JP2022534741A - 減弱化された抗ウイルス導入ベクター免疫応答のための方法および組成物 - Google Patents

減弱化された抗ウイルス導入ベクター免疫応答のための方法および組成物 Download PDF

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Abstract

免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとコルチコステロイドとを組み合わせてウイルス導入ベクターを投与するための方法および関連する組成物またはキットが、本明細書に提供される。

Description

関連出願についての相互参照
本出願は、２０１９年５月２８日に出願の米国仮出願第６２／８５３，６４７号の米国特許法§１１９の下で、利益を主張し、その全体の開示は、参照により、ここで組み込まれる。
発明の分野
本発明は、対象に、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびコルチコステロイドを伴うウイルス導入ベクターを投与するための方法、および関連する組成物に関する。好ましくは、該方法および組成物は、増加した導入遺伝子発現を達成し、および／またはウイルス導入ベクターに対する免疫応答を減弱化し、およびより好ましくは、増加した導入遺伝子発現、および／またはウイルスの導入ベクターに対する減弱化された免疫応答が、ウイルス導入ベクター、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、およびコルチコステロイドの複数回、例として、２回、３回、またはそれ以上の投与にわたって、維持される。
一側面において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、ウイルス導入ベクター、およびナノキャリアに連結されていないコルチコステロイドの、対象への随伴投与によって、対象における抗ウイルス導入ベクターの減弱された応答を確立することを含む方法が、提供される。
本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、抗ウイルス導入ベクターの減弱化された応答は、ウイルス導入ベクターに対するＩｇＧおよび／またはＩｇＭ応答である。
別の側面において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、ウイルスベクター、およびナノキャリアに連結されていないコルチコステロイドを、対象に、反復して、随伴投与することによって、対象におけるウイルス導入ベクターの導入遺伝子発現をエスカレートさせることを含む方法が、提供される。
本明細書に提供される方法のいずれか１つの一態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、ウイルス導入ベクター、およびナノキャリアに連結されていないコルチコステロイドの随伴投与は、反復される（例として、１、２、３、４、または５回）。
提供される方法、組成物、またはキットのいずれか１つの一態様において、該ウイルス導入ベクターは、本請求項のいずれか１つにおいて定義されたかかるベクターのいずれか１つなどの、本明細書に提供されるウイルス導入ベクターのいずれか１つである。
提供される方法、組成物、またはキットのいずれか１つの一態様において、該合成ナノキャリアは、本請求項のいずれか１つにおいて定義されたかかる合成ナノキャリアのいずれか１つなどの、本明細書に提供される合成ナノキャリアのいずれか１つである。
提供される方法、組成物、またはキットのいずれか１つの一態様において、コルチコステロイドは、以下から成る群から選択される：ベサメタゾン、コーチゾン、デキサメタゾン、ベサメタゾン(ethamethasoneb)、ハイドロコーチゾン、プレドノゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、およびトリアムシノロン。
提供される方法、組成物、またはキットのいずれか１つの一態様において、コルチコステロイドは、全身投与されるか、または全身送達のために製剤化される。
別の側面において、本明細書に提供される組成物または組成物の組み合わせのいずれか１つを含むキットが、提供される。提供されるキットのいずれか１つの一態様において、キットは、使用のための説明書をさらに含む。提供されるキットのいずれか１つの一態様において、使用のための説明書は、本明細書に提供される方法のいずれか１つを実行するための説明書を、含む。
別の側面において、例のいずれか１つにおいて記載されるような方法または組成物が提供される。
別の側面において、組成物のいずれか１つは、提供される方法のいずれか１つにおける使用のためのものである。
別の側面において、方法または組成物のいずれか１つは、本明細書において記載される疾患または状態のいずれか１つを処置することにおける使用のためのものである。
別の側面において、方法または組成物のいずれか１つは、抗ウイルス導入ベクター応答（例として、ＩｇＧおよび／またはＩｇＭ応答）を減弱化させること、減弱化された抗ウイルス導入ベクター応答（例として、ＩｇＧおよび／またはＩｇＭ応答）を確立すること、導入遺伝子発現をエスカレートさせることにおける、および／またはウイルス導入ベクターの反復投与に関する使用のために、ある。
別の側面において、例の剤のいずれかの組み合わせを投与する方法が、提供される。別の側面において、剤のこれらの組み合わせのいずれか１つを含む組成物またはキットも、提供される。
方法、組成物、またはキットのいずれか１つの一態様において、該方法、組成物またはキットは、体液、または細胞免疫応答などの、別の免疫応答に加えてＩｇＭおよび／またはＩｇＭ応答を減弱化するために、ある。
方法、組成物、またはキットのいずれか１つの一態様において、該方法、組成物またはキットは、導入遺伝子発現を増加させることに加えて、ＩｇＧおよび／またはＩｇＭ応答を減弱化させるために、ある。
方法、組成物、またはキットのいずれか１つの一態様において、該方法、組成物またはキットは、体液、または細胞免疫応答などの、別の免疫応答に加えてＩｇＭおよび／またはＩｇＭ応答を減弱化するために、ある。
図１Ａ～１Ｂは、血清ＳＥＡＰ発現を示す。同じＡＡＶ、ＩｍｍＴＯＲ（商標）およびデキサメタゾン（Ｄｅｘ）注入スケジュールおよび同様のブリードスケジュールによる、２つの同様の試験が、図１Ａおよび図１Ｂにおいて示される。各時点に関する発現のレベル対１００とした未処置のマウスにおけるそれが（上段）、プレブーストに対するポストブースト比率であるとして（下段）、指し示される。 図２Ａ～２Ｂは、血清ＳＥＡＰ発現を示す。同じＡＡＶ、ＩｍｍＴＯＲ（商標）およびデキサメタゾン（Ｄｅｘ）注入スケジュールおよび同様のブリードスケジュールによる、２つの同様の試験が、図２Ａおよび図２Ｂにおいて示される。各時点に関する発現のレベル対１００とした未処置のマウスにおけるそれが（上段）、プレに対するポストブースト比率であるとして（下段）、指し示される。ブーストは、矢印によって示され、そして、ｄ２０でのすべての群における相対的なＳＥＡＰ発現は、図２Ａにおいて点線によって指し示される。 図３は、ＡＡＶに対するＩｇＭ応答の変遷を示す。同じＡＡＶ、ＩｍｍＴＯＲ（商標）およびデキサメタゾン（Ｄｅｘ）注入スケジュール、および同様のブリードスケジュールを伴なう２つの同様の試験が、実行され、そして、それらのＩｇＭ分析のデータは、統合された。ブーストは、矢印によって示される。 図４は、ＡＡＶに対するＩｇＧ応答の変遷を示す。図１Ｂにおいて示される同じ試験からの試料は、ＥＬＩＳＡにおいて、それらのＡＡＶに対するＩｇＧのレベルに関して、分析された。ブーストは、矢印によって示される。１０４日目までにＩｍｍＴＯＲ（商標）単独で、またはデキサメタゾンによって組み合わされて処置された群における、ＩｇＧ陽性マウスの数（全てのうち）が、示される。
図５Ａは、ＴｏｐＯＤに関するＡＡＶ ＩｇＭを示す（Ｄ６、１３、２０、３４、４９、６２、６９、７６、９０、１０４、１４２、１５４、１６１、１６８、１８２、１９６、および２３１）。 図５Ｂは、ＴｏｐＯＤに関するＡＡＶ ＩｇＭを示す（ｄ２３１）。 図６は、ＡＡＶ－ＳＥＡＰ、ＡＡＶ－ＳＥＡＰ＋ＩｍｍＴＯＲ、ＡＡＶ－ＳＥＡＰ＋ＩｍｍＴＯＲ／Ｄｅｘ、およびＡＡＶ－ＳＥＡＰ／Ｄｅｘに関する抗ＡＶＶ ＩｇＧＴｏｐＯＤ（４５０～５７０）を示す。
発明の詳細な説明
本発明を詳細に記載する前に、本発明は特に例示された材料またはプロセスに限定されず、そうであるからパラメーターは無論変化し得ることが理解されるべきである。また、本明細書において用いられる用語は、本発明の特定の態様のみを記載することを目的とし、本発明を記載する代替的用語の使用を限定することを意図しないことが理解されるべきである。
上記または下記のいずれであっても、本明細書において引用される全ての刊行物、特許および特許出願は、その全体において全ての目的のために本明細書により参考として援用される。かかる参考としての援用は、本明細書において引用される援用された刊行物、特許および特許出願のいずれかが先行技術を構成するという承認であることを意図しない。
本明細書および添付の請求の範囲において用いられる場合、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、内容が明らかに他を支持しない限り、複数の参照対象を含む。例えば、「ポリマー（ａ ｐｏｌｙｍｅｒ）」についての言及は、２以上のかかる分子の混和物または異なる分子量の単一のポリマー種の混和物を含み、「合成ナノキャリア（ａ ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ ｎａｎｏｃａｒｒｉｅｒ）」についての参照は、２以上のかかる合成ナノキャリアの混和物または複数のかかる合成ナノキャリアを含み、「ＤＮＡ分子（ａ ＤＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌｅ）」についての参照は、２以上のかかるＤＮＡ分子の混合物または複数のかかるＤＮＡ分子を含み、「免疫抑制剤（ａｎ ｉｍｍｕｎｏｓｕｏｏｒｅｓａｎｔ）」についての言及は、２以上のかかる免疫抑制剤分子の混和物または複数のかかる免疫抑制剤分子などを含む。
本明細書において用いられる場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」または「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」もしくは「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」などのそのバリエーションは、任意の列記される完全体（ｉｎｔｅｇｅｒ）（例えば、特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップもしくは限定）または完全体の群（例えば特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップもしくは限定）の包含を示すが、任意の他の完全体または完全体の群の除外を示すものではないと読まれるべきである。したがって、本明細書において用いられる場合、用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、包括的であり、さらなる列記されていない完全体または方法／プロセスステップを除外しない。
本明細書において提供される組成物および方法のいずれかの態様において、「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」または「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」で置き換えることができる。句「から本質的になる」は、本明細書において、特定された完全体（単数または複数）またはステップ、ならびに請求される発明の特徴または機能に実質的には影響を及ぼさないものを要求するために用いられる。本明細書において用いられる場合、用語「からなる」は、列記される完全体（例えば特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップもしくは限定）または完全体の群（例えば特色、要素、特徴、特性、方法／プロセスステップもしくは限定）単独での存在を示すために用いられる。
Ａ．序論
ウイルス導入ベクターは、遺伝子治療、遺伝子編集、遺伝子発現調節およびエクソンスキッピングなどの多様な適用のための有望な治療剤である。ウイルス導入ベクターは、したがって、治療用のタンパク質または核酸をコードする導入遺伝子を含んでもよい。残念ながら、これらの治療法の見込みは、ウイルス導入ベクターに対する免疫応答のため、大部分においてまだ完全には実現されていなかった。
しかしながら、遺伝子治療および他の応用におけるウイルスベクターの使用は、ウイルス導入ベクターに対する免疫応答、例として、ＩｇＧおよびＩｇＭ抗体応答のために、限定されてきた。その上、かかる免疫応答は、例として、減少された導入遺伝子発現によって示されるように、ウイルスベクターの減少された有効性に結果としてなることが、できる。ウイルスベクターに対する細胞性および液性免疫応答の両方は、有効性を減弱させ、および／またはかかる治療法を使用する能力を減少させることができる。これらの免疫応答は、抗体応答を含み、ウイルスカプシドまたはコートタンパク質、またはそれらのペプチドなどの、ウイルスベクターのウイルス抗原に、特異的であることができる。
本発明者らは、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアと、コルチコステロイド、例として、ナノキャリアに連結されていないコルチコステロイドとの随伴投与が、例として、ウイルス導入ベクターを単独で投与された対象と比較して、減弱化された免疫応答、例として、減少されたＩｇＧおよび／またはＩｇＭ抗体応答、および／または、改善された導入遺伝子発現を達成することができることを、驚くべきことに、発見した。重要なことに、この効果は、ウイルス導入ベクター、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、およびコルチコステロイドの、複数回、例として、２、３回またはそれ以上の投与にわたって、維持される。
処置のためのウイルス導入ベクターの効果的な使用に対する障害に対する解決方法を提供する方法および組成物が、本明細書において提供される。とりわけ、抗ウイルス導入ベクター免疫応答単独、または他の免疫応答と組み合わせにおいて、本明細書に提供される方法および関連した組成物によって減弱化されることができることが、予想外に発見された。該方法および組成物は、そして、とりわけ、ウイルス導入ベクター、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、およびコルチコステロイドの投与が、反復される、例として、２、３回またはそれ以上投与される場合に、ウイルス導入ベクターによる処置の有効性を増大させ、および免疫減弱化に備えることができる。
本発明をここで、以下により詳細に記載する。
Ｂ．定義
「投与すること」または「投与」または「投与する」とは、材料を、薬理学的に有用である様式において、対象に与えるかまたは分配することを意味する。
当該用語は、「投与させること（ｃａｕｓｉｎｇ ｔｏ ｂｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ）」を含むことを意図される。「投与させること」とは、別の当事者が材料を投与することを、直接的または間接的に、引き起こすこと、駆り立てること、奨励すること、補助すること、誘導することまたは指示することを含む。本明細書に提供される方法のいずれか１つは、ウイルス導入ベクター、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、およびコルチコステロイドを共投与するステップを、含んでもよいかまたはさらに含んでもよい。幾つかの態様において、共投与は、反復して行われる。本発明のまたさらなる態様において、共投与は、同時投与である。
本明細書において提供される対象への投与のための組成物または投与形態に関する「有効量」とは、対象において１以上の所望される結果、例えば、ＩｇＧまたはＩｇＭ応答などのウイルス導入ベクターに対する免疫応答の軽減もしくは除去、または抗ウイルス導入ベクター減弱化応答の発生を生成する、組成物または投与形態の量を指す。有効量は、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏでの目的のためのものであってよい。ｉｎ ｖｉｖｏでの目的のために、量は、医師が、ウイルス導入ベクターの投与の結果として望ましくない免疫応答を経験し得る対象のための臨床的利益を有し得ると考えるものであってよい。
本明細書において提供される方法のいずれか１つにおいて、投与される組成物は、本明細書において提供されるような有効量のうちのいずれか１つにおけるものであってよい。
有効量は、望ましくない免疫応答のレベルを低下させることを含み得るが、幾つかの態様において、それは、望ましくない免疫応答を完全に予防することを含む。有効量はまた、望ましくない免疫応答の発生を遅延させることを含んでもよい。有効量は、所望される治療的エンドポイントまたは所望される治療効果をもたらす量であってもよい。有効量は、好ましくは、対象において、ウイルス導入ベクター抗原などの抗原に対して、免疫寛容原性免疫応答をもたらす。有効量はまた、好ましくは、導入遺伝子発現の増大をもたらし得る（ウイルス導入ベクターにより送達されている導入遺伝子）。このことは、対象における多様な目的の組織または系において、導入遺伝子発現を測定することにより、決定することができる。この発現の増大は、局所的にまたは全身で測定することができる。有効量は、本明細書に記載の結果の１以上を達成する量であることも、できる。有効量は、対象のための治療の有効性に利益を与えるいかなる所望の結果にも、結果としてなる量であることもできる。前述のもののいずれかの達成は、慣用的な方法によりモニタリングすることができる。 提供される組成物および方法のいずれか１つのいくつかの態様において、有効量は、ウイルス導入ベクターに対する免疫応答の軽減もしくは除去、または抗ウイルス導入ベクター減弱応答の発生などの所望される免疫応答は、対象において、少なくとも１週間、少なくとも２週間または少なくとも１か月間にわたり持続する。提供される組成物および方法のいずれ１つのいくつかの態様において、有効量は、所望の免疫応答が、組成物または投与形態の少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回の投与に関して、対象中に残存するものである。提供される組成物および方法のいずれか１つの他の態様において、有効量は、ウイルス導入ベクターに対する免疫応答の軽減もしくは除去、または抗ウイルス導入ベクター減弱応答の発生などの、測定可能な所望される免疫応答をもたらすものである。幾つかの態様において、有効量は、測定可能な所望される免疫応答を（例えば特定のウイルス導入ベクター抗原に対して）、少なくとも１週間、少なくとも２週間または少なくとも１か月間にわたりもたらすものである。いくつかの態様において、有効量は、組成物または投与形態の少なくとも２回、少なくとも３回、少なくとも４回、少なくとも５回の投与に関する、測定可能な所望の免疫応答を、生成するものである。
有効量は、無論、処置された特定の対象；状態、疾患または障害の重篤度；年齢、身体条件、サイズおよび体重を含む個々の患者のパラメーター；処置の期間；併用治療の性質（あれば）；投与の特定の経路、ならびに保健実施者の知識および経験の範囲内の類似の要因に依存するであろう。これらの要因は、当業者に周知であり、慣用的な実験のみを用いて取り組むことができる。
「抗ウイルス導入ベクター免疫応答」または「ウイルス導入ベクターに対する免疫応答」または類似のものは、ウイルス導入ベクターに対する任意の望ましくない免疫応答を指す。幾つかの態様において、望ましくない免疫応答は、ウイルス導入ベクターまたはその抗原に対する抗原特異的免疫応答である。
幾つかの態様において、免疫応答は、ウイルス導入ベクターのウイルス抗原に対して特異的である。免疫応答は、ＩｇＧまたはＩｇＭ応答などの、抗ウイルス導入ベクター抗体応答でもよい。抗ウイルス導入ベクター免疫応答は、それが、対象において何らかの様式において、または対象もしくは別の対象において予測もしくは測定される応答と比較して、低下するかまたは取り除かれる場合に、「抗ウイルス導入ベクター減弱応答」であるといえる。いくつかの態様において、本明細書において提供される共投与の後に対象から得られた生物学的試料を用いて測定される、当該対象における抗ウイルス導入ベクター減弱化応答は、別の対象（試験対象など）から、この他の対象への、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとコルチコステロイドの共投与なしでのウイルス導入ベクター投与の後に得られた生物学的試料を用いて測定される抗ウイルス導入ベクター免疫応答と比較して、減少した抗ウイルス導入ベクター免疫応答（例として、ＩｇＧまたはＩｇＭ抗体応答）を含む。幾つかの態様において、抗ウイルス導入ベクター減弱応答は、本明細書において提供される共投与の後に対象から得られた生物学的試料中の、対象の生物学的試料に対して行われるその後のウイルス導入ベクターのｉｎ ｖｉｔｒｏでの負荷（ｃｈａｌｌｅｎｇｅ）により、別の対象（試験対象など）から、この他方の対象への、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびコルチコステロイドの共投与なしでのウイルス導入ベクターの投与の後に得られた生物学的試料に対して行われるウイルス導入ベクターのｉｎ ｖｉｔｒｏ負荷の後で検出される、抗ウイルス導入ベクター免疫応答と比較して、減少した抗ウイルス導入ベクター免疫応答（抗ＩｇＭ抗体など）である。
「抗原」とは、Ｂ細胞抗原またはＴ細胞抗原を意味する。抗原の型」とは、同じまたは実質的に同じ抗原性の特徴を共有する分子である。幾つかの態様において、抗原は、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、リポタンパク質、糖脂質、ポリヌクレオチド、多糖などであってよい。
「接着する（ａｔｔａｃｈ）」または「接着された（ａｔｔａｃｈｅｄ）」または「カップリングする」または「カップリングされた」（など）は、１つの実体（例えば部分）を別のものに化学的に会合させることを意味する。幾つかの態様において、接着は共有的であり、これは、接着が２つの実体の間の共有結合の存在に関して起こることを意味する。非共有的態様において、非共有的接着は、限定されないが以下を含む非共有的相互作用により媒介される：電荷相互作用、アフィニティー相互作用、金属配位、物理的吸着、主客相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファン・デル・ワールス相互作用、磁性相互作用、静電相互作用、双極子－双極子相互作用、および／またはこれらの組み合わせを含む。態様において、封入は、接着の形態である。
「平均」とは、本明細書において用いられる場合、他に記述されないかぎり、算数的平均値を指す。「コルチコステロイド」は、本明細書に使用されるとき、脊椎動物の副腎皮質において生成されるなどのステロイドホルモン、ならびにこれらのホルモンの合成類似体を、指す。コルチコステロイドは、体のすべての組織に影響することができて、様々な細胞の効果を生成することができる。たとえば、これらのステロイドは、炭水化物、脂質、タンパク質生合成および代謝、ならびに水および電解質バランスを、規制することができる。細胞の生合成または代謝に影響するコルチコステロイドは、糖質コルチコイドとして称され、一方水および電解質バランスに影響を及ぼすものは、鉱質コルチコイドである。糖質コルチコイドおよび鉱質コルチコイドは、副腎皮質から放出される。コルチコステロイドは、例えば、感染、移植拒絶反応、および自己免疫不全から結果として起こるものを含む、炎症性状態の処置において有用な治療剤のクラスである。コルチコステロイドは、たとえば、コレステロール、ジヒドロキシコレステロール、スチグマステロール、およびラノステロール構造中で見いだされるように、４つの縮合環のステロイド核の存在によって、一般に特徴づけられる。コルチコステロイドに対するいかなる言及も、起源において、天然に存在するか、合成であるか、半合成であるものを含む。本明細書に使用されるとき、「コルチコステロイド」は、コルチコステロイドから形成されてもよい、それらの塩または誘導体への言及を、含む。可能な塩または誘導体の例は、以下を含む：ナトリウム塩、スルホベンゾアート、ホスファート、イソニコチナート、アセタート、プロピオナート、二水素ホスファート、パルミタート、ピバラート、ファルネシラート、アセポナート、スレプタナート、プレドニカルバート、フロアート、またはアセトニド。いくつかのケースにおいて、コルチコステロイドは、それらの水和物の形で発生してもよい。
「随伴して（ｃｏｎｃｏｍｉｎｔａｎｔｌｙ）」とは、対象に、時間的に相関する、好ましくは、免疫応答の調節を提供するために時間的に十分に相関する様式において、２以上の材料／剤を投与すること、およびさらにより好ましくは２以上の材料／剤が組み合わせて投与されることを意味する。態様において、共投与は、２以上の材料／剤の、特定された期間内、好ましくは１か月間以内、より好ましくは１週間以内、なおより好ましくは１日以内、さらにより好ましくは１時間以内の投与を包含してもよい。態様において、材料／剤は、繰り返し共投与してもよい；すなわち２以上の場合の共投与である。
「投与形態」とは、培地、対象への投与のために好適なキャリア、ビヒクルまたはデバイス中の薬理学的におよび／または免疫学的に活性な材料を意味する。本明細書において提供される組成物または用量のいずれか１つは、投与形態におけるものであってもよい。
「封入する」とは、合成ナノキャリア内の物質の少なくとも一部を囲い込むことを意味する。幾つかの態様において、物質は、合成ナノキャリア内に完全に囲い込まれる。他の態様において、封入される物質の殆どまたは全てが、合成ナノキャリアの外の局所環境に暴露されない。他の態様において、物質の５０％、４０％、３０％、２０％、１０％、または５％（重量／重量）以下が、局所環境に暴露される。封入は、吸収とは別のものであり、吸収は、物質の殆どまたは全てを合成ナノキャリアの表面上に配置し、物質を合成ナノキャリアの外部の局所環境に暴露させる。
「導入遺伝子発現をエスカレートさせること」とは、対象におけるウイルス導入ベクターの導入遺伝子発現産物のレベルを増大させることを指し、導入遺伝子は、ウイルス導入ベクターにより送達されるものである。幾つかの態様において、導入遺伝子発現産物のレベルは、対象における目的の多様な組織または系における導入遺伝子発現を測定することにより決定することができる。いくつかの態様において、導入遺伝子発現産物は、タンパク質である。他の態様において、導入遺伝子発現産物は、核酸である。導入遺伝子発現をエスカレートさせることは、例えば、対象から得られた試料中の導入遺伝子発現産物の量を測定すること、およびそれを前の試料と比較することにより決定することができる。試料は、組織試料であってよい。幾つかの態様において、導入遺伝子発現産物は、フローサイトメトリーを用いて決定することができる。
「エクソンスキッピング導入遺伝子」とは、エクソンスキッピングを発生させ得るアンチセンスオリゴヌクレオチトまたは他の剤をコードする任意の核酸を意味する。「エクソンスキッピング」とは、タンパク質産生の間に、ｍＲＮＡ前駆体のレベルにおいてスキップされて取り除かれるエクソンを指す。
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、スプライス部位またはエクソン内の調節エレメントと干渉し得る。これは、遺伝子変異の存在に関わらず、短縮された部分的に機能的なタンパク質をもたらす。一般に、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、変異特異的であり、メッセンジャーＲＮＡ前駆体中の変異部位に結合して、エクソンスキッピングを引き起こす。
対象は、エクソンスキッピングが有益であろう疾患または障害を有するものであってよい。対象は、本明細書において提供される、ジストロフィーなどの、エクソンスキッピングの発生が有益となるであろう疾患または障害のいずれか１つを有していてよい。加えて、エクソンスキッピング導入遺伝子は、エクソンスキッピングの結果が利益を与えるであろう任意の内因性タンパク質の発現の間にエクソンスキッピングを発生させることができる剤をコードしていてもよい。かかるタンパク質の例は、本明細書において提供される疾患または障害、例えば本明細書において提供されるジストロフィーのいずれかに関連するタンパク質である。タンパク質は、いくつかの態様においては、本明細書において提供される治療用タンパク質のいずれかの内因性のバージョンであってもよい。
「遺伝子編集導入遺伝子」とは、遺伝子編集プロセスに関与する剤または成分をコードする任意の核酸を意味する。「遺伝子編集」とは、一般に、ターゲティングされたＤＮＡの挿入、置き換え、変異誘発または除去などの、ゲノムＤＮＡに対する持続的または恒久的な改変を指す。遺伝子を編集は、発現されたタンパク質の部分もしくは全てをコードするＤＮＡ配列を標的としても、または標的遺伝子の発現に影響を及ぼすＤＮＡの非コード配列を標的としてもよい。遺伝子編集は、目的のＤＮＡ配列をコードする核酸の送達、およびエンドヌクレアーゼを用いて目的の配列をゲノムＤＮＡ中の標的部位に挿入することを含む。エンドヌクレアーゼは、ゲノム中の所望される位置において二本鎖ＤＮＡの切断部を作り出し、宿主細胞の機構を使用して、相同組み換え、非相同末端結合などを用いて切断部を修復することができる。遺伝子を編集するために用いることができるエンドヌクレアーゼのクラスとして、これらに限定されないが、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＣＲＩＳＰＲおよびホーミングエンドヌクレアーゼが挙げられる。
本明細書において提供される対象は、本明細書において提供される疾患または障害のいずれか１つであってよく、導入遺伝子は、本明細書において提供されるタンパク質のいずれか１つ、またはその内因性バージョンにおける欠損を補正するために用いることができる遺伝子編集剤をコードするものである。
あるいは、いくつかの態様において、遺伝子を編集するウイルス導入ベクターはまた、本明細書において提供される治療用タンパク質またはその部分または核酸をコードする導入遺伝子を含んでもよい。いくつかの態様において、遺伝子を編集するウイルス導入ベクターは、本明細書において提供される治療用タンパク質またはその部分または核酸をコードする導入遺伝子を有するウイルス導入ベクターと共に、対象に投与することができる。
「遺伝子発現調節導入遺伝子」は、遺伝子発現モジュレーターをコードする任意の核酸を指す。「遺伝子発現モジュレーター」とは、１以上の内在遺伝子の発現を、増強、阻害または調節することができる分子を指す。遺伝子発現モジュレーターは、したがって、ＤＮＡ結合タンパク質（例えば、人工転写因子）ならびにＲＮＡ干渉を媒介する分子を含む。遺伝子発現モジュレーターは、ＲＮＡｉ分子（例えば、ｄｓＲＮＡまたはｓｓＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、および三重鎖形成オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）を含む。遺伝子発現モジュレーターはまた、前述のＲＮＡ分子のいずれかの改変されたバージョンを含む、改変されたＲＮＡを含んでもよい。
本明細書において提供される対象は、本明細書において提供される疾患または障害のいずれか１つであってよく、導入遺伝子は、本明細書において提供されるタンパク質のいずれか１つの発現を制御するために用いることができる遺伝子発現モジュレーターをコードするものである。幾つかの態様において、対象は、タンパク質の対象の内因性バージョンが欠損しているか、または限定された量においてのみ産生されるか、全く産生されない疾患または障害を有し、遺伝子発現モジュレーターは、かかるタンパク質の発現を制御することができる。したがって、遺伝子発現モジュレーターは、幾つかの態様において、本明細書において提供されるタンパク質のいずれか１つまたはその内因性バージョン（例えば本明細書において提供される治療用タンパク質の内因性バージョン）の発現を制御することができる。
「遺伝子治療導入遺伝子」は、タンパク質または核酸などの発現産物をコードし、細胞に導入される場合に、タンパク質または核酸の発現を導く核酸を、指す。いくつかの態様において、タンパク質は、治療タンパク質であることができる。本明細書において提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、ウイルス導入ベクターにより遺伝子治療導入遺伝子が投与される対象は、タンパク質の対象の内因性バージョンが欠損しているか、または限定された量においてのみ産生されるか、全く産生されない疾患または障害を有する。幾つかの態様において、コードされたタンパク質は、ヒトのカウンターパートを有しないが、疾患または障害の処置において治療的に有益な効果を提供することが予測される。
「免疫抑制剤」は、好ましくはＡＰＣに対する効果を通して、免疫寛容原性効果を引き起こす化合物を意味する。免疫寛容原性効果は、一般に、ＡＰＣまたは他の免疫細胞による、全身性および／または局所的な調節であって、耐久的な様式において抗原に対する望ましくない免疫応答を阻害または予防するものを指す。一態様において、免疫抑制剤は、ＡＰＣに、１以上の免疫エフェクター細胞における調節性の表現型を促進させるものである。例えば、調節性の表現型は、抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＢ細胞の産生、誘導、刺激または動員の阻害、抗原特異的抗体の産生の阻害、Ｔｒｅｇ細胞（例えば、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＦｏｘＰ３＋Ｔｒｅｇ細胞）の産生、誘導、刺激または動員などにより特徴づけられ得る。このことは、ＣＤ４＋Ｔ細胞またはＢ細胞の調節性の表現型への変換の結果であってもよい。このことはまた、ＣＤ８＋Ｔ細胞、マクロファージおよびｉＮＫＴ細胞などの他の免疫細胞におけるＦｏｘＰ３の誘導の結果であってもよい。一態様において、免疫抑制剤は、ＡＰＣが抗原をプロセッシングした後の応答に影響を及ぼすものである。別の態様において、免疫抑制剤は、抗原のプロセッシングに干渉するものではない。さらなる態様において、免疫抑制剤は、アポトーシスシグナル分子ではない。別の態様において、免疫抑制剤は、リン脂質ではない。
いくつかの態様において、免疫抑制剤は、合成ナノキャリアの構造を構成する材料に加える要素である。例えば、一態様において、合成ナノキャリアが１以上のポリマーからなる場合、免疫抑制剤は、追加の、および幾つかの態様においては１以上のポリマーに接着した、化合物である。別の例として、一態様において、合成ナノキャリアが、１以上の脂質からなる場合、免疫抑制剤は、やはり、１以上の脂質に加えるものであり、およびは幾つかの態様においては、接着している。他の実施態様において、合成ナノキャリアの材料も免疫寛容原性効果に結果としてなる場合に、免疫抑制剤は、免疫寛容原性効果に結果としてなる合成ナノキャリアの材料に加えて存在する要素である。
免疫抑制剤は、スタチンを含むが、これに限定されるものではない；ラパマイシンまたはラパマイシンアナログ（すなわち、ラパログ（ｒａｐａｌｏｇ））などのｍＴＯＲ阻害剤；ＴＧＦ－βシグナル伝達剤；ＴＧＦ－β受容体アゴニスト；トリコスタチンＡなどのヒストンデアセチラーゼ阻害剤；ロテノンなどのミトコンドリアの機能の阻害剤；Ｐ３８阻害剤；６Ｂｉｏ、ＴＣＰＡ－１、ＩＫＫ ＶＩＩなどのＮＦ－κβ阻害剤；アデノシン受容体アゴニスト；ミソプロストールなどのプロスタグランジンＥ２アゴニスト（ＰＧＥ２）；ホスホジエステラーゼ阻害剤、ロリプラムなどのホスホジエステラーゼ４阻害剤（ＰＤＥ４）；プロテアソーム阻害剤；キナーゼ阻害剤；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；レチノイド；サイトカイン阻害剤；サイトカイン受容体阻害剤；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；カルシニューリン阻害剤；ホスファターゼ阻害剤；ＴＧＸ－２２１などのＰＩ３ＫＢ阻害剤；３－メチルアデニンなどのオートファジー阻害剤；アリール炭化水素受容体阻害剤；プロテアソーム阻害剤Ｉ（ＰＳＩ）；ならびにＰ２Ｘ受容体遮断薬などの酸化ＡＴＰ。免疫抑制剤はまた、ＩＤＯ、ビタミンＤ３、レチノイン酸、シクロスポリンＡなどのシクロスポリン、アリール炭化水素受容体阻害剤、レスベラトロール、アザチオプリン（Ａｚａ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）、６－チオグアニン（６－ＴＧ）、ＦＫ５０６、サングリフェリンＡ、サルメテロール、ミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ）、アスピリンおよび他のＣＯＸ阻害剤、ニフルミン酸、エストリオールならびにトリプトライドを含む。他の例示的な免疫抑制剤として、限定されないが、低分子薬、天然生成物、抗体（例えば、ＣＤ２０、ＣＤ３、ＣＤ４に対する抗体）、生物製剤ベースの薬物、炭水化物ベースの薬物、ＲＮＡｉ、アンチセンス核酸、アプタマー、メトトレキサート、ＮＳＡＩＤ；フィンゴリモド；ナタリズマブ；アレムツズマブ；抗ＣＤ３；タクロリムス（ＦＫ５０６）、アバタセプト、ベラタセプトなどが挙げられる。「ラパログ」とは、ラパマイシン（シロリムス）に構造的に関連する（そのアナログである）分子を指す。ラパログの例として、限定することなく、テムシロリムス（ＣＣＩ－７７９）、エベロリムス（ＲＡＤ００１）、リダフォロリムス（ＡＰ－２３５７３）、およびゾタロリムス（ＡＢＴ－５７８）が挙げられる。ラパログのさらなる例は、例えばＷＯ公開ＷＯ１９９８／００２４４１および米国特許第８，４５５，５１０号において見出すことができ、それらのラパログは、本明細書においてその全体において参考として援用される。
さらなる免疫抑制剤は、当業者に公知であり、本発明は、この点において限定されない。態様において、免疫抑制剤は、本明細書に提供される剤のいずれか１つを含んでもよい。
「負荷量（ｌｏａｄ）」とは、合成ナノキャリアと共役する場合、合成ナノキャリア全体における材料の乾燥処方重量（重量／重量）に基づいた、合成ナノキャリアと共役する免疫抑制剤の量である。一般に、かかる負荷量は、合成ナノキャリアの集団全体の平均として計算される。一態様において、負荷量は、合成ナノキャリア全体の平均で０．１％と５０％との間である。別の態様において、負荷量は、０．１％と２０％との間である。さらなる態様において、負荷量は、０．１％と１０％との間である。なおさらなる態様において、負荷量は、１％と１０％との間である。なおさらなる態様において、負荷量は、７％と２０％との間である。さらに別の態様において、負荷量は、合成ナノキャリアの集団全体の平均で、少なくとも０．１％、少なくとも０．２％、少なくとも０．３％、少なくとも０．４％、少なくとも０．５％、少なくとも０．６％、少なくとも０．７％、少なくとも０．８％、少なくとも０．９％、少なくとも１％、少なくとも２％、少なくとも３％、少なくとも４％、少なくとも５％、少なくとも６％、少なくとも少なくとも７％、少なくとも８％、少なくとも９％、少なくとも１０％、少なくとも１１％、少なくとも１２％、少なくとも１３％、少なくとも１４％、少なくとも１５％、少なくとも１６％、少なくとも１７％、少なくとも１８％、少なくとも１９％、少なくとも２０％、または少なくとも２５％である。そのうえさらなる態様において、負荷量は、合成ナノキャリアの集団全体の平均で、０．１％、０．２％、０．３％、０．４％、０．５％、０．６％、０．７％、０．８％、０．９％、１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、または２０％である。上記態様のいずれか１つの態様において、負荷量は、合成ナノキャリアの集団全体の平均において、２５％、３０％、３５％、または４０％以下である。態様において、負荷量は、当該技術分野において公知のいかなる方法も使用して算出される。免合成ナノキャリア中に含まれる疫抑制剤の負荷量は、本明細書に提供される負荷量のいずれか１つであってもよい。
「合成ナノキャリアの最大寸法」とは、合成ナノキャリアの任意の軸に沿って測定されるナノキャリアの最大寸法を意味する。「合成ナノキャリアの最小寸法」とは、合成ナノキャリアの任意の軸に沿って測定される合成ナノキャリアの最小寸法を意味する。例えば、球体の合成ナノキャリアについて、合成ナノキャリアの最大および最小寸法は、実質的に同一であり、その直径のサイズである。同様に、立方状合成ナノキャリアについて、合成ナノキャリアの最小寸法は、その高さ、幅または長さのうちの最小のものであり、一方、合成ナノキャリアの最大寸法は、その高さ、幅または長さのうちの最大のものである。
一態様において、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいた、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１００ｎｍと等しいか、またはこれより大きい。一態様において、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいた、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は、５μｍと等しいか、またはこれより小さい。好ましくは、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいた、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１１０ｎｍより大きく、より好ましくは１２０ｎｍより大きく、より好ましくは１３０ｎｍより大きく、より好ましくはなお、１５０ｎｍより大きい。合成ナノキャリアの最大および最小寸法のアスペクト比は、態様に依存して変化し得る。例えば、合成ナノキャリアの最小寸法に対する最大寸法のアスペクト比は、１：１～１，０００，０００：１、好ましくは１：１～１００，０００：１、より好ましくは１：１～１０，０００：１、より好ましくは１：１～１０００：１、なおより好ましくは１：１～１００：１、およびさらにより好ましくは１：１～１０：１の間で変化し得る。好ましくは、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいた、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最大寸法は、３μｍと等しいか、またはこれより小さく、より好ましくは２μｍと等しいか、またはこれより小さく、より好ましくは１μｍと等しいか、またはこれより小さく、より好ましくは８００ｎｍと等しいか、またはこれより小さく、より好ましくは６００ｎｍと等しいか、またはこれより小さく、およびより好ましくはなお、５００ｎｍと等しいか、またはこれより小さい。好ましい態様において、試料中の合成ナノキャリアの合計数に基づいた、試料中の合成ナノキャリアの少なくとも７５％、好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも９０％の最小寸法は、１００ｎｍと等しいか、またはこれより大きく、より好ましくは１２０ｎｍと等しいか、またはこれより大きく、より好ましくは１３０ｎｍと等しいか、またはこれより大きく、より好ましくは１４０ｎｍと等しいか、またはこれより大きく、およびより好ましくはなお、１５０ｎｍと等しいか、またはこれより大きい。合成ナノキャリアの寸法（例えば有効直径）の測定は、幾つかの態様において、合成ナノキャリアを液体（通常は水性）媒体中に懸濁して、動的光散乱（ＤＬＳ）を用いること（例えばＢｒｏｏｋｈａｖｅｎ ＺｅｔａＰＡＬＳ装置を用いること）により、得ることができる。例えば、合成ナノキャリアの懸濁液を、約０．０１～０．１ｍｇ／ｍＬの最終合成ナノキャリア懸濁液濃度を達成するために、水性バッファーから精製水中で希釈することができる。希釈された懸濁液は、ＤＬＳ分析のために好適なキュベット中で直接調製しても、またはこれに移してもよい。キュベットを、次いで、ＤＬＳ内に置き、制御された温度まで平衡化させて、次いで、媒体の粘度および試料の屈折率のための適切なインプットに基づいて、安定で再現性のある分布を得るために十分な時間にわたりスキャンすることができる。有効直径、または分布の平均を、次いで報告させる。高アスペクト比または非球形の合成ナノキャリアの有効サイズを決定することは、より正確な測定値を得るために、電子顕微鏡法などの増強技術を必要とする場合がある。合成ナノキャリアの「次元」または「寸法」または「直径」は、例えば動的光散乱を用いて得られる粒子サイズ分布の平均を意味する。
「非メトキシ末端のポリマー」とは、メトキシ以外の部分で終了する少なくとも１つの末端を有するポリマーを意味する。幾つかの態様において、ポリマーは、メトキシ以外の部分で終了する少なくとも２つの末端を有する。他の態様において、ポリマーは、メトキシで終了する末端を有しない。「非メトキシ末端のプルロニックポリマー」とは、両端にメトキシを有する直鎖状プルロニックポリマー以外のポリマーを意味する。本明細書において提供されるポリマーナノ粒子は、いくつかの態様において、非メトキシ末端のポリマーまたは非メトキシ末端のプルロニックポリマーを含むことができる。他の態様において、ポリマーナノ粒子は、かかるポリマーを含まない。
薬学的に許容し得る賦形剤は、当該分野において公知の多様な材料を含み、これは、限定されないが、糖（例えばグルコース、ラクトースなど）、抗菌剤などの保存剤、再構成補助剤、色素、食塩水（例えばリン酸緩衝化食塩水）およびバッファーを含む。
「プロトコル」とは、対象に投与するパターンを意味し、１以上の物質の対象への任意の投薬レジメンを含む。プロトコルは、要素（または変数）からなり；したがって、プロトコルは、１以上の要素を含む。プロトコルのかかる要素は、投薬量（用量）、投薬頻度、投与の経路、投薬期間、投薬速度、投薬の間隔、前述のもののいずれかの組み合わせなどを含んでもよい。幾つかの態様において、プロトコルは、１以上の本発明の組成物を、１以上の試験対象に投与するために用いることができる。これらの試験対象における免疫応答を、次いで、所望される、または所望されるレベルの、免疫応答または治療効果を生じることにおいてプロトコルが有効であったか否かを決定するために評価することができる。任意の治療効果および／または免疫性効果を評価することができる。プロトコルのエレメントの１以上は、非ヒト対象などの試験対象において前に実証されていてもよく、次いでヒトプロトコルに翻訳してもよい。
例えば、相対成長率または他の尺度法などの確立された技術を用いて、非ヒト対象において実証された投薬量を、プロトコルのエレメントとしてスケーリングしてもよい。プロトコルが所望される効果を有したか否かは、本明細書において提供されるかまたは他の当該分野において公知の方法のうちのいずれかを用いて決定することができる。例えば、試料は、特定の免疫細胞、サイトカイン、抗体などが、減少、産生または活性化されたか否かなどを決定するために、本明細書において提供される組成物が特定のプロトコルに従って投与された対象から得ることができる。例示的なプロトコルは、ウイルス導入ベクター抗原に対する免疫寛容原性免疫応答をもたらすこと、または本明細書において記載される有益な結果のいずれか１つを達成することが、以前に示されているものである。免疫細胞の存在および／または数検出するために有用な方法として、これらに限定されないが、フローサイトメトリー法（例えば、ＦＡＣＳ）、ＥＬＩＳｐｏｔ、増殖応答、サイトカイン産生、および免疫組織化学法が挙げられる。免疫細胞マーカーの特異的染色のための抗体および他の結合剤は、市販されている。かかるキットは、典型的には、ＦＡＣＳベースの検出、不均一な細胞の集団からの所望される細胞集団の精製および／または定量化を可能にする、抗原についての染色試薬を含む。態様において、本明細書において提供される組成物は、選択された要素が対象において所望される結果を達成すると予測されることを前提として、プロトコルを構成する要素の１もしくは２以上、または全てもしくは実質的に全てを用いて、対象に投与される。かかる予測は、試験対象において決定されたプロトコルおよび必要とされる場合にはスケーリングに基づくものであってよい。本明細書に提供される方法のいずれか１つは、抗ウイルス導入ベクター免疫応答を減弱化し、および／またはウイルス導入ベクターの反復投与をゆるす、および／またはウイルス導入ベクターに対する１以上の免疫応答の減弱化に結果としてなる、および／または増加した導入遺伝子発現に結果としてなるために示されたプロトコルに従って本明細書に記載された、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアとコルチコステロイドと組み合わせて、ウイルス導入ベクターの用量を投与するステップを、含んでもよいかさらに含んでもよい。本明細書において提供される方法のいずれか１つは、本明細書において記載される有益な結果のいずれか１つを達成するかかるプロトコルを決定することを含んでもよいか、またはこれをさらに含んでもよい。
本明細書において提供される方法のいずれか１つは、本明細書において記載される有益な結果のいずれか１つを達成するプロトコルに従い投与することを含んでもよいか、またはこれをさらに含んでもよい。
「反復用量」または「反復投薬」または類似のものは、同じ材料の以前の用量または投薬の後に対象に投与される、少なくとも１回のさらなる用量または投薬を意味する。例えば、ウイルス導入ベクターの反復用量は、同じ材料の以前の用量の後の、ウイルス導入ベクターの少なくとも１回のさらなる用量である。材料は同じであってよいが、一方で、反復用量中の材料の量は、以前の用量と異なっていてもよい。本明細書に提供されるように、反復用量は、例の間隔などで、投与されてもよい。反復投薬は、それが対象のために有益な効果をもたらす場合、有効であると考えられる。好ましくは、有効な反復投与は、減弱化された抗ウイルス導入ベクター応答と連動して、治療効果などの、有益な効果に結果としてなる。
「同時の（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）」とは、医師が、投与の間の任意の時間を、所望される治療成績に対して影響を及ぼすためには実質的に無または無視し得ると考えられるであろう場合に、同じ時間または実質的に同じ時間における投与を意味する。幾つかの態様において、同時とは、投与が、５、４、３、２、１分間またはそれより短い時間内に起きることを意味する。
「対象」とは、ヒトおよび霊長類などの温血哺乳動物；鳥類；ネコ、イヌ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマおよびブタなどの家庭内または家畜動物；マウス、ラットおよびモルモットなどの実験動物；魚類；爬虫類；動物園のおよび野生の動物；など。本明細書において用いられる場合、対象は、本明細書において提供される方法または組成物のいずれか１つを必要とするものであってよい。
「合成ナノキャリア（単数または複数）」とは、天然では見出されない個別の物体であって、サイズが５マイクロメートルより小さいか、またはこれと等しい、少なくとも１つの寸法を有するものを意味する。アルブミンナノ粒子は、一般に合成ナノキャリアとして含まれるが、しかし、ある態様においては、合成ナノキャリアは、アルブミンナノ粒子を含まない。態様において、合成ナノキャリアは、キトサンを含まない。他の態様において、合成ナノキャリアは、脂質ベースのナノ粒子ではない。さらなる態様において、合成ナノキャリアは、リン脂質を含まない。
合成ナノキャリアは、これらに限定されないが、１つまたは複数の脂質ベースのナノ粒子（また本明細書において液体ナノ粒子、すなわち、それらの構造を構成する材料の大部分が脂質であるナノ粒子としても言及される）、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤ベースのエマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤー、ウイルス様粒子（すなわち、主にウイルスの構造タンパク質からなるが、感染性ではないか、低い感染性を有する粒子）、ペプチドまたはタンパク質ベースの粒子（また本明細書において、タンパク質粒子、すなわち、それらの構造を構成する材料の大部分がペプチドもしくはタンパク質である粒子としても言及される）（アルブミンナノ粒子など）および／または脂質－ポリマーナノ粒子などのナノ材料の組み合わせを用いて開発されるナノ粒子であってもよい。合成ナノキャリアは、多様な異なる形状であってよく、これは、限定されないが、球体、立方状、錐体、長方形、円柱状、ドーナツ型などを含む。本発明による合成ナノキャリアは、１以上の表面を含む。本発明の実施における使用のために適応させることができる例示的な合成ナノキャリアは、以下を含む：（１）Ｇｒｅｆらに対する米国特許５，５４３，１５８において開示される生分解性ナノ粒子、（２）Ｓａｌｔｚｍａｎらに対する米国特許出願公開２００６０００２８５２のポリマーナノ粒子、（３）ＤｅＳｉｍｏｎｅらに対する米国特許出願公開２００９００２８９１０のリソグラフィーにより構築されるナノ粒子、（４）ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎらに対するＷＯ ２００９／０５１８３７の開示、（５）Ｐｅｎａｄｅｓらに対する米国特許出願公開２００８／０１４５４４１において開示されるナノ粒子、（６）ｄｅ ｌｏｓ Ｒｉｏｓらに対する米国特許出願公開２００９０２２６５２５において開示されるタンパク質ナノ粒子、（７）Ｓｅｂｂｅｌらに対する米国特許出願公開２００６０２２２６５２において開示されるウイルス様粒子、（８）Ｂａｃｈｍａｎｎらに対する米国特許出願公開２００６０２５１６７７において開示される核酸結合ウイルス様粒子、（９）ＷＯ２０１００４７８３９Ａ１またはＷＯ２００９１０６９９９Ａ２において開示されるウイルス様粒子、（１０）Ｐ． Ｐａｏｌｉｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．， 「Ｓｕｒｆａｃｅ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＰＬＧＡ－ｂａｓｅｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｔｈａｔ ｃａｎ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒ Ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ」Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ． ５（６）： ８４３－８５３ （２０１０）において開示されるナノ沈殿させたナノ粒子、（１１）米国公開２００２／００８６０４９において開示されるアポトーシス細胞、アポトーシス小体または合成もしくは半合成模倣物、あるいは（１２）Ｌｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｎｏｇｅｌ－ｂａｓｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ ａｃｉｄ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ｌｕｐｕｓ ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ ｉｎ ｍｉｃｅ」Ｊ． Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ １２３（４）： １７４１－１７４９ （２０１３）のもの。
約１００ｎｍと等しいかこれより小さい、好ましくは１００ｎｍと等しいかこれより小さい最小寸法を有する、本発明による合成ナノキャリアは、補体を活性化するヒドロキシル基を有する表面を含まないか、あるいは、補体を活性化するヒドロキシル基ではない部分から本質的になる表面を含む。好ましい態様において、約１００ｎｍと等しいかこれより小さい、好ましくは１００ｎｍと等しいかこれより小さい最小寸法を有する、本発明による合成ナノキャリアは、補体を実質的に活性化する表面を含まないか、あるいは、補体を実質的に活性化しない部分から本質的になる表面を含む。より好ましい態様において、約１００ｎｍと等しいかこれより小さい、好ましくは１００ｎｍと等しいかこれより小さい最小寸法を有する、本発明による合成ナノキャリアは、補体を活性化する表面を含まないか、あるいは、補体を活性化しない部分から本質的になる表面を含む。態様において、合成ナノキャリアは、ウイルス様粒子を除外する。態様において、合成ナノキャリアは、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７より高いか等しい、または１：１０より高いか等しいアスペクト比を有してもよい。
「治療用タンパク質」とは、本明細書において提供される遺伝子治療導入遺伝子から発現され得る任意のタンパク質を意味する。治療用タンパク質は、タンパク質の置き換えまたはタンパク質の補充のために用いられるものであってよい。治療用タンパク質として、これらに限定されないが、酵素、酵素補因子、ホルモン、血液凝固因子、サイトカイン、増殖因子などが挙げられる。他の治療用タンパク質の例は、本明細書において他の場所で提供される。対象は、本明細書において提供される治療用タンパク質のいずれかによる処置を必要とするものであってよい。
「ウイルス導入ベクターの導入遺伝子」とは、細胞中に輸送するためにウイルス導入ベクターが用いられる核酸材料であって、一旦細胞中に入ると、発現して、本明細書において記載されるような治療的適用のためのタンパク質または核酸分子を産生するものを指す。導入遺伝子は、遺伝子治療導入遺伝子、遺伝子編集導入遺伝子、遺伝子発現調節導入遺伝子またはエクソンスキッピング導入遺伝子であってよい。「発現される」または「発現」または類似のものは、導入遺伝子が細胞中に形質導入されて、形質導入された細胞によりプロセッシングされた後の、機能的（すなわち、所望される目的のために生理学的に活性な）遺伝子産物の合成を指す。かかる遺伝子産物はまた、本明細書において「導入遺伝子発現産物」としても言及される。発現された産物は、したがって、導入遺伝子によりコードされた結果としてのタンパク質または核酸、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは治療用ＲＮＡを含む。
「ウイルス導入ベクター」は、本明細書に提供されるように、導入遺伝子などの、核酸を送達するのに適していたウイルスのベクターを意味し、かかる核酸を含む。「ウイルスベクター」とは、ウイルス導入ベクターのウイルス成分の全てを、指す。従って、「ウイルス抗原」は、それが送達する導入遺伝子などの核酸ではなく、カプシドまたはコートタンパク質などの、ウイルス導入ベクターのウイルス成分の抗原を、またはそれがコードするいずれかの生成物を、指す。「ウイルス導入ベクター抗原」は、導入遺伝子などの送達された核酸と同様に、そのウイルス成分を含むウイルス導入ベクターのいずれかの抗原、またはそれらのいずれかの発現生成物を、指す。導入遺伝子は、遺伝子治療導入遺伝子、遺伝子編集導入遺伝子、遺伝子発現調節導入遺伝子またはエクソンスキッピング導入遺伝子であってよい。幾つかの態様において、導入遺伝子は、治療用タンパク質、ＤＮＡ結合タンパク質またはエンドヌクレアーゼなどの本明細書において提供されるタンパク質をコードするものである。他の態様において、導入遺伝子は、ガイドＲＮＡ、アンチセンス核酸、ｓｎＲＮＡ、ＲＮＡｉ分子（例えば、ｄｓＲＮＡもしくはｓｓＲＮＡ）、ｍｉＲＮＡ、または三重鎖形成オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）などをコードするものである。ウイルスベクターは、限定することなく、レトロウイルス（例えば、マウスレトロウイルス、トリレトロウイルス、モロニーマウス白血病ウイルス（ＭｏＭｕＬＶ）、ハーヴェイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳房腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）およびラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ））、レンチウイルス、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、アルファウイルスなどに基づくものであってよい。他の例は、本明細書において他の場所において提供されるか、当該分野において公知である。ウイルスベクターは、ウイルスの天然のバリアント、株、または血清型、例えば本明細書において提供されるもののいずれか１つに基づくものであってよい。ウイルスベクターはまた、分子進化を通して選択されるウイルスに基づくものであってよい。ウイルスベクターはまた、操作されたベクター、組み換えベクター、変異体ベクター、またはハイブリッドベクターであってよい。幾つかの態様において、ウイルスベクターは、「キメラウイルスベクター」である。かかる態様において、このことは、ウイルスベクターが、１種より多くのウイルスまたはウイルスベクターに由来するウイルス成分からなることを意味する。
Ｃ．本発明の方法における使用のための組成物
重要なことに、明細書に提供される方法および組成物が、ウイルス導入ベクターに対して、ＩｇＧおよび／またはＩｇＭ応答などの、本免疫応答を減弱化することが、わかった。加えて、本明細書に提供される方法および組成物が、導入遺伝子発現を改善するとわかった。重要なことに、かかる効果は、反復した、例として、２回、３回以上の、請求された組成物の投与を通して、維持される。本明細書において提供される方法および組成物は、ウイルス導入ベクターによる対象の処置のために有用である。ウイルス導入ベクターは、遺伝子治療、遺伝子編集、遺伝子発現調節およびエクソンスキッピングのためのものを含む多様な目的のために導入遺伝子を送達するために用いることができ、本明細書において提供される方法および組成物もまた、そのように適用可能である。
導入遺伝子
本明細書において提供されるウイルス導入ベクターの導入遺伝子は、遺伝子治療導入遺伝子であってよく、疾患または障害によるものなどの、対象にとって有益ないずれかのタンパク質またはその部分をコードしてもよい。タンパク質は、細胞外、細胞内、または膜結合タンパク質であってよい。該タンパク質は、治療用タンパク質であり、ウイルス導入ベクターにより遺伝子治療導入遺伝子が投与される対象は、当該タンパク質の対象の内因性バージョンが欠損しているか、限定された量で産生されるか、または全く産生されない疾患または障害を有する。したがって、対象は、本明細書において提供される疾患または障害のいずれか１つを有するものであってよく、導入遺伝子は、本明細書において提供される治療用タンパク質またはその部分のいずれか１つをコードするものであってもよい。
治療用タンパク質の例として、これらに限定されないが、注入可能なまたは注射可能な治療用タンパク質、酵素、酵素補因子、ホルモン、血液または血液凝固因子、サイトカインおよびインターフェロン、増殖因子、アディポカインなどが挙げられる。
注入可能なまたは注射可能な治療用タンパク質の例として、例えば、トシリズマブ（Ｒｏｃｈｅ／Ａｃｔｅｍｒａ（登録商標））、アルファ－１アンチトリプシン（Ｋａｍａｄａ／ＡＡＴ）、Ｈｅｍａｔｉｄｅ（登録商標）（ＡｆｆｙｍａｘおよびＴａｋｅｄａ、合成ペプチド）、アルブインターフェロンアルファ－２ｂ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ／Ｚａｌｂｉｎ（商標））、Ｒｈｕｃｉｎ（登録商標）（Ｐｈａｒｍｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ、Ｃ１阻害剤補充療法）、テサモレリン（Ｔｈｅｒａｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ／Ｅｇｒｉｆｔａ、合成成長ホルモン放出因子）、オクレリズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、ＲｏｃｈｅおよびＢｉｏｇｅｎ）、ベリムマブ（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ／Ｂｅｎｌｙｓｔａ（登録商標））、ペグロチカーゼ（Ｓａｖｉｅｎｔ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｋｒｙｓｔｅｘｘａ（商標））、タリグルセラーゼアルファ（Ｐｒｏｔａｌｉｘ／Ｕｐｌｙｓｏ）、アガルシダーゼアルファ（Ｓｈｉｒｅ／Ｒｅｐｌａｇａｌ（登録商標））、ならびにベラグルセラーゼアルファ（Ｓｈｉｒｅ）が挙げられる。
酵素の例として、リゾチーム、オキシドレダクターゼ、トランスフェラーゼ、ヒドロラーゼ、リアーゼ、イソメラーゼ、アスパラギナーゼ、ウリカーゼ、グリコシダーゼ、プロテアーゼ、ヌクレアーゼ、コラゲナーゼ、ヒアルロニダーゼ、ヘパリナーゼ、ヘパラナーゼ、キナーゼ、ホスファターゼ、溶解素およびリガーゼが挙げられる。酵素の他の例は、酵素補充療法のために用いられるものを含み、これは、限定されないが、イミグルセラーゼ（例えば、ＣＥＲＥＺＹＭＥ（商標））、ａ－ガラクトシダーゼＡ（ａ－ｇａｌ Ａ）（例えば、アガルシダーゼベータ、ＦＡＢＲＹＺＹＭＥ（商標））、酸ａ－グルコシダーゼ（ＧＡＡ）（例えば、アルグルコシダーゼアルファ、ＬＵＭＩＺＹＭＥ（商標）、ＭＹＯＺＹＭＥ（商標））、およびアリールスルファターゼＢ（例えば、ラロニダーゼ、ＡＬＤＵＲＡＺＹＭＥ（商標）、イデュルスルファーゼ、ＥＬＡＰＲＡＳＥ（商標）、アリールスルファターゼＢ、ＮＡＧＬＡＺＹＭＥ（商標））を含む。
ホルモンの例は、性腺刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、メラノコルチン、脳下垂体ホルモン、バゾプレシン、オキシトシン、成長ホルモン、プロラクチン、オレキシン、ナトリウム排泄増加ホルモン、副甲状腺ホルモン、カルシトニン、エリスロポイエチン、および膵臓ホルモンを含むが、これに限定されない。
血液または血液凝固因子の例として、第Ｉ因子（フィブリノーゲン）、第ＩＩ因子（プロトロンビン）、組織因子、第Ｖ因子（プロアクセレリン、不安定因子）、第ＶＩＩ因子（安定因子、プロコンバーチン）、第ＶＩＩＩ因子（抗血友病性グロブリン）、第ＩＸ因子（クリスマス因子または血漿トロンボプラスチン成分）、第Ｘ因子（スチュアート・プロワー因子）、第Ｘａ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩ因子（ハーゲマン因子）、第ＸＩＩＩ因子（フィブリン安定化因子）、フォン・ヴィルブランド因子、フォンヘルデブラント因子、プレカリクレイン（フレッチャー因子）、高分子キニノーゲン（ＨＭＷＫ）（フィッツジェラルド因子）、フィブロネクチン、フィブリン、トロンビン、アンチトロンビンＩＩＩなどのアンチトロンビン、ヘパリンコファクターＩＩ、プロテインＣ、プロテインＳ、プロテインＺ、プロテインＺ関連プロテアーゼ阻害剤（ＺＰＩ）、プラスミノーゲン、アルファ２－アンチプラスミン、組織プラスミノーゲンアクチベーター（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤－１（ＰＡＩ１）、プラスミノーゲンアクチベーター阻害剤－２（ＰＡＩ２）、癌凝血原（ｃａｎｃｅｒ ｐｒｏｃｏａｇｕｌａｎｔ）、およびエポエチンアルファ（Ｅｐｏｇｅｎ、Ｐｒｏｃｒｉｔ）が挙げられる。
サイトカインの例として、リンホカイン、インターロイキン、ならびにケモカイン、ＩＦＮ－γ、ＴＧＦ－βなどの１型サイトカイン、ならびにＩＬ－４、ＩＬ－１０およびＩＬ－１３などの２型サイトカインが挙げられる。増殖因子の例として、アドレノメデュリン（ＡＭ）、アンギオポエチン（Ａｎｇ）、自己分泌型細胞運動刺激因子、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、上皮増殖因子（ＥＧＦ）、エリスロポエチン（ＥＰＯ）、線維芽細胞増殖因子（ＦＧＦ）、グリア細胞由来神経栄養因子受容体（ＧＤＮＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）、増殖分化因子－９（ＧＤＦ９）、肝細胞増殖因子（ＨＧＦ）、肝細胞腫由来増殖因子（ＨＤＧＦ）、インスリン様増殖因子（ＩＧＦ）、遊走刺激因子、ミオスタチン（ＧＤＦ－８）、神経増殖因子（ＮＧＦ）および他のニューロトロフィン、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）、トランスフォーミング増殖因子アルファ（ＴＧＦ－α）、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）、腫瘍壊死因子－アルファ（ＴＮＦ－α）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、Ｗｎｔシグナル伝達経路、胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）、［（ウシ胎仔ソマトトロフィン）］（ＦＢＳ）、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－３、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６およびＩＬ－７が挙げられる。
アディポカインの例として、レプチンおよびアディポネクチンが挙げられる。
治療用タンパク質のさらなる例として、これらに限定されないが、受容体、シグナル伝達タンパク質、細胞骨格タンパク質、足場タンパク質、転写因子、構造タンパク質、膜タンパク質、細胞質タンパク質、結合タンパク質、核タンパク質、分泌型タンパク質、ゴルジ体タンパク質、小胞体タンパク質、ミトコンドリアタンパク質、および小胞タンパク質などが挙げられる。
本明細書において提供される遺伝子治療用ウイルス導入ベクターの導入遺伝子は、対象におけるその内因性バージョンの何らかの欠損（内因性バージョン発現の欠損を含む）を通して、対象において疾患または障害をもたらす、任意のタンパク質の機能的なバージョンをコードしていてもよい。
かかる疾患または障害の例として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：リソソーム蓄積性疾患／障害、例えばＳａｎｔａｖｕｏｒｉ－Ｈａｌｔｉａ病（小児性神経セロイドリポフスチン沈着症１型）、Ｊａｎｓｋｙ－Ｂｉｅｌｓｃｈｏｗｓｋｙ病（遅発型小児性神経セロイドリポフスチン沈着症、２型）、バッテン病（若年性神経セロイドリポフスチン症、３型）、クーフス病（神経セロイドリポフスチン症、４型）、フォン・ギールケ病（糖原病、Ｉａ型）、糖原病、Ｉｂ型、ポンペ病（糖原病、ＩＩ型）、フォーブス病またはコリ病（糖原病、ＩＩＩ型）、ムコリピドーシスＩＩ（Ｉ－細胞病）、ムコリピドーシスＩＩＩ（偽性ハーラー・ポリジストロフィー）、ムコリピドーシスＩＶ（シアロリピドーシス（ｓｉａｌｏｌｉｐｉｄｏｓｉｓ））、シスチン症（成人非腎症性型）、シスチン症（小児性腎症性型）、シスチン症（若年性または青年性腎症型）、サラ病／小児型シアル酸蓄積障害、およびサポシン欠損；脂質およびスフィンゴ脂質分解の障害、例えばＧＭ１ガングリオシドーシス（小児性、遅発型小児性／若年性、および成人型／慢性）、テイ・サックス病、サンドホフ病、ＧＭ２ガングリオシドーシス、Ａｂバリアント、ファブリー病、ゴーシェ病、Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩ型、異染性白質ジストロフィー、クラッベ病（早発型および遅発型）、ニーマン・ピック病、Ａ、Ｂ、Ｃ１およびＣ２型、ファーバー病およびウォルマン病（コレステリルエステル蓄積症）；ムコ多糖分解の障害、例えばハーラー症候群（ＭＰＳＩ）、シャイエ症候群（ＭＰＳ ＩＳ）、ハーラー・シャイエ症候群（ＭＰＳ ＩＨ／Ｓ）、ハンター症候群（ＭＰＳ ＩＩ）、サンフィリポＡ症候群（ＭＰＳ ＩＩＩＡ）、サンフィリポＢ症候群（ＭＰＳ ＩＩＩＢ）、サンフィリポＣ症候群（ＭＰＳ ＩＩＩＣ）、サンフィリポＤ症候群（ＭＰＳ ＩＩＩＤ）、モルキオＡ症候群（ＭＰＳ ＩＶＡ）、モルキオＢ症候群（ＭＰＳ ＩＶＢ）、マロトー・ラミー症候群（ＭＰＳ ＶＩ）、およびスライ症候群（ＭＰＳ ＶＩＩ）；糖タンパク質分解の障害、例えばアルファマンノース症、ベータマンノース症、フコシドーシス、アスパルチルグルコサミン尿症、ムコリピドーシスＩ（シアリドーシス）、ガラクトシアリドーシス、シンドラー病、およびＩＩ型シンドラー病／神崎病；ならびに白質ジストロフィー疾患／障害、例えば、無ベータリポ蛋白血症、新生児副腎白質ジストロフィー、カナバン病、脳腱黄色腫症、ペリツェウス・メルツバッヘル病、タンジール病、小児性レフサム病、および古典的レフサム病。
本明細書において提供される対象のかかる疾患／障害のさらなる例として、これらに限定されないが、以下が挙げられる：酸性マルターゼ欠損症（例えば、ポンペ病、糖原病２型、リソソーム蓄積症）；カルニチン欠損症；カルニチンパルミチルトランスフェラーゼ欠損症；脱分枝酵素欠損症（例えば、コリ病またはフォーブス病、糖原病３型）；乳酸デヒドロゲナーゼ欠損症（例えば、糖原病１１型）；ミオアデニル酸デアミナーゼ欠損症；ホスホフルクトキナーゼ欠損症（例えば、垂井病、糖原病７型）；ホスホグリセリン酸キナーゼ欠損症（例えば、糖原病９型）；ホスホグリセリン酸ムターゼ欠損症（例えば、糖原病１０型）；ホスホリラーゼ欠損症（例えば、マッカードル病、筋ホスホリラーゼ欠損症、糖原病５型）；ゴーシェ病（例えば、染色体１、酵素グルコセレブロシダーゼが影響を受ける）；軟骨無形成症（例えば、染色体４、線維芽細胞増殖因子受容体３が影響を受ける）；ハンチントン病（例えば、染色体４、ハンチンチン）；ヘモクロマトーシス（例えば、染色体６、ＨＦＥタンパク質）；嚢胞性線維症（例えば、染色体７、ＣＦＴＲ）；フリートライヒ運動失調症（染色体９、フラタキシン）；ベスト病（染色体１１、ＶＭＤ２）；鎌状赤血球症（染色体１１、ヘモグロビン）；フェニルケトン尿症（染色体１２、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ）；マルファン症候群（染色体１５、フィブリリン）；筋緊張性ジストロフィー（染色体１９、筋緊張性ジストロフィータンパク質キナーゼ）；副腎白質ジストロフィー（Ｘ染色体、ペルオキシソーム中のリグノセロイル－ＣｏＡリガーゼ）；デュシェンヌ筋ジストロフィー（Ｘ染色体、ジストロフィン）；レット症候群（Ｘ染色体、メチルＣｐＧ結合タンパク質２）；レーベル遺伝性視神経症（ミトコンドリア、呼吸器タンパク質）；ミトコンドリア脳症、乳酸アシドーシスおよび脳卒中（ＭＥＬＡＳ）（ミトコンドリア、トランスファーＲＮＡ）；ならびに尿素回路の酵素欠損。
かかる疾患または障害のなお追加の例として、これらに限定されないが、鎌状赤血球貧血、筋細管ミオパチー、血友病Ｂ、リポタンパク質リパーゼ欠損症、オルニチントランスカルバミラーゼ欠損症、クリグラー・ナジャー症候群、ムコリピドーシスＩＶ、ニーマン・ピック病Ａ、サンフィリポＡ、サンフィリポＢ、サンフィリポＣ、サンフィリポＤ、ｂ－地中海貧血症およびデュシェンヌ型筋ジストロフィーが挙げられる。疾患または障害のなおさらなる例は、脂質およびスフィンゴ脂質分解、ムコ多糖分解、グリコプロテイン分解、ロイコジストロフィー等々における、欠陥の結果であるものを、含む。
本明細書に提供される疾患または障害のいずれか１つの不完全なタンパク質の機能的なバージョンは、遺伝子治療ウイルス導入ベクターの導入遺伝子によってコードされてもよく、そして、考えられた治療タンパク質でもある。
治療用タンパク質もまた、筋ホスホリラーゼ、グルコセレブロシダーゼ、線維芽細胞増殖因子受容体３、ハンチンチン、ＨＦＥタンパク質、ＣＦＴＲ、フラタキシン、ＶＭＤ２、ヘモグロビン、フェニルアラニンヒドロキシラーゼ、フィブリリン、筋強直性ジストロフィータンパク質キナーゼ、リグノセロイル－ＣｏＡリガーゼ、ジストロフィン、メチルＣｐＧ結合タンパク質２、ベータヘモグロビン、ミオチューブラリン、カテプシンＡ、第ＩＸ因子、リポタンパク質リパーゼ、ベータガラクトシダーゼ、オルニチントランスカルバミラーゼ、イズロン酸－２－スルファターゼ、酸性アルファグルコシダーゼ、ＵＤＰ－グルクロノシルトランスフェラーゼ１－１、ＧｌｃＮＡｃ－１－ホスホトランスフェラーゼ、ＧｌｃＮＡｃ－１－ホスホトランスフェラーゼ、ムコリピン（Ｍｕｃｏｌｉｐｉｎ）－１、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質、スフィンゴミエリナーゼ、酸性セラミダーゼ、ライソゾーム酸性リパーゼ、アルファ－Ｌ－イズロニダーゼ、ヘパランＮ－スルファターゼ、アルファ－Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、アセチル－ＣｏＡアルファ－グルコサミニドアセチルトランスフェラーゼ、Ｎ－アセチルグルコサミン６－スルファターゼ、Ｎ－アセチルガラクトサミン－６スルファターゼ、アルファ－マンノシダーゼ、アルファ－ガラクトシダーゼＡ、嚢胞性線維症膜コンダクタンス制御因子および呼吸器タンパク質を含むということになる。
さらなる例として、治療用タンパク質はまた、以下に関連するタンパク質の機能的バージョンを含む：脂質およびスフィンゴ脂質分解の障害（例えば、β－ガラクトシダーゼ－１、β－ヘキソサミニダーゼＡ、β－ヘキソサミニダーゼＡおよびＢ、ＧＭ２アクチベータータンパク質、８－ガラクトシダーゼＡ、グルコセレブロシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、アリールスルファターゼＡ、ガラクトシルセラミダーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、スフィンゴミエリナーゼ、ＮＰＣ１、ＨＥ１タンパク質（コレステロール輸送の欠陥）、酸性セラミダーゼ、ライソゾーム酸性リパーゼ）；ムコ多糖分解の障害（例えば、Ｌ－イズロニダーゼ、Ｌ－イズロニダーゼ、Ｌ－イズロニダーゼ、イズロン酸スルファターゼ、ヘパランＮ－スルファターゼ、Ｎ－アセチルグルコサミニダーゼ、アセチル－ＣｏＡ－グルコサミニダーゼ、アセチルトランスフェラーゼ、アセチルグルコサミン－６－スルファターゼ、ガラクトサミン－６－スルファターゼ、アリールスルファターゼＢ、グルクロニダーゼ）；糖タンパク質分解の障害（例えば、マンノシダーゼ、マンノシダーゼ、ｌ－フコシダーゼ、アスパルチルグルコサミニダーゼ、ノイラミニダーゼ、リソソーム保護タンパク質、リソソーム８－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ、リソソーム８－Ｎ－アセチルガラクトサミニダーゼ）；リソソーム蓄積障害（例えば、パルミトイル－タンパク質チオエステラーゼ、少なくとも４種のサブタイプ、リソソーム膜タンパク質、未知、グルコース－６－ホスファターゼ、グルコース－６－ホスファートトランスロカーゼ、酸性マルターゼ、脱分枝酵素アミロ－１，６グルコシダーゼ、Ｎ－アセチルグルコサミン－１－ホスホトランスフェラーゼ、Ｎ－アセチルグルコサミン－１－ホスホトランスフェラーゼ、ガングリオシドシアリダーゼ（ノイラミニダーゼ）、リソソームシステイン輸送タンパク質、リソソームシステイン輸送タンパク質、リソソームシステイン輸送タンパク質、シアル酸輸送タンパク質サポニンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ）および白質ジストロフィー（例えば、ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質／アポリポタンパク質Ｂ、ペルオキシソーム膜輸送タンパク質、ペルオキシン、アスパルトアシラーゼ、ステロール－２７－ヒドロキシラーゼ、プロテオリピドタンパク質、ＡＢＣ１トランスポーター、ペルオキシソーム膜タンパク質３またはペルオキシソーム新生因子１、フィタン酸オキシダーゼ）。
本明細書において提供されるウイルス導入ベクターは、遺伝子編集のために用いることができる。かかる態様において、ウイルス導入ベクターの導入遺伝子は、遺伝子編集導入遺伝子である。かかる導入遺伝子は、遺伝子編集プロセスに関与する剤または成分をコードする。一般に、かかるプロセスは、ゲノムＤＮＡに対する、ターゲティングされたＤＮＡの挿入、置き換え、変異誘発または除去などの、持続性のまたは恒久的な改変をもたらす。遺伝子編集は、目的のＤＮＡ配列をコードする核酸の送達、およびエンドヌクレアーゼを用いて目的の配列をゲノムＤＮＡ中の標的部位に挿入することを含む。したがって、遺伝子編集導入遺伝子は、挿入のための目的のＤＮＡ配列をコードするこれらの核酸を含んでもよい。幾つかの態様において、挿入のためのＤＮＡ配列は、本明細書において提供される治療用タンパク質のいずれかをコードするＤＮＡ配列である。あるいは、またはこれに加えて、遺伝子編集導入遺伝子は、単独で、または他の成分と組み合わせて遺伝子編集プロセスを行う１以上の成分をコードする核酸を、含んでもよい。本明細書において提供される遺伝子編集導入遺伝子は、エンドヌクレアーゼおよび／またはガイドＲＮＡなどをコードしていてもよい。
エンドヌクレアーゼは、ゲノム中の所望される位置において二本鎖ＤＮＡ中に切断部を作り出し、宿主細胞の機構を用いて、相同組み換え、非相同末端結合などを用いて切断部を修復する。遺伝子を編集するために用いることができるエンドヌクレアーゼのクラスとして、これらに限定されないが、メガヌクレアーゼ、ジンクフィンガーヌクレアーゼ（ＺＦＮ）、ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）、ＣＲＩＳＰＲおよびホーミングエンドヌクレアーゼが挙げられる。本明細書において提供されるウイルス導入ベクターの遺伝子編集導入遺伝子は、本明細書において提供されるエンドヌクレアーゼのいずれか１つをコードしていてもよい。
メガヌクレアーゼは、一般に、それらがＤＮＡ配列を認識して切断する能力により特徴づけられる（約１４～４０塩基対）。加えて、変異誘発およびハイスループットスクリーニングおおよびコンビナトリアルアセンブリなどの公知の技術を用いて、カスタマイズされたメガヌクレアーゼを作り出すことができ、ここで、タンパク質のサブユニットを会合または融合させることができる。メガヌクレアーゼの例は、米国特許第８，８０２，４３７号、同第８，４４５，２５１号および同第８，３３８，１５７号；ならびに米国公開番号２０１３０２２４８６３、２０１１０１１３５０９および２０１１００３３９３５において見出すことができ、これらのメガヌクレアーゼは、本明細書において参考として援用される。
ジンクフィンガーヌクレアーゼは、典型的には、核酸分子内の特異的な標的部位に結合するジンクフィンガードメイン、および結合ドメインに結合した標的部位内またはその近傍において核酸分子を切断する核酸切断ドメインを含む。典型的な操作されたジンクフィンガーヌクレアーゼは、３～６の個別のジンクフィンガーモチーフを有し、９塩基対～１８塩基対の範囲の長さの標的部位に結合する、結合ドメインを含む。ジンクフィンガーヌクレアーゼは、所与の核酸分子中の実質的にあらゆる所望される配列を、切断のための標的とするように設計することができる。例えば、既知の特異性の個々のジンクフィンガーモチーフを組み合わせることにより、所望される特異性を有するジンクフィンガー結合ドメインを設計することができる。ＤＮＡに結合したジンクフィンガータンパク質Ｚｉｆ２６８の構造は、この分野における研究の多くの情報をもたらし、６４の可能な塩基対トリプレットの各々についてジンクフィンガーを得て、次いでこれらのモジュラージンクフィンガーを混合およびマッチングして、任意の所望される配列特異性を有するタンパク質を設計するというコンセプトが記載されている（Ｐａｖｌｅｔｉｃｈ ＮＰ， Ｐａｂｏ ＣＯ（１９９１年５月）、「Ｚｉｎｃ ｆｉｎｇｅｒ－ＤＮＡ ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ：ｃｒｙｓｔａｌ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａ Ｚｉｆ２６８－ＤＮＡ ｃｏｍｐｌｅｘ ａｔ ２．１ Ａ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２ （５００７）：８０９－１７；この全内容は、本明細書において参考として援用される）。幾つかの態様において、細菌またはファージディスプレイを用いて、所望される核酸配列、例えば所望されるエンドヌクレアーゼ標的部位を認識するジンクフィンガードメインを開発する。ジンクフィンガーヌクレアーゼは、幾つかの態様において、リンカー、例えばポリペプチドリンカーを介して互いに融合または他の方法で共役した、ジンクフィンガー結合ドメインと切断ドメインとを含む。リンカーの長さにより、ジンクフィンガードメインに結合した核酸配列からの切断部の距離を決定することができる。ジンクフィンガーヌクレアーゼの例は、米国特許第８，９５６，８２８；８，９２１，１１２；８，８４６，５７８；８，５６９，２５３号で見つけられることができ、それらのジンクフィンガーヌクレアーゼは、本明細書に参照によって組み込まれる。
ＴＡＬエフェクターヌクレアーゼ（ＴＡＬＥＮ）は、特異的ＤＮＡ結合ドメインを一般的なＤＮＡ切断ドメインに融合させることにより作製された、人工制限酵素である。任意の所望されるＤＮＡ配列に結合するように設計することができるＤＮＡ結合ドメインは、植物に感染する特定の細菌により排出されるＤＮＡ結合タンパク質であるトランスクリプション・アクチベーター－ライク（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ－ｌｉｋｅ）（ＴＡＬ）エフェクターに由来する。ＴＡＬエフェクター（ＴＡＬＥ）は、実際に任意のＤＮＡ配列に結合するように設計するか、または一緒に結合させてＤＮＡ切断ドメインと組み合わせてアレイにすることができる。ＴＡＬＥＮは、ジンクフィンガーヌクレアーゼを設計するために同様に用いることができる。
ＴＡＬＥＮの例は、米国特許第８，６９７，８５３号；ならびに米国公開番号２０１５０１１８２１６、２０１５００７９０６４および２０１４００８７４２６において見出すことができ、そのＴＡＬＥＮＳは、本明細書において参考として援用される。
ＣＲＩＳＰＲ（ｃｌｕｓｔｅｒｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ ｉｎｔｅｒｓｐａｃｅｄ ｓｈｏｒｔ ｐａｌｉｎｄｒｏｍｉｃ ｒｅｐｅａｔｓ）／Ｃａｓシステムもまた、遺伝子編集のためのツールとして用いることができる。
ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムにおいて、ガイドＲＮＡ（ｇＲＮＡ）は、ゲノムにより、またはエピソームにより（例えば、プラスミド上で）コードされる。ｇＲＮＡは、転写に続いて、Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼなどのエンドヌクレアーゼと複合体を形成する。複合体は、次いで、ｇＲＮＡの特異性決定配列（ＳＤＳ）により、典型的には細胞のゲノム中に位置するＤＮＡ標的配列にガイドされる。Ｃａｓ９またはＣａｓ９エンドヌクレアーゼとは、ＲＮＡによりガイドされる、Ｃａｓ９タンパク質、またはそのフラグメント（例えば、Ｃａｓ９の活性もしくは不活性なＤＮＡ切断ドメインまたは部分的に不活性なＤＮＡ切断ドメイン（例えば、Ｃａｓ９ニッカーゼ（ｎｉｃｋａｓｅ））、および／あるいはＣａｓ９のｇＲＮＡ結合ドメインを含むタンパク質）を含む、エンドヌクレアーゼを指す。Ｃａｓ９は、ＣＲＩＳＰＲ反復配列中の短いモチーフ（ＰＡＭまたはプロトスペーサー（ｐｒｏｔｏｓｐａｃｅｒ）隣接モチーフ）を認識して、自己と非自己を区別することを助ける。Ｃａｓ９エンドヌクレアーゼの配列および構造は、当業者に周知である（例えば「Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ａｎ Ｍ１ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ．」Ｆｅｒｒｅｔｔｉ Ｊ．Ｊ．， ＭｃＳｈａｎ Ｗ．Ｍ．， Ａｊｄｉｃ Ｄ．Ｊ．， Ｓａｖｉｃ Ｄ．Ｊ．， Ｓａｖｉｃ Ｇ．， Ｌｙｏｎ Ｋ．， Ｐｒｉｍｅａｕｘ Ｃ．， Ｓｅｚａｔｅ Ｓ．， Ｓｕｖｏｒｏｖ Ａ．Ｎ．， Ｋｅｎｔｏｎ Ｓ．， Ｌａｉ Ｈ．Ｓ．， Ｌｉｎ Ｓ．Ｐ．， Ｑｉａｎ Ｙ．， Ｊｉａ Ｈ．Ｇ．， Ｎａｊａｒ Ｆ．Ｚ．， Ｒｅｎ Ｑ．， Ｚｈｕ Ｈ．， Ｓｏｎｇ Ｌ． ｅｘｐａｎｄ／ｃｏｌｌａｐｓｅ ａｕｔｈｏｒ ｌｉｓｔ ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ Ｒ．Ｅ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ９８：４６５８－４６６３（２００１）；「ＣＲＩＳＰＲ ＲＮＡ ｍａｔｕｒａｔｉｏｎ ｂｙ ｔｒａｎｓ－ｅｎｃｏｄｅｄ ｓｍａｌｌ ＲＮＡ ａｎｄ ｈｏｓｔ ｆａｃｔｏｒ ＲＮａｓｅ ＩＩＩ．」Ｄｅｌｔｃｈｅｖａ Ｅ．， Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ Ｋ．， Ｓｈａｒｍａ Ｃ．Ｍ．， Ｇｏｎｚａｌｅｓ Ｋ．， Ｃｈａｏ Ｙ．， Ｐｉｒｚａｄａ Ｚ．Ａ．， Ｅｃｋｅｒｔ Ｍ．Ｒ．， Ｖｏｇｅｌ Ｊ．， Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ．， Ｎａｔｕｒｅ ４７１：６０２－６０７（２０１１）；および「Ａ ｐｒｏｇｒａｍｍａｂｌｅ ｄｕａｌ－ＲＮＡ－ｇｕｉｄｅｄ ＤＮＡ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅ ｉｎ ａｄａｐｔｉｖｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｉｍｍｕｎｉｔｙ．」Ｊｉｎｅｋ Ｍ．， Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ Ｋ．， Ｆｏｎｆａｒａ Ｉ．， Ｈａｕｅｒ Ｍ．， Ｄｏｕｄｎａ Ｊ．Ａ．， Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７：８１６－８２１（２０１２） を参照）。ｓｇＲＮＡ（ｓｉｎｇｌｅ ｇｕｉｄｅ ＲＮＡ：「ｓｇＲＮＡ」または単に「ｇＮＲＡ」）は、ｃｒＲＮＡとｔｒａｃｒＲＮＡとの両方の側面を単一のＲＮＡ種中に組み込むように操作することができる。例えば、Ｊｉｎｅｋ Ｍ．， Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ Ｋ．， Ｆｏｎｆａｒａ Ｉ．， Ｈａｕｅｒ Ｍ．， Ｄｏｕｄｎａ Ｊ．Ａ．， Ｃｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ Ｅ．．Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３７：８１６－８２１（２０１２）を参照）。
Ｃａｓ９のオルトログは、多様な種において記載されており、これは、これらに限定されないが、Ｓ． ｐｙｏｇｅｎｅｓおよびＳ． ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓを含む。さらなる好適なＣａｓ９エンドヌクレアーゼおよび配列は、当業者には明らかであり、かかるＣａｓ９エンドヌクレアーゼおよび配列は、Ｃｈｙｌｉｎｓｋｉ、ＲｈｕｎおよびＣｈａｒｐｅｎｔｉｅｒ、「Ｔｈｅ ｔｒａｃｒＲＮＡ ａｎｄ Ｃａｓ９ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ＩＩ ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｓｙｓｔｅｍｓ」（２０１３）ＲＮＡ Ｂｉｏｌｏｇｙ １０：５， ７２６－７３７において開示される生物および遺伝子座からのＣａｓ９配列を含む。幾つかの態様において、遺伝子編集導入遺伝子は、野生型Ｃａｓ９、フラグメントまたはＣａｓ９バリアントをコードする。「Ｃａｓ９バリアント」は、Ｃａｓ９の機能を有する任意のタンパク質であって、天然に存在するＣａｓ９野生型エンドヌクレアーゼと同一ではないものである。幾つかの態様において、Ｃａｓ９バリアントは、野生型Ｃａｓ９またはそのフラグメントに対して相同性を共有する。Ｃａｓ９バリアントは、いくつかの態様において、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓまたはＳ． ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓのＣａｓ９タンパク質に対して少なくとも４０％の配列同一性を有し、Ｃａｓ９の機能性を保持する。好ましくは、配列同一性は、少なくとも９０％、９５％であるかまたはそれより高い。より好ましくは、配列同一性は、少なくとも９８％または９９％の配列同一性である。本明細書において提供される方法のいずれか１つにおける使用のためのＣａｓ９バリアントのいずれか１つのいくつかの態様において、配列同一性は、アミノ酸配列同一性である。Ｃａｓ９バリアントはまた、Ｃａｓ９二量体、Ｃａｓ９融合タンパク質、Ｃａｓ９フラグメント、最小化されたＣａｓ９タンパク質、切断ドメインを有しないＣａｓ９バリアント、ｇＲＮＡドメインを有しないＣａｓ９バリアント、Ｃａｓ９リコンビナーゼ融合物、ｆＣａｓ９、ＦｏｋＩ－ｄＣａｓ９などを含む。かかるＣａｓ９バリアントの例は、例えば、米国公開番号２０１５００７１８９８および２０１５００７１８９９において見出すことができ、そのＣａｓ９タンパク質およびＣａｓ９バリアントの記載は、本明細書において参考として援用される。Ｃａｓ９バリアントはまた、Ｃａｓ９ニッカーゼを含み、これは、Ｃａｓ９中の単一のエンドヌクレアーゼドメインを不活化する変異を含む。かかるニッカーゼは、標的核酸において、二本鎖切断とは対照的に、一本鎖の切断を誘導することができる。Ｃａｓ９バリアントはまた、１つのヌクレアーゼドメインが変異により不活化されているＣａｓ９バリアントであるＣａｓ９ヌルヌクレアーゼを含む。さらなるＣａｓ９バリアントおよびさらなるＣａｓ９バリアントを同定する方法の例は、米国公開番号２０１４０３５７５２３、２０１５０１６５０５４および２０１５０１６６９８０において見出すことができ、Ｃａｓ９タンパク質、Ｃａｓ９バリアントおよびそれらの同定の方法に関するこれらの内容は、本明細書において参考として援用される。
Ｃａｓ９バリアントのなお他の例は、Ｃａｓ９Ｄ１０Ａとして知られるニッカーゼ活性のみを有する変異形態を含む。Ｃａｓ９Ｄ１０Ａは、遺伝子座が、隣接するＤＮＡニックを生じるように設計された一対のＣａｓ９複合体により標的とされる場合に、標的特異性に関して魅力的である。Ｃａｓ９バリアントの別の例は、ヌクレアーゼ欠損Ｃａｓ９（ｄＣａｓ９）である。ＨＮＨドメインにおける変異Ｈ８４０ＡおよびＲｕｖＣドメインにおける変異Ｄ１０Ａは、切断活性を不活化するが、ＤＮＡ結合を妨げない。したがって、このバリアントは、切断をともなくことなくゲノムの任意の領域を配列特異的にターゲティングするために、用いることができる。実際に、多様なエフェクタードメインと融合させることにより、ｄＣａｓ９は、遺伝子サイレンシングまたは活性化のいずれかのツールとして用いることができる。遺伝子編集導入遺伝子は、幾つかの態様において、本明細書において提供されるＣａｓ９バリアントのいずれか１つをコードしていてもよい。
Ｃａｓ９などのＲＮＡによりプログラム可能なエンドヌクレアーゼを部位特異的な切断のために（例えばゲノムを改変するために）用いる方法は、当該分野において公知である（例えば、Ｃｏｎｇ， Ｌ． ｅｔ ａｌ． Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｕｓｉｎｇ ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ ｓｙｓｔｅｍｓ． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９， ８１９－８２３ （２０１３）；Ｍａｌｉ， Ｐ． ｅｔ ａｌ． ＲＮＡ－ｇｕｉｄｅｄ ｈｕｍａｎ ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｖｉａ Ｃａｓ９． Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３９， ８２３－８２６ （２０１３）；Ｈｗａｎｇ， Ｗ．Ｙ． ｅｔ ａｌ． Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ｉｎ ｚｅｂｒａｆｉｓｈ ｕｓｉｎｇ ａ ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ ｓｙｓｔｅｍ． Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３１， ２２７－２２９ （２０１３）；Ｊｉｎｅｋ， Ｍ． ｅｔ ａｌ． ＲＮＡ－ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄ ｇｅｎｏｍｅ ｅｄｉｔｉｎｇ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｃｅｌｌｓ． ｅＬｉｆｅ ２， ｅ００４７１ （２０１３）；Ｄｉｃａｒｌｏ， Ｊ．Ｅ． ｅｔ ａｌ． Ｇｅｎｏｍｅ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｉｎ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ ｕｓｉｎｇ ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ ｓｙｓｔｅｍｓ． Ｎｕｃｌｅｉｃ ａｃｉｄｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ （２０１３）；Ｊｉａｎｇ， Ｗ． ｅｔ ａｌ． ＲＮＡ－ｇｕｉｄｅｄ ｅｄｉｔｉｎｇ ｏｆ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｇｅｎｏｍｅｓ ｕｓｉｎｇ ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ ｓｙｓｔｅｍｓ． Ｎａｔｕｒｅ ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３１， ２３３－２３９ （２０１３）を参照）。
ホーミングエンドヌクレアーゼは、数個または単一の位置において、それらを合成するために用いられたゲノムＤＮＡの加水分解を触媒することができ、それにより、それらの遺伝子を宿主中で水平方向に伝達して、それらの対立遺伝子頻度を増大することができる。ホーミングエンドヌクレアーゼは、一般に、長い認識配列を有し、それにより、それらは、低い確率の無作為切断を有する。１つの対立遺伝子は、伝達の前に遺伝子を担持し（ホーミングエンドヌクレアーゼ遺伝子＋、ＨＥＧ＋）、一方、他方はこれを担持せず（ＨＥＧ－）、酵素切断されやすい。酵素は、合成された後、ＨＥＧ－の対立遺伝子において染色体を破壊し、細胞のＤＮＡ修復システムからの応答を開始させ、これが、組み換えを用いて、エンドヌクレアーゼのための遺伝子を含む、損傷を受けていないＤＮＡ対立遺伝子ＨＥＧ＋の逆のパターンを取る。したがって、遺伝子は、初めはそれを有しなかった別の対立遺伝子にコピーされ、首尾よく伝播される。ホーミングエンドヌクレアーゼの例は、例えば、米国公開番号２０１５０１６６９６９；および米国特許第９，００５，９７３号において見出すことができ、そのホーミングエンドヌクレアーゼは、本明細書において参考として援用される。
本明細書において提供されるウイルス導入ベクターは、遺伝子発現調節のために用いることができる。かかる態様において、ウイルス導入ベクターの導入遺伝子は、遺伝子発現調節導入遺伝子である。かかる導入遺伝子は、１以上の内在遺伝子の発現を増強するか、阻害するか、または調節することができる、遺伝子発現モジュレーターをコードする。内在遺伝子は、本明細書において提供されるタンパク質のいずれか１つをコードしていてもよい（当該タンパク質が対象の内因性タンパク質であることを前提とする）。したがって、対象は、遺伝子発現調節により提供される利益が存在するであろう、本明細書において提供される疾患または障害のいずれか１つを有するものであってよい。
遺伝子発現モジュレーターは、ＤＮＡ結合タンパク質（例えば、人工転写因子、例えば米国公開番号２０１４０２９６１２９のもの（その人工転写因子は、本明細書において参考として援用される）；および米国公開番号２００３０１２５２８６の転写サイレンサータンパク質（そのＮＲＦ転写サイレンサータンパク質ＮＲＦは、本明細書において参考として援用される））、ならびに治療用ＲＮＡを含む。治療用ＲＮＡとして、これらに限定されないが、ｍＲＮＡ翻訳の阻害剤（アンチセンス）、ＲＮＡ干渉の剤（ＲＮＡｉ）、触媒活性ＲＮＡ分子（リボザイム）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、ならびにタンパク質および他の分子リガンドに結合するＲＮＡ（アプタマー）が挙げられる。
遺伝子発現モジュレーターは、前述のうちのいずれかの剤を含み、アンチセンス核酸、ＲＮＡｉ分子（例えば、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、低分子ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ））および三重鎖形成オリゴヌクレオチド（ＴＦＯ）を含む。遺伝子発現モジュレーターはまた、前述のＲＮＡ分子のいずれかの改変されたバージョンを含んでもよく、したがって、改変されたｍＲＮＡ、例えば合成化学的に改変されたＲＮＡを含む。
遺伝子発現モジュレーターは、アンチセンス核酸であってもよい。アンチセンス核酸は、遺伝子発現（例えば、変異体タンパク質、優性的に活性な遺伝子産物、毒性に関連するタンパク質、またはウイルスなどの感染性の剤により細胞中に導入される遺伝子産物の発現）の、ターゲティングされた阻害を提供することができる。したがって、遺伝子発現調節ウイルス導入ベクターは、ドミナント・ネガティブまたは機能獲得型の病原機構に関連する疾患もしくは障害、がんまたは感染症を処置するために用いることができる。本明細書において提供される方法のいずれか１つの対象は、ウイルス感染、炎症性障害、心血管疾患、がん、遺伝子障害または自己免疫性疾患を有する対象であってよい。アンチセンス核酸はまた、ｍＲＮＡスプライシング機構に干渉して、正常な細胞によるｍＲＮＡプロセッシングを妨害することができる。したがって、遺伝子発現調節導入遺伝子は、スプライソソームと相互作用する要素をコードしていてもよい。アンチセンス核酸（および関連するコンストラクト）の例は、例えば、米国公開番号２００５００２０５２９および２００５０２７１７３３において見出すことができ、そのアンチセンス核酸およびコンストラクトは、本明細書において参考として援用される。
遺伝子発現モジュレーターはまた、リボザイム（すなわち、一本鎖ＲＮＡなどの他のＲＮＡを切断することができるＲＮＡ分子）であってもよい。かかる分子は、ＲＮＡ分子中の特異的なヌクレオチド配列を認識して、それを切断するように操作することができる（Ｃｅｃｈ， Ｊ． Ａｍｅｒ． Ｍｅｄ． Ａｓｓｎ．， ２６０：３０３０， １９８８）。例えば、リボザイムは、そのリボザイムを含むコンストラクトに相補的な配列を有するｍＲＮＡのみが不活化されるように、操作することができる。リボザイムの型および関連するコンストラクトを調製する方法は、当該分野において公知である（Ｈａｓｓｅｌｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３３４：５８５， １９８８； ａｎｄ 米国公開番号２００５００２０５２９；かかるリボザイムおよび方法に関するその教示は、本明細書において参考として援用される）。
遺伝子発現モジュレーターは、干渉ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）であってよい。ＲＮＡ干渉は、干渉ＲＮＡにより媒介される配列特異的な転写後の遺伝子サイレンシングのプロセスを指す。一般に、ｄｓＲＮＡの存在は、ＲＮＡｉ応答を引き起こし得る。ＲＮＡｉは、多様な系において研究されてきた。Ｆｉｒｅ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ｎａｔｕｒｅ， ３９１， ８０６、Ｃ． ｅｌｅｇａｎｓにおけるＲＮＡｉ；Ｂａｈｒａｍｉａｎ ａｎｄ Ｚａｒｂｌ， １９９９， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， １９， ２７４－２８３およびＷｉａｎｎｙ ａｎｄ Ｇｏｅｔｚ， １９９９， Ｎａｔｕｒｅ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．， ２， ７０、哺乳動物系においてｄｓＲＮＡにより媒介されるＲＮＡｉ；Ｈａｍｍｏｎｄ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ｎａｔｕｒｅ， ４０４， ２９３、ショウジョウバエ細胞におけるＲＮＡｉ ｉｎ Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ ｃｅｌｌｓ；Ｅｌｂａｓｈｉｒ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｎａｔｕｒｅ， ４１１， ４９４、培養哺乳動物細胞において合成の２１ヌクレオチドのＲＮＡの二本鎖の導入により誘導されるＲＮＡｉ。かかる研究は、他のものと共に、ＲＮＡｉ活性を媒介するためにＲＮＡｉ分子の構築において役立つ、長さ、構造、化学組成および配列に関するガイダンスを提供してきた。多様な刊行物が、遺伝子発現モジュレーターとして用いることができるＲＮＡｉ分子の例を提供する。かかる刊行物として、米国特許第８，９９３，５３０号、同第８，８７７，９１７号、同第８，２９３，７１９号、同第７，９４７，６５９号、同第７，９１９，４７３号、同第７，７９０，８７８号、同第７，７３７，２６５号、同第７，５９２，３２２号；ならびに米国公開番号２０１５０１９７７４６、２０１４０３５００７１、２０１４０３１５８３５、２０１３０１５６８４５および２０１００２６７８０５が挙げられ、ＲＮＡｉ分子の型ならびにそれらの作製に関する教示は、本明細書において参考として援用される。
アプタマーは、多様なタンパク質標的に結合して、それらのタンパク質の他のタンパク質との相互作用を妨害することができる。したがって、遺伝子発現モジュレーターは、アプタマーであってもよく、遺伝子発現調節導入遺伝子は、かかるアプタマーをコードしていてもよい。アプタマーは、それらが、調節性タンパク質のＤＮＡ結合部位に特異的に結合することにより遺伝子の転写を妨げる能力のために選択され得る。ＰＣＴ公開番号ＷＯ９８／２９４３０およびＷＯ ００／２００４０は、遺伝子発現を調節するために用いられたアプタマーの例を提供し；米国公開番号２００６０１２８６４９もまた、かかるアプタマーの例を提供する；これらの各々のアプタマーは、本明細書において参考として援用される。
さらなる例として、遺伝子発現の調節剤は、三重鎖オリゴマーであってもよい。かかる分子は、転写を停止させることができる。一般に、これは、オリゴマーが二重らせんＤＮＡの周りを取り巻き、三重鎖らせんを形成するので、三重鎖戦略として知られる。かかる分子は、選択された遺伝子上のユニークな部位を認識するように設計することができる（Ｍａｈｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓ． ａｎｄ Ｄｅｖ．， １（３）：２２７， １９９１；Ｈｅｌｅｎｅ， Ｃ．， Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｄｒｕｇ Ｄｅｓｉｇｎ， ６（６）：５６９， １９９１）。
本明細書において提供されるウイルス導入ベクターはまた、エクソンスキッピングのために用いることができる。かかる態様において、ウイルス導入ベクターの導入遺伝子は、エクソンスキッピング導入遺伝子である。かかる導入遺伝子は、エクソンスキッピングを生じることができるアンチセンスオリゴヌクレオチドまたは他の剤をコードする。アンチセンスオリゴヌクレオチドは、エクソン内のスプライス部位または調節エレメントに干渉して、遺伝子変異の存在に関わらず部分的に機能的な、短縮されたタンパク質をもたらすことができる。加えて、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、変異特異的であってもよく、メッセンジャーＲＮＡ前駆体中の変異部位に結合してエクソンスキッピングを誘導することができる。エクソンスキッピングのためのアンチセンスオリゴヌクレオチドは、当該分野において公知であり、一般に、ＡＯＮと称される。かかるＡＯＮは、ｓｎＲＮＡを含む。アンチセンスオリゴヌクレオチド、それらを設計する方法および関連する作製方法の例は、例えば、米国公開番号２０１５０２２５７１８、２０１５０１５２４１５、２０１５０１４０６３９、２０１５００５７３３０、２０１５００４５４１５、２０１４０３５００７６、２０１４０３５００６７および２０１４０３２９７６２において見出すことができ、それらのＡＯＮ、ならびに記載される関連する方法、例えばＡＯＮを設計および作製する方法は、その全体において本明細書において参考として援用される。
本明細書において提供される方法のいずれか１つは、それを必要とする対象の細胞においてエクソンスキッピングをもたらすために用いることができる。対象は、エクソンスキッピングが利益をもたらすであろう任意の疾患または障害を有していてよく、かかる疾患または障害に関連する適切な（その発現の間のエクソンスキッピングが有益であろう）タンパク質に基づいて、アンチセンスオリゴヌクレオチドを設計することができる。疾患および障害ならびに関連するタンパク質の例は、本明細書において提供される。本明細書において提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、対象は、筋ジストロフィー（例えばデュシェンヌ型筋ジストロフィー）などの本明細書において記載されるジストロフィーのいずれか１つを有する。したがって、本明細書において提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、エクソンスキッピング導入遺伝子は、本明細書において提供されるジストロフィーのいずれか１つと関連する本明細書において提供されるタンパク質のいずれか１つにおいてエクソンスキッピングをもたらすことができる、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは他の剤をコードする。本明細書において提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたは他の剤は、ジストロフィンにおいてエクソンスキッピングをもたらすことができる。
導入遺伝子の配列はまた、発現制御配列を含んでもよい。発現制御ＤＮＡ配列は、プロモーター、エンハンサーおよびオペレーターを含み、一般に、発現コンストラクトが利用されるべき発現系に基づいて選択される。幾つかの態様において、プロモーターおよびエンハンサー配列は、遺伝子発現を増大する能力のために選択され、一方、オペレーター配列は、遺伝子発現を調節する能力のために選択され得る。導入遺伝子はまた、宿主細胞中での相同組み換えを容易にする、および好ましくは促進する、配列を含んでもよい。導入遺伝子はまた、宿主細胞中での複製のために必要である配列を含んでもよい。
例示的な発現制御配列は、プロモーター配列、例えば、サイトメガロウイルスプロモーター；ラウス肉腫ウイルスプロモーター；およびサルウイルス４０プロモーター；ならびに本明細書において他の場所で開示されるか当該分野において他に公知の任意の他の型のプロモーターを含む。一般に、プロモーターは、所望される発現産物をコードする配列の上流（すなわち５’）で作動的に連結される。導入遺伝子はまた、コード配列の下流で作動的に連結された（すなわち３’）好適なポリアデニル化配列（例えば、ＳＶ４０またはヒト成長ホルモン遺伝子ポリアデニル化配列）を含んでもよい。
ウイルスベクター
ウイルスは、それらが感染する細胞の内部でそれらのゲノムを輸送するために特化した機構を進化させてきた；かかるウイルスに基づくウイルスベクターは、特別な用途のために細胞に形質移入するように仕立てることができる。本明細書において提供されるとおり用いることができるウイルスベクターの例は、当該分野において公知であるか、本明細書において記載される。好適なウイルスベクターとして、例えば、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に基づくベクター、アデノウイルスに基づくベクター、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づくベクター、およびＡＡＶ－アデノウイルスキメラベクターが挙げられる。
本明細書において提供されるウイルス導入ベクターは、レトロウイルスに基づくものであってもよい。レトロウイルスは、広範な宿主細胞に感染することができる一本鎖ポジティブ・センスＲＮＡウイルスである。感染すると、レトロウイルスゲノムは、そのＲＮＡゲノムからＤＮＡを生成するためにそれ自身の転写酵素を用いて、その宿主細胞のゲノム中に組み込まれる。ウイルスＤＮＡが、次いで、ウイルスおよび宿主の遺伝子を翻訳および転写する宿主細胞ＤＮＡと共に複製される。レトロウイルスベクターは、ウイルス複製能力を失うように操作することができる。したがって、レトロウイルスベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏでの安定な遺伝子導入のために特に有用であると考えられる。レトロウイルスベクターの例は、例えば、米国公開番号２０１２０００９１６１、２００９０１１８２１２および２００９００１７５４３において見出すことができ、そのウイルスベクターおよびそれらの作製の方法は、本明細書においてその全体において参考として援用される。
レンチウイルスベクターは、本明細書において提供されるウイルス導入ベクターの作製のために用いることができるレトロウイルスベクターの例である。レンチウイルスは、非分裂細胞に感染する能力を有し、これは、遺伝子送達ベクターのより効率的な方法を構成する特性である（例えば、Ｄｕｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．， Ｖｉｒｕｓｅｓ． ２０１１ Ｆｅｂ； ３（２）：１３２－１５９を参照）。レンチウイルスの例として、ＨＩＶ（ヒト）、サル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）およびビスナウイルス（ヒツジレンチウイルス）が挙げられる。他のレトロウイルスとは異なり、ＨＩＶに基づくベクターは、それらのパッセンジャー遺伝子を非分裂細胞中に組み込むことが知られている。レンチウイルスベクターの例は、例えば、米国公開番号２０１５０２２４２０９、２０１５０２０３８７０、２０１４０３３５６０７、２０１４０２４８３０６、２００９０１４８９３６および２００８０２５４００８において見出すことができ、そのウイルスベクターおよびそれらの作製の方法は、本明細書においてその全体において参考として援用される。
単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）に基づくウイルスベクターもまた、本明細書において提供される使用のために好適である。多くの複製欠損ＨＳＶベクターは、複製を防止するために、１以上のｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ－ｅａｒｌｙ遺伝子を取り除く欠失を含む。ヘルペスベクターの利点は、潜伏期に入る能力により長期のＤＮＡ発現をもたらすことができること、および大きなウイルスＤＮＡゲノムにより２５ｋｂまでの外来ＤＮＡを収容することができることである。ＨＳＶに基づくベクターの記載については、例えば、米国特許第５，８３７，５３２号、同第５，８４６，７８２号、同第５，８４９，５７２号および同第５，８０４，４１３号、ならびに国際特許出願ＷＯ９１／０２７８８、ＷＯ９６／０４３９４、ＷＯ９８／１５６３７およびＷＯ９９／０６５８３を参照；そのウイルスベクターおよびそれらの作製の方法の記載は、その全体において参考として援用される。
アデノウイルス（Ａｄ）は、多様な異なる標的細胞型にｉｎ ｖｉｖｏでＤＮＡを導入することができる無エンベロープウイルスである。ウイルスは、ウイルス複製のために必要とされる選択遺伝子を欠失させることにより、複製欠損にすることができる。より大きなＤＮＡインサートのためのさらなる余地を可能にするために、犠牲にしてもよい複製に必須でないＥ３領域もまた頻繁に欠失させられる。ウイルス導入ベクターは、アデノウイルスに基づいていてもよい。アデノウイルス導入ベクターは、高い力価において作製することができ、ＤＮＡを複製中および非複製中の細胞に効率的に導入することができる。レンチウイルスとは異なり、アデノウイルスＤＮＡは、ゲノム中には組み込まれず、したがって、細胞分裂の間には複製せず、その代わりに、それらは宿主細胞の核内で、宿主の複製機構を用いて複製する。
ウイルス導入ベクターの基礎となるアデノウイルスは、任意の起源、任意のサブグループ、任意のサブタイプ、サブタイプの混合物、または任意の血清型からのものであってよい。例えば、アデノウイルスは、サブグループＡ（例えば、血清型１２、１８および３１）、サブグループＢ（例えば、血清型３、７、１１、１４、１６、２１、３４、３５および５０）、サブグループＣ（例えば、血清型１、２、５および６）、サブグループＤ（例えば、血清型８、９、１０、１３、１５、１７、１９、２０、２２～３０、３２、３３、３６～３９および４２～４８）、サブグループＥ（例えば、血清型４）、サブグループＦ（例えば、血清型４０および４１）、未分類の血清群（例えば、血清型４９および５１）、または任意の他のアデノウイルス血清型のものであってよい。アデノウイルス血清型１～５１は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ， Ｖａ．）から入手可能である。非Ｃ群アデノウイルス、および非ヒトアデノウイルスですら、複製欠損アデノウイルスベクターを調製するために用いることができる。非Ｃ群アデノウイルスベクター、非Ｃ群アデノウイルスベクターを作製する方法、および非Ｃ群アデノウイルスベクターを用いる方法は、例えば、米国特許第５，８０１，０３０号、同第５，８３７，５１１号および同第５，８４９，５６１号、ならびに国際特許出願ＷＯ９７／１２９８６およびＷＯ９８／５３０８７において開示される。任意のアデノウイルス、キメラアデノウイルスですら、アデノウイルスベクターのためのウイルスゲノムのソースとして用いることができる。例えば、ヒトアデノウイルスを、複製欠損アデノウイルスベクターのためのウイルスゲノムのソースとして用いることができる。アデノウイルスベクターのさらなる例は、米国公開番号２０１５００９３８３１、２０１４０２４８３０５、２０１２０２８３３１８、２０１００００８８８９、２００９０１７５８９７および２００９００８８３９８において見出すことができ、そのウイルスベクターおよびそれらの作製の方法の記載は、その全体において参考として援用される。
本明細書において提供されるウイルス導入ベクターはまた、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）に基づいていてもよい。ＡＡＶベクターは、本明細書において記載されるもののような治療的適用における使用のために、特に関心を集めて来た。ＡＡＶは、ヒト疾患を引き起こすことは知られていないＤＮＡウイルスである。一般に、ＡＡＶは、効率的な複製のために、ヘルパーウイルス（例えば、アデノウイルスまたはヘルペスウイルス）との共感染またはヘルパー遺伝子の発現を必要とする。ＡＡＶは、宿主細胞ゲノムに特定の部位において安定に感染する能力を有し、それにより、レトロウイルスより予測可能である；しかし、一般に、ベクターのクローニング能力は４．９ｋｂである。遺伝子治療の適用において用いられてきたＡＡＶベクターは、一般に、ＤＮＡ複製およびパッケージングのための認識シグナルを含む末端反復（ＩＴＲ）のみが残るように、親ゲノムの約９６％を欠失している。ＡＡＶに基づくベクターの記載については、例えば、米国特許第８，６７９，８３７号、同第８，６３７，２５５号、同第８，４０９，８４２号、同第７，８０３，６２２号および同第７，７９０，４４９、ならびに米国公開番号２０１５００６５５６２、２０１４０１５５４６９、２０１４００３７５８５、２０１３００９６１８２、２０１２０１００６０６および２００７００３６７５７を参照；そのウイルスベクターおよびそれらの作製の方法は、は、本明細書においてその全体において参考として援用される。ＡＡＶベクターは、組み換えＡＡＶベクターであってよい。
ＡＡＶベクターはまた、自己相補的（ｓｃ）ＡＡＶベクターであってよく、これは、例えば、米国特許公開２００７／０１１１０７２４および２００４／００２９１０６、ならびに米国特許第７，４６５，５８３号および同第７，１８６，６９９号において記載され、ベクターおよびその作製の方法は、本明細書において参考として援用される。
ウイルス導入ベクターの基礎となるアデノ随伴ウイルスは、任意の血清型または血清型の混合物のものであってよい。ＡＡＶ血清型は、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０およびＡＡＶ１１を含む。例えば、ウイルス導入ベクターが血清型の混合物に基づく場合、ウイルス導入ベクターは、ＡＡＶ血清型の１つ（例えばＡＡＶ血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１のいずれか１つから選択される）から取得されるカプシドシグナル配列、ならびに異なる血清型（例えばＡＡＶ血清型１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０および１１のいずれか１つから選択される）からのパッケージング配列を含んでもよい。したがって、本明細書において提供される方法または組成物のいずれか１つのいくつかの態様において、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ ２／８ベクターである。本明細書において提供される方法または組成物のいずれか１つの他の態様において、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ ２／５ベクターである。
本明細書において提供されるウイルス導入ベクターはまた、アルファウイルスに基づいていてもよい。アルファウイルスとして、シンドビス（およびＶＥＥＶ）ウイルス、アウラ（Ａｕｒａ）ウイルス、ババンキ（Ｂａｂａｎｋｉ）ウイルス、バーマフォレストウイルス、ベバル（Ｂｅｂａｒｕ）ウイルス、カバソウ（Ｃａｂａｓｓｏｕ）ウイルス、チクングニアウイルス、東部ウマ脳炎ウイルス、エバーグレード（Ｅｖｅｒｇｌａｄｅｓ）ウイルス、フォートモーガン（Ｆｏｒｔ Ｍｏｒｇａｎ）ウイルス、ゲタウイルス、ハイランドＪ（Ｈｉｇｈｌａｎｄｓ Ｊ）ウイルス、キジラガチ（Ｋｙｚｙｌａｇａｃｈ）ウイルス、マヤロウイルス、メトリ（Ｍｅ Ｔｒｉ）ウイルス、ミデルバーグ（Ｍｉｄｄｅｌｂｕｒｇ）ウイルス、モッソダスペドラス（Ｍｏｓｓｏ ｄａｓ Ｐｅｄｒａｓ）ウイルス、ムカンボウイルス、ヌドゥムウイルス、オニョンニョンウイルス、ピクスナウイルス、リオネグロウイルス、ロスリバーウイルス、サケ膵臓病ウイルス、セムリキ森林ウイルス、南部ゾウアザラシ（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｅｌｅｐｈａｎｔ ｓｅａｌ）ウイルス、トナテ（Ｔｏｎａｔｅ）ウイルス、トロカラ（Ｔｒｏｃａｒａ）ウイルス、ウナウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルス、西部ウマ脳炎ウイルス、およびワタロアウイルスが挙げられる。一般に、かかるウイルスのゲノムは、宿主細胞の細胞質中で翻訳されることができる、非構造タンパク質（例えばレプリコン）および構造タンパク質（例えば、カプシドおよびエンベロープ）をコードする。ロスリバーウイルス、シンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス（ＳＦＶ）、およびベネズエラウマ脳炎ウイルス（ＶＥＥＶ）は全て、導入遺伝子送達のためのウイルス導入ベクターを開発するために用いられてきた。シュードタイプウイルスは、アルファウイルスのエンベロープ糖タンパク質とレトロウイルスのカプシドとを組み合わせることにより形成させることができる。アルファウイルスベクターの例は、米国公開番号２０１５００５０２４３、２００９０３０５３４４および２００６０１７７８１９において見出すことができ；ベクターおよびそれらの作製の方法は、その全体において本明細書において参考として援用される。
コルチコステロイド
「コルチコステロイド」は、脊椎動物の副腎皮質において生成されるなどのステロイドホルモン、ならびにこれらのホルモンの合成類似体である。コルチコステロイドは、糖質コルチコイドおよび鉱質コルチコイドを含む。
コルチコステロイドの例は、以下を含むが、これらに限定されない：アルクロメタゾン、アムシノニド、ベクロメタゾン、ベタメサゾン、ブデソニド、シクレソニド、クロベタゾール、クロベタゾン、クロコルトロン、クロプレドノール、コルチバゾール、デフラザコルト、デオキシコルチコステロン、デソニドデスオキシメタゾン、デキサメタゾン、ジフロラゾン、ジフルコルトロン、ジフルプレドナート、フルクロロン、フルドロコルチゾン、フルドロキシコルチド、フルメタゾン、フルニソリド、フルオシノロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルチン、フルオコルトロン、フルオロメトロン、フルペロロン、フルチカゾン、フルチカゾンプロピオナート、フルプレドニデン、ホルモコルタール、ハルシノニド、ハロメタソーン、ハイドロコーチゾンアセポナート、ハイドロコーチゾン・ブテプラート、酪酸ヒドロコルチゾン、ロテプレドノール、メドリゾン、メプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、メチルプレドニゾロンアセポナート、モメタゾンフロアート、パラメサゾン、プレドニカルバート、プレドノゾン、プレドニゾロン、プレドニリデン、リメキソロン、チキソコルトール、トリアムシノロン、およびウロベタソール、またはそれらの組み合わせ、任意にそれらのラセミ体、それらの鏡像異性体、それらのジアステレオマー、およびそれらの混和物、および任意にそれらの薬理学的に互換性の酸の付加塩の形におけるそれら。好ましい態様において、コルチコステロイドは、デキサメタゾン（Ｄｅｘ）、メチルプレドニゾロン、またはそれらの誘導体である。メチルプレドニゾロンの誘導体は、たとえば、琥珀酸メチルプレドニゾロンナトリウム、および酢酸メチルプレドニゾロンを含む。デキサメタゾンの誘導体は、たとえば、デキサメタゾンナトリウムホスファートおよび酢酸デキサメタゾンを含む。
コルチコステロイドのなお他の例は、天然であるもの（例として、１１‐デヒドロコルチコステロン（１１－オキソコルチコステロン、１７－デオキシコルチゾン）＝２１－ヒドロキシプレグナ－４－エン－３，１１，２０－トリオン；１１‐デオキシコルチコステロン（デオキシコルチコステロン、デスオキシコルトン；２１‐ヒドロキシプロゲステロン）＝２１－ヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；１１‐デオキシコルチゾール（コルトドキソン、コルテキソロン）＝１７α，２１－ジヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；１１－ケトプロゲステロン（１１－オキソプロゲステロン；ケトゲスチン）＝プレグナ－４－エン－３，１１，２０－トリオン；１１β－ヒドロキシプレグネノロン＝３β，１１β－ジヒドロキシプレグナ－５－エン－２０－オン；１１β－ヒドロキシプロゲステロン（２１－デオキシコルチコステロン）＝１１β－ヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；１１β，１７α，２１－トリヒドロキシプレグネノロン＝３β，１１β，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－５－エン－２０－オン；１７α，２１－ジヒドロキシプレグネノロン＝３β，１７α，２１－トリヒドロキシプレグネ－５－エン－２０－オン；１７α－ヒドロキシプレグネノロン＝３β，１７α－ジヒドロキシプレグナ－５－エヌ－２０－オン；１７α－ヒドロキシプロゲステロン＝１７α－ヒドロキシプレグナ－４－エン－３，１１，２０－トリオン；１８－ヒドロキシ－１１‐デオキシコルチコステロン＝１８，２１－ジヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；１８－ヒドロキシコルチコステロン＝１１β，１８，２１－トリヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；１８－ヒドロキシプロゲステロン＝１８－ヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；２１－デオキシコルチゾール＝１１β，１７α－ジヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；２１－デオキシコルチゾン＝１７α－ヒドロキシプレグナ－４－エン－３，１１，２０－トリオン；２１－ヒドロキシプレグネノロン（プレベジオロン）＝３β，２１－ジヒドロキシプレグナ－５－エン－２０－オン；アルドステロン＝１１β，２１－ジヒドロキシプレグナ－４－エン－３，１８，２０－トリオン；コルチコステロン（１７－デオキシコルチゾール）＝１１β，２１－ジヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；コルチゾール（ハイドロコーチゾン）＝１１β，１７α，２１－トリヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；コーチゾン＝１７α，２１－ジヒドロキシプレグナ－４－エン－３，１１，２０－トリオン；プレグネノロン＝プレグナ－５－エヌ－３β－オール－２０－オン；そして、プロゲステロン＝プレグナ－４－エン－３，２０－ジオン）；プロゲステロン－タイプ（例として、フルゲストン（フルロゲストン）＝９α－フルオロ－１１β，１７α－ジヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；フルオロメトロン＝６α－メチル－９α－フルオロ－１１β，１７α－ジヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；メドリゾン（ヒドロキシメチルプロゲステロン）＝６α－メチル－１１β－ヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；そして、プレベジオロンアセタート（２１‐アセトキシプレグネノロン）＝３β，２１－ジヒドロキシプレグナ－５－エヌ－２０－オン２１－アセタート）およびプロゲステロン誘導体女性ホルモン（例として、酢酸クロルマジノン、シプロテロンアセタート、メドロゲストン、メドロキシプロゲステロンアセテート、メゲストロールアセテートおよびセゲステロン・アセタート）；ハイドロコーチゾン－タイプ（例として、クロロプレドニゾン＝６α－クロロ－１７α，２１－ジヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，１１，２０－トリオン；クロプレドノール＝６－クロロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシプレグナ－１，４，６－トリエン－３，２０－ジオン；ジフルプレドナート＝６α，９α－ジフルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン１７α－ブチラート２１－アセタート；フルドロコルチゾン＝９α－フルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；フルオシノロン＝６α，９α－ジフルオロ－１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；フルペロロン＝９α－フルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－２１－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；フルプレドニゾロン＝６α－フルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；ロテプレドノール＝１１β，１７α，ジヒドロキシ－２１－オキサ－２１－クロロメチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；メチルプレドニゾロン＝６α－メチル－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；プレドニカルバート＝１１β，１７α，２１－トリヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン１７α－エチルカルボナート２１－プロピオナート；プレドニゾロン＝１１β，１７α，２１－トリヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；プレドノゾン＝１７α，２１－ジヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，１１，２０－トリオン；チキソコルトール＝１１β，１７α－ジヒドロキシ－２１－スルファニルプレグナ－４－エン－３，２０－ジオン；そして、トリアムシノロン＝９α－フルオロ－１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン）；メタゾン－タイプ（１６をメチル化された）（例として、メタゾン；アルクロメタゾン＝７α－クロロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；ベクロメタゾン＝９α－クロル－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－１６β－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；ベタメサゾン＝９α－フルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－１６β－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；クロベタゾール＝９α－フルオロ－１１β，１７α－ジヒドロキシ－１６β－メチル－２１－クロロプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；クロベタゾン＝９α－フルオロ－１６β－メチル－１７α－ヒドロキシ－２１－クロロプレグナ－１，４－ジエン－３，１１，２０－トリオン；クロコルトロン＝６α－フルオロ－９α－クロロ－１１β，２１－ジヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；デスオキシメタゾン＝９α－フルオロ－１１β，２１－ジヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；デキサメタゾン＝９α－フルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；ジフロラゾン＝６α，９α－ジフルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－１６β－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；ジフルオコルトロン＝６α，９α－ジフルオロ－１１β，２１－ジヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；フルクロロン＝６α－フルオロ－９α，１１β－ジクロロ－１６α，１７α，２１－トリヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；フルメタゾン＝６α，９α－ジフルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；フルオコルチン＝６α－フルオロ－１１β，２１－ジヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０，２１－トリオン；フルオコルトロン＝６α－フルオロ－１１β，２１－ジヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；フルプレドニデン＝９α－フルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－１６－メチレンプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；フルチカゾン＝６α，９α－ジフルオロ－１１β，１７α－ジヒドロキシ－１６α－メチル－２１－チア－２１－フルオロメチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；フルチカゾン・フロアート＝６α，９α－ジフルオロ－１１β，１７α－ジヒドロキシ－１６α－メチル－２１－チア－２１－フルオロメチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン１７α－（２－フロアート）；ハロメタゾン＝２－クロロ－６α，９α－ジフルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；メプレドニゾン＝１６β－メチル－１７α，２１－ジヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，１１，２０－トリオン；モメタゾン＝９α，２１－ジクロロ－１１β，１７α－ジヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；モメタゾンフロアート＝９α，２１－ジクロロ－１１β，１７α－ジヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン１７α－（２－フロアート）；パラメサゾン＝６α－フルオロ－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－１６α－メチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；プレドニリデン＝１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－１６－メチレンプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；リメキソロン＝１１β－ヒドロキシ－１６α，１７α，２１－トリメチルプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン；そして、ウロベタソール（ハロベタゾール）＝６α，９α－ジフルオロ－１１β，１７α－ジヒドロキシ－１６β－メチル－２１－クロロプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオン）；
アセトニドおよび関連（例として、アムシノニド＝シクロペンタノンを伴なう９α－フルオロ－１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール、２１－アセタート；ブデソニド＝ブチルアルデヒドを伴なう１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール；シクレソニド＝（Ｒ）－シクロヘキサンカルボキサルデヒドを伴なう１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール、２１－イソブチラート；デフラザコルト＝１１β，２１－ジヒドロキシ－２’－メチル－５´Ｈ－プレグナ－１，４－ジエノ［１７，１６－ｄ］オキサゾール－３，２０－ジオン、２１－アセタート；デソニド＝アセトンを伴なう１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール；ホルモコルタール（フルオロホルミロン）＝アセトンを伴なう３－（２－クロロエトキシ）－９α－フルオロ－１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシ－２０－オキソプレグナ－３，５－ジエン－６－カルボキサルデヒドサイクリック１６α，１７α－アセタール、２１－アセタート；フルクロロンアセトニド（フルコロニド）＝アセトンを伴なう６α－フルオロ－９α，１１β－ジクロロ－１６α，１７α，２１－トリヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール；
フルドロキシコルチド（フルランドレノロン、フルランドレノリド）＝アセトンを伴う６α－フルオロ－１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－４－エン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール；フルニソリド＝アセトンを伴なう６α－フルオロ－１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール；フルオシノロンアセトニド＝アセトンを伴なう６α，９α－ジフルオロ－１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール；フルオシノニド＝アセトンを伴なう６α，９α－ジフルオロ－１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール、２１－アセタート；ハルシノニド＝アセトンを伴なう９α－フルオロ－１１β，１６α，１７α－トリヒドロキシ－２１－クロロプレグナ－４－エン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール；およびトリアムシノロンアセトニド＝アセトンを伴なう９α－フルオロ－１１β，１６α，１７α，２１－テトラヒドロキシプレグナ－１，４－ジエン－３，２０－ジオンサイクリック１６α，１７α－アセタール）；および、なお他のもの（例として、コルチバゾール＝６，１６α－ジメチル－１１β，１７α，２１－トリヒドロキシ－２’－フェニル［３，２－ｃ］ピラゾロプレグナ－４，６－ジエン－２１－オン－２１－アセタート；および、Ｒｕ－２８３６２＝６－メチル－１１β，１７β－ジヒドロキシ－１７α－（１－プロピニル）アンドロスタ－１，４，６－トリエン－３－オン）などを含むが、これらに限定されない。
本明細書に提供される方法、組成物またはキットのいずれか１つのいくつかの態様において、コルチコステロイドは、合成ナノキャリアに連結されない。
免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア
多種多様な合成ナノキャリアは、本発明に従って使用されることができる。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、球体または球状体である。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、扁平または平板状である。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、立方体または立方である。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、卵円または楕円である。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、円柱、円錐または錐体である。
幾つかの態様において、各々の合成ナノキャリアが類似の特性を有するように、サイズまたは形状に関して比較的均一である合成ナノキャリアの集団の使用が望ましい。例えば、提供される組成物または方法のいずれか１つの合成ナノキャリアの、合成ナノキャリアの合計数に基づいて、少なくとも８０％、少なくとも９０％、または少なくとも９５％は、合成ナノキャリアの平均直径または平均寸法の５％、１０％、または２０％以内に該当する最小寸法または最大寸法を有していてもよい。
合成ナノキャリアは、中実であっても中空であってもよく、１以上の層を含んでもよい。幾つかの態様において、各層は、他の層と比較してユニークな組成およびユニークな特性を有する。一例のみを挙げると、合成ナノキャリアは、コア／シェル構造を有していてもよく、ここで、コアは１つの層であり（例えばポリマーのコア）、シェルは第２の層である（例えば脂質二重層または単層）。
合成ナノキャリアは、複数の異なる層を含んでもよい。
幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、１以上の脂質を任意に含んでもよい。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、リポソームを含んでもよい。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質二重層を含んでもよい。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質単層を含んでもよい。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、ミセルを含んでもよい。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）に囲まれたポリマーマトリックスを含むコアを含んでもよい。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、脂質層（例えば、脂質二重層、脂質単層など）に囲まれた非ポリマー性のコア（例えば、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子、骨粒子、ウイルス粒子、タンパク質、核酸、炭水化物など）を含んでもよい。
他の態様において、合成ナノキャリアは、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子などを含んでもよい。幾つかの態様において、非ポリマー性合成ナノキャリアは、金属原子（例えばとして金原子）の凝集物などの、非ポリマー性成分の凝集物である。
幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、１以上の両親媒体を任意に含んでもよい。幾つかの態様において、両親媒体は、増大した安定性、改善した均一性または増大した粘性により、合成ナノキャリアの製造を促進することができる。幾つかの態様において、両親媒体は、脂質膜（例えば、脂質二重層、脂質単層など）の内部表面に関連していてもよい。当該分野において公知の多くの両親媒体が、本発明による合成ナノキャリアを作製するために好適である。
かかる両親媒性の実体は、ホスホグリセリドを含むが、これに限定されない；ホスファチジルコリン；ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）；ジオレイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；ジオレイルオキシプロピルトリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）；ジオレオイルホスファチジルコリン；コレステロール；コレステロールエステル；ジアシルグリセロール；コハク酸ジアシルグリセロール；ジホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）；ヘキサンデカノール；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの脂肪アルコール；ポリオキシエチレン－９－ラウリルエーテル；パルミチン酸またはオレイン酸などの界面活性脂肪酸；脂肪酸；脂肪酸モノグリセリド；脂肪酸ジグリセリド；脂肪酸アミド；ソルビタントリオレアート（Ｓｐａｎ（登録商標）８５）グリココーレート；ソルビタンモノラウレート（Ｓｐａｎ（登録商標）２０）；ポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０）；ポリソルベート６０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６０）；ポリソルベート６５（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）６５）；ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８０）；ポリソルベート８５（Ｔｗｅｅｎ（登録商標）８５）；ポリオキシエチレンモノステアレート；サーファクチン；ポロキサマー；ソルビタントリオレアートなどのソルビタン脂肪酸エステル；レシチン；リゾレシチン；ホスファチジルセリン；ホスファチジルイノシトール；スフィンゴミエリン；ホスファチジルエタノールアミン（セファリン）；カルジオリピン；ホスファチジン酸；セレブロシド；リン酸ジセチル；ジパルミトイルホスファチジルグリセロール；ステアリルアミン；ドデシルアミン；ヘキサデシルアミン；パルミチン酸アセチル；グリセロールリシノレート；ヘキサデシルステアレート；ミリスチン酸イソプロピル；チロキサポール；ポリ（エチレングリコール）５０００－ホスファチジルエタノールアミン；ポリ（エチレングリコール）４００－モノステアレート；リン脂質；高い界面活性剤特性を有する合成および／または天然の洗剤；デオキシコラート；シクロデキストリン；カオトロピックな塩；イオン対化剤（ｉｏｎ ｐａｉｒｉｎｇ ａｇｅｎｔ）；およびこれらの組み合わせ。両親媒体成分は、異なる両親媒体の混合物であってもよい。当業者は、これは例示的な界面活性剤効果を有する物質のリストであって、包括的なものではないことを理解するであろう。本発明により用いられるべき合成ナノキャリアの製造において、任意の両親媒体を用いることができる。
幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、１以上の炭水化物を任意に含んでもよい。炭水化物は、天然であっても合成であってもよい。炭水化物は、誘導体化された天然の炭水化物であってもよい。ある態様において、炭水化物は、単糖または二糖を含み、これは、限定されないが、グルコース、フルクトース、ガラクトース、リボース、ラクトース、スクロース、マルトース、トレハロース、セロビオース、マンノース、キシロース、アラビノース、グルクロン酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、グルコサミン、ガラクトサミンおよびノイラミン酸を含む。ある態様において、炭水化物は多糖であり、これは、限定されないが、プルラン、セルロース、微晶質セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）、ヒドロキシセルロース（ＨＣ）、メチルセルロース（ＭＣ）、デキストラン、シクロデキストラン、グリコーゲン、ヒドロキシエチルデンプン、カラギーナン、グリコン（ｇｌｙｃｏｎ）、アミロース、キトサン、Ｎ，Ｏ－カルボキシルメチルキトサン、アルギン酸およびアルギニン酸、デンプン、キチン、イヌリン、コンニャク、グルコマンナン、プスツラン（ｐｕｓｔｕｌａｎ）、ヘパリン、ヒアルロン酸、カードランおよびキサンタンを含む。態様において、合成ナノキャリアは、多糖などの炭水化物を含まない（または特に除外する）。ある態様において、炭水化物は、糖アルコールなどの炭水化物誘導体を含んでもよく、これは、限定されないが、マンニトール、ソルビトールキシリトール、エリスリトール、マルチトールおよびラクチトールを含む。
幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、１以上のポリマーを含んでもよい。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、非メトキシ末端のプルロニックポリマーである１以上のポリマーを含む。幾つかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）は、非メトキシ末端のプルロニックポリマーである。幾つかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの全てが、非メトキシ末端のプルロニックポリマーである。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、非メトキシ末端のポリマーである１以上のポリマーを含む。幾つかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）は、非メトキシ末端のポリマーである。幾つかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの全ては、非メトキシ末端のポリマーである。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、プルロニックポリマーを含まない１以上のポリマーを含む。幾つかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの、少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％または９９％（重量／重量）は、は、プルロニックポリマーを含まない。
幾つかの態様において、合成ナノキャリアを構成するポリマーの全ては、プルロニックポリマーを含まない。幾つかの態様において、かかるポリマーは、コーティング層（例えば、リポソーム、脂質単層、ミセルなど）により囲まれていてもよい。幾つかの態様において、合成ナノキャリアの要素は、ポリマーに接着していてもよい。
免疫抑制剤は、多数の方法のうちのいずれかにより合成ナノキャリアにカップリングすることができる。一般に、接着は、免疫抑制剤と合成ナノキャリアとの間の接着の結果である。この結合により、免疫抑制剤の合成ナノキャリアの表面への接着、および／または合成ナノキャリア中での包含（封入）をもたらすことができる。幾つかの態様において、しかし、免疫抑制剤は、合成ナノキャリアへの結合よりもむしろ合成ナノキャリアの構造の結果として、合成ナノキャリアにより封入される。好ましい態様において、合成ナノキャリアは、本明細書において提供されるポリマーを含み、免疫抑制剤はポリマーに接着している。
接着が、免疫抑制剤と合成ナノキャリアとの間の結合の結果として生じる場合、接着は、カップリング部分を介して生じてもよい。カップリング部分は、それを通して免疫抑制剤が合成ナノキャリアに結合する任意の部分であってよい。かかる部分は、アミド結合またはエステル結合などの共有結合、ならびに免疫抑制剤を合成ナノキャリアに（共有的または非共有的に）結合する別の分子を含む。かかる分子は、リンカーまたはポリマーまたはその単位を含む。例えば、カップリング部分は、免疫抑制剤が静電気的に結合する荷電したポリマーを含んでもよい。別の例として、カップリング部分は、それが共有結合しているポリマーまたはその単位を含んでもよい。
好ましい態様において、合成ナノキャリアは、本明細書において提供されるポリマーを含む。これらの合成ナノキャリアは、完全にポリマー性のものであっても、ポリマーと他の材料との混合物であってもよい。
幾つかの態様において、合成ナノキャリアのポリマーは、会合してポリマーマトリックスを形成する。これらの態様のいくつかにおいて、免疫抑制剤などの成分は、ポリマーマトリックスの１以上のポリマーと共有的に会合することができる。幾つかの態様において、共有的会合は、リンカーにより媒介される。幾つかの態様において、成分は、ポリマーマトリックスの１以上のポリマーに、非共有的に会合していてもよい。例えば、幾つかの態様において、成分は、ポリマーマトリックス中に封入されていても、ポリマーマトリックスにより囲まれていても、および／またはポリマーマトリックス全体に分散していてもよい。あるいはまたは加えて、成分は、疎水性相互作用、電荷相互作用、ファン・デル・ワールス力などにより、ポリマーマトリックスの１以上のポリマーに会合することができる。それらからポリマーマトリックスを形成するための広範なポリマーおよび方法が、慣習的に知られている。
ポリマーは、天然または非天然の（合成の）ポリマーであってよい。ポリマーは、ホモポリマーであっても、２以上のモノマーを含むコポリマーであってよい。配列に関して、コポリマーは、ランダムであっても、ブロックであっても、またはランダムおよびブロック配列の組み合わせを含んでもよい。典型的には、本発明によるポリマーは、有機ポリマーである。
幾つかの態様において、ポリマーは、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリアミドまたはポリエーテル、またはこれらの単位を含む。他の態様において、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）コポリマー、またはポリカプロラクトン、またはこれらの単位を含む。幾つかの態様において、ポリマーは、生分解性であることが好ましい。したがって、これらの態様において、ポリマーが、ポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはこれらの単位などのポリエーテルを含む場合、ポリマーが生分解性となるように、ポリマーが、ポリエーテルのブロックコポリマーおよび生分解性ポリマーを含むことが好ましい。他の態様において、ポリマーは、ポリ（エチレングリコール）またはポリプロピレングリコールまたはその単位などのポリエーテルまたはその単位を単独では含まない。
本発明における使用のために好適なポリマーの他の例として、限定されないが、ポリエチレン、ポリカーボネート（例えばポリ（１，３－ジオキサン－２オン））、ポリ酸無水物（例えばポリ（セバシン酸無水物））、フマル酸ポリプロピル、ポリアミド（例えばポリカプロラクタム）、ポリアセタール、ポリエーテル、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリグリコリド、ポリラクチド－グリコリドコポリマー、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシ酸（ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙａｃｉｄ）（例えばポリ（β－ヒドロキシアルカノアート）））、ポリ（オルトエステル）、ポリシアノアクリラート、ポリビニルアルコール、ポリウレタン、ポリホスファゼン、ポリアクリラート、ポリメタクリラート、ポリウレア、ポリスチレンおよびポリアミン、ポリリジン、ポリリジン－ＰＥＧコポリマー、およびポリ（エチレンイミン）、ポリ（エチレンイミン）－ＰＥＧコポリマーが挙げられる。
幾つかの態様において、本発明によるポリマーは、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により２１Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１７７．２６００下においてヒトにおける使用について承認されているポリマーを含み、これは、限定されないが、ポリエステル（例えば、ポリ乳酸、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）コポリマー、ポリカプロラクトン、ポリバレロラクトン、ポリ（１，３－ジオキサン－２オン））；ポリ酸無水物（例えばポリ（セバシン酸無水物））；ポリエーテル（例えば、ポリエチレングリコール）；ポリウレタン；ポリメタクリラート；ポリアクリラート；およびポリシアノアクリラートを含む。
幾つかの態様において、ポリマーは、親水性であってよい。例えば、ポリマーは、アニオン基（例えば、リン酸基、硫酸基、カルボン酸基）；カチオン基（例えば、四級アミン基）；または極性基（例えば、ヒドロキシル基、チオール基、アミン基）を含んでもよい。幾つかの態様において、親水性ポリマーマトリックスを含む合成ナノキャリアは、合成ナノキャリア中に親水性環境を生じる。幾つかの態様において、ポリマーは、疎水性であってもよい。幾つかの態様において、疎水性ポリマーマトリックスを含む合成ナノキャリアは、合成ナノキャリア中に疎水性環境を生じる。ポリマーの親水性または疎水性の選択は、合成ナノキャリア中に組み込まれる材料の性質に対して影響を有し得る。
幾つかの態様において、ポリマーは、１以上の部分および／または官能基により修飾されていてもよい。本発明により多様な部分または官能基を用いることができる。幾つかの態様において、ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）により、炭水化物により、および／または多糖から誘導される非環式ポリアセタールにより修飾することができる（Ｐａｐｉｓｏｖ， ２００１， ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ， ７８６：３０１）。ある態様は、Ｇｒｅｆらに対する米国特許第５５４３１５８号またはＶｏｎ ＡｎｄｒｉａｎらによるＷＯ公開ＷＯ２００９／０５１８３７の一般的教示を用いて行ってもよい。
幾つかの態様において、ポリマーを、脂質または脂肪酸基により修飾されてもよい。いくつかの態様において、脂肪酸群は、酪酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、またはリグノセリン酸の１以上であってもよい。幾つかの態様において、脂肪酸基は、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、リノール酸、アルファ－リノール酸、ガンマ－リノール酸、アラキドン酸、ガドレイン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸またはエルカ酸の１以上であってよい。
幾つかの態様において、ポリマーは、ポリエステルであってよく、これは、乳酸およびグリコール酸の単位を含むコポリマー、例えばポリ（乳酸－コ－グリコール酸）およびポリ（ラクチド－コ－グリコリド）（本明細書において集合的に「ＰＬＧＡ」として言及される）；ならびにグリコール酸単位を含むホモポリマー（本明細書において「ＰＧＡ」として言及される）、ならびにポリ－Ｌ－乳酸、ポリ－Ｄ－乳酸、ポリ－Ｄ，Ｌ－乳酸、ポリ－Ｌ－ラクチド、ポリ－Ｄ－ラクチド、およびポリ－Ｄ，Ｌ－ラクチド乳酸単位を含むホモポリマー（本明細書において集合的に「ＰＬＡ」として言及される）を含む。幾つかの態様において、例示的なポリエステルとして、例えば、ポリヒドロキシ酸；
ＰＥＧコポリマーおよびラクチドとグリコリドとのコポリマー（例えば、ＰＬＡ－ＰＥＧコポリマー、ＰＧＡ－ＰＥＧコポリマー、ＰＬＧＡ－ＰＥＧコポリマー）およびそれらの誘導体が挙げられる。幾つかの態様において、ポリエステルとして、例えば、ポリ（カプロラクトン）、ポリ（カプロラクトン）－ＰＥＧコポリマー、ポリ（Ｌ－ラクチド－Ｌ－リジン）コポリマー、ポリ（セリンエステル）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）、ポリ［α－（４－アミノブチル）－Ｌ－グリコール酸］およびそれらの誘導体が挙げられる。
幾つかの態様において、ポリマーは、ＰＬＧＡであってよい。ＰＬＧＡは、乳酸とグリコール酸との生体適合性かつ生分解性のコポリマーであり、ＰＬＧＡの多様な形態は、乳酸：グリコール酸の比により特徴づけられる。乳酸は、Ｌ－乳酸、Ｄ－乳酸またはＤ，Ｌ－乳酸であってよい。ＰＬＧＡの分解速度は、乳酸：グリコール酸比を変更することにより調節することができる。幾つかの態様において、本発明により用いられるべきＰＬＧＡは、約８５：１５、約７５：２５、約６０：４０、約５０：５０、約４０：６０、約２５：７５または約１５：８５の乳酸：グリコール酸の比により特徴づけられる。
幾つかの態様において、ポリマーは、１以上のアクリル酸ポリマーであってよい。態様において、アクリル酸ポリマーとして、例えば、アクリル酸とメタクリル酸とのコポリマー、メチルメタクリラートコポリマー、エトキシエチルメタクリラート、シアノエチルメタクリラート、アミノアルキルメタクリラートコポリマー、ポリ（アクリル酸）、ポリ（メタクリル酸）、メタクリル酸アルキルアミドコポリマー、ポリ（メチルメタクリラート）、ポリ（メタクリル酸無水物）、メチルメタクリラート、ポリメタクリラート、ポリ（メチルメタクリラート）コポリマー、ポリアクリルアミド、アミノアルキルメタクリラートコポリマー、グリシジルメタクリラートコポリマー、ポリシアノアクリラート、および前述のポリマーの１以上を含む組み合わせが挙げられる。アクリル酸ポリマーは、低い含有量の四級アンモニウム基と共に、アクリル酸とメタクリル酸エステルとの完全に重合したコポリマーを含んでもよい。
幾つかの態様において、ポリマーは、カチオン性ポリマーであってよい。一般的に、カチオン性ポリマーは、核酸の負に荷電した鎖を縮合および／または保護することができる。ポリ（リジン）などのアミン含有ポリマー（Ｚａｕｎｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９８， Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｄｅｌ． Ｒｅｖ．， ３０：９７；およびＫａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．， ６：７）、ポリ（エチレンイミン）（ＰＥＩ； Ｂｏｕｓｓｉｆ ｅｔ ａｌ．， １９９５， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ， １９９５， ９２：７２９７）、およびポリ（アミドアミン）デンドリマー（Ｋｕｋｏｗｓｋａ－Ｌａｔａｌｌｏ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ．， ＵＳＡ， ９３：４８９７；Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９６， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．， ７：７０３；およびＨａｅｎｓｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ．， ４：３７２）は、生理学的ｐＨにおいて正に荷電しており、核酸とイオン対を形成する。態様において、合成ナノキャリアは、カチオン性ポリマーを含まなくともよい（またはこれを除外してもよい）。
幾つかの態様において、ポリマーは、カチオン性側鎖を有する分解性ポリエステルであってもよい（Ｐｕｔｎａｍ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ， ３２：３６５８；Ｂａｒｒｅｒａ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １１５：１１０１０；Ｋｗｏｎ ｅｔ ａｌ．， １９８９， Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ， ２２：３２５０；Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １２１：５６３３；およびＺｈｏｕ ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ， ２３：３３９９）。
これらのポリエステルの例として、ポリ（Ｌ－ラクチド－Ｌ－リジン）コポリマー（Ｂａｒｒｅｒａ ｅｔ ａｌ．， １９９３， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １１５：１１０１０）、ポリ（セリンエステル）（Ｚｈｏｕ ｅｔ ａｌ．， １９９０， Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ， ２３：３３９９）、ポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）（Ｐｕｔｎａｍ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ， ３２：３６５８；およびＬｉｍ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １２１：５６３３）、ならびにポリ（４－ヒドロキシ－Ｌ－プロリンエステル）（Ｐｕｔｎａｍ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ， ３２：３６５８； ａｎｄ Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １２１：５６３３）が挙げられる。
これらおよび他のポリマーの特性およびそれらを調製する方法は、当該技術分野において周知である（たとえば、米国特許第６，１２３，７２７号；５，８０４，１７８号；５，７７０，４１７号；５，７３６，３７２号；５，７１６，４０４号；６，０９５，１４８号；５，８３７，７５２号；５，９０２，５９９号；５，６９６，１７５号；５，５１４，３７８号；５，５１２，６００号；５，３９９，６６５号；５，０１９，３７９号；５，０１０，１６７号；４，８０６，６２１号；４，６３８，０４５号；および４，９４６，９２９号；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １２３：９４８０； Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １２３：２４６０； Ｌａｎｇｅｒ， ２０００， Ａｃｃ． Ｃｈｅｍ． Ｒｅｓ．， ３３：９４； Ｌａｎｇｅｒ， １９９９， Ｊ． Ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｒｅｌｅａｓｅ， ６２：７； および Ｕｈｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ．， １９９９， Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ．， ９９：３１８１参照）。より一般的には、特定の好適なポリマーを合成するための多様な方法は、Ｃｏｎｃｉｓｅ Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ Ａｍｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｍｍｏｎｉｕｍ Ｓａｌｔｓ、Ｇｏｅｔｈａｌｓ編、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ， １９８０；ＯｄｉａｎによるＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｏｌｙｍｅｒｉｚａｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、第４版、２００４；ＡｌｌｃｏｃｋらによるＣｏｎｔｅｍｐｏｒａｒｙ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｐｒｅｎｔｉｃｅ－Ｈａｌｌ、１９８１；Ｄｅｍｉｎｇ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｎａｔｕｒｅ， ３９０：３８６において；および米国特許第６，５０６，５７７号、同第６，６３２，９２２号、同第６，６８６，４４６号および同第６，８１８，７３２号において記載される。
幾つかの態様において、ポリマーは、直鎖状または分枝状ポリマーであってよい。幾つかの態様において、ポリマーは、デンドリマーであってよい。幾つかの態様において、ポリマーは、互いに実質的に架橋されていてもよい。幾つかの態様において、ポリマーは、実質的に架橋を含まなくてもよい。幾つかの態様において、ポリマーは、架橋するステップを経ることなく用いることができる。さらに、合成ナノキャリアは、前述のおよび他のポリマーのいずれかのブロックコポリマー、グラフトコポリマー、ブレンド、混合物および／または付加物を含んでもよいことが、理解されるべきである。当業者は、本明細書において列記されるポリマーは、本発明による使用のものである例示的なポリマーのリストを代表するが、包括的なものではないことを認識するであろう。
幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、ポリマー成分を含まない。幾つかの態様において、合成ナノキャリアは、金属粒子、量子ドット、セラミック粒子などを含んでもよい。幾つかの態様において、非ポリマー性合成ナノキャリアは、金属原子（例えばとして金原子）の凝集物などの、非ポリマー性成分の凝集物である。
本明細書に提供されるいかなる免疫抑制剤も、いくつかの実施形態において、合成ナノキャリアに連結することができる。免疫抑制剤は、スタチンを含むが、これに限定されるものではない；ラパマイシンまたはラパマイシンアナログ（「ラパログ」）などのｍＴＯＲ阻害剤；ＴＧＦ－βシグナル伝達剤；ＴＧＦ－β受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）阻害剤；ロテノンなどのミトコンドリアの機能の阻害剤；Ｐ３８阻害剤；ＮＦ－κβ阻害剤；アデノシン受容体アゴニスト；プロスタグランジンＥ２アゴニスト；ホスホジエステラーゼ４阻害剤などのホスホジエステラーゼ阻害剤；プロテアソーム阻害剤；キナーゼ阻害剤；Ｇタンパク質共役受容体アゴニスト；Ｇタンパク質共役受容体アンタゴニスト；レチノイド；サイトカイン阻害剤；サイトカイン受容体阻害剤；サイトカイン受容体アクチベーター；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アンタゴニスト；ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニスト；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；カルシニューリン阻害剤；ホスファターゼ阻害剤ならびに酸化ＡＴＰ。免疫抑制剤はまた、ＩＤＯ、ビタミンＤ３、シクロスポリンＡ、アリール炭化水素受容体阻害剤、レスベラトロール、アザチオプリン、６－メルカプトプリン、アスピリン、ニフルミン酸、エストリオール、トリポリド（ｔｒｉｐｏｌｉｄｅ）、インターロイキン（例えば、ＩＬ－１、ＩＬ－１０）、シクロスポリンＡ、サイトカインまたはサイトカイン受容体などを標的とするｓｉＲＮＡを含む。
ｍＴＯＲ阻害剤の例として、ラパマイシンおよびそのアナログ（例えば、ＣＣＬ－７７９、ＲＡＤ００１、ＡＰ２３５７３、Ｃ２０－メタリルラパマイシン（Ｃ２０－Ｍａｒａｐ）、Ｃ１６－（Ｓ）－ブチルスルホンアミドラパマイシン（Ｃ１６－ＢＳｒａｐ）、Ｃ１６－（Ｓ）－３－メチルインドールラパマイシン（Ｃ１６－ｉＲａｐ）（Ｂａｙｌｅ ｅｔ ａｌ． Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２００６、１３：９９－１０７）、ＡＺＤ８０５５、ＢＥＺ２３５（ＮＶＰ－ＢＥＺ２３５）、クリソファン酸（クリソファノール）、デフォロリムス（ＭＫ－８６６９）、エベロリムス（ＲＡＤ０００１）、ＫＵ－００６３７９４、ＰＩ－１０３、ＰＰ２４２、テムシロリムス、およびＷＹＥ－３５４（Ｓｅｌｌｅｃｋ、Ｈｏｕｓｔｏｎ、ＴＸ、ＵＳＡから入手可能）が挙げられる。ＮＦ（例えば、ＮＫ－κβ）阻害剤の例として、ＩＦＲＤ１、２－（１，８－ナフチリジン－２－イル）－フェノール、５－アミノサリチル酸、ＢＡＹ １１－７０８２、ＢＡＹ １１－７０８５、ＣＡＰＥ（Ｃａｆｆｅｉｃ Ａｃｉｄ Ｐｈｅｎｅｔｈｙｌエステル）、マレイン酸ジエチル、ＩＫＫ－２阻害剤ＩＶ、ＩＭＤ ０３５４、ラクタシスチン、ＭＧ－１３２［Ｚ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－ＣＨＯ］、ＮＦκＢ活性化阻害剤ＩＩＩ、ＮＦ－κＢ活性化阻害剤ＩＩ、ＪＳＨ－２３、パルテノライド、フェニルアルシンオキシド（ＰＡＯ）、ＰＰＭ－１８、ピロリジンジチオカルバミン酸アンモニウム塩、ＱＮＺ、ＲＯ １０６－９９２０、ロカグラミド、ロカグラミドＡＬ、ロカグラミドＣ、ロカグラミドＩ、ロカグラミドＪ、ロカグラオール、（Ｒ） －ＭＧ－１３２、サリチル酸ナトリウム、トリプトライド（ＰＧ４９０）、およびウェデロラクトンが挙げられる。
「ラパログ」は、本明細書に使用されているように、構造的にラパマイシン（シロリムス）の（類似体）に関する分子を、指す。ラパログの例として、限定することなく、テムシロリムス（ＣＣＩ－７７９）、エベロリムス（ＲＡＤ００１）、リダフォロリムス（ＡＰ－２３５７３）、およびゾタロリムス（ＡＢＴ－５７８）が挙げられる。ラパログのさらなる例は、例えばＷＯ公開ＷＯ１９９８／００２４４１および米国特許第８，４５５，５１０号において見出すことができ、それらのラパログは、本明細書においてその全体において参考として援用される。
さらなる免疫抑制剤は、当業者に公知であり、本発明は、この点において限定されない。提供される方法または組成物またはキットのいずれか１つの態様において、免疫抑制剤は、本明細書に提供される剤のいずれか１つを含んでもよい。
本発明による組成物は、保存剤、バッファー、食塩水またはリン酸緩衝化食塩水などの薬学的に許容し得る賦形剤を含んでもよい。組成物は、有用な投与形態を達成するために、慣用的な医薬の製造および配合技術を用いて製造することができる。一態様において、組成物は、注射のために、無菌の食塩水溶液中で保存剤と一緒に懸濁される。
Ｄ．組成物を使用および作製する方法
ウイルス導入ベクターは、当業者に公知の、または本明細書において他の場所で記載される方法により作製することができる。例えば、ウイルス導入ベクターは、例えば、米国特許第４，７９７，３６８号およびＬａｕｇｈｌｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ， ２３， ６５－７３（１９８３）において記載される方法を用いて構築および／または精製することができる。
例として、複製欠損アデノウイルスベクターは、複製欠損アデノウイルスベクターにおいては存在しないが、ウイルスの伝播のために必要とされる遺伝子の機能を提供する補完細胞株において、高力価のウイルス導入ベクターストックをもたらすために適切なレベルにおいて、作製することができる。補完細胞株は、全てのアデノウイルス機能を含む、ｅａｒｌｙ領域、ｌａｔｅ領域、ウイルスパッケージング領域、ウイルス関連ＲＮＡ領域、またはそれらの組み合わせによりコードされる、少なくとも１つの複製必須遺伝子の機能の欠損を補完することができる（例えば、アデノウイルスアンプリコンの伝播を可能にするために）。補完細胞株の構築は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ， ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第２版、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年）、およびＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９９４年）により記載されるような標準的な分子生物学および細胞培養技術を伴う。
アデノウイルスベクターを作製するための補完細胞株として、これらに限定されないが、２９３細胞（例えばＧｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｇｅｎ． Ｖｉｒｏｌ．， ３６， ５９－７２ （１９７７）において記載される）、ＰＥＲ．Ｃ６細胞（例えば国際特許出願ＷＯ ９７／００３２６、ならびに米国特許第５，９９４，１２８号および同第６，０３３，９０８号において記載される）、ならびに２９３－ＯＲＦ６細胞（例えば国際特許出願ＷＯ ９５／３４６７１およびＢｒｏｕｇｈ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ７１， ９２０６－９２１３ （１９９７）において記載される）が挙げられる。いくつかの例において、補完細胞は、全ての必要とされるアデノウイルス遺伝子機能を補完しない。ヘルパーウイルスは、アデノウイルスベクターの複製を可能にするために、細胞またはアデノウイルスのゲノムによりコードされていない遺伝子機能を、トランスに提供するために使用することができる。
アデノウイルスベクターは、例えば、米国特許第５，９６５，３５８号、同第５，９９４，１２８号、同第６，０３３，９０８号、同第６，１６８，９４１号、同第６，３２９，２００号、同第６，３８３，７９５号、同第６，４４０，７２８号、同第６，４４７，９９５号および同第６，４７５，７５７号、米国特許出願公開番号２００２／００３４７３５Ａ１、ならびに国際特許出願ＷＯ９８／５３０８７、ＷＯ９８／５６９３７、ＷＯ９９／１５６８６、ＷＯ９９／５４４４１、ＷＯ００／１２７６５、ＷＯ０１／７７３０４およびＷＯ０２／２９３８８、ならびに本明細書において同定される他の参考文献において記載される材料および方法を用いて、構築するか、伝播させるか、および／または精製することができる。アデノウイルス血清型３５ベクターを含む非Ｃ群アデノウイルスベクターは、例えば、米国特許第５，８３７，５１１号および同第５，８４９，５６１号、ならびに国際特許出願ＷＯ９７／１２９８６およびＷＯ９８／５３０８７において記載される方法を用いて作製することができる。
ＡＡＶベクターは、組み換え方法を用いて作製することができる。典型的には、方法は、ＡＡＶカプシドタンパク質またはそのフラグメントをコードする核酸配列；機能的ｒｅｐ遺伝子；ＡＡＶ末端逆位反復配列（ＩＴＲ）および導入遺伝子からなる組み換えＡＡＶベクター；ならびに組み換えＡＡＶベクターのＡＡＶカプシドタンパク質中へのパッケージングを可能にするために十分なヘルパー機能を含む宿主細胞を培養することを含む。いくつかの態様において、ウイルスの導入ベクターは、以下からなる群から選択されるＡＡＶ血清型の反転末端反復（ＩＴＲ）を含んでもよい：ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、およびそれらのバリアント。
ｒＡＡＶベクターをＡＡＶカプシド中にパッケージングするために宿主細胞において培養されるべき成分を、宿主細胞にトランスに提供してもよい。あるいは、必要とされる成分のいずれか１つまたは２つ以上（例えば、組み換えＡＡＶベクター、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列および／またはヘルパー機能）を、当業者に公知の方法を用いて、必要とされる成分のいずれか１つまたは２つ以上を含むように操作された安定な宿主細胞により、提供してもよい。最も好適には、かかる安定な宿主細胞は、誘導性プロモーターの制御下において、必要とされる成分を含むことができる。しかし、必要とされる成分は、構成的プロモーターの制御下にあってもよい。本発明のｒＡＡＶを作製するために必要とされる組み換えＡＡＶベクター、ｒｅｐ配列、ｃａｐ配列、およびヘルパー機能は、任意の適切な遺伝子エレメントを用いてパッケージング宿主細胞に送達することができる。選択される遺伝子エレメントは、本明細書において記載されるものを含む任意の好適な方法により送達することができる。本発明の任意の態様を構築するために用いられる方法は、核酸操作において技術を有する当業者に公知であり、遺伝子工学、組み換え工学および合成技術を含む。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、Ｎ．Ｙ．を参照。同様に、ｒＡＡＶウイルス粒子を作製する方法は、周知であり、好適な方法の選択は、本発明に対する限定ではない。例えば、Ｋ． Ｆｉｓｈｅｒ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ．， ７０：５２０－５３２（１９９３）および米国特許第５，４７８，７４５号を参照。
幾つかの態様において、組み換えＡＡＶベクターは、三重トランスフェクション法（ｔｒｉｐｌｅ ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ）を用いて作製することができる（例えば、米国特許第６，００１，６５０号において詳細に記載されるように；三重トランスフェクション法に関するその内容は、本明細書において参考として援用される）。典型的には、組み換えＡＡＶは、宿主細胞を、ＡＡＶ粒子中にパッケージングされるべき組み換えＡＡＶベクター（導入遺伝子を含む）、ＡＡＶヘルパー機能ベクター、および補助機能ベクターでトランスフェクションすることにより作製する。一般に、ＡＡＶヘルパー機能ベクターは、増殖性ＡＡＶの複製およびカプシド形成のためにトランスで機能する、ＡＡＶヘルパー機能配列（ｒｅｐおよびｃａｐ）をコードする。
好ましくは、ＡＡＶヘルパー機能ベクターは、任意の検出可能な野生型ＡＡＶウイルス粒子（すなわち、機能的なｒｅｐおよびｃａｐ遺伝子を含むＡＡＶウイルス粒子）を作製することなく、効率的なＡＡＶベクター作製を支持する。補助機能ベクターは、ＡＡＶが複製のために依存する、非ＡＡＶ由来のウイルスおよび／または細胞の機能のためのヌクレオチド配列をコードしていてもよい。補助機能は、ＡＡＶ複製のために必要とされる機能を含み、これは、限定することなく、ＡＡＶ遺伝子転写、ステージ特異的なＡＡＶのｍＲＮＡのスプライシング、ＡＡＶのＤＮＡの複製、ｃａｐ発現産物の合成、およびＡＡＶカプシドアセンブリーの活性化に関与する部分を含む。ウイルスに基づく補助機能は、アデノウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス１型以外のもの）、およびワクシニアウイルスなどの既知のヘルパーウイルスのいずれかに由来してよい。
レンチウイルスベクターは、当該分野において公知の多数の方法のいずれかを用いて作製することができる。レンチウイルスベクターおよび／またはそれらの作製の方法の例は、例えば、米国公開番号２０１５０２２４２０９、２０１５０２０３８７０、２０１４０３３５６０７、２０１４０２４８３０６、２００９０１４８９３６および２００８０２５４００８において見出すことができ、かかるレンチウイルスベクターおよび作製の方法は、本明細書において参考として援用される。例として、レンチウイルスベクターが組み込み不能である場合、レンチウイルスゲノムはさらに複製起点（ｏｒｉ）を含み、その配列は、レンチウイルスゲノムを発現させなければならない細胞の性質に依存する。
前記複製起点は、真核生物由来、好ましくは哺乳動物起源のもの、最も好ましくヒト起源のものであってよい。レンチウイルスゲノムは細胞宿主のゲノム中に組み込まれない（不完全なインテグラーゼのため）ので、、レンチウイルスゲノムは、頻繁な細胞分裂を経験している細胞においては失われ得る；このことは、ＢまたはＴ細胞などの免疫細胞における場合はことさらである。複製起点の存在は、いくつかの場合において有益であり得る。ベクター粒子は、２９３Ｔ細胞などの適切な細胞のトランスフェクションの後で、前記プラスミドにより、または他のプロセスにより、産生させることができる。レンチウイルス粒子の発現のために用いられる細胞において、プラスミドの全てまたは一部を、それらがコードしているポリヌクレオチドを安定に発現させるために、またはそれらがコードしているポリヌクレオチドを一過性にもしくは半安定して（ｓｅｍｉ－ｓｔａｂｌｙ）発現させるために用いることができる。
本明細書において提供される他のウイルスベクターを作製するための方法は、当該分野において公知であり、上の例示的な方法と同様である。さらに、ウイルスベクターは市販されている。
態様において、免疫抑制剤を含む一定の合成ナノキャリアを調製する場合、免疫抑制剤を合成ナノキャリアに付着させるための方法は、有用かもしれない。
ある態様において、接着は、共有的リンカーであってよい。態様において、本発明による免疫抑制剤は、外側表面に、アルキン基を含む免疫抑制剤とのアジド基の１，３－双極性環化付加反応により、またはアジド基を含む免疫抑制剤とのアルキンの１，３－双極性環化付加反応により形成された、１，２，３－トリアゾールリンカーを介して、共有的に接着していてもよい。かかる環化付加反応は、好ましくは、好適なＣｕ（Ｉ）－リガンドおよびＣｕ（ＩＩ）化合物を触媒活性Ｃｕ（Ｉ）化合物に還元するための還元剤と共に、Ｃｕ（Ｉ）触媒の存在下において行う。このＣｕ（Ｉ）により触媒されたアジド－アルキン環化付加（ＣｕＡＡＣ）はまた、クリック反応としても言及される。
加えて、共有的カップリングは、共有的リンカーを含んでもよく、これは、アミドリンカー、ジスルフィドリンカー、チオエーテルリンカー、ヒドラゾンリンカー、ヒドラジドリンカー、イミンまたはオキシムリンカー、ウレアまたはチオウレアリンカー、アミジンリンカー、アミンリンカー、およびスルホンアミドリンカーを含む。
アミドリンカーは、免疫抑制剤などの１つの成分上のアミンと、ナノキャリアなどの第２の成分のカルボン酸基との間のアミド結合を介して形成される。リンカー中のアミド結合は、Ｎ－ヒドロキシサクシニミドにより活性化されたエステルなどの好適に保護されたアミノ酸との慣用的なアミド結合形成反応のいずれかを用いて生成することができる。
ジスルフィドリンカーは、例えばＲ１－Ｓ－Ｓ－Ｒ２の形態の２つの硫黄原子の間のジスルフィド（Ｓ－Ｓ）結合の形成を介して、生成することができる。
ジスルフィド結合は、チオール／メルカプタン基（－ＳＨ）を含む成分の、別の活性化されたチオール基との、またはチオール／メルカプタン基を含む成分の、活性化されたチオール基を含む成分とのチオール交換により、形成させることができる。
トリアゾールリンカー、特に形態
Figure 2022534741000002
 式中、Ｒ１およびＲ２は、任意の化学成分である、
の１，２，３－トリアゾールは、第１の成分に接着したアジドの、免疫抑制剤などの第２の成分に接着した末端アルキンによる１，３－双極性環化付加反応により生成することができる。１，３－双極性環化付加反応は、触媒を用いてまたはこれを用いずに、好ましくは１，２，３－トリアゾール官能基を通して２つの成分を連結するＣｕ（Ｉ）触媒を用いて行う。この化学は、Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｇｅｗ． Ｃｈｅｍ． Ｉｎｔ． Ｅｄ． ４１（１４）， ２５９６， （２００２）およびＭｅｌｄａｌ， ｅｔ ａｌ， Ｃｈｅｍ． Ｒｅｖ．， ２００８， １０８（８）， ２９５２－３０１５において詳細に記載され、しばしば、「クリック」反応またはＣｕＡＡＣとして言及される。
チオエーテルリンカーは、例えばＲ１－Ｓ－Ｒ２の形態における硫黄－炭素（チオエーテル）結合の形成により生成される。チオエーテルは、１つの成分上でのチオール／メルカプタン（－ＳＨ）基の、第２の成分上のハライドまたはエポキシドなどのアルキル化基によるアルキル化により、生成することができる。チオエーテルリンカーはまた、１つの成分上のチオール／メルカプタン基の、マイケルアクセプターとしてマレイミド基またはビニルスルホン基を含む第２の成分上の電子欠乏アルケン基に対するマイケル付加により、形成させることができる。別の方法において、１つの成分上のチオール／メルカプタン基の、第２の成分上のアルケン基によるラジカルチオール－エン反応により、チオエーテルリンカーを調製することができる。
ヒドラゾンリンカーは、１つの成分上のヒドラジド基の、第２の成分上のアルデヒド／ケトン基との反応により生成することができる。ヒドラジドリンカーは、１つの成分上のヒドラジン基の、第２の成分上のカルボン酸基との反応により生成することができる。かかる反応は、一般に、カルボン酸が活性化試薬により活性化される、アミド結合の形成に類似する化学を用いて行う。
イミンまたはオキシムリンカーは、１つの成分上のアミンまたはＮ－アルコキシアミン（またはアミノオキシ）基の、第２の成分上のアルデヒドまたはケトン基との反応により形成される。
ウレアまたはチオウレアリンカーは、１つの成分上のアミン基の、第２の成分上のイソシアナートまたはチオイソシアナート基との反応により調製される。
アミジンリンカーは、１つの成分上のアミン基の、第２の成分上のイミドエステル基との反応により調製される。
アミンリンカーは、１つの成分上のアミン基の、第２の成分上のハライド、エポキシドまたはスルホナートエステル基などのアルキル化基によるアルキル化反応により生成される。あるいは、アミンリンカーはまた、シアノ水素化ホウ素ナトリウムまたはトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムなどの好適な還元試薬による、１つの成分上のアミン基の、第２の成分上のアルデヒドまたはケトン基による還元性アミノ化により生成することができる。
スルホンアミドリンカーは、１つの成分上のアミン基の、第２の成分上のスルホニルハライド（スルホニルクロリドなどの）基との反応により生成される。
スルホンリンカーは、ビニルスルホンへの求核試薬のマイケル付加により生成される。ビニルスルホンまたは求核試薬のいずれかは、ナノキャリアの表面上にあるか、成分に接着していてもよい。
成分はまた、非共有的共役方法を介して共役させることができる。
例えば、静電吸着を通して、負に荷電した免疫抑制剤を、正に荷電した成分に共役させることができる。金属配位子を含む成分はまた、金属－配位子錯体を介して金属錯体に共役させることができる。
態様において、成分は、合成ナノキャリアのアセンブリーの前に、ポリマー、例えばポリ乳酸－ブロック－ポリエチレングリコールに接着していてもよく、合成ナノキャリアは、反応性または活性化可能な基により形成させることができる。後者の場合において、成分は、合成ナノキャリアの表面により提示される接着化学に適合性である基を用いて調製することができる。他の態様において、ペプチド成分は、好適なリンカーを用いてＶＬＰまたはリポソームに接着させることができる。リンカーは、２つの分子を一緒にカップリングすることができる化合物または試薬である。一態様において、リンカーは、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ ２００８において記載されるようなホモ二官能性またはヘテロ二官能性の試薬であってよい。例えば、表面上にカルボン酸基を含むＶＬＰまたはリポソーム合成ナノキャリアを、ＥＤＣの存在下において、ホモ二官能性リンカーであるアジピン酸ジヒドラジド（ＡＤＨ）で処置して、ＡＤＨリンカーを有する対応する合成ナノキャリアを形成させることができる。結果として生じるＡＤＨと連結された合成ナノキャリアを、次いで、ナノキャリア上のＡＤＨリンカーの他方の末端を介して、酸基を含むペプチド成分と共役させて、対応するＶＬＰまたはリポソームペプチドコンジュゲートを生成する。
態様において、ポリマー鎖の末端側にまたはアルキン基を含むポリマーを調製する。このポリマーを、次いで、複数のアルキンまたはアジド基がナノキャリアの表面上に位置するような様式において合成ナノキャリアを調製するために用いる。あるいは、合成ナノキャリアを、別の経路により調製して、その後、アルキンまたはアジド基で官能化してもよい。成分は、アルキン（ポリマーがアジドを含む場合）またはアジド（ポリマーがアルキンを含む場合）基のいずれかの存在と共に調製される。成分を、次いで、１，３－双極性環化付加反応を介して、１，４－二置換１，２，３－トリアゾールリンカーを通して成分を粒子に共有的に接着させる触媒を用いてまたはこれを用いずに、ナノキャリアと反応させる。
成分が低分子である場合、合成ナノキャリアのアセンブリーの前に成分をポリマーに接着させることは、有利であり得る。態様において、成分を合成ナノキャリアに接着させるために用いられる表面基を用いて、成分をポリマーに接着させるというよりはむしろこれらの表面基の使用を通して、合成ナノキャリアを調製し、次いで、このポリマーコンジュゲートを合成ナノキャリアの構築において用いることもまた、有利であり得る。
利用可能な共役方法の詳細な記載については、Ｈｅｒｍａｎｓｏｎ Ｇ Ｔ「Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、第２版、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．刊行、２００８年を参照。共有的接着に加えて、成分は、予め形成された合成ナノキャリアに吸着させることにより接着させても、または合成ナノキャリアの形成の間の封入により接着させてもよい。
合成ナノキャリアは、当該分野において公知の広範な方法を用いて調製することができる。例えば、合成ナノキャリアは、ナノ沈殿、流体チャネルを用いるフローフォーカシング（ｆｌｏｗ ｆｏｃｕｓｉｎｇ）、スプレー乾燥、シングルおよびダブルエマルション溶媒蒸発、溶媒抽出、相分離、製粉、マイクロエマルション法、微細加工（ｍｉｃｒｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ）、ナノ加工（ｎａｎｏｆａｂｒｉｃａｔｉｏｎ）、犠牲層、単純および複合コアセルベーションなどの方法、ならびに当業者に周知の他の方法により形成することができる。あるいはまたは加えて、単分散半導体のための水性および有機性の溶媒合成、伝導性、磁性、有機および他のナノ材料が記載されている（Ｐｅｌｌｅｇｒｉｎｏ ｅｔ ａｌ．， ２００５， Ｓｍａｌｌ， １：４８； Ｍｕｒｒａｙ ｅｔ ａｌ．， ２０００， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｍａｔ． Ｓｃｉ．， ３０：５４５； ａｎｄ Ｔｒｉｎｄａｄｅ ｅｔ ａｌ．， ２００１， Ｃｈｅｍ． Ｍａｔ．， １３：３８４３）。さらなる方法は、文献において記載されている（例えば、Ｄｏｕｂｒｏｗ編、「Ｍｉｃｒｏｃａｐｓｕｌｅｓ ａｎｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｙ」、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ， １９９２；Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， １９８７， Ｊ． Ｃｏｎｔｒｏｌ． Ｒｅｌｅａｓｅ， ５：１３； Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， １９８７， Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ， ６：２７５；ならびにＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ ｅｔ ａｌ．， １９８８， Ｊ． Ａｐｐｌ． Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉ．， ３５：７５５；米国特許第５５７８３２５号および同第６００７８４５号；Ｐ． Ｐａｏｌｉｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．， 「Ｓｕｒｆａｃｅ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＰＬＧＡ－ｂａｓｅｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｔｈａｔ ｃａｎ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒ Ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ」Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ． ５（６）：８４３－８５３ （２０１０）を参照）。
材料を、望ましい場合には、限定されないが以下を含む多様な方法を用いて、合成ナノキャリア中に封入してもよい：Ｃ． Ａｓｔｅｔｅ ｅｔ ａｌ．， 「Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＰＬＧＡ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ」Ｊ． Ｂｉｏｍａｔｅｒ． Ｓｃｉ． Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｅｄｎ、第１７巻、第３号、ｐｐ． ２４７－２８９（２００６）；Ｋ． Ａｖｇｏｕｓｔａｋｉｓ「Ｐｅｇｙｌａｔｅｄ Ｐｏｌｙ（Ｌａｃｔｉｄｅ） ａｎｄ Ｐｏｌｙ（Ｌａｃｔｉｄｅ－Ｃｏ－Ｇｌｙｃｏｌｉｄｅ） Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ， Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ａｎｄ Ｐｏｓｓｉｂｌｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｉｎ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ １：３２１－３３３（２００４）；Ｃ． Ｒｅｉｓ ｅｔ ａｌ．， 「Ｎａｎｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ Ｉ． Ｍｅｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｒｕｇ－ｌｏａｄｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ」Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ２：８－ ２１（２００６）；Ｐ． Ｐａｏｌｉｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．， 「Ｓｕｒｆａｃｅ－ｍｏｄｉｆｉｅｄ ＰＬＧＡ－ｂａｓｅｄ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｔｈａｔ ｃａｎ Ｅｆｆｉｃｉｅｎｔｌｙ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ ａｎｄ Ｄｅｌｉｖｅｒ Ｖｉｒｕｓ－ｌｉｋｅ Ｐａｒｔｉｃｌｅｓ」Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ． ５（６）： ８４３－８５３（２０１０）。
材料を合成ナノキャリア中に封入するために好適な他の方法を用いてもよく、これらは、限定することなく、２００３年１０月１４日に発行されたＵｎｇｅｒに対する米国特許第６，６３２，６７１号において開示される方法を含む。
ある態様において、合成ナノキャリアは、ナノ沈殿法またはスプレー乾燥により調製される。合成ナノキャリアを調製することにおいて用いられる条件は、所望されるサイズおよび特性（例えば、疎水性、親水性、外側の形態、「粘着性」、形状など）の粒子を得るために改変することができる。合成ナノキャリアを調製する方法および用いられる条件（例えば、溶媒、温度、濃度、気体の流速など）は、合成ナノキャリアに結合させるべき材料および／またはポリマーマトリックスの組成に依存し得る。
上記の方法のいずれかにより調製される合成ナノキャリアが、所望される範囲の外のサイズ範囲を有する場合、合成ナノキャリアを、例えば篩を用いて、サイズ分類することができる。
合成ナノキャリアの要素は、例えば１以上の共有結合により合成ナノキャリア全体に接着させても、１以上のリンカーにより接着させてもよい。合成ナノキャリアを官能化するさらなる方法は、Ｓａｌｔｚｍａｎらに対する米国特許出願公開２００６／０００２８５２、ＤｅＳｉｍｏｎｅらに対する米国特許出願公開２００９／００２８９１０、またはＭｕｒｔｈｙらに対する国際特許出願公開ＷＯ／２００８／１２７５３２ Ａ１から適応させることができる。
あるいはまたは加えて、合成ナノキャリアは、直接的または間接的に、非共有的相互作用を介して、成分に接着させることができる。非共有的態様において、非共有的接着は、限定されないが以下を含む非共有的相互作用により媒介される：電荷相互作用、アフィニティー相互作用、金属配位、物理的吸着、主客相互作用、疎水性相互作用、ＴＴスタッキング相互作用、水素結合相互作用、ファン・デル・ワールス相互作用、磁性相互作用、静電相互作用、双極子－双極子相互作用、および／またはこれらの組み合わせを含む。
かかる接着は、合成ナノキャリアの外部表面または内部表面上にあるように配置することができる。態様において、封入および／または吸収は、接着の形態である。
本明細書において提供される組成物は、無機または有機の緩衝化剤（例えば、リン酸、炭酸、酢酸またはクエン酸のナトリウムまたはカリウム塩）およびｐＨ調整剤（例えば、塩酸、水酸化ナトリウムまたはカリウム、クエン酸または酢酸の塩、アミノ酸およびそれらの塩）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、アルファ－トコフェロール）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、ポリオキシエチレン９－１０ノニルフェノール、デオキシコール酸ナトリウム）、溶液および／または低温（ｃｒｙｏ）／凍結安定化剤（例えば、スクロース、ラクトース、マンニトール、トレハロース）、浸透圧調節剤（例えば、塩または糖）、抗菌剤（例えば、安息香酸、フェノール、ゲンタマイシン）、消泡剤（例えば、ポリジメチルシロキサン、保存剤（例えば、チメロサール、２－フェノキシエタノール、ＥＤＴＡ）、ポリマー性安定化剤および粘度調節剤（例えば、ポリビニルピロリドン、ポロキサマー４８８、カルボキシメチルセルロース）および共溶媒（例えば、グリセロール、ポリエチレングリコール、エタノール）を含んでもよい。
本発明による組成物は、薬学的に許容し得る賦形剤を含んでもよい。組成物は、有用な投与形態を達成するために、慣用的な医薬の製造および配合技術を用いて製造することができる。本発明の実施における使用のために好適な技術は、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ Ｍｉｘｉｎｇ：Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、Ｅｄｗａｒｄ Ｌ． Ｐａｕｌ， Ｖｉｃｔｏｒ Ａ． Ａｔｉｅｍｏ－ＯｂｅｎｇおよびＳｕｚａｎｎｅ Ｍ． Ｋｒｅｓｔａ編、２００４年、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．；ならびにＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ： Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍ Ｄｅｓｉｇｎ、第２版Ｍ． Ｅ． Ａｕｔｅｎ編、２００１年、Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅにおいて見出すことができる。一態様において、組成物を、注射のために、保存剤と共に、無菌の食塩水溶液中に懸濁する。
本発明の組成物は任意の好適な様式において製造することができることが、理解されるべきであり、本発明は、本明細書において記載される方法を用いて製造することができる組成物に決して限定されない。適切な製造の方法の選択は、関連する特定の部分の特性に対する注意を必要とする場合がある。
幾つかの態様において、組成物は、無菌条件下において製造されるか、最終的に無菌化される。このことにより、結果として生じる組成物が無菌であり、非感染性であることを確実にすることができ、それにより、非無菌の組成物と比較して安全性を改善する。このことは、特に組成物を投与されている対象が免疫欠損を有するか、感染症を罹患しているか、および／または感染に対して感受性である場合に、有益な安全性の指標を提供する。
本発明に従う投与は、皮下、鼻腔内、経口、静脈内、腹腔内、筋肉内、経粘膜、経粘膜、舌下、直腸の、眼科の、肺の、皮内、経皮、経皮的、皮内、または、これらの経路の組み合わせを含むがこれに限定されない、様々な経路によって、であってもよい。投与の経路は、吸入または肺エアロゾルによる投与も、含む。エアロゾル送達システムを調製するための技法は、当業者に公知である（例えば、参照によって組み込まれるＳｃｉａｒｒａ ａｎｄ Ｃｕｔｉｅ， “Ａｅｒｏｓｏｌｓ，” ｉｎ Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １８ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， １９９０， ｐｐ． １６９４－１７１２を参照）。いくつかの態様において、ウイルス転送ベクター、免疫抑制剤を含むナノキャリア、およびコルチコステロイドは、同じ経路（例として、静脈内に）を介して、投与される。別の態様において、ウイルス転送ベクター、および免疫抑制剤を含むナノキャリアは、コルチコステロイドとは異なる経路を介して、投与される。たとえば、ウイルス転送ベクターおよび免疫抑制剤を含むナノキャリアは、静脈内に投与されてもよく、その一方で、コルチコステロイドは、経口的に投与されてもよい。本明細書において言及される組成物は、投与、例として共投与のために、従来の方法を用いて製造および調製されてもよい。
本発明の組成物は、有効量、例えば本明細書において他の場所で記載される有効量で投与することができる。いくつかの態様において、ウイルス転送ベクターおよび／または免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよび／またはコルチコステロイドは、ＩｇＧおよび／またはＩｇＭ応答などの、抗ウイルス導入ベクター免疫応答を減弱化し、および／またはウ対象へのイルス導入ベクターの再投与を許し、および／またはウイルス導入ベクターの導入遺伝子発現を増大させるための有効量の投与形態において存在する。投与形態は、多様な頻度において投与することができる。いくつかの態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアおよびコルチコステロイドを伴なうウイルス導入ベクターの反復投与が、行われる。より好ましい態様において、本発明の組成物（例として、ウイルス導入ベクター、免疫抑制剤を含むナノキャリア、およびコルチコステロイド）の少なくとも２回の投与、少なくとも３回の投与、少なくとも４回の投与、または少なくとも５回の投与が、利用される。いくつかの態様において、コルチコステロイドは、ウイルス導入ベクターおよび免疫抑制剤を含むナノキャリアと同時に投与される。
本発明の側面は、本明細書において提供される投与の方法のためのプロトコルを決定することに関する。プロトコルは、ウイルス導入ベクターの、免疫抑制剤および／またはコルチコステロイドを含む合成ナノキャリアの、少なくとも頻度、投与量を変化させることにより、続いて所望されるまたは所望されない免疫応答を評価することによって、決定されることができる。発明の実施のための好ましいプロトコルは、ＩｇＧおよび／またはＩｇＭ応答などのウイルス導入ベクターに対する免疫応答を減弱化し、および／またはウイルス導入ベクターに対する所望されない別の免疫応答を減弱化し、および／または導入遺伝子発現をエスカレートする。プロトコルは、いくつかの態様において、ウイルス導入ベクター、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、およびコルチコステロイドの、少なくとも投与頻度および用量を、含むことができる。
開示の別の側面は、キットに関する。いくつかの態様において、キットは、本明細書に提供される組成物のいずれか１以上の、または本明細書に提供される組成物の組み合わせのいずれか１つを、含む。いくつかの態様において、キットは、ウイルス導入ベクターを含む１以上の組成物、および／または免疫抑制剤含む合成ナノキャリアを含む１以上の組成物、および／またはコルチコステロイドを含む１以上の組成物を、含む。好ましくは、組成物は、量において、本明細書に提供されるいずれか１以上の用量を、提供する。組成物は、１つの容器において、または、キットにおいて複数の容器中に、あることができる。提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、容器は、バイアルまたはアンプルである。提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、組成物は、引き続き再構成されてもよいように、各々別々の容器中で、または同じ容器中で、凍結乾燥型で、ある。提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、キットは、再構成、混合、投与等々のための説明書をさらに備える。提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、説明書は、本明細書に記載される方法のいずれか１つの記載を、含む。説明書は、例として、印刷された挿入または標識として、いずれかの好適な形であることが、できる。本明細書に提供されるキットのいずれか１つのいくつかの態様において、キットは、対象にｉｎ ｖｉｖｏで、組成物を送達することができる１以上のシリンジ、または他の装置を、さらに含む。
例
本明細書に記載の発明が、より完全に理解されてもよいために、以下の例が、規定される。この出願で記載の例は、本明細書に提供されるシステムおよび方法を図示するために提示され、どんな形であれ、それらの範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
例１：免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア
ラパマイシンまたはラパマイシン類似体などの免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、当業者に公知のいずれかの方法を使用して、産生することができる。
好ましくは、本明細書に提供される方法、組成物またはキットのいずれか１つのいくつかの態様において、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、ＵＳ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ＵＳ ２０１６／０１２８９８６ Ａ１およびＵＳ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ Ｎｏ． ＵＳ ２０１６／０１２８９８７ Ａ１の方法のいずれか１つによって産生され、かかる産生および結果として生じる合成ナノキャリアの記載された方法は、本明細書においてその全体において参考として援用される。本明細書に提供される方法、組成物、またはキットのいずれか１つにおいて、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、かかる援用された合成ナノキャリアである。
本明細書に提供される方法、または組成物のいずれか１つにおいて、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリアは、かかる援用された合成ナノキャリアである。
ＩｍｍＴＯＲ、ラパマイシンを封入している生物分解可能なＰＬＡ＋ＰＬＡ－ＰＥＧナノ粒子は、かかる合成ナノキャリアの例を指す（Ｋｉｓｈｉｍｏｔｏ ＴＫ， Ｍａｌｄｏｎａｄｏ ＲＡ． Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｇｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｔｏｌｅｒａｎｃｅ． Ｆｒｏｎｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ． ２０１８； ９： ２３０． Ｓａｎｄｓ Ｅ， Ｋｉｖｉｔｚ ＡＪ， ＤｅＨａａｎ Ｗ， ｅｔ ａｌ． Ｕｐｄａｔｅ ｏｆ ＳＥＬ－２１２ ｐｈａｓｅ ２ ｃｌｉｎｉｃａｌ ｄａｔａ ｉｎ ｓｙｍｐｔｏｍａｔｉｃ ｇｏｕｔ ｐａｔｉｅｎｔｓ： ＳＶＰ－ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｐｅｇａｄｒｉｃａｓｅ ｍｉｔｉｇａｔｅｓ ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｅｎａｂｌｅｓ ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｕｍ ｕｒｉｃ ａｃｉｄ ｌｅｖｅｌｓ， ｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ ｇｏｕｔ ｆｌａｒｅｓ ａｎｄ ｍｏｎｔｈｌｙ ｄｏｓｉｎｇ． Ｐｏｓｔｅｒ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ ａｔ： ２０１８ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ／Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ Ｈｅａｌｔｈ Ｐｒｏｆｅｓｓｉｏｎａｌｓ （ＡＣＲ／ＡＲＨＰ） Ａｎｎｕａｌ Ｍｅｅｔｉｎｇ； Ｏｃｔｏｂｅｒ １９－２４， ２０１８； Ｃｈｉｃａｇｏ， ＩＬ． Ｐｏｓｔｅｒ ＃２２５４）。
ラパマイシンまたはラパマイシン類似体を含む合成ナノキャリアは、これらの組み込まれた方法と少なくとも同様の方法によって生成し、以下の例において使用した。
例２：ナノ粒子封入ラパマイシンおよび全身性のデキサメタゾンの組み合わせの単一または複数の注入による、ｉｎ ｖｉｖｏのＡＡＶ促進導入遺伝子発現の相乗的増強。
Ｃ５７ＢＬ／６の雌のマウス（各々６匹のマウス）の３つの群に、いかなるナノ粒子も伴わないＡＡＶ８－ＳＥＡＰの１×１０１０ＶＧを（１つの群）、またはラパマイシンの１００μｇでのＩｍｍＴＯＲ（商標）（例１において生成されたものなどの、ラパマイシンを含む合成ナノキャリア；２つの群）を、０および５６日目に注入した（ｒ．ｏ．）。前の２つの群の中で、１つの群は未処置のままにし、そして、１つは、注入０および５６日目に、全身性のデキサメタゾン（ｉ．ｐ．、注入当たり１００μＬ中２００μｇ）で、追加で処置した。
図１Ａおよび１Ｂに示された時（１４、３５、４９、６３、および７１日目、または１３、１９、３３、４８、６２、および６９日目）に、マウスから採血し、そして、血清を全血から分離して、－２０±５°Ｃで、分析まで保存した。
血清のＳＥＡＰレベルを、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、ＵＳＡ）からのアッセイキットを使用して、測定した。簡潔には、血清試料およびポジティブコントロールを、希釈緩衝液中で希釈し、６５℃で３０分間インキュベートし、次いで室温に冷却し、９６ウェルフォーマットに塗布した。次いで、アッセイ緩衝液（５分）および基質（２０分）を加え、そして、プレートを、照度計（４７７ｎｍ）で読みとった。
この実験を、同様の結果によって、二回に繰り返した（図１Ａおよび１Ｂ）。即時の違いが、未処置群とＩｍｍＴＯＲ（商標）（ラパマイシンを含む合成ナノキャリア）のみで処置した群との間の最初のＳＥＡＰ発現レベル（それぞれ、図１Ａおよび１Ｂ中のｄ１３およびｄ１４）にあった。しかしながら、きわめてより強い違いが、ＩｍｍＴＯＲ（商標）単独の効果が鎮静した場合に、特に、後で述べられるが、デキサメタゾン（それぞれ、図１Ａおよび１Ｂ中のｄ４８およびｄ４９）で、追加で処置した群において、観察された。全身性のデキサメタゾンと組み合わせたＩｍｍＴＯＲ（商標）で処置したマウスのＳＥＡＰ発現レベルが、未処置のマウスより、およそ２倍高いＳＥＡＰ発現を示したように、同様の効果は、５６日目のブーストの後に見られ、一方で、ＩｍｍＴＯＲ（商標）単独の効果は、より穏当だった（５０～７０％）。
これは、Ｃ５７ＢＬ／６の雌のマウス（各々６匹のマウス）の４つの群に、いかなるナノ粒子も伴わないＡＡＶ８－ＳＥＡＰの１×１０１０ＶＧを（２つの群）、またはラパマイシンの１００μｇでのＩｍｍＴＯＲ（商標）（ラパマイシンを含む合成ナノキャリア；２つの群）を、０、５６、および１４０または１４７日目に注入した（ｒ．ｏ．）一連のさらなる試験を、正当化した。両アームにおいて（未処置のまたはＩｍｍＴＯＲ（商標）により処置した）、１つの群は、いかなる追加の処置も受けず、もう一方は、注入０、５６、および１４０または１４７日目に、全身性のデキサメタゾン（ｉ．ｐ．、注入当たり１００μＬ中２００μｇ）で、追加で処置した。図２Ａおよび２Ｂ中に表示されたとき（１３、２０、４９、６２、６９、７６、１４２、１５４、１６１、１８２、および１９６日目、または１３、２０、４８、６２、６９、７７、１０４、１４６、１５３、および１７４日目）に、マウスを採血し、そして、血清を、ＳＥＡＰ発現のために、上記の通りに分析した。
この実験を、同様の結果によって、二回に繰り返した（図２Ａおよび２Ｂ）。
また、即時の違いが、未処置群と、ＩｍｍＴＯＲ（商標）単独の効果が鎮静した場合の、後でより述べられるが、デキサメタゾン（ｄ４８／ｄ４９）で、追加で処置した群において観察される、より強い違いを伴う、ＩｍｍＴＯＲ（商標）で処置した群との間の、最初のＳＥＡＰ発現レベル（ｄ１３）が、あった。
同様の効果は、５６日目のブーストの後、観察された。デキサメタゾン単独は、改善されたＳＥＡＰ発現も提供し、しかし、それは、ＩｍｍＴＯＲ（商標）単独に対して、より少ないか等しく、そして、ＩｍｍＴＯＲ（商標）とデキサメタゾンとの組み合わせによって提供されるそれに対して、劣った。これは、ｄ１４０（図２Ａ）またはｄ１４７（図２Ｂ）での第２のブーストの後さらにいっそう明白になり、デキサメタゾン単独によるその位置での中程度の利益が、見られ（対未処置１０～８０％）、そして、より強い効果が、ＩｍｍＴＯＲ商標）単独によって呈された（対未処置４０～１１０％）。驚くべきことに、この位置で、ＩｍｍＴＯＲ（商標）とデキサメタゾンとの組み合わせは、きわめて高いＳＥＡＰ発現レベル提供し、およびこの効果は、一般に相乗的だった：全身性のデキサメタゾンと組み合わせたＩｍｍＴＯＲ（商標）で処置した群におけるＳＥＡＰレベル上昇は、個別のＩｍｍＴＯＲ（登録商標）およびデキサメタゾンにより到達された上昇の合計より、高かった。例として、図２Ａ中のｄ１９６での１１５％対５３％、図２Ｂ中の２３１％対１７６％。
まとめると、２．１～３．３倍より高いＳＥＡＰ発現は、未処置のマウスと比較して、第２のブーストの後ＩｍｍＴＯＲ（商標）とデキサメタゾンとの組み合わせで処置した群において、見られた。
例３：ナノ粒子封入ラパマイシン（ＩｍｍＴＯＲ（商標））および全身性のデキサメタゾンの組み合わせによる、ＡＡＶに対するＩｇＭおよびＩｇＧの相乗的減少。
例２と同じ試験のシリーズにおいて、ＥＬＩＳＡを使用して、以下の通りにＡＡＶに対するＩｇＭおよびＩｇＧ抗体を、測定した：９６ウェルプレートを、終夜ＡＡＶでコートし、洗浄し、翌日にブロックした。次いで、希釈した血清試料（１：４０）をプレートに加え、インキュベートした；プレートを洗浄し、そして、ロバ抗マウスＩｇＭまたはヤギ抗マウスＩｇＧ特異的ＨＲＰを、加えた。別のインキュベーションおよび洗浄の後、ＡＶに対するＩｇＭまたはＩｇＧ抗体の存在を、ＴＭＢ基質を加え５７０ｎｍのレファレンス波長により４５０ｎｍの吸光度で測定することにより、検出した（最上部光学密度（ＯＤ）として提示されるシグナルの強度は、試料中のＩｇＭ／ＩｇＧ抗体の量と、直接比例する）。
以前に示されたように、ＡＡＶと共投与したＩｍｍＴＯＲ（商標）は、ＡＡＶ ＩｇＭの初期の誘導を抑制し、そして、特にプライムの後、その出現を遅延させた（図３）。しかしながら、これは、ｄ５６ブーストの後よりも顕著でなく、ｄ６３～ｄ１０６間にＩｍｍＴＯＲ（商標）だけで処置した群における顕著なＩｇＭ上昇に、結果としてなった。同時に、ＩｍｍＴＯＲ（商標）および全身性のデキサメタゾンで処置した群のＩｇＭ生成は、ＩｇＭ応答のさらにより強いおよび統計学的により顕著な抑制を示し、それは、ｄ５６ブーストより前でさえ、ＩｍｍＴＯＲ（商標）だけで処置した群においてより、低かった（図３）。
これは、同様にきわめて低いＩｇＧ変換速度に変換した（図４）。また、以前に示されるとおり、ＡＡＶと共投与したＩｍｍＴＯＲ（商標）は、ｄ５６ブーストの前に、および特にその後遅れていくつかのブレークスルーが見られ、ｄ１０４までにＩｇＧ陽性になっているこの群において、６匹のマウスのうち４匹において結果として生じたが、ＡＡＶ ＩｇＧの初期の誘導を抑制し、その出現を遅延させた。同時に、ｄ１０４まで、ＩｍｍＴＯＲ（商標）と全身性のデキサメタゾンで処置した群における単一のＩｇＧ変換は、なかった（図４）。
例４：全身性のデキサメタゾンと組み合わせたナノ粒子封入ラパマイシン（ＩｍｍＴＯＲ（商標））の相乗作用による、ＡＡＶベクターの複数の投与に対する長期のＩｇＭ免疫応答の減少。
Ｃ５７ＢＬ／６の雌のマウス（各々６匹のマウス）の４つの群に、ＩｍｍＴＯＲ（商標）ナノ粒子を伴わないＡＡＶ８－ＳＥＡＰの１×１０１０ＶＧ（ｄ０および５６）または２×１０１０ＶＧ（ｄ１４７）、またはラパマイシンの１００μｇ（ｄ０および５６）または２００μｇ（ｄ１４７）でのＩｍｍＴＯＲ（商標）（２つの群）を、０、５６、および１４７日目に、３回注入した（ｉ．ｖ．後眼窩神経叢）。群の対のうち、１つの群を、ＡＡＶおよびＩｍｍＴＯＲの注入の時に（０、５６、１４７日目）、全身性のデキサメタゾンで、追加で処置した（ｉ．ｐ．２００μｇ）。まとめると、試験の１つの群は、ＡＡＶ８単独で処置し、１つは、ＩｍｍＴＯＲ（商標）と組み合わせたＡＡＶ８で処置し、１つは、全身性のデキサメタゾンと組み合わせたＡＡＶ８で処置し、そして、１つは、ＩｍｍＴＯＲ（商標）および全身性のデキサメタゾン（Ｄｅｘ）両方と組み合わせたＡＡＶ８で、処置した。
図５Ａ中に示された時（６、１３、２０、３４、４９、６２、６９、７６、９０、１０４、１４２、１５４、１６１、１６８、１８２、１９６、および２３１日目）に、マウスを採血し、そして、血清を、全血から分離し、－２０±５℃で分析まで保存した。次いで、ＡＡＶに対するＩｇＭ抗体を、ＥＬＩＳＡによって以下の通りに測定した：９６ウェルプレートを、ＡＡＶで終夜コートし、次いで洗浄し、そして翌日ブロックした。希釈した血清試料（１：４０）を、プレートに加え、インキュベートし、プレートを洗浄し、ロバ抗マウスＩｇＭ特異的ＨＲＰを加え、別のインキュベーションおよび洗浄の後、ＡＶに対するＩｇＭ抗体の存在を、ＴＭＢ基質を加え５７０ｎｍのレファレンス波長により４５０ｎｍの吸光度で測定することにより、検出した（最上部光学密度（ＯＤ）として提示されるシグナルの強度は、試料のＩｇＭ抗体の量と、直接比例する）。
以前に示されたように、ＡＡＶと共投与したＩｍｍＴＯＲ（商標）ナノ粒子は、ＡＡＶＩｇＭの初期の誘導を抑制し、そして、特にプライムの後、その出現を遅延させた。しかしながら、これは、ｄ５６およびｄ１４７のブースト（矢印によって示された）の後、特に第３のＡＡＶ投与（ｄ１４７）の後に、より目立たず、ＩｍｍＴＯＲ（商標）ナノ粒子だけで処置した群の顕著なＩｇＭ上昇に結果としてなった（図５Ａ）。同時に、ＩｍｍＴＯＲ（商標）ナノ粒子および全身性のデキサメタゾンで処置した群のＩｇＭ生成は、ＩｇＭ応答のより強いおよび統計学的により顕著な抑制を示し、それはＩｍｍＴＯＲナノ粒子だけによって処置した群においてよりも低く、５６および１４７日目の反復したＡＡＶ投与の後で、統計的に有意になり、注目すべきことに、最後のＡＡＶ投与の後８４日間、すなわち２３１日目に、統計学的に差があるままであった（図５Ｂ）。
ｄ２３１までに、ＩｍｍＴＯＲ（商標）で処置していない群のＩｇＭレベルは、これらの群が、最初のＡＡＶ投与の後、早くピークが来たので（ｄ６および１３）、比較的低く、それは、例５に示されるように、これらの群における抗ＡＡＶ ＩｇＧ生成への効率的な移行につながったことに、注意すべきである。
例５：ＡＡＶ ＩｇＧブレークスルーのより低いレベルが、ナノ粒子封入ラパマイシン（ＩｍｍＴＯＲ（商標））と全身性のデキサメタゾンの組み合わせによって誘導される。
例４に記載の試験からの血清試料は、ＥＬＩＳＡによって測定したＡＡＶ ＩｇＧの存在のためにも、試験された。ＥＬＩＳＡは、ヤギ抗マウスＩｇＧ特異的ＨＲＰが、使用された以外は、ＩｇＭレベルを決定するために使用したものと同様だった。以前に示されたように、ＡＡＶと共投与したＩｍｍＴＯＲ（商標）は、いくつかが、該実験において、のちにＩｇＧを開発するために開始したが（それは、この群の遅延ＩｇＭ速度論と相関する）、実験動物の大多数のＡＡＶ ＩｇＧの誘導を抑制した。特に、この群の６匹のうち２匹の動物は、５６日目の第１のブーストの後、検出可能なＩｇＧを示し、６のうち３が、９０日目までに（第１のブーストの後の３４日間）ＩｇＧ陽性であり、６のうち５が、１４７日目に（すなわち、１５４日目までに）、第２のブーストの後直ちに（７日間）転換し、そして、この群の動物の全てが、１９６日目までに（第２のブーストまたは第３のＡＡＶ投与の後の５１日間）、ＡＡＶに対するＩｇＧの存在を、立証した。２３１日目まで、ＩｍｍＴＯＲ（商標）およびデキサメタゾンの組み合わせで処置した群における確認されたＩｇＧブレークスルーがなく、それは、例３に示すとおり、その速度論における、ＩｇＭおよびのより顕著な遅れの低いレベルおよび一時的な生成と、相関した。デキサメタゾンと組み合わせたＩｍｍＴＯＲ（商標）の存在下でのＡＡＶの反復した投与の後に見られたＡＡＶに対するＩｇＧの極めて低いこれらのレベルは、試験の後のステージ、すなわち１４２～２３１日目を通して、ＩｍｍＴＯＲ（商標）だけと組み合わせてＡＡＶで処置した群において見られたそれらと、統計学的に差があった（０．００１＜ｐ＜０．０５）。ＡＡＶだけで処置した群のように、デキサメタゾン単独で処置した群において、ＩｇＧ抑制または遅れは、なかった。
まとめると、ＩｍｍＴＯＲ（商標）単独が、ＡＡＶ ＩｇＭ／ＩｇＧ遅延および抑制のための利益を示し、デキサメタゾン単独が、各々のいずれも示さない一方で、両方の処置の組み合わせは、ＡＡＶ特異的ＩｇＭ／ＩｇＧ抑制において、特に反復したＡＡＶ投与の後に、はるかに優れていた。

Claims (58)

  1. ウイルス導入ベクター、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、およびナノキャリアに連結されていないコルチコステロイドを含む、組成物。
  2. コルチコステロイドが、ベサメタゾン、コーチゾン、デキサメタゾン、ベサメタゾン、ハイドロコーチゾン、メチルプレドニゾロン、プレドニゾン、プレドノゾロン、およびトリアムシノロンから成る群から選択される、請求項１に記載の組成物。
  3. コルチコステロイドが、デキサメタゾンである、請求項２に記載の組成物。
  4. ウイルス導入ベクターが、レトロウイルス導入ベクター、アデノウイルス導入ベクター、レンチウイルス導入ベクターまたはアデノ随伴ウイルス導入ベクターである、請求項１～３のいずれか一項に記載の組成物。
  5. ウイルス導入ベクターが、アデノウイルス導入ベクターであり、ならびに、アデノウイルス導入ベクターが、サブグループＡ、サブグループＢ、サブグループＣ、サブグループＤ、サブグループＥまたはサブグループＦのアデノウイルス導入ベクターである、請求項４に記載の組成物。
  6. ウイルス導入ベクターが、レンチウイルス導入ベクターであり、ならびに、レンチウイルス導入ベクターが、ＨＩＶ、ＳＩＶ、ＦＩＶ、ＥＩＡＶまたはヒツジレンチウイルスベクターである、請求項４に記載の組成物。
  7. ウイルス導入ベクターが、アデノ随伴ウイルス導入ベクターであり、ならびに、アデノ随伴ウイルス導入ベクターが、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ６．２、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０またはＡＡＶ１１アデノ随伴ウイルス導入ベクターである、請求項４に記載の組成物。
  8. ウイルス導入ベクターが、キメラウイルス導入ベクターである、請求項１～７のいずれか一項に記載の組成物。
  9. キメラウイルス導入ベクターが、ＡＡＶアデノウイルス導入ベクターである、請求項８に記載の組成物。
  10. ウイルス導入ベクターの導入遺伝子が、遺伝子治療導入遺伝子、遺伝子編集導入遺伝子、エクソンスキッピング導入遺伝子または遺伝子発現調節導入遺伝子を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の組成物。
  11. 合成ナノキャリアが、脂質ナノ粒子、ポリマーナノ粒子、金属ナノ粒子、界面活性剤ベースのエマルション、デンドリマー、バッキーボール、ナノワイヤー、ウイルス様粒子またはペプチドもしくはタンパク質粒子を含む、請求項１～１０のいずれか一項に記載の組成物。
  12. 合成ナノキャリアが、ポリマー性ナノ粒子を含む、請求項１１に記載の組成物。
  13. ポリマーナノ粒子が、非メトキシ末端のプルロニックポリマーではないポリマーを含む、請求項１２に記載の組成物。
  14. ポリマーナノ粒子が、ポリエステル、ポリエーテルに接着したポリエステル、ポリアミノ酸、ポリカーボネート、ポリアセタール、ポリケタール、多糖、ポリエチルオキサゾリンまたはポリエチレンイミンを含む、請求項１２または１３に記載の組成物。
  15. ポリエステルが、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸－コ－グリコール酸）またはポリカプロラクトンを含む、請求項１４に記載の組成物。
  16. ポリマーナノ粒子が、ポリエステルおよびポリエーテルに接着したポリエステルを含む、請求項１４または１５に記載の組成物。
  17. ポリエーテルが、ポリエチレングリコールまたはポリプロピレングリコールを含む、請求項１４～１６のいずれか一項に記載の組成物。
  18. 合成ナノキャリアの集団の動的光散乱を使用して得られた粒子サイズ分布の平均が、１１０ｎｍより大きい直径である、請求項１～１７のいずれか一項に記載の組成物。
  19. 直径が、１５０ｎｍより大きい、請求項１８に記載の組成物。
  20. 直径が、２００ｎｍより大きい、請求項１９に記載の組成物。
  21. 直径が、２５０ｎｍより大きい、請求項２０に記載の組成物。
  22. 直径が、５μｍより小さい、請求項１８～２１のいずれか一項に記載の組成物。
  23. 直径が、４μｍより小さい、請求項２２に記載の組成物。
  24. 直径が、３μｍより小さい、請求項２３に記載の組成物。
  25. 直径が、２μｍより小さい、請求項２４に記載の組成物。
  26. 直径が、１μｍより小さい、請求項２５に記載の組成物。
  27. 直径が、５００ｎｍより小さい、請求項２６に記載の組成物。
  28. 直径が、４５０ｎｍより小さい、請求項２７に記載の組成物。
  29. 直径が、４００ｎｍより小さい、請求項２８に記載の組成物。
  30. 直径が、３５０ｎｍより小さい、請求項２９に記載の組成物。
  31. 直径が、３００ｎｍより小さい、請求項３０に記載の組成物。
  32. 合成ナノキャリア中に含まれる免疫抑制剤の負荷量が、合成ナノキャリア全体の平均で、０．１％と５０％（重量／重量）との間である、請求項１～３１のいずれか一項に記載の組成物。
  33. 負荷量が、０．１％と、４０％、３５％、３０％、または２５％との間にある、請求項３２に記載の組成物。
  34. 負荷量が、１％と４０％、３５％、３０％または２５％との間にある、請求項３３に記載の組成物。
  35. 負荷量が、２％、４％または８％と、４０％、３５％、３０％、または２５％との間にある、請求項３４に記載の組成物。
  36. 負荷量が、２％、４％、または８％と、２０％との間、２％、４％、または８％と、１５％との間、または、２％、４％、または８％と、１０％との間にある、請求項３５に記載の組成物。
  37. 免疫抑制剤が、ＮＦ－ｋＢ経路のインヒビターである、請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物。
  38. 免疫抑制剤が、ｍＴＯＲ阻害剤である、請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物。
  39. 免疫抑制剤が、ラパログである、請求項１～３６のいずれか一項に記載の組成物。
  40. 免疫抑制剤が、ラパマイシンである、請求項３９に記載の組成物。
  41. 合成ナノキャリアの集団のアスペクト比が、１：１、１：１．２、１：１．５、１：２、１：３、１：５、１：７、または１：１０より大きいかまたは等しい、請求項１～４０のいずれか一項に記載の組成物。
  42. 以下を含む方法：
    免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、ウイルス導入ベクター、およびナノキャリアに連結されていないコルチコステロイドの、対象への随伴投与によって、対象における抗ウイルス導入ベクターの減弱された応答を確立すること。
  43. 抗ウイルス導入ベクター減弱化応答が、ウイルス導入ベクターに対するＩｇＧまたはＩｇＭ応答である、請求項４２に記載の方法。
  44. 方法が、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、ウイルス導入ベクター、およびコルチコステロイドの少なくとも１つの反復用量をさらに含む、請求項４２または４３に記載の方法。
  45. 方法が、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、ウイルス導入ベクター、およびコルチコステロイドの少なくとも２つの反復用量をさらに含む、請求項４２または４３に記載の方法。
  46. 抗ウイルスベクター減弱化応答が、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、ウイルス導入ベクター、およびコルチコステロイドの少なくとも反復用量のために維持される、請求項４２～４５のいずれか一項に記載の方法。
  47. 以下を含む方法：
    免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、ウイルスベクター、およびナノキャリアに連結されていないコルチコステロイドを、対象に、反復して、随伴投与することによって、対象におけるウイルス導入ベクターの導入遺伝子発現をエスカレートさせること。
  48. 方法が、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、ウイルス導入ベクター、およびコルチコステロイドの少なくとも１つ、２つ、または３つの随伴する投与を含む、請求項４７に記載の方法。
  49. ウイルス導入ベクターのエスカレートされた導入遺伝子発現が、免疫抑制剤を含む合成ナノキャリア、ウイルス導入ベクター、およびコルチコステロイドの少なくとも１つ、２つ、または３つの随伴する投与のために維持される、請求項４７または４８に記載の方法。
  50. コルチコステロイドがデキサメタゾンである、請求項４２～４９のいずれか一項に記載の方法。
  51. ウイルス導入ベクターが、請求項１、４～１０、４２～４７、および４９のいずれか一項に記載のとおりである、請求項４２～５０のいずれか一項に記載の方法。
  52. 合成ナノキャリアが、請求項１，１１、１２，１８，３２、４１，４２、および４４～４９のいずれか一項に記載のとおりである、請求項４２～５１のいずれか一項に記載の方法。
  53. 随伴投与が、同時投与である、請求項４２～５２のいずれか一項に記載の方法。
  54. ウイルス導入ベクターおよび／または合成ナノキャリアが、静脈内に投与される、請求項４２～５３のいずれか一項に記載の方法。
  55. コルチコステロイドが、静脈内に、または、経口的に投与される、請求項４２～５４のいずれか一項に記載の方法。
  56. 請求項１～４１に記載のいずれか１つの組成物、および使用のための説明書を含む、キット。
  57. 請求項１、４～１０、４２～４７、４９、５１、および５４のいずれか一項に記載のウイルス導入ベクター、請求項１，１１、１２，１８，３２、４１，４２、４４～４９、５２、および５４のいずれか一項に記載の合成ナノキャリア、請求項１～３、４２、４４～５０、および５５のいずれか一項に記載のコルチコステロイド、および使用のための説明書を含む、キット。
  58. 使用のための説明書が、請求項４２～５５に記載のいずれか１つの方法を実行するための説明書を含む、請求項５６または５７に記載のキット。
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