TW202302855A - 用於治療法布瑞氏症之組成物及方法 - Google Patents

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Abstract

除其它事項外，本發明提供一種治療受試者之法布瑞氏症的方法，該方法包含向有需要的個體投與一種封裝於具廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒載體（rAAV），該載體包含：（a）5’反向終端重複序列；（b）一泛素化啟動子；（c）一編碼野生型α-GAL酶或其變體之核苷酸序列；（d）可選地一土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）；（e）一聚A；及（d）一3’ ITR。

Description

用於治療法布瑞氏症之組成物及方法
無。
法布瑞氏症為罕見的漸進性先天代謝疾病，其由於GLA基因突變導致缺乏溶酶體酶 α-半乳糖苷酶A（ α-GAL）而引起。若不加以治療，法布瑞氏症患者的預期壽命會減少，且由於影響腎臟、心臟及/或中樞神經系統的血管疾病，通常會在四十或五十歲左右死亡。
缺乏α-GAL酵素活性會導致其初級受質、神經醯胺三己糖苷（GB3）及其去乙醯化可溶形式、球形三醯鞘胺醇(lysoGb3)漸進性、系統性累積，進而導致各種健康問題，包括一或多種腎臟疾病、心臟疾病、及/或腦血管疾病，且預期壽命會減少。取決於突變和殘留的 α-GAL酵素含量，該疾病在兒童/青少年期呈現為典型早發型法布瑞氏症，或在生命後期呈現為減弱（成人）形式。當殘留的酶活性＜5%時，就會發生典型的法布瑞氏症(Arends M, et al. (2017) PLoS ONE 12(8): e0182379.)且通常發生於男性。
法布瑞氏症也與疼痛發展相關。在背根神經節及交感神經節、或小纖維神經病變中的脂質沉積可能引起疼痛。一般而言，疼痛可能是慢性或偶發性。法布瑞氏症的偶發性疼痛，稱為「法布瑞氏危機」，通常始於四肢，向近端放射，且可能因運動、疾病、溫度變化或其它身體和情緒壓力而觸發。這種神經性疼痛也與缺乏溫度知覺有關。
目前已核准的法布瑞氏症之特定治療為酵素替代療法(「ERT」)，其涉及用經培養之人類細胞株所製造之二種版本重組人類α-GAL、半乳糖苷酶alfa之任一者；以及由中國倉鼠卵巢細胞轉導GLA基因所製造之β-半乳糖苷酶來治療患者。雖然ERT在許多情況下是有效的，但此治療需要每兩星期終身靜脈投與α-GAL。ERT緩解與法布瑞氏症相關的症狀，但無法治癒且無法停止疾病進展。舉例來說，上述討論的兩種α-GAL 產品尚未顯示可實質降低中風風險、心肌對於治療反應緩慢、且腎臟中一些細胞類型的脂質沉積消除受限。藥理反應不足主要是由於酶的循環半衰期短及細胞遞送不理想所致。因此，仍需要治療法布瑞氏症之療法，其可阻止疾病進展且有可能為治癒性的。
本申請案揭露用於治療及/或預防法布瑞氏症之方法及組成物。本揭露部分提供使用重組腺相關病毒載體（rAAV）的基因療法，以介導GLA基因的轉移和表現。本申請案係基於發現諸如具有廣泛組織趨性且利用泛素化啟動子以驅動廣泛基因表現之rAAV載體的基因遞送媒劑，導致持續的高含量蛋白質表現及穩健的蛋白質暴露於廣泛範圍之組織及/或GB3或lysoGb3含量之降低。本申請案也基於以下發現：使用具有廣泛或組織專一性趨性之rAAV載體遞送GLA之密碼子優化或經工程化變體，且利用泛素化或組織專一性啟動子，會導致活體內的α-GAL活性增加、及/或活體內的lysoGb3或GB3含量減少。此外，此用於驅動編碼具有增加的半衰期及改善的細胞攝取之α-GAL蛋白的GLA變體表現的基因遞送方法，進一步提供使關鍵目標組織中之α-GAL暴露增加。總體而言，這些發現允許本文所述的遞送媒劑實現所投與的轉殖基因的廣泛組織分布，且亦允許更好的治療結果。包含本文所述之GLA序列的遞送媒劑尤其適用於法布瑞氏症的治療。
本文描述為用於向有需要之個體的細胞有效遞送 α--半乳糖苷酶A （GLA）基因的方法及組成物。所遞送之GLA轉殖基因導致表現α-GAL蛋白。本發明係部分地基於包含 α-半乳糖苷酶A（GLA）基因之重組腺相關病毒（rAAV）載體之開發及其它物質，且其一旦存在細胞中會展現穩健的α-GAL蛋白表現。本發明至少部分係基於以下驚人發現：一種在泛素化啟動子下包含GLA基因且封裝於具有廣泛組織趨性之rAAV衣殼中之構築體即使在低劑量下，會導致持續α-GAL蛋白表現及於腎臟、心臟、胃腸道、腦及周邊神經元中穩健的組織生物分布。使用此載體所獲得的廣泛分布允許將α-GAL有效遞送至受法布瑞氏症影響的組織，且因此允許可靠的治療結果。
本文所描述之rAAV載體可與具有野生型序列(SEQ ID NO: 3)之GLA基因或具有本文所描述之經修飾序列之GLA基因一起使用。此類經修飾之GLA序列包括，例如密碼子優化之GLA及/或GLA之經工程化變體。本文所述的rAAV載體允許在各種組織中的神經醯胺己三糖苷（lysoGb3）及/或神經醯胺三己糖苷（GB3）的受質清除。
如下文更詳細描述，本文所述的基因治療系統藉由在法布瑞氏症小鼠模型中體重增加、改善的腎功能與神經症狀，而導致健康獲得整體改善，並進一步預期在人類中引發相同的症狀。本文提供的方法和組成物可用於在受法布瑞氏症影響之廣泛的各種組織中實現GLA之持續表現。因此，本申請案提供對法布瑞氏症之治療及緩解相關症狀方面非常有效的組成物及方法。
在一些態樣中，提供一種具有廣泛組織趨性之重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：（a）5’反向終端重複序列（ITR）；（b）泛素化啟動子；（c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列；（d）聚A；及（e）3’ ITR。
在一些態樣中，提供一種具有廣泛組織趨性之重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：（a）5’反向終端重複序列（ITR）；（b）泛素化啟動子；（c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列；（d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；（e）聚A；及（f）3’ ITR。
具有廣泛組織趨性（術語「廣泛組織趨性」「廣趨性」在本文中可互換使用）之各種AAV衣殼可用於本文所描述之rAAV載體中。舉例而言，在一些實施例中，該AAV衣殼為選自AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV4衣殼、AAV5衣殼、AAV6衣殼、AAV7衣殼、AAV8衣殼、AAV9衣殼、AAV11、12、13、AAVhu.37、AAVrh.8、AAVrh.10、及AAV.39、AAV-DJ、或AAV-DJ/8的廣趨性AAV衣殼。
因此，在一些實施例中，具有廣趨性之AAV衣殼為AAV為AAV1。在一些實施例中，具有廣趨性之AAV衣殼為AAV為AAV2。在一些實施例中，具有廣趨性之AAV衣殼為AAV為AAV3。在一些實施例中，具有廣趨性之AAV衣殼為AAV為AAV4。在一些實施例中，具有廣趨性之AAV衣殼為AAV為AAV5。在一些實施例中，具有廣趨性之AAV衣殼為AAV為AAV6。在一些實施例中，具有廣趨性之AAV衣殼為AAV為AAV7。在一些實施例中，具有廣趨性之AAV衣殼為AAV為AAV8。在一些實施例中，具有廣趨性之AAV衣殼為AAV為AAV9。
各種類型之衣殼及相關趨性係描述於 Curr Opin Vir。2016年12月21:75-80，其內容以引用之方式併入本文中。所謂「廣泛組織趨性」意指該衣殼能使基因轉移至兩種或超過2、3、4、5、6、7、8或更多組織類型。舉例而言，在一些實施例中，具有廣泛組織趨性之衣殼使基因轉移至以下組織中之一或多者：個體之肝、腎臟、心臟、胃腸道、及/或周邊神經元。
在一些實施例中，該泛素化啟動子係選自雞β肌動蛋白（CBA）啟動子、CAG啟動子、EF-1α啟動子、PGK啟動子、UBC啟動子、LSE β-葡萄糖醛酸酶（GUSB）啟動子、或泛染色質開放元件（UCOE）啟動子。在一些實施例中，該泛素化啟動子包含CBh （CMV增強子、雞β肌動蛋白啟動子、雞β肌動蛋白-MVM雜合內含子）。因此，在一些實施例中，該泛素化啟動子為雞β肌動蛋白（CBA）啟動子。在一些實施例中，該泛素化啟動子為EF-1α啟動子。在一些實施例中，該EF-1α啟動子係與來自雞β肌動蛋白及兔β珠蛋白基因之嵌合內含子組合。在一些實施例中，該泛素化啟動子為UBC啟動子。在一些實施例中，該泛素化啟動子為LSE β-葡萄糖醛酸酶（GUSB）啟動子。在一些實施例中，該泛素化啟動子為泛染色質開放元件（UCOE）啟動子。(Powell SK, et al. Discov Med. 2015年1月;19(102):49-57.)
在一些實施例中，該泛素化啟動子包含巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及兔β珠蛋白內含子。
在一些實施例中，該泛素化啟動子包含變短的EF-1α啟動子及一或多個內含子。
在一些實施例中，該一或多個內含子係來自雞β肌動蛋白及/或兔β-珠蛋白基因。
在一些實施例中，該AAV9衣殼為自然存在或經修飾的。
在一些實施例中，該WPRE序列為可選的或經修飾的。
在一些實施例中，該WPRE序列為WPRE mut6delATG。
本發明所涵蓋之基因治療載體中可包含的例示性聚A序列包括人類生長荷爾蒙聚A （hGHpA）、合成聚A （SPA）、猿猴病毒40延遲聚A （SV 40pA）及牛生長荷爾蒙（BGH）聚A。在一特定實施例中，該聚A為牛生長荷爾蒙（BGH）聚A。
在一些實施例中，編碼α-GAL酶之核苷酸序列係經密碼子優化。
在一些實施例中，編碼α-GAL酶的核苷酸序列係對人類細胞進行密碼子優化。
在一些實施例中，該α-GAL酶具有未經修飾之序列。
在一些實施例中，該α-GAL酶具有經修飾序列。
在一些實施例中，編碼該α-GAL酶之核苷酸序列係經工程化。
在一些實施例中，編碼α-GAL酶之核苷酸序列係經工程化及經密碼子優化。
在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含一或多個胺基酸取代。
在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於1至25個胺基酸取代。舉例而言，在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於5至25個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於5至20個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於5至15個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於5至10個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於10至25個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於10與20個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於10與15個胺基酸取代。
在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於1至10個胺基酸取代。舉例而言，在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於1至9個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於1至8個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於1至7個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於1至6個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於1至5個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於1至4個胺基酸取代。在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含介於1與3個胺基酸取代。
在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾序列包含10個胺基酸取代。
在一些實施例中，提供重組α半乳糖苷酶A。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含與SEQ ID NO: 30具有至少85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多之序列一致性之多肽序列，或其功能片段。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少85%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少86%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少87%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少88%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少89%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少90%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少91%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少92%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少93%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少94%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少95%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少96%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少97%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少98%的序列一致性。在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含一多肽序列，其具有與SEQ ID NO：30至少99%的序列一致性。
在一些實施例中，該重組α半乳糖苷酶A包含至少一個取代或在SEQ ID NO：30中在選自以下一或多個位置的之取代：T41/M70/L75/S78/E79/Y123/R193/S197/K237/F248/N247/N278/L286/A292/H302/Q333/K314/L347/M353/S364/A368/S371/K374/K393/F396/E398/W399/R404/M423。
另外的例示性GLA轉殖基因及單α-GA酶序列可見於PCT公開案第：PCT/US2021/019811、PCT/US2019/067493及PCT/US2015/063329，其內容以引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶係選自SEQ ID Nos: 7-17、33、34及46-60中之一者。
在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：7。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：8。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：9。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：10。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：11。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：12。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：13。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：14。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：15。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：16。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：17。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：33。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：34。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：46。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：47。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：48。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：49。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：50。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：51。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：52。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：53。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：54。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：55。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：56。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：57。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：58。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：59。在一些實施例中，該經修飾之α-GAL酶包含胺基酸序列SEQ ID NO：60。
在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾之α-GAL酶已增加穩定性。
在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾之α-GAL酶已增加細胞內活性。
在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾之α-GAL酶已改善血清穩定性。
在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾之α-GAL酶已改善溶酶體穩定性。
在一些實施例中，與野生型α-GAL酶(SEQ ID NO: 30)相比，該經修飾之α-GAL酶已增加特定催化活性。
在一些態樣中，提供一種治療個體之法布瑞氏症的方法，該方法包含向有需要的個體投與如本文所描述之重組腺相關病毒載體（rAAV）。
在一些態樣中，提供了一種醫藥組成物，該組成物包含如本文所描述之rAAV載體。
在一些態樣中，提供了一種細胞，該細胞包含如本文所描述之rAAV載體。該細胞可為任何種類的哺乳動物細胞。舉例而言，在一些實施例中，該細胞為心臟細胞。在一些實施例中，該細胞為腎臟細胞。在一些實施例中，該細胞為肝。在一些實施例中，該細胞為骨骼肌細胞。在一些具體例中，該細胞為胃腸道之細胞。在一些實施例中，該細胞是大腦之細胞，諸如例如神經元或膠質細胞。在一些實施例中，該細胞為周邊神經元。
在一些態樣中，提供一種治療個體之法布瑞氏症的方法，該方法包含向有需要的個體投與封裝於具泛組織趨性之rAAV衣殼中的重組腺相關病毒載體（rAAV），該載體包含：（a）5’反向終端重複序列（ITR）；（b）包含有巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及兔β珠蛋白內含子之泛素化啟動子；（c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列；（d）聚A；以及 （e）3’ ITR。
在一些態樣中，提供一種治療個體之法布瑞氏症的方法，該方法包含向有需要的個體投與封裝於具泛組織趨性之rAAV衣殼中的重組腺相關病毒載體（rAAV），該載體包含：（a）5’反向終端重複序列（ITR）；（b）包含有巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及兔β珠蛋白內含子之泛素化啟動子；（c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列；（d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；（e）聚A；以及（f）3’ ITR。
在一些實施例中，該AAV衣殼為選自AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV4衣殼、AAV5衣殼、AAV6衣殼、AAV7衣殼、AAV8衣殼、或AAV9衣殼的廣趨性AAV衣殼。在一些實施例中，該廣趨性AAV衣殼為AAV1衣殼。在一些實施例中，該廣趨性AAV衣殼為AAV2衣殼。在一些實施例中，該廣趨性AAV衣殼為AAV3衣殼。在一些實施例中，該廣趨性AAV衣殼為AAV4衣殼。在一些實施例中，該廣趨性AAV衣殼為AAV5衣殼。在一些實施例中，該廣趨性AAV衣殼為AAV6衣殼。在一些實施例中，該廣趨性AAV衣殼為AAV7衣殼。在一些實施例中，該廣趨性AAV衣殼為AAV8衣殼。在一些實施例中，該廣趨性AAV衣殼為AAV9衣殼。
在一些實施例中，該rAAV載體係藉由靜脈內、皮下或經皮投與。因此，在一些實施例中，向有需要的個體靜脈內投與該rAAV載體。在一些實施例中，向有需要的個體皮下投與該rAAV載體。在一些實施例中，向有需要的個體經皮投與該rAAV載體。
在一些實施例中，該經皮投與係藉由基因槍。
在一些實施例中，該rAAV載體在投與之後為游離的。
在一些實施例中，向有需要的個體投與本文所述之rAAV，其劑量低於預期使用靶向肝以表現α-GAL之AAV載體之劑量。在其它實施例中，當以與靶向肝之rAAV等效的劑量投與時，本文所描述之rAAV展現較高之α-GAL血清及組織暴露。
在一些實施例中，與使用肝特異性啟動子的包含AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV4衣殼、AAV5衣殼、AAV6衣殼、AAV7衣殼、或AAV8衣殼的rAAV載體相比，具有廣泛組織趨性且使用泛素化啟動子的rAAV載體以更低的劑量達到治療法布瑞氏症的治療效果。因此，在一些實施例中，具有廣泛組織趨性及泛素化啟動子之rAAV載體以低於包含具有含肝特異性啟動子的AAV1衣殼之rAAV載體之劑量達成治療作用。在一些實施例中，具有廣泛組織趨性及泛素化啟動子之rAAV載體以低於包含具有含肝特異性啟動子的AAV2衣殼之rAAV載體之劑量達成治療作用。在一些實施例中，具有廣泛組織趨性及泛素化啟動子之rAAV載體以低於包含具有含肝特異性啟動子的AAV3衣殼之rAAV載體之劑量達成治療作用。在一些實施例中，具有廣泛組織趨性及泛素化啟動子之rAAV載體以低於包含具有含肝特異性啟動子的AAV3衣殼之rAAV載體之劑量達成治療作用。在一些實施例中，具有廣泛組織趨性及泛素化啟動子之rAAV載體以低於包含具有含肝特異性啟動子的AAV4衣殼之rAAV載體之劑量達成治療作用。在一些實施例中，具有廣泛組織趨性及泛素化啟動子之rAAV載體以低於包含具有含肝特異性啟動子的AAV5衣殼之rAAV載體之劑量達成治療作用。在一些實施例中，具有廣泛組織趨性及泛素化啟動子之rAAV載體以低於包含具有含肝特異性啟動子的AAV6衣殼之rAAV載體之劑量達成治療作用。在一些實施例中，具有廣泛組織趨性及泛素化啟動子之rAAV載體以低於包含具有含肝特異性啟動子的AAV7衣殼之rAAV載體之劑量達成治療作用。在一些實施例中，具有廣泛組織趨性及泛素化啟動子之rAAV載體以低於包含具有含肝特異性啟動子的AAV8衣殼之rAAV載體之劑量達成治療作用。
在一些實施例中，能表現α-GAL酶之rAAV載體可包含組織特異性啟動子，例如，肝臟特異性啟動子。例示性肝特異性啟動子包括但不限於，舉例而言，轉甲狀腺素蛋白啟動子（TTR）、甲狀腺素結合球蛋白（TBG）啟動子、混合型肝特異性啟動子（HLP）、及α-1-抗胰蛋白酶（AAT）啟動子。
在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體在血清中具有可偵測的α-GAL至少5星期、10星期、15星期、26星期、1年、5年、10年、或20年。在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體在血清中具有可偵測的之α-GAL至少5星期。在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體在血清中具有可偵測的之α-GAL至少10星期。在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體在血清中具有可偵測的之α-GAL至少15星期。在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體在血清中具有可偵測的之α-GAL至少26星期。在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體在血清中具有可偵測的之α-GAL至少1年。在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體在血清中具有可偵測的之α-GAL至少5年。在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體在血清中具有可偵測的之α-GAL至少10年。在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體在血清中具有可偵測的之α-GAL至少15年。在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體在血清中具有可偵測的之α-GAL至少20年。在一些實施例中，在投與該rAAV載體之後，個體終身在其血清中具有可偵測的之α-GAL。
在一些實施例中，相較於WTα-GAL的表現，經修飾之α-GAL酶的表現提供3、10、30、100、300倍較高的血清α-GAL含量。在一些實施例中，相較於WTα-GAL的表現，經修飾之α-GAL酶的表現提供3、10、30、100、300倍較高的細胞內酶含量。
在一些實施例中，該投與導致α-GAL酶暴露於個體之肝、腎臟、心臟、胃腸道、腦及/或周邊神經元中之一或多者中。因此，在一些實施例中，投與導致α-GAL酶暴露於肝中。因此，在一些實施例中，投與導致α-GAL酶暴露於腎臟中。因此，在一些實施例中，投與導致α-GAL酶暴露於心臟中。在一些實施例中，投與導致α-GAL酶暴露於胃腸道及與胃腸道相關之細胞中。因此，在一些實施例中，投與導致α-GAL酶暴露於腦中。因此，在一些實施例中，投與導致α-GAL酶暴露於周邊神經元中。
在一些實施例中，投與該rAAV載體導致對法布瑞氏症小鼠/患者之存活益處。在一些實施例中，投與該rAAV載體導致個體之肝、心臟、腎臟及胃腸道中之一或多者中的神經醯胺三己糖苷（GB3）含量降低。因此，在一些實施例中，投與該rAAV載體導致心臟中之GB3含量降低。在一些實施例中，投與該rAAV載體導致骨骼肌中之GB3含量降低。在一些實施例中，投與該rAAV載體導致腎臟中之GB3含量降低。在一些實施例中，投與該rAAV載體導致胃腸道中之GB3含量降低。GB3含量可藉由本技藝領域中已知之任何方法評估，包括例如藉由層析方法，其包括例如液相層析串聯質譜儀。
在一些態樣中，本發明包括一種在細胞中表現α-GAL酶之方法，該方法包含投與封裝於AAV9衣殼中之rAAV載體，所述載體包含：（a）5’反向終端重複序列（ITR）；（b）包含巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及兔β珠蛋白內含子之泛素化啟動子；（c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列；（d）牛生長荷爾蒙 (BGH)聚A；及（f）3’ ITR。
在一些態樣中，本發明包括一種在細胞中表現α-GAL酶之方法，該方法包含投與封裝於AAV9衣殼中之rAAV載體，所述載體包含：（a）5’反向終端重複序列（ITR）；（b）包含巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及兔β珠蛋白內含子之泛素化啟動子；（c）編碼α-GAL 酶之核苷酸序列；（d）可選地為帶有mut6delATG突變的土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）；（e）牛生長荷爾蒙（BGH）聚A；及（f）3’ ITR。
在一些態樣中，本發明包括一種封裝於AAV衣殼中之重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含5’反向終端重複序列（ITR）；肝特異性啟動子；編碼α-GAL酶之核苷酸序列；聚A；及3’ ITR。
在一些態樣中，本發明包括封裝於AAV衣殼中之重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含5’反向終端重複序列（ITR）；肝特異性啟動子；編碼α-GAL酶之核苷酸序列；土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）；及聚A；及3’ ITR。
相關申請案之交叉參考
本申請案主張2021年2月26日申請之美國臨時申請案第63/154,485號之優先權及權益，其全部內容在此以引用之方式併入本文中。 序列列表之引用併入
本說明書引用了序列列表（於2022年2月25日以名為MIL-014WO_ST25的.txt檔案通過電子方式提交）。該.txt檔案於2022年2月24日生成，大小為177 KB。序列列表之整個內容以全文引用之方式併入本文中。
法布瑞氏症是一種X性聯遺傳疾病，其由於GLA基因突變，導致生成異常溶酶體水解酶、 α-半乳糖苷酶A（ α-GAL）。因為 α-GAL是醣脂類(諸如鞘脂)分解作用所必需的，α-GAL的缺乏或功能失常導致鞘脂在組織中積累。法布瑞氏症影響每40,000名男性中之1人，其在童年或青春期發展成多系統疾病。法布瑞氏症的臨床表現包括但不限於：四肢灼熱、刺痛、或四肢有刺痛感或麻木感、熱不耐受性、皮膚病變（稱為血管角質瘤）、角膜不透明、心律不整、左心室肥大、蛋白尿、腎功能不全及腦血管意外（諸如中風及/或癲癇）。GLA基因為異質之女性可將疾病傳染給其兒子，且通常無症狀。然而，一些女性因X染色體不均勻失活而發展角膜不透明度或更嚴重的表現。
目前法布瑞氏症的治療選擇包括重組酶替代療法（ERT）。ERT會減緩法布瑞氏症的進展，但不會徹底停止或逆轉疾病。目前法布瑞氏症的治療主要是實現減緩疾病進展，但僅限於腎臟及心臟，而其它器官/組織則表現不足或未改善。法布瑞氏症患者也需要連續的蛋白質輸注，有時會導致輸注反應和免疫原性增強。此類連續性疾病管理要求也增加「治療負擔」或所添加和持續的有關患者的工作量（即，必需和需求），以使其遵從臨床醫師為管理其發病率和健康狀態所提出的建議。與每年腎功能喪失量為-1 mL/分鐘/1.73 m 2/年之健康個體相比，在嚴重感染典型男性法布瑞氏症的患者中，儘管治療後每年腎功能喪失量為至多-6.82 mL/分鐘/1.73 m 2/年（Germain等人，J Med Genet. 2015 May;52(5):353-8.2015）。這些需求可由如本文所述的GLA載體遞送來解決。
法布瑞氏症治療的基因治療方法的一個優點是α-GAL連續暴露，而不是由ERT輸注提供的α-GAL間歇性暴露。基因療法有可能允許被某些組織和細胞類型（例如，心肌細胞、周邊神經元和腎細胞）吸收，而這是輸注ERT不容易實現的。溶酶體中α-GAL的持續可用性可防止劑量之間的鞘糖脂再累積。顯著強化對於目標細胞之酶分配可提供轉化療法，有可能達成優於目前療法的臨床效益。此外，伴隨肝細胞轉導的基因療法可利用肝的耐受性本質，並誘導對於轉殖基因產品之全身性免疫耐受性，消除因抗藥性抗體而降低療效之風險。不希望受理論所束縛，一般相信與單一長效劑量組合後，這些益處可以解決對顯著更高療效的治療需求，並降低患者和照顧者的治療負擔。
除其它事項外，本發明提供（1）受法布瑞氏症影響之組織中的內在GLA表現系統、（2）達到持續且高表現α-GAL的方法，以降低與法布瑞氏症進展相關的疾病負擔和治療負擔，以及（3）使用編碼GLA的載體，以實現降低與法布瑞氏症相關的表型。
在一些實施例中，如本文提供的內在GLA表現系統包含病毒載體，其包含由泛素化啟動子控制的編碼α-GAL的序列。在一些實施例中，該啟動子為哺乳動物泛素化啟動子。在一些實施例中，一般相信泛素化啟動子實現了編碼的α-GAL在哺乳動物中之廣泛分佈。目前用於治療法布瑞氏症的基因療法大多依賴於使用肝特異性啟動子，不同於本文所述的遞送媒劑。使用肝特異性啟動子之法布瑞氏症基因療法系統依賴於肝製造的α-GAL和其它組織的「交叉校正」。本發明提供一種用於在多個目標組織中內在表達α-GAL之系統，使用一個使用了泛素化啟動子的基因療法系統，其導致α-GAL更廣泛地暴露以及對法布瑞氏症及其相關症狀有較佳治療。如下文更詳細地提供，本發明中所使用的泛素化啟動子可選自以下一或多者：EF-1α啟動子、UBC啟動子、LSE β-葡萄醣醛酸酶（GUSB）啟動子、泛染色質開放元件（UCOE）啟動子、GAPDH啟動子、雞β肌動蛋白（CBA）啟動子、PGK啟動子及迷你EF1啟動子。在一些實施例中，該泛素化啟動子可從更多已知的泛素化啟動子之一或多者來進行工程化。
本發明提供一種用於廣泛暴露α-GAL和用於更有效的法布瑞氏症及相關症狀之治療的系統，其使用泛素化啟動子的基因療法系統。如下文更詳細地提供，本發明中所使用的泛素化啟動子可選自以下一或多者：EF-1α啟動子、UBC啟動子、LSE β-葡萄醣醛酸酶（GUSB）啟動子、泛染色質開放元件（UCOE）啟動子、GAPDH啟動子、雞β肌動蛋白（CBA）啟動子、PGK啟動子及迷你EF1啟動子。在一些實施例中，該泛素化可由一或多個已知泛素化啟動子來工程化。
在一些實施例中，如本文所提供之內在GLA表現系統包含可改善哺乳動物中各種組織中α-GAL之暴露或分布的病毒載體。在一些實施例中，在各種組織中所改善的α-GAL暴露或分布改善了與法布瑞氏症相關的症狀。在一些實施例中，在提供GLA之廣趨性方面，病毒載體之使用補充了泛素化啟動子之使用。一般預期GLA的廣趨性將改善法布瑞氏症的症狀。在一些實施例中，該病毒載體係選自具有泛素化啟動子之AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、或AAV9中之一或多者。在一些實施例中，具有廣趨性之適當病毒載體可使用具有泛素化啟動子之AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8或AAV9的組合元件來工程化。
在一些實施例中，本發明所涵蓋之病毒載體包含組織特異性啟動子，例如，編碼α-GAL多肽之核酸序列上游之肝特異性啟動子。
在一些實施例中，如本文所提供之內在GLA表現系統包含可改善哺乳動物中各種組織中α-GAL之暴露或分布的病毒載體。在一些實施例中，在各種組織中所改善的α-GAL暴露或分布改善了與法布瑞氏症相關的症狀。在一些實施例中，在提供α-GAL之強大組織分布方面，病毒載體之使用補充了泛素化啟動子之使用。一般預期α-GAL的生物分布改善將改善法布瑞氏症的症狀。在一些實施例中，該病毒載體係選自具有泛素化啟動子之AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、或AAV9中之一或多者。在一些實施例中，具有廣趨性之適當病毒載體可使用具有泛素化啟動子之AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8或AAV9的組合元件來工程化。
在一些實施例中，如本文提供的內在GLA表現系統為表現野生型或變體α-GAL（例如，經工程化變體）的病毒載體。在一些實施例中，本發明提供一種病毒載體系統，其包含用於廣泛、組織廣泛分布的野生型α-GAL的泛素化啟動子。在一些實施例中，本發明提供一種病毒載體系統，其包含用於廣泛、廣泛組織分布的α-GAL變體的泛素化啟動子。
在一些實施例中，與野生型α-GAL相比，GLA轉殖基因編碼具改善α-GAL的血清或組織穩定性之酶。在一些實施例中，與野生型酶相比，GLA轉殖基因編碼具有更高α-GAL活性之酶。在一些實施例中，本文所述之GLA轉殖基因編碼在野生型α-GAL之位置1至100處包含有一或多個胺基酸修飾之α-GAL酶。在一些實施例中，由GLA轉殖基因編碼之α-GAL酶在野生型α-GAL之位置101-200處包含一或多個胺基酸修飾。在一些實施例中，由GLA轉殖基因編碼之α-GAL酶在野生型α-GAL之位置201-300處包含一或多個胺基酸修飾。在一些實施例中，由GLA轉殖基因編碼之α-GAL酶在野生型α-GAL之位置301-400處包含一或多個胺基酸修飾。在一些實施例中，由GLA轉殖基因編碼之α-GAL酶在野生型α-GAL之位置401-429處包含一或多個胺基酸修飾。在一些實施例中，該修飾可為胺基酸取代。在一些實施例中，該修飾可為胺基酸缺失。在一些實施例中，該修飾可為胺基酸插入。在一些實施例中，該胺基酸取代可為保守取代。在一些實施例中，該胺基酸取代可為非保守取代。在一些實施例中，由GLA轉殖基因編碼之α-GAL包含選自SEQ ID NO: 7-17、33或34之胺基酸序列。 基因治療載體
此處所描述之載體包含GLA序列。在一些實施例中，該GLA序列可為自然存在（野生型）序列(SEQ ID NO: 30)。在一些實施例中，該GLA序列可為經修飾序列，例如，經密碼子優化之GLA序列或經工程化或經修飾的GLA序列。考慮用於本發明之載體中的例示性GLA序列係提供於以下表1中。
在一些實施例中，由GLA轉殖基因編碼之α-GAL包含信號肽序列MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARA (SEQ ID NO: 76)。在一些實施例中，由GLA轉殖基因編碼之α-GAL在N端包含信號肽序列。在一些實施例中，由GLA轉殖基因編碼之α-GAL在C端包含信號肽序列。在一些實施例中，由GLA轉殖基因編碼之α-GAL在N端包含SEQ ID NO: 76。在一些實施例中，由GLA轉殖基因編碼之α-GAL在N端包含SEQ ID NO: 76。
在一些實施例中，GLA序列包含信號肽序列atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagca (SEQ ID NO: 77)。在一些實施例中，GLA序列在5’端包含信號肽序列。在一些實施例中，GLA序列在3'端包含信號肽序列。在一些實施例中，GLA序列在5’端包含SEQ ID NO: 77。在一些實施例中，GLA序列在3’端包含SEQ ID NO: 77。 表 1 ：例示性 α-GAL 胺基酸及 GLA 轉殖基因核苷酸序列
例示性 α- GAL 胺基酸及 GLA 轉殖基因核苷酸序列
標識符 序列
A LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAERMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRQLGFYEWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL (SEQ ID NO: 7)
B LDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL (SEQ ID NO: 8)
C LDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNKTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL (SEQ ID NO: 9)
D LDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTDGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNKTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRGYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL (SEQ ID NO: 10)
E LDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTDGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNKTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRGYTIPVAKLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL (SEQ ID NO: 11)
F LDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTDGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNKTGRDIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDTDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRGYTIPVAKLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL (SEQ ID NO: 46)
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009 LDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTDGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNKTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRQLGFYNWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL (SEQ ID NO: 34)
WT LDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWKSIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAMINRQEIGGPRSYTIAVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEWTSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL (SEQ ID NO: 30)
具有信號肽之例示性 α- GAL 胺基酸
A MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAERMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRQLGFYEWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL (SEQ ID NO: 47)
B MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL (SEQ ID NO: 48)
C MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNKTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL (SEQ ID NO: 49)
D MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTDGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNKTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRGYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL (SEQ ID NO: 50)
E MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTDGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNKTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRGYTIPVAKLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL (SEQ ID NO: 51)
F MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTDGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNKTGRDIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAGPLFMSNDLRAISPQAKALLQDTDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRGYTIPVAKLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQTSLKDLL (SEQ ID NO: 52)
002 MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAVINRQEIGGPRSYTIAVASLGGGVACNPACFITQLLPVKRKLGLYEWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL (SEQ ID NO: 53)
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006 MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWKSIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGDAWAVAMINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEWTSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL (SEQ ID NO: 57)
007 MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTDGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWKSIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEATSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL (SEQ ID NO: 58)
008 MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTDGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRQLGFYNWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL (SEQ ID NO: 59)
009 MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPPMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFEEMAERMVTDGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANHVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNKTGRPIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWASIKSILDWTSRNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWDQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRKGDNFEVWERPLSGDAWAVAIINRQEIGGPRSYTIPVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRQLGFYNWTSRLKSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL (SEQ ID NO: 60)
具有信號肽的野生型 MQLRNPELHLGCALALRFLALVSWDIPGARALDNGLARTPTMGWLHWERFMCNLDCQEEPDSCISEKLFMEMAELMVSEGWKDAGYEYLCIDDCWMAPQRDSEGRLQADPQRFPHGIRQLANYVHSKGLKLGIYADVGNKTCAGFPGSFGYYDIDAQTFADWGVDLLKFDGCYCDSLENLADGYKHMSLALNRTGRSIVYSCEWPLYMWPFQKPNYTEIRQYCNHWRNFADIDDSWKSIKSILDWTSFNQERIVDVAGPGGWNDPDMLVIGNFGLSWNQQVTQMALWAIMAAPLFMSNDLRHISPQAKALLQDKDVIAINQDPLGKQGYQLRQGDNFEVWERPLSGLAWAVAMINRQEIGGPRSYTIAVASLGKGVACNPACFITQLLPVKRKLGFYEWTSRLRSHINPTGTVLLQLENTMQMSLKDLL (SEQ ID NO: 75)
核酸序列
編碼 A 之核酸 ctggataatggattggctagaacacctactatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctcgactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctgtttatggaaatggccgagcgaatggtgtcagaaggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggctccgcaacgggacagtgagggcagacttcaggcagatcctcagcgcttcccacatgggataaggcagctcgccaactacgtccactctaagggactgaaactgggcatctatgctgacgtggggaataagacctgtgcgggatttcccggtagcttcggctactacgacattgatgcccagacctttgccgattggggagttgacctcctcaaattcgatggctgctattgtgactctttggagaacctggcagacgggtacaagcatatgtccctggccctgaatcggacaggtagacccatcgtgtatagttgcgaatggcccctttacatgtggccttttcaaaagccaaactacactgagattcgccagtattgcaatcactggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcgagcatcaaatccatattggattggacctctcggaatcaggagcgcattgtagacgtcgcaggacccggcggctggaacgaccctgatatgctggtgatcgggaattttggtcttagctgggaccagcaagttacgcagatggctctgtgggcaattatggcagccccactcttcatgtccaacgatctgcgacacatctctcctcaagctaaggctctgctgcaggacaaagatgtgattgccatcaatcaggacccactcggaaagcagggctatcagctgagaaaaggcgacaacttcgaagtctgggaaaggccactttcaggagacgcatgggctgtggccataataaaccggcaagagattggtgggcccaggagctacacaatccccgttgccagtttgggcaagggagtggcgtgtaatcctgcctgctttatcactcagctgctcccagtcaaaagacagctggggttctatgagtggacctcccgcctcaagagccatattaatcccacaggtaccgtactgctgcaacttgaaaacacgatgcagatgagtttgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 18)
編碼 B 之核酸 ctggataatggattggctagaacacctcctatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctggactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctctttgaggaaatggccgaacgaatggtgactgagggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggccccacaacgggattctgagggaagacttcaggctgatccgcagcgcttccctcatggcataaggcagctggcaaaccacgtccacagtaaggggctcaaattgggaatctacgcggacgtgggcaataagacctgtgccggttttccgggatcattcgggtattatgacattgacgcccaaacgtttgctgattggggcgttgacctgctgaaattcgatggttgctactgtgacagcctcgaaaacctggcagacggctacaagcatatgtctctcgccctgaatagaaccggtcggccaatcgtatattcctgcgagtggcctctttacatgtggccatttcagaaaccgaactacacagaaattcgccagtattgcaatcattggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcctccataaagagcatcttggactggaccagtcggaatcaggagcgaattgtggatgtcgcaggccctggaggatggaacgatccagacatgctggtgatcggcaattttggcctctcttgggaccagcaggttacccaaatggctctgtgggcaattatggccggtcctcttttcatgagcaacgatctgcgcgcgatctcaccacaggcaaaggccctgctccaagacaaagatgtgatagccatcaatcaggacccgttgggaaagcagggctaccagctgagaaaaggcgacaactttgaggtctgggaaaggcctttgagtggagatgcgtgggctgtggccattattaatcggcaagagatcggaggtccacgctcctatacaattcctgtagcatctcttggcaagggcgttgcctgtaacccagcttgcttcatcactcagcttctgccggtgaagagaaaactgggtttctacgaagctaccagcaggctccgatcccacatcaaccctacaggaaccgtcctcttgcagctggagaatacgatgcagacttcactgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 19)
編碼 C 之核酸 ctggataatggattggctagaacacctcctatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctggactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctctttgaggaaatggccgaacgaatggtgactgagggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggccccacaacgggattctgagggaagacttcaggctgatccgcagcgcttccctcatggcataaggcagctggcaaaccacgtccacagtaaggggctcaaattgggaatctacgcggacgtgggcaataagacctgtgccggttttccgggatcattcgggtattatgacattgacgcccaaacgtttgctgattggggcgttgacctgctgaaattcgatggttgctactgtgacagcctcgaaaacctggcagacggctacaagcatatgtctctcgccctgaataaaaccggtcggccaatcgtatattcctgcgagtggcctctttacatgtggccatttcagaaaccgaactacacagaaattcgccagtattgcaatcattggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcctccataaagagcatcttggactggaccagtcggaatcaggagcgaattgtggatgtcgcaggccctggaggatggaacgatccagacatgctggtgatcggcaattttggcctctcttgggaccagcaggttacccaaatggctctgtgggcaattatggccggtcctcttttcatgagcaacgatctgcgcgcgatctcaccacaggcaaaggccctgctccaagacaaagatgtgatagccatcaatcaggacccgttgggaaagcagggctaccagctgagaaaaggcgacaactttgaggtctgggaaaggcctttgagtggagatgcgtgggctgtggccattattaatcggcaagagatcggaggtccacgctcctatacaattcctgtagcatctcttggcaagggcgttgcctgtaacccagcttgcttcatcactcagcttctgccggtgaagagaaaactgggtttctacgaagctaccagcaggctccgatcccacatcaaccctacaggaaccgtcctcttgcagctggagaatacgatgcagacttcactgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 20)
編碼 D 之核酸 ctggataatggattggctagaacacctcctatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctggactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctctttgaggaaatggccgaacgaatggtgactgacggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggccccacaacgggattctgagggaagacttcaggctgatccgcagcgcttccctcatggcataaggcagctggcaaaccacgtccacagtaaggggctcaaattgggaatctacgcggacgtgggcaataagacctgtgccggttttccgggatcattcgggtattatgacattgacgcccaaacgtttgctgattggggcgttgacctgctgaaattcgatggttgctactgtgacagcctcgaaaacctggcagacggctacaagcatatgtctctcgccctgaataaaaccggtcggccaatcgtatattcctgcgagtggcctctttacatgtggccatttcagaaaccgaactacacagaaattcgccagtattgcaatcattggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcctccataaagagcatcttggactggaccagtcggaatcaggagcgaattgtggatgtcgcaggccctggaggatggaacgatccagacatgctggtgatcggcaattttggcctctcttgggaccagcaggttacccaaatggctctgtgggcaattatggccggtcctcttttcatgagcaacgatctgcgcgcgatctcaccacaggcaaaggccctgctccaagacaaagatgtgatagccatcaatcaggacccgttgggaaagcagggctaccagctgagaaaaggcgacaactttgaggtctgggaaaggcctttgagtggagatgcgtgggctgtggccattattaatcggcaagagatcggaggtccacgcggttatacaattcctgtagcatctcttggcaagggcgttgcctgtaacccagcttgcttcatcactcagcttctgccggtgaagagaaaactgggtttctacgaagctaccagcaggctccgatcccacatcaaccctacaggaaccgtcctcttgcagctggagaatacgatgcagacttcactgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 21)
編碼 D 之經密碼子優化核酸 （ D1 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggactggccagaactcctcccatgggctggctgcactgggaaaggtttatgtgtaatctggactgtcaagaggagccagattcctgcatctctgagaagctctttgaagagatggctgagaggatggtgacagatggttggaaggatgctggttatgagtacctgtgcattgatgactgctggatggccccccagagagattcagaaggcagactgcaagcagaccctcagaggttcccccatggcatccgccagcttgccaaccatgtccactccaagggcctgaaactgggtatctatgctgatgtgggcaataagacctgtgctggctttcctggctcctttggctactatgacattgacgcccagacctttgctgactggggtgtggacttgctgaagtttgatggctgctactgtgactccctggagaacctggcagatggatacaagcacatgtctctggctctgaacaagactggcagacccattgtttacagctgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactacactgagatcagacagtactgcaatcattggaggaactttgccgacatcgatgattcttgggcctccatcaagagcatcctggactggacatccagaaaccaagaaagaattgtggatgtggctggacctggaggatggaatgatcctgacatgctggtgattggaaattttgggctgtcctgggaccagcaagtgactcagatggccctctgggccatcatggctgggcccctcttcatgagcaatgacctgagggccatttccccccaagccaaggccctgcttcaagacaaagatgtcattgctatcaatcaagatcccctggggaagcaaggctaccagctcagaaaaggagacaacttcgaggtgtgggagagacctctgtctggagatgcctgggctgtggccatcatcaacagacaagagattggtggccccagaggttacaccatccctgttgcttctcttggcaagggtgttgcctgcaacccagcttgcttcatcacccagctgctcccagtgaagaggaagctgggcttctatgaagctacctctaggttgagatcccacatcaaccccactggtactgtgctgctgcagctggaaaacaccatgcagacttccctcaaggacctcctgtga (SEQ ID NO: 35)
編碼 D 之經密碼子優化核酸 （ D2 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggacttgcaagaactcctcccatgggctggctgcactgggagaggtttatgtgtaatctggactgtcaagaagaaccagattcctgcatctctgagaagctctttgaggagatggctgagaggatggtgacagatggatggaaggatgctggttatgaatatctgtgcattgatgactgctggatggcccctcagagagacagtgaaggccgcctgcaagcagacccccagaggttcccccatggaatcagacagttggccaaccatgtccactccaagggcctgaaactgggcatctatgctgatgtgggcaataagacctgtgctggcttccctggctcctttgggtactatgacattgacgcccagacttttgctgactggggtgtggacttgctgaagtttgatggctgctactgtgactccctggaaaacctggcagatggttacaagcacatgtctctggccctgaacaagactggcagacccattgtttacagctgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactacactgagatccgccagtactgcaatcattggaggaactttgcagacatcgatgattcttgggccagcatcaagtccatcctggactggacttccagaaaccaagagagaattgtggatgttgctggacctggaggttggaatgatcctgacatgctggtgattggaaattttggactgtcctgggaccagcaagtgactcagatggccctctgggccatcatggctgggcccctcttcatgagcaatgacctgagggccatttccccccaagccaaggctctgcttcaagacaaagatgtcattgctattaatcaagatcccctggggaagcaaggctaccagctcagaaaaggagacaacttcgaggtgtgggaaagacctctgtctggagatgcctgggctgtggctatcatcaacagacaagaaattggtggccccagaggctacaccatccctgtggcctctcttggcaagggtgttgcctgcaacccagcttgcttcatcacccagctgctcccagtgaagaggaagctgggtttctatgaggctacctctaggttgagatcccacatcaatcccactggtacagtgctgctgcagctggagaacaccatgcagacctccctcaaggacctcctttaa (SEQ ID NO: 36)
編碼 D 之經密碼子優化核酸 （ D3 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcattggacaatggactggcaagaactcctcccatgggctggctgcactgggaaaggtttatgtgtaatctggactgtcaagaggagccagattcctgcatctctgagaagctctttgaagagatggctgagaggatggtgacagatggatggaaggatgctggatatgagtacctgtgcattgatgactgctggatggcccctcagagagacagtgaaggcagactgcaagcagacccccagaggttcccccatggcattaggcagctggccaaccatgtccactccaagggcctgaaactgggcatctatgctgatgtgggcaataagacctgtgctggtttccctggctcctttggatactatgacattgatgcccagacctttgctgactggggtgtggacctgctcaagtttgatggctgctactgtgactccctggagaacctggctgatggttacaagcacatgtctcttgctctgaacaagactggtagacccattgtttacagctgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactacactgagatcagacagtactgcaatcattggaggaattttgcagatattgatgattcttgggcctccatcaagagcatcctggactggacttccagaaaccaagaaagaattgtggatgttgctggccctggaggttggaatgaccctgacatgctggtgattggcaactttgggctgtcctgggaccagcaagtgactcagatggccctctgggccatcatggctgggcccctcttcatgtccaatgatctgagggccatttccccccaagccaaggccctgcttcaagacaaagatgtcattgctatcaatcaagatcccctgggcaagcaaggctaccagctcagaaaaggagacaactttgaggtgtgggagagacctctgtctggagatgcctgggctgtggccatcatcaacagacaagagattggtggccccagaggctacaccatccctgtggcttccctggggaagggtgttgcctgcaacccagcttgcttcatcacccagcttctgccagtgaagaggaagctgggcttctatgaagctaccagcagactgagatcccacatcaaccccactggcacagtgctgctgcagctggaaaacaccatgcagacttctctgaaggacctcctgtga (SEQ ID NO: 37)
編碼 D 之經密碼子優化核酸 （ D4 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggactggcaagaactcctcccatgggctggctgcattgggagaggtttatgtgtaatctggactgtcaagaggagccagactcctgcatctctgagaagctctttgaagagatggctgagaggatggtgacagatggttggaaggatgctggatatgagtacctgtgcattgatgactgctggatggccccccagagagacagtgaaggcagactgcaagcagaccctcagaggttcccccatggcattaggcagctggccaaccatgtccactccaagggcctgaaacttggcatctatgctgatgtgggcaataagacctgtgctggcttccctggctcctttggctactatgacattgatgcccagacttttgctgactggggtgtggacctgctcaagtttgatggctgctactgtgactctctggaaaacctggctgatggatacaagcacatgtctttggctctgaacaagactggtaggcccattgtttacagctgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactacactgagatcagacagtactgcaaccactggaggaactttgcagatattgatgattcctgggcctccatcaagagcatcctggactggacttccagaaaccaagagagaattgtggatgttgctgggcctggaggatggaatgatcctgacatgctggtgattggaaattttgggctgagctgggaccagcaagtgactcagatggccctctgggccatcatggctggtcccctcttcatgagcaatgacttgagggccatttccccccaagccaaggccctgcttcaagacaaagatgtcattgctatcaatcaagatcccctgggcaagcaaggctaccagttgagaaaaggagacaactttgaggtgtgggaaagacctctgtctggagatgcctgggctgtggccatcatcaacagacaagaaattggtggccccagaggttacaccatccctgtggcttctcttggaaaaggggttgcctgcaatccagcttgcttcatcacccagctcctgccagtgaagaggaagctgggtttctatgaagctacctctaggctcagatcccacatcaaccccactggcacagtgctgctgcagctggagaacaccatgcagacctccctgaaggacctcctttaa (SEQ ID NO: 38)
編碼 D 之經密碼子優化核酸 （ D5 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggactggcaagaactcctcccatgggctggctgcactgggaaaggtttatgtgtaatctggactgtcaagaggagcctgactcctgcatctctgagaagctctttgaagagatggctgagaggatggtgacagatggatggaaggatgctggttatgagtacctgtgcattgatgactgctggatggcccctcagagagattctgaaggcagactgcaagcagacccccagaggttcccccatggcattaggcagctggccaaccatgtccactccaagggcctgaaactgggcatctatgctgatgtgggcaataagacctgtgctggctttcctggctcctttggatactatgacattgatgcccagacctttgctgactggggtgtggacctcctgaagtttgatggctgctactgtgactctctggagaacctggctgatggttacaagcacatgtctcttgctctgaacaagactggtagacccattgtttacagctgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactacactgagatcagacagtactgcaatcattggaggaattttgcagatattgatgattcctgggcctccatcaagagcatcctggactggacatccagaaaccaagaaagaattgtggatgtggctgggcctggaggttggaatgacccagacatgctggtgattggcaactttgggctgagctgggaccagcaagtgactcagatggccctctgggccatcatggctggacctctcttcatgtccaatgatctgagagccatttccccccaagccaaggccctgctccaagacaaagatgtcattgctatcaatcaagatcccctggggaagcaaggctaccagctcagaaagggtgacaactttgaggtgtgggagagacctctgtctggagatgcctgggctgtggccatcatcaacagacaagagattggtggccccagaggctacaccatccctgttgcttccctgggaaaaggagtggcctgcaacccagcttgcttcatcacccagcttctgcctgtgaagaggaagctgggcttctatgaagctacctctaggctgaggtcccacatcaaccccactggcacagtgctgctgcagctggaaaacaccatgcagacttccctcaaggacctgctttaa (SEQ ID NO: 39)
編碼 D 之經密碼子優化核酸 （ D6 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggacaatggcctggccagaacccctcccatgggctggctgcactgggagagattcatgtgcaacctggattgccaggaggagccagactcttgcatctctgaaaagctgtttgaggaaatggccgagagaatggtgacagatggatggaaggatgccggatacgagtacctgtgtatcgatgactgttggatggccccccagagagactccgagggccgtctgcaggctgacccacagaggtttcctcatggaattaggcagttggccaaccatgtgcactccaagggactgaagctgggcatctatgccgatgtgggcaacaagacctgtgctggcttcccaggcagctttggctattatgatattgatgcacaaacttttgcagactggggagttgatctgctgaaatttgatgggtgttactgtgactccctggagaacctcgccgacggatacaagcatatgtcccttgctctgaacaagactggcaggcccattgtctactcttgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactataccgagattcgccagtactgcaatcactggaggaactttgcagacattgatgacagctgggcctccattaagtctatcctggattggacaagcagaaaccaagagagaattgtggatgtggctggccctggtggttggaatgaccccgatatgctggtgattggcaactttggactgtcttgggaccagcaggtgacccagatggctctgtgggctatcatggccggccccctcttcatgtctaatgacctgagggccatctctcctcaggccaaggcacttctgcaggataaggacgtgattgccatcaatcaggatcctctggggaagcagggctatcagctgagaaagggggacaatttcgaggtctgggagagacccctgagcggcgatgcttgggctgtggccatcatcaatagacaagagattggagggccaagaggctacaccattcctgtggcaagcctaggaaaaggggttgcttgcaatccagcctgtttcatcacccagctgctgcctgttaagagaaagttgggcttctatgaggccacctctaggctgaggtcccatatcaaccccactggcacagtgctgctgcagcttgaaaacaccatgcagACCtccctcaaggacctgctgtaa (SEQ ID NO: 40)
編碼 E 之核酸 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggattggctagaacacctcctatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctggactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctctttgaggaaatggccgaacgaatggtgactgacggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggccccacaacgggattctgagggaagacttcaggctgatccgcagcgcttccctcatggcataaggcagctggcaaaccacgtccacagtaaggggctcaaattgggaatctacgcggacgtgggcaataagacctgtgccggttttccgggatcattcgggtattatgacattgacgcccaaacgtttgctgattggggcgttgacctgctgaaattcgatggttgctactgtgacagcctcgaaaacctggcagacggctacaagcatatgtctctcgccctgaataaaaccggtcggccaatcgtatattcctgcgagtggcctctttacatgtggccatttcagaaaccgaactacacagaaattcgccagtattgcaatcattggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcctccataaagagcatcttggactggaccagtcggaatcaggagcgaattgtggatgtcgcaggccctggaggatggaacgatccagacatgctggtgatcggcaattttggcctctcttgggaccagcaggttacccaaatggctctgtgggcaattatggccggtcctcttttcatgagcaacgatctgcgcgcgatctcaccacaggcaaaggccctgctccaagacaaagatgtgatagccatcaatcaggacccgttgggaaagcagggctaccagctgagaaaaggcgacaactttgaggtctgggaaaggcctttgagtggagatgcgtgggctgtggccattattaatcggcaagagatcggaggtccacgcggttatacaattcctgtagcaaagcttggcaagggcgttgcctgtaacccagcttgcttcatcactcagcttctgccggtgaagagaaaactgggtttctacgaagctaccagcaggctccgatcccacatcaaccctacaggaaccgtcctcttgcagctggagaatacgatgcagacttcactgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 22)
編碼 F 之核酸 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggattggctagaacacctcctatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctggactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctctttgaggaaatggccgaacgaatggtgactgacggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggccccacaacgggattctgagggaagacttcaggctgatccgcagcgcttccctcatggcataaggcagctggcaaaccacgtccacagtaaggggctcaaattgggaatctacgcggacgtgggcaataagacctgtgccggttttccgggatcattcgggtattatgacattgacgcccaaacgtttgctgattggggcgttgacctgctgaaattcgatggttgctactgtgacagcctcgaaaacctggcagacggctacaagcatatgtctctcgccctgaataaaaccggtcgggatatcgtatattcctgcgagtggcctctttacatgtggccatttcagaaaccgaactacacagaaattcgccagtattgcaatcattggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcctccataaagagcatcttggactggaccagtcggaatcaggagcgaattgtggatgtcgcaggccctggaggatggaacgatccagacatgctggtgatcggcaattttggcctctcttgggaccagcaggttacccaaatggctctgtgggcaattatggccggccctcttttcatgagcaacgatctgcgcgcgatctcaccacaggcaaaggccctgctccaagacacggacgtgatagccatcaatcaggacccgttgggaaagcagggctaccagctgagaaaaggcgacaactttgaggtctgggaaaggcctttgagtggagatgcgtgggctgtggccattattaatcggcaagagatcggaggtccacgcggttatacaattcctgtagcaaagcttggcaagggcgttgcctgtaacccagcttgcttcatcactcagcttctgccggtgaagagaaaactgggtttctacgaagctaccagcaggctccgatcccacatcaaccctacaggaaccgtcctcttgcagctggagaatacgatgcagacttcactgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 23)
編碼 002 之核酸 ttggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcatggagatggctgagctgatggtgagcgaagggtggaaggatgcgggctatgagtatctctgtattgatgactgctggatggctccacagcgcgacagtgaaggccggctccaggccgatcctcagcggttcccccacggtatcagacaactggcgaattacgtgcactcaaaaggccttaagctgggtatatatgctgatgtgggtaataaaacatgtgcaggcttcccaggctcttttgggtactatgacatcgacgcccagacttttgcggactggggcgtggacctgctcaagtttgacggatgttactgtgactcccttgagaacctggccgacgggtacaagcatatgtcactggccctgaatcggacaggccgatccatcgtatactcttgcgagtggcctctgtacatgtggcccttccagaagcccaactatacagaaatcaggcaatactgcaaccattggcggaacttcgcagacatagacgacagctgggctagcattaagtctattctggattggaccagtttcaatcaagaaaggattgtcgatgtcgcaggcccaggaggttggaatgacccagacatgctcgtgattggaaatttcggtctgtcatgggaccaacaggtgactcagatggctctgtgggcaatcatggcagcaccactgttcatgagcaatgatttgcgacacatctcccctcaggcgaaagcccttctgcaggataaggacgttatcgccattaaccaggacccgctcggtaagcaagggtaccagttgcgccagggagacaatttcgaggtctgggaacgacccctgtctggactcgcttgggccgtagccgtaattaaccgacaagaaatcggcggaccgcggagctataccatagctgtcgcctccctcggcgggggcgtagcttgtaacccggcttgtttcataacccagctgctgcccgtcaagaggaaactggggctttatgagtggacaagtcggttgaagtctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 24)
編碼 003 之核酸 tttggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcatggaaatggccgagcttatggtctcagaggggtggaaagacgccggatatgagtatctgtgcatcgacgattgctggatggccccccaacgcgattccgaaggccgcttgcaggctgatccgcagcgctttcctcacgggatccgccaattggcaaattacgtgcactcaaaggggctcaagttgggcatctacgcagacgtgggaaacaagacatgtgctggatttcccgggagtttcggttattatgacattgacgcacagacctttgctgattggggggtcgacctcctgaagtttgacggttgttattgcgacagccttgaaaatctggccgacggttacaaacacatgtcccttgcactgaatagaactggtcggtccatcgtctatagttgtgagtggccgctttacatgtggccttttcagaaacccaactacaccgagattcggcaatattgcaatcactggcgaaatttcgcagatatcgatgattcttgggctagtattaaatccatcctggattggacatcattcaaccaggagcgcatcgtggacgttgctggacctggcgggtggaatgatccagacatgcttgtgatcggaaacttcggtctctcttggaaccagcaagtcactcaaatggcactctgggcaattatggccgcccccctctttatgtccaacgatctgaggcatatcagtcctcaggctaaagccctgctgcaagacaaggatgtgattgctatcaaccaagatccccttggtaaacaggggtaccagttgcgcaaaggcgacaattttgaggtgtgggaaaggccactttcaggcgatgcatgggccgttgcaatgatcaacaggcaagaaattggcggacccaggagctatacaataccagtggcgtcactgggtaagggagtcgcctgtaaccccgcatgcttcattactcaacttctgccagtgaaacgaaaactcggattctatgagtggacctcaagactgaggtctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 25)
編碼 004 之核酸 ttggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcatggagatggctgaacgcatggtttctgagggatggaaagatgcaggctacgagtacctgtgtatagacgattgttggatggccccacagcgggattcagaaggtagactccaggcggatccccagagattcccacatggaatcagacagctggccaattacgtccattccaaaggccttaagttgggtatttacgccgacgtaggcaacaagacttgtgccggatttcccggcagtttcggatactatgacattgatgcacagactttcgctgactggggggtggacttgctcaaatttgatggctgttattgcgatagcctcgaaaatctggctgatggctacaagcacatgtcactcgctctcaaccgcactgggcgctctatagtttactcctgcgagtggcctctgtatatgtggccgttccagaaacccaattacacagaaataaggcagtattgcaatcactggcgcaactttgctgatattgatgattcctgggcctccataaagagtatcttggactggactagtcgcaatcaggaaagaattgtcgacgtcgccggaccaggcggatggaatgatcctgatatgctcgtgatcgggaacttcggactctcatgggaccagcaggtgacccagatggctagttgggctatcatggccgcccctctgtttatgagtaacgacctccgccacatcagcccccaggccaaggcgcttctgcaggataaagatgtcatcgccatcaaccaagatcccctgggcaaacaaggctatcagctgcggaagggagacaattttgaggtgtgggaacgccctttgagcggagacgcctgggctgtggctattataaatcgccaggagattgggggcccgagaagttatactatccccgttgcaagcctgggaaagggcgtcgcctgcaaccctgcctgcttcatcacacagctgcttcctgtcaaacgccaattggggttctacaattggacatccagactcaaatctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 26)
編碼 004 之經密碼子優化核酸 （ 004-1 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggactggcaagaaccccaaccatgggctggctgcactgggaaagattcatgtgtaatctggactgtcaagaggagcccgactcctgcatctctgagaagctcttcatggagatggctgagaggatggtgagtgaaggatggaaggatgctggttatgagtacctgtgcattgatgactgctggatggccccccagagagattcagagggcagactgcaagcagatcctcagaggttcccccatggcatcagacagctggccaactatgtccactccaagggcctgaagctgggtatctatgctgatgtgggcaacaagacctgtgctggctttcctggctcctttggttactatgacattgacgcccagacctttgctgactggggagtggacctgttgaagtttgacggctgctactgtgactctctggagaacctggctgatggctacaagcacatgtctcttgccctgaacagaactggtaggagcattgtttacagctgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactacactgagatccgccagtactgcaaccattggaggaactttgcagacatcgatgattcctgggcctccatcaagagcatcctggactggacttccagaaaccaagagagaattgtggatgttgctggacctggaggttggaatgaccctgacatgctggtgattggaaattttgggctgtcctgggaccagcaagtgactcagatggccagctgggccatcatggcagcccctctctttatgtccaatgatctcagacacatttccccccaagccaaggctctgctccaagacaaagatgtcattgctattaatcaagatcccctggggaagcaaggctaccagctgaggaaaggagacaactttgaggtgtgggagagacctctgtctggagatgcctgggctgtggctatcatcaatagacaagaaattggtggccccagatcctacaccatccctgtggcttccctgggcaagggtgtggcctgcaatccagcttgcttcatcacccagctcctcccagtgaagaggcagcttggcttctacaactggacatctaggctcaagtcccacatcaaccccactggcacagtgctgctgcagctggaaaacaccatgcagatgagcctgaaagacctcctgtga (SEQ ID NO: 41)
編碼 004 之經密碼子優化核酸 （ 004-2 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcattggacaatggactggctaggaccccaaccatgggttggctgcactgggagaggtttatgtgtaatctggactgtcaagaagaacctgactcctgcatctctgagaagctgttcatggagatggctgagaggatggtgagtgaaggctggaaggatgctggttatgagtacctgtgcattgatgactgctggatggcccctcagagagattcagagggcagacttcaagcagacccccagaggttcccccatggcatccgccagctggccaactatgtccactccaagggcctgaaactgggtatctatgctgatgtgggcaacaagacctgtgctggctttcctggctcctttggctactatgacattgacgcccagacctttgctgactggggtgtggacctcctcaagtttgatggctgctactgtgactctctggaaaacctggcagatggttacaagcacatgtctcttgccctgaacagaactggtaggagcattgtttacagctgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactacactgagatcagacagtactgcaaccattggaggaattttgccgacatcgatgattcctgggccagcatcaagtccatcctggactggacttccagaaaccaagagagaattgtggatgttgctggacctggaggatggaatgacccagacatgctggtgattggaaatttcgggctgtcctgggaccagcaagtgactcagatggcctcttgggccatcatggcagcccccctcttcatgtccaatgatcttagacacatttccccacaagccaaggccctcctgcaagacaaagatgtcattgctattaatcaagatcccctggggaagcaaggctaccagctcagaaaaggagacaactttgaggtgtgggaaagacctctgtctggagatgcctgggctgtggctatcatcaatagacaagaaattggtggccccagatcctacaccatccctgtggcctccctgggcaagggtgttgcctgcaatccagcttgcttcatcacccagctgctcccagtgaagaggcagttgggcttctacaactggacatctaggttgaagagccacatcaaccccactggcacagtgctgctgcagctggagaacaccatgcagatgagcctgaaggacctgctttaa (SEQ ID NO: 42)
編碼 004 之經密碼子優化核酸 （ 004-3 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggactggcaagaaccccaaccatgggttggctgcactgggagaggtttatgtgtaatctggactgtcaagaggagccagactcctgcatctctgagaagctcttcatggagatggctgagaggatggtgagtgaaggctggaaggatgctggttatgagtacctgtgcattgatgactgctggatggcccctcagagagattcagagggcagactgcaagcagatccccagaggttcccccatggcattaggcaactggccaactatgtccactccaagggcctgaagctgggcatctatgctgatgtgggcaacaagacctgtgctggcttccctggctcctttggctactatgatattgatgcccagacctttgctgactggggtgtggacctgctcaagtttgatggctgctactgtgacagcctggagaacctggctgatggttacaagcacatgtctcttgctctgaacagaactggtagaagcattgtttacagctgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactacactgagatcagacagtactgcaaccattggaggaactttgcagacattgatgattcctgggcctccatcaagagcatcctggactggacttccagaaaccaagagagaattgtggatgttgctggacctggaggatggaatgaccctgacatgctggtgattggaaattttgggctgtcctgggaccagcaagtgactcagatggccagctgggccatcatggcagcccccctgttcatgagcaatgatctcagacacatttccccccaagccaaggccctgcttcaagacaaagatgtcattgctattaatcaagatcctttgggcaagcaaggctaccagctgaggaagggagacaactttgaggtgtgggaaagacctctgtctggagatgcctgggctgtggctatcatcaatagacaagaaattggtggccccagatcctacaccatccctgttgcctctctgggaaaaggagtggcctgcaatccagcttgcttcatcacccagctcctcccagtgaagaggcagctgggtttctacaactggacaagcagattgaagtcccacatcaaccccactggcacagtgctgctgcagctggaaaacaccatgcagatgtccctgaaggacctcctgtga (SEQ ID NO: 43)
編碼 004 之經密碼子優化核酸 （ 004-4 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcacttgataatggactggcaagaaccccaaccatgggctggctgcactgggaaagattcatgtgtaatctggactgtcaagaagaaccagattcctgcatctctgagaagctgtttatggagatggctgagaggatggtgtcagaaggatggaaggatgctggttatgagtacctgtgcattgatgactgctggatggccccccagagagacagtgaaggcagacttcaagcagaccctcagaggttcccccatggcattaggcaactagccaactatgtccactccaagggcctgaaactgggcatctatgctgatgtgggcaacaagacctgtgctggcttccctggctcctttggctactatgacattgatgcccagacctttgctgactggggtgtggacctcctcaagtttgatggctgctactgtgactccctggaaaacctggctgatggttacaagcacatgagcctggccctgaacagaactggtaggagcattgtttacagctgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactacactgagatcagacagtactgcaaccattggaggaactttgcagatattgatgattcttgggccagcatcaagtccatcctggactggacatccagaaaccaagagagaattgtggatgttgctggacctggaggttggaatgatcctgacatgctggtgattggaaattttgggctgtcctgggaccagcaagtgactcagatggcctcctgggccatcatggcagcccctctcttcatgtccaatgacttgagacacatttccccccaagccaaggccctcctgcaagacaaagatgtcattgctattaatcaagatcccttgggcaagcaaggctaccagctgaggaagggagacaactttgaggtgtgggagaggcccctgtctggagatgcctgggctgtggctatcatcaatagacaagaaattggtggccccagatcctacaccatccctgttgcctctcttggcaaaggagtggcctgcaatccagcttgcttcatcacccagctccttcctgtgaagaggcagctgggtttctacaactggacttcaaggttgaagagccacatcaaccccactggcacagtgctgctgcagctggagaacaccatgcagatgtctctgaaggacctgctttaa (SEQ ID NO: 44)
編碼 004 之經密碼子優化核酸 （ 004-5 ） atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggactggcaagaaccccaaccatgggctggctgcactgggagaggttcatgtgtaatctggactgtcaagaggagcctgactcctgcatctctgagaagctgtttatggagatggctgagaggatggtgtctgaaggatggaaggatgctggctatgagtacctgtgcattgatgactgctggatggcccctcagagggacagtgaaggcagactgcaagcagacccccagagattcccccatggcattagacagcttgccaactatgtccactccaagggcctgaaactgggcatctatgctgatgtgggcaacaagacctgtgctggtttccctggctcctttggctactatgacattgatgcccagacctttgctgactggggtgtggacctcctcaagtttgatggctgctactgtgacagcctggaaaacctggctgatggttacaagcacatgtctctggccctgaacagaactggtaggagcattgtttacagctgtgagtggccactgtacatgtggcccttccagaagcccaactacactgagatcagacagtactgcaaccattggaggaactttgcagatattgatgattcctgggcctccatcaagagcatcctggactggacttccagaaaccaagagagaattgtggatgtagctggacctggaggttggaatgacccagacatgctggtgattggaaattttgggctgtcctgggaccagcaagtgactcagatggccagctgggccatcatggcagcccccctcttcatgagcaatgatctcagacacatttccccccaagccaaggctctgctccaagacaaagatgtcattgctattaatcaagatcccctggggaagcaaggctaccagctgaggaagggagacaactttgaggtgtgggaaagacctctgtctggagatgcctgggctgtggctatcatcaatagacaagaaattggtggccccagatcctacaccatccctgttgcttctcttggcaaaggagtggcctgcaatccagcttgcttcatcacccagctcctgcctgtgaagaggcagttgggcttctacaactggacatctaggttgaagtcccacatcaaccccactggcacagtgctgctgcagctggagaacaccatgcagatgtccctgaaggacctgctttaa (SEQ ID NO: 45)
編碼 005 之核酸 ttggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcgaggagatggcagaacgaatggtgacagatggatggaaggacgctggctacgagtatctgtgcatagatgattgttggatggcccctcagcgagactcagaggggagactccaggccgacccccagcgatttccacacggaatccggcaactggctaaccatgtgcactcaaaagggctcaagctgggaatttatgctgacgtcgggaacaaaacttgtgcggggtttcccggctccttcggatattacgacatcgacgcccagactttcgcagactggggtgtggacctgcttaagttcgacggctgttactgcgatagtctggaaaacttggctgacggctataagcacatgagtctcgccctgaaccgaacaggcagaagcatagtctactcctgcgaatggccactttacatgtggccattccagaaacctaattataccgagatcagacaatactgtaaccattggcgaaacttcgccgacattgacgatagttggaagtcaatcaagtccatcctggattggacctctaggaaccaggaaaggatcgtggacgtggctggacctggcggatggaacgatccagacatgctcgtgataggaaactttggactgtcatggaatcagcaagtaacacagatggcgctctgggccattatggctgcccccttgtttatgtctaacgacctgaggcatatctctcctcaagccaaggcactcctgcaggacaaggacgttatcgccatcaaccaggacccactgggcaagcagggataccagctgcggaaaggtgataacttcgaggtctgggagcgaccgctttcaggagacgcctgggcagttgcaatcatcaacaggcaagaaattggtgggccacggtcttatactattcccgtggcttctctcggtaagggcgtcgcctgcaaccccgcctgctttatcacccaattgttgcccgttaagagaaaactgggattttacgagtggacatccaggctgcggtctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 27)
編碼 006 之核酸 ttggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcgaagagatggctgaactgatggtgtccgaggggtggaaggatgcagggtacgagtacctttgcatagacgattgctggatggcaccacagcgggatagtgagggcaggttgcaggcggacccccaaagatttccacatggcatcagacagctggccaaccacgtgcactctaaaggcctgaagctggggatttacgccgatgtcggtaataaaacatgtgctggtttccccggtagctttggatactacgacatcgacgcccagacatttgctgattggggagtggacctgctcaagttcgacggctgctactgcgattctctggaaaatctggccgatgggtataagcacatgagtcttgctcttaatagaaccggacgctctatagtctattcatgtgagtggccactgtacatgtggccatttcagaaacccaactataccgaaattagacagtattgtaaccactggcggaatttcgccgacatagacgatagctggaagagcatcaagtcaattctcgattggacttcattcaaccaggagcggatcgtcgacgtggccggccctgggggctggaatgatccagatatgctggtgatcggaaactttggtctctcctggaatcaacaggtcactcagatggccctctgggccattatggcagcaccactctttatgagcaacgacctgagacacatttccccacaggccaaggcattgctgcaggacaaagacgtgatcgccattaaccaggacccactgggcaagcaagggtaccaacttaggcagggagataattttgaggtctgggagcgcccactcagcggagacgcctgggccgttgccatgataaacagacaggagattggcggccccagatcctacacaattcctgtcgctagcctgggcaagggggtggcttgtaatcccgcctgctttataacccagctgctgccagtgaaacggaaactcgggttctatgaatggacttctaggctcaggtctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 28)
編碼 007 之核酸 ttggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcgaggagatggcagaacgaatggtgacagatggatggaaggacgctggctacgagtatctgtgcatagatgattgttggatggcccctcagcgagactcagaggggagactccaggccgacccccagcgatttccacacggaatccggcaactggctaaccatgtgcactcaaaagggctcaagctgggaatttatgctgacgtcgggaacaaaacttgtgcggggtttcccggctccttcggatattacgacatcgacgcccagactttcgcagactggggtgtggacctgcttaagttcgacggctgttactgcgatagtctggaaaacttggctgacggctataagcacatgagtctcgccctgaaccgaacaggcagaagcatagtctactcctgcgaatggccactttacatgtggccattccagaaacctaattataccgagatcagacaatactgtaaccattggcgaaacttcgccgacattgacgatagttggaagtcaatcaagtccatcctggattggacctctaggaaccaggaaaggatcgtggacgtggctggacctggcggatggaacgatccagacatgctcgtgataggaaactttggactgtcatgggatcagcaagtaacacagatggcgctctgggccattatggctgcccccttgtttatgtctaacgacctgaggcatatctctcctcaagccaaggcactcctgcaggacaaggacgttatcgccatcaaccaggacccactgggcaagcagggataccagctgcggaaaggtgataacttcgaggtctgggagcgaccgctttcaggagacgcctgggcagttgcaatcatcaacaggcaagaaattggtgggccacggtcttatactattcccgtggcttctctcggtaagggcgtcgcctgcaaccccgcctgctttatcacccaattgttgcccgttaagagaaaactgggattttacgaggcgacatccaggctgaagtctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 29)
編碼 008 之核酸 tggacaatggattggcaaggacgcctaccatgggctggctgcactgggagcgcttcatgtgcaaccttgactgccaggaagagccagattcctgcatcagtgagaagctcttcgaggagatggcagagagaatggtcaccgacggctggaaggatgcaggttatgagtacctctgcattgatgactgttggatggctccccaaagagattcagaaggcagacttcaggcagaccctcagcgctttcctcatgggattcgccagctagctaatcacgttcacagcaaaggactgaagctagggatttatgcagatgttggaaataaaacctgcgcaggcttccctgggagttttggatactacgacattgatgcccagacctttgctgactggggagtagatctgctaaaatttgatggttgttactgtgacagtttggaaaatttggcagatggttataagcacatgtccttggccctgaataggactggcagaagcattgtgtactcctgtgagtggcctctttatatgtggccctttcaaaagcccaattatacagaaatccgacagtactgcaatcactggcgaaattttgctgacattgatgattcctgggccagtataaagagtatcttggactggacatctagaaaccaggagagaattgttgatgttgctggaccagggggttggaatgacccagatatgttagtgattggcaactttggcctcagctgggaccagcaagtaactcagatggccctctgggctatcatggctgctcctttattcatgtctaatgacctccgacacatcagccctcaagccaaagctctccttcaggataaggacgtaattgccatcaatcaggaccccttgggcaagcaagggtaccagcttagaaagggagacaactttgaagtgtgggaacgacctctctcaggcgatgcctgggctgtagctatcataaaccggcaggagattggtggacctcgctcttataccatccccgttgcttccctgggtaaaggagtggcctgtaatcctgcctgcttcatcacacagctcctccctgtgaaaaggcagctagggttctataactggacttcaaggttaaagagtcacataaatcccacaggcactgttttgcttcagctagaaaatacaatgcagatgtcattaaaagacttactttaa (SEQ ID NO: 31)
編碼 009 之核酸 tggacaatggattggcaaggacgcctCCCatgggctggctgcactgggagcgcttcatgtgcaaccttgactgccaggaagagccagattcctgcatcagtgagaagctcttcgaggagatggcagagagaatggtcaccgacggctggaaggatgcaggttatgagtacctctgcattgatgactgttggatggctccccaaagagattcagaaggcagacttcaggcagaccctcagcgctttcctcatgggattcgccagctagctaatcacgttcacagcaaaggactgaagctagggatttatgcagatgttggaaataaaacctgcgcaggcttccctgggagttttggatactacgacattgatgcccagacctttgctgactggggagtagatctgctaaaatttgatggttgttactgtgacagtttggaaaatttggcagatggttataagcacatgtccttggccctgaataagactggcagacccattgtgtactcctgtgagtggcctctttatatgtggccctttcaaaagcccaattatacagaaatccgacagtactgcaatcactggcgaaattttgctgacattgatgattcctgggccagtataaagagtatcttggactggacatctagaaaccaggagagaattgttgatgttgctggaccagggggttggaatgacccagatatgttagtgattggcaactttggcctcagctgggaccagcaagtaactcagatggccctctgggctatcatggctgctcctttattcatgtctaatgacctccgacacatcagccctcaagccaaagctctccttcaggataaggacgtaattgccatcaatcaggaccccttgggcaagcaagggtaccagcttagaaagggagacaactttgaagtgtgggaacgacctctctcaggcgatgcctgggctgtagctatcataaaccggcaggagattggtggacctcgctcttataccatccccgttgcttccctgggtaaaggagtggcctgtaatcctgcctgcttcatcacacagctcctccctgtgaaaaggcagctagggttctataactggacttcaaggttaaagagtcacataaatcccacaggcactgttttgcttcagctagaaaatacaatgcagatgtcattaaaagacttactttaa (SEQ ID NO: 32)
野生型 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggacaatggattggcaaggacgcctaccatgggctggctgcactgggagcgcttcatgtgcaaccttgactgccaggaagagccagattcctgcatcagtgagaagctcttcatggagatggcagagctcatggtctcagaaggctggaaggatgcaggttatgagtacctctgcattgatgactgttggatggctccccaaagagattcagaaggcagacttcaggcagaccctcagcgctttcctcatgggattcgccagctagctaattatgttcacagcaaaggactgaagctagggatttatgcagatgttggaaataaaacctgcgcaggcttccctgggagttttggatactacgacattgatgcccagacctttgctgactggggagtagatctgctaaaatttgatggttgttactgtgacagtttggaaaatttggcagatggttataagcacatgtccttggccctgaataggactggcagaagcattgtgtactcctgtgagtggcctctttatatgtggccctttcaaaagcccaattatacagaaatccgacagtactgcaatcactggcgaaattttgctgacattgatgattcctggaaaagtataaagagtatcttggactggacatcttttaaccaggagagaattgttgatgttgctggaccagggggttggaatgacccagatatgttagtgattggcaactttggcctcagctggaatcagcaagtaactcagatggccctctgggctatcatggctgctcctttattcatgtctaatgacctccgacacatcagccctcaagccaaagctctccttcaggataaggacgtaattgccatcaatcaggaccccttgggcaagcaagggtaccagcttagacagggagacaactttgaagtgtgggaacgacctctctcaggcttagcctgggctgtagctatgataaaccggcaggagattggtggacctcgctcttataccatcgcagttgcttccctgggtaaaggagtggcctgtaatcctgcctgcttcatcacacagctcctccctgtgaaaaggaagctagggttctatgaatggacttcaaggttaagaagtcacataaatcccacaggcactgttttgcttcagctagaaaatacaatgcagatgtcattaaaagacttactttaa (SEQ ID NO: 3)
編碼具有信號肽之 α-GLA 變體的核酸序列
編碼 A 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggattggctagaacacctactatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctcgactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctgtttatggaaatggccgagcgaatggtgtcagaaggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggctccgcaacgggacagtgagggcagacttcaggcagatcctcagcgcttcccacatgggataaggcagctcgccaactacgtccactctaagggactgaaactgggcatctatgctgacgtggggaataagacctgtgcgggatttcccggtagcttcggctactacgacattgatgcccagacctttgccgattggggagttgacctcctcaaattcgatggctgctattgtgactctttggagaacctggcagacgggtacaagcatatgtccctggccctgaatcggacaggtagacccatcgtgtatagttgcgaatggcccctttacatgtggccttttcaaaagccaaactacactgagattcgccagtattgcaatcactggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcgagcatcaaatccatattggattggacctctcggaatcaggagcgcattgtagacgtcgcaggacccggcggctggaacgaccctgatatgctggtgatcgggaattttggtcttagctgggaccagcaagttacgcagatggctctgtgggcaattatggcagccccactcttcatgtccaacgatctgcgacacatctctcctcaagctaaggctctgctgcaggacaaagatgtgattgccatcaatcaggacccactcggaaagcagggctatcagctgagaaaaggcgacaacttcgaagtctgggaaaggccactttcaggagacgcatgggctgtggccataataaaccggcaagagattggtgggcccaggagctacacaatccccgttgccagtttgggcaagggagtggcgtgtaatcctgcctgctttatcactcagctgctcccagtcaaaagacagctggggttctatgagtggacctcccgcctcaagagccatattaatcccacaggtaccgtactgctgcaacttgaaaacacgatgcagatgagtttgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 61)
編碼 B 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggattggctagaacacctcctatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctggactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctctttgaggaaatggccgaacgaatggtgactgagggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggccccacaacgggattctgagggaagacttcaggctgatccgcagcgcttccctcatggcataaggcagctggcaaaccacgtccacagtaaggggctcaaattgggaatctacgcggacgtgggcaataagacctgtgccggttttccgggatcattcgggtattatgacattgacgcccaaacgtttgctgattggggcgttgacctgctgaaattcgatggttgctactgtgacagcctcgaaaacctggcagacggctacaagcatatgtctctcgccctgaatagaaccggtcggccaatcgtatattcctgcgagtggcctctttacatgtggccatttcagaaaccgaactacacagaaattcgccagtattgcaatcattggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcctccataaagagcatcttggactggaccagtcggaatcaggagcgaattgtggatgtcgcaggccctggaggatggaacgatccagacatgctggtgatcggcaattttggcctctcttgggaccagcaggttacccaaatggctctgtgggcaattatggccggtcctcttttcatgagcaacgatctgcgcgcgatctcaccacaggcaaaggccctgctccaagacaaagatgtgatagccatcaatcaggacccgttgggaaagcagggctaccagctgagaaaaggcgacaactttgaggtctgggaaaggcctttgagtggagatgcgtgggctgtggccattattaatcggcaagagatcggaggtccacgctcctatacaattcctgtagcatctcttggcaagggcgttgcctgtaacccagcttgcttcatcactcagcttctgccggtgaagagaaaactgggtttctacgaagctaccagcaggctccgatcccacatcaaccctacaggaaccgtcctcttgcagctggagaatacgatgcagacttcactgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 62)
編碼 C 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggattggctagaacacctcctatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctggactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctctttgaggaaatggccgaacgaatggtgactgagggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggccccacaacgggattctgagggaagacttcaggctgatccgcagcgcttccctcatggcataaggcagctggcaaaccacgtccacagtaaggggctcaaattgggaatctacgcggacgtgggcaataagacctgtgccggttttccgggatcattcgggtattatgacattgacgcccaaacgtttgctgattggggcgttgacctgctgaaattcgatggttgctactgtgacagcctcgaaaacctggcagacggctacaagcatatgtctctcgccctgaataaaaccggtcggccaatcgtatattcctgcgagtggcctctttacatgtggccatttcagaaaccgaactacacagaaattcgccagtattgcaatcattggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcctccataaagagcatcttggactggaccagtcggaatcaggagcgaattgtggatgtcgcaggccctggaggatggaacgatccagacatgctggtgatcggcaattttggcctctcttgggaccagcaggttacccaaatggctctgtgggcaattatggccggtcctcttttcatgagcaacgatctgcgcgcgatctcaccacaggcaaaggccctgctccaagacaaagatgtgatagccatcaatcaggacccgttgggaaagcagggctaccagctgagaaaaggcgacaactttgaggtctgggaaaggcctttgagtggagatgcgtgggctgtggccattattaatcggcaagagatcggaggtccacgctcctatacaattcctgtagcatctcttggcaagggcgttgcctgtaacccagcttgcttcatcactcagcttctgccggtgaagagaaaactgggtttctacgaagctaccagcaggctccgatcccacatcaaccctacaggaaccgtcctcttgcagctggagaatacgatgcagacttcactgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 63)
編碼 D 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggattggctagaacacctcctatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctggactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctctttgaggaaatggccgaacgaatggtgactgacggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggccccacaacgggattctgagggaagacttcaggctgatccgcagcgcttccctcatggcataaggcagctggcaaaccacgtccacagtaaggggctcaaattgggaatctacgcggacgtgggcaataagacctgtgccggttttccgggatcattcgggtattatgacattgacgcccaaacgtttgctgattggggcgttgacctgctgaaattcgatggttgctactgtgacagcctcgaaaacctggcagacggctacaagcatatgtctctcgccctgaataaaaccggtcggccaatcgtatattcctgcgagtggcctctttacatgtggccatttcagaaaccgaactacacagaaattcgccagtattgcaatcattggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcctccataaagagcatcttggactggaccagtcggaatcaggagcgaattgtggatgtcgcaggccctggaggatggaacgatccagacatgctggtgatcggcaattttggcctctcttgggaccagcaggttacccaaatggctctgtgggcaattatggccggtcctcttttcatgagcaacgatctgcgcgcgatctcaccacaggcaaaggccctgctccaagacaaagatgtgatagccatcaatcaggacccgttgggaaagcagggctaccagctgagaaaaggcgacaactttgaggtctgggaaaggcctttgagtggagatgcgtgggctgtggccattattaatcggcaagagatcggaggtccacgcggttatacaattcctgtagcatctcttggcaagggcgttgcctgtaacccagcttgcttcatcactcagcttctgccggtgaagagaaaactgggtttctacgaagctaccagcaggctccgatcccacatcaaccctacaggaaccgtcctcttgcagctggagaatacgatgcagacttcactgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 64)
編碼 E 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggattggctagaacacctcctatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctggactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctctttgaggaaatggccgaacgaatggtgactgacggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggccccacaacgggattctgagggaagacttcaggctgatccgcagcgcttccctcatggcataaggcagctggcaaaccacgtccacagtaaggggctcaaattgggaatctacgcggacgtgggcaataagacctgtgccggttttccgggatcattcgggtattatgacattgacgcccaaacgtttgctgattggggcgttgacctgctgaaattcgatggttgctactgtgacagcctcgaaaacctggcagacggctacaagcatatgtctctcgccctgaataaaaccggtcggccaatcgtatattcctgcgagtggcctctttacatgtggccatttcagaaaccgaactacacagaaattcgccagtattgcaatcattggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcctccataaagagcatcttggactggaccagtcggaatcaggagcgaattgtggatgtcgcaggccctggaggatggaacgatccagacatgctggtgatcggcaattttggcctctcttgggaccagcaggttacccaaatggctctgtgggcaattatggccggtcctcttttcatgagcaacgatctgcgcgcgatctcaccacaggcaaaggccctgctccaagacaaagatgtgatagccatcaatcaggacccgttgggaaagcagggctaccagctgagaaaaggcgacaactttgaggtctgggaaaggcctttgagtggagatgcgtgggctgtggccattattaatcggcaagagatcggaggtccacgcggttatacaattcctgtagcaaagcttggcaagggcgttgcctgtaacccagcttgcttcatcactcagcttctgccggtgaagagaaaactgggtttctacgaagctaccagcaggctccgatcccacatcaaccctacaggaaccgtcctcttgcagctggagaatacgatgcagacttcactgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 65)
編碼 F 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggataatggattggctagaacacctcctatggggtggcttcactgggagaggttcatgtgcaacctggactgtcaggaagaaccagacagctgcatctccgagaagctctttgaggaaatggccgaacgaatggtgactgacggctggaaagatgcaggttacgagtatctgtgtattgacgattgctggatggccccacaacgggattctgagggaagacttcaggctgatccgcagcgcttccctcatggcataaggcagctggcaaaccacgtccacagtaaggggctcaaattgggaatctacgcggacgtgggcaataagacctgtgccggttttccgggatcattcgggtattatgacattgacgcccaaacgtttgctgattggggcgttgacctgctgaaattcgatggttgctactgtgacagcctcgaaaacctggcagacggctacaagcatatgtctctcgccctgaataaaaccggtcgggatatcgtatattcctgcgagtggcctctttacatgtggccatttcagaaaccgaactacacagaaattcgccagtattgcaatcattggaggaacttcgctgatatcgatgactcatgggcctccataaagagcatcttggactggaccagtcggaatcaggagcgaattgtggatgtcgcaggccctggaggatggaacgatccagacatgctggtgatcggcaattttggcctctcttgggaccagcaggttacccaaatggctctgtgggcaattatggccggccctcttttcatgagcaacgatctgcgcgcgatctcaccacaggcaaaggccctgctccaagacacggacgtgatagccatcaatcaggacccgttgggaaagcagggctaccagctgagaaaaggcgacaactttgaggtctgggaaaggcctttgagtggagatgcgtgggctgtggccattattaatcggcaagagatcggaggtccacgcggttatacaattcctgtagcaaagcttggcaagggcgttgcctgtaacccagcttgcttcatcactcagcttctgccggtgaagagaaaactgggtttctacgaagctaccagcaggctccgatcccacatcaaccctacaggaaccgtcctcttgcagctggagaatacgatgcagacttcactgaaggacctcctgtag (SEQ ID NO: 66)
編碼 002 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcattggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcatggagatggctgagctgatggtgagcgaagggtggaaggatgcgggctatgagtatctctgtattgatgactgctggatggctccacagcgcgacagtgaaggccggctccaggccgatcctcagcggttcccccacggtatcagacaactggcgaattacgtgcactcaaaaggccttaagctgggtatatatgctgatgtgggtaataaaacatgtgcaggcttcccaggctcttttgggtactatgacatcgacgcccagacttttgcggactggggcgtggacctgctcaagtttgacggatgttactgtgactcccttgagaacctggccgacgggtacaagcatatgtcactggccctgaatcggacaggccgatccatcgtatactcttgcgagtggcctctgtacatgtggcccttccagaagcccaactatacagaaatcaggcaatactgcaaccattggcggaacttcgcagacatagacgacagctgggctagcattaagtctattctggattggaccagtttcaatcaagaaaggattgtcgatgtcgcaggcccaggaggttggaatgacccagacatgctcgtgattggaaatttcggtctgtcatgggaccaacaggtgactcagatggctctgtgggcaatcatggcagcaccactgttcatgagcaatgatttgcgacacatctcccctcaggcgaaagcccttctgcaggataaggacgttatcgccattaaccaggacccgctcggtaagcaagggtaccagttgcgccagggagacaatttcgaggtctgggaacgacccctgtctggactcgcttgggccgtagccgtaattaaccgacaagaaatcggcggaccgcggagctataccatagctgtcgcctccctcggcgggggcgtagcttgtaacccggcttgtttcataacccagctgctgcccgtcaagaggaaactggggctttatgagtggacaagtcggttgaagtctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 67)
編碼 003 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcatttggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcatggaaatggccgagcttatggtctcagaggggtggaaagacgccggatatgagtatctgtgcatcgacgattgctggatggccccccaacgcgattccgaaggccgcttgcaggctgatccgcagcgctttcctcacgggatccgccaattggcaaattacgtgcactcaaaggggctcaagttgggcatctacgcagacgtgggaaacaagacatgtgctggatttcccgggagtttcggttattatgacattgacgcacagacctttgctgattggggggtcgacctcctgaagtttgacggttgttattgcgacagccttgaaaatctggccgacggttacaaacacatgtcccttgcactgaatagaactggtcggtccatcgtctatagttgtgagtggccgctttacatgtggccttttcagaaacccaactacaccgagattcggcaatattgcaatcactggcgaaatttcgcagatatcgatgattcttgggctagtattaaatccatcctggattggacatcattcaaccaggagcgcatcgtggacgttgctggacctggcgggtggaatgatccagacatgcttgtgatcggaaacttcggtctctcttggaaccagcaagtcactcaaatggcactctgggcaattatggccgcccccctctttatgtccaacgatctgaggcatatcagtcctcaggctaaagccctgctgcaagacaaggatgtgattgctatcaaccaagatccccttggtaaacaggggtaccagttgcgcaaaggcgacaattttgaggtgtgggaaaggccactttcaggcgatgcatgggccgttgcaatgatcaacaggcaagaaattggcggacccaggagctatacaataccagtggcgtcactgggtaagggagtcgcctgtaaccccgcatgcttcattactcaacttctgccagtgaaacgaaaactcggattctatgagtggacctcaagactgaggtctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 68)
編碼 004 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcattggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcatggagatggctgaacgcatggtttctgagggatggaaagatgcaggctacgagtacctgtgtatagacgattgttggatggccccacagcgggattcagaaggtagactccaggcggatccccagagattcccacatggaatcagacagctggccaattacgtccattccaaaggccttaagttgggtatttacgccgacgtaggcaacaagacttgtgccggatttcccggcagtttcggatactatgacattgatgcacagactttcgctgactggggggtggacttgctcaaatttgatggctgttattgcgatagcctcgaaaatctggctgatggctacaagcacatgtcactcgctctcaaccgcactgggcgctctatagtttactcctgcgagtggcctctgtatatgtggccgttccagaaacccaattacacagaaataaggcagtattgcaatcactggcgcaactttgctgatattgatgattcctgggcctccataaagagtatcttggactggactagtcgcaatcaggaaagaattgtcgacgtcgccggaccaggcggatggaatgatcctgatatgctcgtgatcgggaacttcggactctcatgggaccagcaggtgacccagatggctagttgggctatcatggccgcccctctgtttatgagtaacgacctccgccacatcagcccccaggccaaggcgcttctgcaggataaagatgtcatcgccatcaaccaagatcccctgggcaaacaaggctatcagctgcggaagggagacaattttgaggtgtgggaacgccctttgagcggagacgcctgggctgtggctattataaatcgccaggagattgggggcccgagaagttatactatccccgttgcaagcctgggaaagggcgtcgcctgcaaccctgcctgcttcatcacacagctgcttcctgtcaaacgccaattggggttctacaattggacatccagactcaaatctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 69)
編碼 005 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcattggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcgaggagatggcagaacgaatggtgacagatggatggaaggacgctggctacgagtatctgtgcatagatgattgttggatggcccctcagcgagactcagaggggagactccaggccgacccccagcgatttccacacggaatccggcaactggctaaccatgtgcactcaaaagggctcaagctgggaatttatgctgacgtcgggaacaaaacttgtgcggggtttcccggctccttcggatattacgacatcgacgcccagactttcgcagactggggtgtggacctgcttaagttcgacggctgttactgcgatagtctggaaaacttggctgacggctataagcacatgagtctcgccctgaaccgaacaggcagaagcatagtctactcctgcgaatggccactttacatgtggccattccagaaacctaattataccgagatcagacaatactgtaaccattggcgaaacttcgccgacattgacgatagttggaagtcaatcaagtccatcctggattggacctctaggaaccaggaaaggatcgtggacgtggctggacctggcggatggaacgatccagacatgctcgtgataggaaactttggactgtcatggaatcagcaagtaacacagatggcgctctgggccattatggctgcccccttgtttatgtctaacgacctgaggcatatctctcctcaagccaaggcactcctgcaggacaaggacgttatcgccatcaaccaggacccactgggcaagcagggataccagctgcggaaaggtgataacttcgaggtctgggagcgaccgctttcaggagacgcctgggcagttgcaatcatcaacaggcaagaaattggtgggccacggtcttatactattcccgtggcttctctcggtaagggcgtcgcctgcaaccccgcctgctttatcacccaattgttgcccgttaagagaaaactgggattttacgagtggacatccaggctgcggtctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 70)
編碼 006 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcattggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcgaagagatggctgaactgatggtgtccgaggggtggaaggatgcagggtacgagtacctttgcatagacgattgctggatggcaccacagcgggatagtgagggcaggttgcaggcggacccccaaagatttccacatggcatcagacagctggccaaccacgtgcactctaaaggcctgaagctggggatttacgccgatgtcggtaataaaacatgtgctggtttccccggtagctttggatactacgacatcgacgcccagacatttgctgattggggagtggacctgctcaagttcgacggctgctactgcgattctctggaaaatctggccgatgggtataagcacatgagtcttgctcttaatagaaccggacgctctatagtctattcatgtgagtggccactgtacatgtggccatttcagaaacccaactataccgaaattagacagtattgtaaccactggcggaatttcgccgacatagacgatagctggaagagcatcaagtcaattctcgattggacttcattcaaccaggagcggatcgtcgacgtggccggccctgggggctggaatgatccagatatgctggtgatcggaaactttggtctctcctggaatcaacaggtcactcagatggccctctgggccattatggcagcaccactctttatgagcaacgacctgagacacatttccccacaggccaaggcattgctgcaggacaaagacgtgatcgccattaaccaggacccactgggcaagcaagggtaccaacttaggcagggagataattttgaggtctgggagcgcccactcagcggagacgcctgggccgttgccatgataaacagacaggagattggcggccccagatcctacacaattcctgtcgctagcctgggcaagggggtggcttgtaatcccgcctgctttataacccagctgctgccagtgaaacggaaactcgggttctatgaatggacttctaggctcaggtctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 71)
編碼 007 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcattggacaatgggctggccaggacacctactatgggctggctccactgggagcgctttatgtgtaacctcgactgccaagaggagccagactcatgcatctctgagaagttgttcgaggagatggcagaacgaatggtgacagatggatggaaggacgctggctacgagtatctgtgcatagatgattgttggatggcccctcagcgagactcagaggggagactccaggccgacccccagcgatttccacacggaatccggcaactggctaaccatgtgcactcaaaagggctcaagctgggaatttatgctgacgtcgggaacaaaacttgtgcggggtttcccggctccttcggatattacgacatcgacgcccagactttcgcagactggggtgtggacctgcttaagttcgacggctgttactgcgatagtctggaaaacttggctgacggctataagcacatgagtctcgccctgaaccgaacaggcagaagcatagtctactcctgcgaatggccactttacatgtggccattccagaaacctaattataccgagatcagacaatactgtaaccattggcgaaacttcgccgacattgacgatagttggaagtcaatcaagtccatcctggattggacctctaggaaccaggaaaggatcgtggacgtggctggacctggcggatggaacgatccagacatgctcgtgataggaaactttggactgtcatgggatcagcaagtaacacagatggcgctctgggccattatggctgcccccttgtttatgtctaacgacctgaggcatatctctcctcaagccaaggcactcctgcaggacaaggacgttatcgccatcaaccaggacccactgggcaagcagggataccagctgcggaaaggtgataacttcgaggtctgggagcgaccgctttcaggagacgcctgggcagttgcaatcatcaacaggcaagaaattggtgggccacggtcttatactattcccgtggcttctctcggtaagggcgtcgcctgcaaccccgcctgctttatcacccaattgttgcccgttaagagaaaactgggattttacgaggcgacatccaggctgaagtctcatattaacccgacagggactgttctcctccagctggaaaacacaatgcagatgagcctgaaggatctcttgtga (SEQ ID NO: 72)
編碼 008 之核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcatggacaatggattggcaaggacgcctaccatgggctggctgcactgggagcgcttcatgtgcaaccttgactgccaggaagagccagattcctgcatcagtgagaagctcttcgaggagatggcagagagaatggtcaccgacggctggaaggatgcaggttatgagtacctctgcattgatgactgttggatggctccccaaagagattcagaaggcagacttcaggcagaccctcagcgctttcctcatgggattcgccagctagctaatcacgttcacagcaaaggactgaagctagggatttatgcagatgttggaaataaaacctgcgcaggcttccctgggagttttggatactacgacattgatgcccagacctttgctgactggggagtagatctgctaaaatttgatggttgttactgtgacagtttggaaaatttggcagatggttataagcacatgtccttggccctgaataggactggcagaagcattgtgtactcctgtgagtggcctctttatatgtggccctttcaaaagcccaattatacagaaatccgacagtactgcaatcactggcgaaattttgctgacattgatgattcctgggccagtataaagagtatcttggactggacatctagaaaccaggagagaattgttgatgttgctggaccagggggttggaatgacccagatatgttagtgattggcaactttggcctcagctgggaccagcaagtaactcagatggccctctgggctatcatggctgctcctttattcatgtctaatgacctccgacacatcagccctcaagccaaagctctccttcaggataaggacgtaattgccatcaatcaggaccccttgggcaagcaagggtaccagcttagaaagggagacaactttgaagtgtgggaacgacctctctcaggcgatgcctgggctgtagctatcataaaccggcaggagattggtggacctcgctcttataccatccccgttgcttccctgggtaaaggagtggcctgtaatcctgcctgcttcatcacacagctcctccctgtgaaaaggcagctagggttctataactggacttcaaggttaaagagtcacataaatcccacaggcactgttttgcttcagctagaaaatacaatgcagatgtcattaaaagacttactttaa (SEQ ID NO: 73)
編碼 009 的核酸序列 atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcatggacaatggattggcaaggacgcctCCCatgggctggctgcactgggagcgcttcatgtgcaaccttgactgccaggaagagccagattcctgcatcagtgagaagctcttcgaggagatggcagagagaatggtcaccgacggctggaaggatgcaggttatgagtacctctgcattgatgactgttggatggctccccaaagagattcagaaggcagacttcaggcagaccctcagcgctttcctcatgggattcgccagctagctaatcacgttcacagcaaaggactgaagctagggatttatgcagatgttggaaataaaacctgcgcaggcttccctgggagttttggatactacgacattgatgcccagacctttgctgactggggagtagatctgctaaaatttgatggttgttactgtgacagtttggaaaatttggcagatggttataagcacatgtccttggccctgaataagactggcagacccattgtgtactcctgtgagtggcctctttatatgtggccctttcaaaagcccaattatacagaaatccgacagtactgcaatcactggcgaaattttgctgacattgatgattcctgggccagtataaagagtatcttggactggacatctagaaaccaggagagaattgttgatgttgctggaccagggggttggaatgacccagatatgttagtgattggcaactttggcctcagctgggaccagcaagtaactcagatggccctctgggctatcatggctgctcctttattcatgtctaatgacctccgacacatcagccctcaagccaaagctctccttcaggataaggacgtaattgccatcaatcaggaccccttgggcaagcaagggtaccagcttagaaagggagacaactttgaagtgtgggaacgacctctctcaggcgatgcctgggctgtagctatcataaaccggcaggagattggtggacctcgctcttataccatccccgttgcttccctgggtaaaggagtggcctgtaatcctgcctgcttcatcacacagctcctccctgtgaaaaggcagctagggttctataactggacttcaaggttaaagagtcacataaatcccacaggcactgttttgcttcagctagaaaatacaatgcagatgtcattaaaagacttactttaa (SEQ ID NO: 74)
在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO：18-29、31、32、35-45及61-74中任一項具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有介於70%及100%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有介於75%及100%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有介於80%及100%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有介於85%及100%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有介於90%及100%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有介於95%及100%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有至少70%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有至少75%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有至少80%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有至少85%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有至少90%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有至少95%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有至少96%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有至少97%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有至少98%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有至少99%一致性之GLA序列。在一些實施例中，該載體包含與SEQ ID NOs. 18-29、31、32、35-45及61-74具有100%一致性之GLA序列。
在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:35具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:36具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:37具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:38具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:39具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:40具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:41具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:42具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:43具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:44具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:45具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:61具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:62具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:63具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:64具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:65具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:66具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:67具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:68具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:69具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:70具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:71具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:72具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:73具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含與SEQ ID NO:74具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%、或超過99%一致性之GLA序列 。
在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 7具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 8具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 9具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 10具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 11具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 12具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 13具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 14具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 15具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 16具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 17具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 30具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 33具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 34具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 46具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 47具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 48具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 49具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 50具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 51具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 52具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 53具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 54具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 56具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 57具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 58具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 59具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含有編碼與SEQ ID NO： 60具有70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%、99%或超過99%一致性之α-GAL酶的核酸序列 。
在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:18的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:19的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:20的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:21的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:22的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:23的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:24的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:25的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:26的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:27的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:28的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:29的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:31的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:32的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:35的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:36的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:37的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:38的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:39的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:40的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:41的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:42的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:43的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:44的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:45的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:61的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:62的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:63的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:64的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:65的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:66的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:67的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:68的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:69的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:70的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:71的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:72的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:73的GLA序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含了包含有SEQ ID NO:74的GLA序列 。
在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：7之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：8之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：9之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：10之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：11之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：12之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：13之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：14之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：15之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：16之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：17之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：30之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：33之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：34之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：46之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：47之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：48之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：49之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：50之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：51之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：52之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：53之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：54之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：55之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：56之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：57之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：58之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：59之α-GAL酶的核酸序列 。在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含編碼包含有SEQ ID NO：60之α-GAL酶的核酸序列 。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼α-GAL酶的核苷酸序列，包含選自由以下所組成之群組之胺基酸序列：SEQ ID NO：7-17、30、33、34、及46-60；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：7的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：8的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：9的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：10的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：11的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：12的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：13的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：14的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：15的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：16的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：17的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：30的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：33的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：34的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：46的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：47的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：48的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：49的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：50的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：51的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：52的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：53的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：54的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：55的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：56的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：57的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：58的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：59的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：60的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：7的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：8的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：9的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：10的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：11的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：12的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：13的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：14的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：15的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：16的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：17的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：30的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：33的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：34的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：46的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：47的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：48的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：49的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：50的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：51的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：52的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：53的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：54的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：55的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：56的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：57的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：58的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：59的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）編碼包含有SEQ ID NO：60的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：7的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：8的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：9的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：1的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：11的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：12的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：13的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：14的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：14的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：15的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：16的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：17的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：30的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：33的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：34的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
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在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：51的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：52的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：53的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：54的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：55的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：56的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：57的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：58的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：59的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：60的α-GAL酶的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：7的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：8的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：9的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：10的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：11的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：12的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：13的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：14的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：15的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：16的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：17的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：30的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：33的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：34的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：46的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：47的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：48的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：49的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：50的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：51的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：52的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：53的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：54的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：55的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：56的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：57的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：58的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：59的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼包含有SEQ ID NO：60的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 35的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 36的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 37的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 38的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 39的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 40的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 41的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 42的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 43的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 44的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 45的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）   泛素化啟動子；c）包含有SEQ ID NO：35的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 36的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 37的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 38的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 39的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    }泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 40的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 41的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 42的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 43的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 44的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 45的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：35之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：36之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：38之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：39之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：40之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：41之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：42之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：43之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：44之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：45之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：35之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：36之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：38之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：39之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：40之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：41之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：42之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：43之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：44之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：45之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼SEQ ID NO：14中所闡述序列之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼SEQ ID NO：10中所闡述序列之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼SEQ ID NO：64中所闡述序列之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼SEQ ID NO：69中所闡述序列之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼用於編碼SEQ ID NO: 14的α-GAL酶的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列，該α-GAL酶編碼SEQ ID NO: 10；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列，該α-GAL酶編碼SEQ ID NO: 64；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列，該α-GAL酶編碼SEQ ID NO: 69；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼SEQ ID NO: 14中所闡述之序列的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼SEQ ID NO: 10中所闡述之序列的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼SEQ ID NO: 64中所闡述之序列的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼SEQ ID NO: 69中所闡述之序列的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼SEQ ID NO: 14中所闡述之序列的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼SEQ ID NO: 10中所闡述之序列的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼SEQ ID NO: 64中所闡述之序列的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）編碼SEQ ID NO: 69中所闡述之序列的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 35的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 36的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 37的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 38的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 39的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 40的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 41的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 42的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 43的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 44的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 45的核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 35的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 36的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 37的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 38的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 39的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 40的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 41的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 42的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 43的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 44的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）    泛素化啟動子；c）包含SEQ ID NO: 45的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）   3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：35之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：36之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：38之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：39之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：40之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：41之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：42之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：43之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：44之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，其中該載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子(例如，具有肌肉或肝趨性)；c）包含SEQ ID NO：45之核苷酸序列；d）聚A；及e）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼中的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO: 35的核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：36之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：37之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：38之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：39之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：40之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
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在一些實施例中，本發明包括封裝於AAV衣殼的重組腺相關病毒（rAAV）載體，所述載體包含：a）5’反向終端重複序列（ITR）；b）組織特異性啟動子；c）包含SEQ ID NO：45之核苷酸序列；d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件(WPRE)；e）聚A；及f）3’ ITR。
載體所遞送的轉殖基因可使用多種方法引入所關注的細胞中。舉例而言，可使用病毒或非病毒載體來遞送所關注的轉殖基因。載體遞送之病毒及非病毒方法兩者通過所提供之方法來考慮。因此，在一些實施例中，本文所描述之載體在病毒載體中遞送。在一些實施例中，本文所描述之載體在非病毒載體中遞送。
如本文所述之載體可被引入細胞中作為具有額外序列之病毒或非病毒載體分子的一部分，諸如例如複製起始點、啟動子及一或多個基因。在一些實施例中，該載體可以裸核酸形式引入、以試劑(諸如脂質體或泊洛沙姆)複合的核酸形式引入，或可藉由病毒（例如，腺病毒、腺相關病毒（AAV）、疱疹病毒、反轉錄病毒、慢病毒及整合酶缺陷慢病毒（IDLV））來遞送。在一些實施例中，該載體係使用病毒載體引入。
各種病毒載體為本領域中已知的，且包括例如整合或非整合載體。在一些實施例中，該病毒載體為非整合性病毒載體。非整合性病毒載體包括，例如非整合性慢病毒載體或AAV載體。因此，在一些實施例中，該病毒載體為腺相關病毒（AAV）載體。
在一些實施例中，該AAV載體在一或多個區域（諸如AAV衣殼）處修飾。在一些實施例中，該rAAV載體為rAAV9載體。
在一些實施例中，本文所描述之rAAV載體包含以下之一或多者：（a）5’反向終端重複序列（ITR）；（b）泛素化啟動子序列；（c）編碼野生型α-GAL或其變體之核苷酸序列；（d）土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）；（e）聚A；及（f）3’ ITR序列。
在各種實施例中，本文所述用於遞送轉殖基因的rAAV載體（例如，編碼α-半乳糖苷酶（α-GAL）蛋白之基因）可使用本領域中已知之技術且如本文所描述包裝。舉例來說，在一些實施例中，rAAV包裝利用包裝細胞以形成能感染宿主細胞之病毒顆粒。此類細胞包括例如用於包裝腺病毒之HEK293、HeLa、HEK293T、Sf9細胞或A549細胞。用於基因療法之病毒載體通常由將核酸載體包裝至病毒顆粒中之生產用細胞株所生成。該載體通常含有用於包裝且隨後整合至宿主中的所需最小病毒序列，其它病毒序列被編碼待表現蛋白質之表現卡匣所替代。在此情況下，要表達的蛋白質為α-GAL，可以是野生型的或經修飾的α-GAL。缺失的病毒功能可由包裝細胞株反向提供。舉例來說，用於基因療法中之AAV載體通常僅擁有來自該AAV基因組之經反向終端重複（ITR）序列，這對包裝和整合至宿主基因組是必需的。病毒DNA被包裝於細胞株中，其含有編碼其它AAV基因的輔助質體，即Rep及cap，但缺乏ITR序列。細胞株亦感染腺病毒以作為輔助子。輔助病毒促進AAV載體之複製及輔助質體之AAV基因表現。由於缺乏ITR序列，該輔助質體並未被大量包裝。腺病毒污染可通過例如熱處理，而腺病毒對熱處理比AAV更敏感來降低。
在許多基因治療應用中，期望將基因治療載體專一性遞送至特定組織類型。因為先前已使用的基因治療載體之組織趨性降低，先前用於治療法布瑞氏症的基因療法方法取得有限的成功。不同於先前使用的載體設計，一旦向有需要的個體投與時，此處提供的載體設計具有廣泛的組織和細胞類型分布。本文所述的rAAV載體具有廣泛的組織分布，且包括，例如心臟、肝、腎臟和胃腸道。
在一些實施例中，能在向有需要之個體投與時達成廣泛α-GAL酶表現之rAAV載體包含：（a）5’反向終端重複序列（ITR）；（b）包含巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及兔β珠蛋白內含子的泛素化啟動子；（c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列；（d）具有mut6delATG突變的土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）；（e）牛生長荷爾蒙（BGH）聚A；及（f）3’ ITR。
能在向有需要之個體投與時達成廣泛α-GAL酶表現之rAAV載體包含：（a）5’反向終端重複序列（ITR）；（b）包含巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及兔β珠蛋白內含子的泛素化啟動子；（c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列；（d）牛生長荷爾蒙（BGH）聚A；及（e）3’ ITR。
在一些實施例中，能在向有需要之個體投與時達成廣泛α-GAL酶表現之rAAV載體係包裝 於AAV9衣殼中，該rAAV載體包含：（a）5’反向終端重複序列（ITR）；（b）包含巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及兔β珠蛋白內含子的泛素化啟動子；（c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列；（d）牛生長荷爾蒙（BGH）聚A；及（e）3’ ITR。
在一些實施例中，rAAV9載體視情況在編碼α-GAL酶與聚A序列之核苷酸序列之間包含土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）（例如，具有mut6delATG突變）。
rAAV之例示性序列展示於下方表2中。在一些實施例中，該rAAV載體包含rAAV載體元件，該rAAV載體元件包含有與下表中所示之載體元件序列具有至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%或99%一致性的核苷酸序列。在一些實施例中，該rAAV載體包含與下表中所示之載體元件核苷酸序列一致的載體元件核苷酸序列。 表 2 ：例示性載體組成序列
5’ ITR  
Ctgcgcgctcgctcgctcactgaggccgcccgggcaaagcccgggcgtcgggcgacctttggtcgcccggcctcagtgagcgagcgagcgcgcagagagggagtggccaactccatcactaggggttcct (SEQ ID NO: 1)
雞 -β （ CB ）啟動子  
gatcttcaatattggccattagccatattattcattggttatatagcataaatcaatattggctattggccattgcatacgttgtatctatatcataatatgtacatttatattggctcatgtccaatatgaccgccatgttggcattgattattgactagttattaatagtaatcaattacggggtcattagttcatagcccatatatggagttccgcgttacataacttacggtaaatggcccgcctggctgaccgcccaacgacccccgcccattgacgtcaataatgacgtatgttcccatagtaacgccaatagggactttccattgacgtcaatgggtggagtatttacggtaaactgcccacttggcagtacatcaagtgtatcatatgccaagtccgccccctattgacgtcaatgacggtaaatggcccgcctggcattatgcccagtacatgaccttacgggactttcctacttggcagtacatctacgtattagtcatcgctattaccatggtcgaggtgagccccacgttctgcttcactctccccatctcccccccctccccacccccaattttgtatttatttattttttaattattttgtgcagcgatgggggcggggggggggggggggcgcgcgccaggcggggcggggcggggcgaggggcggggcggggcgaggcggagaggtgcggcggcagccaatcagagcggcgcgctccgaaagtttccttttatggcgaggcggcggcggcggcggccctataaaaagcgaagcgcgcggcgggcgggagtcgctgcgacgctgccttcgccccgtgccccgctccgccgccgcctcgcgccgcccgccccggctctgactgaccgcgttactcccacaggtgagcgggcgggacggcccttctcctccgggctgtaattagcgcttggtttaatgacggcttgtttcttttctgtggctgcgtgaaagccttgaggggctccgggagggccctttgtgcgggggggagcggctcggggggtgcgtgcgtgtgtgtgtgcgtggggagcgccgcgtgcggcccgcgctgcccggcggctgtgagcgctgcgggcgcggcgcggggctttgtgcgctccgcagtgtgcgcgaggggagcgcggccgggggcggtgccccgcggtgcggggggggctgcgaggggaacaaaggctgcgtgcggggtgtgtgcgtgggggggtgagcagggggtgtgggcgcggcggtcgggctgtaacccccccctgcacccccctccccgagttgctgagcacggcccggcttcgggtgcggggctccgtacggggcgtggcgcggggctcgccgtgccgggcggggggtggcggcaggtgggggtgccgggcggggcggggccgcctcgggccggggagggctcgggggaggggcgcggcggcccccggagcgccggcggctgtcgaggcgcggcgagccgcagccattgccttttatggtaatcgtgcgagagggcgcagggacttcctttgtcccaaatctgtgcggagccgaaatctgggaggcgccgccgcaccccctctagcgggcgcggggcgaagcggtgcggcgccggcaggaaggaaatgggcggggagggccttcgtgcgtcgccgcgccgccgtccccttctccctctccagcctcggggctgtccgcggggggacggctgccttcgggggggacggggcagggcggggttcggcttctggcgtgtgaccggcggctctagagcctctgctaaccatgttcatgccttcttctttttcctacagctcctgggcaacgtgctggttattgtgctgtctcatcattttggcaaagaattcgatatca (SEQ ID NO: 2)
WT-hGLA1
atgcagctgaggaacccagaactacatctgggctgcgcgcttgcgcttcgcttcctggccctcgtttcctgggacatccctggggctagagcactggacaatggattggcaaggacgcctaccatgggctggctgcactgggagcgcttcatgtgcaaccttgactgccaggaagagccagattcctgcatcagtgagaagctcttcatggagatggcagagctcatggtctcagaaggctggaaggatgcaggttatgagtacctctgcattgatgactgttggatggctccccaaagagattcagaaggcagacttcaggcagaccctcagcgctttcctcatgggattcgccagctagctaattatgttcacagcaaaggactgaagctagggatttatgcagatgttggaaataaaacctgcgcaggcttccctgggagttttggatactacgacattgatgcccagacctttgctgactggggagtagatctgctaaaatttgatggttgttactgtgacagtttggaaaatttggcagatggttataagcacatgtccttggccctgaataggactggcagaagcattgtgtactcctgtgagtggcctctttatatgtggccctttcaaaagcccaattatacagaaatccgacagtactgcaatcactggcgaaattttgctgacattgatgattcctggaaaagtataaagagtatcttggactggacatcttttaaccaggagagaattgttgatgttgctggaccagggggttggaatgacccagatatgttagtgattggcaactttggcctcagctggaatcagcaagtaactcagatggccctctgggctatcatggctgctcctttattcatgtctaatgacctccgacacatcagccctcaagccaaagctctccttcaggataaggacgtaattgccatcaatcaggaccccttgggcaagcaagggtaccagcttagacagggagacaactttgaagtgtgggaacgacctctctcaggcttagcctgggctgtagctatgataaaccggcaggagattggtggacctcgctcttataccatcgcagttgcttccctgggtaaaggagtggcctgtaatcctgcctgcttcatcacacagctcctccctgtgaaaaggaagctagggttctatgaatggacttcaaggttaagaagtcacataaatcccacaggcactgttttgcttcagctagaaaatacaatgcagatgtcattaaaagacttactttaa (SEQ ID NO: 3)
WPREmut6delATG
Aatcaacctctggattacaaaatttgtgaaagattgactggtattcttaactttgttgctccttttacgctttgtggatacgctgctttattgcctttgtatcttgctattgcttcccgtttggctttcattttctcctccttgtataaatcctggttgctgtctctttttgaggagttgtggcccgttgtcaggcaacgtggcgtggtgtgcactgtgtttgctgacgcaacccccactggttggggcattgccaccacctgtcagctcctttccgggactttcgctttccccctccctattgccacggcggaactcatcgccgcctgccttgcccgctgctggacaggggctcggctgttgggcactgacaattccgtggtgttgtcggggaaatcatcgtcctttccttggctgctcgcctgtgttgccacctggattctgcgcgggacgtccttctgctacgtcccttcggccctcaatccagcggaccttccttcccgcggcctgctgccggctctgcggcctcttccgcgtcttcgccttcgccctcagacgagtcggatctccctttgggccgcctccccgcatc (SEQ ID NO: 4)
牛生長荷爾蒙聚腺苷酸化信號（ bGHpolyA ）
Cctagagctcgctgatcagcctcgactgtgccttctagttgccagccatctgttgtttgcccctcccccgtgccttccttgaccctggaaggtgccactcccactgtcctttcctaataaaatgaggaaattgcatcgcattgtctgagtaggtgtcattctattctggggggtggggtggggcaggacagcaagggggaggattgggaagacaatagcaggcatgctggggaa (SEQ ID NO: 5)   
3’ ITR
在一些實施例中，本發明包括一種基因治療載體，其包含經修飾之GLA基因序列。可做出此等修飾以改善表現特性。此等修飾可包括但不限於插入轉譯起始位點（例如，甲硫胺酸）、添加Kozak序列、插入信號肽、及/或密碼子優化。因此，在一些實施例中，該GLA基因係經修飾以包括轉譯起始位點之插入點。在一些實施例中，該GLA基因係經修飾以包括Kozak序列之添加物。在一些實施例中，該GLA基因係經修飾以包含信號肽。在一些實施例中，該GLA基因經密碼子優化。在其它實施例中，該GLA基因係經工程化。在又一個其它實施例中，該GLA基因係經密碼子優化且經工程化。
在一些實施例中，該載體包含ID標籤，例如填料序列。ID標籤的目的包括例如讓技術人員識別載體的能力。在某些實施例中，該載體包含土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）。在一些實施例中，該載體包含土撥鼠肝炎病毒轉錄後控制元件（WPRE）。各種優化或變體形式之WPRE為本領域中已知的，且包括WPRE3、WPREmut6delATG等其它方面。其它變體WPRE形式包括例如WPRE2、WPRE_wt（GenBank寄存編號J04514）；WPRE_wt（GenBank寄存編號J02442）及WPREmut6。該WPRE元件可包含野生型序列或經修飾的WPRE元件序列。WPRE之各種突變版本為已知的，且包括例如mut6delATG (SEQ ID NO: 4)。在一些實施例中，該載體包含mut6delATG (SEQ ID NO: 4)。
本文所描述之載體包含一或多個啟動子序列。在一些實施例中，該啟動子序列為泛素化啟動子序列。可使用任何合適的啟動子區域或啟動子序列，只要該啟動子區域促進哺乳動物細胞中編碼序列的表現。在某些實施例中，該啟動子區域促進哺乳動物細胞中編碼序列（例如GLA）的表現。在一些實施例中，控制GLA轉殖基因之表現的啟動子為泛素化啟動子。在一些實施例中，泛素化啟動子係選自GAPDH啟動子、迷你 EF1啟動子、CMV啟動子EF-1α啟動子、PGK啟動子、UBC啟動子、LSEβ-葡萄糖醛酸酶（GUSB）啟動子、或泛染色質開放元件（UCOE）及/或雞β肌動蛋白啟動子之一或多者。在一些實施例中，該泛素化啟動子包含包含有巨細胞病毒（CMV）啟動子、雞β肌動蛋白、及兔β珠蛋白內含子的泛素化啟動子。
在一些實施例中，本文所描述之載體包含一或多個聚A序列。在一些實施例中，該聚A係選自人類生長荷爾蒙聚A （hGHpA）、合成聚A（SPA）、猿猴病毒40延遲聚A （SV 40pA）及牛生長荷爾蒙（BGH）聚A。
在一些實施例中，本發明提供一種表現卡匣，其包含聚核苷酸序列，該聚核苷酸序列包含：（a） 5’反向終端重複序列（ITR）；（b）包含巨細胞病毒（CMV）啟動子、雞β肌動蛋白啟動子、及兔β珠蛋白內含子的泛素化啟動子；（c）編碼α-GAL酶之核苷酸序列；（d）可選擇為包含有mut6delATG突變之土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）；（e）牛生長荷爾蒙（BGH）聚A；及（f）3’ ITR。在一些實施例中，上述表現卡匣中的元件係以5’至3’的順序存在。在各種實施例中，（a）至（f）中之一或多者係以5’至3’的順序可操作地連接。
在一些實施例中，將該載體引入至細胞中。因此，在一些實施例中，提供了一種細胞，所述細胞包含有本文所描述之載體。在一些實施例中，細胞為 活體外的、 原位的或 活體內的。因此，在一些實施例中，包含本文所描述之載體的該細胞為 活體外的。在一些實施例中，包含本文所描述之載體的該細胞為 原位的。在一些實施例中，包含本文所描述之載體的該細胞為 活體內的。 醫藥組成物
包含本文所述之載體的例示性醫藥組成物係詳述於下方。
醫藥上可接受之載劑係部分地藉由所投與之特定組成物及藉由用於投與組成物之特定方法來測定。因此，有廣泛多種之醫藥組成物的合適調配物可利用。
用於 離體施用及 活體內施用的製劑包括液體或乳化液體中的懸浮液。該活性成分通常與醫藥學上可接受且與活性成分相容之賦形劑混合。合適的賦形劑包括，例如水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等、及其組合。此外，該組成物可含有少量輔助物質，諸如潤濕劑或乳化劑、pH緩衝劑、穩定劑或其它增強該醫藥組成物效力之試劑。 治療方法
本發明之載體可用於治療患有法布瑞氏症之個體。因此，本發明之載體可用於治療患有法布瑞氏症之個體，且從而降低與該疾病相關之一或多個症狀。在一些實施例中，本發明之載體可用於治療表現降低或不表現α-GAL的個體。
法布瑞氏症之症狀的非限制性實例包括神經病理性疼痛、少汗症或無汗症、運動不耐症、腹部痙攣、腹瀉、血管角質瘤、角膜濁斑、耳鳴、蛋白尿、慢性腎臟疾病、高血壓、冠心功能不全、AV傳導障礙、心律不整和瓣膜功能不全、左心室肥大、癲癇及中風。
在一些實施例中，本文所提供之載體在患有法布瑞氏症之個體中用作預防性治療。可例如向仍未生病但易患特定生物學病症（包括法布瑞氏症）或以其他方式有風險之個體投與預防性治療（例如，個體可具有引起法布瑞氏症但為無症狀之突變，或引起法布瑞氏症之突變狀態是未知的）。在一些實施例中，可向例如已罹患法布瑞氏症之個體投與治療性治療，以改善或穩定個體的病狀（例如，已存在法布瑞氏症症狀之患者）。
在一些實施例中，該rAAV載體在向有需要之個體投與之後保持游離。在一些實施例中，該rAAV載體在向有需要之個體投與之後不保持游離。舉例而言，在一些實施例中，該rAAV載體整合至個體之基因組中。此類整合可藉由例如使用各種基因編輯技術來達成，諸如鋅指核酸酶（ZFNs）、轉錄活化劑樣效應核酸酶（TALENS）、ARCUS基因組編輯及/或CRISPR-Cas系統。
在一些實施例中，包含本文所描述之rAAV載體的醫藥組合物係用於治療有需要個體。含有本發明之rAAV載體或粒子的醫藥組合物含有醫藥學上可接受之賦形劑、稀釋劑或載劑。合適醫藥載劑之實例為本領域中所熟知的，且包括磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳劑（諸如油/水乳劑）、各種類型的潤濕劑、無菌溶液等。此類載劑可藉由習知方法調配且以治療有效量向個體投與。
經由適合途徑向有需要之個體投與rAAV載體。在一些實施例中，該rAAV載體係藉由靜脈內、腹膜內、皮下或經皮投與。在一個實施例中，該rAAV載體係以靜脈內投與。在一些實施例中，皮內投與包含藉由使用「基因槍」或biolistic微粒遞送系統投與。在一些實施例中，該rAAV載體係經由非病毒脂質奈米顆粒投與。舉例來說，包含該rAAV載體之組合物可包含一或多種稀釋劑、緩衝液、脂質體、脂質、脂質複合物。在一些實施例中，該rAAV載體係包含於微球體或奈米顆粒（諸如脂質奈米顆粒）內。
在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第2至第15星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第2星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第3星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第4星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第5星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第6星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第7星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第8星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第9星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第10星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第11星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第12星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第13星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第14星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第15星期，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後約第2至第15星期，在個體之肝細胞中可偵測到功能性α-GAL。
在一些實施例中，在投與rAAV載體至少3個月、6個月、12個月、2年、3年、4年、5年、6年、7年、8年、9年、10年、15年或20年後，在個體的血漿中可偵測到功能性α-GAL。因此，在一些實施例中，在投與rAAV載體後至少3個月在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體後至少6個月在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後至少12個月，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後至少2年，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後至少3年，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後至少4年，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後至少5年，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後至少6年，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後至少7年，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後至少8年，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後至少9年，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後至少10年，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後於個體之剩餘壽命中，在個體之血漿或血清中可偵測到功能性α-GAL。
在一些實施例中，所投與之包含GLA之rAAV導致製造了與靜脈內遞送純化GLA蛋白之後所發現的程度相同之活性α-GAL。在一些實施例中，與靜脈遞送純化的α-GAL蛋白之投與相比，所投與之包含有GLA之rAAV導致製造了較大量之活性α-GAL。
在一些實施例中，所投與之包含有GLA之rAAV導致個體中之神經醯胺三己糖苷（GB3）降低。在一些實施例中，與投與該包含有GLA的rAAV之前個體的基線GB3含量相比，所投與包含有GLA的rAAV將個體中GB3降低約95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%、50%、45%、40%、35%、30%、25%、20%、15%、或約10%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約95%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約90%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約85%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約80%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約75%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約70%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約65%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約60%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約55%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約50%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約45%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約40%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約35%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約30%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約25%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約20%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約15%。因此，在一些實施例中，經投與包含GLA之rAAV在個體中降低GB3約10%。
在一些實施例中，所投與之包含有GLA的rAAV在個體中降低GB3持續至少約2星期、1個月、2個月、3個月、4個月、5個月、6個月、12個月、1年、2年、3年、4年、5年或超過5年。
在一些實施例中，在向個體投與AAV載體之後，在循環中可偵測到的功能性α-GAL 之含量係介於約2及100倍之間或高於10倍、高於20倍、高於30倍、高於40倍、高於50倍、高於60倍、高於70倍、高於80倍、高於90倍、高於95倍、或100倍或大於在投與包含有GLA轉殖基因之rAAV之前在個體中可偵測到的功能性α-GAL的量。
在一些實施例中，在向個體投與AAV載體之後，可偵測之活性α-GAL之含量符合或超過人類治療含量，亦即，在人類中α-GAL之含量被視為正常循環含量（例如，5-9 nmol/小時/ml）。在一些實施例中，在投與rAAV載體之後活性α-GAL含量為介於約2及35倍或大於35倍、大於40倍、大於45倍、大於50倍、大於55倍、大於60倍、大於65倍、大於70倍、大於75倍、大於80倍、大於85倍、大於90倍、大於95倍、或大於100倍的人類治療含量。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約2倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約3倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約4倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約5倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約6倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約7倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約8倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約9倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約10倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約11倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約15倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約20倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約25倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約30倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約35倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約40倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約45倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約50倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約55倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約60倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約65倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約70倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約75倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約80倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約85倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約90倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約95倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約100倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約200倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約300倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約400倍。在一些實施例中，經投與後活性α-GAL之含量為人類治療含量之約500倍或多於500倍。
因此，與單獨投與純化α-GAL至有需要之個體相比，投與包含有GLA轉殖基因之rAAV載體導致持續穩健的表現。
在一些實施例中，包含有GLA轉殖基因之rAAV載體以每位個體之單一劑量遞送。在一些實施例中，個體係被遞送最低有效劑量（MED）。如本文所用，MED係指達成α-GAL活性所需的rAAV GLA載體劑量，導致在個體中之GB3含量降低。
載體效價係基於載體製備的DNA含量來測定。在一些實施例中，定量PCR或優化定量PCR係用於測定rAAV GLA載體製備之DNA含量。在一個實施例中，該劑量為約1X10 11基因組複本（GC）/公斤體重至約1X10 13GC/kg，包括端點。
在有需要之個體中達成治療效益之劑量係低於使用其它種類的rAAV衣殼(諸如包括肝特異性啟動子之AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7及/或AAV8)所達成的那些劑量。在一些實施例中，表現如本文所描述之α-半乳糖苷酶蛋白質之rAAV基因治療載體係以低於或等效於用於包括肝特異性啟動子之基因治療載體情形下之劑量向個體投與；然而，意外地展現較高血清及組織暴露。
在一些實施例中，該rAAV GLA載體組成物可調配成劑量單位，以含有約1.0 x 10 9GC至約1.0 x 10 15GC範圍之複製缺陷病毒的量。如本文所使用，術語「劑量」可指在治療過程中遞送給個體的總劑量、或單次（於多次之中）投與中所遞送之量。
在一些實施例中，該劑量足以減少25%或更多之患者血漿GB3含量。在一些實施例中，表現α-GAL之rAAV與一或多種用於治療法布瑞氏症之療法組合投與。 組合治療
本發明之組成物及方法亦可與本領域已知用於治療法布瑞氏症或其併發症之其它療法結合使用，包括但不限於：ERT（例如，重组阿糖苷酶β）、止痛藥（例如，利多卡因、苯妥英(diphenylhydantoin)、卡馬西平、加巴噴丁、苯妥英(phenytoin)、神經營養因子、鴉片類藥物）； 消化不良治療（例如，甲氧氯普胺、H-2阻斷劑）、維生素D置換物等、β阻斷劑(美托洛爾、醋丁洛爾、比索洛爾、阿替洛爾、普萘洛爾等) 抗凝結治療(肝素、華法林、阿哌沙班、利伐沙班)。
本發明之組成物及方法亦可與其它治療形式一起使用，包括但不限於：運動（例如，透析、腎臟移植）；飲食鹽分限制、纖維攝入、安裝起搏器、及心臟移植。 製造 rAAV 病毒載體
用於生成及分離適於遞送至個體之AAV病毒載體的方法為本領域中已知的。 參見，例如，美國專利7790449；美國專利7282199；WO 2003/042397；WO 2005/033321、WO 2006/110689；及US 7588772 B2。在一個系統中，以編碼由ITR側接之轉殖基因的構築體及編碼rep和cap的構築體來暫態轉染生產細胞株。在第二系統中，以編碼由ITR側接之轉殖基因的構築體來暫態轉染穩定供應rep及cap的包裝細胞株。在這些系統之每一者中，AAV病毒粒子係響應於輔助腺病毒或疱疹病毒之感染而製造的，需要將rAAV自污染病毒分離出來。最近，已開發了不需要感染輔助病毒以恢復AAV（即，腺病毒El、E2a、VA及E4或疱疹病毒UL5、UL8、UL52及UL29）的系統，且皰疹病毒聚合酶亦以反向方式由系統供應。在這些較新的系統中，該輔助功能可藉由以編碼所需輔助功能之構築體對細胞暫態轉染來供應，或該細胞可經工程化以穩定含有編碼該輔助功能之基因，其表現可於轉錄時或轉錄後程度控制。
在一些實施例中，藉由以基於桿狀病毒之載體感染由ITR側接之表現卡匣及rep/cap基因引入至所需細胞或細胞株中。
在一些實施例中，藉由以基於桿狀病毒之載體感染將由ITR側接之表現卡匣及rep/cap基因引入昆蟲細胞中。有關這些生産系統的評論，大致 參見，例如，Zhang等人，2009，「用於大規模重組腺相關病毒製造的腺病毒-腺相關雜合體」， Human Gene Therapy20:922-929，其全部內容通過引用全部併入本文。製造及使用此等及其它AAV製造系統之方法亦描述於以下美國專利中，其中之每一者之內容係通過引用全部併入本文中：5,139,941；5,741,683；6,057,152；6,204,059；6,268,213；6,491,907；6,660,514；6,951,753；7,094,604；7, 172,893；7,201,898；7,229,823；及7,439,065。大致上 參見，例如，Grieger & Samulski，2005，「作為基因治療載體的腺相關病毒：載體開發、製造和臨床應用」， Adv. Biochem 。 Engin/Bitechnol. 99: 119-145；Buning等人，2008，“最近開發之腺相關病毒載體技術”， J. Gene Med10：717-733；且以下引用之參考文獻，其中每一者以引用方式全部併入本文中。
用於構築如本文所述之載體之方法對於具有核酸操縱技術且包括基因工程、重組工程、及合成技術者來說是已知的。 參見，例如，Green及Sambrook等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor,紐約(2012)。類似地，生成rAAV病毒粒子之方法為已知的，且合適方法之選擇並非對本發明的限制。參見，例如K. Fisher等人，(1993) J. Virol，70:520-532及美國專利第5,478,745號。
可根據本發明而使用之許多質體及其它選殖及表現載體對於本領域中熟習此項技術者來說為所熟知且容易獲得。此外，熟習此項技術者可容易地構築任何數目之適用於本發明之其它質體。在本發明中之此等質體及其它載體之特性、構築體及用途將對於來自本發明之技術者來說顯而易見。
在一個實施例中，製造質體為本文所述或如WO2012/158757中所描述，其以全文引用之方式併入本文中。各種質體為此本領域中已知是用於製造rAAV載體，且適用於本文中。製造質體係培養在表現AAV cap及/或rep蛋白之宿主細胞中。在宿主細胞中，各rAAV基因組經援救且包裝至衣殼蛋白或膜蛋白中以形成感染性病毒顆粒。
在某些實施例中，rAAV表現卡匣、載體（諸如rAAV載體）、病毒（諸如rAAV）、包含AAV反向終端重複序列之製造質體、編碼α-GAL多肽之密碼子優化核酸序列、及直接表現所編碼蛋白質之表現控制序列係存在於宿主細胞中。在其它實施例中，rAAV表現卡匣、病毒、載體（諸如rAAV載體）、製造質體進一步包含一或多種內含子、Kozak序列、聚A、轉錄後調控元件及其它者。在一個實施例中，該轉錄後調控元件為土撥鼠肝炎病毒（WHP）轉錄後調控元件（WPRE）。在各種實施例中，該核酸序列包含編碼α-GAL多肽之轉殖基因上游的信號肽。在一些實施例中，信號肽在α-GAL多肽之N端。在一些實施例中，信號肽在α-GAL多肽之C端。
各種有關AAV載體的製造及純化之方法為本領域中已知的。 參見，例如，Mizukami、Hiroaki等人。AAV載體製造及純化的原理；美國專利公開號US20070015238及US20120322861。舉例而言，包含有所關注之基因的質體可與一或多種輔助質體組合，例如，含有rep基因（例如，編碼Rep78、Rep68、Rep52及Rep40）及cap基因（編碼VP1、VP2及VP3、包括如本文所述之經修飾VP2區域）者，且轉染至重組細胞後使得rAAV可被包裝且隨後被純化。
在一些實施例中，該包裝係在輔助細胞或製造細胞中執行，諸如哺乳動物細胞或昆蟲細胞。例示性哺乳動物細胞包括但不限於HEK293細胞、COS細胞、HeLa細胞、BHK細胞或CHO細胞（參見，例如ATCC® CRL-1573™、ATCC® CRL-1651™、ATCC® CRL-1650™、ATCC® CCL-2、ATCC® CCL-10™、or ATCC® CCL-61™）。例示性昆蟲細胞包括但不限於Sf9細胞（參見，例如ATCC® CRL-1711™）。該輔助細胞可包含編碼該Rep蛋白及/或Cap蛋白以用於本文所述方法中的rep及/或cap基因。在一些實施例中，該包裝係於活體外進行。
在一些實施例中，將包含所關注基因之質體與一或多種輔助質體組合，例如含有相同血清型或不同血清型之代表基因及cap基因且轉染至諸如rAAV封裝之輔助細胞中。
在一些實施例中，該一或多種輔助質體包括包含有rep基因及cap基因之第一輔助質體，及包含有以下輔助基因中之一或多者之第二輔助質體：Ela基因、Elb基因、E4基因、E2a基因及VA基因。為了清楚起見，輔助基因為編碼輔助蛋白Ela、Elb、E4、E2a、及VA之基因。在一些實施例中，cap基因係經修飾使得蛋白VP1、VP2及VP3中之一或多者無法表現。在一些實施例中，cap基因係經修飾使得VP2無法表現。用於作出此類修飾之方法為本領域中已知的(Lux等人(2005), J Virology, 79: 11776-87)。
輔助質體及製造此類質體之方法一般為本領域中已知的，且一般為市面上可獲得的（ 參見，例如，pDF6、pRep、pDM、pDG、pDPlrs、pDP2rs、pDP3rs、pDP4rs、pDP5rs、pDP6rs、pDG(R484E/R585E)、及來自PlasmidFactory，比勒費爾德，德國的pDP8.ape質體；自Vector Biolabs，費城，PA獲得的其它産品和服務；Cellbiolabs，聖地牙哥， CA；安捷倫科技，聖塔克拉拉，CA；及Addgene，劍橋，MA；pxx6；Grimm等人（1998），用於製造及純化重組腺相關病毒載體的新穎工具， Human Gene Therapy，Vol. 9, 2745-2760；Kem, A.等人（2003），識別腺相關病毒第2型衣殼上的肝素結合模體， Journal of Virology ，Vol. 77, 11072-11081；Grimm 等人（2003），無輔助病毒、光學可控及基於雙質粒製造之血清型1至6之腺相關病毒載體， Molecular Therapy，Vol. 7, 839-850；Kronenberg等人（2005）。 實例
本發明之例示性特徵、目標及優點在以下的實例中顯而易見。然而應當理解，這些實例雖然指示了本發明的實施例，但其僅通過說明的方式給出，而非限制。本發明之範疇中之各種變化及修飾將對於熟習此項技術者將從實例中變得顯而易見。
以下實例中之數據係用包含為SEQ ID NO:77之信號肽序列的GLA轉殖基因生成，該信號肽序列編碼包含SEQ ID NO:76之信號肽序列的α-GAL酶 。 實例1. 用於表現α-GAL酶之設計與純化病毒載體
此實例概述本發明所涵蓋之例示性病毒載體的設計。
開發了一種重組腺相關病毒9 （rAAV9），以在病毒載體中表現泛素化啟動子控制下的野生型人類α-GAL或α-GAL變體(例如，表1中所示的胺基酸序列)。WPRE元件係連接至野生型GLA轉殖基因的3'端，以增加轉殖基因的表現並改善mRNA穩定性。將牛生長荷爾蒙聚A尾部附接至WPRE元件的3'端。將啟動子-GLA-WPRE-BGHpA之DNA構築體整合至環狀質體載體之反向終端重複序列之間。圖1顯示例示性rAAV9載體構築體。
使用本領域中之方法將rAAV載體用AAV2反向終端重複序列及rep序列封裝。rAAV9原液係藉由無腺病毒、三重質體共同轉染法利用HEK-293T細胞製造，且使用氯化銫超離心來純化。通過定量PCR來測定v.g.粒子數目之滴度。
將純化rAAV9病毒懸浮液稀釋於由1.5 mM KH 2PO 4（磷酸二氫鉀）、2.7 mM KCl （氯化鉀）、8.1 mM Na 2HPO 4（磷酸氫二鈉）、136.9 mM NaCl （氯化鈉）及0.001% Pluronic F-68所組成之調配物緩衝液中。使用具有rAAV9衣殼之空的載體（rAAV9-空的）作為對照。 實例2. 投與rAAV9後的α-GAL之血清穩定性
此實例顯示將載體投與至小鼠中以後，rAAV9-遞送之GLA轉殖基因在血清中提供α-GAL蛋白表現至少12星期。
首先，如上文實例1中所描述製備rAAV9載體且純化。接下來，以兩種不同劑量2.5x10 11、6.25x10 12vg/kg向6至9個月齡之雄性GLAko小鼠靜脈（IV）投與編碼α-GAL之純化rAAV9載體，且追蹤小鼠12星期。以6.25x10 12vg/kg向一組GLAko小鼠投與空的載體rAAV9-空的作為陰性對照。在試驗期間中的多個時間點以及12星期結束時收集血清。在一動物子集中，在犧牲前24小時投與1 mg/kg劑量之α-GAL ERT，並收集組織，以用作陽性對照。在投與α-GAL ERT1小時後收集血清，以捕捉循環酶的C 最大含量。
使用ELISA量測血清中α-GAL之量。簡言之，將高結合MSD黑板（MSD，型號#L15XB）塗覆於0.2 M碳酸氫鈉-碳酸氫鹽緩衝液（Thermoscientific，型號#28382）中的多株綿羊抗人類α-GLA捕捉抗體(R&D系統,型號#AF6146)，並在4℃下過夜。接著，將該塗覆盤以含有D’PBS及0.05% Tween-20之洗滌緩衝液洗滌三次。在加入樣品或稀釋緩衝液中之純化 α-GLA蛋白標準品（1%之BSA在PBS中）之前，該盤以阻斷緩衝液（3%之BSA在PBS中）阻斷1小時。結合在低速震盪下進行1小時，並用洗滌緩衝液洗滌三次。接著，添加稀釋緩衝液中之多株兔子抗人類 α-GLA （Novus Biologics，型號#H00002717-D01P），且在以洗滌緩衝液洗滌三次前培養1小時，並添加偵測抗體、磺標記之山羊抗兔子抗體（MSD，型號#R32AB-1），在室溫下持續1小時。在MSD Sector成像器S600系統中以1倍讀取緩衝（MSD，型號#R92TC-1）來讀取該盤。使用標準曲線計算α-GAL濃度的最終值。組織α-GAL蛋白濃度係藉由BCA測定法所測得之總蛋白質濃度來標準化。沒有任何此分析法中使用的抗體能辨識小鼠α-GAL蛋白。在投與載體後第2個星期，在血清中觀察到α-GAL快速升高，在第12星期時達到超過在rAAV9-WT之類似高劑量組中正常值的4500倍。觀察到即使在最低劑量下，rAAV9-WT導致導致血清α-GAL酶之穩定含量高於陽性對照α-GAL ERT之C 最大（ 圖 2）。
在給藥後第12星期，收集包括有肝、腎臟、心臟及胃腸道之多個器官以用於進一步評估。以10% NBF固定，以進行組織學評估。關於生理學，將組織急速冷凍並儲存在-80 °C下。
在周邊器官(包括肝（ 圖 3A）、腎臟（ 圖 3B）、心臟（ 圖 3C）及胃腸道（ 圖 3D 至 3E）)中觀察到劑量依賴性持續超生理學含量之α-GAL暴露，導致這些動物中同時降低GB3及lysoGb3積累（ 圖 3F 至 3M）。進一步觀察到，較高劑量之rAAV9-WT使血清及腎臟中之GB3及lysoGb3含量減少＞95%（ 圖 3F 、圖 3H 、圖 3J 、圖 3L ）及在肝及心臟中減少＞99%（ 圖 3G 、圖 3I 、圖 3K 、圖 3M）。同樣地，在高劑量注射rAAV9-WT後，所有受測組織中的lysoGb3含量均降低＞99%。相較之下，如從 圖 3F 至 3M所見，在接受α-GAL蛋白的小鼠中，血清和肝的受質含量中度降低，但在腎臟和心臟中則沒有。
整體而言，以編碼α-GAL之rAAV9-WT治療改善了GB3及lysoGb3在各種組織中之清除。此外，α-GAL持續表現至少12個星期。 實例3. G3Stg/GLAko小鼠之rAAV9-WT治療之效果。
本實例顯示在嚴重法布瑞氏症小鼠模型中各種組織中編碼α-GAL表現之rAAV9-WT之 活體內效應，該嚴重法布瑞氏症小鼠模型之各種組織具有比GLAko小鼠之各種組織顯著較高的受質含量。來自本實例之數據展現rAAV9-WT所遞送之GLA轉殖基因降低與法布瑞氏症相關之GB3積累。
首先，如上述實例1中所描述製備rAAV9-WT載體且純化。
接下來，G3Stg/GLA敲除小鼠係通過雜交具有C57BL/6背景的GLA敲除小鼠與GB3合成酶轉殖基因小鼠而產生。Founder小鼠係購自傑克森實驗室，且育種群在Taconic Biosciences維持。G3Stg/GLA敲除小鼠在內臟器官中具有GB3受質的實質沉積，其導致嚴重的腎臟、胃腸道及神經性表現型，包括白蛋白尿、腎滲透壓降低、結腸推進延遲及熱敏感性損失，這反映了幾種法布瑞氏症的臨床表現（Taguchi等人，2013）。此實驗使用C57BL/6小鼠(查爾斯河實驗室)作為野生型對照。在Melior Discoveries之通風籠架系統中將動物保持在12小時暗/12小時光循環（在上午7：00開燈）下，每籠不超過4隻小鼠，並 隨意餵食標準囓齒動物食物和水。
rAAV9-WT治療在血清中以持續劑量依賴性的方式增加α-GAL濃含量與α-GAL活性（ 圖 4A）。在最高劑量6.24e12vg/kg下，血清α-GAL活性比WT血清α-GAL活性高出10,000倍。 在所有檢查的組織(包括肝（ 圖 4B）、腎臟（ 圖 4C）、心臟（ 圖 4D）、胃腸道（十二指腸 圖 4E及結腸 圖 4F）及腦（ 圖 4G）)中均觀察到組織α-GAL含量和活性劑量依賴性增加。
接下來，使用質譜分析以編碼α-GAL之rAAV9-WT轉染的嚴重法布瑞氏症(G3Stg/GLAko)小鼠中的GB3含量。簡言之，在HPLC及LC-MS/MS中運行（Applied Biosystem API5000, Turbo Ion Spray Ionization，正離子模式）前先使用氯仿：甲醇(v/v 2:1)及甲酸提取受質樣品。觀測到來自此等動物各種組織中之GB3及lyso-Gb3含量顯示在各組織中之積累的受質含量劑量依賴性減少（ 圖 5A 至 5L）。
觀察到法布瑞氏症小鼠中rAAV9-WT表現α-GAL，且降低與法布瑞氏症相關的GB3積累。 實例4. rAAV9對法布瑞氏症小鼠模型（G3Stg/GLAko小鼠）之表現型作用
本實例顯示編碼α-GAL之rAAV9-WT對G3Stg/GLAko小鼠之表現型作用。接受rAAV9-WT治療的法布瑞氏症小鼠顯示，體重隨時間的整體改善。
首先，如上述實例1中所描述製備rAAV9-WT載體且純化。
接下來，如實例3中所描述，該G3Stg/GLAko小鼠以編碼α-GAL酶之rAAV9治療。在試驗持續期間接受體重監測。
G3Stg/GLAko小鼠在試驗期間顯示體重明顯減少；與被給予空的AAV載體的小鼠相比，以編碼α-GAL酶之rAAV9-WT治療的小鼠具有較高體重（ 圖 6）。WT小鼠在整個試驗持續時間中顯示穩定體重增加，然而，以空的載體以及較低劑量之rAAV9-WT治療的G3Stg/GLako小鼠於16至18周齡後開始損失體重，使得空的載體組中的動物以低於試驗開始時(在28星期時22.2 ± 0.5相比於在開始時27.0 ± 0.6 g/小鼠，p ＜ 0.0001)的體重結束試驗。以最高劑量之rAAV9-WT治療顯示在終止時顯著較低之體重損失（空的AAV中之28.5 ± 0.8 g/小鼠相比於22.2 ± 0.5 g/小鼠，p ＜ 0.01）。以高劑量rAAV9-WT治療因此預防了體重損失，展現基因療法候選物對整體健康的益處 。
本實例之結果展現編碼α-GAL酶之rAAV9-WT可用來引起法布瑞氏症之治療症狀之顯著改善。 實例5. 以rAAV9修復法布瑞氏症模型（G3Stg/GLAko小鼠）中的腎功能缺陷
本實例檢驗了編碼α-GAL酶之rAAV9-WT對G3Stg/GLAko小鼠腎功能的影響。
首先，如上述實例1中所描述製備rAAV9-WT載體且純化。
接下來，如實例3中所描述以rAAV9治療G3Stg/GLAko小鼠。腎臟功能是藉由量測諸如血中尿素氮、尿白蛋白含量之標記物來評估。
編碼α-GAL酶之rAAV9-WT在以最高劑量基因療法治療的小鼠中導致血清BUN顯著減少（ 圖 7A）。觀測到以最高劑量基因療法（GT）治療之法布瑞氏症小鼠中之血清白蛋白含量與在WT小鼠中的含量相似（ 圖 7B）。
本實例展現編碼α-GAL酶之rAAV9-WT援救與法布瑞氏症相關的腎表現型。尤其是，rAAV9-WT援救BUN和尿液白蛋白含量。 實例6. 在小鼠模型（G3Stg/GLAko小鼠）中與法布瑞氏症相關的神經病變的恢復
此實例檢驗了編碼α-GAL酶之rAAV9-WT對法布瑞氏症小鼠模型中神經病變標記物的影響。
首先，如上述實例1中所描述製備rAAV9-WT載體且純化。
接下來，如實例3中所描述以rAAV9治療G3Stg/GLAko小鼠。在犧牲後，在周邊神經元組織學中觀察到G3Stg/GLAko小鼠發展幾種神經病變的跡象。收集來自這些動物的後爪和背根神經節的足墊，以藉由免疫組織化學分析來評估小纖維神經元密度，以監測這些動物中的任何神經病理學。在以最高劑量GT治療的動物中，背根神經中的空泡顯著降低（恢復至WT程度）（ 圖 8A）。最後，在所治療的動物的爪中PGP9.5(神經元標誌物)及MPZ(髓鞘神經標誌物)也有劑量依賴性的增加（ 圖 8B和 8C）。
此實例展現，rAAV9-WT製造的 α-GAL酶與藉由法布瑞氏症小鼠模型中之標記物表現所評估之神經病變的改善有關。 實例 7. 法布瑞氏症小鼠模型（ G3Stg/GLAko 小鼠）中的標準化自噬失調
此實例檢驗了編碼α-GAL酶之rAAV9-WT對法布瑞氏症小鼠模型中自噬失調的影響。
已經被報導法布瑞氏症患者具有自噬失調（Chevrier等人，Autophagy，2010年7月;6(5):589-99），且可能在法布瑞氏症神經病變中扮演關鍵角色。蛋白質p62是自噬的典型受體，其在法布瑞氏症患者腎臟及纖維母細胞中積累；在G3Stg/GLAko小鼠中之腎臟、心臟及平滑肌中觀察到類似積累。當以6.25e12vg/kg劑量給藥時，以rAAV9-WT治療完全清除來自腎臟和心臟之p62積累（ 圖 9A 至圖 9F）。
此外，法布瑞氏症患者的慢性發炎引起器官損傷（Pinto等人，High Blood Press Cardiovasc Prev，2020），且這可能是DRG體積增加的原因。以rAAV9-WT治療G3Stg/GLAko小鼠解決DRG中的發炎，如藉由組織學評估來降低巨噬細胞標記物CD68所展現（ 圖 9G 至圖 9I）。 實例8. 與肝驅動的rAAVrAAV8方法相比，使用rAAV9投與的泛素化轉導方法導致較高含量之循環α-GAL、目標組織中較高的α-GAL暴露、以及較多的受質降低量
此實例顯示rAAV9-泛素化啟動子遞送之GLA轉殖基因提供比血清中rAAV8-肝特異性啟動子遞送之GLA更高的α-GAL蛋白表現持續至少12星期。
首先，如上文實例1中所述，製備及純化編碼α-GAL的rAAV9-WT及rAAV8-WT。接著，以2.5x10 11vg/kg劑量向6至9個月齡之雄性GLAko小鼠靜脈投與(IV)純化rAAV9或rAAV8，且對小鼠追蹤12個星期。在試驗期間中的多個時間點以及12星期結束時收集血清。在一動物子集中，在犧牲前24小時投與1 mg/kg劑量之α-GAL ERT，並收集組織，以用作陽性對照。在投與α-GAL ERT1小時後收集血清，以捕捉循環酶的C 最大含量。
血清中α-GAL之量係使用如實例2中所述的ELISA量測。觀察到rAAV9-WT導致血清α-GAL酶之穩定含量高於rAAV8-WT及陽性對照α-GAL ERT之C 最大（ 圖 11A）。
在投與12星期後，收穫腎臟以供進一步評估。
與rAAV8-WT或α-GAL相比，在以rAAV9-WT治療的動物之腎臟中觀察到顯著更高含量的α-GAL暴露（ 圖 11B），導致這些動物中GB3積累隨之降低（ 圖 11C）。進一步觀察到，以rAAV9治療使GB3降低＞86%，而以rAAV8治療使GB3降低78%，而在單一劑量1 mg/kg下之α-GAL治療並未導致任何在腎臟中的GB3降低。
因此，整體上觀察到，以具有驅動GLA表現之泛素化啟動子之rAAV9治療比靶向肝之rAAV8更有效率地降低腎臟中的GB3，並導致血清中較高持續α-GAL活性至少12星期。
不希望受理論束縛，預期肝特異性啟動子亦可與已經另外修飾/密碼子優化之GLA轉殖基因一起使用，以表現高含量的酶。 實例9. 具有驅動GLA表現之泛素化啟動子之rAAV9會導致腎臟功能劑量依賴性恢復，而靶向肝之rAAV8所驅動的GLA表現僅在高劑量時改善腎功能
本實例檢驗rAAV9及rAAV8對G3Stg/GLAko小鼠中腎臟功能的影響。
首先，如上文實例1中所描述，製備且純化rAAV8及rAAV9。
接下來，如實例3中所描述，該G3Stg/GLAko小鼠用rAAV8及rAAV9來治療。將野生型動物以媒劑治療作為控制組。透過量測血中尿素氮來評估腎臟功能。
觀察到rAAV9-WT導致血清BUN之劑量依賴性減少，以6.25e12vg/kg之最高劑量恢復接近健康野生型動物之含量（ 圖 12A）。以靶向肝的rAAV8-WT治療動物導致在2.5e11vg/kg劑量未改善血清BUN，且僅在25倍較高劑量6.25e12vg/kg下顯示反應（ 圖 12B）。
本實例展現經由泛素化啟動子，rAAV9所驅動之GLA表現相較於靶向肝的rAAV8可更有效地援救與法布瑞氏症相關的腎臟表現型。 實例10. 與野生型α-GAL相比，在經由水動力動力尾靜脈注射投與表現這些變體的質體之後，各種組織中　的-GAL變體的較高暴露。
此實例顯示在 活體內的各種α-GAL變體的血清穩定性和組織生物分布。
在法布瑞氏症小鼠模型中測試於泛素化啟動子條件下表現野生型或經工程化人類α半乳糖苷酶（α-GAL）之質體。在第一試驗中測試了以下質體：當A、B、C、D、E、F表現經工程化α-GAL蛋白時WT表現野生型α-GAL。在第二試驗中測試了以下質體：當002、003、004、005、006及007表現經工程化α-GAL變體時WT表現WT α-GAL。
在第一試驗中，各自藉由尾部靜脈注射通過流體力學基因遞送向12至14周齡雄性GLAko小鼠投與50 ug質體DNA。一個臂係包含在試驗中，其中GLAko小鼠僅注射緩衝液作為陰性對照。另一個臂係包含在試驗中，其中WT動物以緩衝液治療。動物在注射2天後犧牲。在終端端點藉由心臟穿刺收集血清，且在用PBS灌流之後收集諸如心臟及腎臟組織。將樣品急速冷凍並儲存於-80 oC。分析血清和組織樣品的α-GAL活性。
在第二試驗中，使用10至12周齡的雄性小鼠。遵循與第一試驗相同的研究設計。在本試驗中包括另一組臂，其中該GLAko小鼠以1 mg/kg劑量注射重組人類α-GAL蛋白，作為陽性對照。
使用0.5% Triton-X 100及1.5x Halt蛋白酶抑制劑雞尾酒混合物、無EDTA、經離心及收集用於分析測定法之上清液將組織在含有10 mM HEPES之溶解緩衝液中均質化。使用螢光受質量測上清液或血清中之α半乳糖苷酶活性。簡言之，將2 ul之生物樣品與15 uL 4-MU-a-GLA受質溶液（Research Products International Company，型號# M65400）與a-半乳糖苷酶B抑制劑（N-乙醯基-D-半乳糖胺，Sigma型號#A-2795）一起在37°C下培育60分鐘。藉由添加200 uL甘胺酸碳酸鹽終止溶液(pH 10.7)來停止酶反應。該4-MU產品係藉由螢光盤讀取器在激發波長360 nm及發射波長465 nm下量測。測試樣品中的4-MU濃度係自相同反應盤中的4-MU校準曲線計算而得。組織活性經標準化為通過BCA測定法所測定的總蛋白質濃度。
在第一試驗中觀察到，與使用WT相比，注射質體A至F之小鼠在循環中以及在心臟及腎臟中具有顯著較高含量的α-GAL活性（ 圖 10A 至圖 10C）。質體A表現野生型人類α-GAL蛋白，而其它質體表現經工程化以改善血清穩定性及組織攝取之α-GAL變體，這反映在這些結果中。質體D導致在血清和組織中有最高的α-GAL活性。
在第二試驗中，與使用001（表現WTα-GAL）相比，注射質體002至007（表現經工程化α-GAL）之小鼠在循環中以及在心臟及腎臟中具有顯著較高含量的α-GAL活性（ 圖 10D 至圖 10F ）。在該試驗中，變體004導致最高的血清和組織α-GAL活性。
與含有野生型GLA之質體相比，此實例展現了含有各種變體α-GAL轉殖基因的質體表現具有顯著較高血清穩定性及組織生物分佈的酶。 實例11. 表現經工程化之α-GAL和WT α-GAL的載體的比較
此實例檢驗在投與編碼經工程化α-GAL和WT α-GAL的病毒載體之後在血清和組織中的酶活性。
首先，如上文實例1中所描述，製備及純化4個rAAV9載體變體（在本文中描述為rAAV9-WT、rAAV9-A、rAAV9-005、rAAV9-D）。 試驗 1
在試驗1中，向12至13周齡G3Stg/GLAko雄性小鼠投與兩種不同劑量
Figure 02_image001
和
Figure 02_image003
vg/kg之rAAV9-A、rAAV9-005、rAAV9-D及rAAV9-WT、或劑量為
Figure 02_image003
vg/kg的空的載體一次，且在給藥後監測4星期。 表 3顯示各rAAV9中使用的特定α-GAL變體。具有相同基因背景的野生型：野生型同胞小鼠係用作對照，且僅以媒劑投與。基於給藥前體重以半隨機過程將小鼠分配至各測試物品組，以確保平衡組別。在試驗期間內於多個時間點收集血清。在試驗期間透過眼窩或尾部靜脈採血收集血液，並在終止時經由心臟穿刺收集血液並處理以收集血清。在試驗結束時，收集末端血清，且將小鼠灌注以用於收集器官(包括肝、腎臟及心臟)，隨後在乾冰中急速冷凍且儲存於-80 ͦC。分析評估包括量測α-GAL酶活性，以及分析在血清和各種組織中的受質含量。 表 3：rAAV9 - α-GAL變體載體摘要
rAAV9 載體名稱 α-GAL 變體 蛋白質包含 SEQ ID NO 核酸包含 SEQ ID NO
rAAV9-WT 野生型 SEQ ID NO: 30 SEQ ID NO: 3
rAAV9-A A SEQ ID NO: 7 SEQ ID NO: 18
rAAV9-005 005 SEQ ID NO: 15 SEQ ID NO: 27
rAAV9-D D SEQ ID NO: 10 SEQ ID NO: 37
rAAV9-40 004 SEQ ID NO: 14 SEQ ID NO: 26
rAAV9-41 008 SEQ ID NO: 33 SEQ ID NO: 31
rAAV9-42 009 SEQ ID NO: 34 SEQ ID NO: 32
α 半乳糖苷酶活性：
使用0.5% Triton-X 100及1.5x Halt蛋白酶抑制劑雞尾酒混合物、無EDTA、經離心及收集用於分析測定法之上清液將組織在含有10 mM HEPES之溶解緩衝液中均質化。使用螢光受質量測上清液或血清中之α半乳糖苷酶活性。簡言之，將2 ul之生物樣品與15 uL 4-MU-a-gal受質溶液（Research Products International Company，型號# M65400）與a-半乳糖苷酶B抑制劑（N-乙醯基-D-半乳糖胺，Sigma型號#A-2795）一起在37°C下培育60分鐘。藉由添加200 uL甘胺酸碳酸鹽終止溶液(pH 10.7)來停止酶反應。該4-MU產品係藉由螢光盤讀取器在激發波長360 nm及發射波長465 nm下量測。測試樣品中的4-MU濃度係自相同反應盤中的4-MU校準曲線計算而得。組織活性經標準化為通過BCA測定法所測定的總蛋白質濃度（Thermo Scientific，型號23225）。
Mus musculus（小家鼠），G3Stg/GLA敲除小鼠係通過雜交具有C57BL/6背景的GLA敲除小鼠與GB3合成酶轉殖基因小鼠而產生。Founder小鼠係購自傑克森實驗室，且育種群在Taconic Biosciences維持。在Takeda或Melior Discoveries之通風籠架系統中將動物保持在12小時暗/12小時光循環（在上午7：00開燈）之受控環境下，每籠不超過4隻小鼠，並隨意餵食標準囓齒動物食物和水。
與在試驗的4星期期間投與rAAV9-WT相比，以
Figure 02_image001
vg/kg或
Figure 02_image003
vg/kg對雄性G3Stg/GLAko小鼠單次靜脈投與rAAV9-A、rAAV9-005及rAAV9-D導致血清中持續較高的α-GAL活性。 試驗 2
在試驗2中，向14至16周齡G3Stg/GLAko雄性小鼠投與rAAV9-40、rAAV9-41、rAAV9-42、rAAV9-WT、或劑量為
Figure 02_image003
vg/kg之空的載體一次，且在給藥後監測4星期。 表 3顯示各rAAV9中所使用的特定α-GAL變體。野生型：野生型同胞小鼠係用作對照，且僅以媒劑投與。遵循與先前試驗相同的試驗設計，其中使用較老的G3Stg/GLAko小鼠（14至16周齡），在
Figure 02_image003
vg/kg之單一劑量下之rAAV9-40、rAAV9-41、及rAAV9-42亦在整個4星期內在血清中製造持續的α-GAL活性，且含量高於rAAV9-WT治療的動物。
圖 13A 至圖 13B描繪血清中各變體的α-半乳糖苷酶活性。如於以媒劑治療之野生型:野生型動物所量測，可觀察到以劑量為
Figure 02_image003
vg/kg之rAAV9-A、rAAV9-005及rAAV9-D給藥的動物血清中的α-GAL活性比WT小鼠中的正常α-GAL活性分別高出超過16,000倍、16,000倍及46,000倍。相較之下，在投與rAAV9-WT後的α-GAL血清活性比正常值高出1000倍以上。此外，與以2種不同劑量rAAV9-WT組別治療之動物相比，在rAAV9-A、rAAV9-005及rAAV9-D治療的動物中亦觀察到組織（腎臟、心臟及肝）中之α-GAL活性升高。 圖 13C 至圖 13E總結每一變體於腎臟、心臟和肝中的α-半乳糖苷酶活性。
圖 14A描繪G3Stg/GLAko小鼠（14至16周齡）中各種變體的血清α-半乳糖苷酶活性。與野生型：野生型媒劑對照組相比，在rAAV9-40及rAAV9-42組中血清α-GAL活性升高超過11,000倍，且在rAAV9-41組高出6,600倍，而在rAAV9-WT治療的動物中的血清α-GAL活性僅高出野生型：野生型控制組780倍。除了rAAV9-41動物之肝係低於以rAAV9-WT治療的動物之肝以外，在rAAV9-40、rAAV9-42及rAAV9-41組中所評估之所有組織亦展現比rAAV9-WT治療的動物更高的α-GAL活性（ 圖 14B 至圖 14D）。
表4總結每一變體的血清和組織α-GAL活性。 表 4 ：與空的對照組相比，在靜脈投與變體後第 4星期血清與組織的α-GAL活性
在
Figure 02_image005
vg/kg劑量下的α-GAL 活性 		 
野生型：野生型媒劑 rAAV9-WT rAAV9-A rAAV9-005 rAAV9-D  
血清、組織 Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N  
血清 11 2 6 423.9 247 6 76503 18281 6 24553 6758 6 23242 4973 6  
腎臟 13 0 6 19 10 6 2052 520 6 468 112 6 350 94 6  
心臟 6 0 6 58 39 6 3951 892 6 799 188 6 758 158 6  
肝 37 2 6 432 241 6 23923 5646 6 4367 1145 6 4623 812 6  
Figure 02_image007
在vg/kg劑量下的α-GAL活性 		 
   野生型：野生型媒劑 rAAV9- 空的 rAAV9-WT rAAV9-A rAAV9-005 rAAV9-D
血清、組織 Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N
血清 11 2 6 1 1 5 11757 2914 5 484606 46941 5 162977 15844 5 160410 35695 5
腎臟 13 0 6 2 1 5 410 71 5 9824 1822 5 5321 962 5 3100 788 5
心臟 6 0 6 0 0 5 1439 343 5 22833 5065 5 10866 1499 5 7653 2700 5
肝 37 2 6 3 1 5 16734 1687 5 86567 7160 5 43162 4175 5 34543 10554 5
 自試驗2中
Figure 02_image009
vg/kg下，在劑量
Figure 02_image007
 vg/kg之α-GAL活性
野生型：野生型媒劑 rAAV9- 空的 rAAV9-WT rAAV9-A rAAV9-005 rAAV9-D
血清、組織 Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Act. nmol/ 小時 /mL 血清或蛋白質之 mg SEM N
血清 23 1 8 0 0 7 17938 2629 7 253154 60153 8 151451 55459 7 309866 75811 7
腎臟 1 0 8 0 0 7 613 87 7 4263 880 8 1968 589 7 5936 1052 7
心臟 7 1 8 5 3 7 2270 423 7 7445 1392 8 5172 1964 7 19168 4040 7
肝 42 2 8 5 1 7 60999 8904 7 142489 21338 8 29357 8232 7 93335 21958 7
血清 23 1 8 0 0 7 17938 2629 7 253154 60153 8 151451 55459 7 309866 75811 7
實例12. 變體中的GB3和lysoGb3受質降低之比較
本實例檢驗了經工程化α-GAL和WT α-GAL變體對GB3和lysoGb3降低的影響。 GB3 和 lysoGb3 受質定量
使用LC-MS方法分析來自血清及組織樣品之受質。在HPLC及LC-MS/MS中運行（Applied Biosystem API5000, Turbo Ion Spray Ionization，正離子模式）前先使用氯仿：甲醇(v/v 2:1)及甲酸提取樣品。
與兩個試驗中之rAAV9-空的對照組相比，觀察到在血清及組織中持續高α-GAL活性，在以表現α-GAL之病毒載體治療之小鼠中實質上降低GB3及lysoGb3受質兩者。 圖 15A 至 15D總結了經靜脈投與來自試驗1之2種不同劑量之rAAV9-A、rAAV9-005、rAAV9-D、rAAV9-WT、空的控制組後第4星期血清和組織的GB3（如實例10中所述）。 圖 16A 至 16D總結了經靜脈投與來自試驗1之2種不同劑量之rAAV9-A、rAAV9-005、rAAV9-D、rAAV9-WT、空的控制組後第4星期血清和組織的lysoGb3。 圖 17A 至 17D總結了經靜脈投與來自試驗2之2種不同劑量之rAAV9-A、rAAV9-005、rAAV9-D、rAAV9-WT、空的控制組後第4星期血清和組織的GB3（如實例10中所述）。 圖 18A 至 18D總結了經靜脈投與來自試驗2之2種不同劑量之rAAV9-A、rAAV9-005、rAAV9-D、rAAV9-WT、空的控制組後第4星期血清和組織的lysoGb3。在肝中，當α-GAL活性在病毒載體給藥後為最高時，所有病毒載體在以
Figure 02_image003
vg/kg劑量給藥後在降低接近零的受質方面均同樣有效。在心臟和腎臟中，rAAV9-A、rAAV9-005、rAAV9-D、rAAV9-41和rAAV9-42在降低GB3方面比rAAV9-WT更有效。其中的一個例外是以rAAV9-41治療之動物的腎臟。 表 5顯示經靜脈投與來自試驗1之在
Figure 02_image003
vg/kg和
Figure 02_image001
vg/kg劑量下之rAAV9-A、rAAV9-005、rAAV9-D、rAAV9-WT、rAAV9空的對照組後第4星期血清和組織的GB3和lysoGb3受質。 表 6顯示經靜脈投與來自試驗2之在
Figure 02_image003
vg/kg下之rAAV9-40、rAAV9-41、rAAV9-42、rAAV9-WT、rAAV9空的對照組後第4星期血清和組織的GB3和lysoGb3受質。
表 7顯示在投與來自試驗1及試驗2之rAAV9測試物品後第4星期的G3Stg/GLAko空的對照組（rAAV9-空的）之組織GB3受質降低百分比的比較。
與用空的載體治療的動物相比，在以表現經工程化α-GAL（在rAAV9-42治療之動物中高達95%）之病毒載體治療的動物中，心臟的GB3降低至86%或大於86%。相較之下，在試驗1和試驗2中，在以rAAV9-WT治療之動物的心臟中GB3分別僅降低70%和58%（ 表 7）。在此小鼠模型中，受質隨年齡增長而逐漸積累。因為在試驗2中使用較年長的小鼠，在本試驗中藉由rAAV9-WT之受質清除百分比低於試驗1。與在試驗1中以rAAV9-WT治療的動物腎臟中GB3降低74%相比，以rAAV9-A、rAAV9-005和rAAV9-D治療後腎臟GB3分別降低為96%、95%和93%（ 表 7）。在試驗2中，與以空的載體治療的動物相比，以rAAV9-40、rAAV9-41與rAAV9-42治療使腎臟GB3受質分別降低86%、51%及86%，而以rAAV9-WT治療的動物則降低79%（ 表 7）。在法布瑞氏症症狀小鼠中表現經工程化α-GAL變體之病毒載體劑量為2.5e11 vg/kg下，lysoGb3受質含量幾乎標準化成以媒劑治療之野生型:野生型小鼠的含量（ 表 5及 表 6）。 表 5 自試驗 1 靜脈投與後第 4 星期的血清及組織 GB3 及 lysoGb3 受質。
野生型：野生型媒劑 rAAV9- 空的對照 rAAV9-22 rAAV9-A rAAV9-005 rAAV9-D
血清、組織 Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N
血清 0.10 0.00 6 9.06 1.91 5 1.74 0.05 5 1.46 0.12 5 1.66 0.12 5 1.58 0.16 5
腎臟 0.88 0.11 6 13.82 1.57 5 3.58 0.95 5 0.48 0.04 5 0.64 0.05 5 0.92 0.25 5
心臟 0.00 0.00 6 36.38 2.59 5 15.20 1.10 5 2.42 0.17 5 4.84 0.84 5 2.82 0.40 5
肝 0.00 0.00 6 18.46 1.47 5 0.10 0.00 5 0.14 0.02 5 0.12 0.02 5 0.12 0.02 5
血清、組織 LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N
血清 2.89 0.12 6 261.80 15.36 5 2.21 0.17 5 3.12 0.17 5 0.79 0.10 5 0.61 0.04 5
腎臟 0.04 0.00 6 8.42 0.68 5 0.30 0.05 5 0.04 0.00 5 0.07 0.01 5 0.05 0.01 5
心臟 0.00 0.00 6 19.49 2.05 5 4.80 0.63 5 0.05 0.01 5 0.71 0.30 5 0.12 0.04 5
肝 0.08 0.00 6 66.27 3.00 5 0.57 0.05 5 0.09 0.00 5 0.15 0.02 5 0.12 0.00 5
    
野生型：野生型媒劑 rAAV9-WT rAAV9-A rAAV9-005 rAAV9-D  
血清、組織 Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N  
血清 0.10 0.00 6 5.08 0.79 5 1.58 0.07 5 2.08 0.20 5 1.85 0.18 5  
腎臟 0.88 0.11 6 9.17 1.35 5 1.40 0.33 5 1.93 0.42 5 1.17 0.10 5  
心臟 0.00 0.00 6 25.42 1.43 5 3.90 0.39 5 12.50 2.82 5 4.67 0.55 5  
肝 0.00 0.00 6 1.67 0.76 5 0.12 0.02 5 0.17 0.05 5 0.15 0.05 5  
血清、組織 LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N  
血清 2.89 0.12 6 29.13 10.39 5 0.66 0.02 5 1.76 0.83 5 1.01 0.41 5  
腎臟 0.04 0.00 6 3.70 0.88 5 0.07 0.01 5 0.27 0.11 5 0.10 0.01 5  
心臟 0.00 0.00 6 12.25 0.95 5 0.29 0.09 5 3.62 1.29 5 0.60 0.19 5  
肝 0.08 0.00 6 8.49 2.74 5 0.13 0.01 5 0.49 0.24 5 0.32 0.17 5  
表 6 在自試驗 2 靜脈投與後第 4 星期血清及組織 GB3 及 lysoGb3 受質。
野生型：野生型媒劑 rAAV9- 空的 rAAV9-WT rAAV9-40 rAAV9-41 rAAV9-42
血清、組織 Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N Gb3 ug/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N
血清 0.1 0.0 6 9.9 0.7 7 1.4 0.1 7 1.0 0.1 8 1.5 0.1 7 1.0 0.1 7
腎臟 2.3 0.5 6 17.0 1.2 7 3.5 0.6 7 2.5 0.6 8 8.4 2.3 7 2.4 0.4 7
心臟 0.0 0.0 6 35.6 3.0 7 10.8 0.8 7 2.7 0.7 8 4.8 1.6 7 1.9 0.2 7
肝 0.0 0.0 6 28.9 2.2 7 0.1 0.0 7 0.1 0.0 8 0.1 0.0 7 0.1 0.0 7
血清、組織 LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N LysoGb3 ng/mL 血清或蛋白質之 mg SEM N
血清 1.5 0.1 6 568.1 33.0 7 11.8 1.1 7 2.0 0.2 7 2.7 0.6 6 2.1 0.1 7
腎臟 0.1 0.0 6 16.9 1.2 7 0.5 0.1 7 0.2 0.1 8 0.4 0.2 7 0.1 0.0 7
心臟 0.0 0.0 6 29.9 2.5 7 6.4 0.8 7 1.0 0.8 8 1.7 1.1 7 0.2 0.0 7
肝 0.1 0.0 6 115.4 8.2 7 0.3 0.0 7 0.2 0.1 8 0.2 0.1 7 0.1 0.0 7
表 7 自 2 個試驗（試驗 1 和試驗 2 ）投與 rAAV9 測試物品後第 4 星期， G3Stg/GLAko 空的對照組（ rAAV9-MY011 ）中組織 GB3 受質降低百分比之比較
試驗 1
在 2.5e11vg/kg 劑量下從空的組別降低之組織 GB3% rAAV9-WT rAAV9-A rAAV9-005 rAAV9-D
腎臟 74% 96% 95% 93%
心臟 58% 93% 86% 92%
肝 99% 99% 99% 99%
試驗 2
rAAV9-WT rAAV9-40 rAAV9-41 rAAV9-42
腎臟 79% 86% 51% 86%
心臟 70% 92% 87% 95%
肝 99.7% 99.7% 99.6% 99.6%
實例 13 - 表現密碼子優化之經工程化之 α-GAL 變體的質體的活體外評估。
本實例檢驗了在兩種不同細胞系中各種密碼子優化之α -GAL變體的α-GAL活性。
經工程化之α -GAL變體D及004之DNA序列進一步經密碼子優化，以改善來自人類肝、腎臟及心臟組織之表現。針對經工程化α -GAL變體D及004各生成至多六個單獨的DNA序列。這些隨後整合至質體中且用於轉染。
根據製造商的指示，使用脂質體3000試劑套組（Thermo Fisher Scientific）以表現不同α-GAL變體的質體來轉染Huh7（人類肝瘤）或HEK293（人類胚胎腎）細胞。簡言之，於12孔盤形式中將細胞以1 mL生長培養基在每孔中接種125,000個細胞，且維持在37C、5% CO 2過夜。  次日，在轉染之前添加一新鮮培養基（每個孔1 mL）。對於每個質體，將1 µg的質體DNA添加至2 ul的P3000試劑、1.5 µl的脂質體3000和足夠的OptiMEM培養基中以補到100 ul，並在室溫下培養10至15分鐘。此混合物隨後添加至細胞中且在37oC、5% CO 2下過夜培養。 次日，換新培養基，且在收集上清液進行α-GAL活性分析之前再將細胞培育另一日。
收集來自經轉染細胞的上清液且測定其α-GAL酶活性。與Huh7細胞中之WT α -GAL或非優化酶D相比，D之所有密碼子優化之變體導致顯著較高之α -GAL活性。 ( 圖 19A) 。相對的，在HEK293細胞中，只有3個優化變體在上清液中顯示出最佳活性（ 圖 19C）。在經工程化變體004中，只有一個密碼子優化變體在Huh7及HEK293細胞中顯示出相對良好的活性（圖19B、19D）。隨後將表現密碼子優化之工程化變體中之兩者的質體包裝至rAAV9病毒中且在活體內測試，如實例13中所描述。 實例 14 - 表現密碼子優化之經工程化之 α-GAL 變體的質體的活體內評估。
此實例檢驗了法布瑞氏症模型小鼠（G3Stg/GLAko）中各種密碼子優化之α -GAL變體的α-GAL活性。
以4種不同劑量
Figure 02_image011
、
Figure 02_image013
、
Figure 02_image015
及
Figure 02_image003
vg/kg之rAAV9-D3和rAAV9-004-3、或在
Figure 02_image003
vg/kg下以空的對照組rAAV9-空的向10至12周齡之G3Stg/GLAko雄性小鼠投與一次，並在給藥後監測4星期。具有相同基因背景之野生型：野生型和野生型：CAR同胞小鼠係用作對照，且僅以媒劑投與。基於給藥前體重以半隨機過程將小鼠分配至各測試物品組，以確保平衡組別。在試驗期間內於多個時間點收集血清。在試驗期間透過眼窩或尾部靜脈採血收集血液，並在終止時經由心臟穿刺收集血液並處理以收集血清。在試驗結束時，收集末端血清，且將小鼠灌注以用於收集器官(包括肝、腎臟及心臟)，隨後在乾冰中急速冷凍且儲存於
Figure 02_image017
。分析評估包括量測α-GAL酶活性，以及分析在血清和各種組織中的受質含量。
使用0.5% Triton-X 100及1.5
Figure 02_image019
Halt蛋白酶抑制劑雞尾酒混合物、無EDTA、經離心及收集用於分析測定法之上清液將組織在含有10 mM HEPES之溶解緩衝液中均質化。使用螢光受質量測上清液或血清中之α半乳糖苷酶活性。簡言之，將2µl之生物樣品與15 uL 4-MU-a-gal受質溶液（Research Products International Company，型號# M65400）與a-半乳糖苷酶B抑制劑（N-乙醯基-D-半乳糖胺，Sigma型號#A-2795）一起在37°C下培育60分鐘。藉由添加200 µL甘胺酸碳酸鹽終止溶液（pH 10.7）停止酶反應。該4-MU產品係藉由螢光盤讀取器在激發波長360 nm及發射波長465 nm下量測。測試樣品中的4-MU濃度係自相同反應盤中的4-MU校準曲線計算而得。組織活性經標準化為通過BCA測定法所測定的總蛋白質濃度（Thermo Scientific，型號23225）。
以劑量範圍2.5e8 vg/kg至2.5e11 vg/kg向雄性G3Stg/GLAko小鼠靜脈內投與rAAV9-D3及rAAV9-004-3 後，在 G3Stg/GLAko 小鼠中觀察到 α-GAL 的劑量依賴性表達，導致在試驗的4星期內血清中α-GAL活性持續更高（ 圖 20A）。如於以媒劑治療之WT動物所量測，以劑量為2.5e11 vg/kg之rAAV9-D3及004-3 給藥的動物血清中的α-GAL活性比WT小鼠中的正常α-GAL活性高出超過2個對數數量級。以rAAV9-空的治療的G3Stg/GLAko小鼠在循環中具有無法偵測的α-GAL含量。在以rAAV9-D3及004-3治療之動物中的組織（腎臟、心臟及肝）中，觀察到α-GAL活性為劑量依賴性增加（ 圖 20B 至 20D）。在rAAV9- D3和rAAV9-004-3之劑量為或高於2.5e10vg/kg時觀察到α-GAL活性顯著高於正常野生型含量。 實例 15 - 用表現密碼子優化之經工程化之 α-GAL 變體的質體在活體內評估 GB3 及 lysoGb3 受質。
此實例檢驗了法布瑞氏症模型小鼠（G3Stg/GLAko）中各種經密碼子優化之α -GAL變體中的GB3及lysoGb3受質的降低。
如實例14中所解釋，G3Stg/GLAko雄性小鼠以4個不同劑量之rAAV9-D3及rAAV9-004-3投與。此外，如先前在實例14中所提及，組織經均質化。使用LC-MS方法分析來自血清及組織樣品之受質。在HPLC及LC-MS/MS中運行（Applied Biosystem API5000, Turbo Ion Spray Ionization，正離子模式）前先使用氯仿：甲醇(v/v 2:1)及甲酸提取樣品。
與rAAV9-空的對照相比，觀察到在以rAAV9-D3及rAAV9-004-3治療之小鼠中GB3及lysoGb3受質兩者以劑量依賴性模式降低（ 圖 21A 至 21H）。在最高劑量2.5e11vg/kg下，以rAAV9-D3或rAAV9-044-3治療之動物導致GB3及lysoGb3受質含量在關鍵目標組織(諸如腎臟及心臟)中減少至正常WT含量。也觀察到肝和血清的相似趨勢。 等效方案及範疇
熟悉本技藝者將認識到或者能夠僅使用常規實驗即可確定本文所描述之本發明特定實施例之許多等效方案。本發明之範疇並不意欲局限於以上描述，而是如以下申請專利範圍中所闡述：
無
圖 1為如本文所述在泛素化啟動子（在本文中通常稱為「rAAV9」）的控制下，包含野生型GAL之例示性rAAV9的載體圖表。
圖 2係顯示在如本文所描述之法布瑞氏症（GLAko）小鼠模型中以rAAV9注射後12星期期間血清中α半乳糖苷酶之含量的圖表。
圖 3A 至圖 3M是顯示在各種組織中 α半乳糖苷酶的表現，以及在法布瑞氏GLAko小鼠中投與rAAV9-WT後，在各種組織中GB3減少的一系列圖表。 圖 3A顯示與rAAV9–空的（「空的」係指不含任何轉殖基因之AAV9）及未經治療之對照相比，在投與rAAV9之後，在肝中表現α半乳糖苷酶。 圖 3B顯示與rAAV9–空的及未經治療對照相比，在投與rAAV9-WT之後，在腎臟中表現α半乳糖苷酶。 圖 3C顯示與及未經治療對照相比，在投與rAAV9-WT之後，在心臟中表現α半乳糖苷酶。 圖 3D顯示與rAAV9 –空的(空的載體)及未經治療對照相比，在投與rAAV9-WT之後，在十二指腸中表現α半乳糖苷酶。 圖 3E顯示與rAAV9–空的及未經治療對照相比，在投與rAAV9-WT之後，在結腸中表現α半乳糖苷酶。 圖 3F顯示與ERT及未經治療對照相比血清中GB3含量。 圖 3G顯示與ERT及未經治療對照相比肝中GB3含量。 圖 3H顯示與ERT及未經治療對照相比腎臟中GB3含量。 圖 3I顯示與ERT及未經治療對照相比心臟中GB3含量。 圖 3J顯示與ERT及未經治療對照相比血清中lysoGB3含量。 圖 3K顯示與ERT及未經治療對照相比肝中lysoGB3含量。 圖 3L顯示與ERT及未經治療對照相比腎臟中lysoGB3含量。 圖 3M顯示與ERT及未經治療對照相比心臟中lysoGB3含量。
圖 4A至 圖 4G是顯示在法布瑞氏模型(G3Stg/GLAko)小鼠中投與rAAV9後，在各種組織中表現α半乳糖苷酶的一系列圖表。 圖 4A顯示與媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比18星期，血清中的劑量依賴性α半乳糖苷酶活性。 圖 4B顯示與空的載體及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，肝中的劑量依賴性α半乳糖苷酶活性增加。 圖 4C顯示與空的載體及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，腎臟中的劑量依賴性α半乳糖苷酶活性增加。 圖 4D顯示與空的載體及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，心臟中的劑量依賴性α半乳糖苷酶活性增加。 圖 4E顯示與空的載體及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，十二指腸中的劑量依賴性α半乳糖苷酶活性增加。 圖 4F顯示與空的載體及媒劑（調配物緩衝液）相比，結腸中的劑量依賴性α半乳糖苷酶活性增加。 圖 4G顯示與空的載體及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，腦中的劑量依賴性α半乳糖苷酶活性增加。
圖 5A至 圖 5F是顯示在嚴重法布瑞氏模型小鼠中投與rAAV9後，在各種組織中GB3減少的一系列圖表。 圖 5A顯示與rAAV9-空的及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，在投與rAAV9-WT之後，肝中的GB3降低。 圖 5B顯示與rAAV9-空的及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，在投與rAAV9-WT之後，腎臟中的GB3降低。 圖 5C顯示與rAAV9-空的及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，在投與rAAV9-WT之後，心臟中的GB3降低。 圖 5D顯示與rAAV9-空的及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，在投與rAAV9-WT之後，十二指腸中的GB3降低。 圖 5E顯示與rAAV9-空的及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，在投與rAAV9-WT之後，結腸中的GB3降低。 圖 5F顯示與rAAV9-空的及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比，在投與rAAV9-WT之後，腦中的GB3降低。 圖 5G顯示與rAAV9-空的相比，肝中劑量依賴性之lysoGb3降低。 圖 5H顯示與rAAV9-空的相比，腎臟中劑量依賴性之lysoGb3降低。 圖 5I顯示與rAAV9-空的相比，心臟中劑量依賴性之lysoGb3降低。 圖 5J顯示與rAAV9-空的相比，十二指腸中劑量依賴性之lysoGb3降低。 圖 5K顯示與rAAV9-空的相比，結腸中劑量依賴性之lysoGb3降低。 圖 5L顯示與rAAV9-空的相比，腦中劑量依賴性之lysoGb3降低。
圖 6係顯示投與增加濃度之rAAV9-WT後，與嚴重法布瑞氏小鼠中之空的載體（rAAV9-空的）及媒劑（即，僅調配物緩衝液）相比體重增加的圖表。
圖 7A至 圖 7B是顯示投與rAAV9-WT後，在27至28週齡嚴重法布瑞氏症模型小鼠的腎臟功能改善的一系列圖表。 圖 7A顯示血清BUN之劑量依賴性標準化。 圖 7B顯示在投與rAAV9-WT後尿液白蛋白含量之標準化。
圖 8A至 圖 8C是顯示嚴重法布瑞氏症小鼠模型（G3Stg/GLAko）之爪墊免疫組織化學的圖。 圖 8A顯示法布瑞氏症模型小鼠之爪墊的免疫組織化學切片，其顯示背根神經中之空泡降低。 圖 8B顯示在法布瑞氏症模型小鼠中PGP9.5 （神經標記物）染色中，劑量依賴性標準化之免疫組織化學切片。 圖 8C顯示在法布瑞氏症模型小鼠中MPZ （許旺細胞標記物）染色中，劑量依賴性增加之免疫組織化學切片。
圖 9A 至圖 9I顯示腎臟、心臟和背根神經節（DRG）的組織病理學特徵的圖。 圖 9A顯示在野生型小鼠-腎臟收集管中觀察到的p62（自噬標記物）染色。 圖 9B顯示在法布瑞氏症-未治療小鼠腎臟收集管中觀察到的p62染色。 圖 9C顯示當用6.25e12vg/kg之rAAV9-WT治療時，在法布瑞氏症小鼠-腎臟收集管中觀測到的p62染色。 圖 9D顯示在野生型小鼠-心臟中觀察到的p62染色。 圖 9E顯示在法布瑞氏症-未治療小鼠心臟中觀察到的p62染色。 圖 9F 顯示當用 6.25e12vg/kg 之 rAAV9-WT 治療時，在法布瑞氏症小鼠 - 心臟中觀察到的 p62 染色。圖9G顯示在野生型小鼠-DRG中觀察到的CD68染色。 圖 9H顯示在經法布瑞氏症-未治療小鼠-DRG中觀察到的CD68染色。 圖 9I顯示當用6.25e12vg/kg之rAAV9-WT治療時，在法布瑞氏症小鼠-DRG中觀察到的CD68染色。
圖 10A 至 10F顯示在以水動力尾靜脈注射表現a-GAL變體之質體後2天，在法布瑞氏症小鼠的之血清和組織中α-GAL變體之暴露。 圖 10A顯示血清中α-GAL變體的暴露量。 圖 10B顯示腎臟中α-GAL變體的暴露量。 圖 10C 顯示心臟中 α-GAL 變體的暴露量。圖10D顯示血清中α-GAL變體的暴露量。圖10E顯示腎臟中α-GAL變體的暴露量 。圖10F顯示心臟中α-GAL變體的暴露量 。
圖 11A為顯示用具有泛素化啟動子之基於rAAV9之構築體或具有肝特異性啟動子之基於rAAV8之構築體注射後12星期期間，在血清中之α半乳糖苷酶含量的圖表。 圖 11B顯示與rAAV8-WT以及對劑量為1 mg/kg之α半乳糖苷酶蛋白及未經治療之對照相比，在投與rAAV9-WT後在腎臟中α半乳糖苷酶的表現。 圖 11C顯示與rAAV8-WT以及對劑量為1 mg/kg之α半乳糖苷酶蛋白及未經治療之對照相比，在投與rAAV9-WT後在腎臟中GB3之降低百分比。
圖 12A-12B是顯示投與rAAV9-WT和rAAV8-WT後，在27至28週齡的法布瑞氏症模型小鼠中的腎臟功能的一系列圖表。 圖 12A顯示具有rAAV9-WT之血中尿素氮（BUN）之劑量依賴性標準化。 圖 12B顯示具有rAAV8-WT之血清BUN變化。
圖 13A 至 13E是顯示在以具有表現α-GAL變體之rAAV9治療嚴重法布瑞氏症小鼠後，α-GAL變體之血清和組織半乳糖苷酶活性的一系列圖表。 圖 13A顯示試驗1的
Figure 02_image001
vg/kg劑量下之血清α半乳糖苷酶活性。 圖 13B顯示根據試驗1的
Figure 02_image003
劑量下之血清α半乳糖苷酶活性。 圖 13C顯示根據試驗1在兩種不同劑量下之腎臟α-半乳糖苷酶活性。 圖 13D顯示根據試驗1在兩種不同劑量下之心臟α-半乳糖苷酶活性。 圖 13E顯示根據試驗1在兩種不同劑量下之肝α-半乳糖苷酶活性。
圖 14A 至 14D 為顯示根據試驗 2 ，在以表現 α-GAL 變體之 rAAV9 治療嚴重法布瑞氏症小鼠後， α-GAL 變體之血清及組織 α- 半乳糖苷酶含量的一系列圖表。圖14A顯示來自試驗2中
Figure 02_image003
vg/kg劑量下之血清α半乳糖苷酶活性。圖14B顯示根據試驗2在兩種不同劑量下之腎臟α-半乳糖苷酶活性。 圖 14C顯示根據試驗2在兩種不同劑量下之心臟α-半乳糖苷酶活性。 圖 14D顯示根據試驗2在兩種不同劑量下之肝α-半乳糖苷酶活性。
圖 15A 至 15D為顯示根據試驗1，以表現α-GAL變體的rAAV9治療之小鼠之血清和組織中存在GB3的一系列圖表。 圖 15A顯示血清GB3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。 圖 15B顯示腎臟GB3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。 圖 15C顯示心臟GB3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。 圖 15D顯示肝GB3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。
圖 16A 至 16D為顯示根據試驗1，以表現α-GAL變體的rAAV9治療之小鼠之血清和組織中存在lysoGb3 的一系列圖表。 圖 16A顯示血清lysoGb3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。 圖 16B顯示腎臟lysoGb3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。 圖 16C顯示心臟lysoGb3在接受變體治療時的反應。 圖 16D顯示肝lysoGb3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。
圖 17A 至 17D為顯示根據試驗2，以表現α-GAL變體的rAAV9治療之小鼠之血清和組織中存在GB3的一系列圖表 。 圖 17A顯示血清GB3在接受變體治療時的反應。 圖 17B顯示腎臟GB3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。 圖 17C顯示心臟GB3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。 圖 17D顯示肝GB3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。
圖 18A 至 18D為顯示根據試驗2，以表現α-GAL變體的rAAV9治療之小鼠之血清和組織中存在lysoGb3 的一系列圖表。 圖 18A顯示血清lysoGb3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。 圖 18B顯示腎臟lysoGb3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。 圖 18C顯示心臟lysoGb3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。 圖 18D顯示肝lysoGb3在接受表現α-GAL變體之rAAV9治療時的反應。
圖 19A 至 19D為顯示在以表現經密碼子優化的α-GAL變體004及D之質體進行轉染之後的HUH-7及HEK293細胞中之活體外α‐GAL活性的一系列圖表。 圖 19A為顯示與WT α-GAL及非質體相比，以質體變體(包含D、D1-D6)轉染的HUH-7細胞內活體外α-GAL活性的柱狀圖。 圖 19B 為顯示與 WT α-GAL 及非質體相比，以質體變體 ( 包含 D 、 D1-D6) 轉染的 HEK293 細胞內活體外 α-GAL 活性的柱狀圖。圖19C為顯示與WT α-GAL及非質體相比，以質體變體(包含004、004-1至004-5)轉染的HUH-7細胞內活體外α-GAL活性的柱狀圖。 圖 19D為顯示與WT α-GAL及非質體相比，以質體變體(包含004、004-1至004-5)轉染的HEK293細胞內活體外α-GAL活性的柱狀圖。
圖 20A 至 20D為顯示以rAAV9-D3及rAAV9-004-3治療的嚴重法布瑞氏症模型小鼠中各種組織的劑量依賴性α-GAL活性的一系列圖表 。 圖 20A為以rAAV9-D3及rAAV9-004-3治療的嚴重法布瑞氏症模型小鼠之血清中劑量依賴性α-GAL活性的柱狀圖。 圖 20B為以rAAV9-D3及rAAV9-004-3治療的嚴重法布瑞氏症模型小鼠之腎臟中劑量依賴性α-GAL活性的柱狀圖。 圖 20C為以rAAV9-D3及rAAV9-004-3治療的嚴重法布瑞氏症模型小鼠之心臟中劑量依賴性α-GAL活性的柱狀圖。 圖 20D為以rAAV9-D3及rAAV9-004-3治療的嚴重法布瑞氏症模型小鼠之肝中劑量依賴性α-GAL活性的柱狀圖。
圖 21A 至 21H顯示以rAAV9-D3和rAAV9-004-3治療嚴重法布瑞氏症模型小鼠中各種組織之受質的劑量依賴性 降低的一系列圖表 。 圖 21A顯示在血清中以rAAV9-D3和rAAV9-004-3治療嚴重法布瑞氏症模型小鼠中GB3劑量依賴性降低的圖表。 圖 21B顯示在血清中以rAAV9-D3和rAAV9-004-3治療嚴重法布瑞氏症模型小鼠中lysoGb3劑量依賴性降低的圖表。 圖 21C顯示以rAAV9-D3和rAAV9-004-3治療嚴重法布瑞氏症模型小鼠在腎臟中GB3劑量依賴性降低的圖表。 圖 21D顯示以rAAV9-D3和rAAV9-004-3治療嚴重法布瑞氏症模型小鼠在腎臟中lysoGb3劑量依賴性降低的圖表。 圖 21E顯示以rAAV9-D3和rAAV9-004-3治療嚴重法布瑞氏症模型小鼠在心臟中GB3劑量依賴性降低的圖表。 圖 21F顯示以rAAV9-D3和rAAV9-004-3治療嚴重法布瑞氏症模型小鼠在心臟中lysoGb3劑量依賴性降低的圖表。 圖 21G顯示以rAAV9-D3和rAAV9-004-3治療嚴重法布瑞氏症模型小鼠在肝中GB3劑量依賴性降低的圖表。 圖 21H顯示以rAAV9-D3和rAAV9-004-3治療嚴重法布瑞氏症模型小鼠在肝中lysoGb3劑量依賴性降低的圖表。 定義
大致或約：如本文所使用，術語「大約」當應用於所關注之一或者 多個數值時係指與所陳述參考值類似之數值。在某些實施例中，除非另外說明或者從上下文可看出，否則術語「大約」係指在任一方向上(大於或者小於)落於所述參考值之25%、20%、19%、18%、17%、16%、15%、14%、13%、12%、11%、10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%或者更小之數值範圍內(排除該數目會超過可能值的100%)。應當理解，當術語「約」或「大約」用於修改所述之參考值時，該所述之參考值本身與所述之參考值兩側接近所述參考值的數值一起被包括。
投與：術語「投與(administer)」、「投與(administration)」及「投與(administering)」係指向有需要之個體（例如，受法布瑞氏症影響之個體）提供本發明之組成物（例如，表現α半乳糖苷酶之重組基因治療載體）。
組合投與：如本文所用，術語「以組合方式投與」或「組合投與」意指於同時或在間隔期間向個體投與兩種或多種試劑，使得各試劑對患者之作用可重疊。在一些實施例中，試劑之投與係間隔足夠近，從而達成組合（例如，協同性）作用。
同種異體：如本文所用，同種異體係指衍生自與被引入之材料的個體相同物種但為不同動物的任何材料。當一或多個基因座上的基因不相同時，該二或多個個體被稱為彼此同種異體。在一些態樣中，來自同一物種個體的同種異體材料可能在基因上有足夠差異，從而使抗原相互作用。
胺基酸取代：術語「胺基酸取代」係指將存在於親本或參考序列（例如，野生型GLA序列）的胺基酸殘基置換成另一胺基酸殘基。胺基酸可在親本或參考序列（例如，野生型GLA多肽序列）中取代，例如，經由化學肽合成或經由本領域中已知的重組方法。因此，所謂「在位置X處取代」係指將位置X處存在的胺基酸取代為替代性胺基酸殘基。在一些態樣中，取代模式可根據AnY模式來描述，其中A為對應於自然或原本存在於位置n處之胺基酸之單一字母代碼，且Y為取代胺基酸殘基。在其它態樣中，取代模式可根據An(YZ)模式來描述，其中A為與用來取代在位置X處之天然或最初存在的胺基酸的胺基酸殘基相對應的單一字母代碼，且Y和Z為取代胺基酸殘基。
用於遺傳編碼胺基酸之縮寫為習知的且如下：丙胺酸（Ala或A）、精胺酸（Arg或R）、天門冬醯胺（Asn或N）、天門冬胺酸（Asp或D）、半胱胺酸（Cys 或C）、麩胺酸（Glu或E）、麩醯胺酸（Gln或Q）、組胺酸（His或H）、異白胺酸（Ile或I）、白胺酸（Leu或L）、離胺酸（Lys或K）、甲硫胺酸（Met或M）、苯丙胺酸（Phe或F）、脯胺酸（Pro或P）、絲胺酸（Ser或S）、蘇胺酸（Thr或T）、色胺酸（Trp或W）、酪胺酸（Tyr或Y）、及纈胺酸（Val或V）。當使用三個字母的縮寫時，除非明確地前面加上「L」或「D」，或對於所使用縮寫的上下文中是清楚的，否則該胺基酸可以是關於　-碳（C 　）的L或D-構型。在本文所述之各種實施例中，野生型GLA序列中之一或多個胺基酸可經不同胺基酸取代，從而導致α-GAL蛋白之變體。
在蛋白質或多肽胺基酸序列中之取代在性質上可為保守性地或非保守性的。保守性的胺基酸取代係指用具有類似側鏈的不同殘基來取代殘基，且因此通常涉及以相同或類似定義的胺基酸類別中的胺基酸來取代在多肽中之胺基酸(例如，α-GAL胺基酸序列)。通過舉例而非限制性方式，分別為具有脂族側鏈之胺基酸可經另一脂族胺基酸（例如 ，丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、及異白胺酸）取代；具有羥基側鏈之胺基酸經另一具有羥基側鏈之胺基酸（例如 ，絲胺酸及蘇胺酸）取代；具有芳族側鏈之胺基酸經具有芳族側鏈之另一胺基酸（例如 ，苯丙胺酸、酪胺酸、色胺酸、及組胺酸）取代；具有鹼性側鏈之胺基酸經另一具有鹼性側鏈之胺基酸（例如 ，離胺酸及精胺酸）取代；具有酸性側鏈之胺基酸經另一具有酸性側鏈之胺基酸（例如 ，天門冬胺酸或麩胺酸）取代；及/或疏水性或親水性胺基酸經另一疏水性或親水性胺基酸置換。非保守性的胺基酸取代係以具有顯著不同側鏈特性的胺基酸來取代在多肽(例如，α-GAL胺基酸序列)中之胺基酸。通過舉例而非限制性方式，例示性非保守性取代可爲經鹼性或脂族胺基酸取代之酸性胺基酸；經小胺基酸取代之芳族胺基酸；及經疏水性胺基酸取代之親水性胺基酸。
在本發明的上下文中，取代（即使當其稱為胺基酸取代時）係在核酸含量下進行，亦即，以替代性胺基酸殘基取代胺基酸殘基係藉由以編碼第二胺基酸之密碼子取代編碼第一胺基酸之密碼子。
動物：如本文所使用之術語「動物」係指動物界之任何成員。在一些實施例中，「動物」係指處於任何發育階段之人類。在一些實施例中，「動物」係指處於任何發育階段之非人類動物。在某些實施例中，該非人類動物為哺乳動物(例如，嚙齒動物、小鼠、大鼠、兔、猴、狗、貓、綿羊、牛、靈長類動物、或豬)。在一些實施例中，動物包括但不限於哺乳動物、鳥、爬蟲類、兩棲動物、魚、及昆蟲。在一些實施例中，動物可為基因轉殖動物、經基因工程化之動物、或克隆物。
血中尿素氮：如本文所用，術語「血中尿素氮」或「BUN」係指血液中之尿素含量。與腎臟相關之病理學中的血中尿素氮升高。慢性腎臟疾病是法布瑞氏症的主要特徵之一，其導致末期腎衰竭。腎絲球足細胞中的Gb-3沉積被認為至少部分導致法布瑞氏症中的蛋白尿或進展速率或腎臟侵犯的嚴重程度。血中尿素氮量測腎臟從血液中移除尿素的效率。高BUN含量表示腎功能不佳。
嵌合體：如本文所用，「嵌合」為具有兩個或多個不均勻或異質部分或區域之實體。舉例來說，嵌合分子可包含包含有GLA多肽之第一部分，及包含有第二治療性蛋白質（例如，具有不同酶活性之蛋白、抗原結合片段、或可延長α-GAL的血漿半衰期的片段，例如，抗體之Fc區）之第二部分（例如，與第一部分遺傳融合）。
密碼子取代：如本文所用，在序列優化之上下文中，術語「密碼子取代」或「密碼子置換」係指將參考核酸序列中存在之密碼子用另一密碼子置換。密碼子可在參考核酸序列中取代，舉例來說，經由化學肽合成或經由本領域中已知的重組方法。因此，在核酸序列（例如，mRNA）或核酸序列（例如，mRNA）的特定區域或子序列中的特定位置之所謂「取代」或「置換」係指以替代的密碼子取代該位置或區域的密碼子。
密碼子優化：術語「密碼子優化(codon optimized)」或「密碼子優化(codon optimization)」係指編碼蛋白質（例如，GLA基因）之多核苷酸的密碼子中之變化，使得該經編碼之蛋白質在例如細胞或生物體中更有效表現。在一些實施例中，編碼α-GAL酶之多核苷酸可經密碼子優化，以從宿主生物體及/或細胞類型中優化生產，這些宿主生物體及/或細胞類型選自用來表現之考慮GC含量、隱蔽剪接位點、轉錄終止信號、可能影響RNA穩定性的修飾物、及核酸次級結構、以及任何其它所關注因子。
經工程化變體：術語「經工程化α-GAL變體」或「經工程化變體」係指GAL蛋白質，其中當與野生型α-GAL相比時，一或多個胺基酸殘基已藉由取代、缺失或插入來修飾。在一些實施例中，經工程化變體系以改善的療效及藥物動力學圖譜來表徵，例如，由於修飾蛋白質之結構特性。在一些實施例中，經工程化α-GAL變體加強清除來自組織中的受質，諸如血清、腎臟、心臟及/或肝。經工程化變體可重組合成或製造。
Gb3：如本文所用，術語「Gb3」或「神經醯胺三己糖苷」或「GB3」或「gb3」或「CD77」或「GL-3」係指在法布瑞氏症溶酶體中積累的一種醣神經鞘脂質類型，且被視為主要之致病性代謝物。GB3是在A4GALT的催化下由半乳糖與乳糖神經酰胺產生α連接而形成的。GB3在末端α連接處被GLA水解。在所有器官（尤其是心臟和腎臟）以及許多細胞和尿液中之GB3積累都是法布瑞氏症的典型特徵。此類積累係伴隨中風、心臟疾病（肥厚性心肌症、心律和傳導系統病症、冠心病、瓣膜異常等）及慢性蛋白尿腎衰竭的風險明顯增加。在一些實施例中，去醯化GB3或lysoGb3亦為法布瑞氏症之有價值的生物標記物。
基因：如本文所用，術語「基因」係指編碼蛋白質或多肽之DNA區域（例如，如本文所述之α-半乳糖苷酶），以及調節蛋白質或多肽之製造的所有DNA區域，無論此類調控序列是否與編碼及/或轉錄序列相鄰。因此，基因包括但不限於啟動子序列、終止子、轉譯調控序列(諸如核糖體結合位點及內部核糖體進入位點、增強子、沉默子、絕緣子、邊界元件、複製起始點、基質附著區及基因座控制區。
GLA 基因：如本文中所用，術語「GLA基因」或「半乳糖苷酶基因」或「α-半乳糖苷酶基因」或「α-半乳糖苷酶基因」係指編碼分解神經醯胺三己糖苷之酶α-半乳糖苷酶之基因。GLA基因中的基因突變導致α-半乳糖苷酶的酵素功能缺陷。在人類中，GLA基因係位於Xq22.1，其為X染色體在位置22.1之長（q）臂。GLA基因的一些其它名稱可能被稱為包括AGAL人類、阿糖苷酶α、α-D-半乳糖苷酶A、α-D-半乳糖苷酶半乳糖水解酶、α-半乳糖苷酶、α-半乳糖苷酶A、神經醯胺三己糖苷、GALA、半乳糖苷酶或蜜二糖酶。
半乳糖苷酶：如本文所使用之術語「半乳糖苷酶」或「α半乳糖苷酶A」或「α-半乳糖苷酶A」或「α-GAL」係指由GLA基因編碼之酶。人類α半乳糖苷酶(EC 3.2.1.22)為水解來自醣脂及醣蛋白之末端α半乳糖基部分之溶酶體酶。如本文中所用，該術語α-GAL可指野生型酶或其變體。α半乳糖苷酶A的缺乏會導致法布瑞氏 症（也稱為血管角質瘤、安德森-法布瑞氏症、遺傳性異位脂沉積症、α-半乳糖苷酶A缺乏症、α-GAL缺乏症、以及神經醯胺三己糖苷酶缺乏症），這是一種X-連鎖的先天性醣神經鞘脂質分解错误。在本文所述之各種實施例中，提供一種用於治療法布瑞氏症之基因治療平台。
「 改善酶特性」：術語「改良酶特性」係指相對於參考α-GAL多肽之相同特性或屬性的經工程化α-GAL多肽（例如，與野生型α-GAL多肽或其它經工程化α-GAL多肽相比）改善任何性質或屬性之-GAL多肽。改善特性包括但不限於：諸如基因表現增加、蛋白質生成增加、熱活性增加、熱穩定性增加、在各種pH值下活性增加、穩定性增加、酶活性增加、受質專一性或親和力增加、專一性活動增加、提高對受質及/或產品抑制的抗性、化學穩定性增加、化學選擇性改善、溶劑穩定性改善、對酸性、中性或鹼性pH的耐受性增加、對蛋白酶解活性的耐受性增加（即： 降低對蛋白酶解的敏感度）、降低聚合、溶解度增加、免疫原性降低、轉譯後修飾（例如， 醣基化）改善、溫度圖譜改變、細胞攝取增加、溶酶體穩定性增加、耗盡細胞中GB3的能力增加、生成α-GAL的細胞的分泌增加等之性質。在各種實施例中，本發明所包括之基因治療載體包含編碼相對於參考α-GAL多肽包含有一或多個改善酶特性之α-GAL多肽的核酸序列。在一些實施例中，該編碼展現一或多種改善酶特性的α--GAL多肽之核酸序列係經密碼子優化。
在各種實施例中，經密碼子優化及/或經工程化α--GAL變體展現一或多種前述的改善特性。在一特定實施例中，具有於SEQ ID NO:10或SEQ ID NO: 50中所闡述之胺基酸序列的α-GAL變體具有改善的血清及溶酶體穩定性，且具有於SEQ ID NO:14或SEQ ID NO: 55中所闡述之胺基酸序列的α-GAL變體比野生型α-GAL多肽具有增加專一性催化活性。
「 增加酶活性」：術語「增加的酶活性」係指與參考α-GAL酶(例如，野生型α-GAL酶或另一種經工程化變體)相比，使用特定含量之工程化α-GAL酶之專一性活性(例如，產品製造/時間/蛋白重)的增加或受質轉化成產物的百分比(例如，在指定期間內受質起始含量轉化為產物的百分比)的增加。本領域已知及/或那些本文所述的任何適合的方法可用於測定酶活性。與酶活性相關的任何特性都可能受到影響，包括K m、V max或k cat的典型酶特性，其變化可導致酶活性增加。酶活性之改善可以是相應的野生型酶之酶活性的約1.1倍，至多2倍、5倍、10倍、20倍、25倍、50倍、75倍、100倍、150倍、200倍或比參考α-GAL酶有更多酶活性。
內在表達：術語「內在表達」及其文法同等物係指在一或多個引入轉殖基因之細胞中的基因表現。內在表達使用細胞本身或既有的轉錄或轉譯機制及資源來表現轉殖基因。舉例來說，在一些實施例中，當此術語用於指「內在α-GAL表現系統」時，意指α-GAL是從組織細胞中表現。
核酸：如本文所用，術語「核酸」、「聚核苷酸」及「寡核苷酸」可互換使用，且係指呈線性或環狀構形、及呈單股或雙股形式的去氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物。基於本揭露之目的，此等術語不應解釋為對聚合物之長度的限制。術語可涵蓋自然核苷酸之已知類似物，以及在鹼基、糖及/或磷酸部分（例如，硫代磷酸酯骨架）中所修飾之核苷酸。一般而言，特定核苷酸之類似物具有相同的鹼基配對專一性；即，A的類似物將與T鹼基配對。
操作性連接：如本文中所用，術語「操作性連接」及「操作性地連接」（或「可操作性地連接」）可互換地使用，指的是兩個或多個組件（諸如序列元件）的並列，其中該組件被配置成使兩個組件功能正常，且允許該等組件中之至少一者可調節對其它元件中的至少一者施加之功能的可能性。簡而言之，若該轉錄調控序列在有一或多個轉錄調控因子存在或不存在時控制該編碼序列的轉錄水平，諸如啟動子的轉錄調控序列係可操作地連接至編碼序列。轉錄調控序列通常可操作地以順式與編碼序列連接，但不需要直接與其相鄰。舉例來說，增強子為可操作地連接至編碼序列之轉錄調控序列，即使它們不相鄰。
生理 pH：如本文所用，「生理pH」意指一般在個體（例如，人類）血液中發現的pH範圍。
鹼性 pH：術語「鹼性pH」（例如，參考使用以改善在鹼性pH條件下之穩定性或增加對鹼性pH之耐受性）意指約7至11之pH範圍。
酸性 pH ：術語「酸性pH」（例如，用以改善對酸性pH條件之穩定性或增加對酸性pH之耐受性）意指在約1.5至4.5的pH值範圍。 多肽：如本文所用，術語「多肽」、「肽」及「蛋白質」可互換地用於意指胺基酸殘基之聚合物。該術語亦適用於胺基酸聚合物，其中一或多種胺基酸為相應自然存在之胺基酸的化學類似物或修飾衍生物。
啟動子：如本文所用，術語「啟動子」如本文所用係涵蓋DNA序列，其引導RNA聚合酶之結合，且因此促進RNA合成，即，足以引導轉錄之最小序列。啟動子及相對應的蛋白質或多肽表現可為泛素化，意指在廣泛範圍之細胞、組織及物種中或細胞類型之專一性、組織專一性、或物種專一性中具有高度活性。在一些實施例中，肝特異性啟動子包括，例如轉甲狀腺素蛋白啟動子（TTR）、甲狀腺素結合球蛋白（TBG）啟動子、混合型肝特異性啟動子（HLP）、及α-1-抗胰蛋白酶（AAT）啟動子。啟動子可以是「持續性」，意指持續活化，或「誘導性」，意指啟動子可透過生物或非生物因子之存在或不存在而活化或失活。在本發明之核酸構築體或載體中亦包括可鄰接或可不與該啟動子序列鄰接的增強子序列。增強子序列影響啟動子依賴性基因表現，且可位於原生基因的5’或3'區中。
序列優化：如本文所用，術語「序列優化」係指一種製程或一系列製程，其在參考核酸序列中之核鹼基被置換成替代的核鹼基，導致具有改善特性的核酸序列，例如，改善蛋白質表現或增加活性。
趨性：如本文所用，AAV之上下文中的術語「趨性」或「趨向性」係指用於不同組織類型之具有各種轉導譜的AAV衣殼血清型。在一些實施例中，「全身性趨性」及「全身性轉導」（及等效術語）指示本發明之病毒衣殼或病毒載體各自展現對超過一個組織、或多個組織或在整個身體中的器官（例如，超過腦、肺臟、骨骼肌、心臟、肝、腎臟及/或胰臟之一者）的趨性或轉化。
載體：如本文所用，術語「載體」能轉移基因序列至目標細胞。通常，「載體構築體」、「表現載體」及「基因轉移載體」意指能引導所關注之基因表現且可將基因序列轉移至目標細胞之任何核酸構築體。因此，該術語包括選殖、及表現媒劑，以及整合載體。在一些實施例中，該載體為病毒，其包括，例如封裝形式之載體核酸，及其中已包裝載體核酸之病毒顆粒。在一些實施例中，該載體不是病毒之野生型菌株，因為其包含人類製造之突變或修飾。在一些實施例中，該載體係藉由基因操作（即，藉由缺失）衍生自野生型病毒菌株，以包含有條件複製的病毒，如本文進一步描述。在一些實施例中，該載體藉由非病毒手段遞送。在一些實施例中，本文中描述的載體為基因治療載體，其被用作向細胞遞送多核苷酸序列（例如，α半乳糖苷酶）的載體。在一特定實施例中，本文所描述之基因治療載體為重組AAV載體（例如，AAV8或AAV9）。
野生型：如本文所用，術語「野生型」及「自然存在」係指自然界中所發現之核酸或蛋白質的形式。舉例來說，野生型多肽或多核苷酸序列為存在於生物體中的序列，其可從自然來源分離出且未經人為操作特意修飾。
依端點數值範圍列舉的數字範圍包括在該範圍內所包括之所有數字及分數（例如1至5包括1、1.5、2、2.75、3、3.9、4及5）。亦應理解，其中所有數目及分數皆被假定為經術語「約」修飾。
本發明之各種態樣在以下章節中加以詳細描述。章節之使用並不意欲限制本發明。各章節可適用於本發明之任何態樣。在本申請案中，除非另外說明，否則使用「或」意指「及/或」。如本文所用，單數形式「一」及「該」包括單數及複數個指示物，除非上下文另外明確指示。
 
<![CDATA[<110>  日商武田藥品工業股份有限公司(TAKEDA PHARMACEUTICAL COMPANY LIMITED)]]>
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          gcggggcggg gcgaggggcg gggcggggcg aggcggagag gtgcggcggc agccaatcag      720
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          aagcgaagcg cgcggcgggc gggagtcgct gcgacgctgc cttcgccccg tgccccgctc      840
          cgccgccgcc tcgcgccgcc cgccccggct ctgactgacc gcgttactcc cacaggtgag      900
          cgggcgggac ggcccttctc ctccgggctg taattagcgc ttggtttaat gacggcttgt      960
          ttcttttctg tggctgcgtg aaagccttga ggggctccgg gagggccctt tgtgcggggg     1020
          ggagcggctc ggggggtgcg tgcgtgtgtg tgtgcgtggg gagcgccgcg tgcggcccgc     1080
          gctgcccggc ggctgtgagc gctgcgggcg cggcgcgggg ctttgtgcgc tccgcagtgt     1140
          gcgcgagggg agcgcggccg ggggcggtgc cccgcggtgc ggggggggct gcgaggggaa     1200
          caaaggctgc gtgcggggtg tgtgcgtggg ggggtgagca gggggtgtgg gcgcggcggt     1260
          cgggctgtaa cccccccctg cacccccctc cccgagttgc tgagcacggc ccggcttcgg     1320
          gtgcggggct ccgtacgggg cgtggcgcgg ggctcgccgt gccgggcggg gggtggcggc     1380
          aggtgggggt gccgggcggg gcggggccgc ctcgggccgg ggagggctcg ggggaggggc     1440
          gcggcggccc ccggagcgcc ggcggctgtc gaggcgcggc gagccgcagc cattgccttt     1500
          tatggtaatc gtgcgagagg gcgcagggac ttcctttgtc ccaaatctgt gcggagccga     1560
          aatctgggag gcgccgccgc accccctcta gcgggcgcgg ggcgaagcgg tgcggcgccg     1620
          gcaggaagga aatgggcggg gagggccttc gtgcgtcgcc gcgccgccgt ccccttctcc     1680
          ctctccagcc tcggggctgt ccgcgggggg acggctgcct tcggggggga cggggcaggg     1740
          cggggttcgg cttctggcgt gtgaccggcg gctctagagc ctctgctaac catgttcatg     1800
          ccttcttctt tttcctacag ctcctgggca acgtgctggt tattgtgctg tctcatcatt     1860
          ttggcaaaga attcgatatc a                                               1881
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  1290]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcactggaca atggattggc aaggacgcct      120
          accatgggct ggctgcactg ggagcgcttc atgtgcaacc ttgactgcca ggaagagcca      180
          gattcctgca tcagtgagaa gctcttcatg gagatggcag agctcatggt ctcagaaggc      240
          tggaaggatg caggttatga gtacctctgc attgatgact gttggatggc tccccaaaga      300
          gattcagaag gcagacttca ggcagaccct cagcgctttc ctcatgggat tcgccagcta      360
          gctaattatg ttcacagcaa aggactgaag ctagggattt atgcagatgt tggaaataaa      420
          acctgcgcag gcttccctgg gagttttgga tactacgaca ttgatgccca gacctttgct      480
          gactggggag tagatctgct aaaatttgat ggttgttact gtgacagttt ggaaaatttg      540
          gcagatggtt ataagcacat gtccttggcc ctgaatagga ctggcagaag cattgtgtac      600
          tcctgtgagt ggcctcttta tatgtggccc tttcaaaagc ccaattatac agaaatccga      660
          cagtactgca atcactggcg aaattttgct gacattgatg attcctggaa aagtataaag      720
          agtatcttgg actggacatc ttttaaccag gagagaattg ttgatgttgc tggaccaggg      780
          ggttggaatg acccagatat gttagtgatt ggcaactttg gcctcagctg gaatcagcaa      840
          gtaactcaga tggccctctg ggctatcatg gctgctcctt tattcatgtc taatgacctc      900
          cgacacatca gccctcaagc caaagctctc cttcaggata aggacgtaat tgccatcaat      960
          caggacccct tgggcaagca agggtaccag cttagacagg gagacaactt tgaagtgtgg     1020
          gaacgacctc tctcaggctt agcctgggct gtagctatga taaaccggca ggagattggt     1080
          ggacctcgct cttataccat cgcagttgct tccctgggta aaggagtggc ctgtaatcct     1140
          gcctgcttca tcacacagct cctccctgtg aaaaggaagc tagggttcta tgaatggact     1200
          tcaaggttaa gaagtcacat aaatcccaca ggcactgttt tgcttcagct agaaaataca     1260
          atgcagatgt cattaaaaga cttactttaa                                      1290
          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  592]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          aatcaacctc tggattacaa aatttgtgaa agattgactg gtattcttaa ctttgttgct       60
          ccttttacgc tttgtggata cgctgcttta ttgcctttgt atcttgctat tgcttcccgt      120
          ttggctttca ttttctcctc cttgtataaa tcctggttgc tgtctctttt tgaggagttg      180
          tggcccgttg tcaggcaacg tggcgtggtg tgcactgtgt ttgctgacgc aacccccact      240
          ggttggggca ttgccaccac ctgtcagctc ctttccggga ctttcgcttt ccccctccct      300
          attgccacgg cggaactcat cgccgcctgc cttgcccgct gctggacagg ggctcggctg      360
          ttgggcactg acaattccgt ggtgttgtcg gggaaatcat cgtcctttcc ttggctgctc      420
          gcctgtgttg ccacctggat tctgcgcggg acgtccttct gctacgtccc ttcggccctc      480
          aatccagcgg accttccttc ccgcggcctg ctgccggctc tgcggcctct tccgcgtctt      540
          cgccttcgcc ctcagacgag tcggatctcc ctttgggccg cctccccgca tc              592
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  234]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          cctagagctc gctgatcagc ctcgactgtg ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc       60
          ccctcccccg tgccttcctt gaccctggaa ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa      120
          aatgaggaaa ttgcatcgca ttgtctgagt aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg      180
          gggcaggaca gcaaggggga ggattgggaa gacaatagca ggcatgctgg ggaa            234
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  133]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          aggaacccct agtgatggag ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg       60
          ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc      120
          gagcgcgcag aga                                                         133
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  398]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Glu Lys Leu Phe Met Glu Met Ala Glu Arg Met Val Ser Glu 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp 
              50                  55                  60                  
          Met Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn Tyr Val His Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Gly Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala 
                      100                 105                 110         
          Gly Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe 
                  115                 120                 125             
          Ala Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Arg Thr Gly Arg Pro Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr 
                          165                 170                 175     
          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Ala Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Arg Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp 
              210                 215                 220                 
          Val Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Phe Gly Leu Ser Trp Asp Gln Gln Val Thr Gln Met Ala Leu Trp 
                          245                 250                 255     
          Ala Ile Met Ala Ala Pro Leu Phe Met Ser Asn Asp Leu Arg His Ile 
                      260                 265                 270         
          Ser Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile 
                  275                 280                 285             
          Asn Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Lys Gly Asp 
              290                 295                 300                 
          Asn Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Asp Ala Trp Ala Val 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Ile Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Ser Tyr Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Pro Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe 
                      340                 345                 350         
          Ile Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Gln Leu Gly Phe Tyr Glu Trp 
                  355                 360                 365             
          Thr Ser Arg Leu Lys Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu 
              370                 375                 380                 
          Gln Leu Glu Asn Thr Met Gln Met Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
          385                 390                 395             
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  398]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Pro Met Gly Trp Leu His Trp 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Glu Lys Leu Phe Glu Glu Met Ala Glu Arg Met Val Thr Glu 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp 
              50                  55                  60                  
          Met Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn His Val His Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Gly Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala 
                      100                 105                 110         
          Gly Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe 
                  115                 120                 125             
          Ala Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Arg Thr Gly Arg Pro Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr 
                          165                 170                 175     
          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Ala Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Arg Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp 
              210                 215                 220                 
          Val Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Phe Gly Leu Ser Trp Asp Gln Gln Val Thr Gln Met Ala Leu Trp 
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                          325                 330                 335     
          Pro Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe 
                      340                 345                 350         
          Ile Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Lys Leu Gly Phe Tyr Glu Ala 
                  355                 360                 365             
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          Gln Leu Glu Asn Thr Met Gln Thr Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
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          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Pro Met Gly Trp Leu His Trp 
          1               5                   10                  15      
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              50                  55                  60                  
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          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
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          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Pro Met Gly Trp Leu His Trp 
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                          85                  90                  95      
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          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Ala Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Arg Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp 
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          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp 
          1               5                   10                  15      
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          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp 
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                          165                 170                 175     
          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Ala Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Arg Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp 
              210                 215                 220                 
          Val Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Phe Gly Leu Ser Trp Asp Gln Gln Val Thr Gln Met Ala Ser Trp 
                          245                 250                 255     
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                      260                 265                 270         
          Ser Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile 
                  275                 280                 285             
          Asn Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Lys Gly Asp 
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          Asn Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Asp Ala Trp Ala Val 
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                          325                 330                 335     
          Pro Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe 
                      340                 345                 350         
          Ile Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Gln Leu Gly Phe Tyr Asn Trp 
                  355                 360                 365             
          Thr Ser Arg Leu Lys Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu 
              370                 375                 380                 
          Gln Leu Glu Asn Thr Met Gln Met Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
          385                 390                 395             
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          <![CDATA[<211>  398]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
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          <![CDATA[<400>  15]]>
          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp 
          1               5                   10                  15      
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          Ile Ser Glu Lys Leu Phe Glu Glu Met Ala Glu Arg Met Val Thr Asp 
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          Gly Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp 
              50                  55                  60                  
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                          85                  90                  95      
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                          165                 170                 175     
          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Lys Ser Ile 
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          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp 
          1               5                   10                  15      
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          Gly Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp 
              50                  55                  60                  
          Met Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln 
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                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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                          165                 170                 175     
          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
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                          325                 330                 335     
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                  355                 360                 365             
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          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp 
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                      100                 105                 110         
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              130                 135                 140                 
          Ser Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Arg Thr Gly Arg Ser Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr 
                          165                 170                 175     
          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Lys Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Arg Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp 
              210                 215                 220                 
          Val Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Phe Gly Leu Ser Trp Asp Gln Gln Val Thr Gln Met Ala Leu Trp 
                          245                 250                 255     
          Ala Ile Met Ala Ala Pro Leu Phe Met Ser Asn Asp Leu Arg His Ile 
                      260                 265                 270         
          Ser Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile 
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          Asn Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Lys Gly Asp 
              290                 295                 300                 
          Asn Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Asp Ala Trp Ala Val 
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          Ala Ile Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Ser Tyr Thr Ile 
                          325                 330                 335     
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          Ile Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Lys Leu Gly Phe Tyr Glu Ala 
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          Thr Ser Arg Leu Lys Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu 
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          Gln Leu Glu Asn Thr Met Gln Met Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
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          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  1197]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          ctggataatg gattggctag aacacctact atggggtggc ttcactggga gaggttcatg       60
          tgcaacctcg actgtcagga agaaccagac agctgcatct ccgagaagct gtttatggaa      120
          atggccgagc gaatggtgtc agaaggctgg aaagatgcag gttacgagta tctgtgtatt      180
          gacgattgct ggatggctcc gcaacgggac agtgagggca gacttcaggc agatcctcag      240
          cgcttcccac atgggataag gcagctcgcc aactacgtcc actctaaggg actgaaactg      300
          ggcatctatg ctgacgtggg gaataagacc tgtgcgggat ttcccggtag cttcggctac      360
          tacgacattg atgcccagac ctttgccgat tggggagttg acctcctcaa attcgatggc      420
          tgctattgtg actctttgga gaacctggca gacgggtaca agcatatgtc cctggccctg      480
          aatcggacag gtagacccat cgtgtatagt tgcgaatggc ccctttacat gtggcctttt      540
          caaaagccaa actacactga gattcgccag tattgcaatc actggaggaa cttcgctgat      600
          atcgatgact catgggcgag catcaaatcc atattggatt ggacctctcg gaatcaggag      660
          cgcattgtag acgtcgcagg acccggcggc tggaacgacc ctgatatgct ggtgatcggg      720
          aattttggtc ttagctggga ccagcaagtt acgcagatgg ctctgtgggc aattatggca      780
          gccccactct tcatgtccaa cgatctgcga cacatctctc ctcaagctaa ggctctgctg      840
          caggacaaag atgtgattgc catcaatcag gacccactcg gaaagcaggg ctatcagctg      900
          agaaaaggcg acaacttcga agtctgggaa aggccacttt caggagacgc atgggctgtg      960
          gccataataa accggcaaga gattggtggg cccaggagct acacaatccc cgttgccagt     1020
          ttgggcaagg gagtggcgtg taatcctgcc tgctttatca ctcagctgct cccagtcaaa     1080
          agacagctgg ggttctatga gtggacctcc cgcctcaaga gccatattaa tcccacaggt     1140
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          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  1197]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          ctggataatg gattggctag aacacctcct atggggtggc ttcactggga gaggttcatg       60
          tgcaacctgg actgtcagga agaaccagac agctgcatct ccgagaagct ctttgaggaa      120
          atggccgaac gaatggtgac tgagggctgg aaagatgcag gttacgagta tctgtgtatt      180
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          cgcttccctc atggcataag gcagctggca aaccacgtcc acagtaaggg gctcaaattg      300
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          tatgacattg acgcccaaac gtttgctgat tggggcgttg acctgctgaa attcgatggt      420
          tgctactgtg acagcctcga aaacctggca gacggctaca agcatatgtc tctcgccctg      480
          aatagaaccg gtcggccaat cgtatattcc tgcgagtggc ctctttacat gtggccattt      540
          cagaaaccga actacacaga aattcgccag tattgcaatc attggaggaa cttcgctgat      600
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          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  1197]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          ctggataatg gattggctag aacacctcct atggggtggc ttcactggga gaggttcatg       60
          tgcaacctgg actgtcagga agaaccagac agctgcatct ccgagaagct ctttgaggaa      120
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          cagaaaccga actacacaga aattcgccag tattgcaatc attggaggaa cttcgctgat      600
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          accgtcctct tgcagctgga gaatacgatg cagacttcac tgaaggacct cctgtag        1197
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  1197]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
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          tgcaacctgg actgtcagga agaaccagac agctgcatct ccgagaagct ctttgaggaa      120
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          ggccctcttt tcatgagcaa cgatctgcgc gcgatctcac cacaggcaaa ggccctgctc      840
          caagacacgg acgtgatagc catcaatcag gacccgttgg gaaagcaggg ctaccagctg      900
          agaaaaggcg acaactttga ggtctgggaa aggcctttga gtggagatgc gtgggctgtg      960
          gccattatta atcggcaaga gatcggaggt ccacgcggtt atacaattcc tgtagcaaag     1020
          cttggcaagg gcgttgcctg taacccagct tgcttcatca ctcagcttct gccggtgaag     1080
          agaaaactgg gtttctacga agctaccagc aggctccgat cccacatcaa ccctacagga     1140
          accgtcctct tgcagctgga gaatacgatg cagacttcac tgaaggacct cctgtag        1197
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  1197]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          ttggacaatg ggctggccag gacacctact atgggctggc tccactggga gcgctttatg       60
          tgtaacctcg actgccaaga ggagccagac tcatgcatct ctgagaagtt gttcatggag      120
          atggctgagc tgatggtgag cgaagggtgg aaggatgcgg gctatgagta tctctgtatt      180
          gatgactgct ggatggctcc acagcgcgac agtgaaggcc ggctccaggc cgatcctcag      240
          cggttccccc acggtatcag acaactggcg aattacgtgc actcaaaagg ccttaagctg      300
          ggtatatatg ctgatgtggg taataaaaca tgtgcaggct tcccaggctc ttttgggtac      360
          tatgacatcg acgcccagac ttttgcggac tggggcgtgg acctgctcaa gtttgacgga      420
          tgttactgtg actcccttga gaacctggcc gacgggtaca agcatatgtc actggccctg      480
          aatcggacag gccgatccat cgtatactct tgcgagtggc ctctgtacat gtggcccttc      540
          cagaagccca actatacaga aatcaggcaa tactgcaacc attggcggaa cttcgcagac      600
          atagacgaca gctgggctag cattaagtct attctggatt ggaccagttt caatcaagaa      660
          aggattgtcg atgtcgcagg cccaggaggt tggaatgacc cagacatgct cgtgattgga      720
          aatttcggtc tgtcatggga ccaacaggtg actcagatgg ctctgtgggc aatcatggca      780
          gcaccactgt tcatgagcaa tgatttgcga cacatctccc ctcaggcgaa agcccttctg      840
          caggataagg acgttatcgc cattaaccag gacccgctcg gtaagcaagg gtaccagttg      900
          cgccagggag acaatttcga ggtctgggaa cgacccctgt ctggactcgc ttgggccgta      960
          gccgtaatta accgacaaga aatcggcgga ccgcggagct ataccatagc tgtcgcctcc     1020
          ctcggcgggg gcgtagcttg taacccggct tgtttcataa cccagctgct gcccgtcaag     1080
          aggaaactgg ggctttatga gtggacaagt cggttgaagt ctcatattaa cccgacaggg     1140
          actgttctcc tccagctgga aaacacaatg cagatgagcc tgaaggatct cttgtga        1197
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  1198]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          tttggacaat gggctggcca ggacacctac tatgggctgg ctccactggg agcgctttat       60
          gtgtaacctc gactgccaag aggagccaga ctcatgcatc tctgagaagt tgttcatgga      120
          aatggccgag cttatggtct cagaggggtg gaaagacgcc ggatatgagt atctgtgcat      180
          cgacgattgc tggatggccc cccaacgcga ttccgaaggc cgcttgcagg ctgatccgca      240
          gcgctttcct cacgggatcc gccaattggc aaattacgtg cactcaaagg ggctcaagtt      300
          gggcatctac gcagacgtgg gaaacaagac atgtgctgga tttcccggga gtttcggtta      360
          ttatgacatt gacgcacaga cctttgctga ttggggggtc gacctcctga agtttgacgg      420
          ttgttattgc gacagccttg aaaatctggc cgacggttac aaacacatgt cccttgcact      480
          gaatagaact ggtcggtcca tcgtctatag ttgtgagtgg ccgctttaca tgtggccttt      540
          tcagaaaccc aactacaccg agattcggca atattgcaat cactggcgaa atttcgcaga      600
          tatcgatgat tcttgggcta gtattaaatc catcctggat tggacatcat tcaaccagga      660
          gcgcatcgtg gacgttgctg gacctggcgg gtggaatgat ccagacatgc ttgtgatcgg      720
          aaacttcggt ctctcttgga accagcaagt cactcaaatg gcactctggg caattatggc      780
          cgcccccctc tttatgtcca acgatctgag gcatatcagt cctcaggcta aagccctgct      840
          gcaagacaag gatgtgattg ctatcaacca agatcccctt ggtaaacagg ggtaccagtt      900
          gcgcaaaggc gacaattttg aggtgtggga aaggccactt tcaggcgatg catgggccgt      960
          tgcaatgatc aacaggcaag aaattggcgg acccaggagc tatacaatac cagtggcgtc     1020
          actgggtaag ggagtcgcct gtaaccccgc atgcttcatt actcaacttc tgccagtgaa     1080
          acgaaaactc ggattctatg agtggacctc aagactgagg tctcatatta acccgacagg     1140
          gactgttctc ctccagctgg aaaacacaat gcagatgagc ctgaaggatc tcttgtga       1198
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  1197]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          ttggacaatg ggctggccag gacacctact atgggctggc tccactggga gcgctttatg       60
          tgtaacctcg actgccaaga ggagccagac tcatgcatct ctgagaagtt gttcatggag      120
          atggctgaac gcatggtttc tgagggatgg aaagatgcag gctacgagta cctgtgtata      180
          gacgattgtt ggatggcccc acagcgggat tcagaaggta gactccaggc ggatccccag      240
          agattcccac atggaatcag acagctggcc aattacgtcc attccaaagg ccttaagttg      300
          ggtatttacg ccgacgtagg caacaagact tgtgccggat ttcccggcag tttcggatac      360
          tatgacattg atgcacagac tttcgctgac tggggggtgg acttgctcaa atttgatggc      420
          tgttattgcg atagcctcga aaatctggct gatggctaca agcacatgtc actcgctctc      480
          aaccgcactg ggcgctctat agtttactcc tgcgagtggc ctctgtatat gtggccgttc      540
          cagaaaccca attacacaga aataaggcag tattgcaatc actggcgcaa ctttgctgat      600
          attgatgatt cctgggcctc cataaagagt atcttggact ggactagtcg caatcaggaa      660
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          aacttcggac tctcatggga ccagcaggtg acccagatgg ctagttgggc tatcatggcc      780
          gcccctctgt ttatgagtaa cgacctccgc cacatcagcc cccaggccaa ggcgcttctg      840
          caggataaag atgtcatcgc catcaaccaa gatcccctgg gcaaacaagg ctatcagctg      900
          cggaagggag acaattttga ggtgtgggaa cgccctttga gcggagacgc ctgggctgtg      960
          gctattataa atcgccagga gattgggggc ccgagaagtt atactatccc cgttgcaagc     1020
          ctgggaaagg gcgtcgcctg caaccctgcc tgcttcatca cacagctgct tcctgtcaaa     1080
          cgccaattgg ggttctacaa ttggacatcc agactcaaat ctcatattaa cccgacaggg     1140
          actgttctcc tccagctgga aaacacaatg cagatgagcc tgaaggatct cttgtga        1197
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  1197]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          ttggacaatg ggctggccag gacacctact atgggctggc tccactggga gcgctttatg       60
          tgtaacctcg actgccaaga ggagccagac tcatgcatct ctgagaagtt gttcgaggag      120
          atggcagaac gaatggtgac agatggatgg aaggacgctg gctacgagta tctgtgcata      180
          gatgattgtt ggatggcccc tcagcgagac tcagagggga gactccaggc cgacccccag      240
          cgatttccac acggaatccg gcaactggct aaccatgtgc actcaaaagg gctcaagctg      300
          ggaatttatg ctgacgtcgg gaacaaaact tgtgcggggt ttcccggctc cttcggatat      360
          tacgacatcg acgcccagac tttcgcagac tggggtgtgg acctgcttaa gttcgacggc      420
          tgttactgcg atagtctgga aaacttggct gacggctata agcacatgag tctcgccctg      480
          aaccgaacag gcagaagcat agtctactcc tgcgaatggc cactttacat gtggccattc      540
          cagaaaccta attataccga gatcagacaa tactgtaacc attggcgaaa cttcgccgac      600
          attgacgata gttggaagtc aatcaagtcc atcctggatt ggacctctag gaaccaggaa      660
          aggatcgtgg acgtggctgg acctggcgga tggaacgatc cagacatgct cgtgatagga      720
          aactttggac tgtcatggaa tcagcaagta acacagatgg cgctctgggc cattatggct      780
          gcccccttgt ttatgtctaa cgacctgagg catatctctc ctcaagccaa ggcactcctg      840
          caggacaagg acgttatcgc catcaaccag gacccactgg gcaagcaggg ataccagctg      900
          cggaaaggtg ataacttcga ggtctgggag cgaccgcttt caggagacgc ctgggcagtt      960
          gcaatcatca acaggcaaga aattggtggg ccacggtctt atactattcc cgtggcttct     1020
          ctcggtaagg gcgtcgcctg caaccccgcc tgctttatca cccaattgtt gcccgttaag     1080
          agaaaactgg gattttacga gtggacatcc aggctgcggt ctcatattaa cccgacaggg     1140
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          <![CDATA[<210>  28]]>
          <![CDATA[<211>  1197]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          ttggacaatg ggctggccag gacacctact atgggctggc tccactggga gcgctttatg       60
          tgtaacctcg actgccaaga ggagccagac tcatgcatct ctgagaagtt gttcgaagag      120
          atggctgaac tgatggtgtc cgaggggtgg aaggatgcag ggtacgagta cctttgcata      180
          gacgattgct ggatggcacc acagcgggat agtgagggca ggttgcaggc ggacccccaa      240
          agatttccac atggcatcag acagctggcc aaccacgtgc actctaaagg cctgaagctg      300
          gggatttacg ccgatgtcgg taataaaaca tgtgctggtt tccccggtag ctttggatac      360
          tacgacatcg acgcccagac atttgctgat tggggagtgg acctgctcaa gttcgacggc      420
          tgctactgcg attctctgga aaatctggcc gatgggtata agcacatgag tcttgctctt      480
          aatagaaccg gacgctctat agtctattca tgtgagtggc cactgtacat gtggccattt      540
          cagaaaccca actataccga aattagacag tattgtaacc actggcggaa tttcgccgac      600
          atagacgata gctggaagag catcaagtca attctcgatt ggacttcatt caaccaggag      660
          cggatcgtcg acgtggccgg ccctgggggc tggaatgatc cagatatgct ggtgatcgga      720
          aactttggtc tctcctggaa tcaacaggtc actcagatgg ccctctgggc cattatggca      780
          gcaccactct ttatgagcaa cgacctgaga cacatttccc cacaggccaa ggcattgctg      840
          caggacaaag acgtgatcgc cattaaccag gacccactgg gcaagcaagg gtaccaactt      900
          aggcagggag ataattttga ggtctgggag cgcccactca gcggagacgc ctgggccgtt      960
          gccatgataa acagacagga gattggcggc cccagatcct acacaattcc tgtcgctagc     1020
          ctgggcaagg gggtggcttg taatcccgcc tgctttataa cccagctgct gccagtgaaa     1080
          cggaaactcg ggttctatga atggacttct aggctcaggt ctcatattaa cccgacaggg     1140
          actgttctcc tccagctgga aaacacaatg cagatgagcc tgaaggatct cttgtga        1197
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  1197]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          ttggacaatg ggctggccag gacacctact atgggctggc tccactggga gcgctttatg       60
          tgtaacctcg actgccaaga ggagccagac tcatgcatct ctgagaagtt gttcgaggag      120
          atggcagaac gaatggtgac agatggatgg aaggacgctg gctacgagta tctgtgcata      180
          gatgattgtt ggatggcccc tcagcgagac tcagagggga gactccaggc cgacccccag      240
          cgatttccac acggaatccg gcaactggct aaccatgtgc actcaaaagg gctcaagctg      300
          ggaatttatg ctgacgtcgg gaacaaaact tgtgcggggt ttcccggctc cttcggatat      360
          tacgacatcg acgcccagac tttcgcagac tggggtgtgg acctgcttaa gttcgacggc      420
          tgttactgcg atagtctgga aaacttggct gacggctata agcacatgag tctcgccctg      480
          aaccgaacag gcagaagcat agtctactcc tgcgaatggc cactttacat gtggccattc      540
          cagaaaccta attataccga gatcagacaa tactgtaacc attggcgaaa cttcgccgac      600
          attgacgata gttggaagtc aatcaagtcc atcctggatt ggacctctag gaaccaggaa      660
          aggatcgtgg acgtggctgg acctggcgga tggaacgatc cagacatgct cgtgatagga      720
          aactttggac tgtcatggga tcagcaagta acacagatgg cgctctgggc cattatggct      780
          gcccccttgt ttatgtctaa cgacctgagg catatctctc ctcaagccaa ggcactcctg      840
          caggacaagg acgttatcgc catcaaccag gacccactgg gcaagcaggg ataccagctg      900
          cggaaaggtg ataacttcga ggtctgggag cgaccgcttt caggagacgc ctgggcagtt      960
          gcaatcatca acaggcaaga aattggtggg ccacggtctt atactattcc cgtggcttct     1020
          ctcggtaagg gcgtcgcctg caaccccgcc tgctttatca cccaattgtt gcccgttaag     1080
          agaaaactgg gattttacga ggcgacatcc aggctgaagt ctcatattaa cccgacaggg     1140
          actgttctcc tccagctgga aaacacaatg cagatgagcc tgaaggatct cttgtga        1197
          <![CDATA[<210>  30]]>
          <![CDATA[<211>  398]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Glu Lys Leu Phe Met Glu Met Ala Glu Leu Met Val Ser Glu 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp 
              50                  55                  60                  
          Met Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn Tyr Val His Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Gly Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala 
                      100                 105                 110         
          Gly Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe 
                  115                 120                 125             
          Ala Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Arg Thr Gly Arg Ser Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr 
                          165                 170                 175     
          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Lys Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Phe Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp 
              210                 215                 220                 
          Val Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Phe Gly Leu Ser Trp Asn Gln Gln Val Thr Gln Met Ala Leu Trp 
                          245                 250                 255     
          Ala Ile Met Ala Ala Pro Leu Phe Met Ser Asn Asp Leu Arg His Ile 
                      260                 265                 270         
          Ser Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile 
                  275                 280                 285             
          Asn Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Gln Gly Asp 
              290                 295                 300                 
          Asn Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Leu Ala Trp Ala Val 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Met Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Ser Tyr Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Ala Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe 
                      340                 345                 350         
          Ile Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Lys Leu Gly Phe Tyr Glu Trp 
                  355                 360                 365             
          Thr Ser Arg Leu Arg Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu 
              370                 375                 380                 
          Gln Leu Glu Asn Thr Met Gln Met Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
          385                 390                 395             
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  1196]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          tggacaatgg attggcaagg acgcctacca tgggctggct gcactgggag cgcttcatgt       60
          gcaaccttga ctgccaggaa gagccagatt cctgcatcag tgagaagctc ttcgaggaga      120
          tggcagagag aatggtcacc gacggctgga aggatgcagg ttatgagtac ctctgcattg      180
          atgactgttg gatggctccc caaagagatt cagaaggcag acttcaggca gaccctcagc      240
          gctttcctca tgggattcgc cagctagcta atcacgttca cagcaaagga ctgaagctag      300
          ggatttatgc agatgttgga aataaaacct gcgcaggctt ccctgggagt tttggatact      360
          acgacattga tgcccagacc tttgctgact ggggagtaga tctgctaaaa tttgatggtt      420
          gttactgtga cagtttggaa aatttggcag atggttataa gcacatgtcc ttggccctga      480
          ataggactgg cagaagcatt gtgtactcct gtgagtggcc tctttatatg tggccctttc      540
          aaaagcccaa ttatacagaa atccgacagt actgcaatca ctggcgaaat tttgctgaca      600
          ttgatgattc ctgggccagt ataaagagta tcttggactg gacatctaga aaccaggaga      660
          gaattgttga tgttgctgga ccagggggtt ggaatgaccc agatatgtta gtgattggca      720
          actttggcct cagctgggac cagcaagtaa ctcagatggc cctctgggct atcatggctg      780
          ctcctttatt catgtctaat gacctccgac acatcagccc tcaagccaaa gctctccttc      840
          aggataagga cgtaattgcc atcaatcagg accccttggg caagcaaggg taccagctta      900
          gaaagggaga caactttgaa gtgtgggaac gacctctctc aggcgatgcc tgggctgtag      960
          ctatcataaa ccggcaggag attggtggac ctcgctctta taccatcccc gttgcttccc     1020
          tgggtaaagg agtggcctgt aatcctgcct gcttcatcac acagctcctc cctgtgaaaa     1080
          ggcagctagg gttctataac tggacttcaa ggttaaagag tcacataaat cccacaggca     1140
          ctgttttgct tcagctagaa aatacaatgc agatgtcatt aaaagactta ctttaa         1196
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  1196]]>
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          tggacaatgg attggcaagg acgcctccca tgggctggct gcactgggag cgcttcatgt       60
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          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Glu Lys Leu Phe Glu Glu Met Ala Glu Arg Met Val Thr Asp 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp 
              50                  55                  60                  
          Met Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn His Val His Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Gly Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala 
                      100                 105                 110         
          Gly Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe 
                  115                 120                 125             
          Ala Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Arg Thr Gly Arg Ser Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr 
                          165                 170                 175     
          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Ala Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Arg Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp 
              210                 215                 220                 
          Val Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly 
          225                 230                 235                 240 
          Asn Phe Gly Leu Ser Trp Asp Gln Gln Val Thr Gln Met Ala Leu Trp 
                          245                 250                 255     
          Ala Ile Met Ala Ala Pro Leu Phe Met Ser Asn Asp Leu Arg His Ile 
                      260                 265                 270         
          Ser Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile 
                  275                 280                 285             
          Asn Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Lys Gly Asp 
              290                 295                 300                 
          Asn Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Asp Ala Trp Ala Val 
          305                 310                 315                 320 
          Ala Ile Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Ser Tyr Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Pro Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe 
                      340                 345                 350         
          Ile Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Gln Leu Gly Phe Tyr Asn Trp 
                  355                 360                 365             
          Thr Ser Arg Leu Lys Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu 
              370                 375                 380                 
          Gln Leu Glu Asn Thr Met Gln Met Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
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          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Pro Met Gly Trp Leu His Trp 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Glu Lys Leu Phe Glu Glu Met Ala Glu Arg Met Val Thr Asp 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp 
              50                  55                  60                  
          Met Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn His Val His Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Gly Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala 
                      100                 105                 110         
          Gly Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe 
                  115                 120                 125             
          Ala Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Lys Thr Gly Arg Pro Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr 
                          165                 170                 175     
          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Ala Ser Ile 
                  195                 200                 205             
          Lys Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Arg Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp 
              210                 215                 220                 
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          Ser Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile 
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          Asn Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Lys Gly Asp 
              290                 295                 300                 
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          gccaaccatg tgcactccaa gggactgaag ctgggcatct atgccgatgt gggcaacaag      420
          acctgtgctg gcttcccagg cagctttggc tattatgata ttgatgcaca aacttttgca      480
          gactggggag ttgatctgct gaaatttgat gggtgttact gtgactccct ggagaacctc      540
          gccgacggat acaagcatat gtcccttgct ctgaacaaga ctggcaggcc cattgtctac      600
          tcttgtgagt ggccactgta catgtggccc ttccagaagc ccaactatac cgagattcgc      660
          cagtactgca atcactggag gaactttgca gacattgatg acagctgggc ctccattaag      720
          tctatcctgg attggacaag cagaaaccaa gagagaattg tggatgtggc tggccctggt      780
          ggttggaatg accccgatat gctggtgatt ggcaactttg gactgtcttg ggaccagcag      840
          gtgacccaga tggctctgtg ggctatcatg gccggccccc tcttcatgtc taatgacctg      900
          agggccatct ctcctcaggc caaggcactt ctgcaggata aggacgtgat tgccatcaat      960
          caggatcctc tggggaagca gggctatcag ctgagaaagg gggacaattt cgaggtctgg     1020
          gagagacccc tgagcggcga tgcttgggct gtggccatca tcaatagaca agagattgga     1080
          gggccaagag gctacaccat tcctgtggca agcctaggaa aaggggttgc ttgcaatcca     1140
          gcctgtttca tcacccagct gctgcctgtt aagagaaagt tgggcttcta tgaggccacc     1200
          tctaggctga ggtcccatat caaccccact ggcacagtgc tgctgcagct tgaaaacacc     1260
          atgcagacct ccctcaagga cctgctgtaa                                      1290
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  1290]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcactggata atggactggc aagaacccca      120
          accatgggct ggctgcactg ggaaagattc atgtgtaatc tggactgtca agaggagccc      180
          gactcctgca tctctgagaa gctcttcatg gagatggctg agaggatggt gagtgaagga      240
          tggaaggatg ctggttatga gtacctgtgc attgatgact gctggatggc cccccagaga      300
          gattcagagg gcagactgca agcagatcct cagaggttcc cccatggcat cagacagctg      360
          gccaactatg tccactccaa gggcctgaag ctgggtatct atgctgatgt gggcaacaag      420
          acctgtgctg gctttcctgg ctcctttggt tactatgaca ttgacgccca gacctttgct      480
          gactggggag tggacctgtt gaagtttgac ggctgctact gtgactctct ggagaacctg      540
          gctgatggct acaagcacat gtctcttgcc ctgaacagaa ctggtaggag cattgtttac      600
          agctgtgagt ggccactgta catgtggccc ttccagaagc ccaactacac tgagatccgc      660
          cagtactgca accattggag gaactttgca gacatcgatg attcctgggc ctccatcaag      720
          agcatcctgg actggacttc cagaaaccaa gagagaattg tggatgttgc tggacctgga      780
          ggttggaatg accctgacat gctggtgatt ggaaattttg ggctgtcctg ggaccagcaa      840
          gtgactcaga tggccagctg ggccatcatg gcagcccctc tctttatgtc caatgatctc      900
          agacacattt ccccccaagc caaggctctg ctccaagaca aagatgtcat tgctattaat      960
          caagatcccc tggggaagca aggctaccag ctgaggaaag gagacaactt tgaggtgtgg     1020
          gagagacctc tgtctggaga tgcctgggct gtggctatca tcaatagaca agaaattggt     1080
          ggccccagat cctacaccat ccctgtggct tccctgggca agggtgtggc ctgcaatcca     1140
          gcttgcttca tcacccagct cctcccagtg aagaggcagc ttggcttcta caactggaca     1200
          tctaggctca agtcccacat caaccccact ggcacagtgc tgctgcagct ggaaaacacc     1260
          atgcagatga gcctgaaaga cctcctgtga                                      1290
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  1290]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcattggaca atggactggc taggacccca      120
          accatgggtt ggctgcactg ggagaggttt atgtgtaatc tggactgtca agaagaacct      180
          gactcctgca tctctgagaa gctgttcatg gagatggctg agaggatggt gagtgaaggc      240
          tggaaggatg ctggttatga gtacctgtgc attgatgact gctggatggc ccctcagaga      300
          gattcagagg gcagacttca agcagacccc cagaggttcc cccatggcat ccgccagctg      360
          gccaactatg tccactccaa gggcctgaaa ctgggtatct atgctgatgt gggcaacaag      420
          acctgtgctg gctttcctgg ctcctttggc tactatgaca ttgacgccca gacctttgct      480
          gactggggtg tggacctcct caagtttgat ggctgctact gtgactctct ggaaaacctg      540
          gcagatggtt acaagcacat gtctcttgcc ctgaacagaa ctggtaggag cattgtttac      600
          agctgtgagt ggccactgta catgtggccc ttccagaagc ccaactacac tgagatcaga      660
          cagtactgca accattggag gaattttgcc gacatcgatg attcctgggc cagcatcaag      720
          tccatcctgg actggacttc cagaaaccaa gagagaattg tggatgttgc tggacctgga      780
          ggatggaatg acccagacat gctggtgatt ggaaatttcg ggctgtcctg ggaccagcaa      840
          gtgactcaga tggcctcttg ggccatcatg gcagcccccc tcttcatgtc caatgatctt      900
          agacacattt ccccacaagc caaggccctc ctgcaagaca aagatgtcat tgctattaat      960
          caagatcccc tggggaagca aggctaccag ctcagaaaag gagacaactt tgaggtgtgg     1020
          gaaagacctc tgtctggaga tgcctgggct gtggctatca tcaatagaca agaaattggt     1080
          ggccccagat cctacaccat ccctgtggcc tccctgggca agggtgttgc ctgcaatcca     1140
          gcttgcttca tcacccagct gctcccagtg aagaggcagt tgggcttcta caactggaca     1200
          tctaggttga agagccacat caaccccact ggcacagtgc tgctgcagct ggagaacacc     1260
          atgcagatga gcctgaagga cctgctttaa                                      1290
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  1290]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcactggata atggactggc aagaacccca      120
          accatgggtt ggctgcactg ggagaggttt atgtgtaatc tggactgtca agaggagcca      180
          gactcctgca tctctgagaa gctcttcatg gagatggctg agaggatggt gagtgaaggc      240
          tggaaggatg ctggttatga gtacctgtgc attgatgact gctggatggc ccctcagaga      300
          gattcagagg gcagactgca agcagatccc cagaggttcc cccatggcat taggcaactg      360
          gccaactatg tccactccaa gggcctgaag ctgggcatct atgctgatgt gggcaacaag      420
          acctgtgctg gcttccctgg ctcctttggc tactatgata ttgatgccca gacctttgct      480
          gactggggtg tggacctgct caagtttgat ggctgctact gtgacagcct ggagaacctg      540
          gctgatggtt acaagcacat gtctcttgct ctgaacagaa ctggtagaag cattgtttac      600
          agctgtgagt ggccactgta catgtggccc ttccagaagc ccaactacac tgagatcaga      660
          cagtactgca accattggag gaactttgca gacattgatg attcctgggc ctccatcaag      720
          agcatcctgg actggacttc cagaaaccaa gagagaattg tggatgttgc tggacctgga      780
          ggatggaatg accctgacat gctggtgatt ggaaattttg ggctgtcctg ggaccagcaa      840
          gtgactcaga tggccagctg ggccatcatg gcagcccccc tgttcatgag caatgatctc      900
          agacacattt ccccccaagc caaggccctg cttcaagaca aagatgtcat tgctattaat      960
          caagatcctt tgggcaagca aggctaccag ctgaggaagg gagacaactt tgaggtgtgg     1020
          gaaagacctc tgtctggaga tgcctgggct gtggctatca tcaatagaca agaaattggt     1080
          ggccccagat cctacaccat ccctgttgcc tctctgggaa aaggagtggc ctgcaatcca     1140
          gcttgcttca tcacccagct cctcccagtg aagaggcagc tgggtttcta caactggaca     1200
          agcagattga agtcccacat caaccccact ggcacagtgc tgctgcagct ggaaaacacc     1260
          atgcagatgt ccctgaagga cctcctgtga                                      1290
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  1290]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  44]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcacttgata atggactggc aagaacccca      120
          accatgggct ggctgcactg ggaaagattc atgtgtaatc tggactgtca agaagaacca      180
          gattcctgca tctctgagaa gctgtttatg gagatggctg agaggatggt gtcagaagga      240
          tggaaggatg ctggttatga gtacctgtgc attgatgact gctggatggc cccccagaga      300
          gacagtgaag gcagacttca agcagaccct cagaggttcc cccatggcat taggcaacta      360
          gccaactatg tccactccaa gggcctgaaa ctgggcatct atgctgatgt gggcaacaag      420
          acctgtgctg gcttccctgg ctcctttggc tactatgaca ttgatgccca gacctttgct      480
          gactggggtg tggacctcct caagtttgat ggctgctact gtgactccct ggaaaacctg      540
          gctgatggtt acaagcacat gagcctggcc ctgaacagaa ctggtaggag cattgtttac      600
          agctgtgagt ggccactgta catgtggccc ttccagaagc ccaactacac tgagatcaga      660
          cagtactgca accattggag gaactttgca gatattgatg attcttgggc cagcatcaag      720
          tccatcctgg actggacatc cagaaaccaa gagagaattg tggatgttgc tggacctgga      780
          ggttggaatg atcctgacat gctggtgatt ggaaattttg ggctgtcctg ggaccagcaa      840
          gtgactcaga tggcctcctg ggccatcatg gcagcccctc tcttcatgtc caatgacttg      900
          agacacattt ccccccaagc caaggccctc ctgcaagaca aagatgtcat tgctattaat      960
          caagatccct tgggcaagca aggctaccag ctgaggaagg gagacaactt tgaggtgtgg     1020
          gagaggcccc tgtctggaga tgcctgggct gtggctatca tcaatagaca agaaattggt     1080
          ggccccagat cctacaccat ccctgttgcc tctcttggca aaggagtggc ctgcaatcca     1140
          gcttgcttca tcacccagct ccttcctgtg aagaggcagc tgggtttcta caactggact     1200
          tcaaggttga agagccacat caaccccact ggcacagtgc tgctgcagct ggagaacacc     1260
          atgcagatgt ctctgaagga cctgctttaa                                      1290
          <![CDATA[<210>  45]]>
          <![CDATA[<211>  1290]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  45]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcactggata atggactggc aagaacccca      120
          accatgggct ggctgcactg ggagaggttc atgtgtaatc tggactgtca agaggagcct      180
          gactcctgca tctctgagaa gctgtttatg gagatggctg agaggatggt gtctgaagga      240
          tggaaggatg ctggctatga gtacctgtgc attgatgact gctggatggc ccctcagagg      300
          gacagtgaag gcagactgca agcagacccc cagagattcc cccatggcat tagacagctt      360
          gccaactatg tccactccaa gggcctgaaa ctgggcatct atgctgatgt gggcaacaag      420
          acctgtgctg gtttccctgg ctcctttggc tactatgaca ttgatgccca gacctttgct      480
          gactggggtg tggacctcct caagtttgat ggctgctact gtgacagcct ggaaaacctg      540
          gctgatggtt acaagcacat gtctctggcc ctgaacagaa ctggtaggag cattgtttac      600
          agctgtgagt ggccactgta catgtggccc ttccagaagc ccaactacac tgagatcaga      660
          cagtactgca accattggag gaactttgca gatattgatg attcctgggc ctccatcaag      720
          agcatcctgg actggacttc cagaaaccaa gagagaattg tggatgtagc tggacctgga      780
          ggttggaatg acccagacat gctggtgatt ggaaattttg ggctgtcctg ggaccagcaa      840
          gtgactcaga tggccagctg ggccatcatg gcagcccccc tcttcatgag caatgatctc      900
          agacacattt ccccccaagc caaggctctg ctccaagaca aagatgtcat tgctattaat      960
          caagatcccc tggggaagca aggctaccag ctgaggaagg gagacaactt tgaggtgtgg     1020
          gaaagacctc tgtctggaga tgcctgggct gtggctatca tcaatagaca agaaattggt     1080
          ggccccagat cctacaccat ccctgttgct tctcttggca aaggagtggc ctgcaatcca     1140
          gcttgcttca tcacccagct cctgcctgtg aagaggcagt tgggcttcta caactggaca     1200
          tctaggttga agtcccacat caaccccact ggcacagtgc tgctgcagct ggagaacacc     1260
          atgcagatgt ccctgaagga cctgctttaa                                      1290
          <![CDATA[<210>  46]]>
          <![CDATA[<211>  398]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  46]]>
          Leu Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Pro Met Gly Trp Leu His Trp 
          1               5                   10                  15      
          Glu Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys 
                      20                  25                  30          
          Ile Ser Glu Lys Leu Phe Glu Glu Met Ala Glu Arg Met Val Thr Asp 
                  35                  40                  45              
          Gly Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp 
              50                  55                  60                  
          Met Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn His Val His Ser Lys 
                          85                  90                  95      
          Gly Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala 
                      100                 105                 110         
          Gly Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe 
                  115                 120                 125             
          Ala Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp 
              130                 135                 140                 
          Ser Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Lys Thr Gly Arg Asp Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr 
                          165                 170                 175     
          Met Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys 
                      180                 185                 190         
          Asn His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Ala Ser Ile 
                  195                 200                 205             
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          Val Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly 
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          Ala Ile Met Ala Gly Pro Leu Phe Met Ser Asn Asp Leu Arg Ala Ile 
                      260                 265                 270         
          Ser Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Thr Asp Val Ile Ala Ile 
                  275                 280                 285             
          Asn Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Lys Gly Asp 
              290                 295                 300                 
          Asn Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Asp Ala Trp Ala Val 
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          Ala Ile Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Gly Tyr Thr Ile 
                          325                 330                 335     
          Pro Val Ala Lys Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe 
                      340                 345                 350         
          Ile Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Lys Leu Gly Phe Tyr Glu Ala 
                  355                 360                 365             
          Thr Ser Arg Leu Arg Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu 
              370                 375                 380                 
          Gln Leu Glu Asn Thr Met Gln Thr Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
          385                 390                 395             
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          Met Gln Leu Arg Asn Pro Glu Leu His Leu Gly Cys Ala Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Arg Phe Leu Ala Leu Val Ser Trp Asp Ile Pro Gly Ala Arg Ala Leu 
                      20                  25                  30          
          Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp Glu 
                  35                  40                  45              
          Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Glu Lys Leu Phe Met Glu Met Ala Glu Arg Met Val Ser Glu Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp Met 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
          Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn Tyr Val His Ser Lys Gly 
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          Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala Gly 
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          Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe Ala 
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          Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp Ser 
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          Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu Asn 
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          Arg Thr Gly Arg Pro Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr Met 
                  195                 200                 205             
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          His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Ala Ser Ile Lys 
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          Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Arg Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp Val 
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          Ile Met Ala Ala Pro Leu Phe Met Ser Asn Asp Leu Arg His Ile Ser 
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          Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile Asn 
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                          325                 330                 335     
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                  355                 360                 365             
          Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe Ile 
              370                 375                 380                 
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          Met Gln Leu Arg Asn Pro Glu Leu His Leu Gly Cys Ala Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Arg Phe Leu Ala Leu Val Ser Trp Asp Ile Pro Gly Ala Arg Ala Leu 
                      20                  25                  30          
          Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Pro Met Gly Trp Leu His Trp Glu 
                  35                  40                  45              
          Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Glu Lys Leu Phe Glu Glu Met Ala Glu Arg Met Val Thr Glu Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp Met 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn His Val His Ser Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala Gly 
              130                 135                 140                 
          Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe Ala 
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          His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Ala Ser Ile Lys 
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              50                  55                  60                  
          Ser Glu Lys Leu Phe Glu Glu Met Ala Glu Arg Met Val Thr Glu Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp Met 
                          85                  90                  95      
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                      100                 105                 110         
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          Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala Gly 
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          Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe Ala 
          145                 150                 155                 160 
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                          165                 170                 175     
          Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu Asn 
                      180                 185                 190         
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                  195                 200                 205             
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          225                 230                 235                 240 
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                          245                 250                 255     
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                      260                 265                 270         
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                  275                 280                 285             
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              290                 295                 300                 
          Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile Asn 
          305                 310                 315                 320 
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                          325                 330                 335     
          Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Asp Ala Trp Ala Val Ala 
                      340                 345                 350         
          Ile Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Ser Tyr Thr Ile Pro 
                  355                 360                 365             
          Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe Ile 
              370                 375                 380                 
          Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Lys Leu Gly Phe Tyr Glu Ala Thr 
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          Leu Glu Asn Thr Met Gln Thr Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
                      420                 425                 
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          1               5                   10                  15      
          Arg Phe Leu Ala Leu Val Ser Trp Asp Ile Pro Gly Ala Arg Ala Leu 
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                  35                  40                  45              
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                          325                 330                 335     
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          Met Gln Leu Arg Asn Pro Glu Leu His Leu Gly Cys Ala Leu Ala Leu 
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                  35                  40                  45              
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                          325                 330                 335     
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                  355                 360                 365             
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          Met Gln Leu Arg Asn Pro Glu Leu His Leu Gly Cys Ala Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
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          Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn His Val His Ser Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala Gly 
              130                 135                 140                 
          Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu Asn 
                      180                 185                 190         
          Arg Thr Gly Arg Ser Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr Met 
                  195                 200                 205             
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          225                 230                 235                 240 
          Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Phe Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp Val 
                          245                 250                 255     
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                      260                 265                 270         
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              290                 295                 300                 
          Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Gln Gly Asp Asn 
                          325                 330                 335     
          Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Asp Ala Trp Ala Val Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Ser Tyr Thr Ile Pro 
                  355                 360                 365             
          Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe Ile 
              370                 375                 380                 
          Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Lys Leu Gly Phe Tyr Glu Trp Thr 
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                          405                 410                 415     
          Leu Glu Asn Thr Met Gln Met Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
                      420                 425                 
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          Met Gln Leu Arg Asn Pro Glu Leu His Leu Gly Cys Ala Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Arg Phe Leu Ala Leu Val Ser Trp Asp Ile Pro Gly Ala Arg Ala Leu 
                      20                  25                  30          
          Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp Glu 
                  35                  40                  45              
          Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Glu Lys Leu Phe Glu Glu Met Ala Glu Arg Met Val Thr Asp Gly 
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          Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp Met 
                          85                  90                  95      
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          Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn His Val His Ser Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala Gly 
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          Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu Asn 
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          Arg Thr Gly Arg Ser Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr Met 
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                          325                 330                 335     
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          Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe Ile 
              370                 375                 380                 
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          Ser Arg Leu Lys Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu Gln 
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          Met Gln Leu Arg Asn Pro Glu Leu His Leu Gly Cys Ala Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Arg Phe Leu Ala Leu Val Ser Trp Asp Ile Pro Gly Ala Arg Ala Leu 
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          Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp Glu 
                  35                  40                  45              
          Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Glu Lys Leu Phe Glu Glu Met Ala Glu Arg Met Val Thr Asp Gly 
          65                  70                  75                  80  
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                      100                 105                 110         
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                  115                 120                 125             
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              130                 135                 140                 
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                          165                 170                 175     
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          Met Gln Leu Arg Asn Pro Glu Leu His Leu Gly Cys Ala Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Arg Phe Leu Ala Leu Val Ser Trp Asp Ile Pro Gly Ala Arg Ala Leu 
                      20                  25                  30          
          Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Pro Met Gly Trp Leu His Trp Glu 
                  35                  40                  45              
          Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Glu Lys Leu Phe Glu Glu Met Ala Glu Arg Met Val Thr Asp Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp Met 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn His Val His Ser Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala Gly 
              130                 135                 140                 
          Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu Asn 
                      180                 185                 190         
          Lys Thr Gly Arg Pro Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr Met 
                  195                 200                 205             
          Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys Asn 
              210                 215                 220                 
          His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Ala Ser Ile Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Arg Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp Val 
                          245                 250                 255     
          Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Phe Gly Leu Ser Trp Asp Gln Gln Val Thr Gln Met Ala Leu Trp Ala 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Ala Ala Pro Leu Phe Met Ser Asn Asp Leu Arg His Ile Ser 
              290                 295                 300                 
          Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Lys Gly Asp Asn 
                          325                 330                 335     
          Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Asp Ala Trp Ala Val Ala 
                      340                 345                 350         
          Ile Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Ser Tyr Thr Ile Pro 
                  355                 360                 365             
          Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe Ile 
              370                 375                 380                 
          Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Gln Leu Gly Phe Tyr Asn Trp Thr 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Arg Leu Lys Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu Gln 
                          405                 410                 415     
          Leu Glu Asn Thr Met Gln Met Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
                      420                 425                 
          <![CDATA[<210>  61]]>
          <![CDATA[<211>  1290]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  61]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcactggata atggattggc tagaacacct      120
          actatggggt ggcttcactg ggagaggttc atgtgcaacc tcgactgtca ggaagaacca      180
          gacagctgca tctccgagaa gctgtttatg gaaatggccg agcgaatggt gtcagaaggc      240
          tggaaagatg caggttacga gtatctgtgt attgacgatt gctggatggc tccgcaacgg      300
          gacagtgagg gcagacttca ggcagatcct cagcgcttcc cacatgggat aaggcagctc      360
          gccaactacg tccactctaa gggactgaaa ctgggcatct atgctgacgt ggggaataag      420
          acctgtgcgg gatttcccgg tagcttcggc tactacgaca ttgatgccca gacctttgcc      480
          gattggggag ttgacctcct caaattcgat ggctgctatt gtgactcttt ggagaacctg      540
          gcagacgggt acaagcatat gtccctggcc ctgaatcgga caggtagacc catcgtgtat      600
          agttgcgaat ggccccttta catgtggcct tttcaaaagc caaactacac tgagattcgc      660
          cagtattgca atcactggag gaacttcgct gatatcgatg actcatgggc gagcatcaaa      720
          tccatattgg attggacctc tcggaatcag gagcgcattg tagacgtcgc aggacccggc      780
          ggctggaacg accctgatat gctggtgatc gggaattttg gtcttagctg ggaccagcaa      840
          gttacgcaga tggctctgtg ggcaattatg gcagccccac tcttcatgtc caacgatctg      900
          cgacacatct ctcctcaagc taaggctctg ctgcaggaca aagatgtgat tgccatcaat      960
          caggacccac tcggaaagca gggctatcag ctgagaaaag gcgacaactt cgaagtctgg     1020
          gaaaggccac tttcaggaga cgcatgggct gtggccataa taaaccggca agagattggt     1080
          gggcccagga gctacacaat ccccgttgcc agtttgggca agggagtggc gtgtaatcct     1140
          gcctgcttta tcactcagct gctcccagtc aaaagacagc tggggttcta tgagtggacc     1200
          tcccgcctca agagccatat taatcccaca ggtaccgtac tgctgcaact tgaaaacacg     1260
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          <![CDATA[<220>]]>
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          <![CDATA[<400>  62]]>
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          tggaaagatg caggttacga gtatctgtgt attgacgatt gctggatggc cccacaacgg      300
          gattctgagg gaagacttca ggctgatccg cagcgcttcc ctcatggcat aaggcagctg      360
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          acctgtgccg gttttccggg atcattcggg tattatgaca ttgacgccca aacgtttgct      480
          gattggggcg ttgacctgct gaaattcgat ggttgctact gtgacagcct cgaaaacctg      540
          gcagacggct acaagcatat gtctctcgcc ctgaatagaa ccggtcggcc aatcgtatat      600
          tcctgcgagt ggcctcttta catgtggcca tttcagaaac cgaactacac agaaattcgc      660
          cagtattgca atcattggag gaacttcgct gatatcgatg actcatgggc ctccataaag      720
          agcatcttgg actggaccag tcggaatcag gagcgaattg tggatgtcgc aggccctgga      780
          ggatggaacg atccagacat gctggtgatc ggcaattttg gcctctcttg ggaccagcag      840
          gttacccaaa tggctctgtg ggcaattatg gccggtcctc ttttcatgag caacgatctg      900
          cgcgcgatct caccacaggc aaaggccctg ctccaagaca aagatgtgat agccatcaat      960
          caggacccgt tgggaaagca gggctaccag ctgagaaaag gcgacaactt tgaggtctgg     1020
          gaaaggcctt tgagtggaga tgcgtgggct gtggccatta ttaatcggca agagatcgga     1080
          ggtccacgct cctatacaat tcctgtagca tctcttggca agggcgttgc ctgtaaccca     1140
          gcttgcttca tcactcagct tctgccggtg aagagaaaac tgggtttcta cgaagctacc     1200
          agcaggctcc gatcccacat caaccctaca ggaaccgtcc tcttgcagct ggagaatacg     1260
          atgcagactt cactgaagga cctcctgtag                                      1290
          <![CDATA[<210>  63]]>
          <![CDATA[<211>  1290]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
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          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
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          gattctgagg gaagacttca ggctgatccg cagcgcttcc ctcatggcat aaggcagctg      360
          gcaaaccacg tccacagtaa ggggctcaaa ttgggaatct acgcggacgt gggcaataag      420
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          gcagacggct acaagcatat gtctctcgcc ctgaataaaa ccggtcggcc aatcgtatat      600
          tcctgcgagt ggcctcttta catgtggcca tttcagaaac cgaactacac agaaattcgc      660
          cagtattgca atcattggag gaacttcgct gatatcgatg actcatgggc ctccataaag      720
          agcatcttgg actggaccag tcggaatcag gagcgaattg tggatgtcgc aggccctgga      780
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          atgcagactt cactgaagga cctcctgtag                                      1290
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          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
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          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcatttggac aatgggctgg ccaggacacc      120
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          gacatgtgct ggatttcccg ggagtttcgg ttattatgac attgacgcac agacctttgc      480
          tgattggggg gtcgacctcc tgaagtttga cggttgttat tgcgacagcc ttgaaaatct      540
          ggccgacggt tacaaacaca tgtcccttgc actgaataga actggtcggt ccatcgtcta      600
          tagttgtgag tggccgcttt acatgtggcc ttttcagaaa cccaactaca ccgagattcg      660
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          atccatcctg gattggacat cattcaacca ggagcgcatc gtggacgttg ctggacctgg      780
          cgggtggaat gatccagaca tgcttgtgat cggaaacttc ggtctctctt ggaaccagca      840
          agtcactcaa atggcactct gggcaattat ggccgccccc ctctttatgt ccaacgatct      900
          gaggcatatc agtcctcagg ctaaagccct gctgcaagac aaggatgtga ttgctatcaa      960
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          ggaaaggcca ctttcaggcg atgcatgggc cgttgcaatg atcaacaggc aagaaattgg     1080
          cggacccagg agctatacaa taccagtggc gtcactgggt aagggagtcg cctgtaaccc     1140
          cgcatgcttc attactcaac ttctgccagt gaaacgaaaa ctcggattct atgagtggac     1200
          ctcaagactg aggtctcata ttaacccgac agggactgtt ctcctccagc tggaaaacac     1260
          aatgcagatg agcctgaagg atctcttgtg a                                    1291
          <![CDATA[<210>  69]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  69]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
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          acttgtgccg gatttcccgg cagtttcgga tactatgaca ttgatgcaca gactttcgct      480
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          <![CDATA[<210>  70]]>
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          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcattggaca atgggctggc caggacacct      120
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          gactcatgca tctctgagaa gttgttcgaa gagatggctg aactgatggt gtccgagggg      240
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          acatgtgctg gtttccccgg tagctttgga tactacgaca tcgacgccca gacatttgct      480
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          agacacattt ccccacaggc caaggcattg ctgcaggaca aagacgtgat cgccattaac      960
          caggacccac tgggcaagca agggtaccaa cttaggcagg gagataattt tgaggtctgg     1020
          gagcgcccac tcagcggaga cgcctgggcc gttgccatga taaacagaca ggagattggc     1080
          ggccccagat cctacacaat tcctgtcgct agcctgggca agggggtggc ttgtaatccc     1140
          gcctgcttta taacccagct gctgccagtg aaacggaaac tcgggttcta tgaatggact     1200
          tctaggctca ggtctcatat taacccgaca gggactgttc tcctccagct ggaaaacaca     1260
          atgcagatga gcctgaagga tctcttgtga                                      1290
          <![CDATA[<210>  72]]>
          <![CDATA[<211>  1290]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  72]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcattggaca atgggctggc caggacacct      120
          actatgggct ggctccactg ggagcgcttt atgtgtaacc tcgactgcca agaggagcca      180
          gactcatgca tctctgagaa gttgttcgag gagatggcag aacgaatggt gacagatgga      240
          tggaaggacg ctggctacga gtatctgtgc atagatgatt gttggatggc ccctcagcga      300
          gactcagagg ggagactcca ggccgacccc cagcgatttc cacacggaat ccggcaactg      360
          gctaaccatg tgcactcaaa agggctcaag ctgggaattt atgctgacgt cgggaacaaa      420
          acttgtgcgg ggtttcccgg ctccttcgga tattacgaca tcgacgccca gactttcgca      480
          gactggggtg tggacctgct taagttcgac ggctgttact gcgatagtct ggaaaacttg      540
          gctgacggct ataagcacat gagtctcgcc ctgaaccgaa caggcagaag catagtctac      600
          tcctgcgaat ggccacttta catgtggcca ttccagaaac ctaattatac cgagatcaga      660
          caatactgta accattggcg aaacttcgcc gacattgacg atagttggaa gtcaatcaag      720
          tccatcctgg attggacctc taggaaccag gaaaggatcg tggacgtggc tggacctggc      780
          ggatggaacg atccagacat gctcgtgata ggaaactttg gactgtcatg ggatcagcaa      840
          gtaacacaga tggcgctctg ggccattatg gctgccccct tgtttatgtc taacgacctg      900
          aggcatatct ctcctcaagc caaggcactc ctgcaggaca aggacgttat cgccatcaac      960
          caggacccac tgggcaagca gggataccag ctgcggaaag gtgataactt cgaggtctgg     1020
          gagcgaccgc tttcaggaga cgcctgggca gttgcaatca tcaacaggca agaaattggt     1080
          gggccacggt cttatactat tcccgtggct tctctcggta agggcgtcgc ctgcaacccc     1140
          gcctgcttta tcacccaatt gttgcccgtt aagagaaaac tgggatttta cgaggcgaca     1200
          tccaggctga agtctcatat taacccgaca gggactgttc tcctccagct ggaaaacaca     1260
          atgcagatga gcctgaagga tctcttgtga                                      1290
          <![CDATA[<210>  73]]>
          <![CDATA[<211>  1289]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  73]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcatggacaa tggattggca aggacgccta      120
          ccatgggctg gctgcactgg gagcgcttca tgtgcaacct tgactgccag gaagagccag      180
          attcctgcat cagtgagaag ctcttcgagg agatggcaga gagaatggtc accgacggct      240
          ggaaggatgc aggttatgag tacctctgca ttgatgactg ttggatggct ccccaaagag      300
          attcagaagg cagacttcag gcagaccctc agcgctttcc tcatgggatt cgccagctag      360
          ctaatcacgt tcacagcaaa ggactgaagc tagggattta tgcagatgtt ggaaataaaa      420
          cctgcgcagg cttccctggg agttttggat actacgacat tgatgcccag acctttgctg      480
          actggggagt agatctgcta aaatttgatg gttgttactg tgacagtttg gaaaatttgg      540
          cagatggtta taagcacatg tccttggccc tgaataggac tggcagaagc attgtgtact      600
          cctgtgagtg gcctctttat atgtggccct ttcaaaagcc caattataca gaaatccgac      660
          agtactgcaa tcactggcga aattttgctg acattgatga ttcctgggcc agtataaaga      720
          gtatcttgga ctggacatct agaaaccagg agagaattgt tgatgttgct ggaccagggg      780
          gttggaatga cccagatatg ttagtgattg gcaactttgg cctcagctgg gaccagcaag      840
          taactcagat ggccctctgg gctatcatgg ctgctccttt attcatgtct aatgacctcc      900
          gacacatcag ccctcaagcc aaagctctcc ttcaggataa ggacgtaatt gccatcaatc      960
          aggacccctt gggcaagcaa gggtaccagc ttagaaaggg agacaacttt gaagtgtggg     1020
          aacgacctct ctcaggcgat gcctgggctg tagctatcat aaaccggcag gagattggtg     1080
          gacctcgctc ttataccatc cccgttgctt ccctgggtaa aggagtggcc tgtaatcctg     1140
          cctgcttcat cacacagctc ctccctgtga aaaggcagct agggttctat aactggactt     1200
          caaggttaaa gagtcacata aatcccacag gcactgtttt gcttcagcta gaaaatacaa     1260
          tgcagatgtc attaaaagac ttactttaa                                       1289
          <![CDATA[<210>  74]]>
          <![CDATA[<211>  1289]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  74]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gcatggacaa tggattggca aggacgcctc      120
          ccatgggctg gctgcactgg gagcgcttca tgtgcaacct tgactgccag gaagagccag      180
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          cctgcttcat cacacagctc ctccctgtga aaaggcagct agggttctat aactggactt     1200
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          <![CDATA[<211>  429]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  75]]>
          Met Gln Leu Arg Asn Pro Glu Leu His Leu Gly Cys Ala Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Arg Phe Leu Ala Leu Val Ser Trp Asp Ile Pro Gly Ala Arg Ala Leu 
                      20                  25                  30          
          Asp Asn Gly Leu Ala Arg Thr Pro Thr Met Gly Trp Leu His Trp Glu 
                  35                  40                  45              
          Arg Phe Met Cys Asn Leu Asp Cys Gln Glu Glu Pro Asp Ser Cys Ile 
              50                  55                  60                  
          Ser Glu Lys Leu Phe Met Glu Met Ala Glu Leu Met Val Ser Glu Gly 
          65                  70                  75                  80  
          Trp Lys Asp Ala Gly Tyr Glu Tyr Leu Cys Ile Asp Asp Cys Trp Met 
                          85                  90                  95      
          Ala Pro Gln Arg Asp Ser Glu Gly Arg Leu Gln Ala Asp Pro Gln Arg 
                      100                 105                 110         
          Phe Pro His Gly Ile Arg Gln Leu Ala Asn Tyr Val His Ser Lys Gly 
                  115                 120                 125             
          Leu Lys Leu Gly Ile Tyr Ala Asp Val Gly Asn Lys Thr Cys Ala Gly 
              130                 135                 140                 
          Phe Pro Gly Ser Phe Gly Tyr Tyr Asp Ile Asp Ala Gln Thr Phe Ala 
          145                 150                 155                 160 
          Asp Trp Gly Val Asp Leu Leu Lys Phe Asp Gly Cys Tyr Cys Asp Ser 
                          165                 170                 175     
          Leu Glu Asn Leu Ala Asp Gly Tyr Lys His Met Ser Leu Ala Leu Asn 
                      180                 185                 190         
          Arg Thr Gly Arg Ser Ile Val Tyr Ser Cys Glu Trp Pro Leu Tyr Met 
                  195                 200                 205             
          Trp Pro Phe Gln Lys Pro Asn Tyr Thr Glu Ile Arg Gln Tyr Cys Asn 
              210                 215                 220                 
          His Trp Arg Asn Phe Ala Asp Ile Asp Asp Ser Trp Lys Ser Ile Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Ser Ile Leu Asp Trp Thr Ser Phe Asn Gln Glu Arg Ile Val Asp Val 
                          245                 250                 255     
          Ala Gly Pro Gly Gly Trp Asn Asp Pro Asp Met Leu Val Ile Gly Asn 
                      260                 265                 270         
          Phe Gly Leu Ser Trp Asn Gln Gln Val Thr Gln Met Ala Leu Trp Ala 
                  275                 280                 285             
          Ile Met Ala Ala Pro Leu Phe Met Ser Asn Asp Leu Arg His Ile Ser 
              290                 295                 300                 
          Pro Gln Ala Lys Ala Leu Leu Gln Asp Lys Asp Val Ile Ala Ile Asn 
          305                 310                 315                 320 
          Gln Asp Pro Leu Gly Lys Gln Gly Tyr Gln Leu Arg Gln Gly Asp Asn 
                          325                 330                 335     
          Phe Glu Val Trp Glu Arg Pro Leu Ser Gly Leu Ala Trp Ala Val Ala 
                      340                 345                 350         
          Met Ile Asn Arg Gln Glu Ile Gly Gly Pro Arg Ser Tyr Thr Ile Ala 
                  355                 360                 365             
          Val Ala Ser Leu Gly Lys Gly Val Ala Cys Asn Pro Ala Cys Phe Ile 
              370                 375                 380                 
          Thr Gln Leu Leu Pro Val Lys Arg Lys Leu Gly Phe Tyr Glu Trp Thr 
          385                 390                 395                 400 
          Ser Arg Leu Arg Ser His Ile Asn Pro Thr Gly Thr Val Leu Leu Gln 
                          405                 410                 415     
          Leu Glu Asn Thr Met Gln Met Ser Leu Lys Asp Leu Leu 
                      420                 425                 
          <![CDATA[<210>  76]]>
          <![CDATA[<211>  31]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多肽]]>
          <![CDATA[<400>  76]]>
          Met Gln Leu Arg Asn Pro Glu Leu His Leu Gly Cys Ala Leu Ala Leu 
          1               5                   10                  15      
          Arg Phe Leu Ala Leu Val Ser Trp Asp Ile Pro Gly Ala Arg Ala 
                      20                  25                  30      
          <![CDATA[<210>  77]]>
          <![CDATA[<211>  93]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人工序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  合成多核苷酸]]>
          <![CDATA[<400>  77]]>
          atgcagctga ggaacccaga actacatctg ggctgcgcgc ttgcgcttcg cttcctggcc       60
          ctcgtttcct gggacatccc tggggctaga gca                                    93
Figure 12_A0101_SEQ_0001
Figure 12_A0101_SEQ_0002
Figure 12_A0101_SEQ_0003
Figure 12_A0101_SEQ_0004
Figure 12_A0101_SEQ_0005
Figure 12_A0101_SEQ_0006
Figure 12_A0101_SEQ_0007
Figure 12_A0101_SEQ_0008
Figure 12_A0101_SEQ_0009
Figure 12_A0101_SEQ_0010
Figure 12_A0101_SEQ_0011
Figure 12_A0101_SEQ_0012
Figure 12_A0101_SEQ_0013
Figure 12_A0101_SEQ_0014
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Figure 12_A0101_SEQ_0019
Figure 12_A0101_SEQ_0020
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Figure 12_A0101_SEQ_0023
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Claims (43)

  1. 一種重組腺相關病毒（rAAV）載體，其封裝於一具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中，所述載體包含 a. 一5’反向終端重複序列（ITR）； b. 一泛素化啟動子； c. 一編碼α-GAL酶之核苷酸序列； d. 一聚A；及 e. 一3’ ITR。
  2. 一種重組腺相關病毒（rAAV）載體，其封裝於一具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中，所述載體包含 a. 一5’反向終端重複序列（ITR）； b. 一泛素化啟動子； c. 一編碼α-GAL酶之核苷酸序列； d. 一土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）； e. 一聚A；及 f. 一3’ ITR。
  3. 如請求項1或2所述之重組rAAV載體，其中該AAV衣殼為選自AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV4衣殼、AAV5衣殼、AAV6衣殼、AAV7衣殼、AAV8衣殼或AAV9衣殼的廣趨性AAV衣殼。
  4. 如請求項3所述之重組rAAV載體，其中該廣趨性AAV衣殼為AAV9。
  5. 如請求項1所述之rAAV載體，其中該泛素化啟動子係選自雞β肌動蛋白（CBA）啟動子、EF-1α啟動子、PGK啟動子、UBC啟動子、LSE β-葡萄糖醛酸苷酶（GUSB）啟動子或泛染色質開放元件（UCOE）啟動子。
  6. 如請求項1所述之rAAV載體，其中該泛素化啟動子包含細胞巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及兔β珠蛋白內含子。
  7. 如請求項1所述之rAAV載體，其中該泛素化啟動子包含縮短的EF-1α啟動子及一或多個內含子。
  8. 如請求項7所述之rAAV載體，其中該一或多個內含子係來自雞β肌動蛋白及/或兔β-珠蛋白基因。
  9. 如請求項4所述之rAAV載體，其中該AAV9衣殼為自然存在或經修飾的。
  10. 如請求項2所述之rAAV載體，其中該WPRE序列係經修飾。
  11. 如請求項10所述之rAAV載體，其中該WPRE序列為WPRE mut6delATG。
  12. 如請求項1或2所述之rAAV載體，其中該聚A為牛生長荷爾蒙（BGH）聚A。
  13. 如前述請求項中任一項所述之rAAV載體，其中該編碼α-GAL酶之核苷酸序列為係經密碼子優化。
  14. 如請求項13所述之rAAV載體，其中該編碼α-GAL酶之核苷酸序列係對人類細胞進行密碼子優化。
  15. 如請求項1至13中任一項所述之rAAV載體，其中該α-GAL酶具有未經修飾之序列。
  16. 一種治療法布瑞氏症之方法，該方法包含對有需要的個體投予前述請求項中任一項所述之重組腺相關病毒載體（rAAV）。
  17. 一種醫藥組成物，其包含請求項1至15中任一項所述之該rAAV載體。
  18. 一種細胞，其包含請求項1至15中任一項所述之該rAAV載體。
  19. 一種治療法布瑞氏症之方法，該方法包含向有需要的個體投與封裝於一具有廣泛組織趨性之衣殼中的一重組腺相關病毒載體（rAAV），該載體包含： a. 一5’反向終端重複序列（ITR）； b. 一泛素化啟動子，其包含有一巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及一兔β珠蛋白內含子； c. 一編碼α-GAL酶之核苷酸序列； d. 一聚A；及 e. 一3’ ITR。
  20. 一種治療法布瑞氏症之方法，該方法包含向有需要的個體投與封裝於一具有廣泛組織趨性之衣殼中的一重組腺相關病毒載體（rAAV），該載體包含： a. 一5’反向終端重複序列（ITR）； b. 一泛素化啟動子，其包含有一巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及一兔β珠蛋白內含子； c. 一編碼α-GAL酶之核苷酸序列； d. 一土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）； e. 一聚A；及 f. 一3’ ITR。
  21. 如請求項19或20所述之方法，其中該AAV衣殼為選自AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV4衣殼、AAV5衣殼、AAV6衣殼、AAV7衣殼、AAV8衣殼或AAV9衣殼的廣趨性AAV衣殼。
  22. 如請求項21所述之重組rAAV載體，其中該廣趨性AAV衣殼為AAV9。
  23. 如請求項19或20所述之方法，其中該編碼α-GAL酶之核苷酸序列係經密碼子優化。
  24. 如請求項19或20所述之方法，其中該編碼α-GAL酶之核苷酸序列經工程化。
  25. 如請求項24所述之方法，其中該編碼α-GAL酶之核苷酸序列係經工程化及經密碼子優化。
  26. 如請求項19至22中任一項所述之方法，其中該α-GAL酶具有未經修飾序列。
  27. 如請求項20所述之方法，其中該WPRE是WPRE mut6delATG。
  28. 如請求項20所述之方法，其中該聚A為牛生長荷爾蒙（BGH）聚A。
  29. 如請求項19至28中任一項所述之方法，其中該rAAV載體係藉由靜脈內、皮下或經皮投與。
  30. 如請求項29所述之方法，其中該經皮投藥係通過基因槍。
  31. 如請求項19至30中任一項所述之方法，其中該rAAV載體在投與之後為游離型。
  32. 如請求項19或20所述之方法，其中該rAAV載體以低於含有AAV1衣殼、AAV2衣殼、AAV3衣殼、AAV4衣殼、AAV5衣殼、AAV6衣殼、AAV7衣殼或AAV8衣殼之rAAV載體的劑量來達成治療效果，其特異性地靶向於使用一肝特異性啟動子之該肝。
  33. 如請求項19至32中任一項所述之方法，其中在投與該rAAV載體之後，該個體在該血清中可偵測到α-GAL至少5星期、10星期、15星期、26星期、1年、5年、10年或15年。
  34. 如請求項33所述之方法，其中該個體在該血清中可偵測α-GAL超過15星期。
  35. 如請求項19至34中任一項所述之方法，其中投與導致在該個體的肝臟、腎臟、心臟及胃腸道中之一或多者中表現α-GAL酶。
  36. 如請求項19至34中任一項所述之方法，其中該rAAV載體之投與導致在該個體之肝、心臟、腎臟及胃腸道中之一或多者醯基鞘氨醇三己糖（gb3）之含量降低。
  37. 一種在細胞中表現α-GAL酶之方法，該方法包含投與封裝於一AAV9衣殼中之一rAAV載體，所述載體包含： a. 一5’反向終端重複序列（ITR）； b. 一泛素化啟動子，其包含有一巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及一兔β珠蛋白內含子； c. 一編碼α-GAL酶之核苷酸序列； d. 一牛生長荷爾蒙（BGH）聚A；及 e. 一3’ ITR。
  38. 一種在細胞中表現α-GAL酶之方法，該方法包含投與封裝於一AAV9衣殼中之一rAAV載體，所述載體包含： a. 一5’反向終端重複序列（ITR）； b. 一泛素化啟動子，其包含有一巨細胞病毒（CMV）增強子、雞β肌動蛋白啟動子、及一兔β珠蛋白內含子； c. 一編碼α-GAL酶之核苷酸序列； d. 一具有mut6delATG突變的土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）； e. 一牛生長荷爾蒙（BGH）聚A；及 f. 一3’ ITR。
  39. 一種重組腺相關病毒（rAAV）載體，其封裝於一具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中，所述載體包含 a. 一5’反向終端重複序列（ITR）； b. 一肝臟特異性啟動子； c. 一編碼α-GAL酶之核苷酸序列； d. 一聚A；及 e. 一3’ ITR。
  40. 一種重組腺相關病毒（rAAV）載體，其封裝於一具有廣泛組織趨性之AAV衣殼中，所述載體包含 a. 一5’反向終端重複序列（ITR）； b. 一肝臟-特異性啟動子； c. 一編碼α-GAL酶之核苷酸序列； d. 一土撥鼠肝炎病毒轉錄後調控元件（WPRE）； e. 一聚A；及 f. 一3’ ITR。
  41. 如請求項39或40所述之載體，其中該編碼α-GAL酶之核苷酸序列係經密碼子優化。
  42. 如請求項39或40所述之載體，其中該編碼α-GAL酶之核苷酸序列係經工程化。
  43. 如請求項39或40所述之載體，其中該編碼α-GAL酶之核苷酸序列係經密碼子優化且經工程化。
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