CN113966236A - 眼睛病状的基因疗法 - Google Patents

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Abstract

本发明描述用于将治疗性产物(诸如治疗性蛋白质(例如抗体)、治疗性RNA(例如shRNA、siRNA及miRNA)及治疗性适体)递送至人受试者的眼睛的视网膜/玻璃体液以治疗眼睛病状的组合物和方法，其涉及例如重组病毒载体，诸如重组腺相关病毒(rAAV)载体。

Description

眼睛病状的基因疗法
1.相关申请的交叉引用
本申请主张以下美国临时专利申请的权益：2019年4月3日提交的申请号62/828,949、2019年6月3日提交的申请号62/856,533及2019年12月10日提交的申请号62/946,158，所述临时专利申请以引用的方式整体并入本文中。
以电子方式提交的序列表的引用
本申请以引用的方式并入与本申请一起提交的序列表，其为名称为“12656-126-228_Sequence_Listing.txt”的正文档案，创建于2020年3月24日，大小为2,025,574字节。
2.技术领域
本发明描述用于将治疗性产物(诸如治疗性蛋白质(例如抗体)、治疗性RNA(例如shRNA、siRNA及miRNA)及治疗性适体)递送至人受试者的眼睛的视网膜/玻璃体液以治疗眼睛病状的组合物和方法，其涉及例如重组病毒载体，诸如重组腺相关病毒(rAAV)载体。
3.背景技术
人眼为高度复杂且高度发达的感觉器官，易患许多疾病和病症。全球约2.85亿人具有视觉障碍，其中3900万人为盲人且2.46亿人具有中度至重度视觉障碍(世界卫生组织,2012,“Global Data On Visual Impairments 2010,”日内瓦：世界卫生组织)。失明的一些主要原因为白内障(47％)、青光眼(12％)、年龄相关性黄斑变性(AMD)(9％)及糖尿病性视网膜病变(5％)(世界卫生组织,2007,“Global Initiative For The Elimination OfAvoidable Blindness:Action Plan 2006-2011,”日内瓦：世界卫生组织)。
大量眼部疾病及眼睛中与病理学表现的疾病可追溯至基因改变或蛋白质失调(Stone等人,2017,Ophthalmology 124(9):1314-1331)。基因组学和蛋白质组学的最新进展对于此类眼部疾病或表现的潜在疾病机理和/或基因基础的理解产生巨大影响。基因疗法已用于治疗某些眼病(参见例如国际专利申请号PCT/US2017/027650(国际公开号WO2017/181021 A1))。
对专门解决潜在基因异常以治疗眼部病状的疗法存在明显未满足的医疗需求。
4.发明内容
本发明描述用于将治疗性产物(诸如治疗性蛋白质(例如抗体)、治疗性RNA(例如shRNA、siRNA及miRNA)及治疗性适体)递送至人受试者的眼睛的视网膜/玻璃体液以治疗眼睛病状的组合物和方法，其涉及例如重组病毒载体，诸如重组腺相关病毒(rAAV)载体。治疗性产物可为例如治疗性蛋白质(例如抗体)、治疗性RNA(例如shRNA、siRNA及miRNA)或治疗性适体。在一个特定实施方案中，治疗性产物为人蛋白质或针对人蛋白质的抗体。抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、重组产生的抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、合成抗体、包含两个重链和两个轻链分子的四聚抗体、抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链-重链对、胞内抗体、异缀合抗体、单价抗体、全长抗体的抗原结合片段及上述的融合蛋白。此类抗原结合片段包括但不限于单结构域抗体(重链抗体的可变结构域(VHH)或纳米抗体)、Fab、F(ab')2及scFv(单链可变片段)。在特定实施方案中，治疗性产物(例如治疗性蛋白质)被翻译后修饰。在一个特定实施方案中，翻译后修饰对使用如本文所述的特定途径将治疗性产物(例如治疗性蛋白质)递送至的细胞类型具有特异性。递送可经由基因疗法完成，例如通过将编码治疗性产物的重组病毒载体或重组DNA表达构建体(统称为“重组载体”)施用于人患者眼睛的脉络膜上腔、视网膜下腔(通过玻璃体切除术或无需玻璃体切除术(例如通过导管穿过脉络膜上腔或经由外周注射)、视网膜内腔和/或巩膜外表面(即巩膜旁施用)，以在眼睛中形成连续供应治疗性产物(例如翻译后修饰的治疗性产物)的永久储槽。
一方面，本文提供了一种无需玻璃体切除术以用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛中的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，施用步骤包括经由所述人受试者的眼睛的脉络膜上腔向所述人受试者的眼睛视网膜下腔施用重组病毒载体治疗性产物。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用包括导管的视网膜下药物递送装置，所述导管可插入并朝向后极穿过脉络膜上腔，小针头在后极注射到视网膜下腔中。在某些实施方案中，施用步骤包括将视网膜下药物递送装置的导管插入并穿过脉络膜上腔。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛中的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，施用步骤包括经由所述人受试者的眼睛的脉络膜上腔向所述人受试者的眼睛的视网膜下腔施用重组病毒载体治疗性产物。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用包括导管的视网膜下药物递送装置，所述导管可插入并朝向后极穿过脉络膜上腔，小针头在后极注射到视网膜下腔中。在某些实施方案中，施用步骤包括将视网膜下药物递送装置的导管插入并穿过脉络膜上腔。
一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的通过玻璃体切除术的视网膜下施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的脉络膜上施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的脉络膜上腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用脉络膜上药物递送装置将重组病毒载体注射到脉络膜上腔中。在某些实施方案中，脉络膜上药物递送装置为显微注射器。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的脉络膜上腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用脉络膜上药物递送装置将重组病毒载体注射到脉络膜上腔中。在某些实施方案中，脉络膜上药物递送装置为显微注射器。
在某些实施方案中，可使用国际公开号WO 2016/042162、WO 2017/046358、WO2017/158365及WO 2017/158366中所描述及公开的方法和/或装置来进行向视网膜下腔或脉络膜上腔的递送，这些公开各自以引用的方式整体并入本文中。
一方面，本文提供了一种向巩膜外空间施用以用于治疗眼睛病状方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的巩膜外表面施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用包括套管的巩膜旁药物递送装置，所述套管的尖端可插入并保持与巩膜表面直接并置。在某些实施方案中，施用步骤包括将套管的尖端插入并保持与巩膜表面直接并置。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛巩膜外表面施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用包括套管的巩膜旁药物递送装置，所述套管的尖端可插入并保持与巩膜表面直接并置。在某些实施方案中，施用步骤包括将套管的尖端插入并保持与巩膜表面直接并置。
在某些实施方案中，治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。
在某些实施方案中，眼睛病状与新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)(也称为AMD的“湿性”新生血管性形式(“WAMD”或“湿性AMD”))不相关。
在某些实施方案中，治疗性产物为抗hVEGF抗体。
在某些实施方案中，眼睛病状与nAMD相关。
在某些实施方案中，眼睛病状与nAMD相关，且治疗性产物为抗hVEGF抗体。
一方面，本文提供了一种伴随玻璃体切除术以用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛中的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术，且其中所述治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。在某些实施方案中，眼睛病状为眼部疾病或涉及包括眼睛在内的多个器官的疾病。在某些实施方案中，玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术，且其中所述治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。在某些实施方案中，眼睛病状为眼部疾病或涉及包括眼睛在内的多个器官的疾病。在某些实施方案中，玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向位于需要治疗的人受试者的眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，注射步骤是通过经玻璃体注射。在某些实施方案中，经玻璃体施用的方法使得治疗性产物在整个眼睛中均匀表达(例如与眼睛其他区域的表达量相比，注射部位的表达量变化小于5％、10％、20％、30％、40％或50％)。在某些实施方案中，经玻璃体注射包含经由眼睛的上侧或下侧将尖锐的针头插入巩膜中，且使尖锐的针头完全穿过玻璃体，以将重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。在某些实施方案中，在2点钟或10点钟位置插入针头。在某些实施方案中，经玻璃体注射包含将套管针插入巩膜中，且经由套管针插入套管并穿过玻璃体，以将重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。在某些实施方案中，治疗性产物为抗hVEGF抗体。在某些实施方案中，抗hVEGF抗体为抗hVEGF抗原结合片段。在某些实施方案中，抗hVEGF抗原结合片段为Fab、F(ab')2或单链可变片段(scFv)。在某些实施方案中，抗hVEGF抗体含有包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链。在某些实施方案中，其中抗hVEGF抗体包含SEQ IDNO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:17-19或SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3。在某些实施方案中，其中眼睛病状与nAMD、干性年龄相关性黄斑变性(干性AMD)、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)相关。在某些实施方案中，眼睛病状与nAMD相关。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向位于需要治疗的人受试者的眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，注射步骤是通过经玻璃体注射。在某些实施方案中，经玻璃体施用的方法使得治疗性产物在整个眼睛中均匀表达(例如与眼睛其他区域的表达量相比，注射部位的表达量变化小于5％、10％、20％、30％、40％或50％)。在某些实施方案中，经玻璃体注射包含经由眼睛的上侧或下侧将尖锐的针头插入巩膜中，且使尖锐的针头完全穿过玻璃体，以将重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。在某些实施方案中，在2点钟或10点钟位置插入针头。在某些实施方案中，经玻璃体注射包含将套管针插入巩膜中，且经由套管针插入套管并穿过玻璃体，以将重组病毒载体注射所述另一侧的视网膜下腔。在某些实施方案中，治疗性产物为抗hVEGF抗体。在某些实施方案中，抗hVEGF抗体为抗hVEGF抗原结合片段。在某些实施方案中，抗hVEGF抗原结合片段为Fab、F(ab')2或单链可变片段(scFv)。在某些实施方案中，抗hVEGF抗体含有包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链。在某些实施方案中，其中抗hVEGF抗体包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:17-19或SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3。在某些实施方案中，其中眼睛病状与nAMD、干性年龄相关性黄斑变性(干性AMD)、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)相关。在某些实施方案中，眼睛病状与nAMD相关。
在本文所述的方法的某些实施方案中，(1)眼睛病状与Batten-CLN1相关，且治疗性产物为棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；(2)眼睛病状与Batten-CLN2相关，且治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；(3)眼睛病状与Batten-CLN3相关，且治疗性产物为Battenin(CLN3)；(4)眼睛病状与Batten-CLN6相关，且治疗性产物为CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；(5)眼睛病状与Batten-CLN7相关，且治疗性产物为含主要易化子超家族结构域8(MFSD8)；(6)眼睛病状与1型亚瑟氏症(Usher's-Type 1)相关，且治疗性产物为肌球蛋白VIIA(MYO7A)；(7)眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为钙粘蛋白相关23(CDH23)；(8)眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；(9)眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为Usherin(USH2A)；(10)眼睛病状与3型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为Clarin 1(CLRN1)；(11)眼睛病状与斯塔加特氏病(Stargardt's)相关，且治疗性产物为ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；(12)眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且治疗性产物为ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；(13)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗白介素6(IL6)单克隆抗体；(14)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；(15)眼睛病状与糖尿病性黄斑水肿(DME)相关，且治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；(16)眼睛病状与红绿色盲相关，且治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；(17)眼睛病状与红绿色盲相关，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(18)眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(19)眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(Leber congenital amaurosis-1，LCA1)相关，且治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；(20)眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；(21)眼睛病状与LCA 3相关，且治疗性产物为精子形成相关7(SPATA7)；(22)眼睛病状与莱伯先天性黑朦4(LCA 4)相关，且治疗性产物为芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；(23)眼睛病状与莱伯先天性黑朦5(LCA 5)相关，且治疗性产物为Lebercilin(LCA5)；(24)眼睛病状与莱伯先天性黑朦6(LCA 6)相关，且治疗性产物为RPGR相互作用蛋白1(RPGRIP1)；(25)眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；(26)眼睛病状与莱伯先天性黑朦8(LCA 8)相关，且治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)(也称为LCA8)；(27)眼睛病状与莱伯先天性黑朦9(LCA9)相关，且治疗性产物为烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；(28)眼睛病状与莱伯先天性黑朦10(LCA 10)相关，且治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；(29)眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；(30)眼睛病状与莱伯先天性黑朦12(LCA 12)相关，且治疗性产物为视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；(31)眼睛病状与莱伯先天性黑朦13(LCA13)相关，且治疗性产物为视黄醇脱氢酶12(RDH12)；(32)眼睛病状与莱伯先天性黑朦14(LCA 14)相关，且治疗性产物为卵磷脂视黄醇酰基转移酶(LRAT)；(33)眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；(34)眼睛病状与莱伯先天性黑朦16(LCA 16)相关，且治疗性产物为钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；(35)眼睛病状与莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；(36)眼睛病状与LHON相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；(37)眼睛病状与LHON相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；(38)眼睛病状与视神经脊髓炎(NMO)相关，且治疗性产物为抗补体抗体或抗补体适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(39)眼睛病状与NMO相关，且治疗性产物为抗IL6单克隆抗体或适体；(40)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(41)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为血管紧张素I转换酶(ACE)；(42)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为白介素10(IL10)；(43)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗TNF单克隆抗体；(44)眼睛病状与无脉络膜症相关，且治疗性产物为Rab护航蛋白1(CHM)；(45)眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；(46)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1(Bardet-Biedl syndrome 1)相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；(47)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征2相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征2(BBS2)；(48)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征3相关，且治疗性产物为ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)(也称为BBS3)；(49)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征4相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征4(BBS4)；(50)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征5相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；(51)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且治疗性产物为麦-考综合征(McKusick-Kaufman Syndrome，MKKS)，也称为BBS6；(52)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征7相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征7(BBS7)；(53)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征8相关，且治疗性产物为三十四肽重复结构域8(TTC8)，也称为BBS8；(54)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征9相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征9(BBS9)；(55)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；(56)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征11相关，且治疗性产物为含三联基序32(TRIM32)，也称为BBS11；(57)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征12相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征12(BBS12)；(58)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征13相关，且治疗性产物为MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)，也称为BBS13；(59)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征14相关，且治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)，也称为BBS14和LCA10；(60)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征15相关，且治疗性产物为含WD重复的平面细胞极性效应子(WDPCP)，也称为BBS15；(61)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征16相关，且治疗性产物为血清学定义的结肠癌抗原8(SDCCAG8)，也称为BBS16；(62)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征17相关，且治疗性产物为亮氨酸拉链转录因子样1(LZTFL1)，也称为BBS17；(63)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征18相关，且治疗性产物为BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)，也称为BBS18；(64)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征19相关，且治疗性产物为纤毛内转运蛋白27(IFT27)，也称为BBS19；(65)眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；(66)眼睛病状与视神经萎缩相关，且治疗性产物为OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；(67)眼睛病状与色素性视网膜炎1相关，且治疗性产物为RP1轴突微管相关(RP1)；(68)眼睛病状与色素性视网膜炎2相关，且治疗性产物为ARL3 GTP酶的RP2活化因子(RP2)；(69)眼睛病状与色素性视网膜炎7相关，且治疗性产物为外周蛋白2(PRPH2)；(70)眼睛病状与色素性视网膜炎11相关，且治疗性产物为前体mRNA加工因子31(PRPF31)；(71)眼睛病状与色素性视网膜炎12相关，且治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)，也称为LCA8；(72)眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；(73)眼睛病状与色素性视网膜炎25相关，且治疗性产物为闭眼同源物(EYS)；(74)眼睛病状与色素性视网膜炎28相关，且治疗性产物为FAM161中心体蛋白A(FAM161A)；(75)眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；(76)眼睛病状与色素性视网膜炎38相关，且治疗性产物为MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；(77)眼睛病状与色素性视网膜炎40相关，且治疗性产物为磷酸二酯酶6B(PDE6B)；(78)眼睛病状与色素性视网膜炎41相关，且治疗性产物为Prominin 1(PROM1)；(79)眼睛病状与色素性视网膜炎43相关，且治疗性产物为磷酸二酯酶6A(PDE6A)；(80)眼睛病状与色素性视网膜炎56相关，且治疗性产物为光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；(81)眼睛病状与色素性视网膜炎62相关，且治疗性产物为雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；(82)眼睛病状与色素性视网膜炎80相关，且治疗性产物为纤毛内转运蛋白140(IFT140)；(83)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(84)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为抗膜攻击复合体(MAC)治疗性产物，优选地，抗MAC治疗性产物为抗MAC单克隆抗体，其为针对攻膜复合体的人蛋白的单克隆抗体，所述人蛋白由四个补体蛋白C5b(SEQ ID NO.314-316)、C6(SEQ ID NO.317)、C7(SEQ IDNO.318)及C8(SEQ ID NO.319-321)构成；(85)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为HtrA丝氨酸肽酶1(HTRA1)；(86)眼睛病状与贝斯特氏病(Best disease)相关，且治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)；(87)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为补体因子B反义寡核苷酸；(88)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体；(89)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为CD59糖蛋白(CD59)；(90)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为光敏感通道蛋白-1(ChR1)，其包括ChR1的人同源物；(91)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为光敏感通道蛋白-2(ChR2)，其包括ChR2的人同源物；(92)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(93)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为抗补体因子D治疗性产物，包括但不限于抗补体因子D单克隆抗体或抗补体因子D适体；(94)眼睛病状与年龄相关性视网膜神经节细胞(RGC)变性相关，且治疗性产物为DnaJ热休克蛋白家族(Hsp40)成员C3(DNAJC3)，也称为P58IPK；(95)眼睛病状与蓝锥细胞单色视(BCM)相关，且治疗性产物为L视蛋白(OPN1MW)；(96)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为β-2肾上腺素受体siRNA；(97)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为半胱天冬酶-2(CASP2)；(98)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为胰岛素受体底物1(IRS1)；(99)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为HIF-1反应蛋白RTP801(RTP801)；(100)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为转化生长因子β2(TGFB2)；(101)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为脑源性神经营养因子(BDNF)；(102)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为睫状神经营养因子(CNTF)；(103)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)；(104)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为前列腺素F受体(PTGFR)(当眼睛病状与青光眼相关时，在一个特定实施方案中，包含编码PTGFR的核苷酸序列的重组病毒载体可与包含编码PTGS2的核苷酸序列的重组病毒载体组合施用人受试者；在另一特定实施方案中，可向人受试者施用包含编码PTGFR的核苷酸序列及编码PTGS2的核苷酸序列的重组病毒载体)；(105)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为透明质酸酶，例如HYAL1、HYAL2、HYAL3、HYAL4及HYAL5；(106)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为色素上皮衍生因子(PEDF)；(107)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为血管内皮生长因子(VEGF)；(108)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为胎盘生长因子(PGF)，其中PGF可与VEGF组合使用；(109)眼睛病状与青光眼(例如先天性青光眼或青少年型青光眼相关)，且治疗性产物为肌纤蛋白(MYOC)；(110)眼睛病状与NMO相关，且治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；(111)眼睛病状与NMO相关，且治疗性产物为C-C基序趋化因子受体5(CCR5)siRNA、CCR5 shRNA、siRNA或CCR5 miRNA(优选地，CCR5 miRNA)；(112)眼睛病状与NMO相关，且治疗性产物为抗CD19单克隆抗体；(113)眼睛病状与视紫质突变相关性色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为光敏感通道蛋白-1(ChR1)，其包括ChR1的人同源物；(114)眼睛病状与视紫质突变相关性色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为光敏感通道蛋白-2(ChR2)，其包括ChR2的人同源物；(115)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为睫状神经营养因子(CNTF)；(116)眼睛病状与常染色体隐性色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；(117)眼睛病状与常染色体隐性色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分2(CRB2)；(118)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)；(119)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为视紫质(RHO)；(120)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为神经生长因子(NGF)；(121)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为核因子红系2样2(NRF2)；(122)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为色素上皮衍生因子(PEDF)；(123)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为谷胱甘肽S-转移酶PI 1(GSTP1)，也称为PI；(124)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为视杆源性视锥活力因子(RDCVF)；(125)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为视紫质(RHO)；(126)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为视黄醛结合蛋白1(RLBP1)；(127)眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且治疗性产物为抗补体C5适体；(128)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为双同源框4(DUX4)；(129)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为NLR家族含Pyrin结构域3(NLRP3)；(130)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为脾相关酪氨酸激酶(SYK)；(131)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为促肾上腺皮质激素(ACTH)；(132)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为半胱天冬酶1(CASP1)；(133)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗CD59治疗性产物(诸如抗CD59治疗性蛋白质(例如抗CD59单克隆抗体)，或抗CD59治疗性RNA(例如抗CD59 shRNA、抗CD59siRNA或抗CD59miRNA)，优选抗CD59单克隆抗体)；(134)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(135)眼睛病状与角膜新血管生成相关，且治疗性产物为胰岛素受体底物1(IRS1)；(136)眼睛病状与角膜新血管生成相关，且治疗性产物为NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；(137)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；(138)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为α-2-抗纤维蛋白溶酶(A2AP)；(139)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为纤维蛋白溶酶原(PLG)；(140)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物可为生长激素；(141)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为胰岛素样生长因子1(IGF1)，其中IGF1可与生长激素组合使用；(142)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为白介素1β(IL1B)；(143)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为血管紧张素I转换酶2(ACE2)，其中ACE2可与IL1B组合使用；(144)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为IRS1；(145)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为抗整合素寡肽；(146)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体；(147)眼睛病状与格雷夫斯眼病(Graves'ophthalmopathy)(也称为格雷夫斯眼眶病)相关，且治疗性产物为抗CD40单克隆抗体；(148)眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且治疗性产物为抗胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)单克隆抗体；(149)眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且治疗性产物为抗胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)单克隆抗体；(150)眼睛病状与DME相关，且治疗性产物为抗整合素寡肽；(151)眼睛病状与DME相关，且治疗性产物为抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体；(152)眼睛病状与DME相关，且治疗性产物为RTP801siRNA；(153)眼睛病状与多发性硬化症(MS)相关的视力丧失相关，且治疗性产物为ND1；(154)眼睛病状与近视相关，且治疗性产物为基质金属蛋白酶2(MMP2)RNAi；(155)眼睛病状与X连锁隐性眼白化病相关，且治疗性产物为G蛋白偶联受体143(GPR143)；(156)眼睛病状与1型眼皮肤白化病相关，且治疗性产物为酪氨酸酶(TYR)；(157)眼睛病状与视神经炎相关，且治疗性产物为半胱天冬酶2(CASP2)；(158)眼睛病状与视神经炎相关，且治疗性产物为抗含亮氨酸富集重复序列和Ig结构域的蛋白质1(LINGO1)单克隆抗体；或(159)眼睛病状与息肉状脉络膜血管病变相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或抗补体适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体/适体、抗补体C1s单克隆抗体/适体、抗补体C2单克隆抗体/适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体。
在本文所述的方法的某些实施方案中，眼睛病状与X连锁色素性视网膜炎(XLRP)相关，且治疗性产物为色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)。在前述方法中的任一种的某些实施方案中，眼睛病状与全色盲(ACHM)相关，且治疗性产物为环核苷酸门控通道β3(CNGB3)。在前述方法中的任一种的某些实施方案中，眼睛病状与全色盲(例如CNGA3连锁的全色盲)相关，且治疗性产物为环核苷酸门控通道α3(CNGA3)。在前述方法中的任一种的某些实施方案中，眼睛病状与二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良相关，且治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，眼睛病状与以下相关：(1)Batten-CLN1，且治疗性产物为棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；(2)Batten-CLN2，且治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；(3)Batten-CLN3，且治疗性产物为Battenin(CLN3)；(4)葡萄膜炎，且治疗性产物为抗白介素6(IL6)单克隆抗体；(5)葡萄膜炎，且治疗性产物为抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；(6)糖尿病性黄斑水肿(DME)，且治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；(7)红绿色盲，且治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；(8)红绿色盲，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(9)蓝锥细胞单色视，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(10)莱伯先天性黑朦1(LCA 1)，且治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；(11)莱伯先天性黑朦2(LCA 2)，且治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；(12)莱伯先天性黑朦7(LCA 7)，且治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；(13)莱伯先天性黑朦11(LCA 11)，且治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；(14)莱伯先天性黑朦12(LCA 12)，且治疗性产物为视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；(15)莱伯先天性黑朦13(LCA 13)，且治疗性产物为视黄醇脱氢酶12(RDH12)；(16)莱伯先天性黑朦15(LCA 15)，且治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；(17)莱伯先天性黑朦16(LCA 16)，且治疗性产物为钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；(18)莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；(19)LHON，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；(20)LHON，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；(21)视神经脊髓炎(NMO)，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或抗补体适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(22)NMO，且治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；(23)葡萄膜炎，且治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；(24)葡萄膜炎，且治疗性产物为血管紧张素I转换酶(ACE)；(25)葡萄膜炎，且治疗性产物为白介素10(IL10)；(26)葡萄膜炎，且治疗性产物为抗TNF单克隆抗体；(27)X连锁视网膜劈裂症(XLRS)，且治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；(28)巴德-毕德氏综合征1，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；(29)巴德-毕德氏综合征3，且治疗性产物为ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)；(30)巴德-毕德氏综合征5，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；(31)巴德-毕德氏综合征6，且治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；(32)巴德-毕德氏综合征10，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；(33)巴德-毕德氏综合征11，且治疗性产物为含三联基序32(TRIM32)；(34)巴德-毕德氏综合征13，且治疗性产物为MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)；(35)巴德-毕德氏综合征18，且治疗性产物为BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)；(36)巴德-毕德氏综合征19，且治疗性产物为纤毛内转运蛋白27(IFT27)；(37)视锥细胞营养不良，且治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；(38)色素性视网膜炎13，且治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；(39)色素性视网膜炎37，且治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；或(40)贝斯特氏病，且治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，眼睛病状与二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良相关，且治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，眼睛病状与以下相关：(1)Batten-CLN2，且治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；(2)1型亚瑟氏症，且治疗性产物为肌球蛋白VIIA(MYO7A)；(3)1型亚瑟氏症，且治疗性产物为钙粘蛋白相关23(CDH23)；(4)2型亚瑟氏症，且治疗性产物为原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；(5)2型亚瑟氏症，且治疗性产物为Usherin(USH2A)；(6)3型亚瑟氏症，且治疗性产物为Clarin 1(CLRN1)；(7)斯塔加特氏病，且治疗性产物为ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；(8)斯塔加特氏病，且治疗性产物为ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；(9)红绿色盲，且治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；(10)红绿色盲，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(11)蓝锥细胞单色视，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(12)莱伯先天性黑朦1(LCA 1)，且治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；(13)莱伯先天性黑朦2(LCA 2)，且治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；(14)莱伯先天性黑朦4(LCA 4)，且治疗性产物为芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；(15)莱伯先天性黑朦7(LCA 7)，且治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；(16)莱伯先天性黑朦8(LCA 8)，且治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；(17)莱伯先天性黑朦9(LCA 9)，且治疗性产物为烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；(18)莱伯先天性黑朦10(LCA 10)，且治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；(19)莱伯先天性黑朦11(LCA 11)，且治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；(20)莱伯先天性黑朦15(LCA 15)，且治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；(21)LHON，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；(22)LHON，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；(23)无脉络膜症，且治疗性产物为Rab护航蛋白1(CHM)；(24)X连锁视网膜劈裂症(XLRS)，且治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；(25)巴德-毕德氏综合征1，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；(26)巴德-毕德氏综合征6，且治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；(27)巴德-毕德氏综合征10，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；(28)视锥细胞营养不良，且治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；(29)视神经萎缩，且治疗性产物为OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；(30)色素性视网膜炎1，且治疗性产物为RP1轴突微管相关(RP1)；(31)色素性视网膜炎2，且治疗性产物为ARL3 GTP酶的RP2活化因子(RP2)；(32)色素性视网膜炎7，且治疗性产物为外周蛋白2(PRPH2)；(33)色素性视网膜炎11，且治疗性产物为前体mRNA加工因子31(PRPF31)；(34)色素性视网膜炎13，且治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；(35)色素性视网膜炎37，且治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；(36)色素性视网膜炎38，且治疗性产物为MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；(37)色素性视网膜炎40，且治疗性产物为磷酸二酯酶6B(PDE6B)；(38)色素性视网膜炎41，且治疗性产物为Prominin 1(PROM1)；(39)色素性视网膜炎56，且治疗性产物为光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；(40)色素性视网膜炎62，且治疗性产物为雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；(41)色素性视网膜炎80，且治疗性产物为纤毛内转运蛋白140(IFT140)；或(42)贝斯特氏病，且治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，眼睛病状与X连锁色素性视网膜炎(XLRP)相关，且治疗性产物为色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)。在前述方法中的任一种的某些实施方案中，眼睛病状与全色盲相关，且治疗性产物为环核苷酸门控通道β3(CNGB3)；或与全色盲(例如CNGA3连锁的全色盲)相关，且治疗性产物为环核苷酸门控通道α3(CNGA3)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，重组病毒载体进一步包含编码启动子或增强子-启动子的核苷酸序列，所述编码启动子或增强子-启动子的核苷酸序列可操作地连接于编码治疗性产物的核苷酸序列，且其中所述启动子或增强子-启动子为普遍存在的启动子/增强子-启动子、眼睛特异性启动子/增强子-启动子或视网膜特异性启动子/增强子-启动子。
在本文所述的方法的某些实施方案中，重组病毒载体进一步包含编码启动子或增强子-启动子的核苷酸序列，所述编码启动子或增强子-启动子的核苷酸序列可操作地连接于编码治疗性产物的核苷酸序列，且其中所述启动子或增强子-启动子为：(1)CAG启动子；(2)CBA启动子；(3)CMV启动子；(4)1.7kb红色视锥视蛋白启动子(PR1.7启动子)；(5)视紫质激酶(GRK1)光感受器特异性增强子-启动子(参见例如Young等人,2003,Retinal CellBiology；44:4076-4085)；(6)hCARp启动子，其为人视锥抑制蛋白启动子；(7)hRKp，其为视紫质激酶启动子；(8)视锥光感受器特异性人抑制蛋白3(ARR3)启动子；(9)视紫质启动子；或(10)U6启动子(尤其当治疗性产物为诸如shRNA和siRNA的小RNA时)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，重组病毒载体进一步包含编码视锥特异性启动子的核苷酸序列，所述编码视锥特异性启动子的核苷酸序列可操作地连接于编码治疗性产物的核苷酸序列，且其中：(1)眼睛病状与红绿色盲相关，且治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；(2)眼睛病状与红绿色盲相关，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(3)眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(4)眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；或(5)眼睛病状与蓝锥细胞单色视(BCM)相关，且治疗性产物为L视蛋白(OPN1MW)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，施用步骤将治疗有效量的治疗性产物递送至所述人受试者的视网膜。
在本文所述的方法的某些实施方案中，治疗有效量的治疗性产物是由所述人受试者的人视网膜细胞产生。
在本文所述的方法的某些实施方案中，治疗有效量的治疗性产物是由所述人受试者的外界膜中的人光感受器细胞、水平细胞、双极细胞、无长突细胞、视网膜神经节细胞和/或视网膜色素上皮细胞产生。
在本文所述的方法的某些实施方案中，人光感受器细胞为视锥细胞和/或视杆细胞。
在本文所述的方法的某些实施方案中，视网膜神经节细胞为侏儒细胞、阳伞细胞、双层细胞、巨型视网膜神经节细胞、光敏性神经节细胞和/或米勒神经胶质细胞(Müllerglia)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，重组病毒载体为rAAV载体(例如rAAV8、rAAV2、rAAV2tYF或rAAV5载体)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，其中重组病毒载体为rAAV8载体。
在本文所述的方法的某些实施方案中，所述方法进一步包括在施用步骤之后，使用红外热像仪监测眼睛表面温度的步骤。在一个特定实施方案中，红外热像仪为FLIR T530红外热像仪。在一个特定实施方案中，红外热像仪为FLIR T420红外热像仪。在一个特定实施方案中，红外热像仪为FLIR T440红外热像仪。在一个特定实施方案中，红外热像仪为Fluke Ti400红外热像仪。在一个特定实施方案中，红外热像仪为FLIRE60红外热像仪。在一个特定实施方案中，红外热像仪的红外分辨率等于或大于75,000像素。在一个特定实施方案中，红外热像仪的热敏性在30℃下等于或小于0.05℃。在一个特定实施方案中，红外热像仪的视场(FOV)等于或低于25°×25°。
在本文所述的方法的某些实施方案中，递送至眼睛包含递送至眼睛的视网膜、脉络膜和/或玻璃体液。
在某些实施方案中，用于递送治疗性产物的重组载体应对眼睛的细胞，例如人视网膜细胞(例如光感受器细胞)具有向性。此类载体可包括非复制型重组腺相关病毒载体(“rAAV”)，尤其带有AAV8衣壳的那些载体是优选的。然而，可使用其他重组病毒载体，包括但不限于重组慢病毒载体、牛痘病毒载体或称为“裸DNA”构建体的非病毒表达载体。优选地，治疗性产物的表达应通过适当的表达控制元件来控制，例如(1)CAG启动子；(2)CBA启动子；(3)CMV启动子；(4)PR1.7启动子；(5)视紫质激酶(GRK1)光感受器特异性增强子-启动子；(6)hCARp启动子；(7)hRKp；(8)视锥光感受器特异性人抑制蛋白3(ARR3)启动子；(9)视紫质启动子；或(10)U6启动子，且可包括增强由载体驱动的治疗性产物的表达的其他表达控制元件(例如内含子，诸如鸡β-肌动蛋白内含子、小鼠微小病毒(MVM)内含子、人因子IX内含子(例如FIX截短的内含子1)、β-球蛋白剪接供体/免疫球蛋白重链剪接受体内含子、腺病毒剪接供体/免疫球蛋白剪接受体内含子、SV40晚期剪接供体/剪接受体(19S/16S)内含子及杂交腺病毒剪接供体/IgG剪接受体内含子，及polyA信号，诸如兔β-球蛋白polyA信号、人生长激素(hGH)polyA信号、SV40晚期polyA信号、合成polyA(SPA)信号及牛生长激素(bGH)polyA信号)。参见例如Powell和Rivera-Soto,2015,Discov.Med.,19(102):49-57。
在本文所述的方法的某些实施方案中，将治疗有效剂量的重组载体施用(1)至无需玻璃体切除术的视网膜下腔(例如经由脉络膜上腔或经由外周注射)，(2)至脉络膜上腔，(3)至巩膜的外空间(即巩膜旁施用)，(4)经由玻璃体切除术至视网膜下腔，或(5)至玻璃体腔，体积范围介于50-100μl或100-500μl，优选100-300μl且最优选250μl，取决于施用方法。在某些实施方案中，治疗有效剂量的重组载体以100μl或更小的体积，例如以50-100μl的体积脉络膜上施用。在某些实施方案中，将治疗有效剂量的重组载体以500μl或更小的体积，例如以10-20μl、20-50μl、50-100μl、100-200μl、200-300μl、300-400μl或400-500μl的体积施用于巩膜的外表面(例如通过后部巩膜旁储槽程序)。在某些实施方案中，治疗有效剂量的重组载体经由外周注射以范围介于50-100μl或100-500μl，优选100-300μl且最优选250μl的体积施用于视网膜下腔。
在某些实施方案中，评定视动性眼球震颤(OKN)以测量患者的视力。在某些实施方案中，OKN可使用例如Cetinkaya等人,2008,Eye,22:77-81；Hyon等人,2010,IOVS,51(2):752-757；Han等人,2011,IOVS,52(10):7492-7497；Wester等人,2007,IOVS,48(10):4542-4548；Palmowski-Wolfe等人,2019,J.AAPOS,23(4):e49；Turuwhenua等人,ObjectiveAssessment of Visual Performance Using Optokinetic Nystagmus in YoungChildren,2016年10月,<anzctr.org.au/AnzctrAttachments/371914-OKN％ 20protocol.pdf>；及从网上<prnewswire.com/news-releases/objective-acuity-and-aier-eye-hospital-group-announce-a-str ategic-cooperation-agreement-300891165.html>检索的Objective Acuity and Aier Eye Hospital Group AnnounceStrategic Cooperation Agreement,Cision PR Newswire,2019年7月25日中所描述和公开的方法和/或装置来执行，所述文献各自以引用的方式整体并入本文中。
在不受理论束缚的情况下，此视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN可用于测量言语前和/或非言语患者的视力。在某些实施方案中，OKN用于测量1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。在某些实施方案中，当患者正在观看iPad上的运动时，使用iPad经由检测OKN反射来测量视力。
在不受理论束缚的情况下，此视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN可用于测量言语前和/或非言语患者的视力。在某些实施方案中，OKN用于测量小于1.5个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。在另一特定实施方案中，OKN用于测量1-2个月、2-3个月、3-4个月、4-5个月、5-6个月、6-7个月、7-8个月、8-9个月、9-10个月、10-11个月、11个月至1岁、1-1.5岁、1.5-2岁、2-2.5岁、2.5-3岁、3-3.5岁、3.5-4岁、4-4.5岁或4.5-5岁患者的视力。在另一特定实施方案中，OKN用于测量6个月至5岁患者的视力。在某些实施方案中，当患者正在观看iPad上的运动时，使用iPad经由检测OKN反射来测量视力。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的患者中，通过在用编码三肽基-肽酶1(TPP1)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码三肽基-肽酶1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的患者中，通过在用编码TPP1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码三肽基-肽酶1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的患者中，通过在用编码棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的至多5岁患者处于该年龄和/或上述年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的患者中，通过在用编码PPT1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的患者中，通过在用编码PPT1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码PPT1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的患者中，通过在用编码Battenin(CLN3)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码Battenin(CLN3)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的患者中，通过在用编码Battenin(CLN3)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码Battenin(CLN3)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的患者中，通过在用编码CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的至多5岁患者处于该年龄和/或上述年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的患者中，通过在用编码CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的患者中，通过在用编码CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的至多5岁患者处于该年龄和/或上述年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的患者中，通过在用编码CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的患者中，通过在用编码含主要易化子超家族结构域8(MFSD8)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的至多5岁患者处于该年龄和/或上述年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的患者中，通过在用编码MFSD8的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的患者中，通过在用编码MFSD8的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码MFSD8的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
经由玻璃体切除术进行视网膜下施用为由经过训练的视网膜医师执行的外科手术，其涉及在局部麻醉下对受试者进行玻璃体切除术，且将基因疗法视网膜下注射到视网膜中(参见例如Campochiaro等人,2017,Hum Gen Ther 28(1):99-111，其以引用的方式整体并入本文中)。或者，可在无需玻璃体切除术的情况下进行视网膜下施用。在一个特定实施方案中，无需玻璃体切除术的视网膜下施用是使用将药物注射到视网膜下腔中的脉络膜上导管经由脉络膜上腔来进行，诸如包括导管的视网膜下药物递送装置，所述导管可插入并朝向后极穿过脉络膜上腔，小针头在后极注射到视网膜下腔中(参见例如Baldassarre等人,2017,Subretinal Delivery of Cells via the Suprachoroidal Space:JanssenTrial.在Schwartz等人(编)Cellular Therapies for Retinal Disease,Springer,Cham中；国际专利申请公开号WO 2016/040635 A1；其各自以引用的方式整体并入本文中)。在另一特定实施方案中，无需玻璃体切除术的视网膜下施用是经由外周注射来进行。换言之，重组载体可通过外周注射到视网膜中(即，位于眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周)递送至视网膜下腔，而无需进行玻璃体切除术。这可通过经玻璃体注射来完成。脉络膜上施用程序涉及将药物施用于眼睛的脉络膜上腔，且通常使用脉络膜上药物递送装置来进行，诸如具有微针的显微注射器(参见例如Hariprasad,2016,Retinal Physician 13:20-23；Goldstein,2014,Retina Today 9(5):82-87；其各自以引用的方式整体并入本文中)。
根据本文所述的本发明，可用于将重组载体沉积于脉络膜上腔中的脉络膜上药物递送装置包括但不限于由
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Biomedical,Inc.制造的脉络膜上药物递送装置(参见例如Hariprasad,2016,Retinal Physician 13:20-23)和MedOne脉络膜上导管。根据本文所述的本发明，可用于经由脉络膜上腔将重组载体沉积于视网膜下腔中的视网膜下药物递送装置包括但不限于由Janssen Pharmaceuticals,Inc.制造的视网膜下药物递送装置(参见例如国际专利申请公开号WO 2016/040635 A1)。根据本文所述的本发明，可用于经由外周注射方法将重组载体沉积于视网膜下腔中的视网膜下药物递送装置包括但不限于可经由眼睛的上侧或下侧(例如在2点钟或10点钟位置)插入巩膜中且完全穿过玻璃体以注射到另一侧视网膜的尖锐的针头，及可插入巩膜中以允许将视网膜下套管插入眼睛且穿过玻璃体到达所需注射区域的套管针。在一个特定实施方案中，施用于巩膜外表面是通过包括套管的巩膜旁药物递送装置来进行，所述套管的尖端可插入并保持与巩膜表面直接并置。
脉络膜上、视网膜下、巩膜旁、玻璃体内、结膜下和/或视网膜内施用应致使可溶性治疗性产物递送至视网膜、玻璃体液和/或水状液。由视网膜细胞，例如视杆细胞、视锥细胞、视网膜色素上皮细胞、水平细胞、双极细胞、无长突细胞、神经节细胞和/或米勒细胞表达治疗性产物致使治疗性产物在视网膜、玻璃体液和/或水状液中递送及维持。在特定实施方案中，因为治疗性产物为连续产生的，所以维持低浓度可为有效的。可在来自治疗的眼睛的前房的玻璃体液和/或水状液的患者样品测量治疗性产物的浓度。或者，可通过测量患者的治疗性产物的血清浓度来估计和/或监测玻璃体液浓度-全身与玻璃体暴露于治疗性产物的比率为约1:90,000。(例如参见Xu L等人,2013,Invest.Opthal.Vis.Sci.54:1616-1624,第1621页和第1623页的表5中报告的兰尼单抗的玻璃体液和血清浓度，其以引用的方式整体并入本文中)。
适用于脉络膜上、视网膜下、巩膜旁、玻璃体内、结膜下和/或视网膜内施用的药物组合物包含重组载体于包含生理学上相容的水性缓冲液、表面活性剂及任选存在的赋形剂的制剂缓冲液中的混悬液。
本发明相对于标准护理治疗具有若干优点，所述标准护理治疗涉及反复眼部注射高剂量治疗性产物大丸剂，其随时间推移消散导致最高及最低含量。与反复注射治疗性产物相反，治疗性产物的持续表达使作用部位处存在的抗体含量更一致，风险更低且对于患者来说更方便，因为需要进行的注射次数更少，使得医生问诊减少。一致的蛋白质产生可能会使得临床结果更好，因为不太可能发生视网膜水肿反弹。此外，在某些实施方案中，由于在翻译期间及之后存在不同的微环境，由重组载体表达的治疗性产物以与直接注射的治疗性产物不同的方式进行翻译后修饰。在不受任何特定理论束缚的情况下，这导致治疗性产物具有不同的扩散、生物活性、分布、亲和力、药物动力学及免疫原性特征，因此与直接注射的治疗性产物相比，递送至作用部位的治疗性产物为“改进型生物药(biobetter)”。
另外，当治疗性产物为抗体时，由重组载体体内表达的抗体不太可能含有与重组技术产生的抗体相关的降解产物，诸如蛋白质聚集和蛋白质氧化。由于蛋白质浓度高、与制造设备和容器的表面相互作用以及利用某些缓冲液系统的纯化，聚集为与蛋白质产生及储存相关的问题。这些促进聚集的条件在基因疗法的抗体表达中不存在。氧化，诸如甲硫氨酸、色氨酸及组氨酸氧化，还与蛋白质产生和储存相关，且由应激的细胞培养条件、金属及空气接触以及缓冲剂和赋形剂中的杂质引起。由重组载体体内表达的蛋白质也可在应激条件中氧化。然而，人及许多其他生物体均配备有抗氧化防御系统，其不仅降低氧化应激，且有时也修复和/或逆转氧化。因此，体内产生的蛋白质不太可能呈氧化形式。聚集和氧化均可能影响效力、药物动力学(清除率)及免疫原性。
与小分子药物不同，生物制剂通常包含许多具有不同修饰或形式的变体的混合物，所述变体具有不同的效力、药物动力学及安全概况。对于在眼睛细胞中表达后翻译后修饰的治疗性产物，在基因疗法或蛋白质疗法中产生的每一个分子不需要完全被翻译后修饰。相反，所产生的此类治疗性产物群体应具有足够的翻译后修饰(例如群体的约1％至约10％、群体的约1％至约20％、群体的约1％至约50％或群体的约10％至约50％)以证明功效。本文提供的基因疗法治疗的目标为通过最少的干预/侵入性手术来减缓或阻止眼睛病状的进展，且减缓或防止视力丧失。可通过测量BCVA(最佳矫正视力)、眼内压、裂隙灯活组织检视法、间接检眼镜检查法、SD-OCT(SD-光学相干断层摄影术)、视网膜电图描记(ERG)来监测功效。也可监测视力丧失、感染、炎症及其他安全事件(包括视网膜剥离)的迹象。在某些实施方案中，可监测视网膜厚度以确定本文所提供的治疗的功效。在不受任何特定理论束缚的情况下，在特定实施方案中，可将视网膜厚度用作临床读数，其中视网膜厚度的减小愈大或视网膜增厚之前的时间愈长，则治疗愈有效。视网膜厚度可例如通过SD-OCT来测定。SD-OCT是一种三维成像技术，其使用低相干干涉术来确定回波时间延迟剂自目标物体反射的反向散射光的量值。OCT可用于以3至15μm轴向分辨率扫描组织样品(例如视网膜)的层，且SD-OCT与以前的技术形式相比提高轴向分辨率和扫描速度(Schuman,2008,Trans.Am.Opthamol.Soc.106:426-458)。视网膜功能可例如通过ERG测定。ERG为经FDA批准用于人的视网膜功能的非侵入性电生理测试，其检查眼睛的光感受器细胞(视杆和视锥)及其连接的神经节细胞，特别是其对闪光刺激的反应。
4.1说明性实施方案
4.1.1第1组
1.一种无需玻璃体切除术以用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛中的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。
2.如段落1的方法，其中所述施用步骤包括经由所述人受试者的眼睛的脉络膜上腔向所述人受试者的眼睛的视网膜下腔施用所述重组病毒载体治疗性产物。
3.如段落2的方法，其中所述施用步骤是通过使用包括导管的视网膜下药物递送装置，所述导管可插入并朝向后极穿过脉络膜上腔，小针头在后极注射到视网膜下腔中。
4.如段落3的方法，其中所述施用步骤包括将所述视网膜下药物递送装置的导管插入并穿过脉络膜上腔。
5.一种用于治疗眼睛病状的脉络膜上施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的脉络膜上腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗。
6.如段落5的方法，其中所述施用步骤是通过使用脉络膜上药物递送装置将所述重组病毒载体注射到脉络膜上腔中。
7.如段落5或6的方法，其中所述脉络膜上药物递送装置为显微注射器。
8.一种向巩膜外表面施用以用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的巩膜外空间施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗。
9.如段落8的方法，其中所述施用步骤是通过使用包括套管的巩膜旁药物递送装置，所述套管的尖端可插入并保持与巩膜表面直接并置。
10.如段落9的方法，其中所述施用步骤包括将所述套管的尖端插入并保持与巩膜表面直接并置。
11.如段落1-10中任一项的方法，其中所述治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。
12.如段落1-11中任一项的方法，其中所述眼睛病状与新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)不相关。
13.一种伴随玻璃体切除术以用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛中的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术，且其中所述治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。
14.如段落13的方法，其中所述玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
15.一种用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向位于需要治疗的人受试者的眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。
16.如段落15的方法，其中所述施用步骤是通过经玻璃体注射。
17.如段落16的方法，其中所述经玻璃体注射包含经由眼睛的上侧或下侧将尖锐的针头插入巩膜中，且使所述尖锐的针头完全穿过玻璃体，以将所述重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。
18.如段落16的方法，其中所述经玻璃体注射包含将套管针插入巩膜中，且经由所述套管针插入套管并穿过玻璃体，以将所述重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。
19.如段落15-18中任一项的方法，其中所述治疗性产物为抗hVEGF抗体。
20.如段落19的方法，其中所述抗hVEGF抗体为抗hVEGF抗原结合片段。
21.如段落20的方法，其中所述抗hVEGF抗原结合片段为Fab、F(ab')2或单链可变片段(scFv)。
22.如段落19-21中任一项的方法，其中所述抗hVEGF抗体含有包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链。
23.如段落19-21中任一项的方法，其中所述抗hVEGF抗体包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:17-19或SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3。
24.如段落19-23中任一项的方法，其中所述眼睛病状与nAMD、干性年龄相关性黄斑变性(干性AMD)、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)相关。
25.如段落19-23中任一项的方法，其中所述眼睛病状与nAMD相关。
26.如段落1-11和13-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与Batten-CLN1相关，且所述治疗性产物为棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；
(2)所述眼睛病状与Batten-CLN2相关，且所述治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；
(3)所述眼睛病状与Batten-CLN3相关，且所述治疗性产物为Battenin(CLN3)；
(4)所述眼睛病状与Batten-CLN6相关，且所述治疗性产物为CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；
(5)所述眼睛病状与Batten-CLN7相关，且所述治疗性产物为含主要易化子超家族结构域8(MFSD8)；
(6)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为肌球蛋白VIIA(MYO7A)；
(7)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为钙粘蛋白相关23(CDH23)；
(8)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；
(9)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Usherin(USH2A)；
(10)所述眼睛病状与3型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Clarin 1(CLRN1)；
(11)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；
(12)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；
(13)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗白介素6(IL6)单克隆抗体；
(14)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；
(15)所述眼睛病状与糖尿病性黄斑水肿(DME)相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(16)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(17)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(18)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(19)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且所述治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；
(20)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；
(21)所述眼睛病状与LCA 3相关，且所述治疗性产物为精子形成相关7(SPATA7)；
(22)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦4(LCA 4)相关，且所述治疗性产物为芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；
(23)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦5(LCA 5)相关，且所述治疗性产物为Lebercilin(LCA5)；
(24)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦6(LCA 6)相关，且所述治疗性产物为RPGR相互作用蛋白1(RPGRIP1)；
(25)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且所述治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；
(26)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦8(LCA 8)相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(27)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦9(LCA 9)相关，且所述治疗性产物为烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；
(28)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦10(LCA 10)相关，且所述治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；
(29)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且所述治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；
(30)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦12(LCA 12)相关，且所述治疗性产物为视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；
(31)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦13(LCA 13)相关，且所述治疗性产物为视黄醇脱氢酶12(RDH12)；
(32)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦14(LCA 14)相关，且所述治疗性产物为卵磷脂视黄醇酰基转移酶(LRAT)；
(33)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且所述治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；
(34)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦16(LCA 16)相关，且所述治疗性产物为钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；
(35)所述眼睛病状与莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；
(36)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；
(37)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；
(38)所述眼睛病状与视神经脊髓炎(NMO)相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(39)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(40)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(41)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为血管紧张素I转换酶(ACE)；
(42)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为白介素10(IL10)；
(43)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF单克隆抗体；
(44)所述眼睛病状与无脉络膜症相关，且所述治疗性产物为Rab护航蛋白1(CHM)；
(45)所述眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且所述治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；
(46)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；
(47)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征2相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征2(BBS2)；
(48)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征3相关，且所述治疗性产物为ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)；
(49)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征4相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征4(BBS4)；
(50)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征5相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；
(51)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且所述治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；
(52)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征7相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征7(BBS7)；
(53)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征8相关，且所述治疗性产物为三十四肽重复结构域8(TTC8)；
(54)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征9相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征9(BBS9)；
(55)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；
(56)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征11相关，且所述治疗性产物为含三联基序32(TRIM32)；
(57)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征12相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征12(BBS12)；
(58)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征13相关，且所述治疗性产物为MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)；
(59)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征14相关，且所述治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；
(60)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征15相关，且所述治疗性产物为含WD重复的平面细胞极性效应子(WDPCP)；
(61)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征16相关，且所述治疗性产物为血清学定义的结肠癌抗原8(SDCCAG8)；
(62)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征17相关，且所述治疗性产物为亮氨酸拉链转录因子样1(LZTFL1)；
(63)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征18相关，且所述治疗性产物为BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)；
(64)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征19相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白27(IFT27)；
(65)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；
(66)所述眼睛病状与视神经萎缩相关，且所述治疗性产物为OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；
(67)所述眼睛病状与色素性视网膜炎1相关，且所述治疗性产物为RP1轴突微管相关(RP1)；
(68)所述眼睛病状与色素性视网膜炎2相关，且所述治疗性产物为ARL3 GTP酶的RP2活化因子(RP2)；
(69)所述眼睛病状与色素性视网膜炎7相关，且所述治疗性产物为外周蛋白2(PRPH2)；
(70)所述眼睛病状与色素性视网膜炎11相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子31(PRPF31)；
(71)所述眼睛病状与色素性视网膜炎12相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(72)所述眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；
(73)所述眼睛病状与色素性视网膜炎25相关，且所述治疗性产物为闭眼同源物(EYS)；
(74)所述眼睛病状与色素性视网膜炎28相关，且所述治疗性产物为FAM161中心体蛋白A(FAM161A)；
(75)所述眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且所述治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；
(76)所述眼睛病状与色素性视网膜炎38相关，且所述治疗性产物为MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；
(77)所述眼睛病状与色素性视网膜炎40相关，且所述治疗性产物为磷酸二酯酶6B(PDE6B)；
(78)所述眼睛病状与色素性视网膜炎41相关，且所述治疗性产物为Prominin 1(PROM1)；
(79)所述眼睛病状与色素性视网膜炎43相关，且所述治疗性产物为磷酸二酯酶6A(PDE6A)；
(80)所述眼睛病状与色素性视网膜炎56相关，且所述治疗性产物为光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；
(81)所述眼睛病状与色素性视网膜炎62相关，且所述治疗性产物为雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；
(82)所述眼睛病状与色素性视网膜炎80相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白140(IFT140)；
(83)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(84)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗膜攻击复合体(MAC)单克隆抗体；
(85)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为HtrA丝氨酸肽酶1(HTRA1)；
(86)所述眼睛病状与贝斯特氏病相关，且所述治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)；
(87)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为补体因子B反义寡核苷酸；
(88)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体；
(89)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为CD59糖蛋白(CD59)；
(90)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-1(ChR1)；
(91)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-2(ChR2)，即在莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)中发现的光敏蛋白；
(92)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗补体因子C5a适体；
(93)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗补体因子D单克隆抗体；
(94)所述眼睛病状与年龄相关性视网膜神经节细胞(RGC)变性相关，且所述治疗性产物为DnaJ热休克蛋白家族(Hsp40)成员C3(DNAJC3)；
(95)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视(BCM)相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(96)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为β-2肾上腺素受体siRNA；
(97)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为半胱天冬酶-2(CASP2)；
(98)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为胰岛素受体底物1(IRS1)；
(99)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为HIF-1反应性蛋白RTP801(RTP801)；
(100)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为转化生长因子β2(TGFB2)；
(101)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为脑源性神经营养因子(BDNF)；
(102)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为睫状神经营养因子(CNTF)；
(103)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)；
(104)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为前列腺素F受体(PTGFR)；
(105)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为透明质酸酶；
(106)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为色素上皮衍生因子(PEDF)；
(107)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为血管内皮生长因子(VEGF)；
(108)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为胎盘生长因子(PGF)；
(109)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为肌纤蛋白(MYOC)；
(110)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(111)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为C-C基序趋化因子受体5(CCR5)siRNA；
(112)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗CD19单克隆抗体；
(113)所述眼睛病状与视紫质突变相关性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-1(ChR1)；
(114)所述眼睛病状与视紫质突变相关性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-2(ChR2)；
(115)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为睫状神经营养因子(CNTF)；
(116)所述眼睛病状与常染色体隐性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(117)所述眼睛病状与常染色体隐性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分2(CRB2)；
(118)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)；
(119)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视紫质(RHO)；
(120)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为神经生长因子(NGF)；
(121)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为核因子红系2样2(NRF2)；
(122)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为色素上皮衍生因子(PEDF)；
(123)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为谷胱甘肽S-转移酶PI 1(GSTP1)；
(124)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视杆源性视锥活力因子(RDCVF)；
(125)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视紫质(RHO)；
(126)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视黄醛结合蛋白1(RLBP1)；
(127)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为抗补体C5适体；
(128)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为双同源框4(DUX4)；
(129)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为NLR家族含Pyrin结构域3(NLRP3)；
(130)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为脾相关酪氨酸激酶(SYK)；
(131)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为促肾上腺皮质激素(ACTH)；
(132)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为半胱天冬酶1(CASP1)；
(133)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗CD59单克隆抗体；
(134)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗补体C5适体；
(135)所述眼睛病状与角膜新血管生成相关，且所述治疗性产物为胰岛素受体底物1(IRS1)；
(136)所述眼睛病状与角膜新血管生成相关，且所述治疗性产物为NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；
(137)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；
(138)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为α-2-抗纤维蛋白溶酶(A2AP)；
(139)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为纤维蛋白溶酶原(PLG)；
(140)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为生长激素；
(141)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为胰岛素样生长因子1(IGF1)；
(142)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为白介素1β(IL1B)；
(143)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为血管紧张素I转换酶2(ACE2)；
(144)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为IRS1；
(145)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为抗整合素寡肽；
(146)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体；
(147)所述眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且所述治疗性产物为抗CD40单克隆抗体；
(148)所述眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且所述治疗性产物为抗胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)单克隆抗体；
(149)所述眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且所述治疗性产物为抗胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)单克隆抗体；
(150)所述眼睛病状与DME相关，且所述治疗性产物为抗整合素寡肽；
(151)所述眼睛病状与DME相关，且所述治疗性产物为抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体；
(152)所述眼睛病状与DME相关，且所述治疗性产物为RTP801 siRNA；
(153)所述眼睛病状与多发性硬化症(MS)相关的视力丧失相关，且所述治疗性产物为ND1；
(154)所述眼睛病状与近视相关，且所述治疗性产物为基质金属蛋白酶2(MMP2)RNAi；
(155)所述眼睛病状与X连锁隐性眼白化病相关，且所述治疗性产物为G蛋白偶联受体143(GPR143)；
(156)所述眼睛病状与1型眼皮肤白化病相关，且所述治疗性产物为酪氨酸酶(TYR)；
(157)所述眼睛病状与视神经炎相关，且所述治疗性产物为半胱天冬酶2(CASP2)；
(158)所述眼睛病状与视神经炎相关，且所述治疗性产物为抗含亮氨酸富集重复序列和Ig结构域的蛋白质1(LINGO1)单克隆抗体；或
(159)所述眼睛病状与息肉状脉络膜血管病变相关，且所述治疗性产物为抗补体C5适体。
27.如段落1-11和15-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与X连锁色素性视网膜炎(XLRP)相关，且所述治疗性产物为色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)；
(2)所述眼睛病状与全色盲(ACHM)相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道β3(CNGB3)；
(3)所述眼睛病状与全色盲相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道α3(CNGA3)；或
(4)所述眼睛病状与二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)。
28.如段落1-11和13-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与Batten-CLN1相关，且所述治疗性产物为棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；
(2)所述眼睛病状与Batten-CLN2相关，且所述治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；
(3)所述眼睛病状与Batten-CLN3相关，且所述治疗性产物为Battenin(CLN3)；
(4)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗白介素6(IL6)单克隆抗体；
(5)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；
(6)所述眼睛病状与糖尿病性黄斑水肿(DME)相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(7)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(8)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(9)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(10)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且所述治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；
(11)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；
(12)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且所述治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；
(13)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且所述治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；
(14)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦12(LCA 12)相关，且所述治疗性产物为视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；
(15)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦13(LCA 13)相关，且所述治疗性产物为视黄醇脱氢酶12(RDH12)；
(16)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且所述治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；
(17)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦16(LCA 16)相关，且所述治疗性产物为钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；
(18)所述眼睛病状与莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；
(19)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；
(20)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；
(21)所述眼睛病状与视神经脊髓炎(NMO)相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(22)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(23)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(24)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为血管紧张素I转换酶(ACE)；
(25)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为白介素10(IL10)；
(26)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF单克隆抗体；
(27)所述眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且所述治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；
(28)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；
(29)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征3相关，且所述治疗性产物为ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)；
(30)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征5相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；
(31)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且所述治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；
(32)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；
(33)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征11相关，且所述治疗性产物为含三联基序32(TRIM32)；
(34)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征13相关，且所述治疗性产物为MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)；
(35)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征18相关，且所述治疗性产物为BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)；
(36)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征19相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白27(IFT27)；
(37)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；
(38)所述眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；
(39)所述眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且所述治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；或
(40)所述眼睛病状与贝斯特氏病相关，且所述治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)。
29.如段落1-11和15-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)。
30.如段落1-11和13-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与Batten-CLN2相关，且所述治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；
(2)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为肌球蛋白VIIA(MYO7A)；
(3)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为钙粘蛋白相关23(CDH23)；
(4)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；
(5)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Usherin(USH2A)；
(6)所述眼睛病状与3型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Clarin 1(CLRN1)；
(7)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；
(8)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；
(9)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(10)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(11)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(12)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且所述治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；
(13)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；
(14)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦4(LCA 4)相关，且所述治疗性产物为芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；
(15)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且所述治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；
(16)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦8(LCA 8)相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(17)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦9(LCA 9)相关，且所述治疗性产物为烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；
(18)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦10(LCA 10)相关，且所述治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；
(19)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且所述治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；
(20)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且所述治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；
(21)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；
(22)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；
(23)所述眼睛病状与无脉络膜症相关，且所述治疗性产物为Rab护航蛋白1(CHM)；
(24)所述眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且所述治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；
(25)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；
(26)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且所述治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；
(27)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；
(28)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；
(29)所述眼睛病状与视神经萎缩相关，且所述治疗性产物为OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；
(30)所述眼睛病状与色素性视网膜炎1相关，且所述治疗性产物为RP1轴突微管相关(RP1)；
(31)所述眼睛病状与色素性视网膜炎2相关，且所述治疗性产物为ARL3 GTP酶的RP2活化因子(RP2)；
(32)所述眼睛病状与色素性视网膜炎7相关，且所述治疗性产物为外周蛋白2(PRPH2)；
(33)所述眼睛病状与色素性视网膜炎11相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子31(PRPF31)；
(34)所述眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；
(35)所述眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且所述治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；
(36)所述眼睛病状与色素性视网膜炎38相关，且所述治疗性产物为MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；
(37)所述眼睛病状与色素性视网膜炎40相关，且所述治疗性产物为磷酸二酯酶6B(PDE6B)；
(38)所述眼睛病状与色素性视网膜炎41相关，且所述治疗性产物为Prominin 1(PROM1)；
(39)所述眼睛病状与色素性视网膜炎56相关，且所述治疗性产物为光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；
(40)所述眼睛病状与色素性视网膜炎62相关，且所述治疗性产物为雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；
(41)所述眼睛病状与色素性视网膜炎80相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白140(IFT140)；或
(42)所述眼睛病状与贝斯特氏病相关，且所述治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)。
31.如段落1-11和15-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与X连锁色素性视网膜炎(XLRP)相关，且所述治疗性产物为色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)；
(2)所述眼睛病状与全色盲相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道β3(CNGB3)；或
(3)所述眼睛病状与全色盲相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道α3(CNGA3)。
32.如段落1-31中任一项的方法，其中所述重组病毒载体进一步包含编码启动子或增强子-启动子的核苷酸序列，所述编码启动子或增强子-启动子的核苷酸序列可操作地连接于编码所述治疗性产物的核苷酸序列，且其中所述启动子或增强子-启动子为：
(1)CAG启动子；
(2)CBA启动子；
(3)CMV启动子；
(4)PR1.7启动子；
(5)视紫质激酶(GRK1)光感受器特异性增强子-启动子；
(6)hCARp启动子；
(7)hRKp；
(8)视锥光感受器特异性人抑制蛋白3(ARR3)启动子；
(9)视紫质启动子；或
(10)U6启动子。
33.如段落1-11和13-15中任一项的方法，其中所述重组病毒载体进一步包含编码视锥特异性启动子的核苷酸序列，所述编码视锥特异性启动子的核苷酸序列可操作地连接于编码所述治疗性产物的核苷酸序列，且其中：
(1)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(2)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(3)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(4)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；或
(5)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视(BCM)相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)。
34.如段落1-33中任一项的方法，其中所述施用步骤将治疗有效量的所述治疗性产物递送至所述人受试者的视网膜。
35.如段落34的方法，其中所述治疗有效量的所述治疗性产物是由所述人受试者的人视网膜细胞产生。
36.如段落34的方法，其中所述治疗有效量的所述治疗性产物是由所述人受试者的外界膜中的人光感受器细胞、水平细胞、双极细胞、无长突细胞、视网膜神经节细胞和/或视网膜色素上皮细胞产生。
37.如段落36的方法，其中所述人光感受器细胞为视锥细胞和/或视杆细胞。
38.如段落36的方法，其中所述视网膜神经节细胞为侏儒细胞、阳伞细胞、双层细胞、巨型视网膜神经节细胞、光敏性神经节细胞和/或米勒神经胶质细胞。
39.如段落1-38中任一项的方法，其中所述重组病毒载体为rAAV载体。
40.如段落39的方法，其中所述重组病毒载体为rAAV8载体。
41.如段落1-40中任一项的方法，其进一步包含在所述施用步骤之后，使用红外热像仪监测眼睛中注射的材料的眼部注射后热分布的步骤。
42.如段落41的方法，其中所述红外热像仪为FLIR T530红外热像仪。
43.如段落1-43中任一项的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约6.0×1010个基因组拷贝的剂量施用。
44.如段落1-43中任一项的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约1.6×1011个基因组拷贝的剂量施用。
45.如段落1-43中任一项的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝的剂量施用。
46.如段落1-43中任一项的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约5.0×1011个基因组拷贝的剂量施用。
47.如段落1-43中任一项的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约3.0×1012个基因组拷贝的剂量施用。
4.1.2第2组
1.一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。
2.如段落1的方法，其中所述施用步骤包括经由所述人受试者的眼睛的脉络膜上腔向所述人受试者的眼睛的视网膜下腔施用所述重组病毒载体治疗性产物。
3.如段落2的方法，其中所述施用步骤是通过使用包括导管的视网膜下药物递送装置，所述导管可插入并朝向后极穿过脉络膜上腔，小针头在后极注射到视网膜下腔中。
4.如段落3的方法，其中所述施用步骤包括将所述视网膜下药物递送装置的导管插入并穿过脉络膜上腔。
5.一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的脉络膜上腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗。
6.如段落5的方法，其中所述施用步骤是通过使用脉络膜上药物递送装置将所述重组病毒载体注射到脉络膜上腔中。
7.如段落5或6的方法，其中所述脉络膜上药物递送装置为显微注射器。
8.一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的巩膜外表面施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗。
9.如段落8的方法，其中所述施用步骤是通过使用包括套管的巩膜旁药物递送装置，所述套管的尖端可插入并保持与巩膜表面直接并置。
10.如段落9的方法，其中所述施用步骤包括将所述套管的尖端插入并保持与巩膜表面直接并置。
11.如段落1-10中任一项的方法，其中所述治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。
12.如段落1-11中任一项的方法，其中所述眼睛病状与新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)不相关。
13.一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术，且其中所述治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。
14.如段落13的方法，其中所述玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
15.一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向位于需要治疗的人受试者的眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。
16.如段落15的方法，其中所述施用步骤是通过经玻璃体注射的。
17.如段落16的方法，其中所述经玻璃体注射包含经由眼睛的上侧或下侧将尖锐的针头插入巩膜中，且使所述尖锐的针头完全穿过玻璃体，以将所述重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。
18.如段落16的方法，其中所述经玻璃体注射包含将套管针插入巩膜中，且经由所述套管针插入套管并穿过玻璃体，以将所述重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。
19.如段落15-18中任一项的方法，其中所述治疗性产物为抗hVEGF抗体。
20.如段落19的方法，其中所述抗hVEGF抗体为抗hVEGF抗原结合片段。
21.如段落20的方法，其中所述抗hVEGF抗原结合片段为Fab、F(ab')2或单链可变片段(scFv)。
22.如段落19-21中任一项的方法，其中所述抗hVEGF抗体含有包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链。
23.如段落19-21中任一项的方法，其中所述抗hVEGF抗体包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:17-19或SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3。
24.如段落19-23中任一项的方法，其中所述眼睛病状与nAMD、干性年龄相关性黄斑变性(干性AMD)、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)相关。
25.如段落19-23中任一项的方法，其中所述眼睛病状与nAMD相关。
26.如段落1-11和13-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与Batten-CLN1相关，且所述治疗性产物为棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；
(2)所述眼睛病状与Batten-CLN2相关，且所述治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；
(3)所述眼睛病状与Batten-CLN3相关，且所述治疗性产物为Battenin(CLN3)；
(4)所述眼睛病状与Batten-CLN6相关，且所述治疗性产物为CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；
(5)所述眼睛病状与Batten-CLN7相关，且所述治疗性产物为含主要易化子超家族结构域8(MFSD8)；
(6)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为肌球蛋白VIIA(MYO7A)；
(7)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为钙粘蛋白相关23(CDH23)；
(8)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；
(9)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Usherin(USH2A)；
(10)所述眼睛病状与3型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Clarin 1(CLRN1)；
(11)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；
(12)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；
(13)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗白介素6(IL6)单克隆抗体；
(14)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；
(15)所述眼睛病状与糖尿病性黄斑水肿(DME)相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(16)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(17)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(18)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(19)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且所述治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；
(20)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；
(21)所述眼睛病状与LCA 3相关，且所述治疗性产物为精子形成相关7(SPATA7)；
(22)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦4(LCA 4)相关，且所述治疗性产物为芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；
(23)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦5(LCA 5)相关，且所述治疗性产物为Lebercilin(LCA5)；
(24)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦6(LCA 6)相关，且所述治疗性产物为RPGR相互作用蛋白1(RPGRIP1)；
(25)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且所述治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；
(26)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦8(LCA 8)相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(27)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦9(LCA 9)相关，且所述治疗性产物为烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；
(28)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦10(LCA 10)相关，且所述治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；
(29)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且所述治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；
(30)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦12(LCA 12)相关，且所述治疗性产物为视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；
(31)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦13(LCA 13)相关，且所述治疗性产物为视黄醇脱氢酶12(RDH12)；
(32)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦14(LCA 14)相关，且所述治疗性产物为卵磷脂视黄醇酰基转移酶(LRAT)；
(33)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且所述治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；
(34)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦16(LCA 16)相关，且所述治疗性产物为钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；
(35)所述眼睛病状与莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；
(36)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；
(37)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；
(38)所述眼睛病状与视神经脊髓炎(NMO)相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(39)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(40)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(41)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为血管紧张素I转换酶(ACE)；
(42)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为白介素10(IL10)；
(43)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF单克隆抗体；
(44)所述眼睛病状与无脉络膜症相关，且所述治疗性产物为Rab护航蛋白1(CHM)；
(45)所述眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且所述治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；
(46)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；
(47)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征2相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征2(BBS2)；
(48)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征3相关，且所述治疗性产物为ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)；
(49)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征4相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征4(BBS4)；
(50)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征5相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；
(51)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且所述治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；
(52)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征7相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征7(BBS7)；
(53)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征8相关，且所述治疗性产物为三十四肽重复结构域8(TTC8)；
(54)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征9相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征9(BBS9)；
(55)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；
(56)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征11相关，且所述治疗性产物为含三联基序32(TRIM32)；
(57)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征12相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征12(BBS12)；
(58)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征13相关，且所述治疗性产物为MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)；
(59)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征14相关，且所述治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；
(60)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征15相关，且所述治疗性产物为含WD重复的平面细胞极性效应子(WDPCP)；
(61)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征16相关，且所述治疗性产物为血清学定义的结肠癌抗原8(SDCCAG8)；
(62)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征17相关，且所述治疗性产物为亮氨酸拉链转录因子样1(LZTFL1)；
(63)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征18相关，且所述治疗性产物为BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)；
(64)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征19相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白27(IFT27)；
(65)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；
(66)所述眼睛病状与视神经萎缩相关，且所述治疗性产物为OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；
(67)所述眼睛病状与色素性视网膜炎1相关，且所述治疗性产物为RP1轴突微管相关(RP1)；
(68)所述眼睛病状与色素性视网膜炎2相关，且所述治疗性产物为ARL3 GTP酶的RP2活化因子(RP2)；
(69)所述眼睛病状与色素性视网膜炎7相关，且所述治疗性产物为外周蛋白2(PRPH2)；
(70)所述眼睛病状与色素性视网膜炎11相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子31(PRPF31)；
(71)所述眼睛病状与色素性视网膜炎12相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(72)所述眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；
(73)所述眼睛病状与色素性视网膜炎25相关，且所述治疗性产物为闭眼同源物(EYS)；
(74)所述眼睛病状与色素性视网膜炎28相关，且所述治疗性产物为FAM161中心体蛋白A(FAM161A)；
(75)所述眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且所述治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；
(76)所述眼睛病状与色素性视网膜炎38相关，且所述治疗性产物为MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；
(77)所述眼睛病状与色素性视网膜炎40相关，且所述治疗性产物为磷酸二酯酶6B(PDE6B)；
(78)所述眼睛病状与色素性视网膜炎41相关，且所述治疗性产物为Prominin 1(PROM1)；
(79)所述眼睛病状与色素性视网膜炎43相关，且所述治疗性产物为磷酸二酯酶6A(PDE6A)；
(80)所述眼睛病状与色素性视网膜炎56相关，且所述治疗性产物为光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；
(81)所述眼睛病状与色素性视网膜炎62相关，且所述治疗性产物为雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；
(82)所述眼睛病状与色素性视网膜炎80相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白140(IFT140)；
(83)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(84)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗膜攻击复合体(MAC)单克隆抗体；
(85)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为HtrA丝氨酸肽酶1(HTRA1)；
(86)所述眼睛病状与贝斯特氏病相关，且所述治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)；
(87)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为补体因子B反义寡核苷酸；
(88)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体；
(89)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为CD59糖蛋白(CD59)；
(90)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-1(ChR1)；
(91)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-2(ChR2)，即在莱茵衣藻中发现的光敏蛋白；
(92)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗补体因子C5a适体；
(93)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗补体因子D单克隆抗体；
(94)所述眼睛病状与年龄相关性视网膜神经节细胞(RGC)变性相关，且所述治疗性产物为DnaJ热休克蛋白家族(Hsp40)成员C3(DNAJC3)；
(95)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视(BCM)相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(96)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为β-2肾上腺素受体siRNA；
(97)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为半胱天冬酶-2(CASP2)；
(98)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为胰岛素受体底物1(IRS1)；
(99)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为HIF-1反应性蛋白RTP801(RTP801)；
(100)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为转化生长因子β2(TGFB2)；
(101)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为脑源性神经营养因子(BDNF)；
(102)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为睫状神经营养因子(CNTF)；
(103)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)；
(104)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为前列腺素F受体(PTGFR)；
(105)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为透明质酸酶；
(106)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为色素上皮衍生因子(PEDF)；
(107)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为血管内皮生长因子(VEGF)；
(108)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为胎盘生长因子(PGF)；
(109)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为肌纤蛋白(MYOC)；
(110)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(111)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为C-C基序趋化因子受体5(CCR5)siRNA；
(112)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗CD19单克隆抗体；
(113)所述眼睛病状与视紫质突变相关性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-1(ChR1)；
(114)所述眼睛病状与视紫质突变相关性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-2(ChR2)；
(115)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为睫状神经营养因子(CNTF)；
(116)所述眼睛病状与常染色体隐性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(117)所述眼睛病状与常染色体隐性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分2(CRB2)；
(118)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)；
(119)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视紫质(RHO)；
(120)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为神经生长因子(NGF)；
(121)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为核因子红系2样2(NRF2)；
(122)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为色素上皮衍生因子(PEDF)；
(123)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为谷胱甘肽S-转移酶PI 1(GSTP1)；
(124)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视杆源性视锥活力因子(RDCVF)；
(125)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视紫质(RHO)；
(126)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视黄醛结合蛋白1(RLBP1)；
(127)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为抗补体C5适体；
(128)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为双同源框4(DUX4)；
(129)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为NLR家族含Pyrin结构域3(NLRP3)；
(130)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为脾相关酪氨酸激酶(SYK)；
(131)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为促肾上腺皮质激素(ACTH)；
(132)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为半胱天冬酶1(CASP1)；
(133)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗CD59单克隆抗体；
(134)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗补体C5适体；
(135)所述眼睛病状与角膜新血管生成相关，且所述治疗性产物为胰岛素受体底物1(IRS1)；
(136)所述眼睛病状与角膜新血管生成相关，且所述治疗性产物为NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；
(137)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；
(138)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为α-2-抗纤维蛋白溶酶(A2AP)；
(139)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为纤维蛋白溶酶原(PLG)；
(140)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为生长激素；
(141)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为胰岛素样生长因子1(IGF1)；
(142)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为白介素1β(IL1B)；
(143)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为血管紧张素I转换酶2(ACE2)；
(144)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为IRS1；
(145)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为抗整合素寡肽；
(146)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体；
(147)所述眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且所述治疗性产物为抗CD40单克隆抗体；
(148)所述眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且所述治疗性产物为抗胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)单克隆抗体；
(149)所述眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且所述治疗性产物为抗胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)单克隆抗体；
(150)所述眼睛病状与DME相关，且所述治疗性产物为抗整合素寡肽；
(151)所述眼睛病状与DME相关，且所述治疗性产物为抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体；
(152)所述眼睛病状与DME相关，且所述治疗性产物为RTP801 siRNA；
(153)所述眼睛病状与多发性硬化症(MS)相关的视力丧失相关，且所述治疗性产物为ND1；
(154)所述眼睛病状与近视相关，且所述治疗性产物为基质金属蛋白酶2(MMP2)RNAi；
(155)所述眼睛病状与X连锁隐性眼白化病相关，且所述治疗性产物为G蛋白偶联受体143(GPR143)；
(156)所述眼睛病状与1型眼皮肤白化病相关，且所述治疗性产物为酪氨酸酶(TYR)；
(157)所述眼睛病状与视神经炎相关，且所述治疗性产物为半胱天冬酶2(CASP2)；
(158)所述眼睛病状与视神经炎相关，且所述治疗性产物为抗含亮氨酸富集重复序列和Ig结构域的蛋白质1(LINGO1)单克隆抗体；或
(159)所述眼睛病状与息肉状脉络膜血管病变相关，且所述治疗性产物为抗补体C5适体。
27.如段落1-11和15-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与X连锁色素性视网膜炎(XLRP)相关，且所述治疗性产物为色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)；
(2)所述眼睛病状与全色盲(ACHM)相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道β3(CNGB3)；
(3)所述眼睛病状与全色盲相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道α3(CNGA3)；或
(4)所述眼睛病状与二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)。
28.如段落1-11和13-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与Batten-CLN1相关，且所述治疗性产物为棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；
(2)所述眼睛病状与Batten-CLN2相关，且所述治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；
(3)所述眼睛病状与Batten-CLN3相关，且所述治疗性产物为Battenin(CLN3)；
(4)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗白介素6(IL6)单克隆抗体；
(5)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；
(6)所述眼睛病状与糖尿病性黄斑水肿(DME)相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(7)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(8)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(9)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(10)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且所述治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；
(11)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；
(12)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且所述治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；
(13)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且所述治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；
(14)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦12(LCA 12)相关，且所述治疗性产物为视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；
(15)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦13(LCA 13)相关，且所述治疗性产物为视黄醇脱氢酶12(RDH12)；
(16)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且所述治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；
(17)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦16(LCA 16)相关，且所述治疗性产物为钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；
(18)所述眼睛病状与莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；
(19)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；
(20)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；
(21)所述眼睛病状与视神经脊髓炎(NMO)相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(22)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(23)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(24)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为血管紧张素I转换酶(ACE)；
(25)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为白介素10(IL10)；
(26)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF单克隆抗体；
(27)所述眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且所述治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；
(28)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；
(29)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征3相关，且所述治疗性产物为ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)；
(30)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征5相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；
(31)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且所述治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；
(32)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；
(33)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征11相关，且所述治疗性产物为含三联基序32(TRIM32)；
(34)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征13相关，且所述治疗性产物为MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)；
(35)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征18相关，且所述治疗性产物为BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)；
(36)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征19相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白27(IFT27)；
(37)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；
(38)所述眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；
(39)所述眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且所述治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；或
(40)所述眼睛病状与贝斯特氏病相关，且所述治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)。
29.如段落1-11和15-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)。
30.如段落1-11和13-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与Batten-CLN2相关，且所述治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；
(2)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为肌球蛋白VIIA(MYO7A)；
(3)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为钙粘蛋白相关23(CDH23)；
(4)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；
(5)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Usherin(USH2A)；
(6)所述眼睛病状与3型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Clarin 1(CLRN1)；
(7)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；
(8)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；
(9)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(10)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(11)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(12)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且所述治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；
(13)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；
(14)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦4(LCA 4)相关，且所述治疗性产物为芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；
(15)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且所述治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；
(16)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦8(LCA 8)相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(17)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦9(LCA 9)相关，且所述治疗性产物为烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；
(18)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦10(LCA 10)相关，且所述治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；
(19)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且所述治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；
(20)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且所述治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；
(21)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；
(22)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；
(23)所述眼睛病状与无脉络膜症相关，且所述治疗性产物为Rab护航蛋白1(CHM)；
(24)所述眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且所述治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；
(25)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；
(26)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且所述治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；
(27)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；
(28)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；
(29)所述眼睛病状与视神经萎缩相关，且所述治疗性产物为OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；
(30)所述眼睛病状与色素性视网膜炎1相关，且所述治疗性产物为RP1轴突微管相关(RP1)；
(31)所述眼睛病状与色素性视网膜炎2相关，且所述治疗性产物为ARL3 GTP酶的RP2活化因子(RP2)；
(32)所述眼睛病状与色素性视网膜炎7相关，且所述治疗性产物为外周蛋白2(PRPH2)；
(33)所述眼睛病状与色素性视网膜炎11相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子31(PRPF31)；
(34)所述眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；
(35)所述眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且所述治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；
(36)所述眼睛病状与色素性视网膜炎38相关，且所述治疗性产物为MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；
(37)所述眼睛病状与色素性视网膜炎40相关，且所述治疗性产物为磷酸二酯酶6B(PDE6B)；
(38)所述眼睛病状与色素性视网膜炎41相关，且所述治疗性产物为Prominin 1(PROM1)；
(39)所述眼睛病状与色素性视网膜炎56相关，且所述治疗性产物为光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；
(40)所述眼睛病状与色素性视网膜炎62相关，且所述治疗性产物为雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；
(41)所述眼睛病状与色素性视网膜炎80相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白140(IFT140)；或
(42)所述眼睛病状与贝斯特氏病相关，且所述治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)。
31.如段落1-11和15-18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与X连锁色素性视网膜炎(XLRP)相关，且所述治疗性产物为色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)；
(2)所述眼睛病状与全色盲相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道β3(CNGB3)；或
(3)所述眼睛病状与全色盲相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道α3(CNGA3)。
32.如段落1-31中任一项的方法，其中所述重组病毒载体进一步包含编码启动子或增强子-启动子的核苷酸序列，所述编码启动子或增强子-启动子的核苷酸序列可操作地连接于编码所述治疗性产物的核苷酸序列，且其中所述启动子或增强子-启动子为：
(1)CAG启动子；
(2)CBA启动子；
(3)CMV启动子；
(4)PR1.7启动子；
(5)视紫质激酶(GRK1)光感受器特异性增强子-启动子；
(6)hCARp启动子；
(7)hRKp；
(8)视锥光感受器特异性人抑制蛋白3(ARR3)启动子；
(9)视紫质启动子；或
(10)U6启动子。
33.如段落1-11和13-15中任一项的方法，其中所述重组病毒载体进一步包含编码视锥特异性启动子的核苷酸序列，所述编码视锥特异性启动子的核苷酸序列可操作地连接于编码所述治疗性产物的核苷酸序列，且其中：
(1)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(2)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(3)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(4)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；或
(5)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视(BCM)相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)。
34.如段落1-33中任一项的方法，其中所述施用步骤将治疗有效量的所述治疗性产物递送至所述人受试者的视网膜。
35.如段落34的方法，其中所述治疗有效量的所述治疗性产物是由所述人受试者的人视网膜细胞产生。
36.如段落34的方法，其中所述治疗有效量的所述治疗性产物是由所述人受试者的外界膜中的人光感受器细胞、水平细胞、双极细胞、无长突细胞、视网膜神经节细胞和/或视网膜色素上皮细胞产生。
37.如段落36的方法，其中所述人光感受器细胞为视锥细胞和/或视杆细胞。
38.如段落36的方法，其中所述视网膜神经节细胞为侏儒细胞、
阳伞细胞、双层细胞、巨型视网膜神经节细胞、光敏性神经节细胞和/或米勒神经胶质细胞。
39.如段落1-38中任一项的方法，其中所述重组病毒载体为rAAV载体。
40.如段落39的方法，其中所述重组病毒载体为rAAV8载体。
41.如段落1-40中任一项的方法，其进一步包含在所述施用步骤之后，使用红外热像仪监测眼睛中注射的材料的眼部注射后热分布的步骤。
42.如段落41的方法，其中所述红外热像仪为FLIR T530红外热像仪。
43.如段落1-43中任一项的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约6.0×1010个基因组拷贝的剂量施用。
44.如段落1-43中任一项的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约1.6×1011个基因组拷贝的剂量施用。
45.如段落1-43中任一项的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝的剂量施用。
46.如段落1-43中任一项的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约5.0×1011个基因组拷贝的剂量施用。
47.如段落1-43中任一项的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约3.0×1012个基因组拷贝的剂量施用。
5.附图说明
图1.由
Figure BDA0003389530610000471
Biomedical,Inc制造的脉络膜上药物递送装置。
图2.由Janssen Pharmaceuticals,Inc制造的包括导管的视网膜下药物递送装置，所述导管可插入并朝向后极穿过脉络膜上腔，小针头在后极注射到视网膜下腔中。
图3.带有横截面图的人眼图。
图4A-图4D.后部巩膜旁储槽程序的图解。
图5.AAV8-抗VEGFfab基因组的示意图。
图6.使用红外热像仪监测脉络膜上注射后的热分布。
图7A和图7B.由Altaviz制造的微量注射器药物递送装置。
图8A和图8B.由Visionisti OY制造的药物递送装置。具体来说，图8A描绘注射适配器，其能够将30g短皮下针头转换成脉络膜上/视网膜下针头。所述装置能够控制自适配器的远端露出的针尖的长度。可以10μL进行调节。所述装置具有调节脉络膜上递送和/或巩膜切开视网膜下递送的能力。图8B描绘针头适配器导向器，其能够保持盖打开并将针头保持在最优角度和深度以进行递送。针头适配器锁定至稳定装置中。针头适配器为用于标准化和最优化门诊脉络膜上和/或视网膜下注射的一体式工具。
6.具体实施方式
本文提供了用于将治疗性产物(诸如治疗性蛋白质(例如抗体)、治疗性RNA(例如shRNA、siRNA及miRNA)及治疗性适体)递送至人受试者的眼睛的视网膜/玻璃体液以治疗眼睛病状的组合物和方法，其涉及例如重组病毒载体，诸如重组腺相关病毒(rAAV)载体。
治疗性产物可为例如治疗性蛋白质(例如抗体)、治疗性RNA(例如shRNA、siRNA及miRNA)或治疗性适体。
在一个特定实施方案中，治疗性产物为人蛋白质或针对人蛋白质的抗体。抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、重组产生的抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、合成抗体、包含两个重链和两个轻链分子的四聚抗体、抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链-重链对、胞内抗体、异缀合抗体、单价抗体、全长抗体的抗原结合片段及上述的融合蛋白。此类抗原结合片段包括但不限于单结构域抗体(重链抗体的可变结构域(VHH)或纳米抗体)、Fab、F(ab')2及scFv(单链可变片段)。在特定实施方案中，治疗性产物(例如治疗性蛋白质)被翻译后修饰。在一个特定实施方案中，翻译后修饰对使用如本文所述的特定途径将治疗性产物(例如治疗性蛋白质)递送至的细胞类型具有特异性。递送可经由基因疗法来实现，例如通过将编码治疗性产物的重组病毒载体或重组DNA表达构建体(统称为“重组载体”)施用人患者眼睛的脉络膜上腔、视网膜下腔(通过玻璃体切除术或无需玻璃体切除术(例如通过导管穿过脉络膜上腔或经由外周注射)、视网膜内腔、玻璃体腔和/或巩膜外表面(即巩膜旁施用)，以在眼睛中形成连续供应治疗性产物(例如翻译后修饰的治疗性产物)的永久储槽。
6.1用于递送治疗性产物的方法
一方面，本文提供了一种无需玻璃体切除术以用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛中的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，施用步骤包括经由所述人受试者的眼睛的脉络膜上腔向所述人受试者的眼睛的视网膜下腔施用重组病毒载体治疗性产物。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用包括导管的视网膜下药物递送装置，所述导管可插入并朝向后极穿过脉络膜上腔，小针头在后极注射到视网膜下腔中。在某些实施方案中，施用步骤包括将视网膜下药物递送装置的导管插入并穿过脉络膜上腔。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，施用步骤包括经由所述人受试者的眼睛的脉络膜上腔向所述人受试者的眼睛的视网膜下腔施用重组病毒载体治疗性产物。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用包括导管的视网膜下药物递送装置，所述导管可插入并朝向后极穿过脉络膜上腔，小针头在后极注射到视网膜下腔中。在某些实施方案中，施用步骤包括将视网膜下药物递送装置的导管插入并穿过脉络膜上腔。
一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的通过玻璃体切除术的视网膜下施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的脉络膜上施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的脉络膜上腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用脉络膜上药物递送装置将重组病毒载体注射到脉络膜上腔中。在某些实施方案中，脉络膜上药物递送装置为显微注射器。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的脉络膜上腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用脉络膜上药物递送装置将重组病毒载体注射到脉络膜上腔中。在某些实施方案中，脉络膜上药物递送装置为显微注射器。
在某些实施方案中，可使用国际公开号WO 2016/042162、WO 2017/046358、WO2017/158365及WO 2017/158366中所描述和公开的方法和/或装置来进行向视网膜下腔或脉络膜上腔的递送，所述公开各自以引用的方式整体并入本文中。
一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的向巩膜外空间施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的巩膜外表面施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用包括套管的巩膜旁药物递送装置，所述套管的尖端可插入并保持与巩膜表面直接并置。在某些实施方案中，施用步骤包括将套管的尖端插入并保持与巩膜表面直接并置。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛巩膜外表面施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用包括套管的巩膜旁药物递送装置，所述套管的尖端可插入并保持与巩膜表面直接并置。在某些实施方案中，施用步骤包括将套管的尖端插入并保持与巩膜表面直接并置。
一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的玻璃体内施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的玻璃体腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用玻璃体内药物递送装置将重组病毒载体注射到玻璃体腔中。在某些实施方案中，玻璃体内药物递送装置为显微注射器。另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的玻璃体腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状。在某些实施方案中，施用步骤是通过使用玻璃体内药物递送装置将重组病毒载体注射到玻璃体腔中。在某些实施方案中，玻璃体内药物递送装置为显微注射器。
在某些实施方案中，治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。
在某些实施方案中，眼睛病状与新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)(也称为AMD的“湿性”新生血管性形式(“WAMD”或“湿性AMD”))不相关。
在某些实施方案中，治疗性产物为抗hVEGF抗体。
在某些实施方案中，眼睛病状与nAMD相关。
在某些实施方案中，眼睛病状与nAMD相关，且治疗性产物为抗hVEGF抗体。
一方面，本文提供了一种伴随玻璃体切除术以用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛中的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术，且其中所述治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。在某些实施方案中，眼睛病状为眼部疾病或涉及包括眼睛在内的多个器官的疾病。在某些实施方案中，玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术，且其中所述治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。在某些实施方案中，眼睛病状为眼部疾病或涉及包括眼睛在内的多个器官的疾病。在某些实施方案中，玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向位于需要治疗的人受试者的眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，注射步骤是通过经玻璃体注射的。在某些实施方案中，经玻璃体施用的方法使得治疗性产物在整个眼睛中均匀表达(例如与眼睛其他区域的表达量相比，注射部位的表达量变化小于5％、10％、20％、30％、40％或50％)。在某些实施方案中，经玻璃体注射包含经由眼睛的上侧或下侧将尖锐的针头插入巩膜中，且使尖锐的针头完全穿过玻璃体，以将重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。在某些实施方案中，在2点钟或10点钟位置插入针头。在某些实施方案中，经玻璃体注射包含将套管针插入巩膜中，且经由套管针插入套管并穿过玻璃体，以将重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔。在某些实施方案中，治疗性产物为抗hVEGF抗体。在某些实施方案中，抗hVEGF抗体为抗hVEGF抗原结合片段。在某些实施方案中，抗hVEGF抗原结合片段为Fab、F(ab')2或单链可变片段(scFv)。在某些实施方案中，抗hVEGF抗体含有包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:1或SEQID NO:3的氨基酸序列的轻链。在某些实施方案中，其中抗hVEGF抗体包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:17-19或SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3。在某些实施方案中，其中眼睛病状与nAMD、干性年龄相关性黄斑变性(干性AMD)、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)相关。在某些实施方案中，眼睛病状与nAMD相关。
另一方面，本文提供了一种用于治疗眼睛病状的方法，其包括向位于需要治疗的人受试者的眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且治疗眼睛病状，其中所述方法不包括在所述人患者的眼睛上进行玻璃体切除术。在某些实施方案中，注射步骤是通过经玻璃体注射。在某些实施方案中，经玻璃体施用的方法使得治疗性产物在整个眼睛中均匀表达(例如与眼睛其他区域的表达量相比，注射部位的表达量变化小于5％、10％、20％、30％、40％或50％)。在某些实施方案中，经玻璃体注射包含经由眼睛的上侧或下侧将尖锐的针头插入巩膜中，且使尖锐的针头完全穿过玻璃体，以将重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。在某些实施方案中，在2点钟或10点钟位置插入针头。在某些实施方案中，经玻璃体注射包含将套管针插入巩膜中，且经由套管针插入套管并穿过玻璃体，以将重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。在某些实施方案中，治疗性产物为抗hVEGF抗体。在某些实施方案中，抗hVEGF抗体为抗hVEGF抗原结合片段。在某些实施方案中，抗hVEGF抗原结合片段为Fab、F(ab')2或单链可变片段(scFv)。在某些实施方案中，抗hVEGF抗体含有包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链。在某些实施方案中，其中抗hVEGF抗体包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:17-19或SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3。在某些实施方案中，其中眼睛病状与nAMD、干性年龄相关性黄斑变性(干性AMD)、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)相关。在某些实施方案中，眼睛病状与nAMD相关。
在本文所述的方法的某些实施方案中，施用步骤将治疗有效量的治疗性产物递送至所述人受试者的视网膜。
在本文所述的方法的某些实施方案中，治疗有效量的治疗性产物是由所述人受试者的人视网膜细胞产生。
在本文所述的方法的某些实施方案中，治疗有效量的治疗性产物是由所述人受试者的外界膜中的人光感受器细胞、水平细胞、双极细胞、无长突细胞、视网膜神经节细胞和/或视网膜色素上皮细胞产生。
在本文所述的方法的某些实施方案中，人光感受器细胞为视锥细胞和/或视杆细胞。
在本文所述的方法的某些实施方案中，视网膜神经节细胞为侏儒细胞、阳伞细胞、双层细胞、巨型视网膜神经节细胞、光敏性神经节细胞和/或米勒神经胶质细胞。
在本文所述的方法的某些实施方案中，重组病毒载体为rAAV载体(例如rAAV8、rAAV2、rAAV2tYF或rAAV5载体)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，其中重组病毒载体为rAAV8载体。
在本文所述的方法的某些实施方案中，递送至眼睛包含递送至眼睛的视网膜、脉络膜和/或玻璃体液。
6.1.1翻译后修饰
在某些实施方案中，治疗性产物(例如治疗性蛋白质)被翻译后修饰。在一个特定实施方案中，翻译后修饰对使用如本文所述的特定途径将治疗性产物(例如治疗性蛋白质)递送至的细胞类型具有特异性。
在一个特定实施方案中，翻译后修饰为糖基化。在另一特定实施方案中，翻译后修饰为酪氨酸硫酸化。在另一特定实施方案中，翻译后修饰为磷酸化。在另一特定实施方案中，翻译后修饰为ADP-核糖基化。在另一特定实施方案中，翻译后修饰为异戊烯化。在另一特定实施方案中，翻译后修饰为豆蔻酰化或棕榈酰化。在另一特定实施方案中，翻译后修饰为泛素化。在另一特定实施方案中，翻译后修饰为小泛素样蛋白化。在另一特定实施方案中，翻译后修饰为泛素化样蛋白质修饰。
在一个特定实施方案中，治疗性产物在人永生化的视网膜来源的细胞中自重组载体表达后被翻译后修饰。
在一个特定实施方案中，重组载体的施用导致储槽的形成，所述储槽释放含有翻译后修饰的治疗性产物。
在一个特定实施方案中，重组载体，当用于在培养物中转导视网膜来源的细胞时，导致产生含有翻译后修饰的治疗性产物。
翻译后修饰可通过本领域中已知用于检测翻译后修饰的任何方法来检测，例如蛋白质印迹、色谱或流动式细胞测量术。
在一个特定实施方案中，翻译后可通过用放射性底物或底物前体分子体内标记细胞底物库，其致使放射性标记的部分，包括但不限于磷酸酯基、脂肪酰基(例如肉豆蔻酰基或棕榈酰基)、小泛素样蛋白、甲基、乙酰基、羟基、碘、黄素、泛素或ADP-核糖基并入治疗性产物来检测。修饰的蛋白质的分析通常通过电泳和自动射线照相术进行，通过在电泳之前对所关注的蛋白质进行免疫沈淀来提高特异性。
在一个特定实施方案中，翻译后可通过体外将经标记的部分(包括但不限于放射性、发光或荧光标记)酶促并入治疗性产物以估计体内修饰状态来检测。
在一个特定实施方案中，翻译后可通过分析与未修饰的治疗性产物相比修饰的治疗性产物(例如糖基化或泛素化)的电泳迁移率的变化来检测。
在一个特定实施方案中，翻译后可通过从治疗性产物提取的放射性标记的脂肪酸的薄层色谱来检测。
在一个特定实施方案中，翻译后可通过利用相分离将治疗性产物分配至富含洗涤剂的层或洗涤剂层中，及酶处理治疗性产物对在水性与富含洗涤剂的环境之间分配的影响来检测。
在一个特定实施方案中，翻译后可通过蛋白质修饰形式的抗体识别，例如通过蛋白质印迹或流动式细胞测量术来检测。
6.1.2构建体和制剂
用于本文所提供的方法的为编码治疗性产物的重组病毒载体或其他重组DNA表达构建体(统称为“重组载体”)。本文所提供的重组病毒载体和其他DNA表达构建体包括用于将治疗性产物(诸如治疗性蛋白质(例如抗体)、治疗性RNA(例如shRNA、siRNA及miRNA)及治疗性适体))递送至靶细胞(例如视网膜色素上皮细胞)的任何适合者。治疗性产物的递送方式包括重组病毒载体、脂质体、其他含脂质复合体、其他大分子复合体、合成的修饰的mRNA、未修饰的mRNA、小分子、非生物活性分子(例如金粒子)、聚合分子(例如树枝状聚合物)、裸DNA、质粒、噬菌体、转座子、粘粒或附加体。在一些实施方案中，载体为靶向载体，例如靶向视网膜色素上皮细胞的载体。
在一些态样中，本公开提供使用的核酸，其中所述核酸编码可操作地连接于本文所述的启动子或增强子-启动子的治疗性产物。
在某些实施方案中，本文提供了包含一种或多种核酸(例如聚核苷酸)的重组载体。核酸可包含DNA、RNA或DNA及RNA的组合。在某些实施方案中，DNA包含选自由启动子序列、编码所关注的治疗性产物的序列、非翻译区及终止序列组成的组的序列中的一或多者。在某些实施方案中，本文所提供的重组载体包含可操作地连接于编码所关注的治疗性产物的序列的启动子。
在某些实施方案中，本文公开的核酸(例如聚核苷酸)和核酸序列可例如经由本领域技术人员已知的任何密码子最优化技术而被密码子最优化(参见例如Quax等人,2015,Mol Cell 59:149-161的综述)。
(a)mRNA
在某些实施方案中，本文所提供的重组载体包含编码所关注的治疗性产物的修饰的mRNA。用于将治疗性产物递送至眼睛细胞，例如视网膜色素上皮细胞的修饰和未修饰的mRNA的合成教导于例如Hansson等人,J.Biol.Chem.,2015,290(9):5661-5672中，其以引用的方式整体并入本文中。在某些实施方案中，本文提供了编码治疗性产物部分的修饰的mRNA。
(b)shRNA、siRNA及miRNA
在某些实施方案中，本文所提供的重组载体包含编码治疗性产物的核苷酸序列，所述治疗性产物为shRNA、siRNA或miRNA。
(c)重组病毒载体
重组病毒载体包括重组腺病毒、腺相关病毒(AAV，例如AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11及AAVrh10)、慢病毒、辅助细胞依赖型腺病毒、单纯疱疹病毒、痘病毒、日本血凝素病毒(HVJ)、α病毒、痘疮病毒及逆转录病毒载体。逆转录病毒载体包括基于小鼠白血病病毒(MLV)和人免疫缺陷病毒(HIV)的载体。α病毒载体包括胜利基森林病毒(semliki forest virus，SFV)和辛得比斯病毒(sindbis virus，SIN)。在某些实施方案中，本文提供的重组病毒载体经过改变以使其在人中为复制缺陷型。在某些实施方案中，重组病毒载体为杂交载体，例如置于“无助”腺病毒载体中的AAV载体。在某些实施方案中，本文提供了重组病毒载体，其包含来自第一病毒的病毒衣壳和来自第二病毒的病毒包膜蛋白。在特定实施方案中，第二病毒为水泡性口炎病毒(VSV)。在更特定的实施方案中，包膜蛋白为VSV-G蛋白。
在某些实施方案中，本文提供的重组病毒载体是基于HIV的病毒载体。在某些实施方案中，本文提供的基于HIV的载体包含至少两个聚核苷酸，其中gag和pol基因来自HIV基因组，env基因来自另一种病毒。
在某些实施方案中，本文提供的重组病毒载体是基于单纯疱疹病毒的病毒载体。在某些实施方案中，本文提供的基于单纯疱疹病毒的载体被修饰以使其不包含一种或多种即刻早期(IE)基因，从而使其无细胞毒性。
在某些实施方案中，本文提供的重组病毒载体是基于MLV的病毒载体。在某些实施方案中，本文提供的基于MLV的载体包含多达8kb的异源DNA代替病毒基因。
在某些实施方案中，本文提供的重组病毒载体是基于慢病毒的病毒载体。在某些实施方案中，本文提供的慢病毒载体来源于人慢病毒。在某些实施方案中，本文提供的慢病毒载体来源于非人慢病毒。在某些实施方案中，将本文提供的慢病毒载体包装于慢病毒衣壳中。在某些实施方案中，本文提供的慢病毒载体包含以下元件中的一或多个：长末端重复序列、引子结合位点、多嘌呤区、att位点及衣壳化位点。
在某些实施方案中，本文提供的重组病毒载体是基于α病毒的病毒载体。在某些实施方案中，本文提供的α病毒载体是重组的复制缺乏型α病毒。在某些实施方案中，本文提供的α病毒载体中的α病毒复制子通过在其病毒粒子表面上呈现功能性异源配体而靶向特定细胞类型。
在某些实施方案中，本文提供的重组病毒载体是基于AAV的病毒载体。在优选实施方案中，本文提供的重组病毒载体是基于AAV8的病毒载体。在某些实施方案中，本文提供的基于AAV8的病毒载体保留视网膜细胞的向性。在某些实施方案中，本文提供的基于AAV的载体编码AAV rep基因(复制所需)和/或AAV cap基因(衣壳蛋白合成所需)。已鉴别多种AAV血清型。在某些实施方案中，本文提供的基于AAV的载体包含来自一种或多种AAV血清型的组分。在某些实施方案中，本文提供的基于AAV的载体包含来自AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh10中的一或多者的衣壳组分。在优选实施方案中，本文提供的基于AAV的载体包含来自AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh10血清型中的一或多种的组分。
在具体实施方案中提供的是AAV8载体，其包含病毒基因组，所述病毒基因组包含在调节元件控制下并侧接ITR的用于表达治疗性产物的表达盒，和病毒衣壳，所述病毒衣壳具有AAV8衣壳蛋白的氨基酸序列或与AAV8衣壳蛋白的氨基酸序列(SEQ ID NO:48)至少95％、96％、97％、98％、99％或99.9％相同，同时保留AAV8衣壳的生物功能。在某些实施方案中，所编码的AAV8衣壳具有SEQ ID NO:48的序列，具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸取代且保留AAV8衣壳的生物功能。
在某些实施方案中，在本文描述的方法中所用的AAV为Anc80或Anc80L65，如Zinn等人,2015,Cell Rep.12(6):1056-1068中所述，其以引用的方式整体并入本文中。在某些实施方案中，在本文描述的方法中所用的AAV包含以下氨基酸插入中的一个：LGETTRP或LALGETTRP，如美国专利号9,193,956；9458517；及9,587,282和美国专利申请公开号2016/0376323中所述，其各自以引用的方式整体并入本文中。在某些实施方案中，在本文描述的方法中所用的AAV为AAV.7m8，如美国专利号9,193,956；9,458,517；及9,587,282号美国专利申请公开号2016/0376323中所述，其各自以引用的方式整体并入本文中。在某些实施方案中，在本文描述的方法中所用的AAV为美国专利号9,585,971中所公开的任何AAV，诸如AAV-PHP.B。在某些实施方案中，在本文描述的方法中所用的AAV为以下专利和专利申请中的任一个中所公开的AAV，其各自以引用的方式整体并入本文中：美国专利号7,906,111；8,524,446；8,999,678；8,628,966；8,927,514；8,734,809；US 9,284,357；9,409,953；9,169,299；9,193,956；9458517；及9,587,282；美国专利申请公开号2015/0374803；2015/0126588；2017/0067908；2013/0224836；2016/0215024；2017/0051257；以及国际专利申请号PCT/US2015/034799；PCT/EP2015/053335。
基于AAV8的病毒载体用于本文所述方法的某些实施方案中。基于AAV的病毒载体的核酸序列及制造重组AAV和AAV衣壳的方法教导于例如美国专利号7,282,199B2、美国专利号7,790,449B2、美国专利号8,318,480B2、美国专利号8,962,332B2及国际专利申请号PCT/EP2014/076466中，其各自以引用的方式整体并入本文中。一方面，本文提供了编码治疗性产物的基于AAV(例如AAV8)的病毒载体。
在某些实施方案中，上文可使用单股AAV(ssAAV)。在某些实施方案中，可使用自互补载体，例如scAAV(参见例如Wu,2007,Human Gene Therapy,18(2):171-82，McCarty等人,2001,Gene Therapy,第8卷,第16期,第1248-1254页；及美国专利号6,596,535；7,125,717；及7,456,683，其各自以引用的方式整体并入本文中)。
在某些实施方案中，在本文描述的方法中所用的重组病毒载体为重组腺病毒载体。重组腺病毒可为第一代载体，其具有E1缺失、具有或不具有E3缺失及具有插入任一缺失区中的表达盒。重组腺病毒可为第二代载体，其含有E2和E4区的全部或部分缺失。辅助细胞依赖型腺病毒仅保留腺病毒反向末端重复序列和包装信号(phi)。治疗性产物插入包装信号与3'ITR之间，具有或不具有填充序列以使基因组接近于约36kb的野生型大小。产生腺病毒载体的例示性方案可见于Alba等人,2005,“Gutless adenovirus:last generationadenovirus for gene therapy,”Gene Therapy 12:S18-S27中，其以引用的方式整体并入本文中。
在某些实施方案中，在本文描述的方法中所用的重组病毒载体为基于慢病毒的病毒载体。使用四种质粒来制造构建体：含有Gag/pol序列的质粒、含有Rev序列的质粒、含有包膜蛋白的质粒(即VSV-G)、及具有包装元件的Cis质粒和含有治疗性产物的质粒。
为了制造慢病毒载体，将四种质粒共转染至细胞(即基于HEK293的细胞)中，其中除其他之外，聚乙烯亚胺或磷酸钙可用作转染剂。随后在上清液中收获慢病毒(慢病毒需要从细胞中萌芽以具有活性，因此不需要/不应该进行细胞收获)。过滤上清液(0.45μm)且随后添加氯化镁和核酸酶。进一步的下游方法可有很大的不同，其中使用TFF和柱色谱为最具GMP相容性的方法。其他方法使用具有/不具有柱色谱的超速离心。用于制造慢病毒载体的例示性方案可见于Lesch等人,2011,“Production and purification of lentiviralvector generated in 293T suspension cells with baculoviral vectors,”GeneTherapy 18:531-538及Ausubel等人,2012,“Production of CGMP-Grade LentiviralVectors,”Bioprocess Int.10(2):32-43中，其均以引用的方式整体并入本文中。
(d)基因表达的启动子和修饰子
在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含调节治疗性产物的递送或表达的组分(例如“表达控制元件”)。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含调节治疗性产物表达的组分。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含影响结合或靶向细胞的组分。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含影响摄取后编码治疗性产物的聚核苷酸在细胞内的定位的组分。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含可用作可检测或可选择标志物的组分，例如以检测或选择已摄取编码治疗性产物的聚核苷酸的细胞。
在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含一种或多种启动子。在某些实施方案中，启动子为组成型启动子。在某些实施方案中，启动子为诱导型启动子。诱导型启动子可为优选的，以便可根据治疗功效的需要打开及关闭治疗性产物的表达。此类启动子包括例如低氧诱导型启动子和药物诱导型启动子，诸如由雷帕霉素(rapamycin)及相关药剂诱导的启动子。低氧诱导型启动子包括具有HIF结合位点的启动子，参见例如
Figure BDA0003389530610000551
等人,2011,Blood 117(23):e207-e217以及Kenneth和Rocha,2008,Biochem J.414:19-29，其各自将低氧诱导型启动子的教导内容以引用的方式并入。另外，可用于构建体中的低氧诱导型启动子包括红细胞生成素启动子和N-WASP启动子(参见Tsuchiya,1993,J.Biochem.113:395有关红细胞生成素启动子的公开内容以及Salvi,2017,Biochemistry and BiophysicsReports 9:13-21有关N-WASP启动子的公开内容，其均将低氧诱导型启动子的教导内容以引用的方式并入)。或者，重组载体可含有药物诱导型启动子，例如通过施用雷帕霉素及相关类似物诱导的启动子(参见例如国际专利申请公开号WO94/18317、WO 96/20951、WO 96/41865、WO 99/10508、WO 99/10510、WO 99/36553及WO 99/41258，以及美国专利号US 7,067,526(公开雷帕霉素类似物)，其关于药物诱导型启动子的公开内容以引用的方式并入本文中)。在某些实施方案中，启动子为低氧诱导型启动子。在某些实施方案中，启动子包含低氧诱导因子(HIF)结合位点。在某些实施方案中，启动子包含HIF-1α结合位点。在某些实施方案中，启动子包含HIF-2α结合位点。在某些实施方案中，HIF结合位点包含RCGTG基序。关于HIF结合位点的位置和序列的详情，参见例如
Figure BDA0003389530610000561
等人,Blood,2011,117(23):e207-e217，其以引用的方式整体并入本文中。在某些实施方案中，启动子包含除HIF转录因子以外的低氧诱导型转录因子的结合位点。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含一个或多个在低氧中优先翻译的IRES位点。对于有关低氧诱导型基因表达及其中所涉及的因素的教导内容，参见例如Kenneth及Rocha,Biochem J.,2008,414:19-29，其以引用的方式整体并入本文中。
在某些实施方案中，启动子为CB7启动子(参见Dinculescu等人,2005,Hum GeneTher 16:649-663，其以引用的方式整体并入本文中)。在某些实施方案中，CB7启动子包括其他表达控制元件，其增强由载体驱动的治疗性产物的表达，例如(1)CAG启动子；(2)CBA启动子；(3)CMV启动子；(4)1.7kb红色视锥视蛋白启动子(PR1.7启动子)；(5)视紫质激酶(GRK1)光感受器特异性增强子-启动子(Young等人,2003,Retinal Cell Biology；44:4076-4085)；(6)hCARp启动子，其为人视锥抑制蛋白启动子；(7)hRKp，其为视紫质激酶启动子；(8)视锥光感受器特异性人抑制蛋白3(ARR3)启动子；(9)视紫质启动子；及(10)U6启动子(尤其当治疗性产物为诸如shRNA和siRNA的小RNA时)。
在某些实施方案中，其他表达控制元件包括鸡β-肌动蛋白内含子和/或兔β-球蛋白polA信号。在某些实施方案中，启动子包含TATA框。在某些实施方案中，启动子包含一个或多个元件。在某些实施方案中，一个或多个启动子元件可相对于彼此倒置或移动。在某些实施方案中，启动子的元件被定位以协同起作用。在某些实施方案中，启动子的元件被定位以独立地起作用。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含一种或多种启动子，其选自由人CMV即刻早期基因启动子、SV40早期启动子、劳斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus，RS)长末端重复序列及大鼠胰岛素启动子组成的组。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含一种或多种长末端重复序列(LTR)启动子，其选自由AAV、MLV、MMTV、SV40、RSV、HIV-1及HIV-2LTR组成的组。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含一种或多种组织特异性启动子(例如视网膜色素上皮细胞特异性启动子)。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含RPE65启动子。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含VMD2启动子。
在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含除启动子以外的一种或多种调节元件。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含增强子。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含抑制子。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含内含子或嵌合内含子。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含聚腺苷酸化序列。
(e)信号肽
在治疗性产物为治疗性蛋白质的某些实施方案中，本文提供的重组载体包含调节蛋白质递送的组分。在某些实施方案中，本文提供的重组载体包含一种或多种信号肽。信号肽在本文中亦可称为“前导序列”或“前导肽”。在某些实施方案中，信号肽允许治疗性产物在细胞中实现适当的包装(例如糖基化)。在某些实施方案中，信号肽允许治疗性产物在细胞中实现适当的定位。在某些实施方案中，信号肽允许治疗性产物实现从细胞的分泌。与本文提供的重组载体和治疗性产物结合使用的信号肽的实例可见于表1中。
表1.与本文提供的载体一起使用的信号肽。
Figure BDA0003389530610000571
(f)多顺反子讯息-IRES和F2A接头
内部核糖体进入位点。单个构建体可被工程改造以编码由可裂解接头或IRES分开的两个肽(例如抗体的重链和轻链)，使得两个肽(例如分开的重链和轻链多肽)由转导的细胞表达。在某些实施方案中，本文提供的重组载体提供多顺反子(例如双顺反子)讯息。举例来说，重组载体可包含编码两个肽(例如抗体的重链和轻链)的核苷酸序列，这两个肽由内部核糖体进入位点(IRES)元件分开(例如使用IRES元件产生双顺反子载体，参见例如Gurtu等人,1996,Biochem.Biophys.Res.Comm.229(1):295-8，其以引用的方式整体并入本文中)。IRES元件绕过核糖体扫描模型且在内部位点开始翻译。IRES在AAV中的用途描述于例如Furling等人,2001,Gene Ther 8(11):854-73中，其以引用的方式整体并入本文中。在某些实施方案中，双顺反子讯息包含在重组载体内，所述重组载体对其中聚核苷酸的大小有限制。在某些实施方案中，双顺反子讯息包含在基于AAV病毒的载体(例如基于AAV8的载体)内。
弗林蛋白酶-F2A接头。在其他实施方案中，本文提供的重组载体包含编码由诸如自裂解弗林蛋白酶/F2A(F/F2A)接头的可裂解接头分开的两个肽(例如抗体的重链和轻链)的核苷酸序列(Fang等人,2005,Nature Biotechnology 23:584-590及Fang,2007,MolTher 15:1153-9，其各自以引用的方式整体并入本文中)。
举例来说，可将弗林蛋白酶-F2A接头并入表达盒中，以分开两个肽的编码序列(例如重链和轻链编码序列)，从而得到具有以下结构的构建体：
前导序列-肽A(例如抗体的重链)-弗林蛋白酶位点-F2A位点-前导序列-肽B(例如抗体的轻链)-PolyA。
具有氨基酸序列LLNFDLLKLAGDVESNPGP(SEQ ID NO:26)的F2A位点为自加工的，导致最终G与P氨基酸残基之间的“裂解”。可使用的其他接头包括但不限于：
·T2A：(GSG)E G R G S L L T C G D V E E N P G P(SEQ ID NO:27)；
·P2A：(GSG)A T N F S L L K Q A G D V E E N P G P(SEQ ID NO:28)；
·E2A：(GSG)Q C T N Y A L L K L A G D V E S N P G P(SEQ ID NO:29)；
·F2A：(GSG)V K Q T L N F D L L K L A G D V E S N P G P(SEQ ID NO:30)。
当核糖体在开放阅读框架中遇到F2A序列时，跳过肽键，从而导致翻译终止或继续翻译下游序列(第二肽)。此自加工序列在第一肽C端的末段产生一串额外的氨基酸。然而，此类额外的氨基酸随后在弗林蛋白酶位点由宿主细胞弗林蛋白酶裂解，所述弗林蛋白酶位点紧接在F2A位点之前和第一肽的序列之后，且由羧基肽酶进一步裂解。所得第一肽可在C端包括一个、两个、三个或更多个额外氨基酸，或其可不具有此类额外氨基酸，取决于所用弗林蛋白酶接头的序列及体内裂解接头的羧肽酶(参见例如Fang等人,2005年4月17日,Nature Biotechnol.Advance Online Publication；Fang等人,2007,Molecular Therapy15(6):1153-1159；Luke,2012,Innovations in Biotechnology,Ch.8,161-186)。可使用的弗林蛋白酶接头包含一系列四个碱性氨基酸，例如RKRR、RRRR、RRKR或RKKR。一旦此接头由羧肽酶裂解，则可保留额外氨基酸，以使得额外的零个、一个、两个、三个或四个氨基酸可保留在第一肽的C端上，例如R、RR、RK、RKR、RRR、RRK、RKK、RKRR、RRRR、RRKR或RKKR。在某些实施方案中，一旦接头由羧肽酶裂解，则不保留额外氨基酸。在某些实施方案中，弗林蛋白酶接头具有序列R-X-K/R-R，使得第一肽的C端上的额外氨基酸为R、RX、RXK、RXR、RXKR或RXRR，其中X为任何氨基酸，例如丙氨酸(A)。在某些实施方案中，无额外氨基酸可保留在第一肽的C端上。
在某些实施方案中，本文所述的表达盒包含在重组载体内，所述重组载体对其中聚核苷酸的大小有限制。在某些实施方案中，表达盒包含在基于AAV病毒的载体(例如基于AAV8的载体)内。
(g)非翻译区
在治疗性产物为治疗性蛋白质的某些实施方案中，本文提供的重组载体包含一个或多个非翻译区(UTR)，例如3'和/或5'UTR。在某些实施方案中，UTR针对所需蛋白质表达量而最优化。在某些实施方案中，UTR针对编码治疗性蛋白质的mRNA的半衰期而最优化。在某些实施方案中，UTR针对编码治疗性蛋白质的mRNA的稳定性而最优化。在某些实施方案中，UTR针对编码治疗性蛋白质的MRNA的二级结构而最优化。
(h)反向末端重复序列
在某些实施方案中，本文提供的重组病毒载体包含一个或多个反向末端重复(ITR)序列。ITR序列可用于将重组治疗性产物表达盒包装至重组病毒载体的病毒粒子中。在某些实施方案中，ITR来自AAV，例如AAV8或AAV2(参见例如Yan等人,2005,J.Virol.,79(1):364-379；美国专利号7,282,199B2、美国专利号7,790,449B2、美国专利号8,318,480B2、美国专利号8,962,332B2及国际专利申请号PCT/EP2014/076466，其各自以引用的方式整体并入本文中)。
(i)治疗性产物
治疗性产物可为例如治疗性蛋白质(例如抗体)、治疗性RNA(例如shRNA、siRNA及miRNA)或治疗性适体。抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、重组产生的抗体、人抗体、人源化抗体、嵌合抗体、合成抗体、包含两个重链和两个轻链分子的四聚抗体、抗体轻链单体、抗体重链单体、抗体轻链二聚体、抗体重链二聚体、抗体轻链-重链对、胞内抗体、异缀合抗体、单价抗体、全长抗体的抗原结合片段及上述的融合蛋白。此类抗原结合片段包括但不限于单结构域抗体(重链抗体的可变结构域(VHH)或纳米抗体)、Fab、F(ab')2及scFv(单链可变片段)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，治疗性产物为：(1)抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体或适体；(2)抗hVEGF抗原结合片段；(3)抗hVEGF抗原结合片段为Fab、F(ab')2或单链可变片段(scFv)；(4)棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；(5)三肽基-肽酶1(TPP1)；(6)Battenin(CLN3)；(7)CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；(8)含主要易化子超家族结构域8(MFSD8)；(9)肌球蛋白VIIA(MYO7A)；(1)钙粘蛋白相关23(CDH23)；(11)原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；(12)Usherin(USH2A)；(13)Clarin 1(CLRN1)；(14)ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；(15)ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；抗白介素6(IL6)单克隆抗体/适体；(16)抗TNF-α(TNF)单克隆抗体或适体；(17)L视蛋白(OPN1LW)；(18)M视蛋白(OPN1MW)；(19)视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；(20)类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；(21)精子形成相关7(SPATA7)；(22)芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；(23)Lebercilin(LCA5)；(24)RPGR相互作用蛋白1(RPGRIP1)；(25)视锥-视杆同源框(CRX)；(26)Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；(27)烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；(28)中心体蛋白290(CEP290)；(29)肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；(3)视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；(31)视黄醇脱氢酶12(RDH12)；(32)卵磷脂视黄醇酰基转移酶(LRAT)；(33)短粗样蛋白1(TULP1)；(34)钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；(35)粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；(36)粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；(37)粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；(38)抗补体单克隆抗体或适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体且眼睛病状与视神经脊髓炎(NMO)相关；(39)抗IL6单克隆抗体或适体且眼睛病状与NMO相关；(40)抗补体单克隆抗体或适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(41)血管紧张素I转换酶(ACE)；(42)白介素10(IL10)；(43)抗TNF单克隆抗体；(43)Rab护航蛋白1(CHM)；(44)视网膜分裂素(RS1)；(45)巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；(46)巴德-毕德氏综合征2(BBS2)；(47)ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)；(48)巴德-毕德氏综合征4(BBS4)；(49)巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；(50)麦-考综合征(MKKS)；(51)巴德-毕德氏综合征7(BBS7)；(52)三十四肽重复结构域8(TTC8)；(53)巴德-毕德氏综合征9(BBS9)；(54)巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；(55)含三联基序32(TRIM32)；(56)巴德-毕德氏综合征12(BBS12)；(57)MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)；(58)含WD重复的平面细胞极性效应子(WDPCP)；(59)血清学定义的结肠癌抗原8(SDCCAG8)；(6)亮氨酸拉链转录因子样1(LZTFL1)；(61)BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)；(62)纤毛内转运蛋白27(IFT27)；(63)鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；(64)OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；(65)RP1轴突微管相关(RP1)；(66)ARL3 GTP酶的RP2活化因子(RP2)；(67)外周蛋白2(PRPH2)；(68)前体mRNA加工因子31(PRPF31)；(69)前体mRNA加工因子8(PRPF8)；(70)闭眼同源物(EYS)；(71)FAM161中心体蛋白A(FAM161A)；(72)核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；(73)MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；(74)磷酸二酯酶6B(PDE6B)；(75)Prominin 1(PROM1)；(76)磷酸二酯酶6A(PDE6A)；(77)光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；(78)雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；(79)纤毛内转运蛋白140(IFT140)；(80)抗膜攻击复合体(MAC)单克隆抗体；(81)HtrA丝氨酸肽酶1(HTRA1)；(82)斑萎蛋白1(BEST1)；(83)补体因子B反义寡核苷酸；(84)抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体；(85)CD59糖蛋白(CD59)；(86)光敏感通道蛋白-1(ChR1)；(87)光敏感通道蛋白-2(ChR2)；(88)抗补体因子C5a适体或单克隆抗体；(89)抗补体因子D单克隆抗体或适体；(90)DnaJ热休克蛋白家族(Hsp40)成员C3(DNAJC3)；(91)β-2肾上腺素受体siRNA；(92)半胱天冬酶-2(CASP2)；(93)胰岛素受体底物1(IRS1)；(94)HIF-1反应蛋白RTP801(RTP801)；(95)转化生长因子β2(TGFB2)；(96)脑源性神经营养因子(BDNF)；(97)睫状神经营养因子(CNTF)；(98)前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)；(99)前列腺素F受体(PTGFR)；(100)透明质酸酶；(101)色素上皮衍生因子(PEDF)；(102)血管内皮生长因子(VEGF)；(103)胎盘生长因子(PGF)；(104)肌纤蛋白(MYOC)；(105)C-C基序趋化因子受体5(CCR5)siRNA；(106)抗CD19单克隆抗体或适体；(107)Crumbs细胞极性复合体组分2(CRB2)；(108)组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)；(109)视紫质(RHO)；(110)神经生长因子(NGF)；(111)核因子红系2样2(NRF2)；(112)谷胱甘肽S-转移酶PI 1(GSTP1)；(113)视杆源性视锥活力因子(RDCVF)；(114)视黄醛结合蛋白1(RLBP1)；(115)双同源框4(DUX4)；(116)NLR家族含Pyrin结构域3(NLRP3)；(117)脾相关酪氨酸激酶(SYK)；(118)促肾上腺皮质激素(ACTH)；(119)抗CD59单克隆抗体或适体；(120)NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；(121)α-2-抗纤维蛋白溶酶(A2AP)；(122)纤维蛋白溶酶原(PLG)；(123)生长激素；(124)胰岛素样生长因子1(IGF1)；(125)白介素1β(IL1B)；(126)血管紧张素I转换酶2(ACE2)；(127)抗整合素寡肽；(128)抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体或适体；(129)抗胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)单克隆抗体或适体；(130)抗胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)单克隆抗体或适体；(131)RTP801 siRNA；(132)基质金属蛋白酶2(MMP2)RNAi；(133)G蛋白偶联受体143(GPR143)；(134)酪氨酸酶(TYR)；(135)抗含亮氨酸富集重复序列和Ig结构域的蛋白质1(LINGO1)单克隆抗体或适体；(136)色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)；(137)环核苷酸门控通道β3(CNGB3)；(138)环核苷酸门控通道α3(CNGA3)；(139)类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；(14)抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；或(140)白介素10(IL10)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，(1)眼睛病状与Batten-CLN1相关，且治疗性产物为棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；(2)眼睛病状与Batten-CLN2相关，且治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；(3)眼睛病状与Batten-CLN3相关，且治疗性产物为Battenin(CLN3)；(4)眼睛病状与Batten-CLN6相关，且治疗性产物为CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；(5)眼睛病状与Batten-CLN7相关，且治疗性产物为含主要易化子超家族结构域8(MFSD8)；(6)眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为肌球蛋白VIIA(MYO7A)；(7)眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为钙粘蛋白相关23(CDH23)；(8)眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；(9)眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为Usherin(USH2A)；(10)眼睛病状与3型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为Clarin 1(CLRN1)；(11)眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且治疗性产物为ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；(12)眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且治疗性产物为ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；(13)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗白介素6(IL6)单克隆抗体；(14)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；(15)眼睛病状与糖尿病性黄斑水肿(DME)相关，且治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；(16)眼睛病状与红绿色盲相关，且治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；(17)眼睛病状与红绿色盲相关，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(18)眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(19)眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；(20)眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；(21)眼睛病状与LCA 3相关，且治疗性产物为精子形成相关7(SPATA7)；(22)眼睛病状与莱伯先天性黑朦4(LCA 4)相关，且治疗性产物为芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；(23)眼睛病状与莱伯先天性黑朦5(LCA 5)相关，且治疗性产物为Lebercilin(LCA5)；(24)眼睛病状与莱伯先天性黑朦6(LCA 6)相关，且治疗性产物为RPGR相互作用蛋白1(RPGRIP1)；(25)眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；(26)眼睛病状与莱伯先天性黑朦8(LCA 8)相关，且治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)(也称为LCA8)；(27)眼睛病状与莱伯先天性黑朦9(LCA 9)相关，且治疗性产物为烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；(28)眼睛病状与莱伯先天性黑朦10(LCA 10)相关，且治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；(29)眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；(30)眼睛病状与莱伯先天性黑朦12(LCA 12)相关，且治疗性产物为视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；(31)眼睛病状与莱伯先天性黑朦13(LCA 13)相关，且治疗性产物为视黄醇脱氢酶12(RDH12)；(32)眼睛病状与莱伯先天性黑朦14(LCA 14)相关，且治疗性产物为卵磷脂视黄醇酰基转移酶(LRAT)；(33)眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；(34)眼睛病状与莱伯先天性黑朦16(LCA 16)相关，且治疗性产物为钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；(35)眼睛病状与莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；(36)眼睛病状与LHON相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；(37)眼睛病状与LHON相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；(38)眼睛病状与视神经脊髓炎(NMO)相关，且治疗性产物为抗补体抗体或抗补体适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(39)眼睛病状与NMO相关，且治疗性产物为抗IL6单克隆抗体或适体；(40)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(41)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为血管紧张素I转换酶(ACE)；(42)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为白介素10(IL10)；(43)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗TNF单克隆抗体；(44)眼睛病状与无脉络膜症相关，且治疗性产物为Rab护航蛋白1(CHM)；(45)眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；(46)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；(47)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征2相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征2(BBS2)；(48)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征3相关，且治疗性产物为ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)(也称为BBS3)；(49)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征4相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征4(BBS4)；(50)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征5相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；(51)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)，也称为BBS6；(52)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征7相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征7(BBS7)；(53)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征8相关，且治疗性产物为三十四肽重复结构域8(TTC8)，也称为BBS8；(54)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征9相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征9(BBS9)；(55)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；(56)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征11相关，且治疗性产物为含三联基序32(TRIM32)，也称为BBS11；(57)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征12相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征12(BBS12)；(58)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征13相关，且治疗性产物为MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)，也称为BBS13；(59)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征14相关，且治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)，也称为BBS14和LCA10；(60)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征15相关，且治疗性产物为含WD重复的平面细胞极性效应子(WDPCP)，也称为BBS15；(61)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征16相关，且治疗性产物为血清学定义的结肠癌抗原8(SDCCAG8)，也称为BBS16；(62)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征17相关，且治疗性产物为亮氨酸拉链转录因子样1(LZTFL1)，也称为BBS17；(63)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征18相关，且治疗性产物为BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)，也称为BBS18；(64)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征19相关，且治疗性产物为纤毛内转运蛋白27(IFT27)，也称为BBS19；(65)眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；(66)眼睛病状与视神经萎缩相关，且治疗性产物为OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；(67)眼睛病状与色素性视网膜炎1相关，且治疗性产物为RP1轴突微管相关(RP1)；(68)眼睛病状与色素性视网膜炎2相关，且治疗性产物为ARL3 GTP酶的RP2活化因子(RP2)；(69)眼睛病状与色素性视网膜炎7相关，且治疗性产物为外周蛋白2(PRPH2)；(70)眼睛病状与色素性视网膜炎11相关，且治疗性产物为前体mRNA加工因子31(PRPF31)；(71)眼睛病状与色素性视网膜炎12相关，且治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)，也称为LCA8；(72)眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；(73)眼睛病状与色素性视网膜炎25相关，且治疗性产物为闭眼同源物(EYS)；(74)眼睛病状与色素性视网膜炎28相关，且治疗性产物为FAM161中心体蛋白A(FAM161A)；(75)眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；(76)眼睛病状与色素性视网膜炎38相关，且治疗性产物为MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；(77)眼睛病状与色素性视网膜炎40相关，且治疗性产物为磷酸二酯酶6B(PDE6B)；(78)眼睛病状与色素性视网膜炎41相关，且治疗性产物为Prominin 1(PROM1)；(79)眼睛病状与色素性视网膜炎43相关，且治疗性产物为磷酸二酯酶6A(PDE6A)；(80)眼睛病状与色素性视网膜炎56相关，且治疗性产物为光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；(81)眼睛病状与色素性视网膜炎62相关，且治疗性产物为雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；(82)眼睛病状与色素性视网膜炎80相关，且治疗性产物为纤毛内转运蛋白140(IFT140)；(83)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(84)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为抗膜攻击复合体(MAC)治疗性产物，优选地，抗MAC治疗性产物为抗MAC单克隆抗体，其为针对攻膜复合体的人蛋白的单克隆抗体，所述人蛋白由四个补体蛋白C5b(SEQ ID NO.314-316)、C6(SEQ ID NO.317)、C7(SEQ ID NO.318)及C8(SEQ ID NO.319-321)构成；(85)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为HtrA丝氨酸肽酶1(HTRA1)；(86)眼睛病状与贝斯特氏病相关，且治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)；(87)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为补体因子B反义寡核苷酸；(88)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体；(89)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为CD59糖蛋白(CD59)；(90)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为光敏感通道蛋白-1(ChR1)，其包括ChR1的人同源物；(91)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为光敏感通道蛋白-2(ChR2)，其包括ChR2的人同源物；(92)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(93)眼睛病状与干性AMD相关，且治疗性产物为抗补体因子D治疗性产物，包括但不限于抗补体因子D单克隆抗体或抗补体因子D适体；(94)眼睛病状与年龄相关性视网膜神经节细胞(RGC)变性相关，且治疗性产物为DnaJ热休克蛋白家族(Hsp40)成员C3(DNAJC3)，也称为P58IPK；(95)眼睛病状与蓝锥细胞单色视(BCM)相关，且治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；(96)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为β-2肾上腺素受体siRNA；(97)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为半胱天冬酶-2(CASP2)；(98)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为胰岛素受体底物1(IRS1)；(99)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为HIF-1反应蛋白RTP801(RTP801)；(100)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为转化生长因子β2(TGFB2)；(101)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为脑源性神经营养因子(BDNF)；(102)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为睫状神经营养因子(CNTF)；(103)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)；(104)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为前列腺素F受体(PTGFR)(当眼睛病状与青光眼相关时，在一个特定实施方案中，包含编码PTGFR的核苷酸序列的重组病毒载体可与包含编码PTGS2的核苷酸序列的重组病毒载体组合施用人受试者；在另一特定实施方案中，可向人受试者施用包含编码PTGFR的核苷酸序列及编码PTGS2的核苷酸序列的重组病毒载体)；(105)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为透明质酸酶，例如HYAL1、HYAL2、HYAL3、HYAL4及HYAL5；(106)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为色素上皮衍生因子(PEDF)；(107)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为血管内皮生长因子(VEGF)；(108)眼睛病状与青光眼相关，且治疗性产物为胎盘生长因子(PGF)，其中PGF可与VEGF组合使用；(109)眼睛病状与青光眼(例如先天性青光眼或青少年型青光眼相关)，且治疗性产物为肌纤蛋白(MYOC)；(110)眼睛病状与NMO相关，且治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；(111)眼睛病状与NMO相关，且治疗性产物为C-C基序趋化因子受体5(CCR5)siRNA、CCR5 shRNA、siRNA或CCR5 miRNA(优选地，CCR5 miRNA)；(112)眼睛病状与NMO相关，且治疗性产物为抗CD19单克隆抗体；(113)眼睛病状与视紫质突变相关性色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为光敏感通道蛋白-1(ChR1)，其包括ChR1的人同源物；(114)眼睛病状与视紫质突变相关性色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为光敏感通道蛋白-2(ChR2)，其包括ChR2的人同源物；(115)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为睫状神经营养因子(CNTF)；(116)眼睛病状与常染色体隐性色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；(117)眼睛病状与常染色体隐性色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分2(CRB2)；(118)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)；(119)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为视紫质(RHO)；(120)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为神经生长因子(NGF)；(121)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为核因子红系2样2(NRF2)；(122)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为色素上皮衍生因子(PEDF)；(123)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为谷胱甘肽S-转移酶PI 1(GSTP1)，也称为PI；(124)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为视杆源性视锥活力因子(RDCVF)；(125)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为视紫质(RHO)；(126)眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且治疗性产物为视黄醛结合蛋白1(RLBP1)；(127)眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且治疗性产物为抗补体C5适体；(128)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为双同源框4(DUX4)；(129)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为NLR家族含Pyrin结构域3(NLRP3)；(130)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为脾相关酪氨酸激酶(SYK)；(131)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为促肾上腺皮质激素(ACTH)；(132)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为半胱天冬酶1(CASP1)；(133)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗CD59治疗性产物(诸如抗CD59治疗性蛋白质(例如抗CD59单克隆抗体)，或抗CD59治疗性RNA(例如抗CD59shRNA、抗CD59 siRNA或抗CD59miRNA)，优选抗CD59单克隆抗体)；(134)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(135)眼睛病状与角膜新血管生成相关，且治疗性产物为胰岛素受体底物1(IRS1)；(136)眼睛病状与角膜新血管生成相关，且治疗性产物为NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；(137)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；(138)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为α-2-抗纤维蛋白溶酶(A2AP)；(139)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为纤维蛋白溶酶原(PLG)；(140)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物可为生长激素；(141)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为胰岛素样生长因子1(IGF1)，其中IGF1可与生长激素组合使用；(142)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为白介素1β(IL1B)；(143)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为血管紧张素I转换酶2(ACE2)，其中ACE2可与IL1B组合使用；(144)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为IRS1；(145)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为抗整合素寡肽；(146)眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且治疗性产物为抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体；(147)眼睛病状与格雷夫斯眼病(也称为格雷夫斯眼眶病)相关，且治疗性产物为抗CD40单克隆抗体；(148)眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且治疗性产物为抗胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)单克隆抗体；(149)眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且治疗性产物为抗胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)单克隆抗体；(150)眼睛病状与DME相关，且治疗性产物为抗整合素寡肽；(151)眼睛病状与DME相关，且治疗性产物为抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体；(152)眼睛病状与DME相关，且治疗性产物为RTP801 siRNA；(153)眼睛病状与多发性硬化症(MS)相关的视力丧失相关，且治疗性产物为ND1；(154)眼睛病状与近视相关，且治疗性产物为基质金属蛋白酶2(MMP2)RNAi；(155)眼睛病状与X连锁隐性眼白化病相关，且治疗性产物为G蛋白偶联受体143(GPR143)；(156)眼睛病状与1型眼皮肤白化病相关，且治疗性产物为酪氨酸酶(TYR)；(157)眼睛病状与视神经炎相关，且治疗性产物为半胱天冬酶2(CASP2)；(158)眼睛病状与视神经炎相关，且治疗性产物为抗含亮氨酸富集重复序列和Ig结构域的蛋白质1(LINGO1)单克隆抗体；或(159)眼睛病状与息肉状脉络膜血管病变相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或抗补体适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体/适体、抗补体C1s单克隆抗体/适体、抗补体C2单克隆抗体/适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体。
在本文所述的方法的某些实施方案中，眼睛病状与X连锁色素性视网膜炎(XLRP)相关，且治疗性产物为色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)。在前述方法中的任一种的某些实施方案中，眼睛病状与全色盲(ACHM)相关，且治疗性产物为环核苷酸门控通道β3(CNGB3)。在前述方法中的任一种的某些实施方案中，眼睛病状与全色盲(例如CNGA3连锁的全色盲)相关，且治疗性产物为环核苷酸门控通道α3(CNGA3)。在前述方法中的任一种的某些实施方案中，眼睛病状与二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良相关，且治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，(1)眼睛病状与Batten-CLN1相关，且治疗性产物为棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；(2)眼睛病状与Batten-CLN2相关，且治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；(3)眼睛病状与Batten-CLN3相关，且治疗性产物为Battenin(CLN3)；(4)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗白介素6(IL6)单克隆抗体；(5)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；(6)眼睛病状与糖尿病性黄斑水肿(DME)相关，且治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；(7)眼睛病状与红绿色盲相关，且治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；(8)眼睛病状与红绿色盲相关，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(9)眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(10)眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；(11)眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；(12)眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；(13)眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；(14)眼睛病状与莱伯先天性黑朦12(LCA 12)相关，且治疗性产物为视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；(15)眼睛病状与莱伯先天性黑朦13(LCA 13)相关，且治疗性产物为视黄醇脱氢酶12(RDH12)；(16)眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA15)相关，且治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；(17)眼睛病状与莱伯先天性黑朦16(LCA16)相关，且治疗性产物为钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；(18)眼睛病状与莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；(19)眼睛病状与LHON相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；(20)眼睛病状与LHON相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；(21)眼睛病状与视神经脊髓炎(NMO)相关，且治疗性产物为抗补体单克隆抗体或抗补体适体，其中所述抗补体单克隆抗体或适体为抗补体C1单克隆抗体或适体、抗补体C1q单克隆抗体或适体、抗补体C1s单克隆抗体或适体、抗补体C2单克隆抗体或适体、抗补体C2a单克隆抗体或适体、抗补体C2b单克隆抗体或适体、抗补体C3单克隆抗体或适体、抗补体C3a单克隆抗体或适体、抗补体C3b单克隆抗体或适体、抗补体C4单克隆抗体或适体、抗补体C4a单克隆抗体或适体、抗补体C4b单克隆抗体或适体、抗补体C5单克隆抗体或适体、抗补体C5a单克隆抗体或适体、抗补体C5b单克隆抗体或适体、抗补体C6单克隆抗体或适体、抗补体C7单克隆抗体或适体、抗补体C8单克隆抗体或适体或抗补体C9单克隆抗体或适体，或优选抗补体C5抗体；(22)眼睛病状与NMO相关，且治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；(23)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；(24)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为血管紧张素I转换酶(ACE)；(25)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为白介素10(IL10)；(26)眼睛病状与葡萄膜炎相关，且治疗性产物为抗TNF单克隆抗体；(27)眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；(28)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；(29)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征3相关，且治疗性产物为ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)；(30)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征5相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；(31)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；(32)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；(33)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征11相关，且治疗性产物为含三联基序32(TRIM32)；(34)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征13相关，且治疗性产物为MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)；(35)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征18相关，且治疗性产物为BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)；(36)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征19相关，且治疗性产物为纤毛内转运蛋白27(IFT27)；(37)眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；(38)眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；(39)眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；或(40)眼睛病状与贝斯特氏病相关，且治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，眼睛病状与二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良相关，且治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，(1)眼睛病状与Batten-CLN2相关，且治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；(2)眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为肌球蛋白VIIA(MYO7A)；(3)眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为钙粘蛋白相关23(CDH23)；(4)眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；(5)眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为Usherin(USH2A)；(6)眼睛病状与3型亚瑟氏症相关，且治疗性产物为Clarin 1(CLRN1)；(7)眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且治疗性产物为ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；(8)眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且治疗性产物为ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；(9)眼睛病状与红绿色盲相关，且治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；(10)眼睛病状与红绿色盲相关，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(11)眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；(12)眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；(13)眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；(14)眼睛病状与莱伯先天性黑朦4(LCA 4)相关，且治疗性产物为芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；(15)眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；(16)眼睛病状与莱伯先天性黑朦8(LCA 8)相关，且治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；(17)眼睛病状与莱伯先天性黑朦9(LCA 9)相关，且治疗性产物为烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；(18)眼睛病状与莱伯先天性黑朦10(LCA 10)相关，且治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；(19)眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；(20)眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA15)相关，且治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；(21)眼睛病状与LHON相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；(22)眼睛病状与LHON相关，且治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；(23)眼睛病状与无脉络膜症相关，且治疗性产物为Rab护航蛋白1(CHM)；(24)眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；(25)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；(26)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；(27)眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；(28)眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；(29)眼睛病状与视神经萎缩相关，且治疗性产物为OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；(30)眼睛病状与色素性视网膜炎1相关，且治疗性产物为RP1轴突微管相关(RP1)；(31)眼睛病状与色素性视网膜炎2相关，且治疗性产物为ARL3 GTP酶的RP2活化因子(RP2)；(32)眼睛病状与色素性视网膜炎7相关，且治疗性产物为外周蛋白2(PRPH2)；(33)眼睛病状与色素性视网膜炎11相关，且治疗性产物为前体mRNA加工因子31(PRPF31)；(34)眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；(35)眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；(36)眼睛病状与色素性视网膜炎38相关，且治疗性产物为MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；(37)眼睛病状与色素性视网膜炎40相关，且治疗性产物为磷酸二酯酶6B(PDE6B)；(38)眼睛病状与色素性视网膜炎41相关，且治疗性产物为Prominin 1(PROM1)；(39)眼睛病状与色素性视网膜炎56相关，且治疗性产物为光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；(40)眼睛病状与色素性视网膜炎62相关，且治疗性产物为雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；(41)眼睛病状与色素性视网膜炎80相关，且治疗性产物为纤毛内转运蛋白140(IFT140)；或(42)眼睛病状与贝斯特氏病相关，且治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，眼睛病状与X连锁色素性视网膜炎(XLRP)相关，且治疗性产物为色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)。在前述方法中的任一种的某些实施方案中，眼睛病状与全色盲相关，且治疗性产物为环核苷酸门控通道β3(CNGB3)；或与全色盲(例如CNGA3连锁的全色盲)相关，且治疗性产物为环核苷酸门控通道α3(CNGA3)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，治疗性产物为蛋白质，或治疗性产物为针对蛋白质的抗体，所述蛋白质与选自部分7中提供的SEQ ID NO:52-321的氨基酸序列具有至少70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。在本文所述的方法的一特定实施方案中，治疗性产物为蛋白质，或治疗性产物为针对蛋白质的抗体，所述蛋白质与选自部分7中提供的SEQ ID NO:52-321的氨基酸序列具有100％的序列同一性。
(j)构建体
在本文所述的方法的某些实施方案中，本文提供的重组载体按以下顺序包含以下元件：a)组成型或低氧诱导型启动子序列，和b)编码治疗性产物的序列。在某些实施方案中，编码治疗性产物的序列包含由IRES元件分隔的多个ORF。在某些实施方案中，编码治疗性产物的序列在一个由F/F2A序列分隔的ORF中包含多个亚基。
在本文所述的方法的某些实施方案中，本文提供的重组载体按以下顺序包含以下元件：a)第一ITR序列，b)第一接头序列，c)组成型或低氧诱导型启动子序列，d)第二接头序列，e)内含子序列，f)第三接头序列，g)第一UTR序列，h)编码治疗性产物的序列，i)第二UTR序列，j)第四接头序列，k)poly A序列，l)第五接头序列，及m)第二ITR序列。
(k)载体的制造和测试
本文提供的重组载体(例如重组病毒载体)可使用宿主细胞制造。本文提供的重组载体可使用哺乳动物宿主细胞制造，例如A549、WEHI、10T1/2、BHK、MDCK、COS1、COS7、BSC 1、BSC 40、BMT 10、VERO、W138、HeLa、293、Saos、C2C12、L、HT1080、HepG2、原代纤维母细胞、肝细胞及成肌细胞。本文提供的重组载体可使用来自人、猴、小鼠、大鼠、兔或仓鼠的宿主细胞来制造。
对于重组病毒载体，宿主细胞被编码治疗性产物的序列及相关元件(即载体基因组)和在宿主细胞中产生病毒的手段，例如复制和衣壳基因(例如AAV的rep和cap基因)稳定转化。关于产生具有AAV8衣壳的重组AAV载体的方法，参见美国专利号7,282,199B2的详细描述的部分IV，其以引用的方式整体并入本文中。所述载体的基因组拷贝滴度可例如通过
Figure BDA0003389530610000691
分析来确定。病毒粒子可例如通过CsCl2沈降来回收。
体外测定，例如细胞培养测定，可用于测量自本文所述的载体的治疗性产物表达，由此指示例如载体的效力。举例来说，
Figure BDA0003389530610000701
细胞系(Lonza)，一种来源于人胚胎视网膜细胞或视网膜色素上皮细胞的细胞系，例如视网膜色素上皮细胞系hTERT RPE-1(可从
Figure BDA0003389530610000702
获得)，可用于评定治疗性产物表达。一旦表达，则可确定所表达的治疗性产物的特征，包括确定翻译后修饰模式。另外，可使用本领域中已知的测定来确定由细胞表达的治疗性产物的翻译后修饰产生的益处。
(l)组合物
描述了包含编码本文所述的治疗性产物的重组载体和适合的载剂的组合物。本领域技术人员将容易地选择适合的载剂(例如用于脉络膜上、视网膜下、巩膜旁、玻璃体内、结膜下和/或视网膜内施用)。
6.1.3基因疗法
描述了向患有眼睛病状的人受试者施用治疗有效量的重组载体(即重组病毒载体或DNA表达构建体)的方法。具体来说，描述了经由以下方法中的一种向人受试者施用治疗有效量的重组载体(即重组病毒载体或DNA表达构建体)的方法：(1)无需玻璃体切除术的视网膜下施用(例如经由脉络膜上腔或经由外周注射施用视网膜下腔)，(2)脉络膜上施用，(3)向巩膜的外空间施用(即巩膜旁施用)；(4)伴随玻璃体切除术的视网膜下施用；(5)玻璃体内施用及(6)结膜下施用。
在某些实施方案中，可使用国际公开号WO 2016/042162、WO 2017/046358、WO2017/158365及WO 2017/158366中所描述和公开的方法和/或装置来进行向视网膜下腔或脉络膜上腔的递送，这些公开各自以引用的方式整体并入本文中。
(a)目标患者群体
在本文所述的方法的某些实施方案中，本文提供的方法是用于向患有眼睛病状的患者施用，所述眼睛病状与以下相关：(1)新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)；(2)干性年龄相关性黄斑变性(干性AMD)；(3)视网膜静脉栓塞(RVO)糖尿病性黄斑水肿(DME)；(4)糖尿病性视网膜病变(DR)；(5)Batten-CLN1；(6)Batten-CLN2；(7)Batten-CLN3；(8)Batten-CLN6；(8)Batten-CLN7；(9)1型亚瑟氏症；(10)2型亚瑟氏症；(11)3型亚瑟氏症；(12)斯塔加特氏病；(13)葡萄膜炎；(14)红绿色盲；(15)蓝锥细胞单色视；(16)莱伯先天性黑朦1(LCA1)；(17)莱伯先天性黑朦2(LCA 2)；(18)莱伯先天性黑朦3(LCA 3)；(19)莱伯先天性黑朦4(LCA 4)；(20)莱伯先天性黑朦5(LCA 5)；(21)莱伯先天性黑朦6(LCA 6)；(22)莱伯先天性黑朦7(LCA 7)；(23)莱伯先天性黑朦8(LCA8)；(24)莱伯先天性黑朦9(LCA 9)；(25)莱伯先天性黑朦10(LCA 10)；(26)莱伯先天性黑朦11(LCA 11)；(27)莱伯先天性黑朦12(LCA 12)；(28)莱伯先天性黑朦13(LCA 13)；(29)莱伯先天性黑朦14(LCA 14)；(30)莱伯先天性黑朦15(LCA 15)；(30)莱伯先天性黑朦16(LCA 16)；(31)莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)；(31)视神经脊髓炎(NMO)；(32)无脉络膜症；(33)X连锁视网膜劈裂症(XLRS)；(34)巴德-毕德氏综合征1；(35)巴德-毕德氏综合征2；(36)巴德-毕德氏综合征3；(37)巴德-毕德氏综合征4；(38)巴德-毕德氏综合征5；(39)巴德-毕德氏综合征6；(40)巴德-毕德氏综合征7；(41)巴德-毕德氏综合征8；(42)巴德-毕德氏综合征9；(43)巴德-毕德氏综合征10；(44)巴德-毕德氏综合征11；(45)巴德-毕德氏综合征12；(46)巴德-毕德氏综合征13；(47)巴德-毕德氏综合征14；(48)巴德-毕德氏综合征15；(49)巴德-毕德氏综合征16；(50)巴德-毕德氏综合征17；(51)巴德-毕德氏综合征18；(52)巴德-毕德氏综合征19；(53)视锥细胞营养不良；(54)视神经萎缩；(55)色素性视网膜炎1；(56)色素性视网膜炎2；(57)色素性视网膜炎7；(58)色素性视网膜炎11；(58)色素性视网膜炎12；(59)色素性视网膜炎13；(60)色素性视网膜炎25；(61)色素性视网膜炎28；(62)色素性视网膜炎37；(63)色素性视网膜炎38；(64)色素性视网膜炎40；(65)色素性视网膜炎41；(66)色素性视网膜炎43；(67)色素性视网膜炎56；(68)色素性视网膜炎62；(69)色素性视网膜炎80；(70)年龄相关性视网膜神经节细胞(RGC)变性；(71)贝斯特氏病；(72)青光眼；(73)视紫质突变相关性色素性视网膜炎；(74)色素性视网膜炎；(75)常染色体隐性色素性视网膜炎；(76)角膜新血管生成；(77)糖尿病性视网膜病变；(78)格雷夫斯眼病；(79)多发性硬化症(MS)相关的视力丧失；(80)近视；(81)X连锁隐性眼白化病；(82)1型眼皮肤白化病；(83)视神经炎；(84)息肉状脉络膜血管病变；(85)X连锁色素性视网膜炎(XLRP)；(86)全色盲(ACHM)；或(87)二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良。
在本文所述的方法的某些实施方案中，人受试者的BCVA≤20/20且≥20/400。在另一特定实施方案中，人受试者的BCVA≤20/63且≥20/400。在某些实施方案中，根据本文所述的方法治疗的受试者为女性。在某些实施方案中，根据本文所述的方法治疗的受试者为男性。在某些实施方案中，根据本文所述的方法治疗的受试者为儿童。在某些实施方案中，根据本文所述的方法治疗的受试者为1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁。在某些实施方案中，根据本文所述的方法治疗的受试者小于1.5个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或小于5岁。在另一特定实施方案中，根据本文所述的方法治疗的受试者为1-2个月、2-3个月、3-4个月、4-5个月、5-6个月、6-7个月、7-8个月、8-9个月、9-10个月、10-11个月、11个月至1岁、1-1.5岁、1.5-2岁、2-2.5岁、2.5-3岁、3-3.5岁、3.5-4岁、4-4.5岁或4.5-5岁。在另一特定实施方案中，根据本文所述的方法治疗的受试者为6个月至5岁。
(b)施用剂量和模式
在本文所述的方法的某些实施方案中，将治疗有效剂量的重组载体施用(1)至无需玻璃体切除术的视网膜下腔(例如经由脉络膜上腔或经由外周注射)，(2)至脉络膜上腔，(3)至巩膜的外空间(即巩膜旁施用)，(4)经由玻璃体切除术至视网膜下腔，或(5)至玻璃体腔，体积范围介于50-100μl或100-500μl，优选100-300μl且最优选250μl，取决于施用方法。在某些实施方案中，治疗有效剂量的重组载体以100μl或更小的体积，例如以50-100μl的体积脉络膜上施用。在某些实施方案中，将治疗有效剂量的重组载体以500μl或更小的体积，例如以10-20μl、20-50μl、50-100μl、100-200μl、200-300μl、300-400μl或400-500μl的体积施用于巩膜的外表面(例如通过后部巩膜旁储槽程序)。在某些实施方案中，治疗有效剂量的重组载体经由外周注射以50-100μl或100-500μl，优选100-300μl且最优选250μl的体积施用于视网膜下腔。
在某些实施方案中，本文描述了一种微量注射器递送系统，其由Altaviz制造(参见图7A和图7B)(参见例如国际专利申请公开号WO 2013/177215、美国专利申请公开号2019/0175825及美国专利申请公开号2019/0167906)，可用于本文关于眼睛施用所述的任何施用途径。微量注射器递送系统可包括一个气动模块，提供强大的力量递送和提高的精度，如美国专利申请公开号2019/0175825和美国专利申请公开号2019/0167906中所述。另外，微量注射器递送系统可包括一个用于提供一致剂量率的液压驱动器，和一个用于控制气动模块的低力启动杆，进而控制流体递送。
在某些实施方案中，微量注射器递送系统可用于微量注射器，其为具有剂量指导的微量注射器，且可与例如脉络膜上针头(例如
Figure BDA0003389530610000721
针头)、视网膜下针头、玻璃体内针头、巩膜旁针头、结膜下针头和/或视网膜内针头一起使用。使用微量注射器的益处包括：(a)更受控制的递送(例如归因于具有精确注射流动速率控制和剂量指导)，(b)单名外科医生、单手、单指操作；(c)10μL增量剂量的气动驱动；(d)与玻璃体切除机分离；(e)400μL注射器剂量；(f)数字引导的递送；(g)数字记录的递送；及(h)不可知的尖端(例如MedOne 38g针头和Dorc 41g针头可用于视网膜下递送，而
Figure BDA0003389530610000722
针头和Visionisti OY适配器可用于视网膜下递送)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，重组载体是脉络膜上施用的(例如通过脉络膜上注射)。在一个特定实施方案中，使用脉络膜上药物递送装置进行脉络膜上施用(例如注射到脉络膜上腔中)。脉络膜上药物递送装置通常用于脉络膜上施用程序，其涉及将药物施用于眼睛的脉络膜上腔(参见例如Hariprasad,2016,Retinal Physician 13:20-23；Goldstein,2014,Retina Today 9(5):82-87；Baldassarre等人,2017；其各自以引用的方式整体并入本文中)。根据本文所述的本发明，可用于将重组载体沉积于脉络膜上腔中的脉络膜上药物递送装置包括但不限于由
Figure BDA0003389530610000723
Biomedical,Inc.制造的脉络膜上药物递送装置(参见例如Hariprasad,2016,Retinal Physician 13:20-23)和MedOne脉络膜上导管。在另一个实施方案中，可根据本文所述的方法使用的脉络膜上药物递送装置包含由Altaviz制造的微量注射器递送系统。(参见图7A和图7B)(参见例如国际专利申请公开号WO2013/177215、美国专利申请公开号2019/0175825及美国专利申请公开号2019/0167906)，可用于本文关于眼睛施用所述的任何施用途径。微量注射器递送系统可包括一个气动模块，提供强大的力量递送和提高的精度，如美国专利申请公开号2019/0175825和美国专利申请公开号2019/0167906中所述。另外，微量注射器递送系统可包括一个用于提供一致剂量率的液压驱动器，和一个用于控制气动模块的低力启动杆，进而控制流体递送。
微量注射器为具有剂量指导的微量注射器，且可与例如脉络膜上针头(例如
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针头)或视网膜下针头一起使用。使用微量注射器的益处包括：(a)更受控制的递送(例如归因于具有精确注射流动速率控制和剂量指导)，(b)单名外科医生、单手、单指操作；(c)10μL增量剂量的气动驱动；(d)与玻璃体切除机分离；(e)400μL注射器剂量；(f)数字引导的递送；(g)数字记录的递送；及(h)不可知的尖端(例如MedOne 38g针头和Dorc 41g针头可用于视网膜下递送，而
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针头和Visionisti OY适配器可用于脉络膜上递送)。在另一个实施方案中，可根据本文所述的方法使用的脉络膜上药物递送装置为包含正常长度的皮下注射针与由Visionisti OY制造的适配器(且优选还具有导针器)的工具，所述适配器通过控制自适配器露出的针尖的长度将正常长度的皮下注射针插入脉络膜上针头中(参见图8)(参见例如美国设计专利号D878,575；和国际专利申请公开号WO/2016/083669)。在一个特定实施方案中，脉络膜上药物递送装置为具有1毫米30规格针头的注射器(参见图1)。在使用此装置进行注射的过程中，针头刺入巩膜的基底且含有药物的流体进入脉络膜上腔，导致脉络膜上腔膨胀。因此，在注射过程中存在触觉和视觉反馈。在注射后，流体向后部流动且主要在脉络膜及视网膜中吸收。此举致使自所有视网膜细胞层及脉络膜细胞产生治疗性产物。使用此类型的装置和手术允许进行快速简便的门诊手术且降低并发症的风险。可将100μl的最大体积注射到脉络膜上腔中。
在本文所述的方法的某些实施方案中，重组载体是经由玻璃体切除术进行视网膜下施用。经由玻璃体切除术进行视网膜下施用为由经过训练的视网膜医师执行的外科手术，其涉及在局部麻醉下对受试者进行玻璃体切除术，且将基因疗法视网膜下注射到视网膜中(参见例如Campochiaro等人,2017,Hum Gen Ther 28(1):99-111，其以引用的方式整体并入本文中)。
在本文所述的方法的某些实施方案中，重组载体无需玻璃体切除术进行视网膜下施用。
在本文所述的方法的某些实施方案中，无需玻璃体切除术的视网膜下施用是通过使用视网膜下药物递送装置经由脉络膜上腔进行。在某些实施方案中，视网膜下药物递送装置为导管，所述导管在外科手术过程中插入并穿过脉络膜上腔到眼睛后部，以将药物递送至视网膜下腔(参见图2)。此手术使玻璃体保持完整，因此存在较小的并发症风险(基因疗法外溢及诸如视网膜脱离和黄斑裂孔的并发症的风险较小)，且无需玻璃体切除术，所产生的泡可更加扩散，从而使更多的视网膜表面区域以较小的体积转导。此手术后诱发白内障的风险降至最低，其为较年轻的患者所期望的。此外，此手术与标准经玻璃体方法相比可更安全地在中央凹下递送泡，其为患有遗传性视网膜疾病且影响中心视觉的患者所期望的，其中用于转导的靶细胞在黄斑中。此手术对于在全身循环中存在针对AAV的中和抗体(Nab)且可影响其他递送途径(诸如脉络膜上及玻璃体内)的患者也是有利的。另外，与标准经玻璃体方法相比，此方法已显示产生泡，较少自视网膜切开术部位溢出。最初由JanssenPharmaceuticals,Inc.制造，现在由Orbit Biomedical Inc.制造的视网膜下药物递送装置(参见例如Subretinal Delivery of Cells via the Suprachoroidal Space:JanssenTrial.In:Schwartz等人(编)Cellular Therapies for Retinal Disease,Springer,Cham；国际专利申请公开号WO 2016/040635 A1)可用于此类目的。
在另一特定实施方案中，无需玻璃体切除术的视网膜下施用是经由向视网膜的外周注射(即位于眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周，参见图3)来进行。这可通过经玻璃体注射来实现。
在一个实施方案中，将尖锐的针头经由眼睛的上侧或下侧(例如在2点钟或10点钟位置)插入巩膜中，使得针头完全穿过玻璃体以注射到另一侧视网膜中。在另一个实施方案中，将套管针插入巩膜中以允许将视网膜下套管插入眼睛。套管经由套管针插入且穿过玻璃体到达所要注射的区域。在任一实施方案中，重组载体在视网膜下腔中注射，在眼睛的相对内表面上形成含有重组载体的泡。半圆形视网膜脱离/视网膜泡的出现证实注射成功。
自发光镜头可用作经玻璃体施用的光源(参见例如Chalam等人,2004,OphthalmicSurgery and Lasers 35:76-77，其以引用的方式整体并入本文中)。或者，如果需要，可置放一个或多个套管针进行光照(或输注)。在另一个实施方案中，可经由套管针利用光纤吊灯以使视网膜下注射可视化。
可进行一次、两次或更多次外周注射以施用重组载体。以此方式，可在视神经盘、中央凹及黄斑外周的视网膜下腔中获得一个、两个或更多个含有重组载体的泡。出人意料的是，尽管重组载体的施用仅限于外周注射的泡，但当使用此方法时可检测到整个视网膜中治疗性产物的表达。
在一个特定实施方案中，玻璃体内施用是通过玻璃体内药物递送装置来进行，所述装置包含由Altaviz制造的微量注射器递送系统。(参见图7A和图7B)(参见例如国际专利申请公开号WO 2013/177215、美国专利申请公开号2019/0175825及美国专利申请公开号2019/0167906)，可用于本文关于眼睛施用所述的任何施用途径。微量注射器递送系统可包括一个气动模块，提供强大的力量递送和提高的精度，如美国专利申请公开号2019/0175825和美国专利申请公开号2019/0167906中所述。另外，微量注射器递送系统可包括一个用于提供一致剂量率的液压驱动器，和一个用于控制气动模块的低力启动杆，进而控制流体递送。微量注射器为具有剂量指导的微量注射器，且可与例如玻璃体内针头一起使用。使用微量注射器的益处包括：(a)更受控制的递送(例如归因于具有精确注射流动速率控制和剂量指导)，(b)单名外科医生、单手、单指操作；(c)10μL增量剂量的气动驱动；(d)与玻璃体切除机分离；(e)400μL注射器剂量；(f)数字引导的递送；(g)数字记录的递送；及(h)不可知的尖端(例如MedOne 38g针头和Dorc 41g针头可用于视网膜下递送，而
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针头和Visionisti OY适配器可用于视网膜下递送)。
在某些实施方案中，外周注射使得治疗性产物在整个眼睛中均匀表达(例如与眼睛其他区域的表达量相比，注射部位的表达量变化小于5％、10％、20％、30％、40％或50％)。治疗性产物在整个眼睛中的表达可通过本领域中已知用于此类目的的任何方法测量，例如通过眼睛或视网膜的整体封装标本免疫荧光染色，或通过对冷冻眼部切片的免疫荧光染色。
在经玻璃体注射导致重组载体在玻璃体中而非在视网膜下腔中丢失的情况下，可进行任选使用的玻璃体切除术以移除注射到玻璃体中的重组载体。可随后进行通过玻璃体切除术的视网膜下注射，以将250μl重组载体递送至视网膜下腔。或者，如果一些注射的重组载体沉积至玻璃体中且不进行玻璃体切除术以自玻璃体移除重组载体，则可将衬有固定化(例如共价结合)的抗AAV抗体(例如抗AAV8抗体)的导管插入玻璃体中以捕捉且从玻璃体移除过量重组载体。
在一个特定实施方案中，视网膜下施用是通过视网膜下药物递送装置来进行，所述装置包含由Altaviz制造的微量注射器递送系统。(参见图7A和图7B)(参见例如国际专利申请公开号WO 2013/177215、美国专利申请公开号2019/0175825及美国专利申请公开号2019/0167906)，可用于本文关于眼睛施用所述的任何施用途径。微量注射器递送系统可包括一个气动模块，提供强大的力量递送和提高的精度，如美国专利申请公开号2019/0175825和美国专利申请公开号2019/0167906中所述。另外，微量注射器递送系统可包括一个用于提供一致剂量率的液压驱动器，和一个用于控制气动模块的低力启动杆，进而控制流体递送。微量注射器为具有剂量指导的微量注射器，且可与例如视网膜下针头一起使用。使用微量注射器的益处包括：(a)更受控制的递送(例如归因于具有精确注射流动速率控制和剂量指导)，(b)单名外科医生、单手、单指操作；(c)10μL增量剂量的气动驱动；(d)与玻璃体切除机分离；(e)400μL注射器剂量；(f)数字引导的递送；(g)数字记录的递送；及(h)不可知的尖端(例如MedOne 38g针头和Dorc 41g针头可用于视网膜下递送，而
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针头和Visionisti OY适配器可用于脉络膜上递送)。
在某些实施方案中，将重组载体施用于巩膜外表面(例如通过使用包括套管的巩膜旁药物递送装置，所述套管的尖端可插入并保持与巩膜表面直接并置)。在一个特定实施方案中，施用于巩膜外表面是使用后部巩膜旁储槽程序来进行，其涉及将药物吸入钝头弯曲的套管中且随后与巩膜外表面直接接触进行递送而不刺穿眼球。具体来说，在对裸露的巩膜形成小切口之后，插入套管尖端(参见图4A)。插入套管轴的弯曲部分，保持套管尖端直接并置于巩膜表面(参见图4B-图4D)。完整插入套管后(图4D)，缓慢地注射药物，同时用无菌棉花拭子沿着套管轴的顶部和侧面维持适度的压力。此递送方法避免眼内感染和视网膜脱离的风险，副作用通常与将治疗剂直接注射到眼睛中相关。
在一个特定实施方案中，巩膜旁施用是通过巩膜旁药物递送装置来进行，所述装置包含由Altaviz制造的微量注射器递送系统。(参见图7A和图7B)(参见例如国际专利申请公开号WO 2013/177215、美国专利申请公开号2019/0175825及美国专利申请公开号2019/0167906)，可用于本文关于眼睛施用所述的任何施用途径。微量注射器递送系统可包括一个气动模块，提供强大的力量递送和提高的精度，如美国专利申请公开号2019/0175825和美国专利申请公开号2019/0167906中所述。另外，微量注射器递送系统可包括一个用于提供一致剂量率的液压驱动器，和一个用于控制气动模块的低力启动杆，进而控制流体递送。微量注射器为具有剂量指导的微量注射器，且可与例如巩膜旁针头一起使用。使用微量注射器的益处包括：(a)更受控制的递送(例如归因于具有精确注射流动速率控制和剂量指导)，(b)单名外科医生、单手、单指操作；(c)10μL增量剂量的气动驱动；(d)与玻璃体切除机分离；(e)400μL注射器剂量；(f)数字引导的递送；(g)数字记录的递送；及(h)不可知的尖端。
在某些实施方案中，在施用比体温低的溶液之后，可使用红外热像仪来检测眼表面的热分布变化，以检测眼表面的热分布变化，从而使溶液例如在SCS内的扩散可视化，且可潜在地确定施用是否成功完成。这是因为在某些实施方案中，含有待施用的重组载体的制剂最初为冷冻的，将其拿到室温(68-72℉)，且在施用之前短时间解冻(例如至少30分钟)，且因此在注射时，制剂比人眼温度(约92℉)低(且有时甚至比室温低)。药品通常在解冻4小时内使用，且最暖的溶液应为室温。在一个优选实施方案中，手术用红外视频来录制。
红外热像仪可检测温度的微小变化。其经由镜头捕捉红外能量且将所述转换为电子信号。红外光聚焦于红外线传感器阵列上，其将能量转换为热影像。红外热像仪可用于任何向眼睛施用的方法，包括本文所述的任何施用途径，例如脉络膜上施用、视网膜下施用、结膜下施用、玻璃体内施用或使用慢速输注导管施用于脉络膜上腔。在一个特定实施方案中，红外热像仪为FLIR T530红外热像仪。FLIR T530红外热像仪可捕捉微小的温度差，精度为±3.6℉。相机的红外分辨率为76,800像素。相机还利用24°镜头捕捉较小的视野。较小的视野与高红外分辨率组合有助于操作员成像的热分布更详细。然而，可使用具有不同的捕捉微小温度变化的能力和精度，具有不同红外分辨率和/或具有不同度数镜头的其他红外相机。
在一个特定实施方案中，红外热像仪为FLIR T420红外热像仪。在一个特定实施方案中，红外热像仪为FLIR T440红外热像仪。在一个特定实施方案中，红外热像仪为FlukeTi400红外热像仪。在一个特定实施方案中，红外热像仪为FLIRE60红外热像仪。在一个特定实施方案中，红外热像仪的红外分辨率等于或大于75,000像素。在一个特定实施方案中，红外热像仪的热敏性在30℃下等于或小于0.05℃。在一个特定实施方案中，红外热像仪的视场(FOV)等于或低于25°×25°。
在某些实施方案中，滤铁器与红外热像仪一起使用以检测眼表面热分布的变化。在一个优选实施方案中，使用滤铁器能够产生伪彩色图像，其中最暖或高温部分着色为白色，中间温度为红色和黄色，且最冷或低温部分为黑色。在某些实施方案中，其他类型的滤器也可用于生成热分布的伪彩色图像。
每种施用方法的热分布可不同。举例来说，在一个实施方案中，成功的脉络膜上注射的特征可在于：(a)深色的缓慢、广泛的径向扩散，(b)开始时颜色很深，及(c)注射液逐渐变为较浅的颜色，即由较浅的颜色标示的温度梯度。在一个实施方案中，不成功的脉络膜上注射的特征可在于：(a)深色没有扩散，及(b)注射部位局部颜色发生轻微变化，没有任何分布。在某些实施方案中，小的局部温度下降是由套管(低温)接触眼组织(高温)引起。在一个实施方案中，成功的玻璃体内注射的特征可在于：(a)深色没有扩散，(b)注射部位局部最初变为非常深的颜色，及(c)整个眼球逐渐均匀地变为较深的颜色。在一个实施方案中，眼外排的特征可在于：(a)眼睛外表面外部的快速流动流，(b)开始时颜色很深，及(c)快速变为较浅的颜色。
因为治疗性产物为连续产生的(在组成型启动子的控制下或在使用低氧诱导型启动子时由低氧条件诱导)，所以维持较低的浓度可为有效的。玻璃体液浓度可直接在从玻璃体液或前房收集的患者流体样品中测量，或通过测量患者的治疗性产物血清浓度来估计和/或监测——全身与玻璃体暴露于治疗性产物的比率为约1:90,000。(例如参见Xu L等人,2013,Invest.Opthal.Vis.Sci.54:1616-1624,第1621页和第1623页的表5中报告的兰尼单抗的玻璃体液和血清浓度，其以引用的方式整体并入本文中)。
在某些实施方案中，剂量是通过每毫升基因组拷贝或施用患者眼睛(例如脉络膜上、视网膜下、玻璃体内、巩膜旁、结膜下和/或视网膜内施用的基因组拷贝数来量度。在某些实施方案中，施用每毫升1×109个基因组拷贝至每毫升1×1015个基因组拷贝。在一个特定实施方案中，施用每毫升1×109个基因组拷贝至每毫升1×1010个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升1×1010个基因组拷贝至每毫升1×1011个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用1×1010至5×1011个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升1×1011个基因组拷贝至每毫升1×1012个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升1×1012个基因组拷贝至每毫升1×1013个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升1×1013个基因组拷贝至每毫升1×1014个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升1×1014个基因组拷贝至每毫升1×1015个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约1×109个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约1×1010个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约1×1011个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约1×1012个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约1×1013个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约1×1014个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约1×1015个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用1×109至1×1015个基因组拷贝。在一个特定实施方案中，施用1×109至1×1010个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用1×1010至1×1011个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用1×1010至5×1011个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用1×1011至1×1012个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用1×1012至1×1013个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用1×1013至1×1014个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用1×1013至1×1014个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用1×1014至1×1015个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用约1×109个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用约1×1010个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用约1×1011个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用约1×1012个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用约1×1013个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用约1×1014个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用约1×1015个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛约3.0×1013个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛多达3.0×1013个基因组拷贝。
在某些实施方案中，施用每只眼睛约6.0×1010个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛约1.6×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛约5.0×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛约3×1012个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛每毫升约1.0×1012个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛每毫升约2.5×1012个基因组拷贝。
在某些实施方案中，通过视网膜下注射施用每只眼睛约6.0×1010个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过视网膜下注射施用每只眼睛约1.6×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过视网膜下注射施用每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过视网膜下注射施用每只眼睛约3.0×1013个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过视网膜下注射施用每只眼睛多达3.0×1013个基因组拷贝。
在某些实施方案中，通过脉络膜上注射施用每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过脉络膜上注射施用每只眼睛约5.0×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过脉络膜上注射施用每只眼睛约3×1012个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过单次脉络膜上注射施用每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过两次脉络膜上注射施用每只眼睛约5.0×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过脉络膜上注射施用每只眼睛约3.0×1013个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过脉络膜上注射施用每只眼睛多达3.0×1013个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过单次脉络膜上注射以100μl的体积施用每只眼睛每毫升约2.5×1012个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过两次脉络膜上注射施用每只眼睛每毫升约2.5×1012个基因组拷贝，其中每次注射的体积为100μl。
如本文所用且除非另外规定，否则术语“约”意谓在既定值或范围的±10％内。在某些实施方案中，术语“约”涵盖所列举的确切数字。
(c)取样及监测功效
在某些实施方案中，当人受试者在CNS和眼睛中均具有疾病表现时(例如当人受试者患有巴藤病时)，本文提供的方法包括经由中枢神经系统(CNS)递送途径和眼部递送途径(例如本文所述的眼部递送途径)向人受试者施用本文所述的重组载体(即重组病毒载体或DNA表达构建体)。在某些实施方案中，眼部递送途径选自以下中的一种：(1)无需玻璃体切除术的视网膜下施用(例如经由脉络膜上腔或经由外周注射施用视网膜下腔)，(2)脉络膜上施用，(3)向巩膜的外空间施用(即巩膜旁施用)；(4)伴随玻璃体切除术的视网膜下施用；(5)玻璃体内施用及(6)玻璃体内施用。在某些实施方案中，CNS递送途径选自以下中的一种：脑室内(ICV)递送、脑池内(IC)递送或腰椎内(IT-L)递送。
本文提供的方法对视觉缺陷的效应可通过BCVA(最佳矫正视力)、眼内压、裂隙灯活组织检视法和/或间接检眼镜检查法来测量。
在特定实施方案中，本文提供的方法对视觉缺陷的效应可通过本文所述的方法治疗的人患者的眼睛在治疗后(例如治疗后46-50周或98-102周)是否达到大于43个字母的BCVA来测量。43个字母的BCVA对应于20/160近似斯内伦当量(approximate Snellenequivalent)。在一个特定实施方案中，本文所述的方法治疗的人患者的眼睛在治疗后(例如治疗后46-50周或98-102周)达到大于43个字母的BCVA。
在特定实施方案中，本文提供的方法对视觉缺陷的效应可通过本文所述的方法治疗的人患者的眼睛在治疗后(例如治疗后46-50周或98-102周)是否达到大于84个字母的BCVA来测量。84个字母的BCVA对应于20/20近似斯内伦当量。在一个特定实施方案中，本文所述的方法治疗的人患者的眼睛在治疗后(例如治疗后46-50周或98-102周)达到大于84个字母的BCVA。
本文提供的方法对眼睛/视网膜的物理变化的效应可通过SD-OCT(SD-光学相干断层摄影术)来测量。
可如通过视网膜电图描记(ERG)测量般监测功效。
本文提供的方法的效应可通过测量视力丧失、感染、炎症及其他安全事件(包括视网膜脱离)的迹象来监测。
可监测视网膜厚度以确定本文提供的方法的功效。在不受任何特定理论束缚的情况下，可将视网膜厚度用作临床读数，其中视网膜厚度的减小愈大或视网膜增厚之前的时间愈长，则治疗愈有效。视网膜功能可例如通过ERG确定。ERG为经FDA批准用于人的视网膜功能的非侵入性电生理测试，其检查眼睛的光感受器细胞(视杆和视锥)及其连接的神经节细胞，特别是其对闪光刺激的反应。视网膜厚度可例如通过SD-OCT来确定。SD-OCT是一种三维成像技术，其使用低相干干涉术来确定回波时间延迟剂从目标物体反射的反向散射光的量值。OCT可用于以3至15μm轴向分辨率扫描组织样品(例如视网膜)的层，且SD-OCT与以前的技术形式相比提高轴向分辨率和扫描速度(Schuman,2008,Trans.Am.Opthamol.Soc.106:426-458)。
本文提供的方法的效应也可通过国家眼科研究所视觉功能问卷Rasch评分版(NEI-VFQ-28-R)(综合评分；活动限制域评分；及社会情感功能域评分)中相对于基线的变化来测量。本文提供的方法的效应也可通过国家眼科研究所视觉功能问卷25项版本(NEI-VFQ-25)(综合评分和心理健康分量表评分)中相对于基线的变化来测量。本文提供的方法的效应还可通过黄斑病治疗满意度问卷(MacTSQ)(综合评分；安全性、功效及不适域评分；以及信息提供和便利领域评分)中相对于基线的变化来测量。
在特定实施方案中，本文所述的方法的功效是通过在约4周、12周、6个月、12个月、24个月、36个月或其他期望时间点的视力改善来反映。在一个特定实施方案中，视力改善的特征在于BCVA的增加，例如增加1个字母、2个字母、3个字母、4个字母、5个字母、6个字母、7个字母、8个字母、9个字母、10个字母、11个字母或12个字母或更多。在一个特定实施方案中，视力改善的特征在于视力相对于基线增加5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％或更多。
在特定实施方案中，本文所述的方法的功效是通过在约4周、12周、6个月、12个月、24个月、36个月或其他期望时间点中心视网膜厚度(CRT)的减小来反映，例如中心视网膜厚度相对于基线降低5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％或更多。
在一个特定实施方案中，治疗后眼睛中不存在炎症或治疗后眼睛中几乎没有炎症(例如炎症水平相对于基线增加10％、5％、2％、1％或更小)。
本文提供的方法对视觉缺陷的效应可通过视动性眼球震颤(OKN)来测量。
在不受理论束缚的情况下，此视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN可用于测量言语前和/或非言语患者的视力。在某些实施方案中，OKN用于测量1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。在某些实施方案中，当患者正在观看iPad上的运动时，使用iPad经由检测OKN反射来测量视力。
在不受理论束缚的情况下，此视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN可用于测量言语前和/或非言语患者的视力。在某些实施方案中，OKN用于测量小于1.5个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。在另一特定实施方案中，OKN用于测量1-2个月、2-3个月、3-4个月、4-5个月、5-6个月、6-7个月、7-8个月、8-9个月、9-10个月、10-11个月、11个月至1岁、1-1.5岁、1.5-2岁、2-2.5岁、2.5-3岁、3-3.5岁、3.5-4岁、4-4.5岁或4.5-5岁患者的视力。在另一特定实施方案中，OKN用于测量6个月至5岁患者的视力。在某些实施方案中，当患者正在观看iPad上的运动时，使用iPad经由检测OKN反射来测量视力。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的患者中，通过在用编码三肽基-肽酶1(TPP1)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码三肽基-肽酶1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的患者中，通过在用编码TPP1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN2相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码三肽基-肽酶1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的患者中，通过在用编码棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的至多5岁患者处于该年龄和/或上述年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的患者中，通过在用编码PPT1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的患者中，通过在用编码PPT1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN1相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码PPT1的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的患者中，通过在用编码Battenin(CLN3)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码Battenin(CLN3)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的患者中，通过在用编码Battenin(CLN3)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN3相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码Battenin(CLN3)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的患者中，通过在用编码CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的至多5岁患者处于该年龄和/或上述年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的患者中，通过在用编码CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的患者中，通过在用编码CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的至多5岁患者处于该年龄和/或上述年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN6相关的视力丧失的患者中，通过在用编码CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的患者中，通过在用编码含主要易化子超家族结构域8(MFSD8)的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的至多5岁患者处于该年龄和/或上述年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的患者中，通过在用编码MFSD8的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的患者中，通过在用编码MFSD8的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之前测量OKN来评定视力。具体来说，表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的患者处于上述年龄和/或年龄范围内。在某些实施方案中，在表现出Batten-CLN7相关的视力丧失的至多5岁患者中，通过在用编码MFSD8的AAV，优选AAV8或AAV9治疗患者之后测量OKN来评定视力。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后视力未降低。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力提高至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或至少100％。在某些实施方案中，基于OKN的视力评估确定在用AAV基因疗法治疗后患者的视力未进一步恶化。
如果人患者为儿童，则可使用基于视动性眼球震颤(OKN)的方法或基于OKN的改进方法来评定视觉功能。
6.2用于本文所述的治疗方法的治疗系统、装置或设备
本文还提供了用于本文所述的治疗方法的治疗系统、装置和设备，其可包含以下中的一或多个：瓶、管、光源、显微注射器及脚踏板。在某些实施方案中，光源为自发光隐形眼镜，其可用于将载体沉积于眼睛后部且尤其用于避免损伤视神经盘、中央凹和/或黄斑(参见例如Chalam等人,2004,Ophthalmic surgery and lasers.35.76-77，其以引用的方式整体并入本文中)。在某些实施方案中，在外周注射期间利用自发光隐形眼镜以使视网膜下注射可视化(参见例如Chalam等人,2004,Ophthalmic surgery and lasers.35.76-77，其以引用的方式整体并入本文中)。在某些实施方案中，经由第二套管针利用光纤吊灯来使视网膜下注射可视化。
6.3抗VEGF抗体或抗原结合片段的递送
在某些实施方案中，治疗性产物为针对VEGF的完全人翻译后修饰的(HuPTM)抗体。在一个特定实施方案中，眼睛病状与由新血管生成增加引起的眼部疾病相关，例如nAMD(也称为“湿性”AMD)、干性AMD、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)(尤其湿性AMD)。在本公开内容的其他部分中所述的实施方案/态样在适用于递送抗VEGF抗体或抗原结合片段的程度上并入本文此部分中。下文描述适用于递送抗VEGF抗体或抗原结合片段的某些其他实施方案。
在一个优选实施方案中，针对VEGF的完全人翻译后修饰的抗体为针对VEGF的单克隆抗体(mAb)的完全人翻译后修饰的抗原结合片段(“HuPTMFabVEGFi”)。在另一优选实施方案中，HuPTMFabVEGFi为抗VEGF mAb的完全人糖基化的抗原结合片段(“HuGlyFabVEGFi”)。对于可根据本文所述的本发明使用的组合物和方法，还参见国际专利申请公开号WO/2017/180936(国际专利申请号PCT/US2017/027529，2017年4月14日提交)和国际专利申请公开号WO/2017/181021(国际专利申请号PCT/US2017/027650，2017年4月14日提交)，其各自以引用的方式整体并入本文中。在一个替代性实施方案中，可使用全长mAb。
施用此类基因疗法的受试者应为对抗VEGF疗法有反应的受试者。在具体实施方案中，所述方法涵盖治疗已经诊断患有湿性AMD、干性AMD、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)(尤其是湿性AMD)且鉴别为对用抗VEGF抗体治疗有反应的患者。在更多特定实施方案中，患者对用抗VEGF抗原结合片段治疗有反应。在某些实施方案中，已显示患者对在用基因疗法治疗之前用玻璃体内注射的抗VEGF抗原结合片段治疗有反应。在特定实施方案中，患者先前已用雷珠
Figure BDA0003389530610000821
Figure BDA0003389530610000822
(兰尼单抗)、
Figure BDA0003389530610000823
(阿柏西普)和/或
Figure BDA0003389530610000824
(贝伐珠单抗)治疗，且已发现对雷珠
Figure BDA0003389530610000825
(兰尼单抗)、
Figure BDA0003389530610000826
(阿柏西普)和/或
Figure BDA0003389530610000827
(贝伐珠单抗)中的一或多种有反应。
递送此类重组病毒载体或其他DNA表达构建体的受试者应对由重组病毒载体或表达构建体中的转基因编码的抗VEGF抗原结合片段有反应。为了确定反应性，可诸如通过玻璃体内注射直接向受试者施用抗hVEGF抗原结合片段转基因产物(例如在细胞培养物、生物反应器等中产生)。
由转基因编码的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，可包括但不限于与hVEGF结合的抗体的抗原结合片段，诸如贝伐珠单抗；抗hVEGF Fab部分，诸如兰尼单抗；或被工程改造以在Fab结构域上含有额外糖基化位点的此类贝伐珠单抗或兰尼单抗Fab部分(例如，参见Courtois等人,2016,mAbs 8:99-112，其关于在全长抗体的Fab结构域上高糖基化的贝伐珠单抗衍生物的描述以引用的方式整体并入本文中)。
用于递送转基因的重组载体应对人视网膜细胞或光感受器细胞具有向性。此类载体可包括非复制型重组腺相关病毒载体(“rAAV”)，尤其带有AAV8衣壳的那些载体为优选的。然而，可使用其他重组病毒载体，包括但不限于重组慢病毒载体、牛痘病毒载体或称为“裸DNA”构建体的非病毒表达载体。优选地，HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi转基因应由适当的表达控制元件来控制，例如CB7启动子(鸡β-肌动蛋白启动子和CMV增强子)、RPE65启动子或视蛋白启动子等，且可包括增强由载体驱动的转基因表达的其他表达控制元件(例如内含子，诸如鸡β-肌动蛋白内含子、小鼠微小病毒(MVM)内含子、人因子IX内含子(例如FIX截短的内含子1)、β-球蛋白剪接供体/免疫球蛋白重链剪接受体内含子、腺病毒剪接供体/免疫球蛋白剪接受体内含子、SV40晚期剪接供体/剪接受体(19S/16S)内含子及杂交腺病毒剪接供体/IgG剪接受体内含子以及polyA信号，诸如兔β-球蛋白polyA信号、人生长激素(hGH)polyA信号、SV40晚期polyA信号、合成polyA(SPA)信号及牛生长激素(bGH)polyA信号)。参见例如Powell和Rivera-Soto,2015,Discov.Med.,19(102):49-57。
在优选实施方案中，基因疗法构建体被设计以使得重链和轻链均得以表达。更具体来说，重链与轻链应以大约相等的量表达，换言之，重链和轻链以重链与轻链约1:1的比率表达。重链和轻链的编码序列可在单个构建体中工程改造，其中重链和轻链通过可裂解接头或IRES分开，从而表达分开的重链和轻链多肽。关于可与本文所提供的方法和组合物一起使用的特定前导序列和特定IRES、2A及其他接头序列，参见例如部分6.1.2。
在不受理论束缚的情况下，在某些实施方案中，本文提供的用于递送抗VEGF抗体或抗原结合片段的方法及组合物部分基于以下原理：
(i)人视网膜细胞为分泌细胞，具有对分泌蛋白进行翻译后加工的细胞机制——包括糖基化和酪氨酸-O-硫酸化，其为视网膜细胞中的强大过程。(参见例如Wang等人,2013,Analytical Biochem.427:20-28及Adamis等人,1993,BBRC 193:631-638报告视网膜细胞产生糖蛋白；以及Kanan等人,2009,Exp.Eye Res.89:559-567及Kanan&Al-Ubaidi,2015,Exp.Eye Res.133:126-131报告视网膜细胞分泌的酪氨酸硫酸化糖蛋白的产生，其各自关于人视网膜细胞进行的翻译后修饰以引用的方式整体并入本文中)。
(ii)与现有技术的理解相反，抗VEGF抗原结合片段，诸如兰尼单抗(及全长抗VEGFmAb的Fab结构域，诸如贝伐珠单抗)确实具有N-连接的糖基化位点。举例来说，参见图1，其标识兰尼单抗的CH结构域(TVSWN165SGAL)和CL结构域(QSGN158SQE)中的非共同天冬酰胺(“N”)糖基化位点，以及VH结构域(Q115GT)和VL结构域(TFQ100GT)中作为糖基化位点的谷氨酰胺(“Q”)残基(以及贝伐珠单抗的Fab中的相应位点)。(参见例如Valliere-Douglass等人,2009,J.Biol.Chem.284:32493-32506及Valliere-Douglass等人,2010,J.Biol.Chem.285:16012-16022，其各自关于抗体中N-连接的糖基化位点的鉴别以引用的方式整体并入本文中)。
(iii)尽管此类非典型位点通常导致抗体群体的糖基化水平低(例如约1-5％)，但功能优势在免疫赦免器官诸如眼睛中可为显著的(参见例如van de Bovenkamp等人,2016,J.Immunol.196:1435-1441)。举例来说，Fab糖基化可影响抗体的稳定性、半衰期及结合特征。为了确定Fab糖基化对抗体对其靶标的亲和力的效应，可使用本领域技术人员已知的任何技术，例如酶联免疫吸附分析(ELISA)或表面等离子体共振(SPR)。为了确定Fab糖基化对抗体的半衰期的效应，可使用本领域技术人员已知的任何技术，例如通过测量已施用放射性标记抗体的受试者的血液或器官(例如眼睛)中的放射性水平。为了确定Fab糖基化对抗体稳定性(例如聚集或蛋白质去折叠水平)的效应，可使用本领域技术人员已知的任何技术，例如差示扫描量热法(DSC)，高效液相色谱(HPLC)，例如尺寸排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)，毛细管电泳，质谱分析或浊度测量。本文提供的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi转基因导致产生在非典型位点0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％或更多糖基化的Fab。在某些实施方案中，来自Fab群体之0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％或更多Fab在非典型位点被糖基化。在某些实施方案中，0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％或更多非典型位点被糖基化。在某些实施方案中，Fab在这些非典型位点的糖基化比HEK293细胞中产生的Fab的这些非典型位点的糖基化的量大25％、50％、100％、200％、300％、400％、500％或更多。
(iv)除糖基化位点之外，抗VEGF Fab诸如兰尼单抗(及贝伐珠单抗的Fab)在CDR中或附近含有酪氨酸(“Y”)硫酸化位点；参见图1，其标识兰尼单抗的VH(EDTAVY94Y95)和VL(EDFATY86)结构域中的酪氨酸-O-硫酸化位点(及贝伐珠单抗的Fab中的相应位点)。(参见例如Yang等人,2015,Molecules 20:2138-2164,尤其第2154页，其关于进行蛋白质酪氨酸硫酸化的酪氨酸残基周围氨基酸的分析以引用的方式整体并入本文中。“规则”可概述如下：Y残基在Y的+5至-5位置内具有E或D，且其中Y的-1位置为中性或酸性带电荷氨基酸，而非消除硫酸化的碱性氨基酸，例如R、K或H)。人IgG抗体可表现出许多其他翻译后修饰，诸如N端修饰、C端修饰、氨基酸残基的降解或氧化、半胱氨酸相关变体及糖基化(参见例如Liu等人,2014,mAbs 6(5):1145-1154)。
(v)人视网膜细胞对抗VEGF Fab(诸如兰尼单抗或贝伐珠单抗的Fab片段)的糖基化将引起聚糖的添加，从而可改进转基因产物的稳定性、半衰期及减少不希望有的聚集和/或免疫原性。(关于Fab糖基化的新兴重要性的综述，参见例如Bovenkamp等人,2016,J.Immunol.196:1435-1441)。重要的是，可添加至本文提供的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi中的聚糖为高度加工的复合型双触角N-聚糖，其含有2,6-唾液酸(例如参见图2，其描绘可并入HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi中的聚糖)和二等分GlcNAc，但不含NGNA(N-羟乙酰基神经氨酸，Neu5Gc)。此类聚糖不存在于兰尼单抗(其在大肠杆菌中制成且根本未被糖基化)或贝伐珠单抗(其在CHO细胞中制成，而CHO细胞不具有进行此翻译后修饰所需的2,6-唾液酸基转移酶，CHO细胞也不产生二等分GlcNAc，尽管所述细胞确实添加Neu5Gc(NGNA)而非Neu5Ac(NANA)作为对人不典型(且可能具有免疫原性)的唾液酸)。参见例如Dumont等人,2015,Crit.Rev.Biotechnol.(早期在线，在线发布于2015年9月18日，第1-13页，第5页)。此外，CHO细胞也可产生一种免疫原性聚糖，即α-Gal抗原，其与大多数个体中存在的抗α-Gal抗体反应，且在高浓度下可触发过敏反应。参见例如Bosques,2010,NatBiotech 28:1153-1156。本文提供的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi的人糖基化型态应降低转基因产物的免疫原性并提高功效。
(vi)抗VEGF Fab，诸如兰尼单抗或贝伐珠单抗的Fab片段的酪氨酸硫酸化(人视网膜细胞中稳固的翻译后过程)可使得转基因产物对VEGF的亲合力增加。实际上，已证明针对其他靶标的治疗性抗体的Fab的酪氨酸硫酸化显著增加对抗原的亲合力和活性。(参见例如Loos等人,2015,PNAS 112:12675-12680及Choe等人,2003,Cell 114:161-170)。此类翻译后修饰不存在于兰尼单抗(其在大肠杆菌中制成，大肠杆菌为不具有酪氨酸硫酸化所需的酶的宿主)上，且最多在贝伐珠单抗(CHO细胞产物)中体现不足。与人视网膜细胞不同，CHO细胞并非分泌细胞，且翻译后酪氨酸硫酸化的能力有限。(参见例如Mikkelsen和Ezban,1991,Biochemistry 30:1533-1537，尤其第1537页的论述)。
出于前述原因，HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi的产生应使得用于治疗湿性AMD、干性AMD、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)(尤其湿性AMD)的“改进型生物药”分子经由基因疗法实现——例如通过向诊断患有湿性AMD、干性AMD、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)(尤其湿性AMD)的患者(人受试者)眼睛的脉络膜上腔、视网膜下腔或巩膜外表面施用编码HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi的重组病毒载体或重组DNA表达构建体，以在眼睛中创建永久的储槽，连续供应由经转导的视网膜细胞产生的完全人翻译后修饰，例如人糖基化、硫酸化的转基因产物。FabVEGFi的cDNA构建体应包括信号肽，以确保由经转导的视网膜细胞进行适当的辅助和翻译后加工(糖基化和蛋白质硫酸化)。由视网膜细胞使用的此类信号序列可包括但不限于：
·MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA(VEGF-A信号肽)
·MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA(纤蛋白-1信号肽)
·MAPLRPLLIL ALLAWVALA(玻连蛋白信号肽)
·MRLLAKIICLMLWAICVA(补体因子H信号肽)
·MRLLAFLSLL ALVLQETGT(旋光蛋白信号肽)
·MKWVTFISLLFLFSSAYS(白蛋白信号肽)
·MAFLWLLSCWALLGTTFG(胰凝乳蛋白酶原信号肽)
·MYRMQLLSCIALILALVTNS(白介素-2信号肽)
·MNLLLILTFVAAAVA(胰蛋白酶原-2信号肽)。
·参见例如Stern等人,2007,Trends Cell.Mol.Biol.,2:1-17及Dalton&Barton,2014,Protein Sci,23:517-525，其各自关于可使用的信号肽以引用的方式整体并入本文中。
作为基因疗法的替代或其他治疗，HuPTMFabVEGFi产物，例如HuGlyFabVEGFi糖蛋白，可通过重组DNA技术在人细胞系中产生，且通过玻璃体内注射施用诊断患有湿性AMD、干性AMD、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)(尤其湿性AMD)的患者。HuPTMFabVEGFi产物，例如糖蛋白，亦可施用患有湿性AMD、干性AMD、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)(尤其湿性AMD)的患者。可用于此类重组糖蛋白生成的人细胞系包括但不限于人胚胎肾293细胞(HEK293)、纤维肉瘤HT-1080、HKB-11、CAP、HuH-7及视网膜细胞系PER.C6或RPE等(例如，参见Dumont等人,2015,Crit.Rev.Biotechnol.(早期在线，在线发布于2015年9月18日，第1-13页)“Humancell lines for biopharmaceutical manufacturing:history,status,and futureperspectives”，其关于可用于重组生产HuPTMFabVEGFi产物，例如HuGlyFabVEGFi糖蛋白的人细胞系的综述以引用的方式整体并入本文中)。为了确保完全糖基化，尤其是唾液酸化和酪氨酸硫酸化，可通过工程改造宿主细胞以共表达α-2,6-唾液酸基转移酶(或α-2,3-和α-2,6-唾液酸转移酶两者)和/或负责视网膜细胞中酪氨酸-O-硫酸化的TPST-1和TPST-2酶来增强用于生产的细胞系。
本文提供的方法涵盖将HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi递送至眼睛/视网膜伴随递送其他可用治疗的组合。可在基因疗法治疗之前、同时或之后施用额外治疗。可与本文提供的基因疗法组合的湿性AMD、干性AMD、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)(尤其湿性AMD)的可用治疗包括但不限于激光光凝术、使用维替泊芬(verteporfin)进行光动力疗法及使用抗VEGF剂进行玻璃体内(IVT)注射，所述抗VEGF剂包括但不限于派加替尼(pegaptanib)、兰尼单抗、阿柏西普或贝伐珠单抗。使用抗VEGF剂(诸如生物制剂)进行的额外治疗可称为“救援”疗法。
6.3.1N-糖基化、酪氨酸硫酸化及O-糖基化
在本文描述的方法中所用的HuPTMFabVEGFi(例如HuGlyFabVEGFi)的抗VEGF抗原结合片段的氨基酸序列(一级序列)包含至少一个发生N-糖基化或酪氨酸硫酸化的位点。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段的氨基酸序列包含至少一个N-糖基化位点和至少一个酪氨酸硫酸化位点。此类位点在下面详细描述。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段的氨基酸序列包含至少一个O-糖基化位点，其可为存在于这些氨基酸序列中的一个或多个N-糖基化位点和/或酪氨酸硫酸化位点的补充。
(a)N-糖基化
反向糖基化位点
典型的N-糖基化序列在本领域中已知为Asn-X-Ser(或Thr)，其中X可为除Pro之外的任何氨基酸。然而，最近已证明，人抗体的天冬酰胺(Asn)残基可在反向共同基序Ser(或Thr)-X-Asn的情形下被糖基化，其中X可为除Pro之外的任何氨基酸。参见Valliere-Douglass等人,2009,J.Biol.Chem.284:32493-32506；及Valliere-Douglass等人,2010,J.Biol.Chem.285:16012-16022。如本文所公开，且与现有技术的理解相反，根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段，例如兰尼单抗，包含数个此类反向共同序列。因此，本文所述的方法包括使用包含至少一个N-糖基化位点的抗VEGF抗原结合片段，所述N-糖基化位点包含序列Ser(或Thr)-X-Asn，其中X可为除Pro之外的任何氨基酸(在本文中也称为“反向N-糖基化位点”)。
在某些实施方案中，本文所述的方法包括使用抗VEGF抗原结合片段，其包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或多于十个包含序列Ser(或Thr)-X-Asn的N-糖基化位点，其中X可为除Pro之外的任何氨基酸。在某些实施方案中，本文所述的方法包括使用抗VEGF抗原结合片段，其包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或多于十个反向N-糖基化位点，以及一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或多于十个非共同N-糖基化位点(如下文所定义)。
在一个特定实施方案中，在本文描述的方法中所用的包含一个或多个反向N-糖基化位点的抗VEGF抗原结合片段为兰尼单抗，其包含分别为SEQ ID NO.1和2的轻链和重链。在另一特定实施方案中，所述方法中使用的包含一个或多个反向N-糖基化位点的抗VEGF抗原结合片段包含贝伐珠单抗的Fab，其包含分别为SEQ ID NO.3和4的轻链和重链。
非共同糖基化位点
除反向N-糖基化位点之外，最近已证明，人抗体的谷氨酰胺(Gln)残基可在非共同基序Gln-Gly-Thr的情形下被糖基化。参见Valliere-Douglass等人,2010,J.Biol.Chem.285:16012-16022。令人惊讶地，根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段，例如兰尼单抗，包含数个此类非共同序列。因此，本文所述的方法包括使用包含至少一个N-糖基化位点的抗VEGF抗原结合片段，所述N-糖基化位点包含序列Gln-Gly-Thr(在本文中也称为“非共同N-糖基化位点”)。
在某些实施方案中，本文所述的方法包括使用抗VEGF抗原结合片段，其包含一个、两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个、十个或多于十个包含序列Gln-Gly-Thr的N-糖基化位点。
在一个特定实施方案中，在本文描述的方法中所用的包含一个或多个非共同N-糖基化位点的抗VEGF抗原结合片段为兰尼单抗(包含分别为SEQ ID NO.1和2的轻链和重链)。在另一特定实施方案中，所述方法中使用的包含一个或多个非共同N-糖基化位点的抗VEGF抗原结合片段包含贝伐珠单抗的Fab(包含分别为SEQ ID NO.3和4的轻链和重链)。
工程改造的N-糖基化位点
在某些实施方案中，编码抗VEGF抗原结合片段的核酸被修饰以包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个N-糖基化位点(包括典型的N-糖基化共同序列、反向N-糖基化位点及非共同N-糖基化位点)，通常与HuGlyFabVEGFi相关(例如相对于与未修饰状态的抗VEGF抗原结合片段相关的N-糖基化位点数)。在特定实施方案中，糖基化位点的引入是通过在抗原结合片段的一级结构中的任何位置插入N-糖基化位点(包括典型的N-糖基化共同序列、反向N-糖基化位点及非共同N-糖基化位点)来实现，只要所述引入不影响抗原结合片段与其抗原VEGF的结合即可。糖基化位点的引入可通过例如向抗原结合片段或衍生抗原结合片段的抗体的一级结构中添加新的氨基酸(即，全部或部分添加糖基化位点)，或通过使抗原结合片段或衍生抗原结合片段的抗体中的现有氨基酸突变，以产生N-糖基化位点(即，不向抗原结合片段/抗体中添加氨基酸，但使抗原结合片段/抗体的所选氨基酸突变以形成N-糖基化位点)来实现。本领域技术人员应认识到，蛋白质的氨基酸序列可使用本领域中已知的方法容易地修饰，例如包括修饰编码蛋白质的核酸序列的重组方法。
在一个特定实施方案中，本文所述的方法中使用的抗VEGF抗原结合片段被修饰以使得当在视网膜细胞中表达时，其可被高糖基化。参见Courtois等人,2016,mAbs8:99-112，其以引用的方式整体并入本文中。在一个特定实施方案中，所述抗VEGF抗原结合片段为兰尼单抗(包含分别为SEQ ID NO.1和2的轻链和重链)。在另一特定实施方案中，所述抗VEGF抗原结合片段包含贝伐珠单抗的Fab(包含分别为SEQ ID NO.3和4的轻链和重链)。
抗VEGF抗原结合片段的N-糖基化
与小分子药物不同，生物制剂通常包含许多具有不同修饰或形式的变体的混合物，所述变体具有不同的效力、药物动力学及安全概况。在基因疗法或蛋白质疗法中产生的每个分子不必完全糖基化和硫酸化。确切而言，所产生的糖蛋白群体应具有足够的糖基化(包括2,6-唾液酸化)和硫酸化以证明功效。本文提供的基因疗法治疗的目标为通过最少的干预/侵入性手术来减缓或阻止视网膜变性的进展，并减缓或防止视力丧失。
在一个特定实施方案中，当在视网膜细胞中表达时，根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段，例如兰尼单抗，可在100％的其N-糖基化位点处被糖基化。然而，本领域技术人员应了解，为了获得糖基化的益处，并非抗VEGF抗原结合片段的每个N-糖基化位点都需要被N-糖基化。确切而言，当仅一定百分比的N-糖基化位点被糖基化时和/或当仅一定百分比的表达抗原结合片段被糖基化时，可实现糖基化的益处。因此，在某些实施方案中，当在视网膜细胞中表达时，根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段在10％-20％、20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％-90％或90％-100％的其可用N-糖基化位点处被糖基化。在某些实施方案中，当在视网膜细胞中表达时，10％-20％、20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％-90％或90％-100％的根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段在其可用的N-糖基化位点中的至少一者被糖基化。
在一个特定实施方案中，当抗VEGF抗原结合片段在视网膜细胞中表达时，根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段中所存在的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、或99％的N-糖基化位点在N-糖基化位点中所存在的Asn残基(或其他相关残基)处被糖基化。即，所得HuGlyFabVEGFi的至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的N-糖基化位点被糖基化。
在另一特定实施方案中，当抗VEGF抗原结合片段在视网膜细胞中表达时，根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段中所存在的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的N-糖基化位点被存在于N-糖基化位点中的Asn残基(或其他相关残基)连接的相同的附接聚糖糖基化。即，所得HuGlyFabVEGFi的至少50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的N-糖基化位点相同的附接聚糖。
当根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段(例如兰尼单抗)在视网膜细胞中表达时，抗原结合片段的N-糖基化位点可被各种不同的聚糖糖基化。抗原结合片段的N-聚糖已在本领域中表征。举例来说，Bondt等人,2014,Mol.&Cell.Proteomics13.11:3029-3039(其关于Fab相关的N-聚糖的公开内容以引用的方式整体并入本文中)表征与Fab相关的聚糖，并且证明抗体的Fab和Fc部分包含独特的糖基化型态，其中相对于Fc聚糖，Fab聚糖在半乳糖基化、唾液酸化及二等分(例如二等分GlcNAc)中高，但在海藻糖基化中低。如同Bondt一般，Huang等人,2006,Anal.Biochem.349:197-207(其关于Fab相关的N-聚糖的公开内容以引用的方式整体并入本文中)发现Fab的大多数聚糖被唾液酸化。然而，在由Huang检验的抗体的Fab(其在小鼠细胞背景中产生)中，鉴别的唾液酸残基为N-羟乙酰基神经氨酸(“Neu5Gc”或“NeuGc”)(它对于人类来说不是天然的)，而非N-乙酰基神经氨酸(“Neu5Ac”，主要的人唾液酸)。另外，Song等人,2014,Anal.Chem.86:5661-5666(其关于Fab相关的N-聚糖的公开内容以引用的方式整体并入本文中)描述与商购获得抗体相关的N-聚糖文库。
重要的是，当根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段(例如兰尼单抗)在人视网膜细胞中表达时，对在原核宿主细胞(例如，大肠杆菌)或真核宿主细胞(例如CHO细胞)中体外生产的需求被规避。相反，由于本文所述的方法(例如使用视网膜细胞表达抗hVEGF抗原结合片段)，抗VEGF抗原结合片段的N-糖基化位点有利地被与人治疗有关及有益的聚糖装饰。当将CHO细胞或大肠杆菌用于抗体/抗原结合片段生产时，这种优势无法实现，因为例如CHO细胞(1)不表达2,6唾液酸基转移酶，且因此在N-糖基化期间无法添加2,6唾液酸，(2)可添加Neu5Gc作为唾液酸代替Neu5Ac；并且因为大肠杆菌天然地不含N-糖基化所需的组分。因此，在一个实施方案中，在视网膜细胞中表达得到本文所述的治疗方法中使用的HuGlyFabVEGFi的抗VEGF抗原结合片段以蛋白质在人视网膜细胞(例如视网膜色素细胞)中N-糖基化的方式被糖基化，但不以蛋白质在CHO细胞中糖基化的方式糖基化。在另一个实施方案中，在视网膜细胞中表达得到本文所述的治疗方法中使用的HuGlyFabVEGFi的抗VEGF抗原结合片段以蛋白质在人视网膜细胞(例如视网膜色素细胞)中N-糖基化的方式被糖基化，其中使用原核宿主细胞，例如使用大肠杆菌不可能天然地进行此类糖基化。
在某些实施方案中，根据本文所述的方法使用的HuGlyFabVEGFi，例如兰尼单抗，包含与人抗体的Fab相关的一个、两个、三个、四个、五个或更多个不同的N-聚糖。在一个特定实施方案中，与人抗体的Fab相关的所述N-聚糖为Bondt等人,2014,Mol.&Cell.Proteomics 13.11:3029-3039，Huang等人,2006,Anal.Biochem.349:197-207和/或Song等人,2014,Anal.Chem.86:5661-5666中所述的N-聚糖。在某些实施方案中，根据本文所述的方法使用的HuGlyFabVEGFi，例如兰尼单抗，不包含可检测的NeuGc和/或α-Gal抗原。
在一个特定实施方案中，根据本文所述的方法使用的HuGlyFabVEGFi，例如兰尼单抗，主要被包含2,6-连接的唾液酸的聚糖糖基化。在某些实施方案中，包含2,6-连接的唾液酸的HuGlyFabVEGFi被聚唾液酸化，即含有多于一个唾液酸。在某些实施方案中，所述HuGlyFabVEGFi的各N-糖基化位点包含具有2,6-连接的唾液酸的聚糖，即所述HuGlyFabVEGFi的100％的N-糖基化位点包含具有2,6-连接的唾液酸的聚糖。在另一特定实施方案中，根据本文所述的方法使用的HuGlyFabVEGFi的至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的N-糖基化位点被包含2,6-连接的唾液酸的聚糖糖基化。在另一特定实施方案中，根据本文所述的方法使用的HuGlyFabVEGFi的至少10％-20％、20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％-90％或90％-99％的N-糖基化位点被包含2,6-连接的唾液酸的聚糖糖基化。在另一特定实施方案中，根据本文所述的方法在视网膜细胞中表达的至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的抗原结合片段(即，产生HuGlyFabVEGFi，例如兰尼单抗的抗原结合片段)被包含2,6-连接的唾液酸的聚糖糖基化。在另一特定实施方案中，根据本文所述的方法在视网膜细胞中表达的至少10％-20％、20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％-90％或90％-99％的抗原结合片段(即，产生HuGlyFabVEGFi，例如兰尼单抗的Fab)被包含2,6-连接的唾液酸的聚糖糖基化。在另一特定实施方案中，所述唾液酸为Neu5Ac。根据此类实施方案，当HuGlyFabVEGFi的仅一定百分比的N-糖基化位点被2,6唾液酸化或聚唾液酸化时，剩余的N-糖基化可包含不同的N-聚糖，或根本不包含N-聚糖(即，保持未糖基化)。
当HuGlyFabVEGFi被2,6聚唾液酸化时，其包含多个唾液酸残基，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10或多于10个唾液酸残基。在某些实施方案中，当HuGlyFabVEGFi经聚唾液酸化时，其包含2-5、5-10、10-20、20-30、30-40或40-50个唾液酸残基。在某些实施方案中，当HuGlyFabVEGFi被聚唾液酸化时，其包含2,6-连接的(唾液酸)n，其中n可为1-100的任何数字。
在一个特定实施方案中，根据本文所述的方法使用的HuGlyFabVEGFi，例如兰尼单抗，主要被包含二等分GlcNAc的聚糖糖基化。在某些实施方案中，所述HuGlyFabVEGFi的各N-糖基化位点包含具有二等分GlcNAc的聚糖，即所述HuGlyFabVEGFi的100％的N-糖基化位点包含具有二等分GlcNAc的聚糖。在另一特定实施方案中，根据本文所述的方法使用的HuGlyFabVEGFi的至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的N-糖基化位点被包含二等分GlcNAc的聚糖糖基化。在另一特定实施方案中，根据本文所述的方法使用的HuGlyFabVEGFi的至少10％-20％、20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％-90％或90％-99％的N-糖基化位点被包含二等分GlcNAc的聚糖糖基化。在另一特定实施方案中，根据本文所述的方法在视网膜细胞中表达的至少20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％的抗原结合片段(即，产生HuGlyFabVEGFi，例如兰尼单抗的抗原结合片段)被包含二等分GlcNAc的聚糖糖基化。在另一特定实施方案中，根据本文所述的方法在视网膜细胞中表达的至少10％-20％、20％-30％、30％-40％、40％-50％、50％-60％、60％-70％、70％-80％、80％-90％或90％-99％的抗原结合片段(即，产生HuGlyFabVEGFi，例如兰尼单抗的抗原结合片段)被包含二等分GlcNAc的聚糖糖基化。
在某些实施方案中，根据本文所述的方法使用的HuGlyFabVEGFi(例如兰尼单抗)被高糖基化，即，除由天然存在的N-糖基化位点产生的N-糖基化之外，所述HuGlyFabVEGFi在被工程改造以存在于抗原结合片段的氨基酸序列中的N-糖基化位点处包含聚糖，从而产生HuGlyFabVEGFi。在某些实施方案中，根据本文所述的方法使用的HuGlyFabVEGFi(例如兰尼单抗)被高糖基化，但不包含可检测的NeuGc和/或α-Gal抗原。
用于确定抗体(包括抗原结合片段)的糖基化型态的测定是本领域中已知的。举例来说，肼解可用于分析聚糖。首先，多糖通过与肼一起培育而自其相关蛋白释放(可使用Ludger Liberate Hydrazinolysis Glycan Release Kit,Oxfordshire,UK)。亲核试剂肼攻击多糖与载体蛋白之间的糖苷键，且释放附接的聚糖。N-乙酰基在此处理过程中丢失，必须通过重新-N-乙酰化来重建。也可使用酶释放聚糖，诸如糖苷酶或内切糖苷酶，诸如PNGase F和Endo H，其与肼相比裂解得更干净，副反应更少。游离聚糖可在碳柱上纯化，且随后在还原端用荧光团2-氨基苯甲酰胺标记。根据Royle等人,Anal Biochem 2002,304(1):70-90的HPLC方案，可在GlycoSep-N柱(GL Sciences)上分离标记的多糖。所得荧光色谱图指示多糖长度和重复单元的数目。可通过收集个别峰及随后进行MS/MS分析来搜集结构信息。由此可确认单糖组成和重复单元的序列，且另外可鉴别多糖组成的均质性。低或高分子量的特定峰可通过MALDI-MS/MS来分析，且结果用于确认聚糖序列。色谱图中的每个峰对应于由一定数量的重复单元及其片段(例如糖残基)组成的聚合物，例如聚糖。因此，色谱图允许测量聚合物(例如聚糖)长度分布。洗脱时间为聚合物长度的指示，而荧光强度与相应聚合物(例如聚糖)的摩尔丰度相关。评定与抗原结合片段相关的聚糖的其他方法包括Bondt等人,2014,Mol.&Cell.Proteomics13.11:3029-3039，Huang等人,2006,Anal.Biochem.349:197-207和/或Song等人,2014,Anal.Chem.86:5661-5666所述的方法。
与抗体(包括抗原结合片段)相关的聚糖型态的均质性或异质性，由于与糖基化位点上存在的聚糖长度或大小和聚糖数目有关，可使用本领域中已知的方法来评定，例如测量聚糖长度或大小及流体动力半径的方法。HPLC，诸如尺寸排阻、正相、反相及阴离子交换HPLC，以及毛细管电泳，允许测量流体动力半径。与具有较少糖基化位点的载体相比，蛋白质中较高的糖基化位点数目导致较大的流体动力半径变化。然而，当分析单一聚糖链时，其可能由于长度更受控制而更均匀。可通过肼解、SDS PAGE及毛细管凝胶电泳来测量聚糖长度。另外，均质性还可意谓某些糖基化位点使用型态变化至更宽/更窄的范围。这些因素可通过糖肽LC-MS/MS来测量。
N-糖基化的益处
N-糖基化赋予用于本文所述方法中的HuGlyFabVEGFi许多益处。通过在大肠杆菌中产生抗原结合片段无法获得此类益处，因为大肠杆菌天然不具有N-糖基化所需的组分。另外，经由在例如CHO细胞中产生抗体无法获得一些益处，因为CHO细胞缺乏添加某些聚糖(例如2,6唾液酸和二等分GlcNAc)所需的组分，且因为CHO细胞可添加对于人来说不典型的聚糖，例如Neu5Gc。参见例如Song等人,2014,Anal.Chem.86:5661-5666。因此，凭借本文所阐述的抗VEGF抗原结合片段(例如兰尼单抗)包含非典型的N-糖基化位点(包括反向及非共同糖基化位点)的发现，已实现以导致糖基化的方式表达此类抗VEGF抗原结合片段的方法(且因此改善与抗原结合片段相关的益处)。具体来说，抗VEGF抗原结合片段在人视网膜细胞中的表达导致产生包含有益聚糖的HuGlyFabVEGFi(例如兰尼单抗)，否则所述有益聚糖将不与抗原结合片段或其亲本抗体缔合。
尽管非典型糖基化位点通常导致抗体群体的糖基化水平低(例如约1-5％)，但功能优势在免疫赦免器官诸如眼睛中可为显著的(参见例如van de Bovenkamp等人,2016,J.Immunol.196:1435-1441)。举例来说，Fab糖基化可影响抗体的稳定性、半衰期及结合特征。为了确定Fab糖基化对抗体对其靶标的亲和力的效应，可使用本领域技术人员已知的任何技术，例如酶联免疫吸附分析(ELISA)或表面等离子体共振(SPR)。为了确定Fab糖基化对抗体的半衰期的效应，可使用本领域技术人员已知的任何技术，例如通过测量已施用放射性标记抗体的受试者的血液或器官(例如眼睛)中的放射性水平。为了确定Fab糖基化对抗体稳定性(例如聚集或蛋白质去折叠水平)的效应，可使用本领域技术人员已知的任何技术，例如差示扫描量热法(DSC)，高效液相色谱(HPLC)，例如尺寸排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)，毛细管电泳，质谱分析或浊度测量。本文提供的HuGlyFabVEGFi转基因导致产生在非典型位点0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％或更多糖基化的抗原结合片段。在某些实施方案中，来自抗原结合片段群体之0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％或更多抗原结合片段在非典型位点被糖基化。在某些实施方案中，0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％或10％或更多非典型位点被糖基化。在某些实施方案中，抗原结合片段在这些非典型位点的糖基化比HEK293细胞中产生的抗原结合片段中这些非典型位点的糖基化量大25％、50％、100％、200％、300％、400％、500％或更多。
本文所述方法中使用的HuGlyFabVEGFi上唾液酸的存在可影响HuGlyFabVEGFi的清除率，例如自玻璃体液清除的速率。因此，HuGlyFabVEGFi的唾液酸型态可用于产生具有最优化清除率的治疗剂。评定抗原结合片段清除率的方法是本领域中已知的。参见例如Huang等人,2006,Anal.Biochem.349:197-207。
在另一特定实施方案中，由N-糖基化赋予的益处为聚集减少。占据的N-糖基化位点可掩盖易于聚集的氨基酸残基，从而导致聚集减少。此类N-糖基化位点可为本文所用的抗原结合片段的天然位点，或被工程改造到本文所用的抗原结合片段中，使得HuGlyFabVEGFi在表达时，例如在视网膜细胞中表达时不易聚集。评定抗体聚集的方法是本领域中已知的。参见例如Courtois等人,2016,mAbs 8:99-112，其以引用的方式整体并入本文中。
在另一特定实施方案中，由N-糖基化赋予的益处为免疫原性降低。此类N-糖基化位点可为本文所用的抗原结合片段的天然位点，或被工程改造到本文所用的抗原结合片段中，使得HuGlyFabVEGFi在表达时，例如在视网膜细胞中表达时不易产生免疫原性。
在另一特定实施方案中，由N-糖基化赋予的益处为蛋白质稳定性。众所周知，蛋白质的N-糖基化赋予其稳定性，且评定由N-糖基化产生的蛋白质稳定性的方法是本领域中已知的。参见例如Sola和Griebenow,2009,J Pharm Sci.,98(4):1223-1245。
在另一特定实施方案中，由N-糖基化赋予的益处为结合亲和力改变。本领域中已知，抗体可变结构域中N-糖基化位点的存在可增加抗体对其抗原的亲和力。参见例如Bovenkamp等人,2016,J.Immunol.196:1435-1441。用于测量抗体结合亲和力的分析是本领域中已知的。参见例如Wright等人,1991,EMBO J.10:2717-2723；及Leibiger等人,1999,Biochem.J.338:529-538。
(b)酪氨酸硫酸化
酪氨酸硫酸化发生在酪氨酸(Y)残基处，谷氨酸(E)或天冬氨酸(D)在Y的+5至-5位置内，且其中Y的位置-1为中性或酸性带电荷氨基酸，而非消除硫酸化的碱性氨基酸，例如精氨酸(R)、赖氨酸(K)或组氨酸(H)。令人惊讶地，根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段，例如兰尼单抗，包含酪氨酸硫酸化位点(参见图1)。因此，本文所述的方法包括使用抗VEGF抗原结合片段，例如HuPTMFabVEGFi，其包含至少一个酪氨酸硫酸化位点，此类抗VEGF抗原结合片段当在视网膜细胞中表达时可被酪氨酸硫酸化。
重要的是，酪氨酸硫酸化的抗原结合片段，例如兰尼单抗，无法在大肠杆菌中产生，大肠杆菌天然不具有酪氨酸硫酸化所需的酶。另外，CHO细胞缺乏酪氨酸硫酸化——其并非分泌细胞并且翻译后酪氨酸硫酸化的能力有限。参见例如Mikkelsen和Ezban,1991,Biochemistry 30:1533-1537。有利地，本文提供的方法需要在分泌且确实具有酪氨酸硫酸化能力的视网膜细胞中表达抗VEGF抗原结合片段，例如HuPTMFabVEGFi，例如兰尼单抗。参见Kanan等人,2009,Exp.Eye Res.89:559-567及Kanan&Al-Ubaidi,2015,Exp.EyeRes.133:126-131，其报告由视网膜细胞分泌的酪氨酸硫酸化的糖蛋白的产生。
酪氨酸硫酸化由于若干原因为有利的。举例来说，已证明针对靶标的治疗性抗体的抗原结合片段的酪氨酸硫酸化显著增加对抗原的亲合力和活性。参见例如Loos等人,2015,PNAS 112:12675-12680及Choe等人,2003,Cell 114:161-170。用于检测酪氨酸硫酸化的分析是本领域中已知的。参见例如Yang等人,2015,Molecules 20:2138-2164。
(c)O-糖基化
O-糖基化包括通过酶将N-乙酰基-半乳糖胺添加至丝氨酸或苏氨酸残基。已证明存在于抗体铰链区中的氨基酸残基可被O-糖基化。在某些实施方案中，根据本文所述的方法使用的抗VEGF抗原结合片段，例如兰尼单抗，包含其铰链区的全部或一部分，且因此当在人视网膜细胞中表达时能够被O-糖基化。与例如大肠杆菌中产生的抗原结合片段相比，O-糖基化的可能性赋予本文提供的HuPTMFabVEGFi(例如HuGlyFabVEGFi)另一个优势，同样因为大肠杆菌天然不含有与人O-糖基化中使用的机制相当的机制。(相反，仅当细菌被修饰以含有特定的O-糖基化机制时，才证明大肠杆菌中的O-糖基化。参见例如Faridmoayer等人,2007,J.Bacteriol.189:8088-8098。)O-糖基化的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，凭借具有聚糖，与N-糖基化的HuGlyFabVEGFi(如上文所论述)共有有利的特征。
6.3.2构建体和制剂
在一些态样中，本公开提供使用的核酸，其中所述核酸编码HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，且可操作地连接于选自由以下组成的组的启动子：细胞巨大病毒(CMV)启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)启动子、MMT启动子、EF-1α启动子、UB6启动子、鸡β-肌动蛋白启动子、CAG启动子、RPE65启动子及视蛋白启动子。
在一个特定实施方案中，本文所述的重组载体包含以下组分：(1)侧接表达盒的AAV2反向末端重复序列；(2)控制元件，其包括a)CB7启动子，包含CMV增强子/鸡β-肌动蛋白启动子，b)鸡β-肌动蛋白内含子及c)兔β-球蛋白poly A信号；及(3)编码抗VEGF抗原结合片段的重链和轻链的核酸序列，由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A接头分开，确保表达等量的重链和轻链多肽。
由转基因编码的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，可包括但不限于与VEGF结合的抗体的抗原结合片段，诸如贝伐珠单抗；抗VEGF Fab部分，诸如兰尼单抗；或被工程改造以在Fab结构域上含有额外糖基化位点的此类贝伐珠单抗或兰尼单抗Fab部分(例如，参见Courtois等人,2016,mAbs 8:99-112，其关于在全长抗体的Fab结构域上高糖基化的贝伐珠单抗衍生物的描述以引用的方式整体并入本文中)。
在某些实施方案中，本文提供的重组载体编码抗VEGF抗原结合片段转基因。在特定实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因受适当的表达控制元件控制以在视网膜细胞中表达：在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因包含轻链和重链cDNA序列(分别为SEQ ID NO.10和11)的贝伐珠单抗Fab部分。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因包含兰尼单抗轻链和重链cDNA序列(分别为SEQ ID NO.12和13)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码贝伐珠单抗Fab，其包含分别为SEQ ID NO:3和4的轻链和重链。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链的抗原结合片段，所述轻链包含与SEQ ID NO:3中所列的序列至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链的抗原结合片段，所述重链包含与SEQ ID NO:4中所列的序列至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链和重链的抗原结合片段，所述轻链包含与SEQ ID NO:3中所列的序列至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，所述重链包含与SEQ ID NO:4中所列的序列至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码高糖基化的兰尼单抗，其包含分别为SEQ ID NO:1和2的轻链和重链。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链的抗原结合片段，所述轻链包含与SEQ ID NO:1中所列的序列至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链的抗原结合片段，所述重链包含与SEQ ID NO:2中所列的序列至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链和重链的抗原结合片段，所述轻链包含与SEQ ID NO:1中所列的序列至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，所述重链包含与SEQ ID NO:2中所列的序列至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。
在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码高糖基化的贝伐珠单抗Fab，其包含SEQ ID NO:3和4的轻链和重链，具有以下突变中的一或多个：L118N(重链)、E195N(轻链)或Q160N或Q160S(轻链)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码高糖基化的兰尼单抗，其包含SEQ ID NO:1和2的轻链和重链，具有以下突变中的一或多个：L118N(重链)、E195N(轻链)或Q160N或Q160S(轻链)。抗原结合片段转基因cDNA的序列可见于例如表2中。在某些实施方案中，抗原结合片段转基因cDNA的序列是通过用表1中所列出的一种或多种信号序列置换SEQ ID NO:10和11或SEQ ID NO:12和13的信号序列。
在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码抗原结合片段且包含六个贝伐珠单抗CDR的核苷酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码抗原结合片段且包含六个兰尼单抗CDR的核苷酸序列。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含兰尼单抗的重链CDR 1-3(SEQ ID NO:20、18及21)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含兰尼单抗的轻链CDR 1-3(SEQ ID NO:14-16)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含贝伐珠单抗的重链CDR 1-3(SEQ ID NO:17-19)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含贝伐珠单抗的轻链CDR 1-3(SEQ ID NO:14-16)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区和轻链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含兰尼单抗的重链CDR 1-3(SEQ ID NO:20、18及21)，所述轻链可变区包含兰尼单抗的轻链CDR 1-3(SEQ IDNO:14-16)。在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区和轻链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含贝伐珠单抗的重链CDR 1-3(SEQ ID NO:17-19)，所述轻链可变区包含贝伐珠单抗的轻链CDR 1-3(SEQ ID NO:14-16)。
在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3，其中轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3，其中轻链CDR1的第八和第十一氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ IDNO.14)中的两个N各自携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3，其中轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)未乙酰化。在一个特定实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ IDNO:14-16的轻链CDR 1-3，其中轻链CDR1的第八和第十一氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQID NO.14)中的两个N各自携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)未乙酰化。在一个优选实施方案中，本文所述的化学修饰或没有化学修饰(视具体情况而定)通过质谱分析来确定。
在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的第九氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未乙酰化。在一个特定实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含重链可变区的抗原结合片段，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的第九氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQID NO.20)中的N)未乙酰化。在一个优选实施方案中，本文所述的化学修饰或没有化学修饰(视具体情况而定)通过质谱分析来确定。
在某些实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区和重链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且其中重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区和重链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中：(1)重链CDR1的第九氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)；及(2)轻链CDR1的第八和第十一氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ IDNO.14)中的两个N各自携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗VEGF抗原结合片段转基因编码包含轻链可变区和重链可变区的抗原结合片段，所述轻链可变区包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3，所述重链可变区包含SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)未乙酰化，且其中重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未乙酰化。在一个特定实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO.20的重链CDR1，其中：(1)重链CDR1的第九氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ IDNO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyroGlu)，重链CDR2的第三氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未乙酰化；及(2)轻链CDR1的第八和第十一氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ ID NO.14)中的两个N各自携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)未乙酰化。在一个优选实施方案中，本文所述的化学修饰或没有化学修饰(视具体情况而定)通过质谱分析来确定。
在某些态样中，本文还提供了包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3的抗VEGF抗原结合片段，及编码此类抗原VEGF抗原结合片段的转基因，其中轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中轻链CDR1的第八和第十一氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ IDNO.14)中的两个N各自携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ IDNO.16)中的第二Q)未乙酰化。在一个特定实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中轻链CDR1的第八和第十一氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ ID NO.14)中的两个N各自携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)未乙酰化。本文提供的抗VEGF抗原结合片段及转基因可用于本文所述的根据本发明的任何方法。在一个优选实施方案中，本文所述的化学修饰或没有化学修饰(视具体情况而定)通过质谱分析来确定。
在某些态样中，本文还提供了包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3的抗VEGF抗原结合片段，及编码此类抗原VEGF抗原结合片段的转基因，其中重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的第九氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗原结合片段包含SEQ IDNO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未乙酰化。在一个特定实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的第九氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未乙酰化。本文提供的抗VEGF抗原结合片段及转基因可用于本文所述的根据本发明的任何方法。在一个优选实施方案中，本文所述的化学修饰或没有化学修饰(视具体情况而定)通过质谱分析来确定。
在某些态样中，本文还提供了包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3的抗VEGF抗原结合片段，及编码此类抗原VEGF抗原结合片段的转基因，其中重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中：(1)重链CDR1的第九氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)；及(2)轻链CDR1的第八和第十一氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ ID NO.14)中的两个N各自携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)不携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)。在一个特定实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的N)未乙酰化，且轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)未乙酰化。在一个特定实施方案中，抗原结合片段包含SEQ ID NO:14-16的轻链CDR 1-3和SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1-3，其中：(1)重链CDR1的第九氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQ ID NO.20)中的M)携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，重链CDR2的第三氨基酸残基(即，WINTYTGEPTYAADFKR(SEQ ID NO.18)中的N携带以下化学修饰中的一或多种：乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且重链CDR1的最后一个氨基酸残基(即，GYDFTHYGMN(SEQID NO.20)中的N)未乙酰化；及(2)轻链CDR1的第八和第十一氨基酸残基(即，SASQDISNYLN(SEQ ID NO.14)中的两个N各自携带以下化学修饰中的一或多种：氧化、乙酰化、脱酰胺化及焦谷氨酸化(pyro Glu)，且轻链CDR3的第二氨基酸残基(即，QQYSTVPWTF(SEQ ID NO.16)中的第二Q)未乙酰化。本文提供的抗VEGF抗原结合片段及转基因可用于本文所述的根据本发明的任何方法。在一个优选实施方案中，本文所述的化学修饰或没有化学修饰(视具体情况而定)通过质谱分析来确定。
表2.例示性抗VEGF转基因和抗体序列
Figure BDA0003389530610000991
Figure BDA0003389530610001001
Figure BDA0003389530610001011
在某些实施方案中，本文提供的重组载体按以下顺序包含如下元件：a)组成型或低氧诱导型启动子序列，和b)编码转基因(例如抗VEGF抗原结合片段部分)的序列。在某些实施方案中，编码转基因的序列包含由IRES元件分隔的多个ORF。在某些实施方案中，ORF编码抗VEGF抗原结合片段的重链和轻链结构域。在某些实施方案中，编码转基因的序列在一个由F/F2A序列分隔的ORF中包含多个亚基。在某些实施方案中，包含转基因的序列编码由F/F2A序列分隔的抗VEGF抗原结合片段的重链和轻链结构域。在某些实施方案中，本文提供的病毒载体按以下顺序包含如下元件：a)组成型或低氧诱导型启动子序列，和b)编码转基因(例如抗VEGF抗原结合片段部分)的序列，其中所述转基因包含VEGF的信号肽(SEQ IDNO:5)，且其中所述转基因编码由IRES元件分隔的轻链和重链序列。在某些实施方案中，本文提供的重组载体按以下顺序包含如下元件：a)组成型或低氧诱导型启动子序列，和b)编码转基因(例如抗VEGF抗原结合片段部分)的序列，其中所述转基因包含VEGF的信号肽(SEQID NO:5)，且其中所述转基因编码由可裂解的F/F2A序列分隔的轻链和重链序列。
在某些实施方案中，本文提供的重组载体按以下顺序包含如下元件：a)第一ITR序列，b)第一接头序列，c)组成型或低氧诱导型启动子序列，d)第二接头序列，e)内含子序列，f)第三接头序列，g)第一UTR序列，h)编码转基因(例如抗VEGF抗原结合片段部分)的序列，i)第二UTR序列，j)第四接头序列，k)poly A序列，l)第五接头序列及m)第二ITR序列。
在某些实施方案中，本文提供的重组载体按以下顺序包含如下元件：a)第一ITR序列，b)第一接头序列，c)组成型或低氧诱导型启动子序列，d)第二接头序列，e)内含子序列，f)第三接头序列，g)第一UTR序列，h)编码转基因(例如抗VEGF抗原结合片段部分)的序列，i)第二UTR序列，j)第四接头序列，k)poly A序列，l)第五接头序列及m)第二ITR序列，其中所述转基因包含VEGF的信号肽(SEQ ID NO:5)，且其中所述转基因编码由可裂解的F/F2A序列分隔的轻链和重链序列。
在一个特定实施方案中，本文提供的重组载体为构建体II，其中所述构建体II包含以下组件：(1)侧接表达盒的AAV2反向末端重复序列；(2)控制元件，其包括a)CB7启动子，包含CMV增强子/鸡β-肌动蛋白启动子，b)鸡β-肌动蛋白内含子及c)兔β-球蛋白poly A信号；及(3)编码抗VEGF抗原结合片段的重链和轻链的核酸序列，由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A接头分隔，确保表达等量的重链和轻链多肽。在一个特定实施方案中，本文所述的构建体绘示于图5中。
6.3.3基因疗法
(a)目标患者群体
在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有眼部疾病(例如湿性AMD、干性AMD、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)(尤其湿性AMD))，尤其由新血管生成增加引起之眼部疾病的患者施用。
在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有严重AMD的患者施用。在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有减弱的AMD的患者施用。
在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有严重湿性AMD的患者施用。在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有减弱的湿性AMD的患者施用。
在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有严重糖尿病性视网膜病变的患者施用。在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有减弱的糖尿病性视网膜病变的患者施用。
在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有AMD的患者施用，所述患者已鉴别为对用抗VEGF抗体治疗有反应。
在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有AMD的患者施用，所述患者已鉴别为对用抗VEGF抗原结合片段治疗有反应。
在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有AMD的患者施用，所述患者已鉴别为在用基因疗法治疗之前对用玻璃体内注射的抗VEGF抗原结合片段治疗有反应。
在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有AMD的患者施用，所述患者已鉴别为对用
Figure BDA0003389530610001031
(兰尼单抗)、
Figure BDA0003389530610001032
(阿柏西普)和/或
Figure BDA0003389530610001033
(贝伐珠单抗)治疗有反应。
在某些实施方案中，如果在用基因疗法治疗之前在向患者玻璃体内注射抗VEGF抗原结合片段后，患者的液体有所改善，则经诊断患有AMD的患者鉴别为对用抗VEGF抗原结合片段(例如兰尼单抗)治疗有反应。在某些实施方案中，如果在用基因疗法治疗之前向患者玻璃体内注射抗VEGF抗原结合片段后，患者的液体有所改善且中心视网膜厚度(CRT)<400μm，则经诊断患有AMD的患者鉴别为对用抗VEGF抗原结合片段(例如兰尼单抗)治疗有反应。在一些实施方案中，在用基因疗法治疗之前，以每月0.5mg向患者玻璃体内注射抗VEGF抗原结合片段，持续两个月。在其他实施方案中，在用基因疗法治疗之前，以每月0.5mg向患者玻璃体内注射抗VEGF抗原结合片段，持续三个月。在一个优选实施方案中，如果患者视网膜内部(旁中心凹3mm)液体相对于玻璃体内注射抗VEGF抗原结合片段之前的水平改善>50μm或30％，或通过CRC所测定的中心子场厚度相对于玻璃体内注射抗VEGF抗原结合片段之前的水平改善>50μm或30％，则他或她的液体有所改善。
在某些实施方案中，本文提供的方法用于向诊断患有AMD的患者施用，所述患者患有除液体导致CRT(即，色素上皮脱落(PED)或视网膜下超反射物质(SHRM))增加以外的疾病及如通过CRC所测定，液体(视网膜内或视网膜下)<75μm。
在本文所述的方法的某些实施方案中，患者在治疗前待治疗的眼睛的BCVA≤20/20且≥20/400。在一个特定实施方案中，患者在治疗前待治疗的眼睛的BCVA≤20/63且≥20/400。
在本文所述的方法的某些实施方案中，患者在治疗前待治疗的眼睛的早期治疗糖尿病性视网膜病变研究(ETDRS)BCVA字母评分在≤78与≥44之间。
在本文所述的方法的某些实施方案中，患者不同时进行抗凝疗法。
(b)剂量
在某些实施方案中，维持治疗性产物在玻璃体液中至少0.330μg/mL或在房水(眼前房)中0.110μg/mL的Cmin浓度持续三个月的剂量为所需的；此后，应维持治疗性产物的玻璃体Cmin浓度介于1.70至6.60μg/mL，和/或房水Cmin浓度介于0.567至2.20μg/mL。然而，因为治疗性产物为连续产生的(在组成型启动子的控制下或在使用低氧诱导型启动子时由低氧条件诱导)，所以维持较低的浓度可为有效的。玻璃体液浓度可直接在自玻璃体液或前房收集的患者流体样品中测量，或通过测量患者的治疗性产物血清浓度来估计和/或监测--全身与玻璃体暴露于治疗性产物的比率为约1:90,000。(例如参见Xu L等人,2013,Invest.Opthal.Vis.Sci.54:1616-1624,第1621页和第1623页之表5中报告的兰尼单抗的玻璃体液和血清浓度，其以引用的方式整体并入本文中)。
在某些实施方案中，剂量是通过每毫升的基因组拷贝或施用患者眼睛(例如脉络膜上、视网膜下、玻璃体内、巩膜旁、结膜下和/或视网膜内(例如通过脉络膜上注射、经由经玻璃体方法方法外科手术)视网膜下注射、经由脉络膜上腔的视网膜下施用或后部巩膜旁储槽程序))的基因组拷贝数来量度。在某些实施方案中，施用每毫升2.4×1011个基因组拷贝至每毫升1×1013个基因组拷贝。在一个特定实施方案中，施用每毫升2.4×1011个基因组拷贝至每毫升5×1011个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升5×1011个基因组拷贝至每毫升1×1012个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升1×1012个基因组拷贝至每毫升5×1012个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升5×1012个基因组拷贝至每毫升1×1013个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约2.4×1011个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约5×1011个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约1×1012个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约5×1012个基因组拷贝。在另一特定实施方案中，施用每毫升约1×1013个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用1×109至1×1012个基因组拷贝。在特定实施方案中，施用3×109至2.5×1011个基因组拷贝。在特定实施方案中，施用1×109至2.5×1011个基因组拷贝。在特定实施方案中，施用1×109至1×1011个基因组拷贝。在特定实施方案中，施用1×109至5×109个基因组拷贝。在特定实施方案中，施用6×109至3×1010个基因组拷贝。在特定实施方案中，施用4×1010至1×1011个基因组拷贝。在特定实施方案中，施用2×1011至1×1012个基因组拷贝。在一个特定实施方案中，施用约3×109个基因组拷贝(其相当于250μl体积中每毫升约1.2×1010个基因组拷贝)。在另一特定实施方案中，施用约1×1010个基因组拷贝(其相当于250μl体积中每毫升约4×1010个基因组拷贝)。在另一特定实施方案中，施用约6×1010个基因组拷贝(其相当于250μl体积中每毫升约2.4×1011个基因组拷贝)。在另一特定实施方案中，施用约1.6×1011个基因组拷贝(其相当于250μl体积中每毫升约6.2×1011个基因组拷贝)。在另一特定实施方案中，施用约1.55×1011个基因组拷贝(其相当于250μl体积中每毫升约6.2×1011个基因组拷贝)。在另一特定实施方案中，施用约2.5×1011个基因组拷贝(其相当于250μl体积中每毫升约1.0×1012个基因组拷贝)。
在某些实施方案中，施用每只眼睛约6.0×1010个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛约1.6×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛约5.0×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛约3×1012个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛每毫升约1.0×1012个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛每毫升约2.5×1012个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛约3.0×1013个基因组拷贝。在某些实施方案中，施用每只眼睛多达3.0×1013个基因组拷贝。
在某些实施方案中，通过视网膜下注射施用每只眼睛约6.0×1010个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过视网膜下注射施用每只眼睛约1.6×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过视网膜下注射施用每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过视网膜下注射施用每只眼睛约3.0×1013个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过视网膜下注射施用每只眼睛多达3.0×1013个基因组拷贝。
在某些实施方案中，通过脉络膜上注射施用每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过脉络膜上注射施用每只眼睛约5.0×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过脉络膜上注射施用每只眼睛约3×1012个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过单次脉络膜上注射施用每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过两次脉络膜上注射施用每只眼睛约5.0×1011个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过脉络膜上注射施用每只眼睛约3.0×1013个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过脉络膜上注射施用每只眼睛多达3.0×1013个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过单次脉络膜上注射以100μl的体积施用每只眼睛每毫升约2.5×1012个基因组拷贝。在某些实施方案中，通过两次脉络膜上注射施用每只眼睛每毫升约2.5×1012个基因组拷贝，其中每次注射的体积为100μl。
如本文所用且除非另外规定，否则术语“约”意谓在既定值或范围的±10％内。在某些实施方案中，术语“约”涵盖所列举的确切数字。
(c)取样及监测功效
本文提供的方法对视觉缺陷的效应可通过BCVA(最佳矫正视力)、眼内压、裂隙灯活组织检视法和/或间接检眼镜检查法来测量。
在特定实施方案中，本文提供的方法对视觉缺陷的效应可通过经本文所述的方法治疗的人患者的眼睛在治疗后(例如治疗后46-50周或98-102周)是否达到大于43个字母的BCVA来测量。43个字母的BCVA对应于20/160近似斯内伦当量。在一个特定实施方案中，经本文所述的方法治疗的人患者的眼睛在治疗后(例如治疗后46-50周或98-102周)达到大于43个字母的BCVA。
在特定实施方案中，本文提供的方法对视觉缺陷的效应可通过经本文所述的方法治疗的人患者的眼睛在治疗后(例如治疗后46-50周或98-102周)是否达到大于84个字母的BCVA来测量。84个字母的BCVA对应于20/20近似斯内伦当量。在一个特定实施方案中，经本文所述的方法治疗的人患者的眼睛在治疗后(例如治疗后46-50周或98-102周)达到大于84个字母的BCVA。
本文提供的方法对眼睛/视网膜的物理变化的效应可通过SD-OCT(SD-光学相干断层摄影术)来测量。
可如通过视网膜电图描记(ERG)测量般监测功效。
本文提供的方法的效应可通过测量视力丧失、感染、炎症及其他安全事件(包括视网膜脱离)的迹象来监测。
可监测视网膜厚度以确定本文提供的方法的功效。在不受任何特定理论束缚的情况下，可将视网膜厚度用作临床读数，其中视网膜厚度的减少愈多或视网膜增厚之前的时间愈长，则治疗愈有效。视网膜功能可例如通过ERG确定。ERG是经FDA批准用于人的视网膜功能的非侵入性电生理测试，其是检查眼睛的光感受器细胞(视杆和视锥)及其连接的神经节细胞，特别是其对闪光刺激的反应。视网膜厚度可例如通过SD-OCT来确定。SD-OCT为一种三维成像技术，其使用低连贯性干涉术来确定回波时间延迟剂自目标物体反射的反向散射光的量值。OCT可用于以3至15μm轴向分辨率扫描组织样品(例如视网膜)的层，且SD-OCT与以前的技术形式相比可提高轴向分辨率和扫描速度(Schuman,2008,Trans.Am.Opthamol.Soc.106:426-458)。
本文提供的方法的效应亦可通过国家眼科研究所视觉功能问卷Rasch评分版(NEI-VFQ-28-R)(综合评分；活动限制域评分；及社会情感功能域评分)中相对于基线的变化来测量。本文提供的方法的效应也可通过国家眼科研究所视觉功能问卷25项版本(NEI-VFQ-25)(综合评分和心理健康分量表评分)中相对于基线的变化来测量。本文提供的方法的效应还可通过黄斑病治疗满意度问卷(MacTSQ)(综合评分；安全性、功效及不适域评分；以及信息提供及便利域评分)中相对于基线的变化来测量。
在特定实施方案中，本文所述的方法的功效是通过在约4周、12周、6个月、12个月、24个月、36个月或其他期望时间点的视力改善来反映。在一个特定实施方案中，视力改善的特征在于BCVA的增加，例如增加1个字母、2个字母、3个字母、4个字母、5个字母、6个字母、7个字母、8个字母、9个字母、10个字母、11个字母或12个字母或更多。在一个特定实施方案中，视力改善的特征在于视力相对于基线增加5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％或更多。
在特定实施方案中，本文所述的方法的功效是通过在约4周、12周、6个月、12个月、24个月、36个月或其他期望时间点中心视网膜厚度(CRT)的减小来反映，例如中心视网膜厚度相对于基线降低5％、10％、15％、20％、30％、40％、50％或更多。
在特定实施方案中，治疗后眼睛中不存在炎症或治疗后眼睛中几乎没有炎症(例如炎症水平相对于基线增加10％、5％、2％、1％或更小)。
如果人患者为儿童，则可使用基于视动性眼球震颤(OKN)的方法或基于OKN的改进方法来评定视觉功能。
6.4组合疗法
本文提供的方法可与一种或多种额外疗法组合。一方面，本文提供的方法与激光光凝术一起施用。一方面，本文提供的方法与使用维替泊芬的光动力疗法一起施用。
一方面，本文提供的方法与治疗性产物的玻璃体内(IVT)注射一起施用。在治疗性产物为抗VEGF抗体或抗原结合片段的一个特定实施方案中，本文提供的方法与抗VEGF剂的IVT注射一起施用，所述抗VEGF剂包括但不限于在人细胞系中产生的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi(Dumont等人,2015，见上文)，或其他抗VEGF剂，诸如派加替尼、兰尼单抗、阿柏西普或贝伐珠单抗。
可在基因疗法治疗之前、同时或之后施用额外疗法。
基因疗法治疗的功效可通过消除或减少使用护理标准的急救治疗的次数来表明。举例来说，当治疗性产物为抗VEGF抗体或抗原结合片段时，可通过消除或减少用抗VEGF剂进行玻璃体内注射的急救治疗的次数来表明基因疗法治疗的功效，所述抗VEGF剂包括但不限于在人细胞系中产生的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，或其他抗VEGF剂，诸如派加替尼、兰尼单抗、阿柏西普或贝伐珠单抗。
7.序列
SEQ ID NO:1
兰尼单抗FAB氨基酸序列(轻链)
Figure BDA0003389530610001061
SEQ ID NO:2
兰尼单抗FAB氨基酸序列(重链)
Figure BDA0003389530610001071
SEQ ID NO:3
贝伐珠单抗FAB氨基酸序列(轻链)
Figure BDA0003389530610001072
SEQ ID NO:4
贝伐珠单抗FAB氨基酸序列(重链)
Figure BDA0003389530610001073
SEQ ID NO:5
VEGF-A信号肽
Figure BDA0003389530610001074
SEQ ID NO:6
纤蛋白-1信号肽
Figure BDA0003389530610001075
SEQ ID NO:7
玻连蛋白信号肽
Figure BDA0003389530610001076
SEQ ID NO:8
补体因子H信号肽
Figure BDA0003389530610001077
SEQ ID NO:9
旋光蛋白信号肽
Figure BDA0003389530610001078
SEQ ID NO:10
贝伐珠单抗CDNA(轻链)
Figure BDA0003389530610001079
SEQ ID NO:11
贝伐珠单抗cDNA(重链)
Figure BDA0003389530610001081
SEQ ID NO:12
兰尼单抗cDNA(包含信号序列的轻链)
Figure BDA0003389530610001082
SEQ ID NO:13
兰尼单抗cDNA(包含信号序列的重链)
Figure BDA0003389530610001083
SEQ ID NO:14
贝伐珠单抗和兰尼单抗轻链CDR1
Figure BDA0003389530610001084
SEQ ID NO:15
贝伐珠单抗和兰尼单抗轻链CDR2
Figure BDA0003389530610001085
SEQ ID NO:16
贝伐珠单抗和兰尼单抗轻链CDR3
Figure BDA0003389530610001086
SEQ ID NO:17
贝伐珠单抗重链CDR1
Figure BDA0003389530610001087
SEQ ID NO:18
贝伐珠单抗和兰尼单抗重链CDR2
Figure BDA0003389530610001091
SEQ ID NO:19
贝伐珠单抗重链CDR3
Figure BDA0003389530610001092
SEQ ID NO:20
兰尼单抗重链CDR1
Figure BDA0003389530610001093
SEQ ID NO:21
兰尼单抗重链CDR1
Figure BDA0003389530610001094
SEQ ID NO:22
白蛋白信号肽
Figure BDA0003389530610001095
SEQ ID NO:23
胰凝乳蛋白酶原信号肽
Figure BDA0003389530610001096
SEQ ID NO:24
白介素-2信号肽
Figure BDA0003389530610001097
SEQ ID NO:25
胰蛋白酶原-2信号肽
Figure BDA0003389530610001098
SEQ ID NO:26
F2A位点
Figure BDA0003389530610001099
SEQ ID NO:27
T2A位点
Figure BDA00033895306100010910
SEQ ID NO:28
P2A位点
Figure BDA00033895306100010911
SEQ ID NO:29
E2A位点
Figure BDA00033895306100010912
SEQ ID NO:30
F2A位点
Figure BDA00033895306100010913
SEQ ID NO:31
弗林蛋白酶接头
Figure BDA00033895306100010914
SEQ ID NO:32
弗林蛋白酶接头
Figure BDA00033895306100010915
SEQ ID NO:33
弗林蛋白酶接头
Figure BDA0003389530610001101
SEQ ID NO:34
弗林蛋白酶接头
Figure BDA0003389530610001102
SEQ ID NO:35
弗林蛋白酶接头
Figure BDA0003389530610001103
SEQ ID NO:36
弗林蛋白酶接头
Figure BDA0003389530610001104
SEQ ID NO:37
弗林蛋白酶接头
Figure BDA0003389530610001105
SEQ ID NO:38
兰尼单抗Fab氨基酸序列(轻链)
Figure BDA0003389530610001106
SEQ ID NO:39
兰尼单抗Fab氨基酸序列(重链)
Figure BDA0003389530610001107
SEQ ID NO:40
兰尼单抗Fab氨基酸序列(重链)
Figure BDA0003389530610001108
SEQ ID NO:41
Figure BDA0003389530610001109
SEQ ID NO:42
Figure BDA00033895306100011010
SEQ ID NO:43
Figure BDA00033895306100011011
Figure BDA0003389530610001111
SEQ ID NO:44
Figure BDA0003389530610001112
SEQ ID NO:45
Figure BDA0003389530610001113
SEQ ID NO:46
Figure BDA0003389530610001114
SEQ ID NO:47
Figure BDA0003389530610001115
SEQ ID NO:48
Figure BDA0003389530610001116
SEQ ID NO:49
Figure BDA0003389530610001121
SEQ ID NO:50
Figure BDA0003389530610001122
SEQ ID NO:51
Figure BDA0003389530610001123
SEQ ID NO:52
精子形成相关7(SPATA7)；
AAH90875.1
Figure BDA0003389530610001124
SEQ ID NO:53LEBERCILIN(LCA5)
NP_001116241.1
Figure BDA0003389530610001125
SEQ ID NO:54
RPGR相互作用蛋白1(RPGRIP1)
CAD01135.1
Figure BDA0003389530610001131
SEQ ID NO:55
视锥-视杆同源框(CRX)
EAW57515.1
Figure BDA0003389530610001132
SEQ ID NO:56
CRUMBS细胞极性复合体组分1(CRB1)，同源物1同种型1前体
NP_957705.1
Figure BDA0003389530610001133
SEQ ID NO:57
CRUMBS细胞极性复合体组分1(CRB1)，同源物1同种型2前体
NP_001180569.1
Figure BDA0003389530610001141
SEQ ID NO:58
烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)
Q9HAN9.1
Figure BDA0003389530610001142
SEQ ID NO:59
烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；同种型CRA_A
EAW71635.1
Figure BDA0003389530610001143
SEQ ID NO:60
烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)，同种型2
NP_001284708.1
Figure BDA0003389530610001144
SEQ ID NO:61
烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)，同种型1
NP_073624.2
Figure BDA0003389530610001145
SEQ ID NO:62
中心体蛋白290(CEP290)；
NP_079390.3
Figure BDA0003389530610001151
SEQ ID NO:63
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X1
XP_011537059.1
Figure BDA0003389530610001161
SEQ ID NO:64
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X2
XP_011537060.1
Figure BDA0003389530610001171
SEQ ID NO:65
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X3
XP_011537061.1
Figure BDA0003389530610001181
SEQ ID NO:66
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X4
XP_011537062.1
Figure BDA0003389530610001191
SEQ ID NO:67
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X5
XP_016875469.1
Figure BDA0003389530610001201
SEQ ID NO:68
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X6
XP_011537063.1
Figure BDA0003389530610001211
SEQ ID NO:69
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X7
XP_016875470.1
Figure BDA0003389530610001212
Figure BDA0003389530610001221
SEQ ID NO:70
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X8
XP_016875471.1
Figure BDA0003389530610001222
Figure BDA0003389530610001231
SEQ ID NO:71
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X9
XP_011537064.1
Figure BDA0003389530610001232
Figure BDA0003389530610001241
SEQ ID NO:72
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X10
XP_011537065.1
Figure BDA0003389530610001242
SEQ ID NO:73
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X11
XP_016875472.1
Figure BDA0003389530610001251
SEQ ID NO:74
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X12
XP_011537066.1
Figure BDA0003389530610001261
SEQ ID NO:75
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X13
XP_011537067.1
Figure BDA0003389530610001262
Figure BDA0003389530610001271
SEQ ID NO:76
中心体蛋白290(CEP290)，同种型X14
XP_011537068.1
Figure BDA0003389530610001272
Figure BDA0003389530610001281
SEQ ID NO:77
肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)
EAL24310.1
Figure BDA0003389530610001282
SEQ ID NO:78
肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)
AAH33622.2
Figure BDA0003389530610001283
SEQ ID NO:79
肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)，同种型CRA_A
EAW83649.1
Figure BDA0003389530610001284
SEQ ID NO:80
肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)，同种型CRA_B
EAW83650.1
Figure BDA0003389530610001291
SEQ ID NO:81
肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)，同种型CRA_C
EAW83651.1
Figure BDA0003389530610001292
SEQ ID NO:82
肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)，同种型CRA_D
EAW83652.1
Figure BDA0003389530610001293
SEQ ID NO:83
视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)
NP_001158160.1
Figure BDA0003389530610001294
SEQ ID NO:84
视黄醇脱氢酶12(RDH12)
Q96NR8.3
Figure BDA0003389530610001295
SEQ ID NO:85
视黄醇脱氢酶12(RDH12)，同种型1，部分
ALQ34323.1
Figure BDA0003389530610001296
SEQ ID NO:86
视黄醇脱氢酶12(RDH12)，同种型4，部分
ALQ34324.1
Figure BDA0003389530610001301
SEQ ID NO:87
视黄醇脱氢酶12(RDH12)，前体
NP_689656.2
Figure BDA0003389530610001302
SEQ ID NO:88
卵磷脂视黄醇酰基转移酶(LRAT)
AAD13529.1
Figure BDA0003389530610001303
SEQ ID NO:89
短粗样蛋白1(TULP1)
AAB97966.1
Figure BDA0003389530610001304
SEQ ID NO:90
短粗样蛋白1(TULP1)，同种型CRA_A
EAX03839.1
Figure BDA0003389530610001305
SEQ ID NO:91
短粗样蛋白1(TULP1)，同种型CRA_B
EAX03840.1
Figure BDA0003389530610001306
SEQ ID NO:92
短粗样蛋白1(TULP1)，同源物同种型A
NP_003311.2
Figure BDA0003389530610001311
SEQ ID NO:93
短粗样蛋白1(TULP1)
NP_813977.1
Figure BDA0003389530610001312
SEQ ID NO:94
钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)
O60928.1
Figure BDA0003389530610001313
SEQ ID NO:95
钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)
AAH37290.1
Figure BDA0003389530610001314
SEQ ID NO:96
粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)
P03886.1
Figure BDA0003389530610001315
SEQ ID NO:97
粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)
ACT53103.1
Figure BDA0003389530610001316
SEQ ID NO:98
粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)
ACT53105.1
Figure BDA0003389530610001321
SEQ ID NO:99
血管紧张素I转换酶(ACE)
P12821.1
Figure BDA0003389530610001322
SEQ ID NO:100
血管紧张素I转换酶(ACE)，同种型1前体
NP_000780.1
Figure BDA0003389530610001323
SEQ ID NO:101
血管紧张素I转换酶(ACE)，同种型2前体
NP_690043.1
Figure BDA0003389530610001331
SEQ ID NO:102
白介素10(IL10)
CAG46790.1
Figure BDA0003389530610001332
SEQ ID NO:103
RAB护航蛋白1(CHM)
EAW98559.1
Figure BDA0003389530610001333
SEQ ID NO:104
视网膜分裂素(RS1)
NP_000321.1
Figure BDA0003389530610001334
SEQ ID NO:105
视网膜分裂素(RS1)，部分
ABK40506.1
Figure BDA0003389530610001335
SEQ ID NO:106
巴德-毕德氏综合征1(BBS1)
AAM92770.1
Figure BDA0003389530610001336
SEQ ID NO:107
巴德-毕德氏综合征2(BBS2)
AAH14140.1
Figure BDA0003389530610001341
SEQ ID NO:108
ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)，同种型BB3SL
NP_001310442.1
Figure BDA0003389530610001342
SEQ ID NO:109
ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)，同种型1
NP_001265222.1
Figure BDA0003389530610001343
SEQ ID NO:110
ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)，同种型2
NP_001310443.1
Figure BDA0003389530610001344
SEQ ID NO:111
巴德-毕德氏综合征4(BBS4)
AAH27624.1
Figure BDA0003389530610001345
SEQ ID NO:112
巴德-毕德氏综合征4(BBS4)，同种型1
NP_149017.2
Figure BDA0003389530610001346
SEQ ID NO:113
巴德-毕德氏综合征4(BBS4)，同种型2
NP_001239607.1
Figure BDA0003389530610001351
SEQ ID NO:114
巴德-毕德氏综合征4(BBS4)，同种型3
NP_001307594.1
Figure BDA0003389530610001352
SEQ ID NO:115
巴德-毕德氏综合征5(BBS5)
NP_689597.1
Figure BDA0003389530610001353
SEQ ID NO:116
巴德-毕德氏综合征5(BBS5)，同种型1
AAT08182.1
Figure BDA0003389530610001354
SEQ ID NO:117
巴德-毕德氏综合征5(BBS5)，同种型2
AAT08183.1
Figure BDA0003389530610001355
SEQ ID NO:118
麦-考综合征(MKKS)
AAH28973.1
Figure BDA0003389530610001356
SEQ ID NO:119
麦-考综合征(MKKS)，同种型CRA_A
EAX10343.1
Figure BDA0003389530610001361
SEQ ID NO:120
麦-考综合征(MKKS)，同种型CRA_B
EAX10344.1
Figure BDA0003389530610001362
SEQ ID NO:121
巴德-毕德氏综合征7(BBS7)
AAH32691.1
Figure BDA0003389530610001363
SEQ ID NO:122
巴德-毕德氏综合征7(BBS7)，同种型A
NP_789794.1
Figure BDA0003389530610001364
SEQ ID NO:123
巴德-毕德氏综合征7(BBS7)，同种型B
NP_060660.2
Figure BDA0003389530610001365
SEQ ID NO:124
三十四肽重复结构域8(TTC8)
AAH95433.1
Figure BDA0003389530610001371
SEQ ID NO:125
三十四肽重复结构域8(TTC8)，同种型A
NP_653197.2
Figure BDA0003389530610001372
SEQ ID NO:126
三十四肽重复结构域8(TTC8)，同种型B
NP_938051.1
Figure BDA0003389530610001373
SEQ ID NO:127
巴德-毕德氏综合征9(BBS9)
AAI03832.1
Figure BDA0003389530610001374
SEQ ID NO:128
巴德-毕德氏综合征10(BBS10)
AAH26355.2
Figure BDA0003389530610001381
SEQ ID NO:129
含三联基序32(TRIM32)
AAH03154.1
Figure BDA0003389530610001382
SEQ ID NO:130
含三联基序32(TRIM32)，同种型CRA_A
EAW87447.1
Figure BDA0003389530610001383
SEQ ID NO:131
巴德-毕德氏综合征12(BBS12)
AAH55426.1
Figure BDA0003389530610001384
SEQ ID NO:132
MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)
NP_060247.2
Figure BDA0003389530610001391
SEQ ID NO:133
含WD重复的平面细胞极性效应子(WDPCP)，同源物同种型1
NP_001036157.1
Figure BDA0003389530610001392
SEQ ID NO:134
含WD重复的平面细胞极性效应子(WDPCP)，同源物同种型2
NP_056994.3
Figure BDA0003389530610001393
SEQ ID NO:135
含WD重复的平面细胞极性效应子(WDPCP)，同源物同种型3
NP_001340973.1
Figure BDA0003389530610001394
SEQ ID NO:136
含WD重复的平面细胞极性效应子(WDPCP)，同源物同种型4
NP_001340974.1
Figure BDA0003389530610001401
SEQ ID NO:137
血清学定义的结肠癌抗原8(SDCCAG8)
Q86SQ7.1
Figure BDA0003389530610001402
SEQ ID NO:138
亮氨酸拉链转录因子样1(LZTFL1)
CAB95836.1
Figure BDA0003389530610001403
SEQ ID NO:139
BBSOME相互作用蛋白1(BBIP1)，同种型1
NP_001182233.1
Figure BDA0003389530610001404
SEQ ID NO:140
BBSOME相互作用蛋白1(BBIP1)，同种型2
NP_001182234.1
Figure BDA0003389530610001405
SEQ ID NO:141
纤毛内转运蛋白27(IFT27)，同源物同种型1
NP_001349932.1
Figure BDA0003389530610001406
SEQ ID NO:142
纤毛内转运蛋白27(IFT27)，同源物同种型2
NP_006851.1
Figure BDA0003389530610001407
SEQ ID NO:143
鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)
EAX04084.1
Figure BDA0003389530610001411
SEQ ID NO:144
OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；
AAH58013.1
Figure BDA0003389530610001412
SEQ ID NO:145
RP1轴突微管相关(RP1)
AAA20120.1
Figure BDA0003389530610001413
SEQ ID NO:146
ARL3 GTP酶的RP2活化因子(RP2)
ANZ79619.1
Figure BDA0003389530610001414
SEQ ID NO:147
外周蛋白2(PRPH2)
NP_000313.2
Figure BDA0003389530610001415
SEQ ID NO:148
前体MRNA加工因子31(PRPF31)
AAI17390.1
Figure BDA0003389530610001416
SEQ ID NO:149
前体MRNA加工因子31(PRPF31)，同种型CRA_A
EAW72190.1
Figure BDA0003389530610001421
SEQ ID NO:150
前体MRNA加工因子31(PRPF31)，同种型CRA_A
EAW72191.1
Figure BDA0003389530610001422
SEQ ID NO:151
前体MRNA加工因子8(PRPF8)
AAH64370.1
Figure BDA0003389530610001423
SEQ ID NO:152
前体MRNA加工因子8(PRPF8)，同种型CRA_A
EAW90588.1
Figure BDA0003389530610001431
SEQ ID NO:153
前体MRNA加工因子8(PRPF8)，同种型CRA_B
EAW90589.1
Figure BDA0003389530610001432
Figure BDA0003389530610001441
SEQ ID NO:154
前体MRNA加工因子8(PRPF8)，同种型CRA_C
EAW90590.1
Figure BDA0003389530610001442
SEQ ID NO:155
前体MRNA加工因子8(PRPF8)，同种型CRA_D
EAW90591.1
Figure BDA0003389530610001443
SEQ ID NO:156
前体MRNA加工因子8(PRPF8)，同种型CRA_E
EAW90592.1
Figure BDA0003389530610001444
SEQ ID NO:157
前体MRNA加工因子8(PRPF8)，同种型CRA_F
EAW90593.1
Figure BDA0003389530610001451
SEQ ID NO:158
前体MRNA加工因子8(PRPF8)，同种型CRA_G
EAW90594.1
Figure BDA0003389530610001452
SEQ ID NO:159
闭眼同源物(EYS)
CAR64275.1
Figure BDA0003389530610001461
SEQ ID NO:160
FAM161中心体蛋白A(FAM161A)，同种型1
NP_001188472.1
Figure BDA0003389530610001471
SEQ ID NO:161
FAM161中心体蛋白A(FAM161A)，同种型2
NP_115556.2
Figure BDA0003389530610001472
SEQ ID NO:162
MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；
Q12866.2
Figure BDA0003389530610001473
SEQ ID NO:163
磷酸二酯酶6B(PDE6B)
AAH00249.1
Figure BDA0003389530610001474
SEQ ID NO:164
磷酸二酯酶6B(PDE6B)，同种型CRA_A
EAW82661.1
Figure BDA0003389530610001481
SEQ ID NO:165
磷酸二酯酶6B(PDE6B)，同种型CRA_B
EAW82662.1
Figure BDA0003389530610001482
SEQ ID NO:166
PROMININ 1(PROM1)
O43490.1
Figure BDA0003389530610001483
SEQ ID NO:167
PROMININ 1(PROM1)，同种型CRA_A
EAW92750.1
Figure BDA0003389530610001491
SEQ ID NO:168
PROMININ 1(PROM1)，同种型CRA_B
EAW92751.1
Figure BDA0003389530610001492
SEQ ID NO:169
PROMININ 1(PROM1)，同种型CRA_C
EAW92752.1
Figure BDA0003389530610001493
SEQ ID NO:170
磷酸二酯酶6A(PDE6A)
AAH35909.1
Figure BDA0003389530610001494
SEQ ID NO:171
磷酸二酯酶6A(PDE6A)，同种型CRA_A
EAW61756.1
Figure BDA0003389530610001501
SEQ ID NO:172
磷酸二酯酶6A(PDE6A)，同种型CRA_B
EAW61757.1
Figure BDA0003389530610001502
SEQ ID NO:173
光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)
EAW79803.1
Figure BDA0003389530610001503
SEQ ID NO:174
雄性生殖细胞相关激酶(MAK)
AAN16405.1
Figure BDA0003389530610001504
SEQ ID NO:175
雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；富含视网膜的同种型
AEL29206.1
Figure BDA0003389530610001511
SEQ ID NO:176
纤毛内转运蛋白140(IFT140)
NP_055529.2
Figure BDA0003389530610001512
SEQ ID NO:177
HTRA丝氨酸肽酶1(HTRA1)
EAW49312.1
Figure BDA0003389530610001513
SEQ ID NO:178
斑萎蛋白1(BEST1)，同种型1
NP_004174.1
Figure BDA0003389530610001514
SEQ ID NO:179
斑萎蛋白1(BEST1)，同种型2
NP_001132915.1
Figure BDA0003389530610001521
SEQ ID NO:180
斑萎蛋白1(BEST1)，同种型3
ALQ33849.1
Figure BDA0003389530610001522
SEQ ID NO:181
斑萎蛋白1(BEST1)，同种型4
NP_001287716.1
Figure BDA0003389530610001523
SEQ ID NO:182
斑萎蛋白1(BEST1)，同种型5
NP_001350520.1
Figure BDA0003389530610001524
SEQ ID NO:183
斑萎蛋白1(BEST1)，同种型6
NP_001350521.1
Figure BDA0003389530610001525
SEQ ID NO:184
斑萎蛋白1(BEST1)，同种型7
NP_001350522.1
Figure BDA0003389530610001531
SEQ ID NO:185
斑萎蛋白1(BEST1)，同种型8
ALQ33852.1
Figure BDA0003389530610001532
SEQ ID NO:186
补体因子B
AAA16820.1
Figure BDA0003389530610001533
SEQ ID NO:187
β-淀粉样蛋白，部分
AAB29908.1
Figure BDA0003389530610001534
SEQ ID NO:188
β-淀粉样蛋白，部分
AAB26264.2
Figure BDA0003389530610001535
SEQ ID NO:189
CD59糖蛋白(CD59)
NP_001120697.1
Figure BDA0003389530610001536
SEQ ID NO:190
光敏感通道蛋白-1(CHR1)[团藻]
ABZ90901.1
Figure BDA0003389530610001541
SEQ ID NO:191
光敏感通道蛋白-2(CHR2)[团藻
ABZ90903.1
Figure BDA0003389530610001542
SEQ ID NO:192
补体因子C5，同种型1
NP_001726.2
Figure BDA0003389530610001543
SEQ ID NO:193
补体因子C5，同种型2
NP_001304092.1
Figure BDA0003389530610001551
SEQ ID NO:194
补体因子C5，同种型2
NP_001304093.1
Figure BDA0003389530610001552
SEQ ID NO:195
补体因子C5A
3PVM_A
Figure BDA0003389530610001553
Figure BDA0003389530610001561
SEQ ID NO:196
补体因子D，同种型1
NP_001919.2
Figure BDA0003389530610001562
SEQ ID NO:197
补体因子D，同种型2
NP_001304264.1
Figure BDA0003389530610001563
SEQ ID NO:198
DNAJ热休克蛋白家族(HSP40)成员C3(DNAJC3)，也称为P58IPK
NP_006251.1
Figure BDA0003389530610001564
SEQ ID NO:199
DNAJ热休克蛋白家族(HSP40)成员C3(DNAJC3)，也称为P58IPK，同种型X1
XP_011519406.1
Figure BDA0003389530610001565
SEQ ID NO:200
DNAJ热休克蛋白家族(HSP40)成员C3(DNAJC3)，也称为P58IPK，同种型X2
XP_011519407.1
Figure BDA0003389530610001571
SEQ ID NO:201
DNAJ热休克蛋白家族(HSP40)成员C3(DNAJC3)，也称为P58IPK，同种型X3
XP_016876163.1
Figure BDA0003389530610001572
SEQ ID NO:202
DNAJ热休克蛋白家族(HSP40)成员C3(DNAJC3)，也称为P58IPK，同种型X4
XP_016876164.1
Figure BDA0003389530610001573
SEQ ID NO:203
β-2肾上腺素受体
NP_000015.1
Figure BDA0003389530610001574
SEQ ID NO:204
半胱天冬酶-2(CASP2)
AAX36439.1
Figure BDA0003389530610001575
SEQ ID NO:205
胰岛素受体底物1(IRS1)
NP_005535.1
Figure BDA0003389530610001581
SEQ ID NO:206
HIF-1反应蛋白RTP801(RTP801)
Q9NX09.1
Figure BDA0003389530610001582
SEQ ID NO:207
转化生长因子β2(TGFB2)
AAH99635.1
Figure BDA0003389530610001583
SEQ ID NO:208
转化生长因子β2(TGFB2)，同种型CRA_A
EAW93326.1
Figure BDA0003389530610001584
SEQ ID NO:209
转化生长因子β2(TGFB2)，同种型CRA_B
EAW93327.1
Figure BDA0003389530610001585
SEQ ID NO:210
脑源性神经营养因子(BDNF)
AAO15434.1
Figure BDA0003389530610001591
SEQ ID NO:211
睫状神经营养因子(CNTF)
NP_000605.1
Figure BDA0003389530610001592
SEQ ID NO:212
前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)
BAA05698.1
Figure BDA0003389530610001593
SEQ ID NO:213
前列腺素F受体(PTGFR)
AAQ76788.1
Figure BDA0003389530610001594
SEQ ID NO:214
前列腺素F受体(PTGFR)，同种型CRA_A
EAX06350.1
Figure BDA0003389530610001595
SEQ ID NO:215
前列腺素F受体(PTGFR)，同种型CRA_B
EAX06351.1
Figure BDA0003389530610001596
SEQ ID NO:216
透明质酸酶
AAC70915.1
Figure BDA0003389530610001601
SEQ ID NO:217
色素上皮衍生因子(PEDF)；
P36955.4
Figure BDA0003389530610001602
SEQ ID NO:218
色素上皮衍生因子(PEDF)；同种型1前体
NP_001316832.1
Figure BDA0003389530610001603
SEQ ID NO:219
色素上皮衍生因子(PEDF)；同种型2
NP_001316834.1
Figure BDA0003389530610001604
SEQ ID NO:220
血管内皮生长因子(VEGF)
CAA44447.1
Figure BDA0003389530610001605
SEQ ID NO:221
胎盘生长因子(PGF)
AAH07789.1
Figure BDA0003389530610001606
SEQ ID NO:222
肌纤蛋白(MYOC)
BAA24532.1
Figure BDA0003389530610001607
SEQ ID NO:223
C-C基序趋化因子受体5(CCR5)
NP_001093638.1
Figure BDA0003389530610001611
SEQ ID NO:224
CD19
AAB60697.1
Figure BDA0003389530610001612
SEQ ID NO:225
CRUMBS细胞极性复合体组分2(CRB2)，前体
NP_775960.4
Figure BDA0003389530610001613
SEQ ID NO:226
CRUMBS细胞极性复合体组分2(CRB2)，同种型X1
XP_011516858.1
Figure BDA0003389530610001621
SEQ ID NO:227
CRUMBS细胞极性复合体组分2(CRB2)，同种型X2
XP_011516860.1
Figure BDA0003389530610001622
SEQ ID NO:228
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)
NP_006028.2
Figure BDA0003389530610001631
SEQ ID NO:229
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)同种型X2
XP_006712940.1
Figure BDA0003389530610001632
SEQ ID NO:230
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)同种型X3
XP_011510520.1
Figure BDA0003389530610001633
SEQ ID NO:231
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)同种型X4
XP_011510521.1
Figure BDA0003389530610001641
SEQ ID NO:232
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)同种型X5
XP_011510522.1
Figure BDA0003389530610001642
SEQ ID NO:233
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)同种型X6
XP_011510523.1
Figure BDA0003389530610001643
SEQ ID NO:234
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)同种型X7
XP_011510526.1
Figure BDA0003389530610001651
SEQ ID NO:235
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)同种型X8
XP_011510527.1
Figure BDA0003389530610001652
SEQ ID NO:236
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)同种型X9
XP_016860883.1
Figure BDA0003389530610001653
SEQ ID NO:237
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)同种型X10
XP_011510528.1
Figure BDA0003389530610001661
SEQ ID NO:238
组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)同种型X11
XP_006712943.1
Figure BDA0003389530610001662
SEQ ID NO:239
视紫质(RHO)
NP_000530.1
Figure BDA0003389530610001663
SEQ ID NO:240
神经生长因子(NGF)
CAA37703.1
Figure BDA0003389530610001664
SEQ ID NO:241
核因子红系2样2(NRF2)
AAB32188.1
Figure BDA0003389530610001671
SEQ ID NO:242
谷胱甘肽S-转移酶PI 1(GSTP1)
AAH10915.1
Figure BDA0003389530610001672
SEQ ID NO:243
视杆源性视锥活力因子(RDCVF)
NP_612463.1
Figure BDA0003389530610001673
SEQ ID NO:244
视黄醛结合蛋白1(RLBP1)
EAX02038.1
Figure BDA0003389530610001674
SEQ ID NO:245
双同源框4(DUX4)
AUA60624.1
Figure BDA0003389530610001675
SEQ ID NO:246
NLR家族含PYRIN结构域3(NLRP3)
AAI43360.1
Figure BDA0003389530610001681
SEQ ID NO:247
脾相关酪氨酸激酶(SYK)，同种型SYK(S)
NP_001167639.1
Figure BDA0003389530610001682
SEQ ID NO:248
脾相关酪氨酸激酶(SYK)，同种型SYK(L)
NP_003168.2
Figure BDA0003389530610001683
SEQ ID NO:249
促肾上腺皮质激素(ACTH)，前原蛋白
NP_000930.1
Figure BDA0003389530610001684
SEQ ID NO:250
半胱天冬酶1(CASP1)，同种型α前体
NP_001244047.1
Figure BDA0003389530610001691
SEQ ID NO:251
半胱天冬酶1(CASP1)，同种型β前体
NP_001244048.1
Figure BDA0003389530610001692
SEQ ID NO:252
CD59
CAG46523.1
Figure BDA0003389530610001693
SEQ ID NO:253
NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)
NP_001004354.1
Figure BDA0003389530610001694
SEQ ID NO:254
α-2-抗纤维蛋白溶酶(A2AP)，同种型A前体
NP_000925.2
Figure BDA0003389530610001695
SEQ ID NO:255
α-2-抗纤维蛋白溶酶(A2AP)，同种型B前体
NP_001159393.1
Figure BDA0003389530610001696
SEQ ID NO:256
纤维蛋白溶酶原(PLG)
AAA60113.1
Figure BDA0003389530610001701
SEQ ID NO:257
生长激素
AAA98618.1
Figure BDA0003389530610001702
SEQ ID NO:258
胰岛素样生长因子1(IGF1)
CAG46659.1
Figure BDA0003389530610001703
SEQ ID NO:259
白介素1β(IL1B)
AAA74137.1
Figure BDA0003389530610001704
SEQ ID NO:260
血管紧张素I转换酶2(ACE2)
ACT66268.1
Figure BDA0003389530610001705
SEQ ID NO:261
整合素α亚基前体
AAA51620.1
Figure BDA0003389530610001711
SEQ ID NO:262
整合素α亚基前体
P05556.2
Figure BDA0003389530610001712
SEQ ID NO:263
CD40
AAH64518.1
Figure BDA0003389530610001713
SEQ ID NO:264
胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)
AAI43722.1
Figure BDA0003389530610001721
SEQ ID NO:265
胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)
AAK56918.1
Figure BDA0003389530610001722
Figure BDA0003389530610001731
SEQ ID NO:266
RTP801
AAL38424.1
Figure BDA0003389530610001732
SEQ ID NO:267
基质金属蛋白酶2(MMP2)
BAA12023
Figure BDA0003389530610001733
SEQ ID NO:268
G蛋白偶联受体143(GPR143)
NP_000264
Figure BDA0003389530610001734
SEQ ID NO:269
G蛋白偶联受体143(GPR143)
EAW98773.1
Figure BDA0003389530610001735
SEQ ID NO:270
酪氨酸酶(TYR)
AAB60319.1
Figure BDA0003389530610001741
SEQ ID NO:271
半胱天冬酶2(CASP2)
CAG46548.1
Figure BDA0003389530610001742
SEQ ID NO:272
含亮氨酸富集重复序列和Ig结构域的蛋白质1(LINGO1)
AAH68558.1
Figure BDA0003389530610001743
SEQ ID NO:273
棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)
AAH08426.1
Figure BDA0003389530610001744
SEQ ID NO:274
三肽基-肽酶1(TPP1)
NP_000382.3
Figure BDA0003389530610001745
SEQ ID NO:275
BATTENIN(CLN3)
AAI11069.1
Figure BDA0003389530610001751
SEQ ID NO:276
CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)
NP_060352.1
Figure BDA0003389530610001752
SEQ ID NO:277
含主要易化子超家族结构域8(MFSD8)
AAH29503.1
Figure BDA0003389530610001753
SEQ ID NO:278
肌球蛋白VIIA(MYO7A)
AAB03679.1
Figure BDA0003389530610001754
Figure BDA0003389530610001761
SEQ ID NO:279
肌球蛋白VIIA(MYO7A)，同种型CRA_A
EAW75018.1
Figure BDA0003389530610001762
SEQ ID NO:280
肌球蛋白VIIA(MYO7A)，同种型CRA_B
EAW75019.1
Figure BDA0003389530610001771
SEQ ID NO:281
肌球蛋白VIIA(MYO7A)，同种型CRA_C
EAW75020.1
Figure BDA0003389530610001772
Figure BDA0003389530610001781
SEQ ID NO:282
肌球蛋白VIIA(MYO7A)，同种型CRA_D
EAW75021.1
Figure BDA0003389530610001782
SEQ ID NO:283
肌球蛋白VIIA(MYO7A)，同种型CRA_E
EAW75022.1
Figure BDA0003389530610001783
Figure BDA0003389530610001791
SEQ ID NO:284
肌球蛋白VIIA(MYO7A)，同种型CRA_F
EAW75023.1
Figure BDA0003389530610001792
SEQ ID NO:285
钙粘蛋白相关23(CDH23)
AAG27034.2
Figure BDA0003389530610001801
SEQ ID NO:286
原钙粘蛋白相关15(PCDH15)
AAK31581.1
Figure BDA0003389530610001811
SEQ ID NO:287
原钙粘蛋白相关15(PCDH15)，同种型CRA_A
EAW54151.1
Figure BDA0003389530610001812
SEQ ID NO:288
原钙粘蛋白相关15(PCDH15)，同种型X1
XP_016872062.1
Figure BDA0003389530610001821
SEQ ID NO:289
USHERIN(USH2A)，同种型A
NP_009054.5
Figure BDA0003389530610001822
SEQ ID NO:290
USHERIN(USH2A)，同种型B前体
NP_996816.2
Figure BDA0003389530610001831
Figure BDA0003389530610001841
SEQ ID NO:291
USHERIN(USH2A)，IIA型
AAC23748.2
Figure BDA0003389530610001851
SEQ ID NO:292
CLARIN 1(CLRN1)
AAH74971.1
Figure BDA0003389530610001852
SEQ ID NO:293
CLARIN 1(CLRN1)，同种型A
NP_777367.1
Figure BDA0003389530610001853
SEQ ID NO:294
CLARIN 1(CLRN1)，同种型D
NP_001182723.1
Figure BDA0003389530610001854
SEQ ID NO:295
CLARIN 1(CLRN1)，同种型C
NP_443721.1
Figure BDA0003389530610001855
SEQ ID NO:296
CLARIN 1(CLRN1)，同种型E
NP_001243748.1
Figure BDA0003389530610001856
SEQ ID NO:297
ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)
P78363.3
Figure BDA0003389530610001861
SEQ ID NO:298
ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)，同种型CRA_A
EAW73056.1
Figure BDA0003389530610001862
Figure BDA0003389530610001871
SEQ ID NO:299
ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)，同种型CRA_B
EAW73057.1
Figure BDA0003389530610001872
SEQ ID NO:300
ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)，同种型CRA_C
EAW73058.1
Figure BDA0003389530610001881
SEQ ID NO:301
ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)
NP_073563.1
Figure BDA0003389530610001882
SEQ ID NO:302
白介素6(IL6)
AAC41704.1
Figure BDA0003389530610001883
SEQ ID NO:303
TNF-α(TNF)
CAA26669.1
Figure BDA0003389530610001884
SEQ ID NO:304
L视蛋白(OPN1LW)
NP_064445.2
Figure BDA0003389530610001891
SEQ ID NO:305
M视蛋白(OPN1MW)
NP_000504.1
Figure BDA0003389530610001892
SEQ ID NO:306
视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)
Q02846.2
Figure BDA0003389530610001893
SEQ ID NO:307
类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)
NP_000320.1
Figure BDA0003389530610001894
SEQ ID NO:308
类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)，同种型X1
XP_016857516.1
Figure BDA0003389530610001901
SEQ ID NO:309
芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)
CAH25996.1
Figure BDA0003389530610001902
SEQ ID NO:310
芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)
CAH25995.1
Figure BDA0003389530610001903
SEQ ID NO:311
芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)
CAG17883.1
Figure BDA0003389530610001904
SEQ ID NO:312
芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)
CAG17882.1
Figure BDA0003389530610001905
SEQ ID NO:313
芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)
AAH12055.1
Figure BDA0003389530610001906
SEQ ID NO:314
C5B同种型1
NP_001726.2
Figure BDA0003389530610001911
SEQ ID NO:315
C5B，同种型2
NP_001304092.1
Figure BDA0003389530610001912
SEQ ID NO:316
C5B，同种型3
NP_001304093.1
Figure BDA0003389530610001921
SEQ ID NO:317
C6
NP_001108603.2
Figure BDA0003389530610001922
SEQ ID NO:318
C7
NP_000578.2
Figure BDA0003389530610001923
Figure BDA0003389530610001931
SEQ ID NO:319
C8α亚基
NP_000553.1
Figure BDA0003389530610001932
SEQ ID NO:320
C8β亚基
AAA51862.1
Figure BDA0003389530610001933
SEQ ID NO:321
C8γ亚基
AAA51888.1
Figure BDA0003389530610001934
8.实施例
8.1实施例1：基于贝伐珠单抗Fab cDNA的载体
构建基于贝伐珠单抗Fab cDNA的载体，其包含具有轻链和重链cDNA序列(分别为SEQ ID NO.10和11)的贝伐珠单抗Fab部分的转基因。所述转基因还包含具有选自表1中所列组的信号肽的核酸。编码轻链和重链的核苷酸序列是由IRES元件或2A裂解位点分隔，以产生双顺反子载体。任选地，所述载体另外包含低氧诱导型启动子。
8.2实施例2：基于兰尼单抗cDNA的载体
构建基于兰尼单抗Fab cDNA的载体，其包含具有兰尼单抗Fab轻链和重链cDNA(分别为SEQ ID NO.12和13的部分，不编码信号肽)的转基因。所述转基因还包含具有选自表1中所列组的信号肽的核酸。编码轻链和重链的核苷酸序列是由IRES元件或2A裂解位点分隔，以产生双顺反子载体。任选地，所述载体另外包含低氧诱导型启动子。
8.3实施例3：基于高糖基化的贝伐珠单抗Fab cDNA的载体
构建基于高糖基化的贝伐珠单抗Fab cDNA的载体，其包含具有轻链和重链cDNA序列(分别为SEQ ID NO.10和11)的贝伐珠单抗Fab部分的转基因，具有编码以下突变中的一或多个的序列突变：L118N(重链)、E195N(轻链)或Q160N或Q160S(轻链)。所述转基因还包含具有选自表1中所列组的信号肽的核酸。编码轻链和重链的核苷酸序列是由IRES元件或2A裂解位点分隔，以产生双顺反子载体。任选地，所述载体另外包含低氧诱导型启动子。
8.4实施例4：基于高糖基化的兰尼单抗cDNA的载体
构建基于高糖基化的兰尼单抗Fab cDNA的载体，其包含具有兰尼单抗Fab轻链和重链cDNA(分别为SEQ ID NO.12和13的部分，不编码信号肽)的转基因，具有编码以下突变中的一或多个的序列突变：L118N(重链)、E195N(轻链)或Q160N或Q160S(轻链)。所述转基因还包含具有选自表1中所列组的信号肽的核酸。编码轻链和重链的核苷酸序列是由IRES元件或2A裂解位点分隔，以产生双顺反子载体。任选地，所述载体另外包含低氧诱导型启动子。
8.5实施例5：基于兰尼单抗的HuGlyFabVEGFi
基于兰尼单抗Fab cDNA的载体(参见实例2)在AAV8背景的
Figure BDA0003389530610001941
细胞系(Lonza)中表达。确定所得产物，基于兰尼单抗的HuGlyFabVEGFi稳定产生。通过肼解和MS/MS分析证实HuGlyFabVEGFi的N-糖基化。参见例如Bondt等人,Mol.&Cell.Proteomics13.11:3029-3039。基于聚糖分析，证实HuGlyFabVEGFi被N-糖基化，其中2,6唾液酸为主要修饰。使用本领域中已知的方法确定N-糖基化的HuGlyFabVEGFi的有利特性。可发现HuGlyFabVEGFi的稳定性增加且对其抗原(VEGF)的亲和力增加。关于评定稳定性的方法，参见Sola和Griebenow,2009,J Pharm Sci.,98(4):1223-1245，而关于评定亲和力的方法，参见Wright等人,1991,EMBO J.10:2717-2723及Leibiger等人,1999,Biochem.J.338:529-538。
8.6实施例6：通过外周注射用基于兰尼单抗的HuGlyFabVEGFi治疗湿性AMD
基于确定基于兰尼单抗的HuGlyFabVEGFi的有利特征(参见实例5)，认为基于兰尼单抗Fab cDNA的载体在作为转基因表达时，对治疗湿性AMD有用。向患有湿性AMD的受试者施用编码兰尼单抗Fab的AAV8，其剂量足以在玻璃体液中产生Cmin为至少0.330μg/mL的浓度的转基因产物，持续三个月。施用是通过外周注射到视网膜中(即，位于眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周)的视网膜下施用来完成，所述视网膜下施用通过经玻璃体注射来实现。在治疗后，评估受试者的湿性AMD症状的改善。
8.7实施例7：基于棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1cDNA的载体
构建基于棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)cDNA的载体，其包含具有对应于SEQ IDNO.273的氨基酸序列的核苷酸序列的转基因。任选地，所述载体另外包含低氧诱导型启动子。
8.8实施例8：通过外周注射用基于棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1cDNA的载体治疗Batten-CLN1相关的视力丧失
向患有Batten-CLN1相关的视力丧失的受试者施用编码棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1的AAV8或AAV9，其剂量足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。施用是通过外周注射到视网膜中(即，位于眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周)的视网膜下施用来完成，所述视网膜下施用通过经玻璃体注射来实现。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN1相关的视力丧失的改善。
本文提供的方法对视觉缺陷的效应是通过一种或多种视力筛查来测量，包括视动性眼球震颤(OKN)。OKN视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN用于测量言语前和/或非言语患者，包括1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。计算所述治疗之前和之后OKN筛查结果的百分比变化。
8.9实施例9：通过脉络膜上注射用基于棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1cDNA的载体治疗Batten-CLN1相关的视力丧失
向患有Batten-CLN1相关的视力丧失的受试者施用编码棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1的AAV8或AAV9，其剂量足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。施用是通过向脉络膜上腔施用来完成。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN1相关的视力丧失的改善。
本文提供的方法对视觉缺陷的效应是通过一种或多种视力筛查来测量，包括视动性眼球震颤(OKN)。OKN视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN用于测量言语前和/或非言语患者，包括1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。计算所述治疗之前和之后OKN筛查结果的百分比变化。
8.10实施例10：通过经由玻璃体切除术进行视网膜下注射用基于棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1cDNA的载体治疗Batten-CLN1相关的视力丧失
向患有Batten-CLN1相关的视力丧失的受试者施用编码棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1的AAV8或AAV9，其剂量足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。施用是通过经由玻璃体切除术向视网膜下腔施用来完成。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN1相关的视力丧失的改善。
本文提供的方法对视觉缺陷的效应是通过一种或多种视力筛查来测量，包括视动性眼球震颤(OKN)。OKN视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN用于测量言语前和/或非言语患者，包括1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。计算所述治疗之前和之后OKN筛查结果的百分比变化。
8.11实施例11：通过经由脉络膜上腔的视网膜下施用用基于棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1cDNA的载体治疗Batten-CLN1相关的视力丧失
向患有Batten-CLN1相关的视力丧失的受试者施用编码棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1的AAV8或AAV9，其剂量足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。施用是通过经由脉络膜上腔向视网膜下腔施用来完成。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN1相关的视力丧失的改善。
本文提供的方法对视觉缺陷的效应是通过一种或多种视力筛查来测量，包括视动性眼球震颤(OKN)。OKN视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN用于测量言语前和/或非言语患者，包括1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。计算所述治疗之前和之后OKN筛查结果的百分比变化。
8.12实施例12：基于三肽基-肽酶1(TPP1)cDNA的载体
构建基于三肽基-肽酶1(TPP1)cDNA的载体，其包含具有对应于SEQ ID NO.274的氨基酸序列的核苷酸序列的转基因。任选地，所述载体另外包含低氧诱导型启动子。
8.13实施例13：通过外周注射用基于三肽基-肽酶1(TPP1)cDNA的载体治疗Batten-CLN2相关的视力丧失
向患有Batten-CLN2相关的视力丧失的受试者施用编码三肽基-肽酶1的AAV8或AAV9，其剂量足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。施用是通过外周注射到视网膜中(即，位于眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周)的视网膜下施用来完成，所述视网膜下施用通过经玻璃体注射来实现。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN2相关的视力丧失的改善。
本文提供的方法对视觉缺陷的效应是通过一种或多种视力筛查来测量，包括视动性眼球震颤(OKN)。OKN视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN用于测量言语前和/或非言语患者，包括1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。计算所述治疗之前和之后OKN筛查结果的百分比变化。
8.14实施例14：通过脉络膜上注射用基于三肽基-肽酶1(TPP1)cDNA的载体治疗Batten-CLN2相关的视力丧失
向患有Batten-CLN2相关的视力丧失的受试者施用编码三肽基-肽酶1的AAV8或AAV9，其剂量足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。施用是通过向脉络膜上腔施用来完成。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN2相关的视力丧失的改善。
本文提供的方法对视觉缺陷的效应是通过一种或多种视力筛查来测量，包括视动性眼球震颤(OKN)。OKN视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN用于测量言语前和/或非言语患者，包括1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。计算所述治疗之前和之后OKN筛查结果的百分比变化。
8.15实施例15：通过经由玻璃体切除术进行视网膜下注射用基于三肽基-肽酶1cDNA的载体治疗Batten-CLN2相关的视力丧失
向患有Batten-CLN2相关的视力丧失的受试者施用编码三肽基-肽酶1的AAV8或AAV9，其剂量足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。施用是通过经由玻璃体切除术向视网膜下腔施用来完成。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN2相关的视力丧失的改善。
本文提供的方法对视觉缺陷的效应是通过一种或多种视力筛查来测量，包括视动性眼球震颤(OKN)。OKN视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN用于测量言语前和/或非言语患者，包括1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。计算所述治疗之前和之后OKN筛查结果的百分比变化。
8.16实施例16：通过经由脉络膜上腔的视网膜下施用用基于三肽基-肽酶1cDNA的载体治疗Batten-CLN2相关的视力丧失
向患有Batten-CLN2相关的视力丧失的受试者施用编码三肽基-肽酶1的AAV8或AAV9，其剂量足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。施用是通过经由脉络膜上腔向视网膜下腔施用来完成的。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN2相关的视力丧失的改善。
本文提供的方法对视觉缺陷的效应是通过一种或多种视力筛查来测量，包括视动性眼球震颤(OKN)。OKN视力筛查使用OKN非自主反射的原理来客观地评定患者的眼睛是否可跟随移动的目标。通过使用OKN，测试者与患者之间无需口头交流。因此，OKN用于测量言语前和/或非言语患者，包括1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、1岁、1.5岁、2岁、2.5岁、3岁、3.5岁、4岁、4.5岁或5岁患者的视力。计算所述治疗之前和之后OKN筛查结果的百分比变化。
8.17实施例17：评估构建体II基因疗法对患有nAMD的参与者的安全性和功效的随机分组、部分掩蔽、对照的2b期临床研究
8.17.1大纲
主要目标.
评估构建体II在第50周与兰尼单抗相比的最佳矫正视力(BCVA)的平均变化。
次要目标.
评估构建体II至第102周的安全性和耐受性。评估构建体II对BCVA的影响。评估构建体II对通过谱域-光学相干断层摄影术(SD-OCT)所测量的中心视网膜厚度(CRT)的影响。评定在构建体II治疗组中对补充抗血管内皮生长因子(VEGF)疗法的需求。评定构建体II的房水蛋白质浓度。评估构建体II的免疫原性。
探索性目标.
评估地图状萎缩区域随时间的变化，且在基线无迹象的参与者中评定新的地图状萎缩区域的发生率。评定SD-OCT上无液体的参与者的比例。评定房水VEGF-A浓度。使用患者报告的结果(PRO)问卷评估视觉功能和治疗满意度。
研究设计.
此2b期部分掩蔽、随机分组、多中心研究将包括3个时期：有效导入期(即筛查)、治疗期及延长期。在完成或提前中止当前研究后，将要求接受构建体II的参与者参加长期随访研究，且在彼时签署单独的随访研究知情同意书。
有效导入期将持续长达10周，从参与者签署知情同意书时开始，并且在参与者经过资格评估并接受3次每月的兰尼单抗0.5mg的玻璃体内注射后结束。治疗期将持续长达12个月，从参与者随机分组进行研究治疗时开始且在第50周结束。延长期将持续长达12个月，从第50周后开始且在第102周结束。
在第1次筛查随访(第-10周)，符合纳入/排除准则的参与者将进入研究且在研究眼睛中接受0.5mg兰尼单抗的玻璃体内注射。在第2次筛查随访(第-6周)，参与者将在研究眼睛中接受第二次0.5mg兰尼单抗的玻璃体内注射。一周后，在第3次筛查随访(第-5周)，参与者在SD-OCT上的解剖反应将针对预先规定的反应准则进行评估。不符合反应准则的参与者将退出研究。如果参与者符合所有纳入准则，则在第4次筛查随访(第-2周)，参与者将被随机分组。在筛查期间退出或不符合随机分组资格且发生与玻璃体内兰尼单抗注射相关的不良事件(AE)的任何参与者将被随访，直到AE解决(注射后至多30天)。在第4次筛查随访中鉴别为符合条件的参与者将在研究眼睛中接受第三次0.5mg兰尼单抗的玻璃体内注射。在中央阅读中心(CRC)验证CRT后，将使用交互式反应技术系统将参与者随机分组(1:1:1)，以接受单次剂量的构建体II(剂量1)、单次剂量的构建体II(剂量2)或每月玻璃体内兰尼单抗0.5mg；构建体II将通过视网膜下递送施用。参与者将根据随机分组的基线(第4次筛查随访)BCVA评分(>58个字母对≤58个字母)进行分层。
随机分配至构建体II治疗组的参与者将在第1天进行外科手术，随后在第2天和第8天进行随访以评定术后安全性。在第2周，参与者将接受玻璃体内兰尼单抗，以补充在玻璃体切除术期间可能去除的任何抗VEGF，且提供抗VEGF疗法覆盖，同时基因疗法介导的蛋白质的潜在产量逐步上升。随后，参与者将从第6周开始每月进行一次检查，在此期间，如果需要，可施用补充玻璃体内兰尼单抗0.5mg疗法，如通过完全掩蔽的对SD-OCT数据的CRC评估及完全掩蔽的视力评估者对BCVA的评估所确定。注意，掩蔽的评定者的SD-OCT和BCVA结果及预定义的再治疗准则将为研究者提供补充抗VEGF疗法的决定提供依据。
随机分配至兰尼单抗对照组的参与者将在第2周进行首次随机分组后随访，并且接受玻璃体内兰尼单抗0.5mg。在第2周随访后，参与者将每月(～28天)进行研究随访，在此期间，他们将接受兰尼单抗0.5mg的玻璃体内注射。
在第50周的主要终点，兰尼单抗对照组的参与者若仍符合关键的纳入/排除准则，则将有机会接受构建体II治疗。治疗医师将确定参与者是否符合条件且是否为手术的良好候选者。随后将向合格的参与者施用此方案中评估的最高耐受剂量。在第50周后切换至构建体II的兰尼单抗对照组的参与者将遵循与最初随机分组接受构建体II的参与者在第1天开始的随访时程相同的随访时程。选择不接受构建体II治疗或不符合构建体II治疗条件的那些参与者将自研究中终止。
在整个研究过程中，将经由评定眼部和非眼部AE，包括严重不良事件(SAE)和特别受关注的不良事件(AESI)(研究者认为与手术/研究程序无关，且在眼部炎症分级量表上分级为2+或更高的眼部炎症、眼部感染[包括眼内炎]、视网膜撕裂或脱落、视网膜变薄及新的动脉血栓栓塞事件[非致命性中风、非致命性心肌梗塞或血管性死亡(包括原因不明的死亡)])，以及评定临床实验室测试(化学、血液学、凝血、尿分析)、眼部检查及成像(BCVA、眼内压、裂隙灯活组织检视法、间接检眼镜检查法、荧光素血管造影[FA]、眼底自发荧光检查[FAF]及SD-OCT)及生命体征来评估参与者。注意，所有研究随访均会收集AE。还将评定对构建体II的载体和转基因产物(TP)的免疫原性。患者报告的结果将使用补充的国家眼科研究所视觉功能问卷25项版本(NEI-VFQ-25)(还包含Rasch评分版本NEI-VFQ-28-R)和黄斑疾病治疗满意度问卷(MacTSQ)来收集。
将持续对研究参与者进行有计划的安全监测。其包括由部分掩蔽的医疗监测员进行的审查及由部分掩蔽的主办方内部安全委员会进行的例行审查。另外，还将建立独立的数据监测委员会(IDMC)，且定期召开会议以独立地审查临床数据。如果需要进行未掩蔽的审查以了解潜在的安全信号，则这些审查将由IDMC进行。
诊断及主要纳入准则.
为了有资格参加此研究，年龄≥50岁且≤89岁的参与者必须在研究眼睛中诊断出继发于年龄相关性黄斑变性的中央凹下脉络膜新生血管。来自中心子场流体当前图像的光学相干断层摄影文档必须由CRC确认。参与者的研究眼睛的BCVA字母评分必须在≤78与≥44之间，且研究眼睛为伪晶状体(白内障术后状态)。在解释研究性质之后且在进行任何研究相关程序之前，参与者还必须愿意且能够为此研究提供书面、签署的知情同意书。
研究产品、剂量及施用模式.
构建体II剂量1：1.6×1011GC/眼睛(6.2×1011GC/mL)。构建体II剂量2：2.5×1011GC/眼睛(1.0×1012GC/mL)。构建体II是经由视网膜下递送施用的(单次剂量250μL)。
治疗持续时间.
在构建体II治疗组中：1天。在兰尼单抗对照组中：50周
参考疗法、剂量及施用模式.
大约每28天通过玻璃体内注射施用兰尼单抗((
Figure BDA0003389530610002001
Genentech)0.5mg(0.05mL的10mg/mL溶液)。
在导入期(第1次、第2次及第4次筛查随访)及第2周，还将在所有治疗组中施用玻璃体内兰尼单抗0.5mg作为补充抗VEGF疗法。构建体II组的参与者将根据再治疗准则对在第6周开始接受玻璃体内兰尼单抗0.5mg作为补充抗VEGF疗法进行评估；在第50周后切换至构建体II的兰尼单抗对照组的参与者将在第54周接受玻璃体内兰尼单抗0.5mg，且将根据再治疗准则对在第58周开始接受玻璃体内兰尼单抗0.5mg作为补充抗VEGF疗法进行评估。
评估准则.
主要终点：
基于早期治疗糖尿病性视网膜病变研究(ETDRS)评分，BCVA从基线至第50周(作为第46周和第50周的平均值)的平均变化
次要终点：
经50周的眼部和非眼部AE的发生率。
经102周的眼部和非眼部AE的发生率。
BCVA从基线至第102周(作为第98周和第102周的平均值)的平均变化。
在第50周(作为第46周和第50周的平均值)及第102周(作为第98周和第102周的平均值)，BCVA为43个字母(20/160近似斯内伦当量)或更差的参与者的比例。
在第50周(作为第46周和第50周的平均值)及第102周(作为第98周和第102周的平均值)，BCVA为84个字母(20/20近似斯内伦当量)或更好的参与者的比例。
在第50周(作为第46周和第50周的平均值)及第102周(作为第98周和第102周的平均值)，根据BCVA，与基线相比，(1)获得或失去≥15、≥10、≥5或≥0个字母；(2)维持视力(未失去≥15个字母)的参与者的比例。
接受≤2次补充抗VEGF注射、2次补充抗VEGF注射、1次补充抗VEGF注射或0次补充抗VEGF的参与者(构建体II随机参与者)的BCVA从基线至第50周(作为第46周和第50周的平均值)的平均变化。
BCVA从第50周至第102周(作为第98周和第102周的平均值)的平均变化(切换至构建体II的对照组参与者)。
如通过SD-OCT所测量的CRT从基线至第50周(作为第46周和第50周的平均值)及第102周(作为第98周和第102周的平均值)的平均变化。
如通过SD-OCT所测量的CRT从第50周至第102周(作为第98周和第102周的平均值)的平均变化(切换至构建体II的对照组参与者)。
与作为有效导入期的一部分而接受第一次玻璃体内兰尼单抗注射之前的前50周相比，至第50周和第102周补充抗VEGF注射率降低≥50％的参与者的比例(构建体II随机参与者)。
与作为有效导入期的一部分而接受第一次兰尼单抗注射之前的前50周相比，至第50周及第102周补充抗VEGF注射率的平均减少量(构建体II随机参与者)。
构建体II组中至第50周及第102周的补充抗VEGF注射的平均次数；相对于研究之前50周，在第50周后至第102周的补充抗VEGF注射的平均次数(切换至构建体II的对照组参与者)。
在构建体II组第2周注射后首次补充抗VEGF注射的时间。
在第2周至第26周后，第26周至第50周后，第50周至第74周后，第74周至第102周后，第2周至第50周后及第2周至第10周后，接受补充抗VEGF注射的构建体II组参与者的比例
在评定时间点的房水构建体II TP浓度；在评定时间点的免疫原性测量(针对AAV8的血清中和抗体和针对构建体II TP的血清抗体)。
探索性终点：
基于评定时间点的FAF的地图状萎缩区域相对于基线的平均变化。
根据FAF的新的地图状萎缩区域的发生率(在基线时无地图状萎缩的参与者)。
滤泡区域视网膜变薄的发生率。
SD-OCT上无液体的参与者的比例。
评定时间点的VEGF-A浓度(房水)。
在评定时间点，NEI-VFQ-28-R(综合评分；活动限制域评分；及社会情感功能域评分)相对于基线的平均变化。
在评定时间点，NEI-VFQ-25(综合评分及心理健康分量表评分)相对于基线的平均变化。
在评定时间点，MacTSQ(综合评分；安全、功效和不适域评分；及信息提供和便利域评分)相对于基线的平均变化。
表3.目标和终点
Figure BDA0003389530610002011
Figure BDA0003389530610002021
Figure BDA0003389530610002031
AAV8＝腺相关病毒血清型8；AE＝不良事件；BCVA＝最佳矫正视力；
CRT＝中心视网膜厚度；ETDRS＝早期治疗糖尿病性视网膜病变研究；FAF＝眼底自发荧光检查；MacTSQ＝黄斑疾病治疗满意度问卷；NEI-VFQ-25＝国家眼科研究所视觉功能问卷25项版本；NEI-VFQ-28-R＝国家眼科研究所视觉功能问卷28项Rasch评分版本；PRO＝患者报告的结果；SD-OCT＝谱域-光学相干断层摄影术；TP＝转基因产物；VEGF＝血管内皮生长因子
8.17.2研究设计
总体研究设计
此2b期部分掩蔽、随机分组、多中心研究将包括3个时期：有效导入期(即筛查)、治疗期及延长期。在完成或提前中止当前研究后，将要求接受构建体II的参与者参加长期随访研究，且在彼时签署单独的随访研究知情同意书。
有效导入期将持续长达10周，自参与者签署知情同意书(ICF)时开始，且在参与者经过资格评估并接受3次每月的玻璃体内兰尼单抗注射后结束。治疗期将持续长达12个月，自参与者随机分组进行研究治疗时开始且在第50周结束。延长期将持续长达12个月，从第50周后开始且在第102周结束。
在第1次筛查随访(第-10周)，符合纳入/排除准则的参与者将进入研究且在研究眼睛中接受0.5mg兰尼单抗的玻璃体内注射。在第2次筛查随访(第-6周)，参与者将在研究眼睛中接受第二次0.5mg兰尼单抗的玻璃体内注射。一周后，在第3次筛查随访(第-5周)，参与者在SD-OCT上的解剖反应将针对预先规定的反应准则进行评估。不符合反应准则的参与者将退出研究。如果参与者符合所有纳入准则，则在第4次筛查随访(第-2周)，参与者将被随机分组。在筛查期间退出或不符合随机分组资格且发生与玻璃体内兰尼单抗注射相关的AE的任何参与者将被随访，直到AE解决(注射后至多30天)。在第4次筛查随访中鉴别为符合条件的参与者将在研究眼睛中接受第三次0.5mg兰尼单抗的玻璃体内注射。在中央阅读中心(CRC)验证中心视网膜厚度(CRT)后，将使用交互式反应技术系统(IRT)将参与者随机分组(1:1:1)，以接受单次剂量的构建体II(剂量1)、单次剂量的构建体II(剂量2)或每月玻璃体内兰尼单抗0.5mg；构建体II将通过视网膜下递送施用。参与者将根据随机分组的基线(第4次筛查随访)最佳矫正视力(BCVA)评分(>58个字母对≤58个字母)进行分层。
随机分配至构建体II治疗组的参与者将在第1天进行外科手术，随后在第2天和第8天进行随访以评定术后安全性。在第2周，参与者将接受玻璃体内兰尼单抗，以补充在玻璃体切除术期间可能去除的任何抗VEGF，提供抗VEGF疗法覆盖，同时基因疗法介导的蛋白质的潜在产量逐步上升。随后，参与者将从第6周开始每月进行一次检查，在此期间，如果需要，可施用补充玻璃体内兰尼单抗0.5mg疗法，如通过完全掩蔽的对SD-OCT数据的CRC评估及完全掩蔽的VA评定者对BCVA的评估所确定。注意，SD-OCT和BCVA结果及预定义的再治疗准则将为研究者提供补充抗VEGF疗法的决定提供依据。
随机分配至兰尼单抗对照组的参与者将在第2周进行首次随机分组后随访，且接受玻璃体内兰尼单抗0.5mg。在第2周随访后，参与者将每月(～28天)进行研究随访，在此期间，他们将接受兰尼单抗0.5mg之注射。
在第50周的主要终点，兰尼单抗对照组的参与者若仍符合关键的纳入/排除准则，则将有机会接受构建体II治疗。治疗医师将确定参与者是否符合条件且是否为手术的良好候选者。随后将向合格的参与者施用此方案中评估的最高耐受剂量。在第50周后切换至构建体II的兰尼单抗对照组的参与者将遵循与最初随机分组接受构建体II的参与者在第1天开始的随访时程相同的随访时程。选择不接受构建体II治疗或不符合构建体II治疗条件的那些参与者将自研究中终止。
在整个研究过程中，将经由评定眼部和非眼部AE，包括严重不良事件(SAE)和特别受关注的不良事件(AESI)(研究者认为与手术/研究程序无关，且在眼部炎症分级量表(参见部分8.17.7)上分级为2+或更高的眼部炎症、眼部感染[包括眼内炎]、视网膜撕裂或脱落、视网膜变薄及新的动脉血栓栓塞事件[非致命性中风、非致命性心肌梗塞或血管性死亡(包括原因不明的死亡)])，以及评定临床实验室测试(化学、血液学、凝血、尿分析)、眼部检查及成像(BCVA、IOP、裂隙灯活组织检视法、间接检眼镜检查法、荧光素血管造影[FA]、眼底自发荧光检查[FAF]及SD-OCT)及生命体征来评估参与者。注意，所有研究随访均会收集AE。还将评定对构建体II的载体和TP的免疫原性。患者报告的结果(PRO)将使用补充的国家眼科研究所视觉功能问卷25项版本(NEI-VFQ-25)(还包含Rasch评分版本NEI-VFQ-28-R)和黄斑疾病治疗满意度问卷(MacTSQ)来收集。
将持续对研究参与者进行有计划的安全监测。其包括由部分掩蔽的医疗监测员进行的审查及由部分掩蔽的主办方内部安全委员会(ISC)进行的例行审查。另外，还将建立独立的数据监测委员会(IDMC)，且定期召开会议以独立地审查临床数据。如果需要进行未掩蔽的审查以了解潜在的安全信号，则这些审查将由IDMC进行。
8.17.3研究群体
(a)一般考虑事项
符合纳入/排除准则的约300名患有nAMD的参与者将被随机分组。预计美国将有多达50个研究中心参与此研究。不允许前瞻性地批准对招募和登记准则的协议偏差，也称为协议豁免或豁免。
(b)纳入准则
参与者必须符合以下所有准则，才有资格参加本研究：
1.年龄≥50岁且≤89岁的男性或女性。
2.在第1次筛查随访时，研究眼睛的早期治疗糖尿病性视网膜病变研究(ETDRS)BCVA字母评分在≤78与≥44之间。
3.如果双眼均符合条件，则研究眼睛必须为研究者在随机分组之前确定的参与者的视力较差的眼睛。
4.在第1次筛查随访时，必须具有研究眼睛继发于AMD的中央凹下CNV的诊断以及旁中心凹(3mm黄斑中心，基于早期治疗糖尿病性视网膜病变栅格)内的液体。由CRC所评定的CNV病变特征：病变大小需小于10个视盘面积(典型的视盘面积＝2.54mm2)。
5.研究眼睛必须为伪晶状体(白内障手术后至少12周)
6.必须愿意且能够遵守所有的研究程序，且在研究期间有空。
7.女性必须为绝经后(定义为至少连续12个月无月经)或手术绝育(即进行过双侧输卵管结扎/双侧输卵管卵巢切除术、双侧输卵管闭塞术、子宫切除术或双侧卵巢切除术)。否则，女性必须在第1次筛查随访时血清妊娠测试呈阴性，在第4次筛查随访时尿液妊娠测试结果呈阴性，且愿意在研究期间进行额外的妊娠测试。
8.育龄妇女(及其男性伴侣)必须愿意使用高效避孕方法，与育龄妇女发生性关系的男性参与者必须愿意从第1次筛查随访开始使用保险套，直到构建体II施用后24周。出于此研究的目的，育龄妇女的高效避孕方法包括以下：与抑制排卵相关的组合激素避孕(口服、阴道内、经皮)；与抑制排卵相关的仅孕激素避孕(口服、可注射、可植入)；宫内节育器；宫内激素释放系统；双侧输卵管闭塞；伴侣输精管结扎；或性禁欲，当其为参与者喜欢及惯常的生活方式时。
9.必须愿意且能够提供书面、签署的知情同意书。
10.基于第3次筛查随访SD-OCT，参与者必须具有液体的改善(参见下面的反应准则)且CRT<400μm。注意，如果参与者患有除液体导致CRT增加以外的疾病(即PED或SHRM)，则若如通过CRC所测定，他们的液体(视网膜内或视网膜下)<75μm，则他们将入选。反应准则：受试者视网膜内部(旁中心凹3mm)液体相对于第1次筛查随访必须改善>50μm或30％；或通过CRC所测定的中心子场厚度改善>50μm或30％。
(c)排除准则
如果参与者适于以下任何准则，则排除在研究之外：
1.研究眼睛的CNV或黄斑水肿继发于除AMD以外的任何原因。
2.如通过CRC所确定的中央凹下纤维化或萎缩。
3.在第1次筛查随访之前的12个月需要>10次抗VEGF注射的参与者。
4.任何研究者认为可能限制研究眼睛的VA改善的状况。
5.研究眼睛的视网膜脱离活跃或有病史。
6.研究眼睛的晚期青光眼，定义为IOP>23mmHg，不受2种降低IOP的药物或任何治疗青光眼的侵入性手术(例如分流、管或MIGS装置；允许进行选择性激光小梁切除术和氩激光小梁成形术)控制。
7.任何研究者认为可能会增加参与者的风险，需要在研究过程中进行医疗或手术干预以防止或治疗视力丧失，或干扰研究程序或评定的研究眼睛的状况。
8.在第1次筛查随访之前12周内研究眼睛有眼内手术史。如果在第1次筛查随访之前>10周进行钇铝石榴石囊切开术，则允许。
9.在第1次筛查随访之前6个月内，研究眼睛有玻璃体内治疗史，诸如玻璃体内类固醇注射或研究产品，但抗VEGF疗法除外。
10.在第1次筛查随访时研究眼睛中存在任何植入物(不包括人工晶状体)。
11.在第1次筛查随访之前5年内有可能损害免疫系统的恶性肿瘤或恶性血液病史，需要进行化疗和/或放疗。允许局部基底细胞癌。
12.在登记后30天内或在研究产品的5个半衰期内接受任何研究产品，以时间长者为准。
13.接受过基因疗法。
14.由疗法引起的视网膜毒性史，或使用任何可能影响VA或具有已知视网膜毒性的药物(例如氯喹或羟氯喹)的伴随疗法。
15.可能干扰外科手术的研究眼睛的眼部或眼周感染。
16.过去6个月内有心肌梗塞、脑血管意外或短暂性缺血发作。
17.尽管经过最大限度的医疗治疗，但高血压仍未得到控制(收缩血压[BP]>180mmHg，舒张BP>100mmHg)。
18.在第1次筛查随访时具有以下实验室值的任何参与者将退出研究：
·天冬氨酸转氨酶(AST)/丙氨酸转氨酶(ALT)>2.5×正常的上限(ULN)。
·总胆红素>1.5×ULN，除非参与者之前有已知的吉尔伯特综合征(Gilbert'ssyndrome)病史，且分离胆红素显示结合胆红素<总胆红素的35％。
·凝血酶原时间>1.5×ULN，除非参与者处于抗凝状态。抗凝的参与者将由当地实验室进行监测，并且按照当地的惯例进行管理，以保持或渡过研究过程中的抗凝疗法；还需要与医疗监护人协商。
·男性参与者的血红蛋白<10g/dL，女性参与者<9g/dL。
·血小板<100×103/μL。
·估计肾小球滤过率<30mL/min/1.73m2。
19.任何研究者认为可能干扰眼外科手术或愈合过程的伴随治疗。
20.已知对兰尼单抗或其任何组分超敏。
21.患有研究者或主办方认为可能会损害参与者的安全性或完成研究中所有评定及随访的能力的严重、慢性或不稳定的医疗或心理病况。
22.当前正在接受抗凝疗法，而治疗研究者(即视网膜外科医生)以及为参与者开具抗凝处方的医师认为，保持抗凝疗法的构建体II施用抗凝疗法未经指定或被认为不安全。
对照组参与者在第50周后获得构建体II的准则
(a)纳入准则.
1.研究眼睛将为随机化时合格的眼睛。
2.参与者具有CRT<400μm的视网膜下/视网膜内流体或(在参与者可能在CRT中具有非液体升高的情况下，例如色素上皮缺损)<75μm的过量流体，由掩蔽的CRC所证实。
3.育龄妇女(及其男性伴侣)必须愿意使用高效避孕方法，与育龄妇女发生性关系的男性参与者必须愿意自手术随访开始使用保险套，直到构建体II施用后24周。出于此研究的目的，育龄妇女的高效避孕方法包括以下：与抑制排卵相关的组合激素避孕(口服、阴道内、经皮)；与抑制排卵相关的仅孕激素避孕(口服、可注射、可植入)；宫内节育器；宫内激素释放系统；双侧输卵管闭塞；伴侣输精管结扎；或性禁欲，当其为参与者喜欢及惯常的生活方式时。
4.育龄妇女必须在第52周尿液妊娠测试呈阴性，且愿意在研究期间进行额外的妊娠测试。
(b)排除准则.
1.研究眼睛的CNV或黄斑水肿继发于除AMD以外的任何原因。
2.如通过CRC所确定的中央凹下纤维化或萎缩，或阻碍研究眼睛的VA改善的任何状况。
3.可能干扰外科手术的研究眼睛的眼部或眼周感染。
4.自随机分组以来，心肌梗塞、脑血管意外或短暂性缺血发作。
5.尽管经过最大限度的医疗治疗，但高血压仍未得到控制(收缩BP>180mmHg，舒张BP>100mmHg)。
6.任何研究者认为可能干扰眼外科手术或愈合过程的伴随治疗。
7.过去一年内有可能损害免疫系统的恶性肿瘤或恶性血液病史，需要进行化疗和/或放疗。允许局部基底细胞癌。
8.当前正在接受抗凝疗法，而治疗研究者以及为参与者开具抗凝处方的医师认为，保持抗凝疗法的构建体II施用抗凝疗法未经指定或被认为不安全。
8.17.4研究干预
研究干预定义为根据研究方案欲向研究参与者施用的任何研究用干预、销售产品、安慰剂或医疗装置。
(a)施用的研究干预
符合条件的参与者将1:1:1随机分组以接受单次剂量的构建体II(剂量1)、单次剂量的构建体II(剂量2)或每月玻璃体内注射兰尼单抗。
构建体II组中的任一者的参与者将在第1天在手术室内经由视网膜下递送接受构建体II。在研究期间，构建体II组的参与者将在第1、2及4次筛查随访时、在第2周接受通过玻璃体内注射施用的兰尼单抗0.5mg，且随后从第6周起始按需要每4周接受一次。
兰尼单抗对照组的参与者将在第1、2及4次筛查随访时、在第2周接受通过玻璃体内注射施用的兰尼单抗0.5mg，且随后此后每月(～28天)接受一次。
表4.施用的研究干预
Figure BDA0003389530610002081
Figure BDA0003389530610002091
8.17.5眼部炎症分级量表
将在裂隙灯活组织检视法和独立的检眼镜检查法期间评定眼部炎症，且使用以下量表分级。应使用裂隙灯活组织检视法和间接检眼镜检查法评定的标准操作。
表5.眼部炎症的分级量表：前房细胞和前房闪辉
Figure BDA0003389530610002092
来源：Jabs等人,2005,Am J Ophthalmol 140(3):509-516。
表6.玻璃体浊度的分级量表
Figure BDA0003389530610002093
来源：Nussenblatt等人,1985,Ophthalmology,92(4):467-471。
8.18实施例18：在患有新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)的参与者中评估经由一或两次脉络膜上腔(SCS)注射递送的构建体II基因疗法的功效、安全性及耐受性的2期、随机分组、剂量递增、兰尼单抗对照的研究
8.18.1大纲
(a)目标和终点
表7：目标和终点
Figure BDA0003389530610002094
Figure BDA0003389530610002101
Figure BDA0003389530610002111
AAV8＝腺相关病毒血清型8；AE＝不良事件；BCVA＝最佳矫正视力；CNV＝脉络膜新生血管；CRT＝中心视网膜厚度；ELISpot＝酶联免疫斑点；ETDRS＝早期治疗糖尿病性视网膜病变研究；FA＝荧光素血管造影；FAF＝眼底自发荧光检查；NAbs＝中和抗体；SAE＝严重不良事件；SCS＝脉络膜上腔；SD-OCT＝谱域-光学相干断层摄影术；TAbs＝总结合抗体；TP＝转基因产物；VEGF＝血管内皮生长因子
(b)研究设计
在此2期、随机分组(3:1)、剂量递增、兰尼单抗对照的研究中，约40名患有nAMD的参与者将入选至2个剂量群组中。在各剂量群组内，参与者将在SCS中接受一次构建体II施用(n＝15名参与者)，或每4周玻璃体内注射兰尼单抗0.5mg一次，直到第52周(n＝5名参与者)。
将大力鼓励接受构建体II的参与者在第52周完成当前研究后(或提前中止)参加长期的后续研究，且在彼时签署后续研究的单独知情同意书。兰尼单抗对照组的参与者将有机会在第52周随访后纳入未来的构建体II剂量群组。
筛查将包含3次随访，以选择具有限定的AAV8中和抗体(NAb)力价(第1次随访)，且在兰尼单抗导入期(第2次和第3次随访)期间表现出对兰尼单抗的解剖反应性的合格参与者。在第1次随访期间，签署知情同意书(ICF)的参与者将针对合格性进行评估，且将收集血清样品以筛查先前存在的NAb，或将根据NAb筛查方案确认NAb状态。血清AAV8 NAb力价结果呈阴性或低(≤300)的参与者将返回研究中心确认其余纳入/排除准则。继续符合资格准则的参与者将在第2次随访(第1天)在研究眼睛中接受0.5mg兰尼单抗的玻璃体内注射。在第3次随访(第1周)，参与者将通过谱域-光学相干断层摄影术(SD-OCT)进行评估，以经由与他们在筛查兰尼单抗注射之前采取的第1天SD-OCT评定进行比较来确认其对筛查抗VEGF注射的解剖反应。解剖反应将由中央阅读中心(CRC)根据预先规定的准则来确定。一旦CRC验证解剖学资格，各群组中的2名标记参与者将随机分配一个至构建体II或兰尼单抗对照。没有解剖反应的参与者将视为筛查失败。对于筛查失败的参与者，任何在第1天具有与兰尼单抗注射相关的AE的人将被随访，直到AE解决(注射后至多30天)。
在第2周随访，构建体II随机参与者将根据剂量接受1或2次构建体II注射，在研究中心使用Clearside SCS MicroinjectorTM研究装置通过SCS递送来施用；注意研究的治疗期自构建体II施用时开始。所有研究者将经过关于SCS程序的培训。程序的详细描述可见于SCS施用手册。在向随机分配至构建体II的标记参与者施用构建体II后，为了安全起见，将进行为期2周的观察期。主办方内部安全委员会(ISC)将审查此参与者的安全性数据，如果不存在安全性问题，则可随机分配另外至多18名参与者(14名构建体II和4名兰尼单抗对照)。如果未观察到安全审查触发事件(SRT)，则在群组内最后一个给药的参与者进行2周的观察期后，将由独立的数据监测委员会(IDMC)评估所有可用的安全性数据。另外，如果任何事件符合停止规则的准则，则将暂停任何新参与者的给药，直到已对所有安全性数据进行完整的审查。在任何规定的IDMC会议，无论是计划中的抑或由于SRT而召集的，IDMC均可建议停止研究、进行下一个给药群组或进行较低的剂量(至多半对数)。
随机分配至构建体II的参与者将有2次注射后安全性随访(程序后1天及程序后1周)。在构建体II施用后2周开始，参与者将每月进行研究随访，如果他们符合预定义的补充注射准则，则可接受玻璃体内兰尼单抗补充疗法。对于构建体II治疗组的参与者，将在整个研究中评定对载体的免疫原性(通过AAV8 NAb、AAV8 TAb、针对构建体II蛋白的抗体及酶联免疫斑点[ELISpot]评定)、VEGF-A浓度及抗构建体II抗体。
随机分配至兰尼单抗对照组的参与者将在第4周进行首次随机分组后随访，且接受玻璃体内兰尼单抗0.5mg。在第4周随访后，参与者将每月(～每28天)进行研究随访，在此期间，他们将接受兰尼单抗0.5mg的玻璃体内注射。
功效将为最初40周(主要研究期)的主要焦点。在主要研究期结束后，将继续对参与者进行评定，直到第52周。在第52周研究随访结束时，将邀请接受构建体II的参与者加入长期随访研究，而兰尼单抗对照组的参与者，如果符合条件，则将有机会纳入未来的构建体II剂量群组。将经由评定AE，包括SAE及特别受关注的不良事件(AESI)(研究者认为与手术/研究程序无关，且在眼部炎症分级量表上分级为2+或更高的眼部炎症、眼部感染[包括眼内炎]、视网膜撕裂或脱落、视网膜变薄及新的动脉血栓栓塞事件[非致命性中风、非致命性心肌梗塞或血管性死亡(包括原因不明的死亡)])，以及评定临床实验室测试(化学、血液学、凝血、尿分析)、眼部检查及成像(BCVA、IOP、裂隙灯活组织检视法、间接检眼镜检查法、荧光素血管造影[FA]、超宽视野Optos眼底自发荧光检查[FAF]、超宽视野Optos彩色眼底摄影[CFP]、Humphrey视野120、微视野检查及SD-OCT)来对参与者进行安全性评估。注意，所有研究随访均会收集AE。与基线相比，有证据显示新的视网膜低/高色素沉着变化的参与者将使用SD OCT扫描监测。当可能时，将撷取横贯低/高色素区域边缘的径向SD-OCT扫描。
将持续对研究参与者进行有计划的安全监测。监测将包括由医疗监测员进行的审查及由主办方ISC进行的例行审查。另外，还将建立IDMC，定期开会以独立地审查临床数据。
8.18.2纳入准则
所有进入研究的参与者
参与者仅在符合以下所有准则时才有资格被纳入研究：
1.年龄≥50岁且≤89岁的男性或女性。
2.必须具有研究眼睛继发于AMD的中央凹下CNV的诊断以及通过CRC评定的旁中心凹(3mm黄斑中心，基于早期治疗糖尿病性视网膜病变栅格)内的视网膜液体(视网膜下或视网膜内)。
·CNV病变特征：病变大小需小于10个视盘面积(典型的视盘面积＝2.54mm2)。
3.可为有晶状体或伪晶状体。
4.必须具有AAV8 Nab的阴性或低血清力价结果(≤300)。
5.研究眼睛的BCVA在≤20/25与≥20/125之间(≤83且≥44个早期治疗糖尿病性视网膜病变研究[ETDRS]字母)。
6.基于在第1周获得的SD-OCT影像，参与者必须具有液体的改善(参见下面的反应准则)且中心视网膜厚度(CRT)<400μm。注意，如果参与者患有除液体导致CRT增加以外的疾病(即PED或SHRM)，则若如通过CRC所测定，他们的总液体(视网膜内或视网膜下)<75μm，则他们将入选。
·反应准则：参与者视网膜内部(旁中心凹3mm)液体相对于第2次随访必须改善>50μm或50％；或通过CRC所测定的中心子场厚度改善>50μm或50％。
7.如果双眼均符合条件，则研究眼睛必须为研究者确定的参与者的视力较差的眼睛。
8.女性必须为绝经后(定义为至少连续12个月无月经)或手术绝育(即进行过双侧输卵管结扎/双侧输卵管卵巢切除术、双侧输卵管闭塞术、子宫切除术或双侧卵巢切除术)。否则，女性必须在第1天血清和尿液妊娠测试呈阴性，且愿意在研究期间进行额外的妊娠测试。
9.育龄妇女(WOCBP)(及其男性伴侣)必须愿意使用高效避孕方法(部分8.5)，与WOCBP发生性关系的男性参与者必须愿意从第2周开始使用保险套，直到构建体II施用后24周。
10.必须愿意且能够提供签署的知情同意书，遵守所有的研究程序，且在研究期间有空。
8.18.3排除准则
如果参与者适于以下任何准则，则排除在研究之外：
1.研究眼睛的CNV或黄斑水肿继发于除AMD以外的任何原因。
2.如通过CRC所确定的中央凹下纤维化或萎缩。
3.在第2次随访之前的12个月需要>10次抗VEGF注射的参与者。
4.曾做过玻璃体切除术的参与者。
5.任何研究者认为可能限制研究眼睛的VA改善的状况。
6.研究眼睛的视网膜脱离活跃或有病史。
7.研究眼睛的晚期青光眼，定义为IOP>23mmHg，不受2种降低IOP的药物或任何治疗青光眼的侵入性手术(例如分流、管或MIGS装置；然而，允许进行选择性激光小梁切除术和氩激光小梁成形术)控制。
8.任何研究者认为可能会增加参与者的风险，需要在研究过程中进行医疗或手术干预以防止或治疗视力丧失，或干扰研究程序或评定的研究眼睛的状况。
9.在第2次随访之前6个月内，研究眼睛有玻璃体内治疗史，诸如玻璃体内类固醇注射或研究产品，但抗VEGF疗法除外。
10.在筛查时研究眼睛中存在植入物(不包括人工晶状体)。
11.在筛查之前5年内有需要进行化疗和/或放疗的恶性肿瘤病史。允许局部基底细胞癌。
12.接受过任何基因疗法。
13.已知具有引起视网膜毒性的疗法史，或使用任何可能影响VA或具有已知视网膜毒性的药物(例如氯喹或羟氯喹)的伴随疗法。
14.任何研究者认为可能干扰眼部手术或愈合过程的伴随治疗。
15.已知对兰尼单抗或其任何组分超敏或过去对如构建体II的药剂超敏(研究者认为)。
16.患有研究者认为可能会损害参与者的安全性或完成研究中所有评定及随访的能力的严重、慢性或不稳定的医疗或心理病况。
17.任何阻碍研究眼睛的眼底视力或VA改善的病况，例如白内障、玻璃体不透明、纤维化、萎缩或中央凹中心的视网膜上皮撕裂。
18.在第2次随访之前12周内研究眼睛有眼内手术史。如果在第2次随访之前>10周进行钇铝石榴石囊切开术，则允许。
19.在第2次随访30天内或在研究产品的5个半衰期内接受任何研究产品，以时间长者为准。
20.可能干扰构建体II施用的研究眼睛的眼部或眼周感染。
21.在第2次随访之前6个月内有心肌梗塞、脑血管意外或短暂性缺血发作。
22.尽管经过最大限度的医疗治疗，但高血压仍未得到控制(收缩血压[BP]>180mmHg，舒张BP>100mmHg)。
23.具有在第2次随访时收集且在第3次随访时确认的以下实验室值的任何参与者：
·天冬氨酸转氨酶(AST)/丙氨酸转氨酶(ALT)>2.5×正常的上限(ULN)。
·总胆红素>1.5×ULN，除非参与者之前有已知的吉尔伯特综合征病史，且分离胆红素显示结合胆红素<总胆红素的35％。
·凝血酶原时间>1.5×ULN，除非参与者处于抗凝状态。
·男性参与者的血红蛋白<10g/dL，女性参与者<9g/dL。
·血小板<100×103/μL。
·估计肾小球滤过率<30mL/min/1.73m2。
8.18.4施用的研究干预
符合条件的参与者将被分配以在研究眼睛中接受构建体II(剂量1或剂量2)或兰尼单抗。关于构建体II和兰尼单抗的信息如下。
表8.关于构建体II和兰尼单抗的信息
Figure BDA0003389530610002151
Figure BDA0003389530610002161
8.19实施例19：在非人灵长类动物中用基于三肽基-肽酶1(TPP1)cDNA的载体治疗Batten-CLN2相关的视力丧失
在非人灵长类动物中开始一项非临床毒理学研究，以通过两种不同的施用途径——视网膜下和脉络膜上评估基于三肽基-肽酶1(TPP1)cDNA的载体。处死所有动物并分析组织。
在此研究中，经由视网膜下(SR)注射以0(媒介物)、1×1010、1×1011、1×1012或1×1013GC/眼睛(100μL)的剂量向各组食蟹猕猴(5只动物/组)施用基于TPP1cDNA的载体。另外各组(5只动物/组)经由使用微针以0(媒介物)或1×1012GC/眼睛的剂量(在颞上象限或鼻下象限的两次50μL注射)注射到脉络膜上腔(SCS)中来施用基于TPP1 cDNA的载体。所有治疗组均在双眼中施用基于TPP1 cDNA的载体。对照动物经由SCS(OS)或SR途径(OD)接受媒介物注射。在施用基于TPP1 cDNA的载体后4周(2只动物/组)或3个月(3只动物/组)，对动物施以安乐死。此项研究中包括的终点为：临床观察结果、体重、眼科程序(检眼镜检查法、眼内压、光学相干断层摄影术、眼底照相及全场视网膜电图描记)、TPP1(水状液和玻璃体[仅末端]液；血清)、抗AAV抗体(nAb)、抗转基因产物抗体(ATPA)、生物分布、器官重量、免疫组织化学(眼睛中的抗TPP1)、宏观及微观检查。
8.20实施例20：在人受试者中用基于三肽基-肽酶1(TPP1)cDNA的载体治疗Batten-CLN2相关的视力丧失
向患有Batten-CLN2相关的视力丧失的受试者施用编码三肽基-肽酶1的AAV9，其剂量(例如每只眼睛1×1010至5×1011个基因组拷贝)足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。施用是通过双重施用途径来完成，所述双重施用途径涉及中枢神经系统(CNS)递送(例如脑室内(ICV)、脑池内(IC)或腰椎内(IT-L)递送)及眼部递送(例如脉络膜上、视网膜下、巩膜旁或玻璃体内递送)。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN2相关的视力丧失的改善。
8.21实施例21：使用红外热像仪监测猪的注射
使用FLIR T530红外热像仪表征活猪眼部注射后的热分布。或者，使用FLIR T420、FLIR T440、Fluke Ti400或FLIRE60红外热像仪。在研究中评定室温生理盐水(68-72℉)的脉络膜上(图6)、不成功的脉络膜上、玻璃体内及眼外流出注射。每次注射的剂量体积为100μL，使来自冰箱的溶液达到室温进行注射。
红外摄像机镜头至眼表面距离确立在约1ft。将摄像机上用于查看的手动温度范围设定为～80-90℉。成像操作者手持摄像机，且在视频录制过程中设置中心屏幕光标对准注射部位。猪接受眼球后注射生理盐水，使眼睛突起以提高可视性，且将眼睑切开后回缩以暴露注射部位的巩膜。在热视频录制过程中使用滤铁器。
成功的脉络膜上注射的特征在于：(a)深色的缓慢、广泛的径向扩散，(b)开始时颜色很深，及(c)注射液逐渐变为较浅的颜色，即由较浅的颜色标示的温度梯度。不成功的脉络膜上注射的特征在于：(a)深色没有扩散，及(b)注射部位局部颜色发生轻微变化。成功的玻璃体内注射的特征在于：(a)深色没有扩散，(b)注射部位局部最初变为非常深的颜色，及(c)注射后随着时间的推移出现整个眼球逐渐均匀地变为较深的颜色。眼外流出的特征在于：(a)眼睛外部的外快速流动的物流，(b)开始时颜色很深及(c)快速转为较浅的颜色。
8.22实施例22：使用红外热像仪监测人患者的注射
向患有湿性AMD的受试者施用编码兰尼单抗Fab的AAV8(例如通过视网膜下施用、脉络膜上施用或玻璃体内施用)，其剂量足以在玻璃体液中产生Cmin为至少0.330μg/mL的浓度的转基因产物，持续三个月。FLIR T530红外热像仪用于在程序期间评估注射，且可用于在注射后进行评估，以确认施用是否成功完成或施用剂量错误。或者，使用FLIR T420、FLIR T440、Fluke Ti400或FLIRE60红外热像仪。在治疗后，临床上评估受试者的临床效果的迹象及湿性AMD的病征和症状的改善。
8.23实施例23：在人受试者中通过脉络膜上施用用基于三肽基-肽酶1(TPP1)cDNA的载体治疗Batten-CLN2相关的视力丧失
向患有Batten-CLN2相关的视力丧失的受试者施用编码三肽基-肽酶1的AAV9，其剂量(例如每只眼睛1×1010至5×1011个基因组拷贝)足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。基于TPP1 cDNA的载体是通过脉络膜上施用来施用。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN2相关的视力丧失的改善。
8.24实施例24：在人受试者中通过视网膜下施用用基于三肽基-肽酶1(TPP1)cDNA的载体治疗Batten-CLN2相关的视力丧失
向患有Batten-CLN2相关的视力丧失的受试者施用编码三肽基-肽酶1的AAV9，其剂量(例如每只眼睛1×1010至5×1011个基因组拷贝)足以在玻璃体液中产生治疗有效浓度的转基因产物，持续三个月。基于TPP1 cDNA的载体是通过视网膜下施用来施用。在治疗后，评估受试者的Batten-CLN2相关的视力丧失的改善。
等效物
尽管本发明参考其特定实施方案详细描述，但应了解功能上等效的变化在本发明的范围内。实际上，根据前述说明和随附图式，除本文所展示和描述的修改以外，本发明的各种修改对本领域技术人员来说也会变得显而易见。此类修饰意在属于随附权利要求书的范围内。本领域技术人员将认识到或能够仅使用常规实验即可确定本文所描述的本发明特定实施方案的许多等效物。此类等效物意在由以下权利要求所涵盖。
本说明书中所提及的所有公开、专利及专利申请在本文中以引用的方式并入本说明书中，程度如同各个别公开、专利或专利申请专门且单独地指示为以引用的方式整体并入本文中一般。

Claims (47)

1.一种无需玻璃体切除术以用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛中的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述施用步骤包括经由所述人受试者的眼睛脉络膜上腔向所述人受试者的眼睛视网膜下腔施用所述重组病毒载体治疗性产物。
3.如权利要求2所述的方法，其中所述施用步骤是通过使用包括导管的视网膜下药物递送装置，所述导管可插入并朝向后极穿过脉络膜上腔，小针头在后极注射到视网膜下腔中。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述施用步骤包括将所述视网膜下药物递送装置的导管插入并穿过脉络膜上腔。
5.一种用于治疗眼睛病状的脉络膜上施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛脉络膜上腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗。
6.如权利要求5所述的方法，其中所述施用步骤是通过使用脉络膜上药物递送装置将所述重组病毒载体注射到至脉络膜上腔中。
7.如权利要求5或6所述的方法，其中所述脉络膜上药物递送装置为显微注射器。
8.一种向巩膜外空间施用以用于治疗眼睛病状的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛巩膜外表面施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述施用步骤是通过使用包括套管的巩膜旁药物递送装置，所述套管的尖端可插入并保持与巩膜表面直接并置。
10.如权利要求9所述的方法，其中所述施用步骤包括将所述套管的尖端插入并保持与巩膜表面直接并置。
11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。
12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述眼睛病状与新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)不相关。
13.一种伴随玻璃体切除术以用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向需要治疗的人受试者的眼睛中的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗，其中所述方法包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术，且其中所述治疗性产物不为抗人血管内皮生长因子(hVEGF)抗体。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述玻璃体切除术为部分玻璃体切除术。
15.一种用于治疗眼睛病状的视网膜下施用的方法，其包括向位于需要治疗的人受试者的眼睛后部的视神经盘、中央凹及黄斑外周的视网膜下腔施用包含编码治疗性产物的核苷酸序列的重组病毒载体，使得所述治疗性产物得以表达且所述眼睛病状得以治疗，其中所述方法不包括对所述人患者的眼睛进行玻璃体切除术。
16.如权利要求15所述的方法，其中所述施用步骤是通过经玻璃体注射的。
17.如权利要求16所述的方法，其中所述经玻璃体注射包含经由眼睛的上侧或下侧将尖锐的针头插入巩膜中，且使所述尖锐的针头完全穿过玻璃体，以将所述重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。
18.如权利要求16所述的方法，其中所述经玻璃体注射包含将套管针插入巩膜中，且经由所述套管针插入套管并穿过玻璃体，以将所述重组病毒载体注射到另一侧的视网膜下腔中。
19.如权利要求15至18中任一项所述的方法，其中所述治疗性产物为抗hVEGF抗体。
20.如权利要求19所述的方法，其中所述抗hVEGF抗体为抗hVEGF抗原结合片段。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述抗hVEGF抗原结合片段为Fab、F(ab')2或单链可变片段(scFv)。
22.如权利要求19至21中任一项所述的方法，其中所述抗hVEGF抗体包含以下：包含SEQID NO:2或SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链和包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链。
23.如权利要求19至21中任一项所述的方法，其中所述抗hVEGF抗体包含SEQ ID NO:14至16的轻链CDR 1至3和SEQ ID NO:17至19或SEQ ID NO:20、18及21的重链CDR 1至3。
24.如权利要求19至23中任一项所述的方法，其中所述眼睛病状与nAMD、干性年龄相关性黄斑变性(干性AMD)、视网膜静脉栓塞(RVO)、糖尿病性黄斑水肿(DME)或糖尿病性视网膜病变(DR)相关。
25.如权利要求19至23中任一项所述的方法，其中所述眼睛病状与nAMD相关。
26.如权利要求1至11和13至18中任一项所述的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与Batten-CLN1相关，且所述治疗性产物为棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；
(2)所述眼睛病状与Batten-CLN2相关，且所述治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；
(3)所述眼睛病状与Batten-CLN3相关，且所述治疗性产物为Battenin(CLN3)；
(4)所述眼睛病状与Batten-CLN6相关，且所述治疗性产物为CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；
(5)所述眼睛病状与Batten-CLN7相关，且所述治疗性产物为含主要易化子超家族结构域8(MFSD8)；
(6)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症(Usher’s-Type 1)相关，且所述治疗性产物为肌球蛋白VIIA(MYO7A)；
(7)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为钙粘蛋白相关23(CDH23)；
(8)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；
(9)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Usherin(USH2A)；
(10)所述眼睛病状与3型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Clarin 1(CLRN1)；
(11)所述眼睛病状与斯塔加特氏病(Stargardt’s)相关，且所述治疗性产物为ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；
(12)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；
(13)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗白介素6(IL6)单克隆抗体；
(14)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；
(15)所述眼睛病状与糖尿病性黄斑水肿(DME)相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(16)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(17)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(18)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(19)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且所述治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；
(20)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；
(21)所述眼睛病状与LCA 3相关，且所述治疗性产物为精子形成相关7(SPATA7)；
(22)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦4(LCA 4)相关，且所述治疗性产物为芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；
(23)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦5(LCA 5)相关，且所述治疗性产物为Lebercilin(LCA5)；
(24)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦6(LCA 6)相关，且所述治疗性产物为RPGR相互作用蛋白1(RPGRIP1)；
(25)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且所述治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；
(26)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦8(LCA 8)相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(27)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦9(LCA 9)相关，且所述治疗性产物为烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；
(28)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦10(LCA 10)相关，且所述治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；
(29)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且所述治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；
(30)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦12(LCA 12)相关，且所述治疗性产物为视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；
(31)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦13(LCA 13)相关，且所述治疗性产物为视黄醇脱氢酶12(RDH12)；
(32)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦14(LCA 14)相关，且所述治疗性产物为卵磷脂视黄醇酰基转移酶(LRAT)；
(33)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且所述治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；
(34)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦16(LCA 16)相关，且所述治疗性产物为钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；
(35)所述眼睛病状与莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；
(36)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；
(37)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；
(38)所述眼睛病状与视神经脊髓炎(NMO)相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(39)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(40)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(41)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为血管紧张素I转换酶(ACE)；
(42)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为白介素10(IL10)；
(43)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF单克隆抗体；
(44)所述眼睛病状与无脉络膜症相关，且所述治疗性产物为Rab护航蛋白1(CHM)；
(45)所述眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且所述治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；
(46)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征(Bardet-Biedl syndrome)1相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；
(47)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征2相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征2(BBS2)；
(48)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征3相关，且所述治疗性产物为ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)；
(49)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征4相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征4(BBS4)；
(50)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征5相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；
(51)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且所述治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；
(52)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征7相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征7(BBS7)；
(53)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征8相关，且所述治疗性产物为三十四肽重复结构域8(TTC8)；
(54)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征9相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征9(BBS9)；
(55)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；
(56)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征11相关，且所述治疗性产物为含三联基序32(TRIM32)；
(57)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征12相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征12(BBS12)；
(58)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征13相关，且所述治疗性产物为MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)；
(59)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征14相关，且所述治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；
(60)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征15相关，且所述治疗性产物为含WD重复的平面细胞极性效应子(WDPCP)；
(61)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征16相关，且所述治疗性产物为血清学定义的结肠癌抗原8(SDCCAG8)；
(62)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征17相关，且所述治疗性产物为亮氨酸拉链转录因子样1(LZTFL1)；
(63)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征18相关，且所述治疗性产物为BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)；
(64)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征19相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白27(IFT27)；
(65)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；
(66)所述眼睛病状与视神经萎缩相关，且所述治疗性产物为OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；
(67)所述眼睛病状与色素性视网膜炎1相关，且所述治疗性产物为RP1轴突微管相关(RP1)；
(68)所述眼睛病状与色素性视网膜炎2相关，且所述治疗性产物为ARL3GTP酶的RP2活化因子(RP2)；
(69)所述眼睛病状与色素性视网膜炎7相关，且所述治疗性产物为外周蛋白2(PRPH2)；
(70)所述眼睛病状与色素性视网膜炎11相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子31(PRPF31)；
(71)所述眼睛病状与色素性视网膜炎12相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(72)所述眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；
(73)所述眼睛病状与色素性视网膜炎25相关，且所述治疗性产物为闭眼同源物(EYS)；
(74)所述眼睛病状与色素性视网膜炎28相关，且所述治疗性产物为FAM161中心体蛋白A(FAM161A)；
(75)所述眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且所述治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；
(76)所述眼睛病状与色素性视网膜炎38相关，且所述治疗性产物为MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；
(77)所述眼睛病状与色素性视网膜炎40相关，且所述治疗性产物为磷酸二酯酶6B(PDE6B)；
(78)所述眼睛病状与色素性视网膜炎41相关，且所述治疗性产物为Prominin 1(PROM1)；
(79)所述眼睛病状与色素性视网膜炎43相关，且所述治疗性产物为磷酸二酯酶6A(PDE6A)；
(80)所述眼睛病状与色素性视网膜炎56相关，且所述治疗性产物为光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；
(81)所述眼睛病状与色素性视网膜炎62相关，且所述治疗性产物为雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；
(82)所述眼睛病状与色素性视网膜炎80相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白140(IFT140)；
(83)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(84)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗膜攻击复合体(MAC)单克隆抗体；
(85)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为HtrA丝氨酸肽酶1(HTRA1)；
(86)所述眼睛病状与贝斯特氏病相关，且所述治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)；
(87)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为补体因子B反义寡核苷酸；
(88)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗β-淀粉样蛋白单克隆抗体；
(89)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为CD59糖蛋白(CD59)；
(90)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-1(ChR1)；
(91)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-2(ChR2)，即在莱茵衣藻中发现的光敏蛋白；
(92)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗补体因子C5a适体；
(93)所述眼睛病状与干性AMD相关，且所述治疗性产物为抗补体因子D单克隆抗体；
(94)所述眼睛病状与年龄相关性视网膜神经节细胞(RGC)变性相关，且所述治疗性产物为DnaJ热休克蛋白家族(Hsp40)成员C3(DNAJC3)；
(95)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视(BCM)相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1MW)；
(96)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为β-2肾上腺素受体siRNA；
(97)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为半胱天冬酶-2(CASP2)；
(98)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为胰岛素受体底物1(IRS1)；
(99)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为HIF-1反应性蛋白RTP801(RTP801)；
(100)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为转化生长因子β2(TGFB2)；
(101)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为脑源性神经营养因子(BDNF)；
(102)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为睫状神经营养因子(CNTF)；
(103)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为前列腺素内过氧化物合成酶2(PTGS2)；
(104)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为前列腺素F受体(PTGFR)；
(105)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为透明质酸酶；
(106)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为色素上皮衍生因子(PEDF)；
(107)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为血管内皮生长因子(VEGF)；
(108)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为胎盘生长因子(PGF)；
(109)所述眼睛病状与青光眼相关，且所述治疗性产物为肌纤蛋白(MYOC)；
(110)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(111)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为C-C基序趋化因子受体5(CCR5)siRNA；
(112)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗CD19单克隆抗体；
(113)所述眼睛病状与视紫质突变相关性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-1(ChR1)；
(114)所述眼睛病状与视紫质突变相关性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为光敏感通道蛋白-2(ChR2)；
(115)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为睫状神经营养因子(CNTF)；
(116)所述眼睛病状与常染色体隐性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(117)所述眼睛病状与常染色体隐性色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分2(CRB2)；
(118)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为组蛋白脱乙酰酶4(HDAC4)；
(119)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视紫质(RHO)；
(120)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为神经生长因子(NGF)；
(121)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为核因子红系2样2(NRF2)；
(122)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为色素上皮衍生因子(PEDF)；
(123)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为谷胱甘肽S-转移酶PI 1(GSTP1)；
(124)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视杆源性视锥活力因子(RDCVF)；
(125)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视紫质(RHO)；
(126)所述眼睛病状与色素性视网膜炎相关，且所述治疗性产物为视黄醛结合蛋白1(RLBP1)；
(127)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为抗补体C5适体；
(128)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为双同源框4(DUX4)；
(129)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为NLR家族含Pyrin结构域3(NLRP3)；
(130)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为脾相关酪氨酸激酶(SYK)；
(131)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为促肾上腺皮质激素(ACTH)；
(132)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为半胱天冬酶1(CASP1)；
(133)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗CD59单克隆抗体；
(134)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗补体C5适体；
(135)所述眼睛病状与角膜新血管生成相关，且所述治疗性产物为胰岛素受体底物1(IRS1)；
(136)所述眼睛病状与角膜新血管生成相关，且所述治疗性产物为NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；
(137)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为NOTCH调节的锚蛋白重复蛋白(NRARP)；
(138)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为α-2-抗纤维蛋白溶酶(A2AP)；
(139)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为纤维蛋白溶酶原(PLG)；
(140)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为生长激素；
(141)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为胰岛素样生长因子1(IGF1)；
(142)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为白介素1β(IL1B)；
(143)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为血管紧张素I转换酶2(ACE2)；
(144)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为IRS1；
(145)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为抗整合素寡肽；
(146)所述眼睛病状与糖尿病性视网膜病变相关，且所述治疗性产物为抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体；
(147)所述眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且所述治疗性产物为抗CD40单克隆抗体；
(148)所述眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且所述治疗性产物为抗胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)单克隆抗体；
(149)所述眼睛病状与格雷夫斯眼病相关，且所述治疗性产物为抗胰岛素样生长因子2受体(IGF2R)单克隆抗体；
(150)所述眼睛病状与DME相关，且所述治疗性产物为抗整合素寡肽；
(151)所述眼睛病状与DME相关，且所述治疗性产物为抗胎盘生长因子(PGF)单克隆抗体；
(152)所述眼睛病状与DME相关，且所述治疗性产物为RTP801 siRNA；
(153)所述眼睛病状与多发性硬化症(MS)相关的视力丧失相关，且所述治疗性产物为ND1；
(154)所述眼睛病状与近视相关，且所述治疗性产物为基质金属蛋白酶2(MMP2)RNAi；
(155)所述眼睛病状与X连锁隐性眼白化病相关，且所述治疗性产物为G蛋白偶联受体143(GPR143)；
(156)所述眼睛病状与1型眼皮肤白化病相关，且所述治疗性产物为酪氨酸酶(TYR)；
(157)所述眼睛病状与视神经炎相关，且所述治疗性产物为半胱天冬酶2(CASP2)；
(158)所述眼睛病状与视神经炎相关，且所述治疗性产物为抗含亮氨酸富集重复序列和Ig结构域的蛋白质1(LINGO1)单克隆抗体；或
(159)所述眼睛病状与息肉状脉络膜血管病变相关，且所述治疗性产物为抗补体C5适体。
27.如权利要求1至11和15至18中任一项的方法，其中：(1)所述眼睛病状与X连锁色素性视网膜炎(XLRP)相关，且所述治疗性产物为色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)；
(2)所述眼睛病状与全色盲(ACHM)相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道β3(CNGB3)；
(3)所述眼睛病状与全色盲相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道α3(CNGA3)；或
(4)所述眼睛病状与二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)。
28.如权利要求1至11和13至18中任一项所述的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与Batten-CLN1相关，且所述治疗性产物为棕榈酰基-蛋白质硫酯酶1(PPT1)；
(2)所述眼睛病状与Batten-CLN2相关，且所述治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；
(3)所述眼睛病状与Batten-CLN3相关，且所述治疗性产物为Battenin(CLN3)；
(4)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗白介素6(IL6)单克隆抗体；
(5)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF-α(TNF)单克隆抗体；
(6)所述眼睛病状与糖尿病性黄斑水肿(DME)相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(7)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(8)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(9)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(10)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且所述治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；
(11)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；
(12)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且所述治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；
(13)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且所述治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；
(14)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦12(LCA 12)相关，且所述治疗性产物为视网膜变性3，GUCY2D调节因子(RD3)；
(15)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦13(LCA 13)相关，且所述治疗性产物为视黄醇脱氢酶12(RDH12)；
(16)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且所述治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；
(17)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦16(LCA 16)相关，且所述治疗性产物为钾电压门控通道亚家族J成员13(KCNJ13)；
(18)所述眼睛病状与莱伯氏遗传性视神经病变(LHON)相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶1(MT-ND1)；
(19)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；
(20)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；
(21)所述眼睛病状与视神经脊髓炎(NMO)相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(22)所述眼睛病状与NMO相关，且所述治疗性产物为抗IL6单克隆抗体；
(23)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗补体C5单克隆抗体；
(24)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为血管紧张素I转换酶(ACE)；
(25)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为白介素10(IL10)；
(26)所述眼睛病状与葡萄膜炎相关，且所述治疗性产物为抗TNF单克隆抗体；
(27)所述眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且所述治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；
(28)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；
(29)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征3相关，且所述治疗性产物为ADP核糖基化因子样GTP酶6(ARL6)；
(30)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征5相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征5(BBS5)；
(31)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且所述治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；
(32)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；
(33)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征11相关，且所述治疗性产物为含三联基序32(TRIM32)；
(34)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征13相关，且所述治疗性产物为MKS过渡区复合体亚基1(MKS1)；
(35)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征18相关，且所述治疗性产物为BBSome相互作用蛋白1(BBIP1)；
(36)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征19相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白27(IFT27)；
(37)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；
(38)所述眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；
(39)所述眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且所述治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；或
(40)所述眼睛病状与贝斯特氏病相关，且所述治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)。
29.如权利要求1至11和15至18中任一项所述的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与二等位基因RPE65突变相关的视网膜营养不良相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)。
30.如权利要求1至11和13至18中任一项的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与Batten-CLN2相关，且所述治疗性产物为三肽基-肽酶1(TPP1)；
(2)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为肌球蛋白VIIA(MYO7A)；
(3)所述眼睛病状与1型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为钙粘蛋白相关23(CDH23)；
(4)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为原钙粘蛋白相关15(PCDH15)；
(5)所述眼睛病状与2型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Usherin(USH2A)；
(6)所述眼睛病状与3型亚瑟氏症相关，且所述治疗性产物为Clarin 1(CLRN1)；
(7)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ATP结合盒亚家族A成员4(ABCA4)；
(8)所述眼睛病状与斯塔加特氏病相关，且所述治疗性产物为ELOVL脂肪酸延长酶4(ELOVL4)；
(9)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(10)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(11)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(12)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦1(LCA 1)相关，且所述治疗性产物为视网膜鸟苷酸环化酶2D(GUCY2D)；
(13)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦2(LCA 2)相关，且所述治疗性产物为类视黄素异构水解酶RPE65(RPE65)；
(14)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦4(LCA 4)相关，且所述治疗性产物为芳烃受体相互作用蛋白样1(AIPL1)；
(15)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦7(LCA 7)相关，且所述治疗性产物为视锥-视杆同源框(CRX)；
(16)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦8(LCA 8)相关，且所述治疗性产物为Crumbs细胞极性复合体组分1(CRB1)；
(17)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦9(LCA 9)相关，且所述治疗性产物为烟酰胺核苷酸腺苷酰基转移酶1(NMNAT1)；
(18)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦10(LCA 10)相关，且所述治疗性产物为中心体蛋白290(CEP290)；
(19)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦11(LCA 11)相关，且所述治疗性产物为肌苷单磷酸脱氢酶1(IMPDH1)；
(20)所述眼睛病状与莱伯先天性黑朦15(LCA 15)相关，且所述治疗性产物为短粗样蛋白1(TULP1)；
(21)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶4(MT-ND4)；
(22)所述眼睛病状与LHON相关，且所述治疗性产物为粒线体编码的NADH脱氢酶6(MT-ND6)；
(23)所述眼睛病状与无脉络膜症相关，且所述治疗性产物为Rab护航蛋白1(CHM)；
(24)所述眼睛病状与X连锁视网膜劈裂症(XLRS)相关，且所述治疗性产物为视网膜分裂素(RS1)；
(25)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征1相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征1(BBS1)；
(26)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征6相关，且所述治疗性产物为麦-考综合征(MKKS)；
(27)所述眼睛病状与巴德-毕德氏综合征10相关，且所述治疗性产物为巴德-毕德氏综合征10(BBS10)；
(28)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；
(29)所述眼睛病状与视神经萎缩相关，且所述治疗性产物为OPA1粒线体发动蛋白样GTP酶(OPA1)；
(30)所述眼睛病状与色素性视网膜炎1相关，且所述治疗性产物为RP1轴突微管相关(RP1)；
(31)所述眼睛病状与色素性视网膜炎2相关，且所述治疗性产物为ARL3GTP酶的RP2活化因子(RP2)；
(32)所述眼睛病状与色素性视网膜炎7相关，且所述治疗性产物为外周蛋白2(PRPH2)；
(33)所述眼睛病状与色素性视网膜炎11相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子31(PRPF31)；
(34)所述眼睛病状与色素性视网膜炎13相关，且所述治疗性产物为前体mRNA加工因子8(PRPF8)；
(35)所述眼睛病状与色素性视网膜炎37相关，且所述治疗性产物为核受体亚家族2组E成员3(NR2E3)；
(36)所述眼睛病状与色素性视网膜炎38相关，且所述治疗性产物为MER原癌基因酪氨酸激酶(MERTK)；
(37)所述眼睛病状与色素性视网膜炎40相关，且所述治疗性产物为磷酸二酯酶6B(PDE6B)；
(38)所述眼睛病状与色素性视网膜炎41相关，且所述治疗性产物为Prominin 1(PROM1)；
(39)所述眼睛病状与色素性视网膜炎56相关，且所述治疗性产物为光感受器间基质蛋白聚糖2(IMPG2)；
(40)所述眼睛病状与色素性视网膜炎62相关，且所述治疗性产物为雄性生殖细胞相关激酶(MAK)；
(41)所述眼睛病状与色素性视网膜炎80相关，且所述治疗性产物为纤毛内转运蛋白140(IFT140)；或
(42)所述眼睛病状与贝斯特氏病相关，且所述治疗性产物为斑萎蛋白1(BEST1)。
31.如权利要求1至11和15至18中任一项所述的方法，其中：
(1)所述眼睛病状与X连锁色素性视网膜炎(XLRP)相关，且所述治疗性产物为色素性视网膜炎GTP酶调节因子(RPGR)；
(2)所述眼睛病状与全色盲相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道β3(CNGB3)；或
(3)所述眼睛病状与全色盲相关，且所述治疗性产物为环核苷酸门控通道α3(CNGA3)。
32.如权利要求1至31中任一项所述的方法，其中所述重组病毒载体进一步包含编码启动子或增强子-启动子的核苷酸序列，所述编码启动子或增强子-启动子的核苷酸序列可操作地连接于编码所述治疗性产物的核苷酸序列，且其中所述启动子或增强子-启动子为：
(1)CAG启动子；
(2)CBA启动子；
(3)CMV启动子；
(4)PR1.7启动子；
(5)视紫质激酶(GRK1)光感受器特异性增强子-启动子；
(6)hCARp启动子；
(7)hRKp；
(8)视锥光感受器特异性人抑制蛋白3(ARR3)启动子；
(9)视紫质启动子；或
(10)U6启动子。
33.如权利要求1至11和13至15中任一项所述的方法，其中所述重组病毒载体进一步包含编码视锥特异性启动子的核苷酸序列，所述编码视锥特异性启动子的核苷酸序列可操作地连接于编码所述治疗性产物的核苷酸序列，且其中：
(1)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1LW)；
(2)所述眼睛病状与红绿色盲相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(3)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视相关，且所述治疗性产物为M视蛋白(OPN1MW)；
(4)所述眼睛病状与视锥细胞营养不良相关，且所述治疗性产物为鸟苷酸环化酶活化因子1A(GUCA1A)；或
(5)所述眼睛病状与蓝锥细胞单色视(BCM)相关，且所述治疗性产物为L视蛋白(OPN1MW)。
34.如权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述施用步骤将治疗有效量的所述治疗性产物递送至所述人受试者的视网膜。
35.如权利要求34所述的方法，其中所述治疗有效量的所述治疗性产物是由所述人受试者的人视网膜细胞产生。
36.如权利要求34所述的方法，其中所述治疗有效量的所述治疗性产物是由所述人受试者的外界膜中的人光感受器细胞、水平细胞、双极细胞、无长突细胞、视网膜神经节细胞和/或视网膜色素上皮细胞产生的。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述人光感受器细胞为视锥细胞和/或视杆细胞。
38.如权利要求36所述的方法，其中所述视网膜神经节细胞为侏儒细胞、阳伞细胞、双层细胞、巨型视网膜神经节细胞、光敏性神经节细胞和/或米勒神经胶质细胞。
39.如权利要求1至38中任一项所述的方法，其中所述重组病毒载体为rAAV载体。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述重组病毒载体为rAAV8载体。
41.如权利要求1至40中任一项所述的方法，其进一步包括在所述施用步骤之后，使用红外热像仪监测眼睛中注射材料的眼部注射后热分布的步骤。
42.如权利要求41所述的方法，其中所述红外热像仪为FLIR T530红外热像仪。
43.如权利要求1至43中任一项所述的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约6.0×1010个基因组拷贝的剂量施用。
44.如权利要求1至43中任一项所述的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约1.6×1011个基因组拷贝的剂量施用。
45.如权利要求1至43中任一项所述的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约2.5×1011个基因组拷贝的剂量施用。
46.如权利要求1至43中任一项所述的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约5.0×1011个基因组拷贝的剂量施用。
47.如权利要求1至43中任一项所述的方法，其中所述重组核苷酸表达载体以每只眼睛约3.0×1012个基因组拷贝的剂量施用。
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