KR20230106598A

KR20230106598A - 겔 제형과 같은 맥락막위 투여용 제형

Info

Publication number: KR20230106598A
Application number: KR1020237014819A
Authority: KR
Inventors: 자레드 비; 트리스탄 제임스 마샬; 에버렌 셰리 반; 스티븐 조셉 파콜라; 니콜라스 알렉산더 피어스 사스카 버스; 안토니 레이 오베리; 제시 아이. 유; 에와 부드진스키
Original assignee: 리젠엑스바이오 인크.
Priority date: 2020-10-07
Filing date: 2021-10-06
Publication date: 2023-07-13
Also published as: AU2021356645A1; US20230414788A1; TW202228646A; IL301947A; CA3194861A1; MX2023004005A; EP4225380A1; WO2022076595A1; JP2023545424A

Abstract

대상체의 눈의 맥락막상 공간(suprachoroidal space)에 투여하기 위한 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공된다. 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV)를 포함할 수 있다. 대상체에서 질병을 치료 또는 예방하기 위한 방법이 본 명세서에 또한 제공되며, 상기 방법은 이를 필요로 하는 대상체에게 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 투여함으로써 수행된다.

Description

겔 제형과 같은 맥락막상 투여를 위한 제형

우선권

본 출원은 2020년 10월 7일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/088,886호 및 2021년 2월 9일자로 출원된 미국 특허 출원 제63/147,584호에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.

전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조

본 출원은 2021년 9월 30일에 생성되고 107,121 바이트의 크기를 갖는, 파일명이 "12656-143-228_Sequence_Listing.txt"인, 텍스트 파일로서 본 출원과 함께 제출된 서열 목록을 참조로 포함한다.

인간의 눈은 고도로 복잡하고 고도로 발전된 감각 기관으로서, 이는 질병 및 장애의 숙주가 되기 쉽다. 전세계적으로 약 2만8천500만 명의 사람이 시각적으로 손상되어 있으며, 이들 중 3천900만 명이 실명 상태이고, 2만4천600만 명이 중등도 내지 중도의 시각적 손상을 갖는다(문헌[World Health Organization, 2012, "Global Data On Visual Impairments 2010," Geneva: World Health Organization]). 실명의 주요 원인 중 일부는 백내장(47%), 녹내장(12%), 연령-관련 황반 변성(AMD)(9%), 및 당뇨병성 망막병증(5%)이다(문헌[World Health Organization, 2007, "Global Initiative For The Elimination Of Avoidable Blindness: Action Plan 2006-2011," Geneva : World Health Organization]).

유전자 요법이 소정의 눈의 질병을 치료하는 데 사용되어 왔다(예를 들어, 국제 특허 출원 PCT/US2017/027650호(국제 특허 출원 공개 WO 2017/181021 A1호) 참조). 아데노-관련 바이러스(AAV)는 비병원성, 감염성의 폭넓은 숙주 및 세포 유형 지향성 범위 - 분열성 세포 및 비분열성 세포 둘 모두를 포함함 -, 및 장기간 도입유전자 발현을 확립하는 능력의 특성으로 인해 유전자 유법을 위한 매력적인 툴이다(예를 들어, 문헌[

, 2005, Virology Journal, 2:43]).

(예를 들어, 유리체강내 또는 망막하 투여에 의한) 안구 유전자 요법에 사용되는 현재의 방법은 침습적이며, 증가된 백내장 위험, 망막 박리(retinal detachment), 및 중심와(fovea)에서의 망막 색소 상피(RPE)로부터의 광수용기(photoreceptor)의 분리와 같은 심각한 실패를 갖는다. 현재의 안구 유전자 요법으로부터의 실패를 개선하거나 없애는 요법에 대한 상당한 충족되지 않은 의학적 요구가 존재한다.

파르보바이러스과(Parvoviridae family) 지정 데펜도바이러스(Dependovirus)의 구성원인 아데노-관련 바이러스(AAV)는 대략 4.7 킬로베이스(kb) 내지 6 kb의 단일-가닥 선형 DNA 게놈을 갖는 작은 외피 비보유 20면체 바이러스이다. 비병원성, 감염성의 폭넓은 숙주 및 세포 유형 지향성 범위 - 분열성 세포 및 비분열성 세포 둘 모두를 포함함 -, 및 장기간 도입유전자 발현을 확립하는 능력의 특성은 AAV를 유전자 요법을 위한 매력적인 툴이 되게 한다(예를 들어, 문헌[

, 2005, Virology Journal, 2:43]).

작제물 II는 맥락막상 공간(suprachoroidal space) 내로의 주사에 의해 전달되는 치료제로서 조사 중이다. 맥락막상 공간(SCS)은 약물 용액의 주사 시에 확장되는 공막과 맥락막 사이의 영역이다(문헌[Habot-Wilner, 2019]). SCS 공간은 주사된 용액이 생리학적 과정에 의해 제거됨에 따라 그의 주사전 크기로 회복된다. 약물 용액은 SCS 내에서 확산되고 인접 조직 내로 흡수된다. 맥락막 내의 모세관은 저분자량 삼투물질(osmolyte)에 대해 투과성이다. 본 발명은 맥락막상 공간에서의 더 긴 체류 시간 및 결과적으로 개선된 효능으로 이어지는 약제학적 조성물의 제공에 대한 충족되지 않은 필요성을 해결한다.

일 태양에서, 인간 대상체의 눈의 맥락막상 공간(SCS)에 투여하기에 적합한 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공되며, 상기 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터를 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 증가하는 온도에 따라 증가하는 점도 및/또는 더 높은 탄성 모듈러스를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 겔화 온도가 약 27 내지 32℃이다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 겔화 시간이 약 15 내지 90초이다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 약 1 s^-1내지 약 1000 s^-1의 전단율에서 측정될 때 5℃에서의 점도가 약 183 mPas이다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 약 1 s^-1내지 약 1000 s^-1의 전단율에서 측정될 때 5℃에서의 점도가 약 183 mPas 미만이다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 약 1 s^-1내지 약 1000 s^-1의 전단율에서 측정될 때 20℃에서의 점도가 약 183 mPas이다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 약 1 s^-1내지 약 1000 s^-1의 전단율에서 측정될 때 20℃에서의 점도가 약 183 mPas 미만이다.

일부 실시 형태에서, 27℃ 미만에서의 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 탄성 모듈러스는 약 0.1 Pa 이하, 약 0.01 Pa 이하, 약 0.001 Pa 이하 또는 0이다. 일부 실시 형태에서, 약 32℃ 내지 35℃에서의 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 탄성 모듈러스는 약 0.1 Pa 이상, 약 1 Pa 이상, 약 10 Pa 이상, 약 100 Pa 이상, 약 1000 Pa 이상, 약 10,000 Pa 이상 또는 약 100,000 Pa 이상이다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 투여 후의 제거 시간(clearance time)은 맥락막상 투여 후의 참조 약제학적 조성물의 제거 시간 이상이며, 여기서 참조 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물이 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 본 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 투여 후의 원주방향 확산(circumferential spread)이 맥락막상 투여 후의 참조 약제학적 조성물의 원주방향 확산에 비해 더 작으며, 여기서 참조 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물이 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 본 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 맥락막상 투여 후의 원주방향 확산은 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 더 작다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께가 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께와 동일하거나 그에 비해 더 높으며, 여기서 참조 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물이 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 본 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는다.

일부 실시 형태에서, 도입유전자의 발현 수준이 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후에 눈에서 검출되는 기간에 비해 맥락막상 투여 후에 더 긴 기간 동안 눈에서 검출되며, 여기서 참조 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물이 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 본 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 투여 후의 눈에서의 도입유전자의 농도는 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 눈에서의 도입유전자의 농도와 동일하거나 그에 비해 더 높으며, 여기서 참조 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물이 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 본 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 형질도입 속도가 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 형질도입 속도와 동일하거나 그에 비해 더 높으며, 여기서 참조 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물이 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 본 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 투여 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준이 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준과 동일하거나 그에 비해 감소되며, 여기서 참조 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물이 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 본 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 점도 및/또는 탄성 모듈러스와 참조 약제학적 조성물의 점도 및/또는 탄성 모듈러스는 동일한 전단율에서 측정된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 점도 및/또는 탄성 모듈러스는 적어도 약 1,000 s^-1, 2,000 s^-1, 3,000 s^-1, 4,000 s^-1, 5,000 s^-1, 6,000 s^-1, 7,000 s^-1, 8,000 s^-1, 9,000 s^-1, 10,000 s^-1, 15,000 s^-1, 20,000 s^-1, 또는 30,000 s^-1의 전단율에서 측정된다.

일부 실시 형태에서, 재조합 AAV는 작제물 II이다. 일부 실시 형태에서, 도입유전자는 항-인간 혈관 내피 성장 인자(항-VEGF) 항체이다. 일부 실시 형태에서, 재조합 AAV는 AAV1, AAV2, AAV2tYF, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAVrh10, AAV.rh20, AAV.rh39, AAV.Rh74, AAV.RHM4-1, AAV.hu37, AAV.Anc80, AAV.Anc80L65, rAAV.7m8, AAV.PHP.B, AAV.PHP.eB, AAV2.5, AAV2tYF, AAV3B, AAV.LK03, AAV.HSC1, AAV.HSC2, AAV.HSC3, AAV.HSC4, AAV.HSC5, AAV.HSC6, AAV.HSC7, AAV.HSC8, AAV.HSC9, AAV.HSC10, AAV.HSC11, AAV.HSC12, AAV.HSC13, AAV.HSC14, AAV.HSC15, 및 AAV.HSC16으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아데노-관련 바이러스 혈청형 유래 성분을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 재조합 AAV는 AAV8이다. 일부 실시 형태에서, 재조합 AAV는 AAV9이다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 수크로스를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 수크로스를 포함하지 않는다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 제거 시간은 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%, 또는 적어도 500%만큼 더 크다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 제거 시간은 약 30분 내지 약 20시간, 약 2시간 내지 약 20시간, 약 30분 내지 약 24시간, 약 1시간 내지 약 2시간, 약 30분 내지 약 90일, 약 30분 내지 약 60일, 약 30분 내지 약 30일, 약 30분 내지 약 21일, 약 30분 내지 약 14일, 약 30분 내지 약 7일, 약 30분 내지 약 3일, 약 30분 내지 약 2일, 약 30분 내지 약 1일, 약 4시간 내지 약 90일, 약 4시간 내지 약 60일, 약 4시간 내지 약 30일, 약 4시간 내지 약 21일, 약 4시간 내지 약 14일, 약 4시간 내지 약 7일, 약 4시간 내지 약 3일, 약 4시간 내지 약 2일, 약 4시간 내지 약 1일, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 16시간, 약 4시간 내지 약 20시간, 약 1일 내지 약 90일, 약 1일 내지 약 60일, 약 1일 내지 약 30일, 약 1일 내지 약 21일, 약 1일 내지 약 14일, 약 1일 내지 약 7일, 약 1일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 90일, 약 3일 내지 약 90일, 약 3일 내지 약 60일, 약 3일 내지 약 30일, 약 3일 내지 약 21일, 약 3일 내지 약 14일, 또는 약 3일 내지 약 7일이다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 제거 시간은 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일 이전이 아니다. 일부 실시 형태에서, 맥락막상 투여 후의 참조 약제학적 조성물의 제거 시간은 최대 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일이다. 일부 실시 형태에서, 제거 시간은 SCS로부터의 또는 눈으로부터의 제거 시간이다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께는 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 더 높다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께는 약 500 μm 내지 약 3.0 mm, 750 μm 내지 약 2.8 mm, 약 750 μm 내지 약 2.5 mm, 약 750 μm 내지 약 2 mm, 또는 약 1 mm 내지 약 2 mm이다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께는 적어도 약 50 μm, 100 μm, 200 μm, 300 μm, 400 μm, 500 μm, 600 μm, 700 μm, 800 μm, 900 μm, 1000 μm, 1 mm, 1.5 mm, 2 mm, 2.5 mm, 3 mm, 3.5 mm, 4 mm, 4.5 mm, 5 mm, 5.5 mm, 6 mm, 6.5 mm, 7 mm, 7.5 mm, 8 mm, 8.5 mm, 9 mm, 9.5 mm, 또는 10 mm이다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께는 최대 약 1 nm, 5 nm, 10 nm, 25 nm, 50 nm, 100 nm, 200 nm, 300 nm, 400 nm, 500 nm, 600 nm, 700 nm, 800 nm, 900 nm, 1 μm, 5 μm, 10 μm, 15 μm, 20 μm, 25 μm, 30 μm, 35 μm, 40 μm, 50 μm, 100 μm, 200 μm, 300 μm, 400 μm, 500 μm, 600 μm, 700 μm, 800 μm, 900 μm, 또는 1000 μm이다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께는 적어도 2시간, 적어도 3시간, 적어도 4시간, 적어도 5시간, 적어도 6시간, 적어도 7시간, 적어도 8시간, 적어도 10시간, 적어도 12시간, 적어도 18시간, 적어도 24시간, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 5일, 적어도 10일, 적어도 21일, 적어도 1개월, 적어도 6주, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 1년, 적어도 3년, 또는 적어도 5년 동안 지속된다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 눈에서의 도입유전자의 농도는 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 더 높다. 일부 실시 형태에서, 도입유전자는 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후에 적어도 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일 동안 눈에서 검출된다. 일부 실시 형태에서, 도입유전자는 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후에 최대 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 또는 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일 후 동안 눈에서 검출된다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 더 긴 기간은 적어도 4시간, 8시간, 12시간, 16시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일만큼 더 길다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준은 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준과 동일하거나 그에 비해 감소된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준은 적어도 약 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 감소된다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 형질도입 속도는 적어도 약 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 더 높다.

일부 실시 형태에서, 재조합 AAV 안정성은 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV 안정성에 비해 본 약제학적 조성물에서 더 높다. 일부 실시 형태에서, 재조합 AAV 안정성은 재조합 AAV의 감염성에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, 재조합 AAV 안정성은 재조합 AAV의 응집 수준에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, 재조합 AAV 안정성은 재조합 AAV에 의해 방출되는 유리 DNA의 수준에 의해 결정된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 참조 약제학적 조성물에서의 유리 DNA의 수준에 비해 약 50% 더 많은, 약 25% 더 많은, 약 15% 더 많은, 약 10% 더 많은, 약 5% 더 많은, 약 4% 더 많은, 약 3% 더 많은, 약 2% 더 많은, 약 1% 더 많은, 약 0% 더 많은, 약 1% 더 적은, 약 2% 더 적은, 약 5% 더 적은, 약 7% 더 적은, 약 10% 더 적은, 약 2배 더 많은, 약 3배 더 많은, 약 2배 더 적은, 약 3배 더 적은 유리 DNA를 포함한다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV의 감염성에 비해 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 높은 감염성을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV 응집의 수준에 비해 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 적은 재조합 AAV 응집을 포함한다.

일부 실시 형태에서, 도입유전자는 관심 질병을 치료하거나, 달리 호전시키거나, 예방하거나 이의 진행을 둔화시키는 데 적합한 도입유전자이다.

일부 실시 형태에서, 인간 대상체는 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막병증(DR), X-연관 질병 또는 바텐병(Batten disease)으로 진단된다. 일부 실시 형태에서, 인간 대상체는 녹내장 또는 비감염성 포도막염으로 진단된다. 일부 실시 형태에서, 인간 대상체는 뮤코다당증 IVA형(MPS IVA), 뮤코다당증 I형(MPS I), 뮤코다당증 II형(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질병, 뇌혈관 질병, 듀센(Duchenne) 근이영양증, 림 거들(Limb Girdle) 근이영양증, 베커(Becker) 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염, 또는 칼리크레인-관련 질병으로 진단된다.

일부 실시 형태에서, AAV는 팔미토일-단백질 티오에스테라제 1(PPT1) 또는 트라이펩티딜-펩티다제 1(TPP1)을 인코딩한다. 다른 실시 형태에서, AAV는 항-VEGF 융합 단백질, 항-VEGF 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-칼리크레인 항체 또는 항원-결합 단편, 항-TNF 항체 또는 항원-결합 단편, 항-C3 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 항-C5 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩한다.

일부 실시 형태에서, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 벡터 게놈 농도에 기초한다. 일부 실시 형태에서, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 투여당 게놈 카피수에 기초한다. 일부 실시 형태에서, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 인간 대상체에게 투여되는 총 게놈 카피수에 기초한다. 일부 실시 형태에서, 투여당 게놈 카피수는 맥락막상 투여당 재조합 AAV의 게놈 카피수이다.

일부 실시 형태에서, 투여되는 총 게놈 카피수는, 맥락막상으로 투여되는 재조합 AAV의 총 게놈 카피수이다. 일부 실시 형태에서, 벡터 게놈 농도(VGC)는 약 3 × 10⁹ GC/mL, 약 1 × 10¹⁰ GC/mL, 약 1.2 × 10¹⁰ GC/mL, 약 1.6 × 10¹⁰ GC/mL, 약 4 × 10¹⁰ GC/mL, 약 6 × 10¹⁰ GC/mL, 약 2 × 10¹¹ GC/mL, 약 2.4 × 10¹¹ GC/mL, 약 2.5 × 10¹¹GC/mL, 약 3 × 10¹¹ GC/mL, 약 6.2 × 10¹¹ GC/mL, 약 1 × 10¹² GC/mL, 약 2.5 × 10¹²GC/mL, 약 3 × 10¹²GC/mL, 약 5 × 10¹²GC/mL, 약 6 × 10¹²GC/mL, 약 1.5 × 10¹³ GC/mL, 약 2 × 10¹³ GC/mL, 또는 약 3 × 10¹³ GC/mL이다. 일부 실시 형태에서, 투여되는 총 게놈 카피수는 약 6.0 × 10¹⁰개의 게놈 카피, 약 1.6 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 2.5 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 3.0 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 5.0 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 6.0 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 1.5 x 10¹²개의 게놈 카피, 약 3 × 10¹²개의 게놈 카피, 약 1.0 × 10¹² GC/mL, 약 2.5 × 10¹² GC/mL, 또는 약 3.0 × 10¹³개의 게놈 카피이다. 일부 실시 형태에서, 투여되는 총 게놈 카피수는 약 6.0 × 10¹⁰개의 게놈 카피, 약 1.6 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 2.5 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 5.0 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 1.5 x 10¹²개의 게놈 카피, 약 3 x 10¹²개의 게놈 카피, 약 1.0 × 10¹²개의 게놈 카피, 약 2.5 × 10¹²개의 게놈 카피, 또는 약 3.0 × 10¹³개의 게놈 카피이다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회, 15회, 20회, 25회, 또는 30회 투여된다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회, 15회, 20회, 25회, 또는 30회 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 일일 1회, 일일 2회, 일일 3회, 일일 4회, 일일 5회, 일일 6회, 또는 일일 7회 투여된다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은 일일 1회, 일일 2회, 일일 3회, 일일 4회, 일일 5회, 일일 6회, 또는 일일 7회 투여된다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 폴록사머 407 및 폴록사머 188을 함유한다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 16 내지 22% 폴록사머 407을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 0 내지 16% 폴록사머 188을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 19% 폴록사머 407 및 6% 폴록사머 188을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 18% 폴록사머 407 및 6.5% 폴록사머 188을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 17.5% 폴록사머 407 및 7% 폴록사머 188을 포함한다.

일부 실시 형태에서, 본 조성물은 변형된 둘베코 인산염-완충 식염수 용액, 및 선택적으로 계면활성제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 0.2 mg/mL의 염화칼륨, 0.2 mg/mL의 일염기성 인산칼륨, 5.84 mg/mL의 염화나트륨, 1.15 mg/mL의 무수 이염기성 인산나트륨, 40.0 mg/mL(4% w/v)의 수크로스, 및 선택적으로 계면활성제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 조성물은 염화칼륨, 일염기성 인산칼륨, 염화나트륨, 무수 이염기성 인산나트륨, 수크로스, 및 선택적으로 계면활성제를 포함한다.

다른 태양에서, 대상체에서 질병을 치료하는 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 투여될 때 약 2 내지 10℃의 온도이다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 투여될 때 약 20 내지 25℃의 온도이다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 약 43 PSI 미만의 주사 압력으로 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 약 65 PSI 미만의 주사 압력으로 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 약 100 PSI 미만의 주사 압력으로 투여된다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 29 게이지 바늘을 사용하여 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 30 게이지 바늘을 사용하여 투여된다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 약 10 내지 15초의 주사 시간으로 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 약 5 내지 30초의 주사 시간으로 투여된다.

일부 실시 형태에서, 대상체는 인간이다.

일부 실시 형태에서, 질병은 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 당뇨병성 망막병증(DR), 바텐병, 뮤코다당증 IVA형(MPS IVA), 뮤코다당증 I형(MPS I), 뮤코다당증 II형(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질병, 뇌혈관 질병, 듀센 근이영양증, 림 거들 근이영양증, 베커 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염 및 칼리크레인-관련 질병으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

도 1. 열반응성 겔 제형을 사용한, 맥락막상 공간 내에서의 작제물 II의 국부화의 개요. 열반응성 겔 제형은 주사 동안의 액체 상태로부터 맥락막상 공간 내에서 겔로 변화되며, 이에 따라 투여된 AAV를, 더 큰 치료적 효과를 가지면서 더 긴 기간 동안 맥락막상 공간 내에 국부적으로 보유할 것으로 예상된다.
도 2a 내지 도 2c. 상이한 30 게이지 및 29 게이지 바늘에 대한 점도의 함수로서의 계산된 주사 압력. 패널 A는 100 PSI, 패널 B는 65 PSI, 그리고 패널 C는 45 PSI의 한계에 대한 축척으로 그려져 있다.
도 3. 열 카메라를 사용한 안구외 온도 측정.
도 4. 실험 설계(design of experiment) 연구로부터의 제형 조성 표면 도표의 함수로서의 겔화 온도.
도 5. 실험 설계 연구로부터의 제형 조성 표면 도표의 함수로서의 20℃에서의 점도.
도 6. 실험 설계 연구로부터의 제형 조성 표면 도표의 함수로서의 5℃에서의 점도.
도 7. 실험 설계(DOE) 연구로부터의 겔화 온도 레올로지 데이터의 요약. 샘플은 P407-P188 수준으로 라벨링된다(예를 들어, "16-0"으로 라벨링된 샘플 #1은 16% P407 및 0% P188을 갖는다).
도 8. G'과 G"의 교차점(crossover)이 어떻게 겔화 온도를 결정하는 데 사용되는지를 보여주는 DOE 연구에서의 샘플 #9(19% P407/8% P188)에 대한 예시적인 겔화 온도 프로파일.
도 9. DOE 연구로부터의 20℃에서 34℃로의 점프에 대한 겔화 시간의 레올로지 데이터의 요약. 샘플은 P407-P188 수준으로 라벨링된다(예를 들어, 샘플 #1은 16% P407 및 0% P188을 갖는다).
도 10. DOE 연구로부터의 5℃에서 34℃로의 점프에 대한 겔화 시간의 레올로지 데이터의 요약. 샘플은 P407-P188 수준으로 라벨링된다(예를 들어, 샘플 #1은 16% P407 및 0% P188을 갖는다).
도 11. G'과 G"의 교차점이 어떻게 겔화 시간을 결정하는 데 사용되는지를 보여주는 샘플 #9(19% P407/8% P188)에 대한 20℃에서 34℃로의 점프에 대한 예시적인 겔화 시간 프로파일
도 12. DOE 연구로부터의 20℃에서의 점도 vs. 전단율 스위프(sweep)의 요약. 샘플은 P407-P188 수준으로 라벨링된다(예를 들어, 샘플 #1은 16% P407 및 0% P188을 갖는다). 샘플 2 및 샘플 4는 20℃에서 이미 겔화되었으며, 이에 따라 겔 구조의 파괴에 대한 전단의 영향을 보여주고 있음에 유의한다. 다른 모든 샘플은 뉴턴 거동(전단율의 함수로서 일정한 점도)을 나타낸다.
도 13. DOE 연구로부터의 5℃에서의 점도 vs. 전단율 스위프의 요약. 샘플은 P407-P188 수준으로 라벨링된다(예를 들어, 샘플 #1은 16% P407 및 0% P188을 갖는다). 모든 샘플은 뉴턴 거동(전단율의 함수로서 일정한 점도)을 나타낸다.
도 14. 겔 온도에 대해 27℃부터 32℃까지의 한계를 갖는 열반응성 겔 제형 설계 공간(백색 영역). 이러한 설계 공간은 용량이 2 내지 8℃에서 준비되고, 여전히 냉각되어 있거나 냉장되어 있는 동안에 투여되는 시나리오를 나타낼 수 있다. 한계: 15 내지 90초의 겔 시간, 5℃에서의 점도: 183 mPas 이하, 주사 지속시간 = 10초, 및 220 μm 이상의 바늘 ID. 음영처리된 영역은 각각의 인자에 대해 정의된 Lo 한계 및 Hi 한계를 초과하는 영역에 상응한다. 등고선은 겔화 온도를 나타낸다.
도 15. 겔 온도에 대한 27℃부터 32℃까지의 제한(분홍색 음영) 및 20℃에서의 점도에 대해 183 mPas 이하라는 추가의 제한(183 mPas 초과의 영역은 녹색 음영으로 표시되어 있음)을 갖는 열반응성 겔 제형 설계 공간(백색 영역). 이 시나리오에서, 용량은 10 s의 주사 시간으로 제어된 실온(20℃)에서 투여된다. 한계: 15 내지 90초의 겔 시간(청색 음영), 20℃에서의 점도: 183 mPas 이하(녹색 영역), 주사 지속시간 = 10초, 및 220 μm 이상의 바늘 ID. 음영처리된 영역은 각각의 인자에 대해 정의된 Lo 한계 및 Hi 한계를 초과하는 영역에 상응한다. 등고선은 겔화 온도를 나타낸다. 십자선은 폴록사머 188 및 폴록사머 407에 대해 각각 A = 6%/19%, B = 6.5%/18%, 및 C = 7%/17.5% w/v로 추가로 평가된 3개의 제형을 보여준다.
도 16. 오토클레이브 멸균을 갖는 임상 약물 제품의 예시적인 제조.
도 17. 멸균 여과를 갖는 임상 약물 제품의 예시적인 제조.
도 18. 예비가온된(31.3℃) 표면 상에서의 액적 유동의 겔화 시간에 대한 셋업을 보여주는 열 카메라 이미지(열질량(thermal mass)을 위해 가온수가 담긴 병). 20℃에서 50 μL 부피의 제형 A(좌측), 제형 B(중간), 및 제형 C(우측)를 가온된 표면 상에 분배하고, 액적 유동의 비디오를 사용하여 액적이 유동을 멈춘 시간을 결정하였다.
도 19. 제형 A에 대한 겔화 온도 프로파일.
도 20. 제형 B에 대한 겔화 온도 프로파일.
도 21. 제형 C에 대한 겔화 온도 프로파일.
도 22. 제형 A에 대한 20℃에서 34℃로의 점프에 대한 겔화 시간
도 23. 제형 B에 대한 20℃에서 34℃로의 점프에 대한 겔화 시간
도 24. 제형 C에 대한 20℃에서 34℃로의 점프에 대한 겔화 시간
도 25. 제형 A에 대한 5℃에서 34℃로의 점프에 대한 겔화 시간
도 26. 제형 B에 대한 5℃에서 34℃로의 점프에 대한 겔화 시간
도 27. 제형 C에 대한 5℃에서 34℃로의 점프에 대한 겔화 시간
도 28. 제형 A에 대한 20℃에서의 점도 vs. 전단율
도 29. 제형 B에 대한 20℃에서의 점도 vs. 전단율
도 30. 제형 C에 대한 20℃에서의 점도 vs. 전단율
도 31. 제형 A에 대한 5℃에서의 점도 vs. 전단율
도 32. 제형 B에 대한 5℃에서의 점도 vs. 전단율
도 33. 제형 C에 대한 5℃에서의 점도 vs. 전단율
도 34. 10%로 희석된 제형 A에 대한 겔화 프로파일.
도 35. 10%로 희석된 제형 B에 대한 겔화 프로파일.
도 36. 10%로 희석된 제형 C에 대한 겔화 프로파일.
도 37. 대조군(S-0DGN) 및 제형 A(S-0DGO), 제형 B(S-0DGP), 및 제형 C(S-0DGQ)의 시차 주사 형광측정법 프로파일.
도 38. 30 Ga 바늘을 구비한 CLSD 장치를 사용하여 약 35℃에서 제핵된 돼지 눈 안으로 주사된 0.1 mL의 제형 B에 대한 주사 압력 프로파일.
도 39. 30 Ga TW 바늘을 구비한 1 mL 주사기를 사용하여 공기 중에 주사된 0.1 mL의 제형 A, 제형 B 및 제형 C에 대한 주사 시간 프로파일(압력/힘은 작업자에 의해 대략 일정하게 유지되었으며, 그 결과 더 높은 점도 제형에 대해 더 긴 주사 시간을 가져왔음).

대상체의 눈의 맥락막상 공간(SCS)에 투여하기에 적합한 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 약제학적 조성물이 본 명세서에 제공된다. 대상체는 섹션 4.5에 기재된 하나 이상의 질병으로 진단된 대상체일 수 있다. AAV 벡터는 섹션 4.4에 기재되어 있고, 그러한 벡터의 투여량은 섹션 4.3에 기재되어 있다. 일부 실시 형태에서, 섹션 4.1에 제공되는 약제학적 조성물은 섹션 4.2에 기재된 하나 이상의 기능적 특성을 갖도록 제형화된다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은, 예를 들어 다음과 같은 다양한 이점을 갖는다: 증가된 또는 더 느린 제거 시간(섹션 4.2.1); 감소된 원주방향 확산(섹션 4.2.2); 증가된 SCS 두께(섹션 4.2.3); 감소된 혈관확장 및/또는 혈관 누출(섹션 4.2.4); 주사 부위에서의 증가된 AAV 수준 및 증가된 형질도입 속도(섹션 4.2.5); 및 본 약제학적 조성물이 SCS 내에 투여된 후에 도입유전자의 증가된 농도. 이론에 의해 구애됨이 없이, 이들 기능적 특성은 섹션 4.1에 개시된 바와 같은 열반응성 제형을 사용하여 달성될 수 있다. 관련 연구에서 사용될 수 있는 검정(섹션 4.6)이 본 명세서에 또한 제공된다.

4.1 약제학적 조성물의 제형

본 발명은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터를 포함하는 맥락막상 투여에 적합한 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 안구외 온도(extraocular temperature)(약 32 내지 35℃)에서 상이한 점도(또는 "손실 모듈러스(G")") 값 특성을 갖는 몇몇 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 AAV를 투여하는 데 사용된다. 일부 실시 형태에서, 안구외 온도(약 32 내지 35℃)에서 상이한 탄성/저장 모듈러스(G') 특성을 갖는 몇몇 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 AAV를 투여하는 데 사용된다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 열반응성이다. 용어 "열반응성"은 상이한 온도에서 상이한 물리적 특성을 나타내는 물질을 설명하기 위한 것으로 당업계에 일반적으로 알려져 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 안구외 온도(약 32 내지 35℃)에 있을 때보다 실온(예를 들어, 약 20 내지 25℃)에서 더 낮은 점도, 더 낮은 손실 모듈러스(G"), 및/또는 더 낮은 탄성/저장 모듈러스(G')를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 안구외 온도(약 32 내지 35℃)에 있을 때보다 냉각될(예를 들어, 약 2 내지 10℃) 때 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스(G')를 갖는다. 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약제학적 조성물의 점도가 안구외 온도(약 32 내지 35℃)에 있을 때보다 더 낮은 온도(예를 들어, 냉각된 상태 또는 실온에서)에서 대상체의 눈에 투여될 수 있다. 어떠한 특정 이론에 의해서도 구애되고자 함이 없이, 대상체의 눈에의 투여(예를 들어, 맥락막상 투여) 시의 온도 변화는 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')의 증가로 이어질 수 있으며, 그 결과 참조 약제학적 조성물에 비해 주사 부위 부근에서 본 조성물의 증가된 체류 시간을 가져올 수 있으며, 여기서 참조 약제학적 조성물은 안구외 온도(약 32 내지 35℃)에서 더 낮은 점도를 갖는다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물 및 참조 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물과 참조 약제학적 조성물은 벡터 게놈 농도를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물과 참조 약제학적 조성물은 동일한 양의 게놈 카피를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G') 값이 약 32 내지 35℃에서의 물의 점도보다 더 높다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G') 값이 약 32 내지 35℃에서의 대조물의 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')보다 더 높다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G') 값이 약 32 내지 35℃에서의 망막하 주사를 위해 통상적으로 사용되는 용액의 점도보다 더 높다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G') 값이 약 32 내지 35℃에서의 PBS 또는 dPBS의 점도보다 더 높다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G') 값이 약 32 내지 35℃에서의 행크 평형 염 용액(HBSS)의 점도보다 더 높다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은 약 20 내지 25℃에서의 본 약제학적 조성물과 동일하거나 유사한 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은 대조 용액(예를 들어, PBS, 물, 또는 HBSS)이다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은 수크로스를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은 AAV 망막하 주사에 일반적으로 사용되는 약제학적 조성물이다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은 열반응성이 아니며, 예를 들어 참조 약제학적 조성물은 약 20 내지 25℃에서의 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')가 약 32 내지 35℃에서와 실질적으로 동일하거나, 또는 증가된 온도에서 더 높은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖지 않는다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은, 예를 들어 0, 0.001, 0.01, 0.1 또는 1 s^-1전단율에서 또는 약 1000 s^-1 이상의 전단율에서, 약 32 내지 35℃에서의 점도가 약, 적어도 약, 또는 최대 약 10 cP, 15 cP, 20 cP, 25 cP, 30 cP, 35 cP, 40 cP, 45 cP, 50 cP, 60 cP, 70 cP, 80 cP, 90 cP, 100 cP, 150 cP, 200 cP, 250 cP, 300 cP, 350 cP, 400 cP, 450 cP, 500 cP, 550 cP, 600 cP, 650 cP, 700 cP, 800 cP, 900 cP, 1000 cP, 2,000 cP, 3,000 cP, 4,000 cP, 5,000 cP, 6,000 cP, 7,000 cP, 8,000 cP, 9,000 cP, 10,000 cP, 12,000 cP, 또는 15,000 cP이다. 일부 실시 형태에서, 전단율은 약 100 s^-1, 50 s^-1, 10 s^-1, 1 s^-1, 0.1 s^-1, 0.01 s^-1, 0.001 s^-1, 또는 0.0001 s^-1 이하이다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물의 점도는, 예를 들어 약 100 s^-1, 50 s^-1, 10 s^-1, 1 s^-1, 0.01 s^-1, 0.001 s^-1, 또는 0.0001 s^-1 이하의 전단율에서 본 명세서에 개시된 임의의 점도이다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물 또는 약 32 내지 35℃에서의 참조 약제학적 조성물(또는 대조 약제학적 조성물 또는 비교가능한 약제학적 조성물)은 (예를 들어, 약 1000 s^-1 이상의 전단율에서 측정된 바와 같은) 점도가 약 또는 적어도 약 5 cP, 약 또는 적어도 약 10 cP, 약 또는 적어도 약 15 cP, 약 또는 적어도 약 20 cP, 약 또는 적어도 약 25 cP, 약 또는 적어도 약 30 cP, 약 또는 적어도 약 35 cP, 약 또는 적어도 약 40 cP, 약 또는 적어도 약 45 cP, 약 또는 적어도 약 50 cP, 약 또는 적어도 약 60 cP, 약 또는 적어도 약 70 cP, 약 또는 적어도 약 80 cP, 약 또는 적어도 약 90 cP, 100 cP, 약 또는 적어도 약 115 cP, 약 또는 적어도 약 120 cP, 약 또는 적어도 약 125 cP, 약 또는 적어도 약 130 cP, 약 또는 적어도 약 135 cP, 약 또는 적어도 약 140 cP, 약 또는 적어도 약 145 cP, 약 또는 적어도 약 150 cP, 약 또는 적어도 약 160 cP, 약 또는 적어도 약 170 cP, 약 또는 적어도 약 180 cP, 약 또는 적어도 약 190 cP, 약 또는 적어도 약 200 cP, 약 또는 적어도 약 300 cP, 약 또는 적어도 약 400 cP, 약 또는 적어도 약 500 cP, 약 또는 적어도 약 600 cP, 약 또는 적어도 약 700 cP, 약 또는 적어도 약 800 cP, 약 또는 적어도 약 900 cP, 약 또는 적어도 약 1000 cP, 약 또는 적어도 약 1500 cP, 약 또는 적어도 약 2000 cP, 약 또는 적어도 약 2500 cP, 약 또는 적어도 약 3000 cP, 약 또는 적어도 약 3500 cP, 약 또는 적어도 약 4000 cP, 약 또는 적어도 약 4500 cP, 약 또는 적어도 약 5000 cP, 약 또는 적어도 약 5500 cP, 약 또는 적어도 약 6000 cP, 약 또는 적어도 약 6500 cP, 약 또는 적어도 약 7000 cP, 약 또는 적어도 약 7500 cP, 약 또는 적어도 약 8000 cP, 약 또는 적어도 약 9000 cP, 약 또는 적어도 약 10000 cP, 약 또는 적어도 약 1×10³ cP, 약 또는 적어도 약 3×10³ cP, 약 또는 적어도 약 1×10⁴ cP, 약 또는 적어도 약 3×10⁴ cP, 약 또는 적어도 약 1×10⁵ cP, 약 또는 적어도 약 1.7×10⁵ cP, 약 또는 적어도 약 3×10⁵ cP, 약 또는 적어도 약 1×10⁶ cP, 약 또는 적어도 약 3×10⁶ cP, 약 또는 적어도 약 1×10⁷ cP, 약 또는 적어도 약 3×10⁷ cP, 약 또는 적어도 약 1×10⁸ cP, 약 또는 적어도 약 3×10⁸ cP이다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 (예를 들어, 약 1000 s^-1 이상의 전단율에서 측정된 바와 같은) 점도는 약 25 cP 내지 약 1 x 10⁶ cP, 약 25 cP 내지 약 1 x 10⁴ cP, 약 25 cP 내지 약 5,000 cP, 약 25 cP 내지 약 1 x 10³ cP, 약 100 cP 내지 약 1 x 10⁶ cP, 약 100 cP 내지 약 1 x 10⁴ cP, 약 100 cP 내지 약 5,000 cP, 약 100 cP 내지 약 1 x 10³ cP이다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 (예를 들어, 약 1000 s^-1 이상의 전단율에서 측정된 바와 같은) 점도는 약 25 cP 내지 약 3×10⁶ cP, 약 10 cP 내지 약 3×10⁸ cP, 약 50 cP 내지 약 5000 cP, 약 10 cP 내지 약 15000 cP, 약 25 cP 내지 약 1500 cP, 약 50 cP 내지 약 1500 cP, 약 25 cP 내지 약 3×10⁴ cP이다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물은 (예를 들어, 약 1000 s^-1 이상의 전단율에서 측정된 바와 같은) 점도가 적어도 약 25 cP 내지 약 3×10⁶ cP, 적어도 약 10 cP 내지 약 3×10⁸ cP, 적어도 약 50 cP 내지 약 5000 cP, 적어도 약 10 cP 내지 약 15000 cP, 적어도 약 25 cP 내지 약 1500 cP, 적어도 약 50 cP 내지 약 1500 cP, 또는 적어도 약 25 cP 내지 약 3×10⁴ cP이다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 비교가능한 약제학적 조성물, 또는 참조 약제학적 조성물, 또는 대조물은 (예를 들어, 약 1000 s^-1 이상의 전단율에서 측정된 바와 같은) 점도가 약 또는 최대 약 1 cP, 약 또는 최대 약 2 cP, 약 또는 최대 약 3 cP, 약 또는 최대 약 4 cP, 약 또는 최대 약 5 cP, 약 또는 최대 약 6 cP, 약 또는 최대 약 7 cP, 약 또는 최대 약 8 cP, 약 또는 최대 약 9 cP, 약 또는 최대 약 10 cP, 약 또는 최대 약 15 cP, 약 또는 최대 약 20 cP, 약 또는 최대 약 25 cP, 약 또는 최대 약 30 cP, 약 또는 최대 약 35 cP, 약 또는 최대 약 40 cP, 약 또는 최대 약 45 cP, 약 또는 최대 약 50 cP, 약 또는 최대 약 55 cP, 약 또는 최대 약 60 cP, 약 또는 최대 약 65 cP, 약 또는 최대 약 70 cP, 약 또는 최대 약 75 cP, 약 또는 최대 약 80 cP, 약 또는 최대 약 85 cP, 약 또는 최대 약 90 cP, 약 또는 최대 약 95 cP, 약 또는 최대 약 100 cP, 약 또는 최대 약 200 cP, 약 또는 최대 약 300 cP, 약 또는 최대 약 400 cP, 약 또는 최대 약 500 cP이다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 비교가능한 약제학적 조성물, 또는 참조 약제학적 조성물, 또는 대조물은 점도가 약 1 cP 내지 약 25 cP, 약 1 cP 내지 약 20 cP, 약 1 cP 내지 약 24 cP, 약 1 cP 내지 약 10 cP, 약 1 cP 내지 약 50 cP, 약 1 cP 내지 약 100 cP, 약 5 cP 내지 약 50 cP, 약 1 cP 내지 약 5 cP, 또는 약 1 cP 내지 약 200 cP이다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 참조 약제학적 조성물은 (예를 들어, 약 1000 s^-1 이상의 전단율에서의) 점도가 약 1 cP 또는 약 1 cP 미만이다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 참조 약제학적 조성물은 (예를 들어, 적어도 약 1000 ^-1의 전단율에서의) 점도가 약 1 cP 미만이다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 20℃에서의 점도가 183 mPas 이하이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 5℃에서의 점도가 183 mPas 이하이다. 점도는 전단율에 좌우되기 때문에, 약제학적 조성물의 "점도"는 0.01 s^-1 내지 100,000 s^-1의 전단율의 임의의 지점에서의 점도이다. 일부 실시 형태에서, 점도에 대한 단위는 cP 또는 mPas로 정의될 수 있다. 일부 경우에, cP와 mPas는 상호교환 가능하게 사용된다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 32 내지 35℃에서의 점도가 265 내지 655 mPas 미만이다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물의 점도는 적어도 약 10 cP 또는 적어도 약 100 cP 또는 적어도 약 1000 cP, 또는 적어도 약 10,000 cP, 또는 적어도 약 70,000 cP, 또는 최대 약 200,000 cP, 또는 최대 약 250,000 cP, 또는 최대 약 300,000 cP 또는 그 이상이다. 일부 실시 형태에서, 전단율은 약 1000 s^-1 이상의 전단율이다. 일부 실시 형태에서, 제형은 적어도 300,000 mPas의 제로 전단 점도를 특징으로 한다. 일부 실시 형태에서, 제형은 추가로 1000 s^-1 전단율에서 약 400 mPas 이하의 점도를 특징으로 한다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 참조 약제학적 제형, 또는 약 32 내지 35℃에서 더 낮은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는 제형에 비해 주사 후에 (상이한 시점들에서 측정될 때) 더 긴 기간 동안 SCS 내에(또는 눈 안에) 남아 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 (예를 들어, 참조 약제학적 조성물, 또는 약 32 내지 35℃에서 더 낮은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는 제형에 비해) SCS 또는 주사 부위에서의 두께를 확장시킨다(섹션 4.2.3 참조).

일부 실시 형태에서, 27℃ 미만에서의 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 탄성 모듈러스는 약 0.1 Pa 이하, 약 0.01 Pa 이하, 약 0.001 Pa 이하 또는 0이다. 일부 실시 형태에서, 32℃ 내지 35℃에서의 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 탄성 모듈러스는 약 0.1 Pa 이상, 약 1 Pa 이상, 약 10 Pa 이상, 약 100 Pa 이상, 약 1000 Pa 이상, 약 10,000 Pa 이상 또는 약 100,000 Pa 이상이다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 겔화 온도가 27℃ 초과이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 겔화 온도가 32℃ 미만이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 겔화 온도가 약 27 내지 32℃ 초과이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 겔화 온도가 약 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 또는 35℃이다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 겔화 시간이 약 10초보다 더 길다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 겔화 시간이 약 15초보다 더 길다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 겔화 시간이 약 10 내지 15초, 약 15 내지 20초, 약 20 내지 25초, 약 25 내지 30초, 약 30 내지 35초, 약 35 내지 40초, 약 40 내지 45초, 약 45 내지 50초, 약 50 내지 55초, 약 55 내지 60초, 약 60 내지 65초, 약 65 내지 70초, 약 70 내지 75초, 약 75 내지 80초, 약 80 내지 85초, 또는 약 85 내지 90초이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 겔화 시간이 90초 미만이다. 일부 실시 형태에서, 겔화 시간은 약 34℃에서 결정된다. 일부 실시 형태에서, 겔화 시간은 약 32 내지 34℃에서 결정된다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 겔화 시간은 상기 조성물의 주사 시간보다 더 길다. 일부 실시 형태에서, 겔화 시간은 주사 시간보다 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 90% 초과하여 더 길다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물은 투여 후 적어도 2시간 동안 주사 부위(예를 들어, SCS)의 적어도 일부분을 적어도 500 μm 또는 약 500 μm 내지 약 3 mm의 두께로 확장시키기에 충분한 점도를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물의 점도는 주사 부위(예를 들어, SCS)를 약 750 μm 내지 약 2.8 mm, 약 750 μm 내지 약 2.5 mm, 약 750 μm 내지 약 2 mm, 또는 약 1 mm 내지 약 2 mm의 두께로 확장시키기에 충분하다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물의 점도는 투여 후 적어도 2시간, 적어도 3시간, 적어도 4시간, 적어도 5시간, 적어도 6시간, 적어도 7시간, 적어도 8시간, 적어도 10시간, 적어도 12시간, 적어도 18시간, 적어도 24시간, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 5일, 적어도 10일, 적어도 21일, 적어도 1개월, 적어도 6주, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 1년, 적어도 3년, 또는 적어도 5년 동안 주사 부위(예를 들어, SCS)를 약 500 μm 내지 약 3.0 mm의 두께로 확장시키기에 충분하다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물의 점도는 투여 후 적어도 2시간, 적어도 3시간, 적어도 4시간, 적어도 5시간, 적어도 6시간, 적어도 7시간, 적어도 8시간, 적어도 10시간, 적어도 12시간, 적어도 18시간, 또는 적어도 24시간 동안 주사 부위(예를 들어, SCS)를 약 1 mm 내지 약 3 mm의 두께로 확장시키기에 충분하다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물의 점도는 투여 후 적어도 2시간, 적어도 3시간, 적어도 4시간, 적어도 5시간, 적어도 6시간, 적어도 7시간, 적어도 8시간, 적어도 10시간, 적어도 12시간, 적어도 18시간, 적어도 24시간, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 5일, 적어도 10일, 적어도 21일, 적어도 1개월, 적어도 6주, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 1년, 적어도 3년, 또는 적어도 5년 동안 주사 부위(예를 들어, SCS)를 약 1 mm 내지 약 2 mm의 두께로 확장시키기에 충분하다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물의 점도는 투여 후 적어도 2시간, 적어도 3시간, 적어도 4시간, 적어도 5시간, 적어도 6시간, 적어도 7시간, 적어도 8시간, 적어도 10시간, 적어도 12시간, 적어도 18시간, 적어도 24시간, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 5일, 적어도 10일, 적어도 21일, 적어도 1개월, 적어도 6주, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 1년, 적어도 3년, 또는 적어도 5년 동안 주사 부위(예를 들어, SCS)를 약 2 mm 내지 약 3 mm의 두께로 확장시키기에 충분하다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물의 점도는 무기한 동안 주사 부위(예를 들어, SCS)를 약 750 μm 내지 약 2.8 mm, 약 750 μm 내지 약 2.5 mm, 약 750 μm 내지 약 2 mm, 또는 약 1 mm 내지 약 2 mm의 두께로 확장시키기에 충분하다. 무기한 기간은, 적어도 부분적으로, 주사 부위(예를 들어, SCS)에서의 약제학적 조성물의 안정성으로 인해 달성될 수 있다.

일부 실시 형태에서, 주사 부위(예를 들어, SCS)를 적어도 500 μm, 또는 약 500 μm 내지 약 3 mm의 두께로 확장시키기에 충분한 점도를 갖는 약 32 내지 35℃에서의 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서의 물의 점도(즉, 약 1 cP)보다 더 큰 점도를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 약제학적 조성물은 주사 부위(예를 들어, SCS)를 적어도 약 50 μm, 100 μm, 200 μm, 300 μm, 400 μm, 500 μm, 600 μm, 700 μm, 800 μm, 900 μm, 1000 μm, 1 mm, 1.5 mm, 2 mm, 2.5 mm, 3 mm, 3.5 mm, 4 mm, 4.5 mm, 5 mm, 5.5 mm, 6 mm, 6.5 mm, 7 mm, 7.5 mm, 8 mm, 8.5 mm, 9 mm, 9.5 mm, 10 mm, 또는 10 mm 초과의 두께로 확장시키기에 충분한 점도를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 참조 약제학적 조성물은 주사 부위를 최대 약 1 nm, 5 nm, 10 nm, 25 nm, 50 nm, 100 nm, 200 nm, 300 nm, 400 nm, 500 nm, 600 nm, 700 nm, 800 nm, 900 nm, 1 μm, 5 μm, 10 μm, 15 μm, 20 μm, 25 μm, 30 μm, 35 μm, 40 μm, 50 μm, 100 μm, 200 μm, 300 μm, 400 μm, 500 μm, 600 μm, 700 μm, 800 μm, 900 μm, 1000 μm, 1 mm, 1.5 mm, 2 mm, 2.5 mm, 3 mm, 3.5 mm, 4 mm, 4.5 mm, 5 mm, 5.5 mm, 6 mm, 6.5 mm, 7 mm, 7.5 mm, 8 mm, 8.5 mm, 9 mm, 9.5 mm, 또는 10 mm의 두께로 확장시키기에 충분한 점도를 갖는다.

본 명세서에 개시된 약제학적 조성물을 사용하여 섹션 4.5에 기재된 질병(예를 들어, 안구 질병)을 치료하는 방법이 본 명세서에 또한 제공된다. 일부 실시 형태에서, 안구 질병을 치료하는 방법은 대상체(예를 들어, 인간)에게 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터)의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 대상체의 눈의 맥락막상 공간(SCS)에 투여된다. 일부 실시 형태에서, SCS에 투여될 때 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 본 약제학적 조성물의 유효량은 망막하 투여될 때 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 본 약제학적 조성물의 유효량보다 더 적다. 일부 실시 형태에서, SCS에 투여될 때 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 본 약제학적 조성물의 유효량은 유리체강내 투여될 때 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 본 약제학적 조성물의 유효량보다 더 적다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 SCS에 투여될 때에, 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여될 때와 동일한 벡터 게놈 농도를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 SCS에 투여될 때에, 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여될 때와 동일한 게놈 카피의 양을 갖는다. 일부 실시 형태에서, SCS에 투여될 때 대상체에서 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 본 약제학적 조성물의 유효량은 대상체에서 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 참조 약제학적 조성물의 유효량에 비해 더 낮다. 일부 실시 형태에서, SCS에 투여될 때 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 본 약제학적 조성물의 유효량은 망막하 투여될 때 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 참조 약제학적 조성물의 유효량보다 더 적다. 일부 실시 형태에서, SCS에 투여될 때 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 본 약제학적 조성물의 유효량은 유리체강내 투여될 때 치료 반응을 이끌어내기에 충분한 참조 약제학적 조성물의 유효량보다 더 적다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물과 참조 약제학적 조성물은 벡터 게놈 농도를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물과 참조 약제학적 조성물은 동일한 양의 게놈 카피를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')가 참조 약제학적 조성물의 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')보다 더 높다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 삽입 부위 부근에 실질적으로 국부화된다(섹션 4.2.1 및 섹션 4.2.2 참조). 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은, 본 약제학적 조성물이 망막하 또는 유리체강내 투여될 때에 비해 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여될 때 더 높은 수준의 도입유전자 발현(농도)을 가져온다(섹션 4.2.6 참조). 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은, 참조 약제학적 조성물이 망막하, 유리체강내, 또는 SCS에 투여될 때에 비해 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여될 때 더 높은 수준의 도입유전자 발현(농도)을 가져온다(섹션 4.2.6 참조). 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은, 본 약제학적 조성물이 망막하 또는 유리체강내 투여될 때에 비해 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여될 때 더 높은 수준의 AAV를 가져온다(섹션 4.2.5 참조). 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은, 참조 약제학적 조성물이 망막하, 유리체강내, 또는 SCS에 투여될 때에 비해 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여될 때 더 높은 수준의 AAV를 가져온다(섹션 4.2.5 참조). 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은, 본 약제학적 조성물이 망막하 또는 유리체강내 투여될 때에 비해 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여될 때 주사 부위에서의 더 높은 형질도입 속도(또는 감염 속도)를 가져온다(섹션 4.2.5 참조). 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은, 참조 약제학적 조성물이 망막하, 유리체강내, 또는 SCS에 투여될 때에 비해 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여될 때 주사 부위에서의 더 높은 형질도입 속도(또는 감염 속도)를 가져온다(섹션 4.2.5 참조). 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은, 본 약제학적 조성물이 망막하 또는 유리체강내 투여될 때에 비해 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여될 때 감소된 혈관확장 및/또는 혈관 누출을 가져온다(섹션 4.2.4 참조). 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은, 참조 약제학적 조성물이 망막하, 유리체강내, 또는 SCS에 투여될 때에 비해 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여될 때 감소된 혈관확장 및/또는 혈관 누출을 가져온다(섹션 4.2.4 참조). 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 본 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서의 참조 약제학적 조성물보다 더 높은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물과 참조 약제학적 조성물은 벡터 게놈 농도를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물과 참조 약제학적 조성물은 동일한 양의 게놈 카피를 갖는다.

4.1.1 점도의 조작

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')는 제형이 약 32 내지 35℃로 가온됨에 따라 물의 점도를 충분히 초과하는 값으로 증가되고(예를 들어, 0.1 s^-1의 전단율에서 적어도 약 100 cP), 그 결과 대상체의 눈 안으로(예를 들어, SCS에) 배치하기에, 예를 들어 주사하기에 매우 효과적인 제형이 된다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서의 제형의 상대적으로 높은 점도 및/또는 탄성 모듈러스는 그러한 제형이 치료적 성분(예를 들어, 도입유전자를 포함하는 발현 카세트를 포함하는 AAV)을 장기간 동안 제형 내에 실질적으로 균일한 현탁 상태로 유지할 수 있는 능력을 향상시키고, 또한 제형의 저장 안정성을 도울 수 있다.

본 명세서에 제공된 약제학적 조성물(예를 들어, 열반응성 약제학적 조성물)은 액체 분산 매질("용매") 및 겔화제("겔형성제(gelator)")를 포함할 수 있다. 용매 분자는 겔형성제에 의해 형성된 하이드로콜로이드 네트워크를 침투할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 수성 시스템 내에 친수성 중합체를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 천연 중합체(예를 들어, 잔탄 검, 전분, 겔란, 곤약, 카라기난, 콜라겐, 피브린, 실크 피브로인, 하이알루논산 또는 젤라틴)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 합성 중합체(예를 들어, 키토산-β-글리세로포스페이트, 폴리 (N-아이소프로필아크릴아미드)(pNIPAAm), 플루로닉 F127, 메틸셀룰로스 또는 PEG-PCL)를 포함한다. 예를 들어, 문헌[Taylor et al., Gels. 2017 Mar; 3(1): 4]을 참조한다.

더 낮은 온도에 비해 약 32 내지 35℃에서 더 높은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖고 본 발명의 약제학적 조성물에 사용될 수 있는 용액의 비제한적인 예에는 다양한 농도의 폴록사머 407(P407, CAS 번호: 9003-11-6) 및 폴록사머 188(P188, CAS 번호: 9003-11-6)을 포함하는 용액이 포함된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 16% P407 및 0% P188을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 22% P407 및 0% P188을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 16% P407 및 16% P188을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 22% P407 및 16% P188을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 19% P407 및 0% P188을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 16% P407 및 8% P188을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 22% P407 및 8% P188을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 19% P407 및 8% P188을 포함한다.

4.1.2 제형의 다른 성분

일부 실시 형태에서, 본 발명은 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV)와, 일염기성 인산칼륨, 염화나트륨, 무수 이염기성 인산나트륨, 수크로스, 및 계면활성제 중 적어도 하나를 포함하는 약제학적 조성물(예를 들어, 액체 제형)을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물(예를 들어, 액체 제형)은 수크로스를 포함하지 않는다. 섹션 4.6 및/또는 섹션 5에 기재된 것들과 같은 검정이, 추가 성분의 존재가, 증가된 온도에서 더 높은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')와 같은 본 제형의 특성을 방해하지 않는다는 것을 결정하는 데 사용될 수 있다.

일부 실시 형태에서, 본 발명은 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV)와, 이온성 염 부형제 또는 완충제, 수크로스, 및 계면활성제 중 적어도 하나를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 이온성 염 부형제 또는 완충제는 일염기성 인산칼륨, 인산칼륨, 염화나트륨, 무수 이염기성 인산나트륨, 인산나트륨 6수화물, 일염기성 인산나트륨 1수화물, 트로메타민, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 하이드로클로라이드(Tris-HCl), 아미노산, 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드(히스티딘-HCl), 소듐 석시네이트, 소듐 시트레이트, 소듐 아세테이트, 및 (4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄설폰산)(HEPES), 황산나트륨, 황산마그네슘, 염화마그네슘 6수화물, 황산칼슘, 염화칼륨, 염화칼슘, 및 칼슘 시트레이트로 이루어진 군으로부터의 하나 이상의 성분일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 계면활성제는 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터의 하나 이상의 성분일 수 있다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 약 115 mM의 이온 강도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 약 100 mM의 이온 강도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 65 mM 내지 약 95 mM의 이온 강도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 70 mM 내지 약 90 mM의 이온 강도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 75 mM 내지 약 85 mM의 이온 강도를 갖는다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 30 mM 내지 약 100 mM의 이온 강도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 35 mM 내지 약 95 mM의 이온 강도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 40 mM 내지 약 90 mM의 이온 강도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 45 mM 내지 약 85 mM의 이온 강도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 50 mM 내지 약 80 mM의 이온 강도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 55 mM 내지 약 75 mM의 이온 강도를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 약 70 mM의 이온 강도를 갖는다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 (예를 들어, 0.2 g/L의 농도의) 염화칼륨을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 (예를 들어, 0.2 g/L의 농도의) 일염기성 인산칼륨을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 (예를 들어, 5.84 g/L의 농도의) 염화나트륨을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 (예를 들어, 1.15 g/L의 농도의) 무수 이염기성 인산나트륨을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 염화칼륨, 일염기성 인산칼륨, 염화나트륨, 및 무수 이염기성 인산나트륨을 포함한다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 3% (중량/부피, 30 g/L) 내지 18% (중량/부피, 180 g/L)의 농도의 수크로스를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 4% (중량/부피, 40 g/L)의 농도의 수크로스를 포함한다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 0.001% (중량/부피, 0.01 g/L)의 농도의 폴록사머 188을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 0.0005% (중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05% (중량/부피, 0.5 g/L)의 농도의 폴록사머 188을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 0.001% (중량/부피, 0.01 g/L)의 농도의 폴록사머 188을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 0.0005% (중량/부피, 0.05 g/L) 내지 0.05% (중량/부피, 0.5 g/L)의 농도의 폴리소르베이트 20을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 0.0005% (중량/부피, 0.05 g/L) 내지 0.05% (중량/부피, 0.5 g/L)의 농도의 폴리소르베이트 80을 포함한다.

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 pH는 약 7.4이다. 소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 pH는 약 6.0 내지 9.0이다. 소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 pH는 7.4이다. 소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물의 pH는 6.0 내지 9.0이다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 소수성-코팅된 유리 바이알 내에 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 사이클로 올레핀 중합체(Cyclo Olefin Polymer, COP) 바이알 내에 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 Daikyo Crystal Zenith® (CZ) 바이알 내에 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 TopLyo 코팅된 바이알 내에 있다.

소정 실시 형태에서, 약제학적 조성물이 본 명세서에 개시되며, 상기 약제학적 조성물은 재조합 AAV와, (a) 0.2 g/L 농도의 염화칼륨, (b) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산칼륨, (c) 5.84 g/L 농도의 염화나트륨, (d) 1.15 g/L 농도의 무수 이염기성 인산나트륨, (e) 4% 질량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (f) 0.001% 질량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (g) 물 중 적어도 하나를 포함하며, 상기 재조합 AAV는 AAV8이다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 수크로스를 포함하지 않는다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 (a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 인코딩하는 작제물 II와, (b) 0.2 g/L 농도의 염화칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 무수 이염기성 인산나트륨, (f) 4% 질량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 질량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물 중 적어도 하나를 포함하며, 상기 항-hVEGF 항체는 서열 번호 2 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 1 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 수크로스를 포함하지 않는다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 (a) 트라이펩티딜-펩티다제 1을 인코딩하는 AAV8 또는 AAV9와, (b) 0.2 g/L 농도의 염화칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 무수 이염기성 인산나트륨, (f) 4% 질량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 질량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 수크로스를 포함하지 않는다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 (예를 들어, 맥락막상 약물 전달 장치, 예컨대 미세바늘을 구비한 마이크로인젝터(microinjector)를 통한) 맥락막상 주사에 적합한 원하는 점도, 탄성 모듈러스(G'), 밀도, 및/또는 오스몰랄 농도(osmolality)를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 액체 조성물이다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 냉동된 조성물이다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 겔이다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 오스몰랄 농도 범위가 200 mOsm/L 내지 660 mOsm/L이다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 오스몰랄 농도가 약, 적어도 약, 또는 최대 약 200 mOsm/L, 250 mOsm/L, 300 mOsm/L, 350 mOsm/L, 400 mOsm/L, 450 mOsm/L, 500 mOsm/L, 550 mOsm/L, 600 mOsm/L, 650 mOsm/L, 또는 660 mOsm/L이다.

소정 실시 형태에서, 유전자 요법 작제물은 제형 완충액 중의 AAV 벡터 활성 성분의 냉동된 멸균 일회용 용액으로 공급된다. 구체적인 실시 형태에서, 맥락막상 투여에 적합한 약제학적 조성물은, 생리학적으로 적합한 수성 완충제, 계면활성제 및 선택적인 부형제를 포함하는 제형 완충액 중 재조합(예를 들어, rHuGlyFabVEGFi) 벡터의 현탁액을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 작제물은 둘베코 인산염 완충 식염수 및 0.001% 폴록사머 188, pH = 7.4 중에서 제형화된다.

구체적인 실시 형태에서, 본 조성물은 변형된 둘베코 인산염-완충 식염수 용액, 및 선택적으로 계면활성제를 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 0.2 mg/mL의 염화칼륨, 0.2 mg/mL의 일염기성 인산칼륨, 5.84 mg/mL의 염화나트륨, 1.15 mg/mL의 무수 이염기성 인산나트륨, 40.0 mg/mL(4% w/v)의 수크로스, 및 선택적으로 계면활성제를 포함한다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 본 조성물은 염화칼륨, 일염기성 인산칼륨, 염화나트륨, 무수 이염기성 인산나트륨, 수크로스, 및 선택적으로 계면활성제를 포함한다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 문헌[Zeinab et al. (European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 114 (2017) 119-13)]에 기재된 조성물이 아니다.

4.2 기능적 특성

4.2.1 제거 시간

본 발명은 SCS로부터의 지연된 제거 시간을 가져오는 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성(또는 더 점성인) 및/또는 탄성 및/또는 겔화된(또는 더 탄성인 그리고/또는 더 겔화된) 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 비점성 또는 낮은 점도 및/또는 덜 탄성이고/이거나 겔화되지 않은 약제학적 조성물에 비해 SCS로부터의 지연된 제거 시간을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성(또는 더 점성인) 및/또는 탄성 및/또는 겔화된(또는 더 탄성인 그리고/또는 더 겔화된) 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 비점성 또는 낮은 점도 및/또는 덜 탄성이고/이거나 겔화되지 않은 약제학적 조성물에 비해 눈으로부터의 지연된 제거 시간을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 더 점성 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물은 덜 점성 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물에 비해 눈으로부터의 지연된 제거 시간을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서의 물의 점도보다 더 높은 점도 값을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및 겔화된 약제학적 조성물은 점도 값 및/또는 탄성 모듈러스 값이 약 32 내지 35℃에서의 망막하 주사를 위해 통상적으로 사용되는 용액의 점도 및/또는 탄성 모듈러스보다 더 높다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후에 본 약제학적 조성물의 제거 시간은 참조 약제학적 조성물이 망막하 또는 유리체강내 투여된 후에 참조 약제학적 조성물의 제거 시간과 동일하거나 그보다 더 높다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후에 본 약제학적 조성물의 제거 시간은 참조 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후에 참조 약제학적 조성물의 제거 시간과 동일하거나 그보다 더 높다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)은 약 30분 내지 약 20시간, 약 2시간 내지 약 20시간, 약 30분 내지 약 24시간, 약 1시간 내지 약 2시간, 약 30분 내지 약 90일, 약 30분 내지 약 60일, 약 30분 내지 약 30일, 약 30분 내지 약 21일, 약 30분 내지 약 14일, 약 30분 내지 약 7일, 약 30분 내지 약 3일, 약 30분 내지 약 2일, 약 30분 내지 약 1일, 약 4시간 내지 약 90일, 약 4시간 내지 약 60일, 약 4시간 내지 약 30일, 약 4시간 내지 약 21일, 약 4시간 내지 약 14일, 약 4시간 내지 약 7일, 약 4시간 내지 약 3일, 약 4시간 내지 약 2일, 약 4시간 내지 약 1일, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 16시간, 약 4시간 내지 약 20시간, 약 1일 내지 약 90일, 약 1일 내지 약 60일, 약 1일 내지 약 30일, 약 1일 내지 약 21일, 약 1일 내지 약 14일, 약 1일 내지 약 7일, 약 1일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 90일, 약 3일 내지 약 90일, 약 3일 내지 약 60일, 약 3일 내지 약 30일, 약 3일 내지 약 21일, 약 3일 내지 약 14일, 또는 약 3일 내지 약 7일의 SCS로부터의 제거 시간을 가져온다. 일부 실시 형태에서, SCS로부터의 제거 시간은 약 3일 내지 약 365일, 약 3일 내지 약 300일, 약 3일 내지 약 200일, 약 3일 내지 약 150일, 약 3일 내지 약 125일, 약 7일 내지 약 365일, 약 7일 내지 약 300일, 약 7일 내지 약 200일, 약 7일 내지 약 150일, 약 7일 내지 약 125일이다. "SCS로부터의 제거 시간"은 실질적으로 모든 약제학적 조성물, 약제학적 작용제, 또는 AAV가 SCS를 빠져나가는 데 필요한 시간이다. 일부 실시 형태에서, "SCS로부터의 제거 시간"은 약제학적 조성물, 약제학적 작용제, 또는 AAV가 임의의 표준 방법(예컨대, 섹션 4.6 및 섹션 5에 기재된 것들)에 의해 SCS 내에서 검출되지 않는 데 필요한 시간이다. 일부 실시 형태에서, "SCS로부터의 제거 시간"은 약제학적 조성물, 약제학적 작용제, 또는 AAV가 임의의 표준 방법(예컨대, 섹션 4.6 및 섹션 5에 기재된 것들)에 의해 검출되는 바와 같이 최대 약 2% 또는 최대 약 5%의 양으로 SCS에 존재할 때이다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)은 약 30분 내지 약 20시간, 약 2시간 내지 약 20시간, 약 30분 내지 약 24시간, 약 1시간 내지 약 2시간, 약 30분 내지 약 90일, 약 30분 내지 약 60일, 약 30분 내지 약 30일, 약 30분 내지 약 21일, 약 30분 내지 약 14일, 약 30분 내지 약 7일, 약 30분 내지 약 3일, 약 30분 내지 약 2일, 약 30분 내지 약 1일, 약 4시간 내지 약 90일, 약 4시간 내지 약 60일, 약 4시간 내지 약 30일, 약 4시간 내지 약 21일, 약 4시간 내지 약 14일, 약 4시간 내지 약 7일, 약 4시간 내지 약 3일, 약 4시간 내지 약 2일, 약 4시간 내지 약 1일, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 16시간, 약 4시간 내지 약 20시간, 약 1일 내지 약 90일, 약 1일 내지 약 60일, 약 1일 내지 약 30일, 약 1일 내지 약 21일, 약 1일 내지 약 14일, 약 1일 내지 약 7일, 약 1일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 90일, 약 3일 내지 약 90일, 약 3일 내지 약 60일, 약 3일 내지 약 30일, 약 3일 내지 약 21일, 약 3일 내지 약 14일, 또는 약 3일 내지 약 7일의 눈으로부터의 제거 시간을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 눈으로부터의 제거 시간은 약 3일 내지 약 365일, 약 3일 내지 약 300일, 약 3일 내지 약 200일, 약 3일 내지 약 150일, 약 3일 내지 약 125일, 약 7일 내지 약 365일, 약 7일 내지 약 300일, 약 7일 내지 약 200일, 약 7일 내지 약 150일, 약 7일 내지 약 125일이다. "눈으로부터의 제거 시간"은 실질적으로 모든 약제학적 조성물, 약제학적 작용제, 또는 AAV가 눈을 빠져나가는 데 필요한 시간이다. 일부 실시 형태에서, "눈으로부터의 제거 시간"은 약제학적 조성물, 약제학적 작용제, 또는 AAV가 임의의 방법(예컨대, 섹션 4.6 및 섹션 5에 기재된 것들)에 의해 눈 안에서 검출되지 않는 데 필요한 시간이다. 일부 실시 형태에서, "눈으로부터의 제거 시간"은 약제학적 조성물, 약제학적 작용제, 또는 AAV가 임의의 표준 방법(예컨대, 섹션 4.6 및 섹션 5에 기재된 것들)에 의해 검출되는 바와 같이 최대 약 2% 또는 최대 약 5%의 양으로 눈에 존재할 때이다.

일부 실시 형태에서, 제거 시간은 본 약제학적 조성물의 투여 후 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일 이전이 아니다(예를 들어, SCS 또는 눈으로부터의 제거 시간은 상기 기간 전에 일어나지 않는다). 일부 실시 형태에서, 제거 시간은 본 약제학적 조성물의 투여 후 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일이다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)은, 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물이 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 (예를 들어, 망막하 투여를 통해, 유리체강내 투여를 통해, 또는 SCS에) 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 큰, 적어도 3배 더 큰, 적어도 4배 더 큰, 적어도 5배 더 큰, 적어도 6배 더 큰, 적어도 7배 더 큰, 적어도 8배 더 큰, 적어도 9배 더 큰, 적어도 10배 더 큰, 적어도 15배 더 큰, 적어도 20배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 100배 더 큰, 적어도 5% 더 큰, 적어도 10% 더 큰, 적어도 15% 더 큰, 적어도 20% 더 큰, 적어도 25% 더 큰, 적어도 30% 더 큰, 적어도 35% 더 큰, 적어도 40%, 적어도 45% 더 큰, 적어도 50% 더 큰, 적어도 55% 더 큰, 적어도 60% 더 큰, 적어도 65% 더 큰, 적어도 70% 더 큰, 적어도 75% 더 큰, 적어도 80% 더 큰, 적어도 85% 더 큰, 적어도 90% 더 큰, 적어도 95% 더 큰, 적어도 100% 더 큰, 적어도 150% 더 큰, 또는 적어도 200% 더 큰, 적어도 250% 더 큰, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 큰, 또는 적어도 500% 더 큰 제거 시간을 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 약 32 내지 35℃에서 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물이, 예를 들어 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 맥락막상 투여에 의해 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 큰, 적어도 3배 더 큰, 적어도 4배 더 큰, 적어도 5배 더 큰, 적어도 6배 더 큰, 적어도 7배 더 큰, 적어도 8배 더 큰, 적어도 9배 더 큰, 적어도 10배 더 큰, 적어도 15배 더 큰, 적어도 20배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 100배 더 큰, 적어도 5% 더 큰, 적어도 10% 더 큰, 적어도 15% 더 큰, 적어도 20% 더 큰, 적어도 25% 더 큰, 적어도 30% 더 큰, 적어도 35% 더 큰, 적어도 40%, 적어도 45% 더 큰, 적어도 50% 더 큰, 적어도 55% 더 큰, 적어도 60% 더 큰, 적어도 65% 더 큰, 적어도 70% 더 큰, 적어도 75% 더 큰, 적어도 80% 더 큰, 적어도 85% 더 큰, 적어도 90% 더 큰, 적어도 95% 더 큰, 적어도 100% 더 큰, 적어도 150% 더 큰, 또는 적어도 200% 더 큰, 적어도 250% 더 큰, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 큰, 또는 적어도 500% 더 큰 제거 시간을 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 약 32 내지 35℃에서 덜 점성인 약제학적 조성물이, 예를 들어 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 망막하 투여에 의해 또는 유리체강내 투여에 의해 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 큰, 적어도 3배 더 큰, 적어도 4배 더 큰, 적어도 5배 더 큰, 적어도 6배 더 큰, 적어도 7배 더 큰, 적어도 8배 더 큰, 적어도 9배 더 큰, 적어도 10배 더 큰, 적어도 15배 더 큰, 적어도 20배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 100배 더 큰, 적어도 5% 더 큰, 적어도 10% 더 큰, 적어도 15% 더 큰, 적어도 20% 더 큰, 적어도 25% 더 큰, 적어도 30% 더 큰, 적어도 35% 더 큰, 적어도 40%, 적어도 45% 더 큰, 적어도 50% 더 큰, 적어도 55% 더 큰, 적어도 60% 더 큰, 적어도 65% 더 큰, 적어도 70% 더 큰, 적어도 75% 더 큰, 적어도 80% 더 큰, 적어도 85% 더 큰, 적어도 90% 더 큰, 적어도 95% 더 큰, 적어도 100% 더 큰, 적어도 150% 더 큰, 또는 적어도 200% 더 큰, 적어도 250% 더 큰, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 큰, 또는 적어도 500% 더 큰 제거 시간을 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성인(예를 들어, 상대적으로 점성인, 중간 점도 내지 초고점도, 또는 물보다 더 점성인, 또는 대조 용액보다 더 점성인, 또는 망막하 투여에 일반적으로 사용되는 용액보다 더 점성인) 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 동일한 약제학적 조성물이, 예를 들어 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 큰, 적어도 3배 더 큰, 적어도 4배 더 큰, 적어도 5배 더 큰, 적어도 6배 더 큰, 적어도 7배 더 큰, 적어도 8배 더 큰, 적어도 9배 더 큰, 적어도 10배 더 큰, 적어도 15배 더 큰, 적어도 20배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 100배 더 큰, 적어도 5% 더 큰, 적어도 10% 더 큰, 적어도 15% 더 큰, 적어도 20% 더 큰, 적어도 25% 더 큰, 적어도 30% 더 큰, 적어도 35% 더 큰, 적어도 40%, 적어도 45% 더 큰, 적어도 50% 더 큰, 적어도 55% 더 큰, 적어도 60% 더 큰, 적어도 65% 더 큰, 적어도 70% 더 큰, 적어도 75% 더 큰, 적어도 80% 더 큰, 적어도 85% 더 큰, 적어도 90% 더 큰, 적어도 95% 더 큰, 적어도 100% 더 큰, 적어도 150% 더 큰, 또는 적어도 200% 더 큰, 적어도 250% 더 큰, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 큰, 또는 적어도 500% 더 큰 제거 시간을 가져온다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 주사에 의해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 상대적으로 점성 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)의 제거 시간은 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여되는 동일한 약제학적 조성물의 제거 시간보다 더 길다. 일부 실시 형태에서, 맥락막상 주사에 의해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)의 제거 시간은, 맥락막상 주사에 의해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물의 제거 시간보다 더 길다. 일부 실시 형태에서, 맥락막상 주사에 의해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)의 제거 시간은, 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물의 제거 시간보다 더 길다. 일부 실시 형태에서, 맥락막상 주사에 의해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 점성 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)의 제거 시간은, 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물의 제거 시간보다 더 길다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 주사에 의해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 점성 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)의 제거 시간은 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여되는 동일한 약제학적 조성물보다 적어도 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일만큼 더 길다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 주사에 의해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)의 제거 시간은, 맥락막상 주사에 의해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물보다 적어도 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일만큼 더 길다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 주사에 의해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)의 제거 시간은, 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여되는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물보다 적어도 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일만큼 더 길다.

일부 실시 형태에서, 유리체강내 주사를 통해 또는 망막하 주사를 통해 투여되는 본 약제학적 조성물의 제거 시간은 투여 후 최대 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 최대 약 400일이다.

일부 실시 형태에서, 유리체강내 주사에 의해, 망막하 주사에 의해, 또는 SCS에 투여되는 참조 약제학적 조성물의 제거 시간은 투여 후 최대 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 최대 약 400일이다.

일부 실시 형태에서, 제거 시간은 눈으로부터의 제거 시간이다. 일부 실시 형태에서, 제거 시간은 SCS로부터의 제거 시간이다. 일부 실시 형태에서, 제거 시간은 주사 부위로부터의 제거 시간이다.

4.2.2 원주방향 확산

일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은 주사 부위에서 국부화된다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은, 더 낮은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖고/갖거나 안구외 온도(약 32 내지 35℃)에서 겔화되지 않은 비교가능한 약제학적 조성물보다 더 긴 기간 동안 주사 부위에서 국부화된다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은, 약제학적 조성물이 망막하 주사 또는 유리체강내 주사에 의해 투여될 때에 비해 SCS 내에 주사될 때 더 긴 기간 동안 주사 부위에서 국부화된다. 약제학적 조성물은 상이한 점도 및/또는 탄성 모듈러스 값을 가질 수 있다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성 및/또는 탄성 및/또는 겔화된(또는 더 점성, 더 탄성 및/또는 더 겔화된) 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 비점성이거나 낮은 점도를 갖고/갖거나 겔화되지 않은 약제학적 조성물에 비해 더 긴 기간 동안 SCS 내에 국부화된 상태로 남아 있다.

일부 실시 형태에서, 국부화는 원주방향 확산(예를 들어, 2D 원주방향 확산)을 평가함으로써 결정될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)은, 세포외 온도(약 32 내지 35℃)에서 덜 점성인 참조 약제학적 조성물이, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 (예를 들어, 맥락막상 주사에 의해, 망막하 주사에 의해, 또는 유리체강내 주사에 의해) 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 적은, 적어도 3배 더 적은, 적어도 4배 더 적은, 적어도 5배 더 적은, 적어도 6배 더 적은, 적어도 7배 더 적은, 적어도 8배 더 적은, 적어도 9배 더 적은, 적어도 10배 더 적은, 적어도 15배 더 적은, 적어도 20배 더 적은, 적어도 50배 더 적은, 적어도 100배 더 적은, 적어도 5% 더 적은, 적어도 10% 더 적은, 적어도 15% 더 적은, 적어도 20% 더 적은, 적어도 25% 더 적은, 적어도 30% 더 적은, 적어도 35% 더 적은, 적어도 40%, 적어도 45% 더 적은, 적어도 50% 더 적은, 적어도 55% 더 적은, 적어도 60% 더 적은, 적어도 65% 더 적은, 적어도 70% 더 적은, 적어도 75% 더 적은, 적어도 80% 더 적은, 적어도 85% 더 적은, 적어도 90% 더 적은, 적어도 95% 더 적은, 적어도 100% 더 적은, 적어도 150% 더 적은, 또는 적어도 200% 더 적은, 적어도 250% 더 적은, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 적은, 또는 적어도 500% 더 적은 원주방향 확산을 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 참조 약제학적 조성물이, 예를 들어 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 맥락막상 투여에 의해, 망막하 투여에 의해, 또는 유리체강내 투여에 의해 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 적은, 적어도 3배 더 적은, 적어도 4배 더 적은, 적어도 5배 더 적은, 적어도 6배 더 적은, 적어도 7배 더 적은, 적어도 8배 더 적은, 적어도 9배 더 적은, 적어도 10배 더 적은, 적어도 15배 더 적은, 적어도 20배 더 적은, 적어도 50배 더 적은, 적어도 100배 더 적은, 적어도 5% 더 적은, 적어도 10% 더 적은, 적어도 15% 더 적은, 적어도 20% 더 적은, 적어도 25% 더 적은, 적어도 30% 더 적은, 적어도 35% 더 적은, 적어도 40%, 적어도 45% 더 적은, 적어도 50% 더 적은, 적어도 55% 더 적은, 적어도 60% 더 적은, 적어도 65% 더 적은, 적어도 70% 더 적은, 적어도 75% 더 적은, 적어도 80% 더 적은, 적어도 85% 더 적은, 적어도 90% 더 적은, 적어도 95% 더 적은, 적어도 100% 더 적은, 적어도 150% 더 적은, 또는 적어도 200% 더 적은, 적어도 250% 더 적은, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 적은, 또는 적어도 500% 더 적은 원주방향 확산을 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성(예를 들어, 상대적으로 점성인, 중간 점도 내지 초고점도, 또는 물보다 더 점성인, 또는 대조 용액보다 더 점성인, 또는 망막하 투여에 일반적으로 사용되는 용액보다 더 점성인) 또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 동일한 약제학적 조성물이, 예를 들어 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 망막하 투여에 의해 또는 유리체강내 투여에 의해 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 적은, 적어도 3배 더 적은, 적어도 4배 더 적은, 적어도 5배 더 적은, 적어도 6배 더 적은, 적어도 7배 더 적은, 적어도 8배 더 적은, 적어도 9배 더 적은, 적어도 10배 더 적은, 적어도 15배 더 적은, 적어도 20배 더 적은, 적어도 50배 더 적은, 적어도 100배 더 적은, 적어도 5% 더 적은, 적어도 10% 더 적은, 적어도 15% 더 적은, 적어도 20% 더 적은, 적어도 25% 더 적은, 적어도 30% 더 적은, 적어도 35% 더 적은, 적어도 40%, 적어도 45% 더 적은, 적어도 50% 더 적은, 적어도 55% 더 적은, 적어도 60% 더 적은, 적어도 65% 더 적은, 적어도 70% 더 적은, 적어도 75% 더 적은, 적어도 80% 더 적은, 적어도 85% 더 적은, 적어도 90% 더 적은, 적어도 95% 더 적은, 적어도 100% 더 적은, 적어도 150% 더 적은, 또는 적어도 200% 더 적은, 적어도 250% 더 적은, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 적은, 또는 적어도 500% 더 적은 원주방향 확산을 가져온다.

일부 실시 형태에서, 원주방향 확산은 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물이 투여된 후 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일에서 결정될 수 있다.

4.2.3 SCS 두께

일부 실시 형태에서, 국부화는 약제학적 조성물이 대상체에게 투여된 후에 SCS 두께를 평가함으로써 결정될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은, 약제학적 조성물이 SCS 내에 주사된 후에 SCS의 두께를 증가시킨다. 일부 실시 형태에서, SCS는 약 32 내지 35℃에서 낮은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖고/갖거나 겔화되지 않은 약제학적 조성물의 주입을 수용가능하도록 확장된다. 일부 실시 형태에서, 낮은 점도 및/또는 낮은 탄성 모듈러스 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물의 더 큰 부피의 주입은 SCS의 추가의 확장을 야기하지 않는다. 일부 실시 형태에서, 낮은 점도 및/또는 낮은 탄성 모듈러스 유체 제형의 더 큰 부피는 SCS를 추가로 확장시키지 않고서 SCS 내의 유체 확산의 면적을 증가시킴으로써 수용된다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물의 SCS 내로의 주입은 낮은 점도 및/또는 낮은 탄성 모듈러스 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물이 SCS 내로 주입될 때 달성되는 SCS 두께를 넘어서 SCS 두께를 확장시킨다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물의 경우 SCS 두께를 증가시키는 것은 SCS에 대한 용이한 접근이 가능할 수 있으며, 그럼으로써 SCS 내의 장치의 배치를 용이하게 하거나 가능하게 한다. 일부 실시 형태에서, SCS 두께를 확장시키는 것은 약제학적 조성물 및/또는 도입유전자를 인코딩하는 AAV가 더 긴 기간 동안 주사 부위에 남아 있게(국부화되게) 한다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물은, 약 32 내지 35℃에서 비점성이거나 낮은 점도 및/또는 낮은 탄성 모듈러스를 갖고/갖거나 겔화되지 않은 약제학적 조성물에 비해 더 긴 기간 동안 주사 부위 또는 그 부근에서 두께를 증가시킨다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물은, 약 32 내지 35℃에서 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물에 비해 더 긴 기간 동안 주사 부위 또는 그 부근에서 두께를 증가시킨다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후의 주사 부위에서의 두께는 참조 약제학적 조성물이 망막하 또는 유리체강내 투여된 후에 참조 약제학적 조성물의 주사 부위에서의 두께와 동일하거나 그보다 더 높다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후의 본 약제학적 조성물의 주사 부위에서의 두께는 참조 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후의 참조 약제학적 조성물의 주사 부위에서의 두께와 동일하거나 그보다 더 높다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성(예를 들어, 상대적으로 점성인, 중간 점도 내지 초고점도, 또는 물보다 더 점성인, 또는 대조 용액보다 더 점성인, 또는 망막하 투여에 일반적으로 사용되는 용액보다 더 점성인) 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 약 32 내지 35℃에서 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물이, 예를 들어 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 맥락막상 투여에 의해 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 큰, 적어도 3배 더 큰, 적어도 4배 더 큰, 적어도 5배 더 큰, 적어도 6배 더 큰, 적어도 7배 더 큰, 적어도 8배 더 큰, 적어도 9배 더 큰, 적어도 10배 더 큰, 적어도 15배 더 큰, 적어도 20배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 100배 더 큰, 적어도 5% 더 큰, 적어도 10% 더 큰, 적어도 15% 더 큰, 적어도 20% 더 큰, 적어도 25% 더 큰, 적어도 30% 더 큰, 적어도 35% 더 큰, 적어도 40%, 적어도 45% 더 큰, 적어도 50% 더 큰, 적어도 55% 더 큰, 적어도 60% 더 큰, 적어도 65% 더 큰, 적어도 70% 더 큰, 적어도 75% 더 큰, 적어도 80% 더 큰, 적어도 85% 더 큰, 적어도 90% 더 큰, 적어도 95% 더 큰, 적어도 100% 더 큰, 적어도 150% 더 큰, 또는 적어도 200% 더 큰, 적어도 250% 더 큰, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 큰, 또는 적어도 500% 더 큰 SCS 두께의 증가를 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 약 32 내지 35℃에서 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물이, 예를 들어 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 망막하 투여에 의해 또는 유리체강내 투여에 의해 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 큰, 적어도 3배 더 큰, 적어도 4배 더 큰, 적어도 5배 더 큰, 적어도 6배 더 큰, 적어도 7배 더 큰, 적어도 8배 더 큰, 적어도 9배 더 큰, 적어도 10배 더 큰, 적어도 15배 더 큰, 적어도 20배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 100배 더 큰, 적어도 5% 더 큰, 적어도 10% 더 큰, 적어도 15% 더 큰, 적어도 20% 더 큰, 적어도 25% 더 큰, 적어도 30% 더 큰, 적어도 35% 더 큰, 적어도 40%, 적어도 45% 더 큰, 적어도 50% 더 큰, 적어도 55% 더 큰, 적어도 60% 더 큰, 적어도 65% 더 큰, 적어도 70% 더 큰, 적어도 75% 더 큰, 적어도 80% 더 큰, 적어도 85% 더 큰, 적어도 90% 더 큰, 적어도 95% 더 큰, 적어도 100% 더 큰, 적어도 150% 더 큰, 또는 적어도 200% 더 큰, 적어도 250% 더 큰, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 큰, 또는 적어도 500% 더 큰 주사 부위 또는 그 부근에서의 두께의 증가를 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성(예를 들어, 상대적으로 점성인, 중간 점도 내지 초고점도, 또는 물보다 더 점성인, 또는 대조 용액보다 더 점성인, 또는 망막하 투여에 일반적으로 사용되는 용액보다 더 점성인) 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 동일한 약제학적 조성물이, 예를 들어 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 망막하 투여에 의해 또는 유리체강내 투여에 의해 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 큰, 적어도 3배 더 큰, 적어도 4배 더 큰, 적어도 5배 더 큰, 적어도 6배 더 큰, 적어도 7배 더 큰, 적어도 8배 더 큰, 적어도 9배 더 큰, 적어도 10배 더 큰, 적어도 15배 더 큰, 적어도 20배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 100배 더 큰, 적어도 5% 더 큰, 적어도 10% 더 큰, 적어도 15% 더 큰, 적어도 20% 더 큰, 적어도 25% 더 큰, 적어도 30% 더 큰, 적어도 35% 더 큰, 적어도 40%, 적어도 45% 더 큰, 적어도 50% 더 큰, 적어도 55% 더 큰, 적어도 60% 더 큰, 적어도 65% 더 큰, 적어도 70% 더 큰, 적어도 75% 더 큰, 적어도 80% 더 큰, 적어도 85% 더 큰, 적어도 90% 더 큰, 적어도 95% 더 큰, 적어도 100% 더 큰, 적어도 150% 더 큰, 또는 적어도 200% 더 큰, 적어도 250% 더 큰, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 큰, 또는 적어도 500% 더 큰 주사 부위 또는 그 부근에서의 두께의 증가를 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)이 맥락막상 주사에 의해 투여된 후에 주사 부위에서 얻어진 두께는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물이 맥락막상 주사에 의해 투여된 후보다 더 크다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)이 맥락막상 주사에 의해 투여된 후에 주사 부위에서 얻어진 두께는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물이 망막하 주사에 의해 또는 유리체강내 주사에 의해 투여된 후보다 더 크다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)이 맥락막상 주사에 의해 투여된 후에 주사 부위에서 얻어진 두께는, 동일한 약제학적 조성물이 망막하 투여에 의해 또는 유리체강내 투여에 의해 투여된 후보다 더 크다.

일부 실시 형태에서, 주사 부위 또는 그 부근에서의 두께(예를 들어, SCS 또는 그 부근에서의 두께)는 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물이 투여된 후 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일에서 결정될 수 있다.

4.2.4 혈관확장 및 혈관 누출

일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준은 참조 약제학적 조성물이 망막하 또는 유리체강내 투여된 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준과 동일하거나 그보다 낮다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준은 참조 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준과 동일하거나 그보다 낮다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)은, 동일한 약제학적 조성물이 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여된 후에 비해, 동일한 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후에 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 감소된 수준을 가져온다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물은, 비교가능한(약 32 내지 35℃에서 덜 점성인) 약제학적 조성물이 망막하 투여를 통해, 유리체강내 투여를 통해, 또는 SCS에 투여된 후에 비해, 상기 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후에 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 감소된 수준을 가져온다. 일부 실시 형태에서, VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출은 적어도 약 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 감소된다. 일부 실시 형태에서, 도입유전자는 항-인간 혈관 내피 성장 인자(항-VEGF) 항체이다.

일부 실시 형태에서, VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출은 투여 후 약 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 10시간, 12시간, 14시간, 15시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 최대 약 400일에서 결정된다.

4.2.5 주사 부위에서의 형질도입 속도(또는 감염 속도)

일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물이 SCS 내에 투여된 후에 형질도입 부위에서의 감염 속도(또는 주사 속도)는 동일한 약제학적 조성물이 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여된 후에 주사 부위에서의 형질도입 속도(또는 감염 속도)와 동일하거나 그에 비해 더 높다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물이 SCS 내에 투여된 후에 주사 부위에서의 형질도입 속도(또는 감염 속도)는 비교가능한(예를 들어, 약 32 내지 35℃에서 덜 점성 및/또는 비-겔화된) 약제학적 조성물이 망막하 투여를 통해, 또는 유리체강내 투여를 통해, 또는 SCS에 투여된 후에 주사 부위에서의 형질도입 속도(또는 감염 속도)와 동일하거나 그에 비해 더 높다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 참조 약제학적 조성물(약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물)보다, 약 32 내지 35℃에서 더 높은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖고/갖거나 겔화된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물과 참조 약제학적 조성물은 벡터 게놈 농도를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물과 참조 약제학적 조성물은 동일한 양의 게놈 카피를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 주사 부위에서의 형질도입 속도(또는 감염 속도)의 증가는 적어도 약 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%의 증가이다.

일부 실시 형태에서, 주사 부위에서의 AAV의 수준은 본 약제학적 조성물이 맥락막상 투여된 후에, 동일한 약제학적 조성물이 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여된 후에 주사 부위에서의 AAV 수준과 동일하거나 그에 비해 더 높다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물이 맥락막상 투여된 후에 주사 부위에서의 AAV의 수준은 비교가능한(예를 들어, 약 32 내지 35℃에서 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된) 약제학적 조성물이 망막하 투여를 통해, 또는 유리체강내 투여를 통해, 또는 SCS에 투여된 후에 주사 부위에서의 AAV의 수준과 동일하거나 그에 비해 더 높다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 참조 약제학적 조성물보다 약 32 내지 35℃에서 더 높은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖고/갖거나 겔화된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물과 참조 약제학적 조성물(약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물)은 동일한 벡터 게놈 농도를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물과 참조 약제학적 조성물은 동일한 양의 게놈 카피를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 주사 부위에서의 AAV의 수준의 증가는 적어도 약 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%의 증가이다.

일부 실시 형태에서, AAV 수준 또는 형질도입 속도(또는 감염 속도)는 투여 후 약 30분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 8시간, 10시간, 12시간, 14시간, 15시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 최대 약 400일에서 결정된다.

4.2.6 도입유전자 발현

일부 실시 형태에서, 도입유전자 산물의 농도는 약제학적 조성물이 SCS 내에 주사된 후에, 참조(예를 들어, 약 32 내지 35℃에서 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된) 약제학적 조성물이 SCS 내에 주사된 후와 적어도 동일하거나 그에 비해 더 높다. 일부 실시 형태에서, 도입유전자 산물의 농도는 약제학적 조성물이 SCS 내에 주사된 후에, 참조(약 32 내지 35℃에서 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된) 약제학적 조성물이 망막하 주사에 의해 또는 유리체강내 주사에 의해 주사된 후와 적어도 동일하거나 그에 비해 더 높다. 일부 실시 형태에서, 도입유전자 산물의 농도는 약제학적 조성물이 SCS 내에 주사된 후에, 동일한 약제학적 조성물이 망막하 주사에 의해 또는 유리체강내 주사에 의해 주사된 후와 적어도 동일하거나 그에 비해 더 높다.

일부 실시 형태에서, 도입유전자 산물(예를 들어, 도입유전자 산물의 농도)은 약제학적 조성물이 SCS 내에 주사된 후에, 비교가능한(약 32 내지 35℃에서 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된) 약제학적 조성물이 SCS 내에 주사된 후에 비해 더 긴 기간 동안 눈(예를 들어, 유리체액)에서 검출된다. 일부 실시 형태에서, 도입유전자 산물(예를 들어, 도입유전자 산물의 농도)은 약제학적 조성물이 SCS 내에 주사된 후에, 참조(약 32 내지 35℃에서 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된) 약제학적 조성물이 망막하 주사에 의해 또는 유리체강내 투여에 의해 주사된 후에 비해 더 긴 기간 동안 눈(예를 들어, 유리체액)에서 검출된다. 일부 실시 형태에서, 도입유전자 산물(예를 들어, 도입유전자 산물의 농도)은 약제학적 조성물이 SCS 내에 주사된 후에, 동일한(또는 약 32 내지 35℃에서 유사한 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')) 약제학적 조성물이 망막하 주사에 의해 또는 유리체강내 주사에 의해 주사된 후에 비해 더 긴 기간 동안 눈(예를 들어, 유리체액)에서 검출된다.

일부 실시 형태에서, 더 긴 기간은 적어도 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일 더 길다. 일부 실시 형태에서, 더 긴 기간은 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일 더 길다.

일부 실시 형태에서, 도입유전자는 본 약제학적 조성물이 SCS에 투여된 후, 투여 후 적어도 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일인 기간 동안 눈(예를 들어, 유리체액)에서 검출된다.

일부 실시 형태에서, 도입유전자는 (예를 들어, 참조 약제학적 조성물이 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 또는 SCS에 투여된 후에; 또는 본 약제학적 조성물이 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여된 후에) 투여 후 최대 약 30분, 1 hour, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 또는 100일의 일정 기간 동안 눈(예를 들어, 유리체액) 안에서 검출된다.

일부 실시 형태에서, 눈(예를 들어, 유리체액)에서의 도입유전자 산물의 농도는 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물이 투여된 후 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일에서 결정될 수 있다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성(예를 들어, 상대적으로 점성인, 중간 점도 내지 초고점도, 또는 물보다 더 점성인, 또는 대조 용액보다 더 점성인, 또는 망막하 투여에 일반적으로 사용되는 용액보다 더 점성인) 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물이, 예를 들어 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 맥락막상 투여에 의해 투여하는 데 사용된 후보다 적어도 2배 더 큰, 적어도 3배 더 큰, 적어도 4배 더 큰, 적어도 5배 더 큰, 적어도 6배 더 큰, 적어도 7배 더 큰, 적어도 8배 더 큰, 적어도 9배 더 큰, 적어도 10배 더 큰, 적어도 15배 더 큰, 적어도 20배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 100배 더 큰, 적어도 5% 더 큰, 적어도 10% 더 큰, 적어도 15% 더 큰, 적어도 20% 더 큰, 적어도 25% 더 큰, 적어도 30% 더 큰, 적어도 35% 더 큰, 적어도 40%, 적어도 45% 더 큰, 적어도 50% 더 큰, 적어도 55% 더 큰, 적어도 60% 더 큰, 적어도 65% 더 큰, 적어도 70% 더 큰, 적어도 75% 더 큰, 적어도 80% 더 큰, 적어도 85% 더 큰, 적어도 90% 더 큰, 적어도 95% 더 큰, 적어도 100% 더 큰, 적어도 150% 더 큰, 또는 적어도 200% 더 큰, 적어도 250% 더 큰, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 큰, 또는 적어도 500% 더 큰 도입유전자의 더 높은 농도를 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물(참조 약제학적 조성물)이, 예를 들어 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 망막하 투여에 의해 또는 유리체강내 투여에 의해 투여하는 데 사용될 때보다 적어도 2배 더 큰, 적어도 3배 더 큰, 적어도 4배 더 큰, 적어도 5배 더 큰, 적어도 6배 더 큰, 적어도 7배 더 큰, 적어도 8배 더 큰, 적어도 9배 더 큰, 적어도 10배 더 큰, 적어도 15배 더 큰, 적어도 20배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 100배 더 큰, 적어도 5% 더 큰, 적어도 10% 더 큰, 적어도 15% 더 큰, 적어도 20% 더 큰, 적어도 25% 더 큰, 적어도 30% 더 큰, 적어도 35% 더 큰, 적어도 40%, 적어도 45% 더 큰, 적어도 50% 더 큰, 적어도 55% 더 큰, 적어도 60% 더 큰, 적어도 65% 더 큰, 적어도 70% 더 큰, 적어도 75% 더 큰, 적어도 80% 더 큰, 적어도 85% 더 큰, 적어도 90% 더 큰, 적어도 95% 더 큰, 적어도 100% 더 큰, 적어도 150% 더 큰, 또는 적어도 200% 더 큰, 적어도 250% 더 큰, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 큰, 또는 적어도 500% 더 큰 도입유전자의 더 높은 농도를 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성(예를 들어, 상대적으로 점성인, 중간 점도 내지 초고점도, 또는 물보다 더 점성인, 또는 대조 용액보다 더 점성인, 또는 망막하 투여에 일반적으로 사용되는 용액보다 더 점성인) 및/또는 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 조성물)의 맥락막상 투여는, 동일한 약제학적 조성물이 망막하 투여를 통해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여될 때보다 적어도 2배 더 큰, 적어도 3배 더 큰, 적어도 4배 더 큰, 적어도 5배 더 큰, 적어도 6배 더 큰, 적어도 7배 더 큰, 적어도 8배 더 큰, 적어도 9배 더 큰, 적어도 10배 더 큰, 적어도 15배 더 큰, 적어도 20배 더 큰, 적어도 50배 더 큰, 적어도 100배 더 큰, 적어도 5% 더 큰, 적어도 10% 더 큰, 적어도 15% 더 큰, 적어도 20% 더 큰, 적어도 25% 더 큰, 적어도 30% 더 큰, 적어도 35% 더 큰, 적어도 40%, 적어도 45% 더 큰, 적어도 50% 더 큰, 적어도 55% 더 큰, 적어도 60% 더 큰, 적어도 65% 더 큰, 적어도 70% 더 큰, 적어도 75% 더 큰, 적어도 80% 더 큰, 적어도 85% 더 큰, 적어도 90% 더 큰, 적어도 95% 더 큰, 적어도 100% 더 큰, 적어도 150% 더 큰, 또는 적어도 200% 더 큰, 적어도 250% 더 큰, 또는 적어도 300%, 적어도 400% 더 큰, 또는 적어도 500% 더 큰 도입유전자의 더 높은 농도를 가져온다.

일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)이 맥락막상 주사에 의해 투여된 후에 도입유전자의 농도는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물이 맥락막상 주사에 의해 투여된 후보다 더 크다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 더 점성 및/또는 더 탄성 및/또는 겔화된 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)이 맥락막상 주사에 의해 투여된 후에 도입유전자의 농도는, 약 32 내지 35℃에서 비교가능하게 덜 점성 및/또는 덜 탄성 및/또는 비-겔화된 약제학적 조성물이 망막하 투여에 의해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여된 후보다 더 크다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 점성인 약제학적 조성물(예를 들어, 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 AAV를 포함하는 약제학적 조성물)이 맥락막상 주사에 의해 투여된 후에 도입유전자의 농도는, 동일한 약제학적 조성물이 망막하 투여에 의해 또는 유리체강내 투여를 통해 투여된 후보다 더 크다.

4.2.7 다른 기능적 특성

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 약제학적 조성물은 맥락막상 주사에 적합한 원하는 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 적어도 참조 약제학적 조성물(또는 비교가능한 약제학적 조성물)에서의 재조합 AAV만큼 안정하다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물(또는 비교가능한 약제학적 조성물)에서의 재조합 AAV의 적어도 50%만큼 안정하다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV와 적어도 동일하거나 비교가능한 응집 수준을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV와 적어도 동일하거나 비교가능한 감염성 수준을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV와 적어도 동일하거나 비교가능한 유리 DNA 수준을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV와 적어도 동일하거나 비교가능한 시험관내 상대 역가(in vitro relative potency, IVRP)를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV와 적어도 동일하거나 비교가능한 크기 변화 수준을 갖는다.

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 냉동/해동 사이클에 대해 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 안정하다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 냉동/해동 사이클에 대해 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV의 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%만큼 안정하다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 안정성은 섹션 4.6 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 많은 감염성을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV의 감염성의 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 본 명세서에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.6 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 소정 실시 형태에서, 크기는 냉동/해동 사이클 전 또는 후에 측정된다.

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 적은 응집을 나타낸다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 응집은 본 명세서에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 소정 실시 형태에서, 응집은 냉동/해동 사이클 전 또는 후에 측정된다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.6에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 (예를 들어, -20℃에서 또는 37℃에서 저장될 때) 일정 기간에 걸쳐, 예를 들어 적어도 약 또는 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 12개월, 약 15개월, 약 18개월, 약 24개월, 약 2년, 약 3년, 약 4년 동안 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 안정하다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 일정 기간에 걸쳐 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV의 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%만큼 안정하다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 본 명세서에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.6 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 (예를 들어, -20℃에서 또는 37℃에서 저장될 때) 시험관내 상대 역가(IVRP)에 있어서 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 높다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV와 대략 동일한 시험관내 상대 역가(IVRP)를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV의 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%의 시험관내 상대 역가(IVRP)를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대 역가(IVRP)는 본 명세서에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 소정 실시 형태에서, 시험관내 상대 역가(IVRP)는 냉동/해동 사이클 전 또는 후에 측정된다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대 역가(IVRP)는 섹션 4.6에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 적은 유리 DNA를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV와 대략 동일한 양의 유리 DNA를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV의 유리 DNA의 양의 약 2배 이하를 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV의 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100%의 유리 DNA의 양을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 약 50% 더 많은, 약 25% 더 많은, 약 15% 더 많은, 약 10% 더 많은, 약 5% 더 많은, 약 4% 더 많은, 약 3% 더 많은, 약 2% 더 많은, 약 1% 더 많은, 약 0% 더 많은, 약 1% 더 적은, 약 2% 더 적은, 약 5% 더 적은, 약 7% 더 적은, 약 10% 더 적은, 약 2배 더 많은, 약 3배 더 많은, 약 2배 더 적은, 또는 약 3배 더 적은 유리 DNA를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.6 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 (예를 들어, -20℃에서 또는 37℃에서 저장될 때) 일정 기간에 걸쳐, 예를 들어 적어도 약 또는 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 1개월, 약 2개월, 약 3개월, 약 4개월, 약 5개월, 약 6개월, 약 7개월, 약 8개월, 약 9개월, 약 10개월, 약 11개월, 약 12개월, 약 15개월, 약 18개월, 약 24개월, 약 2년, 약 3년, 및 약 4년 동안 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1%의 크기 변화를 갖는다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 크기는 본 명세서에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 소정 실시 형태에서, 크기는 냉동/해동 사이클 전 또는 후에 측정된다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.6에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 (예를 들어, -20℃에서 또는 37℃에서 저장될 때) 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 안정하다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 (예를 들어, -20℃에서 또는 37℃에서 저장될 때) 대략적으로 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV만큼 안정하다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 (예를 들어, -20℃에서 또는 37℃에서 저장될 때) 참조 약제학적 조성물에서의 동일한 재조합 AAV와 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99%만큼 안정하다. 소정 실시 형태에서, 재조합 AAV의 안정성은 섹션 4.6에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은, 예를 들어 섹션 4.6에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정될 때, 안정성의 손실 없이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개월 동안 저장될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 안정성의 손실 없이 4℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개월 동안 저장될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 안정성의 손실 없이 60℃ 이하에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개월 동안 저장될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 안정성의 손실 없이 -80℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개월 동안 저장될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 안정성의 손실 없이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 12개월 동안 -20℃에서 저장된 후에 4℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개월 동안 저장될 수 있다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은, 예를 들어 섹션 4.6에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정될 때 안정성의 손실 없이, 먼저 -80℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개월 동안 저장되고, 이어서 해동되고, 해동 후에는 추가로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 12개월 동안 2 내지 10℃, 4 내지 8℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃ 또는 9℃에서 저장될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은, 예를 들어 섹션 4.6에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정될 때 안정성의 손실 없이, 먼저 -80℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개월 동안 저장되고, 이어서 해동되고, 해동 후에는 추가로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 12개월 동안 약 4℃에서 저장될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은, 예를 들어 섹션 4.6에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정될 때 안정성의 손실 없이, 먼저 60℃ 이하에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개월 동안 저장되고, 이어서 해동되고, 해동 후에는 추가로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 12개월 동안 약 4℃에서 저장될 수 있다.

본 명세서에 제공된 방법 또는 약제학적 조성물의 효과는 시력 상실, 감염, 염증 및 다른 안전성 사건 - 망막 박리를 포함함 - 의 징후를 측정함으로써 모니터링될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 상이한 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')(예를 들어, 낮은 점도부터 매우 높은 점도까지의 범위)를 갖는 상이한 약제학적 조성물이 SCS 내에 벡터를 전달하는 데 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 중간 내지 높은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는 약제학적 조성물을 사용하여 전달되는 벡터는 (예를 들어, SCS 내에 투여될 때) 약 32 내지 35℃에서 낮은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는 약제학적 조성물을 사용하여 전달되는 벡터보다 더 효과적이다. 일부 실시 형태에서, 약 32 내지 35℃에서 중간 내지 높은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는 제형을 사용하여 전달되는 벡터는 약 32 내지 35℃에서 낮은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는 제형을 사용하여 전달되는 벡터에 비해 개선된 전망을 가져온다.

본 명세서에 제공된 방법 또는 약제학적 조성물의 효과는 또한 NEI-VFQ-28-R(National Eye Institute Visual Functioning Questionnaire, the Rasch-scored version)(종합 점수; 활동 제한 영역 점수; 및 사회-정서적 기능 영역 점수)에 있어서의 기저선으로부터의 변화에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 방법의 효과는 또한 NEI-VFQ-25(National Eye Institute Visual Functioning Questionnaire 25-item version)(종합 점수 및 정신 건강 하위척도 점수)에 있어서의 기저선으로부터의 변화에 의해 측정될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 방법의 효과는 또한 MacTSQ(Macular Disease Treatment Satisfaction Questionnaire)(종합 점수; 안전성, 효능, 및 불편함 영역 점수; 및 정보 제공 및 편의성 영역 점수)에 있어서의 기저선으로부터의 변화에 의해 측정될 수 있다.

구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 방법 또는 벡터(벡터 제형)의 효능은 약 4주, 12주, 6개월, 12개월, 24개월, 36개월 시점에서, 또는 다른 원하는 시점에서 시력의 개선에 의해 반영된다. 구체적인 실시 형태에서, 시력의 개선은 BCVA의 증가, 예를 들어 1개의 문자, 2개의 문자, 3개의 문자, 4개의 문자, 5개의 문자, 6개의 문자, 7개의 문자, 8개의 문자, 9개의 문자, 10개의 문자, 11개의 문자, 또는 12개의 문자만큼, 또는 그 이상으로의 증가를 특징으로 한다. 구체적인 실시 형태에서, 시력의 개선은 시력(visual acuity, VA)에 있어서의 기저선으로부터의 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50% 또는 그 이상의 증가를 특징으로 한다.

구체적인 실시 형태에서, 치료 후 눈에 염증이 없거나 치료 후 눈에 염증이 거의 없다(예를 들어, 기저선으로부터 10%, 5%, 2%, 1%만큼 또는 그 이하로의 염증 수준의 증가).

4.3 투여량 및 투여 방식

일 태양에서, 눈의 병리를 치료하기 위한 맥락막상 투여 방법이 본 명세서에 제공되며, 상기 방법은 치료를 필요로 하는 인간 대상체의 눈 안의 맥락막상 공간에 치료용 산물을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 재조합 바이러스 벡터를 투여하여, 상기 치료용 산물을 발현시켜 상기 눈의 병리를 치료하도록 하는 단계를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 투여하는 단계는 맥락막상 약물 전달 장치를 사용하여 재조합 바이러스 벡터를 맥락막상 공간 내로 주사함으로써 행해진다. 소정 실시 형태에서, 맥락막상 약물 전달 장치는 마이크로인젝터이다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물은 1개, 2개 또는 그 이상의 투여 경로에 의해 투여하기에 적합하다(예를 들어, 맥락막상 및 망막하 투여에 적합하다).

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물(또는 참조 약제학적 조성물)의 벡터 게놈 농도(VGC)는 약 3 × 10⁹ GC/mL, 약 1 × 10¹⁰ GC/mL, 약 1.2 × 10¹⁰GC/mL, 약 1.6 × 10¹⁰ GC/mL, 약 4 × 10¹⁰ GC/mL, 약 6 × 10¹⁰ GC/mL, 약 2 × 10¹¹ GC/mL, 약 2.4 × 10¹¹ GC/mL, 약 2.5 × 10¹¹ GC/mL, 약 3 × 10¹¹ GC/mL, 약 3.2 × 10¹¹ GC/mL, 약 6.2 × 10¹¹ GC/mL, 약 6.5 × 10¹¹ GC/mL, 약 1 × 10¹² GC/mL, 약 2.5 × 10¹² GC/mL, 약 3 × 10¹²GC/mL, 약 5 × 10¹² GC/mL, 약 1.5 × 10¹³ GC/mL, 약 2 × 10¹³ GC/mL 또는 약 3 × 10¹³ GC/mL이다.

소정 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물(또는 참조 약제학적 조성물)의 벡터 게놈 농도(VGC)는 약 3 × 10⁹ GC/mL, 4 × 10⁹ GC/mL, 5 × 10⁹ GC/mL, 6 × 10⁹ GC/mL, 7 × 10⁹ GC/mL, 8 × 10⁹ GC/mL, 9 × 10⁹ GC/mL, 약 1 × 10¹⁰ GC/mL, 약 2 × 10¹⁰GC/mL, 약 3 × 10¹⁰ GC/mL, 약 4 × 10¹⁰ GC/mL, 약 5 × 10¹⁰ GC/mL, 약 6 × 10¹⁰ GC/mL, 약 7 × 10¹⁰ GC/mL, 약 8 × 10¹⁰ GC/mL, 약 9 × 10¹⁰ GC/mL, 약 1 × 10¹¹ GC/mL, 약 2 × 10¹¹ GC/mL, 약 3 × 10¹¹ GC/mL, 약 4 × 10¹¹ GC/mL, 약 5 × 10¹¹ GC/mL, 약 6 × 10¹¹ GC/mL, 약 7 × 10¹¹ GC/mL, 약 8 × 10¹¹ GC/mL, 약 9 × 10¹¹ GC/mL, 약 1 × 10¹² GC/mL, 약 2 × 10¹² GC/mL, 약 3 × 10¹² GC/mL, 약 4 × 10¹² GC/mL, 약 5 × 10¹² GC/mL, 약 6 × 10¹² GC/mL, 약 7 × 10¹² GC/mL, 약 8 × 10¹² GC/mL, 약 9 × 10¹² GC/mL, 약 1 × 10¹³ GC/mL, 약 1.5 × 10¹³ GC/mL, 약 2 × 10¹³ GC/mL, 약 3 × 10¹³ GC/mL이다.

일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 부피는 공막과 맥락막을 분리시키기 위한 최소한의 힘을 감소시킬 수 있는 임의의 부피이다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 부피는 약 50 μL 내지 약 1000 μL, 50 μL 내지 약 500 μL, 50 μL 내지 약 400 μL, 50 μL 내지 약 350 μL, 50 μL 내지 약 300 μL, 약 50 μL 내지 약 275 μL, 약 50 μL 내지 약 250 μL, 약 50 μL 내지 약 225 μL, 약 50 μL 내지 약 200 μL, 약 50 μL 내지 약 175 μL, 약 50 μL 내지 약 150 μL, 약 60 μL 내지 약 140 μL, 약 70 μL 내지 약 130 μL, 약 80 μL 내지 약 120 μL, 약 90 μL 내지 약 110 μL, 또는 약 100 μL이다.

맥락막상 공간(SCS) 전달을 위해 현재 이용가능한 기술이 존재한다. 전임상적으로는, 공막편(scleral flap) 기법, 카테터 및 표준 피하주사 바늘을 사용하여, 이뿐만 아니라 미세바늘을 사용하여 SC 주사가 달성되어 왔다. 중공-보어(hollow-bore) 750 um-긴 미세바늘(Clearside Biomedical, Inc.)이 상기 부분(pars)에서 삽입될 수 있으며, 임상 시험에서의 가능성을 보여주었다. 힘-감지(force-sensing) 기술을 사용하여 고안된 미세바늘이 SC 주사에 이용될 수 있으며, 이는 Chitnis, et al.에 의해 기재된 바와 같다(문헌[Chitnis, G.D., et al. A resistance-sensing mechanical injector for the precise delivery of liquids to target tissue. Nat Biomed Eng 3, 621-631 (2019)]. https://doi.org/10.1038/s41551-019-0350-2). Oxular Limited는 맥락막상 공간에서 조명 캐뉼라(illuminated cannula)를 전진시키는 전달 시스템(Oxulumis)을 개발 중이다. Orbit 장치(Gyroscope)는 가요성 캐뉼라를 구비한 맥락막상 공간의 캐뉼라 삽입(cannulation)을 가능하게 하는 특수하게 설계된 시스템이다. 캐뉼라 내부의 미세바늘이 목표 용량 전달을 가능하게 하도록 망막하 공간 내로 전진된다. 최소한으로 침습적인 녹내장 수술(minimally-invasive glaucoma surgery, MIGS) 장치로서의 역할을 하는 마이크로-스텐트(micro-stent)를 사용하여 SCS에 대한 내부 접근(ab interno access)이 또한 달성될 수 있다. 예에는 CyPass® Micro-Stent(Alcon, 미국 텍사스주 포스 워스 소재) 및 iStent®(Glaukos)가 포함되며, 이들은 외과적으로 이식되어, 여과포(filtering bleb)를 형성하지 않고서 방수(aqueous humor)를 배액하도록 전안방(anterior chamber)으로부터 SCS로의 도관을 제공한다. 맥락막상 전달을 위해 고려되는 다른 장치는 영국 특허 출원 공개 GB 2531910A호 및 미국 특허 제10,912,883 B2호에 기재된 것들을 포함한다.

일부 실시 형태에서, 맥락막상 약물 전달 장치는 1 밀리미터 30 게이지 바늘을 구비한 주사기이다. 일부 실시 형태에서, 주사기는 더 큰 원주(예를 들어, 29 게이지 바늘)를 갖는다. 이 장치를 사용하여 주사하는 동안, 바늘이 공막의 기저부까지 뚫고 들어가서 약물 함유 유체가 맥락막상 공간에 진입하여, 맥락막상 공간의 확장으로 이어진다. 결과적으로, 주사 동안 촉각 및 시각 피드백이 존재한다. 주사 후에, 유체는 후방으로 유동하고 맥락막 및 망막에서 주로 흡수한다. 이는 모든 망막 세포 층 및 맥락막 세포로부터의 도입유전자 단백질의 생성을 가져온다. 이러한 유형의 장치 및 절차를 사용하는 것은 합병증 위험이 낮으면서 신속하고 용이한 간단한 시술(in-office procedure)을 가능하게 한다.

일부 실시 형태에서, 미세바늘 또는 주사기는 약제학적 조성물의 점도에 기초하여 선택된다. 일부 실시 형태에서, 미세바늘은 약제학적 조성물이 투여될 때 눈에서(예를 들어, SCS에서) 얻어지는 압력에 기초하여 선택된다. 예를 들어, 약 32 내지 35℃에서 중간 또는 높은 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')를 갖는 약제학적 조성물은 주사를 위한 더 넓은 미세바늘의 사용으로부터 이익을 얻을 수 있다. 일부 실시 형태에서, SCS에서의 압력은 더 넓은 미세바늘이 사용될 때, 더 좁은 미세바늘이 사용될 때 얻어지는 압력에 비해 더 낮다. 일부 실시 형태에서, 10 게이지 바늘, 11 게이지 바늘, 12 게이지 바늘, 13 게이지 바늘, 14 게이지 바늘, 15 게이지 바늘, 16 게이지 바늘, 17 게이지 바늘, 18 게이지 바늘, 19 게이지 바늘, 20 게이지 바늘, 21 게이지 바늘, 22 게이지 바늘, 23 게이지 바늘, 24 게이지 바늘, 25 게이지 바늘, 26 게이지 바늘, 27 게이지 바늘, 28 게이지 바늘, 29 게이지 바늘, 30 게이지 바늘, 31 게이지 바늘, 32 게이지 바늘, 33 게이지 바늘, 또는 34 게이지 바늘이 사용된다. 일부 실시 형태에서, 27 게이지 바늘이 사용된다. 일부 실시 형태에서, 28 게이지 바늘이 사용된다. 일부 실시 형태에서, 29 게이지 바늘이 사용된다. 일부 실시 형태에서, 30 게이지 바늘이 사용된다. 일부 실시 형태에서, 31 게이지 바늘이 사용된다. 일부 실시 형태에서, 27 게이지 바늘보다 더 작은 게이지가 사용된다. 일부 실시 형태에서, 27 게이지 바늘보다 더 큰 게이지가 사용된다. 일부 실시 형태에서, 30 게이지 바늘보다 더 작은 게이지가 사용된다. 일부 실시 형태에서, 30 게이지 바늘보다 더 큰 게이지가 사용된다.

일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 투여 동안의 압력은 약 10 PSI, 15 PSI, 20 PSI, 25 PSI, 30 PSI, 35 PSI, 40 PSI, 45 PSI, 50 PSI, 55 PSI, 60 PSI, 65 PSI, 70 PSI, 75 PSI, 80 PSI, 85 PSI, 90 PSI, 95 PSI, 100 PSI, 150 PSI, 또는 200 PSI이다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 투여 동안의 압력은 약 10 PSI, 15 PSI, 20 PSI, 25 PSI, 30 PSI, 35 PSI, 40 PSI, 45 PSI, 50 PSI, 55 PSI, 60 PSI, 65 PSI, 70 PSI, 75 PSI, 80 PSI, 85 PSI, 90 PSI, 95 PSI, 100 PSI, 150 PSI, 또는 200 PSI 이하이다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 투여 동안 SCS를 개방하기 위한 압력은 약 10 PSI, 15 PSI, 20 PSI, 25 PSI, 30 PSI, 35 PSI, 40 PSI, 45 PSI, 50 PSI, 55 PSI, 60 PSI, 65 PSI, 70 PSI, 75 PSI, 80 PSI, 85 PSI, 90 PSI, 95 PSI, 100 PSI, 150 PSI, 또는 200 PSI 이하이다. 일부 실시 형태에서, 약제학적 조성물의 투여 동안의 압력(또는 SCS를 개방하는 데 필요한 압력)은 20 PSI 내지 50 PSI, 20 PSI 내지 75 PSI, 20 PSI 내지 40 PSI, 10 PSI 내지 40 PSI, 10 PSI 내지 100 PSI, 또는 10 PSI 내지 80 PSI이다. 일부 실시 형태에서, 압력은 주사 속도가 감소함에 따라 감소한다(예를 들어, 4초의 주사 속도로부터 10초의 주사 속도로 압력은 감소한다). 일부 실시 형태에서, 압력은 바늘의 크기가 증가함에 따라 감소한다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 43 PSI 미만의 주사 압력으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 43 PSI의 주사 압력으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 43 내지 65 PSI의 주사 압력으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 65 PSI의 주사 압력으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 65 PSI 미만의 주사 압력으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 65 내지 100 PSI의 주사 압력으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 100 PSI의 주사 압력으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 100 PSI 미만의 주사 압력으로 인간의 눈에 투여된다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 5 내지 10초의 주사 시간으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 10 내지 15초의 주사 시간으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 15 내지 20초의 주사 시간으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 20 내지 25초의 주사 시간으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 약 25 내지 30초의 주사 시간으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 30초 미만의 주사 시간으로 인간의 눈에 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물은 안구외 온도(약 32 내지 35℃)에서 조성물의 겔화 시간의 길이의 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90%인 주사 시간으로 인간의 눈에 투여된다.

3개월 동안 눈(예를 들어, 유리체액)에서 적어도 0.330 ㎍/mL, 또는 방수(눈의 전안방)에서 적어도 0.110 ㎍/mL의 C_min로 도입유전자 산물의 농도를 유지하는 용량이 요구되며; 이후에, 1.70 내지 6.60 ㎍/mL 범위의 도입유전자 산물의 유리체 C_min 농도, 및/또는 0.567 내지 2.20 ㎍/mL 범위의 방수 C_min 농도가 유지되어야 한다. 그러나, 도입유전자 산물은 연속적으로 생성되기 때문에(구성적 프로모터의 제어 하에서 행해짐, 또는 저산소증-유도성 프로모터를 사용할 때에는 저산소 조건에 의해 유도됨), 더 낮은 농도의 유지가 효과적일 수 있다. 도입유전자 농도는 체액, 안액(ocular fluid), 유리체액, 또는 전안방으로부터 수집된 유체의 환자 샘플에서 직접 측정될 수 있거나, 또는 도입유전자 산물의 환자의 혈청 농도를 측정함으로써 추정되고/되거나 모니터링될 수 있다 - 도입유전자 산물에 대한 전신 노출 대 유리체 노출의 비는 약 1:90,000이다. (예를 들어, 문헌[Xu L, et al., 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624, at p. 1621 and Table 5 at p. 1623]에 보고된 라니비주맙의 유리체액 및 혈청 농도를 참조하며, 이는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함됨).

소정 실시 형태에서, ml당 게놈 카피수(GC/mL) 또는 환자의 눈에 투여되는(예를 들어, 맥락막상 투여되는) 게놈 카피수에 의해 투여량이 측정된다. 일부 실시 형태에서, 2.4 x 10¹¹ GC/mL 내지 1 x 10¹³ GC/mL가 투여되고, 2.4 x 10¹¹ GC/mL 내지 5 x 10¹¹ GC/mL가 투여되고, 5 x 10¹¹ GC/mL 내지 1 x 10¹² GC/mL가 투여되고, 1 x 10¹² GC/mL 내지 5 x 10¹² GC/mL가 투여되고, 또는 5 x 10¹² GC/mL 내지 1 x 10¹³ GC/mL가 투여된다. 일부 실시 형태에서, 1.5 × 10¹³ GC/mL 내지 3 × 10¹³ GC/mL가 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 2.4 x 10¹¹ GC/mL, 약 5 x 10¹¹ GC/mL, 약 1 x 10¹² GC/mL, 약 2.5 x 10¹² GC/mL, 약 5 x 10¹² GC/mL, 약 1 x 10¹³ GC/mL 또는 약 1.5 x 10¹³ GC/mL가 투여된다. 일부 실시 형태에서, 1 x 10⁹ 내지 1 x 10¹²개의 게놈 카피가 투여된다. 일부 실시 형태에서, 3 x 10⁹ 내지 2.5 x 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 구체적인 실시 형태에서, 1 x 10⁹ 내지 2.5 x 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 구체적인 실시 형태에서, 1 x 10⁹ 내지 1 x 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 구체적인 실시 형태에서, 1 x 10⁹ 내지 5 x 10⁹개의 게놈 카피가 투여된다. 구체적인 실시 형태에서, 6 x 10⁹ 내지 3 x 10¹⁰개의 게놈 카피가 투여된다. 구체적인 실시 형태에서, 4 x 10¹⁰ 내지 1 x 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 구체적인 실시 형태에서, 2 x 10¹¹ 내지 1.5 x 10¹²개의 게놈 카피가 투여된다. 구체적인 실시 형태에서, 약 3 x 10⁹개의 게놈 카피(이는 250 μl의 부피에서 약 1.2 x 10¹⁰ GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 1 x 10¹⁰개의 게놈 카피(이는 250 μl의 부피에서 약 4 x 10¹⁰ GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 6 x 10¹⁰개의 게놈 카피(이는 250 μl의 부피에서 약 2.4 x 10¹¹ GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 6.4 x 10¹⁰개의 게놈 카피(이는 200 μl의 부피에서 약 3.2 x 10¹¹ GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 1.3 x 10¹¹개의 게놈 카피(이는 200 μl의 부피에서 약 6.5 x 10¹¹ GC/mL에 상응함)가 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 6.4 x 10¹⁰개의 게놈 카피가 눈 한쪽당, 또는 용량당, 또는 투여 경로당 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 6.4 x 10¹⁰개의 게놈 카피가 투여되는 게놈 카피의 총수이다. 일부 실시 형태에서, 약 1.3 x 10¹¹개의 게놈 카피가 눈 한쪽당, 또는 용량당, 또는 투여 경로당 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 1.3 x 10¹¹개의 게놈 카피가 투여되는 게놈 카피의 총수이다. 일부 실시 형태에서, 약 2.5 x 10¹¹개의 게놈 카피가 눈 한쪽당, 또는 용량당, 또는 투여 경로당 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 2.5 x 10¹¹개의 게놈 카피가 투여되는 게놈 카피의 총수이다. 일부 실시 형태에서, 약 5 x 10¹¹개의 게놈 카피가 눈 한쪽당, 또는 용량당, 또는 투여 경로당 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 5 x 10¹¹개의 게놈 카피가 투여되는 게놈 카피의 총수이다. 일부 실시 형태에서, 약 3 x 10¹²개의 게놈 카피가 눈 한쪽당, 또는 용량당, 또는 투여 경로당 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 3 x 10¹²개의 게놈 카피가 투여되는 게놈 카피의 총수이다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 1.6 x 10¹¹개의 게놈 카피(이는 250 μl의 부피에서 약 6.2 x 10¹¹ GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 1.55 x 10¹¹개의 게놈 카피(이는 250 μl의 부피에서 약 6.2 x 10¹¹ GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 1.6 x 10¹¹개의 게놈 카피(이는 250 μl의 부피에서 약 6.4 x 10¹¹ GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 2.5 x 10¹¹개의 게놈 카피(이는 250 μl의 부피에서 약 1.0 x 10¹² GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 2.5 x 10¹¹개의 게놈 카피(이는 100 μl의 부피에서 약 2.5 x 10¹² GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 5 x 10¹¹개의 게놈 카피(이는 200 μl의 부피에서 약 5 x 10¹² GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 1.5 x 10¹²개의 게놈 카피(이는 100 μl의 부피에서 약 1.5 x 10¹³ GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 3 x 10¹¹개의 게놈 카피(이는 100μl의 부피에서 약 3 x 10¹² GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 6 x 10¹¹개의 게놈 카피(이는 200μl의 부피에서 약 3 x 10¹² GC/mL에 상응함)가 투여된다. 다른 구체적인 실시 형태에서, 약 6 x 10¹¹개의 게놈 카피(이는 100 μl의 부피에서 약 6 x 10¹² GC/mL에 상응함)가 투여된다.

소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 6.0 × 10¹⁰개의 게놈 카피가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 6.4 × 10¹⁰개의 게놈 카피가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 1.3 × 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 1.5 × 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 1.6 × 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 2.5 × 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 5.0 × 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 6 × 10¹¹개의 게놈 카피가 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 1.5 x 10¹²개의 게놈 카피가 눈 한쪽당, 또는 용량당, 또는 투여 경로당 투여된다. 일부 실시 형태에서, 약 1.5 x 10¹²개의 게놈 카피가 투여되는 게놈 카피의 총수이다.

소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹²개의 게놈 카피가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 1.0 × 10¹² GC/mL가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 2.5 × 10¹² GC/mL가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹² GC/mL가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3.0 × 10¹³개의 게놈 카피가 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 최대 3.0 × 10¹³개의 게놈 카피가 투여된다.

소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 1.5 × 10¹¹개의 게놈 카피가 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 2.5 × 10¹¹개의 게놈 카피가 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹¹개의 게놈 카피가 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 5.0 × 10¹¹개의 게놈 카피가 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 6 × 10¹¹개의 게놈 카피가 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 1.5 × 10¹²개의 게놈 카피가 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹²개의 게놈 카피가 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 눈 한쪽당 약 2.5 × 10¹¹개의 게놈 카피가 단회 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹¹개의 게놈 카피가 단회 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹¹개의 게놈 카피가 100 μl의 부피로 단회 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹¹개의 게놈 카피가 200 μl의 부피로 단회 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹¹개의 게놈 카피가 이중 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹¹개의 게놈 카피가 이중 맥락막상 주사에 의해 투여되며, 여기서는 매 주사마다 50 μl의 부피이다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3 × 10¹¹개의 게놈 카피가 이중 맥락막상 주사에 의해 투여되며, 여기서는 매 주사마다 100 μl의 부피이다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 5.0 × 10¹¹개의 게놈 카피가 이중 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 6 × 10¹¹개의 게놈 카피가 단회 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 6 × 10¹¹개의 게놈 카피가 100 μl의 부피로 단회 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 6 × 10¹¹개의 게놈 카피가 200 μl의 부피로 단회 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 6 × 10¹¹개의 게놈 카피가 이중 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 6 × 10¹¹개의 게놈 카피가 이중 맥락막상 주사에 의해 투여되며, 여기서는 매 주사마다 50 μl의 부피이다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 6 × 10¹¹개의 게놈 카피가 이중 맥락막상 주사에 의해 투여되며, 여기서는 매 주사마다 100 μl의 부피이다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 약 3.0 × 10¹³개의 게놈 카피가 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 투여당 또는 눈 한쪽당 최대 3.0 × 10¹³개의 게놈 카피가 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 눈 한쪽당 약 2.5 × 10¹² GC/mL가 100 μl의 부피로 단회 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 눈 한쪽당 약 2.5 × 10¹² GC/mL가 이중 맥락막상 주사에 의해 투여되며, 여기서는 매 주사마다 100 μl의 부피이다. 소정 실시 형태에서, 눈 한쪽당 약 1.5 × 10¹³ GC/mL가 100 μl의 부피로 단회 맥락막상 주사에 의해 투여된다.

소정 실시 형태에서, 재조합 바이러스 벡터는 이중 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 우안에서의 첫 번째 주사가 상측두(superior temporal) 사분면(즉, 10시 방향과 11시 방향 위치 사이)에 투여되고, 동일한 눈에서의 두 번째 주사가 하비(inferior nasal) 사분면(즉, 4시 방향과 5시 방향 위치 사이)에 투여된다. 소정 실시 형태에서, 우안에서의 첫 번째 주사가 하비 사분면(즉, 4시 방향과 5시 방향 위치 사이)에 투여되고, 동일한 눈에서의 두 번째 주사가 상측두 사분면(즉, 10시 방향과 11시 방향 위치 사이)에 투여된다. 소정 실시 형태에서, 좌안에서의 첫 번째 주사가 상측두 사분면(즉, 1시 방향과 2시 방향 위치 사이)에 투여되고, 동일한 눈에서의 두 번째 주사가 하비 사분면(즉, 7시 방향과 8시 방향 위치 사이)에 투여된다. 소정 실시 형태에서, 좌안에서의 첫 번째 주사가 하비 사분면(즉, 7시 방향과 8시 방향 위치 사이)에 투여되고, 동일한 눈에서의 두 번째 주사가 상측두 사분면(즉, 1시 방향과 2시 방향 위치 사이)에 투여된다.

소정 실시 형태에서, 재조합 바이러스 벡터는 단회 맥락막상 주사에 의해 투여된다. 소정 실시 형태에서, 우안에서의 단회 주사는 상측두 사분면(즉, 10시 방향과 11시 방향 위치 사이)에 투여된다. 소정 실시 형태에서, 우안에서의 단회 주사는 하비 사분면(즉, 4시 방향과 5시 방향 위치 사이)에 투여된다. 소정 실시 형태에서, 좌안에서의 단회 주사는 상측두 사분면(즉, 1시 방향과 2시 방향 위치 사이)에 투여된다. 소정 실시 형태에서, 좌안에서의 단회 주사는 하비 사분면(즉, 7시 방향과 8시 방향 위치 사이)에 투여된다.

일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물은 인간 대상체에게 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회, 15회, 20회, 25회, 또는 30회 (예를 들어, 맥락막상, 망막하, 또는 유리체강내) 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물은 대상체에게 일일 1회, 일일 2회, 일일 3회, 일일 4회, 일일 5회, 일일 6회, 또는 일일 7회 투여된다. 일부 실시 형태에서, 투여당 동일한 양의 AAV 게놈 카피가 투여된다. 예를 들어, 동일한 게놈 카피수가 맥락막상, 망막하, 또는 유리체강내 투여된다. 일부 실시 형태에서, 동일한 총량의 AAV 게놈 카피가 투여된다. 예를 들어, AAV 게놈 카피의 동일한 총량이 총 투여 횟수에 관계없이 맥락막상, 망막하, 또는 유리체강내 투여된다(예를 들어, 망막하 투여가 1회 수행되고 맥락막상 투여가 2회 수행되면, 1회의 망막하 투여에서의 게놈 카피수는 둘 모두를 합한 맥락막상 투여에서의 게놈 카피수와 동일하다).

본 명세서에 사용되는 바와 같이 그리고 달리 명시되지 않는 한, 용어 "약"은 주어진 값 또는 범위의 + 또는 - 10% 이내를 의미한다.

4.4 작제물 및 제형

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 재조합 벡터는 하기 순서로 하기 요소들을 포함한다: a) 구성적 또는 저산소증-유도성 프로모터 서열, 및 b) 도입유전자(예를 들어, 치료용 산물)를 인코딩하는 서열. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 재조합 벡터는 하기 순서로 하기 요소들을 포함한다: a) 제1 ITR 서열, b) 제1 링커 서열, c) 구성적 또는 저산소증-유도성 프로모터 서열, d) 제2 링커 서열, e) 인트론 서열, f) 제3 링커 서열, g) 제1 UTR 서열, h) 도입유전자(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)를 인코딩하는 서열, i) 제2 UTR 서열, j) 제4 링커 서열, k) 폴리 A 서열, l) 제5 링커 서열, 및 m) 제2 ITR 서열.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 재조합 벡터는 하기 순서로 하기 요소들을 포함하며: a) 제1 ITR 서열, b) 제1 링커 서열, c) 구성적 또는 저산소증-유도성 프로모터 서열, d) 제2 링커 서열, e) 인트론 서열, f) 제3 링커 서열, g) 제1 UTR 서열, h) 도입유전자(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)를 인코딩하는 서열, i) 제2 UTR 서열, j) 제4 링커 서열, k) 폴리 A 서열, l) 제5 링커 서열, 및 m) 제2 ITR 서열, 여기서 도입유전자는 VEGF의 신호 펩티드(서열 번호 5)를 포함하고, 도입유전자는 절단성 F/F2A 서열에 의해 분리된 경쇄 및 중쇄 서열을 인코딩한다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 AAV(AAV 바이러스 벡터)는 하기 순서로 하기 요소들을 포함한다: a) 구성적 또는 저산소증-유도성 프로모터 서열, 및 b) 도입유전자(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)를 인코딩하는 서열. 일부 실시 형태에서, 도입유전자는 VEGF에 대한 완전 인간 번역 후 변형된(HuPTM) 항체이다. 일부 실시 형태에서, VEGF에 대한 완전 인간 번역 후 변형된 항체는 VEGF에 대한 단일클론 항체(mAb)의 완전 인간 번역 후 변형된 항원-결합 단편("HuPTMFabVEGFi")이다. 일부 실시 형태에서, HuPTMFabVEGFi는 항-VEGF mAb의 완전 인간 글리코실화된 항원-결합 단편("HuGlyFabVEGFi")이다. 대안적인 실시 형태에서, 전장 mAb가 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 도입유전자를 전달하는 데 사용되는 AAV는 인간 망막 세포 또는 광수용기 세포에 대한 지향성을 가져야 한다. 그러한 AAV는 비복제성 재조합 아데노-관련 바이러스 벡터("rAAV")를 포함할 수 있으며, 특히 AAV8 캡시드를 보유하는 것들이 바람직하다. 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물은 작제물 I이며, 여기서 작제물 I은 하기 성분들을 포함한다: (1) 발현 카세트를 플랭킹하는 AAV8 역위 말단 반복부; (2) a) CMV 인핸서/닭 β-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 폴리 A 신호를 포함한 제어 요소들; 및 (3) 자가-절단 푸린(F)/F2A 링커에 의해 분리되어 동일한 양의 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 발현을 보장하는, 항-VEGF 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열들. 일부 실시 형태에서, 바이러스 벡터는 신호 펩티드를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 신호 펩티드는 MYRMQLLLLIALSLALVTNS(서열 번호 55)이다. 일부 실시 형태에서, 신호 펩티드는 IL-2 신호 서열로부터 유래된다. 일부 실시 형태에서, 바이러스 벡터는 하기와 같은 표 1에 개시된 임의의 신호펩티드로부터의 신호 펩티드를 포함한다: MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA (VEGF-A 신호 펩티드)(서열 번호 5); MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA (피불린-1 신호 펩티드) (서열 번호 6); MAPLRPLLIL ALLAWVALA (비트로넥틴 신호 펩티드) (서열 번호 7); MRLLAKIICLMLWAICVA (보체 인자 H 신호 펩티드) (서열 번호 8); MRLLAFLSLL ALVLQETGT (옵티신 신호 펩티드) (서열 번호 9); MKWVTFISLLFLFSSAYS (알부민 신호 펩티드) (서열 번호 22); MAFLWLLSCWALLGTTFG (키모트립시노겐 신호 펩티드) (서열 번호 23); MYRMQLLSCIALILALVTNS (인터류킨-2 신호 펩티드) (서열 번호 24); MNLLLILTFVAAAVA (트립시노겐-2 신호 펩티드) (서열 번호 25); 또는 MYRMQLLLLIALSLALVTNS (돌연변이체 인터류킨-2 신호 펩티드) (서열 번호 55). 다른 구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물은 작제물 II이며, 여기서 작제물 II는 하기 성분들을 포함한다: (1) 발현 카세트를 플랭킹하는 AAV2 역위 말단 반복부; (2) a) CMV 인핸서/닭 β-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 폴리 A 신호를 포함한 제어 요소들; 및 (3) 자가-절단 푸린(F)/F2A 링커에 의해 분리되어 동일한 양의 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 발현을 보장하는, 항-VEGF 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열들. 일부 실시 형태에서, 항-hVEGF 항체는 서열 번호 2 또는 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열 번호 1 또는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.

일부 실시 형태에서, 바이러스 벡터, 또는 AAV 캡시드 내에 패키징하기에 적합한 다른 발현 작제물은 하기를 포함한다: (1) 발현 카세트를 플랭킹하는 AAV 역위 말단 반복부(ITR); (2) 하나 이상의 인핸서 및/또는 프로모터, d) 폴리 A 신호, 및 e) 선택적으로 인트론으로 본질적으로 이루어진 조절 제어 요소들; 및 (3) 하나 이상의 RNA 또는 관심 단백질 산물을 제공하는(예를 들어, 코딩하는) 도입유전자.

일부 태양에서, 본 발명은 사용을 위한 핵산을 제공하며, 상기 핵산은 본 명세서에 기재된 프로모터 또는 인핸서-프로모터에 작동가능하게 연결된 치료용 산물을 인코딩한다.

일부 태양에서, 본 발명은 사용을 위한 핵산을 제공하며, 상기 핵산은 프로모터에 작동가능하게 연결된 HuPTMFabVEGFi, 예를 들어 HuGlyFabVEGFi를 인코딩하며, 상기 프로모터는 CB7 프로모터(닭 β-액틴 프로모터 및 CMV 인핸서), 거대세포바이러스(CMV) 프로모터, 라우스 육종 바이러스(RSV) 프로모터, MMT 프로모터, EF-1 알파 프로모터, UB6 프로모터, 닭 베타-액틴 프로모터, CAG 프로모터, RPE65 프로모터 및 옵신 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된다. 구체적인 실시 형태에서, HuPTMFabVEGFi는 CB7 프로모터에 작동가능하게 연결된다.

소정 실시 형태에서, 하나 이상의 핵산(예를 들어, 폴리뉴클레오티드)을 포함하는 재조합 벡터가 본 명세서에 제공된다. 핵산은 DNA, RNA, 또는 DNA와 RNA의 조합을 포함할 수 있다. 소정 실시 형태에서, DNA는 프로모터 서열, 관심 치료용 산물(도입유전자, 예를 들어 항-VEGF 항원-결합 단편)을 인코딩하는 서열, 비번역 영역, 및 종결 서열로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열 중 하나 이상을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 재조합 벡터는 관심 치료용 산물을 인코딩하는 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터를 포함한다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 핵산(예를 들어, 폴리뉴클레오티드) 및 핵산 서열은, 예를 들어 당업자에게 알려진 임의의 코돈-최적화 기법을 통해 코돈-최적화될 수 있다(예를 들어, 문헌[Quax et al., 2015, Mol Cell 59:149-161]에 의한 리뷰 참조).

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 재조합 벡터는 관심 치료용 산물(예를 들어, 도입유전자, 예를 들어 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)을 인코딩하는 변형된 mRNA를 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티를 인코딩하는 변형된 mRNA가 본 명세서에 제공된다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 재조합 벡터는 shRNA, siRNA, 또는 miRNA인 치료용 산물을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 벡터는 단백질 전달을 조절하는 성분들을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 바이러스 벡터는 하나 이상의 신호 펩티드를 포함한다. 신호 펩티드의 예에는 VEGF-A 신호 펩티드(서열 번호 5), 피불린-1 신호 펩티드(서열 번호 6), 비트로넥틴 신호 펩티드(서열 번호 7), 보체 인자 H 신호 펩티드(서열 번호 8), 옵티신 신호 펩티드(서열 번호 9), 알부민 신호 펩티드(서열 번호 22), 키모트립시노겐 신호 펩티드(서열 번호 23), 인터류킨-2 신호 펩티드(서열 번호 24), 및 트립시노겐-2 신호 펩티드(서열 번호 25), 돌연변이체 인터류킨-2 신호 펩티드(서열 번호 55)가 포함되지만 이로 한정되지 않는다.

4.4.1 바이러스 벡터

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 바이러스 벡터는 AAV-기반 바이러스 벡터이다. 바람직한 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 바이러스 벡터는 AAV8-기반 바이러스 벡터이다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 AAV8-기반 바이러스 벡터는 망막 세포에 대한 지향성을 보유한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 AAV-기반 벡터는 (복제에 필요한) AAV Rep 유전자 및/또는 (캡시드 단백질의 합성에 필요한) AAV Cap 유전자를 인코딩한다. 다수의 AAV 혈청형이 확인되어 있다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 AAV-기반 벡터는 AAV의 하나 이상의 혈청형 유래 성분을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 AAV-기반 벡터는 AAV1, AAV2, AAV2tYF, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAVrh10, AAV.rh20, AAV.rh39, AAV.Rh74, AAV.RHM4-1, AAV.hu37, AAV.Anc80, AAV.Anc80L65, rAAV.7m8, AAV.PHP.B, AAV.PHP.eB, AAV2.5, AAV2tYF, AAV3B, AAV.LK03, AAV.HSC1, AAV.HSC2, AAV.HSC3, AAV.HSC4, AAV.HSC5, AAV.HSC6, AAV.HSC7, AAV.HSC8, AAV.HSC9, AAV.HSC10, AAV.HSC11, AAV.HSC12, AAV.HSC13, AAV.HSC14, AAV.HSC15, 및 AAV.HSC16 중 하나 이상으로부터의 캡시드 성분을 포함한다. 바람직한 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 AAV-기반 벡터는 AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, 또는 AAVrh10 혈청형 중 하나 이상으로부터의 성분을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 재조합 바이러스 벡터는 인간에서 복제-결손성이 되도록 변경된다. 소정 실시 형태에서, 재조합 바이러스 벡터는 하이브리드 벡터, 예를 들어 "무력한(helpless)" 아데노바이러스 벡터 내로 넣어진 AAV 벡터이다. 소정 실시 형태에서, 제1 바이러스로부터의 바이러스 캡시드와 제2 바이러스로부터의 바이러스 외피 단백질을 포함하는 재조합 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 제2 바이러스는 수포성 구내염 바이러스(VSV)이다. 더 구체적인 실시 형태에서, 외피 단백질은 VSV-G 단백질이다.

특정 실시 형태에서, 조절 요소들의 제어 하에 있고 ITR이 플랭킹된, 도입유전자의 발현을 위한 발현 카세트를 포함하는 바이러스 게놈, 및 AAV8 캡시드 단백질의 아미노산 서열을 갖거나 AAV8 캡시드의 생물학적 기능을 보유하면서 AAV8 캡시드 단백질의 아미노산 서열(서열 번호 48)과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일한 바이러스 캡시드를 포함하는 AAV8 벡터가 제공된다. 소정 실시 형태에서, 인코딩된 AAV8 캡시드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호 48의 서열을 가지며, AAV8 캡시드의 생물학적 기능을 보유한다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 사용되는 AAV는 Anc80 또는 Anc80L65인데, 이는 문헌[Zinn et al., 2015, Cell Rep. 12(6): 1056-1068]에 기재된 바와 같으며, 이 문헌은 전체적으로 참고로 포함된다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 사용되는 AAV는 하기 아미노산 삽입, 즉, LGETTRP 또는 LALGETTRP 중 하나를 포함하는데, 이는, 미국 특허 제9,193,956호; 제9,458,517호; 및 제9,587,282호 및 미국 특허 출원 공개 제2016/0376323호에 기재된 바와 같으며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 사용되는 AAV는 AAV.7m8인데, 이는, 미국 특허 제9,193,956호; 제9,458,517호; 및 제9,587,282호 및 미국 특허 출원 공개 제2016/0376323호에 기재된 바와 같으며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 사용되는 AAV는 미국 특허 제9,585,971호에 개시된 임의의 AAV, AAV.PHP.B이다. 소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 사용되는 AAV는 하기 특허 및 특허 출원 중 임의의 것에 개시된 AAV이며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다: 미국 특허 제7,906,111호; 제8,524,446호; 제8,999,678호; 제8,628,966호; 제8,927,514호; 제8,734,809호; 제9,284,357호; 제9,409,953호; 제9,169,299호; 제9,193,956호; 제9,458,517호; 및 제9,587,282호; 미국 특허 출원 공개 제2015/0374803호; 제2015/0126588호; 제2017/0067908호; 제2013/0224836호; 제2016/0215024호; 제2017/0051257호; 및 국제 특허 출원 PCT/US2015/034799호; PCT/EP2015/053335호.

AAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 기재된 소정의 방법에 사용된다. AAV-기반 바이러스 벡터의 핵산 서열, 및 재조합 AAV 및 AAV 캡시드의 제조 방법이, 예를 들어 미국 특허 제7,282,199 B2호, 미국 특허 제7,790,449 B2호, 미국 특허 제8,318,480 B2호, 미국 특허 제8,962,332 B2호 및 국제 특허 출원 PCT/EP2014/076466호에 교시되어 있으며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 일 태양에서, 도입유전자(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편)를 인코딩하는 AAV(예를 들어, AAV8)-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 구체적인 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편을 인코딩하는 AAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 더 구체적인 실시 형태에서, 라니비주맙을 인코딩하는 AAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다.

소정 실시 형태에서, 단일-가닥 AAV(ssAAV)가 상기에서 사용될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 자가-상보적 벡터, 예를 들어 scAAV가 사용될 수 있다(예를 들어, 문헌[Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82], 문헌[McCarty et al, 2001, Gene Therapy, Vol 8, Number 16, Pages 1248-1254]; 및 미국 특허 제6,596,535호; 제7,125,717호; 및 제7,456,683호를 참조하며, 이들 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다).

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 사용되는 바이러스 벡터는 아데노바이러스-기반 바이러스 벡터이다. 재조합 아데노바이러스 벡터가 항-VEGF 항원-결합 단편을 전달하는 데 사용될 수 있다. 재조합 아데노바이러스는, E1 결실을 갖고, E3 결실을 갖거나 갖지 않고, 어느 것이든 결실된 영역 내로 삽입된 발현 카세트를 갖는 제1 세대 벡터일 수 있다. 재조합 아데노바이러스는 E2 및 E4 영역의 전체 또는 부분 결실을 함유하는 제2 세대 벡터일 수 있다. 헬퍼-의존성 아데노바이러스는 단지 아데노바이러스 역위 말단 반복부 및 패키징 신호(phi)만을 보유한다. 도입유전자는 패키징 신호와 3'ITR 사이에 삽입되는데, 이때 게놈을 대략 36 kb의 야생형 크기에 가깝게 유지하기 위해 스터퍼(stuffer) 서열을 사용하거나 사용하지 않는다. 아데노바이러스 벡터의 생성을 위한 예시적인 프로토콜을 문헌[Alba et al., 2005, "Gutless adenovirus: last generation adenovirus for gene therapy," Gene Therapy 12:S18-S27]에서 찾아볼 수 있으며, 이는 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.

구체적인 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 사용하기 위한 벡터는 항-VEGF 항원-결합 단편(예를 들어, 라니비주맙)을, 관련 세포(예를 들어, 생체내(in vivo) 또는 시험관내에서 망막 세포) 내로의 벡터의 도입 시에, 항-VEGF 항원-결합 단편의 글리코실화된 및/또는 티로신 황산화된(tyrosine sulfated) 변이체가 세포에 의해 발현되도록 인코딩하는 것이다. 구체적인 실시 형태에서, 발현된 항-VEGF 항원-결합 단편은 글리코실화 및/또는 티로신 황산화 패턴을 포함한다.

4.4.2 치료용 산물 또는 도입유전자

치료용 산물은, 예를 들어 치료용 단백질(예를 들어, 항체), 치료용 RNA(예를 들어, shRNA, siRNA, 및 miRNA), 또는 치료용 압타머일 수 있다.

소정 실시 형태에서, 본 발명은 도입유전자를 인코딩하는 재조합 AAV를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 항-VEGF Fab 또는 항-VEGF 항체를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항-VEGF Fab 또는 항-VEGF 항체를 인코딩하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 라니비주맙을 인코딩하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 이두로니다제(IDUA)를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, IDUA를 인코딩하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 이두로네이트 2-설파타제(IDS)를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, IDS를 인코딩하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 저밀도 지질단백질 수용체(LDLR)를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, LDLR을 인코딩하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 트라이펩티딜 펩티다제 1(TPP1) 단백질을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, TPP1을 인코딩하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 마이크로디스트로핀 단백질을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 마이크로디스트로핀을 인코딩하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 마이크로디스트로핀을 인코딩하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항-칼리크레인(항-pKal) 단백질을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 라나델루맙 Fab 또는 전장 항체를 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, huFollistatin344를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN2를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN3을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN6을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, huFollistatin344를 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN2를 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN3을 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN6을 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다.

소정 실시 형태에서, 치료용 산물(예를 들어, 도입유전자)은 다음과 같다: (1) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체 또는 압타머; (2) 항-hVEGF 항원-결합 단편; (3) 항-hVEGF 항원-결합 단편은 Fab, F(ab')₂, 또는 단일쇄 가변 단편(scFv)임; (4) 팔미토일-단백질 티오에스테라제 1(PPT1); (5) 트라이펩티딜-펩티다제 1(TPP1); (6) Battenin(CLN3); 및 (7) CLN6 막관통 ER 단백질(CLN6).

소정 실시 형태에서, 본 발명은 도입유전자를 인코딩하는 재조합 AAV를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 항-VEGF Fab 또는 항-VEGF 항체를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항-VEGF Fab 또는 항-VEGF 항체를 인코딩하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 추가의 실시 형태에서, 라니비주맙을 인코딩하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 이두로니다제(IDUA)를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, IDUA를 인코딩하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 이두로네이트 2-설파타제(IDS)를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, IDS를 인코딩하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 저밀도 지질단백질 수용체(LDLR)를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, LDLR을 인코딩하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 트라이펩티딜 펩티다제 1(TPP1) 단백질을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, TPP1을 인코딩하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 마이크로디스트로핀 단백질을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 마이크로디스트로핀을 인코딩하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 마이크로디스트로핀을 인코딩하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 항-칼리크레인(항-pKal) 단백질을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 라나델루맙 Fab 또는 전장 항체를 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, huFollistatin344를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN2를 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN3을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN6을 인코딩하는 rAAV 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, huFollistatin344를 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN2를 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN3을 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다. 일부 실시 형태에서, CLN6을 인코딩하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 본 명세서에 제공된다.

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 벡터는 (1) Batten-CLN1과 관련된 눈의 병리에 사용될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 팔미토일-단백질 티오에스테라제 1(PPT1)이고; (2) Batten-CLN2와 관련된 눈의 병리에 사용될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 트라이펩티딜-펩티다제 1(TPP1)이고; (3) Batten-CLN3과 관련된 눈의 병리에 사용될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 Battenin(CLN3)이고; (4) Batten-CLN6과 관련된 눈의 병리에 사용될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 CLN6 막관통 ER 단백질(CLN6)이고; (5) Batten-CLN7과 관련된 눈의 병리에 사용될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 MFSD8(Major Facilitator Superfamily Domain Containing 8)이고; (6) Batten-CLN1과 관련된 눈의 병리에 사용될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 팔미토일-단백질 티오에스테라제 1(PPT1)이다.

일부 실시 형태에서, 도입유전자에 의해 인코딩되는 HuPTMFabVEGFi, 예를 들어 HuGlyFabVEGFi는 하기를 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다: VEGF에 결합하는 항체, 예컨대 베바시주맙의 항원-결합 단편; 항-VEGF Fab 모이어티, 예컨대 라니비주맙; 또는 Fab 도메인 상에 추가의 글리코실화 부위를 함유하도록 조작된 그러한 베바시주맙 또는 라니비주맙 Fab 모이어티(예를 들어, 문헌[Courtois et al., 2016, mAbs 8: 99-112]을 참조하며, 이는 전장 항체의 Fab 도메인 상에 과글리코실화된(hyperglycosylated) 베바시주맙의 유도체에 대한 설명을 위해 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함됨).

소정 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 벡터는 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자를 인코딩한다. 구체적인 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 망막 세포에서의 발현을 위한 적절한 발현 제어 요소에 의해 제어된다: 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 경쇄 및 중쇄 cDNA 서열(각각 서열 번호 10 및 11)의 베바시주맙 Fab 부분을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 라니비주맙 경쇄 및 중쇄 cDNA 서열(각각 서열 번호 12 및 13)을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 각각 서열 번호 3 및 4의 경쇄 및 중쇄를 포함하는 베바시주맙 Fab를 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 3에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 4에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 3에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 4에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 각각 서열 번호 1 및 2의 경쇄 및 중쇄를 포함하는 과글리코실화된 라니비주맙을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 1에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 2에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 1에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열 번호 2에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다.

소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 하기 돌연변이 중 하나 이상을 갖는, 서열 번호 3 및 4의 경쇄 및 중쇄를 포함하는 과글리코실화된 베바시주맙 Fab를 인코딩한다: L118N(중쇄), E195N(경쇄), 또는 Q160N 또는 Q160S(경쇄). 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 하기 돌연변이 중 하나 이상을 갖는, 서열 번호 1 및 2의 경쇄 및 중쇄를 포함하는 과글리코실화된 라니비주맙을 인코딩한다: L118N(중쇄), E195N(경쇄), 또는 Q160N 또는 Q160S(경쇄). 항원-결합 단편 도입유전자 cDNA의 서열은, 예를 들어 표 1에서 찾아볼 수 있다. 소정 실시 형태에서, 항원-결합 단편 도입유전자 cDNA의 서열은 서열 번호 10 및 11 또는 서열 번호 12 및 13의 신호 서열을 하나 이상의 신호 서열로 대체함으로써 얻어진다.

소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 항원-결합 단편을 인코딩하고, 6개의 베바시주맙 CDR의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 항원-결합 단편을 인코딩하고, 6개의 라니비주맙 CDR의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 라니비주맙의 중쇄 CDR1 내지 CDR3(서열 번호 20, 18, 및 21)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 라니비주맙의 경쇄 CDR1 내지 CDR3(서열 번호 14 내지 16)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 베바시주맙의 중쇄 CDR1 내지 CDR3(서열 번호 17 내지 19)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 베바시주맙의 경쇄 CDR1 내지 CDR3(서열 번호 14 내지 16)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 라니비주맙의 중쇄 CDR1 내지 CDR3(서열 번호 20, 18, 및 21)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 라니비주맙의 경쇄 CDR1 내지 CDR3(서열 번호 14 내지 16)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다. 소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 베바시주맙의 중쇄 CDR1 내지 CDR3(서열 번호 17 내지 19)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 베바시주맙의 경쇄 CDR1 내지 CDR3(서열 번호 14 내지 16)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩한다.

소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열 번호 14)에서의 2개의 N)는 각각 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu); 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열 번호 14)에서의 2개의 N)는 각각 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu); 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 바람직한 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.

소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 M)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열 번호 18)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 아세틸화되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 M)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열 번호 18)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 아세틸화되지 않는다. 바람직한 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.

소정 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 경쇄 CDR3의 두 번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 두 번째 Q)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않으며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 M)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열 번호 18)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않으며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu); (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열 번호 14)에서의 2개의 N)는 각각 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu); 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 도입유전자는 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 인코딩하며, 여기서 경쇄 CDR3의 두 번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 두 번째 Q)는 아세틸화되지 않으며, 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 아세틸화되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 서열 번호 20의 중쇄 CDR1을 포함하며, 여기서 (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 M)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열 번호 18)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 아세틸화되지 않으며; (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열 번호 14)에서의 2개의 N)는 각각 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu); 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 바람직한 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.

소정 태양에서, 항-VEGF 항원-결합 단편이 본 명세서에 또한 제공되며, 상기 항-VEGF 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3, 및 그러한 항원-VEGF 항원-결합 단편을 인코딩하는 도입유전자를 포함하며, 여기서 경쇄 CDR3의 두 번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 두 번째 Q)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열 번호 14)에서의 2개의 N)는 각각 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu); 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열 번호 14)에서의 2개의 N)는 각각 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu); 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 본 명세서에 제공된 항-VEGF 항원-결합 단편 및 도입유전자는 본 명세서에 기재된 본 발명에 따른 임의의 방법에 사용될 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.

소정 태양에서, 항-VEGF 항원-결합 단편이 본 명세서에 또한 제공되며, 상기 항-VEGF 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3, 및 그러한 항원-VEGF 항원-결합 단편을 인코딩하는 도입유전자를 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 M)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열 번호 18)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 아세틸화되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 M)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열 번호 18)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 아세틸화되지 않는다. 본 명세서에 제공된 항-VEGF 항원-결합 단편 및 도입유전자는 본 명세서에 기재된 본 발명에 따른 임의의 방법에 사용될 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.

소정 태양에서, 항-VEGF 항원-결합 단편이 본 명세서에 또한 제공되며, 상기 항-VEGF 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3, 및 그러한 항원-VEGF 항원-결합 단편을 인코딩하는 도입유전자를 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않으며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 경쇄 CDR3의 두 번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 두 번째 Q)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하며, 여기서 (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 M)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열 번호 18)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않으며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu); (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열 번호 14)에서의 2개의 N)는 각각 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu); 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 갖지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu). 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 아세틸화되지 않으며, 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 구체적인 실시 형태에서, 항원-결합 단편은 서열 번호 14 내지 16의 경쇄 CDR1 내지 CDR3 및 서열 번호 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR1 내지 CDR3을 포함하며, 여기서 (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 M)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열 번호 18)에서의 N)는 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열 번호 20)에서의 N)는 아세틸화되지 않으며; (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열 번호 14)에서의 2개의 N)는 각각 하기 화학적 변형 중 하나 이상을 가지며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루타메이트화(pyro Glu); 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열 번호 16)에서의 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 본 명세서에 제공된 항-VEGF 항원-결합 단편 및 도입유전자는 본 명세서에 기재된 본 발명에 따른 임의의 방법에 사용될 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.

[표 1]

4.5 질병

본 명세서에 제공된 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물(예를 들어, 섹션 4.1)은 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 당뇨병성 망막병증(DR), 또는 바텐병으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있다.

일부 실시 형태에서, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 당뇨병성 망막병증(DR), 또는 바텐병으로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 본 명세서에 개시되며, 상기 방법은 상기 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 (예를 들어, 맥락막상 약물 전달 장치, 예컨대 미세바늘을 구비한 마이크로인젝터를 통해) 맥락막상 주사에 의해 상기 대상체에게 투여하는 단계에 의해 수행된다.

일부 실시 형태에서, 0.2 mg/mL의 염화칼륨, 0.2 mg/mL의 일염기성 인산칼륨, 5.84 mg/mL의 염화나트륨, 1.15 mg/mL의 무수 이염기성 인산나트륨, 40.0 mg/mL, 4% w/v 수크로스, 및 선택적으로 계면활성제를 포함하는 약제학적 조성물의 약 2.5 × 10¹¹ GC/눈, 약 5 × 10¹¹ GC/눈, 또는 약 1.5 × 10¹² GC/눈의 작제물 II를 함유하는 약제학적 조성물은 맥락막상 투여를 통해 환자에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 환자는 당뇨병성 망막병증을 갖는다.

일부 실시 형태에서, 10% w/v 수크로스를 포함하는 약제학적 조성물의 약 2.5 × 10¹¹ GC/눈, 약 5 × 10¹¹ GC/눈, 또는 약 1.5 × 10¹² GC/눈의 작제물 II를 함유하는 약제학적 조성물은 맥락막상 투여를 통해 환자에게 투여된다. 일부 실시 형태에서, 환자는 당뇨병성 망막병증을 갖는다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 240 mOsm/㎏ 이상의 장성(tonicity)/오스몰랄 농도를 갖는다.

일부 태양에서, 뮤코다당증 IVA형(MPS IVA), 뮤코다당증 I형(MPS I), 뮤코다당증 II형(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질병, 뇌혈관 질병, 듀센 근이영양증, 림 거들 근이영양증, 베커 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염, 또는 칼리크레인-관련 질병으로 진단된 대상체를 치료하는 데 적합한 약제학적 조성물 또는 상기 대상체를 치료하는 방법이 본 명세서에 개시되며, 상기 방법은 상기 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 약제학적 조성물은 SCS 내에 투여된다.

일부 실시 형태에서, 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물(예를 들어, 섹션 4.1)은 (1) Batten-CLN2로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 TPP1(Tripeptidyl-Peptidase 1, 트라이펩티딜-펩티다제 1)이거나; (2) 제1형 어셔(Usher's-Type 1)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 MYO7A(Myosin VIIA)이거나; (3) 제1형 어셔로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 CDH23(Cadherin Related 23)이거나; (4) 제2형 어셔로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 PCDH15(Protocadherin Related 15)이거나; (5) 제2형 어셔로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 USH2A(Usherin)이거나; (6) 제3형 어셔로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 CLRN1(Clarin 1)이거나; (7) 스타가르트병(Stargardt)으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 ABCA4(ATP Binding Cassette Subfamily A Member 4)이거나; (8) 스타가르트병으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 ELOVL4(ELOVL Fatty Acid Elongase 4)이거나; (9) 적록 색맹으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 OPN1LW(L opsin, L 옵신)이거나; (10) 적록 색맹으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 OPN1MW(M opsin, M 옵신)이거나; (11) 청색 추체 단색형색각(blue cone monochromacy)으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 OPN1MW(M opsin, M 옵신)이거나; (12) 레버 선천성 흑암시-1(Leber congenital amaurosis-1, LCA1)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 GUCY2D(Guanylate Cyclase 2D, Retinal)이거나; (13) 레버 선천성 흑암시-2(LCA2)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 RPE65(Retinoid Isomerohydrolase RPE65, 레티노이드 아이소머하이드롤라제 RPE65)이거나; (14) 레버 선천성 흑암시-4(LCA4)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 AIPL1(Aryl Hydrocarbon Receptor Interacting Protein Like 1, 아릴 탄화수소 수용체 상호작용 단백질 유사 1)이거나; (15) 레버 선천성 흑암시-7(LCA7)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 CRX(Cone-Rod Homeobox, 추체-간체 호메오박스)이거나; (16) 레버 선천성 흑암시-8(LCA8)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 CRB1(Crumbs Cell Polarity Complex Component 1))이거나; (17) 레버 선천성 흑암시-9(LCA9)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 NMNAT1(Nicotinamide Nucleotide Adenylyltransferase 1, 니코틴아미드 뉴클레오티드 아데닐릴트랜스퍼라제 1)이거나; (18) 레버 선천성 흑암시-10(LCA10)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 CEP290(Centrosomal Protein 290, 중심체 단백질 290)이거나; (19) 레버 선천성 흑암시-11(LCA11)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 IMPDH1(Inosine Monophosphate Dehydrogenase 1, 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제 1)이거나; (20) 레버 선천성 흑암시-15(LCA15)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 TULP1(Tubby Like Protein 1, 튜비 유사 단백질 1)이거나; (21) LHON으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 MT-ND4(Mitochondrially Encoded NADH Dehydrogenase 4, 미토콘드리아에 인코딩된 NADH 데하이드로게나제 4)이거나; (22) LHON으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 MT-ND6(Mitochondrially Encoded NADH Dehydrogenase 6, 미토콘드리아에 인코딩된 NADH 데하이드로게나제 6)이거나; (23) 맥락막결손(choroideremia)으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 CHM(Rab Escort Protein 1, Rab 에스코트 단백질 1)이거나; (24) X-연관 망막층간분리(XLRS)로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 RS1(Retinoschisin, 레티노쉬신)이거나; (25) 바르데-비들(Bardet-Biedl) 증후군 1로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 BBS1(Bardet-Biedl Syndrome 1)이거나; (26) 바르데-비들 증후군 6으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 MKKS(McKusick-Kaufman Syndrome, 맥쿠식-카우프만 증후군)이거나; (27) 바르데-비들 증후군 10으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 BBS10(Bardet-Biedl Syndrome 10)이거나; (28) 추체 이영양증으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 GUCA1A(Guanylate Cyclase Activator 1A, 구아닐레이트 사이클라제 활성화인자 1A)이거나; (29) 시신경 위축증으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 OPA1(OPA1 Mitochondrial Dynamin Like GTPase)이거나; (30) 제1형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 RP1(RP1 Axonemal Microtubule Associated)이거나; (31) 제2형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 RP2(RP2 Activator of ARL3 GTPase, ARL3 GTPase의 RP2 활성화인자)이거나; (32) 제7형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 PRPH2(Peripherin 2)이거나; (33) 제11형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 PRPF31(Pre-mRNA Processing Factor 31)이거나; (34) 제13형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 PRPF8(Pre-mRNA Processing Factor 8)이거나; (35) 제37형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 NR2E3(Nuclear Receptor Subfamily 2 Group E Member 3)이거나; (36) 제38형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 MERTK(MER Proto-Oncogene, Tyrosine Kinase)이거나; (37) 제40형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 PDE6B(Phosphodiesterase 6B, 포스포다이에스테라제 6B)이거나; (38) 제41형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 PROM1(Prominin 1)이거나; (39) 제56형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 IMPG2(Interphotoreceptor Matrix Proteoglycan 2)이거나; (40) 제62형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 MAK(Male Germ Cell Associated Kinase)이거나; (41) 제80형 색소성 망막염으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 IFT140(Intraflagellar Transport 140)이거나; 또는 (42) 베스트병(Best disease)으로 진단된 대상체에게 투여될 수 있으며, 이때의 치료용 산물은 BEST1(Bestrophin 1)이다.

4.6 검정

당업자는 본 명세서에 기재된 조성물 및 방법을 연구하기 위해, 예를 들어 본 명세서에 제공된 제형을 시험하기 위해 본 명세서에 기재된 바와 같은 검정 및/또는 당업계에 알려진 기법을 사용할 수 있다. 섹션 5에 상세히 설명된 바와 같이, 하기 검정이 본 명세서에 또한 제공된다.

4.6.1 초음파 B-스캔

약 32 내지 35℃에서 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')에서 소정 범위에 걸쳐 상이한 부피(예를 들어, 낮은 점도부터 높은 점도까지의 범위에 걸쳐 25 μL부터 500 μL까지)를 주사한 후에 생체외(ex vivo)에서 동물 눈에서의 SCS의 2D 단면 이미지를 생성함으로써 SCS 두께를 결정하는 데 고주파수 초음파(U/S) 프로브(UBM Plus; Accutome, 미국 펜실베이니아주 말번 소재)가 사용될 수 있다. U/S 이미지 획득을 용이하게 하기 위해 UBM Plus에 U/S 프로브 커버(Clearscan, Eye-Surgical-Instruments, 미국 미네소타주 플리머스 소재)가 부착될 수 있다. U/S 프로브는 눈 주위의 시상면 영상(sagittal view)(예를 들어, 8개의 시상면 영상)을 획득하는 데 사용될 수 있다. 외부 공막부터 내부 망막까지의, 예를 들어 공막극(scleral spur) 후방으로 1, 5, 및 9 mm 지점에서의 두께를 구하기 위해 U/S B-스캔의 후처리(postprocessing)가 수행될 수 있다. 각각의 눈에 대한 평균, 중위값, 및 표준 편차가 계산될 수 있다.

4.6.2 액체 부피에 기초한 SCS 두께의 측정

3D 동결-재구성(cryo-reconstruction) 이미징이 SCS 두께를 측정하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, 25 μL 내지 500 μL(적색-형광 입자를 함유함)가 주사된 동물 눈을 주사 후 수 분(예를 들어, 3 내지 5분) 동안 냉동시키고, 동결절단(cryosectioning)을 위해 준비한다. 크라이오스탯(cryostat)을 사용하여 샘플을 슬라이싱함으로써 매 300 μm마다 조직의 크라이오블록(cryoblock)의 하나의 적색-형광 이미지를 디지털 카메라를 사용하여 얻을 수 있다. 적색-형광 이미지들로 이루어진 이미지 스택들을 분석하여 SCS 두께를 결정한다.

4.6.3 제형에 기초한 SCS 두께의 측정

점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')가 일정 범위에 걸친 약제학적 조성물을 동물의 SCS 내로 주사한 후에 SCS 두께를 결정하는 데 U/S B-스캔이 사용될 수 있다. SCS 붕괴의 속도를 결정하는 데 고주파수 초음파 B-스캔이 사용될 수 있다. 평면부(pars plana)에 대한 8개의 시상면 영상이 획득될 수 있다: (a) 상비측(supranasal), 주사 부위 위로; (b) 상측(superior); (c) 비측(nasal); (d) 상측두측(supratemporal); (e) 측두측(temporal); (f) 하측두측(infratemporal); (g) 하측(inferior); 및 (h) 하비측(infranasal).

SCS 두께를 측정하기 위해 U/S 영상에 대해 오프라인 후처리가 수행될 수 있다. U/S 프로브는 15 μm의 최소 축방향 분해능을 가질 수 있다. 각각의 U/S 영상에 대해, 공막극 후방으로 5 mm에 위치하고 공막에 대해 직각으로 위치한 지점에서 라인 세그먼트가 생성될 수 있다. 라인은 공막의 외부 표면에서 시작하여 망막의 내부 표면에서 종료될 수 있다. 공막과 맥락망막은 라인이 수직임을 보장하기 위해 측정에 포함될 수 있다. 이어서, 측정된 라인 길이로부터 조직 두께를 감산함으로써 SCS 두께를 계산한다. 곡선 적합화를 행하여 SCS 붕괴의 속도를 결정한다.

시간 경과에 따라 다수의 위치에서의 SCS 두께를 결정하는 데 U/S B-스캔이 사용될 수 있으며, SCS 붕괴의 속도가 계산될 수 있다. 형광이 더 이상 검출되지 않을 때까지 시간 경과에 따라 생체내에서 동물 눈에서의 형광 안저(fundus) 이미지를 촬영함으로써 SCS로부터의 주사된 형광 물질의 대략적인 제거 속도를 구할 수 있다.

4.6.4 안저 이미징에 의한 SCS 제거 속도론적 특성

SCS에서의 이동에 대한 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')의 효과를 연구하기 위해, 점도 및/또는 탄성 모듈러스(G')가 일정 범위에 걸쳐 있고 플루오레세인을 함유하는 상이한 약제학적 조성물이 SCS 내로 주사될 수 있다. 생체내에서 동물 눈에서의 시간 경과에 따른 형광 안저 이미지를 촬영함으로써 SCS로부터의 주사된 형광 물질의 대략적인 제거 속도 또는 제거 시간을 구할 수 있다. 일부 경우에, 제거 속도는 총 제거 시간을 결정함으로써 결정될 수 있으며, 제거 시간 상수(t_제거)는 시간 경과에 따른 총 형광 신호의 정규화된 농도로부터 도출된 곡선 적합을 사용하여 계산될 수 있다. 트로피카미드 및 페닐에프린의 국소 점안제(Akorn, 미국 일리노이주 레이크 포레스트 소재)가 눈을 확장시키기 위해 매 이미징 세션마다 사전투여될 수 있다. 130° 렌즈 부착 및 내장 플루오레세인 형광조영술 모듈을 구비한 RetCam II(Clarity Medical Systems, 미국 캘리포니아주 플리전턴 소재)가 이미지를 획득하는 데 사용될 수 있다. RetCam II로부터, 예를 들어 0.0009, 1.6, 및 2.4 W/m²로 설정된 청색광 출력을 사용하여 다수의 이미지가 촬영될 수 있다. 안구의 전체 내부 표면을 캡처하려는 시도에서, 다음 9개의 이미지가 캡처될 수 있다: 중앙측, 상비측, 상측, 상측두측, 측두측, 하측두측, 하측, 하비측, 및 비측. 이는 먼 주변부(far periphery) 내로의 이미징을 가능하게 한다. 이미징은 주사 직후, 주사 후 1시간째, 12시간 동안 매 3시간마다, 그리고 매 2일마다 수행될 수 있다. 형광이 시각적 관찰에 의해 검출 불가능한 최초의 시점으로서 정의될 수 있는 총 제거 시간은 주사된 모든 눈에 대해 결정된다. 플루오레세인 아이소티오시아네이트-접합된 AAV(FITC-AAV), 또는 FITC 접합된-AAV 캡시드 단백질-특이적 단일클론 항체가 유사한 실험에서 SCS 내에서의 AAV 입자의 이동 및 제거를 추적하는 데 이용될 수 있다. AAV의 형광 표지화를 위한 방법이 당업계(문헌[Shi, et al. Sci. Adv. 2020; 6 : eaaz3621]; 및 문헌[Tsui, T. Y., et al. Hepatology 42, 335-342 (2005)])에 알려져 있다. 많은 AAV 혈청형을 인식하는 항체(FITC 접합된)가 구매가능하다.

4.6.5 2D 원주방향 확산을 특성화하기 위한 플랫 마운트(flat mount)

플루오레세인, 또는 형광 표지된 AAV를 함유하는 본 발명의 약제학적 조성물을 SCS 내로 주사한다. SCS 주사 및 동결 후에, 입자 및 플루오레세인의 2D 확산을 평가하도록 눈을 준비할 수 있다. 냉동된 눈을 윤부(limbus)부터 후극(posterior pole)까지 슬라이싱으로 개방하여 등거리 공막편을 생성한다. 생성된 공막편을 벌려서 열고, 냉동된 유리체액, 수정체, 및 방수를 제거한다.

100 mm 렌즈(Canon)를 구비한 디지털 SLR 카메라(Canon 60D, Canon, 미국 뉴욕주 멜빌 소재)가 명시야 및 형광 이미지를 획득하는 데 사용될 수 있다. 카메라 파라미터는 일정하게 유지된다. 플루오레세인 확산 면적을 획득하기 위하여, 녹색 광학 대역-통과 필터(520±10 nm; Edmunds Optics, 미국 뉴저지주 배링턴 소재)가 렌즈 상에 놓여질 수 있고, 샘플이 다색 LED 전구(S 시리즈 RGB MR16/E26, HitLights, 미국 루이지애나주 배턴 루지 소재)의 자색 설정을 갖는 램프에 의해 조명될 수 있다. 적색-형광 입자의 위치를 시각화하기 위해, 적색 필터(610±10 nm; Edmunds Optics)가 렌즈 상에 놓여질 수 있고, 샘플이 녹색광으로 전환된 동일한 램프를 사용하여 조명될 수 있다. 역치(threshold)를 초과하는 녹색 형광 및 적색 형광의 면적이 ImageJ(National Institutes of Health, 미국 메릴랜드주 베데스다 소재)를 사용하여 각각의 눈에 대해 계산될 수 있다. 역치는 백그라운드 신호의 시각적 검사에 기초하여 수동적으로 설정될 수 있다.

4.6.6 안압 측정

SCS 주사 후에 SCS 내의 압력을 측정하기 위해 압력 측정 시스템이 사용될 수 있다. 케타민/자일라진 칵테일의 피하 주사에 의해 동물이 말기 마취될(terminally anesthetized) 수 있다. SCS 주사(N=4) 후에, SCS 내의 압력이 매 수 분마다 측정될 수 있다. 주사 전부터의 원래의 기저선 값(즉, 약 15 mmHg)에 도달할 때까지 압력을 모니터링한다. 측정 후에, 펜토바르비탈의 치사 용량을 정맥내로 주사하여 동물을 안락사시킨다. 두 번째 세트의 SCS 주사가 사후 동물에서 행해질 수 있다. 사후 측정에서는, 주사가 행해진 조직 공간(즉, SCS) 내에서만 압력이 측정된다.

4.6.7 온도 스트레스 검정

본 명세서에 제공된 제형의 상대 안정성을 평가하기 위해 온도 스트레스 발달(temperature stress development) 안정성 연구가 37℃에서 4일에 걸쳐 1.0 × 10¹² GC/mL에서 수행될 수 있다.

안정성을 평가하는 데 사용될 수 있는 검정은 시험관내 상대 역가(IVRP), 벡터 게놈 농도(ddPCR에 의한 VGC), 염료 형광에 의한 유리 DNA, 동적 광산란, 외관, 및 pH를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 제공된 제형에서 -80℃(-60℃ 이하) 및 -20℃(-25℃ 내지 -15℃)에서의 시험관내 상대 효능 및 다른 품질의 유지를 입증하기 위해 장기간 발달 안정성 연구가 12개월 동안 수행될 수 있다.

4.6.8 시험관내 상대 효능(IVRP) 검정

ddPCR GC 역가를 유전자 발현과 관련시키기 위하여, HEK293 세포를 형질도입시키고 항-VEGF Fab 단백질 수준에 대해 세포 배양물 상층액을 검정함으로써 시험관내 생물학적 검정이 수행될 수 있다. HEK293 세포를 3개의 폴리-D-라이신-코팅된 96웰 조직 배양 플레이트 상에서 하룻밤 플레이팅한다. 이어서, 세포를 야생형 인간 Ad5 바이러스로 사전감염시킨 후, AAV 벡터 참조 표준물 및 시험 대상물의 독립적으로 제조된 3개의 연속 희석물로 형질도입시켰으며, 이때 각각의 제조물은 별개의 플레이트 상에 상이한 위치에서 플레이팅한다. 형질도입 후 3일째에, 세포 배양 배지를 플레이트로부터 수집하고, ELISA를 통해 VEGF-결합 Fab 단백질 수준에 대해 측정한다. ELISA에 대해서는, 96웰 ELISA 플레이트를 VEGF로 코팅하고, 차단하고, 이어서 수집된 세포 배양 배지와 함께 인큐베이션하여, HEK293 세포에 의해 생성된 항-VEGF Fab를 포획한다. Fab-특이적 항-인간 IgG 항체가 VEGF-포획된 Fab 단백질을 검출하는 데 사용된다. 세척 후에, 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP) 기질 용액을 첨가하고, 발달되게 하고, 정지 완충액으로 정지시키고, 플레이트를 플레이트 판독기에서 판독한다. HRP 산물의 흡광도 또는 OD를 로그 희석(log dilution)에 대해 도표로 나타내고, 각각의 시험 대상물의 상대 효능을, 식 EC₅₀ 참조물 ÷ EC₅₀ 시험 대상물을 사용하는, 평행성 유사성 검정(parallelism similarity test)을 통과한 후에 4-파라미터 로지스틱 회귀 모델을 사용하여 적합화된 동일한 플레이트 상의 참조 표준물에 대한 상대적인 값으로 계산한다. 시험 대상물의 효능은 3개의 플레이트의 가중 평균으로부터 계산된 참조 표준물 효능의 백분율로서 보고된다.

ddPCR GC 역가를 기능성 유전자 발현과 관련시키기 위하여, HEK293 세포를 형질도입시키고 도입유전자(예를 들어, 효소) 활성을 검정함으로써 시험관내 생물학적 검정이 수행될 수 있다. HEK293 세포를 3개의 96웰 조직 배양 플레이트 상에서 하룻밤 플레이팅한다. 이어서, 세포를 야생형 인간 아데노바이러스 혈청형 5 바이러스로 사전감염시킨 후, 효소 참조 표준물 및 시험 대상물의 독립적으로 제조된 3개의 연속 희석물로 형질도입시켰으며, 이때 각각의 제조물은 별개의 플레이트 상에 상이한 위치에서 플레이팅한다. 형질도입 후 두 번째 날에, 세포를 용해시키고, 낮은 pH로 처리하여 효소를 활성화시키고, 도입유전자(효소)에 의한 절단 시에 증가된 형광 신호를 산출하는 펩티드 기질을 사용하여 효소 활성에 대해 검정하였다. 형광 또는 RFU를 로그 희석에 대해 도표로 나타내고, 각각의 시험 대상물의 상대 효능을, 식 EC₅₀ 참조물 ÷ EC₅₀ 시험 대상물을 사용하는, 평행성 유사성 검정을 통과한 후에 4-파라미터 로지스틱 회귀 모델을 사용하여 적합화된 동일한 플레이트 상의 참조 표준물에 대한 상대적인 값으로 계산한다. 시험 대상물의 효능은 3개의 플레이트의 가중 평균으로부터 계산된 참조 표준물 효능의 백분율로서 보고된다.

4.6.9 벡터 게놈 농도 검정

플루오레세인 아이소티오시아네이트-접합된 AAV(FITC-AAV), 또는 FITC 접합된-AAV 캡시드 단백질-특이적 단일클론 항체가 유사한 실험에서 SCS 내에서의 AAV 입자의 이동 및 제거를 추적하는 데 이용될 수 있다. AAV의 형광 표지화를 위한 방법이 당업계(문헌[Shi, et al. Sci. Adv. 2020; 6 : eaaz3621]; 및 문헌[Tsui, T. Y., et al. Hepatology 42, 335-342 (2005)])에 알려져 있다. 많은 AAV 혈청형을 인식하는 항체(FITC 접합된)가 구매가능하다.

4.6.10 염료 형광 검정을 사용한 유리 DNA 분석

DNA에 결합된 SYBR® Gold 핵산 겔 염색제('SYBR Gold 염료')의 형광에 의해 유리 DNA가 결정될 수 있다. 형광은 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 측정되고 DNA 표준물을 사용하여 정량화될 수 있다. 결과는 ng/μL 단위로 보고될 수 있다.

ng/μL 단위로 측정된 유리 DNA를 유리 DNA의 백분율로 변환시키기 위해 총 DNA를 추정하는 데 2가지 접근법이 사용될 수 있다. 첫 번째 접근법에서는, UV-가시광 분광법에 의해 결정된 GC/mL(OD)를 사용하여 샘플 내의 총 DNA를 추정하였으며, 여기서 M은 DNA의 분자량이고, 1 x 10⁶은 단위 변환 인자이다:

추정된 총 DNA(ng/μL) = 1x10⁶ × GC/mL(OD) × M(g/mol) / 6.02x10²³

두 번째 접근법에서는, 샘플을 0.05% 폴록사머 188과 함께 20분 동안 85℃로 가열하고, SYBR Gold 염료 검정에 의해 가열된 샘플에서 측정된 실제 DNA가 총 DNA로서 사용할 수 있다. 따라서, 이는 모든 DNA가 회수되고 정량화되었다는 가정을 갖는다. 트렌딩을 위해, 원시(raw) ng/μL가 사용될 수 있거나, 일관된 방법에 의해 결정된 백분율이 사용될 수 있다.

4.6.11 크기 배제 크로마토그래피(SEC)

25 mm 경로길이 플로우셀을 구비한, Waters Acquity Arc Equipment ID 0447(C3PO) 상의 Sepax SRT SEC-1000 Peek 컬럼(PN 215950P-4630, SN: 8A11982, LN: BT090, 5 μm 1000A, 4.6 x 300 mm)을 사용하여 SCE가 수행될 수 있다. 이동상은, 예를 들어 20 mM 인산나트륨, 300 mM NaCl, 0.005% 폴록사머 188, pH 6.5일 수 있으며, 이의 유량은 20분 동안 0.35 mL/분이며, 컬럼은 주위 온도에 있다. 214, 260, 및 280 nm에서의 25점 평균 평활화와 함께 1.2 nm 분해능 및 2점/초 샘플링 속도를 사용하여 데이터 수집이 수행될 수 있다. 이상적인 목표 로드는 1.5x10¹¹ GC일 수 있다. 샘플은 이상적인 목표의 약 1/3인 50 μL로 주사되거나, 또는 5 μL로 주사될 수 있다.

4.6.12 동적 광 산란(DLS) 검정

30 μL의 샘플 부피와 함께 Corning 3540 384웰 플레이트를 사용하여 Wyatt DynaProIII 상에서 동적 광 산란(DLS)이 수행될 수 있다. 10초 동안 각각 10개의 획득이 반복 1회당 수집될 수 있으며, 샘플당 3회 반복 측정이 있을 수 있다. 용매는 샘플에서 사용되는 용매에 따라 설정될 수 있으며, 예를 들어 dPBS 중의 AAV 벡터에 대해서는 'PBS'로 설정될 수 있다. 데이터 품질 기준(기저선, SOS, 노이즈, 적합)을 충족하지 않는 결과가 '마킹'되고 분석에서 제외될 수 있다.

4.6.13 점도 측정

당업계에 알려진 방법, 예를 들어 2019년 공개된 미국 약전(USP) 및 이의 이전 버전에 제공된 방법(전체적으로 본 명세서에 참고로 포함됨)을 사용하여 점도가 측정될 수 있다. USP <911>에 기재된 방법을 사용하여, 모세관 점도계를 사용하여 낮은 전단에서의 점도를 측정하였다.

점도 vs. 전단율은 콘-플레이트 회전 레오미터(cone and plate rotational rheometer)를 사용하여 결정될 수 있다. 레오메트리 측정은 미국 약전(USP) USP <1911>에 기재되어 있으며, 회전 점도측정은 USP <912>에 기재되어 있다. 회전 레오메트리 점도 측정치는 60 mm 1° 각도 알루미늄 콘 부속물(TA Instruments, 미국 델라웨어주 뉴캐슬 소재)과 함께 펠티에 온도 제어 플레이트가 구비된 AR-G2 레오미터를 사용하여 수집될 수 있다. 0.3 s^-1 미만에서 시작하여 최대 5000 s^-1에 이르는 범위에 걸쳐 점도 vs. 전단율 스위프가 수행될 수 있으며, 이때 디케이드(decade)당 5개의 점이 수집된다. 점도 vs. 전단율을 20℃에서 수집하였다. 10,000 및 20,000 s^-1에서의 점도를 데이터로부터 외삽하였다.

일부 경우에, 본 약제학적 조성물 또는 참조 약제학적 조성물의 점도는 0, 0.1 s^-1, 1 s^-1, 1000 s^-1, 5000 s^-1, 10,000 s^-1, 20,000 s^-1, 또는 20,000 s^-1 초과에서 측정될 수 있다.

4.6.14 레올로지 측정

레오메트리 측정은 미국 약전(USP) USP <1911>에 기재되어 있으며, 회전 점도측정은 USP <912>에 기재되어 있다.

60 mm 1° 각도 알루미늄 콘 부속물(TA Instruments, 미국 델라웨어주 뉴캐슬 소재)과 함께 펠티에 온도 제어 플레이트가 구비된 AR-G2 레오미터를 사용하여 레올로지 측정치를 수집하였다

0.1% 변형률 및 1 ㎐에서 진동 모드로 온도 램프(temperature ramp)에서의 적용에 의해 사용함으로써 겔화 온도를 결정하였다. 샘플을 로딩하고 5℃에서 5분 동안 사전평형화한 후, 최대 40℃ 또는 60℃ 중 어느 하나까지 5℃/분으로의 온도 램프를 수행하였다. 저장/탄성 모듈러스(G')와 손실/점성 모듈러스(G")가 교차한 지점에서의 온도를 시스템 겔화 온도로서 기록하였다. 토크 스위프는, 선형 점탄성 영역이 약 0.4%까지 연장되었으며, 이에 따라 0.1%에서의 작동이 선형 점탄성 영역 내에 충분히 있었음을 입증하였다.

겔화 시간을 진동 모드 0.1% 변형률 및 1 ㎐에서 결정하였다. 샘플을 5℃ 및 20℃ 둘 모두에서 평형화시키고, 34℃까지의 온도 점프에 노출시켰다. 상기에서와 같이, 겔화까지의 시간은 저장 모듈러스 곡선과 손실 모듈러스 곡선의 교차점으로서 정의되었다.

4.6.15 바이러스 감염성 검정

문헌

, et al. Molecular Therapy Methods & Clinical Development (2018) Vol. 10, pp. 223-236] (전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된)에 기재된 바와 같은 TCID₅₀ 감염 역가 검정이 사용될 수 있다. 2018년 10월 15일자로 출원된 미국 가출원 제62/745859호에 기재된 바와 같은 상대 감염성 검정이 사용될 수 있다.

4.6.16 시차 주사 형광측정법

단백질, 및 단백질로 구성된 바이러스 캡시드의 열 안정성은 시차 주사 형광측정법(DSF)에 의해 결정될 수 있다. DSF는 온도의 함수로서 단백질의 고유 트립토판 및 티로신 방출을 측정한다. Trp 및 Tyr 잔기의 국부 환경은 단백질이 풀림에 따라 변화하여 형광의 큰 증가를 가져온다. 단백질의 50%가 풀리는 온도가 '용융' 온도(T_m)로서 정의된다. 형광 분광법은 USP <853> 및 USP <1853>에 기재되어 있다.

Promethius NTPlex Nano DSF Instrument(NanoTemper Technologies, 독일 뮌헨 소재)를 사용하여 DSF 데이터를 수집하였다. 샘플을 20℃에서 모세관 셀 내로 로딩하고, 1℃/분의 속도로 95℃까지 온도를 램핑하였다. 350 nm(풀림) 및 330 nm(풀림)에서의 방출의 신호 출력비를 사용하여 T_m을 결정하였다.

4.6.17 주사 압력 측정

Flow Screen and Fluid Sensor(Viscotec America, 미국 조지아주 케네소 소재) 또는 일회용 압력 센서 S-N-000을 구비한 PressureMAT-DPG(PendoTECH, 미국 뉴저지주 프린스턴 소재) 중 어느 하나를 사용하여 주사 압력을 측정하였다.

수동으로 또는 Legato-100 주사기 펌프(Kd Scientific, 미국 매사추세츠주 홀리스턴 소재)를 사용하여 공기 중으로의 주사를 수행하여 일관된 유량을 적용하였다. 제핵된 돼지 눈 안으로의 주사를 위하여, 눈을 Mandell Eye Mount(Mastel) 상에 마운팅하였으며, 아울러 눈의 안압을 조정하기 위해 흡인을 가하였다.

4.6.18 참조 조성물

본 명세서에 제공된 조성물의 점도는 본 조성물을 참조 약제학적 조성물과 대비함으로써 평가될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은, 평가되는 조성물과 동일한 유형 및 양의 재조합 AAV를 포함하지만 열반응성 조성물이 아닌 약제학적 조성물이다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은, 평가되는 조성물과 동일한 유형 및 양의 재조합 AAV를 포함하지만 평가되는 조성물보다 안구외 온도(약 32 내지 35℃)에서 더 낮은 점도 및/또는 탄성 모듈러스를 갖는 약제학적 조성물이다.

일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은, 인산염 완충 식염수 중에, 평가되는 조성물과 동일한 농도로 동일한 재조합 AAV를 포함하는 약제학적 조성물이다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은, 0.001% 폴록사머 188, pH 7.4를 갖는 둘베코 인산염 완충 식염수 중에, 평가되는 조성물과 동일한 농도로 동일한 재조합 AAV를 포함하는 약제학적 조성물이다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은, 4% 수크로스 및 0.001% 폴록사머 188, pH 7.4를 갖는 둘베코 인산염 완충 식염수 중에, 평가되는 조성물과 동일한 농도로 동일한 재조합 AAV를 포함하는 약제학적 조성물이다. 평가되는 조성물과 동일한 경로 또는 상이한 경로에 의해 참조 약제학적 조성물이 투여될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 참조 약제학적 조성물은 맥락막상 투여된다.

실시예

이 섹션(즉, 섹션 5)에서의 실시예는 제한으로서가 아니라 예시로서 제공된다.

5.1 실시예 1: 맥락막상 전달을 위한 열반응성 겔 제형의 최적화

5.1.1 열반응성 겔 제형의 목적의 개요

작제물 II는 맥락막상 공간 내로의 주사에 의해 전달되는 치료제로서 조사 중이다. 맥락막상 공간(SCS)은 약물 용액의 주사 시에 확장되는 공막과 맥락막 사이의 영역이다(문헌[Habot-Wilner, 2019]). 도 1을 또한 참조한다. SCS 공간은 주사된 용액이 생리학적 과정에 의해 제거됨에 따라 그의 주사전 크기로 회복된다. 약물 용액은 SCS 내에서 확산되고 인접 조직 내로 흡수된다. 맥락막 내의 모세관은 저분자량 삼투물질에 대해 투과성이다. 이 실시예는 맥락막상 공간에서의 작제물 II의 체류 시간을 증가시키고 궁극적으로 이의 효능을 개선하기 위한 실험적 접근법을 기재한다.

더 긴 체류 시간을 달성하기 위하여, 아데노-관련 바이러스(AAV)를, 냉장된 조건(2 내지 8℃)과 제어된 실온(20℃) 사이의 온도에 있을 때에는 주사가능한 액체이고, 이어서 눈의 온도(34.5 ± 0.8℃)에서는 겔로 상태를 변화시키는 최종 제형으로 제형화하였다. 겔은 맥락막상 공간 내에 AAV를 유지하여, 제거를 감소시키고 국부화를 증가시키며, 그럼으로써 원하는 표적 조직에서 향상된 치료적 효능을 가져온다.

5.1.2 초기 설계 파라미터의 개요

제형 실행가능성을 위한 초기 설계 파라미터를 추가 데이터를 사용하고 본 명세서에 기재된 대로 조정하여 제형 최적화를 위한 출발점을 입증한다.

눈은 중요한 기관이기 때문에, 눈에 대한 주사는 민감한 주사 절차이다. 통증, 조직 손상, 또는 염증을 피하기 위해 눈 안에 약물을 주사할 때에는 바늘 게이지가 너무 높을 수 없다. 예를 들어, 일부 경우에는 30 게이지가 선택될 수 있고, 다른 경우에는 29 게이지가 선택된다. 눈 안으로의 주사를 위해서는, 용액이 겔화되어 바늘 및 주사 부위가 막히기 전에, 지정된 시간 프레임 이내에 매우 좁은 보어 바늘을 통해 용액을 주사하는 것이 가능해야 한다. 이는 실온(또는 차가운 상태로 주사된다면 냉장된 상태)에서의 제형의 점도에 대한 그리고 또한 주사가 완료되게 하기까지의 겔화 시간에 제한을 추가한다. 이 실시예는 맥락막상 전달을 위해 확인된 모든 요건을 동시에 충족시킬 수 있는 제형 조성물을 최적화하기 위한 반응 표면 실험 설계 접근법을 기재한다.

제형은 눈의 온도에서 겔화되어야 한다. 눈의 표면의 온도는 34.5 ± 0.8℃(문헌[Tkacova et al., 2011, MEASUREMENT 2011, Proceedings of the 8th International Conference, Smolenice, Slovakia])인 것으로 보고되어 있다. 도 3은 열 카메라(FLIR, 모델 T530)를 사용하여 33.1℃에서 측정된 안구외 온도를 나타낸다. 눈의 표면의 온도는 맥락막상 공간 온도에 대한 최악의 경우로서 취해질 수 있는데, 이는 표면보다 약간 더 따뜻할 수 있다. 겔화 온도에 대한 한계는 눈의 온도(34.5℃)이다. 눈 온도의 평균 - 3 표준 편차는 32℃이다. 따라서, 32℃ 이하의 바람직한 겔화 온도를 설계 파라미터로서 사용하여 겔화가 눈에서 일어날 것임을 보장하였다.

열반응성 겔은 냉장된 조건(2 내지 8℃)과 제어된 실온(20℃) 사이의 온도에 있을 때에는 주사가능한 액체여야 한다. 이상적으로, 투여 준비 및 제조의 용이성을 위하여, 겔 온도는 실온에서의 가변성을 허용하고 실제 혼합, 펌핑 및 다른 작업이 수행될 수 있게 하도록 충분히 실온보다 높아야 한다. 예를 들어, 27℃ 이상의 겔화 온도가 더 용이하게 취급될 수 있다. 더 높은 겔화 온도(27℃ 이상)가 바람직하지만 엄격한 요건은 아닌데, 그 이유는, 투여 준비를 위해 용량이 더 낮은 온도로 냉각될 수 있고 필요하다면 또한 투여 전에 또한 냉각될 수 있기 때문이다.

제형은, 일반적으로 이용가능한 주사기 구성요소를 사용하여 주사를 가능하게 할 허용되는 점도를 가져야 한다(즉, 주사 압력 한계는 주사기 압력-등급 한계에 기초함). 겔-형성 온도와 시간 및 주사가능성(injectability) 사이에 균형을 이루는 데 있어서 상충되는 설계 파라미터들이 존재한다.

원하는 바늘 크기는 30 또는 29 게이지이며, 이는 주사 압력에 영향을 줄 것이다. 바늘 또는 주사 부위가 막히는 것을 피하기 위해 주사가 완료되기 전에 겔화가 일어나지 않아야 한다. 초기 모델링을 위해, 10초의 주입 시간이 가정되었다.

필요하다면, 주사 압력을 감소시키기 위한 대안적인 접근법이 존재한다. 온도, 점도, 겔화 시간, 및 필요 주사 시간이 연관 파라미터이다. 하겐-푸아죄유 방정식(Hagen-Poiseuille equation)(ΔP = (8μLQ)/(πR⁴), 하기 참조)은 주사 압력 및 주사 시간(유량에 의해 좌우됨)이 선형적으로 연관됨을 보여준다. 따라서, 10초에서 20초로 주사 시간을 배가하는 것은 압력을 2배만큼 감소시킬 것이다. 점도와 압력은 역상관 관계에 있다. 점도를, 예를 들어 온도 감소에 의해 감소시키는 것은 주사 압력을 감소시킬 것이다. 용량이 냉각된다면, 겔화까지의 시간은 더 길다. 용량의 냉각은 점도 및 주사 압력을 낮출 것이다. 냉각된 용량은 또한 겔화까지 더 오래 걸릴 것이며, 이는 더 느린 주사를 가능하게 하고, 이는 또한 주사 압력을 감소시킬 수 있다.

겔화 시간은 바늘 또는 주사 부위가 막히는 것을 피하기 위해 주사 시간보다 더 길어야 하고, 문헌에 보고된 압력 구동 역류(pressure driven reflux)에 대해 예상된 10분(600초)의 제거 시간보다 더 짧아야 한다(문헌[Chiang, IOVS, 2017, 58 (1) 545 - 554]). 예상된 600초 역류 제거 시간에 비해 매우 보수적인 겔화 시간으로서 90초 미만의 바람직한 초기 설계 목표가 (실행가능하다면) 제형 평가에 대해 고려된다. 혈액 유동, 겔의 침식, 확산 및 대류에 의한 SCS 공간으로부터의 AAV의 중간 기간 및 더 긴 기간의 제거가 겔화가 일어난 후에 유의하게 감소될 것으로 예상된다.

가능하다면, 확인된 설계 공간 이내에서, 동일하거나 유사한 온도에서 겔화되는 능력을 여전히 유지하면서, 겔이 주사 시에 약간 희석될 약간의 여유를 가질 것이 추가로 요구된다.

[표 2]

5.1.3 점도 설계 공간

바늘을 통한 유동 동안의 압력 강하에 대한 하겐-푸아죄유 방정식은 ΔP = (8μLQ) / (πR⁴)에 의해 주어진다. 압력은 점도(μ), 바늘 길이(L), 부피 유량(Q), 및 바늘의 내부 반경(R)에 좌우된다. 이 방정식을 사용하여 30 게이지 및 29 게이지 바늘(ISO 9626:2016: 설계되어 있거나 개발 연구에 사용되는 규칙적인 벽(regular wall), RW; 박형 벽, TW(thin wall); 엑스트라 박형 벽(extra thin wall), ETW; 및 초박형 벽(ultra thin wall), UTW, 및 추가의 ClearSide(CLSD) 바늘)에 대한 점도의 함수로서 제곱인치당 파운드(PSI) 단위로 압력 강하를 계산하였다. PSI = Pa/6894.76의 변환 인자를 사용하여 PSI로 변환시켰다. 마운팅 길이를 포함한 총 바늘 길이는 14 mm이고, 주사 부피는 0.1 mL이고, 주사 시간은 10초(Q = 0.1 mL/10 = 0.01 mL/s)에서 모델링되고, 고려되는 바늘 내경은 다음과 같다: 30 Ga/29 Ga(133 μm ID), 30 Ga TW(165 μm ID), 30 Ga ETW/29 Ga TW(190 μm ID), 30 Ga UTW/29 Ga ETW(240 μm ID), ClearSide(CLSD) 브랜드 30 Ga 바늘(160 μm ID), CLSD 30 Ga ETW(220 μm ID), CLSD 29 Ga ETW(240 μm ID).

압력 vs. 점도 계산 결과가 도 2에 나타나 있으며, 이 결과는 표 3에 바람직한 값, 목표 값, 및 한계 값에 대해 작성되어 있다. 표 3에서의 계산에 기초하여, 초기 설계 평가는 CLSD 30 Ga ETW(220 μm ID) 바늘을 사용하여 65 PSI의 목표 압력에 기초하였으며, 이는 183 mPas의 점도에 상응한다.

CLSD 30 Ga 바늘(160 μm ID)에 비해 CLSD 30 Ga ETW(220 μm ID) 또는 CLSD 29 Ga ETW(240 μm ID)를 주사하는 데 필요한 일정 압력에서의 시간 및/또는 압력의 상대적 감소는 바늘 내경의 비의 네 제곱에 기초하며, 각각 (220/160)⁴= 3.6배 및 (240/160)⁴= 5배이다. 따라서, 현재 160 μm ID 30 Ga CLSD 바늘에 대한 초기 실행가능성 데이터가, 겔 제형의 임상 전달에 대해 계획된 30 및 29 Ga ETW 바늘의 사용에 대해 예상된 압력 및 시간을 외삽하는 데 사용될 수 있다.

[표 3]

5.1.4 열반응성 하이드로겔 제형 조성물에 대한 설계 공간의 확인

수크로스를 함유하는 현재 변형된 DPBS 제형과의 컨시스턴시를 유지하기 위하여 그리고 또한 하이드로겔 매트릭스 내의 유체의 장성을 생리학적으로 허용되는 범위 이내(240 < 오스몰랄 농도 < 600 mOsm/㎏)로 유지하기 위하여, 하이드로겔은 수크로스를 함유하는 현재 변형된 DPBS 제형 완충액(오스몰랄 농도 = 345 mOsm/㎏) 중으로의 폴록사머 407 및 폴록사머 188의 용해에 기초할 것이다.

원하는 목표 범위의 겔 온도를 가지면서 또한 30 또는 29 게이지 바늘을 통해 주사될 수 있는 수준으로 점도를 제한하는 제형 조성물이 있는지를 확인하기 위한 실험 설계 접근법에서 폴록사머 407과 폴록사머 188의 조합을 평가하였다.

5℃ 및 20℃ 둘 모두에서의 겔화 온도, 및 겔화 시간 및 점도에 대한 하이드로겔 제형의 조성의 영향을 JMP 15 소프트웨어(미국 노스 캐롤라이나주 캐리 소재)를 이용하는 반응 표면 중심 합성 실험 설계(DOE) 접근법을 사용하여 평가하였다. 조성 변화에 대해 상이한 반응을 갖고 하나 이상의 최적의 목표 제형의 결정을 가능하게 하는 데 필요한 제형 설계 제한사항의 수에 기초하여 DOE 접근이 요구되었다. 중복 중심점(duplicate center point)을 사용하여, 폴록사머 407을 16% 내지 22% w/v로 변동시키고, 폴록사머 188을 0% 내지 16% w/v로 변동시켰다. 각종 방법을 사용하여 겔화가 결정될 수 있다. 일부 방법은 겔화의 개시를 측정할 수 있고, 다른 방법은 겔화 온도로서 재료 특성들의 객관적인 '교차점'을 측정할 수 있다. 제형 설계의 목적상, 온도의 함수로서의 G'과 G"에서의 교차점을 컨시스턴시 및 객관성을 위하여 겔화 온도로서 취하였다. 원시 데이터는 겔화의 개시가 교차점보다 약간 더 낮은 온도에서 발생함을 보여준다.

DOE 연구의 결과가 표 4에 요약되어 있다. 이 데이터를 JMP DOE 소프트웨어에서 적합화하여 각종 측정에 대한 반응 표면을 생성하였으며, 도 4는 제형 조성 반응 표면의 함수로서의 겔화 온도를 나타내고, 조성의 함수로서의 점도에 대한 반응 표면이 도 5(20℃) 및 도 6(5℃)에 나타나 있고, 원시 전단율 스위프 데이터의 요약이 도 12 및 도 13에 나타나 있다.

겔화 프로파일에 대한 원시 데이터가 도 7에 요약되어 있으며, 어떻게 겔화 온도가 샘플 #9에 대한 G'과 G"에서의 교차점으로서 결정되는지에 대한 구체적인 예가 도 8에 나타나 있다. 원시 데이터는 겔화의 개시가 교차점보다 약간 더 낮은 온도에서 발생함을 보여준다. 따라서, 제형에 대한 겔화 온도의 정의로서의 교차점의 사용은 이러한 설계에 대한 추가의 견고함을 부가하는데, 그 이유는, SCS 공간에서의 AAV의 국부화를 극적으로 증가시키는 데 완전한 겔화가 반드시 필요한 것은 아니기 때문이다.

도 9 및 도 10은 각각 5℃ 및 20℃에서 34℃로의 온도 점프에 노출된 샘플에 대한 겔화 시간을 결정하는 데 사용된 G' vs. 시간을 나타낸다. 도 11은 샘플 #9에 대한 구체적인 예를 도시한다.

표 1에 요약된 모든 설계 파라미터에 대한 잠재적인 제형 설계 공간을 평가하고 최적화하기 위해 전체적으로 데이터를 취하였다. 도 14는 겔 온도에 대해 27℃부터 32℃까지의 한계를 갖는 열반응성 겔 제형 설계 공간(백색 영역)을 나타낸다. 이러한 설계 공간은 용량이 2 내지 8℃에서 준비되고, 여전히 냉각되어 있거나 냉장되어 있는 동안에 투여되는 시나리오를 나타낼 수 있다. 한계: 15 내지 90초의 겔 시간, 5℃에서의 점도: 183 mPas 이하, 주사 지속시간 = 10초, 및 220 μm 이상의 바늘 ID. 도 15는 20℃에서의 점도가 183 mPas 이하라는 추가의 파라미터 제약을 가지면서 동일한 인자들을 사용하여 설계 공간을 추가로 좁힌다.

[표 4]

5.1.5 설계 공간 내에서의 제형 A, 제형 B 및 제형 C의 레올로지 평가

DOE 설계 공간 연구 결과에 기초하여, 도 15에서 십자선으로서 나타낸 3개의 제형, 즉, A, B, 및 C를 추가 연구를 위해 확인하였다. 조성은 다음과 같다: A = 6%/19%, B = 6.5%/18%, 및 C = 7%/17.5% w/v (각각 폴록사머 188과 폴록사머 407).

제형 A, 제형 B 및 제형 C를 도 16에 나타낸 바와 같이 멸균 상태로 제조하였다. 모든 제형은 변형된 둘베코 인산염 완충 식염수 용액에 기반하였다. 수크로스 용액을 함유하는 변형된 둘베코 인산염 완충 식염수를 대조군(100 mM 염화나트륨, 2.70 mM 염화칼륨, 8.10 mM 무수 이염기성 인산나트륨, 1.47 mM 일염기성 인산칼륨, 117 mM 수크로스, 0.001%(0.01 mg/mL) 폴록사머 188)으로서 사용하였다. 이들 스파이크 용액을 10/9 또는 1.11배의 비로 약간 더 농축된 상태로 제조하였으며, 이에 따라 이들은 AAV 중간체의 1/10의 비를 사용하여 9/10의 비로 스파이킹되어, 예를 들어 원하는 최종 조성을 달성할 수 있다. 다른 희석비가 또한 사용될 수 있다. 점성 제형은 멸균 여과가 어려울 수 있으며, 이에 따라 이들은 121℃에서 20분 동안 오토클레이트에 의해 멸균하였다(최대 200 mL까지 적합하며; 더 큰 부피에 대해서는 더 긴 시간이 사용될 수 있는데, 예를 들어 2000 mL에 대해 40분이 사용될 수 있음). '끓어넘침(boiling-over)'을 방지하기 위해 온도가 감소될 때 압력을 점차적으로 감소시키는 '액체' 사이클을 사용하였으며, 멸균 필터가 구비된 캡 달린 병을 사용하여, 멸균성을 유지하면서 스팀이 병에 들어갈 수 있게 하고, 이어서 충전을 위하여 멸균 후드로 옮겼다(예시적인 캡은 Chemglass CLS1484-12, 또는 Sartorius MYCAP™ 캡 시리즈 또는 등가물을 포함함). 실행된 사이클은, 질량의 2 내지 4%가 사이클 동안 물의 증발로 인해 손실될 수 있고, 이는 활성 AAV 제형화된 중간체의 스파이킹과 함께 멸균 주사용수로서 다시 첨가될 수 있음을 나타내었다. 표 7은 제형의 열 겔화 특성에 대해 오토클레이빙의 영향이 없었음을 보여준다. 값의 약간의 차이는 측정 및 제조 변동성을 나타낸다.

도 17에 나타낸 대안적인 제조는 멸균 여과를 수반한다. 조성 및 온도에 의한 제형 점도의 최적화 및 여과 유동 및 압력의 최적화에 의해, 멸균 여과가 또한 최종 산물의 멸균을 위해 실행가능할 수 있다.

표 5는 제형 A, 제형 B, 및 제형 C의 레올로지 특성을 요약한다. 겔화 온도는 28℃ 내지 32℃의 범위였다. 겔화에 대한 개시가 또한 나타나 있고 27 내지 30℃의 범위였으며, 완전 겔화에 대한 평탄역(plateau)은 29℃ 내지 33℃의 범위였다. 이들 모두는 겔화가 눈의 온도(약 34.5℃) 이하에서 발생하도록 한 설계 공간 이내에 속한다. 겔화까지의 시간은 3개의 제형에 대해 16 내지 29초의 범위였으며, 이 또한 초기 설계 파라미터 이내였다. 마지막으로, 3개의 제형의 점도는 20℃에서 183 mPas 이하였으며, 이 또한 설계 파라미터 이내였다. 제형 A, 제형 B, 및 제형 C의 겔화에 대한 프로파일이 도 19, 도 20, 및 도 21에 나타나 있다. 겔화의 개시는 교차점보다 약 2℃ 아래에서 일어나고, 전체 겔화에 걸친 G'의 변화는 탄성 모듈러스의 6 내지 7 자릿수의 증가를 포함한다. 20℃ 및 5℃에서의 점도 프로파일은 도 28 내지 도 33에 나타나 있다.

도 18은 겔화 시간을 평가하는 상이한 방법을 나타낸다. 20℃에서 50 μL 부피의 제형 A(좌측), 제형 B(중간), 및 제형 C(우측)를 가온된 표면 상에 분배하고, 액적 유동의 비디오를 사용하여 액적이 유동을 멈춘 시간을 결정하였다. 이 접근법을 사용한 겔화까지의 시간은 약 10초(A), 25초(B), 및 45초(C)였다. 20℃ 및 5℃에서 시작하여 34℃로 점프할 때의 겔화 시간에 대한 레올로지 프로파일이 도 22 내지 도 27에 나타나 있다.

제형은, 특히 볼루스 주사의 주변부에서 완전히 겔화되기 전에, 주사 후에 약간 희석될 수 있는 것이 가능하다. 제형 A, 제형 B, 및 제형 C를 겔화에 대한 등온선을 따라 희석(설계 공간에서 약간 아래쪽으로 그리고 좌측으로 이동)을 허용하게 할 설계 공간의 우상측을 향하는 방식으로 넣었다(도 15 참조). 따라서, 제형 겔화 특성은 주사 후 어느 정도 약간의 희석이 있다면 견고하게 유지될 것이다. 이들 제형에 대한 볼루스의 주요 완전성은 얼마나 신속하게 이들이 겔화될 것인지를 고려하면 유지될 것으로 예상된다. 생체내 유체에 의한 약간의 희석을 모방하기 위해 0.001% P188을 함유하는 둘베코 인산염 완충 식염수를 사용하여 질량 기준으로 10% 희석의 영향을 수행하고, 레올로지 특성을 측정하였다. 겔화 온도를 정의하는 데 사용되는 교차점에서, 저장 모듈러스 G'은 실온에서의 거동에 비해 이미 실질적으로 증가되어 있다. 겔화 개시는 10%만큼 희석 후에 3개의 모든 제형에 대해 허용가능하였으며(표 6), 이는 주요 볼루스가 주사 직후 완전히 겔화될 수 있기 전에 겔 주변부의 완전성을 유지할 것으로 예상된다. 희석된 제형에 대한 겔화 특성에 있어서 약간의 이동을 가질지라도, G' 값은 눈의 온도에서 적어도 한 자릿수만큼 증가된다. 약간의 희석 후 겔화 시간이 증가되었지만, 제형 A 및 제형 B의 경우 90초 이내에 그리고 제형 C의 경우 4.4분 이내에 유지되었으며; 이들 모두는 초기 설계에 대해 10분의 한계 이내에 있었다. 이들 데이터는 제형이 모두 주사 직후, 볼루스의 겔화가 주사 후 처음 15 내지 30초 이내에 실질적으로 완료될 수 있기 전에, 주변부에서의 약간의 희석에 대해 안정할 것임을 나타낸다.

[표 5]

[표 6]

[표 7]

5.1.6 제형 A, 제형 B 및 제형 C에서의 작제물 II의 스트레스 안정성

시차 주사 형광측정법(DSF)은 온도의 함수로서 단백질의 고유 트립토판 및 티로신 방출을 측정한다. Trp 및 Tyr 잔기의 국부 환경은 단백질이 풀림에 따라 변화하여 형광의 큰 증가를 가져온다. 도 37은 제형 A, 제형 B, 및 제형 C와 대비하여 대조군에 대한 시차 주사 형광측정법 열 램프 데이터를 나타낸다. 상부 패널: 원시 용융 곡선 신호. 중간 패널: 피크를 확인하기 위한 데이터의 도함수. 하부 패널: 어느 것이든 응집을 나타내기 위한 광 산란 데이터. 모든 제형은 열 램핑 시에 대조군과 유사한 프로파일을 가졌다. 표 8은 제형 A, 제형 B 및 제형 C가 대조군 제형과 유사한 열 안정성을 갖고 이에 따라 AAV가 안정하다는 결과를 요약한다.

[표 8]

표 9는 대조군과 대비하여 제형 A, 제형 B 및 제형 C에서의 AAV의 안정성에 대한 37℃ 스트레스의 영향을 요약한다. DNA 페이로드(payload)의 방출과 함께 캡시드 파괴를 가져오는, AAV 불안정성의 척도인 검출된 유리 DNA는, 37℃에서 3일 후 모든 샘플에 대한 방법 변동성을 고려할 때 초기 수준보다 낮거나 이와 유사하였다. 제형 A, 제형 B, 및 제형 C의 벡터 게놈 농도(ddPCR에 의함)를 3배로 희석시켜 점도를 감소시킨 샘플에 대해 측정하였다. 결과는 약간의 변동성을 가졌는데, 이는 이것이 질량 기준이 아니라 부피 기준으로 희석되었다는 사실과 관련되어 있을 가능성이 높다(이들은 높은 점도를 갖기 때문에, 희석이 변동성을 이끌어내었을 수 있다). 3일째의 제형 A 및 제형 B 샘플은 대조군과 유사한 벡터 게놈 농도를 가졌으며, 전체적으로 이들이 안정하였음을 나타낸다. 희석에 있어서의 변동성은 제형 B의 초기 샘플은 목표보다 더 높고 제형 C의 3일째 샘플은 더 낮다는 것에서 알 수 있다. 향후에, 밀도를 고려할 때 질량 기준 희석은 샘플 제조에서 변동성을 감소시키는 데 잠재적으로 도움이 될 수 있는 접근법이다. 전체적으로, A, B, 및 C의 벡터 게놈 농도는 변동성을 고려할 때 대조군과 유사하였는데, 이는 모든 제형이 온도 스트레스에 대해 유사하고 허용가능한 안정성을 갖는다는 것을 나타낸다.

[표 9]

5.1.7 제형 A, 제형 B 및 제형 C의 주사가능성 및 투여 준비의 평가

A, B 및 C의 샘플을 2 mL COP(West Pharmaceuticals, 19550057) Crystal Zenith^TM 바이알 내로 충전시키고, 바이알 어댑터(West, 8070117)를 사용하여 추출하였다. 모든 샘플은 다수의 날에 평가될 때 실온에서 주사기 내로 용이하게 충전되었다. 실온은 대표적인 1주 기간에 걸쳐 22.4℃ ± 0.6℃(최소 = 20.7℃ 및 최대 = 23.7℃)인 것으로 측정되었다. 이는 겔화 특성이 전형적인 제어된 실온에서 취급을 가능하게 함을 입증한다.

도 38은 Clearside 주사기 장치(CLS-HN001) 및 30 게이지(160 μm ID, CLS-MN1100) 바늘을 사용하여 35℃에서 평형을 이룬 제핵된 돼지 눈 안으로의 제형 B의 주사에 대한 주사 압력을 나타낸다. 제형은 눈 안으로 용이하게 주사되었지만, 압력은 약 160 PSI였다. 그러나, 사용된 바늘 ID(160 μm ID)를 더 큰 바늘 ID로 규모확대하는 것은 하겐-푸아죄유 방정식에 기초하여 약 5배 더 낮은 압력을 가져올 것인데, 그 이유는, 압력은 내경의 네 제곱에 반비례하기 때문이다(즉, (240/160)⁴ = 5). 따라서, 개발 중인 바늘에 대해, 예상되는 압력은 5배 더 낮거나 약 32 PSI인데, 이는 허용가능한 범위 이내에 충분히 있다.

도 39는 30 GG * 1/2 인치(0.3 * 13 mm) TW 바늘(Nipro, HN-3013-ET)을 구비한 BD 1 mL 주사기(309628)를 사용하여 공기 중에 주사하는 것을 나타낸다. Clearside 장치 및 바늘은 맥락막상 주사를 위해 특정 노출된 바늘 길이를 갖도록 설계되어 있다. 현재 30 게이지(160 μm ID)가 이 포맷으로 이용가능하다. 220 또는 240 μm ID를 갖는 더 큰 바늘 ID 버전이 개발 중이다. 기지의 바늘 크기를 사용한 주사는 하겐-푸아죄유 방정식에 의해 주어진 압력과 주사 시간 및 바늘 ID의 관계에 따라 규모확대될 수 있다. 따라서, 이용가능한 크기 바늘을 사용한 주사는, 제형이, 현재 제조 개발 중인 바늘에 대한 원하는 주사 압력 및 시간 파라미터를 가질지의 여부를 확인하는 데 사용될 수 있다. 더 큰 ID 바늘 대비 이 바늘에 대한 압력 규모확대는 약 4.5배((240/165)⁴ = 4.5)이다. 압력은 또한 유량에 비례한다. 이 실험에서는, 압력을 일정하게 유지하였고, 주사까지의 시간을 평가하였다. 이어서, 압력 및 주사까지의 시간을 4.5의 총 복합 계수(total combined factor)만큼 규모확대시켜 판독치를 개발 중인 더 큰 바늘로 변환시킬 수 있다. 따라서, 제형 C는 30 GaTW(165 μm ID) 바늘의 사용으로 약 120 PSI로 12초에 걸쳐 주사되었는데, 이는 240 μm ID 바늘이 사용된다면 약 27 PSI로 감소될 것이다. 제형 B는 약 120 PSI로 17초에 걸쳐 주사되었는데, 이는 또한 더 큰 바늘의 사용으로 약 27 PSI로 감소될 것이다. 제형 B가 더 빨리, 예컨대 12초에 걸쳐 주사된다면, 약 38 PSI의 더 큰 바늘 ID 압력이 예상된다. 이들은 확인된 주사 압력 설계 공간 이내에 충분히 있다. 제형 A의 37초 및 140 PSI 주사가 더 큰 바늘 및 더 빠른 주사로 규모확대된다면, 12 내지 16초 주사에 대한 예상된 압력은 64 내지 78 PSI이며, 이 또한 확인된 제한 설계 공간(100 PSI 미만 또는 64 PSI 미만) 이내에 있다.

(a) 레올로지 측정

(b) 겔화 온도

0.1% 변형률 및 1 ㎐에서 진동 모드로 온도 램프에서의 적용에 의해 사용함으로써 겔화 온도를 결정하였다. 샘플을 로딩하고 5℃에서 5분 동안 사전평형화한 후, 최대 40℃ 또는 60℃ 중 어느 하나까지 5℃/분으로의 온도 램프를 수행하였다. 저장/탄성 모듈러스(G")와 손실/점성 모듈러스(G')가 교차한 지점에서의 온도를 시스템 겔화 온도로서 기록하였다. 토크 스위프는, 선형 점탄성 영역이 약 0.4%까지 연장되었으며, 이에 따라 0.1%에서의 작동이 선형 점탄성 영역 내에 충분히 있었음을 입증하였다.

(c) 겔화 시간

(d) 점도 vs. 전단율

0.25 s^-1 내지 5000 s^-1의 범위에 걸쳐 점도 vs. 전단율 스위프를 수행하였으며, 이때 디케이드당 5개의 점이 수집되었다. 점도 vs. 전단율을 5℃ 및 20℃ 둘 모두에서 수집하였다. 10,000 및 20,000 s^-1에서의 점도를 데이터로부터 외삽하였다.

(e) 시차 주사 형광측정법

Promethius NT.Plex Nano DSF Instrument(NanoTemper Technologies, 독일 뮌헨 소재)를 사용하여 DSF 데이터를 수집하였다. 샘플을 20℃에서 모세관 셀 내로 로딩하고, 1℃/분의 속도로 95℃까지 온도를 램핑하였다. 350 nm(풀림) 및 330 nm(풀림)에서의 방출의 신호 출력비를 사용하여 T_m을 결정하였다.

(f) 주사 압력 측정

Flow Screen and Fluid Sensor(Viscotec America, 미국 조지아주 케네소 소재) 또는 압력 센서 S-N-000을 구비한 PressureMAT-DPG(PendoTECH, 미국 뉴저지주 프린스턴 소재) 중 어느 하나를 사용하여 주사 압력을 측정하였다.

수동으로 또는 Legato-100 주사기 펌프(Kd Scientific, 미국 매사추세츠주 홀리스턴 소재)를 사용하여 공기 중으로의 주사를 수행하여 일관된 유량을 적용하였다. 제핵된 돼지 눈 안으로의 주사를 위하여, 눈을 Mandell Eye Mount(Mastel, 미국 사우스 다코타주 래피드 시티 소재) 상에 마운팅하였으며, 아울러 눈의 안압을 조정하기 위해 흡인을 가하였다.

5.2 실시예 2: 상이한 맥락막상 제형들을 사용한 사이몰거스(Cynomolgus) 원숭이에서의 약력학적 특성, 생체내분포, 및 내약성 연구

본 연구의 목적은 사이노몰거스 원숭이에 대한 맥락막상 주사를 통해 단회 용량으로 투여될 때 AAV8-항-VEGF-ab를 포함하는 상이한 제형들의 생체내분포, 약력학적 특성(도입유전자 농도), 및 내약성을 평가하기 위한 것이다. 투여 후, 동물은 적어도 4주 동안 투여 후 관찰이 수행된다. 하나의 군에는 또한 높은 부피의 제형이 투여된다. 제형들 중 일부는 다양한 겔 온도를 포함한다. 예를 들어, 제형 1은 약 28℃의 겔 온도를 가지며, 제형 2는 약 30℃의 겔 온도를 가지며, 제형 3은 약 32℃의 겔 온도를 갖는다. 군 배정 및 용량 수준은 표 10에 나타나 있다. 시험 대상물은 AAV8-항-VEGF-ab이다. 대조군 대상물은 플라세보이다. 제형 및 대조군은 -60℃ 내지 -80℃의 냉동고에 저장되고 사용 당일에 실온에서 해동될 수 있거나, 또는 제형화 당일에 사용되는 경우 실온에서 저장되거나, 또는 2℃ 내지 8℃의 냉장고에 저장될 수 있다. 적응증은 습성 AMD 및 당뇨병성 망막병증을 포함한 만성 망막 질환이다.

[표 10]

동물 공급업체에서의 항체 사전-스크리닝: 약 90 마리의 암컷 원숭이로부터의 혈액(적어도 1 mL)을 각각의 동물로부터 대퇴 정맥을 통해 수집하고, 항응고제가 담겨 있지 않은 튜브 내로 넣는다. 필요에 따라, 다른 정맥이 수집에 사용될 수 있다. 사전-스크리닝 결과에 기초하여 연구 후보로서 동물을 선택한다. 혈액을 실온에 두어서 혈병을 형성시키고, 1시간 이내에 원심분리하여 혈청을 얻는다. 혈청을 2개의 분취물로 분할하고 크라이오바이알(cryovial) 내로 넣고, 대략 -70℃에서 저장 전에 드라이아이스 상에 유지한다. 샘플을 분석을 위해 드라이아이스 상에서 하룻밤 동안 운송한다. 이어서, 샘플을 임의의 허용가능한 방법에 의해 항-AAV8 중화 항체(NAb)에 대해 분석한다. 항-AAV8 Nab 결과에 기초하여 운송하기 위한 동물을 선택한다.

용량 투여: 동물을 하룻밤 절식시키고, 맥락막상 주사 전에 케타민 및 덱스메데토미딘으로 마취시킨다. 간략하게 말하면, 100 μL의 단회 맥락막상 주사(또는 매회 50μL씩 2회의 주사)를 한쪽 눈마다 (윤부로부터 3 내지 4 mm 위치에) 5 내지 10초에 걸쳐 투여한다. 제형은 모두 실온에서 투여된다. 제형은 Clearside SCS 마이크로인젝터를 사용하여 투여된다. 미세바늘 크기는 제형의 점도에 따라 달라진다. 일부 경우에, 30 게이지 미세바늘이 사용된다. 우안에서의 주사는 상측두 사분면(즉, 10시 방향과 11시 방향 위치 사이)에 투여된다. 좌안에서의 주사는 상측두 사분면(즉, 1시 방향과 2시 방향 위치 사이)에 투여된다. 주사 후에, 바늘을 대략 5초 동안 눈 안에 유지하고 나서 인출한다. 미세바늘의 인출 시에, 면봉(도즈 와이프(dose wipe))을 대략 10초 동안 주사 부위 위에 놓아둔다. 투여 후에 한쪽 눈마다 전형적인 항생제(예를 들어, Tobrex® 또는 적절한 대용물)를 점적주입(instill)한다. 매회마다 투여 시간을 매회 주사의 완료 시점에서 시간으로서 기록한다. 우안에 먼저 투여된 후, 좌안에 투여된다.

안과적 절차 : (예를 들어, 투여 후 일수 4, 8, 15, 및 29에서) 안과 검사가 수행된다. 슬릿 램프 생체현미경(slit lamp biomicroscope) 및 간접 검안경(indirect ophthalmoscope)을 사용하여 동물을 조사한다. 양쪽 눈의 부속기(adnexa) 및 전방 부분은 슬릿 램프 생체현미경을 사용하여 조사한다. 양쪽 눈의 안저는 (가시적인 경우) 간접 검안경을 사용하여 검사한다. 간접 검안경에 의한 조사 이전에, 산동제(1% 트로피카미드)를 사용하여 동공을 확장시킨다. 안압은 투여 당일에(투여 전 10분 이내에), 그리고, 예를 들어 일수 4, 8, 15 및 29에서 측정된다. 리바운드 안압계(Rebound tonometry)(TonoVet)가 안압을 평가하는 데 사용될 수 있다. 안구 사진촬영은 대략 주수 4에서 수행된다. 디지털 안저 카메라를 사용하여 사진을 촬영한다. 후극의 입체 사진 및 2개의 중간 주변부(midperipheral) 시야(측두측 및 비측)의 비입체 사진을 포함하도록 한쪽 눈마다 컬러 사진을 촬영한다. 주변부의 사진촬영이 또한 수행된다. 또한, 인도시아닌 그린에 의한 자가형광 이미징을 수행하여 용량의 확산을 문서로 기록한다(예를 들어, 일수 1 및 일수 2에서).

항-AAV8 중화 항체 분석 : 상이한 시점에서(예를 들어, 투여 전, 투여 당일, 그리고 투여 후 일수에서) 대퇴 정맥으로부터 채취된 각각의 동물로부터의 혈액 샘플을 실온에서 유지하고, 원심분리 전에 적어도 30분 동안 혈병이 형성되게 한다. 샘플을 수집 1시간 이내에 원심분리하고, 혈청을 수거한다. 수거 후, 샘플을 -60℃ 내지 -80℃에서 저장될 때까지 드라이아이스 상에 놓아둔다. 이어서, 승인된 중화 항체 검정을 사용하여 AAV8 항체에 대한 혈청 분석을 수행한다.

항-AAV8-항-VEGF-ab 도입유전자 산물 항체 분석 : 상기에 논의된 바와 같이 혈액 샘플을 채취하고, 본 발명의 임의의 검정 또는 임의의 허용가능한 검정을 사용하여 AAV8-항-VEGF-ab에 대한 항체에 대해 혈청 샘플을 분석한다. AAV8-항-VEGF-ab 도입유전자 분석을 위하여, 투여 시점보다 적어도 2주 전에, 일수 15에서, 그리고 동물 희생 당일(일수 29)에 전술된 바와 같이 혈액 샘플을 채취한다. 전안방으로부터의 50μL를 용량 투여 전에 수집한다. 방수 및 유리체액으로부터의 샘플이 종점 부검에서 수집될 수 있다. 혈청 샘플은 투여 전, 일수 15에서, 그리고 부검 전에 수집될 수 있다. 이어서, 본 발명의 임의의 검정 또는 임의의 적용가능한 검정 또는 방법에 의해 (예를 들어, 도입유전자 농도에 대해) 샘플을 분석한다.

방수 수집: 투여 시점보다 적어도 2주 전에, 일수 15에서, 그리고 동물을 희생시킨 당일에 한쪽 눈마다 대략 50μL를 취출한다. 한쪽 눈마다의 방수 샘플을 Watson 바코딩된 라벨이 달린 별개의 튜브 내에 넣고, 액체 질소 중에서 급속 냉동시키고, -60℃ 내지 -80℃에서 저장될 때까지 드라이아이스 상에 놓아둔다.

방수 탭 후(post-aqueous tap) 투약물 계획 : 이 치료 계획의 목적은 방수 수집 절차와 관련된 고식적 치료를 제공하는 것이다. 수집 일수 후의 치료 목적은 유해 사건(예를 들어, 불편함)의 적절한 고식을 제공하는 것이다. 동물을 안구 통증 및 부작용에 대해 시험한다.

[표 11]

연구 종료: 동물을 소듐 펜토바르비탈로 마취시키고, 일수 29에서 방혈시킨다.

방수 및 유리체액의 부검 수집 : 눈 한쪽당 최대 50 μL 및 눈 한쪽당 최대 100 μL를 각각 방수 및 유리체액으로부터 취출한다. 방혈 후, 눈을 제핵하고, 방수 및 유리체액 샘플을 한쪽 눈마다 수집한다. 유리체액 샘플을 2개의 대략 동일한 분취물로 분할하고, 방수 샘플을 1개의 분취물로서 저장한다. 매 수집마다 그 후에, 동물의 우안에 변형된 다비드슨 고정제(Davidson's fixative)를 팽만해질 때까지 주사한다. 변형된 다비드슨 고정제 중에 48 내지 96시간 동안 눈을 저장하고, 이어서 10% 중성-완충 포르말린에 옮긴다. 샘플을 급속 냉동시키고, -60℃ 내지 -80℃에서 저장한다. 방수 및 유리체액 샘플을 도입유전자 농도에 대해 분석한다.

생체내분포를 위한 안구 조직 수집: 방혈 후에, 다양한 제형군으로부터 (생존에 따라) 2 마리의 동물로부터 우안을 그리고 모든 동물로부터 좌안을 제핵하고, 조직을 수집한다. 조직을 Watson 바코딩된 라벨을 갖는 별개의 튜브 내로 수집한다. 수집된 조직은 망막 색소 상피를 갖는 맥락막, 각막, 홍채-섬모체, 시신경 교차부(optic chiasm), 시신경, 망막, 공막, 및 후안 컵(posterior eye cup)을 포함한다. 눈은 4개의 대략 동일한 사분면으로 분할된다(투여 부위의 영역을 포함할 상측두측, 상비측, 하측두측, 및 투여 부위의 영역을 포함할 하비측). 각각의 사분면으로부터, 8 mm 생검 펀치를 사용하여 하나의 샘플을 채취한다. 샘플을 -60℃ 내지 -80℃에서 저장한다. qPCR 또는 qRT-PCR 방법을 사용하여 벡터 DNA 또는 RNA에 대해 샘플을 분석한다.

생체내분포를 위한 비-안구 조직 수집: 대략 5 mm x 5 mm x 5 mm의 2개의 샘플을 우뇌 반구(예를 들어, 소뇌(외측), 소뇌(배측), 전두 피질(브로드만 영역(Brodmann area) 4), 전두 피질(브로드만 영역 6), 후두 피질(피질 표면), 후두 피질(실질)), 난소, 심장, 신장, 눈물샘(좌측), 간(좌외엽), 폐(좌미상엽), 림프절(이하선), 림프절(하악), 뇌하수체, 타액선(하악), 비장, 흉선, 후근 신경절(경부, 좌측), 후근 신경절(요부, 좌측), 및 후근 신경절(흉부, 좌측)로부터 수집한다. 샘플을 -60℃ 내지 -80℃에서 저장한다.

조직학적 분석: 동물로부터의 우안 및 우시신경을 공칭 5 μm에서 절편화하고, 헤마톡실린 및 에오신으로 염색한다. 중심와, 주사 부위 영역, 황반, 시신경 원반(optic disc), 및 시신경의 검사를 용이하게 하도록 눈 조직을 절편화한다. 단일 수직 절편(vertical section)을 하측 칼로트(inferior calotte)의 대략적인 중심을 통해 채취한다. 이는 하나의 슬라이드/블록/눈(눈 한쪽당 총 3개의 슬라이드)을 생성한다. 또한, 디지털 스캔(가상 슬라이드)이 선택된 현미경 슬라이드로부터 제조될 수 있다.

데이터 평가 및 통계학적 분석: 통계학적 데이터 분석은 평균 및 표준 편차를 사용하여 계산된다. 절대 체중, 체중 변화, 및 안압 측정치에 대한 평균 및 표준 편차를 계산한다.

5.3 실시예 3: 상이한 맥락막상 제형들을 사용한 사이몰거스 원숭이에서의 약력학적 특성, 생체내분포, 및 내약성 연구

본 연구의 목적은 사이노몰거스 원숭이에 대한 맥락막상 주사를 통해 단회 용량으로 투여될 때 AAV8-항-VEGF-ab를 포함하는 겔 제형 B의 생체내분포(DNA 및 mRNA), 약력학적 특성(도입유전자 농도), 및 내약성을 평가하기 위한 것이었다. 투여 후, 동물은 적어도 4주 동안 투여 후 관찰이 수행되었다. 각각의 군에 동일한 용량 부피를 달성하도록 2회 주사를 투여하였다. 군 배정 및 용량 수준은 표 12에 나타나 있다. 시험 대상물은 AAV8-항-VEGF-ab였다. 대조군 대상물은 플라세보였다.

[표 12]

용량 투여 : 시험 대상물 및 대조군 대상물의 제조가 표 13에 나타나 있다. 시험 대상물 및 대조군 대상물을 -60℃ 내지 -80℃에서 냉동고에서 저장하고, 사용 당일에 실온에서 해동시켰다. 제형을 실온에서 해동시키고, 주사기 충전에 사용될 때까지 콜드 팩(cold pack) 상에 저장하였다. 동물을 맥락막상 주사 전에 케타민 및 덱스메데토미딘으로 마취시켰다. 투여 시, 50 μL의 2회의 맥락막상 주사(군 1 및 군 2)를 한쪽 눈마다 (윤부로부터 3 내지 4 mm 위치에) 10 내지 15초에 걸쳐 투여하였다. 주사기 및 미세바늘 크기가 표 13에 나타나 있다. 우안에서의 첫 번째 주사를 상측두 사분면(즉, 10시 방향과 11시 방향 위치 사이)에 투여하고, 우안(적용가능한 경우)에서의 두 번째 주사를 하비 사분면(즉, 4시 방향과 5시 방향 위치 사이)에 투여하였다. 좌안에서의 첫 번째 주사를 상측두 사분면(즉, 1시 방향과 2시 방향 위치 사이)에 투여하고, 좌안(적용가능한 경우)에서의 두 번째 주사를 하비 사분면(즉, 7시 방향과 8시 방향 위치 사이)에 투여하였다. 주사 후에, 바늘을 대략 30초 동안 눈 안에 유지하고 나서 인출하였다. 미세바늘의 인출 시에, 면봉(도즈 와이프)을 대략 10초 동안 주사 부위 위에 놓아두었다.

[표 13]

항-AAV8-항-VEGF-ab 도입유전자 산물 항체 분석 : 투여 후 1회, 그리고 일정이 잡힌 희생 당일(일수 29)에 상기에 논의된 바와 같이 혈액 샘플을 채취하였다. 검증된 항체 검정을 사용하여 AAV8-항-VEGF-ab에 대한 항체에 대해 혈청 샘플을 분석하였다. AAV8-항-VEGF-ab 도입유전자 분석을 위하여, 투여 시점보다 적어도 2주 전에, 일수 15에서, 그리고 일정이 잡힌 희생 당일(일수 29)에 전술된 바와 같이 혈액 샘플을 채취하였다. 이어서, 샘플을 검증된 항체 검정에 의해 분석하였다.

방수 수집: 투여 시점보다 적어도 2주 전에, 일수 15에서, 그리고 일정이 잡힌 희생 당일(일수 29)에 한쪽 눈마다 대략 50μL를 취출하였다. 한쪽 눈마다의 방수 샘플을 Watson 바코딩된 라벨이 달린 별개의 튜브 내에 넣고, 액체 질소 중에서 급속 냉동시키고, -60℃ 내지 -80℃에서 저장될 때까지 드라이아이스 상에 놓아두었다. 샘플을 검증된 방법에 의해 항-VEGF 농도에 대해 분석하였다.

연구 종료: 동물을 소듐 펜토바르비탈로 마취시키고, 일수 29에서 방혈시켰다. 골수 도말을 일수 29에서 수집하고, (가능하다면) 일정이 잡히지 않은 간격으로 희생된 동물로부터 수집하였다.

방수 및 유리체액의 부검 수집: 방혈 후에, 눈을 제핵하고, 방수 및 유리체액 샘플을 수집하였다. 수집 후, 샘플을 급속 냉동시키고, -60℃ 내지 -80℃에서 저장하였다. 방수 및 유리체액 샘플을 검증된 방법에 의해 도입유전자 농도에 대해 분석하였다.

생체내분포를 위한 안구 조직 수집: 방혈 후, 군 2에서 (생존에 따라) 마지막 2 마리의 동물로부터 좌안을 그리고 각각의 동물로부터 우안을 제핵하고, 조직을 수집하였다. 조직을 별개의 튜브 내로 수집하였다. 수집된 조직은 망막 색소 상피를 갖는 맥락막, 망막, 및 공막을 포함하였다. 조직을 전술된 바와 같이 초청정(ultra-clean) 절차를 사용하여 수집하고, 식염수로 헹구고, 닦아내어서 건조시켰다. 샘플을 급속 냉동시키고, -60℃ 내지 -80℃에서 저장하였다. qPCR 또는 qRT-PCR 방법을 사용하여 벡터 DNA 또는 RNA에 대해 샘플을 분석하였다.

비교기준물 연구: 이 실시예에 기재된 프로토콜과 유사하게 수행된 사이노몰거스 원숭이 연구에서는, 대조군 제형(대조군 대상물 1.5)을 대상체의 한쪽 눈마다 SCS에 주사하였다(마이크로인젝터를 사용한 상측두측 및 하비측 주사). 수성 대조군 제형은 겔을 형성하지 않는다.

[표 15]

대조군 제형은 또한 AAV8-항-VEGF-ab를 함유하였으며, 100 μL/눈/용량(2회의 50 μL 주사)으로 3 x 10¹¹ gc/눈으로 투여하였다.

데이터 평가 및 통계학적 분석: 통계학적 데이터 분석은 평균 및 표준 편차를 사용하여 계산하였다. 방수 중의 도입유전자 산물(단백질)은 15일째 및 29일째에 평가하였으며, 달리 TP, DNA 및 RNA는 29일째에서 유리체액 중에서 평가하였다.

결과

[표 16]

상측두측 및 하비측에서의 눈의 SCS 내로의 시험 대상물 1(겔 제형)의 2회의 주사는 대조군 제형에 비해 방수 중의 더 큰 도입유전자 산물(TP) 농도를 가져왔다.

[표 17]

눈의 상측두측 및 하비측 위치에서 SCD 내로 주사된 시험 대상물 1은 대조군 제형에 대해 VH에서 더 큰 TP 농도를 가져온다. 유리체액 도입유전자 산물 농도는 주사 후 15일째 및 29일째에서 유리체액 내에서 발견된 TP보다 전체적으로 더 높았다.

[표 18]

SCS 내로 주사된 AAV8-항-VEGF-ab를 함유하는 시험 대상물 1(겔) 또는 대조군 제형 각각은 혈청 중에 도입유전자 산물(항-VEGF-ab)의 최소한의 역가를 생성하였다.

[표 19]

시험 대상물 1(겔)은 대조군 제형에 비해 망막 및 맥락막에 대한 전달에 영향을 미쳤다.

등가물

본 발명이 이의 구체적인 실시 형태를 참조하여 상세히 기재되어 있지만, 기능적으로 등가인 변형이 본 발명의 범주 내에 있음이 이해될 것이다. 실제로, 본 명세서에 제시되고 기재된 것들에 더하여 본 발명의 다양한 변경은 전술한 설명 및 첨부 도면으로부터 당업자에게 명백할 것이다. 그러한 변경은 첨부된 청구범위의 범주 내에 속하는 것으로 의도된다. 당업자는 단지 일반적인 실험을 사용하여, 본 명세서에서 설명된 본 발명의 구체적인 실시 형태에 대한 많은 등가물을 인식하거나 확인할 수 있을 것이다. 그러한 등가물은 하기 청구범위에 의해 포함되도록 의도된다.

본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원이 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함되는 것으로 구체적이고 개별적으로 지시된 것처럼 그와 동일한 정도로 본 명세서 내로 참고로 포함된다.

SEQUENCE LISTING <110> REGENXBIO Inc. <120> FORMULATIONS FOR SUPRACHOROIDAL ADMINISTRATION SUCH AS GEL FORMULATIONS <130> 12656-143-228 <140> TBA <141> <150> US 63/088,886 <151> 2020-10-07 <150> US 63/147,584 <151> 2021-02-09 <160> 55 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ranibizumab Fab Amino Acid Sequence - light chain <400> 1 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys 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Gly Met Val Trp Gln 595 600 605 Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 615 620 Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met 625 630 635 640 Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650 655 Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 660 665 670 Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 675 680 685 Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 690 695 700 Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Ser Thr Glu Gly Val 705 710 715 720 Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735 <210> 50 <211> 736 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> hu32 <400> 50 Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser 1 5 10 15 Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 20 25 30 Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45 Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60 Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80 Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95 Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110 Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro 115 120 125 Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly 145 150 155 160 Lys Ser Gly Ser Gln Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gln Thr 165 170 175 Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro 180 185 190 Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205 Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser 210 215 220 Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240 Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255 Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn 260 265 270 Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 275 280 285 Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn 290 295 300 Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile 305 310 315 320 Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn 325 330 335 Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu 340 345 350 Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 355 360 365 Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp 370 375 380 Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 385 390 395 400 Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu 405 410 415 Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu 420 425 430 Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser 435 440 445 Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser 450 455 460 Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro 465 470 475 480 Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn 485 490 495 Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn 500 505 510 Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys 515 520 525 Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly 530 535 540 Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile 545 550 555 560 Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser 565 570 575 Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln 580 585 590 Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 595 600 605 Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 615 620 Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met 625 630 635 640 Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650 655 Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 660 665 670 Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 675 680 685 Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 690 695 700 Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val 705 710 715 720 Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735 <210> 51 <211> 736 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> AAV9 <400> 51 Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 1 5 10 15 Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro 20 25 30 Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45 Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60 Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80 Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95 Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110 Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro 115 120 125 Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly 145 150 155 160 Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 165 170 175 Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro 180 185 190 Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205 Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser 210 215 220 Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240 Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255 Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn 260 265 270 Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 275 280 285 Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn 290 295 300 Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile 305 310 315 320 Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn 325 330 335 Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu 340 345 350 Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 355 360 365 Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp 370 375 380 Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 385 390 395 400 Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu 405 410 415 Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu 420 425 430 Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser 435 440 445 Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser 450 455 460 Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro 465 470 475 480 Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn 485 490 495 Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn 500 505 510 Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys 515 520 525 Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly 530 535 540 Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile 545 550 555 560 Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser 565 570 575 Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln 580 585 590 Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 595 600 605 Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 615 620 Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met 625 630 635 640 Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650 655 Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 660 665 670 Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 675 680 685 Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 690 695 700 Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val 705 710 715 720 Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735 <210> 52 <211> 191 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Vascular endothelial growth factor (vegf) Caa44447.1 <400> 52 Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala Pro Met Ala Glu Gly 20 25 30 Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe Met Asp Val Tyr Gln 35 40 45 Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val Asp Ile Phe Gln Glu 50 55 60 Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys Pro Ser Cys Val Pro Leu 65 70 75 80 Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly Leu Glu Cys Val Pro 85 90 95 Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met Arg Ile Lys Pro His 100 105 110 Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu Gln His Asn Lys Cys 115 120 125 Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln Glu Asn Pro Cys Gly 130 135 140 Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys His Leu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr 145 150 155 160 Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn Thr Asp Ser Arg Cys Lys Ala Arg Gln 165 170 175 Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr Cys Arg Cys Asp Lys Pro Arg Arg 180 185 190 <210> 53 <211> 306 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Palmitoyl-protein thioesterase 1 (ppt1) Aah08426.1 <400> 53 Met Ala Ser Pro Gly Cys Leu Trp Leu Leu Ala Val Ala Leu Leu Pro 1 5 10 15 Trp Thr Cys Ala Ser Arg Ala Leu Gln His Leu Asp Pro Pro Ala Pro 20 25 30 Leu Pro Leu Val Ile Trp His Gly Met Gly Asp Ser Cys Cys Asn Pro 35 40 45 Leu Ser Met Gly Ala Ile Lys Lys Met Val Glu Lys Lys Ile Pro Gly 50 55 60 Ile Tyr Val Leu Ser Leu Glu Ile Gly Lys Thr Leu Met Glu Asp Val 65 70 75 80 Glu Asn Ser Phe Phe Leu Asn Val Asn Ser Gln Val Thr Thr Val Cys 85 90 95 Gln Ala Leu Ala Lys Asp Pro Lys Leu Gln Gln Gly Tyr Asn Ala Met 100 105 110 Gly Phe Ser Gln Gly Gly Gln Phe Leu Arg Ala Val Ala Gln Arg Cys 115 120 125 Pro Ser Pro Pro Met Ile Asn Leu Ile Ser Val Gly Gly Gln His Gln 130 135 140 Gly Val Phe Gly Leu Pro Arg Cys Pro Gly Glu Ser Ser His Ile Cys 145 150 155 160 Asp Phe Ile Arg Lys Thr Leu Asn Ala Gly Ala Tyr Ser Lys Val Val 165 170 175 Gln Glu Arg Leu Val Gln Ala Glu Tyr Trp His Asp Pro Ile Lys Glu 180 185 190 Asp Val Tyr Arg Asn His Ser Ile Phe Leu Ala Asp Ile Asn Gln Glu 195 200 205 Arg Gly Ile Asn Glu Ser Tyr Lys Lys Asn Leu Met Ala Leu Lys Lys 210 215 220 Phe Val Met Val Lys Phe Leu Asn Asp Ser Ile Val Asp Pro Val Asp 225 230 235 240 Ser Glu Trp Phe Gly Phe Tyr Arg Ser Gly Gln Ala Lys Glu Thr Ile 245 250 255 Pro Leu Gln Glu Thr Ser Leu Tyr Thr Gln Asp Arg Leu Gly Leu Lys 260 265 270 Glu Met Asp Asn Ala Gly Gln Leu Val Phe Leu Ala Thr Glu Gly Asp 275 280 285 His Leu Gln Leu Ser Glu Glu Trp Phe Tyr Ala His Ile Ile Pro Phe 290 295 300 Leu Gly 305 <210> 54 <211> 563 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Tripeptidyl-peptidase 1 (tpp1) Np_000382.3 <400> 54 Met Gly Leu Gln Ala Cys Leu Leu Gly Leu Phe Ala Leu Ile Leu Ser 1 5 10 15 Gly Lys Cys Ser Tyr Ser Pro Glu Pro Asp Gln Arg Arg Thr Leu Pro 20 25 30 Pro Gly Trp Val Ser Leu Gly Arg Ala Asp Pro Glu Glu Glu Leu Ser 35 40 45 Leu Thr Phe Ala Leu Arg Gln Gln Asn Val Glu Arg Leu Ser Glu Leu 50 55 60 Val Gln Ala Val Ser Asp Pro Ser Ser Pro Gln Tyr Gly Lys Tyr Leu 65 70 75 80 Thr Leu Glu Asn Val Ala Asp Leu Val Arg Pro Ser Pro Leu Thr Leu 85 90 95 His Thr Val Gln Lys Trp Leu Leu Ala Ala Gly Ala Gln Lys Cys His 100 105 110 Ser Val Ile Thr Gln Asp Phe Leu Thr Cys Trp Leu Ser Ile Arg Gln 115 120 125 Ala Glu Leu Leu Leu Pro Gly Ala Glu Phe His His Tyr Val Gly Gly 130 135 140 Pro Thr Glu Thr His Val Val Arg Ser Pro His Pro Tyr Gln Leu Pro 145 150 155 160 Gln Ala Leu Ala Pro His Val Asp Phe Val Gly Gly Leu His Arg Phe 165 170 175 Pro Pro Thr Ser Ser Leu Arg Gln Arg Pro Glu Pro Gln Val Thr Gly 180 185 190 Thr Val Gly Leu His Leu Gly Val Thr Pro Ser Val Ile Arg Lys Arg 195 200 205 Tyr Asn Leu Thr Ser Gln Asp Val Gly Ser Gly Thr Ser Asn Asn Ser 210 215 220 Gln Ala Cys Ala Gln Phe Leu Glu Gln Tyr Phe His Asp Ser Asp Leu 225 230 235 240 Ala Gln Phe Met Arg Leu Phe Gly Gly Asn Phe Ala His Gln Ala Ser 245 250 255 Val Ala Arg Val Val Gly Gln Gln Gly Arg Gly Arg Ala Gly Ile Glu 260 265 270 Ala Ser Leu Asp Val Gln Tyr Leu Met Ser Ala Gly Ala Asn Ile Ser 275 280 285 Thr Trp Val Tyr Ser Ser Pro Gly Arg His Glu Gly Gln Glu Pro Phe 290 295 300 Leu Gln Trp Leu Met Leu Leu Ser Asn Glu Ser Ala Leu Pro His Val 305 310 315 320 His Thr Val Ser Tyr Gly Asp Asp Glu Asp Ser Leu Ser Ser Ala Tyr 325 330 335 Ile Gln Arg Val Asn Thr Glu Leu Met Lys Ala Ala Ala Arg Gly Leu 340 345 350 Thr Leu Leu Phe Ala Ser Gly Asp Ser Gly Ala Gly Cys Trp Ser Val 355 360 365 Ser Gly Arg His Gln Phe Arg Pro Thr Phe Pro Ala Ser Ser Pro Tyr 370 375 380 Val Thr Thr Val Gly Gly Thr Ser Phe Gln Glu Pro Phe Leu Ile Thr 385 390 395 400 Asn Glu Ile Val Asp Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Ser Asn Val Phe 405 410 415 Pro Arg Pro Ser Tyr Gln Glu Glu Ala Val Thr Lys Phe Leu Ser Ser 420 425 430 Ser Pro His Leu Pro Pro Ser Ser Tyr Phe Asn Ala Ser Gly Arg Ala 435 440 445 Tyr Pro Asp Val Ala Ala Leu Ser Asp Gly Tyr Trp Val Val Ser Asn 450 455 460 Arg Val Pro Ile Pro Trp Val Ser Gly Thr Ser Ala Ser Thr Pro Val 465 470 475 480 Phe Gly Gly Ile Leu Ser Leu Ile Asn Glu His Arg Ile Leu Ser Gly 485 490 495 Arg Pro Pro Leu Gly Phe Leu Asn Pro Arg Leu Tyr Gln Gln His Gly 500 505 510 Ala Gly Leu Phe Asp Val Thr Arg Gly Cys His Glu Ser Cys Leu Asp 515 520 525 Glu Glu Val Glu Gly Gln Gly Phe Cys Ser Gly Pro Gly Trp Asp Pro 530 535 540 Val Thr Gly Trp Gly Thr Pro Asn Phe Pro Ala Leu Leu Lys Thr Leu 545 550 555 560 Leu Asn Pro <210> 55 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant interleukin-2 signal peptide <400> 55 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Leu Leu Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Val Thr Asn Ser 20

Claims

인간 대상체의 눈의 맥락막상 공간(suprachoroidal space, SCS)에 투여하기에 적합한 약제학적 조성물로서,
상기 약제학적 조성물은 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 아데노-관련 바이러스(AAV) 벡터를 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 증가하는 온도에 따라 증가하는 점도 및/또는 더 높은 탄성 모듈러스를 갖는, 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 겔화 온도가 약 27 내지 32℃인, 약제학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 조성물은 겔화 시간이 약 15 내지 90초인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약 1 s^-1내지 약 1000 s^-1의 전단율에서 측정될 때 5℃에서의 점도가 약 183 mPas인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약 1 s^-1내지 약 1000 s^-1의 전단율에서 측정될 때 5℃에서의 점도가 약 183 mPas 미만인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약 1 s^-1내지 약 1000 s^-1의 전단율에서 측정될 때 20℃에서의 점도가 약 183 mPas인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약 1 s^-1내지 약 1000 s^-1의 전단율에서 측정될 때 20℃에서의 점도가 약 183 mPas 미만인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 27℃ 미만에서의 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 탄성 모듈러스는 약 0.1 Pa 이하, 약 0.01 Pa 이하, 약 0.001 Pa 이하 또는 0인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 32℃ 내지 35℃에서의 본 명세서에 제공된 약제학적 조성물의 탄성 모듈러스는 약 0.1 Pa 이상, 약 1 Pa 이상, 약 10 Pa 이상, 약 100 Pa 이상, 약 1000 Pa 이상, 약 10,000 Pa 이상 또는 약 100,000 Pa 이상인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 맥락막상 투여 후의 제거 시간(clearance time)은 맥락막상 투여 후의 참조 약제학적 조성물의 제거 시간 이상이며, 여기서 상기 참조 약제학적 조성물은 상기 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 상기 약제학적 조성물 또는 상기 참조 약제학적 조성물이 상기 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 상기 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 상기 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 맥락막상 투여 후의 원주방향 확산(circumferential spread)이 맥락막상 투여 후의 참조 약제학적 조성물의 원주방향 확산에 비해 더 작으며, 여기서 상기 참조 약제학적 조성물은 상기 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 상기 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 상기 약제학적 조성물 또는 상기 참조 약제학적 조성물이 상기 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 상기 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 상기 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는, 약제학적 조성물.
제11항에 있어서, 상기 맥락막상 투여 후의 원주방향 확산은 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 더 작은, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께가 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께와 동일하거나 그에 비해 더 높으며, 여기서 상기 참조 약제학적 조성물은 상기 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 상기 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 상기 약제학적 조성물 또는 상기 참조 약제학적 조성물이 상기 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 상기 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 상기 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 도입유전자의 발현 수준이 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후에 눈에서 검출되는 상기 도입유전자의 발현 수준 기간에 비해 맥락막상 투여 후에 더 긴 기간 동안 눈에서 검출되며, 여기서 상기 참조 약제학적 조성물은 상기 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 상기 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 상기 약제학적 조성물 또는 상기 참조 약제학적 조성물이 상기 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 상기 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 상기 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 맥락막상 투여 후의 눈에서의 상기 도입유전자의 농도는 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 눈에서의 상기 도입유전자의 농도와 동일하거나 그에 비해 더 높으며, 여기서 상기 참조 약제학적 조성물은 상기 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 상기 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 상기 약제학적 조성물 또는 상기 참조 약제학적 조성물이 상기 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 상기 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 상기 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 형질도입 속도가 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 형질도입 속도와 동일하거나 그에 비해 더 높으며, 여기서 상기 참조 약제학적 조성물은 상기 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 상기 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 상기 약제학적 조성물 또는 상기 참조 약제학적 조성물이 상기 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 상기 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 상기 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 맥락막상 투여 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준이 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준과 동일하거나 그에 비해 감소되며, 여기서 상기 참조 약제학적 조성물은 상기 도입유전자를 인코딩하는 발현 카세트를 포함하는 재조합 AAV를 포함하고, 상기 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 상기 약제학적 조성물 또는 상기 참조 약제학적 조성물이 상기 맥락막상 공간에 투여될 때 동일하고, 상기 참조 약제학적 조성물은 약 32 내지 35℃에서 상기 약제학적 조성물보다 더 낮은 점도 및/또는 더 낮은 탄성 모듈러스를 갖는, 약제학적 조성물.
제10항, 제11항, 및 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 점도 및/또는 탄성 모듈러스와 상기 참조 약제학적 조성물의 점도 및/또는 탄성 모듈러스는 동일한 전단율에서 측정되는, 약제학적 조성물.
제4항 내지 제11항 및 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 점도 및/또는 탄성 모듈러스는 적어도 약 1,000 s^-1, 2,000 s^-1, 3,000 s^-1, 4,000 s^-1, 5,000 s^-1, 6,000 s^-1, 7,000 s^-1, 8,000 s^-1, 9,000 s^-1, 10,000 s^-1, 15,000 s^-1, 20,000 s^-1, 또는 30,000 s^-1의 전단율에서 측정되는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV는 작제물 II인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 도입유전자는 항-인간 혈관 내피 성장 인자(항-VEGF) 항체인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV는 AAV1, AAV2, AAV2tYF, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAVrh10, AAV.rh20, AAV.rh39, AAV.Rh74, AAV.RHM4-1, AAV.hu37, AAV.Anc80, AAV.Anc80L65, rAAV.7m8, AAV.PHP.B, AAV.PHP.eB, AAV2.5, AAV2tYF, AAV3B, AAV.LK03, AAV.HSC1, AAV.HSC2, AAV.HSC3, AAV.HSC4, AAV.HSC5, AAV.HSC6, AAV.HSC7, AAV.HSC8, AAV.HSC9, AAV.HSC10, AAV.HSC11, AAV.HSC12, AAV.HSC13, AAV.HSC14, AAV.HSC15, 및 AAV.HSC16으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 아데노-관련 바이러스 혈청형 유래 성분을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV는 AAV8인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제19항 및 제21항 또는 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV는 AAV9인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 수크로스를 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 수크로스를 포함하지 않는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 제거 시간은 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%, 또는 적어도 500%만큼 더 큰, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 제거 시간은 약 30분 내지 약 20시간, 약 2시간 내지 약 20시간, 약 30분 내지 약 24시간, 약 1시간 내지 약 2시간, 약 30분 내지 약 90일, 약 30분 내지 약 60일, 약 30분 내지 약 30일, 약 30분 내지 약 21일, 약 30분 내지 약 14일, 약 30분 내지 약 7일, 약 30분 내지 약 3일, 약 30분 내지 약 2일, 약 30분 내지 약 1일, 약 4시간 내지 약 90일, 약 4시간 내지 약 60일, 약 4시간 내지 약 30일, 약 4시간 내지 약 21일, 약 4시간 내지 약 14일, 약 4시간 내지 약 7일, 약 4시간 내지 약 3일, 약 4시간 내지 약 2일, 약 4시간 내지 약 1일, 약 4시간 내지 약 8시간, 약 4시간 내지 약 16시간, 약 4시간 내지 약 20시간, 약 1일 내지 약 90일, 약 1일 내지 약 60일, 약 1일 내지 약 30일, 약 1일 내지 약 21일, 약 1일 내지 약 14일, 약 1일 내지 약 7일, 약 1일 내지 약 3일, 약 2일 내지 약 90일, 약 3일 내지 약 90일, 약 3일 내지 약 60일, 약 3일 내지 약 30일, 약 3일 내지 약 21일, 약 3일 내지 약 14일, 또는 약 3일 내지 약 7일인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 제거 시간은 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일 이전이 아닌, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 맥락막상 투여 후의 참조 약제학적 조성물의 제거 시간은 최대 약 30분, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 12시간, 14시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 또는 14일인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제거 시간은 상기 SCS로부터의 또는 눈으로부터의 제거 시간인, 약제학적 조성물.
제13항 및 제20항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께는 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 더 높은, 약제학적 조성물.
제13항 및 제20항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께는 약 500 μm 내지 약 3.0 mm, 750 μm 내지 약 2.8 mm, 약 750 μm 내지 약 2.5 mm, 약 750 μm 내지 약 2 mm, 또는 약 1 mm 내지 약 2 mm인, 약제학적 조성물.
제13항 및 제20항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께는 적어도 약 50 μm, 100 μm, 200 μm, 300 μm, 400 μm, 500 μm, 600 μm, 700 μm, 800 μm, 900 μm, 1000 μm, 1 mm, 1.5 mm, 2 mm, 2.5 mm, 3 mm, 3.5 mm, 4 mm, 4.5 mm, 5 mm, 5.5 mm, 6 mm, 6.5 mm, 7 mm, 7.5 mm, 8 mm, 8.5 mm, 9 mm, 9.5 mm, 또는 10 mm인, 약제학적 조성물.
제13항 및 제20항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께는 최대 약 1 nm, 5 nm, 10 nm, 25 nm, 50 nm, 100 nm, 200 nm, 300 nm, 400 nm, 500 nm, 600 nm, 700 nm, 800 nm, 900 nm, 1 μm, 5 μm, 10 μm, 15 μm, 20 μm, 25 μm, 30 μm, 35 μm, 40 μm, 50 μm, 100 μm, 200 μm, 300 μm, 400 μm, 500 μm, 600 μm, 700 μm, 800 μm, 900 μm, 또는 1000 μm인, 약제학적 조성물.
제13항 및 제20항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 두께는 적어도 2시간, 적어도 3시간, 적어도 4시간, 적어도 5시간, 적어도 6시간, 적어도 7시간, 적어도 8시간, 적어도 10시간, 적어도 12시간, 적어도 18시간, 적어도 24시간, 적어도 2일, 적어도 3일, 적어도 5일, 적어도 10일, 적어도 21일, 적어도 1개월, 적어도 6주, 적어도 2개월, 적어도 3개월, 적어도 4개월, 적어도 5개월, 적어도 6개월, 적어도 9개월, 적어도 1년, 적어도 3년, 또는 적어도 5년 동안 지속되는, 약제학적 조성물.
제15항 및 제20항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 눈에서의 도입유전자의 농도는 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 더 높은, 약제학적 조성물.
제14항 및 제20항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 더 긴 기간은 적어도 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일만큼 더 긴, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 도입유전자는 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후에 적어도 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일 동안 눈에서 검출되는, 약제학적 조성물.
제10항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 도입유전자는 상기 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후에 최대 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 23일, 25일, 27일, 30일, 35일, 40일, 50일, 55일, 60일, 65일, 70일, 75일, 80일, 85일, 90일, 95일, 또는 100일, 120일, 140일, 160일, 180일, 200일, 220일, 240일, 260일, 280일, 300일, 320일, 340일, 360일, 380일, 또는 400일 후 동안 눈에서 검출되는, 약제학적 조성물.
제21항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준은 상기 참조 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준과 동일하거나 그에 비해 감소되는, 약제학적 조성물.
제17항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 VEGF-유도 혈관확장 및/또는 혈관 누출의 수준은 적어도 약 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 감소되는, 약제학적 조성물.
제16항 및 제20항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 맥락막상 투여 후의 주사 부위에서의 형질도입 속도는 적어도 약 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40%, 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 100%, 적어도 150%, 또는 적어도 200%, 적어도 250%, 또는 적어도 300%, 적어도 400%만큼, 또는 적어도 500%만큼 더 높은, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 AAV 안정성은 상기 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV 안정성에 비해 상기 약제학적 조성물에서 더 높은, 약제학적 조성물.
제44항에 있어서, 상기 재조합 AAV 안정성은 상기 재조합 AAV의 감염성에 의해 결정되는, 약제학적 조성물.
제44항에 있어서, 상기 재조합 AAV 안정성은 상기 재조합 AAV의 응집 수준에 의해 결정되는, 약제학적 조성물.
제44항에 있어서, 상기 재조합 AAV 안정성은 상기 재조합 AAV에 의해 방출되는 유리 DNA의 수준에 의해 결정되는, 약제학적 조성물.
제47항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 상기 참조 약제학적 조성물에서의 유리 DNA의 수준에 비해 약 50% 더 많은, 약 25% 더 많은, 약 15% 더 많은, 약 10% 더 많은, 약 5% 더 많은, 약 4% 더 많은, 약 3% 더 많은, 약 2% 더 많은, 약 1% 더 많은, 약 0% 더 많은, 약 1% 더 적은, 약 2% 더 적은, 약 5% 더 적은, 약 7% 더 적은, 약 10% 더 적은, 약 2배 더 많은, 약 3배 더 많은, 약 2배 더 적은, 약 3배 더 적은 유리 DNA를 포함하는, 약제학적 조성물.
제45항에 있어서, 상기 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV는 상기 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV의 감염성에 비해 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 높은 감염성을 갖는, 약제학적 조성물.
제46항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 상기 참조 약제학적 조성물에서의 재조합 AAV 응집의 수준에 비해 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2배, 3배, 5배, 10배, 100배, 또는 1000배 더 적은 재조합 AAV 응집을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 도입유전자는 관심 질병을 치료하거나, 달리 호전시키거나, 예방하거나 이의 진행을 둔화시키는 데 적합한 도입유전자인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 대상체는 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 당뇨병성 망막병증(DR), 녹내장, 비감염성 포도막염, X-연관 질병 또는 바텐병(Batten disease)으로 진단되는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 대상체는 뮤코다당증 IVA형(MPS IVA), 뮤코다당증 I형(MPS I), 뮤코다당증 II형(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질병, 뇌혈관 질병, 듀센(Duchenne) 근이영양증, 림 거들(Limb Girdle) 근이영양증, 베커(Becker) 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염, 또는 칼리크레인-관련 질병으로 진단되는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제19항 및 제22항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AAV는 팔미토일-단백질 티오에스테라제 1(PPT1), 트라이펩티딜-펩티다제 1(TPP1), 항-VEGF 융합 단백질, 항-VEGF 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항-칼리크레인 항체 또는 항원-결합 단편, 항-TNF 항체 또는 항원-결합 단편, 항-C3 항체 또는 항원-결합 단편, 또는 항-C5 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 벡터 게놈 농도에 기초한, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 투여당 게놈 카피수에 기초한, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제54항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV 게놈 카피의 양은 상기 인간 대상체에게 투여되는 총 게놈 카피수에 기초한, 약제학적 조성물.
제56항에 있어서, 상기 투여당 게놈 카피수는 맥락막상 투여당 상기 재조합 AAV의 게놈 카피수인, 약제학적 조성물.
제57항에 있어서, 상기 투여되는 총 게놈 카피수는, 맥락막상으로 투여되는 상기 재조합 AAV의 총 게놈 카피수인, 약제학적 조성물.
제55항에 있어서, 상기 벡터 게놈 농도(VGC)는 약 3 × 10⁹ GC/mL, 약 1 × 10¹⁰ GC/mL, 약 1.2 × 10¹⁰ GC/mL, 약 1.6 × 10¹⁰ GC/mL, 약 4 × 10¹⁰ GC/mL, 약 6 × 10¹⁰ GC/mL, 약 2 × 10¹¹ GC/mL, 약 2.4 × 10¹¹ GC/mL, 약 2.5 × 10¹¹GC/mL, 약 3 × 10¹¹ GC/mL, 약 6.2 × 10¹¹ GC/mL, 약 1 × 10¹² GC/mL, 약 2.5 × 10¹²GC/mL, 약 3 × 10¹²GC/mL, 약 5 × 10¹²GC/mL, 약 6 × 10¹²GC/mL, 약 1.5 × 10¹³ GC/mL, 약 2 × 10¹³ GC/mL, 또는 약 3 × 10¹³ GC/mL인, 약제학적 조성물.
제57항 또는 제59항에 있어서, 상기 투여되는 게놈 카피의 총수는 약 6.0 × 10¹⁰개의 게놈 카피, 약 1.6 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 2.5 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 3 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 5.0 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 6 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 3 x 10¹²개의 게놈 카피, 약 1.0 × 10¹²개의 게놈 카피, 약 1.5 × 10¹²개의 게놈 카피, 약 2.5 × 10¹²개의 게놈 카피, 또는 약 3.0 × 10¹³개의 게놈 카피인, 약제학적 조성물.
제56항 또는 제58항에 있어서, 상기 투여되는 게놈 카피의 총수는 약 6.0 × 10¹⁰개의 게놈 카피, 약 1.6 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 2.5 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 3 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 5.0 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 6 × 10¹¹개의 게놈 카피, 약 3 x 10¹²개의 게놈 카피, 약 1.0 × 10¹²개의 게놈 카피, 약 1.5 × 10¹²개의 게놈 카피, 약 2.5 × 10¹²개의 게놈 카피, 또는 약 3.0 × 10¹³개의 게놈 카피인, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회, 15회, 20회, 25회, 또는 30회 투여되는, 약제학적 조성물.
제10항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조 약제학적 조성물은 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 8회, 9회, 10회, 15회, 20회, 25회, 또는 30회 투여되는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 일일 1회, 일일 2회, 일일 3회, 일일 4회, 일일 5회, 일일 6회, 또는 일일 7회 투여되는, 약제학적 조성물.
제10항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 참조 약제학적 조성물은 일일 1회, 일일 2회, 일일 3회, 일일 4회, 일일 5회, 일일 6회, 또는 일일 7회 투여되는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 폴록사머 407 및 폴록사머 188을 함유하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 16 내지 22% 폴록사머 407을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 0 내지 16% 폴록사머 188을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 19% 폴록사머 407 및 6% 폴록사머 188을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 18% 폴록사머 407 및 6.5% 폴록사머 188을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 17.5% 폴록사머 407 및 7% 폴록사머 188을 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 변형된 둘베코 인산염-완충 식염수 용액, 및 선택적으로 계면활성제를 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 0.2 mg/mL의 염화칼륨, 0.2 mg/mL의 일염기성 인산칼륨, 5.84 mg/mL의 염화나트륨, 1.15 mg/mL의 무수 이염기성 인산나트륨, 40.0 mg/mL(4% w/v)의 수크로스, 및 선택적으로 계면활성제를 포함하는, 약제학적 조성물.
제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 염화칼륨, 일염기성 인산칼륨, 염화나트륨, 무수 이염기성 인산나트륨, 수크로스, 및 선택적으로 계면활성제를 포함하는, 약제학적 조성물.
대상체에서 질병을 치료하는 방법으로서,
제1항 내지 제72항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
대상체에서 질병을 치료하는 방법으로서,
상기 대상체에게 제4항 또는 제5항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 약제학적 조성물은 투여될 때 약 2 내지 10℃의 온도인, 방법.
대상체에서 질병을 치료하는 방법으로서,
상기 대상체에게 제6항 또는 제8항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 약제학적 조성물은 투여될 때 약 20 내지 25℃의 온도인, 방법.
제76항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 약 43 PSI 미만의 주사 압력으로 투여되는, 방법.
제76항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 약 65 PSI 미만의 주사 압력으로 투여되는, 방법.
제76항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 약 100 PSI 미만의 주사 압력으로 투여되는, 방법.
제76항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 29 게이지 바늘을 사용하여 투여되는, 방법.
제76항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 30 게이지 바늘을 사용하여 투여되는, 방법.
제76항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 약 10 내지 15초의 주사 시간으로 투여되는, 방법.
제76항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물은 약 5 내지 30초의 주사 시간으로 투여되는, 방법.
제76항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
제76항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 질병은 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 당뇨병성 망막병증(DR), 바텐병, 뮤코다당증 IVA형(MPS IVA), 뮤코다당증 I형(MPS I), 뮤코다당증 II형(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합성 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질병, 뇌혈관 질병, 듀센 근이영양증, 림 거들 근이영양증, 베커 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염 및 칼리크레인-관련 질병으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.