CN116546975A

CN116546975A - 用于脉络膜上施用的制剂诸如高粘度制剂

Info

Publication number: CN116546975A
Application number: CN202180081373.4A
Authority: CN
Inventors: 贾里德·比; 特里斯坦·詹姆斯·马歇尔; S·范艾维伦; 斯蒂芬·约瑟夫·帕科拉; 尼古拉斯·亚历山大·皮尔斯·萨沙·巴斯; 安东尼·雷·欧贝里; 杰西·I·尤; 埃瓦·布津斯基
Original assignee: Bio Regeneration Co ltd
Current assignee: Bio Regeneration Co ltd
Priority date: 2020-10-07
Filing date: 2021-10-06
Publication date: 2023-08-04

Abstract

本文提供了用于施用于受试者眼睛的脉络膜上腔的药物组合物。所述药物组合物可包含编码转基因的重组腺相关病毒(AAV)。本文还提供了用于通过向有需要的受试者施用治疗有效量的所述药物组合物来治疗或预防所述受试者体内疾病的方法。

Description

用于脉络膜上施用的制剂诸如高粘度制剂

优先权

本申请要求2020年10月7日提交的美国序列号63/088,826和2021年2月9日提交的美国序列号63/147,527的优先权权益，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。

电子提交的序列表的引用

本申请以引用的方式并入随本申请一起作为文本文件提交的序列表，所述文本文件标题为“12656-141-228_Sequence_Listing.txt”，创建于2021年9月30日并且大小为107,133字节。

1.发明背景

人眼是高度复杂和高度发达的感觉器官，其很容易成为疾病和病症的宿主。世界上约有2.85亿人视力受损，其中3900万人失明，并且2.46亿人患有中度至重度视力损伤(世界卫生组织，2012，“Global Data On Visual Impairments 2010”，日内瓦:世界卫生组织)。失明的一些主要病因是白内障(47％)、青光眼(12％)、年龄相关性黄斑变性(AMD)(9％)和糖尿病性视网膜病变(5％)(世界卫生组织，2007，“Global Initiative For TheElimination Of Avoidable Blindness:Action Plan2006-2011”，日内瓦:世界卫生组织)。

基因疗法已被用于治疗某些眼病(参见例如国际专利申请号PCT/US2017/027650(国际公布号WO 2017/181021 A1))。腺相关病毒(AAV)是一种有吸引力的基因疗法的工具，这归因于非致病性、广泛的宿主和细胞类型嗜性感染范围(包括分裂和非分裂细胞两者)，以及建立长期转基因表达的能力(例如，2005,Virology Journal,2:43)的特性。

当前用于眼部基因疗法的方法(例如，通过玻璃体内或视网膜下施用)是侵入性的并且存在严重的阻碍，诸如发生白内障、视网膜脱离以及中心凹中的光感受器与视网膜色素上皮(RPE)分离的风险增加。对于改善或消除当前眼部基因疗法中的阻碍的疗法，存在显著的未满足的医疗需求。

作为细小病毒科家族的指定为依赖病毒属的成员，腺相关病毒(AAV)是一种小型无包膜的二十面体病毒，其单链线性DNA基因组为大约4.7千碱基(kb)至6kb。非致病性、广泛的宿主和细胞类型嗜性感染范围(包括分裂和非分裂细胞两者)，以及建立长期转基因表达的能力的特性使得AAV成为了一种有吸引力的基因疗法工具(例如，2005,Virology Journal,2:43)。

作为通过注射到脉络膜上腔中来递送的治疗，正在对构建体II进行研究。脉络膜上腔(SCS)是巩膜与脉络膜之间在注射药物溶液之后会扩大的区域(Habot-Wilner,2019)。随着注射溶液被生理过程清除，SCS空间恢复到其注射前大小。药物溶液在SCS内扩散并被吸收到相邻组织中。脉络膜中的毛细血管可透过低分子量渗透剂。本公开解决了提供带来脉络膜上腔中更长的停留时间，以及因此改善的功效的药物组合物的未满足的需求。

2.发明内容

在一个方面，本文提供了一种适合施用于人受试者眼睛的脉络膜上腔(SCS)的药物组合物，其中所述药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)载体，所述重组腺相关病毒载体包含编码转基因的表达盒，并且其中所述药物组合物的粘度在约25cP至约3×10⁶cP之间，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

在一个方面，本文提供了一种适合施用于人受试者眼睛的脉络膜上腔(SCS)的药物组合物，其中所述药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)载体，所述重组AAV载体包含编码转基因的表达盒，其中所述转基因是抗人血管内皮生长因子(抗VEGF)抗体，并且其中所述药物组合物的粘度在约25cP至约3×10⁶cP之间，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

在一些实施方案中，在脉络膜上施用后的清除时间等于或大于参考药物组合物在脉络膜上施用后的清除时间，其中参考药物组合物包含重组AAV，所述重组AAV包含编码转基因的表达盒，其中当将药物组合物或参考药物组合物施用于脉络膜上腔时，重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，在脉络膜上施用后的周向扩散小于参考药物组合物在脉络膜上施用后的周向扩散，其中参考药物组合物包含重组AAV，所述重组AAV包含编码转基因的表达盒，其中当将药物组合物或参考药物组合物施用于脉络膜上腔时，重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，在脉络膜上施用后注射部位处的厚度等于或大于在脉络膜上施用参考药物组合物后注射部位处的厚度，其中参考药物组合物包含重组AAV，所述重组AAV包含编码转基因的表达盒，其中当将药物组合物或参考药物组合物施用于脉络膜上腔时，重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，在脉络膜上施用后在眼睛中检测到转基因的表达水平的时间段长于在脉络膜上施用参考药物组合物后在眼睛中检测到转基因的表达水平的时间段，其中参考药物组合物包含重组AAV，所述重组AAV包含编码转基因的表达盒，其中当将药物组合物或参考药物组合物施用于脉络膜上腔时，重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，在脉络膜上施用后眼睛中转基因的浓度等于或大于在脉络膜上施用参考药物组合物后眼睛中转基因的浓度，其中参考药物组合物包含重组AAV，所述重组AAV包含编码转基因的表达盒，其中当将药物组合物或参考药物组合物施用于脉络膜上腔时，重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，在脉络膜上施用后注射部位处的转导率等于或大于在脉络膜上施用参考药物组合物后注射部位处的转导率，其中参考药物组合物包含重组AAV，所述重组AAV包含编码转基因的表达盒，其中当将药物组合物或参考药物组合物施用于脉络膜上腔时，重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

在一些实施方案中，在脉络膜上施用后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平等于或低于在脉络膜上施用参考药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平，其中参考药物组合物包含重组AAV，所述重组AAV包含编码转基因的表达盒，其中当将药物组合物或参考药物组合物施用于脉络膜上腔时，重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

在一些实施方案中，重组AAV是构建体II。在一些实施方案中，转基因是抗人血管内皮生长因子(抗VEGF)抗体。在一些实施方案中，重组AAV包含来自选自由以下组成的组的一种或多种腺相关病毒血清型的组分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15和AAV.HSC16。在一些实施方案中，重组AAV是AAV8。在一些实施方案中，重组AAV是AAV9。

在一些实施方案中，药物组合物的粘度在约25cP至约100,000cP之间、在约25cP至约50,000cP之间、在约25cP至约1x 10⁴cP之间、在约25cP至约5,000cP之间、在约25cP至约1x 10³cP之间、在约100cP至约100,000cP之间、在约100cP至约1x 10⁴cP之间、在约100cP至约5,000cP之间、在约100cP至约1x 10³cP之间，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为至少约100cP、至少约400cP、至少约500cP、至少约900cP、至少约1000cP、至少约4000cP或至少约1x 10⁶cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约4000cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约或大于约500cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

在一些实施方案中，药物组合物包含蔗糖。在一些实施方案中，药物组合物不包含蔗糖。在一些实施方案中，药物组合物包含以下中的至少一种：蔗糖、4％蔗糖、6％蔗糖、10％蔗糖、2％羧甲基纤维素钠盐、1％羧甲基纤维素钠盐、羧甲基纤维素(CMC)、0.5％CMC、1％CMC、2％CMC、4％CMC、聚乙烯醇、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠盐和羟丙基甲基纤维素。在一些实施方案中，药物组合物包含4％蔗糖、6％蔗糖或10％蔗糖。

在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后的周向扩散变小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后的清除时间变长至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后的清除时间为约30分钟至约20小时、约2小时至约20小时、约30分钟至约24小时、约1小时至约2小时、约30分钟至约90天、约30分钟至约60天、约30分钟至约30天、约30分钟至约21天、约30分钟至约14天、约30分钟至约7天、约30分钟至约3天、约30分钟至约2天、约30分钟至约1天、约4小时至约90天、约4小时至约60天、约4小时至约30天、约4小时至约21天、约4小时至约14天、约4小时至约7天、约4小时至约3天、约4小时至约2天、约4小时至约1天、约4小时至约8小时、约4小时至约16小时、约4小时至约20小时、约1天至约90天、约1天至约60天、约1天至约30天、约1天至约21天、约1天至约14天、约1天至约7天、约1天至约3天、约2天至约90天、约3天至约90天、约3天至约60天、约3天至约30天、约3天至约21天、约3天至约14天或约3天至约7天。在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后的清除时间不先于约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些实施方案中，参考药物组合物在脉络膜上施用后的清除时间为至多约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。

在一些实施方案中，清除时间是从SCS中或从眼睛中的清除时间。在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后注射部位处的厚度变大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后注射部位处的厚度为约500μm至约3.0mm、750μm至约2.8mm、约750μm至约2.5mm、约750μm至约2mm或约1mm至约2mm。在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后注射部位处的厚度为至少约50μm、100μm、200μm、300μm、400μm、500μm、600μm、700μm、800μm、900μm、1000μm、1mm、1.5mm、2mm、2.5mm、3mm、3.5mm、4mm、4.5mm、5mm、5.5mm、6mm、6.5mm、7mm、7.5mm、8mm、8.5mm、9mm、9.5mm或10mm。

在一些实施方案中，在脉络膜上施用参考药物组合物后注射部位处的厚度为至多约1nm、5nm、10nm、25nm、50nm、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1μm、5μm、10μm、15μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、50μm、100μm、200μm、300μm、400μm、500μm、600μm、700μm、800μm、900μm或1000μm。

在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后注射部位处的厚度持续至少两个小时、至少三个小时、至少四个小时、至少五个小时、至少六个小时、至少七个小时、至少八个小时、至少十个小时、至少十二个小时、至少十八个小时、至少二十四个小时、至少两天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一个月、至少六周、至少二个月、至少三个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少9个月、至少一年、至少三年或至少五年。

在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后眼睛中转基因的浓度变大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后的更长时间段是变长至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。

在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后在至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天内在眼睛中检测到转基因。在一些实施方案中，在脉络膜上施用参考药物组合物后在至多约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天内在眼睛中检测到转基因。

在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平等于或低于在脉络膜上施用参考药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平。在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平降低至少约2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后注射部位处的转导率变大至少约2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV稳定性是参考药物组合物中的重组AAV稳定性的至少约50％。在一些实施方案中，重组AAV稳定性由重组AAV的感染性决定。在一些实施方案中，重组AAV稳定性由重组AAV的聚集水平决定。在一些实施方案中，重组AAV稳定性由重组AAV所释放的游离DNA的水平决定。在一些实施方案中，药物组合物包含比参考药物组合物中的游离DNA的水平多约50％、约25％、约15％、约10％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0％，少约1％、约2％、约5％、约7％、约10％，多约2倍、约3倍，少约2倍、约3倍的游离DNA。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV的感染性比参考药物组合物中的重组AAV的感染性高至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些实施方案中，药物组合物包含比参考药物组合物中的重组AAV聚集水平低至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍的重组AAV聚集。

在一些实施方案中，转基因是适合于治疗或以其他方式改善、预防感兴趣的疾病或减慢感兴趣的疾病进展的转基因。在一些实施方案中，人受试者被诊断患有nAMD(湿性AMD)、干性AMD、视网膜静脉阻塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、或糖尿病性视网膜病变(DR)、或Batten(Batten)病。在一些实施方案中，人受试者被诊断患有IVA型粘多糖病(MPSIVA)、I型粘多糖病(MPS I)、II型粘多糖病(MPS II)、家族性高胆固醇血症(FH)、纯合子家族性高胆固醇血症(HoFH)、冠状动脉疾病、脑血管疾病、杜氏(Duchenne)肌营养不良症、肢带型肌营养不良症、贝克型(Becker)肌营养不良症和散发性包涵体肌炎、或激肽释放酶相关疾病。在一些实施方案中，AAV编码棕榈酰蛋白硫酯酶1(PPT1)或三肽基肽酶1(TPP1)。

在一些实施方案中，重组AAV基因组拷贝的量基于载体基因组浓度。在一些实施方案中，重组AAV基因组拷贝的量基于每次施用的基因组拷贝。在一些实施方案中，重组AAV基因组拷贝的量基于施用于人受试者的总基因组拷贝。在一些实施方案中，每次施用的基因组拷贝是每次脉络膜上施用的重组AAV的基因组拷贝。在一些实施方案中，施用的总基因组拷贝是脉络膜上施用的重组AAV的总基因组拷贝。在一些实施方案中，载体基因组浓度(VGC)为约3×10⁹GC/mL、约1×10¹⁰GC/mL、约1.2×10¹⁰GC/mL、约1.6×10¹⁰GC/mL、约4×10¹⁰GC/mL、约6×10¹⁰GC/mL、约2×10¹¹GC/mL、约2.4×10¹¹GC/mL、约2.5×10¹¹GC/mL、约3×10¹¹GC/mL、约6.2×10¹¹GC/mL、约1×10¹²GC/mL、约2.5×10¹²GC/mL、约3×10¹²GC/mL、约5×10¹²GC/mL、约1.5×10¹³GC/mL、约2×10¹³GC/mL或约3×10¹³GC/mL。在一些实施方案中，所施用的总基因组拷贝为约6.0×10¹⁰个基因组拷贝、约1.6×10¹¹个基因组拷贝、约2.5×10¹¹个基因组拷贝、约5.0×10¹¹个基因组拷贝、约1.5x 10¹²个基因组拷贝、约3x 10¹²个基因组拷贝、约1.0×10¹²个基因组拷贝、约2.5×10¹²个基因组拷贝或约3.0×10¹³个基因组拷贝。在一些实施方案中，每次施用的基因组拷贝为约6.0×10¹⁰个基因组拷贝、约1.6×10¹¹个基因组拷贝、约2.5×10¹¹个基因组拷贝、约5.0×10¹¹个基因组拷贝、约1.5x 10¹²个基因组拷贝、约3x 10¹²个基因组拷贝、约1.0×10¹²个基因组拷贝、约2.5×10¹²个基因组拷贝或约3.0×10¹³个基因组拷贝。

在一些实施方案中，将药物组合物施用一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些实施方案中，将参考药物组合物施用一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些实施方案中，一天一次地、一天两次地、一天三次地、一天四次地、一天五次地、一天六次地或一天七次地施用药物组合物。在一些实施方案中，一天一次地、一天两次地、一天三次地、一天四次地、一天五次地、一天六次地或一天七次地施用参考药物组合物。

在一些实施方案中，参考药物组合物包含DPBS和蔗糖。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度为约1cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物包含1％高粘度等级羧甲基纤维素。在一些实施方案中，药物组合物包含0.2％至15％高粘度等级羧甲基纤维素(CMC)、高粘度等级CMC、中等粘度等级CMC、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、HPMC、羟乙基纤维素(HES)、低粘度等级CMC和/或泊洛沙姆407。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在0s^-1的剪切速率下测量。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度在0s^-1的剪切速率下测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度和参考药物组合物的粘度在相同的剪切速率下测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度是剪切稀化的。

在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约、至多约或至少约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、2cP、3cP、4cP、5cP、10cP、20cP、25cP、30cP、35cP、40cP、50cP、60cP、70cP、80cP、90cP、100cP、150cP、200cP、250cP、300cP、350cP、400cP、450cP、500cP、550cP、600cP、650cP、700cP、750cP、800cP、850cP、900cP、950cP、1000cP、1500cP、2000cP、2500cP、3000cP、3500cP、4000cP、4500cP、5000cP或10000cP，如在至少约1,000s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在至少约1,000s^-1、2,000s^-1、3,000s^-1、4,000s^-1、5,000s^-1、6,000s^-1、7,000s^-1、8,000s^-1、9,000s^-1、10,000s^-1、15,000s^-1、20,000s^-1或30,000s^-1的剪切速率下测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约或至多约35cP，如在约5,000s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约或至多约25cP，如在约10,000s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约或至少约500cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约或至少约1500cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约或至多约362cP，如在至少约1000s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度为约或至多约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、1.1cP、1.2cP、1.3cP、1.4cP、1.5cP、1.6cP、1.7cP、1.8cP、1.9cP、2cP、2.1cP、2.2cP、2.3cP、2.4cP、2.5cP、2.6cP、2.7cP、2.8cP、2.9cP、3cP、3.1cP、3.2cP、3.3cP、3.4cP、3.5cP、3.6cP、3.7cP、3.8cP、3.9cP、4cP、4.1cP、4.2cP、4.3cP、4.4cP、4.5cP、4.6cP、4.7cP、4.8cP、4.9cP或5cP，如在至少约1000s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度为约或至多约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、1.1cP、1.2cP、1.3cP、1.4cP、1.5cP、1.6cP、1.7cP、1.8cP、1.9cP、2cP、2.1cP、2.2cP、2.3cP、2.4cP、2.5cP、2.6cP、2.7cP、2.8cP、2.9cP、3cP、3.1cP、3.2cP、3.3cP、3.4cP、3.5cP、3.6cP、3.7cP、3.8cP、3.9cP、4cP、4.1cP、4.2cP、4.3cP、4.4cP、4.5cP、4.6cP、4.7cP、4.8cP、4.9cP或5cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约0.5cP至约400cP，如在至少约1000s^-1的剪切速率下所测量。

在一些实施方案中，药物组合物包含改良的杜氏(Dulbecco’s)磷酸盐缓冲盐水溶液和任选的表面活性剂。在一些实施方案中，表面活性剂是泊洛沙姆188、聚山梨酯20和/或聚山梨酯80。在一些实施方案中，药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖和任选的表面活性剂。在一些实施方案中，药物组合物包含0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖和任选的表面活性剂。在一些实施方案中，药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖、选自泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80的任选的一种或多种表面活性剂，以及选自以下的任选的一种或多种粘度调节剂：高粘度等级CMC、中等粘度等级CMC、低粘度等级CMC、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟乙基纤维素(HES)和泊洛沙姆407。在一些实施方案中，药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖、选自泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80的任选的一种或多种表面活性剂，以及选自以下的任选的一种或多种粘度调节剂：0.5％高粘度等级CMC、1％高粘度等级CMC、0.5％中等粘度等级CMC、低粘度等级CMC、0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)、0.2％HPMC、2％羟乙基纤维素(HES)和15％泊洛沙姆407。在一些实施方案中，药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖、选自泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80的一种或多种表面活性剂，以及选自CMC、HPMC和HES的一种或多种多糖。在一些实施方案中，药物组合物包含0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖、0.001％(0.01mg/mL)泊洛沙姆188和1％高粘度等级羧甲基纤维素(CMC)。在一些实施方案中，药物组合物在约室温、20℃、4℃或-80℃下储存。在一些实施方案中，药物组合物在施用于人受试者之前储存。

2.1说明性实施方案

1.一种适合施用于人受试者眼睛的脉络膜上腔(SCS)的药物组合物，其中所述药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)载体，所述重组AAV载体包含编码转基因的表达盒，并且其中所述药物组合物的粘度在约25cP至约3×10⁶cP之间，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

2.一种适合施用于人受试者眼睛的脉络膜上腔(SCS)的药物组合物，其中所述药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)载体，所述重组AAV载体包含编码转基因的表达盒，其中所述转基因是抗人血管内皮生长因子(抗VEGF)抗体，并且其中所述药物组合物的粘度在约25cP至约3×10⁶cP之间，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

3.如段落1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后的清除时间等于或大于参考药物组合物在脉络膜上施用后的清除时间，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

4.如段落1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后的周向扩散小于参考药物组合物在脉络膜上施用后的周向扩散，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

5.如段落1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后注射部位处的厚度等于或大于在脉络膜上施用参考药物组合物后注射部位处的厚度，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

6.如段落1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后在所述眼睛中检测到所述转基因的表达水平的时间段长于在脉络膜上施用参考药物组合物后在所述眼睛中检测到所述转基因的表达水平的时间段，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

7.如段落1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后所述眼睛中所述转基因的浓度等于或大于在脉络膜上施用参考药物组合物后所述眼睛中所述转基因的浓度，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

8.如段落1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后注射部位处的转导率等于或大于在脉络膜上施用参考药物组合物后注射部位处的转导率，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

9.如段落2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平等于或低于在脉络膜上施用参考药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

10.如段落1-9中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV是构建体II。

11.如段落1、3-8和10中任一项所述的药物组合物，其中所述转基因是抗人血管内皮生长因子(抗VEGF)抗体。

12.如段落1-11中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV包含来自选自由以下组成的组的一种或多种腺相关病毒血清型的组分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15和AAV.HSC16。

13.如段落1-12中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV是AAV8。

14.如段落1-9和11-12中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV是AAV9。

15.如段落1-14中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的粘度在约25cP至约100,000cP之间、在约25cP至约50,000cP之间、在约25cP至约1x 10⁴cP之间、在约25cP至约5,000cP之间、在约25cP至约1x 10³cP之间、在约100cP至约100,000cP之间、在约100cP至约1x 10⁴cP之间、在约100cP至约5,000cP之间、在约100cP至约1x 10³cP之间，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

16.如段落1-15中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的粘度为至少约100cP、至少约400cP、至少约500cP、至少约900cP、至少约1000cP、至少约4000cP或至少约1x 10⁶cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

17.如段落1-16中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的粘度为约或大于约500cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

18.如段落1-17中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含蔗糖。

19.如段落1-17中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物不包含蔗糖。

20.如段落1-19中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含以下中的至少一种：蔗糖、4％蔗糖、6％蔗糖、10％蔗糖、2％羧甲基纤维素钠盐、1％羧甲基纤维素钠盐、羧甲基纤维素(CMC)、0.5％CMC、1％CMC、2％CMC、4％CMC、聚乙烯醇、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠盐和羟丙基甲基纤维素。

21.如段落1-18和20中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含4％蔗糖、6％蔗糖或10％蔗糖。

22.如段落4和10-21中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后的所述周向扩散变小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

23.如段落3和10-22中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后的所述清除时间变大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

24.如段落1-23中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后的所述清除时间为约30分钟至约20小时、约2小时至约20小时、约30分钟至约24小时、约1小时至约2小时、约30分钟至约90天、约30分钟至约60天、约30分钟至约30天、约30分钟至约21天、约30分钟至约14天、约30分钟至约7天、约30分钟至约3天、约30分钟至约2天、约30分钟至约1天、约4小时至约90天、约4小时至约60天、约4小时至约30天、约4小时至约21天、约4小时至约14天、约4小时至约7天、约4小时至约3天、约4小时至约2天、约4小时至约1天、约4小时至约8小时、约4小时至约16小时、约4小时至约20小时、约1天至约90天、约1天至约60天、约1天至约30天、约1天至约21天、约1天至约14天、约1天至约7天、约1天至约3天、约2天至约90天、约3天至约90天、约3天至约60天、约3天至约30天、约3天至约21天、约3天至约14天或约3天至约7天。

25.如段落1-24中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后的所述清除时间不先于约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。

26.如段落3-25中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物在脉络膜上施用后的所述清除时间为至多约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。

27.如段落1-26中任一项所述的药物组合物，其中所述清除时间是从所述SCS中或从所述眼睛中的清除时间。

28.如段落5和10-27中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述注射部位处的所述厚度变大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

29.如段落5和10-28中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述注射部位处的所述厚度为约500μm至约3.0mm、750μm至约2.8mm、约750μm至约2.5mm、约750μm至约2mm或约1mm至约2mm。

30.如段落5和10-29中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述注射部位处的所述厚度为至少约50μm、100μm、200μm、300μm、400μm、500μm、600μm、700μm、800μm、900μm、1000μm、1mm、1.5mm、2mm、2.5mm、3mm、3.5mm、4mm、4.5mm、5mm、5.5mm、6mm、6.5mm、7mm、7.5mm、8mm、8.5mm、9mm、9.5mm或10mm。

31.如段落5和10-30中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述参考药物组合物后所述注射部位处的所述厚度为至多约1nm、5nm、10nm、25nm、50nm、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1μm、5μm、10μm、15μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、50μm、100μm、200μm、300μm、400μm、500μm、600μm、700μm、800μm、900μm或1000μm。

32.如段落5和10-31中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述注射部位处的所述厚度持续至少两个小时、至少三个小时、至少四个小时、至少五个小时、至少六个小时、至少七个小时、至少八个小时、至少十个小时、至少十二个小时、至少十八个小时、至少二十四个小时、至少两天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一个月、至少六周、至少二个月、至少三个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少9个月、至少一年、至少三年或至少五年。

33.如段落7和10-32中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述眼睛中所述转基因的所述浓度变大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

34.如段落6和10-33中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后的更长时间段是变长至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。

35.如段落1-34中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后在至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天内在所述眼睛中检测到所述转基因。

36.如段落3-35中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述参考药物组合物后在至多约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天内在所述眼睛中检测到所述转基因。

37.如段落11所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平等于或低于在脉络膜上施用所述参考药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平。

38.如段落9-37中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平降低至少约2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

39.如段落8和10-38中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述注射部位处的所述转导率变大至少约2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

40.如段落1-39中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物中的重组AAV稳定性是所述参考药物组合物中的重组AAV稳定性的至少约50％。

41.如段落40所述的药物组合物，其中所述重组AAV稳定性由所述重组AAV的感染性决定。

42.如段落40所述的药物组合物，其中所述重组AAV稳定性由所述重组AAV的聚集水平决定。

43.如段落40所述的药物组合物，其中所述重组AAV稳定性由所述重组AAV所释放的游离DNA的水平决定。

44.如段落43所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含比所述参考药物组合物中的游离DNA的水平多约50％、约25％、约15％、约10％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0％，少约1％、约2％、约5％、约7％、约10％，多约2倍、约3倍，少约2倍、约3倍的游离DNA。

45.如段落41所述的药物组合物，其中所述药物组合物中的所述重组AAV的感染性比所述参考药物组合物中的所述重组AAV的感染性高至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。

46.如段落42所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含比所述参考药物组合物中的重组AAV聚集水平低至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍的重组AAV聚集。

47.如段落1-46中任一项所述的药物组合物，其中所述转基因是适合于治疗或以其他方式改善、预防感兴趣的疾病或减慢所述感兴趣的疾病进展的转基因。

48.如段落1-47中任一项所述的药物组合物，其中所述人受试者被诊断患有nAMD(湿性AMD)、干性AMD、视网膜静脉阻塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、糖尿病性视网膜病变(DR)、Batten病、青光眼或非感染性葡萄膜炎。

49.如段落1-47中任一项所述的药物组合物，其中所述人受试者被诊断患有IVA型粘多糖病(MPS IVA)、I型粘多糖病(MPS I)、II型粘多糖病(MPS II)、家族性高胆固醇血症(FH)、纯合子家族性高胆固醇血症(HoFH)、冠状动脉疾病、脑血管疾病、杜氏肌营养不良症、肢带型肌营养不良症、贝克型肌营养不良症和散发性包涵体肌炎、或激肽释放酶相关疾病。

50.如段落1、3-8和10-49中任一项所述的药物组合物，其中所述AAV编码棕榈酰蛋白硫酯酶1(PPT1)、三肽基肽酶1(TPP1)、抗VEGF抗体或其抗原结合片段、抗激肽释放酶抗体或抗原结合片段、抗TNF抗体或抗原结合片段、抗C3抗体或抗原结合片段、或抗C5抗体或抗原结合片段。

51.如段落3-50中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV基因组拷贝的所述量基于载体基因组浓度。

52.如段落3-50中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV基因组拷贝的所述量基于每次施用的基因组拷贝。

53.如段落3-50中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV基因组拷贝的所述量基于施用于所述人受试者的总基因组拷贝。

54.如段落52所述的药物组合物，其中每次施用的所述基因组拷贝是每次脉络膜上施用的所述重组AAV的基因组拷贝。

55.如段落53所述的药物组合物，其中所述施用的总基因组拷贝是脉络膜上施用的所述重组AAV的总基因组拷贝。

56.如段落51所述的药物组合物，其中所述载体基因组浓度(VGC)为约3×10⁹GC/mL、约1×10¹⁰GC/mL、约1.2×10¹⁰GC/mL、约1.6×10¹⁰GC/mL、约4×10¹⁰GC/mL、约6×10¹⁰GC/mL、约2×10¹¹GC/mL、约2.4×10¹¹GC/mL、约2.5×10¹¹GC/mL、约3×10¹¹GC/mL、约6.2×10¹¹GC/mL、约1×10¹²GC/mL、约2.5×10¹²GC/mL、约3×10¹²GC/mL、约5×10¹²GC/mL、约6×10¹²GC/mL、约1.5×10¹³GC/mL、约2×10¹³GC/mL或约3×10¹³GC/mL。

57.如段落53和55中任一项所述的药物组合物，其中所述施用的总基因组拷贝为约6.0×10¹⁰个基因组拷贝、约1.6×10¹¹个基因组拷贝、约2.5×10¹¹个基因组拷贝、约3×10¹¹个基因组拷贝、约5.0×10¹¹个基因组拷贝、约6×10¹¹个基因组拷贝、约3x 10¹²个基因组拷贝、约1.0×10¹²个基因组拷贝、约1.5×10¹²个基因组拷贝、约2.5×10¹²个基因组拷贝或约3.0×10¹³个基因组拷贝。

58.如段落52和54中任一项所述的药物组合物，其中每次施用的所述基因组拷贝为约6.0×10¹⁰个基因组拷贝、约1.6×10¹¹个基因组拷贝、约2.5×10¹¹个基因组拷贝、约3×10¹¹个基因组拷贝、约5.0×10¹¹个基因组拷贝、约3x 10¹²个基因组拷贝、约1.0×10¹²个基因组拷贝、约1.5×10¹²个基因组拷贝、约2.5×10¹²个基因组拷贝或约3.0×10¹³个基因组拷贝。

59.如段落1-58中任一项所述的药物组合物，其中将所述药物组合物施用一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。

60.如段落3-59中任一项所述的药物组合物，其中将所述参考药物组合物施用一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。

61.如段落1-60中任一项所述的药物组合物，其中一天一次地、一天两次地、一天三次地、一天四次地、一天五次地、一天六次地或一天七次地施用所述药物组合物。

62.如段落3-60中任一项所述的药物组合物，其中一天一次地、一天两次地、一天三次地、一天四次地、一天五次地、一天六次地或一天七次地施用所述参考药物组合物。

63.如段落1-60中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物包含DPBS和蔗糖。

64.如段落3-60中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物的粘度为约1cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

65.如段落1-64中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含0.2％至15％高粘度等级羧甲基纤维素(CMC)、高粘度等级CMC、中等粘度等级CMC、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、HPMC、羟乙基纤维素(HES)、低粘度等级CMC和/或泊洛沙姆407。

66.如段落1-65中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度在0s^-1的剪切速率下测量。

67.如段落3-66中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物的所述粘度在0s^-1的剪切速率下测量。

68.如段落1-67中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度和所述参考药物组合物的所述粘度在相同的剪切速率下测量。

69.如段落1-68中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度是剪切稀化的。

70.如段落1-69中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约、至多约或至少约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、2cP、3cP、4cP、5cP、10cP、20cP、25cP、30cP、35cP、40cP、50cP、60cP、70cP、80cP、90cP、100cP、150cP、200cP、250cP、300cP、350cP、400cP、450cP、500cP、550cP、600cP、650cP、700cP、750cP、800cP、850cP、900cP、950cP、1000cP、1500cP、2000cP、2500cP、3000cP、3500cP、4000cP、4500cP、5000cP或10000cP，如在至少约1,000s^-1的剪切速率下所测量。

71.如段落70所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度在至少约1,000s^-1、2,000s^-1、3,000s^-1、4,000s^-1、5,000s^-1、6,000s^-1、7,000s^-1、8,000s^-1、9,000s^-1、10,000s^-1、15,000s^-1、20,000s^-1或30,000s^-1的剪切速率下测量。

72.如段落1-71中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约或至多约35cP，如在约5,000s^-1的剪切速率下所测量。

73.如段落1-71中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约或至多约25cP，如在约10,000s^-1的剪切速率下所测量。

74.如段落1-71中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约或至少约500cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

75.如段落1-71中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约或至少约1500cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

76.如段落1-71中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约或至多约362cP，如在至少约1000s^-1的剪切速率下所测量。

77.如段落3-76中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物的所述粘度为约或至多约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、1.1cP、1.2cP、1.3cP、1.4cP、1.5cP、1.6cP、1.7cP、1.8cP、1.9cP、2cP、2.1cP、2.2cP、2.3cP、2.4cP、2.5cP、2.6cP、2.7cP、2.8cP、2.9cP、3cP、3.1cP、3.2cP、3.3cP、3.4cP、3.5cP、3.6cP、3.7cP、3.8cP、3.9cP、4cP、4.1cP、4.2cP、4.3cP、4.4cP、4.5cP、4.6cP、4.7cP、4.8cP、4.9cP或5cP，如在至少约1000s^-1的剪切速率下所测量。

78.如段落3-77中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物的所述粘度为约或至多约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、1.1cP、1.2cP、1.3cP、1.4cP、1.5cP、1.6cP、1.7cP、1.8cP、1.9cP、2cP、2.1cP、2.2cP、2.3cP、2.4cP、2.5cP、2.6cP、2.7cP、2.8cP、2.9cP、3cP、3.1cP、3.2cP、3.3cP、3.4cP、3.5cP、3.6cP、3.7cP、3.8cP、3.9cP、4cP、4.1cP、4.2cP、4.3cP、4.4cP、4.5cP、4.6cP、4.7cP、4.8cP、4.9cP或5cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

79.如段落1-78中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约0.5cP至约400cP，如在至少约1000s^-1的剪切速率下所测量。

80.如段落1-79中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含改良的杜氏磷酸盐缓冲盐水溶液和任选的表面活性剂。

81.如段落1-80中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖和选自泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80的任选的一种或多种表面活性剂。

82.如段落1-81中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖和任选的表面活性剂。

83.如段落1-82中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖、选自泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80的任选的一种或多种表面活性剂，以及选自以下的任选的一种或多种粘度调节剂：高粘度等级CMC、中等粘度等级CMC、低粘度等级CMC、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟乙基纤维素(HES)和泊洛沙姆407。

84.如段落1-83中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖、选自泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80的任选的一种或多种表面活性剂，以及选自以下的任选的一种或多种粘度调节剂：0.5％高粘度等级CMC、1％高粘度等级CMC、0.5％中等粘度等级CMC、低粘度等级CMC、0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)、0.2％HPMC、2％羟乙基纤维素(HES)和15％泊洛沙姆407。

85.如段落1-84中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖、选自泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80的一种或多种表面活性剂，以及选自CMC、HPMC和HES的一种或多种多糖。

86.如段落1-85中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖、0.001％(0.01mg/mL)泊洛沙姆188和1％高粘度等级羧甲基纤维素(CMC)。

87.如段落1-86中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物在约室温、20℃、4℃或-80℃下储存。

88.如段落1-87中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物在施用于人受试者之前储存。

3.附图说明

图1A至图1C.具有不同粘度值的溶液在脉络膜上施用后离体眼睛中蓝色染料或荧光染料的扩散区的图示。图1A示出了含有蓝色染料的水溶液在脉络膜上施用后蓝色染料的扩散区。图1B示出了含有蓝色染料的1％中等粘度CMC溶液在脉络膜上施用后蓝色染料的扩散区。图1C示出了含有荧光染料的1％中等粘度CMC溶液在脉络膜上施用后荧光染料的扩散区。

图2A至图2B.显示出在将具有不同粘度值的溶液注射在SCS中时获得的压力的图。图2A描绘了显示出在将粘度为约1cP的水溶液注射在SCS中时获得的压力的图。图2B描绘了显示出在将粘度为约4000cP的2％羟丙甲纤维素溶液注射在SCS中时获得的压力的图。

图3.显示出使用30号针以不同的注射速率将具有不同粘度值(mPas)的不同溶液注射在SCS中的计算压力值(PSI)的图。

图4A至图4C.显示出对于不同的30号和29号针，计算的注射压力随粘度变化的图。这些图被缩放到100PSI(图4A)、65PSI(图4B)或45PSI(图4C)的极限。

图5.显示出使用具有以下不同针号大小的针将具有不同粘度值(mPas)的不同溶液注射在SCS中的计算压力值(PSI)的图：30号(GA)、30GA STW和29GA STW针。

图6.显示出针对具有不同粘度值的溶液获得的扩散数据的图。在起始日(T0)和37℃下四天后，针对含有AAV(例如，包含编码转基因的表达盒的重组腺相关病毒(AAV)载体)的六种溶液获得了扩散数据。溶液包括含蔗糖的DPBS(对照)、0.5％中等粘度羧甲基纤维素(CMC)、0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)、0.2％HPMC、2％羟乙基纤维素(HES)和1％低粘度CMC。

图7.显示出针对具有不同粘度值的溶液获得的游离DNA的百分比的图。在起始日(T0)和37℃下四天后，针对含有AAV(例如，包含编码转基因的表达盒的重组腺相关病毒(AAV)载体)的六种溶液获得了游离DNA的百分比。溶液是含蔗糖的DPBS(对照)、0.5％中等粘度羧甲基纤维素(CMC)、0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)、0.2％HPMC、2％羟乙基纤维素(HES)或1％低粘度CMC。

图8.显示出针对具有不同粘度值的溶液获得的DLS热变温(DLS-熔化)的图。溶液包括含蔗糖的DPBS(对照)、0.5％中等粘度羧甲基纤维素(CMC)、0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)、0.2％HPMC、2％羟乙基纤维素(HES)和1％低粘度CMC。

图9.显示出具有不同粘度值的溶液的差示扫描荧光法热变温数据的图。从上到下(S-0C0V至S-0C12)，溶液包括含蔗糖的DPBS(对照)、0.5％中等粘度羧甲基纤维素(CMC)、0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)、0.2％HPMC、2％羟乙基纤维素(HES)和1％低粘度CMC、15％泊洛沙姆407和0.5％高粘度羧甲基纤维素。上图：原始熔化曲线信号。中间图：鉴定峰值的数据导数。下图：指示聚集或凝胶形成的光散射数据。对于两种羟丙甲纤维素制剂，在约55℃下观察到由于混浊凝胶形成所致的光散射的增加。由上图中的竖直线和中间图中的峰值所示的熔化温度起点和中点对于所有制剂而言是相似的，从而证明衣壳在不同制剂中具有相似的热稳定性。

图10.20℃下的1％高粘度等级CMC制剂的粘度(Pas)与剪切速率的关系。

图11.中等粘度等级CMC制备物的注入摘出的猪眼中的注射压力与浓度的关系。

图12.高粘度等级CMC制备物的注入摘出的猪眼中的注射压力与浓度的关系。

图13.用高压釜灭菌进行的临床药物产品的示例制备。

图14.使用Clearside装置和30号针(160μm针)对1％羧甲基纤维素制剂进行的注射压力测量。

图15.对照(S-0DGN)和1％羧甲基纤维素制剂(S-0DGR)的差示扫描荧光法曲线。

4.具体实施方式

本文提供了适合施用于受试者的眼睛的脉络膜上腔(SCS)的药物组合物，所述药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)载体，所述重组AAV载体包含编码转基因的表达盒。受试者可以是被诊断患有第4.5节中描述的一种或多种疾病的受试者。AAV载体在第4.4节中进行描述，并且此类载体的剂量在第4.3节中进行描述。在一些实施方案中，第4.1节中提供的药物组合物被配制为使得它们具有第4.2节中描述的一种或多种功能特性。在某些实施方案中，本文所提供的药物组合物具有各种优点，例如，清除时间增加或减慢(第4.2.1节)；周向扩散减少(第4.2.2节)；SCS厚度增加(第4.2.3节)；血管舒张和/或血管渗漏减少(第4.2.4节)；AAV水平增加并且注射部位处的转导率增加(第4.2.5节)；以及在SCS中施用药物组合物后转基因浓度增加。不受理论的约束，可使用如在第4.1节中所公开的高粘度制剂实现功能特性。本文还提供了可用于相关研究的测定(第4.6节)。

4.1药物组合物的配制

本公开提供了一种适合于脉络膜上施用的药物组合物，所述药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)载体，所述重组AAV载体包含编码转基因的表达盒。在一些实施方案中，使用具有不同粘度值的若干药物组合物(例如，液体制剂)来施用编码转基因的AAV。

在一些实施方案中，药物组合物比可比的药物组合物(参考药物组合物)更粘稠。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)载体，所述重组AAV载体包含编码转基因的表达盒。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物具有相同的载体基因组浓度。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物具有相同量的基因组拷贝。在一些实施方案中，药物组合物的粘度值高于水的粘度。在一些实施方案中，药物组合物的粘度值高于对照的粘度。在一些实施方案中，药物组合物的粘度值高于平常用于视网膜下注射的溶液的粘度。在一些实施方案中，药物组合物的粘度值高于PBS或dPBS的粘度。在一些实施方案中，药物组合物的粘度值高于汉克斯(Hank’s)平衡盐溶液(HBSS)的粘度。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度低于药物组合物。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度与药物组合物相同或相似。在一些实施方案中，参考药物组合物是对照溶液(例如，PBS、水或HBSS)。在一些实施方案中，参考药物组合物包含蔗糖。在一些实施方案中，参考药物组合物是常用于AAV视网膜下注射的药物组合物。

在一些实施方案中，药物组合物的特征在于低剪切粘度的增加(大幅增加)(例如，在1s^-1或更小值下测量，或外推的零速率粘度高达10,000cP)。在一些实施方案中，药物组合物的特征在于高剪切粘度的增加(小幅增加)(例如，定义为约1000/s至约5000/s，或外推至10,000/s或20,000/s的剪切速率增加不到约500、400、300、200、100、90、80、70、60、50、40、30、20或10cP)。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约、至多约或至少约5cP、10cP、20cP、25cP、30cP、35cP、40cP、50cP、60cP、70cP、80cP、90cP、100cP、110cP、120cP、125cP、130cP、135cP、140cP、150cP、160cP、170cP、180cP、190cP、200cP、210cP、220cP、225cP、230cP、235cP、240cP、250cP、260cP、270cP、280cP、290cP、300cP、310cP、320cP、325cP、330cP、335cP、340cP、350cP、360cP、370cP、380cP、390cP、400cP、410cP、420cP、425cP、430cP、435cP、440cP、450cP、460cP、470cP、480cP、490cP、500cP、550cP、600cP、650cP、700cP、750cP、800cP、850cP、900cP、950cP、1000cP、1500cP、2000cP、2500cP、3000cP、3500cP、4000cP、4500cP、5000cP或10000cP，如在至少约1,000s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，剪切速率为至少约1,000s^-1、2,000s^-1、3,000s^-1、4,000s^-1、5,000s^-1、6,000s^-1、7,000s^-1、8,000s^-1、9,000s^-1、10,000s^-1、15,000s^-1、20,000s^-1或30,000s^-1。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约0.1cP至约2cP、约0.1cP至约5cp、约0.1cP至约10cP、约0.1cP至约1.5cP、约5cP至约150cP、约5cP至约500cP、约5cP至约300cP、约20cP至约40cP、约15cP至约200cP、约15cP至约50cP、约20cP至约200cP、约20cP至约400cP、约30cP至约40cP、约30cP至约500cP、约30cP至约1000cP、约20cP至约1000cP，如在至少约1,000s^-1(例如，1,000s^-1、2,000s^-1、5,000s^-1、10,000s^-1或20,000s^-1)的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约或至多约34cP，如在约5,000s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，药物组合物的粘度为约或至多约24cP，如在约10,000s^-1的剪切速率下所测量，或外推至所述剪切速率。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在约或超过约2,000s^-1的剪切速率下为约或至多约365cP(例如，在约或超过约2,100s^-1的剪切速率下为约或小于约362cP)。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在约或超过约10,000s^-1的剪切速率下为约或至多约35cP(例如，在约16,000s^-1的剪切速率下为约或小于约34cP)。在一些实施方案中，药物组合物的脉络膜上施用在高剪切(例如，至少约1,000s^-1，或约2,000s^-1至约20,000s^-1的剪切速率)下进行。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在至少约1,000s^-1(例如，约5,000s^-1)的剪切速率下为约或小于约105cP，并且任选地产生约或小于约43PSI的压力。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在至少约1,000s^-1(例如，约2,100s^-1)的剪切速率下为约或小于约365cP，并且任选地产生约或小于约43PSI的压力。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在至少约1,000s^-1(例如，约6,300s^-1)的剪切速率下为约或小于约121cP，并且任选地产生约或小于约43PSI的压力。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在至少约1,000s^-1(例如，约16,000s^-1)的剪切速率下为约或小于约35cP，并且任选地产生约或小于约43PSI的压力。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在至少约1s^-1的剪切速率下为约或超过约500cP。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在至多约1s^-1的剪切速率下为约或至少约1500cP。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在至少约1000s^-1的剪切速率下为约或至多约362cP。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在至少约1,000s^-1的剪切速率下在约0.1cP至约400cP之间。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度在至少约1s^-1的剪切速率下为约0.5cP至约10cP。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度在至少约1,000s^-1的剪切速率下为约0.5cP至约10cP。在一些实施方案中，参考药物组合物不具有剪切稀化性或者略微具有剪切稀化性。在一些实施方案中，药物组合物具有剪切稀化性。

在一些实施方案中，药物组合物的粘度在零、0.001、0.01、0.1或1s^-1剪切速率下或在约或至多约1s^-1的剪切速率下为约、至少约或至多约2cP、3cP、4cP、5cP、10cP、15cP、20cP、25cP、30cP、35cP、40cP、45cP、50cP、60cP、70cP、80cP、90cP、100cP、150cP、200cP、250cP、300cP、350cP、400cP、450cP、500cP、550cP、600cP、650cP、700cP、800cP、900cP、1000cP、1,500cP、2,000cP、3,000cP、4,000cP、5,000cP、6,000cP、7,000cP、8,000c、9,000cP、10,000cP、12,000cP或15,000cP。在一些实施方案中，剪切速率为约或小于约100s^-1、50s^-1、10s^-1、1s^-1、0.1s^-1、0.01s^-1、0.001s^-1或0.0001s^-1。在一些实施方案中，药物组合物或参考药物组合物的粘度是本文所公开的在例如约或小于约100s^-1、50s^-1、10s^-1、1s^-1、0.01s^-1、0.001s^-1或0.0001s^-1的剪切速率下的任何粘度。在一些实施方案中，药物组合物或参考药物组合物在注射期间经历剪切稀化。

在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度为约或至多约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、1.1cP、1.2cP、1.3cP、1.4cP、1.5cP、1.6cP、1.7cP、1.8cP、1.9cP、2cP、2.1cP、2.2cP、2.3cP、2.4cP、2.5cP、2.6cP、2.7cP、2.8cP、2.9cP、3cP、3.1cP、3.2cP、3.3cP、3.4cP、3.5cP、3.6cP、3.7cP、3.8cP、3.9cP、4cP、4.1cP、4.2cP、4.3cP、4.4cP、4.5cP、4.6cP、4.7cP、4.8cP、4.9cP或5cP，如在至少约1000s^-1的剪切速率下所测量。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度为约或至多约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、1.1cP、1.2cP、1.3cP、1.4cP、1.5cP、1.6cP、1.7cP、1.8cP、1.9cP、2cP、2.1cP、2.2cP、2.3cP、2.4cP、2.5cP、2.6cP、2.7cP、2.8cP、2.9cP、3cP、3.1cP、3.2cP、3.3cP、3.4cP、3.5cP、3.6cP、3.7cP、3.8cP、3.9cP、4cP、4.1cP、4.2cP、4.3cP、4.4cP、4.5cP、4.6cP、4.7cP、4.8cP、4.9cP或5cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)的粘度(低剪切粘度，例如约或至多约1s^-1或外推的零速率粘度)或剪切粘度为约或至少约5cP、约或至少约10cP、约或至少约15cP、约或至少约20cP、约或至少约25cP、约或至少约30cP、约或至少约35cP、约或至少约40cP、约或至少约45cP、约或至少约50cP、约或至少约60cP、约或至少约70cP、约或至少约80cP、约或至少约90cP、100cP、约或至少约115cP、约或至少约120cP、约或至少约125cP、约或至少约130cP、约或至少约135cP、约或至少约140cP、约或至少约145cP、约或至少约150cP、约或至少约160cP、约或至少约170cP、约或至少约180cP、约或至少约190cP、约或至少约200cP、约或至少约300cP、约或至少约400cP、约或至少约500cP、约或至少约600cP、约或至少约700cP、约或至少约800cP、约或至少约900cP、约或至少约1000cP、约或至少约1500cP、约或至少约2000cP、约或至少约2500cP、约或至少约3000cP、约或至少约3500cP、约或至少约4000cP、约或至少约4500cP、约或至少约5000cP、约或至少约5500cP、约或至少约6000cP、约或至少约6500cP、约或至少约7000cP、约或至少约7500cP、约或至少约8000cP、约或至少约9000cP、约或至少约10000cP、约或至少约1×10³cP、约或至少约3×10³cP、约或至少约1×10⁴cP、约或至少约3×10⁴cP、约或至少约1×10⁵cP、约或至少约1.7×10⁵cP、约或至少约3×10⁵cP、约或至少约1×10⁶cP、约或至少约3×10⁶cP、约或至少约1×10⁷cP、约或至少约3×10⁷cP、约或至少约1×10⁸cP、或约或至少约3×10⁸cP(例如，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量)。在一些实施方案中，粘度在约25cP至约1x 10⁶cP之间、在约25cP至约1x 10⁴cP之间、在约25cP至约5,000cP之间、在约25cP至约1x 10³cP之间、在约100cP至约1x 10⁶cP之间、在约100cP至约1x 10⁴cP之间、在约100cP至约5,000cP之间、在约100cP至约1x 10³cP之间。在一些实施方案中，粘度在约25cP至约3×10⁶cP之间、在约10cP至约3×10⁸cP之间、在约50cP至约5000cP之间、在约10cP至约15000cP之间、在约25cP至约1500cP之间、在约50cP至约1500cP之间、在约25cP至约3×10⁴cP之间。在一些实施方案中，药物组合物的粘度至少在约25cP至约3×10⁶cP之间、至少在约10cP至约3×10⁸cP之间、至少在约50cP至约5000cP之间、至少在约10cP至约15000cP之间、至少在约25cP至约1500cP之间、至少在约50cP至约1500cP之间或至少在约25cP至约3×10⁴cP之间。在一些实施方案中，可比的药物组合物、或参考药物组合物、或对照的粘度为约或至多约0.1cP、约或至多约0.2cP、约或至多约0.3cP、约或至多约0.4cP、约或至多约0.5cP、约或至多约0.6cP、约或至多约0.7cP、约或至多约0.8cP、约或至多约0.9cP、约或至多约1cP、约或至多约1.1cP、约或至多约1.2cP、约或至多约1.3cP、约或至多约1.4cP、约或至多约1.5cP、约或至多约1.6cP、约或至多约1.7cP、约或至多约1.8cP、约或至多约1.9cP、约或至多约2cP、约或至多约3cP、约或至多约4cP、约或至多约5cP、约或至多约6cP、约或至多约7cP、约或至多约8cP、约或至多约9cP、约或至多约10cP、约或至多约15cP、约或至多约20cP、约或至多约25cP、约或至多约30cP、约或至多约35cP、约或至多约40cP、约或至多约45cP、约或至多约50cP、约或至多约55cP、约或至多约60cP、约或至多约65cP、约或至多约70cP、约或至多约75cP、约或至多约80cP、约或至多约85cP、约或至多约90cP、约或至多约95cP、约或至多约100cP、约或至多约200cP、约或至多约300cP、约或至多约400cP、或约或至多约500cP(例如，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量)。在一些实施方案中，可比的药物组合物、或参考药物组合物、或对照的粘度为约或至多约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、1cP、1.3cP、1.5cP、2cP、3cP、5cP或10cP(例如，在至少约1000s^-1的剪切速率下)。在一些实施方案中，可比的药物组合物、或参考药物组合物、或对照的粘度为约或至多约2cP(例如，在至少约1000s^-1的剪切速率下)。在一些实施方案中，可比的药物组合物、或参考药物组合物、或对照的粘度为约或至多约1.5cP(例如，在至少约1000s^-1的剪切速率下)。在一些实施方案中，可比的药物组合物、或参考药物组合物、或对照的粘度为约1.3cP(例如，在至多约1s^-1的剪切速率下)。在一些实施方案中，可比的药物组合物、或参考药物组合物、或对照的粘度在约0.1cP至约3cP、约0.1cP至约2cP、0.1cP至约1.5cP、0.1cP至约5cP、1cP至约20cP之间、在约1cP至约24cP之间、在约1cP至约25cP之间、在约1cP至约10cP之间、在约1cP至约50cP之间、在约1cP至约100cP之间、在约5cP至约50cP之间、在约1cP至约5cP之间或在约1cP至约200cP之间。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度为约1cP或小于约1cP(例如，在至多约1s^-1的剪切速率下)。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度小于约1cP(例如，在至少约1000s^-1的剪切速率下)。由于粘度取决于剪切速率，药物组合物(例如，液体制剂)的“低剪切或零速率粘度”是在0.01s^-1至1s^-1的剪切速率之间的任意点处的粘度。在一些实施方案中，粘度的单位可被定义为cP或mPas。在一些情况下，cP和mPas可互换使用。

在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)的粘度(或在零或1s^-1处的剪切粘度)为至少约10cP、或至少约100cP、或至少约1000cP、或至少约10,000cP、或至少约70,000cP、或高达约200,000cP、或高达约250,000cP、或高达约300,000cP或更大。在一些实施方案中，剪切速率是0.1/秒的剪切速率。在一些实施方案中，制剂的特征在于至少300,000mPas的零剪切粘度。在一些实施方案中，药物组合物的特征在于在1000s^-1剪切速率下不超过约400mPas的粘度。在一些实施方案中，药物组合物的粘度在约25℃下在约0.1/秒的剪切速率下可在约130,000cP与约300,000cP之间。在一些实施方案中，在零或1s^-1处的粘度比在至少1000s^-1(例如，1,000s^-1、2,000s^-1、5,000s^-1、10,000s^-1、或20,000s^-1)的剪切速率下的粘度小至少约2倍、3倍、5倍、10倍或20倍(或20倍以上)。在一些实施方案中，在100s^-1处的粘度比在5s^-1的剪切速率下的粘度小至少约2倍、3倍、5倍、10倍或甚至20倍或更多倍。在一些实施方案中，剪切稀化开始时的应力被称为屈服应力。在一些实施方案中，在药物组合物开始容易流动之前需要一定的剪切应力(力)。这个临界剪切应力常常被称为屈服应力。屈服应力可根据用应力控制流变仪测量到的稳态流动曲线来确定。当根据施加的剪切应力来绘制粘度时，在超过临界剪切应力之后可看到粘度急剧下降。在一些实施方案中，屈服应力为约、至少约或至多约0.0001Pa、0.0005Pa、0.001Pa、0.005Pa、0.01Pa、0.05Pa、0.1Pa、0.5Pa、1Pa、2Pa、3Pa、5Pa、10Pa、15Pa、20Pa、25Pa、30Pa、35Pa、40Pa、45Pa、50Pa、55Pa、60Pa、65Pa、70Pa、75Pa、80Pa、85Pa、90Pa、100Pa、110Pa、120Pa、130Pa、140Pa、150Pa、200Pa、250Pa、300Pa、350Pa、400Pa、450Pa、500Pa或超过500Pa。

在一些实施方案中，与低粘度制剂、或具有较低粘度的制剂相比，相对高粘度的药物组合物在注射后更长时间段地保留在SCS中(或在眼睛中)(在不同的时间点测量)。在一些实施方案中，较高粘度的药物组合物扩大了SCS或注射部位处的厚度(例如，与低粘度制剂、或具有较低粘度的制剂相比)(参见第4.2.3节)。

在一些实施方案中，在施用后至少两个小时内，药物组合物(例如，液体制剂)的粘度足以使注射部位(例如，SCS)的至少一部分扩大到至少500μm或约500μm至约3mm的厚度。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)的粘度足以使注射部位(例如，SCS)扩大到约750μm至约2.8mm、约750μm至约2.5mm、约750μm至约2mm或约1mm至约2mm的厚度。在一些实施方案中，在施用后的至少两个小时、至少三个小时、至少四个小时、至少五个小时、至少六个小时、至少七个小时、至少八个小时、至少十个小时、至少十二个小时、至少十八个小时、至少二十四个小时、至少两天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一个月、至少六周、至少二个月、至少三个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少9个月、至少一年、至少三年或至少五年内，药物组合物(例如，液体制剂)的粘度足以使注射部位(例如，SCS)扩大到约500μm至约3.0mm的厚度。在一些实施方案中，在施用后的至少两个小时、至少三个小时、至少四个小时、至少五个小时、至少六个小时、至少七个小时、至少八个小时、至少十个小时、至少十二个小时、至少十八个小时或至少二十四个小时内，药物组合物(例如，液体制剂)的粘度足以使注射部位(例如，SCS)扩大到约1mm至约3mm的厚度。在一些实施方案中，在施用后的至少两个小时、至少三个小时、至少四个小时、至少五个小时、至少六个小时、至少七个小时、至少八个小时、至少十个小时、至少十二个小时、至少十八个小时、至少二十四个小时、至少两天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一个月、至少六周、至少二个月、至少三个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少9个月、至少一年、至少三年或至少五年内，药物组合物(例如，液体制剂)的粘度足以使注射部位(例如，SCS)扩大到约1mm至约2mm的厚度。在一些实施方案中，在施用后的至少两个小时、至少三个小时、至少四个小时、至少五个小时、至少六个小时、至少七个小时、至少八个小时、至少十个小时、至少十二个小时、至少十八个小时、至少二十四个小时、至少两天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一个月、至少六周、至少二个月、至少三个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少9个月、至少一年、至少三年或至少五年内，药物组合物(例如，液体制剂)的粘度足以使注射部位(例如，SCS)扩大到约2mm至约3mm的厚度。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)的粘度足以在无限期时段内使注射部位(例如，SCS)扩大到约750μm至约2.8mm、约750μm至约2.5mm、约750μm至约2mm或约1mm至约2mm的厚度。可实现无限期时段至少部分地归因于药物组合物(例如，液体制剂)在注射部位(例如，SCS)中的稳定性。

在一些实施方案中，粘度足以使注射部位(例如，SCS)扩大到至少500μm或约500μm至约3mm的厚度的药物组合物(例如，液体制剂)的粘度大于水的粘度(即，约1cP)。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)的粘度足以使注射部位(例如，SCS)扩大到至少约50μm、100μm、200μm、300μm、400μm、500μm、600μm、700μm、800μm、900μm、1000μm、1mm、1.5mm、2mm、2.5mm、3mm、3.5mm、4mm、4.5mm、5mm、5.5mm、6mm、6.5mm、7mm、7.5mm、8mm、8.5mm、9mm、9.5mm、10mm或大于10mm的厚度。在一些实施方案中，参考药物组合物的粘度足以使注射部位扩大到至多约1nm、5nm、10nm、25nm、50nm、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1μm、5μm、10μm、15μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、50μm、100μm、200μm、300μm、400μm、500μm、600μm、700μm、800μm、900μm、1000μm、1mm、1.5mm、2mm、2.5mm、3mm、3.5mm、4mm、4.5mm、5mm、5.5mm、6mm、6.5mm、7mm、7.5mm、8mm、8.5mm、9mm、9.5mm或10mm的厚度。

在一些实施方案中，粘度足以使注射部位(例如，SCS)扩大到至少500μm、或约500μm至约3mm的厚度的药物组合物(例如，液体制剂)包含多糖。参见例如，第4.1.1节中描述的多糖。

本文还提供了使用本文所公开的药物组合物治疗第4.5节中描述的疾病(例如，眼病)的方法。在一些实施方案中，一种治疗眼病的方法包括向受试者(例如，人)施用有效量的药物组合物(例如，包含编码转基因的表达盒的重组腺相关病毒(AAV)载体)。在一些实施方案中，药物组合物施用于受试者眼睛的脉络膜上腔(SCS)中。在一些实施方案中，当施用于SCS时足以引发治疗反应的药物组合物的有效量小于当视网膜下施用时足以引发治疗反应的药物组合物的有效量。在一些实施方案中，当施用于SCS时足以引发治疗反应的药物组合物的有效量小于当玻璃体内施用时足以引发治疗反应的药物组合物的有效量。在一些实施方案中，药物组合物在施用于SCS时具有与经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用时相同的载体基因组浓度。在一些实施方案中，药物组合物在施用于SCS时具有与经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用时相同量的基因组拷贝。在一些实施方案中，与当施用于SCS时足以在受试者体内引发治疗反应的参考药物组合物的有效量相比，足以在所述受试者体内引发治疗反应的药物组合物的有效量更低。在一些实施方案中，当施用于SCS时足以引发治疗反应的药物组合物的有效量小于当视网膜下施用时足以引发治疗反应的参考药物组合物的有效量。在一些实施方案中，当施用于SCS时足以引发治疗反应的药物组合物的有效量小于当玻璃体内施用时足以引发治疗反应的参考药物组合物的有效量。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物具有相同的载体基因组浓度。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物具有相同量的基因组拷贝。在一些实施方案中，药物组合物的粘度高于参考药物组合物的粘度。

在一些实施方案中，药物组合物基本上集中在插入部位附近(参见第4.2.1节和第4.2.2节)。在一些实施方案中，与在视网膜下或玻璃体内施用药物组合物时相比，在SCS中施用药物组合物时，药物组合物产生更高水平的转基因表达(浓度)(参见第4.2.6节)。在一些实施方案中，与在视网膜下、玻璃体内或在SCS中施用参考药物组合物时相比，在SCS中施用药物组合物时，药物组合物产生更高水平的转基因表达(浓度)(参见第4.2.6节)。在一些实施方案中，与在视网膜下或玻璃体内施用药物组合物时相比，在SCS中施用药物组合物时，药物组合物产生更高水平的AAV(参见第4.2.5节)。在一些实施方案中，与在视网膜下、玻璃体内或在SCS中施用参考药物组合物时相比，在SCS中施用药物组合物时，药物组合物产生更高水平的AAV(参见第4.2.5节)。在一些实施方案中，与在视网膜下或玻璃体内施用药物组合物时相比，在SCS中施用药物组合物时，药物组合物在注射部位处产生更高的转导率(或感染率)(参见第4.2.5节)。在一些实施方案中，与在视网膜下、玻璃体内或在SCS中施用参考药物组合物时相比，在SCS中施用药物组合物时，药物组合物在注射部位处产生更高的转导率(或感染率)(参见第4.2.5节)。在一些实施方案中，与在视网膜下或玻璃体内施用药物组合物时相比，在SCS中施用药物组合物时，药物组合物使得血管舒张和/或血管渗漏减少(参见第4.2.4节)。在一些实施方案中，与在视网膜下、玻璃体内或在SCS中施用参考药物组合物时相比，在SCS中施用药物组合物时，药物组合物使得血管舒张和/或血管渗漏减少(参见第4.2.4节)。在一些实施方案中，参考药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)载体，所述重组AAV载体包含编码转基因的表达盒。在一些实施方案中，药物组合物的粘度高于参考药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物具有相同的载体基因组浓度。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物具有相同量的基因组拷贝。

4.1.1粘度的操纵

在一些实施方案中，粘度诱导组分以一定量存在以增加药物组合物(例如，液体制剂)的粘度。在一些实施方案中，将制剂的粘度增加到远远超过水的粘度的值(例如，在0.1/秒至1/秒的剪切速率下为至少约100cP)导致制剂能够非常有效地置入(例如，注射)到受试者眼睛的SCS中。在一些实施方案中，制剂的相对高的粘度增强了此类制剂将治疗组分(例如，包含含有转基因的表达盒的AAV)以基本上均匀的悬浮液的形式长时间段地保持在制剂中的能力，并且还可有助于制剂的储存稳定性。

在一些实施方案中，低粘度药物组合物(例如，液体制剂)用于施用编码转基因的AAV。在一些实施方案中，具有中等粘度的药物组合物(例如，液体制剂)用于施用编码转基因的AAV。在一些实施方案中，高粘度药物组合物(例如，液体制剂)用于施用编码转基因的AAV。在一些实施方案中，与对照溶液相比，或与PBS相比，或与常用于视网膜下注射的药物组合物(例如，液体制剂)相比，具有更高粘度的药物组合物(例如，液体制剂)用于施用编码转基因的AAV。具有低粘度并可用于本公开的药物组合物的溶液的非限制性实例包括含有蔗糖的溶液(例如，100mM NaCl和4％蔗糖、6％蔗糖或10％蔗糖(粘度为约1.3cP))、PEG3350、葡聚糖40k、PEG12000和/或羧甲基纤维素钠盐(粘度为10-50cP；2％H₂O，25℃)。具有中等粘度并可用于本公开的药物组合物的溶液的非限制性实例包括羧甲基纤维素钠盐(2％＝400-800cP)、聚乙烯醇26–88(4％＝25cP)(即，)和/或羟乙基纤维素(粘度为100cP NF)(即，羟乙基淀粉)。具有高粘度或极高粘度并可用于本公开的药物组合物的溶液的非限制性实例包括羧甲基纤维素钠盐(1500-3000cP的高粘度)(1％H₂O，25℃)、羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)(4000mPas的高粘度，2910类型)和/或聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮K-90)(分子量为约360,000K-90；极高粘度)。

在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)包含多糖。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)包含羧甲基纤维素钠盐。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)包含羧甲基纤维素钠盐(粘度为10-50cP；2％H₂O，25℃)。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)包含羧甲基纤维素钠盐(2％＝400-800cP)。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)包含羟乙基纤维素(粘度为100cP NF)(即，羟乙基淀粉)。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)包含羧甲基纤维素钠盐(1500-3000cP的高粘度)(1％H₂O，25℃)。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)包含羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)(4000mPas的高粘度，2910类型)。

在一些实施方案中，基于药物组合物(例如，液体制剂)的重量，药物组合物(例如，液体制剂)包含浓度按重量计为约0.2％至约50％的多糖。在一些实施方案中，基于药物组合物(例如，液体制剂)的重量，药物组合物(例如，液体制剂)包含浓度按重量计为约0.5％至约2％的多糖。在一些实施方案中，基于药物组合物(例如，液体制剂)的重量，药物组合物(例如，液体制剂)包含浓度按重量计为约0.2％至约40％的多糖。在一些实施方案中，基于药物组合物(例如，液体制剂)的重量，药物组合物(例如，液体制剂)包含浓度按重量计为约0.2％至约30％的多糖。在一些实施方案中，基于药物组合物(例如，液体制剂)的重量，药物组合物(例如，液体制剂)包含浓度按重量计为约0.2％至约20％的多糖。在一些实施方案中，基于药物组合物(例如，液体制剂)的重量，药物组合物(例如，液体制剂)包含浓度按重量计为约0.2％至约10％的多糖。在一些实施方案中，基于药物组合物(例如，液体制剂)的重量，药物组合物(例如，液体制剂)包含浓度按重量计为约0.2％至约5％的多糖。多糖可选自任何生物相容性多糖，诸如羧甲基纤维素、葡聚糖、透明质酸、硫酸软骨素，或它们的组合。在一些实施方案中，表现出非牛顿剪切稀化行为的药物组合物(例如，液体制剂)是合乎需要的，因为在通过针输注期间，在高剪切下，粘度是较低的。药物组合物(例如，液体制剂)还可包含浓度足以将一种或多种眼液的一部分吸入注射部位(例如，SCS)中的添加剂。将一种或多种眼液吸入注射部位(例如，SCS)中可帮助扩大注射部位(例如，SCS)。在一些实施方案中，一种或多种添加剂包括多糖。在一些实施方案中，粘度诱导组分以制剂的约0.5％或约1.0％至约5％或约10％或约20％(重量/体积)范围内的量存在。

在一些实施方案中，粘度诱导剂(例如，粘度调节剂)用于增加药物组合物(例如，液体制剂)的粘度。粘度诱导组分的实例包括但不限于透明质酸、卡波姆、聚丙烯酸、纤维素衍生物、聚卡波非、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、糊精、多糖、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、其衍生物以及它们的混合物。

在一些实施方案中，药物组合物包含聚合物组分。聚合物组分包括可用于哺乳动物身体内的无论是来源于天然来源还是合成的任何聚合物材料。可用于制剂中的聚合物材料的实例包括基于碳水化合物的聚合物，诸如甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、乙基纤维素、糊精、环糊精、海藻酸、透明质酸和壳聚糖；基于蛋白质的聚合物，诸如明胶、胶原蛋白和糖蛋白；以及羟基酸聚酯，诸如可生物蚀解的聚交酯-乙交酯共聚物(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚乙交酯、聚羟丁酸、聚己内酯、聚戊内酯、聚磷腈和聚原酸酯。聚合物还可交联、共混或用作制剂中的共聚物。其他聚合物载剂包括白蛋白、聚酸酐、聚乙二醇、聚乙烯聚甲基丙烯酸羟烷基酯(polyvinyl polyhydroxyalkylmethacrylate)、吡咯烷酮和聚乙烯醇。

可用于药物组合物的非易蚀聚合物的一些实例包括硅酮、聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚酰胺、聚砜、聚乙酸乙烯酯、聚氨酯、乙基乙酸乙烯酯衍生物、丙烯酸树脂、交联聚乙烯醇和交联聚乙烯吡咯烷酮、聚苯乙烯和乙酸纤维素衍生物。

在一些实施方案中，粘度诱导组分的分子量在高达约200万道尔顿，诸如约10,000道尔顿或更小至约200万道尔顿或更大的范围内。在一些实施方案中，粘度诱导组分的分子量在约100,000道尔顿或约200,000道尔顿至约100万道尔顿或约150万道尔顿的范围内。在一些实施方案中，粘度诱导组分是透明质酸盐聚合物组分，例如金属透明质酸盐组分，诸如碱金属透明质酸盐、碱土金属透明质酸盐和它们的混合物、透明质酸钠、以及它们的混合物。在一些实施方案中，这种透明质酸盐组分的分子量在约50,000道尔顿或约100,000道尔顿至约130万道尔顿或约200万道尔顿的范围内。

4.1.2制剂的其他组分

在一些实施方案中，本公开提供了一种药物组合物(例如，液体制剂)，所述药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)和以下中的至少一种：磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖和表面活性剂。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)不包含蔗糖。

在一些实施方案中，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)和以下中的至少一种：离子盐赋形剂或缓冲剂、蔗糖和表面活性剂。在一些实施方案中，离子盐赋形剂或缓冲剂可以是来自由以下组成的组的一种或多种组分：磷酸二氢钾、磷酸钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、磷酸钠六水合物、磷酸二氢钠一水合物、氨丁三醇、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)、氨基酸、组氨酸、组氨酸盐酸盐(组氨酸-HCl)、琥珀酸钠、柠檬酸钠、乙酸钠和(4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸)(HEPES)、硫酸钠、硫酸镁、氯化镁六水合物、硫酸钙、氯化钾、氯化钙和柠檬酸钙。在一些实施方案中，表面活性剂可以是来自由以下组成的组的一种或多种组分：泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80。在一些实施方案中，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)和一种或多种粘度调节剂。粘度调节剂的实例包括但不限于高粘度等级羧甲基纤维素(CMC)、中等粘度等级CMC、低粘度等级CMC、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟乙基纤维素(HES)和泊洛沙姆407。在一些实施方案中，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含重组腺相关病毒(AAV)和一种或多种多糖，所述一种或多种多糖包括但不限于纤维素或淀粉的任何衍生物，诸如CMC、HPMC和HES。在一些实施方案中，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含0.2％至15％高粘度等级羧甲基纤维素(CMC)、高粘度等级CMC、中等粘度等级CMC、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、HPMC、羟乙基纤维素(HES)、低粘度等级CMC和/或泊洛沙姆407。在一些实施方案中，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含0.2％至10％高粘度等级羧甲基纤维素(CMC)、高粘度等级CMC、中等粘度等级CMC、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、HPMC、羟乙基纤维素(HES)或低粘度等级CMC和15％泊洛沙姆407。

在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约60mM至约115mM。在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约60mM至约100mM。在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约65mM至约95mM。在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约70mM至约90mM。在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约75mM至约85mM。

在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约30mM至约100mM。在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约35mM至约95mM。在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约40mM至约90mM。在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约45mM至约85mM。在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约50mM至约80mM。在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约55mM至约75mM。在某些实施方案中，药物组合物的离子强度为约60mM至约70mM。

在某些实施方案中，药物组合物包含氯化钾(例如，浓度为0.2g/L)。在某些实施方案中，药物组合物包含磷酸二氢钾(例如，浓度为0.2g/L)。在某些实施方案中，药物组合物包含氯化钠(例如，浓度为5.84g/L)。在某些实施方案中，药物组合物包含无水磷酸氢二钠(例如，浓度为1.15g/L)。在某些实施方案中，药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠和无水磷酸氢二钠。

在一些实施方案中，参考药物组合物包含与药物组合物相同的组分。在一些实施方案中，参考药物组合物包含与药物组合物相同的组分，但具有比药物组合物低的粘度值。在一些实施方案中，除了影响或增加组合物或溶液的粘度的一种或多种组分以外，参考药物组合物包含与药物组合物相同的组分。

在某些实施方案中，药物组合物包含浓度为3％(重量/体积，30g/L)至18％(重量/体积，180g/L)的蔗糖。在某些实施方案中，药物组合物包含浓度为4％(重量/体积，40g/L)的蔗糖。

在某些实施方案中，药物组合物包含浓度为0.001％(重量/体积，0.01g/L)的泊洛沙姆188。在某些实施方案中，药物组合物包含浓度为0.0005％(重量/体积，0.005g/L)至0.05％(重量/体积，0.5g/L)的泊洛沙姆188。在某些实施方案中，药物组合物包含浓度为0.001％(重量/体积，0.01g/L)的泊洛沙姆188。在某些实施方案中，药物组合物包含浓度为0.0005％(重量/体积，0.05g/L)至0.05％(重量/体积，0.5g/L)的聚山梨酯20。在某些实施方案中，药物组合物包含浓度为0.0005％(重量/体积，0.05g/L)至0.05％(重量/体积，0.5g/L)的聚山梨酯80。

在某些实施方案中，药物组合物的pH为约7.4。在某些实施方案中，药物组合物的pH为约6.0至9.0。在某些实施方案中，药物组合物的pH为7.4。在某些实施方案中，药物组合物的pH为6.0至9.0。

在某些实施方案中，药物组合物在经疏水涂覆的玻璃小瓶中。在某些实施方案中，药物组合物在环烯烃聚合物(COP)小瓶中。在某些实施方案中，药物组合物在DaikyoCrystal(CZ)小瓶中。在某些实施方案中，药物组合物在经TopLyo涂覆的小瓶中。

在某些实施方案中，本文公开了一种药物组合物，所述药物组合物包含重组AAV和以下中的至少一种：(a)浓度为0.2g/L的氯化钾，(b)浓度为0.2g/L的磷酸二氢钾，(c)浓度为5.84g/L的氯化钠，(d)浓度为1.15g/L的无水磷酸氢二钠，(e)浓度为4％重量/体积(40g/L)的蔗糖，(f)浓度为0.001％重量/体积(0.01g/L)的泊洛沙姆188，以及(g)水，并且其中重组AAV是AAV8。在一些实施方案中，药物组合物不包含蔗糖。

在一些实施方案中，药物组合物包含：(a)编码抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体的构建体II和以下中的至少一种：(b)浓度为0.2g/L的氯化钾，(c)浓度为0.2g/L的磷酸二氢钾，(d)浓度为5.84g/L的氯化钠，(e)浓度为1.15g/L的无水磷酸氢二钠，(f)浓度为4％重量/体积(40g/L)的蔗糖，(g)浓度为0.001％重量/体积(0.01g/L)的泊洛沙姆188，以及(h)水，并且其中抗hVEGF抗体包含：重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或SEQ IDNO:4；以及轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3。在一些实施方案中，药物组合物不包含蔗糖。

在一些实施方案中，药物组合物包含：(a)编码三肽基肽酶1的AAV8或AAV9和以下中的至少一种：(b)浓度为0.2g/L的氯化钾，(c)浓度为0.2g/L的磷酸二氢钾，(d)浓度为5.84g/L的氯化钠，(e)浓度为1.15g/L的无水磷酸氢二钠，(f)浓度为4％重量/体积(40g/L)的蔗糖，(g)浓度为0.001％重量/体积(0.01g/L)的泊洛沙姆188，以及(h)水。在一些实施方案中，药物组合物不包含蔗糖。在一些实施方案中，药物组合物的粘度会影响Batten-CLN2相关视力丧失。

在一些实施方案中，药物组合物具有适合于脉络膜上注射(例如，经由脉络膜上药物递送装置，诸如具有微针的微量注射器)的期望的粘度、密度和/或渗透压。在一些实施方案中，药物组合物是液体组合物。在一些实施方案中，药物组合物是冷冻组合物。在一些实施方案中，药物组合物是来自本文公开的液体组合物的冻干组合物。在一些实施方案中，药物组合物是复原的冻干制剂。

在一些实施方案中，药物组合物是包含约1％与约7％之间的残余含水量的冻干组合物。在一些实施方案中，药物组合物是包含约2％与约6％之间的残余含水量的冻干组合物。在一些实施方案中，药物组合物是包含约3％与约4％之间的残余含水量的冻干组合物。在一些实施方案中，药物组合物是包含约5％的残余含水量的冻干组合物。

在某些实施方案中，药物组合物的渗透压范围为200mOsm/L至660mOsm/L。在某些实施方案中，药物组合物的渗透压为约、至少约或至多约：200mOsm/L、250mOsm/L、300mOsm/L、350mOsm/L、400mOsm/L、450mOsm/L、500mOsm/L、550mOsm/L、600mOsm/L、650mOsm/L或660mOsm/L。

在某些实施方案中，基因疗法构建体作为AAV载体活性成分在制剂缓冲液中的冷冻无菌型单次使用溶液供应。在一个具体实施方案中，适合于视网膜下施用的药物组合物包含重组(例如，rHuGlyFabVEGFi)载体在制剂缓冲液中的悬浮液，所述制剂缓冲液包含生理上相容的水性缓冲液、表面活性剂和任选的赋形剂。在一些实施方案中，构建体在杜氏磷酸盐缓冲盐水和0.001％泊洛沙姆188(pH＝7.4)中配制。

4.2功能特性

4.2.1清除时间

本公开提供了一种使得从SCS中的清除时间有所延迟的药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)。在一些实施方案中，与非粘性或低粘度药物组合物相比，粘性(或较粘稠的)药物组合物使得从SCS中的清除时间有所延迟。在一些实施方案中，与非粘性或低粘度药物组合物相比，粘性(或较粘稠的)药物组合物使得从眼睛中的清除时间有所延迟。在一些实施方案中，与不太粘稠的药物组合物相比，较粘稠的药物组合物使得从眼睛中的清除时间有所延迟。在一些实施方案中，较粘稠的药物组合物的粘度值高于水的粘度。在一些实施方案中，较粘稠的药物组合物的粘度值高于平常用于视网膜下注射的溶液的粘度。在一些实施方案中，在将药物组合物施用于SCS后药物组合物的清除时间等于或高于在视网膜下或玻璃体内施用参考药物组合物后参考药物组合物的清除时间。在一些实施方案中，在将药物组合物施用于SCS后药物组合物的清除时间等于或高于在将参考药物组合物施用于SCS后参考药物组合物的清除时间。

在一些实施方案中，药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)使得从SCS中的清除时间为约30分钟至约20小时、约2小时至约20小时、约30分钟至约24小时、约1小时至约2小时、约30分钟至约90天、约30分钟至约60天、约30分钟至约30天、约30分钟至约21天、约30分钟至约14天、约30分钟至约7天、约30分钟至约3天、约30分钟至约2天、约30分钟至约1天、约4小时至约90天、约4小时至约60天、约4小时至约30天、约4小时至约21天、约4小时至约14天、约4小时至约7天、约4小时至约3天、约4小时至约2天、约4小时至约1天、约4小时至约8小时、约4小时至约16小时、约4小时至约20小时、约1天至约90天、约1天至约60天、约1天至约30天、约1天至约21天、约1天至约14天、约1天至约7天、约1天至约3天、约2天至约90天、约3天至约90天、约3天至约60天、约3天至约30天、约3天至约21天、约3天至约14天或约3天至约7天。在一些实施方案中，从SCS中的清除时间为约3天至约365天、约3天至约300天、约3天至约200天、约3天至约150天、约3天至约125天、约7天至约365天、约7天至约300天、约7天至约200天、约7天至约150天、约7天至约125天。“从SCS中的清除时间”是基本上所有的药物组合物、药剂或AAV逃离SCS所需的时间。在一些实施方案中，“从SCS中的清除时间”是通过任何标准方法(诸如第4.6节和第5节中描述的那些)在SCS中检测不到药物组合物、药剂或AAV所需的时间。在一些实施方案中，“从SCS中的清除时间”是如通过任何标准方法(诸如第4.6节和第5节中所描述的那些)所检测，药物组合物、药剂或AAV以至多约2％或至多约5％的量存在于SCS中的时间。

在一些实施方案中，药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)使得从眼睛中的清除时间为约30分钟至约20小时、约2小时至约20小时、约30分钟至约24小时、约1小时至约2小时、约30分钟至约90天、约30分钟至约60天、约30分钟至约30天、约30分钟至约21天、约30分钟至约14天、约30分钟至约7天、约30分钟至约3天、约30分钟至约2天、约30分钟至约1天、约4小时至约90天、约4小时至约60天、约4小时至约30天、约4小时至约21天、约4小时至约14天、约4小时至约7天、约4小时至约3天、约4小时至约2天、约4小时至约1天、约4小时至约8小时、约4小时至约16小时、约4小时至约20小时、约1天至约90天、约1天至约60天、约1天至约30天、约1天至约21天、约1天至约14天、约1天至约7天、约1天至约3天、约2天至约90天、约3天至约90天、约3天至约60天、约3天至约30天、约3天至约21天、约3天至约14天或约3天至约7天。在一些实施方案中，从眼睛中的清除时间为约3天至约365天、约3天至约300天、约3天至约200天、约3天至约150天、约3天至约125天、约7天至约365天、约7天至约300天、约7天至约200天、约7天至约150天、约7天至约125天。“从眼睛中的清除时间”是基本上所有的药物组合物、药剂或AAV逃离眼睛所需的时间。在一些实施方案中，“从眼睛中的清除时间”是通过任何方法(诸如第4.6节和第5节中所描述的那些)在眼睛中检测不到药物组合物、药剂或AAV所需的时间。在一些实施方案中，“从眼睛中的清除时间”是如通过任何标准方法(诸如第4.6节和第5节中所描述的那些)所检测，药物组合物、药剂或AAV以至多约2％或至多约5％的量存在于眼睛中的时间。

在一些实施方案中，清除时间并不先于(例如，从SCS或眼睛中的清除时间并不早于)施用药物组合物(例如，液体制剂)后约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些实施方案中，清除时间是在施用药物组合物(例如，液体制剂)后约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。

在一些实施方案中，较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)使得清除时间比在使用不太粘稠的药物组合物(参考药物组合物)来施用包含编码转基因的表达盒的AAV(例如，经由视网膜下施用、玻璃体内施用或施用于SCS)时的清除时间大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得清除时间比在例如使用不太粘稠的药物组合物(参考药物组合物)通过脉络膜上施用来施用包含编码转基因的表达盒的AAV时的清除时间大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得清除时间比在例如使用不太粘稠的药物组合物通过视网膜下施用或通过玻璃体内施用来施用包含编码转基因的表达盒的AAV时的清除时间大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，粘性(例如，相对粘稠、中等粘度到超高粘度、或比水粘稠、或比对照溶液粘稠、或比常用于视网膜下施用的溶液粘稠的)药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得清除时间比在例如使用相同药物组合物经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用包含编码转基因的表达盒的AAV时的清除时间大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，通过脉络膜上注射施用的相对粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的清除时间大于经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用的相同药物组合物的清除时间。在一些实施方案中，通过脉络膜上注射施用的较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的清除时间大于通过脉络膜上注射施用的可比的不太粘稠的药物组合物的清除时间。在一些实施方案中，通过脉络膜上注射施用的较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的清除时间大于经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用的可比的不太粘稠的药物组合物的清除时间。在一些实施方案中，通过脉络膜上注射施用的粘性药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的清除时间大于经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用的可比的粘性药物组合物的清除时间。

在一些实施方案中，通过脉络膜上注射施用的粘性药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的清除时间比经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用的相同药物组合物大至少30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。

在一些实施方案中，通过脉络膜上注射施用的较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的清除时间比通过脉络膜上注射施用的可比的不太粘稠的药物组合物(参考药物组合物)大至少30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。

在一些实施方案中，通过脉络膜上注射施用的较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的清除时间比经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用的可比的不太粘稠的药物组合物大至少30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。

在一些实施方案中，经由玻璃体内注射或经由视网膜下注射施用的药物组合物的清除时间是在施用后至多约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多约400天。

在一些实施方案中，通过玻璃体内注射、视网膜下注射施用，或施用于SCS的参考药物组合物的清除时间是在施用后至多约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多约400天。

在一些实施方案中，清除时间是从眼睛中的清除时间。在一些实施方案中，清除时间是从SCS中的清除时间。在一些实施方案中，清除时间是从注射部位中的清除时间。

4.2.2周向扩散

在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)集中在注射部位处。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)比可比的不太粘稠的药物组合物集中在注射部位处的时间段长。在一些实施方案中，与通过视网膜下注射或玻璃体内注射施用药物组合物时相比，药物组合物(例如，液体制剂)在注射在SCS中时更长时间段地集中在注射部位处。药物组合物可具有不同的粘度值。在一些实施方案中，与非粘性或低粘度药物组合物相比，粘性(或较粘稠的)药物组合物更长时间段地保持集中在SCS中。

在一些实施方案中，可通过评估周向扩散(例如，2D周向扩散)来确定集中性。在一些实施方案中，较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)使得周向扩散比使用不太粘稠的药物组合物来施用包含编码转基因的表达盒的AAV(例如，通过脉络膜上注射，通过视网膜下注射，或通过玻璃体内注射)时的周向扩散少至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得周向扩散比例如使用不太粘稠的药物组合物通过脉络膜上施用，通过视网膜下施用，或通过玻璃体内施用来施用包含编码转基因的表达盒的AAV时的周向扩散少至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，粘性(例如，相对粘稠、中等粘度到超高粘度、或比水粘稠、或比对照溶液粘稠、或比常用于视网膜下施用的溶液粘稠的)药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得周向扩散比例如使用相同药物组合物通过视网膜下施用，或通过玻璃体内施用来施用包含编码转基因的表达盒的AAV时的周向扩散少至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，周向扩散可在施用药物组合物或参考药物组合物后约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天进行确定。

4.2.3SCS厚度

在一些实施方案中，可通过评估在将药物组合物(例如，液体制剂)施用于受试者后的SCS厚度来确定集中性。在一些实施方案中，在将药物组合物(例如，液体制剂)注射在SCS中之后，药物组合物(例如，液体制剂)增加SCS的厚度。在一些实施方案中，SCS扩大以适应低粘度药物组合物(例如，液体制剂)的输注。在一些实施方案中，输注较大体积的低粘度药物组合物(例如，液体制剂)不会引起SCS的进一步扩大。在一些实施方案中，较大体积的低粘度流体制剂通过增加SCS中的流体扩散区，而不是进一步扩大SCS来进行适应。在一些实施方案中，将粘性药物组合物(例如，液体制剂)输注到SCS中可使SCS厚度扩大到超过在将低粘度药物组合物(例如，液体制剂)输注到SCS中时达到的SCS厚度。在一些实施方案中，用粘性药物组合物(例如，液体制剂)增加SCS厚度可方便对SCS的触及，从而方便或准许处置SCS中的装置。在一些实施方案中，扩大SCS厚度允许药物组合物(例如，液体制剂)和/或AAV编码的转基因较长时间段地保留在注射部位处(集中)。在一些实施方案中，与非粘性或低粘度药物组合物相比，粘性药物组合物更长时间段地增加注射部位处或附近的厚度。在一些实施方案中，与不太粘稠的药物组合物相比，较粘稠的药物组合物更长时间段地增加注射部位处或附近的厚度。在一些实施方案中，在将药物组合物施用于SCS后注射部位处的厚度等于或高于在视网膜下或玻璃体内施用参考药物组合物后参考药物组合物在注射部位处的厚度。在一些实施方案中，在将药物组合物施用于SCS后药物组合物在注射部位处的厚度等于或高于在将参考药物组合物施用于SCS后参考药物组合物在注射部位处的厚度。

在一些实施方案中，粘性(例如，相对粘稠、中等粘度到超高粘度、或比水粘稠、或比对照溶液粘稠、或比常用于视网膜下施用的溶液粘稠的)药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得SCS厚度增加到比在例如使用不太粘稠的药物组合物通过脉络膜上施用来施用包含编码转基因的表达盒的AAV时的SCS厚度大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得注射部位处或附近的厚度增加到比在例如使用不太粘稠的药物组合物通过视网膜下施用或通过玻璃体内施用来施用包含编码转基因的表达盒的AAV时的厚度大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，粘性(例如，相对粘稠、中等粘度到超高粘度、或比水粘稠、或比对照溶液粘稠、或比常用于视网膜下施用的溶液粘稠的)药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得注射部位处或附近的厚度增加到比在例如使用相同药物组合物通过视网膜下施用或通过玻璃体内施用来施用包含编码转基因的表达盒的AAV时的厚度大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，在通过脉络膜上注射施用较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)后在注射部位处的获得的厚度大于在通过脉络膜上注射施用可比的不太粘稠的药物组合物后的厚度。在一些实施方案中，在通过脉络膜上注射施用较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)后在注射部位处的获得的厚度大于在通过视网膜下注射或通过玻璃体内注射施用可比的不太粘稠的药物组合物后的厚度。在一些实施方案中，在通过脉络膜上注射施用粘性药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)后在注射部位处的获得的厚度大于在通过视网膜下施用或通过玻璃体内施用来施用相同药物组合物后的厚度。

在一些实施方案中，注射部位处或附近的厚度(例如，SCS处或附近的厚度)可在施用药物组合物或参考药物组合物后30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天进行确定。

4.2.4血管舒张和血管渗漏

在一些实施方案中，在将药物组合物施用于SCS后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平等于或小于在视网膜下或玻璃体内施用参考药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平。在一些实施方案中，在将药物组合物施用于SCS后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平等于或低于在将参考药物组合物施用于SCS后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平。在一些实施方案中，与在经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用药物组合物后相比，药物组合物(例如，包含编码转基因的表达盒的AAV的液体制剂)使得在将相同药物组合物施用于SCS后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平有所降低。在一些实施方案中，与在经由视网膜下施用，经由玻璃体内施用，或向SCS施用可比的(不太粘稠的)药物组合物后相比，药物组合物(例如，液体制剂)使得在将药物组合物施用于SCS后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平有所降低。在一些实施方案中，VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏降低至少约2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。在一些实施方案中，转基因是抗人血管内皮生长因子(抗VEGF)抗体。

在一些实施方案中，VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏在施用后约30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、15小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多约400天进行确定。

4.2.5注射部位处的转导率(或感染率)

在一些实施方案中，在将药物组合物施用于SCS中之后注射部位处的转导率(或感染率)等于或高于在经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用相同药物组合物后注射部位处的转导率(或感染率)。在一些实施方案中，在将药物组合物施用于SCS中之后注射部位处的转导率(或感染率)等于或高于在经由视网膜下施用或玻璃体内施用，或向SCS施用可比的(例如，不太粘稠的)药物组合物(参考药物组合物)后注射部位处的转导率(或感染率)。在一些实施方案中，药物组合物的粘度高于参考药物组合物(可比的不太粘稠的药物组合物)。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物具有相同的载体基因组浓度。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物具有相同量的基因组拷贝。在一些实施方案中，注射部位处的转导率(或感染率)的增加是增加至少约2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后注射部位处的AAV水平等于或高于在经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用相同药物组合物后注射部位处的AAV水平。在一些实施方案中，在脉络膜上施用药物组合物后注射部位处的AAV水平等于或高于在经由视网膜下施用或玻璃体内施用，或向SCS施用可比的(例如，不太粘稠的)药物组合物后注射部位处的AAV水平。在一些实施方案中，药物组合物的粘度高于参考药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物(可比的不太粘稠的药物组合物)具有相同的载体基因组浓度。在一些实施方案中，药物组合物和参考药物组合物具有相同量的基因组拷贝。在一些实施方案中，注射部位处的AAV水平的增加是增加至少约2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，AAV水平或转导率(或感染率)在施用后约30分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、8小时、10小时、12小时、14小时、15小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多约400天进行确定。

4.2.6转基因表达

在一些实施方案中，在将药物组合物注射在SCS中之后转基因产物的浓度至少等于或高于在将参考(不太粘稠的)药物组合物注射在SCS中之后的浓度。在一些实施方案中，在将药物组合物注射在SCS中之后转基因产物的浓度至少等于或高于在通过视网膜下注射或通过玻璃体内注射来注射参考(不太粘稠的)药物组合物后的浓度。在一些实施方案中，在将药物组合物注射在SCS中之后转基因产物的浓度至少等于或高于在通过视网膜下注射或通过玻璃体内注射来注射相同药物组合物后的浓度。

在一些实施方案中，与在将可比的(不太粘稠的)药物组合物注射在SCS中之后相比，在将药物组合物注射在SCS中之后能更长时间段地在眼睛(例如，玻璃体液)中检测到转基因产物(例如，转基因产物的浓度)。在一些实施方案中，与在通过视网膜下注射或通过玻璃体内施用注射参考(不太粘稠的)药物组合物后相比，在将药物组合物注射在SCS中之后能更长时间段地在眼睛(例如，玻璃体液)中检测到转基因产物(例如，转基因产物的浓度)。在一些实施方案中，与在通过视网膜下注射或通过玻璃体内注射来注射相同(或相似粘度的)药物组合物后相比，在将药物组合物注射在SCS中之后能更长时间段地在眼睛(例如，玻璃体液)中检测到转基因产物(例如，转基因产物的浓度)。

在一些实施方案中，更长的时间段是长至少30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些实施方案中，更长的时间段是长约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。

在一些实施方案中，在将药物组合物施用于SCS中之后，在施用后至少约或约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天的时间段内在眼睛(例如，玻璃体液)中检测到转基因。

在一些实施方案中，(例如，在经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用或向SCS施用参考药物组合物后；或在经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用药物组合物后)在施用后至多约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天的时间段内在眼睛(例如，玻璃体液)中检测到转基因。

在一些实施方案中，转基因产物在眼睛(例如，玻璃体液)中的浓度可在施用药物组合物或参考药物组合物后约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、24小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天进行确定。

在一些实施方案中，粘性(例如，相对粘稠、中等粘度到超高粘度、或比水粘稠、或比对照溶液粘稠、或比常用于视网膜下施用的溶液粘稠的)药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得转基因的浓度升高到比在例如使用可比的不太粘稠的药物组合物(参考药物组合物)通过脉络膜上施用来施用包含编码转基因的表达盒的AAV后的转基因的浓度大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得转基因的浓度升高到比在例如使用可比的不太粘稠的药物组合物(参考药物组合物)通过视网膜下施用或通过玻璃体内施用来施用包含编码转基因的表达盒的AAV时的转基因的浓度大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，粘性(例如，相对粘稠、中等粘度到超高粘度、或比水粘稠、或比对照溶液粘稠、或比常用于视网膜下施用的溶液粘稠的)药物组合物(例如，包含AAV的液体制剂，所述AAV包含编码转基因的表达盒)的脉络膜上施用使得转基因的浓度升高到比在经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用相同药物组合物时的转基因的浓度大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

在一些实施方案中，在通过脉络膜上注射施用较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)后转基因的浓度大于在通过脉络膜上注射施用可比的不太粘稠的药物组合物后的转基因的浓度。在一些实施方案中，在通过脉络膜上注射施用较粘稠的药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)后转基因的浓度大于在通过视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用可比的不太粘稠的药物组合物后的转基因的浓度。在一些实施方案中，在通过脉络膜上注射施用粘性药物组合物(例如，包含AAV的药物组合物，所述AAV包含编码转基因的表达盒)后转基因的浓度大于在通过视网膜下施用或经由玻璃体内施用来施用相同药物组合物后的转基因的浓度。

4.2.7其他功能特性

在一些实施方案中，本文所述的药物组合物具有适合于脉络膜上注射的期望的粘度。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV至少与参考药物组合物(或可比的药物组合物)中的重组AAV一样稳定。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV至少达到参考药物组合物(或可比的药物组合物)中的重组AAV的50％的稳定性。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有至少与参考药物组合物中的重组AAV相同或相当的聚集水平。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有至少与参考药物组合物中的重组AAV相同或相当的感染性水平。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有至少与参考药物组合物中的重组AAV相同或相当的游离DNA水平。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有至少与参考药物组合物中的重组AAV相同或相当的体外相对效力(IVRP)。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有至少与参考药物组合物中的重组AAV相同或相当的大小变化水平。

在某些实施方案中，药物组合物中的重组AAV相对于冷冻/解冻循环的稳定性比参考药物组合物中的相同的重组AAV的稳定性高至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV相对于冷冻/解冻循环的稳定性为参考药物组合物中的相同的重组AAV的稳定性的至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，重组AAV的稳定性通过第4.6节和第5节中公开的一种或多种测定来确定。

在某些实施方案中，药物组合物中的重组AAV表现出比参考药物组合物中的相同的重组AAV的感染性高至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍的感染性。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有参考药物组合物中的相同的重组AAV的至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的感染性。在某些实施方案中，重组AAV的病毒感染性通过本公开中公开的一种或多种测定来确定。在某些实施方案中，重组AAV的大小通过第4.6节和第5节中公开的一种或多种测定来确定。在某些实施方案中，大小在冷冻/解冻循环之前或之后测量。

在某些实施方案中，药物组合物中的重组AAV表现出比参考药物组合物中的相同的重组AAV的聚集性小至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍的聚集性。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV在某一时间段内的稳定性为参考药物组合物中的相同的重组AAV的稳定性的至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，重组AAV的聚集性通过本公开中公开的一种或多种测定来确定。在某些实施方案中，聚集性在冷冻/解冻循环之前或之后测量。在某些实施方案中，重组AAV的聚集性通过第4.6节中公开的一种或多种测定来确定。

在某些实施方案中，药物组合物中的重组AAV在某一时间段(例如，当在-20℃下或在37℃下储存时)，例如至少约或约1周、约2周、约3周、约4周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月、12个月、约15个月、约18个月、约24个月、约2年、约3年、约4年内的稳定性比参考药物组合物中的相同的重组AAV的稳定性高至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV在某一时间段内的稳定性为参考药物组合物中的相同的重组AAV的稳定性的至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，重组AAV在某一时间段内的稳定性通过本公开中公开的一种或多种测定来确定。在某些实施方案中，重组AAV在某一时间段内的稳定性通过第4.6节和第5节中公开的一种或多种测定来确定。

在某些实施方案中，药物组合物中的重组AAV的体外相对效力(IVRP)比参考药物组合物中的相同的重组AAV的IVRP高2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍(例如，当在-20℃下或在37℃下储存时)。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有与参考药物组合物中的相同的重组AAV大约相同的体外相对效力(IVRP)。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有参考药物组合物中的相同的重组AAV的约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的体外相对效力(IVRP)。在某些实施方案中，重组AAV的体外相对效力(IVRP)通过本公开中公开的一种或多种测定来确定。在某些实施方案中，体外相对效力(IVRP)在冷冻/解冻循环之前或之后测量。在某些实施方案中，重组AAV的体外相对效力(IVRP)通过第4.6节中公开的一种或多种测定来确定。

在某些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有比参考药物组合物中的相同的重组AAV的游离DNA少至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍的游离DNA。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有与参考药物组合物中的相同的重组AAV大约相同量的游离DNA。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有大约不超过参考药物组合物中的相同的重组AAV两倍的量的游离DNA。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有参考药物组合物中的相同的重组AAV的约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％的量的游离DNA。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV具有比参考药物组合物中的相同的重组AAV多至少约50％、约25％、约15％、约10％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0％，少至少约1％、约2％、约5％、约7％、约10％，多至少约2倍、约3倍，少至少约2倍或约3倍的游离DNA。在某些实施方案中，重组AAV的游离DNA通过第4.6节和第5节中公开的一种或多种测定来确定。

在某些实施方案中，药物组合物中的重组AAV在某一时间段(例如，当在-20℃下或在37℃下储存时)，例如至少约或约1周、约2周、约3周、约4周、约1个月、约2个月、约3个月、约4个月、约5个月、约6个月、约7个月、约8个月、约9个月、约10个月、约11个月、约12个月、约15个月、约18个月、约24个月、约2年、约3年和约4年内具有至多20％、15％、10％、8％、5％、4％、3％、2％或1％的大小变化。在某些实施方案中，重组AAV的大小通过本公开中公开的一种或多种测定来确定。在某些实施方案中，大小在冷冻/解冻循环之前或之后测量。在某些实施方案中，重组AAV的大小通过第4.6节中公开的一种或多种测定来确定。

在某些实施方案中，药物组合物中的重组AAV的稳定性比参考药物组合物中的相同的重组AAV的稳定性高2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍(例如，当在-20℃下或在37℃下储存时)。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV与参考药物组合物中的相同的重组AAV大约一样稳定(例如，当在-20℃下或在37℃下储存时)。在一些实施方案中，药物组合物中的重组AAV的稳定性为参考药物组合物中的相同的重组AAV的稳定性至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％(例如，当在-20℃下或在37℃下储存时)。在某些实施方案中，重组AAV的稳定性通过第4.6节中公开的一种或多种测定来确定。

在某些实施方案中，如例如通过第4.6节或第5节中公开的一种或多种测定所确定，本文所提供的药物组合物能够储存1、2、3、4、

22、23或24个月，而不会失去稳定性。在某些实施方案中，本文所提供的药物组合物能够在4℃下储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月，而不会失去稳定性。在某些实施方案中，本文所提供的药物组合物能够在≤60℃下储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月，而不会失去稳定性。在某些实施方案中，本文所提供的药物组合物能够在-80℃下储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月，而不会失去稳定性。在某些实施方案中，本文所提供的药物组合物能够在已经在-20℃下储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或12个月后在4℃下储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月，而不会失去稳定性。

在某些实施方案中，如例如通过第4.6节或第5节中公开的一种或多种测定所确定，本文所提供的药物组合物能够首先在-80℃下储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月，然后解冻，并且在解冻后在2℃至10℃、4℃至8℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃或9℃下再储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或12个月，而不会失去稳定性。在某些实施方案中，如例如通过第4.6节或第5节中公开的一种或多种测定所确定，本文所提供的药物组合物能够首先在-80℃下储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月，然后解冻，并且在解冻之后在约4℃下再储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或12个月，而不会失去稳定性。在某些实施方案中，如例如通过第4.6节或第5节中公开的一种或多种测定所确定，本文所提供的药物组合物能够首先在≤60℃下储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个月，然后解冻，并且在解冻之后在约4℃下再储存1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或12个月，而不会失去稳定性。

本文所提供的方法或药物组合物的效果可通过测量视力丧失、感染、炎症和其他安全事件(包括视网膜脱离)的体征来监测。在一些实施方案中，可使用具有不同粘度(例如，从低粘度到极高粘度不等)的不同药物组合物(例如，液体制剂)来将载体递送到SCS中。在一些实施方案中，使用中等至高粘度药物组合物(例如，液体制剂)递送的载体比使用低粘度药物组合物(例如，液体制剂)递送的载体更为有效(例如，当施用于SCS中时)。在一些实施方案中，与使用低粘度制剂递送的载体相比，使用中等至高粘度制剂递送的载体使得视力有所改善。

本文所提供的方法或药物组合物的效果也可根据美国国家眼科研究所视觉功能问卷调查Rasch评分版本(NEI-VFQ-28-R)(综合评分；活动限制域评分；以及社会情感功能域评分)中相对于基线的变化来衡量。在一些实施方案中，本文所提供的方法的效果也可根据美国国家眼科研究所视觉功能问卷调查25项版本(NEI-VFQ-25)(综合评分和心理健康分量表评分)中相对于基线的变化来衡量。在一些实施方案中，本文所提供的方法的效果也可根据黄斑疾病治疗满意度调查问卷(MacTSQ)(综合评分；安全性、功效和不适域评分；以及信息提供和便利域评分)中相对于基线的变化来衡量。

在具体实施方案中，本文所述的方法或载体(载体制剂)的功效通过在约4周、12周、6个月、12个月、24个月、36个月或在其他期望的时间点的视力改善来反映。在一个具体实施方案中，视力改善的特征在于BCVA的增加，例如增加1个字母、2个字母、3个字母、4个字母、5个字母、6个字母、7个字母、8个字母、9个字母、10个字母、11个字母或12个字母，或更多个字母。在一个具体实施方案中，视力改善的特征在于视敏度相对于基线增加5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％或更多。

在具体实施方案中，在治疗后眼睛中没有炎症或者在治疗后眼睛中几乎没有炎症(例如，炎症水平相对于基线增加10％、5％、2％、1％或更少)。

4.3剂量和施用模式

在一个方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病变的脉络膜上施用方法，所述方法包括向需要治疗的人受试者的眼睛中的脉络膜上腔施用重组病毒载体，所述重组病毒载体包含编码治疗产物的核苷酸序列，使得治疗产物被表达并且实现对眼睛病变的治疗。在某些实施方案中，施用步骤通过使用脉络膜上药物递送装置将重组病毒载体注射到脉络膜上腔中来进行。在某些实施方案中，脉络膜上药物递送装置是微量注射器。在一些实施方案中，本文所提供的药物组合物或参考药物组合物适合于通过一种、两种或更多种施用途径来施用(例如，适合于脉络膜上施用和视网膜下施用)。

在某些实施方案中，药物组合物(或参考药物组合物)的载体基因组浓度(VGC)为约3×10⁹GC/mL、约1×10¹⁰GC/mL、约1.2×10¹⁰GC/mL、约1.6×10¹⁰GC/mL、约4×10¹⁰GC/mL、约6×10¹⁰GC/mL、约2×10¹¹GC/mL、约2.4×10¹¹GC/mL、约2.5×10¹¹GC/mL、约3×10¹¹GC/mL、约3.2×10¹¹GC/mL、约6.2×10¹¹GC/mL、约6.5×10¹¹GC/mL、约1×10¹²GC/mL、约2.5×10¹²GC/mL、约3×10¹²GC/mL、约5×10¹²GC/mL、约1.5×10¹³GC/mL、约2×10¹³GC/mL或约3×10¹³GC/mL。

在某些实施方案中，药物组合物(或参考药物组合物)的载体基因组浓度(VGC)为约3×10⁹GC/mL、4×10⁹GC/mL、5×10⁹GC/mL、6×10⁹GC/mL、7×10⁹GC/mL、8×10⁹GC/mL、9×10⁹GC/mL、约1×10¹⁰GC/mL、约2×10¹⁰GC/mL、约3×10¹⁰GC/mL、约4×10¹⁰GC/mL、约5×10¹⁰GC/mL、约6×10¹⁰GC/mL、约7×10¹⁰GC/mL、约8×10¹⁰GC/mL、约9×10¹⁰GC/mL、约1×10¹¹GC/mL、约2×10¹¹GC/mL、约3×10¹¹GC/mL、约4×10¹¹GC/mL、约5×10¹¹GC/mL、约6×10¹¹GC/mL、约7×10¹¹GC/mL、约8×10¹¹GC/mL、约9×10¹¹GC/mL、约1×10¹²GC/mL、约2×10¹²GC/mL、约3×10¹²GC/mL、约4×10¹²GC/mL、约5×10¹²GC/mL、约6×10¹²GC/mL、约7×10¹²GC/mL、约8×10¹²GC/mL、约9×10¹²GC/mL、约1×10¹³GC/mL、约1.5×10¹³GC/mL、约2×10¹³GC/mL、约3×10¹³GC/mL。

在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)的体积是能够减小分离巩膜和脉络膜的最小力的任何体积。在一些实施方案中，药物组合物(例如，液体制剂)的体积为约50μL至约1000μL、50μL至约500μL、50μL至约400μL、50μL至约350μL、50μL至约300μL、约50μL至约275μL、约50μL至约250μL、约50μL至约225μL、约50μL至约200μL、约50μL至约175μL、约50μL至约150μL、约60μL至约140μL、约70μL至约130μL、约80μL至约120μL、约90μL至约110μL、或约100μL。

当前存在可用于脉络膜上腔(SCS)递送的技术。在临床前，已经通过巩膜瓣技术、导管和标准皮下注射针以及微针实现了SC注射。可将750um长的中空孔微针(ClearsideBiomedical,Inc.)插入体部中，并且在临床试验中已经显示出前景。以力传感技术设计的微针可用于SC注射，如由Chitnis等人(Chitnis,G.D.,等人A resistance-sensingmechanical injector for the precise delivery of liquids to target tissue.NatBiomed Eng 3,621–631(2019).https://doi.org/10.1038/s41551-019-0350-2)所描述。Oxular Limited正在开发一种在脉络膜上腔中推进带照明的插管的递送系统(Oxulumis)。Orbit装置(Gyroscope)是一种专门设计的用柔性插管实现对脉络膜上腔的插管的系统。插管内部的微针被推进到视网膜下腔中以实现定向剂量递送。也可使用微型支架实现对SCS的内部(ab interno)触及，所述微型支架用作微创青光眼手术(MIGS)装置。实例包括微型支架(Alcon,Fort Worth,Texas,US)和(Glaukos)，它们通过外科手术植入来提供从前房到SCS的导管以排出房水，而不会形成滤过泡。考虑用于脉络膜上递送的其他装置包括在英国专利公布号GB 2531910A和美国专利号10,912,883B2中描述的那些。

在一些实施方案中，脉络膜上药物递送装置是具有1毫米30号针的针筒。在一些实施方案中，针筒具有更大的圆周(例如，29号针)。在使用这种装置进行注射期间，针穿刺到巩膜底部并且含有药物的流体进入脉络膜上腔，从而导致脉络膜上腔扩大。因此，在注射期间会有触觉和视觉反馈。在注射之后，流体向后流动并且主要在脉络膜和视网膜中吸收。这导致从所有视网膜细胞层和脉络膜细胞中产生转基因蛋白。使用这种类型的装置和程序实现了快速而简便的诊室内程序，同时并发症风险低。

在一些实施方案中，基于药物组合物(例如，液体制剂)的粘度而选择微针或针筒。在一些实施方案中，基于施用药物组合物(例如，液体制剂)时在眼睛中(例如，在SCS中)产生的压力而选择微针。例如，具有中等粘度或高粘度的药物组合物(例如，液体制剂)在注射时可受益于较宽微针的使用。在一些实施方案中，与使用较窄微针时获得的压力相比，当使用较宽微针时，SCS中的压力更低。一些实施方案中，使用10号针、11号针、12号针、13号针、14号针、15号针、16号针、17号针、18号针、19号针、20号针、21号针、22号针、23号针、24号针、25号针、26号针、27号针、28号针、29号针、30号针、31号针、32号针、33号针或34号针。在一些实施方案中，使用27号针。在一些实施方案中，使用28号针。在一些实施方案中，使用29号针。在一些实施方案中，使用30号针。在一些实施方案中，使用31号针。在一些实施方案中，使用小于27号针的针号。在一些实施方案中，使用大于27号针的针号。在一些实施方案中，使用小于30号针的针号。在一些实施方案中，使用高于30号针的针号。

在一些实施方案中，药物组合物施用期间的压力为约10PSI、15PSI、20PSI、25PSI、30PSI、35PSI、40PSI、45PSI、50PSI、55PSI、60PSI、65PSI、70PSI、75PSI、80PSI、85PSI、90PSI、95PSI、100PSI、150PSI或200PSI。在一些实施方案中，药物组合物施用期间的压力不大于约10PSI、15PSI、20PSI、25PSI、30PSI、35PSI、40PSI、45PSI、50PSI、55PSI、60PSI、65PSI、70PSI、75PSI、80PSI、85PSI、90PSI、95PSI、100PSI、150PSI或200PSI。在一些实施方案中，药物组合物施用期间打开SCS的压力不大于约10PSI、15PSI、20PSI、25PSI、30PSI、35PSI、40PSI、45PSI、50PSI、55PSI、60PSI、65PSI、70PSI、75PSI、80PSI、85PSI、90PSI、95PSI、100PSI、150PSI或200PSI。在一些实施方案中，药物组合物施用期间的压力(或打开SCS所需的压力)在20PSI与50PSI、20PSI与75PSI、20PSI与40PSI、10PSI与40PSI、10PSI与100PSI或10PSI与80PSI之间。在一些实施方案中，压力随着注射速率降低而降低(例如，压力从4秒注射速率降低到10秒注射速率)。在一些实施方案中，压力随着针的大小增加而降低。在一些实施方案中，压力随着粘度增加而增加。

以下剂量是期望的：维持在眼睛(例如，玻璃体液)中Cmin为至少0.330μg/mL，或在房水(眼睛的前房)中为0.110μg/mL的持续三个月的转基因产物的浓度；此后，应维持转基因产物的范围为1.70至6.60μg/mL的玻璃体Cmin浓度，和/或范围为0.567至2.20μg/mL的房水Cmin浓度。然而，由于转基因产物会连续产生(在组成型启动子的控制下或在使用缺氧诱导型启动子时由缺氧条件诱导)，维持较低浓度可能是有效的。转基因浓度可直接在从体液、眼液、玻璃体液或前房收集的患者流体样品中进行测量，或者通过测量转基因产物的患者血清浓度来估计和/或监测——全身性暴露于转基因产物与玻璃体暴露于转基因产物的比率为约1:90,000。(例如，参见vitreous humor and serum concentrations ofranibizumab，报导于Xu L等人,2013,Invest.Opthal.Vis.Sci.54:1616-1624，第1621页和第1623页表5，所述文献以引用的方式整体并入本文)。

在某些实施方案中，剂量通过每ml基因组拷贝(GC/mL)或施用于患者眼睛(例如，脉络膜上施用)的基因组拷贝的数量来测量。在一些实施方案中，施用2.4x 10¹¹GC/mL至1x10¹³GC/mL，施用2.4x10¹¹GC/mL至5x 10¹¹GC/mL，施用5x 10¹¹GC/mL至1x 10¹²GC/mL，施用1x10¹²GC/mL至5x 10¹²GC/mL，或施用5x 10¹²GC/mL至1x 10¹³GC/mL。在一些实施方案中，施用1.5×10¹³GC/mL至3×10¹³GC/mL。在一些实施方案中，施用约2.4x 10¹¹GC/mL、约5x 10¹¹GC/mL、约1x 10¹²GC/mL、约2.5x 10¹²GC/mL、约5x 10¹²GC/mL、约1x 10¹³GC/mL或约1.5x 10¹³GC/mL。在一些实施方案中，施用1x 10⁹至1x 10¹²个基因组拷贝。在一些实施方案中，施用3x10⁹至2.5x 10¹¹个基因组拷贝。在具体实施方案中，施用1x 10⁹至2.5x 10¹¹个基因组拷贝。在具体实施方案中，施用1x 10⁹至1x 10¹¹个基因组拷贝。在具体实施方案中，施用1x 10⁹至5x 10⁹个基因组拷贝。在具体实施方案中，施用6x 10⁹至3x 10¹⁰个基因组拷贝。在具体实施方案中，施用4x 10¹⁰至1x 10¹¹个基因组拷贝。在具体实施方案中，施用2x 10¹¹至1.5x 10¹²个基因组拷贝。在一个具体实施方案中，施用约3x 10⁹个基因组拷贝(这对应于约1.2x10¹⁰GC/mL，以250μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约1x 10¹⁰个基因组拷贝(这对应于约4x 10¹⁰GC/mL，以250μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约6x 10¹⁰个基因组拷贝(这对应于约2.4x 10¹¹GC/mL，以250μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约6.4x10¹⁰个基因组拷贝(这对应于约3.2x 10¹¹GC/mL，以200μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约1.3x 10¹¹个基因组拷贝(这对应于约6.5x 10¹¹GC/mL，以200μl体积计)。在一些实施方案中，每只眼睛，或每个剂量，或每种施用途径施用约6.4×10¹⁰个基因组拷贝。在一些实施方案中，约6.4×10¹⁰个基因组拷贝是所施用的基因组拷贝的总数。在一些实施方案中，每只眼睛，或每个剂量，或每种施用途径施用约1.3×10¹¹个基因组拷贝。在一些实施方案中，约1.3×10¹¹个基因组拷贝是所施用的基因组拷贝的总数。在一些实施方案中，每只眼睛，或每个剂量，或每种施用途径施用约2.5×10¹¹个基因组拷贝。在一些实施方案中，约2.5×10¹¹个基因组拷贝是所施用的基因组拷贝的总数。在一些实施方案中，每只眼睛，或每个剂量，或每种施用途径施用约5×10¹¹个基因组拷贝。在一些实施方案中，约5×10¹¹个基因组拷贝是所施用的基因组拷贝的总数。在一些实施方案中，每只眼睛，或每个剂量，或每种施用途径施用约3×10¹²个基因组拷贝。在一些实施方案中，约3×10¹²个基因组拷贝是所施用的基因组拷贝的总数。在另一个具体实施方案中，施用约1.6x 10¹¹个基因组拷贝(这对应于约6.2x 10¹¹GC/mL，以250μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约1.55x 10¹¹个基因组拷贝(这对应于约6.2x10¹¹GC/mL，以250μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约1.6x 10¹¹个基因组拷贝(这对应于约6.4x 10¹¹GC/mL，以250μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约2.5x 10¹¹个基因组拷贝(这对应于约1.0x 10¹²GC/mL，以250μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约2.5x 10¹¹个基因组拷贝(这对应于约2.5x 10¹²GC/mL，以100μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约3x 10¹¹个基因组拷贝(这对应于约3x 10¹²GC/mL，以100μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约5x 10¹¹个基因组拷贝(这对应于约5x 10¹²GC/mL，以200μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约6x 10¹¹个基因组拷贝(这对应于约3x 10¹²GC/mL，以200μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约6x 10¹¹个基因组拷贝(这对应于约6x10¹²GC/mL，以100μl体积计)。在另一个具体实施方案中，施用约1.5x 10¹²个基因组拷贝(这对应于约1.5x 10¹³GC/mL，以100μl体积计)。

在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约6.0×10¹⁰个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约6.4×10¹⁰个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约1.3×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约1.5×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约1.6×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约2.5×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约3×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约5.0×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约6×10¹¹个基因组拷贝。在一些实施方案中，每只眼睛，或每个剂量，或每种施用途径施用约1.5×10¹²个基因组拷贝。在一些实施方案中，约1.5×10¹²个基因组拷贝是所施用的基因组拷贝的总数。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约3x 10¹²个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约1.0×10¹²GC/mL。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约2.5×10¹²GC/mL。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约3×10¹²GC/mL。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用约3.0×10¹³个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛施用高达3.0×10¹³个基因组拷贝。

在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过脉络膜上注射来施用约1.5×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过脉络膜上注射来施用约2.5×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过脉络膜上注射来施用约3×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过脉络膜上注射来施用约5.0×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过脉络膜上注射来施用约6×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过脉络膜上注射来施用约1.5×10¹²个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过脉络膜上注射来施用约3x 10¹²个基因组拷贝。在某些实施方案中，每只眼睛通过单次脉络膜上注射来施用约2.5×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过单次脉络膜上注射来施用约3×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过体积为100μl的单次脉络膜上注射来施用约3×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过体积为200μl的单次脉络膜上注射来施用约3×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过两次脉络膜上注射来施用约3×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过两次脉络膜上注射来施用约3×10¹¹个基因组拷贝，其中每次注射的体积为50μl。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过两次脉络膜上注射来施用约3×10¹¹个基因组拷贝，其中每次注射的体积为100μl。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过两次脉络膜上注射来施用约5.0×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过单次脉络膜上注射来施用约6×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过体积为100μl的单次脉络膜上注射来施用约6×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过体积为200μl的单次脉络膜上注射来施用约6×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过两次脉络膜上注射来施用约6×10¹¹个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过两次脉络膜上注射来施用约6×10¹¹个基因组拷贝，其中每次注射的体积为50μl。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过两次脉络膜上注射来施用约6×10¹¹个基因组拷贝，其中每次注射的体积为100μl。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过脉络膜上注射来施用约3.0×10¹³个基因组拷贝。在某些实施方案中，每次施用，或每只眼睛通过脉络膜上注射来施用高达3.0×10¹³个基因组拷贝。在某些实施方案中，每只眼睛通过体积为100μl的单次脉络膜上注射来施用约2.5×10¹²GC/mL。在某些实施方案中，每只眼睛通过两次脉络膜上注射来施用约2.5×10¹²GC/mL，其中每次注射的体积为100μl。在某些实施方案中，每只眼睛通过体积为100μl的单次脉络膜上注射来施用约1.5×10¹³GC/mL。

在某些实施方案中，重组病毒载体通过两次脉络膜上注射来施用。在某些实施方案中，右眼中的第一次注射施用于颞上象限中(即，在10点钟与11点钟位置之间)，并且同一只眼睛中的第二次注射施用于鼻下象限中(即，在4点钟与5点钟位置之间)。在某些实施方案中，右眼中的第一次注射施用于鼻下象限中(即，在4点钟与5点钟位置之间)，并且同一只眼睛中的第二次注射施用于颞上象限中(即，在10点钟与11点钟位置之间)。在某些实施方案中，左眼中的第一次注射施用于颞上象限中(即，在1点钟与2点钟位置之间)，并且同一只眼睛中的第二次注射施用于鼻下象限中(即，在7点钟与8点钟位置之间)。在某些实施方案中，左眼中的第一次注射施用于鼻下象限中(即，在7点钟与8点钟位置之间)，并且同一只眼睛中的第二次注射施用于颞上象限中(即，在1点钟与2点钟位置之间)。

在某些实施方案中，重组病毒载体通过单次脉络膜上注射来施用。在某些实施方案中，右眼中的单次注射施用于颞上象限中(即，在10点钟与11点钟位置之间)。在某些实施方案中，右眼中的单次注射施用于鼻下象限中(即，在4点钟与5点钟位置之间)。在某些实施方案中，左眼中的单次注射施用于颞上象限中(即，在1点钟与2点钟位置之间)。在某些实施方案中，左眼中的单次注射施用于鼻下象限中(即，在7点钟与8点钟位置之间)。

在一些实施方案中，将药物组合物或参考药物组合物施用于人受试者(例如，在脉络膜上、视网膜下或玻璃体内施用)一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些实施方案中，一天一次地、一天两次地、一天三次地、一天四次地、一天五次地、一天六次地或一天七次地将药物组合物或参考药物组合物施用于人受试者。在一些实施方案中，每次施用都施用相同量的AAV基因组拷贝。例如，在脉络膜上、视网膜下或玻璃体内施用相同的基因组拷贝。在一些实施方案中，施用相同总量的AAV基因组拷贝。例如，在脉络膜上、视网膜下或玻璃体内施用相同总量的AAV基因组拷贝，而不管总的施用次数如何(例如，如果进行一次视网膜下施用并且进行两次脉络膜上施用，则在一次视网膜下施用中的基因组拷贝与组合的两次脉络膜上施用中的基因组拷贝相同)。

如本文所用且除非另有指明，否则术语“约”表示在给定值或范围的加减10％以内

4.4构建体和制剂

在一些实施方案中，本文所提供的重组载体按以下次序包含以下元件：a)组成型或缺氧诱导型启动子序列，以及b)编码转基因(例如，治疗产物)的序列。在某些实施方案中，本文所提供的重组载体按以下次序包含以下元件：a)第一ITR序列，b)第一接头序列，c)组成型或缺氧诱导型启动子序列，d)第二接头序列，e)内含子序列，f)第三接头序列，g)第一UTR序列，h)编码转基因(例如，抗VEGF抗原结合片段部分)的序列，i)第二UTR序列，j)第四接头序列，k)多聚腺苷酸序列，l)第五接头序列，以及m)第二ITR序列。

在某些实施方案中，本文所提供的重组载体按以下次序包含以下元件：a)第一ITR序列，b)第一接头序列，c)组成型或缺氧诱导型启动子序列，d)第二接头序列，e)内含子序列，f)第三接头序列，g)第一UTR序列，h)编码转基因(例如，抗VEGF抗原结合片段部分)的序列，i)第二UTR序列，j)第四接头序列，k)多聚腺苷酸序列，l)第五接头序列，以及m)第二ITR序列，其中转基因包含VEGF的信号肽(SEQ ID NO:5)，并且其中转基因编码由可裂解的F/F2A序列分开的轻链和重链序列。

在一些实施方案中，本文所提供的AAV(AAV病毒载体)按以下次序包含以下元件：a)组成型或缺氧诱导型启动子序列，以及b)编码转基因(例如，抗VEGF抗原结合片段部分)的序列。在一些实施方案中，转基因是针对VEGF的全人源翻译后修饰(HuPTM)的抗体。在一些实施方案中，针对VEGF的全人源翻译后修饰的抗体是针对VEGF的单克隆抗体(mAb)的全人源翻译后修饰的抗原结合片段(“HuPTMFabVEGFi”)。在一些实施方案中，HuPTMFabVEGFi是抗VEGF mAb的全人源糖基化的抗原结合片段(“HuGlyFabVEGFi”)。在一个替代实施方案中，可使用全长mAb。在一些实施方案中，用于递送转基因的AAV应对人视网膜细胞或感光细胞具有嗜性。这种AAV可包括非复制型重组腺相关病毒载体(“rAAV”)，携带AAV8衣壳的那些是特别优选的。在一个具体实施方案中，本文所述的病毒载体或其他DNA表达构建体是构建体I，其中构建体I包含以下组件：(1)侧接表达盒的AAV8反向末端重复序列；(2)控制元件，所述控制元件包括：a)CB7启动子，所述CB7启动子包含CMV增强子/鸡β-肌动蛋白启动子，b)鸡β-肌动蛋白内含子，以及c)兔β-珠蛋白多聚腺苷酸信号；以及(3)对抗VEGF抗原结合片段的重链和轻链进行编码的核酸序列，所述重链和轻链由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A接头分开，从而确保表达等量的重链和轻链多肽。在一些实施方案中，病毒载体包含信号肽。在一些实施方案中，信号肽是MYRMQLLLLIALSLALVTNS(SEQ ID NO:55)。在一些实施方案中，信号肽来源于IL-2信号序列。在一些实施方案中，病毒载体包含来自表1中公开的任何信号肽的信号肽，诸如MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA(VEGF-A信号肽)(SEQ ID NO:5)；MERAAPSRRVPLPLLLLGGL ALLAAGVDA(腓骨蛋白-1信号肽)(SEQ ID NO:6)；MAPLRPLLIL ALLAWVALA(玻连蛋白信号肽)(SEQ ID NO:7)；MRLLAKIICLMLWAICVA(补体因子H信号肽)(SEQ ID NO:8)；MRLLAFLSLL ALVLQETGT(旋光蛋白信号肽)(SEQ ID NO:9)；MKWVTFISLLFLFSSAYS(白蛋白信号肽)(SEQ ID NO:22)；MAFLWLLSCWALLGTTFG(胰凝乳蛋白酶原信号肽)(SEQ ID NO:23)；MYRMQLLSCIALILALVTNS(白细胞介素-2信号肽)(SEQ ID NO:24)；MNLLLILTFVAAAVA(胰蛋白酶原-2信号肽)(SEQ ID NO:25)；或MYRMQLLLLIALSLALVTNS(突变型白细胞介素-2信号肽)(SEQ ID NO:55)。在另一个具体实施方案中，本文所述的病毒载体或其他DNA表达构建体是构建体II，其中构建体II包含以下组件：(1)侧接表达盒的AAV2反向末端重复序列；(2)控制元件，所述控制元件包括：a)CB7启动子，所述CB7启动子包含CMV增强子/鸡β-肌动蛋白启动子，b)鸡β-肌动蛋白内含子，以及c)兔β-珠蛋白多聚腺苷酸信号；以及(3)对抗VEGF抗原结合片段的重链和轻链进行编码的核酸序列，所述重链和轻链由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A接头分开，从而确保表达等量的重链和轻链多肽。在一些实施方案中，抗hVEGF抗体包含：重链，所述重链包含氨基酸序列SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4；以及轻链，所述轻链包含氨基酸序列SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3。

在一些实施方案中，适合于包装在AAV衣壳中的病毒载体或其他表达构建体包含：(1)侧接表达盒的AAV反向末端重复序列(ITR)；(2)调节控制元件，所述调节控制元件基本上由一个或多个增强子和/或启动子组成，d)多聚腺苷酸信号，以及e)任选的内含子；以及(3)提供感兴趣的一种或多种RNA或蛋白质产物(例如，对它们进行编码)的转基因。

在一些方面，本公开提供了一种供使用的核酸，其中核酸编码可操作地连接到本文所述的启动子或增强子-启动子的治疗产物。

在一些方面，本公开提供了一种供使用的核酸，其中核酸编码HuPTMFabVEGFi，例如，HuGlyFabVEGFi，其可操作地连接到选自由以下组成的组的启动子：CB7启动子(鸡β-肌动蛋白启动子和CMV增强子)、巨细胞病毒(CMV)启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子、MMT启动子、EF-1α启动子、UB6启动子、鸡β-肌动蛋白启动子、CAG启动子、RPE65启动子和视蛋白启动子。在一个具体实施方案中，HuPTMFabVEGFi可操作地连接到CB7启动子。

在某些实施方案中，本文提供了包含一种或多种核酸(例如，多核苷酸)的重组载体。核酸可包含DNA、RNA、或DNA和RNA的组合。在某些实施方案中，DNA包含选自由以下组成的组的一个或多个序列：启动子序列、编码感兴趣的治疗产物(转基因，例如抗VEGF抗原结合片段)的序列、非翻译区和终止序列。在某些实施方案中，本文所提供的重组载体包含可操作地连接到编码感兴趣的治疗产物的序列的启动子。

在某些实施方案中，本文所公开的核酸(例如，多核苷酸)和核酸序列可例如经由本领域技术人员已知的任何密码子优化技术进行密码子优化(参见例如由Quax等人,2015,Mol Cell 59:149-161综述)。

在某些实施方案中，本文所提供的重组载体包含编码感兴趣的治疗产物(例如，转基因，例如，抗VEGF抗原结合片段部分)的修饰的mRNA。在某些实施方案中，本文提供了编码抗VEGF抗原结合片段部分的修饰的mRNA。在某些实施方案中，本文所提供的重组载体包含编码治疗产物的核苷酸序列，所述治疗产物是shRNA、siRNA或miRNA。

在某些实施方案中，本文所提供的载体包含调节蛋白质递送的组件。在某些实施方案中，本文所提供的病毒载体包含一种或多种信号肽。信号肽的实例包括但不限于VEGF-A信号肽(SEQ ID NO:5)、腓骨蛋白-1信号肽(SEQ ID NO:6)、玻连蛋白信号肽(SEQ ID NO:7)、补体因子H信号肽(SEQ ID NO:8)、旋光蛋白信号肽(SEQ ID NO:9)、白蛋白信号肽(SEQID NO:22)、胰凝乳蛋白酶原信号肽(SEQ ID NO:23)、白细胞介素-2信号肽(SEQ ID NO:24)和胰蛋白酶原-2信号肽(SEQ ID NO:25)、突变型白细胞介素-2信号肽(SEQ ID NO:55)。

(a)病毒载体

在一些实施方案中，本文所提供的病毒载体是基于AAV的病毒载体。在优选的实施方案中，本文所提供的病毒载体是基于AAV8的病毒载体。在某些实施方案中，本文所提供的基于AAV8的病毒载体保留了对视网膜细胞的嗜性。在某些实施方案中，本文所提供的基于AAV的载体编码AAV rep基因(为复制所需)和/或AAV cap基因(为衣壳蛋白的合成所需)。已鉴定出多种AAV血清型。在某些实施方案中，本文所提供的基于AAV的载体包含来自一种或多种AAV血清型的组件。在某些实施方案中，本文所提供的基于AAV的载体包含来自以下中的一种或多种的衣壳组件：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15和AAV.HSC16。在优选的实施方案中，本文所提供的基于AAV的载体包含来自AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh10血清型中的一种或多种的组件。在某些实施方案中，本文所提供的重组病毒载体被改变为使得它们在人体中是复制缺陷型的。在某些实施方案中，重组病毒载体是杂交载体，例如，被置入“无助”腺病毒载体中的AAV载体。在某些实施方案中，本文提供了包含来自第一病毒的病毒衣壳和来自第二病毒的病毒包膜蛋白的重组病毒载体。在具体实施方案中，第二病毒是水疱性口炎病毒(VSV)。在更具体的实施方案中，包膜蛋白是VSV-G蛋白。

在具体实施方案中提供了AAV8载体，其包含：病毒基因组，所述病毒基因组包含表达转基因的表达盒，所述表达盒在调节元件的控制下并且被ITR侧接；以及病毒衣壳，所述病毒衣壳具有AAV8衣壳蛋白的氨基酸序列或者与AAV8衣壳蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO:48)具有至少95％、96％、97％、98％、99％或99.9％同一性，同时保留了AAV8衣壳的生物学功能。在某些实施方案中，编码的AAV8衣壳具有SEQ ID NO:48的序列，所述序列具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸取代并且保留AAV8衣壳的生物学功能。

在某些实施方案中，本文所述的方法中使用的AAV是Anc80或Anc80L65，如Zinn等人，2015,Cell Rep.12(6):1056-1068中所描述，所述参考文献以引用的方式整体并入。在某些实施方案中，本文所述的方法中使用的AAV包含以下氨基酸插入之一：LGETTRP或LALGETTRP，如美国专利号9,193,956；9458517；和9,587,282以及美国专利申请公布号2016/0376323中所描述，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，本文所述的方法中使用的AAV是AAV.7m8，如美国专利号9,193,956；9,458,517；和9,587,282以及美国专利申请公布号2016/0376323中所描述，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。在某些实施方案中，本文所述的方法中使用的AAV是美国专利号9,585,971中公开的任何AAV，诸如AAV.PHP.B。在某些实施方案中，本文所述的方法中使用的AAV是任何以下专利和专利申请中公开的AAV，所述专利各自以引用的方式整体并入本文：美国专利号7,906,111；8,524,446；8,999,678；8,628,966；8,927,514；8,734,809；US 9,284,357；9,409,953；9,169,299；9,193,956；9458517；和9,587,282；美国专利申请公布号2015/0374803；2015/0126588；2017/0067908；2013/0224836；2016/0215024；2017/0051257；以及国际专利申请号PCT/US2015/034799；PCT/EP2015/053335。

基于AAV8的病毒载体用于本文所述的某些方法中。基于AAV的病毒载体的核酸序列以及制备重组AAV和AAV衣壳的方法例如在以下中有所教导：美国专利号7,282,199B2；美国专利号7,790,449B2；美国专利号8,318,480B2；美国专利号8,962,332B2和国际专利申请号PCT/EP2014/076466，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。在一个方面，本文提供了编码转基因(例如，抗VEGF抗原结合片段)的基于AAV(例如，AAV8)的病毒载体。在具体实施方案中，本文提供了编码抗VEGF抗原结合片段的基于AAV8的病毒载体。在更具体的实施方案中，本文提供了编码兰尼单抗(ranibizumab)的基于AAV8的病毒载体。

在某些实施方案中，可使用前述的单链AAV(ssAAV)。在某些实施方案中，可使用自身互补载体，例如，scAAV(参见例如，Wu,2007,Human Gene Therapy,18(2):171-82；McCarty等人,2001,Gene Therapy，第8卷，第16期，第1248页至第1254页；以及美国专利号6,596,535；7,125,717；和7,456,683，所述参考文献各自以引用的方式整体并入本文)。

在某些实施方案中，本文所述的方法中使用的病毒载体是基于腺病毒的病毒载体。重组腺病毒载体可用于在抗VEGF抗原结合片段中转移。重组腺病毒可以是第一代载体，其具有E1缺失，具有或不具有E3缺失，并且表达盒插入任一缺失区中。重组腺病毒可以是第二代载体，其含有E2和E4区的完全或部分缺失。辅助依赖型腺病毒仅保留腺病毒反向末端重复序列和包装信号(phi)。在具有或不具有保持基因组接近于大约36kb的野生型大小的填充序列的情况下，将转基因插入包装信号与3’ITR之间。用于产生腺病毒载体的示例性方案可见于Alba等人,2005,“Gutless adenovirus:last generation adenovirus for genetherapy,”Gene Therapy 12:S18-S27，所述参考文献以引用的方式整体并入本文。

在一个具体实施方案中，用于本文所述的方法的载体是编码抗VEGF抗原结合片段(例如，兰尼单抗)的载体，使得在将载体引入相关细胞(例如，体内或体外的视网膜细胞)中之后，所述细胞表达抗VEGF抗原结合片段的糖基化和/或酪氨酸硫酸化变体。在一个具体实施方案中，所表达的抗VEGF抗原结合片段包含糖基化和/或酪氨酸硫酸化模式。

(b)治疗产物或转基因

治疗产物可以是例如治疗性蛋白质(例如，抗体)、治疗性RNA(例如，shRNA、siRNA和miRNA)或治疗性适体。

在某些实施方案中，本公开提供了包含编码转基因的重组AAV的药物组合物。在一些实施方案中，本文提供了编码抗VEGF Fab或抗VEGF抗体的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码抗VEGF Fab或抗VEGF抗体的基于rAAV8的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码兰尼单抗的基于rAAV8的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码艾杜糖醛酸酶(IDUA)的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码IDUA的基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码IDS的基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码低密度脂蛋白受体(LDLR)的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码LDLR的基于rAAV8的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码三肽基肽酶1(TPP1)蛋白的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码TPP1的基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码微小抗肌萎缩蛋白的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码微小抗肌萎缩蛋白的基于rAAV8的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码微小抗肌萎缩蛋白的基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码抗激肽释放酶(抗pKal)蛋白的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码拉那利尤单抗(lanadelumab)Fab或全长抗体的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码人-α-肌聚糖-γ-肌聚糖的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码huFollistatin344的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码人-α-肌聚糖-γ-肌聚糖的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN2的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN3的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN6的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码人-α-肌聚糖-γ-肌聚糖的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码huFollistatin344的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码人-α-肌聚糖-γ-肌聚糖的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN2的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN3的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN6的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。

在某些实施方案中，治疗产物(例如，转基因)是：(1)抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体或适体；(2)抗hVEGF抗原结合片段；(3)抗hVEGF抗原结合片段是Fab、F(ab’)2或单链可变片段(scFv)；(4)棕榈酰蛋白硫酯酶-1(PPT1)；(5)三肽基肽酶1(TPP1)；(6)Battenin(CLN3)；以及(7)CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)。

在某些实施方案中，本公开提供了包含编码转基因的重组AAV的药物组合物。在一些实施方案中，本文提供了编码抗VEGF Fab或抗VEGF抗体的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码抗VEGF Fab或抗VEGF抗体的基于rAAV8的病毒载体。在更多实施方案中，本文提供了编码兰尼单抗的基于rAAV8的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码艾杜糖醛酸酶(IDUA)的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码IDUA的基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码艾杜糖-2-硫酸酯酶(IDS)的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码IDS的基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码低密度脂蛋白受体(LDLR)的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码LDLR的基于rAAV8的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码三肽基肽酶1(TPP1)蛋白的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码TPP1的基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码微小抗肌萎缩蛋白的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码微小抗肌萎缩蛋白的基于rAAV8的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码微小抗肌萎缩蛋白的基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码抗激肽释放酶(抗pKal)蛋白的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码拉那利尤单抗Fab或全长抗体的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码人-α-肌聚糖-γ-肌聚糖的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码huFollistatin344的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码人-α-肌聚糖-γ-肌聚糖的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN2的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN3的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN6的rAAV病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码人-α-肌聚糖-γ-肌聚糖的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码huFollistatin344的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码人-α-肌聚糖-γ-肌聚糖的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN2的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN3的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。在一些实施方案中，本文提供了编码CLN6的基于rAAV8或基于rAAV9的病毒载体。

在某些实施方案中，本文所提供的载体可用于：(1)与Batten-CLN1相关联的眼睛病变，并且治疗产物是棕榈酰蛋白硫酯酶1(PPT1)；(2)与Batten-CLN2相关联的眼睛病变，并且治疗产物是三肽基肽酶1(TPP1)；(3)与Batten-CLN3相关联的眼睛病变，并且治疗产物是Battenin(CLN3)；(4)与Batten-CLN6相关联的眼睛病变，并且治疗产物是CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；(5)与Batten-CLN7相关联的眼睛病变，并且治疗产物是含主要协助超家族结构域8(MFSD8)；以及(6)与Batten-CLN1相关联的眼睛病变，并且治疗产物是棕榈酰蛋白硫酯酶1(PPT1)。

在一些实施方案中，由转基因编码的HuPTMFabVEGFi(例如，HuGlyFabVEGFi)可包括但不限于结合到VEGF的抗体的抗原结合片段，诸如贝伐珠单抗(bevacizumab)；抗VEGFFab部分，诸如兰尼单抗；或者此类贝伐珠单抗或兰尼单抗Fab部分被工程化为在Fab结构域上含有额外的糖基化位点(例如，参见Courtois等人,2016,mAbs 8:99-112，所述参考文献关于在全长抗体的Fab结构域上高糖基化的贝伐珠单抗衍生物的描述以引用的方式整体并入本文)。

在某些实施方案中，本文所提供的载体编码抗VEGF抗原结合片段转基因。在具体实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因由适当的表达控制元件控制以在视网膜细胞中表达。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因包含轻链和重链cDNA序列(分别为SEQID No:10和11)的贝伐珠单抗Fab部分。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因包含兰尼单抗轻链和重链cDNA序列(分别为SEQ ID No:12和13)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码贝伐珠单抗Fab，其包含分别为SEQ ID NO:3和4的轻链和重链。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链的抗原结合片段，所述轻链包含与列示于SEQ ID NO:3中的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链的抗原结合片段，所述重链包含与列示于SEQ ID NO:4中的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含以下项的抗原结合片段：轻链，所述轻链包含与列示于SEQ ID NO:3中的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；以及重链，所述重链包含与列示于SEQ ID NO:4中的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码高糖基化的兰尼单抗，其包含分别为SEQ ID NO:1和2的轻链和重链。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链的抗原结合片段，所述轻链包含与列示于SEQ ID NO:1中的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链的抗原结合片段，所述重链包含与列示于SEQ ID NO:2中的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含以下项的抗原结合片段：轻链，所述轻链包含与列示于SEQ ID NO:1中的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列；以及重链，所述重链包含与列示于SEQ ID NO:2中的序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列。

在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码高糖基化的贝伐珠单抗Fab，其包含SEQ ID NO:3和4的轻链和重链，具有以下突变中的一种或多种：L118N(重链)、E195N(轻链)、或Q160N或Q160S(轻链)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码高糖基化的兰尼单抗Fab，其包含SEQ ID NO:1和2的轻链和重链，具有以下突变中的一种或多种：L118N(重链)、E195N(轻链)、或Q160N或Q160S(轻链)。抗原结合片段转基因cDNA的序列可见于例如表1中。在某些实施方案中，抗原结合片段转基因cDNA的序列通过用一个或多个信号序列替换SEQ ID NO:10和11或SEQ ID NO:12和13的信号序列来获得。

在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码抗原结合片段并且包含六个贝伐珠单抗CDR的核苷酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码抗原结合片段并且包含六个兰尼单抗CDR的核苷酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含兰尼单抗的重链CDR 1-3(SEQ ID NO:20、18和21)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含兰尼单抗的轻链CDR 1-3(SEQ ID NO:14-16)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含贝伐珠单抗的重链CDR 1-3(SEQ ID NO:17-19)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含贝伐珠单抗的轻链CDR 1-3(SEQ ID NO:14-16)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含以下项的抗原结合片段：重链可变区，所述重链可变区包含兰尼单抗的重链CDR 1-3(SEQ ID NO:20、18和21)；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含兰尼单抗的轻链CDR 1-3(SEQ ID NO:14-16)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含以下项的抗原结合片段：重链可变区，所述重链可变区包含贝伐珠单抗的重链CDR 1-3(SEQ ID NO:17-19)；以及轻链可变区，所述轻链可变区包含贝伐珠单抗的轻链CDR 1-3(SEQ ID NO:14-16)。

在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3，其中轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3，其中轻链CDR1的第八位和第十一位氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQID NO.14)中的两个N)各自携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3，其中轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)未被乙酰化。在一个具体实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3，其中轻链CDR1的第八位和第十一位氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ ID NO.14)中的两个N)各自携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)未被乙酰化。在一个优选的实施方案中，本文所述的化学修饰或缺乏化学修饰(视情况而定)通过质谱法来确定。

在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的第九位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ IDNO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyroGlu)，重链CDR2的第三位氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含SEQ IDNO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQID NO.20)中的N)未被乙酰化。在一个具体实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的第九位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三位氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未被乙酰化。在一个优选的实施方案中，本文所述的化学修饰或缺乏化学修饰(视情况而定)通过质谱法来确定。

在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含以下项的抗原结合片段：轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3；以及重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且其中重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含以下项的抗原结合片段：轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3；以及重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中：(1)重链CDR1的第九位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三位氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)；并且(2)轻链CDR1的第八位和第十一位氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ ID NO.14)中的两个N)各自携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含以下项的抗原结合片段：轻链可变区，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3；以及重链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)未被乙酰化，并且其中重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未被乙酰化。在一个具体实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO.20的重链CDR1，其中：(1)重链CDR1的第九位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三位氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未被乙酰化；并且(2)轻链CDR1的第八位和第十一位氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ ID NO.14)中的两个N)各自携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)未被乙酰化。在一个优选的实施方案中，本文所述的化学修饰或缺乏化学修饰(视情况而定)通过质谱法来确定。

在某些方面，本文还提供了抗VEGF抗原结合片段，所述抗VEGF抗原结合片段包含：SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，以及编码此类抗原-VEGF抗原结合片段的转基因，其中轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQID NO.16)中的第二位Q)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中轻链CDR1的第八位和第十一位氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ ID NO.14)中的两个N)各自携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)未被乙酰化。在一个具体实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中轻链CDR1的第八位和第十一位氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ IDNO.14)中的两个N)各自携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)未被乙酰化。本文所提供的抗VEGF抗原结合片段和转基因可用于本文所述的根据本发明的任何方法。在一个优选的实施方案中，本文所述的化学修饰或缺乏化学修饰(视情况而定)通过质谱法来确定。

在某些方面，本文还提供了抗VEGF抗原结合片段，所述抗VEGF抗原结合片段包含：SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，以及编码此类抗原-VEGF抗原结合片段的转基因，其中重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的第九位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三位氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ IDNO.18)中的N)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyroGlu)，并且重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未被乙酰化。在一个具体实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的第九位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三位氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ IDNO.18)中的N)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyroGlu)，并且重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未被乙酰化。本文所提供的抗VEGF抗原结合片段和转基因可用于本文所述的根据本发明的任何方法。在一个优选的实施方案中，本文所述的化学修饰或缺乏化学修饰(视情况而定)通过质谱法来确定。

在某些方面，本文还提供了抗VEGF抗原结合片段，所述抗VEGF抗原结合片段包含：SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，以及编码此类抗原-VEGF抗原结合片段的转基因，其中重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中(1)重链CDR1的第九位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三位氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ IDNO.18)中的N)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyroGlu)，并且重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)；并且(2)轻链CDR1的第八位和第十一位氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ ID NO.14)中的两个N)各自携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.

16)中的第二位Q)不携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个具体实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未被乙酰化，并且轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)未被乙酰化。在一个具体实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18和21的重链CDR 1-3，其中(1)重链CDR1的第九位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三位氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N)携带以下化学修饰中的一种或多种：乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且重链CDR1的最后一位氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未被乙酰化；并且(2)轻链CDR1的第八位和第十一位氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ ID NO.14)中的两个N)各自携带以下化学修饰中的一种或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺和焦谷氨酸化(pyro Glu)，并且轻链CDR3的第二位氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二位Q)未被乙酰化。本文所提供的抗VEGF抗原结合片段和转基因可用于本文所述的根据本发明的任何方法。在一个优选的实施方案中，本文所述的化学修饰或缺乏化学修饰(视情况而定)通过质谱法来确定。

表1：示例性序列

4.5疾病

本文所提供的药物组合物或参考药物组合物(例如，第4.1节)可施用于被诊断患有nAMD(湿性AMD)、干性AMD、视网膜静脉阻塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、糖尿病性视网膜病变(DR)或Batten病的受试者。

在一些实施方案中，本文公开了通过经由脉络膜上注射(例如，经由诸如具有微针的微量注射器的脉络膜上药物递送装置)向受试者施用治疗有效量的药物组合物来治疗被诊断患有nAMD(湿性AMD)、干性AMD、视网膜静脉阻塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、糖尿病性视网膜病变(DR)或Batten的受试者的方法。

在一些实施方案中，经由脉络膜上施用向患者施用药物组合物，所述药物组合物含有约2.5×10¹¹GC/眼睛、约5×10¹¹GC/眼睛或约1.5×10¹²GC/眼睛的药物组合物的构建体II，所述药物组合物包含0.2mg/mL氯化钾，0.2mg/mL磷酸二氢钾，5.84mg/mL氯化钠，1.15mg/mL无水磷酸氢二钠，40.0mg/mL、4％重量/体积蔗糖和任选的表面活性剂。在一些实施方案中，患者患有糖尿病性视网膜病变。

在一些实施方案中，经由脉络膜上施用向患者施用药物组合物，所述药物组合物含有约2.5×10¹¹GC/眼睛、约5×10¹¹GC/眼睛或约1.5×10¹²GC/眼睛的药物组合物的构建体II，所述药物组合物包含10％重量/体积蔗糖。在一些实施方案中，患者患有糖尿病性视网膜病变。在一些实施方案中，药物组合物的张力/渗透压等于或大于240mOsm/kg。

在一些方面，本文公开了适合于治疗被诊断患有IVA型粘多糖病(MPS IVA)、I型粘多糖病(MPS I)、II型粘多糖病(MPS II)、家族性高胆固醇血症(FH)、纯合子家族性高胆固醇血症(HoFH)、冠状动脉疾病、脑血管疾病、杜氏肌营养不良症、肢带型肌营养不良症、贝克型肌营养不良症和散发性包涵体肌炎、或激肽释放酶相关疾病的受试者，或治疗所述受试者的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的药物组合物。在一些实施方案中，药物组合物施用于SCS中。

在一些实施方案中，本文所提供的药物组合物或参考药物组合物(例如，第4.1节)可施用于被诊断患有以下项的受试者：(1)Batten-CLN2，并且治疗产物是三肽基肽酶1(TPP1)；(2)1型尤塞氏病(Usher’s)，并且治疗产物是肌球蛋白VIIA(MYO7A)；(3)1型尤塞氏病，并且治疗产物是钙粘蛋白相关23(CDH23)；(4)2型尤塞氏病，并且治疗产物是原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；(5)2型尤塞氏病，并且治疗产物是Usherin(USH2A)；(6)3型尤塞氏病，并且治疗产物是Clarin 1(CLRN1)；(7)斯特格氏病(Stargardt’s)，并且治疗产物是ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；(8)斯特格氏病，并且治疗产物是ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；(9)红绿色盲，并且治疗产物是L视蛋白(OPN1LW)；(10)红绿色盲，并且治疗产物是M视蛋白(OPN1MW)；(11)蓝视锥全色盲，并且治疗产物是M视蛋白(OPN1MW)；(12)莱伯(Leber)先天性黑蒙症-1(LCA 1)，并且治疗产物是鸟苷酸环化酶2D，视网膜(GUCY2D)；(13)莱伯先天性黑蒙症-2(LCA 2)，并且治疗产物是维甲酸异构水解酶RPE65(RPE65)；(14)莱伯先天性黑蒙症-4(LCA 4)，并且治疗产物是芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；(15)莱伯先天性黑蒙症-7(LCA 7)，并且治疗产物是视锥-视杆同源盒(CRX)；(16)莱伯先天性黑蒙症-8(LCA 8)，并且治疗产物是碎屑细胞极性复合成分1(CRB1)；(17)莱伯先天性黑蒙症-9(LCA9)，并且治疗产物是烟酰胺核苷酸腺苷转移酶1(NMNAT1)；(18)莱伯先天性黑蒙症-10(LCA10)，并且治疗产物是中心体蛋白290(CEP290)；(19)莱伯先天性黑蒙症-11(LCA 11)，并且治疗产物是肌苷一磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；(20)莱伯先天性黑蒙症-15(LCA 15)，并且治疗产物是类Tubby蛋白1(TULP1)；(21)LHON，并且治疗产物是线粒体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；(22)LHON，并且治疗产物是线粒体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；(23)无脉络膜症，并且治疗产物是Rab护送蛋白1(CHM)；(24)X连锁视网膜劈裂症(XLRS)，并且治疗产物是视网膜劈裂蛋白(RS1)；(25)Bardet-Biedl综合征1，并且治疗产物是Bardet-Biedl综合征1(BBS1)；(26)Bardet-Biedl综合症6，并且治疗产物是McKusick-Kaufman综合症(MKKS)；(27)Bardet-Biedl综合征10，并且治疗产物是Bardet-Biedl综合征10(BBS10)；(28)视锥细胞营养不良症，并且治疗产物是鸟苷酸环化酶激活剂1A(GUCA1A)；(29)视神经萎缩，并且治疗产物是OPA1线粒体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；(30)视网膜色素变性1，并且治疗产物是RP1轴丝微管相关(RP1)；(31)视网膜色素变性2，并且治疗产物是ARL3 GTP酶的RP2激活剂(RP2)；(32)视网膜色素变性7，并且治疗产物是外周蛋白2(PRPH2)；(33)视网膜色素变性11，并且治疗产物是前mRNA加工因子31(PRPF31)；(34)视网膜色素变性13，并且治疗产物是前mRNA加工因子8(PRPF8)；(35)视网膜色素变性37，并且治疗产物是核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；(36)视网膜色素变性38，并且治疗产物是MER原癌基因，酪氨酸激酶(MERTK)；(37)视网膜色素变性40，并且治疗产物是磷酸二酯酶6B(PDE6B)；(38)视网膜色素变性41，并且治疗产物是Prominin 1(PROM1)；(39)视网膜色素变性56，并且治疗产物是间光感受器基质蛋白聚糖2(IMPG2)；(40)视网膜色素变性62，并且治疗产物是雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；(41)视网膜色素变性80，并且治疗产物是细胞纤毛内转运蛋白140(IFT140)；或(42)贝斯特病(Best disease)，并且治疗产物是斑萎蛋白1(BEST1)。

4.6测定

技术人员可使用如本文所述的测定和/或本领域已知的技术来研究本文所述的组合物和方法，例如以测试本文所提供的制剂。如第5节中所详述，本文还提供了以下测定。

4.6.1超声B扫描

高频超声(U/S)探头(UBM Plus；Accutome,Malvern,PA,USA)可用于通过在注射粘度不等的不同体积(例如，从25μL到500μL，从低粘度到高粘度不等)后生成离体动物眼睛中的SCS的2D横截面图像来确定SCS厚度。U/S探头盖(Clearscan,Eye-Surgical-Instruments,Plymouth,MN)可附接到UBM Plus以有助于U/S图像采集。U/S探头可用于获取眼睛周围的矢状视图(例如，八个矢状视图)。可对U/S B扫描进行后处理，以找出从外巩膜到在例如巩膜突后方1、5和9mm处的内视网膜的厚度。可计算每只眼睛的平均值、中值和标准偏差。

4.6.2基于液体体积而测量SCS厚度

3D冷冻重建成像可用于测量SCS厚度。将注射了例如含有红色荧光颗粒的25μL至500μL的动物眼睛在注射后冷冻几分钟(例如，3-5分钟)并且准备好进行冷冻切片。使用数字相机，通过用低温恒温器对样品进行切片，每300μm就可获得组织冷冻块的一张红色荧光图像。分析由红色荧光图像组成的图像堆栈以确定SCS厚度。

4.6.3基于制剂而测量SCS厚度

U/S B扫描可用于确定将粘度不等的药物组合物注射到动物的SCS中之后的SCS厚度。高频超声B扫描可用于确定SCS塌陷率。可获取平坦部上的八个矢状视图：(a)鼻上，注射部位上方；(b)上位；(c)鼻部；(d)颞上；(e)颞部；(f)颞下；(g)下位；以及(h)鼻下。

可对U/S视图进行离线后处理以测量SCS厚度。U/S探头的最小轴向分辨率为15μm。对于每个U/S视图，可创建在巩膜突后方5mm处并垂直于巩膜的线段。线可开始于巩膜的外表面，并且结束于视网膜的内表面。巩膜和脉络膜视网膜(chorioretina)可包括在测量中以确保线是垂直的。然后通过从测量到的线长度中减去组织厚度来计算SCS厚度。进行曲线拟合以确定SCS塌陷率。

U/S B扫描可用于确定随时间推移在多个位置处的SCS厚度，并且可计算SCS塌陷率。SCS中的注射荧光物质的大致清除率可通过随时间推移在体内动物眼睛中拍摄荧光眼底图像来找到，直到不再检测到荧光。

4.6.4眼底成像的SCS清除动力学

为了研究AAV聚集对SCS中的运动的影响，可将AAV聚集水平不等且含有荧光素的不同药物组合物注射到SCS中。通过随时间推移在体内动物眼睛中拍摄荧光眼下图像，可找到从SCS中的注射荧光物质的大致清除率或清除时间。在一些情况下，可通过确定总清除时间和清除时间常数(t_清除)来确定清除率，所述清除时间常数使用从总荧光信号随时间推移的归一化浓度得出的曲线拟合来计算。可在每个成像会话之前施用托吡卡胺和去氧肾上腺素(Akorn,Lake Forest,IL)的局部滴眼液来使眼睛扩张。可使用具有130°镜头附件和内置荧光素血管造影模块的RetCam II(Clarity Medical Systems,Pleasanton,CA)来获取图像。在将RetCam II的蓝光输出设置为例如0.0009、1.6和2.4W/m²的情况下，可拍摄多个图像。为了捕获眼球的整个内表面，可捕获九个图像：中心、鼻上、上位、颞上、颞部、颞下、下位、鼻下和鼻部图像。这允许成像到远侧外围。成像可紧接在注射之后进行，在注射后1小时，在12小时中每3小时，以及每两天就进行成像。总清除时间针对注射的所有眼睛进行确定，所述总清除时间可被定义为注射后通过目视观察无法检测到荧光的第一时间点。异硫氰酸荧光素缀合的AAV(FITC-AAV)或FITC缀合的AAV衣壳蛋白特异性单克隆抗体可用于类似的实验中以跟踪AAV颗粒在SCS中的运动和清除。荧光标记AAV的方法是本领域已知的(Shi,等人Sci.Adv.2020；6:eaaz3621；以及Tsui,T.Y.,等人Hepatology 42,335–342(2005)。识别许多AAV血清型的抗体(FITC缀合)是可商购获得的。

4.6.5铺片以表征2D周向扩散

将含有荧光素或荧光标记的AAV的本公开的药物组合物注射到SCS中。在SCS注射和冷冻之后，可使眼睛准备好来评定颗粒和荧光素的2D扩散。将冷冻的眼睛从角膜缘切开到后极以产生等距的巩膜瓣。将所得的巩膜瓣张开，并且取出冷冻的玻璃体液、晶状体和房水。

可使用具有100mm镜头(Canon)的数字SLR相机(Canon 60D,Canon,Melville,N.Y.)来获取明场和荧光图像。相机参数保持不变。为了获取荧光素扩散区，可将绿色光带通滤波器(520±10nm；Edmunds Optics,Barrington,N.J.)放置于镜头上，并且可通过灯以多色LED灯(S Series RGB MR16/E26.HitLights,Baton Rouge,La.)的紫色设置来照亮样品。为了使红色荧光颗粒的位置可视化，可将红色滤光片(610±10nm；Edmunds Optics)放置于镜头上，并且可用切换到绿光的同一盏灯来照亮样品。可使用ImageJ(NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.)针对每只眼睛计算高于阈值的绿色和红色荧光区。可基于背景信号的目视检查而手动地设置阈值。

4.6.6眼压测量

压力测量系统可用于测量在SCS注射后SCS中的压力。最终可通过皮下注射氯胺酮/甲苯噻嗪混合物来对动物进行麻醉。在SCS注射(N＝4)之后，可每隔几分钟测量SCS中的压力。监测压力，直到它们达到其在注射之前的原始基线值(即，约15mmHg)。在测量之后，通过静脉内注射致死剂量的戊巴比妥来对动物实施安乐死。可在动物尸体中进行第二组SCS注射。在尸检测量中，仅在进行注射的组织空间(即，SCS)中测量压力。

4.6.7温度胁迫测定

可在37℃下在4天内以1.0×10¹²GC/mL进行温度胁迫发展稳定性研究，以评估本文所提供的制剂的相对稳定性。

可用于评定稳定性的测定包括但不限于体外相对效力(IVRP)、载体基因组浓度(通过ddPCR测出VGC)、通过染料荧光测出的游离DNA、动态光散射、外观和pH。可实施12个月的长期发展稳定性研究，以证明本文所提供的制剂的体外相对效力以及在-80℃(≤-60℃)和-20℃(-25℃至-15℃)下的其他性质的维持。

4.6.8体外相对效力(IVRP)测定

为了使ddPCR GC滴度与基因表达相关联，可通过转导HEK293细胞并对细胞培养上清液测定抗VEGF Fab蛋白水平来进行体外生物测定。将HEK293细胞铺涂到三个聚-D-赖氨酸涂覆的96孔组织培养板上过夜。然后用野生型人Ad5病毒预感染细胞，之后用三种独立制备的AAV载体参考标准品和测试品的连续稀释液进行转导，其中将每种制备物在不同位置处铺涂到单独的板上。在转导后的第三天，从板中收集细胞培养基并且经由ELISA测量VEGF结合Fab蛋白水平。对于ELISA，封闭涂覆有VEGF的96孔ELISA板，并且然后用所收集的细胞培养基进行孵育以捕获由HEK293细胞产生的抗VEGF Fab。使用Fab特异性抗人IgG抗体来检测VEGF捕获的Fab蛋白。在洗涤之后，添加辣根过氧化物酶(HRP)底物溶液，允许发展，用终止缓冲液终止，并且在读板器中读取板。相对于对数稀释度绘制HRP产物的吸光度或OD，并且相对于同一板上的参考标准品计算每种测试品的相对效力，这用经过平行度相似性测试后的四参数逻辑回归模型，使用公式：EC50参考÷EC50测试品进行拟合。测试品的效力报告为参考标准品效力的百分比，这根据三个板的加权平均值计算。

为了使ddPCR GC滴度与功能性基因表达相关联，可通过转导HEK293细胞并测定转基因(例如，酶)活性来进行体外生物测定。将HEK293细胞铺涂到三个96孔组织培养板上过夜。然后用野生型人腺病毒血清型5病毒预感染细胞，之后用三种独立制备的酶参考标准品和测试品的连续稀释液进行转导，其中将每种制备物在不同位置处铺涂到单独的板上。在转导后的第二天，裂解细胞，将其用低pH进行处理以激活酶，并且使用肽底物测定酶活性，所述肽底物在通过转基因(酶)裂解后产生增加的荧光信号。相对于对数稀释度绘制荧光或RFU，并且相对于同一板上的参考标准品计算每种测试品的相对效力，这用经过平行度相似性测试后的四参数逻辑回归模型，使用公式：EC50参考÷EC50测试品进行拟合。测试品的效力报告为参考标准品效力的百分比，这根据三个板的加权平均值计算。

4.6.9载体基因组浓度测定

也可使用ddPCR来评估载体基因组浓度(GC)。在注射后的不同时间点，将若干小鼠处死，并且对眼组织进行总DNA提取和ddPCR测定以获得载体拷贝数。在连续时间点在各个组织切片中鉴定的每克组织的载体基因组(转基因)的拷贝将显示出AAV在眼睛中的扩散。

用DNeasy Blood&Tissue Kit从所收集的眼组织切片中提取总DNA，并且使用Nanodrop分光光度计重新测量DNA浓度。为了确定组织切片中的载体拷贝数，用NaicaCrystal数字PCR系统(Stilla技术)进行数字PCR。在此处应用了双色复用系统来同时测量转基因AAV和内源对照基因。简而言之，可用FAM(6-羧基荧光素)染料标记转基因探针，同时可用VIC荧光染料标记内源对照基因。特定组织切片中的每个二倍体细胞的递送载体的拷贝数被计算为：(载体拷贝数)/(内源对照)×2。诸如RPE细胞的特定细胞类型中的载体拷贝可显示出对视网膜的持续递送。

4.6.10使用染料荧光测定进行游离DNA分析

游离DNA可通过结合到DNA的Gold核酸凝胶染色剂(‘SYBR Gold染料’)的荧光来测定。可使用微板读数器测量荧光并且用DNA标准品进行量化。可报告以ng/μL为单位的结果。

可使用两种方法来估计总DNA，以便将测量到的以ng/μL为单位的游离DNA转换为游离DNA的百分比。在第一种方法中，通过紫外-可见光谱法测定的GC/mL(OD)用于估计样品中的总DNA，其中M是DNA的分子量，并且1E6是单位转换因子：

估计的总DNA(ng/μL)＝1E6×GC/mL(OD)×M(g/mol)/6.02E23

在第二种方法中，可将样品与0.05％泊洛沙姆188一起加热到85℃，持续20分钟，并且通过SYBR Gold染料测定在加热样品中测量到的实际DNA可用作总DNA。因此，这假设了所有DNA都被回收和量化。关于趋势，可使用原始ng/μL，或者可使用通过一致方法测定的百分比。

4.6.11尺寸排阻色谱法(SEC)

SEC可在具有25mm路径长度流通池的Waters Acquity Arc Equipment ID 0447(C3PO)上使用Sepax SRT SEC-1000Peek色谱柱(PN 215950P-4630,SN:8A11982,LN:BT090,5μm 1000A,4.6x300mm)来进行。流动相可以是例如20mM磷酸钠、300mM NaCl、0.005％泊洛沙姆188，pH 6.5，其中0.35mL/min的流速持续20分钟，其中色谱柱处于环境温度。可以2点/秒采样率进行数据收集，并且25点下1.2nm分辨率表示在214、260和280nm处平滑。理想的目标负载可为1.5E11 GC。可对样品注射50μL，约1/3的理想目标或注射5μL。

4.6.12动态光散射(DLS)测定

可在Wyatt DynaProIII上使用Corning 3540 384孔板以30μL样品体积进行动态光散射(DLS)。每次重复可各自在10s内收集十次采集，并且每个样品可有三次重复测量。溶剂可根据样品中使用的溶剂进行设置，例如对于含AAV载体的dPBS为‘PBS’。不满足数据质量标准(基线、SOS、噪声、拟合)的结果可被‘标记’并且排除在分析之外。

4.6.13粘度测量

可使用本领域已知的方法来测量粘度，例如2019年出版的美国药典(USP)及其先前版本(以引用的方式整体并入本文)中提供的方法。使用毛细管粘度计，使用USP<911>中描述的方法来测量低剪切粘度。

使用锥板旋转流变仪来确定粘度与剪切速率的关系。美国药典(USP)USP<1911>中描述了流变测量，并且USP<912>中描述了旋转粘度测定法。用AR-G2流变仪收集旋转流变粘度测量结果，所述流变仪配备有Peltier温度控制板和60mm 1°角铝锥附件(TAInstruments,New Castle,DE)。在从<0.3s^-1开始斜升到高达5000s^-1的范围内进行粘度与剪切速率扫描，其中每十进位收集5个点。在20℃下收集得出粘度与剪切速率的关系。根据数据外推在10,000和20,000s^-1下的粘度。在一些情况下，药物组合物或参考药物组合物的粘度可在零、0.1s^-1、1s^-1、1000s^-1、5000s^-1、10,000s^-1、20,000s^-1或超过20,000s^-1下测量。

4.6.14病毒感染性测定

可使用如在等人Molecular Therapy Methods&Clinical Development(2018)，第10卷，第223页至第236页(以引用的方式整体并入本文)中描述的TCID₅₀感染滴度测定。可使用如在2018年10月15日提交的临时申请62/745859中描述的相对感染性测定。

4.6.15差示扫描荧光法

蛋白质和由蛋白质构成的病毒衣壳的热稳定性可通过差示扫描荧光法(DSF)来确定。DSF测量蛋白质的固有色氨酸和酪氨酸释放随温度的变化。Trp和Tyr残基的局部环境随着蛋白质展开而变化，从而导致荧光大幅增加。50％的蛋白质展开时的温度被定义为‘熔化’温度(T_m)。USP<853>和USP<1853>中描述了荧光光谱法。

DSF数据使用Promethius NTPlex Nano DSF仪器(NanoTemper technologies,Munich,Germany)来收集。在20℃下将样品加载到毛细管池中，并且以1℃/min的速率使温度斜升到95℃。使用350nm(展开)和330nm(展开)下释放的信号输出比来确定T_m。

4.6.16注射压力测量

使用流筛和流体传感器(Viscotec America,Kennesaw,GA)或具有一次性压力传感器SN-000的PressureMAT-DPG(PendoTECH,Princeton,NJ)来测量注射压力。

手动地，或使用Legato-100针筒泵(Kd Scientific,Holliston,MA)来注射到空气中以施加一致的流速。对于注射到摘出的猪眼中，将眼睛安装在Mandell眼座(Mastel)上，同时施加吸力以调节眼睛的眼压。

4.6.17参考组合物

本文所提供的组合物的粘度可通过将所述组合物与参考药物组合物进行比较来评估。在一些实施方案中，参考药物组合物是包含浓度与在磷酸盐缓冲盐水中评估组合物相同的相同重组AAV的药物组合物。在一些实施方案中，参考药物组合物是包含浓度与在含0.001％泊洛沙姆188，pH 7.4的杜氏磷酸盐缓冲盐水中评估组合物相同的相同重组AAV的药物组合物。在一些实施方案中，参考药物组合物是包含浓度与在具有4％蔗糖和0.001％泊洛沙姆188，pH 7.4的杜氏磷酸盐缓冲盐水中评估组合物相同的相同的重组AAV的药物组合物。

5.实施例

本节(即，第5节)中的实施例通过举例说明的方式而非限制的方式提供。

5.1实施例1：用于脉络膜上递送的粘度制剂的优化

在此实验中，对施用于脉络膜上腔的含有AAV8-抗VEGF-ab(例如，AAV8-抗VEGFfab)的溶液进行评估。脉络膜上腔(SCS)是巩膜与脉络膜之间在注射药物溶液后会扩大的区域(Habot-Wilner,2019)。随着注射溶液被生理过程清除，SCS空间恢复到其注射前大小。药物溶液在SCS内扩散并且被吸收到相邻组织中。脉络膜中的毛细血管可透过低分子量渗透剂。将具有不同粘度水平的不同溶液注射在脉络膜上腔中，以基于溶液在SCS中的停留时间而评估功效。

在此实验中，通过将AAV配制在具有高粘度(当注射时在较低粘度下剪切稀化)的最终制剂中来实现较长的停留时间。与较低粘度制剂相比，当使用高粘度制剂(在存在剪切稀化的情况下)将AAV注射在SCS中时，集中性有所增加并且清除时间有所增加。这种集中性和清除时间的增加表明功效增强。在注射时导致较低粘度的剪切稀化行为允许较低的注射压力与以下项相容：针大小(例如，29或30号针)、标准聚合物针筒压力额定值限制和适于由医生注射在人眼中的足够低的压力。

5.1.1初始设计参数概述：

粘性制剂到脉络膜上腔的递送具有其他施用途径所没有的设计参数和限制。对眼睛注射是敏感的注射程序，因为眼睛是重要的器官。当将药物注射在眼睛中时，为了避免疼痛、组织损伤或炎症，针号不能过大。例如，在一些情况下，可选择30号，而在其他情况下，选择29号。相比之下，18或21号针可用于外周静脉常规注射，并且皮下施用可使用29至27号针。这些区中的组织损伤或暂时性炎症不如眼睛中的组织损伤或暂时性炎症严重。因此，通过其他施用途径注射粘性制剂较少受到针号的限制。

如Hagen-Poiseuille方程所示，注射压力与针内径(ID)的4次方成反比，并且与制剂粘度成正比。Hagen-Poiseuille方程表示为ΔP＝(8μLQ)/(πR⁴)。压力取决于粘度(μ)、针长度(L)、体积流速(Q)和针的内半径(R)。因此，对于脉络膜上注射，针号有严格的限制。在不考虑其他因素的情况下，合乎逻辑的方法是最小化制剂粘度以通过注射递送到脉络膜上腔。然而，与这方面相反，本公开期望具有极高粘度的制剂以便使所递送的剂量较长时间段地集中于脉络膜上腔。这些因素直接相反的事实导致特别需要一种剪切稀化制剂以用于脉络膜上递送，同时最小化由注射引起的潜在炎症。

在此实验中，针对脉络膜上注射测试了不同制剂，所述不同制剂具有可接受的粘度并且适合于使用可通常或合理获得的针筒部件进行注射(即基于针筒压力额定值限制的注射压力限值或针号偏好)。在施加了针号限制的情况下，为了在支持注射的低粘度与支持集中性的高粘度之间取得平衡，存在相互矛盾的设计参数。在一些情况下，期望的针大小可以是30号或29号大小。针号大小会影响注射期间的压力。在一些情况下，注射压力符合行业标准部件和部件规范(例如，ISO)。表2总结了设计参数。

表2：设计参数

5.2实施例2：溶液在脉络膜上腔(SCS)中的分布取决于溶液的粘度

在此实验中，将具有不同粘度的溶液注射在离体眼睛中，以分析流体粘度对溶液在SCS中的集中性和扩散的影响。将三种不同的溶液注射在离体的不同眼睛中：1)含有水和蓝色染料的溶液；2)含有1％中等粘度等级羧甲基纤维素(CMC)和蓝色染料的溶液；以及3)含有1％中等粘度CMC和荧光染料的溶液。在还含有0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖和0.001％(0.01mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4的溶液中制备CMC溶液。在注射后的不同时间点目视分析眼睛。此实验显示，流体粘度对溶液在SCS中的扩散具有显著的影响。例如，与含有1％CMC的溶液相比，含有水和蓝色染料的溶液实现了更大的周向扩散(图1A至图1C)。与含有水的溶液相比，当用含有1％CMC的溶液注射眼睛时，蓝色染料和荧光染料在眼睛中(在SCS中)明显更为集中(图1A至图1C)。此实验显示，当将具有期望的流体粘度的溶液注射在SCS中时，感兴趣的剂(例如，AAV、药物或组合物)可以最小扩散集中在SCS中。

5.3实施例3：粘度、注射速率和针号对注射压力的影响

在此实验中，将具有不同粘度的不同溶液注射在若干眼睛的SCS中。在还含有0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖和0.001％(0.01mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4的‘基底’溶液中制备羟丙甲纤维素溶液。将额外的赋形剂溶解在此溶液中。简而言之，将含有水的溶液和含有2％羟丙基甲基纤维素(羟丙甲纤维素)的溶液单独注射在不同的眼睛中。SCS中的注射可通过使用例如SCS微量注射器^TM(Clearside Biomedical,Alpharetta,GA)来进行。此实验显示，将溶液注射在SCS中所需的压力量受到溶液粘度的影响。例如，已经发现，将水溶液(粘度为约1cP)注射在SCS中所需的压力量为约25PSI，而注射含有2％羟丙甲纤维素的溶液(粘度为约4000cP)所需的压力量的范围为约25PSI至约40PSI(图2A至图2B)。这个压力远低于基于牛顿流体行为(恒定粘度对剪切速率)而预测的压力。此实验还显示，对于极粘的溶液，剪切稀化是优选的。对于剪切稀化流体，粘度在低剪切(例如，静止或极低流速)下极高，并且随着剪切速率增加或当流速增加时降低。注射期间在剪切速率下的较低粘度将通过针注射剂量所需的压力减小到与期望的针和针筒相容的范围。在注射之后，流体的粘度要高得多(因为流体不再移动)，从而减少溶液的扩散并且保持所注射的剂量集中较长的时间段。

这种设计空间研究还分析了注射速率对将不同溶液注射在SCS中所需的计算的压力量的影响。对于这种设计空间可行性计算，针对经由具有160μm内径(ID)的30号(GA)针将不同粘度的溶液注射在SCS中计算了4秒、6秒、8秒或10秒的注射速率。关于流经针期间压降的Hagen-Poiseuille方程由ΔP＝(8μLQ)/(πR4)给出。压力取决于粘度(μ)、针长度(L)、体积流速(Q)和针的内半径(R)。最慢的注射速率(即，10秒)产生了最小量的计算压力(图3)。例如，图3中的数据显示，以10秒速率注射的粘度为10mPas的溶液产生的压力为约12PSI，但是当以4秒速率注射时为约28PSI。这个计算显示，随着溶液粘度增加，压力甚至更易受到注射速率的影响(图3)。例如，粘度为30mPas的溶液经计算在10秒注射速率期间产生的压力为约36PSI，并且在4秒注射速率期间为约96PSI(图3)。在一些情况下，注射时间的范围在5s至30s之间不等。在一些情况下，使用10s至15s之间的注射时间来经由脉络膜上施用注射溶液。剪切稀化流体的粘度取决于剪切速率因此，预测的注射压力直接取决于以流速表示的注射速度，并且还取决于流体的剪切稀化粘度行为。可使用计算流经针的流体的平均剪切速率(Jaspe,J.；Hagen,S.J.Biophys J 2006,91,3415–3424)。在图3所示的实例中，剪切速率的范围为10s注射的约16,500s^-1至4s注射的41,000s^-1。对于20s注射，剪切速率为约8000s^-1，而对于30s注射，剪切速率为约5000s^-1。

使用Hagen-Poiseuille方程和平均剪切速率的方程，可计算出优选的制剂粘度特征和注射期间特定压力限制的范围。压力的变化可基于针号而评估(图4A至图4C和图5)。使用三种不同大小的针号(例如，30号针、30号STW针和29号STW针)来注射含有不同粘度水平的溶液。此实验显示，针号会影响将溶液注射在SCS中所需的压力。Hagen-Poiseuille方程用于计算30号和29号针(ISO 9626:2016:常规壁，RW；薄壁，TW；极薄壁，ETW；以及超薄壁，UTW，以及在设计中或在开发研究中使用的附加ClearSide(CLSD)针)的随粘度变化的以每平方英寸磅数(PSI)为单位的压降。转换因子PSI＝Pa/6894.76用于转换为PSI。包括安装长度的总体针长度为14mm，注射体积为0.1mL，注射时间以10s建模(Q＝0.1mL/10＝0.01mL/s)，并且所考虑的针内径为：30Ga/29Ga(133μm ID)、30Ga TW(165μmID)、30Ga ETW/29Ga TW(190μm ID)、30Ga UTW/29Ga ETW(240μm ID)、ClearSide(CLSD)品牌30Ga针(160μm ID)、CLSD 30Ga ETW(220μm ID)、CLSD 29Ga ETW(240μm ID)。

图4A至图4C示出了压力对粘度的计算，并且表3示出了针对优选值(在一些情况下)、目标值和极限值的列表结果。在一些情况下，可通过使用较大的针或较高压力的针筒来扩大粘度范围。

基于计算，在考虑了注射剪切速率下的剪切稀化的情况下，在室温下对于160μmID针的优选(在一些情况下)制剂粘度为34mPas。对于160μm和220μm ID针的情况，可接受的粘度分别可高达103mPas和362mPas，以进行较慢(30s)或压力较高(65PSI)的注射。在考虑了注射剪切速率下的剪切稀化的情况下，在室温下计算出可接受的范围为103mPas、121mPas和高达362mPas(cP)。这是基于当使用CLSD 30Ga(160μm ID)时针高达43PSI的优选注射压力目标和10s注射。可接受的范围包括使用CLSD 30Ga ETW(220μm ID)针进行注射的注射压力目标为高达43PSI的压力目标和10s注射。替代地，当使用CLSD 30Ga(160μm ID)针或CLSD 30Ga ETW(220μmID)针时，注射压力目标高达65PSI，或者注射压力目标为43PSI，持续30s注射。在一些情况下，优选的针是CLSD 30Ga(160μm ID针)或CLSD 30Ga ETW(220μmID针)。其他针也是可能的选择，并且一些针可能会在注射剪切速率值下产生更宽泛的粘度(例如，在10s注射内，对于43PSI高达约175mPas，并且对于65PSI高达约250mPas)。

表3：基于注射压力的粘度设计空间

在160μm针下对于10s注射和43PSI压力的优选粘度值：优选设计是使用ID为160μm的针进行10s注射。对于使用160μm ID针进行的10s注射，在注射剪切速率(经计算为约16,000s-1)下产生43PSI的压力的优选粘度为约34mPas。

在220μm针下对于10s注射和43PSI压力的可接受的粘度值：对于使用220μm ID针进行的10s注射，在注射剪切速率(经计算为约6,300s-1)下产生43PSI的压力的可接受的粘度为约121mPas。

对于30s注射和43PSI压力的可接受的粘度值范围：高达30s的较长注射时间在可接受的范围内。对于使用160μm ID针进行的30s注射，在注射剪切速率(经计算为约5000s^-1)下产生43PSI的压力的可接受的粘度为约103mPas。对于使用220μm ID针进行的30s注射，在注射剪切速率(经计算为约2100s^-1)下产生43PSI的压力的可接受的粘度为约362mPas。

对于10s注射和65PSI压力的可接受的粘度值范围：高达65PSI的较高压力在可接受的范围内。对于使用160μm ID针进行的10s注射，在注射剪切速率(经计算为约16,000s^-1)下产生65PSI的压力的可接受的粘度为约51mPas。对于使用220μm ID针进行的10s注射，在注射剪切速率(经计算为约6,300s^-1)下产生65PSI的压力的可接受的粘度为约183mPas。

此外，Hagen-Poiseuille方程用于计算30号和29号针的随粘度变化的以每平方英寸磅数(PSI)为单位的压降。较宽直径的针(例如，29号STW)使得SCS注射所需的压力较低。随着流体粘度增加，针号对压力的影响甚至更为显著(图5)。例如，当使用30号针时，粘度为约30mPas的流体产生的压力为约48PSI，而当分别使用30号STW和29号针时，对于粘度为100mPas的流体或粘度为150mPas的流体观察到48PSI压力(这分别对应于3.5倍和5倍的粘度)(图5)。因此，较大内径的针号显著降低了所得的压力。

5.4实施例4：对具有各种赋形剂的若干溶液筛查其在增加制剂粘度方面的适合性

对于此实验中，分析了粘度不等的不同溶液。在还含有0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖和0.001％(0.01mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4的‘基底’溶液中制备溶液。将额外的粘度调节赋形剂溶解在此溶液中。表4示出了使用毛细管粘度计在低剪切下测量的粘度、注入空气中的注射压力和注入摘出的猪眼中的注射压力。在此实验期间，PEG3350、葡聚糖40k、PEG12000的低剪切粘度被认为太低而无法潜在地帮助提高脉络膜上腔中的集中性，因此被认为是不合适的。另外，已知PEG在较高浓度下会使AAV沉淀，因此，例如，PEG12000是不合适的。基于粘度和压力行为，聚乙烯吡咯烷酮似乎没有充分地剪切稀化。对使用聚乙烯吡咯烷酮的研究表明，它主要用作口服递送的赋形剂，并且作为胃肠外赋形剂可能存在安全问题，因此也被排除在考虑之外。聚乙烯醇非常难以溶解，并且有起泡和冒泡的迹象，因此基于制造可行性被排除在外。进一步研究和分析了多糖赋形剂(CMC、羟丙甲纤维素、羟乙基淀粉)以及泊洛沙姆407的差异。

表4：测量的粘度和注入空气或摘出的猪眼中的注射压力以进行赋形剂增加粘度方面的筛查

NT＝未测试

5.5实施例5：分析具有各种粘度的若干溶液的扩散、游离DNA和AAV稳定性

基于从具有不同粘度的六种溶液获得的数据而分析扩散数据、游离DNA的百分比和直径。对照溶液是含蔗糖的DPBS。其他五种溶液是0.5％中等粘度羧甲基纤维素(CMC)(2％＝400-800cP)、0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)、0.2％HPMC、2％羟乙基纤维素(HES)和1％低粘度CMC。简而言之，AAV(例如，复制缺陷型腺相关病毒载体8(AAV8)，其携带可溶性抗VEGF Fab蛋白的编码序列)存在于六种溶液之一中。图6示出了针对在起始日(T0)和在四天后在37℃下取出的六种溶液中的每一种获得的扩散数据。此实验显示，扩散数据在初始测量(T0)与四天后的测量之间是可比的(图6)。此实验还证实了扩散系数取决于溶剂的粘度。图7示出了在T0期间获得以及在四天后在37℃下获得的游离DNA的百分比。图8示出了DLS热变温(DLS-熔化)表观直径，其显示出在约63℃下出现小的峰值，随后在约70℃下出现了较大规模的熔化活动，这表明了AAV稳定性。HPMC在55℃下形成凝胶(图8)。综合起来，数据表明CMC和HES溶液与AAV相容。

图9示出了具有不同粘度值的溶液的差示扫描荧光法热变温数据。从上到下(S-0C0V至S-0C12)，溶液包括含蔗糖的DPBS(对照)、0.5％中等粘度等级羧甲基纤维素(CMC)(2％＝400-800cP(或mPas))、0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)、0.2％HPMC、2％羟乙基纤维素(HES)和1％低粘度等级CMC(2％H₂O 25℃＝10-50cP)、15％泊洛沙姆407和0.5％高粘度等级羧甲基纤维素(1％H₂O,25℃＝1500-3000cP)。上图：原始熔化曲线信号。中间图：鉴定峰值的数据导数。下图：指示聚集或凝胶形成的光散射数据。对于两种羟丙甲纤维素制剂，在约55℃下观察到由于混浊凝胶形成所致的光散射的增加。由上图中的竖直线和中间图中的峰值所示的熔化温度起点和中点对于所有制剂而言是相似的，从而证明衣壳在不同制剂中具有相似的热稳定性。表5中总结了结果。

表5：如通过差示扫描荧光法熔化温度所测量的AAV在不同粘性制剂中的稳定性的总结

针对AAV的耐受性/安全性、稳定性和其他递送因素的实验使用具有不同粘度的各种溶液(诸如此实验中呈现的那些)来进行。对于含有蔗糖的溶液和本文所公开的大多数溶液都没有产生阻碍。然而，PEG12000溶液会引起沉淀(引起AAV的不稳定)，聚乙烯吡咯烷酮溶液会产生高注射压力，很有可能是因为它无法剪切稀化或剪切稀化行为有限，而聚乙烯醇溶液可能难以溶解。

5.6实施例6：先导候选制剂的注射压力和流变学测量

图10中示出了1％高粘度等级羧甲基纤维素制剂的粘度与剪切速率的关系。粘度在约1s^-1剪切速率下大于2,000mPas(2Pas)，并且在5,000s^-1下降低至34mPas的测量值，并且外推到在10,000s^-1剪切速率下低至约24mPas。这出现了粘度65倍的降低，如果将1s^-1至5000s^-1的剪切速率下的粘度进行比较的话。使用Hagen-Poiseuille方程计算，或读取图3中的计算数据图，这种剪切稀化行为允许用30Ga针(160μm ID)以40与30PSI之间的压力注射1％高粘度等级制剂(如果注射持续8至10s的话)。这完全在注射压力的可接受的范围内，同时允许制剂在注射后具有极高粘度。对于ID为220μm的30Ga ETW针，10s注射的平均剪切速率为约10,000s^-1，20s注射为约5000s^-1。如先前所描述，在注射剪切速率下，优选的(在一些情况下)最大粘度为34mPas(使用160μm ID针)或高达121mPas(使用220μm ID针)。

图11中示出了将中等粘度等级羧甲基纤维素制剂注入摘出的猪眼中的注射压力。图12示出了将高粘度等级羧甲基纤维素制剂注入摘出的猪眼中的注射压力。两种制剂的注射压力都不超过43PSI。基于图11中的数据的外推，使用图4A至图4C中压降的计算和图10中的粘度数据，在1％水平的高粘度等级羧甲基纤维素制剂对于期望的制剂特性来说似乎是合适的。图13示出了可如何以无菌方式制造1％高粘度等级羧甲基纤维素制剂。例如，可制备1.11％溶液，通过高压釜灭菌(因为粘性溶液的过滤是一项挑战)，然后以9:1的比率掺入配制的AAV中间体，以实现最终浓度为1％的羧甲基纤维素。实验室研究表明在灭菌程序期间可能会发生一些轻微的水损失(约2％至4％损失)，为了考虑到这一点，可任选地添加水。

5.7实施例7：将基因疗法施用于患有新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)的受试者的脉络膜上腔中

5.7.1研究概述：

此实施例涉及对患有新生血管性(湿性)年龄相关性黄斑变性(nAMD)的患者的基因疗法治疗。在此实施例中，使用具有不同粘度值(从低粘度到极高粘度不等)的不同溶液将构建体II或携带可溶性抗VEGF Fab蛋白的编码序列的复制缺陷型腺相关病毒载体8(AAV8)施用于患有nAMD的患者。基因疗法治疗的目标是减慢或遏制视网膜变性的进展，并且通过最小的干预/微创程序来减慢或防止视力丧失。当前的抗VEGF疗法已经显著改变了湿性AMD的治疗前景，由于它们能够阻碍大多数患者视力丧失的进展，因此成为了护理标准。然而，这些疗法需要终生眼内注射，通常以每四周至12周的频率进行重复，以维持功效。由于治疗负担，随着时间的推移，治疗频率降低的情况下，患者往往会经历视力的下降。施用于脉络膜上腔中的基因疗法正被开发为湿性AMD或任何其他眼病的潜在一次性治疗。

研究详述：本剂量递增研究被设计成评估构建体II或AAV8-抗VEGF-ab基因疗法在患有nAMD的受试者中的功效、安全性和耐受性。功效是研究的主要焦点。在整个研究中，对受试者评估了构建体II或AAV8-抗VEGF-ab的安全性和耐受性。满足纳入/排除标准的大约40名受试者被随机地分入两个剂量组之一。一些受试者接受兰尼单抗作为对照治疗，一些接受经由一次脉络膜上腔(SCS)注射递送的构建体II或AAV8-抗VEGF-ab，并且一些接受经由两次脉络膜上腔(SCS)注射递送的构建体II或AAV8-抗VEGF-ab。此实施例还可用于递送存在于具有不同粘度水平的不同溶液中的基因疗法。例如，一些溶液可具有高粘度，而其他溶液可具有低粘度。构建体II或AAV8-抗VEGF-ab(或任何其他基因疗法)的功效、安全性和耐受性也可就递送溶液的粘度而言进行分析。

本研究的主要结果指标是在40周的时间范围内，每月与兰尼单抗相比，评估构建体II或AAV8-抗VEGF-ab的最佳矫正视敏度(BCVA)的平均变化。使用的量表是从0-100的早期治疗糖尿病性视网膜病变研究(ETDRS)字母评分(评分越高视力越好)。

本研究的次要结果指标包括：1)通过在52周的时间范围内检测眼部和非眼部不良事件(AE)以及严重不良事件(SAE)的发生率来评估构建体II或AAV8-抗VEGF-ab的安全性和耐受性；2)通过在第40周和第52周基于荧光素血管造影术(FA)而分析脉络膜新生血管(CNV)病变大小和渗漏面积相对于基线的平均变化来评估构建体II或AAV8-抗VEGF-ab在52周的时间范围内对CNV病变生长和渗漏的影响；3)通过分析BCVA从基线到第52周的平均变化来评估构建体II或AAV8-抗VEGF-ab在52周的时间范围内对BCVA的影响；4)通过分析如由光谱域光学相干断层扫描(SD-OCT)所测量的中心凹视网膜厚度(CRT)从基线到第40周和第52周的平均变化来评估构建体II或AAV8-抗VEGF-ab在52周的时间范围内对CRT的影响；以及5)评定接受了构建体II或AAV8-抗VEGF-ab治疗的参与者在52周的时间范围内对补充抗血管内皮生长因子(VEGF)疗法的需求(例如，通过检查在第40周和第52周中的按年计的补充抗VEGF注射速率)。

5.7.2合格标准：

以下合格标准适用于本研究：

最低年龄：50岁

最高年龄：89岁

性别：全部

基于性别：否

接受健康志愿者：否

5.7.3纳入标准：

≥50岁且≤89岁的患者，在研究眼睛中诊断出继发于年龄相关性黄斑变性(AMD)的中心凹下CNV。

参与者必须展示对抗VEGF疗法的有意义的反应。

5.7.4排除标准：

研究眼睛中有继发于除AMD以外的任何病因的CNV或黄斑水肿。

研究眼睛中有中心凹下纤维化或萎缩。

受试者先前进行过玻璃体切除术。

研究眼睛中有研究人员认为可能会限制视敏度(VA)改善的任何疾患。

研究眼睛中有活动性视网膜脱离或视网膜脱离史。

研究眼睛中有不受控的青光眼。

接受过任何基因疗法。

研究眼睛中有妨碍眼底可视化或VA改善的任何疾患，例如，白内障、玻璃体混浊、纤维化、萎缩或中心凹中心的视网膜上皮撕裂。

研究眼睛中有眼内手术史。

在第2次访视的30天内接受过任何试验用药品。

进入研究的6个月内发生心肌梗塞、脑血管意外或短暂性脑缺血发作。

5.8实施例8：在动物模型中进行AAV(例如，AAV8-抗VEGFfab)的脉络膜上和视网膜下注射的比较

5.8.1研究概述

进行以下研究以比较通过脉络膜上与视网膜下注射各种药物组合物(例如，液体制剂)实现的表达，所述药物组合物含有AAV(例如，复制缺陷型腺相关病毒载体8(AAV8)，其携带可溶性抗VEGF Fab蛋白的编码序列)。此实验还用于确定与通过视网膜下注射或通过脉络膜上注射来递送含AAV的低粘性溶液相比，脉络膜上注射含AAV(例如，AAV8-抗VEGFfab)的中等至高粘性溶液是否可减少眼睛中VEGF诱导的渗漏和新生血管并且产生增加的抗VEGF。测试了含有不同粘度水平的若干药物组合物(例如，液体制剂)。

结果显示，溶液的粘度会影响注射了脉络膜上或视网膜下AAV-抗VEGFfab的眼睛中检测到的抗VEGFfab，影响视网膜与脉络膜中的抗VEGF蛋白分布，并且影响中和VEGF诱导的渗漏和新生血管。通过ELISA测量抗VEGFfab蛋白的浓度，以证明当将溶液注射在SCS中(脉络膜上注射)时，与在存在对照溶液(例如，PBS，一种常用于AAV视网膜下注射的溶液，或不太粘稠的溶液)的情况下递送的AAV-抗VEGFfab相比，在存在更粘稠的溶液(与PBS相比或与常用于AAV视网膜下注射的溶液相比)的情况下递送的AAV-抗VEGFfab导致在眼睛中检测到更高水平的抗VEGFfab。此实验还显示，与含AAV-抗VEGFfab的对照溶液(例如，常用于AAV视网膜下注射的溶液，或不太粘稠的溶液)的视网膜下注射相比，当经由脉络膜上注射来注射含有AAV-抗VEGFfab的更粘稠的溶液时，在眼睛中检测到更高水平的抗VEGFfab。此实验还显示，与通过视网膜下注射施用相同的粘性药物组合物时相比，经由脉络膜上注射来注射含有AAV-抗VEGFfab的粘性药物组合物时，在眼睛中检测到更高水平的抗VEGFfab。相同浓度的病毒基因组用于SCS和视网膜下施用。

通过ELISA测量玻璃体样品中的白蛋白来评定血管渗漏，以证明与含有AAV-抗VEGFfab的相同粘性溶液的视网膜下注射相比，含有AAV-抗VEGFfab的粘性溶液的脉络膜上注射能更有效地中和VEGF诱导的渗漏和新生血管。

5.8.2方法

动物(例如，挪威棕色大鼠)在一只眼睛中接受例如3μl含有2.85×10¹⁰基因组拷贝(GC)/眼睛(浓度为4×10¹⁰GC/ml)的AAV8-CB7-抗VEGFfab的脉络膜上或视网膜下注射，并且在另一只眼睛中接受3μl含有7.2×10⁸GC的AAV8-CB7-GFP的脉络膜上或视网膜下注射。在几周(例如，2周)之后，将VEGF(例如，200ng)注射到眼睛中。在动物的子集中，注射不同量的VEGF(例如，100ng)。

5.8.3结果

在VEGF注射后24小时拍摄的眼底照片(例如，2周时)显示注射AAV8-抗VEGFfab的眼睛中的正常的视网膜和视网膜血管口径，而注射AAV8-GFP的眼睛显示血管扩张、水肿迹象、视盘边缘模糊和乳白色视网膜。

通过ELISA测量玻璃体样品中的白蛋白来评定血管渗漏。与使用相同浓度的病毒基因组经由视网膜下施用注射相同药物组合物时相比，在SCS中注射了含有AAV8-抗VEGFfab的粘性溶液的眼睛中检测到更高水平的抗VEGFfab。此外，与在SCS中注射或经由视网膜下递送注射含有AAV8-抗VEGFfab的对照溶液(例如，通常用于AAV视网膜下注射的溶液，或不太粘稠的溶液)相比，在SCS中注射了含有AAV8-抗VEGFfab的更粘稠的溶液的眼睛中检测到更高水平的抗VEGFfab。AAV抗VEGFfab保持在注射部位处(更少地扩散)，并且与使用对照溶液(例如，通常用于AAV视网膜下注射的溶液，或不太粘稠的溶液)来将AAV注射在SCS中或经由视网膜下递送进行时相比，当使用更粘稠的溶液来将AAV注射在SCS中时更为集中。

5.9实施例9：液体制剂对脉络膜上腔(SCS)厚度的影响

在活体动物(例如，兔、小鼠或猴)中测量液体制剂随时间推移对SCS厚度以及SCS塌陷率的影响。使用具有不同粘度的不同溶液。可用于此实验的溶液的实例公开于本公开中，诸如实施例1中。含有例如不同百分比的CMC或HES的溶液可用于此实验中。通过例如使用超声成像(参见第4.6节)针对各种药物组合物(例如，液体制剂)计算注射部位处的初始SCS厚度。SCS厚度(例如，注射前和注射后测量的SCS厚度)取决于溶液的粘度。SCS厚度可在不同时间点，诸如在注射前和注射后的不同时间点测量。例如，与1％CMC溶液或PBS相比，5％CMC溶液显示出更高的SCS厚度。也会随着时间的推移在眼睛中的不同位置处测量SCS厚度。随着时间的推移，溶液的粘度会影响SCS的厚度。例如，1％CMC溶液即使随着时间的推移而测量时也会增加注射部位附近的SCS厚度，而当使用PBS溶液时，注射部位处的SCS厚度会随着时间的推移而降低。使用PBS时注射部位处的SCS厚度随时间推移而降低伴随着SCS中的相邻部位处的SCS厚度的同时增加。液体的粘度会影响SCS厚度的持续时间和SCS厚度的集中性。溶液的粘度还会影响溶液从SCS中清除所需的时间量。例如，与诸如PBS的低粘度溶液相比，具有1％CMC的溶液更长时间段地保留在SCS中(或在眼睛中)。

5.10实施例10：确定脉络膜上腔(SCS)厚度的超声成像

高频超声(U/S)探头(例如，UBM Plus,Accutome,Malvern,PA)用于生成离体眼睛(例如，动物眼睛)中的SCS的2D横截面图像(参见第4.6节)。在对眼睛注射溶液后生成横截面图像。溶液的粘度和体积可发生变化。例如，体积的范围可为1μL至500μL。在一些情况下，体积可小于1μL或大于500μL。溶液可以是水溶液(例如，水)、PBS、汉克斯平衡盐溶液(HBSS)、1％-5％CMC或本公开的任何其他溶液。溶液还可包含染料(例如，荧光染料、红色荧光、蓝色荧光、蓝色染料或任何其他染料)。溶液还可包含可与本公开一起使用的任何组合物、药物、剂或病毒(例如，AAV)。U/S探头盖(例如，Clearscan,Eye-Surgical-Instruments,Plymouth,MN)附接到UBM Plus以有助于U/S图像采集。在注射后几分钟，U/S探头用于获取眼睛周围的矢状视图(例如，在12点、1.5点、3点、4.5点、6点、7.5点、9点和10.5点位置处)。对U/S B扫描进行后处理，以找出从外巩膜到在巩膜突后方(例如，1、5和9mm处)的内视网膜的厚度。计算每只眼睛的平均值、中值和标准偏差。可通过例如找到从外巩膜到内视网膜的垂直于巩膜和脉络膜的线段来对超声B扫描中的SCS厚度进行计算。结膜被排除在测量之外。找到并减去组织厚度，从而产生SCS厚度。

5.11实施例11：通过脉络膜上注射治疗Batten-CLN1或CLN2相关视力丧失

以足以在三个月内在眼睛(例如，玻璃体液)中产生治疗有效浓度的转基因产物的剂量对呈现出Batten-CLN1相关视力丧失的受试者施用编码棕榈酰蛋白硫酯酶1的AAV8或AAV9。以足以在三个月内在眼睛(例如，玻璃体液)中产生治疗有效浓度的转基因产物的剂量对呈现出Batten-CLN2相关视力丧失的受试者施用编码三肽基肽酶1的AAV8或AAV9。通过施用于脉络膜上腔来进行施用。使用具有不同粘度的若干药物组合物(例如，液体制剂)。药物组合物(例如，液体制剂)的粘度会影响Batten-CLN2或CLN1相关视力丧失和治疗功效。在治疗之后，评估受试者在Batten-CLN2相关视力丧失方面的改善情况。在治疗之后，评估受试者在Batten-CLN1相关视力丧失方面的改善情况。与通过视网膜下注射施用了相同药物组合物的受试者相比，当使用粘性药物组合物时在SCS中施用了AAV的受试者在Batten-CLN1或CLN2相关视力丧失方面显示出更好的改善。与通过视网膜下注射，通过玻璃体内施用或向SCS施用了参考药物组合物的受试者相比，当使用相对粘稠的药物组合物时在SCS中施用了AAV的受试者在Batten-CLN1或CLN2相关视力丧失方面显示出更好的改善。

本文所提供的方法对视力缺陷的影响通过一次或多次包括视动性眼球震颤(OKN)的视敏度筛查来衡量。OKN视敏度筛查使用OKN不自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否能够跟随移动目标。计算所述治疗前后OKN筛查结果的百分比变化。

5.12实施例12：使用红外热感相机监测人患者的注射

以足以在三个月内在眼睛(例如，玻璃体液)中产生Cmin为至少0.330μg/mL的浓度的转基因产物的剂量向呈现出湿性AMD的受试者施用编码兰尼单抗Fab的AAV8(例如，通过视网膜下施用、脉络膜上施用或玻璃体内施用)。编码兰尼单抗Fab的AAV8可通过脉络膜上施用使用具有不同粘度的若干药物组合物(例如，液体制剂)来施用。与通过脉络膜上施用在低粘度溶液(例如，PBS，或常用于AAV视网膜下施用的溶液，或不太粘稠的溶液)中施用了编码兰尼单抗Fab的AAV8的受试者体内的转基因浓度相比，在中等至高粘度溶液(与PBS相比，或与常用于AAV视网膜下注射的溶液相比)中施用了编码兰尼单抗Fab的AAV8的受试者显示出更高浓度的转基因(例如，如在施用后1周、2周、3周、4周、8周或12周所测量)。可在施用编码兰尼单抗Fab的AAV8后的任何时间测量转基因的浓度。例如，与使用不太粘稠的溶液在SCS中、或经由视网膜下施用、或经由玻璃体内施用而施用了AAV8的受试者相比，使用更粘稠的溶液在SCS中施用了AAV8的受试者在眼睛中显示出更高浓度的转基因，如在施用AAV后1周、4周、2个月或3个月所测量。类似地，与经由视网膜下施用或经由玻璃体内施用而施用了相同药物组合物的受试者相比，使用粘性溶液在SCS中施用了AAV8的受试者显示出更高浓度的转基因。此实验中使用的所有溶液都具有相同量的基因组拷贝。

FLIR T530红外热感相机用于在手术期间评估注射，并且可在注射后进行评估以确认施用成功完成或施用剂量有误。替代地，使用FLIR T420、FLIR T440、Fluke Ti400或FLIRE60红外热感相机。在治疗后，针对体征临床评估受试者的临床效果以及湿性AMD体征和症状的改善。

5.13实施例13：制剂A和制剂B中的组分

此实施例示出了在≤-60℃下储存的制剂A(含0.001％泊洛沙姆188，pH 7.4的杜氏磷酸盐缓冲盐水)和在-20℃下储存的制剂B(含4％蔗糖和0.001％泊洛沙姆188，pH 7.4’的‘改良的’杜氏磷酸盐缓冲盐水)中的组分。表6中提供了对两种制剂的比较和影响分析。制剂B具有改进的储存可行性，而在储存2年后迄今并未观察到对AAV产物的影响。测试具有不同粘度值的其他药物组合物(例如，液体制剂)。本公开的药物组合物(例如，具有中等或高粘度)可包含例如来自制剂B的一种或多种组分。本公开的药物组合物(例如，具有中等或高粘度)具有改进的储存可行性，而不会影响AAV产物(例如，在储存2年后)。

表6：制剂A和制剂B

制剂B(含蔗糖的改良的DPBS)包含0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖、0.001％(0.01mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4。以摩尔单位计，制剂B包含2.70mM氯化钾、1.47mM磷酸二氢钾、100mM氯化钠、8.1mM无水磷酸氢二钠、117mM蔗糖、0.001％(0.01mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4。制剂B的密度可为1.0188g/mL；制剂B的渗透压可为大约345(331–354)。

表7：以构建体II作为活性药物成分(API)的制剂B

a.掺入0.1mL/L＝0.1mL/kg的10％储备液P188。可使用来自Spectrum的NF等级F-68(泊洛沙姆188)和来自BASF的P188BIO。

b.1kg溶液的体积为大约982mL(1kg/1.0188kg/L＝982mL)

5.14实施例14：制剂A和制剂B在长期稳定性方面的比较

此实施例示出了制剂A和制剂B在长期稳定性方面的比较。制剂A和制剂B在-80℃下具有相似的长期冷冻稳定性，并且制剂B在-20℃下也很稳定。‘含4％蔗糖的改良的dPBS’制剂B在-20℃和-80℃下保持效力12个月。测试具有不同粘度值的其他药物组合物(例如，液体制剂)。本公开的药物组合物(例如，具有中等或高粘度)在-20℃和-80℃下是稳定的。具有中等和高粘度的药物组合物在-20℃和-80℃下保持效力12个月。本公开的药物组合物(例如，具有中等或高粘度)可包含例如来自制剂B的一种或多种组分。

5.15实施例15：制剂A和制剂C体外效力的比较

此实施例示出了制剂A和制剂C在长期稳定性方面的比较。制剂C是含60mM NaCl和6％蔗糖的‘含蔗糖的改良的dPBS’的变体。制剂C包含0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、3.50mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、60.0mg/mL(6％重量/体积)蔗糖、0.001％(0.01mg/mL)泊洛沙姆188，pH 7.4。

制剂C在-20℃下稳定2年。参考制剂A(dPBS)在-20℃下不稳定。制剂B和制剂C在-20℃下可能具有相当且优异的长期稳定性。测试具有不同粘度值的其他药物组合物(例如，液体制剂)。本公开的药物组合物(例如，具有中等或高粘度)可包含例如来自制剂B或制剂C的一种或多种组分。本公开的药物组合物(例如，具有中等或高粘度)在-20℃下稳定2年。

5.16实施例16：使用不同的脉络膜上制剂在食蟹猴体内进行的药效学、生物分布和耐受性研究

本研究的目的是评估包含AAV8-抗VEGF-ab的不同制剂在作为单一剂量经由脉络膜上注射施用于食蟹猴时的生物分布、药效学(转基因浓度)和耐受性。在给药之后，对动物进行至少4周的给药后观察。对一个组也施用大容量制剂。一些制剂包含不同的粘度水平，从低粘度到高粘度不等。例如，制剂1具有低粘度，制剂2具有中间粘度，并且制剂3具有高粘度。表8中示出了组分配和剂量水平。测试品是AAV8-抗VEGF-ab。对照品是安慰剂。制剂和对照可储存在-60℃到-80℃的冷冻箱中，并且在使用当天在室温下解冻，或者如果在配制当天使用，则在室温下储存，或者储存在2℃到8℃的冰箱中。适应症是慢性视网膜疾患，包括湿性AMD和糖尿病性视网膜病变。

表8：组分配和剂量水平

GC＝基因组拷贝

a组1将仅施用对照品。

b剂量水平基于制剂1-3的100μL/眼睛的剂量体积，以及大容量制剂组的200μL/眼睛的体积。每只眼睛施用两次注射。

c在给药阶段的第29天处死所有动物。

在动物供应商处进行抗体预筛选：经由股静脉从每只动物身上收集约90只雌性猴子的血液(至少1mL)，并且将所述血液放入不含抗凝剂的管中。根据需要，可使用另一条静脉进行收集。基于预筛选结果而选择动物作为研究候选者。允许血液在室温下凝结并且在1小时内离心以获得血清。将血清分成2个等分试样并放入冷冻小瓶中，并且在大约-70℃下储存之前保持在干冰上。将样品在干冰上运输过夜以供分析。然后通过任何可接受的方法来分析样品的抗AAV8中和抗体(NAb)。基于抗AAV8 Nab结果而选择动物进行运输。

剂量施用：使动物禁食过夜并且在脉络膜上注射之前用氯胺酮和右美托咪定进行麻醉。简而言之，在5至10秒内向每只眼睛(距角膜缘3与4mm之间处)施用单次100μL的脉络膜上注射(或者每次50μL，进行2次注射)。对于大容量制剂，每只眼睛施用200μL。所述制剂用Clearside SCS微量注射器来施用。微针大小根据制剂的粘度而变化。在一些情况下，使用30号微针。右眼中的注射施用于颞上象限中(即，在10点钟与11点钟位置之间)。左眼中的注射施用于颞上象限中(即，在1点钟与2点钟位置之间)。在注射之后，将针在眼睛中保持大约5秒钟，之后取回。在取回微针之后，将棉头涂抹器(剂量擦拭片)放置于注射部位上，持续大约10秒。在给药之后，将局部抗生素(例如，或适当的替代品)滴入每只眼睛中。每次给药时间被记录为每次注射完成的时间。首先对右眼给药，然后对左眼给药。

眼科手术：进行眼科检查(例如，在施用后第4天、第8天、第15天和第29天)。用裂隙灯生物显微镜和间接检眼镜检查动物。使用裂隙灯生物显微镜检查双眼的附件和前部。使用间接检眼镜检查双眼的眼底(在可见的情况下)。在用间接检眼镜检查之前，用扩瞳剂(例如，1％托吡卡胺)使瞳孔扩张。在施用当天(给药前10分钟内)以及例如在第4天、第8天、第15天和第29天测量眼压。回弹式眼压计(TonoVet)可用于评估眼压。在第4周左右进行眼底摄影术。用数字眼底相机拍摄照片。为每只眼睛拍摄彩色照片，以包括后极的立体照片和两个中间周边视野(颞部和鼻部)的非立体照片。还对周边进行照相。此外，用吲哚菁绿进行自体荧光成像以记录剂量的扩散(例如，在第一天和第二天)。

抗AAV8中和抗体分析：在不同时间点(例如，施用前、施用当天和施用后数天)从股静脉取得的每只动物的血液样品在室温下保存并且允许在离心之前凝结至少30分钟。在收集1小时内使样品离心，并且收获血清。在收获之后，将样品放置于干冰上，直到在-60℃与-80℃之间储存为止。然后使用合格的中和抗体测定对AAV8抗体进行血清分析。

抗AAV8-抗VEGF-ab转基因产物抗体分析：如上文所讨论取得血液样品并且使用本公开的任何测定或任何可接受的测定来分析血清样品的针对AAV8-抗VEGF-ab的抗体。对于AAV8-抗VEGF-ab转基因分析，如上文所描述在施用前至少两周、在第15天以及在处死动物当天(第29天)取得血液样品。在剂量施用前从前房收集50μL。可在临终验尸时收集来自房水和玻璃体液的样品。可在给药前、在第15天以及在验尸前收集血清样品。然后通过本公开的任何测定或任何适用的测定或方法(例如，适用于转基因浓度)来分析样品。

房水收集：在施用前至少2周、在第15天以及在处死动物当天从每只眼睛中取出大约50μL。将来自每只眼睛的房水样品放置到带有Watson条形码标签的单独管中，在液氮中快速冷冻，并且放置于干冰上，直到在-60℃与-80℃之间储存为止。

取水后用药方案：此治疗方案的目的是提供与房水收集程序相关的姑息治疗。收集日后的治疗目的是提供对不良事件(例如，不适)的适当缓解。测试动物的眼部疼痛和副作用。

表9：用药方案

BID＝每天两次(相隔至少6小时)；IM＝肌肉内注射

a将1至2滴溶液施加到从中收集样品的每只眼睛。

b将大约0.25英寸的膏条施加到从中收集样品的每只眼睛。

研究终止：用戊巴比妥钠将动物麻醉并且在第29天放血。

房水和玻璃体液的验尸收集：从房水和玻璃体液分别取出每只眼睛高达50μL，以及每只眼睛高达100μL。在放血之后，摘出眼睛并且从每只眼睛收集房水和玻璃体液样品。将玻璃体液样品分成2个大致相等的等分试样，并且将房水样品作为一个等分试样进行储存。在每次收集之后，向动物的右眼注射改良的戴维森固定液(Davidson’sfixative)，直至肿胀。将眼睛在改良的戴维森固定液中储存48至96小时，并且然后转移到10％中性缓冲福尔马林中。将样品快速冷冻并且在-60℃与-80℃之间储存。分析房水和玻璃体样品的转基因浓度。

针对生物分布的眼组织收集：在放血之后，将来自不同制剂组的所有动物的左眼和两只动物(取决于存活率)的右眼摘出并且收集组织。将组织收集到带有Watson条形码标签的单独管中。收集的组织包括具有视网膜色素上皮细胞的脉络膜、角膜、虹膜睫状体、视交叉、视神经、视网膜、巩膜和后眼杯(posterior eye cup)。眼睛被分成四个大致相等的象限(包括给药部位区的颞上、鼻上、颞下和包括给药部位区的鼻下)。使用8mm活检穿孔器从每个象限取得一个样品。样品在-60℃与-80℃之间储存。使用qPCR或qRT-PCR方法分析样品的载体DNA或RNA。

针对生物分布的非眼组织收集：从以下项收集大约5mm x 5mm x 5mm的两个样品：右脑半球(例如，小脑(外侧)、小脑(背侧)、额皮质(布罗德曼分区4)、额皮质(布罗德曼分区6)、枕叶皮质区(皮层表面)、枕叶皮质区(实质))、卵巢、心脏、肾、泪腺(左侧)、肝(肝左外叶)、肺(左尾叶)、淋巴结(腮腺)、淋巴结(下颌骨)、垂体、唾液腺(下颌骨)、脾、胸腺、背根神经节(颈椎，左侧)、背根神经节(腰椎，左侧)和背根神经节(胸椎，左侧)。样品在-60℃与-80℃之间储存。

组织学：以标称5μm对来自动物的右眼和右视神经进行切片，并且用苏木精和伊红染色。对眼组织进行切片以便于检查中心凹、注射部位区域、黄斑、视盘和视神经。穿过下侧帽状物(inferior calotte)的大致中心取得单个垂直切片。这产生了一个载玻片/块/眼睛(每只眼睛总共三个载玻片)。此外，可从选定的显微镜载玻片准备数字扫描(虚拟载玻片)。

数据评估和统计分析：统计数据分析使用平均值和标准偏差来计算。计算绝对体重、体重变化和眼压测量值的平均值和标准偏差。

5.17实施例17：1％高粘度等级羧甲基纤维素制剂可注射性和热稳定性的评估

对在还含有0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖和0.001％(0.01mg/mL)泊洛沙姆188，pH7.4的‘基底’溶液中制备的含有1％高粘度等级羧甲基纤维素的制剂评估稳定性和可注射性。图14示出了在约13s内进行手动注射以及在10s和15s内使用受控速率针筒泵进行两次注射的注射压力与时间的关系。使用Clearside针筒装置(CLS-HN001)和30号(160μm ID,CLS-MN1100)针来进行注射。结果显示，所获得的压力大致都在优选(在一些情况下)的<43PSI范围内。手动注射的最大压力为42PSI，在15s内的针筒泵注射最大压力为39PSI，并且在10s内的针筒泵注射最大压力短暂激增到49PSI(图14)。手动注射被认为注射起来容易且顺畅。

差示扫描荧光法(DSF)测量蛋白质的固有色氨酸和酪氨酸释放随温度的变化。Trp和Tyr残基的局部环境随着蛋白质展开而变化，从而导致荧光大幅增加。图15示出了对照对比1％羧甲基纤维素制剂的差示扫描荧光法热变温数据。上图：原始熔化曲线信号。中间图：鉴定峰值的数据导数。下图：指示聚集的光散射数据。在热变温之后，1％羧甲基纤维素制剂(T_m＝67.52℃)与对照(T_m＝67.10℃)具有相似的曲线，这证明AAV在此制剂中是稳定的。

5.18实施例18：使用不同的脉络膜上制剂在食蟹猴体内进行药效学、生物分布和耐受性研究

本研究的目的是评估包含AAV8-抗VEGF-ab的1％CMC制剂在作为单一剂量经由脉络膜上注射施用于食蟹猴时的生物分布(DNA和mRNA)、药效学(转基因浓度)和耐受性。在给药之后，对动物进行至少4周的给药后观察。

其他研究已经证明，与单次注射相比，将两次注射而不是一次注射施用于大鼠或兔的脉络膜上腔中与注射制剂在眼睛周围的更大扩散相关联。在那些研究中，眼睛周围增加的扩散与治疗剂到眼睛的增加的递送相关联。

在这些研究中，为了理解一次与两次注射对转基因表达和生物分布的影响，对一组施用以全剂量体积注入颞上象限中的单次注射。对其余组施用两次注射以达到相同的剂量体积，一次注射到颞上象限中，并且一次注射到鼻下象限中。表10中示出了组分配和剂量水平。测试品是AAV8-抗VEGF-ab。对照品是安慰剂。

表10：组分配和剂量水平

gc＝基因组拷贝

a.组1仅施用对照品。

b.组1和组2的剂量水平基于作为两次50μL注射施用的100μL/眼睛/剂量的剂量体积。组3的剂量水平基于作为100μL/眼睛/剂量的一次注射施用的100μL/眼睛的剂量体积。

c.在给药阶段的第29天处死所有动物。

剂量施用：表11中示出了测试品和对照品的制备。将测试品和对照品储存在-60℃到-80℃的冷冻箱中并且在使用当天在室温下解冻。将制剂解冻并且在室温下储存。在给药前不使动物禁食过夜。在脉络膜上注射前用氯胺酮和右美托咪定将动物麻醉。在施用时，在10至15秒内向每只眼睛(距角膜缘3与4mm之间处)施用两次50μL脉络膜上注射(组1和组2)或一次100μL注射(总共100μL/眼睛；组3)。表11中示出了针筒和微针大小。右眼中的第一次注射施用于颞上象限中(即，在10点钟与11点钟位置之间)，并且右眼中的第二次注射(在适用时)施用于鼻下象限中(即，在4点钟与5点钟位置之间)。左眼中的第一次注射施用于颞上象限中(即，在1点钟与2点钟位置之间)，并且左眼中的第二次注射(在适用时)施用于鼻下象限中(即，在7点钟与8点钟位置之间)。在注射之后，将针在眼睛中保持大约30秒钟，之后取回。在取回微针之后，将棉头涂抹器(剂量擦拭片)放置于注射部位上，持续大约10秒。

表11：测试品和媒介物对照品的制备

眼科手术：在施用后第4天、第8天、第15天和第29天进行眼科检查。用裂隙灯生物显微镜和间接检眼镜检查动物。使用裂隙灯生物显微镜检查双眼的附件和前部。使用间接检眼镜检查双眼的眼底(在可见的情况下)。在用间接检眼镜检查之前，用扩瞳剂(例如，1％托吡卡胺)使瞳孔扩张。在施用当天(给药前10分钟内)以及在第4天、第8天、第15天和第29天测量眼压(IOP)。IOP测量使用扁平眼压计来进行。在第4周期间进行眼底摄影术。用数字眼底相机和广角镜头拍摄照片。为每只眼睛拍摄彩色照片，以包括后极的立体照片和两个周边视野(颞上和鼻下)的非立体照片。

抗AAV8-抗VEGF-ab转基因产物抗体分析：如上文所讨论在给药前一次以及在计划处死当天(第29天)取得血液样品。使用经过验证的抗体测定分析血清样品的针对AAV8-抗VEGF-ab的抗体。对于AAV8-抗VEGF-ab转基因分析，如上文所述在施用前至少两周、在第15天以及在计划处死当天(第29天)取得血液样品。然后通过经过验证的抗体测定来分析样品。

房水收集：在施用前至少2周、在第15天以及在计划处死当天(第29天)从每只眼睛中取出大约50μL。将来自每只眼睛的房水样品放置到带有Watson条形码标签的单独管中，在液氮中快速冷冻，并且放置于干冰上，直到在-60℃与-80℃之间储存为止。通过经过验证的方法分析样品的抗VEGF浓度。

研究终止：用戊巴比妥钠将动物麻醉并且在第29天放血。

房水和玻璃体液的验尸收集：在放血之后，摘出眼睛并且收集房水和玻璃体液样品。在收集之后，将样品快速冷冻并且在-60℃与-80℃之间储存。通过经过验证的方法分析房水和玻璃体液样品的转基因浓度。

针对生物分布的眼组织收集：在放血之后，对组2和组3中的每只动物的右眼和最后两只动物的左眼摘除眼球并且收集组织。组织被收集到单独的管中。收集的组织包括具有视网膜色素上皮细胞的脉络膜、视网膜和巩膜。如上文所述使用超净程序收集组织，并且用盐水冲洗并控干(blotted dry)。将样品快速冷冻并且在-60℃与-80℃之间储存。使用qPCR或qRT-PCR方法分析样品的载体DNA或RNA。

比较研究：在与这个实施例中描述的方案类似地进行的食蟹猴研究中，将对照制剂(对照品2.5)注射到每只眼睛的SCS(用微量注射器进行颞上和鼻下注射)。对照制剂不含羧甲基纤维素钠。

表13：对照制剂的制备

对照制剂还含有AAV8-抗VEGF-ab，并且以3x 10¹¹gc/眼睛按100μL/眼睛/剂量(两次50μL注射)进行给药。

数据评估和统计分析：统计数据分析使用平均值和标准偏差来计算。在第15天和第29天评定房水中的转基因产物(“TP”，蛋白质)，除了TP之外，还在第29天在玻璃体液、血清和肝中评定DNA和RNA。

结果

表14：房水转基因产物(ng/mL)

^a当值低于量化极限(<0.100ng/mL)时，为描述性统计的计算指定值“0”。

与对照制剂相比，将测试品2(1％CMC)在颞上一次注射到SCS中以及两次注射测试品2(1％CMC)在房水中产生了更大的转基因产物(TP)浓度。与具有相同组合物的两次注射相比，测试品2的一次注射增加了房水中的TP浓度，但是在一次注射中以全剂量施用于颞上位置处。

表15：玻璃体液转基因产物(ng/mL)

与两次注射测试品2(1％CMC)和对照制剂相比，将测试品2(1％CMC)在颞上位置处一次注射到SCS中会在VH中产生最高浓度的转基因产物。在注射后29天，玻璃体液转基因产物浓度总体高于房水中所存在的TP。

表16：血清转基因产物(ng/mL)

每次将测试品2(1％CMC)或含有AAV8-抗VEGF-ab的对照制剂注射到SCS中都会在血清中产生最小滴度的转基因产物(抗VEGF-ab)。

表17：组织中的DNA或RNA(拷贝/μg)生物分布

nt＝未测试

一次性将CMC制剂注射到眼睛中似乎比以相同剂量施用两次注射更有效地转导视网膜。总体而言，与对照制剂相比，测试品2(1％CMC)增加了载体到脉络膜和巩膜两者的递送。

5.19实施例19：不同脉络膜上制剂的稳定性和相容性

本研究的目的是评估用含1.0％羧甲基纤维素钠的含蔗糖的改良的DPBS(5.84mg/mL氯化钠、0.201mg/mL氯化钾、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、0.200mg/mL磷酸二氢钾、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖、0.001％泊洛沙姆188，pH 7.4)配制的AAV8-抗VEGF-ab的稳定性以及与装置的相容性。

稳定性结果表明，在研究的持续时间内，配制的AAV8-抗VEGF-ab测试品和安慰剂物品在≤-60℃的储存温度下保持稳定。研究测试的收尾工作是在填充后3.3个月开始。

使用稳定性结果表明，配制的AAV8-抗VEGF-ab在室温下可稳定长达6小时。另外，已经证明，配制的AAV8-抗VEGF-ab与预期用于本研究的脉络膜上递送系统相容。下表中提供了支持数据。

表18：使用稳定性和装置相容性

^a将样品稀释10倍以避免基质干扰。对结果进行校正以测试稀释度。RT＝室温

等效方案

尽管参考其具体实施方案详细地描述了本发明，但是应当理解，功能上等效的变型形式处于本发明的范围内。实际上，根据前面的描述和附图，除本文示出和描述的那些以外对本发明的各种修改对于本领域技术人员将变得显而易见。此类修改意图落入所附权利要求的范围内。本领域技术人员仅仅使用常规试验将认识到或者能够确定本文描述的发明的具体实施方案的许多等效方案。此类等效方案意图被所附权利要求涵盖。

本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请均在本文以引用的方式并入说明书中，其程度就如同每个单独的出版物、专利或专利申请被具体地且单独地指出以引用的方式整体并入本文一样。

序列表

<110> 再生生物股份有限公司(REGENXBIO Inc.)

<120> 用于脉络膜上施用的制剂诸如高粘度制剂

<130> 12656-141-228

<140> TBA

<141>

<150> US 63/088,826

<151> 2020-10-07

<150> US 63/147,527

<151> 2021-02-09

<160> 55

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 兰尼单抗Fab氨基酸序列-轻链

<400> 1

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 2

<211> 231

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 兰尼单抗Fab氨基酸序列-重链

<400> 2

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe

50 55 60

Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Leu

225 230

<210> 3

<211> 214

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 贝伐珠单抗Fab氨基酸序列-轻链

<400> 3

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile

35 40 45

Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala

100 105 110

Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly

115 120 125

Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala

130 135 140

Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln

145 150 155 160

Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser

165 170 175

Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr

180 185 190

Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser

195 200 205

Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210

<210> 4

<211> 231

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 贝伐珠单抗Fab氨基酸序列-重链

<400> 4

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe

50 55 60

Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly

115 120 125

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

130 135 140

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe

165 170 175

Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val

180 185 190

Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val

195 200 205

Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys

210 215 220

Ser Cys Asp Lys Thr His Leu

225 230

<210> 5

<211> 26

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> VEGF-A信号肽

<400> 5

Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu

1 5 10 15

Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala

20 25

<210> 6

<211> 29

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> Fibulin-1信号肽

<400> 6

Met Glu Arg Ala Ala Pro Ser Arg Arg Val Pro Leu Pro Leu Leu Leu

1 5 10 15

Leu Gly Gly Leu Ala Leu Leu Ala Ala Gly Val Asp Ala

20 25

<210> 7

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 玻连蛋白信号肽

<400> 7

Met Ala Pro Leu Arg Pro Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Trp Val

1 5 10 15

Ala Leu Ala

<210> 8

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 补体因子H信号肽

<400> 8

Met Arg Leu Leu Ala Lys Ile Ile Cys Leu Met Leu Trp Ala Ile Cys

1 5 10 15

Val Ala

<210> 9

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 旋光蛋白信号肽

<400> 9

Met Arg Leu Leu Ala Phe Leu Ser Leu Leu Ala Leu Val Leu Gln Glu

1 5 10 15

Thr Gly Thr

<210> 10

<211> 728

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 贝伐珠单抗cDNA -轻链

<400> 10

gctagcgcca ccatgggctg gtcctgcatc atcctgttcc tggtggccac cgccaccggc 60

gtgcactccg acatccagat gacccagtcc ccctcctccc tgtccgcctc cgtgggcgac 120

cgggtgacca tcacctgctc cgcctcccag gacatctcca actacctgaa ctggtaccag 180

cagaagcccg gcaaggcccc caaggtgctg atctacttca cctcctccct gcactccggc 240

gtgccctccc ggttctccgg ctccggctcc ggcaccgact tcaccctgac catctcctcc 300

ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac tgccagcagt actccaccgt gccctggacc 360

ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaag cggaccgtgg ccgccccctc cgtgttcatc 420

ttccccccct ccgacgagca gctgaagtcc ggcaccgcct ccgtggtgtg cctgctgaac 480

aacttctacc cccgggaggc caaggtgcag tggaaggtgg acaacgccct gcagtccggc 540

aactcccagg agtccgtgac cgagcaggac tccaaggact ccacctactc cctgtcctcc 600

accctgaccc tgtccaaggc cgactacgag aagcacaagg tgtacgcctg cgaggtgacc 660

caccagggcc tgtcctcccc cgtgaccaag tccttcaacc ggggcgagtg ctgagcggcc 720

gcctcgag 728

<210> 11

<211> 1440

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 贝伐珠单抗cDNA -重链

<400> 11

gctagcgcca ccatgggctg gtcctgcatc atcctgttcc tggtggccac cgccaccggc 60

gtgcactccg aggtgcagct ggtggagtcc ggcggcggcc tggtgcagcc cggcggctcc 120

ctgcggctgt cctgcgccgc ctccggctac accttcacca actacggcat gaactgggtg 180

cggcaggccc ccggcaaggg cctggagtgg gtgggctgga tcaacaccta caccggcgag 240

cccacctacg ccgccgactt caagcggcgg ttcaccttct ccctggacac ctccaagtcc 300

accgcctacc tgcagatgaa ctccctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc 360

aagtaccccc actactacgg ctcctcccac tggtacttcg acgtgtgggg ccagggcacc 420

ctggtgaccg tgtcctccgc ctccaccaag ggcccctccg tgttccccct ggccccctcc 480

tccaagtcca cctccggcgg caccgccgcc ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc 540

gagcccgtga ccgtgtcctg gaactccggc gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc 600

gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtcctccg tggtgaccgt gccctcctcc 660

tccctgggca cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg 720

gacaagaagg tggagcccaa gtcctgcgac aagacccaca cctgcccccc ctgccccgcc 780

cccgagctgc tgggcggccc ctccgtgttc ctgttccccc ccaagcccaa ggacaccctg 840

atgatctccc ggacccccga ggtgacctgc gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccc 900

gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc 960

cgggaggagc agtacaactc cacctaccgg gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag 1020

gactggctga acggcaagga gtacaagtgc aaggtgtcca acaaggccct gcccgccccc 1080

atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc cagccccggg agccccaggt gtacaccctg 1140

cccccctccc gggaggagat gaccaagaac caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc 1200

ttctacccct ccgacatcgc cgtggagtgg gagtccaacg gccagcccga gaacaactac 1260

aagaccaccc cccccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctgtactc caagctgacc 1320

gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc 1380

ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg tccctgtccc ccggcaagtg agcggccgcc 1440

<210> 12

<211> 733

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 兰尼单抗cDNA (包含信号序列的轻链)

<400> 12

gagctccatg gagtttttca aaaagacggc acttgccgca ctggttatgg gttttagtgg 60

tgcagcattg gccgatatcc agctgaccca gagcccgagc agcctgagcg caagcgttgg 120

tgatcgtgtt accattacct gtagcgcaag ccaggatatt agcaattatc tgaattggta 180

tcagcagaaa ccgggtaaag caccgaaagt tctgatttat tttaccagca gcctgcatag 240

cggtgttccg agccgtttta gcggtagcgg tagtggcacc gattttaccc tgaccattag 300

cagcctgcag ccggaagatt ttgcaaccta ttattgtcag cagtatagca ccgttccgtg 360

gacctttggt cagggcacca aagttgaaat taaacgtacc gttgcagcac cgagcgtttt 420

tatttttccg cctagtgatg aacagctgaa aagcggcacc gcaagcgttg tttgtctgct 480

gaataatttt tatccgcgtg aagcaaaagt gcagtggaaa gttgataatg cactgcagag 540

cggtaatagc caagaaagcg ttaccgaaca ggatagcaaa gatagcacct atagcctgag 600

cagcaccctg accctgagca aagcagatta tgaaaaacac aaagtgtatg cctgcgaagt 660

tacccatcag ggtctgagca gtccggttac caaaagtttt aatcgtggcg aatgctaata 720

gaagcttggt acc 733

<210> 13

<211> 779

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 兰尼单抗cDNA (包含信号序列的重链)

<400> 13

gagctcatat gaaatacctg ctgccgaccg ctgctgctgg tctgctgctc ctcgctgccc 60

agccggcgat ggccgaagtt cagctggttg aaagcggtgg tggtctggtt cagcctggtg 120

gtagcctgcg tctgagctgt gcagcaagcg gttatgattt tacccattat ggtatgaatt 180

gggttcgtca ggcaccgggt aaaggtctgg aatgggttgg ttggattaat acctataccg 240

gtgaaccgac ctatgcagca gattttaaac gtcgttttac ctttagcctg gataccagca 300

aaagcaccgc atatctgcag atgaatagcc tgcgtgcaga agataccgca gtttattatt 360

gtgccaaata tccgtattac tatggcacca gccactggta tttcgatgtt tggggtcagg 420

gcaccctggt taccgttagc agcgcaagca ccaaaggtcc gagcgttttt ccgctggcac 480

cgagcagcaa aagtaccagc ggtggcacag cagcactggg ttgtctggtt aaagattatt 540

ttccggaacc ggttaccgtg agctggaata gcggtgcact gaccagcggt gttcatacct 600

ttccggcagt tctgcagagc agcggtctgt atagcctgag cagcgttgtt accgttccga 660

gcagcagcct gggcacccag acctatattt gtaatgttaa tcataaaccg agcaatacca 720

aagtggataa aaaagttgag ccgaaaagct gcgataaaac ccatctgtaa tagggtacc 779

<210> 14

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 贝伐珠单抗和兰尼单抗轻链CDR1

<400> 14

Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 贝伐珠单抗和兰尼单抗轻链CDR2

<400> 15

Phe Thr Ser Ser Leu His Ser

1 5

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 贝伐珠单抗和兰尼单抗轻链CDR3

<400> 16

Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 17

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 贝伐珠单抗重链CDR1

<400> 17

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn

1 5 10

<210> 18

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 贝伐珠单抗重链CDR2

<400> 18

Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys

1 5 10 15

Arg

<210> 19

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 贝伐珠单抗重链CDR3

<400> 19

Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 20

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 兰尼单抗重链CDR1

<400> 20

Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr Gly Met Asn

1 5 10

<210> 21

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 兰尼单抗重链CDR3

<400> 21

Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 22

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 白蛋白信号肽

<400> 22

Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala

1 5 10 15

Tyr Ser

<210> 23

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 胰凝乳蛋白酶原信号肽

<400> 23

Met Ala Phe Leu Trp Leu Leu Ser Cys Trp Ala Leu Leu Gly Thr Thr

1 5 10 15

Phe Gly

<210> 24

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 白细胞介素-2信号肽

<400> 24

Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ile Leu Ala Leu

1 5 10 15

Val Thr Asn Ser

20

<210> 25

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 胰蛋白酶原-2信号肽

<400> 25

Met Asn Leu Leu Leu Ile Leu Thr Phe Val Ala Ala Ala Val Ala

1 5 10 15

<210> 26

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> F2A位点

<400> 26

Leu Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn

1 5 10 15

Pro Gly Pro

<210> 27

<211> 21

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 接头T2A

<400> 27

Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu

1 5 10 15

Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 28

<211> 22

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 接头P2A

<400> 28

Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val

1 5 10 15

Glu Glu Asn Pro Gly Pro

20

<210> 29

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 接头E2A

<400> 29

Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp

1 5 10 15

Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro

20

<210> 30

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 接头F2A

<400> 30

Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala

1 5 10 15

Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro

20 25

<210> 31

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 弗林蛋白酶接头

<400> 31

Arg Lys Arg Arg

1

<210> 32

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 弗林蛋白酶接头

<400> 32

Arg Arg Arg Arg

1

<210> 33

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 弗林蛋白酶接头

<400> 33

Arg Arg Lys Arg

1

<210> 34

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 弗林蛋白酶接头

<400> 34

Arg Lys Lys Arg

1

<210> 35

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 弗林蛋白酶接头

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> X =任何氨基酸

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (3)..(3)

<223> X = Lys或Arg

<400> 35

Arg Xaa Xaa Arg

1

<210> 36

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 弗林蛋白酶接头

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> X =任何氨基酸

<400> 36

Arg Xaa Lys Arg

1

<210> 37

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 弗林蛋白酶接头

<220>

<221> MISC_FEATURE

<222> (2)..(2)

<223> X =任何氨基酸

<400> 37

Arg Xaa Arg Arg

1

<210> 38

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 兰尼单抗Fab氨基酸序列-轻链

<400> 38

Met Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val

1 5 10 15

Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn

20 25 30

Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu

35 40 45

Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln

65 70 75 80

Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro

85 90 95

Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala

100 105 110

Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser

115 120 125

Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu

130 135 140

Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser

145 150 155 160

Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu

165 170 175

Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val

180 185 190

Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys

195 200 205

Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215

<210> 39

<211> 236

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 兰尼单抗Fab氨基酸序列-重链

<400> 39

Met Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly

1 5 10 15

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His

20 25 30

Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp

50 55 60

Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Leu Arg Lys Arg Arg

225 230 235

<210> 40

<211> 232

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 兰尼单抗Fab氨基酸序列-重链

<400> 40

Met Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly

1 5 10 15

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His

20 25 30

Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp

50 55 60

Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala

65 70 75 80

Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp

100 105 110

Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys

115 120 125

Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly

130 135 140

Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro

145 150 155 160

Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr

165 170 175

Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val

180 185 190

Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn

195 200 205

Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro

210 215 220

Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Leu

225 230

<210> 41

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> AAV1

<400> 41

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly

145 150 155 160

Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His

260 265 270

Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe

275 280 285

His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn

290 295 300

Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln

305 310 315 320

Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn

325 330 335

Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro

340 345 350

Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala

355 360 365

Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly

370 375 380

Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro

385 390 395 400

Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe

405 410 415

Glu Glu Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp

420 425 430

Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg

435 440 445

Thr Gln Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser

450 455 460

Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gln Pro Lys Asn Trp Leu Pro

465 470 475 480

Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn

485 490 495

Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn

500 505 510

Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys

515 520 525

Asp Asp Glu Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly

530 535 540

Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile

545 550 555 560

Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg

565 570 575

Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Phe Gln Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala

580 585 590

Thr Gly Asp Val His Ala Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln

595 600 605

Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His

610 615 620

Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu

625 630 635 640

Lys Asn Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala

645 650 655

Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr

660 665 670

Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln

675 680 685

Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Tyr Thr Ser Asn

690 695 700

Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu

705 710 715 720

Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu

725 730 735

<210> 42

<211> 735

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> AAV2

<400> 42

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro

20 25 30

Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg

130 135 140

Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly

145 150 155 160

Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu

325 330 335

Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr

340 345 350

Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp

355 360 365

Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser

370 375 380

Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser

385 390 395 400

Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu

405 410 415

Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg

420 425 430

Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr

435 440 445

Asn Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gln Ser Arg Leu Gln Phe Ser Gln

450 455 460

Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly

465 470 475 480

Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ser Ala Asp Asn Asn

485 490 495

Asn Ser Glu Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly

500 505 510

Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp

515 520 525

Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys

530 535 540

Gln Gly Ser Glu Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr

545 550 555 560

Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr

565 570 575

Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Arg Gly Asn Arg Gln Ala Ala Thr

580 585 590

Ala Asp Val Asn Thr Gln Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp

595 600 605

Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr

610 615 620

Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys

625 630 635 640

His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn

645 650 655

Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gln

660 665 670

Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys

675 680 685

Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr

690 695 700

Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr

705 710 715 720

Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu

725 730 735

<210> 43

<211> 736

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> AAV3-3

<400> 43

Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser

1 5 10 15

Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Val Pro Gln Pro

20 25 30

Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Arg Arg Gly Leu Val Leu Pro

35 40 45

Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro

50 55 60

Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp

65 70 75 80

Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala

85 90 95

Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly

100 105 110

Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Ile Leu Glu Pro

115 120 125

Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Gly

130 135 140

Ala Val Asp Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly

145 150 155 160

Lys Ser Gly Lys Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr

165 170 175

Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro

180 185 190

Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly

195 200 205

Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser

210 215 220

Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile

225 230 235 240

Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu

245 250 255

Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr

260 265 270

Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His

275 280 285

Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp

290 295 300

Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val

305 310 315 320

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325 330 335

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Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly

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Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile

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<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 棕榈酰蛋白硫酯酶1 (ppt1) Aah08426.1

<400> 53

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Glu Asn Ser Phe Phe Leu Asn Val Asn Ser Gln Val Thr Thr Val Cys

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Gln Ala Leu Ala Lys Asp Pro Lys Leu Gln Gln Gly Tyr Asn Ala Met

100 105 110

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Gly Val Phe Gly Leu Pro Arg Cys Pro Gly Glu Ser Ser His Ile Cys

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165 170 175

Gln Glu Arg Leu Val Gln Ala Glu Tyr Trp His Asp Pro Ile Lys Glu

180 185 190

Asp Val Tyr Arg Asn His Ser Ile Phe Leu Ala Asp Ile Asn Gln Glu

195 200 205

Arg Gly Ile Asn Glu Ser Tyr Lys Lys Asn Leu Met Ala Leu Lys Lys

210 215 220

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Ser Glu Trp Phe Gly Phe Tyr Arg Ser Gly Gln Ala Lys Glu Thr Ile

245 250 255

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Glu Met Asp Asn Ala Gly Gln Leu Val Phe Leu Ala Thr Glu Gly Asp

275 280 285

His Leu Gln Leu Ser Glu Glu Trp Phe Tyr Ala His Ile Ile Pro Phe

290 295 300

Leu Gly

305

<210> 54

<211> 563

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 三肽基肽酶1 (tpp1) Np_000382.3

<400> 54

Met Gly Leu Gln Ala Cys Leu Leu Gly Leu Phe Ala Leu Ile Leu Ser

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Pro Gly Trp Val Ser Leu Gly Arg Ala Asp Pro Glu Glu Glu Leu Ser

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50 55 60

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65 70 75 80

Thr Leu Glu Asn Val Ala Asp Leu Val Arg Pro Ser Pro Leu Thr Leu

85 90 95

His Thr Val Gln Lys Trp Leu Leu Ala Ala Gly Ala Gln Lys Cys His

100 105 110

Ser Val Ile Thr Gln Asp Phe Leu Thr Cys Trp Leu Ser Ile Arg Gln

115 120 125

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130 135 140

Pro Thr Glu Thr His Val Val Arg Ser Pro His Pro Tyr Gln Leu Pro

145 150 155 160

Gln Ala Leu Ala Pro His Val Asp Phe Val Gly Gly Leu His Arg Phe

165 170 175

Pro Pro Thr Ser Ser Leu Arg Gln Arg Pro Glu Pro Gln Val Thr Gly

180 185 190

Thr Val Gly Leu His Leu Gly Val Thr Pro Ser Val Ile Arg Lys Arg

195 200 205

Tyr Asn Leu Thr Ser Gln Asp Val Gly Ser Gly Thr Ser Asn Asn Ser

210 215 220

Gln Ala Cys Ala Gln Phe Leu Glu Gln Tyr Phe His Asp Ser Asp Leu

225 230 235 240

Ala Gln Phe Met Arg Leu Phe Gly Gly Asn Phe Ala His Gln Ala Ser

245 250 255

Val Ala Arg Val Val Gly Gln Gln Gly Arg Gly Arg Ala Gly Ile Glu

260 265 270

Ala Ser Leu Asp Val Gln Tyr Leu Met Ser Ala Gly Ala Asn Ile Ser

275 280 285

Thr Trp Val Tyr Ser Ser Pro Gly Arg His Glu Gly Gln Glu Pro Phe

290 295 300

Leu Gln Trp Leu Met Leu Leu Ser Asn Glu Ser Ala Leu Pro His Val

305 310 315 320

His Thr Val Ser Tyr Gly Asp Asp Glu Asp Ser Leu Ser Ser Ala Tyr

325 330 335

Ile Gln Arg Val Asn Thr Glu Leu Met Lys Ala Ala Ala Arg Gly Leu

340 345 350

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355 360 365

Ser Gly Arg His Gln Phe Arg Pro Thr Phe Pro Ala Ser Ser Pro Tyr

370 375 380

Val Thr Thr Val Gly Gly Thr Ser Phe Gln Glu Pro Phe Leu Ile Thr

385 390 395 400

Asn Glu Ile Val Asp Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Ser Asn Val Phe

405 410 415

Pro Arg Pro Ser Tyr Gln Glu Glu Ala Val Thr Lys Phe Leu Ser Ser

420 425 430

Ser Pro His Leu Pro Pro Ser Ser Tyr Phe Asn Ala Ser Gly Arg Ala

435 440 445

Tyr Pro Asp Val Ala Ala Leu Ser Asp Gly Tyr Trp Val Val Ser Asn

450 455 460

Arg Val Pro Ile Pro Trp Val Ser Gly Thr Ser Ala Ser Thr Pro Val

465 470 475 480

Phe Gly Gly Ile Leu Ser Leu Ile Asn Glu His Arg Ile Leu Ser Gly

485 490 495

Arg Pro Pro Leu Gly Phe Leu Asn Pro Arg Leu Tyr Gln Gln His Gly

500 505 510

Ala Gly Leu Phe Asp Val Thr Arg Gly Cys His Glu Ser Cys Leu Asp

515 520 525

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530 535 540

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Leu Asn Pro

<210> 55

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 突变型白细胞介素-2信号肽

<400> 55

Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Leu Leu Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu

1 5 10 15

Val Thr Asn Ser

20

Claims

3.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后的清除时间等于或大于参考药物组合物在脉络膜上施用后的所述清除时间，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

4.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后的周向扩散小于参考药物组合物在脉络膜上施用后的周向扩散，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

5.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后注射部位处的厚度等于或大于在脉络膜上施用参考药物组合物后注射部位处的厚度，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

6.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后在所述眼睛中检测到所述转基因的表达水平的时间段长于在脉络膜上施用参考药物组合物后在所述眼睛中检测到所述转基因的表达水平的时间段，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

7.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后所述眼睛中所述转基因的浓度等于或大于在脉络膜上施用参考药物组合物后所述眼睛中所述转基因的浓度，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

8.如权利要求1或2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后注射部位处的转导率等于或大于在脉络膜上施用参考药物组合物后注射部位处的转导率，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

9.如权利要求2所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平等于或低于在脉络膜上施用参考药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平，其中所述参考药物组合物包含所述重组AAV，所述重组AAV包含编码所述转基因的所述表达盒，其中当将所述药物组合物或所述参考药物组合物施用于所述脉络膜上腔时，所述重组AAV基因组拷贝的量是相同的，并且其中所述参考药物组合物的粘度为至多约24cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

10.如权利要求1-9中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV是构建体II。

11.如权利要求1、3-8和10中任一项所述的药物组合物，其中所述转基因是抗人血管内皮生长因子(抗VEGF)抗体。

12.如权利要求1-11中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV包含来自选自由以下组成的组的一种或多种腺相关病毒血清型的组分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15和AAV.HSC16。

13.如权利要求1-12中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV是AAV8。

14.如权利要求1-9和11-12中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV是AAV9。

15.如权利要求1-14中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的粘度在约25cP至约100,000cP之间、在约25cP至约50,000cP之间、在约25cP至约1x 10⁴cP之间、在约25cP至约5,000cP之间、在约25cP至约1x 10³cP之间、在约100cP至约100,000cP之间、在约100cP至约1x 10⁴cP之间、在约100cP至约5,000cP之间、在约100cP至约1x 10³cP之间，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

16.如权利要求1-15中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的粘度为至少约100cP、至少约400cP、至少约500cP、至少约900cP、至少约1000cP、至少约4000cP或至少约1x 10⁶cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

17.如权利要求1-16中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的粘度为约或大于约500cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

18.如权利要求1-17中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含蔗糖。

19.如权利要求1-17中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物不包含蔗糖。

20.如权利要求1-19中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含以下中的至少一种：蔗糖、4％蔗糖、6％蔗糖、10％蔗糖、2％羧甲基纤维素钠盐、1％羧甲基纤维素钠盐、羧甲基纤维素(CMC)、0.5％CMC、1％CMC、2％CMC、4％CMC、聚乙烯醇、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠盐和羟丙基甲基纤维素。

21.如权利要求1-18和20中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含4％蔗糖、6％蔗糖或10％蔗糖。

22.如权利要求4和10-21中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后的所述周向扩散变小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

23.如权利要求3和10-22中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后的所述清除时间变大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

24.如权利要求1-23中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后的所述清除时间为约30分钟至约20小时、约2小时至约20小时、约30分钟至约24小时、约1小时至约2小时、约30分钟至约90天、约30分钟至约60天、约30分钟至约30天、约30分钟至约21天、约30分钟至约14天、约30分钟至约7天、约30分钟至约3天、约30分钟至约2天、约30分钟至约1天、约4小时至约90天、约4小时至约60天、约4小时至约30天、约4小时至约21天、约4小时至约14天、约4小时至约7天、约4小时至约3天、约4小时至约2天、约4小时至约1天、约4小时至约8小时、约4小时至约16小时、约4小时至约20小时、约1天至约90天、约1天至约60天、约1天至约30天、约1天至约21天、约1天至约14天、约1天至约7天、约1天至约3天、约2天至约90天、约3天至约90天、约3天至约60天、约3天至约30天、约3天至约21天、约3天至约14天或约3天至约7天。

25.如权利要求1-24中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后的所述清除时间不先于约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。

26.如权利要求3-25中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物在脉络膜上施用后的所述清除时间为至多约30分钟、1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、14小时、16小时、18小时、20小时、22小时、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。

27.如权利要求1-26中任一项所述的药物组合物，其中所述清除时间是从所述SCS中或从所述眼睛中的清除时间。

28.如权利要求5和10-27中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述注射部位处的所述厚度变大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

29.如权利要求5和10-28中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述注射部位处的所述厚度为约500μm至约3.0mm、750μm至约2.8mm、约750μm至约2.5mm、约750μm至约2mm或约1mm至约2mm。

30.如权利要求5和10-29中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述注射部位处的所述厚度为至少约50μm、100μm、200μm、300μm、400μm、500μm、600μm、700μm、800μm、900μm、1000μm、1mm、1.5mm、2mm、2.5mm、3mm、3.5mm、4mm、4.5mm、5mm、5.5mm、6mm、6.5mm、7mm、7.5mm、8mm、8.5mm、9mm、9.5mm或10mm。

31.如权利要求5和10-30中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述参考药物组合物后所述注射部位处的所述厚度为至多约1nm、5nm、10nm、25nm、50nm、100nm、200nm、300nm、400nm、500nm、600nm、700nm、800nm、900nm、1μm、5μm、10μm、15μm、20μm、25μm、30μm、35μm、40μm、50μm、100μm、200μm、300μm、400μm、500μm、600μm、700μm、800μm、900μm或1000μm。

32.如权利要求5和10-31中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述注射部位处的所述厚度持续至少两个小时、至少三个小时、至少四个小时、至少五个小时、至少六个小时、至少七个小时、至少八个小时、至少十个小时、至少十二个小时、至少十八个小时、至少二十四个小时、至少两天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一个月、至少六周、至少二个月、至少三个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少9个月、至少一年、至少三年或至少五年。

33.如权利要求7和10-32中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述眼睛中所述转基因的浓度变大至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

34.如权利要求6和10-33中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后的更长时间段是变长至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。

35.如权利要求1-34中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后在至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天内在所述眼睛中检测到所述转基因。

36.如权利要求3-35中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述参考药物组合物后在至多约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天内在所述眼睛中检测到所述转基因。

37.如权利要求11所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平等于或低于在脉络膜上施用所述参考药物组合物后VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平。

38.如权利要求9-37中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述VEGF诱导的血管舒张和/或血管渗漏水平降低至少约2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

39.如权利要求8和10-38中任一项所述的药物组合物，其中在脉络膜上施用所述药物组合物后所述注射部位处的转导率变大至少约2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少100％、至少150％或至少200％、至少250％或至少300％、至少400％或至少500％。

40.如权利要求1-39中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物中的重组AAV稳定性是所述参考药物组合物中的重组AAV稳定性的至少约50％。

41.如权利要求40所述的药物组合物，其中所述重组AAV稳定性由所述重组AAV的感染性决定。

42.如权利要求40所述的药物组合物，其中所述重组AAV稳定性由所述重组AAV的聚集水平决定。

43.如权利要求40所述的药物组合物，其中所述重组AAV稳定性由所述重组AAV所释放的游离DNA的水平决定。

44.如权利要求43所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含比所述参考药物组合物中的游离DNA的水平多约50％、约25％、约15％、约10％、约5％、约4％、约3％、约2％、约1％、约0％，少约1％、约2％、约5％、约7％、约10％，多约2倍、约3倍，少约2倍、约3倍的游离DNA。

45.如权利要求41所述的药物组合物，其中所述药物组合物中的所述重组AAV的感染性比所述参考药物组合物中的所述重组AAV的感染性高至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。

46.如权利要求42所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含比所述参考药物组合物中的重组AAV聚集水平低至少2％、5％、7％、10％、12％、15％、17％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、100％、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍的重组AAV聚集。

47.如权利要求1-46中任一项所述的药物组合物，其中所述转基因是适合于治疗或以其他方式改善、预防感兴趣的疾病或减慢所述感兴趣的疾病进展的转基因。

48.如权利要求1-47中任一项所述的药物组合物，其中所述人受试者被诊断患有nAMD(湿性AMD)、干性AMD、视网膜静脉阻塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)、糖尿病性视网膜病变(DR)、Batten病、青光眼或非感染性葡萄膜炎。

49.如权利要求1-47中任一项所述的药物组合物，其中所述人受试者被诊断患有IVA型粘多糖病(MPS IVA)、I型粘多糖病(MPS I)、II型粘多糖病(MPS II)、家族性高胆固醇血症(FH)、纯合子家族性高胆固醇血症(HoFH)、冠状动脉疾病、脑血管疾病、杜氏肌营养不良症、肢带型肌营养不良症、贝克型肌营养不良症和散发性包涵体肌炎、或激肽释放酶相关疾病。

50.如权利要求1、3-8和10-49中任一项所述的药物组合物，其中所述AAV编码棕榈酰蛋白硫酯酶1(PPT1)、三肽基肽酶1(TPP1)、抗VEGF抗体或其抗原结合片段、抗激肽释放酶抗体或抗原结合片段、抗TNF抗体或抗原结合片段、抗C3抗体或抗原结合片段、或抗C5抗体或抗原结合片段。

51.如权利要求3-50中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV基因组拷贝的所述量基于载体基因组浓度。

52.如权利要求3-50中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV基因组拷贝的所述量基于每次施用的基因组拷贝。

53.如权利要求3-50中任一项所述的药物组合物，其中所述重组AAV基因组拷贝的所述量基于施用于所述人受试者的总基因组拷贝。

54.如权利要求52所述的药物组合物，其中每次施用的所述基因组拷贝是每次脉络膜上施用的所述重组AAV的基因组拷贝。

55.如权利要求53所述的药物组合物，其中所述施用的总基因组拷贝是脉络膜上施用的所述重组AAV的总基因组拷贝。

56.如权利要求51所述的药物组合物，其中所述载体基因组浓度(VGC)为约3×10⁹GC/mL、约1×10¹⁰GC/mL、约1.2×10¹⁰GC/mL、约1.6×10¹⁰GC/mL、约4×10¹⁰GC/mL、约6×10¹⁰GC/mL、约2×10¹¹GC/mL、约2.4×10¹¹GC/mL、约2.5×10¹¹GC/mL、约3×10¹¹GC/mL、约6.2×10¹¹GC/mL、约1×10¹²GC/mL、约2.5×10¹²GC/mL、约3×10¹²GC/mL、约5×10¹²GC/mL、约6×10¹²GC/mL、约1.5×10¹³GC/mL、约2×10¹³GC/mL或约3×10¹³GC/mL。

57.如权利要求53和55中任一项所述的药物组合物，其中施用的基因组拷贝的总数为约6.0×10¹⁰个基因组拷贝、约1.6×10¹¹个基因组拷贝、约2.5×10¹¹个基因组拷贝、约3×10¹¹个基因组拷贝、约5.0×10¹¹个基因组拷贝、约6×10¹¹个基因组拷贝、约3x 10¹²个基因组拷贝、约1.0×10¹²个基因组拷贝、约1.5×10¹²个基因组拷贝、约2.5×10¹²个基因组拷贝或约3.0×10¹³个基因组拷贝。

58.如权利要求52和54中任一项所述的药物组合物，其中每次施用的基因组拷贝的总数为约6.0×10¹⁰个基因组拷贝、约1.6×10¹¹个基因组拷贝、约2.5×10¹¹个基因组拷贝、约3×10¹¹个基因组拷贝、约5.0×10¹¹个基因组拷贝、约3x 10¹²个基因组拷贝、约1.0×10¹²个基因组拷贝、约1.5×10¹²个基因组拷贝、约2.5×10¹²个基因组拷贝或约3.0×10¹³个基因组拷贝。

59.如权利要求1-58中任一项所述的药物组合物，其中将所述药物组合物施用一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。

60.如权利要求3-59中任一项所述的药物组合物，其中将所述参考药物组合物施用一次、两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。

61.如权利要求1-60中任一项所述的药物组合物，其中一天一次地、一天两次地、一天三次地、一天四次地、一天五次地、一天六次地或一天七次地施用所述药物组合物。

62.如权利要求3-60中任一项所述的药物组合物，其中一天一次地、一天两次地、一天三次地、一天四次地、一天五次地、一天六次地或一天七次地施用所述参考药物组合物。

63.如权利要求1-60中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物包含DPBS和蔗糖。

64.如权利要求3-60中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物的粘度为约1cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

65.如权利要求1-64中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含0.2％至15％高粘度等级羧甲基纤维素(CMC)、高粘度等级CMC、中等粘度等级CMC、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、HPMC、羟乙基纤维素(HES)、低粘度等级CMC和/或泊洛沙姆407。

66.如权利要求1-65中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度在0s^-1的剪切速率下测量。

67.如权利要求3-66中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物的所述粘度在0s^-1的剪切速率下测量。

68.如权利要求1-67中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度和所述参考药物组合物的所述粘度在相同的剪切速率下测量。

69.如权利要求1-68中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度是剪切稀化的。

70.如权利要求1-69中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约、至多约或至少约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、2cP、3cP、4cP、5cP、10cP、20cP、25cP、30cP、35cP、40cP、50cP、60cP、70cP、80cP、90cP、100cP、150cP、200cP、250cP、300cP、350cP、400cP、450cP、500cP、550cP、600cP、650cP、700cP、750cP、800cP、850cP、900cP、950cP、1000cP、1500cP、2000cP、2500cP、3000cP、3500cP、4000cP、4500cP、5000cP或10000cP，如在至少约1,000s^-1的剪切速率下所测量。

71.如权利要求70所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度在至少约1,000s^-1、2,000s^-1、3,000s^-1、4,000s^-1、5,000s^-1、6,000s^-1、7,000s^-1、8,000s^-1、9,000s^-1、10,000s^-1、15,000s^-1、20,000s^-1或30,000s^-1的剪切速率下测量。

72.如权利要求1-71中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约或至多约35cP，如在约5,000s^-1的剪切速率下所测量。

73.如权利要求1-71中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约或至多约25cP，如在约10,000s^-1的剪切速率下所测量。

74.如权利要求1-71中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约或至少约500cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

75.如权利要求1-71中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约或至少约1500cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

76.如权利要求1-71中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约或至多约362cP，如在至少约1000s^-1的剪切速率下所测量。

77.如权利要求3-76中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物的所述粘度为约或至多约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、1.1cP、1.2cP、1.3cP、1.4cP、1.5cP、1.6cP、1.7cP、1.8cP、1.9cP、2cP、2.1cP、2.2cP、2.3cP、2.4cP、2.5cP、2.6cP、2.7cP、2.8cP、2.9cP、3cP、3.1cP、3.2cP、3.3cP、3.4cP、3.5cP、3.6cP、3.7cP、3.8cP、3.9cP、4cP、4.1cP、4.2cP、4.3cP、4.4cP、4.5cP、4.6cP、4.7cP、4.8cP、4.9cP或5cP，如在至少约1000s^-1的剪切速率下所测量。

78.如权利要求3-77中任一项所述的药物组合物，其中所述参考药物组合物的所述粘度为约或至多约0.1cP、0.2cP、0.3cP、0.4cP、0.5cP、0.6cP、0.7cP、0.8cP、0.9cP、1cP、1.1cP、1.2cP、1.3cP、1.4cP、1.5cP、1.6cP、1.7cP、1.8cP、1.9cP、2cP、2.1cP、2.2cP、2.3cP、2.4cP、2.5cP、2.6cP、2.7cP、2.8cP、2.9cP、3cP、3.1cP、3.2cP、3.3cP、3.4cP、3.5cP、3.6cP、3.7cP、3.8cP、3.9cP、4cP、4.1cP、4.2cP、4.3cP、4.4cP、4.5cP、4.6cP、4.7cP、4.8cP、4.9cP或5cP，如在至多约1s^-1的剪切速率下所测量。

79.如权利要求1-78中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物的所述粘度为约0.5cP至约400cP，如在至少约1000s^-1的剪切速率下所测量。

80.如权利要求1-79中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含改良的杜氏磷酸盐缓冲盐水溶液和任选的表面活性剂。

81.如权利要求1-80中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖和任选的一种或多种表面活性剂。

82.如权利要求1-81中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖和任选的表面活性剂。

83.如权利要求1-82中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖、选自泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80的一种或多种表面活性剂，以及选自以下的一种或多种粘度调节剂：高粘度等级CMC、中等粘度等级CMC、低粘度等级CMC、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟乙基纤维素(HES)和泊洛沙姆407。

84.如权利要求1-83中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖、选自泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80的任选的一种或多种表面活性剂，以及选自以下的任选的一种或多种粘度调节剂：0.5％高粘度等级CMC、1％高粘度等级CMC、0.5％中等粘度等级CMC、低粘度等级CMC、0.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC)、0.2％HPMC、2％羟乙基纤维素(HES)和15％泊洛沙姆407。

85.如权利要求1-84中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠、无水磷酸氢二钠、蔗糖、选自泊洛沙姆188、聚山梨酯20和聚山梨酯80的一种或多种表面活性剂，以及选自CMC、HPMC和HES的一种或多种多糖。

86.如权利要求1-85中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含0.2mg/mL氯化钾、0.2mg/mL磷酸二氢钾、5.84mg/mL氯化钠、1.15mg/mL无水磷酸氢二钠、40.0mg/mL(4％重量/体积)蔗糖、0.001％(0.01mg/mL)泊洛沙姆188和1％高粘度等级羧甲基纤维素(CMC)。

87.如权利要求1-86中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物在约室温、20℃、4℃或-80℃下储存。

88.如权利要求1-87中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物在施用于人受试者之前储存。