JP2023545424A - ゲル製剤などの脈絡膜上投与用製剤 - Google Patents
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Abstract
本明細書では、対象の眼の脈絡膜上腔に投与するための医薬組成物が提供される。医薬組成物は、導入遺伝子をコードする組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含むことができる。本明細書では、治療有効量の医薬組成物を必要とする対象に投与することによって、対象における疾患を治療又は予防するための方法も提供される。
Description
（優先権）
関連出願は、２０２０年１０月７日に出願された米国特許出願第６３／０８８，８８６号及び２０２１年２月９日に出願された米国特許出願第６３・１４７，５８４号に対する優先権の利益を主張するものであり、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
関連出願は、２０２０年１０月７日に出願された米国特許出願第６３／０８８，８８６号及び２０２１年２月９日に出願された米国特許出願第６３・１４７，５８４号に対する優先権の利益を主張するものであり、これらのそれぞれは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。
（電子的に提出された配列表への参照）
本出願は、２０２１年９月３０日に作成され、１０７，１２１バイトのサイズを有する「１２６５６－１４３－２２８＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」と題するテキストファイルとして本出願とともに提出された配列表を参照により組み込む。
本出願は、２０２１年９月３０日に作成され、１０７，１２１バイトのサイズを有する「１２６５６－１４３－２２８＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」と題するテキストファイルとして本出願とともに提出された配列表を参照により組み込む。
ヒトの眼は、非常に複雑で高度に発達した感覚器官であり、多くの疾患及び障害を起こしやすい。世界中の約２億８５００万人が視覚障害を有し、そのうちの３９００万人が盲人であり、２億４６００万人が中程度から重度の視覚障害を有する（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，２０１２，「Ｇｌｏｂａｌ Ｄａｔａ Ｏｎ Ｖｉｓｕａｌ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ２０１０，」Ｇｅｎｅｖａ：Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）。失明の主な原因のいくつかは、白内障（４７％）、緑内障（１２％）、加齢性黄斑変性症（ａｇｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｍａｃｕｌａｒ ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ、ＡＭＤ）（９％）、及び糖尿病性網膜症（５％）である（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，２００７，「Ｇｌｏｂａｌ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｖｏｉｄａｂｌｅ Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ：Ａｃｔｉｏｎ Ｐｌａｎ ２００６－２０１１，」Ｇｅｎｅｖａ：Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）。
遺伝子治療は、ある特定の眼疾患を治療するのに使用されてきた（例えば、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２７６５０号（国際公開第ＷＯ２０１７／１８１０２１（Ａ１）号）を参照されたい）。アデノ随伴ウイルス（Adeno-associated virus、ＡＡＶ）は、非病原性の広範な宿主及び細胞型指向性範囲の感染性（分裂細胞及び非分裂細胞の両方を含む）、並びに長期導入遺伝子発現を確立する能力の特性のために、遺伝子治療のための魅力的なツールである（例えば、Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ，２００５，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，２：４３）。
眼の遺伝子治療（例えば、硝子体内又は網膜下投与による）のために使用される現在の方法は、侵襲性であり、白内障、網膜剥離、及び中心窩における網膜色素上皮（retinal pigment epithelium、ＲＰＥ）からの光受容体の分離のリスクの増加などの深刻な欠点を有する。現在の眼の遺伝子治療からのセットバックを改善又は排除する療法に対する重要な満たされていない医学的必要性が存在する。
ディペンドウイルスと称されるパルボウイルスファミリーのメンバーであるアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、約４．７キロベース（ｋｂ）～６ｋｂの一本鎖線状ＤＮＡゲノムを有する小さな非エンベロープ二十面体ウイルスである。非病原性の広範な宿主及び細胞型指向性範囲の感染性（分裂細胞及び非分裂細胞の両方を含む）、並びに長期導入遺伝子発現を確立する能力の特性により、ＡＡＶは遺伝子治療のための魅力的なツールである（例えば、Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ，２００５，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，２：４３）。
構築物ＩＩは、脈絡膜上腔への注射によって送達される治療として研究されている。脈絡膜上腔（suprachoroidal space、ＳＣＳ）は、強膜と脈絡膜との間の領域であり、薬物溶液の注射の際に拡大する（Ｈａｂｏｔ－Ｗｉｌｎｅｒ，２０１９）。ＳＣＳ空間は、注射された溶液が生理学的プロセスによって除去されるにつれて、その注射前のサイズに回復する。薬物溶液はＳＣＳ内に拡散し、隣接する組織に吸収される。脈絡膜の毛細血管は、低分子量オスモライトに対して透過性である。本開示は、脈絡膜上腔におけるより長い滞留時間、したがって改善された有効性をもたらす医薬組成物を提供するという満たされていない必要性に対処する。
一態様では、ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に好適な医薬組成物が本明細書で提供され、医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、医薬品は、温度上昇とともに増加する粘度及び／又はより高い弾性率を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、約２７～３２℃のゲル化温度を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、約１５～９０秒のゲル化時間を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｓ-1～約１０００ｓ-1の剪断速度で測定されるとき、５℃で約１８３ｍＰａｓの粘度を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｓ-1～１０００ｓ-1の剪断速度で測定されるとき、５℃で約１８３ｍＰａｓ未満の粘度を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｓ-1～１０００ｓ-1での剪断速度で測定されるとき、２０℃で約１８３ｍＰａｓの粘度を有する。いくつかの実施形態では、組成物は、約１ｓ-1～１０００ｓ-1での剪断速度で測定されるとき、２０℃で約１８３ｍＰａｓ未満の粘度を有する。
いくつかの実施形態では、２７℃未満での本明細書で提供される医薬組成物の弾性率は、約０．１Ｐａ未満若しくは約０．１Ｐａ、約０．０１Ｐａ未満若しくは約０．０１Ｐａ、約０．００１Ｐａ未満若しくは約０．００１Ｐａ又は０である。いくつかの実施形態では、約３２℃～３５℃での本明細書で提供される医薬組成物の弾性率は、約０．１Ｐａ若しくは少なくとも約０．１Ｐａ、約１Ｐａ若しくは少なくとも約１Ｐａ、約１０Ｐａ若しくは少なくとも約１０Ｐａ、約１００Ｐａ若しくは少なくとも約１００Ｐａ、約１０００Ｐａ若しくは少なくとも約１０００Ｐａ、約１０，０００Ｐａ若しくは少なくとも約１０，０００Ｐａ、又は約１００，０００Ｐａ若しくは少なくとも約１００，０００Ｐａである。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後のクリアランス時間は、脈絡膜上投与後の参照医薬組成物のクリアランス時間と同等であるか又はより長く、参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物又は参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、参照医薬組成物は、約３２～３５℃での医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後の周囲への拡散は、脈絡膜上投与後の参照医薬組成物の周囲への拡散と比較してより小さく、参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物又は参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、参照医薬組成物は、約３２～３５℃での医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する。いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後の周囲への拡散は、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％小さい。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後の注射部位における厚さは、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注射部位における厚さと比較して同等であるか又はより厚く、参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物又は参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、参照医薬組成物は、約３２～３５℃での医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子の発現レベルは、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後に導入遺伝子の発現レベルが眼内で検出される期間と比較して、脈絡膜上投与後により長い期間にわたって眼内で検出され、参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物又は参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、参照医薬組成物は、約３２～３５℃での医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後の眼内の導入遺伝子の濃度は、参照医薬組成物の眼内脈絡膜上投与の導入遺伝子の濃度と比較して同等であるか又はより高く、参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物又は参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、参照医薬組成物は、約３２～３５℃での医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後の注射部位における形質導入率は、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注射部位における形質導入率と比較して同等であるか又はより高く、参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物又は参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、参照医薬組成物は、約３２～３５℃での医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルは、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルと比較して同等であるか又は減少しており、参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物又は参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、参照医薬組成物は、約３２～３５℃での医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の粘度及び／又は弾性率並びに参照医薬組成物の粘度及び／又は弾性率は、同じ剪断速度で測定される。いくつかの実施形態では、医薬組成物の粘度及び／又は弾性率は、少なくとも約１，０００ｓ－１、２，０００ｓ－１、３，０００ｓ－１、４，０００ｓ－１、５，０００ｓ－１、６，０００ｓ－１、７，０００ｓ－１、８，０００ｓ－１、９，０００ｓ－１、１０，０００ｓ－１、１５，０００ｓ－１、２０，０００ｓ－１、又は３０，０００ｓ－１の剪断速度で測定される。
いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは構築物ＩＩである。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）抗体である。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６からなる群から選択される１つ以上のアデノ随伴ウイルス血清型由来の成分を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶはＡＡＶ８である。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶはＡＡＶ９である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物はスクロースを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物はスクロースを含まない。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間は、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％長い。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間は、約３０分～約２０時間、約２時間～約２０時間、約３０分～約２４時間、約１時間～約２時間、約３０分～約９０日、約３０分～約６０日、約３０分～約３０日、約３０分～約２１日、約３０分～約１４日、約３０分～約７日、約３０分～約３日、約３０分～約２日、約３０分～約１日、約４時間～約９０日、約４時間～約６０日、約４時間～約３０日、約４時間～約２１日、約４時間～約１４日、約４時間～約７日、約４時間～約３日、約４時間～約２日、約４時間～約１日、約４時間～約８時間、約４時間～約１６時間、約４時間～約２０時間、約１日～約９０日、約１日～約６０日、約１日～約３０日、約１日～約２１日、約１日～約１４日、約１日～約７日、約１日～約３日、約２日～約９０日、約３日～約９０日、約３日～約６０日、約３日～約３０日、約３日～約２１日、約３日～約１４日、又は約３日～約７日である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間は、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日より前ではない。いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後の参照医薬組成物のクリアランス時間は、多くとも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、又は１４日である。いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、ＳＣＳから、又は眼からのクリアランス時間である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注射部位における厚さは、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％厚い。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注射部位における厚さは、約５００μｍ～約３．０ｍｍ、７５０μｍ～約２．８ｍｍ、約７５０μｍ～約２．５ｍｍ、約７５０μｍ～約２ｍｍ、又は約１ｍｍ～約２ｍｍである。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注射部位における厚さは、少なくとも約５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、１０００μｍ、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、２．５ｍｍ、３ｍｍ、３．５ｍｍ、４ｍｍ、４．５ｍｍ、５ｍｍ、５．５ｍｍ、６ｍｍ、６．５ｍｍ、７ｍｍ、７．５ｍｍ、８ｍｍ、８．５ｍｍ、９ｍｍ、９．５ｍｍ、又は１０ｍｍである。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注射部位における厚さは、多くとも約１ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、２５ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１μｍ、５μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２０μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、又は１０００μｍである。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注射部位における厚さは、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、又は少なくとも５年間持続する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の眼内の導入遺伝子の濃度は、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％高い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、医薬組成物の脈絡膜上投与後、少なくとも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日にわたって眼内で検出される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後、多くとも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日後眼内で検出される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のより長い期間は、少なくとも４時間、８時間、１２時間、１６時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日長い。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルは、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルと比較して同である等か又は減少している。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルは、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％減少している。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注射部位における形質導入率は、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％高い。
いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶ安定性は、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶ安定性と比較して、医薬組成物中でより高い。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶ安定性は、組換えＡＡＶの感染性によって決定される。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶ安定性は、組換えＡＡＶの凝集のレベルによって決定される。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶ安定性は、組換えＡＡＶによって放出される遊離ＤＮＡのレベルによって決定される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物中の遊離ＤＮＡのレベルと比較して、約５０％多い、約２５％多い、約１５％多い、約１０％多い、約５％多い、約４％多い、約３％多い、約２％多い、約１％多い、約０％多い、約１％少ない、約２％少ない、約５％少ない、約７％少ない、約１０％少ない、約２倍多い、約３倍多い、約２分の１、約３分の１の遊離ＤＮＡを含む。
いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶの感染性と比較して、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、又は１０００倍高い感染性を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶの凝集と比較して、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２分の１、３分の１、５分の１、１０分の１、１００分の１、又は１０００分の１の組換えＡＡＶ凝集を含む。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、関心対象の疾患を治療するか、又はそうでなければ改善するか、予防するか、若しくはその進行を遅らせるのに好適な導入遺伝子である。
いくつかの実施形態では、ヒト対象は、ｎＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ）、萎縮型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（retinal vein occlusion、ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（diabetic macular edema、ＤＭＥ）、又は糖尿病性網膜症（diabetic retinopathy、ＤＲ）、ｘ連鎖又はバッテン病と診断されている。いくつかの実施形態では、ヒト対象は、緑内障又は非感染性ブドウ膜炎と診断されている。いくつかの実施形態では、ヒト対象は、ムコ多糖症ＩＶＡ型（mucopolysaccharidosis type IVA、ＭＰＳ ＩＶＡ）、ムコ多糖症Ｉ型（mucopolysaccharidosis type I、ＭＰＳ Ｉ）、ムコ多糖症ＩＩ型（mucopolysaccharidosis type II、ＭＰＳ ＩＩ）、家族性高コレステロール血症（familial hypercholesterolemia、ＦＨ）、同型接合性家族性高コレステロール血症（homozygous familial hypercholesterolemia、ＨｏＦＨ）、冠状動脈疾患、脳血管疾患、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー及び孤発性封入体筋炎、又はカリクレインに関連する疾患と診断されている。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（Palmitoyl-Protein Thioesterase 1、ＰＰＴ１）又はトリペプチジルペプチダーゼ１（Tripeptidyl-Peptidase 1、ＴＰＰ１）をコードする。他の実施形態では、ＡＡＶは、抗ＶＥＧＦ融合タンパク質、抗ＶＥＧＦ抗体若しくはその抗原結合断片、抗カリクレイン抗体若しくは抗原結合断片、抗ＴＮＦ抗体若しくは抗原結合断片、抗Ｃ３抗体若しくは抗原結合断片、又は抗Ｃ５抗体若しくは抗原結合断片をコードする。
いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、ベクターゲノム濃度に基づく。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、投与当たりのゲノムコピーに基づく。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、ヒト対象に投与される全ゲノムコピーに基づく。いくつかの実施形態では、投与当たりのゲノムコピーは、脈絡膜上投与当たりの組換えＡＡＶのゲノムコピーである。
いくつかの実施形態では、投与される全ゲノムコピーは、脈絡膜上に投与される組換えＡＡＶの全ゲノムコピーである。いくつかの実施形態では、ベクターゲノム濃度（vector genome concentration、ＶＧＣ）は、約３×１０9ＧＣ／ｍＬ、約１×１０10ＧＣ／ｍＬ、約１．２×１０10ＧＣ／ｍＬ、約１．６×１０10ＧＣ／ｍＬ、約４×１０10ＧＣ／ｍＬ、約６×１０10ＧＣ／ｍＬ、約２×１０11ＧＣ／ｍＬ、約２．４×１０11ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０11ＧＣ／ｍＬ、約３×１０11ＧＣ／ｍＬ、約６．２×１０11ＧＣ／ｍＬ、約１×１０12ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０12ＧＣ／ｍＬ、約３×１０12ＧＣ／ｍＬ、約５×１０12ＧＣ／ｍＬ、約６×１０12ＧＣ／ｍＬ、約１．５×１０13ＧＣ／ｍＬ、約２×１０13ＧＣ／ｍＬ、又は約３×１０13ＧＣ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、投与される全ゲノムコピーは、約６．０×１０10ゲノムコピー、約１．６×１０11ゲノムコピー、約２．５×１０11ゲノムコピー、約３．０×１０11ゲノムコピー、約５．０×１０11ゲノムコピー、約６．０×１０11ゲノムコピー、約１．５×１０12ゲノムコピー、約３×１０12ゲノムコピー、約１．０×１０12ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０12ＧＣ／ｍＬ、又は約３．０×１０13ゲノムコピーである。いくつかの実施形態では、投与される全ゲノムコピーは、約６．０×１０10ゲノムコピー、約１．６×１０11ゲノムコピー、約２．５×１０11ゲノムコピー、約５．０×１０11ゲノムコピー、約１．５×１０12ゲノムコピー、約３×１０12ゲノムコピー、約１．０×１０12ゲノムコピー、約２．５×１０12ゲノムコピー、又は約３．０×１０13ゲノムコピーである。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、又は３０回投与される。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、又は３０回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回、又は１日７回投与される。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回、又は１日７回投与される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物はポロキサマー４０７及びポロキサマー１８８を含有する。いくつかの実施形態では、組成物は、１６～２２％のポロキサマー４０７を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、０～１６％のポロキサマー１８８を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１９％のポロキサマー４０７及び６％のポロキサマー１８８を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１８％のポロキサマー４０７及び６．５％のポロキサマー１８８を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、１７．５％のポロキサマー４０７及び７％のポロキサマー１８８を含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、改変ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水溶液、及び任意選択で界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのリン酸二水素カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬのリン酸水素二ナトリウム無水物、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のスクロース、及び任意選択で界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム無水物、スクロース、及び任意選択で界面活性剤を含む。
別の態様では、対象における疾患を治療する方法であって、本明細書で提供される医薬組成物を対象に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、投与されるとき、約２～１０℃の温度である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、投与されるとき、約２０～２５℃の温度である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約４３ＰＳＩ未満の注射圧力で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約６５ＰＳＩ未満の注射圧力で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１００ＰＳＩ未満の注射圧力で投与される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２９ゲージ針を使用して投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、３０ゲージ針を使用して投与される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１０～１５秒の注射時間で投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約５～３０秒の注射時間で投与される。
いくつかの実施形態では、対象はヒトである。
いくつかの実施形態では、疾患は、ｎＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ）、萎縮型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、バッテン病、ムコ多糖症ＩＶＡ型（ＭＰＳ ＩＶＡ）、ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、同型接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、冠状動脈疾患、脳血管疾患、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー及び孤発性封入体筋炎並びにカリクレインに関連する疾患からなる群から選択される。
本明細書では、対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に好適な導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む医薬組成物が提供される。対象は、セクション４．５に記載される１つ以上の疾患と診断された対象であり得る。ＡＡＶベクターはセクション４．４に記載されており、そのようなベクターの投与量はセクション４．３に記載されている。いくつかの実施形態では、セクション４．１に提供される医薬組成物は、セクション４．２に記載される１つ以上の機能特性を有するように製剤化される。ある特定の実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、様々な利点、例えば、増大した又はより遅いクリアランス時間（セクション４．２．１）、減少した周りの広がり（セクション４．２．２）、増加したＳＣＳ厚さ（セクション４．２．３）、減少した血管拡張及び／又は血管漏出の減少（セクション４．２．４）、注射部位におけるＡＡＶレベルの増加及び形質導入の速度の増加（第４．２．５セクション）、並びに医薬組成物がＳＣＳに投与された後の導入遺伝子の増加した濃度を有する。理論に束縛されるものではないが、機能特性は、セクション４．１に開示されるような熱応答性製剤を使用して達成することができる。また本明細書では、関連研究において使用され得るアッセイ（セクション４．６）も提供される。
４．１ 医薬組成物の製剤
本開示は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む、脈絡膜上投与に好適な医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、眼外温度（約３２～３５℃）で異なる粘度（又は「損失弾性率（Ｇ’’）」）値特性を有するいくつかの医薬組成物を使用して、導入遺伝子をコードするＡＡＶを投与する。いくつかの実施形態では、眼外温度（約３２～３５℃）で異なる弾性／貯蔵弾性率（Ｇ’）」）特性を有するいくつかの医薬組成物を使用して、導入遺伝子をコードするＡＡＶを投与する。
本開示は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む、脈絡膜上投与に好適な医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、眼外温度（約３２～３５℃）で異なる粘度（又は「損失弾性率（Ｇ’’）」）値特性を有するいくつかの医薬組成物を使用して、導入遺伝子をコードするＡＡＶを投与する。いくつかの実施形態では、眼外温度（約３２～３５℃）で異なる弾性／貯蔵弾性率（Ｇ’）」）特性を有するいくつかの医薬組成物を使用して、導入遺伝子をコードするＡＡＶを投与する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は熱応答性である。「熱応答性」という用語は、異なる温度で異なる物理的特性を示す物質を説明するために当該技術分野において一般的に知られている。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、室温（例えば、約２０～２５℃）で、眼外温度（約３２～３５℃）におけるものよりも低い粘度、低い損失弾性率（Ｇ’’）、及び／又は低い弾性／貯蔵弾性率（Ｇ’）を有する。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、冷却されたとき（例えば、約２～１０℃）に、眼外温度（約３２～３５℃）におけるものよりも低い粘度及び／又は低い弾性率（Ｇ’）を有する。本明細書で提供される医薬組成物は、医薬組成物の粘度が眼外温度（約３２～３５℃）での粘度よりも低い温度（例えば、冷却又は室温）で対象の眼に投与され得る。いかなる特定の理論にも束縛されることを望むものではないが、対象の眼への投与（例えば、脈絡膜上投与）時の温度の変化は、粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）の増加をもたらすことができ、参照医薬組成物と比較して、注射部位付近の組成物の保持時間の増加をもたらし、参照医薬組成物は、眼外温度（約３２～３５℃）でより低い粘度を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃における医薬組成物は、約３２～３５℃における水の粘度よりも高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）値を有する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃における医薬組成物は、約３２～３５℃における対照の粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）よりも高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）値を有する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃における医薬組成物は、約３２～３５℃における網膜下注射に通常使用される溶液の粘度よりも高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）値を有する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃における医薬組成物は、約３２～３５℃におけるＰＢＳ又はｄＰＢＳの粘度よりも高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）値を有する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃における医薬組成物は、約３２～３５℃におけるハンクス平衡塩溶液（Ｈａｎｋ’ｓ Ｂａｌａｎｃｅｄ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、ＨＢＳＳ）の粘度よりも高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）値を有する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃における参照医薬組成物は、約３２～３５℃における医薬組成物よりも低い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有する。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、約２０～２５℃における医薬組成物と同じ又は類似の粘度を有する。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、対照溶液（例えば、ＰＢＳ、水、又はＨＢＳＳ）である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物はスクロースを含む。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、ＡＡＶ網膜下注射に一般的に使用される医薬組成物である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は熱応答性ではなく、例えば、参照医薬組成物は、約２０～２５℃において約３２～３５℃と実質的に同じ粘度及び／若しくは弾性率（Ｇ’）を有するか、又は高温においてより高い粘度及び／若しくは弾性率（Ｇ’）を有さない。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約３２～３５℃で、例えば、０、０．００１、０．０１、０．１若しくは１ｓ-1剪断速度で、又は約１０００ｓ－１若しくは少なくとも約１０００ｓ－１の剪断速度で、約、少なくとも約、又は多くとも約１０ｃＰ、１５ｃＰ、２０ｃＰ、２５ｃＰ、３０ｃＰ、３５ｃＰ、４０ｃＰ、４５ｃＰ、５０ｃＰ、６０ｃＰ、７０ｃＰ、８０ｃＰ、９０ｃＰ、１００ｃＰ、１５０ｃＰ、２００ｃＰ、２５０ｃＰ、３００ｃＰ、３５０ｃＰ、４００ｃＰ、４５０ｃＰ、５００ｃＰ、５５０ｃＰ、６００ｃＰ、６５０ｃＰ、７００ｃＰ、８００ｃＰ、９００ｃＰ、１０００ｃＰ、２、０００ｃＰ、３、０００ｃＰ、４、０００ｃＰ、５、０００ｃＰ、６、０００ｃＰ、７、０００ｃＰ、８、０００ｃ、９、０００ｃＰ、１０、０００ｃＰ、１２、０００ｃＰ、若しくは１５、０００ｃＰの粘度を有する。いくつかの実施形態では、剪断速度は、約１００ｓ-1、５０ｓ-1、１０ｓ-1、１ｓ-1、０．１ｓ-1、０．０１ｓ-1、０．００１ｓ-1、若しくは０．０００１ｓ-1又は約それ未満である。いくつかの実施形態では、医薬組成物又は参照医薬組成物の粘度は、例えば、約１００ｓ-1、５０ｓ-1、１０ｓ-1、１ｓ-1、０．０１ｓ-1、０．００１ｓ-1、若しくは０．０００１ｓ-1又は約それ未満の剪断速度において本明細書に開示される任意の粘度である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約３２～３５℃で、又は参照医薬組成物（又は対照医薬組成物若しくは同等の医薬組成物）は、約３２～３５℃で、約若しくは少なくとも約５ｃＰ、約若しくは少なくとも約１０ｃＰ、約若しくは少なくとも約１５ｃＰ、約若しくは少なくとも約２０ｃＰ、約若しくは少なくとも約２５ｃＰ、約若しくは少なくとも約３０ｃＰ、約若しくは少なくとも約３５ｃＰ、約若しくは少なくとも約４０ｃＰ、約若しくは少なくとも約４５ｃＰ、約若しくは少なくとも約５０ｃＰ、約若しくは少なくとも約６０ｃＰ、約若しくは少なくとも約７０ｃＰ、約若しくは少なくとも約８０ｃＰ、約若しくは少なくとも約９０ｃＰ、１００ｃＰ、約若しくは少なくとも約１１５ｃＰ、約若しくは少なくとも約１２０ｃＰ、約若しくは少なくとも約１２５ｃＰ、約若しくは少なくとも約１３０ｃＰ、約若しくは少なくとも約１３５ｃＰ、約若しくは少なくとも約１４０ｃＰ、約若しくは少なくとも約１４５ｃＰ、約若しくは少なくとも約１５０ｃＰ、約若しくは少なくとも約１６０ｃＰ、約若しくは少なくとも約１７０ｃＰ、約若しくは少なくとも約１８０ｃＰ、約若しくは少なくとも約１９０ｃＰ、約若しくは少なくとも約２００ｃＰ、約若しくは少なくとも約３００ｃＰ、約若しくは少なくとも約４００ｃＰ、約若しくは少なくとも約５００ｃＰ、約若しくは少なくとも約６００ｃＰ、約若しくは少なくとも約７００ｃＰ、約若しくは少なくとも約８００ｃＰ、約若しくは少なくとも約９００ｃＰ、約若しくは少なくとも約１０００ｃＰ、約若しくは少なくとも約１５００ｃＰ、約若しくは少なくとも約２０００ｃＰ、約若しくは少なくとも約２５００ｃＰ、約若しくは少なくとも約３０００ｃＰ、約若しくは少なくとも約３５００ｃＰ、約若しくは少なくとも約４０００ｃＰ、約若しくは少なくとも約４５００ｃＰ、約若しくは少なくとも約５０００ｃＰ、約若しくは少なくとも約５５００ｃＰ、約若しくは少なくとも約６０００ｃＰ、約若しくは少なくとも約６５００ｃＰ、約若しくは少なくとも約７０００ｃＰ、約若しくは少なくとも約７５００ｃＰ、約若しくは少なくとも約８０００ｃＰ、約若しくは少なくとも約９０００ｃＰ、約若しくは少なくとも約１００００ｃＰ、約若しくは少なくとも約１×１０3ｃＰ、約若しくは少なくとも約３×１０3ｃＰ、約若しくは少なくとも約１×１０4ｃＰ、約若しくは少なくとも約３×１０4ｃＰ、約若しくは少なくとも約１×１０5ｃＰ、約若しくは少なくとも約１．７×１０5ｃＰ、約若しくは少なくとも約３×１０5ｃＰ、約若しくは少なくとも約１×１０6ｃＰ、約若しくは少なくとも約３×１０6ｃＰ、約若しくは少なくとも約１×１０7ｃＰ、約若しくは少なくとも約３×１０7ｃＰ、約若しくは少なくとも約１×１０8ｃＰ、約若しくは少なくとも約３×１０8ｃＰである粘度（例えば、約若しくは少なくとも約１０００ｓ-1の剪断速度で測定される）を有する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃での粘度（例えば、約又は少なくとも約１０００ｓ-1の剪断速度で測定される）は、約２５ｃＰ～約１×１０6ｃＰ、約２５ｃＰ～約１×１０4ｃＰ、約２５ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約２５ｃＰ～約１×１０3ｃＰ、約１００ｃＰ～約１×１０6ｃＰ、約１００ｃＰ～約１×１０4ｃＰ、約１００ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１００ｃＰ～約１×１０3ｃＰである。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃での粘度（例えば、約若しくは少なくとも約１０００ｓ-1の剪断速度で測定される）は、約２５ｃＰ～約３×１０6ｃＰ、約１０ｃＰ～約３×１０8ｃＰ、約５０ｃＰ～約５，０００ｃＰ、約１０ｃＰ～約１５０００ｃＰ、２５ｃＰ～約１５００ｃＰ、約５０ｃＰ～約１５００ｃＰ、約２５ｃＰ～約３×１０4ｃＰである。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約３２～３５℃で、少なくとも約２５ｃＰ～約３×１０6ｃＰ、少なくとも約１０ｃＰ～約３×１０8ｃＰ、少なくとも約５０ｃＰ～約５０００ｃＰ、少なくとも約１０ｃＰ～約１５０００ｃＰ、少なくとも約２５ｃＰ～約１５００ｃＰ、少なくとも約５０ｃＰ～約１５００ｃＰ、又は少なくとも約２５ｃＰ～約３×１０4ｃＰである粘度（例えば、約若しくは少なくとも約１０００ｓ-1の剪断速度で測定される）を有する。いくつかの実施形態では、同等の医薬組成物、又は参照医薬組成物、又は対照は、約３２～３５℃で、約若しくは多くとも１ｃＰ、約若しくは多くとも２ｃＰ、約若しくは多くとも３ｃＰ、約若しくは多くとも４ｃＰ、約若しくは多くとも５ｃＰ、約若しくは多くとも６ｃＰ、約若しくは多くとも７ｃＰ、約若しくは多くとも８ｃＰ、約若しくは多くとも９ｃＰ、約若しくは多くとも１０ｃＰ、約若しくは多くとも１５ｃＰ、約若しくは多くとも２０ｃＰ、約若しくは多くとも２５ｃＰ、約若しくは多くとも３０ｃＰ、約若しくは多くとも３５ｃＰ、約若しくは多くとも４０ｃＰ、約若しくは多くとも４５ｃＰ、約若しくは多くとも５０ｃＰ、約若しくは多くとも５５ｃＰ、約若しくは多くとも６０ｃＰ、約若しくは多くとも６５ｃＰ、約若しくは多くとも７０ｃＰ、約若しくは多くとも７５ｃＰ、約若しくは多くとも８０ｃＰ、約若しくは多くとも８５ｃＰ、約若しくは多くとも９０ｃＰ、約若しくは多くとも９５ｃＰ、約若しくは多くとも１００ｃＰ、約若しくは多くとも２００ｃＰ、約若しくは多くとも３００ｃＰ、約若しくは多くとも４００ｃＰ、約若しくは多くとも５００ｃＰの粘度（例えば、約若しくは少なくとも約１０００ｓ-1の剪断速度で測定される）を有する。いくつかの実施形態では、同等の医薬組成物、又は参照医薬組成物、又は対照は、約３２～３５℃で、約１ｃＰ～約２５ｃＰ、約１ｃＰ～約２０ｃＰ、約１ｃＰ～約２４ｃＰ、約１ｃＰ～約１０ｃＰ、約１ｃＰ～約５０ｃＰ、約１ｃＰ～約１００ｃＰ、約５ｃＰ～約５０ｃＰ、約１ｃＰ～約５ｃＰ、又は約１ｃＰ～約２００ｃＰの粘度を有する。
いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、約３２～３５℃で、約又１ｃＰ又は約１ｃＰ未満の粘度（例えば、約１０００ｓ-1又は少なくとも約１０００ｓ-1の剪断速度での）を有する。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、約３２～３５℃で、約１ｃＰ未満の粘度（例えば、少なくとも約１０００ｓ-1の剪断速度での）を有する。
いくつかの実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、２０℃で≦１８３ｍＰａｓの粘度を有する。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、５℃で≦１８３ｍＰａｓの粘度を有する。粘度は剪断速度に依存するので、医薬組成物の「粘度」は、０．０１ｓ－１～１００，０００ｓ－１の剪断速度の間の任意の点における粘度である。いくつかの実施形態では、粘度についての単位は、ｃＰ又はｍＰａｓとして定義することができる。場合によっては、ｃＰ及びｍＰａｓは互換的に使用される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、３２～３５℃で２６５未満～６５５ｍＰａｓの粘度を有する。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃での医薬組成物の粘度は、少なくとも約１０ｃＰ、又は少なくとも約１００ｃＰ、又は少なくとも約１０００ｃＰ、又は少なくとも約１０，０００ｃＰ、又は少なくとも約７０，０００ｃＰ、又は最大約２００，０００ｃＰ、又は最大約２５０，０００ｃＰ、又は最大約３００，０００ｃＰ以上である。いくつかの実施形態では、剪断速度は、約若しくは少なくとも約１０００／秒の剪断速度である。いくつかの実施形態では、製剤は、少なくとも３００，０００ｍＰａｓのゼロ剪断粘度によって特徴付けられる。いくつかの実施形態では、製剤は、１０００ｓ－１の剪断速度での約４００ｍＰａｓ以下の粘度によって更に特徴付けられる。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、参照医薬製剤、又は約３２～３５℃でより低い粘度及び／若しくは弾性率（Ｇ’）を有する製剤と比較して、注射後により長い期間（異なる時点で測定される）にわたってＳＣＳ（又は眼）内に留まる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、注射部位でＳＣＳ又は厚さを拡張する（例えば、参照医薬組成物、又は約３２～３５℃でより低い粘度及び／若しくは弾性率（Ｇ’）を有する製剤と比較して）（セクション４．２．３を参照されたい）。
いくつかの実施形態では、２７℃未満での本明細書で提供される医薬組成物の弾性率は、約０．１Ｐａ未満若しくは約０．１Ｐａ、約０．０１Ｐａ未満若しくは約０．０１Ｐａ、約０．００１Ｐａ未満若しくは約０．００１Ｐａ又は０である。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物の弾性率は、３２℃～３５℃で、約０．１Ｐａ若しくは少なくとも約０．１Ｐａ、約１Ｐａ若しくは少なくとも約１Ｐａ、約１０Ｐａ若しくは少なくとも約１０Ｐａ、約１００Ｐａ若しくは少なくとも約１００Ｐａ、約１０００Ｐａ若しくは少なくとも約１０００Ｐａ、約１０，０００Ｐａ若しくは少なくとも約１０，０００Ｐａ、又は約１００，０００Ｐａ若しくは少なくとも約１００，０００Ｐａである。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２７℃を超えるゲル化温度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、３２℃未満のゲル化温度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約２７～３２℃を超えるゲル化温度を有する。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、約２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、又は３５℃のゲル化温度を有する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約１０秒より長いゲル化時間を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約１５秒より長いゲル化時間を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約１０～１５秒、約１５～２０秒、約２０～２５秒、約２５～３０秒、約３０～３５秒、約３５～４０秒、約４０～４５秒、約４５～５０秒、約５０～５５秒、約５５～６０秒、約６０～６５秒、約６５～７０秒、約７０～７５秒、約７５～８０秒、約８０～８５秒、又は約８５～９０秒のゲル化時間を有する。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、９０秒未満のゲル化時間である。いくつかの実施形態では、ゲル化時間は、約３４℃で決定される。いくつかの実施形態では、ゲル化時間は、約３２～３４℃で決定される。いくつかの実施形態では、医薬組成物のゲル化時間は、当該組成物の注射時間よりも長い。いくつかの実施形態では、ゲル化時間は、注射時間よりも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％又は９０％超長い。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約３２～３５℃で、投与後少なくとも２時間、注射部位（例えば、ＳＣＳ）の少なくとも一部を少なくとも５００μｍ又は約５００μｍ～約３ｍｍの厚さに拡張させるのに十分な粘度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物の粘度は、約３２～３５℃で、注射部位（例えば、ＳＣＳ）を約７５０μｍ～約２．８ｍｍ、約７５０μｍ～約２．５ｍｍ、約７５０μｍ～約２ｍｍ、又は約１ｍｍ～約２ｍｍの厚さに拡張させるのに十分である。いくつかの実施形態では、医薬組成物の粘度は、約３２～３５℃で、投与後少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、又は少なくとも５年間、注射部位（例えば、ＳＣＳ）を約５００μｍ～約３ｍｍの厚さに拡張させるのに十分である。いくつかの実施形態では、医薬組成物の粘度は、約３２～３５℃で、投与後少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、又は少なくとも２４時間、注射部位（例えば、ＳＣＳ）を約１ｍｍ～約３ｍｍの厚さに拡張させるのに十分である。いくつかの実施形態では、医薬組成物の粘度は、約３２～３５℃で、投与後少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、又は少なくとも５年間、注射部位（例えば、ＳＣＳ）を約１ｍｍ～約２ｍｍの厚さに拡張させるのに十分である。いくつかの実施形態では、医薬組成物の粘度は、約３２～３５℃で、投与後少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、又は少なくとも５年間、注射部位（例えば、ＳＣＳ）を約２ｍｍ～約３ｍｍの厚さに拡張させるのに十分である。いくつかの実施形態では、医薬組成物の粘度は、約３２～３５℃で、注射部位（例えば、ＳＣＳ）を約７５０μｍ～約２．８ｍｍ、約７５０μｍ～約２．５ｍｍ、約７５０μｍ～約２ｍｍ、又は約１ｍｍ～約２ｍｍの厚さに無期限に拡張させるのに十分である。無期限は、注射部位（例えば、ＳＣＳ）における医薬組成物の安定性に少なくとも部分的に起因して達成され得る。
いくつかの実施形態では、注射部位（例えば、ＳＣＳ）を少なくとも５００μｍ、又は約５００μｍ～約３ｍｍの厚さに拡張させるのに十分な粘度を有する約３２～３５℃での医薬組成物は、約３２～３５℃の水の粘度（すなわち、約１ｃＰ）を超える粘度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約３２～３５℃で、注射部位（例えば、ＳＣＳ）を少なくとも約５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、１０００μｍ、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、２．５ｍｍ、３ｍｍ、３．５ｍｍ、４ｍｍ、４．５ｍｍ、５ｍｍ、５．５ｍｍ、６ｍｍ、６．５ｍｍ、７ｍｍ、７．５ｍｍ、８ｍｍ、８．５ｍｍ、９ｍｍ、９．５ｍｍ、１０ｍｍ、又は１０ｍｍ超の厚さに拡張させるのに十分な粘度を有する。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、約３２～３５℃で、注射部位を多くとも約１ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、２５ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１μｍ、５μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２０μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、１０００μｍ、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、２．５ｍｍ、３ｍｍ、３．５ｍｍ、４ｍｍ、４．５ｍｍ、５ｍｍ、５．５ｍｍ、６ｍｍ、６．５ｍｍ、７ｍｍ、７．５ｍｍ、８ｍｍ、８．５ｍｍ、９ｍｍ、９．５ｍｍ、又は１０ｍｍの厚さに拡張させるのに十分な粘度を有する。
本明細書に開示される医薬組成物を使用して、セクション４．５に記載される疾患（例えば、眼疾患）を治療する方法も本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、眼疾患を治療する方法は、有効量の医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター）を対象（例えば、ヒト）に投与することを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）に投与される。いくつかの実施形態では、ＳＣＳに投与されたときに治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量は、網膜下に投与されたときに治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量を下回る。いくつかの実施形態では、ＳＣＳに投与されたときに治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量は、硝子体内に投与されたときに治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量を下回る。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＳに投与されるとき、網膜下投与を介して又は硝子体内投与を介して投与されるときに同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＳに投与されるとき、網膜下投与を介して又は硝子体内投与を介して投与されるときに同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、対象において治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量は、ＳＣＳに投与されたときに対象において治療応答を誘発するのに十分な参照医薬組成物の有効量と比較して低い。いくつかの実施形態では、ＳＣＳに投与されたときに治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量は、網膜下に投与されたときに治療応答を誘発するのに十分な参照医薬組成物の有効量を下回る。いくつかの実施形態では、ＳＣＳに投与されたときに治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量は、硝子体内に投与されたときに治療応答を誘発するのに十分な参照医薬組成物の有効量を下回る。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物の粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）よりも高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、挿入部位の近くに実質的に局在化される（セクション４．２．１及びセクション４．２．２を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与されるときと比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与されるときに、より高いレベルの導入遺伝子発現（濃度）をもたらす（セクション４．２．６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物が網膜下、硝子体内、又はＳＣＳ内に投与されるときと比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与されるときに、より高いレベルの導入遺伝子発現（濃度）をもたらす（セクション４．２．６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与されるときと比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与されるときに、より高いレベルのＡＡＶをもたらす（セクション４．２．５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物が網膜下、硝子体内、又はＳＣＳ内に投与されるときと比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与されるときに、より高いレベルのＡＡＶをもたらす（セクション４．２．５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与されるときと比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与されるときに、注射部位におけるより高い形質導入率（又は感染率）をもたらす（セクション４．２．５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物が網膜下、硝子体内、又はＳＣＳ内に投与されるときと比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与されるときに、注射部位におけるより高い形質導入率（又は感染率）をもたらす（セクション４．２．５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与されるときと比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与されるときに、減少した血管拡張及び／又は血管漏出をもたらす（セクション４．２．４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物が網膜下、硝子体内、又はＳＣＳ内に投与されるときと比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与されるときに、減少した血管拡張及び／又は血管漏出をもたらす（セクション４．２．４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃における参照医薬組成物は、約３２～３５℃における参照医薬組成物よりも高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。
４．１．１ 粘度の操作
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物の粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）は、製剤が約３２～３５℃に温まるにつれて、水の粘度を十分に超える値（例えば、剪断速度０．１／秒で少なくとも約１００ｃＰ）に増加し、対象の眼（例えば、ＳＣＳ）への配置、例えば、注射に非常に有効である製剤をもたらす。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃での製剤の比較的高い粘度及び／又は弾性率は、そのような製剤が、治療成分（例えば、導入遺伝子を含む発現カセットを含むＡＡＶ）を製剤中の実質的に均一な懸濁液中に長期間維持する能力を増強し、製剤の貯蔵安定性にも役立ち得る。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物の粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）は、製剤が約３２～３５℃に温まるにつれて、水の粘度を十分に超える値（例えば、剪断速度０．１／秒で少なくとも約１００ｃＰ）に増加し、対象の眼（例えば、ＳＣＳ）への配置、例えば、注射に非常に有効である製剤をもたらす。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃での製剤の比較的高い粘度及び／又は弾性率は、そのような製剤が、治療成分（例えば、導入遺伝子を含む発現カセットを含むＡＡＶ）を製剤中の実質的に均一な懸濁液中に長期間維持する能力を増強し、製剤の貯蔵安定性にも役立ち得る。
本明細書で提供される医薬組成物（例えば、熱応答性医薬組成物）は、液体分散媒（「溶媒」）及びゲル化剤（「ゲル化剤（gelator）」）を含み得る。溶媒分子は、ゲル化剤によって形成される親水コロイドネットワークに浸透することができる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、水性系中に親水性ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、天然ポリマー（例えば、キサンタンガム、デンプン、ジェラン、コンニャク、カラギーナン、コラーゲン、フィブリン、絹フィブロイン、ヒアルロン酸又はゼラチン）を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、合成ポリマー（例えば、キトサン－β－グリセロホスフェート、ポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）（ｐＮＩＰＡＡｍ）、プルロニックＦ１２７、メチルセルロース又はＰＥＧ－ＰＣＬ）を含む。例えば、Ｔａｙｌｏｒ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｌｓ．２０１７ Ｍａｒ；３（１）：４を参照されたい。
より低い温度と比較して、約３２～３５℃でより高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有し、本開示の医薬組成物中で使用することができる溶液の非限定的な例としては、様々な濃度のポロキサマー４０７（Ｐ４０７、ＣＡＳ番号：９００３－１１－６）及びポロキサマー１８８（Ｐ１８８、ＣＡＳ番号：９００３－１１－６）を含む溶液が挙げられる。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１６％のＰ４０７及び０％のＰ１８８を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、２２％のＰ４０７及び０％のＰ１８８を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１６％のＰ４０７及び１６％のＰ１８８を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、２２％のＰ４０７及び１６％のＰ１８８を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１９％のＰ４０７及び０％のＰ１８８を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１６％のＰ４０７及び８％のＰ１８８を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、２２％のＰ４０７及び８％のＰ１８８を含む。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１９％のＰ４０７及び８％のＰ１８８を含む。
４．１．２ 製剤の他の成分
いくつかの実施形態では、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）と、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム無水物、スクロース、及び界面活性剤のうちの少なくとも１つとを含む医薬組成物（例えば、液体製剤）を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、液体製剤）は、スクロースを含まない。セクション４．６及び／又はセクション５に記載されるものなどのアッセイを使用して、追加の成分の存在が、高温でのより高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）などの本製剤の特性に干渉しないことを決定することができる。
いくつかの実施形態では、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）と、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム無水物、スクロース、及び界面活性剤のうちの少なくとも１つとを含む医薬組成物（例えば、液体製剤）を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、液体製剤）は、スクロースを含まない。セクション４．６及び／又はセクション５に記載されるものなどのアッセイを使用して、追加の成分の存在が、高温でのより高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）などの本製剤の特性に干渉しないことを決定することができる。
いくつかの実施形態では、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）と、イオン性塩賦形剤又は緩衝剤、スクロース、及び界面活性剤のうちの少なくとも１つとを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、イオン性塩賦形剤又は緩衝剤は、リン酸二水素カリウム、リン酸カリウム、塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム無水物、リン酸ナトリウム六水和物、リン酸二水素ナトリウム一水和物、トロメタミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩（Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ）、アミノ酸、ヒスチジン、ヒスチジン塩酸塩（ヒスチジン－ＨＣｌ）、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム六水和物、硫酸カルシウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、及びクエン酸カルシウムからなる群からの１つ以上の成分であり得る。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポロキサマー１８８、ポリソルベート２０、及びポリソルベート８０からなる群からの１つ以上の成分であり得る。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約６０ｍＭ～約１１５ｍＭのイオン強度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約６０ｍＭ～約１００ｍＭのイオン強度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約６５ｍＭ～約９５ｍＭのイオン強度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約７０ｍＭ～約９０ｍＭのイオン強度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約７５ｍＭ～約８５ｍＭのイオン強度を有する。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約３０ｍＭ～約１００ｍＭのイオン強度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約３５ｍＭ～約９５ｍＭのイオン強度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのイオン強度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約４５ｍＭ～約８５ｍＭのイオン強度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約５０ｍＭ～約８０ｍＭのイオン強度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約５５ｍＭ～約７５ｍＭのイオン強度を有する。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、約６０ｍＭ～約７０ｍＭのイオン強度を有する。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、塩化カリウムを（例えば、０．２ｇ／Ｌの濃度で）含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、リン酸二水素カリウムを（例えば、０．２ｇ／Ｌの濃度で）含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、塩化ナトリウムを（例えば、５．８４ｇ／Ｌの濃度で）含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、リン酸水素二ナトリウム無水物（例えば、１．１５ｇ／Ｌの濃度で）を含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウム、及びリン酸水素二ナトリウム無水物を含む。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、スクロースを３％（重量／体積、３０ｇ／Ｌ）～１８％（重量／体積、１８０ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物はスクロースを４％（重量／体積、４０ｇ／Ｌ）の濃度で含む。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、ポロキサマー１８８を０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、ポロキサマー１８８を０．０００５％（重量／体積、０．００５ｇ／Ｌ）～０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、ポロキサマー１８８を０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、ポリソルベート２０を０．０００５％（重量／体積、０．０５ｇ／Ｌ）～０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、ポリソルベート８０を０．０００５％（重量／体積、０．０５ｇ／Ｌ）～０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度で含む。
ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約７．４である。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、約６．０～９．０である。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、７．４である。ある特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは、６．０～９．０である。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、疎水性コーティングされたガラスバイアル中にある。ある特定の実施形態では、医薬組成物はシクロオレフィンポリマー（Cyclo Olefin Polymer、ＣＯＰ）バイアル中にある。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｄａｉｋｙｏ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）（ＣＺ）バイアル中にある。ある特定の実施形態では、医薬組成物は、ＴｏｐＬｙｏコーティングバイアル中にある。
ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶと、（ａ）０．２ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、（ｂ）０．２ｇ／Ｌの濃度のリン酸二水素カリウム、（ｃ）５．８４ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、（ｄ）１．１５ｇ／Ｌの濃度のリン酸水素二ナトリウム無水物、（ｅ）４％重量／体積（４０ｇ／Ｌ）の濃度のスクロース、（ｆ）０．００１％重量／体積（０．０１ｇ／Ｌ）の濃度のポロキサマー１８８、及び（ｇ）水のうちの少なくとも１つと、を含む医薬組成物が本明細書に開示され、組換えＡＡＶはＡＡＶ８である。いくつかの実施形態では、医薬組成物はスクロースを含まない。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、（ａ）抗ヒト血管内皮増殖因子（ｈＶＥＧＦ）抗体をコードする構築物ＩＩと、（ｂ）０．２ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、（ｃ）０．２ｇ／Ｌの濃度のリン酸二水素カリウム、（ｄ）５．８４ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、（ｅ）１．１５ｇ／Ｌの濃度のリン酸水素二ナトリウム無水物、（ｆ）４％重量／体積（４０ｇ／Ｌ）の濃度のスクロース、（ｇ）０．００１％重量／体積（０．０１ｇ／Ｌ）の濃度のポロキサマー１８８、及び（ｈ）水のうちの少なくとも１つと、を含み、抗ｈＶＥＧＦ抗体は、配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１又は配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物はスクロースを含まない。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、（ａ）トリペプチジルペプチダーゼ１をコードするＡＡＶ８又はＡＡＶ９と、（ｂ）０．２ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、（ｃ）０．２ｇ／Ｌの濃度のリン酸二水素カリウム、（ｄ）５．８４ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、（ｅ）１．１５ｇ／Ｌの濃度のリン酸水素二ナトリウム無水物、（ｆ）４％重量／体積（４０ｇ／Ｌ）の濃度のスクロース、（ｇ）０．００１％重量／体積（０．０１ｇ／Ｌ）の濃度のポロキサマー１８８、及び（ｈ）水のうちの少なくとも１つと、を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物はスクロースを含まない。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、脈絡膜上注射（例えば、マイクロニードルを有するマイクロインジェクターなどの脈絡膜上薬物送達デバイスを介する）に好適である所望の粘度、弾性率（Ｇ’）、密度、及び／又は重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は液体組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は凍結組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物はゲルである。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、２００ｍＯｓｍ／Ｌ～６６０ｍＯｓｍ／Ｌのオスモル濃度範囲を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約、少なくとも約、又は多くとも約２００ｍＯｓｍ／Ｌ、２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、３００ｍＯｓｍ／Ｌ、３５０ ｍＯｓｍ／Ｌ、４００ｍＯｓｍ／Ｌ、４５０ｍＯｓｍ／Ｌ、５００ｍＯｓｍ／Ｌ、５５０ｍＯｓｍ／Ｌ、６００ｍＯｓｍ／Ｌ、６５０ｍＯｓｍ／Ｌ、又は６６０ｍＯｓｍ／Ｌのオスモル濃度を有する。
ある特定の実施形態では、遺伝子治療構築物は、製剤緩衝液中のＡＡＶベクター活性成分の凍結滅菌単回使用溶液として供給される。ある特定の実施形態では、脈絡膜上投与に好適な医薬組成物は、生理学的に適合性の水性緩衝液、界面活性剤及び任意選択の賦形剤を含む製剤緩衝液中の組換え（例えば、ｒＨｕＧｌｙＦａｂＶＥＧＦｉ）ベクターの懸濁液を含む。いくつかの実施形態では、構築物は、ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水及び０．００１％ポロキサマー１８８、ｐＨ＝７．４中で製剤化される。
具体的な実施形態では、組成物は、改変ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水溶液、及び任意選択で界面活性剤を含む。他の具体的な実施形態では、医薬組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのリン酸二水素カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬのリン酸水素二ナトリウム無水物、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のスクロース、及び任意選択で界面活性剤を含む。他の具体的な実施形態では、医薬組成物は、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム無水物、スクロース、及び任意選択で界面活性剤を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、Ｚｅｉｎａｂら（Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ａｎｄ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ １１４（２０１７）１１９－１３）に記載されている組成物ではない。
４．２ 機能特性
４．２．１ クリアランス時間
本開示は、ＳＣＳからのクリアランス時間の遅延をもたらす医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）を提供する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性（若しくはより粘性）かつ／又は弾性かつ／又はゲル化（若しくはより弾性及び／又はよりゲル化）する医薬組成物は、約３２～３５℃で非粘性若しくは低粘性かつ／又は低弾性かつ／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、ＳＣＳからのクリアランス時間の遅延をもたらす。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性（若しくはより粘性）かつ／又は弾性かつ／又はゲル化（若しくはより弾性及び／又はよりゲル化）する医薬組成物は、約３２～３５℃で非粘性若しくは低粘性かつ／又は低弾性かつ／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、眼からのクリアランス時間の遅延をもたらす。いくつかの実施形態では、より粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化された医薬組成物は、より粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、眼からのクリアランス時間の遅延をもたらす。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物は、約３２～３５℃での水の粘度より高い粘度値を有する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性でありゲル化する医薬組成物は、約３２～３５℃での網膜下注射に通常使用される溶液の粘度及び／又は弾性率よりも高い粘度値及び／又は弾性率値を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の医薬組成物のクリアランス時間は、参照医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与された後の参照医薬組成物のクリアランス時間と同等であるか又はより長い。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の医薬組成物のクリアランス時間は、参照医薬組成物がＳＣＳに投与された後の参照医薬組成物のクリアランス時間と同等であるか又はより長い。
４．２．１ クリアランス時間
本開示は、ＳＣＳからのクリアランス時間の遅延をもたらす医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）を提供する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性（若しくはより粘性）かつ／又は弾性かつ／又はゲル化（若しくはより弾性及び／又はよりゲル化）する医薬組成物は、約３２～３５℃で非粘性若しくは低粘性かつ／又は低弾性かつ／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、ＳＣＳからのクリアランス時間の遅延をもたらす。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性（若しくはより粘性）かつ／又は弾性かつ／又はゲル化（若しくはより弾性及び／又はよりゲル化）する医薬組成物は、約３２～３５℃で非粘性若しくは低粘性かつ／又は低弾性かつ／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、眼からのクリアランス時間の遅延をもたらす。いくつかの実施形態では、より粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化された医薬組成物は、より粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、眼からのクリアランス時間の遅延をもたらす。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物は、約３２～３５℃での水の粘度より高い粘度値を有する。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性でありゲル化する医薬組成物は、約３２～３５℃での網膜下注射に通常使用される溶液の粘度及び／又は弾性率よりも高い粘度値及び／又は弾性率値を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の医薬組成物のクリアランス時間は、参照医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与された後の参照医薬組成物のクリアランス時間と同等であるか又はより長い。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の医薬組成物のクリアランス時間は、参照医薬組成物がＳＣＳに投与された後の参照医薬組成物のクリアランス時間と同等であるか又はより長い。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）は、約３０分～約２０時間、約２時間～約２０時間、約３０分～約２４時間、約１時間～約２時間、約３０分～約９０日、約３０分～約６０日、約３０分～約３０日、約３０分～約２１日、約３０分～約１４日、約３０分～約７日、約３０分～約３日、約３０分～約２日、約３０分～約１日、約４時間～約９０日、約４時間～約６０日、約４時間～約３０日、約４時間～約２１日、約４時間～約１４日、約４時間～約７日、約４時間～約３日、約４時間～約２日、約４時間～約１日、約４時間～約８時間、約４時間～約１６時間、約４時間～約２０時間、約１日～約９０日、約１日～約６０日、約１日～約３０日、約１日～約２１日、約１日～約１４日、約１日～約７日、約１日～約３日、約２日～約９０日、約３日～約９０日、約３日～約６０日、約３日～約３０日、約３日～約２１日、約３日～約１４日、又は約３日～約７日のＳＣＳからのクリアランス時間をもたらす。いくつかの実施形態では、ＳＣＳからのクリアランス時間は、約３日～約３６５日、約３日～約３００日、約３日～約２００日、約３日～約１５０日、約３日～約１２５日、約７日～約３６５日、約７日～約３００日、約７日～約２００日、約７日～約１５０日、約７日～約１２５日である。「ＳＣＳからのクリアランス時間」は、医薬組成物、医薬品、又はＡＡＶの実質的に全てがＳＣＳから逃れるために必要とされる時間である。いくつかの実施形態では、「ＳＣＳからのクリアランス時間」は、医薬組成物、医薬品、又はＡＡＶが、任意の標準的な方法（セクション４．６及びセクション５に記載されているものなど）によってＳＣＳにおいて検出されないために必要な時間である。いくつかの実施形態では、「ＳＣＳからのクリアランス時間」は、医薬組成物、医薬品、又はＡＡＶが、任意の標準的方法（セクション４．６及びセクション５に記載されるものなど）によって検出されるように、多くとも約２％又は多くとも約５％である量でＳＣＳ内に存在するときである。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）は、約３０分～約２０時間、約２時間～約２０時間、約３０分～約２４時間、約１時間～約２時間、約３０分～約９０日、約３０分～約６０日、約３０分～約３０日、約３０分～約２１日、約３０分～約１４日、約３０分～約７日、約３０分～約３日、約３０分～約２日、約３０分～約１日、約４時間～約９０日、約４時間～約６０日、約４時間～約３０日、約４時間～約２１日、約４時間～約１４日、約４時間～約７日、約４時間～約３日、約４時間～約２日、約４時間～約１日、約４時間～約８時間、約４時間～約１６時間、約４時間～約２０時間、約１日～約９０日、約１日～約６０日、約１日～約３０日、約１日～約２１日、約１日～約１４日、約１日～約７日、約１日～約３日、約２日～約９０日、約３日～約９０日、約３日～約６０日、約３日～約３０日、約３日～約２１日、約３日～約１４日、又は約３日～約７日の眼からのクリアランス時間をもたらす。いくつかの実施形態では、眼からのクリアランス時間は、約３日～約３６５日、約３日～約３００日、約３日～約２００日、約３日～約１５０日、約３日～約１２５日、約７日～約３６５日、約７日～約３００日、約７日～約２００日、約７日～約１５０日、約７日～約１２５日である。「眼からのクリアランス時間」は、医薬組成物、医薬品、又はＡＡＶの実質的に全てが眼から逃れるために必要とされる時間である。いくつかの実施形態では、「眼からのクリアランス時間」は、医薬組成物、医薬品、又はＡＡＶが、任意の的な方法（セクション４．６及びセクション５に記載されているものなど）によって眼において検出されないために必要な時間である。いくつかの実施形態では、「眼からのクリアランス時間」は、医薬組成物、医薬品、又はＡＡＶが、任意の標準的方法（セクション４．６及びセクション５に記載されるものなど）によって検出されるように、多くとも約２％又は多くとも約５％である量で眼内に存在するときである。
いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、医薬組成物の投与後約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日後のクリアランス時間より前ではない（例えば、ＳＣＳ又は眼からのクリアランス時間は、これらの前に生じない）。いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、医薬組成物の投与後、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日である。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを（例えば、網膜下投与、硝子体内投与を介して、又はＳＣＳに）投与するために、より粘性が低いかつ／又はより弾性が低いかつ／又はゲル化しない医薬組成物が使用されるときより、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％大きい、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、又は少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、又は少なくとも５００％大きいクリアランス時間をもたらす。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化される医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを脈絡膜上投与によって投与するために、約３２～３５℃でより粘性が低いかつ／又はより弾性が低いかつ／又はゲル化しない医薬組成物が使用されるときより、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％大きい、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、又は少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、又は少なくとも５００％大きいクリアランス時間をもたらす。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化される医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを、脈絡膜上投与によって又は硝子体内投与によって投与するために、約３２～３５℃でより粘性が低い医薬組成物が使用されるときより、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％大きい、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、又は少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、又は少なくとも５００％大きいクリアランス時間をもたらす。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性（例えば、比較的粘性、中～超高粘度、又は水よりも粘性、又は対照溶液よりも粘性、又は網膜下投与に一般的に使用される溶液よりも粘性）である医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、脈絡膜上投与を介して又は硝子体内投与を介して投与するために、同じ医薬組成物が使用されるときより、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％大きい、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、又は少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、又は少なくとも５００％大きいクリアランス時間をもたらす。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上注射によって投与される、約３２～３５℃で比較的粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、網膜下投与を介して又は硝子体内投与を介して投与される同じ医薬組成物のクリアランス時間よりも長い。いくつかの実施形態では、脈絡膜上注射によって投与される、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、脈絡膜上注射によって投与される約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又はより弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物よりも長い。いくつかの実施形態では、脈絡膜上注射によって投与される、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、網膜下投与を介して又は硝子体内投与を介して投与される、約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又は弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物よりも長い。いくつかの実施形態では、脈絡膜上注射によって投与される、約３２～３５℃で粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、網膜下投与を介して又は硝子体内投与を介して投与される、約３２～３５℃で比較的粘性でありかつ／又は弾性でありかつ／又はゲル化する医薬組成物よりも長い。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上注射によって投与される、約３２～３５℃で粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、網膜下投与を介して又は硝子体内投与を介して投与される、同じ医薬組成物よりも、少なくとも３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日長い。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上注射によって投与される、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、脈絡膜上注射により投与される、約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又は弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物よりも、少なくとも３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日長い。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上注射によって投与される、約３２～３５℃で粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、網膜下投与を介して又は硝子体内投与を介して投与される、約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又は弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物よりも、少なくとも３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日長い。
いくつかの実施形態では、硝子体内注射を介して又は網膜下注射を介して投与される医薬組成物のクリアランス時間は、投与後、多くとも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は多くとも約４００日である。
いくつかの実施形態では、硝子体内注射、網膜下注射によって、又はＳＣＳに投与された参照医薬組成物のクリアランス時間は、投与後、多くとも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は多くとも約４００日である。
いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、眼からのクリアランス時間である。いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、ＳＣＳからのクリアランス時間である。いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、注射部位からのクリアランス時間である。
４．２．２ 周囲への拡散
いくつかの実施形態では、医薬組成物は注射部位に局在化する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、より低い粘度及び／若しくは弾性率（Ｇ’）を有し、並びに／又は眼外温度（約３２～３５℃）でゲル化しない同等の医薬組成物よりも長い期間にわたって注射部位に局在化する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＳに注射されたとき、医薬組成物が網膜下注射又は硝子体内注射によって投与されるときと比較して、より長い期間にわたって注射部位に局在化する。医薬組成物は、異なる粘度及び／又は弾性率値を有し得る。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化される（若しくはより粘性、より弾性かつ／又はよりゲル化する）医薬組成物は、約３２～３５℃で非粘性であるか若しくは低粘度を有するかつ／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、より長い期間にわたってＳＣＳに局在化したままである。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は注射部位に局在化する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、より低い粘度及び／若しくは弾性率（Ｇ’）を有し、並びに／又は眼外温度（約３２～３５℃）でゲル化しない同等の医薬組成物よりも長い期間にわたって注射部位に局在化する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＳに注射されたとき、医薬組成物が網膜下注射又は硝子体内注射によって投与されるときと比較して、より長い期間にわたって注射部位に局在化する。医薬組成物は、異なる粘度及び／又は弾性率値を有し得る。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化される（若しくはより粘性、より弾性かつ／又はよりゲル化する）医薬組成物は、約３２～３５℃で非粘性であるか若しくは低粘度を有するかつ／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、より長い期間にわたってＳＣＳに局在化したままである。
いくつかの実施形態では、局在化は、周囲への拡散（例えば、２Ｄの周囲への拡散）を評価することによって判定されることができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）は、眼外温度（約３２～３５℃）で粘性が低い、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを投与するために参照医薬組成物を使用したとき（例えば、脈絡膜上注射によって、網膜下注射によって、又は硝子体内注射によって）よりも、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１、少なくとも５％、少なくとも１０％少ない、少なくとも１５％少ない、少なくとも２０％少ない、少なくとも２５％少ない、少なくとも３０％少ない、少なくとも３５％少ない、少なくとも４０％少ない、少なくとも４５％少ない、少なくとも５０％少ない、少なくとも５５％少ない、少なくとも６０％少ない、少なくとも６５％少ない、少なくとも７０％少ない、少なくとも７５％少ない、少なくとも８０％少ない、少なくとも８５％少ない、少なくとも９０％少ない、少なくとも９５％少ない、少なくとも１００％少ない、少なくとも１５０％少ない、又は少なくとも２００％少ない、少なくとも２５０％少ない、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％少ない、又は少なくとも５００％少ない周囲への拡散をもたらす。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、例えば、脈絡膜上注射によって、網膜下注射によって、又は硝子体内注射によって、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを投与するために参照医薬組成物を使用したときよりも、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１、少なくとも５％、少なくとも１０％少ない、少なくとも１５％少ない、少なくとも２０％少ない、少なくとも２５％少ない、少なくとも３０％少ない、少なくとも３５％少ない、少なくとも４０％少ない、少なくとも４５％少ない、少なくとも５０％少ない、少なくとも５５％少ない、少なくとも６０％少ない、少なくとも６５％少ない、少なくとも７０％少ない、少なくとも７５％少ない、少なくとも８０％少ない、少なくとも８５％少ない、少なくとも９０％少ない、少なくとも９５％少ない、少なくとも１００％少ない、少なくとも１５０％少ない、又は少なくとも２００％少ない、少なくとも２５０％少ない、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％少ない、又は少なくとも５００％少ない周囲への拡散をもたらす。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性（例えば、比較的粘性、中～超高粘度、又は水よりも粘性、又は対照溶液よりも粘性、又は網膜下投与に一般的に使用される溶液よりも粘性）若しくは弾性及び／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを網膜下投与又は硝子体内投与によって投与するために同じ医薬組成物が使用されるときよりも、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１、少なくとも５％、少なくとも１０％少ない、少なくとも１５％少ない、少なくとも２０％少ない、少なくとも２５％少ない、少なくとも３０％少ない、少なくとも３５％少ない、少なくとも４０％少ない、少なくとも４５％少ない、少なくとも５０％少ない、少なくとも５５％少ない、少なくとも６０％少ない、少なくとも６５％少ない、少なくとも７０％少ない、少なくとも７５％少ない、少なくとも８０％少ない、少なくとも８５％少ない、少なくとも９０％少ない、少なくとも９５％少ない、少なくとも１００％少ない、少なくとも１５０％少ない、又は少なくとも２００％少ない、少なくとも２５０％少ない、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％少ない、又は少なくとも５００％少ない周囲への拡散をもたらす。
いくつかの実施形態では、周囲への拡散は、医薬組成物又は参照医薬組成物が投与されてから３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日後に決定することができる。
４．２．３ ＳＣＳの厚さ
いくつかの実施形態では、局在化は、医薬組成物が対象に投与された後にＳＣＳの厚さを評価することによって決定することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬組成物がＳＣＳに注射された後、ＳＣＳの厚さを増加させる。いくつかの実施形態では、ＳＣＳは、低粘度及び／若しくは弾性率（Ｇ’）を有する、並びに／又は約３２～３５℃でゲル化しない医薬組成物の注入に適応するように拡張する。いくつかの実施形態では、低粘度及び／若しくは低弾性率及び／又はゲル化しない医薬組成物のより大量の注入は、ＳＣＳの更なる拡張を引き起こさない。いくつかの実施形態では、より大量の低粘度及び／若しくは低弾性率の流体製剤は、ＳＣＳを更に拡張させることなく、ＳＣＳ内の流体拡散の面積を増加させることによって適応される。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性及び／若しくは弾性及び／又はゲル化する医薬組成物のＳＣＳへの注入は、低粘度及び／若しくは低弾性率及び／又はゲル化しない医薬組成物がＳＣＳに注入されるときに達成されるＳＣＳの厚さを超えて、ＳＣＳの厚さを拡張させることができる。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性及び／又はゲル化する医薬組成物を用いてＳＣＳの厚さを増加させることは、ＳＣＳへのアクセスを容易にすることができ、それによって、ＳＣＳ内でのデバイスの処理を容易にするか又は可能にする。いくつかの実施形態では、ＳＣＳの厚さを拡張させることは、医薬組成物及び／又はＡＡＶにコードされた導入遺伝子が、より長い期間にわたって注射部位に留まること（局在化）を可能にする。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性及び／若しくは弾性及び／又はゲル化する医薬組成物は、約３２～３５℃で非粘性であるか、又は低粘度及び／若しくは低弾性率を有する及び／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、注射部位又はその付近の厚さをより長い期間増加させる。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物は、約３２～３５℃でより粘性が低くかつ／又はより弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、注射部位又はその付近での厚さをより長い期間増加させる。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注射部位での厚さは、参照医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与された後の参照医薬組成物の注射部位での厚さと同等であるか又はより厚い。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注射部位での厚さは、参照医薬組成物がＳＣＳに投与された後の参照医薬組成物の注射部位での厚さと同等であるか又はより厚い。
いくつかの実施形態では、局在化は、医薬組成物が対象に投与された後にＳＣＳの厚さを評価することによって決定することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬組成物がＳＣＳに注射された後、ＳＣＳの厚さを増加させる。いくつかの実施形態では、ＳＣＳは、低粘度及び／若しくは弾性率（Ｇ’）を有する、並びに／又は約３２～３５℃でゲル化しない医薬組成物の注入に適応するように拡張する。いくつかの実施形態では、低粘度及び／若しくは低弾性率及び／又はゲル化しない医薬組成物のより大量の注入は、ＳＣＳの更なる拡張を引き起こさない。いくつかの実施形態では、より大量の低粘度及び／若しくは低弾性率の流体製剤は、ＳＣＳを更に拡張させることなく、ＳＣＳ内の流体拡散の面積を増加させることによって適応される。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性及び／若しくは弾性及び／又はゲル化する医薬組成物のＳＣＳへの注入は、低粘度及び／若しくは低弾性率及び／又はゲル化しない医薬組成物がＳＣＳに注入されるときに達成されるＳＣＳの厚さを超えて、ＳＣＳの厚さを拡張させることができる。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性及び／又はゲル化する医薬組成物を用いてＳＣＳの厚さを増加させることは、ＳＣＳへのアクセスを容易にすることができ、それによって、ＳＣＳ内でのデバイスの処理を容易にするか又は可能にする。いくつかの実施形態では、ＳＣＳの厚さを拡張させることは、医薬組成物及び／又はＡＡＶにコードされた導入遺伝子が、より長い期間にわたって注射部位に留まること（局在化）を可能にする。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性及び／若しくは弾性及び／又はゲル化する医薬組成物は、約３２～３５℃で非粘性であるか、又は低粘度及び／若しくは低弾性率を有する及び／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、注射部位又はその付近の厚さをより長い期間増加させる。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物は、約３２～３５℃でより粘性が低くかつ／又はより弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物と比較して、注射部位又はその付近での厚さをより長い期間増加させる。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注射部位での厚さは、参照医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与された後の参照医薬組成物の注射部位での厚さと同等であるか又はより厚い。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注射部位での厚さは、参照医薬組成物がＳＣＳに投与された後の参照医薬組成物の注射部位での厚さと同等であるか又はより厚い。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性（例えば、比較的粘性、中～超高粘度、又は水よりも粘性、又は対照溶液よりも粘性、又は網膜下投与に一般的に使用される溶液よりも粘性）かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、例えば、脈絡膜上投与によって導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを投与するために、約３２～３５℃でより粘性が低くかつ／又はより弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物を使用するときよりも、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％大きい、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、又は少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、又は少なくとも５００％大きいＳＣＳの厚さにおける増加をもたらす。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを脈網膜下投与によって又は硝子体内投与によって与するために、約３２～３５℃でより粘性が低くかつ／又はより弾性が低いかつ／又はゲル化しない医薬組成物を使用するときより、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％大きい、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、又は少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、又は少なくとも５００％大きい注射部位又はその付近での厚さの増加をもたらす。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性（例えば、比較的粘性、中～超高粘度、又は水よりも粘性、又は対照溶液よりも粘性、又は網膜下投与に一般的に使用される溶液よりも粘性）かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを網膜下投与によって又は硝子体内投与によって同じ医薬組成物を投与するときより、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％大きい、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、又は少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、又は少なくとも５００％大きい注射部位又はその付近での厚さの増加をもたらす。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注射によって投与された後に注射部位で得られる厚さは、約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又はより弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物が脈絡膜上投与された後よりも厚い。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注射によって投与された後に注射部位で得られる厚さは、約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又はより弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物が網膜下投与によって又は硝子体内投与によって投与された後よりも厚い。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性及び／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注射によって投与された後に注射部位で得られる厚さは、同じ医薬組成物が網膜下投与によって又は硝子体内投与によって投与された後よりも厚い。
いくつかの実施形態では、注射部位又はその付近での厚さは、医薬組成物又は参照医薬組成物が投与されてから３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日後に決定することができる。
４．２．４ 血管拡張及び血管漏出
いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルは、参照医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与された後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルと同等であるか又はそれ未満である。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルは、参照医薬組成物がＳＣＳに投与された後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルと同等であるか又はより低い。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）は、医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与された後と比較して、同じ医薬組成物がＳＣＳに投与された後に、減少したレベルのＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出をもたらす。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、同等の（約３２～３５℃で粘性が低い）医薬組成物が網膜下投与を介して、硝子体内投与を介して、又はＳＣＳに投与された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された後に、減少したレベルのＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出をもたらす。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出は、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％減少している。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）抗体である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルは、参照医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与された後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルと同等であるか又はそれ未満である。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルは、参照医薬組成物がＳＣＳに投与された後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルと同等であるか又はより低い。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）は、医薬組成物が網膜下又は硝子体内に投与された後と比較して、同じ医薬組成物がＳＣＳに投与された後に、減少したレベルのＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出をもたらす。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、同等の（約３２～３５℃で粘性が低い）医薬組成物が網膜下投与を介して、硝子体内投与を介して、又はＳＣＳに投与された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された後に、減少したレベルのＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出をもたらす。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出は、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％減少している。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）抗体である。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出は、投与後約３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１５時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は多くとも約４００日で決定される。
４．２．５ 注射部位における形質導入率（又は感染率）
いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の形質導入部位での感染率（又は注射率）は、同じ医薬組成物が網膜下投与を介して又は静脈内投与を介して投与された後の注射部位における形質導入率（又は感染率）と比較して同等であるか又はより高い。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注射部位における形質導入率（又は感染率）は、同等の（例えば、約３２～３５℃で粘性が低くかつ／又はゲル化しない）医薬組成物が網膜下又は静脈内投与を介して、又はＳＣＳに投与された後の注射部位における形質導入率（又は感染率）と比較して同等であるか又はより高い。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物（約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又は弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物）よりも高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有し、かつ／又は約３２～３５℃でゲル化する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、注射部位での形質導入率（又は感染率）における増加は、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％の増加である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の形質導入部位での感染率（又は注射率）は、同じ医薬組成物が網膜下投与を介して又は静脈内投与を介して投与された後の注射部位における形質導入率（又は感染率）と比較して同等であるか又はより高い。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注射部位における形質導入率（又は感染率）は、同等の（例えば、約３２～３５℃で粘性が低くかつ／又はゲル化しない）医薬組成物が網膜下又は静脈内投与を介して、又はＳＣＳに投与された後の注射部位における形質導入率（又は感染率）と比較して同等であるか又はより高い。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物（約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又は弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物）よりも高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有し、かつ／又は約３２～３５℃でゲル化する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、注射部位での形質導入率（又は感染率）における増加は、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％の増加である。
いくつかの実施形態では、注射部位におけるＡＡＶのレベルは、医薬組成物が脈絡膜上に投与された後、同じ医薬組成物が網膜下投与を介して又は静脈内投与を介して投与された後の注射部位におけるＡＡＶのレベルと比較して同等であるか又はより高い。いくつかの実施形態では、医薬組成物が脈絡膜上に投与された後の注射部位におけるＡＡＶのレベルは、同等の（例えば、約３２～３５℃で粘性が低いかつ／又は弾性が低いかつ／又はゲル化しない）医薬組成物が網膜下を介して、又は静脈内投与を介して、又はＳＣＳに投与された後の注射部位におけるＡＡＶのレベルと比較して同等であるか又はより高い。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物よりも高い粘度及び／若しくは弾性率（Ｇ’）を有し、かつ／又は約３２～３５℃でゲル化する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物（約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又は弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物）は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、注射部位でＡＡＶのレベルの増加は、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％の増加である。
いくつかの実施形態、ＡＡＶレベル又は形質導入率（若しくは感染率）は、投与後約３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１５時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は多くとも約４００日で決定される。
４．２．６ 導入遺伝子発現
いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物の濃度は、参照（例えば、約３２～３５℃で低粘性かつ／又は低弾性かつ／又はゲル化しない）医薬組成物がＳＣＳに注射された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注射された後に少なくとも同等であるか又はより高い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物の濃度は、参照（例えば、約３２～３５℃で低粘性かつ／又は低弾性かつ／又はゲル化しない）医薬組成物が網膜下注射によって又は硝子体内注射によって注射された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注射された後に少なくとも同等であるか又はより高い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物の濃度は、同じ医薬組成物が網膜下注射又は硝子体内注射によって注射された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注射された後に少なくとも同等であるか又はより高い。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物の濃度は、参照（例えば、約３２～３５℃で低粘性かつ／又は低弾性かつ／又はゲル化しない）医薬組成物がＳＣＳに注射された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注射された後に少なくとも同等であるか又はより高い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物の濃度は、参照（例えば、約３２～３５℃で低粘性かつ／又は低弾性かつ／又はゲル化しない）医薬組成物が網膜下注射によって又は硝子体内注射によって注射された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注射された後に少なくとも同等であるか又はより高い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物の濃度は、同じ医薬組成物が網膜下注射又は硝子体内注射によって注射された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注射された後に少なくとも同等であるか又はより高い。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物（例えば、導入遺伝子産物の濃度）は、同等の（約３２～３５℃で粘性が低いかつ／又は弾性が低いかつ／又はゲル化しない）医薬組成物がＳＣＳに注射された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注射された後により長い期間にわたって眼（例えば、硝子体液）において検出される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物（例えば、導入遺伝子産物の濃度）は、参照（約３２～３５℃で粘性が低いかつ／又は弾性が低いかつ／又はゲル化しない）医薬組成物が網膜下注射又は硝子体内注射によって注射された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注射された後により長い期間にわたって眼（例えば、硝子体液）において検出される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物（例えば、導入遺伝子産物の濃度）は、同じ（又は約３２～３５℃で類似の粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）の）医薬組成物が網膜下注射又は硝子体内注射によって注射された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注射された後により長い期間にわたって眼（例えば、硝子体液）において検出される。
いくつかの実施形態では、より長い期間は、少なくとも３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日長い。いくつかの実施形態では、より長い期間は、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日長い。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、医薬組成物がＳＣＳに投与された後、ある期間、すなわち、投与から少なくとも約又は約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日又は４００日後に、眼（例えば、硝子体液）において検出される。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、一定期間にわたって（例えば、参照医薬組成物が網膜下投与を介して、又は硝子体内投与を介して、又はＳＣＳに投与された後；若しくは医薬組成物が網膜下を介して又は硝子体内投与を介して投与された後）、すなわち投与から多くとも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、又は１００日後に、眼（例えば、硝子体液）において検出される。
いくつかの実施形態では、眼（例えば、硝子体液）における導入遺伝子産物の濃度は、医薬組成物又は参照医薬組成物が投与されてから約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、又は１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日又は４００日後に決定することができる。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性（例えば、比較的粘性、中～超高粘度、又は水よりも粘性、又は対照溶液よりも粘性、又は網膜下投与に一般的に使用される溶液よりも粘性）かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、例えば、脈絡膜上投与によって導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを投与するために、約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又は弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物を使用した後よりも、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％大きい、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、又は少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、又は少なくとも５００％大きい導入遺伝子のより高い濃度をもたらす。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化される医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを網膜下投与によって又は硝子体よって投与するために、約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又は弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物（参照医薬組成物）を使用するときより、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％大きい、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、又は少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、又は少なくとも５００％大きい導入遺伝子のより高い濃度をもたらす。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で粘性（例えば、比較的粘性、中～超高粘度、又は水よりも粘性、又は対照溶液よりも粘性、又は網膜下投与に一般的に使用される溶液よりも粘性）かつ／又は弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む組成物）の脈絡膜上投与は、同じ医薬組成物を網膜下投与を介して又は硝子体内投与を介して投与するときより、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％大きい、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、又は少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、又は少なくとも５００％大きい導入遺伝子のより高い濃度をもたらす。
いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注射によって投与された後の導入遺伝子の濃度は、約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又は弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物が脈絡膜上注射によって投与された後よりも大きい。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注射によって投与された後の導入遺伝子の濃度は、約３２～３５℃で比較的粘性が低くかつ／又は弾性が低くかつ／又はゲル化しない医薬組成物が網膜下投与を介して又は硝子体内投与を介して投与された後よりも大きい。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃でより粘性かつ／又はより弾性かつ／又はゲル化する医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注射によって投与された後の導入遺伝子の濃度は、同じ医薬組成物が網膜下投与を介して又は硝子体内投与を介して投与された後よりも大きい。
４．２．７ 他の機能特性
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、脈絡膜上注射に好適な所望の粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、少なくとも参照医薬組成物（又は同等の医薬組成物）中の組換えＡＡＶと同程度に安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、少なくとも参照医薬組成物（又は同等の医薬組成物）中の組換えＡＡＶと少なくとも５０％程度に安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じ又は同等の凝集レベルを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じ又は同等の感染性レベルを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じ又は同等の遊離ＤＮＡレベルを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じ又は同等のインビトロ相対効力（ＩＶＲＰ）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じ又は同等のサイズ変化のレベルを有する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物は、脈絡膜上注射に好適な所望の粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、少なくとも参照医薬組成物（又は同等の医薬組成物）中の組換えＡＡＶと同程度に安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、少なくとも参照医薬組成物（又は同等の医薬組成物）中の組換えＡＡＶと少なくとも５０％程度に安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じ又は同等の凝集レベルを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じ又は同等の感染性レベルを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じ又は同等の遊離ＤＮＡレベルを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じ又は同等のインビトロ相対効力（ＩＶＲＰ）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じ又は同等のサイズ変化のレベルを有する。
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、凍結／融解サイクルに対して少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、又は１０００倍安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、凍結／融解サイクルに対して、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％安定である。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶの安定性は、セクション４．６及びセクション５に開示される１つ以上のアッセイによって決定される。
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、凍結／融解サイクルに対して少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、又は１０００倍高い感染性を示す。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶに対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％の感染性を有する。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶのウイルス感染性は、本開示に開示される１つ以上のアッセイによって決定される。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶのサイズは、セクション４．６及びセクション５に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。ある特定の実施形態では、サイズは、凍結／解凍サイクルの前又は後に測定される。
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％少ない、２分の１、３分の１、５分の１、１０分の１、１００分の１、又は１０００分の１の凝集を示す。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶの凝集は、本開示に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。ある特定の実施形態では、凝集は、凍結／解凍サイクルの前又は後に測定される。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶの凝集は、セクション４．６に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、一定期間にわたって（例えば、－２０℃又は３７℃で保存したとき）、例えば、少なくとも約又は約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年、約３年、約４年にわたって、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、又は１０００倍安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％安定である。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶの一定期間にわたる安定性は、本開示に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶの一定期間にわたる安定性は、セクション４．６及びセクション５に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、インビトロ相対効力（ＩＶＲＰ）において少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、又は１０００倍安定である（例えば、－２０℃又は３７℃で保存したとき）。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶとほぼ同じインビトロ相対効力（in vitro relative potency、ＩＶＲＰ）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％のインビトロ相対効力（ＩＶＲＰ）を有する。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶのインビトロ相対効力（ＩＶＲＰ）は、本開示に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。ある特定の実施形態では、インビトロ相対効力（ＩＶＲＰ）は、凍結／解凍サイクルの前又は後に測定される。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶのインビトロ相対効力（ＩＶＲＰ）は、セクション４．６に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％少ない、２分の１、３分の１、５分の１、１０分の１、１００分の１、又は１０００分の１の遊離ＤＮＡを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶとほぼ同じ量の遊離ＤＮＡを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶの約２倍以下の量の遊離ＤＮＡを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％の遊離ＤＮＡの量を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも少なくとも約５０％多い、約２５％多い、約１５％多い、約１０％多い、約５％多い、約４％多い、約３％多い、約２％多い、約１％多い、約０％多い、約１％少ない、約２％少ない、約５％少ない、約７％少ない、約１０％少ない、約２倍多い、約３倍多い、約２分の１、又は約３分の１の遊離ＤＮＡを有する。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶの遊離ＤＮＡは、セクション４．６及びセクション５に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、一定期間にわたって（例えば、－２０℃又は３７℃で保存されたとき）、例えば、少なくとも約又は約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年、約３年、及び約４年にわたって、多くとも２０％、１５％、１０％、８％、５％、４％、３％、２％、又は１％のサイズ変化を有する。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶの寸法は、本開示に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。ある特定の実施形態では、サイズは、凍結／解凍サイクルの前又は後に測定される。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶのサイズは、セクション４．６に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。
ある特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、又は１０００倍安定である（例えば、－２０℃又は３７℃で保存したとき）。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶとほぼ同程度に安定である（例えば、－２０℃又は３７℃で保存したとき）。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９９％安定である（例えば、－２０℃又は３７℃で保存したとき）。ある特定の実施形態では、組換えＡＡＶの安定性は、セクション４．６に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される。
ある特定の実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、例えば、セクション４．６に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される安定性を失うことなく、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヶ月間保存することができる。ある特定の実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、安定性を失うことなく、４℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヶ月間保存することができる。ある特定の実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、安定性を失うことなく≦６０℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヶ月間保存することができる。ある特定の実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、安定性を失うことなく、－８０℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヶ月間保存することができる。ある特定の実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、－２０℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２ヶ月間保存した後、安定性を失うことなく、４℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヶ月間保存することができる。
ある特定の実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、最初に－８０℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヶ月間保存することができ、次いで解凍され、解凍後、例えば、セクション４．６に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される安定性を失うことなく、２～１０℃、４～８℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃、又は９℃で、更に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１２ヶ月間保存することができる。ある特定の実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、最初に－８０℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヶ月間保存され、次いで解凍され、解凍後、例えば、セクション４．６に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される安定性を失うことなく、約４℃で更に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１２ヶ月間保存することができる。ある特定の実施態様では、本明細書で提供される医薬組成物は、最初に≦６０℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、又は２４ヶ月間保存され、次いで解凍され、解凍後、例えば、セクション４．６に開示されるアッセイ（複数可）によって決定される安定性を失うことなく、約４℃で更に１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１２ヶ月間保存することができる。
本明細書で提供される方法又は医薬組成物の効果は、視力喪失、感染、炎症、及び網膜剥離を含む他の安全性イベントの徴候を測定することによってモニタリングされ得る。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で異なる粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）（例えば、低粘度から非常に高い粘度までの範囲）を有する異なる医薬組成物を使用して、ベクターをＳＣＳに送達することができる。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で中～高粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有する医薬組成物を使用して送達されるベクターは、約３２～３５℃で低粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有する医薬組成物を使用して送達されるベクターよりも有効である（例えば、ＳＣＳに投与されるとき）。いくつかの実施形態では、約３２～３５℃で中～高粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有する製剤を使用して送達されたベクターは、約３２～３５℃で低粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有する製剤を使用して送達されたベクターと比較して、視覚の改善をもたらす。
本明細書で提供される方法又は医薬組成物の効果はまた、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｖｉｓｕａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ，Ｒａｓｃｈ－ｓｃｏｒｅｄ ｖｅｒｓｉｏｎ（ＮＥＩ－ＶＦＱ－２８－Ｒ）（複合スコア；活動制限ドメインスコア；及び社会感情的機能ドメインスコア）におけるベースラインからの変化によっても測定され得る。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される方法の効果は、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｖｉｓｕａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ ２５－ｉｔｅｍ ｖｅｒｓｉｏｎ（ＮＥＩ－ＶＦＱ－２５）（複合スコア及びメンタルヘルスサブスケールスコア）におけるベースラインからの変化によっても測定され得る。いくつかの実施態様では、本明細書で提供される方法の効果はまた、黄斑部疾患治療満足度質問票（Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｓａｔｉｓｆａｃｔｉｏｎ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ、ＭａｃＴＳＱ）（複合スコア；安全性、有効性、及び不快感ドメインスコア；並びに情報提供及び利便性ドメインスコア）におけるベースラインからの変化によって測定されてもよい。
具体的な実施形態では、本明細書に記載される方法又はベクター（ベクター製剤）の有効性は、約４週間、１２週間、６ヶ月、１２ヶ月、２４ヶ月、３６ヶ月、又は他の所望の時点での視力の改善によって反映される。具体的な実施形態では、視力の改善は、ＢＣＶＡの増加、例えば、１文字、２文字、３文字、４文字、５文字、６文字、７文字、８文字、９文字、１０文字、１１文字、若しくは１２文字、又はそれ以上の増加によって特徴付けられる。具体的な実施形態では、視力の改善は、ベースラインからの視力の５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％又はそれ以上の向上によって特徴付けられる。
特定の実施態様では、治療後の眼には炎症がないか、又は治療後の眼にはほとんど炎症がない（例えば、ベースラインから１０％、５％、２％、１％以下の炎症レベルの増加）。
４．３ 投与量及び投与方法
一態様では、眼の病態を治療するための脈絡膜上投与の方法であって、治療用産物が発現され、眼の病態の治療をもたらすように、治療用産物をコードするヌクレオチド配列を含む組換えウイルスベクターを、治療を必要とするヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。ある具体的な実施形態では、投与ステップは、脈絡膜上薬物送達デバイスを使用して、組換えウイルスベクターを脈絡膜上腔に注射することによる。ある特定の実施形態では、脈絡膜上薬物送達デバイスは、マイクロインジェクターである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物又は参照医薬組成物は、１つ、２つ以上の投与経路による投与に好適である（例えば、脈絡膜上及び網膜下投与に好適である）。
一態様では、眼の病態を治療するための脈絡膜上投与の方法であって、治療用産物が発現され、眼の病態の治療をもたらすように、治療用産物をコードするヌクレオチド配列を含む組換えウイルスベクターを、治療を必要とするヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与することを含む、方法が本明細書で提供される。ある具体的な実施形態では、投与ステップは、脈絡膜上薬物送達デバイスを使用して、組換えウイルスベクターを脈絡膜上腔に注射することによる。ある特定の実施形態では、脈絡膜上薬物送達デバイスは、マイクロインジェクターである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物又は参照医薬組成物は、１つ、２つ以上の投与経路による投与に好適である（例えば、脈絡膜上及び網膜下投与に好適である）。
ある特定の実施形態では、医薬組成物（又は参照医薬組成物）のベクターゲノム濃度（ＶＧＣ）は、約３×１０9ＧＣ／ｍＬ、約１×１０10ＧＣ／ｍＬ、約１．２×１０10ＧＣ／ｍＬ、約１．６×１０10ＧＣ／ｍＬ、約４×１０10ＧＣ／ｍＬ、約６×１０10ＧＣ／ｍＬ、約２×１０11ＧＣ／ｍＬ、約２．４×１０11ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０11ＧＣ／ｍＬ、約３×１０11ＧＣ／ｍＬ、約３．２×１０11ＧＣ／ｍＬ、約６．２×１０11ＧＣ／ｍＬ、約６．５×１０11ＧＣ／ｍＬ、約１×１０12ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０12ＧＣ／ｍＬ、約３×１０12ＧＣ／ｍＬ、約５×１０12ＧＣ／ｍＬ、約１．５×１０13ＧＣ／ｍＬ、約２×１０13ＧＣ／ｍＬ、又は約３×１０13ＧＣ／ｍＬである。
ある特定の実施形態では、医薬組成物（又は参照医薬組成物）のベクターゲノム濃度（ＶＧＣ）は、約３×１０9ＧＣ／ｍＬ、４×１０9ＧＣ／ｍＬ、５×１０9ＧＣ／ｍＬ、６×１０9ＧＣ／ｍＬ、７×１０9ＧＣ／ｍＬ、８×１０9ＧＣ／ｍＬ、９×１０9ＧＣ／ｍＬ、約１×１０10ＧＣ／ｍＬ、約２×１０10ＧＣ／ｍＬ、約３×１０10ＧＣ／ｍＬ、約４×１０10ＧＣ／ｍＬ、約５×１０10ＧＣ／ｍＬ、約６×１０10ＧＣ／ｍＬ、約７×１０10ＧＣ／ｍＬ、約８×１０10ＧＣ／ｍＬ、約９×１０10ＧＣ／ｍＬ、約１×１０11ＧＣ／ｍＬ、約２×１０11ＧＣ／ｍＬ、約３×１０11ＧＣ／ｍＬ、約４×１０11ＧＣ／ｍＬ、約５×１０11ＧＣ／ｍＬ、約６×１０11ＧＣ／ｍＬ、約７×１０11ＧＣ／ｍＬ、約８×１０11ＧＣ／ｍＬ、約９×１０11ＧＣ／ｍＬ、約１×１０12ＧＣ／ｍＬ、約２×１０12ＧＣ／ｍＬ、約３×１０12ＧＣ／ｍＬ、約４×１０12ＧＣ／ｍＬ、約５×１０12ＧＣ／ｍＬ、約６×１０12ＧＣ／ｍＬ、約７×１０12ＧＣ／ｍＬ、約８×１０12ＧＣ／ｍＬ、約９×１０12ＧＣ／ｍＬ、約１×１０13ＧＣ／ｍＬ、約１．５×１０13ＧＣ／ｍＬ、約２×１０13ＧＣ／ｍＬ、約３×１０13ＧＣ／ｍＬである。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の容量は、強膜と脈絡膜とを分離するための最小力を低減することができる任意の容量である。いくつかの実施形態では、医薬組成物の容量は、約５０μＬ～約１０００μＬ、５０μＬ～約５００μＬ、５０μＬ～約４００μＬ、５０μＬ～約３５０μＬ、５０μＬ～約３００μＬ、約５０μＬ～約２７５μＬ、約５０μＬ～約２５０μＬ、約５０μＬ～約２２５μＬ、約５０μＬ～約２００μＬ、約５０μＬ～約１７５μＬ、約５０μＬ～約１５０μＬ、約６０μＬ～約１４０μＬ、約７０μＬ～約１３０μＬ、約８０μＬ～約１２０μＬ、約９０μＬ～約１１０μＬ、又は約１００μＬである。
脈絡膜上腔（ＳＣＳ）送達のための現在利用可能な技術が存在する。前臨床的に、ＳＣ注射は、強膜フラップ技術、カテーテル及び標準的な皮下注射針、並びにマイクロニードルを用いて達成されている。中空の７５０ｕｍの長さのマイクロニードル（Ｃｌｅａｒｓｉｄｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）をその部分に挿入することができ、臨床試験において有望であることが示されている。Ｃｈｉｔｎｉｓら（Ｃｈｉｔｎｉｓ，Ｇ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．Ａ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ－ｓｅｎｓｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｉｎｊｅｃｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｃｉｓｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄｓ ｔｏ ｔａｒｇｅｔ ｔｉｓｓｕｅ．Ｎａｔ Ｂｉｏｍｅｄ Ｅｎｇ ３，６２１－６３１（２０１９）．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５５１－０１９－０３５０－２）によって記載されるように、力覚センシング技術を用いて設計されたマイクロニードルをＳＣ注射に利用することができる。Ｏｘｕｌａｒ Ｌｉｍｉｔｅｄは、脈絡膜上腔内でカニューレを前進させる送達システムを開発している。Ｏｒｂｉｔデバイス（ジャイロスコープ）は、可撓性カニューレによる脈絡膜上腔のカニューレ挿入を可能にする特別に設計されたシステムである。カニューレの内側のマイクロニードルは、標的化された用量送達を可能にするように、網膜下腔の中へ前進させられる。ＳＣＳへの眼の内側からの（ａｂ ｉｎｔｅｒｎｏ）アクセスは、低侵襲緑内障手術（minimally-invasive glaucoma surgery、ＭＩＧＳ）デバイスとして機能するマイクロステントを使用して達成することもできる。例としては、ＣｙＰａｓｓ（登録商標）Ｍｉｃｒｏ－Ｓｔｅｎｔ（Ａｌｃｏｎ，Ｆｏｒｔ Ｗｏｒｔｈ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳ）及びｉＳｔｅｎｔ（登録商標）（Ｇｌａｕｋｏｓ）が挙げられ、これらは、前眼房からＳＣＳへの導管を提供して濾過胞（filtering bleb）を形成することなく房水を排出するために外科的に埋め込まれる。脈絡膜上送達のために企図される他のデバイスとしては、英国特許公開第ＧＢ ２５３１９１０（Ａ）号及び米国特許第１０，９１２，８８３（Ｂ２）号に記載されるものが挙げられる。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上薬物送達デバイスは、１ミリメートル３０ゲージ針を有するシリンジである。いくつかの実施形態では、シリンジは、より大きい周径（例えば、２９ゲージ針）を有する。このデバイスを使用する注射の間、針は、強膜の基部を穿刺し、薬物を含有する流体が脈絡膜上腔に進入し、脈絡膜上腔の拡張をもたらす。その結果、注射中に触覚的及び視覚的フィードバックがある。注射後、流体は後方に流れ、主に脈絡膜及び網膜で吸収される。これは、全ての網膜細胞層及び脈絡膜細胞からの導入遺伝子タンパク質の産生をもたらす。このタイプのデバイス及び手順を使用することにより、合併症のリスクが低い迅速かつ容易な医院内処置が可能になる。
いくつかの実施形態では、マイクロニードル又はシリンジは、医薬組成物の粘度に基づいて選択される。いくつかの実施形態では、マイクロニードルは、医薬組成物が投与されたときに眼に（例えば、ＳＣＳに）生じる圧力に基づいて選択される。例えば、約３２～３５℃で中程度若しくは高い粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）を有する医薬組成物は、注射のためのより広いマイクロニードルの使用から利益を得ることができる。いくつかの実施形態では、ＳＣＳ内の圧力は、より狭いマイクロニードルが使用されるときに得られる圧力と比較して、より広いマイクロニードルが使用されるときに、より低い。いくつかの実施形態では、１０ゲージ針、１１ゲージ針、１２ゲージ針、１３ゲージ針、１４ゲージ針、１５ゲージ針、１６ゲージ針、１７ゲージ針、１８ゲージ針、１９ゲージ針、２０ゲージ針、２１ゲージ針、２２ゲージ針、２３ゲージ針、２４ゲージ針、２５ゲージ針、２６ゲージ針、２７ゲージ針、２８ゲージ針、２９ゲージ針、３０ゲージ針、３１ゲージ針、３２ゲージ針、３３ゲージ針、又は３４ゲージ針が使用される。いくつかの実施形態では、２７ゲージ針が使用される。いくつかの実施形態では、２８ゲージ針が使用される。いくつかの実施形態では、２９ゲージ針が使用される。いくつかの実施形態では、３０ゲージ針が使用される。いくつかの実施形態では、３１ゲージ針が使用される。いくつかの実施形態では、２７ゲージ針よりも小さいゲージが使用される。いくつかの実施形態では、２７ゲージ針よりも大きいゲージが使用される。いくつかの実施形態では、３０ゲージ針よりも小さいゲージが使用される。いくつかの実施形態では、３０ゲージ針よりも高いゲージが使用される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の投与中の圧力は、約１０ＰＳＩ、１５ＰＳＩ、２０ＰＳＩ、２５ＰＳＩ、３０ＰＳＩ、３５ＰＳＩ、４０ＰＳＩ、４５ＰＳＩ、５０ＰＳＩ、５５ＰＳＩ、６０ＰＳＩ、６５ＰＳＩ、７０ＰＳＩ、７５ＰＳＩ、８０ＰＳＩ、８５ＰＳＩ、９０ＰＳＩ、９５ＰＳＩ、１００ＰＳＩ、１５０ＰＳＩ、又は２００ＰＳＩである。いくつかの実施形態では、医薬組成物の投与中の圧力は、約１０ＰＳＩ、１５ＰＳＩ、２０ＰＳＩ、２５ＰＳＩ、３０ＰＳＩ、３５ＰＳＩ、４０ＰＳＩ、４５ＰＳＩ、５０ＰＳＩ、５５ＰＳＩ、６０ＰＳＩ、６５ＰＳＩ、７０ＰＳＩ、７５ＰＳＩ、８０ＰＳＩ、８５ＰＳＩ、９０ＰＳＩ、９５ＰＳＩ、１００ＰＳＩ、１５０ＰＳＩ、又は２００ＰＳＩ以下である。いくつかの実施形態では、医薬組成物の投与中のＳＣＳを開くための圧力は、約１０ＰＳＩ、１５ＰＳＩ、２０ＰＳＩ、２５ＰＳＩ、３０ＰＳＩ、３５ＰＳＩ、４０ＰＳＩ、４５ＰＳＩ、５０ＰＳＩ、５５ＰＳＩ、６０ＰＳＩ、６５ＰＳＩ、７０ＰＳＩ、７５ＰＳＩ、８０ＰＳＩ、８５ＰＳＩ、９０ＰＳＩ、９５ＰＳＩ、１００ＰＳＩ、１５０ＰＳＩ、又は２００ＰＳＩ以下である。いくつかの実施形態では、医薬組成物の投与中の圧力（又はＳＣＳを開くのに必要な圧力）は、２０ＰＳＩ～５０ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～７５ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～４０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～４０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、又は１０ＰＳＩ～８０ＰＳＩである。いくつかの実施形態では、圧力は、注射速度が減少するにつれて減少する（例えば、圧力は、４秒の注射速度から１０秒の注射速度に減少する）。いくつかの実施形態では、圧力は、針のサイズが増加するにつれて減少する。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、４３ＰＳＩ未満の注射圧力でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約４３ＰＳＩの注射圧力でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約４３～６５ＰＳＩの注射圧力でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約６５ＰＳＩの注射圧力でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、６５ＰＳＩ未満の注射圧力でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約６５～１００ＰＳＩの注射圧力でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約１００ＰＳＩの注射圧力でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、１００ＰＳＩ未満の注射圧力でヒトの眼に投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約５～１０秒の注射時間でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約１０～１５秒の注射時間でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約１５～２０秒の注射時間でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約２０～２５秒の注射時間でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、約２５～３０秒の注射時間でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、３０秒未満の注射時間でヒトの眼に投与される。いくつかの実施形態では、本明細書で提供される医薬組成物は、眼外温度（約３２～３５℃）での組成物のゲル化時間の長さの約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％である注射時間でヒトの眼に投与される。
眼（例えば、硝子体液）において少なくとも０．３３０μｇ／ｍＬ、又は房水（眼の前房）において０．１１０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎで導入遺伝子産物の濃度を３ヶ月間維持する用量が望まれ、その後、１．７０～６．６０μｇ／ｍＬの範囲の導入遺伝子産物の硝子体Ｃｍｉｎ濃度、及び／又は０．５６７～２．２０μｇ／ｍＬの範囲の房水Ｃｍｉｎ濃度が維持されるべきである。しかし、導入遺伝子産物は連続的に産生されるので（構成的プロモーターの制御下で、又は低酸素誘導性プロモーターを使用するとき、低酸素状態によって誘導される）、より低い濃度の維持が有効であり得る。導入遺伝子濃度は、体液、眼液、硝子体液、若しくは前房から収集された流体の患者試料において直接測定することができ、又は導入遺伝子産物の患者の血清濃度を測定することによって推定及び／若しくはモニタリングすることができ、導入遺伝子産物への全身曝露対硝子体曝露の比は約１：９０，０００である。（例えば、Ｘｕ Ｌ，ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｔｈａｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５４：１６１６－１６２４の１６２１ページ及び１６２３ページの表５（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に報告されたラニビズマブの硝子体液及び血清濃度を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、投与量は、１ｍｌ当たりのゲノムコピー（ＧＣ／ｍＬ）又は患者の眼に投与される（例えば、脈絡膜上に投与される）ゲノムコピーの数によって測定される。いくつかの実施形態では、２．４×１０11ＧＣ／ｍＬ～１×１０13ＧＣ／ｍＬが投与され、２．４×１０11ＧＣ／ｍＬ～５×１０11ＧＣ／ｍＬが投与され、５×１０11ＧＣ／ｍＬ～１×１０12ＧＣ／ｍＬが投与され、１×１０12ＧＣ／ｍＬ～５×１０12ＧＣ／ｍＬが投与され、又は５×１０12ＧＣ／ｍＬ～１×１０13ＧＣ／ｍＬが投与される。いくつかの実施形態では、１．５×１０13ＧＣ／ｍＬ～３×１０13ＧＣ／ｍＬが投与される。いくつかの実施形態では、約２．４×１０11ＧＣ／ｍＬ、約５×１０11ＧＣ／ｍＬ、約１×１０12ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０12ＧＣ／ｍＬ、約５×１０12ＧＣ／ｍＬ、約１×１０13ＧＣ／ｍＬ又は約１．５×１０13ＧＣ／ｍＬが投与される。いくつかの実施形態では、１×１０9～１×１０12ゲノムコピーが投与される。いくつかの実施形態では、３×１０9～２．５×１０11個のゲノムコピーが投与される。具体的な実施形態では、１×１０9～２．５×１０11ゲノムコピーが投与される。具体的な実施形態では、１×１０9～１×１０11ゲノムコピーが投与される。具体的な実施形態では、１×１０9～５×１０9ゲノムコピーが投与される。具体的な実施形態では、６×１０9～３×１０10ゲノムコピーが投与される。具体的な実施形態では、４×１０10～１×１０11ゲノムコピーが投与される。具体的な実施形態では、２×１０11～１．５×１０12ゲノムコピーが投与される。具体的な実施形態では、約３×１０9ゲノムコピーが投与される（これは、２５０μｌの容量中、約１．２×１０10ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約１×１０10ゲノムコピーが投与される（これは、２５０μｌの容量中、約４×１０10ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約６×１０10ゲノムコピーが投与される（これは、２５０μｌの容量中、約２．４×１０11ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約６．４×１０10ゲノムコピーが投与される（これは、２００μｌの容量中、約３．２×１０11ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約１．３×１０11ゲノムコピーが投与される（これは、２００μｌの容量中、約６．５×１０11ＧＣ／ｍＬに相当する）。いくつかの実施形態では、片眼当たり、又は１用量当たり、又は１投与経路当たり約６．４×１０10ゲノムコピーが投与される。いくつかの実施形態では、約６．４×１０10ゲノムコピーが、投与されるゲノムコピーの総数である。いくつかの実施形態では、片眼当たり、又は１用量当たり、又は１投与経路当たり約１．３×１０11ゲノムコピーが投与される。いくつかの実施形態では、約１．３×１０11ゲノムコピーが、投与されるゲノムコピーの総数である。いくつかの実施形態では、片眼当たり、又は１用量当たり、又は１投与経路当たり約２．５×１０11ゲノムコピーが投与される。いくつかの実施形態では、約２．５×１０11ゲノムコピーが、投与されるゲノムコピーの総数である。いくつかの実施形態では、片眼当たり、又は１用量当たり、又は１投与経路当たり約５×１０11ゲノムコピーが投与される。いくつかの実施形態では、約５×１０11ゲノムコピーが、投与されるゲノムコピーの総数である。いくつかの実施形態では、片眼当たり、又は１用量当たり、又は１投与経路当たり約３×１０12ゲノムコピーが投与される。いくつかの実施形態では、約３×１０12ゲノムコピーが、投与されるゲノムコピーの総数である。別の具体的な実施形態では、約１．６×１０11ゲノムコピーが投与される（これは、２５０μｌの容量中、約６．２×１０11ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約１．５５×１０11ゲノムコピーが投与される（これは、２５０μｌの容量中、約６．２×１０11ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約１．６×１０11ゲノムコピーが投与される（これは、２５０μｌの容量中、約６．４×１０11ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約２．５×１０11ゲノムコピー（これは、２５０μｌの容量中、約１．０×１０12に相当する）が投与される。別の具体的な実施形態では、約２．５×１０11ゲノムコピーが投与される（これは、１００μｌの容量中、約２．５×１０12ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約５×１０11ゲノムコピーが投与される（これは、２００μｌの容量中、約５×１０12ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約１．５×１０12ゲノムコピーが投与される（これは、１００μｌの容量中、約１．５×１０13ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約３×１０11ゲノムコピーが投与される（これは、１００μｌの容量中、約３×１０12ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約６×１０11ゲノムコピーが投与される（これは、２００μｌの容量中、約３×１０12ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の具体的な実施形態では、約６×１０11ゲノムコピーが投与される（これは、１００μｌの容量中、約６×１０12ＧＣ／ｍＬに相当する）。
ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約６．０×１０10ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約６．４×１０10ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約１．３×１０11ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約１．５×１０11ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約１．６×１０11ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約２．５×１０11ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０11ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約５．０×１０11ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約６×１０11ゲノムコピーが投与される。いくつかの実施形態では、片眼当たり、又は１用量当たり、又は１投与経路当たり約１．５×１０12ゲノムコピーが投与される。いくつかの実施形態では、約１．５×１０12ゲノムコピーが、投与されるゲノムコピーの総数である。
ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０12ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約１．０×１０12ＧＣ／ｍＬが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約２．５×１０12ＧＣ／ｍＬが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０12ＧＣ／ｍＬが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３．０×１０13ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり最大３．０×１０13ゲノムコピーが投与される。
ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約１．５×１０11ゲノムコピーが、脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約２．５×１０11ゲノムコピーが、脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０11ゲノムコピーが、脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約５．０×１０11ゲノムコピーが、脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約６×１０11ゲノムコピーが、脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約１．５×１０12ゲノムコピーが、脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０12ゲノムコピーが、脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、片眼当たり約２．５×１０11ゲノムコピーが、１回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０11ゲノムコピーが、１回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０11ゲノムコピーが、１００μｌの容量の１回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０11ゲノムコピーが、２００μｌの容量の１回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０11ゲノムコピーが、２回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０11ゲノムコピーが、２回の脈絡膜上注射によって投与され、各注射は、５０μｌの容量である。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３×１０11ゲノムコピーが、２回の脈絡膜上注射によって投与され、各注射は、１００μｌの容量である。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約５．０×１０11ゲノムコピーが、２回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約６×１０11ゲノムコピーが、１回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約６×１０11ゲノムコピーが、１００μｌの容量の１回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約６×１０11ゲノムコピーが、２００μｌの容量の１回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約６×１０11ゲノムコピーが、２回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約６×１０11ゲノムコピーが、２回の脈絡膜上注射によって投与され、各注射は、５０μｌの容量である。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約６×１０11ゲノムコピーが、２回の脈絡膜上注射によって投与され、各注射は、１００μｌの容量である。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり約３．０×１０13ゲノムコピーが、脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、１回の投与当たり、又は片眼当たり最大３．０×１０13ゲノムコピーが、脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、片眼当たり、約２．５×１０12ＧＣ／ｍＬが、１００μｌの容量の１回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、片眼当たり、約２．５×１０12ＧＣ／ｍＬが、２回の脈絡膜上注射によって投与され、各注射は、１００μｌの容量である。ある特定の実施形態では、片眼当たり、約１．５×１０13ＧＣ／ｍＬが、１００μｌの容量の１回の脈絡膜上注射によって投与される。
ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、２回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、右眼への第１の注射は、上側頭四分円（すなわち、１０時と１１時の位置の間）に投与され、同じ眼への第２の注射は、下鼻四分円（すなわち、４時と５時の位置の間）に投与される。特定の実施形態では、右眼への第１の注射は、下鼻四分円（すなわち、４時と５時の位置の間）に投与され、同じ眼への第２の注射は、上側頭四分円（すなわち、１０時と１１時の位置の間）に投与される。ある特定の実施形態では、左眼への第１の注射は、上側頭四分円（すなわち、１時と２時の位置の間）に投与され、同じ眼への第２の注射は、下鼻四分円（すなわち、７時と８時の位置の間）に投与される。特定の実施形態では、左眼への第１の注射は、下鼻四分円（すなわち、７時と８時の位置の間）に投与され、同じ眼への第２の注射は、上側頭四分円（すなわち、１時と２時の位置の間）に投与される。
ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、１回の脈絡膜上注射によって投与される。ある特定の実施形態では、右眼における１回の注射は、上側頭四分円（すなわち、１０時と１１時の位置の間）に投与される。ある特定の実施形態では、右眼における１回の注射は、下鼻四分円（すなわち、４時と５時の位置との間）に投与される。ある特定の実施形態では、左眼における１回の注射は、上側頭四分円（すなわち、１時と２時の位置との間）に投与される。ある特定の実施形態では、左眼における１回の注射は、下鼻四分円（すなわち、７時と８時の位置の間）に投与される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物又は参照医薬組成物は、ヒト対象に（例えば、脈絡膜上に、網膜下に、又は硝子体内に）１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、又は３０回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物又は参照医薬組成物は、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回、又は１日７回投与される。いくつかの実施形態では、同じ量のＡＡＶゲノムコピーが投与ごとに投与される。例えば、同じゲノムコピーが、脈絡膜上、網膜下、又は硝子体内に投与される。いくつかの実施形態では、同じ総量のＡＡＶゲノムコピーが投与される。例えば、同じ総量のＡＡＶゲノムコピーが、総投与回数にかかわらず、脈絡膜上、網膜下、又は硝子体内に投与される（例えば、網膜下投与が１回行われ、脈絡膜上投与が２回行われるとき、１回の網膜下投与におけるゲノムコピーは、組み合わされた両方の脈絡膜上投与におけるゲノムコピーと同じである）。
本明細書で使用される場合、別段の指定がない限り、「約」という用語は、所与の値又は範囲の±１０％以内を意味する。
４．４ 構築物及び製剤
いくつかの態様において、本明細書において提供される組換えベクターは、以下の要素を以下の順序で含む：ａ）構成的又は低酸素誘導性プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、治療用産物）をコードする配列。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組換えベクターは、以下の要素を以下の順序で含む：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）構成的又は低酸素誘導性プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片部分）をコードする配列、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列。
いくつかの態様において、本明細書において提供される組換えベクターは、以下の要素を以下の順序で含む：ａ）構成的又は低酸素誘導性プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、治療用産物）をコードする配列。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組換えベクターは、以下の要素を以下の順序で含む：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）構成的又は低酸素誘導性プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片部分）をコードする配列、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組換えベクターは、以下の要素を以下の順序で含み：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）構成的又は低酸素誘導性プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）イントロン配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子（例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片部分）をコードする配列、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列、導入遺伝子が、ＶＥＧＦのシグナルペプチド（配列番号５）を含み、導入遺伝子が切断可能なＦ／Ｆ２Ａ配列によって分離される軽鎖及び重鎖配列をコードする。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶ（ＡＡＶウイルスベクター）は、以下の要素を以下の順序で含む：ａ）構成的又は低酸素誘導性プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子（例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片部分）をコードする配列。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、ＶＥＧＦに対する完全ヒト翻訳後修飾（human post-translationally modified、ＨｕＰＴＭ）抗体である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦに対する完全ヒト翻訳後修飾抗体は、ＶＥＧＦに対するモノクローナル抗体（monoclonal antibody、ｍＡｂ）の完全ヒト翻訳後修飾抗原結合断片（「ＨｕＰＴＭＦａｂＶＥＧＦｉ」）である。いくつかの実施形態では、ＨｕＰＴＭＦａｂＶＥＧＦｉは、抗ＶＥＧＦ ｍＡｂの完全ヒトグリコシル化抗原結合断片（「ＨｕＧｌｙＦａｂＶＥＧＦｉ」）である。代替的な実施形態では、全長ｍＡｂが使用され得る。いくつかの実施形態では、導入遺伝子を送達するために使用されるＡＡＶは、ヒト網膜細胞又は光受容体細胞に対する向性を有するべきである。このようなＡＡＶは、非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含み得、特に、ＡＡＶ８キャプシドを保有するベクターが好ましい。具体的な実施形態では、本明細書に記載されるウイルスベクター又は他のＤＮＡ発現構築物は構築物Ｉであり、構築物Ｉは以下の成分を含む：（１）発現カセットに隣接するＡＡＶ８逆方向末端反復；（２）ａ）ＣＭＶエンハンサー／ニワトリを含むＣＢ７プロモーターβ－アクチンプロモーター、ｂ）ニワトリβ－アクチンイントロン及びｃ）ウサギβ－グロビンポリＡシグナル；及び（３）自己切断型フューリン（Ｆ）／Ｆ２Ａリンカーによって分離され、等量の重鎖及び軽鎖ポリペプチドの発現を確実にする、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片の重鎖及び軽鎖をコードする核酸配列。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターはシグナルペプチドを含む。いくつかの態様において、シグナルペプチドはＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号５５）である。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩＬ－２シグナル配列に由来する。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、表１に開示される任意のシグナルペプチド由来のシグナルペプチド、例えば、ＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷ ＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨ ＡＫＷＳＱＡ（ＶＥＧＦ－Ａシグナルペプチド）（配列番号５）、ＭＥＲＡＡＰＳＲＲＶ ＰＬＰＬＬＬＬＧＧＬ ＡＬＬＡＡＧＶＤＡ（フィビュリン－１シグナルペプチド）（配列番号６）、ＭＡＰＬＲＰＬＬＩＬ ＡＬＬＡＷＶＡＬＡ（ビトロネクチンシグナルペプチド）（配列番号７）、ＭＲＬＬＡＫＩＩＣＬＭＬＷＡＩＣＶＡ（補体因子Ｈシグナルペプチド）（配列番号８）、ＭＲＬＬＡＦＬＳＬＬ ＡＬＶＬＱＥＴＧＴ（オプチシンシグナルペプチド）（配列番号９）、ＭＫＷＶＴＦＩＳＩＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ（アルブミンシグナルペプチド）（配列番号２２）、ＭＡＦＬＷＬＬＳＣＷＡＬＬＧＴＴＦＧ（キモトリプシノーゲンシグナルペプチド）（配列番号２３）、ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（インターロイキン－２シグナルペプチド）（配列番号２４）、ＭＮＬＬＬＩＬＴＦＶＡＡＡＶＡ（トリプシノーゲン－２シグナルペプチド）（配列番号２５）、又はＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（変異体インターロイキン－２シグナルペプチド）（配列番号５５）を含む。別の具体的な実施形態では、本明細書に記載されるウイルスベクター又は他のＤＮＡ発現構築物は構築物ＩＩであり、構築物ＩＩは以下の成分を含む：（１）発現カセットに隣接するＡＡＶ２逆方向末端反復；（２）ａ）ＣＭＶエンハンサー／ニワトリを含むＣＢ７プロモーターβ－アクチンプロモーター、ｂ）ニワトリβ－アクチンイントロン及びｃ）ウサギβ－グロビンポリＡシグナル；及び（３）自己切断型フューリン（Ｆ）／Ｆ２Ａリンカーによって分離され、等量の重鎖及び軽鎖ポリペプチドの発現を確実にする、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片の重鎖及び軽鎖をコードする核酸配列。いくつかの実施態様では、抗ｈＶＥＧＦ抗体は、配列番号２又は配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１又は配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶキャプシドへのパッケージングに好適なウイルスベクター又は他の発現構築物は、（１）発現カセットに隣接するＡＡＶ逆方向末端反復（ＩＴＲ）、（２）１つ以上のエンハンサー及び／又はプロモーターから本質的になる調節制御エレメント、ｄ）ポリＡシグナル、及びｅ）任意選択でイントロン、並びに（３）１つ以上の目的のＲＮＡ又はタンパク質産物を提供する（例えば、コードする）導入遺伝子を含む。
いくつかの態様では、本開示は、使用のための核酸を提供し、核酸は、本明細書に記載されるプロモーター又はエンハンサー－プロモーターに作動可能に連結された治療用産物をコードする。
いくつかの態様では、本開示は、使用のための核酸を提供し、核酸は、ＨｕＰＴＭＦａｂＶＥＧＦｉ、例えばＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー）、サイトメガロウイルス（cytomegalovirus、ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（Rous sarcoma virus、ＲＳＶ）プロモーター、ＭＭＴプロモーター、ＥＦ－１アルファプロモーター、ＵＢ６プロモーター、ニワトリベータ－アクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＲＰＥ６５プロモーター及びオプシンプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに作動可能に連結されたＨｕＧｌｙＦａｂＶＥＧＦｉをコードする。具体的な実施形態では、ＨｕＰＴＭＦａｂＶＥＧＦｉは、ＣＢ７プロモーターに作動可能に連結されている。
ある特定の実施形態では、１つ以上の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）を含む組換えベクターが本明細書で提供される。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、又はＤＮＡ及びＲＮＡの組み合わせを含んでもよい。ある特定の実施形態では、ＤＮＡは、プロモーター配列、目的の治療用産物をコードする配列（導入遺伝子、例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片）、非翻訳領域、及び終結配列からなる群から選択される配列のうちの１つ以上を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組換えベクターは、目的の治療用産物をコードする配列に作動可能に連結されたプロモーターを含む。
ある特定の実施形態では、本明細書に開示される核酸例えば、ポリヌクレオチド及び核酸配列は、例えば、当業者に公知の任意のコドン最適化技術を介してコドン最適化され得る（例えば、Ｑｕａｘ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ５９：１４９－１６１によるレビューを参照されたい）。
ある特定の実施態様では、本明細書で提供される組換えベクターは、目的の治療用産物（例えば、導入遺伝子、例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片部分）をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。ある特定の実施態様では、本明細書で提供されるのは、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片部分をコードする修飾ｍＲＮＡである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組換えベクターは、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、又はｍｉＲＮＡである治療用産物をコードするヌクレオチド配列を含む。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるベクターは、タンパク質送達を調節する成分を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるウイルスベクターは、１つ以上のシグナルペプチドを含む。シグナルペプチドの例としては、ＶＥＧＦ－Ａシグナルペプチド（配列番号５）、フィビュリン－１シグナルペプチド（配列番号６）、ビトロネクチンシグナルペプチド（配列番号７）、補体Ｈ因子シグナルペプチド（配列番号８）、オプチシンシグナルペプチド（配列番号９）、アルブミンシグナルペプチド（配列番号２２）、キモトリプシノーゲンシグナルペプチド（配列番号２３）、インターロイキン－２シグナルペプチド（配列番号２４）、及びトリプシノーゲン－２シグナルペプチド（配列番号２５）、変異体インターロイキン－２シグナルペプチド（配列番号５５）が挙げられるが、これらに限定されない。
４．４．１ ウイルスベクター
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるウイルスベクターは、ＡＡＶベースのウイルスベクターである。好ましい実施形態では、本明細書で提供されるウイルスベクターは、ＡＡＶ８ベースのウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶ８ベースのウイルスベクターは、網膜細胞に対する向性を保持する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ ｒｅｐ遺伝子（複製に必要とされる）及び／又はＡＡＶ ｃａｐ遺伝子（キャプシドタンパク質の合成に必要とされる）をコードする。複数のＡＡＶ血清型が同定されている。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶの１つ以上の血清型由来の成分を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６のうちの１つ以上に由来のキャプシド成分を含む。好ましい実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、又はＡＡＶｒｈ１０血清型のうちの１つ以上に由来する成分を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組換えウイルスベクターは、ヒトにおいて複製欠損であるように改変される。ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、ハイブリッドベクター、例えば「無力（helpless）」アデノウイルスベクター中に配置されたＡＡＶベクターである。ある特定の実施態様では、本明細書で提供されるのは、第１のウイルス由来のウイルスキャプシド及び第２のウイルス由来のウイルスエンベロープタンパク質を含む組換えウイルスベクターである。具体的な実施形態では、第２のウイルスは、水疱性口内炎ウイルス（vesicular stomatitis virus、ＶＳＶ）である。より具体的な実施形態では、エンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供されるウイルスベクターは、ＡＡＶベースのウイルスベクターである。好ましい実施形態では、本明細書で提供されるウイルスベクターは、ＡＡＶ８ベースのウイルスベクターである。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶ８ベースのウイルスベクターは、網膜細胞に対する向性を保持する。特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ ｒｅｐ遺伝子（複製に必要とされる）及び／又はＡＡＶ ｃａｐ遺伝子（キャプシドタンパク質の合成に必要とされる）をコードする。複数のＡＡＶ血清型が同定されている。ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶの１つ以上の血清型由来の成分を含む。ある特定の実施形態では、本明細書に提供されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６のうちの１つ以上に由来のキャプシド成分を含む。好ましい実施形態では、本明細書で提供されるＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、又はＡＡＶｒｈ１０血清型のうちの１つ以上に由来する成分を含む。ある特定の実施形態では、本明細書で提供される組換えウイルスベクターは、ヒトにおいて複製欠損であるように改変される。ある特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、ハイブリッドベクター、例えば「無力（helpless）」アデノウイルスベクター中に配置されたＡＡＶベクターである。ある特定の実施態様では、本明細書で提供されるのは、第１のウイルス由来のウイルスキャプシド及び第２のウイルス由来のウイルスエンベロープタンパク質を含む組換えウイルスベクターである。具体的な実施形態では、第２のウイルスは、水疱性口内炎ウイルス（vesicular stomatitis virus、ＶＳＶ）である。より具体的な実施形態では、エンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
具体的な実施形態では、調節エレメントの制御下にあり、ＩＴＲが隣接する導入遺伝子の発現のための発現カセットを含むウイルスゲノムと、ＡＡＶ８キャプシドタンパク質のアミノ酸配列を有するか、又はＡＡＶ８キャプシドタンパク質のアミノ酸配列（配列番号４８）と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％若しくは９９．９％同一であるが、ＡＡＶ８キャプシドの生物学的機能を保持するウイルスキャプシドと、を含むＡＡＶ８ベクターが提供される。ある特定の実施形態では、コードされたＡＡＶ８キャプシドは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０個のアミノ酸置換を有し、ＡＡＶ８キャプシドの生物学的機能を保持する配列番号４８の配列を有する。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用されるＡＡＶは、Ｚｉｎｎｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１２（６）：１０５６－１０６８（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるようなＡｎｃ８０又はＡｎｃ８０Ｌ６５である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用されるＡＡＶは、：米国特許第９，１９３，９５６号、同第９４５８５１７号、及び同第９，５８７，２８２号並びに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号（これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているような以下のアミノ酸挿入：ＬＧＥＴＴＲＰ又はＬＡＬＧＥＴＴＲＰのうちの１つを含む。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用されるＡＡＶは、米国特許第９，１９３，９５６号、同第９，４５８，５１７号、及び同第９，５８７，２８２号並びに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号（これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されているようなＡＡＶ．７ｍ８である。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用されるＡＡＶは、米国特許第９，５８５，９７１号に開示されている任意のＡＡＶ、例えば、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂである。ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用されるＡＡＶは、以下の特許及び特許出願（これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）のいずれかに開示されているＡＡＶである：米国特許第７，９０６，１１１号、同第８，５２４，４４６号、同第８，９９９，６７８号、同第８，６２８，９６６号、同第８，９２７，５１４号、同第８，７３４，８０９号、米国特許第９，２８４，３５７号、同第９，４０９，９５３号、同第９，１６９，２９９号、同第９，１９３，９５６号、同第９４５８５１７号、及び同第９，５８７，２８２号 米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号、同第２０１５／０１２６５８８号、同第２０１７／００６７９０８号、同第２０１３／０２２４８３６号、同第２０１６／０２１５０２４号、同第２０１７／００５１２５７号、及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９号、第ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５号。
ＡＡＶ８ベースのウイルスベクターは、本明細書に記載される特定の方法において使用される。ＡＡＶベースのウイルスベクターの核酸配列並びに組換えＡＡＶ及びＡＡＶキャプシドを作製する方法は、例えば、米国特許第７，２８２，１９９（Ｂ２）号、米国特許第７，７９０，４４９（Ｂ２）号、米国特許第８，３１８，４８０（Ｂ２）号、米国特許第８，９６２，３３２（Ｂ２）号及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６号に教示されており、これらの各々は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。一態様では、導入遺伝子（例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片）をコードするＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ８）ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。具体的な実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片をコードするＡＡＶ８ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。より具体的な実施形態では、ラニビズマブをコードするＡＡＶ８ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、一本鎖ＡＡＶ（single-stranded AAV、ｓｓＡＡＶ）が上記で使用され得る。ある特定の実施形態では、自己相補的ベクター、例えば、ｓｃＡＡＶを使用することができる（例えば、Ｗｕ，２００７，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１８（２）：１７１－８２、ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ ８，Ｎｕｍｂｅｒ １６，Ｐａｇｅｓ １２４８－１２５４、並びに米国特許第６，５９６，５３５号、同第７，１２５，７１７号、及び同第７，４５６，６８３号を参照されたい）。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載される方法において使用されるウイルスベクターは、アデノウイルスベースのウイルスベクターである。組換えアデノウイルスベクターを用いて、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片中に移動させることができる。組換えアデノウイルスは、Ｅ１欠失を有し、Ｅ３欠失を有するか又は有さず、いずれかの欠失領域に挿入された発現カセットを有する第１世代ベクターであり得る。組換えアデノウイルスは、Ｅ２領域及びＥ４領域の完全欠失又は部分欠失を含む第２世代ベクターであり得る。ヘルパー依存性アデノウイルスは、アデノウイルス逆方向末端反復及びパッケージングシグナル（ｐｈｉ）のみを保持する。導入遺伝子は、約３６ｋｂの野生型サイズに近いゲノムを維持するために、スタッファー配列を伴い又は伴わずに、パッケージングシグナルと３’ＩＴＲとの間に挿入される。アデノウイルスベクターの産生のための例示的なプロトコールは、Ａｌｂａｅｔ ａｌ．，２００５，「Ｇｕｔｌｅｓｓ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ：ｌａｓｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ，」Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１８－Ｓ２７（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）で見出すことができる。
具体的な実施態様では、本明細書に記載の方法における使用のためのベクターは、関連細胞（例えば、インビボ又はインビトロでの網膜細胞）へのベクターの導入時に、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片のグリコシル化及び／又はチロシン硫酸化変異体が細胞によって発現されるように、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片（例えば、ラニビズマブ）をコードするものである。具体的な実施態様では、発現された抗ＶＥＧＦ抗原結合断片は、グリコシル化及び／又はチロシン硫酸化パターンを含む。
４．４．２ 治療用産物又は導入遺伝子
治療用産物は、例えば、治療用タンパク質（例えば、抗体）、治療用ＲＮＡ（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及びｍｉＲＮＡ）、又は治療用アプタマーであり得る。
治療用産物は、例えば、治療用タンパク質（例えば、抗体）、治療用ＲＮＡ（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及びｍｉＲＮＡ）、又は治療用アプタマーであり得る。
ある特定の実施形態では、本開示は、導入遺伝子をコードする組換えＡＡＶを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様では、本明細書で提供されるのは、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂ又は抗ＶＥＧＦ抗体をコードするｒＡＡＶウイルスベクターである。いくつかの実施態様では、本明細書で提供されるのは、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂ又は抗ＶＥＧＦ抗体をコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターである。いくつかの実施態様では、ラニビズマブをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、イズロニダーゼ（Iduronidase、ＩＤＵＡ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、ＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、イズロン酸２－スルファターゼ（Iduronate 2-Sulfatase、ＩＤＳ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＩＤＳをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、低密度リポタンパク質受容体（low-density lipoprotein receptor、ＬＤＬＲ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＬＤＬＲをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）タンパク質をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＴＰＰ１をコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、マイクロジストロフィンタンパク質をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、マイクロジストロフィンをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、マイクロジストロフィンをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、抗カリクレイン（抗ｐＫａｌ）タンパクをコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ラナンデルマブＦａｂ又は完全長抗体をコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ヒト－アルファ－サルコグリカン－ガンマ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、ｈｕフォリスタン３４４をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ヒト－アルファ－サルコグリカン－ガンマ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、ＣＬＮ２をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、ＣＬＮ３をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ヒト－アルファ－サルコグリカン－ガンマ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ｈｕフォリスタン３４４をコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ヒト－アルファ－サルコグリカン－ガンマ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、ＣＬＮ２をコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ３をコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６をコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、治療用産物（例えば、導入遺伝子）は、（１）抗ヒト血管内皮増殖因子（human vascular endothelial growth factor、ｈＶＥＧＦ）抗体又はアプタマー、（２）抗ｈＶＥＧＦ抗原結合断片、（３）抗ｈＶＥＧＦ抗原結合断片は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、又は単鎖可変断片（single chain variable fragment、ｓｃＦｖ）であり、（４）パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）、（５）トリペプチジル－ペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）、（６）バテン（ＣＬＮ３）、及び（７）ＣＬＮ６膜貫通ＥＲタンパク質（ＣＬＮ６）である。
ある特定の実施形態では、本開示は、導入遺伝子をコードする組換えＡＡＶを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様では、本明細書で提供されるのは、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂ又は抗ＶＥＧＦ抗体をコードするｒＡＡＶウイルスベクターである。いくつかの実施態様では、本明細書で提供されるのは、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂ又は抗ＶＥＧＦ抗体をコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターである。更なる実施態様では、ラニビズマブをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書において提供される。いくつかの実施形態では、ＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、イズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＩＤＳをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＬＤＬＲをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）タンパク質をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＴＰＰ１をコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、マイクロジストロフィンタンパク質をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、マイクロジストロフィンをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、マイクロジストロフィンをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、抗カリクレイン（抗ｐＫａｌ）タンパクをコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ラナンデルマブＦａｂ又は完全長抗体をコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ヒト－アルファ－サルコグリカン－ガンマ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、ｈｕフォリスタン３４４をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ヒト－アルファ－サルコグリカン－ガンマ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、ＣＬＮ２をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、ＣＬＮ３をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６をコードするｒＡＡＶウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ヒト－アルファ－サルコグリカン－ガンマ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ｈｕフォリスタン３４４をコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ヒト－アルファ－サルコグリカン－ガンマ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施態様では、ＣＬＮ２をコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ３をコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。いくつかの実施形態では、ＣＬＮ６をコードするｒＡＡＶ８ベース又はｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターが本明細書で提供される。
ある特定の実施形態では、本明細書で提供されるベクターは、（１）Ｂａｔｔｅｎ－ＣＬＮ１に関連する眼の病態に使用することができ、治療用産物がパルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）であり、（２）Ｂａｔｔｅｎ－ＣＬＮ２に関連する病態に使用することができ、治療用産物がトリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）であり、（３）Ｂａｔｔｅｎ－ＣＬＮ３に関連する眼の病態に使用することができ、治療用産物がＢａｔｔｅｎｉｎ（ＣＬＮ３）であり、（４）Ｂａｔｔｅｎ－ＣＬＮ６に関連する眼の病態に使用することができ、治療用産物がＣＬＮ６膜貫通ＥＲタンパク質（ＣＬＮ６）であり、（５）Ｂａｔｔｅｎ－ＣＬＮ７に関連する眼の病態に使用することができ、治療用産物が主要なファシリテータースーパーファミリードメイン含有８（Ｍａｊｏｒ Ｆａｃｉｌｉｔａｔｏｒ Ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ Ｄｏｍａｉｎ Ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ８、ＭＦＳＤ８）であり、（６）Ｂａｔｔｅｎ－ＣＬＮ１に関連する眼の病態に使用することができ、治療用産物がパルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）である。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子によってコードされるＨｕＰＴＭＦａｂＶＥＧＦｉ、例えばＨｕＧｌｙＦａｂＶＥＧＦｉには、ベバシズマブなどのＶＥＧＦに結合する抗体の抗原結合断片；ラニビズマブなどの抗ＶＥＧＦ Ｆａｂ部分；又はＦａｂドメイン上に追加のグリコシル化部位を含有するように操作されたそのようなベバシズマブ若しくはラニビズマブＦａｂ部分（例えば、完全長抗体のＦａｂドメイン上で高グリコシル化されているベバシズマブの誘導体の説明については、全体が参照により本明細書に組み込まれるＣｏｕｒｔｏｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６，ｍＡｂｓ ８：９９－１１２を参照されたい）を挙げることができるが、これらに限定されない。
ある特定の実施態様では、本明細書で提供されるベクターは、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子をコードする。具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、網膜細胞における発現のための適切な発現制御エレメントによって制御される。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、軽鎖及び重鎖ｃＤＮＡ配列（それぞれ配列番号１０及び１１）のベバシズマブＦａｂ部分を含む。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、ラニビズマブ軽鎖及び重鎖ｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１２及び１３）を含む。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、それぞれ配列番号３及び４の軽鎖及び重鎖を含むベバシズマブＦａｂをコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号３に記載の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗原結合断片をコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号４に記載の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合断片をコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号３に記載の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号４に記載の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、を含む抗原結合断片をコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、それぞれ配列番号１及び２の軽鎖及び重鎖を含む高グリコシル化ラニビズマブをコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗原結合断片をコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号２に記載の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合断片をコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号１に記載の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む軽鎖と、配列番号２に記載の配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、又は９９％同一であるアミノ酸配列を含む重鎖と、を含む抗原結合断片をコードする。
ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、以下の変異：Ｌ１１８Ｎ（重鎖）、Ｅ１９５Ｎ（軽鎖）、又はＱ１６０Ｎ若しくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）のうちの１つ以上を有する、配列番号３及び４の軽鎖及び重鎖を含む高グリコシル化ベバシズマブＦａｂをコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、以下の変異：Ｌ１１８Ｎ（重鎖）、Ｅ１９５Ｎ（軽鎖）、又はＱ１６０Ｎ若しくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）のうちの１つ以上を有する、配列番号１及び２の軽鎖及び重鎖を含む高グリコシル化ラニビズマブをコードする。抗原結合断片導入遺伝子ｃＤＮＡの配列は、例えば、表１に見出され得る。ある特定の実施形態では、抗原結合性断片導入遺伝子ｃＤＮＡの配列は、配列番号１０及び１１又は配列番号１２及び１３のシグナル配列を１つ以上のシグナル配列で置換することによって得られる。
ある実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、抗原結合断片をコードし、６つのベバシズマブＣＤＲのヌクレオチド配列を含む。ある実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、抗原結合断片をコードし、６つのラニビズマブＣＤＲのヌクレオチド配列を含む。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、ラニビズマブの重鎖ＣＤＲ１～３（配列番号２０、１８、及び２１）を含む重鎖可変領域を含む抗原結合断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、ラニビズマブの軽鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１４～１６）を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合断片をコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、ベバシズマブの重鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１７～１９）を含む重鎖可変領域を含む抗原結合断片をコードする。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片導入遺伝子は、ベバシズマブの軽鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１４～１６）を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合性断片をコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、ラニビズマブの重鎖ＣＤＲ１～３（配列番号２０、１８、及び２１）を含む重鎖可変領域と、ラニビズマブの軽鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１４～１６）を含む軽鎖可変領域と、を含む抗原結合断片をコードする。ある特定の実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、ベバシズマブの重鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１７～１９）を含む重鎖可変領域と、ベバシズマブの軽鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１４～１６）を含む軽鎖可変領域と、を含む抗原結合断片をコードする。
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合性断片をコードし、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱは、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン酸化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さない。具体的な実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合断片をコードし、軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）中の２つのＮ）は、それぞれ、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン酸化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さず、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン酸化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さない。具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合断片をコードし、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、アセチル化されていない。具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合断片をコードし、軽鎖ＣＤＲ１の８番目と１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）中の２つのＮ）は、それぞれ以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、アセチル化されていない。好ましい実施形態では、本明細書に記載される化学修飾（複数可）又は化学修飾（複数可）の欠如（場合によって）は、質量分析によって決定される。
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片導入遺伝子は、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合性断片をコードし、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン酸化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さない。具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合断片をコードし、重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＭ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）中のＮ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、ピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上の化学修飾を有さない。具体的な実施態様では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合断片をコードし、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、アセチル化されていない。具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合断片をコードし、重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＭ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）中のＮ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、ピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、アセチル化されていない。好ましい実施形態では、本明細書に記載される化学修飾（複数可）又は化学修飾（複数可）の欠如（場合によって）は、質量分析によって決定される。
ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号１４～１６の重鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域と、を含む抗原結合性断片をコードし、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さず、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上の化学修飾を有さない。具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合断片導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合断片をコードし、（１）重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＭ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）中のＮ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、ピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上の化学修飾を有さず；（２）軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）中の２つのＮ）は、それぞれ、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン酸化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの２つ以上を有さず、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン酸化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さない。具体的な実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域と、を含む抗原結合性断片をコードし、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）はアセチル化されておらず、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ））は、アセチル化されていない。具体的な実施形態では、抗原結合断片は、配列番号２０の重鎖ＣＤＲ１を含み、（１）重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＭ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）中のＮ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、ピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、アセチル化されておらず；（２）軽鎖ＣＤＲ１の８番目と１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）中の２つのＮ）は、それぞれ、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、アセチル化されていない。好ましい実施形態では、本明細書に記載される化学修飾（複数可）又は化学修飾（複数可）の欠如（場合によって）は、質量分析によって決定される。
ある特定の態様では、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含む抗ＶＥＧＦ抗原結合性断片、並びにそのような抗原結合性断片をコードする導入遺伝子も本明細書で提供され、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上の化学修飾を有さない。具体的な実施形態では、抗原結合性断片は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含み、軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）中の２つのＮ）はそれぞれ、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さない。具体的な実施形態では、抗原結合性断片は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含み、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、アセチル化されていない。特定の実施形態では、抗原結合性断片は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含み、軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）中の２つのＮ）はそれぞれ、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）うちの１つ以上を有し、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の意の２番目のＱ）は、アセチル化されていない。本明細書で提供される抗ＶＥＧＦ抗原結合断片及び導入遺伝子は、本明細書に記載される本発明による任意の方法において使用することができる。好ましい実施形態では、本明細書に記載される化学修飾（複数可）又は化学修飾（複数可）の欠如（場合によって）は、質量分析によって決定される。
ある特定の態様では、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含む抗ＶＥＧＦ抗原結合断片、並びにそのような抗原－ＶＥＧＦ抗原結合断片をコードする導入遺伝子も本明細書で提供され、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン酸化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さない。具体的な実施形態では、抗抗原結合断片は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含み、重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＭ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）中のＮ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、ピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上の化学修飾を有さない。具体的な実施形態では、抗原結合性断片は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含み、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、アセチル化されていない。具体的な実施形態では、抗原結合断片は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含み、重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＭ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）中のＮ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、アセチル化されていない。本明細書で提供される抗ＶＥＧＦ抗原結合断片及び導入遺伝子は、本明細書に記載される本発明による任意の方法において使用することができる。好ましい実施形態では、本明細書に記載される化学修飾（複数可）又は化学修飾（複数可）の欠如（場合によって）は、質量分析によって決定される。
ある特定の態様では、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含む抗ＶＥＧＦ抗原結合断片、並びにそのような抗原－ＶＥＧＦ抗原結合断片をコードする導入遺伝子も本明細書で提供され、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さず、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さない。具体的な実施形態では、抗原結合断片は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含み、（１）重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＭ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）中のＮ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、ピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上の化学修飾を有さず、（２）軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）中の２つのＮ）は、それぞれ、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン酸化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの２つ以上を有さず、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン酸化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有さない。具体的な実施形態では、抗原結合性断片は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含み、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、アセチル化されておらず、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、アセチル化されていない。具体的な実施形態では、抗原結合断片は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３と、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３と、を含み、（１）重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＭ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）中のＮ）は、以下の化学修飾：アセチル化、脱アミド化、ピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）中のＮ）は、アセチル化されておらず；（２）軽鎖ＣＤＲ１の８番目と１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）中の２つのＮ）は、それぞれ、以下の化学修飾：酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミン化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）のうちの１つ以上を有し、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）中の２番目のＱ）は、アセチル化されていない。本明細書で提供される抗ＶＥＧＦ抗原結合断片及び導入遺伝子は、本明細書に記載される本発明による任意の方法において使用することができる。好ましい実施形態では、本明細書に記載される化学修飾（複数可）又は化学修飾（複数可）の欠如（場合によって）は、質量分析によって決定される。
４．５ 疾患
本明細書（例えば、セクション４．１）に提供される医薬組成物又は参照医薬組成物は、ｎＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ）、萎縮型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、又はバッテン病と診断された対象に投与することができる。
本明細書（例えば、セクション４．１）に提供される医薬組成物又は参照医薬組成物は、ｎＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ）、萎縮型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、又はバッテン病と診断された対象に投与することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるのは、ｎＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ）、萎縮型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、又はバッテンと診断された対象を、治療有効量の医薬組成物を脈絡膜上注射によって（例えば、マイクロニードルを有するマイクロインジェクターなどの脈絡膜上薬物送達デバイスを介して）対象に投与することによって治療する方法である。
いくつかの実施形態では、約２．５×１０11ＧＣ／眼、約５×１０11ＧＣ／眼、又は約１．５×１０12ＧＣ／眼の、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのリン酸二水素カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬのリン酸水素二ナトリウム無水物、４０．０ｍｇ／ｍＬ、４％ｗ／ｖスクロース、及び任意選択で界面活性剤を含む医薬組成物の構築物ＩＩが、脈絡膜上投与によって患者に投与される。いくつかの実施形態では、患者は糖尿病性網膜症を有する。
いくつかの実施形態では、約２．５×１０11ＧＣ／眼、約５×１０11ＧＣ／眼、又は約１．５×１０12ＧＣ／眼の、１０％ｗ／ｖスクロースを含む医薬組成物の構築物ＩＩを含む医薬組成物が、脈絡膜上投与によって患者に投与される。いくつかの実施形態では、患者は糖尿病性網膜症を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２４０ ｍＯｓｍ／ｋｇ以上の張度／重量オスモル濃度を有する。
いくつかの態様では、本明細書で開示されるのは、治療有効量の医薬組成物を対象に投与することを含む、ムコ多糖症ＩＶＡ型（ＭＰＳ ＩＶＡ）、ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、同型接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、冠状動脈疾患、脳血管疾患、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー及び孤発性封入体筋炎、又はカリクレインに関連する疾患と診断された対象を治療するために好適な医薬組成物、又はその方法である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＳにおいて投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書（例えば、セクション４．１）で提供される医薬組成物又は参照医薬組成物は、（１）バッテン－ＣＬＮ２と診断された対象に投与され得、治療用産物がトリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）であり、（２）アッシャー症候群タイプ１と診断された対象に投与され得、治療用産物がミオシンＶＩＩＡ（Myosin VIIA、ＭＹＯ７Ａ）であり、（３）アッシャー症候群タイプ１と診断された対象に投与され得、治療用産物がカドヘリン関連２３（Cadherin Related 23、ＣＤＨ２３）であり、（４）アッシャー症候群タイプ２と診断された対象に投与され得、治療用産物がプロトカドヘリン関連１５（Protocadherin Related 15、ＰＣＤＨ１５）であり、（５）アッシャー症候群タイプ２と診断された対象に投与され得、治療用産物がアシュリン（Usherin、ＵＳＨ２Ａ）であり、（６）アッシャー症候群タイプ３と診断された対象に投与され得、治療用産物がクラリン１（Clarin 1、ＣＬＲＮ１）であり、（７）シュタルガルト（Stargardt’s）病と診断された対象に投与され得、治療用産物がＡＴＰ結合カセットサブファミリーＡメンバー４（ATP Binding Cassette Subfamily A Member 4、ＡＢＣＡ４）であり、（８）シュタルガルト病と診断された対象に投与され得、治療用産物がＥＬＯＶＬ脂肪酸エロンガーゼ４（Elongase 4、ＥＬＯＶＬ４）であり、（９）赤色－緑色色盲と診断された対象に投与され得、治療用産物がＬオプシン（ＯＰＮ１ＬＷ）であり、（１０）赤色－緑色色盲と診断された対象に投与され得、治療用産物がＭオプシン（ＯＰＮ１ＭＷ）であり、（１１）青色錐体単色性と診断された対象に投与され得、治療用産物がＭオプシン（ＯＰＮ１ＭＷ）であり、（１２）レーバー先天性黒内障１型（ＬＣＡ １）と診断された対象に投与され得、治療用産物がグアニル酸シクラーゼ２Ｄレチナール（ＧＵＣＹ２Ｄ）であり、（１３）レーバー先天性黒内障２（ＬＣＡ ２）と診断された対象に投与され得、治療用産物がレチノイドイソメロヒドロラーゼＲＰＥ６５（ＲＰＥ６５）であり、（１４）レーバー先天性黒内障－４（ＬＣＡ ４）と診断された対象に投与され得、治療用産物がアリール炭化水素受容体相互作用タンパク質様１（Aryl Hydrocarbon Receptor Interacting Protein Like 1、ＡＩＰＬ１）であり、（１５）レーバー先天性黒内障－７（ＬＣＡ ７）と診断された対象に投与され得、治療用産物が錐体杆体ホメオボックス（Cone-Rod Homeobox、ＣＲＸ）であり、（１６）レーバー先天黒内障８型（ＬＣＡ ８）と診断された対象に投与され得、治療用産物がクラム細胞極性複合体成分１（Crumbs Cell Polarity Complex Component 1、ＣＲＢ１）であり、（１７）レーバー先天性黒内障－９（ＬＣＡ ９）と診断された対象に投与され得、治療用産物がニコチンアミドヌクレオチドアデニリルトランスフェラーゼ１（ＮＭＮＡＴ１）であり、（１８）レーバー先天性黒内障－１０（ＬＣＡ １０）と診断された対象に投与され得、治療用産物が中心体タンパク質２９０（Centrosomal Protein 290、ＣＥＰ２９０）であり、（１９）レーバー先天性黒内障－１１（ＬＣＡ １１）と診断された対象に投与され得、治療用産物がイノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ１（Inosine Monophosphate Dehydrogenase 1、ＩＭＰＤＨ１）であり、（２０）レーバー先天性黒内障－１５（ＬＣＡ １５）と診断された対象に投与され得、治療用産物がタビー様タンパク質１（Tubby Like Protein 1、ＴＵＬＰ１）であり、（２１）ＬＨＯＮと診断された対象に投与され得、治療用産物がミトコンドリアにコードされたＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ４（Mitochondrially Encoded NADH Dehydrogenase 4、ＭＴ－ＮＤ４）であり、（２２）ＬＨＯＮと診断された対象に投与され得、治療用産物がミトコンドリアにコードされたＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ６（Mitochondrially Encoded NADH Dehydrogenase 6、ＭＴ－ＮＤ６）であり、（２３）コロイデレミアと診断された対象に投与され得、治療用産物がＲａｂ Ｅｓｃｏｒｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ １（Ｒａｂ Ｅｓｃｏｒｔ Ｐｒｏｔｅｉｎ １、ＣＨＭ）であり、（２４）Ｘ連鎖網膜分離症（X-linked retinoschisis、ＸＬＲＳ）と診断された対象に投与され得、治療用産物がレチノスキシン（Retinoschisin、ＲＳ１）であり、（２５）バルデー・ビードル症候群１と診断された対象に投与され得、治療用産物がバルデー・ビードル症候群１型（Bardet-Biedl Syndrome 1、ＢＢＳ１）であり、（２６）バルデー・ビードル症候群６と診断された対象に投与され得、治療用産物がマクージック・カウフマン症候群（McKusick-Kaufman Syndrome、ＭＫＫＳ）であり、（２７）バルデー・ビードル症候群１０と診断された対象に投与され得、治療用産物がバルデー・ビードル症候群１０（Bardet-Biedl Syndrome 10、ＢＢＳ１０）であり、（２８）錐体ジストロフィーと診断された対象に投与され得、治療用産物がグアニル酸シクラーゼ活性化剤１Ａ（Guanylate Cyclase Activator 1A、ＧＵＣＡ１Ａ）であり、（２９）視神経萎縮症と診断された対象に投与され得、治療用産物がＯＰＡ１ミトコンドリアダイナミン様ＧＴＰａｓｅ（ＯＰＡ１）であり、（３０）色素性網膜炎１と診断された対象に投与され得、治療用産物がＲＰ１軸糸微小管関連（ＲＰ１）であり、（３１）色素性網膜炎２と診断された対象に投与され得、治療用産物がＡＲＬ３ ＧＴＰａｓｅのＲＰ２活性化剤（ＲＰ２）であり、（３２）色素性網膜炎７と診断された対象に投与され得、治療用産物がペリフェリン２（ＰＲＰＨ２）であり、（３３）網膜色素変性症１１と診断された対象に投与され得、治療用産物がｍＲＮＡ前駆体プロセシング因子３１（Pre-mRNA Processing Factor 31、ＰＲＰＦ３１）であり、（３４）網膜色素変性症１３と診断された対象に投与され得、治療用産物がｍＲＮＡ前駆体プロセシング因子８（Pre-mRNA Processing Factor 8、ＰＲＰＦ８）であり、（３５）網膜色素変性症３７と診断された対象に投与され得、治療用産物が核内受容体サブファミリー２グループＥメンバー３（Nuclear Receptor Subfamily 2 Group E Member 3、ＮＲ２Ｅ３）であり、（３６）網膜色素変性症３８と診断された対象に投与され得、治療用産物がＭＥＲ癌原遺伝子チロシンキナーゼ（MER Proto-Oncogene,Tyrosine Kinase、ＭＥＲＴＫ）であり、（３７）網膜色素変性症４０と診断された対象に投与され得、治療用産物がホスホジエステラーゼ６Ｂ（Phosphodiesterase 6B、ＰＤＥ６Ｂ）であり、（３８）網膜色素変性症４１と診断された対象に投与され得、治療用産物がプロミニン１（Prominin 1、ＰＲＯＭ１）であり、（３９）網膜色素変性症５６と診断された対象に投与され得、治療用産物が光受容体間マトリックスプロテオグリカン２（Interphotoreceptor Matrix Proteoglycan 2、ＩＭＰＧ２）であり、（４０）網膜色素変性症６２と診断された対象に投与され得、治療用産物が雄性生殖細胞関連キナーゼ（Male Germ Cell Associated Kinase、ＭＡＫ）であり、（４１）網膜色素変性症８０と診断された対象に投与され得、治療用産物が鞭毛内輸送１４０（Intraflagellar Transport 140、ＩＦＴ１４０）であり、又は（４２）最良の疾患及び治療用産物は、ベストロフィン１（Bestrophin 1、ＢＥＳＴ１）である。
４．６ アッセイ
当業者は、本明細書に記載のアッセイ及び／又は当技術分野で公知の技術を使用して、本明細書に記載の組成物及び方法を研究し、例えば、本明細書で提供される製剤を試験することができる。セクション５に詳述されるように、以下のアッセイも本明細書で提供される。
当業者は、本明細書に記載のアッセイ及び／又は当技術分野で公知の技術を使用して、本明細書に記載の組成物及び方法を研究し、例えば、本明細書で提供される製剤を試験することができる。セクション５に詳述されるように、以下のアッセイも本明細書で提供される。
４．６．１ 超音波Ｂスキャン
高周波超音波（Ｕ／Ｓ）プローブ（ＵＢＭ Ｐｌｕｓ、Ａｃｃｕｔｏｍｅ、Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ，ＵＳＡ）を使用して、約３２～３５℃で、粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）に目標を絞って様々な量（例えば、低粘度から高粘度までの範囲で ２５μＬ～５００μＬ）を注射した後に、動物の眼のエクスビボでのＳＣＳの２Ｄ断面画像を生成することによって、ＳＣＳの厚さを決定することができる。Ｕ／Ｓプローブカバー（Ｃｌｅａｒｓｃａｎ、Ｅｙｅ－Ｓｕｒｇｉｃａｌ－Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ，ＭＮ）をＵＢＭ Ｐｌｕｓに取り付けて、Ｕ／Ｓ画像取得を容易にすることができる。Ｕ／Ｓプローブは、眼の周囲の矢状ビュー（例えば、８つの矢状ビュー）を取得するために使用され得る。Ｕ／Ｓ Ｂスキャンの後処理は、例えば、強膜輪の１、５、及び９ｍｍ後方で、外側強膜から内側網膜までの厚さを見出すために行うことができる。各眼の平均値、中央値、及び標準偏差を計算することができる。
高周波超音波（Ｕ／Ｓ）プローブ（ＵＢＭ Ｐｌｕｓ、Ａｃｃｕｔｏｍｅ、Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ，ＵＳＡ）を使用して、約３２～３５℃で、粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）に目標を絞って様々な量（例えば、低粘度から高粘度までの範囲で ２５μＬ～５００μＬ）を注射した後に、動物の眼のエクスビボでのＳＣＳの２Ｄ断面画像を生成することによって、ＳＣＳの厚さを決定することができる。Ｕ／Ｓプローブカバー（Ｃｌｅａｒｓｃａｎ、Ｅｙｅ－Ｓｕｒｇｉｃａｌ－Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ，ＭＮ）をＵＢＭ Ｐｌｕｓに取り付けて、Ｕ／Ｓ画像取得を容易にすることができる。Ｕ／Ｓプローブは、眼の周囲の矢状ビュー（例えば、８つの矢状ビュー）を取得するために使用され得る。Ｕ／Ｓ Ｂスキャンの後処理は、例えば、強膜輪の１、５、及び９ｍｍ後方で、外側強膜から内側網膜までの厚さを見出すために行うことができる。各眼の平均値、中央値、及び標準偏差を計算することができる。
４．６．２ 液体体積に基づくＳＣＳ厚さの測定
３Ｄクライオ再構成イメージングは、ＳＣＳ厚さを測定するために使用されることができる。例えば、赤色蛍光粒子を含有する２５μＬ～５００μＬを注射した動物の眼を、注射後数分（例えば、３～５分）凍結し、凍結切片作製のために調製する。デジタルカメラを使用して、クリオスタットで試料をスライスすることによって、３００μｍごとに組織のクライオブロックの１つの赤色蛍光画像を得ることができる。赤色蛍光画像からなる画像スタックを分析して、ＳＣＳ厚さを決定する。
３Ｄクライオ再構成イメージングは、ＳＣＳ厚さを測定するために使用されることができる。例えば、赤色蛍光粒子を含有する２５μＬ～５００μＬを注射した動物の眼を、注射後数分（例えば、３～５分）凍結し、凍結切片作製のために調製する。デジタルカメラを使用して、クリオスタットで試料をスライスすることによって、３００μｍごとに組織のクライオブロックの１つの赤色蛍光画像を得ることができる。赤色蛍光画像からなる画像スタックを分析して、ＳＣＳ厚さを決定する。
４．６．３ 液体体積に基づくＳＣＳ厚さの測定
Ｕ／Ｓ Ｂスキャンを使用して、粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）の範囲の医薬組成物を動物のＳＣＳに注射した後のＳＣＳの厚さを決定することができる。高周波超音波Ｂスキャンを使用して、ＳＣＳ崩壊の速度を決定することができる。毛様体扁平部上の８つの矢状ビューを取得することができる：（ａ）注射部位上の鼻腔上、（ｂ）頭側、（ｃ）経鼻、（ｄ）側頭上、（ｅ）側頭部、（ｆ）側頭下、（ｇ）下側、及び（ｈ）鼻腔下。
Ｕ／Ｓ Ｂスキャンを使用して、粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）の範囲の医薬組成物を動物のＳＣＳに注射した後のＳＣＳの厚さを決定することができる。高周波超音波Ｂスキャンを使用して、ＳＣＳ崩壊の速度を決定することができる。毛様体扁平部上の８つの矢状ビューを取得することができる：（ａ）注射部位上の鼻腔上、（ｂ）頭側、（ｃ）経鼻、（ｄ）側頭上、（ｅ）側頭部、（ｆ）側頭下、（ｇ）下側、及び（ｈ）鼻腔下。
Ｕ／Ｓビューに対してオフライン後処理を実行して、ＳＣＳ厚さを測定することができる。Ｕ／Ｓプローブは、１５μｍの最小軸方向分解能を有することができる。各Ｕ／Ｓビューについて、強膜棘の５ｍｍ後方で強膜に垂直な線分を作成することができる。線は、強膜の外側表面で始まり、網膜の内側表面で終わることができる。強膜及び脈絡網膜を測定に含めて、線が確実に垂直になるようにすることができる。次いで、ＳＣＳの厚さは、測定された線の長さから組織の厚さを減算することによって計算される。曲線当てはめを行って、ＳＣＳ崩壊の速度を決定する。
Ｕ／Ｓ Ｂスキャンは、経時的に複数の場所におけるＳＣＳ厚さを決定するために使用されることができ、ＳＣＳ崩壊率を計算することができる。注射された蛍光物質のＳＣＳからのおおよそのクリアランス速度は、蛍光がもはや検出されなくなるまで、インビボで動物の眼における蛍光眼底画像を経時的に撮影することによって見出すことができる。
４．６．４ 眼底イメージングによるＳＣＳクリアランス動態
ＳＣＳにおける運動に対する粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）の効果を研究するために、粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）の範囲であり、フルオレセインを含有する異なる医薬組成物をＳＣＳに注射することができる。注射された蛍光物質のＳＣＳからのおおよそのクリアランス速度又はクリアランス時間は、インビボで動物の眼において経時的に蛍光眼底画像を撮影することによって見出すことができる。いくつかの場合において、クリアランス速度は、総クリアランス時間を決定することによって決定され得、クリアランス時定数（ｔｃｌｅａｒａｎｃｅ）は、経時的な全蛍光シグナルの正規化された濃度から導出される曲線当てはめを使用して計算される。トロピカミド及びフェニレフリン（Ａｋｏｒｎ、Ｌａｋｅ Ｆｏｒｅｓｔ、ＩＬ）の局所点眼剤を各イメージングセッションの前に投与して、眼を散大させることができる。１３０°レンズアタッチメント及び内蔵フルオレセイン血管造影モジュールを有するＲｅｔＣａｍ ＩＩ（Ｃｌａｒｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ）を使用して、画像を取得することができる。ＲｅｔＣａｍ ＩＩからの青色光出力を、例えば、０．０００９、１．６、及び２．４ Ｗ／ｍ２に設定して、複数の画像を撮影することができる。眼球の内部表面全体を捕捉しようとして、９つの画像、すなわち、中心部、鼻腔上、側頭上、側頭部、側頭下、下側、鼻腔下、及び鼻を捕捉することができる。これは、遠くの周辺への撮像を可能にする。イメージングは、注射直後、１時間毎、３時間毎に１２時間、及び注射後２日毎に行うことができる。蛍光が目視観察によって検出できない最初の時点として定義することができる総クリアランス時間を、注射した全ての眼について決定する。フルオレセインイソチオシアネートコンジュゲートＡＡＶ（Fluorescein isothiocyanate-conjugated AAV、ＦＩＴＣ－ＡＡＶ）又はＦＩＴＣコンジュゲートＡＡＶキャプシドタンパク質特異的モノクローナル抗体は、ＳＣＳにおけるＡＡＶ粒子の移動及びクリアランスを追跡するために、類似の実験において利用され得る。ＡＡＶの蛍光標識のための方法は、当技術分野において既知である（Ｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ．Ａｄｖ．２０２０；６：ｅａａｚ３６２１、及びＴｓｕｉ，Ｔ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ４２，３３５－３４２（２００５）。多くのＡＡＶ血清型を認識する（ＦＩＴＣコンジュゲートされた）抗体が市販されている。
ＳＣＳにおける運動に対する粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）の効果を研究するために、粘度及び／又は弾性率（Ｇ’）の範囲であり、フルオレセインを含有する異なる医薬組成物をＳＣＳに注射することができる。注射された蛍光物質のＳＣＳからのおおよそのクリアランス速度又はクリアランス時間は、インビボで動物の眼において経時的に蛍光眼底画像を撮影することによって見出すことができる。いくつかの場合において、クリアランス速度は、総クリアランス時間を決定することによって決定され得、クリアランス時定数（ｔｃｌｅａｒａｎｃｅ）は、経時的な全蛍光シグナルの正規化された濃度から導出される曲線当てはめを使用して計算される。トロピカミド及びフェニレフリン（Ａｋｏｒｎ、Ｌａｋｅ Ｆｏｒｅｓｔ、ＩＬ）の局所点眼剤を各イメージングセッションの前に投与して、眼を散大させることができる。１３０°レンズアタッチメント及び内蔵フルオレセイン血管造影モジュールを有するＲｅｔＣａｍ ＩＩ（Ｃｌａｒｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ）を使用して、画像を取得することができる。ＲｅｔＣａｍ ＩＩからの青色光出力を、例えば、０．０００９、１．６、及び２．４ Ｗ／ｍ２に設定して、複数の画像を撮影することができる。眼球の内部表面全体を捕捉しようとして、９つの画像、すなわち、中心部、鼻腔上、側頭上、側頭部、側頭下、下側、鼻腔下、及び鼻を捕捉することができる。これは、遠くの周辺への撮像を可能にする。イメージングは、注射直後、１時間毎、３時間毎に１２時間、及び注射後２日毎に行うことができる。蛍光が目視観察によって検出できない最初の時点として定義することができる総クリアランス時間を、注射した全ての眼について決定する。フルオレセインイソチオシアネートコンジュゲートＡＡＶ（Fluorescein isothiocyanate-conjugated AAV、ＦＩＴＣ－ＡＡＶ）又はＦＩＴＣコンジュゲートＡＡＶキャプシドタンパク質特異的モノクローナル抗体は、ＳＣＳにおけるＡＡＶ粒子の移動及びクリアランスを追跡するために、類似の実験において利用され得る。ＡＡＶの蛍光標識のための方法は、当技術分野において既知である（Ｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ．Ａｄｖ．２０２０；６：ｅａａｚ３６２１、及びＴｓｕｉ，Ｔ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ４２，３３５－３４２（２００５）。多くのＡＡＶ血清型を認識する（ＦＩＴＣコンジュゲートされた）抗体が市販されている。
４．６．５ ２Ｄの周囲への拡散を特徴付けるためのフラットマウント
フルオレセイン、又は蛍光標識ＡＡＶを含有する本開示の医薬組成物は、ＳＣＳに注射される。ＳＣＳ注射及び凍結後、粒子及びフルオレセインの２Ｄの拡散を評価するために眼を調製することができる。凍結した眼を輪部から後極まで切開して、等距離の強膜フラップを作製する。得られた強膜フラップを広げ、凍結した硝子体液、水晶体、及び房水を除去する。
フルオレセイン、又は蛍光標識ＡＡＶを含有する本開示の医薬組成物は、ＳＣＳに注射される。ＳＣＳ注射及び凍結後、粒子及びフルオレセインの２Ｄの拡散を評価するために眼を調製することができる。凍結した眼を輪部から後極まで切開して、等距離の強膜フラップを作製する。得られた強膜フラップを広げ、凍結した硝子体液、水晶体、及び房水を除去する。
１００ｍｍレンズ（Ｃａｎｏｎ）を備えたデジタルＳＬＲカメラ（Ｃａｎｏｎ ６０Ｄ、Ｃａｎｏｎ、Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，Ｎ．Ｙ．）を使用して、明視野及び蛍光画像を取得することができる。カメラパラメータは一定に保持される。フルオレセイン拡散の面積を得るために、緑色光学バンドパスフィルター（５２０±１０ｎｍ、Ｅｄｍｕｎｄｓ Ｏｐｔｉｃｓ、Ｂａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）をレンズ上に配置することができ、多色ＬＥＤ電球（ＳシリーズＲＧＢ ＭＲ１６／Ｅ２６．ＨｉｔＬｉｇｈｔｓ、Ｂａｔｏｎ Ｒｏｕｇｅ，Ｌａ．）の紫色設定を有するランプによって試料を照明することができる。赤色蛍光粒子の位置を可視化するために、赤色フィルター（６１０±１０ｎｍ、Ｅｄｍｕｎｄｓ Ｏｐｔｉｃｓ）をレンズ上に配置することができ、試料は、緑色光に切り替えられた同じランプで照射することができる。閾値を上回る緑色及び赤色蛍光の面積をＩｍａｇｅＪ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）を使用して、各眼について計算することができる。閾値化は、バックグラウンド信号の目視検査に基づいて手動で設定することができる。
４．６．６ 眼内圧測定
圧力測定システムを使用して、ＳＣＳ注射後のＳＣＳ内の圧力を測定することができる。動物は、ケタミン／キシラジンカクテルの皮下注射によって終末麻酔することができる。ＳＣＳ注射後（Ｎ＝４）、ＳＣＳ内の圧力を数分毎に測定することができる。圧力は、注射前から元のベースライン値（すなわち、約１５ｍｍＨｇ）に達するまでモニタリングされる。測定後、致死量のペントバルビタールを静脈注射して動物を安楽死させる。２回目のＳＣＳ注射は、動物の死後に行うことができる。死後測定において、血圧は、注射が行われた組織間隙（すなわち、ＳＣＳ）においてのみ測定される。
圧力測定システムを使用して、ＳＣＳ注射後のＳＣＳ内の圧力を測定することができる。動物は、ケタミン／キシラジンカクテルの皮下注射によって終末麻酔することができる。ＳＣＳ注射後（Ｎ＝４）、ＳＣＳ内の圧力を数分毎に測定することができる。圧力は、注射前から元のベースライン値（すなわち、約１５ｍｍＨｇ）に達するまでモニタリングされる。測定後、致死量のペントバルビタールを静脈注射して動物を安楽死させる。２回目のＳＣＳ注射は、動物の死後に行うことができる。死後測定において、血圧は、注射が行われた組織間隙（すなわち、ＳＣＳ）においてのみ測定される。
４．６．７ 温度ストレスアッセイ
本明細書で提供される製剤の相対的安定性を評価するために、１．０×１０12ＧＣ／ｍＬにて３７℃で４日間にわたって、温度ストレス発生安定性試験を実施することができる。安定性を評価するために使用され得るアッセイとしては、インビトロ相対効力（ＩＶＲＰ）、ベクターゲノム濃度（ｄｄＰＣＲによるＶＧＣ）、色素蛍光による遊離ＤＮＡ、動的光散乱、外観、及びｐＨが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で提供される製剤における－８０℃（≦－６０℃）及び－２０℃（－２５℃～－１５℃）でのインビトロ相対効力及び他の品質の維持を実証するために、長期開発安定性試験を１２ヶ月間実施することができる。
本明細書で提供される製剤の相対的安定性を評価するために、１．０×１０12ＧＣ／ｍＬにて３７℃で４日間にわたって、温度ストレス発生安定性試験を実施することができる。安定性を評価するために使用され得るアッセイとしては、インビトロ相対効力（ＩＶＲＰ）、ベクターゲノム濃度（ｄｄＰＣＲによるＶＧＣ）、色素蛍光による遊離ＤＮＡ、動的光散乱、外観、及びｐＨが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で提供される製剤における－８０℃（≦－６０℃）及び－２０℃（－２５℃～－１５℃）でのインビトロ相対効力及び他の品質の維持を実証するために、長期開発安定性試験を１２ヶ月間実施することができる。
４．６．８ インビトロ相対効力（ＩＶＲＰ）アッセイ
ｄｄＰＣＲ ＧＣ力価を遺伝子発現に関連付けるために、ＨＥＫ２９３細胞を形質導入し、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂタンパク質レベルについて細胞培養上清をアッセイすることによって、インビトロバイオアッセイを実施することができる。ＨＥＫ２９３細胞を、３つのポリ－Ｄ－リジンがコーティングされた９６ウェル組織培養プレート上に一晩プレーティングする。次いで、細胞を野生型ヒトＡｄ５ウイルスで前感染させ、続いて、ＡＡＶベクター参照標準及び被験物質の３つの独立して調製された連続希釈物で形質導入し、各調製物を別々のプレート上の異なる位置にプレーティングする。形質導入後３日目に、細胞培養培地をプレートから収集し、ＥＬＩＳＡを介してＶＥＧＦ結合Ｆａｂタンパク質レベルについて測定する。ＥＬＩＳＡについては、ＶＥＧＦでコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートをブロッキングし、次いで、収集した細胞培養培地とともにインキュベートして、ＨＥＫ２９３細胞によって産生された抗ＶＥＧＦ Ｆａｂを捕捉する。Ｆａｂ特異的抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して、ＶＥＧＦ捕捉Ｆａｂタンパク質を検出する。洗浄後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）基質溶液を添加し、発色させ、停止緩衝液で停止させ、プレートをプレートリーダーで読み取る。ＨＲＰ生成物の吸光度又はＯＤを対数希釈に対してプロットし、平行性類似性試験に合格した後に４パラメータロジスティック回帰モデルに適合させた同じプレート上の参照標準に対して、式：ＥＣ５０参照÷ＥＣ５０被験物質を用いて、各被験物質の相対効力を計算する。被験物質の効力を、３枚のプレートの加重平均から計算した参照標準効力の百分率として報告する。
ｄｄＰＣＲ ＧＣ力価を遺伝子発現に関連付けるために、ＨＥＫ２９３細胞を形質導入し、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂタンパク質レベルについて細胞培養上清をアッセイすることによって、インビトロバイオアッセイを実施することができる。ＨＥＫ２９３細胞を、３つのポリ－Ｄ－リジンがコーティングされた９６ウェル組織培養プレート上に一晩プレーティングする。次いで、細胞を野生型ヒトＡｄ５ウイルスで前感染させ、続いて、ＡＡＶベクター参照標準及び被験物質の３つの独立して調製された連続希釈物で形質導入し、各調製物を別々のプレート上の異なる位置にプレーティングする。形質導入後３日目に、細胞培養培地をプレートから収集し、ＥＬＩＳＡを介してＶＥＧＦ結合Ｆａｂタンパク質レベルについて測定する。ＥＬＩＳＡについては、ＶＥＧＦでコーティングした９６ウェルＥＬＩＳＡプレートをブロッキングし、次いで、収集した細胞培養培地とともにインキュベートして、ＨＥＫ２９３細胞によって産生された抗ＶＥＧＦ Ｆａｂを捕捉する。Ｆａｂ特異的抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して、ＶＥＧＦ捕捉Ｆａｂタンパク質を検出する。洗浄後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）基質溶液を添加し、発色させ、停止緩衝液で停止させ、プレートをプレートリーダーで読み取る。ＨＲＰ生成物の吸光度又はＯＤを対数希釈に対してプロットし、平行性類似性試験に合格した後に４パラメータロジスティック回帰モデルに適合させた同じプレート上の参照標準に対して、式：ＥＣ５０参照÷ＥＣ５０被験物質を用いて、各被験物質の相対効力を計算する。被験物質の効力を、３枚のプレートの加重平均から計算した参照標準効力の百分率として報告する。
ｄｄＰＣＲ ＧＣ力価を機能的遺伝子発現に関連付けるために、ＨＥＫ２９３細胞に形質導入し、導入遺伝子（例えば、酵素）活性についてアッセイすることによって、インビトロバイオアッセイを行うことができる。ＨＥＫ２９３細胞を、３つの９６ウェル組織培養プレート上に一晩プレーティングする。次いで、細胞を野生型ヒトアデノウイルス血清型５ウイルスで前感染させ、続いて酵素参照標準及び被験物質の３つの独立して調製された連続希釈物で形質導入し、各調製物を別々のプレート上の異なる位置にプレーティングする。形質導入後２日目に、細胞を溶解し、低ｐＨで処理して酵素を活性化し、導入遺伝子（酵素）による切断の際に蛍光シグナルの増加を生じるペプチド基質を使用して酵素活性についてアッセイする。蛍光又はＲＦＵを対数希釈に対してプロットし、平行性類似性試験に合格した後に４パラメータロジスティック回帰モデルに適合させた同じプレート上の参照標準に対して、式：ＥＣ５０参照÷ＥＣ５０被験物質を用いて、各被験物質の相対効力を計算する。被験物質の効力を、３枚のプレートの加重平均から計算した参照標準効力の百分率として報告する。
４．６．９ ベクターゲノム濃度アッセイ
フルオレセインイソチオシアネートコンジュゲートＡＡＶ（ＦＩＴＣ－ＡＡＶ）又はＦＩＴＣコンジュゲートＡＡＶキャプシドタンパク質特異的モノクローナル抗体は、ＳＣＳにおけるＡＡＶ粒子の移動及びクリアランスを追跡するために、類似の実験において利用され得る。ＡＡＶの蛍光標識のための方法は、当技術分野において既知である（Ｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ．Ａｄｖ．２０２０；６：ｅａａｚ３６２１、及びＴｓｕｉ，Ｔ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ４２，３３５－３４２（２００５）。多くのＡＡＶ血清型を認識する（ＦＩＴＣコンジュゲートされた）抗体が市販されている。
フルオレセインイソチオシアネートコンジュゲートＡＡＶ（ＦＩＴＣ－ＡＡＶ）又はＦＩＴＣコンジュゲートＡＡＶキャプシドタンパク質特異的モノクローナル抗体は、ＳＣＳにおけるＡＡＶ粒子の移動及びクリアランスを追跡するために、類似の実験において利用され得る。ＡＡＶの蛍光標識のための方法は、当技術分野において既知である（Ｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ．Ａｄｖ．２０２０；６：ｅａａｚ３６２１、及びＴｓｕｉ，Ｔ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ４２，３３５－３４２（２００５）。多くのＡＡＶ血清型を認識する（ＦＩＴＣコンジュゲートされた）抗体が市販されている。
４．６．１０ 色素蛍光アッセイを用いた遊離ＤＮＡ分析
遊離ＤＮＡは、ＤＮＡに結合したＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｏｌｄ核酸ゲル染色（「ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ色素」）の蛍光によって決定することができる。蛍光は、マイクロプレートリーダーを使用して測定し、ＤＮＡ標準で定量することができる。結果は、ｎｇ／μＬで報告することができる。
遊離ＤＮＡは、ＤＮＡに結合したＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｏｌｄ核酸ゲル染色（「ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ色素」）の蛍光によって決定することができる。蛍光は、マイクロプレートリーダーを使用して測定し、ＤＮＡ標準で定量することができる。結果は、ｎｇ／μＬで報告することができる。
測定された遊離ＤＮＡ（ｎｇ／μＬ）を遊離ＤＮＡのパーセンテージに変換するために、２つのアプローチを使用して総ＤＮＡを推定することができる。第１のアプローチでは、ＵＶ－可視分光法によって決定されたＧＣ／ｍＬ（ＯＤ）を使用して、試料中の総ＤＮＡを推定し、ここで、ＭはＤＮＡの分子量であり、１×１０6は単位変換係数である。
推定される総ＤＮＡ（ｎｇ／μＬ）＝１×１０6×ＧＣ／ｍＬ（ＯＤ）×Ｍ（ｇ／ｍｏｌ）／６．０２×１０23
第２のアプローチでは、試料を０．０５％ポロキサマー１８８とともに８５℃に２０分間加熱することができ、ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ色素アッセイによって加熱試料中で測定された実際のＤＮＡを合計として使用することができる。したがって、これは、全てのＤＮＡが回収され、定量されたという仮定を有する。傾向決定のために、生のｎｇ／μＬを使用することができるか、又は一貫した方法によって決定されたパーセンテージを使用することができる。
４．６．１１ サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
ＳＥＣは、２５ｍｍ経路長フローセルを備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ａｒｃ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ＩＤ ０４４７（Ｃ３ＰＯ）上のＳｅｐａｘ ＳＲＴ ＳＥＣ－１０００ Ｐｅｅｋカラム（ＰＮ ２１５９５０Ｐ－４６３０、ＳＮ：８Ａ１１９８２、ＬＮ：ＢＴ０９０、５μｍ １０００Ａ、４．６×３００ｍｍ）を使用して行うことができる。移動相は、例えば、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％のポロキサマー１８８、ｐＨ ６．５、０．３５ ｍＬ／分の流速で２０分間とすることができ、カラムは周囲温度である。データ収集は、２１４、２６０、及び２８０ｎｍで２５点平均平滑化を用いて、２点／秒のサンプリング速度及び１．２ｎｍの分解能で行うことができる。理想的な目標ロードは、１．５×１０11ＧＣであり得る。試料は、理想的な標的の約１／３である５０μＬで注射され得るか、又は５μＬで注射され得る。
ＳＥＣは、２５ｍｍ経路長フローセルを備えたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ａｒｃ Ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ ＩＤ ０４４７（Ｃ３ＰＯ）上のＳｅｐａｘ ＳＲＴ ＳＥＣ－１０００ Ｐｅｅｋカラム（ＰＮ ２１５９５０Ｐ－４６３０、ＳＮ：８Ａ１１９８２、ＬＮ：ＢＴ０９０、５μｍ １０００Ａ、４．６×３００ｍｍ）を使用して行うことができる。移動相は、例えば、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、３００ｍＭのＮａＣｌ、０．００５％のポロキサマー１８８、ｐＨ ６．５、０．３５ ｍＬ／分の流速で２０分間とすることができ、カラムは周囲温度である。データ収集は、２１４、２６０、及び２８０ｎｍで２５点平均平滑化を用いて、２点／秒のサンプリング速度及び１．２ｎｍの分解能で行うことができる。理想的な目標ロードは、１．５×１０11ＧＣであり得る。試料は、理想的な標的の約１／３である５０μＬで注射され得るか、又は５μＬで注射され得る。
４．６．１２ 動的光散乱（Dynamic Light Scattering、ＤＬＳ）アッセイ
動的光散乱（ＤＬＳ）は、３０μＬの試料容量を有するＣｏｒｎｉｎｇ ３５４０ ３８４ウェルプレートを使用して、Ｗｙａｔｔ ＤｙｎａＰｒｏＩＩＩで行うことができる。それぞれ１０秒間の１０回の取得を、反復ごとに収集することができ、試料ごとに３回の反復測定があり得る。溶媒は、試料中で使用される溶媒に従って設定することができ、例えば、ｄＰＢＳ中のＡＡＶベクターについては「ＰＢＳ」である。データ品質基準（ベースライン、ＳＯＳ、ノイズ、フィット）を満たさない結果を「マーク」し、分析から除外することができる。
動的光散乱（ＤＬＳ）は、３０μＬの試料容量を有するＣｏｒｎｉｎｇ ３５４０ ３８４ウェルプレートを使用して、Ｗｙａｔｔ ＤｙｎａＰｒｏＩＩＩで行うことができる。それぞれ１０秒間の１０回の取得を、反復ごとに収集することができ、試料ごとに３回の反復測定があり得る。溶媒は、試料中で使用される溶媒に従って設定することができ、例えば、ｄＰＢＳ中のＡＡＶベクターについては「ＰＢＳ」である。データ品質基準（ベースライン、ＳＯＳ、ノイズ、フィット）を満たさない結果を「マーク」し、分析から除外することができる。
４．６．１３ 粘度測定
粘度は、当技術分野において公知の方法、例えば、２０１９年に公開された米国薬局方（ＵＳＰ）及びその以前のバージョン（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）において提供される方法を使用して測定することができる。低剪断での粘度は、ＵＳＰ＜９１１＞に記載されている方法を用いて、毛管粘度計を用いて測定した。
粘度は、当技術分野において公知の方法、例えば、２０１９年に公開された米国薬局方（ＵＳＰ）及びその以前のバージョン（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）において提供される方法を使用して測定することができる。低剪断での粘度は、ＵＳＰ＜９１１＞に記載されている方法を用いて、毛管粘度計を用いて測定した。
粘度対剪断速度は、コーンプレート回転レオメーターを使用して決定することができる。レオメトリー測定は米国薬局方（United States Pharmacopeia、ＵＳＰ）ＵＳＰ＜１９１１＞に記載されており、回転粘度測定法はＵＳＰ＜９１２＞に記載されている。回転レオメトリー粘度測定値は、６０ｍｍ １°の角度のアルミニウムコーンアクセサリーを有するＰｅｌｔｉｅｒ温度制御プレートを備えたＡＲ－Ｇ２レオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）を用いて収集することができる。粘度対剪断速度掃引は、＜０．３ｓ－１で開始して５０００ｓ－1まで上昇する範囲にわたって実行することができ、１０当たり５ポイントが収集される。粘度対剪断速度を２０℃で収集した。１０，０００及び２０，０００ｓ-1での粘度をデータから外挿した。
いくつかの場合において、医薬組成物又は参照医薬組成物の粘度は、０、０．１ｓ-1、１ｓ-1、１０００ｓ-1、５０００ｓ-1、１０，０００ｓ-1、２０，０００ｓ-1、又は２０，０００ｓ-1超で測定され得る。
４．６．１４ レオロジー測定
レオメトリー測定は米国薬局方（ＵＳＰ）ＵＳＰ＜１９１１＞に記載されており、回転粘度測定法はＵＳＰ＜９１２＞に記載されている。
レオメトリー測定は米国薬局方（ＵＳＰ）ＵＳＰ＜１９１１＞に記載されており、回転粘度測定法はＵＳＰ＜９１２＞に記載されている。
レオロジー測定は、６０ｍｍ １°角度アルミニウムコーンアクセサリーを有するＰｅｌｔｉｅｒ温度制御プレートを備えたＡＲ－Ｇ２レオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）を用いて収集することができる。
ゲル化温度は、０．１％歪み及び１Ｈｚの振動モードで温度ランプを適用することによって決定した。試料をロードし、５℃で５分間予備平衡化した後、５℃／分で４０℃又は６０℃のいずれかまで温度を上昇させた。貯蔵／弾性率（Ｇ’）及び損失／粘性率（Ｇ’’）が交差する温度を、系ゲル化温度として記録した。トルク掃引は、線形粘弾性領域が約０．４％まで延び、したがって０．１％での動作が線形粘弾性領域内に十分にあることを実証した。
ゲル化時間は、振動モード０．１％歪み及び１Ｈｚで測定した。試料を５℃及び２０℃の両方で平衡化し、３４℃への温度ジャンプに曝露した。上記のように、ゲル化時間は、貯蔵弾性率曲線と損失弾性率曲線の交差として定義された。
４．６．１５ ウイルス感染性アッセイ
Ｆｒａｎｃｏｉｓ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１８）Ｖｏｌ．１０，ｐｐ．２２３－２３６（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるＴＣＩＤ50感染力価アッセイを使用することができる。２０１８年１０月１５日に出願された仮出願第６２／７４５８５９号に記載されている相対感染性アッセイを使用することができる。
Ｆｒａｎｃｏｉｓ，ｅｔ ａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ＆Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１８）Ｖｏｌ．１０，ｐｐ．２２３－２３６（参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されるＴＣＩＤ50感染力価アッセイを使用することができる。２０１８年１０月１５日に出願された仮出願第６２／７４５８５９号に記載されている相対感染性アッセイを使用することができる。
４．６．１６ 示差走査蛍光定量法
タンパク質及びタンパク質から構成されるウイルスキャプシドの熱安定性は、示差走査蛍光定量法（differential scanning fluorimetry、ＤＳＦ）によって決定することができる。ＤＳＦは、温度の関数としてタンパク質の固有のトリプトファン及びチロシン放出を測定する。Ｔｒｐ及びＴｙｒ残基の局所環境は、タンパク質がアンフォールドするにつれて変化し、蛍光の大きな増加をもたらす。タンパク質の５０％がアンフォールディングされる温度は、「融解温度」Tとして定義される。蛍光分光法は、ＵＳＰ＜８５３＞及びＵＳＰ＜１８５３＞に記載されている。
タンパク質及びタンパク質から構成されるウイルスキャプシドの熱安定性は、示差走査蛍光定量法（differential scanning fluorimetry、ＤＳＦ）によって決定することができる。ＤＳＦは、温度の関数としてタンパク質の固有のトリプトファン及びチロシン放出を測定する。Ｔｒｐ及びＴｙｒ残基の局所環境は、タンパク質がアンフォールドするにつれて変化し、蛍光の大きな増加をもたらす。タンパク質の５０％がアンフォールディングされる温度は、「融解温度」Tとして定義される。蛍光分光法は、ＵＳＰ＜８５３＞及びＵＳＰ＜１８５３＞に記載されている。
ＤＳＦデータを、Ｐｒｏｍｅｔｈｉｕｓ ＮＴＰｌｅｘ Ｎａｎｏ ＤＳＦ機器（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して収集した。試料を２０℃でキャピラリーセルにロードし、温度を１℃／分の速度で９５℃まで上昇させた。３５０ｎｍ（アンフォールド）及び３３０ｎｍ（アンフォールド）での発光のシグナル出力比を使用して、Ｔmを決定した。
４．６．１７ 注射圧力測定
注射圧力は、Ｆｌｏｗ Ｓｃｒｅｅｎ ａｎｄ Ｆｌｕｉｄ Ｓｅｎｓｏｒ（Ｖｉｓｃｏｔｅｃ Ａｍｅｒｉｃａ、Ｋｅｎｎｅｓａｗ，ＧＡ）又は単回使用圧力センサーＳ－Ｎ－０００を備えたＰｒｅｓｓｕｒｅＭＡＴ－ＤＰＧ（ＰｅｎｄｏＴＥＣＨ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）のいずれかを使用して測定した。
注射圧力は、Ｆｌｏｗ Ｓｃｒｅｅｎ ａｎｄ Ｆｌｕｉｄ Ｓｅｎｓｏｒ（Ｖｉｓｃｏｔｅｃ Ａｍｅｒｉｃａ、Ｋｅｎｎｅｓａｗ，ＧＡ）又は単回使用圧力センサーＳ－Ｎ－０００を備えたＰｒｅｓｓｕｒｅＭＡＴ－ＤＰＧ（ＰｅｎｄｏＴＥＣＨ、Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）のいずれかを使用して測定した。
空気中への注射は、手動で、又はＬｅｇａｔｏ－１００シリンジポンプ（Ｋｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を使用して一貫した流量を適用して行った。摘出されたブタの眼への注射のために、眼の眼内圧を調整するために吸引を適用して、眼をマンデル眼マウント（Ｍａｓｔｅｌ）上に取り付けた。
４．６．１８ 参照組成物
本明細書で提供される組成物の粘度は、組成物を参照医薬組成物と比較することによって評価することができる。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、評価される組成物と同じタイプ及び量の組換えＡＡＶを含む医薬組成物であるが、熱応答性組成物ではない。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、評価される組成物と同じタイプ及び量の組換えＡＡＶを含む医薬組成物であるが、評価される組成物よりも眼外温度（約３２～３５℃）で低い粘度及び／又は弾性率を有する。
本明細書で提供される組成物の粘度は、組成物を参照医薬組成物と比較することによって評価することができる。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、評価される組成物と同じタイプ及び量の組換えＡＡＶを含む医薬組成物であるが、熱応答性組成物ではない。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、評価される組成物と同じタイプ及び量の組換えＡＡＶを含む医薬組成物であるが、評価される組成物よりも眼外温度（約３２～３５℃）で低い粘度及び／又は弾性率を有する。
いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、リン酸緩衝生理食塩水中で評価される組成物と同じ濃度で同じ組換えＡＡＶを含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、０．００１％ポロキサマー１８８を含むダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４）中で評価される組成物と同じ濃度で同じ組換えＡＡＶを含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、４％スクロース及び０．００１％ポロキサマー１８８を含むダルベッコリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ ７．４）中で評価される組成物と同じ濃度で同じ組換えＡＡＶを含む医薬組成物である。参照医薬組成物は、評価される組成物と同じ経路又は異なる経路によって投与することができる。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、脈絡膜上に投与される。
５．実施例
このセクション（すなわち、セクション５）における実施例は、限定としてではなく、例証として提供される。
このセクション（すなわち、セクション５）における実施例は、限定としてではなく、例証として提供される。
５．１ 実施例１：脈絡膜上送達のための熱応答性ゲル製剤の最適化
５．１．１ 熱応答性ゲル製剤の目的の概要
構築物ＩＩは、脈絡膜上腔への注射によって送達される治療として研究されている。脈絡膜上腔（ＳＣＳ）は、強膜と脈絡膜との間の領域であり、薬物溶液の注射の際に拡大する（Ｈａｂｏｔ－Ｗｉｌｎｅｒ，２０１９）。図１も参照されたい。ＳＣＳ空間は、注射された溶液が生理学的プロセスによって除去されるにつれて、その注射前のサイズに回復する。薬物溶液はＳＣＳ内に拡散し、隣接する組織に吸収される。脈絡膜の毛細血管は、低分子量オスモライトに対して透過性である。本実施例は、脈絡膜上腔における構築物ＩＩの滞留時間を増加させ、最終的にその有効性を改善するための実験的アプローチを記載する。
５．１．１ 熱応答性ゲル製剤の目的の概要
構築物ＩＩは、脈絡膜上腔への注射によって送達される治療として研究されている。脈絡膜上腔（ＳＣＳ）は、強膜と脈絡膜との間の領域であり、薬物溶液の注射の際に拡大する（Ｈａｂｏｔ－Ｗｉｌｎｅｒ，２０１９）。図１も参照されたい。ＳＣＳ空間は、注射された溶液が生理学的プロセスによって除去されるにつれて、その注射前のサイズに回復する。薬物溶液はＳＣＳ内に拡散し、隣接する組織に吸収される。脈絡膜の毛細血管は、低分子量オスモライトに対して透過性である。本実施例は、脈絡膜上腔における構築物ＩＩの滞留時間を増加させ、最終的にその有効性を改善するための実験的アプローチを記載する。
より長い滞留時間を達成するために、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、冷蔵条件（２～８℃）と制御された室温（２０℃）との間の温度で注射可能な液体であり、次いで眼の温度（３４．５±０．８℃）で状態をゲルに変化させる最終製剤中に製剤化した。ゲルは、脈絡膜上腔にＡＡＶを保持し、クリアランスを減少させ、局在化を増加させ、それによって、所望の標的組織における治療有効性の増強をもたらす。
５．１．２ 初期設計パラメータの概要
製剤実現可能性のための初期設計パラメータは、追加のデータによる調整に供され、製剤最適化のための開始点を実証するために本明細書に記載される。
製剤実現可能性のための初期設計パラメータは、追加のデータによる調整に供され、製剤最適化のための開始点を実証するために本明細書に記載される。
眼への注射は、眼が重要な器官であるため、敏感な注射手順である。針ゲージは、痛み、組織損傷、又は炎症を回避するために、眼に薬物を注射するときに高すぎてはならない。例えば、ある場合には、３０ゲージが選択され得、他の場合には、２９ゲージが選択される。眼への注射のためには、溶液がゲル化して針及び注射部位を塞ぐ前に、特定の時間枠内で非常に狭い口径の針を通して溶液を注射することが可能でなければならない。これは、室温（又は低温で注射される場合には冷蔵）での製剤の粘度に制限を加え、注射を完了させるゲル化時間にも制限を加える。この実施例は、脈絡膜上送達のために特定された全ての要件を同時に満たすことができる製剤組成を最適化するための実験アプローチの応答表面設計を説明する。
製剤は眼の温度でゲル化すべきである。眼の表面の温度は、３４．５±０．８℃と報告されている（Ｔｋａｃｏｖａ ｅｔ ａｌ．，２０１１，ＭＥＡＳＵＲＥＭＥＮＴ ２０１１，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ ８ｔｈ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ，Ｓｍｏｌｅｎｉｃｅ，Ｓｌｏｖａｋｉａ）。図３は、サーマルカメラＦＬＩＲ、モデルＴ５３０を使用して測定された３３．１℃での眼外温度を示す。眼の表面の温度は、脈絡膜上腔温度の最悪の場合とみなすことができ、脈絡膜上腔温度は、表面よりもわずかに温かい可能性がある。ゲル化温度の限界は、眼の温度（３４．５℃）である。眼の温度の平均－３標準偏差は３２℃である。したがって、≦３２℃の好ましいゲル化温度を設計パラメータとして使用して、ゲル化が眼内で起こることを確実にした。
温度応答性ゲルは、冷蔵条件（２～８℃）と制御された室温（２０℃）との間の温度である場合、注射可能な液体であるべきである。理想的には、用量の調製及び製造を容易にするために、ゲル温度は、室温における変動性、並びに実際の混合、ポンピング及び他の操作が行われることを可能にするように、室温より十分に高くあるべきである。例えば、≧２７℃のゲル化温度は、より容易に取り扱うことができる。より高いゲル化温度２７℃以上が好ましいが、用量調製のために用量をより低い温度に冷却することができ、必要であれば投与前に冷却することもできるので、厳格な要件ではない。
製剤は、一般に入手可能なシリンジ構成要素を使用した注射を可能にする許容可能な粘度（すなわち、シリンジ圧力定格限界に基づく注射圧力限界）を有するべきである。ゲル形成温度及び時間と注射性との間のバランスをとるための相反する設計パラメータが存在する。
所望の針サイズは３０又は２９ゲージであり、これは注射の圧力に影響を与える。針又は注射部位の目詰まりを回避するために、注射が完了する前にゲル化が生じてはならない。初期モデル化のために、１０秒の注射時間を仮定した。
必要であれば、注射圧力を低下させる別のアプローチがある。温度、粘度、ゲル化時間、及び必要な注射時間は、関連するパラメータである。ハーゲン－ポアズイユの式ΔＰ＝（８μＬＱ）／（πＲ4）、以下を参照は、注射圧力及び時間（流量によって決定される）が線形に関連付けられることを示す。したがって、注射時間を１０秒から２０秒に２倍にすると、圧力は２分の１に減少する。粘度と圧力とは、逆に相関する。温度の低下などによって粘度を低下させると、注射圧力が低下する。用量が冷却される場合、ゲル化時間はより長くなる。用量の冷却は、粘度及び注射圧力を低下させる。冷却された用量はまた、ゲル化するのにより長い時間がかかり、より遅い注射を可能にし、これはまた、注射圧力を低下させ得る。
ゲル化時間は、針又は注射部位の詰まりを回避するために注射時間よりも長くなければならず、文献（Ｃｈｉａｎｇ，ＩＯＶＳ，２０１７，５８（１）５４５－５５４）に報告されている圧力駆動還流についての１０分（６００秒）の予想クリアランス時間よりも短くなければならない。９０秒未満の初期設計の好ましい目標は、予想される６００秒の還流クリアランス時間と比較して非常に保守的なゲル化時間として製剤評価のために考慮される（実現可能であれば）。血流、ゲルの浸食、拡散及び対流によるＳＣＳ空間からのＡＡＶの中程度及びより長期間のクリアランスは、ゲル化が起こった後に有意に減少すると予想される。
可能であれば、特定された設計空間内で、同じ又は同様の温度でゲル化する能力を依然として維持しながら、ゲルが注射時にわずかに希釈されるためのいくらかの余地を有することが更に望まれる。
５．１．３ 粘度設計空間
針を通る流れの間の圧力降下についてのハーゲン－ポアズイユの式は、ΔＰ＝（８μＬＱ）／（πＲ4）によって与えられる。圧力は、粘度（μ）、針の長さ（Ｌ）、体積流量（Ｑ）、及び針の内径（Ｒ）に依存する。この式を使用して、３０ゲージ及び２９ゲージの針について、粘度の関数として圧力降下（ポンド／平方インチ（per square inch、ＰＳＩ））を計算した（ＩＳＯ ９６２６：２０１６：通常の壁、ＲＷ；薄い壁、ＴＷ；極薄い壁、ＥＴＷ；及び超薄い壁、ＵＴＷ、及び追加のＣｌｅａｒＳｉｄｅ（ＣＬＳＤ）針（設計中又は開発研究で使用される）。ＰＳＩ＝Ｐａ／６８９４．７６の変換係数を用いてＰＳＩに変換した。取り付け長さを含む全針長さは１４ｍｍであり、注射量は０．１ｍＬであり、注射時間は１０秒（Ｑ＝０．１ｍＬ／１０＝０．０１ｍＬ／秒）でモデル化され、考慮される針内径は、３０Ｇａ／２９Ｇａ（１３３μｍ ＩＤ）、３０Ｇａ ＴＷ（１６５μｍ ＩＤ）、３０Ｇａ ＥＴＷ／２９ ＧａＴＷ（１９０μｍ ＩＤ）、３０ Ｇａ ＵＴＷ／２９Ｇａ ＥＴＷ（２４０μｍ ＩＤ）、ＣｌｅａｒＳｉｄｅ（ＣＬＳＤ）ブランド３０ Ｇａ針（１６０μｍ ＩＤ）、ＣＬＳＤ ３０Ｇａ ＥＴＷ（２２０μｍ ＩＤ）、ＣＬＳＤ２９Ｇａ ＥＴＷ（２４０μｍ ＩＤ）である。
針を通る流れの間の圧力降下についてのハーゲン－ポアズイユの式は、ΔＰ＝（８μＬＱ）／（πＲ4）によって与えられる。圧力は、粘度（μ）、針の長さ（Ｌ）、体積流量（Ｑ）、及び針の内径（Ｒ）に依存する。この式を使用して、３０ゲージ及び２９ゲージの針について、粘度の関数として圧力降下（ポンド／平方インチ（per square inch、ＰＳＩ））を計算した（ＩＳＯ ９６２６：２０１６：通常の壁、ＲＷ；薄い壁、ＴＷ；極薄い壁、ＥＴＷ；及び超薄い壁、ＵＴＷ、及び追加のＣｌｅａｒＳｉｄｅ（ＣＬＳＤ）針（設計中又は開発研究で使用される）。ＰＳＩ＝Ｐａ／６８９４．７６の変換係数を用いてＰＳＩに変換した。取り付け長さを含む全針長さは１４ｍｍであり、注射量は０．１ｍＬであり、注射時間は１０秒（Ｑ＝０．１ｍＬ／１０＝０．０１ｍＬ／秒）でモデル化され、考慮される針内径は、３０Ｇａ／２９Ｇａ（１３３μｍ ＩＤ）、３０Ｇａ ＴＷ（１６５μｍ ＩＤ）、３０Ｇａ ＥＴＷ／２９ ＧａＴＷ（１９０μｍ ＩＤ）、３０ Ｇａ ＵＴＷ／２９Ｇａ ＥＴＷ（２４０μｍ ＩＤ）、ＣｌｅａｒＳｉｄｅ（ＣＬＳＤ）ブランド３０ Ｇａ針（１６０μｍ ＩＤ）、ＣＬＳＤ ３０Ｇａ ＥＴＷ（２２０μｍ ＩＤ）、ＣＬＳＤ２９Ｇａ ＥＴＷ（２４０μｍ ＩＤ）である。
圧力対粘度の計算結果を図２に示し、これらの結果を、好ましい値、目標値、及び限界値について表３にまとめた。表３の計算に基づいて、初期設計評価は、１８３ｍＰａｓの粘度に対応する、ＣＬＳＤ ３０Ｇａ ＥＴＷ（２２０μｍ ＩＤ）針を使用した６５ＰＳＩの目標圧力に基づいた。
ＣＬＳＤ ３０Ｇａ針（１６０μｍ ＩＤ）と比較して、ＣＬＳＤ ３０Ｇａ ＥＴＷ（２２０μｍ ＩＤ）又はＣＬＳＤ ２９Ｇａ ＥＴＷ（２４０μｍ ＩＤ）を注射するために必要とされる圧力及び／又は定圧での時間の相対的減少は、針内径の４乗に対する比に基づき、以下の通りである：それぞれ、（２２０／１６０）4＝３．６倍及び（２４０／１６０）4＝５倍である。したがって、現在の１６０μｍ ＩＤ ３０Ｇａ ＣＬＳＤ針を用いた初期実現可能性データを使用して、ゲル製剤の臨床送達のために計画された３０及び２９Ｇａ ＥＴＷ針の使用について予想される圧力及び時間を外挿することができる。
５．１．４ 熱応答性ヒドロゲル製剤組成物のための設計空間の特定
スクロース製剤を含む現在の改変ＤＰＢＳとの一貫性を維持するために、また、生理学的に許容される範囲内（２４０＜重量オスモル濃度＜６００ｍＯｓｍ／ｋｇ）でヒドロゲルマトリックス内の流体の張度を維持するために、ヒドロゲルは、スクロース製剤緩衝液（重量オスモル濃度＝３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ）を含む現在の改変ＤＰＢＳへのポロキサマー４０７及びポロキサマー１８８の溶解に基づく。
スクロース製剤を含む現在の改変ＤＰＢＳとの一貫性を維持するために、また、生理学的に許容される範囲内（２４０＜重量オスモル濃度＜６００ｍＯｓｍ／ｋｇ）でヒドロゲルマトリックス内の流体の張度を維持するために、ヒドロゲルは、スクロース製剤緩衝液（重量オスモル濃度＝３４５ｍＯｓｍ／ｋｇ）を含む現在の改変ＤＰＢＳへのポロキサマー４０７及びポロキサマー１８８の溶解に基づく。
ポロキサマー４０７及びポロキサマー１８８の組み合わせを、３０又は２９ゲージ針を通して注射することができるレベルに粘度も制限しながら、所望の標的範囲内のゲル温度を有する製剤組成物が存在するかどうかを同定するための実験アプローチの設計において評価した。
ヒドロゲル製剤の組成がゲル化温度に与える影響、及び５℃と２０℃の両方でのゲル化時間と粘度は、ＪＭＰ１５ ソフトウェア（Ｃａｒｙ、ＮＣ）を利用した応答曲面中央複合実験計画法（ＤＯＥ）アプローチを使用して評価した。ＤＯＥアプローチは、組成変化に対して異なる応答を有し、１つ以上の最適な標的製剤の決定を可能にする、必要とされる製剤設計制限の数に基づいて必要とした。ポロキサマー４０７は１６％から２２％ｗ／ｖまで変化させ、ポロキサマー１８８は０％から１６％ｗ／ｖまで変化させ、中心点は２通りとした。ゲル化は、異なる方法を使用して決定することができる。ゲル化の開始を測定する方法もあれば、ゲル化温度として材料特性における客観的な「クロスオーバー」を測定する方法もある。製剤設計の目的のために、温度の関数としてのＧ’及びＧ’’のクロスオーバーを、一貫性及び客観性のためのゲル化温度とした。生データは、ゲル化の開始がクロスオーバーよりもわずかに低い温度で起こることを示す。
ＤＯＥ研究の結果を表４に要約する。異なる測定の応答局面を生成するためにデータをＪＭＰ ＤＯＥソフトウェアに当てはめ、図４は、製剤組成応答曲面の関数としてのゲル化温度を示し、組成関数としての粘度に対する応答曲面を、図５（２０℃）及び図６（５℃）に示し、生の剪断速度スイープデータの概要を図１２及び図１３に示す。
ゲル化プロファイルの生データを図７に要約し、試料＃９のＧ’及びＧ’’のクロスオーバーとしてゲル化温度がどのように決定されるかの具体例を図８に示す。生データは、ゲル化の開始がクロスオーバーよりもわずかに低い温度で起こることを示す。したがって、完全なゲル化は、ＳＣＳ空間におけるＡＡＶの局在化を劇的に増加させるために必ずしも必要とされないため、製剤のゲル化温度の定義としてのクロスオーバーとしての使用は、設計に追加のロバスト性を加える。
図９及び図１０は、それぞれ５℃及び２０℃から３４℃への温度ジャンプに曝露された試料についてのゲル化時間を決定するために使用されるＧ’対時間を示す。図１１は、試料＃９の具体例を示す。
データを全体として採取し、表１に要約した全ての設計パラメータについて潜在的な製剤設計空間を評価し、最適化した。図１４は、ゲル温度に関して２７～３２℃の限界を有する熱応答性ゲル製剤設計空間（白色領域）を示す。このデザインスペースは、用量が２～８℃で調製され、まだ冷却又は冷蔵されている間に投与されるシナリオを表すことができる。限界：１５～９０秒のゲル化時間、５℃における粘度≦１８３ｍＰａｓ、注射持続時間＝１０秒、及び≧２２０μｍの針ＩＤ）。図１５は、≦１８３ｍＰａｓの２０℃での粘度に対する追加のパラメータ制約を有する同じ因子を用いて設計空間を更に狭める。
ｂ ＮＡであり、既にゲル化していた。
Ｃ ２０℃から３４℃へのゲル化時間と比較した５℃から３４℃へのゲル化時間の平均増加は、２４±７秒である
５．１．５ 設計空間内の製剤Ａ、Ｂ及びＣのレオロジー評価
ＤＯＥ設計空間研究結果に基づいて、図１５に十字線として示されている３つの製剤Ａ、Ｂ、及びＣを、更なる研究のために同定した。組成は、Ａ＝６％／１９％、Ｂ＝６．５％／１８％、及びＣ＝７％／１７．５％ｗ／ｖのそれぞれポロキサマー１８８及び４０７である。
ＤＯＥ設計空間研究結果に基づいて、図１５に十字線として示されている３つの製剤Ａ、Ｂ、及びＣを、更なる研究のために同定した。組成は、Ａ＝６％／１９％、Ｂ＝６．５％／１８％、及びＣ＝７％／１７．５％ｗ／ｖのそれぞれポロキサマー１８８及び４０７である。
製剤Ａ、Ｂ及びＣは、図１６に示すように滅菌で調製した。全ての製剤は、改変ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水に基づいていた。スクロース溶液を含む改変ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水を対照として使用した（１００ｍＭの塩化ナトリウム、２．７０ｍＭの塩化カリウム、８．１０ｍＭのリン酸水素二ナトリウム無水物、１．４７ｍＭのリン酸二水素カリウム、１１７ｍＭのスクロース、０．００１％（０．０１ｍｇ／ｍＬ）ポロキサマー１８８）。スパイク溶液は、例えば、所望の最終組成物を達成するために、ＡＡＶ中間体の１／１０の比とともに９／１０の比でスパイクすることができるように、１０／９又は１．１１倍の比でわずかにより濃縮して調製した。他の希釈率も使用することができる。粘性製剤は、濾過滅菌することが困難であり得るので、１２１℃で２０分間のオートクレーブによって滅菌した（２００ ｍＬまで好適であり、２０００ｍＬに対して４０分などのより長い時間がより大きい体積に対して使用され得る）。「沸騰中にこぼれること」を防止するために温度を下げたときに徐々に減圧する「液体」サイクルを使用し、滅菌フィルターを備えたキャップを有するボトルを使用して、滅菌を維持しながら水蒸気をボトルに入れ、次いで充填のために滅菌フードに移した（キャップの例としては、Ｃｈｅｍｇｌａｓｓ ＣＬＳ１４８４－１２、又はＳａｒｔｏｒｉｕｓ ＭＹＣＡＰ（商標）シリーズのキャップ又は同等物が挙げられる）。実行されたサイクルは、２～４％の質量がサイクル中の水の蒸発により失われ得ることを示し、これは、活性ＡＡＶ製剤化中間体の添加とともに注射用滅菌水として添加し戻され得る。表７は、製剤の熱ゲル化特性にオートクレーブ処理の影響がなかったことを示す。値のわずかな差は、測定及び調製の変動性を表す。
図１７に示される別の調製物は、滅菌濾過を含む。組成及び温度による製剤粘度の最適化並びに濾過流量及び圧力の最適化により、最終生成物の滅菌のために滅菌濾過も実行可能であり得る。
表５は、製剤Ａ、Ｂ及びＣのレオロジー特性を要約する。ゲル化温度は、２８℃～３２℃の範囲であった。ゲル化の開始も示され、２７～３０℃の範囲であり、競合ゲル化のプラトーは２９℃～３３℃の範囲であった。これらは全て、眼の温度（約３４．５℃）以下でゲル化が生じる設計空間内に入る。ゲル化時間は、３つの製剤について１６～２９秒の範囲であり、これも初期設計パラメータ内であった。最後に、３つの製剤の粘度は、２０℃で≦１８３ｍＰａｓであり、これも設計パラメータ内であった。製剤Ａ、Ｂ、及びＣのゲル化のプロファイルを図１９、図２０、及び図２１に示す。ゲル化の開始は、クロスオーバー点の約２℃下で起こり、ゲル化全体にわたるＧ’の変化は、弾性率の６～７桁の増加をカバーする。２０℃及び５℃での粘度プロファイルを図２８～図３３に示す。
図１８は、ゲル化時間を評価する異なる方法を示す。２０℃で５０μＬ体積の製剤Ａ（左）、Ｂ（中央）２０℃（右）を温かい表面上に分注し、液滴の流れのビデオを使用して、液滴が流れを停止した時間を決定した。このアプローチを用いたゲル化時間は、約１０秒（Ａ）、２５秒（Ｂ）、及び４５秒（Ｃ）であった。２０℃及び５℃で開始し、３４℃にジャンプするゲル化時間についてのレオロジープロファイルを、図２２～図２７に示す。
製剤は、特にボーラス注射の周辺で、それらが完全にゲル化する前に注射後にわずかに希釈され得る可能性がある。製剤Ａ、Ｂ、及びＣは、ゲル化のための等温線に沿って希釈（設計空間におけるわずかな下方及び左方への移動）を可能にするように、設計空間の右上に向かって配置された（図１５参照）。したがって、製剤のゲル化特性はロバストであり、注射後にいくらかのわずかな希釈があっても維持される。これらの製剤のボーラスの主な完全性は、それらがいかに迅速にゲル化するかを考慮すると、維持されることが期待される。インビボ体液によるわずかな希釈を模倣するために、０．００１％Ｐ１８８を含むダルベッコリン酸緩衝生理食塩水を用いた１０質量％希釈の影響を実施し、レオロジー特性を測定した。ゲル化温度を定義するために使用される交差点では、貯蔵弾性率Ｇ’は、室温での挙動と比較して既に実質的に増加している。ゲル化開始は、１０％の希釈後に３つの製剤全てについて許容可能であり（表６）、これは、主ボーラスが完全にゲル化できる前に、注射直後にゲル周辺部の完全性を維持すると予想される。希釈製剤のゲル化特性がわずかにシフトしても、Ｇ’値は、眼の温度で少なくとも１桁増加する。わずかに希釈した後のゲル化時間は増加したが、製剤Ａ及びＢについては９０秒以内、製剤Ｃについては４．４分以内のままであった。全て初期設計の１０分の制限内である。これらのデータは、ボーラスのゲル化が注射後最初の１５～３０秒以内に実質的に完了することができる前に、注射直後の末梢でのわずかな希釈に関して製剤が全て安定であることを示す。
５．１．６ 製剤Ａ、Ｂ及びＣにおける構築物ＩＩのストレス安定性。
示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）は、温度の関数としてタンパク質の固有のトリプトファン及びチロシン放出を測定する。Ｔｒｐ及びＴｙｒ残基の局所環境は、タンパク質がアンフォールドするにつれて変化し、蛍光の大きな増加をもたらす。図３７は、製剤Ａ、Ｂ、及びＣと比較した対照の示差走査蛍光定量法の熱ランプデータを示す。上パネル：生の融解曲線シグナル。中央パネル：ピークを同定するためのデータの導関数。下パネル：いずれかの凝集を示す光散乱データ。全ての製剤は、熱勾配で対照と同様のプロファイルを有した。表８は、製剤Ａ、Ｂ及びＣが対照製剤と同様の熱安定性を有し、したがってＡＡＶが安定であるという結果を要約する。
示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）は、温度の関数としてタンパク質の固有のトリプトファン及びチロシン放出を測定する。Ｔｒｐ及びＴｙｒ残基の局所環境は、タンパク質がアンフォールドするにつれて変化し、蛍光の大きな増加をもたらす。図３７は、製剤Ａ、Ｂ、及びＣと比較した対照の示差走査蛍光定量法の熱ランプデータを示す。上パネル：生の融解曲線シグナル。中央パネル：ピークを同定するためのデータの導関数。下パネル：いずれかの凝集を示す光散乱データ。全ての製剤は、熱勾配で対照と同様のプロファイルを有した。表８は、製剤Ａ、Ｂ及びＣが対照製剤と同様の熱安定性を有し、したがってＡＡＶが安定であるという結果を要約する。
表９は、対照と比較した製剤Ａ、Ｂ及びＣにおけるＡＡＶの安定性に対する３７℃のストレスの影響を要約する。ＤＮＡペイロードの放出を伴うキャプシド破壊をもたらすＡＡＶ不安定性の尺度である、検出された遊離ＤＮＡは低く、初期レベルと同様であり、３７℃で３日後の全ての試料についての方法変動性を説明した。製剤Ａ、Ｂ、及びＣのベクターゲノム濃度（ｄｄＰＣＲによる）を、粘度を低下させるために３倍希釈した試料で測定した。結果は、おそらくそれらが質量ではなく体積で希釈されたという事実に関連して、いくらかの変動性を有していた（それらは高い粘度を有するので、希釈は変動性を導入した可能性がある）。３日目の製剤Ａ及びＢ試料は、対照と同様のベクターゲノム濃度を有し、全体として、それらが安定であったことを示す。希釈の変動性は、製剤Ｂの最初の試料が目標より高く、製剤Ｃの３日目の試料がより低いことに見ることができる。将来、密度を説明する質量による希釈は、試料調製における変動性を低減するのに役立つ可能性があるアプローチである。全体として、Ａ、Ｂ、及びＣのベクターゲノム濃度は、変動性を考慮した場合、対照と同様であり、製剤が全て、温度ストレスに関して同様かつ許容可能な安定性を有することを示した。
５．１．７ 製剤Ａ、Ｂ及びＣの注射可能性及び用量調製の評価
Ａ、Ｂ、及びＣの試料を２ｍＬ ｍｐＣＯＰ（Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、１９５５００５７）Ｃｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（商標）バイアルに充填し、バイアル アダプター（Ｗｅｓｔ、８０７０１１７）を使用して抽出した。全ての試料は、複数日で評価されるように、室温でシリンジに容易に充填された。室温は、代表的な１週間にわたって２２．４℃±０．６℃（最小＝２０．７℃及び最大＝２３．７℃）であると測定された。これは、ゲル化特性が、典型的な制御された室温での取り扱いを可能にすることを実証する。
Ａ、Ｂ、及びＣの試料を２ｍＬ ｍｐＣＯＰ（Ｗｅｓｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、１９５５００５７）Ｃｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（商標）バイアルに充填し、バイアル アダプター（Ｗｅｓｔ、８０７０１１７）を使用して抽出した。全ての試料は、複数日で評価されるように、室温でシリンジに容易に充填された。室温は、代表的な１週間にわたって２２．４℃±０．６℃（最小＝２０．７℃及び最大＝２３．７℃）であると測定された。これは、ゲル化特性が、典型的な制御された室温での取り扱いを可能にすることを実証する。
図３８は、Ｃｌｅａｒｓｉｄｅシリンジデバイス（ＣＬＳ－ＨＮ００１）及び３０ゲージ（１６０μｍ ＩＤ、ＣＬＳ－ＭＮ１１００）針を使用して、３５℃で平衡化された摘出されたブタ眼への製剤Ｂの注射についての注射圧力を示す。圧力は約１６０ＰＳＩであったが、製剤は眼に容易に注射された。しかしながら、使用される針 ＩＤ（１６０μｍ ＩＤ）をより大きな必要ＩＤにスケーリングすることは、圧力は内径の４乗に反比例する（つまり、（２４０／１６０）４＝５）ため、ハーゲン－ポアズイユの式に基づいて約５分の１の圧力をもたらす。したがって、開発中の針では、予想される圧力は５分の１又は約３２ＰＳＩであり、十分に許容範囲内である。
図３９は、３０ＧＧ*１／２インチ（０．３×１３ｍｍ）ＴＷ針（Ｎｉｐｒｏ、ＨＮ－３０１３－ＥＴ）を有するＢＤ１ｍＬシリンジ（３０９６２８）を使用した空気中への注射を示す。Ｃｌｅａｒｓｉｄｅデバイス及び針は、脈絡膜上注射のための特定の露出針長を有するように設計される。現在、３０ゲージ（１６０μｍ ＩＤ）がこのフォーマットで利用可能である。２２０又は２４０μｍのＩＤを有するより大きい針ＩＤバージョンが開発中である。既知の針サイズを使用する注射は、ハーゲン－ポアズイユの式によって与えられる注射時間及び針ＩＤに対する圧力の関係に従ってスケーリングすることができる。したがって、利用可能なサイズの針を用いた注射を使用して、製剤が現在製造開発中の針について所望の注射圧力及び時間パラメータを有するかどうかを確認することができる。より大きなＩＤの針に対するこの針の圧力スケーリングは、約４．５倍（２４０／１６５）４＝４．５）である。圧力は流量にも比例する。この実験では、圧力を一定に保ち、注射時間を評価した。注射するための圧力及び時間は、次いで、４．５の総合係数によってスケーリングされて、読み取り値を開発中のより大きい針に変換することができる。したがって、製剤Ｃは、３０Ｇａ ＴＷ（１６５μｍ ＩＤ）針を用いて約１２０ＰＳＩで１２秒間にわたって注射され、これは、２４０μｍ ＩＤ針が使用される場合、約２７ＰＳＩに減少する。製剤Ｂは、約１２０ＰＳＩで１７秒間にわたって注射され、これはまた、より大きい針で約２７ＰＳＩに減少する。製剤Ｂがより迅速に、例えば１２秒にわたって注射される場合、約３８ＰＳＩのより大きな必要ＩＤ圧力が予想される。これらは、識別された注射圧力設計空間内に十分にある。製剤Ａの３７秒及び１４０ＰＳＩの注射を、より大きい針及びより速い注射にスケーリングした場合、１２～１６秒の注射についての予想される圧力は６４～７８ ＰＳＩであり、これもまた、同定した制限設計空間内である（＜１００ＰＳＩ又は＜６４ＰＳＩ）。
（ａ）レオロジー測定
レオメトリー測定は米国薬局方（ＵＳＰ）ＵＳＰ＜１９１１＞に記載されており、回転粘度測定法はＵＳＰ＜９１２＞に記載されている。
レオメトリー測定は米国薬局方（ＵＳＰ）ＵＳＰ＜１９１１＞に記載されており、回転粘度測定法はＵＳＰ＜９１２＞に記載されている。
レオロジー測定は、６０ｍｍ １°角度アルミニウムコーンアクセサリーを有するＰｅｌｔｉｅｒ温度制御プレートを備えたＡＲ－Ｇ２レオメーター（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）を用いて収集することができる。
（ｂ）ゲル化温度
ゲル化温度は、０．１％歪み及び１Ｈｚの振動モードで温度ランプを適用することによって決定した。試料をロードし、５℃で５分間予備平衡化した後、５℃／分で４０℃又は６０℃のいずれかまで温度を上昇させた。貯蔵／弾性率（Ｇ’）及び損失／粘性率（Ｇ’’）が交差する温度を、系ゲル化温度として記録した。トルク掃引は、線形粘弾性領域が約０．４％まで延び、したがって０．１％での動作が線形粘弾性領域内に十分にあることを実証した。
ゲル化温度は、０．１％歪み及び１Ｈｚの振動モードで温度ランプを適用することによって決定した。試料をロードし、５℃で５分間予備平衡化した後、５℃／分で４０℃又は６０℃のいずれかまで温度を上昇させた。貯蔵／弾性率（Ｇ’）及び損失／粘性率（Ｇ’’）が交差する温度を、系ゲル化温度として記録した。トルク掃引は、線形粘弾性領域が約０．４％まで延び、したがって０．１％での動作が線形粘弾性領域内に十分にあることを実証した。
（ｃ）ゲル化時間
ゲル化時間は、振動モード０．１％歪み及び１Ｈｚで測定した。試料を５℃及び２０℃の両方で平衡化し、３４℃への温度ジャンプに曝露した。上記のように、ゲル化時間は、貯蔵弾性率曲線と損失弾性率曲線の交差として定義された。
ゲル化時間は、振動モード０．１％歪み及び１Ｈｚで測定した。試料を５℃及び２０℃の両方で平衡化し、３４℃への温度ジャンプに曝露した。上記のように、ゲル化時間は、貯蔵弾性率曲線と損失弾性率曲線の交差として定義された。
（ｄ）粘度対剪断速度
粘度対剪断速度掃引を、０．２５ｓ-1～５０００ｓ-1の範囲にわたって行い、１０当たり５ポイントを収集した。粘度対剪断速度を、５℃及び２０℃の両方で収集した。１０，０００及び２０，０００ｓ-1での粘度をデータから外挿した。
粘度対剪断速度掃引を、０．２５ｓ-1～５０００ｓ-1の範囲にわたって行い、１０当たり５ポイントを収集した。粘度対剪断速度を、５℃及び２０℃の両方で収集した。１０，０００及び２０，０００ｓ-1での粘度をデータから外挿した。
（ｅ）示差走査蛍光定量法
タンパク質及びタンパク質から構成されるウイルスキャプシドの熱安定性は、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって決定することができる。ＤＳＦは、温度の関数としてタンパク質の固有のトリプトファン及びチロシン放出を測定する。Ｔｒｐ及びＴｙｒ残基の局所環境は、タンパク質がアンフォールドするにつれて変化し、蛍光の大きな増加をもたらす。タンパク質の５０％がアンフォールディングされる温度は、「融解温度」Tとして定義される。蛍光分光法は、ＵＳＰ＜８５３＞及びＵＳＰ＜１８５３＞に記載されている。
タンパク質及びタンパク質から構成されるウイルスキャプシドの熱安定性は、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって決定することができる。ＤＳＦは、温度の関数としてタンパク質の固有のトリプトファン及びチロシン放出を測定する。Ｔｒｐ及びＴｙｒ残基の局所環境は、タンパク質がアンフォールドするにつれて変化し、蛍光の大きな増加をもたらす。タンパク質の５０％がアンフォールディングされる温度は、「融解温度」Tとして定義される。蛍光分光法は、ＵＳＰ＜８５３＞及びＵＳＰ＜１８５３＞に記載されている。
ＤＳＦデータを、Ｐｒｏｍｅｔｈｉｕｓ ＮＴ．Ｐｌｅｘ Ｎａｎｏ ＤＳＦ機器（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して収集した。試料を２０℃でキャピラリーセルに装填し、温度を１℃／分の速度で９５℃まで上昇させた。３５０ｎｍ（アンフォールド）及び３３０ｎｍ（アンフォールド）での発光のシグナル出力比を使用して、Ｔmを決定した。
（ｆ）注射圧力測定
注射圧力は、Ｆｌｏｗ Ｓｃｒｅｅｎ ａｎｄ Ｆｌｕｉｄ Ｓｅｎｓｏｒ（Ｖｉｓｃｏｔｅｃ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｋｅｎｎｅｓａｗ，ＧＡ）又は圧力センサーＳ－Ｎ－０００を備えたＰｒｅｓｓｕｒｅＭＡＴ－ＤＰＧ（ＰｅｎｄｏＴＥＣＨ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）のいずれかを使用して測定した。
注射圧力は、Ｆｌｏｗ Ｓｃｒｅｅｎ ａｎｄ Ｆｌｕｉｄ Ｓｅｎｓｏｒ（Ｖｉｓｃｏｔｅｃ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｋｅｎｎｅｓａｗ，ＧＡ）又は圧力センサーＳ－Ｎ－０００を備えたＰｒｅｓｓｕｒｅＭＡＴ－ＤＰＧ（ＰｅｎｄｏＴＥＣＨ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）のいずれかを使用して測定した。
空気中への注射は、手動で、又はＬｅｇａｔｏ－１００シリンジポンプ（Ｋｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を使用して一貫した流量を適用して行った。摘出されたブタの眼への注射のために、眼の眼内圧を調整するために吸引を適用して、眼をマンデル眼マウント（Ｍａｓｔｅｌ，Ｒａｐｉｄ Ｃｉｔｙ，ＳＤ）上に取り付けた。
５．２ 実施例２：異なる脈絡膜上製剤を使用したカニクイザルにおける薬物動態、生体内分布、及び忍容性試験
この試験の目的は、カニクイザルに脈絡膜上注射を介して単回用量として投与された場合の、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを含む異なる製剤の生体内分布、薬物動態（導入遺伝子濃度）、及び忍容性を評価することである。投与後、動物を投与後少なくとも４週間観察する。１群には、高容量の製剤も投与する。いくつかの製剤は、様々なゲル温度を含む。例えば、製剤１は、約２８℃のゲル温度を有し、製剤２は、約３０℃のゲル温度を有し、製剤３は、約３２℃のゲル温度を有する。群割り当て及び用量レベルを表１０に示す。被験物質はＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂである。対照品はプラセボである。製剤及び対照は、－６０℃～－８０℃の冷凍庫で保存し、使用日に室温で解凍するか、又は製剤日に使用する場合は室温で保存するか、又は２℃～８℃の冷蔵庫で保存することができる。適応症は、滲出型ＡＭＤ及び糖尿病性網膜症を含む慢性網膜状態である。
この試験の目的は、カニクイザルに脈絡膜上注射を介して単回用量として投与された場合の、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを含む異なる製剤の生体内分布、薬物動態（導入遺伝子濃度）、及び忍容性を評価することである。投与後、動物を投与後少なくとも４週間観察する。１群には、高容量の製剤も投与する。いくつかの製剤は、様々なゲル温度を含む。例えば、製剤１は、約２８℃のゲル温度を有し、製剤２は、約３０℃のゲル温度を有し、製剤３は、約３２℃のゲル温度を有する。群割り当て及び用量レベルを表１０に示す。被験物質はＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂである。対照品はプラセボである。製剤及び対照は、－６０℃～－８０℃の冷凍庫で保存し、使用日に室温で解凍するか、又は製剤日に使用する場合は室温で保存するか、又は２℃～８℃の冷蔵庫で保存することができる。適応症は、滲出型ＡＭＤ及び糖尿病性網膜症を含む慢性網膜状態である。
ａ 群１には、対照物質のみを投与する。
ｂ 用量レベルは、製剤１～３については１００μＬ／眼の用量体積、及び高体積製剤群については２００μＬ／眼の体積に基づく。各眼に２回の注射を施す。
ｃ 全ての動物を投薬期の２９日目に安楽死させる。
動物供給元での抗体プレスクリーニング：約９０匹の雌サルからの血液（少なくとも１ｍＬ）を大腿静脈を介して各動物から採取し、抗凝固剤を含有しないチューブに入れる。必要に応じて、別の静脈が収集のために使用されてもよい。動物は、プレスクリーニング結果に基づいて研究候補として選択される。血液を室温で凝固させ、１時間以内に遠心分離して血清を得る。血清を２つのアリコートに分け、クライオバイアルに入れ、ドライアイス上で維持した後、約－７０℃で保存する。試料を分析のためにドライアイス上で一晩掛けて輸送する。次いで、試料を、任意の許容される方法によって抗ＡＡＶ８中和抗体（neutralizing antibodies、ＮＡｂ）について分析する。抗ＡＡＶ８ Ｎａｂ結果に基づいて、輸送のために動物を選択する。
用量投与：動物を一晩絶食させ、脈絡膜上注射の前にケタミン及びデクスメデトミジンで麻酔する。簡潔に述べると、１００μＬの単回脈絡膜上注射（又は各５０μＬの２回の注射）を、各眼（輪部から３～４ｍｍの間）に５～１０秒間にわたって投与する。製剤は全て室温で投与される。製剤は、Ｃｌｅａｒｓｉｄｅ ＳＣＳマイクロインジェクターで投与される。マイクロニードルのサイズは、製剤の粘度に応じて変化する。場合によっては、３０ゲージのマイクロニードルが使用される。右眼における注射は、上側頭四分円（すなわち、１０時と１１時の位置の間に投与される。左眼における注射は、上側頭四分円（すなわち、１時と２時の位置との間）に投与される。注射後、針は、引き抜かれる前に約５秒間眼内に保持される。マイクロニードルを引き抜いたら、綿棒（用量ワイプ）を注射部位の上に約１０秒間置く。局所抗生物質（例えば、Ｔｏｂｒｅｘ（登録商標）又は適当な代替物）を、投与後に各眼に滴下する。各投与時間を、各注射の完了時の時間として記録する。最初に右眼に投与し、続いて左眼に投与する。
眼科的処置：眼科検診を（例えば、投与後４、８、１５、及び２９日目に）行う。動物を細隙灯生体顕微鏡及び間接検眼鏡で検査する。細隙灯生体顕微鏡を用いて、両眼の付属部分及び前側部分を検査する。間接検眼鏡を使用して両眼の眼底を検査する（見える場合）。倒像検眼鏡で検査する前に、瞳孔を散瞳剤（例えば、１％トロピカミド）で散大させる。眼内圧は、投与日（投与前１０分以内）、例えば、４、８、１５、及び２９日目に測定する。リバウンド眼圧測定（ＴｏｎｏＶｅｔ）を使用して、眼圧を評価することができる。眼の写真撮影を約４週目に行う。デジタル眼底カメラで写真を撮影する。後極の立体写真及び２つの中間周辺視野（側頭及び鼻）の非立体写真を含むように、各眼のカラー写真を撮影する。周辺の写真も撮影する。更に、インドシアニングリーンを用いた自家蛍光イメージングを行って、用量の拡散を記録する（例えば、１日目及び２日目）。
抗ＡＡＶ中和抗体分析：異なる時点で（例えば、投与前、投与日、及び投与後の日に）大腿静脈から採取した各動物からの血液試料を室温で保持し、遠心分離前に少なくとも３０分間凝固させる。採取から１時間以内に試料を遠心分離し、血清を採取する。採取後、試料をドライアイス上に置き、その間保存する－６０℃～－８０℃）。次いで、ＡＡＶ８抗体についての血清分析を、適格な中和抗体アッセイを使用して実施する。
抗ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂ導入遺伝子産物抗体分析：血液試料を上記のように採取し、血清試料を、本開示の任意のアッセイ又は任意の許容されるアッセイを使用して、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂに対する抗体について分析する。ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂ導入遺伝子分析のために、血液試料を、投与の少なくとも２週間前、１５日目、及び動物を安楽死させた日（２９日目）に上記のように採取する。用量投与前に、５０μＬを前房から採取する。房水及び硝子体液からの試料は、最終剖検時に収集することができる。血清試料は、投与前、１５日目、及び剖検前に採取することができる。次いで、試料を、本開示の任意のアッセイ又は任意の適用可能なアッセイ若しくは方法によって（例えば、導入遺伝子濃度について）分析する。
房水収集：投与の少なくとも２週間前、１５日目、及び動物を安楽死させた日に、約５０μＬを各眼から除去する。各眼からの房水試料を、Ｗａｔｓｏｎバーコード化標識を有する別々のチューブに入れ、液体窒素中で急速凍結し、－６０℃～－８０℃で保存されるまで、ドライアイス上に置く。
水性タップ後（Post-Aqueous Tap）投薬レジメン：この治療レジメンの目的は、房水収集手順に関連する緩和的治療を提供することである。収集日後の治療目的は、有害事象（例えば、不快感）の適切な緩和を提供することである。動物を眼痛及び副作用について試験する。
ａ 試料を採取した各眼に１～２滴の溶液を適用した。
ｂ 試料を採取した各眼に約０．２５インチのストリップとして適用した。
試験の終了：動物をペントバルビタールナトリウムで麻酔し、２９日目に放血させた。
房水及び硝子体液の剖検収集：最大５０μＬ／眼、最大１００μＬ／眼を、それぞれ、房水及び硝子体液から除去する。放血後、眼を摘出し、房水及び硝子体液試料を各眼から収集する。硝子体液試料を２つのほぼ等しいアリコートに分割し、房水試料を１つのアリコートとして保存する。各収集後、動物の右眼に、改変Ｄａｖｉｄｓｏｎ固定液を膨らむまで注射する。眼を改変Ｄａｖｉｄｓｏｎ固定液中で４８～９６時間保存し、次いで、１０％中性緩衝ホルマリンに移す。試料を急速冷凍し、－６０℃～－８０℃で保存する。房水及び硝子体液試料を導入遺伝子濃度について分析する。
生体内分布のための眼組織収集：放血後、様々な製剤群からの全ての動物からの左眼及び２匹の動物からの右眼を（生存に応じて）摘出し、組織を収集する。組織を、Ｗａｔｓｏｎバーコード標識を有する別々のチューブに収集する。収集された組織には、網膜色素上皮を有する脈絡膜、角膜、虹彩－毛様体、視交叉、視神経、網膜、鞏膜、及び後眼杯が含まれる。眼は、４つのほぼ等しい四分円（投与部位の面積を含むための上側頭、上鼻、下側頭、及び投与部位の面積を含むための下鼻）に分割される。各四分円から、８ｍｍ生検パンチを使用して１つの試料を採取する。試料を、－６０℃～－８０℃で保存する。ｑＰＣＲ又はｑＲＴ－ＰＣＲ法を使用して、ベクターＤＮＡ又はＲＮＡについて試料を分析する。
生体分布のための非眼組織収集：およそ５ｍｍ×５ｍｍ×５ｍｍの２つの試料を、右脳半球（例えば、小脳（外側）、小脳（背側）、前頭皮質（ブロードマン領域４）、前頭皮質（ブロードマン領域６）、後頭葉（皮質表面）、後頭葉（実質）、卵巣、心臓、腎臓、涙腺（左）、肝臓（左側葉）、肺（左尾葉）、リンパ節（耳下腺）、リンパ節（下顎）、下垂体、唾液腺（下顎）、脾臓、胸腺、後根神経節（頸部、左）、後根神経節（腰部、左）、及び後根神経節（胸部、左））から収集する。試料を、－６０℃～－８０℃で保存する。
組織学：動物からの右眼及び右視神経を公称５μｍで切断し、ヘマトキシリン及びエオシンで染色した。眼組織を切断して、中心窩、注射部位領域、黄斑、視神経円板、及び視神経の検査を容易にする。単一の垂直断面が、下キャロット（calotte）のほぼ中心を通って取られる。これにより、１スライド／ブロック／眼（１眼当たり合計３スライド）が得られる。更に、デジタルスキャン（バーチャルスライド）は、選択された顕微鏡スライドから調製され得る。
データ評価及び統計分析：統計データ分析を、平均及び標準偏差を使用して計算する。平均及び標準偏差を、絶対体重、体重変化、及び眼内圧測定値について計算する。
５．３ 実施例３：異なる脈絡膜上製剤を使用したカニクイザルにおける薬物動態、生体内分布、及び忍容性試験
この試験の目的は、カニクイザルに脈絡膜上注射を介して単回用量として投与された場合の、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを含むゲル製剤Ｂの生体内分布（ＤＮＡ及びｍＲＮＡ）、薬物動態（導入遺伝子濃度）、及び忍容性を評価することであった。投与後、動物を投与後少なくとも４週間観察した。各群に２回の注射を投与して、同じ投与量を達成した。群割り当て及び用量レベルを表１２に示した。被験物質はＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂであった。対照品はプラセボであった。
この試験の目的は、カニクイザルに脈絡膜上注射を介して単回用量として投与された場合の、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを含むゲル製剤Ｂの生体内分布（ＤＮＡ及びｍＲＮＡ）、薬物動態（導入遺伝子濃度）、及び忍容性を評価することであった。投与後、動物を投与後少なくとも４週間観察した。各群に２回の注射を投与して、同じ投与量を達成した。群割り当て及び用量レベルを表１２に示した。被験物質はＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂであった。対照品はプラセボであった。
ａ 群１には、対照品のみを投与した。
ｂ 群１及び２についての用量レベルは、２回の５０μＬ注射として投与される１００μＬ／眼／用量の投与量に基づいた。
ｃ 全ての動物を投薬期の２９日目に安楽死させた。
用量投与：被験物質及び対照物質の調製を表１３に示す。被験物質及び対照品を－６０℃～－８０℃の冷凍庫に保存し、使用日に室温で解凍した。製剤を室温で解凍し、シリンジ充填に使用するまで冷パック上で保存した。動物を、脈絡膜上注射の前にケタミン及びデクスメデトミジンで麻酔した。投与において、５０μＬの２回の脈絡膜上注射（群１及び２）を、１０～１５秒にわたって各眼（縁から３～４ｍｍの間）に投与した。シリンジ及びマイクロニードルのサイズを表１３に示す。右眼への第１の注射は、上側頭四分円（すなわち、１０時と１１時の位置の間）に投与され、右眼への第２の注射（該当する場合）は、下鼻四分円（すなわち、４時と５時の位置の間）に投与された。左眼への第１の注射は、上側頭四分円（すなわち、１時と２時の位置の間）に投与され、左眼への第２の注射（該当する場合）は、下鼻四分円（すなわち、７時と８時の位置の間）に投与された。注射後、針は、引き抜かれる前に約３０秒間眼内に保持された。マイクロニードルを引き抜いたら、綿棒（用量ワイプ）を注射部位の上に約１０秒間置いた。
抗ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂ導入遺伝子産物抗体分析：血液試料を、投与前に１回、及び安楽死を予定した日（２９日目）に上記のように採取した。血清試料を、検証された抗体アッセイを使用して、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂに対する抗体について分析した。ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂ導入遺伝子分析のために、血液試料を、投与の少なくとも２週間前、１５日目、及び安楽死を予定した日（２９日目）に上記のように採取した。次いで、試料を検証された抗体アッセイによって分析した。
房水収集：投与の少なくとも２週間前、１５日目、及び安楽死を予定した日（２９日目）に、約５０μＬを各眼から除去した。各眼からの房水試料を、Ｗａｔｓｏｎバーコード化標識を有する別々のチューブに入れ、液体窒素中で急速凍結し、－６０℃～－８０℃で保存されるまで、ドライアイス上に置いた。試料を有効な方法によって抗ＶＥＧＦ濃度について分析した。
試験の終了：動物をペントバルビタールナトリウムで麻酔し、２９日目に放血させた。２９日目に骨髄塗抹標本を採取し、予定外の間隔で安楽死させた動物から（可能であれば）採取した。
房水及び硝子体液の剖検採取：放血後、眼を摘出し、房水及び硝子体液試料を採取した。収集後、試料を急速冷凍し、－６０℃～－８０℃で保存した。房水及び硝子体試料を、検証された方法によって導入遺伝子濃度について分析した。
生体分布のための眼組織収集：放血後の、群２における各マウスからの右眼及び最後の２匹のマウスからの左眼を摘出し、組織を収集した。組織を別々のチューブに収集した。収集した組織は、網膜色素上皮を有する脈絡膜、網膜、及び強膜を含んでいた。上記のような超清浄手順を使用して組織を収集し、生理食塩水ですすぎ、拭き取って乾燥させた。試料を急速冷凍し、－６０℃～－８０℃で保存した。ｑＰＣＲ又はｑＲＴ－ＰＣＲ法を使用して、ベクターＤＮＡ又はＲＮＡについて試料を分析した。
比較試験：この実施例に記載されるプロトコールと同様に行われたカニクイザル研究において、対照製剤（対照物品１．５）を対象のそれぞれの眼のＳＣＳに注射した（マイクロインジェクターを用いた側頭上及び鼻下注射）。水性対照製剤はゲルを形成しない。
対照製剤はまた、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを含有し、１００μＬ／眼／用量で３×１０11ｇｃ／眼で投与した（２回の５０μＬ注射）。
データ評価及び統計分析：統計データ分析を、平均及び標準偏差を使用して計算した。房水中の導入遺伝子産物（タンパク質）を１５日目及び２９日目に評価し、そうでなければＴＰ、ＤＮＡ及びＲＮＡを２９日目に硝子体液中で評価した。
結果
被験物質１（ゲル製剤）を眼のＳＣＳの側頭上部及び鼻下部に２回注射すると、対照製剤と比較して、房水中のより高い導入遺伝子産物（transgene product、ＴＰ）濃度をもたらした。
眼の側頭上部及び鼻下部位置でＳＣＳに注射された被験物質１は、対照製剤と比較して、ＶＨ中のより高いＴＰ濃度をもたらす。硝子体液導入遺伝子産物濃度は、注射後１５日目及び２９日目に、房水において見出されたＴＰよりも全体的に高かった。
ＳＣＳに注射されたＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを含有する試験品１（ゲル）又は対照製剤のそれぞれは、血清中に最小力価の導入遺伝子産物（抗ＶＥＧＦ－ａｂ）を産生した。
被験物質１（ゲル）は、対照製剤と比較して、網膜及び脈絡膜への送達に影響を及ぼした。
等価物
本発明は、その具体的な実施形態を参照して詳細に記載されるが、機能的に等価である変形は、本発明の範囲内であることが理解されよう。実際、本明細書に示され、記載されたものに加えて、本発明の様々な修正が、前述の説明及び添付の図面から当業者に明らかになるであろう。そこのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。当業者であれば、本明細書中に記載される本発明の具体的な実施形態に対する多くの等価物を認識するか、又は日常的な実験のみを使用して確認することができよう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
本発明は、その具体的な実施形態を参照して詳細に記載されるが、機能的に等価である変形は、本発明の範囲内であることが理解されよう。実際、本明細書に示され、記載されたものに加えて、本発明の様々な修正が、前述の説明及び添付の図面から当業者に明らかになるであろう。そこのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図される。当業者であれば、本明細書中に記載される本発明の具体的な実施形態に対する多くの等価物を認識するか、又は日常的な実験のみを使用して確認することができよう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。
本明細書中で言及される全ての刊行物、特許及び特許出願は、それぞれ個々の刊行物、特許又は特許出願が、その全体が本明細書中に参考として組み込まれることが具体的かつ個別に示される場合と同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
Claims (87)
- ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に好適な医薬組成物であって、前記医薬組成物が、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、医薬品が、温度上昇とともに増加する粘度及び／又はより高い弾性率を有する、医薬組成物。
- 前記組成物が、約２７～３２℃のゲル化温度を有する、請求項１に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、約１５～９０秒のゲル化時間を有する、請求項１又は２に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、約１ｓ-1～約１０００ｓ-1の剪断速度で測定されるとき、５℃で約１８３ｍＰａｓの粘度を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、約１ｓ-1～約１０００ｓ-1の剪断速度で測定されるとき、５℃で約１８３ｍＰａｓ未満の粘度を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、約１ｓ-1～約１０００ｓ-1での剪断速度で測定されるとき、２０℃で約１８３ｍＰａｓの粘度を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、約１ｓ-1～約１０００ｓ-1での剪断速度で測定されるとき、２０℃で約１８３ｍＰａｓ未満の粘度を有する、請求項１～３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- ２７℃未満での本明細書で提供される医薬組成物の前記弾性率が、約０．１Ｐａ未満若しくは約０．１Ｐａ、約０．０１Ｐａ未満若しくは約０．０１Ｐａ、約０．００１Ｐａ未満若しくは約０．００１Ｐａ、又は０である、請求項１～７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- ３２℃～３５℃での本明細書で提供される医薬組成物の前記弾性率が、約０．１Ｐａ若しくは少なくとも約０．１Ｐａ、約１Ｐａ若しくは少なくとも約１Ｐａ、約１０Ｐａ若しくは少なくとも約１０Ｐａ、約１００Ｐａ若しくは少なくとも約１００Ｐａ、約１０００Ｐａ若しくは少なくとも約１０００Ｐａ、約１０，０００Ｐａ若しくは少なくとも約１０，０００Ｐａ、又は約１００，０００Ｐａ若しくは少なくとも約１００，０００Ｐａである、請求項１～７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 脈絡膜上投与後のクリアランス時間が、脈絡膜上投与後の参照医薬組成物のクリアランス時間と同等であるか又はより長く、前記参照医薬組成物が、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量が、前記医薬組成物又は前記参照医薬組成物が前記脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、前記参照医薬組成物が、約３２～３５℃で前記医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 脈絡膜上投与後の周囲への拡散が、脈絡膜上投与後の参照医薬組成物の周囲への拡散と比較してより小さく、前記参照医薬組成物が、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量が、前記医薬組成物又は前記参照医薬組成物が前記脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、前記参照医薬組成物が、約３２～３５℃で前記医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記脈絡膜上投与後の周囲への拡散が、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％小さい、請求項１１に記載の医薬組成物。
- 脈絡膜上投与後の注射部位における厚さが、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注射部位における厚さと比較して同等であるか又はより厚く、前記参照医薬組成物が、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量が、前記医薬組成物又は前記参照医薬組成物が前記脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、前記参照医薬組成物が、約３２～３５℃で前記医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記導入遺伝子の発現レベルが、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後に前記導入遺伝子の発現レベルが前記眼内で検出される期間と比較して、脈絡膜上投与後により長い期間にわたって前記眼内で検出され、前記参照医薬組成物が、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量が、前記医薬組成物又は前記参照医薬組成物が前記脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、前記参照医薬組成物が、約３２～３５℃で前記医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 脈絡膜上投与後の前記眼内の前記導入遺伝子の濃度が、参照医薬組成物の前記眼内脈絡膜上投与の前記導入遺伝子の濃度と比較して同等であるか又はより高く、前記参照医薬組成物が、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量が、前記医薬組成物又は前記参照医薬組成物が前記脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、前記参照医薬組成物が、約３２～３５℃で前記医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 脈絡膜上投与後の注射部位における形質導入率が、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注射部位における形質導入率と比較して同等であるか又はより高く、前記参照医薬組成物が、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量が、前記医薬組成物又は前記参照医薬組成物が前記脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、前記参照医薬組成物が、約３２～３５℃で前記医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルが、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルと比較して同等であるか又は減少しており、前記参照医薬組成物が、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、組換えＡＡＶゲノムコピーの量が、前記医薬組成物又は前記参照医薬組成物が前記脈絡膜上腔に投与されたときに同じであり、前記参照医薬組成物が、約３２～３５℃で前記医薬組成物よりも低い粘度及び／又は低い弾性率を有する、請求項１～８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の前記粘度及び／又は弾性率並びに前記参照医薬組成物の前記粘度及び／又は弾性率が、同じ剪断速度で測定される、請求項１０、１１、及び１３～１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の前記粘度及び／又は弾性率が、少なくとも約１，０００ｓ-1、２，０００ｓ-1、３，０００ｓ-1、４，０００ｓ-1、５，０００ｓ-1、６，０００ｓ-1、７，０００ｓ-1、８，０００ｓ-1、９，０００ｓ-1、１０，０００ｓ-1、１５，０００ｓ-1、２０，０００ｓ-1、又は３０，０００ｓ-1の剪断速度で測定される、請求項４～１１及び１３～１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組換えＡＡＶが、構築物ＩＩである、請求項１～１９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記導入遺伝子が、抗ヒト血管内皮増殖因子（抗ＶＥＧＦ）抗体である、請求項１～２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組換えＡＡＶが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６からなる群から選択される１つ以上のアデノ随伴ウイルス血清型由来の成分を含む、請求項１～２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組換えＡＡＶが、ＡＡＶ８である、請求項１～２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組換えＡＡＶが、ＡＡＶ９である、請求項１～１９、２１又は２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物が、スクロースを含む、請求項１～２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物が、スクロースを含まない、請求項１～２４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間が、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％長い、請求項１～２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間が、約３０分～約２０時間、約２時間～約２０時間、約３０分～約２４時間、約１時間～約２時間、約３０分～約９０日、約３０分～約６０日、約３０分～約３０日、約３０分～約２１日、約３０分～約１４日、約３０分～約７日、約３０分～約３日、約３０分～約２日、約３０分～約１日、約４時間～約９０日、約４時間～約６０日、約４時間～約３０日、約４時間～約２１日、約４時間～約１４日、約４時間～約７日、約４時間～約３日、約４時間～約２日、約４時間～約１日、約４時間～約８時間、約４時間～約１６時間、約４時間～約２０時間、約１日～約９０日、約１日～約６０日、約１日～約３０日、約１日～約２１日、約１日～約１４日、約１日～約７日、約１日～約３日、約２日～約９０日、約３日～約９０日、約３日～約６０日、約３日～約３０日、約３日～約２１日、約３日～約１４日、又は約３日～約７日である、請求項１～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間が、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日より前ではない、請求項１～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 脈絡膜上投与後の前記参照医薬組成物の前記クリアランス時間が、多くとも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、又は１４日である、請求項１～２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記クリアランス時間が、前記ＳＣＳから、又は前記眼からのクリアランス時間である、請求項１～３０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注射部位における前記厚さが、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％厚い、請求項１３及び２０～３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注射部位における前記厚さが、約５００μｍ～約３．０ｍｍ、７５０μｍ～約２．８ｍｍ、約７５０μｍ～約２．５ｍｍ、約７５０μｍ～約２ｍｍ、又は約１ｍｍ～約２ｍｍである、請求項１３及び２０～３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注射部位における前記厚さが、少なくとも約５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、１０００μｍ、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、２．５ｍｍ、３ｍｍ、３．５ｍｍ、４ｍｍ、４．５ｍｍ、５ｍｍ、５．５ｍｍ、６ｍｍ、６．５ｍｍ、７ｍｍ、７．５ｍｍ、８ｍｍ、８．５ｍｍ、９ｍｍ、９．５ｍｍ、又は１０ｍｍである、請求項１３及び２０～３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記参照医薬組成物の前記脈絡膜上投与後の前記注射部位における前記厚さが、多くとも約１ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、２５ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１μｍ、５μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２０μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、又は１０００μｍである、請求項１３及び２０～３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注射部位における前記厚さが、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、又は少なくとも５年間持続する、請求項１３及び２０～３１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記眼内の前記導入遺伝子の前記濃度が、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％高い、請求項１５及び２０～３６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記より長い期間が、少なくとも１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日長い、請求項１４及び２０～３７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記導入遺伝子が、前記医薬組成物の脈絡膜上投与後、少なくとも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日にわたって前記眼内で検出される、請求項１～３８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記導入遺伝子が、前記参照医薬組成物の脈絡膜上投与後、多くとも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、又は４００日後に前記眼内で検出される、請求項１０～３９のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルが、前記参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルと比較して同等であるか又は減少している、請求項２１に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記ＶＥＧＦ誘導性血管拡張及び／又は血管漏出のレベルが、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％減少している、請求項１７～４１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注射部位における前記形質導入率が、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、又は少なくとも２００％、少なくとも２５０％、又は少なくとも３００％、少なくとも４００％、又は少なくとも５００％高い、請求項１６及び２０～４２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 組換えＡＡＶ安定性が、前記参照医薬組成物中の組換えＡＡＶ安定性と比較して、前記医薬組成物中でより高い、請求項１～４３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組換えＡＡＶ安定性が、前記組換えＡＡＶの感染性によって決定される、請求項４４に記載の医薬組成物。
- 前記組換えＡＡＶ安定性が、前記組換えＡＡＶの凝集のレベルによって決定される、請求項４４に記載の医薬組成物。
- 前記組換えＡＡＶ安定性が、前記組換えＡＡＶによって放出される遊離ＤＮＡのレベルによって決定される、請求項４４に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物が、前記参照医薬組成物中の遊離ＤＮＡのレベルと比較して、約５０％多い、約２５％多い、約１５％多い、約１０％多い、約５％多い、約４％多い、約３％多い、約２％多い、約１％多い、約０％多い、約１％少ない、約２％少ない、約５％少ない、約７％少ない、約１０％少ない、約２倍多い、約３倍多い、約２分の１、約３分の１の遊離ＤＮＡを含む、請求項４７に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物中の前記組換えＡＡＶが、前記参照医薬組成物中の前記組換えＡＡＶの感染性と比較して、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、又は１０００倍高い感染性を有する、請求項４５に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物が、前記参照医薬組成物中の前記組換えＡＡＶの凝集のレベルと比較して、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％少ない、２分の１、３分の１、５分の１、１０分の１、１００分の１、又は１０００分の１の組換えＡＡＶ凝集を含む、請求項４６に記載の医薬組成物。
- 前記導入遺伝子が、目的の疾患を治療するか、又はそうでなければ改善するか、予防するか、若しくはその進行を遅らせるために好適な導入遺伝子である、請求項１～５０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記ヒト対象が、ｎＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ）、萎縮型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、緑内障、非感染性ブドウ膜炎、ｘ連鎖又はバッテン病と診断されている、請求項１～５１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記ヒト対象が、ムコ多糖症ＩＶＡ型（ＭＰＳ ＩＶＡ）、ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、同型接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、冠状動脈疾患、脳血管疾患、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー及び孤発性封入体筋炎、又はカリクレインに関連する疾患と診断されている、請求項１～５１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記ＡＡＶが、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）、抗ＶＥＧＦ融合タンパク質、抗ＶＥＧＦ抗体若しくはその抗原結合断片、抗カリクレイン抗体若しくは抗原結合断片、抗ＴＮＦ抗体若しくは抗原結合断片、抗Ｃ３抗体若しくは抗原結合断片、又は抗Ｃ５抗体若しくは抗原結合断片をコードする、請求項１～１９及び２２～５３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組換えＡＡＶゲノムコピーの前記量が、ベクターゲノム濃度に基づく、請求項１～５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組換えＡＡＶゲノムコピーの前記量が、投与当たりのゲノムコピーに基づく、請求項１～５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組換えＡＡＶゲノムコピーの前記量が、前記ヒト対象に投与される全ゲノムコピーに基づく、請求項１～５４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記投与当たりのゲノムコピーが、脈絡膜上投与当たりの前記組換えＡＡＶの前記ゲノムコピーである、請求項５６に記載の医薬組成物。
- 投与される前記全ゲノムコピーが、脈絡膜上に投与される前記組換えＡＡＶの前記全ゲノムコピーである、請求項５７に記載の医薬組成物。
- 前記ベクターゲノム濃度（ＶＧＣ）が、約３×１０9ＧＣ／ｍＬ、約１×１０10ＧＣ／ｍＬ、約１．２×１０10ＧＣ／ｍＬ、約１．６×１０10ＧＣ／ｍＬ、約４×１０10ＧＣ／ｍＬ、約６×１０10ＧＣ／ｍＬ、約２×１０11ＧＣ／ｍＬ、約２．４×１０11ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０11ＧＣ／ｍＬ、約３×１０11ＧＣ／ｍＬ、約６．２×１０11ＧＣ／ｍＬ、約１×１０12ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０12ＧＣ／ｍＬ、約３×１０12ＧＣ／ｍＬ、約５×１０12ＧＣ／ｍＬ、約６×１０12ＧＣ／ｍＬ、約１．５×１０13ＧＣ／ｍＬ、約２×１０13ＧＣ／ｍＬ、又は約３×１０13ＧＣ／ｍＬである、請求項５５に記載の医薬組成物。
- 投与されるゲノムコピーの総数が、約６．０×１０10ゲノムコピー、約１．６×１０11ゲノムコピー、約２．５×１０11ゲノムコピー、約３×１０11ゲノムコピー、約５．０×１０11ゲノムコピー、約６×１０11ゲノムコピー、約３×１０12ゲノムコピー、約１．０×１０12ゲノムコピー、約１．５×１０12ゲノムコピー、約２．５×１０12ゲノムコピー、又は約３．０×１０13ゲノムコピーである、請求項５７又は５９に記載の医薬組成物。
- 投与されるゲノムコピーの総数が、約６．０×１０10ゲノムコピー、約１．６×１０11ゲノムコピー、約２．５×１０11ゲノムコピー、約３×１０11ゲノムコピー、約５．０×１０11ゲノムコピー、約６×１０11ゲノムコピー、約３×１０12ゲノムコピー、約１．０×１０12ゲノムコピー、約１．５×１０12ゲノムコピー、約２．５×１０12ゲノムコピー、又は約３．０×１０13ゲノムコピーである、請求項５６又は５８に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物が、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、又は３０回投与される、請求項１～６２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記参照医薬組成物が、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、又は３０回投与される、請求項１０～６３のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物が、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回、又は１日７回投与される、請求項１～６４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記参照医薬組成物が、１日１回、１日２回、１日３回、１日４回、１日５回、１日６回、又は１日７回投与される、請求項１０～６４のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物が、ポロキサマー４０７及びポロキサマー１８８を含有する、請求項１～６６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、１６～２２％のポロキサマー４０７を含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、０～１６％のポロキサマー１８８を含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、１９％のポロキサマー４０７及び６％のポロキサマー１８８を含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、１８％のポロキサマー４０７及び６．５％のポロキサマー１８８を含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、１７．５％のポロキサマー４０７及び７％のポロキサマー１８８を含む、請求項１～６７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、改変ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、及び任意選択で界面活性剤を含む、請求項１～７２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記医薬組成物が、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬのリン酸二水素カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬのリン酸水素二ナトリウム無水物、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のスクロース、及び任意選択で界面活性剤を含む、請求項１～７２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が、塩化カリウム、リン酸二水素カリウム、塩化ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム無水物、スクロース、及び任意選択で界面活性剤を含む、請求項１～７２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 対象における疾患を治療する方法であって、請求項１～７２のいずれか一項に記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
- 対象における疾患を治療する方法であって、請求項４又は５に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含み、前記医薬組成物が、投与されるときに約２～１０℃の温度である、方法。
- 対象における疾患を治療する方法であって、請求項６又は８に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含み、前記医薬組成物が、投与されるときに約２０～２５℃の温度である、方法。
- 前記医薬組成物が、約４３ＰＳＩ未満の注射圧力で投与される、請求項７６～７８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記医薬組成物が、約６５ＰＳＩ未満の注射圧力で投与される、請求項７６～７８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記医薬組成物が、約１００ＰＳＩ未満の注射圧力で投与される、請求項７６～７８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記医薬組成物が、２９ゲージ針を用いて投与される、請求項７６～８１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記医薬組成物が、３０ゲージ針を用いて投与される、請求項７６～８１のいずれか一項に記載の方法。
- 前記医薬組成物が、約１０～１５秒の注射時間で投与される、請求項７６～８３のいずれか一項に記載の方法。
- 前記医薬組成物が、約５～３０秒の注射時間で投与される、請求項７６～８３のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象がヒトである、請求項７６～８５のいずれか一項に記載の方法。
- 前記疾患が、ｎＡＭＤ（滲出型ＡＭＤ）、萎縮型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、バッテン病、ムコ多糖症ＩＶＡ型（ＭＰＳ ＩＶＡ）、ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、同型接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、冠状動脈疾患、脳血管疾患、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー及び孤発性封入体筋炎並びにカリクレインに関連する疾患からなる群から選択される、請求項７６～８６のいずれか一項に記載の方法。
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