TW202228646A - 諸如凝膠調配物之用於脈絡膜上投與之調配物 - Google Patents

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Abstract

本文提供用於投與至個體眼睛之脈絡膜上腔的醫藥組合物。該等醫藥組合物可包括編碼轉殖基因之重組腺相關病毒(AAV)。本文亦提供藉由向有需要之個體投與治療有效量之該等醫藥組合物來治療或預防該個體之疾病的方法。

Description

諸如凝膠調配物之用於脈絡膜上投與之調配物
人眼係一個高度複雜且高度發達之感覺器官，容易發生許多疾病及病症。世界上約2.85億人有視覺障礙，其中3900萬人視盲且2.46億人患有中度至重度視覺障礙(World Health Organization, 2012, 「Global Data On Visual Impairments 2010」, Geneva : World Health Organization)。導致視盲之一些主要原因為白內障(47%)、青光眼(12%)、年齡相關性黃斑變性(AMD) (9%)及糖尿病性視網膜病變(5%) (World Health Organization, 2007, 「Global Initiative For The Elimination Of Avoidable Blindness: Action Plan 2006-2011」, Geneva: World Health Organization)。
已採用基因療法來治療某些眼部疾病(參見例如國際專利申請案第PCT/US2017/027650號(國際公開案第WO 2017/181021 A1號))。腺相關病毒(AAV)係一種有吸引力的用於基因療法之工具，因為其具有如下特性：非致病性、廣泛的宿主及細胞類型向性感染範圍(包括分裂細胞與非分裂細胞二者)以及建立長期轉殖基因表現之能力(例如Gonçalves, 2005, Virology Journal, 2:43)。
當前用於眼部基因療法之方法(例如藉由玻璃體內或視網膜下投與)係侵入性的，且會遭遇嚴重挫折，諸如白內障、視網膜剝離及感光受體與中央凹視網膜色素上皮(RPE)分離之風險增加。對改善或消除當前眼部基因療法之挫折的療法存在顯著未滿足之醫療需求。
腺相關病毒(AAV)係稱為依賴病毒( Dependovirus)之細小病毒科( Parvoviridae)成員，為一種小型無套膜之二十面體病毒，具有約4.7千鹼基(kb)至6 kb之單股線性DNA基因體。非致病性、廣泛的宿主及細胞類型向性感染範圍(包括分裂細胞與非分裂細胞二者)以及建立長期轉殖基因表現之能力的特性使AAV成為一種有吸引力的用於基因療法之工具(例如Gonçalves, 2005, Virology Journal, 2:43)。
正在研究構築體II作為一種藉由注射至脈絡膜上腔中來遞送的治療。脈絡膜上腔(SCS)係介於鞏膜與脈絡膜之間的一個區域，在注射藥物溶液時會擴大(Habot-Wilner, 2019)。當注射之溶液藉由生理過程清除時，SCS空間恢復至其注射前之尺寸。藥物溶液在SCS內擴散且吸收至鄰近組織中。脈絡膜中之毛細血管可滲透低分子量滲透物。本揭示案解決提供如下醫藥組合物之未滿足需求，該醫藥組合物使得在脈絡膜上腔中之滯留時間更長，從而提高功效。
在一態樣中，本文提供一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中該醫藥具有隨著溫度增加而增加之黏度及/或較高彈性模數。在一些實施例中，組合物具有約27-32℃之膠凝溫度。在一些實施例中，組合物具有約15-90秒之膠凝時間。在一些實施例中，如在約1s -1至約1000s -1之剪切速率下所量測，組合物在5℃下具有約183 mPas之黏度。在一些實施例中，如在約1s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，組合物在5℃下具有小於約183 mPas之黏度。在一些實施例中，其中如在約1s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在20℃下具有約183 mPas之黏度。在一些實施例中，如在約1s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，組合物在20℃下具有小於約183 mPas之黏度。
在一些實施例中，在低於27℃下本文提供之醫藥組合物之彈性模數小於約或約0.1 Pa、小於約或約0.01 Pa、小於約或約0.001 Pa或為零。在一些實施例中，在約32℃-35℃下本文提供之醫藥組合物之彈性模數為約或至少約0.1 Pa、約或至少約1 Pa、約或至少約10 Pa、約或至少約100 Pa、約或至少約1000 Pa、約或至少約10,000 Pa、或約或至少約100,000 Pa。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後之清除時間等於或大於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中在約32-35℃下與醫藥組合物相比參考醫藥組合物具有較低黏度及/或較低彈性模數。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後之圓周擴散比參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之圓周擴散小，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中在約32-35℃下與醫藥組合物相比參考醫藥組合物具有較低黏度及/或較低彈性模數。在一些實施例中，在脈絡膜上投與後之圓周擴散小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%、或至少200%、至少250%、或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後在注射部位之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中在約32-35℃下與醫藥組合物相比參考醫藥組合物具有較低黏度及/或較低彈性模數。
在一些實施例中，與在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在眼睛中偵測到表現水準之轉殖基因的時段相比在脈絡膜上投與後更長時段在眼睛中偵測到表現水準之轉殖基因，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中在約32-35℃下與醫藥組合物相比參考醫藥組合物具有較低黏度及/或較低彈性模數。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後眼睛中轉殖基因之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後眼睛中轉殖基因之濃度，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中在約32-35℃下與醫藥組合物相比參考醫藥組合物具有較低黏度及/或較低彈性模數。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後在注射部位之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之轉導率，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中在約32-35℃下與醫藥組合物相比參考醫藥組合物具有較低黏度及/或較低彈性模數。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組AAV，其中當將醫藥組合物或參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中在約32-35℃下與醫藥組合物相比參考醫藥組合物具有較低黏度及/或較低彈性模數。
在一些實施例中，醫藥組合物之黏度及/或彈性模數及參考醫藥組合物之黏度及/或彈性模數係在相同剪切速率下量測。在一些實施例中，醫藥組合物之黏度及/或彈性模數在至少約1,000 s-1、2,000 s-1、3,000 s-1、4,000 s-1、5,000 s-1、6,000 s-1、7,000 s-1、8,000 s-1、9,000 s-1、10,000 s-1、15,000 s-1、20,000 s-1或30,000 s-1之剪切速率下量測。
在一些實施例中，重組AAV為構築體II。在一些實施例中，轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。在一些實施例中，重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。在一些實施例中，重組AAV為AAV8。在一些實施例中，重組AAV為AAV9。
在一些實施例中，醫藥組合物包含蔗糖。在一些實施例中，醫藥組合物不包含蔗糖。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間多至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間為約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後之清除時間不早於約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間為至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。在一些實施例中，清除時間係自SCS或自眼睛之清除時間。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。在一些實施例中，在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後眼睛中轉殖基因之濃度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在眼睛中偵測到轉殖基因達至少約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在眼睛中偵測到轉殖基因達至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後的更長時段長至少4小時、8小時、12小時、16小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低。在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，在脈絡膜上投與醫藥組合物後在注射部位之轉導率高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV穩定性比參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性高。在一些實施例中，重組AAV穩定性係藉由重組AAV之感染力確定。在一些實施例中，重組AAV穩定性係藉由重組AAV之聚集水準確定。在一些實施例中，重組AAV穩定性係藉由重組AAV釋放之游離DNA之水準確定。在一些實施例中，與參考醫藥組合物中之游離DNA之水準相比，醫藥組合物包含多約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍的游離DNA。
在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV的感染力比參考醫藥組合物中之重組AAV之感染力高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中，醫藥組合物之重組AAV聚集比參考醫藥組合物中之重組AAV聚集水準少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
在一些實施例中，轉殖基因係適合治療，或以其他方式改善所關注之疾病、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病之進展的轉殖基因。
在一些實施例中，人類個體經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)、x性聯病或巴登氏病(Batten disease)。在一些實施例中，人類個體經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症(Duchenne muscular dystrophy)、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症(Becker muscular dystrophy)及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病。
在一些實施例中，AAV編碼棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)或三肽基-肽酶1 (TPP1)。
在一些實施例中，重組AAV基因體複本之量係基於載體基因體濃度。在一些實施例中，重組AAV基因體複本之量係基於每次投與之基因體複本。在一些實施例中，重組AAV基因體複本之量係基於向人類個體投與之總基因體複本。在一些實施例中，每次投與之基因體複本係每次脈絡膜上投與之重組AAV之基因體複本。
在一些實施例中，所投與之總基因體複本係經脈絡膜上投與之重組AAV之總基因體複本。在一些實施例中，載體基因體濃度(VGC)為約3×10 9GC/mL、約1×10 10GC/mL、約1.2×10 10GC/mL、約1.6×10 10GC/mL、約4×10 10GC/mL、約6×10 10GC/mL、約2×10 11GC/mL、約2.4×10 11GC/mL、約2.5×10 11GC/mL、約3×10 11GC/mL、約6.2×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL、約3×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約1.5×10 13GC/mL、約2×10 13GC/mL或約3×10 13GC/mL。在一些實施例中，所投與之總基因體複本為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL或約3.0×10 13個基因體複本。在一些實施例中，投與之總基因體複本為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。
在一些實施例中，醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中，參考醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中，一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與醫藥組合物。在一些實施例中，一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與參考醫藥組合物。
在一些實施例中，醫藥組合物含有泊洛沙姆407及泊洛沙姆188。在一些實施例中，組合物包含16-22%泊洛沙姆407。在一些實施例中，組合物包含0-16%泊洛沙姆188。在一些實施例中，組合物包含19%泊洛沙姆407及6%泊洛沙姆188。在一些實施例中，組合物包含18%泊洛沙姆407及6.5%泊洛沙姆188。在一些實施例中，組合物包含17.5%泊洛沙姆407及7%泊洛沙姆188。
在一些實施例中，組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液(modified Dulbecco’s phosphate-buffered saline solution)，及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中，醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況選用之界面活性劑。在一些實施例中，組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之界面活性劑。
在另一態樣中，本文提供一種治療個體之疾病之方法，該方法包括向該個體投與本文提供之醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物在投與時處於約2-10℃之溫度下。在一些實施例中，醫藥組合物在投與時處於約20-25℃之溫度下。
在一些實施例中，醫藥組合物在小於約43 PSI之注射壓力下投與。在一些實施例中，醫藥組合物在小於約65 PSI之注射壓力下投與。在一些實施例中，醫藥組合物在小於約100 PSI之注射壓力下投與。
在一些實施例中，醫藥組合物係使用29規格針投與。在一些實施例中，醫藥組合物係使用30規格針投與。
在一些實施例中，醫藥組合物在約10-15秒之注射時間內投與。在一些實施例中，醫藥組合物在約5-30秒之注射時間內投與。
在一些實施例中，個體為人類。
在一些實施例中，疾病係選自由以下組成之群：nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)、巴登氏病、IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症及散發性包涵體肌炎及激肽釋放素相關疾病。
優先權
本申請案主張於2020年10月7日申請之美國序列號63/088,886及於2021年2月9日申請之美國序列號63/147,584的優先權權益，各以引用之方式整體併入本文中。 關於以電子方式提交之序列表的參考
本申請案以引用之方式併入序列表，該序列表係以標題為「12656-143-036_Sequence_Listing.txt」之文本文件形式與本申請案一起提交，該文本文件於2021年10月1日創建且大小為107,035位元組。
本文提供適合投與至個體眼睛脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，該等醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。個體可為經診斷患有部分4.5中描述之多種疾病中之一種的個體。AAV載體描述於部分4.4中且此類載體之劑量描述於部分4.3中。在一些實施例中，部分4.1中提供之醫藥組合物經調配以使得其具有部分4.2中之描述之一或多種功能特性。在某些實施例中，本文提供之醫藥組合物具有多個優點，例如清除時間增加或減慢(部分4.2.1)；圓周擴散減少(部分4.2.2)；增加SCS厚度(部分4.2.3)；血管舒張及/或血管滲漏減少(部分4.2.4)；增加AAV水準及增加注射部位之轉導率(部分4.2.5)；及在SCS中投與醫藥組合物後轉殖基因之濃度增加。不受理論束縛，可使用如部分4.1中揭示之溫度感應性調配物來實現該等功能特性。本文亦提供可用於相關研究之分析法(部分4.6)。 4.1  醫藥組合物之調配
本揭示案提供一種適合脈絡膜上投與之醫藥組合物，其包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中，使用在眼外溫度(約32-35℃)下具有不同黏度(或「損耗模數(G”)」)值特性之若干種醫藥組合物來投與編碼轉殖基因之AAV。在一些實施例中，使用在眼外溫度(約32-35℃)下具有不同彈性/儲存模數(G’)特性之若干種醫藥組合物來投與編碼轉殖基因之AAV。
在一些實施例中，醫藥組合物為溫度感應性的。術語「溫度感應性」係所屬領域中眾所周知的，描述在不同溫度下表現出不同物理特性之物質。在某些實施例中，與在眼外溫度(約32-35℃)下相比，本文提供之醫藥組合物在室溫(例如約20-25℃)下具有較低黏度、較低損耗模數(G”)及/或較低彈性/儲存(G’)模數。在某些實施例中，與在眼外溫度(約32-35℃)下相比，當冷卻(例如約2-10℃)時本文提供之醫藥組合物具有較低黏度及/或較低彈性模數(G’)。在醫藥組合物之黏度比在眼外溫度(約32-35℃)下低的溫度下(例如冷卻或在室溫下)，本文提供之醫藥組合物可投與至個體眼睛。不希望受任何特定理論束縛，在投與至個體眼睛(例如脈絡膜上投與)後溫度之改變可能引起黏度及/或彈性模數(G’)增加，使得組合物在注射部位附近之滯留時間與參考醫藥組合物相比增加，其中該參考醫藥組合物在眼外溫度(約32-35℃)下具有較低黏度。
在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中，醫藥組合物在約32-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值高於水在約32-35℃下之黏度。在一些實施例中，醫藥組合物在約32-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值高於對照物在約32-35℃下之黏度。在一些實施例中，醫藥組合物在約32-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值高於通常用於視網膜下注射之溶液在約32-35℃下之黏度。在一些實施例中，醫藥組合物在約32-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值高於PBS或dPBS在約32-35℃下之黏度。在一些實施例中，醫藥組合物在約32-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值高於漢克平衡鹽溶液(Hank’s Balanced Salt Solution，HBSS)在約32-35℃下之黏度。在一些實施例中，參考醫藥組合物在約32-35℃下之黏度及/或彈性模數(G’)值比在約32-35℃下之醫藥組合物低。在一些實施例中，在約20-25℃下參考醫藥組合物具有與醫藥組合物相同或相似之黏度及/或彈性模數(G’)。在一些實施例中，參考醫藥組合物為對照溶液(例如，PBS、水或HBSS)。在一些實施例中，參考醫藥組合物包含蔗糖。在一些實施例中，參考醫藥組合物為常用於AAV視網膜下注射之醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物非溫度感應性的，例如參考醫藥組合物在約20-25℃下之黏度及/或彈性模數(G’)實質上與其在約32-35℃下相同，或在溫度增加下不具有較高黏度及/或彈性模數(G’)。
在一些實施例中，例如在零、0.001、0.01、0.1或1 s − 1之剪切速率下或在約或至少約1000 s − 1之剪切速率下在約32-35℃下醫藥組合物具有約、至少約或至多約10 cP、15 cP、20 cP、25 cP、30 cP、35 cP、40 cP、45 cP、50 cP、60 cP、70 cP、80 cP、90 cP、100 cP、150 cP、200 cP、250 cP、300 cP、350 cP、400 cP、450 cP、500 cP、550 cP、600 cP、650 cP、700 cP、800 cP、900 cP、1000 cP、2,000 cP、3,000 cP、4,000 cP、5,000 cP、6,000 cP、7,000 cP、8,000 c、9,000 cP、10,000 cP、12,000 cP或15,000 cP之黏度。在一些實施例中，剪切速率為約或小於約100 s -1、50 s -1、10 s -1、1 s -1、0.1 s -1、0.01 s -1、0.001 s -1或0.0001 s -1。在一些實施例中，醫藥組合物或參考醫藥組合物之黏度為在例如約或小於約100 s -1、50 s -1、10 s -1、1 s -1、0.01 s -1、0.001 s -1或0.0001 s -1之剪切速率下本文揭示之任何黏度。
在一些實施例中，醫藥組合物在約32-35℃下或參考醫藥組合物(或對照醫藥組合物或可比較之醫藥組合物)在約32-35℃下之黏度(例如，如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下所量測)為約或至少約5 cP、約或至少約10 cP、約或至少約15 cP、約或至少約20 cP、約或至少約25 cP、約或至少約30 cP、約或至少約35 cP、約或至少約40 cP、約或至少約45 cP、約或至少約50 cP、約或至少約60 cP、約或至少約70 cP、約或至少約80 cP、約或至少約90 cP、100 cP、約或至少約115 cP、約或至少約120 cP、約或至少約125 cP、約或至少約130 cP、約或至少約135 cP、約或至少約140 cP、約或至少約145 cP、約或至少約150 cP、約或至少約160 cP、約或至少約170 cP、約或至少約180 cP、約或至少約190 cP、約或至少約200 cP、約或至少約300 cP、約或至少約400 cP、約或至少約500 cP、約或至少約600 cP、約或至少約700 cP、約或至少約800 cP、約或至少約900 cP、約或至少約1000 cP、約或至少約1500 cP、約或至少約2000 cP、約或至少約2500 cP、約或至少約3000 cP、約或至少約3500 cP、約或至少約4000 cP、約或至少約4500 cP、約或至少約5000 cP、約或至少約5500 cP、約或至少約6000 cP、約或至少約6500 cP、約或至少約7000 cP、約或至少約7500 cP、約或至少約8000 cP、約或至少約9000 cP、約或至少約10000 cP、約或至少約1×10 3cP、約或至少約3×10 3cP、約或至少約1×10 4cP、約或至少約3×10 4cP、約或至少約1×10 5cP、約或至少約1.7×10 5cP、約或至少約3×10 5cP、約或至少約1×10 6cP、約或至少約3×10 6cP、約或至少約1×10 7cP、約或至少約3×10 7cP、約或至少約1×10 8cP、約或至少約3×10 8cP。在一些實施例中，在約32-35℃下黏度(例如，如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下所量測)介於約25 cP至約1×10 6cP之間、介於約25 cP至約1×10 4cP之間、介於約25 cP至約5,000 cP之間、介於約25 cP至約1×10 3cP之間、介於約100 cP至約1×10 6cP之間、介於約100 cP至約1×10 4cP之間、介於約100 cP至約5,000 cP之間、介於約100 cP至約1×10 3cP之間。在一些實施例中，在約32-35℃下黏度(例如，如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下所量測)介於約25 cP至約3×10 6cP之間、介於約10 cP至約3×10 8cP之間、介於約50 cP至約5000 cP之間、介於約10 cP至約15000 cP之間、介於約25 cP至約1500 cP之間、介於約50 cP至約1500 cP之間、介於約25 cP至約3×10 4cP之間。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物具有至少介於約25 cP至約3×10 6cP之間、至少介於約10 cP至約3×10 8cP之間、至少介於約50 cP至約5000 cP之間、至少介於約10 cP至約15000 cP之間、至少介於約25 cP至約1500 cP之間、至少介於約50 cP至約1500 cP之間或至少介於約25 cP至約3×10 4cP之間的黏度(例如，如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下所量測)。在一些實施例中，在約32-35℃下可比較之醫藥組合物或參考醫藥組合物或對照物具有約或至多約1 cP、約或至多約2 cP、約或至多約3 cP、約或至多約4 cP、約或至多約5 cP、約或至多約6 cP、約或至多約7 cP、約或至多約8 cP、約或至多約9 cP、約或至多約10 cP、約或至多約15 cP、約或至多約20 cP、約或至多約25 cP、約或至多約30 cP、約或至多約35 cP、約或至多約40 cP、約或至多約45 cP、約或至多約50 cP、約或至多約55 cP、約或至多約60 cP、約或至多約65 cP、約或至多約70 cP、約或至多約75 cP、約或至多約80 cP、約或至多約85 cP、約或至多約90 cP、約或至多約95 cP、約或至多約100 cP、約或至多約200 cP、約或至多約300 cP、約或至多約400 cP、約或至多約500 cP之黏度(例如，如在約或至少約1000 s -1之剪切速率下所量測)。在一些實施例中，在約32-35℃下可比較之醫藥組合物或參考醫藥組合物或對照物具有介於約1 cP至約25 cP之間、介於約1 cP至約20 cP之間、介於約1 cP至約24 cP之間、介於約1 cP至約10 cP之間、介於約1 cP至約50 cP之間、介於約1 cP至約100 cP之間、介於約5 cP至約50 cP之間、介於約1 cP至約5 cP之間或介於約1 cP至約200 cP之間的黏度。
在一些實施例中，在約32-35℃下參考醫藥組合物具有約1 cP或小於約1 cP之黏度(例如，在約或至少約1000 s -1之剪切速率下)。在一些實施例中，在約32-35℃下參考醫藥組合物具有小於約1 cP之黏度(例如，在至少約1000 s − 1之剪切速率下)。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在20℃下之黏度≤ 183 mPas。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在5℃下之黏度≤ 183 mPas。因為黏度視剪切速率而定，所以醫藥組合物之「黏度」為在剪切速率0.01 s−1至100,000 s−1之間的任何點處之黏度。在一些實施例中，黏度單位可定義為cP或mPas。在一些情況下，cP與mPas可互換使用。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在32-35℃下之黏度小於265至655 mPas。
在一些實施例中，醫藥組合物在約32-35℃下之黏度為至少約10 cP、或至少約100 cP、或至少約1000 cP、或至少約10,000 cP、或至少約70,000 cP、或至多約200,000 cP、或至多約250,000 cP、或至多約300,000 cP或更多。在一些實施例中，剪切速率為約或至少約1000/秒之剪切速率。在一些實施例中，調配物之特徵在於至少300,000 mPas之零剪切黏度。在一些實施例中，調配物之特徵進一步在於在1000 s − 1剪切速率下不超過約400 mPas之黏度。
在一些實施例中，與參考醫藥調配物或在約32-35℃下具有較低黏度及/或彈性模數(G’)之調配物相比，本文提供之醫藥組合物在注射後在SCS中(或在眼睛中)保留更長時段(在不同時間點量測)。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物擴大SCS或注射部位之厚度(例如，與參考醫藥組合物或在約32-35℃下具有較低黏度及/或彈性模數(G’)之調配物相比) (參見部分4.2.3)。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在低於27℃下之彈性模數小於約或約0.1 Pa、小於約或約0.01 Pa、小於約或約0.001 Pa或為零。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在32℃至35℃下之彈性模數為約或至少約0.1 Pa、約或至少約1 Pa、約或至少約10 Pa、約或至少約100 Pa、約或至少約1000 Pa、約或至少約10,000 Pa、或約或至少約100,000 Pa。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物具有超過27℃之膠凝溫度。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物具有小於32℃之膠凝溫度。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物具有約27-32℃之膠凝溫度。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物具有約25、26、27、28、29、30、31、32、33、34或35℃之膠凝溫度。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物具有長於約10秒之膠凝時間。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物具有長於約15秒之膠凝時間。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物具有約10-15秒、約15-20秒、約20-25秒、約25-30秒、約30-35秒、約35-40秒、約40-45秒、約45-50秒、約50-55秒、約55-60秒、約60-65秒、約65-70秒、約70-75秒、約75-80秒、約80-85秒或約85-90秒之膠凝時間。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物之膠凝時間小於90秒。在一些實施例中，膠凝時間係在約34℃下測定。在一些實施例中，膠凝時間係在約32-34℃下測定。在一些實施例中，醫藥組合物之膠凝時間長於該組合物之注射時間。在一些實施例中，膠凝時間比注射時間長10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或超過90%。
在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物之黏度足以使注射部位之至少一部分(例如SCS)擴大至至少500 μm或約500 μm至約3 mm之厚度，長達投與後至少兩小時。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物之黏度足以使注射部位(例如SCS)擴大至約750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm之厚度。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物之黏度足以使注射部位(例如SCS)擴大至約500 μm至約3.0 mm之厚度，長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物之黏度足以使注射部位(例如SCS)擴大至約1 mm至約3 mm之厚度，長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時或至少二十四小時。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物之黏度足以使注射部位(例如SCS)擴大至約1 mm至約2 mm之厚度，長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物之黏度足以使注射部位(例如SCS)擴大至約2 mm至約3 mm之厚度，長達投與後至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物之黏度足以無限期地使注射部位(例如SCS)擴大至約750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm之厚度。可實現無限期，至少部分係因為醫藥組合物在注射部位(例如，SCS)之穩定性。
在一些實施例中，在約32-35℃下黏度足以使注射部位(例如SCS)擴大至至少500 μm或約500 μm至約3 mm之厚度的醫藥組合物具有比水在約32-35℃下之黏度(亦即約1 cP)大的黏度。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物具有足以使注射部位(例如SCS)擴大至至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm、10 mm或大於10 mm之厚度的黏度。在一些實施例中，在約32-35℃下參考醫藥組合物具有足以使注射部位擴大至至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm之厚度的黏度。
本文亦提供使用本文揭示之醫藥組合物治療部分4.5中描述之疾病(例如眼部疾病)的方法。在一些實施例中，治療眼部疾病之方法包括向個體(例如，人類)投與有效量之醫藥組合物(例如，包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體)。在一些實施例中，醫藥組合物投與個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)中。在一些實施例中，投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量小於視網膜下投與時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量小於玻璃體內投與時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，投與至SCS時醫藥組合物之載體基因體濃度與經由視網膜下投與或藉經由玻璃體內投與時相同。在一些實施例中，投與至SCS時醫藥組合物之基因體複本之量與經由視網膜下投與或藉經由玻璃體內投與時相同。在一些實施例中，投與至SCS時足以在個體中引發治療反應之醫藥組合物之有效量低於足以在個體中引發治療反應之參考醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量小於視網膜下投與時足以引發治療反應之參考醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，投與至SCS時足以引發治療反應之醫藥組合物之有效量為小於玻璃體內投與時足以引發治療反應之參考醫藥組合物之有效量。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中，醫藥組合物具有比參考醫藥組合物之黏度及/或彈性模數(G’)高的黏度及/或彈性模數(G’)。
在一些實施例中，醫藥組合物實質上位於插入部位附近(參見部分4.2.1及部分4.2.2)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起更高水準之轉殖基因表現(濃度) (參見部分4.2.6)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起更高水準之轉殖基因表現(濃度) (參見部分4.2.6)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起更高水準之AAV (參見部分4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起更高水準之AAV (參見部分4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物在注射部位引起更高轉導率(或感染率) (參見部分4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物在注射部位引起更高轉導率(或感染率) (參見部分4.2.5)。在一些實施例中，與在視網膜下或玻璃體內投與醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起血管舒張及/或血管滲漏減少(參見部分4.2.4)。在一些實施例中，與在視網膜下、玻璃體內或SCS中投與參考醫藥組合物時相比，在SCS中投與醫藥組合物時，醫藥組合物引起血管舒張及/或血管滲漏減少(參見部分4.2.4)。在一些實施例中，參考醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物具有比在約32-35℃下參考醫藥組合物高之黏度及/或彈性模數(G’)。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。  4.1.1     黏度控制
在一些實施例中，當調配物升溫至約32-35℃時，本文提供之醫藥組合物之黏度及/或彈性模數(G’)增加至遠超過水之黏度的值(例如在0.1/秒之剪切速率下至少約100 cP)，使得調配物可高度有效地置放，例如注射至個體眼睛(例如SCS)中。在一些實施例中，在約32-35℃下調配物之相對高黏度及/或彈性模數增強此類調配物將治療組分(例如，包括包含轉殖基因之表現卡匣之AAV)在調配物中長時間保持在基本上均勻之懸浮液中的能力，且亦可有助於調配物之儲存穩定性。
本文提供之醫藥組合物(例如溫度感應性醫藥組合物)可包含液體分散介質(「溶劑」)及膠凝劑(「凝膠劑」)。溶劑分子可滲透由凝膠劑形成之水狀膠體網路。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含水性系統中之親水性聚合物。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含天然聚合物(例如黃原膠、澱粉、結冷膠、蒟蒻、鹿角菜苷、膠原、纖維蛋白、絲蛋白、透明質酸或明膠)。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含合成聚合物(例如幾丁聚糖-β-甘油磷酸酯、聚(N-異丙基丙烯醯胺) (pNIPAAm)、普朗尼克(pluronic) F127、甲基纖維素或PEG-PCL)。參見例如Taylor等人 ,Gels. 2017年3月; 3(1): 4。
與較低溫度相比在約32-35℃下具有較高黏度及/或彈性模數(G’)且可用於本揭示案之醫藥組合物中的溶液之非限制性實例包括包含變化濃度之泊洛沙姆407 (P407，CAS編號：9003-11-6)及泊洛沙姆188 (P188，CAS編號：9003-11-6)的溶液。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含16% P407及0% P188。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含22% P407及0% P188。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含16% P407及16% P188。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含22% P407及16% P188。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含19% P407及0% P188。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含16% P407及8% P188。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含22% P407及8% P188。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物包含19% P407及8% P188。 4.1.2     調配物之其他組分
在一些實施例中，本揭示案提供一種醫藥組合物(例如，液體調配物)，其包含重組腺相關病毒(AAV)及以下至少一者：磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及界面活性劑。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，液體調配物)不包含蔗糖。諸如部分4.6及/或部分5中之分析法的分析法可用於確定額外組分之存在不干擾本發明之調配物之性質，諸如在增加溫度下較高黏度及/或彈性模數(G’)。
在一些實施例中，本揭示案提供一種醫藥組合物，其包含重組腺相關病毒(AAV)及以下至少一者：離子鹽賦形劑或緩衝劑、蔗糖及界面活性劑。在一些實施例中，離子鹽賦形劑或緩衝劑可為一或多種來自由以下組成之群的組分：磷酸二氫鉀、磷酸鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、六水磷酸鈉、一水合磷酸二氫鈉、胺丁三醇、三(羥甲基)胺基甲烷鹽酸鹽(Tris-HCl)、胺基酸、組胺酸、組胺酸鹽酸鹽(組胺酸-HCl)、琥珀酸鈉、檸檬酸鈉、乙酸鈉及(4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙磺酸) (HEPES)、硫酸鈉、硫酸鎂、氯化鎂6-水合物、硫酸鈣、氯化鉀、氯化鈣及檸檬酸鈣。在一些實施例中，界面活性劑可為一或多種來自由以下組成之群的組分：泊洛沙姆188、聚山梨醇酯20及聚山梨醇酯80。
在某些實施例中，醫藥組合物具有約60 mM至約115 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約60 mM至約100 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約65 mM至約95 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約70 mM至約90 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約75 mM至約85 mM之離子強度。
在某些實施例中，醫藥組合物具有約30 mM至約100 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約35 mM至約95 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約40 mM至約90 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約45 mM至約85 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約50 mM至約80 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約55 mM至約75 mM之離子強度。在某些實施例中，醫藥組合物具有約60 mM至約70 mM之離子強度。
在某些實施例中，醫藥組合物包含氯化鉀(例如，濃度為0.2 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含磷酸二氫鉀(例如，濃度為0.2 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含氯化鈉(例如，濃度為5.84 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含無水磷酸氫二鈉(例如，濃度為1.15 g/L)。在某些實施例中，醫藥組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉及無水磷酸氫二鈉。
在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為3% (重量/體積，30 g/L)至18% (重量/體積，180 g/L)之蔗糖。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為4% (重量/體積，40 g/L)之蔗糖。
在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.001% (重量/體積，0.01 g/L)之泊洛沙姆188。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積，0.005 g/L)至0.05% (重量/體積，0.5 g/L)之泊洛沙姆188。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.001% (重量/體積，0.01 g/L)之泊洛沙姆188。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積，0.05 g/L)至0.05% (重量/體積，0.5 g/L)之聚山梨醇酯20。在某些實施例中，醫藥組合物包含濃度為0.0005% (重量/體積，0.05 g/L)至0.05% (重量/體積，0.5 g/L)之聚山梨醇酯80。
在某些實施例中，醫藥組合物之pH值為約7.4。在某些實施例中，醫藥組合物之pH值為約6.0至9.0。在某些實施例中，醫藥組合物之pH值為7.4。在某些實施例中，醫藥組合物之pH值為6.0至9.0。
在某些實施例中，醫藥組合物在疏水塗層玻璃小瓶中。在某些實施例中，醫藥組合物在環烯烴聚合物(COP)小瓶中。在某些實施例中，醫藥組合物在Daikyo Crystal Zenith® (CZ)小瓶中。在某些實施例中，醫藥組合物在TopLyo塗層小瓶中。
在某些實施例中，本文揭示一種醫藥組合物，其包含重組AAV及以下至少一者：(a)氯化鉀濃度為0.2 g/L、(b)磷酸二氫鉀濃度為0.2 g/L、(c)氯化鈉濃度為5.84 g/L、(d)無水磷酸氫二鈉濃度為1.15 g/L、(e)蔗糖濃度為4%重量/體積(40 g/L)、(f)泊洛沙姆188濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)及(g)水，且其中重組AAV為AAV8。在一些實施例中，醫藥組合物不包含蔗糖。
在一些實施例中，醫藥組合物包含(a)編碼抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體之構築體II及以下至少一者：(b)濃度為0.2 g/L之氯化鉀、(c)濃度為0.2 g/L之磷酸二氫鉀、(d)濃度為5.84 g/L之氯化鈉、(e)濃度為1.15 g/L之無水磷酸氫二鈉、(f)濃度為4%重量/體積(40 g/L)之蔗糖、(g)濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)之泊洛沙姆188及(h)水，且其中該抗hVEGF抗體包含：包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4之胺基酸序列之重鏈，及包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3之胺基酸序列之輕鏈。在一些實施例中，醫藥組合物不包含蔗糖。
在一些實施例中，醫藥組合物包含(a)編碼三肽基-肽酶1之AAV8或AAV9及以下至少一者：(b)濃度為0.2 g/L之氯化鉀、(c)濃度為0.2 g/L之磷酸二氫鉀、(d)濃度為5.84 g/L之氯化鈉、(e)濃度為1.15 g/L之無水磷酸氫二鈉、(f)濃度為4%重量/體積(40 g/L)之蔗糖、(g)濃度為0.001%重量/體積(0.01 g/L)之泊洛沙姆188及(h)水。在一些實施例中，醫藥組合物不包含蔗糖。
在一些實施例中，醫藥組合物具有適合脈絡膜上注射(例如，經由脈絡膜上藥物遞送裝置，例如具有微針之微注射器)之所需黏度、彈性模數(G’)、密度及/或滲透壓。在一些實施例中，醫藥組合物為液體組合物。在一些實施例中，醫藥組合物為冷凍組合物。在一些實施例中，醫藥組合物為凝膠。
在某些實施例中，醫藥組合物具有200 mOsm/L至660 mOsm/L之滲透壓範圍。在某些實施例中，醫藥組合物具有約、至少約或至多約以下之滲透壓：200 mOsm/L、250 mOsm/L、300 mOsm/L、350 mOsm/L、400 mOsm/L、450 mOsm/L、500 mOsm/L、550 mOsm/L、600 mOsm/L、650 mOsm/L或660 mOsm/L。
在某些實施例中，基因療法構築體呈AAV載體活性成分在調配物緩衝液中之冷凍無菌單次使用溶液供應。在一具體實施例中，適合脈絡膜上投與之醫藥組合物包含重組(例如rHuGlyFabVEGFi)載體在調配物緩衝液中之懸浮液，該調配物緩衝液包含生理學相容之水性緩衝液、界面活性劑及視情況選用之賦形劑。在一些實施例中，構築體在杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水及0.001%泊洛沙姆188 pH = 7.4中調配。
在特定實施例中，組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液及視情況選用之界面活性劑。在其他特定實施例中，醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況選用之界面活性劑。在其他特定實施例中，組合物包含氯化鉀、磷酸二氫鉀、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉、蔗糖及視情況選用之界面活性劑。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物不為Zeinab等人(European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics 114 (2017) 119-13)中所述之組合物。 4.2  功能特性 4.2.1     清除時間
本揭示案提供一種引起自SCS之清除時間延遲之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)。在一些實施例中，與在約32-35℃下非黏性或低黏度及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物相比，在約32-35℃下黏性(或較高黏性)及/或彈性及/或膠凝(或較大彈性及/或更加膠凝)之醫藥組合物引起自SCS之清除時間延遲。在一些實施例中，與在約32-35℃下非黏性或低黏度及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物相比，在約32-35℃下黏性(或較高黏性)及/或彈性及/或膠凝(或較大彈性及/或更加膠凝)之醫藥組合物引起自眼睛之清除時間延遲。在一些實施例中，與較低黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物相比，較高黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物引起自眼睛之清除時間延遲。在一些實施例中，在約32-35℃下較高黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物之黏度值高於水在約32-35℃下之黏度。在一些實施例中，在約32-35℃下較高黏性及膠凝之醫藥組合物之黏度值及/或彈性模數值高於在約32-35℃下通常用於視網膜下注射之溶液之黏度及/或彈性模數。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS後醫藥組合物之清除時間等於或高於在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物後參考醫藥組合物之清除時間。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS後醫藥組合物之清除時間等於或高於在參考醫藥組合物投與至SCS後參考醫藥組合物之清除時間。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)引起約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天的自SCS之清除時間。在一些實施例中，自SCS之清除時間為約3天至約365天、約3天至約300天、約3天至約200天、約3天至約150天、約3天至約125天、約7天至約365天、約7天至約300天、約7天至約200天、約7天至約150天、約7天至約125天。「自SCS之清除時間」係實質上所有之醫藥組合物、藥劑或AAV排出SCS所需之時間。在一些實施例中，「自SCS之清除時間」係藉由任何標準方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)均未在SCS中偵測到醫藥組合物、藥劑或AAV所需的時間。在一些實施例中，「自SCS之清除時間」係如藉由任何標準方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)所偵測，醫藥組合物、藥劑或AAV以至多約2%或至多約5%之量存在於SCS中時。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)引起約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天的自眼睛之清除時間。在一些實施例中，自眼睛之清除時間為約3天至約365天、約3天至約300天、約3天至約200天、約3天至約150天、約3天至約125天、約7天至約365天、約7天至約300天、約7天至約200天、約7天至約150天、約7天至約125天。「自眼睛之清除時間」係實質上所有之醫藥組合物、藥劑或AAV排出眼睛所需之時間。在一些實施例中，「自眼睛之清除時間」係藉由任何方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)均未偵測到醫藥組合物、藥劑或AAV所需的時間。在一些實施例中，「自眼睛之清除時間」係如藉由任何標準方法(例如部分4.6及部分5中描述之彼等方法)所偵測，醫藥組合物、藥劑或AAV以至多約2%或至多約5%之量存在於眼睛中時。
在一些實施例中，清除時間不早於(例如，自SCS或眼睛之清除時間在以下時間之前未發生過)在投與醫藥組合物之後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，清除時間為在投與醫藥組合物之後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)引起清除時間比當使用較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV (例如，經由視網膜下投與、玻璃體內投與或投與至SCS)時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、至少40%、多至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中，在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起清除時間比當藉由脈絡膜上投與例如使用在約32-35℃下較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、至少40%、多至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中，在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起清除時間比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用在約32-35℃下較低黏性之醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、至少40%、多至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中，在約32-35℃下黏性(例如，相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起清除時間比當經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與例如使用相同醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時多至少2倍、多至少3倍、多至少4倍、多至少5倍、多至少6倍、多至少7倍、多至少8倍、多至少9倍、多至少10倍、多至少15倍、多至少20倍、多至少50倍、多至少100倍、多至少5%、多至少10%、多至少15%、多至少20%、多至少25%、多至少30%、多至少35%、至少40%、多至少45%、多至少50%、多至少55%、多至少60%、多至少65%、多至少70%、多至少75%、多至少80%、多至少85%、多至少90%、多至少95%、多至少100%、多至少150%或多至少200%、多至少250%或至少300%、多至少400%或多至少500%。
在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與之在約32-35℃下相對黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間大於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之相同醫藥組合物的清除時間。在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與之在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間大於藉由脈絡膜上注射投與之在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物。在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與之在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間大於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物。在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與之在約32-35℃下黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間大於經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之在約32-35℃下可比較之黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物。
在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與之在約32-35℃下黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間比經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之相同醫藥組合物多至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與之在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間比藉由脈絡膜上注射投與之在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物多至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，藉由脈絡膜上注射投與之在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)的清除時間比經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與之在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物多至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，經由玻璃體內注射或經由視網膜下注射投與之醫藥組合物的清除時間為投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天。
在一些實施例中，藉由玻璃體內注射、視網膜下注射或注射至SCS投與之參考醫藥組合物的清除時間為投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天。
在一些實施例中，清除時間係自眼睛之清除時間。在一些實施例中，清除時間係自SCS之清除時間。在一些實施例中，清除時間係自注射部位之清除時間。  4.2.2     圓周擴散
在一些實施例中，醫藥組合物定位於注射部位。在一些實施例中，醫藥組合物定位於注射部位之時段比可比較之在眼外溫度(約32-35℃)下具有較低黏度及/或彈性模數(G’)及/或未膠凝之醫藥組合物長。在一些實施例中，當在SCS中注射時醫藥組合物定位於注射部位之時段比當藉由視網膜下注射或玻璃體內注射投與醫藥組合物時長。醫藥組合物可具有不同黏度及/或彈性模數值。在一些實施例中，在約32-35℃下黏性及/或彈性及/或膠凝(或較高黏性、較大彈性及/或更加膠凝)之醫藥組合物保持定位於SCS中之時段比在約32-35℃下非黏性或具有低黏度及/或未膠凝之醫藥組合物長。
在一些實施例中，定位可藉由評估圓周擴散(例如，2D圓周擴散)來確定。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)引起圓周擴散比當使用在眼外溫度(約32-35℃)下較低黏性之參考醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV (例如，藉由脈絡膜上注射、藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射)時少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、至少40%、少至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起圓周擴散比當藉由脈絡膜上投與、藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用參考醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、至少40%、少至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中，在約32-35℃下黏性(例如，相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)或彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起圓周擴散比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用相同醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時少至少2倍、少至少3倍、少至少4倍、少至少5倍、少至少6倍、少至少7倍、少至少8倍、少至少9倍、少至少10倍、少至少15倍、少至少20倍、少至少50倍、少至少100倍、少至少5%、少至少10%、少至少15%、少至少20%、少至少25%、少至少30%、少至少35%、至少40%、少至少45%、少至少50%、少至少55%、少至少60%、少至少65%、少至少70%、少至少75%、少至少80%、少至少85%、少至少90%、少至少95%、少至少100%、少至少150%或少至少200%、少至少250%或至少300%、少至少400%或少至少500%。
在一些實施例中，圓周擴散可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物後30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定。 4.2.3     SCS厚度
在一些實施例中，可藉由在向個體投與醫藥組合物之後評估SCS厚度來確定定位。在一些實施例中，在將醫藥組合物注射在SCS中之後，醫藥組合物增加SCS之厚度。在一些實施例中，SCS擴大以適應在約32-35℃下具有低黏度及/或彈性模數(G’)及/或未膠凝之醫藥組合物之輸注。在一些實施例中，更大體積之低黏度及/或低彈性模數及/或未膠凝之醫藥組合物之輸注不會引起SCS之進一步擴大。在一些實施例中，藉由增加流體在SCS中之擴散面積而非進一步擴大SCS來適應更大體積之低黏度及/或低彈性模數之流體調配物。在一些實施例中，將在約32-35℃下黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物輸注至SCS中可使SCS厚度擴大至超過將低黏度及/或低彈性模數及/或未膠凝之醫藥組合物輸注至SCS中時所達到之SCS厚度。在一些實施例中，用在約32-35℃下黏性及/或膠凝之醫藥組合物增加SCS厚度可使得接近SCS容易，從而容易或允許在SCS中處置裝置。在一些實施例中，擴大SCS厚度允許醫藥組合物及/或編碼轉殖基因之AAV在注射部位(定位)保持更長時段。在一些實施例中，與在約32-35℃下非黏性或具有低黏度及/或低彈性模數及/或未膠凝之醫藥組合物相比，在約32-35℃下黏性及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物在更長時段內增加注射部位或附近之厚度。在一些實施例中，與在約32-35℃下較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物相比，在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物在更長時段內增加注射部位或附近之厚度。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後在注射部位之厚度等於或高於在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物之後參考醫藥組合物在注射部位之厚度。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後醫藥組合物在注射部位之厚度等於或高於在參考醫藥組合物投與至SCS之後參考醫藥組合物在注射部位之厚度。
在一些實施例中，在約32-35℃下黏性(例如，相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起SCS厚度之增加比當藉由脈絡膜上投與例如使用在約32-35℃下較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起注射部位或附近之厚度之增加比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用在約32-35℃下較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在約32-35℃下黏性(例如，相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起注射部位或附近之厚度之增加比當藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用相同醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後在注射部位所獲得之厚度大於在藉由脈絡膜上注射投與在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物之後。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後在注射部位所獲得之厚度大於在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射投與在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物之後。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32-35℃下黏性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後在注射部位所獲得之厚度大於在藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物之後。
在一些實施例中，注射部位或附近之厚度(例如，SCS處或附近之厚度)可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物之後30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定。 4.2.4     血管舒張及血管滲漏
在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於或小於在視網膜下或玻璃體內投與參考醫藥組合物之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準。在一些實施例中，在醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於或低於在參考醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準。在一些實施例中，醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)引起在相同醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準與在經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與醫藥組合物之後相比減少。在一些實施例中，醫藥組合物引起在醫藥組合物投與至SCS之後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準與在經由視網膜下投與、經由玻璃體內投與或投與至SCS投與可比較之(在約32-35℃下較低黏性)醫藥組合物之後相比減少。在一些實施例中，VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。在一些實施例中，轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。
在一些實施例中，VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏在投與後約30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、15小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天測定。 4.2.5     注射部位之轉導率(或感染率)
在一些實施例中，在SCS中投與醫藥組合物之後在轉導部位之感染率(或注射率)等於或高於在經由視網膜下投與或經由靜脈內投與來投與相同醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(或感染率)。在一些實施例中，在SCS中投與醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(或感染率)等於或高於在經由視網膜下或靜脈內投與或投與至SCS投與可比較之(例如，在約32-35℃下較低黏性及/或未膠凝)醫藥組合物之後在注射部位之轉導率(或感染率)。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物具有比參考醫藥組合物(在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物)高之黏度及/或彈性模數(G’)及/或膠凝。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中，在注射部位之轉導率(或感染率)的增加係增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%
在一些實施例中，在經脈絡膜上投與醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準等於或高於在經由視網膜下投與或經由靜脈內投與來投與相同醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準。在一些實施例中，在經脈絡膜上投與醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準等於或高於在經由視網膜下或靜脈內投與或投與至SCS投與可比較之(例如，在約32-35℃下較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝)醫藥組合物之後在注射部位之AAV水準。在一些實施例中，在約32-35℃下醫藥組合物具有比參考醫藥組合物高的黏度及/或彈性模數(G’)及/或膠凝。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物(在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物)具有相同載體基因體濃度。在一些實施例中，醫藥組合物及參考醫藥組合物具有相同量之基因體複本。在一些實施例中，在注射部位之AAV水準的增加係增加至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
在一些實施例中，AAV水準或轉導率(或感染率)在投與後約30分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、8小時、10小時、12小時、14小時、15小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或至多約400天測定。 4.2.6     轉殖基因表現
在一些實施例中，在SCS中注射醫藥組合物之後轉殖基因產物之濃度至少等於或高於在SCS中注射參考(例如，在約32-35℃下較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝)醫藥組合物之後。在一些實施例中，在SCS中注射醫藥組合物之後轉殖基因產物之濃度至少等於或高於在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射參考(在約32-35℃下較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝)醫藥組合物之後。在一些實施例中，在SCS中注射醫藥組合物之後轉殖基因產物之濃度至少等於或高於在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射相同醫藥組合物之後。
在一些實施例中，與在SCS中注射可比較之(在約32-35℃下較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝)醫藥組合物之後相比，在SCS中注射醫藥組合物之後更長時段在眼睛(例如，玻璃狀液)中偵測到轉殖基因產物(例如，轉殖基因產物之濃度)。在一些實施例中，與在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內投與注射參考(在約32-35℃下較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝)醫藥組合物之後相比，在SCS中注射醫藥組合物之後更長時段在眼睛(例如，玻璃狀液)中偵測到轉殖基因產物(例如，轉殖基因產物之濃度)。在一些實施例中，與在藉由視網膜下注射或藉由玻璃體內注射來注射相同(或在約32-35℃下相似黏度及/或彈性模數(G’))醫藥組合物之後相比，在SCS中注射醫藥組合物之後更長時段在眼睛(例如，玻璃狀液)中偵測到轉殖基因產物(例如，轉殖基因產物之濃度)。
在一些實施例中，更長時段長至少30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。在一些實施例中，更長時段長約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
在一些實施例中，在SCS中投與醫藥組合物之後在投與後至少約或約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天的時段內在眼睛(例如，玻璃狀液)中偵測到轉殖基因。
在一些實施例中，在投與後至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天的時段內在眼睛(例如，玻璃狀液)中偵測到轉殖基因(例如，在經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與或投與至SCS投與參考醫藥組合物之後；或在經由視網膜下或經由玻璃體內投與來投與醫藥組合物之後)。
在一些實施例中，眼睛(例如，玻璃狀液)中之轉殖基因產物之濃度可在投與醫藥組合物或參考醫藥組合物之後約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、24小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天測定。
在一些實施例中，在約32-35℃下黏性(例如，相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起轉殖基因之濃度比在藉由脈絡膜上投與例如使用在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV之後高，大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起轉殖基因之濃度比藉由視網膜下投與或藉由玻璃體內投與例如使用在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物(參考醫藥組合物)來投與包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV時高，大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在約32-35℃下黏性(例如，相對黏稠、中等至超高黏度、或黏性超過水、或黏性超過對照溶液、或黏性超過常用於視網膜下投與之溶液)及/或彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的組合物)之脈絡膜上投與引起轉殖基因之濃度比經由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與相同醫藥組合物時高，大至少2倍、大至少3倍、大至少4倍、大至少5倍、大至少6倍、大至少7倍、大至少8倍、大至少9倍、大至少10倍、大至少15倍、大至少20倍、大至少50倍、大至少100倍、大至少5%、大至少10%、大至少15%、大至少20%、大至少25%、大至少30%、大至少35%、至少40%、大至少45%、大至少50%、大至少55%、大至少60%、大至少65%、大至少70%、大至少75%、大至少80%、大至少85%、大至少90%、大至少95%、大至少100%、大至少150%或大至少200%、大至少250%或至少300%、大至少400%或大至少500%。
在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後轉殖基因之濃度大於在藉由脈絡膜上注射投與在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物之後。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32-35℃下較高黏性及/或較大彈性及/或膠凝之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後轉殖基因之濃度大於在藉由視網膜下投與或經由玻璃體內投與來投與在約32-35℃下可比較之較低黏性及/或較小彈性及/或未膠凝之醫藥組合物。在一些實施例中，在藉由脈絡膜上注射投與在約32-35℃下黏性之醫藥組合物(例如，包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之AAV的醫藥組合物)之後轉殖基因之濃度大於在藉由視網膜下投與或經由玻璃體內投與投與相同醫藥組合物之後。  4.2.7     其他功能特性
在一些實施例中，本文所述之醫藥組合物具有適合脈絡膜上注射之所需黏度及/或彈性模數(G’)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV至少與參考醫藥組合物(可比較之醫藥組合物)中之重組AAV一樣穩定。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV至少有參考醫藥組合物(可比較之醫藥組合物)中之重組AAV 50%穩定。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之聚集水準。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之感染力水準。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之游離DNA水準。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之活體外相對效力(IVRP)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有至少與參考醫藥組合物中之重組AAV相同或可比較之尺寸水準變化。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV面對凍/融循環比參考醫藥組合物中之相同重組AAV穩定至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV面對凍/融循環之穩定性至少為參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，重組AAV之穩定性係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV表現出比參考醫藥組合物中之相同重組AAV多至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之感染力。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有參考醫藥組合物中之相同重組AAV之感染力的至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，重組AAV之病毒感染力係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，重組AAV之尺寸係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，在凍/融循環之前或之後量測尺寸。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV表現出比參考醫藥組合物中之相同重組AAV少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍之聚集。在某些實施例中，重組AAV之聚集係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，在凍/融循環之前或之後量測聚集。在某些實施例中，重組AAV之聚集係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)，例如至少約或約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、12個月、約15個月、約18個月、約24個月、約2年、約3年、約4年，比參考醫藥組合物中之相同重組AAV穩定至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內之穩定性至少為參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在某些實施例中，重組AAV在一段時間內之穩定性係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，重組AAV在一段時間內之穩定性係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV的活體外相對效力(IVRP)比參考醫藥組合物中之相同重組AAV高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000 (例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有與參考醫藥組合物中之相同重組AAV約相同的活體外相對效力(IVRP)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%活體外相對效力(IVRP)。在某些實施例中，重組AAV之活體外相對效力(IVRP)係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，在凍/融循環之前或之後量測活體外相對效力(IVRP)。在某些實施例中，重組AAV之活體外相對效力(IVRP)係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有比參考醫藥組合物中之相同重組AAV少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍的游離DNA。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有與參考醫藥組合物中之相同重組AAV約相同量之游離DNA。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有的游離DNA之量約不超過參考醫藥組合物中之相同重組AAV的兩倍。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有的游離DNA之量為參考醫藥組合物中之相同重組AAV的約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或100%。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV具有比參考醫藥組合物中之相同重組AAV多至少約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍或少約3倍的游離DNA。在某些實施例中，重組AAV之游離DNA係藉由部分4.6及部分5中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV在一段時間內(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)，例如至少約或約1週、約2週、約3週、約4週、約1個月、約2個月、約3個月、約4個月、約5個月、約6個月、約7個月、約8個月、約9個月、約10個月、約11個月、約12個月、約15個月、約18個月、約24個月、約2年、約3年及約4年具有至多20%、15%、10%、8%、5%、4%、3%、2%或1%之尺寸變化。在某些實施例中，重組AAV之尺寸係藉由本揭示案中揭示之分析法來測定。在某些實施例中，在凍/融循環之前或之後量測尺寸。在某些實施例中，重組AAV之尺寸係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV比參考醫藥組合物中之相同重組AAV穩定至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV與參考醫藥組合物中之相同重組AAV約一樣穩定(例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在一些實施例中，醫藥組合物中之重組AAV的穩定性係參考醫藥組合物中之相同重組AAV的至少約50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99% (例如，當在-20℃下或在37℃下儲存時)。在某些實施例中，重組AAV之穩定性係藉由部分4.6中揭示之分析法來測定。
在某些實施例中，如例如藉由部分4.6中揭示之分析法所測定，本文提供之醫藥組合物能夠儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，本文提供之醫藥組合物能夠在4℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，本文提供之醫藥組合物能夠在≤60℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，本文提供之醫藥組合物能夠在-80℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，本文提供之醫藥組合物能夠在-20℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月之後在4℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，不喪失穩定性。
在某些實施例中，如例如藉由部分4.6中揭示之分析法所測定，本文提供之醫藥組合物能夠首先在-80℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，接著解凍且在解凍後，在2-10℃、4-8℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃或9℃下再儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，如例如藉由部分4.6中揭示之分析法所測定，本文提供之醫藥組合物能夠首先在-80℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，接著解凍且在解凍後，在約4℃下再儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月，不喪失穩定性。在某些實施例中，如例如藉由部分4.6中揭示之分析法所測定，本文提供之醫藥組合物能夠首先在≤60℃下儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月、12個月、13個月、14個月、15個月、16個月、17個月、18個月、19個月、20個月、21個月、22個月、23個月或24個月，接著解凍且在解凍後，在約4℃ 下再儲存1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、7個月、8個月、9個月、10個月或12個月，不喪失穩定性。
可藉由量測視力喪失、感染、炎症及其他安全事件(包括視網膜剝離)之徵象來監測本文提供之方法或醫藥組合物之效果。在一些實施例中，可使用在約32-35℃下具有不同黏度及/或彈性模數(G’)(例如，從低黏度至極高黏度)之不同醫藥組合物在SCS中遞送載體。在一些實施例中，使用在約32-35℃下具有中等至高黏度及/或彈性模數(G’)之醫藥組合物遞送之載體比使用在約32-35℃下具有低黏度及/或彈性模數(G’)之醫藥組合物遞送之載體(例如，當在SCS中投與時)更有效。在一些實施例中，與使用在約32-35℃下具有低黏度及/或彈性模數(G’)之調配物遞送之載體相比，使用在約32-35℃下具有中等至高黏度及/或彈性模數(G’)之調配物遞送之載體改善視力。
本文提供之方法或醫藥組合物之效果亦可藉由美國國家眼科研究所視覺功能問卷(National Eye Institute Visual Functioning Questionnaire)、羅氏評分版本(Rasch-scored version) (NEI-VFQ-28-R) (綜合評分；活動限制領域評分；及社會情感功能領域評分)自基線之變化來量測。在一些實施例中，本文提供之方法之效果亦可藉由美國國家眼科研究所視覺功能問卷25項版本(NEI-VFQ-25)(綜合評分及心理健康分量表評分)自基線之變化來量測。在一些實施例中，本文提供之方法之效果亦可藉由黃斑疾病治療滿意度問卷(MacTSQ) (綜合評分；安全性、功效及不適領域評分；以及資訊提供及便利性領域評分)從基線之變化來量測。
在具體實施例中，本文所述之方法或載體(載體調配物)之功效反映在約4週、12週、6個月、12個月、24個月、36個月或其他所需時間點之視力改善。在一個具體實施例中，視力改善之特徵在於BCVA增加，例如增加1個字母、2個字母、3個字母、4個字母、5個字母、6個字母、7個字母、8個字母、9個字母、10個字母、11個字母或12個字母或更多。在一個具體實施例中，視力改善之特徵在於視覺敏銳度自基線增加5%、10%、15%、20%、30%、40%、50%或更多。
在具體實施例中，治療後眼睛無炎症或治療後眼睛幾乎無炎症(例如，炎症水準自基線增加10%、5%、2%、1%或更少)。 4.3  劑量及投藥模式
在一態樣中，本文提供一種用於治療眼病之脈絡膜上投與方法，其包括向需要治療之人類個體之眼中之脈絡膜上腔投與重組病毒載體，該重組病毒載體包含編碼治療產物之核苷酸序列，以使得治療產物表現且治療眼病。在某些實施例中，投與步驟係藉由使用脈絡膜上藥物遞送裝置將重組病毒載體注射至脈絡膜上腔中。在某些實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置為微注射器。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物適合藉由一種、兩種或更多種投藥途徑投與(例如，適合脈絡膜上及視網膜下投與)。
在某些實施例中，醫藥組合物(或參考醫藥組合物)之載體基因體濃度(VGC)為約3×10 9GC/mL、約1×10 10GC/mL、約1.2×10 10GC/mL、約1.6×10 10GC/mL、約4×10 10GC/mL、約6×10 10GC/mL、約2×10 11GC/mL、約2.4×10 11GC/mL、約2.5×10 11GC/mL、約3×10 11GC/mL、約3.2×10 11GC/mL、約6.2×10 11GC/mL、約6.5×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL、約3×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約1.5×10 13GC/mL、約2×10 13GC/mL或約3×10 13GC/mL。
在某些實施例中，醫藥組合物(或參考醫藥組合物)之載體基因體濃度(VGC)為約3×10 9GC/mL、4×10 9GC/mL、5×10 9GC/mL、6×10 9GC/mL、7×10 9GC/mL、8×10 9GC/mL、9×10 9GC/mL、約1×10 10GC/mL、約2×10 10GC/mL、約3×10 10GC/mL、約4×10 10GC/mL、約5×10 10GC/mL、約6×10 10GC/mL、約7×10 10GC/mL、約8×10 10GC/mL、約9×10 10GC/mL、約1×10 11GC/mL、約2×10 11GC/mL、約3×10 11GC/mL、約4×10 11GC/mL、約5×10 11GC/mL、約6×10 11GC/mL、約7×10 11GC/mL、約8×10 11GC/mL、約9×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2×10 12GC/mL、約3×10 12GC/mL、約4×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約6×10 12GC/mL、約7×10 12GC/mL、約8×10 12GC/mL、約9×10 12GC/mL、約1×10 13GC/mL、約1.5×10 13GC/mL、約2×10 13GC/mL、約3×10 13GC/mL。
在一些實施例中，醫藥組合物之體積為能夠減小使鞏膜與脈絡膜分離之最小力的任何體積。在一些實施例中，醫藥組合物之體積為約50 μL至約1000 μL、50 μL至約500 μL、50 μL至約400 μL、50 μL至約350 μL、50 μL至約300 μL、約50 μL至約275 μL、約50 μL至約250 μL、約50 μL至約225 μL、約50 μL至約200 μL、約50 μL至約175 μL、約50 μL至約150 μL、約60 μL至約140 μL、約70 μL至約130 μL、約80 μL至約120 μL、約90 μL至約110 μL或約100 μL。
在一些實施例中，脈絡膜上藥物遞送裝置為具有1毫米30規格針之注射器。在一些實施例中，注射器具有更大周長(例如，29規格針)。在使用此裝置進行注射期間，針刺入鞏膜底部，且含有藥物之流體進入脈絡膜上腔，導致脈絡膜上腔擴大。因此，在注射過程中會有觸覺及視覺反饋。注射後，流體向後流動且主要在脈絡膜及視網膜中吸收。此導致所有視網膜細胞層及脈絡膜細胞產生轉殖基因蛋白。使用此種類型之設備及程序可實現快速簡便之辦公室程序，併發症風險低。
在一些實施例中，基於醫藥組合物之黏度來選擇微針或注射器。在一些實施例中，基於當投與醫藥組合物時在眼睛中(例如，在SCS中)產生之壓力來選擇微針。例如，在約32-35℃下具有中等或高黏度及/或彈性模數(G’)之醫藥組合物可受益於使用更寬之注射用微針。在一些實施例中，與使用較窄微針時獲得之壓力相比，當使用較寬微針時，SCS中之壓力較低。在一些實施例中，使用10規格針、11規格針、12規格針、13規格針、14規格針、15規格針、16規格針、17規格針、18規格針、19規格針、20規格針、21規格針、22規格針、23規格針、24規格針、25規格針、26規格針、27規格針、28規格針、29規格針、30規格針、31規格針、32規格針、33規格針或34規格針。在一些實施例中，使用27規格針。在一些實施例中，使用28規格針。在一些實施例中，使用29規格針。在一些實施例中，使用30規格針。在一些實施例中，使用31規格針。在一些實施例中，使用小於27規格針之規格。在一些實施例中，使用大於27規格針之規格。在一些實施例中，使用小於30規格針之規格。在一些實施例中，使用高於30規格針之規格。
在一些實施例中，投與醫藥組合物期間之壓力為約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中，投與醫藥組合物期間之壓力不大於約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中，投與醫藥組合物期間打開SCS之壓力不大於約10 PSI、15 PSI、20 PSI、25 PSI、30 PSI、35 PSI、40 PSI、45 PSI、50 PSI、55 PSI、60 PSI、65 PSI、70 PSI、75 PSI、80 PSI、85 PSI、90 PSI、95 PSI、100 PSI、150 PSI或200 PSI。在一些實施例中，投與醫藥組合物期間之壓力(或打開SCS所需之壓力)介於20 PSI與50 PSI、20 PSI與75 PSI、20 PSI與40 PSI、10 PSI與40 PSI、10 PSI與100 PSI或10 PSI與80 PSI之間。在一些實施例中，壓力隨著注射速率之降低(例如，壓力自4秒注射速率降低至10秒注射速率)而降低。在一些實施例中，壓力隨著針尺寸增加而降低。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在小於43 PSI之注射壓力下投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在約43 PSI之注射壓力下投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在約43-65 PSI之注射壓力下投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在約65 PSI之注射壓力下投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在小於65 PSI之注射壓力下投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在約65-100 PSI之注射壓力下投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在約100 PSI之注射壓力下投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在小於100 PSI之注射壓力下投與至人類眼睛。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在約5-10秒之注射時間內投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在約10-15秒之注射時間內投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在約15-20秒之注射時間內投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在約20-25秒之注射時間內投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在約25-30秒之注射時間內投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在小於30秒之注射時間內投與至人類眼睛。在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物在係組合物在眼外溫度(約32-35℃)下之膠凝時間長度之約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的注射時間內投與至人類眼睛。
希望劑量將轉殖基因產物之濃度維持在眼睛(例如，玻璃狀液)中至少0.330 µg/mL或水狀液(眼睛前房)中0.110 µg/mL之Cmin持續三個月；此後，應維持轉殖基因產物之玻璃體Cmin濃度範圍為1.70至6.60 µg/mL，及/或水狀液Cmin濃度範圍為0.567至2.20 µg/mL。然而，因為轉殖基因產物係連續產生的(在組成型啟動子之控制下或在使用缺氧誘導型啟動子時由缺氧條件誘導)，所以可有效維持較低濃度。可在自體液、眼液、玻璃狀液或前房收集之患者流體樣本中直接量測轉殖基因濃度，或者藉由量測患者之轉殖基因產物血清濃度來估計及/或監測——對轉殖基因產物之全身比玻璃體暴露比率為約1:90,000。(例如參見vitreous humor and serum concentrations of ranibizumab, Xu L等人報導, 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624, 第1621頁及第1623頁表5，其以引用方式整體併入本文)。
在某些實施例中，劑量藉由每毫升基因體複本數(GC/mL)或投與至患者眼睛(例如，脈絡膜上)之基因體複本數來量測。在一些實施例中，投與2.4×10 11GC/mL至1×10 13GC/mL，投與2.4×10 11GC/mL至5×10 11GC/mL，投與5×10 11GC/mL至1×10 12GC/mL，投與1×10 12GC/mL至5×10 12GC/mL或投與5×10 12GC/mL至1×10 13GC/mL。在一些實施例中，投與1.5×10 13GC/mL至3×10 13GC/mL。在一些實施例中，投與約2.4×10 11GC/mL、約5×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約1×10 13GC/mL或約1.5×10 13GC/mL。在一些實施例中，投與1×10 9至1×10 12個基因體複本。在一些實施例中，投與3×10 9至2.5×10 11個基因體複本。在具體實施例中，投與1×10 9至2.5×10 11個基因體複本。在具體實施例中，投與1×10 9至1×10 11個基因體複本。在具體實施例中，投與1×10 9至5×10 9基因體複本。在具體實施例中，投與6×10 9至3×10 10個基因體複本。在具體實施例中，投與4×10 10至1×10 11個基因體複本。在具體實施例中，投與2×10 11至1.5×10 12個基因體複本。在一具體實施例中，投與約3×10 9基因體複本(其對應於250 μl體積中約1.2×10 10GC/mL)。在其他具體實施例中，投與約1×10 10個基因體複本(其對應於250 μl體積中約4×10 10GC/mL)。在其他具體實施例中，投與約6×10 10個基因體複本(其對應於250 μl體積中約2.4×10 11GC/mL)。在其他具體實施例中，投與約6.4×10 10個基因體複本(其對應於200 μl體積中約3.2×10 11GC/mL)。在其他具體實施例中，投與約1.3×10 11個基因體複本(其對應於200 μl體積中約6.5×10 11GC/mL)。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約6.4×10 10個基因體複本。在一些實施例中，約6.4×10 10基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約1.3×10 11個基因體複本。在一些實施例中，約1.3×10 11個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約2.5×10 11個基因體複本。在一些實施例中，約2.5×10 11個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約5×10 11個基因體複本。在一些實施例中，約5×10 11個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約3×10 12個基因體複本。在一些實施例中，約3×10 12個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。在其他具體實施例中，投與約1.6×10 11個基因體複本(其對應於250 μl體積中約6.2×10 11GC/mL)。在其他具體實施例中，投與約1.55×10 11個基因體複本(其對應於250 μl體積中約6.2×10 11GC/mL)。在其他具體實施例中，約1.6×10 11個基因體複本投與(其對應於250 μl體積中約6.4×10 11GC/mL)。在其他具體實施例中，投與約2.5×10 11個基因體複本(其對應於250 μl體積中約1.0×10 12)。在其他具體實施例中，投與約2.5×10 11個基因體複本(其對應於100 μl體積中約2.5×10 12GC/mL)。在其他具體實施例中，投與約5×10 11個基因體複本(其對應於200 μl體積中約5×10 12GC/mL)。在其他具體實施例中，投與約1.5×10 12個基因體複本(其對應於100 μl體積中約1.5×10 13GC/mL)。
在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約6.0×10 10個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約6.4×10 10個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約1.3×10 11個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約1.6×10 11個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約2.5×10 11個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約5.0×10 11個基因體複本。在一些實施例中，每隻眼睛或每劑或每種投藥途徑投與約1.5×10 12個基因體複本。在一些實施例中，約1.5×10 12個基因體複本為所投與之基因體複本之總數。
在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約3×10 12個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約1.0×10 12GC/mL。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約2.5×10 12GC/mL。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與約3.0×10 13個基因體複本。在某些實施例中，每次投與或每隻眼睛投與至多3.0×10 13個基因體複本。
在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約2.5×10 11個基因體複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約5.0×10 11個基因體複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約1.5×10 12個基因體複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約3×10 12個基因體複本。在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射每隻眼睛投與約2.5×10 11個基因體複本。在某些實施例中，藉由雙重脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約5.0×10 11個基因體複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與約3.0×10 13個基因體複本。在某些實施例中，藉由脈絡膜上注射每次投與或每隻眼睛投與至多3.0×10 13個基因體複本。在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射每隻眼睛投與100 μl體積中約2.5×10 12GC/mL。在某些實施例中，藉由雙重脈絡膜上注射每隻眼睛投與約2.5×10 12GC/mL，其中每次注射在100 μl體積中。在某些實施例中，藉由單次脈絡膜上注射每隻眼睛投與100 μl體積中約1.5×10 13GC/mL。
在一些實施例中，向人類個體(例如，脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內)投與醫藥組合物或參考醫藥組合物一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。在一些實施例中，一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次向人類個體投與醫藥組合物或參考醫藥組合物。在一些實施例中，每次投與投與相同量之AAV基因體複本。舉例而言，經脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內投與相同基因體複本。在一些實施例中，投與相同總量之AAV基因體複本。舉例而言，無論總投藥次數如何，經脈絡膜上、視網膜下或玻璃體內投與相同總量之AAV基因體複本(例如，若視網膜下投與進行一次，且脈絡膜上投與進行兩次，則一次視網膜下投與中之基因體複本與兩次脈絡膜上組合投與中之基因體複本相同)。
如本文所用且除非另有說明，否則術語「約」意謂在給定值或範圍之正負10%以內 4.4  構築體及調配物
在一些實施例中，本文提供之重組載體包含按以下順序之以下元件：a)組成型或缺氧誘導型啟動子序列，及b)編碼轉殖基因(例如治療產物)之序列。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含按以下順序之以下元件：a)第一ITR序列、b)第一連接子序列、c)組成型或缺氧誘導型啟動子序列、d)第二連接子序列、e)內含子序列、f)第三連接子序列、g)第一UTR序列、h)編碼轉殖基因之序列(例如，抗VEGF抗原結合片段部分)、i)第二UTR序列、j)第四連接子序列、k)聚A序列、l)第五連接子序列及m)第二ITR序列。
在某些實施例中，本文提供之重組載體包含按以下順序之以下元件：a)第一ITR序列、b)第一連接子序列、c)組成型或缺氧誘導型啟動子序列、d)第二連接子序列、e)內含子序列、f)第三連接子序列、g)第一UTR序列、h)編碼轉殖基因之序列(例如，抗VEGF抗原結合片段部分)、i)第二UTR序列、j)第四連接子序列、k)聚A序列、l)第五連接子序列及m)第二ITR序列，其中該轉殖基因包含VEGF之單肽(SEQ ID NO: 5)，且其中該轉殖基因編碼由可裂解F/F2A序列分開之輕鏈及重鏈序列。
在一些實施例中，本文提供之AAV (AAV病毒載體)包含按以下順序之以下元件：a)組成型或缺氧誘導型啟動子序列，及b)編碼轉殖基因之序列(例如，抗VEGF抗原結合片段部分)。在一些實施例中，轉殖基因為針對VEGF之完全人類轉譯後修飾(HuPTM)抗體。在一些實施例中，針對VEGF之完全人類轉譯後修飾抗體為針對VEGF之單株抗體(mAb)之完全人類轉譯後修飾抗原結合片段(「HuPTMFabVEGFi」)。在一些實施例中，HuPTMFabVEGFi為抗VEGF mAb之完全人類糖基化抗原結合片段 (「HuGlyFabVEGFi」)。在替代實施例中，可使用全長mAb。在一些實施例中，用於遞送轉殖基因之AAV應對人類視網膜細胞或感光受體細胞具有向性。此類AAV可包括非複製性重組腺相關病毒載體(「rAAV」)，尤其較佳為攜帶AAV8殼體之彼等載體。在一具體實施例中，本文所述之病毒載體或其他DNA表現構築體為構築體I，其中該構築體I包含以下組分：(1)位於表現卡匣側面之AAV8反向末端重複序列；(2)控制元件，其包括a) CB7啟動子，包含CMV強化子/雞β-肌動蛋白啟動子，b)雞β-肌動蛋白內含子，及c)兔β-球蛋白聚A信號；及(3)編碼抗VEGF抗原結合片段之重鏈及輕鏈的核酸序列，由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A連接子分開，確保表現等量之重鏈及輕鏈多肽。在一些實施例中，病毒載體包含信號肽。在一些實施例中，信號肽為MYRMQLLLLIALSLALVTNS (SEQ ID NO: 55)。在一些實施例中，信號肽源自於IL-2信號序列。在一些實施例中，病毒載體包含來自表1中揭示之任何信號肽之信號肽，諸如MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA (VEGF-A信號肽) (SEQ ID NO: 5)；MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA (腓骨蛋白-1信號肽) (SEQ ID NO: 6)；MAPLRPLLIL ALLAWVALA (玻連蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 7)；MRLLAKIICLMLWAICVA (補體因子H信號肽) (SEQ ID NO: 8)；MRLLAFLSLL ALVLQETGT (視蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 9)；MKWVTFISLLFLFSSAYS (白蛋白信號肽) (SEQ ID NO: 22)；MAFLWLLSCWALLGTTFG (胰凝乳蛋白酶原信號肽) (SEQ ID NO: 23)；MYRMQLLSCIALILALVTNS (介白素-2信號肽) (SEQ ID NO: 24)；MNLLLILTFVAAAVA (胰蛋白酶原-2信號肽) (SEQ ID NO: 25)；或MYRMQLLLLIALSLALVTNS (突變介白素-2信號肽) (SEQ ID NO: 55)。在其他具體實施例中，本文所述之病毒載體或其他DNA表現構築體為構築體II，其中該構築體II包含以下組分：(1)位於表現卡匣側面之AAV2反向末端重複序列；(2)控制元件，其包括 a) CB7啟動子，包含CMV強化子/雞β-肌動蛋白啟動子，b)雞β-肌動蛋白內含子，及c)兔β-球蛋白聚A信號；及(3)編碼抗VEGF抗原結合片段之重鏈及輕鏈的核酸序列，由自裂解弗林蛋白酶(F)/F2A連接子分開，確保表現等量之重鏈及輕鏈多肽。在一些實施例中，抗hVEGF抗體包含：重鏈，其包含SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4之胺基酸序列；及輕鏈，其包含SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:3之胺基酸序列。
在一些實施例中，病毒載體或其他適合包裝在AAV殼體中之表現構築體包含(1)位於表現卡匣側面之AAV反向末端重複序列(ITR)；(2)調節控制元件，其基本上由一或多種強化子及/或啟動子、d)聚A信號及e)視情況內含子組成；及(3)提供(例如，編碼)所關注之一或多種RNA或蛋白質產物的轉殖基因。
在一些態樣中，本揭示案提供一種供使用之核酸，其中該核酸編碼與本文所述之啟動子或強化子-啟動子可操作地連接之治療產物。
在一些態樣中，本揭示案提供一種供使用之核酸，其中該核酸編碼與啟動子可操作地連接的HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi，該啟動子選自由以下組成之群：CB7啟動子(雞β-肌動蛋白啟動子及CMV強化子)、巨細胞病毒(CMV)啟動子、勞斯肉瘤病毒(Rous sarcoma virus，RSV)啟動子、MMT啟動子、EF-1α啟動子、UB6啟動子、雞β-肌動蛋白啟動子、CAG啟動子、RPE65啟動子及視蛋白啟動子。在一具體實施例中，HuPTMFabVEGFi與CB7啟動子可操作地連接。
在某些實施例中，本文提供包含一或多種核酸(例如多核苷酸)之重組載體。核酸可包括DNA、RNA或DNA與RNA之組合。在某些實施例中，DNA包含一或多種選自由以下組成之群的序列：啟動子序列、編碼所關注之治療產物(轉殖基因，例如抗VEGF抗原結合片段)之序列、未轉譯區及終止序列。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含與編碼所關注之治療產物之序列可操作連接之啟動子。
在某些實施例中，本文揭示之核酸(例如，多核苷酸)及核酸序列可例如經由熟習所屬領域技術者已知之任何密碼子優化技術進行密碼子優化(參見例如Quax等人, 2015, Mol Cell 59:149-161之評述)。
在某些實施例中，本文提供之重組載體包含編碼所關注之治療產物(例如轉殖基因，例如抗VEGF抗原結合片段部分)之經修飾之mRNA。在某些實施例中，本文提供編碼抗VEGF抗原結合片段部分之經修飾之mRNA。在某些實施例中，本文提供之重組載體包含編碼治療產物之核苷酸序列，該治療產物為shRNA、siRNA或miRNA。
在某些實施例中，本文提供之載體包含調節蛋白質遞送之組分。在某些實施例中，本文提供之病毒載體包含一或多種信號肽。信號肽之實例包括但不限於VEGF-A信號肽(SEQ ID NO: 5)、腓骨蛋白-1信號肽(SEQ ID NO: 6)、玻連蛋白信號肽(SEQ ID NO: 7)、補體因子H信號肽(SEQ ID NO: 8)、視蛋白信號肽(SEQ ID NO: 9)、白蛋白信號肽(SEQ ID NO: 22)、胰凝乳蛋白酶原信號肽(SEQ ID NO: 23)、介白素-2信號肽(SEQ ID NO: 24)及胰蛋白酶原-2信號肽(SEQ ID NO: 25)、突變介白素-2信號肽(SEQ ID NO: 55)。 4.4.1 病毒載體
在一些實施例中，本文提供之病毒載體係基於AAV之病毒載體。在較佳實施例中，本文提供之病毒載體係基於AAV8之病毒載體。在某些實施例中，本文提供之基於AAV8之病毒載體保留對視網膜細胞之向性。在某些實施例中，本文提供之基於AAV之載體編碼AAV rep基因(複製所需)及/或AAV cap基因(殼蛋白合成所需)。已鑑別出多種AAV血清型。在某些實施例中，本文提供之基於AAV之載體包含來自一或多種AAV血清型之組分。在某些實施例中，本文提供之基於AAV之載體包含來自以下一或多種之殼體組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。在較佳實施例中，本文提供之基於AAV之載體包含來自AAV8、AAV9、AAV10、AAV11或AAVrh10血清型中之一或多種之組分。在某些實施例中，本文提供之重組病毒載體經改變，使得其在人類中係複製缺陷的。在某些實施例中，重組病毒載體為雜合載體，例如置於「無助」腺病毒載體中之AAV載體。在某些實施例中，本文提供包含來自第一病毒之病毒殼體及來自第二病毒之病毒包膜蛋白之重組病毒載體。在具體實施例中，第二病毒為水泡性口炎病毒(VSV)。在更具體之實施例中，包膜蛋白為VSV-G蛋白。
在特定實施例中，提供AAV8載體，其包含：病毒基因體，其包含用於表現轉殖基因之表現卡匣，該表現卡匣處於調節元件控制下且兩側為ITR；及病毒殼體，其具有AAV8殼蛋白之胺基酸序列或與AAV8殼蛋白之胺基酸序列(SEQ ID NO: 48)至少95%、96%、97%、98%、99%或99.9%一致，同時保留AAV8殼體之生物功能。在某些實施例中，經編碼之AAV8殼體具有SEQ ID NO: 48之序列，具有1個、2個、3個、4個、5個、6個、7個、8個、9個、10個、11個、12個、13個、14個、15個、16個、17個、18個、19個、20個、21個、22個、23個、24個、25個、26個、27個、28個、29個或30個胺基酸取代且保留AAV8殼體之生物功能。
在某些實施例中，在本文所述之方法中使用之AAV為Anc80或Anc80L65，如Zinn等人, 2015, Cell Rep. 12(6): 1056-1068 (其以引用之方式整體併入)中所述。在某些實施例中，在本文所述之方法中使用之AAV包含以下胺基酸插入之一：LGETTRP或LALGETTRP，如美國專利第9,193,956號、第9458517號及第9,587,282號及美國專利申請公開案第2016/0376323號(各以引用之方式整體併入本文中)中所述。在某些實施例中，在本文所述之方法中使用之AAV為AAV.7m8，如美國專利第9,193,956號、第9,458,517號及第9,587,282號及美國專利申請公開案第2016/0376323號(各以引用之方式整體併入本文中)中所述。在某些實施例中，在本文所述之方法中使用之AAV為美國專利第9,585,971號中揭示之任何AAV，諸如AAV.PHP.B。在某些實施例中，在本文所述之方法中使用之AAV為以下專利及專利申請案(各以引用之方式整體併入本文中)中之任一者中揭示的AAV：美國專利第7,906,111號、第8,524,446號、第8,999,678號、第8,628,966號、第8,927,514號、第8,734,809號、第US 9,284,357號、第9,409,953號、第9,169,299號、第9,193,956號、第9458517號及第9,587,282號；美國專利申請公開案第2015/0374803號、第2015/0126588號、第2017/0067908號、第2013/0224836號、第2016/0215024號、第2017/0051257號；及國際專利申請案第PCT/US2015/034799號、第PCT/EP2015/053335號。
本文所述之某些方法中使用基於AAV8之病毒載體。基於AAV之病毒載體之核酸序列及製造重組AAV及AAV殼體之方法在例如美國專利第7,282,199 B2號、美國專利第7,790,449 B2號、美國專利第8,318,480 B2號、美國專利第8,962,332 B2號及國際專利申請案第PCT/EP2014/076466號(各以引用之方式整體併入本文中)中教示。在一態樣中，本文提供編碼轉殖基因(例如，抗VEGF抗原結合片段)之基於AAV (例如，AAV8)之病毒載體。在具體實施例中，本文提供編碼抗VEGF抗原結合片段之基於AAV8之病毒載體。在更具體之實施例中，本文提供編碼蘭尼單抗(ranibizumab)之基於AAV8之病毒載體。
在某些實施例中，可使用單股AAV (ssAAV) (同上述)。在某些實施例中，可使用自互補型載體，例如scAAV (參見例如Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82；McCarty等人, 2001, Gene Therapy, 第8卷, 第16期, 第1248-1254頁；及美國專利第6,596,535號；第7,125,717號；及第7,456,683號(各以引用之方式整體併入本文中))。
在某些實施例中，本文所述之方法中使用之病毒載體係基於腺病毒之病毒載體。重組腺病毒載體可用於轉移抗VEGF抗原結合片段。重組腺病毒可為第一代載體，具有E1缺失、具有或不具有E3缺失，且表現卡匣插入至任一缺失區域中。重組腺病毒可為第二代載體，其含有E2及E4區域之全部或部分缺失。輔助病毒依賴型腺病毒僅保留腺病毒反向末端重複序列及包裝信號(φ)。轉殖基因插入在包裝信號與3'ITR之間，有或無填充序列，以保持基因體接近大約36 kb之野生型大小。產生腺病毒載體之示例性方案可見於Alba等人, 2005, 「Gutless adenovirus: last generation adenovirus for gene therapy」, Gene Therapy 12:S18-S27 (其以引用之方式整體併入本文中)。
在一具體實施例中，用於本文所述之方法中之載體係編碼抗VEGF抗原結合片段(例如蘭尼單抗)之載體，使得在將載體引入相關細胞(例如，活體內或活體外視網膜細胞)後，細胞表現抗VEGF抗原結合片段之糖基化及或酪胺酸硫酸化變異體。在一具體實施例中，表現之抗VEGF抗原結合片段包含糖基化及/或酪胺酸硫酸化模式。 4.4.2 治療產物或轉殖基因
治療產物可例如為治療性蛋白質(例如抗體)、治療性RNA (例如shRNA、siRNA及miRNA)或治療性適體。
在某些實施例中，本揭示案提供一種醫藥組合物，其包含編碼轉殖基因之重組AAV。在一些實施例中，本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼蘭尼單抗之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼艾杜糖醛酸酶(IDUA)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼IDUA之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼艾杜糖2-硫酸酯酶(IDS)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼IDS之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼低密度脂蛋白受體(LDLR)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼LDLR之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼三肽基肽酶1 (TPP1)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼TPP1之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼抗激肽釋放素 (抗pKal)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼拉那魯單抗(lanadelumab) Fab或全長抗體之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人卵泡抑素344之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人卵泡抑素344之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。
在某些實施例中，治療產物(例如，轉殖基因)為：(1)抗人類血管內皮生長因子(hVEGF)抗體或適體；(2)抗hVEGF抗原結合片段；(3)抗hVEGF抗原結合片段為Fab、F(ab’)2或單鏈可變片段(scFv)；(4)棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)；(5)三肽基-肽酶1 (TPP1)；(6)巴登蛋白(Battenin) (CLN3)；及(7) CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)。
在某些實施例中，本揭示案提供一種醫藥組合物，其包含編碼轉殖基因之重組AAV。在一些實施例中，本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼抗VEGF Fab或抗VEGF抗體之基於rAAV8之病毒載體。在更多實施例中，本文提供編碼蘭尼單抗之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼艾杜糖醛酸酶 (IDUA)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼IDUA之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼艾杜糖2-硫酸酯酶(IDS)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼IDS之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼低密度脂蛋白受體(LDLR)之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼LDLR之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼三肽基肽酶1 (TPP1)蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼TPP1之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV8之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼微小抗肌萎縮蛋白之基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼抗激肽釋放素(抗pKal) 蛋白之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼拉那魯單抗Fab或全長抗體之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人卵泡抑素344之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之rAAV病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人卵泡抑素344之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼人類-α-肌聚糖-γ-肌聚糖之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN2之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN3之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。在一些實施例中，本文提供編碼CLN6之基於rAAV8或基於rAAV9之病毒載體。
在某些實施例中，本文提供之載體可用於：(1)與巴登蛋白-CLN1相關之眼部病變且治療產物為棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)；(2)與巴登蛋白-CLN2相關之眼部病變且治療產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)；(3)與巴登蛋白-CLN3相關之眼部病變且治療產物為巴登蛋白(CLN3)；(4)與巴登蛋白-CLN6相關之眼部病變且治療產物為CLN6跨膜ER蛋白(CLN6)；(5)與巴登蛋白-CLN7相關之眼部病變且治療產物為含主要協同轉運蛋白超家族結構域蛋白8 (MFSD8)；及(6)與巴登蛋白-CLN1相關之眼部病變且治療產物為棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)。
在一些實施例中，由轉殖基因編碼之HuPTMFabVEGFi，例如HuGlyFabVEGFi可包括但不限於結合VEGF之抗體之抗原結合片段，諸如貝伐單抗(bevacizumab)；抗VEGF Fab部分，諸如蘭尼單抗；或經工程改造以在Fab結構域上含有額外糖基化位點之此類貝伐單抗或蘭尼單抗Fab部分(例如，參見Courtois等人, 2016, mAbs 8: 99-112，其中關於在全長抗體之Fab結構域上高糖基化之貝伐單抗衍生物之描述以引用之方式整體併入本文中)。
在某些實施例中，本文提供之載體編碼抗VEGF抗原結合片段轉殖基因。在具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因在視網膜細胞中表現由適當表現控制元件控制：在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因包含輕鏈及重鏈cDNA序列(分別SEQ ID No: 10及11)之貝伐單抗Fab部分。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因包含蘭尼單抗輕鏈及重鏈cDNA序列(分別SEQ ID No: 12及13)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含分別SEQ ID NO: 3及4之輕鏈及重鏈的貝伐單抗Fab。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈之抗原結合片段，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 3中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈之抗原結合片段，該重鏈包含與SEQ ID NO: 4中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段，該抗原結合片段包含：輕鏈，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 3中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列；及重鏈，該重鏈包含與SEQ ID NO: 4中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含分別SEQ ID NO: 1及2之輕鏈及重鏈的高糖基化蘭尼單抗。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含輕鏈之抗原結合片段，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 1中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含重鏈之抗原結合片段，該重鏈包含與SEQ ID NO: 2中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包含抗原結合片段，該抗原結合片段包含：輕鏈，該輕鏈包含與SEQ ID NO: 1中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列；及重鏈，該重鏈包含與SEQ ID NO: 2中所示之序列至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%一致的胺基酸序列。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼高糖基化貝伐單抗Fab，其包含SEQ ID NO: 3及4之輕鏈及重鏈，具有一或多個以下突變：L118N (重鏈)、E195N (輕鏈)或Q160N或Q160S (輕鏈)。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼高糖基化蘭尼單抗，其包含SEQ ID NO: 1及2之輕鏈及重鏈，具有一或多個以下突變：L118N (重鏈)、E195N (輕鏈)或Q160N或Q160S (輕鏈)。抗原結合片段轉殖基因cDNA之序列可見於例如表1中。在某些實施例中，抗原結合片段轉殖基因cDNA之序列藉由用一或多種信號序列替換SEQ ID NO: 10及11或SEQ ID NO: 12及13之信號序列來獲得。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段且包含六個貝伐單抗CDR之核苷酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼抗原結合片段且包含六個蘭尼單抗CDR之核苷酸序列。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含蘭尼單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 20、18及21)之重鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含蘭尼單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含貝伐單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 17-19)之重鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含貝伐單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含蘭尼單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 20、18及21)之重鏈可變區及包含蘭尼單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含貝伐單抗之重鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 17-19)之重鏈可變區及包含貝伐單抗之輕鏈CDR 1-3 (SEQ ID NO: 14-16)之輕鏈可變區的抗原結合片段。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中：(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)；及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗VEGF抗原結合片段轉殖基因編碼包括包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3之輕鏈可變區及包含SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3之重鏈可變區的抗原結合片段，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化，且其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO. 20之重鏈CDR1，其中：(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化；及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些態樣中，本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段，及編碼此類抗VEGF抗原結合片段之轉殖基因，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於根據本發明之任何方法中。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些態樣中，本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段，及編碼此類抗VEGF抗原結合片段之轉殖基因，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於根據本發明之任何方法中。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。
在某些態樣中，本文亦提供包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3的抗VEGF抗原結合片段，及編碼此類抗VEGF抗原結合片段之轉殖基因，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中：(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)；及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)不攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。在一具體實施例中，抗原結合片段包含SEQ ID NO: 14-16之輕鏈CDR 1-3及SEQ ID NO: 20、18及21之重鏈CDR 1-3，其中：(1)重鏈CDR1之第九個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之M)攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，重鏈CDR2之第三個胺基酸殘基(亦即，WINTYTGEPTYAADFKR (SEQ ID NO. 18)中之N攜帶以下化學修飾中之一或多者：乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且重鏈CDR1之最後一個胺基酸殘基(亦即，GYDFTHYGMN (SEQ ID NO. 20)中之N)未乙醯化；及(2)輕鏈CDR1之第八個及第十一個胺基酸殘基(亦即，SASQDISNYLN (SEQ ID NO. 14)中之兩個N各自攜帶以下化學修飾中之一或多者：氧化、乙醯化、脫醯胺及焦麩胺酸化(pyro Glu)，且輕鏈CDR3之第二個胺基酸殘基(亦即，QQYSTVPWTF (SEQ ID NO. 16)中之第二個Q)未乙醯化。本文提供之抗VEGF抗原結合片段及轉殖基因可用於根據本發明之任何方法中。在一較佳實施例中，本文所述之化學修飾或化學修飾之缺乏(視情況而定)係藉由質譜法來測定。 表 1 ：示例性序列
SEQ ID NO: 描述 序列
1 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(輕鏈)
Figure 02_image001
2 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈)
Figure 02_image003
3 貝伐單抗Fab胺基酸序列(輕鏈)
Figure 02_image005
4 貝伐單抗Fab胺基酸序列(重鏈)
Figure 02_image007
5 VEGF-A信號肽 MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA
6 腓骨蛋白-1信號肽 MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA
7 玻連蛋白信號肽 MAPLRPLLIL ALLAWVALA
8 補體因子H信號肽 MRLLAKIICLMLWAICVA
9 視蛋白信號肽 MRLLAFLSLL ALVLQETGT
10 貝伐單抗cDNA (輕鏈)
Figure 02_image009
11 貝伐單抗cDNA (重鏈)
Figure 02_image011
12 蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之輕鏈)
Figure 02_image013
13 蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之重鏈)
Figure 02_image015
14 貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR1 SASQDISNYLN
15 貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR2 FTSSLHS
16 貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR3 QQYSTVPWT
17 貝伐單抗重鏈CDR1 GYTFTNYGMN
18 貝伐單抗及蘭尼單抗重鏈CDR2 WINTYTGEPTYAADFKR
19 貝伐單抗重鏈CDR3 YPHYYGSSHWYFDV
20 蘭尼單抗重鏈CDR1 GYDFTHYGMN
21 蘭尼單抗重鏈CDR3 YPYYYGTSHWYFDV
22 白蛋白信號肽 MKWVTFISLLFLFSSAYS
23 胰凝乳蛋白酶原信號肽 MAFLWLLSCWALLGTTFG
24 介白素-2信號肽 MYRMQLLSCIALILALVTNS
25 胰蛋白酶原-2信號肽 MNLLLILTFVAAAVA
26 F2A位點 LLNFDLLKLAGDVESNPGP
27 T2A位點 (GSG)EGRGSLLTCGDVEENPGP
28 P2A位點 (GSG)ATNFSLLKQAGDVEENPGP
29 E2A位點 (GSG)QCTNYALLKLAGDVESNPGP
30 F2A位點 (GSG)VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
31 弗林蛋白酶連接子 RKRR
32 弗林蛋白酶連接子 RRRR
33 弗林蛋白酶連接子 RRKR
34 弗林蛋白酶連接子 RKKR
35 弗林蛋白酶連接子 R-X-K/R-R
36 弗林蛋白酶連接子 RXKR
37 弗林蛋白酶連接子 RXRR
38 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(輕鏈)
Figure 02_image017
39 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈)
Figure 02_image019
40 蘭尼單抗Fab胺基酸序列(重鏈)
Figure 02_image021
41 AAV1
Figure 02_image023
42 AAV2
Figure 02_image025
43 AAV3-3
Figure 02_image027
44 AAV4-4
Figure 02_image029
45 AAV5
Figure 02_image031
46 AAV6
Figure 02_image033
47 AAV7
Figure 02_image035
48 AAV8
Figure 02_image037
49 hu31
Figure 02_image039
50 hu32
Figure 02_image041
51 AAV9
Figure 02_image043
52 血管內皮生長因子(vegf) Caa44447.1
Figure 02_image045
53 棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (ppt1) Aah08426.1
Figure 02_image047
54 三肽基-肽酶1 (tpp1) Np_000382.3
Figure 02_image049
55 突變介白素-2信號肽 MYRMQLLLLIALSLALVTNS
4.5  疾病
本文提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物(例如，部分4.1)可投與至經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登氏病之個體。
在一些實施例中，本文揭示治療經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)或巴登蛋白之個體的方法，該等方法向個體投與治療有效量之醫藥組合物藉由脈絡膜上注射(例如，經由脈絡膜上藥物遞送裝置，諸如具有微針之微注射器)。
在一些實施例中，經由脈絡膜上投與向患者投與一種醫藥組合物，其含有包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL、4% w/v蔗糖及視情況選用之界面活性劑之醫藥組合物的約2.5×10 11GC/眼、約5×10 11GC/眼或約1.5×10 12GC/眼之構築體II。在一些實施例中，患者具有糖尿病性視網膜病變。
在一些實施例中，經由脈絡膜上投與向患者投與一種醫藥組合物，其含有包含10% w/v蔗糖之醫藥組合物的約2.5×10 11GC/眼、約5×10 11GC/眼或約1.5×10 12GC/眼之構築體II。在一些實施例中，患者具有糖尿病性視網膜病變。在一些實施例中，醫藥組合物之滲壓性/滲透壓等於或大於240 mOsm/kg。
在一些態樣中，本文描述適合治療經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病之個體的醫藥組合物或治療方法，該等方法包括向個體投與治療有效量之醫藥組合物。在一些實施例中，醫藥組合物在SCS中投與。
在一些實施例中，本文提供之醫藥組合物或參考醫藥組合物(例如，部分4.1)可投與至經診斷患有以下疾病之個體：(1)巴登蛋白-CLN2且治療產物為三肽基-肽酶1 (TPP1)；(2)阿瑟氏第1型(Usher’s-Type 1)且治療產物為肌凝蛋白VIIA (MYO7A)；(3) 阿瑟氏第1型且治療產物為鈣黏蛋白相關23 (CDH23)；(4)阿瑟氏第2型且治療產物為原鈣黏蛋白相關15 (PCDH15)；(5)阿瑟氏第2型且治療產物為阿瑟蛋白(Usherin) (USH2A)；(6)阿瑟氏第3型且治療產物為克萊蛋白1 (Clarin 1) (CLRN1)；(7)斯特格氏病(Stargardt's)且治療產物為ATP結合卡匣亞家族A成員4 (ABCA4)；(8)斯特格氏病且治療產物為ELOVL脂肪酸延長酶4 (ELOVL4)；(9)紅綠色盲且治療產物為L視蛋白(OPN1LW)；(10)紅綠色盲且治療產物為M視蛋白(OPN1MW)；(11)藍色視錐全色盲且治療產物為M視蛋白(OPN1MW)；(12)萊伯先天性黑朦(Leber congenital amaurosis)-1 (LCA 1)且治療產物為視網膜鳥苷酸環化酶2D (GUCY2D)；(13)萊伯先天性黑朦-2 (LCA 2)且治療產物為類視色素異構水解酶RPE65 (RPE65)；(14)萊伯先天性黑朦-4 (LCA 4)且治療產物為芳基烴受體相互作用蛋白樣1 (AIPL1)；(15)萊伯先天性黑朦-7 (LCA 7)且治療產物為視錐-視杆同源盒(CRX)；(16)萊伯先天性黑朦-8 (LCA 8)且治療產物為克魯蛋白細胞極性複合體組分1 (Crumbs Cell Polarity Complex Component 1，CRB1)；(17)萊伯先天性黑朦-9 (LCA 9)且治療產物為煙鹼醯胺核苷酸腺苷酸轉移酶1 (NMNAT1)；(18)萊伯先天性黑朦-10 (LCA 10)且治療產物為中心體蛋白290 (CEP290)；(19)萊伯先天性黑朦-11 (LCA 11)且治療產物為肌苷單磷酸去氫酶1 (IMPDH1)；(20)萊伯先天性黑朦-15 (LCA 15)且治療產物為矮胖樣蛋白1 (Tubby Like Protein 1，TULP1)；(21) LHON且治療產物為粒線體編碼之NADH去氫酶4 (MT-ND4)；(22) LHON且治療產物為粒線體編碼之NADH去氫酶6 (MT-ND6)；(23)無脈絡膜且治療產物為Rab護衛蛋白1 (CHM)；(24) X性聯視網膜劈裂症(XLRS)且治療產物為視網膜劈裂蛋白(RS1)；(25)巴德-畢德氏症候群(Bardet-Biedl syndrome) 1且治療產物為巴德-畢德氏症候群1 (BBS1)；(26)巴德-畢德氏症候群6且治療產物為麥庫西克-考夫曼症候群(McKusick-Kaufman Syndrome，MKKS)；(27)巴德-畢德氏症候群10且治療產物為巴德-畢德氏症候群10 (BBS10)；(28)錐體營養不良且治療產物為鳥苷酸環化酶活化因子1A (GUCA1A)；(29)視神經萎縮且治療產物為OPA1粒線體發動蛋白樣GTP酶(OPA1)；(30)色素性視網膜炎1且治療產物為RP1軸絲微管相關(RP1)；(31)色素性視網膜炎2且治療產物為RP2 ARL3 GTP酶活化因子(RP2)；(32)色素性視網膜炎7且治療產物為外周蛋白2 (PRPH2)；(33)色素性視網膜炎11且治療產物為前mRNA加工因子31(PRPF31)；(34)色素性視網膜炎13且治療產物為前mRNA加工因子8 (PRPF8)；(35)色素性視網膜炎37且治療產物為核受體亞家族2組E成員3 (NR2E3)；(36)色素性視網膜炎38且治療產物為MER原癌基因酪胺酸激酶(MERTK)；(37)色素性視網膜炎40且治療產物為磷酸二酯酶6B (PDE6B)；(38)色素性視網膜炎41且治療產物為Prominin 1 (PROM1)；(39)色素性視網膜炎56且治療產物為光間受體基質蛋白多醣2 (IMPG2)；(40)色素性視網膜炎62且治療產物為男性生殖細胞相關激酶(MAK)；(41)色素性視網膜炎80且治療產物為細胞纖毛內轉運蛋白140 (IFT140)；或(42)貝斯特氏病(Best disease)且治療產物為斑萎蛋白1 (Bestrophin 1，BEST1)。 4.6  分析法
技術人員可使用本文所述之分析法及/或所屬領域已知之技術來研究本文所述之組合物及方法，例如測試本文提供之調配物。如部分5中所詳述，本文亦提供以下分析法。  4.6.1     超音波B掃描
可使用高頻超音波(U/S)探針(UBM Plus；Accutome, Malvern, PA, USA)，藉由在注射在約32-35℃下黏度及/或彈性模數(G’)在一定範圍內變化之不同體積(例如25 μL至500 μL，範圍為低黏度至高黏度)之後在離體動物眼睛中生成SCS之2D橫截面影像來測定SCS厚度。U/S探針蓋(Clearscan；Eye-Surgical-Instruments, Plymouth, MN)可附接至UBM Plus以促進U/S影像擷取。可使用U/S探針來獲取眼睛周圍之矢狀視圖(例如，八個矢狀視圖)。可對U/S B掃描執行後處理以找到自外鞏膜至內視網膜之厚度，例如鞏膜突後方1、5及9 mm。可計算每隻眼睛之平均值、中位數及標準偏差。  4.6.2     基於液體體積量測SCS厚度
可使用3D冷凍重建成像來量測SCS厚度。將注射例如含有紅色螢光粒子之25 μL至500 μL之動物眼睛在注射後幾分鐘(例如3-5分鐘)冷凍，且準備進行冷凍切片。使用數位相機，藉由在低溫恒溫器下對樣品進行切片，每300 μm可獲得組織冷凍塊之一張紅色螢光影像。分析由紅色螢光影像組成之影像堆以測定SCS厚度。  4.6.3     基於調配物量測SCS厚度
在將黏度及/或彈性模數(G’)在一定範圍內變化之醫藥組合物注射至動物SCS中之後，可使用U/S B掃描來測定SCS厚度。可使用高頻超音波B掃描來確定SCS塌陷率。可獲取平坦部之八個矢狀視圖：(a)鼻上，注射部位上方；(b)上方；(c)鼻；(d)顳上；(e)顳；(f)顳下；(g)下方；及(h)鼻下。
可對U/S視圖執行離線後處理以量測SCS厚度。U/S探針之最小軸向解析度為15 μm。對於各U/S視圖，可建立一條線段，其在鞏膜突後5 mm處且與鞏膜垂直。一條線可自鞏膜外表面開始，且在視網膜內表面結束。在量測中可包括鞏膜及脈絡膜視網膜以確保線垂直。接著藉由自所量測之線長度減去組織厚度來計算SCS厚度。進行曲線擬合以確定SCS塌陷率。
可使用U/S B掃描隨著時間之推移在多個位置測定SCS厚度，且可計算SCS塌陷率。可藉由隨著時間之推移在活體內拍攝動物眼睛中之螢光眼底影像直到不再偵測到螢光，發現所注射之螢光材料自SCS之大致清除速率。 4.6.4     藉由眼底成像之SCS清除動力學
為研究黏度及/或彈性模數(G’)對在SCS中之運動的影響，可將黏度及/或彈性模數(G’)在一定範圍內變化且含有螢光素之不同醫藥組合物注射至SCS中。可藉由隨著時間之推移在活體內拍攝動物眼睛中之螢光眼底影像來發現所注射之螢光材料自SCS之大致清除率或清除時間。在一些情況下，清除率可藉由確定總清除時間及清除時間常數(t清除)來確定，該清除時間常數係使用自總螢光信號隨時間之正規化濃度推導之曲線擬合計算的。可在每次成像期之前投與托吡卡胺(tropicamide)及去羥腎上腺素(Akorn, Lake Forest, IL)之局部滴眼液以使眼睛擴張。可使用RetCam II (Clarity Medical Systems, Pleasanton, CA)獲取影像，其帶有130°鏡頭附件及內置螢光素血管攝影模組。可在RetCam II之藍光輸出設置為0.0009、1.6及2.4 W/m2下拍攝多張影像。為嘗試捕捉眼球之整個內表面，可捕捉九個影像：中央、鼻上、上方、顳上、顳、顳下、下方、鼻下及鼻。此允許成像至遠周邊。可在注射後即刻、1小時、12小時中每3小時及注射後每兩天進行成像。總清除時間可定義為藉由目視觀測無法偵測到螢光之第一個時間點，針對所有注射之眼睛來確定。螢光素異硫氰酸酯結合之AAV (FITC-AAV)或FITC結合之AAV殼蛋白特異性單株抗體可用於類似實驗中，以追蹤AAV粒子在SCS中之運動及清除。AAV之螢光標記方法係所屬領域中已知的(Shi等人, Sci. Adv. 2020; 6 : eaaz3621；及Tsui, T. Y.等人, Hepatology 42, 335-342 (2005))。可購得識別許多AAV血清型之抗體(FITC結合)。 4.6.5     平面安裝(Flat Mount)以表徵2D圓周擴散
將含有螢光素或螢光標記之AAV的本揭示案之醫藥組合物注射至SCS中。在SCS注射及冷凍之後，可準備好眼睛以評估粒子及螢光素之2D擴散。自角膜緣至後極切開冷凍之眼睛以產生等距之鞏膜瓣。將所得到之鞏膜瓣張開，且取出冷凍之玻璃狀液、晶狀體及水狀液。
可使用帶有100 mm鏡頭(Canon)之數位SLR相機(Canon 60D；Canon, Melville, N.Y.)來獲取明場及螢光影像。相機參數保持不變。為獲得螢光素擴散之面積，可將綠色光學帶通濾波器(520±10 nm；Edmunds Optics, Barrington, N.J.)置放在鏡頭上，且可用一盞燈利用多色LED燈泡(S系列RGB MR16/E26. HitLights, Baton Rouge, La.)之紫色背景來照亮樣品。為目測紅色螢光粒子之位置，可在鏡頭上置放一個紅色濾光片(610±10 nm；Edmunds Optics)，且可用同一盞燈切換至綠光來照亮樣品。可使用ImageJ (National Institutes of Health, Bethesda, Md.)針對每隻眼睛計算超過閾值之綠色及紅色螢光面積。可基於背景信號之目視檢查手動設置閾值。 4.6.6     眼內壓量測
可使用壓力量測系統在SCS注射後量測SCS中之壓力。動物可藉由皮下注射氯胺酮(ketamine)/賽拉嗪(xylazine)混合液進行終末麻醉。在SCS注射(N=4)後，可每隔幾分鐘量測一次SCS中之壓力。對壓力進行監測，直到其達到注射前之原始基線值(亦即約15 mmHg)。量測後，藉由靜脈注射致死劑量之戊巴比妥(pentobarbital)對動物實施安樂死。可在動物死後進行第二組SCS注射。在死後量測中，僅在進行注射之組織空間(亦即SCS)中量測壓力。  4.6.7     溫度應力分析法
可在37℃下以1.0×10 12GC/mL進行4天之溫度應力發展穩定性研究，以評估本文提供之調配物之相對穩定性。
可用於評估穩定性之分析包括但不限於活體外相對效力(IVRP)、載體基因體濃度(VGC，藉由ddPCR)、藉由染料螢光之游離DNA、動態光散射、外觀及pH值。可進行歷時12個月之長期發展穩定性研究，以證明在本文提供之調配物中在-80℃ (≤-60℃)及-20℃ (-25℃至-15℃)下活體外相對效力及其他品質之維持。 4.6.8     活體外相對效力(IVRP)分析法
為將ddPCR GC力價與基因表現相關聯，可進行一項活體外生物分析，該生物分析係藉由轉導HEK293細胞且分析細胞培養上清液之抗VEGF Fab蛋白水準來進行。將HEK293細胞塗鋪至三個經聚-D-離胺酸包被之96孔組織培養盤上隔夜。然後將細胞用野生型人類Ad5病毒預感染，接著用AAV載體參考標準及測試物品之三種獨立製備之連續稀釋液進行轉導，其中每種製劑塗鋪至單獨板上不同位置處。在轉導後第三天，自培養盤中收集細胞培養基且經由ELISA量測結合VEGF之Fab蛋白水準。對於ELISA，將用VEGF包被之96孔ELISA盤封閉，然後與所收集之細胞培養基一起培育以捕獲由HEK293細胞產生之抗VEGF Fab。使用Fab特異性抗人類IgG抗體來偵測捕獲VEGF之Fab蛋白。在洗滌之後，添加辣根過氧化酶(HRP)受質溶液，使其顯色，用終止緩衝液終止，且在盤式讀取儀中讀取培養盤。將HRP產物之吸光度或OD相對於對數稀釋作圖，且在通過平行相似性測試(parallelism similarity test)後使用四參數邏輯回歸模型進行擬合，使用如下公式計算各測試物品相對於同一培養盤上之參考標準的相對效力：EC50參考÷EC50測試物品。測試物品之效力報導為參考標準效力之百分比，由三個培養盤之加權平均值計算出。
為將ddPCR GC力價與功能基因表現相關聯，可進行一項活體外生物分析，該生物分析係藉由轉導HEK293細胞且分析轉殖基因(例如酶)活性來進行。將HEK293細胞塗鋪至三個96孔組織培養盤上隔夜。然後將細胞用野生型人類腺病毒血清型5病毒預感染，接著用酶參考標準及測試物品之三種獨立製備之連續稀釋液進行轉導，其中每種製劑塗鋪至單獨板上不同位置處。在轉導後第二天，使細胞溶解，用低pH值處理以活化酶，且使用肽受質分析酶活性，該肽受質在由轉殖基因(酶)裂解時產生增加之螢光信號。將螢光或RFU相對於對數稀釋作圖，且在通過平行相似性測試後使用四參數邏輯回歸模型進行擬合，使用如下公式計算各測試物品相對於同一培養盤上之參考標準的相對效力：EC50參考÷EC50測試物品。測試物品之效力報導為參考標準效力之百分比，由三個培養盤之加權平均值計算出。  4.6.9     載體基因體濃度分析法
螢光素異硫氰酸酯結合之AAV (FITC-AAV)或FITC結合之AAV殼蛋白特異性單株抗體可用於類似實驗中，以追蹤AAV粒子在SCS中之運動及清除。AAV之螢光標記方法係所屬領域中已知的(Shi等人, Sci. Adv. 2020; 6 : eaaz3621；及Tsui, T. Y.等人, Hepatology 42, 335-342 (2005)。可購得識別許多AAV血清型之抗體(FITC結合)。 4.6.10   使用染料螢光分析進行游離DNA分析法
可藉由與DNA結合之SYBR® Gold核酸凝膠染料(『SYBR Gold dye』)之螢光來測定游離DNA。可使用微定量盤式讀取儀量測螢光且用DNA標準進行定量。結果可以ng/µL為單位報導。
可使用兩種方法來估計總DNA，以便將量測之游離DNA (以ng/µL為單位)轉換為游離DNA之百分比。在第一種方法中，使用藉由紫外-可見光譜法測定之GC/mL (OD)估計樣品中之總DNA，其中M為DNA之分子量，且1×10 6為單位轉換因子： 估計之總DNA (ng/µL) = 1×10 6× GC/mL (OD) × M (g/mol)/6.02×10 23在第二種方法中，可在0.05%泊洛沙姆188下將樣品加熱至85℃，保持20分鐘，且可使用藉由SYBR Gold染料分析法在加熱樣品中量測之實際DNA作為總數。因此，假設所有DNA皆回收且定量。對於趨勢分析，既可使用原始ng/µL，亦可使用由一致方法確定之百分比。 4.6.11   粒徑排阻層析法(SEC)
可使用Sepax SRT SEC-1000 Peek管柱(PN 215950P-4630，SN: 8A11982，LN: BT090，5 µm 1000A，4.6×300 mm)，在Waters Acquity Arc設備ID 0447 (C3PO)上利用25 mm光程流通池執行SEC。移動相可為例如20 mM磷酸鈉、300 mM NaCl、0.005%泊洛沙姆188 pH 6.5，流速為0.35毫升/分鐘，歷時20分鐘，管柱處於環境溫度下。可在214 nm、260 nm及280 nm下使用2點/秒採樣速率及1.2 nm解析度利用25點平均平滑進行資料收集。理想目標負載可為1.5×10 11GC。樣品可注射50 µL，約為理想目標之1/3，或注射5 µL。 4.6.12   動態光散射(DLS)分析法
可在Wyatt DynaProIII上使用Corning 3540 384孔盤及30 µL樣品體積進行動態光散射(DLS)。每個重複可收集各歷時10 s之10次採集，且每個樣品可有3次重複量測。可根據樣品中使用之溶劑設置溶劑，例如dPBS中AAV載體之『PBS』。不符合資料品質標準(基線、SOS、雜訊、擬合)之結果可經『標記』且自分析中排除。 4.6.13   黏度量測
可使用所屬領域中已知之方法量測黏度，例如在2019年出版之美國藥典(United States Pharmacopeia，USP)及其先前版本(藉由引用之方式整體併入本文中)中提供之方法。使用毛細管黏度計，使用USP ＜911＞中描述之方法量測低剪切下之黏度。
可使用錐板式旋轉流變儀測定黏度與剪切速率之關係。美國藥典(USP) USP ＜1911＞中描述流變測定法之量測，且USP＜912＞中描述旋轉黏度測定法。旋轉流變黏度量測可用AR-G2流變儀收集，該流變儀配備有帕耳帖(Peltier)溫度控制板及60 mm 1°角鋁錐附件(TA Instruments, New Castle, DE)。可在＜0.3 s-1開始上升至5000 s -1之範圍內進行黏度對比剪切速率掃描，每十個收集5個點。在20℃下收集黏度對比剪切速率。10,000及20,000 s -1下之黏度係自資料中推斷出來。
在一些情況下，可在零、0.1 s -1、1 s -1、1000 s -1、5000 s -1、10,000 s -1、20,000 s -1或超過20,000 s -1下量測醫藥組合物或參考醫藥組合物之黏度。 4.6.14 流變學量測
美國藥典(USP) USP ＜1911＞中描述流變測定法之量測，且USP＜912＞中描述旋轉黏度測定法。
流變學量測係用AR-G2流變儀收集的，該流變儀配備有帕耳帖(Peltier)溫度控制板及60 mm 1°角鋁錐附件(TA Instruments, New Castle, DE)。
藉由在0.1%應變及1 Hz下以振盪模式施加溫度上升來確定膠凝溫度。將樣品裝載且在5℃下預平衡5分鐘，接著以5℃/min上升溫度，達至40℃或60℃。儲存/彈性模數(G’)與損耗/黏性模數(G”)交叉時之溫度記錄為系統膠凝溫度。扭矩掃描顯示，線性黏彈區域擴大至約0.4%，因此在0.1%下操作完全在線性黏彈區域內。
在0.1%應變及1 Hz下以振盪模式確定膠凝時間。在5℃及20℃兩者下使樣品平衡且暴露於溫度躍升至34℃。如上，膠凝時間定義為儲存模數與損耗模數曲線之交叉。 4.6.15   病毒感染力分析法
可使用如François等人, Molecular Therapy Methods & Clinical Development (2018) 第10卷, 第223-236頁(以引用之方式整體併入本文中)中所述之TCID 50感染力價分析。可使用如2018年10月15日申請之臨時申請案62/745859中所述之相對感染力分析  4.6.16   微差掃描螢光法
蛋白質及由蛋白質組成之病毒殼體之熱穩定性可藉由微差掃描螢光法(DSF)來確定。DSF量測蛋白質之固有色胺酸及酪胺酸發射作為溫度之函數。Trp及Tyr殘基之局部環境隨著蛋白質未摺疊而發生變化，從而引起螢光大量增加。使50%蛋白質未摺疊之溫度定義為『熔融』溫度(T m)。USP ＜853＞及USP ＜1853＞中描述螢光光譜法。
DSF資料係使用Promethius NTPlex Nano DSF儀器(NanoTemper technologies, Munich, Germany)收集的。在20℃下將樣品裝載至毛細管池中，且溫度以1℃/min之速率上升至95℃。使用350 nm (未摺疊)及330 nm (未摺疊)下發射之信號輸出比來確定T m。 4.6.17   注射壓力量測
使用流動篩網及流體感測器(Flow Screen and Fluid Sensor) (Viscotec America, Kennesaw, GA)或帶有單次使用壓力感測器S-N-000之PressureMAT-DPG (PendoTECH, Princeton, NJ)量測注射壓力。
藉由手動或使用Legato-100注射泵(Kd Scientific, Holliston, MA)施加一致流速來進行空氣注射。為注射至去核豬眼中，將眼睛安裝在Mandell眼睛支架(Mastel)上，且施加吸力以調節眼睛之眼內壓。 4.6.18   參考組合物
本文提供之組合物之黏度可藉由將組合物與參考醫藥組合物進行比較來評估。在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含與所評估之組合物相同類型及量之重組AAV的醫藥組合物，但不為溫度感應性組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含與所評估之組合物相同類型及量之重組AAV的醫藥組合物，但在眼外溫度(約32-35℃)下具有比所評估之組合物低的黏度及/或彈性模數。
在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含磷酸鹽緩衝鹽水中與評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含具有0.001%泊洛沙姆188之pH 7.4杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水中與評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。在一些實施例中，參考醫藥組合物為包含具有4%蔗糖及0.001%泊洛沙姆188之pH 7.4杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水中與評估之組合物濃度相同之相同重組AAV的醫藥組合物。參考醫藥組合物可藉由與所評估之組合物相同的途徑或不同的途徑投與。在一些實施例中，參考醫藥組合物經脈絡膜上投與。 5.    實例
本部分(亦即，部分5)中之實例係作為說明來提供的，而非限制。 5.1  實例1：用於脈絡膜上遞送之溫度感應性凝膠調配物之優化 5.1.1     溫度感應性凝膠調配物目標概述
正研究構築體II作為藉由注射遞送至脈絡膜上腔之治療。脈絡膜上腔(SCS)係介於鞏膜與脈絡膜之間的一個區域，在注射藥物溶液時會擴大(Habot-Wilner, 2019)。亦參見圖1。當注射之溶液藉由生理過程清除時，SCS空間恢復至其注射前之尺寸。藥物溶液在SCS內擴散且吸收至鄰近組織中。脈絡膜中之毛細血管可滲透低分子量滲透物。本實例描述增加構築體II在脈絡膜上腔中之滯留時間及最終提高其功效的實驗方法。
為實現更長滯留時間，將腺相關病毒(AAV)調配成最終調配物，該調配物當在介於冷藏條件(2-8℃)與控制室溫(20℃)之間的溫度下時為可注射液體，且接著在眼睛溫度(34.5±0.8℃)下狀態變成凝膠。凝膠將AAV保持在脈絡膜上腔中，減少清除且增加定位，從而增強在所欲標靶組織中之治療功效。 5.1.2 初始設計參數概述
利用其他資料對關於調配物可行性之初步設計參數進行調整，且此處描述以顯示調配物優化之起始點。
由於眼睛係一個關鍵器官，所以注射至眼睛係一項敏感注射程序。將藥物注射至眼睛中時，針規格不能太高，以避免疼痛、組織損傷或炎症。例如，在某些情況下，可選擇30規格，而在其他情況下，選擇29規格。為注射至眼睛中，必須在溶液膠凝且堵塞針及注射部位之前在指定時間框內將其注射通過極窄口徑針。為允許注射完成，此對室溫下(或若冷時注射，則為冷藏)調配物之黏度以及對膠凝時間增添限制。本實例描述一種反應曲面實驗設計方法，其優化調配物組成，使其可同時滿足針對脈絡膜上遞送所鑑定之所有要求。
調配物在眼睛溫度下應膠凝。已報導眼睛表面之溫度為34.5 ± 0.8℃ (Tkacova等人, 2011, MEASUREMENT 2011, Proceedings of the 8th International Conference, Smolenice, Slovakia)。圖3展示使用熱感照相機(FLIR，型號T530)量測之眼外溫度在33.1℃下。眼睛表面溫度可視作脈絡膜上腔溫度之最壞情況，脈絡膜上腔溫度可能比表面略溫熱些。膠凝溫度之極限為眼睛溫度(34.5℃)。眼睛溫度之平均值減去三個標準偏差為32℃。因此，較佳膠凝溫度≤32℃用作設計參數以確保在眼睛中會發生膠凝。
溫度感應性凝膠當在介於冷藏條件(2-8℃）與控制室溫(20℃)之間的溫度下時將為可注射液體。理想地，為便於劑量製備及製造，膠凝溫度應足以超過室溫，以允許室溫之變化性及進行之實際混合、抽吸及其他操作。例如，膠凝溫度≥ 27℃可更容易處置。較高膠凝溫度(≥27℃)為較佳，但此並非硬性要求，因為劑量可冷卻至較低溫度來進行劑量製備，且需要時，在投與前亦可冷卻。
調配物應具有可接受之黏度，該黏度將允許使用常用注射器組件進行注射(亦即基於注射器壓力定額限制之注射壓力限制)。為平衡凝膠形成溫度及時間與注射能力，設計參數存在衝突。
所需之針尺寸為30或29規格，且此會影響注射之壓力。在注射完成前不應發生膠凝以免堵住針或注射部位。對於初始模型化，假定10秒之注射時間。
需要時，存在替代方法來降低注射壓力。溫度、黏度、膠凝時間及所需注射時間係相關聯之參數。哈庚-帕穗方程式(Hagen-Poiseuille equation) ( ∆ P=(8μLQ)/(πR 4)，見下文)顯示注射壓力及時間(由流速決定)線性相關。因此，注射時間自10 s加倍至20 s將使壓力降低兩倍。黏度與壓力負相關。例如藉由降低溫度使黏度降低，將降低注射壓力。若劑量冷卻，則膠凝時間更長。劑量冷卻將降低黏度及注射壓力。冷卻之劑量亦將花費更長時間來膠凝，考慮進行更緩慢之注射，此亦可降低注射壓力。
膠凝時間應大於注射時間以免堵住針或注射部位，且應小於文獻中針對壓力驅動之回流所預期之10分鐘(600 s)清除時間(Chiang, IOVS, 2017, 58 (1) 545-554)。對於調配物評估，考慮＜ 90秒之初始設計較佳目標(可行時)，此與600 s預期回流清除時間相比，係非常保守之膠凝時間。預期在膠凝發生之後AAV藉由血流、凝膠腐蝕、擴散及慣例自SCS空間之中期及長期清除會顯著降低。
如有可能，在所鑑定之設計空間內，進一步希望凝膠有在注射後進行輕微稀釋之空間，同時仍然維持在相同或相似溫度下膠凝之能力。 表 2 ：初始設計參數
參數 目標 基本原理
賦形劑安全性 泊洛沙姆407及188賦形劑安全，且以前曾用於溫度感應性凝膠調配物 安全性
載體之穩定性 載體穩定且保留效力 需要穩定性以確保功效
膠凝溫度 較佳：27℃ ＜ T (凝膠) ＜32℃ 範圍：20℃ ＜ T (凝膠) ＜32℃ 極限：20℃ ＜ T (凝膠) ＜34.5℃ 上限為眼睛表面之溫度(34℃)且範圍為此減去3個標準偏差(32℃) 下限係基於對於投藥及製造而言，在室溫下盡可能低之黏度下之工作可行性，27℃至32℃之範圍用於初始評估。 對於某些操作，且甚至對於給藥，需要時，基於黏度，可冷卻調配物
膠凝時間 較佳：90 s ＞ 時間(凝膠) ＞ 15 s 範圍：600 s ＞ 時間(凝膠) ＞ 10 s 大於注射時間。 膠凝時間應足夠短以免在完全膠凝前劑量被清除或消散。 需要時，可藉由冷卻劑量來增加膠凝時間。
注射時間 較佳：10-15 s 範圍：5-30 s 臨床投藥目標
投與組件 較佳：29或30 Ga ETW針(ID = 220或ID = 240 µm)及標準塑膠注射器 臨床投藥要求及使用標準組件之能力
注射壓力 較佳 ≤ 43 PSI 範圍 ≤ 65 PSI 極限 ≤ 100 PSI 注射器壓力定額較佳係基於ISO 7886-1: 2017，及低/容易注射壓力及力。 65 PSI之範圍係基於實驗室注射可行性實驗期間所需之力的人為因素/感覺 100 PSI之極限係基於水準低於塑膠注射器之125 PSI典型壓力定额
黏度 在室溫下較佳 ≤ 183 mPas 當冷卻時初始目標 ≤ 183 mPas 在室溫下或當冷卻時當使用CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID)針時(參見表3)基於65 PSI之注射壓力目標。 此目標可藉由使用較大針或考慮較高壓力注射器來放寬，因此其為初始目標，而非絕對要求。
5.1.3     黏度設計空間
關於流經針時壓降之哈庚-帕穗方程式由 ∆ P=(8μLQ)/(πR 4)表示。壓力視黏度(µ)、針長度(L)、體積流速(Q)及針內徑(R)而定。對於30規格針及29規格針(ISO 9626:2016：常規壁，RW；薄壁，TW；特薄壁，ETW；以及超薄壁，UTW，及在設計中或用於開發研究之額外ClearSide (CLSD)針)，使用該方程式計算以磅/平方吋(PSI)為單位之壓降作為黏度之函數。使用轉換因子PSI = Pa/6894.76轉換成PSI。包括安裝長度在內之總針長為14 mm，注射體積為0.1 mL，注射時間建模為10 s (Q = 0.1 mL/10 = 0.01 mL/s)，且考慮之針內徑為：30 Ga/29 Ga (133 µm ID)、30 Ga TW (165 µm ID)、30 Ga ETW/29 Ga TW (190 µm ID)、30 Ga UTW/29 Ga ETW (240 µm ID)、ClearSide (CLSD)品牌30 Ga針(160 µm ID)、CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID)、CLSD 29 Ga ETW (240 µm ID)。
圖2中展示壓力對比黏度之計算結果，且表3展示較佳值、目標值及極限值之列表結果。基於表3中之計算，初始設計評估係基於使用CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID)針，目標壓力為65 PSI，對應於183 mPas之黏度。
與CLSD 30 Ga針(160 μm ID)相比，注射CLSD 30 Ga ETW (220 μm ID)或CLSD 29 Ga ETW (240 μm ID)所需之壓力及/或恒壓下時間的相對下降係基於針內徑比率之四次方且為：分別為(220/160) 4= 3.6倍及(240/160) 4= 5倍。因此，利用當前160 μm ID 30 Ga CLSD針之初始可行性資料可用於推斷使用計劃臨床遞送膠凝調配物之30及29 Ga ETW針的預期壓力及時間。 表 3 ：基於注射壓力之黏度設計空間
針 黏度(mPas) 上限範圍
對於 ≤ 43 PSI ( 較佳) 對於65 PSI ( 目標) 對於100 PSI ( 極限)
30 Ga/29 Ga (133 µm ID) 16 24 38
30 Ga TW (165 µm ID) 38 58 90
30 Ga ETW/29 Ga TW (190 µm ID) 67 102 157
30 Ga UTW/29 Ga ETW (240 µm ID) 171 259 400
CLSD 30 Ga針(160 µm ID) 34 51 79
CLSD 30 Ga ETW (220 µm ID) 121 183* 282
CLSD 29 Ga ETW (240 µm ID) 171 259 400
* 30 Ga TW (220 μm ID) 針及預期約 65 PSI 標稱注射壓力的初始調配物設計可行性評估設定 5.1.4 溫度感應性水凝膠調配物組成之設計空間的鑑定
為維持與當前具有蔗糖之經改良之DPBS調配物的一致性且亦維持水凝膠基質內流體之滲壓性在生理學上可接受之範圍(240 ＜滲透壓＜600 mOsm/kg)內，水凝膠將基於泊洛沙姆407及泊洛沙姆188溶解於當前具有蔗糖之經改良之DPBS調配物緩衝液中(滲透壓 = 345 mOsm/kg)。
在實驗設計方法中評估泊洛沙姆407與泊洛沙姆188之組合，以確定是否存在一種調配物組成，其具有在期望目標範圍內之膠凝溫度，同時亦將黏度限於可經由30或29規格針注射之水準。
使用反應曲面中心複合實驗設計(DOE)方法利用JMP 15軟體(Cary, NC)評估水凝膠調配物之組成對膠凝溫度以及5℃及20℃下膠凝時間及黏度的影響。需要一種DOE方法，其基於調配物設計限制的數目，要求對組成變化具有不同反應且能夠確定一或多種最優目標調配物。在重複中心點下泊洛沙姆407自16%變成22 % w/v且泊洛沙姆188自0%變成16 % w/v。可使用不同方法測定膠凝。一些方法可量測膠凝之開始且其他方法可量測材料性質之客觀『交叉』作為膠凝溫度。出於調配物設計之目的，為保持一致性及客觀性，將隨溫度而變之G’與G”之交叉視為膠凝溫度。原始資料顯示膠凝之開始發生在比交叉略低之溫度下。
表4中總結DOE研究結果。資料在JMP DOE軟體中進行擬合以產生不同量測之反應曲面，圖4展示膠凝溫度與調配物組成反應曲面之函數關係，圖5 (20℃)及圖6 (5℃)中展示黏度反應曲面與組成之函數關係，且圖12及圖13中展示原始剪切速率掃描資料之總結。
圖7中總結膠凝曲線之原始資料，且圖8中展示對於樣品#9，關於如何確定膠凝溫度為G’與G”之交叉的具體實例。原始資料顯示膠凝之開始發生在比交叉略低之溫度下。因此，使用交叉來定義調配物之膠凝溫度為設計增添額外穩固性，因為要顯著增加AAV在SCS空間中之定位，不一定需要完全膠凝。
圖9及圖10分別展示用於確定暴露於溫度自5℃及20℃躍升至34℃之樣品之膠凝時間的G’對比時間的關係曲線。圖11展示樣品#9之具體實例。
資料作為一個整體來考慮，以針對表1中總結之所有設計參數來評估及優化潛在調配物設計空間。圖14展示在膠凝溫度極限為27至32℃下的溫度感應性凝膠調配物設計空間(白色區域)。此設計空間可代表一種如下情況，其中在2-8℃下製備劑量且在仍然冷或冷藏時投與。極限：15-90 s膠凝時間，5℃下黏度≤183 mPas，注射持續時間= 10 s，且針ID≥220 μm)。圖15利用相同因素及對20℃下黏度≤183 mPas之附加參數約束進一步縮小設計空間。 表 4 ：凝膠組成對膠凝溫度、時間及黏度之影響的實驗設計研究 .
DOE 模式 泊洛沙姆407 (% w/v) 泊洛沙姆188 (% w/v) 膠凝溫度(℃) 20℃ 躍升至34℃ 之膠凝時間 (s) 5℃ 躍升至34℃ 之膠凝時間(s) 與20℃ 相比初始在5℃ 下膠凝時間之增加 c(s) 20℃ 下黏度(mPas) 5℃ 下黏度(mPas)
−− 16 0 23.72 9.92 29.87 20.0 54.6 27.6
−+ 22 0 18.85 1 a 20.53 19.5 NA b 53.8
+− 16 16 28.75 20.05 43.27 23.2 233.4 145.7
++ 22 16 21.93 3.42 29.71 26.3 NA b 296.9
a0 19 0 22.04 5.58 24.85 19.3 164.1 36.5
A0 19 16 24.03 13.34 33.47 20.1 497.1 203
0a 16 8 33.88 34.52 78.76 44.2 85.7 59.4
0A 22 8 25.9 10.13 31.46 21.3 330.4 92.9
0 19 8 28.89 14.45 39.30 24.9 203.1 82.2
0 19 8 29.03 17.82 38.92 21.1 200 82.6
a 立即膠凝，因此輸入1作為結果佔位符。 b NA，已膠凝。 C 與20℃至34℃相比，5℃至34℃之膠凝時間平均增加為24±7 s 5.1.5 設計空間內調配物 A 、 B 及 C 之流變性評估
基於DOE設計空間研究結果，鑑定圖15上展示為十字準線之三種調配物A、B及C用於額外研究。組成分別為：A = 6%/19%，B = 6.5%/18%，及C = 7%/17.5% w/v泊洛沙姆188及407。
如圖16所示，將調配物A、B及C無菌製備。所有調配物均基於經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液。具有蔗糖之經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液用作對照物(100 mM氯化鈉、2.70 mM氯化鉀、8.10 mM無水磷酸氫二鈉、1.47 mM磷酸二氫鉀、117 mM蔗糖、0.001% (0.01 mg/mL)泊洛沙姆188)。外加溶液藉由10/9或1.11倍之比率稍加濃縮製備，以便在1/10比率之AAV中間物下，其可以9/10之比率外加，以例如實現期望最終組成。亦可使用其他稀釋比率。黏性調配物很難無菌過濾，因此藉由在121℃下高壓殺菌20分鐘來殺菌(適合於至多200 mL；體積愈大，時間可愈長，例如2000 mL為40分鐘)。使用『液體』循環，其在降低溫度以防『沸溢』時逐漸降低壓力，且使用蓋配備無菌過濾器之瓶，以允許蒸汽進入瓶，同時維持無菌性，接著轉移至無菌罩，用於填充(示例蓋包括Chemglass CLS1484-12，或Sartorius MYCAP™系列蓋或等效物)。執行循環表明，在循環期間由於水分蒸發，可能損失2%至4%之間的質量，且此可藉由無菌注射用水以及外加活性AAV調配中間物來加回。表7顯示高壓滅菌對調配物之熱膠凝性質無影響。值之輕微差異代表量測及製備之變化性。
圖17中所示之替代製備涉及無菌過濾。藉由組成及溫度優化調配物黏度以及優化過濾流及壓力下，無菌過濾亦可用於對最終產物殺菌。
表5總結調配物A、B及C之流變性質。膠凝溫度在28℃至32℃範圍內。亦展示膠凝之開始且在27℃至30℃範圍內，且競爭膠凝之平臺期在29℃至33℃範圍內。此等均落在膠凝在眼睛溫度(約34.5℃)或低於眼睛溫度下發生的設計空間內。三種調配物之膠凝時間在16至29 s範圍內，亦在初始設計參數內。最終，在20℃下三種調配物之黏度≤183 mPas，亦在設計參數內。圖19、圖20及圖21中展示調配物A、B及C之膠凝曲線。膠凝之開始發生在交叉點以下約2℃，且在整個膠凝上G’之變化覆蓋彈性模數增加6至7個數量級。圖28至圖33中展示20℃及5℃下之黏度曲線。
圖18展示一種不同的評估膠凝時間之方法。將20℃下50 μL體積之調配物A (左)、B (中間)及C (右)分配在溫熱表面上且使用液滴流之視訊來確定液滴停止流動之時間。使用此方法獲得之膠凝時間為約10s (A)、25s (B)及45s (C)。圖22至圖27中展示在躍升至34℃下在20℃及5℃下開始之膠凝時間的流變學曲線。
調配物有可能在注射後在其變得完全膠凝前輕微稀釋，特別是在團注周圍。調配物A、B及C以允許沿著膠凝等溫線稀釋(在設計空間中微微向下及向左移動)之方式置於設計空間之右上方(參見圖15)。因此，若在注射後存在一些輕微稀釋，則調配物膠凝性質將為穩固的且維持。預期此等調配物之藥團的主要完整性無論其如何迅速地膠凝均得以維持。使用具有0.001% P188之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水進行10質量%稀釋以模擬經活體內流體輕微稀釋的影響，且量測流變性質。在用於界定膠凝溫度之交叉點，與室溫下之行為相比，儲存模數G’實質上已增加。在稀釋10%之後所有三種調配物之膠凝開始係可接受的(表6)且預期此可在注射後即刻，在主要藥團完全膠凝前維持凝膠周圍之完整性。即使經稀釋之調配物的膠凝性質有輕微變化，在眼睛溫度下G’值增加至少一個數量級。在輕微稀釋之後膠凝時間增加，但對於調配物A及B，保持在90 s內，且對於調配物C，保持在4.4分鐘內；均在初始設計10分鐘之極限內。此等資料表明在注射後即刻，在藥團在注射後開始15至30 s內實質上可完成膠凝前，調配物在周圍經輕微稀釋均穩定。 表 5 ：調配物 A 、 B 及 C 之流變及熱性質
調配物 泊洛沙姆188 (% w/v) 泊洛沙姆407 (% w/v) 膠凝溫度(℃) 20℃ 躍升至34℃ 之膠凝時間(s) 5℃ 躍升至34℃ 之膠凝時間(s) 20℃ 下黏度(mPas) 5℃ 下黏度(mPas)
A 6 19 開始 = 26.66 交叉 = 28.45 平臺期 = 29.08 16.2 34.2 174 177
B 6.5 18 開始 = 27.49 交叉 = 30.17 平臺期 = 32.41 22.2 52.2 118 121
C 7 17.5 開始 = 29.63 交叉 = 31.91 平臺期 = 33.42 29.4 61.2 107 116
表 6 ：調配物 A 、 B 及 C 之稀釋對膠凝溫度及膠凝時間的影響
   膠凝溫度(℃) 20℃ 下膠凝時間(s)
調配物* 純 90% 純 90%
A 開始 = 26.66 交叉 = 28.45 平臺期 = 29.08 開始 = 28.77 交叉 = 30.35 平臺期 = 33.51 16.2 28.2
B 開始 = 27.49 交叉 = 30.17 平臺期 = 32.41 開始 = 32.97 交叉 = 35.11 平臺期 = 37.47 22.2 60.6
C 開始 = 29.63 交叉 = 31.91 平臺期 = 33.42 開始 = 34.41 交叉 = 36.21 平臺期 = 38.40 29.4 262.8
表 7 ：高壓殺菌對膠凝溫度及時間之影響
膠凝溫度(℃) 20℃ 下膠凝時間(s)
調配物* 高壓殺菌 未高壓殺菌 高壓殺菌 未高壓殺菌
A 開始 = 26.66 交叉 = 28.45 平臺期 = 29.08 開始 = 26.56 交叉 = 28.29 平臺期 = 29.99 16.2 16.2
B 開始 = 27.49 交叉 = 30.17 平臺期 = 32.41 開始 = 28.51 交叉 = 30.66 平臺期 = 32.45 22.2 27.0
C 開始 = 29.63 交叉 = 31.91 平臺期 = 33.42 開始 = 29.01 交叉 = 32.03 平臺期 = 33.45 29.4 28.2
5.1.6 調配物 A 、 B 及 C 中構築體 II 之應力穩定性
微差掃描螢光法(DSF)量測蛋白質之固有色胺酸及酪胺酸發射作為溫度之函數。Trp及Tyr殘基之局部環境隨著蛋白質未摺疊而發生變化，從而引起螢光大量增加。圖37展示對照物對比調配物A、B及C之微差掃描螢光法熱上升資料。上圖：原始熔融曲線信號。中圖：用於鑑別峰之數據導數。底圖：光散射數據以指示聚集。所有調配物在熱上升後均具有與對照物類似之曲線。表8總結調配物A、B及C具有與對照調配物類似之熱穩定性且因此AAV穩定的結果。 表 8 ：與對照物相比不同凝膠調配物中構築體 II AAV 殼之微差掃描熒光法熔融溫度
測試 具有蔗糖之經改良之DPBS 中的對照物 調配物A (19%P407/6%P188) 調配物B (18%P407/6.5%P188) 調配物C (17.5%P407/7%P188)
樣品ID S-0DGN S-0DGO S-0DGP S-0DGQ
微差掃描熒光法熔融溫度(℃) 71.69 73.36 73.81 73.46
表9總結與對照物相比37℃應力對調配物A、B及C中之AAV穩定性的影響。作為AAV不穩定，引起殼破裂且釋放DNA有效負載的量度的偵測到之游離DNA係低的，且與初始水準類似，此說明所有樣品在37℃下3天后的方法變化性。在稀釋3倍以降低黏度之樣品上量測調配物A、B及C之載體基因體濃度(藉由ddPCR)。結果有一定變化性，可能與其按體積而非按質量稀釋之實情相關(因為其具有高黏度，所以稀釋可能引入變化性)。第3天之調配物A及B樣品的載體基因體濃度與對照物類似，且總體上表明其穩定。稀釋之變化性可體現在調配物B之初始樣品比目標高且調配物C之3天樣品比目標低上。以後，按說明密度之質量稀釋係一種可能有助於降低樣品製備變化性之方法。當說明變化性時，總體上，A、B及C之載體基因體濃度類似於對照物，此表明調配物相對於溫度應力均具有類似及可接受之穩定性。 表 9 ：與對照物相比 37℃ 應力對調配物 A 、及 C 之穩定性的影響
測試 時間點( 天) 具有蔗糖之經改良之DPBS 中的對照物 調配物A (19%P407/6%P188) 調配物B (18%P407/6.5%P188) 調配物C (17.5%P407/7%P188)
載體基因體濃度(ddPCR) (GC/mL) 0 1.41×10 12 NT 1.85×10 12 NT
3 1.36×10 12 1.57×10 12 1.18×10 12 5.79×10 11
藉由SYBR Gold 之游離DNA (%) 0 1.2 ± 0.5 0.5 ± 0.3 1.2 ± 0.7 0.6 ± 0.3
3 1.7 ± 0.8 0.8 ± 0.6 1.3 ± 0.7 2.8 ± 1.2
5.1.7 對調配物 A 、 B 及 C 之注射能力及劑量製備的評估
樣品A、B及C填充至2 mL COP (West Pharmaceuticals，19550057) Crystal Zenith TM小瓶中且使用小瓶適配器(West, 8070117)提取。如在多天所評估，在室溫下所有樣品均容易填充至注射器中。在代表性1週時期內測得室溫為22.4℃±0.6℃ (min = 20.7℃且max = 23.7℃)。此證明膠凝性質允許在典型控制室溫下處置。
圖38展示使用Clearside注射器裝置(CLS-HN001)及30規格(160 μm ID，CLS-MN1100)針將調配物B注射至平衡在35℃下之去核豬眼中的注射壓力。調配物容易注射至眼睛中，儘管壓力為約160 PSI。然而，基於哈庚-帕穗方程式，因為壓力與內徑四次方成反比，所以將使用之針ID (160 μm ID)擴大至更大針ID將引起壓力降低約5倍(亦即(240/160)4 = 5)。因此，利用開發中之針，預期壓力低5倍或為約32 PSI，完全在可接受範圍內。
圖39展示使用BD 1 mL注射器(309628)利用30 GG×1/2吋(0.3×13 mm) TW針(Nipro，HN-3013-ET)注射至空氣中。Clearside裝置及針設計有用於脈絡膜上注射之特定暴露針長度。當前可利用呈此格式之30規格(160 μm ID)。具有220或240 μm ID之較大針ID型式處於開發中。使用已知針尺寸之注射可根據哈庚-帕穗方程式所給出之壓力與注射時間及針ID的關係來縮放。因此，用可利用尺寸針注射可用於確定對於當前處於製造開發中之針，調配物是否具有期望注射壓力及時間參數。此針相對於較大ID針之壓力擴大比例為約4.5倍(240/165)4 = 4.5)。壓力亦與流速成比例。在此實驗中，壓力保持不變且評估注射時間。接著壓力及注射時間可根據4.5之總組合係數縮放，以針對開發中之較大針來轉變讀數。因此，利用30 GaTW (165 μm ID)針在約120 PSI下在12 s內注射調配物C，若使用240 μm ID針，則壓力降低至約27 PSI。在約120 PSI下在17 s內注射調配物B，在較大針下，壓力亦降低至約27 PSI。若更迅速地注射調配物B，例如在12 s內，則預期約38 PSI之更大針ID壓力。此等均完全在所確定之注射壓力設計空間內。若調配物A之37 s及140 PSI注射擴大至更大針及更快注射，則12至16 s注射之預期壓力為64至78 PSI，亦在所確定之限制性設計空間內(＜100 PSI或＜64 PSI)。 (a)  流變學量測
美國藥典(USP) USP ＜1911＞中描述流變測定法之量測，且USP＜912＞中描述旋轉黏度測定法。
流變學量測係用AR-G2流變儀收集的，該流變儀配備有帕耳帖溫度控制板及60 mm 1°角鋁錐附件(TA Instruments, New Castle, DE)。 (b)  膠凝溫度
藉由在0.1%應變及1 Hz下以振盪模式施加溫度上升來確定膠凝溫度。將樣品裝載且在5℃下預平衡5分鐘，接著以5℃/min上升溫度，達至40℃或60℃。儲存/彈性模數(G”)與損耗/黏性模數(G')交叉時之溫度記錄為系統膠凝溫度。扭矩掃描顯示，線性黏彈區域擴大至約0.4%，因此在0.1%下操作完全在線性黏彈區域內。 (c)  膠凝時間
在0.1%應變及1 Hz下以振盪模式確定膠凝時間。使樣品平衡在5℃及20℃兩者下且暴露於溫度躍升至34℃。如上，膠凝時間界定為儲存模數與損耗模數曲線之交叉。 (d)  黏度對比剪切速率
可在0.25 s -1至5000 s -1之範圍內進行黏度對比剪切速率掃描，每十個收集5個點。在5℃及20℃下收集黏度對比剪切速率。10,000及20,000 s -1下之黏度係自資料中推斷出來。  (e)  微差掃描螢光法
蛋白質及由蛋白質組成之病毒殼體之熱穩定性可藉由微差掃描螢光法(DSF)來確定。DSF量測蛋白質之固有色胺酸及酪胺酸發射作為溫度之函數。Trp及Tyr殘基之局部環境隨著蛋白質未摺疊而發生變化，從而引起螢光大量增加。使50%蛋白質未摺疊之溫度定義為『熔融』溫度(T m)。USP ＜853＞及USP ＜1853＞中描述螢光光譜法。
DSF資料係使用Promethius NT.Plex Nano DSF儀器(NanoTemper technologies, Munich, Germany)收集的。在20℃下將樣品裝載至毛細管池中，且溫度以1℃/min之速率上升至95℃。使用350 nm (未摺疊)及330 nm (未摺疊)下發射之信號輸出比來確定T m。 (f)   注射壓力量測
使用流動篩網及流體感測器(Flow Screen and Fluid Sensor) (Viscotec America, Kennesaw, GA)或帶有壓力感測器S-N-000之PressureMAT-DPG (PendoTECH, Princeton, NJ)量測注射壓力。
藉由手動或使用Legato-100注射泵(Kd Scientific, Holliston, MA)施加一致流速來進行空氣注射。為注射至去核豬眼中，將眼睛安裝在Mandell眼睛支架(Mastel, Rapid City, SD)上，且施加吸力以調節眼睛之眼內壓。 5.2  實例2：使用不同脈絡膜上調配物在食蟹獼猴中之藥效學、生物分佈及耐受性研究
本研究之目的係評估包含AAV8-抗VEGF-ab之不同調配物在藉由脈絡膜上注射單劑量投與至食蟹獼猴時之生物分佈、藥效學(轉殖基因濃度)及耐受性。在給藥之後，觀測動物給藥後至少4週。一組亦投與高容量調配物。一些調配物包括不同凝膠溫度。舉例而言，調配物1具有約28℃之凝膠溫度，調配物2具有約30℃之凝膠溫度，且調配物3具有約32℃之凝膠溫度。表10中展示組分配及劑量水準。測試物品為AAV8-抗VEGF-ab。對照物品為安慰劑。調配物及對照物可儲存在-60℃與-80℃之間的冷凍機中，且在使用當日在室溫下解凍，或若在調配物當日使用，則儲存在室溫下，或儲存在2℃與8℃之間的冰箱中。適應症為慢性視網膜疾患，包括濕性AMD及糖尿病性視網膜病變。 表 10 ：組分配及劑量水準
組 劑量方案左眼 劑量方案右眼 劑量水準 b(GC/ 眼) 給藥濃度(GC/mL) 動物數目( 雌性)
對照物1 a 對照物品1 對照物品1 0 0 41
對照物2 對照物品2 對照物品2 0 0 1
對照物3 對照物品3 對照物品3 0 0 1
調配物1 測試物品1 測試物品1 3×10 11 3×10 12 4
調配物2 測試物品2 測試物品2 3×10 11 3×10 12 4
調配物3 測試物品3 測試物品3 3×10 11 3×10 12 4
高容量調配物 測試物品1、2或3 測試物品1、2或3 3×10 11 1.5×10 12 4
GC =基因體複本 a 第1組將僅投與對照物品。 b 劑量水準係基於調配物1-3之100 μL/眼之劑量體積，以及高容量調配物組之200 μL/眼之劑量體積。每隻眼睛注射兩次。 c 在給藥期第29天處死所有動物。
在動物供應商處進行抗體預篩選：經由股靜脈自每隻動物中收集約90隻雌猴之血液(至少1 mL)，且置於不含抗凝劑之試管中。根據需要，可使用另一條靜脈進行收集。基於預篩選結果選擇動物作為研究候選者。使血液在室溫下凝結且在1小時內離心以獲得血清。將血清分成2個等分試樣且置於冷凍瓶中，且維持在乾冰上，然後儲存於大約-70℃下。將樣品在乾冰上運輸隔夜以進行分析。然後藉由任何可接受之方法分析樣品之抗AAV8中和抗體(NAb)。基於抗AAV8 Nab結果選擇用於運輸之動物。
劑量投與：動物禁食隔夜且在脈絡膜上注射之前用氯胺酮及右美托咪啶(dexmedetomidine)麻醉。簡而言之，在5至10秒內向每隻眼睛(距角膜緣3至4 mm之間)投與100 μL單次脈絡膜上注射(或注射2次，每次50 μL)。調配物均在室溫下投與。調配物係用Clearside SCS微注射器投與。微針尺寸視調配物之黏度而變。在一些情況下，使用30規格微針。右眼注射在顳上象限(亦即10點鐘與11點鐘位置之間)進行。左眼注射在顳上象限(亦即1點鐘與2點鐘位置之間)進行。在注射之後，針在眼中保持約5秒後拔出。拔出微針後，將棉頭塗抹器(劑量擦拭物)置放在注射部位約10秒。給藥後在每隻眼睛中滴注局部抗生素(例如Tobrex®或適當替代品)。每次給藥時間記錄為每次注射完成時之時間。右眼先給藥，然後為左眼。
眼科程序：進行眼科檢查(例如，在投與後第4天、第8天、第15天及第29天)。用裂隙燈生物顯微鏡及間接檢眼鏡檢查動物。使用裂隙燈生物顯微鏡檢查雙眼之附件及前部。使用間接檢眼鏡檢查雙眼之眼底(若可見)。在用間接檢眼鏡檢查之前，用散瞳劑(如1%托吡醯胺(tropicamide))散瞳。在投與當天(給藥前10分鐘內)且例如在第4天、第8天、第15天及第29天量測眼內壓。可使用回彈眼壓計(TonoVet)評估眼壓。第4週左右進行眼部攝影。使用數位眼底相機拍攝照片。對每隻眼睛拍攝彩色照片，包括後極之立體照片及兩個中間周邊視野(顳側及鼻側)之非立體照片。亦拍攝周邊照片。此外，使用靛青綠(indocyanine green)進行自發螢光成像以記錄劑量之擴散(例如，在第一天及第二天)。
抗 AAV8 中和抗體分析：將在不同時間點(例如，投與前、投與當天及投與後數天)自股靜脈採集之每隻動物之血液樣品保持在室溫下且使其凝結至少30分鐘，然後離心。將樣品在收集後1小時內離心，且收穫血清。收穫後，將樣品置於乾冰上直至儲存在-60℃與-80℃之間。然後使用合格中和抗體分析對AAV8抗體進行血清分析。
抗 AAV8- 抗 VEGF-ab 轉殖基因產物抗體分析：如上文所討論採集血液樣品且使用本揭示案之任何分析法或任何可接受之分析法分析血清樣品中針對AAV8-抗VEGF-ab之抗體。對於AAV8-抗VEGF-ab轉殖基因分析，如上所述，在投與前至少兩週、第15天及動物處死當天(第29天)採集血液樣品。在劑量投與之前自前房收集50 μL。可在終末屍檢時收集來自水狀液及玻璃狀液之樣品。可在給藥前、第15天及屍檢之前收集血清樣品。然後藉由本揭示案之任何分析法或任何適用之分析法或方法分析樣品(例如，轉殖基因濃度)。
水狀液收集：在投與前至少2週、第15天及處死動物當天，自每隻眼睛中取出約50 μL。將每隻眼睛之水狀液樣品置於具有Watson條碼標簽之單獨試管中，在液氮中快速冷凍，且置於乾冰上直至儲存在-60℃與-80℃之間。
水狀液穿刺後用藥方案：此治療方案之目的係提供與水狀液收集程序相關之姑息治療。收集日之後的治療目的係提供對不良事件(例如不適)之適當緩解。測試動物之眼痛及副作用。 表 11 ：用藥方案
天 藥物( 劑量水準) 給藥途徑 時間間隔
取樣日 氟尼辛葡甲胺(Flunixin meglumine) (2mg/kg) IM 為進行收集而進行鎮靜之前
取樣日 丁丙諾啡(Buprenorphine) (0.05 mg/kg) IM 自麻醉中恢復後；5至7小時後，且至少16小時後(自第一次注射開始)
取樣日 1%硫酸阿托品(Atropine sulfate)溶液 a 局部 收集程序後
取樣日 Neo-Poly-Dex軟膏 b 局部 收集程序後
取樣後1天 1%硫酸阿托品溶液 a 局部 一次
取樣後1天 Neo-Poly-Dex軟膏 b 局部 BID
取樣後2天 1%硫酸阿托品溶液 a 局部 一次
取樣後2天 Neo-Poly-Dex軟膏 b 局部 BID
BID = 每天兩次(至少間隔6小時)；IM = 肌肉內注射 a 將1至2滴溶液施加至每隻供收集樣品之眼睛上。 b 將大約0.25吋條施加至每隻供收集樣品之眼睛。
研究終止：將動物用戊巴比妥鈉麻醉且在第29天放血。
水狀液及玻璃狀液之屍檢收集：分別自水狀液及玻璃狀液中取出每隻眼睛最多50 μL及每隻眼睛最多100 μL。放血後，摘除眼睛且自每隻眼睛收集水狀液及玻璃狀液樣品。將玻璃狀液樣品分成2個大致相等之等分試樣，且水狀液樣品作為一個等分試樣儲存。每次收集之後，動物右眼注射經改良之戴維森固定液(modified Davidson’s fixative)直至腫脹。眼睛在經改良之戴維森固定液中儲存48至96小時，然後轉移至10%中性緩衝福馬林(formalin)中。將樣品快速冷凍且儲存在-60℃與-80℃之間。分析水狀液及玻璃狀液樣品之轉殖基因濃度。
用於生物分佈之眼組織收集：放血後，將來自不同調配物組之所有動物之左眼及兩隻動物(視存活而定)之右眼摘除且收集組織。將組織收集至帶有Watson條碼標簽之單獨管中。收集之組織包括具有視網膜色素上皮之脈絡膜、角膜、虹膜睫狀體、視交叉、視神經、視網膜、鞏膜及後眼杯。眼睛分成四個大致相等之象限(包括給藥部位區域之顳上、鼻上、顳下及包括給藥部位區域之鼻下)。自各象限像限，使用8 mm生檢穿孔器採集一個樣品。樣品儲存在-60℃與-80℃之間。使用qPCR或qRT-PCR方法分析樣品中之載體DNA或RNA。
用於生物分佈之非眼組織收集：自以下中收集約5 mm×5 mm×5mm之兩個樣品：右腦半球(例如，小腦(外側)、小腦(背側)、額葉皮質(布洛曼氏分區(Brodmann area) 4)、額葉皮質(布洛曼氏分區6)、枕葉皮質(皮質表面)、枕葉皮質(實質))、卵巢、心臟、腎臟、淚腺(左)、肝臟(左外側葉)、肺(左尾葉)、淋巴結(腮腺)、淋巴結(下頜)、腦垂體、唾液腺(下頜)、脾、胸腺、背根神經節(頸椎，左)、背根神經節(腰椎，左)及背根神經節(胸椎，左)。將樣品儲存在-60℃與-80℃之間。
組織學：將動物之右眼及右視神經以標稱5 μm切片，且用蘇木精(hematoxylin)及伊紅(eosin)染色。將眼組織切片以方便檢查中央凹、注射部位區域、黃斑、視盤及視神經。單一垂直切片係穿過下顱頂之近似中心獲取。此產生一張載玻片/塊/眼睛(每隻眼睛總共三張載玻片)。此外，可自選定之顯微載玻片準備數位掃描(虛擬載玻片)。
資料評估及統計分析：統計資料分析係使用平均值及標準偏差計算。計算絕對體重、體重變化及眼內壓量測之平均值及標準偏差。 等效物
儘管參考本發明之具體實施例對本發明進行詳細描述，但應理解，在功能上等效之變體亦在本發明之範疇內。實際上，根據前面之描述及附圖，除了在本文中展示及描述之內容之外，對本發明之各種修改對於所屬領域技術人員而言將變得顯而易見。此類修改旨在落入所附申請專利範圍之範疇內。所屬領域技術人員將認識到或能夠僅使用常規實驗即可確定本文描述之本發明之具體實施例的許多等效物。此類等效物旨在涵蓋於以下申請專利範圍中。
在本說明書中提到之所有公開案、專利及專利申請案皆以引用之方式併入本說明書中，其引用程度如同具體且個別地指出各個別公開案、專利或專利申請案以引用之方式整體併入本文中一般。
圖 1.構築體II使用溫度感應性凝膠調配物在脈絡膜上腔中之定位的概述。預期溫度感應性凝膠調配物自注射期間之液態變成脈絡膜上腔中之凝膠，因此使所給與之AAV更長時間地局部保留在脈絡膜上腔中且具有更大治療作用。 圖 2A-2C.針對不同30規格及29規格針計算之注射壓力與黏度之函數關係。圖A縮放至100 PSI之極限，圖B縮放至65 PSI，且圖C縮放至45 PSI。 圖 3.使用熱感照相機進行眼外溫度量測。 圖 4.膠凝溫度與來自實驗設計研究之調配物組成曲面圖的函數關係。 圖 5.20℃下黏度與來自實驗設計研究之調配物組成曲面圖的函數關係。 圖 6.5℃下黏度與來自實驗設計研究之調配物組成曲面圖的函數關係。 圖 7.來自實驗設計(DOE)研究之膠凝溫度流變學資料的總結。樣品用P407-P188水準標記(例如標記為「16-0」之樣品#1具有16% P407及0% P188)。 圖 8.DOE研究中樣品#9 (19% P407/8% P188)之示例膠凝溫度曲線，其展示如何使用G’及G”之交叉來確定膠凝溫度。 圖 9.來自DOE研究之20℃躍升至34℃膠凝時間流變學資料的總結。樣品用P407-P188水準標記(例如樣品#1具有16% P407及0% P188)。 圖 10.來自DOE研究之5℃躍升至34℃膠凝時間流變學資料的總結。樣品用P407-P188水準標記(例如樣品#1具有16% P407及0% P188)。 圖 11.樣品#9 (19% P407/8% P188)在20℃躍升至34℃下之示例膠凝時間曲線，其展示如何使用G’及G”之交叉來確定膠凝時間。 圖 12.來自DOE研究之20℃下黏度對比剪切速率掃描的總結。樣品用P407-P188水準標記(例如樣品#1具有16% P407及0% P188)。注意，樣品2及4在20℃下已膠凝，因此展示剪切力對破壞凝膠結構之影響。所有其他樣品均顯示牛頓行為(Newtonian behavior) (作為剪切速率之函數，黏度恒定)。 圖 13.來自DOE研究之5℃下黏度對比剪切速率掃描的總結。樣品用P407-P188水準標記(例如樣品#1具有16% P407及0% P188)。所有樣品均顯示牛頓行為(作為剪切速率之函數，黏度恒定)。 圖 14.在膠凝溫度極限為27至32℃下的溫度感應性凝膠調配物設計空間(白色區域)。此設計空間可代表一種如下情況，其中在2-8℃下製備劑量且在仍然冷或冷藏時投與。極限：15-90 s膠凝時間，5℃下黏度≤183 mPas，注射持續時間= 10 s，且針ID≥220 μm)。陰影區域對應於超過針對各因素界定之下限及上限的區域。等高線展示膠凝溫度。 圖 15.在膠凝溫度極限為27至32℃(粉紅色陰影)及另外20℃下黏度極限≤183 mPas下的溫度感應性凝膠調配物設計空間(白色區域) (區域＞183 mPas以綠色陰影展示)。在此情況下，在控制室溫(20℃)下投與劑量，注射時間為10 s。極限：15-90 s膠凝時間(藍色陰影)，20℃下黏度≤183 mPas (綠色陰影)，注射持續時間= 10 s，且針ID≥220 μm。陰影區域對應於超過針對各因素界定之下限及上限的區域。等高線展示膠凝溫度。十字準線展示進一步評估之三種調配物：分別A = 6%/19%，B = 6.5%/18%，及C = 7%/17.5% w/v泊洛沙姆188及407。 圖 16.利用高壓釜殺菌之臨床藥品之示例製備。 圖 17.利用無菌過濾之臨床藥品之示例製備。 圖 18.展示液滴流在預溫(31.3℃)表面上之膠凝時間之設置的熱感照相機影像(瓶子含有用於熱質量之溫水)。將20℃下50 μL體積之調配物A (左)、B (中間)及C (右)分配在溫熱表面上且使用液滴流之視訊來確定液滴停止流動之時間。 圖 19.調配物A之膠凝溫度曲線。 圖 20.調配物B之膠凝溫度曲線。 圖 21.調配物C之膠凝溫度曲線。 圖 22.調配物A自20℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 23.調配物B自20℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 24.調配物C自20℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 25.調配物A自5℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 26.調配物B自5℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 27.調配物C自5℃躍升至34℃之膠凝時間。 圖 28.調配物A在20℃下之黏度對比剪切速率。 圖 29.調配物B在20℃下之黏度對比剪切速率。 圖 30.調配物C在20℃下之黏度對比剪切速率。 圖 31.調配物A在5℃下之黏度對比剪切速率。 圖 32.調配物B在5℃下之黏度對比剪切速率。 圖 33.調配物C在5℃下之黏度對比剪切速率。 圖 34.稀釋10%之調配物A之膠凝曲線。 圖 35.稀釋10%之調配物B之膠凝曲線。 圖 36.稀釋10%之調配物C之膠凝曲線。 圖 37.對照物(S-0DGN)及調配物A (S-0DGO)、B (S-0DGP)及C (S-0DGQ)之微差掃描熒光法曲線。 圖 38.使用具有30 Ga針之CLSD裝置在約35℃下注射0.1 mL調配物B至去核豬眼中之注射壓力曲線。 圖 39.使用具有30 Ga TW針之1 mL注射器注射0.1 mL調配物A、B及C至空氣中之注射時間曲線(壓力/力藉由操作人員保持恒定，調配物黏度愈高，注射時間愈長)。 

          <![CDATA[<110>  美商銳進科斯生物股份有限公司(REGENXBIO Inc.)]]>
          <![CDATA[<120>  諸如凝膠調配物之用於脈絡膜上投與之調配物]]>
          <![CDATA[<130>  12656-143-888]]>
          <![CDATA[<140>  TBA]]>
          <![CDATA[<141>  ]]>
          <![CDATA[<160>  55   ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
          <![CDATA[<210>  1]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗Fab胺基酸序列-輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  2]]>
          <![CDATA[<211>  231]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗Fab胺基酸序列-重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 
                          165                 170                 175     
          Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 
                  195                 200                 205             
          Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 
              210                 215                 220                 
          Ser Cys Asp Lys Thr His Leu 
          225                 230     
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗Fab胺基酸序列-輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 
          1               5                   10                  15      
          Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 
                  35                  40                  45              
          Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 
              50                  55                  60                  
          Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 
                          85                  90                  95      
          Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 
                      100                 105                 110         
          Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 
                  115                 120                 125             
          Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 
          145                 150                 155                 160 
          Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 
                          165                 170                 175     
          Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 
                      180                 185                 190         
          Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 
                  195                 200                 205             
          Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  231]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗Fab胺基酸序列-重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 
          1               5                   10                  15      
          Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr 
                      20                  25                  30          
          Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 
              50                  55                  60                  
          Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 
          65                  70                  75                  80  
          Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 
                          85                  90                  95      
          Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 
                      100                 105                 110         
          Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 
                          165                 170                 175     
          Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 
                      180                 185                 190         
          Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 
                  195                 200                 205             
          Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 
              210                 215                 220                 
          Ser Cys Asp Lys Thr His Leu 
          225                 230     
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  26]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  VEGF-A信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala 
                      20                  25      
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  29]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  腓骨蛋白-1信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Met Glu Arg Ala Ala Pro Ser Arg Arg Val Pro Leu Pro Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Leu Gly Gly Leu Ala Leu Leu Ala Ala Gly Val Asp Ala 
                      20                  25                  
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  玻連蛋白信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Met Ala Pro Leu Arg Pro Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Trp Val 
          1               5                   10                  15      
          Ala Leu Ala 
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  補體因子H信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Met Arg Leu Leu Ala Lys Ile Ile Cys Leu Met Leu Trp Ala Ile Cys 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala 
          <![CDATA[<210>  9]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  視蛋白信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          Met Arg Leu Leu Ala Phe Leu Ser Leu Leu Ala Leu Val Leu Gln Glu 
          1               5                   10                  15      
          Thr Gly Thr 
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  728]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗cDNA -輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          gctagcgcca ccatgggctg gtcctgcatc atcctgttcc tggtggccac cgccaccggc       60
          gtgcactccg acatccagat gacccagtcc ccctcctccc tgtccgcctc cgtgggcgac      120
          cgggtgacca tcacctgctc cgcctcccag gacatctcca actacctgaa ctggtaccag      180
          cagaagcccg gcaaggcccc caaggtgctg atctacttca cctcctccct gcactccggc      240
          gtgccctccc ggttctccgg ctccggctcc ggcaccgact tcaccctgac catctcctcc      300
          ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac tgccagcagt actccaccgt gccctggacc      360
          ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaag cggaccgtgg ccgccccctc cgtgttcatc      420
          ttccccccct ccgacgagca gctgaagtcc ggcaccgcct ccgtggtgtg cctgctgaac      480
          aacttctacc cccgggaggc caaggtgcag tggaaggtgg acaacgccct gcagtccggc      540
          aactcccagg agtccgtgac cgagcaggac tccaaggact ccacctactc cctgtcctcc      600
          accctgaccc tgtccaaggc cgactacgag aagcacaagg tgtacgcctg cgaggtgacc      660
          caccagggcc tgtcctcccc cgtgaccaag tccttcaacc ggggcgagtg ctgagcggcc      720
          gcctcgag                                                               728
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  1440]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗cDNA -重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          gctagcgcca ccatgggctg gtcctgcatc atcctgttcc tggtggccac cgccaccggc       60
          gtgcactccg aggtgcagct ggtggagtcc ggcggcggcc tggtgcagcc cggcggctcc      120
          ctgcggctgt cctgcgccgc ctccggctac accttcacca actacggcat gaactgggtg      180
          cggcaggccc ccggcaaggg cctggagtgg gtgggctgga tcaacaccta caccggcgag      240
          cccacctacg ccgccgactt caagcggcgg ttcaccttct ccctggacac ctccaagtcc      300
          accgcctacc tgcagatgaa ctccctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc      360
          aagtaccccc actactacgg ctcctcccac tggtacttcg acgtgtgggg ccagggcacc      420
          ctggtgaccg tgtcctccgc ctccaccaag ggcccctccg tgttccccct ggccccctcc      480
          tccaagtcca cctccggcgg caccgccgcc ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc      540
          gagcccgtga ccgtgtcctg gaactccggc gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc      600
          gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtcctccg tggtgaccgt gccctcctcc      660
          tccctgggca cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg      720
          gacaagaagg tggagcccaa gtcctgcgac aagacccaca cctgcccccc ctgccccgcc      780
          cccgagctgc tgggcggccc ctccgtgttc ctgttccccc ccaagcccaa ggacaccctg      840
          atgatctccc ggacccccga ggtgacctgc gtggtggtgg acgtgtccca cgaggacccc      900
          gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc      960
          cgggaggagc agtacaactc cacctaccgg gtggtgtccg tgctgaccgt gctgcaccag     1020
          gactggctga acggcaagga gtacaagtgc aaggtgtcca acaaggccct gcccgccccc     1080
          atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc cagccccggg agccccaggt gtacaccctg     1140
          cccccctccc gggaggagat gaccaagaac caggtgtccc tgacctgcct ggtgaagggc     1200
          ttctacccct ccgacatcgc cgtggagtgg gagtccaacg gccagcccga gaacaactac     1260
          aagaccaccc cccccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctgtactc caagctgacc     1320
          gtggacaagt cccggtggca gcagggcaac gtgttctcct gctccgtgat gcacgaggcc     1380
          ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg tccctgtccc ccggcaagtg agcggccgcc     1440
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  733]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之輕鏈)]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          gagctccatg gagtttttca aaaagacggc acttgccgca ctggttatgg gttttagtgg       60
          tgcagcattg gccgatatcc agctgaccca gagcccgagc agcctgagcg caagcgttgg      120
          tgatcgtgtt accattacct gtagcgcaag ccaggatatt agcaattatc tgaattggta      180
          tcagcagaaa ccgggtaaag caccgaaagt tctgatttat tttaccagca gcctgcatag      240
          cggtgttccg agccgtttta gcggtagcgg tagtggcacc gattttaccc tgaccattag      300
          cagcctgcag ccggaagatt ttgcaaccta ttattgtcag cagtatagca ccgttccgtg      360
          gacctttggt cagggcacca aagttgaaat taaacgtacc gttgcagcac cgagcgtttt      420
          tatttttccg cctagtgatg aacagctgaa aagcggcacc gcaagcgttg tttgtctgct      480
          gaataatttt tatccgcgtg aagcaaaagt gcagtggaaa gttgataatg cactgcagag      540
          cggtaatagc caagaaagcg ttaccgaaca ggatagcaaa gatagcacct atagcctgag      600
          cagcaccctg accctgagca aagcagatta tgaaaaacac aaagtgtatg cctgcgaagt      660
          tacccatcag ggtctgagca gtccggttac caaaagtttt aatcgtggcg aatgctaata      720
          gaagcttggt acc                                                         733
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  779]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗cDNA (包含信號序列之重鏈)]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          gagctcatat gaaatacctg ctgccgaccg ctgctgctgg tctgctgctc ctcgctgccc       60
          agccggcgat ggccgaagtt cagctggttg aaagcggtgg tggtctggtt cagcctggtg      120
          gtagcctgcg tctgagctgt gcagcaagcg gttatgattt tacccattat ggtatgaatt      180
          gggttcgtca ggcaccgggt aaaggtctgg aatgggttgg ttggattaat acctataccg      240
          gtgaaccgac ctatgcagca gattttaaac gtcgttttac ctttagcctg gataccagca      300
          aaagcaccgc atatctgcag atgaatagcc tgcgtgcaga agataccgca gtttattatt      360
          gtgccaaata tccgtattac tatggcacca gccactggta tttcgatgtt tggggtcagg      420
          gcaccctggt taccgttagc agcgcaagca ccaaaggtcc gagcgttttt ccgctggcac      480
          cgagcagcaa aagtaccagc ggtggcacag cagcactggg ttgtctggtt aaagattatt      540
          ttccggaacc ggttaccgtg agctggaata gcggtgcact gaccagcggt gttcatacct      600
          ttccggcagt tctgcagagc agcggtctgt atagcctgag cagcgttgtt accgttccga      660
          gcagcagcct gggcacccag acctatattt gtaatgttaa tcataaaccg agcaatacca      720
          aagtggataa aaaagttgag ccgaaaagct gcgataaaac ccatctgtaa tagggtacc       779
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  11]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 
          1               5                   10      
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  7]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          Phe Thr Ser Ser Leu His Ser 
          1               5           
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗及蘭尼單抗輕鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  17]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  17]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗重鏈CDR2]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 
          1               5                   10                  15      
          Arg 
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  貝伐單抗重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗重鏈CDR1]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr Gly Met Asn 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  14]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗重鏈CDR3]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 
          1               5                   10                  
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  白蛋白信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala 
          1               5                   10                  15      
          Tyr Ser 
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  18]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  胰凝乳蛋白酶原信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Met Ala Phe Leu Trp Leu Leu Ser Cys Trp Ala Leu Leu Gly Thr Thr 
          1               5                   10                  15      
          Phe Gly 
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  介白素-2信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ile Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser 
                      20  
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  15]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  胰蛋白酶原-2信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Met Asn Leu Leu Leu Ile Leu Thr Phe Val Ala Ala Ala Val Ala 
          1               5                   10                  15  
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  19]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  F2A位點]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          Leu Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn 
          1               5                   10                  15      
          Pro Gly Pro 
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  21]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子T2A]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Gly Ser Gly Glu Gly Arg Gly Ser Leu Leu Thr Cys Gly Asp Val Glu 
          1               5                   10                  15      
          Glu Asn Pro Gly Pro 
                      20      
          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  22]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子P2A]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          Gly Ser Gly Ala Thr Asn Phe Ser Leu Leu Lys Gln Ala Gly Asp Val 
          1               5                   10                  15      
          Glu Glu Asn Pro Gly Pro 
                      20          
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  23]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子E2A]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Gly Ser Gly Gln Cys Thr Asn Tyr Ala Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp 
          1               5                   10                  15      
          Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro 
                      20              
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  25]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  連接子F2A]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Gly Ser Gly Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala 
          1               5                   10                  15      
          Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro 
                      20                  25  
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Arg Lys Arg Arg 
          1               
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Arg Arg Arg Arg 
          1               
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  4]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Arg Arg Lys Arg 
          1               
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          <![CDATA[<223>  弗林蛋白酶連接子]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          Arg Lys Lys Arg 
          1               
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          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  35]]>
          Arg Xaa Xaa Arg 
          1               
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          <![CDATA[<223>  X = 任何胺基酸]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          Arg Xaa Lys Arg 
          1               
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<221>  MISC_FEATURE]]>
          <![CDATA[<222>  (2)..(2)]]>
          <![CDATA[<223>  X = 任何胺基酸]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          Arg Xaa Arg Arg 
          1               
          <![CDATA[<210>  38]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗Fab胺基酸序列-輕鏈]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          Met Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 
          1               5                   10                  15      
          Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn 
                      20                  25                  30          
          Tyr Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu 
                  35                  40                  45              
          Ile Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser 
              50                  55                  60                  
          Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro 
                          85                  90                  95      
          Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala 
                      100                 105                 110         
          Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser 
                  115                 120                 125             
          Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu 
              130                 135                 140                 
          Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys 
                  195                 200                 205             
          Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  236]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗Fab胺基酸序列-重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          Met Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His 
                      20                  25                  30          
          Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Cys Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp 
                      100                 105                 110         
          Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 
                  115                 120                 125             
          Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 
                          165                 170                 175     
          Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 
                      180                 185                 190         
          Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 
                  195                 200                 205             
          Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Leu Arg Lys Arg Arg 
          225                 230                 235     
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  232]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  蘭尼單抗Fab胺基酸序列-重鏈]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          Met Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 
          1               5                   10                  15      
          Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Asp Phe Thr His 
                      20                  25                  30          
          Tyr Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 
                  35                  40                  45              
          Val Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp 
              50                  55                  60                  
          Phe Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 
                          85                  90                  95      
          Cys Ala Lys Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Tyr Phe Asp 
                      100                 105                 110         
          Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 
                  115                 120                 125             
          Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 
              130                 135                 140                 
          Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 
                          165                 170                 175     
          Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 
                      180                 185                 190         
          Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 
                  195                 200                 205             
          Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 
              210                 215                 220                 
          Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Leu 
          225                 230         
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  736]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV1]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His 
                      260                 265                 270         
          Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 
                  275                 280                 285             
          His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 
                  355                 360                 365             
          Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe 
                          405                 410                 415     
          Glu Glu Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp 
                      420                 425                 430         
          Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg 
                  435                 440                 445             
          Thr Gln Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gln Pro Lys Asn Trp Leu Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Asp Asp Glu Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg 
                          565                 570                 575     
          Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Phe Gln Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Asp Val His Ala Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Lys Asn Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu 
                          725                 730                 735     
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  735]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV2]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr 
                      260                 265                 270         
          Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 
                  275                 280                 285             
          Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 
              290                 295                 300                 
          Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val 
          305                 310                 315                 320 
          Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 
                          325                 330                 335     
          Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr 
                      340                 345                 350         
          Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 
                  355                 360                 365             
          Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 
              370                 375                 380                 
          Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 
                          405                 410                 415     
          Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg 
                      420                 425                 430         
          Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr 
                  435                 440                 445             
          Asn Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gln Ser Arg Leu Gln Phe Ser Gln 
              450                 455                 460                 
          Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ser Ala Asp Asn Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Ser Glu Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly 
                      500                 505                 510         
          Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp 
                  515                 520                 525             
          Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys 
              530                 535                 540                 
          Gln Gly Ser Glu Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr 
          545                 550                 555                 560 
          Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr 
                          565                 570                 575     
          Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Arg Gly Asn Arg Gln Ala Ala Thr 
                      580                 585                 590         
          Ala Asp Val Asn Thr Gln Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp 
                  595                 600                 605             
          Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr 
              610                 615                 620                 
          Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys 
          625                 630                 635                 640 
          His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn 
                          645                 650                 655     
          Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gln 
                      660                 665                 670         
          Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys 
                  675                 680                 685             
          Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr 
              690                 695                 700                 
          Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr 
          705                 710                 715                 720 
          Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 
                          725                 730                 735 
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  736]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV3-3]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Val Pro Gln Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Arg Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Ile Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Gly 
              130                 135                 140                 
          Ala Val Asp Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ser Gly Lys Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Thr Ser Leu Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr 
                      260                 265                 270         
          Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 
                  275                 280                 285             
          Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 
              290                 295                 300                 
          Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val 
          305                 310                 315                 320 
          Arg Gly Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 
                          325                 330                 335     
          Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr 
                      340                 345                 350         
          Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 
                  355                 360                 365             
          Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 
              370                 375                 380                 
          Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 
          385                 390                 395                 400 
          Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 
                          405                 410                 415     
          Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg 
                      420                 425                 430         
          Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg Thr 
                  435                 440                 445             
          Gln Gly Thr Thr Ser Gly Thr Thr Asn Gln Ser Arg Leu Leu Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Gln Ala Gly Pro Gln Ser Met Ser Leu Gln Ala Arg Asn Trp Leu Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Leu Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Asn Phe Pro Trp Thr Ala Ala Ser Lys Tyr His Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Asp Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Glu Gly Thr Thr Ala Ser Asn Ala Glu Leu Asp Asn Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln 
                          565                 570                 575     
          Tyr Gly Thr Val Ala Asn Asn Leu Gln Ser Ser Asn Thr Ala Pro Thr 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Thr Val Asn His Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Met Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asn Pro Pro Thr Thr Phe Ser Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 
                          725                 730                 735     
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  734]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV4-4]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          Met Thr Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser Glu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Val Arg Glu Trp Trp Ala Leu Gln Pro Gly Ala Pro Lys Pro Lys 
                      20                  25                  30          
          Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro Gly 
                  35                  40                  45              
          Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro Val 
              50                  55                  60                  
          Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp 
                          85                  90                  95      
          Ala Glu Phe Gln Gln Arg Leu Gln Gly Asp Thr Ser Phe Gly Gly Asn 
                      100                 105                 110         
          Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro Leu 
                  115                 120                 125             
          Gly Leu Val Glu Gln Ala Gly Glu Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg Pro 
              130                 135                 140                 
          Leu Ile Glu Ser Pro Gln Gln Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Gly Lys Gln Pro Ala Lys Lys Lys Leu Val Phe Glu Asp Glu Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Thr Ser Gly Ala Met Ser 
                      180                 185                 190         
          Asp Asp Ser Glu Met Arg Ala Ala Ala Gly Gly Ala Ala Val Glu Gly 
                  195                 200                 205             
          Gly Gln Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys 
              210                 215                 220                 
          Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly His Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr 
          225                 230                 235                 240 
          Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu Gly Glu 
                          245                 250                 255     
          Ser Leu Gln Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 
                      260                 265                 270         
          Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln 
                  275                 280                 285             
          Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Met Arg Pro Lys Ala Met Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Lys Ile Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Ile Phe Ala Asp 
                          325                 330                 335     
          Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gln Glu Gly Ser 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr 
                  355                 360                 365             
          Cys Gly Leu Val Thr Gly Asn Thr Ser Gln Gln Gln Thr Asp Arg Asn 
              370                 375                 380                 
          Ala Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Asn Phe Glu Ile Thr Tyr Ser Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser 
                          405                 410                 415     
          Met Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile 
                      420                 425                 430         
          Asp Gln Tyr Leu Trp Gly Leu Gln Ser Thr Thr Thr Gly Thr Thr Leu 
                  435                 440                 445             
          Asn Ala Gly Thr Ala Thr Thr Asn Phe Thr Lys Leu Arg Pro Thr Asn 
              450                 455                 460                 
          Phe Ser Asn Phe Lys Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Ser Ile Lys Gln 
          465                 470                 475                 480 
          Gln Gly Phe Ser Lys Thr Ala Asn Gln Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Thr 
                          485                 490                 495     
          Gly Ser Asp Ser Leu Ile Lys Tyr Glu Thr His Ser Thr Leu Asp Gly 
                      500                 505                 510         
          Arg Trp Ser Ala Leu Thr Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro 
                  515                 520                 525             
          Ala Asp Ser Lys Phe Ser Asn Ser Gln Leu Ile Phe Ala Gly Pro Lys 
              530                 535                 540                 
          Gln Asn Gly Asn Thr Ala Thr Val Pro Gly Thr Leu Ile Phe Thr Ser 
          545                 550                 555                 560 
          Glu Glu Glu Leu Ala Ala Thr Asn Ala Thr Asp Thr Asp Met Trp Gly 
                          565                 570                 575     
          Asn Leu Pro Gly Gly Asp Gln Ser Asn Ser Asn Leu Pro Thr Val Asp 
                      580                 585                 590         
          Arg Leu Thr Ala Leu Gly Ala Val Pro Gly Met Val Trp Gln Asn Arg 
                  595                 600                 605             
          Asp Ile Tyr Tyr Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp 
              610                 615                 620                 
          Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His 
          625                 630                 635                 640 
          Pro Pro Pro Gln Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro 
                          645                 650                 655     
          Ala Thr Thr Phe Ser Ser Thr Pro Val Asn Ser Phe Ile Thr Gln Tyr 
                      660                 665                 670         
          Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Gln Ile Asp Trp Glu Ile Gln Lys Glu 
                  675                 680                 685             
          Arg Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Phe Thr Ser Asn Tyr Gly 
              690                 695                 700                 
          Gln Gln Asn Ser Leu Leu Trp Ala Pro Asp Ala Ala Gly Lys Tyr Thr 
          705                 710                 715                 720 
          Glu Pro Arg Ala Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr His His Leu 
                          725                 730                 
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  724]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV5]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          Met Ser Phe Val Asp His Pro Pro Asp Trp Leu Glu Glu Val Gly Glu 
          1               5                   10                  15      
          Gly Leu Arg Glu Phe Leu Gly Leu Glu Ala Gly Pro Pro Lys Pro Lys 
                      20                  25                  30          
          Pro Asn Gln Gln His Gln Asp Gln Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro Gly 
                  35                  40                  45              
          Tyr Asn Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Arg Gly Glu Pro Val 
              50                  55                  60                  
          Asn Arg Ala Asp Glu Val Ala Arg Glu His Asp Ile Ser Tyr Asn Glu 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Leu Glu Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp 
                          85                  90                  95      
          Ala Glu Phe Gln Glu Lys Leu Ala Asp Asp Thr Ser Phe Gly Gly Asn 
                      100                 105                 110         
          Leu Gly Lys Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro Phe 
                  115                 120                 125             
          Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Thr Gly Lys Arg Ile 
              130                 135                 140                 
          Asp Asp His Phe Pro Lys Arg Lys Lys Ala Arg Thr Glu Glu Asp Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Pro Ser Thr Ser Ser Asp Ala Glu Ala Gly Pro Ser Gly Ser Gln 
                          165                 170                 175     
          Gln Leu Gln Ile Pro Ala Gln Pro Ala Ser Ser Leu Gly Ala Asp Thr 
                      180                 185                 190         
          Met Ser Ala Gly Gly Gly Gly Pro Leu Gly Asp Asn Asn Gln Gly Ala 
                  195                 200                 205             
          Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys Asp Ser Thr Trp 
              210                 215                 220                 
          Met Gly Asp Arg Val Val Thr Lys Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Tyr Asn Asn His Gln Tyr Arg Glu Ile Lys Ser Gly Ser Val Asp 
                          245                 250                 255     
          Gly Ser Asn Ala Asn Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 
                      260                 265                 270         
          Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Ser His Trp Ser Pro Arg Asp Trp Gln 
                  275                 280                 285             
          Arg Leu Ile Asn Asn Tyr Trp Gly Phe Arg Pro Arg Ser Leu Arg Val 
              290                 295                 300                 
          Lys Ile Phe Asn Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Val Gln Asp Ser Thr 
          305                 310                 315                 320 
          Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp 
                          325                 330                 335     
          Asp Asp Tyr Gln Leu Pro Tyr Val Val Gly Asn Gly Thr Glu Gly Cys 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Ala Phe Pro Pro Gln Val Phe Thr Leu Pro Gln Tyr Gly Tyr 
                  355                 360                 365             
          Ala Thr Leu Asn Arg Asp Asn Thr Glu Asn Pro Thr Glu Arg Ser Ser 
              370                 375                 380                 
          Phe Phe Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Lys Met Leu Arg Thr Gly Asn 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Phe Glu Phe Thr Tyr Asn Phe Glu Glu Val Pro Phe His Ser Ser 
                          405                 410                 415     
          Phe Ala Pro Ser Gln Asn Leu Phe Lys Leu Ala Asn Pro Leu Val Asp 
                      420                 425                 430         
          Gln Tyr Leu Tyr Arg Phe Val Ser Thr Asn Asn Thr Gly Gly Val Gln 
                  435                 440                 445             
          Phe Asn Lys Asn Leu Ala Gly Arg Tyr Ala Asn Thr Tyr Lys Asn Trp 
              450                 455                 460                 
          Phe Pro Gly Pro Met Gly Arg Thr Gln Gly Trp Asn Leu Gly Ser Gly 
          465                 470                 475                 480 
          Val Asn Arg Ala Ser Val Ser Ala Phe Ala Thr Thr Asn Arg Met Glu 
                          485                 490                 495     
          Leu Glu Gly Ala Ser Tyr Gln Val Pro Pro Gln Pro Asn Gly Met Thr 
                      500                 505                 510         
          Asn Asn Leu Gln Gly Ser Asn Thr Tyr Ala Leu Glu Asn Thr Met Ile 
                  515                 520                 525             
          Phe Asn Ser Gln Pro Ala Asn Pro Gly Thr Thr Ala Thr Tyr Leu Glu 
              530                 535                 540                 
          Gly Asn Met Leu Ile Thr Ser Glu Ser Glu Thr Gln Pro Val Asn Arg 
          545                 550                 555                 560 
          Val Ala Tyr Asn Val Gly Gly Gln Met Ala Thr Asn Asn Gln Ser Ser 
                          565                 570                 575     
          Thr Thr Ala Pro Ala Thr Gly Thr Tyr Asn Leu Gln Glu Ile Val Pro 
                      580                 585                 590         
          Gly Ser Val Trp Met Glu Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp 
                  595                 600                 605             
          Ala Lys Ile Pro Glu Thr Gly Ala His Phe His Pro Ser Pro Ala Met 
              610                 615                 620                 
          Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Met Met Leu Ile Lys Asn 
          625                 630                 635                 640 
          Thr Pro Val Pro Gly Asn Ile Thr Ser Phe Ser Asp Val Pro Val Ser 
                          645                 650                 655     
          Ser Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Thr Val Glu Met Glu 
                      660                 665                 670         
          Trp Glu Leu Lys Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln 
                  675                 680                 685             
          Tyr Thr Asn Asn Tyr Asn Asp Pro Gln Phe Val Asp Phe Ala Pro Asp 
              690                 695                 700                 
          Ser Thr Gly Glu Tyr Arg Thr Thr Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu 
          705                 710                 715                 720 
          Thr Arg Pro Leu 
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          <![CDATA[<400>  46]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Phe Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Thr Gly Gln Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His 
                      260                 265                 270         
          Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 
                  275                 280                 285             
          His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln 
          305                 310                 315                 320 
          Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 
                          325                 330                 335     
          Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro 
                      340                 345                 350         
          Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 
                  355                 360                 365             
          Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 
              370                 375                 380                 
          Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe 
                          405                 410                 415     
          Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp 
                      420                 425                 430         
          Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg 
                  435                 440                 445             
          Thr Gln Asn Gln Ser Gly Ser Ala Gln Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gln Pro Lys Asn Trp Leu Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Asp Asp Lys Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg 
                          565                 570                 575     
          Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Leu Gln Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Asp Val His Val Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 
          625                 630                 635                 640 
          Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu 
                          725                 730                 735     
          <![CDATA[<210>  47]]>
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          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV7]]>
          <![CDATA[<400>  47]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Ala Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln 
                          165                 170                 175     
          Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro 
                      180                 185                 190         
          Pro Ala Ala Pro Ser Ser Val Gly Ser Gly Thr Val Ala Ala Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn 
              210                 215                 220                 
          Ala Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 
                          245                 250                 255     
          Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Glu Thr Ala Gly Ser Thr Asn Asp Asn 
                      260                 265                 270         
          Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 
                  275                 280                 285             
          Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn 
                          325                 330                 335     
          Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 
                  355                 360                 365             
          Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn 
              370                 375                 380                 
          Gly Ser Gln Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Ser 
                          405                 410                 415     
          Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu 
                      420                 425                 430         
          Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala 
                  435                 440                 445             
          Arg Thr Gln Ser Asn Pro Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gln 
              450                 455                 460                 
          Phe Tyr Gln Gly Gly Pro Ser Thr Met Ala Glu Gln Ala Lys Asn Trp 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Leu Asp 
                          485                 490                 495     
          Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 
                      500                 505                 510         
          Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 
                  515                 520                 525             
          His Lys Asp Asp Glu Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile 
              530                 535                 540                 
          Phe Gly Lys Thr Gly Ala Thr Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Met Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu 
                          565                 570                 575     
          Glu Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gln Ala Ala Asn Thr Ala Ala 
                      580                 585                 590         
          Gln Thr Gln Val Val Asn Asn Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp 
                  595                 600                 605             
          Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro 
              610                 615                 620                 
          His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly 
          625                 630                 635                 640 
          Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro 
                          645                 650                 655     
          Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile 
                      660                 665                 670         
          Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu 
                  675                 680                 685             
          Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser 
              690                 695                 700                 
          Asn Phe Glu Lys Gln Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gln Gly 
          705                 710                 715                 720 
          Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn 
                          725                 730                 735     
          Leu 
          <![CDATA[<210>  48]]>
          <![CDATA[<211>  738]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  AAV8]]>
          <![CDATA[<400>  48]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln Lys Gln Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Gln Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Gln Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Pro Ser Pro Gln Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Gly Lys Lys Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln 
                          165                 170                 175     
          Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Glu Pro 
                      180                 185                 190         
          Pro Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 
          225                 230                 235                 240 
          Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 
                          245                 250                 255     
          Leu Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ala Thr Asn Asp 
                      260                 265                 270         
          Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 
                  275                 280                 285             
          Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn 
              290                 295                 300                 
          Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Ser Phe Lys Leu Phe Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Ile Gln Val Lys Glu Val Thr Gln Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 
                          325                 330                 335     
          Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln 
                      340                 345                 350         
          Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe 
                  355                 360                 365             
          Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 
              370                 375                 380                 
          Asn Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 
          385                 390                 395                 400 
          Phe Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Thr Tyr 
                          405                 410                 415     
          Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser 
                      420                 425                 430         
          Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu 
                  435                 440                 445             
          Ser Arg Thr Gln Thr Thr Gly Gly Thr Ala Asn Thr Gln Thr Leu Gly 
              450                 455                 460                 
          Phe Ser Gln Gly Gly Pro Asn Thr Met Ala Asn Gln Ala Lys Asn Trp 
          465                 470                 475                 480 
          Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Thr Gly 
                          485                 490                 495     
          Gln Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Ala Gly Thr Lys Tyr His 
                      500                 505                 510         
          Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Ala Asn Pro Gly Ile Ala Met Ala Thr 
                  515                 520                 525             
          His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Asn Gly Ile Leu Ile 
              530                 535                 540                 
          Phe Gly Lys Gln Asn Ala Ala Arg Asp Asn Ala Asp Tyr Ser Asp Val 
          545                 550                 555                 560 
          Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 
                          565                 570                 575     
          Glu Glu Tyr Gly Ile Val Ala Asp Asn Leu Gln Gln Gln Asn Thr Ala 
                      580                 585                 590         
          Pro Gln Ile Gly Thr Val Asn Ser Gln Gly Ala Leu Pro Gly Met Val 
                  595                 600                 605             
          Trp Gln Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 
              610                 615                 620                 
          Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 
          625                 630                 635                 640 
          Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val 
                          645                 650                 655     
          Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gln Ser Lys Leu Asn Ser Phe 
                      660                 665                 670         
          Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 
                  675                 680                 685             
          Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr 
              690                 695                 700                 
          Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Ser Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu 
          705                 710                 715                 720 
          Gly Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 
                          725                 730                 735     
          Asn Leu 
          <![CDATA[<210>  49]]>
          <![CDATA[<211>  736]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu31]]>
          <![CDATA[<400>  49]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ser Gly Ser Gln Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn 
                      260                 265                 270         
          Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 
                  275                 280                 285             
          Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn 
                          325                 330                 335     
          Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 
                  355                 360                 365             
          Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp 
              370                 375                 380                 
          Gly Gly Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu 
                          405                 410                 415     
          Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu 
                      420                 425                 430         
          Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser 
                          565                 570                 575     
          Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met 
          625                 630                 635                 640 
          Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Ser Thr Glu Gly Val 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 
                          725                 730                 735     
          <![CDATA[<210>  50]]>
          <![CDATA[<211>  736]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  hu32]]>
          <![CDATA[<400>  50]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ser Gly Ser Gln Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn 
                      260                 265                 270         
          Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 
                  275                 280                 285             
          Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn 
                          325                 330                 335     
          Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 
                  355                 360                 365             
          Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp 
              370                 375                 380                 
          Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu 
                          405                 410                 415     
          Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu 
                      420                 425                 430         
          Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser 
                          565                 570                 575     
          Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met 
          625                 630                 635                 640 
          Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 
                          725                 730                 735     
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          <![CDATA[<400>  51]]>
          Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Gln Pro 
                      20                  25                  30          
          Lys Ala Asn Gln Gln His Gln Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro 
                  35                  40                  45              
          Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 
              50                  55                  60                  
          Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 
          65                  70                  75                  80  
          Gln Gln Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 
                          85                  90                  95      
          Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 
                      100                 105                 110         
          Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Leu Leu Glu Pro 
                  115                 120                 125             
          Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 
              130                 135                 140                 
          Pro Val Glu Gln Ser Pro Gln Glu Pro Asp Ser Ser Ala Gly Ile Gly 
          145                 150                 155                 160 
          Lys Ser Gly Ala Gln Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 
                          165                 170                 175     
          Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Ile Gly Glu Pro Pro 
                      180                 185                 190         
          Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Leu Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 
                  195                 200                 205             
          Ala Pro Val Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser 
              210                 215                 220                 
          Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Gln Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 
                          245                 250                 255     
          Tyr Lys Gln Ile Ser Asn Ser Thr Ser Gly Gly Ser Ser Asn Asp Asn 
                      260                 265                 270         
          Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 
                  275                 280                 285             
          Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn 
              290                 295                 300                 
          Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Val Lys Glu Val Thr Asp Asn Asn Gly Val Lys Thr Ile Ala Asn 
                          325                 330                 335     
          Asn Leu Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Asp Tyr Gln Leu 
                      340                 345                 350         
          Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Glu Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 
                  355                 360                 365             
          Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asp 
              370                 375                 380                 
          Gly Ser Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 
          385                 390                 395                 400 
          Pro Ser Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Glu 
                          405                 410                 415     
          Phe Glu Asn Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu 
                      420                 425                 430         
          Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser 
                  435                 440                 445             
          Lys Thr Ile Asn Gly Ser Gly Gln Asn Gln Gln Thr Leu Lys Phe Ser 
              450                 455                 460                 
          Val Ala Gly Pro Ser Asn Met Ala Val Gln Gly Arg Asn Tyr Ile Pro 
          465                 470                 475                 480 
          Gly Pro Ser Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Thr Thr Val Thr Gln Asn 
                          485                 490                 495     
          Asn Asn Ser Glu Phe Ala Trp Pro Gly Ala Ser Ser Trp Ala Leu Asn 
                      500                 505                 510         
          Gly Arg Asn Ser Leu Met Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys 
                  515                 520                 525             
          Glu Gly Glu Asp Arg Phe Phe Pro Leu Ser Gly Ser Leu Ile Phe Gly 
              530                 535                 540                 
          Lys Gln Gly Thr Gly Arg Asp Asn Val Asp Ala Asp Lys Val Met Ile 
          545                 550                 555                 560 
          Thr Asn Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser 
                          565                 570                 575     
          Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln 
                      580                 585                 590         
          Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 
                  595                 600                 605             
          Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 
              610                 615                 620                 
          Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met 
          625                 630                 635                 640 
          Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 
                          645                 650                 655     
          Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 
                      660                 665                 670         
          Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 
                  675                 680                 685             
          Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 
              690                 695                 700                 
          Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val 
          705                 710                 715                 720 
          Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 
                          725                 730                 735     
          <![CDATA[<210>  52]]>
          <![CDATA[<211>  191]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  血管內皮生長因子(vegf) Caa44447.1]]>
          <![CDATA[<400>  52]]>
          Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu 
          1               5                   10                  15      
          Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala Ala Pro Met Ala Glu Gly 
                      20                  25                  30          
          Gly Gly Gln Asn His His Glu Val Val Lys Phe Met Asp Val Tyr Gln 
                  35                  40                  45              
          Arg Ser Tyr Cys His Pro Ile Glu Thr Leu Val Asp Ile Phe Gln Glu 
              50                  55                  60                  
          Tyr Pro Asp Glu Ile Glu Tyr Ile Phe Lys Pro Ser Cys Val Pro Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Met Arg Cys Gly Gly Cys Cys Asn Asp Glu Gly Leu Glu Cys Val Pro 
                          85                  90                  95      
          Thr Glu Glu Ser Asn Ile Thr Met Gln Ile Met Arg Ile Lys Pro His 
                      100                 105                 110         
          Gln Gly Gln His Ile Gly Glu Met Ser Phe Leu Gln His Asn Lys Cys 
                  115                 120                 125             
          Glu Cys Arg Pro Lys Lys Asp Arg Ala Arg Gln Glu Asn Pro Cys Gly 
              130                 135                 140                 
          Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys His Leu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn Thr Asp Ser Arg Cys Lys Ala Arg Gln 
                          165                 170                 175     
          Leu Glu Leu Asn Glu Arg Thr Cys Arg Cys Asp Lys Pro Arg Arg 
                      180                 185                 190     
          <![CDATA[<210>  53]]>
          <![CDATA[<211>  306]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (ppt1) Aah08426.1]]>
          <![CDATA[<400>  53]]>
          Met Ala Ser Pro Gly Cys Leu Trp Leu Leu Ala Val Ala Leu Leu Pro 
          1               5                   10                  15      
          Trp Thr Cys Ala Ser Arg Ala Leu Gln His Leu Asp Pro Pro Ala Pro 
                      20                  25                  30          
          Leu Pro Leu Val Ile Trp His Gly Met Gly Asp Ser Cys Cys Asn Pro 
                  35                  40                  45              
          Leu Ser Met Gly Ala Ile Lys Lys Met Val Glu Lys Lys Ile Pro Gly 
              50                  55                  60                  
          Ile Tyr Val Leu Ser Leu Glu Ile Gly Lys Thr Leu Met Glu Asp Val 
          65                  70                  75                  80  
          Glu Asn Ser Phe Phe Leu Asn Val Asn Ser Gln Val Thr Thr Val Cys 
                          85                  90                  95      
          Gln Ala Leu Ala Lys Asp Pro Lys Leu Gln Gln Gly Tyr Asn Ala Met 
                      100                 105                 110         
          Gly Phe Ser Gln Gly Gly Gln Phe Leu Arg Ala Val Ala Gln Arg Cys 
                  115                 120                 125             
          Pro Ser Pro Pro Met Ile Asn Leu Ile Ser Val Gly Gly Gln His Gln 
              130                 135                 140                 
          Gly Val Phe Gly Leu Pro Arg Cys Pro Gly Glu Ser Ser His Ile Cys 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Phe Ile Arg Lys Thr Leu Asn Ala Gly Ala Tyr Ser Lys Val Val 
                          165                 170                 175     
          Gln Glu Arg Leu Val Gln Ala Glu Tyr Trp His Asp Pro Ile Lys Glu 
                      180                 185                 190         
          Asp Val Tyr Arg Asn His Ser Ile Phe Leu Ala Asp Ile Asn Gln Glu 
                  195                 200                 205             
          Arg Gly Ile Asn Glu Ser Tyr Lys Lys Asn Leu Met Ala Leu Lys Lys 
              210                 215                 220                 
          Phe Val Met Val Lys Phe Leu Asn Asp Ser Ile Val Asp Pro Val Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Glu Trp Phe Gly Phe Tyr Arg Ser Gly Gln Ala Lys Glu Thr Ile 
                          245                 250                 255     
          Pro Leu Gln Glu Thr Ser Leu Tyr Thr Gln Asp Arg Leu Gly Leu Lys 
                      260                 265                 270         
          Glu Met Asp Asn Ala Gly Gln Leu Val Phe Leu Ala Thr Glu Gly Asp 
                  275                 280                 285             
          His Leu Gln Leu Ser Glu Glu Trp Phe Tyr Ala His Ile Ile Pro Phe 
              290                 295                 300                 
          Leu Gly 
          305     
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  563]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  三肽基-肽酶1 (tpp1) Np_000382.3]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          Met Gly Leu Gln Ala Cys Leu Leu Gly Leu Phe Ala Leu Ile Leu Ser 
          1               5                   10                  15      
          Gly Lys Cys Ser Tyr Ser Pro Glu Pro Asp Gln Arg Arg Thr Leu Pro 
                      20                  25                  30          
          Pro Gly Trp Val Ser Leu Gly Arg Ala Asp Pro Glu Glu Glu Leu Ser 
                  35                  40                  45              
          Leu Thr Phe Ala Leu Arg Gln Gln Asn Val Glu Arg Leu Ser Glu Leu 
              50                  55                  60                  
          Val Gln Ala Val Ser Asp Pro Ser Ser Pro Gln Tyr Gly Lys Tyr Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Thr Leu Glu Asn Val Ala Asp Leu Val Arg Pro Ser Pro Leu Thr Leu 
                          85                  90                  95      
          His Thr Val Gln Lys Trp Leu Leu Ala Ala Gly Ala Gln Lys Cys His 
                      100                 105                 110         
          Ser Val Ile Thr Gln Asp Phe Leu Thr Cys Trp Leu Ser Ile Arg Gln 
                  115                 120                 125             
          Ala Glu Leu Leu Leu Pro Gly Ala Glu Phe His His Tyr Val Gly Gly 
              130                 135                 140                 
          Pro Thr Glu Thr His Val Val Arg Ser Pro His Pro Tyr Gln Leu Pro 
          145                 150                 155                 160 
          Gln Ala Leu Ala Pro His Val Asp Phe Val Gly Gly Leu His Arg Phe 
                          165                 170                 175     
          Pro Pro Thr Ser Ser Leu Arg Gln Arg Pro Glu Pro Gln Val Thr Gly 
                      180                 185                 190         
          Thr Val Gly Leu His Leu Gly Val Thr Pro Ser Val Ile Arg Lys Arg 
                  195                 200                 205             
          Tyr Asn Leu Thr Ser Gln Asp Val Gly Ser Gly Thr Ser Asn Asn Ser 
              210                 215                 220                 
          Gln Ala Cys Ala Gln Phe Leu Glu Gln Tyr Phe His Asp Ser Asp Leu 
          225                 230                 235                 240 
          Ala Gln Phe Met Arg Leu Phe Gly Gly Asn Phe Ala His Gln Ala Ser 
                          245                 250                 255     
          Val Ala Arg Val Val Gly Gln Gln Gly Arg Gly Arg Ala Gly Ile Glu 
                      260                 265                 270         
          Ala Ser Leu Asp Val Gln Tyr Leu Met Ser Ala Gly Ala Asn Ile Ser 
                  275                 280                 285             
          Thr Trp Val Tyr Ser Ser Pro Gly Arg His Glu Gly Gln Glu Pro Phe 
              290                 295                 300                 
          Leu Gln Trp Leu Met Leu Leu Ser Asn Glu Ser Ala Leu Pro His Val 
          305                 310                 315                 320 
          His Thr Val Ser Tyr Gly Asp Asp Glu Asp Ser Leu Ser Ser Ala Tyr 
                          325                 330                 335     
          Ile Gln Arg Val Asn Thr Glu Leu Met Lys Ala Ala Ala Arg Gly Leu 
                      340                 345                 350         
          Thr Leu Leu Phe Ala Ser Gly Asp Ser Gly Ala Gly Cys Trp Ser Val 
                  355                 360                 365             
          Ser Gly Arg His Gln Phe Arg Pro Thr Phe Pro Ala Ser Ser Pro Tyr 
              370                 375                 380                 
          Val Thr Thr Val Gly Gly Thr Ser Phe Gln Glu Pro Phe Leu Ile Thr 
          385                 390                 395                 400 
          Asn Glu Ile Val Asp Tyr Ile Ser Gly Gly Gly Phe Ser Asn Val Phe 
                          405                 410                 415     
          Pro Arg Pro Ser Tyr Gln Glu Glu Ala Val Thr Lys Phe Leu Ser Ser 
                      420                 425                 430         
          Ser Pro His Leu Pro Pro Ser Ser Tyr Phe Asn Ala Ser Gly Arg Ala 
                  435                 440                 445             
          Tyr Pro Asp Val Ala Ala Leu Ser Asp Gly Tyr Trp Val Val Ser Asn 
              450                 455                 460                 
          Arg Val Pro Ile Pro Trp Val Ser Gly Thr Ser Ala Ser Thr Pro Val 
          465                 470                 475                 480 
          Phe Gly Gly Ile Leu Ser Leu Ile Asn Glu His Arg Ile Leu Ser Gly 
                          485                 490                 495     
          Arg Pro Pro Leu Gly Phe Leu Asn Pro Arg Leu Tyr Gln Gln His Gly 
                      500                 505                 510         
          Ala Gly Leu Phe Asp Val Thr Arg Gly Cys His Glu Ser Cys Leu Asp 
                  515                 520                 525             
          Glu Glu Val Glu Gly Gln Gly Phe Cys Ser Gly Pro Gly Trp Asp Pro 
              530                 535                 540                 
          Val Thr Gly Trp Gly Thr Pro Asn Phe Pro Ala Leu Leu Lys Thr Leu 
          545                 550                 555                 560 
          Leu Asn Pro 
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  20]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列(Artificial Sequence)]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  突變介白素-2信號肽]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Leu Leu Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Val Thr Asn Ser 
                      20
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
Figure 12_A0101_SEQ_0015
Figure 12_A0101_SEQ_0016
Figure 12_A0101_SEQ_0017
Figure 12_A0101_SEQ_0018
Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
Figure 12_A0101_SEQ_0021
Figure 12_A0101_SEQ_0022
Figure 12_A0101_SEQ_0023
Figure 12_A0101_SEQ_0024
Figure 12_A0101_SEQ_0025
Figure 12_A0101_SEQ_0026
Figure 12_A0101_SEQ_0027
Figure 12_A0101_SEQ_0028
Figure 12_A0101_SEQ_0029
Figure 12_A0101_SEQ_0030
Figure 12_A0101_SEQ_0031
Figure 12_A0101_SEQ_0032
Figure 12_A0101_SEQ_0033
Figure 12_A0101_SEQ_0034
Figure 12_A0101_SEQ_0035
Figure 12_A0101_SEQ_0036
Figure 12_A0101_SEQ_0037
Figure 12_A0101_SEQ_0038
Figure 12_A0101_SEQ_0039
Figure 12_A0101_SEQ_0040
Figure 12_A0101_SEQ_0041
Figure 12_A0101_SEQ_0042
Figure 12_A0101_SEQ_0043
Figure 12_A0101_SEQ_0044
Figure 12_A0101_SEQ_0045
Figure 12_A0101_SEQ_0046
Figure 12_A0101_SEQ_0047
Figure 12_A0101_SEQ_0048
Figure 12_A0101_SEQ_0049
Figure 12_A0101_SEQ_0050
Figure 12_A0101_SEQ_0051
Figure 12_A0101_SEQ_0052
Figure 12_A0101_SEQ_0053
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Claims (87)

  1. 一種適合投與至人類個體眼睛之脈絡膜上腔(SCS)之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包括包含編碼轉殖基因之表現卡匣之重組腺相關病毒(AAV)載體，且其中該醫藥組合物具有隨著溫度升高而增加之黏度及/或較高彈性模數。
  2. 如請求項1之醫藥組合物，其中該組合物具有約27-32℃之膠凝溫度。
  3. 如請求項1或2之醫藥組合物，其中該組合物具有約15-90秒之膠凝時間。
  4. 如請求項1至3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1s -1至約1000s -1之剪切速率下所量測，該組合物在5℃下具有約183 mPas之黏度。
  5. 如請求項1至3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在5℃下具有小於約183 mPas之黏度。
  6. 如請求項1至3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在20℃下具有約183 mPas之黏度。
  7. 如請求項1至3中任一項之醫藥組合物，其中如在約1s -1至1000 s -1之剪切速率下所量測，該組合物在20℃下具有小於約183 mPas之黏度。
  8. 如請求項1至7中任一項之醫藥組合物，其中本文提供之醫藥組合物在低於27℃下之彈性模數小於約或約0.1 Pa、小於約或約0.01 Pa、小於約或約0.001 Pa或為零。
  9. 如請求項1至7中任一項之醫藥組合物，其中本文提供之醫藥組合物在32℃至35℃下之彈性模數為約或至少約0.1 Pa、約或至少約1 Pa、約或至少約10 Pa、約或至少約100 Pa、約或至少約1000 Pa、約或至少約10,000 Pa、或約或至少約100,000 Pa。
  10. 如請求項1至8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後之清除時間等於或大於參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該參考醫藥組合物與該醫藥組合物相比在約32-35℃下具有較低黏度及/或較低彈性模數。
  11. 如請求項1至8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後之圓周擴散比參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之圓周擴散小，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該參考醫藥組合物與該醫藥組合物相比在約32-35℃下具有較低黏度及/或較低彈性模數。
  12. 如請求項11之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後之圓周擴散小至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  13. 如請求項1至8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後在注射部位之厚度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之厚度，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該參考醫藥組合物與該醫藥組合物相比在約32-35℃下具有較低黏度及/或較低彈性模數。
  14. 如請求項1至8中任一項之醫藥組合物，其中與在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準的時段相比，在脈絡膜上投與後更長時段在該眼睛中偵測到該轉殖基因之表現水準，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該參考醫藥組合物與該醫藥組合物相比在約32-35℃下具有較低黏度及/或較低彈性模數。
  15. 如請求項1至8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後該轉殖基因之濃度等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該參考醫藥組合物與該醫藥組合物相比在約32-35℃下具有較低黏度及/或較低彈性模數。
  16. 如請求項1至8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後在注射部位之轉導率等於或高於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後在注射部位之轉導率，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該參考醫藥組合物與該醫藥組合物相比在約32-35℃下具有較低黏度及/或較低彈性模數。
  17. 如請求項1至8中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低，其中該參考醫藥組合物包括包含編碼該轉殖基因之該表現卡匣之該重組AAV，其中當將該醫藥組合物或該參考醫藥組合物投與至脈絡膜上腔時，重組AAV基因體複本之量相同，且其中該參考醫藥組合物與該醫藥組合物相比在約32-35℃下具有較低黏度及/或較低彈性模數。
  18. 如請求項10、11及13至17中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之黏度及/或彈性模數及該參考醫藥組合物之黏度及/或彈性模數係在相同剪切速率下量測。
  19. 如請求項4至11及13至17中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之黏度及/或彈性模數在至少約1,000 s -1、2,000 s -1、3,000 s -1、4,000 s -1、5,000 s -1、6,000 s -1、7,000 s -1、8,000 s -1、9,000 s -1、10,000 s -1、15,000 s -1、20,000 s -1或30,000 s -1之剪切速率下量測。
  20. 如請求項1至19中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV為構築體II。
  21. 如請求項1至20中任一項之醫藥組合物，其中該轉殖基因為抗人類血管內皮生長因子(抗VEGF)抗體。
  22. 如請求項1至21中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV包含來自選自由以下組成之群的一或多種腺相關病毒血清型之組分：AAV1、AAV2、AAV2tYF、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAVrh10、AAV.rh20、AAV.rh39、AAV.Rh74、AAV.RHM4-1、AAV.hu37、AAV.Anc80、AAV.Anc80L65、rAAV.7m8、AAV.PHP.B、AAV.PHP.eB、AAV2.5、AAV2tYF、AAV3B、AAV.LK03、AAV.HSC1、AAV.HSC2、AAV.HSC3、AAV.HSC4、AAV.HSC5、AAV.HSC6、AAV.HSC7、AAV.HSC8、AAV.HSC9、AAV.HSC10、AAV.HSC11、AAV.HSC12、AAV.HSC13、AAV.HSC14、AAV.HSC15及AAV.HSC16。
  23. 如請求項1至22中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV為AAV8。
  24. 如請求項1至19及21至22中任一項之醫藥組合物，其中該重組AAV為AAV9。
  25. 如請求項1至24中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含蔗糖。
  26. 如請求項1至24中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物不包含蔗糖。
  27. 如請求項1至26中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間多至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  28. 如請求項1至27中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間為約30分鐘至約20小時、約2小時至約20小時、約30分鐘至約24小時、約1小時至約2小時、約30分鐘至約90天、約30分鐘至約60天、約30分鐘至約30天、約30分鐘至約21天、約30分鐘至約14天、約30分鐘至約7天、約30分鐘至約3天、約30分鐘至約2天、約30分鐘至約1天、約4小時至約90天、約4小時至約60天、約4小時至約30天、約4小時至約21天、約4小時至約14天、約4小時至約7天、約4小時至約3天、約4小時至約2天、約4小時至約1天、約4小時至約8小時、約4小時至約16小時、約4小時至約20小時、約1天至約90天、約1天至約60天、約1天至約30天、約1天至約21天、約1天至約14天、約1天至約7天、約1天至約3天、約2天至約90天、約3天至約90天、約3天至約60天、約3天至約30天、約3天至約21天、約3天至約14天或約3天至約7天。
  29. 如請求項1至27中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後之清除時間不早於約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
  30. 如請求項1至27中任一項之醫藥組合物，其中該參考醫藥組合物在脈絡膜上投與後之清除時間為至多約30分鐘、1小時、2小時、3小時、4小時、5小時、6小時、7小時、8小時、9小時、10小時、12小時、14小時、16小時、18小時、20小時、22小時、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。
  31. 如請求項1至30中任一項之醫藥組合物，其中清除時間係自該SCS或自該眼睛之清除時間。
  32. 如請求項13及20至31中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  33. 如請求項13及20至31中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為約500 μm至約3.0 mm、750 μm至約2.8 mm、約750 μm至約2.5 mm、約750 μm至約2 mm或約1 mm至約2 mm。
  34. 如請求項13及20至31中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為至少約50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm、1000 μm、1 mm、1.5 mm、2 mm、2.5 mm、3 mm、3.5 mm、4 mm、4.5 mm、5 mm、5.5 mm、6 mm、6.5 mm、7 mm、7.5 mm、8 mm、8.5 mm、9 mm、9.5 mm或10 mm。
  35. 如請求項13及20至31中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在該注射部位之該厚度為至多約1 nm、5 nm、10 nm、25 nm、50 nm、100 nm、200 nm、300 nm、400 nm、500 nm、600 nm、700 nm、800 nm、900 nm、1 μm、5 μm、10 μm、15 μm、20 μm、25 μm、30 μm、35 μm、40 μm、50 μm、100 μm、200 μm、300 μm、400 μm、500 μm、600 μm、700 μm、800 μm、900 μm或1000 μm。
  36. 如請求項13及20至31中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該厚度持續至少兩小時、至少三小時、至少四小時、至少五小時、至少六小時、至少七小時、至少八小時、至少十小時、至少十二小時、至少十八小時、至少二十四小時、至少兩天、至少三天、至少五天、至少十天、至少二十一天、至少一個月、至少六週、至少兩個月、至少三個月、至少4個月、至少5個月、至少6個月、至少9個月、至少一年、至少三年或至少五年。
  37. 如請求項15及20至36中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後該眼睛中該轉殖基因之濃度高至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  38. 如請求項14及20至37中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後的該更長時段長至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
  39. 如請求項1至38中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因達至少約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天、100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天。
  40. 如請求項10至39中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後在該眼睛中偵測到該轉殖基因達至多約1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、23天、25天、27天、30天、35天、40天、50天、55天、60天、65天、70天、75天、80天、85天、90天、95天或100天、120天、140天、160天、180天、200天、220天、240天、260天、280天、300天、320天、340天、360天、380天或400天後。
  41. 如請求項21之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準等於在脈絡膜上投與該參考醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之水準或與之相比降低。
  42. 如請求項17至41中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後VEGF誘發之血管舒張及/或血管滲漏之該水準降低至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  43. 如請求項16及20至42中任一項之醫藥組合物，其中在脈絡膜上投與該醫藥組合物後在該注射部位之該轉導率高至少約2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少15倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少5%、至少10%、至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少100%、至少150%或至少200%、至少250%或至少300%、至少400%或至少500%。
  44. 如請求項1至43中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之重組AAV穩定性比該參考醫藥組合物中之重組AAV穩定性高。
  45. 如請求項44之醫藥組合物，其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV之感染力確定。
  46. 如請求項44之醫藥組合物，其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV之聚集水準確定。
  47. 如請求項44之醫藥組合物，其中重組AAV穩定性係藉由該重組AAV釋放之游離DNA之水準確定。
  48. 如請求項47之醫藥組合物，其中與該參考醫藥組合物中之游離DNA之水準相比，該醫藥組合物包含多約50%、多約25%、多約15%、多約10%、多約5%、多約4%、多約3%、多約2%、多約1%、多約0%、少約1%、少約2%、少約5%、少約7%、少約10%、多約2倍、多約3倍、少約2倍、少約3倍之游離DNA。
  49. 如請求項45之醫藥組合物，其中該醫藥組合物中之該重組AAV之感染力比該參考醫藥組合物中之該重組AAV之該感染力高至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
  50. 如請求項46之醫藥組合物，其中該醫藥組合物之重組AAV聚集比該參考醫藥組合物中之重組AAV聚集水準少至少2%、5%、7%、10%、12%、15%、17%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、100%、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍或1000倍。
  51. 如請求項1至50中任一項之醫藥組合物，其中該轉殖基因係適合治療所關注之疾病，或以其他方式改善所關注之疾病、預防所關注之疾病或減緩所關注之疾病之進展的轉殖基因。
  52. 如請求項1至51中任一項之醫藥組合物，其中該人類個體經診斷患有nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)或糖尿病性視網膜病變(DR)、x性聯病或巴登氏病(Batten disease)。
  53. 如請求項1至51中任一項之醫藥組合物，其中該人類個體經診斷患有IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症(Duchenne muscular dystrophy)、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症(Becker muscular dystrophy)及散發性包涵體肌炎或激肽釋放素相關疾病。
  54. 如請求項1至19及22至53中任一項之醫藥組合物，其中該AAV編碼棕櫚醯-蛋白硫酯酶1 (PPT1)或三肽基-肽酶1 (TPP1)。
  55. 如請求項1至54中任一項之醫藥組合物，其中重組AAV基因體複本之量係基於載體基因體濃度。
  56. 如請求項1至54中任一項之醫藥組合物，其中重組AAV基因體複本之量係基於每次投與之基因體複本。
  57. 如請求項1至54中任一項之醫藥組合物，其中重組AAV基因體複本之量係基於向該人類個體投與之總基因體複本。
  58. 如請求項56之醫藥組合物，其中每次投與之基因體複本係每次脈絡膜上投與之該重組AAV之基因體複本。
  59. 如請求項57之醫藥組合物，其中所投與之該等總基因體複本係經脈絡膜上投與之該重組AAV之總基因體複本。
  60. 如請求項55之醫藥組合物，其中該載體基因體濃度(VGC)為約3×10 9GC/mL、約1×10 10GC/mL、約1.2×10 10GC/mL、約1.6×10 10GC/mL、約4×10 10GC/mL、約6×10 10GC/mL、約2×10 11GC/mL、約2.4×10 11GC/mL、約2.5×10 11GC/mL、約3×10 11GC/mL、約6.2×10 11GC/mL、約1×10 12GC/mL、約2.5×10 12GC/mL、約3×10 12GC/mL、約5×10 12GC/mL、約1.5×10 13GC/mL、約2×10 13GC/mL或約3×10 13GC/mL。
  61. 如請求項57及59中任一項之醫藥組合物，其中所投與之基因體複本之總數為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。
  62. 如請求項56及58中任一項之醫藥組合物，其中每次投與之基因體複本之總數為約6.0×10 10個基因體複本、約1.6×10 11個基因體複本、約2.5×10 11個基因體複本、約5.0×10 11個基因體複本、約3×10 12個基因體複本、約1.0×10 12個基因體複本、約1.5×10 12個基因體複本、約2.5×10 12個基因體複本或約3.0×10 13個基因體複本。
  63. 如請求項1至62中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
  64. 如請求項10至63中任一項之醫藥組合物，其中該參考醫藥組合物經投與一次、兩次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、十次、十五次、二十次、二十五次或三十次。
  65. 如請求項1至64中任一項之醫藥組合物，其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該醫藥組合物。
  66. 如請求項10至64中任一項之醫藥組合物，其中一天一次、一天兩次、一天三次、一天四次、一天五次、一天六次或一天七次投與該參考醫藥組合物。
  67. 如請求項1至66中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物含有泊洛沙姆407及泊洛沙姆188。
  68. 如請求項1至67中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含16-22%泊洛沙姆407。
  69. 如請求項1至67中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含0-16%泊洛沙姆188。
  70. 如請求項1至67中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含19%泊洛沙姆407及6%泊洛沙姆188。
  71. 如請求項1至67中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含18%泊洛沙姆407及6.5%泊洛沙姆188。
  72. 如請求項1至67中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含17.5%泊洛沙姆407及7%泊洛沙姆188。
  73. 如請求項1至72中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含經改良之杜貝爾寇磷酸鹽緩衝鹽水溶液(modified Dulbecco’s phosphate-buffered saline solution)及視情況選用之界面活性劑。
  74. 如請求項1至72中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物包含0.2 mg/mL氯化鉀、0.2 mg/mL磷酸二氫鉀、5.84 mg/mL氯化鈉、1.15 mg/mL無水磷酸氫二鈉、40.0 mg/mL (4% w/v)蔗糖及視情況選用之界面活性劑。
  75. 如請求項1至72中任一項之醫藥組合物，其中該組合物包含氯化鉀；磷酸二氫鉀；氯化鈉；無水磷酸氫二鈉；蔗糖；及視情況選用之界面活性劑。
  76. 一種治療個體之疾病之方法，該方法包括投與如請求項1至72中任一項之醫藥組合物。
  77. 一種治療個體之疾病之方法，該方法包括向該個體投與如請求項4或5之醫藥組合物，其中該醫藥組合物在投與時處於約2-10℃之溫度下。
  78. 一種治療個體之疾病之方法，該方法包括向該個體投與如請求項6或8之醫藥組合物，其中該醫藥組合物在投與時處於約20-25℃之溫度下。
  79. 如請求項76至78中任一項之方法，其中該醫藥組合物在小於約43 PSI之注射壓力下投與。
  80. 如請求項76至78中任一項之方法，其中該醫藥組合物在小於約65 PSI之注射壓力下投與。
  81. 如請求項76至78中任一項之方法，其中該醫藥組合物在小於約100 PSI之注射壓力下投與。
  82. 如請求項76至81中任一項之方法，其中該醫藥組合物係使用29規格針投與。
  83. 如請求項76至81中任一項之方法，其中該醫藥組合物係使用30規格針投與。
  84. 如請求項76至83中任一項之方法，其中該醫藥組合物在約10-15秒之注射時間內投與。
  85. 如請求項76至83中任一項之方法，其中該醫藥組合物在約5-30秒之注射時間內投與。
  86. 如請求項76至85中任一項之方法，其中該個體為人類。
  87. 如請求項76至86中任一項之方法，其中該疾病係選自由以下組成之群：nAMD (濕性AMD)、乾性AMD、視網膜靜脈阻塞(RVO)、糖尿病性黃斑水腫(DME)、糖尿病性視網膜病變(DR)、巴登氏病、IVA型黏多醣病(MPS IVA)、I型黏多醣病(MPS I)、II型黏多醣病(MPS II)、家族性高膽固醇血症(FH)、同合子型家族性高膽固醇血症(HoFH)、冠狀動脈疾病、腦血管疾病、杜顯氏肌肉失養症、肢帶肌肉失養症、貝克爾肌肉失養症及散發性包涵體肌炎及激肽釋放素相關疾病。
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