TW202102679A - 眼睛病狀之基因療法 - Google Patents

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Abstract

本發明描述用於將治療性產物(諸如治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)及治療性適體)遞送至人類個體之眼睛的視網膜/玻璃體液以治療眼睛病狀之組合物及方法，其涉及例如重組病毒載體，諸如重組腺相關病毒(rAAV)載體。

Description

眼睛病狀之基因療法
本發明描述用於將治療性產物(諸如治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)及治療性適體)遞送至人類個體之眼睛的視網膜/玻璃體液以治療眼睛病狀之組合物及方法，其涉及例如重組病毒載體，諸如重組腺相關病毒(rAAV)載體。
人眼為高度複雜且高度發達之感覺器官，易患許多疾病及病症。全球約2.85億人具有視覺障礙，其中3900萬人為盲人且2.46億人具有中度至重度視覺障礙(世界衛生組織, 2012, 「Global Data On Visual Impairments 2010,」 日內瓦：世界衛生組織)。失明的一些主要原因為白內障(47%)、青光眼(12%)、年齡相關性黃斑變性(AMD) (9%)及糖尿病性視網膜病變(5%) (世界衛生組織, 2007, 「Global Initiative For The Elimination Of Avoidable Blindness: Action Plan 2006-2011,」 日內瓦：世界衛生組織)。
極多數眼部疾病及眼睛中與病理學表現的疾病可追溯至基因改變或蛋白質失調(Stone等人, 2017, Ophthalmology 124(9): 1314-1331)。基因組學及蛋白質組學之最新進展對吾等對於此類眼部疾病或表現之潛在疾病機理及/或基因基礎的理解產生巨大影響。基因療法已用於治療某些眼病(參見例如國際專利申請案第PCT/US2017/027650號(國際公開案第WO 2017/181021 A1號))。
對專門解決潛在基因異常以治療眼部病狀之療法存在明顯未滿足的醫療需求。
本發明描述用於將治療性產物(諸如治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)及治療性適體)遞送至人類個體之眼睛的視網膜/玻璃體液以治療眼睛病狀之組合物及方法，其涉及例如重組病毒載體，諸如重組腺相關病毒(rAAV)載體。治療性產物可為例如治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)或治療性適體。在一特定實施例中，治療性產物為人類蛋白質或針對人類蛋白質之抗體。抗體包括但不限於單株抗體、多株抗體、重組產生之抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、合成抗體、包含兩個重鏈及兩個輕鏈分子之四聚抗體、抗體輕鏈單體、抗體重鏈單體、抗體輕鏈二聚體、抗體重鏈二聚體、抗體輕鏈-重鏈對、胞內抗體、異結合抗體、單價抗體、全長抗體之抗原結合片段及上述之融合蛋白。此類抗原結合片段包括但不限於單域抗體(重鏈抗體之可變域(VHH)或奈米抗體)、Fab、F(ab')2 及scFv (單鏈可變片段)。在特定實施例中，治療性產物(例如治療性蛋白質)經轉譯後修飾。在一特定實施例中，轉譯後修飾對使用如本文所述之特定途徑將治療性產物(例如治療性蛋白質)遞送至的細胞類型具有特異性。遞送可經由基因療法來實現，例如藉由將編碼治療性產物之重組病毒載體或重組DNA表現構築體(統稱為「重組載體」)投與人類患者眼睛之脈絡膜上腔、視網膜下腔(藉由玻璃體切除術或無需玻璃體切除術(例如藉由導管穿過脈絡膜上腔或經由外周注射)、視網膜內腔及/或鞏膜外表面(亦即近鞏膜投與)，以在眼睛中形成連續供應治療性產物(例如經轉譯後修飾之治療性產物)的永久儲槽。
在一個態樣中，本文提供一種無需玻璃體切除術以用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，投與步驟包含經由該人類個體之眼睛的脈絡膜上腔向該人類個體之眼睛視網膜下腔投與重組病毒載體治療性產物。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用包含導管之視網膜下藥物遞送裝置，該導管可插入且通過脈絡膜上腔向後極穿隧，小針頭在後極注入視網膜下腔。在某些實施例中，投與步驟包含將視網膜下藥物遞送裝置之導管插入且穿隧通過脈絡膜上腔。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，投與步驟包含經由該人類個體之眼睛的脈絡膜上腔向該人類個體之眼睛的視網膜下腔投與重組病毒載體治療性產物。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用包含導管之視網膜下藥物遞送裝置，該導管可插入且通過脈絡膜上腔向後極穿隧，小針頭在後極注入視網膜下腔。在某些實施例中，投與步驟包含將視網膜下藥物遞送裝置之導管插入且穿隧通過脈絡膜上腔。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之藉由玻璃體切除術之視網膜下投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之脈絡膜上投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的脈絡膜上腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將重組病毒載體注入脈絡膜上腔。在某些實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置為顯微注射器。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的脈絡膜上腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將重組病毒載體注入脈絡膜上腔。在某些實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置為顯微注射器。
在某些實施例中，可使用國際公開案第WO 2016/042162號、第WO 2017/046358號、第WO 2017/158365號及第WO 2017/158366號中所描述及揭示之方法及/或裝置來進行向視網膜下腔或脈絡膜上腔之遞送，該等公開案各自以全文引用的方式併入本文中。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之向鞏膜外表面投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的鞏膜外表面投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用包含套管之近鞏膜藥物遞送裝置，該套管之尖端可插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。在某些實施例中，投與步驟包含將套管之尖端插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛鞏膜外表面投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用包含套管之近鞏膜藥物遞送裝置，該套管之尖端可插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。在某些實施例中，投與步驟包含將套管之尖端插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。
在某些實施例中，治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。
在某些實施例中，眼睛病狀與新生血管性年齡相關性黃斑變性(nAMD) (亦稱為AMD之「濕性」新生血管性形式(「WAMD」或「濕性AMD」))不相關。
在某些實施例中，治療性產物為抗hVEGF抗體。
在某些實施例中，眼睛病狀與nAMD相關。
在某些實施例中，眼睛病狀與nAMD相關，且治療性產物為抗hVEGF抗體。
在一個態樣中，本文提供一種偕同玻璃體切除術以用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術，且其中該治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。在某些實施例中，眼睛病狀為眼部疾病或涉及包括眼睛在內之多個器官的疾病。在某些實施例中，玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術，且其中該治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。在某些實施例中，眼睛病狀為眼部疾病或涉及包括眼睛在內之多個器官的疾病。在某些實施例中，玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向位於需要治療之人類個體之眼睛後部的視神經盤、中央凹及黃斑外周的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，注射步驟係藉由經玻璃體注射。在某些實施例中，經玻璃體投與之方法使得治療性產物在整個眼睛中均勻表現(例如與眼睛其他區域之表現量相比，注射部位之表現量變化小於5%、10%、20%、30%、40%或50%)。在某些實施例中，經玻璃體注射包含經由眼睛之上側或下側將尖銳的針頭插入鞏膜中，且使尖銳的針頭完全穿過玻璃體，以將重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。在某些實施例中，在2點鐘或10點鐘位置插入針頭。在某些實施例中，經玻璃體注射包含將套管針插入鞏膜中，且經由套管針插入套管並穿過玻璃體，以將重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。在某些實施例中，治療性產物為抗hVEGF抗體。在某些實施例中，抗hVEGF抗體為抗hVEGF抗原結合片段。在某些實施例中，抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab')2 或單鏈可變片段(scFv)。在某些實施例中，抗hVEGF抗體含有包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。在某些實施例中，其中抗hVEGF抗體包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 17-19或SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3。在某些實施例中，其中眼睛病狀與nAMD、乾性年齡相關性黃斑變性(乾性AMD)、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)相關。在某些實施例中，眼睛病狀與nAMD相關。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向位於需要治療之人類個體之眼睛後部的視神經盤、中央凹及黃斑外周的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，注射步驟係藉由經玻璃體注射。在某些實施例中，經玻璃體投與之方法使得治療性產物在整個眼睛中均勻表現(例如與眼睛其他區域之表現量相比，注射部位之表現量變化小於5%、10%、20%、30%、40%或50%)。在某些實施例中，經玻璃體注射包含經由眼睛之上側或下側將尖銳的針頭插入鞏膜中，且使尖銳的針頭完全穿過玻璃體，以將重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。在某些實施例中，在2點鐘或10點鐘位置插入針頭。在某些實施例中，經玻璃體注射包含將套管針插入鞏膜中，且經由套管針插入套管並穿過玻璃體，以將重組病毒載體注射所述另一側的視網膜下腔。在某些實施例中，治療性產物為抗hVEGF抗體。在某些實施例中，抗hVEGF抗體為抗hVEGF抗原結合片段。在某些實施例中，抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab')2 或單鏈可變片段(scFv)。在某些實施例中，抗hVEGF抗體含有包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。在某些實施例中，其中抗hVEGF抗體包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 17-19或SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3。在某些實施例中，其中眼睛病狀與nAMD、乾性年齡相關性黃斑變性(乾性AMD)、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)相關。在某些實施例中，眼睛病狀與nAMD相關。
在本文所述之方法的某些實施例中，(1)眼睛病狀與Batten-CLN1相關，且治療性產物為棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)；(2)眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)；(3)眼睛病狀與Batten-CLN3相關，且治療性產物為Battenin (CLN3)；(4)眼睛病狀與Batten-CLN6相關，且治療性產物為CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；(5)眼睛病狀與Batten-CLN7相關，且治療性產物為含主要易化子超家族域8 (MFSD8)；(6)眼睛病狀與1型亞瑟氏症(Usher's-Type 1)相關，且治療性產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)；(7)眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且治療性產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)；(8)眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且治療性產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)；(9)眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且治療性產物為Usherin (USH2A)；(10)眼睛病狀與3型亞瑟氏症相關，且治療性產物為Clarin 1 (CLRN1)；(11)眼睛病狀與斯特格氏病(Stargardt's)相關，且治療性產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)；(12)眼睛病狀與斯特格氏病相關，且治療性產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)；(13)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗介白素6 (IL6)單株抗體；(14)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗TNF-α (TNF)單株抗體；(15)眼睛病狀與糖尿病性黃斑水腫(DME)相關，且治療性產物為抗IL6單株抗體；(16)眼睛病狀與紅綠色盲相關，且治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)；(17)眼睛病狀與紅綠色盲相關，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(18)眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(19)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (Leber congenital amaurosis-1，LCA 1)相關，且治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)；(20)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)；(21)眼睛病狀與LCA 3相關，且治療性產物為精子形成相關7 (SPATA7)；(22)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)相關，且治療性產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)；(23)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦5 (LCA 5)相關，且治療性產物為Lebercilin (LCA5)；(24)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦6 (LCA 6)相關，且治療性產物為RPGR相互作用蛋白1 (RPGRIP1)；(25)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)；(26)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)相關，且治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1) (亦稱為LCA8)；(27)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)相關，且治療性產物為菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)；(28)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)相關，且治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)；(29)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)；(30)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)相關，且治療性產物為視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)；(31)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)相關，且治療性產物為視黃醇去氫酶12 (RDH12)；(32)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦14 (LCA 14)相關，且治療性產物為卵磷脂視黃醇醯基轉移酶(LRAT)；(33)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)；(34)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)相關，且治療性產物為電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)；(35)眼睛病狀與萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)；(36)眼睛病狀與LHON相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)；(37)眼睛病狀與LHON相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)；(38)眼睛病狀與視神經脊髓炎(NMO)相關，且治療性產物為抗補體抗體或抗補體適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(39)眼睛病狀與NMO相關，且治療性產物為抗IL6單株抗體或適體；(40)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(41)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為血管收縮素I轉化酶(ACE)；(42)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為介白素10 (IL10)；(43)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗TNF單株抗體；(44)眼睛病狀與無脈絡膜症相關，且治療性產物為Rab護航蛋白1 (CHM)；(45)眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)；(46)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1 (Bardet-Biedl syndrome 1)相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)；(47)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群2相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群2 (BBS2)；(48)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群3相關，且治療性產物為ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6) (亦稱為BBS3)；(49)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群4相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群4 (BBS4)；(50)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群5相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)；(51)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且治療性產物為麥-考症候群(McKusick-Kaufman Syndrome，MKKS)，亦稱為BBS6；(52)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群7相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群7 (BBS7)；(53)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群8相關，且治療性產物為三十四肽重複域8 (TTC8)，亦稱為BBS8；(54)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群9相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群9 (BBS9)；(55)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)；(56)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群11相關，且治療性產物為含三聯基元32 (TRIM32)，亦稱為BBS11；(57)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群12相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群12 (BBS12)；(58)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群13相關，且治療性產物為MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)，亦稱為BBS13；(59)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群14相關，且治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)，亦稱為BBS14及LCA10；(60)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群15相關，且治療性產物為含WD重複之平面細胞極性效應子(WDPCP)，亦稱為BBS15；(61)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群16相關，且治療性產物為血清學定義之結腸癌抗原8 (SDCCAG8)，亦稱為BBS16；(62)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群17相關，且治療性產物為白胺酸拉鏈轉錄因子樣1 (LZTFL1)，亦稱為BBS17；(63)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群18相關，且治療性產物為BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)，亦稱為BBS18；(64)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群19相關，且治療性產物為纖毛內轉運27 (IFT27)，亦稱為BBS19；(65)眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；(66)眼睛病狀與視神經萎縮相關，且治療性產物為OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)；(67)眼睛病狀與色素性視網膜炎1相關，且治療性產物為RP1軸突微管相關(RP1)；(68)眼睛病狀與色素性視網膜炎2相關，且治療性產物為ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)；(69)眼睛病狀與色素性視網膜炎7相關，且治療性產物為外周蛋白2 (PRPH2)；(70)眼睛病狀與色素性視網膜炎11相關，且治療性產物為前體mRNA加工因子31 (PRPF31)；(71)眼睛病狀與色素性視網膜炎12相關，且治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)，亦稱為LCA8；(72)眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)；(73)眼睛病狀與色素性視網膜炎25相關，且治療性產物為閉眼同源物(EYS)；(74)眼睛病狀與色素性視網膜炎28相關，且治療性產物為FAM161中心體蛋白A (FAM161A)；(75)眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；(76)眼睛病狀與色素性視網膜炎38相關，且治療性產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)；(77)眼睛病狀與色素性視網膜炎40相關，且治療性產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)；(78)眼睛病狀與色素性視網膜炎41相關，且治療性產物為Prominin 1 (PROM1)；(79)眼睛病狀與色素性視網膜炎43相關，且治療性產物為磷酸二酯酶6A (PDE6A)；(80)眼睛病狀與色素性視網膜炎56相關，且治療性產物為感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)；(81)眼睛病狀與色素性視網膜炎62相關，且治療性產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)；(82)眼睛病狀與色素性視網膜炎80相關，且治療性產物為纖毛內轉運140 (IFT140)；(83)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(84)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為抗攻膜複合物(MAC)治療性產物，較佳地，抗MAC治療性產物為抗MAC單株抗體，其為針對攻膜複合物之人類蛋白的單株抗體，該人類蛋白由四個補體蛋白C5b (SEQ ID NO. 314-316)、C6 (SEQ ID NO. 317)、C7 (SEQ ID NO. 318)及C8 (SEQ ID NO. 319-321)構成；(85)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為HtrA絲胺酸肽酶1 (HTRA1)；(86)眼睛病狀與貝斯特氏病(Best disease)相關，且治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)；(87)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為補體因子B反義寡核苷酸；(88)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為抗β-類澱粉蛋白單株抗體；(89)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為CD59糖蛋白(CD59)；(90)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為光敏感通道蛋白-1 (ChR1)，其包括ChR1之人類同源物；(91)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為光敏感通道蛋白-2 (ChR2)，其包括ChR2之人類同源物；(92)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(93)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為抗補體因子D治療性產物，包括但不限於抗補體因子D單株抗體或抗補體因子D適體；(94)眼睛病狀與年齡相關性視網膜神經節細胞(RGC)變性相關，且治療性產物為DnaJ熱休克蛋白家族(Hsp40)成員C3 (DNAJC3)，亦稱為P58IPK；(95)眼睛病狀與藍錐細胞單色視(BCM)相關，且治療性產物為L視蛋白(OPN1MW)；(96)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為β-2腎上腺素受體siRNA；(97)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為半胱天冬酶-2 (CASP2)；(98)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為胰島素受體受質1 (IRS1)；(99)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為HIF-1反應蛋白RTP801 (RTP801)；(100)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為轉化生長因子β2 (TGFB2)；(101)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為腦源性神經營養因子(BDNF)；(102)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為睫狀神經營養因子(CNTF)；(103)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為前列腺素內過氧化物合成酶2 (PTGS2)；(104)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為前列腺素F受體(PTGFR) (當眼睛病狀與青光眼相關時，在一特定實施例中，包含編碼PTGFR之核苷酸序列的重組病毒載體可與包含編碼PTGS2之核苷酸序列的重組病毒載體組合投與人類個體；在另一特定實施例中，可向人類個體投與包含編碼PTGFR之核苷酸序列及編碼PTGS2之核苷酸序列的重組病毒載體)；(105)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為玻尿酸酶，例如HYAL1、HYAL2、HYAL3、HYAL4及HYAL5；(106)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為色素上皮衍生因子(PEDF)；(107)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為血管內皮生長因子(VEGF)；(108)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為胎盤生長因子(PGF)，其中PGF可與VEGF組合使用；(109)眼睛病狀與青光眼(例如先天性青光眼或青少年型青光眼相關)，且治療性產物為肌纖蛋白(MYOC)；(110)眼睛病狀與NMO相關，且治療性產物為抗補體C5單株抗體；(111)眼睛病狀與NMO相關，且治療性產物為C-C基元趨化因子受體5 (CCR5) siRNA、CCR5 shRNA、siRNA或CCR5 miRNA (較佳地，CCR5 miRNA)；(112)眼睛病狀與NMO相關，且治療性產物為抗CD19單株抗體；(113)眼睛病狀與視紫質突變相關性色素性視網膜炎相關，且治療性產物為光敏感通道蛋白-1 (ChR1)，其包括ChR1之人類同源物；(114)眼睛病狀與視紫質突變相關性色素性視網膜炎相關，且治療性產物為光敏感通道蛋白-2 (ChR2)，其包括ChR2之人類同源物；(115)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為睫狀神經營養因子(CNTF)；(116)眼睛病狀與常染色體隱性色素性視網膜炎相關，且治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)；(117)眼睛病狀與常染色體隱性色素性視網膜炎相關，且治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分2 (CRB2)；(118)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)；(119)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為視紫質(RHO)；(120)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為神經生長因子(NGF)；(121)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為核因子紅血球系2樣2 (NRF2)；(122)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為色素上皮衍生因子(PEDF)；(123)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為麩胱甘肽S-轉移酶PI 1 (GSTP1)，亦稱為PI；(124)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為視桿源性視錐活力因子(RDCVF)；(125)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為視紫質(RHO)；(126)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為視黃醛結合蛋白1 (RLBP1)；(127)眼睛病狀與斯特格氏病相關，且治療性產物為抗補體C5適體；(128)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為雙同源盒4 (DUX4)；(129)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為NLR家族含Pyrin域3 (NLRP3)；(130)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為脾相關酪胺酸激酶(SYK)；(131)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為促腎上腺皮質激素(ACTH)；(132)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為半胱天冬酶1 (CASP1)；(133)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗CD59治療性產物(諸如抗CD59治療性蛋白質(例如抗CD59單株抗體)，或抗CD59治療性RNA (例如抗CD59 shRNA、抗CD59 siRNA或抗CD59 miRNA)，較佳抗CD59單株抗體)；(134)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(135)眼睛病狀與角膜新血管生成相關，且治療性產物為胰島素受體受質1 (IRS1)；(136)眼睛病狀與角膜新血管生成相關，且治療性產物為NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)；(137)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)；(138)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為α-2-抗纖維蛋白溶酶(A2AP)；(139)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為纖維蛋白溶酶原(PLG)；(140)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物可為生長激素；(141)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為胰島素樣生長因子1 (IGF1)，其中IGF1可與生長激素組合使用；(142)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為介白素1β (IL1B)；(143)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為血管收縮素I轉化酶2 (ACE2)，其中ACE2可與IL1B組合使用；(144)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為IRS1；(145)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為抗整合素寡肽；(146)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體；(147)眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病(Graves' ophthalmopathy) (亦稱為葛瑞夫茲氏眼眶病)相關，且治療性產物為抗CD40單株抗體；(148)眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且治療性產物為抗胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)單株抗體；(149)眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且治療性產物為抗胰島素樣生長因子2受體(IGF2R)單株抗體；(150)眼睛病狀與DME相關，且治療性產物為抗整合素寡肽；(151)眼睛病狀與DME相關，且治療性產物為抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體；(152)眼睛病狀與DME相關，且治療性產物為RTP801 siRNA；(153)眼睛病狀與多發性硬化症(MS)相關之視力喪失相關，且治療性產物為ND1；(154)眼睛病狀與近視相關，且治療性產物為基質金屬蛋白酶2 (MMP2) RNAi；(155)眼睛病狀與X性聯隱性眼白化病相關，且治療性產物為G蛋白偶合受體143 (GPR143)；(156)眼睛病狀與1型眼皮膚白化病相關，且治療性產物為酪胺酸酶(TYR)；(157)眼睛病狀與視神經炎相關，且治療性產物為半胱天冬酶2 (CASP2)；(158)眼睛病狀與視神經炎相關，且治療性產物為抗含白胺酸富集重複序列及Ig域之蛋白質1 (LINGO1)單株抗體；或(159)眼睛病狀與息肉狀脈絡膜血管病變相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或抗補體適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體/適體、抗補體C1s單株抗體/適體、抗補體C2單株抗體/適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體。
在本文所述之方法的某些實施例中，眼睛病狀與X性聯色素性視網膜炎(XLRP)相關，且治療性產物為色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)。在前述方法中之任一者的某些實施例中，眼睛病狀與全色盲(ACHM)相關，且治療性產物為環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)。在前述方法中之任一者的某些實施例中，眼睛病狀與全色盲(例如CNGA3連鎖之全色盲)相關，且治療性產物為環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)。在前述方法中之任一者的某些實施例中，眼睛病狀與二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良相關，且治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)。
在本文所述之方法的某些實施例中，眼睛病狀與以下相關：(1) Batten-CLN1，且治療性產物為棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)；(2) Batten-CLN2，且治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)；(3) Batten-CLN3，且治療性產物為Battenin (CLN3)；(4)葡萄膜炎，且治療性產物為抗介白素6 (IL6)單株抗體；(5)葡萄膜炎，且治療性產物為抗TNF-α (TNF)單株抗體；(6)糖尿病性黃斑水腫(DME)，且治療性產物為抗IL6單株抗體；(7)紅綠色盲，且治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)；(8)紅綠色盲，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(9)藍錐細胞單色視，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(10)萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)，且治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)；(11)萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)，且治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)；(12)萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)，且治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)；(13)萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)，且治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)；(14)萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)，且治療性產物為視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)；(15)萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)，且治療性產物為視黃醇去氫酶12 (RDH12)；(16)萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)，且治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)；(17)萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)，且治療性產物為電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)；(18)萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)；(19) LHON，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)；(20) LHON，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)；(21)視神經脊髓炎(NMO)，且治療性產物為抗補體單株抗體或抗補體適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(22) NMO，且治療性產物為抗IL6單株抗體；(23)葡萄膜炎，且治療性產物為抗補體C5單株抗體；(24)葡萄膜炎，且治療性產物為血管收縮素I轉化酶(ACE)；(25)葡萄膜炎，且治療性產物為介白素10 (IL10)；(26)葡萄膜炎，且治療性產物為抗TNF單株抗體；(27) X性聯視網膜劈裂症(XLRS)，且治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)；(28)巴德-畢德氏症候群1，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)；(29)巴德-畢德氏症候群3，且治療性產物為ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)；(30)巴德-畢德氏症候群5，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)；(31)巴德-畢德氏症候群6，且治療性產物為麥-考症候群(MKKS)；(32)巴德-畢德氏症候群10，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)；(33)巴德-畢德氏症候群11，且治療性產物為含三聯基元32 (TRIM32)；(34)巴德-畢德氏症候群13，且治療性產物為MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)；(35)巴德-畢德氏症候群18，且治療性產物為BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)；(36)巴德-畢德氏症候群19，且治療性產物為纖毛內轉運27 (IFT27)；(37)視錐細胞營養不良，且治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；(38)色素性視網膜炎13，且治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)；(39)色素性視網膜炎37，且治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；或(40)貝斯特氏病，且治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。
在本文所述之方法的某些實施例中，眼睛病狀與二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良相關，且治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)。
在本文所述之方法的某些實施例中，眼睛病狀與以下相關：(1) Batten-CLN2，且治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)；(2) 1型亞瑟氏症，且治療性產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)；(3) 1型亞瑟氏症，且治療性產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)；(4) 2型亞瑟氏症，且治療性產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)；(5) 2型亞瑟氏症，且治療性產物為Usherin (USH2A)；(6) 3型亞瑟氏症，且治療性產物為Clarin 1 (CLRN1)；(7) 斯特格氏病，且治療性產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)；(8)斯特格氏病，且治療性產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)；(9)紅綠色盲，且治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)；(10)紅綠色盲，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(11)藍錐細胞單色視，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(12)萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)，且治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)；(13)萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)，且治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)；(14)萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)，且治療性產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)；(15)萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)，且治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)；(16)萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)，且治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)；(17)萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)，且治療性產物為菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)；(18)萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)，且治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)；(19)萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)，且治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)；(20)萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)，且治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)；(21) LHON，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)；(22) LHON，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)；(23)無脈絡膜症，且治療性產物為Rab護航蛋白1 (CHM)；(24)X性聯視網膜劈裂症(XLRS)，且治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)；(25)巴德-畢德氏症候群1，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)；(26)巴德-畢德氏症候群6，且治療性產物為麥-考症候群(MKKS)；(27)巴德-畢德氏症候群10，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)；(28)視錐細胞營養不良，且治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；(29)視神經萎縮，且治療性產物為OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)；(30)色素性視網膜炎1，且治療性產物為RP1軸突微管相關(RP1)；(31)色素性視網膜炎2，且治療性產物為ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)；(32)色素性視網膜炎7，且治療性產物為外周蛋白2 (PRPH2)；(33)色素性視網膜炎11，且治療性產物為前體mRNA加工因子31 (PRPF31)；(34)色素性視網膜炎13，且治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)；(35)色素性視網膜炎37，且治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；(36)色素性視網膜炎38，且治療性產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)；(37)色素性視網膜炎40，且治療性產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)；(38)色素性視網膜炎41，且治療性產物為Prominin 1 (PROM1)；(39)色素性視網膜炎56，且治療性產物為感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)；(40)色素性視網膜炎62，且治療性產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)；(41)色素性視網膜炎80，且治療性產物為纖毛內轉運140 (IFT140)；或(42)貝斯特氏病，且治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。
在本文所述之方法的某些實施例中，眼睛病狀與X性聯色素性視網膜炎(XLRP)相關，且治療性產物為色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)。在前述方法中之任一者的某些實施例中，眼睛病狀與全色盲相關，且治療性產物為環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)；或與全色盲(例如CNGA3連鎖之全色盲)相關，且治療性產物為環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)。
在本文所述之方法的某些實施例中，重組病毒載體進一步包含編碼啟動子或強化子-啟動子之核苷酸序列，該編碼啟動子或強化子-啟動子之核苷酸序列可操作地連接於編碼治療性產物之核苷酸序列，且其中該啟動子或強化子-啟動子為普遍存在的啟動子/強化子-啟動子、眼睛特異性啟動子/強化子-啟動子或視網膜特異性啟動子/強化子-啟動子。
在本文所述之方法的某些實施例中，重組病毒載體進一步包含編碼啟動子或強化子-啟動子之核苷酸序列，該編碼啟動子或強化子-啟動子之核苷酸序列可操作地連接於編碼治療性產物之核苷酸序列，且其中該啟動子或強化子-啟動子為：(1) CAG啟動子；(2) CBA啟動子；(3) CMV啟動子；(4) 1.7 kb紅色視錐視蛋白啟動子(PR1.7啟動子)；(5)視紫質激酶(GRK1)感光器特異性強化子-啟動子(參見例如Young等人, 2003, Retinal Cell Biology；44:4076-4085)；(6) hCARp啟動子，其為人類視錐抑制蛋白啟動子；(7) hRKp，其為視紫質激酶啟動子；(8)視錐感光器特異性人類抑制蛋白3 (ARR3)啟動子；(9)視紫質啟動子；或(10) U6啟動子(尤其當治療性產物為諸如shRNA及siRNA之小RNA時)。
在本文所述之方法的某些實施例中，重組病毒載體進一步包含編碼視錐特異性啟動子之核苷酸序列，該編碼視錐特異性啟動子之核苷酸序列可操作地連接於編碼治療性產物之核苷酸序列，且其中：(1)眼睛病狀與紅綠色盲相關，且治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)；(2)眼睛病狀與紅綠色盲相關，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(3)眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(4)眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；或(5)眼睛病狀與藍錐細胞單色視(BCM)相關，且治療性產物為L視蛋白(OPN1MW)。
在本文所述之方法的某些實施例中，投與步驟將治療有效量之治療性產物遞送至該人類個體之視網膜。
在本文所述之方法的某些實施例中，治療有效量之治療性產物係由該人類個體之人類視網膜細胞產生。
在本文所述之方法的某些實施例中，治療有效量之治療性產物係由該人類個體之外界膜中的人類感光細胞、水平細胞、雙極細胞、無軸突神經細胞、視網膜神經節細胞及/或視網膜色素上皮細胞產生。
在本文所述之方法的某些實施例中，人類感光細胞為視錐細胞及/或視桿細胞。
在本文所述之方法的某些實施例中，視網膜神經節細胞為侏儒細胞、陽傘細胞、雙層細胞、巨型視網膜神經節細胞、感光神經節細胞及/或穆勒神經膠質細胞(Müller glia)。
在本文所述之方法的某些實施例中，重組病毒載體為rAAV載體(例如rAAV8、rAAV2、rAAV2tYF或rAAV5載體)。
在本文所述之方法的某些實施例中，其中重組病毒載體為rAAV8載體。
在本文所述之方法的某些實施例中，該方法進一步包含在投與步驟之後，使用紅外熱像儀監測眼睛表面溫度的步驟。在一特定實施例中，紅外熱像儀為FLIR T530紅外熱像儀。
在本文所述之方法的某些實施例中，遞送至眼睛包含遞送至眼睛之視網膜、脈絡膜及/或玻璃體液。
在某些實施例中，用於遞送治療性產物之重組載體應對眼睛之細胞，例如人類視網膜細胞(例如感光細胞)具有向性。此類載體可包括非複製型重組腺相關病毒載體(「rAAV」)，尤其帶有AAV8衣殼之彼等載體為較佳的。然而，可使用其他重組病毒載體，包括但不限於重組慢病毒載體、牛痘病毒載體或稱為「裸DNA」構築體之非病毒表現載體。較佳地，治療性產物之表現應藉由適當的表現控制元件來控制，例如(1) CAG啟動子；(2) CBA啟動子；(3) CMV啟動子；(4) PR1.7啟動子；(5)視紫質激酶(GRK1)感光器特異性強化子-啟動子；(6) hCARp啟動子；(7) hRKp；(8)視錐感光器特異性人類抑制蛋白3 (ARR3)啟動子；(9)視紫質啟動子；或(10) U6啟動子，且可包括增強由載體驅動之治療性產物之表現的其他表現控制元件(例如內含子，諸如雞β-肌動蛋白內含子、小鼠微小病毒(MVM)內含子、人類因子IX內含子(例如FIX截短之內含子1)、β-球蛋白剪接供體/免疫球蛋白重鏈剪接受體內含子、腺病毒剪接供體/免疫球蛋白剪接受體內含子、SV40晚期剪接供體/剪接受體(19S/16S)內含子及雜交腺病毒剪接供體/IgG剪接受體內含子，及polyA信號，諸如兔β-球蛋白polyA信號、人類生長激素(hGH) polyA信號、SV40晚期polyA信號、合成polyA (SPA)信號及牛生長激素(bGH) polyA信號)。參見例如Powell及Rivera-Soto, 2015, Discov. Med., 19(102):49-57。
在本文所述之方法的某些實施例中，將治療有效劑量之重組載體投與(1)至無需玻璃體切除術之視網膜下腔(例如經由脈絡膜上腔或經由外周注射)，(2)至脈絡膜上腔，(3)至鞏膜之外表面(亦即近鞏膜投與)，(4)經由玻璃體切除術至視網膜下腔，或(5)至玻璃體腔，體積範圍介於50-100 μl或100-500 μl，較佳100-300 μl且最佳250 μl，視投與方法而定。在某些實施例中，治療有效劑量之重組載體以100 μl或更小之體積，例如以50-100 μl之體積脈絡膜上投與。在某些實施例中，將治療有效劑量之重組載體以500 μl或更小之體積，例如以10-20 μl、20-50 μl、50-100 μl、100-200 μl、200-300 μl、300-400 μl或400-500 μl之體積投與至鞏膜之外表面(例如藉由後部近鞏膜儲槽術)。在某些實施例中，治療有效劑量之重組載體經由外周注射以範圍介於50-100 μl或100-500 μl，較佳100-300 μl且最佳250 μl之體積投與至視網膜下腔。
在某些實施例中，評定視動眼球震顫(OKN)以量測患者之視力。在某些實施例中，OKN可使用例如Cetinkaya等人, 2008, Eye, 22:77-81；Hyon等人, 2010, IOVS, 51(2): 752-757；Han等人, 2011, IOVS, 52(10): 7492-7497；Wester等人, 2007, IOVS, 48(10):4542-4548；Palmowski-Wolfe等人, 2019, J. AAPOS, 23(4): e49；Turuwhenua等人, Objective Assessment of Visual Performance Using Optokinetic Nystagmus in Young Children, 2016年10月, ＜anzctr.org.au/AnzctrAttachments/371914-OKN%20protocol.pdf＞；及自網際網路＜prnewswire.com/news-releases/objective-acuity-and-aier-eye-hospital-group-announce-a-strategic-cooperation-agreement-300891165.html＞擷取之Objective Acuity and Aier Eye Hospital Group Announce Strategic Cooperation Agreement, Cision PR Newswire, 2019年7月25日中所描述及揭示之方法及/或裝置來執行，該等文獻各自以全文引用的方式併入本文中。
在不受理論束縛的情況下，此視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN可用於量測言語前及/或非言語患者之視力。在某些實施例中，OKN用於量測1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。在某些實施例中，當患者正在觀看iPad上之運動時，使用iPad經由偵測OKN反射來量測視力。
在不受理論束縛的情況下，此視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN可用於量測言語前及/或非言語患者之視力。在某些實施例中，OKN用於量測小於1.5個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。在另一特定實施例中，OKN用於量測1-2個月、2-3個月、3-4個月、4-5個月、5-6個月、6-7個月、7-8個月、8-9個月、9-10個月、10-11個月、11個月至1歲、1-1.5歲、1.5-2歲、2-2.5歲、2.5-3歲、3-3.5歲、3.5-4歲、4-4.5歲或4.5-5歲患者的視力。在另一特定實施例中，OKN用於量測6個月至5歲患者的視力。在某些實施例中，當患者正在觀看iPad上之運動時，使用iPad經由偵測OKN反射來量測視力。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼三肽基-肽酶1 (TPP1)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼三肽基-肽酶1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼TPP1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼三肽基-肽酶1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的至多5歲患者處於該年齡及/或上述年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼PPT1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼PPT1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼PPT1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼Battenin (CLN3)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼Battenin (CLN3)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼Battenin (CLN3)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼Battenin (CLN3)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的至多5歲患者處於該年齡及/或上述年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的至多5歲患者處於該年齡及/或上述年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼含主要易化子超家族域8 (MFSD8)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的至多5歲患者處於該年齡及/或上述年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼MFSD8之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼MFSD8之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼MFSD8之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
經由玻璃體切除術進行視網膜下投藥為由經過訓練之視網膜醫師執行的外科手術，其涉及在局部麻醉下對個體進行玻璃體切除術，且將基因療法視網膜下注射至視網膜中(參見例如Campochiaro等人, 2017, Hum Gen Ther 28(1):99-111，其以全文引用的方式併入本文中)。或者，可在無需玻璃體切除術之情況下進行視網膜下投藥。在一特定實施例中，無需玻璃體切除術之視網膜下投藥係使用將藥物注射至視網膜下腔中之脈絡膜上導管經由脈絡膜上腔來進行，諸如包含導管之視網膜下藥物遞送裝置，該導管可插入且通過脈絡膜上腔向後極穿隧，小針頭在後極注入視網膜下腔(參見例如Baldassarre等人, 2017, Subretinal Delivery of Cells via the Suprachoroidal Space: Janssen Trial. 在Schwartz等人(編) Cellular Therapies for Retinal Disease, Springer, Cham中；國際專利申請公開案第WO 2016/040635 A1號；其各自以全文引用的方式併入本文中)。在另一特定實施例中，無需玻璃體切除術之視網膜下投藥係經由外周注射來進行。換言之，重組載體可藉由外周注射至視網膜中(亦即，位於眼睛後部之視神經盤、中央凹及黃斑外周)遞送至視網膜下腔，而無需進行玻璃體切除術。此可藉由經玻璃體注射來實現。脈絡膜上投藥程序涉及將藥物投與至眼睛之脈絡膜上腔，且通常使用脈絡膜上藥物遞送裝置來進行，諸如具有微針之顯微注射器(參見例如Hariprasad, 2016, Retinal Physician 13: 20-23；Goldstein, 2014, Retina Today 9(5): 82-87；其各自以全文引用的方式併入本文中)。
根據本文所述之本發明，可用於將重組載體沈積於脈絡膜上腔中之脈絡膜上藥物遞送裝置包括但不限於由Clearside® Biomedical, Inc.製造之脈絡膜上藥物遞送裝置(參見例如Hariprasad, 2016, Retinal Physician 13: 20-23)及MedOne脈絡膜上導管。根據本文所述之本發明，可用於經由脈絡膜上腔將重組載體沈積於視網膜下腔中之視網膜下藥物遞送裝置包括但不限於由Janssen Pharmaceuticals, Inc.製造之視網膜下藥物遞送裝置(參見例如國際專利申請公開案第WO 2016/040635 A1號)。根據本文所述之本發明，可用於經由外周注射方法將重組載體沈積於視網膜下腔中之視網膜下藥物遞送裝置包括但不限於可經由眼睛之上側或下側(例如在2點鐘或10點鐘位置)插入鞏膜中且完全穿過玻璃體以注射至另一側視網膜的尖銳的針頭，及可插入鞏膜中以允許將視網膜下套管插入眼睛且穿過玻璃體到達所需注射區域的套管針。在一特定實施例中，投與至鞏膜外表面係藉由包含套管之近鞏膜藥物遞送裝置來進行，該套管之尖端可插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。
脈絡膜上、視網膜下、近鞏膜、玻璃體內、結膜下及/或視網膜內投藥應致使可溶性治療性產物遞送至視網膜、玻璃體液及/或水狀液。由視網膜細胞，例如視桿細胞、視錐細胞、視網膜色素上皮細胞、水平細胞、雙極細胞、無軸突神經細胞、神經節細胞及/或穆勒細胞表現治療性產物致使治療性產物在視網膜、玻璃體液及/或水狀液中遞送及維持。在特定實施例中，因為治療性產物為連續產生的，所以維持低濃度可為有效的。可在來自經治療之眼睛之前房的玻璃體液及/或水狀液的患者樣品量測治療性產物之濃度。或者，可藉由量測患者之治療性產物的血清濃度來估計及/或監測玻璃體液濃度 - 全身與玻璃體暴露於治療性產物之比率為約1:90,000。(例如參見Xu L等人, 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624, 第1621頁及第1623頁之表5中報告之蘭尼單抗的玻璃體液及血清濃度，其以全文引用的方式併入本文中)。
適用於脈絡膜上、視網膜下、近鞏膜、玻璃體內、結膜下及/或視網膜內投藥的醫藥組合物包含重組載體於包含生理學上相容之水性緩衝液、界面活性劑及視情況存在之賦形劑的調配物緩衝液中之懸浮液。
本發明相對於標準護理治療具有若干優點，該等標準護理治療涉及反複眼部注射高劑量治療性產物大丸劑，其隨時間推移消散導致最高及最低含量。與反複注射治療性產物相反，治療性產物之持續表現使作用部位處存在之抗體含量更一致，風險更低且對於患者而言更方便，因為需要進行的注射次數更少，使得醫生問診減少。一致的蛋白質產生可能會使得臨床結果更好，因為不太可能發生視網膜水腫反彈。此外，在某些實施例中，由於在轉譯期間及之後存在不同的微環境，由重組載體表現之治療性產物以與直接注射之治療性產物不同的方式進行轉譯後修飾。在不受任何特定理論束縛的情況下，此導致治療性產物具有不同的擴散、生物活性、分佈、親和力、藥物動力學及免疫原性特徵，因此與直接注射之治療性產物相比，遞送至作用部位之治療性產物為「改良型生物藥(biobetter)」。
另外，當治療性產物為抗體時，由重組載體活體內表現之抗體不太可能含有與重組技術產生之抗體相關的降解產物，諸如蛋白質聚集及蛋白質氧化。由於蛋白質濃度高、與製造設備及容器之表面相互作用以及利用某些緩衝液系統之純化，聚集為與蛋白質產生及儲存相關之問題。此等促進聚集之條件在基因療法之抗體表現中不存在。氧化，諸如甲硫胺酸、色胺酸及組胺酸氧化，亦與蛋白質產生及儲存相關，且由應激的細胞培養條件、金屬及空氣接觸以及緩衝劑及賦形劑中之雜質引起。由重組載體活體內表現之蛋白質亦可在應激條件中氧化。然而，人類及許多其他生物體均配備有抗氧化防禦系統，其不僅降低氧化應激，且有時亦修復及/或逆轉氧化。因此，活體內產生之蛋白質不太可能呈氧化形式。聚集及氧化均可能影響效力、藥物動力學(清除率)及免疫原性。
與小分子藥物不同，生物製劑通常包含許多具有不同修飾或形式之變體的混合物，該等變體具有不同的效力、藥物動力學及安全概況。對於在眼睛細胞中表現後經轉譯後修飾之治療性產物，在基因療法或蛋白質療法中產生之每一分子不需要完全經轉譯後修飾。相反，所產生之此類治療性產物群體應具有足夠的轉譯後修飾(例如群體之約1%至約10%、群體之約1%至約20%、群體之約1%至約50%或群體之約10%至約50%)以證明功效。本文提供之基因療法治療的目標為藉由最少的干預/侵入性手術來減緩或阻止眼睛病狀之進展，且減緩或防止視力喪失。可藉由量測BCVA (最佳矯正視力)、眼內壓、裂隙燈活組織檢視法、間接檢眼鏡檢查法、SD-OCT (SD-光學相干斷層攝影術)、視網膜電圖描記(ERG)來監測功效。亦可監測視力喪失、感染、炎症及其他安全事件(包括視網膜剝離)之跡象。在某些實施例中，可監測視網膜厚度以判定本文所提供之治療的功效。在不受任何特定理論束縛的情況下，在特定實施例中，可將視網膜厚度用作臨床讀數，其中視網膜厚度之減小愈大或視網膜增厚之前的時間愈長，則治療愈有效。視網膜厚度可例如藉由SD-OCT來判定。SD-OCT為一種三維成像技術，其使用低相干干涉術來判定回波時間延遲劑自目標物體反射之反向散射光的量值。OCT可用於以3至15 μm軸向解析度掃描組織樣品(例如視網膜)之層，且SD-OCT與以前的技術形式相比提高軸向解析度及掃描速度(Schuman, 2008, Trans. Am. Opthamol. Soc. 106:426-458)。視網膜功能可例如藉由ERG判定。ERG為經FDA批准用於人類之視網膜功能的非侵入性電生理測試，其檢查眼睛之感光細胞(視桿及視錐)及其連接之神經節細胞，特別是其對閃光刺激之反應。 1.1          說明性實施例 1.1.1     第1組 1.      一種無需玻璃體切除術以用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。 2.      如段落1之方法，其中該投與步驟包含經由該人類個體之眼睛的脈絡膜上腔向該人類個體之眼睛的視網膜下腔投與該重組病毒載體治療性產物。 3.      如段落2之方法，其中該投與步驟係藉由使用包含導管之視網膜下藥物遞送裝置，該導管可插入且通過脈絡膜上腔向後極穿隧，小針頭在後極注入視網膜下腔。 4.      如段落3之方法，其中該投與步驟包含將該視網膜下藥物遞送裝置之導管插入且穿隧通過脈絡膜上腔。 5.      一種用於治療眼睛病狀之脈絡膜上投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的脈絡膜上腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀。 6.      如段落5之方法，其中該投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將該重組病毒載體注入脈絡膜上腔。 7.      如段落5或6之方法，其中該脈絡膜上藥物遞送裝置為顯微注射器。 8.      一種用於治療眼睛病狀之向鞏膜外表面投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的鞏膜外表面投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀。 9.      如段落8之方法，其中該投與步驟係藉由使用包含套管之近鞏膜藥物遞送裝置，該套管之尖端可插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。 10.   如段落9之方法，其中該投與步驟包含將該套管之尖端插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。 11.   如段落1-10中任一項之方法，其中該治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。 12.   如段落1-11中任一項之方法，其中該眼睛病狀與新生血管性年齡相關性黃斑變性(nAMD)不相關。 13.   一種偕同玻璃體切除術以用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術，且其中該治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。 14.   如段落13之方法，其中該玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。 15.   一種用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向位於需要治療之人類個體之眼睛後部的視神經盤、中央凹及黃斑外周的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。 16.   如段落15之方法，其中該投與步驟係藉由經玻璃體注射。 17.   如段落16之方法，其中該經玻璃體注射包含經由眼睛之上側或下側將尖銳的針頭插入鞏膜中，且使該尖銳的針頭完全穿過玻璃體，以將該重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。 18.   如段落16之方法，其中該經玻璃體注射包含將套管針插入鞏膜中，且經由該套管針插入套管並穿過玻璃體，以將該重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。 19.   如段落15-18中任一項之方法，其中該治療性產物為抗hVEGF抗體。 20.   如段落19之方法，其中該抗hVEGF抗體為抗hVEGF抗原結合片段。 21.   如段落20之方法，其中該抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab')2 或單鏈可變片段(scFv)。 22.   如段落19-21中任一項之方法，其中該抗hVEGF抗體含有包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。 23.   如段落19-21中任一項之方法，其中該抗hVEGF抗體包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 17-19或SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3。 24.   如段落19-23中任一項之方法，其中該眼睛病狀與nAMD、乾性年齡相關性黃斑變性(乾性AMD)、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)相關。 25.   如段落19-23中任一項之方法，其中該眼睛病狀與nAMD相關。 26.   如段落1-11及13-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與Batten-CLN1相關，且該治療性產物為棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)； (2)該眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且該治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)； (3)該眼睛病狀與Batten-CLN3相關，且該治療性產物為Battenin (CLN3)； (4)該眼睛病狀與Batten-CLN6相關，且該治療性產物為CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)； (5)該眼睛病狀與Batten-CLN7相關，且該治療性產物為含主要易化子超家族域8 (MFSD8)； (6)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)； (7)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)； (8)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)； (9)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Usherin (USH2A)； (10)該眼睛病狀與3型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Clarin 1 (CLRN1)； (11)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)； (12)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)； (13)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗介白素6 (IL6)單株抗體； (14)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF-α (TNF)單株抗體； (15)該眼睛病狀與糖尿病性黃斑水腫(DME)相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (16)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (17)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (18)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (19)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且該治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)； (20)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)； (21)該眼睛病狀與LCA 3相關，且該治療性產物為精子形成相關7 (SPATA7)； (22)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)相關，且該治療性產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)； (23)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦5 (LCA 5)相關，且該治療性產物為Lebercilin (LCA5)； (24)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦6 (LCA 6)相關，且該治療性產物為RPGR相互作用蛋白1 (RPGRIP1)； (25)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且該治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)； (26)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (27)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)相關，且該治療性產物為菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)； (28)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)相關，且該治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)； (29)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且該治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)； (30)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)相關，且該治療性產物為視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)； (31)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)相關，且該治療性產物為視黃醇去氫酶12 (RDH12)； (32)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦14 (LCA 14)相關，且該治療性產物為卵磷脂視黃醇醯基轉移酶(LRAT)； (33)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且該治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)； (34)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)相關，且該治療性產物為電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)； (35)該眼睛病狀與萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)； (36)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)； (37)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)； (38)該眼睛病狀與視神經脊髓炎(NMO)相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (39)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (40)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (41)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為血管收縮素I轉化酶(ACE)； (42)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為介白素10 (IL10)； (43)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF單株抗體； (44)該眼睛病狀與無脈絡膜症相關，且該治療性產物為Rab護航蛋白1 (CHM)； (45)該眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且該治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)； (46)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)； (47)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群2相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群2 (BBS2)； (48)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群3相關，且該治療性產物為ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)； (49)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群4相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群4 (BBS4)； (50)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群5相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)； (51)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且該治療性產物為麥-考症候群(MKKS)； (52)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群7相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群7 (BBS7)； (53)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群8相關，且該治療性產物為三十四肽重複域8 (TTC8)； (54)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群9相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群9 (BBS9)； (55)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)； (56)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群11相關，且該治療性產物為含三聯基元32 (TRIM32)； (57)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群12相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群12 (BBS12)； (58)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群13相關，且該治療性產物為MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)； (59)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群14相關，且該治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)； (60)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群15相關，且該治療性產物為含WD重複之平面細胞極性效應子(WDPCP)； (61)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群16相關，且該治療性產物為血清學定義之結腸癌抗原8 (SDCCAG8)； (62)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群17相關，且該治療性產物為白胺酸拉鏈轉錄因子樣1 (LZTFL1)； (63)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群18相關，且該治療性產物為BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)； (64)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群19相關，且該治療性產物為纖毛內轉運27 (IFT27)； (65)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)； (66)該眼睛病狀與視神經萎縮相關，且該治療性產物為OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)； (67)該眼睛病狀與色素性視網膜炎1相關，且該治療性產物為RP1軸突微管相關(RP1)； (68)該眼睛病狀與色素性視網膜炎2相關，且該治療性產物為ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)； (69)該眼睛病狀與色素性視網膜炎7相關，且該治療性產物為外周蛋白2 (PRPH2)； (70)該眼睛病狀與色素性視網膜炎11相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子31 (PRPF31)； (71)該眼睛病狀與色素性視網膜炎12相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (72)該眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)； (73)該眼睛病狀與色素性視網膜炎25相關，且該治療性產物為閉眼同源物(EYS)； (74)該眼睛病狀與色素性視網膜炎28相關，且該治療性產物為FAM161中心體蛋白A (FAM161A)； (75)該眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且該治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)； (76)該眼睛病狀與色素性視網膜炎38相關，且該治療性產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)； (77)該眼睛病狀與色素性視網膜炎40相關，且該治療性產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)； (78)該眼睛病狀與色素性視網膜炎41相關，且該治療性產物為Prominin 1 (PROM1)； (79)該眼睛病狀與色素性視網膜炎43相關，且該治療性產物為磷酸二酯酶6A (PDE6A)； (80)該眼睛病狀與色素性視網膜炎56相關，且該治療性產物為感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)； (81)該眼睛病狀與色素性視網膜炎62相關，且該治療性產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)； (82)該眼睛病狀與色素性視網膜炎80相關，且該治療性產物為纖毛內轉運140 (IFT140)； (83)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (84)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗攻膜複合物(MAC)單株抗體； (85)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為HtrA絲胺酸肽酶1 (HTRA1)； (86)該眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且該治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)； (87)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為補體因子B反義寡核苷酸； (88)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗β-類澱粉蛋白單株抗體； (89)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為CD59糖蛋白(CD59)； (90)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-1 (ChR1)； (91)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-2 (ChR2)，亦即在萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii )中發現之感光蛋白； (92)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗補體因子C5a適體； (93)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗補體因子D單株抗體； (94)該眼睛病狀與年齡相關性視網膜神經節細胞(RGC)變性相關，且該治療性產物為DnaJ熱休克蛋白家族(Hsp40)成員C3 (DNAJC3)； (95)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視(BCM)相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (96)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為β-2腎上腺素受體siRNA； (97)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為半胱天冬酶-2 (CASP2)； (98)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為胰島素受體受質1 (IRS1)； (99)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為HIF-1反應性蛋白RTP801 (RTP801)； (100)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為轉化生長因子β2 (TGFB2)； (101)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為腦源性神經營養因子(BDNF)； (102)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為睫狀神經營養因子(CNTF)； (103)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為前列腺素內過氧化物合成酶2 (PTGS2)； (104)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為前列腺素F受體(PTGFR)； (105)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為玻尿酸酶； (106)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為色素上皮衍生因子(PEDF)； (107)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為血管內皮生長因子(VEGF)； (108)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為胎盤生長因子(PGF)； (109)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為肌纖蛋白(MYOC)； (110)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (111)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為C-C基元趨化因子受體5 (CCR5) siRNA； (112)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗CD19單株抗體； (113)該眼睛病狀與視紫質突變相關性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-1 (ChR1)； (114)該眼睛病狀與視紫質突變相關性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-2 (ChR2)； (115)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為睫狀神經營養因子(CNTF)； (116)該眼睛病狀與常染色體隱性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (117)該眼睛病狀與常染色體隱性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分2 (CRB2)； (118)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)； (119)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視紫質(RHO)； (120)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為神經生長因子(NGF)； (121)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為核因子紅血球系2樣2 (NRF2)； (122)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為色素上皮衍生因子(PEDF)； (123)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為麩胱甘肽S-轉移酶PI 1 (GSTP1)； (124)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視桿源性視錐活力因子(RDCVF)； (125)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視紫質(RHO)； (126)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視黃醛結合蛋白1 (RLBP1)； (127)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為抗補體C5適體； (128)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為雙同源盒4 (DUX4)； (129)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為NLR家族含Pyrin域3 (NLRP3)； (130)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為脾相關酪胺酸激酶(SYK)； (131)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為促腎上腺皮質激素(ACTH)； (132)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為半胱天冬酶1 (CASP1)； (133)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗CD59單株抗體； (134)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗補體C5適體； (135)該眼睛病狀與角膜新血管生成相關，且該治療性產物為胰島素受體受質1 (IRS1)； (136)該眼睛病狀與角膜新血管生成相關，且該治療性產物為NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)； (137)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)； (138)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為α-2-抗纖維蛋白溶酶(A2AP)； (139)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為纖維蛋白溶酶原(PLG)； (140)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為生長激素； (141)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為胰島素樣生長因子1 (IGF1)； (142)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為介白素1β (IL1B)； (143)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為血管收縮素I轉化酶2 (ACE2)； (144)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為IRS1； (145)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為抗整合素寡肽； (146)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體； (147)該眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且該治療性產物為抗CD40單株抗體； (148)該眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且該治療性產物為抗胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)單株抗體； (149)該眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且該治療性產物為抗胰島素樣生長因子2受體(IGF2R)單株抗體； (150)該眼睛病狀與DME相關，且該治療性產物為抗整合素寡肽； (151)該眼睛病狀與DME相關，且該治療性產物為抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體； (152)該眼睛病狀與DME相關，且該治療性產物為RTP801 siRNA； (153)該眼睛病狀與多發性硬化症(MS)相關之視力喪失相關，且該治療性產物為ND1； (154)該眼睛病狀與近視相關，且該治療性產物為基質金屬蛋白酶2 (MMP2) RNAi； (155)該眼睛病狀與X性聯隱性眼白化病相關，且該治療性產物為G蛋白偶合受體143 (GPR143)； (156)該眼睛病狀與1型眼皮膚白化病相關，且該治療性產物為酪胺酸酶(TYR)； (157)該眼睛病狀與視神經炎相關，且該治療性產物為半胱天冬酶2 (CASP2)； (158)該眼睛病狀與視神經炎相關，且該治療性產物為抗含白胺酸富集重複序列及Ig域之蛋白質1 (LINGO1)單株抗體；或 (159)該眼睛病狀與息肉狀脈絡膜血管病變相關，且該治療性產物為抗補體C5適體。 27.   如段落1-11及15-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與X性聯色素性視網膜炎(XLRP)相關，且該治療性產物為色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)； (2)該眼睛病狀與全色盲(ACHM)相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)； (3)該眼睛病狀與全色盲相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)；或 (4)該眼睛病狀與二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)。 28.   如段落1-11及13-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與Batten-CLN1相關，且該治療性產物為棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)； (2)該眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且該治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)； (3)該眼睛病狀與Batten-CLN3相關，且該治療性產物為Battenin (CLN3)； (4)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗介白素6 (IL6)單株抗體； (5)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF-α (TNF)單株抗體； (6)該眼睛病狀與糖尿病性黃斑水腫(DME)相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (7)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (8)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (9)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (10)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且該治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)； (11)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)； (12)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且該治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)； (13)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且該治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)； (14)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)相關，且該治療性產物為視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)； (15)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)相關，且該治療性產物為視黃醇去氫酶12 (RDH12)； (16)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且該治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)； (17)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)相關，且該治療性產物為電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)； (18)該眼睛病狀與萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)； (19)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)； (20)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)； (21)該眼睛病狀與視神經脊髓炎(NMO)相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (22)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (23)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (24)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為血管收縮素I轉化酶(ACE)； (25)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為介白素10 (IL10)； (26)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF單株抗體； (27)該眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且該治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)； (28)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)； (29)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群3相關，且該治療性產物為ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)； (30)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群5相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)； (31)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且該治療性產物為麥-考症候群(MKKS)； (32)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)； (33)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群11相關，且該治療性產物為含三聯基元32 (TRIM32)； (34)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群13相關，且該治療性產物為MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)； (35)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群18相關，且該治療性產物為BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)； (36)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群19相關，且該治療性產物為纖毛內轉運27 (IFT27)； (37)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)； (38)該眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)； (39)該眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且該治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；或 (40)該眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且該治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。 29.   如段落1-11及15-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)。 30.   如段落1-11及13-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且該治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)； (2)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)； (3)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)； (4)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)； (5)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Usherin (USH2A)； (6)該眼睛病狀與3型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Clarin 1 (CLRN1)； (7)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)； (8)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)； (9)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (10)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (11)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (12)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且該治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)； (13)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)； (14)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)相關，且該治療性產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)； (15)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且該治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)； (16)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (17)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)相關，且該治療性產物為菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)； (18)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)相關，且該治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)； (19)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且該治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)； (20)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且該治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)； (21)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)； (22)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)； (23)該眼睛病狀與無脈絡膜症相關，且該治療性產物為Rab護航蛋白1 (CHM)； (24)該眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且該治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)； (25)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)； (26)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且該治療性產物為麥-考症候群(MKKS)； (27)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)； (28)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)； (29)該眼睛病狀與視神經萎縮相關，且該治療性產物為OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)； (30)該眼睛病狀與色素性視網膜炎1相關，且該治療性產物為RP1軸突微管相關(RP1)； (31)該眼睛病狀與色素性視網膜炎2相關，且該治療性產物為ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)； (32)該眼睛病狀與色素性視網膜炎7相關，且該治療性產物為外周蛋白2 (PRPH2)； (33)該眼睛病狀與色素性視網膜炎11相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子31 (PRPF31)； (34)該眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)； (35)該眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且該治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)； (36)該眼睛病狀與色素性視網膜炎38相關，且該治療性產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)； (37)該眼睛病狀與色素性視網膜炎40相關，且該治療性產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)； (38)該眼睛病狀與色素性視網膜炎41相關，且該治療性產物為Prominin 1 (PROM1)； (39)該眼睛病狀與色素性視網膜炎56相關，且該治療性產物為感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)； (40)該眼睛病狀與色素性視網膜炎62相關，且該治療性產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)； (41)該眼睛病狀與色素性視網膜炎80相關，且該治療性產物為纖毛內轉運140 (IFT140)；或 (42)該眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且該治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。 31.   如段落1-11及15-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與X性聯色素性視網膜炎(XLRP)相關，且該治療性產物為色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)； (2)該眼睛病狀與全色盲相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)；或 (3)該眼睛病狀與全色盲相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)。 32.   如段落1-31中任一項之方法，其中該重組病毒載體進一步包含編碼啟動子或強化子-啟動子之核苷酸序列，該編碼啟動子或強化子-啟動子之核苷酸序列可操作地連接於編碼該治療性產物之核苷酸序列，且其中該啟動子或強化子-啟動子為： (1) CAG啟動子； (2) CBA啟動子； (3) CMV啟動子； (4) PR1.7啟動子； (5)視紫質激酶(GRK1)感光器特異性強化子-啟動子； (6) hCARp啟動子； (7) hRKp； (8)視錐感光器特異性人類抑制蛋白3 (ARR3)啟動子； (9)視紫質啟動子；或 (10) U6啟動子。 33.   如段落1-11及13-15中任一項之方法，其中該重組病毒載體進一步包含編碼視錐特異性啟動子之核苷酸序列，該編碼視錐特異性啟動子之核苷酸序列可操作地連接於編碼該治療性產物之核苷酸序列，且其中： (1)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (2)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (3)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (4)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；或 (5)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視(BCM)相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)。 34.   如段落1-33中任一項之方法，其中該投與步驟將治療有效量之該治療性產物遞送至該人類個體之視網膜。 35.   如段落34之方法，其中該治療有效量之該治療性產物係由該人類個體之人類視網膜細胞產生。 36.   如段落34之方法，其中該治療有效量之該治療性產物係由該人類個體之外界膜中的人類感光細胞、水平細胞、雙極細胞、無軸突神經細胞、視網膜神經節細胞及/或視網膜色素上皮細胞產生。 37.   如段落36之方法，其中該等人類感光細胞為視錐細胞及/或視桿細胞。 38.   如段落36之方法，其中該等視網膜神經節細胞為侏儒細胞、陽傘細胞、雙層細胞、巨型視網膜神經節細胞、感光神經節細胞及/或穆勒神經膠質細胞。 39.   如段落1-38中任一項之方法，其中該重組病毒載體為rAAV載體。 40.   如段落39之方法，其中該重組病毒載體為rAAV8載體。 41.   如段落1-40中任一項之方法，其進一步包含在該投與步驟之後，使用紅外熱像儀監測眼睛中注射之材料的眼部注射後熱分佈的步驟。 42.   如段落41之方法，其中該紅外熱像儀為FLIR T530紅外熱像儀。 43.   如段落1-43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約6.0 × 1010 個基因組複本之劑量投與。 44.   如段落1-43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約1.6 × 1011 個基因組複本之劑量投與。 45.   如段落1-43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本之劑量投與。 46.   如段落1-43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約5.0 × 1011 個基因組複本之劑量投與。 47.   如段落1-43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約3.0 × 1012 個基因組複本之劑量投與。 1.1.2     第2組 1.      一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。 2.      如段落1之方法，其中該投與步驟包含經由該人類個體之眼睛的脈絡膜上腔向該人類個體之眼睛的視網膜下腔投與該重組病毒載體治療性產物。 3.      如段落2之方法，其中該投與步驟係藉由使用包含導管之視網膜下藥物遞送裝置，該導管可插入且通過脈絡膜上腔向後極穿隧，小針頭在後極注入視網膜下腔。 4.      如段落3之方法，其中該投與步驟包含將該視網膜下藥物遞送裝置之導管插入且穿隧通過脈絡膜上腔。 5.      一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的脈絡膜上腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀。 6.      如段落5之方法，其中該投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將該重組病毒載體注入脈絡膜上腔。 7.      如段落5或6之方法，其中該脈絡膜上藥物遞送裝置為顯微注射器。 8.      一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的鞏膜外表面投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀。 9.      如段落8之方法，其中該投與步驟係藉由使用包含套管之近鞏膜藥物遞送裝置，該套管之尖端可插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。 10.   如段落9之方法，其中該投與步驟包含將該套管之尖端插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。 11.   如段落1-10中任一項之方法，其中該治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。 12.   如段落1-11中任一項之方法，其中該眼睛病狀與新生血管性年齡相關性黃斑變性(nAMD)不相關。 13.   一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術，且其中該治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。 14.   如段落13之方法，其中該玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。 15.   一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向位於需要治療之人類個體之眼睛後部的視神經盤、中央凹及黃斑外周的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。 16.   如段落15之方法，其中該投與步驟係藉由經玻璃體注射。 17.   如段落16之方法，其中該經玻璃體注射包含經由眼睛之上側或下側將尖銳的針頭插入鞏膜中，且使該尖銳的針頭完全穿過玻璃體，以將該重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。 18.   如段落16之方法，其中該經玻璃體注射包含將套管針插入鞏膜中，且經由該套管針插入套管並穿過玻璃體，以將該重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。 19.   如段落15-18中任一項之方法，其中該治療性產物為抗hVEGF抗體。 20.   如段落19之方法，其中該抗hVEGF抗體為抗hVEGF抗原結合片段。 21.   如段落20之方法，其中該抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab')2 或單鏈可變片段(scFv)。 22.   如段落19-21中任一項之方法，其中該抗hVEGF抗體含有包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。 23.   如段落19-21中任一項之方法，其中該抗hVEGF抗體包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 17-19或SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3。 24.   如段落19-23中任一項之方法，其中該眼睛病狀與nAMD、乾性年齡相關性黃斑變性(乾性AMD)、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)相關。 25.   如段落19-23中任一項之方法，其中該眼睛病狀與nAMD相關。 26.   如段落1-11及13-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與Batten-CLN1相關，且該治療性產物為棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)； (2)該眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且該治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)； (3)該眼睛病狀與Batten-CLN3相關，且該治療性產物為Battenin (CLN3)； (4)該眼睛病狀與Batten-CLN6相關，且該治療性產物為CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)； (5)該眼睛病狀與Batten-CLN7相關，且該治療性產物為含主要易化子超家族域8 (MFSD8)； (6)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)； (7)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)； (8)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)； (9)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Usherin (USH2A)； (10)該眼睛病狀與3型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Clarin 1 (CLRN1)； (11)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)； (12)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)； (13)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗介白素6 (IL6)單株抗體； (14)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF-α (TNF)單株抗體； (15)該眼睛病狀與糖尿病性黃斑水腫(DME)相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (16)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (17)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (18)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (19)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且該治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)； (20)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)； (21)該眼睛病狀與LCA 3相關，且該治療性產物為精子形成相關7 (SPATA7)； (22)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)相關，且該治療性產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)； (23)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦5 (LCA 5)相關，且該治療性產物為Lebercilin (LCA5)； (24)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦6 (LCA 6)相關，且該治療性產物為RPGR相互作用蛋白1 (RPGRIP1)； (25)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且該治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)； (26)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (27)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)相關，且該治療性產物為菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)； (28)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)相關，且該治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)； (29)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且該治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)； (30)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)相關，且該治療性產物為視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)； (31)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)相關，且該治療性產物為視黃醇去氫酶12 (RDH12)； (32)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦14 (LCA 14)相關，且該治療性產物為卵磷脂視黃醇醯基轉移酶(LRAT)； (33)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且該治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)； (34)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)相關，且該治療性產物為電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)； (35)該眼睛病狀與萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)； (36)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)； (37)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)； (38)該眼睛病狀與視神經脊髓炎(NMO)相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (39)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (40)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (41)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為血管收縮素I轉化酶(ACE)； (42)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為介白素10 (IL10)； (43)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF單株抗體； (44)該眼睛病狀與無脈絡膜症相關，且該治療性產物為Rab護航蛋白1 (CHM)； (45)該眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且該治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)； (46)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)； (47)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群2相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群2 (BBS2)； (48)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群3相關，且該治療性產物為ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)； (49)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群4相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群4 (BBS4)； (50)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群5相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)； (51)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且該治療性產物為麥-考症候群(MKKS)； (52)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群7相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群7 (BBS7)； (53)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群8相關，且該治療性產物為三十四肽重複域8 (TTC8)； (54)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群9相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群9 (BBS9)； (55)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)； (56)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群11相關，且該治療性產物為含三聯基元32 (TRIM32)； (57)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群12相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群12 (BBS12)； (58)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群13相關，且該治療性產物為MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)； (59)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群14相關，且該治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)； (60)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群15相關，且該治療性產物為含WD重複之平面細胞極性效應子(WDPCP)； (61)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群16相關，且該治療性產物為血清學定義之結腸癌抗原8 (SDCCAG8)； (62)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群17相關，且該治療性產物為白胺酸拉鏈轉錄因子樣1 (LZTFL1)； (63)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群18相關，且該治療性產物為BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)； (64)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群19相關，且該治療性產物為纖毛內轉運27 (IFT27)； (65)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)； (66)該眼睛病狀與視神經萎縮相關，且該治療性產物為OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)； (67)該眼睛病狀與色素性視網膜炎1相關，且該治療性產物為RP1軸突微管相關(RP1)； (68)該眼睛病狀與色素性視網膜炎2相關，且該治療性產物為ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)； (69)該眼睛病狀與色素性視網膜炎7相關，且該治療性產物為外周蛋白2 (PRPH2)； (70)該眼睛病狀與色素性視網膜炎11相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子31 (PRPF31)； (71)該眼睛病狀與色素性視網膜炎12相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (72)該眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)； (73)該眼睛病狀與色素性視網膜炎25相關，且該治療性產物為閉眼同源物(EYS)； (74)該眼睛病狀與色素性視網膜炎28相關，且該治療性產物為FAM161中心體蛋白A (FAM161A)； (75)該眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且該治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)； (76)該眼睛病狀與色素性視網膜炎38相關，且該治療性產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)； (77)該眼睛病狀與色素性視網膜炎40相關，且該治療性產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)； (78)該眼睛病狀與色素性視網膜炎41相關，且該治療性產物為Prominin 1 (PROM1)； (79)該眼睛病狀與色素性視網膜炎43相關，且該治療性產物為磷酸二酯酶6A (PDE6A)； (80)該眼睛病狀與色素性視網膜炎56相關，且該治療性產物為感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)； (81)該眼睛病狀與色素性視網膜炎62相關，且該治療性產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)； (82)該眼睛病狀與色素性視網膜炎80相關，且該治療性產物為纖毛內轉運140 (IFT140)； (83)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (84)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗攻膜複合物(MAC)單株抗體； (85)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為HtrA絲胺酸肽酶1 (HTRA1)； (86)該眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且該治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)； (87)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為補體因子B反義寡核苷酸； (88)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗β-類澱粉蛋白單株抗體； (89)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為CD59糖蛋白(CD59)； (90)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-1 (ChR1)； (91)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-2 (ChR2)，亦即在萊茵衣藻中發現之感光蛋白； (92)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗補體因子C5a適體； (93)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗補體因子D單株抗體； (94)該眼睛病狀與年齡相關性視網膜神經節細胞(RGC)變性相關，且該治療性產物為DnaJ熱休克蛋白家族(Hsp40)成員C3 (DNAJC3)； (95)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視(BCM)相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (96)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為β-2腎上腺素受體siRNA； (97)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為半胱天冬酶-2 (CASP2)； (98)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為胰島素受體受質1 (IRS1)； (99)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為HIF-1反應性蛋白RTP801 (RTP801)； (100)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為轉化生長因子β2 (TGFB2)； (101)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為腦源性神經營養因子(BDNF)； (102)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為睫狀神經營養因子(CNTF)； (103)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為前列腺素內過氧化物合成酶2 (PTGS2)； (104)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為前列腺素F受體(PTGFR)； (105)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為玻尿酸酶； (106)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為色素上皮衍生因子(PEDF)； (107)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為血管內皮生長因子(VEGF)； (108)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為胎盤生長因子(PGF)； (109)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為肌纖蛋白(MYOC)； (110)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (111)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為C-C基元趨化因子受體5 (CCR5) siRNA； (112)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗CD19單株抗體； (113)該眼睛病狀與視紫質突變相關性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-1 (ChR1)； (114)該眼睛病狀與視紫質突變相關性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-2 (ChR2)； (115)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為睫狀神經營養因子(CNTF)； (116)該眼睛病狀與常染色體隱性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (117)該眼睛病狀與常染色體隱性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分2 (CRB2)； (118)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)； (119)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視紫質(RHO)； (120)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為神經生長因子(NGF)； (121)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為核因子紅血球系2樣2 (NRF2)； (122)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為色素上皮衍生因子(PEDF)； (123)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為麩胱甘肽S-轉移酶PI 1 (GSTP1)； (124)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視桿源性視錐活力因子(RDCVF)； (125)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視紫質(RHO)； (126)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視黃醛結合蛋白1 (RLBP1)； (127)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為抗補體C5適體； (128)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為雙同源盒4 (DUX4)； (129)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為NLR家族含Pyrin域3 (NLRP3)； (130)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為脾相關酪胺酸激酶(SYK)； (131)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為促腎上腺皮質激素(ACTH)； (132)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為半胱天冬酶1 (CASP1)； (133)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗CD59單株抗體； (134)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗補體C5適體； (135)該眼睛病狀與角膜新血管生成相關，且該治療性產物為胰島素受體受質1 (IRS1)； (136)該眼睛病狀與角膜新血管生成相關，且該治療性產物為NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)； (137)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)； (138)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為α-2-抗纖維蛋白溶酶(A2AP)； (139)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為纖維蛋白溶酶原(PLG)； (140)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為生長激素； (141)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為胰島素樣生長因子1 (IGF1)； (142)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為介白素1β (IL1B)； (143)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為血管收縮素I轉化酶2 (ACE2)； (144)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為IRS1； (145)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為抗整合素寡肽； (146)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體； (147)該眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且該治療性產物為抗CD40單株抗體； (148)該眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且該治療性產物為抗胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)單株抗體； (149)該眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且該治療性產物為抗胰島素樣生長因子2受體(IGF2R)單株抗體； (150)該眼睛病狀與DME相關，且該治療性產物為抗整合素寡肽； (151)該眼睛病狀與DME相關，且該治療性產物為抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體； (152)該眼睛病狀與DME相關，且該治療性產物為RTP801 siRNA； (153)該眼睛病狀與多發性硬化症(MS)相關之視力喪失相關，且該治療性產物為ND1； (154)該眼睛病狀與近視相關，且該治療性產物為基質金屬蛋白酶2 (MMP2) RNAi； (155)該眼睛病狀與X性聯隱性眼白化病相關，且該治療性產物為G蛋白偶合受體143 (GPR143)； (156)該眼睛病狀與1型眼皮膚白化病相關，且該治療性產物為酪胺酸酶(TYR)； (157)該眼睛病狀與視神經炎相關，且該治療性產物為半胱天冬酶2 (CASP2)； (158)該眼睛病狀與視神經炎相關，且該治療性產物為抗含白胺酸富集重複序列及Ig域之蛋白質1 (LINGO1)單株抗體；或 (159)該眼睛病狀與息肉狀脈絡膜血管病變相關，且該治療性產物為抗補體C5適體。 27.   如段落1-11及15-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與X性聯色素性視網膜炎(XLRP)相關，且該治療性產物為色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)； (2)該眼睛病狀與全色盲(ACHM)相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)； (3)該眼睛病狀與全色盲相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)；或 (4)該眼睛病狀與二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)。 28.   如段落1-11及13-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與Batten-CLN1相關，且該治療性產物為棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)； (2)該眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且該治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)； (3)該眼睛病狀與Batten-CLN3相關，且該治療性產物為Battenin (CLN3)； (4)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗介白素6 (IL6)單株抗體； (5)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF-α (TNF)單株抗體； (6)該眼睛病狀與糖尿病性黃斑水腫(DME)相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (7)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (8)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (9)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (10)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且該治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)； (11)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)； (12)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且該治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)； (13)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且該治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)； (14)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)相關，且該治療性產物為視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)； (15)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)相關，且該治療性產物為視黃醇去氫酶12 (RDH12)； (16)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且該治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)； (17)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)相關，且該治療性產物為電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)； (18)該眼睛病狀與萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)； (19)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)； (20)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)； (21)該眼睛病狀與視神經脊髓炎(NMO)相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (22)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (23)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (24)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為血管收縮素I轉化酶(ACE)； (25)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為介白素10 (IL10)； (26)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF單株抗體； (27)該眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且該治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)； (28)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)； (29)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群3相關，且該治療性產物為ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)； (30)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群5相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)； (31)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且該治療性產物為麥-考症候群(MKKS)； (32)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)； (33)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群11相關，且該治療性產物為含三聯基元32 (TRIM32)； (34)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群13相關，且該治療性產物為MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)； (35)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群18相關，且該治療性產物為BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)； (36)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群19相關，且該治療性產物為纖毛內轉運27 (IFT27)； (37)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)； (38)該眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)； (39)該眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且該治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；或 (40)該眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且該治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。 29.   如段落1-11及15-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)。 30.   如段落1-11及13-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且該治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)； (2)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)； (3)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)； (4)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)； (5)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Usherin (USH2A)； (6)該眼睛病狀與3型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Clarin 1 (CLRN1)； (7)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)； (8)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)； (9)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (10)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (11)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (12)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且該治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)； (13)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)； (14)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)相關，且該治療性產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)； (15)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且該治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)； (16)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (17)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)相關，且該治療性產物為菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)； (18)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)相關，且該治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)； (19)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且該治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)； (20)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且該治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)； (21)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)； (22)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)； (23)該眼睛病狀與無脈絡膜症相關，且該治療性產物為Rab護航蛋白1 (CHM)； (24)該眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且該治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)； (25)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)； (26)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且該治療性產物為麥-考症候群(MKKS)； (27)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)； (28)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)； (29)該眼睛病狀與視神經萎縮相關，且該治療性產物為OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)； (30)該眼睛病狀與色素性視網膜炎1相關，且該治療性產物為RP1軸突微管相關(RP1)； (31)該眼睛病狀與色素性視網膜炎2相關，且該治療性產物為ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)； (32)該眼睛病狀與色素性視網膜炎7相關，且該治療性產物為外周蛋白2 (PRPH2)； (33)該眼睛病狀與色素性視網膜炎11相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子31 (PRPF31)； (34)該眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)； (35)該眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且該治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)； (36)該眼睛病狀與色素性視網膜炎38相關，且該治療性產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)； (37)該眼睛病狀與色素性視網膜炎40相關，且該治療性產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)； (38)該眼睛病狀與色素性視網膜炎41相關，且該治療性產物為Prominin 1 (PROM1)； (39)該眼睛病狀與色素性視網膜炎56相關，且該治療性產物為感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)； (40)該眼睛病狀與色素性視網膜炎62相關，且該治療性產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)； (41)該眼睛病狀與色素性視網膜炎80相關，且該治療性產物為纖毛內轉運140 (IFT140)；或 (42)該眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且該治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。 31.   如段落1-11及15-18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與X性聯色素性視網膜炎(XLRP)相關，且該治療性產物為色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)； (2)該眼睛病狀與全色盲相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)；或 (3)該眼睛病狀與全色盲相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)。 32.   如段落1-31中任一項之方法，其中該重組病毒載體進一步包含編碼啟動子或強化子-啟動子之核苷酸序列，該編碼啟動子或強化子-啟動子之核苷酸序列可操作地連接於編碼該治療性產物之核苷酸序列，且其中該啟動子或強化子-啟動子為： (1) CAG啟動子； (2) CBA啟動子； (3) CMV啟動子； (4) PR1.7啟動子； (5)視紫質激酶(GRK1)感光器特異性強化子-啟動子； (6) hCARp啟動子； (7) hRKp； (8)視錐感光器特異性人類抑制蛋白3 (ARR3)啟動子； (9)視紫質啟動子；或 (10) U6啟動子。 33.   如段落1-11及13-15中任一項之方法，其中該重組病毒載體進一步包含編碼視錐特異性啟動子之核苷酸序列，該編碼視錐特異性啟動子之核苷酸序列可操作地連接於編碼該治療性產物之核苷酸序列，且其中： (1)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (2)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (3)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (4)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；或 (5)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視(BCM)相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)。 34.   如段落1-33中任一項之方法，其中該投與步驟將治療有效量之該治療性產物遞送至該人類個體之視網膜。 35.   如段落34之方法，其中該治療有效量之該治療性產物係由該人類個體之人類視網膜細胞產生。 36.   如段落34之方法，其中該治療有效量之該治療性產物係由該人類個體之外界膜中的人類感光細胞、水平細胞、雙極細胞、無軸突神經細胞、視網膜神經節細胞及/或視網膜色素上皮細胞產生。 37.   如段落36之方法，其中該等人類感光細胞為視錐細胞及/或視桿細胞。 38.   如段落36之方法，其中該等視網膜神經節細胞為侏儒細胞、陽傘細胞、雙層細胞、巨型視網膜神經節細胞、感光神經節細胞及/或穆勒神經膠質細胞。 39.   如段落1-38中任一項之方法，其中該重組病毒載體為rAAV載體。 40.   如段落39之方法，其中該重組病毒載體為rAAV8載體。 41.   如段落1-40中任一項之方法，其進一步包含在該投與步驟之後，使用紅外熱像儀監測眼睛中注射之材料的眼部注射後熱分佈的步驟。 42.   如段落41之方法，其中該紅外熱像儀為FLIR T530紅外熱像儀。 43.   如段落1-43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約6.0 × 1010 個基因組複本之劑量投與。 44.   如段落1-43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約1.6 × 1011 個基因組複本之劑量投與。 45.   如段落1-43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本之劑量投與。 46.   如段落1-43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約5.0 × 1011 個基因組複本之劑量投與。 47.   如段落1-43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約3.0 × 1012 個基因組複本之劑量投與。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張以下美國臨時專利申請案之權益：2019年4月3日申請之第62/828,949號、2019年6月3日申請之第62/856,533號及2019年12月10日申請之第62/946,158號，該等臨時專利申請案以全文引用之方式併入本文中。以電子方式提交之序列表的引用
本申請案以引用的方式併入與本申請案一起提交之序列表，其為名稱為「12656-126-228_Sequence_Listing.txt」之正文檔案，創建於2020年3月24日，大小為2,025,574位元組。
本文提供用於將治療性產物(諸如治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)及治療性適體)遞送至人類個體之眼睛的視網膜/玻璃體液以治療眼睛病狀之組合物及方法，其涉及例如重組病毒載體，諸如重組腺相關病毒(rAAV)載體。
治療性產物可為例如治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)或治療性適體。
在一特定實施例中，治療性產物為人類蛋白質或針對人類蛋白質之抗體。抗體包括但不限於單株抗體、多株抗體、重組產生之抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、合成抗體、包含兩個重鏈及兩個輕鏈分子之四聚抗體、抗體輕鏈單體、抗體重鏈單體、抗體輕鏈二聚體、抗體重鏈二聚體、抗體輕鏈-重鏈對、胞內抗體、異結合抗體、單價抗體、全長抗體之抗原結合片段及上述之融合蛋白。此類抗原結合片段包括但不限於單域抗體(重鏈抗體之可變域(VHH)或奈米抗體)、Fab、F(ab')2 及scFv (單鏈可變片段)。在特定實施例中，治療性產物(例如治療性蛋白質)經轉譯後修飾。在一特定實施例中，轉譯後修飾對使用如本文所述之特定途徑將治療性產物(例如治療性蛋白質)遞送至的細胞類型具有特異性。遞送可經由基因療法來實現，例如藉由將編碼治療性產物之重組病毒載體或重組DNA表現構築體(統稱為「重組載體」)投與人類患者眼睛之脈絡膜上腔、視網膜下腔(藉由玻璃體切除術或無需玻璃體切除術(例如藉由導管穿過脈絡膜上腔或經由外周注射)、視網膜內腔、玻璃體腔及/或鞏膜外表面(亦即近鞏膜投與)，以在眼睛中形成連續供應治療性產物(例如經轉譯後修飾之治療性產物)的永久儲槽。 6.1 用於遞送治療性產物之方法
在一個態樣中，本文提供一種無需玻璃體切除術以用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，投與步驟包含經由該人類個體之眼睛的脈絡膜上腔向該人類個體之眼睛的視網膜下腔投與重組病毒載體治療性產物。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用包含導管之視網膜下藥物遞送裝置，該導管可插入且通過脈絡膜上腔向後極穿隧，小針頭在後極注入視網膜下腔。在某些實施例中，投與步驟包含將視網膜下藥物遞送裝置之導管插入且穿隧通過脈絡膜上腔。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，投與步驟包含經由該人類個體之眼睛的脈絡膜上腔向該人類個體之眼睛的視網膜下腔投與重組病毒載體治療性產物。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用包含導管之視網膜下藥物遞送裝置，該導管可插入且通過脈絡膜上腔向後極穿隧，小針頭在後極注入視網膜下腔。在某些實施例中，投與步驟包含將視網膜下藥物遞送裝置之導管插入且穿隧通過脈絡膜上腔。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之藉由玻璃體切除術之視網膜下投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之脈絡膜上投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的脈絡膜上腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將重組病毒載體注入脈絡膜上腔。在某些實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置為顯微注射器。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的脈絡膜上腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將重組病毒載體注入脈絡膜上腔。在某些實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置為顯微注射器。
在某些實施例中，可使用國際公開案第WO 2016/042162號、第WO 2017/046358號、第WO 2017/158365號及第WO 2017/158366號中所描述及揭示之方法及/或裝置來進行向視網膜下腔或脈絡膜上腔之遞送，該等公開案各自以全文引用的方式併入本文中。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之向鞏膜外表面投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的鞏膜外表面投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用包含套管之近鞏膜藥物遞送裝置，該套管之尖端可插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。在某些實施例中，投與步驟包含將套管之尖端插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛鞏膜外表面投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用包含套管之近鞏膜藥物遞送裝置，該套管之尖端可插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。在某些實施例中，投與步驟包含將套管之尖端插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之玻璃體內投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的玻璃體腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用玻璃體內藥物遞送裝置將重組病毒載體注入玻璃體腔。在某些實施例中，玻璃體內藥物遞送裝置為顯微注射器。在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的玻璃體腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用玻璃體內藥物遞送裝置將重組病毒載體注入玻璃體腔。在某些實施例中，玻璃體內藥物遞送裝置為顯微注射器。
在某些實施例中，治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。
在某些實施例中，眼睛病狀與新生血管性年齡相關性黃斑變性(nAMD) (亦稱為AMD之「濕性」新生血管性形式(「WAMD」或「濕性AMD」))不相關。
在某些實施例中，治療性產物為抗hVEGF抗體。
在某些實施例中，眼睛病狀與nAMD相關。
在某些實施例中，眼睛病狀與nAMD相關，且治療性產物為抗hVEGF抗體。
在一個態樣中，本文提供一種偕同玻璃體切除術以用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術，且其中該治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。在某些實施例中，眼睛病狀為眼部疾病或涉及包括眼睛在內之多個器官的疾病。在某些實施例中，玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術，且其中該治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。在某些實施例中，眼睛病狀為眼部疾病或涉及包括眼睛在內之多個器官的疾病。在某些實施例中，玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。
在一個態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向位於需要治療之人類個體之眼睛後部的視神經盤、中央凹及黃斑外周的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，注射步驟係藉由經玻璃體注射。在某些實施例中，經玻璃體投與之方法使得治療性產物在整個眼睛中均勻表現(例如與眼睛其他區域之表現量相比，注射部位之表現量變化小於5%、10%、20%、30%、40%或50%)。在某些實施例中，經玻璃體注射包含經由眼睛之上側或下側將尖銳的針頭插入鞏膜中，且使尖銳的針頭完全穿過玻璃體，以將重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。在某些實施例中，在2點鐘或10點鐘位置插入針頭。在某些實施例中，經玻璃體注射包含將套管針插入鞏膜中，且經由套管針插入套管並穿過玻璃體，以將重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。在某些實施例中，治療性產物為抗hVEGF抗體。在某些實施例中，抗hVEGF抗體為抗hVEGF抗原結合片段。在某些實施例中，抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab')2 或單鏈可變片段(scFv)。在某些實施例中，抗hVEGF抗體含有包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。在某些實施例中，其中抗hVEGF抗體包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 17-19或SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3。在某些實施例中，其中眼睛病狀與nAMD、乾性年齡相關性黃斑變性(乾性AMD)、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)相關。在某些實施例中，眼睛病狀與nAMD相關。
在另一態樣中，本文提供一種用於治療眼睛病狀之方法，其包含向位於需要治療之人類個體之眼睛後部的視神經盤、中央凹及黃斑外周的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。在某些實施例中，注射步驟係藉由經玻璃體注射。在某些實施例中，經玻璃體投與之方法使得治療性產物在整個眼睛中均勻表現(例如與眼睛其他區域之表現量相比，注射部位之表現量變化小於5%、10%、20%、30%、40%或50%)。在某些實施例中，經玻璃體注射包含經由眼睛之上側或下側將尖銳的針頭插入鞏膜中，且使尖銳的針頭完全穿過玻璃體，以將重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。在某些實施例中，在2點鐘或10點鐘位置插入針頭。在某些實施例中，經玻璃體注射包含將套管針插入鞏膜中，且經由套管針插入套管並穿過玻璃體，以將重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。在某些實施例中，治療性產物為抗hVEGF抗體。在某些實施例中，抗hVEGF抗體為抗hVEGF抗原結合片段。在某些實施例中，抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab')2 或單鏈可變片段(scFv)。在某些實施例中，抗hVEGF抗體含有包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。在某些實施例中，其中抗hVEGF抗體包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 17-19或SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3。在某些實施例中，其中眼睛病狀與nAMD、乾性年齡相關性黃斑變性(乾性AMD)、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)相關。在某些實施例中，眼睛病狀與nAMD相關。
在本文所述之方法的某些實施例中，投與步驟將治療有效量之治療性產物遞送至該人類個體之視網膜。
在本文所述之方法的某些實施例中，治療有效量之治療性產物係由該人類個體之人類視網膜細胞產生。
在本文所述之方法的某些實施例中，治療有效量之治療性產物係由該人類個體之外界膜中的人類感光細胞、水平細胞、雙極細胞、無軸突神經細胞、視網膜神經節細胞及/或視網膜色素上皮細胞產生。
在本文所述之方法的某些實施例中，人類感光細胞為視錐細胞及/或視桿細胞。
在本文所述之方法的某些實施例中，視網膜神經節細胞為侏儒細胞、陽傘細胞、雙層細胞、巨型視網膜神經節細胞、感光神經節細胞及/或穆勒神經膠質細胞。
在本文所述之方法的某些實施例中，重組病毒載體為rAAV載體(例如rAAV8、rAAV2、rAAV2tYF或rAAV5載體)。
在本文所述之方法的某些實施例中，其中重組病毒載體為rAAV8載體。
在本文所述之方法的某些實施例中，遞送至眼睛包含遞送至眼睛之視網膜、脈絡膜及/或玻璃體液。 6.1.1         轉譯後修飾
在某些實施例中，治療性產物(例如治療性蛋白質)經轉譯後修飾。在一特定實施例中，轉譯後修飾對使用如本文所述之特定途徑將治療性產物(例如治療性蛋白質)遞送至的細胞類型具有特異性。
在一特定實施例中，轉譯後修飾為糖基化。在另一特定實施例中，轉譯後修飾為酪胺酸硫酸化。在另一特定實施例中，轉譯後修飾為磷酸化。在另一特定實施例中，轉譯後修飾為ADP-核糖基化。在另一特定實施例中，轉譯後修飾為異戊烯化。在另一特定實施例中，轉譯後修飾為豆蔻醯化或棕櫚醯化。在另一特定實施例中，轉譯後修飾為泛素化。在另一特定實施例中，轉譯後修飾為小泛素樣蛋白化。在另一特定實施例中，轉譯後修飾為泛素化樣蛋白質修飾。
在一特定實施例中，治療性產物在人類永生化之視網膜來源的細胞中自重組載體表現後經轉譯後修飾。
在一特定實施例中，重組載體之投與導致儲槽之形成，該儲槽釋放含有轉譯後修飾之治療性產物。
在一特定實施例中，重組載體，當用於在培養物中轉導視網膜來源的細胞時，導致產生含有轉譯後修飾之治療性產物。
轉譯後修飾可藉由此項技術中已知用於偵測轉譯後修飾之任何方法來偵測，例如西方墨點、層析或流動式細胞測量術。
在一特定實施例中，轉譯後可藉由用放射性受質或受質前體分子活體內標記細胞受質庫，其致使經放射性標記之部分，包括但不限於磷酸酯基、脂肪醯基(例如肉豆蔻醯基或棕櫚醯基)、小泛素樣蛋白、甲基、乙醯基、羥基、碘、黃素、泛素或ADP-核糖基併入治療性產物來偵測。經修飾之蛋白質的分析通常藉由電泳及自動放射照像術進行，藉由在電泳之前對所關注之蛋白質進行免疫沈澱來增強特異性。
在一特定實施例中，轉譯後可藉由活體外將經標記之部分(包括但不限於放射性、發光或螢光標記)酶促併入治療性產物以估計活體內修飾狀態來偵測。
在一特定實施例中，轉譯後可藉由分析與未修飾之治療性產物相比經修飾之治療性產物(例如糖基化或泛素化)之電泳遷移率的變化來偵測。
在一特定實施例中，轉譯後可藉由自治療性產物提取之經放射性標記之脂肪酸的薄層層析來偵測。
在一特定實施例中，轉譯後可藉由利用相分離將治療性產物分配至洗滌劑富集或洗滌劑層中，及酶處理治療性產物對在水性及洗滌劑富集環境之間分配的影響來偵測。
在一特定實施例中，轉譯後可藉由蛋白質修飾形式之抗體識別，例如藉由西方墨點或流動式細胞測量術來偵測。 6.1.2         構築體及調配物
用於本文所提供之方法的為編碼治療性產物之重組病毒載體或其他重組DNA表現構築體(統稱為「重組載體」)。本文所提供之重組病毒載體及其他DNA表現構築體包括用於將治療性產物(諸如治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)及治療性適體))遞送至靶細胞(例如視網膜色素上皮細胞)的任何適合者。治療性產物之遞送方式包括重組病毒載體、脂質體、其他含脂質複合物、其他大分子複合物、合成的經修飾之mRNA、未修飾之mRNA、小分子、非生物活性分子(例如金粒子)、聚合分子(例如樹枝狀聚合物)、裸DNA、質體、噬菌體、轉座子、黏質體或游離基因體。在一些實施例中，載體為靶向載體，例如靶向視網膜色素上皮細胞之載體。
在一些態樣中，本揭示案提供使用的核酸，其中該核酸編碼可操作地連接於本文所述之啟動子或強化子-啟動子的治療性產物。
在某些實施例中，本文提供包含一或多種核酸(例如聚核苷酸)之重組載體。核酸可包含DNA、RNA或DNA及RNA之組合。在某些實施例中，DNA包含選自由啟動子序列、編碼所關注之治療性產物之序列、非轉譯區及終止序列組成之群的序列中之一或多者。在某些實施例中，本文所提供之重組載體包含可操作地連接於編碼所關注之治療性產物之序列的啟動子。
在某些實施例中，本文揭示之核酸(例如聚核苷酸)及核酸序列可例如經由熟習此項技術者已知的任何密碼子最佳化技術而經密碼子最佳化(參見例如Quax等人, 2015, Mol Cell 59:149-161之綜述)。 (a)      mRNA
在某些實施例中，本文所提供之重組載體包含編碼所關注之治療性產物的經修飾之mRNA。用於將治療性產物遞送至眼睛細胞，例如視網膜色素上皮細胞之經修飾及未修飾之mRNA的合成教示於例如Hansson等人, J. Biol. Chem., 2015, 290(9):5661-5672中，其以全文引用的方式併入本文中。在某些實施例中，本文提供編碼治療性產物部分之經修飾之mRNA。 (b)     shRNA，siRNA及miRNA
在某些實施例中，本文所提供之重組載體包含編碼治療性產物之核苷酸序列，該治療性產物為shRNA、siRNA或miRNA。 (c)      重組病毒載體
重組病毒載體包括重組腺病毒、腺相關病毒(AAV，例如AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11及AAVrh10)、慢病毒、輔助細胞依賴型腺病毒、單純疱疹病毒、痘病毒、日本血球凝集素病毒(HVJ)、α病毒、痘瘡病毒及反轉錄病毒載體。反轉錄病毒載體包括基於小鼠白血病病毒(MLV)及人類免疫缺陷病毒(HIV)之載體。α病毒載體包括勝利基森林病毒(semliki forest virus，SFV)及辛得比斯病毒(sindbis virus，SIN)。在某些實施例中，本文提供之重組病毒載體經改變以使其在人類中為複製缺陷型。在某些實施例中，重組病毒載體為雜交載體，例如置於「無助」腺病毒載體中之AAV載體。在某些實施例中，本文提供重組病毒載體，其包含來自第一病毒之病毒衣殼及來自第二病毒之病毒包膜蛋白。在特定實施例中，第二病毒為水泡性口炎病毒(VSV)。在更特定的實施例中，包膜蛋白為VSV-G蛋白。
在某些實施例中，本文提供之重組病毒載體為基於HIV之病毒載體。在某些實施例中，本文提供之基於HIV之載體包含至少兩個聚核苷酸，其中gag及pol基因來自HIV基因組，env基因來自另一種病毒。
在某些實施例中，本文提供之重組病毒載體為基於單純疱疹病毒之病毒載體。在某些實施例中，本文提供之基於單純疱疹病毒之載體經修飾以使其不包含一或多種即刻早期(IE)基因，從而使其無細胞毒性。
在某些實施例中，本文提供之重組病毒載體為基於MLV之病毒載體。在某些實施例中，本文提供之基於MLV之載體包含多達8 kb之異源DNA代替病毒基因。
在某些實施例中，本文提供之重組病毒載體為基於慢病毒之病毒載體。在某些實施例中，本文提供之慢病毒載體來源於人類慢病毒。在某些實施例中，本文提供之慢病毒載體來源於非人類慢病毒。在某些實施例中，將本文提供之慢病毒載體包裝於慢病毒衣殼中。在某些實施例中，本文提供之慢病毒載體包含以下元件中之一或多者：長末端重複序列、引子結合位點、聚嘌呤區、att位點及衣殼化位點。
在某些實施例中，本文提供之重組病毒載體為基於α病毒之病毒載體。在某些實施例中，本文提供之α病毒載體為重組的複製缺乏型α病毒。在某些實施例中，本文提供之α病毒載體中的α病毒複製子藉由在其病毒粒子表面上呈現功能性異源配體而靶向特定細胞類型。
在某些實施例中，本文提供之重組病毒載體為基於AAV之病毒載體。在較佳實施例中，本文提供之重組病毒載體為基於AAV8之病毒載體。在某些實施例中，本文提供之基於AAV8之病毒載體保留視網膜細胞之向性。在某些實施例中，本文提供之基於AAV之載體編碼AAV rep基因(複製所需)及/或AAV cap基因(衣殼蛋白合成所需)。已鑑別多種AAV血清型。在某些實施例中，本文提供之基於AAV之載體包含來自一或多種AAV血清型之組分。在某些實施例中，本文提供之基於AAV之載體包含來自AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh10中之一或多者的衣殼組分。在較佳實施例中，本文提供之基於AAV之載體包含來自AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh10血清型中之一或多者的組分。
在具體實施例中提供的為AAV8載體，其包含病毒基因組，該病毒基因組包含在調節元件控制下且側接ITR之用於表現治療性產物的表現卡匣，及病毒衣殼，該病毒衣殼具有AAV8衣殼蛋白之胺基酸序列或與AAV8衣殼蛋白之胺基酸序列(SEQ ID NO: 48)至少95%、96%、97%、98%、99%或99.9%一致，同時保留AAV8衣殼之生物功能。在某些實施例中，所編碼之AAV8衣殼具有SEQ ID NO: 48之序列，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30個胺基酸取代且保留AAV8衣殼之生物功能。
在某些實施例中，在本文描述之方法中所用的AAV為Anc80或Anc80L65，如Zinn等人, 2015, Cell Rep. 12(6): 1056-1068中所述，其以全文引用的方式併入本文中。在某些實施例中，在本文描述之方法中所用的AAV包含以下胺基酸插入中之一者：LGETTRP或LALGETTRP，如美國專利第9,193,956號；第9458517號；及第9,587,282號及美國專利申請公開案第2016/0376323號中所述，其各自以全文引用的方式併入本文中。在某些實施例中，在本文描述之方法中所用的AAV為AAV.7m8，如美國專利第9,193,956號；第9,458,517號；及第9,587,282號及美國專利申請公開案第2016/0376323號中所述，其各自以全文引用的方式併入本文中。在某些實施例中，在本文描述之方法中所用的AAV為美國專利第9,585,971號中所揭示之任何AAV，諸如AAV-PHP.B。在某些實施例中，在本文描述之方法中所用的AAV為以下專利及專利申請案中之任一者中所揭示的AAV，其各自以全文引用的方式併入本文中：美國專利第7,906,111號；第8,524,446號；第8,999,678號；第8,628,966號；第8,927,514號；第8,734,809號；第US 9,284,357號；第9,409,953號；第9,169,299號；第9,193,956號；第9458517號；及第9,587,282號；美國專利申請公開案第2015/0374803號；第2015/0126588號；第2017/0067908號；第2013/0224836號；第2016/0215024號；第2017/0051257號；及國際專利申請案第PCT/US2015/034799號；第PCT/EP2015/053335號。
基於AAV8之病毒載體用於本文所述方法之某些實施例中。基於AAV之病毒載體的核酸序列及製造重組AAV及AAV衣殼之方法教示於例如美國專利第7,282,199 B2號、美國專利第7,790,449 B2號、美國專利第8,318,480 B2號、美國專利第8,962,332 B2號及國際專利申請案第PCT/EP2014/076466號中，其各自以全文引用的方式併入本文中。在一個態樣中，本文提供編碼治療性產物之基於AAV (例如AAV8)之病毒載體。
在某些實施例中，上文可使用單股AAV (ssAAV)。在某些實施例中，可使用自互補載體，例如scAAV (參見例如Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82，McCarty等人, 2001, Gene Therapy, 第8卷, 第16期, 第1248-1254頁；及美國專利第6,596,535號；第7,125,717號；及第7,456,683號，其各自以全文引用的方式併入本文中)。
在某些實施例中，在本文描述之方法中所用的重組病毒載體為重組腺病毒載體。重組腺病毒可為第一代載體，其具有E1缺失、具有或不具有E3缺失及具有插入任一缺失區中之表現卡匣。重組腺病毒可為第二代載體，其含有E2及E4區之全部或部分缺失。輔助細胞依賴型腺病毒僅保留腺病毒反向末端重複序列及包裝信號(phi)。治療性產物插入包裝信號與3'ITR之間，具有或不具有填充序列以使基因組接近於約36 kb之野生型大小。產生腺病毒載體之例示性方案可見於Alba等人, 2005, 「Gutless adenovirus: last generation adenovirus for gene therapy,」 Gene Therapy 12:S18-S27中，其以全文引用的方式併入本文中。
在某些實施例中，在本文描述之方法中所用的重組病毒載體為基於慢病毒之病毒載體。使用四種質體來製造構築體：含有Gag/pol序列之質體、含有Rev序列之質體、含有包膜蛋白之質體(亦即VSV-G)及具有包裝元件及含有治療性產物之質體的Cis質體。
為了製造慢病毒載體，將四種質體共轉染至細胞(亦即基於HEK293之細胞)中，其中除其他之外，聚乙烯亞胺或磷酸鈣可用作轉染劑。隨後在清液層中收穫慢病毒(慢病毒需要自細胞中萌芽以具有活性，因此不需要/不應該進行細胞收穫)。過濾清液層(0.45 µm)且隨後添加氯化鎂及核酸酶。進一步的下游方法可有很大的不同，其中使用TFF及管柱層析為最具GMP相容性之方法。其他方法使用具有/不具有管柱層析之超速離心。用於製造慢病毒載體之例示性方案可見於Lesch等人, 2011, 「Production and purification of lentiviral vector generated in 293T suspension cells with baculoviral vectors,」 Gene Therapy 18:531-538及Ausubel等人, 2012, 「Production of CGMP-Grade Lentiviral Vectors,」 Bioprocess Int. 10(2):32-43中，其均以全文引用的方式併入本文中。 (d)   基因表現之啟動子及修飾子
在某些實施例中，本文提供之重組載體包含調節治療性產物之遞送或表現的組分(例如「表現控制元件」)。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含調節治療性產物表現之組分。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含影響結合或靶向細胞之組分。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含影響攝取後編碼治療性產物之聚核苷酸在細胞內之定位的組分。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含可用作可偵測或可選擇標誌物之組分，例如以偵測或選擇已攝取編碼治療性產物之聚核苷酸的細胞。
在某些實施例中，本文提供之重組載體包含一或多種啟動子。在某些實施例中，啟動子為組成型啟動子。在某些實施例中，啟動子為誘導型啟動子。誘導型啟動子可為較佳的，以便可根據治療功效的需要打開及關閉治療性產物之表現。此類啟動子包括例如低氧誘導型啟動子及藥物誘導型啟動子，諸如由雷帕黴素(rapamycin)及相關藥劑誘導之啟動子。低氧誘導型啟動子包括具有HIF結合位點之啟動子，參見例如Schӧdel等人, 2011, Blood 117(23):e207-e217及Kenneth及Rocha, 2008, Biochem J. 414:19-29，其各自將低氧誘導型啟動子之教示內容以引用的方式併入。另外，可用於構築體中之低氧誘導型啟動子包括紅血球生成素啟動子及N-WASP啟動子(參見Tsuchiya, 1993, J. Biochem. 113:395有關紅血球生成素啟動子之揭示內容及Salvi, 2017, Biochemistry and Biophysics Reports 9:13-21有關N-WASP啟動子之揭示內容，其均將低氧誘導型啟動子之教示內容以引用的方式併入)。或者，重組載體可含有藥物誘導型啟動子，例如藉由投與雷帕黴素及相關類似物誘導之啟動子(參見例如國際專利申請公開案第WO94/18317號、第WO 96/20951號、第WO 96/41865號、第WO 99/10508號、第WO 99/10510號、第WO 99/36553號及第WO 99/41258號，及美國專利第US 7,067,526號(揭示雷帕黴素類似物)，其關於藥物誘導型啟動子之揭示內容以引用的方式併入本文中)。在某些實施例中，啟動子為低氧誘導型啟動子。在某些實施例中，啟動子包含低氧誘導因子(HIF)結合位點。在某些實施例中，啟動子包含HIF-1α結合位點。在某些實施例中，啟動子包含HIF-2α結合位點。在某些實施例中，HIF結合位點包含RCGTG基元。關於HIF結合位點之位置及序列的詳情，參見例如Schӧdel等人, Blood, 2011, 117(23):e207-e217，其以全文引用的方式併入本文中。在某些實施例中，啟動子包含除HIF轉錄因子以外之低氧誘導型轉錄因子的結合位點。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含一或多個在低氧中優先轉譯之IRES位點。對於有關低氧誘導型基因表現及其中所涉及之因素的教示內容，參見例如Kenneth及Rocha, Biochem J., 2008, 414:19-29，其以全文引用的方式併入本文中。
在某些實施例中，啟動子為CB7啟動子(參見Dinculescu等人, 2005, Hum Gene Ther 16: 649-663，其以全文引用的方式併入本文中)。在某些實施例中，CB7啟動子包括其他表現控制元件，其增強由載體驅動的治療性產物之表現，例如(1) CAG啟動子；(2) CBA啟動子；(3) CMV啟動子；(4) 1.7 kb紅色視錐視蛋白啟動子(PR1.7啟動子)；(5)視紫質激酶(GRK1)感光器特異性強化子-啟動子(Young等人, 2003, Retinal Cell Biology；44:4076-4085)；(6) hCARp啟動子，其為人類視錐抑制蛋白啟動子；(7) hRKp，其為視紫質激酶啟動子；(8)視錐感光器特異性人類抑制蛋白3 (ARR3)啟動子；(9)視紫質啟動子；及(10) U6啟動子(尤其當治療性產物為諸如shRNA及siRNA之小RNA時)。
在某些實施例中，其他表現控制元件包括雞β-肌動蛋白內含子及/或兔β-球蛋白polA信號。在某些實施例中，啟動子包含TATA盒。在某些實施例中，啟動子包含一或多個元件。在某些實施例中，一或多個啟動子元件可相對於彼此倒置或移動。在某些實施例中，啟動子之元件經定位以協同起作用。在某些實施例中，啟動子之元件經定位以獨立地起作用。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含一或多種啟動子，其選自由人類CMV即刻早期基因啟動子、SV40早期啟動子、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus，RS)長末端重複序列及大鼠胰島素啟動子組成之群。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含一或多種長末端重複序列(LTR)啟動子，其選自由AAV、MLV、MMTV、SV40、RSV、HIV-1及HIV-2 LTR組成之群。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含一或多種組織特異性啟動子(例如視網膜色素上皮細胞特異性啟動子)。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含RPE65啟動子。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含VMD2啟動子。
在某些實施例中，本文提供之重組載體包含除啟動子以外之一或多種調節元件。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含強化子。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含抑制子。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含內含子或嵌合內含子。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含聚腺苷酸化序列。 (e)      信號肽
在治療性產物為治療性蛋白質之某些實施例中，本文提供之重組載體包含調節蛋白質遞送之組分。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含一或多種信號肽。信號肽在本文中亦可稱為「前導序列」或「前導肽」。在某些實施例中，信號肽允許治療性產物在細胞中實現適當的包裝(例如糖基化)。在某些實施例中，信號肽允許治療性產物在細胞中實現適當的定位。在某些實施例中，信號肽允許治療性產物實現自細胞之分泌。與本文提供之重組載體及治療性產物結合使用之信號肽的實例可見於表1。 表1.  與本文提供之載體一起使用的信號肽。
SEQ ID NO. 信號肽 序列
5 VEGF-A信號肽 MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA
6 纖蛋白-1信號肽 MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA
7 玻璃連結蛋白信號肽 MAPLRPLLIL ALLAWVALA
8 補體因子H信號肽 MRLLAKIICLMLWAICVA
9 旋光蛋白信號肽 MRLLAFLSLL ALVLQETGT
22 白蛋白信號肽 MKWVTFISLLFLFSSAYS
23 胰凝乳蛋白酶原信號肽 MAFLWLLSCWALLGTTFG
24 介白素-2信號肽 MYRMQLLSCIALILALVTNS
25 胰蛋白酶原-2信號肽 MNLLLILTFVAAAVA
(f)      多順反子訊息 - IRES及F2A連接子
內部核糖體進入位點。單個構築體可經工程改造以編碼由可裂解連接子或IRES分開的兩個肽(例如抗體之重鏈及輕鏈)，使得兩個肽(例如分開的重鏈及輕鏈多肽)由經轉導之細胞表現。在某些實施例中，本文提供之重組載體提供多順反子(例如雙順反子)訊息。舉例而言，重組載體可包含編碼兩個肽(例如抗體之重鏈及輕鏈)之核苷酸序列，該兩個肽由內部核糖體進入位點(IRES)元件分開(例如使用IRES元件產生雙順反子載體，參見例如Gurtu等人, 1996, Biochem. Biophys. Res. Comm. 229(1):295-8，其以全文引用之方式併入本文中)。IRES元件繞過核糖體掃描模型且在內部位點開始轉譯。IRES在AAV中之用途描述於例如Furling等人, 2001, Gene Ther 8(11): 854-73中，其以全文引用之方式併入本文中。在某些實施例中，雙順反子訊息包含在重組載體內，該重組載體對其中聚核苷酸之大小有限制。在某些實施例中，雙順反子訊息包含在基於AAV病毒之載體(例如基於AAV8之載體)內。
弗林蛋白酶-F2A連接子。在其他實施例中，本文提供之重組載體包含編碼由諸如自裂解弗林蛋白酶/F2A (F/F2A)連接子之可裂解連接子分開的兩個肽(例如抗體之重鏈及輕鏈)的核苷酸序列(Fang等人, 2005, Nature Biotechnology 23: 584-590及Fang, 2007, Mol Ther 15: 1153-9，其各自以全文引用的方式併入本文中)。
舉例而言，可將弗林蛋白酶-F2A連接子併入表現卡匣中，以分開兩個肽之編碼序列(例如重鏈及輕鏈編碼序列)，從而得到具有以下結構之構築體： 前導序列-肽A (例如抗體之重鏈)-弗林蛋白酶位點-F2A位點-前導序列-肽B (例如抗體之輕鏈)-PolyA。
具有胺基酸序列LLNFDLLKLAGDVESNPGP (SEQ ID NO: 26)之F2A位點為自加工的，導致最終G及P胺基酸殘基之間的「裂解」。可使用之其他連接子包括但不限於： ●   T2A：(GSG) E G R G S L L T C G D V E E N PG P (SEQ ID NO: 27)； ●   P2A：(GSG) A T N F S L L K Q A G D V E E N PG P (SEQ ID NO: 28)； ●   E2A：(GSG) Q C T N Y A L L K L A G D V E S N PG P (SEQ ID NO: 29)； ●   F2A：(GSG) V K Q T L N F D L L K L A G D V E S N PG P (SEQ ID NO: 30)。
當核糖體在開放閱讀框架中遇到F2A序列時，跳過肽鍵，從而導致轉譯終止或繼續轉譯下游序列(第二肽)。此自加工序列在第一肽C端之末段產生一串額外的胺基酸。然而，此類額外的胺基酸隨後在弗林蛋白酶位點由宿主細胞弗林蛋白酶裂解，該等弗林蛋白酶位點緊接在F2A位點之前及第一肽之序列之後，且由羧基肽酶進一步裂解。所得第一肽可在C端包括一個、兩個、三個或更多個額外胺基酸，或其可不具有此類額外胺基酸，視所用弗林蛋白酶連接子之序列及活體內裂解連接子之羧肽酶而定(參見例如Fang等人, 2005年4月17日, Nature Biotechnol. Advance Online Publication；Fang等人, 2007, Molecular Therapy 15(6):1153-1159；Luke, 2012, Innovations in Biotechnology, Ch. 8, 161-186)。可使用之弗林蛋白酶連接子包含一系列四個鹼性胺基酸，例如RKRR、RRRR、RRKR或RKKR。一旦此連接子由羧肽酶裂解，則可保留額外胺基酸，以使得額外的零個、一個、兩個、三個或四個胺基酸可保留在第一肽之C端上，例如R、RR、RK、RKR、RRR、RRK、RKK、RKRR、RRRR、RRKR或RKKR。在某些實施例中，一旦連接子由羧肽酶裂解，則不保留額外胺基酸。在某些實施例中，弗林蛋白酶連接子具有序列R-X-K/R-R，使得第一肽之C端上的額外胺基酸為R、RX、RXK、RXR、RXKR或RXRR，其中X為任何胺基酸，例如丙胺酸(A)。在某些實施例中，無額外胺基酸可保留在第一肽之C端上。
在某些實施例中，本文所述之表現卡匣包含在重組載體內，該重組載體對其中聚核苷酸之大小有限制。在某些實施例中，表現卡匣包含在基於AAV病毒之載體(例如基於AAV8之載體)內。 (g)     非轉譯區
在治療性產物為治療性蛋白質之某些實施例中，本文提供之重組載體包含一或多個非轉譯區(UTR)，例如3'及/或5' UTR。在某些實施例中，UTR針對所需蛋白質表現量而經最佳化。在某些實施例中，UTR針對編碼治療性蛋白質之mRNA的半衰期而經最佳化。在某些實施例中，UTR針對編碼治療性蛋白質之mRNA的穩定性而經最佳化。在某些實施例中，UTR針對編碼治療性蛋白質之mRNA的二級結構而經最佳化。 (h)     反向末端重複序列
在某些實施例中，本文提供之重組病毒載體包含一或多個反向末端重複(ITR)序列。ITR序列可用於將重組治療性產物表現卡匣包裝至重組病毒載體之病毒粒子中。在某些實施例中，ITR來自AAV，例如AAV8或AAV2 (參見例如Yan等人, 2005, J. Virol., 79(1):364-379；美國專利第7,282,199 B2號、美國專利第7,790,449 B2號、美國專利第8,318,480 B2號、美國專利第8,962,332 B2號及國際專利申請案第PCT/EP2014/076466號，其各自以全文引用的方式併入本文中)。 (i)       治療性產物
治療性產物可為例如治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)或治療性適體。抗體包括但不限於單株抗體、多株抗體、重組產生之抗體、人類抗體、人類化抗體、嵌合抗體、合成抗體、包含兩個重鏈及兩個輕鏈分子之四聚抗體、抗體輕鏈單體、抗體重鏈單體、抗體輕鏈二聚體、抗體重鏈二聚體、抗體輕鏈-重鏈對、胞內抗體、異結合抗體、單價抗體、全長抗體之抗原結合片段及上述之融合蛋白。此類抗原結合片段包括但不限於單域抗體(重鏈抗體之可變域(VHH)或奈米抗體)、Fab、F(ab')2 及scFv (單鏈可變片段)。
在本文所述之方法的某些實施例中，治療性產物為：(1)抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體或適體；(2)抗hVEGF抗原結合片段；(3)抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab')2或單鏈可變片段(scFv)；(4)棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)；(5)三肽基-肽酶1 (TPP1)；(6) Battenin (CLN3)；(7) CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；(8)含主要易化子超家族域8 (MFSD8)；(9)肌球蛋白VIIA (MYO7A)；(1)鈣黏蛋白相關23 (CDH23)；(11)原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)；(12) Usherin (USH2A)；(13) Clarin 1 (CLRN1)；(14) ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)；(15) ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)；抗介白素6 (IL6)單株抗體/適體；(16)抗TNF-α (TNF)單株抗體或適體；(17) L視蛋白(OPN1LW)；(18) M視蛋白(OPN1MW)；(19)視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)；(20)類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)；(21)精子形成相關7 (SPATA7)；(22)芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)；(23) Lebercilin (LCA5)；(24) RPGR相互作用蛋白1 (RPGRIP1)；(25)視錐-視桿同源盒(CRX)；(26)Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)；(27)菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)；(28)中心體蛋白290 (CEP290)；(29)肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)；(3)視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)；(31)視黃醇去氫酶12 (RDH12)；(32)卵磷脂視黃醇醯基轉移酶(LRAT)；(33)短粗樣蛋白1 (TULP1)；(34)電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)；(35)粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)；(36)粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)；(37)粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)；(38)抗補體單株抗體或適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體且眼睛病狀與視神經脊髓炎(NMO)相關；(39)抗IL6單株抗體或適體且眼睛病狀與NMO相關；(40)抗補體單株抗體或適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(41)血管收縮素I轉化酶(ACE)；(42)介白素10 (IL10)；(43)抗TNF單株抗體；(43) Rab護航蛋白1 (CHM)；(44)視網膜劈裂素(RS1)；(45)巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)；(46)巴德-畢德氏症候群2 (BBS2)；(47) ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)；(48)巴德-畢德氏症候群4 (BBS4)；(49)巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)；(50)麥-考症候群(MKKS)；(51)巴德-畢德氏症候群7 (BBS7)；(52)三十四肽重複域8 (TTC8)；(53)巴德-畢德氏症候群9 (BBS9)；(54)巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)；(55)含三聯基元32 (TRIM32)；(56)巴德-畢德氏症候群12 (BBS12)；(57) MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)；(58)含WD重複之平面細胞極性效應子(WDPCP)；(59)血清學定義之結腸癌抗原8 (SDCCAG8)；(6)白胺酸拉鏈轉錄因子樣1 (LZTFL1)；(61) BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)；(62)纖毛內轉運27 (IFT27)；(63)鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；(64) OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)；(65) RP1軸突微管相關(RP1)；(66) ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)；(67)外周蛋白2 (PRPH2)；(68)前體mRNA加工因子31 (PRPF31)；(69)前體mRNA加工因子8 (PRPF8)；(70)閉眼同源物(EYS)；(71) FAM161中心體蛋白A (FAM161A)；(72)核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；(73)MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)；(74)磷酸二酯酶6B (PDE6B)；(75) Prominin 1 (PROM1)；(76)磷酸二酯酶6A (PDE6A)；(77)感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)；(78)雄性生殖細胞相關激酶(MAK)；(79)纖毛內轉運140 (IFT140)；(80)抗攻膜複合物(MAC)單株抗體；(81) HtrA絲胺酸肽酶1 (HTRA1)；(82)斑萎蛋白1 (BEST1)；(83)補體因子B反義寡核苷酸；(84)抗β-類澱粉蛋白單株抗體；(85) CD59糖蛋白(CD59)；(86)光敏感通道蛋白-1 (ChR1)；(87)光敏感通道蛋白-2 (ChR2)；(88)抗補體因子C5a適體或單株抗體；(89)抗補體因子D單株抗體或適體；(90) DnaJ熱休克蛋白家族(Hsp40)成員C3 (DNAJC3)；(91) β-2腎上腺素受體siRNA；(92)半胱天冬酶-2 (CASP2)；(93)胰島素受體受質1 (IRS1)；(94) HIF-1反應蛋白RTP801 (RTP801)；(95)轉化生長因子β2 (TGFB2)；(96)腦源性神經營養因子(BDNF)；(97)睫狀神經營養因子(CNTF)；(98)前列腺素內過氧化物合成酶2 (PTGS2)；(99)前列腺素F受體(PTGFR)；(100)玻尿酸酶；(101)色素上皮衍生因子(PEDF)；(102)血管內皮生長因子(VEGF)；(103)胎盤生長因子(PGF)；(104)肌纖蛋白(MYOC)；(105) C-C基元趨化因子受體5 (CCR5) siRNA；(106)抗CD19單株抗體或適體；(107)Crumbs細胞極性複合物組分2 (CRB2)；(108)組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)；(109)視紫質(RHO)；(110)神經生長因子(NGF)；(111)核因子紅血球系2樣2 (NRF2)；(112)麩胱甘肽S-轉移酶PI 1 (GSTP1)；(113)視桿源性視錐活力因子(RDCVF)；(114)視黃醛結合蛋白1 (RLBP1)；(115)雙同源盒4 (DUX4)；(116) NLR家族含Pyrin域3 (NLRP3)；(117)脾相關酪胺酸激酶(SYK)；(118)促腎上腺皮質激素(ACTH)；(119)抗CD59單株抗體或適體；(120)NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)；(121) α-2-抗纖維蛋白溶酶(A2AP)；(122)纖維蛋白溶酶原(PLG)；(123)生長激素；(124)胰島素樣生長因子1 (IGF1)；(125)介白素1β (IL1B)；(126)血管收縮素I轉化酶2 (ACE2)；(127)抗整合素寡肽；；(128)抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體或適體；(129)抗胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)單株抗體或適體；(130)抗胰島素樣生長因子2受體(IGF2R)單株抗體或適體；(131) RTP801 siRNA；(132)基質金屬蛋白酶2 (MMP2) RNAi；(133) G蛋白偶合受體143 (GPR143)；(134)酪胺酸酶(TYR)；(135)抗含白胺酸富集重複序列及Ig域之蛋白質1 (LINGO1)單株抗體或適體；(136)色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)；(137)環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)；(138)環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)；(139)類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)；(14)抗TNF-α (TNF)單株抗體；或(140)介白素10 (IL10)。
在本文所述之方法的某些實施例中，(1)眼睛病狀與Batten-CLN1相關，且治療性產物為棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)；(2)眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)；(3)眼睛病狀與Batten-CLN3相關，且治療性產物為Battenin (CLN3)；(4)眼睛病狀與Batten-CLN6相關，且治療性產物為CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；(5)眼睛病狀與Batten-CLN7相關，且治療性產物為含主要易化子超家族域8 (MFSD8)；(6)眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且治療性產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)；(7)眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且治療性產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)；(8)眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且治療性產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)；(9)眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且治療性產物為Usherin (USH2A)；(10)眼睛病狀與3型亞瑟氏症相關，且治療性產物為Clarin 1 (CLRN1)；(11)眼睛病狀與斯特格氏病相關，且治療性產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)；(12)眼睛病狀與斯特格氏病相關，且治療性產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)；(13)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗介白素6 (IL6)單株抗體；(14)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗TNF-α (TNF)單株抗體；(15)眼睛病狀與糖尿病性黃斑水腫(DME)相關，且治療性產物為抗IL6單株抗體；(16)眼睛病狀與紅綠色盲相關，且治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)；(17)眼睛病狀與紅綠色盲相關，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(18)眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(19)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)；(20)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)；(21)眼睛病狀與LCA 3相關，且治療性產物為精子形成相關7 (SPATA7)；(22)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)相關，且治療性產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)；(23)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦5 (LCA 5)相關，且治療性產物為Lebercilin (LCA5)；(24)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦6 (LCA 6)相關，且治療性產物為RPGR相互作用蛋白1 (RPGRIP1)；(25)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)；(26)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)相關，且治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1) (亦稱為LCA8)；(27)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)相關，且治療性產物為菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)；(28)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)相關，且治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)；(29)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)；(30)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)相關，且治療性產物為視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)；(31)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)相關，且治療性產物為視黃醇去氫酶12 (RDH12)；(32)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦14 (LCA 14)相關，且治療性產物為卵磷脂視黃醇醯基轉移酶(LRAT)；(33)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)；(34)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)相關，且治療性產物為電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)；(35)眼睛病狀與萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)；(36)眼睛病狀與LHON相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)；(37)眼睛病狀與LHON相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)；(38)眼睛病狀與視神經脊髓炎(NMO)相關，且治療性產物為抗補體抗體或抗補體適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(39)眼睛病狀與NMO相關，且治療性產物為抗IL6單株抗體或適體；(40)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(41)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為血管收縮素I轉化酶(ACE)；(42)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為介白素10 (IL10)；(43)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗TNF單株抗體；(44)眼睛病狀與無脈絡膜症相關，且治療性產物為Rab護航蛋白1 (CHM)；(45)眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)；(46)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)；(47)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群2相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群2 (BBS2)；(48)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群3相關，且治療性產物為ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6) (亦稱為BBS3)；(49)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群4相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群4 (BBS4)；(50)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群5相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)；(51)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且治療性產物為麥-考症候群(MKKS)，亦稱為BBS6；(52)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群7相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群7 (BBS7)；(53)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群8相關，且治療性產物為三十四肽重複域8 (TTC8)，亦稱為BBS8；(54)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群9相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群9 (BBS9)；(55)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)；(56)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群11相關，且治療性產物為含三聯基元32 (TRIM32)，亦稱為BBS11；(57)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群12相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群12 (BBS12)；(58)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群13相關，且治療性產物為MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)，亦稱為BBS13；(59)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群14相關，且治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)，亦稱為BBS14及LCA10；(60)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群15相關，且治療性產物為含WD重複之平面細胞極性效應子(WDPCP)，亦稱為BBS15；(61)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群16相關，且治療性產物為血清學定義之結腸癌抗原8 (SDCCAG8)，亦稱為BBS16；(62)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群17相關，且治療性產物為白胺酸拉鏈轉錄因子樣1 (LZTFL1)，亦稱為BBS17；(63)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群18相關，且治療性產物為BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)，亦稱為BBS18；(64)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群19相關，且治療性產物為纖毛內轉運27 (IFT27)，亦稱為BBS19；(65)眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；(66)眼睛病狀與視神經萎縮相關，且治療性產物為OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)；(67)眼睛病狀與色素性視網膜炎1相關，且治療性產物為RP1軸突微管相關(RP1)；(68)眼睛病狀與色素性視網膜炎2相關，且治療性產物為ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)；(69)眼睛病狀與色素性視網膜炎7相關，且治療性產物為外周蛋白2 (PRPH2)；(70)眼睛病狀與色素性視網膜炎11相關，且治療性產物為前體mRNA加工因子31 (PRPF31)；(71)眼睛病狀與色素性視網膜炎12相關，且治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)，亦稱為LCA8；(72)眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)；(73)眼睛病狀與色素性視網膜炎25相關，且治療性產物為閉眼同源物(EYS)；(74)眼睛病狀與色素性視網膜炎28相關，且治療性產物為FAM161中心體蛋白A (FAM161A)；(75)眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；(76)眼睛病狀與色素性視網膜炎38相關，且治療性產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)；(77)眼睛病狀與色素性視網膜炎40相關，且治療性產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)；(78)眼睛病狀與色素性視網膜炎41相關，且治療性產物為Prominin 1 (PROM1)；(79)眼睛病狀與色素性視網膜炎43相關，且治療性產物為磷酸二酯酶6A (PDE6A)；(80)眼睛病狀與色素性視網膜炎56相關，且治療性產物為感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)；(81)眼睛病狀與色素性視網膜炎62相關，且治療性產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)；(82)眼睛病狀與色素性視網膜炎80相關，且治療性產物為纖毛內轉運140 (IFT140)；(83)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(84)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為抗攻膜複合物(MAC)治療性產物，較佳地，抗MAC治療性產物為抗MAC單株抗體，其為針對攻膜複合物之人類蛋白的單株抗體，該人類蛋白由四個補體蛋白C5b (SEQ ID NO. 314-316)、C6 (SEQ ID NO. 317)、C7 (SEQ ID NO. 318)及C8 (SEQ ID NO. 319-321)構成；(85)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為HtrA絲胺酸肽酶1 (HTRA1)；(86)眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)；(87)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為補體因子B反義寡核苷酸；(88)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為抗β-類澱粉蛋白單株抗體；(89)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為CD59糖蛋白(CD59)；(90)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為光敏感通道蛋白-1 (ChR1)，其包括ChR1之人類同源物；(91)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為光敏感通道蛋白-2 (ChR2)，其包括ChR2之人類同源物；(92)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(93)眼睛病狀與乾性AMD相關，且治療性產物為抗補體因子D治療性產物，包括但不限於抗補體因子D單株抗體或抗補體因子D適體；(94)眼睛病狀與年齡相關性視網膜神經節細胞(RGC)變性相關，且治療性產物為DnaJ熱休克蛋白家族(Hsp40)成員C3 (DNAJC3)，亦稱為P58IPK；(95)眼睛病狀與藍錐細胞單色視(BCM)相關，且治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)；(96)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為β-2腎上腺素受體siRNA；(97)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為半胱天冬酶-2 (CASP2)；(98)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為胰島素受體受質1 (IRS1)；(99)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為HIF-1反應蛋白RTP801 (RTP801)；(100)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為轉化生長因子β2 (TGFB2)；(101)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為腦源性神經營養因子(BDNF)；(102)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為睫狀神經營養因子(CNTF)；(103)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為前列腺素內過氧化物合成酶2 (PTGS2)；(104)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為前列腺素F受體(PTGFR) (當眼睛病狀與青光眼相關時，在一特定實施例中，包含編碼PTGFR之核苷酸序列的重組病毒載體可與包含編碼PTGS2之核苷酸序列的重組病毒載體組合投與人類個體；在另一特定實施例中，可向人類個體投與包含編碼PTGFR之核苷酸序列及編碼PTGS2之核苷酸序列的重組病毒載體)；(105)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為玻尿酸酶，例如HYAL1、HYAL2、HYAL3、HYAL4及HYAL5；(106)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為色素上皮衍生因子(PEDF)；(107)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為血管內皮生長因子(VEGF)；(108)眼睛病狀與青光眼相關，且治療性產物為胎盤生長因子(PGF)，其中PGF可與VEGF組合使用；(109)眼睛病狀與青光眼(例如先天性青光眼或青少年型青光眼相關)，且治療性產物為肌纖蛋白(MYOC)；(110)眼睛病狀與NMO相關，且治療性產物為抗補體C5單株抗體；(111)眼睛病狀與NMO相關，且治療性產物為C-C基元趨化因子受體5 (CCR5) siRNA、CCR5 shRNA、siRNA或CCR5 miRNA (較佳地，CCR5 miRNA)；(112)眼睛病狀與NMO相關，且治療性產物為抗CD19單株抗體；(113)眼睛病狀與視紫質突變相關性色素性視網膜炎相關，且治療性產物為光敏感通道蛋白-1 (ChR1)，其包括ChR1之人類同源物；(114)眼睛病狀與視紫質突變相關性色素性視網膜炎相關，且治療性產物為光敏感通道蛋白-2 (ChR2)，其包括ChR2之人類同源物；(115)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為睫狀神經營養因子(CNTF)；(116)眼睛病狀與常染色體隱性色素性視網膜炎相關，且治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)；(117)眼睛病狀與常染色體隱性色素性視網膜炎相關，且治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分2 (CRB2)；(118)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)；(119)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為視紫質(RHO)；(120)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為神經生長因子(NGF)；(121)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為核因子紅血球系2樣2 (NRF2)；(122)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為色素上皮衍生因子(PEDF)；(123)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為麩胱甘肽S-轉移酶PI 1 (GSTP1)，亦稱為PI；(124)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為視桿源性視錐活力因子(RDCVF)；(125)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為視紫質(RHO)；(126)眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且治療性產物為視黃醛結合蛋白1 (RLBP1)；(127)眼睛病狀與斯特格氏病相關，且治療性產物為抗補體C5適體；(128)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為雙同源盒4 (DUX4)；(129)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為NLR家族含Pyrin域3 (NLRP3)；(130)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為脾相關酪胺酸激酶(SYK)；(131)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為促腎上腺皮質激素(ACTH)；(132)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為半胱天冬酶1 (CASP1)；(133)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗CD59治療性產物(諸如抗CD59治療性蛋白質(例如抗CD59單株抗體)，或抗CD59治療性RNA (例如抗CD59 shRNA、抗CD59 siRNA或抗CD59 miRNA)，較佳抗CD59單株抗體)；(134)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(135)眼睛病狀與角膜新血管生成相關，且治療性產物為胰島素受體受質1 (IRS1)；(136)眼睛病狀與角膜新血管生成相關，且治療性產物為NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)；(137)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)；(138)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為α-2-抗纖維蛋白溶酶(A2AP)；(139)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為纖維蛋白溶酶原(PLG)；(140)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物可為生長激素；(141)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為胰島素樣生長因子1 (IGF1)，其中IGF1可與生長激素組合使用；(142)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為介白素1β (IL1B)；(143)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為血管收縮素I轉化酶2 (ACE2)，其中ACE2可與IL1B組合使用；(144)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為IRS1；(145)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為抗整合素寡肽；(146)眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且治療性產物為抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體；(147)眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病(亦稱為葛瑞夫茲氏眼眶病)相關，且治療性產物為抗CD40單株抗體；(148)眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且治療性產物為抗胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)單株抗體；(149)眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且治療性產物為抗胰島素樣生長因子2受體(IGF2R)單株抗體；(150)眼睛病狀與DME相關，且治療性產物為抗整合素寡肽；(151)眼睛病狀與DME相關，且治療性產物為抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體；(152)眼睛病狀與DME相關，且治療性產物為RTP801 siRNA；(153)眼睛病狀與多發性硬化症(MS)相關之視力喪失相關，且治療性產物為ND1；(154)眼睛病狀與近視相關，且治療性產物為基質金屬蛋白酶2 (MMP2) RNAi；(155)眼睛病狀與X性聯隱性眼白化病相關，且治療性產物為G蛋白偶合受體143 (GPR143)；(156)眼睛病狀與1型眼皮膚白化病相關，且治療性產物為酪胺酸酶(TYR)；(157)眼睛病狀與視神經炎相關，且治療性產物為半胱天冬酶2 (CASP2)；(158)眼睛病狀與視神經炎相關，且治療性產物為抗含白胺酸富集重複序列及Ig域之蛋白質1 (LINGO1)單株抗體；或(159)眼睛病狀與息肉狀脈絡膜血管病變相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或抗補體適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體/適體、抗補體C1s單株抗體/適體、抗補體C2單株抗體/適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體。
在本文所述之方法的某些實施例中，眼睛病狀與X性聯色素性視網膜炎(XLRP)相關，且治療性產物為色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)。在前述方法中之任一者的某些實施例中，眼睛病狀與全色盲(ACHM)相關，且治療性產物為環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)。在前述方法中之任一者的某些實施例中，眼睛病狀與全色盲(例如CNGA3連鎖之全色盲)相關，且治療性產物為環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)。在前述方法中之任一者的某些實施例中，眼睛病狀與二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良相關，且治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)。
在本文所述之方法的某些實施例中，(1)眼睛病狀與Batten-CLN1相關，且治療性產物為棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)；(2)眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)；(3)眼睛病狀與Batten-CLN3相關，且治療性產物為Battenin (CLN3)；(4)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗介白素6 (IL6)單株抗體；(5)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗TNF-α (TNF)單株抗體；(6)眼睛病狀與糖尿病性黃斑水腫(DME)相關，且治療性產物為抗IL6單株抗體；(7)眼睛病狀與紅綠色盲相關，且治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)；(8)眼睛病狀與紅綠色盲相關，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(9)眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(10)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)；(11)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)；(12)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)；(13)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)；(14)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)相關，且治療性產物為視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)；(15)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)相關，且治療性產物為視黃醇去氫酶12 (RDH12)；(16)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)；(17)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)相關，且治療性產物為電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)；(18)眼睛病狀與萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)；(19)眼睛病狀與LHON相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)；(20)眼睛病狀與LHON相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)；(21)眼睛病狀與視神經脊髓炎(NMO)相關，且治療性產物為抗補體單株抗體或抗補體適體，其中該抗補體單株抗體或適體為抗補體C1單株抗體或適體、抗補體C1q單株抗體或適體、抗補體C1s單株抗體或適體、抗補體C2單株抗體或適體、抗補體C2a單株抗體或適體、抗補體C2b單株抗體或適體、抗補體C3單株抗體或適體、抗補體C3a單株抗體或適體、抗補體C3b單株抗體或適體、抗補體C4單株抗體或適體、抗補體C4a單株抗體或適體、抗補體C4b單株抗體或適體、抗補體C5單株抗體或適體、抗補體C5a單株抗體或適體、抗補體C5b單株抗體或適體、抗補體C6單株抗體或適體、抗補體C7單株抗體或適體、抗補體C8單株抗體或適體或抗補體C9單株抗體或適體，或較佳抗補體C5抗體；(22)眼睛病狀與NMO相關，且治療性產物為抗IL6單株抗體；(23)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗補體C5單株抗體；(24)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為血管收縮素I轉化酶(ACE)；(25)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為介白素10 (IL10)；(26)眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且治療性產物為抗TNF單株抗體；(27)眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)；(28)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)；(29)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群3相關，且治療性產物為ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)；(30)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群5相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)；(31)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且治療性產物為麥-考症候群(MKKS)；(32)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)；(33)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群11相關，且治療性產物為含三聯基元32 (TRIM32)；(34)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群13相關，且治療性產物為MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)；(35)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群18相關，且治療性產物為BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)；(36)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群19相關，且治療性產物為纖毛內轉運27 (IFT27)；(37)眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；(38)眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)；(39)眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；或(40)眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。
在本文所述之方法的某些實施例中，眼睛病狀與二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良相關，且治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)。
在本文所述之方法的某些實施例中，(1)眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)；(2)眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且治療性產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)；(3)眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且治療性產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)；(4)眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且治療性產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)；(5)眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且治療性產物為Usherin (USH2A)；(6)眼睛病狀與3型亞瑟氏症相關，且治療性產物為Clarin 1 (CLRN1)；(7)眼睛病狀與斯特格氏病相關，且治療性產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)；(8)眼睛病狀與斯特格氏病相關，且治療性產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)；(9)眼睛病狀與紅綠色盲相關，且治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)；(10)眼睛病狀與紅綠色盲相關，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(11)眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)；(12)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)；(13)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)；(14)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)相關，且治療性產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)；(15)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)；(16)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)相關，且治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)；(17)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)相關，且治療性產物為菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)；(18)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)相關，且治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)；(19)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)；(20)眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)；(21)眼睛病狀與LHON相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)；(22)眼睛病狀與LHON相關，且治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)；(23)眼睛病狀與無脈絡膜症相關，且治療性產物為Rab護航蛋白1 (CHM)；(24)眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)；(25)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)；(26)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且治療性產物為麥-考症候群(MKKS)；(27)眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)；(28)眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；(29)眼睛病狀與視神經萎縮相關，且治療性產物為OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)；(30)眼睛病狀與色素性視網膜炎1相關，且治療性產物為RP1軸突微管相關(RP1)；(31)眼睛病狀與色素性視網膜炎2相關，且治療性產物為ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)；(32)眼睛病狀與色素性視網膜炎7相關，且治療性產物為外周蛋白2 (PRPH2)；(33)眼睛病狀與色素性視網膜炎11相關，且治療性產物為前體mRNA加工因子31 (PRPF31)；(34)眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)；(35)眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；(36)眼睛病狀與色素性視網膜炎38相關，且治療性產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)；(37)眼睛病狀與色素性視網膜炎40相關，且治療性產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)；(38)眼睛病狀與色素性視網膜炎41相關，且治療性產物為Prominin 1 (PROM1)；(39)眼睛病狀與色素性視網膜炎56相關，且治療性產物為感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)；(40)眼睛病狀與色素性視網膜炎62相關，且治療性產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)；(41)眼睛病狀與色素性視網膜炎80相關，且治療性產物為纖毛內轉運140 (IFT140)；或(42)眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。
在本文所述之方法的某些實施例中，眼睛病狀與X性聯色素性視網膜炎(XLRP)相關，且治療性產物為色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)。在前述方法中之任一者的某些實施例中，眼睛病狀與全色盲相關，且治療性產物為環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)；或與全色盲(例如CNGA3連鎖之全色盲)相關，且治療性產物為環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)。
在本文所述之方法的某些實施例中，治療性產物為蛋白質，或治療性產物為針對蛋白質之抗體，該蛋白質與選自部分7中提供之SEQ ID NO: 52-321的胺基酸序列具有至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%的序列一致性。在本文所述之方法的一特定實施例中，治療性產物為蛋白質，或治療性產物為針對蛋白質之抗體，該蛋白質與選自部分7中提供之SEQ ID NO: 52-321的胺基酸序列具有100%的序列一致性。 (j)      構築體
在本文所述之方法的某些實施例中，本文提供之重組載體按以下順序包含以下元件：a)組成型或低氧誘導型啟動子序列，及b)編碼治療性產物之序列。在某些實施例中，編碼治療性產物之序列包含由IRES元件分隔的多個ORF。在某些實施例中，編碼治療性產物之序列在一個由F/F2A序列分隔之ORF中包含多個次單元。
在本文所述之方法的某些實施例中，本文提供之重組載體按以下順序包含以下元件：a)第一ITR序列，b)第一連接子序列，c)組成型或低氧誘導型啟動子序列，d)第二連接子序列，e)內含子序列，f)第三連接子序列，g)第一UTR序列，h)編碼治療性產物之序列，i)第二UTR序列，j)第四連接子序列，k) poly A序列，l)第五連接子序列，及m)第二ITR序列。 (k)     載體之製造及測試
本文提供之重組載體(例如重組病毒載體)可使用宿主細胞製造。本文提供之重組載體可使用哺乳動物宿主細胞製造，例如A549、WEHI、10T1/2、BHK、MDCK、COS1、COS7、BSC 1、BSC 40、BMT 10、VERO、W138、HeLa、293、Saos、C2C12、L、HT1080、HepG2、初級纖維母細胞、肝細胞及肌母細胞。本文提供之重組載體可使用來自人類、猴、小鼠、大鼠、兔或倉鼠之宿主細胞來製造。
對於重組病毒載體，宿主細胞經編碼治療性產物之序列及相關元件(亦即載體基因組)以及在宿主細胞中產生病毒之手段，例如複製及衣殼基因(例如AAV之rep及cap基因)穩定轉型。關於產生具有AAV8衣殼之重組AAV載體的方法，參見美國專利第7,282,199 B2號之詳細描述的部分IV，其以全文引用之方式併入本文中。該等載體之基因組複本滴度可例如藉由TAQMAN®分析來判定。病毒粒子可例如藉由CsCl2 沈降來回收。
活體外分析法，例如細胞培養分析法，可用於量測自本文所述之載體的治療性產物表現，由此指示例如載體之效力。舉例而言，PER.C6®細胞株(Lonza)，一種來源於人類胚胎視網膜細胞或視網膜色素上皮細胞之細胞株，例如視網膜色素上皮細胞株hTERT RPE-1 (可自ATCC®獲得)，可用於評定治療性產物表現。一旦表現，則可判定所表現之治療性產物的特徵，包括判定轉譯後修飾模式。另外，可使用此項技術中已知的分析法來判定由細胞表現之治療性產物的轉譯後修飾產生的益處。 (l)       組合物
描述包含編碼本文所述之治療性產物的重組載體及適合之載劑的組合物。熟習此項技術者將容易地選擇適合之載劑(例如用於脈絡膜上、視網膜下、近鞏膜、玻璃體內、結膜下及/或視網膜內投藥)。 6.1.3  基因療法
描述向患有眼睛病狀之人類個體投與治療有效量之重組載體(亦即重組病毒載體或DNA表現構築體)的方法。特定言之，描述經由以下方法中之一者向人類個體投與治療有效量之重組載體(亦即重組病毒載體或DNA表現構築體)的方法：(1)無需玻璃體切除術之視網膜下投藥(例如經由脈絡膜上腔或經由外周注射投與視網膜下腔)，(2)脈絡膜上投藥，(3)向鞏膜之外表面投藥(亦即近鞏膜投藥)；(4)偕同玻璃體切除術之視網膜下投藥；(5)玻璃體內投藥及(6)結膜下投藥。
在某些實施例中，可使用國際公開案第WO 2016/042162號、第WO 2017/046358號、第WO 2017/158365號及第WO 2017/158366號中所描述及揭示之方法及/或裝置來進行向視網膜下腔或脈絡膜上腔之遞送，該等公開案各自以全文引用的方式併入本文中。 (a)   目標患者群體
在本文所述之方法的某些實施例中，本文提供之方法係用於向患有眼睛病狀之患者投藥，該眼睛病狀與以下相關：(1)新生血管性年齡相關性黃斑變性(nAMD)；(2)乾性年齡相關性黃斑變性(乾性AMD)；(3)視網膜靜脈栓塞(RVO)糖尿病性黃斑水腫(DME)；(4)糖尿病性視網膜病變(DR)；(5) Batten-CLN1；(6) Batten-CLN2；(7) Batten-CLN3；(8) Batten-CLN6；(8) Batten-CLN7；(9) 1型亞瑟氏症；(10) 2型亞瑟氏症；(11) 3型亞瑟氏症；(12)斯特格氏病；(13)葡萄膜炎；(14)紅綠色盲；(15)藍錐細胞單色視；(16)萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)；(17)萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)；(18))萊伯先天性黑朦3 (LCA 3)；(19)萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)；(20)萊伯先天性黑朦5 (LCA 5)；(21)萊伯先天性黑朦6 (LCA 6)；(22)萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)；(23)萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)；(24)萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)；(25)萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)；(26)萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)；(27)萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)；(28)萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)；(29)萊伯先天性黑朦14 (LCA 14)；(30)萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)；(30)萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)；(31)萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)；(31)視神經脊髓炎(NMO)；(32)無脈絡膜症；(33)X性聯視網膜劈裂症(XLRS)；(34)巴德-畢德氏症候群1；(35)巴德-畢德氏症候群2；(36)巴德-畢德氏症候群3；(37)巴德-畢德氏症候群4；(38)巴德-畢德氏症候群5；(39)巴德-畢德氏症候群6；(40)巴德-畢德氏症候群7；(41)巴德-畢德氏症候群8；(42)巴德-畢德氏症候群9；(43)巴德-畢德氏症候群10；(44)巴德-畢德氏症候群11；(45)巴德-畢德氏症候群12；(46)巴德-畢德氏症候群13；(47)巴德-畢德氏症候群14；(48)巴德-畢德氏症候群15；(49)巴德-畢德氏症候群16；(50)巴德-畢德氏症候群17；(51)巴德-畢德氏症候群18；(52)巴德-畢德氏症候群19；(53)視錐細胞營養不良；(54)視神經萎縮；(55)色素性視網膜炎1；(56)色素性視網膜炎2；(57)色素性視網膜炎7；(58)色素性視網膜炎11；(58)色素性視網膜炎12；(59)色素性視網膜炎13；(60)色素性視網膜炎25；(61)色素性視網膜炎28；(62)色素性視網膜炎37；(63)色素性視網膜炎38；(64)色素性視網膜炎40；(65)色素性視網膜炎41；(66)色素性視網膜炎43；(67)色素性視網膜炎56；(68)色素性視網膜炎62；(69)色素性視網膜炎80；(70)年齡相關性視網膜神經節細胞(RGC)變性；(71)貝斯特氏病；(72)青光眼；(73)視紫質突變相關性色素性視網膜炎；(74)色素性視網膜炎；(75)常染色體隱性色素性視網膜炎；(76)角膜新血管生成；(77)糖尿病性視網膜病變；(78)葛瑞夫茲氏眼病；(79)多發性硬化症(MS)相關之視力喪失；(80)近視；(81) X性聯隱性眼白化病；(82) 1型眼皮膚白化病；(83)視神經炎；(84)息肉狀脈絡膜血管病變；(85) X性聯色素性視網膜炎(XLRP)；(86)全色盲(ACHM)；或(87)二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良。
在本文所述之方法的某些實施例中，人類個體之BCVA≤20/20且≥20/400。在另一特定實施例中，人類個體之BCVA≤20/63且≥20/400。在某些實施例中，根據本文所述之方法治療之個體為女性。在某些實施例中，根據本文所述之方法治療之個體為男性。在某些實施例中，根據本文所述之方法治療之個體為兒童。在某些實施例中，根據本文所述之方法治療之個體為1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲。在某些實施例中，根據本文所述之方法治療之個體小於1.5個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或小於5歲。在另一特定實施例中，根據本文所述之方法治療之個體為1-2個月、2-3個月、3-4個月、4-5個月、5-6個月、6-7個月、7-8個月、8-9個月、9-10個月、10-11個月、11個月至1歲、1-1.5歲、1.5-2歲、2-2.5歲、2.5-3歲、3-3.5歲、3.5-4歲、4-4.5歲或4.5-5歲。在另一特定實施例中，根據本文所述之方法治療之個體為6個月至5歲。 (b)   投藥劑量及模式
在本文所述之方法的某些實施例中，將治療有效劑量之重組載體投與(1)至無需玻璃體切除術之視網膜下腔(例如經由脈絡膜上腔或經由外周注射)，(2)至脈絡膜上腔，(3)至鞏膜之外表面(亦即近鞏膜投與)，(4)經由玻璃體切除術至視網膜下腔，或(5)至玻璃體腔，體積範圍介於50-100 μl或100-500 μl，較佳100-300 μl且最佳250 μl，視投與方法而定。在某些實施例中，治療有效劑量之重組載體以100 μl或更小之體積，例如以50-100 μl之體積脈絡膜上投與。在某些實施例中，將治療有效劑量之重組載體以500 μl或更小之體積，例如以10-20 μl、20-50 μl、50-100 μl、100-200 μl、200-300 μl、300-400 μl或400-500 μl之體積投與至鞏膜之外表面(例如藉由後部近鞏膜儲槽術)。在某些實施例中，治療有效劑量之重組載體經由外周注射以50-100 μl或100-500 μl，較佳100-300 μl且最佳250 μl之體積投與至視網膜下腔。
在特定實施例中，本文描述一種微量注射器遞送系統，其由Altaviz製造(參見圖7A及圖7B) (參見例如國際專利申請公開案第WO 2013/177215號)，可用於本文關於眼睛投藥所述之任何投藥途徑。在特定實施例中，微量注射器遞送系統可用於微量注射器，其為具有劑量指導之微量注射器，且可與例如脈絡膜上針頭(例如Clearside®針頭)、視網膜下針頭、玻璃體內針頭、近鞏膜針頭、結膜下針頭及/或視網膜內針頭一起使用。使用微量注射器之益處包括：(a)更受控制的遞送(例如歸因於具有精確注射流動速率控制及劑量指導)，(b)單名外科醫生、單手、單指操作；(c) 10 µL增量劑量之氣動驅動；(d)與玻璃體切除機分離；(e) 400 µL注射器劑量；(f)數位引導之遞送；(g)數位記錄之遞送；及(h)不可知的尖端(例如MedOne 38g針頭及Dorc 41g針頭可用於視網膜下遞送，而Clearside®針頭及Visionisti OY配接器可用於視網膜下遞送)。
在本文所述之方法的某些實施例中，重組載體係經脈絡膜上投與(例如藉由脈絡膜上注射)。在一特定實施例中，使用脈絡膜上藥物遞送裝置進行脈絡膜上投藥(例如注射至脈絡膜上腔中)。脈絡膜上藥物遞送裝置通常用於脈絡膜上投藥程序，其涉及將藥物投與至眼睛之脈絡膜上腔(參見例如Hariprasad, 2016, Retinal Physician 13: 20-23；Goldstein, 2014, Retina Today 9(5): 82-87；Baldassarre等人, 2017；其各自以全文引用的方式併入本文中)。根據本文所述之本發明，可用於將重組載體沈積於脈絡膜上腔中之脈絡膜上藥物遞送裝置包括但不限於由Clearside® Biomedical, Inc.製造之脈絡膜上藥物遞送裝置(參見例如Hariprasad, 2016, Retinal Physician 13: 20-23)及MedOne脈絡膜上導管。在另一個實施例中，可根據本文所述之方法使用的脈絡膜上藥物遞送裝置包含由Altaviz製造之微量注射器遞送系統。(參見圖7A及圖7B) (參見例如國際專利申請公開案第WO 2013/177215號)微量注射器為具有劑量指導之微量注射器，且可與例如脈絡膜上針頭(例如Clearside®針頭)或視網膜下針頭一起使用。使用微量注射器之益處包括：(a)更受控制的遞送(例如歸因於具有精確注射流動速率控制及劑量指導)，(b)單名外科醫生、單手、單指操作；(c) 10 µL增量劑量之氣動驅動；(d)與玻璃體切除機分離；(e) 400 µL注射器劑量；(f)數位引導之遞送；(g)數位記錄之遞送；及(h)不可知的尖端(例如MedOne 38g針頭及Dorc 41g針頭可用於視網膜下遞送，而Clearside®針頭及Visionisti OY配接器可用於脈絡膜上遞送)。在另一個實施例中，可根據本文所述之方法使用的脈絡膜上藥物遞送裝置為包含正常長度的皮下注射針與由Visionisti OY製造之配接器(且較佳亦具有導針器)的工具，該配接器藉由控制自配接器露出之針尖的長度將正常長度的皮下注射針插入脈絡膜上針頭中(參見圖8) (參見例如美國設計專利第D878,575號；及國際專利申請公開案第WO/2016/083669號)。在一特定實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置為具有1毫米30規格針頭之注射器(參見圖1)。在使用此裝置進行注射的過程中，針頭刺入鞏膜之基底且含有藥物之流體進入脈絡膜上腔，導致脈絡膜上腔膨脹。因此，在注射過程中存在觸覺及視覺反饋。在注射後，流體向後部流動且主要在脈絡膜及視網膜中吸收。此舉致使自所有視網膜細胞層及脈絡膜細胞產生治療性產物。使用此類型之裝置及手術允許進行快速簡便的門診手術且降低併發症的風險。可將100 μl之最大體積注射至脈絡膜上腔中。
在本文所述之方法的某些實施例中，重組載體係經由玻璃體切除術進行視網膜下投與。經由玻璃體切除術進行視網膜下投藥為由經過訓練之視網膜醫師執行的外科手術，其涉及在局部麻醉下對個體進行玻璃體切除術，且將基因療法視網膜下注射至視網膜中(參見例如Campochiaro等人, 2017, Hum Gen Ther 28(1):99-111，其以全文引用的方式併入本文中)。
在本文所述之方法的某些實施例中，重組載體無需玻璃體切除術進行視網膜下投與。
在本文所述之方法的某些實施例中，無需玻璃體切除術之視網膜下投藥係藉由使用視網膜下藥物遞送裝置經由脈絡膜上腔進行。在某些實施例中，視網膜下藥物遞送裝置為導管，該導管在外科手術過程中插入且經由脈絡膜上腔穿隧至眼睛後部，以將藥物遞送至視網膜下腔(參見圖2)。此手術使玻璃體保持完整，因此存在較小的併發症風險(基因療法外溢及諸如視網膜脫離及黃斑裂孔之併發症的風險較小)，且無需玻璃體切除術，所產生的泡可更加擴散，從而使更多的視網膜表面區域以較小的體積轉導。此手術後誘發白內障的風險降至最低，其為較年輕的患者所期望的。此外，此手術與標準經玻璃體方法相比可更安全地在中央凹下遞送泡，其為患有遺傳性視網膜疾病且影響中心視覺之患者所期望的，其中用於轉導之靶細胞在黃斑中。此手術對於在全身循環中存在針對AAV之中和抗體(Nab)且可影響其他遞送途徑(諸如脈絡膜上及玻璃體內)的患者亦為有利的。另外，與標準經玻璃體方法相比，此方法已顯示產生泡，較少自視網膜切開術部位溢出。最初由Janssen Pharmaceuticals, Inc.製造，現在由Orbit Biomedical Inc.製造之視網膜下藥物遞送裝置(參見例如Subretinal Delivery of Cells via the Suprachoroidal Space: Janssen Trial. In: Schwartz等人 (編) Cellular Therapies for Retinal Disease, Springer, Cham；國際專利申請公開案第WO 2016/040635 A1號)可用於此類目的。
在另一特定實施例中，無需玻璃體切除術之視網膜下投藥係經由向視網膜之外周注射(亦即位於眼睛後部之視神經盤、中央凹及黃斑外周，參見圖3)來進行。此可藉由經玻璃體注射來實現。
在一個實施例中，將尖銳的針頭經由眼睛之上側或下側(例如在2點鐘或10點鐘位置)插入鞏膜中，使得針頭完全穿過玻璃體以注射至另一側視網膜。在另一個實施例中，將套管針插入鞏膜中以允許將視網膜下套管插入眼睛。套管經由套管針插入且穿過玻璃體到達所要注射的區域。在任一實施例中，重組載體在視網膜下腔中注射，在眼睛之相對內表面上形成含有重組載體之泡。半圓形視網膜脫離/視網膜泡之出現證實注射成功。
自發光鏡頭可用作經玻璃體投藥之光源(參見例如Chalam等人, 2004, Ophthalmic Surgery and Lasers 35: 76-77，其以全文引用的方式併入本文中)。或者，若需要，可置放一或多個套管針進行光照(或輸注)。在另一個實施例中，可經由套管針利用光纖吊燈以使視網膜下注射可視化。
可進行一次、兩次或更多次外周注射以投與重組載體。以此方式，可在視神經盤、中央凹及黃斑外周之視網膜下腔中獲得一個、兩個或更多個含有重組載體之泡。出人意料的是，儘管重組載體之投與僅限於外周注射之泡，但當使用此方法時可偵測到整個視網膜中治療性產物之表現。
在一特定實施例中，玻璃體內投藥係藉由玻璃體內藥物遞送裝置來進行，該裝置包含由Altaviz製造之微量注射器遞送系統。(參見圖7A及圖7B) (參見例如國際專利申請公開案第WO 2013/177215號) 微量注射器為具有劑量指導之微量注射器，且可與例如玻璃體內針頭一起使用。使用微量注射器之益處包括：(a)更受控制的遞送(例如歸因於具有精確注射流動速率控制及劑量指導)，(b)單名外科醫生、單手、單指操作；(c) 10 µL增量劑量之氣動驅動；(d)與玻璃體切除機分離；(e) 400 µL注射器劑量；(f)數位引導之遞送；(g)數位記錄之遞送；及(h)不可知的尖端(例如MedOne 38g針頭及Dorc 41g針頭可用於視網膜下遞送，而Clearside®針頭及Visionisti OY配接器可用於視網膜下遞送)。
在某些實施例中，外周注射使得治療性產物在整個眼睛中均勻表現(例如與眼睛其他區域之表現量相比，注射部位之表現量變化小於5%、10%、20%、30%、40%或50%)。治療性產物在整個眼睛中之表現可藉由此項技術中已知用於此類目的之任何方法量測，例如藉由眼睛或視網膜之整體封裝標本免疫螢光染色，或藉由對冷凍眼部切片之免疫螢光染色。
在經玻璃體注射導致重組載體在玻璃體中而非在視網膜下腔中丟失之情況下，可進行視情況選用之玻璃體切除術以移除注射至玻璃體中之重組載體。可隨後進行藉由玻璃體切除術之視網膜下注射，以將250 μl重組載體遞送至視網膜下腔。或者，若一些注射之重組載體沈積至玻璃體中且不進行玻璃體切除術以自玻璃體移除重組載體，則可將襯有固定化(例如共價結合)之抗AAV抗體(例如抗AAV8抗體)的導管插入玻璃體中以捕捉且自玻璃體移除過量重組載體。
在一特定實施例中，視網膜下投藥係藉由視網膜下藥物遞送裝置來進行，該裝置包含由Altaviz製造之微量注射器遞送系統。(參見圖7A及圖7B) (參見例如國際專利申請公開案第WO 2013/177215號) 微量注射器為具有劑量指導之微量注射器，且可與例如視網膜下針頭一起使用。使用微量注射器之益處包括：(a)更受控制的遞送(例如歸因於具有精確注射流動速率控制及劑量指導)，(b)單名外科醫生、單手、單指操作；(c) 10 µL增量劑量之氣動驅動；(d)與玻璃體切除機分離；(e) 400 µL注射器劑量；(f)數位引導之遞送；(g)數位記錄之遞送；及(h)不可知的尖端(例如MedOne 38g針頭及Dorc 41g針頭可用於視網膜下遞送，而Clearside®針頭及Visionisti OY配接器可用於脈絡膜上遞送)。
在某些實施例中，將重組載體投與至鞏膜外表面(例如藉由使用包含套管之近鞏膜藥物遞送裝置，該套管之尖端可插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面)。在一特定實施例中，投與至鞏膜外表面係使用後部近鞏膜儲槽術來進行，其涉及將藥物吸入鈍頭彎曲的套管中且隨後與鞏膜外表面直接接觸進行遞送而不刺穿眼球。特定言之，在對裸露的鞏膜形成小切口之後，插入套管尖端(參見圖4A)。插入套管軸之彎曲部分，保持套管尖端直接並置於鞏膜表面(參見圖4B-圖4D)。完整插入套管後(圖4D)，緩慢地注射藥物，同時用無菌棉花拭子沿著套管軸的頂部及側面維持適度的壓力。此遞送方法避免眼內感染及視網膜脫離之風險，副作用通常與將治療劑直接注射至眼睛中相關。
在一特定實施例中，近鞏膜投藥係藉由近鞏膜藥物遞送裝置來進行，該裝置包含由Altaviz製造之微量注射器遞送系統。(參見圖7A及圖7B) (參見例如國際專利申請公開案第WO 2013/177215號) 微量注射器為具有劑量指導之微量注射器，且可與例如近鞏膜針頭一起使用。使用微量注射器之益處包括：(a)更受控制的遞送(例如歸因於具有精確注射流動速率控制及劑量指導)，(b)單名外科醫生、單手、單指操作；(c) 10 µL增量劑量之氣動驅動；(d)與玻璃體切除機分離；(e) 400 µL注射器劑量；(f)數位引導之遞送；(g)數位記錄之遞送；及(h)不可知的尖端。
在某些實施例中，在投與比體溫低的溶液之後，可使用紅外熱像儀來偵測眼表面之熱分佈變化，以偵測眼表面之熱分佈變化，從而使溶液例如在SCS內之擴散可視化，且可潛在地判定投藥是否成功完成。此係因為在某些實施例中，含有待投與之重組載體的調配物最初為冷凍的，將其拿到室溫(68-72℉)，且在投與之前短時間解凍(例如至少30分鐘)，且因此在注射時，調配物比人眼溫度(約92℉)低(且有時甚至比室溫低)。藥品通常在解凍4小時內使用，且最暖的溶液應為室溫。在一較佳實施例中，手術用紅外視訊來錄製。
紅外熱像儀可偵測溫度之微小變化。其經由鏡頭捕捉紅外能量且將所述轉換為電子信號。紅外光聚焦於紅外線感測器陣列上，其將能量轉換為熱影像。紅外熱像儀可用於任何向眼睛投藥之方法，包括本文所述之任何投藥途徑，例如脈絡膜上投藥、視網膜下投藥、結膜下投藥、玻璃體內投藥或使用慢速輸注導管投藥至脈絡膜上腔。在一特定實施例中，紅外熱像儀為FLIR T530紅外熱像儀。FLIR T530紅外熱像儀可捕捉微小的溫度差，精度為±3.6℉。相機之紅外解析度為76,800像素。相機亦利用24°鏡頭捕捉較小的視野。較小的視野與高紅外解析度組合有助於操作員成像之熱分佈更詳細。然而，可使用具有不同的捕捉微小溫度變化之能力及精度，具有不同紅外解析度及/或具有不同度數鏡頭的其他紅外相機。
在某些實施例中，濾鐵器與紅外熱像儀一起使用以偵測眼表面熱分佈之變化。在一較佳實施例中，使用濾鐵器能夠產生偽彩色圖像，其中最暖或高溫部分著色為白色，中間溫度為紅色及黃色，且最冷或低溫部分為黑色。在某些實施例中，亦可使用其他類型的濾器以生成熱分佈之偽彩色影像。
每種投藥方法之熱分佈可不同。舉例而言，在一個實施例中，成功的脈絡膜上注射之特徵可在於：(a)深色的緩慢、廣泛的徑向擴散，(b)開始時顏色很深，及(c)注射液逐漸變為較淺的顏色，亦即由較淺的顏色標示之溫度梯度。在一個實施例中，不成功的脈絡膜上注射之特徵可在於：(a)深色沒有擴散，及(b)注射部位局部顏色發生輕微變化，沒有任何分佈。在某些實施例中，小的局部溫度下降係由套管(低溫)接觸眼組織(高溫)引起。在一個實施例中，成功的玻璃體內注射之特徵可在於：(a)深色沒有擴散，(b)注射部位局部最初變為非常深的顏色，及(c)整個眼球逐漸均勻地變為較深的顏色。在一個實施例中，眼外排之特徵可在於：(a)眼睛外表面外部的快速流動流，(b)開始時顏色很深，及(c)快速變為較淺的顏色。
因為治療性產物為連續產生的(在組成型啟動子的控制下或在使用低氧誘導型啟動子時由低氧條件誘導)，所以維持較低的濃度可為有效的。玻璃體液濃度可直接在自玻璃體液或前房收集之患者流體樣品中量測，或藉由量測患者之治療性產物血清濃度來估計及/或監測——全身與玻璃體暴露於治療性產物之比率為約1:90,000。(例如參見Xu L等人, 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624, 第1621頁及第1623頁之表5中報告之蘭尼單抗的玻璃體液及血清濃度，其以全文引用的方式併入本文中)。
在某些實施例中，劑量係藉由每毫升基因組複本或投與患者眼睛(例如脈絡膜上、視網膜下、玻璃體內、近鞏膜、結膜下及/或視網膜內投與之基因組複本數來量度。在某些實施例中，投與每毫升1 × 109 個基因組複本至每毫升1 × 1015 個基因組複本。在一特定實施例中，投與每毫升1 × 109 個基因組複本至每毫升1 × 1010 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升1 × 1010 個基因組複本至每毫升1 × 1011 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與1 × 1010 至5 × 1011 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升1 × 1011 個基因組複本至每毫升1 × 1012 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升1 × 1012 個基因組複本至每毫升1 × 1013 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升1 × 1013 個基因組複本至每毫升1 × 1014 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升1 × 1014 個基因組複本至每毫升1 × 1015 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約1 × 109 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約1 × 1010 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約1 × 1011 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約1 × 1012 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約1 × 1013 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約1 × 1014 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約1 × 1015 個基因組複本。在某些實施例中，投與1 × 109 至1 × 1015 個基因組複本。在一特定實施例中，投與1 × 109 至1 × 1010 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與1 × 1010 至1 × 1011 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與1 × 1010 至5 × 1011 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與1 × 1011 至1 × 1012 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與1 × 1012 至1 × 1013 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與1 × 1013 至1 × 1014 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與1 × 1013 至1 × 1014 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與1 × 1014 至1 × 1015 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與約1 × 109 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與約1 × 1010 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與約1 × 1011 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與約1 × 1012 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與約1 × 1013 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與約1 × 1014 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與約1 × 1015 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛約3.0 × 1013 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛多達3.0 × 1013 個基因組複本。
在某些實施例中，投與每隻眼睛約6.0 × 1010 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛約1.6 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛約5.0 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛約3 × 1012 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛每毫升約1.0 × 1012 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛每毫升約2.5 × 1012 個基因組複本。
在某些實施例中，藉由視網膜下注射投與每隻眼睛約6.0 × 1010 個基因組複本。在某些實施例中，藉由視網膜下注射投與每隻眼睛約1.6 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由視網膜下注射投與每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由視網膜下注射投與每隻眼睛約3.0 × 1013 個基因組複本。在某些實施例中，藉由視網膜下注射投與每隻眼睛多達3.0 × 1013 個基因組複本。
在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與每隻眼睛約5.0 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與每隻眼睛約3 × 1012 個基因組複本。在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射投與每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由兩次脈絡膜上注射投與每隻眼睛約5.0 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與每隻眼睛約3.0 × 1013 個基因組複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與每隻眼睛多達3.0 × 1013 個基因組複本。在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射以100 μl之體積投與每隻眼睛每毫升約2.5 × 1012 個基因組複本。在某些實施例中，藉由兩次脈絡膜上注射投與每隻眼睛每毫升約2.5 × 1012 個基因組複本，其中每次注射之體積為100 μl。
如本文所用且除非另外規定，否則術語「約」意謂在既定值或範圍之±10%內。在某些實施例中，術語「約」涵蓋所列舉之確切數字。 (c)   取樣及監測功效
在某些實施例中，當人類個體在CNS及眼睛中均具有疾病表現時(例如當人類個體患有巴藤病時)，本文提供之方法包含經由中樞神經系統(CNS)遞送途徑及眼部遞送途徑(例如本文所述之眼部遞送途徑)向人類個體投與本文所述之重組載體(亦即重組病毒載體或DNA表現構築體)。在某些實施例中，眼部遞送途徑係選自以下中之一者：(1)無需玻璃體切除術之視網膜下投藥(例如經由脈絡膜上腔或經由外周注射投與視網膜下腔)，(2)脈絡膜上投藥，(3)向鞏膜之外表面投藥(亦即近鞏膜投藥)；(4)偕同玻璃體切除術之視網膜下投藥；(5)玻璃體內投藥及(6)玻璃體內投藥。在某些實施例中，CNS遞送途徑係選自以下中之一者：腦室內(ICV)遞送、腦池內(IC)遞送或腰椎內(IT-L)遞送。
本文提供之方法對視覺缺損之效應可藉由BCVA (最佳矯正視力)、眼內壓、裂隙燈活組織檢視法及/或間接檢眼鏡檢查法來量測。
在特定實施例中，本文提供之方法對視覺缺損之效應可藉由經本文所述之方法治療之人類患者的眼睛在治療後(例如治療後46-50週或98-102週)是否達到大於43個字母的BCVA來量測。43個字母之BCVA對應於20/160近似斯內倫當量(approximate Snellen equivalent)。在一特定實施例中，經本文所述之方法治療之人類患者的眼睛在治療後(例如治療後46-50週或98-102週)達到大於43個字母的BCVA。
在特定實施例中，本文提供之方法對視覺缺損之效應可藉由經本文所述之方法治療之人類患者的眼睛在治療後(例如治療後46-50週或98-102週)是否達到大於84個字母的BCVA來量測。84個字母之BCVA對應於20/20近似斯內倫當量。在一特定實施例中，經本文所述之方法治療之人類患者的眼睛在治療後(例如治療後46-50週或98-102週)達到大於84個字母的BCVA。
本文提供之方法對眼睛/視網膜之物理變化的效應可藉由SD-OCT (SD-光學相干斷層攝影術)來量測。
可如藉由視網膜電圖描記(ERG)量測般監測功效。
本文提供之方法的效應可藉由量測視力喪失、感染、炎症及其他安全事件(包括視網膜脫離)之跡象來監測。
可監測視網膜厚度以判定本文提供之方法的功效。在不受任何特定理論束縛的情況下，可將視網膜厚度用作臨床讀數，其中視網膜厚度之減小愈大或視網膜增厚之前的時間愈長，則治療愈有效。視網膜功能可例如藉由ERG判定。ERG為經FDA批准用於人類之視網膜功能的非侵入性電生理測試，其檢查眼睛之感光細胞(視桿及視錐)及其連接之神經節細胞，特別是其對閃光刺激之反應。視網膜厚度可例如藉由SD-OCT來判定。SD-OCT為一種三維成像技術，其使用低相干干涉術來判定回波時間延遲劑自目標物體反射之反向散射光的量值。OCT可用於以3至15 μm軸向解析度掃描組織樣品(例如視網膜)之層，且SD-OCT與以前的技術形式相比提高軸向解析度及掃描速度(Schuman, 2008, Trans. Am. Opthamol. Soc. 106:426-458)。
本文提供之方法的效應亦可藉由國家眼科研究所視覺功能問卷Rasch評分版(NEI-VFQ-28-R) (綜合評分；活動限制域評分；及社會情感功能域評分)中相對於基線的變化來量測。本文提供之方法的效應亦可藉由國家眼科研究所視覺功能問卷25項版本(NEI-VFQ-25) (綜合評分及心理健康分量表評分)中相對於基線的變化來量測。本文提供之方法的效應亦可藉由黃斑病治療滿意度問卷(MacTSQ) (綜合評分；安全性、功效及不適域評分；以及資訊提供及便利域評分)中相對於基線的變化來量測。
在特定實施例中，本文所述之方法的功效係藉由在約4週、12週、6個月、12個月、24個月、36個月或其他期望時間點的視力改善來反映。在一特定實施例中，視力改善之特徵在於BCVA的增加，例如增加1個字母、2個字母、3個字母、4個字母、5個字母、6個字母、7個字母、8個字母、9個字母、10個字母、11個字母或12個字母或更多。在一特定實施例中，視力改善之特徵在於視力相對於基線增加5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%或更多。
在特定實施例中，本文所述之方法的功效係藉由在約4週、12週、6個月、12個月、24個月、36個月或其他期望時間點中心視網膜厚度(CRT)之減小來反映，例如中心視網膜厚度相對於基線降低5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%或更多。
在一特定實施例中，治療後眼睛中不存在炎症或治療後眼睛中幾乎沒有炎症(例如炎症水準相對於基線增加10%、5%、2%、1%或更小)。
本文提供之方法對視覺缺損的效應可藉由視動眼球震顫(OKN)來量測。
在不受理論束縛的情況下，此視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN可用於量測言語前及/或非言語患者之視力。在某些實施例中，OKN用於量測1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。在某些實施例中，當患者正在觀看iPad上之運動時，使用iPad經由偵測OKN反射來量測視力。
在不受理論束縛的情況下，此視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN可用於量測言語前及/或非言語患者之視力。在某些實施例中，OKN用於量測小於1.5個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。在另一特定實施例中，OKN用於量測1-2個月、2-3個月、3-4個月、4-5個月、5-6個月、6-7個月、7-8個月、8-9個月、9-10個月、10-11個月、11個月至1歲、1-1.5歲、1.5-2歲、2-2.5歲、2.5-3歲、3-3.5歲、3.5-4歲、4-4.5歲或4.5-5歲患者的視力。在另一特定實施例中，OKN用於量測6個月至5歲患者的視力。在某些實施例中，當患者正在觀看iPad上之運動時，使用iPad經由偵測OKN反射來量測視力。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼三肽基-肽酶1 (TPP1)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼三肽基-肽酶1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼TPP1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN2相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼三肽基-肽酶1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的至多5歲患者處於該年齡及/或上述年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼PPT1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼PPT1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN1相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼PPT1之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼Battenin (CLN3)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼Battenin (CLN3)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼Battenin (CLN3)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN3相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼Battenin (CLN3)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的至多5歲患者處於該年齡及/或上述年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的至多5歲患者處於該年齡及/或上述年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN6相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼含主要易化子超家族域8 (MFSD8)之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的至多5歲患者處於該年齡及/或上述年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼MFSD8之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
在某些實施例中，在表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的患者中，藉由在用編碼MFSD8之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之前量測OKN來評定視力。具體而言，表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的患者處於上述年齡及/或年齡範圍內。在某些實施例中，在表現出Batten-CLN7相關之視力喪失的至多5歲患者中，藉由在用編碼MFSD8之AAV，較佳AAV8或AAV9治療患者之後量測OKN來評定視力。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後視力未降低。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力提高至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或至少100%。在某些實施例中，基於OKN之視力評定判定在用AAV基因療法治療後患者之視力未進一步惡化。
若人類患者為兒童，則可使用基於視動眼球震顫(OKN)之方法或基於OKN之改進方法來評定視覺功能。 6.2   用於本文所述之治療方法的治療系統、裝置或設備
本文亦提供用於本文所述之治療方法的治療系統、裝置及設備，其可包含以下中之一或多者：瓶、管、光源、顯微注射器及腳踏板。在某些實施例中，光源為自發光隱形眼鏡，其可用於將載體沈積於眼睛後部且尤其用於避免損傷視神經盤、中央凹及/或黃斑(參見例如Chalam等人, 2004, Ophthalmic surgery and lasers. 35. 76-77，其以全文引用的方式併入本文中)。在某些實施例中，在外周注射期間利用自發光隱形眼鏡以使視網膜下注射可視化(參見例如Chalam等人, 2004, Ophthalmic surgery and lasers. 35. 76-77，其以全文引用的方式併入本文中)。在某些實施例中，經由第二套管針利用光纖吊燈來使視網膜下注射可視化。 6.3   抗VEGF抗體或抗原結合片段之遞送
在某些實施例中，治療性產物為針對VEGF之完全人類轉譯後修飾之(HuPTM)抗體。在一特定實施例中，眼睛病狀與由新血管生成增加引起之眼部疾病相關，例如nAMD (亦稱為「濕性」AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR) (尤其濕性AMD)。在本揭示內容之其他部分中所述之實施例/態樣在適用於遞送抗VEGF抗體或抗原結合片段之程度上併入本文此部分中。下文描述適用於遞送抗VEGF抗體或抗原結合片段之某些其他實施例。
在一較佳實施例中，針對VEGF之完全人類轉譯後修飾之抗體為針對VEGF之單株抗體(mAb)的完全人類轉譯後修飾之抗原結合片段(「HuPTMFabVEGFi」)。在另一較佳實施例中，HuPTMFabVEGFi為抗VEGF mAb之完全人類糖基化之抗原結合片段(「HuGlyFabVEGFi」)。對於可根據本文所述之本發明使用的組合物及方法，亦參見國際專利申請公開案第WO/2017/180936號(國際專利申請案第PCT/US2017/027529號，2017年4月14日申請)及國際專利申請公開案第WO/2017/181021號(國際專利申請案第PCT/US2017/027650號，2017年4月14日申請)，其各自以全文引用的方式併入本文中。在一替代性實施例中，可使用全長mAb。
投與此類基因療法之個體應為對抗VEGF療法有反應之個體。在具體實施例中，該等方法涵蓋治療已經診斷患有濕性AMD、乾性AMD、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR) (尤其濕性AMD)且鑑別為對用抗VEGF抗體治療有反應的患者。在更多特定實施例中，患者對用抗VEGF抗原結合片段治療有反應。在某些實施例中，已顯示患者對在用基因療法治療之前用玻璃體內注射之抗VEGF抗原結合片段治療有反應。在特定實施例中，患者先前已用雷珠單抗® (蘭尼單抗)、EYLEA® (阿柏西普)及/或AVASTIN® (貝伐珠單抗)治療，且已發現對該雷珠單抗® (蘭尼單抗)、EYLEA® (阿柏西普)及/或AVASTIN® (貝伐珠單抗)中之一或多者有反應。
遞送此類重組病毒載體或其他DNA表現構築體之個體應對由重組病毒載體或表現構築體中之轉殖基因編碼的抗VEGF抗原結合片段有反應。為了判定反應性，可諸如藉由玻璃體內注射直接向個體投與抗hVEGF抗原結合片段轉殖基因產物(例如在細胞培養物、生物反應器等中產生)。
由轉殖基因編碼之HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，可包括但不限於與hVEGF結合之抗體的抗原結合片段，諸如貝伐珠單抗；抗hVEGF Fab部分，諸如蘭尼單抗；或經工程改造以在Fab域上含有額外糖基化位點的此類貝伐珠單抗或蘭尼單抗Fab部分(例如，參見Courtois等人, 2016, mAbs 8: 99-112，其關於在全長抗體之Fab域上高糖基化之貝伐珠單抗衍生物的描述全部以引用的方式併入本文中)。
用於遞送轉殖基因之重組載體應對人類視網膜細胞或感光細胞具有向性。此類載體可包括非複製型重組腺相關病毒載體(「rAAV」)，尤其帶有AAV8衣殼之彼等載體為較佳的。然而，可使用其他重組病毒載體，包括但不限於重組慢病毒載體、牛痘病毒載體或稱為「裸DNA」構築體之非病毒表現載體。較佳地，HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi轉殖基因應由適當的表現控制元件來控制，例如CB7啟動子(雞β-肌動蛋白啟動子及CMV強化子)、RPE65啟動子或視蛋白啟動子等，且可包括增強由載體驅動之轉殖基因表現的其他表現控制元件(例如內含子，諸如雞β-肌動蛋白內含子、小鼠微小病毒(MVM)內含子、人類因子IX內含子(例如FIX截短之內含子1)、β-球蛋白剪接供體/免疫球蛋白重鏈剪接受體內含子、腺病毒剪接供體/免疫球蛋白剪接受體內含子、SV40晚期剪接供體/剪接受體(19S/16S)內含子及雜交腺病毒剪接供體/IgG剪接受體內含子以及polyA信號，諸如兔β-球蛋白polyA信號、人類生長激素(hGH) polyA信號、SV40晚期polyA信號、合成polyA (SPA)信號及牛生長激素(bGH) polyA信號)。參見例如Powell及Rivera-Soto, 2015, Discov. Med., 19(102):49-57。
在較佳實施例中，基因療法構築體經設計以使得重鏈及輕鏈均得以表現。更特定言之，重鏈及輕鏈應以大約相等的量表現，換言之，重鏈及輕鏈以重鏈與輕鏈約1:1之比率表現。重鏈及輕鏈之編碼序列可在單個構築體中工程改造，其中重鏈及輕鏈藉由可裂解連接子或IRES分開，從而表現分開的重鏈及輕鏈多肽。關於可與本文所提供之方法及組合物一起使用的特定前導序列及特定IRES、2A及其他連接子序列，參見例如部分6.1.2。
在不受理論束縛的情況下，在某些實施例中，本文提供之用於遞送抗VEGF抗體或抗原結合片段之方法及組合物部分基於以下原理：(i) 人類視網膜細胞為分泌細胞，具有對分泌蛋白進行轉譯後加工之細胞機制——包括糖基化及酪胺酸-O-硫酸化，其為視網膜細胞中之強大過程。 (參見例如Wang等人, 2013, Analytical Biochem. 427: 20-28及Adamis等人, 1993, BBRC 193: 631-638報告視網膜細胞產生糖蛋白；以及Kanan等人, 2009, Exp. Eye Res. 89: 559-567及Kanan & Al-Ubaidi, 2015, Exp. Eye Res. 133: 126-131報告視網膜細胞分泌之酪胺酸硫酸化糖蛋白的產生，其各自關於人類視網膜細胞進行的轉譯後修飾全部以引用的方式併入本文中)。(ii) 與目前先進技術理解相反，抗VEGF抗原結合片段，諸如蘭尼單抗(及全長抗VEGF mAb之Fab域，諸如貝伐珠單抗)確實具有N-連接之糖基化位點。 舉例而言，參見圖1，其標識蘭尼單抗之CH 域(TVSWN165 SGAL)及CL 域(QSGN158 SQE)中之非共同天冬醯胺(「N」)糖基化位點，以及VH 域(Q115 GT)及VL 域(TFQ100 GT)中作為糖基化位點的麩醯胺酸(「Q」)殘基(以及貝伐珠單抗之Fab中的相應位點)。 (參見例如Valliere-Douglass等人, 2009, J. Biol. Chem. 284: 32493-32506及Valliere-Douglass等人, 2010, J. Biol. Chem. 285: 16012-16022，其各自關於抗體中N-連接之糖基化位點的鑑別全部以引用的方式併入本文中)。 (iii) 儘管此類非典型位點通常導致抗體群體之糖基化水準低(例如約1-5%)，但功能優勢在免疫赦免器官諸如眼睛中可為顯著的(參見例如van de Bovenkamp等人, 2016, J. Immunol. 196:1435-1441)。 舉例而言，Fab糖基化可影響抗體之穩定性、半衰期及結合特徵。 為了判定Fab糖基化對抗體對其靶標之親和力的效應，可使用熟習此項技術者已知的任何技術，例如酶聯免疫吸附分析(ELISA)或表面電漿子共振(SPR)。 為了判定Fab糖基化對抗體之半衰期的效應，可使用熟習此項技術者已知的任何技術，例如藉由量測已投與放射性標記抗體之個體的血液或器官(例如眼睛)中之放射性水準。 為了判定Fab糖基化對抗體穩定性(例如聚集或蛋白質去摺疊水準)之效應，可使用熟習此項技術者已知的任何技術，例如差示掃描量熱法(DSC)，高效液相層析(HPLC)，例如尺寸排阻高效液相層析(SEC-HPLC)，毛細管電泳，質譜分析或濁度量測。 本文提供之HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi轉殖基因導致產生在非典型位點0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%或更多經糖基化之Fab。 在某些實施例中，來自Fab群體之0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%或更多Fab在非典型位點經糖基化。 在某些實施例中，0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%或更多非典型位點經糖基化。 在某些實施例中，Fab在此等非典型位點之糖基化比HEK293細胞中產生之Fab之此等非典型位點之糖基化的量大25%、50%、100%、200%、300%、400%、500%或更多。 (iv) 除糖基化位點之外，抗VEGF Fab諸如蘭尼單抗(及貝伐珠單抗之Fab)在CDR中或附近含有酪胺酸(「Y」)硫酸化位點；參見圖1，其標識蘭尼單抗之VH (EDTAVY94 Y95 )及VL (EDFATY86 )域中之酪胺酸-O-硫酸化位點(及貝伐珠單抗之Fab中的相應位點)。 (參見例如Yang等人, 2015, Molecules 20:2138-2164, 尤其第2154頁，其關於進行蛋白質酪胺酸硫酸化之酪胺酸殘基周圍胺基酸的分析全部以引用的方式併入本文中。 「規則」可概述如下：Y殘基在Y之+5至-5位置內具有E或D，且其中Y之-1位置為中性或酸性帶電荷胺基酸，而非消除硫酸化之鹼性胺基酸，例如R、K或H)。 人類IgG抗體可表現出許多其他轉譯後修飾，諸如N端修飾、C端修飾、胺基酸殘基之降解或氧化、半胱胺酸相關變體及糖基化(參見例如Liu等人, 2014, mAbs 6(5):1145-1154)。(v) 人類視網膜細胞對抗VEGF Fab (諸如蘭尼單抗或貝伐珠單抗之Fab片段)的糖基化將引起聚糖之添加，從而可改良轉殖基因產物之穩定性、半衰期及減少不希望的聚集及/或免疫原性。 (關於Fab糖基化之新興重要性的綜述，參見例如Bovenkamp等人, 2016, J. Immunol. 196: 1435-1441)。 重要的是，可添加至本文提供之HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi的聚糖為高度加工的複合型雙觸角N-聚醣，其含有2,6-唾液酸(例如參見圖2，其描繪可併入HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi中之聚糖)及二等分GlcNAc，但不含NGNA (N-羥乙醯基神經胺糖酸，Neu5Gc)。 此類聚糖不存在於蘭尼單抗(其在大腸桿菌中製成且根本未經糖基化)或貝伐珠單抗(其在CHO細胞中製成，而CHO細胞不具有進行此轉譯後修飾所需的2,6-唾液酸基轉移酶，CHO細胞亦不產生二等分GlcNAc，儘管該等細胞確實添加Neu5Gc (NGNA)而非Neu5Ac (NANA)作為對人類不典型(且可能具有免疫原性)的唾液酸)。 參見例如Dumont等人, 2015, Crit. Rev. Biotechnol. (早期在線，在線發佈於2015年9月18日，第1-13頁，第5頁)。 此外，CHO細胞亦可產生一種免疫原性聚糖，亦即α-Gal抗原，其與大多數個體中存在之抗α-Gal抗體反應，且在高濃度下可觸發全身性過敏反應。 參見例如Bosques, 2010, Nat Biotech 28: 1153-1156。 本文提供之HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi的人類糖基化型態應降低轉殖基因產物之免疫原性且提高功效。(vi) 抗VEGF Fab，諸如蘭尼單抗或貝伐珠單抗之Fab片段的酪胺酸硫酸化(人類視網膜細胞中穩固的轉譯後過程)可使得轉殖基因產物對VEGF之親合力增加。 實際上，已證明針對其他靶標之治療性抗體之Fab的酪胺酸硫酸化顯著增加對抗原之親合力及活性。 (參見例如Loos等人, 2015, PNAS 112: 12675-12680及Choe等人, 2003, Cell 114: 161-170)。 此類轉譯後修飾不存在於蘭尼單抗(其在大腸桿菌中製成，大腸桿菌為不具有酪胺酸硫酸化所需之酶的宿主)上，且最多在貝伐珠單抗(CHO細胞產物)中體現不足。 與人類視網膜細胞不同，CHO細胞並非分泌細胞，且轉譯後酪胺酸硫酸化之能力有限。 (參見例如Mikkelsen及Ezban, 1991, Biochemistry 30: 1533-1537，尤其第1537頁之論述)。
出於前述原因，HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi之產生應使得用於治療濕性AMD、乾性AMD、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR) (尤其濕性AMD)之「改良型生物藥」分子經由基因療法實現——例如藉由向診斷患有濕性AMD、乾性AMD、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR) (尤其濕性AMD)之患者(人類個體)眼睛的脈絡膜上腔、視網膜下腔或鞏膜外表面投與編碼HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi之重組病毒載體或重組DNA表現構築體，以在眼睛中創建永久的儲槽，連續供應由經轉導之視網膜細胞產生的完全人類轉譯後修飾，例如人類糖基化、硫酸化之轉殖基因產物。FabVEGFi之cDNA構築體應包括信號肽，以確保由經轉導之視網膜細胞進行適當的輔助及轉譯後加工(糖基化及蛋白質硫酸化)。由視網膜細胞使用之此類信號序列可包括但不限於： ●   MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA (VEGF-A信號肽) ●   MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA (纖蛋白-1信號肽) ●   MAPLRPLLIL ALLAWVALA (玻璃連結蛋白信號肽) ●   MRLLAKIICLMLWAICVA (補體因子H信號肽) ●   MRLLAFLSLL ALVLQETGT (旋光蛋白信號肽) ●   MKWVTFISLLFLFSSAYS (白蛋白信號肽) ●   MAFLWLLSCWALLGTTFG (胰凝乳蛋白酶原信號肽) ●   MYRMQLLSCIALILALVTNS  (介白素-2信號肽) ●   MNLLLILTFVAAAVA (胰蛋白酶原-2信號肽)。 ●   參見例如Stern等人, 2007, Trends Cell. Mol. Biol., 2:1-17及Dalton & Barton, 2014, Protein Sci, 23: 517-525，其各自關於可使用的信號肽全部以引用的方式併入本文中。
作為基因療法之替代或其他治療，HuPTMFabVEGFi產物，例如HuGlyFabVEGFi糖蛋白，可藉由重組DNA技術在人類細胞株中產生，且藉由玻璃體內注射投與診斷患有濕性AMD、乾性AMD、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR) (尤其濕性AMD)的患者。HuPTMFabVEGFi產物，例如糖蛋白，亦可投與患有濕性AMD、乾性AMD、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR) (尤其濕性AMD)之患者。可用於此類重組糖蛋白生成之人類細胞株包括但不限於人類胚胎腎293細胞(HEK293)、纖維肉瘤HT-1080、HKB-11、CAP、HuH-7及視網膜細胞株PER.C6或RPE等(例如，參見Dumont等人, 2015, Crit. Rev. Biotechnol. (早期在線，在線發佈於2015年9月18日，第1-13頁) 「Human cell lines for biopharmaceutical manufacturing: history, status, and future perspectives」，其關於可用於重組生產HuPTMFabVEGFi產物，例如HuGlyFabVEGFi糖蛋白之人類細胞株的綜述全部以引用的方式併入本文中)。為了確保完全糖基化，尤其唾液酸化及酪胺酸硫酸化，可藉由工程改造宿主細胞以共表現α-2,6-唾液酸基轉移酶(或α-2,3-及α-2,6-唾液酸轉移酶兩者)及/或負責視網膜細胞中酪胺酸-O-硫酸化之TPST-1及TPST-2酶來增強用於生產之細胞株。
本文提供之方法涵蓋將HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi遞送至眼睛/視網膜伴隨遞送其他可用治療之組合。可在基因療法治療之前、同時或之後投與額外治療。可與本文提供之基因療法組合之濕性AMD、乾性AMD、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR) (尤其濕性AMD)的可用治療包括但不限於雷射光凝、使用維替泊芬(verteporfin)進行光動力療法及使用抗VEGF劑進行玻璃體內(IVT)注射，該等抗VEGF劑包括但不限於派加替尼(pegaptanib)、蘭尼單抗、阿柏西普或貝伐珠單抗。使用抗VEGF劑(諸如生物製劑)進行的額外治療可稱為「救援」療法。 6.3.1         N-糖基化、酪胺酸硫酸化及O-糖基化
在本文描述之方法中所用的HuPTMFabVEGFi (例如HuGlyFabVEGFi)之抗VEGF抗原結合片段的胺基酸序列(一級序列)包含至少一個發生N-糖基化或酪胺酸硫酸化的位點。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段之胺基酸序列包含至少一個N-糖基化位點及至少一個酪胺酸硫酸化位點。此類位點在下面詳細描述。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段之胺基酸序列包含至少一個O-糖基化位點，其可為存在於該胺基酸序列中之一或多個N-糖基化位點及/或酪胺酸硫酸化位點的補充。 (a)   N-糖基化反向糖基化位點
典型的N-糖基化序列在此項技術中已知為Asn-X-Ser(或Thr)，其中X可為除Pro之外的任何胺基酸。然而，最近已證明，人類抗體之天冬醯胺(Asn)殘基可在反向共同基元Ser(或Thr)-X-Asn之情形下經糖基化，其中X可為除Pro之外的任何胺基酸。參見Valliere-Douglass等人, 2009, J. Biol. Chem. 284:32493-32506；及Valliere-Douglass等人, 2010, J. Biol. Chem. 285:16012-16022。如本文所揭示，且與目前先進技術之理解相反，根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段，例如蘭尼單抗，包含數個此類反向共同序列。因此，本文所述之方法包含使用包含至少一個N-糖基化位點之抗VEGF抗原結合片段，該N-糖基化位點包含序列Ser(或Thr)-X-Asn，其中X可為除Pro之外的任何胺基酸(在本文中亦稱為「反向N-糖基化位點」)。
在某些實施例中，本文所述之方法包含使用抗VEGF抗原結合片段，其包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或多於十個包含序列Ser(或Thr)-X-Asn之N-糖基化位點，其中X可為除Pro之外的任何胺基酸。在某些實施例中，本文所述之方法包含使用抗VEGF抗原結合片段，其包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或多於十個反向N-糖基化位點，以及一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或多於十個非共同N-糖基化位點(如下文所定義)。
在一特定實施例中，在本文描述之方法中所用的包含一或多個反向N-糖基化位點之抗VEGF抗原結合片段為蘭尼單抗，其包含分別為SEQ ID NO. 1及2之輕鏈及重鏈。在另一特定實施例中，該等方法中使用的包含一或多個反向N-糖基化位點之抗VEGF抗原結合片段包含貝伐珠單抗之Fab，其包含分別為SEQ ID NO. 3及4之輕鏈及重鏈。非共同糖基化位點
除反向N-糖基化位點之外，最近已證明，人類抗體之麩醯胺酸(Gln)殘基可在非共同基元Gln-Gly-Thr之情形下經糖基化。參見Valliere-Douglass等人, 2010, J. Biol. Chem. 285:16012-16022。令人驚訝地，根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段，例如蘭尼單抗，包含數個此類非共同序列。因此，本文所述之方法包含使用包含至少一個N-糖基化位點之抗VEGF抗原結合片段，該N-糖基化位點包含序列Gln-Gly-Thr (在本文中亦稱為「非共同N-糖基化位點」)。
在某些實施例中，本文所述之方法包含使用抗VEGF抗原結合片段，其包含一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或多於十個包含序列Gln-Gly-Thr之N-糖基化位點。
在一特定實施例中，在本文描述之方法中所用的包含一或多個非共同N-糖基化位點之抗VEGF抗原結合片段為蘭尼單抗(包含分別為SEQ ID NO. 1及2之輕鏈及重鏈)。在另一特定實施例中，該等方法中使用的包含一或多個非共同N-糖基化位點之抗VEGF抗原結合片段包含貝伐珠單抗之Fab (包含分別為SEQ ID NO. 3及4之輕鏈及重鏈)。經工程改造之 N - 糖基化位點
在某些實施例中，編碼抗VEGF抗原結合片段之核酸經修飾以包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個N-糖基化位點(包括典型的N-糖基化共同序列、反向N-糖基化位點及非共同N-糖基化位點)，通常與HuGlyFabVEGFi相關(例如相對於與未修飾狀態之抗VEGF抗原結合片段相關之N-糖基化位點數)。在特定實施例中，糖基化位點之引入係藉由在抗原結合片段之一級結構中的任何位置插入N-糖基化位點(包括典型的N-糖基化共同序列、反向N-糖基化位點及非共同N-糖基化位點)來實現，只要該引入不影響抗原結合片段與其抗原VEGF之結合即可。糖基化位點之引入可藉由例如向抗原結合片段或衍生抗原結合片段之抗體的一級結構中添加新的胺基酸(亦即，全部或部分添加糖基化位點)，或藉由使抗原結合片段或衍生抗原結合片段之抗體中的現有胺基酸突變，以產生N-糖基化位點(亦即，不向抗原結合片段/抗體中添加胺基酸，但使抗原結合片段/抗體之所選胺基酸突變以形成N-糖基化位點)來實現。熟習此項技術者應認識到，蛋白質之胺基酸序列可使用此項技術中已知的方法容易地修飾，例如包括修飾編碼蛋白質之核酸序列的重組方法。
在一特定實施例中，本文所述之方法中使用的抗VEGF抗原結合片段經修飾以使得當在視網膜細胞中表現時，其可經高糖基化。參見Courtois等人, 2016, mAbs 8:99-112，其以全文引用的方式併入本文中。在一特定實施例中，該抗VEGF抗原結合片段為蘭尼單抗(包含分別為SEQ ID NO. 1及2之輕鏈及重鏈)。在另一特定實施例中，該抗VEGF抗原結合片段包含貝伐珠單抗之Fab(包含分別為SEQ ID NO. 3及4之輕鏈及重鏈)。抗 VEGF 抗原結合片段之 N - 糖基化
與小分子藥物不同，生物製劑通常包含許多具有不同修飾或形式之變體的混合物，該等變體具有不同的效力、藥物動力學及安全概況。在基因療法或蛋白質療法中產生之每個分子不必完全經糖基化及硫酸化。確切而言，所產生之糖蛋白群體應具有足夠的糖基化(包括2,6-唾液酸化)及硫酸化以證明功效。本文提供之基因療法治療的目標為藉由最少的干預/侵入性手術來減緩或阻止視網膜變性之進展，且減緩或防止視力喪失。
在一特定實施例中，當在視網膜細胞中表現時，根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段，例如蘭尼單抗，可在100%的其N-糖基化位點處經糖基化。然而，熟習此項技術者應瞭解，為了獲得糖基化之益處，並非抗VEGF抗原結合片段之每個N-糖基化位點均需要經N-糖基化。確切而言，當僅一定百分比之N-糖基化位點經糖基化時及/或當僅一定百分比之表現抗原結合片段經糖基化時，可實現糖基化之益處。因此，在某些實施例中，當在視網膜細胞中表現時，根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段在10%-20%、20%-30%、30%-40%、40%-50%、50%-60%、60%-70%、70%-80%、80%-90%或90%-100%之其可用N-糖基化位點處經糖基化。在某些實施例中，當在視網膜細胞中表現時，10%-20%、20%-30%、30%-40%、40%-50%、50%-60%、60%-70%、70%-80%、80%-90%或90%-100%之根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段在其可用的N-糖基化位點中之至少一者經糖基化。
在一特定實施例中，當抗VEGF抗原結合片段在視網膜細胞中表現時，根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段中所存在的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、或99%之N-糖基化位點在N-糖基化位點中所存在的Asn殘基(或其他相關殘基)處經糖基化。亦即，所得HuGlyFabVEGFi之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%之N-糖基化位點經糖基化。
在另一特定實施例中，當抗VEGF抗原結合片段在視網膜細胞中表現時，根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段中所存在的至少10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%之N-糖基化位點經存在於N-糖基化位點中之Asn殘基(或其他相關殘基)連接的相同的附接聚糖糖基化。亦即，所得HuGlyFabVEGFi之至少50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%之N-糖基化位點相同的附接聚糖。
當根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段(例如蘭尼單抗)在視網膜細胞中表現時，抗原結合片段之N-糖基化位點可經各種不同的聚糖糖基化。抗原結合片段之N-聚醣已在此項技術中經表徵。舉例而言，Bondt等人, 2014, Mol. & Cell. Proteomics 13.11:3029-3039 (其關於Fab相關之N-聚醣的揭示內容全部以引用的方式併入本文中)表徵與Fab相關之聚糖，且證明抗體之Fab及Fc部分包含獨特的糖基化型態，其中相對於Fc聚糖，Fab聚糖在半乳糖基化、唾液酸化及二等分(例如二等分GlcNAc)中高，但在海藻糖基化中低。如同Bondt一般，Huang等人, 2006, Anal. Biochem. 349:197-207 (其關於Fab相關之N-聚醣的揭示內容全部以引用的方式併入本文中)發現Fab之大多數聚糖經唾液酸化。然而，在由Huang檢驗之抗體的Fab(其在小鼠細胞背景中產生)中，經鑑別之唾液酸殘基為N-羥乙醯基神經胺糖酸(「Neu5Gc」或「NeuGc」) (其不為人類天然的)，而非N-乙醯基神經胺糖酸(「Neu5Ac」，主要的人類唾液酸)。另外，Song等人, 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666 (其關於Fab相關之N-聚醣的揭示內容全部以引用的方式併入本文中)描述與市售抗體相關之N-聚醣文庫。
重要的是，當根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段(例如蘭尼單抗)在人類視網膜細胞中表現時，對在原核宿主細胞(例如，大腸桿菌)或真核宿主細胞(例如CHO細胞)中活體外生產之需求被規避。相反，由於本文所述之方法(例如使用視網膜細胞表現抗hVEGF抗原結合片段)，抗VEGF抗原結合片段之N-糖基化位點有利地經與人類治療有關及有益的聚糖裝飾。當將CHO細胞或大腸桿菌用於抗體/抗原結合片段生產時，此種優勢無法實現，因為例如CHO細胞(1)不表現2,6唾液酸基轉移酶，且因此在N-糖基化期間無法添加2,6唾液酸，(2)可添加Neu5Gc作為唾液酸代替Neu5Ac；且因為大腸桿菌天然不含N-糖基化所需之組分。因此，在一個實施例中，在視網膜細胞中表現得到本文所述之治療方法中使用之HuGlyFabVEGFi的抗VEGF抗原結合片段以蛋白質在人類視網膜細胞(例如視網膜色素細胞)中經N-糖基化之方式經糖基化，但不以蛋白質在CHO細胞中經糖基化之方式經糖基化。在另一個實施例中，在視網膜細胞中表現得到本文所述之治療方法中使用之HuGlyFabVEGFi的抗VEGF抗原結合片段以蛋白質在人類視網膜細胞(例如視網膜色素細胞)中經N-糖基化之方式經糖基化，其中使用原核宿主細胞，例如使用大腸桿菌不可能天然地進行此類糖基化。
在某些實施例中，根據本文所述之方法使用的HuGlyFabVEGFi，例如蘭尼單抗，包含與人類抗體之Fab相關之一個、兩個、三個、四個、五個或更多個不同的N-聚醣。在一特定實施例中，與人類抗體之Fab相關的該等N-聚醣為Bondt等人, 2014, Mol. & Cell. Proteomics 13.11:3029-3039，Huang等人, 2006, Anal. Biochem. 349:197-207及/或Song等人, 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666中所述之N-聚醣。在某些實施例中，根據本文所述之方法使用的HuGlyFabVEGFi，例如蘭尼單抗，不包含可偵測之NeuGc及/或α-Gal抗原。
在一特定實施例中，根據本文所述之方法使用的HuGlyFabVEGFi，例如蘭尼單抗，主要經包含2,6-連接之唾液酸的聚糖糖基化。在某些實施例中，包含2,6-連接之唾液酸的HuGlyFabVEGFi經聚唾液酸化，亦即含有多於一個唾液酸。在某些實施例中，該HuGlyFabVEGFi之各N-糖基化位點包含具有2,6-連接之唾液酸的聚糖，亦即該HuGlyFabVEGFi之100%的N-糖基化位點包含具有2,6-連接之唾液酸的聚糖。在另一特定實施例中，根據本文所述之方法使用的HuGlyFabVEGFi的至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%之N-糖基化位點經包含2,6-連接之唾液酸的聚糖糖基化。在另一特定實施例中，根據本文所述之方法使用的HuGlyFabVEGFi的至少10%-20%、20%-30%、30%-40%、40%-50%、50%-60%、60%-70%、70%-80%、80%-90%或90%-99%之N-糖基化位點經包含2,6-連接之唾液酸的聚糖糖基化。在另一特定實施例中，根據本文所述之方法在視網膜細胞中表現的至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%之抗原結合片段(亦即，產生HuGlyFabVEGFi，例如蘭尼單抗之抗原結合片段)經包含2,6-連接之唾液酸的聚糖糖基化。在另一特定實施例中，根據本文所述之方法在視網膜細胞中表現的至少10%-20%、20%-30%、30%-40%、40%-50%、50%-60%、60%-70%、70%-80%、80%-90%或90%-99%之抗原結合片段(亦即，產生HuGlyFabVEGFi，例如蘭尼單抗之Fab)經包含2,6-連接之唾液酸的聚糖糖基化。在另一特定實施例中，該唾液酸為Neu5Ac。根據此類實施例，當HuGlyFabVEGFi之僅一定百分比的N-糖基化位點經2,6唾液酸化或聚唾液酸化時，剩餘的N-糖基化可包含不同的N-聚糖，或根本不包含N-聚糖(亦即，保持未糖基化)。
當HuGlyFabVEGFi經2,6聚唾液酸化時，其包含多個唾液酸殘基，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10或多於10個唾液酸殘基。在某些實施例中，當HuGlyFabVEGFi經聚唾液酸化時，其包含2-5、5-10、10-20、20-30、30-40或40-50個唾液酸殘基。在某些實施例中，當HuGlyFabVEGFi經聚唾液酸化時，其包含2,6-連接之(唾液酸)n ，其中n可為1-100之任何數字。
在一特定實施例中，根據本文所述之方法使用的HuGlyFabVEGFi，例如蘭尼單抗，主要經包含二等分GlcNAc的聚糖糖基化。在某些實施例中，該HuGlyFabVEGFi之各N-糖基化位點包含具有二等分GlcNAc的聚糖，亦即該HuGlyFabVEGFi之100%的N-糖基化位點包含具有二等分GlcNAc的聚糖。在另一特定實施例中，根據本文所述之方法使用的HuGlyFabVEGFi的至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%之N-糖基化位點經包含二等分GlcNAc的聚糖糖基化。在另一特定實施例中，根據本文所述之方法使用的HuGlyFabVEGFi的至少10%-20%、20%-30%、30%-40%、40%-50%、50%-60%、60%-70%、70%-80%、80%-90%或90%-99%之N-糖基化位點經包含二等分GlcNAc的聚糖糖基化。在另一特定實施例中，根據本文所述之方法在視網膜細胞中表現的至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%之抗原結合片段(亦即，產生HuGlyFabVEGFi，例如蘭尼單抗之抗原結合片段)經包含二等分GlcNAc的聚糖糖基化。在另一特定實施例中，根據本文所述之方法在視網膜細胞中表現的至少10%-20%、20%-30%、30%-40%、40%-50%、50%-60%、60%-70%、70%-80%、80%-90%或90%-99%之抗原結合片段(亦即，產生HuGlyFabVEGFi，例如蘭尼單抗之抗原結合片段)經包含二等分GlcNAc的聚糖糖基化。
在某些實施例中，根據本文所述之方法使用的HuGlyFabVEGFi (例如蘭尼單抗)經高糖基化，亦即，除由天然存在之N-糖基化位點產生之N-糖基化之外，該HuGlyFabVEGFi在經工程改造以存在於抗原結合片段之胺基酸序列中之N-糖基化位點處包含聚糖，從而產生HuGlyFabVEGFi。在某些實施例中，根據本文所述之方法使用的HuGlyFabVEGFi (例如蘭尼單抗)經高糖基化，但不包含可偵測之NeuGc及/或α-Gal抗原。
用於判定抗體(包括抗原結合片段)之糖基化型態的分析為此項技術中已知的。舉例而言，肼解可用於分析聚糖。首先，多糖藉由與肼一起培育而自其相關蛋白釋放(可使用Ludger Liberate Hydrazinolysis Glycan Release Kit, Oxfordshire, UK)。親核肼攻擊多醣與載體蛋白之間的糖苷鍵，且釋放附接之聚糖。N-乙醯基在此處理過程中丟失，必須藉由重新-N-乙醯化來重建。亦可使用酶釋放聚糖，諸如醣苷酶或內切糖苷酶，諸如PNGase F及Endo H，其與肼相比裂解得更乾淨，副反應更少。游離聚糖可在碳柱上純化，且隨後在還原端用螢光團2-胺基苯甲醯胺標記。根據Royle等人, Anal Biochem 2002, 304(1):70-90之HPLC方案，可在GlycoSep-N柱(GL Sciences)上分離經標記之多糖。所得螢光層析圖表明多醣長度及重複單元之數目。可藉由收集個別峰且隨後進行MS/MS分析來搜集結構資訊。由此可確認重複單元之單糖組成及序列，且另外可鑑別多醣組成之均質性。低或高分子量之特定峰可藉由MALDI-MS/MS來分析，且結果用於確認聚糖序列。層析圖中之每個峰對應於由一定數量的重複單元及其片段(例如糖殘基)組成之聚合物，例如聚糖。因此，層析圖允許量測聚合物(例如聚糖)長度分佈。溶離時間為聚合物長度之指示，而螢光強度與相應聚合物(例如聚糖)之莫耳豐度相關。評定與抗原結合片段相關之聚糖的其他方法包括Bondt等人, 2014, Mol. & Cell. Proteomics 13.11:3029-3039，Huang等人, 2006, Anal. Biochem. 349:197-207及/或Song等人, 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666所述之方法。
與抗體(包括抗原結合片段)相關之聚糖型態的均質性或異質性，由於與糖基化位點上存在之聚糖長度或大小及聚糖數目有關，可使用此項技術中已知之方法來評定，例如量測聚糖長度或大小及流體動力半徑之方法。HPLC，諸如尺寸排阻、正相、逆相及陰離子交換HPLC，以及毛細管電泳，允許量測流體動力半徑。與具有較少糖基化位點之載體相比，蛋白質中較高的糖基化位點數目導致較大的流體動力半徑變化。然而，當分析單一聚糖鏈時，其可能由於長度更受控制而更均勻。可藉由肼解、SDS PAGE及毛細管凝膠電泳來量測聚糖長度。另外，均質性亦可意謂某些糖基化位點使用型態變化至更寬/更窄的範圍。此等因素可藉由糖肽LC-MS/MS來量測。N - 糖基化之益處
N-糖基化賦予用於本文所述方法中之HuGlyFabVEGFi許多益處。藉由在大腸桿菌中產生抗原結合片段無法獲得此類益處，因為大腸桿菌天然不具有N-糖基化所需之組分。另外，經由在例如CHO細胞中產生抗體無法獲得一些益處，因為CHO細胞缺乏添加某些聚糖(例如2,6唾液酸及二等分GlcNAc)所需之組分，且因為CHO細胞可添加對於人類而言不典型的聚糖，例如Neu5Gc。參見例如Song等人, 2014, Anal. Chem. 86:5661-5666。因此，憑藉本文所闡述之抗VEGF抗原結合片段(例如蘭尼單抗)包含非典型的N-糖基化位點(包括反向及非共同糖基化位點)的發現，已實現以導致糖基化的方式表現此類抗VEGF抗原結合片段的方法(且因此改良與抗原結合片段相關之益處)。特定言之，抗VEGF抗原結合片段在人類視網膜細胞中之表現導致產生包含有益聚糖之HuGlyFabVEGFi (例如蘭尼單抗)，否則該等有益聚糖將不與抗原結合片段或其親本抗體締合。
儘管非典型糖基化位點通常導致抗體群體之糖基化水準低(例如約1-5%)，但功能優勢在免疫赦免器官諸如眼睛中可為顯著的(參見例如van de Bovenkamp等人, 2016, J. Immunol. 196:1435-1441)。舉例而言，Fab糖基化可影響抗體之穩定性、半衰期及結合特徵。為了判定Fab糖基化對抗體對其靶標之親和力的效應，可使用熟習此項技術者已知的任何技術，例如酶聯免疫吸附分析(ELISA)或表面電漿子共振(SPR)。為了判定Fab糖基化對抗體之半衰期的效應，可使用熟習此項技術者已知的任何技術，例如藉由量測已投與放射性標記抗體之個體的血液或器官(例如眼睛)中之放射性水準。為了判定Fab糖基化對抗體穩定性(例如聚集或蛋白質去摺疊水準)之效應，可使用熟習此項技術者已知的任何技術，例如差示掃描量熱法(DSC)，高效液相層析(HPLC)，例如尺寸排阻高效液相層析(SEC-HPLC)，毛細管電泳，質譜分析或濁度量測。本文提供之HuGlyFabVEGFi轉殖基因導致產生在非典型位點0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%或更多經糖基化之抗原結合片段。在某些實施例中，來自抗原結合片段群體之0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%或更多抗原結合片段在非典型位點經糖基化。在某些實施例中，0.5%、1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%或10%或更多非典型位點經糖基化。在某些實施例中，抗原結合片段在此等非典型位點之糖基化比HEK293細胞中產生之抗原結合片段中此等非典型位點的糖基化量大25%、50%、100%、200%、300%、400%、500%或更多。
本文所述方法中使用的HuGlyFabVEGFi上唾液酸之存在可影響HuGlyFabVEGFi之清除率，例如自玻璃體液清除之速率。因此，HuGlyFabVEGFi之唾液酸型態可用於產生具有最佳化清除率之治療劑。評定抗原結合片段清除率之方法為此項技術中已知的。參見例如Huang等人, 2006, Anal. Biochem. 349:197-207。
在另一特定實施例中，由N-糖基化賦予之益處為聚集減少。佔據之N-糖基化位點可掩蓋易於聚集之胺基酸殘基，從而導致聚集減少。此類N-糖基化位點可為本文所用之抗原結合片段的天然位點，或經工程改造至本文所用之抗原結合片段中，使得HuGlyFabVEGFi在表現時，例如在視網膜細胞中表現時不易聚集。評定抗體聚集之方法為此項技術中已知的。參見例如Courtois等人, 2016, mAbs 8:99-112，其以全文引用的方式併入本文中。
在另一特定實施例中，由N-糖基化賦予之益處為免疫原性降低。此類N-糖基化位點可為本文所用之抗原結合片段的天然位點，或經工程改造至本文所用之抗原結合片段中，使得HuGlyFabVEGFi在表現時，例如在視網膜細胞中表現時不易產生免疫原性。
在另一特定實施例中，由N-糖基化賦予之益處為蛋白質穩定性。眾所周知，蛋白質之N-糖基化賦予其穩定性，且評定由N-糖基化產生之蛋白質穩定性的方法為此項技術中已知的。參見例如Sola及Griebenow, 2009, J Pharm Sci., 98(4): 1223-1245。
在另一特定實施例中，由N-糖基化賦予之益處為結合親和力改變。此項技術中已知，抗體可變域中N-糖基化位點之存在可增加抗體對其抗原的親和力。參見例如Bovenkamp等人, 2016, J. Immunol. 196:1435-1441。用於量測抗體結合親和力之分析為此項技術中已知的。參見例如Wright等人, 1991, EMBO J. 10:2717-2723；及Leibiger等人, 1999, Biochem. J. 338:529-538。 (b)   酪胺酸硫酸化
酪胺酸硫酸化發生在酪胺酸(Y)殘基處，麩胺酸(E)或天冬胺酸(D)在Y之+5至-5位置內，且其中Y之位置-1為中性或酸性帶電荷胺基酸，而非消除硫酸化之鹼性胺基酸，例如精胺酸(R)、離胺酸(K)或組胺酸(H)。令人驚訝地，根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段，例如蘭尼單抗，包含酪胺酸硫酸化位點(參見圖1)。因此，本文所述之方法包含使用抗VEGF抗原結合片段，例如HuPTMFabVEGFi，其包含至少一個酪胺酸硫酸化位點，此類抗VEGF抗原結合片段當在視網膜細胞中表現時可經酪胺酸硫酸化。
重要的是，經酪胺酸硫酸化之抗原結合片段，例如蘭尼單抗，無法在大腸桿菌中產生，大腸桿菌天然不具有酪胺酸硫酸化所需之酶。另外，CHO細胞缺乏酪胺酸硫酸化——其並非分泌細胞且轉譯後酪胺酸硫酸化之能力有限。參見例如Mikkelsen及Ezban, 1991, Biochemistry 30: 1533-1537。有利地，本文提供之方法需要在分泌且確實具有酪胺酸硫酸化能力之視網膜細胞中表現抗VEGF抗原結合片段，例如HuPTMFabVEGFi，例如蘭尼單抗。參見Kanan等人, 2009, Exp. Eye Res. 89: 559-567及Kanan & Al-Ubaidi, 2015, Exp. Eye Res. 133: 126-131，其報告由視網膜細胞分泌之經酪胺酸硫酸化之糖蛋白的產生。
酪胺酸硫酸化由於若干原因為有利的。舉例而言，已證明針對靶標之治療性抗體之抗原結合片段的酪胺酸硫酸化顯著增加對抗原之親合力及活性。參見例如Loos等人, 2015, PNAS 112: 12675-12680及Choe等人, 2003, Cell 114: 161-170。用於偵測酪胺酸硫酸化之分析為此項技術中已知的。參見例如Yang等人, 2015, Molecules 20:2138-2164。 (c)   O-糖基化
O-糖基化包含藉由酶將N-乙醯基-半乳糖胺添加至絲胺酸或蘇胺酸殘基。已證明存在於抗體鉸鏈區中之胺基酸殘基可經O-糖基化。在某些實施例中，根據本文所述之方法使用的抗VEGF抗原結合片段，例如蘭尼單抗，包含其鉸鏈區之全部或一部分，且因此當在人類視網膜細胞中表現時能夠經O-糖基化。與例如大腸桿菌中產生之抗原結合片段相比，O-糖基化之可能性賦予本文提供之HuPTMFabVEGFi (例如HuGlyFabVEGFi)另一個優勢，同樣因為大腸桿菌天然不含有與人類O-糖基化中使用的機制相當的機制。(相反，僅當細菌經修飾以含有特定的O-糖基化機制時，才證明大腸桿菌中之O-糖基化。參見例如Faridmoayer等人, 2007, J. Bacteriol. 189:8088-8098。) 經O-糖基化之HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，憑藉具有聚糖，與經N-糖基化之HuGlyFabVEGFi (如上文所論述)共有有利的特徵。 6.3.2         構築體及調配物
在一些態樣中，本揭示案提供使用的核酸，其中該核酸編碼HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，且可操作地連接於選自由以下組成之群的啟動子：細胞巨大病毒(CMV)啟動子、勞斯肉瘤病毒(RSV)啟動子、MMT啟動子、EF-1α啟動子、UB6啟動子、雞β-肌動蛋白啟動子、CAG啟動子、RPE65啟動子及視蛋白啟動子。
在一特定實施例中，本文所述之重組載體包含以下組分：(1)側接表現卡匣之AAV2反向末端重複序列；(2)控制元件，其包括a) CB7啟動子，包含CMV強化子/雞β-肌動蛋白啟動子，b)雞β-肌動蛋白內含子及c)兔β-球蛋白poly A信號；及(3)編碼抗VEGF抗原結合片段之重鏈及輕鏈的核酸序列，由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A連接子分開，確保表現等量的重鏈及輕鏈多肽。
由轉殖基因編碼之HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，可包括但不限於與VEGF結合之抗體的抗原結合片段，諸如貝伐珠單抗；抗VEGF Fab部分，諸如蘭尼單抗；或經工程改造以在Fab域上含有額外糖基化位點的此類貝伐珠單抗或蘭尼單抗Fab部分(例如，參見Courtois等人, 2016, mAbs 8: 99-112，其關於在全長抗體之Fab域上高糖基化之貝伐珠單抗衍生物的描述全部以引用的方式併入本文中)。
在某些實施例中，本文提供之重組載體編碼抗VEGF抗原結合片段轉殖基因。在特定實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因受適當的表現控制元件控制以在視網膜細胞中表現：在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因包含輕鏈及重鏈cDNA序列(分別為SEQ ID NO. 10及11)之貝伐珠單抗Fab部分。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因包含蘭尼單抗輕鏈及重鏈cDNA序列(分別為SEQ ID NO. 12及13)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼貝伐珠單抗Fab，其包含分別為SEQ ID NO: 3及4之輕鏈及重鏈。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈之抗原結合片段，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 3中所列之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈之抗原結合片段，該重鏈包含與SEQ ID NO: 4中所列之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈及重鏈之抗原結合片段，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 3中所列之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列，該重鏈包含與SEQ ID NO: 4中所列之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼經高糖基化之蘭尼單抗，其包含分別為SEQ ID NO: 1及2之輕鏈及重鏈。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈之抗原結合片段，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 1中所列之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈之抗原結合片段，該重鏈包含與SEQ ID NO: 2中所列之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈及重鏈之抗原結合片段，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 1中所列之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列，該重鏈包含與SEQ ID NO: 2中所列之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼經高糖基化之貝伐珠單抗Fab，其包含SEQ ID NO: 3及4之輕鏈及重鏈，具有以下突變中之一或多者：L118N (重鏈)、E195N (輕鏈)或Q160N或Q160S (輕鏈)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼經高糖基化之蘭尼單抗，其包含SEQ ID NO: 1及2之輕鏈及重鏈，具有以下突變中之一或多者：L118N (重鏈)、E195N (輕鏈)或Q160N或Q160S (輕鏈)。抗原結合片段轉殖基因cDNA之序列可見於例如表2中。在某些實施例中，抗原結合片段轉殖基因cDNA之序列係藉由用表1中所列出之一或多種信號序列置換SEQ ID NO: 10及11或SEQ ID NO: 12及13之信號序列。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段且包含六個貝伐珠單抗CDR之核苷酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段且包含六個蘭尼單抗CDR之核苷酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈可變區之抗原結合片段，該重鏈可變區包含蘭尼單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 20、18及21)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈可變區之抗原結合片段，該輕鏈可變區包含蘭尼單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈可變區之抗原結合片段，該重鏈可變區包含貝伐珠單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 17-19)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈可變區之抗原結合片段，該輕鏈可變區包含貝伐珠單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗原結合片段，該重鏈可變區包含蘭尼單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 20、18及21)，該輕鏈可變區包含蘭尼單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈可變區及輕鏈可變區之抗原結合片段，該重鏈可變區包含貝伐珠單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 17-19)，該輕鏈可變區包含貝伐珠單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈可變區之抗原結合片段，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈可變區之抗原結合片段，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR1之第八及第十一胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈可變區之抗原結合片段，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)未乙醯化。在一特定實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈可變區之抗原結合片段，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR1之第八及第十一胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)未乙醯化。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或沒有化學修飾(視具體情況而定)係藉由質譜分析來判定。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈可變區之抗原結合片段，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈可變區之抗原結合片段，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之第九胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈可變區之抗原結合片段，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一特定實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈可變區之抗原結合片段，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之第九胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或沒有化學修飾(視具體情況而定)係藉由質譜分析來判定。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈可變區及重鏈可變區之抗原結合片段，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈可變區及重鏈可變區之抗原結合片段，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中：(1)重鏈CDR1之第九胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)；及(2)輕鏈CDR1之第八及第十一胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈可變區及重鏈可變區之抗原結合片段，該輕鏈可變區包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3，該重鏈可變區包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)未乙醯化，且其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一特定實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO. 20之重鏈CDR1，其中：(1)重鏈CDR1之第九胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化；及(2)輕鏈CDR1之第八及第十一胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)未乙醯化。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或沒有化學修飾(視具體情況而定)係藉由質譜分析來判定。
在某些態樣中，本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段，及編碼此類抗原VEGF抗原結合片段之轉殖基因，其中輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR1之第八及第十一胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)未乙醯化。在一特定實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR1之第八及第十一胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於本文所述之根據本發明之任何方法。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或沒有化學修飾(視具體情況而定)係藉由質譜分析來判定。
在某些態樣中，本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段，及編碼此類抗原VEGF抗原結合片段之轉殖基因，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之第九胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一特定實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之第九胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於本文所述之根據本發明之任何方法。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或沒有化學修飾(視具體情況而定)係藉由質譜分析來判定。
在某些態樣中，本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段，及編碼此類抗原VEGF抗原結合片段之轉殖基因，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中：(1)重鏈CDR1之第九胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)；及(2)輕鏈CDR1之第八及第十一胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一特定實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化，且輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)未乙醯化。在一特定實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中：(1)重鏈CDR1之第九胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化；及(2)輕鏈CDR1之第八及第十一胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺化及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二Q)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於本文所述之根據本發明之任何方法。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或沒有化學修飾(視具體情況而定)係藉由質譜分析來判定。
表2.  例示性抗VEGF轉殖基因及抗體序列
VEGF抗原結合片段(SEQ ID NO.) 序列
貝伐珠單抗cDNA (輕鏈) (10) gctagcgcca ccatgggctg gtcctgcatc atcctgttcc tggtggccac cgccaccggc gtgcactccg acatccagat gacccagtcc ccctcctccc tgtccgcctc cgtgggcgac cgggtgacca tcacctgctc cgcctcccag gacatctcca actacctgaa ctggtaccag cagaagcccg gcaaggcccc caaggtgctg atctacttca cctcctccct gcactccggc gtgccctccc ggttctccgg ctccggctcc ggcaccgact tcaccctgac catctcctcc ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac tgccagcagt actccaccgt gccctggacc ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaag cggaccgtgg ccgccccctc cgtgttcatc ttccccccct ccgacgagca gctgaagtcc ggcaccgcct ccgtggtgtg cctgctgaac aacttctacc cccgggaggc caaggtgcag tggaaggtgg acaacgccct gcagtccggc aactcccagg agtccgtgac cgagcaggac tccaaggact ccacctactc cctgtcctcc accctgaccc tgtccaaggc cgactacgag aagcacaagg tgtacgcctg cgaggtgacc caccagggcc tgtcctcccc cgtgaccaag tccttcaacc ggggcgagtg ctgagcggcc gcctcgag
貝伐珠單抗cDNA (重鏈) (11) gctagcgcca ccatgggctg gtcctgcatc atcctgttcc tggtggccac cgccaccggc gtgcactccg aggtgcagct ggtggagtcc ggcggcggcc tggtgcagcc cggcggctcc ctgcggctgt cctgcgccgc ctccggctac accttcacca actacggcat gaactgggtg cggcaggccc ccggcaaggg cctggagtgg gtgggctgga tcaacaccta caccggcgag cccacctacg ccgccgactt caagcggcgg ttcaccttct ccctggacac ctccaagtcc accgcctacc tgcagatgaa ctccctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc aagtaccccc actactacgg ctcctcccac tggtacttcg acgtgtgggg ccagggcacc ctggtgaccg tgtcctccgc ctccaccaag ggcccctccg tgttccccct ggccccctcc tccaagtcca cctccggcgg caccgccgcc ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc gagcccgtga ccgtgtcctg gaactccggc gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtcctccg tggtgaccgt gccctcctcc tccctgggca cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg gacaagaagg tggagcccaa gtcctgcgac aagacccaca cctgcccccc ctgccccgcc cccgagctgc tgggcggccc ctccgtgttc ctgttccccc ccaagcccaa ggacaccctg atgatctccc ggacccccga ggtgacctgc gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccc gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc cgggaggagc agtacaactc cacctaccgg gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc aaggtgtcca acaaggccct gcccgccccc atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc cagccccggg agccccaggt gtacaccctg cccccctccc gggaggagat gaccaagaac caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc ttctacccct ccgacatcgc cgtggagtgg gagtccaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc cccccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctgtactc caagctgacc gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg tccctgtccc ccggcaagtg agcggccgcc
貝伐珠單抗Fab胺基酸序列(輕鏈) (3) DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLH SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
貝伐珠單抗Fab胺基酸序列(重鏈) (4) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYT GEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYF DVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKK VEPKSCDKTHL
蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之輕鏈) (12) gagctccatg gagtttttca aaaagacggc acttgccgca ctggttatgg gttttagtgg tgcagcattg gccgatatcc agctgaccca gagcccgagc agcctgagcg caagcgttgg tgatcgtgtt accattacct gtagcgcaag ccaggatatt agcaattatc tgaattggta tcagcagaaa ccgggtaaag caccgaaagt tctgatttat tttaccagca gcctgcatag cggtgttccg agccgtttta gcggtagcgg tagtggcacc gattttaccc tgaccattag      cagcctgcag ccggaagatt ttgcaaccta ttattgtcag cagtatagca ccgttccgtg gacctttggt cagggcacca aagttgaaat taaacgtacc gttgcagcac cgagcgtttt tatttttccg cctagtgatg aacagctgaa aagcggcacc gcaagcgttg tttgtctgct gaataatttt tatccgcgtg aagcaaaagt gcagtggaaa gttgataatg cactgcagag cggtaatagc caagaaagcg ttaccgaaca ggatagcaaa gatagcacct atagcctgag cagcaccctg accctgagca aagcagatta tgaaaaacac aaagtgtatg cctgcgaagt tacccatcag ggtctgagca gtccggttac caaaagtttt aatcgtggcg aatgctaata gaagcttggt acc
蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之重鏈) (13) gagctcatat gaaatacctg ctgccgaccg ctgctgctgg tctgctgctc ctcgctgccc agccggcgat ggccgaagtt cagctggttg aaagcggtgg tggtctggtt cagcctggtg gtagcctgcg tctgagctgt gcagcaagcg gttatgattt tacccattat ggtatgaatt gggttcgtca ggcaccgggt aaaggtctgg aatgggttgg ttggattaat acctataccg gtgaaccgac ctatgcagca gattttaaac gtcgttttac ctttagcctg gataccagca aaagcaccgc atatctgcag atgaatagcc tgcgtgcaga agataccgca gtttattatt gtgccaaata tccgtattac tatggcacca gccactggta tttcgatgtt tggggtcagg gcaccctggt taccgttagc agcgcaagca ccaaaggtcc gagcgttttt ccgctggcac cgagcagcaa aagtaccagc ggtggcacag cagcactggg ttgtctggtt aaagattatt ttccggaacc ggttaccgtg agctggaata gcggtgcact gaccagcggt gttcatacct ttccggcagt tctgcagagc agcggtctgt atagcctgag cagcgttgtt accgttccga gcagcagcct gggcacccag acctatattt gtaatgttaa tcataaaccg agcaatacca aagtggataa aaaagttgag ccgaaaagct gcgataaaac ccatctgtaa tagggtacc
蘭尼單抗Fab胺基酸序列(輕鏈) (1) DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLH SGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKRTV AAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTE QDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈) (2) EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYDFTHYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYT GEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPYYYGTSHWYF DVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWN SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKK VEPKSCDKTHL
貝伐珠單抗輕鏈CDR (14，15及16) SASQDISNYLN FTSSLHS QQYSTVPWT
貝伐珠單抗重鏈CDR (17，18及19) GYTFTNYGMN WINTYTGEPTYAADFKR YPHYYGSSHWYFDV
蘭尼單抗輕鏈CDR (14，15及16) SASQDISNYLN FTSSLHS QQYSTVPWT
蘭尼單抗重鏈CDR (20，18及21) GYDFTHYGMN WINTYTGEPTYAADFKR YPYYYGTSHWYFDV
在某些實施例中，本文提供之重組載體按以下順序包含以下元件：a)組成型或低氧誘導型啟動子序列，及b)編碼轉殖基因(例如抗VEGF抗原結合片段部分)之序列。在某些實施例中，編碼轉殖基因之序列包含由IRES元件分隔的多個ORF。在某些實施例中，ORF編碼抗VEGF抗原結合片段之重鏈及輕鏈域。在某些實施例中，編碼轉殖基因之序列在一個由F/F2A序列分隔的ORF中包含多個次單元。在某些實施例中，包含轉殖基因之序列編碼由F/F2A序列分隔的抗VEGF抗原結合片段之重鏈及輕鏈域。在某些實施例中，本文提供之病毒載體按以下順序包含以下元件：a)組成型或低氧誘導型啟動子序列，及b)編碼轉殖基因(例如抗VEGF抗原結合片段部分)之序列，其中該轉殖基因包含VEGF之信號肽(SEQ ID NO: 5)，且其中該轉殖基因編碼由IRES元件分隔的輕鏈及重鏈序列。在某些實施例中，本文提供之重組載體按以下順序包含以下元件：a)組成型或低氧誘導型啟動子序列，及b)編碼轉殖基因(例如抗VEGF抗原結合片段部分)之序列，其中該轉殖基因包含VEGF之信號肽(SEQ ID NO: 5)，且其中該轉殖基因編碼由可裂解的F/F2A序列分隔的輕鏈及重鏈序列。
在某些實施例中，本文提供之重組載體按以下順序包含以下元件：a)第一ITR序列，b)第一連接子序列，c)組成型或低氧誘導型啟動子序列，d)第二連接子序列，e)內含子序列，f)第三連接子序列，g)第一UTR序列，h)編碼轉殖基因(例如抗VEGF抗原結合片段部分)之序列，i)第二UTR序列，j)第四連接子序列，k) poly A序列，l)第五連接子序列及m)第二ITR序列。
在某些實施例中，本文提供之重組載體按以下順序包含以下元件：a)第一ITR序列，b)第一連接子序列，c)組成型或低氧誘導型啟動子序列，d)第二連接子序列，e)內含子序列，f)第三連接子序列，g)第一UTR序列，h)編碼轉殖基因(例如抗VEGF抗原結合片段部分)之序列，i)第二UTR序列，j)第四連接子序列，k) poly A序列，l)第五連接子序列及m)第二ITR序列，其中該轉殖基因包含VEGF之信號肽(SEQ ID NO: 5)，且其中該轉殖基因編碼由可裂解的F/F2A序列分隔的輕鏈及重鏈序列。
在一特定實施例中，本文提供之重組載體為構築體II，其中該構築體II包含以下組件：(1)側接表現卡匣之AAV2反向末端重複序列；(2)控制元件，其包括a) CB7啟動子，包含CMV強化子/雞β-肌動蛋白啟動子，b)雞β-肌動蛋白內含子及c)兔β-球蛋白poly A信號；及(3)編碼抗VEGF抗原結合片段之重鏈及輕鏈的核酸序列，由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A連接子分隔，確保表現等量的重鏈及輕鏈多肽。在一特定實施例中，本文所述之構築體繪示於圖5中。 6.3.3         基因療法 (a)      目標患者群體
在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有眼部疾病(例如濕性AMD、乾性AMD、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR) (尤其濕性AMD))，尤其由新血管生成增加引起之眼部疾病的患者投藥。
在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有嚴重AMD之患者投藥。在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有減弱的AMD之患者投藥。
在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有嚴重濕性AMD之患者投藥。在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有減弱的濕性AMD之患者投藥。
在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有嚴重糖尿病性視網膜病變之患者投藥。在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有減弱的糖尿病性視網膜病變之患者投藥。
在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有AMD之患者投藥，該等患者已鑑別為對用抗VEGF抗體治療有反應。
在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有AMD之患者投藥，該等患者已鑑別為對用抗VEGF抗原結合片段治療有反應。
在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有AMD之患者投藥，該等患者已鑑別為在用基因療法治療之前對用玻璃體內注射之抗VEGF抗原結合片段治療有反應。
在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有AMD之患者投藥，該等患者已鑑別為對用LUCENTIS® (蘭尼單抗)、EYLEA® (阿柏西普)及/或AVASTIN® (貝伐珠單抗)治療有反應。
在某些實施例中，若在用基因療法治療之前在向患者玻璃體內注射抗VEGF抗原結合片段後，患者的液體有所改善，則經診斷患有AMD之患者鑑別為對用抗VEGF抗原結合片段(例如蘭尼單抗)治療有反應。在某些實施例中，若在用基因療法治療之前向患者玻璃體內注射抗VEGF抗原結合片段後，患者的液體有所改善且中心視網膜厚度(CRT) ＜ 400 µm，則經診斷患有AMD之患者鑑別為對用抗VEGF抗原結合片段(例如蘭尼單抗)治療有反應。在一些實施例中，在用基因療法治療之前，以每月0.5 mg向患者玻璃體內注射抗VEGF抗原結合片段，持續兩個月。在其他實施例中，在用基因療法治療之前，以每月0.5 mg向患者玻璃體內注射抗VEGF抗原結合片段，持續三個月。在一較佳實施例中，若患者視網膜內部(網膜側3 mm)液體相對於玻璃體內注射抗VEGF抗原結合片段之前的水準改善＞ 50 µm或30%，或藉由CRC所測定之中心子場厚度相對於玻璃體內注射抗VEGF抗原結合片段之前的水準改善＞ 50 µm或30%，則他或她之液體有所改善。
在某些實施例中，本文提供之方法用於向診斷患有AMD之患者投藥，該等患者患有除液體導致CRT (亦即，色素上皮脫落(PED)或視網膜下高反射物質(SHRM))增加以外之疾病及如藉由CRC所測定，液體(視網膜內或視網膜下) ＜ 75 µm。
在本文所述之方法的某些實施例中，患者在治療前待治療之眼睛的BCVA ≤20/20且≥20/400。在一特定實施例中，患者在治療前待治療之眼睛的BCVA ≤20/63且≥20/400。
在本文所述之方法的某些實施例中，患者在治療前待治療之眼睛的早期治療糖尿病性視網膜病變研究(ETDRS) BCVA字母評分在≤78與≥44之間。
在本文所述之方法的某些實施例中，患者不同時進行抗凝療法。 (b)     劑量
在某些實施例中，維持治療性產物在玻璃體液中至少0.330 μg/mL或在房水(眼前房)中0.110 μg/mL之Cmin 濃度持續三個月的劑量為所需的；此後，應維持治療性產物之玻璃體Cmin 濃度介於1.70至6.60 μg/mL，及/或房水Cmin 濃度介於0.567至2.20 μg/mL。然而，因為治療性產物為連續產生的(在組成型啟動子的控制下或在使用低氧誘導型啟動子時由低氧條件誘導)，所以維持較低的濃度可為有效的。玻璃體液濃度可直接在自玻璃體液或前房收集之患者流體樣品中量測，或藉由量測患者之治療性產物血清濃度來估計及/或監測--全身與玻璃體暴露於治療性產物之比率為約1:90,000。(例如參見Xu L等人, 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624, 第1621頁及第1623頁之表5中報告之蘭尼單抗的玻璃體液及血清濃度，其以全文引用的方式併入本文中)。
在某些實施例中，劑量係藉由每毫升之基因組複本或投與患者眼睛(例如脈絡膜上、視網膜下、玻璃體內、近鞏膜、結膜下及/或視網膜內(例如藉由脈絡膜上注射、經由經玻璃體方法方法外科手術)視網膜下注射、經由脈絡膜上腔之視網膜下投藥或後部近鞏膜儲槽術))之基因組複本數來量度。在某些實施例中，投與每毫升2.4 × 1011 個基因組複本至每毫升1 × 1013 個基因組複本。在一特定實施例中，投與每毫升2.4 × 1011 個基因組複本至每毫升5 × 1011 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升5 × 1011 個基因組複本至每毫升1 × 1012 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升1 × 1012 個基因組複本至每毫升5 × 1012 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升5 × 1012 個基因組複本至每毫升1 × 1013 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約2.4 × 1011 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約5 × 1011 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約1 × 1012 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約5 × 1012 個基因組複本。在另一特定實施例中，投與每毫升約1 × 1013 個基因組複本。在某些實施例中，投與1 × 109 至1 × 1012 個基因組複本。在特定實施例中，投與3 × 109 至2.5 × 1011 個基因組複本。在特定實施例中，投與1 × 109 至2.5 × 1011 個基因組複本。在特定實施例中，投與1 × 109 至1 × 1011 個基因組複本。在特定實施例中，投與1 × 109 至5 × 109 個基因組複本。在特定實施例中，投與6 × 109 至3 × 1010 個基因組複本。在特定實施例中，投與4 × 1010 至1 × 1011 個基因組複本。在特定實施例中，投與2 × 1011 至1 × 1012 個基因組複本。在一特定實施例中，投與約3 × 109 個基因組複本(其相當於250 μl體積中每毫升約1.2 × 1010 個基因組複本)。在另一特定實施例中，投與約1 × 1010 個基因組複本(其相當於250 μl體積中每毫升約4 × 1010 個基因組複本)。在另一特定實施例中，投與約6 × 1010 個基因組複本(其相當於250 μl體積中每毫升約2.4 × 1011 個基因組複本)。在另一特定實施例中，投與約1.6 × 1011 個基因組複本(其相當於250 μl體積中每毫升約6.2 × 1011 個基因組複本)。在另一特定實施例中，投與約1.55 × 1011 個基因組複本(其相當於250 μl體積中每毫升約6.2 × 1011 個基因組複本)。在另一特定實施例中，投與約2.5 × 1011 個基因組複本(其相當於250 μl體積中每毫升約1.0 × 1012 個基因組複本)。
在某些實施例中，投與每隻眼睛約6.0 × 1010 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛約1.6 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛約5.0 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛約3 × 1012 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛每毫升約1.0 × 1012 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛每毫升約2.5 × 1012 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛約3.0 × 1013 個基因組複本。在某些實施例中，投與每隻眼睛多達3.0 × 1013 個基因組複本。
在某些實施例中，藉由視網膜下注射投與每隻眼睛約6.0 × 1010 個基因組複本。在某些實施例中，藉由視網膜下注射投與每隻眼睛約1.6 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由視網膜下注射投與每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由視網膜下注射投與每隻眼睛約3.0 × 1013 個基因組複本。在某些實施例中，藉由視網膜下注射投與每隻眼睛多達3.0 × 1013 個基因組複本。
在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與每隻眼睛約5.0 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與每隻眼睛約3 × 1012 個基因組複本。在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射投與每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由兩次脈絡膜上注射投與每隻眼睛約5.0 × 1011 個基因組複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與每隻眼睛約3.0 × 1013 個基因組複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與每隻眼睛多達3.0 × 1013 個基因組複本。在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射以100 μl之體積投與每隻眼睛每毫升約2.5 × 1012 個基因組複本。在某些實施例中，藉由兩次脈絡膜上注射投與每隻眼睛每毫升約2.5 × 1012 個基因組複本，其中每次注射之體積為100 μl。
如本文所用且除非另外規定，否則術語「約」意謂在既定值或範圍之±10%內。在某些實施例中，術語「約」涵蓋所列舉之確切數字。 (c)      取樣及監測功效
本文提供之方法對視覺缺損之效應可藉由BCVA (最佳矯正視力)、眼內壓、裂隙燈活組織檢視法及/或間接檢眼鏡檢查法來量測。
在特定實施例中，本文提供之方法對視覺缺損之效應可藉由經本文所述之方法治療之人類患者的眼睛在治療後(例如治療後46-50週或98-102週)是否達到大於43個字母的BCVA來量測。43個字母之BCVA對應於20/160近似斯內倫當量。在一特定實施例中，經本文所述之方法治療之人類患者的眼睛在治療後(例如治療後46-50週或98-102週)達到大於43個字母的BCVA。
在特定實施例中，本文提供之方法對視覺缺損之效應可藉由經本文所述之方法治療之人類患者的眼睛在治療後(例如治療後46-50週或98-102週)是否達到大於84個字母的BCVA來量測。84個字母之BCVA對應於20/20近似斯內倫當量。在一特定實施例中，經本文所述之方法治療之人類患者的眼睛在治療後(例如治療後46-50週或98-102週)達到大於84個字母的BCVA。
本文提供之方法對眼睛/視網膜之物理變化的效應可藉由SD-OCT (SD-光學相干斷層攝影術)來量測。
可如藉由視網膜電圖描記(ERG)量測般監測功效。
本文提供之方法的效應可藉由量測視力喪失、感染、炎症及其他安全事件(包括視網膜脫離)之跡象來監測。
可監測視網膜厚度以判定本文提供之方法的功效。在不受任何特定理論束縛的情況下，可將視網膜厚度用作臨床讀數，其中視網膜厚度之減少愈多或視網膜增厚之前的時間愈長，則治療愈有效。視網膜功能可例如藉由ERG判定。ERG係經FDA批准用於人類之視網膜功能的非侵入性電生理測試，其係檢查眼睛之感光細胞(視桿及視錐)及其連接之神經節細胞，特別是其對閃光刺激之反應。視網膜厚度可例如藉由SD-OCT來判定。SD-OCT為一種三維成像技術，其使用低連貫性干涉術來判定回波時間延遲劑自目標物體反射之反向散射光的量值。OCT可用於以3至15 μm軸向解析度掃描組織樣品(例如視網膜)之層，且SD-OCT與以前的技術形式相比可提高軸向解析度及掃描速度(Schuman, 2008, Trans. Am. Opthamol. Soc. 106:426-458)。
本文提供之方法的效應亦可藉由國家眼科研究所視覺功能問卷Rasch評分版(NEI-VFQ-28-R) (綜合評分；活動限制域評分；及社會情感功能域評分)中相對於基線的變化來量測。本文提供之方法的效應亦可藉由國家眼科研究所視覺功能問卷25項版本(NEI-VFQ-25) (綜合評分及心理健康分量表評分)中相對於基線的變化來量測。本文提供之方法的效應亦可藉由黃斑病治療滿意度問卷(MacTSQ) (綜合評分；安全性、功效及不適域評分；以及資訊提供及便利域評分)中相對於基線的變化來量測。
在特定實施例中，本文所述之方法的功效係藉由在約4週、12週、6個月、12個月、24個月、36個月或其他期望時間點的視力改善來反映。在一特定實施例中，視力改善之特徵在於BCVA的增加，例如增加1個字母、2個字母、3個字母、4個字母、5個字母、6個字母、7個字母、8個字母、9個字母、10個字母、11個字母或12個字母或更多。在一特定實施例中，視力改善之特徵在於視力相對於基線增加5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%或更多。
在特定實施例中，本文所述之方法的功效係藉由在約4週、12週、6個月、12個月、24個月、36個月或其他期望時間點中心視網膜厚度(CRT)之減小來反映，例如中心視網膜厚度相對於基線降低5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%或更多。
在特定實施例中，治療後眼睛中不存在炎症或治療後眼睛中幾乎沒有炎症(例如炎症水準相對於基線增加10%、5%、2%、1%或更小)。
若人類患者為兒童，則可使用基於視動眼球震顫(OKN)之方法或基於OKN之改進方法來評定視覺功能。 6.4   組合療法
本文提供之方法可與一或多種額外療法組合。在一個態樣中，本文提供之方法與雷射光凝一起投與。在一個態樣中，本文提供之方法與使用維替泊芬之光動力療法一起投與。
在一個態樣中，本文提供之方法與治療性產物之玻璃體內(IVT)注射一起投與。在治療性產物為抗VEGF抗體或抗原結合片段之一特定實施例中，本文提供之方法與抗VEGF劑之IVT注射一起投與，該等抗VEGF劑包括但不限於在人類細胞株中產生之HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi (Dumont等人, 2015，見上文)，或其他抗VEGF劑，諸如派加替尼、蘭尼單抗、阿柏西普或貝伐珠單抗。
可在基因療法治療之前、同時或之後投與額外療法。
基因療法治療之功效可藉由消除或減少使用護理標準之急救治療的次數來表明。舉例而言，當治療性產物為抗VEGF抗體或抗原結合片段時，可藉由消除或減少用抗VEGF劑進行玻璃體內注射之急救治療的次數來表明基因療法治療之功效，該等抗VEGF劑包括但不限於在人類細胞株中產生的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，或其他抗VEGF劑，諸如派加替尼、蘭尼單抗、阿柏西普或貝伐珠單抗。 7.     序列 SEQ ID NO:1 蘭尼單抗FAB胺基酸序列(輕鏈)
Figure 02_image001
SEQ ID NO:2 蘭尼單抗FAB胺基酸序列(重鏈)
Figure 02_image003
SEQ ID NO:3 貝伐珠單抗FAB胺基酸序列(輕鏈)
Figure 02_image005
SEQ ID NO:4 貝伐珠單抗FAB胺基酸序列(重鏈)
Figure 02_image007
SEQ ID NO:5 VEGF-A信號肽
Figure 02_image009
SEQ ID NO:6 纖蛋白-1信號肽
Figure 02_image011
SEQ ID NO:7 玻璃連結蛋白信號肽
Figure 02_image013
SEQ ID NO:8 補體因子H信號肽
Figure 02_image015
SEQ ID NO:9 旋光蛋白信號肽
Figure 02_image017
SEQ ID NO:10 貝伐珠單抗CDNA (輕鏈)
Figure 02_image019
SEQ ID NO:11 貝伐珠單抗cDNA (重鏈)
Figure 02_image021
SEQ ID NO:12 蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之輕鏈)
Figure 02_image023
Figure 02_image025
SEQ ID NO:13 蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之重鏈)
Figure 02_image027
SEQ ID NO:14 貝伐珠單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR1
Figure 02_image029
SEQ ID NO:15 貝伐珠單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR2
Figure 02_image031
SEQ ID NO:16 貝伐珠單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR3
Figure 02_image033
SEQ ID NO:17 貝伐珠單抗重鏈CDR1
Figure 02_image035
SEQ ID NO:18 貝伐珠單抗及蘭尼單抗重鏈CDR2
Figure 02_image037
SEQ ID NO:19 貝伐珠單抗重鏈CDR3
Figure 02_image039
SEQ ID NO:20 蘭尼單抗重鏈CDR1
Figure 02_image041
SEQ ID NO:21 蘭尼單抗重鏈CDR1
Figure 02_image043
SEQ ID NO:22 白蛋白信號肽
Figure 02_image045
SEQ ID NO:23 胰凝乳蛋白酶原信號肽
Figure 02_image047
SEQ ID NO:24 介白素-2信號肽
Figure 02_image049
SEQ ID NO:25 胰蛋白酶原-2信號肽
Figure 02_image051
SEQ ID NO:26 F2A位點
Figure 02_image053
SEQ ID NO:27 T2A位點
Figure 02_image055
SEQ ID NO:28 P2A位點
Figure 02_image057
SEQ ID NO:29 E2A位點
Figure 02_image059
SEQ ID NO:30 F2A位點
Figure 02_image061
SEQ ID NO:31 弗林蛋白酶連接子
Figure 02_image063
SEQ ID NO:32 弗林蛋白酶連接子
Figure 02_image065
SEQ ID NO:33 弗林蛋白酶連接子
Figure 02_image067
SEQ ID NO:34 弗林蛋白酶連接子
Figure 02_image069
SEQ ID NO:35 弗林蛋白酶連接子
Figure 02_image071
SEQ ID NO:36 弗林蛋白酶連接子
Figure 02_image073
SEQ ID NO:37 弗林蛋白酶連接子
Figure 02_image075
SEQ ID NO:38 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(輕鏈)
Figure 02_image077
SEQ ID NO:39 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈)
Figure 02_image079
SEQ ID NO:40 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈)
Figure 02_image081
SEQ ID NO:41
Figure 02_image083
SEQ ID NO: 42
Figure 02_image085
SEQ ID NO: 43
Figure 02_image087
Figure 02_image089
SEQ ID NO: 44
Figure 02_image091
SEQ ID NO: 45
Figure 02_image093
SEQ ID NO: 46
Figure 02_image095
SEQ ID NO: 47
Figure 02_image097
Figure 02_image099
SEQ ID NO: 48
Figure 02_image101
SEQ ID NO: 49
Figure 02_image103
SEQ ID NO: 50
Figure 02_image105
SEQ ID NO: 51
Figure 02_image107
SEQ ID NO:52 精子形成相關7 (SPATA7)； AAH90875.1
Figure 02_image109
SEQ ID NO:53 LEBERCILIN (LCA5) NP_001116241.1
Figure 02_image111
SEQ ID NO:54 RPGR相互作用蛋白1 (RPGRIP1) CAD01135.1
Figure 02_image113
SEQ ID NO:55 視錐-視桿同源盒(CRX) EAW57515.1
Figure 02_image115
SEQ ID NO:56 CRUMBS細胞極性複合物組分1 (CRB1)，同源物1同功異型物1前體 NP_957705.1
Figure 02_image117
SEQ ID NO:57 CRUMBS細胞極性複合物組分1 (CRB1)，同源物1同功異型物2前體 NP_001180569.1
Figure 02_image119
Figure 02_image121
SEQ ID NO:58 菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1) Q9HAN9.1
Figure 02_image123
SEQ ID NO:59 菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)；同功異型物CRA_A EAW71635.1
Figure 02_image125
SEQ ID NO:60 菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)，同功異型物2 NP_001284708.1
Figure 02_image127
SEQ ID NO:61 菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)，同功異型物1 NP_073624.2
Figure 02_image129
SEQ ID NO:62 中心體蛋白290 (CEP290)； NP_079390.3
Figure 02_image131
Figure 02_image133
SEQ ID NO:63 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X1 XP_011537059.1
Figure 02_image135
Figure 02_image137
SEQ ID NO:64 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X2 XP_011537060.1
Figure 02_image139
Figure 02_image141
SEQ ID NO:65 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X3 XP_011537061.1
Figure 02_image143
Figure 02_image145
SEQ ID NO:66 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X4 XP_011537062.1
Figure 02_image147
Figure 02_image149
SEQ ID NO:67 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X5 XP_016875469.1
Figure 02_image151
SEQ ID NO:68 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X6 XP_011537063.1
Figure 02_image153
SEQ ID NO:69 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X7 XP_016875470.1
Figure 02_image155
Figure 02_image157
SEQ ID NO:70 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X8 XP_016875471.1
Figure 02_image159
Figure 02_image161
SEQ ID NO:71 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X9 XP_011537064.1
Figure 02_image163
Figure 02_image165
SEQ ID NO:72 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X10 XP_011537065.1
Figure 02_image167
Figure 02_image169
SEQ ID NO:73 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X11 XP_016875472.1
Figure 02_image171
SEQ ID NO:74 中心體蛋白290 (CEP290), 同功異型物X12 XP_011537066.1
Figure 02_image173
SEQ ID NO:75 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X13 XP_011537067.1
Figure 02_image175
Figure 02_image177
SEQ ID NO:76 中心體蛋白290 (CEP290)，同功異型物X14 XP_011537068.1
Figure 02_image179
Figure 02_image181
SEQ ID NO:77 肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1) EAL24310.1
Figure 02_image183
SEQ ID NO:78 肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1) AAH33622.2
Figure 02_image185
SEQ ID NO:79 肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)，同功異型物CRA_A EAW83649.1
Figure 02_image187
SEQ ID NO:80 肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)，同功異型物CRA_B EAW83650.1
Figure 02_image189
SEQ ID NO:81 肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)，同功異型物CRA_C EAW83651.1
Figure 02_image191
SEQ ID NO:82 肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)，同功異型物CRA_D EAW83652.1
Figure 02_image193
SEQ ID NO:83 視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3) NP_001158160.1
Figure 02_image195
SEQ ID NO:84 視黃醇去氫酶12 (RDH12) Q96NR8.3
Figure 02_image197
SEQ ID NO:85 視黃醇去氫酶12 (RDH12)，同功異型物1，部分 ALQ34323.1
Figure 02_image199
SEQ ID NO:86 視黃醇去氫酶12 (RDH12)，同功異型物4，部分 ALQ34324.1
Figure 02_image201
SEQ ID NO:87 視黃醇去氫酶12 (RDH12)，前體 NP_689656.2
Figure 02_image203
SEQ ID NO:88 卵磷脂視黃醇醯基轉移酶(LRAT) AAD13529.1
Figure 02_image205
SEQ ID NO:89 短粗樣蛋白1 (TULP1) AAB97966.1
Figure 02_image207
SEQ ID NO:90 短粗樣蛋白1 (TULP1)，同功異型物CRA_A EAX03839.1
Figure 02_image209
Figure 02_image211
SEQ ID NO:91 短粗樣蛋白1 (TULP1)，同功異型物CRA_B EAX03840.1
Figure 02_image213
SEQ ID NO:92 短粗樣蛋白1 (TULP1)，同源物同功異型物A NP_003311.2
Figure 02_image215
SEQ ID NO:93 短粗樣蛋白1 (TULP1) NP_813977.1
Figure 02_image217
SEQ ID NO:94 電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13) O60928.1
Figure 02_image219
SEQ ID NO:95 電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13) AAH37290.1
Figure 02_image221
SEQ ID NO:96 粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1) P03886.1
Figure 02_image223
SEQ ID NO:97 粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4) ACT53103.1
Figure 02_image225
SEQ ID NO:98 粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6) ACT53105.1
Figure 02_image227
SEQ ID NO:99 血管收縮素I轉化酶(ACE) P12821.1
Figure 02_image229
Figure 02_image231
SEQ ID NO:100 血管收縮素I轉化酶(ACE)，同功異型物1前體 NP_000780.1
Figure 02_image233
SEQ ID NO:101 血管收縮素I轉化酶(ACE)，同功異型物2前體 NP_690043.1
Figure 02_image235
SEQ ID NO:102 介白素10 (IL10) CAG46790.1
Figure 02_image237
SEQ ID NO:103 RAB護航蛋白1 (CHM) EAW98559.1
Figure 02_image239
SEQ ID NO:104 視網膜劈裂素(RS1) NP_000321.1
Figure 02_image241
SEQ ID NO:105 視網膜劈裂素(RS1)，部分 ABK40506.1
Figure 02_image243
SEQ ID NO:106 巴德-畢德氏症候群1 (BBS1) AAM92770.1
Figure 02_image245
SEQ ID NO:107 巴德-畢德氏症候群2 (BBS2) AAH14140.1
Figure 02_image247
Figure 02_image249
SEQ ID NO:108 ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)，同功異型物BB3SL NP_001310442.1
Figure 02_image251
SEQ ID NO:109 ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)，同功異型物1 NP_001265222.1
Figure 02_image253
SEQ ID NO:110 ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)，同功異型物2 NP_001310443.1
Figure 02_image255
SEQ ID NO:111 巴德-畢德氏症候群4 (BBS4) AAH27624.1
Figure 02_image257
SEQ ID NO:112 巴德-畢德氏症候群4 (BBS4)，同功異型物1 NP_149017.2
Figure 02_image259
SEQ ID NO:113 巴德-畢德氏症候群4 (BBS4)，同功異型物2 NP_001239607.1
Figure 02_image261
Figure 02_image263
SEQ ID NO:114 巴德-畢德氏症候群4 (BBS4)，同功異型物3 NP_001307594.1
Figure 02_image265
SEQ ID NO:115 巴德-畢德氏症候群5 (BBS5) NP_689597.1
Figure 02_image267
SEQ ID NO:116 巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)，同功異型物1 AAT08182.1
Figure 02_image269
SEQ ID NO:117 巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)，同功異型物2 AAT08183.1
Figure 02_image271
SEQ ID NO:118 麥-考症候群(MKKS) AAH28973.1
Figure 02_image273
Figure 02_image275
SEQ ID NO:119 麥-考症候群(MKKS)，同功異型物CRA_A EAX10343.1
Figure 02_image277
SEQ ID NO:120 麥-考症候群(MKKS)，同功異型物CRA_B EAX10344.1
Figure 02_image279
SEQ ID NO:121 巴德-畢德氏症候群7 (BBS7) AAH32691.1
Figure 02_image281
SEQ ID NO:122 巴德-畢德氏症候群7 (BBS7)，同功異型物A NP_789794.1
Figure 02_image283
SEQ ID NO:123 巴德-畢德氏症候群7 (BBS7)，同功異型物B NP_060660.2
Figure 02_image285
SEQ ID NO:124 三十四肽重複域8 (TTC8) AAH95433.1
Figure 02_image287
SEQ ID NO:125 三十四肽重複域8 (TTC8)，同功異型物A NP_653197.2
Figure 02_image289
SEQ ID NO:126 三十四肽重複域8 (TTC8)，同功異型物B NP_938051.1
Figure 02_image291
SEQ ID NO:127 巴德-畢德氏症候群9 (BBS9) AAI03832.1
Figure 02_image293
SEQ ID NO:128 巴德-畢德氏症候群10 (BBS10) AAH26355.2
Figure 02_image295
SEQ ID NO:129 含三聯基元32 (TRIM32) AAH03154.1
Figure 02_image297
SEQ ID NO:130 含三聯基元32 (TRIM32)，同功異型物CRA_A EAW87447.1
Figure 02_image299
Figure 02_image301
SEQ ID NO:131 巴德-畢德氏症候群12 (BBS12) AAH55426.1
Figure 02_image303
SEQ ID NO:132 MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1) NP_060247.2
Figure 02_image305
SEQ ID NO:133 含WD重複之平面細胞極性效應子(WDPCP)，同源物同功異型物1 NP_001036157.1
Figure 02_image307
SEQ ID NO:134 含WD重複之平面細胞極性效應子(WDPCP)，同源物同功異型物2 NP_056994.3
Figure 02_image309
Figure 02_image311
SEQ ID NO:135 含WD重複之平面細胞極性效應子(WDPCP)，同源物同功異型物3 NP_001340973.1
Figure 02_image313
SEQ ID NO:136 含WD重複之平面細胞極性效應子(WDPCP)，同源物同功異型物4 NP_001340974.1
Figure 02_image315
SEQ ID NO:137 血清學定義之結腸癌抗原8 (SDCCAG8) Q86SQ7.1
Figure 02_image317
SEQ ID NO:138 白胺酸拉鏈轉錄因子樣1 (LZTFL1) CAB95836.1
Figure 02_image319
SEQ ID NO:139 BBSOME相互作用蛋白1 (BBIP1)，同功異型物1 NP_001182233.1
Figure 02_image321
SEQ ID NO:140 BBSOME相互作用蛋白1 (BBIP1)，同功異型物2 NP_001182234.1
Figure 02_image323
SEQ ID NO:141 纖毛內轉運27 (IFT27)，同源物同功異型物1 NP_001349932.1
Figure 02_image325
SEQ ID NO:142 纖毛內轉運27 (IFT27)，同源物同功異型物2 NP_006851.1
Figure 02_image327
SEQ ID NO:143 鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A) EAX04084.1
Figure 02_image329
SEQ ID NO:144 OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1); AAH58013.1
Figure 02_image331
SEQ ID NO:145 RP1軸突微管相關(RP1) AAA20120.1
Figure 02_image333
SEQ ID NO:146 ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2) ANZ79619.1
Figure 02_image335
SEQ ID NO:147 外周蛋白2 (PRPH2) NP_000313.2
Figure 02_image337
SEQ ID NO:148 前體MRNA加工因子31(PRPF31) AAI17390.1
Figure 02_image339
SEQ ID NO:149 前體MRNA加工因子31(PRPF31)，同功異型物CRA_A EAW72190.1
Figure 02_image341
SEQ ID NO:150 前體MRNA加工因子31(PRPF31)，同功異型物CRA_A EAW72191.1
Figure 02_image343
SEQ ID NO:151 前體MRNA加工因子8 (PRPF8) AAH64370.1
Figure 02_image345
SEQ ID NO:152 前體MRNA加工因子8 (PRPF8)，同功異型物CRA_A EAW90588.1
Figure 02_image347
Figure 02_image349
SEQ ID NO:153 前體MRNA加工因子8 (PRPF8)，同功異型物CRA_B EAW90589.1
Figure 02_image351
Figure 02_image353
SEQ ID NO:154 前體MRNA加工因子8 (PRPF8)，同功異型物CRA_C EAW90590.1
Figure 02_image355
SEQ ID NO:155 前體MRNA加工因子8 (PRPF8)，同功異型物CRA_D EAW90591.1
Figure 02_image357
SEQ ID NO:156 前體MRNA加工因子8 (PRPF8)，同功異型物CRA_E EAW90592.1
Figure 02_image359
SEQ ID NO:157 前體MRNA加工因子8 (PRPF8)，同功異型物CRA_F EAW90593.1
Figure 02_image361
SEQ ID NO:158 前體MRNA加工因子8 (PRPF8)，同功異型物CRA_G EAW90594.1
Figure 02_image363
SEQ ID NO:159 閉眼同源物(EYS) CAR64275.1
Figure 02_image365
SEQ ID NO:160 FAM161中心體蛋白A (FAM161A)，同功異型物1 NP_001188472.1
Figure 02_image367
SEQ ID NO:161 FAM161中心體蛋白A (FAM161A)，同功異型物2 NP_115556.2
Figure 02_image369
SEQ ID NO:162 MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)； Q12866.2
Figure 02_image371
SEQ ID NO:163 磷酸二酯酶6B (PDE6B) AAH00249.1
Figure 02_image373
Figure 02_image375
SEQ ID NO:164 磷酸二酯酶6B (PDE6B)，同功異型物CRA_A EAW82661.1
Figure 02_image377
SEQ ID NO:165 磷酸二酯酶6B (PDE6B)，同功異型物CRA_B EAW82662.1
Figure 02_image379
SEQ ID NO:166 PROMININ 1 (PROM1) O43490.1
Figure 02_image381
Figure 02_image383
SEQ ID NO:167 PROMININ 1 (PROM1)，同功異型物CRA_A EAW92750.1
Figure 02_image385
SEQ ID NO:168 PROMININ 1 (PROM1)，同功異型物CRA_B EAW92751.1
Figure 02_image387
SEQ ID NO:169 PROMININ 1 (PROM1)，同功異型物CRA_C EAW92752.1
Figure 02_image389
SEQ ID NO:170 磷酸二酯酶6A (PDE6A) AAH35909.1
Figure 02_image391
Figure 02_image393
SEQ ID NO:171 磷酸二酯酶6A (PDE6A)，同功異型物CRA_A EAW61756.1
Figure 02_image395
SEQ ID NO:172 磷酸二酯酶6A (PDE6A)，同功異型物CRA_B EAW61757.1
Figure 02_image397
SEQ ID NO:173 感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2) EAW79803.1
Figure 02_image399
Figure 02_image401
SEQ ID NO:174 雄性生殖細胞相關激酶(MAK) AAN16405.1
Figure 02_image403
SEQ ID NO:175 雄性生殖細胞相關激酶(MAK)；視網膜富集之同功異型物 AEL29206.1
Figure 02_image405
SEQ ID NO:176 纖毛內轉運140 (IFT140) NP_055529.2
Figure 02_image407
Figure 02_image409
SEQ ID NO:177 HTRA絲胺酸肽酶1 (HTRA1) EAW49312.1
Figure 02_image411
SEQ ID NO:178 斑萎蛋白1 (BEST1)，同功異型物1 NP_004174.1
Figure 02_image413
SEQ ID NO:179 斑萎蛋白1 (BEST1)，同功異型物2 NP_001132915.1
Figure 02_image415
SEQ ID NO:180 斑萎蛋白1 (BEST1)，同功異型物3 ALQ33849.1
Figure 02_image417
SEQ ID NO:181 斑萎蛋白1 (BEST1)，同功異型物4 NP_001287716.1
Figure 02_image419
SEQ ID NO:182 斑萎蛋白1 (BEST1)，同功異型物5 NP_001350520.1
Figure 02_image421
SEQ ID NO:183 斑萎蛋白1 (BEST1)，同功異型物6 NP_001350521.1
Figure 02_image423
SEQ ID NO:184 斑萎蛋白1 (BEST1)，同功異型物7 NP_001350522.1
Figure 02_image425
SEQ ID NO:185 斑萎蛋白1 (BEST1)，同功異型物8 ALQ33852.1
Figure 02_image427
SEQ ID NO:186 補體因子B AAA16820.1
Figure 02_image429
SEQ ID NO:187 β-類澱粉蛋白，部分 AAB29908.1
Figure 02_image431
SEQ ID NO:188 β-類澱粉蛋白，部分 AAB26264.2
Figure 02_image433
SEQ ID NO:189 CD59糖蛋白(CD59) NP_001120697.1
Figure 02_image435
SEQ ID NO:190 光敏感通道蛋白-1 (CHR1) [團藻] ABZ90901.1
Figure 02_image437
Figure 02_image439
SEQ ID NO:191 光敏感通道蛋白-2 (CHR2) [團藻 ABZ90903.1
Figure 02_image441
SEQ ID NO:192 補體因子C5，同功異型物1 NP_001726.2
Figure 02_image443
SEQ ID NO:193 補體因子C5，同功異型物2 NP_001304092.1
Figure 02_image445
Figure 02_image447
SEQ ID NO:194 補體因子C5，同功異型物2 NP_001304093.1
Figure 02_image449
SEQ ID NO:195 補體因子C5A 3PVM_A
Figure 02_image451
Figure 02_image453
SEQ ID NO:196 補體因子D，同功異型物1 NP_001919.2
Figure 02_image455
SEQ ID NO:197 補體因子D，同功異型物2 NP_001304264.1
Figure 02_image457
SEQ ID NO:198 DNAJ熱休克蛋白家族(HSP40)成員C3 (DNAJC3)，亦稱為P58IPK NP_006251.1
Figure 02_image459
SEQ ID NO:199 DNAJ熱休克蛋白家族(HSP40)成員C3 (DNAJC3)，亦稱為P58IPK，同功異型物X1 XP_011519406.1
Figure 02_image461
SEQ ID NO:200 DNAJ熱休克蛋白家族(HSP40)成員C3 (DNAJC3)，亦稱為P58IPK，同功異型物X2 XP_011519407.1
Figure 02_image463
SEQ ID NO:201 DNAJ熱休克蛋白家族(HSP40)成員C3 (DNAJC3)，亦稱為P58IPK，同功異型物X3 XP_016876163.1
Figure 02_image465
SEQ ID NO:202 DNAJ熱休克蛋白家族(HSP40)成員C3 (DNAJC3)，亦稱為P58IPK，同功異型物X4 XP_016876164.1
Figure 02_image467
SEQ ID NO:203 β-2腎上腺素受體 NP_000015.1
Figure 02_image469
Figure 02_image471
SEQ ID NO:204 半胱天冬酶-2 (CASP2) AAX36439.1
Figure 02_image473
SEQ ID NO:205 胰島素受體受質1 (IRS1) NP_005535.1
Figure 02_image475
SEQ ID NO:206 HIF-1反應蛋白RTP801 (RTP801) Q9NX09.1
Figure 02_image477
SEQ ID NO:207 轉化生長因子β2 (TGFB2) AAH99635.1
Figure 02_image479
SEQ ID NO:208 轉化生長因子β2 (TGFB2)，同功異型物CRA_A EAW93326.1
Figure 02_image481
SEQ ID NO:209 轉化生長因子β2 (TGFB2)，同功異型物CRA_B EAW93327.1
Figure 02_image483
SEQ ID NO:210 腦源性神經營養因子(BDNF) AAO15434.1
Figure 02_image485
SEQ ID NO:211 睫狀神經營養因子(CNTF) NP_000605.1
Figure 02_image487
SEQ ID NO:212 前列腺素內過氧化物合成酶2 (PTGS2) BAA05698.1
Figure 02_image489
SEQ ID NO:213 前列腺素F受體(PTGFR) AAQ76788.1
Figure 02_image491
SEQ ID NO:214 前列腺素F受體(PTGFR)，同功異型物CRA_A EAX06350.1
Figure 02_image493
SEQ ID NO:215 前列腺素F受體(PTGFR)，同功異型物CRA_B EAX06351.1
Figure 02_image495
SEQ ID NO:216 玻尿酸酶 AAC70915.1
Figure 02_image497
SEQ ID NO:217 色素上皮衍生因子(PEDF)； P36955.4
Figure 02_image499
SEQ ID NO:218 色素上皮衍生因子(PEDF)；同功異型物1前體 NP_001316832.1
Figure 02_image501
Figure 02_image503
SEQ ID NO:219 色素上皮衍生因子(PEDF)；同功異型物2 NP_001316834.1
Figure 02_image505
SEQ ID NO:220 血管內皮生長因子(VEGF) CAA44447.1
Figure 02_image507
SEQ ID NO:221 胎盤生長因子(PGF) AAH07789.1
Figure 02_image509
SEQ ID NO:222 肌纖蛋白(MYOC) BAA24532.1
Figure 02_image511
SEQ ID NO:223 C-C基元趨化因子受體5 (CCR5) NP_001093638.1
Figure 02_image513
SEQ ID NO:224 CD19 AAB60697.1
Figure 02_image515
Figure 02_image517
SEQ ID NO:225 CRUMBS細胞極性複合物組分2 (CRB2)，前體 NP_775960.4
Figure 02_image519
SEQ ID NO:226 CRUMBS細胞極性複合物組分2 (CRB2)，同功異型物X1 XP_011516858.1
Figure 02_image521
Figure 02_image523
SEQ ID NO:227 CRUMBS細胞極性複合物組分2 (CRB2)，同功異型物X2 XP_011516860.1
Figure 02_image525
SEQ ID NO:228 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4) NP_006028.2
Figure 02_image527
SEQ ID NO:229 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)同功異型物X2 XP_006712940.1
Figure 02_image529
Figure 02_image531
SEQ ID NO:230 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)同功異型物X3 XP_011510520.1
Figure 02_image533
SEQ ID NO:231 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)同功異型物X4 XP_011510521.1
Figure 02_image535
Figure 02_image537
SEQ ID NO:232 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)同功異型物X5 XP_011510522.1
Figure 02_image539
SEQ ID NO:233 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)同功異型物X6 XP_011510523.1
Figure 02_image541
SEQ ID NO:234 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)同功異型物X7 XP_011510526.1
Figure 02_image543
Figure 02_image545
SEQ ID NO:235 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)同功異型物X8 XP_011510527.1
Figure 02_image547
SEQ ID NO:236 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)同功異型物X9 XP_016860883.1
Figure 02_image549
Figure 02_image551
SEQ ID NO:237 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)同功異型物X10 XP_011510528.1
Figure 02_image553
SEQ ID NO:238 組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)同功異型物X11 XP_006712943.1
Figure 02_image555
SEQ ID NO:239 視紫質(RHO) NP_000530.1
Figure 02_image557
SEQ ID NO:240 神經生長因子(NGF) CAA37703.1
Figure 02_image559
SEQ ID NO:241 核因子紅血球系2樣2 (NRF2) AAB32188.1
Figure 02_image561
SEQ ID NO:242 麩胱甘肽S-轉移酶PI 1 (GSTP1) AAH10915.1
Figure 02_image563
SEQ ID NO:243 視桿源性視錐活力因子(RDCVF) NP_612463.1
Figure 02_image565
SEQ ID NO:244 視黃醛結合蛋白1 (RLBP1) EAX02038.1
Figure 02_image567
SEQ ID NO:245 雙同源盒4 (DUX4) AUA60624.1
Figure 02_image569
Figure 02_image571
SEQ ID NO:246 NLR家族含PYRIN域3 (NLRP3) AAI43360.1
Figure 02_image573
SEQ ID NO:247 脾相關酪胺酸激酶(SYK)，同功異型物SYK(S) NP_001167639.1
Figure 02_image575
SEQ ID NO:248 脾相關酪胺酸激酶(SYK)，同功異型物SYK(L) NP_003168.2
Figure 02_image577
SEQ ID NO:249 促腎上腺皮質激素(ACTH)，前原蛋白 NP_000930.1
Figure 02_image579
SEQ ID NO:250 半胱天冬酶1 (CASP1)，同功異型物α前體 NP_001244047.1
Figure 02_image581
SEQ ID NO:251 半胱天冬酶1 (CASP1)，同功異型物β前體 NP_001244048.1
Figure 02_image583
SEQ ID NO:252 CD59 CAG46523.1
Figure 02_image585
SEQ ID NO:253 NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP) NP_001004354.1
Figure 02_image587
SEQ ID NO:254 α-2-抗纖維蛋白溶酶(A2AP)，同功異型物A前體 NP_000925.2
Figure 02_image589
SEQ ID NO:255 α-2-抗纖維蛋白溶酶(A2AP)，同功異型物B前體 NP_001159393.1
Figure 02_image591
SEQ ID NO:256 纖維蛋白溶酶原(PLG) AAA60113.1
Figure 02_image593
SEQ ID NO:257 生長激素 AAA98618.1
Figure 02_image595
SEQ ID NO:258 胰島素樣生長因子1 (IGF1) CAG46659.1
Figure 02_image597
SEQ ID NO:259 介白素1β (IL1B) AAA74137.1
Figure 02_image599
SEQ ID NO:260 血管收縮素I轉化酶2 (ACE2) ACT66268.1
Figure 02_image601
Figure 02_image603
SEQ ID NO:261 整合素α次單元前體 AAA51620.1
Figure 02_image605
SEQ ID NO:262 整合素α次單元前體 P05556.2
Figure 02_image607
SEQ ID NO:263 CD40 AAH64518.1
Figure 02_image609
SEQ ID NO:264 胰島素樣生長因子1受體(IGF1R) AAI43722.1
Figure 02_image611
SEQ ID NO:265 胰島素樣生長因子2受體(IGF2R) AAK56918.1
Figure 02_image613
Figure 02_image615
SEQ ID NO:266 RTP801 AAL38424.1
Figure 02_image617
SEQ ID NO:267 基質金屬蛋白酶2 (MMP2) BAA12023
Figure 02_image619
SEQ ID NO:268 G蛋白偶合受體143 (GPR143) NP_000264
Figure 02_image621
SEQ ID NO:269 G蛋白偶合受體143 (GPR143) EAW98773.1
Figure 02_image623
Figure 02_image625
SEQ ID NO:270 酪胺酸酶(TYR) AAB60319.1
Figure 02_image627
SEQ ID NO:271 半胱天冬酶2 (CASP2) CAG46548.1
Figure 02_image629
SEQ ID NO:272 含白胺酸富集重複序列及Ig域之蛋白質1 (LINGO1) AAH68558.1
Figure 02_image631
SEQ ID NO:273 棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1) AAH08426.1
Figure 02_image633
SEQ ID NO:274 三肽基-肽酶1 (TPP1) NP_000382.3
Figure 02_image635
SEQ ID NO:275 BATTENIN (CLN3) AAI11069.1
Figure 02_image637
SEQ ID NO:276 CLN6跨膜ER蛋白(CLN6) NP_060352.1
Figure 02_image639
SEQ ID NO:277 含主要易化子超家族域8 (MFSD8) AAH29503.1
Figure 02_image641
SEQ ID NO:278 肌球蛋白VIIA (MYO7A) AAB03679.1
Figure 02_image643
Figure 02_image645
SEQ ID NO:279 肌球蛋白VIIA (MYO7A)，同功異型物CRA_A EAW75018.1
Figure 02_image647
SEQ ID NO:280 肌球蛋白VIIA (MYO7A)，同功異型物CRA_B EAW75019.1
Figure 02_image649
SEQ ID NO:281 肌球蛋白VIIA (MYO7A)，同功異型物CRA_C EAW75020.1
Figure 02_image651
Figure 02_image653
SEQ ID NO:282 肌球蛋白VIIA (MYO7A)，同功異型物CRA_D EAW75021.1
Figure 02_image655
SEQ ID NO:283 肌球蛋白VIIA (MYO7A)，同功異型物CRA_E EAW75022.1
Figure 02_image657
Figure 02_image659
SEQ ID NO:284 肌球蛋白VIIA (MYO7A)，同功異型物CRA_F EAW75023.1
Figure 02_image661
Figure 02_image663
SEQ ID NO:285 鈣黏蛋白相關23 (CDH23) AAG27034.2
Figure 02_image665
Figure 02_image667
SEQ ID NO:286 原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15) AAK31581.1
Figure 02_image669
SEQ ID NO:287 原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)，同功異型物CRA_A EAW54151.1
Figure 02_image671
Figure 02_image673
SEQ ID NO:288 原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)，同功異型物X1 XP_016872062.1
Figure 02_image675
SEQ ID NO:289 USHERIN (USH2A)，同功異型物A NP_009054.5
Figure 02_image677
Figure 02_image679
SEQ ID NO:290 USHERIN (USH2A)，同功異型物B前體 NP_996816.2
Figure 02_image681
Figure 02_image683
SEQ ID NO:291 USHERIN (USH2A)，IIA型 AAC23748.2
Figure 02_image685
SEQ ID NO:292 CLARIN 1 (CLRN1) AAH74971.1
Figure 02_image687
SEQ ID NO:293 CLARIN 1 (CLRN1)，同功異型物A NP_777367.1
Figure 02_image689
SEQ ID NO:294 CLARIN 1 (CLRN1)，同功異型物D NP_001182723.1
Figure 02_image691
SEQ ID NO:295 CLARIN 1 (CLRN1)，同功異型物C NP_443721.1
Figure 02_image693
SEQ ID NO:296 CLARIN 1 (CLRN1)，同功異型物E NP_001243748.1
Figure 02_image695
SEQ ID NO:297 ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4) P78363.3
Figure 02_image697
SEQ ID NO:298 ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)，同功異型物CRA_A EAW73056.1
Figure 02_image699
Figure 02_image701
SEQ ID NO:299 ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)，同功異型物CRA_B EAW73057.1
Figure 02_image703
Figure 02_image705
SEQ ID NO:300 ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)，同功異型物CRA_C EAW73058.1
Figure 02_image707
SEQ ID NO:301 ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4) NP_073563.1
Figure 02_image709
SEQ ID NO:302 介白素6 (IL6) AAC41704.1
Figure 02_image711
SEQ ID NO:303 TNF-α (TNF) CAA26669.1
Figure 02_image713
SEQ ID NO:304 L視蛋白(OPN1LW) NP_064445.2
Figure 02_image715
SEQ ID NO:305 M視蛋白(OPN1MW) NP_000504.1
Figure 02_image717
SEQ ID NO:306 視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D) Q02846.2
Figure 02_image719
Figure 02_image721
SEQ ID NO:307 類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65) NP_000320.1
Figure 02_image723
SEQ ID NO:308 類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)，同功異型物X1 XP_016857516.1
Figure 02_image725
SEQ ID NO:309 芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1) CAH25996.1
Figure 02_image727
SEQ ID NO:310 芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1) CAH25995.1
Figure 02_image729
SEQ ID NO:311 芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1) CAG17883.1
Figure 02_image731
Figure 02_image733
SEQ ID NO:312 芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1) CAG17882.1
Figure 02_image735
SEQ ID NO:313 芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1) AAH12055.1
Figure 02_image737
SEQ ID NO:314 C5B同功異型物1 NP_001726.2
Figure 02_image739
SEQ ID NO:315 C5B，同功異型物2 NP_001304092.1
Figure 02_image741
SEQ ID NO:316 C5B，同功異型物3 NP_001304093.1
Figure 02_image743
SEQ ID NO:317 C6 NP_001108603.2
Figure 02_image745
SEQ ID NO:318 C7 NP_000578.2
Figure 02_image747
SEQ ID NO:319 C8 α次單元 NP_000553.1
Figure 02_image749
SEQ ID NO:320 C8 β次單元 AAA51862.1
Figure 02_image751
Figure 02_image753
SEQ ID NO:321 C8 γ次單元 AAA51888.1
Figure 02_image755
8.     實例 8.1   實例1：基於貝伐珠單抗Fab cDNA之載體
構築基於貝伐珠單抗Fab cDNA之載體，其包含具有輕鏈及重鏈cDNA序列(分別為SEQ ID NO. 10及11)之貝伐珠單抗Fab部分的轉殖基因。該轉殖基因亦包含具有選自表1中所列群之信號肽的核酸。編碼輕鏈及重鏈之核苷酸序列係由IRES元件或2A裂解位點分隔，以產生雙順反子載體。視情況，該載體另外包含低氧誘導型啟動子。 8.2   實例2：基於蘭尼單抗cDNA之載體
構築基於蘭尼單抗Fab cDNA之載體，其包含具有蘭尼單抗Fab輕鏈及重鏈cDNA (分別為SEQ ID NO. 12及13之部分，不編碼信號肽)之轉殖基因。該轉殖基因亦包含具有選自表1中所列群之信號肽的核酸。編碼輕鏈及重鏈之核苷酸序列係由IRES元件或2A裂解位點分隔，以產生雙順反子載體。視情況，該載體另外包含低氧誘導型啟動子。 8.3   實例3：基於經高糖基化之貝伐珠單抗Fab cDNA之載體
構築基於經高糖基化之貝伐珠單抗Fab cDNA之載體，其包含具有輕鏈及重鏈cDNA序列(分別為SEQ ID NO. 10及11)之貝伐珠單抗Fab部分的轉殖基因，具有編碼以下突變中之一或多者的序列突變：L118N (重鏈)、E195N (輕鏈)或Q160N或Q160S (輕鏈)。該轉殖基因亦包含具有選自表1中所列群之信號肽的核酸。編碼輕鏈及重鏈之核苷酸序列係由IRES元件或2A裂解位點分隔，以產生雙順反子載體。視情況，該載體另外包含低氧誘導型啟動子。 8.4   實例4：基於經高糖基化之蘭尼單抗cDNA之載體
構築基於經高糖基化之蘭尼單抗Fab cDNA之載體，其包含具有蘭尼單抗Fab輕鏈及重鏈cDNA (分別為SEQ ID NO. 12及13之部分，不編碼信號肽)之轉殖基因，具有編碼以下突變中之一或多者的序列突變：L118N (重鏈)、E195N (輕鏈)或Q160N或Q160S (輕鏈)。該轉殖基因亦包含具有選自表1中所列群之信號肽的核酸。編碼輕鏈及重鏈之核苷酸序列係由IRES元件或2A裂解位點分隔，以產生雙順反子載體。視情況，該載體另外包含低氧誘導型啟動子。 8.5   實例5：基於蘭尼單抗之HuGlyFabVEGFi
基於蘭尼單抗Fab cDNA之載體(參見實例2)在AAV8背景之PER.C6®細胞株(Lonza)中表現。判定所得產物，基於蘭尼單抗之HuGlyFabVEGFi穩定產生。藉由肼解及MS/MS分析證實HuGlyFabVEGFi之N-糖基化。參見例如Bondt等人, Mol. & Cell. Proteomics 13.11:3029-3039。基於聚糖分析，證實HuGlyFabVEGFi經N-糖基化，其中2,6唾液酸為主要修飾。使用此項技術中已知的方法判定經N-糖基化之HuGlyFabVEGFi的有利特性。可發現HuGlyFabVEGFi之穩定性增加且對其抗原(VEGF)之親和力增加。關於評定穩定性之方法，參見Sola及Griebenow, 2009, J Pharm Sci., 98(4): 1223-1245，而關於評定親和力之方法，參見Wright等人, 1991, EMBO J. 10:2717-2723及Leibiger等人, 1999, Biochem. J. 338:529-538。 8.6   實例6：藉由外周注射用基於蘭尼單抗之HuGlyFabVEGFi治療濕性AMD
基於判定基於蘭尼單抗之HuGlyFabVEGFi的有利特徵(參見實例5)，認為基於蘭尼單抗Fab cDNA之載體在作為轉殖基因表現時，對治療濕性AMD有用。向患有濕性AMD之個體投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8，其劑量足以在玻璃體液中產生Cmin為至少0.330 µg/mL之濃度的轉殖基因產物，持續三個月。投藥係藉由外周注射至視網膜中(亦即，位於眼睛後部之視神經盤、中央凹及黃斑外周)之視網膜下投藥來完成，該視網膜下投藥藉由經玻璃體注射來實現。在治療後，評估個體之濕性AMD症狀的改善。 8.7   實例7：基於棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 cDNA之載體
構築基於棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1) cDNA之載體，其包含具有對應於SEQ ID NO. 273之胺基酸序列之核苷酸序列的轉殖基因。視情況，該載體另外包含低氧誘導型啟動子。 8.8   實例8：藉由外周注射用基於棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 cDNA之載體治療Batten-CLN1相關之視力喪失
向患有Batten-CLN1相關之視力喪失的個體投與編碼棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1之AAV8或AAV9，其劑量足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。投藥係藉由外周注射至視網膜中(亦即，位於眼睛後部之視神經盤、中央凹及黃斑外周)之視網膜下投藥來完成，該視網膜下投藥藉由經玻璃體注射來實現。在治療後，評估個體之Batten-CLN1相關之視力喪失的改善。
本文提供之方法對視覺缺損之效應係藉由一或多種視力篩查來量測，包括視動眼球震顫(OKN)。OKN視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN用於量測言語前及/或非言語患者，包括1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。計算該治療之前及之後OKN篩查結果的百分比變化。 8.9   實例9：藉由脈絡膜上注射用基於棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 cDNA之載體治療Batten-CLN1相關之視力喪失
向患有Batten-CLN1相關之視力喪失的個體投與編碼棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1之AAV8或AAV9，其劑量足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。投藥係藉由向脈絡膜上腔投藥來完成。在治療後，評估個體之Batten-CLN1相關之視力喪失的改善。
本文提供之方法對視覺缺損之效應係藉由一或多種視力篩查來量測，包括視動眼球震顫(OKN)。OKN視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN用於量測言語前及/或非言語患者，包括1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。計算該治療之前及之後OKN篩查結果的百分比變化。 8.10 實例10：藉由經由玻璃體切除術進行視網膜下注射用基於棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 cDNA之載體治療Batten-CLN1相關之視力喪失
向患有Batten-CLN1相關之視力喪失的個體投與編碼棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1之AAV8或AAV9，其劑量足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。投藥係藉由經由玻璃體切除術向視網膜下腔投藥來完成。在治療後，評估個體之Batten-CLN1相關之視力喪失的改善。
本文提供之方法對視覺缺損之效應係藉由一或多種視力篩查來量測，包括視動眼球震顫(OKN)。OKN視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN用於量測言語前及/或非言語患者，包括1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。計算該治療之前及之後OKN篩查結果的百分比變化。 8.11 實例11：藉由經由脈絡膜上腔之視網膜下投藥用基於棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 cDNA之載體治療Batten-CLN1相關之視力喪失
向患有Batten-CLN1相關之視力喪失的個體投與編碼棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1之AAV8或AAV9，其劑量足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。投藥係藉由經由脈絡膜上腔向視網膜下腔投藥來完成。在治療後，評估個體之Batten-CLN1相關之視力喪失的改善。
本文提供之方法對視覺缺損之效應係藉由一或多種視力篩查來量測，包括視動眼球震顫(OKN)。OKN視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN用於量測言語前及/或非言語患者，包括1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。計算該治療之前及之後OKN篩查結果的百分比變化。 8.12 實例12：基於三肽基-肽酶1 (TPP1) cDNA之載體
構築基於三肽基-肽酶1 (TPP1) cDNA之載體，其包含具有對應於SEQ ID NO. 274之胺基酸序列之核苷酸序列的轉殖基因。視情況，該載體另外包含低氧誘導型啟動子。 8.13 實例13：藉由外周注射用基於三肽基-肽酶1 (TPP1) cDNA之載體治療Batten-CLN2相關之視力喪失
向患有Batten-CLN2相關之視力喪失的個體投與編碼三肽基-肽酶1之AAV8或AAV9，其劑量足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。投藥係藉由外周注射至視網膜中(亦即，位於眼睛後部之視神經盤、中央凹及黃斑外周)之視網膜下投藥來完成，該視網膜下投藥藉由經玻璃體注射來實現。在治療後，評估個體之Batten-CLN2相關之視力喪失的改善。
本文提供之方法對視覺缺損之效應係藉由一或多種視力篩查來量測，包括視動眼球震顫(OKN)。OKN視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN用於量測言語前及/或非言語患者，包括1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。計算該治療之前及之後OKN篩查結果的百分比變化。 8.14 實例14：藉由脈絡膜上注射用基於三肽基-肽酶1 (TPP1) cDNA之載體治療Batten-CLN2相關之視力喪失
向患有Batten-CLN2相關之視力喪失的個體投與編碼三肽基-肽酶1之AAV8或AAV9，其劑量足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。投藥係藉由向脈絡膜上腔投藥來完成。在治療後，評估個體之Batten-CLN2相關之視力喪失的改善。
本文提供之方法對視覺缺損之效應係藉由一或多種視力篩查來量測，包括視動眼球震顫(OKN)。OKN視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN用於量測言語前及/或非言語患者，包括1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。計算該治療之前及之後OKN篩查結果的百分比變化。 8.15 實例15：藉由經由玻璃體切除術進行視網膜下注射用基於三肽基-肽酶1 cDNA之載體治療Batten-CLN2相關之視力喪失
向患有Batten-CLN2相關之視力喪失的個體投與編碼三肽基-肽酶1之AAV8或AAV9，其劑量足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。投藥係藉由經由玻璃體切除術向視網膜下腔投藥來完成。在治療後，評估個體之Batten-CLN2相關之視力喪失的改善。
本文提供之方法對視覺缺損之效應係藉由一或多種視力篩查來量測，包括視動眼球震顫(OKN)。OKN視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN用於量測言語前及/或非言語患者，包括1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。計算該治療之前及之後OKN篩查結果的百分比變化。 8.16 實例16：藉由經由脈絡膜上腔之視網膜下投藥用基於三肽基-肽酶1 cDNA之載體治療Batten-CLN2相關之視力喪失
向患有Batten-CLN2相關之視力喪失的個體投與編碼三肽基-肽酶1之AAV8或AAV9，其劑量足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。投藥係藉由經由脈絡膜上腔向視網膜下腔投藥來完成。在治療後，評估個體之Batten-CLN2相關之視力喪失的改善。
本文提供之方法對視覺缺損之效應係藉由一或多種視力篩查來量測，包括視動眼球震顫(OKN)。OKN視力篩查使用OKN非自主反射之原理來客觀地評定患者的眼睛是否可跟隨移動的目標。藉由使用OKN，測試者與患者之間無需口頭交流。因此，OKN用於量測言語前及/或非言語患者，包括1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、11個月、1歲、1.5歲、2歲、2.5歲、3歲、3.5歲、4歲、4.5歲或5歲患者的視力。計算該治療之前及之後OKN篩查結果的百分比變化。 8.17 實例17：評估構築體II基因療法對患有nAMD之參與者的安全性及功效之隨機分組、部分掩蔽、對照的2b期臨床研究 8.17.1   大綱
主要目標 .
評估構築體II在第50週與蘭尼單抗相比之最佳矯正視力(BCVA)的平均變化。
次要目標 .
評估構築體II至第102週之安全性及耐受性。評估構築體II對BCVA之影響。評估構築體II對藉由光譜域-光學相干斷層攝影術(SD-OCT)所量測之中心視網膜厚度(CRT)的影響。評定在構築體II治療組中對補充抗血管內皮生長因子(VEGF)療法之需求。評定構築體II之房水蛋白質濃度。評估構築體II之免疫原性。
探索性目標 .
評估地圖狀萎縮區域隨時間之變化，且在基線無跡象之參與者中評定新的地圖狀萎縮區域的發生率。評定SD-OCT上無液體之參與者的比例。評定房水VEGF-A濃度。使用患者報告之結果(PRO)問卷評估視覺功能及治療滿意度。
研究設計 .
此2b期部分掩蔽、隨機分組、多中心研究將包括3個時期：有效導入期(亦即篩查)、治療期及延長期。在完成或提前中止當前研究後，將要求接受構築體II之參與者參加長期隨訪研究，且在彼時簽署單獨的隨訪研究知情同意書。
有效導入期將持續長達10週，自參與者簽署知情同意書時開始，且在參與者經過資格評估並接受3次每月的蘭尼單抗0.5mg的玻璃體內注射後結束。治療期將持續長達12個月，自參與者隨機分組進行研究治療時開始且在第50週結束。延長期將持續長達12個月，自第50週後開始且在第102週結束。
在第1次篩查訪視（第-10週），符合納入/排除準則之參與者將進入研究且在研究眼睛中接受0.5 mg蘭尼單抗之玻璃體內注射。在第2次篩查訪視（第-6週），參與者將在研究眼睛中接受第二次0.5 mg蘭尼單抗之玻璃體內注射。一週後，在第3次篩查訪視（第-5週），參與者在SD-OCT上之解剖反應將針對預先規定的反應準則進行評估。不符合反應準則之參與者將退出研究。若參與者符合所有納入準則，則在第4次篩查訪視(第−2週)，參與者將被隨機分組。在篩查期間退出或不符合隨機分組資格且發生與玻璃體內蘭尼單抗注射相關之不良事件(AE)的任何參與者將被隨訪，直至AE解決(注射後至多30天)。在第4次篩查訪視中鑑別為符合條件的參與者將在研究眼睛中接受第三次0.5 mg蘭尼單抗之玻璃體內注射。在中央閱讀中心(CRC)驗證CRT後，將使用交互式反應技術系統將參與者隨機分組(1:1:1)，以接受單次劑量之構築體II (劑量1)、單次劑量之構築體II (劑量2)或每月玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg；構築體II將藉由視網膜下遞送投與。參與者將根據隨機分組之基線(第4次篩查訪視) BCVA評分(＞58個字母對≤58個字母)進行分層。
隨機分配至構築體II治療組之參與者將在第1天進行外科手術，隨後在第2天及第8天進行訪視以評定術後安全性。在第2週，參與者將接受玻璃體內蘭尼單抗，以補充在玻璃體切除術期間可能去除的任何抗VEGF，且提供抗VEGF療法覆蓋，同時基因療法介導之蛋白質的潛在產量逐步上升。隨後，參與者將自第6週開始每月進行一次檢查，在此期間，若需要，可投與補充玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg療法，如藉由完全掩蔽之對SD-OCT資料的CRC評估及完全掩蔽之視力評定者對BCVA之評估所判定。注意，經掩蔽之評定者的SD-OCT及BCVA結果以及預定義之再治療準則將為研究者提供補充抗VEGF療法的決定提供依據。
隨機分配至蘭尼單抗對照組之參與者將在第2週進行首次隨機分組後訪視，且接受玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg。在第2週訪視後，參與者將每月(~28天)進行研究訪視，在此期間，他們將接受蘭尼單抗0.5 mg之玻璃體內注射。
在第50週的主要終點，蘭尼單抗對照組之參與者若仍符合關鍵的納入/排除準則，則將有機會接受構築體II治療。治療醫師將判定參與者是否符合條件且是否為手術之良好候選者。隨後將向合格的參與者投與此方案中評估之最高耐受劑量。在第50週後切換至構築體II之蘭尼單抗對照組的參與者將遵循與最初隨機分組接受構築體II之參與者在第1天開始之訪視時程相同的訪視時程。選擇不接受構築體II治療或不符合構築體II治療條件的彼等參與者將自研究中終止。
在整個研究過程中，將經由評定眼部及非眼部AE，包括嚴重不良事件(SAE)及特別受關注之不良事件(AESI) (研究者認為與手術/研究程序無關，且在眼部炎症分級量表上分級為2+或更高之眼部炎症、眼部感染[包括眼內炎]、視網膜撕裂或脫落、視網膜變薄及新的動脈血栓栓塞事件[非致命性中風、非致命性心肌梗塞或血管性死亡(包括原因不明的死亡)])，以及評定臨床實驗室測試(化學、血液學、凝血、尿分析)、眼部檢查及成像(BCVA、眼內壓、裂隙燈活組織檢視法、間接檢眼鏡檢查法、螢光素血管造影[FA]、眼底自發螢光檢查[FAF]及SD-OCT)及生命體徵來評估參與者。注意，所有研究訪視均會收集AE。亦將評定對構築體II之載體及轉殖基因產物(TP)的免疫原性。患者報告之結果將使用補充的國家眼科研究所視覺功能問卷25項版本(NEI-VFQ-25) (亦包含Rasch評分版本NEI-VFQ-28-R)及黃斑疾病治療滿意度問卷(MacTSQ)來收集。
將持續對研究參與者進行有計劃的安全監測。其包括由部分掩蔽之醫療監測員進行的審查及由部分掩蔽之主辦方內部安全委員會進行的例行審查。另外，亦將建立獨立的資料監測委員會(IDMC)，且定期召開會議以獨立地審查臨床資料。若需要進行未掩蔽之審查以瞭解潛在的安全信號，則此等審查將由IDMC進行。
診斷及主要納入準則 .
為了有資格參加此研究，年齡≥50歲且≤89歲的參與者必須在研究眼睛中診斷出繼發於年齡相關性黃斑變性之中央凹下脈絡膜新生血管。來自中心子場流體當前圖像之光學相干斷層攝影文檔必須由CRC確認。參與者之研究眼睛的BCVA字母評分必須在≤78與≥44之間，且研究眼睛為偽晶狀體(白內障術後狀態)。在解釋研究性質之後且在進行任何研究相關程序之前，參與者亦必須願意且能夠為此研究提供書面、簽署的知情同意書。
研究產品、劑量及投藥模式 .
構築體II劑量1：1.6 × 1011 GC/眼睛(6.2 × 1011 GC/mL)。構築體II劑量2：2.5 × 1011 GC/眼睛(1.0 × 1012 GC/mL)。構築體II係經由視網膜下遞送投與(單次劑量250 μL)。
治療持續時間 .
在構築體II治療組中：1天。在蘭尼單抗對照組中：50週
參考療法、劑量及投藥模式 .
大約每28天藉由玻璃體內注射投與蘭尼單抗((LUCENTIS®, Genentech) 0.5 mg (0.05 mL之10 mg/mL溶液)。
在導入期(第1次、第2次及第4次篩查訪視)及第2週，亦將在所有治療組中投與玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg作為補充抗VEGF療法。構築體II組之參與者將根據再治療準則對在第6週開始接受玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg作為補充抗VEGF療法進行評估；在第50週後切換至構築體II的蘭尼單抗對照組之參與者將在第54週接受玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg，且將根據再治療準則對在第58週開始接受玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg作為補充抗VEGF療法進行評估。
評估準則 .
主要終點：
基於早期治療糖尿病性視網膜病變研究(ETDRS)評分，BCVA自基線至第50週(作為第46週及第50週之平均值)之平均變化
次要終點：
經50週之眼部及非眼部AE的發生率。
經102週之眼部及非眼部AE的發生率。
BCVA自基線至第102週(作為第98週及第102週之平均值)之平均變化。
在第50週(作為第46週及第50週之平均值)及第102週(作為第98週及第102週之平均值)，BCVA為43個字母(20/160近似斯內倫當量)或更差之參與者的比例。
在第50週(作為第46週及第50週之平均值)及第102週(作為第98週及第102週之平均值)，BCVA為84個字母(20/20近似斯內倫當量)或更好之參與者的比例。
在第50週(作為第46週及第50週之平均值)及第102週(作為第98週及第102週之平均值)，根據BCVA，與基線相比，(1)獲得或失去≥15、≥10、≥5或≥0個字母；(2)維持視力(未失去≥15個字母)之參與者的比例。
接受≤2次補充抗VEGF注射、2次補充抗VEGF注射、1次補充抗VEGF注射或0次補充抗VEGF之參與者(構築體II隨機參與者)之BCVA自基線至第50週(作為第46週及第50週之平均值)的平均變化。
BCVA自第50週至第102週(作為第98週及第102週之平均值)之平均變化(切換至構築體II之對照組參與者)。
如藉由SD-OCT所量測之CRT自基線至第50週(作為第46週及第50週之平均值)及第102週(作為第98週及第102週之平均值)之平均變化。
如藉由SD-OCT所量測之CRT自第50週至第102週(作為第98週及第102週之平均值)之平均變化(切換至構築體II之對照組參與者)。
與作為有效導入期之一部分而接受第一次玻璃體內蘭尼單抗注射之前的前50週相比，至第50週及第102週補充抗VEGF注射率降低≥50%之參與者的比例(構築體II隨機參與者)。
與作為有效導入期之一部分而接受第一次蘭尼單抗注射之前的前50週相比，至第50週及第102週補充抗VEGF注射率之平均減少量(構築體II隨機參與者)。
構築體II組中至第50週及第102週之補充抗VEGF注射的平均次數；相對於研究之前50週，在第50週後至第102週之補充抗VEGF注射的平均次數(切換至構築體II之對照組參與者)。
在構築體II組第2週注射後首次補充抗VEGF注射的時間。
在第2週至第26週後，第26週至第50週後，第50週至第74週後，第74週至第102週後，第2週至第50週後及第2週至第10週後，接受補充抗VEGF注射之構築體II組參與者的比例
在評定時間點之房水構築體II TP濃度；在評定時間點之免疫原性量測(針對AAV8之血清中和抗體及針對構築體II TP之血清抗體)。
探索性終點：
基於評定時間點之FAF之地圖狀萎縮區域相對於基線的平均變化。
根據FAF之新的地圖狀萎縮區域的發生率(在基線時無地圖狀萎縮之參與者)。
濾泡區域視網膜變薄之發生率。
SD-OCT上無液體之參與者的比例。
評定時間點之VEGF-A濃度(房水)。
在評定時間點，NEI-VFQ-28-R (綜合評分；活動限制域評分；及社會情感功能域評分)相對於基線之平均變化。
在評定時間點，NEI-VFQ-25 (綜合評分及心理健康分量表評分)相對於基線之平均變化。
在評定時間點，MacTSQ (綜合評分；安全、功效及不適域評分；及資訊提供及便利域評分)相對於基線之平均變化。
表3. 目標及終點
目標 終點
主要
功效 ●     評估構築體II在第50週與蘭尼單抗相比之BCVA的平均變化 ●    基於ETDRS評分，BCVA自基線至第50週(作為第46週及第50週之平均值)之平均變化
次要
安全性 ●     評估構築體II至第102週之安全性及耐受性 ●    經50週之眼部及非眼部AE的發生率 ●    經102週之眼部及非眼部AE的發生率
功效 ●     評估構築體II對BCVA之影響 ●    BCVA自基線至第102週(作為第98週及第102週之平均值)之平均變化 ●    在第50週(作為第46週及第50週之平均值)及第102週(作為第98週及第102週之平均值)，BCVA為43個字母(20/160近似斯內倫當量)或更差之參與者的比例 ●    在第50週(作為第46週及第50週之平均值)及第102週(作為第98週及第102週之平均值)，BCVA為84個字母(20/20近似斯內倫當量)或更好之參與者的比例 ●    在第50週(作為第46週及第50週之平均值)及第102週(作為第98週及第102週之平均值)，根據BCVA，與基線相比，(1)獲得或失去≥15、≥10、≥5或≥0個字母；(2)維持視力(未失去≥15個字母)之參與者的比例 ●    接受≤2次補充抗VEGF注射、2次補充抗VEGF注射、1次補充抗VEGF注射或0次補充抗VEGF之參與者(構築體II隨機參與者)之BCVA自基線至第50週(作為第46週及第50週之平均值)的平均變化 ●    BCVA自第50週至第102週(作為第98週及第102週之平均值)之平均變化(切換至構築體II之對照組參與者)
功效 ●     評估構築體II對藉由SD-OCT所量測之CRT的影響 ●    如藉由SD-OCT所量測之CRT自基線至第50週(作為第46週及第50週之平均值)及第102週(作為第98週及第102週之平均值)之平均變化 ●    如藉由SD-OCT所量測之CRT自第50週至第102週(作為第98週及第102週之平均值)之平均變化(切換至構築體II之對照組參與者)
功效 ●     評定在構築體II治療組中對補充抗VEGF療法之需求 ●    與作為有效導入期之一部分而接受第一次玻璃體內蘭尼單抗注射之前的前50週相比，至第50週及第102週補充抗VEGF注射率降低≥50%之參與者的比例(構築體II隨機參與者) ●    與作為有效導入期之一部分而接受第一次蘭尼單抗注射之前的前50週相比，至第50週及第102週補充抗VEGF注射率之平均減少量(構築體II隨機參與者) ●    構築體II組中至第50週及第102週之補充抗VEGF注射的平均次數 ●    相對於研究之前50週，在第50週後至第102週之補充抗VEGF注射的平均次數(切換至構築體II之對照組參與者) ●    在構築體II組第2週注射後首次補充抗VEGF注射的時間 ●    在第2週至第26週後，第26週至第50週後，第50週至第74週後，第74週至第102週後，第2週至第50週後及第2週至第102週後，接受補充抗VEGF注射之構築體II組參與者的比例
藥效學 ●     評定構築體II之房水蛋白質濃度 ●    在評定時間點之房水構築體II TP濃度
免疫原性 ●     評估構築體II之免疫原性 ●    在評定時間點之免疫原性量測(針對AAV8之血清中和抗體及針對構築體II TP之血清抗體)
功效 ●     評估地圖狀萎縮區域隨時間之變化，且在基線無跡象之參與者中評定新的地圖狀萎縮區域的發生率 ●    基於評定時間點之FAF之地圖狀萎縮區域相對於基線的平均變化 ●    根據FAF之新的地圖狀萎縮區域的發生率(在基線時無地圖狀萎縮之參與者) ●    濾泡區域視網膜變薄之發生率
功效 ●     評定SD-OCT上無液體之參與者的比例 ●    SD-OCT上無液體之參與者的比例
生物標誌物 ●     評定房水VEGF-A濃度 ●    評定時間點之VEGF-A濃度(房水)
PRO 問卷 ●     使用PRO問卷評估視覺功能及治療滿意度 ●    在評定時間點，NEI-VFQ-28-R (綜合評分；活動限制域評分；及社會情感功能域評分)相對於基線之平均變化 ●    在評定時間點，NEI-VFQ-25 (綜合評分及心理健康分量表評分)相對於基線之平均變化 ●    在評定時間點，MacTSQ (綜合評分；安全、功效及不適域評分；及資訊提供及便利域評分)相對於基線之平均變化
AAV8 = 腺相關病毒血清型8；AE = 不良事件；BCVA = 最佳矯正視力； CRT = 中心視網膜厚度；ETDRS = 早期治療糖尿病性視網膜病變研究；FAF = 眼底自發螢光檢查；MacTSQ = 黃斑疾病治療滿意度問卷；NEI-VFQ-25 = 國家眼科研究所視覺功能問卷25項版本；NEI-VFQ-28-R =國家眼科研究所視覺功能問卷28項Rasch評分版本；PRO = 患者報告之結果；SD-OCT = 光譜域-光學相干斷層攝影術；TP = 轉殖基因產物；VEGF = 血管內皮生長因子 8.17.2    研究設計
總體研究設計
此2b期部分掩蔽、隨機分組、多中心研究將包括3個時期：有效導入期(亦即篩查)、治療期及延長期。在完成或提前中止當前研究後，將要求接受構築體II之參與者參加長期隨訪研究，且在彼時簽署單獨的隨訪研究知情同意書。
有效導入期將持續長達10週，自參與者簽署知情同意書(ICF)時開始，且在參與者經過資格評估並接受3次每月的玻璃體內蘭尼單抗注射後結束。治療期將持續長達12個月，自參與者隨機分組進行研究治療時開始且在第50週結束。延長期將持續長達12個月，自第50週後開始且在第102週結束。
在第1次篩查訪視（第-10週），符合納入/排除準則之參與者將進入研究且在研究眼睛中接受0.5 mg蘭尼單抗之玻璃體內注射。在第2次篩查訪視（第-6週），參與者將在研究眼睛中接受第二次0.5 mg蘭尼單抗之玻璃體內注射。一週後，在第3次篩查訪視（第-5週），參與者在SD-OCT上之解剖反應將針對預先規定的反應準則進行評估。不符合反應準則之參與者將退出研究。若參與者符合所有納入準則，則在第4次篩查訪視(第−2週)，參與者將被隨機分組。在篩查期間退出或不符合隨機分組資格且發生與玻璃體內蘭尼單抗注射相關之AE的任何參與者將被隨訪，直至AE解決(注射後至多30天)。在第4次篩查訪視中鑑別為符合條件的參與者將在研究眼睛中接受第三次0.5 mg蘭尼單抗之玻璃體內注射。在中央閱讀中心(CRC)驗證中心視網膜厚度(CRT)後，將使用交互式反應技術系統(IRT)將參與者隨機分組(1:1:1)，以接受單次劑量之構築體II (劑量1)、單次劑量之構築體II (劑量2)或每月玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg；構築體II將藉由視網膜下遞送投與。參與者將根據隨機分組之基線(第4次篩查訪視)最佳矯正視力(BCVA)評分(＞58個字母對≤58個字母)進行分層。
隨機分配至構築體II治療組之參與者將在第1天進行外科手術，隨後在第2天及第8天進行訪視以評定術後安全性。在第2週，參與者將接受玻璃體內蘭尼單抗，以補充在玻璃體切除術期間可能去除的任何抗VEGF，提供抗VEGF療法覆蓋，同時基因療法介導之蛋白質的潛在產量逐步上升。隨後，參與者將自第6週開始每月進行一次檢查，在此期間，若需要，可投與補充玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg療法，如藉由完全掩蔽之對SD-OCT資料的CRC評估及完全掩蔽之VA評定者對BCVA之評估所判定。注意，SD-OCT及BCVA結果以及預定義之再治療準則將為研究者提供補充抗VEGF療法的決定提供依據。
隨機分配至蘭尼單抗對照組之參與者將在第2週進行首次隨機分組後訪視，且接受玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg。在第2週訪視後，參與者將每月(~28天)進行研究訪視，在此期間，他們將接受蘭尼單抗0.5 mg之注射。
在第50週的主要終點，蘭尼單抗對照組之參與者若仍符合關鍵的納入/排除準則，則將有機會接受構築體II治療。治療醫師將判定參與者是否符合條件且是否為手術之良好候選者。隨後將向合格的參與者投與此方案中評估之最高耐受劑量。在第50週後切換至構築體II之蘭尼單抗對照組的參與者將遵循與最初隨機分組接受構築體II之參與者在第1天開始之訪視時程相同的訪視時程。選擇不接受構築體II治療或不符合構築體II治療條件的彼等參與者將自研究中終止。
在整個研究過程中，將經由評定眼部及非眼部AE，包括嚴重不良事件(SAE)及特別受關注之不良事件(AESI) (研究者認為與手術/研究程序無關，且在眼部炎症分級量表(參見部分8.17.7)上分級為2+或更高之眼部炎症、眼部感染[包括眼內炎]、視網膜撕裂或脫落、視網膜變薄及新的動脈血栓栓塞事件[非致命性中風、非致命性心肌梗塞或血管性死亡(包括原因不明的死亡)])，以及評定臨床實驗室測試(化學、血液學、凝血、尿分析)、眼部檢查及成像(BCVA、IOP、裂隙燈活組織檢視法、間接檢眼鏡檢查法、螢光素血管造影[FA]、眼底自發螢光檢查[FAF]及SD-OCT)及生命體徵來評估參與者。注意，所有研究訪視均會收集AE。亦將評定對構築體II之載體及TP的免疫原性。患者報告之結果(PRO)將使用補充的國家眼科研究所視覺功能問卷25項版本(NEI-VFQ-25) (亦包含Rasch評分版本NEI-VFQ-28-R)及黃斑疾病治療滿意度問卷(MacTSQ)來收集。
將持續對研究參與者進行有計劃的安全監測。其包括由部分掩蔽之醫療監測員進行的審查及由部分掩蔽之主辦方內部安全委員會(ISC)進行的例行審查。另外，亦將建立獨立的資料監測委員會(IDMC)，且定期召開會議以獨立地審查臨床資料。若需要進行未掩蔽之審查以瞭解潛在的安全信號，則此等審查將由IDMC進行。 8.17.3    研究群體 (a)      一般考慮事項
符合納入/排除準則之約300名患有nAMD的參與者將被隨機分組。預計美國將有多達50個研究中心參與此研究。不允許前瞻性地批准對招募及登記準則的協議偏差，亦稱為協議豁免或豁免。 (b)     納入準則
參與者必須符合以下所有準則，才有資格參加本研究：
1. 年齡≥50歲且≤89歲之男性或女性。
2. 在第1次篩查訪視時，研究眼睛之早期治療糖尿病性視網膜病變研究(ETDRS) BCVA字母評分在≤78與≥44之間。
3. 若雙眼均符合條件，則研究眼睛必須為研究者在隨機分組之前判定的參與者之視力較差的眼睛。
4. 在第1次篩查訪視時，必須具有研究眼睛繼發於AMD之中央凹下CNV的診斷以及網膜側(3 mm黃斑中心，基於早期治療糖尿病性視網膜病變柵格)內的液體。由CRC所評定之CNV病變特徵：病變大小需小於10個視盤面積(典型的視盤面積= 2.54 mm2 )。
5. 研究眼睛必須為偽晶狀體(白內障手術後至少12週)
6. 必須願意且能夠遵守所有的研究程序，且在研究期間有空。
7. 女性必須為絕經後(定義為至少連續12個月無月經)或手術絕育(亦即進行過雙側輸卵管結紮/雙側輸卵管卵巢切除術、雙側輸卵管閉塞術、子宮切除術或雙側卵巢切除術)。否則，女性必須在第1次篩查訪視時血清妊娠測試呈陰性，在第4次篩查訪視時尿液妊娠測試結果呈陰性，且願意在研究期間進行額外的妊娠測試。
8. 育齡婦女(及其男性伴侶)必須願意使用高效避孕方法，與育齡婦女發生性關係之男性參與者必須願意自第1次篩查訪視開始使用保險套，直至構築體II投與後24週。出於此研究之目的，育齡婦女之高效避孕方法包括以下：與抑制排卵相關之組合激素避孕(口服、陰道內、經皮)；與抑制排卵相關之僅孕激素避孕(口服、可注射、可植入)；宮內節育器；宮內激素釋放系統；雙側輸卵管閉塞；伴侶輸精管結紮；或性禁慾，當其為參與者喜歡及慣常的生活方式時。
9. 必須願意且能夠提供書面、簽署的知情同意書。
10. 基於第3次篩查訪視SD-OCT，參與者必須具有液體之改善(參見下面的反應準則)且CRT ＜ 400 μm。注意，若參與者患有除液體導致CRT增加以外的疾病(亦即PED或SHRM)，則若如藉由CRC所測定，他們之液體(視網膜內或視網膜下) ＜ 75 μm，則他們將入選。反應準則：個體視網膜內部(網膜側3 mm)液體相對於第1次篩查訪視必須改善＞ 50 µm或30%；或藉由CRC所測定之中心子場厚度改善＞ 50 µm或30%。 (c)      排除準則
若參與者適於以下任何準則，則排除在研究之外：
1. 研究眼睛之CNV或黃斑水腫繼發於除AMD以外的任何原因。
2. 如藉由CRC所判定之中央凹下纖維化或萎縮。
3. 在第1次篩查訪視之前的12個月需要＞ 10次抗VEGF注射之參與者。
4. 任何研究者認為可能限制研究眼睛之VA改善的狀況。
5. 研究眼睛之視網膜脫離活躍或有病史。
6. 研究眼睛之晚期青光眼，定義為IOP ＞ 23 mmHg，不受2種降低IOP之藥物或任何治療青光眼之侵入性手術(例如分流、管或MIGS裝置；允許進行選擇性雷射小樑切除術及氬激光小樑成形術)控制。
7. 任何研究者認為可能會增加參與者之風險，需要在研究過程中進行醫療或手術干預以防止或治療視力喪失，或干擾研究程序或評定的研究眼睛之狀況。
8. 在第1次篩查訪視之前12週內研究眼睛有眼內手術史。若在第1次篩查訪視之前＞ 10週進行釔鋁石榴石囊切開術，則允許。
9. 在第1次篩查訪視之前6個月內，研究眼睛有玻璃體內治療史，諸如玻璃體內類固醇注射或研究產品，但抗VEGF療法除外。
10. 在第1次篩查訪視時研究眼睛中存在任何植入物(不包括人工晶狀體)。
11. 在第1次篩查訪視之前5年內有可能損害免疫系統之惡性腫瘤或惡性血液病史，需要進行化療及/或放療。允許局部基底細胞癌。
12. 在登記後30天內或在研究產品之5個半衰期內接受任何研究產品，以時間長者為準。
13. 接受過基因療法。
14. 由療法引起之視網膜毒性史，或使用任何可能影響VA或具有已知視網膜毒性之藥物(例如氯喹或羥氯喹)之伴隨療法。
15. 可能干擾外科手術之研究眼睛之眼部或眼周感染。
16. 過去6個月內有心肌梗塞、腦血管意外或短暫性缺血發作。
17. 儘管經過最大限度的醫療治療，但高血壓仍未得到控制(收縮血壓[BP] ＞ 180 mmHg，舒張BP ＞ 100 mmHg)。
18. 在第1次篩查訪視時具有以下實驗室值之任何參與者將退出研究： ●   天冬胺酸轉胺酶(AST)/丙胺酸轉胺酶(ALT) ＞ 2.5 × 正常之上限(ULN)。 ●   總膽紅素＞ 1.5 × ULN，除非參與者之前有已知的吉爾伯特症候群(Gilbert's syndrome)病史，且分離膽紅素顯示結合膽紅素＜總膽紅素之35%。 ●   凝血酶原時間＞ 1.5 × ULN，除非參與者處於抗凝狀態。 抗凝之參與者將由當地實驗室進行監測，且按照當地的慣例進行管理，以保持或彌合研究過程中的抗凝療法；亦需要與醫療監護人協商。 ●   男性參與者之血紅蛋白＜ 10 g/dL，女性參與者＜ 9 g/dL。 ●   血小板＜ 100 × 103/µL。 ●   估計腎小球濾過率＜ 30 mL/min/1.73 m2 。
19. 任何研究者認為可能干擾眼外科手術或癒合過程的伴隨治療。
20. 已知對蘭尼單抗或其任何組分超敏。
21. 患有研究者或主辦方認為可能會損害參與者之安全性或完成研究中所有評定及隨訪之能力的嚴重、慢性或不穩定的醫療或心理病況。
22. 當前正在接受抗凝療法，而治療研究者(亦即視網膜外科醫生)以及為參與者開具抗凝處方之醫師認為，保持抗凝療法之構築體II投藥抗凝療法未經指定或被認為不安全。
對照組參與者在第 50 週後獲得構築體 II 之準則 (a)      納入準則.
1. 研究眼睛將為隨機化時合格之眼睛。
2. 參與者具有CRT ＜ 400 μm之視網膜下/視網膜內流體或(在參與者可能在CRT中具有非液體升高之情況下，例如色素上皮缺損) ＜ 75 μm之過量流體，由經掩蔽之CRC所證實。
3. 育齡婦女(及其男性伴侶)必須願意使用高效避孕方法，與育齡婦女發生性關係之男性參與者必須願意自手術訪視開始使用保險套，直至構築體II投與後24週。出於此研究之目的，育齡婦女之高效避孕方法包括以下：與抑制排卵相關之組合激素避孕(口服、陰道內、經皮)；與抑制排卵相關之僅孕激素避孕(口服、可注射、可植入)；宮內節育器；宮內激素釋放系統；雙側輸卵管閉塞；伴侶輸精管結紮；或性禁慾，當其為參與者喜歡及慣常的生活方式時。
4. 育齡婦女必須在第52週尿液妊娠測試呈陰性，且願意在研究期間進行額外的妊娠測試。 (b)     排除準則.
1. 研究眼睛之CNV或黃斑水腫繼發於除AMD以外的任何原因。
2. 如藉由CRC所判定之中央凹下纖維化或萎縮，或阻礙研究眼睛之VA改善的任何狀況。
3. 可能干擾外科手術之研究眼睛之眼部或眼周感染。
4. 自隨機分組以來，心肌梗塞、腦血管意外或短暫性缺血發作。
5. 儘管經過最大限度的醫療治療，但高血壓仍未得到控制(收縮BP ＞ 180 mmHg，舒張BP ＞ 100 mmHg)。
6. 任何研究者認為可能干擾眼外科手術或癒合過程的伴隨治療。
7. 過去一年內有可能損害免疫系統之惡性腫瘤或惡性血液病史，需要進行化療及/或放療。允許局部基底細胞癌。
8. 當前正在接受抗凝療法，而治療研究者以及為參與者開具抗凝處方之醫師認為，保持抗凝療法之構築體II投藥抗凝療法未經指定或被認為不安全。 8.17.4   研究干預
研究干預定義為根據研究方案欲向研究參與者投與之任何研究用干預、銷售產品、安慰劑或醫療裝置。 (a)      投與之研究干預
符合條件之參與者將1:1:1隨機分組以接受單次劑量之構築體II (劑量1)、單次劑量之構築體II (劑量2)或每月玻璃體內注射蘭尼單抗。
構築體II組中之任一者的參與者將在第1天在手術室內經由視網膜下遞送接受構築體II。在研究期間，構築體II組之參與者將在第1、2及4次篩查訪視時、在第2週接受藉由玻璃體內注射投與之蘭尼單抗0.5 mg，且隨後自第6週起始按需要每4週接受一次。
蘭尼單抗對照組之參與者將在第1、2及4次篩查訪視時、在第2週接受藉由玻璃體內注射投與之蘭尼單抗0.5 mg，且隨後此後每月(~28天)接受一次。
表4. 投與之研究干預
組名 構築體 II 劑量 1 構築體 II 劑量 2 蘭尼單抗 (LUCENTIS)
類型 基因療法 藥物
劑量調配物 溶液
單位劑量濃度 6.2 × 1011 GC/mL 1.0 × 1012 GC/mL 10 mg/mL
劑量 250 μL (1.6 × 1011 GC/眼睛) 一次劑量 250 μL (2.5 × 1011 GC/眼睛) 一次劑量 0.5 mg (0.05 mL之10 mg/mL溶液)，一月一次(約每28天一次)
投藥途徑 視網膜下遞送 玻璃體內注射
物理描述 構築體II研究產品以AAV載體活性成分於調配物緩衝液中之冷凍、無菌、一次性溶液形式供應。溶液在室溫下呈透明至乳白色、無色，且無可見顆粒。 LUCENTIS以無防腐劑之無菌溶液形式在經設計以遞送0.05 mL之10 mg/mL LUCENTIS (0.5 mg劑量預填充之注射器或小瓶)水溶液的一次性容器中供應。溶液呈無色至淺黃色。
製造商 Advanced Bioscience Laboratories, Inc Genentech, Inc
封裝及標籤 構築體II將以無菌一次性溶液形式在用無乳膠橡膠塞及鋁製翻蓋密封件密封之2 mL Crystal Zenith®小瓶中供應。各小瓶將按照國家監管要求貼上標籤。 研究干預將以商業封裝獲得，經設計以遞送0.05 mL之10 mg/mL蘭尼單抗溶液之預填充注射器(NDC 50242-080-03)或一次性2 mL玻璃小瓶(NDC 50242-080-02)。
8.17.5 眼部炎症分級量表
將在裂隙燈活組織檢視法及獨立的檢眼鏡檢查法期間評定眼部炎症，且使用以下量表分級。應使用裂隙燈活組織檢視法及間接檢眼鏡檢查法評定之標準操作。
表5. 眼部炎症之分級量表：前房細胞及前房閃輝前房細胞
分級 視野內之細胞 ( 1 mm × 1 mm 狹縫光束 )
0 無
+0.5 1 - 5
+1 6 - 15
+2 16 - 25
+3 26 - 50
+4 ＞ 50
前房閃輝
分級 描述
0 無
+1 跡線
+2 中度(虹膜及晶狀體細節清晰)
+3 明顯(虹膜及晶狀體細節模糊)
+4 強烈(纖維蛋白或塑膠樣房水)
來源：Jabs等人, 2005, Am J Ophthalmol 140(3):509-516。
表6. 玻璃體濁度之分級量表
分級 玻璃體濁度之量
0 無
+0.5 跡線
+1 視盤及血管清晰；神經纖維層渾濁
+2 視盤及血管渾濁
+3 視盤可見
+4 視盤不可見
來源：Nussenblatt等人, 1985, Ophthalmology, 92(4):467-471。8.18 實例 18 ： 在患有新生血管性年齡相關性黃斑變性 ( nAMD ) 之參與者中評估經由一或兩次脈絡膜上腔 ( SCS ) 注射遞送之構築體 II 基因療法的功效、安全性及耐受性的 2 期、隨機分組、劑量遞增、蘭尼單抗對照之研究 8.18.1 大綱 (a)           目標及終點
表7：目標及終點
量測 目標 終點
主要
功效 在第40週每月評估構築體II與蘭尼單抗相比之BCVA的平均變化 基於ETDRS評分，BCVA自基線至第40週之平均變化
次要
安全性 評估構築體II之安全性及耐受性 至第52週之總體及眼部AE及SAE的發生率 血清、尿液及淚液中之載體排出分析
評估構築體II對藉由FA所量測之CNV病變生長及滲漏之影響 在第40週及第52週，基於FA之CNV病變大小及滲漏面積相對於基線的平均變化
功效 評估構築體II對BCVA之影響 BCVA自基線至第102週之平均變化 在第40週及第52週，根據BCVA，與基線相比，(1)獲得或失去≥15、≥10、≥5或≥0個字母；(2)維持視力(未失去≥15個字母)之參與者的比例 接受≤2次補充抗VEGF注射、2次補充抗VEGF注射、1次補充抗VEGF注射或0次補充抗VEGF之參與者(構築體II隨機參與者)之BCVA自基線至第40週及第52週的平均變化
評估構築體II對藉由SD-OCT所量測之CRT的影響 如藉由SD-OCT所量測之CRT自基線至第40週及第52週的平均變化
評定接受構築體II治療之參與者對補充抗VEGF療法之需求 至第40週及第52週之年化補充抗VEGF注射率 與作為篩查期之一部分而接受第一次玻璃體內蘭尼單抗注射之前的前52週相比，至第40週及第52週年化補充抗VEGF注射率降低≥50%之參與者的比例(構築體II隨機參與者) 與作為篩查期之一部分而接受第一次蘭尼單抗注射之前的前52週相比，至第40週及第52週年化補充抗VEGF注射率之平均減少量(構築體II隨機參與者) 首次補充抗VEGF注射的時間
藥效學 評估水狀液中構築體II TP之濃度 隨時間推移房水構築體II TP濃度相對於基線的平均變化
免疫原性 評估構築體II之免疫原性 免疫原性量測(AAV8：NAb、TAb及ELISpot；構築體II蛋白：TAb及ELISpot)
探索性
功效 評估構築體II對藉由SD-OCT評定之液體積聚的影響 SD-OCT上無液體之參與者的比例 在SD-OCT上基線30 µm內具有穩定液體之參與者的比例
安全性 藉由視野評定視覺功能之變化 視野測試隨時間推移之變化
評估藉由FAF評定之新的地圖狀萎縮區域的發生率 根據FAF之新的地圖狀萎縮區域的發生率(在基線時無地圖狀萎縮之參與者)
生物標誌物 評定水狀液VEGF濃度 在評定時間點之VEGF-A濃度(房水)
AAV8 =腺相關病毒血清型8；AE =不良事件；BCVA =最佳矯正視力；CNV = 脈絡膜新生血管；CRT =中心視網膜厚度；ELISpot =酶聯免疫斑點；ETDRS =早期治療糖尿病性視網膜病變研究；FA =螢光素血管造影；FAF =眼底自發螢光檢查；NAbs = 中和抗體；SAE = 嚴重不良事件；SCS = 脈絡膜上腔；SD-OCT =光譜域-光學相干斷層攝影術；TAbs = 總結合抗體；TP =轉殖基因產物；VEGF = 血管內皮生長因子 (b)          研究設計
在此2期、隨機分組(3:1)、劑量遞增、蘭尼單抗對照之研究中，約40名患有nAMD之參與者將入選至2個劑量群組中。在各劑量群組內，參與者將在SCS中接受一次構築體II投藥(n = 15名參與者)，或每4週玻璃體內注射蘭尼單抗0.5 mg一次，直至第52週(n = 5名參與者)。
將大力鼓勵接受構築體II之參與者在第52週完成當前研究後(或提前中止)參加長期的後續研究，且在彼時簽署後續研究的單獨知情同意書。蘭尼單抗對照組之參與者將有機會在第52週訪視後納入未來的構築體II劑量群組。
篩查將包含3次訪視，以選擇具有限定之AAV8中和抗體(NAb)力價(第1次訪視)，且在蘭尼單抗導入期(第2次及第3次訪視)期間表現出對蘭尼單抗之解剖反應性的合格參與者。 在第1次訪視期間，簽署知情同意書(ICF)之參與者將針對合格性進行評估，且將收集血清樣品以篩查先前存在之NAb，或將根據NAb篩查方案確認NAb狀態。 血清AAV8 NAb力價結果呈陰性或低(≤ 300)的參與者將返回研究中心確認其餘納入/排除準則。 繼續符合資格準則之參與者將在第2次訪視(第1天)在研究眼睛中接受0.5 mg蘭尼單抗之玻璃體內注射。 在第3次訪視(第1週)，參與者將藉由光譜域-光學相干斷層攝影術(SD-OCT)進行評估，以經由與他們在篩查蘭尼單抗注射之前採取的第1天SD-OCT評定進行比較來確認其對篩查抗VEGF注射之解剖反應。 解剖反應將由中央閱讀中心(CRC)根據預先規定之準則來判定。 一旦CRC驗證解剖學資格，各群組中之2名標記參與者將隨機分配一個至構築體II或蘭尼單抗對照。 沒有解剖反應之參與者將視為篩查失敗。 對於篩查失敗之參與者，任何在第1天具有與蘭尼單抗注射相關之AE的人將被隨訪，直至AE解決(注射後至多30天)。
在第2週訪視，構築體II隨機參與者將視劑量而定接受1或2次構築體II注射，在研究中心使用Clearside SCS Microinjector™研究裝置藉由SCS遞送來投與；注意研究之治療期自構築體II投藥時開始。 所有研究者將經過關於SCS程序之培訓。 程序之詳細描述可見於SCS投藥手冊。 在向隨機分配至構築體II之標記參與者投與構築體II後，為了安全起見，將進行為期2週的觀察期。 主辦方內部安全委員會(ISC)將審查此參與者之安全性資料，若不存在安全性問題，則可隨機分配另外至多18名參與者(14名構築體II及4名蘭尼單抗對照)。 若未觀察到安全審查觸發事件(SRT)，則在群組內最後一個給藥之參與者進行2週的觀察期後，將由獨立的資料監測委員會(IDMC)評估所有可用的安全性資料。 另外，若任何事件符合停止規則之準則，則將暫停任何新參與者之給藥，直至已對所有安全性資料進行完整的審查。 在任何規定的IDMC會議，無論是計劃中的亦或由於SRT而召集的，IDMC均可建議停止研究、進行下一個給藥群組或進行較低的劑量(至多半對數)。
隨機分配至構築體II之參與者將有2次注射後安全性訪視(程序後1天及程序後1週)。 在構築體II投藥後2週開始，參與者將每月進行研究訪視，若他們符合預定義之補充注射準則，則可接受玻璃體內蘭尼單抗補充療法。 對於構築體II治療組之參與者，將在整個研究中評定對載體之免疫原性(藉由AAV8 NAb、AAV8 TAb、針對構築體II蛋白之抗體及酶聯免疫斑點[ELISpot]評定)、VEGF-A濃度及抗構築體II抗體。
隨機分配至蘭尼單抗對照組之參與者將在第4週進行首次隨機分組後訪視，且接受玻璃體內蘭尼單抗0.5 mg。 在第4週訪視後，參與者將每月(~每28天)進行研究訪視，在此期間，他們將接受蘭尼單抗0.5 mg之玻璃體內注射。
功效將為最初40週(主要研究期)之主要焦點。 在主要研究期結束後，將繼續對參與者進行評定，直至第52週。 在第52週研究訪視結束時，將邀請接受構築體II之參與者加入長期隨訪研究，而蘭尼單抗對照組之參與者，若符合條件，則將有機會納入未來的構築體II劑量群組。 將經由評定AE，包括SAE及特別受關注之不良事件(AESI) (研究者認為與手術/研究程序無關，且在眼部炎症分級量表上分級為2+或更高之眼部炎症、眼部感染[包括眼內炎]、視網膜撕裂或脫落、視網膜變薄及新的動脈血栓栓塞事件[非致命性中風、非致命性心肌梗塞或血管性死亡(包括原因不明的死亡)])，以及評定臨床實驗室測試(化學、血液學、凝血、尿分析)、眼部檢查及成像(BCVA、IOP、裂隙燈活組織檢視法、間接檢眼鏡檢查法、螢光素血管造影[FA]、超寬視野Optos眼底自發螢光檢查[FAF]、超寬視野Optos彩色眼底攝影[CFP]、Humphrey視野120、微視野檢查及SD-OCT)來對參與者進行安全性評估。 注意，所有研究訪視均會收集AE。 與基線相比，有證據顯示新的視網膜低/高色素沉著變化的參與者將使用SD OCT掃描監測。 當可能時，將擷取橫貫低/高色素區域邊緣的徑向SD-OCT掃描。
將持續對研究參與者進行有計劃的安全監測。 監測將包括由醫療監測員進行的審查及由主辦方ISC進行的例行審查。 另外，亦將建立IDMC，定期開會以獨立地審查臨床資料。8.18.2 納入準則 所有進入研究之參與者
參與者僅在符合以下所有準則時才有資格被納入研究：1. 年齡≥50歲且≤89歲之男性或女性。2. 必須具有研究眼睛繼發於AMD之中央凹下CNV的診斷以及藉由CRC評定之網膜側(3 mm黃斑中心，基於早期治療糖尿病性視網膜病變柵格)內的視網膜液體(視網膜下或視網膜內)。 •     CNV病變特徵：病變大小需小於10個視盤面積(典型的視盤面積= 2.54 mm2 )。3. 可為有晶狀體或偽晶狀體。4. 必須具有AAV8 Nab之陰性或低血清力價結果(≤ 300)。5. 研究眼睛之BCVA在≤ 20/25與≥ 20/125之間(≤ 83且≥ 44個早期治療糖尿病性視網膜病變研究[ETDRS]字母)。6. 基於在第1週獲得之SD-OCT影像，參與者必須具有液體之改善(參見下面的反應準則)且中心視網膜厚度(CRT) ＜ 400 μm。 注意，若參與者患有除液體導致CRT增加以外的疾病(亦即PED或SHRM)，則若如藉由CRC所測定，他們之總液體(視網膜內或視網膜下) ＜ 75 μm，則他們將入選。 •     反應準則：參與者視網膜內部(網膜側3 mm)液體相對於第2次訪視必須改善＞ 50 µm或50%；或藉由CRC所測定之中心子場厚度改善＞ 50 µm或50%。7. 若雙眼均符合條件，則研究眼睛必須為研究者判定的參與者之視力較差的眼睛。8. 女性必須為絕經後(定義為至少連續12個月無月經)或手術絕育(亦即進行過雙側輸卵管結紮/雙側輸卵管卵巢切除術、雙側輸卵管閉塞術、子宮切除術或雙側卵巢切除術)。 否則，女性必須在第1天血清及尿液妊娠測試呈陰性，且願意在研究期間進行額外的妊娠測試。9. 育齡婦女(WOCBP) (及其男性伴侶)必須願意使用高效避孕方法(部分8.5)，與WOCBP發生性關係之男性參與者必須願意自第2週開始使用保險套，直至構築體II投與後24週。10. 必須願意且能夠提供簽署的知情同意書，遵守所有的研究程序，且在研究期間有空。 8.18.3 排除準則
若參與者適於以下任何準則，則排除在研究之外： 1.      研究眼睛之CNV或黃斑水腫繼發於除AMD以外的任何原因。 2.      如藉由CRC所判定之中央凹下纖維化或萎縮。 3.      在第2次訪視之前的12個月需要＞ 10次抗VEGF注射之參與者。 4.      曾做過玻璃體切除術之參與者。 5.      任何研究者認為可能限制研究眼睛之VA改善的狀況。 6.      研究眼睛之視網膜脫離活躍或有病史。 7.      研究眼睛之晚期青光眼，定義為IOP ＞ 23 mmHg，不受2種降低IOP之藥物或任何治療青光眼之侵入性手術(例如分流、管或MIGS裝置；然而，允許進行選擇性雷射小樑切除術及氬激光小樑成形術)控制。 8.      任何研究者認為可能會增加參與者之風險，需要在研究過程中進行醫療或手術干預以防止或治療視力喪失，或干擾研究程序或評定的研究眼睛之狀況。 9.      在第2次訪視之前6個月內，研究眼睛有玻璃體內治療史，諸如玻璃體內類固醇注射或研究產品，但抗VEGF療法除外。 10.   在篩查時研究眼睛中存在植入物(不包括人工晶狀體)。 11.   在篩查之前5年內有需要進行化療及/或放療之惡性腫瘤病史。允許局部基底細胞癌。 12.   接受過任何基因療法。 13.   已知具有引起視網膜毒性之療法史，或使用任何可能影響VA或具有已知視網膜毒性之藥物(例如氯喹或羥氯喹)之伴隨療法。 14.   任何研究者認為可能干擾眼部手術或癒合過程的伴隨治療。 15.   已知對蘭尼單抗或其任何組分超敏或過去對如構築體II之藥劑超敏(研究者認為)。 16.   患有研究者認為可能會損害參與者之安全性或完成研究中所有評定及隨訪之能力的嚴重、慢性或不穩定的醫療或心理病況。 17.   任何阻礙研究眼睛之眼底視力或VA改善之病況，例如白內障、玻璃體不透明、纖維化、萎縮或中央凹中心之視網膜上皮撕裂。 18.   在第2次訪視之前12週內研究眼睛有眼內手術史。若在第2次訪視之前＞10週進行釔鋁石榴石囊切開術，則允許。 19.   在第2次訪視30天內或在研究產品之5個半衰期內接受任何研究產品，以時間長者為準。 20.   可能干擾構築體II投與之研究眼睛之眼部或眼周感染。 21.   在第2次訪視之前6個月內有心肌梗塞、腦血管意外或短暫性缺血發作。 22.   儘管經過最大限度的醫療治療，但高血壓仍未得到控制(收縮血壓[BP] ＞ 180 mmHg，舒張BP ＞ 100 mmHg)。 23.   具有在第2次訪視時收集且在第3次訪視時確認之以下實驗室值的任何參與者： ●    天冬胺酸轉胺酶(AST)/丙胺酸轉胺酶(ALT) ＞ 2.5 × 正常之上限(ULN)。 ●    總膽紅素＞ 1.5 × ULN，除非參與者之前有已知的吉爾伯特症候群病史，且分離膽紅素顯示結合膽紅素＜總膽紅素之35%。 ●    凝血酶原時間＞ 1.5 × ULN，除非參與者處於抗凝狀態。 ●    男性參與者之血紅蛋白＜ 10 g/dL，女性參與者＜ 9 g/dL。 ●    血小板 ＜ 100 × 103 /µL。 ●    估計腎小球濾過率＜ 30 mL/min/1.73 m2 。 8.18.4       投與之研究干預
符合條件的參與者將經分配以在研究眼睛中接受構築體II (劑量1或劑量2)或蘭尼單抗。關於構築體II及蘭尼單抗之資訊如下。
表8. 關於構築體II及蘭尼單抗之資訊
組名 構築體 II 劑量 1 構築體 II 劑量 2 蘭尼單抗 (LUCENTIS)
類型 基因療法(AAV8.CB7.CI.amd42.RBG) 藥物(對照治療組及導入/救援)
劑量調配物 溶液   
單位劑量濃度 1.0 × 1012 GC/mL 2.5 × 1012 GC/mL 10 mg/mL
劑量 經由單次SCS注射遞送100 μL (2.5 × 1011 GC/眼睛) 在同一次訪視時經由2次SCS注射遞送100 μL (5.0 × 1011 GC/眼睛) 0.5 mg (0.05 mL之10 mg/mL溶液)，在第2次訪視時一次或在構築體II投藥後2週開始作為救援，根據救援準則提供
投藥途徑 使用Clearside SCS Microinjector™研究裝置在研究眼睛中進行脈絡膜上腔注射 在研究眼睛中進行玻璃體內注射
物理描述 構築體II研究產品以AAV載體活性成分(AAV8.CB7.CI.amd42.RBG)於調配物緩衝液中之冷凍、無菌、一次性溶液形式供應。溶液在室溫下呈透明至乳白色、無色，且無可見顆粒。 LUCENTIS以無防腐劑之無菌溶液形式在經設計以遞送0.05 mL之10 mg/mL LUCENTIS (0.5 mg劑量預填充之注射器或小瓶)水溶液的一次性容器中供應。溶液呈無色至淺黃色。
製造商 Advanced BioScience Laboratories, Inc Genentech, Inc
封裝及標籤 構築體II將以無菌一次性溶液形式在用無乳膠橡膠塞及鋁製翻蓋密封件密封之2 mL Crystal Zenith®小瓶中供應。各小瓶將按照國家監管要求貼上標籤。 研究干預將以商業封裝獲得，經設計以遞送0.05 mL之10 mg/mL蘭尼單抗溶液之預填充注射器(NDC 50242-080-03)或一次性2 mL玻璃小瓶(NDC 50242-080-02)。
8.19   實例19：在非人類靈長類動物中用基於三肽基-肽酶1 (TPP1) cDNA之載體治療Batten-CLN2相關之視力喪失
在非人類靈長類動物中開始一項非臨床毒理學研究，以藉由兩種不同的投藥途徑——視網膜下及脈絡膜上評估基於三肽基-肽酶1 (TPP1) cDNA之載體。處死所有動物且分析組織。
在此研究中，經由視網膜下(SR)注射以0 (媒劑)、1×1010 、1×1011 、1×1012 或1×1013 GC/眼睛(100 µL)之劑量向各組食蟹獼猴(5隻動物/組)投與基於TPP1 cDNA之載體。另外各組(5隻動物/組)經由使用微針以0 (媒劑)或1×1012 GC/眼睛之劑量(在顳上象限或鼻下象限之兩次50 µL注射)注射至脈絡膜上腔(SCS)中來投與基於TPP1 cDNA之載體。所有治療組均在雙眼中投與基於TPP1 cDNA之載體。對照動物經由SCS (OS)或SR途徑(OD)接受媒劑注射。在投與基於TPP1 cDNA之載體後4週(2隻動物/組)或3個月(3隻動物/組)，將動物安樂死。此項研究中包括之終點為：臨床觀察結果、體重、眼科程序(檢眼鏡檢查法、眼內壓、光學相干斷層攝影術、眼底照相及全場視網膜電圖描記)、TPP1 (水狀液及玻璃體[僅末端]液；血清)、抗AAV抗體(nAb)、抗轉殖基因產物抗體(ATPA)、生物分佈、器官重量、免疫組織化學(眼睛中之抗TPP1)、宏觀及微觀檢查。 8.20   實例20：在人類個體中用基於三肽基-肽酶1 (TPP1) cDNA之載體治療Batten-CLN2相關之視力喪失
向患有Batten-CLN2相關之視力喪失的個體投與編碼三肽基-肽酶1之AAV9，其劑量(例如每隻眼睛1 × 1010 至5 × 1011 個基因組複本)足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。投藥係藉由雙重投藥途徑來完成，該雙重投藥途徑涉及中樞神經系統(CNS)遞送(例如腦室內(ICV)、腦池內(IC)或腰椎內(IT-L)遞送)及眼部遞送(例如脈絡膜上、視網膜下、近鞏膜或玻璃體內遞送)。在治療後，評估個體之Batten-CLN2相關之視力喪失的改善。 8.21   實例21：使用紅外熱像儀監測豬之注射
使用FLIR T530紅外熱像儀表徵活豬眼部注射後之熱分佈。在研究中評定室溫生理鹽水(68-72℉)之脈絡膜上(圖6)、不成功的脈絡膜上、玻璃體內及眼外流出注射。每次注射之劑量體積為100 µL，使來自冰箱之溶液達到室溫進行注射。
紅外攝影機鏡頭至眼表面距離確立在約1 ft。將攝影機上用於查看之手動溫度範圍設定為~80-90℉。成像操作者手持攝影機，且在視訊錄製過程中設置中心屏幕光標對準注射部位。豬接受眼球後注射生理鹽水，使眼睛突起以提高可視性，且將眼瞼切開後回縮以暴露注射部位的鞏膜。在熱視訊錄製過程中使用濾鐵器。
成功的脈絡膜上注射之特徵在於：(a)深色的緩慢、廣泛的徑向擴散，(b)開始時顏色很深，及(c)注射液逐漸變為較淺的顏色，亦即由較淺的顏色標示之溫度梯度。不成功的脈絡膜上注射之特徵在於：(a)深色沒有擴散，及(b)注射部位局部顏色發生輕微變化。成功的玻璃體內注射之特徵在於：(a)深色沒有擴散，(b)注射部位局部最初變為非常深的顏色，及(c)注射後隨著時間的推移出現整個眼球逐漸均勻地變為較深的顏色。眼外流出之特徵在於：(a)眼睛外部之外快速流動的物流，(b)開始時顏色很深及(c)快速轉為較淺的顏色。 8.22   實例22：使用紅外熱像儀監測人類患者之注射
向患有濕性AMD之個體投與編碼蘭尼單抗Fab之AAV8 (例如藉由視網膜下投藥、脈絡膜上投藥或玻璃體內投藥)，其劑量足以在玻璃體液中產生Cmin為至少0.330 µg /mL之濃度的轉殖基因產物，持續三個月。FLIR T530紅外熱像儀用於在程序期間評估注射，且可用於在注射後進行評估，以確認投藥是否成功完成或投藥劑量錯誤。在治療後，臨床上評估個體之臨床效果的跡象及濕性AMD或DR之病徵及症狀的改善。 8.23   實例23：在人類個體中藉由脈絡膜上投藥用基於三肽基-肽酶1 (TPP1) cDNA之載體治療Batten-CLN2相關之視力喪失
向患有Batten-CLN2相關之視力喪失的個體投與編碼三肽基-肽酶1之AAV9，其劑量(例如每隻眼睛1 × 1010 至5 × 1011 個基因組複本)足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。基於TPP1 cDNA之載體係藉由脈絡膜上投藥來投與。在治療後，評估個體之Batten-CLN2相關之視力喪失的改善。 8.24   實例24：在人類個體中藉由視網膜下投藥用基於三肽基-肽酶1 (TPP1) cDNA之載體治療Batten-CLN2相關之視力喪失
向患有Batten-CLN2相關之視力喪失的個體投與編碼三肽基-肽酶1之AAV9，其劑量(例如每隻眼睛1 × 1010 至5 × 1011 個基因組複本)足以在玻璃體液中產生治療有效濃度之轉殖基因產物，持續三個月。基於TPP1 cDNA之載體係藉由視網膜下投藥來投與。在治療後，評估個體之Batten-CLN2相關之視力喪失的改善。 等效物
儘管本發明參考其特定實施例詳細描述，但應瞭解功能上等效之變化在本發明之範疇內。實際上，根據前述說明及隨附圖式，除本文所展示及描述之修改以外，本發明之各種修改對熟習此項技術者而言亦會變得顯而易見。此類修飾意欲屬於隨附申請專利範圍之範疇內。熟習此項技術者將認識到或能夠僅使用常規實驗即可判定本文所描述之本發明特定實施例的許多等效物。此類等效物意欲由以下申請專利範圍所涵蓋。
本說明書中所提及之所有公開案、專利及專利申請案在本文中以引用之方式併入本說明書中，程度如同各個別公開案、專利或專利申請案專門且單獨地指示為以全文引用之方式併入本文中一般。
圖 1. 由Clearside® Biomedical, Inc製造之脈絡膜上藥物遞送裝置。
圖 2. 由Janssen Pharmaceuticals, Inc製造之包含導管之視網膜下藥物遞送裝置，該導管可插入且通過脈絡膜上腔向後極穿隧，小針頭在後極注入視網膜下腔。
圖 3. 帶有橫截面圖之人眼圖。
圖 4A- 圖 4D . 後部近鞏膜儲槽術之圖解。
圖 5. AAV8-抗VEGFfab基因組之示意圖。
圖 6. 使用紅外熱像儀監測脈絡膜上注射後之熱分佈。
圖 7A 及圖 7B .  由Altaviz製造之微量注射器藥物遞送裝置。
圖 8A 及圖 8B. 由Visionisti OY製造之藥物遞送裝置。具體而言，圖8A描繪注射配接器，其能夠將30g短皮下針頭轉換成脈絡膜上/視網膜下針頭。該裝置能夠控制自配接器之遠端露出之針尖的長度。可以10 µL進行調節。該裝置具有調節脈絡膜上遞送及/或鞏膜切開視網膜下遞送之能力。圖8B描繪針頭配接器導向器，其能夠保持蓋打開且將針頭保持在最佳角度及深度以進行遞送。針頭配接器鎖定至穩定裝置中。針頭配接器為用於標準化及最佳化門診脈絡膜上及/或視網膜下注射之一體式工具。
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Claims (47)

  1. 一種無需玻璃體切除術以用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者眼睛上進行玻璃體切除術。
  2. 如請求項1之方法，其中該投與步驟包含經由該人類個體之眼睛脈絡膜上腔向該人類個體之眼睛視網膜下腔投與該重組病毒載體治療性產物。
  3. 如請求項2之方法，其中該投與步驟係藉由使用包含導管之視網膜下藥物遞送裝置，該導管可插入及通過脈絡膜上腔朝向後極穿隧，小針頭在後極注入視網膜下腔。
  4. 如請求項3之方法，其中該投與步驟包含將該視網膜下藥物遞送裝置之導管插入及穿隧通過脈絡膜上腔。
  5. 一種用於治療眼睛病狀之脈絡膜上投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛脈絡膜上腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀。
  6. 如請求項5之方法，其中該投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將該重組病毒載體注入至脈絡膜上腔。
  7. 如請求項5或6之方法，其中該脈絡膜上藥物遞送裝置為顯微注射器。
  8. 一種向鞏膜外表面投藥以用於治療眼睛病狀之方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛鞏膜外表面投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀。
  9. 如請求項8之方法，其中該投與步驟係藉由使用包含套管之近鞏膜藥物遞送裝置，該套管之尖端可插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。
  10. 如請求項9之方法，其中該投與步驟包含將該套管之尖端插入至鞏膜表面且保持直接並置於鞏膜表面。
  11. 如請求項1至10中任一項之方法，其中該治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。
  12. 如請求項1至11中任一項之方法，其中該眼睛病狀與新生血管性年齡相關性黃斑變性(nAMD)不相關。
  13. 一種偕同玻璃體切除術以用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向需要治療之人類個體之眼睛視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀，其中該方法包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術，且其中該治療性產物不為抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體。
  14. 如請求項13之方法，其中該玻璃體切除術為部分玻璃體切除術。
  15. 一種用於治療眼睛病狀之視網膜下投藥的方法，其包含向位於需要治療之人類個體之眼睛後部的視神經盤、中央凹及黃斑外周的視網膜下腔投與包含編碼治療性產物之核苷酸序列的重組病毒載體，使得該治療性產物得以表現且治療該眼睛病狀，其中該方法不包含在該人類患者之眼睛上進行玻璃體切除術。
  16. 如請求項15之方法，其中該投與步驟係藉由經玻璃體注射。
  17. 如請求項16之方法，其中該經玻璃體注射包含經由眼睛之上側或下側將尖銳的針頭插入至鞏膜中，且使該尖銳的針頭完全穿過玻璃體，以將該重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。
  18. 如請求項16之方法，其中該經玻璃體注射包含將套管針插入至鞏膜中，且經由該套管針插入套管並穿過玻璃體，以將該重組病毒載體注射至另一側的視網膜下腔。
  19. 如請求項15至18中任一項之方法，其中該治療性產物為抗hVEGF抗體。
  20. 如請求項19之方法，其中該抗hVEGF抗體為抗hVEGF抗原結合片段。
  21. 如請求項20之方法，其中該抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab')2 或單鏈可變片段(scFv)。
  22. 如請求項19至21中任一項之方法，其中該抗hVEGF抗體包含以下：包含SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的重鏈及包含SEQ ID NO: 1或SEQ ID NO: 3之胺基酸序列的輕鏈。
  23. 如請求項19至21中任一項之方法，其中該抗hVEGF抗體包含SEQ ID NO: 14至16之輕鏈CDR 1至3及SEQ ID NO: 17至19或SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1至3。
  24. 如請求項19至23中任一項之方法，其中該眼睛病狀與nAMD、乾性年齡相關性黃斑變性(乾性AMD)、視網膜靜脈栓塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)相關。
  25. 如請求項19至23中任一項之方法，其中該眼睛病狀與nAMD相關。
  26. 如請求項1至11及13至18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與Batten-CLN1相關，且該治療性產物為棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)； (2)該眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且該治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)； (3)該眼睛病狀與Batten-CLN3相關，且該治療性產物為Battenin (CLN3)； (4)該眼睛病狀與Batten-CLN6相關，且該治療性產物為CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)； (5)該眼睛病狀與Batten-CLN7相關，且該治療性產物為含主要易化子超家族域8 (MFSD8)； (6)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)； (7)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)； (8)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)； (9)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Usherin (USH2A)； (10)該眼睛病狀與3型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Clarin 1 (CLRN1)； (11)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)； (12)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)； (13)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗介白素6 (IL6)單株抗體； (14)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF-α (TNF)單株抗體； (15)該眼睛病狀與糖尿病性黃斑水腫(DME)相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (16)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (17)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (18)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (19)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且該治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)； (20)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)； (21)該眼睛病狀與LCA 3相關，且該治療性產物為精子形成相關7 (SPATA7)； (22)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)相關，且該治療性產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)； (23)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦5 (LCA 5)相關，且該治療性產物為Lebercilin (LCA5)； (24)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦6 (LCA 6)相關，且該治療性產物為RPGR相互作用蛋白1 (RPGRIP1)； (25)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且該治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)； (26)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (27)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)相關，且該治療性產物為菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)； (28)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)相關，且該治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)； (29)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且該治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)； (30)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)相關，且該治療性產物為視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)； (31)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)相關，且該治療性產物為視黃醇去氫酶12 (RDH12)； (32)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦14 (LCA 14)相關，且該治療性產物為卵磷脂視黃醇醯基轉移酶(LRAT)； (33)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且該治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)； (34)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)相關，且該治療性產物為電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)； (35)該眼睛病狀與萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)； (36)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)； (37)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)； (38)該眼睛病狀與視神經脊髓炎(NMO)相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (39)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (40)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (41)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為血管收縮素I轉化酶(ACE)； (42)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為介白素10 (IL10)； (43)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF單株抗體； (44)該眼睛病狀與無脈絡膜症相關，且該治療性產物為Rab護航蛋白1 (CHM)； (45)該眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且該治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)； (46)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)； (47)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群2相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群2 (BBS2)； (48)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群3相關，且該治療性產物為ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)； (49)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群4相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群4 (BBS4)； (50)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群5相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)； (51)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且該治療性產物為麥-考症候群(MKKS)； (52)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群7相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群7 (BBS7)； (53)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群8相關，且該治療性產物為三十四肽重複域8 (TTC8)； (54)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群9相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群9 (BBS9)； (55)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)； (56)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群11相關，且該治療性產物為含三聯基元32 (TRIM32)； (57)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群12相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群12 (BBS12)； (58)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群13相關，且該治療性產物為MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)； (59)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群14相關，且該治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)； (60)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群15相關，且該治療性產物為含WD重複之平面細胞極性效應子(WDPCP)； (61)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群16相關，且該治療性產物為血清學定義之結腸癌抗原8 (SDCCAG8)； (62)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群17相關，且該治療性產物為白胺酸拉鏈轉錄因子樣1 (LZTFL1)； (63)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群18相關，且該治療性產物為BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)； (64)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群19相關，且該治療性產物為纖毛內轉運27 (IFT27)； (65)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)； (66)該眼睛病狀與視神經萎縮相關，且該治療性產物為OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)； (67)該眼睛病狀與色素性視網膜炎1相關，且該治療性產物為RP1軸突微管相關(RP1)； (68)該眼睛病狀與色素性視網膜炎2相關，且該治療性產物為ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)； (69)該眼睛病狀與色素性視網膜炎7相關，且該治療性產物為外周蛋白2 (PRPH2)； (70)該眼睛病狀與色素性視網膜炎11相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子31 (PRPF31)； (71)該眼睛病狀與色素性視網膜炎12相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (72)該眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)； (73)該眼睛病狀與色素性視網膜炎25相關，且該治療性產物為閉眼同源物(EYS)； (74)該眼睛病狀與色素性視網膜炎28相關，且該治療性產物為FAM161中心體蛋白A (FAM161A)； (75)該眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且該治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)； (76)該眼睛病狀與色素性視網膜炎38相關，且該治療性產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)； (77)該眼睛病狀與色素性視網膜炎40相關，且該治療性產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)； (78)該眼睛病狀與色素性視網膜炎41相關，且該治療性產物為Prominin 1 (PROM1)； (79)該眼睛病狀與色素性視網膜炎43相關，且該治療性產物為磷酸二酯酶6A (PDE6A)； (80)該眼睛病狀與色素性視網膜炎56相關，且該治療性產物為感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)； (81)該眼睛病狀與色素性視網膜炎62相關，且該治療性產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)； (82)該眼睛病狀與色素性視網膜炎80相關，且該治療性產物為纖毛內轉運140 (IFT140)； (83)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (84)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗攻膜複合物(MAC)單株抗體； (85)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為HtrA絲胺酸肽酶1 (HTRA1)； (86)該眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且該治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)； (87)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為補體因子B反義寡核苷酸； (88)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗β-類澱粉蛋白單株抗體； (89)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為CD59糖蛋白(CD59)； (90)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-1 (ChR1)； (91)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-2 (ChR2)，亦即在萊茵衣藻中發現之感光蛋白； (92)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗補體因子C5a適體； (93)該眼睛病狀與乾性AMD相關，且該治療性產物為抗補體因子D單株抗體； (94)該眼睛病狀與年齡相關性視網膜神經節細胞(RGC)變性相關，且該治療性產物為DnaJ熱休克蛋白家族(Hsp40)成員C3 (DNAJC3)； (95)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視(BCM)相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1MW)； (96)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為β-2腎上腺素受體siRNA； (97)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為半胱天冬酶-2 (CASP2)； (98)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為胰島素受體受質1 (IRS1)； (99)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為HIF-1反應性蛋白RTP801 (RTP801)； (100)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為轉化生長因子β2 (TGFB2)； (101)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為腦源性神經營養因子(BDNF)； (102)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為睫狀神經營養因子(CNTF)； (103)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為前列腺素內過氧化物合成酶2 (PTGS2)； (104)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為前列腺素F受體(PTGFR)； (105)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為玻尿酸酶； (106)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為色素上皮衍生因子(PEDF)； (107)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為血管內皮生長因子(VEGF)； (108)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為胎盤生長因子(PGF)； (109)該眼睛病狀與青光眼相關，且該治療性產物為肌纖蛋白(MYOC)； (110)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (111)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為C-C基元趨化因子受體5 (CCR5) siRNA； (112)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗CD19單株抗體； (113)該眼睛病狀與視紫質突變相關性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-1 (ChR1)； (114)該眼睛病狀與視紫質突變相關性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為光敏感通道蛋白-2 (ChR2)； (115)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為睫狀神經營養因子(CNTF)； (116)該眼睛病狀與常染色體隱性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (117)該眼睛病狀與常染色體隱性色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分2 (CRB2)； (118)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為組蛋白去乙醯基酶4 (HDAC4)； (119)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視紫質(RHO)； (120)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為神經生長因子(NGF)； (121)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為核因子紅血球系2樣2 (NRF2)； (122)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為色素上皮衍生因子(PEDF)； (123)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為麩胱甘肽S-轉移酶PI 1 (GSTP1)； (124)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視桿源性視錐活力因子(RDCVF)； (125)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視紫質(RHO)； (126)該眼睛病狀與色素性視網膜炎相關，且該治療性產物為視黃醛結合蛋白1 (RLBP1)； (127)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為抗補體C5適體； (128)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為雙同源盒4 (DUX4)； (129)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為NLR家族含Pyrin域3 (NLRP3)； (130)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為脾相關酪胺酸激酶(SYK)； (131)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為促腎上腺皮質激素(ACTH)； (132)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為半胱天冬酶1 (CASP1)； (133)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗CD59單株抗體； (134)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗補體C5適體； (135)該眼睛病狀與角膜新血管生成相關，且該治療性產物為胰島素受體受質1 (IRS1)； (136)該眼睛病狀與角膜新血管生成相關，且該治療性產物為NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)； (137)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為NOTCH調節之錨蛋白重複蛋白(NRARP)； (138)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為α-2-抗纖維蛋白溶酶(A2AP)； (139)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為纖維蛋白溶酶原(PLG)； (140)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為生長激素； (141)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為胰島素樣生長因子1 (IGF1)； (142)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為介白素1β (IL1B)； (143)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為血管收縮素I轉化酶2 (ACE2)； (144)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為IRS1； (145)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為抗整合素寡肽； (146)該眼睛病狀與糖尿病性視網膜病變相關，且該治療性產物為抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體； (147)該眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且該治療性產物為抗CD40單株抗體； (148)該眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且該治療性產物為抗胰島素樣生長因子1受體(IGF1R)單株抗體； (149)該眼睛病狀與葛瑞夫茲氏眼病相關，且該治療性產物為抗胰島素樣生長因子2受體(IGF2R)單株抗體； (150)該眼睛病狀與DME相關，且該治療性產物為抗整合素寡肽； (151)該眼睛病狀與DME相關，且該治療性產物為抗胎盤生長因子(PGF)單株抗體； (152)該眼睛病狀與DME相關，且該治療性產物為RTP801 siRNA； (153)該眼睛病狀與多發性硬化症(MS)相關之視力喪失相關，且該治療性產物為ND1； (154)該眼睛病狀與近視相關，且該治療性產物為基質金屬蛋白酶2 (MMP2) RNAi； (155)該眼睛病狀與X性聯隱性眼白化病相關，且該治療性產物為G蛋白偶合受體143 (GPR143)； (156)該眼睛病狀與1型眼皮膚白化病相關，且該治療性產物為酪胺酸酶(TYR)； (157)該眼睛病狀與視神經炎相關，且該治療性產物為半胱天冬酶2 (CASP2)； (158)該眼睛病狀與視神經炎相關，且該治療性產物為抗含白胺酸富集重複序列及Ig域之蛋白質1 (LINGO1)單株抗體；或 (159)該眼睛病狀與息肉狀脈絡膜血管病變相關，且該治療性產物為抗補體C5適體。
  27. 如請求項1至11及15至18中任一項之方法，其中：(1)該眼睛病狀與X性聯色素性視網膜炎(XLRP)相關，且該治療性產物為色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)； (2)該眼睛病狀與全色盲(ACHM)相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)； (3)該眼睛病狀與全色盲相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)；或 (4)該眼睛病狀與二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)。
  28. 如請求項1至11及13至18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與Batten-CLN1相關，且該治療性產物為棕櫚醯基-蛋白質硫酯酶1 (PPT1)； (2)該眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且該治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)； (3)該眼睛病狀與Batten-CLN3相關，且該治療性產物為Battenin (CLN3)； (4)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗介白素6 (IL6)單株抗體； (5)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF-α (TNF)單株抗體； (6)該眼睛病狀與糖尿病性黃斑水腫(DME)相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (7)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (8)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (9)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (10)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且該治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)； (11)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)； (12)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且該治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)； (13)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且該治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)； (14)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦12 (LCA 12)相關，且該治療性產物為視網膜變性3，GUCY2D調節因子(RD3)； (15)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦13 (LCA 13)相關，且該治療性產物為視黃醇去氫酶12 (RDH12)； (16)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且該治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)； (17)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦16 (LCA 16)相關，且該治療性產物為電壓閘控鉀通道亞家族J成員13 (KCNJ13)； (18)該眼睛病狀與萊伯氏遺傳性視神經病變(LHON)相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶1 (MT-ND1)； (19)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)； (20)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)； (21)該眼睛病狀與視神經脊髓炎(NMO)相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (22)該眼睛病狀與NMO相關，且該治療性產物為抗IL6單株抗體； (23)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗補體C5單株抗體； (24)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為血管收縮素I轉化酶(ACE)； (25)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為介白素10 (IL10)； (26)該眼睛病狀與葡萄膜炎相關，且該治療性產物為抗TNF單株抗體； (27)該眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且該治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)； (28)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)； (29)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群3相關，且該治療性產物為ADP核糖基化因子樣GTP酶6 (ARL6)； (30)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群5相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群5 (BBS5)； (31)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且該治療性產物為麥-考症候群(MKKS)； (32)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)； (33)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群11相關，且該治療性產物為含三聯基元32 (TRIM32)； (34)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群13相關，且該治療性產物為MKS過渡區複合物次單元1 (MKS1)； (35)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群18相關，且該治療性產物為BBSome相互作用蛋白1 (BBIP1)； (36)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群19相關，且該治療性產物為纖毛內轉運27 (IFT27)； (37)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)； (38)該眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)； (39)該眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且該治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；或 (40)該眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且該治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。
  29. 如請求項1至11及15至18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與二對偶基因RPE65突變相關之視網膜營養不良相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)。
  30. 如請求項1至11及13至18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與Batten-CLN2相關，且該治療性產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)； (2)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為肌球蛋白VIIA (MYO7A)； (3)該眼睛病狀與1型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)； (4)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)； (5)該眼睛病狀與2型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Usherin (USH2A)； (6)該眼睛病狀與3型亞瑟氏症相關，且該治療性產物為Clarin 1 (CLRN1)； (7)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)； (8)該眼睛病狀與斯特格氏病相關，且該治療性產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)； (9)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (10)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (11)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (12)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦1 (LCA 1)相關，且該治療性產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)； (13)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦2 (LCA 2)相關，且該治療性產物為類視黃素異構水解酶RPE65 (RPE65)； (14)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦4 (LCA 4)相關，且該治療性產物為芳烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)； (15)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦7 (LCA 7)相關，且該治療性產物為視錐-視桿同源盒(CRX)； (16)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦8 (LCA 8)相關，且該治療性產物為Crumbs細胞極性複合物組分1 (CRB1)； (17)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦9 (LCA 9)相關，且該治療性產物為菸鹼醯胺核苷酸腺苷醯基轉移酶1 (NMNAT1)； (18)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦10 (LCA 10)相關，且該治療性產物為中心體蛋白290 (CEP290)； (19)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦11 (LCA 11)相關，且該治療性產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)； (20)該眼睛病狀與萊伯先天性黑朦15 (LCA 15)相關，且該治療性產物為短粗樣蛋白1 (TULP1)； (21)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)； (22)該眼睛病狀與LHON相關，且該治療性產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)； (23)該眼睛病狀與無脈絡膜症相關，且該治療性產物為Rab護航蛋白1 (CHM)； (24)該眼睛病狀與X性聯視網膜劈裂症(XLRS)相關，且該治療性產物為視網膜劈裂素(RS1)； (25)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群1相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)； (26)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群6相關，且該治療性產物為麥-考症候群(MKKS)； (27)該眼睛病狀與巴德-畢德氏症候群10相關，且該治療性產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)； (28)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)； (29)該眼睛病狀與視神經萎縮相關，且該治療性產物為OPA1粒線體動力蛋白樣GTP酶(OPA1)； (30)該眼睛病狀與色素性視網膜炎1相關，且該治療性產物為RP1軸突微管相關(RP1)； (31)該眼睛病狀與色素性視網膜炎2相關，且該治療性產物為ARL3 GTP酶之RP2活化因子(RP2)； (32)該眼睛病狀與色素性視網膜炎7相關，且該治療性產物為外周蛋白2 (PRPH2)； (33)該眼睛病狀與色素性視網膜炎11相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子31 (PRPF31)； (34)該眼睛病狀與色素性視網膜炎13相關，且該治療性產物為前體mRNA加工因子8 (PRPF8)； (35)該眼睛病狀與色素性視網膜炎37相關，且該治療性產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)； (36)該眼睛病狀與色素性視網膜炎38相關，且該治療性產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)； (37)該眼睛病狀與色素性視網膜炎40相關，且該治療性產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)； (38)該眼睛病狀與色素性視網膜炎41相關，且該治療性產物為Prominin 1 (PROM1)； (39)該眼睛病狀與色素性視網膜炎56相關，且該治療性產物為感光器間基質蛋白聚糖2 (IMPG2)； (40)該眼睛病狀與色素性視網膜炎62相關，且該治療性產物為雄性生殖細胞相關激酶(MAK)； (41)該眼睛病狀與色素性視網膜炎80相關，且該治療性產物為纖毛內轉運140 (IFT140)；或 (42)該眼睛病狀與貝斯特氏病相關，且該治療性產物為斑萎蛋白1 (BEST1)。
  31. 如請求項1至11及15至18中任一項之方法，其中： (1)該眼睛病狀與X性聯色素性視網膜炎(XLRP)相關，且該治療性產物為色素性視網膜炎GTP酶調節因子(RPGR)； (2)該眼睛病狀與全色盲相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道β3 (CNGB3)；或 (3)該眼睛病狀與全色盲相關，且該治療性產物為環核苷酸閘控通道α3 (CNGA3)。
  32. 如請求項1至31中任一項之方法，其中該重組病毒載體進一步包含編碼啟動子或強化子-啟動子之核苷酸序列，該編碼啟動子或強化子-啟動子之核苷酸序列可操作地連接於編碼該治療性產物之核苷酸序列，且其中該啟動子或強化子-啟動子為： (1) CAG啟動子； (2) CBA啟動子； (3) CMV啟動子； (4) PR1.7啟動子； (5)視紫質激酶(GRK1)感光器特異性強化子-啟動子； (6) hCARp啟動子； (7) hRKp； (8)視錐感光器特異性人類抑制蛋白3 (ARR3)啟動子； (9)視紫質啟動子；或 (10) U6啟動子。
  33. 如請求項1至11及13至15中任一項之方法，其中該重組病毒載體進一步包含編碼視錐特異性啟動子之核苷酸序列，該編碼視錐特異性啟動子之核苷酸序列可操作地連接於編碼該治療性產物之核苷酸序列，且其中： (1)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1LW)； (2)該眼睛病狀與紅綠色盲相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (3)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視相關，且該治療性產物為M視蛋白(OPN1MW)； (4)該眼睛病狀與視錐細胞營養不良相關，且該治療性產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；或 (5)該眼睛病狀與藍錐細胞單色視(BCM)相關，且該治療性產物為L視蛋白(OPN1MW)。
  34. 如請求項1至33中任一項之方法，其中該投與步驟係將治療有效量之該治療性產物遞送至該人類個體之視網膜。
  35. 如請求項34之方法，其中該治療有效量之該治療性產物係由該人類個體之人類視網膜細胞產生。
  36. 如請求項34之方法，其中該治療有效量之該治療性產物係由該人類個體之外界膜中的人類感光細胞、水平細胞、雙極細胞、無軸突神經細胞、視網膜神經節細胞及/或視網膜色素上皮細胞產生。
  37. 如請求項36之方法，其中該等人類感光細胞為視錐細胞及/或視桿細胞。
  38. 如請求項36之方法，其中該等視網膜神經節細胞為侏儒細胞、陽傘細胞、雙層細胞、巨型視網膜神經節細胞、感光神經節細胞及/或穆勒神經膠質細胞。
  39. 如請求項1至38中任一項之方法，其中該重組病毒載體為rAAV載體。
  40. 如請求項39之方法，其中該重組病毒載體為rAAV8載體。
  41. 如請求項1至40中任一項之方法，其進一步包含在該投與步驟之後，使用紅外熱像儀監測眼睛中注射材料的眼部注射後熱分佈的步驟。
  42. 如請求項41之方法，其中該紅外熱像儀為FLIR T530紅外熱像儀。
  43. 如請求項1至43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約6.0 × 1010 個基因組複本之劑量投與。
  44. 如請求項1至43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約1.6 × 1011 個基因組複本之劑量投與。
  45. 如請求項1至43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約2.5 × 1011 個基因組複本之劑量投與。
  46. 如請求項1至43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約5.0 × 1011 個基因組複本之劑量投與。
  47. 如請求項1至43中任一項之方法，其中該重組核苷酸表現載體以每隻眼睛約3.0 × 1012 個基因組複本之劑量投與。
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