TW202345913A - 用於脈絡膜上投與之調配物諸如凝膠調配物 - Google Patents

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Abstract

本文提供用於投與至個體眼睛之脈絡膜上腔之醫藥組合物。該等醫藥組合物可包括編碼轉殖基因之重組腺相關病毒(AAV)。本文亦提供用於治療或預防個體疾病之方法，該等方法係藉由向有需要之該個體投與治療有效量之該等醫藥組合物來實施。

Description

用於脈絡膜上投與之調配物諸如凝膠調配物
人眼係高度複雜且高度發育之感覺器官，其易於成為疾病及病症之宿主。世界上約有2.85億人視力受損，其中3900萬人失明，且2.46億人患有中度至重度視力損傷(World Health Organization, 2012, 「Global Data On Visual Impairments 2010」, Geneva: World Health Organization)。失明之一些主要原因為白內障(47%)、青光眼(12%)、年齡相關性黃斑退化(AMD) (9%)及糖尿病性視網膜病變(5%) (World Health Organization, 2007,「Global Initiative For The Elimination Of Avoidable Blindness:Action Plan 2006-2011」, Geneva : World Health Organization)。
基因療法已用於治療某些眼病(例如，參見國際專利申請案第PCT/US2017/027650號(國際公開案第WO 2017/181021 A1號))。腺相關病毒(AAV)係一種有吸引力的基因療法工具，此係由於其具有以下性質：非致病性、宿主廣泛及細胞類型向性感染範圍(包括分裂及非分裂細胞兩者)，以及建立長期轉殖基因表現之能力(例如，Gonçalves, 2005, Virology Journal, 2:43)。
當前用於眼部基因療法之方法(例如，藉由玻璃體內或視網膜下投與)係侵入性的，且存在嚴重阻礙，諸如發生白內障、視網膜脫離及中心凹中之光感受器與視網膜色素上皮(RPE)分離之風險增加。對於改善或消除當前眼部基因療法中之阻礙之療法，存在顯著的未滿足之醫療需求。
作為細小病毒科( Parvoviridae)家族之指定為依賴病毒屬( Dependovirus)之成員，腺相關病毒(AAV)係一種小型無包膜之二十面體病毒，其單股線性DNA基因體為大約4.7千鹼基(kb)至6 kb。非致病性、廣泛之宿主及細胞類型向性感染範圍(包括分裂及非分裂細胞兩者)，以及建立長期轉殖基因表現之能力之性質使得AAV成為一種有吸引力的基因療法工具(例如，Gonçalves, 2005, Virology Journal, 2:43)。
脈絡膜上腔(SCS)係鞏膜與脈絡膜之間的區域，其在注射藥物溶液後擴大(Habot-Wilner, 2019)。隨著注射溶液由生理過程清除，SCS空間恢復至其注射前大小。藥物溶液在SCS內擴散且吸收至毗鄰組織中。脈絡膜中之毛細血管可透過低分子量滲透劑。本揭示案解決了提供如下醫藥組合物之未滿足需求：該等醫藥組合物使得在脈絡膜上腔中停留時間更長，且由此使得功效改良。
在一態樣中，本文提供適於投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組腺相關病毒載體包含編碼轉殖基因之表現盒，且其中該醫藥組合物之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼時： 該醫藥組合物之清除時間介於約5天與約15天之間；且 在投與一小時內之某一時間，注射部位處之SCS厚度介於約400 μm與約800 μm之間；且 在投與約一小時內之某一時間，該醫藥組合物自注射部位之周向擴散為脈絡膜表面之約八分之一或更小。
在一些實施例中，組合物之膠凝溫度為約27℃-32℃。在一些實施例中，組合物之膠凝時間為約15-90秒。在一些實施例中，如在約1 s -1至約1000 s -1之剪切速率下所量測，組合物在5℃下之黏度為約183 mPas。在一些實施例中，如在約1 s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，組合物在5℃下之黏度小於約183 mPas。在一些實施例中，其中如在約1 s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，組合物在20℃下之黏度為約183 mPas。在一些實施例中，如在約1 s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，組合物在20℃下之黏度小於約183 mPas。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物在27℃以下之彈性模數小於約或為約0.1 Pa、小於約或為約0.01 Pa、小於約或為約0.001 Pa或零。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物在約32℃-35℃下之彈性模數為約或至少約0.1 Pa、約或至少約1 Pa、約或至少約10 Pa、約或至少約100 Pa、約或至少約1000 Pa、約或至少約10,000 Pa或約或至少約100,000 Pa。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後之清除時間等於或大於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
在一些實施例中，清除時間為自SCS中或自眼睛中之清除時間。在一些實施例中，清除時間為醫藥組合物及/或重組腺相關病毒(AAV)載體藉由任何標準方法在SCS中偵測不到所需之時間。在一些實施例中，當醫藥組合物及/或重組腺相關病毒(AAV)載體在SCS中之存在量為藉由任何標準方法可偵測量之至多約2%或至多約5%於時之清除時間。在一些實施例中，清除時間為注射後注射部位之厚度減小至約1 nm或更小、約2 nm或更小、約5 nm或更小、約10 nm或更小、約25 nm或更小、約50 nm或更小、約100 nm或更小、約200 nm或更小或約500 nm或更小所需之時間量。在一些實施例中，清除時間為注射後注射部位之厚度減小至約500 nm或更小、約200 nm或更小、約100 nm或更小、約50 nm或更小、約25 nm或更小、約10 nm或更小或偵測不到所需之時間量。在一些實施例中，清除時間為注射後醫藥組合物自注射部位周向擴散以覆蓋眼睛脈絡膜之約十六分之一或更多、約八分之一或更多、約四分之一或更多、約二分之一或更多、約四分之三或更多或全部周邊所需之時間量。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後之周向擴散小於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之周向擴散，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。在一些實施例中，在脈絡膜上投與後之周向擴散小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後注射部位處之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後注射部位處之厚度，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後在眼睛中偵測到轉殖基因之表現水準之時間段長於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在眼睛中偵測到轉殖基因之表現水準之時間段，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後眼睛中轉殖基因產物之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛中轉殖基因產物之濃度，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後眼睛後部(例如視網膜)中轉殖基因產物之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛後部中轉殖基因產物之濃度，及/或在脈絡膜上投與醫藥組合物後眼睛外層(例如鞏膜)中轉殖基因產物之濃度低於在脈絡膜上投與本文所揭示之參考醫藥組合物後眼睛外層中轉殖基因產物之濃度。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後注射部位處之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後注射部位處之轉導率，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
在一些實施例中，醫藥組合物之黏度及/或彈性模數及參考醫藥組合物之黏度及/或彈性模數係在相同的剪切速率下量測。在一些實施例中，醫藥組合物之黏度及/或彈性模數係在至少約1,000 s-1、2,000 s-1、3,000 s-1、4,000 s-1、5,000 s-1、6,000 s-1、7,000 s-1、8,000 s-1、9,000 s-1、10,000 s-1、15,000 s-1、20,000 s-1或30,000 s-1之剪切速率下量測。
在一些實施例中，轉殖基因不為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。在一些實施例中，重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。在一些實施例中，重組AAV為AAV8。在一些實施例中，重組AAV為AAV9。
在一些實施例中，醫藥組合物包含蔗糖。在一些實施例中，醫藥組合物不包含蔗糖。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間變長至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間為約6天至約15天、約7天至約15天、約8天至約15天、約9天至約15天、約10天至約15天、約11天至約15天、約12天至約15天、約13天至約15天、約14天至約15天、約5天至約14天、約5天至約13天、約5天至約12天、約5天至約11天、約5天至約10天、約5天至約9天、約5天至約8天、約5天至約7天或約5天至約6天。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間不早於約5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或15天。在一些實施例中，參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間為至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。在一些實施例中，清除時間為自SCS中或自眼睛中之清除時間。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後注射部位處之厚度變大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後注射部位處之厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後注射部位處之厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。在一些實施例中，在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後注射部位處之厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後注射部位處之厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。
在一些實施例中，在投與一小時內之某一時間，注射部位處之SCS厚度為約400 μm至約700 μm、約400 μm至約600 μm、約400 μm至約500 μm、約500 μm至約800 μm、約600 μm至約800 μm、700 μm至約800 μm。在一些實施例中，投與一小時內之時間係在投與約5分鐘內、投與約10分鐘內、投與約15分鐘內、投與約20分鐘內、投與約30分鐘內、投與約45分鐘內或投與約60分鐘內。
在一些實施例中，在投與約5分鐘內、投與約10分鐘內、投與約15分鐘內、投與約20分鐘內、投與約30分鐘內、投與約45分鐘內或投與約60分鐘內之某一時間，醫藥組合物自注射部位之周向擴散為脈絡膜表面之約八分之一或更小。在一些實施例中，自注射部位之周向擴散為脈絡膜表面之約十六分之一或更小。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後眼睛中轉殖基因之濃度變高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在至少約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天內在眼睛中偵測到轉殖基因。在一些實施例中，在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後在眼睛中偵測到轉殖基因。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之更長時間段變長至少4小時、8小時、12小時、16小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後注射部位處之轉導率變高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV穩定性高於參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性。在一些實施例中，重組AAV穩定性由重組AAV之感染性決定。在一些實施例中，重組AAV穩定性由重組AAV之聚集水準決定。在一些實施例中，重組AAV穩定性由重組AAV所釋放之游離DNA之水準決定。在一些實施例中，與參考醫藥組合物中游離DNA之水準相比，醫藥組合物包含多約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍之游離DNA。
在一些實施例中，與參考醫藥組合物中重組AAV之感染性相比，醫藥組合物中重組AAV之感染性高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中，與參考醫藥組合物中之重組AAV聚集水準相比，醫藥組合物包含低至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之重組AAV聚集。
在一些實施例中，轉殖基因係適於治療或以其他方式改善、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病進展之轉殖基因。
在一些實施例中，人類個體 診斷為患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)、x性聯或貝敦氏病(Batten disease)。在一些實施例中，人類個體診斷為患有青光眼、非傳染性眼色素層炎或激肽釋放酶相關之疾病。
在一些實施例中，AAV編碼棕櫚醯基蛋白質硫酯酶1 (PPT1)或三肽基肽酶1 (TPP1)。在其他實施例中，AAV編碼抗激肽釋放酶抗體或抗原結合片段、抗TNF融合蛋白、抗TNF抗體或抗原結合片段、抗C3抗體或抗原結合片段或抗C5抗體或抗原結合片段。
在一些實施例中，重組AAV基因體拷貝之量係基於載體基因體濃度。在一些實施例中，重組AAV基因體拷貝之量係基於每次投與之基因體拷貝。在一些實施例中，重組AAV基因體拷貝之量係基於投與給人類個體之總基因體拷貝。在一些實施例中，每次投與之基因體拷貝係每次脈絡膜上投與之重組AAV之基因體拷貝。
在一些實施例中，所投與之總基因體拷貝係脈絡膜上投與之重組AAV之總基因體拷貝。在一些實施例中，載體基因體濃度(VGC)為約3 × 10 9GC/mL、約1 × 10 10GC/mL、約1.2 × 10 10GC/mL、約1.6 × 10 10GC/mL、約4 × 10 10GC/mL、約6 × 10 10GC/mL、約2 × 10 11GC/mL、約2.4 × 10 11GC/mL、約2.5 × 10 11GC/mL、約3 × 10 11GC/mL、約6.2 × 10 11GC/mL、約1 × 10 12GC/mL、約2.5 × 10 12GC/mL、約3 × 10 12GC/mL、約5 × 10 12GC/mL、約6 × 10 12GC/mL、約1.5 × 10 13GC/mL、約2 × 10 13GC/mL或約3 × 10 13GC/mL。在一些實施例中，所投與之總基因體拷貝為約6.0 × 10 10個基因體拷貝、約1.6 × 10 11個基因體拷貝、約2.5 × 10 11個基因體拷貝、約3.0 × 10 11個基因體拷貝、約5.0 × 10 11個基因體拷貝、約6.0 × 10 11個基因體拷貝、約1.5 × 10 12個基因體拷貝、約3 × 10 12個基因體拷貝、約1.0 × 10 12GC/mL、約2.5 × 10 12GC/mL或約3.0 × 10 13個基因體拷貝。在一些實施例中，所投與之總基因體拷貝為約6.0 × 10 10個基因體拷貝、約1.6 × 10 11個基因體拷貝、約2.5 × 10 11個基因體拷貝、約5.0 × 10 11個基因體拷貝、約1.5 × 10 12個基因體拷貝、約3 × 10 12個基因體拷貝、約1.0 × 10 12個基因體拷貝、約2.5 × 10 12個基因體拷貝或約3.0 × 10 13個基因體拷貝。
在一些實施例中，將醫藥組合物投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中，將參考醫藥組合物投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中，一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與醫藥組合物。在一些實施例中，一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與參考醫藥組合物。
在一些實施例中，醫藥組合物含有泊洛沙姆(poloxamer) 407及泊洛沙姆188。在一些實施例中，組合物包含16%-22%之泊洛沙姆407。在一些實施例中，組合物包含0-16%之泊洛沙姆188。在一些實施例中，組合物包含19%之泊洛沙姆407及6%之泊洛沙姆188。在一些實施例中，組合物包含18%之泊洛沙姆407及6.5%之泊洛沙姆188。在一些實施例中，組合物包含17.5%之泊洛沙姆407及7%之泊洛沙姆188。
在一些實施例中，組合物包含經改質之杜貝克氏磷酸鹽緩衝鹽水溶液(Dulbecco’s phosphate-buffered saline solution)及視情況表面活性劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況表面活性劑。在一些實施例中，組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況表面活性劑。在一些實施例中，組合物包含18.0% w/v泊洛沙姆407及6.5% w/v泊洛沙姆188與包含5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188之溶液(pH 7.4)之混合物。在一些實施例中，組合物包含18.0% w/v泊洛沙姆407及6.5% w/v泊洛沙姆188，其係於包含5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188之溶液(pH 7.4)中。
在一態樣中，本文提供適於投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組腺相關病毒載體包含編碼轉殖基因之表現盒，其中該醫藥組合物包含18.0% w/v泊洛沙姆407及6.5% w/v泊洛沙姆188，其係於包含5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188之溶液(pH 7.4)中。
在另一態樣中，本文提供治療個體疾病之方法，該方法包括向該個體投與本文所提供之醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物在投與時處於約2℃-10℃之溫度。在一些實施例中，醫藥組合物在投與時處於約20℃-25℃之溫度。
在一些實施例中，醫藥組合物係以小於約43 PSI之注射壓力投與。在一些實施例中，醫藥組合物係以小於約65 PSI之注射壓力投與。在一些實施例中，醫藥組合物係以小於約100 PSI之注射壓力投與。
在一些實施例中，使用29號針投與醫藥組合物。在一些實施例中，使用30號針投與醫藥組合物。
在一些實施例中，醫藥組合物係以約10-15秒之注射時間投與。在一些實施例中，醫藥組合物係以約5-30秒之注射時間投與。
在一些實施例中，個體為人類。
在一些實施例中，疾病選自由以下組成之群：nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)、貝敦氏病、青光眼、非傳染性眼色素層炎及激肽釋放酶相關之疾病。 2.1  說明性實施例
1. 一種適於投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組腺相關病毒載體包含編碼轉殖基因之表現盒，且其中該醫藥組合物具有隨溫度升高而增加之黏度及/或更高之彈性模數，且其中該組合物之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼時： a.    該醫藥組合物之清除時間介於約5天與約15天之間；且 b.    在投與一小時內之某一時間，注射部位處之SCS厚度介於約400 μm與約800 μm之間；且 c.    在投與約一小時內之某一時間，該醫藥組合物自注射部位之周向擴散為脈絡膜表面之約八分之一或更小。
2. 如段落‎1之醫藥組合物，其中該組合物之膠凝溫度為約27℃-32℃。
3. 如段落‎1或‎2之醫藥組合物，其中該組合物之膠凝時間為約15-90秒。
4. 如段落‎1至‎3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1 s -1至約1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在5℃下之黏度為約183 mPas。
5. 如段落‎1至‎3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1 s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在5℃下之黏度小於約183 mPas。
6. 如段落‎1至‎3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1 s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在20℃下之黏度為約183 mPas。
7. 如段落‎1至‎3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1 s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在20℃下之黏度小於約183 mPas。
8. 如段落‎1至‎7中任一項之醫藥組合物，其中本文所提供之醫藥組合物在27℃以下之彈性模數小於約或為約0.1 Pa、小於約或為約0.01 Pa、小於約或為約0.001 Pa或零。
9. 如段落‎1至‎7中任一項之醫藥組合物，其中本文所提供之醫藥組合物在32℃至35℃下之彈性模數為約或至少約0.1 Pa、約或至少約1 Pa、約或至少約10 Pa、約或至少約100 Pa、約或至少約1000 Pa、約或至少約10,000 Pa或約或至少約100,000 Pa。
10. 如段落‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後之清除時間等於或大於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
11. 如段落‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後之周向擴散小於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之周向擴散，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
12. 如段落‎11之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後之該周向擴散變小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
13. 如段落‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後注射部位處之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後注射部位處之厚度，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
14. 如段落‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後在眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準之時間段長於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準之時間段，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼該轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
15. 如段落‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後眼睛中轉殖基因產物之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛中該轉殖基因產物之濃度，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼該轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數； 視情況其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後眼睛後部(例如視網膜)中該轉殖基因產物(TP)之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛後部中該轉殖基因產物之濃度，及/或在脈絡膜上投與該醫藥組合物後眼睛外層(例如鞏膜)中該TP之濃度低於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛外層中該TP之濃度。
16. 如段落‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後注射部位處之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後注射部位處之轉導率，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
17. 如段落‎10、‎11及‎13至16中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之黏度及/或彈性模數與該參考醫藥組合物之黏度及/或彈性模數係在相同的剪切速率下量測。
18. 如段落‎4至‎11及‎13至16中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之黏度及/或彈性模數係在至少約1,000 s -1、2,000 s -1、3,000 s -1、4,000 s -1、5,000 s -1、6,000 s -1、7,000 s -1、8,000 s -1、9,000 s -1、10,000 s -1、15,000 s -1、20,000 s -1或30,000 s -1之剪切速率下量測。
19. 如段落‎1至18中任一項之醫藥組合物，其中該轉殖基因不為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。
20. 如段落‎1至19中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。
21. 如段落‎1至20中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV為AAV8。
22. 如段落‎1至20中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV為AAV9。
23. 如段落‎1至22中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含蔗糖。
24. 如段落‎1至23中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物不包含蔗糖。
25. 如段落‎1至24中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間變長至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
26. 如段落‎1至25中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間為約6天至約15天、約7天至約15天、約8天至約15天、約9天至約15天、約10天至約15天、約11天至約15天、約12天至約15天、約13天至約15天、約14天至約15天、約5天至約14天、約5天至約13天、約5天至約12天、約5天至約11天、約5天至約10天、約5天至約9天、約5天至約8天、約5天至約7天或約5天至約6天。
27. 如段落‎1至26中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間不早於約5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或15天。
28. 如段落‎1至27中任一項之醫藥組合物，其中該參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間為至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。
29. 如段落‎1至28中任一項之醫藥組合物，其中該清除時間係自SCS中或自眼睛中。
30. 如段落‎1至28中任一項之醫藥組合物，其中該清除時間為該醫藥組合物及/或該重組腺相關病毒(AAV)載體藉由任何標準方法在SCS中偵測不到所需之時間。
31. 如段落‎1至28中任一項之醫藥組合物，其中當該醫藥組合物及/或該重組腺相關病毒(AAV)載體在SCS中之存在量為藉由任何標準方法可偵測量之至多約2%或至多約5%時之清除時間。
32. 如段落‎1至28中任一項之醫藥組合物，其中該清除時間為注射後注射部位之厚度減小至約500 nm或更小、約200 nm或更小、約100 nm或更小、約50 nm或更小、約25 nm或更小、約10 nm或更小或偵測不到所需之時間量。
33. 如段落‎1至28中任一項之醫藥組合物，其中該清除時間為注射後該醫藥組合物自注射部位周向擴散以覆蓋眼睛脈絡膜之約十六分之一或更多、約八分之一或更多、約四分之一或更多、約二分之一或更多、約四分之三或更多或全部周邊所需之時間量。
34. 如段落‎13及19至33中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後注射部位處之厚度變大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
35. 如段落‎13及19至33中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後注射部位處之厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。
36. 如段落‎13及19至33中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後注射部位處之厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。
37. 如段落‎13及19至33中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後注射部位處之厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。
38. 如段落1至37中任一項之醫藥組合物‎，其中在投與一小時內之某一時間，注射部位處之SCS厚度為約400 μm至約700 μm、約400 μm至約600 μm、約400 μm至約500 μm、約500 μm至約800 μm、約600 μm至約800 μm、700 μm至約800 μm。
39. 如段落38之醫藥組合物‎，其中投與一小時內之該時間係在投與約5分鐘內、投與約10分鐘內、投與約15分鐘內、投與約20分鐘內、投與約30分鐘內、投與約45分鐘內或投與約60分鐘內。
40. 如段落‎13及19至39中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後注射部位處之厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。
41. 如段落1至40中任一項之醫藥組合物，其中在投與約5分鐘內、投與約10分鐘內、投與約15分鐘內、投與約20分鐘內、投與約30分鐘內、投與約45分鐘內或投與約60分鐘內之某一時間，該醫藥組合物自注射部位之周向擴散為脈絡膜表面之約八分之一或更小。
42. 如段落41之醫藥組合物‎，其中自注射部位之該周向擴散為脈絡膜表面之約十六分之一或更小。
43. 如段落‎15及19至42中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後眼睛中該轉殖基因之濃度變高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
44. 如段落‎14及19至43中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之更長時間段變長至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
45. 如段落‎1至‎44中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在至少約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天內在眼睛中偵測到該轉殖基因。
46. 如段落‎10至45中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後在眼睛中偵測到該轉殖基因。
47. 如段落‎16及19至46中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後注射部位處之轉導率變高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
48. 如段落‎1至47中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之重組AAV穩定性高於該參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性。
49. 如段落48之醫藥組合物，其中該重組AAV穩定性係由該重組AAV之感染性決定。
50. 如段落48之醫藥組合物，其中該重組AAV穩定性係由該重組AAV之聚集水準決定。
51. 如段落48之醫藥組合物，其中該重組AAV穩定性係由該重組AAV所釋放之游離DNA之水準決定。
52. 如段落51之醫藥組合物，其中與該參考醫藥組合物中游離DNA之水準相比，該醫藥組合物包含多約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍之游離DNA。
53. 如段落49之醫藥組合物，其中與該參考醫藥組合物中該重組AAV之感染性相比，該醫藥組合物中該重組AAV之感染性高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
54. 如段落50之醫藥組合物，其中與該參考醫藥組合物中之重組AAV聚集水準相比，該醫藥組合物包含低至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之重組AAV聚集。
55. 如段落‎1至54中任一項之醫藥組合物，其中該轉殖基因係適於治療或以其他方式改善、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病進展之轉殖基因。
56. 如段落‎1至55中任一項之醫藥組合物，其中該人類個體診斷為患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)、x性聯或貝敦氏病。
57. 如段落‎1至55中任一項之醫藥組合物，其中該人類個體診斷為患有青光眼、非傳染性眼色素層炎或激肽釋放酶相關之疾病。
58. 如段落1至57中任一項之醫藥組合物，其中該AAV編碼棕櫚醯基蛋白質硫酯酶1 (PPT1)、三肽基肽酶1 (TPP1)、抗激肽釋放酶抗體或抗原結合片段、抗TNF融合蛋白、抗TNF抗體或抗原結合片段、抗C3抗體或抗原結合片段或抗C5抗體或抗原結合片段。
59. 如段落‎1至58中任一項之醫藥組合物，其中重組AAV基因體拷貝之量係基於載體基因體濃度。
60. 如段落‎1至59中任一項之醫藥組合物，其中重組AAV基因體拷貝之量係基於每次投與之基因體拷貝。
61. 如段落‎1至60中任一項之醫藥組合物，其中重組AAV基因體拷貝之量係基於投與給該人類個體之總基因體拷貝。
62. 如段落61之醫藥組合物，其中每次投與之基因體拷貝係每次脈絡膜上投與之該重組AAV之基因體拷貝。
63. 如段落61之醫藥組合物，其中所投與之總基因體拷貝係脈絡膜上投與之該重組AAV之總基因體拷貝。
64. 如段落59至63中任一項之醫藥組合物，其中該載體基因體濃度(VGC)為約3 × 10 9GC/mL、約1 × 10 10GC/mL、約1.2 × 10 10GC/mL、約1.6 × 10 10GC/mL、約4 × 10 10GC/mL、約6 × 10 10GC/mL、約2 × 10 11GC/mL、約2.4 × 10 11GC/mL、約2.5 × 10 11GC/mL、約3 × 10 11GC/mL、約6.2 × 10 11GC/mL、約1 × 10 12GC/mL、約2.5 × 10 12GC/mL、約3 × 10 12GC/mL、約5 × 10 12GC/mL、約6 × 10 12GC/mL、約1.5 × 10 13GC/mL、約2 × 10 13GC/mL或約3 × 10 13GC/mL。
65. 如段落61及63中任一項之醫藥組合物，其中所投與之基因體拷貝總數為約6.0 × 10 10個基因體拷貝、約1.6 × 10 11個基因體拷貝、約2.5 × 10 11個基因體拷貝、約3 × 10 11個基因體拷貝、約5.0 × 10 11個基因體拷貝、約6 × 10 11個基因體拷貝、約3 × 10 12個基因體拷貝、約1.0 × 10 12個基因體拷貝、約1.5 × 10 12個基因體拷貝、約2.5 × 10 12個基因體拷貝或約3.0 × 10 13個基因體拷貝。
66. 如段落60及62中任一項之醫藥組合物，其中所投與之基因體拷貝總數為約6.0 × 10 10個基因體拷貝、約1.6 × 10 11個基因體拷貝、約2.5 × 10 11個基因體拷貝、約3 × 10 11個基因體拷貝、約5.0 × 10 11個基因體拷貝、約6 × 10 11個基因體拷貝、約3 × 10 12個基因體拷貝、約1.0 × 10 12個基因體拷貝、約1.5 × 10 12個基因體拷貝、約2.5 × 10 12個基因體拷貝或約3.0 × 10 13個基因體拷貝。
67. 如段落‎1至66中任一項之醫藥組合物，其中將該醫藥組合物投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
68. 如段落‎10至67中任一項之醫藥組合物，其中將該參考醫藥組合物投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
69. 如段落‎1至68中任一項之醫藥組合物，其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該醫藥組合物。
70. 如段落10至69中任一項之醫藥組合物，其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該參考醫藥組合物。
71. 如段落‎1至70中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物含有泊洛沙姆407及泊洛沙姆188。
72. 如段落‎1至71中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含16%-22%之泊洛沙姆407。
73. 如段落‎1至71中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含0-16%之泊洛沙姆188。
74. 如段落‎1至71中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含19%之泊洛沙姆407及6%之泊洛沙姆188。
75. 如段落‎1至70中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含18%之泊洛沙姆407及6.5%之泊洛沙姆188。
76. 如段落‎1至71中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含17.5%之泊洛沙姆407及7%之泊洛沙姆188。
77. 如段落‎1至76中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含經改質之杜貝克氏磷酸鹽緩衝鹽水溶液及視情況表面活性劑。
78. 如段落‎1至76中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況表面活性劑。
79. 如段落‎1至76中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況表面活性劑。
80. 一種治療個體疾病之方法，該方法包括投與如段落‎1至76中任一項之醫藥組合物。
81. 一種治療個體疾病之方法，該方法包括向該個體投與如段落‎4或‎‎5之醫藥組合物，其中該醫藥組合物在投與時處於約2℃-10℃之溫度。
82. 一種治療個體疾病之方法，該方法包括向該個體投與如段落‎‎6或‎‎8之醫藥組合物，其中該醫藥組合物在投與時處於約20℃-25℃之溫度。
83. 如段落80至82中任一項之方法，其中該醫藥組合物係以小於約43 PSI之注射壓力投與。
84. 如段落80至82中任一項之方法，其中該醫藥組合物係以小於約65 PSI之注射壓力投與。
85. 如段落80至82中任一項之方法，其中該醫藥組合物係以小於約100 PSI之注射壓力投與。
86. 如段落80至85中任一項之方法，其中該醫藥組合物係使用29號針投與。
87. 如段落80至85中任一項之方法，其中該醫藥組合物係使用30號針投與。
88. 如段落80至87中任一項之方法，其中該醫藥組合物係以約10-15秒之注射時間投與。
89. 如段落80至87中任一項之方法，其中該醫藥組合物係以約5-30秒之注射時間投與。
90. 如段落80至89中任一項之方法，其中該個體為人類。
91. 如段落80至90中任一項之方法，其中該疾病選自由以下組成之群：nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)、貝敦氏病、青光眼、非傳染性眼色素層炎及激肽釋放酶相關之疾病。
92. 如段落‎1至76‎中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含18.0% w/v泊洛沙姆407及6.5% w/v泊洛沙姆188，其於包含5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188之溶液(pH 7.4)中。
93. 一種適於投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組腺相關病毒載體包含編碼轉殖基因之表現盒，其中該醫藥組合物包含18.0% w/v泊洛沙姆407及6.5% w/v泊洛沙姆188，其係於包含5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188之溶液(pH 7.4)中。
94. 一種製備如段落92或段落93之醫藥組合物之方法，該方法包括(a)提供包含5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/ml氯化鉀、1.15 mg/ml無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/ml磷酸二氫鉀、40.0 mg/ml (4% w/v)蔗糖、0.001%泊洛沙姆188之溶液(ph 7.4)，及(b)將18.0% w/v泊洛沙姆407及6.5% w/v泊洛沙姆188混合至該溶液中。
95. 如段落94之方法，其中在該混合步驟後，該組合物之pH介於約pH 6.0與約pH 7.9之間。
優先權
本申請案主張2022年4月6日提出申請之美國第63/328,271號之優先權權益，該案係以全文引用的方式併入本文中。 電子提交序列表之引用
本申請案含有電腦可讀序列表，該序列表已以XML檔案格式與本申請案一起提交，其全部內容係以全文引用的方式併入本文中。與本申請案一起提交之序列表XML檔案之標題為「12656-164-228_SEQLISTING.XML」，其創建於2023年3月30日且大小為51,162個位元組。
本文提供適於投與至個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，該等醫藥組合物包含重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組腺相關病毒載體包含編碼轉殖基因之表現盒。個體可為經診斷患有部分‎4.5中所闡述之一或多種疾病之個體。AAV載體在部分‎4.4中予以闡述，且此等載體之劑量闡述於部分‎‎4.3中。在一些實施例中，部分‎4.1中所提供之醫藥組合物之調配方式使得該等醫藥組合物具有部分‎4.2中所闡述之一或多種功能性質。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物具有各種優點，例如清除時間增加或減緩(部分‎‎4.2.1)；周向擴散減少(部分‎4.2.2)；SCS厚度增加(部分‎4.2.3)；AAV水準增加且注射部位處之轉導率增加(部分‎4.2.4)；及在SCS中投與醫藥組合物後轉殖基因之濃度增加。不受理論束縛，可使用如部分‎4.1中所揭示之熱反應性調配物達成功能性質。本文亦提供可用於相關研究中之分析(部分‎4.6)。  4.1  醫藥組合物之調配
本揭示案提供適於脈絡膜上投與之醫藥組合物，其包含重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組腺相關病毒載體包含編碼轉殖基因之表現盒。在一些實施例中，使用在眼外溫度(約32℃-35℃)下具有不同黏度(或「損耗模數(G”)」)值性質之若干種醫藥組合物投與編碼轉殖基因之AAV。在一些實施例中，使用在眼外溫度(約32℃-35℃)下具有不同彈性/儲存模數(G’) 性質之若干種醫藥組合物投與編碼轉殖基因之AAV。
在一些實施例中，醫藥組合物係熱反應性的。術語「熱反應性」為此項技術中所眾所周知，其用以描述在不同溫度下展現不同物理性質之物質。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物在室溫(例如約20℃-25℃)下較在眼外溫度(約32℃-35℃)下具有更低之黏度、更低之損耗模數(G”)及/或更低之彈性/儲存(G’)模數。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物在冷卻時(例如約2℃-10℃)較在眼外溫度(約32℃-35℃)下具有更低之黏度及/或更低之彈性模數(G’)。可將本文所提供之醫藥組合物在醫藥組合物之黏度低於眼外溫度(約32℃-35℃)之溫度(例如冷卻或在室溫下)下投與至個體之眼睛。不希望受任何特定理論束縛，在投與至個體之眼睛(例如脈絡膜上投與)後溫度之變化可導致黏度及/或彈性模數(G’)增加，從而導致組合物在注射部位附近之滯留時間與參考醫藥組合物相比增加，其中該參考醫藥組合物在眼外溫度(約32℃-35℃)下具有更低之黏度。
在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物包含重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組腺相關病毒載體包含編碼轉殖基因之表現盒。在一些實施例中，醫藥組合物與參考醫藥組合物具有相同之載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物與參考醫藥組合物具有相同量之基因體拷貝。在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值高於水在約32℃-35℃下之黏度。在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值高於對照在約32℃-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)。在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值高於通常用於視網膜下注射之溶液在約32℃-35℃下之黏度。在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值高於PBS或dPBS在約32℃-35℃下之黏度。在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值高於漢克氏平衡鹽溶液(Hank’s Balanced Salt Solution, HBSS)在約32℃-35℃下之黏度。在一些實施例中，參考醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)低於在約32℃-35℃下之醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物在約20℃-25℃下之黏度及/或彈性模數(G’)與醫藥組合物相同或相似。在一些實施例中，參考醫藥組合物為對照溶液(例如PBS、水或HBSS)。在一些實施例中，參考醫藥組合物包含蔗糖。在一些實施例中，參考醫藥組合物為常用於AAV視網膜下注射之醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物不為熱反應性的，例如參考醫藥組合物在約20℃-25℃下具有與在約32℃-35℃下實質上相同之黏度及/或彈性模數(G’)，或在升高之溫度下不具有更高之黏度及/或彈性模數(G’)。
在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下、例如在零、0.001、0.01、0.1或1 s -1剪切速率下或在約或至少約1000 s-1之剪切速率下之黏度為約、至少約或至多 約10 cP、15 cP、20 cP、25 cP、30 cP、35 cP、40 cP、45 cP、50 cP、60 cP、70 cP、80 cP、90 cP、100 cP、150 cP、200 cP、250 cP、300 cP、350 cP、400 cP、450 cP、500 cP、550 cP、600 cP、650 cP、700 cP、800 cP、900 cP、1000 cP、2,000 cP、3,000 cP、4,000 cP、5,000 cP、6,000 cP、7,000 cP、8,000 c、9,000 cP、10,000 cP、12,000 cP或15,000 cP。在一些實施例中，剪切速率為約或小於約100 s -1、50 s -1、10 s -1、1 s -1、0.1 s -1、0.01 s -1、0.001 s -1或0.0001 s -1。在一些實施例中，醫藥組合物或參考醫藥組合物之黏度為本文所揭示在例如約或小於約100 s -1、50 s -1、10 s -1、1 s -1, 0.01 s -1、0.001 s -1或0.0001 s -1之剪切速率下之任何黏度。
在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下或參考醫藥組合物(或對照醫藥組合物或相當之醫藥組合物)在約32℃-35℃ 下之黏度(例如如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下所量測)為約或至少約5 cP、約或至少約10 cP、約或至少約15 cP、約或至少約20 cP、約或至少約25 cP、約或至少約30 cP、約或至少約35 cP、約或至少約40 cP、約或至少約45 cP、約或至少約50 cP、約或至少約60 cP、約或至少約70 cP、約或至少約80 cP、約或至少約90 cP、100 cP、約或至少約115 cP、約或至少約120 cP、約或至少約125 cP、約或至少約130 cP、約或至少約135 cP、約或至少約140 cP、約或至少約145 cP、約或至少約150 cP、約或至少約160 cP、約或至少約170 cP、約或至少約180 cP、約或至少約190 cP、約或至少約200 cP、約或至少約300 cP、約或至少約400 cP、約或至少約500 cP、約或至少約600 cP、約或至少約700 cP、約或至少約800 cP、約或至少約900 cP、約或至少約1000 cP、約或至少約1500 cP、約或至少約2000 cP、約或至少約2500 cP、約或至少約3000 cP、約或至少約3500 cP、約或至少約4000 cP、約或至少約4500 cP、約或至少約5000 cP、約或至少約5500 cP、約或至少約6000 cP、約或至少約6500 cP、約或至少約7000 cP、約或至少約7500 cP、約或至少約8000 cP、約或至少約9000 cP、約或至少約10000 cP、約或至少約1×10 3cP、約或至少約3×10 3cP、約或至少約1×10 4cP、約或至少約3×10 4cP、約或至少約1×10 5cP、約或至少約1.7×10 5cP、約或至少約3×10 5cP、約或至少約1×10 6cP、約或至少約3×10 6cP、約或至少約1×10 7cP、約或至少約3×10 7cP、約或至少約1×10 8cP、約或至少約3×10 8cP。在一些實施例中，在約32℃-35℃下之黏度(例如如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下所量測)為約25 cP至約1 × 10 6cP、約25 cP至約1 × 10 4cP、約25 cP至約5,000 cP、約25 cP至約1 × 10 3cP、約100 cP至約1 × 10 6cP、約100 cP至約1 × 10 4cP、約100 cP至約5,000 cP、約100 cP至約1 × 10 3cP。在一些實施例中，在約32℃-35℃下之黏度(例如如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下所量測)為約25 cP至約3×10 6cP、約10 cP至約3×10 8cP、約50 cP至約5000 cP、約10 cP至約15000 cP、約25 cP至約1500 cP、約50 cP至約1500 cP、約25 cP至約3×10 4cP。在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度(例如如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下所量測)為至少約25 cP至約3×10 6cP、至少約10 cP至約3×10 8cP、至少約50 cP至約5000 cP、至少約10 cP至約15000 cP、至少約25 cP至約1500 cP、至少約50 cP至約1500 cP或至少約25 cP至約3×10 4cP。在一些實施例中，相當之醫藥組合物或參考醫藥組合物或對照在約32℃-35℃下之黏度(例如如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下所量測)為約或至多約1 cP 約或至多約2 cP、約或至多約3 cP、約或至多約4 cP、約或至多約5 cP、約或至多約6 cP、約或至多約7 cP、約或至多約8 cP、約或至多約9 cP、約或至多約10 cP、約或至多約15 cP、約或至多約20 cP、約或至多約25 cP、約或至多約30 cP、約或至多約35 cP、約或至多約40 cP、約或至多約45 cP、約或至多約50 cP、約或至多約55 cP、約或至多約60 cP、約或至多約65 cP、約或至多約70 cP、約或至多約75 cP、約或至多約80 cP、約或至多約85 cP、約或至多約90 cP、約或至多約95 cP、約或至多約100 cP、約或至多約200 cP、約或至多約300 cP、約或至多約400 cP、約或至多約500 cP。在一些實施例中，相當之醫藥組合物或參考醫藥組合物或對照在約32℃-35℃下之黏度為約1 cP至約25 cP、約1 cP至約20 cP、約1 cP至約24 cP、約1 cP至約10 cP、約1 cP至約50 cP、約1 cP至約100 cP、約5 cP至約50 cP、約1 cP至約5 cP或約1 cP至約200 cP。
在一些實施例中，參考醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度為約1 cP或小於約1 cP (例如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下)。在一些實施例中，參考醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度小於約1 cP (例如在至少約1000 s -1之剪切速率下)。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物在20℃下之黏度  ≤ 183 mPas。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物在5℃下之黏度  ≤ 183 mPas。由於黏度取決於剪切速率，故醫藥組合物之「黏度」係在0.01 s-1至100,000 s-1之剪切速率之間的任何點處之黏度。在一些實施例中，黏度單位可定義為cP或mPas。在一些情形中，cP與mPas可互換使用。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物在32℃-35℃下之黏度小於265至655 mPas。
在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度為 至少約10 cP或至少約100 cP或至少約1000 cP、或至少約10,000 cP、或至少約70,000 cP、或至多約200,000 cP、或至多約250,000 cP、或至多約300,000 cP或更大。在一些實施例中，剪切速率為約或至少約1000/秒之剪切速率。在一些實施例中，調配物之特徵在於至少300,000 mPas之零剪切黏度。在一些實施例中，調配物之特徵進一步在於在1000 s-1剪切速率下不超過約400 mPas之黏度。
在一些實施例中，與參考醫藥調配物或在約32℃-35℃下具有較低黏度及/或彈性模數(G’)之調配物相比，本文所提供之醫藥組合物在注射後更長時間段地保留在SCS中(或在眼睛中) (在不同的時間點量測)。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物使SCS或注射部位處之厚度擴大(例如與參考醫藥組合物或在約32℃-35℃下具有較低黏度及/或彈性模數(G’)之調配物相比) (參見部分‎4.2.3)。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物在27℃以下之彈性模數小於約或為約0.1 Pa、小於約或為約0.01 Pa、小於約或為約0.001 Pa或零。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物在32℃至35℃下之彈性模數為約或至少約0.1 Pa、約或至少約1 Pa、約或至少約10 Pa、約或至少約100 Pa、約或至少約1000 Pa、約或至少約10,000 Pa或約或至少約100,000 Pa。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物之膠凝溫度超過27℃。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物之膠凝溫度低於32℃。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物之膠凝溫度超過約27℃-32℃。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物之膠凝溫度為約25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃或35℃。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物之膠凝時間長於約10秒。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物之膠凝時間長於約15秒。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物之膠凝時間為約10-15秒、約15-20秒、約20-25秒、約25-30秒、約30-35秒、約35-40秒、約40-45秒、約45-50秒、約50-55秒、約55-60秒、約60-65秒、約65-70秒、約70-75秒、約75-80秒、約80-85秒或約85-90秒。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物之膠凝時間短於90秒。在一些實施例中，膠凝時間係在約34℃下測定。在一些實施例中，膠凝時間係在約32℃-34℃下測定。在一些實施例中，醫藥組合物之膠凝時間長於該組合物之注射時間。在一些實施例中，膠凝時間較注射時間長10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或90%以上。
在一些實施例中，在投與後至少兩小時內，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度足以使注射部位(例如 SCS)之至少一部分擴大至厚度為至少500 μm或約500 μm至約3 mm。在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度足以使注射部位(例如 SCS)擴大至厚度為約750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。在一些實施例中，在投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年內，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度足以使注射部位(例如SCS) SCS)擴大至厚度為約500 μm至約3.0 mm。在一些實施例中，在投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時或至少二十四小時內，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度足以使注射部位(例如 SCS)擴大至厚度為約1 mm至約3 mm。在一些實施例中，在投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年內，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度足以使注射部位(例如 SCS)擴大至厚度為約1 mm至約2 mm。在一些實施例中，在投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年內，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度足以使注射部位(例如 SCS)擴大至厚度為約2 mm至約3 mm。在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度足以在無限期時段內使注射部位(例如 SCS)擴大至厚度為約750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。至少部分地由於醫藥組合物在注射部位(例如 SCS)中之穩定性，可達成無限期時段。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下黏度足以使注射部位(例如 SCS)擴大至厚度為至少500 μm或約500 μm至約3 mm之醫藥組合物所具有之黏度大於水在約32℃-35℃下之黏度(亦即約1 cP)。在一些實施例中，醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度足以使注射部位(例如 SCS)擴大至厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm、10 mm或10 mm以上。在一些實施例中，參考醫藥組合物在約32℃-35℃下之黏度足以使注射部位擴大至厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。
本文亦提供使用本文所揭示之醫藥組合物治療部分‎‎4.5中所闡述之疾病(例如眼病)之方法。在一些實施例中，治療眼病之方法包括向個體(例如人類)投與有效量之醫藥組合物(例如包含編碼轉殖基因之表現盒之重組腺相關病毒(AAV)載體)。在一些實施例中，醫藥組合物投與於個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)中。在一些實施例中，醫藥組合物在投與至SCS時足以引發治療反應之有效量小於醫藥組合物在視網膜下投與時足以引發治療反應之有效量。在一些實施例中，醫藥組合物在投與至SCS時足以引發治療反應之有效量小於醫藥組合物在玻璃體內投與時足以引發治療反應之有效量。在一些實施例中，醫藥組合物在投與至SCS時具有與經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與時相同之載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物在投與至SCS時具有與經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與時相同量之基因體拷貝。在一些實施例中，當投與至SCS時，醫藥組合物足以在個體體內引發治療反應之有效量低於參考醫藥組合物足以在該個體體內引發治療反應之有效量。在一些實施例中，醫藥組合物在投與至SCS時足以引發治療反應之有效量小於參考醫藥組合物在視網膜下投與時足以引發治療反應之有效量。在一些實施例中，醫藥組合物在投與至SCS時足以引發治療反應之有效量小於參考醫藥組合物在玻璃體內投與時足以引發治療反應之有效量。在一些實施例中，醫藥組合物與參考醫藥組合物具有相同之載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物與參考醫藥組合物具有相同量之基因體拷貝。在一些實施例中，醫藥組合物之黏度及/或彈性模數(G’)高於參考醫藥組合物之黏度及/或彈性模數(G’)。
在一些實施例中，醫藥組合物實質上集中在插入部位附近(參見部分‎4.2.1及部分‎4.2.2)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物產生更高水準之轉殖基因表現(濃度) (參見部分‎4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或在SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物產生更高水準之轉殖基因表現(濃度) (參見部分‎4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物產生更高水準之AAV (參見部分‎4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或在SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物產生更高水準之AAV (參見部分‎4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物在注射部位處產生更高之轉導率(或感染率) (參見部分‎4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或在SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物在注射部位處產生更高之轉導率(或 感染率) (參見部分‎4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物使得血管舒張及/或血管滲漏減少。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或在SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物使得血管舒張及/或血管滲漏減少。在一些實施例中，參考醫藥組合物包括重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組腺相關病毒載體包含編碼轉殖基因之表現盒。在一些實施例中，約32℃-35℃下之醫藥組合物較約32℃-35℃下之參考醫藥組合物具有更高之黏度及/或彈性模數(G’)。在一些實施例中，醫藥組合物與參考醫藥組合物具有相同之載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物與參考醫藥組合物具有相同量之基因體拷貝。  4.1.1     黏度之操縱
在一些實施例中，當調配物升溫至約32℃-35℃時，本文所提供之醫藥組合物之黏度及/或彈性模數(G’)增加至遠遠超過水之黏度之值(例如在0.1/秒之剪切速率下至少約100 cP)，此產生高度有效用於放置(例如注射)至個體之眼睛(例如SCS)中之調配物。在一些實施例中，調配物在約32℃-35℃下之相對高之黏度及/或彈性模數增強此等調配物將治療組分(例如包含含有轉殖基因之表現盒之AAV)以實質上均勻之懸浮液形式長時間段地保持在調配物中之能力，且亦可有助於調配物之儲存穩定性。
本文所提供之醫藥組合物(例如 熱反應性醫藥組合物)可包含液體分散介質(「溶劑」)及膠凝劑(「凝膠因子(gelator)」)。溶劑分子可滲透由凝膠因子形成之水膠體網路。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含於水性系統中之親水性聚合物。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含天然聚合物(例如黃原膠、澱粉、結蘭膠(gellan)、蒟蒻、卡拉膠、膠原、纖維蛋白、絲素蛋白、玻尿酸或明膠)。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含合成聚合物(例如幾丁聚糖-β-甘油磷酸鹽、聚(N-異丙基丙烯醯胺) (pNIPAAm)、普郎尼克F127 (pluronic F127)、甲基纖維素或PEG-PCL)。例如，參見Taylor等人，Gels. 2017年3月; 3(1): 4。
在約32℃-35℃下與較低溫度相比具有更高黏度及/或彈性模數(G’)且可用於本揭示案之醫藥組合物中之溶液之非限制性實例包括包含不同濃度之泊洛沙姆407 (P407，CAS編號：9003-11-6)及泊洛沙姆188 (P188，CAS編號：9003-11-6)之溶液。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含16% P407及0% P188。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含22% P407及0% P188。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含16% P407及16% P188。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含22% P407及16% P188。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含19% P407及0% P188。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含16% P407及8% P188。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含22% P407及8% P188。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物包含19% P407及8% P188。  4.1.2     調配物之其他組分
在一些實施例中，本揭示案提供醫藥組合物(例如液體調配物)，其包含重組腺相關病毒(AAV)及以下中之至少一者：磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及表面活性劑。在一些實施例中，醫藥組合物(例如液體調配物)不包含蔗糖。可使用分析(諸如部分‎4.6及/或部分‎5中所闡述之彼等分析)來確定其他組分之存在不干擾本發明調配物之性質，諸如在升高之溫度下更高之黏度及/或彈性模數(G’)。
在一些實施例中，本揭示案提供醫藥組合物，其包含重組腺相關病毒(AAV)及以下中之至少一者：離子鹽賦形劑或緩衝劑、蔗糖及表面活性劑。在一些實施例中，離子鹽賦形劑或緩衝劑可為來自由以下組成之群的一或多種組分：磷酸二氫鉀、磷酸鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、磷酸鈉六水合物、磷酸二氫鈉一水合物、胺丁三醇、參(羥甲基)胺基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)、胺基酸、組胺酸、組胺酸鹽酸鹽(組胺酸-HCl)、琥珀酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉及(4-(2-羥基乙基)-1-六氫吡嗪乙磺酸) (HEPES)、硫酸鈉、硫酸鎂、氯化鎂6-水合物、硫酸鈣、氯化鉀、氯化鈣及檸檬酸鈣。在一些實施例中，表面活性劑可為來自由以下組成之群的一或多種組分：泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80。
在一些實施例中，醫藥組合物包含約、至少約、或至多約以下之無水磷酸氫二鈉(或等效物)：0.5 mg/mL、0.55 mg/mL、0.6 mg/mL、0.65 mg/mL、0.7 mg/mL、0.75 mg/mL、0.8 mg/mL、0.85 mg/mL、0.9 mg/mL、0.95 mg/mL、1 mg/mL、1.05 mg/mL、1.10 mg/mL、1.15 mg/mL、1.20 mg/mL、1.25 mg/mL、1.30 mg/mL、1.35 mg/mL、1.40 mg/mL、1.45 mg/mL、1.50 mg/mL或1.50 mg/mL以上。在一些實施例中，醫藥組合物包含約、至少約、或至多約以下之氯化鈉(或等效物)：4.5 mg/mL、4.55 mg/mL、4.6 mg/mL、4.65 mg/mL、4.7 mg/mL、4.75 mg/mL、4.8 mg/mL、4.85 mg/mL、4.9 mg/mL、4.95 mg/mL、5 mg/mL、5.05 mg/mL、5.10 mg/mL、5.15 mg/mL、5.20 mg/mL、5.25 mg/mL、5.30 mg/mL、5.35 mg/mL、5.40 mg/mL、5.45 mg/mL、5.50 mg/mL、5.55 mg/mL、5.60 mg/mL、5.65 mg/mL、5.70 mg/mL、5.75 mg/mL、5.80 mg/mL、5.81 mg/mL、5.82 mg/mL、5.83 mg/mL、5.84 mg/mL、5.85 mg/mL、5.86 mg/mL、5.87 mg/mL、5.88 mg/mL、5.89 mg/mL、5.90 mg/mL、5.95 mg/mL、6 mg/mL或6 mg/mL以上。在一些實施例中，醫藥組合物包含約、至少約、或至多約以下之氯化鉀及/或磷酸二氫鉀(或其等效物)：0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.03 mg/mL、0.04 mg/mL、0.05 mg/mL、0.06 mg/mL、0.07 mg/mL、0.08 mg/mL、0.09 mg/mL、0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.3 mg/mL、0.4 mg/mL、0.5 mg/mL、0.6 mg/mL、0.7 mg/mL、0.8 mg/mL、0.9 mg/mL、1 mg/mL或1 mg/mL以上。
在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約60 mM至約115 mM。在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約60 mM至約100 mM。在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約65 mM至約95 mM。在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約70 mM至約90 mM。在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約75 mM至約85 mM。
在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約30 mM至約100 mM。在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約35 mM至約95 mM。在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約40 mM至約90 mM。在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約45 mM至約85 mM。在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約50 mM至約80 mM。在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約55 mM至約75 mM。在某些實施例中，醫藥組合物之離子強度為約60 mM至約70 mM。
在某些實施例中，醫藥組合物包含氯化鉀(例如濃度為0.2 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含磷酸二氫鉀(例如濃度為0.2 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含氯化鈉(例如濃度為5.84 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含無水磷酸氫二鈉(例如濃度為1.15 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉及無水磷酸氫二鈉。
在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為3% (重量/體積，30 g/L)至18% (重量/體積，180 g/L)之蔗糖。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為4% (重量/體積，40 g/L)之蔗糖。
在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.001% (重量/體積，0.01 g/L)之泊洛沙姆188  。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積，0.005 g/L)至0.05% (重量/體積，0.5 g/L)之泊洛沙姆188  。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.001% (重量/體積，0.01 g/L)之泊洛沙姆188。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積，0.05 g/L)至0.05% (重量/體積，0.5 g/L)之聚山梨醇酯20。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積，0.05 g/L)至0.05% (重量/體積，0.5 g/L)之聚山梨醇酯80。在一些實施例中，醫藥組合物包含表面活性劑(例如泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及/或聚山梨醇酯80)，其濃度為約、至少約或至多約以下：0.0001%、0.0002%、0.0003%、0.0004%、0.0005%、0.0006%、0.0007%、0.0008%、0.0009%、0.001%、0.002%、0.003%、0.004%、0.005%、0.006%、0.007%、0.008%、0.009%、0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08%、0.09%、0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、0.1%或0.1%以上。
在某些實施例中，醫藥組合物之pH為約7.4。在某些實施例中，醫藥組合物之pH為約6.0至9.0。在某些實施例中，醫藥組合物之pH為7.4。在某些實施例中，醫藥組合物之pH為6.0至9.0。
在某些實施例中，醫藥組合物在經疏水塗覆之玻璃小瓶中。在某些實施例中，醫藥組合物在環烯烴聚合物(COP)小瓶中。在某些實施例中，醫藥組合物在Daikyo Crystal Zenith® (CZ)小瓶中。在某些實施例中，醫藥組合物在經TopLyo塗覆之小瓶中。
在某些實施例中，本文揭示醫藥組合物，其包含重組AAV及以下中之至少一者：(a)濃度為0.2 g/L之氯化鉀，(b)濃度為0.2 g/L之磷酸二氫鉀，(c)濃度為5.84 g/L之氯化鈉，(d)濃度為1.15 g/L之無水磷酸氫二鈉，(e)濃度為4%重量/體積(40 g/L)之蔗糖，(f)濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)之泊洛沙姆188，及(g)水，且其中該重組AAV為AAV8。在一些實施例中，醫藥組合物不包含蔗糖。
在某些實施例中，本文揭示醫藥組合物，其包含重組AAV、18.0% w/v泊洛沙姆407及6.5% w/v泊洛沙姆188，其各自係於包含5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188之溶液(pH 7.4)中。
在一些實施例中，醫藥組合物包含(a)編碼三肽基肽酶1之AAV8或AAV9及以下中之至少一者：(b)濃度為0.2 g/L之氯化鉀，(c)濃度為0.2 g/L之磷酸二氫鉀，(d)濃度為5.84 g/L之氯化鈉，(e)濃度為1.15 g/L之無水磷酸氫二鈉，(f)濃度為4%重量/體積(40 g/L)之蔗糖，(g)濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)之泊洛沙姆188，及(h)水。在一些實施例中，醫藥組合物不包含蔗糖。
在一些實施例中，醫藥組合物具有適於脈絡膜上注射(例如經由脈絡膜上藥物遞送裝置，諸如具有微針之微量注射器)之期望黏度、彈性模數(G’)、密度及/或滲透壓。在一些實施例中，醫藥組合物為液體組合物。在一些實施例中，醫藥組合物為冷凍組合物。在一些實施例中，醫藥組合物為凝膠。
在某些實施例中，醫藥組合物之滲透壓範圍為200 mOsm/L至660 mOsm/L。在某些實施例中，醫藥組合物之滲透壓為約、至少約或至多約以下：200 mOsm/L、250 mOsm/L、300 mOsm/L、350 mOsm/L、400 mOsm/L、450 mOsm/L、500 mOsm/L、550 mOsm/L、600 mOsm/L、650 mOsm/L或660 mOsm/L。
在某些實施例中，基因療法構築體作為AAV載體活性成分在調配緩衝液中之冷凍無菌型單次使用溶液供應。在具體實施例中，適於脈絡膜上投與之醫藥組合物包含重組載體於調配緩衝液中之懸浮液，該調配緩衝液包含生理學上相容之水性緩衝液、表面活性劑及視情況存在之賦形劑。在一些實施例中，構築體於杜貝克氏磷酸鹽緩衝鹽水及0.001%泊洛沙姆188 (pH = 7.4)中調配。
在具體實施例中，組合物包含經改質之杜貝克氏磷酸鹽緩衝鹽水溶液及視情況表面活性劑。在其他具體實施例中，醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況表面活性劑。在其他具體實施例中，組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況表面活性劑。
在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物不為Zeinab等人(European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 114 (2017) 119-13)中所闡述之組合物。 4.2  功能性質 4.2.1     清除時間
本揭示案提供使得自SCS中之清除時間延遲之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)。在一些實施例中，與在約32℃-35℃下非黏性或低黏度及/或彈性較小及/或不膠凝之醫藥組合物相比，在約32℃-35℃下有黏性(或黏性更高)及/或彈性及/或膠凝(或彈性更高及/或膠凝更高)之醫藥組合物使得自SCS中之清除時間延遲。在一些實施例中，與在約32℃-35℃下非黏性或低黏度及/或彈性較小及/或不膠凝之醫藥組合物相比，在約32℃-35℃下有黏性(或黏性更高)及/或彈性及/或膠凝(或彈性更高及/或膠凝更高)之醫藥組合物使得自眼睛中之清除時間延遲。在一些實施例中，與黏性及/或彈性及/或膠凝較低之醫藥組合物相比，黏性及/或彈性及/或膠凝更高之醫藥組合物使得自眼睛中之清除時間延遲。在一些實施例中，在約32℃-35℃下黏性及/或彈性及/或膠凝更高之醫藥組合物的黏度值高於水在約32℃-35℃下之黏度。在一些實施例中，在約32℃-35℃下黏性及膠凝更高之醫藥組合物之黏度值及/或彈性模數值高於通常用於視網膜下注射之溶液在約32℃-35℃下之黏度及/或彈性模數。在一些實施例中，在將醫藥組合物投與至SCS後，醫藥組合物之清除時間等於或高於在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物後參考醫藥組合物之清除時間。在一些實施例中，在將醫藥組合物投與至SCS後，醫藥組合物之清除時間等於或高於在將參考醫藥組合物投與至SCS後參考醫藥組合物之清除時間。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)使得自SCS中之清除時間為約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天。在一些實施例中，自SCS中之清除時間為約3天至約365天、約3天至約300天、約3天至約200天、約3天至約150天、約3天至約125天、約7天至約365天、約7天至約300天、約7天至約200天、約7天至約150天、約7天至約125天。「自SCS中之清除時間」係實質上所有醫藥組合物、醫藥劑或AAV逃離SCS所需之時間。在一些實施例中，「自SCS中之清除時間」係藉由任何標準方法(諸如部分‎4.6及部分‎5中所闡述之彼等方法)在SCS中偵測不到醫藥組合物、醫藥劑或AAV所需之時間。在一些實施例中，「自SCS中之清除時間」係如藉由任何標準方法(諸如部分‎4.6及部分‎5中所闡述之彼等方法)所偵測，醫藥組合物、醫藥劑或AAV以至多約2%或至多約5%之量存在於SCS中之時間。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)使得自眼睛中之清除時間為約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天。在一些實施例中，自眼睛中之清除時間為約3天至約365天、約3天至約300天、約3天至約200天、約3天至約150天、約3天至約125天、約7天至約365天、約7天至約300天、約7天至約200天、約7天至約150天、約7天至約125天。「自眼睛中之清除時間」係實質上所有醫藥組合物、醫藥劑或AAV逃離眼睛所需之時間。在一些實施例中，「自眼睛中之清除時間」係藉由任何方法(諸如部分‎4.6及部分‎5中所闡述之彼等方法)在眼睛中偵測不到醫藥組合物、醫藥劑或AAV所需之時間。在一些實施例中，「自眼睛中之清除時間」係如藉由任何標準方法(諸如部分‎4.6及部分‎5中所闡述之彼等方法)所偵測，醫藥組合物、醫藥劑或AAV以至多約2%或至多約5%之量存在於眼睛中之時間。
在一些實施例中，清除時間不早於(例如自SCS或眼睛中之清除時間不早於)投與醫藥組合物後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，清除時間為在投與醫藥組合物後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)使得清除時間係使用黏性較低及/或彈性較低及/或非膠凝醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV (例如經由視網膜下投與、玻璃體內投與或投與至SCS)時之清除時間的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、長至少5%、長至少10%、長至少15%、長至少20%、長至少25%、長至少30%、長至少35%、長至少40%、長至少45%、長至少50%、長至少55%、長至少60%、長至少65%、長至少70%、長至少75%、長至少80%、長至少85%、長至少90%、長至少95%、長至少100%、長至少150%或長至少200%、長至少250%或長至少300%、長至少400%或長至少500%。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得清除時間係例如使用在約32℃-35℃下黏性較低及/或彈性較低及/或非膠凝之醫藥組合物 以藉由脈絡膜上投與來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV時之清除時間的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、長至少5%、長至少10%、長至少15%、長至少20%、長至少25%、長至少30%、長至少35%、長至少40%、長至少45%、長至少50%、長至少55%、長至少60%、長至少65%、長至少70%、長至少75%、長至少80%、長至少85%、長至少90%、長至少95%、長至少100%、長至少150%或長至少200%、長至少250%或長至少300%、長至少400%或長至少500%。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得清除時間係例如使用在約32℃-35℃下黏性較低之醫藥組合物藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV時之清除時間的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、長至少5%、長至少10%、長至少15%、長至少20%、長至少25%、長至少30%、長至少35%、長至少40%、長至少45%、長至少50%、長至少55%、長至少60%、長至少65%、長至少70%、長至少75%、長至少80%、長至少85%、長至少90%、長至少95%、長至少100%、長至少150%或長至少200%、長至少250%或長至少300%、長至少400%或長至少500%。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下有黏性(例如相對有黏性、中等至超高黏度、或黏性高於水、或黏性高於對照溶液、或黏性高於常用於視網膜下投與之溶液)之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得清除時間係在例如使用相同醫藥組合物經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV時之清除時間的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、長至少5%、長至少10%、長至少15%、長至少20%、長至少25%、長至少30%、長至少35%、長至少40%、長至少45%、長至少50%、長至少55%、長至少60%、長至少65%、長至少70%、長至少75%、長至少80%、長至少85%、長至少90%、長至少95%、長至少100%、長至少150%或長至少200%、長至少250%或長至少300%、長至少400%或長至少500%。
在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與的在約32℃-35℃下相對有黏性及/或有彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之清除時間長於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物之清除時間。在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與的在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之清除時間長於藉由脈絡膜上注射投與的在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或非膠凝之醫藥組合物。在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與的在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之清除時間長於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與的在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或非膠凝之醫藥組合物。在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與的在約32℃-35℃下有黏性及/或有彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之清除時間長於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與的在約32℃-35℃下有同等黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物。
在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與的在約32℃-35℃下有黏性及/或有彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之清除時間較經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與的相同醫藥組合物長至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與的在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之清除時間較藉由脈絡膜上注射投與的在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物長至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與的在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之清除時間較經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與的在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物長至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，經由玻璃體內注射或經由視網膜下注射投與的醫藥組合物之清除時間係在投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天。
在一些實施例中，藉由玻璃體內注射、視網膜下注射或投與至SCS投與之參考醫藥組合物之清除時間係在投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天。
在一些實施例中，清除時間為自眼睛中之清除時間。在一些實施例中，清除時間為自SCS中之清除時間。在一些實施例中，清除時間為自注射部位中之清除時間。
在一些實施例中，「自SCS中之清除時間」係如藉由標準技術(例如活體內成像技術，諸如OCT成像、超高解析度OCT (UHR-OCT)、超音波及三維(3D)冷凍重構)所量測，在注射醫藥組合物、醫藥劑或AAV後，注射部位處或其附近之SCS厚度減小至約1 nm或更小、約2 nm或更小、約5 nm或更小、約10 nm或更小、約25 nm或更小、約50 nm或更小、約100 nm或更小、約200 nm或更小或約500 nm或更小所需之時間量。在一些實施例中，「自SCS中之清除時間」係如藉由標準技術(例如活體內成像技術，諸如OCT成像、UHR-OCT、超音波及三維(3D)冷凍重構)所量測，在注射醫藥組合物、醫藥劑或AAV後，注射部位處或其附近之SCS厚度減小至500 nm或更小、約200 nm或更小、約100 nm或更小、約50 nm或更小、約25 nm或更小、約10 nm或更小或偵測不到所需之時間量。在一些實施例中，使用Heidelberg光學同調斷層掃描(OCT)量測SCS厚度。在一些實施例中，醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)之黏度足以使清除時間為至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，「自SCS中之清除時間」係如藉由標準技術(例如活體內成像技術，諸如OCT成像)所量測，醫藥組合物、醫藥劑或AAV在注射後自注射部位周向擴散以覆蓋脈絡膜表面之約十六分之一或更多、約八分之一或更多、約四分之一或更多、約二分之一或更多、約四分之三或更多或全部所需之時間量。在一些實施例中，醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)之黏度足以使清除時間為至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，將醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)投與至豬眼之脈絡膜上腔(例如小型豬，諸如猶卡坦(Yucatan)小型豬)。在一些實施例中，豬為小型豬。在一些實施例中，小型豬可為哥廷根(Goettingen)、猶卡坦、巴馬香豬(Bama Xiang Zhu)、五指山(Wuzhishan)及/或西雙版納(Xi Shuang Banna)。在一些實施例中，小型豬為猶卡坦。在一些實施例中，醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼之SCS時，醫藥組合物之清除時間介於約5天與約15天、約6天至約15天、約7天至約15天、約8天至約15天、約9天至約15天、約10天至約15天、約11天至約15天、約12天至約15天、約13天至約15天、約14天至約15天、約5天至約14天、約5天至約13天、約5天至約12天、約5天至約11天、約5天至約10天、約5天至約9天、約5天至約8天、約5天至約7天或約5天至約6天之間。在一些實施例中，將醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)投與至豬眼之脈絡膜上腔。在一些實施例中，醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼之SCS時，醫藥組合物之清除時間介於約5天與約15天之間。 4.2.2     周向擴散
在一些實施例中，醫藥組合物集中在注射部位處。在一些實施例中，相較於在眼外溫度(約32℃-35℃)下具有較低黏度及/或彈性模數(G’)及/或不膠凝之相當之醫藥組合物，醫藥組合物更長時間段地集中在注射部位處。在一些實施例中，與藉由視網膜下注射或玻璃體內注射投與醫藥組合物時相比，醫藥組合物在注射於SCS中時 更長時間段地集中在注射部位處。醫藥組合物可具有不同的黏度及/或彈性模數值。在一些實施例中，與在約32℃-35℃下非黏性或具有低黏度及/或不膠凝之醫藥組合物相比，在約32℃-35℃下有黏性及/或彈性及/或膠凝(或黏性更高、彈性更高及/或更具膠凝性)之醫藥組合物更長時間段地保持集中在SCS中。
在一些實施例中，可藉由評估周向擴散(例如2D周向擴散)測定集中性。在一些實施例中，藉由分析SCS在進行注射之象限中之擴大或開口來測定周向擴散(在一些情形中，在2D中，毗鄰脈絡膜之此空間似乎為線性的)。在一些實施例中，醫藥組合物(例如 包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)使得周向擴散較使用在眼外溫度(約32℃-35℃)下黏性較低之參考醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV (例如藉由脈絡膜上注射、藉由視網膜下注射或藉由 玻璃體內注射)時之周向擴散少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、少至少40%、少至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或少至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得周向擴散較使用例如參考醫藥組合物藉由脈絡膜上投與、藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV時之周向擴散少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、少至少40%、少至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或少至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下有黏性(例如相對有黏性、中等至超高黏度、或黏性高於水、或黏性高於對照溶液、或黏性高於常用於視網膜下投與之溶液)或有彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得周向擴散較例如使用相同醫藥組合物藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV時之周向擴散少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、少至少40%、少至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%、或少至少200%、少至少250%、或少至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中，周向擴散可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物後30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定。
在一些實施例中，將醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)投與至豬眼之脈絡膜上腔。在一些實施例中，醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼之SCS時，在投與約5分鐘、約10分鐘、15分鐘、約20分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約1小時、約2小時、約4小時、約8小時或約24小時內之某一時間，醫藥組合物自注射部位之周向擴散為脈絡膜表面之約十六分之一或更小、約八分之一或更小、約四分之一或更小或約二分之一或更小。在一些實施例中，將醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)投與至豬眼之脈絡膜上腔。在一些實施例中，醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼之SCS時，在投與約5分鐘、約10分鐘、15分鐘、約20分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約1小時、約2小時、約4小時、約8小時或約24小時內之某一時間，醫藥組合物自注射部位之周向擴散為脈絡膜表面之約八分之一或更小。在一些實施例中，醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼之SCS時，在投與約1小時內之某一時間，醫藥組合物自注射部位之周向擴散為脈絡膜表面之約八分之一或更小。 4.2.3     SCS厚度
在一些實施例中，可藉由評估在將醫藥組合物投與給個體後之SCS厚度來測定集中性。在一些實施例中，在將醫藥組合物注射在SCS中之後，醫藥組合物增加SCS之厚度。在一些實施例中，SCS擴大以適應在約32℃-35℃下具有低黏度及/或彈性模數(G’)及/或不膠凝之醫藥組合物之輸注。在一些實施例中，輸注較大體積之低黏度及/或低彈性模數及/或非膠凝醫藥組合物不會引起SCS之進一步擴大。在一些實施例中，較大體積之低黏度及/或低彈性模數流體調配物藉由增加SCS中之流體擴散區而非進一步擴大SCS來進行適應。在一些實施例中，將在約32℃-35℃下有黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物輸注至SCS中可使SCS厚度擴大至超過在將低黏度及/或低彈性模數及/或非膠凝醫藥組合物輸注至SCS中時所達成之SCS厚度。在一些實施例中，用在約32℃-35℃下有黏性及/或膠凝之醫藥組合物增加SCS厚度可方便對SCS之觸及，藉此方便或允許處置SCS中之裝置。在一些實施例中，擴大SCS厚度容許醫藥組合物及/或AAV編碼之轉殖基因更長時間段地保留在注射部位處(集中)。在一些實施例中，與在約32℃-35℃下非黏性或具有低黏度及/或低彈性模數及/或不膠凝之醫藥組合物相比，在約32℃-35℃下有黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物更長時間段地增加注射部位處或其附近之厚度。在一些實施例中，與在約32℃-35℃下黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物相比，在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物更長時間段地增加注射部位處或其附近之厚度。在一些實施例中，在將醫藥組合物投與至SCS後注射部位處之厚度等於或高於在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物後參考醫藥組合物在注射部位處之厚度。在一些實施例中，在將醫藥組合物投與至SCS後醫藥組合物在注射部位處之厚度等於或高於在將參考醫藥組合物投與至SCS後參考醫藥組合物在注射部位處之厚度。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下有黏性(例如相對有黏性、中等至超高黏度、或黏性高於水、或黏性高於對照溶液、或黏性高於常用於視網膜下投與之溶液)及/或有彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得SCS厚度增加至係在例如使用在約32℃-35℃下黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物藉由脈絡膜上投與來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV時之SCS厚度的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或大至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得注射部位處或其附近之厚度增加至係在例如使用在約32℃-35℃下黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV時之厚度的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或大至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下有黏性(例如相對有黏性、中等至超高黏度、或黏性高於水、或黏性高於對照溶液、或黏性高於常用於視網膜下投與之溶液)及/或有彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得注射部位處或其附近之厚度增加至係在例如使用相同的醫藥組合物藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV時之厚度的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或大至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)後，在注射部位處所獲得之厚度大於在藉由脈絡膜上注射投與在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物後之厚度。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)後，在注射部位處所獲得之厚度大於在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射投與在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物後的厚度。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32℃-35℃下有黏性及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)後，在注射部位處所獲得之厚度大於在藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物後之厚度。
在一些實施例中，可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物後30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定注射部位處或其附近之厚度(例如SCS處或其附近之厚度)。
在一些實施例中，將醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)投與至豬眼之脈絡膜上腔。在一些實施例中，醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼之SCS時，在投與約5分鐘、約10分鐘、15分鐘、約20分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約1小時、約2小時、約4小時、約8小時或約24小時內之某一時間，注射部位處之SCS厚度介於約400 μm與約800 μm、約400 μm至約700 μm、約400 μm至約600 μm、約400 μm至約500 μm、約500 μm至約800 μm、約600 μm至約800 μm、700 μm至約800 μm之間。在一些實施例中，將醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)投與至豬眼之脈絡膜上腔。在一些實施例中，醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼之SCS時，在投與約5分鐘、約10分鐘、15分鐘、約20分鐘、約30分鐘、約45分鐘、約1小時、約2小時、約4小時、約8小時或約24小時內之某一時間，注射部位處之SCS厚度介於約400 μm與約800 μm之間。在一些實施例中，醫藥組合物(例如經稀釋之醫藥組合物)之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼之SCS時，在投與約1小時內之某一時間，注射部位處之SCS厚度介於約400 μm與約800 μm之間。 4.2.4     注射部位處之轉導率(或感染率)
在一些實施例中，在將醫藥組合物投與於SCS中後，轉導部位處之感染率(或注射速率)等於或高於經由視網膜下投與或經由靜脈內投與來投與相同醫藥組合物後注射部位處之轉導率(或感染率)。在一些實施例中，在將醫藥組合物投與於SCS中後，注射部位處之轉導率(或感染率)等於或高於經由視網膜下或靜脈內投與或向SCS投與來投與相當(例如在約32℃-35℃下黏性較低及/或不膠凝)之醫藥組合物後注射部位處之轉導率(或感染率)。在一些實施例中，醫藥組合物較參考醫藥組合物(在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物)在約32℃-35℃下具有更高之黏度及/或彈性模數(G’)及/或膠凝。在一些實施例中，醫藥組合物與參考醫藥組合物具有相同之載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物與參考醫藥組合物具有相同量之基因體拷貝。在一些實施例中，注射部位處之轉導率(或感染率)之增加係增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後，注射部位處之AAV水準等於或高於經由視網膜下投與或經由靜脈內投與來投與相同醫藥組合物後注射部位處之AAV水準。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後，注射部位處之AAV水準等於或高於經由視網膜下或靜脈內投與或向SCS投與來投與相當(例如在約32℃-35℃下黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝)之醫藥組合物後注射部位處之AAV水準。在一些實施例中，醫藥組合物較參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有更高之黏度及/或彈性模數(G’)及/或膠凝。在一些實施例中，醫藥組合物與參考醫藥組合物(在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物)具有相同之載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物與參考醫藥組合物具有相同量之基因體拷貝。在一些實施例中，注射部位處之AAV水準之增加係增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%、或至少200%、至少250%、或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，在投與後約30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、15小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天測定AAV水準或轉導率(或感染率)。 4.2.5     轉殖基因表現
在一些實施例中，在將醫藥組合物注射於SCS中後，轉殖基因產物之濃度至少等於或高於將參考(例如在約32℃-35℃下黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝)醫藥組合物注射於SCS中後之濃度。在一些實施例中，在將醫藥組合物注射於SCS中後，轉殖基因產物之濃度至少等於或高於藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射參考(在約32℃-35℃下黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝)醫藥組合物後之濃度。在一些實施例中，在將醫藥組合物注射於SCS中後，轉殖基因產物之濃度至少等於或高於藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射相同醫藥組合物後之濃度。
在一些實施例中，與在將相當(在約32℃-35℃下黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝)之醫藥組合物注射於SCS中後相比，在將醫藥組合物注射於SCS中後，在眼睛(例如玻璃體液)中更長時間段地偵測到轉殖基因產物(例如轉殖基因產物之濃度)。在一些實施例中，與在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內投與注射參考(在約32℃-35℃下黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝)醫藥組合物後相比，在將醫藥組合物注射於SCS中後，在眼睛(例如玻璃體液)中更長時間段地偵測到轉殖基因產物(例如轉殖基因產物之濃度)。在一些實施例中，與在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射相同(或在約32℃-35℃下黏度及/或彈性模數(G’)相似)之醫藥組合物後相比，在將醫藥組合物注射於SCS中後，在眼睛(例如玻璃體液)中更長時間段地偵測到轉殖基因產物(例如轉殖基因產物之濃度)。
在一些實施例中，更長時間段係長至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，更長時間段係長約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，在將醫藥組合物投與於SCS中後，在投與後至少約或約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天之時間段內在眼睛(例如玻璃體液)中偵測到轉殖基因。
在一些實施例中，(例如在經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與或向SCS投與來投與參考醫藥組合物後；或經由視網膜下或經由玻璃體內投與來投與醫藥組合物後)，在投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天之時間段內在眼睛(例如玻璃體液)中偵測到轉殖基因。
在一些實施例中，可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定轉殖基因產物在眼睛(例如玻璃體液)中之濃度。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下有黏性(例如相對而言有黏性、中等至超高黏度、或黏性高於水、或黏性高於對照溶液、或黏性高於常用於視網膜下投與之溶液)及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得轉殖基因之濃度升高至係例如使用在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物藉由脈絡膜上投與來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV後之濃度的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或大至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得轉殖基因之濃度升高至係在例如使用在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物(參考醫藥組合物)藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與來投與包含編碼轉殖基因之表現盒之AAV時之濃度的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或大至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在約32℃-35℃下有黏性(例如相對而言有黏性、中等至超高黏度、或黏性高於水、或黏性高於對照溶液、或黏性高於常用於視網膜下投與之溶液)及/或有彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)之脈絡膜上投與使得轉殖基因之濃度升高至係在經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物時之濃度的至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、大至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或大至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)後，轉殖基因產物之濃度大於在藉由脈絡膜上注射投與在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物後之濃度。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32℃-35℃下黏性更高及/或彈性更高及/或膠凝之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)後，轉殖基因產物之濃度大於在藉由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與在約32℃-35℃下相對而言黏性較低及/或彈性較低及/或不膠凝之醫藥組合物後之濃度。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32℃-35℃下有黏性之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)後，轉殖基因產物之濃度大於在藉由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物後之濃度。
在一些實施例中，本文所揭示之醫藥組合物(例如包含AAV之醫藥組合物，該AAV包含編碼轉殖基因之表現盒)經由SCS遞送在眼睛後部(例如視網膜)提供較在眼睛外層(例如鞏膜)中更大之轉殖基因表現及/或組織/細胞轉導。本發明所揭示之醫藥組合物之此等特徵具有優勢，此乃因藉由脈絡膜上投與本發明所揭示之醫藥組合物，不需要視網膜下遞送即可在眼睛後部達成高於眼睛外層之眼部轉殖基因表現。
在一些實施例中，在SCS中注射包含編碼轉殖基因產物(TP)之AAV的本發明所揭示之醫藥組合物後，該TP在視網膜中之濃度等於或高於在SCS中注射包含相同AAV之參考醫藥組合物之TP濃度。在其他實施例中，在SCS中注射包含編碼TP之AAV之醫藥組合物後，與在SCS中注射包含相同AAV之參考醫藥組合物相比，視網膜中TP之濃度相等或更高，且鞏膜中TP之濃度更低。 4.2.6     其他功能性質
在一些實施例中，本文所闡述之醫藥組合物具有適於脈絡膜上注射之期望黏度及/或彈性模數(G’)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV至少與參考醫藥組合物(或相當之醫藥組合物)中之重組AAV一樣穩定。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV至少達到參考醫藥組合物(或相當之醫藥組合物)中之重組AAV之50%穩定性。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或相當之聚集水準。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或相當之感染性水準。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或相當之游離DNA水準。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或相當之活體外相對效能(IVRP)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或相當之大小變化水準。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV相對於冷凍/解凍循環之穩定性較參考醫藥組合物中之相同重組AAV之穩定性高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV相對於冷凍/解凍循環之穩定性為參考醫藥組合物中之相同重組AAV之穩定性的至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，藉由部分‎4.6及部分‎5中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之穩定性。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV展現出較參考醫藥組合物中之相同重組AAV之感染性高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之感染性。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有參考醫藥組合物中之相同重組AAV之至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%之感染性。在某些實施例中，藉由本揭示案中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之病毒感染性。在某些實施例中，藉由部分‎4.6及部分‎5中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之大小。在某些實施例中，在冷凍/解凍循環之前或之後量測大小。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV展現出較參考醫藥組合物中之相同重組AAV之聚集小至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之聚集。在某些實施例中，藉由本揭示案中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之聚集。在某些實施例中，在冷凍/解凍循環之前或之後量測聚集。在某些實施例中，藉由部分‎4.6中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之聚集。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)，例如至少約或約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、12個月、約15個月、約18個月、約24個月、約2年、約3年、約4年內之穩定性較參考醫藥組合物中之相同重組AAV之穩定性高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內之穩定性為參考醫藥組合物中之相同重組AAV之穩定性的至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，藉由本揭示案中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV在一段時間內之穩定性。在某些實施例中，藉由部分‎4.6及部分‎5中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV在一段時間內之穩定性。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV之活體外相對效能(IVRP)較參考醫藥組合物中之相同重組AAV之IVRP高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有與參考醫藥組合物中之相同重組AAV大約相同的活體外相對效能(IVRP)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有參考醫藥組合物中之相同重組AAV之約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%之活體外相對效能(IVRP)。在某些實施例中，藉由本揭示案中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之活體外相對效能(IVRP)。在某些實施例中，在冷凍/解凍循環之前或之後量測活體外相對效能(IVRP)。在某些實施例中，藉由部分‎4.6中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之活體外相對效能(IVRP)。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有較參考醫藥組合物中之相同重組AAV之游離DNA少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之游離DNA。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有與參考醫藥組合物中之相同重組AAV大約相同量之游離DNA。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有大約不超過參考醫藥組合物中之相同重組AAV兩倍之量的游離DNA。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有參考醫藥組合物中之相同重組AAV之約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%之量的游離DNA。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有較參考醫藥組合物中之相同重組AAV多至少約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、約2倍、約3倍、少約2倍或少約3倍之游離DNA。在某些實施例中，藉由部分‎4.6及部分‎5中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之游離DNA。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)，例如至少約或約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約12個月、約15個月、約18個月、約24個月、約2年、約3年及約4年內具有至多20%、15%、10%、8%、5%、4%、3%、2%或1%之大小變化。在某些實施例中，藉由本揭示案中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之大小。在某些實施例中，在冷凍/解凍循環之前或之後量測大小。在某些實施例中，藉由部分‎4.6中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之大小。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV之穩定性較參考醫藥組合物中之相同重組AAV之穩定性高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV與參考醫藥組合物中之相同重組AAV大約一樣穩定(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV之穩定性為參考醫藥組合物中之相同重組AAV之穩定性的至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99% (例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在某些實施例中，藉由部分‎4.6中所揭示之一或多種分析來測定重組AAV之穩定性。
在某些實施例中，如例如藉由部分‎4.6中所揭示之一或多種分析所測定，本文所提供之醫藥組合物能夠儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月，而不失去穩定性。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物能夠在4℃下儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月，而不失去穩定性。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物能夠在≤60℃下儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月，而不失去穩定性。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物能夠在-80℃下儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月，而不失去穩定性。在某些實施例中，本文所提供之醫藥組合物能夠在-20℃下已儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或12個月後在4℃下儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月，而不失去穩定性。
在某些實施例中，如例如藉由部分‎4.6中所揭示之一或多種分析所測定，本文所提供之醫藥組合物能夠首先在-80℃下儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月，接著解凍，且在解凍後在2℃-10℃、4℃-8℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃或 9℃下再儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或12個月，而不失去穩定性。在某些實施例中，如例如藉由部分‎4.6中所揭示之一或多種分析所測定，本文所提供之醫藥組合物能夠首先在-80℃下儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月，接著解凍，且在解凍後在約4℃下再儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或12個月，而不失去穩定性。在某些實施例中，如例如藉由部分‎4.6中所揭示之一或多種分析所測定，本文所提供之醫藥組合物能夠首先在≤60℃下儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24個月，接著解凍，且在解凍後在約4℃下再儲存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或12個月，而不失去穩定性。
可藉由量測視力喪失、感染、發炎及其他安全事件(包括視網膜脫離)之徵象來監測本文所提供之方法或醫藥組合物之效應。在一些實施例中，可使用在約32℃-35℃下具有不同黏度及/或彈性模數(G’) (例如範圍為低黏度至極高黏度)之不同醫藥組合物 將載體遞送至SCS中。在一些實施例中，使用在約32℃-35℃下具有中等至高黏度及/或彈性模數(G’)之醫藥組合物遞送之載體較使用在約32℃-35℃下具有低黏度及/或彈性模數(G’)之醫藥組合物遞送之載體更有效(例如，當投與於SCS中時)。在一些實施例中，與使用在約32℃-35℃下具有低黏度及/或彈性模數(G’)之調配物遞送之載體相比，使用在約32℃-35℃下具有中等至高黏度及/或彈性模數(G’)之調配物遞送之載體使得視力改善。
本文所提供之方法或醫藥組合物之效應亦可藉由美國國家眼科研究所視覺功能問卷Rasch評分版本(National Eye Institute Visual Functioning Questionnaire, the Rasch-scored version, NEI-VFQ-28-R) (綜合評分；活動限制域評分；以及社會情感功能域評分)中相對於基線之變化來量測。在一些實施例中，本文所提供之方法之效應亦可藉由美國國家眼科研究所視覺功能問卷25項版本(NEI-VFQ-25) (綜合評分及心理健康分量表評分)中相對於基線之變化來量測。在一些實施例中，本文所提供之方法之效應亦可藉由黃斑疾病治療滿意度問卷(MacTSQ) (綜合評分；安全性、功效及不適域評分；以及資訊提供及便捷域評分)中相對於基線之變化來量測。
在具體實施例中，本文所闡述之方法或載體(載體調配物)之功效係藉由在約4週、12週、6個月、12個月、24個月、36個月或在其他期望時間點之視力改善來反映。在具體實施例中，視力改善之特徵在於BCVA之增加，例如增加1個字母、2個字母、3個字母、4個字母、5個字母、6個字母、7個字母、8個字母、9個字母、10個字母、11個字母或12個字母，或更多個字母。在具體實施例中，視力改善之特徵在於視覺敏銳度相對於基線增加5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%或更多。
在具體實施例中，在治療後眼睛中沒有發炎或在治療後眼睛中幾乎沒有發炎(例如發炎水準相對於基線增加10%、5%、2%、1%或更少)。  4.3  劑量及投與模式
在一態樣中，本文提供用於治療眼睛病變之脈絡膜上投與之方法，該方法包括向需要治療之人類個體之眼睛中之脈絡膜上腔投與重組病毒載體，該重組病毒載體包含編碼治療產物之核苷酸序列，使得治療產物表現且實現對眼睛病變之治療。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將重組病毒載體注射至脈絡膜上腔中來進行。在某些實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置為微量注射器。在一些實施例中，本文所提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物適於藉由一種、兩種或更多種投與途徑來投與(例如，適於脈絡膜上投與及視網膜下投與)。
在某些實施例中，醫藥組合物(或參考醫藥組合物)之載體基因體濃度(VGC)為約3 × 10 9GC/mL、約1 × 10 10GC/mL、約1.2 × 10 10GC/mL、約1.6 × 10 10GC/mL、約4 × 10 10GC/mL、約6 × 10 10GC/mL、約2 × 10 11GC/mL、約2.4 × 10 11GC/mL、約2.5 × 10 11GC/mL、約3 × 10 11GC/mL、約3.2 × 10 11GC/mL、約6.2 × 10 11GC/mL、約6.5 × 10 11GC/mL、約1 × 10 12GC/mL、約2.5 × 10 12GC/mL、約3 × 10 12GC/mL、約5 × 10 12GC/mL、約1.5 × 10 13GC/mL、約2 × 10 13GC/mL或約3 × 10 13GC/mL。
在某些實施例中，醫藥組合物(或參考醫藥組合物)之載體基因體濃度(VGC)為約3 × 10 9GC/mL、4 × 10 9GC/mL、5 × 10 9GC/mL、6 × 10 9GC/mL、7 × 10 9GC/mL、8 × 10 9GC/mL、9 × 10 9GC/mL、約1 × 10 10GC/mL、約2 × 10 10GC/mL、約3 × 10 10GC/mL、約4 × 10 10GC/mL、約5 × 10 10GC/mL、約6 × 10 10GC/mL、約7 × 10 10GC/mL、約8 × 10 10GC/mL、約9 × 10 10GC/mL、約1 × 10 11GC/mL、約2 × 10 11GC/mL、約3 × 10 11GC/mL、約4 × 10 11GC/mL、約5 × 10 11GC/mL、約6 × 10 11GC/mL、約7 × 10 11GC/mL、約8 × 10 11GC/mL、約9 × 10 11GC/mL、約1 × 10 12GC/mL、約2 × 10 12GC/mL、約3 × 10 12GC/mL、約4 × 10 12GC/mL、約5 × 10 12GC/mL、約6 × 10 12GC/mL、約7 × 10 12GC/mL、約8 × 10 12GC/mL、約9 × 10 12GC/mL、約1 × 10 13GC/mL、約1.5 × 10 13GC/mL、約2 × 10 13GC/mL、約3 × 10 13GC/mL。
在一些實施例中，醫藥組合物之體積為能夠減小分離鞏膜及脈絡膜之最小力之任何體積。在一些實施例中，醫藥組合物之體積為約50 μL至約1000 μL、50 μL至約500 μL、50 μL至約400 μL、50 μL至約350 μL、50 μL至約300 μL、約50 μL至約275 μL、約50 μL至約250 μL、約50 μL至約225 μL、約50 μL至約200 μL、約50 μL至約175 μL、約50 μL至約150 μL、約60 μL至約140 μL、約70 μL至約130 μL、約80 μL至約120 μL、約90 μL至約110 μL或約100 μL。
目前存在用於脈絡膜上腔(SCS)遞送之可用技術。在臨床前，已利用鞏膜瓣技術、導管及標準皮下注射針以及微針達成SC注射。可將750 μm長之中空孔微針(Clearside Biomedical, Inc.)插入體部中，且在臨床試驗中已顯示出前景。如Chitnis等人(Chitnis, G.D.等人，A resistance-sensing mechanical injector for the precise delivery of liquids to target tissue. Nat Biomed Eng3, 621-631 (2019). https://doi.org/10.1038/s41551-019-0350-2)所闡述，可利用以力感測技術設計之微針進行SC注射。Oxular Limited正在開發一種在脈絡膜上腔中推進帶照明之插管之遞送系統(Oxulumis)。Orbit裝置(Gyroscope)係一種專門設計之系統，其能夠用撓性插管對脈絡膜上腔進行插管。將插管內部之微針推進至視網膜下腔中，以使能夠進行靶向劑量遞送。亦可使用微型支架達成對SCS之內部(ab interno)觸及，該微型支架用作微創青光眼手術(MIGS)裝置。實例包括CyPass®微型支架(Alcon, Fort Worth, Texas, US)及iStent® (Glaukos)，其以外科手術方式植入以提供自前房至SCS之導管以排出房水，而不形成濾過泡。考慮用於脈絡膜上遞送之其他裝置包括英國專利公開案第GB 2531910A號及美國專利第10,912,883 B2號中所闡述之彼等裝置。
在一些實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置係具有1毫米30號針之注射器。在一些實施例中，注射器具有更大之圓周(例如29號針)。在使用此裝置進行注射期間，針穿刺至鞏膜底部且含有藥物之流體進入脈絡膜上腔，從而導致脈絡膜上腔擴大。因此，在注射期間有觸覺及視覺反饋。注射後，流體向後流動且主要在脈絡膜及視網膜中吸收。此導致自所有視網膜細胞層及脈絡膜細胞中產生轉殖基因蛋白。使用此類型之裝置及程序容許快速且簡便之診室內程序，同時併發症風險低。
在一些實施例中，基於醫藥組合物之黏度來選擇微針或注射器。在一些實施例中，基於投與醫藥組合物時在眼睛中(例如在SCS中)產生之壓力來選擇微針。舉例而言，在約32℃-35℃下具有中等或高黏度及/或彈性模數(G’)之醫藥組合物在注射時可受益於較寬微針之使用。在一些實施例中，與使用較窄微針時獲得之壓力相比，當使用較寬微針時，SCS中之壓力更低。在一些實施例中，使用10號針、11號針、12號針、13號針、14號針、15號針、16號針、17號針、18號針、19號針、20號針、21號針、22號針、23號針、24號針、25號針、26號針、27號針、28號針、29號針、30號針、31號針、32號針、33號針或34號針。在一些實施例中，使用27號針。在一些實施例中，使用28號針。在一些實施例中，使用29號針。在一些實施例中，使用30號針。在一些實施例中，使用31號針。在一些實施例中，使用小於27號針之針號。在一些實施例中，使用大於27號針之針號。在一些實施例中，使用小於30號針之針號。在一些實施例中，使用高於30號針之針號。
在一些實施例中，醫藥組合物投與期間之壓力為約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中，醫藥組合物投與期間之壓力不大於約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中，醫藥組合物投與期間打開SCS之壓力不大於約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中，醫藥組合物投與期間之壓力(或打開SCS所需之壓力)介於20 PSI與50 PSI、20 PSI與75 PSI、20 PSI與40 PSI、10 PSI與40 PSI、10 PSI與100 PSI或10 PSI與80 PSI之間。在一些實施例中，壓力隨著注射速率降低而降低(例如，壓力自4秒注射速率降低至10秒注射速率)。在一些實施例中，壓力隨著針之大小增加而降低。
在一些實施例中，以小於43 PSI之注射壓力將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，以約43 PSI之注射壓力將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，以約43-65 PSI之注射壓力將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，以約65 PSI之注射壓力將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，以小於65 PSI之注射壓力將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，以約65-100 PSI之注射壓力將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，以約100 PSI之注射壓力將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，以小於100 PSI之注射壓力將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。
在一些實施例中，在約5-10秒之注射時間內將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，在約10-15秒之注射時間內將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，在約15-20秒之注射時間內將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，在約20-25秒之注射時間內將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，在約25-30秒之注射時間內將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，在小於30秒之注射時間內將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。在一些實施例中，在為組合物在眼外溫度(約32℃-35℃)下之膠凝時間長度之約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%之注射時間內將本文所提供之醫藥組合物投與至人眼。
以下劑量係期望的：維持在眼睛(例如玻璃體液)中C最小為至少0.330 µg/mL，或在房水(眼睛之前房)中為0.110 µg/mL持續三個月之轉殖基因產物之濃度；此後，應維持轉殖基因產物之範圍為1.70至6.60 µg/mL之玻璃體C最小濃度，及/或範圍為0.567至2.20 µg/mL之房水C最小濃度。然而，由於轉殖基因產物連續產生(在組成型啟動子之控制下或在使用缺氧誘導型啟動子時由缺氧條件誘導)，故維持較低濃度可為有效的。轉殖基因濃度可在自體液、眼液、玻璃體液或前房收集之患者流體樣品中進行直接量測，或藉由量測轉殖基因產物之患者血清濃度來估計及/或監測，全身性暴露於轉殖基因產物與玻璃體暴露於轉殖基因產物之比率為約1:90,000。(例如，參見Xu L等人，2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624，第1621頁及第1623頁表5，該文獻係以全文引用的方式併入本文中)。
在某些實施例中，根據每ml之基因體拷貝(GC/mL)或投與至患者眼睛(例如脈絡膜上投與)之基因體拷貝數量來量測劑量。在一些實施例中，投與2.4 × 10 11GC/mL至1 × 10 13GC/mL，投與2.4 × 10 11GC/mL至5 × 10 11GC/mL，投與5 × 10 11GC/mL至1 × 10 12GC/mL，投與1 × 10 12GC/mL至5 × 10 12GC/mL或投與5 × 10 12GC/mL至1 × 10 13GC/mL。在一些實施例中，投與1.5 × 10 13GC/mL至3 × 10 13GC/mL。在一些實施例中，投與約2.4 × 10 11GC/mL、約5 × 10 11GC/mL、約1 × 10 12GC/mL、約2.5 × 10 12GC/mL、約5 × 10 12GC/mL、約1 × 10 13GC/mL或約1.5 × 10 13GC/mL。在一些實施例中，投與1 × 10 9至1 × 10 12個基因體拷貝。在一些實施例中，投與3 × 10 9至2.5 × 10 11個基因體拷貝。在具體實施例中，投與1 × 10 9至2.5 × 10 11個基因體拷貝。在具體實施例中，投與1 × 10 9至1 × 10 11個基因體拷貝。在具體實施例中，投與1 × 10 9至5 × 10 9個基因體拷貝。在具體實施例中，投與6 × 10 9至3 × 10 10個基因體拷貝。在具體實施例中，投與4 × 10 10至1 × 10 11個基因體拷貝。在具體實施例中，投與2 × 10 11至1.5 × 10 12個基因體拷貝。在具體實施例中，投與約3 × 10 9個基因體拷貝(此對應於約1.2 × 10 10GC/mL，以250 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約1 × 10 10個基因體拷貝(此對應於約4 × 10 10GC/mL，以250 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約6 × 10 10個基因體拷貝(此對應於約2.4 × 10 11GC/mL，以250 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約6.4 × 10 10個基因體拷貝(此對應於約3.2 × 10 11GC/mL，以200 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約1.3 × 10 11個基因體拷貝(此對應於約6.5 × 10 11GC/mL，以200 μl體積計)。在一些實施例中，每隻眼睛、或每個劑量、或每種投與途徑投與約6.4 × 10 10個基因體拷貝。在一些實施例中，約6.4 × 10 10個基因體拷貝係所投與之基因體拷貝之總數。在一些實施例中，每隻眼睛、或每個劑量、或每種投與途徑投與約1.3 × 10 11個基因體拷貝。在一些實施例中，約1.3 × 10 11個基因體拷貝係所投與之基因體拷貝之總數。在一些實施例中，每隻眼睛、或每個劑量、或每種投與途徑投與約2.5 × 10 11個基因體拷貝。在一些實施例中，約2.5 × 10 11個基因體拷貝係所投與之基因體拷貝之總數。在一些實施例中，每隻眼睛、或每個劑量、或每種投與途徑投與約5 × 10 11個基因體拷貝。在一些實施例中，約5 × 10 11個基因體拷貝係所投與之基因體拷貝之總數。在一些實施例中，每隻眼睛、或每個劑量、或每種投與途徑投與約3 × 10 12個基因體拷貝。在一些實施例中，約3 × 10 12個基因體拷貝係所投與之基因體拷貝之總數。在另一具體實施例中，投與約1.6 × 10 11個基因體拷貝(此對應於約6.2 × 10 11GC/mL，以250 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約1.55 × 10 11個基因體拷貝(此對應於約6.2 × 10 11GC/mL，以250 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約1.6 × 10 11個基因體拷貝(此對應於約6.4 × 10 11GC/mL，以250 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約2.5 × 10 11個基因體拷貝(此對應於約1.0 × 10 12，以250 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約2.5 × 10 11個基因體拷貝(此對應於約2.5 × 10 12GC/mL，以100 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約5 × 10 11個基因體拷貝(此對應於約5 × 10 12GC/mL，以200 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約1.5 × 10 12個基因體拷貝(此對應於約1.5 × 10 13GC/mL，以100 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約3 × 10 11個基因體拷貝(此對應於約3 × 10 12GC/mL，以100 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約6 × 10 11個基因體拷貝(此對應於約3 × 10 12GC/mL，以200 μl體積計)。在另一具體實施例中，投與約6 × 10 11個基因體拷貝(此對應於約6 × 10 12GC/mL，以100 μl體積計)。
在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約6.0 × 10 10個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約6.4 × 10 10個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約1.3 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約1.5 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約1.6 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約2.5 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約3 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約5.0 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約6 × 10 11個基因體拷貝。在一些實施例中，每隻眼睛、或每個劑量、或每種投與途徑投與約1.5 × 10 12個基因體拷貝。在一些實施例中，約1.5 × 10 12個基因體拷貝係所投與之基因體拷貝之總數。
在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約3 × 10 12個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約1.0 × 10 12GC/mL。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約2.5 × 10 12GC/mL。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約3 × 10 12GC/mL。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約3.0 × 10 13個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與高達3.0 × 10 13個基因體拷貝。
在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由脈絡膜上注射來投與約1.5 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由脈絡膜上注射來投與約2.5 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由脈絡膜上注射來投與約3 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由脈絡膜上注射來投與約5.0 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由脈絡膜上注射來投與約6 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由脈絡膜上注射來投與約1.5 × 10 12個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由脈絡膜上注射來投與約3 × 10 12個基因體拷貝。在某些實施例中，每隻眼睛藉由單次脈絡膜上注射來投與約2.5 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由單次脈絡膜上注射來投與約3 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由體積為100 μl之單次脈絡膜上注射來投與約3 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由體積為200 μl之單次脈絡膜上注射來投與約3 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由兩次脈絡膜上注射來投與約3 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由兩次脈絡膜上注射來投與約3 × 10 11個基因體拷貝，其中每次注射之體積為50 μl。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由兩次脈絡膜上注射來投與約3 × 10 11個基因體拷貝，其中每次注射之體積為100 μl。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由兩次脈絡膜上注射來投與約5.0 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由單次脈絡膜上注射來投與約6 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由體積為100 μl之單次脈絡膜上注射來投與約6 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由體積為200 μl之單次脈絡膜上注射來投與約6 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由兩次脈絡膜上注射來投與約6 × 10 11個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由兩次脈絡膜上注射來投與約6 × 10 11個基因體拷貝，其中每次注射之體積為50 μl。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由兩次脈絡膜上注射來投與約6 × 10 11個基因體拷貝，其中每次注射之體積為100 μl。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由脈絡膜上注射來投與約3.0 × 10 13個基因體拷貝。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛藉由脈絡膜上注射來投與高達3.0 × 10 13個基因體拷貝。在某些實施例中，每隻眼睛藉由體積為100 μl之單次脈絡膜上注射來投與約2.5 × 10 12GC/mL。在某些實施例中，每隻眼睛藉由兩次脈絡膜上注射來投與約2.5 × 10 12GC/mL，其中每次注射之體積為100 μl。在某些實施例中，每隻眼睛藉由體積為100 μl之單次脈絡膜上注射來投與約1.5 × 10 13GC/mL。
在某些實施例中，藉由兩次脈絡膜上注射來投與重組病毒載體。在某些實施例中，右眼中之第一次注射投與於顳上象限中(亦即，在10點鐘與11點鐘位置之間)，且同一隻眼睛中之第二次注射投與於鼻下象限中(亦即，在4點鐘與5點鐘位置之間)。在某些實施例中，右眼中之第一次注射投與於鼻下象限中(亦即，在4點鐘與5點鐘位置之間)，且同一隻眼睛中之第二次注射投與於顳上象限中(亦即，在10點鐘與11點鐘位置之間)。在某些實施例中，左眼中之第一次注射投與於顳上象限中(亦即，在1點鐘與2點鐘位置之間)，且同一隻眼睛中之第二次注射投與於鼻下象限中(亦即，在7點鐘與8點鐘位置之間)。在某些實施例中，左眼中之第一次注射投與於鼻下象限中(亦即，在7點鐘與8點鐘位置之間)，且同一隻眼睛中之第二次注射投與於顳上象限中(亦即，在1點鐘與2點鐘位置之間)。
在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射來投與重組病毒載體。在某些實施例中，右眼中之單次注射投與於顳上象限中(亦即，在10點鐘與11點鐘位置之間)。在某些實施例中，右眼中之單次注射投與於鼻下象限中(亦即，在4點鐘與5點鐘位置之間)。在某些實施例中，左眼中之單次注射投與於顳上象限中(亦即，在1點鐘與2點鐘位置之間)。在某些實施例中，左眼中之單次注射投與於鼻下象限中(亦即，在7點鐘與8點鐘位置之間)。
在一些實施例中，將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至人類個體(例如脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內)一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中，將醫藥組合物或參考醫藥組合物一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與至人類個體。在一些實施例中，每次投與均投與相同量之AAV基因體拷貝。舉例而言，脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內投與相同之基因體拷貝。在一些實施例中，投與相同總量之AAV基因體拷貝。舉例而言，脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內投與相同總量之AAV基因體拷貝，而不管總投與次數如何(例如，若實施一次視網膜下投與且實施兩次脈絡膜上投與，則在一次視網膜下投與中之基因體拷貝與組合之兩次脈絡膜上投與中之基因體拷貝相同)。
如本文所用且除非另有指定，否則術語「約」意指在給定值或範圍之± 10%內。 4.4  構築體及調配物
在一些實施例中，本文所提供之重組載體按以下次序包含以下元件： a)組成型或缺氧誘導型啟動子序列，及b)編碼轉殖基因(例如治療產物)之序列。在某些實施例中，本文所提供之重組載體按以下次序包含以下元件： a)第一ITR序列，b)第一連接體序列，c)組成型或 缺氧誘導型啟動子序列，d)第二連接體序列，e)內含子序列，f)第三連接體序列，g)第一UTR序列，h)編碼轉殖基因之序列，i)第二UTR序列，j)第四連接體序列，k)聚A序列，l)第五連接體序列，及m)第二ITR序列。
在某些實施例中，本文所提供之重組載體按以下次序包含以下元件： a)第一ITR序列，b)第一連接體序列，c)組成型或缺氧誘導型啟動子序列，d)第二連接體序列，e)內含子序列，f)第三連接體序列，g)第一UTR序列，h)編碼轉殖基因之序列，i)第二UTR序列，j)第四連接體序列，k)聚A序列，l)第五連接體序列，及m)第二ITR序列，其中該轉殖基因編碼由可裂解之F/F2A序列分開之輕鏈及重鏈序列。
在一些實施例中，本文所提供之AAV (AAV病毒載體)按以下次序包含以下元件：a)組成型或缺氧誘導型啟動子序列，及b)編碼轉殖基因之序列。在一些實施例中，用於遞送轉殖基因之AAV應對人類視網膜細胞或感光細胞具有向性。此AAV可包括非複製型重組腺相關病毒載體(「rAAV」)，攜帶AAV8衣殼之彼等載體尤佳。在一些實施例中，病毒載體包含信號肽。在一些實施例中，信號肽為MYRMQLLLLIALSLALVTNS (SEQ ID NO: 55)。在一些實施例中，信號肽源自IL-2信號序列。在一些實施例中，病毒載體包含來自表1中所揭示之任何信號肽之信號肽，諸如MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA (VEGF-A信號肽) (SEQ ID NO: 5)；MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA (腓骨蛋白-1信號肽) (SEQ ID NO: 6)；MAPLRPLLIL ALLAWVALA (玻連蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 7)；MRLLAKIICLMLWAICVA (補體因子H信號肽) (SEQ ID NO: 8)；MRLLAFLSLL ALVLQETGT (旋光蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 9)；MKWVTFISLLFLFSSAYS (白蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 22)；MAFLWLLSCWALLGTTFG (胰凝乳蛋白酶原信號肽) (SEQ ID NO: 23)；MYRMQLLSCIALILALVTNS (介白素-2信號肽) (SEQ ID NO: 24)；MNLLLILTFVAAAVA (胰蛋白酶原-2信號肽) (SEQ ID NO: 25)；或MYRMQLLLLIALSLALVTNS (突變型介白素-2信號肽) (SEQ ID NO: 55)。在一些實施例中，適於包裝在AAV衣殼中之病毒載體或其他表現構築體包含(1)側接表現盒之AAV反向末端重複序列(ITR)；(2)調控性控制元件，該調控性控制元件基本上由一或多個增強子及/或啟動子組成，d)聚A信號，及e)視情況內含子；及(3)提供所關注之一或多種RNA或蛋白質產物(例如對其進行編碼)之轉殖基因。
在一些態樣中，本揭示案提供一種供使用之核酸，其中該核酸編碼可操作地連接至本文所闡述之啟動子或增強子-啟動子之治療產物。
在一些態樣中，本揭示案提供一種供使用之核酸，其中該核酸編碼可操作地連接至啟動子之轉殖基因，該啟動子選自由以下組成之群：CB7啟動子(雞β-肌動蛋白啟動子及CMV增強子)、巨細胞病毒(CMV)啟動子、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus, RSV)啟動子、MMT啟動子、EF-1 α啟動子、UB6啟動子、雞β-肌動蛋白啟動子、CAG啟動子、RPE65啟動子及視蛋白啟動子。在具體實施例中，轉殖基因可操作地連接至CB7啟動子。
在某些實施例中，本文提供包含一或多種核酸(例如多核苷酸)之重組載體。核酸可包含DNA、RNA或DNA與RNA之組合。在某些實施例中，DNA包含選自由以下組成之群的序列中之一或多者：啟動子序列、編碼所關注之治療產物(轉殖基因)之序列、非轉譯區及 終止序列。在某些實施例中，本文所提供之重組載體包含啟動子，該啟動子可操作地連接至編碼所關注之治療產物之序列。
在某些實施例中，本文所揭示之核酸(例如多核苷酸)及核酸序列可例如經由熟習此項技術者已知之任何密碼子最佳化技術進行密碼子最佳化(例如，參見Quax等人，2015, Mol Cell 59:149-161之綜述)。
在某些實施例中，本文所提供之重組載體 包含編碼所關注之治療產物(例如轉殖基因)之經修飾之mRNA。在某些實施例中，本文所提供之重組載體包含編碼治療產物之核苷酸序列，該治療產物為shRNA、siRNA或miRNA。
在某些實施例中，本文所提供之載體包含調節蛋白質遞送之組件。在某些實施例中，本文所提供之病毒載體包含一或多種信號肽。信號肽之實例包括(但不限於) VEGF-A信號肽(SEQ ID NO: 5)、腓骨蛋白-1信號肽(SEQ ID NO: 6)、玻連蛋白信號肽(SEQ ID NO: 7)、補體因子H信號肽(SEQ ID NO: 8)、旋光蛋白信號肽(SEQ ID NO: 9)、白蛋白信號肽(SEQ ID NO: 22)、胰凝乳蛋白酶原信號肽(SEQ ID NO: 23)、介白素-2信號肽(SEQ ID NO: 24)及胰蛋白酶原-2信號肽(SEQ ID NO: 25)、突變型介白素-2信號肽(SEQ ID NO: 55)。  4.4.1     病毒載體
在一些實施例中，本文所提供之病毒載體係基於AAV之病毒載體。在較佳實施例中，本文所提供之病毒載體係基於AAV8之病毒載體。在某些實施例中，本文所提供之基於AAV8之病毒載體保留對視網膜細胞之向性。在某些實施例中，本文所提供之基於AAV之載體編碼AAV rep基因(為複製所需)及/或AAV cap基因(為衣殼蛋白之合成所需)。已鑑別出多種AAV血清型。在某些實施例中，本文所提供之基於AAV之載體包含來自一或多種AAV血清型之組件。在某些實施例中，本文所提供之基於AAV之載體包含來自以下中之一或多者之衣殼組件：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。在較佳實施例中，本文所提供之基於AAV之載體包含來自AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh10血清型中之一或多者之組件。在某些實施例中，本文所提供之重組病毒載體經改變使得其在人類中係複製缺陷型的。在某些實施例中，重組病毒載體為雜合載體，例如置入「無助」腺病毒載體中之AAV載體。在某些實施例中，本文提供包含來自第一病毒之病毒衣殼及來自第二病毒之病毒套膜蛋白之重組病毒載體。在具體實施例中，第二病毒為水疱性口炎病毒(VSV)。在更具體之實施例中，套膜蛋白為VSV-G蛋白。
特定實施例中提供AAV8載體，其包含：病毒基因體，該病毒基因體包含表現轉殖基因之表現盒，該表現盒在 調控元件之控制下且側接ITR；及病毒衣殼，該病毒衣殼具有AAV8衣殼蛋白之胺基酸序列或與AAV8衣殼蛋白之胺基酸序列(SEQ ID NO: 48)至少95%、96%、97%、98%、99%或99.9%一致，同時保留AAV8衣殼之生物學功能。在某些實施例中，所編碼之AAV8衣殼具有SEQ ID NO: 48之序列，該序列具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個胺基酸取代且保留AAV8衣殼之生物學功能。
在某些實施例中，本文所闡述之方法中所用之AAV為如Zinn等人，2015, Cell Rep. 12(6): 1056-1068中所闡述之Anc80或Anc80L65，該文獻係以全文引用的方式併入。在某些實施例中，本文所闡述之方法中所用之AAV包含以下胺基酸插入中之一者：如美國專利第9,193,956號；第9458517號；及第9,587,282號以及美國專利申請公開案第2016/0376323號中所闡述之 LGETTRP或LALGETTRP，該等案件各自係以全文引用的方式併入本文中。在某些實施例中，本文所闡述之方法中所用之AAV為如美國專利第9,193,956號；第9,458,517號；及第9,587,282號以及美國專利申請公開案第2016/0376323號中所闡述之AAV.7m8，該等案件各自係以全文引用的方式併入本文中。在某些實施例中，本文所闡述之方法中所用之AAV為美國專利第9,585,971號中所揭示之任何AAV，諸如AAV.PHP.B。在某些實施例中，本文所闡述之方法中所用之AAV為以下專利及專利申請案中之任一者中所揭示之AAV，該等案件各自係以全文引用的方式併入本文中：美國專利第7,906,111號；第8,524,446號；第8,999,678號；第8,628,966號；第8,927,514號；第8,734,809號；第US 9,284,357號；第9,409,953號；第9,169,299號；第9,193,956號；第9458517號；及第9,587,282號；美國專利申請公開案第 2015/0374803號；第2015/0126588號；第2017/0067908號；第2013/0224836號；第2016/0215024號；第2017/0051257號；及國際專利申請案第 PCT/US2015/034799號；第PCT/EP2015/053335號。
基於AAV8之病毒載體用於本文所闡述之某些方法中。基於AAV之病毒載體之核酸序列以及製備重組AAV及AAV衣殼之方法例如在以下中予以教示：美國專利第7,282,199 B2號、美國專利第7,790,449 B2號、美國專利第8,318,480 B2號、美國專利第8,962,332 B2號及國際專利申請案第PCT/EP2014/076466號，該等案件各自係以全文引用的方式併入本文中。在一態樣中，本文提供編碼轉殖基因之基於AAV (例如AAV8)之病毒載體。
在一些實施例中，已顯示重組AAV病毒載體對眼組織具有特定向性，且有效轉導並表現此重組AAV之轉殖基因產物。因此，眼向性載體可用於本文所揭示之方法及醫藥組合物中。在一些實施例中，本文所揭示之方法或醫藥組合物包含對眼後段(諸如視網膜及RPE/脈絡膜)具有增強之向性之AAV病毒載體。在一些實施例中，本文所揭示之方法或醫藥組合物包含重組AAV3B病毒載體。在某些實施例中，AAV載體係PCT國際申請案第PCT/US2021/054008號(PCT國際公開案第WO2022076711A2號，2022年4月14日公開)中所揭示之AAV載體，該案係以全文引用的方式併入本文中。
在某些實施例中，可使用單股AAV (ssAAV)，參見上文。在某些實施例中，可使用自身互補載體，例如scAAV (例如，參見Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82；McCarty等人，2001, Gene Therapy，第8卷，第16期，第1248-1254頁；以及美國專利第6,596,535號；第7,125,717號；及第7,456,683號，該等文獻各自係以全文引用的方式併入本文中)。
在某些實施例中，本文所闡述之方法中所用之病毒載體係基於腺病毒之病毒載體。重組腺病毒載體可用於在轉殖基因中轉移。重組腺病毒可為第一代載體，其具有E1缺失，具有或不具有E3缺失，且表現盒插入至任一缺失區中。重組腺病毒可為第二代載體，其含有E2及E4區之完全或部分缺失。輔助依賴型腺病毒僅保留腺病毒反向末端重複序列及包裝信號(phi)。在具有或不具有保持基因體接近於大約36 kb之野生型大小之填充序列之情形下，將轉殖基因插入在包裝信號與3’ITR之間。用於產生腺病毒載體之例示性方案可參見Alba等人，2005, 「Gutless adenovirus:  last generation adenovirus for gene therapy」, Gene Therapy 12:S18-S27，該文獻係以全文引用的方式併入本文中。
在具體實施例中，用於本文所闡述之方法中之載體係編碼轉殖基因之載體，使得在將載體引入至相關細胞(例如活體內或活體外之視網膜細胞)中後，該細胞表現轉殖基因產物或片段之糖基化及或酪胺酸硫酸化變異體。在具體實施例中，所表現之轉殖基因產物或片段包含糖基化及/或酪胺酸硫酸化模式。  4.4.2     治療產物或轉殖基因
治療產物可為(例如)治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)或治療性適配體。
在某些實施例中，本揭示案提供包含編碼轉殖基因之重組AAV之醫藥組合物。在一些實施例中，本文提供不編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供不編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼三肽基肽酶1 (TPP1)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼TPP1之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼抗激肽釋放酶(抗pKal)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼拉那魯單抗(lanadelumab) Fab或全長抗體之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。
在某些實施例中，本文提供編碼依那西普(etanercept) (抗TNF融合蛋白)之rAAV病毒載體。在某些實施例中，本文提供編碼阿達木單抗(adalimumab)抗體(抗TNF抗體)或其抗原結合片段之rAAV病毒載體。在某些實施例中，本文提供編碼全長抗C3或抗C5抗體、抗C3或抗C5 Fab、補體因子H (CFH)或補體因子H樣(CFHL-1)蛋白之rAAV病毒載體。在某些實施例中，本文提供編碼依庫珠單抗(eculizumab)、雷夫利珠單抗(ravulizumab)、特度魯單抗(tesidolumab)、珂羅利單抗(crovalimab)、NGM621或BB5.1抗體或其抗原結合片段之rAAV病毒載體。
在某些實施例中，治療產物(例如轉殖基因)為：(1)棕櫚醯蛋白硫酯酶1 (PPT1)；(2)三肽基肽酶1 (TPP1)；(3) Battenin (CLN3)；及(4) CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)。
在某些實施例中，本揭示案提供包含編碼轉殖基因之重組AAV之醫藥組合物。在一些實施例中，本文提供編碼三肽基肽酶1 (TPP1)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼TPP1之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼抗激肽釋放酶(抗pKal)蛋白(諸如拉那魯單抗)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼拉那魯單抗Fab或全長抗體之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之rAAV病毒載體。在某些實施例中，rAAV載體係PCT國際申請案第 PCT/US2020/029802號(PCT國際公開案第WO2020219868A1號，2020年10月29日公開)中所揭示之編碼抗體轉殖基因之AAV載體，該案係以全文引用的方式併入本文中。
在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。
在某些實施例中，本文所提供之載體可用於：  (1)與Batten-CLN1相關之眼睛病變，且治療產物為棕櫚醯蛋白硫酯酶1 (PPT1)；(2)與Batten-CLN2相關之眼睛病變，且治療產物為三肽基肽酶1 (TPP1)；(3)與Batten-CLN3相關之眼睛病變，且治療產物為Battenin (CLN3)；(4)與Batten-CLN6相關之眼睛病變，且治療產物為CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；(5)與Batten-CLN7相關之眼睛病變，且治療產物為含主要協助超家族結構域8 (MFSD8)；及(6)與Batten-CLN1相關之眼睛病變，且治療產物為棕櫚醯蛋白硫酯酶1 (PPT1)。 表 1 ：例示性序列
SEQ ID NO: 說明 序列
5 VEGF-A信號肽 MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA
6 腓骨蛋白-1信號肽 MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA
7 玻連蛋白信號肽 MAPLRPLLIL ALLAWVALA
8 補體因子H信號肽 MRLLAKIICLMLWAICVA
9 旋光蛋白信號肽 MRLLAFLSLL ALVLQETGT
22 白蛋白信號肽 MKWVTFISLLFLFSSAYS
23 胰凝乳蛋白酶原信號肽 MAFLWLLSCWALLGTTFG
24 介白素-2信號肽 MYRMQLLSCIALILALVTNS
25 胰蛋白酶原-2信號肽 MNLLLILTFVAAAVA
26 F2A位點 LLNFDLLKLAGDVESNPGP
27 T2A位點 (GSG)EGRGSLLTCGDVEENPGP
28 P2A位點 (GSG)ATNFSLLKQAGDVEENPGP
29 E2A位點 (GSG)QCTNYALLKLAGDVESNPGP
30 F2A位點 (GSG)VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
31 弗林蛋白酶(Furin)連接體 RKRR
32 弗林蛋白酶連接體 RRRR
33 弗林蛋白酶連接體 RRKR
34 弗林蛋白酶連接體 RKKR
35 弗林蛋白酶連接體 R-X-K/R-R
36 弗林蛋白酶連接體 RXKR
37 弗林蛋白酶連接體 RXRR
41 AAV1 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEEVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDEDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNFQSSSTDPATGDVHAMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKNPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL
42 AAV2 MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDRQLDSGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEPVKTAPGKKRPVEHSPVEPDSSSGTGKAGQQPARKRLNFGQTGDADSVPDPQPLGQPPAAPSGLGTNTMATGSGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSTWMGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTNTPSGTTTQSRLQFSQAGASDIRDQSRNWLPGPCYRQQRVSKTSADNNNSEYSWTGATKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPQSGVLIFGKQGSEKTNVDIEKVMITDEEEIRTTNPVATEQYGSVSTNLQRGNRQAATADVNTQGVLPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPSTTFSAAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL
43 AAV3-3 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGVPQPKANQQHQDNRRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRILEPLGLVEEAAKTAPGKKGAVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVRGVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTGTVNHQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL
44 AAV4-4 MTDGYLPDWLEDNLSEGVREWWALQPGAPKPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQQRLQGDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEQAGETAPGKKRPLIESPQQPDSSTGIGKKGKQPAKKKLVFEDETGAGDGPPEGSTSGAMSDDSEMRAAAGGAAVEGGQGADGVGNASGDWHCDSTWSEGHVTTTSTRTWVLPTYNNHLYKRLGESLQSNTYNGFSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGMRPKAMRVKIFNIQVKEVTTSNGETTVANNLTSTVQIFADSSYELPYVMDAGQEGSLPPFPNDVFMVPQYGYCGLVTGNTSQQQTDRNAFYCLEYFPSQMLRTGNNFEITYSFEKVPFHSMYAHSQSLDRLMNPLIDQYLWGLQSTTTGTTLNAGTATTNFTKLRPTNFSNFKKNWLPGPSIKQQGFSKTANQNYKIPATGSDSLIKYETHSTLDGRWSALTPGPPMATAGPADSKFSNSQLIFAGPKQNGNTATVPGTLIFTSEEELAATNATDTDMWGNLPGGDQSNSNLPTVDRLTALGAVPGMVWQNRDIYYQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLIGGFGLKHPPPQIFIKNTPVPANPATTFSSTPVNSFITQYSTGQVSVQIDWEIQKERSKRWNPEVQFTSNYGQQNSLLWAPDAAGKYTEPRAIGTRYLTHHL
45 AAV5 MSFVDHPPDWLEEVGEGLREFLGLEAGPPKPKPNQQHQDQARGLVLPGYNYLGPGNGLDRGEPVNRADEVAREHDISYNEQLEAGDNPYLKYNHADAEFQEKLADDTSFGGNLGKAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPTGKRIDDHFPKRKKARTEEDSKPSTSSDAEAGPSGSQQLQIPAQPASSLGADTMSAGGGGPLGDNNQGADGVGNASGDWHCDSTWMGDRVVTKSTRTWVLPSYNNHQYREIKSGSVDGSNANAYFGYSTPWGYFDFNRFHSHWSPRDWQRLINNYWGFRPRSLRVKIFNIQVKEVTVQDSTTTIANNLTSTVQVFTDDDYQLPYVVGNGTEGCLPAFPPQVFTLPQYGYATLNRDNTENPTERSSFFCLEYFPSKMLRTGNNFEFTYNFEEVPFHSSFAPSQNLFKLANPLVDQYLYRFVSTNNTGGVQFNKNLAGRYANTYKNWFPGPMGRTQGWNLGSGVNRASVSAFATTNRMELEGASYQVPPQPNGMTNNLQGSNTYALENTMIFNSQPANPGTTATYLEGNMLITSESETQPVNRVAYNVGGQMATNNQSSTTAPATGTYNLQEIVPGSVWMERDVYLQGPIWAKIPETGAHFHPSPAMGGFGLKHPPPMMLIKNTPVPGNITSFSDVPVSSFITQYSTGQVTVEMEWELKKENSKRWNPEIQYTNNYNDPQFVDFAPDSTGEYRTTRPIGTRYLTRPL
46 AAV6 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPFGLVEEGAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSSGIGKTGQQPAKKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPATPAAVGPTTMASGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSASTGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTVQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFTFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQNQSGSAQNKDLLFSRGSPAGMSVQPKNWLPGPCYRQQRVSKTKTDNNNSNFTWTGASKYNLNGRESIINPGTAMASHKDDKDKFFPMSGVMIFGKESAGASNTALDNVMITDEEEIKATNPVATERFGTVAVNLQSSSTDPATGDVHVMGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPAEFSATKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEVQYTSNYAKSANVDFTVDNNGLYTEPRPIGTRYLTRPL
47 AAV7 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWDLKPGAPKPKANQQKQDNGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPAKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSSVGSGTVAAGGGAPMADNNEGADGVGNASGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSETAGSTNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLRFKLFNIQVKEVTTNDGVTTIANNLTSTIQVFSDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQSVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFEFSYSFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLARTQSNPGGTAGNRELQFYQGGPSTMAEQAKNWLPGPCFRQQRVSKTLDQNNNSNFAWTGATKYHLNGRNSLVNPGVAMATHKDDEDRFFPSSGVLIFGKTGATNKTTLENVLMTNEEEIRPTNPVATEEYGIVSSNLQAANTAAQTQVVNNQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPANPPEVFTPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNFEKQTGVDFAVDSQGVYSEPRPIGTRYLTRNL
48 AAV8 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPKPKANQQKQDDGRGLVLPGYKYLGPFNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLQAGDNPYLRYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRVLEPLGLVEEGAKTAPGKKRPVEPSPQRSPDSSTGIGKKGQQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPSGVGPNTMAAGGGAPMADNNEGADGVGSSSGNWHCDSTWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNGTSGGATNDNTYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLSFKLFNIQVKEVTQNEGTKTIANNLTSTIQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFTYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSRTQTTGGTANTQTLGFSQGGPNTMANQAKNWLPGPCYRQQRVSTTTGQNNNSNFAWTAGTKYHLNGRNSLANPGIAMATHKDDEERFFPSNGILIFGKQNAARDNADYSDVMLTSEEEIKTTNPVATEEYGIVADNLQQQNTAPQIGTVNSQGALPGMVWQNRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGLKHPPPQILIKNTPVPADPPTTFNQSKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSTSVDFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
49 hu31 MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGSQPAKKKLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGGQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVSTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
50 hu32 MAADGYLPDWLEDTLSEGIRQWWKLKPGPPPPKPAERHKDDSRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGSQPAKKKLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
51 AAV9 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGAPQPKANQQHQDNARGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNAADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLKEDTSFGGNLGRAVFQAKKRLLEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVEQSPQEPDSSAGIGKSGAQPAKKRLNFGQTGDTESVPDPQPIGEPPAAPSGVGSLTMASGGGAPVADNNEGADGVGSSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISNSTSGGSSNDNAYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKRLNFKLFNIQVKEVTDNNGVKTIANNLTSTVQVFTDSDYQLPYVLGSAHEGCLPPFPADVFMIPQYGYLTLNDGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYEFENVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLSKTINGSGQNQQTLKFSVAGPSNMAVQGRNYIPGPSYRQQRVSTTVTQNNNSEFAWPGASSWALNGRNSLMNPGPAMASHKEGEDRFFPLSGSLIFGKQGTGRDNVDADKVMITNEEEIKTTNPVATESYGQVATNHQSAQAQAQTGWVQNQGILPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGNFHPSPLMGGFGMKHPPPQILIKNTPVPADPPTAFNKDKLNSFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYYKSNNVEFAVNTEGVYSEPRPIGTRYLTRNL
53 棕櫚醯蛋白硫酯酶1 (ppt1) Aah08426.1 MASPGCLWLLAVALLPWTCASRALQHLDPPAPLPLVIWHGMGDSCCNPLSMGAIKKMVEKKIPGIYVLSLEIGKTLMEDVENSFFLNVNSQVTTVCQALAKDPKLQQGYNAMGFSQGGQFLRAVAQRCPSPPMINLISVGGQHQGVFGLPRCPGESSHICDFIRKTLNAGAYSKVVQERLVQAEYWHDPIKEDVYRNHSIFLADINQERGINESYKKNLMALKKFVMVKFLNDSIVDPVDSEWFGFYRSGQAKETIPLQETSLYTQDRLGLKEMDNAGQLVFLATEGDHLQLSEEWFYAHIIPFLG
54 三肽基肽酶1 (tpp1) Np_000382.3 MGLQACLLGLFALILSGKCSYSPEPDQRRTLPPGWVSLGRADPEEELSLTFALRQQNVERLSELVQAVSDPSSPQYGKYLTLENVADLVRPSPLTLHTVQKWLLAAGAQKCHSVITQDFLTCWLSIRQAELLLPGAEFHHYVGGPTETHVVRSPHPYQLPQALAPHVDFVGGLHRFPPTSSLRQRPEPQVTGTVGLHLGVTPSVIRKRYNLTSQDVGSGTSNNSQACAQFLEQYFHDSDLAQFMRLFGGNFAHQASVARVVGQQGRGRAGIEASLDVQYLMSAGANISTWVYSSPGRHEGQEPFLQWLMLLSNESALPHVHTVSYGDDEDSLSSAYIQRVNTELMKAAARGLTLLFASGDSGAGCWSVSGRHQFRPTFPASSPYVTTVGGTSFQEPFLITNEIVDYISGGGFSNVFPRPSYQEEAVTKFLSSSPHLPPSSYFNASGRAYPDVAALSDGYWVVSNRVPIPWVSGTSASTPVFGGILSLINEHRILSGRPPLGFLNPRLYQQHGAGLFDVTRGCHESCLDEEVEGQGFCSGPGWDPVTGWGTPNFPALLKTLLNP
55 突變型介白素-2信號肽 MYRMQLLLLIALSLALVTNS
56 AAV3B之衣殼蛋白VP1 MAADGYLPDWLEDNLSEGIREWWALKPGVPQPKANQQHQDNRRGLVLPGYKYLGPGNGLDKGEPVNEADAAALEHDKAYDQQLKAGDNPYLKYNHADAEFQERLQEDTSFGGNLGRAVFQAKKRILEPLGLVEEAAKTAPGKKRPVDQSPQEPDSSSGVGKSGKQPARKRLNFGQTGDSESVPDPQPLGEPPAAPTSLGSNTMASGGGAPMADNNEGADGVGNSSGNWHCDSQWLGDRVITTSTRTWALPTYNNHLYKQISSQSGASNDNHYFGYSTPWGYFDFNRFHCHFSPRDWQRLINNNWGFRPKKLSFKLFNIQVKEVTQNDGTTTIANNLTSTVQVFTDSEYQLPYVLGSAHQGCLPPFPADVFMVPQYGYLTLNNGSQAVGRSSFYCLEYFPSQMLRTGNNFQFSYTFEDVPFHSSYAHSQSLDRLMNPLIDQYLYYLNRTQGTTSGTTNQSRLLFSQAGPQSMSLQARNWLPGPCYRQQRLSKTANDNNNSNFPWTAASKYHLNGRDSLVNPGPAMASHKDDEEKFFPMHGNLIFGKEGTTASNAELDNVMITDEEEIRTTNPVATEQYGTVANNLQSSNTAPTTRTVNDQGALPGMVWQDRDVYLQGPIWAKIPHTDGHFHPSPLMGGFGLKHPPPQIMIKNTPVPANPPTTFSPAKFASFITQYSTGQVSVEIEWELQKENSKRWNPEIQYTSNYNKSVNVDFTVDTNGVYSEPRPIGTRYLTRNL
4.5  疾病
可將本文(例如部分‎4.1)所提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物投與給診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)或貝敦氏病之個體。
在一些實施例中，本文揭示治療診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)或貝敦氏病之個體之方法，該方法係藉由脈絡膜上注射(例如，經由脈絡膜上藥物遞送裝置，諸如具有微針之微量注射器)向該個體投與治療有效量之醫藥組合物來實施。
在一些實施例中，將本文所闡述之醫藥組合物投與給診斷患有乾性AMD之個體，其中該醫藥組合物包含rAAV載體，該載體編碼改善眼睛後段疾病病理學之轉殖基因產物。此醫藥組合物可減緩或阻止乾性AMD之進展或減輕其一或多種症狀，諸如降低地圖樣萎縮之速率或改良視覺敏銳度(或降低視覺敏銳度喪失之速率)。醫藥組合物可脈絡膜上投與，作為將轉殖基因產物遞送至視網膜及/或RPE-脈絡膜或眼睛之其他後段之方法。
對於乾性AMD，可使用此項技術中已知之方法藉由光學同調斷層掃描來量測眼睛之物理變化，包括地圖樣萎縮之變化。可使用活體外補體抑制分析(諸如攻膜複合物(「MAC」)形成、C5a生成及溶血)來評價本文所闡述之組合物及方法之功效。可在任何適當細胞類型中實施補體抑制分析，諸如ARPE19細胞(MAC及C5a分析)、iPSC源性RPE細胞(MAC及C5a分析)或綿羊/兔紅血球(溶血分析)。MAC形成分析量測MAC在RPE細胞表面上之沈積(MAC形成之相對抑制%)。C5a生成分析量測C5抗體防止C5裂解之能力(較少之C5裂解=較少之C5a)。溶血分析容許比較不同補體抑制劑之間的補體抑制(50%補體抑制劑量(ng/ml) (CH50; AH50)。可向動物模型投與本文所闡述之載體，例如脈絡膜上，且接著藉由OCT評價地圖樣萎縮(或其中之變化)、視網膜病理學(RPE之損害或修復)及乾性AMD病理學之其他評價，以及C3a或C5a之減少、C3或C5之裂解或補體活化之其他標記物。
可向動物及動物模型投與本文所闡述之醫藥組合物，例如脈絡膜上，且接著評價轉殖基因產物在靶組織中之濃度(例如，參見實例2至7)。
在一些實施例中，經由脈絡膜上投與向患者投與醫藥組合物，該醫藥組合物含有約2.5 ×10 11GC/眼睛、約5 × 10 11GC/眼睛或約1.5 × 10 12GC/眼睛之醫藥組合物之構築體(例如本揭示案之構築體)，該醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL、4% w/v蔗糖及視情況表面活性劑。在一些實施例中，患者患有糖尿病性視網膜病變。在一些實施例中，患者患有乾性AMD。
在一些實施例中，經由脈絡膜上投與向患者投與醫藥組合物，該醫藥組合物含有約2.5 × 10 11GC/眼睛、約5 × 10 11GC/眼睛或約1.5 × 10 12GC/眼睛之醫藥組合物之構築體(例如本揭示案之構築體)，該醫藥組合物包含10% w/v蔗糖。在一些實施例中，患者患有糖尿病性視網膜病變。在一些實施例中，患者患有乾性AMD。在一些實施例中，醫藥組合物之張力/滲透壓等於或大於240 mOsm/kg。
在一些態樣中，本文揭示適於治療診斷患有激肽釋放酶相關疾病之個體之醫藥組合物。在一些態樣中，本文揭示治療診斷患有激肽釋放酶相關疾病之個體之方法，其包括向該個體投與治療有效量之醫藥組合物。在一些實施例中，將醫藥組合物投與於SCS中。
在一些實施例中，可將本文(例如部分4.1)所提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物投與給診斷患有以下之個體：(1) Batten-CLN2，且治療產物為三肽基肽酶1 (TPP1)；(2) 1型尤塞氏病(Usher’s)，且治療產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)；(3) 1型尤塞氏病，且治療產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)；(4) 2型尤塞氏病，且治療產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)；(5) 2型尤塞氏病，且治療產物為Usherin (USH2A)；(6) 3型尤塞氏病，且治療產物為Clarin 1 (CLRN1)；(7)斯特格氏病(Stargardt’s)，且治療產物為ATP結合盒亞家族A成員4 (ABCA4)；(8)斯特格氏病，且治療產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)；(9)紅綠色盲，且治療產物為L視蛋白(OPN1LW)；(10)紅綠色盲，且治療產物為M視蛋白(OPN1MW)；(11)藍視錐全色盲，且治療產物為M視蛋白(OPN1MW)；(12)萊伯(Leber)先天性黑蒙症-1 (LCA 1)，且治療產物為鳥苷酸環化酶2D，視網膜(GUCY2D)；(13)萊伯先天性黑蒙症-2 (LCA 2)，且治療產物為維甲酸異構水解酶RPE65 (RPE65)；(14)萊伯先天性黑蒙症-4 (LCA 4)，且治療產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)；(15)萊伯先天性黑蒙症-7 (LCA 7)，且治療產物為視錐-視桿同源盒(CRX)；(16)萊伯先天性黑蒙症-8 (LCA 8)，且治療產物為碎屑細胞極性複合成分1 (CRB1)；(17)萊伯先天性黑蒙症-9 (LCA 9)，且治療產物為煙醯胺核苷酸腺苷轉移酶1 (NMNAT1)；(18)萊伯先天性黑蒙症-10 (LCA 10)，且治療產物為中心體蛋白290 (CEP290)；(19)萊伯先天性黑蒙症-11 (LCA 11)，且治療產物為肌苷一磷酸脫氫酶1 (IMPDH1)；(20)萊伯先天性黑蒙症-15 (LCA 15)，且治療產物為Tubby樣蛋白1 (TULP1)；(21) LHON，且治療產物為粒線體編碼之NADH脫氫酶4 (MT-ND4)；(22) LHON，且治療產物為粒線體編碼之NADH脫氫酶6 (MT-ND6)；(23)無脈絡膜症，且治療產物為Rab護送蛋白1 (CHM)；(24) X性聯視網膜劈裂症(XLRS)，且治療產物為視網膜劈裂蛋白(RS1)；(25) Bardet-Biedl症候群1，且治療產物為Bardet-Biedl症候群1 (BBS1)；(26) Bardet-Biedl症候群6，且治療產物為McKusick-Kaufman症候群(MKKS)；(27) Bardet-Biedl症候群10，且治療產物為Bardet-Biedl症候群10 (BBS10)；(28)視錐細胞營養不良症，且治療產物為鳥苷酸環化酶活化劑1A (GUCA1A)；(29)視神經萎縮，且治療產物為OPA1粒線體發動蛋白樣GTP酶(OPA1)；(30)視網膜色素變性1，且治療產物為RP1軸絲微管相關(RP1)；(31)視網膜色素變性2，且治療產物為ARL3 GTP酶之RP2活化劑(RP2)；(32)視網膜色素變性7，且治療產物為外周蛋白2 (PRPH2)；(33)視網膜色素變性11，且治療產物為前mRNA加工因子31 (PRPF31)；(34)視網膜色素變性13，且治療產物為前mRNA加工因子8 (PRPF8)；(35)視網膜色素變性37，且治療產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；(36)視網膜色素變性38，且治療產物為MER原癌基因，酪胺酸激酶(MERTK)；(37)視網膜色素變性40，且治療產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)；(38)視網膜色素變性41，且治療產物為Prominin 1 (PROM1)；(39)視網膜色素變性56，且治療產物為間光感受器基質蛋白聚糖2 (IMPG2)；(40)視網膜色素變性62，且治療產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)；(41)視網膜色素變性80，且治療產物為細胞纖毛內轉運蛋白140 (IFT140)；或(42)貝斯特病(Best disease)，且治療產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。 4.6  分析
熟習此項技術者可使用如本文所闡述之分析及/或此項技術中已知之技術來研究本文所闡述之組合物及方法，例如以測試本文所提供之調配物。在一些實施例中，熟習此項技術者可使用(例如)以下文獻中所闡述之任何分析及/或技術：Chiang等人，「Clearance Kinetics and Clearance Routes of Molecules From the Suprachoroidal Space After Microneedle Injection」, Invest Ophthalmol Vis Sci. 2017年1月; 58(1): 545-554；Gu等人，「Real-Time Monitoring of Suprachoroidal Space (SCS) Following SCS Injection Using Ultra-High Resolution」, Optical Coherence Tomography in Guinea Pig Eyes」, Invest Ophthalmol Vis Sci. 2015年6月; 56(6):3623-34；及Seiler等人，「Effect and Distribution of Contrast Medium after Injection into the Anterior Suprachoroidal Space in Ex Vivo Eyes」, Invest Ophthalmol Vis Sci. 2011年7月29日;52(8):5730-6 (其各自係以全文併入本文中)。如部分‎5中所詳述，本文亦提供以下分析。  4.6.1     超音波B掃描
高頻超音波(U/S)探頭(UBM Plus; Accutome, Malvern, PA, USA)可用於藉由在注射在約32℃-35℃下黏度及/或彈性模數(G’)不等之不同體積(例如自25 μL至500 μL，範圍為低黏度到高黏度)後生成離體動物眼睛中之SCS之2D橫截面影像來測定SCS厚度。U/S探頭蓋(Clearscan, Eye-Surgical-Instruments, Plymouth, MN)可連接至UBM Plus以有助於U/S影像採集。U/S探頭可用於獲取眼睛周圍之矢狀視圖(例如八個矢狀視圖)。可對U/S B掃描實施後處理，以找出自外鞏膜至在例如鞏膜突後方1、5及9 mm處之內視網膜之厚度。可計算每隻眼睛之平均值、中值及標准偏差。  4.6.2     SCS擴張
高頻(50 MHz)超音波(E-technologies, Bettendorf, IA)可用於對在SCS上注射之效應及擴張進行即時成像。超音波探頭可直接定位在注射部位上方，使得在注射期間可對毗鄰鞏膜、SCS及睫狀體/脈絡膜進行即時成像。可收集影像，且可利用超音波之內部測徑器量測在注射PBS或醫藥組合物時SCS擴張之最大距離。
此技術亦可用于測定注射後生理性眼內壓(IOP)對SCS擴張之效應及測定SCS注射後IOP之變化。在將導管置於SCS中後，可穿過角膜緣將針(例如27號)置於前房中，且可使用氰基丙烯酸酯組織黏合劑來密封角膜緣切口。針可用0.9%鹽水填充之管連接至壓力轉換器(MedEx LogiCal轉換器，型號MX960；MedExSupply Medical Supplies, Monsey, NY)及電子監測器，此容許連續量測IOP。可使用超音波之內部測徑器量測並報告SCS之最大擴張。對於每一注射體積，可記錄最大SCS擴張時之IOP (以mm Hg計)。 4.6.3     SCS之二維超音波對比成像
使用對比增強超音波(Mylab70; Biosound Esaote, Inc., Indianapolis, IN)，可經由所放置之插管將微泡超音波對比劑(Targestar-P, Targeson Inc., San Diego, CA)注射至脈絡膜上腔前部。可使用影像分析軟體(Elements 4.0 [Adobe Photoshop]; ImageJ 1.42q)在矢狀超音波平面中測定對比劑在SCS中之最大分佈百分比。使用對比介質偵測軟體(Qontrast; Biosound Esaote, Inc., Indianapolis, IN)，可將所關注之區域置於整個SCS及後部SCS上，且可將隨時間之對比增強量測為平均像素強度。 4.6.4     SCS之三維超音波對比成像
可使用定製3D對比成像系統對離體豬眼進行成像，該系統將電腦控制之線性運動軸與臨床超音波掃描儀(Acuson Sequoia; Siemens Medical Solutions, Malvern, PA)介接。可使用4-MHz (4-C1)轉換器及對比成像(Cadence CPS; Siemens Medical Solutions, Malvern, PA)。可將豬眼置於水浴中，且可經由置入前部SCS中之導管注射微泡對比介質。可在正中矢狀平面中觀察到動態對比介質流入，之後對整個球體進行3D成像，以評價對比劑之空間分佈。可使用影像分析軟體(Elements 4.0 [Adobe Photoshop]; ImageJ 1.42q)逐片測定對比劑在SCS中之最大分佈百分比。 4.6.5     基於液體體積量測SCS厚度
可使用3D冷凍重構成像來量測SCS厚度。將注射有例如含有紅色螢光顆粒之25 μL至500 μL之動物眼睛在注射後冷凍幾分鐘(例如3-5分鐘)且準備好進行冷凍切片。使用數位照相機，藉由用低溫恒溫器對樣品進行切片，每300 μm即可獲得組織冷凍塊之一張紅色螢光影像。分析由紅色螢光影像組成之影像堆疊以測定SCS厚度。  4.6.6     基於調配物量測SCS厚度
U/S B掃描可用於測定將黏度及/或彈性模數(G’)不等之醫藥組合物注射至動物SCS中後之SCS厚度。高頻超音波B掃描可用於測定SCS塌陷率。可獲取平坦部上之八個矢狀視圖：(a)鼻上，注射部位上方；(b)上位；(c)鼻部；(d)顳上；(e)顳部；(f)顳下；(g)下位；及(h)鼻下。
可對U/S視圖實施離線後處理以量測SCS厚度。U/S探頭之最小軸向解析度可為15 μm。對於每個U/S視圖，可創建在鞏膜突後方5 mm處且垂直於鞏膜之線段。線可開始於鞏膜之外表面，且結束於視網膜之內表面。可在量測中包括鞏膜及脈絡膜視網膜(chorioretina)，以確保線係垂直的。接著藉由自所量測之線長度中減去組織厚度來計算SCS厚度。進行曲線擬合以測定SCS塌陷率。
U/S B掃描可用於測定隨時間推移在多個位置處之SCS厚度，且可計算SCS塌陷率。所注射之螢光材料自SCS中之大致清除率可藉由在活體內動物眼睛中隨時間拍攝螢光眼底影像來獲得，直至不再偵測到螢光。  4.6.7     根據眼底成像之SCS清除動力學
為研究黏度及/或彈性模數(G’)對SCS中之運動之效應，可將黏度及/或彈性模數(G’)不等且含有螢光黃之不同醫藥組合物注射至SCS中。所注射之螢光材料自SCS中之大致清除率或清除時間可藉由在活體內動物眼睛中隨時間拍攝螢光眼底影像來獲得。在一些情形中，可藉由測定總清除時間及清除時間常數(t清除)來測定清除率，該清除時間常數使用自總螢光信號隨時間推移之正規化濃度得出之曲線擬合來計算。可在每個成像會話(session)之前投與托吡卡胺(tropicamide)及苯福林(phenylephrine)(Akorn, Lake Forest, IL)之局部滴眼劑使眼睛擴張。可使用具有130°鏡頭附件及內置螢光黃血管攝影術模組之RetCam II (Clarity Medical Systems, Pleasanton, CA)來獲取影像。在將RetCam II之藍光輸出設置為例如0.0009、1.6及2.4 W/m2之情形下，可拍攝多個影像。為了捕獲眼球之整個內表面，可捕獲九個影像：中心、鼻上、上位、顳上、顳部、顳下、下位、鼻下及鼻部影像。此容許成像至遠側外圍。成像可緊接在注射之後進行，在注射後1 h，在12 h中每3 h，以及每兩天即進行成像。對所有注射之眼睛測定總清除時間，該總清除時間可定義為藉由目視觀察偵測不到螢光之第一時間點。異硫氰酸螢光黃結合之AAV (FITC-AAV)或FITC結合之AAV衣殼蛋白特異性單株抗體可用於類似之實驗中以追蹤AAV顆粒在SCS中之運動及清除。螢光標記AAV之方法為此項技術中所已知(Shi等人，Sci. Adv. 2020; 6 : eaaz3621；及Tsui, T. Y.等人，Hepatology 42, 335-342 (2005)。識別許多AAV血清型之抗體(FITC結合)可商業購得。 4.6.8     鋪片以表徵2D周向擴散
將含有螢光黃或螢光標記之AAV的本揭示案之醫藥組合物注射至SCS中。在SCS注射及冷凍後，可使眼睛準備好以評價顆粒及螢光黃之2D擴散。將冷凍眼睛自角膜緣切開至後極以產生等距之鞏膜瓣。將所得之鞏膜瓣張開，且取出冷凍之玻璃體液、晶狀體及房水。
可使用具有100 mm鏡頭(Canon)之數位SLR照相機(Canon 60D, Canon, Melville, N.Y.)來獲取明場及螢光影像。照相機參數保持不變。為獲取螢光黃擴散區，可將綠色光帶通濾波器(520±10 nm; Edmunds Optics, Barrington, N.J.)放置於鏡頭上，且可藉由燈以多色LED燈(S Series RGB MR16/E26. HitLights, Baton Rouge, La.)之紫色設置來照亮樣品。為使紅色螢光顆粒之位置可視化，可將紅色濾光片(610±10 nm; Edmunds Optics)放置於鏡頭上，且可用切換至綠光之同一盞燈來照亮樣品。可使用ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, Md.)針對每隻眼睛計算高於臨限值之綠色及紅色螢光區。可基於背景信號之目視檢查手動地設置臨限值。  4.6.9     眼內壓量測
壓力量測系統可用於量測在SCS注射後SCS中之壓力。最終可藉由皮下注射氯胺酮/甲苯噻嗪混合劑對動物進行麻醉。在SCS注射(N=4)後，可每幾分鐘量測SCS中之壓力。監測壓力，直至其達到在注射之前的原始基線值(亦即約15 mmHg)。在量測後，靜脈內注射致死劑量之戊巴比妥(pentobarbital)使動物安樂死。可在動物屍體中進行第二組SCS注射。在屍檢量測中，僅在進行注射之組織空間(亦即SCS)中量測壓力。
在一些情形中，可在SCS注射前後藉由眼科血壓計(Tono-Pen; AVIA, Reichert Technologies, Depew, NY, USA)獲得眼內壓。當眼內壓回至基線水準時，可停止眼內壓量測。 4.6.10   溫度應力分析
可在37℃下在4天內以1.0 × 10 12GC/mL進行溫度應力發展穩定性研究，以評估本文所提供之調配物之相對穩定性。
可用於評價穩定性之分析包括(但不限於)活體外相對效能(IVRP)、載體基因體濃度(根據ddPCR之VGC)、根據染料螢光之游離DNA、動態光散射、外觀及pH。可實施12個月之長期發展穩定性研究，以證明本文所提供之調配物之活體外相對效能以及在-80℃ (≤-60℃)及-20℃ (-25℃至-15℃)下之其他品質之維持。 4.6.11   活體外相對效能(IVRP)分析
為使ddPCR GC效價與基因表現相關聯，可藉由轉導HEK293細胞且分析細胞培養上清液之轉殖基因蛋白水準來實施活體外生物分析。將HEK293細胞平鋪至三個聚-D-離胺酸塗覆之96孔組織培養板上隔夜。接著用野生型人類Ad5病毒預感染細胞，之後用三種獨立製備之AAV載體參考標準品及檢品之連續稀釋液進行轉導，其中將每一製備物在不同位置平鋪至單獨板上。在轉導後之第三天，自板中收集細胞培養基且經由ELISA量測轉殖基因蛋白水準。對於ELISA，封阻塗覆有受體之96孔ELISA板，且接著用所收集之細胞培養基進行培育以捕獲由HEK293細胞產生之轉殖基因。使用Fab特異性抗人類IgG抗體來偵測轉殖基因蛋白。在洗滌後，添加辣根過氧化物酶(HRP)受質溶液，容許顯影，用終止緩衝液終止，且在讀板儀中讀板。相對於對數稀釋度繪製HRP產物之吸光度或OD，且相對於同一板上之參考標準品計算每一檢品之相對效能，此用通過平行相似性測試後之四參數邏輯式回歸模型使用公式：EC50參考÷ EC50檢品進行擬合。檢品之效能報告為參考標準品效能之百分比，此係根據三個板之加權平均值計算。
為使ddPCR GC效價與功能性基因表現相關聯，可藉由轉導HEK293細胞且分析轉殖基因(例如酶)活性來實施活體外生物分析。將HEK293細胞平鋪至三個96孔組織培養板上隔夜。接著用野生型人類腺病毒血清型5病毒預感染細胞，之後用三種獨立製備之酶參考標準品及檢品之連續稀釋液進行轉導，其中將每一製備物在不同位置平鋪至單獨板上。在轉導後第二天，使細胞溶解，用低pH處理以使酶活化，且使用肽受質分析酶活性，該肽受質在藉由轉殖基因(酶)裂解後產生增加之螢光信號。相對於對數稀釋度繪製螢光或RFU，且相對於同一板上之參考標準品計算每一檢品之相對效能，此用通過平行相似性測試後之四參數邏輯式回歸模型使用公式：EC50參考 ÷ EC50檢品進行擬合。檢品之效能報告為參考標準品效能之百分比，此係根據三個板之加權平均值計算。  4.6.12   載體基因體濃度分析
異硫氰酸螢光黃結合之AAV (FITC-AAV)或FITC結合之AAV衣殼蛋白特異性單株抗體可用於類似之實驗中以追蹤AAV顆粒在SCS中之運動及清除。螢光標記AAV之方法為此項技術中所已知(Shi等人，Sci. Adv. 2020; 6 : eaaz3621；及Tsui, T. Y.等人，Hepatology 42, 335-342 (2005)。識別許多AAV血清型之抗體(FITC結合)可商業購得。  4.6.13   使用染料螢光分析進行游離DNA分析
游離DNA可藉由結合至DNA之SYBR® Gold核酸凝膠染色劑(『SYBR Gold染料』)之螢光來測定。可使用微板讀數器量測螢光且用DNA標準品進行量化。可報告以ng/μL計之結果。
可使用兩種方法來估計總DNA，以將所量測之以ng/μL計之游離DNA轉換為游離DNA之百分比。在第一種方法中，藉由UV-可見光譜法測定之GC/mL (OD)用於估計樣品中之總DNA，其中M為DNA之分子量，且1×10 6為單位轉換因子： 所估計之總DNA (ng/μL) = 1×10 6× GC/mL (OD)×M (g/mol)/6.02×10 23在第二種方法中，可將樣品與0.05%泊洛沙姆188一起加熱至85℃持續20分鐘，且可使用藉由SYBR Gold染料分析在加熱樣品中所量測之實際DNA作為總DNA。因此，此假定所有DNA均經回收並量化。關於趨勢，可使用原始ng/μL，或可使用藉由一致方法測定之百分比。 4.6.14   粒徑篩析層析(SEC)
SEC可在具有25 mm路徑長度流通池之Waters Acquity Arc Equipment ID 0447 (C3PO)上使用Sepax SRT SEC-1000 Peek管柱(PN 215950P-4630, SN: 8A11982, LN: BT090, 5 μm 1000A, 4.6×300 mm)來實施。移動相可為例如20 mM磷酸鈉、300 mM NaCl、0.005%泊洛沙姆188，pH 6.5，其中0.35 mL/min之流量持續20分鐘，其中管柱處於環境溫度。可以2點/秒取樣率實施數據收集，且25點下1.2 nm解析度意指在214、260及280 nm處平滑。理想目標負載可為1.5×10 11GC。可對樣品注射50 μL，理想目標之約1/3或注射5 μL。 4.6.15   動態光散射(DLS)分析
可在Wyatt DynaProIII上使用Corning 3540 384孔板以30 μL樣品體積實施動態光散射(DLS)。每次重複可各自在10 s內收集十次採集，且每個樣品可有三次重複量測。溶劑可根據樣品中所用之溶劑進行設置，例如對於含AAV載體之dPBS為『PBS』。不滿足數據品質準則(基線、SOS、雜訊、擬合)之結果可經『標記』且排除在分析之外。 4.6.16   黏度量測
可使用此項技術中已知之方法來量測黏度，例如2019年出版之美國藥典(USP)及其先前版本(以全文引用的方式併入本文中)中提供之方法。使用毛細管黏度計，使用USP ＜911＞中所闡述之方法來量測低剪切黏度。
可使用錐板旋轉流變儀來測定黏度與剪切速率之關係。美國藥典(USP) USP ＜1911＞中闡述流變學量測，且USP＜912＞中闡述旋轉黏度測定法。可利用AR-G2流變儀收集旋轉流變黏度量測值，該流變儀配備有Peltier溫度控制板與60 mm 1°角鋁錐附件(TA Instruments, New Castle, DE)。黏度對剪切速率之掃描可在＜0.3 s-1開始逐步增加至5000 s -1之範圍內實施，每十進位收集5個點。在20℃下收集黏度與剪切速率之關係。自數據中外推在10,000及20,000 s -1下之黏度。
在一些情形中，可在0、0.1 s -1、1 s -1、1000 s -1、5000 s -1、10,000 s -1、20,000 s -1或超過20,000 s -1下量測醫藥組合物或參考醫藥組合物之黏度。 4.6.17   流變學量測
美國藥典(USP) USP ＜1911＞中闡述流變學量測，且USP＜912＞中闡述旋轉黏度測定法。
利用AR-G2流變儀收集流變學量測值，該流變儀配備有Peltier溫度控制板與60 mm 1°角鋁錐附件(TA Instruments, New Castle, DE)
藉由在0.1%應變及1 Hz下以振盪模式施加溫度斜坡來測定膠凝溫度。加載樣品且在5℃下預平衡5分鐘，之後以5℃/min溫度斜升至40℃或60℃。將儲存/彈性模數(G’)及耗損/黏性模數(G”)相交時之溫度記錄為系統膠凝溫度。扭矩掃描證明線性黏彈性區擴展至約0.4%，且因此在0.1%之操作完全在線性黏彈性區內。
以振盪模式0.1%應變及1 Hz測定膠凝時間。樣品在5℃及20℃下平衡且暴露於溫度躍升至34℃。如上，膠凝時間定義為儲存模數與耗損模數曲線之交叉點。 4.6.18   病毒感染性分析
可使用如François等人，Molecular Therapy Methods & Clinical Development (2018)，第10卷，第223-236頁(以全文引用的方式併入本文中)中所闡述之TCID 50感染效價分析。可使用如在2018年10月15日提出申請之臨時申請案62/745859中所闡述之相對感染性分析。  4.6.19   差示掃描螢光法
可藉由差示掃描螢光法(DSF)來測定蛋白質及由蛋白質構成之病毒衣殼之熱穩定性。DSF量測蛋白質之固有色胺酸及酪胺酸釋放隨溫度之變化。Trp及Tyr殘基之局部環境隨蛋白質解摺疊而變化，從而導致螢光大幅增加。50%之蛋白質解摺疊時之溫度定義為『熔融』溫度(T m)。USP ＜853＞及USP ＜1853＞中闡述螢光光譜法。
使用Promethius NTPlex Nano DSF儀器(NanoTemper technologies, Munich, Germany)收集DSF數據。在20℃下將樣品加載至毛細管池中，且以1℃/min之速率使溫度斜升至95℃。使用350 nm (解摺疊)與330 nm(解摺疊)下釋放之信號輸出比來測定T m。 4.6.20   注射壓力量測
使用流篩及流體感測器(Viscotec America, Kennesaw, GA)或具有一次性壓力感測器S-N-000之PressureMAT-DPG (PendoTECH, Princeton, NJ)來量測注射壓力。
手動地或使用Legato-100注射器幫浦(Kd Scientific, Holliston, MA)注射至空氣中以施加一致之流速。對於注射至摘出之豬眼中，將眼睛安裝在Mandell眼座(Mastel)上，同時施加吸力以調整眼睛之眼內壓。 4.6.21   參考組合物
本文所提供組合物之黏度可藉由將該組合物與參考醫藥組合物進行比較來評估。在一些實施例中，參考醫藥組合物係包含與所評估之組合物相同類型及量之重組AAV之醫藥組合物，但不為熱反應性組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物係包含與所評估之組合物相同類型及量之重組AAV之醫藥組合物，但在眼外溫度(約32℃-35℃)下較所評估之組合物具有更低之黏度及/或彈性模數。
在一些實施例中，參考醫藥組合物係包含與所評估之組合物在磷酸鹽緩衝鹽水中之濃度相同之相同重組AAV之醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物係包含與所評估之組合物在含有0.001%泊洛沙姆188之杜貝克氏磷酸鹽緩衝鹽水(pH 7.4)中之濃度相同之相同重組AAV之醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物係包含與所評估之組合物在含有4%蔗糖及0.001%泊洛沙姆188之杜貝克氏磷酸鹽緩衝鹽水(pH 7.4)中之濃度相同之相同重組AAV之醫藥組合物。參考醫藥組合物可藉由與所評估之組合物相同之途徑或不同之途徑來投與。在一些實施例中，脈絡膜上投與參考醫藥組合物。 4.7  製造方法
在一些實施例中，本文所闡述之醫藥組合物係藉由包括以下之方法來製備：a)製備預凝膠溶液，其包含介於約10%與約30%之間的泊洛沙姆407及介於約2%與約15%之間的泊洛沙姆188，b)在高壓釜中加熱該預凝膠溶液，c)視情況用水稀釋該預凝膠溶液，及d)將該預凝膠溶液與本文所闡述之重組腺相關病毒載體之濃溶液混合。
在一些實施例中，步驟a)中之預凝膠溶液包含介於約18%與約22%之間的泊洛沙姆407。在一個實施例中，步驟a)中之預凝膠溶液包含約20%之泊洛沙姆407。在一些實施例中，步驟a)中之預凝膠溶液包含介於約5%與約9%之間的泊洛沙姆188。在一個實施例中，步驟a)中之預凝膠溶液包含約7.2%之泊洛沙姆188。在一個實施例中，步驟a)中之預凝膠溶液包含約20%之泊洛沙姆407及約7.2%之泊洛沙姆188。
在一些實施例中，在步驟b)中將預凝膠溶液加熱至介於約80℃與約150℃之間的溫度。在一些實施例中，在步驟b)中將預凝膠溶液加熱至介於約115℃與約125℃之間的溫度。在一個實施例中，在步驟b)中將預凝膠溶液加熱至約120℃之溫度。在一個實施例中，在步驟b)中將預凝膠溶液加熱至約121℃之溫度。
在一些實施例中，步驟b)中之加熱導致預凝膠溶液之材料(例如水)及/或體積損失。在一個實施例中，步驟b)中之加熱導致預凝膠溶液中損失約1%至約5%之水。在一個實施例中，步驟b)中之水損失為約3%。
在一些實施例中，在步驟d)中混合之預凝膠及重組腺相關病毒載體濃溶液之體積經選擇使得最終混合物中重組腺相關病毒載體之濃度較重組腺相關病毒載體濃溶液低約2倍、約3倍、約4倍、約5倍、約6倍、約7倍、約8倍、約10倍、約12倍、約15倍或約20倍。在一個實施例中，最終混合物中重組腺相關病毒載體之濃度較重組腺相關病毒載體濃溶液低約10倍。
在一些實施例中，在步驟d)中混合之預凝膠及重組腺相關病毒載體濃溶液之體積經選擇使得最終混合物包含介於約15%與約25%之間的泊洛沙姆407。在一個實施例中，最終混合物包含約18%之泊洛沙姆407。在一些實施例中，在步驟d)中混合之預凝膠及重組腺相關病毒載體濃溶液之體積經選擇使得最終混合物包含介於約3%與約10%之間的泊洛沙姆188。在一個實施例中，最終混合物包含約6.5%之泊洛沙姆188。在一個實施例中，最終混合物包含約18%之泊洛沙姆407及約6.5%之泊洛沙姆188。 5.    實例
本部分(亦即部分‎5)中之實例係藉由闡釋方式而非限制方式提供。 5.1  實例1：用於脈絡膜上遞送之熱反應性凝膠調配物之最佳化 5.1.1     熱反應性凝膠調配物目標之概述
正在研究一種構築體，作為藉由注射至脈絡膜上腔中遞送之治療。脈絡膜上腔(SCS)係鞏膜與脈絡膜之間的區域，其在注射藥物溶液後擴大(Habot-Wilner, 2019)。亦參見圖1。隨著注射溶液由生理過程清除，SCS空間恢復至其注射前大小。藥物溶液在SCS內擴散且吸收至毗鄰組織中。脈絡膜中之毛細血管可透過低分子量滲透劑。該實例闡述延長構築體在脈絡膜上腔中之滯留時間且最終提高其功效之實驗方法。
為達成更長之滯留時間，將腺相關病毒(AAV)調配成最終調配物，該調配物在處於冷藏條件(2℃-8℃)與受控室溫(20℃)之間的溫度下時為可注射液體，且接著在眼睛溫度(34.5 ± 0.8℃)下改變狀態為凝膠。凝膠將AAV保持在脈絡膜上腔中，減少清除且增加集中性，藉此使得在期望靶組織中之治療功效增強。  5.1.2     初始設計參數之概述
使調配物可行性之初始設計參數經受額外數據之調整，且在此處闡述以證明調配物最佳化之起始點。
由於眼睛係關鍵器官，故向眼睛注射係一個敏感注射程序。為避免疼痛、組織損傷或發炎，當在眼睛中注射藥物時，針號不能過高。舉例而言，在一些情形中，可選擇30號，且在其他情形中，選擇29號。為注射至眼睛中，必須能夠在溶液膠凝且將針及注射部位堵塞之前，在指定時間範圍內經由極窄之孔針注射溶液。此增加對調配物在室溫下之黏度之限制(若注射時係冷的，則為冷藏的)，且亦增加使注射完成之膠凝時間之限制。該實例闡述最佳化可同時滿足所鑑別之針對脈絡膜上遞送之所有要求的調配物組成之反應曲面實驗設計方法。
調配物在眼睛溫度下應膠凝。據報導，眼睛表面之溫度為34.5 ± 0.8℃ (Tkacova等人，2011, , MEASUREMENT 2011, Proceedings of the 8th International Conference, Smolenice, Slovakia)。圖3.顯示使用熱像儀(FLIR，型號T530)所量測之處於33.1℃之眼外溫度。眼睛表面之溫度可視為脈絡膜上腔溫度之最差情形，其可能較表面稍熱。膠凝溫度之限值為眼睛溫度(34.5℃)。眼睛溫度之平均值減去三個標準偏差為32℃。因此，使用≤32℃之較佳膠凝溫度作為設計參數，以確保將在眼睛中發生膠凝。
當處於冷藏條件(2℃-8℃)與受控室溫(20℃)之間的溫度下時，熱反應性凝膠應為可注射液體。理想地，為便於劑量製備及製造，凝膠溫度應充分高於室溫，以容許室溫之可變性及實施實際混合、泵送及其他操作。舉例而言，膠凝溫度≥ 27℃可能更易於處置。較高之膠凝溫度(≥27℃)較佳，但並非嚴格要求，此乃因可將劑量冷卻至較低溫度以供劑量製備，且若需要，亦可在投與前冷卻。
調配物應具有可接受之黏度，該黏度將容許使用通常可獲得之注射器組件進行注射(亦即基於注射器壓力額定值限制之注射壓力限值)。在凝膠形成溫度與時間及可注射性之間平衡存在相衝突之設計參數。
期望之針大小為30或29號，且此將影響注射壓力。在注射完成之前不應發生膠凝，以避免堵塞針或注射部位。對於初始建模，假定注射時間為10秒。
若需要，存在降低注射壓力之替代方法。溫度、黏度、膠凝時間及所需注射時間係相關聯之參數。Hagen-Poiseuille方程( ∆P =(8 μLQ)/(πR 4)，參見下文)顯示，注射壓力與時間(由流速決定)係線性相關的。因此，使注射時間自10 s加倍至20 s將使壓力降低兩倍。黏度與壓力成負相關。降低黏度，諸如藉由降低溫度將降低注射壓力。若劑為冷卻的，則膠凝時間更長。將劑冷卻將降低黏度及注射壓力。冷卻之劑亦將需要更長時間膠凝，從而容許更緩慢之注射，此亦可降低注射壓力。
膠凝時間應大於注射時間以避免堵塞針或注射部位，且應小於文獻中所報導之壓力驅動回流之預期清除時間10分鐘(600秒) (Chiang, IOVS, 2017, 58 (1) 545 - 554)。與預期之600 s回流清除時間相比，對於調配物評估，＜ 90秒之初始設計較佳目標視為極保守之膠凝時間(若可行)。在膠凝發生後，預期AAV自SCS空間中藉由血流、凝膠侵蝕、擴散及對流之中等及更長期清除率顯著降低。
若可能，在所鑑別之設計空間內，進一步期望凝膠在注射時具有略微稀釋之一些空間，同時仍維持在相同或相似溫度下膠凝之能力。 表 2 ：初始設計參數
參數 目標 論據
賦形劑安全性 泊洛沙姆407及188賦形劑係安全的，且先前已用於熱反應性凝膠調配物中 安全性
載體穩定性 載體係穩定的且保持效能 需要穩定性來確保功效
膠凝溫度 較佳：27℃ ＜ T (膠凝) ＜32℃ 範圍：20℃ ＜ T (膠凝) ＜32℃ 限值：20℃ ＜ T (膠凝) ＜34.5℃ 上限為眼睛表面溫度(34℃)，且範圍為此溫度減去3個標準偏差 (32℃) 下限係基於在室溫下以儘可能低之黏度運行之可行性，對於劑量投與及製造，初始評價使用27℃至32℃之範圍。 可使調配物冷卻，以進行某些操作且甚至基於黏度若需要則進行投藥
膠凝時間 較佳：90 s ＞時間(膠凝) ＞ 15 s 範圍：600 s ＞時間(膠凝) ＞ 10 s 大於注射時間。 膠凝時間應足夠短，以避免在完全膠凝前劑量清除或消散。 若需要，則可藉由使劑量冷卻來延長膠凝時間。
注射時間 較佳：10 - 15 s 範圍：5 - 30 s 臨床投與目標
投與組件 較佳：29或30 Ga ETW針(ID = 220或ID = 240 μm)及標準塑膠注射器 臨床投與要求及能夠使用標準組件
注射壓力 較佳≤ 43 PSI 範圍≤ 65 PSI 限值≤ 100 PSI 較佳值係基於ISO 7886-1: 2017中之注射器壓力額定值，以及低/易注射壓力及力。 65 PSI之範圍係基於人為因素/實驗室注射可行性實驗期間所需之力感 100 PSI之限值係基於低於125 PSI之塑膠注射器典型壓力額定值之水準
黏度 在室溫下較佳≤ 183 mPas 在冷卻時初始目標≤ 183 mPas 當在室溫下或在冷卻時使用CLSD 30 Ga ETW (220 μm ID)針(參見表3)時，基於65 PSI之注射壓力目標。 此目標可藉由使用更大之針或容許更高壓力注射器來擴大，故為初始目標而非絕對要求
5.1.3     黏度設計空間
關於流經針期間壓降之Hagen-Poiseuille方程由 ∆P=(8 μLQ)/(πR 4)給出。壓力取決於黏度(μ)、針長度(L)、體積流速(Q)及針之內半徑(R)。該方程用於計算30號及29號針(ISO 9626:2016：常規壁，RW；薄壁，TW；極薄壁，ETW；及超薄壁，UTW，以及在設計中或在開發研究中使用之額外ClearSide (CLSD)針)隨黏度變化之以每平方英吋磅數(PSI)為單位之壓降。轉換因子PSI = Pa/6894.76用於轉換成PSI。包括安裝長度之總針長為14 mm，注射體積為0.1 mL，注射時間以10 s建模(Q = 0.1 mL/10 = 0.01 mL/s)，且所考慮之針內徑為：30 Ga/29 Ga (133 μm ID)、30 Ga TW (165 μm ID)、30Ga ETW/29 Ga TW (190 μm ID)、30 Ga UTW/29 Ga ETW (240 μm ID)、ClearSide (CLSD)品牌30 Ga針(160 μm ID)、CLSD 30 Ga ETW (220 μm ID)、CLSD 29 Ga ETW (240 μm ID)。
壓力對黏度之計算結果示於圖2中，且表3中示出針對較佳值、目標值及限值之列表結果。基於表3中之計算，初始設計評價係基於使用CLSD 30 Ga ETW (220 μm ID)針之65 PSI目標壓力，其對應於183 mPas之黏度。
與CLSD 30 Ga針(160 μm ID)相比，在恆壓下注射CLSD 30 Ga ETW (220 μm ID)或CLSD 29 Ga ETW (240 μm ID)所需之壓力及/或時間之相對減少係基於針內徑之四次方之比率且分別為：(220/160) 4= 3.6倍及(240/160) 4= 5倍。因此，利用目前160 μm ID 30 Ga CLSD針之初始可行性數據可用於外推使用30及29 Ga ETW針計劃用於臨床遞送凝膠調配物之預期壓力及時間。 表 3 ：基於注射壓力之黏度設計空間
針 黏度(mPas) 上限
對於≤ 43 PSI ( 較佳) 對於65 PSI ( 目標) 對於100 PSI ( 限值)
30 Ga/29 Ga (133 μm ID) 16 24 38
30 Ga TW (165 μm ID) 38 58 90
30 Ga ETW/29 Ga TW (190 μm ID) 67 102 157
30 Ga UTW/29 Ga ETW (240 μm ID) 171 259 400
CLSD 30 Ga針(160 μm ID) 34 51 79
CLSD 30 Ga ETW (220 μm ID) 121 183* 282
CLSD 29 Ga ETW (240 μm ID) 171 259 400
*30 Ga TW (220 μm ID)針及預期約65 PSI標稱注射壓力之初始調配物設計可行性評價集 5.1.4     鑑別熱反應性水凝膠調配物組成之設計空間
為維持與目前經改質之含蔗糖調配物之DPBS的一致性且亦將水凝膠基質內流體之張力維持在生理學上可接受之範圍(240 ＜滲透壓＜600 mOsm/kg)內，水凝膠將基於將泊洛沙姆407及泊洛沙姆188溶解至目前經改質之含蔗糖調配物之DPBS緩衝液中(滲透壓 = 345 mOsm/kg)。
在實驗設計方法中評估泊洛沙姆407及泊洛沙姆188之組合，以鑑別是否存在使凝膠溫度在期望目標範圍內、同時亦將黏度限於可經由30或29號針注射之水準之調配物組成。
使用反應曲面中心複合實驗設計(DOE)方法，利用JMP 15軟體(Cary, NC)評價水凝膠調配物之組成對膠凝溫度以及5℃及20℃下之膠凝時間及黏度之影響。基於對組成變化具有不同反應之所需調配物設計限制之數量，需要DOE方法，使得能夠確定一或多種最佳目標調配物。泊洛沙姆407自16%至22% w/v變化且泊洛沙姆188自0%至16% w/v變化，具有兩個重複中心點。可使用不同方法測定膠凝。一些方法可量測膠凝之開始，且其他方法可量測材料性質之客觀『交叉』作為膠凝溫度。出於調配物設計之目的，為獲得一致性及客觀性，將隨溫度而變化的G’與G”之交叉作為膠凝溫度。原始數據顯示，膠凝之開始發生在較交叉略低之溫度下。
DOE 研究之結果彙總於表4中。數據在JMP DOE軟體中擬合以產生針對不同量測之反應曲面，圖4顯示隨調配物組成反應曲面而變化之膠凝溫度，隨組成而變化之黏度反應曲面示於圖5 (20℃)及圖6 (5℃)中，且原始剪切速率掃描數據之彙總示於圖12及圖13中。
膠凝型態之原始數據彙總於圖7中，且圖8中顯示如何根據G’與G”之交叉確定9號樣品之膠凝溫度之具體實例。原始數據顯示，膠凝之開始發生在較交叉略低之溫度下。因此，使用交叉作為調配物之膠凝溫度之定義為設計增加額外之穩健性，此乃因不一定需要完全膠凝來顯著增加AAV在SCS空間中之集中性。
圖9及圖10顯示G’與時間之關係，其用於測定分別暴露於自5℃及20℃溫度躍升至34℃之樣品之膠凝時間。圖11顯示9號樣品之具體實例。
將數據作為一個整體，以評估且最佳化表1中所彙總之所有設計參數之潛在調配物設計空間。圖14顯示熱反應性凝膠調配物設計空間(白色區域)，凝膠溫度限值為27℃至32℃。此設計空間可代表在2℃-8℃下製備劑且在仍冷卻或冷藏時投與之情形。限值：15-90 s膠凝時間，在5℃下之黏度≤ 183 mPas，注射持續時間= 10 s，且≥220 μm針ID。圖15利用相同因子以及在20℃下黏度  ≤ 183 mPas之額外參數約束進一步縮小設計空間。 表 4 ：凝膠組成對膠凝溫度、時間及黏度之影響之實驗設計研究。
DOE 模式 泊洛沙姆407 (% w/v) 泊洛沙姆188 (% w/v) 凝膠溫度(℃) 20℃ 至34℃ 躍升之膠凝時間(s) 5℃ 至34℃ 躍升之膠凝時間(s) 最初5℃ 與20℃ 相比膠凝時間之延長 c(s) 20℃ 下之黏度(mPas) 5℃ 下之黏度(mPas)
-- 16 0 23.72 9.92 29.87 20.0 54.6 27.6
-+ 22 0 18.85 1 a 20.53 19.5 NA b 53.8
+- 16 16 28.75 20.05 43.27 23.2 233.4 145.7
++ 22 16 21.93 3.42 29.71 26.3 NA b 296.9
a0 19 0 22.04 5.58 24.85 19.3 164.1 36.5
A0 19 16 24.03 13.34 33.47 20.1 497.1 203
0a 16 8 33.88 34.52 78.76 44.2 85.7 59.4
0A 22 8 25.9 10.13 31.46 21.3 330.4 92.9
0 19 8 28.89 14.45 39.30 24.9 203.1 82.2
0 19 8 29.03 17.82 38.92 21.1 200 82.6
a立即膠凝，故輸入1 s作為結果佔位符。 b NA，已膠凝。 C與20℃至34℃相比，自5℃至34℃膠凝時間平均延長24 ± 7 s 5.1.5     在設計空間內對調配物A、B及C之流變評估
基於DOE設計空間研究結果，鑑別出三種調配物(A、B及C，在圖15中以十字準線顯示)進行額外研究。組成分別為：A = 6%/19%，B = 6.5%/18%，及C = 7%/17.5% w/v泊洛沙姆188及407。
如圖16中所示，無菌製備調配物A、B及C。所有調配物均係基於經改質之杜貝克氏磷酸鹽緩衝鹽水溶液。使用含有蔗糖之經改質之杜貝克氏磷酸鹽緩衝鹽水溶液作為對照(100 mM氯化鈉、2.70 mM氯化鉀、8.10 mM無水磷酸氫二鈉、1.47 mM磷酸二氫鉀、117 mM蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188)。舉例而言，按10/9或1.11倍之比率製備略微更濃之摻料溶液，使得該等溶液可以9/10之比率摻入1/10比率之AAV中間體，以達成期望最終組成。亦可使用其他稀釋比率。黏性調配物可難以無菌過濾，故其藉由高壓釜在121℃下滅菌20分鐘(適用于至多200 mL；對於更大之體積，可使用更長時間，諸如對於2000 mL則為40 min)。使用『液體』循環，當溫度降低時逐漸降低壓力以防止『沸溢』，且使用帶有配備無菌過濾器之蓋子的瓶子以容許蒸汽進入瓶子，同時維持無菌，接著轉移至無菌罩中進行填充(實例蓋子包括Chemglass CLS1484-12或Sartorius MYCAP™系列蓋子或等效物)。所進行之循環指示，在循環期間由於水蒸發可能損失2%至4%之質量，且此可作為注射用無菌水與活性AAV調配中間體之摻入一起重新加入。表7顯示高壓釜滅菌對調配物之熱膠凝性質沒有影響。值之略微差異代表量測及製備之可變性。
圖17中所示之替代製備涉及無菌過濾。按組成及溫度對調配物黏度進行最佳化且對過濾流量及壓力進行最佳化，無菌過濾對於最終產品之滅菌亦為可行的。
表5彙總調配物A、B及C之流變性質。膠凝溫度範圍為28℃至32℃。膠凝之開始亦示出且範圍為27℃至30℃，且完全膠凝之平穩期範圍為29℃至33℃。該等均在處於眼睛溫度(約34.5℃)或以下發生膠凝之設計空間內。該三種調配物之膠凝時間範圍為16至29 s，亦在初始設計參數內。最終，該三種調配物在20℃下之黏度≤ 183 mPas，亦在設計參數內。調配物A、B及C之膠凝型態示於圖19、圖20及圖21中。膠凝開始發生在交叉點以下約2℃，且在整個膠凝中G’之變化覆蓋6至7個數量級之彈性模數增加。20℃及5℃下之黏度型態示於圖28至圖33中。
圖18顯示評價膠凝時間之不同方法。在20℃下將50 μL體積之調配物A (左)、B (中)及C (右)分配於溫暖表面上，且使用液滴流動之視訊來確定液滴停止流動之時間。使用此方法之膠凝時間為約10 s (A)、25 s (B)及45 s (C)。在20℃及5℃起始且躍升至34℃之膠凝時間之流變型態示於圖22至圖27中。
調配物在注射後在其完全膠凝之前可經略微稀釋，尤其是在濃注注射之外周。將調配物A、B及C以朝向設計空間右上方之方式放置，其將容許沿著膠凝等溫線稀釋(在設計空間中略微向下及向左移動) (參見圖15)。因此，若在注射後在一定程度上略微稀釋，則調配物膠凝性質將為強勁的且得以維持。鑑於調配物膠凝之速度，預期該等調配物濃注之主要完整性得以維持。使用含有0.001% P188之杜貝克氏磷酸鹽緩衝鹽水按質量進行10%稀釋模擬活體內流體之輕微稀釋之影響，且量測流變性質。在用於定義膠凝溫度之交叉點，儲存模數G’與室溫下之行為相比已顯著增加。在稀釋10%後，所有三種調配物之膠凝開始均係可接受的(表6)，且預期此在緊接注射後在主要濃注可完全膠凝之前維持凝膠外周之完整性。即使稀釋調配物之膠凝性質略有變化，但在眼睛溫度下，G’值亦增加至少一個數量級。調配物A及B在略微稀釋後之膠凝時間增加，但保持在90 s內，且調配物C保持在4.4 min內；所有均在初始設計之10分鐘限值內。該等數據指示，在注射後的最初15 s至30 s內，在濃注之膠凝可實質上完成之前，就緊接在注射後在外周處略微稀釋而言，調配物將均為穩定的。 表 5 ：調配物 A 、 B 及 C 之流變性質及熱性質
調配物 泊洛沙姆188 (% w/v) 泊洛沙姆407 (% w/v) 凝膠溫度(℃) 20℃ 至34℃ 躍升之膠凝時間(s) 5℃ 至34℃ 躍升之膠凝時間(s) 20℃ 下之黏度(mPas) 5℃ 下之黏度(mPas)
A 6 19 開始= 26.66 交叉= 28.45 平穩期= 29.08 16.2 34.2 174 177
B 6.5 18 開始= 27.49 交叉= 30.17 平穩期= 32.41 22.2 52.2 118 121
C 7 17.5 開始= 29.63 交叉= 31.91 平穩期= 33.42 29.4 61.2 107 116
表 6 ：稀釋對調配物 A 、 B 及 C 之凝膠溫度及膠凝時間之影響
凝膠溫度(℃) 20℃ 下之膠凝時間(s)
調配物* 純淨 90% 純淨 90%
A 開始= 26.66 交叉= 28.45 平穩期= 29.08 開始= 28.77 交叉= 30.35 平穩期= 33.51 16.2 28.2
B 開始= 27.49 交叉= 30.17 平穩期= 32.41 開始= 32.97 交叉= 35.11 平穩期= 37.47 22.2 60.6
C 開始= 29.63 交叉= 31.91 平穩期= 33.42 開始= 34.41 交叉= 36.21 平穩期= 38.40 29.4 262.8
表 7 ：高壓釜滅菌對凝膠溫度及時間之影響
凝膠溫度(℃) 20℃ 下之膠凝時間(s)
調配物* 高壓釜滅菌 未高壓釜滅菌 高壓釜滅菌 未高壓釜滅菌
A 開始= 26.66 交叉= 28.45 平穩期= 29.08 開始= 26.56 交叉= 28.29 平穩期= 29.99 16.2 16.2
B 開始= 27.49 交叉= 30.17 平穩期= 32.41 開始= 28.51 交叉= 30.66 平穩期= 32.45 22.2 27.0
C 開始= 29.63 交叉= 31.91 平穩期= 33.42 開始= 29.01 交叉= 32.03 平穩期= 33.45 29.4 28.2
5.1.6     調配物A、B及C中構築體之應力穩定性
差示掃描螢光法(DSF)量測蛋白質之固有色胺酸及酪胺酸釋放隨溫度之變化。Trp及Tyr殘基之局部環境隨蛋白質解摺疊而變化，從而導致螢光大幅增加。圖37顯示與調配物A、B及C相比，對照之差示掃描螢光法熱斜坡數據。上圖：原始熔融曲線信號。中圖：數據之導數以鑑別峰。底圖：光散射數據以指示任一聚集。所有調配物在熱升溫時均具有與對照相似之型態。表8彙總如下結果：調配物A、B及C具有與對照調配物相似之熱穩定性且AAV因此係穩定的。 表 8 ：與對照相比，不同凝膠調配物中構築體 AAV 衣殼之差示掃描螢光法熔融溫度
測試 於含有蔗糖之經改質DPBS 中之對照 調配物A (19% P407/6% P188) 調配物B (18% P407/6.5% P188) 調配物C (17.5% P407/7% P188)
樣品ID S-0DGN S-0DGO S-0DGP S-0DGQ
差示掃描螢光法熔融溫度 (℃) 71.69 73.36 73.81 73.46
表9彙總與對照相比，37℃應力對調配物A、B及C中之AAV穩定性之影響。所偵測到之游離DNA較低且與初始水準相似，該游離DNA係導致衣殼破裂且釋放DNA有效載荷之AAV不穩定性之量度，此說明在37℃下3天后針對所有樣品之方法可變性。對稀釋3倍以降低黏度之樣品量測調配物A、B及C之載體基因體濃度(藉由ddPCR)。結果具有一定可變性，有可能與其按體積而非按質量稀釋之事實有關(此乃因其具有高黏度，稀釋可引入可變性)。3天調配物A及B樣品具有與對照相似之載體基因體濃度，且總體上指示該等樣品係穩定的。可在以下中觀察到稀釋度之可變性：調配物B之初始樣品高於目標，而調配物C之3天樣品低於目標。將來，計及密度按質量進行稀釋係一種可潛在地有助於減少樣品製備可變性之方法。總體上，當計及可變性時，A、B及C之載體基因體濃度與對照相似，此指示調配物關於溫度應力均具有相似且可接受之穩定性。 表 9 ：與對照相比， 37℃ 應力對調配物 A 、 B 及 C 之穩定性之影響
測試 時間點( 天) 於含有蔗糖之經改質DPBS 中之對照 調配物A (19% P407/6% P188) 調配物B (18% P407/6.5% P188) 調配物C (17.5% P407/7% P188)
載體基因體濃度(ddPCR) (GC/mL) 0 1.41×10 12 NT 1.85×10 12 NT
3 1.36×10 12 1.57×10 12 1.18×10 12 5.79×10 11
游離DNA (%) ，藉由SYBR Gold 0 1.2 ± 0.5 0.5 ± 0.3 1.2 ± 0.7 0.6 ± 0.3
3 1.7 ± 0.8 0.8 ± 0.6 1.3 ± 0.7 2.8 ± 1.2
5.1.7     調配物A、B及C之可注射性及劑量製備之評估
將A、B及C之樣品填充至2 mL COP (West Pharmaceuticals, 19550057) Crystal Zenith TM小瓶中，且使用小瓶適配器(West, 8070117)提取。如在多天中所評價，在室溫下，所有樣品均易於填充至注射器中。在代表性1週時間段內，室溫經量測為22.4℃ ± 0.6℃ (最小值= 20.7℃且最大值= 23.7℃)。此證明膠凝性質容許在典型受控室溫下處置。
圖38顯示使用Clearside注射器裝置(CLS-HN001)及30號(160 μm ID, CLS-MN1100)針，將調配物B注射至在35℃下平衡之摘出豬眼中之注射壓力。儘管壓力為約160 PSI，但調配物易於注射至眼睛中。然而，基於Hagen-Poiseuille方程，將所使用之針ID (160 μm ID)縮放成更大需求之ID將導致壓力低約5倍，此乃因壓力與內徑之四次方成反比(亦即(240/160)4 = 5)。因此，隨著針之開發，預期壓力低5倍或為約32 PSI，完全在可接受之範圍內。
圖39顯示使用具有30 GG*1/2英吋(0.3 * 13 mm) TW針(Nipro, HN-3013-ET)之BD 1 mL注射器(309628)注射至空氣中。Clearside裝置及針經設計具有用於脈絡膜上注射之特定暴露針長度。目前，以此格式，30號(160 μm ID)係可用的。正在開發具有220或240 μm ID之更大的針ID形式。使用已知針大小之注射可根據由Hagen-Poiseuille方程給出之壓力與注射時間及針ID之關係來縮放。因此，利用可用大小之針進行注射可用於鑑別調配物是否將具有當前處於製造開發中之針的期望注射壓力及時間參數。該針相對於更大ID之針的壓力縮放為約4.5倍(240/165)4 = 4.5)。壓力亦與流速成比例。在該實驗中，壓力保持恒定，且評估注射時間。接著，注射之壓力及時間可按4.5之總組合因子來縮放，以將讀數轉化成開發中之更大針。因此，利用30 GaTW (165 μm ID)針以約120 PSI在12 s內注射調配物C，若使用240 μm ID針，則將減少至約27 PSI。以約120 PSI在17 s內注射調配物B，利用更大之針則亦將減少至約27 PSI。若更快速地注射調配物B ，諸如在12 s內，則預期約38 PSI之更大需求ID壓力。該等壓力均在所鑑別之注射壓力設計空間內。若將調配物A之37 s及140 PSI注射縮放成更大之針及更快速之注射，則12 s至16 s注射之預期壓力為64至78 PSI，其亦在所鑑別之限制性設計空間內(＜100 PSI或＜64 PSI)。 (a)  流變學量測
美國藥典(USP) USP ＜1911＞中闡述流變學量測，且USP＜912＞中闡述旋轉黏度測定法。
利用AR-G2流變儀收集流變學量測值，該流變儀配備有Peltier溫度控制板與60 mm 1°角鋁錐附件(TA Instruments, New Castle, DE)。 (b)  膠凝溫度
藉由在0.1%應變及1 Hz下以振盪模式施加溫度斜坡來測定膠凝溫度。加載樣品且在5℃下預平衡5分鐘，之後以5℃/min溫度斜升至40℃或60℃。將儲存/彈性模數(G”)及耗損/黏性模數(G’)相交時之溫度記錄為系統膠凝溫度。扭矩掃描證明線性黏彈性區擴展至約0.4%，且因此在0.1%之操作完全在線性黏彈性區內。 (c)  膠凝時間
以振盪模式0.1%應變及1 Hz測定膠凝時間。樣品在5℃及20℃下平衡且暴露於溫度躍升至34℃。如上，膠凝時間定義為儲存模數與耗損模數曲線之交叉點。 (d)  黏度對剪切速率
在範圍0.25 s -1至5000 s -1內實施黏度對剪切速率之掃描，每十進位收集5個點。在5℃及20℃下收集黏度與剪切速率之關係。自數據中外推在10,000及20,000 s -1下之黏度。  (e)  差示掃描螢光法
可藉由差示掃描螢光法(DSF)來測定蛋白質及由蛋白質構成之病毒衣殼之熱穩定性。DSF量測蛋白質之固有色胺酸及酪胺酸釋放隨溫度之變化。Trp及Tyr殘基之局部環境隨蛋白質解摺疊而變化，從而導致螢光大幅增加。50%之蛋白質解摺疊時之溫度定義為『熔融』溫度(T m)。USP ＜853＞及USP ＜1853＞中闡述螢光光譜法。
使用Promethius NT.Plex Nano DSF儀器(NanoTemper technologies, Munich, Germany)收集DSF數據。在20℃下將樣品加載至毛細管池中，且以1℃/min之速率使溫度斜升至95℃。使用350 nm (解摺疊)與330 nm(解摺疊)下釋放之信號輸出比來測定T m。 (f)   注射壓力量測
使用流篩及流體感測器(Viscotec America, Kennesaw, GA)或具有壓力感測器S-N-000之PressureMAT-DPG (PendoTECH, Princeton, NJ)來量測注射壓力。
手動地或使用Legato-100注射器幫浦(Kd Scientific, Holliston, MA)注射至空氣中以施加一致之流速。對於注射至摘出之豬眼中，將眼睛安裝在Mandell眼座(Mastel, Rapid City, SD)上，同時施加吸力以調整眼睛之眼內壓。 5.2  實例2：使用不同的脈絡膜上調配物在食蟹猴中進行之關於藥效學、生物分佈及耐受性研究之預言性實例
本研究之目的係評估包含AAV8構築體之凝膠調配物B在作為單次劑量經由脈絡膜上注射投與給食蟹猴時之生物分佈(DNA及mRNA)、藥效學(轉殖基因濃度)及耐受性。投藥後，對動物進行至少4週之投藥後觀察。每一組投與兩次注射，以達成相同劑量體積。
劑量投與：將檢品及對照品儲存於-60℃至-80℃之冷凍器中，且在使用當天在室溫下解凍。使調配物在室溫下解凍且在冷敷包上儲存，直至用於注射器填充。在脈絡膜上注射前，利用氯胺酮及右美托咪定(dexmedetomidine)對動物進行麻醉。在投與中，在10至15秒內向每隻眼睛(距角膜緣3 mm至4 mm)投與兩次50 μL脈絡膜上注射(組1及組2)。第一次注射係在右眼中投與於顳上象限中(亦即，在10點鐘與11點鐘位置之間)，且右眼中之第二次注射(若適用)投與於鼻下象限中(亦即，在4點鐘與5點鐘位置之間)。左眼中之第一次注射投與於顳上象限中(亦即，在1點鐘與2點鐘位置之間)，且左眼中之第二次注射(若適用)投與於鼻下象限中(亦即，在7點鐘與8點鐘位置之間)。注射後，針在抽出前在眼睛中保持大約30秒。在取出微針後，將棉頭塗藥器(劑量擦)置於注射部位上大約10秒。 表 10 ：檢品及媒劑對照品之製備
調配物 組成 注射器準備
檢品1 凝膠B調配物 於含有1.1 mL 3×10 12個基因體拷貝(GC)/mL之即用型小瓶中 1-mL BD注射器(部件號309628)，附帶小瓶適配器(West Pharma Services IL, Ltd；部件號8070101)，且固定至MedOne脈絡膜上手術針29 g × 0.7 mm (REF: 8014-16)
對照品1 安慰劑凝膠B調配物(媒劑) 18.0%泊洛沙姆407及6.5%泊洛沙姆188於含有蔗糖之經改質DPBS (5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4)中 1-mL BD注射器(部件號309628)，附帶小瓶適配器(West Pharma Services IL, Ltd；部件號8070101)，且固定至MedOne脈絡膜上手術針29 g × 0.7 mm (REF: 8014-16)
房水收集：在投與前至少2週、在第15天及在排定處死當天(第29天)自每隻眼睛中取出大約50 μL。將來自每隻眼睛之房水樣品置入帶有Watson條形碼標籤之單獨管中，在液氮中快速冷凍，且置於乾冰上，直至在-60℃與-80℃之間儲存為止。
研究終止：在第29天用戊巴比妥鈉對動物進行麻醉且放血。在第29天收集骨髓塗片，且係以未排定之間隔自處死動物收集(若可能)。
尸檢收集房水及玻璃體液：在放血後，將眼睛摘出且收集房水及玻璃體液樣品。收集後，將樣品急凍且儲存在-60℃與-80℃之間。藉由經驗證之方法分析房水及玻璃體液樣品之轉殖基因濃度。
針對生物分佈之眼部組織收集：放血後，將來自每一動物之右眼及最後兩隻動物(取決於存活)之左眼摘出且收集組織。將組織收集至單獨管中。所收集之組織包括具有視網膜色素上皮之脈絡膜、視網膜及鞏膜。使用如上文所闡述之超淨程序收集組織，且用鹽水沖洗並吸乾。將樣品急凍且儲存在-60℃與-80℃之間。使用qPCR或qRT-PCR方法分析樣品之載體DNA或RNA。
比較研究：在與本實例中所闡述之方案類似地進行之食蟹猴研究中，將對照調配物(對照品1.5)注射至個體每隻眼睛之SCS中(用微量注射器進行顳上及鼻下注射)。水性對照調配物不形成凝膠。 表 11 ：對照調配物之製備
調配物 組成 注射器準備
對照品1.5 對照SCS調配物 含有蔗糖之經改質DPBS (5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4) 如表9中所闡述之Clearside微量注射器注射器
數據評估及統計分析：使用平均值及標準偏差來計算統計數據分析。在第15天及第29天評價房水中之轉殖基因產物(蛋白質)，在第29天，除TP以外，在玻璃體液中亦評價DNA及RNA。 5.3  實例3：脈絡膜上調配物：在豬中進行之藥效學/生物分佈及毒性研究
本實例係關於在單次脈絡膜上注射後，在動物(例如小型豬，諸如猶卡坦小型豬)中評估(例如AAV.GFP)檢品之不同調配物之藥效學/生物分佈及毒性。簡言之，三(3)隻豬經由雙側脈絡膜上注射在顳上象限中接受每一檢品調配物(實施一次)。每天至少兩次分析動物之明顯不適跡象，諸如嚴重瞼痙攣、嚴重結膜充血、淚溢、過度揉眼睛及不進食。若該等狀況持續12小時，則將該等豬人道安樂死。 表 12 ：實驗設計
組 動物數量 檢品 (OU) 劑量 (GC/ 眼睛 )/ 體積 途徑 終點參數 安樂死
0 1 含有蔗糖之AAV.CAG.GFP改質DPBS 3×10 11於100 μl中 SCS • 眼部檢查/眼壓計：基線、第8天、第14天、第21天、第29天 • EDI-光學同調斷層掃描(b掃描)及藍色自體螢光( 正面)：基線、投藥後立即、第14天、第21天及第29天 • 彩色及藍色眼底成像：基線、第14天及第29天 • 血清取樣：基線及第29天 • 全血取樣：基線及第29天 第29天 OU：新鮮冷凍收集
1 3 含有蔗糖之AAV.CAG.GFP改質DPBS 3×10 11於100 μl中 SCS • 眼部檢查/眼壓計：基線、第8天、第14天、第21天、第29天 • EDI-光學同調斷層掃描(b掃描)及藍色自體螢光(正面)：基線、投藥後立即、第14天、第21天及第29天 • 彩色及藍色眼底成像：基線、第14天及第29天 • 血清取樣：基線及第29天 • 全血取樣：基線及第29天 第29天 每組 N=5 隻眼睛：收穫角膜、虹膜-睫狀體、視網膜、脈絡膜/RPE、鞏膜、視神經、視交叉 每組 N=1 隻眼睛：收集眼睛進行H&E及GFP IHC 非眼部組織：針對生物分佈收集
2 3 AAV.CAG.GFP凝膠調配物 3×10 11於100 μl中 SCS • 眼部檢查/眼壓計：基線、第8天、第14天、第21天、第29天 • EDI-光學同調斷層掃描(b掃描)及藍色自體螢光( 正面)：基線、投藥後立即、第14天、第21天及第29天 • 彩色及藍色眼底成像：基線、第14天及第29天 • 血清取樣：基線及第29天 • 全血取樣：基線及第29天 第29天 每組 N=5 隻眼睛：收穫角膜、虹膜-睫狀體、視網膜、脈絡膜/RPE、鞏膜、視神經、視交叉 每組 N=1 隻眼睛：收集眼睛進行H&E及GFP IHC 非眼部組織：針對生物分佈收集
3 3 AAV.CAG.GFP群集調配物 3×10 11於100 μl中 SCS • 眼部檢查/眼壓計：基線、第8天、第14天、第21天、第29天 • EDI-光學同調斷層掃描(b掃描)及藍色自體螢光( 正面)：基線、投藥後立即、第14天、第21天及第29天 • 彩色及藍色眼底成像：基線、第14天及第29天 • 血清取樣：基線及第29天 • 全血取樣：基線及第29天 第29天 每組 N=5 隻眼睛：收穫角膜、虹膜-睫狀體、視網膜、脈絡膜/RPE、鞏膜、視神經、視交叉 每組 N=1 隻眼睛：收集眼睛進行H&E及GFP IHC 非眼部組織：針對生物分佈收集
調配物： 調配物1 (組1)： 檢品：於含有蔗糖之經改質DPBS中之檢品(TA) 標籤名稱：AAV.CAG.GFP對照FDP 濃度3×10 12GC/mL 儲存條件：-80℃ 數量：每隻動物1個小瓶，外加2個小瓶備用；總計5個 調配物2 (組2)： 檢品：於熱反應性凝膠調配物中之TA (「凝膠調配物」) 標籤名稱：AAV.CAG.GFP凝膠調配物 濃度3×10 12GC/mL 儲存條件：-80℃ 數量：每隻動物1個小瓶，外加1個小瓶備用；總計4個 調配物3之組分(組3)： 檢品：群集原液 標籤名稱：AAV.CAG.GFP群集原液 濃度3×10 13GC/mL 儲存條件：-80℃ 數量：每隻動物1個小瓶，外加2個小瓶備用；總計5個 檢品：群集稀釋液 標籤名稱：群集稀釋液 儲存條件：-80℃ 數量：每隻動物1個小瓶，外加4個小瓶備用；總計7個 檢品：空小瓶 標籤名稱：空小瓶 儲存條件：-80℃ 數量：每隻動物1個小瓶，外加4個小瓶備用；總計7個
製備調配物 3 之說明：除上文所列示之3種組分以外，製備檢品亦需要3個小瓶適配器、4個BD注射器及2個針。
準備步驟如下：1. 將小瓶適配器連接至群集原液及群集稀釋液小瓶 2. 自群集原液小瓶中抽取活性物質(約200 μL) 3. 將群集原液預處理(prime)至100 μL 4. 向空小瓶中添加100 μL群集原液且移除注射器。 5. 自群集稀釋液小瓶中抽取群集稀釋液(約1100 μL) 6. 將群集稀釋液預處理至900 μL 7. 向空小瓶(其中具有100 μL來自步驟4之群集原液)中添加900 μL群集稀釋液且移除注射器。 8. 將新的BD注射器連接至含有群集原液及群集稀釋液之小瓶。使用注射器上下混合。在填充注射器以將＞ 150 μL抽取至BD注射器中時，藉由上下移動活塞逐出氣泡。連接投藥針，且將注射器準備至100 μL以準備投藥。 9. 將第二個BD注射器連接至含有混合群集原液及群集稀釋液之小瓶，抽取＞150 μL，連接投藥針，且將注射器準備至100 μL以準備投藥。 10. 所製備之劑量應在解凍後總計6小時內使用。
投藥：動物(例如小型豬；10隻猶卡坦(雌性，4-6月齡))在注射前一天禁食。在麻醉之前的十五分鐘，施加局部瞳孔放大劑(1.0%托吡卡胺鹽酸鹽)。肌內(IM)投與丁基原啡因(buprenorphine) (0.01-0.05 mg/kg)或美洛西卡(meloxicam) (0.4 mg/kg)，以及0.05 mg/kg阿托品( atropine) IM或0.01 mg/kg格隆溴銨(glycopyrrolate) IM。利用氯胺酮(10 mg/kg) /右美托咪定(0.05 mg/kg) IM對動物進行麻醉。使用紗布用10%嬰兒洗髮精溶液清洗眼睛周圍區域(包括眼瞼)，用無菌鹽水沖洗，局部施加5%必妥碘(betadine)溶液，且再次用無菌鹽水沖洗。動物雙眼局部接受0.5%丙美卡因鹽酸鹽(proparacaine HCl)及10.0%苯福林鹽酸鹽各一滴。使用浸泡於1%必妥碘中之無菌棉頭塗藥器，擦拭雙眼及第三眼瞼下之結膜穹窿，之後用無菌鹽水沖洗。放置眼瞼窺器，且使用長度為大約900或1100 μm之30號針藉由脈絡膜上腔(SCS)注射投與檢品。對於第一隻動物(第0組)，用1 mL BD針遞送注射，且首先使用MedOne 900 μm (或1100 μm)針進行注射。對於剩餘動物，使用基於第一隻投藥動物所選擇之針。注射係以雙側實施，且遞送至距右眼中10點鐘與11點鐘之間及左眼中1點鐘與2點鐘之間的角膜緣4 mm之顳上象限。
注射後程序及恢復：在注射後，投與局部抗生素(新聚短桿菌素或等效物)。實施具有增強深度成像(EDI)之OCT，獲取跨越投藥部位之大約15次b掃描。接著，當動物保持鎮靜且處於相同姿勢時，實施正面藍色自體螢光成像。跨越視覺條紋(將ON置於視圖頂部第3處)進行第二個OCT，之後為藍色自體螢光成像。若需要，動物接受阿替美唑(atipamezole) IM以逆轉右美托咪定之效應，且容許其自該程序中正常恢復。在成像後且亦在之後6小時給予第二滴局部抗生素。BID投與預防性抗生素額外2天，劑量之間相隔6-8小時。
所量測之參數：每天兩次在早上及下午評價動物之死亡率或發病率，且在投藥前、每週一次及終止時獲取體重。
眼睛檢查 (OE) ：使用局部1%托吡卡胺鹽酸鹽(檢查前15分鐘每隻眼睛中一滴)擴大瞳孔以進行眼部檢查。如表12中所指示，使用利用裂隙燈生物顯微鏡及間接檢眼鏡之完整OE來評估每個時間點之眼表形態、前段及後段。使用具有針對眼睛後段之額外評分參數之修正Hackett及McDonald眼睛分級系統對發炎進行分級(Hackett, R.B.及McDonald, T.O. Ophthalmic Toxicology and Assessing Ocular Irritation. Dermatoxicology，第五版，編輯F.N. Marzulli及H.I. Maibach.，Washington, D.C.: Hemisphere Publishing Corporation. 1996; 299-305及557-566)。若獸醫眼科醫生在第8天檢查後注意到眼部發炎水準較高，則考慮在研究之剩餘時間內利用二氟潑尼酯(difluprednate) BID (4-8小時)來治療眼睛。在一些情形中，需要二氟潑尼酯治療。
眼壓計：在表12中所指示之時間點量測雙眼之眼內壓(IOP)。在非鎮靜狀態動物中實施量測。在不使用局部麻醉劑之情形下，使用Tonovet探頭(iCare Tonometer, Espoo, Finland)進行量測。引導Tonovet探頭之尖端以輕輕接觸中心角膜。記錄顯示器上所顯示之平均IOP，且測定三個量測值。
光學同調斷層掃描 (OCT) ：在注射後立即且在第14天、第21天及第29天，使用Spectralis HRA OCT II (Heidelberg Engineering)實施用於檢查眼睛後部之具有增強深度成像之OCT。亦獲取藍色自體螢光成像。在第14天、第21天及第29天OCT成像前，使動物禁食隔夜。利用氯胺酮(10 mg/kg) /右美托咪定(0.05 mg/kg) IM對動物進行麻醉，且使用局部1%托吡卡胺鹽酸鹽(在成像之前的15分鐘施加)將其眼睛擴大。若可能，對兩個部位進行成像(藥物沈積及視覺條紋)。跟蹤特徵用於追蹤注射部位之變化。以電子方式遞送原始OCT影像以供分析。
彩色及鈷藍眼底成像：伴隨OCT成像，動物經歷使用RetCam3 (Natus)之基底成像。實施彩色及鈷藍成像二者。在成像完成後，若需要，動物接受阿替美唑IM以逆轉右美托咪定之效應，且容許其自該程序中正常恢復。對劑量沈積部位及視覺條紋進行成像。眼底影像以電子方式傳輸。
血液收集以獲得血清：用於tab分析之血清收集：在基線(投藥前)及在即將安樂死前，自頸靜脈中抽取至少1.2 mL全血且存放至非抗凝管(1.3 mL)中，以自所有動物進行血清收集。收集後，藉由將管顛倒3-5次輕輕混合管。在處理前，將血液樣品在室溫下儲存至少30分鐘，但少於60分鐘。在冷凍離心機中，使全血樣品在4℃下以10,000 g離心10分鐘。離心後立即將澄清血清分成兩個等分試樣，且轉移至2 mL冷凍小瓶聚丙烯管中，且置於乾冰上並在-80℃下冷凍儲存，直至用於生物分析型分析。
全血收集：自動物之頸靜脈中抽取至少2.0 mL全血(在特定時間)至管中以進行血漿收集。收集後，藉由將管顛倒5-8次輕輕混合管。將樣品分成兩個大致相等之等分試樣且轉移至單獨的無核酸酶管中。接著將等分試樣置於乾冰上直至在-80℃下儲存。
安樂死：在保持鎮靜的同時，利用靜脈內注射AVMA批准之基於巴比妥酸鹽之安樂死劑(例如Euthasol)使動物安樂死。藉由聽診確保死亡。
眼部組織收集：對於組1至組3，在安樂死後立即收集眼部組織。將雙眼摘出，且用縫線標記注射部位。對於每組N=5隻眼睛(3隻右眼及兩隻左眼)，經由27號或30號注射器取出房水，稱重，且藉由浸入液氮中快速冷凍。接著將整個球體在液氮中快速冷凍且在-80℃下儲存。對於每組N =1隻眼睛(1隻左眼；第一隻動物/組)，將淚腺在室溫下於戴維森溶液(Davidson’s solution)(係組織體積之體積之15至20倍)中固定至少48小時至72小時。固定72小時後，轉移組織且儲存在70%乙醇中。
自每組N =5隻眼睛收集眼外組織，若經血液污染，則在PBS中短暫沖洗，稱重，且快速冷凍。根據標準操作程序在冷凍時解剖該等眼部組織。用單刃刀片切碎鞏膜及視神經，之後獲得組織重量。接著將樣品儲存在-80℃下 收集以用於生物分佈或轉殖基因產物水準分析之組織列表：1. 每次收集將血清樣品分裝至2個管中(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 2. 每次收集將全血樣品分裝至2個管中(2 mL不含DNA酶/RNA酶之聚丙烯管) 3. 房水(2 mL聚丙烯管) 4. 玻璃體液(5-7 mL聚丙烯管) 5. 鞏膜：每次收集1個管(5-7 mL聚丙烯管) 6. 視神經：2個管(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 7. 視網膜：每次收集1個管(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 8. RPE-脈絡膜：每次收集1個管(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 9. 虹膜-睫狀體：1個管(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 10. 視交叉：2個管(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 11. 枕葉：每次收集3個管(3) 6-7 mm生檢穿孔) (2 mL聚丙烯管) 12. 額葉皮質：每次收集3個管(3) 6-7 mm生檢穿孔) (2 mL聚丙烯管)
組 0 ：安樂死後，立即將雙眼摘出，且用組織標記物標記注射部位。經由27號或30號注射器自雙眼中取出房水，稱重，且藉由浸入液氮中快速冷凍。兩隻眼睛均經歷新鮮之眼解剖。首先利用3 ml注射器使用23-25號針收集玻璃體液(VH)。將針插入角膜緣下2 mm至中心玻璃體中，避免與晶狀體接觸。緩慢收集VH且置於2 ml聚丙烯管中。小心不要施加過大真空壓力。接著收集虹膜-睫狀體。去除晶狀體，且基於標記物將眼睛切割成4個象限(顳上(投藥部位)、顳下、鼻上及鼻下)。自每一象限中打出八(8) mm穿孔，且將視網膜、RPE /脈絡膜及鞏膜單獨地收集至2 mL聚丙烯管中。接著分離組織之剩餘部分(視網膜、RPE /脈絡膜及鞏膜)，且收集至2 mL聚丙烯管中。每隻眼睛之組織列表如下： 1. 房水(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 2. 玻璃體液(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 3. 鞏膜：n=5個樣品，4個穿孔及剩餘組織(穿孔用2 mL聚丙烯螺旋蓋管，且剩餘組織用5-7 mL聚丙烯管) 4. 視網膜：n=5個樣品，4個穿孔及剩餘組織(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 5. RPE-脈絡膜：n=5個樣品，4個穿孔及剩餘組織(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 6. 虹膜-睫狀體1個管(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 7. 視交叉：2個管(2 mL聚丙烯螺旋蓋管) 8. 枕葉：每次收集3個管(3) 6-7 mm生檢穿孔) (2 mL聚丙烯管) 9. 額葉皮質：每次收集3個管(3) 6-7 mm生檢穿孔) (2 mL聚丙烯管)
非眼部組織收集 ( 所有組 ) ：摘出後，收集非眼部組織且保持以供潛在分析。利用清潔收集技術以避免交叉污染，且每一組織取兩個樣品。在分析前，將樣品快速冷凍且儲存在-80℃下。 針對收集之組織列表：1. 肝臟(6-7 mm生檢穿孔，左側葉) (3個樣品) (2 mL聚丙烯管) 2. 主淚腺(2) (2 mL聚丙烯管) 3. 下頜淋巴結(2) (2 mL聚丙烯管) 4. 腮腺淋巴結(2) (2 mL聚丙烯管) 表 13 ：用於分析之組織指派
組 所收集之樣品 等分試樣 1 之指派 等分試樣 2 之指派
組1、組2、組3 左側(2)視網膜、RPE/脈絡膜、鞏膜 qPCR NA (僅一個等分試樣)
右側(3)視網膜、RPE/脈絡膜、鞏膜 轉殖基因產物分析 NA (僅一個等分試樣)
房水、淚腺、眼引流淋巴結 保持以供潛在分析或方法開發 NA (僅一個等分試樣)
血清、視神經、虹膜-睫狀體、視交叉、枕葉、肝臟 qPCR 保持以供潛在分析或方法開發
額葉皮質 保持以供潛在分析或方法開發 保持以供潛在分析或方法開發
血清 Tab分析 保持以供潛在分析或方法開發
組0 血清、鞏膜(所有穿孔)、RPE/脈絡膜(所有穿孔)、視網膜(所有穿孔) qPCR NA (僅一個等分試樣)
後段(單獨RPE/脈絡膜、視網膜、鞏膜管)、房水、玻璃體液、淚腺、眼引流淋巴結 保持以供潛在分析或方法開發 若適當，保持以供潛在分析或方法開發
血清、視神經、虹膜-睫狀體、視交叉、枕葉、肝臟 qPCR 保持以供潛在分析或方法開發
額葉皮質 保持以供潛在分析或方法開發 保持以供潛在分析或方法開發
血清 Tab分析 保持以供潛在分析或方法開發
本研究經設計以評估在豬脈絡膜上注射後，測試材料之藥效學/生物分佈及毒性。本研究經設計以進一步開發一種治療患有眼病(例如眼色素層及視網膜之疾病)之人類的遞送平台。 5.4  實例4：脈絡膜上調配物：在豬中進行之藥效學/生物分佈及毒性研究
該實例彙總實例3之結果。在投與AAV.CAG.GFP凝膠調配物之6隻眼睛中有5隻觀察到SCS擴大，且在該等眼睛中，SCS在第15天下降至正常。平均而言，與投與含有蔗糖調配物之AAV.CAG.GFP改質DPBS之眼睛相比，投與AAV.CAG.GFP凝膠調配物之眼睛展現出更多的在視網膜中之轉殖基因產物(TP)(10X)。此外，在向動物投與不同的調配物及對照後，量測SCS厚度。據發現，對於凝膠調配物治療之動物，SCS之估計厚度在其最寬部分(約400-800 μm)增加至標記物(200 μm)之2-4倍。具有最高投藥前總抗體(Tab)之動物具有低於偵測限之GFP濃度，且未成像。參見表14及表15。 表 14 ：轉殖基因產物 (GFP) 蛋白質濃度
劑量組 檢品 動物數 基質類型 平均稀釋結果(pg/mL) 稀釋因子 最終濃度(pg/mL) 最終濃度(ng TP/mg 蛋白質)
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-125 脈絡膜-RPE，右眼 53.8 8 430 0.0680
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-114 脈絡膜-RPE，右眼 30.7 8 245 0.0361
1 含有蔗糖之經改質dPBS 90-034 脈絡膜-RPE，右眼 168 8 1340 0.223
2 凝膠B 89-061 脈絡膜-RPE，右眼 QNS QNS QNS QNS
2 凝膠B 89-059 脈絡膜-RPE，右眼 50.2 8 401 0.0638
2 凝膠B 90-063 脈絡膜-RPE，右眼 206 8 1650 0.281
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-125 鞏膜， 右眼 120 8 961 0.498
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-114 鞏膜， 右眼 249 8 1990 0.776
1 含有蔗糖之經改質dPBS 90-034 鞏膜， 右眼 312 8 2500 0.970
2 凝膠B 89-061 鞏膜， 右眼 53.3 8 427 0.167
2 凝膠B 89-059 鞏膜， 右眼 93.1 8 745 0.300
2 凝膠B 90-063 鞏膜， 右眼 845 8 6760 2.31
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-125 視網膜， 右眼 2個之平均值 2個之平均值 40.7 0.00988
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-114 視網膜， 右眼 27.4 1 27.4 0.00596
1 含有蔗糖之經改質dPBS 90-034 視網膜， 右眼 2個之平均值 2個之平均值 42.2 0.00933
2 凝膠B 89-061 視網膜， 右眼 BLQ 1 BLQ BLQ
2 凝膠B 89-059 視網膜， 右眼 3個之平均值 3個之平均值 198 0.0415
2 凝膠B 90-063 視網膜， 右眼 3個之平均值 3個之平均值 621 0.104
QNS：數量不足 表 15 ：每一眼組織中總蛋白質濃度之對照量測
劑量組 檢品 動物數 基質類型 組織質量(mg) 平均結果(mg/mL) 稀釋因子 總眼組織蛋白質- 最終濃度(mg/mL)
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-125 脈絡膜-RPE，右眼 48.6 0.632 10 6.32
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-114 脈絡膜-RPE，右眼 58.8 0.678 10 6.78
1 含有蔗糖之經改質dPBS 90-034 脈絡膜-RPE，右眼 56.8 0.601 10 6.01
2 凝膠B 89-061 脈絡膜-RPE，右眼 57.9 0.568 10 5.68
2 凝膠B 89-059 脈絡膜-RPE，右眼 71.8 0.628 10 6.28
2 凝膠B 90-063 脈絡膜-RPE，右眼 65.5 0.588 10 5.88
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-125 鞏膜， 右眼 384 0.193 10 1.93
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-114 鞏膜， 右眼 465 0.257 10 2.57
1 含有蔗糖之經改質dPBS 90-034 鞏膜， 右眼 392 0.258 10 2.58
2 凝膠B 89-061 鞏膜， 右眼 393 0.256 10 2.56
2 凝膠B 89-059 鞏膜， 右眼 415 0.249 10 2.49
2 凝膠B 90-063 鞏膜， 右眼 549 0.292 10 2.92
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-125 視網膜， 右眼 71.4 0.411 10 4.11
1 含有蔗糖之經改質dPBS 89-114 視網膜， 右眼 64.4 0.460 10 4.60
1 含有蔗糖之經改質dPBS 90-034 視網膜， 右眼 99.8 0.452 10 4.52
2 凝膠B 89-061 視網膜， 右眼 88.4 0.501 10 5.01
2 凝膠B 89-059 視網膜， 右眼 87.7 0.478 10 4.78
2 凝膠B 90-063 視網膜， 右眼 87.4 0.595 10 5.95
5.5  實例5：脈絡膜上調配物：豬中之探索性研究
該實例係關於在單次脈絡膜上注射後，對在動物(例如小型豬)中表現分泌型轉殖基因產物(例如IgG或Fab)之測試AAV的不同調配物之藥物動力學/藥效學(PK/PD)及生物分佈之評估。該實例進一步旨在表徵眼睛中全長及片段抗體之PK/PD且評價眼部區室中之TP濃度。該研究之實施與先前實例類似，研究設計如表16中所說明。 表 16 ：拉那魯單抗投藥之研究概述
研究組 TM 劑量 (GC/kg) 途徑 動物數 尸檢
群組1
1 AAV8.CAG.Lan.IgG 低 SR 2 SR = 8週；SCS=4週 蛋白質：1隻眼睛 RNA：1隻眼睛 DNA：1隻眼睛 組織學：1隻眼睛
2 AAV8.CAG.Lan. IgG 高 SCS 2
群組2
3 AAV8.CAG.Lan.Fab 低 SR 2 SR = 8週；SCS=4週 蛋白質：1隻眼睛 RNA：1隻眼睛 DNA：1隻眼睛 組織學：1隻眼睛
4 AAV8.CAG.Lan.Fab 高 SCS 2
群組3 (取決於來自群組1之數據)
1 AAV8.CAG.Lan.IgG 低 SR 3 SR = 8週；SCS=4週 蛋白質：2隻眼睛 RNA：1隻眼睛 DNA：2隻眼睛 組織學：1隻眼睛
2 AAV8.CAG.Lan.IgG 高 SCS 3
群組4 (取決於來自群組2之數據)
3 AAV8.CAG.Lan.Fab 低 SR 3 SR = 8週；SCS=4週 蛋白質：2隻眼睛 RNA：1隻眼睛 DNA：2隻眼睛 組織學：1隻眼睛
4 AAV8.CAG.Lan.Fab 高 SCS 3
群組5 (取決於來自群組1之數據)
1 AAV8.CAG.Lan.IgG 低 SR 2 SR =4週 蛋白質：2隻眼睛 RNA：1隻眼睛 DNA：2隻眼睛 組織學：1隻眼睛
Lan.IgG：拉那魯單抗全長抗體 Lan.Fab：拉那魯單抗Fab
所調配AAV之投與。如上表中所指示，拉那魯單抗 係以視網膜下或脈絡膜上方式投與。低劑量SCS：3×10 11GC/眼睛；高劑量SCS：5×10 11- 10×10 11GC/眼睛或7×10 11GC/眼睛。低劑量SR：1×10 10- 3×10 10GC/眼睛；高劑量SR：3×10 10- 7×10 10GC/眼睛。二者之劑量體積：單次注射100 uL。臨床觀察結果包括每天兩次動物房檢查、每週體重及食物消耗(僅定性)。 觀察結果 / 間隔：● 投藥前之眼科檢查/IOP (AH液收集後1週)：投藥後約第3天，及第1週、第2週、第4週、第6週及第8週。在房水引流(tap)日，在引流之前進行OE。 ● 房水收集：投藥前，及投藥後約第2週、第4週、第6週、第8週 ● 彩色成像/螢光黃血管攝影術：投藥前(全部)，投藥後第1天(僅SR動物)及投藥後約第2週、第4週、第8週。中央區、顳區及鼻區。對於SCS，嘗試在所有間隔對顳上象限進行成像(劑量遞送部位) ● 光學同調斷層掃描(OCT)：投藥前(全部)，投藥後約第4週及第8週。中央區、顳區及鼻區。對於SCS，嘗試在所有間隔對顳上象限進行成像(劑量遞送部位)。 ● 血清收集： TAB分析：投藥前，投藥後約第2週、第4週、第6週、第8週(血清)。TP及ATPA：投藥前，投藥後約第2週、第4週、第6週、第8週(血清)。 ● 用於AAV載體DNA分析(qPCR)之全血樣品：投藥前，投藥後約第2週、第4週、第8週(血清)。 終止時(4週或8週)，收集以下組織： - 房水 - 玻璃體液 - 視神經 - 虹膜-睫狀體 - 視交叉 - 枕葉 - 額葉皮質 - 角膜 - 晶狀體
新鮮收集樣品；對於後段收集4個8-mm穿孔及剩餘後眼杯，且分離成視網膜、RPE/脈絡膜及鞏膜。 亦收集非眼部組織並進行檢查： ○    肝臟(左側葉；3個樣品) ○    主淚腺(2) ○    下頜淋巴結(2) ○ 腮腺淋巴結(2) 5.6. 實例6：使用不同的脈絡膜上調配物在食蟹猴中進行之藥效學、生物分佈及耐受性研究
本研究之目的係評估包含AAV8構築體之凝膠調配物B在作為單次劑量經由脈絡膜上注射投與給食蟹猴時之生物分佈(DNA及mRNA)、藥效學(轉殖基因濃度)及耐受性。投藥後，對動物進行至少4週之投藥後觀察。每一組投與兩次注射，以達成相同劑量體積。組分配及劑量水準示於表17中。檢品為表現轉殖基因產物(TP)之AAV8構築體。對照品為安慰劑。 表 17 ：組分配及劑量水準
組 a 劑量方案 劑量水準 b(gc/眼睛) 劑量濃度 (gc/mL) 動物數量 c
左眼 右眼 雄性 雌性
1 對照品1 對照品1 0 0 1 NA
2 檢品1 檢品1 3×10 11 3×10 12 3 1
gc =基因體拷貝 a 組1僅投與對照品。 b 組1及組2之劑量水準係基於100 μL/眼睛/劑之劑量體積，其係以兩次50 μL注射來投與。 c 所有動物均在投藥期第29天處死。
劑量投與：檢品及對照品之製備示於表18中。將檢品及對照品儲存於-60℃至-80℃之冷凍器中，且在使用當天在室溫下解凍。使調配物在室溫下解凍且在冷敷包上儲存，直至用於注射器填充。在脈絡膜上注射前，利用氯胺酮及右美托咪定對動物進行麻醉。在投與中，在10至15秒內向每隻眼睛(距角膜緣3 mm至4 mm)投與兩次50 μL脈絡膜上注射(組1及組2)。注射器及微針大小示於表18中。第一次注射係在右眼中投與於顳上象限中(亦即，在10點鐘與11點鐘位置之間)，且右眼中之第二次注射(若適用)投與於鼻下象限中(亦即，在4點鐘與5點鐘位置之間)。左眼中之第一次注射投與於顳上象限中(亦即，在1點鐘與2點鐘位置之間)，且左眼中之第二次注射(若適用)投與於鼻下象限中(亦即，在7點鐘與8點鐘位置之間)。注射後，針在抽出前在眼睛中保持大約30秒。在取出微針後，將棉頭塗藥器(劑量擦)置於注射部位上大約10秒。 表 18 ：檢品及媒劑對照品之製備
調配物 組成 注射器準備
檢品1 凝膠B調配物 於含有1.1 mL 3×10 12個基因體拷貝(GC)/mL之即用型小瓶中 1-mL BD注射器(部件號309628)，附帶小瓶適配器(West Pharma Services IL, Ltd；部件號8070101)，且固定至MedOne脈絡膜上手術針29 g × 0.7 mm (REF: 8014-16)
對照品1 安慰劑凝膠B調配物(媒劑) 18.0%泊洛沙姆407及6.5%泊洛沙姆188於含有蔗糖之經改質DPBS (5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4)中 1-mL BD注射器(部件號309628)，附帶小瓶適配器(West Pharma Services IL, Ltd；部件號8070101)，且固定至MedOne脈絡膜上手術針29 g × 0.7 mm (REF: 8014-16)
TP 分析：如上文所論述，在投藥前且在排定處死當天(第29天)採集一次血液樣品。使用經驗證之抗體分析來分析血清樣品之針對TP之抗體。對於TP轉殖基因分析，如上文所闡述在投與前至少兩週、在第15天及在排定處死當天(第29天)採集血液樣品。接著藉由經驗證之抗體分析來分析樣品。
房水收集：在投與前至少2週、在第15天及在排定處死當天(第29天)自每隻眼睛中取出大約50 μL。將來自每隻眼睛之房水樣品置入帶有Watson條形碼標籤之單獨管中，在液氮中快速冷凍，且置於乾冰上，直至在-60℃與-80℃之間儲存為止。藉由經驗證之方法分析樣品之TP濃度。
研究終止：在第29天用戊巴比妥鈉對動物進行麻醉且放血。在第29天收集骨髓塗片，且係以未排定之間隔自處死動物收集(若可能)。
房水及玻璃體液之尸檢收集：放血後，將眼睛摘出且收集房水及玻璃體液樣品。收集後，將樣品急凍且儲存在-60℃與-80℃之間。藉由經驗證之方法分析房水及玻璃體液樣品之轉殖基因濃度。
針對生物分佈之眼部組織收集：放血後，將組2中來自每一動物之右眼及最後兩隻動物(取決於存活)之左眼摘出且收集組織。將組織收集至單獨管中。所收集之組織包括具有視網膜色素上皮之脈絡膜、視網膜及鞏膜。使用如上文所闡述之超淨程序收集組織，且用鹽水沖洗並吸乾。將樣品急凍且儲存在-60℃與-80℃之間。使用qPCR或qRT-PCR方法分析樣品之載體DNA或RNA。
比較研究：在與本實例中所闡述之方案類似地進行之食蟹猴研究中，將對照調配物(對照品1.5)注射至個體每隻眼睛之SCS中(用微量注射器進行顳上及鼻下注射)。水性對照調配物不形成凝膠。 表 19 ：對照調配物之製備
調配物 組成 注射器準備
對照品1.5 對照SCS調配物 含有蔗糖之經改質DPBS (5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4) 如表9中所闡述之Clearside微量注射器注射器
對照調配物亦含有TP，且以3 × 10 11gc/眼睛按100 μL/眼睛/劑量(兩次50 μL注射)進行投藥。
數據評估及統計分析：使用平均值及標準偏差來計算統計數據分析。在第15天及第29天評價房水中之轉殖基因產物(蛋白質)，在第29天，除TP以外，在玻璃體液中亦評價DNA及RNA。 結果 表 20 ：房水轉殖基因產物 (ng/mL)
對照品1-安慰劑 (TP ng/mL) 檢品1-兩次注射 (TP ng/mL) 對照品1.5-對照調配物 (TP ng/mL)
15天 29天 15天 29天 15天 29天
平均值 0 a 0 a 16.79 29.44 2.79 3.69
a當值低於定量限(＜0.100 ng/mL)時，為描述性統計之計算分配值「0」。
與對照調配物相比，在顳上及鼻下將檢品1 (凝膠調配物)兩次注射至眼睛之SCS中使得房水中之轉殖基因產物(TP)濃度更大。 表 21 ：玻璃體液轉殖基因產物 (ng/mL)
對照品1-安慰劑 (TP ng/mL) 檢品1-兩次注射 (TP ng/mL) 對照品1.5-對照調配物 (TP ng/mL)
平均值 0 a 67.76 17.99
a當值低於定量限(＜0.100 ng/mL)時，為描述性統計之計算分配值「0」。
與對照調配物相比，在眼睛之顳上及鼻下位置將檢品1注射至SCS中使得VH中之TP濃度更大。在注射後15天及29天，玻璃體液轉殖基因產物濃度總體上高於房水中所發現之TP。 表 22 ：血清轉殖基因產物 (ng/mL)
對照品1-安慰劑 (TP ng/mL) 檢品1-兩次注射 (TP ng/mL) 對照品1.5-對照調配物 (TP ng/mL)
平均值 0 a 0.28 0.44
a當值低於定量限(＜0.100 ng/mL)時，為描述性統計之計算分配值「0」。
每次將檢品1 (膠凝)或含有 TP之對照調配物注射至SCS中均在血清中產生最小效價之轉殖基因產物。 表 23 ：組織中之 DNA 或 RNA ( 拷貝 /μg) 生物分佈
對照品1-安慰劑 (拷貝/μg) 檢品1-兩次注射 (拷貝/μg) 對照品1.5-對照調配物 (拷貝/μg)
DNA RNA DNA RNA DNA RNA
視網膜(平均值) nt Nt 2.08×10 4 7.15×10 5 5.61×10 3 nt
RPE/脈絡膜(平均值) nt Nt 1.03×10 7 1.93×10 5 3.97×10 6 nt
鞏膜(平均值) nt Nt 1.29×10 8 1.91×10 4 7.92×10 7 nt
nt=未測試
與對照調配物相比，檢品1 (膠凝)對向視網膜及脈絡膜之遞送有影響 。5.7  實例7：脈絡膜上調配物：在小型豬中進行之藥效學/生物分佈研究
該實例評估在單次脈絡膜上注射後，AAV.GFP之群集調配物在小型豬中之藥效學及生物分佈。該實例中所用之方法及材料與本揭示案之實例3中所揭示之方法及材料實質上相同。
該實例主要評估與蔗糖調配物相比，凝膠B調配物是否與視網膜或RPE/脈絡膜中蛋白質水準及DNA之增加相關。該實例進一步評估用於監測SCS空間中調配物之存在之活體內成像技術、用於表現監測之活體內成像技術以及轉殖基因產物(TP)、載體DNA及RNA之分佈。由於在眼睛大小、鞏膜、血液供應及人類視網膜方面與人類相似，該實例選擇小型豬。該實例之研究設計示於表24中。 表 24 ：組分配及劑量水準
組 載體 / 調配物 動物數量 劑量水準 (GC/ 眼睛 ) 終點
0 AAV.CAG.GFP 含有蔗糖之經改質DPBS 1 3×10 11 測試針長且比較不同組織收集之DNA
1 (a+b) 含有蔗糖之AAV.CAG.GFP改質DPBS 3+3 3×10 11 眼底影像，具有AF及增強深度成像之OCT，OE TP之組織-右眼(完成) DNA/RNA - 2隻左眼(僅初始動物之DNA) GFP IHC及ISH - 1隻左眼
2 (a+b) AAV.CAG.GFP 凝膠調配物 3+3 3×10 11
該實驗發現，活體內成像技術及SCS投與途徑在小型豬中係可行的。對於SCS投與之凝膠B調配物，在成像時或在眼科檢查期間未觀察到異常。所有小型豬在投藥前均具有陰性或低效價之血清TAb，此不影響生物分佈(BD)。
在投與凝膠B調配物後偵測SCS空間( 圖 40)。在投與凝膠B調配物之3隻眼睛中觀察導SCS空間明顯擴大(++)且在4隻眼睛中觀察到輕微擴大(+)(組2a及組2b中總計12隻眼睛)，且在投與蔗糖調配物之14隻眼睛中之6隻中觀察到部分或輕微分離(組0、組1a及組1b)。
小型豬(群組a)中之載體DNA生物分佈(BD)數據示於下表25中。表25中之每一數據點代表一隻動物(OS)，在第29天進行量測。收集整個組織。所有肝臟樣品均顯示BLQ (BLQ = 50個拷貝/rxn)。 表 25 ：載體 DNA 生物分佈。
AAV.CAG.GFP 含有蔗糖之經改質DPBS 載體DNA (GC/μg DNA) AAV.CAG.GFP凝膠B調配物 載體DNA (GC/μg DNA)
視網膜 1790 50 50 50 50
脈絡膜 408 1750 5690 26500 16000
鞏膜 128000 119000 481000 93100 34200
載體DNA在不同組織中之BD模式為鞏膜＞ RPE/脈絡膜＞視網膜，此與實例6中所示之食蟹猴中之BD模式一致。凝膠調配物較蔗糖調配物具有更高之RPE/脈絡膜BD。此外，調配物之間的BD相當，唯凝膠B在脈絡膜中之載體DNA似乎更高。在食蟹猴SCS研究中，凝膠B調配物較蔗糖調配物具有更高之視網膜及脈絡膜BD。一般而言，食蟹猴中之BD高於小型豬，視網膜中之蔗糖調配物除外。
亦量測組織中之GFP蛋白(轉殖基因產物(TP))濃度(群組a及群組b)，且示於表26中。收集OD以進行TP定量。BLQ為18.8 pg/ml/mg總蛋白質。來自群組a及群組b之數據分佈及平均值相當。與蔗糖調配物相比，凝膠B在視網膜中具有更高(8.5X)之平均TP濃度。基於該等數據，凝膠B之轉殖基因產物在脈絡膜中亦略高。 表 26 ：組織中之轉殖基因產物 (GFP) 濃度
含有蔗糖之AAV.CAG.GFP改質DPBS GFP濃度(ng/mg蛋白質)
視網膜 0.00988 0.00596 0.00933 0.0034 0.0029 0.0029
脈絡膜 0.068 0.036 0.223 0.258 0.16 0.0037
鞏膜 0.498 0.776 0.97 0.879 1.143 0.137
AAV.CAG.GFP凝膠B調配物 GFP濃度(ng/mg蛋白質)
視網膜 0.0038 0.0415 0.104 0.031 0.106 0.0068
脈絡膜 0 0.0638 0.281 0.12 0.137 0.168
鞏膜 0.167 0.3 2.314 0.708 0.087 0.565
平均而言，與在SCS中不形成凝膠之對照調配物相比，在rAAV SCS注射後29天，凝膠調配物使得鞏膜中之轉殖基因產物(TP)表現較少且視網膜中之TP表現顯著增加更多。 等效形式
儘管參考本發明之具體實施例對本發明進行詳細闡述，但應理解，在功能上等效之變化形式亦在本發明之範圍內。實際上，根據前述說明及附圖，除本文所顯示及闡述之彼等修改以外，熟習此項技術者將明瞭對本發明之各種修改。此等修改意欲屬於隨附申請專利範圍之範圍內。熟習此項技術者將認識到，或能夠僅使用常規實驗確定本文所闡述之本發明具體實施例之許多等效形式。以下申請專利範圍意欲涵蓋此等等效形式。
本說明書中所提及之所有公開案、專利及專利申請案均係以引用的方式併入本文說明書中，其併入程度如同每一個別公開案、專利或專利申請案明確且個別地指示為以全文引用的方式併入本文中一般。
圖 1.使用熱反應性凝膠調配物，構築體(例如本揭示案之構築體)在脈絡膜上腔中之集中性之概述。預期熱反應性凝膠調配物在注射期間自液態變為在脈絡膜上腔中之凝膠，且因此將所投用之AAV局部保留在脈絡膜上腔中更長時間且具有更大之治療效應。 圖 2A- 圖 2C.對於不同的30號及29號針，注射壓力計算值隨黏度之變化。A圖縮放至100 PSI之限值，B圖縮放至65 PSI，且C圖縮放至45 PSI。 圖 3.使用熱像儀量測眼外溫度。 圖 4.來自實驗設計研究之膠凝溫度隨調配物組成而變化之曲面圖。 圖 5.來自實驗設計研究之20℃下之黏度隨調配物組成而變化之曲面圖。 圖 6.來自實驗設計研究之5℃下之黏度隨調配物組成而變化之曲面圖。 圖 7.來自實驗設計(DOE)研究之膠凝溫度流變學數據之彙總。樣品標記有P407-P188水準(例如標記「16-0」之1號樣品具有16% P407及0% P188)。 圖 8.DOE研究中9號樣品(19% P407/8% P188)之實例膠凝溫度型態，其顯示如何使用G’與G”之交叉來確定膠凝溫度。 圖 9.來自DOE研究之自20℃躍升至34℃之流變學數據膠凝時間彙總。樣品標記有P407-P188水準(例如1號樣品具有16% P407及0% P188)。 圖 10.來自DOE研究之自5℃躍升至34℃之流變學數據膠凝時間彙總。樣品標記有P407-P188水準(例如1號樣品具有16% P407及0% P188)。 圖 11.9號樣品(19% P407/8% P188)自20℃躍升至34℃之實例膠凝時間型態，其顯示如何使用G’與G”之交叉來確定膠凝時間。 圖 12.來自DOE研究之在20℃下黏度對剪切速率之掃描之彙總。樣品標記有P407-P188水準(例如1號樣品具有16% P407及0% P188)。注意，樣品2及4在20℃下已膠凝，且因此顯示剪切對破壞凝膠結構之影響。所有其他樣品均顯示牛頓行為(Newtonian behavior) (黏度隨剪切速率為恆定的)。 圖 13.來自DOE研究之在5℃下黏度對剪切速率之掃描之彙總。樣品標記有P407-P188水準(例如1號樣品具有16% P407及0% P188)。所有樣品均顯示牛頓行為(黏度隨剪切速率為恆定的)。 圖 14.熱反應性凝膠調配物設計空間(白色區域)，凝膠溫度限值為27℃至32℃。此設計空間可代表在2℃-8℃下製備劑且在仍冷卻或冷藏時投與之情形。限值：15-90 s膠凝時間，在5℃下之黏度≤ 183 mPas，注射持續時間= 10 s，且≥220 μm針ID。陰影區域對應於超出針對每一因子所定義之下限及上限之區域。等值線顯示膠凝溫度。 圖 15.熱反應性凝膠調配物設計空間(白色區域)，凝膠溫度限值為27℃至32℃ (粉色陰影)且在20℃下黏度之另一限值為  ≤ 183 mPas (＞183 mPas之區域以綠色陰影顯示)。在此情形中，在受控室溫(20℃)下投與劑量，注射時間為10 s。限值：15-90 s膠凝時間(藍色陰影)，在20℃下之黏度≤ 183 mPas (綠色陰影)，注射持續時間= 10 s，且≥220 μm針ID。陰影區域對應於超出針對每一因子所定義之下限及上限之區域。等值線顯示膠凝溫度。十字準線顯示進一步分別評估之三種調配物：A = 6%/19%，B = 6.5%/18%，及C = 7%17.5% w/v泊洛沙姆188及407。 圖 16.利用高壓釜滅菌製備臨床藥物產品之實例。 圖 17.利用無菌過濾製備臨床藥物產品之實例。 圖 18.熱像儀影像，其顯示液滴在預熱(31.3℃)表面(含有溫水以獲得熱容量之瓶子)上流動之膠凝時間設置。在20℃下將50 μL體積之調配物A (左)、B (中)及C (右)分配於溫暖表面上，且使用液滴流動之視訊來確定液滴停止流動之時間。 圖 19.調配物A之膠凝溫度型態。 圖 20.調配物B之膠凝溫度型態。 圖 21.調配物C之膠凝溫度型態。 圖 22.調配物A自20℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 23.調配物B自20℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 24.調配物C自20℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 25.調配物A自5℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 26.調配物B自5℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 27.調配物C自5℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 28.調配物A在20℃下之黏度與剪切速率之關係。 圖 29.調配物B在20℃下之黏度與剪切速率之關係。 圖 30.調配物C在20℃下之黏度與剪切速率之關係。 圖 31.調配物A在5℃下之黏度與剪切速率之關係。 圖 32.調配物B在5℃下之黏度與剪切速率之關係。 圖 33.調配物C在5℃下之黏度與剪切速率之關係。 圖 34.稀釋10%之調配物A之膠凝型態。 圖 35.稀釋10%之調配物B之膠凝型態。 圖 36.稀釋10%之調配物C之膠凝型態。 圖 37.對照(S-0DGN)及調配物A (S-0DGO)、B (S-0DGP)及C (S-0DGQ)之差示掃描螢光型態。 圖 38.使用具有30 Ga針之CLSD裝置，在約35℃下將0.1 mL調配物B注射至摘出之豬眼中之注射壓力型態。 圖 39.使用具有30 Ga TW針之1 mL注射器將0.1 mL調配物A、B及C注射至空氣中之注射時間型態(壓力/力由操作者保持大致恆定，使得黏度更高調配物之注射時間更長)。 圖 40. 在投與凝膠B調配物後之SCS空間影像。
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Claims (95)

  1. 一種適於投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組腺相關病毒載體包含編碼轉殖基因之表現盒，且其中該醫藥組合物具有隨溫度升高而增加之黏度及/或更高之彈性模數，且其中該組合物之黏度及/或彈性模數使得在投與至豬眼時： a. 該醫藥組合物之清除時間介於約5天與約15天之間；且 b. 在投與一小時內之某一時間，注射部位處之SCS厚度介於約400 μm與約800 μm之間；且 c. 在投與約一小時內之某一時間，該醫藥組合物自注射部位之周向擴散為脈絡膜表面之約八分之一或更小。
  2. 如請求項‎1之醫藥組合物，其中該組合物之膠凝溫度為約27℃-32℃。
  3. 如請求項‎1或‎2之醫藥組合物，其中該組合物之膠凝時間為約15-90秒。
  4. 如請求項‎1至‎3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1 s -1至約1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在5℃下之黏度為約183 mPas。
  5. 如請求項‎1至‎3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1 s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在5℃下之黏度小於約183 mPas。
  6. 如請求項‎1至‎3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1 s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在20℃下之黏度為約183 mPas。
  7. 如請求項‎1至‎3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1 s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在20℃下之黏度小於約183 mPas。
  8. 如請求項‎1至‎7中任一項之醫藥組合物，其中本文所提供之醫藥組合物在27℃以下之彈性模數小於約或為約0.1 Pa、小於約或為約0.01 Pa、小於約或為約0.001 Pa或零。
  9. 如請求項‎1至‎7中任一項之醫藥組合物，其中本文所提供之醫藥組合物在32℃至35℃下之彈性模數為約或至少約0.1 Pa、約或至少約1 Pa、約或至少約10 Pa、約或至少約100 Pa、約或至少約1000 Pa、約或至少約10,000 Pa或約或至少約100,000 Pa。
  10. 如請求項‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後之清除時間等於或大於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
  11. 如請求項‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後之周向擴散小於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之周向擴散，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
  12. 如請求項‎11之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後之該周向擴散變小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  13. 如請求項‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後注射部位處之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後注射部位處之厚度，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
  14. 如請求項‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後在眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準之時間段長於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準之時間段，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼該轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
  15. 如請求項‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後眼睛中轉殖基因產物之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛中該轉殖基因產物之濃度，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼該轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數；  視情況其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後眼睛後部(例如視網膜)中該轉殖基因產物之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛後部中該轉殖基因產物之濃度，及/或在脈絡膜上投與該醫藥組合物後眼睛外層(例如鞏膜)中該轉殖基因產物之濃度低於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛外層中該轉殖基因產物之濃度。
  16. 如請求項‎1至‎8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後注射部位處之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後注射部位處之轉導率，其中該參考醫藥組合物包含重組AAV，該重組AAV包含編碼轉殖基因之表現盒，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體拷貝之量係相同的，且其中該參考醫藥組合物在約32℃-35℃下具有較該醫藥組合物更低之黏度及/或更低之彈性模數。
  17. 如請求項‎10、‎11及‎13至16中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之黏度及/或彈性模數與該參考醫藥組合物之黏度及/或彈性模數係在相同的剪切速率下量測。
  18. 如請求項‎4至‎11及‎13至16中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之黏度及/或彈性模數係在至少約1,000 s -1、2,000 s -1、3,000 s -1、4,000 s -1、5,000 s -1、6,000 s -1、7,000 s -1、8,000 s -1、9,000 s -1、10,000 s -1、15,000 s -1、20,000 s -1或30,000 s -1之剪切速率下量測。
  19. 如請求項‎1至18中任一項之醫藥組合物，其中該轉殖基因不為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。
  20. 如請求項‎1至19中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。
  21. 如請求項‎1至20中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV為AAV8。
  22. 如請求項‎1至20中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV為AAV9。
  23. 如請求項‎1至22中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含蔗糖。
  24. 如請求項‎1至23中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物不包含蔗糖。
  25. 如請求項‎1至24中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間變長至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  26. 如請求項‎1至25中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間為約6天至約15天、約7天至約15天、約8天至約15天、約9天至約15天、約10天至約15天、約11天至約15天、約12天至約15天、約13天至約15天、約14天至約15天、約5天至約14天、約5天至約13天、約5天至約12天、約5天至約11天、約5天至約10天、約5天至約9天、約5天至約8天、約5天至約7天或約5天至約6天。
  27. 如請求項‎1至26中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間不早於約5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天或15天。
  28. 如請求項‎1至27中任一項之醫藥組合物，其中該參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間為至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。
  29. 如請求項‎1至28中任一項之醫藥組合物，其中該清除時間係自SCS中或自眼睛中。
  30. 如請求項‎1至28中任一項之醫藥組合物，其中該清除時間為該醫藥組合物及/或該重組腺相關病毒(AAV)載體藉由任何標準方法在SCS中偵測不到所需之時間。
  31. 如請求項‎1至28中任一項之醫藥組合物，其中當該醫藥組合物及/或該重組腺相關病毒(AAV)載體在SCS中之存在量為藉由任何標準方法可偵測量之至多約2%或至多約5%時之清除時間。
  32. 如請求項‎1至28中任一項之醫藥組合物，其中該清除時間為注射後注射部位之厚度減小至約500 nm或更小、約200 nm或更小、約100 nm或更小、約50 nm或更小、約25 nm或更小、約10 nm或更小或偵測不到所需之時間量。
  33. 如請求項‎1至28中任一項之醫藥組合物，其中該清除時間為注射後該醫藥組合物自注射部位周向擴散以覆蓋眼睛脈絡膜之約十六分之一或更多、約八分之一或更多、約四分之一或更多、約二分之一或更多、約四分之三或更多或全部周邊所需之時間量。
  34. 如請求項‎13及19至33中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後注射部位處之厚度變大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  35. 如請求項‎13及19至33中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後注射部位處之厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。
  36. 如請求項‎13及19至33中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後注射部位處之厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。
  37. 如請求項‎13及19至33中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後注射部位處之厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。
  38. 如請求項1至37中任一項之醫藥組合物‎，其中在投與一小時內之某一時間，注射部位處之SCS厚度為約400 μm至約700 μm、約400 μm至約600 μm、約400 μm至約500 μm、約500 μm至約800 μm、約600 μm至約800 μm、700 μm至約800 μm。
  39. 如請求項38之醫藥組合物‎，其中投與一小時內之該時間係在投與約5分鐘內、投與約10分鐘內、投與約15分鐘內、投與約20分鐘內、投與約30分鐘內、投與約45分鐘內或投與約60分鐘內。
  40. 如請求項‎13及19至39中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後注射部位處之厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。
  41. 如請求項1至40中任一項之醫藥組合物，其中在投與約5分鐘內、投與約10分鐘內、投與約15分鐘內、投與約20分鐘內、投與約30分鐘內、投與約45分鐘內或投與約60分鐘內之某一時間，該醫藥組合物自注射部位之周向擴散為脈絡膜表面之約八分之一或更小。
  42. 如請求項41之醫藥組合物‎，其中自注射部位之該周向擴散為脈絡膜表面之約十六分之一或更小。
  43. 如請求項‎15及19至42中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後眼睛中該轉殖基因之濃度變高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  44. 如請求項‎14及19至43中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之更長時間段變長至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
  45. 如請求項‎1至‎44中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在至少約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天內在眼睛中偵測到該轉殖基因。
  46. 如請求項‎10至45中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後在眼睛中偵測到該轉殖基因。
  47. 如請求項‎16及19至46中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後注射部位處之轉導率變高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  48. 如請求項‎1至47中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之重組AAV穩定性高於該參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性。
  49. 如請求項48之醫藥組合物，其中該重組AAV穩定性係由該重組AAV之感染性決定。
  50. 如請求項48之醫藥組合物，其中該重組AAV穩定性係由該重組AAV之聚集水準決定。
  51. 如請求項48之醫藥組合物，其中該重組AAV穩定性係由該重組AAV所釋放之游離DNA之水準決定。
  52. 如請求項51之醫藥組合物，其中與該參考醫藥組合物中游離DNA之水準相比，該醫藥組合物包含多約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍之游離DNA。
  53. 如請求項49之醫藥組合物，其中與該參考醫藥組合物中該重組AAV之感染性相比，該醫藥組合物中該重組AAV之感染性高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
  54. 如請求項50之醫藥組合物，其中與該參考醫藥組合物中之重組AAV聚集水準相比，該醫藥組合物包含低至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之重組AAV聚集。
  55. 如請求項‎1至54中任一項之醫藥組合物，其中該轉殖基因係適於治療或以其他方式改善、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病進展之轉殖基因。
  56. 如請求項‎1至55中任一項之醫藥組合物，其中該人類個體診斷為患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)、x性聯或貝敦氏病(Batten disease)。
  57. 如請求項‎1至56中任一項之醫藥組合物，其中該人類個體診斷為患有青光眼、非傳染性眼色素層炎或激肽釋放酶相關之疾病。
  58. 如請求項1至57中任一項之醫藥組合物，其中該AAV編碼棕櫚醯基蛋白質硫酯酶1 (PPT1)、三肽基肽酶1 (TPP1)、抗激肽釋放酶抗體或抗原結合片段、抗TNF融合蛋白、抗TNF抗體或抗原結合片段、抗C3抗體或抗原結合片段或抗C5抗體或抗原結合片段。
  59. 如請求項‎1至58中任一項之醫藥組合物，其中重組AAV基因體拷貝之量係基於載體基因體濃度。
  60. 如請求項‎1至59中任一項之醫藥組合物，其中重組AAV基因體拷貝之量係基於每次投與之基因體拷貝。
  61. 如請求項‎1至60中任一項之醫藥組合物，其中重組AAV基因體拷貝之量係基於投與給該人類個體之總基因體拷貝。
  62. 如請求項61之醫藥組合物，其中每次投與之基因體拷貝係每次脈絡膜上投與之該重組AAV之基因體拷貝。
  63. 如請求項61之醫藥組合物，其中所投與之總基因體拷貝係脈絡膜上投與之該重組AAV之總基因體拷貝。
  64. 如請求項59至63中任一項之醫藥組合物，其中該載體基因體濃度(VGC)為約3 × 10 9GC/mL、約1 × 10 10GC/mL、約1.2 × 10 10GC/mL、約1.6 × 10 10GC/mL、約4 × 10 10GC/mL、約6 × 10 10GC/mL、約2 × 10 11GC/mL、約2.4 × 10 11GC/mL、約2.5 × 10 11GC/mL、約3 × 10 11GC/mL、約6.2 × 10 11GC/mL、約1 × 10 12GC/mL、約2.5 × 10 12GC/mL、約3 × 10 12GC/mL、約5 × 10 12GC/mL、約6 × 10 12GC/mL、約1.5 × 10 13GC/mL、約2 × 10 13GC/mL或約3 × 10 13GC/mL。
  65. 如請求項61及63中任一項之醫藥組合物，其中所投與之基因體拷貝總數為約6.0 × 10 10個基因體拷貝、約1.6 × 10 11個基因體拷貝、約2.5 × 10 11個基因體拷貝、約3 × 10 11個基因體拷貝、約5.0 × 10 11個基因體拷貝、約6 × 10 11個基因體拷貝、約3 × 10 12個基因體拷貝、約1.0 × 10 12個基因體拷貝、約1.5 × 10 12個基因體拷貝、約2.5 × 10 12個基因體拷貝或約3.0 × 10 13個基因體拷貝。
  66. 如請求項60及62中任一項之醫藥組合物，其中所投與之基因體拷貝總數為約6.0 × 10 10個基因體拷貝、約1.6 × 10 11個基因體拷貝、約2.5 × 10 11個基因體拷貝、約3 × 10 11個基因體拷貝、約5.0 × 10 11個基因體拷貝、約6 × 10 11個基因體拷貝、約3 × 10 12個基因體拷貝、約1.0 × 10 12個基因體拷貝、約1.5 × 10 12個基因體拷貝、約2.5 × 10 12個基因體拷貝或約3.0 × 10 13個基因體拷貝。
  67. 如請求項‎1至66中任一項之醫藥組合物，其中將該醫藥組合物投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
  68. 如請求項‎10至67中任一項之醫藥組合物，其中將該參考醫藥組合物投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
  69. 如請求項‎1至68中任一項之醫藥組合物，其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該醫藥組合物。
  70. 如請求項10至69中任一項之醫藥組合物，其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該參考醫藥組合物。
  71. 如請求項‎1至70中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物含有泊洛沙姆(poloxamer) 407及泊洛沙姆188。
  72. 如請求項‎1至71中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含16%-22%之泊洛沙姆407。
  73. 如請求項‎1至71中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含0-16%之泊洛沙姆188。
  74. 如請求項‎1至71中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含19%之泊洛沙姆407及6%之泊洛沙姆188。
  75. 如請求項‎1至70中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含18%之泊洛沙姆407及6.5%之泊洛沙姆188。
  76. 如請求項‎1至71中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含17.5%之泊洛沙姆407及7%之泊洛沙姆188。
  77. 如請求項‎1至76中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含經改質之杜貝克氏磷酸鹽緩衝鹽水溶液(modified Dulbecco’s phosphate-buffered saline solution)及視情況表面活性劑。
  78. 如請求項‎1至76中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況表面活性劑。
  79. 如請求項‎1至76中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況表面活性劑。
  80. 一種治療個體疾病之方法，該方法包括投與如請求項‎1至76中任一項之醫藥組合物。
  81. 一種治療個體疾病之方法，該方法包括向該個體投與如請求項‎4或‎‎5之醫藥組合物，其中該醫藥組合物在投與時處於約2℃-10℃之溫度。
  82. 一種治療個體疾病之方法，該方法包括向該個體投與如請求項‎‎6或‎‎8之醫藥組合物，其中該醫藥組合物在投與時處於約20℃-25℃之溫度。
  83. 如請求項80至82中任一項之方法，其中該醫藥組合物係以小於約43 PSI之注射壓力投與。
  84. 如請求項80至82中任一項之方法，其中該醫藥組合物係以小於約65 PSI之注射壓力投與。
  85. 如請求項80至82中任一項之方法，其中該醫藥組合物係以小於約100 PSI之注射壓力投與。
  86. 如請求項80至85中任一項之方法，其中該醫藥組合物係使用29號針投與。
  87. 如請求項80至85中任一項之方法，其中該醫藥組合物係使用30號針投與。
  88. 如請求項80至87中任一項之方法，其中該醫藥組合物係以約10-15秒之注射時間投與。
  89. 如請求項80至87中任一項之方法，其中該醫藥組合物係以約5-30秒之注射時間投與。
  90. 如請求項80至89中任一項之方法，其中該個體為人類。
  91. 如請求項80至90中任一項之方法，其中該疾病選自由以下組成之群：nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)、貝敦氏病、青光眼、非傳染性眼色素層炎及激肽釋放酶相關之疾病。
  92. 如請求項‎1至76‎中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含18.0% w/v泊洛沙姆407及6.5% w/v泊洛沙姆188，其於包含5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188之溶液(pH 7.4)中。
  93. 一種適於投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含重組腺相關病毒(AAV)載體，該重組腺相關病毒載體包含編碼轉殖基因之表現盒，其中該醫藥組合物包含18.0% w/v泊洛沙姆407及6.5% w/v泊洛沙姆188，其係於包含5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188之溶液(pH 7.4)中。
  94. 一種製備如請求項92或93之醫藥組合物之方法，該方法包括(a)提供包含5.84 mg/mL氯化鈉、0.201 mg/mL氯化鉀、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、0.200 mg/mL磷酸二氫鉀、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖、0.001%泊洛沙姆188之溶液(pH 7.4)，及(b)將18.0% w/v泊洛沙姆407及6.5% w/v泊洛沙姆188混合至該溶液中。
  95. 如請求項94之方法，其中在該混合步驟後，該組合物之pH介於約pH 6.0與約pH 7.9之間。
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