods using cre-lox for production of recombinant adeno-associated viruses |
EP0931158A1 (en) | 1996-09-06 | 1999-07-28 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase |
EP0932694A2 (en) | 1996-09-11 | 1999-08-04 | THE UNITED STATES GOVERNMENT as represented by THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Aav4 vector and uses thereof |
EP0938578B1 (en) | 1996-12-05 | 2004-02-04 | Crucell Holland B.V. | Genetic modification of primate hemopoietic repopulating stem cells |
US6399358B1 (en) * | 1997-03-31 | 2002-06-04 | Thomas Jefferson University | Human gene encoding human chondroitin 6-sulfotransferase |
US6156303A (en) * | 1997-06-11 | 2000-12-05 | University Of Washington | Adeno-associated virus (AAV) isolates and AAV vectors derived therefrom |
US6251677B1 (en) * | 1997-08-25 | 2001-06-26 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof |
CN1182551C (zh) | 1997-09-18 | 2004-12-29 | 霍莱茨荷兰公司 | 电磁驱动器 |
CA2303768C (en) | 1997-09-19 | 2009-11-24 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and vector constructs useful for production of recombinant aav |
CA2304131A1 (en) | 1997-09-19 | 1999-04-01 | James M. Wilson | Method for gene transfer using bcl2 and compositions useful therein |
CA2304168A1 (en) | 1997-09-19 | 1999-04-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods and cell line useful for production of recombinant adeno-associated viruses |
US6953690B1 (en) | 1998-03-20 | 2005-10-11 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses |
DE69922934T2 (de) | 1998-03-20 | 2005-12-08 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Zusammensetzungen und Verfahren zur helfer-freien Herstellung von rekombinanten Adeno-assoziierten Viren |
WO1999058140A1 (en) * | 1998-05-11 | 1999-11-18 | University Of Southern California | Methods to increase white blood cell survival after chemotherapy |
WO1999061601A2 (en) | 1998-05-28 | 1999-12-02 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Aav5 vector and uses thereof |
WO2000028061A2 (en) | 1998-11-05 | 2000-05-18 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same |
US6759237B1 (en) * | 1998-11-05 | 2004-07-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same |
US6387368B1 (en) | 1999-02-08 | 2002-05-14 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof |
US6258595B1 (en) | 1999-03-18 | 2001-07-10 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses |
JP4693244B2 (ja) | 1999-03-18 | 2011-06-01 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | 組換えアデノ随伴ウイルスのヘルパー無しの生産のための組成物および方法 |
EP1183380A1 (en) | 1999-06-02 | 2002-03-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods useful for production of recombinant viruses which require helper viruses |
JP2003523320A (ja) * | 1999-09-29 | 2003-08-05 | ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア | ウイルスベクターの迅速なpeg改変方法、高められた遺伝子形質導入のための組成物、高められた物理的安定性を伴う組成物、およびそのための用途 |
US6365394B1 (en) | 1999-09-29 | 2002-04-02 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Cell lines and constructs useful in production of E1-deleted adenoviruses in absence of replication competent adenovirus |
US7115391B1 (en) | 1999-10-01 | 2006-10-03 | Genovo, Inc. | Production of recombinant AAV using adenovirus comprising AAV rep/cap genes |
WO2001025462A1 (en) * | 1999-10-01 | 2001-04-12 | Genovo, Incorporated | Production of recombinant aav using adenovirus comprising aav rep/cap genes |
US6821512B1 (en) * | 1999-12-03 | 2004-11-23 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for increasing packaging and yield of recombinant adenoviruses using multiple packaging signals |
CA2392537A1 (en) | 1999-12-03 | 2001-06-07 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Compositions and methods for increasing packaging and yields of recombinant adenoviruses using multiple packaging signals |
CA2373110A1 (en) * | 2000-03-14 | 2001-09-20 | Neurologix, Inc. | Production of chimeric capsid vectors |
US6468524B1 (en) * | 2000-03-22 | 2002-10-22 | The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | AAV4 vector and uses thereof |
US6855314B1 (en) | 2000-03-22 | 2005-02-15 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | AAV5 vector for transducing brain cells and lung cells |
AU2001255575B2 (en) | 2000-04-28 | 2006-08-31 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Recombinant aav vectors with aav5 capsids and aav5 vectors pseudotyped in heterologous capsids |
AU2001289177A1 (en) | 2000-08-30 | 2002-03-13 | Haplogen, Llc | Method for determining alleles |
AU2002248297A1 (en) * | 2001-01-05 | 2002-07-16 | Children's Hospital, Inc. | Aav2 vectors and methods |
US7749492B2 (en) * | 2001-01-05 | 2010-07-06 | Nationwide Children's Hospital, Inc. | AAV vectors and methods |
NZ532635A (en) * | 2001-11-13 | 2007-05-31 | Univ Pennsylvania | A method of identifying unknown adeno-associated virus (AAV) sequences and a kit for the method |
PT1453547T (pt) | 2001-12-17 | 2016-12-28 | Univ Pennsylvania | Sequências do vírus adeno-associado (aav) do serotipo 8, vetores contendo as mesmas, e utilizações destas |
AU2002359284A1 (en) * | 2001-12-17 | 2003-06-30 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Adeno-associated virus (aav) serotype 9 sequences, vectors containing same, and uses therefor |
AU2002367943A1 (en) * | 2001-12-18 | 2003-12-22 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Improved reagents and methods for producing parvoviruses |
DK2292780T3 (en) | 2003-09-30 | 2017-12-04 | Univ Pennsylvania | Clades and sequences of adeno-associated virus (AAV), vectors containing them, and uses thereof |
US9819463B2 (en) | 2016-02-18 | 2017-11-14 | Huawei Technologies Co., Ltd. | Method and apparatus for transmitting data in a wireless communication system |
-
2002
- 2002-11-12 PT PT2795539T patent/PT1453547T/pt unknown
- 2002-11-12 DK DK02795539.2T patent/DK1453547T3/en active
- 2002-11-12 EP EP02795539.2A patent/EP1453547B1/en not_active Revoked
- 2002-11-12 FI FIEP18212719.1T patent/FI3517134T3/fi active
- 2002-11-12 ES ES10189725T patent/ES2717377T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-12 EP EP10189725.4A patent/EP2359869B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-12 ES ES18212719T patent/ES2975413T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-12 PT PT10189725T patent/PT2359869T/pt unknown
- 2002-11-12 AU AU2002360291A patent/AU2002360291A1/en not_active Abandoned
- 2002-11-12 DK DK10189725.4T patent/DK2359869T3/en active
- 2002-11-12 CA CA2469785A patent/CA2469785C/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-12 ES ES02795539.2T patent/ES2602352T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-12 JP JP2003552918A patent/JP4810062B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-12 EP EP18212719.1A patent/EP3517134B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-12 WO PCT/US2002/033630 patent/WO2003052051A2/en active Application Filing
-
2003
- 2003-04-25 US US10/423,704 patent/US7282199B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2007
- 2007-09-06 US US11/899,500 patent/US7790449B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2007-10-31 US US11/981,022 patent/US8962330B2/en active Active
- 2007-10-31 US US11/981,191 patent/US8318480B2/en active Active
-
2011
- 2011-07-11 JP JP2011152748A patent/JP5649529B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2013
- 2013-09-13 US US14/025,951 patent/US8962332B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2015
- 2015-01-16 US US14/598,477 patent/US9587250B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2015-01-16 US US14/598,462 patent/US9493788B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2016
- 2016-03-30 US US15/084,615 patent/US9677089B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2016-10-20 US US15/298,760 patent/US10266846B2/en not_active Expired - Lifetime
- 2016-12-19 CY CY20161101313T patent/CY1120162T1/el unknown
-
2017
- 2017-05-01 US US15/582,815 patent/US10301650B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2018
- 2018-09-26 US US16/142,921 patent/US10590435B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2019
- 2019-03-22 CY CY20191100341T patent/CY1121446T1/el unknown
- 2019-04-08 US US16/377,895 patent/US11396663B2/en not_active Expired - Lifetime
-
2020
- 2020-02-28 US US16/804,401 patent/US20200283799A1/en not_active Abandoned
-
2021
- 2021-01-11 US US17/145,844 patent/US20210348190A1/en not_active Abandoned
- 2021-10-01 US US17/492,229 patent/US11390883B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11390883B2 (en) | Adeno-associated virus (AAV) serotype 8 sequences, vectors containing same, and uses therefor | |
ES2526341T3 (es) | Secuencias de serotipo 9 de virus adeno-asociado (AAV), vectores que las contienen, y usos de las mismas | |
EP1456419B1 (en) | A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby |