PL221877B1 - Wirus stowarzyszony z adenowirusem, kompozycja, wyizolowane białko kapsydu, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa, komórka gospodarza - Google Patents

Wirus stowarzyszony z adenowirusem, kompozycja, wyizolowane białko kapsydu, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa, komórka gospodarza

Info

Publication number
PL221877B1
PL221877B1 PL404537A PL40453702A PL221877B1 PL 221877 B1 PL221877 B1 PL 221877B1 PL 404537 A PL404537 A PL 404537A PL 40453702 A PL40453702 A PL 40453702A PL 221877 B1 PL221877 B1 PL 221877B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
aav
seq
capsid
virus
aav2
Prior art date
Application number
PL404537A
Other languages
English (en)
Other versions
PL404537A1 (pl
Inventor
Guangping Gao
James M. Wilson
Mauricio Alvira
Original Assignee
Univ Pennsylvania
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27502639&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL221877(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Univ Pennsylvania filed Critical Univ Pennsylvania
Publication of PL404537A1 publication Critical patent/PL404537A1/pl
Publication of PL221877B1 publication Critical patent/PL221877B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/01—DNA viruses
    • C07K14/015—Parvoviridae, e.g. feline panleukopenia virus, human parvovirus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/864—Parvoviral vectors, e.g. parvovirus, densovirus
    • C12N15/8645—Adeno-associated virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C12N2750/14152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14161—Methods of inactivation or attenuation
    • C12N2750/14162—Methods of inactivation or attenuation by genetic engineering
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14171—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/48—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating transport or export of RNA, e.g. RRE, PRE, WPRE, CTE
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/80—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates
    • C12N2830/85—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates mammalian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/80—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates
    • C12N2830/90—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates avian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Description

Opis wynalazku
Przedmiotem wynalazku jest wirus stowarzyszony z adenowirusem, kompozycja, wyizolowane białko kapsydu, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania rekombinowanych wirusów, komórka gospodarza.
Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), należący do rodziny Parvowirusów, jest małym, nieotoczkowanym ikozaedronalnym wirusem z genomami jednoniciowego liniowego DNA o wielkości od 4,7 kilozasad (kz) do 6 kz. AAV przypisano do rodzaju Dependovirus, ponieważ wirus ten odkryto jako zanieczyszczenie w oczyszczonych hodowlach adenowirusa. Cykl życiowy AAV obejmuje fazę latentną, w której genomy AAV po infekcji są integrowane w specyficzne miejsce w chromosomach gospodarza i fazę zakaźną, w której po zakażeniu adenowirusem lub wirusem opryszczki zwykłej zintegrowane genomy są wycinane, replikowane i pakowane do zakaźnych wirusów. Niepatogeniczność, szeroki zakres gospodarzy podlegających infekcji, w tym komórki niedzielące się i potencjalna miejscowospecyficzna integracja do chromosomu czynią AAV atrakcyjnym narzędziem do przenoszenia genów.
Pożądane są konstrukty do dostarczania genów oparte na AAV.
Niniejszy wynalazek dotyczy wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmującego kapsyd AAV o sekwencji aminokwasowej AAV7, obejmującej aminokwasy 1 do 737 z Sek. NR ID.: 2 lub o sekwencji, która w 95% lub więcej jest z nią identyczna, minigen mający odwrócone powtórzenia końcowe (ITR) AAV i gen homologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza.
Korzystnie kapsyd AAV ma białka kapsydowe vp1, białka kapsydowe vp2 i białka kapsydowe vp3.
Korzystnie białka kapsydowe vp1 mają sekwencję, która w 95% lub więcej jest identyczna z aminokwasami 1 do 737 SEK. NR ID.: 2.
Korzystnie białka kapsydowe vp1 mają sekwencję aminokwasową, która w 99% lub więcej jest identyczna z aminokwasami 1 do 737 z SEK. Nr ID.: 2.
Korzystnie białka kapsydowe vp1 mają sekwencję aminokwasów od 1 do 737 SEK. NR ID.: 2.
Korzystnie białka kapsydowe vp2 AAV mają sekwencję aminokwasową aminokwasów 138 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
Korzystnie białka kapsydowe vp3 AAV mają sekwencję aminokwasową aminokwasów 203 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
Korzystnie ITR pochodzą z AAV2.
W zakres wynalazku wchodzi wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), który obejmuje kapsyd AAV obejmujący vp3 AAV7 mający sekwencję aminokwasową 203 do 737 z SEK. NR ID.: 2 lub sekwencję, która w 95% jest z nią identyczna i minigen mający odwrócone powtórzenia końcowe (ITR) AAV i gen heterologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza.
Korzystnie białka kapsydowe vp1 mają sekwencję w co najmniej 95% identyczną z aminokwasami 203 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
Korzystnie białka kapsydowe vp3 AAV mają sekwencję aminokwasową aminokwasów 203 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
Korzystnie białka kapsydowe vp2 AAV mają sekwencję aminokwasową aminokwasów 138 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
Ponadto niniejszy wynalazek obejmuje kompozycję, która obejmuje AAV określony powyżej i fizjologicznie kompatybilny nośnik.
Niniejszy wynalazek dotyczy również wyizolowanego białka kapsydu obejmującego białko AAV7 wybrane z grupy składającej się z:
białka kapsydowego vp1, aminokwasy (aa) 1 do 737 z SEK. NR ID.: 2; białka kapsydowego vp2, (aa) 138 do 737 z SEK. NR ID.: 2; i białka kapsydowego vp3, (aa) 203 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
W zakres wynalazku wchodzi również wyizolowana lub syntetyczna cząsteczka kwasu nukleinowego kodująca białko określone powyżej.
Wynalazek dotyczy również wyizolowanej lub syntetycznej cząsteczki kwasu nukleinowego kodującej fragment białka kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem 7, przy czym ta cząsteczka kwasu nukleinowego jest wybrana z grupy składającej się z:
PL 221 877 B1 vp1, nukleotydy (nt) 845 do 3061 z SEK. NR ID.: 59; vp2, (nt) 1256 do 3061 z SEK. NR ID.: 59; i vp3, (nt) 1454 do 3061 z SEK. NR ID.: 59.
Korzystnie cząsteczka ta jest plazmidem.
Korzystnie obejmuje ona ponadto funkcjonalny gen rep AAV.
W zakres wynalazku wchodzi także sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV), obejmującego kapsyd AAV serotypu 7, który obejmuje etap hodowania komórki gospodarza zawierającej (a) cząsteczkę według wynalazku określoną w powyżej, która koduje kapsyd wirusa stowarzyszonego z adenowirusami; (b) funkcjonalny gen rep; (c) minigen obejmujący odwrócone powtórzenia końcowe (ITR) i transgen; i (d) geny adenowirusa, które kodują wystarczające funkcje pomocnicze pozwalające na upakowanie minigenu do białka kapsydu AAV.
Niniejszy wynalazek dotyczy również komórki gospodarza in vitro zawierającej wirus stowarzyszony z adenowirusami określony powyżej lub cząsteczkę określoną powyżej.
KRÓTKI OPIS RYSUNKÓW
Figury 1A do 1AAAR przedstawiają dopasowania sekwencji nukleotydowych kodujących co najmniej białka cap serotypów AAV. Sekwencje pełnej długości obejmujące ITR, region rep oraz region kapsydu dostarczono dla opublikowanego uprzednio AAV1 [SEKW . NR ID.: 6], AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i AAV3 [SEKW. NR ID.: 8]. Nowe serotypy AAV8 [SEKW. NR ID.: 4] i AAV9 [SEKW. NR ID.: 5] są przedmiotem równocześnie złożonych zgłoszeń. Do innych nowych klonów dostarczonych w tym dopasowaniu należą: 42-2 [SEKW. NR ID.: 9], 42-8 [SEKW. NR ID.: 27], 42-15 [SEKW. NR ID.: 28], 42-5b [SEKW. NR ID.: 29], 42-1b [SEKW. NR ID.: 30]; 42-13 [SEKW. NR ID.: 31], 42-3a [SEKW. NR ID.: 32], 42-4 [SEKW. NR ID.: 33], 42-5a [SEKW. NR ID.: 34], 42-10 [SEKW. NR ID.: 35], 42-3b [SEKW. NR ID.: 36], 42-11 [SEKW. NR ID.: 37], 42-6b [SEKW. NR ID.: 38], 43-1 [SEKW. NR ID.: 39], 43-5 [SEKW. NR ID.: 40], 43-12 [SEKW. NR ID.: 41], 43-20 [SEKW. NR ID.: 42], 43-21 [SEKW. NR ID.: 43], 43-23 [SEKW. NR ID.: 44], 43-25 [SEKW. NR ID.: 45], 44.1 [SEKW. NR ID.: 47], 44.5 [SEKW. NR ID.: 47], 223.10 [SEKW. NR ID.: 48], 223.2 [SEKW. NR ID.: 49], 223.4 [SEKW. NR ID.: 50], 223.5 [SEKW. NR ID.: 51], 223.6 [SEKW. NR ID.: 52], 223.7 [SEKW. NR ID.: 53], A3.4 [SEKW. NR ID.: 54], A3.5 [SEKW. NR ID.: 55], A3.7 [SEKW. NR ID.: 56], A3.3 [SEKW. NR ID.: 57], 42.12 [SEKW. NR ID.: 58], 44.2 [SEKW. NR ID.: 59]. Nowym serotypem AAV według wynalazku jest serotyp 7 AAV [SEKW. NR ID.: 1].
Przedstawiono też sekwencje nukleotydowe charakterystycznych regionów AAV10 [SEKW. NR ID.: 117], AAV11 [SEKW. NR ID.: 118] i AAV12 [SEKW. NR ID.: 119], a także krytyczne elementy struktury genomów AAV. Przerwy oznaczono kropkami. 3' ITR AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] przedstawiono w tej samej konfiguracji, jak w opublikowanych sekwencjach. TRS oznacza końcowe miejsce rozdziału (terminal resolution site). Należy zauważyć, że AAV7 jest jedynym opisanym AAV wykorzystującym GTG jako kodon inicjacyjny VP3.
Figury 2A do 2F przedstawiają dopasowanie sekwencji aminokwasowych białek kapsydowych vp1 opublikowanych uprzednio serotypów AAV1 [SEKW. NR ID.: 64], AAV2 [SEKW. NR ID.: 70], AAV3 [SEKW. NR ID.: 71], AAV4 [SEKW. NR ID.: 63], AAV5 [SEKW. NR ID.: 114], i AAV6 [SEKW. NR ID.: 65] i nowych sekwencji AAV, w tym: C1 [SEKW. NR ID.: 60], C2 [SEKW. NR ID.: 61], C5 [SEKW. NR ID.: 62], A3-3 [SEKW. NR ID.: 66], A3-7 [SEKW. NR ID.: 67], A3-4 [SEKW. NR ID.: 68], A3-5 [SEKW. NR ID.: 69], 3.3b [SEKW. NR ID.: 62], 223.4 [SEKW. NR ID.: 73], 223-5 [SEKW. NR ID.: 74], 223-10 [SEKW. NR ID.: 75], 223-2 [SEKW. NR ID.: 76], 223-7 [SEKW. NR ID.: 77], 223-6 [SEKW. NR ID.: 78], 44-1 [SEKW. NR ID.: 79], 44-5 [SEKW. NR ID.: 80], 44-2 [SEKW. NR ID.: 81],
42- 15 [SEKW. NR ID.: 84], 42-8 [SEKW. NR ID.: 85], 42-13 [SEKW. NR ID.: 86], 42-3A [SEKW. NR ID.: 87], 42-4 [SEKW. NR ID.: 88], 42-5A [SEKW. NR ID.: 89], 42-1B [SEKW. NR ID.: 90], 42-5B [SEKW. NR ID.: 91], 43-1 [SEKW. NR ID.: 92], 43-12 [SEKW. NR ID.: 93], 43-5 [SEKW. NR ID.: 94],
43- 21 [SEKW. NR ID.: 96], 43-25 [SEKW. NR ID.: 97], 43-20 [SEKW. NR ID.: 99], 24.1 [SEKW. NR ID.: 101], 42.2 [SEKW. NR ID.: 102], 7.2 [SEKW. NR ID.: 103], 27.3 [SEKW. NR ID.: 104], 16.3 [SEKW. NR ID.: 105], 42.10 [SEKW. NR ID.: 106], 42-3B [SEKW. NR ID.: 107], 42-11 [SEKW. NR ID.: 108], F1 [SEKW. NR ID.: 109], F5 [SEKW. NR ID.: 110], F3 [SEKW. NR ID.: 111], 42-6B [SEKW. NR ID.: 112], 42-12 [SEKW. NR ID.: 113].
Figury 3A do 3C przedstawiają sekwencje aminokwasowe białek rep AAV7 [SEKW. NR ID.: 3].
Jednym z wirusów stowarzyszonych z adenowirusem jest nowy serotyp, nazwany tu serotypem 7 (AAV7). Do innych nowych serotypów należą AAV10, AAV11 i AAV12. Ujawnione są także sekwencje
PL 221 877 B1 nukleinowe nowych serotypów i fragmenty tych sekwencji AAV. Patrz Figury i Lista sekwencji, które niniejszym są włączone przez referencję.
Wśród szczególnie pożądanych fragmentów AAV są białka cap, w tym vp1, vp2, vp3, regiony hiperzmienne, białka rep, w tym rep 78, rep 68, rep 52 i rep 40, oraz sekwencje kodujące te białka. Każdy z tych fragmentów może zostać z łatwością wykorzystany w różnorodnych systemach wektorowych i komórkach gospodarza. Fragmenty takie można wykorzystywać osobno, w kombinacji z innymi sekwencjami i fragmentami AAV, lub w kombinacji z innymi sekwencjami wirusowymi z AAV lub nie z AAV. W jednym szczególnie korzystnym wykonaniu, wektor zawiera sekwencje cap i/lub rep AAV.
Jak tu opisano, dopasowania wykonywane są z zastosowaniem dowolnego z szeregu dostępnych publicznie lub w handlowo programów do wielokrotnego dopasowania sekwencji takich, jak „Clustal W”, dostępny przez serwery Web w Internecie. Alternatywnie, stosowane są także narzędzia z pakietu Vector NTI. W dziedzinie z jest także wiele algorytmów, które można zastosować do mierzenia identyczności sekwencji nukleotydowych obejmujących te zawarte w opisanych powyżej programach. W innym przykładzie, sekwencje polinukleotydowe mogą być porównywane z zastosowaniem Fasta, programu w GCG wersja 6.1. Fasta dostarcza dopasowań i procentu identyczności sekwencji regionów najlepszego zachodzenia na siebie pomiędzy sekwencją zapytania i przeszukiwaną. Na przykład, procent identyczność sekwencji między sekwencjami nukleotydowymi można wyznaczyć z zastosowaniem Fasta z domyślnymi parametrami (długość słowa 6 i współczynnik NOPAM dla macierzy podobieństwa), jak dostarczone w GCG wersja 6.1, niniejszym włączonym przez referencję. Podobne programy dostępne są też dla sekwencji aminokwasowych, np. program „Clustal X”. Na ogół, wszystkie te programy są stosowane z ustawieniami domyślnymi, chociaż specjalista w dziedzinie może w miarę potrzeby zmienić te ustawienia. Alternatywnie, specjalista w dziedzinie może zastosować inny algorytm lub program komputerowy, który dostarcza przynajmniej poziomu identyczności lub dopasowania, jak dostarczony przez odnośnikowe algorytmy i programy.
Termin „znacząca homologia” lub „znaczące podobieństwo” w odniesieniu do kwasu nukleinowego lub jego fragmentu wskazuje, że przy optymalnym dopasowaniu z innym kwasem nukleinowym (lub jego nicią komplementarną) z odpowiednimi insercjami lub delecjami nukleotydowymi, występuje identyczność sekwencji nukleotydowej w co najmniej około 95 do 99% dopasowanych sekwencji. Korzystnie, homologia zachodzi na całej długości sekwencji, lub jej otwartej ramki odczytu, lub innego odpowiedniego fragmentu, który ma długość co najmniej 15 nukleotydów. Przykłady odpowiednich dopasowań są tu opisane.
Termin „znacząca homologia” lub „znaczące podobieństwo” w odniesieniu do sekwencji aminokwasowej lub jej fragmentu wskazuje, że przy optymalnym dopasowaniu z inną sekwencją aminokwasową z odpowiednimi insercjami lub delecjami aminokwasów, występuje identyczność sekwencji aminokwasowej w co najmniej około 95 do 99% dopasowanych sekwencji.
Korzystnie, homologia zachodzi na całej długości sekwencji, lub jej białka, np. białka cap, białka rep lub jej fragmentu, który ma długość co najmniej 8 aminokwasów, lub korzystniej, co najmniej 15 aminokwasów. Przykłady odpowiednich dopasowań są tu opisane.
Termin „wysoce konserwatywne” oznacza co najmniej 80% identyczności, korzystnie co najmniej 90% identyczności, a korzystniej co najmniej 97% identyczności. Specjalista łatwo określi identyczność przy pomocy algorytmów i programów komputerowych znanych specjalistom w dziedzinie.
Termin „procent identyczności sekwencji” lub „identyczne” w kontekście sekwencji kwasów nukleinowych odnosi się do pozycji w obu sekwencjach, które są takie same przy dopasowaniu dla maksymalnej zgodności. Długość porównywania identyczności sekwencji może obejmować całą długość genomu, całą długość sekwencji kodującej gen, lub w razie potrzeby fragment o długości co najmniej 500 do 5000 nukleotydów. Jednak może być również potrzebna identyczność między mniejszymi fragmentami, np. co najmniej dziewięciu nukleotydów, zwykle co najmniej 20 do 24 nukleotydów, co najmniej 28 do 32 nukleotydów, co najmniej 36 lub więcej nukleotydów. Podobnie „procent identyczności sekwencji” można łatwo określić dla sekwencji aminokwasowych na całej długości białka lub jego fragmentu. Odpowiednio, fragment ma długość co najmniej 8 aminokwasów i może dochodzić do około 700 aminokwasów. Przykłady odpowiednich fragmentów są tu opisane.
Sekwencje AAV i ich fragmenty są przydatne w wytwarzaniu rAAV i są również przydatne jako antysensowne wektory do dostarczania, wektory do terapii genowej lub wektory szczepionkowe. Wynalazek dostarcza ponadto cząsteczek kwasów nukleinowych i komórek gospodarza zawierających sekwencje AAV.
PL 221 877 B1
Jak tu opisano, wektory zawierające białka kapsydu AAV szczególnie dobrze nadają się do użycia w zastosowaniach, w których przeciwciała neutralizujące zmniejszają skuteczność wektorów opartych na innych serotypach AAV, jak również innych wektorów wirusowych. Wektory rAAV są szczególnie korzystne przy ponownym podawaniu rAAV i powtórnej terapii genowej.
W użytym w tym opisie i zastrzeżeniach znaczeniu, terminy „obejmujący” i „zawierający” i ich odmiany, obejmują inne składniki, elementy, liczby całkowite, etapy i podobne. Przeciwnie, termin „złożone” i jego odmiany wyklucza inne składniki, elementy, liczby całkowite, etapy i podobne.
I Nowe serotypy AAV
A. Sekwencje nukleotydowe
Dostarczono sekwencje nukleotydowe nowych serotypów AAV zidentyfikowanych sposobami opisanymi powyżej. Patrz SEKW. NR ID.: 1, 9-59 i 117-120, które są tu włączone przez referencję. Patrz też Fig. 1 i lista sekwencji.
Dla nowego serotypu AAV7 sekwencje pełnej długości obejmujące 5'ITR AAV, kapsyd, rep i 3' ITR AAV dostarczono w SEKW. NR ID.: 1.
Dla innych nowych serotypów AAV dostarczono fragment około 3,1 kz wyizolowany zgodnie ze sposobem opisanym powyżej. Fragment ten zawiera sekwencje kodujące białko kapsydowe pełnej długości i całość lub część sekwencji kodujących białko rep. Sekwencje te obejmują klony zidentyfikowane poniżej.
Dla jeszcze innych nowych serotypów AAV dostarczono region charakterystyczny kodujący białko kapsydu. Na przykład, sekwencje nukleotydowe AAV10 obejmują przedstawione na Fig. 1 [patrz, SEKW. NR ID.: 117, która obejmuje 255 zasad]. Sekwencje nukleotydowe AAV11 obejmują sekwencje DNA przedstawione na Fig. 1 [patrz, SEKW. NR ID.: 118, która obejmuje 258 zasad]. Sekwencje nukleotydowe AAV12 obejmują sekwencje DNA przedstawione na Fig. 1 [patrz, SEKW. NR ID.: 119, która obejmuje 255 zasad]. Przy zastosowaniu opisanej powyżej metodologii, dalsze sekwencje AAV10, AAV11 i AAV12 mogą być łatwo zidentyfikowane i wykorzystane dla szeregu różnych celów, w tym opisanych tu dla AAV7 i innych nowych serotypów.
Figura 1 przedstawia sekwencje kwasu nukleinowego AAV od naczelnych innych niż człowiek (NHP) pokrywających się z opublikowanymi dotychczas serotypami AAV, AAV1 [SEKW. NR ID.: 6], AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i AAV3 [SEKW. NR ID.: 8]. Te nowe sekwencje NHP obejmują te dostarczone w następującej Tabeli 1, które są zidentyfikowane numerem klonu:
T a b e l a 1
Sekwencja Cap AAV Klon numer Źródło
Gatunek Tkanka SEKW. NR ID. (DNA)
Rh. 1 Klon 9 (AAV 9) Rezus Serce 5
Rh. 2 Klon 43.1 Rezus MLN 39
Rh. 3 Klon 43.5 Rezus MLN 40
Rh. 4 Klon 43.12 Rezus MLN 41
Rh. 5 Klon 43.20 Rezus MLN 42
Rh. 6 Klon 43.21 Rezus MLN 43
Rh. 7 Klon 43.23 Rezus MLN 44
Rh. 8 Klon 43.25 Rezus MLN 45
Rh. 9 Klon 44.1 Rezus Wątroba 46
Rh. 10 Klon 44.2 Rezus Wątroba 59
Rh. 11 Klon 44.5 Rezus Wątroba 47
Rh. 12 Klon 42.1B Rezus MLN 30
Rh. 13 Klon 42.2 Rezus MLN 9
Rh. 14 Klon 42.3A Rezus MLN 32
PL 221 877 B1 cd. tabeli 1
Rh. 15 Klon 42.3B Rezus MLN 36
Rh. 16 Klon 42.4 Rezus MLN 33
Rh. 17 Klon 42.5A Rezus MLN 34
Rh. 18 Klon 42.5B Rezus MLN 29
Rh. 19 Klon 42.6B Rezus MLN 38
Rh. 20 Klon 42.8 Rezus MLN 27
Rh. 21 Klon 42.10 Rezus MLN 35
Rh. 22 Klon 42.11 Rezus MLN 37
Rh. 23 Klon 42.12 Rezus MLN 58
Rh. 24 Klon 42.13 Rezus MLN 31
Rh. 25 Klon 42.15 Rezus MLN 28
Rh. 26 Klon 223.2 Rezus Wątroba 49
Rh. 27 Klon 223.4 Rezus Wątroba 50
Rh. 28 Klon 223.5 Rezus Wątroba 51
Rh. 29 Klon 223.6 Rezus Wątroba 52
Rh. 30 Klon 223.7 Rezus Wątroba 53
Rh. 31 Klon 223.10 Rezus Wątroba 48
Rh. 32 Klon C1 Rezus Śledziona, dwunastnica, nerka i wątroba 19
Rh. 33 Klon C3 Rezus 20
Rh. 34 Klon C5 Rezus 21
Rh. 35 Klon F1 Rezus Wątroba 22
Rh. 36 Klon F3 Rezus 23
Rh. 37 Klon F5 Rezus 24
Cy. 1 Klon 1.3 Makak Krew 14
Cy. 2 Klon 13.3B Makak Krew 15
Cy. 3 Klon 24.1 Makak Krew 16
Cy. 4 Klon 27.3 Makak Krew 17
Cy. 5 Klon 7.2 Makak Krew 18
Cy. 6 Klon 16.3 Makak Krew 10
bb. 1 Klon 29.3 Pawian Krew 11
bb. 2 Klon 29.5 Pawian Krew 13
Ch. 1 Klon A3.3 Szympans Krew 57
Ch. 2 Klon A3.4 Szympans Krew 54
Ch. 3 Klon A3.5 Szympans Krew 55
Ch. 4 Klon A3.7 Szympans Krew 56
Nowy klon NHP sporządzono włączając fragmenty kapsydu dwóch adenowirusów szympansa do konstruktu AAV2 rep. Ten nowy klon, A3.1 nazwano też Ch.5 [SEKW. NR ID.: 20]. Ponadto, ujawniono dwie sekwencje ludzkiego AAV, nazwane H6 [SEKW. NR ID.: 25] i H2 [SEKW. NR ID.: 26].
PL 221 877 B1
Sekwencje kwasu nukleinowego z nowych AAV serotypów obejmują ponadto nić, która jest komplementarna do nici dostarczonych w sekwencjach przedstawionych na Fig. 1 i w Liście Sekwencji
[SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120], sekwencje kwasu nukleinowego, zarówno sekwencje RNA i cDNA odpowiadające sekwencjom przedstawionym na Fig. 1 i w Liście Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1, 9-59, 117-120] i ich nici komplementarne. Sekwencje nukleotydowe nowych serotypów obejmują także naturalne warianty i skonstruowane modyfikacje sekwencji z Fig. 1 i Listy Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1, 9-59, 117-120] i ich nici komplementarne. Modyfikacje takie obejmują, na przykład, znane w technice znaczniki, metylację i podstawienie jednego lub więcej naturalnie występujących nukleotydów nukleotydem zdegenerowanym.
Ujawniono sekwencje kwasu nukleinowego z nowych serotypów o homologii lub identyczności ponad 85%, korzystnie ponad 90%, a najkorzystniej przynajmniej 98 do 99% względem sekwencji nukleotydowych nowych serotypów, w tym Fig. 1 i Lista Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1, 9-59, 117-120]. Terminy te są stosowane zgodnie z podaną tu definicją.
Fragmenty nowych sekwencji AAV zidentyfikowane opisanym tu sposobem mają długość co najmniej 15 nukleotydów i obejmują fragmenty funkcjonalne, tzn. fragmenty, które mają znaczenie biologiczne. W jednym wykonaniu, fragmentami tymi są fragmenty nowych sekwencji z Fig. 1 i Listy Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1, 9-59, 117-120], ich nici komplementarne, i komplementarne do nich cDNA i RNA.
Przykłady odpowiednich fragmentów dostarczono z uwzględnieniem położenia tych fragmentów w AAV1, AAV2 lub AAV7. Jednak, z zastosowaniem przedstawionego tu dopasowania (uzyskanego za pomocą programu Clustal W przy ustawieniach domyślnych) do tworzenia dopasowania z innymi nowymi serotypami, specjalista bez trudu zidentyfikuje dokładne pozycje nukleotydowe kodonów start i stop dla pożądanych fragmentów.
Przykłady odpowiednich fragmentów obejmują sekwencje kodujące trzy białka zmienne (vp) kapsydu AAV będące wariantami alternatywnego składania: vp1 [np. nt 825 do 3049 AAV7, SEKW. NR ID: 1]; vp2 [np. nt 1234-3049 AAV7, SEKW. NR ID: 1]; i vp3 [np. nt 1434-3049 AAV7, SEKW. NR ID: 1]. Godne uwagi jest to, że AAV7 ma nietypowy kodon start GTG, za wyjątkiem kilku genów typu house-keeping, takich, jak kodon start nie opisany dotychczas w wirusach DNA. Uważano, że kodony start vp1, vp2 i vp3 dla innych serotypów AAV są takie, że mechanizm komórkowy komórki gospodarza, w której przebywają, może wytworzyć vp1, vp2 i vp3 w stosunku odpowiednio 10%:10%:80% w celu umożliwienia wydajnego złożenia wirionu. Stwierdzono jednak, że wirion AAV7 składa się wydajnie, nawet z tym rzadkim kodonem start GTG. Przewiduje się zatem, że konieczna jest zmiana kodonu start vp3 innych serotypów AAV tak, aby zawierały ten rzadki kodon start GTG, w celu poprawy wydajności pakowania, zmiany struktury wirionu i/lub zmiany położenia epitopów (np. epitopów dla przeciwciał neutralizujących) innych serotypów AAV. Kodony start można zmienić za pomocą konwencjonalnych technik, w tym np. mutagenezy ukierunkowanej. Ujawniono tu zatem zmienione wiriony AAV dowolnego wybranego serotypu, złożone z vp3, i/lub ewentualnie vp1 i/lub vp2 z kodonem start zamienionym na GTG.
Do innych odpowiednich fragmentów AAV należy fragment zawierający kodon start białka kapsydu AAV [np. nt 468 do 3090 AAV7, SEKW. NR ID: 1, nt 725 do 3090, SEKW. NR ID: 1, i odpowiednie regiony innych serotypów AAV]. Jeszcze inne fragmenty AAV7 i innych nowych serotypów AAV zidentyfikowanych za pomocą opisanych tu sposobów obejmują fragmenty kodujące białka rep, w tym rep78 [np. kodon inicjacyjny 334 z Fig. 1 dla AAV7], rep68 [kodon inicjacyjny 334 z Fig. 1 dla AAV7], rep52 [kodon inicjacyjny 1006 z Fig. 1 dla AAV7] i rep40 [kodon inicjacyjny 1006 z Fig. 1 dla AAV7]. Inne fragmenty będące przedmiotem zainteresowania mogą obejmować odwrócone końcowe powtórzenia ITR AAV 5' [nt 1 do 107 z Fig. 1 dla AAV7]; ITR AAV 3' [nt 4704 do 4721 z Fig. 1 dla AAV7]; sekwencje P19, sekwencje P40 AAV, miejsce wiązania rep i końcowe miejsce rozdziału (TRS) (ang. Terminal Resolute Site). Jeszcze inne odpowiednie fragmenty będą oczywiste dla specjalisty. Odpowiednie regiony w innych nowych serotypach mogą być łatwo wyznaczone przez odniesienie do Figury 1 lub przy zastosowaniu konwencjonalnych technik dopasowania z dostarczonymi tu sekwencjami.
Poza włączeniem sekwencji nukleotydowych dostarczonych na figurach i w Liście Sekwencji ujawniono cząsteczki kwasów nukleinowych i sekwencje, które zaprojektowano do wyrażania sekwencji aminokwasowych, białek i peptydów serotypów AAV tu ujawnionych. Zatem ujawniono sekwencje nukleotydowe, które kodują następujące nowe sekwencje aminokwasowe AAV: C1 [SEKW NR ID: 60], C2 [SEKW. NR ID: 61], C5 [SEKW. NR ID: 62], A3-3 [SEKW. NR ID: 66], A3-7 [SEKW. NR ID: 67], A3-4 [SEKW. NR ID: 68], A3-5 [SEKW. NR ID: 69], 3.3b [SEKW. NR ID: 62], 223.4
PL 221 877 B1
[SEKW. NR ID: 73], 223-5 [SEKW. NR ID: 74], 223-10 [SEKW. NR ID: 75], 223-2 [SEKW. NR ID: 76], 223-7 [SEKW. NR ID: 77], 223-6 [SEKW. NR ID: 78], 44-1 [SEKW. NR ID: 79], 44-5 [SEKW. NR ID: 80], 44-2 [SEKW. NR ID: 81], 42-15 [SEKW. NR ID: 84], 42-8 [SEKW. NR ID: 85], 42-13 [SEKW. NR ID: 86], 42-3A [SEKW. NR ID: 87], 42-4 [SEKW. NR ID: 88], 42-5A [SEKW. NR ID: 89], 42-1B [SEKW. NR ID: 90], 42-5B [SEKW. NR ID: 91], 43-1 [SEKW. NR ID: 92], 43-12 [SEKW. NR ID: 93], 43-5 [SEKW. NR ID: 94], 43-21 [SEKW. NR ID: 96], 43-25 [SEKW. NR ID: 97], 43-20 [SEKW. NR ID: 99], 24.1 [SEKW. NR ID: 101], 42.2 [SEKW. NR ID: 102], 7.2 [SEKW. NR ID: 103], 27.3 [SEKW. NR ID: 104], 16.3 [SEKW. NR ID: 105], 42.10 [SEKW. NR ID: 106], 42-3B [SEKW. NR ID: 107], 42-11 [SEKW. NR ID: 108], F1 [SEKW. NR ID: 109], F5 [SEKW. NR ID: 110], F3 [SEKW. NR ID: I 11],
42- 6B [SEKW. NR ID: 112], i/lub 42-12 [SEKW. NR ID: 113] i sztuczne serotypy AAV wytworzone za pomocą tych sekwencji i/lub ich charakterystycznych fragmentów.
W użytym tu znaczeniu, sztuczne serotypy AAV obejmują, między innymi, AAV z białkiem kapsydu niewystępującym naturalnie. Taki sztuczny kapsyd może być wytworzony dowolną odpowiednią techniką przy wykorzystaniu nowej sekwencji AAV tu ujawnionej (np. fragmentu białka kapsydu vp1) w połączeniu z heterologicznymi sekwencjami, które można uzyskać z innego serotypu AAV (znanego lub nowego), nieciągłej części tego samego serotypu AAV, innego niż AAV źródła wirusowego, lub ze źródła nie będącego wirusem. Sztuczny serotyp AAV może być, między innymi, chimerycznym kapsydem AAV, zrekombinowanym kapsydem AAV lub „humanizowanym” kapsydem AAV.
B. Sekwencje aminokwasowe AAV, białka i peptydy
Ujawniono tu białka i ich fragmenty, kodowane przez sekwencje nukleotydowe zidentyfikowanych tu nowych serotypów AAV, w tym np. AAV7 [nt 825 do 3049 AAV7, SEKW. NR. ID.: 1] i innych dostarczonych tu nowych serotypów. Białka kapsydu nowych serotypów, w tym: H6 [SEKW. NR ID: 25], H2 [SEKW. NR ID: 26], 42-2 [SEKW. NR ID: 9], 42-8 [SEKW. NR ID: 27], 42-15 [SEKW. NR ID: 28], 42-5b [SEKW. NR ID: 29], 42-1b [SEKW. NR ID: 30], 42-13 [SEKW. NR ID: 31], 42-3a [SEKW. NR ID: 32], 42-4 [SEKW. NR ID: 33], 42-5a [SEKW. NR ID: 34], 42-10 [SEKW. NR ID: 35], 42-3b [SEKW. NR ID: 36], 42-11 [SEKW. NR ID: 37], 42-6b [SEKW. NR ID: 38], 43-1 [SEKW. NR ID: 39],
43- 5 [SEKW. NR ID: 40], 43-12 [SEKW. NR ID: 41], 43-20 [SEKW. NR ID: 42], 43-21 [SEKW. NR ID: 43], 43-23 [SEKW. NR ID: 44], 43-25 [SEKW. NR ID: 45], 44.1 [SEKW. NR ID: 47], 44.5 [SEKW. NR ID: 47], 223.10 [SEKW. NR ID: 48], 223.2 [SEKW. NR ID: 49], 223.4 [SEKW. NR ID: 50], 223.5 [SEKW. NR ID: 51], 223.6 [SEKW. NR ID: 52], 223.7 [SEKW. NR ID: 53], A3.4 [SEKW. NR ID: 54], A3.5 [SEKW. NR ID: 55], A3.7 [SEKW. NR ID: 56], A3.3 [SEKW. NR ID: 57], 42.12 [SEKW. NR ID: 58], i 44.2 [SEKW. NR ID: 59] mogą zatem być łatwo wytworzone konwencjonalnymi technikami z otwartych ramek odczytu dostarczonych przez wymienione powyżej klony.
Ujawniono ponadto serotypy AAV wytworzone z zastosowaniem sekwencji nowych serotypów AAV, które są wytworzone przy zastosowaniu technik syntezy rekombinacji lub innych znanych specjalistom. Sekwencje aminokwasowe, peptydy i białka mogą być też wytworzone innymi sposobami znanymi w technice, w tym np. przez syntezę chemiczną, innymi technikami syntezy lub innymi sposobami. Na przykład, sekwencje każdego spośród C1 [SEKW. NR ID: 60], C2 [SEKW. NR ID: 61], C5 [SEKW. NR ID: 62], A3-3 [SEKW. NR ID: 66], A3-7 [SEKW. NR ID: 67], A3-4 [SEKW. NR ID: 68], A3-5 [SEKW. NR ID: 69], 3.3b [SEKW. NR ID: 62], 223.4 [SEKW. NR ID: 73], 223-5 [SEKW. NR ID: 74], 223-10 [SEKW. NR ID: 75], 223-2 [SEKW. NR ID: 76], 223-7 [SEKW. NR ID: 77], 223-6 [SEKW. NR ID: 78], 44-1 [SEKW. NR ID: 79], 44-5 [SEKW. NR ID: 80], 44-2 [SEKW. NR ID: 81], 42-15 [SEKW. NR ID: 84], 42-8 [SEKW. NR ID: 85], 42-13 [SEKW. NR ID: 86], 42-3A [SEKW. NR ID: 87], 42-4 [SEKW. NR ID: 88], 42-5A [SEKW. NR ID: 89], 42-1B [SEKW. NR ID: 90], 42-5B [SEKW. NR ID: 91], 43-1 [SEKW. NR ID: 92], 43-12 [SEKW. NR ID: 93], 43-5 [SEKW. NR ID: 94], 43-21 [SEKW. NR ID: 96], 43-25 [SEKW. NR ID: 97], 43-20 [SEKW. NR ID: 99], 24.1 [SEKW. NR ID: 101], 42.2 [SEKW. NR ID: 102], 7.2 [SEKW. NR ID: 103], 27.3 [SEKW. NR ID: 104], 16.3 [SEKW. NR ID: 105], 42.10 [SEKW. NR ID: 106], 42-3B [SEKW. NR ID: 107], 42-11 [SEKW. NR ID: 108], F1 [SEKW. NR ID: 109], F5 [SEKW. NR ID: 110], F3 [SEKW. NR ID: 111], 42-6B [SEKW. NR ID: 112], i/lub 42-12 [SEKW. NR ID: 113] można łatwo wytworzyć z zastosowaniem szeregu różnych technik.
Odpowiednie techniki wytwarzania są dobrze znane specjalistom. Patrz np. Sambrook i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (Cold Spring Harbor, NY). Alternatywnie, peptydy mogą być też syntetyzowane za pomocą dobrze znanych sposobów syntezy peptydów w fazie stałej (Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85: 2149 (1962); Stewart i Young, Solid Phase Peptide Synthesis (Freeman, San Francisco, 1969) ss. 27-62). Te i inne odpowiednie sposoby wytwarzania są znane specjalistom.
PL 221 877 B1
Do szczególnie pożądanych białek należą białka kapsydu AAV, które są kodowane przez zidentyfikowane powyżej sekwencje nukleotydowe. Sekwencje wielu spośród białek kapsydu według wynalazku dostarczono w dopasowaniu na Fig. 2 i/lub w Liście Sekwencji, SEKW. NR ID.: 2 i 60 do 115, które są tu niniejszym włączone przez referencję. Kapsyd AAV składa się z trzech białek vp1, vp2 i vp3, które są wariantami alternatywnego składania. Pełnej długości sekwencja przedstawiona na tych figurach to sekwencja vp1. Na podstawie numeracji kapsydu AAV7 [SEKW. NR ID.: 2], sekwencje vp2 obejmują aminokwasy 138-737 AAV7, zaś sekwencje vp3 obejmują aminokwasy 203-737 AAV7. Na podstawie tych informacji specjalista może bez trudu wyznaczyć położenie białek vp2 i vp3 dla innych nowych serotypów.
Do innych pożądanych białek i fragmentów białek kapsydu należą stałe i zmienne regiony, położone pomiędzy regionami hiperzmiennymi (HPV) oraz sekwencje samych regionów HPV. Algorytm opracowany dla wyznaczenia powierzchni w dywergencji sekwencji w AAV2 wykazał 12 regionów hiperzmiennych (HVR), z których 5 nakłada się, lub stanowi część czterech wcześniej opisanych regionów zmiennych. [Chiorini i wsp., J. Virol, 73: 1309-19 (1999); Rutledge i wsp., J: Virol., 72: 309319]. Przy zastosowaniu tego algorytmu i/lub opisanych tu technik dopasowania wyznaczane są HVR nowych serotypów AAV. Na przykład, względem numeracji vp1 AAV2 [SEKW . NR ID.: 70], HVR zlokalizowane są następująco: HVR1, aa 146-152; HVR2, aa 182-186; HVR3, aa 262-264; HVR4, aa 381-383; HVR5, aa 450-474; HVR6, aa 490-495; HVR7, aa 500-504; HVR8, aa 514-522; HVR9, aa 534-555; HVR10, aa 581-594; HVR11, aa 658-667; i HVR12, aa 705-719. Przy zastosowaniu dopasowania, przygotowanego według konwencjonalnych sposobów, oraz dostarczonych tu nowych sekwencji [patrz, np. Figura 2], można łatwo wyznaczyć położenie HVR w nowych serotypach AAV tu ujawnionych. Przykładowo, przy wykorzystaniu Figury 2 można z łatwością stwierdzić, że dla AAV7 [SEKW . NR ID.: 2] HVR1 jest zlokalizowany w aa 146-152; HVR2 jest zlokalizowany w 182-187; HVR3 jest zlokalizowany w aa 263-266, HVR4 jest zlokalizowany w aa 383-385, HVR5 jest zlokalizowany w aa 451-475; HVR6 jest zlokalizowany w aa 491-496 z AAV7; HVR7 jest zlokalizowany w aa 501-505; HVR8 jest zlokalizowany w aa 513-521; HVR9 jest zlokalizowany w 533-554; HVR10 jest zlokalizowany w aa 583-596; HVR11 jest zlokalizowany w aa 660-669; HVR12 jest zlokalizowany w aa 707-721. Z zastosowaniem dostarczonej tu informacji z łatwością można wyznaczyć HVR dla innych nowych serotypów.
Dodatkowo zidentyfikowano w kapsydzie aminokwasowe kasety identyczności. Kasety te są szczególnie interesujące, gdyż są przydatne do konstruowania sztucznych serotypów, np. przez wymianę kasety HVR1 wybranego serotypu na kasetę HVR1 innego serotypu. Niektóre spośród tych kaset identyczności zaznaczono na Fig. 2. Patrz Fig. 2 dostarczająca dopasowania Clustal X, które ma przedstawioną pod sekwencjami linijkę, poczynając od pierwszej pozycji oznaczonej 1. Linia nad linijką jest stosowana do zaznaczenia silnie konserwatywnych pozycji. Wykorzystywane są trzy znaki (*,:,.). „*” oznacza pozycje zawierające jeden, w pełni konserwatywny aminokwas. „:” oznacza, że grupa „silna” jest w pełni konserwatywna. „.” oznacza, że grupa „słabsza” jest w pełni konserwatywna. Są to grupy o dodatniej wartości występujące w macierzy Gonnet Pam250. Grupy silne zdefiniowane są przez silną wartość >0,5, zaś grupy słabe są zdefiniowane przez słabą wartość <0,5.
Dodatkowo, przykłady innych odpowiednich fragmentów kapsydów AAV obejmują według numeracji AAV2 [SEKW. NR ID.: 70], aa 24-42, aa 25-28; aa 81-85; aa 133-165; aa 134-165; aa 137143; aa 154-156; aa 194-208; aa 261-274; aa 262-274; aa 171-173; aa 413-417; aa 449-478; aa 494-525; aa 534-571; aa 581-601; aa 660-671; aa 709-723. Do jeszcze innych żądanych fragmentów należą, na przykład, dla AAV7 aminokwasy 1 do 184 SEKW. NR ID.: 2, aminokwasy 199 do 259; aminokwasy 274 do 446; aminokwasy 603 do 659; aminokwasy 670 do 706; aminokwasy 724 do 736; aa 185 do 198; aa 260 do 273; aa 447 do 477; aa 495 do 602; aa 660 do 669; i aa 707 do 723. Jeszcze inne żądane fragmenty, według numeracji AAV7 [SEKW. NR ID.: 2], wybrane są z grupy złożonej z aa 185 do 198; aa 260 do 273; aa 447 do 477; aa 495 do 602; aa 660 do 669; i aa 707 do 723. Jeszcze inne żądane fragmenty, według numeracji AAV7 [SEKW. NR ID.: 2], wybrane są z grupy złożonej z aa 185 do 198; aa 260 do 273; aa 447 do 477; aa 495 do 602; aa 660 do 669; i aa 707 do 723. Stosując dostarczone tu dopasowanie wykonane przy użyciu programu Clustal X przy domyślnych ustawieniach, lub przy zastosowaniu innego dostępnego w handlu lub publiczne programu przy domyślnych ustawieniach, specjalista łatwo określi odpowiadające im fragmenty nowych kapsydów AAV.
Innymi żądanymi białkami są białka rep AAV [aa 1 do 623 SEKW. NR ID.: 3 dla AAV7] i ich funkcjonalne fragmenty, w tym między innymi np. aa 1 do 171, aa 172 do 372, aa 373 do 444, aa 445
PL 221 877 B1 do 623 SEKW. NR ID.: 3. Odpowiednio, fragmenty takie mają przynajmniej 8 aminokwasów długości. Patrz Fig. 3. Porównywalne regiony mogą być zidentyfikowane we fragmentach innych nowych AAV z zastosowaniem technik opisanych tu i znanych w dziedzinie. Ponadto, fragmenty innej żądanej długości mogą być łatwo wykorzystane. Fragmenty takie mogą być wytworzone przez rekombinację lub innymi odpowiednimi środkami, np. przez syntezę chemiczną.
Sekwencje, białka i fragmenty mogą być wytworzone dowolnymi odpowiednimi sposobami, w tym przez rekombinację, syntezę chemiczną lub innymi środkami syntezy. Takie metody wytwarzania są znane specjalistom.
II Wytwarzanie rAAV z nowymi kapsydami AAV
Wynalazek dostarcza cząsteczki, które wykorzystują nowe sekwencje AAV ujawnione w wynalazku, w tym ich fragmenty, do wytwarzania cząsteczek przydatnych do dostarczania heterologicznych genów lub innych sekwencji kwasów nukleinowych do komórki docelowej.
Cząsteczką według wynalazku jest wyizolowaną lub syntetyczną cząsteczką kwasu nukleinowego kodującą fragment białka kapsydowego wirusa stowarzyszonego z adenowirusami 7 zawierająca sekwencję nowego serotypu wirusa AAV według wynalazku, która może być dostarczona do komórki gospodarza, a korzystnie jest plazmid. W niniejszym wynalazku ujawniono też inne elementy genetyczne (wektory), które mogą być dostarczone do komórki gospodarza, np. nagi DNA, plazmid, fag, transpozon, kosmid, episom, białko w niewirusowym nośniku (np. nośniku lipidowym), wirus itp., które przenoszą niesione w nich sekwencje. Wybrany wektor może być dostarczony dowolnym odpowiednim sposobem, w tym przez transfekcję, elektroporację, dostarczenie liposomów, techniki fuzji błonowej, opłaszczone DNA kulki o dużej prędkości, infekcję wirusową i fuzję protoplastów. Sposoby stosowane do skonstruowania dowolnego wykonania wynalazku są znane specjalistom w dziedzinie manipulacji kwasami nukleinowymi i obejmują inżynierię genetyczną, inżynierię rekombinacyjną i techniki syntetyczne. Patrz, np. Sambrook i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY.
W jednym wykonaniu, wektory zawierają sekwencje kodujące nowy kapsyd AAV (np. kapsyd
AAV7, kapsyd AAV 44-2 (rh.10), kapsyd AAV10, kapsyd AAV11, kapsyd AAV12), lub fragment jednego lub więcej z tych kapsydów. Alternatywnie, wektory mogą zawierać samo białko kapsydu lub jego fragment.
Ewentualnie, wektory mogą zawierać sekwencje kodujące białka rep AAV. Takie sekwencje rep mogą pochodzić z tego samego serotypu AAV, co dostarczający sekwencji cap. Alternatywnie, wektorami są te, w których sekwencje rep pochodzą z serotypu AAV różniącego się od serotypu dostarczającego sekwencji cap. W jednym wykonaniu sekwencje rep i cap są wyrażane z różnych źródeł (np. oddzielnych wektorów, lub komórki gospodarza i wektora). W innym wykonaniu, te sekwencje rep są wyrażane z tego samego źródła, co sekwencje cap. W tym wykonaniu, sekwencje rep mogą być połączone w ramce z sekwencjami cap innego serotypu AAV tworząc chimeryczny wektor AAV. Ewentualnie, wektory zawierają ponadto minigen obejmujący wybrany transgen otoczony ITR 5' AAV i ITR 3' AAV.
Zatem, w jednym wykonaniu, opisane tu wektory zawierają sekwencje nukleotydowe kodujące pełny kapsyd AAV, który może pochodzić z pojedynczego serotypu AAV (np. AAV7 lub innego nowego AAV). Alternatywnie, wektory te zawierają sekwencje kodujące sztuczne kapsydy, które zawierają jeden lub więcej fragmentów kapsydu AAV7 (lub innego nowego AAV) połączone z białkami kapsydu heterologicznego AAV lub nie AAV (lub ich fragmentami). Te sztuczne białka kapsydu są wybrane z nieciągłych części kapsydu AAV7 (lub innego nowego AAV) lub z kapsydów innych serotypów AAV. Na przykład, może być konieczna modyfikacja regionów kodujących jeden lub więcej vp1 AAV, np. w jednym lub więcej regionów hiperzmiennych (tzn. HPV1-12), lub vp2 i/lub vp3. W innym przykładzie, może być konieczna zmiana kodonu start białka vp3 na GTG. Modyfikacje te mogą mieć na celu zwiększenie ekspresji, wydajności i/lub poprawę oczyszczania w wybranych systemach ekspresyjnych lub też inny żądany cel (np. zmianę tropizmu lub zmianę epitopów dla przeciwciał neutralizujących).
Opisane tu wektory, np. plazmidowe, są przydatne w szeregu zastosowań, lecz szczególnie dobrze nadają się do wykorzystania do wytwarzania rAAV zawierającego kapsyd obejmujący sekwencje AAV lub jej fragment. Te wektory, obejmujące rAAV, ich elementy, konstrukcję i zastosowania są tu opisane szczegółowo.
Wynalazek dostarcza sposobu wytwarzania rekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) obejmującego kapsyd AAV o serotypie AAV7, lub jego części. Sposób taki obejmuje hodowanie komórki gospodarza zawierającej sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsyPL 221 877 B1 du wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) serotypu 7 i/lub jego fragment tak, jak tu określono; funkcjonalny gen rep; minigen złożony minimalnie z odwróconych końcowych powtórzeń (ITR)
AAV i transgenu; oraz geny adenowirusa kodujące odpowiednie funkcje pomocnicze dla umożliwienia pakowania minigenu do białka kapsydu AAV.
Składniki wymagane w hodowli w komórce gospodarza do upakowania minigenu AAV do kapsydu AAV mogą być dostarczone do komórki gospodarza in trans. Alternatywnie, dowolny jeden lub więcej z wymaganych składników (np. minigen, sekwencje rep, sekwencje cap, i/lub funkcje pomocnicze) mogą być dostarczone przez stabilną komórkę gospodarza, którą zmieniono tak, aby zawierała jeden lub więcej wymaganych składników, przy użyciu sposobów znanych specjalistom. Najdogodniej, taka stabilna komórka gospodarza będzie zawierać wymagany składnik (i) pod kontrolą indukowalnego promotora. Jednak wymagany składnik(i) może być pod kontrolą promotora konstytutywnego. Przykłady odpowiednich promotorów indukowalnych i konstytutywnych dostarczono tu przy omówieniu elementów regulacyjnych odpowiednich do zastosowania razem z transgenem. Wybrana stabilna komórka gospodarza może zawierać wybrany składniki(i) pod kontrolą promotora konstytutywnego i inny wybrany składnik(i) pod kontrolą jednego lub więcej indukowalnych promotorów. Na przykład, stabilna komórka gospodarza może być wytworzona z komórki pochodzącej z komórek 293 (zawierających funkcje pomocnicze E1 pod kontrolą promotora konstytutywnego), lecz zawierających białka rep i/lub cap pod kontrolą promotorów indukowalnych. Jeszcze inne stabilne komórki gospodarza mogą być wytworzone przez specjalistę.
Minigen, sekwencje rep, sekwencje cap, i funkcje pomocnicze wymagane do wytworzenia rAAV mogą być dostarczone do upakowania w komórce gospodarza w postaci dowolnego elementu genetycznego, który przenosi niesione w sobie sekwencje. Wybrany element genetyczny może być dostarczony dowolnym odpowiednim sposobem, w tym tu opisanymi. Sposoby zastosowane w dowolnym wykonaniu tego wynalazku są znane specjalistom w dziedzinie manipulacji kwasami nukleinowymi i obejmują inżynierię genetyczną, inżynierię rekombinacyjną i techniki syntetyczne. Patrz, np. Sambrook i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY. Podobnie, sposoby wytwarzania wirionów rAAV są dobrze znane i wybór odpowiedniego sposobu nie stanowi ograniczenia niniejszego wynalazku, patrz, np. K. Fisher i wsp., J. Virol., 70: 520-532 (1993) i patent USA nr 5,478,745.
A. Minigen
Minigen składa się minimalnie z transgenu i jego sekwencji regulatorowych, oraz odwróconych końcowych powtórzeń 5' i 3' AAV (ITR). Jest to ten minigen, który jest pakowany do białka kapsydowego i dostarczany do wybranej komórki gospodarza.
1. Transgen
Transgen jest sekwencją nukleotydową, heterologiczną względem sekwencji wektorowych otaczających transgen, która koduje polipeptyd, białko lub inny będący przedmiotem zainteresowania produkt. Kodująca sekwencja kwasu nukleinowego jest funkcjonalnie połączona ze składnikami regulatorowymi w sposób, który pozwala na transkrypcję transgenu i/lub ekspresję w komórce gospodarza.
Skład sekwencji transgenu będzie zależał od zastosowania, do którego będzie przeznaczony uzyskany wektor. Na przykład, jeden z typów sekwencji transgenu zawiera sekwencję reporterową, która po ekspresji wytwarza wykrywalny sygnał. Do takich sekwencji reporterowych należą, między innymi, sekwencje DNA kodujące β-laktamazę, β-galaktozydazę (lacZ), alkaliczną fosfatazę, kinazę tymidynową, białko zielonej fluorescencji (GFP), acetylotransferazę chloramfenikolu (CAT), lucyferazę, białka związane z błoną, w tym, na przykład, CD2, CD4, CD8, białko hemaglutyniny wirusa grypy i inne dobrze znane w dziedzinie, dla których istnieją lub mogą być wytworzone konwencjonalnymi środkami skierowane przeciwko nim przeciwciała o wysokim powinowactwie, oraz białka fuzyjne obejmujące związane z błoną białko odpowiednio połączone z domeną znacznika antygenowego z, między innymi, hemaglutyniny lub Myc.
Te sekwencje kodujące, gdy są połączone z elementami regulatorowymi kontrolującymi ich ekspresję, dostarczają sygnałów wykrywalnych konwencjonalnymi środkami, w tym oznaczeniami enzymatycznymi, radiograficznymi, kolorymetrycznymi, fluorescencją lub innymi oznaczeniami spektrograficznymi, oznaczeniami opartymi na sortowaniu komórek aktywowanego przez fluorescencję i oznaczeniami immunologicznymi, w tym, immunoenzymatycznym (ELISA), radioimmunologicznym (RIA) i immunohistochemią. Na przykład, gdy sekwencją znacznikową jest gen LacZ, obecność wektora niosącego sygnał jest wykrywana przez oznaczenia aktywności beta-galaktozydazy. Gdy transge12
PL 221 877 B1 nem jest zielone białko fluorescencji lub lucyferaza, wektor niosący sygnał można oznaczyć wizualnie przez wytwarzanie barwy lub światła w luminometrze.
Jednak, korzystnie, transgenem jest sekwencja nie będąca znacznikiem kodująca produkt, który jest przydatny w biologii i medycynie, taki jak białka, peptydy, RNA, enzymy lub RNA katalityczne. Do pożądanych cząsteczek RNA należą tRNA, dsRNA, rybosomalne RNA, katalityczne RNA i RNA antysensowne. Jednym z przykładów użytecznej sekwencji RNA jest sekwencja hamująca ekspresję docelowej sekwencji kwasu nukleinowego u leczonego zwierzęcia.
Transgen można wykorzystać do skorygowania lub złagodzenia defektów genu, do których mogą należeć defekty genów, w których prawidłowe geny są wyrażane na niższym poziomie, niż prawidłowy lub defekty, w których nie jest wyrażany funkcjonalny produkt genu. Korzystny typ transgenu koduje białko lub polipeptyd terapeutyczny wyrażany w komórce gospodarza. Można stosować wiele transgenów, np. do skorygowania lub złagodzenia defektu genowego powodowanego brakiem białka złożonego z wielu podjednostek. W pewnych sytuacjach osobny transgen może być stosowany do kodowania każdej podjednostki białka, lub kodowania różnych peptydów lub białek. Jest to konieczne, gdy wielkość DNA kodującego podjednostkę białkową jest duża, np. dla immunoglobuliny, czynnika wzrostu pochodzenia płytkowego lub białka dystrofiny. Aby komórka wytwarzała białko złożone z wielu podjednostek, infekuje się ją zrekombinowanym wirusem zawierającym każdą z różnych podjednostek. Alternatywnie, różne podjednostki białka mogą być kodowane przez ten sam transgen. W tym przypadku, pojedynczy transgen zawiera DNA kodujący każdą z podjednostek, przy czym DNA dla każdej z podjednostek jest oddzielony wewnętrznym miejscem przyłączenia rybosomu (IRES). Jest to pożądane, gdy wielkość DNA kodującego każdą z podjednostek jest niewielka, np. całkowita wielkość DNA kodującego podjednostki i IRES wynosi poniżej pięciu kilobaz. Jako alternatywę dla IRES, DNA można przedzielić sekwencjami kodującymi peptyd 2A, który sam się przecina w procesie posttranslacyjnym. Patrz np., M. L. Donelly i wsp., J. Gen. Virol., 78 (pt 1): 13-21 (Styczeń 1997); Furler S. i wsp., Gene Ther., 8 (11): 864-873 (Czerwiec 2001); Klump H., i wsp., Gene Ther., 8 (10): 811-817 (Maj 2001). Ten peptyd 2A jest znacząco mniejszy niż IRES, co czyni go szczególnie przydatnym w zastosowaniach, w których czynnikiem ograniczającym jest przestrzeń. Wybrany transgen może jednak kodować dowolny czynny biologicznie produkt lub inny produkt, np. produkt pożądany w celu badań.
Odpowiednie transgeny mogą być bez trudu wybrane przez specjalistę. Wybór transgenu nie jest uważany za ograniczenie niniejszego wynalazku.
2. Elementy regulatorowe
Oprócz głównych elementów zidentyfikowanych powyżej dla minigenu, wektor zawiera także niezbędne konwencjonalne elementy kontrolne, które są funkcjonalnie połączone z transgenem w sposób umożliwiający jego transkrypcję, translację i/lub ekspresję w komórce stransfekowanej wektorem plazmidowym lub zainfekowanej wirusem wytworzonym sposobem według wynalazku. W użytym tu znaczeniu, „funkcjonalnie połączone” sekwencje obejmują zarówno sekwencje kontrolujące ekspresję, które sąsiadują z genem będącym przedmiotem zainteresowania oraz sekwencje kontrolne działające in trans lub na odległość kontrolując gen będący przedmiotem zainteresowania.
Do sekwencji kontrolujących ekspresję należą odpowiednie sekwencje inicjacji transkrypcji, terminacji, sekwencje promotorowe i sekwencje wzmacniaczy; wydajne sygnały obróbki RNA, takie jak sygnały składania i poliadenylacji (poliA); sekwencje stabilizujące mRNA cytoplazmatyczne; sekwencje wzmacniające wydajność translacji (tzn. sekwencja najwyższej zgodności Kozaka); sekwencje wzmacniające stabilność białka; oraz gdy jest to konieczne, sekwencje wzmacniające wydzielanie kodowanego produktu. Duża liczba sekwencji kontrolujących ekspresję, w tym promotorów natywnych, konstytutywnych, indukowalnych i/lub swoistych tkankowo jest znana w dziedzinie i może być wykorzystana.
Przykłady promotorów konstytutywnych obejmują, ale nie wyłącznie, retrowirusowy promotor LTR wirusa mięsaka Rousa (RSV) (ewentualnie ze wzmacniaczem RSV), promotor cytomegalowirusa (CMV) (ewentualnie ze wzmacniaczem CMV) [patrz, np. Boshart i wsp., Cell, 41: 521-530 (1985)], promotor SV40, promotor reduktazy dihydrofolianowej, promotor β-aktyny, promotor kinazy fosfoglicerolowej (PGK) oraz promotor EF1a [Invitrogen].
Promotory indukowalne umożliwiają regulację ekspresji genów i mogą być regulowane przez związki egzogenne, czynniki środowiskowe, takie jak temperatura lub obecność konkretnego stanu fizjologicznego, np. fazy ostrej, konkretnego stanu różnicowania komórki, lub tylko w komórkach replikujących się. Indukowalne promotory i indukowalne systemy dostępne są z wielu źródeł handlowych,
PL 221 877 B1 w tym, ale nie wyłącznie, od Invitrogen, Clontech i Ariad. Wiele innych systemów zostało opisanych i mogą one być łatwo wybrane przez specjalistę. Do przykładów indukowalnych promotorów regulowanych przez związki dostarczane z zewnątrz należą indukowany przez cynk promotor metalotioneiny (MT) owcy, indukowany przez deksametazon (Dex) promotor mysiego wirusa nowotworu sutka (MMTV), system promotora polimerazy T7 [WO 98/10088]; owadzi promotor ekdyzonu [No i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 3346-3351 (1996)], system reprymowany przez tetracyklinę [Gossen i wsp., Proc. Natl. Acad Sci. USA, 89: 5547-5551 (1992)], system indukowany przez tetracyklinę [Gossen i wsp., Science, 268: 1766-1769 (1995), patrz też Harvey i wsp., Curr. Opin. Chem. Biol., 2: 512-518 (1998)], system indukowany przez RU486 [Wang i wsp., Nat. Biotech., 15: 239-243 (1997) i Wang i wsp., Gene Ther., 4: 432-441 (1997)] oraz system indukowany przez rapamycynę [Magari i wsp., J. Clin. Invest., 100: 2865-2872 (1997)]. Jeszcze innymi typami indukowalnych promotorów, które mogą być przydatne w tym kontekście, są promotory regulowane przez specyficzny stan fizjologiczny, np. temperaturę, fazę ostrą, konkretny stan różnicowania komórki lub tylko w komórkach replikujących się dzielących się.
W innym wykonaniu użyty będzie natywny promotor transgenu. Natywny promotor może być korzystny gdy ekspresja transgenu musi naśladować ekspresję natywną. Natywny promotor może być użyty gdy ekspresja transgenu musi być regulowana czasowo lub rozwojowo, lub w sposób swoisty tkankowo, lub w odpowiedzi na konkretne bodźce transkrypcyjne. W dalszym wykonaniu, inne natywne elementy kontroli ekspresji, takie jak elementy wzmacniaczy, miejsca poliadenylacji lub sekwencje najwyższej zgodności Kozaka mogą być także wykorzystane do naśladowania natywnej ekspresji.
Inne wykonanie transgenu obejmuje transgen funkcjonalnie połączony z promotorem swoistym tkankowo. Na przykład, jeżeli pożądana jest ekspresja w mięśniu szkieletowym, zastosowany powinien być promotor aktywny w mięśniu. Należą do nich promotory genów kodujących szkieletową β-aktynp, lekki łańcuch 2A miozyny, dystrofinę, mięśniową kinazę kreatyny, a także syntetyczne promotory mięśniowe o aktywnościach wyższych, niż w naturalnie występujących promotorach (patrz Li i wsp., Nat. Biotech., 17: 241-245 (1999)). Przykłady promotorów, które są swoiste tkankowo znane są dla wątroby (albumina, Miyatake i wsp., J. Virol., 71: 5124-32 (1997); rdzeniowy promotor wirusa zapalenia wątroby typu B, Sandig i wsp., Gene Ther., 3: 1002-9 (1996); alfa-fetoproteina (AFP), Arbuthnot i wsp., Hum. Gene Ther., 7: 1503-14 (1996)), osteokalcyna kości (Stein i wsp., Mol. Biol. Rep., 24: 185-96 (1997)); sialoproteina kości (Chen i wsp., J. Bone. Miner. Res., 11: 654-64 (1996)), limfocytów (CD2, Hansal i wsp., J. Immunol., 161: 1063-8 (1998); ciężki łańcuch immunoglobuliny; łańcuch a receptora komórek T), neuronów takie, jak promotor swoistej dla neuronów enolazy (NSE) (Andersen i wsp., Cell. Mol. Neurobiol., 13: 503-15 (1993)), genu lekkiego łańcucha neurofilamentu (Piccioli i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 5611-5 (1991)), oraz swoistego dla neuronów genu vgf (Piccioli i wsp., Neuron, 15: 373-84 (1995)) i inne.
Ewentualnie, plazmidy niosące przydatne terapeutycznie transgeny mogą także zawierać markery selekcyjne lub geny reporterowe, do których mogą należeć geny kodujące oporność na, między innymi, genetycynę, hygromycynę lub puromycynę. Takie selekcyjne geny reporterowe lub markerowe (umieszczone poza genomem wirusa, który ma być odzyskany) mogą być wykorzystane do sygnalizacji obecności plazmidów w komórkach bakterii, np. przez oporność na ampicylinę. Do innych składników plazmidu może należeć miejsce startu replikacji. Wybór tych i innych promotorów i elementów wektorowych jest konwencjonalny i dostępnych jest wiele takich sekwencji [patrz np., Sambrook i wsp., i cytowane tam referencje].
Połączenie transgenu, promotora/wzmacniacza, oraz ITR 5' i 3' dla ułatwienia jest tu nazywane „minigenem”. Projektowanie takiego minigenu można przeprowadzić za pomocą konwencjonalnych technik.
3. Dostarczenia minigenu do pakującej komórki gospodarza
Minigen może być niesiony w dowolnym odpowiednim wektorze, np. plazmidzie, który jest dostarczany do komórki gospodarza. Plazmidy można skonstruować tak, aby nadawały się do replikacji i ewentualnie, integracji w komórkach prokariotycznych, komórkach ssaków lub w obu typach. Plazmidy te (lub inne wektory niosące 5'ITR AAV-heterologiczna cząsteczka-3'ITR) zawierają sekwencje umożliwiające replikację minigenu w eukariontach i/lub prokariontach oraz markery selekcyjne dla tych systemów. Markery selekcyjne lub geny reporterowe mogą obejmować geny kodujące oporność na, między innymi, genetycynę, hygromycynę lub puromycynę. Plazmidy mogą także zawierać pewne selekcyjne geny markerowe lub reporterowe, które można zastosować do sygnalizacji obecności wektorów w komórkach bakterii, takie jak oporność na ampicylinę. Do innych składników plazmidu może
PL 221 877 B1 należeć miejsce startu replikacji oraz amplikon, taki jak system amplikonu wykorzystujący antygen jądrowy wirusa Epsteina Barra. Ten system amplikonu lub inne podobne składniki amplikonu pozwalają na replikację episomalną w komórce w wysokiej liczbie kopii. Korzystnie, cząsteczka niosąca minigen jest transfekowana do komórki, gdzie może występować przejściowo. Alternatywnie, minigen (niosący 5' ITR AAV-heterologiczna cząsteczka-3'ITR) może być stabilnie zintegrowany z genomem komórki gospodarza, albo z chromosomem, albo jako episom. W niektórych wykonaniach minigen może być obecny w wielu kopiach, ewentualnie w postaci konkatamerów w układzie głowa do głowy, głowa do ogona lub ogon do ogona. Odpowiednie techniki transfekcji są znane i mogą łatwo być wykorzystane do dostarczenia minigenu do komórki gospodarza.
Na ogół, przy dostarczaniu wektora obejmującego minigen przez transfekcję, wektor dostarczany jest w ilości od około 5 μg do około 100 μg DNA, a korzystnie około 10 do około 50 μg DNA do około 1 x 104 do około 1 x 1013 komórek, a korzystnie około 105 komórek. Względne stosunki ilości DNA wektora do komórek gospodarza mogą jednak być dostosowane, biorąc pod uwagę takie czynniki, jak wybrany wektor, sposób dostarczenia i wybrane komórki gospodarza.
B. Sekwencje Rep i Cap
Poza minigenem, komórka gospodarza zawiera sekwencje kierujące wyrażaniem nowego białka kapsydu AAV (np. kapsydu AAV7 lub innego nowego AAV lub sztucznego białka kapsydu obejmującego fragment jednego lub więcej tych kapsydów) w komórce gospodarza oraz sekwencje rep tego samego serotypu, co serotyp ITR AAV znajdujących się w minigenie. Sekwencje cap i rep AAV można uzyskać niezależnie ze źródła AAV jak opisano powyżej i można wprowadzić do komórki gospodarza dowolnym sposobem znanym specjaliście tak, jak opisano powyżej. Ponadto, przy pseudotypowaniu nowego kapsydu AAV, sekwencje kodujące każde z niezbędnych białek rep mogą być dostarczone przez ten sam serotyp AAV, lub sekwencje kodujące białka rep mogą być dostarczone przez inne serotypy AAV (np. AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6 lub jeden z nowych zidentyfikowanych tu serotypów). Na przykład, sekwencje rep78/68 mogą pochodzić z AAV2, podczas gdy sekwencje rep52/40 mogą pochodzić z AAV1.
W jednym wykonaniu komórka gospodarza stabilnie zawiera białko kapsydu pod kontrolą odpowiedniego promotora, takiego, jak opisane powyżej. W tym wykonaniu, białko kapsydu jest wyrażane pod kontrolą promotora indukowalnego. W innym wykonaniu, białko kapsydu jest dostarczane do komórki gospodarza in trans. Przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, białka kapsydu mogą być dostarczane przez plazmid, który zawiera sekwencje niezbędne do kierowania ekspresją wybranego białka kapsydu w komórce gospodarza. Przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, plazmid niosący białko kapsydu niesie również inne sekwencje wymagane do pakowania rAAV, np. sekwencje rep.
Zatem w innym wykonaniu komórka gospodarza stabilnie zawiera sekwencje rep pod kontrolą odpowiedniego promotora, takiego jak opisane powyżej. W tym wykonaniu, niezbędne białka rep są wyrażane pod kontrolą promotora indukowalnego. W innym wykonaniu, białka rep są dostarczane do komórki gospodarza in trans. Przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, białka rep mogą być dostarczane przez plazmid, który zawiera sekwencje niezbędne do kierowania ekspresją wybranych białek rep w komórce gospodarza. Przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, plazmid niosący białko kapsydu niesie również inne sekwencje wymagane do pakowania rAAV, np. sekwencje rep i cap.
Zatem w jednym z wykonań, sekwencje rep i cap mogą być transfekowane do komórki gospodarza na jednej cząsteczce kwasu nukleinowego i istnieć stabilnie w komórce w postaci episomu. W innym wykonaniu, sekwencje rep i cap są stabilnie zintegrowane z genomem komórki. W innym wykonaniu sekwencje rep i cap są przejściowo wyrażane w komórce gospodarza. Na przykład, przydatna w takiej transfekcji cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje od 5' do 3' promotor, ewentualnie łącznik między promotorem a początkiem sekwencji genu rep, sekwencję genu rep AAV oraz sekwencję genu cap AAV.
Ewentualnie, sekwencje rep i/lub cap mogą być dostarczone na wektorze zawierającym inne sekwencje DNA, które mają być wprowadzone do komórek gospodarza. Na przykład, wektor może zawierać konstrukt rAAV obejmujący minigen. Wektor może obejmować jeden lub więcej genów kodujących funkcje pomocnicze, np. adenowirusowe białka E1, E2a i E4ORF6, oraz gen RNA VAI.
Promotor stosowany w tym konstrukcie może być dowolnym z konstytutywnych, indukowalnych lub natywnych promotorów znanych specjalistom lub omówionych powyżej. W jednym wykonaniu zastosowany jest promotor P5 AAV. W innym korzystnym wykonaniu, promotor rep jest promotorem
PL 221 877 B1 indukowalnym, jak omówiono to powyżej w związku z elementami regulacyjnymi transgenu. Jednym z korzystnych promotorów do wyrażania rep jest promotor T7. Wektor obejmujący gen rep regulowany przez promotor T7 i gen cap jest transfekowany lub transformowany do komórki, która konstytutywnie albo indukowalnie wyraża polimerazę T7. Patrz WO 98/10088, opublikowany 12 marca 1998.
Łącznik jest ewentualnym elementem konstrukcji wektora. Łącznik jest to sekwencja DNA wstawiona między promotorem a kodonem start ATG genu rep. Łącznik może mieć dowolny żądany charakter; to znaczy może być losową sekwencją nukleotydową lub alternatywnie, może on kodować produkt genu takiego, jak gen markerowy. Łącznik może zawierać geny, które typowo zawierają miejsca start/stop i poliA. Łącznik może być niekodującą sekwencją DNA z prokarionta lub eukarionta, powtarzalną sekwencją niekodującą, sekwencją kodującą bez sygnałów kontroli translacji lub sekwencją kodującą z sygnałami kontroli translacji. Dwoma przykładowymi źródłami sekwencji łącznikowej są sekwencje drabinki faga λ oraz sekwencje drabinki drożdży, które są dostępne w handlu, np. z Gibco lub Invitrogen. między innymi. Łącznik może mieć dowolną długość wystarczającą do obniżenia ekspresji produktów genów rep78 i rep8, pozostawiając ekspresję produktów genów rep52, rep40 oraz cap na normalnych poziomach. Długość łącznika może zatem wynosić od około 10 bp do około 10,0 kb, korzystnie w zakresie od około 100 bp do około 8,0 kb. Dla zmniejszenia możliwości rekombinacji, łącznik korzystnie ma długość poniżej 2 kb.
Chociaż cząsteczka(i) dostarczająca rep i cap mogą występować w komórce gospodarza przejściowo (tj. przez transfekcję), korzystne jest, żeby jedno lub więcej spośród białek rep i cap oraz promotor(y) kontrolujący ich ekspresję były stabilnie wyrażane w komórce gospodarza, np. jako episom lub przez integrację z chromosomem komórki gospodarza. Konstrukty takie są wytwarzane konwencjonalnymi technikami inżynierii genetycznej lub inżynierii rekombinacyjnej. Podczas, gdy opis ten dostarcza ilustrujących przykładów konkretnych konstruktów, przy wykorzystaniu dostarczonej tu informacji, specjalista w dziedzinie może wybrać i zaprojektować inne odpowiednie konstrukty stosując wybór łączników, promotorów P5 i innych elementów, w tym co najmniej jeden sygnał start i stop translacji, oraz ewentualny dodatek miejsc poliadenylacji.
W innym wykonaniu białko rep lub cap może być stabilnie dostarczane przez komórkę gospodarza.
C. Funkcje pomocnicze
Pakująca komórka gospodarza wymaga też funkcji pomocniczych w celu pakowania rAAV. Ewentualnie, funkcje te mogą być dostarczane przez wirusa opryszczki. Najkorzystniej, niezbędne funkcje pomocnicze są wszystkie dostarczane przez źródło adenowirusa pochodzącego od człowieka lub naczelnego innego niż człowiek, takiego jak te opisane powyżej i/lub są dostępne z szeregu źródeł, w tym American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA (USA). Komórce gospodarza dostarcza się i/lub zawiera ona produkt genu E1a, produkt genu E1b, produkt genu E2a i/lub produkt genu E4 ORF6. Komórka gospodarza może zawierać inne geny adenowirusowe takie, jak RNA VAI, geny te nie są jednak niezbędne. Żadne inne geny lub funkcje genów adenowirusa nie są obecne w komórce gospodarza.
Przez „DNA adenowirusa wyrażający produkt genu E1a” rozumie się dowolną sekwencję adenowirusa kodującą E1a lub dowolną funkcjonalną część E1a. DNA adenowirusa wyrażający produkt genu E2a oraz DNA adenowirusa wyrażający produkt genu E4 ORF6 są definiowane podobnie. Włączone są tu również dowolne allele lub inne modyfikacje genu adenowirusa lub jego funkcjonalnej części. Modyfikacje takie mogą być celowo wprowadzone przy pomocy konwencjonalnych technik inżynierii genetycznej lub mutagenezy w celu wzmocnienia w jakiś sposób funkcji adenowirusa lub mogą być jego naturalnie występującymi wariantami allelicznymi. Takie modyfikacje i sposoby manipulowania DNA dla uzyskania tych funkcji genów adenowirusa są znane specjalistom.
Produkty genów adenowirusa E1a, E1b, E2a i/lub E4ORF6, a także dowolne inne pożądane funkcje pomocnicze mogą być dostarczone z zastosowaniem dowolnych środków umożliwiających ich wyrażanie w komórce. Każda z sekwencji kodujących te produkty może być na osobnym wektorze, lub też jeden lub więcej genów może być na tym samym wektorze. Wektorem może być dowolny wektor znany w dziedzinie lub ujawniony powyżej, w tym plazmid, kosmid i wirus. Wprowadzenie do komórki gospodarza można osiągnąć dowolnymi środkami znanymi w dziedzinie lub ujawnionymi powyżej, w tym między innymi, przez transfekcję, infekcję, elektroporację, dostarczenie liposomów, techniki fuzji błonowej, opłaszczone DNA kulki o dużej prędkości, infekcję wirusową i fuzję protoplastów. Jeden lub więcej genów adenowirusa może być stabilnie zintegrowanych z genomem komórki gospodarza, stabilnie wyrażanych jako episomy, lub wyrażanych przejściowo. Wszystkie produkty genów mogą być
PL 221 877 B1 wyrażane przejściowo, na episomie lub stabilnie wintegrowane, albo niektóre spośród produktów genów mogą być wyrażane stabilnie, podczas gdy inne są wyrażane przejściowo. Ponadto, promotory każdego z genów adenowirusa mogą być wybrane niezależnie spośród promotorów, konstytutywnych, promotorów indukowalnych lub natywnych promotorów adenowirusowych. Promotory mogą być regulowane przez specyficzny stan fizjologiczny organizmu lub komórki (np. przez stan różnicowania lub w replikujących się lub będących w spoczynku komórkach) lub przez dodane z zewnątrz czynniki, przykładowo.
D. Komórki gospodarza i pakujące linie komórkowe
Sama komórka gospodarza może być wybrana spośród dowolnych organizmów biologicznych, w tym komórek prokariotycznych (np. bakteryjnych) i komórek eukariotycznych, w tym komórek owadzich, komórek drożdży i komórek ssaków. Szczególnie pożądane komórki gospodarza wybrane są spośród dowolnego gatunku ssaka, w tym, między innymi, komórek takich, jak A549, WEHI, 3T3, 10T1/2, BHK, MDCK, COS 1, COS 7, BSC 1, BSC 40, BMT 10, VERO, WI38, HeLa, komórki 293 (które wyrażają funkcjonalne E1 adenowirusa), Saos, C2C12, komórki L, HT1080, HepG2 i pierwotne komórki fibroblastów, hepatocytów i mioblastów pochodzące od ssaków, w tym, od człowieka, małpy, myszy, szczura, królika i chomika. Wybór gatunku ssaka dostarczającego komórek, ani typ komórki ssaka, tzn. fibroblast, hepatocyt, komórka nowotworowa itp. nie jest ograniczeniem wynalazku. Najbardziej pożądane komórki nie niosą żadnych genów adenowirusa poza E1, E2a i/lub E4 ORF6, ani nie zawierają żadnych innych genów wirusowych, które mogłyby spowodować rekombinację homologiczną lub zanieczyszczenie wirusem podczas wytwarzania rAAV; są one także zdolne do infekcji lub transfekcji DNA oraz wyrażania stransfekowanego DNA. W korzystnym wykonaniu, komórka gospodarza posiada rep i cap stabilnie transfekowane do komórki.
Jedną z przydatnych komórek gospodarza jest komórka gospodarza stabilnie stransformowana sekwencjami kodującymi rep i cap i stransfekowana DNA adenowirusa E1, E2a i E4ORF6 oraz konstruktem niosącym minigen tak, jak opisano powyżej. Podobnie, mogą być zastosowane komórki stabilnie wyrażające rep i/lub cap, takie, jak B-50 (PCT/US98/19463), lub opisane w Patencie USA nr 5,658,785. Inna pożądana komórka gospodarza zawiera minimalny adenowirusowy DNA wystarczający do wyrażania E4 ORF6. Jeszcze inne linie komórkowe można skonstruować wykorzystując nowe sekwencje rep AAV i/lub nowe sekwencje cap AAV.
Przygotowanie komórki gospodarza obejmuje techniki takie, jak składanie wybranych sekwencji DNA. Składanie to można przeprowadzić z zastosowaniem konwencjonalnych technik. Techniki takie obejmują cDNA i klonowanie genomowe, które są dobrze znane i opisane w Sambrook i wsp., cytowanym powyżej, zastosowanie nakładających się sekwencji oligonukleotydowych genomów adenowirusa i genomów AAV, w połączeniu z łańcuchową reakcją polimerazy, metody syntetyczne i dowolne inne odpowiednie sposoby, które dostarczają pożądaną sekwencję nukleotydową.
Cząsteczki (takie jak plazmidy i wirusy) można wprowadzić do komórki gospodarza z zastosowaniem technik znanych specjaliście i omawianych w tym opisie. Stosowane są standardowe techniki transfekcji, np. transfekcja CaPC4 lub elektroporacja i/lub infekcja hybrydowymi wektorami adenowirus/AAV do linii komórkowych, takich jak ludzka zarodkowa linia komórek nerki HEK 293 (linia ludzkich komórek nerki zawierających funkcjonalny gen E1 adenowirusa dostarczający działających w układzie trans białek E1).
Te nowe oparte na AAV wektory, które są wytworzone przez specjalistę, są korzystne dla dostarczania genów do wybranych komórek gospodarza i pacjentów poddanych terapii genowej, ponieważ nie odnaleziono w populacji ludzkiej przeciwciał neutralizujących przeciwko AAV7. Ponadto, początkowe badania wykazują brak przeciwciał neutralizujących w populacjach makaka i szympansa oraz mniej niż 15% reaktywności krzyżowej AAV7 u rezusów, gatunku, z którego wyizolowano ten serotyp. Specjalista z łatwością może wytworzyć inne wektory wirusowe rAAV zawierające dostarczone tu białka kapsydu AAV7 przy zastosowaniu szeregu technik znanych specjalistom. Podobnie można wytworzyć jeszcze inne wektory wirusowe rAAV zawierające sekwencję AAV7 i kapsydy AAV innego serotypu. Podobne korzyści związane są z użyciem wektorów opartych na innych nowych AAV.
Zatem specjalista z łatwością zrozumie, że sekwencje AAV7 mogą być z łatwością dostosowane do zastosowania w tych i innych systemach wektorów wirusowych do dostarczania genów in vitro, ex vivo lub in vivo. Podobnie, specjalista może łatwo wybrać inne fragmenty nowego genomu AAV do zastosowania w szeregu systemów wektorowych opartych na rAAV, ale nie na rAAV. Do takich systemów wektorowych mogą między innymi należeć np. lentiwirusy, retrowirusy, wirusy ospy, wirusy krowianki i systemy adenowirusowe. Wektory można wytworzyć z zastosowaniem sekwencji nukleotyPL 221 877 B1 dowych i aminokwasowych nowych AAV. Wektory takie są przydatne dla różnych celów, w tym, do dostarczania cząsteczek terapeutycznych i do stosowania w reżimach szczepień. Szczególnie pożądane do dostarczania cząsteczek terapeutycznych są zrekombinowane AAV zawierające kapsydy nowych AAV. Te, lub inne konstrukty wektorowe zawierające nowe sekwencje AAV mogą być stosowane w reżimach szczepień, np. do współdostarczania cytokiny, lub do dostarczania samego immunogenu.
III Zrekombinowane wektory i ich zastosowania
Przy zastosowaniu opisanych tu technik specjalista może wytworzyć rAAV mający kapsyd nowego serotypu lub nowy kapsyd zawierający jeden lub więcej nowych fragmentów serotypu AAV wytworzonego sposobem według wynalazku. W jednym wykonaniu, może być zastosowany pełnej długości kapsyd z pojedynczego serotypu, np. AAV7 [SEKW. NR. ID.: 2]. W innym wykonaniu można wytworzyć pełnej długości kapsyd zawierający jeden lub więcej fragmentów nowego serotypu sfuzowanych z sekwencjami z innego wybranego serotypu AAV. Na przykład, rAAV może zawierać jedną lub więcej nowych sekwencji regionów hiperzmiennych z serotypu AAV według wynalazku. Alternatywnie, unikatowe serotypy AAV można zastosować w konstruktach zawierających inne sekwencje wirusowe lub niewirusowe.
Specjalista w dziedzinie z łatwością zauważy, że pewne serotypy mogą być szczególnie dobrze dopasowane do pewnych zastosowań. Na przykład, wektory oparte na kapsydach AAV7 są szczególnie przydatne do stosowania w mięśniach, podczas gdy wektory oparte na kapsydach rh.10(44-2) według wynalazku są szczególnie przydatne do stosowania w płucach. Zastosowania takich wektorów nie są w ten sposób ograniczone i specjalista może wykorzystać te wektory do dostarczania do innych typów komórek, tkanek lub narządów. Ponadto, wektory oparte na innych kapsydach mogą być stosowane do dostarczania do tych, lub innych komórek, tkanek lub narządów.
A. Dostarczanie transgenu
Sposób dostarczania transgenu do gospodarza, który obejmuje transfekcję lub infekcję wybranej komórki gospodarza wektorem wytworzonym z sekwencji AAV. Sposoby dostarczania są dobrze znane specjalistom.
Sposób wprowadzania za pośrednictwem AAV transgenu do gospodarza obejmuje transfekcję lub infekcję wybranej komórki gospodarza zrekombinowanym wektorem wirusowym zawierającym wybrany transgen pod kontrolą sekwencji kierujących ekspresją jego i białek kapsydu AAV.
Ewentualnie, próbka od gospodarza może być najpierw zbadana pod kątem obecności przeciwciał przeciwko wybranemu serotypowi AAV. Specjalistom jest dobrze znanych szereg różnych formatów oznaczeń do wykrywania przeciwciał neutralizujących. Patrz np. Fisher i wsp., Nature Med., 3 (3): 306-312 (marzec 1997) i W. C. Manning i wsp., Human Gene Therapy, 9: 477-485 (1 marzec, 1998). Wyniki tego oznaczenia mogą być wykorzystane do określania, który wektor AAV zawierający białka kapsydu konkretnego serotypu będzie korzystny do dostarczenia, np. na podstawie nieobecności przeciwciał neutralizujących swoistych wobec tego serotypu kapsydu.
W jednym aspekcie tego sposobu, dostarczenie wektora z wybranymi białkami kapsydu AAV może poprzedzać lub następować po dostarczeniu genu za pośrednictwem wektora z białkiem kapsydu AAV innego serotypu. Podobnie, dostarczenie wektora z innymi nowymi białkami kapsydu AAV może poprzedzać lub następować po dostarczeniu genu za pośrednictwem wektora z białkiem kapsydu AAV innego serotypu. Dostarczenie genów za pośrednictwem wektorów rAAV może zatem być stosowane do wielokrotnego dostarczania genów do wybranej komórki gospodarza. Podawane później wektory rAAV niosą ten sam transgen, co pierwszy wektor rAAV, lecz zawierają białka kapsydu serotypów różnych od tego z pierwszego wektora. Na przykład, jeżeli pierwszy wektor ma białka kapsydu AAV7 [SEKW. NR ID.: 2], podawane później wektory mogą mieć białka kapsydu wybrane spośród innych serotypów, w tym, AAV1, AAV2, AAV3A, AAV3B, AAV4, AAV6, AAV10, AAV11, i AAV12, lub któregokolwiek z innych nowych kapsydów AAV zidentyfikowanych tu, w tym między innymi: A3.1, H2, H6, C1, C2, C5, A3-3, A3-7, A3-4, A3-5, 3.3b, 223.4, 223-5, 223-10, 223-2, 223-7, 223-6, 44-1, 44-5, 44-2, 42-15, 42-8, 42-13, 42-3A, 42-4, 42-5A, 42-1B, 42-5B, 43-1, 43-12, 43-5, 43-21, 43-25, 43-20, 24.1, 42.2, 7.2, 27.3, 16.3, 42.10, 42-3B, 42-11, F1, F5, F3, 42-6B, i/lub 42-12.
Opisane powyżej zrekombinowane wektory mogą być dostarczone do komórek gospodarza zgodnie z opublikowanymi sposobami. rAAV zawieszony w zgodnym fizjologicznie nośniku, może być podany pacjentowi - człowiekowi lub ssakowi innemu niż człowiek. Odpowiednie nośniki mogą być łatwo wybrane przez specjalistę zgodnie ze wskazaniami, dla których ukierunkowany jest transfer wirusa. Na przykład, jednym z odpowiednich nośników jest sól fizjologiczna, która może być formuło18
PL 221 877 B1 wana z szeregiem roztworów buforujących (np. sól fizjologiczna buforowana fosforanem). Do innych przykładowych nośników należą jałowy roztwór soli fizjologicznej, laktoza, sacharoza, fosforan wapnia, żelatyna, dekstran, agar, pektyna, olej z orzeszków ziemnych, olej sezamowy i woda. Ewentualnie, kompozycje mogą zawierać, poza rAAV i nośnikiem(-ami) inne konwencjonalne składniki farmaceutyczne, takie jak środki konserwujące lub chemiczne środki stabilizujące. Do odpowiednich przykładowych środków konserwujących należą chlorobutanol, sorbinian potasu, kwas sorbinowy, ditlenek siarki, galusan propylu, parabeny, etylowanilina, gliceryna, fenol i parachlorofenol. Do odpowiednich chemicznych środków stabilizujących należą żelatyna i albumina.
Wektory wirusowe są podawane w ilościach wystarczających do transfekowania komórek i dostarczenia odpowiedniego poziomu przeniesienia i ekspresji genu dla uzyskania korzyści terapeutycznej bez szkodliwych skutków ubocznych lub z dopuszczalnymi medycznie skutkami fizjologicznymi, które mogą być określone przez specjalistę w dziedzinie medycyny. Do konwencjonalnych i dopuszczalnych farmaceutycznie dróg podawania należą, ale nie wyłącznie, bezpośrednie podanie do wybranego narządu (np. dostarczenie do żyły wrotnej do wątroby), doustne, inhalacja (w tym droga wewnątrznosowa i wewnątrztchawicza), dooczne, dożylne, domięśniowe, podskórne, śródskórne i inne pozajelitowe drogi podawania. Gdy jest to pożądane można łączyć różne drogi podawania.
Dawkowanie wektora wirusowego będzie zależeć głównie od czynników takich, jak leczone schorzenie, wiek, waga i zdrowie pacjenta i może zatem zmieniać się zależnie od pacjenta. Na przykład, skuteczne terapeutycznie dawkowanie wektora wirusowego u człowieka mieści się z reguły w zakresie od około 1 ml do około 100 ml roztworu zawierającego stężenia od około 1 x 109 do 1 x 1016 genomów wektora wirusowego. Korzystna dawka u człowieka może wynosić od około 1 x 1013 do około 1 x 1016 genomów AAV. Dawkowanie będzie dostosowane do zrównoważenia korzyści terapeutycznej z jakimikolwiek skutkami ubocznymi, a dawkowanie to może zmieniać się w zależności od celu terapeutycznego, w którym stosowany jest zrekombinowany wektor. Poziomy ekspresji transgenu można monitorować w celu ustalenia częstości dawkowania uzyskanych wektorów wirusowych, korzystnie wektorów AAV zawierających minigen. Ewentualnie, reżimy dawkowania podobne do opisanych tu dla celów terapeutycznych mogą być stosowane do immunizacji z zastosowaniem kompozycji według wynalazku.
Przykłady produktów terapeutycznych i produktów immunogennych do dostarczania wektorami zawierającymi AAV dostarczone są poniżej. Wektory te mogą być stosowane w szeregu różnych reżimów terapeutycznych lub szczepień tak, jak tu opisano. Dodatkowo, wektory te mogą być dostarczane w połączeniu z jednym lub więcej innymi wektorami lub składnikami czynnymi w żądanym reżimie terapeutycznym i/lub szczepień.
B. Transgeny terapeutyczne
Do użytecznych produktów terapeutycznych kodowanych przez transgen należą hormony i czynniki wzrostu i różnicowania, w tym, ale nie wyłącznie, insulina, glukagon, hormon wzrostu (GH), hormon przytarczycy (PTH), czynnik uwalniający hormon wzrostu (GRF), hormon folikulotropowy (FSH), hormon luteinizujący (LH), ludzka gonadotropina kosmówkowa (hCG), naczyniowo-śródbłonkowy czynnik wzrostu (VEGF), angiopoetyny, angiostatyna, czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów i makrofagów (GCSF), erytropoetyna (EPO), czynnik wzrostu tkanki łącznej (CTGF), zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów (bFGF), kwaśny czynnik wzrostu fibroblastów (aFGF), naskórkowy czynnik wzrostu (EGF), transformujący czynnik wzrostu a (TGFa), płytkowy czynnik wzrostu (PDGF), insulinopodobne czynniki wzrostu I i II (IGF-I i IGF-II), dowolny z nadrodziny transformujących czynników wzrostu β, w tym TGF3, aktywiny, inhibiny lub dowolne z białek morfogenezy kości (BMP) BMP 1-15, dowolny z rodziny czynników wzrostu i różnicowania (NDF) hereguliny/neureguliny/ARIA/neu, czynnik wzrostu nerwu (NGF), czynnik neutroficzny pochodzenia mózgowego (BDNF), neurotrofiny NT-3 i NT-4/5, rzęskowy czynnik neurotroficzny (CNTF), czynnik neutroficzny pochodzący z linii komórek gleju (GDNF), neurturyna, agrina, dowolny z rodziny semaforyn/kolapsyn, netryna-1 i netryna-2, czynnik wzrostu hepatocytów (HGF), efryny, noggina, sonie hedgehog i hydroksylaza tyrozynowa.
Do innych użytecznych produktów transgenu należą białka regulujące układ odpornościowy, w tym, ale nie wyłącznie, cytokiny i limfokiny, takie jak trombopoetyna (TPO), interleukiny (IL) IL-1 do IL-25 (w tym, IL-2, IL-4, IL-12 i IL-18), białko chemotaktyczne monocytów, czynnik hamujący białaczkę, czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów i makrofagów, ligand Fas, czynnik martwicy nowotworów a i β, interferony a, β i γ, czynnik komórek macierzystych, ligand flk-2/flt3. Użyteczne są również produkty genów wytwarzane przez ludzki układ odpornościowy. Należą do nich, ale nie wyPL 221 877 B1 łącznie, immunoglobuliny IgG, IgM, IgA, IgD i IgE, chimeryczne immunoglobuliny, humanizowane przeciwciała, przeciwciała jednołańcuchowe, receptory limfocytów T, chimeryczne receptory limfocytów T, jednołańcuchowe receptory limfocytów T, cząsteczki MHC klasy I i II, a także skonstruowane metodami inżynierii immunoglobuliny i cząsteczki MHC. Do użytecznych produktów genów należą także białka regulujące dopełniacz, takie jak białka regulujące dopełniacz, białko kofaktora błonowego (MCP), czynnik przyspieszający rozpad (DAF), CR1, CF2 i CD59.
Do jeszcze innych użytecznych produktów genów należą dowolne spośród receptorów hormonów, czynników wzrostu, cytokin, limfokin, białek regulatorowych i białek układu odpornościowego. Receptory regulacji cholesterolu obejmują receptor lipoproteiny o małej gęstości (LDL), receptor lipoproteiny o wysokiej gęstości (HDL), receptor lipoproteiny bardzo małej gęstości (VLDL) i receptor usuwający resztki. Produktami takich genów mogą być przedstawiciele nadrodziny receptorów hormonów sterydowych, w tym receptory glukokortykoidów i receptory estrogenów, receptory witaminy D inne receptory jądrowe. Dodatkowo, do użytecznych produktów genów należą czynniki transkrypcyjne, takie jak jun, fos, max, mad, czynnik odpowiedzi na surowicę (SRF), AP-1, AP-2, myb, MyoD i miogenina, białka zawierające ETS-box, TFE3, E2F, ATF1, ATF2, ATF3, ATF4, ZF5, NFAT, CREB, HNF-4, C/EBP, SP1, białka wiążące motyw CCAAT, czynnik regulacji przez interferon (IRF-1), białko guza Wilmsa, białko wiążące ETS, STAT, białka wiążące motyw GATA, np. GATA-3 i rodzina forkhead białek z motywem uskrzydlonej helisy.
Inne użyteczne produkty genów obejmują syntetazę karbamoilową I, transkarbamylazę ornitynową, syntetazę argininobursztynianową, liazę argininobursztynianową, arginazę, hydrolazę fumaryloacetooctanową, hydroksylazę fenyloalaninową, alfa-1 antytrypsynę, glukozo-6-fosfatazę, deaminazę porfobilinogenu, czynnik VIII, czynnik IX, syntazę beta-cystationu, dekarboksylazę rozgałęzionych ketokwasów, albuminę, dehydrogenazę izowalerylo-CoA, karboksylazę propionylo-CoA, mutazę metylo-malonylo CoA, dehydrogenazę glutarylo CoA, insulinę, beta-glukozydazę, karboksylazę pirogronianową, fosforylazę wątrobową, kinazę fosforylazową, dekarboksylazę glicynową, białko H, białko T, transbłonowy regulator mukowiscydozy (CFTR) i sekwencję cDNA dystrofiny. Do jeszcze innych użytecznych produktów genów należą enzymy, takie jakie mogą być przydatne w terapii zastępczej, która jest użyteczna w szeregu schorzeń wynikających z defektu aktywności enzymu. Na przykład, enzymy zawierające mannozo-6-fosforan mogą być przydatne w leczeniu chorób magazynowania lizosomalnego (np. odpowiedni gen kodujący β-glukuronidazę (GUSB)).
Do innych użytecznych produktów genów należą polipeptydy niewystępujące naturalnie, takie jak polipeptydy chimeryczne lub hybrydowe mające sekwencję aminokwasową niewystępującą naturalnie, zawierającą insercje, delecje lub podstawienia aminokwasowe. Na przykład, jednołańcuchowe immunoglobuliny wytworzone metodami inżynierii mogłyby być przydatne u pewnych pacjentów z obniżoną odpornością. Inne typy sekwencji genowych niewystępujących naturalnie obejmują cząsteczki antysensowne i katalityczne kwasy nukleinowe, takie jak rybozymy, które mogłyby być stosowane do zmniejszenia nadekspresji cząsteczki docelowej.
Zmniejszenie, i/lub regulacja ekspresji genu są szczególnie pożądane przy leczeniu schorzeń hiperproliferacyjnych cechujących się hiperproliferacją komórek tak, jak w chorobie nowotworowej i łuszczycy. Docelowe polipeptydy obejmują polipeptydy, które są wytwarzane wyłączn ie lub na wyższych poziomach w komórkach hiperproliferujących w porównaniu z komórkami prawidłowymi. Do antygenów docelowych należą polipeptydy kodowane przez onkogeny, takie jak myb, myc, fyn i gen translokacji bcr/abl, ras, src, P53, neu, trk i EGRF. Oprócz produktów onkogenów jako antygeny docelowe są stosowane docelowe polipeptydy do reżimów leczenia przeciwnowotworowego i ochronnego obejmujące regiony zmienne przeciwciał wytwarzanych przez chłoniaki limfocytów B oraz regiony zmienne receptorów T chłoniaków limfocytów T, które, w niektórych wykonaniach, są też stosowane jako antygeny docelowe w chorobach autoimmunologicznych. Jako polipeptydy docelowe mogą być użyte inne polipeptydy związane z nowotworami takie, jak polipeptydy, których podwyższony poziom stwierdzany jest w komórkach nowotworowych, jak polipeptyd rozpoznawany przez przeciwciało monoklonalne 17-1A i polipeptydy wiążące kwasy foliowy.
Do innych odpowiednich polipeptydów i białek terapeutycznych należą te, które mogą być przydatne w leczeniu osobników cierpiących na choroby i schorzenia autoimmunologiczne nadając szeroką odpowiedź odporności ochronnej przeciwko celom związanym z odpowiedzią autoimmunologiczną, w tym receptorom komórkowym i komórkom wytwarzającym przeciwciała skierowane przeciwko „swoim” celom. Do chorób autoimmunologicznych, w których pośredniczą limfocyty T należą reumatoidalne zapalenie stawów (RA), stwardnienie rozsiane (MS), zespół Sjorgena, sarkoidoza, cukrzyca insulino20
PL 221 877 B1 zależna (IDDM), autoimmunologiczne zapalenie tarczycy (wole Hashimoto), reaktywne zapalenie stawów, zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa, twardzina skóry, zapalenie wielomięśniowe, zapalenie skórno-mięśniowe, łuszczyca, zapalenie naczyń, ziarniniak Wegenera, choroba Crohna i wrzodziejące zapalenie okrężnicy. Każda z tych chorób cechuje się występowaniem receptorów limfocytów T (TCR), które wiążą się z antygenami endogennymi i zapoczątkowują kaskadę zapalną związaną z chorobą autoimmunologiczną.
C. Transgeny immunogenne
Alternatywnie lub dodatkowo, wektory mogą zawierać sekwencje AAV oraz transgen kodujący peptyd, polipeptyd lub białko wywołujące odpowiedź odpornościową przeciwko wybranemu immunogenowi. Na przykład, immunogeny mogą być wybrane spośród szeregu rodzin wirusów. Do przykładów celowych rodzin wirusów, przeciwko którym celowa byłaby odpowiedź odpornościowa należą: rodzina pikornawirusów, która obejmuje rodzaje rhinowirusów, odpowiedzialnych za około 50% przypadków przeziębienia, rodzaj enterowirusów, do którego należą poliowirusy, wirusy Coxsackie, echowirusy oraz enterowirusy ludzkie, takie jak wirus zapalenia wątroby typu A oraz rodzaj aptowirusów, które są odpowiedzialne za pryszczycę, głównie u zwierząt innych niż człowiek. W rodzinie pikornawirusów do antygenów docelowych należą VP1, VP2, VP3, VP4 i VPG. Inna rodzina wirusów obejmuje rodzinę kaliciwirusów, która obejmuje grupę wirusów Norwalk, które są istotnym czynnikiem sprawczym epidemicznego zapalenia żołądka i jelit. Jeszcze inną rodziną wirusów wskazaną w zastosowaniu do kierowania antygenów do indukowania odpowiedzi odpornościowej u ludzi i innych zwierząt jest rodzina togawirusów, do której należy rodzaj alfawirus, który obejmuje wirusy Sindbis, wirus RossRiver, wirusy zapalenia mózgu koni i wirus Wenezuelski, Wschodni i Zachodni, oraz rubiwirus, w tym, wirus różyczki. Do rodziny Flaviviridae należą wirusy denga, żółtej febry, japońskiego zapalenia mózgu, zapalenia mózgu St. Louis i wirusy kleszczowego zapalenia mózgu. Inne antygeny docelowe można wytworzyć z rodziny wirusa zapalenia wątroby typu C lub koronawirusów, która obejmuje szereg wirusów zwierząt innych niż człowiek, takich jak zakaźny wirus zapalenia oskrzeli (drobiu), wirus zapalenia żołądka i jelit świń, wirus hemaglutynacyjnego zapalenia mózgu i rdzenia świń, wirus zakaźnego zapalenia otrzewnej kotów, jelitowy koronawirus kotów, koronawirus psów oraz ludzkie koronawirusy dróg oddechowych, które mogą powodować przeziębienia i/lub zapalenie wątroby inne niż typu A, B lub C. W rodzinie koronawirusów do antygenów docelowych należą E1 (zwany również M lub białkiem macierzy), E2 (zwany również S lub białkiem iglicy), E3 (zwany również HE lub hemaglutyno-elterozą), glikoproteina (niewystępująca u wszystkich koronawirusów) lub N (nukleokapsyd). Jeszcze inne antygeny mogą być skierowane przeciwko rodzinie rabdowirusów, do której należy rodzaj vesiculovirus (np. wirus pęcherzykowatego zapalenia jamy ustnej) i rodzaj lyssavirus (np. wścieklizny). W rodzinie rabdowirusów odpowiednie antygeny mogą pochodzić z białka G lub białka N. Rodzina filowirusów, do której należą wirusy gorączki krwotocznej takie, jak Marburg lub Ebola może być odpowiednim źródłem antygenów. Do rodziny paramyksowirusów należy wirus grypy rzekomej typu 1, wirus grypy rzekomej typu 3, wirus grypy rzekomej bydła typu 3, rubulawirus (wirus świnki), wirus grypy rzekomej typu 2, wirus grypy rzekomej typu 4, wirus choroby Newcastle kurcząt, wirus księgosuszu bydła, morbiliwirus, w tym wirus odry i nosówki psów oraz pneumowirus, w tym syncytialny wirus oddechowy. Wirus grypy zaliczany jest do grupy ortomyksowirusów i jest odpowiednim źródłem antygenu (np. białko HA, białko NI). Do rodziny bunyawirusów należą rodzaje bunyawirus (zapalenie mózgu Kalifornia, La Crosse), flebowirus (gorączka Rift Valley), hantawirus (puremala jest wirusem gorączki krwotocznej), nairowirus (choroba owiec Nairobi) i szereg niesklasyfikowanych bungawirusów. Rodzina arenawirusów dostarcza źródła antygenów przeciwko wirusowi LCM i gorączki Lassa. Do rodziny reowirusów należą rodzaje reowirus, rotawirus (powodujący ostre zapalenie żołądka i jelit u dzieci), orbiwirusy i kultiwirusy (gorączka kleszczowa Colorado, Lebombo (ludzie), zapalenie mózgu koni, niebieski język).
Do rodziny retrowirusów należy podrodzina onkowirusów, która obejmuje, takie wirusy chorób ludzkich i weterynaryjnych, jak wirus białaczki kotów HTLVI i HTLVII, lentiwirus (który obejmuje ludzki wirus braku odporności (HIV), małpi wirus braku odporności (SIV), koci wirus braku odporności (FIV), wirus zakaźnej anemii koni i spumawirus). Dla HIV i SIV opisano wiele odpowiednich antygenów, które można łatwo wybrać. Przykłady odpowiednich antygenów HIV i SIV obejmują, ale nie wyłącznie, białka gag, pol, Vif, Vpx, VPR, Env, Tat i Rev oraz różne ich fragmenty. Ponadto opisano wiele modyfikacji tych antygenów. Odpowiednie do tego celu antygeny są znane specjalistom. Na przykład, można wybrać sekwencję kodującą, między innymi białkami, gag, pol, Vif i Vpr, Env, Tat i Rev. Patrz np. modyfikowane białko gag opisane w opisie patentowym USA nr 5,972,596. Patrz też białka SIV i HIV
PL 221 877 B1 opisane przez D. H. Barouch i wsp. J. Virol., 75 (5): 2462-2467 (marzec 2001) i R. R. Amara, i wsp., Science, 292: 69-74 (6 kwietnia 2001). Białka te lub ich podjednostki można dostarczyć same, lub w kombinacji za pośrednictwem osobnych wektorów lub na jednym wektorze.
Rodzina papowawirusów obejmuje podrodziny poliomawirusów (wirusy BKU i JCU) oraz podrodzinę papillomawirusów (związaną z nowotworami lub złośliwym rozwojem brodawczaków). Rodzina adenowirusów obejmuje wirusy (EX, AD7, ARD, O.B.), które wywołują choroby dróg oddechowych i/lub zapalenie jelita. Do rodziny parwowirusów należą koci parwowirus (zapalenie jelita kotów), wirus leukocytopenii kotów, psi parwowirus i parwowirus świń. Do rodziny herpeswirusów należy podrodzina alphaherpesvirinae obejmująca rodzaje simplexvirus (HSVI, HSVII), varicellovirus (wścieklizna rzekoma, półpasiec) oraz podrodzina betaherpesvirinae obejmująca rodzaj cytomegalowirus (HCMV, muromegalovirus) i podrodzina gammaherpesvirinae obejmująca rodzaje lymphocryptovirus, EBV (chłoniak Burkitta), wirus zapalenia nosa i tchawicy, wirus choroby Mareka i rhadinovirus. Do rodziny pokswirusów należy podrodzina chordopoxvirinae obejmująca rodzaje orthopoxvirus (ospa (ospa prawdziwa) i krowianka (ospa bydlęca)), parapoxvirus, avipoxvirus, capripoxvirus, leporipoxvirus, suipoxvirus i podrodzina entomopoxvirinae. Do rodziny hepadnawirusów należy wirus zapalenia wątroby typu B. Jednym z niesklasyfikowanych wirusów, który może być odpowiednim źródłem antygenów jest wirus zapalenia wątroby delta. Jeszcze inne źródła wirusowe mogą obejmować wirus zakaźnej choroby kaletki ptaków i wirus zespołu oddechowego i rozrodczego świń. Do rodziny alfawirusów należy wirus zapalenia tętnicy koni i różne wirusy zapalenia mózgu.
Immunogeny są użyteczne do immunizacji człowieka lub zwierzęcia innego niż człowiek przeciwko innym patogenom obejmującym bakterie, grzyby, mikroorganizmy pasożytnicze lub pasożyty wielokomórkowe zakażające człowieka i inne kręgowce, lub z komórki nowotworowej lub komórki guza. Przykłady patogenów bakteryjnych obejmują patogenne gram-dodatnie ziarniaki, w tym pneumokoki, gronkowce i paciorkowce. Patogenne gram-ujemne ziarniaki obejmują meningokoki i gonokoki. Patogenne jelitowe laseczki gram-ujemne obejmują enterobacteriaceae; pseudomonas, acinetobacteria i eikenella; melioidoza; salmonella; shigella; pałeczki hemofilne; moraxella; H. ducreyi (wywołująca wrzód weneryczny); pałeczkę brucelozy; Francisella tularensis (wywołująca tularemię); yersinia (pasteurella); Streptobacillus moniliformis (zarazek gorączki ukąszenia szczura) i śrubowiec; gram dodatnie laseczki obejmują pałeczkę listeriozy; włoskowiec różycy; Corynebacterium diphtheria (błonica); cholerę; B. anthracis (wąglik); donowanozę (ziarniak pachwinowy); i bartonellozę. Do chorób wywoływanych przez patogenne bakterie beztlenowe należą tężec, botulizm, zakażenia innymi laseczkami; gruźlica; trąd i inne mykobakterie. Do chorób wywoływanych przez patogenne krętki należy kiła, krętkowica, frambezja, pinta i kiła endemiczna oraz leptospiroza. Do innych zakażeń wywoływanych przez wyższe bakterie patogenne i grzyby patogenne należą promienica; nokardioza; kryptokokoza, drożdżyca wywołana przez Blastomyces, histoplasmoza i kokcydioidomykoza; kandydoza, grzybica kropidlakowa, mukormykoza; sporotrychoza; parakokcydioidomykoza, petriellidioza, torulopsoza, mycetoma i chromoblastomykoza i grzybica skóry. Do zakażeń riketsjami należą dur plamisty, gorączka plamista Gór Skalistych, gorączka Q i zakażenie Rickettsia akari. Do przykładów zakażeń mykoplazmami i chlamydiami należą mykoplazma zapalenia płuc, ziarnica weneryczna pachwin, papuzica i okołoporodowe zakażenia chlamydiami. Do patogennych eukariontów należą patogenne pierwotniaki i robaki, zaś do wywoływanych przez nie zakażeń należą pełzakowica, malaria, leiszmanioza, trypanosomatoza, toksoplazmoza, Pneumocystis carinii, Trichans, Toxoplasma gondii, babeszjoza, lamblioza, włośnica, filarioza, schistosomatoza, zakażenia nicieniami, przywrami i tasiemcami.
Wiele spośród tych organizmów i/lub wytwarzanych przez nie toksyn zostało zidentyfikowane przez Centra Zwalczania Chorób Zakaźnych [Centers for Disease Control (CDC), Department of Heath and Human Services, USA] jako czynniki mające potencjalne zastosowanie w atakach biologicznych. Na przykład, niektóre z tych czynników biologicznych obejmują Bacillus anthracis (wąglik), Clostridium botulinum i jego toksynę (botulizm), Yersinia pestis (dżuma), ospę prawdziwą, Francisella tularensis (tularemia) i wirusową gorączkę krwotoczną, z których wszystkie są obecnie zaliczane do czynników kategorii A; Coxiella burnetti (gorączka Q); Brucella species (bruceloza), Burkholderia mallei (nosacizna), Ricinus communis i jego toksyna (rycyna, toksyna rącznika), Clostridium perfringens i jego toksyna (toksyna epsilon), Staphylococcus species i ich toksyny (enterotoksyna B), z których wszystkie są obecnie zaliczane do kategorii B; oraz wirus Nipan i hantawirusy, które są obecnie zaliczane do kategorii C. Ponadto, inne organizmy, które są tak sklasyfikowane lub sklasyfikowane inaczej mogą być zidentyfikowane i/lub zastosowane w tym celu w przyszłości. Łatwo można zauważyć, że wektory wirusowe i inne konstrukty tu opisane, są przydatne w dostarczaniu antygenów z tych or22
PL 221 877 B1 ganizmów, wirusów, ich toksyn lub innych produktów ubocznych, co zapobiegnie i/lub wyleczy zakażenie lub inne niepożądane reakcje na te czynniki biologiczne.
Podanie wektorów w celu dostarczenia immunogenów przeciwko zmiennemu regionowi limfocytów T wywołuje odpowiedź odpornościową, w tym CTL dla wyeliminowania tych limfocytów T. W reumatoidalnym zapaleniu stawów (RA) scharakteryzowano kilka konkretnych regionów zmiennych receptorów limfocytów T (TCR) związanych z chorobą. Do tych TCR należą V-3, V-14, V-17 i Va-17. Dostarczenie sekwencji kwasu nukleinowego kodującej przynajmniej jeden z tych polipeptydów wywoła zatem odpowiedź odpornościową skierowaną przeciwko limfocytom T związanym z RA. W stwardnieniu rozsianym (MS) scharakteryzowano kilka konkretnych regionów zmiennych receptorów limfocytów T (TCR) związanych z chorobą. Do tych TCR należą V-7 i Va-10. Dostarczenie sekwencji kwasu nukleinowego kodującej przynajmniej jeden z tych polipeptydów wywoła zatem odpowiedź odpornościową skierowaną przeciwko limfocytom T związanym z MS. W twardzinie skóry scharakteryzowano kilka konkretnych regionów zmiennych receptorów limfocytów T (TCR) związanych z chorobą. Do tych TCR należą V-6, V-8, V-14 i Va-16, Va-3C, Va-7, Va-14, Va-15, Va-16, Va-28 i Va-12. Dostarczenie sekwencji kwasu nukleinowego kodującej przynajmniej jeden z tych polipeptydów wywoła zatem odpowiedź odpornościową skierowaną przeciwko limfocytom T związanym z twardziną skóry.
Ewentualnie, wektory zawierające sekwencje AAV można dostarczyć z zastosowaniem reżimu dawki podstawowej i dawki przypominającej. Szereg takich reżimów opisano w dziedzinie i można je łatwo wybrać. Patrz np., WO 00/11140.
Takie reżimy dawki podstawowej i dawki przypominającej typowo obejmują podanie wektora opartego na DNA (np. plazmidu) dla przygotowania układu odpornościowego na drugie, przypominające podanie tradycyjnego antygenu, takiego jak białko lub zrekombinowany wirus niosący sekwencje kodujące taki antygen. Sposób taki zapoczątkowuje i wzmacnia odpowiedź odpornościową na wybrany antygen obejmując dostarczenie wektora plazmidowego DNA niosącego ten antygen, z późniejszym przypomnieniem, np. wektorem zawierającym sekwencje AAV.
Reżim dawki podstawowej i dawki przypominającej obejmuje wyrażanie multiprotein z nośnika podstawowego i przypominającego. Patrz np., R.R. Amara, Science, 292: 69-14 (6 kwietnia 2001), opisujący reżim multiproteinowy do wyrażania podjednostek białkowych przydatny do wytwarzania odpowiedzi odpornościowej przeciwko HIV i SIV. Na przykład dawka podstawowa DNA może dostarczać Gag, Pol, Vif, VPX i Vpr oraz Env, Tat i Rev z pojedynczego transkryptu. Alternatywnie, dostarczane są SIV, Gag i Pol oraz Env HIV-I.
Reżimy dawki podstawowej i dawki przypominającej nie są jednak ograniczone do immunizacji przeciwko HIV lub dostarczania tych antygenów. Na przykład, dawka podstawowa może obejmować dostarczenie w pierwszym szympansim wektorze oraz przypomnienie w drugim wektorze szympansim lub kompozycję zawierającą sam antygen w postaci białka. Reżim dawki podstawowej i dawki przypominającej może dostarczyć ochronną odpowiedź odpornościową przeciwko wirusowi, bakterii lub innemu organizmowi, z którego pochodzi antygen. W innym żądanym wykonaniu, reżim dawki podstawowej i dawki przypominającej dostarcza efektu terapeutycznego, który można zmierzyć za pomocą konwencjonalnych oznaczeń wykrywających obecność schorzenia, przeciwko któremu stosowana jest terapia.
Szczepionkę podstawową można podawać w różnych miejscach ciała w sposób zależny od dawki, który zależy od antygenu, przeciwko któremu skierowana jest pożądana odpowiedź odpornościowa i nie jest ograniczany ilością lub miejscem wstrzyknięcia, ani nośnikiem farmaceutycznym. Etap podstawowy obejmuje raczej reżimy terapeutyczne obejmujące jedną dawkę lub dawkowanie co godzina, dzień, tydzień lub miesiąc lub rok. Na przykład, ssaki mogą otrzymać jedną lub dwie iniekcje podstawowe zawierające od około 10 μg do około 50 μg plazmidu w nośniku. Korzystna ilość podstawowa lub dawkowanie kompozycji podstawowej szczepionki DNA wynosi od około 1 μg do 10000 μg szczepionki DNA. Dawki mogą się wahać od około 1 μg do 10000 μg DNA na kg masy ciała pacjenta. Ilość lub miejsce wstrzyknięcia są korzystnie wybierane zależnie od rodzaju i stanu szczepionego ssaka.
Jednostka dawkowania szczepionki DNA odpowiednia do dostarczenia antygenu ssakowi jest tu opisana. Szczepionka DNA jest przygotowywana do podania przez zawieszenie lub rozpuszczenie w farmaceutycznie lub fizjologicznie dopuszczalnym nośniku, takim jak izotoniczna sól, roztwór soli izotonicznych lub inne formulacje, które będą oczywiste dla specjalisty w dziedzinie takiego podawania. Odpowiedni nośnik będzie oczywisty dla specjalisty i będzie w dużej części zależał od drogi podawania. Kompozycje mogą być podawane ssakowi zgodnie z opisanymi powyżej drogami, w formuPL 221 877 B1 lacji o przedłużonym uwalnianiu wykorzystującej ulegający biodegradacji biozgodny polimer lub przez podanie domiejscowe z zastosowaniem micelli, żeli i liposomów.
Ewentualnie, etap piętnowania obejmuje także podanie razem z kompozycją podstawowej szczepionki DNA odpowiedniej ilości adiuwanta, takiego jak tu określone.
Kompozycja przypominająca jest podawana około 2 do około 27 tygodni po podaniu podstawowej szczepionki DNA pacjentowi - ssakowi. Podawanie kompozycji przypominającej prowadzi się za pomocą skutecznej ilości kompozycji szczepionki przypominającej zawierającej lub zdolnej do dostarczenia tego samego antygenu, co podawany przez podstawową szczepionkę DNA. Kompozycja przypominająca może składać się ze zrekombinowanego wektora wirusowego pochodzącego z tego samego źródła lub z innego źródła. Alternatywnie, „kompozycja przypominająca” może być kompozycją zawierającą ten sam antygen, jak kodowany przez podstawową szczepionkę DNA, ale w postaci białka lub peptydu, która to kompozycja indukuje odpowiedź odpornościową u gospodarza. Kompozycja szczepionki przypominającej obejmuje kompozycję zawierającą sekwencję DNA kodującą antygen pod kontrolą sekwencji regulatorowej kierującej jego ekspresją w komórce ssaka, np. wektory takie, jak dobrze znane wektory bakteryjne lub wirusowe. Podstawowym wymogiem wobec szczepionki przypominającej jest to, aby antygen kompozycji szczepionki był tym samym antygenem lub antygenem reagującym krzyżowo, co antygen kodowany przez szczepionkę DNA.
Odpowiednio, wektory są również dobrze przystosowane do stosowania w reżimach wykorzystujących wektory inne niż AAV, a także białka, peptydy i/lub inne użyteczne biologicznie związki terapeutyczne lub immunogenne. Reżimy te są szczególnie dobrze przystosowane do dostarczania genów dla celów terapeutycznych i do immunizacji obejmującej wzbudzanie odporności ochronnej. Zastosowania takie będą oczywiste dla specjalisty.
Ponadto, wektor może dostarczać skutecznego nośnika transferu genów, który dostarcza wybrany transgen do wybranej komórki gospodarza in vivo lub ex vivo, nawet gdy organizm ma przeciwciała neutralizujące przeciwko jednemu lub więcej serotypom AAV. Wektor (np. rAAV) i komórki miesza się ex vivo; zainfekowane komórki hoduje się z wykorzystaniem konwencjonalnych metod; zaś transdukowane komórki ponownie wprowadza się pacjentowi. Ponadto, wektory mogą być także wykorzystane do wytwarzania żądanego produktu genu in vitro. Dla wytwarzania in vitro żądany produkt (np. białko) można uzyskać z żądanej hodowli po transfekcji komórek gospodarza rAAV zawierającym cząsteczkę kodującą żądany produkt i hodowli komórek w warunkach pozwalających na ekspresję. Wyrażany produkt można następnie oczyścić i wyizolować według potrzeby. Odpowiednie techniki transfekcji, hodowli komórek, oczyszczania i izolacji są znane specjalistom.
Następujące przykłady ilustrują kilka aspektów i wykonań wynalazku.
P r z y k ł a d y
P r z y k ł a d 1: Amplifikacje PCR, klonowanie i charakterystyka nowych sekwencji AAV
Tkanki naczelnych innych niż człowiek przeszukano pod kątem obecności sekwencji AAV stosując metodę PCR opartą na oligonukleotydach komplementarnych do wysoce konserwatywnych sekwencji znanych AAV. Odcinek sekwencji obejmujący pozycje od 2886 do 3143 pz AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] wybrano jako amplikon PCR, w którym region hiperzmienny białka kapsydu (Cap), który jest niepowtarzalny w każdym znanym serotypie AAV, nazwany tu „regionem charakterystycznym”, jest otoczony przez sekwencje konserwatywne. W dalszej analizie wykazano, że ten region charakterystyczny jest zlokalizowany pomiędzy konserwatywnymi aminokwasami łączącymi region hiperzmienny 3.
Wstępny przegląd krwi obwodowej szeregu gatunków naczelnych innych niż człowiek ujawnił wykrywalne AAV u podgrupy zwierząt gatunków, takich jak rezusy, makaki jawajskie, szympansy i pawiany. Nie wykryto jednak sekwencji AAV u niektórych innych badanych gatunków, w tym makaków japońskich, lapunderów i sajmiri. Dokładniejszą analizę rozmieszczenia wektorów przeprowadzono w tkankach rezusów z kolonii University of Pennsylvania i Tulane odzyskanych po sekcji. Ujawniła ona sekwencje AAV w szeregu różnych tkanek.
A. Amplifikacja regionu charakterystycznego AAV
Sekwencje DNA AAV1-6 i AAV wyizolowane od osobników Goose i Duck dopasowano do siebie przy użyciu „Clustal W” z domyślnymi ustawieniami. Dopasowanie AAV1-6, w tym informację dla nowego AAV7 przedstawiono na Fig. 1. Porównano podobieństwa sekwencji między AAV.
W trakcie badania twórcy zidentyfikowali region 257 pz rozciągający się od pozycji 2886 do 3143 pz AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] i odpowiadający mu region w genomach AAV2-6 [patrz Fig. 1]. Region ten jest położony w genie kapsydu AAV i ma wysoce konserwatywne sekwencje na końcu 5' i 3' i stosunkowo zmienną sekwencję pośrodku. Ponadto, region ten zawiera miejsce rozpoznawane
PL 221 877 B1 przez enzym restrykcyjny DraIII (CACCACGTC, SEKW. NR ID.: 15). Twórcy stwierdzili, że region ten służy jako specyficzny podpis dla każdego znanego typu DNA AAV. Innymi słowy, po reakcjach PCR, trawieniu endonukleazami specyficznymi dla każdego znanego serotypu i analizie elektroforetycznej w żelu, regiony te można wykorzystać do ostatecznej identyfikacji amplifikowanego DNA, jako pochodzącego z serotypu 1, 2, 3, 4, 5, 6 lub innego serotypu.
Startery zaprojektowano, walidowano i dokonano optymalizacji warunków PCR posługując się kontrolami DNA AAV1, 2 i 5. Startery bazowały na sekwencji AAV2: starter 5', 1S: pz 2867-2891 AAV2 (SEKW. NR ID.: 7) i starter 3', 18as: pz 3095-3121 AAV2 (SEKW. NR ID.: 7).
Posługując się opisaną powyżej strategią przebadano DNA komórkowe z różnych tkanek, w tym z krwi, mózgu, wątroby, płuca, jądra itd., od różnych rezusów. Wyniki ujawniły, że DNA z różnych tkanek tych małp powodowało silne amplifikacje PCR. Dalsze analizy restrykcyjne produktów PCR wykazały, że amplifikowano je z sekwencji AAV innych niż wszystkie opublikowane sekwencje AAV.
Produkty PCR (wielkości około 255 pz) z DNA szeregu różnych tkanek małp sklonowano i zsekwencjonowano. Bioinformatyczne badanie tych nowych sekwencji AAV wykazało, że są to nowe sekwencje genu kapsydu AAV i różnią się od siebie. Fig. 1 obejmuje dopasowanie nowych regionów charakterystycznych AAV z AAV10-12 [odpowiednio SEKW. NR ID.: 117, 118 i 119]. Analizę wielokrotnego dopasowania sekwencji przeprowadzono za pomocą programu Clustal W (1.81). Procent identyczności sekwencji między regionami charakterystycznymi AAV 1-7 i AAV 10-12 podano poniżej.
T a b e l a 1. Sekwencje do analizy
Sekwencja # Serotyp AAV Wielkość (bp)
1 AAV1 258
2 AAV2 255
3 AAV3 255
4 AAV4 246
5 AAV5 258
6 AAV6 258
7 AAV7 258
10 AAV10 255
11 AAV11 258
12 AAV12 255
T a b e l a 3. Dopasowanie parami (procent identyczności)
AAV2 AAV3 AAV4 AAV5 AAV6 AAV7 AAV10 AAV11 AAV12
AAV1 90 90 81 76 97 91 93 94 93
AAV2 93 79 78 90 90 93 93 92
AAV3 80 76 90 92 92 92 92
AAV4 76 81 84 82 81 79
AAV5 75 78 79 79 76
AAV6 91 92 94 94
AAV7 94 92 92
AAV10 95 93
AAV11 94
PL 221 877 B1
Wyizolowano i zsekwencjonowano ponad 300 klonów zawierających sekwencje nowych serotypów AAV obejmujące wybrany region 257 pz. Bioinformatyczna analiza tych ponad 300 klonów sugeruje, że ten region 257 pz jest krytyczny w roli dobrego znacznika lub sekwencji charakterystycznej dla szybkiej izolacji i identyfikacji nowego serotypu AAV.
B. Zastosowanie regionu charakterystycznego do amplifikacji PCR
Region charakterystyczny 257 pz wykorzystano jako kotwicę PCR do wydłużenia amplifikacji w kierunku 5' w genomie dla pokrycia regionu połączenia genów rep i cap (pozycje 1398 pz - 3143 pz, SEKW. NR ID.: 6) i w kierunku 3' w genomie dla uzyskania całej sekwencji genu cap (pozycje 2866 pz - 4600 pz, SEKW. NR ID.: 6). Amplifikacje w PCR przeprowadzono z zastosowaniem standardowych warunków, w tym denaturacji w 95°C przez 0,5-1 min, przyłączania starterów w 60-65°C przez 0,5-1 min i wydłużania w 72°C przez 1 min na kz, przy całkowitej liczbie cykli amplifikacji w zakresie od 28 do 42.
Przy zastosowaniu dopasowanych sekwencji, jak opisano w punkcie A, zidentyfikowano dwa inne stosunkowo konserwatywne regiony w sekwencji położonej w końcu 3' genów rep i 5' regionu 257 pz i w sekwencji poniżej fragmentu 257 pz, lecz przed 3' ITR AAV. Zaprojektowano dwa nowe zestawy starterów i dokonano optymalizacji warunków PCR dla uzyskania całego kapsydu i części sekwencji rep nowych serotypów AAV. Konkretniej, dla amplifikacji 5' starterem 5', AV1Ns był GCTGCGTCAACTGGACCAATGAGAAC [nt 1398-1423 AAV1 SEKW. NR ID.: 6] a starterem 3' był zidentyfikowany powyżej 18as. Dla amplifikacji 3', starterem 5' był zidentyfikowany powyżej 1s, zaś starterem 3' był AV2Las, TCGTTTCAGTTGAACTTTGGTCTCTGCG [nt 4435-4462 z AAV2 SEKW. NR ID.: 7].
W tych amplifikacjach PCR, regionu 257 pzp użyto w charakterze kotwicy PCR i znacznika dla wytworzenia nakładających się fragmentów dla skonstruowania kompletnego genu kapsydu przez połączenie w miejscu DraIII w regionie charakterystycznym po amplifikacji fragmentów wydłużania 5' i 3' uzyskanych tak, jak tu opisano. Konkretniej, dla wytworzenia całego genu cap AAV7 trzy produkty amplifikacji (a) sekwencje regionu charakterystycznego; (b) sekwencje wydłużania 5'; i (c) sekwencje wydłużania 3' wklonowano w szkielet plazmidu pCR4-Topo [Invitrogen] zgodnie z instrukcjami wytwórcy. Następnie plazmidy strawiono DraIII i zrekombinowano w celu odtworzenia pełnego genu cap.
W trakcie tych prac wyizolowano i przeanalizowano około 80% sekwencji kapsydów AAV7 i AAV8. Wykryto także nowy serotyp, AAV9, od osobnika małpy #2.
Przy wykorzystaniu opisanych powyżej warunków PCR, pozostałą część sekwencji genu rep dla AAV7 wyizolowano i sklonowano z zastosowaniem starterów amplifikujących pozycje 108 pz do 1461 pz genomu AAV (obliczone na podstawie numeracji AAV2, SEKW. NR ID.: 7). Klon ten zsekwencjonowano w celu skonstruowania pełnego genomu AAV7 bez ITR.
C. Bezpośrednia amplifikacja fragmentu Cap długości 3,1 kz
W celu bezpośredniej amplifikacji fragmentu Cap pełnej długości 3,1 kz z DNA z tkanki i krwi NHP zidentyfikowano dwa inne wysoce konserwatywne regiony w genomach AAV do wykorzystania w amplifikacji dużych fragmentów w PCR. Wybrano starter w konserwatywnym regionie zlokalizowanym w środku genu rep (AV1ns: 5' GCTGCGTCAACTGGACCAATGAGAAC 3', nt 1398-1423 z SEKW. NR ID.: 6) w połączeniu ze starterem 3' zlokalizowanym w innym konserwatywnym regionie poniżej genu Cap (AV2cas: 5' CGCAGAGACCAAAGTTCAACTGAAACGA 3', SEKW. NR ID.: 7) dla amplifikacji fragmentów cap pełnej długości. Produkty PCR klonowano systemem Topo zgodnie ze wskazaniami producenta (Invitrogen), zaś analizę sekwencji przeprowadzono przez Qiagengenomics (Qiagengenomics, Seattle, WA) z dokładnością > 99,9%. W sumie wyizolowano i scharakteryzowano 50 klonów kapsydu. Wśród nich 37 klonów pochodziło z tkanek rezusa (rh.1-rh.37), 6 klonów z tkanek makaka jawajskiego (cy.1-cy.6), 2 klony z tkanek pawianów (bb.1 i bb.2) i 5 klonów z tkanek szympansów (ch.1-ch.5).
Aby wykluczyć możliwość, że zróżnicowanie sekwencji nowej rodziny AAV jest artefaktem PCR, takim jak składanie fragmentów genów w PCR przez wydłużania nakładających się fragmentów różnych niepełnych matryc DNA z sekwencjami homologicznymi, lub wynikiem procesów rekombinacji w bakteriach, przeprowadzono serię doświadczeń w identycznych warunkach dla amplifikacji VP1 z zastosowaniem całkowitych DNA komórkowych. Najpierw zmieszano nienaruszone plazmidy AAV7 i AAV8 w stosunku równomolarnym, po czym rozcieńczono je metodą seryjnych rozcieńczeń. Seryjnie rozcieńczone mieszaniny wykorzystano jako matryce dla amplifikacji w PCR fragmentów VP1 o długości 3,1 kz przy zastosowaniu uniwersalnych starterów i identycznych warunków PCR, jak użyte do amplifikacji DNA, aby sprawdzić, czy nie powstają jakiekolwiek hybrydowe produkty PCR. Mieszaninę
PL 221 877 B1 transformowano do bakterii i izolowano transformanty poszukując klonów hybrydowych, które mogłyby pochodzić z procesu rekombinacji w komórkach bakterii. W innym doświadczeniu przecięliśmy plazmidy AAV7 i AAV8 enzymami Msp I, Ava I i Hael, z których wszystkie wielokrotnie tną oba genomy w różnych pozycjach, zmieszaliśmy mieszaniny po trawieniu w różnych kombinacjach i zastosowaliśmy do amplifikacji fragmentów VP1 w tych samych warunkach, aby zbadać, czy można wytworzyć jakiekolwiek produkty PCR przez wydłużanie nakładających się sekwencji niepełnych sekwencji AAV. W innym doświadczeniu mieszaninę oczyszczonych z żelu fragmentów 5' 1,5 kz VP1 AAV7 i 3' 1,7 kz VP1 AAV8, które nakładają się w regionie charakterystycznym rozcieńczono seryjnie i zastosowano do amplifikacji PCR w obecności lub nieobecności 200 ng DNA komórkowego wyizolowanego z małpiej linii komórek, w której w analizie TaqMan nie wykryto sekwencji AAV. W żadnym z tych doświadczeń nie wykazano skutecznego wytwarzania za pośrednictwem PCR nakładających się sekwencji w warunkach amplifikacji Cap z genomowego DNA (dane nie przedstawione). W celu dalszego potwierdzenia zaprojektowano 3 pary starterów, które były zlokalizowane w różnych HVR i specyficzne dla sekwencji wariantów klonu 42s z rezusa F953, w różnych kombinacjach dla amplifikacji krótszych fragmentów z DNA węzła chłonnego krezki (MLN) z F593, z którego wyizolowano klon 42s. Wszystkie warianty sekwencji zidentyfikowane w klonach Cap pełnej długości odnaleziono w tych krótszych fragmentach (dane nie przedstawione).
P r z y k ł a d 2: Wirusy stowarzyszone z adenowirusami podlegają znaczącej ewolucji u naczelnych podczas naturalnych zakażeń
Analiza sekwencji wybranych izolatów AAV ujawniła zróżnicowanie w całym genomie, najbardziej skoncentrowane w regionach hiperzmiennych białek kapsydu. Dane epidemiologiczne wskazują, że wszystkie znane serotypy są endemiczne u naczelnych, aczkolwiek izolacja izolatów klinicznych była ograniczona do AAV2 i AAV3 z wymazów z odbytu i gardła ludzkich niemowląt oraz AAV5 z kłykciny kończystej człowieka. Zakażeniom AAV nie towarzyszyły żadne znane następstwa kliniczne.
W próbie lepszego zrozumienia biologii AAV, jako modele wykorzystano naczelne inne niż człowiek dla scharakteryzowania następstw naturalnych zakażeń. Tkanki od naczelnych innych niż człowiek badano pod kątem obecności sekwencji AAV z wykorzystaniem ujawnionego sposobu PCR w oparciu o oligonukleotydy komplementarne do wysoce konserwatywnych regionów i znanych AAV (patrz Przykład 1). Jako amplikon PCR wybrano ciąg sekwencji AAV rozciągających się od pozycji 2886 do pozycji 3143 AAV1 [SEKW. NR ID.: 6], w którym konserwatywne sekwencje są flankowane przez region hiperzmienny unikatowy dla każdego znanego serotypu AAV, nazwany tu „regionem charakterystycznym”.
Wstępne badanie krwi obwodowej szeregu gatunków naczelnych innych niż człowiek, w tym, rezusów, makaków jawajskich, szympansów i pawianów, ujawniło wykrywalne AAV u podgrupy zwierząt ze wszystkich gatunków. Dokładniejszą analizę rozmieszczenia wektora przeprowadzono w tkankach rezusów z University of Pennsylvania i kolonii Tulane pozyskanych po sekcji. Badanie to ujawniło sekwencje AAV w szeregu różnych tkanek.
Amplifikowane sekwencje charakterystyczne subklonowano do plazmidów i pojedyncze transformanty poddano analizie sekwencji. Ujawniła ona znaczącą zmienność w sekwencji nukleotydowej klonów pochodzących od różnych zwierząt. Zmienność w sekwencji charakterystycznej odnotowano także w klonach uzyskanych od pojedynczych zwierząt. Tkanki zebrane od dwóch zwierząt, u których zidentyfikowano unikatowe sekwencje charakterystyczne (tj. okrężnica z 98E044 i serce z 98E056) poddano dalszej charakterystyce przez wydłużenie sekwencji amplifikowanej w PCR za pomocą oligonukleotydów komplementarnych do wysoce konserwatywnych sekwencji. W ten sposób zrekonstruowano pełne struktury prowirusowe dla genomów wirusa z obu tkanek, jak tu opisano. Prowirusy te różnią się od innych znanych AAV największym zróżnicowaniem sekwencji zaobserwowanym w regionach genu Cap.
Przeprowadzono dodatkowe doświadczenia dla potwierdzenia, że sekwencje AAV rezydujące w tkance naczelnego, innego niż człowiek, stanowiły prowirusowe genomy zakaźnych wirusów, które można odzyskać tworząc wiriony.
DNA genomowy z tkanki wątroby zwierzęcia 98E056, w którym wykryto sekwencję charakterystyczną AAV8 strawiono endonukleazą, która nie ma miejsca w sekwencji AAV i transfekowano do komórek 293 plazmidem zawierającym pozbawiony E1 genom ludzkiego adenowirusa serotypu 5, jako źródłem funkcji pomocniczych. Uzyskany lizat pasażowano jednokrotnie w komórkach 293, a następnie odzyskano i przeanalizowano pod kątem obecności białek Cap AAV z zastosowaniem szeroko reagującego poliklonalnego przeciwciała przeciwko białkom Cap i pod kątem obecności
PL 221 877 B1 i ilości sekwencji DNA z amplifikowanego w PCR prowirusa, z którego pochodził AAV8. Transfekcja trawionego endonukleazą DNA z serca i adenowirusowego plazmidu pomocniczego dała duże ilości wirusa AAV8, co wykazano wykrywając białka Cap analizą Western i wykazując obecność 104 genomów wektora AAV8 na komórkę 293. Z preparatu na dużą skalę przygotowano lizaty i oczyszczono AAV przez sedymentację w chlorku cezu. Oczyszczony preparat wykazywał obecność ikozaedronalnych struktur o wielkości 26 nm wyglądających identycznie, jak struktury AAV serotypu 2. Transfekcja samym pomocniczym adenowirusem nie dała białek ani genomów AAV, co wyklucza zanieczyszczenie jako źródło odzyskanego AAV.
Dla dalszego scharakteryzowania między- i wewnątrzosobniczej zmienności sekwencji charakterystycznej AAV wybrane tkanki poddano wydłużonej PCR w celu amplifikacji pełnych otwartych ramek odczytu Cap.
Uzyskane fragmenty wklonowano do plazmidów bakteryjnych i wyizolowano, i w pełni zsekwencjonowano pojedyncze transformanty. Analiza ta obejmowała węzły chłonne krezki od trzech rezusów (Tulane/V223 - 6 klonów; Tulane/T612 - 7 klonów; Tulane/F953 - 14 klonów), wątrobę od dwóch rezusów (Tulane/V251 - 3 klony; Penn/00E033 - 3 klony), śledzionę od jednego rezusa (Penn/97E043 - 3 klony), serce od jednego rezusa (IHGT/98E046 - 1 klon), krew obwodową od jednego szympansa (New Iberia/X133 - 5 klonów), sześć makaków jawajskich (Charles River/A1378, A3099, A3442, A2821, A3242 - w sumie 6 klonów) i jednego pawiana (SFRB/8644 - 2 klony). Spośród 50 klonów zsekwencjonowanych od 15 różnych zwierząt, 30 uznano za niepowtarzające się na podstawie ustalenia co najmniej 7 różnic aminokwasowych między nimi. Niepowtarzające się klony VP1 ponumerowano w kolejności izolacji, z prefiksem wskazującym gatunek naczelnego innego niż człowiek, od którego pochodziły. Związki strukturalne między tymi 30 niepowtarzającymi się klonami oraz opisanymi wcześniej 8 serotypami AAV określono z zastosowaniem programu SplitsTree [Huson,
D. H. SplitsTree: analyzing and visualizing evolutionary data. Bioinformatics 14, 68-73 (1998)] z wdrożeniem metody rozkładu dzielonego (split decomposition). Analiza przedstawia homoplazję między zestawem sekwencji raczej w postaci sieci przypominającej drzewo, niż w postaci rozdwajającego się drzewa. Korzyścią jest tu możliwość wykrycia zgrupowań, które są wynikiem konwergencji i przedstawienia związków filogenetycznych nawet, gdy są zaburzone przez zdarzenia równoległe. Dla wyjaśnienia ewolucji AAV konieczna będzie obszerna analiza filogenetyczna, podczas gdy tu zamiarem było jedynie pogrupowanie klonów według podobieństwa sekwencji.
W celu potwierdzenia, że nowe sekwencje VP1 pochodziły z zakaźnych genomów wirusowych, komórkowe DNA z tkanek o wysokiej zawartości DNA wirusowego strawiono endonukleazą, która nie powinna przecinać wewnątrz AAV i transfekowano do komórek 293, po czym zakażano je adenowirusem. Spowodowało to odzyskanie i amplifikację genomów AAV z DNA z tkanek dwóch różnych zwierząt (dane nie przedstawione).
Sekwencje VP1 nowych AAV poddano dalszej charakterystyce pod kątem charakteru i lokalizacji zmienności sekwencji aminokwasowej. Wykazano, że wszystkie 30 klonów VP1 różni się od siebie o ponad 1% sekwencji aminokwasowej po dopasowaniu i podsumowaniu zmienności w każdej pozycji. Algorytm opracowany dla wyznaczenia obszarów dywergencji sekwencji wykazał obecność 12 regionów hiperzmiennych (HVR), z których 5 nakłada się lub stanowi część 4 opisanych uprzednio regionów zmiennych [Kotin, cytowane powyżej; Rutledge, cytowane powyżej]. Wierzchołki bliższe osi trzykrotnej zawierają większość zmienności (HVR5-10). Co ciekawe, pętle zlokalizowane na osi dwui pięciokrotnej także wykazują znaczną zmienność. HVR1 i 2 występują w N-końcowej części białka kapsydu, która nie jest rozstrzygnięta w strukturze rentgenowskiej, co sugeruje, że N-koniec białka VP1 jest eksponowany na powierzchni wirionu.
W celu ilościowego oznaczenia sekwencji AAV z tkanek 21 rezusów zastosowano PCR w czasie rzeczywistym z zastosowaniem starterów i sond komplementarnych do wysoce konserwatywnych sekwencji Rep (jeden zestaw) i Cap (dwa zestawy) znanych AAV. Każdy punkt danych przedstawia analizę DNA z tkanki pojedynczego zwierzęcia. Potwierdziło to szeroki zakres występowania sekwencji AAV, chociaż rozmieszczenie ilościowe różniło się między pojedynczymi osobnikami. Pochodzenie zwierząt i wcześniejsza historia leczenia nie wydawały się wpływać na rozmieszczenie sekwencji AAV u rezusów. Trzy różne zestawy starterów i sond zastosowane do ilościowego oznaczenia AAV dały zgodne wyniki. Najwyższe poziomy AAV konsekwentnie znajdowano w krezkowych węzłach chłonnych, ze średnią 0,01 kopii na genom diploidalny dla 13 zwierząt z dodatnim wynikiem. Wątroba i śledziona również zawierały znaczną ilość wirusowego DNA. Stwierdzono przykłady bardzo znacznej ilości AAV, na przykład w sercu rezusa 98E056, śledzionie rezusa 97E043 i wątrobie rezusa RQ4407,
PL 221 877 B1 w których wykazano odpowiednio 1,5; 3 i 20 kopii sekwencji AAV na genom diploidalny. Stosunkowo niski poziom DNA wirusa odnotowano w komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej, co sugeruje, że wyniki dla tkanek nie są spowodowane obecnością resztkowych składników krwi (dane nie przedstawione). Należy zauważyć, że sposób ten nie koniecznie wychwyci wszystkie AAV przebywające u naczelnych innych niż człowiek, ponieważ do wykrycia konieczna jest wysoka homologia zarówno do oligonukleotydów, jak i do sondy PCR czasu rzeczywistego. Ponadto tkanki od zwierząt o wysokiej zawartości DNA AAV przeanalizowano pod kątem stanu molekularnego DNA za pomocą technik hybrydyzacji DNA i jego rozmieszczenia w komórce przez hybrydyzację in situ.
Rodzaj zmienności sekwencji ujawniony w prowirusowych fragmentach AAV wyizolowanych od różnych zwierząt i z tkanek tego samego zwierzęcia przypomina ewolucję zachodzącą u wielu wirusów RNA podczas pandemii, a nawet podczas zakażenia jednego osobnika. W niektórych sytuacjach ideę wirusa typu dzikiego zastąpiono występowaniem mnóstwa quasi-gatunków ewoluujących w wyniku szybkiej replikacji i mutacji w obecności presji doboru. Jednym z przykładów jest zakażenie HIV, ewoluujące w odpowiedzi na presję immunologiczną i farmakologiczną. Do wysokiej częstości mutacji u wirusów RNA przyczynia się kilka mechanizmów, w tym niska wierność i brak zdolności korekcyjnych odwrotnej transkryptazy oraz rekombinacja niehomologiczna i homologiczna.
Dowody na powstawanie quasi-gatunków AAV zilustrowano w tych badaniach przez systematyczne sekwencjonowanie wielu sklonowanych fragmentów prowirusowych. Rzeczywiście, nie można było odnaleźć dwóch identycznych sekwencji wśród wszystkich wydłużonych klonów wyizolowanych od tego samego zwierzęcia bądź różnych. Istotnym mechanizmem dla tej ewolucji sekwencji wydaje się być wysoka częstość rekombinacji homologicznej między bardziej ograniczoną liczbą wirusów rodzicielskich. Ostatecznym efektem jest częsta wymiana regionów hiperzmiennych białka Cap prowadząca do powstania szeregu chimer, które mogą mieć różny tropizm i swoistość serologiczną (tj. zdolność do uniknięcia odpowiedzi odpornościowej, zwłaszcza w odniesieniu do przeciwciał neutralizujących). Mechanizmy, przez które może zachodzić rekombinacja homologiczna nie są jasne. Jedną z możliwości jest to, że nici + i - różnych jednoniciowych genomów AAV łączą się podczas replikacji tak, jak opisano to przy wysokiej krotności zakażenia rekombinantami AAV. Nie jest jasne, czy inne mechanizmy przyczyniają się do ewolucji sekwencji w zakażeniach AAV. Ogólna częstość mutacji zachodzących podczas replikacji AAV wydaje się być stosunkowo niska, a dane nie wskazują na to, aby błędy replikacji pojawiały się często. Opisano jednak znaczne rearanżacje genomu AAV podczas zakażenia litycznego, prowadzące do tworzenia się defektywnych cząstek przeszkadzających. Niezależnie od mechanizmów prowadzących do dywergencji sekwencji, z nielicznymi wyjątkami, struktury vp1 quasi-gatunków pozostają nietknięte, bez przesunięć ramki odczytu ani mutacji typu nonsens, co sugeruje wpływ konkurencyjnego doboru wirusów o najkorzystniejszym profilu dopasowania na dynamikę populacji.
Badania te mają implikacje dla kilku obszarów biologii i medycyny. Koncepcja szybkiej ewolucji wirusów, uprzednio uważana za własność wyłącznie wirusów RNA, powinna być uwzględniona dla wirusów DNA, które klasycznie charakteryzowano oznaczeniami serologicznymi. Istotnym będzie opracowanie dla parworwirusów nowego sposobu opisywania izolatów wirusowych, który obejmie złożoność ich struktury i biologii, podobnie jak w przypadku HIV, który znajduje się w kategorii ogólnych rodzin o podobnej strukturze i funkcji zwanych kladami. Alternatywną strategią jest kontynuacja podziału izolatów ze względu na swoistość serologiczną i opracowanie kryteriów opisu wariantów w obrębie grup serologicznych.
P r z y k ł a d 3: Wektorologia zrekombinowanych genomów AAV wyposażonych w ITR AAV2 z zastosowaniem chimerycznych plazmidów zawierających rep AAV2 i nowe geny cap AAV do badań serologicznych i badań transferu genów w różnych modelach zwierzęcych
Chimeryczne konstrukty pakujące tworzy się przez fuzję rep AAV2 z sekwencjami cap nowych serotypów AAV. Te chimeryczne konstrukty pakujące są stosowane początkowo do pseudotypowania zrekombinowanych genomów AAV niosących ITR AAV2 przez potrójną transfekcję w komórkach 293 z zastosowaniem plazmidu pomocniczego Ad5. Te pseudotypowane wektory są następnie stosowane do oceny działania w opartych na transdukcji badaniach serologicznych i oceny skuteczności transferu genów nowych serotypów AAV w różnych modelach zwierzęcych, w tym NHP i gryzoniach, zanim te nowe serotypy całych i zakaźnych wirusów zostaną wyizolowane
PL 221 877 B1
A. pAAV2GFP
Plazmid AAV2 zawierający ITR AAV2 i białko zielonej fluorescencji wyrażono pod kontrolą promotora konstytutywnego. Plazmid ten zawiera następujące elementy: ITR AAV2, promotor CMV i sekwencje kodujące GFP.
B. Klonowanie plazmidu trans
Dla skonstruowania chimerycznego plazmidu trans do wytwarzania zrekombinowanych pseudotypowanych wektorów AAV7, plazmid p5E18 (Xiao i wsp., 1999, J. Virol 73: 3994-4003) częściowo strawiono XhoI w celu zlinearyzowania plazmidu jedynie w miejscu XhoI w pozycji 2169 pz. Końce po trawieniu Xhol wypełniono następnie i ponownie zligowano. Tak zmodyfikowany plazmid p5E18 strawiono w całkowitym trawieniu Xba I i Xho I w celu usunięcia sekwencji genu cap i zastąpiono ją wyizolowanym z plazmidu pCRAAV7 6-5+15-4 fragmentem Spe I/Xho I o długości 2267 pz zawierającym gen cap AAV7.
Uzyskany plazmid zawiera sekwencje rep AAV2 kodujące Rep78/68 pod kontrolą promotora P5 AAV2 i sekwencje rep AAV2 kodujące Rep52/40 pod kontrolą promotora P19 AAV2. Sekwencje kapsydu AAV7 są pod kontrolą promotora P40 AAV7, zlokalizowanego w sekwencjach Rep. Plazmid ten zawiera ponadto łącznik 5' z ORF rep.
C. Wytwarzanie pseudotypowanego rAAV
Cząstki rAAV (wektor AAV2 w kapsydzie AAV7) są wytwarzane z zastosowaniem metody wolnej od adenowirusa. W skrócie, plazmid cis (plazmid pAAv2.1 lacZ zawierający IRT AAV) i plazmid trans pCRAAV7 6-5+15-4 (zawierający rep AAV2 i cap AAV7) i plazmid pomocniczy odpowiednio, były jednocześnie kotransfekowane do komórek 293 w stosunkach odpowiednio 1:1:2 przez strącanie fosforanem wapnia.
Do konstrukcji plazmidów pomocniczych pAd zakupiono plazmid pBG10 z Microbix (Kanada). Fragment Rsrll zawierający L2 i L3 usunięto z pBHG10 uzyskując pierwszy plazmid pomocniczy pAdAF13. Plazmid AdAF1 skonstruowano klonując fragment Asp700/Sall z delecją Pmel/Sgfl wyizolowany z pBHG10 do Bluescript. W pAdAF1 usunięte są MLP, L2, L2 i L3. Dalsze delecje fragmentu Nrul o wielkości 2,3 kz a następnie fragmentu RsRII/NruI o wielkości 0,5 kz wytworzyły odpowiednio plazmidy pomocnicze pAdAF5 i pAdAF6. Plazmid pomocniczy nazwany pAF6 dostarcza niezbędnych funkcji pomocniczych E2A i E4 ORF6 niedostarczanych przez wyrażającą E1 komórkę pomocniczą, pozbawiony jest jednak adenowirusowych białek kapsydu i funkcjonalnych regionów E1.
Zazwyczaj 50 μg DNA (cis:trans:pomocniczy) transfekowano do szalkę do hodowli tkankowych o średnicy 150 mm. Komórki 293 zbierano 72 godziny po transfekcji, sonikowano i traktowano 0,5% deoksycholanu sodu (37°C przez 10 min.) Lizaty komórkowe poddawano następnie dwóm rundom oczyszczania w gradiencie CsCl. Frakcje pików zawierające wektory rAAV zbierano, łączono i dializowano wobec PBS.
P r z y k ł a d 4: Tworzenie zakaźnych klonów niosących całe nowe serotypy AAV w celu zbadania podstawowej wirusologii w liniach komórek pochodzących od człowieka i NHP i oceny patogenezy nowych serotypów AAV u NHP i w innych modelach zwierzęcych
Dla osiągnięcia tego celu zastosowano system kroczenia po genomie (genome walker) w celu uzyskania sekwencji końcowych 5' i 3' (ITR) oraz pełnej konstrukcji klonów zawierających pełne genomy nowych serotypów AAV.
W skrócie, przy zastosowaniu dostępnego w handlu zestawu Universal Genome Walker [Clontech] DNA genomowy z tkanek małp lub linii komórkowych, które zidentyfikowano pozytywnie na obecność sekwencji AAV7, trawiono endonukleazami Dra I, EcoR V, Pvu II i Stu I i zligowano z adaptorem Genome Walker Adaptor, tworząc 4 osobne biblioteki systemu Genome Walker (Genome Walker Libraries, GWL). Stosując DNA z GWL jako matryce AAV7 i przylegające sekwencje genomowe amplifikuje się przez PCR za pomocy startera adaptorowego 1 (AP1, dostarczony z zestawem) i swoistego dla AAV7 startera 1, po czym przez kolejny, zagnieżdżony PCR z zastosowaniem startera adaptorowego 2 (AP2) i innego swoistego dla AAV7 startera 2, z których oba są wewnętrzne w stosunku do pierwszego zestawu starterów. Główne produkty PCR z zagnieżdżonego PCR są klonowane i charakteryzowane przez analizę sekwencji.
W tym doświadczeniu startery pokrywające 257 pz lub inny fragment charakterystyczny rodzajowego genomu AAV są stosowane do amplifikacji w PCR komórkowych DNA wyekstrahowanych z linii komórkowych pochodzących od człowieka i NHP dla identyfikacji i scharakteryzowania latentnych sekwencji AAV. Zidentyfikowane latentne genomy AAV odzyskuje się z dających pozytywny sygnał linii komórkowych przy zastosowaniu pomocniczych adenowirusów różnych gatunków i szczepów.
PL 221 877 B1
W celu wyizolowania zakaźnych klonów AAV z pochodzących z linii komórkowych NHP, żądaną linię uzyskuje się z ATCC i przeszukuje przez PCR w celu zidentyfikowania amplikonu 257 pz, tj. regionu charakterystycznego. Produkt PCR o długości 257 pz klonuje się i poddaje identyfikacji serotypu przez analizę sekwencji. Dla tych linii komórkowych zawierających AAV7 komórki są zakażane SV-15, małpim adenowirusem nabytym z ATCC, ludzkim Ad5, lub transfekowane konstruktem plazmidowym niosącym ludzkie geny Ad odpowiadające za funkcje pomocnicze dla AAV. 48 godzin po infekcji lub transfekcji komórki są zbierane i przygotowywany jest DNA Hirt do klonowania genomu AAV7 według Xiao i wsp., 1999, J. Virol, 73: 3994-4003.
P r z y k ł a d 5 - Wytwarzanie wektorów AAV
Strategię pseudotypowania podobną do użytej w Przykładzie dla AAV1/7 zastosowano do wytworzenia wektorów AAV2 pakowanych z białkami kapsydu AAV1, AAV5 i AAV8. W skrócie, zrekombinowane genomy AAV wyposażone w ITR AAV2 pakowano przez potrójną transfekcję komórek 293 plazmidem cis, adenowirusowym plazmidem pomocniczym i chimerycznym konstruktem pakującym, w którym gen rep AAV2 jest połączony z genami cap nowych serotypów AAV. Dla stworzenia chimerycznych konstruktów pakujących usunięto miejsce Xho I w pozycji 3169 pz plazmidu p5E18 a zmodyfikowany plazmid strawiono Xba I i Xho I w całkowitym trawieniu z usunięciem genu cap AAV2 i zastąpieniem go fragmentem Spe I/Xho I długości 2267 pz zawierającym gen cap AAV8 [Xiao i wsp., 1999, J. Virol, 73: 3994-4003]. Podobną strategię klonowania zastosowano w celu utworzenia chimerycznych plazmidów pakujących AAV2/1 i AAV2/5. Wszystkie zrekombinowane wektory oczyszczono standardową metodą sedymentacji w CsCl2, z wyjątkiem AAV2/2, który oczyszczono przez jednoetapową chromatografię na heparynie.
Miana kopii genomu (GC) wektorów AAV określono analizą TaqMan z zastosowaniem sond i starterów rozpoznających region poli A SV40 tak, jak opisano uprzednio [Gao, G., i wsp., (2000) Hum Gene Ther 11,2079-91].
Dla każdego serotypu skonstruowano wektory do szeregu badań in vitro i in vivo. Osiem różnych kaset transgenicznych włączono do wektorów i wytworzono zrekombinowane wirusy dla każdego serotypu. Odzyskiwanie wirusów, w oparciu o liczbę kopii genomu, podsumowano w Tabeli 4 poniżej. Wydajność uzyskania wektora była wysoka dla każdego serotypu bez powtarzalnych różnic między serotypami. Dane przedstawione w tabeli to średnia liczba kopii genomu z odchyleniem standardo13 wym x 1013 wielu serii produkcyjnych transfekcji 50 szalek (150 mm).
T a b e l a 4. Wytwarzanie zrekombinowanych wektorów
AAV2/1 AAV2/2 AAV2/5 AAV2/7 AAV2/8
CMV LacZ 7,30 ± 4,33 4,49 ± 2,89 5,19 ± 5,19 3,42 0,87
(n=9) (n=6) (n=8 ) (n=1) (n=1)
CMV EGFP 6,43 ± 2,42 3,39 ± 2,42 5,55 ± 6,49 2,98 ± 2,66 3,74 ± 3,88
(n=2) (n=2) (n=4) (n=2) (n=2)
TBG LacZ 4,18 0,23 0,704 ± 0,43 2,16 0,532
(n=1) (n=1) (n=2) (n=1) (n=1)
Alb A1AT 4,67 ± 0,75 4,77 4,09 5,04 2,02
(n=2) (n=1) (n=1) (n=1) (n=1)
CB A1AT 0,567 0,438 2,82 2,78 0,816 ± 0,679
(n=1) (n=1) (n=1) (n=1) (n=2)
TBG rgCG 8,51 ± 6,65 3,47 ± 2,09 5,26 ± 3,85 6,52 ± 3,08 1,83 ± 0,98
(n=6) (n=5) (n=4) (n=4) (n=5)
TBG cFIX 1,24 ± 1,29 0,63 ± 0,394 3,74 ± 2,48 4,05 15,8 ± 15,0
(n=3) (n=6) (n=7) (n=1) (n=5)
P r z y k ł a d 6 - Serologiczna analiza pseudotypowanych wektorów
Myszom C57BL/6 wstrzyknięto domięśniowo wektory różnych serotypów AAVCBA1AT (5 x 1011 GC) i 34 dni później pobrano próbki surowicy. Aby zbadać aktywność neutralizującą i neutralizującą krzyżowo surowic względem każdego serotypu AAV surowice przebadano w oznaczeniu przeciwciał neutralizujących opartym na transdukcji [Gao, G. P., i wsp., (1996) J Virol 70, 8934-43]. Konkretniej, obecność przeciwciał neutralizujących wyznaczono oznaczając zdolność surowicy do
PL 221 877 B1 hamowania transdukcji komórek 84-31 przez wirusy reporterowe (AAVCMVEGFP) różnych serotypów. Konkretnie, wirus reporterowy AAVCMVEGFP każdego serotypu [przy krotności infekcji (MOI) prowadzącej do transdukcji 90% komórek wskaźnikowych] preinkubowano ze zinaktywowaną cieplnie surowicą od zwierząt, które otrzymały różne serotypy AAV lub od myszy nie stykających się z antygenem (naiwnych). Po 1-godzinnej inkubacji w 37°C wirusy dodano do komórek 84-31 w płytkach 96-studzienkowych na 48 lub 72 godziny, zależnie od serotypu wirusa. Ekspresję GFP mierzono za pomocą Fluorolmagin (Molecular Dynamics) i oznaczano ilościowo za pomocą oprogramowania Image Quant. Miana przeciwciał neutralizujących podawano jako najwyższe rozcieńczenie surowicy, które hamowało transdukcję do mniej niż 50%.
Dostępność wektorów wyrażających GFP uprościła opracowanie oznaczenia przeciwciał neutralizujących opartego na hamowaniu transdukcji w permisywnej linii komórkowej (tj. komórkach 293 stabilnie wyrażających E4 z Ad5). Surowice przeciwko wybranym serotypom AAV wytworzono przez domięśniowe wstrzyknięcie zrekombinowanych wirusów. Oznaczono neutralizację transdukcji AAV przez rozcieńczenia 1:20 i 1:80 surowic odpornościowych (patrz Tabela 5 poniżej). Surowice odpornościowe przeciwko AAV1, AAV2, AAV5 i AAV8 neutralizowały transdukcję serotypu, przeciwko któremu wytworzono surowicę odpornościową (AAV5 i AAV8 w mniejszym stopniu niż AAV1 i AAV2), lecz nie innego serotypu (tj. nie było dowodów na neutralizację krzyżową, co sugeruje, że AAV 8 jest w istocie unikatowym serotypem).
T a b e l a 5. Analiza serologiczna nowych serotypów AAV
% infekcji komórek 84-31 wirusem AAVCMVEGFP
AAV2/1 AAV2/2 AAV2/5 AAV2/7 AAV2/8
Rozcieńczenie surowicy Rozcieńczenie surowicy Rozcieńczenie surowicy Rozcieńczenie surowicy Rozcieńczenie surowicy
Surowice Wektor immuni- zujący 1:20 1:80 1:20 1:80 1:20 1:80 1:20 1:80 1:20 1:80
Grupa 1 AAV2/1 0 0 100 100 100 100 100 100 100 100
Grupa 2 AAV2/2 100 100 0 0 100 100 100 100 100 100
Grupa 3 AAV2/5 100 100 100 100 16,5 16,5 100 100 100 100
Grupa 4 AAV2/7 100 100 100 100 100 100 61,5 100 100 100
Grupa 5 AAV2/8 100 100 100 100 100 100 100 100 26,3 60
Surowice ludzkie od 52 zdrowych osobników przebadano na neutralizację przeciwko wybranym serotypom. Żadna z próbek surowicy nie neutralizowała AAV2/7 i AAV2/8, podczas gdy wektory AAV2/2 i AAV2/1 były neutralizowane w odpowiednio 20% i 10% surowic. Frakcja połączonej ludzkiej IgG reprezentująca zbiór 60 000 pojedynczych próbek nie neutralizowała AAV2/7 i AAV2/8, podczas gdy wektory AAV2/2 i AAV2/1 były neutralizowane przy mianie surowicy wynoszącym odpowiednio 1/1280 i 1/640.
P r z y k ł a d 7 - Badanie in vivo różnych serotypów wektorów AAV
W tym badaniu 7 zrekombinowanych genomów AAV: AAV2CBhA1AT, AAV2AlbhA1AT, AAV2CMVrhCG, AAV2TBGrhCG, AAV2TBGcFIX, AAV2CMVLacZ i AAV2TBGLacZ upakowano
PL 221 877 B1 w białka kapsydu różnych serotypów. We wszystkich konstruktach kasety minigenu otoczono ITR AAV2. Jako genów reporterowych użyto cDNA antytrypsyny ludzkiej (A1AT) [Xiao, W., i wsp., (1999) J Virol 73, 3994-4003], podjednostki β gonadotropiny kosmówkowej małpy rezusa (CG) [Zoltick, P. W. & Wilson, J. M. (2000) Mol Ther 2, 657-9], psiego czynnika IX [Wang, L., i wsp., (1997) Proc Natl Acad Sci USA 94, 11563-6] i bakteryjnej β-galaktozydazy (tj. LacZ). Dla transferu genów skierowanego do wątroby w celu kierowania ekspresją genów specyficznie w wątrobie użyto albo promotora mysiego genu albuminy (Alb) [Xiao, W. (1999), cytowane powyżej] albo promotora ludzkiego genu globuliny wiążącej hormon tarczycy (TBG) [Wang (1997), cytowane powyżej]. W doświadczeniach transferu genów skierowanego do mięśni w celu kierowania ekspresją genów użyto albo wczesnego promotora cytomegalowirusa (CMV) albo promotora β-aktyny kurzej ze wzmacniaczem CMV (CB).
Dla transferu genów skierowanego do mięśni wektory wstrzykiwano do prawego przedniego mięśnia piszczelowego nagich myszy NCR lub C57BL/6 (Taconic, Germantown, NY) w wieku 4-6 tygodni. W badaniach transferu genów skierowanego do wątroby dokonywano wlewu wektorów do żyły wrotnej myszy NCR nagich lub C57BL/6 (Taconic, Germantown, NY) w wieku 7-9 tygodni. Próbki surowicy pobierano wewnątrzoczodołowo w różnych punktach czasowych po podaniu wektora. Tkanki mięśni i wątroby pobrano od zwierząt, które otrzymały wektory lacZ w różnych punktach czasowych dla uzyskania skrawków kriogennych i wybarwienia histochemicznego Xgal. W ponownym doświadczeniu myszy C56BL/6 początkowo otrzymały domięśniowo wektory AAV2/1, 2/2, 2/5, 2/7 i 2/8CBA1AT, po czym monitorowano ekspresję genu A1AT przez 7 tygodni. Następnie zwierzętom podano do żyły wrotnej AAV2/8TBGcFIX i badano ekspresję genu cFIX.
Dla ilościowego oznaczenia poziomów osoczowych białek hA1AT, rhCG i cFIX przeprowadzono oznaczenia oparte na teście ELISA tak, jak opisano poprzednio [Gao, G. P., i wsp., (1996) J Virol, 8934-43; Zoltick, P. W. & Wilson, J. M. (2000) Mol Ther 2, 657-9; Wang, L., i wsp., Proc Natl Acad Sci USA 94, 11563-6]. Doświadczenia zakończono gdy zwierzęta uśmiercono w celu pobrania tkanek mięśni i wątroby do ekstrakcji DNA i ilościowej analizy liczby kopii genomu wektora obecnego w tkankach docelowych metodą TaqMan z zastosowaniem tych samych zestawów starterów i sond, co przy miareczkowaniu preparatów wektora [Zhang, Y., i wsp., (2001) Mol Ther 3, 697-707].
Wydajność działania wektorów opartych na nowych serotypach oceniono w mysich modelach transferu genów skierowanego do mięśni i do wątroby i porównano z wektorami opartymi na znanych serotypach AAV1, AAV2 i AAV5. Wektory wyrażające białka wydzielane na zewnątrz komórki - (alfaantytrypsynę (A1AT) i gonadotropinę kosmówkową (CG)) zastosowano do ilościowego oznaczenia względnych wydajności transdukcji między różnymi serotypami za pomocą analizy surowic w ELISA. Rozmieszczenie komórkowe transdukcji wewnątrz narządu docelowego oceniono z zastosowaniem wektorów wyrażających lacZ i histochemii X-gal.
Przeanalizowano działanie wektorów AAV w mięśniu szkieletowym po bezpośrednim wstrzyknięciu do przedniego mięśnia piszczelowego. Wektory zawierały ten sam genom oparty na AAV2 z promotorem najwcześniejszego genu CMV lub wzmocnionym CMV promotorem β-aktyny kierującym ekspresją transgenu. Wcześniejsze badania wykazały, że immunokompetentne myszy C57BL/6 wywołują humoralną odpowiedź odpornościową przeciwko ludzkiemu białku A1AT wyrażanemu z wektorów AAV [Xiao, W., i wsp., (1999) J Virol 73, 3994-4003].
W każdym ze szczepów wektor AAV2/1 wytwarzał najwyższy poziom A1AT, zaś wektor AAV2/2 - najniższy, natomiast wektory AAV2/7 i AAV2/8 wykazywały pośrednie poziomy ekspresji. Szczytowy poziom CG 28 dni po wstrzyknięciu myszom nu/nu NCR wykazywał najwyższą wartość dla AAV2/7 a najniższą dla AAV2/2, przy pośrednich wartościach dla AAV2/8 i AAV2/1. Wstrzyknięcie wektorów AAV2/1 i AAV2/7 lacZ dawało ekspresję genu w miejscu wstrzyknięcia we wszystkich włóknach mięśniowych, przy czym znacząco mniej włókien dodatnich pod względem lacZ zaobserwowano dla wektorów AAV2/2 i AAV2/8. Dane te wskazują, że wydajność transdukcji wektorami AAV2/7 w mięśniu szkieletowym jest podobna do uzyskiwanej dla AAV2/1, który wśród opisanych wcześniej serotypów jest najwydajniejszy w mięśniu szkieletowym [Xiao, W. (1999), cytowane powyżej; Chao, H., i wsp., (2001) Mol Ther 4, 217-22; Chao, H., i wsp., (2000) Mol Ther 2, 619-23].
Podobne mysie modele stosowano do oceny transferu genów skierowanego do wątroby. Identyczne dawki wektorów na podstawie liczby kopii genomu podawano we wlewie do żył wrotnych myszy, które następnie analizowano pod kątem ekspresji transgenu. Każdy wektor zawierał genom oparty na AAV2 wykorzystujący opisane uprzednio specyficzne dla wątroby promotory (tj. promotor albuminy lub globuliny wiążącej hormon tarczycy) kierujące ekspresją transgenu. Konkretniej, kasety CMVCG i minigenu TBGCG użyto do transferu genów skierowanego odpowiednio do mięśni i wątroby.
PL 221 877 B1 3
Poziomy rhCG określono w jednostkach względnych (RU x 103). Dane pochodziły z oznaczeń próbek surowicy zebranych w dniu 28 po podaniu wektora (4 zwierzęta na grupę). Jak przedstawiono w Tabeli 3, wpływ białek kapsydu na wydajność transdukcji wektorów A1AT u myszy nu/nu i C57BL/6 i wektorów CG u myszy C57BL/6 był zgodny (patrz Tabela 6).
T a b e l a 6. Ekspresja podjednostki β gonadotropiny kosmówkowej małpy rezus (rhCG)
Wektor Mięsień Wątroba
AAV2/1 4,5 ± 2,1 1,6 ± 1,0
AAV2 0,5 ± 0,1 0,7 ± 0,3
AAV2/5 ND* 4,8 ± 0,8
AAV2/7 14,2 ± 2,4 8,2 ± 4,3
AAV2/8 4,0 ± 0,7 76,0 ± 22,8
* Nie określone w tym doświadczeniu.
We wszystkich przypadkach wektory AAV2/8 dawały najwyższy poziom ekspresji transgenu, który był w zakresie od 16 do 110 razy większy niż uzyskany dla wektorów AAV2/2; ekspresja z wektorów AAV2/5 i AAV2/7 miała wartość pośrednią, przy czym wyższą dla AAV2/7 niż dla AAV2/5. Analiza wybarwionych X-Gal skrawków wątroby zwierząt, które otrzymały odpowiednie wektory lacZ wykazała korelację między liczbą transdukowanych komórek a ogólnym poziomem ekspresji transgenu. DNA wyizolowany z wątrób myszy C57BL/6, które otrzymały wektory A1AT przebadano pod kątem ilości DNA wektora przy zastosowaniu technologii PCR w czasie rzeczywistym.
Ilość DNA wektora stwierdzona w wątrobie 56 dni po iniekcji korelowała z poziomami ekspresji transgenu (patrz Tabela 7). Dla tego doświadczenia do PCR TaqMan zastosowano zestaw sondy i starterów rozpoznających region poliA SV40 genomu wektora. Przedstawione wartości są średnimi z odchyleniami standardowymi. Zwierzęta uśmiercono w 56 dniu w celu pobrania tkanek wątroby do ekstrakcji DNA. Badania te wskazują, że AAV8 jest najwydajniejszym wektorem dla skierowanego do wątroby transferu genów ze względu na zwiększoną liczbę transdukowanych hepatocytów.
T a b e l a 7. Analiza PCR w czasie rzeczywistym ilości wektorów AAV w wątrobie myszy nu/nu po wstrzyknięciu 1 x 1011 kopii genomu wektora
Wektory AAV/dawka Kopie genomu na komórkę
AAV2/1AlbA1AT 0,6 ± 0,36
AAV2AlbA1AT 0,003 ± 0,001
AAV2/5AlbA1AT 0,83 ± 0,64
AAV2/7AlbA1AT 2,2 ± 1,7
AAV2/8AlbA1AT 18 ± 11
Opisane powyżej dane serologiczne sugerują, że wektor AAV2/8 nie powinien być neutralizowany in vivo po immunizacji innymi serotypami. Myszy C57BL/6 otrzymały do żyły wrotnej iniekcje z wektora AAV2/8 wyrażającego psi czynnik IX (1011 kopii genomu) 56 dni po otrzymaniu domięśniowych iniekcji z wektorów A1AT różnych serotypów. Wysoki poziom ekspresji czynnika IX uzyskano 14 dni po wlewie AAV2/8 do zwierząt naiwnych (17±2 μg/ml, n=4), który nie różnił się znacząco od poziomu zaobserwowanego u zwierząt immunizowanych AAV2/1 (31±23 μg/ml, n=4), AAV2/2 (16 μg/ml, n=2) i AAV2/7 (12 μg/ml, n=2). Stanowi to przeciwieństwo sytuacji zaobserwowanej u zwierząt immunizowanych AAV2/8, którym podawano we wlewie wektor AAV2/8 z czynnikiem IX, u których nie zaobserwowano wykrywalnego czynnika IX (<0,1 μg/ml, n=4).
Oligonukleotydy komplementarne do konserwatywnych regionów genu cap amplifikowały sekwencje rezusów stanowiące unikatowe AAV. Identyczne sekwencje charakterystyczne cap odnaleziono w wielu tkankach rezusów pochodzących z co najmniej dwóch różnych kolonii. Pełnej długości otwarte ramki odczytu rep i cap wyizolowano i zsekwencjonowano z pojedynczych źródeł. Jedynie otwarte ramki odczytu cap nowych AAV były niezbędne do oceny ich potencjału jako wektorów, po34
PL 221 877 B1 nieważ wektory z kapsydami AAV7 lub AAV8 wytworzono wykorzystując ITR i rep z AAV2. Uprościło to także porównanie różnych wektorów, ponieważ rzeczywisty genom wektora jest identyczny w różnych serotypach wektora. W istocie wydajność zrekombinowanych wektorów wytworzonych w tym podejściu nie wykazywała różnic dla różnych serotypów.
Wektory oparte na AAV7 i AAV8 wydają się być immunologicznie różne (tj. nie są neutralizowane przez przeciwciała wytworzone przeciwko innym serotypom). Ponadto, surowice ludzkie nie neutralizują transdukcji przez wektory AAV7 i AAV8, co stanowi istotną przewagę nad obecnie opracowywanymi AAV pochodzącymi od ludzi, przeciwko którym u znaczącej części populacji ludzkiej występuje istniejąca wcześniej odporność, która jest neutralizującą [Chirmule, N., i wsp., (1999) Gene Ther 6, 1574-83].
Tropizm każdego z nowych wektorów jest korzystny dla zastosowań in vivo. Wektory AAV2/7 wydają się transdukować do mięśni szkieletowych równie wydajnie, jak AAV2/1, który jest serotypem nadającym najwyższy poziom transdukcji w mięśniu szkieletowym spośród zbadanych do tej pory AAV naczelnych [Xiao, W., cytowane powyżej; Chou (2001), cytowane powyżej i Chou (2000), cytowane powyżej]. Co ważne, AAV2/8 dostarcza istotnej przewagi w porównaniu z innymi serotypami w odniesieniu do transferu genów do wątroby, który dotychczas był stosunkowo zawodny w kategoriach ilości stabilnie stransdukowanych hepatocytów. AAV2/8 powtarzalnie osiągał 10 do 100-krotną poprawę wydajności transferu genów w porównaniu z innymi wektorami. Podstawa poprawionej wydajności AAV2/8 jest niejasna, choć przypuszczalnie jest ona związana z pobieraniem przez inny receptor, który jest bardziej aktywny na bazolateralnej powierzchni hepatocytów. Ta poprawiona wydajność będzie bardzo przydatna w opracowywaniu skierowanego do wątroby transferu genów, gdzie liczba transdukowanych komórek jest krytyczna tak, jak w schorzeniach cyklu mocznikowego i rodzinnej hipercholesterolemii.
Zaprezentowano nowe podejście do wykrywania nowych AAV, oparte na odzyskiwaniu sekwencji genomowych przez PCR. Amplifikowane sekwencje łatwo wbudowano do wektorów i przebadano na zwierzętach. Brak uprzedniej odporności przeciwko AAV7 i korzystny tropizm wektorów wobec mięśni wskazuje, że AAV7 jest odpowiedni do wykorzystania jako wektor w terapii genowej człowieka i innych zastosowaniach in vivo. Podobnie, brak uprzedniej odporności przeciwko innym serotypom AAV i ich tropizm czyni je użytecznymi do dostarczania cząsteczek terapeutycznych i innych użytecznych cząsteczek.
P r z y k ł a d 9 - Badania tropizmu tkankowego
W projekcie schematu wysoko wydajnego przeszukiwania funkcjonalnego nowych konstruktów AAV na szeroką skalę wybrano niespecyficzny względem tkanki i wysoce aktywny promotor CB (wzmocniony CMV promotor kurzej β-aktyny) do kierowania ekspresją łatwo wykrywalnego i oznaczalnego ilościowo genu - ludzkiego genu α-antytrypsyny. Zatem dla każdego nowego klonu AAV powinien być wykonany tylko jeden wektor do badania transferu genów skierowanego do trzech różnych tkanek: wątroby, płuca i mięśni, w celu zbadania tropizmu tkankowego konkretnego konstruktu AAV. W następującej tabeli podsumowano dane uzyskane z 4 nowych wektorów AAV w badaniach tropizmu tkankowego (AAVCBA1AT), w których stwierdzono, że nowy klon kapsydu AAV - 44.2 jest bardzo silnym nośnikiem transferu genów we wszystkich 3 tkankach, ze szczególnie dużą przewagą w tkance płuca. Tabela 8 przedstawia dane (w μg A1AT/ml surowicy) w 14 dniu badania.
T a b e l a 8
Wektor Tkanka docelowa
Płuco Wątroba Mięsień
AAV2/1 ND ND 45 ± 11
AAV2/5 0,6 ± 0,2 ND ND
AAV2/8 ND 84 ± 30 ND
AAV2/rh.2 (43.1) 14 ± 7 25 ± 7,4 35 ± 14
AAV2/rh.10 (44.2) 23 ± 6 53 ± 19 46 ± 11
AAV2/rh.13 (42.2) 3,5 ± 2 2 ± 0,8 3,5 ± 1,7
AAV2/rh.21 (42.10) 3,1 ± 2 2 ± 1,4 4,3 ± 2
AAV2/rh.21 (42.10) 3,1 ± 2 2 ± 1,4 4,3 ± 2
PL 221 877 B1
Dla potwierdzenia lepszego tropizmu AAV 44.2 w tkance płuca przeprowadzono kilka innych doświadczeń. Najpierw wektor AAV niosący minigen CC10hA1AT dla specyficznej ekspresji w płucach pseudotypowano kapsydami nowych AAV i podano zwierzętom pozbawionym odporności (nagie NCR) w takiej samej objętości (50 μl każdego z oryginalnych preparatów) przez wstrzyknięcie dotchawicze tak, jak przedstawiono w następującej tabeli. W Tabeli 9, 50 μl każdego oryginalnego preparatu na mysz, nagie NCR, granica wykrywalności >0,033 μg/ml, dzień 28.
T a b e l a 9
Wektor Całkowite GC w 50 μ! wektora μ9 A1AT/ml dla 50 μ! wektora μ9 A1AT/ml na 1Χ1011 wektora Względny transfer genu w porównaniu z rh.10 (klon 44.2)
2/1 3 x 1012 2,6 ± 0,5 0,09 ± 0,02 2,2
2/2 5,5 x 1011 <0,03 <0,005 <0,1
2/5 3,6 x 1012 0,65 ± 0,16 0,02 ± 0,004 0,5
2/7 4,2 x 1012 1 ± 0,53 0,02 ± 0,01 0,5
2/8 7,5 x 1011 0,9 ± 0,7 0,12 ± 0,09 2,9
2/ch.5 (A.3.1) 9 x 1012 1 ± 0,7 0,01 ± 0,008 0,24
2/rh.8 (43.25) 4,6 x 1012 26 ± 21 0,56 ± 0,46 13,7
2/rh.10 (44.2) 2,8 x 1012 115 ± 38 4,1 ± 1,4 100
2/rh.13 (42.2) 6 x 1012 7,3 ± 0,8 0,12 ± 0,001 2,9
2/rh.21 (42.10) 2,4 x 1012 9 ± 0,9 0,38 ± 0,04 9,3
2/rh.22 (42.11) 2,6 x 1012 6 ± 0,4 0,23 ± 0,02 5,6
2/rh.24 (42.13) 1,1 x 1011 0,4 ± 0,3 0,4 ± 0,3 1
Wektory podano także zwierzętom immunokompetentnym (C57BL/6) w jednakowej liczbie kopii genomu (1x1011 GC) jak przedstawiono w Tabeli 10. (1x1011 GC na zwierzę, C57BL/6, dzień 14, granica wykrywalności >0,033 μg/ml).
T a b e l a 10
Wektor AAV μg A1AT/ml na 1Χ1011 wektora Względny transfer genu w porównaniu z rh.10 (klon 44.2)
2/1 0,076 ± 0,031 2,6
2/2 0,1 ± 0,09 3,4
2/5 0,0840 ± 0,033 2,9
2/7 0,33 ± 0,01 11
2/8 1,92 ± 1,3 2,9
2/ch.5 (A.3.1) 0,048 ± 0,004 1,6
2/rh.8 (43.25) 1,7 ± 0,7 58
2/rh.10 (44.2) 2,93 ± 1,7 100
2/rh.13 (42.2) 0,45 ± 0,15 15
2/rh.21 (42.10) 0,86 ± 0,32 29
2/rh.22 (42.11) 0,38 ± 0,18 13
2/rh.24 (42.13) 0,3 ± 0,19 10
PL 221 877 B1
Dane z obu doświadczeń potwierdzają doskonały tropizm klonu 44.2 w transferze genów skierowanym do płuc.
Co ciekawe, skuteczność klonu 44.2 w transferze genów skierowanym do wątroby i mięśni była również znakomita, zbliżona do AAV8 najskuteczniejszego w transdukcji do wątroby i AAV1 najskuteczniejszego w transdukcji do mięśni, co sugeruje, że ten nowy AAV ma jakieś intrygujące znaczenie biologiczne.
W celu zbadania właściwości serologicznych tych nowych AAV, stworzono pseudotypowane wektory AAVGFP do immunizacji królików i transdukcji in vitro komórek 84-31 w obecności i pod nieobecność surowic odpornościowych przeciwko różnym kapsydom. Dane podsumowano poniżej:
T a b e l a 11a. Oznaczenia krzyżowych NAB w komórkach 8431 i koinfekcja adenowirusem (Adv) Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z:
Surowica królika immunizowanego: 109 GC 109 GC 109 GC 1010 GC
rh.13 rh.21 rh.22 rh.24
AAV2/42.2 AAV2/42.10 AAV2/42.11 AAV2/42.13
AAV2/1 1/20 1/20 1/20 brak NAB
AAV2/2 1/640 1/1280 1/5120 brak NAB
AAV2/5 brak NAB 1/40 1/160 brak NAB
AAV2/7 1/81920 1/81920 1/40960 1/640
AAV2/8 1/640 1/640 1/320 1/5120
ch.5 AAV2/A3 1/20 1/160 1/640 1/640
rh.8 AAV2/43.25 1/20 1/20 1/20 1/320
rh.10 AAV2/44.2 brak NAB brak NAB brak NAB 1/5120
rh.13 AAV2/42.2 1/5120 1/5120 1/5120 brak NAB
rh.21 AAV2/42.10 1/5120 1/10240 1/5120 1/20
rh.22 AAV2/42.11 1/20480 1/20480 1/40960 brak NAB
rh.24 AAV2/43.13 brak NAB 1/20 1/20 1/5120
Surowica królika immunizowanego
T a b e l a 11b. Oznaczenie krzyżowych NAB w komórkach 8431 i koinfekcja Adv Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z:
109 GC 1010 GC 1010 GC 109 GC 109 GC
rh.12 ch5 rh.8 rh.10 rh.20
AAV/42.1B AAV2/A3 AAV2/43.25 AAV2/44.2 AAV2/42.8.2
AAV2/1 brak NAB 1/20480 brak NAB 1/80 ND
AAV2/2 1/20 brak NAB brak NAB brak NAB ND
AAV2/5 brak NAB 1/320 brak NAB brak NAB ND
AAV2/7 1/2560 1/640 1/160 1/81920 ND
AAV2/8 1/10240 1/2560 1/2560 1/81920 ND
ch.5 AAV2/A3 1/1280 1/10240 ND 1/5120 1/320
rh.8 AAV2/43.25 1/1280 ND 1/20400 1/5120 1/2560
PL 221 877 B1 cd. tabeli 11b
rh.10 AAV2/44.2 1/5120 ND ND 1/5120 1/5120
rh.13 AAV2/42.2 1/20 ND ND brak NAB 1/320
rh.21 AAV2/42.10 1/20 ND ND 1/40 1/80
rh.22 AAV2/42.11 brak NAB ND ND ND brak NAB
rh.24 AAV2/43.13 1/5120 ND ND ND 1/2560
T a b e l a 12
Miano surowic królika Miano po dawce przypominającej
Wektor Miano d21
ch.5 AAV2/A3 1/10,240 1/40960
rh.8 AAV2/43.25 1/20,400 1/163840
rh.10 AAV2/44.2 1/10,240 1/527680
rh.13 AAV2/42.2 1/5,120 1/20960
rh.21 AAV2/42.10 1/20,400 1/81920
rh.22 AAV2/42.11 1/40,960 ND
rh.24 AAV2/43.13 1/5,120 ND
T a b e l a 13a. Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z GFP:
109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę
ch. 5
AAV2/1 AAV2/2 AAV2/5 AAV2/7 AAV2/8 AAV2/A3
#GFU/ /pole 128 >200 95 56 13 1
83 >200 65 54 11 1
T a b e l a 13b. Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z GFP:
109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę 109 GC/stu- dzienkę
rh.8 rh.10 rh.13 rh.21 rh.22 rh.24 rh.12
AAV2/4 3.2 5 AAV2/44.2 AAV2/42.2 AAV2/42.10 AAV2/42.11 AAV2/42.13 AAV2/42.1B
# GFU/- /pole 3 13 54 62 10 3 18
2 12 71 60 14 2 20
48 47 16 3 12
P r z y k ł a d 10 - Mysi model rodzinnej hipercholesterolemii
Następujące doświadczenie wykazuje, że konstrukt AAV2/7 dostarcza receptora LDL i wyraża receptor LDL w ilości wystarczającej do zmniejszenia poziomu cholesterolu i triglicerydów w osoczu w zwierzęcych modelach rodzinnej hipercholesterolemii.
PL 221 877 B1
A. Konstrukcja wektora
Wektory AAV upakowane w białkach kapsydowych AAV7 lub AAV8 skonstruowano stosując strategię pseudotypowania [Hildinger M, i wsp., J. Virol 2001; 75: 6199-6203]. Zrekombinowane genomy AAV z odwróconymi powtórzeniami końcowymi (ITR) AAV2 upakowano przez potrójną transfekcję komórek 293 plazmidem cis, adenowirusowym plazmidem pomocniczym i chimerycznym konstruktem pakującym - fuzją kapsydów nowych serotypów AAV z genem rep AAV2. Chimeryczny plazmid pakujący skonstruowano tak, jak opisano poprzednio [Hildinger i wsp., cytowane powyżej]. Zrekombinowane wektory oczyszczono standardową metodą sedymentacji w CsCl2. Dla określenia wydajności przeprowadzono analizę TagMan (Applied Biosystems) z zastosowaniem sond i starterów rozpoznających region poli(A) SV40 wektorów [Gao GP, i wsp., Hum Gene Ther. 2000 10 października; 11 (15): 2079-91]. Uzyskane wektory wyrażają transgen pod kontrolą promotora ludzkiego genu globuliny wiążącej hormon tarczycy (TBG).
B. Zwierzęta
Myszy pozbawione receptora LDL w tle C57BL/6 nabyto z Jackson Laboratory (Bay Harbor, ME, USA) i utrzymywano jako kolonię rozrodczą. Myszom dawano nieograniczony dostęp do wody i podawano bogatą w tłuszcz dietę Western (wysoki % cholesterolu) począwszy od trzech tygodni przed infekcją. W dniu -7 oraz w dniu 0 pobrano krew przez skrwawienie zaoczodołowe i oznaczono profil lipidowy. Myszy losowo podzielono na siedem grup. Wektor wstrzyknięto do żyły wrotnej tak, jak opisano uprzednio [Chen SJ i wsp., Mol Therapy 2000; 2 (3), 256-261]. W skrócie, myszy znieczulono ketaminą i ksylazyną. Przeprowadzono laparotomię i odsłonięto żyłę wrotną. Za pomocy igły 30 G wstrzyknięto odpowiednią dawkę wektora rozcieńczonego w 100 μl PBS bezpośrednio do żyły wrotnej. W miejscu wstrzyknięcia zastosowano ucisk, aby zapewnić zatrzymanie krwawienia. Ranę zamknięto i opatrzono, a myszy starannie obserwowano kolejnego dnia. Cotygodniowe skrwawienia przeprowadzano począwszy od 14 dnia 14 skierowanym do wątroby transferze genów dla zmierzenia poziomu lipidów krwi. Dwa zwierzęta z każdej grupy uśmiercono w punktach czasowych - 6 tydzień i 12 tydzień po wstrzyknięciu wektora w celu zbadania wielkości płytek miażdżycowych oraz ekspresji wektora. Pozostałe myszy uśmiercono w 20 tygodniu w celu zmierzenia płytek i określenia ekspresji transgenu.
T a b e l a 14
Wektor Dawka n
Grupa 1 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1012 gc 12
Grupa 2 AAV2/7-TBG-hLDLr 3 x 1011 gc 12
Grupa 3 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1011 gc 12
Grupa 4 AAV2/8-TBG-hLDLr 1 x 1012 gc 12
Grupa 5 AAV2/8-TBG-hLDLr 3 x 1011 gc 12
Grupa 6 AAV2/8-TBG-hLDLr 1 x 1011 gc 12
Grupa 7 AAV2/7-TBG-LacZ 1 x 1011 gc 16
C. Analiza lipoprotein osocza i funkcji wątroby
Próbki krwi pobrano ze splotu zaoczodołowego po 6 godzinnym okresie postu. Surowicę oddzielono od osocza przez wirowanie. Ilość lipoprotein osocza i transaminaz wątroby w surowicy wykryto z zastosowaniem automatycznego analizatora chemii klinicznej (ACE, Schiapparelli Biosystems, Alpha Wassermann) .
D. Wykrywanie ekspresji transgenu
Ekspresję receptora LDL oceniono barwieniem immunofluorescencyjnym i analizą Western blot. Do analizy Western blot zamrożoną tkankę wątroby homogenizowano z buforem do lizy (20 mM Tris, pH 7,4, 130 mM NaCl, 1% Triton X 100, inhibitor proteazy (kompletny, pozbawiony EDTA, Roche, Mannheim, Niemcy). Stężenie białka określono stosując zestaw Micro BCA Protein Assay Reagent Kit (Pierce, Rockford, IL). 40 μg białka rozdzielano na żelach 4-15% Tris-HCl Ready (Biorad, Hercules, CA) i przenoszono na filtr nitrocelulozowy (Invitrogen). Dla wytworzenia przeciwciał przeciwko recepto13 rowi hLDL królikowi wstrzyknięto dożylnie preparat AdhLDLr (1x1013 GC). Cztery tygodnie później pozyskano surowicę królika i wykorzystano do analizy Western. Jako przeciwciało pierwszorzędowe
PL 221 877 B1 wykorzystano rozcieńczenie 1:100 surowicy, po czym zastosowano skoniugowane z HRP IgG antykrólik i detekcję chemiluminescencyjną ECL (zestaw ECL Western Blot Detection Kit, Amersham, Arlington Heights, IL).
E. Immunocytochemia
Dla określenia ekspresji receptora LDL w zamrożonych skrawkach wątroby przeprowadzono analizę immunocytochemiczną. 10 μm skrawki z kriostatu utrwalano w acetonie przez 5 minut albo pozostawiano nieutrwalone. Blokowanie uzyskiwano przez 1 godzinną inkubację z 10% surowicą kozią. Skrawki inkubowano następnie przez godzinę z pierwszorzędowym przeciwciałem w temperaturze pokojowej. Królicze poliklonalne przeciwciało przeciwko ludzkiemu LDL (Biomedical Technologies Inc., Stoughton, MA) zostało użyte w rozcieńczeniu zgodnym z zaleceniami wytwórcy. Skrawki przepłukano PBS i inkubowano z rozcieńczonym 1:100 kozim przeciwciałem przeciw króliczym skoniugowanym z fluoresceiną (Sigma, St. Louis, MO). Próbki ostatecznie badano pod mikroskopem fluorescencyjnym Nikon Microphot-FXA. We wszystkich przypadkach po inkubacji skrawki intensywnie płukano w PBS. Na negatywne kontrole składały się preinkubacja w PBS, pominięcie pierwszorzędowego przeciwciała i zamiana pierwszorzędowego przeciwciała na dopasowane izotypowo nieimunogenne przeciwciało kontrolne. Wspomniane powyżej trzy typy kontroli przeprowadzono dla każdego z doświadczeń tego samego dnia.
F. Wydajność transferu genów
Tkankę wątroby pozyskano po uśmierceniu myszy w wyznaczonych punktach czasowych. Tkankę błyskawicznie zamrożono w ciekłym azocie i przechowywano w -80°C do dalszej obróbki. DNA ekstrahowano z tkanki wątroby z zastosowaniem zestawu QIAmp DNA Mini (QIAGEN GmbH, Niemcy) według protokołu wytwórcy. Liczbę kopii genomu wektorów AAV w tkance wątroby oznaczono przy użyciu analizy TaqMan z zastosowaniem sond i starterów rozpoznających ogon poli(A) SV40 tak, jak opisano powyżej.
G. Pomiar płytek miażdżycowych
Dla ilościowego oznaczenia płytek miażdżycowych w aorcie, myszy znieczulano (10% ketamina i ksylazyna, ip), otwierano klatkę piersiową i poddawano perfuzji lodowatym roztworem soli buforowanej fosforanem przez lewy przedsionek.
Następnie, starannie pobierano aortę, przecinano wzdłuż linii brzusznej od łuku aorty do tętnic udowych i utrwalano w formalinie. Bogate w lipidy płytki miażdżycowe wybarwiano Sudanem IV (Sigma, Niemcy) i rozpinano aortę na płaskiej czarnej woskowej powierzchni. Obraz utrwalono kolorową kamerą wideo Sony DXC-960 MD. Powierzchnię płytek jak również całkowitą powierzchnię aorty określano za pomocą sytemu analizy obrazu Phase 3 Imaging Systems (Media Cybernetics).
H. Klirens I125 LDL
125
Zbadano dwa zwierzęta z każdej grupy doświadczalnej. Dawkę wyznakowanego I125 LDL (uprzejmie udostępnionego przez Dana Radera, U Penn) wlewano powoli przez żyłę ogonową w ciągu
125 sek (1 000 000 zliczeń [I ]-LDL rozcieńczonych w 100 μl jałowego PBS na zwierzę). W punktach czasowych 3 min, 30 min, 1,5 godz., 3 godz., 6 godz. po wstrzyknięciu pobierano próbkę krwi przez splot zaoczodołowy. Osocze oddzielono od krwi i zliczono 10 μl osocza w liczniku gamma. Ostatecznie na podstawie danych klirensu lipoprotein obliczono metabolizm w jednostce czasu (ang. „fractional catabolic rate”).
I. Ocena nagromadzenia lipidów w wątrobie
Przeprowadzono barwienie czerwienią oleistą (Oil Red) zamrożonych skrawków wątroby dla określenia nagromadzenia lipidów. Zamrożone skrawki wątroby krótko przepłukano w destylowanej wodzie, po czym inkubowano przez 2 minuty w absolutnym glikolu propylenowym. Skrawki wybarwiano następnie w roztworze czerwieni oleistej (0,5% w glikolu propylenowym) przez 16 godzin, po czym barwiono kontrastowo roztworem hematoksyliny Mayera przez 30 sekund i osadzano w ogrzanym roztworze galaretki glicerynowej.
Dla ilościowego określenia cholesterolu i zawartości triglicerydów w wątrobie, skrawki wątroby homogenizowano i inkubowano w mieszaninie chloroform/metanol (2:1) przez noc. Po dodaniu 0,05% H2SO4 i odwirowaniu przez 10 minut zebrano dolną warstwę każdej próbki, podzielono na dwie porcje i wysuszono w atmosferze azotu. Do pomiaru cholesterolu wysuszone lipidy pierwszej porcji rozpuszczano w 1% Triton X-100 w chloroformie. Po rozpuszczeniu roztwór suszono w atmosferze azotu. Po rozpuszczeniu lipidów w ddH2O i inkubacji przez 30 minut w 37°C całkowite stężenie cholesterolu mierzono przy zastosowaniu zestawu Total Cholesterol Kit (Wako Diagnostics). Dla drugiej porcji wysuszone lipidy rozpuszczano w alkoholowym roztworze KOH i inkubowano w 60°C przez 30 minut.
PL 221 877 B1
Następnie dodawano 1M MgCl2, po czym inkubowano na lodzie przez 10 minut i wirowano przy 14 000 rpm przez 30 minut. Ostatecznie w supernatancie oznaczano triglicerydy (Wako Diagnostics).
Wszystkie wektory pseudotypowane w kapsydzie AAV2/8 lub AAV2/7 obniżały całkowity cholesterol, LDL i triglicerydy w porównaniu z kontrolą. Te wektory doświadczalne poprawiały także fenotyp hipercholesterolemii w sposób zależny od dawki. Obniżenie powierzchni płytek u myszy z AAV2/8 i AAV2/7 zaobserwowano u traktowanych myszy w pierwszym teście (2 miesiące) i obserwowano utrzymywanie się tego efektu przez cały czas trwania doświadczenia (6 miesięcy).
P r z y k ł a d 10 - Ekspresja funkcjonalnego czynnika IX i poprawa w hemofilii
A. Myszy z nokautem
Ekspresję funkcjonalnego psiego czynnika IX (FIX) zbadano u myszy z hemofilią B. Skonstruowano wektory z kapsydami AAV1, AAV2, AAV5, AAV7 lub AAV8 dla dostarczenia konstruktu 5' ITR AAV2 - promotor specyficzny dla wątroby [LSP] - FIX psa - element post-regulacyjny wirusa zapalenia wątroby świstaka amerykańskiego (woodchuck hepatitis post-regulatory element - WPRE) - ITR 3' AAV2. Wektory skonstruowano tak, jak opisano to w Wang i wsp., Molecular Therapy 2: 154-158, z zastosowaniem odpowiednich kapsydów.
Myszy z nokautem skonstruowano tak, jak opisano w Wang i wsp., 1997. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 11563-11566. Model ten blisko naśladuje fenotypy hemofilii B u człowieka.
Wektory różnych serotypów (AAV1, AAV2, AAV5, AAV7 i AAV8) dostarczano w pojedynczej iniekcji do żyły wrotnej do wątroby dorosłych myszy C57BL/6 cierpiących na hemofilię w dawce 1x1011
GC/mysz dla pięciu różnych serotypów, zaś jedna grupa otrzymała AAV8 w mniejszej dawce 1x1010 GC/mysz. Grupie kontrolnej wstrzyknięto 1x1011 GC AAV2/8 TBG LacZ3. Każda grupa składała się z 5-10 samców i samic myszy. Myszy skrwawiano co dwa tygodnie po podaniu wektorów.
1. ELISA
Stężenie psiego FIX w osoczu myszy określono za pomocą oznaczenia ELISA swoistego wobec psiego czynnika IX, przeprowadzanego zasadniczo tak, jak opisano w Axelrod i wsp., 1990, Proc. Natl. Acad Sci. USA, 87: 5173-5177 z modyfikacjami. Jako pierwszorzędowego przeciwciała użyto przeciwciała owcy przeciwko psiemu czynnikowi IX (Enzyme Research Laboratories), zaś jako drugorzędowego przeciwciała użyto przeciwciała królika przeciwko psiemu czynnikowi IX (Enzyme Research Laboratories). Począwszy od dwóch tygodni po wstrzyknięciu wykryto podwyższone poziomy cFIX w osoczu dla wszystkich wektorów doświadczalnych. Podwyższone poziomy utrzymywały się na poziomie terapeutycznym przez cały czas trwania doświadczenia, tj. do 12 tygodni. Za poziom terapeutyczny uważa się 5% poziomu prawidłowego, czyli około 250 ng/ml.
Najwyższy poziom ekspresji zaobserwowano dla konstruktów AAV2/8 (przy 1011) i AAV2/7 z utrzymującym się ponad fizjologicznym poziomem cFIX (dziesięciokrotnie wyższym, niż poziom prawidłowy. Poziomy ekspresji dla AAV2/8 (1011) były w przybliżeniu dziesięciokrotnie większe, niż obserwowane dla AAV2/2 i AAV2/8 (1010). Najniższy poziom ekspresji, choć ciągle w granicach poziomu terapeutycznego, zaobserwowano dla AAV2/5.
2. Oznaczenie czasu częściowej tromboplastyny po aktywacji (aPTT) in vitro
Aktywność funkcjonalnego czynnika IX w osoczu myszy z nokautem FIX określono za pomocą oznaczenia czasu częściowej tromboplastyny po aktywacji (aPTT) in vitro. Próbki krwi myszy pobrano ze splotu zaoczodołowego do 1/10 objętości buforu cytrynianowego. Oznaczenie aPTT przeprowadzono tak, jak opisano to w Wang i wsp., 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 11563-11566.
Czasy krzepnięcia w aPTT w próbkach osocza wszystkich myszy, którym wstrzyknięto wektor były w prawidłowym zakresie (około 60 sek.) przy pomiarze dwa tygodnie po wstrzyknięciu i utrzymywały się w prawidłowym, lub niższym niż prawidłowy zakresie przez okres badania (12 tygodni).
Najniższe utrzymujące się czasy krzepnięcia zaobserwowano u zwierząt otrzymujących AAV2/8 (1011) i AAV2/7. Do tygodnia 12 AAV2/2 również indukował czas krzepnięcia podobny do obserwowanego dla AAV2/8 i AAV2/7. Tego krótszego czasu krzepnięcia nie zaobserwowano jednak dla AAV2/2 przed tygodniem 12, podczas gdy obniżone czasy krzepnięcia (w zakresie 25-40 sek.) obserwowano dla AAV2/8 i AAV2/7 począwszy od drugiego tygodnia.
Obecnie przeprowadza się barwienie immunohistochemiczne tkanek wątroby pobranych od niektórych z leczonych myszy. Około 70-80% hepatocytów wybarwia się dodatnio pod kątem psiego FIX u myszy, której wstrzyknięto wektor AAV2/8.cFIX.
B. Psy cierpiące na hemofilię B
Psy mające mutację w domenie katalitycznej genu F.IX, która, na podstawie badań modelowych, wydaje się destabilizować białko, cierpią na hemofilię B [Evans i wsp., 1989, Proc. Natl. Acad.
PL 221 877 B1
Sci. USA, 86: 10095-10099]. Grupę takich psów utrzymywano przez ponad dwadzieścia lat w University of North Carolina, Chapel Hill. Parametry hemostatyczne tych psów są dobrze opisane i obejmują brak antygenu osocza F.IX, czasy krzepnięcia całej krwi ponad 60 minut, podczas gdy u zdrowych psów wynoszą one 6-8 minut, a przedłużony czas częściowej tromboplastyny po aktywacji 50-80 sekund, podczas gdy u zdrowych psów wynosi on 13-28 sekund. Psy te cierpią na nawracające samorzutne krwotoki. Zazwyczaj poważne epizody krwawienia są leczone z sukcesem pojedynczym dożylnym wlewem 10 ml/kg prawidłowego osocza psa; niekiedy dla powstrzymania krwawienia konieczne są powtórne wlewy.
Czterem psom wstrzyknięto do żyły wrotnej AAV.cFIX zgodnie z poniższym schematem. Pierwszy pies otrzymał pojedynczy zastrzyk AAV2/2.cFIX w dawce 3,7x1011 kopii genomu (GC)/kg. Drugi pies otrzymał pierwszy zastrzyk AAV2/2.cFIX (2,8x1011 GC/kg), po czym drugi zastrzyk AAV2/7.cFIX (2,3x1013 GC/kg) w dniu 1180. Trzeci pies otrzymał pojedynczy zastrzyk AAV2/2.cFIX w dawce 4,6x1012 GC/kg. Czwarty pies otrzymał zastrzyk AAV2/2.cFIX (2,8x1012 GC/kg) oraz zastrzyk w dniu 995 z AAV2/7.CFIX (5x1012 GC/kg).
Podbrzusze cierpiących na hemofilię psów otwiera się chirurgicznie i aseptycznie pod ogólnym znieczuleniem i podaje się do żyły wrotnej pojedynczą dawkę wektora. Zwierzęta chroni się przed krwotokiem w czasie około operacyjnym przez dożylne podanie prawidłowego osocza psa. Pies jest usypiany, intubowany dla uzyskania znieczulenia ogólnego, a podbrzusze golone i przygotowywane. Po otwarciu podbrzusza śledziona jest przesuwana w pole operacyjne. Lokalizowana jest żyła śledzionowa i umieszcza się luźno szew w pobliżu małego dystalnego nacięcia w żyle. Do żyły szybko wprowadza się igłę, po czym luzuje się szew i przewleka kaniulę 5F do miejsca w żyle w pobliżu odgałęzienia żyły wrotnej. Po zabezpieczeniu hemostazy i napełnieniu balonika cewnika do żyły wrotnej wlewa się około 5,0 ml wektora rozcieńczonego w PBS w czasie 5 minut. Następnie opróżnia się balonik, usuwa kaniulę i zabezpiecza hemostazę żylną. Następnie umieszcza się śledzionę z powrotem na miejscu, przyżega krwawiące naczynia i zamyka ranę operacyjną. Po dobrym zniesieniu operacji zwierze jest ekstubowane. Próbki krwi analizuje się tak, jak opisano [Wang i wsp., 2000, Molecular Therapy 2: 154-158].
Oczekiwane są wyniki wskazujące na poprawę lub częściową poprawę dla AAV2/7.
Podczas, gdy wynalazek opisano w odniesieniu do szczególnie korzystnych wykonań, należy zauważyć, że modyfikacje mogą być wprowadzone.
PL 221 877 B1
Lista SEKWENCJI <110 > The Truscees of the Universicy ci FensylvaniŁ
Ga o, G-u angp i ag
Wilson, James K.
Alvira, Mauricio <120> Wirusy stowarzyszone z adenowirusem, kompozycje, wyizolowane białko kapsydu, wyizolowana lub syntetyczna cząsteczka kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania rekombinowanycH wirusów, komórki gospodarza, białka obejmujące fragment białka kapsydu AAV, sztuczne białka, rekombinowane wirusy, cząsteczki, sposoby dostarczania transgenu do komórki, sposób identyfikacji serotypu sekwencji wirusa (AAV), zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, nowe serotypy wirusa, wyizolowane wirusy, rekombinowana komórka, zastosowanie wirusa
<13G> UPM-02735PCT
<150> <151 > US 60/350,607 2001-11-13
<15O> <151> US 60/341,117 2001*12*17
<15C> <151> US 60/377,065 2002-05-01
< 1SO> <151> US 60/336,675 2002-05-05
< 160 > 120
<170> Patent w wersj
<210> 1 <211> 4721 < 212 > DMA <213> serotyp 7 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 1
ztggccactc cccctatgcg cgctcgctcg ctcggtgggg cctgcggacc aaaggtccgc 60
agacggcaga gctctgctct gccggcccca ccaagccacc gaacgcgcat agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg taccgcgaag cgcctcccac gctgccgcgt eagcgctgac ISO
gtaaatcacg tcatagggga gtggtcctgt attagctgtc acgtgagtgc ttttgcgaca 240
tctćgcgaca ccacgtcgcc atfctgaggta tatatggccg agtgagcgag caggatctcc 300
attttgaccg cgaaatttga acgagcagca gccatgccgg gtttctacgs gategtgatc •60
aaggtgccga gcgacctgga cgagcacctc ccgggcattt ctgacćcgtt tgtgaactgg 420
gtggccgaga aggaatggga gctgcccccg gattctgaca tggatctgaa tctgatcgag 430
caggcacccc tgaccgtggc cgagaagctg cagcgccact zcctggtcca atggcgccgc 540 gtgagtaagg ccccggaggc cctattcttt gttcagttcg agaagggcga gagctacttc 600 caccttcacg ttctggtgga gaccacgggg gtcasgtcca tggtgctagg ccgcttcctg 660 agtcagattc gggagaagct ggtccagacc atctaccgcg gggtcgagcc cacgctgccc 720
PL 221 877 B1
aactggttcg cggtgaccaa gacgcgtaat ggcgccggcg gggggaacaa ggtggtggac 730
gagtgctaca tccccaacta cctcctgccc aagacccagc ccgagctgca gtgggcgtgg 340
actaacatgg aggagtatat aagcgcgcgt ttgaacctgg ccgaacgcaa acggctcgtg 900
gcgcagcacc tgacccacgt cagccagacg caggagcaga acaaggagaa tctgaacccc 960
aatfcctgacg cgcccgtgat caggtcaaaa acctccgcgc gctacatgga gctggtcggg 1020
tggctggtgg accggggcat cacctccgag aagcagtgga tccaggagga ccaggcctcg 1080
Cacatctcct tcaacgccgc ctccaactcg cggtcccaga tcaaggccgc gctggacaat 114 0
gccggcaaga tcatggcgct gaccaaatcc gcgcccgact acctggtggg gccctcgctg 1200
cccgcggaca ttaaaaccaa ccgcatctac cgcatcctgg agctgaacgg gtacgatcct 1260
gcctacgccg gctccgtctt tctcggctgg gcccagaaaa agttcgggaa gcgcaacacc 1320
atctggctgt ttgggcccgo caccaccggc aagaccaaca ttgcggaagc catcgcccac 13Θ0
gccgtgccct tctacggctg cgtcaactgg accaatgaga actttccctt caacgattgc 1440
gtcgacaaga tggtgatctg gtgggaggag ggcaagatga cggccaaggt cgtggagtcc 1500
gccaaggcca ttctcggcgg cagcaaggtg cgcgtggacc aaaagtgcaa gtcgtccgcc 1560
cagatcgacc ccacccccgt gatcgtcacc tccaacacca acatgtgcgc cgtgattgac 1620
gggaacagca ccaccttcga goaccagcag ccgttgcagg accggatgtt caaatttgaa 1680
ctcacccgcc gtctggagca cgactttggc aaggtgacga agcaggaagt caaagagttc 1740
ttccgctggg ccagtgatca cgtgaccgag gtggcgcatg agttctacgt cagaaagggc 1800
ggagccagca aaagacccgc ccccgatgac gcggatataa gcgagcccaa gcgggectgc 1860
ccctcagtcg cggatccatc gacgtcagac gcggaaggag ctccggtgga ctttgccgac 1920
aggtaccaaa acaaatgttc tcgtcacgcg ggcatgattc agatgctgtt tccctgcaaa 1930
acgtgcgaga gaatgaatca gaatttcaac atttgcttca cacacggggt cagagactgt 2040
ttagagtgtt tccccggcgt gtcagaatct caaccggtcg tcagaaaaaa gacgtatcgg 2100
aaactctgcg cgattcatca tctgctgggg cgggcgcccg agattgcttg ctcggcctgc 2160
gacctggtca acgtggacct ggacgactgc gtttctgagc aataaatgac ttaaaccagg 2220
tatggctgcc gatggttatc ttccagattg gctcgaggac aacctctctg agggcattcg 2230
cgagtggtgg gacctgaaac ctggagcccc gaaacccaaa gccaaccagc aaaagcagga 2340
caacggccgg ggtctggtgc ttcctggcta caagtacctc ggacccttca acggactcga 2400
caagggggag cccgtcaacg cggcggacgc agcggccctc gagcacgaca aggcctacga 2460
ccagcagctc aaagcgggtg acaatccgta cctgcggtat aaccacgccg acgccgagtt 2520
tcaggagcgt ctgcaagaag atacgtcatt tgggggcaac ctcgggcgag cagtcttcca 2530
ggccaagaag cgggttctcg aacctctcgg tctggttgag gaaggcgcta agacggctcc 2640
PL 221 877 B1
cgcaaagaag agaccggtag agccgtcacc tcagcgttcc cccgacCcct ccacgggcat 2700
cgacaagaaa ggccagcagc ccgccagaaa gagactcaat ttcggtcaga otggcgactc 2760
agagtcagtc cccgaccctc aacctctcgg agaacctcca gcagcgccct ctagtgtggg 2820
atctggtaca gtggctgcag gcggtggcgc accsatggca gacaataacg aaggtgccga 2880
cggagtgggt aatgcctcag gaaattggca ttgcgattcc acatggctag gcgacagagt 2340
cattaccacc agcacccgaa cctgggccct gcccacctac aacaaccacc tctacaagca 2000
aatctccagt gaaactgcag gtagtaccaa cgacaacacc tacttcggct acagcacccc 3060
ctgggggtat tttgacttta acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg 3120
actcatcaac aacaactggg gattccggcc caagaagctg cggttcaagc tcttcaacat 3180
ccaggtcaag gaggtcacga cgaatgacgg cgttacgacc atcgctaata accttaccag 3240
cacgattcag gtattctcgg actcggaata ccagctgccg tacgtcctcg gctctgcgca 3300
ccagggctgc ctgcctccgc tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acggctacct 3360
gactctcaac aatggcagcc agtctgtggg acgttcctcc ttctactgcc tggagtactt 3420
cccctctcag atgctgagaa cgggcaacaa ctttgagttc agctacaget tcgaggacgt 3480
gcctttccac agcagctacg cacacagcca gagcctggac cggctcatga atcccctcat 3540
cgaccagtac ttgtactacc tggccagaac acagagtaac ccaggaggca cagctggcaa 3600
tcgggaactg cagttttacc agggcgggcc ttcaactatg gccgaacaag ccaagaattg 3660
gttacctgga ccttgcttcc ggcaacaaag agtctccaaa acgctggatc aaaacaacaa 3720
cagcaacttC gcttggactg gtgccaccaa atatcacctg aacggcagaa actcgttggt 3780
taatcccggc gtcgccatgg caactcacaa ggacgacgag gaccgctctt tcccatccag 3840
cggagtcctg atttttggaa aaactggagc aactaacaaa actacattgg aaaatgtgfct 3900
aatgacaaat gaagaagaaa ttcgtcctac taatcctgta gccacggaag aatacgggat 3960
agtcagcagc aacttacaag ccgctaatac tgcagcccag acacaagttg tcaacaacca 4020
gggagcctta cctggeatgg tctggcagaa ccgggacgtg tacctgcagg gtcccatctg 4080
ggccaagatt cctcacacgg atggcaactt tcacccgtct cctttgatgg gcggctttgg 4140
acttaaacat ccgcctcctc agatcctgat caagaacact cccgttcccg ctaatcctcc 4200
ggaggtgttt actcctgcca agtttgcttc gttcatcaca cagtacagca ccggacaagt 4260
cagcgtggaa atcgagtggg agctgcagaa ggaaaacagc aagcgctgga acccggagat 4320
tcagtacacc tccaactttg aaaagcagac tggfcgtggac tttgccgttg acagccaggg 4380
tgtttactct gagcctcgcc cfcattggcac tcgttacctc acccgtaatc tgtaattgca 4440
tgttaatcaa Caaaccggtt gattcgtttc agttgaactt tggtctcctg tgcttcttat 4500
cttatcggtt tccatagcaa ctggttacac attaactgct t999tgcgct tcacgataag 4560
PL 221 877 B1 aacactgacg tcaccgcggt acccctagtg atggagttgg ccactccctc tatgcgcgct 4620 cgctcgctcg gtggggcctg cggaccaaag gtccgcagac ggcagagctc tgctctgccg 4680 gccccaccga gcgagcgagc gcgcatagag ggagtggcca a 4721 <210> 2 <211> 737 <212> PET <213> białko kapsydu serotypu 7 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 2
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 30
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 10S 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Ala Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 15S 160
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro: Gin Pro Leu Gly Glu Pro 180 135 190
Pro Ala Ala Pro Ser Ser Val Gly Ser Gly Thr Val Ala Ala Gly Gly 195 200 205
PL 221 877 B1
Gly Al3 210 Pro Met Ala Asp Asn Asn 215 Glu Gly Ala Asp 220 C-ly Val Gly Asn
Ala Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His
245 250 255
iłSli Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Glu Thr Al a Gly Ser Thr Asn Asp Asn
260 2S5 270
Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg
275 280 285
Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn
230 295 300
Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile
305 310 315 320
Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn
325 330 335
Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Pile Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu 340 345 350
Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 355 360 365
Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn 370 375 330
Gly Ser Gin Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 335 330 335 400
Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asa Phe Glu Phe Ser Tyr Ser 405 410 415
Phe Glu Asp Val Pro Phe His ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu 420 425 430
Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala 435 440 445
Arg Thr Gin ser Asn Pro Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin 450 455 460
Phe Tyr Gin. Gly Gly Pro Ser Thr Ket Ala Glu Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
PL 221 877 B1
Leu Ero Gly Pro Cys Phe Arg Gin Gin Arg Val Ser Lys Thr Leu Asp 435 490 495
Gin Asn Asa Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 510
Leli Α»Π Gly Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Tar 515 520 525
Hi s Lys S30 Asp Asp Glu Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile 535 540
Phe Gly 54 5 Lys Thr Gly Ala Thr Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu 550 555 560
Met Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu 565 570 575
Glu Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala Asn Thr Ala Ala S30 535 590
Gin Thr Gin Val Val Asn Asa Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp 595 600 605
Gin Asn 610 Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro 615 620
His Thr 625 Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly 630 635 640
Leu Lys His Pro Pro Pro Gla Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro 645 650 655
A.1 a Asa Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile 660 6S5 670
Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu S75 680 6ΘΞ
Gin Lys 690 Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser 695 700
Asn Phe 705 Glu Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly 710 715 720
Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn 725 730 735
PL 221 877 B1 <210> 3 <211> 623 <212> ERT <213> rep_ białko serotypu 7 wirusa stowarzyszonego z adenowiruserr.
<400> 3
Met Pro Gly Ehe Tyr Glu Ile Val Ile Lys Val Pro Ser Asp Leu Asp
1 5 10 15
Glu His Leu Ero 20 Gly Ile ssr Asp ser 25 Ehe Val Asn 2rp Val 30 Ala Glu
lys Glu Trp 35 Glu Leu Ero Pro Asp 40 Ser A-SP Met Asp Leu 45 Asn leu Ile
Glu Gin 50 Ala Ero Leu Thr Val Ala Glu Ly3 55 ’ Leu Gin Arg Asp 60 Ehe Leu
Val Gin Trp Arg Arg Val Ser Lys Ala Pro Glu Ala Leu Ehe Ehe Val
65 70 75 30
Gin Phe Glu Lys Gly Glu Ser Tyr Phe Eis Leu His Val Leu Val Glu
85 90 95
Thr Thr Gly Val Lys Ser Met Val Leu Gly Arg Ehe Leu Ser Gin Ile
IOO 105 110
Glu L vs Leu Val Gin Thr Ile Tyr Arg Gly Val Glu Ero Thr Leu
115 120 125
2270 Asn Trp Phe Ala Val Thr lys Thr Arg A.sa Gly A-l a Gly Gly Gly
130 135 140
Asn Lys Val val Asp GlU Cys Tyr Ile Ero Asn Tyr Leu Leu Ero lys
145 150 155 160
Thr Gin Pro Glu Leu Gin Trp Ala Trp Thr Asn Met Glu Glu Tyr Ile
165 170 175
Ser Ala Cys Leu Asn Leu Ala Glu Arg Lys Arg Leu Val Ala Gin His
180 135 190
Leu Thr His Val Ser Gin Thr Gin Glu Gin Asn Lys Glu Asn Leu Asn
195 200 205
Pro Asn Ser Asp Ala Pro Val Ile Arg Ser Lys Thr Ser Ala Arg Tyr
210 215 220
Met Glu leu Val Gly Trp Leu Val Asp Arg Gly Ile Thr ser Glu Lys
225 230 235 240
PL 221 877 B1
Gin Trp
Ile Gin Glu Asp Gin Ala Ser Tyr ile ser Phe Asn Ala Ala 245 250 255
Ser Asn
Ser Arg Ser Gin Ile Lys Ala Ala Leu Asp Asn Ala Gly Lys 260 265 270
Ile Met
Ala Leu Thr Lys Ser Ala Pro Asp Tyr Leu Val Gly Pro Ser 275 230 285 *
Leu. Pro 290
Ala Asp Ile Lys Thr Asn Arg Ile Tyr Arg Ile Leu Glu Leu 295 300
Asn Gly 305
Tyr Asp Pro Ala Tyr Ala Gly Ser Val Phe Leu Gly Trp Ala 310 315 320
Gin Lys lys Phe Gly Lys Arg Asn Thr Ile Trp Leu Phe Gly Pro Ala 325 330 335
Thr Thr
Gly Lys Thr Asn Ile Ala Glu Ala ule Ala His Ala Val Pro 340 345 350
Phs Tyr
Gly Cys Val Asn Trp Thr Asn Glu Asn Phe Pro Phe Asn Asp 355 360 365 ' cys Val 370
Asp Lys Mst Val Ile Trp Trp Glu Glu Gly Lys Met Thr Ala 375 380
Lys Val 385
Val Glu Ssr Ala Lys Ala Ile Leu Gly Gly Ser Lys Val Arg 390 395 * 400
Val Asp
Gin Lys Cys Lys Ser Ser Ala Gin Ile Asp Pro Thr Pro Val 405 410 415
Ile Val
Thr Ser Asn Thr Asn Met Cys Ala Val Ile Asp Gly Asn Ser 420 425 430
Thr Thr
Phe Glu His Gin Gin Pro Leu Gin Asp Arg Met phe Lys Phe 435 440 445
Glu Leu 450
Thr Arg Arg Leu Glu His Asp Phe Gly Lys Val Thr Lys Gin ' 455 460 ’
Glu Val 465
Lys Glu Phe Phe A.rg Trp Ala Ser Asp His Val Thr Glu Val 470 475 480
PL 221 877 B1
Ala His Glu Phe Tyr Val Arg Lys Gly Gly Ala Ser Lys Arg Pro Ala
4S5 490 495
pro Asp Asp Ala Asp Ile Ser Glu Pro Lys Arg Ala Cys Pro Ser Val
500 505 510
Ala Asp Pro Ser Thr Ser Aso Ala C-lu C-ly Ala Pro Val •Asp Phe Ala
515 520 525
Asp Arg Tyr Gin Asn Lys Cys Ser Arg His Ala Gly Met Ile Gin Met
530 535 540
Leu Phe Pro Cys Lys Thr Cys Glu Arg Met Asn Gin Asn Phe Asn Ile
545 550 555 5S0
Cys Phe Thr His Gly Val Arg Asp Cys Leu Glu Cys Phe Pro Gly Val
555 570 575
Ser Glu Ser Gin Pro Val Val Arg Lys Lys Thr Tyr Arg Lys Leu Cys
530 585 590
Ala Ile His His Leu Leu Gly Arg Ala Pro Glu Ile Ala Cys Ser Ala
5S5 600 605
Cys Asp Leu Val Asn Val Asp Leu Asp Asp Cys Val Ser C-lu Gin
SIO SIS 620 <210> 4 <211> 4392 <212> DSFA <213> serotyp 3 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 4
cagagaggga gtggccaact ccatcactag gggtagcgcg aagcgcctcc cacgctgccg 60
cgtcagcgct gacgtaaatt acgtcatagg ggagtggtcc tgtattagct gtcacgtgeg 120
tgcttttgcg gcattttgcg acaccacgtg gccatttgag gtatatatgg ccgagtgagc 180
gagcaggatc tccattttga ccacgaaatfc tgaacgagca gcagccatgc cgggcttcta 240
cgagatcgtg atcaaggtgc cgagcgaccc ggacgagcac ctgccgggca tttctgactc 300
gtttgtgaac tgggtggccg agaaggaatg ggagctgccc ccggattctg aca tggatcg 360
gaatctgatc gagcaggcac ccctgaccgt ggccgagaag ctgcagcgcg acttcctggt 420
ccaatggcgc cgcgtgagta aggccccgga ggccctcttc tttgttcagt tcgagaaggg 43 0
cgagagctac tttcacctgc acgttctggt cgsgaccacg ggggtcaagt ccatggtgct 540
aggccgcttc ctgagtcaga ttcgggaaaa gcttggtcca gaccatctac ccgeggggtc 600
gagccccacc ctgcccaact ggttcgcggt gaccaaagac gcggtaatgg cgccggcggg 650
PL 221 877 B1
ggggaacaag gtggtggacg agtgctacat ccccaactac ctcctgccca agactcagcc 720
cgagctgcag tgggcgtgga ctaacatgga agagtatata agcgcgtgct tgaacctggc 730
cgagcgcaaa cggctcgtgg cgcagcacct gacccacgtc agccagacgc aggagcagaa 840
caaggagaat ctgaacccca attctgacgc gcccgtgatc aggtcaaaaa cctccgcgcg 900
ctatatggag ctggtcgggt ggctggtgga ccggggcatc acctccgaga agcagtggat 960
ccaggaggac caggcctcgt acatctcctt caacgccgcc tccaactcgc ggtcccagat 1020
caaggccgcg ctggacaatg ccggcaagat catggcgctg accaaatccg cgcccgacta 1030
cctggtgggg ccctcgctgc ccgcggacat tacccagaac cgcatctacc gcatcctcgc 1140
tctcaacggc tacgaccctg cctacgccgg ctccgtcttt ctcggctggg ctcagaaaaa 1200
gttcgggaaa cgcaacacca tctggctgtt tggacccgcc accaccggca agaccaacat 1260
tgcggaagcc atcgcccacg ccgtgccctt ctacggctgc gtcaactgga ccaatgagaa 1320
ctttcccttc aatgattgcg tcgacaagat ggtgatctgg tgggaggagg gcaagatgac 1380
ggccaaggtc gtggagtccg ccaaggccat tctcggcggc agcaaggtgc gcgtggacca 1440
aaagtgcaag tcgtccgccc agatcgaccc cacccccgtg atcgtcacct ccaacaccaa 1500
catgtgcgcc gtgattgacg ggaacagcac caccttcgag caccagcagc ctctccagga 1560
ccggatgttt aagttcgaac tcacccgccg tctggagcac gactttggca aggtgacaaa 1620
gcaggaagtc aaagagttct tccgctgggc cagtgatcac gtgaccgagg tggcgcatga 1680
gttttacgtc agaaagggcg gagccagcaa aagacccacc cccgatgacg cggataaaag 1740
cgagcccaag cgggcctgcc cctcagtcgc ggatccatcg acgtcagacg cggaaggagc 1800
tccggtggac tttgccgaca ggtaccaaaa caaatgttct cgtcacgcgg gcatgcttca 1860
gatgctgttt ccctgcaaaa cgtgcgagag aatgaatcag aatttcaaca tttgcttcac 1920
acacggggtc agagactgct cagagtgttt ccccggcgtg tcagaatctc aaccggtcgt 1980
cagaaagagg acgtatcgga aactctgtgc gattcatcat ctgctggggc gggctcccga 2040
gattgcttgc tcggcctgcg atctggtcaa cgtggacctg gatgactgtg tttctgagca 2100
ataaatgact taaaccaggt atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca 2160
acctctctga gggcattcgc gagtggtggg cgctgaaacc tggagccccg aagcccaaag 2220
ccaaccagca aaagcaggac gacggccggg gtctggtgct tcctggctac aagtacctcg 2280
gacccttcaa cggactcgac aagggggagc ccgtcaacgc ggcggacgca gcggccctcg 2340
agcacgacaa ggcctacgac cagcagctgę aggcgggtga caatccgtac ctgcggtata 2400
accacgccga cgccgagttt caggagcgtc tgcaagaaga tacgtctttt gggggcaacc 2460
tcgggcgagc agtcttccag gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggttgagg 2520
aaggcgctaa gacggctcct ggaaagaaga gaccggtaga gccatcaccc cagcgttctc 2580
PL 221 877 B1
cagactcctc tacgggcatc ggcaagaaag gccaacagcc ccccagaaaa agactcaatt 2640
ttggtcagac tggcgactca gagtcagttc csgaccctca acctctcgga gaacctccag 2700
cagcgccctc tggtgtggga cctaatacaa tggctgcagg cggtggcgca ccaatggcag 2 760
acaataacga aggcgccgac ggagtgggta gttcctcggg aaattggcat tgcgattcca 2820
catggctggg cgacagagtc atcaccacca gcacccgaac ctgggccctg cccacctaca 2aao
acaaccacct ctacaagcaa atctccaacg ęgacatcggg aggagccacc aacgacaaca 2940
cctacttcgg ctacagcacc ccctgggggt attttgactt taacagattc cactgccact 3000
tttcaccacg tgactggcag cgactcatca acaacaactg gggattccgg cccaagagac 3060
tcagcttcaa gctcttcaac atccaggtca aggaggtcac gcagaatgaa ggcaccaaga 3120
ccatcgccaa taacctcacc agcaccatcc aggtgtttac ggactcggag taccagctgc 3130
cgtacgttct cggctctgcc caccagggct gcctgcctcc gttcccggcg gacgtgttca 3240
tgattcccca gtacggcfcac ctaacactca acaacggtag tcaggccgtg ggacgctcct 3300
ccttctactg cctggaatac tttccttcgc agatgctgag aaccggcaac aacttccagt 3360
ttacttacac cttcgaggac gtgcctttcc acagcagcta cgcccacagc cagagcttgg 3420
accggctgat gaatcctctg attgaccagt acetgtacta cttgtctcgg actcaaacaa 3430
caggaggcac ggcaaatacg cagactctgg gcttcagcca aggtggscct aatacaatgg 3540
ccaatcaggc aaagaactgg ctgccaggac cctgttaccg ccaacaicgc gtctcaacga 3600
caaccgggca aaacaacaat agcaactttg cctggactgc tgggaccaaa taccatctga 3660
atggaagaaa ttcattggct aatcctggca tcgctatggc aacacacaaa gacgacgagg 3720
agcgtttttt tcccagtaac gggatcctga tttttggcaa acaaaatgct gccagagaca 3750
atgcggatta cagcgatgtc atgctcacca gcgaggaaga aatcaaaacc actaaccctg 3 840
tggctacaga ggaatacggt atcgtggcag ataadttgca gcagcaaaac acggctcctc 3 900
aaattggaac tgtcaacagc cagggggcct tacccggtat ggtctggcag aaccgggacg 3960
tatacctgca gagtcccatc tgggccaaga ttcctcacac ggacggcaac ttccacccgt 4020
ctccgctgat gggcggcttt ggcctgaaac atcctccgcc tcagatcctg atcaagaaca 4080
cgcctgtacc tgcggatcct ccgaccacct tcaaccagtc aaagctgaac tctttcatca 4140
cgcaatacag caccggacag gtcagcgtgg aaattgaatg ggagctgcag dćięjCfćl ćL a. SC 3. 4200
gcaagcgctg gaaccccgag atccagtaca cctccaacta ctacaaatct acaagtgtgg 4260
actttgctgt taatacagaa ggcgtgtact ctgaaccccg ccccattggc acccgttacc 4320
tcacccgtaa tctgtaattg cctgttaatc aataaaccgg ttgattcgtt tcagttgaac 4330
tttggtctct gcg 4393
PL 221 877 B1 <210> 5 <211> 4335 <212> DNA <213 > serotyp 9 wirusa stowarzyszonego z adenowirusera <400> 5
cagagaggga gtggccaact ccatcactag gggtaatcgc gaagcgcctc ccacgctgcc 60
gcgtcagcgc tgacgtagat tacgtcatag gggagtggtc ctgtattagc tgtcacgtga 120
gtgcttttgc gacattttgo gacaccacat ggccatttga ggtatatatg gccgagtgag ISO
cgagcaggat ctccattttg accgcgaaat ttgaacgagc agcagccatg ccgggcttct 240
acgagattgt gatcaaggtg ccgagcgacc tggacgagca cctgccgggc atttctgact 300
cttttgtgaa ctgggtggcc gagaaggaat gggagctgcc ccoggattct gacatggatc 360
ggaatctgat cgagcaggca cccctgaccg tggccgagaa gctgcagcgc gacttcctgg 420
tccaatggcg ccgcgtgagt aaggccccgg aggccctctt ctttgttcag ttcgagaagg 480
gcgagagcta ctttcacctg cacgttctgg tcgagaccac gggggtcaag tccatggtgc 540
taggccgctt cctgagtcag attcgggaga agctggtcca gaccatctac cgcgggatcg 600
agccgaccct gcccaactgg ttcgcggtga ccaagacgcg taatggcgcc ggcgggggga 660
acaaggtggt ggacgagtgc tacatcccca actacctcot gcccaagact cagcccgagc 720
tgcagtgggc gtggactaac atggaggagt atataagcgc gtgottgaao ctggccgagc 780
gcaaacggct cgtggcgcag cacctgaccc acgtcagcca gacgcaggag cagaacaagg 840
agaatctgaa ccccaattcc gacgcgcccg tgatcaggtc aaaaacctcc gcgcgctaca 900
tggagctggt cgggtggctg gtggaccggg gcatcacctc cgagaagcag tggatccagg 960
aggaccaggc ctcgtacatc tccttcaacg ccgcctccaa ctcgcggtcc cagatcaagg 1020
ccgcgctgga caatgccggc aagatoatgg cgctgaccaa atccgcgccc gactacctgg 1080
taggcccttc acttccggtg gaoattacgo agaaccgcat ctaccgcatc ctgcagctca 1140
acggctacga ccctgcctac gccggctccg tctttctcgg ctgggcacaa aagaagttcg 1200
ggaaacgcaa caccatctgg ctgtttgggc cggccaccac gggaaagacc aacatcgcag 1260
aagccattgc ccacgccgtg cccttctacg gctgcgtcaa ctggaccaat gagaactttc 1320
ccttcaacga ttgcgtogao aagatggtga tctggtggga ggagggcaag atgacggcca 1380
aggtcgtgga gtccgccaag gccattctcg gcggcagcaa ggtgcgcgtg gaccaaaagt 1440
gcaagtcgtc cgcccagatc gaccccactc ccgtgatcgt cacctccaac accaacatgt 1500
gcgccgtgat tgacgggaac agcaccacct tcgagcacca gcagcctctc caggaccgga 1560
tgtttaagtt cgaactcacc cgccgtctgg agcacgactt tggcaaggtg acaaagcagg 1620
aagtcaaaga gttcttccgc tgggocagtg atcacgtgac cgaggtggcg catgagtttt 16Θ0
acgtcagaaa gggcggagcc agcaaaagac ccgcccccga tgacgcggat aaaagcgagc 1740
PL 221 877 B1
ccaagcgggc ctgcccctca gtcgcggatc catcgacgtc agacgcggaa ggagctccgg 1800
tggactstgc egacsggtae caaaacaaat gttctcgtca cgcgggcatg cttcagatgc 1860
tgcttccctg caaaacgtgc gagagaatga atcagaattt caacatttgc ttcacacacg 1920
gggtcagaga ctgctcagag tgtttccccg gcgtgtcags atctcaaccg gtcgtcagaa 1980
agaggacgta tcggaaactc tgtgcgattc atcatctgct ggggcgggct cccgaaattg 2040
cttgctcggc ctgcgatctg gtcaacgtgg acctgaatga ctgtgtttct gagcaataaa 2100
tgacttaaac caggtatggc tgccgatggt tatcttccag attggctcga ggacaacctc 2160
tctgagggca ttcgcgagtg gtgggcgctg aaacctggag ccccgaagcc caaagccaac 2220
cagcaaaagc aggacgacgg ccggggtctg gtgcttcctg gctacaagta cctcggaccc 2230
ttcaacggac tcgacaaggg ggagcccgtc aacgcggcgg acgcagcggc cctcgagcac 2340
ggcaaggcct acgaccagca gctgcaggcg ggtgacaatc cgtacctgcg gtataaccac 2400
gccgacgccg agtttcagga gcgtctgcaa gaagatacgt cttttggggg caacctcggg 2460
cgagcagtct tccaggcoaa gaagcgggtt ctcgaacctc tcggtctggt Łgaggaaggc 2520
gctaagacgg ctcctggaaa gaagagaccg gtagagccat caecccagcg ttctccagac 2 580
tcctctacgg gcatcggcaa gaaaggccaa cagcccgcca gaaaaagact caattttggt 2640
cagactggcg actcagagtc agttccagac cctcaacctc tcggagaacc tccagcagcg 2700
ccctctggtg tgggacctaa tacaatggct gcaggcggtg gcgcaccaat ggcagacaat 2760
aacgaaggcg ccgacggagt gggtaattcc tcgggaaatt ggcattgcga ttccacatgg 2820
ctgggggaca gagtcatcac caccagcacc cgaacctggg cattgcccac ctacaacaac 2330
cacctctaca agcaaatctc caatggaaca tcgggaggaa gcaccaacga caacacctac 2940
tttggctaca gcaccccctg ggggtatttt gacttcaaca gattccactg ccacttctca 3000
ccacgtgact ggcagcgact catcaacaac aactggggat tccggccaaa gagactcaac 3060
ttcaagctgt tcaacatcca ggtcaaggag gttacgacga acgaaggcac caagaccatc 3120
gccaataacc ttaccagcac cgtccaggtc tttacggact cggagtacca gctaccgtac 3130
gtcctaggct ctgcccacca aggatgcctg ccaccgtttc ctgcagacgt cttcatggtt 3240
cctcagtacg gctacctgac gctcaacaat ggaagtcaag cgttaggacg ttcttctttc 3300
tactgtctgg aatacttccc ttctcagatg ctgagaaccg gcaacaactt tcagttcagc 3360
sacactttcg aggacgtgcc tttccacagc agctacgcac acagccagag tctagatcga 3420
ctgatgaacc ccctcatcga ccagtaocta taotacctgg tcagaacaca gacaactgga 3430
actgggggaa ctcaaacttt ggcattcagc caagcaggcc ctagctcaat ggccaatcag 3540
gctagaaact gggtacccgg gccttgctac cgtcagcagc < gcgtctccac . aaccaccaac 3600
caaaataaca acagcaactt tgcgtggacg ggagctgcta . aattcaagct gaacgggaga 3660
PL 221 877 B1
gactcgctaa tgaatcctgg cgtggctatg gcatcgcaca aagacgacga ggaccgcttc 3720
tttccatcaa gtggcgttct catatttggc aagcaaggag ccgggaacga tggagtcgac 3780
tacagccagg tgctgattac agatgaggaa gaaattaaag ccaccaaccc tgtagccaca 3840
gaggaatacg gagcagtggc catcaacaac caggccgcta acacgcaggc gcaaactgga 3900
cttgtgcatą accagggagt tattcctggt atggtctggc agaaccggga cgtgtacctg 3950
cagggcccta tttgggctaa aatacctcac acagatggca actttcaccc gtctcctctg 4020
atgggtggat ttggactgaa acacccacct ccacagattc taattaaaaa tacaccagtg 4080
ccggcagatc ctcctcttac cttcaatcaa gccaagctga actctttcat cacgcagtac 4140
agcacgggac aagtcagcgt ggaaatcgag tgggagctgc agaaagaaaa cagcaagcgc 4200
tggaatccag agatccagta tacttcaaac tactacaaat ctacaaatgt ggactttgct 42S0
gtcaatacca aaggtgttta ctctgagcct cgccccattg gtactcgtta cctcacccgt 4320
aatttgtaat tgcctgttaa tcaataaacc ggttaattcg tttcagttga actttggtct 4380
ctgcg 4385 =210> 6 <211> 4718
<212> DNA <213> serotyp 1 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem
<400> 5 ttgcccacto cctctctgcg cgctcgetcg ctcggtgggg cctgcggaec aaaggtccgc 50
agacggcaga gctctgctct gccggcccca ccgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
ggcaactcca tcactagggg taatcgcgaa gcgcctccca cgctgccgcg tcagcgctga 180
cgtaaattac gtcatagggg agtggtcctg tattagctgt cacgtgagtg cttttgcgac 240
attttgcgac accacgtggc catttagggt atatatggcc gagtgagcga gcaggatctc 300
cattttgacc gcgaaatttg aacgagcagc agccatgccg ggcttctacg agatcgtgat 350
caaggtgccg agcgacctgg acgagcacct gccgggcatt tctgactcgt ttgtgagctg 420
ggtggccgag aaggaatggg agctgccccc ggattctgac atggatctga atctgattga 480
gcaggcaccc ctgacogtgg ccgagaagct goagcgcgac ttcctggtcc aatggcgccg 540
cgtgagtaag gccccggagg ccctottctt tgttcagttc gagaagggcg agtcctactt 600
ccacctccat attctggtgg agaccacggg ggtcaaatcc atggtgctgg gccgcttcct 560
gagtcagatt agggacaagc tggtgcagac catctaccgc gggatcgagc cgaccctgcc 720
caactggttc gcggtgacca agacgcgtaa tggcgccgga ggggggaaca aggtggtgga 780
cgagtgctac atccccaact acctcctgco caagactcag cccgagctgc agtgggcgtg 340
gactaacatg gaggagtata taagcgcctg tttgaacctg gccgagcgca aacggctcgt 900
ggcgcagcac ctgacccacg tcagccagac ccaggagcag aacaaggaga atctgaaccc 960
PL 221 877 B1 caatfcetgac gcgcctgtca tccggtcaaa aacctccgcg cgctacatgg agctggtcgg 1020 gtggctggtg gaccggggca tcacctccga gaagcagtgg atccaggagg accaggcctc 1080 gtacatctcc ttcaacgccg cttccaactc gcggtcccag atcaaggccg ctctggacaa 1140 tgccggcaag atcatggcgc tgaccaaatc cgcgcccgac tacctggtag gccccgctcc 1200 gcccgcggac attaaaacca accgcatcta ccgcatcctg gagctgaacg gctacgaacc 1260 tgcctacgcc ggctccgtct ttctcggctg ggcccagaaa sggttcggga agcgcaacac 1320 catctggctg tttgggccgg ccaccacggg caagaccaac atcgcggaag ccatcgccca 1380 cgccgtgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag aactctccct tcaatgattg 1440 cgtcgacaag atggtgatcc ggtgggagga gggcaagatg acggccaagg tcgtggagtc 1500 cgccaaggcc attctcggcg gcagcaaggt gcgcgtggac caaaagtgca agtcgtccgc 1560 ccagatcgac cccacccccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 1620
cgggaacagc accaccttcg agcaccagca gccgttgcag gaccggatgt tcaaatttga 1630
actcacccgc cgtctggagc atgactttgg caaggtgaca aagcaggaag tcaaagagtt 1740
cttccgctgg gcgcaggatc acgtgaccga ggtggcgcat gagttctacg tcagaaaggg 1800
tggagccaac aaaagacccg cccccgatga cgcggataaa agcgagccca agcgggcctg 1860
cccctcagtc gcggatccat cgacgccaga cgcggaagga gctccggtgg actttgccga 1920
caggtaccaa aacaaatgtt ctcgtcacgc gggcatgctt cagatgctgt ttccctgcaa 1980
gacatgcgag agaatgaatc agaatttcaa catttgcttc acgcacggga cgagagactg 2040
ttcagagtgc ttccccggcg tgtcagaatc tcaaccggtc gtcagaaaga ggacgtatcg 2100
gaaactctgt gccattcatc atctgctggg gcgggctccc gagattgctt gctcggcctg 2160
cgatctggtc aacgtggacc tggatgactg tgtttctgag caataaatga cttaaaccag 2220
gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga caacctctct gagggcattc 2280
gcgaatggtg ggacttgaaa cctggagccc cgaagcccaa agccaaccag caaaagcagg 2340
acgacggccg gggtctggtg cttcctggct acaagtacct cggacccttc aacggactcg 2400
acaaggggga gcccgtcaac gcggcggacg cagcggccct cgagcacgac aaggcctacg 2460
accagcagct caaagcgggt gacaatccgt acctgcggta taaccacgcc gacgccgagt 2520
ttcaggagcg tctgcaagaa gatacgtctt ttgggggcaa cctcgggcga gcagtcttcc 2 53C
aggccaagaa gcgggttctc gaacctctcg gtctggttga ggaaggcgct aagacggctc 2640
ctggaaagaa acgtccggta gagcagtcgc cacaagagcc agactcctcc tcgggcatcg 2700
gcaagacagg ccagcagccc gctaaaaaga gactcaattt tggtcagact ggcgactcag 2760
agtcagtccc cgatccacaa cctctcggag aacctccagc aacccccgct gctgtgggsc 2820
ctactacaat ggcttcaggc ggtggcgcac caatggcaga caataacgaa ggcgccgacg 2880
PL 221 877 B1
gagtgggtaa tgcctcagga aattggcatt gcgattccac atggctgggc gacagagtca 294
tcaccaccag cacccgcacc tgggccttgc ccacctacaa taaccacctc tacaagcaaa 300
tctccagtgc ttcaacgggg gccagcaacg acaaccacta cttcggctac agcaccccct 306
gggggtattt tgatttcaac agattccact gccacttttc accacgtgac tggcagcgac 312
tcatcaacaa caattgggga ttccggccca agagactcaa cttcaaactc ttcaacatcc 318
aagtcaagga ggtcacgacg aatgatggcg tcacaaccat cgctaataac cttaccagca 324
cggttcaagt cttctcggac tcggagtacc agcttccgta cgtcctcggc tctgcgcacc 330
agggctgcct ccctccgttc ccggcggacg tgttcatgat tccgcaatac ggctacctga 336
cgctcaacaa tggcagccaa gccgtgggac gttcatcctt ttactgcctg gaatatttcc 342
cttctcagat gctgagaacg ggcaacaact ttaccttcag ctacaccttt gaggaagtgc 34S
ctttccacag cagctacgcg cacagccaga gcctggaccg gctgatgaat cctctcatcg 354
accaatacct gtattacctg aacagaactc aaaatcagtc cggaagtgcc caaaacaagg 360
acttgctgtt tagccgtggg tctccagctg gcatgtctgt tcagcccaaa aactggctac 366
ctggaccctg ttatcggcag cagcgcgttt ctaaaacaaa aacagacaac aacaacagca 372
attttacctg gactggtgct tcaaaatata acctcaatgg gcgtgaatcc atcatcaacc 378
ctggcactgc tatggcctca cacaaagacg acgaagacaa gttctttccc atgagcggtg 384
tcatgatttt tggaaaagag agcgccggag cttcaaacac tgcattggac aatgtcatga 390
ttacagacga agaggaaatt aaagccacta accctgtggc caccgaaaga tttgggaccg 396
tggcagtcaa tttccagagc agcagcacag accctgcgac cggagatgtg catgctatgg 402
gagcattacc tggcatggtg tggcaagata gagacgtgta cctgcagggt cccatttggg 408
ccaaaattcc tcacacagat ggacactttc acccgtctcc tcttatgggc ggctttggac 414
tcaagaaccc gcctcctcag atcctcatca aaaacacgcc tgttcctgcg aatcctccgg 420
cggagttttc agctacaaag tttgcttcat tcatcaccca atactccaca ggacaagtga 426
gtgtggaaat tgaatgggag ctgcagaaag aaaacagcaa gcgctggaat cccgaagtgc 432
agtacacatc caattatgca aaatctgcca acgttgattt tactgtggac aacaatggac 438
tttatactga gcctcgcccc attggcaccc gttaccttac ccgtcccctg taattacgtg 444
ttaatcaata aaccggttga ttcgtttcag ttgaactttg gtctcctgtc cttcttatct 450
tatcggttac catggttata gcttacacat taactgcttg gttgcgcttc gcgataaaag 456
acttacgtca tcgggttacc cctagtgatg gagttgccca ctccctctct gcgcgctcgc 462
tcgctcggtg gggcctgcgg accaaaggtc cgcagacggc agagctctgc tctgccggcc 468
ccaccgagcg agcgagcgcg cagagaggga gtgggcaa 4711
PL 221 877 B1 <210> 7 <211> 4575 <212> DNA c213> serotyp 2 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 7
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactcaęg 1 ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag ' agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctggagg ggtggagtcg tgacgtgaat tacgtcataa ISO
ggttagggag gtcctgtatt agaagtcacg tgagtgtttt gcgacatctt gcgacaccat 240
gtggtcacgc tgggtattta agcccgagtg agcacgcagg gtctccattt tgaagcggga 300
ggtttgaacg cgcagccgcc atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg 3S0
accttgacgg gcatctgccc ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg 420
aatgggagtt gccgccagat tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga 480
ccgtggccga gaagctgcag cgcgactttc tgacggaatg gcgccatgtg agtaaggccc 540
cggaggccct tttctttgtg caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc 500
tcgtggaaac caccggggtg aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg 660
aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg 720
tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc 780
ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac 340
agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga 900
cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc 960
cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca 1020
aggggattac ctcggagaag cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca 1080
atgcggcctc caactcgcgg tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta 1140
tgagcctgac taaaaccgcc cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt 1200
ccagcaatcg gatttataaa attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt 1260
ccgtctttct gggatgggcc acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg 1320
ggcctgcaac taccgggaag accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct 1380
aegggtgcgt aaactggacc aatgagaact ttcccttcaa cgactgtgtc gacaagatgg 1440
tgatctggtg ggaggagggg aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc 1500
tcggaggaag caaggtgcgc gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga 1560
ctcccgtgat cgtcacctcc aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga 1620
ccttcgaaca ccagcagccg ttgcaagacc ggatgttcaa acttgaactc acccgccgtc 1680
tggatcatga ctttgggaag gtcaccaagc aggaagtcaa , agactttttc i cggtgggcaa 1740
PL 221 877 B1
aggatcacgt ggttgaggtg gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga gccaagaaaa 1800
gacccgcccc cagtgacgca gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc 1360
agccatcgac gtcagacgcg gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat 192 0
gttctcgtca cgtgggcatg aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga 1980
atcagaattc aaatatctgc ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg 2040
tgtcagaatc tcaacccgtt tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc 2100
atcatatcat gggaaaggtg ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt 2160
tggatgactg catctttgaa caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat 2220
cttccagatt ggctcgagga cactctctct gaaggaataa gacagtggtg gaagctcaaa 2280
cctggcccac caccaccaaa gcccgcagag cggcataagg acgacagcag gggtcttgtg 2340
cttcctgggt acaagtacct dggacccttc aacggactcg acaagggaga gccggtcaac 2400
gaggcagacg ccgcggccct cgagcacgta caaagcctac gaccggcagc tcgacagcgg 2460
agacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgcggag tttcaggagc gccttaaaga 2520
agatacgtct tttgggggca acctcggacg agcagtcttc caggcgaaaa agagggttct 2580
tgaacctctg ggcctggttg aggaacctgt taagacggct ccgggaaaaa agaggccggt 2640
agagcactct cctgtggagc cagactcctc ctcgggaacc ggaaaggcgg gccagcagcc 2700
tgcaagaaaa agattgaatt ttggtcagac tggagacgca gactcagtac ctgaccccca 2760
gcctctcgga cagccaccag cagccccctc tggtctggga actaatacga tggctacagg 2820
cagtggcgca ccaatggcag acaataacga gggcgccgac ggagtgggta attcctccgg 2880
aaattggcat tgcgattcca catggatggg cgacagagtc atcaccacca gcacccgaac 2 940
ctgggccctg cccacctaca acaaccacct ctacaaacaa atttccagcc aatcaggagc 3000
ctcgaacgac aatcactact ttggctacag caccccttgg gggtattttg acttcaacag 3060
attccactgc cacttttcac cacgtgactg gcaaagactc atcaacaaca actggggatt 312 0
ccgacccaag agactcaact tcaagctctt taacattcaa gtcaaagagg tcacgcagaa 3180
tgacggtacg acgacgattg ccaataacct taccagcacg gttcaggtgt ttactgactc 3240
ggagtaccag ctcccgtacg tcctcggctc ggcgcatcaa ggatgcctcc cgccgttccc 3300
agcagacgtc ttcatggtgc cacagtatgg atacctcacc ctgaacaacg ggagtcaggc 3360
agtaggacgc tcttcatttt actgcctgga gtactttcct tctcagatgc tgcgtaccgg 3420
aaacaacttt accttcagct acacttttga ggacgttcct ttccacagca gctacgctca 3480
cagccagagt ctggaccgtc tcatgaatcc tctcatcgac cagtacctgt attacttgag 3540
cagaacaaac actccaagtg gaaccaccac gcagtcaagg cttcagtttt ctcaggccgg 3600
agcgagtgac attcgggacc agtctaggaa ctggcttcct ggaccctgtt accgccagca 3660
PL 221 877 B1
gcgagtatca aagacatctg cggataacaa caacagtgaa tactcgtgga ctggagctac 3720
caagtaccac ctcaatggca gagactctct ggtgaatccg gccatgacaa gccacaagga 3780
cgatgaagaa aagtttcttc ctcagagcgg ggttctcatc tttgggaagc aaggctcaga 3840
gaaaacaaat gtgaacattg aaaaggtcat gattacagac gaagaggaaa tcggaacaac 3900
caatcccgtg gctacggagc agtatggttc tgtatctacc aacctccaga gaggcaacag 3960
acaagcagct accgcagatg tcaacacaca aggcgttctt ccaggcatgg tctggcagga 4020
cagagstgtg taccttcagg ggcccatctg ggcaaagatt ccacacacgg acggacattt 4080
tcacccctct cccctcatgg gtggattcgg acttaaacac cctcctccac agattctcat 4140
caagaacacc ccggtacctg cgaatccttc gaccaccttc agtgcggcaa agtttgcttc 4200
cttcatcaca cagtactcca cgggacacgg tcagcgtgga gatcgagtgg gagctgcaga 4260
aggaaaacag caaacgctgg aatcccgaaa ttcagtacac ttccaactac aacaagtctg 4320
ttaatcgtgg acttaccgtg aatactaatg gcgtgtattc agagcctcgc cccattggca 4380
ccagatacct gactcgtaat ctgtaattgc ttgttaatca ataaaccgtt taattcgttt 4440
cagttgaaet ttggtctctg cgtatttctt tcttatctag tttccatggc tacgtagata 4500
agtagcatgg cgggttaatc attaactaca aggaacccct agtgatggag ttggccactc 4560
cctctctgcg cactcgctcg ctcactgagg ccgagcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg 4620
gctttgcccg ggcggcctca gtgagccagc gagcgcgcag agagggagtg gccaa 4675
<210> 8 <211> 4726 <212 > DNA <213> serotyp 3 wirusa stowarzyszonego 2 adenowirusera <400s 8
ttggccactc cctctatgcg cactcgctcg ctcggtgggg cctggcgacc aaaggtcgcc 60
agacggacgt gctttgcacg tccggcccca ccgagcgagc gagtgcgcat agagggagtg 120
gccaactcca tcactagagg tatggcagtg acgtaacgcg aagcgcgcga agcgagacca iao
cgcctaccag ctgcgtcagc agtcaggcga cccttttgcg acagtttgcg acaccacgtg 240
gccgctgagg gtatatattc tcgagtgagc gaaccaggag ctccattttg accgcgaaat 300
ttgaacgagc agcagccatg ccggggttct acgagattgt cctgaaggtc ccgagtgacc 360
tggacgagcg cctgccgggc atttctaact cgtttgttaa ctgggtggcc gagaaggaat 420
gggacgtgcc gccggattct gacatggatc cgaatctgae tgagcaggca cccctgaccg 430
tggccgaaaa gcttcagcgc gagttcctgg tggagtggcg ccgcgtgagt aaggccccgg 540
aggccctctt ttttgtccag ttcgaaaagg gggagaccta cttccacctg cacgtgctga 600
ctgagaccat cggggtcaaa tccatggtgg Łcggccgcta cgtgagccag attaaagaga 660
agctggtgac ccgcatctac cgcggggtcg agccgcagct tccgaactgg ttcgcggtga 720
PL 221 877 B1
ccaaaacgcg aaatggcgcc gggggcggga acaaggtggt ggacgactgc tacatcccca 780
actacctgct ccccaagacc cagcccgagc tccagtgggc gtggactaac atggaccagt 840
atttaagcgc ctgtttgaat ctcgcggagc gtaaacggct ggtggcgcag catctgacgc 900
acgtgtcgca gacgcaggag cagaacaaag agaatcagaa ccccaattct gacgcgccgg 960
tcatcaggtc aaaaacctca gccaggtaca tggagctggt cgggtggctg gtggaccgcg 1020
ggatcacgtc agaaaagcaa tggattcagg aggaccaggc ctcgtacatc tccttcaacg 1080
ccgcctccaa ctcgcggtcc cagatcaagg ccgcgctgga caatgcctcc aagatcatga 1140
gcctgacaaa gacggctccg gactacetgg tgggcagcaa cccgccggag gacattacca 1200
aaaatcggat ctaccaaatc ctggagctga acgggtacga tccgcagtac gcggcctccg 1260
tcttcctggg ctgggcgcaa aagaagttcg ggaagaggaa caccatctgg ctctttgggc 1320
cggccacgac gggtaaaacc aacatcgcgg aagccatcgc ccacgccgtg cccttctacg 13Θ0
gctgcgtaaa ctggaccaat gagaactttc ccttcaacga ttgcgtcgac aagatggtga 1440
tctggtggga ggagggcaag atgacggcca aggtcgtgga gagcgccaag gccattctgg 1500
gcggaagcaa ggtgcgcgtg gaccaaaagt gcaagtcatc ggcccagatc gaacccactc 1560
ccgtgatcgt cacctccaac accaacatgt gcgccgtgat tgacgggaac agcaccacct 1620
tcgagcatca gcagccgctg caggaccgga tgtttgaatt tgaacttacc cgccgtttgg 1680
accatgactt tgggaaggtc accaaacagg aagtaaagga ctttttccgg tgggcttccg 1740
accacgtgac tgacgtggct catgagttct acgtcagaaa gggtggagct aagaaacgcc 1800
ccgcctccaa tgacgcggat gtaagcgagc caaaacggga gtgcacgtca cttgcgcagc 1860
cgacaacgtc agacgcggaa gcaccggcgg actacgcgga caggtaccaa aacaaatgtt 1920
ctcgtcacgt gggcatgaat ctgatgcttt ttccctgtaa aacatgcgag agaatgaatc 1930
aaatttccaa tgtctgtttt acgcatggtC aaagagactg tggggaatgc ttccctggaa 2040
tgtcagaatc tcaacccgtt tctgtcgtca aaaagaagac ttatcagaaa ctgtgtccaa 2100
ttcatcatat cctgggaagg gcacccgaga ttgcctgttc ggcctgcgat ttggccaatg 2160
tggacttgga tgactgtgte tctgagcaat aaatgactta aaccaggtat ggctgctgac 2220
ggttatcttc cagattggct cgaggacaac ctttctgaag gcattcgtga gtggtgggcc 2280
ctgaaacctg gagtccctea acccaaagcg aaccaacaac accaggacaa ccgtcggggt 2340
cttgtgcttc cgggttacaa atacctcgga cccggtaacg gactcgacaa aggagagccg 2400
gtcaacgagg cggacgcggc agccctcgaa cacgacaaag cttacgacca gcagctcaag 2460
gccggtgaca acccgtacct caagtacaac cacgccgacg ccgagtttca ggagcgtctt 2520
caagaagata cgtcttttgg gggcaacctt ggcagagcag tcttccaggc caaaaagagg 2580
atccttgagc ctcttggtct ggttgaggaa gcagctaaaa cggctcctgg aaagaagggg 2640
PL 221 877 B1 gctgcagatc agtctcctca ggaaccggac tcatcatctg gtgttggcaa atcgggcaaa 2700 cagcctgcca gaaaaagact aaatttcggt cagactggag actcagagtc agtcccagac 2760 cctcaacctc tcggagaacc accagcagcc cccacaagtt tgggatctaa tacaatggct 2820 tcaggcggtg gcgcaccaac ggcagacaat aacgagggtg ccgatggagt gggtaattcc 2880 tcaggaaatt ggcattgcga ttcccaatgg ctgggcgaca gagtcatcac caccagcacc 2940 agaacctggg ccctgcccac ttacaacaac catctctaca agcaaatctc cagccaatca 3000 ggagcttcaa acgacaacca ctactttggc tacagcaccc cttgggggta ttttgacttt 3060 aacagattcc actgccactt ctcaccacgt gactggcagc gactcattaa caacaactgg 3120 ggattccggc ccaagaaact cagcttcaag ctcttcaaca tccaagttag aggggtcacg 3180 cagaacgatg gcacgacgac tattgccaat aaccttacca gcacggttca agtgtttacg 3240 gactcggagt atcagctccc gtacgtgctc gggtcggcgc accaaggctg tctcccgccg 3300 tttccagcgg acgtcttcat ggtccctcag tatggatacc tcaccctgaa caacggaagt 3360 caagcggtgg gacgctcatc cttttactgc ctggagtact tcccttcgca gatgctaagg 3420 actggaaata acttccaatt cagctatacc ttcgaggatg taccttttca cagcagctac 3400 gctcacagcc agagtttgga tcgcttgacg aatcctctta ttgatcagta tctgtactac 3540
ctgaacagaa cgcaaggaac ascctctgga acaaccaacc aatcacggct gctttttage 3600
caggctgggc ctcagtctat gtctttgcag gccagaaatt ggctacctgg gccctgctac 3660
cggcaacaga gactttcaaa gactgctaac gacaacaaca acagtaactt tccttggaca 3720
gcggccagca aatatcatct caatggccgc gactcgctgg tgaatccagg accagctatg 3780
gccagtcaca aggacgatga agaaaaattt ttccctatgc acggcaatct aatatttggc 3840
aaagaaggga caacggcaag taacgcagaa ttagataatg taatgattac ggatgaagaa 3900
gagattcgta ccaccaatcc tgtggcaaca gagcagtatg gsactgtggc aaataacttg 3360
cagagctcaa atacagctcc cacgactgga actgtcaatc atcaggaggc cttacctggc 4020
atggtgtggc aagatcgtga cgtgtacctt caaggaccta tctgggcaaa gattcctcac 4080
acggatggac actttcatcc ttctcctctg atgggaggct ttggactgaa acatccgcct 4140
cctcaaatca tgatcaaaaa tactccggta ccggcaaatc ctccgacgac tttcagcccg 4200
gccaagtttg cttcatttat cactcagtac tccactggac aggtcagcgt ggaaattgag 4260
tgggagctac agaaagaaaa cagcaaacgt tggaatccag agattcagta cacttccaac 4320
tacaacaagt ctgttaatgt ggactttact gfcagacacta atggtgttta tagtgaacct 4330
cgccctattg gaacccggta tctcacacga aacttgtgaa tcctggttaa tcaataaacc 4440
gtttaattcg tttcagttga actttggctc ttgtgcactt ctttatcttt atcttgtttc 4500
catggctact gcgtagataa gcagcggcct gcggcgcttg cgcttcgcgg tttacaactg 4560
PL 221 877 B1
ctggttaata tttaactetc gccatacctc tagtgatgga gttggccact ccctctatgc 4620
gcactcgctc gctcggtggg gcctggcgac caaaggtcgc cagacggacg tgctttgcac 4680
gtccggcccc accgagcgag cgagtgcgca tagagggagt ggccaa 4726
<210> 9 <211> 3093 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42 .2
<400> 9 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gctgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 430
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgacc gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa aectggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaagggag agccggtcaa cgaggcagac gccgcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gacaagcagc tcgagcaggg ggacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagacccat agaatccccc gactcctcca cgggcatcgg caagaaaggc 1320
cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaacttt gggcagactg gcgactcaga gtcagtgccc 1330
gacccccaac ctctcggaga acctcccgcc gcgccctcag gtctgggatc tggtacaatg 1440
gctgcaggcg gtggcgcacc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtaat 1500
PL 221 877 B1
gcctccggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat caccaccagc 1560
acccgcacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcagat atcaagtcag 1620
agcggggcta ccaacgacaa ccacttcttc ggctacagca ccccctgggg ctattttgac 1630
ttcaacagat tccactgcca cttctcacca cgtgactggc agcgactcat caacaacaac 1740
tggggattcc ggcccagaaa actgcggttc aagttgttca acatccaggt caaggaggtc 1800
acgacgaacg acggcgttac gaccatcgct aataacctta ccagcacgat tcaggtcttc 1860
tcggactcgg agtaccaact gccgtacgtc ctcggctctg cgcaccaggg ctgcctccct 192 0
ccgttccctg cggacgtgtt catgattcct cagtacggat atctgactct aaacaacggc 1960
agtcagtctg tgggacgttc ctccttctac tgcctggagt actttccttc tcagatgctg 2040
agaacgggca ataactttga attcagctac acctttgagg aagtgccttt ccacagcagc 2100
tatgcgcaca gccagagcct ggaccggctg atgaatcccc tcatcgacca gtacctgtac 2160
tacctggccc ggacccagag cactacgggg tccacaaggg agctgcagtt ccatcaggct 2220
gggcccaaca ccatggccga gcaatcaaag aactggctgc ccggaccctg ttatcggcag 2280
cagagactgt caaaaaacat agacagcaac aacaacagta acfcttgcctg gaccggggcc 2340
actaaatacc atctgaatgg tagaaattca ttaaccaacc cgggcgtagc catggccacc 2400
aacaaggacg acgaggacca gttctttccc atcaacggag tgctggtttt tggcgaaacg 2460
ggggctgcca acaagacaac gctggaaaac gtgctaatga ccagcgagga ggagatcaaa 2520
accaccaatc ccgtggctac agaagaatac ggtgtggtct ccagcaacct gcaatcgtct 2530
acggccggac cccagacaca gactgtcaac agccaggggg ctctgcccgg catggtctgg 2640
cagaaccggg acgtgtacct gcagggtccc atctgggcca aaattcctca cacggacggc 2700
aactttcacc cgtctcccct gatgggcgga tttggactca aacacccgcc tcctcaaatt 2760
ctcatcaaaa acaccccggt acctgctaat cctccagagg tgtttactcc tgccaagttt 2320
acctcattta tcacgcagta cagcaccggc caggtcagcg tggagatcga gtgggaactg 2880
cagaaagaaa acagcaaacg ctggaatcca gagattcagt acacctcaaa ttatgccaag 2940
tctaataatg tggaatttgc tgtcaacaac gaaggggttt atactgagcc tcgccccatt 3000
ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa ttgcctgtta atcaataaac cggttaattc 3060
gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg gcgaattc 3093
<210> 10 <211> 3098 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 16.3 <400> 10 gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga atcaaccggt ttattgatta 60 acaagtaatt acaggttacg ggtgaggtaa cgggtgccaa fcggggcgagg ctcagtataa 120
PL 221 877 B1
accccttcgt tgttgacagc aaattccaca ttattagact tggcataatt tgaggtgtac 180
tgaatctctg gattccagcg tttgctgttt tctttctgca gttcccactc gatctccacg 240
ctgacctggo cggtgctgta ctgcgtgata aatgaggcaa actaggcagg agtaaacacc 300
cctggaggat tagcaggtac cggggtgttt ttgatgagaa tttgaggagg cgggtgtttg 360
agtccaaatc cgcccatcag gggagacggg tgaaagttgc cgtccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag gtacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc gggcagagcc 480
ccctggctgt tgacagtctg tgtctggggt ccggccgtag acgattgcag gttgctggag 540
accacaccgt attcttctgt agccacggga ttggtggttt tgatctcctc ctcgctggtc 600
attagcacgt tttccagcgt tgtcttgttg gcagcccccg ttttgccaaa aaccagcact 660
ccgttgatgg gaaagaactg gccctcgtcg tccttgttgg tggccatggc tacgcccggg 720
ttggttaatg aatttctacc attcagatgg tatttagtgg ccccggtcca ggcaaagtta 780
ctgttgttgt tgctgtetat gttttttgac agtctctgct gccgataaca gggtccgggc 840
agccagttct ttgattgctc ggccatggtg ttgggcccag cctgatggaa ctgcagctcc 900
cttgtggacc ccgtagtgct ctgggtccgg gccaggtagc acaggtactg gtcgatgagg 960
ggattcatca gccggtccag gctctggctg tgcgcatagc tgctgtggaa aggcacttcc 1020
tcaaaggtgt agctgaattc aaagttattg cccgttctca gcatctgaga aggaaagtac 1080
tccaggcagt agaaggagga acgtcccata gactgactgc cgttgtttag agtcagatat 1140
ccgtactgag gaatcatgaa cacgtccgca gggaacggag ggaggcagcc ctggtgcgca 1200
gagccgagga cgtacggcag ttggtaetcc gagtccgaga agacctgaat cgtgctggta 1260
aggttattag cgatggtcgt aacgccgtcg ttcgtcgtga cctccttgac ctggatgttg 1320
aacaacttga accgcagctt tctgggccgg aatccccagt tgttgttgat gągtcgctgc 1380
cagtcacgtg gtgagaagtg gcagtggaat ctgttgaagt caaaatagcc ccagggggtg 1440
ctgtagccga agaagtggtt gtcgttggta gccccgctct gacttgatat ctgcttgtag isao
aggtggttgt tgtaggtggg cagggcccag gtgcgggtgc tggtggtgat gactctgtcg 1560
cccagccatg tggaatcgca atgccaattt ccggaggcat taeccactcc gtcggcgcct 1620
tcgttattgt ctgccattgg tgcgccaccg cctgcagcca ttgtaccaga tcccagacct 1680
gagggcgcgg cgggaggttc tccgagaggt tgggggtcgg gcactgactc tgagtcgcca 1740
gtctgcccaa agttgagctt ctttttagcg ggctgctggc ctttcttgcc gatgcccgtg 1800
gaggagtcgg gggattctat gggtctcttc Łttccaggag ccgtcfctagc gccttcctca 1860
accagaccga gaggttcgag aacccgcttc ttggcctgga agactgctcg cccgaggttg 1920
cccccaaaag acgtatcttc ttgaagacgc tcctgaaact cagcgtcggc gtggttgtac 1980
ttgaggtacg ggttgtcccc ctgctcgagc tgcttgtcgt aggccttgtc gtgctcgagg 2040
PL 221 877 B1
gccgcggcgt ctgcctcgtt gaccggctct cccttgtcga gtccgttaaa gggtccgagg 2100
tacttgtagc caggaagcac cagaccccgg ccgtcgtccfc gcttttgctg gttggctttg 2160
ggtttcggga ctccaggttt caagtcccac cactcgcgaa tgccctcaga gaggttgtcc 2220
tcgagccaat ctggaagata accatcggca gccatacctg gtttaagtca tt1a ttgctc 2230
agaaacacag tcatccaggC ccacgttgac cagatcgcag gccgagcaag caatctcggg 2340
agcccgcccc agcagatgat gaatggcaca gagtttccga tacgtcctct ttctgscgac 2400
cggttgagat tctgacacgc cggggaaaca ttctgaacag tctctggtcc cgtgcgtgaa 2460
gcaaatgttg aaattctgat tcattctctc gcatgtcttg cagggaaaca gcatctgaag 2S20
cacgcccgcg tgacgagaac atttgttttg gtacctgtcg gcaaagtcca ccggagctcc 2580
ttccgcgtct gacgtcgatg gatccgcgac tgaggggcag gcccgcttgg gctcgctttt 2640
atccgcgtca tcgggggcgg gcctcttgtt ggctccaccc tttctgacat agaactcatg 2700
cgccacctcg gtcacgtgat cctgcgccca gcggaagaac tctttgactt cctgctttgt 2760
caccttgcca aagtcctgct ccagacggcg ggtgagttca aatttgaaca Łccggtcttg 2820
taacggctgc tggtgctcga aggtggtgct gttcccgtca atcacggcgc acatgttggt 2880
gttggaagtg acgatcacgg gggtgggatc gatctgggcg gacgacttgc acttttggtc 2940
cacgcgcacc ttgctgccgc cgagaatggc cttggcggac tccacgacct tggccgtcat 3 000
cttgccctcc tcccaccaga tcaccatctt gtcgacgcaa tcgttgaagg gaaagttctc 3060
attggtccag ttgacgcagc cgtagaaagg gcgaattc 3093
<210=. II <211s 3121
<212 > DNA <213 > nowy serotyp AAV, klon 29 .3
<4OQ=> 11 gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga atcaaccggt ttattgatta 60
acaagcaatt acagattacg ggtgaggtaa cgggtgccga tggggcgagg ctcagaataa 120
gtgccatctg tgttaacagc aaagtccaca tttgtagatt tgtagtagtt ggaagtgtat ISO
tgaacctctg ggttccagcg tttgctgttt tctttctgca gctcccattc aatttccacg 240
ctgacctgtc cggtgctgta ctgcgtgatg aacgacgcca gcttagcttg actgaaggta 300
gttggaggat ccgcgggaac aggtgtattc ttaatcagga tctgaggagg cgggtgtttc 360
agtccaaagc cccccatcag cggcgaggga tgaaagtttc cgtccgtgtg aggaatcttg 420
gcccagatag gaccctgcag gtacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc aggtaaggct 480
ccttgactgt tgacggcccc tacaatagga gcggcgtttt gctgttgcag getatcggcc 540
accacgccgt actgttctgt ggccactggg ttggtggttt taatttcttc ctcactggtt SOO
PL 221 877 B1
agcataacgc tgctatagtc cacgttgcct tttccagctc cctgtttccc aaacattaag 660
actccgctgg acggaaaaaa tcgctcttcg tcgtccttgt gggttgccat agcgacaccg 720
ggatttacca gagagtctct gccattcaga tgatacttgg tggcaccggt ccaggcaaag 780
ttgctgttgt tattttgcga cagtgtcgtg gagacgcgtt gctgccggta Scagggcccg 340
ggtagccagt ttttggcctg agccgacatg ttattaggcc cggcctgaga aaatagcaac 900
tgctgagttc ctgcggtacc tcccgtggac tgagtccgag acaggtagta caggtactgg 960
tcgatgaggg ggttcatcag ccggtccagg ctttggctgt gcgcgtagct gctgtgaaaa 1020
ggcacgtcct caaactggta gctgaactca aagttgttgc ccgttctcag catttgagaa 1080
ggaaagtact ccaggcagta gaaggaggaa cggcccacgg cctgactgcc attgttcaga 1140
gtcaggtacc cgtactgagg aatcatgaag acgtccgccg ggaacggagg caggcagccc 1200
tggcgcgcag agccgaggac gtacgggagc tggtattccg agtccgtaaa gacCtgaatc 1260
gtgctggtaa ggttattggc gatggtcttg gtgccttcat tctgcgtgac ctccttgacc 1320
tggatgttga agagcttgaa gttgagtctc ttgggccgga atccccagtt gttgttgatg 1380
agtcgctgcc agtcacgtgg tgagaagtgg cagtggaatc tgttaaagtc aaaatacccc 1440
cagggggtgc tgtagccgaa gtaggtgttg tcgttggtgc ttcctcccga agtcccgttg 1500
gagatttgct tgtagaggtg gttgttgtag gtggggaggg cccaggttcg ggtgctggtg 1560
gtgatgactc tgtcgcccag ccatgtggaa tcgcaatgcc aatttcctga ggaactaccc 1620
actccgtcgg cgccttcgtt attgtctgcc attggagcgc caccgcctgc agccattgta 1690
ccagatccca gaccagaggg gcctgcgggg ggttctccga ttggttgagg gtcgggcact 1740
gactctgagt cgccagtctg cccaaagttg agtctctttt tcgcgggctg ctggcctttc 1800
ttgccgatgc ccgtagtgga gtctggagaa cgctggggtg atggctctac cggtctcttc 1860
tttccaggag ccgtcttagc gccttcctca accagaccga gaggttcgag aacccgctcc 1920
ttggcctgga agactgctcg tccgaggttg cccccaaaag acgtatcttc ttgcagacgc 1980
tcctgaaact cggcgtcggc gtggttatac cgcaggtacg gattgtcacc cgctttgagc 2040
tgctggtcgt aggccttgtc gtgctcgągg gccgctgcgt ccgccgcgtt gacgggctcc 2100
cccttgtcga gtccgttgaa gggtccgagg tacttgtagc caggaagcac cagaccccgg 2160
ccgtcgtcct gcttttgctg gttggctttg ggcttcgggg ctccaggttt cagcgcccac 2220
cactcgcgaa tgccctcaga gaggttgtcc tcgagccaat ctggaagata accatcggca 2280
gccatacctg atctaaatca tttattgttc aaagatgcag tcatccaaat ccacattgac 2340
cagatcgcag gcagtgcaag cgtctggcac ctttcccatg atatgatgaa tgtagcacag 2400
tttctgatac gcctttttga cgacagaaac gggttgagat tctgacacgg gaaagcactc 2460
taaacagtct ttctgtccgt gagtgaagca gatatttgaa ttctgattca ttctctcgca 2520
PL 221 877 B1
ttgtctgcag ggaaacagca tcagattcat gcccacgtga cgagaacatŁ tgttttggta 2580
cctgtccgcg tagttgstcg aagcttccgc gtctgacgtc gatggctgcg caactgactc 2640
gcgcacccgt ttgggctcac ttatatctgc gtcactgggg gcgggtcttt tcttggctcc 2700
accctttttg acgtagaatt catgctccac ctcaaccacg tgatcctttg cccaccggaa 2760
aaagtctfctg acttcctgct tggtgacctt cccaaagtca tgatccagac gacgggtgag 2820
11 c aaat t tg aacatccggt cttgcaacgg cLgctggtgt tcgaaggtcg ttgagttccc 2Θ80
gtcaatcacg gcgcacatgt tggtgttgga ggtgacgatc acgggagtcg ggtctatctg 2340
ggccgaggac ttgcstttct gctccacgcg caccttgctt cctccgagaa tggctttggc 3000
cgactccacg accttggcgg tcatcttccc ctcctcccac cagatcacca tcttgtcgac 3060
acagtcgttg aagggaaagt tctcattggt ccagttgacg cagccgtaga agggcgaatt 3120
C 3121 <210a 12 <211=· 3121 <212=· DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 29.4 <400> 12
gaattcgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag aactttccct tcaacgactg 60
tgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga ggggaagatg accgccaagg tcgtggagtc 120
ggccaaagcc attctcggag gaagcaaggt gcgcgtggac cagaaatgca agtcctcggc 130
ccagatagac ccgactcccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 240
cgggaactca acgaccttcg aacaccagca gccgttgcaa gaccggatgt tcaaatttga 300
actcacccgc cgtccggatc atgactttgg gaaggtcacc aagcaggaag tcaaagactt 360
tttccggtgg gcaaaggatc acgtggttga ggtggagcac gaattctacg tcaaaaaggg 420
tggagccaag aaaagacccg cccccagtga cgcagatata agtgagccca aacgggtgcg 480
cgagtcagtt gcgcagccat cgacgtcaga cgcggaagct tcgatcaact acgcagacag 540
gtaccaaaac aaatgttctc gtcacgcggg catgaatctg atgctgtttc cctgcagaca 600
atgcgagaga atgaatcaga attcaaatat ctgcttcact cacggacaga aagactgttt 660
agagtgcttt cccgtgtcag aatctcaacc cgtttctgtc gtcaaaaagg cgtatcagaa 720
actgtgctac attcatcata tcatgggaaa ggtgccagac gcttgcactg cctgcgatct ?ao
ggtcgatgtg gatttggatg actgcatctt tgaacaataa atgatttaaa tcaggtatgg 340
ctgccgatgg ttatcttcca gattggctcg aggacaacct ctctgagggc attcgcgagt 900
ggtgggcgct gaaacctgga gccccgaagc ccaaagccaa ccagcaaaag caggacggcg 960
gccggggtct ggtgcttcct ggctacaagt acctcggacc cttcaacgga ctcgacaagg 1020
gggagcccgt caacgcggcg gacgcagcgg ccctcgagca cgacaaggcc tacgaccagc 1030
PL 221 877 B1
agctcaaagc gggtgacaat ccgtacctgc ggtataacca cgccgacgcc gagtttcagg 1140
agcgtctgca agaagatacg tcttttgggg gcaacctcgg gcgagcagtc ttccaggcca 1200
agaagcgggt tctcgaacct ctcggtctgg ttgaggaagg cgctaagacg gctcctggaa 1260
agaagagacc ggtagagcca tcaccccagc gttctccaga ctcctctacg ggcatcggca 1320
agaaaggcca gcagcccgcg aaaaagagac tcaactttgg gcagactggc gactcagagt 1380
cagtgcccga ccctcaacca atcggagaac cccccgcagg cccctctggt ctgggatctg 1440
gtacaatggc tgcaggcggt ggcgctccaa tggcagacaa taacgaaggc gccgacggag 1500
tgggtagttc ctcaggaaat tggcattgcg attccacatg gctgggcgac tgagtcatca 1560
ccaccagcac ccgaacctgg gccctcccca cctacaacaa ccacctctac aagcaaatct 1620
ccaacgggac ttcgggagga agcaccaacg acaacaccta cttcggctac agcadcccct 1680
gggggtattt tgactttaac agattccact gccacttctc accacgtgac tggcagcgac 1740
tcatcaacaa caactgggga ttccggccca agagactcaa cttcaagctc ttcaacatcc 1BOO
aggtcaagga ggtcacgcag aatgaaggca ccaagaccat cgccaataac cttaccagca 1360
cgattcaggt ctttacggac tcggaatacc agctcccgta cgtcctcggc tctgcgcacc 1920
aggactgcct gcctccgttc ccggcggacg tcttcatgat tcctcagtac gggtacctga 1960
ctctgaacaa tggcagtcag gccgtgggcc gttcctcctt ctactgcctg gagtactttc 2040
cttctcaaat gctgagaacg ggcaacaact ttgagttcag ctaccagttt gaggacgtgc 2100
cttttcacag cagctacgcg cacagccaaa gcctggaccg gctgatgaac cccctcatcg 2160
accagtacct gtactacctg tctcggactc agtccacggg aggtaccgca ggaactcagc 2220
agttgctatt ttctcaggcc gggcctaata acatgtcggc tcaggccaaa aactggctac 2280
ccgggccctg ctaccggcag taacgcgtct ccacgacact gtcgcaaaat aacaacagca 2340
actttgtctg gaccggtgcc accaagtatc atctgaatgg cagagactct ctggtagatc 2400
ccggtgtcgc tatggcaacc cacaaggacg acgaagagcg attttttccg tocagcggag 2460
tcataatgtt tgggaaacag ggagctggaa aagacaacgt ggactatagc agcgtcatgc 2520
taaccagtga ggaagaaatt aaaaccacca acccagtggc cacagaacag tacggcgtgg 2530
tggccgataa cctgcaacag caaaacgccg ctcctattgt aggggccgtc aacagtcaag 2640
gagccttacc tggcatggtc tggcagaacc gggacgtgta cctgcagggt cctacctggg 2700
ccaagattcc tcacacggac ggaaactttc atccctcgcc gctgatggga ggctttggac 2760
tgaaacaccc gcctcctcag atcctgatta agaatacacc tgttcccgcg gatcctccaa 2820
ctaccttcag tcaagctaag ctggcgtcgt tcatcacgca gtacagcacc ggacaggtca 2880
gcgtggaaat tgaatgggag ctgcaggaag aaaacagcaa acgctggaac ccagagattc 2940
aatacacttc caactactac aaatctacaa atgtggactt tgctgttaac acagatggca 3000
PL 221 877 B1
cttattctga ttaatcaata c gcctcgcccc atcggcaccc gttacctcac ccgtaatctg taattgcttg 30S0 3120 3121
aaccggttga ttcgtttcag ttgaactttg gtctctgcga agggcgaatt
<210> 13 <211> 3121 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 29 .5
<400> 13 gaattcgccc ttcgcgagac caaagttcaa ctgaaacgaa tcaaccggtt tattgattaa 60
caagcaatta cagattacgg gtgaggtaac gggtgccgat ggggcgaggc tcagaataag 120
tgccatctgt gttaacagca aagtccacat ttgtagattt gfcagtagttg gaagtgtatt ISO
gaatctctgg gttccagcgt ttgctgtttt ctttctgcag ctcccattca atttccacgc 240
tgacctgtCC ggtgctgtac tgcgtgatga acgacgccag cttagcttga ctgaaggtag 300
ttggaggatc cgcgggaaca ggtgtattct taatcaggat ctgaggaggc gggtgtttca 360
gtccaaagcc tcccatcagc ggcgagggat gaaagtttcc gtccgtgtga ggaatcttgg 420
cccagatagg accctgcagg tacacgtccc ggttctgcca gaccatgcca ggtaaggctc 430
cttgactgtt gacggcccct acaataggag cggcgttttg ctgttgcagg ttatcggcca 540
ccacgccgta ctgttctgtg gccactgggt tggtggtttt aatttcttcc tcactggtta 600
gcataacgct gctatagtcc acgttgtctt tćccagctcc ctgtttccca aacattaaga 660
ctccgctgga cggaaaaaat cgctcttcgt cgtccttgtg ggttgccata gcgacaccgg 720
gatttaccag agagtctctg ccattcagat gatacttggt ggcaccggtc caggcaaagt 760
tgctgttgtc attttgcgac agtgtcgtgg agacgcgttg ctgccggtag cagggcccgg 840
gtagccagtt tttggcctga gccgacatgt tattaggccc ggcctgagaa aatagcaact 900
gctgagttcc tgcggtacct cccgtggact gagtccgaga caggtagtac aggtactggt 960
cgatgagggg gttcatcagc cggtccaggc tttggctgtg cgcgtagctg ctgtgaaaag 1020
gcacgtcctc aaactggtag ctgaactcaa agttgttgcc cgttctcagc atttgagaag 1080
gaaagtactc caggcagtag aaggaggaac ggcccacggc ctgactgcca ttgttcagag 1140
tcaggtaccc gtactgagga atcatgaaga cgtccgccgg gaacggaggc aggcagccct 1200
ggtgcgcaga gccgaggacg tacgggagct ggtattccga gtccgtaaag acctgaatcg 1260
tgctggtaag gttattggcg atggtcttgg tgccttcatt ctgcgtgacc tccttgacct 1320
ggatgttgaa gagcttgaag ttgaggctct tgggccggaa tccccagttg ttgttgatga 1380
gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttaaagtca aaataccccc 1440
agggggtgct gtagccgaag taggtgttgt cgttggtgct tcctcccgaa gtcccgttgg 1500
PL 221 877 B1
agatttgctt gtagaggtgg ttgttgtagg tggggagggc ccaggttcgg gtgctggtgg 1560
tgatgactcc gtcgcccagc catgtggaat cgcaatgcca atttcctgag gaactaccca 1620
ctccgtcggc gccttcgtta ttgtctgcca ttggagcgcc accgcctgca gccattgtac 1630
cagatcccag accagagggg cctgcggggg gttctccgat tggttgaggg tcgggcactg 1740
actctgagtc gccagtctgc ccaaagttga gtctcttttt cgcgggctgc tggcctctct 1800
tgccgatgcc cgtagaggag tctggagaac gctggggtga tggctctacc ggtctcttct 1360
ttccaggagc cgtcttagcg ccttcctcaa ccagaccgag aggttcgaga acccgcttct 1920
tggcctggaa gactgctcgc ccgaggttgc ccccaaaaga cgtatcttct tgcagacgct 1930
cctgaaactc ggcgtcggcg tggttatacc gcaggtacgg attgtcaccc gctttgagct 2040
gctggtcgta ggccttgtcg tgctcgaggg ccgctgcgtc cgccgcgttg acgggctccc 2100
ccttgtcgag tccgttgaag ggtccgaggt acttgtagcc aggaagcacc agaccccggc 2160
cgtcgtcctg cttttgctgg ttggctttgg gcttcggggc tccaggtttc agcgcccacc 2220
actcgcgaat gccctcagag aggttgtcct cgagccaatc tggaagataa ccatcggcag 2280
ccatacctga tttaaatcat ttattgttca aagatgcagt catccaaatc cacactgacc 2340
agatcgcagg cagtgcaagc gtctggcacc tttcccatga tatgatgaat gtagcacagt 2400
ttctgatacg cctttttgac gacagaaacg ggttgagatt ctgacacggg aaagcactct 2460
aaacagtctt tctgtccgtg agtgaagcag atatttgaat tctgattcat tctctcgcat 2520
tgtctgcagg gaaacagcat cagattcatg cccacgtgac gagaacattt gttttggtac 2580
ctgtctgcgt agttgatcga agcttccgcg tctgacgtcg atggctgcgc aactgactcg 2640
cgcacccgtt tgggctcact tatatctgcg tcactggggg cgggtctttt cttggctcca 2700
ccctttttga cgtagaattc atgctccacc tcaaccacgt gatcctttgc ccaccggaaa 2760
aagtctttga cttcctgctt ggtgaccttc ccaaagtcat gatccagacg gcgggtgagt 2820
tcaaatttga acatccggtc ttgcaacggc tgctggtgtt cgaaggtcgt tgagtfccccg 2880
tcaatcacgg cgcacatgtt ggtgttggag gtgacgatca cgggagtcgg gtctatctgg 2940
gccgaggact tgcatttctg gtccacgcgc accttgcttc ctccgagaat ggctttggcc 3000
gactccacga ccttggcggt catcttcccc tcctcccacc agatcaccat cttgtcgaca 3060
cagtcgttga agggaaagtt ctcattggtc cagttgacgc agccgtagaa agggcgaatt 3120
C 3121 <210> 14 <211> 3131 <212 > DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 1-3 <400> 14 gcggccgcga attcgccctt ggctgcgtca actggaccaa tgagaacttt cccttcaatg 60
PL 221 877 B1
attgcgtcga caagatggtg atctggtggg aggagggcaa gatgacggcc aaggtcgtgg 12 0
agtccgccaa ggccattctc ggcggcagca aggtgcgcgt ggaccaaaag tgcaagtcgt 180
ccgcccagat cgaccccacc cccgtgatcg tcacctccaa caccaacatg tgcgccgtga 240
ttgacgggaa cagcaccacc ttcgagcacc agcagcctct ccaggaccgg atgtttaagt 300
tcgaactcac ccgccgtctg gagcacgact ttggcaaggt gacaaagcag gaagtcaaag 3S0
agttcttccg ctgggccagt gatcacgtga ccgaggtggc gcatgagttt tacgtcagaa 420
agggcggagc cagcaaaaga cccgcccccg atgacgcgga taaaagcgag cccaagcggg 4B0
cctgcccctc agtcgcggat ccatcgacgt cagacgcgga aggagctccg gtggactttg 540
ccgacaggta ccaaaacaaa tgttctcgtc acgcgggcat gcttcagatg ctgtttccct 600
gcaaaacgtg cgagagaatg aatcggaatt tcaacatttg cttcacacac ggggtcagag 660
actgctcaga gtgtttcccc ggcgtgtcag aatctcaacc ggtcgtcaga aagaggacgt 720
atcggaaact ccgtgcgatt caccatctgc tggggcgggc tcccgagatt gcttgctcgg 780
cctgcgatct ggtcaacgtg gacctggatg actgtgtttc tgagcaataa atgacttaaa 840
ccaggtatgg ctgccgatgg ttatcttcca gattggctcg aggacaacct ctctgagggc 900
attcgcgagt ggtgggcgct gaaacctgga gccccgaagc ccaaagccaa ccagcaaaag 960
caggacgacg gccggggtct ggtgcttcct ggctacaagt acctcggacc cttcaacgga 1020
ctcgacaagg gggagcccgt caacgcggcg gacgcagcgg ccctcgagca cgacaaggct 1080
tacgaccagc agctgcaggc gggtgacaat ccgtacctgc ggtataacca cgccgacgcc 1140
gagtttcagg agcgtctgca agaagatacg tcttttgggg gcaacctcgg gcgagcagtc 1200
ttccaggcca agaagcgggt tctcgaacct ctcggtctgg ttgaggaagg cgctaagacg 1260
gctcctggaa agaagagacc ggtagagcca tcaccccagc gttctccaga ctcctctacg 1320
ggcatcggca agaaaggcca acagcccgcc agaaaaagac tcaattttgg tcagactggc 1380
gactcagagt cagttccaga ccctcaacct ctcggagaac ctccagcagc gccctctggt 1440
gtgggaccta atacaatggc tgcaggcggt agcgcaccaa tggcagacaa taacgaaggc 1500
gccgacggag tgggtagttc ctcgggaaat tggcattgcg attccacatg gctgggcgac 1560
agagtcatca ccaccagcac ccgaacctgg gccctgccca cctacaacaa ccacctctac 1620
aagcaaatct ccaacgggac atcgggagga gccaccaacg acaacaccta cttcggctac 1680
agcaccccct gggggtattt tgactttaac agattccact gccacctttc accacgtgac 1740
tggcagcgac tcatcaacaa caactgggga ttccgaccca agagactcag cttcaagctc iaoo
ttcaacatcc aggtcaagga ggtcacgcag aatgaaggca ccaagaccat cgccaataac 1860
ctcaccagca ccatccaggt gtttacggac tcggagtacc agctgccgta cgttctcggc 1920
tctgtccacc agggctgcct gcctccgttc ccggcggacg tgttcatgat tccccagtac 1980
PL 221 877 B1
ggctacctaa cactcaacaa cggtagtcag gccgtgggac gctcctcctt ctactgcctg 2040
gaatactttc cttcgcagat gctgagaacc ggcaacaact tccagtttac ttacaccttc 2100
gaggacgtgc ctttccacag cagctacgcc cacagctaga gcttggaccg gctgatgaat 2160
cctctgattg accagtacct gtactacttg tctcggactc aaacaacagg aggcacggca 2220
aatacgcaga ctctgggctt cagccaaggt gggcctaata caatggccaa tcaggcaaag 2200
aactggctgc caggaccctg ttaccgccaa caacgcgtct caacgacaac cgggcaaaac 2340
aacaatagca actttgcctg gactgctggg accaaatacc atctgaatgg aagaaattca 2400
ttggctaatc ctggcatcgc tatggcaaca cacaaagacg acgaggagcg tttttttccc 2460
agtaacggga tcctgatttt tggcaaacaa aatgctgcca gagacaatgc ggattacagc 2520
gatgtcatgc tcaccagcga ggaagaaatc aaaaccacta accctgtggc tacagaggaa 2580
tacggtatcg tggcagataa cttgcagcag caaaacacgg ctcctcaaat tggaactgtc 2640
aacagccagg gggccttacc cggtatggtc tggcagaacc gggacgtgta cctgcagggt 2700
cccatctggg ccaagattcc tcacacggac ggcaacttcc acccgtctcc gctgatgggc 2760
ggctttggcc tgaaacatcc tccgcctcag atcctgatca agaacacgcc tgtacctgcg 2320
gatcctccga ccaccttcaa ccagtcaaag ctgaactctt tcatcacgca atacagcacc 2330
ggacaggtca gcgtggaaat tgaatgggag ctgcagaagg aaaacagcaa gcgctggaac 2940
cccgagatcc agtacacctc caactactac aaatctataa gtgtggactt tgctgttaat 3000
acagaaggcg tgtactctga accccgcccc attggcaccc gttacctcac ccgtaatctg 3060
taattgcctg ttaatcaata aaccggttga ttcgtttcag ttgaactttg gtctctgcga 3120
agggcgaatt c 3131
<210> 15 <211> 3127
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 13- -3b
<400> 1S gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat caaccggttt 60
attgattaac atgcaattac agattacggg tgaggtaacg agtgccaata gggcgaggct 12 0
cagagtaaac accctggctg tcaacggcaa agtccacacc agtctgcttt tcaaagttgg 180
aggtgtactg aatctccggg tcccagcgct tgctgttttc cttctgcagc tcccactcga 240
tttccacgct gacttgtccg gtgctgtact gtgtgatgaa cgaagcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc cggaggatta gcgggaacgg gagtgttctt gatcaggatc tgaggaggcg 360
gatgtttaag tccaaagccg cccatcaaag gagacgggtg aaagttgcca tccgtgtgag 420
gaatcttggc ccagatggga ccctgcaggt acacgtcccg gttctgccag accatgccag 480
PL 221 877 B1
gtaaggctcc ctggttgttg acaacttgtg tctgggctgc agtattagcc gcttgtaagt 340
tgctgctgac tatcccgtat tcttccgtgg ctacaggatt agtaggacga atttcttctt SOO
catttgtcat taacacattt tccaatgtag ttttgtcagt tgctccagtt 1ttccaaaaa 660
tcaggactcc gctggatggg aaaaagcggt cctcgtcgtc cttgtgagtt gccatggcga 720
cgccgggatt aaccaacgag tttctgccgt tcaggtgata tttggtggca ccagtccaag 780
caaagttgct gttgttgttt tgatccaacg ttttggagac cctttgttgc cggaagcagg 840
gtccaggtaa ccaattcttg gcttgttcgg ccstagttga aggcccgccc tggtaaaact 900
gcagttcccg attgccagct gtacctcctg ggtcactctg tgttctggcc aggtagtaca 960
agtactggtc gatgagggga ttcatcagcc ggtccaggct ctggctgtgt gcgtagctgc 1020
tgtggaaagg cacgtcctcg aagctgtagc tgaactcaaa gttgttgccc gttctcagca 1060
tctgagaggg gaagtactcc aggcagtaga aggaggaacg tcccacagac tgactgccat 1140
tgttgagagt caggcagccg tactgaggaa tcatgaagac gtccgccggg aacggaggca 1200
ggcagccctg gtgcgcagag ccgaggacgt acggcagctg gtattcegag tccgagaata 1260
cctgaatcgt gctggtaagg ttattagcga tggtcgtaac gccgtcattc gtcgtgacct 1320
ccttgacctg gatgttgaag agcttgaacc gcagcttctt gggccggaat ccccagttgt 1330
tgttgatgag tcgctgccag tcacgtggtg agaagtggca gtggaatctg ttaaagtcaa 1440
aataccccca gggggtgctg tagccgaagt aggtgttgtc gttggtacta cctgcagttt 1500
cactggagat ttgctcgtag aggtggttgt tgtaggtggg cagggcccag gttcgggtgc 1560
tggtggtaat gactctgtcg cccagccatg tggaatcgca atgccaattt cctgaggcat 1620
tacccactcc gtcggcacct tcgttattgt ctgccattgg tgcgccaccg cctgcagcca 1680
ctgtaccaga tcccacacta aagggcsttg ctggaggttc tccgagaggt tgagggtcgg 1740
ggactgactc tgagtcgcca gtctgaccga aattgagcct CttŁcŁggcg ggctgctggc 1300
ccttcttgcc gatgcccgtg gaggagtcgg gggaacgctg aggtgacggc tctaccggtc 1860
tcttctttgc aggagccgtc ttagcgcctt cctcaaccag accgagaggt tcgagaaccc 1920
gcttcttggc ctggaagact gctcgcccga ggttgccccc aaatgacgta tcttcttgca 1380
aaegctcctg aaactcggcg tcggcgtggt tataccgcag gtacgggttg tcacccgcat 2040
tgagctgctg gtcgtaggcc ttgtcgtgct cgagggccgc tgcgtccgcc gcgttgacgg 2100
gctccccctt gtcgagtccg ttgaagggtc cgaggtactt gtagccagga agcaccagac 2160
cccggccgtt gtcctgcttt tgctggttgg ctttgggttt cggggctcca ggtttcaggt 2220
cccaecactc gcgaatgccc tcagagaggt tgtcctcgag ccaatctgga agataaccat 2280
cggcagccat acctgattta aatcatttat tgttcaaaga tgcagtcatc caaatccaca 2340
ttgaccagat cgcaggcagt gcaagcgtct ggcacctttc ccatgatata atgaatgtsg 2400
PL 221 877 B1
cacagtttct gatacgcctt tttgacgaca gaaacgggtt tagattctga cacgggaaag 2450
cactctaaac agtctttctg tccgtgagtg aagcagatat ttgaattctg attcattctc 2520
tcgcattgtc tgcagggaaa cagcatcaga ttcatgccca cgtgacgaga acatttgttt 2580
tggtacctgt ctgcgtagtt gatcgaagct tccgcgtcCg acgtcgatgg ctgcgcaact 264 0
gactcgcgca cccgtttggg ctcacttata tctgcgtcac tgggggcggg tcttttcttg 2700
gctccaccct ttctgacgta gaattcatgc tccacctcaa ccacgtaatc ctttgcccac 2760
cggaaaaagt ctttgacttc ctgcttggtg accttcccaa agtcatgatc cagacggcgg 2820
gtgagttcaa atttgaacat ccggtcttgc aacggctgct ggtgttcgaa ggtcgttgag 2830
ttcccgtcga tcacggcgca catgttggtg ttcgagatga cgatcgcggg agtcgggtct 2940
atctgggccg aggacttgca tttctggtcc acgcgcacct tgcttcctcc gagaatggct 3000
ttggccgact ccacgacctt ggcggtcatc ttcccctcct cccaccagat caccatcttg 3060
tcgacacagt cgttgaaggg aaagttctca ttggtccagt tgacgcagcc gtagaaaggg 3120
cgaattc 3127 <210> 16 <211> 3106
<212s DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 24· -1
<400> 16 gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat caaccggttt 60
attgattaac aagtaattac aggttacggg tgaggtaacg ggtgccaatg gggcgaggct 12 0
cagtataaac cccttcgttg ttgacagcaa attccacatt attagacttg gcataatttg ISO
aggtgtactg aatctctgga ttccagcgtt tgctgttttc tttctgcagt tcccactcga 240
tctccacgct gacctggccg gtgctgtact gcgtgataaa tgaggcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc tggaggatta gcaggtaccg gggtgttttt gatgagaatt tgaggaggcg 360
ggtgtttgag tccaaatccg cccatoaggg gagacgggtg aaagttgccg tccgtgtgag 420
gaattttggc ccagatggga ccctgcaggc acacgtcccg gttctgccag accatgccgg 4 80
gcagagcccc ctggctgttg acagtcfcgtg tctggggtcc ggccgtagac gattgcaggt 540
tgctggagac cacaccgtat tcttctgtag ccacgggatt ggtggttttg atctcctcct 600
cgctggtcat tagcacgttt tccagcgttg tcttgttggc agcccccgtt ttgccaaaaa S6O
ccagcactcc gttgatggga aagaactggt cctcgtcgtc cttgttggtg gccatggcta 720
cgcccgggtt ggttaatgaa tttctaccat tcagatggta tttagtggcc ccggtccagg 780
caaagttact gttgttgttg ctgtctatgt tttttgacag Łctctgctgc cgataacagg 340
gtccgggcag ccagttcttt gattgctcgg ccatggtgtt gggcccagcc tgatggaact 900
gcagctccct tgtggacccc gtagtgctct gggtccgggc caggtagtac aggtactggt 960
PL 221 877 B1
cgatgagggg attcatcagc cggtctaggc tctggcfcgtg cacatagctg ctgtggaaag 1020
gcacttcctc aaaggtgtag ctgaattcaa agttattgcc cgttctcagc atctgagaag 1080
gaaagtactc caggcagtag aaggaggaac gtcccacaga ctgactgccg ttgtttagag 1140
tcagatatcc gtactgagga atcatgaaca cgtccgcagg gaacggaggg aggcagccct 1200
ggtgcgcaga gccgaggacg tacggcagtt ggtactccga gtccgagaag acctgaatcg 1260
tgctggtaag gttattagcg atggtcgtaa cgccgtcgtt cgtcgtgacc tccttgacct 1320
ggatgttgaa caacttgaac cgcagctttc tgggccggaa eccccagctg ttgttgacga 1380
gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttgaagtca aaatagcccc 1440
agggggtgct gtagctgaag aagtggttgt cgttggtagc cccgctctga cttgatatct 1500
gcttgtagag gfcggttgttg taggtgggca gggcccaggt gcgggtgctg gtggtgatga 1560
ctctgtcgcc cagccatgtg gaatcgcaat gccaatttcc ggaggcatta cccactccgt 1620
cggcgccttc gttattgtct gccattggtg cgccaccgcc tgcagccatt gtaccagatc 1680
ccagacctga gggcgcggcg ggaggttctc cgagaggttg ggggtcgggc actgactctg 1740
agtcgccagt ctgcccaaag ttgagcttct ttttagcggg ctgctggcct ttctcgccga 1800
tgcccgtgga ggagtcgggg gattctatgg gtctcttctt tccaggagcc gtcttagcga 1860
cttcctcaac cagaccgaga ggttcgagaa cccgcttctt ggcctggaag actgctcgcc 1920
cgaggttgcc cccaaaagac gtatcttctt gaagacgctc ctgaaactcg gcgtcggcgt 1980
ggttgtactt gaggtacggg ttgtccccct gctcgagctg cttgtcgtag gccttgtcgt 2040
gctcgagggc cgcggcgtct gcctcgttga ccggctctcc cttgtcgagt ccgttgaagg 2100
gtctgaggta cttgtagcca ggaagcacca gaccccggcc gtcgtcctgc ttttgctggt 2160
tggctttggg tttcggggct ccaggtttca agtcccacca ctcgcgaatg ccctcagaga 2220
ggttgtcctc gagccaatct ggaagataac catcggcagc catacctggt ttaagtcatt 2280
tattgctcag aaacacagtc atccaggtcc acgttgacca gatcgcaggc cgagcaagca 2340
atctcgggag cccgccccag cagatgatga atggcacaga gtttccgata cgtcctcttt 2400
ctgacgaccg gttgagattc tgacacgccg gggaaacatt ctgaacagtc tctggtcccg 2450
tgcgtgaagc aaatgttgaa attctgattc actctctcgc atgtcttgca gggaaacagc 2S20
atctgaagca tgcccgcgtg acgagaacat ttgttttggt acctgtcggc aaagtccacc 2580
ggagctcctt ccgcgtctga cgtcgatgga ttcgcgactg aggggcaggc ccgcttgggc 2640
tcgcttttat ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ccceaccctt tctgacgtag 2700
aacccatgcg ccacctcggt cacgtgatcc tgcgcccagc ggaagaacct tttgacttcc 2760
tgctttgtca ccttgccaaa gttatgctcc agacggcggg tgggttcaaa tttgaacatc 2820
cggtcctgca acggctgctg gtgctcgaag gtggcgctgt tcccgtcaat cacggcgcac 2880
PL 221 877 B1
atgttggtgt tggaggtgac ggtcacgggg gtggggtcga tctgggcgga cgacttgcac 2940
ttttggtcca cgcgcacctt gctgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg 3000
gccgtcatct tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cggcgcaatc gttgaaggga 3060
aagttctcat tggtccagtt gacgcagccg tagaaagggc gaattc 3106
<210> 17 <211> 3102
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 27- -3
<400> 17 gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat caaccggttt 60
attgattaac aagtaattac aggttacggg tgaggtaacg ggtgccaatg gggcgaggct 120
cagtataaac cccttcgttg ttgacagcaa attccacatt attagacttg gcataatttg 130
aggtgtactg aatctctgga ttccagcgtt tgctgttttc tttctgcagt tcccactcga 240
tctccacgct gacctggccg gtgctgtact gcgtgataaa tgaggcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc tggaggatta gcaggtaccg gggtgttttt gatgagaatt tgaggaggcg 360
ggtgtttgag tccaaatccg cccatcaggg gagacgggtg aaagttgccg tccgtgtgag 420
gaatttcggc ccagatggga ccctgcaggt acacgtcccg gttctgccag accatgccgg 430
gcagagcccc ctggctgttg acagtctgtg tccggggtcc ggccgtagac gattgcaggt 540
tgctggagac cacaccgtat tcttctgtag ccacgggatt ggtggttttg atctcctcct 600
cgctggtcat tagcacgttt tccagcgttg tcttgttggc agcccccgtt ttgccaaaaa 660
ccagcactcc gttgatggga aggaactggt cctcgtcgtc cttgttggtg gccatggcta 720
cgcccgggtt ggttaatgaa tttctaccat tcagatggta tttagtggcc ccggtccagg 730
caaagttact gttgttgttg ctgtctatgt tttttgacag tctctgctgc cgataacagg 340
gtccgggcag ccagttcttt gattgctcgg ccacggtgtt gggcccagcc tgatggaact 900
gcagctccct tgtggacccc gtagtgctct gggtccgggc caggtagtac aggtactggt 960
cgatgagggg attcatcagc cggtccaggc tctggctgtg cgcatagctg ctgtggaaag 1020
gcacttcctc aaaggtgtag ctgaattcaa agttattgcc cgttctcagc atctgagaag 1080
gaaagtactc caggcagcag aaggaggaac gtcccacaga ctgactgccg ttgtttagag 114 0
tcagatatcc gtactgagga atcatgaaca cgtccgcagg gaacggaggg aggcagccct 1200
ggtgcgcaga gccgaggacg tacggcagtt ggtactccga gtccgagaag acctgaatcg 1260
tgctggtaag gttattagcg atggtcgtaa cgccgtcgtt cgtcgtgacc tccttgacct 1320
ggatgttgaa caacttgaac cgcagctttc tgggccggaa tccccagttg ttgttgatga 1380
gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttgaagtca aaatagcccc 1440
PL 221 877 B1
agggggtgct gtagccgaag aagtggttgt cgttggtagc cccgctctga cttgatatct 1500
gcttgtagag gtggttgttg taggtgggca gggcccaggt gcggatgctg gtggtgatga 1560
ctctgtcgcc cagccatgtg gaatcgcaat gccaatttcc ggaggcatta cccactccgt 1620
cggcgccttc gttattgtct gccattggtg cgccaccgcc tgcagccatt gtaccagatc 1680
ccagacctga gggcgcggcg ggaggttctc cgagaggttg ggggtcgggc actgactctg 1740
agtcgccagt ctgcccaaag ttgagcttct ttttagcggg ctgctggcct ttcttgccga 1800
cgcccgtgga ggagtcgggg gattctatgg gtctcttctt tccggaagcc gtcttagcgc 1860
ottcctcaao cagaccgaga ggttcgagaa cccgcttctt ggcctggaag actgctcgcc 1920
ogaggttgcc cccaaaagac gtatcttctt gaagacgctc ctgaaactcg gcgtcggcgt 1980
ggttgtaett gaggtacggg ttgtccccct gctcgagctg cttgtcgtag gccttgtcgt 2040
gctcgagggc cgcggcgtct gcotcgttga ccggctctcc cttgtcgagt ccgttgaagg 2100
gtccgaggta cttgtagcca ggaagcacca gąccccggoc gtcgtcctgc ttttgctggt 2160
tggctttggg tttcggggct ccaggtttca agtcccacca ctcgcgaatg ccctcagaga 2220
ggttgtcctc gagccaatct ggaagataac catcggcagc catacctggt ttaagtcatt 2280
tattgctcag aaacacagtc atccaagtcc acgttgacca gatcgcaggc cgagcaagca 2340
atctcgggag cccgccccag cagatgatga atggoacaga gtttccgata cgtcctcttt 2400
ctgacgaccg gttgagattc tgacacgccg gggaaacatt ctgaacagtc tctggtcccg 2460
tgcgtgaagc aaatgttgaa attctgattc attctctcgc atgtcttgca gggaaacagc 2520
atctgaagca tgcccgcgtg acgagaacat ttgttttggt acctgtcggc aaagtccacc 2580
ggagctcctt ccgcgtctga cgtcgatgga tccgcgactg aggggcaagc ccgcttgggc 2640
tcgcttttat ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ctccaccctt tctgacgtag 2700
aactcatgcg ccacctcggt cacgtgatcc tgcgcccagc ggaagaactc tttgacctcc 2760
tgctttgtca ccttgccaaa gtcatgctcc agacggcggg tgagttcaaa tttgaacatc 2820
cggtettgta ącggctgctg gtgctcgaag gtggtgctgt tcccgtcaat cacggcgcac 2880
atgttggtgt tggaagtgac gatcacgggg gtgggatcga tctgggcgga cgacttgcac 2940
ctttggtcca cgcgcacctt gctgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg 3000
gccgtcatct tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatc gttgaaggga 3060
aagttctcat tggtccagtt gacgcagccg aagggcgaat tc 3102
<210> 18 <211> 3106 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon. 7-2 <400> 18 gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat cagccggttt 60
PL 221 877 B1
attgattaac aagtaattac aggttacggg tgaggtaacg ggtgccaatg gggcgaggct 120
cagtataaac cccttcgttg ttgacagcaa attccacatt attagacttg gcataatttg 180
aggtgtactg aatctctgga ttccagcgtt tgctgttttc tttctgcagt tcccactcga 240
tctccacgct gacctggccg gtgctgtact gcgtgataaa tgaggcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc tggaggatta gcaggtaccg gggtgttttt gatgagaatt tgaggaggcg 360
ggtgtttgag tccaaatccg cccatcaggg gagacgggtg aaagttgccg tccgtgtgag 420
gaattttggc ccagatggga ccctgcaggt acacgtcccg gttctgccag accatgccgg 480
gcagagcccc ctggctgttg acagtctgtg tctggggtcc ggccgtagac gattgcaggt 540
tgctggagac cacaccgtat tcttctgtag ccacgggatt ggtggttttg atctcctcct 600
cgctggtcat tagcacgttt tccagcgttg tcttgttggc agcccccgtt ttgccaaaaa 660
ccagcactcc gttgatggga aagaactggt cctcgtcgtc cttgttggtg gccatggcta 720
cgcccgggtt ggttaatgaa tttctaccat tcagatggta tttagtggcc ccggtccagg 780
caaagttact gttgttgttg ctgtctatgt tttttgacag tctctgctgc cgataacagg 840
gtccgggcag ccagttcttt gattgctcgg ccatggtgtt gggcccagcc tgatggaact 900
gcagctccct tgtggacccc gtagtgctct gggtccgggc caggtagtac aggtactggt 960
cgatgagggg attcatcagc cggtccaggc tctggctgtg cgcatagctg ctgtggaaag 1020
gcacttcctc aaaggtgtag ctgaattcaa agttatcgcc cgttctcagc atctgagaag 1080
gaaagtactc caggcagtag aaggaggaac gtcccacaga ctgactgccg ttgtttagag 1140
tcagatatcc gtactgagga atcatgaaca cgtccgcagg gaacggaggg aggcagccct 1200
ggtgcgcaga gccgaggacg tacggcagtt ggtactccga gtccgagaag acctgaatcg 1260
tgctggtaag gttattagcg atggtcgtaa cgccgtcgtt cgtcgtgacc tccttgacct 1320
ggatgttgaa caacttgaac cgcagctttc tgggccggaa tccccagttg ttgttgatga 1380
gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttgaagtca aaatagcccc 1440
agggggtgct gtagccgaag aagtggttgt cgttggtagc cccgctctga cttgatatct 1500
gcttgtagag gtggttgttg taggtgggca gggcccaggt gcgggtgctg gtggtgatga 1560
ctctgtcgcc cagccatgtg gaatcgcaat gccaatttcc ggaggcatta cccactccgt 1620
cggcgccttc gttattgtct gccattggtg cgccaccgcc tgcagccatt gtaccagatc 1680
ccagacctga gggcgcggcg ggaęgttctc cgagaggttg ggggtcgggc actgactctg 1740
agtcgccagt ctgcccaaag ttgagcttct ttttagcggg cggctggccg ttcttgccga 1800
tgcccgtgga ggagtcgggg gattctatgg gtctcttctt tccaggagcc gtcttagcgc 1860
cttcctcaac cagaccgaga ggttcgagaa cccgcttctt ggcctggaag actgctcgcc 1920
cgaggttgcc cccaaaagac gtatcttctt gaagacgctc ctgaaactcg gcgtcggcgt 1980
PL 221 877 B1
ggttgtactt gaggtacggg ttgtccccct gctcgagctg cttgtcgtag gccttgtcgt 2040
gctcgagggc cgcggcgtct gcctcgttga ccggctctcc cttgtcgagt ccgttgaagg 2100
gtccgaggta cctgtagcca ggaagcacca gaccccggcc gtcgtcctgc ttttgctggt 2160
tggctttggg tttcggggct ccaggtttca agtcccacca ctcgcgaatg ccctcagaga 2220
ggttgccctc gagccaatct ggaagataac catcggcagc catacctggt ttaagtcatt 2280
tattgctcag aaacacagtc atccaggtcc acgttggcca gatcgcaggc cgagcaagca 2340
atctcgggag cccgccccag cagatgatga atggcacaga gtttccgata cgtcctcttt 2400
ctgacgaccg gttgagattc tgacacgccg gggaaacatt ctgaacagtc tctggtcccg 2460
tgcgtgaagc aaatgttgaa attctgattc attctctcgc atgtcttgca agggaacagc 2520
atctgaagca tgcccgcgtg acgagaacat ttgttttggt acctgtcggc aaagtccacc 2530
ggagctcctt ccgcgtctga cgtcgatgga tccgcgactg aggggcaggc ccgcttgggc 2640
tegcttfctat ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ctccaccctt tctgacgtag 2700
aactcatacg ccacctcggt cacgtgatcc tgcgcccagc ggaagaactc tttgacttcc 2760
tgctttgtca ccttgccaaa gtcatgctcc agacggcggg tgagttcaaa tttgaacatc 2320
cggtcttgta acggctgctg gtgctcgaag gtggtgctgt tcccgtcaat cacagcgcac 2330
atgttggtgt tggaagtgac gatcacgggg gtgggatcga tctgggcgga cgacttgcac 2940
ttttggtcca cgcgcacctt gctgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg 3 000
gccgtcatcc tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatc gttgaaggga 3060
aagttctcat tggtccagtt gacgcagccg tagaaagggc gaattc 3106
<210? 19 <211? 3105 <212? DNA <213? nowy serotyp AA.V, klon Cl
<400? 19 gaattcgccc ttgctgcgtc aactggacca atgagaactt tcccttcaac gattgcgtcg 60
acaagatggt gatctggtgg gaggagggca agatgaccgc caaggtcgtg gagtccgcca 120
aggccattct gggcggaagc aaggtgcgcg tggaccaaaa gtgcaagtca tcggcccaga 130
tcgaccccac gcccgtgatc gtcacctcca acaccaacat gtgcgccgfcg atcgacggga 240
acagcaccac cttcgagcac cagcagccgc tgcaggaccg catgttcaag ttcgagctca 300
cccgccgtct ggagcacgac tttggcaagg tgaccaagca ggaagtcaaa gagttcttcc 360 gctgggctca ggatcacgtg actgaggtgg cgcatgagtt ctacgtcaga aagggcggag 420 ccaccaaaag acccgccccc agtgacgcgg atataagcga gcccaagcgg gcctgcccct 430 cagttgcgga gccatcgacg tcagacgcgg aagcaccggt ggactttgcg gacaggtacc 540
PL 221 877 B1
aaaacaaatg ttctcgtcac gcgggcatgc ttcagatgct gtttccctgc aagacatgcg soo
agagaatgaa tcagaatttc aacgtctgct tcacgcacgg ggtcagagac tgctcagagt sso
gcttccccgg cgcgtcagaa tctcaacccg tcgtcagaaa aaagacgtat cagaaactgt 720
gcgcgattca tcatctgctg gggcgggcac ccgagattgc gtgttcggcc cgcgatctcg 780
tcaacgtgga cttggatgac tgtgtttctg agcaataaat gacttaaacc aggtatggct 940
gctgacggtt atcttccaga ttggctcgag gacaacctct ctgagggcat tcgcgagtgg 90 0
tgggacctga aacctggagc ccccaagccc aaggccaacc agcagaagca ggacgacggc 960
cggggtctgg tgcttcctgg ctacaagtac ctcggaccct tcaacggact cgacaagggg 1020
gagcccgtca acgcggcgga cgcagcggcc ctcgagcacg acaaggccta cgaccagcag 1080
ctcaaagcgg gtgacaatcc gtacctgcgg tataaccacg ccgacgccga gttfccaggag 1140
cgtctgcaag aagatacgtc ttttgggggc aacctcgggc gagcagtctt ccaggccaag 1200
aagagggtac tcgaacctct gggcctggtt gaagaaggtg ctaagacggc tcctggaaag 1260
aagagaccgt tagagtcacc acaagagccc gactcctcct caggaatcgg caaaaaaggc 1320
aaacaaccag ccaaaaagag actcaacttt gaagaggaca ctggagccgg agacggaccc 1380
cctgaaggat cagataccag cgccatgtct tcagacattg aaatgcgtgc agcaccgggc 1440
ggaaatgctg tcgatgcggg acaaggttcc gatggagtgg gtaatgcctc gggtgattgg 1500
cattgcgatt ccacctggtc tgagggcaag gtcacaacaa cctcgaccag aacctgggtc 1560
tcgcccacct acaacaacca cttgtacctg cggctcggaa caacatcaaa cagcaacacc 1620
tacaacggat tctccacccc ctggggatac tttgacttta acagattcca ctgtcacttc 1680
Łcaccacgtg actggcaaag actcatcaac aacaactggg gactacgacc aaaagccatg 1740
cgcgttaaaa tcttcaatat ccaagttaag gaggtcacaa cgtcgaacgg cgagaccacg 1800
gtcgctaata accttaccag cacggttcag atatttgcgg actcgtcgta tgagctcccg 1860
tacgtgatgg acgctggaca agagggaagt ctgtctcctt tccccaatga cgtcttcatg 1920
gtgcctcaat atggctactg tggcattgtg actggcgaaa atcagaacca gacggacaga 1980
aatgctttct actgcctgga gtattttcct tcacaaatgc tgagaactgg caataacttt 2040
gaaatggctt acaactttgg gaaggtgccg ttccactcaa tgtatgctta cagccagagc 2100
ccggacagac tgatgaatcc cctcctggac cagtacctgt ggcacttaca gtcgaccacc 2160
tctggagaga ctctgaatca aggcaatgca gcaaccacat ttggaaaaat caggagtgga 2220
gactttgcct tttacagaaa gaactggctg cctgggcctt gtgttaaaca gcagagactc 2280
tcaaaaactg ccagtcaaaa ttacaagatt cctgccagcg ggggcaacgc tctgttaaag 2340
tatgacaccc actatacctt aaacaaccgc tggagcaaca tagcgcctgg acctccaatg 2400
gcaacagctg gaccttcaga tggggacttc agcaacgccc agctcatctt ccctggacca 2460
PL 221 877 B1
tcagtcaccg caaacacaac aacctcagca aacaatctgt Łgtttacatc agaag aagaa 2520
attgctgcca ccaacccaag agacacggac atgtttggtc agattgctga caataatcag 2580
aatgctacaa ctgctcccat aaccggcaac gtgactgcta tgggagtgct tcctggcatg 2640
gtgtggcaaa acagagacat ttactaccaa gggccaattt gggccaagat cccacacgcg 2700
gacggacatt ttcatccttc accgctaatt ggcggttttg gactgaaaca tccgcctccc 2760
cagatattta tcaaaaacac ccccgtacct gccaatcctg cgacaacctt cactgcagcc 2820
agagtggact ctttcatcac acaatacagc accggccagg tcgctgttca gattgaatgg 2380
gaaatcgaaa aggaacgctc caaacgctgg aatcctgaag tgcagtttac tccaaactat 2940
gggaaccagt cttctacgtt gtgggctccc gatacaactg ggaagtatac agagccgcgg 3000
gttattggct ctcgttattt gactaatcat ttgtaactgc ctagttaatc aataaaccgt 3060'
gtgactcgtt tcagttgaac tttggtctct gcgaagggcg aattc 3105
<210> 20 <211? 3105
<212> DNA
<213> nowy serotyp AAV, klon C3
<400> 20 gaattcgccc ttgctgcgtc aactggacca atgagaactt tcccttcaac gattgcgtcg 60
acaagatggt gatctggtgg gaggagagca agatgaccgc caaggtcgtg gagtccgcca 120
aggccattct gggcggaagc aaggtgcgcg tggaccaaaa gtgcaagtca tcggcccaga 180
tcgaccccac gcccgtgatc gtcacctcca acaccaacat gtgcgccatg atcgacggga 240
acagcaccac cttcgagcac cagcagccgc tgcaggaccg catgttcaag ttcgagctca 30Q
cccgccgtct ggagcacgac tttggcaagg tgaccaagca ggaagtcaaa gagttcttcc 360 gctgggctca ggatcacgtg actgaggtgg cgcatgagct ctacgtcaga aagggcggag 420 ccaccaaaag acccgccccc agtgacgcgg atataagcga gcccaagcgg gcctgcccct 480 cagttgcgga gccafccgacg tcagacgcgg aagcaccggt ggactttgcg gacaggtacc 540
aaaacaaatg ttctcgtcac gcgggcatgc ttcagatgct gtttccctgc aagacatgcg 600
agagaatgaa tcaaaatttc aacgtctgct tcacgcacgg ggtcagagac tgctcagagt 660
gcttccccgg cgcgtcagaa tctcaacccg tcgtcagaaa aaagacgtat cagaaactgt 720
gcgcgattca tcatctgctg gggcgggcac ccgagattgc gtgttcggcc tgcgatctcg 780
tcaacgtgga cttggatgac cgtgtttctg agcaataaat gacttaaacc aggtatggct 840
gctgacggtt atcttccaga ttggctcgag gacaacctct ctgagggcat tcgcgagtgg 900
Łgggacctga aacctcgagc ccccaagctc aaggccaacc agcagaagca ggacgacggc 960
cggggtctgg tgcttcctgg ctacaagtac ctcggaccct tccacggact cgacaagggg 1020
gagcccgtca acgcggcgga cgcagcggcc ctcgagcacg acaaggccta cgaccagcag 1080
PL 221 877 B1
ctcaaagcgg gtgacaatcc gtacctgcgg tataaccacg ccgacgccga gtttcaggag 1140
cgtctgcaag aagatacgtc ttttgggggc aacctcgggc gagcagtctt ccaggccaag 1200
aagagggtac tcgaaccact gggcctggtt gaagaaggtg ctaagacggc tcctggaaag 1260
aagagaccgt tagagtcacc acaagagccc gactcctcct caggaatcgg caaaaaaggc 1320
aaacaaccag ccaaaaagag actcaacttt gaagaggaca ctggagccgg agacggaccc 1360
cctgaaggat cagataccag cgccatgtct tcagacattg aaatgcgtgc agcaccgggc 1440
ggaaatgctg tcgatgcggg aeaaggttec gatggagtgg gtaatgcctc gggtgattgg 1500
cattgcgatt ccacctggtc tgagggcaag gtcacaacaa cctcgaccag aacctgggtc 1560
ttgcccacct acaacaacca cttgtacctg cggctcggaa caacatcaaa cagcaacacc 1620
tacaacggat tctccacccc ctggggatac tttgacttta acagattcca ctgtcacttc 1680
tcaccacgtg actggcaaag actcatcaac aacaactggg gactacgacc aaaagccatg 1740
cgcgttaaaa tcttcaatat ccaagttaag gaggtcacaa cgtcgaacgg cgagactacg 1800
gtcgctaata accttaccag cacggttcag atatttgcgg actcgtcgta tgagctcccg 1360
tacgtgatgg acgctggaca agagggaagt ctgcctcctt tccccaatga cgtcttcatg 1920
gtgcctcaat atggctactg tggcattgtg actggcgaaa atcagaacca gacggacaga 1990
aatgctttct actgcctgga gtattttcct tcacaaatgc tgagaactgg caataacttt 2040
gaaatggctt acaactttga gaaggtgccg ttccactcaa tgtatgctca cagccagagc 2100
ctggacagac tgatgaatcc cctcctggac cagtacctgt ggcacttaca gtcgaccacc 2160
tctggagaga ctctgaatca aggcaatgca gcaaccacat ttggaaaaat caggagtgga 2220
gactttgcct tttacagaaa gaactggctg cctgggcctt gtgttaaaca gcagagattc 2260
tcaaaaactg ccagtcaaaa ttacaagatt cctgccagcg ggggcaacgc tctgttaaag 2340
tatgacaccc actatacctt aaacaaccgc tggagcaaca tagcgcctgg acctccaatg 2400
gcaacagctg gaccttcaga tgSSijacttc agcaacgccc agctcatctt ccctggacca 2460
tcagtcaccg gaaacacaac aacctcagca aacaatctgt tgtttacatc agaaggagaa 2520
attgctgcca ccaacccaag agacacggac atgtttggtc agattgctga caataatcag 2530
aatgctacaa ctgctcccat aaccggcaac gtgactgcta tgggagtgct tcctggcatg 2640
gtgtggcaaa acagagacat ttactaccaa gggccaattt gggccaagat cccacacgcg 2700
gacggacatt ttcatccttc accgctaatt ggcggttttg gactgaaaca tccgcctccc 2760
cagatattta tcaaaaacac ccccgtacct gccaatcctg cgacaacctt cactgcagcc 2820
agagtggact ctttcatcac acaatacagc accggccagg tcgctgttca gattgaatgg 2880
gaaatcgaaa aggaacgctc caaacgccgg aatcctgaag tgcagtttac ttcaaactat 2940
gggaaccagt cttctatgtt gtgggctccc gatacaactg ggaagtatac agagccgcgg 3000
PL 221 877 B1 gttattggct ctcgttatet gactaatcat tcgtaactgc ctagttaatc aataaaccgt 3050 gtgattcgtt tcagttgaac tttggtctct gcgaagggcg aattc 3105
<210> 21
<211> 3105
<212> DNA
<213> nowy serotyp AAV, klon C5
<400? 21
gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga atcacacggt ttattgatta SO actaggcagt tacaaatgat tagtcaaata acgagagcca ataacccgcg gctctgtata 120 cttcccagtt gtatcgggag cccacaacat agaagactgg ttcccacagt ttgaagtaaa 180 ctgcacttca ggattccagc gtttggagcg ttccttttcg atttcccatt caatctgaac 240 agcgacctgg ccggtgctgt attgtgtgat gaaagagtcc actctggctg cagtgaaggt 300 cgtcgcagga taggcaggta cgggggtgtt tttgataaat atctggggag gcggatgttt 360 cagtccaaaa ccgccaatta gcggtgaagg atgaaaatgt ccgtccgcgt gtgggatctt 420 ggcccaaatt ggcccttggt agtaaatgtc tctgttttgc cacaccatgc caggaagcac 490 tcccatagca gtcacgttgc cggttatggg agcagttgta gcattctgat tatcgtcagc 540
aatctgacca aacatgtccg tgtctcttgg gttggtggca gcaatttctt cttctgatgt 600
aaacaacaga ttgtttgctg aggttgttgt gtttccggtg actgatggtc cagggaagat 660
gagctgggcg ttgctgaagt ccccatctga aggtccagct gttgccattg gaggtccagg 720
cgctatgttg ctccagcggt tgtttaaggt atagtgggtg tcatacttta acagagcgtt 780
gcccccgctg gcaggaatct tgtaattttg actggcagtt tttgagaatc tctgctgttt 840
aacacaaggc ccaggcagcc agttctttct gtaaaaggca aagtctccac tcctgatttt 900
tccaaatgtg gttgctgcat tgccttgatt cagagtctct ccagaggtgg tcgactgtaa 960
gtgccacagg tactggtcca ggaggggatt catcagtccg tccaggctct ggctgtgagc 1020
atacattgag tggaacggca ccttctcaaa gttgtaagcc gtttcaaagt tattgccagt 1030
tctcagcatt tgtgaaggaa aatactccag gcagtagaaa gcatttctgt ccgtctggtt 114 0
ctgattttcg ccagtcacaa tgccacagta gccatattga ggcaccatga agacgtcatt 1200
ggggaaagga ggcagacttc cctcttgtcc agcgtccatc acgtacggga gctcatacga 1260
cgagtccgca aatatctgaa ccgtgctggt aaggttatta gcgaccgtag tctcgccgtt 1320
cgacgttgtg acctccttaa cttggafcatt gaagatttta acgcgcatgg cttttggtcg 1330
tagtccccag ttgttgttga tgagtctttg ccagtcacgt ggtgagaagt gacagtggaa 1440
tctgttaaag tcaaagtatc cccagggggt ggagaatccg ttgtaggtgt tgctgtttga 1500
tgttgttccg agccgcaggt acaagtggtt gttgtaggtg ggcaagaccc aggttctggt 1560
cgaggttgtt gtgaccttgc cctcagacca ggtggaatcg caatgccaat cacccgaggc 1620
PL 221 877 B1
attacccact ccatcggaac cttgtcccgc atcgacagca tttccgcccg gtgctgcacg 1680
catttcaatg tctgaagaca tggcgctggt atctgatcct tcagggggtc cgtctccggc 1740
tccagtgtcc tcttcaaagt tgagtctctt tttggctggt tgtttgcctt ttttgccgat 1800
tcctgaggag gagtcgggct cttgtggtga ctctaacggt ctcttctttc caggagccgt 1860
cttagcacct tcttcaacca ggcccagagg ttcgagtacc ctcttcttgg cctggaagac 192 0
tgctcgcccg aggttgcccc caaaagacgt atcttcttgc agacgctcct gaaactcggc I9ao
gtcggcgtgg ttataccgca ggtacggatt gtcacccgct ttgagctgct ggtcgtaggc 2040
cttgtcgtgc tcgagggccg ctgcgtccgc cgcgttgacg ggctccccct tgtcgagtcc 2100
gttgaagggt ccgaggtact cgtagccagg aagcaccaga ccccggccgt cgtcctgctt 2160
ctgctggttg gccttgggct tgggggctcc aggtttcagg tcccaccact cgcgaatgcc 2220
ctcagagagg ttgtcctcga gccaatctgg aagataaccg tcagcagcca tacctggttt 2280
aagtcattta ttgctcagaa acacagtcat ccaagtccac gttgacgaga tcgcaggccg 2340
aacacgcaat ctcgggtgcc cgccccagca gatgatgaat cgcgcacagt ttctgatacg 2400
tcttttttct gacgacgggt tgagattctg acgcgccggg gaagcactct gagcagtctc 2460
tgaccccgtg cgtgaagcag acgttgaaat tctgattcat tctctcgcat gtcttgcagg 2520
gaaacagcat ctgaagcatg cccgcgtgac gagaacattt gttttggtac ctgtccgcaa 2580
ggtccaccgg tgcttccgcg tctgacgtcg atggctccgc aactgagggg caggcccgct 2640
tgggctcgct Catatccgcg tcactggggg cgggtctttt ggtggctccg ccctttctga 2700
cgtagaactc atgcgccacc tcagtcacgt gatcctgagc ccagcggaag aactctttga 2760
cttcctgctt ggtcaccttg ccaaagtcgt gctccagacg gcgggtgagc tcgaacttga 2820
acatgcggtc ctgcagcggc tgctggtgct cgaaggtggt gctgttcccg tcgatcacgg 2880
cgcacatgtt ggtgttggag gtgacgatca cgggcgtggg gtcgatctgg gccgatgact 2340
tgcacttttg gtccacgcgc accttgcttc cgcccagaat ggccttggcg gactccacga 3000
ccttggcggt catcttgccc tcctcccacc agatcaccat cttgtcgacg caatcgttga 3060
agggaaagtt ctcattggtc cagttgacgc agcaagggcg aattc 3105
<210> 22 <211> 3034
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon FI
<400> 22 gaattcgccc ttgctgcgtc aactggacca agagaacttt cccttcaacg attgcgtcga 60
caagatggtg atctggtggg aggagggcaa gatgacggcc aaggtcgtgg agtccgccaa 120
agccattctg ggcggaagca aggtgcgcgt cgaccaaaag tgcaagtcct cggcccagat 180
PL 221 877 B1
cgatcccacc cccgtgatcg tcacctccaa. caccaacatg tgcgccgtga . tcgacgggaa 240
cagcaccacc ttcgagcacc agcagccgtt gcaggaccgg atgttcaaat ttgaactcac 300
ccgccgtctg gaacacgact ctggcaaggt gaccaagcag gaagtcaaag agttcttccg 360
ctgggctagt gatcacgtga ctgaggtgac gcatgagttc tacgtcagaa agggcggagc 420
cagcaaaaga cccgcccccg atgacgcgga tataagcgag cccaagcggg cctgtccctc 480
agtcacggac ccatcgacgt cagacgcgga aggagctccg gtggactttg ccgacaggta 540
ccaaaacaaa tgttctcgtc acgcgggcat gcttcagatg ctgtttccct gcaaaacgtg 600
cgagagaatg aatcagaatt tcaacatttg cttcacgcac ggggtcagag actgtttaga 660
atgtttcccc ggcgtgtcag aatctcaacc ggtcgtcaga aaaaagacgt atcggaagct 720
gtgtgcgatt catcatctgc tggggcgggc acccgagatt gcttgctcgg cctgcgacct 7B0
ggtcascgtg gacctggacg actgtgtttc tgagcaataa atgacttaaa ccgggtatgg 840
ctgccgatgg ttatcttcca gattggctcg aggacaacct ctctgagggc attcgcgagt 900
ggtgggacct gaaacctgga gccccgaaac ccaaagccaa ccagcaaaag caggacgacg 960
gccggggtct ggtgcttcct ggctacaagt acctcggacc cttcaacgga ctcgacaagg 1020
gggagcccgt caacgcggcg gacgcagcgg ccctcgagea cgacaaggcc tacgaccagc 1080
agctcaaagc gggtgacaat ccgtacctgc ggtataacca cgccgacgcc gagtttcagg 1140
agcgtctgca acaagatacg tcatttgggg gcaacctcgg gcgagcagtc ttccaggcca 1200
agaagcgggt tctcgaacct ctcggtctgg ttgaggaagg cgctaagacg gctcctggaa 1260
agaagagacc catagactct ccagactcct ccacgggcat cggcaaaaaa ggccagcagc 1320
ccgctaaaaa gaagctcaat tttggtcaga ctggcgactc agagtcagtc cccgaccctc 1380
aacctcttgg agaacctcca gcagcgccct ctagtgtggg atćtggtaca atggctgcag 1440
gcggtggcgc accaatggca gacaataacg aaggtgccga cggagtgggt aatgcctcag 1500
gaaattggca ttgcgattcc acatggctgg gcgacagagt catcaccacc agcaccagaa 1560
cctgggccct ccccacctac aacaaccacc tctacaagca aatctccagc agcagctcag 1620
gagccaccaa tgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat tttgacttta 1680
acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac aacaactggg 1740
gattccggcc caagaagctg cggttcaagc tcttcaacat ccaggtcaag gaggtcacaa 1800
cgaatgacgg cgtcacgacc atcgctaata accttaccag cacggttcag gtcttctcgg 1860
actcggaata ccagctgccg tacgtcctcg gctctgcgca ccagggctgc ctgcctccgt 1920
tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acggctacct gactctgaac aacggcagcc 1980
aatcggtggg ccgttcctcc ttctactgcc tggaatattt cccctctcaa atgctgagaa 2040
cgggcaacaa ctttgagttc agttacagct tcgaggacgt ; gcctttccac : agcagctacg 210 0
PL 221 877 B1
cgcacagcca gagcctagac cggctgatga accctctcat cgaccagtac ctgtactacc 2160
tggcccggac ccagagcacc acgggttcca ccagggaact gcaatttcat caagctgggc 2220
ccaatactat ggccgagcag tcaaagaact ggctgcctgg accctgctat aggcaacagg 2280
gactgtcaaa gaacttggac tctaacaaca acagcaattt tgcctggact gctgccacta 2340
aatatcatct gaatggcaga aactctttga ccaatcctgg cattcccatg gcaaccaaca 2400
aggatgatga ggaccagttc tttcccatca acggggtact ggtttttggc aagacgggag 2460
ctgccaacaa aactacgctg gaaaacgttc tgatgaccag cgaggaggag atcaagacca 2520
ctaaccctgt ggctacagaa gaatacggtg tggtctccag caacctgcag ccgtctacag 2580
ccgggcctca atcacagact atcaacagcc agggagcact gcctggcatg gtctggcaga 2640
accgggacgt gtatctgcag ggtcccatct gggccaaaat tcctcacacg gatggcaact 2700
ttcacccgtc tcctctgatg ggcggttttg gactcaaaca cccgcctcca cagatcctga 2760
tcaaaaacac acctgtacct gctaatcctc cggaggtgtt tactcctgcc aagtttgcct 2820
ccttcatcac gcagtacagc accggacaag tcagcgtgga aatcgagtgg gagctgcaga 2880
aagaaaacag caagcgctgg aacccagaaa ttcagtatac ttccaattat gccaagtcta 2940
ataatgttga atttgctgtg aaccctgatg gtgtttatac tgagcctcgc cccattggca 3000
ctcgttacct cccccgtaat ctgtaattgc ttgttaatca ataaaccggt tgattcgttt 3060
cagttgaact Łtggtctctg cgaagggcga attc 3094
<210> 23 <211> 3095 <212> DNA <213 > nowy serotyp AAV, klon F3 <400> 23
gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga atcaaccggt ttattgatta 60
acaagcaatt acagattacg ggtgaggtaa cgagtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 12 0
acaccafccag ggttcacagc aaattcaaca ttattagact tggcataatt ggaagtatac 180
tgaattfcctg ggttccagcg cttgctgttt tctttctgca gctcccactc gatttccacg 240
ctgacttgtc cggtgctgta ctgcgtgatg aaggaggcaa acttggcagg agtaaacacc 300
tccggaggat tagcaggtac aggtgtgttt ttgatcagga tctgtggagg cgggtgtttg 360
agtccaaaac cgcccatcag aggagacggg tgaaagttgc catccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag atacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc aggcagtgct 480
ccctggctgt tgatagtctg tgattgaggc ccggctgtag acgactgcag gttgctggag 540
accacaccgt attcttctgt agccacaggg ttagtggtct tgatctcctc ctcgctggtc 600
atcagaacgt tttccagcgt agttttgttg gcagctcccg tcttgccaaa aaccagtacc 660
PL 221 877 B1
ccgttgatgg gaaagaactg gtcctcatca tccttgttgg ttgccatggg aatgccagga 720
ttggtcaaag agtttctgcc attcagatga tatttagtgg cagcagtcca ggcaaaaCtg 780
ctgttgttgt taaagtccaa gttctttgac agtctctgtt gcctatagca gggtccaggc 340
agccagttct ttgactgctc ggccatagta ttgggcccag cttgatgaaa ttgcagttcc 900
ctggtggaac ccgtggtgct ctgggtccgg gccaggtagt acaggtactg gtcgatgaga 960
gggttcatca gccggtctag gctctggctg tgcgcgtagc tgctgtggaa aggcacgtcc 1020
tcgaagctgt aactgaactc aaagttgttg cccgttctca gcatttgaga ggggaaatat 1030
tccaggcagt agaaggagga acggcccacc gattggctgc cgttgtccag agtcaggtag 1140
ccgtactgag gaatcatgaa gacgtccgcc gggaacggag gcaggcagcc ctggtgcgca 1200
gagccgagga cgtacggcag ctggtattcc gagtccgaga agacctgaac cgtgctggta 1260
aggttattag cgatggtcgt gacgccgtca ttcgttgtga cctccttgac ctggatgttg 1320
aggagcttga accgcagctt cttgggccgg aatccccagt tgttgttgat gagtcgctgc 1380
cagtcacgtg gtgagaagtg gcagtggaat ctgttaaagt caaaataccc ccagggggtg 1440
ctgtagccga agtagtggtt gtcattggtg gctcctgagc tgctgctgga gatttgcttg 1500
tagaggtggt tgttgtaggt ggggagggcc caggttctgg tgctggtggt gataactctg 1560
tcgcccagcc atgtggaatc gcaatgccaa tttcctgagg cattacccac tccgtcggca 1620
ccttcgttat tgtctgccat tggtgcgcca ecgcctgcag ccattgtacc agatcccaca 1630
ctagagggcg ctgctggagg ttctccaaga ggttgagggt cggggactga ctctgagtcg 1740
ccagtctgac caaaattgag cttcttttta gcgggctgct ggcctttttt gccgatgccc 1800
gtggaggagt ctggagagcc tatgggtctc ttctttccag gagccgtctt agcgccttcc 1860 ccaaccagac cgagaggttc gagaacccgc ttcttggcct ggaagactgc tcgcccgagg 1920 ttgcccccaa atgacgtatc ttcttgcaga cgctcctgaa actcggcgtc ggcgtggtta 1980 taccgcaggt acggattgtc acccgctttg agctgctggt cgtaggcctt gtcgtgctcg 2040 agggccgctg cgtccgacgc gttgacgggc tcccccttgt cgagtccgtt gaagggtccg 2100 aggtacttgt agccaggaag caccagaccc cggccgtcgt cctgcttttg ctggttggct 2160 ttgggtttcg gggctccagg tttcaggtcc caccactcgc gaatgccctc agagaggttg 2220 tcctcgagcc aatctggaag ataaccatcg gcagccatac ctggtttaag tcatttattg 2230 ctcagaaaca cagtcgtcca ggtccacgtt gaccaggtcg caggccgagc aagcaatctc 2340 gggtgcccgc cccagcagat gatgaatcgc acacagcttc cgatacgtct tttttctgac 2400 gaccggttga gattctgaca cgccggggaa acattctaaa cagtctctga ccccgtgcgt 2460 gaagcaaatg ttgaaattct gattcattct ctcgcacgtt ttgcagggaa acagcacctg 2520 aagcatgccc gcgtgacgag aacatttgtt ttggtacctg tcggcaaagt ccaccggagc 2580
PL 221 877 B1
tccttccgcg tctgacgtcg atgggtccgt gactgaggga cgggcccgct tgggctcgct 2640
tatatccgcg tcatoggggg cgggtctttt gctggctccg ccctttctga cgtagaactc 2700
atgcgtcacc tcagtcacgt gatcactagc ccagcggaag aactctttga cttcctgctt 2760
tgtcaccttg ccaaagtcgt gttccagacg gcgggtgagt tcaaatttga acatccggtc 2820
ctgcaacggt tgctggtgct cgaaggtggt gctgttcccg tcgatcacgg cgcacatgtt 2880
ggtgttggag gtgacgatca cgggggtggg atcgatctgg gcggacgact tgcacttttg 2940
gtccacgcgc accttgctgc cgccgagaat ggccttggcg gactccacga ccttggccgt 3000
catcttgccc tcctcccacc agatcaccat cttgtcgacg caatcgttga agggaaagtt 3060
ctcattggtc cagttgacgc agcaagggcg aattc 3095
<210> 24 <211» 3095 <212» DNA <213» nawy serotyp AAV, klon F5 <400> 24
gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga atcaaccggt ttattgatta 60
acaagcaatt acagattacg ggtgaggtaa cgagtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 12 0
acaccatcag ggttcacagc aaattcaaca ttattagact tggcataatt ggaagtatac 180
tgaatttctg ggttccagcg cttgctgttt tctttctgca gctcccactc gatttccacg 240
ctgacttgtc cggtgctgta ctgcgtgatg aaggaggcaa acttggcagg agtaaacacc 300
tccggaggat tagcaggtac aggtgtgttt ttgatcagga tctgtggagg cgggtgttcg 360
agtccaaaac cgcccatcag aggagacggg tgaaagttgc catccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag atacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc aggcagtgct 480
ccctggctgt tgatagtctg tgattgaggc ccggctgtag acgactgcag gttgctggag 540
accacaccgt attcttctgt agccacaggg ttagtggtct tgatctcctc ctcgctggtc 600
atcagaacgt tttccagcgt agttttgttg gcagctcccg tcttgccaaa aaccagtacc 660
ccgttgatgg gaaagaactg gtcctcatca tccttgttgg ttgccatggg aatgccagga 720
ttggtcaaag agtttctgcp attcagatga tatttagtgg cagcagtcca ggcaaaattg 780
ctgttgttgt taaagtccaa gttctttgac agtctctgtt gcctatagca gggtccaggc 840
agccagttct ttgactgctc ggccatagta ttgggcccag cttgatgaaa ttgcagttcc 900
ctggtggaac ccgtggtgct ctgggtccgg gccaggtagt acaggtactg gtcgatgaga 960
gggttcatca gccggtctag gctctggctg tgcgcgtagc tgctgtggaa aggcacgtcc 1020
tcgaagctgt aactgaactc aaagttgttg cccgttctca gcatttgaga ggggaaatat 1080
tccaggcagt agaaggagga acggcccacc gattggctgc cgttgttcag agtcaggtag 1140
PL 221 877 B1
ccgtactgag gaatcatgaa gacgtccgcc gggaacggag gcaggcagcc ctggtgcgca 1200
gagccgagga cgtacggcag ctggtattcc gagtccgaga agacctgaac cgtgctggta 1260
aggttattag cgatggtcgt gacgccgtca ttcgttgtga cctccttgac ctggatgttg 1320
aagagcttga accgcagctt cttgggccgg aatccccagt tgttgttgat gagtcgctgc 1330
cagtcacgtg gtgagaagtg gcagtggaat ctgttaaagt caaaataccc ccagggggtg 1440
ctgtagccga agtagtggtt gtcattggtg gctcctgagc tgctgctgga gatttgcttg 1500
tagaggtggt tgttgtaggt ggggagggcc caggttctgg tgctggtggt gatgactctg 1560
tcgcccagcc atgtggaatc gcaatgccaa tttcctgagg cattacccac tccgtcggca 1620
ccttcgttat tgtctgccgt tggtgcgcca ccgcctgcag ccattgtacc agatcccaca 1630
ctagagggcg ctgctggagg ttctccaaga ggttgagggt cggggactga ctctgagtcg 1740
ccagtctgac caaaattgag cttcttttta gcgggctgct ggcctttttt gccgatgccc 1300
gtggaggagt ctggagagtc tatgggtctc ttctttccag gagccgtctt agcgccttcc 1860
tcaaccagac cgagaggttc gagaacccgc ttcttggcct ggaagactgc tcgcccgagg 1920
ttgcccccaa atgacgtatc ttcttgcagg cgctcctgaa actcggcgtc ggcgtggtta 1930
taccgcaggt acggattgtc acccgctttg agctgctggt cgtaggcctt gtcgtgctcg 2040
agggccgctg cgtccgccgc gttgacgggc tcccccttgt cgagtccgtt gaagggtccg 2100
aggtacttgt agccaggaag caccagaccc cggccgtcgt cctgcttttg ctggttggct 21S0
ttgggtttcg gggctccagg tttcaggtcc caccactcgc gaatgccctc agagaggctg 2220
tcctcgagcc aatctggaag ataaccatcg gcagccatac ctggtttaag ccatttattg 22S0
ctcagaaaca cagtcgtcca ggtccacgtt gaccaggtcg caggccgagc aggcaatctc 2340 gggtgcccgc cccagcagat gatgaatcgc acacagcttc cgatacgtct tttttctgac 2400 gaccggttga gattctgaca cgccggggaa acattctaaa cagtctctga ccccgtgcgt 2460 gaagcaaatg ttgaaattct gattcattct ctcgcacgtt ttgcagggaa acagcatctg 2520 aagcatgccc gcgtggcgag aacatttgtt ttggtacctg tcggcaaagt ccaccggagc 25S0 tccttccgcg tctgacgtcg atgggtccgt gactgaggga caggcccgct tgggctcgct 2640 tatatccgcg tcatcggcgg cgggtctttt gctggctccg ccctttctga cgtagaactc 2700 atgcgtcacc tcagtcacgt gatcactagc ccagcggaag aactctttga cttcctgctt 2760 tgtcaccttg ccaaagtcgt gttccagacg gcgggtgagt tcaaatttga acatccggtc 2920 ctgcaacggc egctggtgct cgaaggtggt gctgttcccg tcgatcacgg cgcgcatgtt 2830 ggtgttggag gtgacgatca cgggggtggg atcgatctgg gcggacgact tgcacttttg 2940 gtccacgcgc accttgctgc cgccgagaat ggccttggcg gactccacga ccttggccgt 3000 catcttgccc tcctcccacc agatcaccat cttgtcgacg caatcgttaa agggaaagtt 3060
PL 221 877 B1 ctcattggtc cagttgacgc agcaagggcg aattc 3095 <210> 25 <211» 3142 <212» DNA <213» nowy serotyp AAV, klon H6 <400» 25
aaaacgacgg gccagtgatt gtaatacgac tcactatagg gcgaaattga aattagcggc 60
cgcgaattcg cctttcgcag agaccaaagt tcaactgaaa cgaattaaac ggtttattga 120
ttaacaagca attacagatt acgagtcagg tatctggtgc caatggggcg aggctctgaa 180
tacacaccat tagtgtccac agtaaagtcc acattaacag acttgttgta gttggaagtg 240
tactgaattt cgggattcca gcgtttgctg ttctccttct gcagctccca ctcgatctcc 300
acgctgacct gtcccgtgga atactgtgtg atgaaagaag caaacttggc agaactgaag 360
tttgtgggag gattggctgg aacgggagtg tttttgatca tgatctgagg aggcgggtgt 420
ttgagtccaa aacctcccat cagtggagaa ggatgaaagt gtccatcggt gtgaggaatc 480
ttggcccaaa tgggtccctg caggtacacg tctcgatcct gccacaccat accaggtaac 540
gctccttggt gattgacagt tccagtagtt ggaccagtgt ttgagttttg caaattattt 600
gacacagtcc cgtactgctc cgtagccacg ggattggtgg ccctgatttc ttcttcatct 660
gtaatcatga cattttccaa atccgcgtcg ttggcatttg ttccttgttt accaaatatc 720
agggttccat gcatggggaa aaacttttct tcgtcatcct tgtgactggc catagctggt 780
cctggattaa ccaacgagtc ccggccattt agatgatact ttgtagctgc agtccaggga 840
aagttgctgt tgttgttgtc gtttgcctgt tttgacagac gctgctgtct gtagcaaggt 900
ccaggcagcc agtttttagc ttgaagagac atgttggttg gtccagcttg gctaaacagt 950
agccgagact gctgaagagt tccactattt gtttgtgtct tgctcagata atacaggtac 1020
tggtcgatca gaggattcat cagccgatcc agactctggc tgtgagcgta gctgctgtgg 1030
aaaggcacgt cttcaaaagt gtagctgaac tgaaagttgt ttccagtacg cagcatctga 1140
gaaggaaagt actccaggca gtaaaaggaa gagcgtccta ccgcctgact cccgttgttc 1200
agggtgaggt atccatactg tgggaccatg aagacgtccg ctggaaacgg cgggaggcat 1260
ccttgatgcg ccgagcccag gacgtacggg agctggtact ccgagtcagt aaacacctga 1320
accgtgctgg taaggttatt ggcaatcgtc gtcgtaccgt cattctgcgt gacctctttg 1380
acttgaatat taaagagctt gaagttgagt cttttgggcc ggaatccccg gttgttgttg 1440
acgagtcttt gccagfccacg tggtgaaaag tggcagtgga atctgttgaa gtcaaaatac 1500
ccccaggggg tgctgtagcc aaagtagtgg ttgtcgttgc tggctcctga ttggctggag 1560
atttgcttgt agaggtggtfc gttgtatgtg ggcagggccc aggttcgggt gctggtggtg 1620
PL 221 877 B1 atgactctgt cgcccagcca ttgggaatcg caatgccaat ttcctgagga attacccact 1680 ccatcggcac cctcgttatt gtctgccatt ggtgcgccac tgcctatagc cattgtagta 1740 gatcccagac cagagggggc tgctggtggc tgtccgagag gctgggggtc aggtacggag 1300 tctgcgtctc cagtctgacc aaaattcaat ctttttcttg caggctgctg gcccgctttt 1860
ccggttcccg aggaggagtc tggctccaca ggagagtgct ctaccggcct cttttttccc 1920
ggagccgtct taacaggctc ctcaaccagg cccagaggtt caagaaccct ctttttcgcc 1980
tggaagactg ctcgtccgag gttgccccca aaagacgtat cttctttaag gcgctcctga 2040
aactctgcgt cggcgtggtt gtacttgagg tacgggttgt ctccgctgtc gagctgccgg 2100
tcgtaggcct tgtcgtgctc gagggccgcg gcgtctgcct cgttgaccgg ctcccccttg 2160
tcgagtccgt tgaagggtcc gaggtacttg tacccaggaa gcacaagacc cctgctgtcg 2220
tccttatgcc gctctgcggg ctttggtggt ggtgggccag gtttgagctt ccaccactgt 2280
cttattcctt cagagagagt gtcctcgagc caatctggaa gataaccatc ggcagccata 2340
cctgatttaa atcatttatt gttcagagat gcagtcatcc aaatccacat tgaccagatc 2400
gcaggcagtg caagcgtctg gcacctttcc catgatatga tgaatgtagc acagtttctg 24S0
atacgccttt ttgacgacag aaacgggttg agattctgac acgggaaagc actctaaaca 2520
gtctttctgt ccgtgagtga agcagatatt tgaattctga ttoattctct cgcattgtct 2580
gcagggaaac agcatcagat tcatgcccac gtgacgagaa catttgtttt ggtacctgtc 2640
cgcgtagttg atcgaagctt ccgcgtctga cgtcgatggc tgcgcaactg actcgcgcgc 2700
ccgtttgggc tcacttatat ctgcgtcact gggggcgggt cttttcttag ctccaccctt 2760
tttgacgtag aattcatgct ccacctcaac cacgtgatcc tttgcccacc ggaaaaagtc 2820
tttcacttcc tgcttggtga cctttccaaa gtcatgatcc agacggcggg taagttcaaa 2880
tttgaacatc cggtcttgca acggctgctg gtgctcgaag gtcgttgagt tcccgtcaat 2940
cacggcgcac atgttggtgt tggaggtgao gatcacggga gtcgggtcta tctgggccga 3000
ggacttgcat ttctggtcca cacgcacctt gcttcctcca agaatggctt tggccgactc 3060
cacgaccttg gcggtcatct tcccctcctc ccaccagato accatcttgt cgacgcaatg 3120
gtaaaaggaa agttctcatt gg 3142 <210> 26 <211> 3075 <212> DMA <213> nowy serotyp AAV, klon H2 <400> 26 tgagaacttt cctttcaacg attgcgtcgg acaagatggt gatctggtgg gaggagggga 60 agatgaccgc caaggtcgtg gagtcggcca aagccattct tggaggaagc aaggtgcgtg 120
PL 221 877 B1
tggaccagaa atgcaagtcc tcggcccaga tagacccgac tcccgtgatc gtcacctcca 180
acaccaacat gtgcgccgtg attgacggga actcaacgac cttcgagcac cagcagccgt 240
tgcaagaccg gatgttcaaa tttgaactta cccgccgtct ggatcatgac tttggaaagg 300
tcaccaagca ggaagtgaaa gactttttcc ggtgggcaaa ggatcacgtg gttgaggtgg 360
agcatgaatt ctacgtcaaa aagggtggag ctaagaaaag acccgccccc agtgacgcag 420
atataagtga gcccaaacgg gcgcgcgagt cagttgcgca gccatcaacg tcagacgcgg 480
aagcttcgat caactacgcg gacaggtacc aaaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 540
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atcagaattc aaatatctgc 600
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 650
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 720
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctctgaa 730
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat cctccagatt ggctcgagga 840
cactctctct gaagggataa gacagtggtg gaagctcaaa cctggcccac caccaccaaa 900
gcccgcagag cggcataagg acgacagcag gggtcttgtg cttcctgggt acaagtacct 960
cggacccttc aacggactcg acaaggggga gccggtcaac gaggcagacg ccgcggccct 1020
cgagcacgac aaggcctacg accggcagct cgacagcgga gacaacccgt acctcaagta 1080
caaccacgcc gacgcagagt ttcaggagcg ccttaaagaa gatacgtctt ttgggggcaa 1140
cctcggacga gcagtcttcc aggcgaaaaa gagggttctt gaacctctgg gcctggttga 12 0 0
ggaacctgtt aagacggctc cgggaaaaaa gaggccggta gagcactctc ctgtggagcc 1260
agactcctcc tcgggaaccg gaaaagcggg ccagcggcct gcaagaaaaa gattaaattt 1320
tggtcagact ggagacgcag actccgtacc tgacccccag cctctcggac agccaccagc 1380
agccccctct ggtctgggat ctactacaat ggctacaggc agtggcgcac caatggcaga 1440
caataacgag ggtgccgatg gagtgggtaa ttcctcagga aattggcatt gcgattccca 1500
atggctgggc gacagagtca tcaccaccag cacccgaacc tgggccctgc ccacatacaa 1560
caaccacctc tacaagcaaa tctccagcca atcaggagcc agcaacgaca accactactt 1620
tggctacagc accccctggg ggtattttga cttcaacaga ttccactgcc acttttcacc 1680
acgtgactgg caaagactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaaa gactcaactt 1740
caagctcttt aatattcaag tcaaagaggt cacgcagaat gacggtacga cgacgattgc 1800
caataacctt accagcacgg ttcaggtgtt tactgactcg gagtaccagc tcccgtacgt 1860
cctgggctcg gcgcatcaag gatgcctccc gccgtttcca gcggacgtct tcatggtccc 1920
acagtatgga tacctcaccc tgaacaacgg gagtcaggcg gtaggacgct cttcctttta 1980
ctgcctggag tactttcctt ctcagatgct gcgtactgga aacaactttc agttcagcta 2040
PL 221 877 B1 cacttttgaa ęacgtgcctt tccacaacag ctacgctcac agccagagtc tggatcggct 2100 gaegaatcct ctgatcgacc agtacctgta ttatctgaac aagacacaaa caaatagtgg 2160 aactcttcag cagtctcgac tactgtttag ccaagctgga ccaaccaaca tgtctcttca 2220 agctaaaaac tggctgcctg gaccttgcta cagacagcag cgtctgtcaa aacaggcaaa 2280 cgacaacaac aacagcaact ttccctggac tgcagctaca aagtatcatc taaatggccg 2340 ggactcgttg gttaatccag gaccagctat ggccagtcac aaggatgacg aagaaaagtt 2400 tttccccatg catggaaccc tgatatttgg taaacaagga acaaatgcca acgacgcgga 2460 tttggaaaat gtcatgatta cagatgaaga agaaatcagg gccaccaatc ccgtggctac 2320 ggagcagtac gggactgtgt caaataattt gcaaaactca aacactggtc caactactgg 2580 aactgtcaat cgccaaggag cgttacctgg tatggtgtgg caggatcgag acgtgtacct 2640 gcagggaccc atttgggcca agattcctca caccgatgga cactttcatc cttctccact 2700 gatgggaggt tttggactca aacacccgcc tcctcagatc atgatcaaaa acactcccgt 2760 tccagccaat cctcccacaa acttcagttc tgccaagttt gcttctttca tcacacagta 2820 ttccacggga caggtcagcg tggagatcga gtgggagctg cagaaggaga acagcaaacg 2880 ctggaatccc gaaattcagt acacttccaa ctacaacaag tctgttaatg tggactttac 2940
tgtggacact aatggtgtgt attcagagcc tcgccccatt ggcaccagat acctgactcg 3000
taatctgtaa ttgcttgtta atcaataaac cgtttaattc gtttcagttg aactttggcc 3060
tctgcgaagg gcgaa 3075
<210> 27
<211> 3123
<212> DNA <213> 42. 9
<400> 27 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 12 0
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg 18 0
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gccgtgatćg 240
ac999aatag caccaccttc gagcaccagc agccgt taca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggfcg gactfctgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct fccagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagacfc 660
PL 221 877 B1
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctag ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gagacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 9S0
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tacctgactc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2230
tagctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcttggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacgcac aaggacgacg aagagcgatt ttttccatcc 2460
agcggagtct tgatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaatcaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2580
PL 221 877 B1
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacggc aactttcatc cttcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2 82 0
cctccaacta ccttcagtca agccaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2S30
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaga acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000
gagggtactt attcagagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa 3060
ttgcctgtta atcaataaac cggctaattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattc 3128
<210> 28 <211> 3128 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.15 <400» 28
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 12 0
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag catgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcgcggg accagagact 660
gttcagaatg tttcccgggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 340
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa aectggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
PL 221 877 B1
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1250
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttCCactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gogcaccagg gctgcccgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tacctgactc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgcg gagaacgggc aacaactttg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcat agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2280
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcttggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacgcac aaggacgacg aagagcgatt ttttccatcc 2460
agcggagtct tgatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaatcaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacggc aactttcatc cttcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agccaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaga acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000
PL 221 877 B1 gagggtactt attcagagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa 3060 ttgcctgtta atcaataaac cggttaattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120 gcgaattc 312S <210? 29 <211> 3197 <212? DNA <213? nowy serotyp AAV, klon 42.5b <400> 29
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtganc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg ISO
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 350
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact S60
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgfcggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 340
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaagggag agccggtcaa cgaggcagac gccgcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gacaagcagc tcgagcaggg ggacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
PL 221 877 B1
caaatctcca acgggacatc gggaggaągc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1630
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tacotgactc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agttcagcta ccagtctgag 2100
gacgtgoctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2280
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcttggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacgcac aaggacgacg aagagcgatt ttttccatcc 2460
agcggagtct tgatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgcfcaa ccagtgagga agaaatcaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacggc aactttcatc cttcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agccaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2380
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaga acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000
gagggtactt attcagagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa 3060
ttgcctgtta atcaataaac cggttaattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattcgt ttaaacctgc aggactagtc cctttagtga gggttaattc tgagcttggc 3180
gtaatcatgg gtcatag 3197
<210» 30 <211» 2501 <212» DNA <213» nowy serotyp AAV, klon 42.Ib <400» 30 gaattcgccc ttggctgcgt caactggacc aatgagaact ttcccttcaa cgattgcgtc 60
100
PL 221 877 B1
gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc aagatgacgg ccaaggtcgt ggagtccgcc 12 0
aaggccattc atcatctgct ggggcgggct cccgagattg cttgctcggc ctgcgatctg ISO
gtcaacgtgg acctggatga ctgtgtttct gagcaataaa tgacttaaac caggtatggc 240
cgccgatggt tatcttccag sttggctcga ggacaacctc tctgagggca ttcgcgagtg 300
gtgggacttg agacctggag ccccgaaacc caaagccaac cagcaaaagc aggacgacgg 360
ccggggtctg gtgcttcctg gctacaagta cctcggaccc ttcaacggac tcgacaaggg 420
agagccggtc aacgaggcag acgccgcggc cctcgagcac gacaaggcct acgacaagca 480
gctcgagcag agggacaacc cgtacctcaa gtacaaccac gccgacgccg agtttcagga 540
gcgtcttcaa gaagatacgt cttttggggg caacctcggg cgagcagtct tccaggccaa 600
gaagcgggtt ctcgaacctc tcggtctggt tgaggaaggc gctaagacgg ctcctggaaa 660
gaagagaccc atagaatccc ccgactcctc cacgggcatc ggcaagaaag gccagcagcc 720
cgctaaaaag agactcaact ttgggcagac tggcgactca gagtcagtgc ccgaccctca 7S0
accaatcgga gaaccccccg eaggcccctc tggtctggga tctggcacaa tggctgcagg 340
cggtggcgct ccaatggcag acaataacga aggcgccgac ggagtgggta gttcctcagg 900
aaattggcat tgcgattcca catggctggg cgacagagtc atcaccacca gcacccgaac 960
ctgggccctc cccacctaca acaaccacct ctacaagcaa atctccaacg ggacatcggg 1020
aggaagcacc aacgacaaca cctacttcgg ctacagcacc ecctgggggt attttgactt 1080 taacagattc cactgccact tctcaccacg tgactggcag cgactcatca acaacaactg 1140 gggattccgg cccaagagac tcaacttcaa gctcttcaac atccaggtca aggaggtcac 1200 gcagaatgaa ggcaccaaga ccatcgccaa taaccttacc agcacgattc aggtctttac 1260 ggactcggaa taccagctcc cgtacgtcct cggctctgcg caccagggct gcctgcctcc 1320 gttcccggcg gacgtcttca tgattcctca gtacgggtac ctgactctga acaacggcag 1330 tcaggccgtg ggccgttcct ccttctactg cctggagtac tttccttctc aaatgctgag 1440 aacgggcaac aactttgagt tcagctacca gtttgaggac gtgccttttc acagcagcta 1500 tgcgcacagc caaagcctgg accggctgat gaaccccctc atcgaccagt acctgtacta 1560 cctgtctcgg actcagtcca cgggaggtac cgcaggaact cagcagttgc tattttctca 1620 ggccgggcct aataacatgt cggctcaggc caaaaactgg ctacccgggc cctgctaccg 1630 gcagcaacgc gtctccacga cagtgtcgca aaataacaac agcaactttg cttggaccgg 1740 tgccaccaag tatcatctga atggcagaga ctctctggta aatcccggtg tcgctatggc 1800 aacgcacaag ggcgacgaag agcgattttt tccatccagc ggagtcttga tgtttgggaa 1860 acagggagct ggaaaagaca acgtagacta tagcagcgtt atgctaacca gtgaggaaga 1920 aatcaaaacc accaacccag tggccacaga acagtacggc gtggtggccg ataacctgca 1990
PL 221 877 B1
101
acagcaaaac gccgctccta ttgtaggggc cgtcaacagt caaggagcct tacctggcat 2040
ggtctggcag aaccgggacg tgtacctgca gggtcctatc tgggccaaga ttcctcacac 2100
ggacggcaac tttcatcctt cgccgctgat gggaggcttt ggactgaaac acccgcctcc 2160
tcagatcctg attaagaata cacctgttcc cgcggatcct ccaactacct tcagtcaagc 2220
caagctggcg tcgttcatca cgcagtacag caccggacag gtcagcgtgg aaattgaatg 2280
ggagctgcag aaagagaaca gcaagcgctg gaacccagag attcagtata cttccaacta 2340
ctacaaatct acaaatgtgg actttgctgt caatactgag ggtacttatt cagagcctcg 2400
ccccattggc acccgttacc tcacccgtaa cctgtaattg cctgttaatc aataaaccgg 2460
ttgattcgtt tcagttgaac tttggtctca agggcgaatt c 2501
<210? 31 <211? 3113
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42. 13
<400? 31 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag catgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
102
PL 221 877 B1
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc gctctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagacccat agaatccccc gactcctcca cgggcatcgg caagaaaggc 1320
cagcagcccg gaccctcaac ctaaaaagaa caatcggaga gctcaacttt gggcagactg gcgactcaga accccccgca ggcccctctg gtctgggatc gtcagtgccc tggtacaatg 1390 1440
gctgcaggcg gtggcgctcc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtagt 1500
tcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat caccaccagc 1560
acccgaacct gggccctccc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat ctccaacggg 1620
acatcgggag gaagcaccaa cgacaacacc tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 1680
tttgacttta acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 1740
aacaactggg gattccggcc caagagactc aacttcaagc tcttcaacat ccaggtcaag 1800
gaggtcacgc agaatgaagg caccaagacc atcgccaata accttaccag cacgattcag 1860
gcctttacgg actcggaata ccagctcccg tacgtcctcg gctctgcgca ccagggctgc 1920
ctgcctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acgggtacct gaetctgaac 1980
aacggcagtc aggccgtggg ccgttcctcc ttctactgcc tggagtactt tccttctcaa 2040
atgctgagaa cgggcaacaa ctttgagttc agctaccagt ttgaggacgt gccttttcac 2100
agcagctatg cgcacagcca aagcctggac cggctgatga accccctcat cgaccagtac 2160
ctgtactacc tgtctcggac tcagtccacg ggaggtaccg caggaactca gcagttgcta 2220
ttttctcagg ccgggcctaa taacatgtcg gctcaggcca aaaactggct acccgggccc 2280
tgctaccggc agcaacgcgt ctccacgaca gtgtcgcaaa ataacaacag caactttgct 2340
tggaccggtg ccaccaagta tcatctgaat ggcagagact ctctggtaaa tcccggtgtc 2400
gctatggcaa cgcacaaggg cgacgaagag cgattttttc catccagcgg agtcttgatg 2460
tttgggaaac agggagctgg aaaagacaac gtggactata gcagcgttat gctaaccagt 2520
gaggaagaaa tcaaaaccac caacccagtg gccacagaac agtacggcgt ggtggccgat 2580
aacctgcaac agcaaaacgc cgctcctatt gtaggggccg tcaacagtca aggagcctta 2 64 0
cctggcatgg tctggcagaa ccgggacgtg tacctgcagg gtcctatctg ggccaagatt 2700
cctcacacgg acggcaactt tcatccttcg ccgctgatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
ccgcctcctc agatcctgat taagaataca cctgttcccg cggatcctcc aactaccttc 2820
agtcaagcca agctggcgtc gttcatcacg cagtacagca ccggacaggt cagcgtggaa 2880
attgaatggg agctgcagaa agagaacagc aagcgctgga acccagagat tcagtatact 2940
tccaactact acaaatctac aaatgtggac tttgctgtca atactgaggg tacttattca 3000
gagcctcgcc ccattggcac ccgtfcacctc acccgtagcc tgtaattgcc tgttaatcaa 3060
taaaccggtt gattcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttc 3113
PL 221 877 B1
103 <210> 32 <211> 3113 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.3a <400> 32
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag catgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg cttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca gcatttgctt cacgcacggg accagagact 650
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgfcttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtca tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggaottgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagoggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagacccat agaatccccc gactcctcca cgggcatcgg caagaaaggc 1320
cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaacttt gggcagactg gcgactcaga gtcagtgccc 1380
gaccctcaac caatcggaga accccccgca ggcccctctg gtctgggatc tggtacaatg 1440
gctgcaggcg gtggcgctcc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtagt 1500
tcctcaggaa attggcattg cgattccaca tagctgggcg acagagtcat caccaccagc 1560
acccgaacct gggccctccc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat ctccaacggg 1620
acatcgggag gaagcaccaa cgacaacacc tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 1680
tttgacttta acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 1740
104
PL 221 877 B1
aacagctggg gattccggcc caagagactc aacttcaagc tcttcaacat ccaggtcaag 1800
gaggtcacgc agaatgaagg caccaagacc atcgccaata accttaccag cacgattcag 1860
gtctttacgg actcggaata ccagctcccg tacgtcctcg gctctgcgca ccagggctgc 1920
ctgcctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acgggtacct gactctgaac 1980
aacggcagtc aggccgtggg ccgttcctcc ttctactgcc tggagtactt tccttctcaa 2040
atgctgagaa cgggcaacaa ctttgagttc agctaccagt ttgaggacgt gccttttcac 2100
agcagctacg cgcacagcca aagcctggac cggctgatga accccctcat cgaccagtac 2160
ctgtactacc tgtctcggac tcagtccacg ggaggtaccg caggaactca gcagttgcta 2220
ttttctcagg ccgggcctaa taacatgtcg gctcaggcca aaaactggct acccgggccc 2280
tgctaccggc agcaacgcgt ctccacgaca ctgtcgcaaa ataacaacag caactttgct 2340
tggaccggtg ccaccaagta tcatctgaat ggcagagact ctctggtaaa tcccggtgtc 2400
gctatggcaa cgcacaagga cgacgaagag cgattttttc catccagcgg agtcttgatg 2460
tttgggaaac agggagctgg aaaagacaac gtggactata gcagcgttat gctaaccagt 2520
gaggaagaaa tcaaaaccac caacccągtg gccacagaac agtacggcgt ggtggccgat 2580
aacctgcaac agcaaaacgc cgctcctatt gtaggggccg tcaacagtca aggagcctta 2640
cctggcatgg tctggcagaa ccgggacgtg tacctgcagg · gtcctatctg ggccaagatt 2700
cctcacacgg acggcaactt tcatccttcg ccgctgatgg gaggctttgg actgaaacac 2760 ccgcctcctc agatcctgat taagaataca cctgttcccg cggatcctcc aactaccttc 2320 agtcaagcca agctggcgtc gttcatcacg cagtacagca ccggacaggt cagcgtggaa 2830 attgaatggg agctgcagaa agagaacagc aagcgctgga acccagagat tcagtatact 2940 tccaactact acaaatctac aaatgtggac tttgctgtca atactgaggg tacttattca 3000 gagcctcgcc ccattggcac ccgttacctc acccgtaacc tgtaattgcc tgttaatcaa 3060 taaaccggtt aaetcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttc 3113 <210> 33 <211> 2504 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.4 <400» 33 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60 gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120 ccgccaaggc cattcatcat ctgctggggc gggctcccga gattgcttgc tcggcctgcg 180 atctggtcaa cgtggacctg gatgactgtg tttctgagca ataaatgact taaaccaggt 240 atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca acctctctga gggcattcgc 300 gagtggtggg acttgaaaec tggagccccg aaacccaaag ccaaccagca aaagcaggac 360
PL 221 877 B1
105
gacggccggg gtctggtgct tcctggctac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 420
aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 480
aagcagctcg agcaggggga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgccgagttt 540
caggagcgtc ttcaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcgggcgagc agtcttccag 600
gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggttgagg aaggcgctaa gacggctcct 660
ggaaagaaga gacccataga atcccccgac tcctccacgg gcatcggcaa gaaaggccag 720
cagcccgcta aaaagaagct caactttggg cagactggcg actcagagtc agtgcccgac 780
cctcaaccaa tcggagaacc ccccgcaggc ccctctggtc tgggatctgg tacaatggct Θ40
gcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt gggtaatgcc 500
tccggaaatt ggcattgcga ttccacatgg etgggcgaca gagtcatcac caccagcacc 560
cgcacctggg ccctgcccac ctacaacaac cacctctaca agcagatatc aagtcagagc 1020
ggggctacca acgacaacca cttcttcggc tacagcaccc cctggggcta ttttgacttc 1080
aacagattcc actgccactt ctcatcacgt gactggcagc gactcatcaa caacaactgg 1140
ggattccggc ccaagagact caacttcaag ctcttcaaca tccaggtcaa ggaggtcacg 1200
cagaatgaag gcaccaagac catcgccaat aaccttacca gcacgattca ggtctttacg 1260
gactcggaat accggctccc gtacgtcctc ggctctgcgc accagggctg cctgcctccg 1320
ttcccggcgg acgtcttcat gattcctcag tacgggtacc tgactctgaa caacggcagt 1380
caggccgtgg gccgttcctc cttctactgc ctggagtact ttcctfcctca aatgctgaga 1440
acgggcaaca actttgagtt cagctaccag tttgaggacg tgccttttca cagcagctac 1500
gcgcacagcc aaagcctgga ccggctgatg aaccccctca tcgaccagta cctgtactac 1560
ctgtctcgga ctcagtccac gggaggtacc gcaggaactc agcagttgct attttctcag 1620
gccgggccta ataacatgtc ggctcaggcc aaaaactggc tacccgggcc ctgctaccgg 1680
cagcaacgcg tctccacgac actgtcgcaa aataacaaca gcaactttgc ttggaccggt 1740
gccaccaagt atcatctgaa tggcagagac tctctggtaa atcccggtgt cgctatggca 1800
acgcacaagg acgacgaaga gcgatttttt ccatccagcg gagtcttgat gtttgggaaa 1860
cagggagctg gaaaagacaa cgtggactat agcagcgtta tgctaaccag tgaggaagaa 1920
atcaaaacca ccaacccagt ggccacagaa cagtacggcg tggtggccga taacctgcaa 1980
cagcaaaacg ccgctcctat tgtaggggcc gtcaacagtc aaggagcctt acctggcatg 2040
gtctggcaga accgggacgt gtacctgcag ggtcctatct gggccaagat tcctcacacg 2100
gacggcaact ttcatccttc gccgctgatg ggaggctttg gactgaaaca cccgcctcct 2160
cagatcctga ttaagaatac acctgttccc gcggatcctc caactacctt cagtcaagcc 2220
aagccggcgt cgttcatcac gcagtacagc accggacagg tcagcgtgga aattgaatgg 2280
106
PL 221 877 B1
gagctgcaga aagagaacag caagcgcfcgg aacccagaga ttcagtatac ttccaactac 2340
tacaaatcta caaatgtgga ctttgctgtc aatactgagg gtacttattc agagcctcgc 2400
cccattggca cccgttacct cacccgtaac ctgtaattgc ctgttaatca ataaaccggt 2460
taattcgttt cagttgaact ttggtctctg cgaagggcga attc 2504
<210» 34
<211» 3106
<212» DNA
<213» nowy serotyp AAV, klon 42
<400» 34
gaattcgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag aactttccct tcaacgattg 60
cgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga gggcaagatg acggecaagg tcgtggagtc 120
cgccaaggcc attctcggcg gcagcaaggt gcgcgtggac caaaagtgca agtcgtccgc 180
ccagatcgac cccacccccg tgatcgfccac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 240
cgggaacagc accaccttcg agcaccagca gccgttgcag gaccggatgt tcaaatttga 300
actcacccgc cgtctggagc atgactttgg caaggcgaca aagcaggaag tcaaagagtt 360
cttccgctgg gcgcaggatc acgtgaccga ggtggcgcat gagttctacg tcagaaaggg 420
tggagccaac aagagacccg cccccgatga cgcggataaa agcgagccca agcgggcccg 480
cccctcagtc gcggatccat cgacgtcaga cgcggaagga gct-ccggtgg actttgccga 540
caggtaccaa aacaaatgtt ctcgtcacgc gggcatgctt cagatgctgt ttccctgcaa 600
aacatgcgag agaatgaatc agaatttcaa catttgcttc acgcacggga ccagagactg 660
ttcagaatgt ttccccggcg tgtcagaatc tcaaccggtc gtcagaaaga ggacgtatcg 720
gaaactctgt gccattcafcc atctgctggg gcgggctccc gagattgctt gctcggcctg 7S0
cgatctggtc aacgtggacc tggatgactg tgtttctgag caataaatga cttaaaccag 840
gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga caacctctct gagggcattc 900
gcgagtggtg ggacttgaaa cctggagccc cgaaacccaa agccaaccag caaaagcagg 960
acgacggccg gggtctggtg cttcctggct acaagtacct cggacccttc aacggactcg 1020
acaagggaga gccggtcaac gaggcagacg ccgcggccct cgagcacgac aaggcctacg 1030
acaagcagct cgagcagggg gacaacccgt acctcaagta caaccacgcc gacgccgagt 1140
ttcaggagcg tcttcaagaa gatacgtctt ttgggggcaa cctcgggcga gcagtcttcc 1200
gggccaagaa gcgggttctc gaacctctcg gtctggttga ggaaggcgct aagacggctc 12 60
ctggaaagaa gagacccata gaatcccccg actcctccac gggcatcggc aagaaaggcc 1320
agcagcccgc taaaaagaag ctcaactttg ggcagactgg cgactcagag tcagtgcccg 1380
acccccaacc tctcggagaa cctcccgccg cgccctcagg tctgggatct ggtacaatgg 1440
ctgcaggcgg tggcgcacca atggcagaca ataacgaagg cgccgacgga gtgggtaatg 1500
PL 221 877 B1
107
cctccggaaa ttggcattgc gattccacat ggctgggcga cagagtcatc accaccagca 1560
cccgcacctg ggccctgccc acctacaaca accacctcta caagcagata tcaagtcaga 1620
gcggggctac caacgacaac cacttcttcg gctacagcac cccctggggc tattttgact 1680
tcaacagatt ccactgccac ttctcaccac gtgactggca gcgactcatc aacaacaacc 1740
ggggattccg gcccagaaag ctgcggttca agttgttcaa catccaggtc aaggaggtca 1800
cgacgaacga cggcgttacg sccatcęcts. ataaccttac cagcacgatt caggtcttct 1B60
cggactcgga gtaccaactg ccgtacgtcc tcggctctgc gcaccagggc tgcctccctc 1920
cgttccctgc ggacgtgttc atgattcctc agtacggata tctgactcta aacaacggca 1980
gtcagtctgt gggacgttcc tccttctact gcctggagta ctttccttct cagatgctga 2040
gaacgggcaa taactttgaa ttcagctacc agtttgagga cgtgcccttt cacagcagct 2100
acgcgcacag ccaaagcctg gaccggctga tgaaccccct catcgaccag tacctgtact 2160
acctgtctcg gactcagtcc acgggaggta ccgcaggaac tcagcagttg ctattttctc 2220
aggccgggcc taataacatg tcggctcagg ccaaaaactg gctacccggg ccctgctacc 2280
ggcagcaacg cgtctccacg acactgtcgc aaaataacaa cagcaacttt gcttggaccg 2340
gtgccaccaa gtatcatctg aatggcagag actctctggt aaatcccggt gtcgctatgg 2400
caacgcacaa ggacgacgaa gagcgatttt ttccatccag cggagtcttg atgtttggga 2460
aacagggagc tggaaaagac aacgtggact atagcagcgt tatgctaacc agtgaggaag 2520
aaatcaaaac caccaaccca gtggccacag aacagtacgg cgtggtggcc gataacctgc 2530
aacagcaaaa cgccgctcct attgtagggg ccgtcaacag tcaaggagcc ttacctggca 2640
tggcctggca gaaccgggac gtgtacctgc agggtcctat ctgggccaag attcctcaca 2700
cggacggcaa ctttcatcct tcgccgctga tgggaggctt tggactgaaa cacccgcctc 2760
ctcagatcct gattaagaat acacctgttc ccgcggatcc tccaactacc ttcagtcaag 2820
ccaagctggc gtcgttcatc acgcagtaca gcaccggaca ggtcagcgtg gaaattgaat 2880
gggagctgca gaaagagaac agcaagcgct ggaacccaga gattcagtat acttccaact 2940
actacaaatc tacaaatgtg gactttgctg tcaatactga gggtacttat tcagagcctc 3000
gccccattgg cacccgttac ctcacccgta acctgtaatt gcctgttaat caataaaccg 3060
gttaattcgt ttcagttgaa ctttggtctc tgcgaagggc gaattc 3106
<210> 35 <211> 2489
<212> <213> DNA nowy serotyp AAV, klon 42.10
<400> 35
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtgaagt 120
108
PL 221 877 B1
ccgccaaggc cattcatcat ctgctggggc gggctcccga gattgcttgc tcggcctgcg 130
atctggtcaa cgtggacctg gatgactgtg tttctgacca ataaatgact taaaccaggt 240
atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaagaca acctctctga gggcattcgc 300
gagtggtggg acttgaaacc tggagccccg aaacccaaag ccaaccagca aaagcaggac 360
gacggccggg gtctggtgct tcctggctac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 420
aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 480
aagcagctcg agcaggggga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgccgagttt 540
caggagcgtc ttcaagaaga cacgtctttt gggggcaacc tcgggcgagc agtcttccag 600
gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggttgagg aaggcgctaa gacggctcct 660
ggaaagaaga gacccataga atcccccgac tcctccacgg gcatcggcag gaaaggccag 720
cagcccgcta aaaagaagct caactttggg cagactggcg actcagagtc agtgcccgac 780
cctcaaccaa tcggagaacc ccccgcaggc ccctctggtc tgggatctgg tacaatggct 640
gcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt gggtaatgcc 900
tccggaaatt ggcattgcga ttccacatgg ctgggcgaca gagtcatcac caccagcacc 960
cgcacctggg ccctgcccac ctacaacaac cacctctaca agcagatatc aagtcagagc 1020
ggggctacca acgscaacca cttcttcggc tacagcaccc cctggggcta ttttgacttc 1030
aacagattcc actgccactt ctcaccacgt gactggcagc gactcatcaa caacaactgg 1140
ggattccggc ccagaaagct gcggttcaag ttgttcaaca tccaggtcaa ggaggtcacg 1200
acgaacgacg gcgttacgac catcgccaat aaccttacca gcacgattca ggtcttctcg 1260
gactcagagt accaactgcc gtacgtcctc ggctctgcgc accagggctg cctccctccg 1320
ttccctgcgg acgtgttcat gattcctcag tacggatatc tgactctaaa caacggcagt 1380
cagtctgtgg gacgttcctc cttctactgc ctggagtact ttccttctca gatgctgaga 1440
acgggcaata actttgaatt cagctacacc tttgaggaag tgcctttcca cagcagctat 1500
gcgcacagcc agagcctgga ccggctgatg aatcccctca tcgaccagta cctgtactac 1560
ctggcccgga cccagagcac tacggggtcc acaagggagc tgcagttcca tcaggctggg 1620
cccaacacca tggccgagca afccaaagaac tggctgcccg gaccctgtta tcggcagcag 1680
agactgtcaa aaaacataga cagcaacaac aacagtaact ttgcctggac cggggccact 1740
aaataccatc tgaatggtag aaattcatta accaacccgg gcgtagccat ggccaccaac 1800
aaggacgacg aggaccagtt ctttcccatc aacggagtgc tggtttttgg caaaacgggg 1860
gctgccaaca agacaacgct ggaaaacgtg ctaatgacca gcgaggagga gatcaaaacc 1920
accaatcccg ćggctacaga agaatacggt gtggtctcca gcaacctgca atcgtctacg 1980
gccggacccc agacacagac tgtcaacagc cagggggctc tgcccggcat ggtctggcag 2040
PL 221 877 B1
109
aaccgggacg tgtacctgca gggtcccatc tgggccaaaa ttcctcacac ggacggcaac 2100
tttcacccgt ctcccctgat gggcggattt ggactcaaac acccgcctcc tcaaattctc 2150
atcaaaaaca ccccggtacc tgctaatcct ccagaggtgt ttactcctgc caagtttgcc 2220
tcatttatca cgcagtacag caccggccag gtcagcgtgg agatcgagtg ggaactgcag 2280
aaagaaaaca gcaaacgctg gaatccagag attcagtaca cctcaaatta tgccaagtct 2340
aataatgtgg aatfctgctgt caacaacgaa ggggtttata ctgagcctcg ccccattggc 2400
acccgttacc tcacccgtaa cctgtaattg cctgttaatc aataaaccgg ttaattcgtt 2460
tcagttgaac tttggtcaag ggcgaattc 2489
<210> 36 <211> 2495
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42. ,3b
<40O> 36 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact agaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattcatcat ctgctggggc gggctcccga gattgcttgc tcggcctgcg 180
atctggtcaa cgtggacctg gatgactgtg tttctgagca ataaatgact taaaccaggt 240
atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca acctctctga gggcattcgc 300
gagtggtggg acttgaaacc tggagccccg aaacccaaag ccaaccagca aaagcaggac 360
gacggccggg gtctggtgct tcctggctac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 420
aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 480
aagcagctcg agcaggggga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga cgccgagttt 540
caggagcgte ttcaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcgggcgagc agtcttccag 600
gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggttgagg aaggcgctaa gacggctcct 660
ggaaagaaga gacccataga atcccccgac tcctccacgg gcatcggcaa gaaaggccag 720
cagcccgcta aaaagaagct caactttggg cagactggcg actcagagtc agtgcccgac 780
cctcaaccaa tcggagaacc ccccgcaggc ccctctggtc tgggatctgg tacaatggct 840
gcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt gggtaatgcc 900
tccggaaatt ggcattgcga ttccacatgg ctgggcgaca gagtcatcac caccagcacc 960
cgcacctggg ccctgcccac ctacaacaac cacctctaca agcagatatc aagtcagagc 1020
ggggctacca acgacaacca cttcttcggc tacagcaccc cctggggcta ttttgacttc 1080
aacagattcc actgccactt ctcaccacgt gactggcagc gactcatcaa caacaactgg 1140
ggattccggc ccagaaagct gcggttcaag ttgttcaaca tccaggtcaa ggaggtcacg 1200
acgaacgacg gcgttacgac catcgctaat aaccttacca gcacgattca ggtcttctcg 1260
110
PL 221 877 B1
gactcggagt accaactgcc gtacgtcctc ggctctgcgc accagggctg cctccctccg 1320
ttccctgcgg acgtgttcat gattcctcag tacggatatc tgactctaaa caacggcagt 1380
cagtctgtgg gacgttcctc cttctactgc ctggagtact ttccttctca gatgctgaga 1440
acgggcaata actttgaatt cagctacacc tttgaggaag tgcctttcca cagcagctat 1500
gcgcacagcc agagcctgga ccggctgatg aatcccctca tcgaccagta cctgtactac 1560
ctggcccgga cccagagcac tacggggtcc acaagggagc tgcagttcca tcaggctggg 1620
cccaacacca tggccgagca atcaaagaac tggctgcccg gaccctgtta tcggcagcag 1680
agactgtcaa aaaacataga cagcaacaac accagtaact ttgcctggac cggggccact 1740
aaataccatc tgaatggtag aaattcatta accaacccgg gcgtagccat ggccaccaac 1300
aaggacgacg aggaccagtt ctttcccatc aacggagtgc tggtttttgg caaaacgggg 1860
gctgccaaca agacaacgct ggaaaacgtg ctaatgacca gcgaggagga gatcaaaacc 1920
accaatcccg tggctacaga acagtacggt gtggtctcca gcaacctgca atcgtctacg 1980
gccggacccc agacacagac tgtcaacagc cagggggctc tgcccggcat ggtctggcag 2040
aaccgggacg tgtacctgca gggtcccatc tgggccaaaa ttcctcacac ggacggcaac 2100
tttcacccgt ctcccctgat gggcggattt ggactcaaac acccgcctcc tcaaattctc 2160
atcaaaaaca ccccggtacc tgctaatcct ccagaggtgt ttactcctgc caagtttgcc 2220
tcatttatca cgcagtacag caccggccag gtcagcgtgg agatcgagtg ggaactgcag 2280
aaagaaaaca gcaaacgctg gaatccagag attcagtaca cctcaaatta tgccaagtct 2340
aataatgtgg aatttgctgt caacaacgaa ggggtttata ctgagcctcg ccccattggc 2400
acccgttacc tcacccgtaa cctgtaattg cctgttaatc aataaaccgg ttaattcgtt 2460
tcagttgaac tttggtctct gcgaagggcg aattc 2495
<210> 37 <211> 3098 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.11 <400> 37
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg 130
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
PL 221 877 B1
111
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accggagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 640
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaagggag agccggtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagacccat agaatccccc gactcctcca cgggcatcgg caagaaaggc 1320
cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaacttt gggcagactg gcgactcaga gtcagtgccc 1380
gaccctcaac caatcggaga acccccćgca ggcccctctg gtctgggatc tggtacaatg 1440
gctgcaggcg gtggcgctcc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtaat 1500
gcctccggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat caccaccagc 1560
acccgcacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcagat atcaagtcag 1620
agcggggcta ccaacgacaa ccacttcttc ggctacagca ccccctgggg ctattttgac 1680
ttcaacagat tccactgcca cttctcacca cgtgactggc agcgactcat caacaacaac 1740
tggggattcc ggcccagaaa gctgcggttc aagttgttca acatccaggt caaggaggtc 1800
acgacgaacg acggcgttac gaccatcgct aataacctta ccagcacgat tcaggtcttc 1860
tcggactcgg agtaccaact gccgtacgtc ctcggctctg cgcaccaggg ctgcctccct 1920
ccgttccctg cggacgtgtt catgattcct cagtacggat atctgactct aaacaacggc 1980
agtcagtctg tgggacgttc ctccttctac tgcctggagt actttccttc tcagatgctg 2040
agaacgggca ataactttga attcagctac acctttgagg aagtgccttt ccacagcagc 2100
tatgcgcaca gccagagcct ggaccggctg atgaatcccc tcatcgacca gtacctgtac 2160
tacctggccc ggacccagag cactacgggg tccacaaggg agctgcagtt ccatcaggct 2220
gggcccaaca ccatggccga gcaatcaaag aactggctgc ccggaccctg ttatcggcgg 2230
cagagactgt caaaagacat agacagcaac aacaacagta actttgcctg gaccggggcc 2340
actaaatacc atctgaatgg tagaaattca ttaaccaacc cgggcgtagc catggccacc 2400
112
PL 221 877 B1
aacaaggacg acgaggacca gttctttccc atcaacggag tgctggtttt cggcaaaacg 2460
ggggctgcca acaagacaac gctggaaaac gtgctaatga ccagcgagga ggagatcaaa 2520
accaccaatc ccgtggctac agaagaatac ggtgtggtct ccagcaacct gcaatcgtct 2580
acggccggac cccagacaca gaotgtcaac agccaggggg ctctgcccgg catggtctgg 2640
cagaaccggg acgtgtacct gcagggtccc atctgggcca aaattcctca cacggacggc 2700
aactttcacc cgtctcccct gatgggcgga tttggactca aacacccgcc tcctcaaatt 2760
ctcatcaaaa acaccccggt acctgctaat cctccagagg tgtttactcc tgccaagttt 2820
gcctcattta tcacgcagta cagcaccggc caggtcagcg tggagatcga gtgggaactg 2880
cagaaagaga acagcaaacg ctggaatcca gagattcagt acacctcaaa ttatgccaag 2940
tctaataatg tggaatttgc tgtcaacaac gaaggggttt atactgagcc togccccatt 3000
ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa ttacttgtta atcaataaac cggttgattc 3060
gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg gcgaattc 3098
<210» 38 <211» 3276 <212» DNA <213» nowy serotyp AAV, klon 42.6a <400» 38
gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga attaaccggt ttattgatta 60
acaggcaatt acaggttacg ggtgaggtaa cgggtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 120
accccttcgt tgttgacagc aaattccaoa ttattagact tggcataatt tgaggtgtac 180
tgaatctctg gattccagcg tttgctgttt tctttctgca gttcccactc gatctccacg 240
ctaacctggc cggtgctgta ctgcgtgata aatgaggcaa acttggcagg agtaaacacc 300
tctggaggat tagcaggtac cggggtgttt ttgatgagaa tttgaggagg cgggtgtttg 360
agtccaaatc cgtccatcag gggagacggg tgaaagttgc cgtccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag gtacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc gggcagagcc 480
ccctggctgt tgacagtctg tgtctggggt ccggccgtag acgatcgcag gttgctggag 540
accacaccgt attcttctgt agccacggga ttggtggttt tgatetcctc ctcgctggtc 600
attagoacgt tttcoagcgt tgtcttgttg gcagcccccg ttttgccaaa aaccagcact 660
ccgttgatgg gaaagaactg gtcctcgtcg tccttgttgg tggccatggc tacgccoggg 720
ttggttaatg aatttctacc attcagatgg tatttagtgg ccccggtcca ggcaaagtta 780
ctgttgttgt tgctgtctat gttttttgac agtctctgct gccgataaca gggtccgggc 040
agccagttct ttgattgctc ggccatggtg ttgggcccag cctgatggaa ctgcagctcc 900
cttgtggacc ccgtagtgct ctgggtccgg gccaggtagt acaggtactg gtcgatgagg 960
ggattcatca gccggtccag gctctggcta tgcgcatagc tgctgtggaa aggcacttcc 1020
PL 221 877 B1
113
tcaaaggtgt agctgaattc aaagttattg cccgttctca gcatctgaga aggaaagtac 1080
tccaggcagt agaaggagga acgtcccaca gactgactgc cgttgtttag agtcagatat 114 0
ccgtactgag gaatcatgaa cacgtccgca gggaacggag ggaggcagcc ctggtgcgca 1200
gagccgagga cgtacggcag ttggtactcc gagtccgaga agacctgaat cgtgctggta 1260
aggttattag cgatggtcgt aacgccgtcg tccgtcgtga cctccttgac ctggatgttg 1320
aacaacttga accgcagctt tctgggccgg aatccccagt tgttgttgat gagtcgctgc 1380
cagtcacgtg gtgagaagtg gcagtgcaat ctgttaaagt caaaataccc ccagggggtg 144 0
ctgtagccga agtaggtgtt gtcgttggtg cttcctcccg atgtcccgtt ggagatttgc 1500
ttgtagaggt ggttgctgta ggtggggagg gcccaggttc gggtgctggt ggtgatgact 1560
ctgtcgccca gccatgtgga atcgcaatgc caatttcctg aggaactacc cactccgtcg 162 0
gcgccttcgt tattgtctgc cattggagcg ccaccgcctg cagccattgt accagatccc 1680
agaccagagg ggcctgcggg gggttctccg attggttgag ggtcgggcac tgactctgag 1740
tcgccagtct gcccaaagtt gagtctcttt ttcgcgggct gctggcctgt cttgccgatg 1800
cccgtagagg agtctggaga acgctggggt gatggctcta ccggtctctt ctttccagga 1860
gccgtcttag cgccttcctc aaccagaccg agaggttcga gaacccgctt cttggcctgg 1920
aagactgctc gcccgaggtt gcccccaaaa gacgtatctt cttgaagacg ctcctgaaac 1980
tcggcgtcgg cgtggttgta cttgaggtac gggttgtccc cctgctcgag ctgcttgtcg 2040
Łaggccttgt cgtgctcgag ggccgcggcg tctgcctcgt tgaccggctc tcccttgtcg 2100
agtccgttga agggtccgag gtacttgtag ccaggaagca ccagaccccg gccgtcgtcc 2160
tgcttttgct ggttggcttt gggtttcggg gctccaggtt tcaagtccca ccactcgcga 2220
atgccctcag agaggttgtc ctcgagccaa tctggaagat aaccatcggc agccatacct 2280
ggtttaagtc atttattgct cagaaacaca gtcatccagg tccacgttga ccagatcgca 2340
ggccgagcaa gcaatctcgg gagcccgccc cagcagatga tgaatggcac agagtttccg 2400
atacgtcctc tttctgacga ccggttgaga ttctgacacg ccggggaaac attctgaaca 2460
gtctctggtc ccgtgcgtga agcaaatgtt gaaattctga ttcattctct cgcatgtctt 2520
gcagggaaac agcatctgaa gcatgcccgc gtgacgagaa cacttgtttt ggtacctgtc 2580
ggcaaagtcc accggagctc cttccgcgtc tgacgtcgat ggatgcaaaa tgtcgcaaaa 2640
gcactcacgt gacagctaat acaggaccac tcccctatga cgtgatttac gtcagcgcta 2700
tgcccgcgtg acgagaacat ttgttttggt acctgtcggc aaagtccacc ggagctcctt 2760
ccgcgtctga cgtcgatgga tccgcgactg aggggcaggc ccgcttgggc tcgcttttat 2820
ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ctccaccctt tctgacgtag aactcatgcg 2880
ccacctcggt cacgtgatcc tgcgcccagc ggaagaactc tttgacttcc tgctttgtca 2 94 0
ccttgccaaa gtcatgctcc agacggcggg tgagttcaaa tttgaacatc cggtcctgca 3000
114
PL 221 877 B1
acggctgctg gtgctcgaag gtggtgctgt tcccgtcaat caccgcgcac atgttggtgt 3060
tggaagtgac gatcacgggg gtgggatcga tctgggcgga agacttgcac ttttggtcca 3120
cgcgcacctt gctgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg gccgtcatct 3180
tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatc gttgaaggga aagttctcat 3240
tggtccagtt gacgcagccg tagaaagggc gaattc 3276
<210? 39 <211? 3084 <212? DMA <213? 43.1 <400? 39 gaattcgccc tttctacggc tgcatcsact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60 gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120 ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180 cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240 acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaagttcg 300 aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac caagcaggaa gtcaaagagt 360 tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420 gcggagccag caaaagaccc gcccccgatg acgcggatat aagcgagccc aagcgggcct 480 gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540 acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600 aaacgtgcga gaaaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg gtcagagact 660
gctcagaatg tttccccggt gcatcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aaaacgtatc 720
agaaactgtg tgccattcat catctgctgg ggcgggcacc cgagattgct tgctcggcct 730
gcgatctggt caacgtggac ctggacgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggcttgagg acaacctccc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacctgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca cctcagcgtt cccccgactc ctccacgggc 1320
atcggcaaga aaggccacca gcccgcgaga aagagactga actttgggca gactggcgac 1380
PL 221 877 B1
115
tcggagtcag tccccgaccc tcaaccaatc ggagaaccac cagcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1550
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctgcccacct acaacaacca tctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc actaacgaca acacctactt tggctacagc 1690
accccctggg ggtattttga cttcaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaataa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1360
accagcacga ttcaggtgtt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt ccccggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctccc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tatctgaccc taaacaatgg cagtcaggct gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggaa 2040
tacttccctt ctcaaatgct gaggacgggc aacaactttg aattcagcta caccttcgag 2100
gacgtgcctt tccacagcag ctacgcgcac agccagagcc tggaccggct gatgaaccct 2160
ctcatcgacc agtacctgta ttacttatcc agaactcagt ccacaggagg aactcaaggt 2220
actcagcaat tgttattttc tcaagccggg cccgcaaaca tgtcggctca ggccaagaac 2280
tggctacctg gaccgtgtta ccgtcagcaa cgagtttęca cgacactgrc gcaaaacaac 2340
aacagcaatt ttgcttggac cggtgccacc aagtatcacc tgaatggcag agactccctg 2400
gttaatcccg gcgttgccat ggctacccac aaggacgacg aggagcgctt cttcccgtca 2460
agcggagttc taatgtttgg caagcagggg gctggaaaag acaatgtgga ctacagcagc 2520
gtgatgctca ccagcgaaga agaaattaaa actactaacc cagtggctac agagcagtat 2580
ggtgtggtgg cagacaacct gcagcagacc aacggagctc ccattgtggg aactgtcaac 2640
agccaggggg ccttacctgg tatggtctgg caaaaccggg acgtgtacct gcagggcccc 2700
atctgggcca aaattcctca cacggacggc aactttcatc cttcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctggtgaaaa acactcctgt tcctgcggat 2820
cctccgacca ccttcagcca ggccaagctg gcttctttta tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaatcga atgggagctg cagaaagaaa acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000
gagggtactt attcagagcc tcgccccatt ggcactcgtt atctcacccg taatctgtaa 3060
ttgcttgtta atcaataaac cggt 3084
<210? 40
<211? 2370
<212? DNA
<213? nowy serotyp AAV, klon 43
<400? 40
116
PL 221 877 B1
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga i gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat . gacggccaag gtcgtggagt 12 0
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga , ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaagttcg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac caagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gcggagccag caaaagaccc gcccccgatg aegeggatat aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagacgctg tttccctgca 600
aaacgtgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg gtcagagact S60
gctcagaatg tttccccggc gcatcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aaaacgtatc 720
agaaactgtg tgccattcat catctgctgg ggcgggcacc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggacgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggcttgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacctgaa aectggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cacggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca cctcagcgtt cccccgactc ctccacgggc 1320
atcggcaaga aaggccacca gcccgcgaaa aagagactga actttgggca gactggcgac 1380
tcggagtcag tccccgaccc tcaaccaatc ggagaaccac cagcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctgcccacct acaacaacca tctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc actaacgaca acacctactt tgactacage 1630
accccctggg ggtattttga cttcaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaataa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtgtt tacggactcg - gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctccc tccgttcccg < gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
PL 221 877 B1
117
tatctgaccc taaacaatgg cagtcaggct gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggaa 2040
tacttccctt ctcaaatgct gaggacgggc aacaactttg aattcagcta caccttcgag 2100
gacgtgcctt tccacagcag ctacgcgcac agccagagcc tggaccggct gatgaaccct 2160
ctcatcgacc agtacctgta ttacttatcc agaactcagt ccaćaggagg aactcaaggt 2220
actcagcaat tgttattttc tcaagccggg cccgcaaaca tgtyggctca ggccaagaac 2280
tggctacctg gaccgtgtta ccgtcagcaa cgagtttcca cgacactgtc gcaaaacaac 2340
aacagcaatt ttgctggacc ggtgccacca 2370
<210> 41 <211> 3123 <212> DNA <213> 43.12 <400> 41
gaattcgccc ttggctgcgt caactggacc aatgagaact ttcccttcaa cgattgcgtc 60
gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc aagatgacgg ccaaggtcgt ggagtccgcc 120
aaggccattc tcggcggcag caaggtgcgc gtggaccaaa agtgcaagtc gtccgcccag 180
atcgacccca cccccgtgat cgtcacctcc aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg 240
aacagcacca ccttcgagca ccagcagccg ttgcaggacc ggatgttcaa gttcgaactc 300
acccgccgtc tggagcacga ctttggcaag gtgaccaagc aggaagtcaa agagttcttc 360
cgctgggcgc aggatcacgt gaccgaggtg gcgcatgagt tctacgtcag aaagggcgga 420
gccagcaaaa gacccgcccc cgatgacgcg gatataagcg agcccaagcg ggcctgcccc 480
tcagtcgcgg atccatcgac gtcagacgcg gaaggagctc cggtggactt tgccgacagg 540
taccaaaaca aatgttctcg tcacgcgggc atgctccaga tgctgtttcc ctgcaaaacg 600
tgcgagagaa tgaatcagaa tttcaacatt tgcttcacgc acggggtcag agactgctca 660
gaatgtttcc ccggtgcatc agaatctcaa ccggtcgtca gaaaaaaaac gtatcagaaa 720
ctgtgtgcca ttcatcatct gctggggcgg gcacccgaga ttgcttgctc ggcctgcgat 780
ctggtcaacg tggacctgga cgactgtgtt tctgagcaat aaatgactta aaccaggtat 840
ggctgccgat ggttatcttc cagattggct tgaggacaac ctctctgagg gcattcgcga 900
gtggtgggac ctgaaacctg gagccccgaa acccaaagcc aaccagcaaa agcaggacga 960
cggccggggt ctggtgcttc ctggctacaa gtacctcgga cccttcaacg gactcgacaa 1020
gggggagccc gtcaacgcgg cggacgcagc ggccctcgag cacgacaagg cctacgacca 1080
gcagctcaaa gcgggtgaca atccgtacct gcggtataac cacgccgacg ccgagtttca 1140
ggagcgtctg caagaagata cgtcttttgg gggcaacctc gggcgagcag tcttccaggc 1200
caagaagcgg gttctcgaac ctctcggtct ggttgaggaa ggcgctaaga cggctcctgg 1260
118
PL 221 877 B1
aaagaagaga ccggtagagc catcacctca gcgttccccc gactcctcca cgggcatcgg 1320
caagaaaggc caccagcccg cgagaaagag actgaacttt gggcagactg gcgactcgga 1380
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 1440
cggtacaatg gctgcaggcg gtggcgctcc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg 1500
agtgggtagt tcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 1560
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccatctct acaagcaaat 1620
ctccaacggg acatcgggag gaagcactaa cgacaacacc tactttggct acagcacccc 1580
ctgggggtat tttgacttca acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg 1740
actcatcaac aataactggg gattccggcc caagagactc aacttcaagc tcttcaacat 1800
ccaggtcaag gaggccacgc agaatgaagg caccaagacc atcgccaata accttaccag 1860
cacgattcag gtgtttacgg actcggaata ccagctcccg tacgtcctcg gctctgcgca 1920
ccagggctgc ctccctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acgggtatct 1980
gaccctaaac aatggcagtc aggctgtggg ccgttcctcc ttctactgcc tggaatactt 2040
cccttctcaa atgctgagga cgggcaacaa ctttgaattc agctacacct tcgaggacgt 2100
gcctttccac agcagctacg cgcacagcca gagcctggac cggctgatga accctctcat 2160
cgaccagtac ctgtattact tatccagaac tcagtccaca ggaggaactc aaggtactca 2220
gcaattgtta ttttctcaag ccgggcccgc aaacatgtcg gctcaggcca agaactggct 2280
acctggaccg tgttaccgcc agcaacgagt ttccacgaca ctgtcgcaaa acaacaacag 2340
caattttgct tggaccggtg ccaccaagta tcacctgaat ggcagagact ccctggttaa 240 0
tcccggcgtt gccatggcta cccacaagga cgacgaggag cgcttcttcc cgtcaagcgg 2460
agttctaatg tttggcaagc agggggctgg aaaagacaat gtggactaca gcagcgtgat 2520
gctcaccagc gaagaagaaa ttaaaactac taacccagtg gctacagagc agtatggtgt 2580
ggtggcagac aacctgcagc agaccaacgg agctcccatt gtgggaactg tcaacagcca 2640
gggggcctta cctggtatgg tctggcaaaa ccgggacgtg tacctgcagg gccccatctg 2700
ggccaaaatt cctcacacgg acggcaactt tcatccttcg ccgctgatgg gaggctttgg 2760
actgaaacac ccgccfccctc agatcctggt gaaaaacact cctgttcctg cggatcctcc 2820
gaccaccttc agccaggcca agctggcttc ttttatcacg cagtacagca ccggacaggt 2880
cagcgtggaa atcgaatggg agctgcagaa agaaaacagc aagcgctgga acccagagat 2940
tcagtatact tccaactact acaaatctac aaatgtggac tttgctgtca atactgaggg 3000
tacttattca gagcctcgcc ccattggcac tcgttatctc acccgtaatc tgtaattgct 3060
tgttaatcaa taaaccggtt aattcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa 3120
ttc 3123
PL 221 877 B1
119 <210» 42 <211» 3122 <212» DNA <213» 43.20 <400» 42
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgtgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg ISO
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag cgccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag catgactttg gcaaggtgac gaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttccac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg aegeggatat aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgcgattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 7S0
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa aectggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaagcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataatcacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagactggt agagcagtcg ccacaagagc cagactcctc ctcgggcatc 1320
ggcaagacag gccagcagcc cgctaaaaag agactcaatt ttggtcagac tggcgactca 1380
gagtcagtcc ccgacccaca acctctcgga gaacctccag cagccccctc aggtctggga 1440
cctaatacaa tggcttcagg cggtggcgct ccaatggcag acaataacga aggcgccgac 1500
ggagtgggta attcctcggg aaattggcat tgcgattcca catggctggg ggacagagtc 1560
atcaccacca gcacccgaac ctgggccctg cccacctaca acaaccacct ctacaagcaa 1620
atctccaacg gcacctcggg aggaagcacc aacgacaaca cctattttgg ctacagcacc 1680
ccctgggggt attttgactt caacagattc cactgtcact tttcaccacg tgactggcaa 1740
120
PL 221 877 B1
cgactcatca acaacaattg gggattccgg ctcaaaagac tcaacttcaa gctgttcaac 1S00
atccaggtca aggaagtcac gacgaacgaa ggcaccaaga ccatcgccaa taatctcacc iasa
agcaccgtgc aggtctttac ggactcggag taccagttac cgtacgtgct aggatccgct 1920
caccagggat gtctgcctcc gttcccggcg gacgtcttca cggttcctca gtacggctat 1980
ttaactttaa acaatggaag ccaagccctg ggacgttcct ccttctactg tctggagtat 2040
ttcccatcgc agatgctgag aaccggcaac aactttcagt tcagctacac cttcgaggac 2100
gtgcctttcc acagcagcta cgcgcacagc cagagcctgg acaggctgat gaatcccctc 2160
atcgaccagt acetgtacta cctggtcaga acgcaaacga ctggaactgg agggacgcag 2220
actctggcat tcagccaagc gggtcctagc tcaatggcca accaggctag aaattgggtg 2280
cccggacctt gctaccggca gcagcgcgtc tccacgacaa ccaaccagaa caacaacagc 2340
aactttgcct ggacgggagc tgccaagttt aagctgaacg gccgagactc tctaatgaat 2400
ccgggcgtgg caatggcttc ccacaaggat gacgacgacc gcttcttccc ttcgagcggg 2460
gtcctgattt ttggcaagca aggagccggg aacgatggag tggattacag ccaagtgctg 2520
attacagatg aggaagaaat caaggctacc aaccccgtgg ccacagaaga atatggagea 2580
gtggccatca acaaccaggc cgccaatacg caggcgcaga ccggactcgt gcacaaccag 2640
ggggtgattc ccggcatggt gtggcagaat agagacgtgt acctgcaggg tcccatctgg 2700
gccaaaattc ctcacacgga cggcaacttt cacccgtctc ccctgafcggg cggctttgga 2760
ctgaagcacc cgcctcctca aatteteate aagaacacac cggttccagc ggacccgccg 2820
cttaccttca accaggccaa gctgaactct ttcatcacgc agtacagcac cggacaggtc 2880
agcgtggaaa tcgagtggga gctgcagaaa gaaaacagca aacgctggaa tccagagatt 2340
caatacactt ccaactacta caaatctaca aatgtggact ttgctgtcaa cacggaagga 3000
gtttatagcg agcctcgccc cattggcacc cgttacctca cccgcaacct gtaattacat 3060
gttaatcaat aaaccggtta attcgtttca gttgaacttt ggtctctgcg aagggcgaat 3120
tc 3122 <210? 43 <211? 3117 <212? DNA <213? 43.21
<400? 43 gaattcgccc ttggctgcgt caactggacc aatgagaact ttcccttcaa cgattgcgtc 60
gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc aagatgacgg ccaaggtcgt ggagtccgcc 120
aaggccattc tcggcggcag caaggtgcgt gtggaccaaa agtgcaagtc ttccgcccag 180
atcgatccca cccccgtgat cgtcacctcc aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg 240
aacagcacca ccttcgagca ccagcagccg ttgcaggacc ggatgttcaa atttgaactc 300
PL 221 877 B1
121
acccgccgtc tggagcatga ctttggcaag gtgacgaagc aggaagtcaa agagttcttc 360
cgctgggcgc aggatcacgt gaccgaggtg gcgcatgagt tccacgtcag aaagggtgga 420
gccaacaaga gacccgcccc cgatgacgcg gatataagcg agcccaagcg ggcctgcccc 480
tcagtcgcgg atccatcgac gtcagacgcg gaaggagctc cggtggactt tgccgacagg 540
taccsaaaca aatgttctcg tcacgcgggc atgcttcaaa tgctgtttcc ctgcaagaca 600
tgcgagagaa tgaatcagaa tttcaacatt tgcttcacgc acgggaccag agactgttca 660
gaatgtttcc ccggcgtgtc agaatctcaa ccggtcgtca gaaagaggac gtatcggaaa 720
ctctgtgcga ttcatcatct gctggggcgg gctcccgaga ttgcttgctc ggcctgcgat 780
ctggtcaacg tggacctgga tgactgtgtt tctgagcaat aaatgactta aaccaggtat 840
ggctgccgat ggttatcttc cagattggct cgaggacaac ctctctgagg gcattcgcga 900
gtggtgggac ttgaaacctg gagccccgaa acccaaagcc aaccagcaaa agcaggacga 960
cggccggggt ctggtgcttc ctggctacaa gtacctcgga cccttcaacg gactcgacaa 1020
gęigęgagccc gtcaacgcgg cggacgcagc ggccctcgag cacgacaaag cctacgacca 1080
gcagctcaaa gcgggtgaca atccgtacct gcggtataat cacgccgacg ccgagtttca 1140
ggagcgtctg caagaagata cgtcttttgg gggcaacctc gggcgagcag tcttccaggc 1200
caagaagcgg gttctcgaac ctctcggtct ggttgaggaa ggcgctaaga cggctcctgg 1260
aaagaagaga ccggtagagc agtcgccaca agagccagac tcctcctcgg gcatcggcaa 1320
gacaggccag cagcccgcta aaaagagacć caattttggt cagactggcg actcagagtc 1380
agtccccgac ccacaacctc tcggagaacc tccagcagcc ccctcaggtc tgggacctaa 1440
tacaatggct tcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt 1500
gggtaattcc tcgggaaatt ggcattgcga ttccacatgg ctgggggaca gagtcatcac 1560
caccagcacc cgaacctggg ccctgcccac ctacaacaac cacctctaca agcaaatctc 1620
caacggcacc tcgggagg^a gcaccaacga caacacctat tttggctaca gcaccccctg 1680
ggggtatttt gacttcaaca gattccactg tcacttttca ccacgtgact ggcaacgact 1740
catcaacaac aattggggat tccggcccaa aagactcaac ttcaagctgt tcaacatcca 1800
ggtcaaggaa gtcacgacga acgaaggcac caagaccatc gccaataatc tcaccagcac 1860
cgtgcgggtc tttacggact cggagtacca gttaccgtac gtgctaggat ccgctcacca 1920
gggatgtctg cctccgttcc cggcggacgt cttcatggtt cctcagtacg gctatttaac 1930
tttaaacaat ggaagccaag ccctgggacg ttcctccttc tactgtctgg agtatttccc 2040
atcgcagatg ctgagaaccg gcaacaactt tcagttcagc tacaccttcg aggacgtgcc 2100
tttccacagc agctacgcgc acagccagag cctggacagg ctgatgaatc ccctcatcga 2160
ccagtacctg tactacctgg tcagaacgca aacgactgga actggaggga cgcagactct 2220
122
PL 221 877 B1 gacattcagc caagcgggtc ccagctcaat ggccaaccag gctagaaatt gggtgcccgg 2280 accttgctac cggcagcagc acgtctccac gacaaccaac cagagcaaca acagcaactt 2340 tgcctggscg ggagctgcca agtttaagct gaacggccga gactctctaa tgaatccggg 2400 cgtggcaatg gcttcccaca aggatgacga cgaccgcttc ttcccttcga gcggggtcct 2460 gatttttggc aagcaaggag ccgggaacga tggagtggat tacagccasg tgctgattac 2520 agatgaggaa gaaatcaagg ctaccaaccc cgfcgaccaca gaagaatatg gagcagtggc 2580 catcaacaac caggccgcca atacgcaggc gcagaccgga ctcgtgcaca accagggggt 2640 gattcccggc atggtgtggc agaatagaga cgtgtacctg cagggtccca tctgggccaa 2700 aattcctcac acggacggca actttcaccc gtctcccctg atgggcggct ttggactgaa 2760
gcacccgcct cctcaaattc tcatcaagaa cacaccggtt ccagcggacc cgccgcttac 2820
cttcaaccag gccaagctga actctttcat cacgcagtac agcaccggac aggtcagcgt 2S80
ggaaatcgag tgggagctgc agaaagaaaa cagcaaacgc eggaatccag agattcaata 2940
cacttccaac tactacaaat ctacaaatgt ggactttgct gtcaacacgg aaggagttta 3000
tagcgagcct cgccccattg gcacccgtta cctcacccgc aacctgtaat tacatgttaa 3060
ecaataaacc ggttaattcg tttcagttga actttggtct ctgcgaaggg cgaattc 3117
<21Q> 44 <211> 3121
<212> DNA <213> 43.23
<400> 44 gaattcgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag aactttccct tcaacgattg 60
cgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga gggcaagatg acggccaagg tcgtggagtc 120
cgccaaggcc attctcggcg gcagcaaggt gcgtgtggac caaaagtgca agfccttccgc 1.80
ccagatcgat cccacccccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 240
cgggaacagc accaccttcg agcaccagca gccgttgcag gaccggatgt tcaaatttga 300
actcacccgc cgtctggagc atgactttgg caaggtgacg aagcaggaag tcaaagagtt 3S0
cttccgctgg gcgcaggatc acgtgaccga ggtggcgcat gagttccacg tcagaaaggg 420
tggcgccaac aagagacccg cccccgatga cgcggatata agcgagccca agcgggcctg 480
cccctcagtc gcggatccat cgacgtcaga cgcggaagga gctccggtgg actttgccga 540
caggtaccaa aacaaatgtt ctcgtcacgc gggcatgctt cagatgctgt ttccctgcaa 600
gacatgcgag agaatgaatc agaatttcaa catttgcttc acgcacggga ccagagactg 660
ttcagaatgt ttccccggcg tgtcagaatc tcaaccggtc gtcagaaaga ggacgtatcg 720
gaaactctgt gcgattcatc atctgctggg gcgggctccc gagattgctt gctcggcctg 780
PL 221 877 B1
123
cgatctggtc aacgtggacc tggatgactg tgtttctgag caataaatga cttaaaccag 040
gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga caacctctct gagggcattc 900
gcgagtagtg ggacttgaaa cctggagccc cgaaacccaa agccaaccag caaaagcagg 960
acgacggccg gggtctggtg cttcctggct acaagtacct cggacccttc aacggactcg 1020
acaaggggga gcccgtcaac gcggcggacg cagcggccct cgagcacgac aaagcctacg 1080
accagcagct caaagcgggt gacaatccgt acctgcggta taatcacgcc gacgccgagt 1140
ttcaggagcg tctgcaagaa gatacgtcct ttgggggcaa cctcgggcga gcagtcttcc 1200
aggccaagaa gcgggttctc gaacctctcg gtctggttga ggaaggcgct aagacggctc 1260
ctggaaagaa gagaccggta gagcagtcgc cacaagagcc agactcctcc tcgggcatcg 1320
gcaagacagg ccagcagccc gctaaaaaga gactcaattt tggtcagact ggcgactcag 1380
agtcagtccc cgacccacaa cctctcggag aacctccagc agccccctca ggtctgggac 1440
ctaatacaat ggcttcaggc ggtggcgctc caatggcaga caataacgaa ggcgccgacg 1500
gagtgggtaa ttcctcggga aattggcatt gcgattccac atggctgggg gacagagtca 1560
tcaccaccag cacccgaacc tgggccctgc ccacctacaa caaccacctc tacaagcaaa 1620
tctccaacgg cacctcggga ggaagcacca acgacaacac ctattttggc tacagcaccc 1630
cctgggggta ttttgacttc aacagattcc actgtcactt ttcaccacgt gactggcaac 1740
gactcatcaa caacaattgg ggattccggc ccaaaagact caacttcaag ctgttcaaca 1800
tccaggtcaa ggaagtcacg acgaacgaag gcaccaagac catcgccaat aatctcacca 1860
gcaccgtgca ggtctttacg gacttggagt accagttacc gtacgtgcta ggatccgctc 1920
accagggatg tctgcctccg ttcccggcgg acgtcttcat ggttcctcag tacggctatt 1980
taactttaaa caatggaagc caagccctgg gacgttcctc cttctactgt ctggagtatt 2040
tcccatcgca gacgccgaga accggcaaca actttcagtt cagctacacc ttcgaggacg 2100
tgcctttcca cagcagctac gcgcacagcc agagcctgga caggctgatg aatcccctca 2160
tcgaccagta cctgtactac ctggtcagaa cgcaaacgac tggaactgga gggacgcaga 2220
ctctggcatt cagccaagcg ggtcctagct caatggccaa ccaggctaga aattgggtgc 2230
ccggaccttg ctaccggcag cagcgcgtct ccacgacaac caaccagaac aacaacagca 2340
actttgcctg gacgggagct gccaagtfcta agctgaacgg ccgagactct ctaatgaatc 2400
cgggcgtggc aatggcttcc cacaaggatg acgacgaccg cttcttccct tcgagcgggg 2460
tcctgatttt tggcaagcaa ggagccggga acgatggagt ggattacagc caagtgctga 2520
ttacagatga ggaagaaatc aaggctacca accccgtggc cacagaagaa tatggagcag 2580
tggccatcaa caaccaggcc gccaatacgc aggcgcagac cggactcgtg cacaaccagg 2640
gggtgattcc cggcatggtg tggcagaata gagacgtgta cctgcagggt cccatctggg 2700
124
PL 221 877 B1
ccaaaactcc tcacacggac ggcaactttc acccgtctcc cctgatgggc ggctttggac 2760
tgaagcaccc gcctcctcaa attctcatca agaacacacc ggttccagcg aacccgccgc 2820
ttaccttcaa ccaggccaag ctgaactctt tcatcacgca gtacagcacc ggacaggtca 2830
gcgtggaaat cgagtgggag ctgcagaaag aaaacagcaa acgctggaat ccagagattc 2940
aatacacttc caactactac aaatctacaa atgtggactt tgctgtcaac acggaaggag 3000
tttatagcga gcctcgcccc attggcaccc gttacctcac ccgcaacctg taattacatg 3060
ttaatcaata aaccggttaa ttcgtttcag ttgaaetttg gtctctgcga agggcgaatt 3120
C 3121 <210> 45 <211> 3122
<212> DNA <213> 43. 25
<400> 45 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgtgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg leo
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag catgactttg gcaaggtgac gaagcaggaa gtcaaagggt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttccac gtgcgagccc 420
aagcgggcct gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag accagaaagg gtggagccaa 480
caagagaccc gcccccgatg aegeggatat aagcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgcgattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa aectggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaagcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataatcacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
PL 221 877 B1
125
cctggaaaga agagaccggt agagcagtcg ccacaagagc cagactcctc Ctcgggcatc 1320
ggcaacacag gccagcagcc cgctaaaaag agactcaatt ttggtcagac tggcgactca 1380
gagtcagtcc ccgacccaca acctctcgga gaacctccag cagccccctc aggtctggga 1440
cctaatacaa tggcttcagg cggtggcgct ccaatggcag acaataacga aggcgccgac 1500
ggagtgggta attcctcggg aaattggcat tgcgattcca catggctggg ggacagagtc 1560
atcaccacca gcacccgaac ctgggccctg cccacctaca acaaccacct ctacaagcaa 1620
atctccaacg gcacctcggg aggaagcacc aacgacaaca cctattttgg ctacagcacc 1680
ccctgggggt attttgactt caacagattc cactgtcact tttcaccacg tgactggcaa 1740
cgactcatca acaacaattg gggattccgg cccaaaagac tcaacttcaa gctgttcaac 1800
atccaggtca aggaagtcac gacgaacgaa ggcaccaaga ccatcgccaa taatctcacc 1860
agcaccgtgc aggtctttac ggactcggag taccagttac cgtacgtgct aggatccgct 1920
caccagggat gtctgcctcc gttcccggcg gacgtcttca tggttcctca gtacggctat 1980
ttaactttaa acaatggaag ccaagccctg ggacgttcct ccttctactg tctggagtat 2040
ttcccatcgc agatgctgag aaccggcaac aactttcagt tcagctacac cttcgaggac 2100
gtgcctttcc acagcagcta cgcgcacagc cagagcctgg acaggctgat gaatcccctc 2160
atcgaccagt acetgtacta cctggtcaga acgcaaacga ctggaactgg agggacgcag 2220
actctggcat tcagccaagc gggtcctagc tcaatggcca accaggctag aaattgggtg 2280
cccggacctt gctaccggca gcagcgcgtc tccacgacaa ccaaccagaa caacaacagc 2340
aactttgcct ggacgggagc tgccaagttt aagctgaacg gccgagactc tctaatgaat 2400
ccgggcgtgg caatggcttc ccacaaggat gacgacgacc gcttcttccc ttcgagcggg 2460
gtcctgattt ttggcaagca aggagccggg aacgatggag tggattacag ccaagtgctg 2520
attacagatg aggaagaaat caaggctacc aaccccgtgg ccacagaaga atatggagea 2580
gtggccatca acaaccaggc cgccaatacg caggcgcaga ccggactcgt gcacaaccag 2640
ggggtgattc ccggcatggt gtggcagaat agagacgtgt acctgcaggg tcccatctgg 2700
gccaaaattc ctcacacgga cggcaacttt cacccgtctc ccctgatggg cggctttgga 2760
ctgaagcacc cgcctcctca aatteteate aagaacacac cggttccagc ggacccgccg 2820
cttaccttca accaggccaa gctgaactct ttcatcacgc agtacagcac cggacaggtc 2880
agcgtggaaa tcgagtggga gctgcagaaa gaaaacagca aacgctggaa tccagagatt 2 94 0
caatacactt ccaactacta caaatctaca aatgtggact ttgctgtcaa cacggagggg 3000
gtttatagcg agcctcgccc cattggcacc cgttacctca cccgcaacct gtaattacat 3060
gttaatcaat aaaccggtta attcgtttca gttgaacttt ggtctctgcg aagggcgaat 3120
tc 3122
126
PL 221 877 B1 <21O> 46 <211» 3128 <212> DNA <213> 44.1 <400> 46
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatgttgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaaag tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagccgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgcg ggaccggatg ttcaagtttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacaactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcagagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacatgaccg aggtggcgca cgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct teagatgetg tttccctgca 600
aaacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aagacgtatc 720
ggaaact ctg tgcgattcat catctgctgg ggcgggcacc egagattget Łgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctagatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgaggacatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacetgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg ageagtette 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga aaggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacttc gggaggaagc aecaacgaca acacctactt cggctacagc 1630
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
PL 221 877 B1
127
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tacctgactc tgaacaatgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt c t caaatgct gaga acgggc aacaactttg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2280
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacccac aaggacgacg aagagcgatt 2400
ttgcctggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg ttttccgtcc 2460
agcggagtct taatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaattaaa accaccaacc cagtggccac ggaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacgga aactttcatc cctcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agctaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaaa acagcaaacg ctggaaccca 2940
gagattcaat acacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggacttcgc tgttaacaca 3000
gatggcactt attctgagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taatctgtaa 3060
ttgctcgtta atcaataaac cggttgattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattc 3128 <210? 47 <211? 3128
<212 > DNA <213> 44.5
<400> 47 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaaag tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaagtttg 300
128
PL 221 877 B1
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcagagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca cgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 4S0
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
aaacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt tgtcagaaaa aagacgtatc 720
ggaaactctg tgcgattcat catctgctgg ggcgggcacc cgagattgct tgctcggcct 760
gcgatctggt caacgtggac ctagatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 500
cgcgagtggt gggacttgaa aectggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1250
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 13 2 0
atcggcaaga aaggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacttc gggaggaagc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gacccaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1930
tacctgactc tgaacaatgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2280
PL 221 877 B1
129
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcctggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacccac aaggacgacg aagagcgatt ttttccgtcc 2460
agcggagtct taatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaattaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacgga aactttcatc cctcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agctaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaaa acagcaaacg ctggaaccca 2940
gagattcaat acacttccaa ctactacaaą tctacaaatg tggactttgc tgttaacaca 3000
gatggcactt attctgagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taatctgtaa 3060
ttgcttgtta atcaataaac cggttgattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattc 3128 <210> 48 <211> 1833
<212> DNA <213? nowy serotyp AAV, klon 223.10
<220> <221> cecha dowolna <222> (1302) . . (1302) <22 3 > może być a, c. g lub t
<400> 48 caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
agcagtcttc caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc 180
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
130
PL 221 877 B1
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag ' gtcacgacga atgacggtgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 700
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gttcatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacag gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 10SC
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatctaaat gnaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1SS0
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagt ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gagtgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
gtacacctcc aactttgaca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1920
ctactctgag cct 1933
<210> 49 <211> 1933 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 223 . 2
<400> 49 caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggagt gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
agcagtcttc caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc 180
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg < gcgactcaga 300
gtcagtcccc < gaccctcaac caatcggaga accaccagca < ggcccctctg gtctgggatc 360
PL 221 877 B1
131
tggtacaatg gttgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggtgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gttcatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttctccc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacgccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagt ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gagtgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
gtacacctcc aactttgaca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1920
ttactctgag cct 1933
<210> SO <211> 1933 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 223.4 <400> 50 caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc £0 cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
132
PL 221 877 B1
agcagtcttc caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt : ggtctggttg agacgccagc 180
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gccagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca cggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg SOO
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact S60
iatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggcgt cacaaccatc gctaataacc ttacdagcac 780
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gttcatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctgggccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca Sgaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggaccggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa egcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagt ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gaafegggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
gtacacctcc aactttgaca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1920
ttactctgag cct 1933
<210> 51 <211? 1933
PL 221 877 B1
133 <212? DNA <213? nowy serotyp AAV, klon 223.5 <400? 51
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc SO
cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 12 G
agcagtcttc caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc 180
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gccagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca cggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggcgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gttcatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttcccagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctgggccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagt ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gaatgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
134
PL 221 877 B1
gtacacctcc ttactctgag aactttgaca ' cct : aacagactgg agtggacttt : gctgttgaca i gccagggtgt 1920 1933
<210» 52 <211» 1933 <212= DNA <213» nowy serotyp AAV, klon 223.S <400= 52 caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 12 0
agcagtcttc caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc iao
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aatagcgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg SOO
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggtgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gttcatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca SSaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
PL 221 877 B1
135
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagc ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gagtgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
gtacacctcc aactttgaca 3.3.C3.CJ 3.C tęjCf agtggacttt gctgttgaca gceagggtgt 1920
ttactctgag cct 1933
<210> 53 <211> 1933
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 22; 1.7
<400> 53 caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 12 0
agcagtcttc caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc 130
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 3S0
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggcgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggacc cggaatatca actgccgtac gtcctcggct cegcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gfctcatgatfc ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 96 0
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 114 0
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 12S0
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320
136
PL 221 877 B1
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa . cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agtt ctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa aagcagcaac gaagaaattc ttgcaggcgg gtcctaccaa ctagcaccgc cccggtagct agcccagaca accgaggaat caagttgtta acgggattgt acaaccaggg 1500 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1520
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1630
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaaga ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gagtgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
gtacacctcc aactttgaca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1320
ttactctgag cct 1933
<210> 54 <211» 3123 <212» DNA <213» nowy serotyp AAV, klon A3 , 4
<400» Ξ4 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga aaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggaaagat gaccgccaag gtcgtggaat 120
ctgccaaagc cattctgggt ggaagcaagg ttcgtgtgga ccagaaatgc aagtcttcgg iao
cccagatcga cccgactccg gtgattgtca cctctaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acggaaactc gaccaccttc gagcaccagc agccgttgca agaccggatg ttcaaatttg 300
aacttacccg ccgtttggat catgactttg ggaaggtcac caagcaggaa gtcaaagact 360
ttttccggtg ggctcaagat cacgtgactg aggtggagca tgagttctac gtcaaaaagg 420
gtggagccaa gaaaaggccc gcccccgatg atgtatatat aaatgagccc aagcgggcgc 430
gcgagtcagt tgcgcagcca tcgacgtcag acgcggaagc ttcgataaac tacgcgggca 540
ggtaccaaaa caaatgttct cgtcacgtgg gcatgaatct gatgctgttt ccctgtcgac 600
aatgcgaaag aatgaatcag aattcaaata tctgcttcac acacgggcaa aaagactgtt 660
tggaatgctt tcccgtgtca gaatctcaac ccgtttctgt cgtcagaaaa acgtatcaga 720
aactttgtta cattcatcat atcatgggaa aagaaccaga cgcctgcact gcctgcgacc 780
tggtaaatgt ggacttggat gactgtattt ctgagcaata aatgacttaa atcaggtatg 840
gctgctgacg gttatcttcc agattggctc gaggacactc tctctgaagg aatcagacag 900
tggtggaagc tcaaacctgg cccaccaccg ccgaaaccta accaacaaca ccgggacgac 960
agtaggggtc ttgtgcttcc tgggtacaag tacctcggac ccttcaacgg actcgacaaa 1020
ggagagccgg tcaacgaggc agacgccgcg gccctcgagc acgacaaagc ctacgaccac 1080
PL 221 877 B1
137
cagctcaagc aaggggacaa cccgtacctc aaatacaacc acgcggacgc tgaatttcag 1140
gagcgtcttc aagaagatac gtctttcggg ggcaacctcg ggcgagcagt cttccaggcc 1200
aaaaagaggg tactcgagcc tcttggtctg 9ttgaggaag ctgttaagac ggctcctgga 1260
aaaaagagac ctatagagca gtctcctgca gaaccggact cttcctcggg catcggcgaa 1320
tcaggccagc agcccgctaa gaaaagactc aattttggtc agactggcga cacagagtca 1390
gtcccagacc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcagccc cctctggtgt gggatctaat 1440
acaatggctt caggcggtgg ggcaccaatg gcagacgata acgaaggcgc cgacggagtg 1500
ggtaattcct cgggaaattg gcattgcgat tccacatgga tgggcgacag agttatcacc 1560
accagcacaa gaacctgggc cctccccacc tacaataatc acctctacaa gcaaatctcc 1620
agcgaatcgg gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 1680
tttgacttta acagattcca ctgtcacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 1740
aacaactggg gatttagacc caagaaactc aatttcaagc tcttcaacat ccaagtcaag 1800
gaggtcacgc agaatgatgg aaccacgacc atcgccaata accttaccag cacggtgcag 1860
gtcttcacag actctgagta ccagctgccc tacgtcctcg gttcggctca ccagggctgc 1920
cttccgccgt tcccagcaga cgtcttcatg attcctcagt acggctactt gactctgaac 1980
aatggcagcc aagcggtagg acgttcttca ttctactgtc tagagtattt tccctctcag 2040
atgctgagga cgggaaacaa cttcaccttc agctacactt ttgaagacgt gcctttccac 2100
agcagctacg cgcacagcca gagtctggat cggctgatga atcctctcat tgaccagtac 2160
ctgtattacc tgagcaaaac tcagggtaca agtggaacaa cgcagcaatc gagactgcag 2220
ttcagccaag ctgggcctag ctccatggct cagcaggcca aaaactggct accgggaccc 2280
agctaccgac agcagcgaat gtctaagacg gctaatgaca acaacaacag tgaatttgct 2340
tggactgcag ccaccaaata ttacctgaat ggaagaaatt ctctggtcaa tcccgggccc 2400
ccaatggcca gtcacaagga cgatgaggaa aagtatttcc ccatgcacgg aaatctcatc 2460
tttggaaaac aaggcacagg aactaccaat gtggacattg aatcagtgct tattacagac 2S20
gaagaagaaa tcagaacaac taatcctgtg gctacagaac aatacggaca ggttgccacc 2530
aaccatcaga gtcaggacac cacagcttcc tatggaagtg tggacagcca gggaatctta 2640
cctggaatgg tgtggcagga ccgcgatgtc tatcttcaag gtcccatttg ggccaaaact 2700
cctcacacgg acggacactt tcatccttct ccgctcatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
cctcctcccc agatcctgat caaaaacaca cctgtgccag cgaatcccgc gaccactttc 2820
actcctggaa agtttgcttc gttcattacc cagtattcca ccggacaggt cagcgtggaa 2880
atagagtggg agctgcagaa agaaaacagc aaacgctgga acccagaaat tcagtacacc 2940
tccaactaca acaagtcggt gaatgtggag tttaccgtgg acgcaaacgg tgtttattct 3000
gaaccccgcc ctattggcac tcgttacctt acccggaact tgtaatttcc tgttaatgaa 3060
138
PL 221 877 B1 taaaccgatt tatgcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttcgcggccg 3120 eta 3123 <210? 55 <211? 3113 <212? DNA <213? nowy serotyp AAV, klon A3 .5 <400? 55
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga aaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggaaagat gaccgccaag gtcgtggaat 120
ctgccaaagc cattctgggt ggaagcaagg ttcgtgtgga ccagaaatgc aagtcttcgg 130
cccagatcga cccgactccg gtgattgtca cctctaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acggaaactc gaccaccttc gagcaccagc agccgttgca agaccggatg ttcaaatttg 300
aacttacccg ccgtttggat catgactttg gcaaggtcac caagcaggaa gtcaaagact 360
ttttccggtg ggctcaagat cacgtgactg aggtggagca tgagttctac gtcaaaaagg 420
gtggagccaa gaaaaggccc gcccccgatg atgtatatat aaatgagccc aagcgggcgc 480
gcgagtcagt tgcgcagcca tcgacgtcag acgcggaagc ttcgataaac tacgcggaca 540
ggtaccaaaa caaatgttct cgtcacgtgg gcatgaatct gatgctgttt ccctgtcgac 600
aatgcgaaag aatgaatcag aattcaaata tctgcttcac acacgggcaa aaagactgtt 660
tggaatgctt tcccgtgtca gaatctcaac ccgttcctgt cgtcagaaaa acgtatcaga 720
aactttgtta cattcatcat atcatgggaa aagtaccaga cgcctgcact gcctgcgacc 780
tggtaaatgt ggacttggat gactgtattt ctgagcaata aatgacttaa atcaggtatg 640
gctgctgacg gttatcttcc agattggctc gaggacacte tctctgaagg aatcagacag 900
tggtggaagc tcaaacctgg cccaccaccg ccgaaaccta accaacaaca ccgggacgac 960
agtaggggtc ttgtgcttcc tgggtacaag tacctcggac ccttcaacgg actcgacaaa 1020
ggagagccgg tcaacgaggc agacgccgcg gccctcgagc acgacaaagc ctacgaccac 1080
cagctcaagc aaggggacaa cccgtacctc aaatacaacc acgcggacgc tgaatttcag 1140
gagcgtcttc aagaagatac gtctttcggg ggcaacctcg ggcgagcagt cttccaggcc 1200
aaaaagaggg tactcgagcc tcttggtctg gttgaggaag ctgttaagac ggctcctgga 1260
aaaaagagac etatagagea gtctcctgca gaaccggact Gttcctcggg catcggcaaa 1320
tcaggccagc agcccgctaa gaaaagactc aattttggtc agactggcga cacagagtca 1380
gtcccagacc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcagccc cctctggtgt gggatctaat 1440
acaatggctt caggcggtgg ggcaccaatg gcagacaata acgaaggcgc cgacggagtg 1500
ggtaattcct cgggaaattg geattgegat tccacatgga tgggcgacag agttatcacc 1560
accagcacaa gaacctgggc cctccccacc tacaataatc acctctacaa gcaaatctcc 1620
PL 221 877 B1
139
agcgaatcgg gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 1690
tttgacttta acagattcca ctgtcacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaat 1740
aacaactggg gatttagacc caagaaactc aatttcaagc tcttcaacat ccaagtcaag 1300
gaggtcacgc agaatgatgg aaccacgacc atcgccaata accttaccag cacggtgcag 1860
gtcttcacag actctgagta ccagctgccc tacgtcctcg gttcggctca ccagggctgc 1920
cttccgccgt tcccagcaga cgtcttcatg attcctcagt acggctactt gactctgaac 1980
aatggcagcc aagcggtagg acgttcttca ttctactgtc tagagtattt tccctctcag 2040
atgctgagga cgggaaacaa cttcaccttc agctacactt ttgaagacgt gcctttccac 2100
agcagctacg cgcacagcca gagtctggat cggctgatga atcctctcat tgaccagtac 2160
ctgtattacc tgagcaaaac tcagggtaca agtggaacaa cgcagcaatc gagactgcag 2220
ttcaaccaag ctgggcctag ctccatggct cagcaggcca aaaactggct accgggaccc 2280
agctaccgac agcagcgaat gtctaagacg gctaatgaca acaacaacag tgaatttgct 2340
tggactgcag ccaccaaata ttacccgaat ggaagaaatt ctctggtcaa tcccgggccc 2400
ccaatggcca gtcacaagga cgatgaggaa aagtatttcc ccatgcacgg aaatctcatc 2460
tttggaaaac aaggcacagg aactaccaat gtggacattg aatcagtgct tattacagac 2520
gaagaagaaa tcagaacgac taatcctgtg gctacagaac aatacggaca ggttgccacc 2580
aaccgtcaga gtcagaacac cacagcttcc tatggaagtg tggacagcca gggaatctta 2640
cctggaatgg tgtggcagga ccgcgatgtc tatcttcaag gtcccatttg ggccaaaact 2700
cctcacacgg acggacactt tcatccttct ccgctcatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
cctcctcccc agatcctgat caaaaacaca cctgtgccag cgaatcccgc gaccactttc 2820
actcctggaa agtttgcttc gttcattacc cagtattcca ccggacaggt cagcgtggaa 2880
atagagtggg agctgcagaa agaaaacagc aaacgctgga acccggaaat tcagtacacc 2940
tccaactaca acaagtcggt gaatgtggag tttaccgtgg acgcaaacgg tgtttattct 3000
gaaccccgcc ctattggcac tcgttacctt acccggaact tgtaatttcc tgttaatgaa 3060
taaaccgatt tatgcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttc 3113
<210> 56 <211> 3122
<212> <213> DNA now} r serotyp AAV, klon A3 .7
<400> 56
agcggccgcg aattcgccct ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgaa aactttccct 60
tcaacgattg cgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga gggaaagatg accgccaagg 120
tcgtggaatc tgccaaagcc attctgggtg gaagcaaggt tcgtgtggac cagaaatgca 180
140
PL 221 877 B1 ggtcttcggc ccagatcgac ccgactccgg tgattgtcac ctctaacacc aacatgtgcg 240 ccgtgattga cagaaactcg accaccttcg agcaccagca gccgttgcaa gaccggatgt 300 tcaaatttga acttacccgc cgtttggatc atgactttgg gaaggtcacc aagcaggaag 360 tcaaagactt tttccggtgg gctcaagatc acgtgactga ggtggagcat gagttctacg 420 tcaaaaaggg tggagccaag aaaaggcccg cccccgatga tgtatatata aatgagccca 480 agcgggcgcg cgagtcagtt gcgcagccat cgacgtcaga cgcggaagct tcgataaact 540 acgcggacag gtaccaaaac aaatgttctc gtcacgtggg catgaatctg atgctgtttc 600 cctgtcgaca atgcgaaaga atgaatcaga attcaaatat ctgcttcaca cacgggcaaa 660
aagactgttt ggaatgcttt cccgtgtcag aatctcaacc cgtttctgtc gtcagaaaaa 720
cgtatcagaa actttgttac attcatcata tcatgggaaa agtaccagac gcctgcactg 780
cctgcgacct ggtaaatgtg gacttggatg actgtatttc tgagcaataa atgacttaaa 840
tcaggtatgg ctgctgacgg ttatcttcca gattggctcg aggacactct ctctgaagga 900
atcagacagt ggtggaagct caaacctggc ccaccaccgc cgaaacctaa ccaacaacac 960
cgggacgaca gtaggggtct tgtgcttcct gggtacaagt acctcggacc cttcaacgga 1020
ctcgacaaag gagagccggt caacgaggca gacgccgcgg ccctcgagca cgacaaagcc 1080
tacgaccacc agctcaagca aggggacaac ccgtacctca aatacaacca cgcggacgct 1140
gaatttcagg agcgtcttca agaagatacg tctttcgggg gcaacctcgg gcgagcagtc 1200
ttccaggcca aaaagagggt actcgagcct cttggtctgg ttgaggaagc tgttaagacg 1260
gctcctggaa aaaagagacc tatagagcag tctcctgcag aaccggactc ttcctcgggc 1320
atcggcaaat caggccagca gcccgctaag aaaagactca attttggtca gactggcgac 1380
acagagtcag tcccagaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcagcccc ctctggtgtg 1440
ggatctaata caatggcttc aggcggtggg gcaccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtaattcctc gggaaattgg cattgcgatt ccacatggat gggcgacaga 1560
gttatcacca ccagcacaag aacctgggcc ctccccacct acaataatcg cctctacaag 1620
caaatctcca gcgaatcggg agccaccaac gacaaccact acttcggcta cagcaccccc 1680
tgggggtatt ttgactttaa cagattccac tgtcacttct caccacgtga ctggcagcga 1740
ctcatcaaca acaactgggg atttagaccc aagaaactca atttcaagct cttcaacatc 1800
caagtcaagg aggtcacgca gaatgatgga accacgacca tcgccaataa ccttaccagc 18 60
acggtgcagg tcttcacaga ctctgagtac cagctgccct acgtcctcgg ttcggctcac 1920
cagggctgcc ttccgccgtt cccagcagac gtcttcatga ttcctcagta cggctacttg 1980
actctgaaca atggcagcca agcggtagga cgttcttcat tctactgtct agagtatttt 2040
ccctctcaga tgctgaggac gggaaacaac ttcaccttca gctacacttt tgaagacgtg 2100
cctttccaca gcagctacgc gcacagccag agtctggatc ggctgafcgaa tcctctcatt 2150
PL 221 877 B1
141
gaccagtacc tgtattacct gagcaaaact cagggtacaa gtggaacaac gcagcaatcg 2220
agactgcagt tcagccaagc tgggcctagc tccatggctc agcaggccaa aaactggcta 22S0
ccgggaccca gctaccgaca gcagcgaatg tctaagacgg ctaatgacaa caacaacagt 2340
gaatttgctt ggactgcagc caccaaatat tacctgaatg gaagaaattc tctggtcaat 2400
cccgggcccc caatggccag tcacaaggac gatgaggaaa agtatttccc catgcacgga 2460
aatctcatct ttggaaaaca aggcacagga actaccaatg ŁggacaCtga atcagtgctt 2520
attacagacg aagaagaaat cagaacaact aatcctgtgg ctacagaaca atacggacag 2580
gttgccacca accatcagag tcagaacacc acagcttcct atggaagtgt ggacagccag 2640
ggaatcttac ctggaatggt gtggcaggac cgcgatgtct atcttcaagg tcccatttgg 2700
gccaaaactc ctcacacgga cggacacttt catccttctc cgctcatggg aggctttgga 2760
ctgaaacacc ctcctcccca gatcctgatc aaaaacacac ctgtgccagc gaatcccgcg 2820
accactttca ctcctggaaa gtttgcttcg ttcattaccc agtattccac cggacaggtc 2380
agcgtggaaa tagagtggga gctgcagaaa gaaaacagca aacgctggaa cccagaaatt 2940
cagtacacct ccaactacaa caagtcggtg aatgtggagt ttaccgtgga cgcaaacggt 3000
gtttattctg aaccccgccc tattggcact cgttacctta cccggaactt gtaatttcct 3060
gttaatgaat aaaccgattt atgcgtttca gttgaacttt ggtctctgcg aagggcgaat 3120
tc 3122 <210> 57 <211? 3123
<212 > DNA
<213 > nowy serotyp AAV, klon A3. ,3
<400> 57 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga aaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggaaagat gaccgccaag gtcgtggaat 120
ctgccaaagc cattctgggt ggaggcaagg ttcgtgtgga ccagaaatgc aagtcttcgg 180
cccagatcga cccgactccg gtgattgtca cctctaacac caacatgtgc gccgtgattg 24 0
acggaaactc gaccaccttc gagcaccagc agccgttgca agaccggatg ttcaaatttg 300
aacttacccg ccgtttggat catgactttg ggaaggtcac caagcaggaa gtcaaagact 360
ttttccggtg ggctcaagat cacgtgactg aggtggagca tgagttctac gtcaaaaagg 42 0
gtggagccaa gaaaaggccc gcccccgatg atgtatatat aaatgagccc aagcgggcgc 480
gcgagtcagt tgcgcagcca tcgacgtcag acgcggaagc ttcgataaac tacgcggaca 540
ggtaccaaaa caaatgttct cgtcacgtgg gcatgaatct gatgctgttt ccctgtcgac 600
aatgcgaaag aatgaatcag aattcaaata tctgcttcac acacgggcaa aaagactgtt 660
142
PL 221 877 B1
tggaatgctt tcccgtgtca gaatctcaac ccgcttctgt cgtcagaaaa acgtatcaga 720
aactttgtta cattcatcat atcatgggaa aagtaccaga cgcctgcact gcctgcgacc 780
tggtaaatgt ggacttggat gactgtattt ctgagcaata aatgacttaa atcaggtatg 840
gctgctgacg gttatcttcc agattggctc gaggacacte tctctgaagg aatcagacag 900
tggtggaagc tcaaacctgg cccaccaccg ccgaaaccta accaacaaca ccgggacgac 960
agtaggggtc ttgtgcttcc tgggtacaag tacctcggac ccttcaacgg actcgacaaa 1020
ggagagccgg tcaacgaggc agacgccgcg gccctcgagc acgacaaagc ctacgaccac 1030
cagctcaagc aaggggacaa cccgtacctc aaatacaacc acgcggacgc tgaatttcag 1140
gagcgtcttc aagaagatac gtctttcggg ggcaacctcg ggcgagcagt cttccaggcc 1200
aaaaagaggg tactcgagcc tcttggtctg gttgaggaag ctgttaagac ggctcctgga 1260
aaaaagagac etatagagea gtctcctgca gaaccggact cttcctcggg catcggcaaa 1320
tcaggccagc agcccgctaa gaaaagactc aattttggtc agactggcga cacagagtca 1380
gtcccaggcc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcagccc cctctggtgt gggatctaat 1440
acaatggctt caggcggtgg ggcaccaatg gcagacaata acgaaggcgc cgacggagtg 1500
ggtaattcct cgggaaattg geattgegat tccacatgga tgggcgacag agttatcacc 1560
accagcacaa gaacctgggc cctccccacc tacaataatc acctctacaa gcaaatctcc 1620
agcgaatcgg gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 1680
tttgacttta acagattcca ctgtcacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 1740
aacaactggg gatttagacc caagaaactc aatttcaagc tcttcaacat ccaagtcaag 1800
gaggtcacgc agaatgatgg aaccacgacc atcgccaata accttaccag cgcggtgcag 1860
gtcttcacag actctgagta ccagctgccc tacgtcctcg gttcggctca ccagggctgc 1920
cttccgccgt tcccagcaga cgtcttcatg attcctcagt aeggetaett gactctgaac 1980
aatggcagcc aagcggtagg acgttcttca ttctactgcc tagagtattt tccctctcag 2040
atgctgagga cgggaaacaa cttcaccttc agctacactt ttgaagacgt gcctttccac 2100
agcagctacg cgcacagcca gagtctggat cggctgatga atcctctcat tgaccagtac 2160
ctgtattacc tgagcaaaac tcagggtaca agtggaacaa cgcagcaatc gagactgcag 2220
ttcagccaag ctgggcctag ctccatggct cagcaggcca aaaactggct accgggaccc 2280
agctaccgac agcagcgaat gtctaagacg gctaatgaca acaacaacag tgaatttgct 2340
tggactgcag ccaccaaata ttacctgaat ggaagaaatt ctctggtcaa tcccgggccc 2400
ccagtggcca gtcacaagga cgatgaggaa aagtatttcc ccatgcacgg aaateteate 2460
tttggaaaac aaggcacagg aactaccaat gtggacattg aatcagtgct tattacagac 2520
gaagaagaaa tcagaacaac taatcctgtg gctacagaac aatacggaca ggttgccacc 2580
aaccatcaga gtcagaacac cacagcttcc tatggaagtg tggacagcca gggaatctta 2640
PL 221 877 B1
143
cctggaatgg tgtggcagga ccgcgatgtc tatcttcaag gtcccatttg ggccaaaact 2700
cctcacacgg acggacactt tcatccttct ccgctcatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
cctcctcccc agatcctgat caaaaacaca cctgtgccag cgaatcccgc gaccactttc 2820
actcctggaa agtttgcttc gttcattacc cagtattcca cctgacaggt cagcgtggaa 2880
atagagtggg agctgcagaa agaaaacagc aaacgctgga acccagaaat tcagtacacc 2940
tccaactaca acaagtcggt gaatgtggag tttaccgtgg acgcaaacgg tgtttattct 3000
gaaccccgcc ctattggcac tcgttacctt acccggaact tgtaatttcc tgttaatgaa 3060
taagccgatt tatgcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttcgtttaaa 3120
CCt 3123 <210» 58 <211» 2969
<212» DNA <213» 42.12 <400» 58 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 12 0
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 3 60
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatc 900
cgcgagtggt gggacttgaa aectggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaagggag agccggtcaa cgaggcagac gccgcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gacaagcagc tcgagcaggg ggacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgccgag 1140
144
PL 221 877 B1
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1250
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtgac gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tacctgactc tgaacaacgg cagtcaggcc Gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gacgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctcgcc cggacccaga gcactacggg gtccacaagg 2220
gggctgcagt tccatcaggc tgggcccaac accatggccg agcaatcaaa gaactggctg 2280
cccggaccct gttatcggca gcagagactg tcaaaaaaca tagacagcaa caacaacagt 2340
aactttgcct ggaccggggc cactaaatac catctgaatg gtagaaattc attaaccaac 2400
ccgggcgtag ccatggccac caacaaggac gacgaggacc agttctttcc catcaacgga 2460
gtgctggttt ttggcaaaac gggggctgcc aacaagacaa cgctggaaaa cgtgctaatg 2520
accagcgagg aggagatcaa aaccaccaat cccgtggcta cagaagaata cggtgtggtc 2580
tccagcaacc tgcaatcgtc tacggccgga ccccagacac agactgtcaa cagccagggg 2640
gctctgcccg gcatggtctg gcagaaccgg gacgtgtacc tgcagggtcc catctgggcc 2700
aaaattcctc acacggacgg caactttcac ccgtctcccc tgatgggcgg atttggactc 2750
aaacacccgc ctcctcaaat tctcatcaag tatacttcca actactacaa atctacaaat 2820
gtggactttg ctgtcaatac tgagggtact tattcagagc ctcgccccat tggcacccgt 2880
tacctcaccc gtaacctgta attgcctgtt aatcaataaa ccggttaatt cgtttcagtt 2940
gaactttggt ctctgcgaag ggcgaattc 2969
<210> 59 <211» 3129
PL 221 877 B1
145 <212> DNA <213> 44.2 <400> 59
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaaag tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 130
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaagtttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcagagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca cgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 460
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct teagatgetg tttccctgca 600
aaacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aagacgtatc 720
ggaaactctg tgcgattcat catctgctgg gggcgggcac ccgagattgc ttgctcggcc 780
tgcgatctgg tcaacgtgga cctagatgac tgtgtttctg agcaataaat gacttaaacc 340
aggtatggct gccgatggtt atcttccaga ttggctcgag gacaacctct ctgagggcat 900
tcgcgagtgg tgggacttga aacctggagc cccgaaaccc aaagccaacc agcaaaagca 960
ggacgacggc cggggtctgg tgcttcctgg ctacaagtac ctcggaccct tcaacggact 1020
cgacaagggg gagcccgtca acgcggcgga cgcagcggcc ctcgagcacg acaaggccta 10B0
cgaccagcag ctcaaagcgg gtgacaatcc gtacctgcgg tataaccacg ccgacgcega 1140
gtttcaggag cgtctgcaag aagatacgtc ttttgggggc aacctcgggc gageagtett 1200
ccaggccaag aagcgggttc tcgaacctct cggtctggtt gaggaaggcg ctaagacggc 1260
tcctggaaag aagagaccgg tagagccatc accccagcgt tctccagact cctctacggg 1320
catcggcaag aaaggccagc agcccgcgaa aaagagactc aactttgggc agactggcga 1360
ctcagagtca gtgcccgacc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcaggcc cctctggtct 1440
gggatctggt acaatggctg caggcggtgg cgctccaatg gcagacaata acgaaggcgc 1500
cgacggagtg ggtagttcct caggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgacag 1560
agtcatcacc accagcaccc gaacctgggc cctccccacc tacaacaacc acctctacaa 1620
gcaaatctcc aacgggactt cgggaggaag caccaacgac aacacctact tcggctacag 1680
caccccctgg gggtattttg actttaacag attccactgc cacttctcac cacgtgactg 1740
gcagcgactc atcaacaaca actggggatt ccggcccaag agactcaact tcaagctctt 1800
caacatccag gtcaaggagg tcacgcagaa tgaaggcacc aagaccatcg ccaataacct 1860
146
PL 221 877 B1
taccagcacg attcaggtct ttacggactc ggaataccag ctcccgtacg tcctcggctc 1920
tgcgcaccag ggctgcctgc ctccgttccc ggcggacgtc ttcatgattc ctcagtacgg 1980
gtaectgact ctgaacaatg gcagtcaggc cgtgggccgt tcctccttct actgcctgga 2040
gtactttcct tctcaaatgc tgagaacggg caacaacttt gagttcagct accagtttga 2100
ggacgtgcct tttcacagca gctacgcgca cagccaaagc ctggaccggc tgatgaaccc 2160
cctcatcgac cagtacctgt actacctgtc tcggactcag tccacgggag gtaccgcagg 2220
aactcagcag ttgctatttt ctcaggccgg gcctaataac atgtcggctc aggccaaaaa 2280
ctggctaccc gggccctgct accggcagca acgcgtctcc acgacactgt cgcaaaataa 2340
caacagcaac tttgcctgga ccggtgccac caagtatcat ctgaatggca gagactctct 2400
ggtaaatccc ggtgtcgcta tggcaaccca caaggacgac gaagagcgat tttttccgtc 2460
cagcggagtc ttaatgtttg ggaaacaggg agctggaaaa gacaacgtgg actatagcag 2520
cgttatgcta accagtgagg aagaaattaa aaccaccaac ccagtggcca cagaacagta 2580
cggcgtggtg gccgataacc tgcaacagca aaacgccgcfc cctattgtag gggccgtcaa 2640
cagtcaagga gccttacctg gcatggtctg gcagaaccgg gacgtgtacc tgcagggtcc 2700
tatctgggcc aagattcctc acacggacgg aaactttcat ccctcgccgc tgatgggagg 2760
ctttggactg aaacacccgc ctcctcagat cctgattaag aatacacctg ttcccgcgga 2820
tcctccaact accttcagtc aagctaagct ggcgtcgttc atcacgcagt acagcaccgg 2880
acaggtcagc gtggaaattg aatgggagct gcagaaagaa aacagcaaac gctggaaccc 2940
agagattcaa tacacttcca actactacaa atctacaaat gtggactttg ctgttaacac 3000
agatggcact tattctgagc ctcgccccat cggcacccgt tacctcaccc gtaatctgta 3060
attgcttgtt aatcaataaa ccggttgatt cgtttcagtt gaactttggt ggcgaattc <21O> 60 <211» 733 <212> PRT <213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon C1VP1 <400> 60 ctctgcgaag 3120 312 9
Met Ala Ala 1 Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn 5 10 Leu Ser 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro 20 25 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val 40 45 Leu Pro
PL 221 877 B1
147
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 SO
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 ........
Pro Leu Glu Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly Lys 145 ISO 155 160
Lys Gly Lys Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Glu Glu Asp Thr 165 170 175
Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Asp Thr Ser Ala Met Ser 180 135 190
Ser Asp Ile Glu Met Arg Ala Ala Pro Gly Gly Asn Ala Val Asp Ala 195 200 205
Gly Gin Gly Ser Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys 210 215 220
Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly Lys Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr 225 230 235 240
Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Leu Arg Leu Gly Thr 245 250 255
Thr Ser Asn Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 260 265 270
Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin 275 280 285
Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Leu Arg Pro Lys Ala Met Arg Val 290 295 300
148
PL 221 877 B1
Lys Ile Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu
305 310 315 320
Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Ile Phe Ala Asp 325 330 335
Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gin Glu Gly Ser 340 345 350
Leu Ser Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr 355 360 365
Cys Gly Ile Val Thr Gly Glu Asn Gin Asn Gin Thr Asp Arg Asn Ala 370 375 390
Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn 335 390 395 400
Asn Phe Glu Met Ala Tyr Asn Phe Gly Lys Val Pro Phe His Ser Met 405 410 415
Tyr Ala Tyr Ser Gin Ser Pro Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Leu Asp 420 425 430
Gin Tyr Leu Trp His Leu Gin Ser Thr Thr Ser Gly Glu Thr Leu Asn 435 440 445
Gin Gly Asn Ala Ala Thr Thr Phe Gly Lys Ile Arg Ser Gly Asp Phe 450 455 460
Ala Phe Tyr Arg Lys A.sn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Val Lys Gin Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Thr Ala Ser Gin Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Ser Gly 485 490 495
Gly Asn Ala Leu Leu Lys Tyr Asp Thr His Tyr Thr Leu Asn Asn Arg SOO 505 510
Trp Ser Asn Ile Ala Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro Ser S15 520 525
Asp Gly Asp Phe Ser Asn Ala Gin Leu Ile Phe Pro Gly Pro Ser Val 530 Ξ3Ξ 540
Thr Gly Asn Thr Thr Thr Ser Ala Asn Asn Leu Leu Phe Thr Ser Glu 545 550 555 560
PL 221 877 B1
149
Glu Glu Ile Ala Ala Thr Asn Pro Arg Asp Thr Asp Met Phe Gly Gin
565 570 575
Ile Ala Asp Asn Asn 580 Gin Asn Ala Thr Thr 585 Ala Pro Ile Thr Gly 590 Asn
Val Thr Ala Met Gly 595 Val Leu Pro 500 Gly Met Val Trp Gin Asn Arg 605 Asp
Ile Tyr 610 Tyr Gin Gly Pro Ile 615 Trp Ala Lys Ile Pro His Ala Asp 620 Gly
His Phe 625 His Pro Ser Pro Leu 630 Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His 635 Pro 640
Pro Pro Gin Ile Phe 645 Ile Lys Asn Thr Pro 650 Vał Pro Ala Asn Pro 655 Ala
Thr Thr Phe Thr Ala 660 Ala Arg Val Asp Ser 665 Phe Ile Thr Gin Tyr 670 Ser
Thr Gly Gin Val Ala 675 Val Gin Ile 680 Glu Trp Glu Ile Glu Lys Glu 685 Arg
Ser Lys 690 Arg Trp Asn Pro Glu 695 Val Gin Phe Thr Ser Asn Tyr Gly 700 Asn
Gin Ser Ser Met Leu Trp Ala Pro Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Thr 705 710 715 Pro Arg Val Ile Gly Ser Arg Tyr Leu Thr Asn His Leu 725 730 <210> 61 <211> 733 <212> PAT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon C2VP1 <400> 61 Glu 720
Met Ala 1 Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg Glu 20 Trp Trp Asp Leu Lys 25 Pro Gly Ala Pro Lys 30 Leu
Lys Ala Asn Gin Gin 35 Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu 45 Pro
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe His Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
150
PL 221 877 B1
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 30
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
.Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala val Phe Gin Ala Lys Lys Arg val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 14 0
Pro Leu Glu Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly Lys 145 150 155 160
Lys Gly Lys Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Glu Glu Asp Thr 165 170 175
Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Asp Thr Ser Ala Met Ser 180 185 190
Ser Asp Ile Glu Met Arg Ala A.la Pro Gly Gly Asn Ala Val Asp Ala 195 200 205
Gly Gin Gly Ser Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys 210 215 220
Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly Lys Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr 225 230 235 240
Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Leu Arg Leu Gly Thr 245 250 255
Thr Ser Asn Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 260 265 270
Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin 275 280 285
Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Leu Arg Pro Lys Ala Met Arg Val 290 295 300
Lys Ile Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu 305 310 315 320
PL 221 877 B1
151
152
PL 221 877 B1 ile Ala Asp Asn Asn Gin. Asn Ala Thr Thr Ala Pro ile Thr Gly Asn 580 585 590
Val Thr Ala Met Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp 595 500 605
Ile Tyr Tyr Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Ala Asp Gly 610 615 620
His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro 625 630 635 640
Pro Pro Gin Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro A.la Asn Pro Ala 645 650 655
Thr Thr Phe Thr Ala Ala Arg Val Asp Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser 660 665 S70
Thr Gly Gin Val Ala Val Gin Ile Glu Trp Glu Ile Glu Lys Glu Arg 675 680 685
Ser Lys Arg Arg Asn Pro Glu Val Gin Phe Thr Ser Asn Tyr Gly Asn 690 695 700
Gin Ser Ser Met Leu Trp Ala Pro Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Thr Glu 705 710 715 720
Pro Arg Val Ile Gly Ser Arg Tyr Leu Thr Asn His Leu 725 730
<210> <211> <212> <213 > 62 733 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon C5VP1@2
<400> 62
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Glu Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
PL 221 877 B1
153
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
13 0 135 14 0
Pro Leu Glu Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly Lys
14 5 150 155 160
Lys Gly Lys Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Glu Glu Asp Thr
165 170 175
Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Asp Thr Ser Ala Met Ser
180 185 190
Ser Asp Ile Glu Met Arg Ala Ala Pro Gly Gly Asn Ala Val Asp Ala
195 200 205
Gly Gin Gly Ser Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys
210 215 22 0
Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly Lys Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr
225 230 235 240
Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Leu Arg Leu Gly Thr
245 250 255
Thr Ser Asn Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp □ly Tyr
260 265 270
Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin
275 280 285
Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Leu Arg Pro Lys Ala Met Arg Val
290 295 300
Lys Ile Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu
305 310 315 320
Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Ile Phe Ala Asp
325 330 335
154
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
155
Val Thr Ala Met Gly Val Leu. Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp 595 600 605
Ile Tyr Tyr Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Ala Asp Gly 610 615 620
His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro 625 530 635 640
Pro Pro Gin Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Tyr Pro Ala 645 550 655
Thr Thr Phe Thr Ala Ala Arg Val Asp Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser 660 665 670
Thr Gly Gin Val Ala Val Gin Ile Glu Trp Glu Ile Glu Lys Glu Arg 675 680 685
Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gin Phe Thr Ser Asn Cys Gly Asn 690 695 700
Gin Ser Ser Met Leu Trp Ala Pro Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Thr Glu 705 710 715 720
Pro Arg Val Ile Gly Ser Arg Tyr Leu Thr Asn His Leu 725 730
<210> 63
<211> 734
<212> PRT
<213> capsid protein of AAV serotype, clone AAV4VP1
<400> 63
Met Thr Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser Glu
Gly Val Arg Glu Trp Trp Ala Leu Gin Pro Gly Ala Pro Lys Pro Lys 20 25 30
Ala Asn Gin Gin His Gin Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro Gly 35 40 45
Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro Val 50 55 60
Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp Gin 65 70 75 30
Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp
156
PL 221 877 B1
90 95
Ala Glu Phe Gin Gin Arg Leu Gin Gly Asp Thr Ser Phe Gly Gly Asn 100 105 110
Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro Leu 115 120 125
Gly Leu Val Glu Gin Ala Gly Glu Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg Pro 130 135 140
Leu Ile Glu Ser Pro Gin Gin Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys 145 150 155 160
Lys Gly Lys Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Val Phe Glu Asp Glu Thr 165 170 175
Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Thr Ser Gly Ala Met Ser 180 185 190
Asp Asp Ser Glu Met Arg Ala Ala Ala Gly Gly Ala Ala Val Glu Gly 195 200 205
Gly Gin Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys 210 215 220
Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly His Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr 225 230 235 240
Trp Val Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr nys Arg Leu Gly Glu 245 250 25S
Ser Leu Gin Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 260 265 270
Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin 275 280 285
Arg Leu Ile Asn Asn A.sn Trp Gly Met Arg Pro Lys Ala Met Arg Val 290 295 300
Lys Ile Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu 305 310 315 320
Thr Thr Val A.la Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Ile Phe Ala Asp 325 330 335
Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gin Glu Gly Ser 340 345 350
PL 221 877 B1
157
Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr 3SS 360 365
Cys Gly Leu Val Thr Gly Asn Thr Ser Gin Gin Gin Thr Asp Arg Asn 370 375 380
Ala Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly 385 390 395 400
Asn Asn Phe Glu Ile Thr Tyr Ser Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser 405 410 415
Met Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile 420 425 430
Asp Gin Tyr Leu Trp Gly Leu Gin Ser Thr Thr Thr Gly Thr Thr Leu 435 440 445
Asn Ala Gly Thr Ala Thr Thr Asn Phe Thr Lys Leu Arg Pro Thr Asn 450 455 460
Phe Ser Asn Phe Lys Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Ser Ile Lys Gin 465 470 475 480
Gin Gly Phe Ser Lys Thr Ala Asn Gin Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Thr 485 490 495
Gly Ser Asp Ser Leu Ile Lys Tyr Glu Thr His Ser Thr Leu Asp Gly 500 505 510
Arg Trp Ser Ala Leu Thr Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro 515 520 525
Ala Asp Ser Lys Phe Ser Asn Ser Gin Leu Ile Phe Ala Gly Pro Lys 530 535 540
Gin Asn Gly Asn Thr Ala Thr Val Pro Gly Thr Leu Ile Phe Thr Ser 545 550 555 560
Glu Glu Glu Leu Ala Ala Thr Asn Ala Thr Asp Thr Asp Met Trp Gly 565 570 575
Asn Leu Pro Gly Gly Asp Gin Ser Asn Ser Asn Leu Pro Thr Val Asp 580 585 590
Arg Leu Thr Ala Leu Gly Ala Val Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg 595 600 605
158
PL 221 877 B1
Asp Ile SIO Tyr Tyr Gin Gly Pro Ile 615 Trp Ala Lys Ile 620 Pro His Thr Asp
Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His
625 630 63 5 640
Pro Pro Pro Gin ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro
645 650 655
Ala Thr Thr Phe Ser Ser Thr Pro Val Asn Ser Phe Ile Thr Gin Tyr
660 565 670
Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Gin Ile Asp Trp Glu Ile Gin Lys Glu
675 680 695
Arg Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gin Phe Thr Ser Asn Tyr Gly
690 695 700
Gin Gin Asn Ser Leu Leu Trp Ala Pro Asp Ala Ala Gly Lys Tyr Thr
705 710 715 720
Glu Pro Arg Ala Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr His His Leu
725 730 <210? 54 <211? 735 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu fJW, klon AAV1 <400? 64
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu A.sp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 30
Gin Gin Leu Lys Ala 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
PL 221 877 B1
159
10C
105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin 115 120
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala 130 135
Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 125
Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 140
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu 145 150
Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys 155
Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp 180
Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 185 190
Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro 195 200
Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu 210 215
Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser 225 230
Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala 245
Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 250 255
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Ala Ser 260
Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His 265 270
Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp 275 280
Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 285
His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp 290 295
Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn 300
Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu 305 310
Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin 315 320
Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp 325
Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 330 335
Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe 340
Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro 345 350
Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin 355 360
Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 365
160
PL 221 877 B1
Asp Val 370 Phe Met Ile Pro Gin 375 Tyr Gly Tyr Leu Thr 380 Leu Asn Asn Gly
Ser 385 Gin Ala Val Gly Arg 390 Ser Ser Phe Tyr Cys 395 Leu Glu Tyr Phe Pro 400
Ser Gin Met Leu Arg 405 Thr Gly Asn Asn Phe 410 Thr Phe Ser Tyr Thr 415 Phe
Glu Glu Val Pro 420 Phe His Ser Ser Tyr 425 Ala His Ser Gin Ser 430 Leu Asp
Arg Leu Met 435 Asn Pro Lau Ile Asp 440 Gin Tyr Leu Tyr Tyr 445 Leu Asn Arg
Thr Gin Asn Gin Ser Gly Ser Ala Gin Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser
450 455 460
Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gin Pro Lys Asn Trp Leu Pro 465 470 475 4S0
Glv Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn 4Θ5 490 495
Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn 500 505 510
Gly Arg Glu Ser Ile Ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala ser His Lys ’ 515 520 525
Asp Asp Glu Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly 530 535 540
Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile 545 550 555 560
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg 565 570 575
Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Phe Gin Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala 580 585 590
Thr Gly Asp Val His Ala Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin 595 600 605
Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 515 620
PL 221 877 B1
161
Thr 625 Asp Gly His Phe His 630 Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly 635 Phe Gly Leu 640
Lys Asn Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro val Pro Ala
645 650 65 5
Asn Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr
660 665 670
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin
575 680 685
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gin Tyr Thr Ser Asn
690 695 700
Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu
705 710 715 720
Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu
725 730 735 <210? 65 <211? 736 <212? PRT
<213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV6VP1
<400> 65
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin. Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
162
PL 221 877 B1
115 120 125
Phe Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
13 0 135 140
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly
145 150 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro
ISO 185 190
Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Ala Ser Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His 260 265 270
Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 275 230 285
His Cys His phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn. Asn 290 295 300
Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin 305 310 315 320
Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 325 330 335
Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro 340 345 350
Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 355 360 365
Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 370 375 380
PL 221 877 B1
163
164
PL 221 877 B1
Lys His Pro Pro Pro Gin 645 ile Leu Ile Lys 650 Asn Thr Pro Val Pro 655 Al a
Asn. Pro Pro Ala Glu Phe Ser Ala Thr Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr
660 665 670
Gin. Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin
675 680 685
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gin Tyr Thr Ser Asn
690 695 700
Tyr Ala Lys Ser Ala Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Asn Asn Gly Leu
705 710 715 720
Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu
725 730 735 <210» 66 <211» 735 <212» PRT
<213» białko kapsydu serotypu AAV, klon A3 . 3
<400» 66
Met Ala 1 Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp 5 Trp Leu 10 Glu Asp Thr Leu Ser 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu 20 25 Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp 35 40 Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 45
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn 55 Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 60
Val Asn 6 5 Glu Ala Asp Ala A.la Ala Leu 70 Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
His Gin Leu Lys Gin Gly Asp Asn Pro 35 Tyr Leu 90 Lys Tyr Asn His Ala 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin 100 105 Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala 115 120 Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 125
PL 221 877 B1
165
166
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
167
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn
645 S50 655
Pro Ala Thr Thr Phe Thr Pro Gly Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin
660 665 670
Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys
675 630 6Θ5
Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr
690 695 700
Asn Lys Ser Val Asn Val Glu Phe Thr val Asp Ala Asn Gly Val Tyr
705 710 715 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735 <210» 67 <211» 735 <212» PRT
<213» białko kapsydu serotypu AAV, klon A3 .7
<400» 67
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
His Gin Leu Lys Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu ASp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
168
PL 221 877 B1
130
135
140
Pro Ile Glu Gin Ser Pro 145 ISO
Lys Ser Gly Gin Gin 165
Ala Glu Pro Asp
Ala Lys Lys Arg 17 0
Ser Ser Ser Gly Ile Gly 155 160
Leu Asn Phe Gly Gin Thr 175
Gly Asp Thr Glu Ser 180
Val Pro Asp Pro Gin Pro 185
Ile Gly Glu Pro Pro 190
Ala Ala Pro Ser Gly 395
Val Gly Ser Asn Thr Met 200
Ala Ser Gly Gly Gly 205
Ala Pro Met Ala Asp 210
Asn Asn Glu Gly Ala Asp 215
Gly Val Gly Asn Ser 220
Ser Gly Asn Trp His 225
Cys Asp Ser Thr Trp Met 230 235
Gly Asp Arg Val Ile 240
Thr Thr Ser Thr Arg 245
Thr Trp Ala Leu Pro Thr 250
Tyr Asn Asn Arg Leu 255
Tyr Lys Gin Ile Ser 260
Ser Glu Ser Gly Ala Thr 265
Asn Asp Asn His Tyr 270
Phe Gly Tyr Ser Thr 275
Pro Trp Gly Tyr Phe Asp 280
Phe Asn Arg Phe His 285
Cys His Phe Ser Pro 2 90
Arg Asp Trp Gin Arg Leu 295
Ile Asn Asn Asn Trp 300
Gly Phe Arg Pro Lys 305
Lys Leu Asn Phe Lys Leu 310 315
Phe Asn Ile Gin Val 320
Lys Glu Val Thr Gin 325
Asn Asp Gly Thr Thr Thr 330
Ile Ala Asn Asn Leu 335
Thr Ser Thr Val Gin 340
Val Phe Thr Asp Ser Glu 345
Tyr Gin Leu Pro Tyr 350
Val Leu Gly Ser Ala 355
His Gin Gly Cys Leu Pro 360
Pro Phe Pro Ala Asp 365
Tal Phe Met Ile Pro 370
Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr 375
Leu Asn Asn Gly Ser 380
Gin Ala Val Gly Arg 385
Ser Ser Phe Tyr Cys 390
Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 395 400
PL 221 877 B1
169
170
PL 221 877 B1
Pro Ala Thr Thr 660 Phe Thr Pro Gly Lys □ 65 Phe Ala Ser Phe Ile 570 Thr Gin
Tyr Ser Thr 675 Gly Gin Val Ser Val □ 80 Glu Ile Glu Trp Glu 6S5 Leu Gin Lys
Glu Asn 690 Ser Lys Arg Trp Asn 695 Pro Glu Ile Gin Tyr 700 Thr Ser Asn Tyr
Asn 705 Lys Ser Val Asn Val 710 Glu Phe Thr Val Asp 715 Ala Asn Gly Val Tyr 720
Ser Glu Pro Arg Pro 725 Ile Gly Thr Arg Tyr 730 Leu Thr Arg Asn Leu 735
<210> 5 8
<211> 735
<212> PET
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon A3.4
<400> 68
Met Ala . Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
10 15
Glu. Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 20 2S 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
His Gin Leu Lys Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Gin Ser Pro Ala Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly
PL 221 877 B1
171
145 150 155 160
Glu Ser Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 16Ξ 170 175
Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro
180 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asp Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Glu Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Tyr 260 265 270
Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 275 280 285 ’
Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 290 295 300
Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val 305 310 315 320
Lys Glu Val Thr Gin Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 325 330 335
Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr 340 345 350
Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 355 360 365
Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 370 375 380
Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 385 390 395 400
Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 405 410 415
172
PL 221 877 B1
Asp Val Pro Phe 420 His Ser Ser Tyr Ala His 425 Ser Gin Ser Leu 430 Asp Arg
Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Lys Thr
435 440 445
Gin Gly Thr Ser Gly Thr Thr Gin Gin Ser Arg Leu Gin Phe Ser Gin
450 455 460
Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Gin Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly
465 470 475 480
Pro Ser Tyr Arg Gin Gin Arg Met Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn Asn
485 490 495
Asn Ser Glu Phe Ala Trp Thr Ala Ala Thr Lys Tyr Tyr Leu Asn Gly 500 5C5 510
Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Pro Met Ala Ser His Lys Asp 515 520 525
Asp Glu Glu Lys Tyr Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly Lys 530 535 540
Gin Gly Thr Gly Thr Thr Asn Val Asp Ile Glu Ser Val Leu Ile Thr 545 550 555 SSO
Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr 565 570 575
Gly Gin Val Ala Thr Asn His Gin Ser Gin Asp Thr Thr Ala Ser Tyr 580 585 590
Gly Ser Val Asp Ser Gin Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asp 595 600 605
Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Thr Pro His Thr 610 615 620
Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys 525 630 635 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn 645 650 655
Pro Ala Thr Thr Phe Thr Pro Gly Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin 660 665 670
PL 221 877 B1
173
Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys
675 680 685
Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr
690 695 700
Asn Lys Ser Val Asn Val Glu Phe Thr Val Asp Ala Asn Gly Val Tyr
705 710 715 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 73Ξ <210? 69 <211> 735 <212? PRT
<213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon A3 .5
<400> 69
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro
' 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 30
His Gin Leu Lys Gin Gly Asp Asn. Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg A.la Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 12S
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 14 0
Pro Ile Glu Gin Ser Pro Ala Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly
145 150 155 160
Lys Ser Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
174
PL 221 877 B1
165 170 175
Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro
180 165 190
Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly
195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser
210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg VaL Ile
225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu
245 250 255
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Glu Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Tyr
260 265 270
Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His
275 280 285
Cys His Phe Ser Pro Arg A.sp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp
290 295 300
Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val
305 310 315 320
Lys Glu Val Thr Gin Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu
325 330 335
Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr 340 345 350
Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 355 360 365
Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 370 375 380
Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 385 390 395 400
Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 405 410 415
Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg 420 425 430
PL 221 877 B1
175
176
PL 221 877 B1
Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro i Glu . Ile Gin . Tyr Thr Ser ' Asn Tyr
690 695 700
Asn Lys i Ser Val Asn Val Glu Phe Thr Val Asp Ala Asn Gly Val Tyr
705 710 715 720
Ser Glu . Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 73S
<210> 70
<2115 735
<2125 PRT
<213> białko kapsydu serotypu . AAV, klon AAV2
<400> 70
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 eo
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Arg Gin Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu. Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly 145 ISO 155 150
Lys Ala Gly Gin Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 165 170 175
Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Gin Pro Pro
PL 221 877 B1
177
Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255
Tyr Lys Gin Ile ser ser Gin Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr 260 265 270
Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 275 280 285
Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 290 295 300
Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val 305 310 315 320
Lys Glu Val Thr Gin Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 325 330 335
Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr 340 345 350
Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 355 360 365
Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 370 375 380
Gin Ala Tal Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 385 390 395 400
Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 405 410 415
Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg 420 425 430
178
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
179
Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr
690 695 700
Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr val Asp Thr Asn Gly Val Tyr
705 710 715 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735 <210> 71 <211> 736 <212> ΡΒΤ
<213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV3
<400> 71
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Val Pro Gin Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin His Gin Asp Asn Arg Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Aia Lys Lys Arg Ile Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Gly
130 135 140
Ala Val Asp Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly
145 150 155 160
Lys Ser Gly Lys Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro
180
PL 221 877 B1 t-j ο
PL 221 877 B1
181
182
PL 221 877 B1
2yr Sei : Glu Pro .Arg Ero lis Gly Thi 725 • Arg ryz 73Q Leu TiiZ 1 Arg Asn leu 735
<210 7 2
<211> 737
<212> PAT
<213> capsid p rotsin of AAV serot y?ef clone 3.3bVPl
<400 72
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Ero Asp Trp Leu Glu .Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Tm Tm Aso Leu Lys Pro Gly Ala ?ro Lys Pro
20 ~ ‘ 25 30
Lys Ala Asn Gir. Gin Lys Gin Asp Asn Gly Arg Gly Leu Vs.l· leu Pro
35 40 ' 45
Gly Tyr lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Aso Lys Gly Glu Pro
50 55 50
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu Kis 75 Asp Lys Ala Tyr .Asp 60*
Gin Gin Leu Asn Ala Gly S5 Asp Asn. Pro Tyr SO Leu Arg Tyf Asn Eis 35 .Ala
Asp Ala Glu Phe Gin C-lu 100 .Arg Leu Gin Glu 105 Asp Thr Ser Phe Gly 110 ‘ Gly
A-Sn Leu Gly 113 .Arg -Ale Val Phe Gin .Ala Lys 120 ’ Lys Arg Val Leu Glu ” 125 Pro
LeU Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr 135 Ala Pro Ala Lys Lys 140 Arg
Pro 145 Val Glu Pro Ser Pro ISO Gin .Arg S er Pro Asd 155 Ser Ser Thr Gly Ile ISO
Gly Lys Lys Gly Gin Gin 165 Pro -Ala Arg Lys ’ 170 Arg Leu Asn Phe Giy 175 Gin
Thr Gly Asp Ser Glu Ser ISO Val Pro Asn ?ro 185 Gin pro Leu Gly Glu ISO Pro
Pro Ala Ala 135 Ero Ser Ser Val Glv Ser Gly 2 00 Thr Val .Ala Ala Gly 205 Gly
PL 221 877 B1
183
Gly Ala Ero Met Ala Asp Asn Asb Glu Gly Ala Asp Gly Vel Gly Asn 210 215 220
Ala Ser Gly Asn Trp gis Cys As? ser Tar Trp Leu Gly As? Arg Val
225 230 ’ 235 ' ’ 240 ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ale Leu Ero Thr Tyr Asn Asa Eis 245 250 ’ 255
Leu Tyr Glu Gin Ile Ser Ser Glu Thr Ale Gly Ser Thr Asn Asp Asa 260 265 ’ 270
Thr Tyr Ehe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Ehe A.sn Arg 275 2S0 ' * 255 hs Kis Cys Eis Ehe Sar Ero Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asa Asa 290 2S5 300
Asn Trp Gly Pha Arg Ero Lys Lys Leu Arg Ehe Lys Lsu Ehe A.sn Ile 305 310 315 320
Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn 325 330 335 .Asa Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Ehe Ser Asp Ser Glu Tvr Gin Leu 340 345 * 350
Ero Tyr Val Leu Gly Ser A.la His Gin GIv Cys Lsu Ero Pro Ehe Ero 355 360 3S5
Ala A.sp Val Ehe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu A.sn Asn 370 37S * 380
Gly Ser Gin Ser Val Gly Arg Ser Ser Ehe Tyr Cys Leu Glu Tyr Ehe 385 390 395 400
Erc Ser Gin Met Leu Arg Th- Gly Asn Asn Ehe Glu Phe Ser Tyr Ser 405 410 415
Phe Glu A.sp Val Ero Ehe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu 420 425 430
A.sp .Arg Leu Met Am Ero Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu .Ala 435 440 * 445 .Arg Thr Gin Ser Asp Pro Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin 450 455 460
184
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
185
186
PL 221 877 B1 ;ia Cvs His Phs Ser Pro Arg Ast Tro Gin Arg Leu lis Asn Asn Asis 210 215 220
Trp Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phs Asn Tle Gin 225 230 235 240
Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 245 250 255
Leu Thr Ser Thr Val c-ln Yai Phs Ser Asp Sar Glu Tyr Gin Leu Pro 260 265 ’ ' 270
Tyr Val Leu Gly Ser Ala Kis Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 275 2S0 ’ 235
Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 2S0 255 ' 300
Ser Gin Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Lau Glu Tyr Phe Pro 305 310 315 320
Ser Gin. Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phs 325 330 335
Glu Asp Val Sro Phe His Ser Sar Tyr Ala Kis Ser Gin Ser Leu Gly ~ 340 345 350 ’
Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu A.la Arg 355 360 365
Thr Gin Ser Asn Ala Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin Phe 370 375 380
Tyr Gin Gly Gly Pro Thr Thr Met Ala Glu Gin Ala Lys Asn Trp Leu 385 330 3S5 400
Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gin Gin Arg Yal Ser Lys Thr Leu Asp Gin 405 410 415
Asn Asn. Asn Ser A.sn Phe Ala Trp Thr Gly Ale Thr Lys Tyr His Leu 420 425 430
Asn Gly Arg Asn Ser Leu Val A.sn Pro Gly Val Ala Met Ala, Thr Kis 435 440 445 '
Lvs Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe ’ 450 ~ 455 460
PL 221 877 B1
187
Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu. Met
465 ' 470 ' 475 480
Thr Asn Glu C-lu Glu ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu 485 450 4S5
Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gin Ala A.la Sar Thr Ala Ala Gin 500 505 510
Thr Gin Val Val Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin 515 520 525
Asn Arę Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp A.la Lys Ile Pro His 530 535 ' 540
Thr Asp Gly Asn Phe Mis Pro Ser Pro Leu Mst Gly Gly Phs Gly Leu 545 550 555 560
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys P.sn Thr Pro Val Pro Ala 565 570 575
A.sn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe ule Thr 580 585 550
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Vai Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 5S5 ' 600 605
Lys Glu Asn ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn SIO * 615 620 ’
Phe Asp lys Gin Thr Gly Val A.sp Phs Ala Val Asp Ser Gin Gly Val 625 630 ’ 635 ’ 640
Tyr Ser Glu Pro
<210 74
<211> 644
<212> PRT
<213> capsid protein of
<400 74
Lys Ala Tyr Asp Gin Gin :
Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Ehe Gin Glu Arg leu Gin Glu Asp Thr 20 25 30
Sar Phe Gly Gly A.sn LeU Glv Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg 35 *40 45
188
PL 221 877 B1
Val Leu Glu Pro Leu Gly Leu Val Glu Thr Pro Ala Lys Thr Ala Pro 50 55 60
Gly Lys Lys Arg Pro Val Asp Ser Pro Asp Ser Thr Ser C-iy Ile Gly 55 70 75 80
Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn. Phe Gly Gin Thr Θ5 90 95
Gly Asp Ser Glu Pro Val Pro Asp Pro Gin Pro ile Gly Glu Pro Pro 100 105 110
Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly 115 120 125
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 130 135 140
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Arg Leu Gly Asp Arg Val Ile 145 150 155 160
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 165 170 175
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Gin Ser Ala Gly Ser Thr Asn Asp Asn v'al 180 185 190
Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe A.sn Arg Phe 195 200 205
His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn 210 215 220
Trp Gly Phe A_rg Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin 225 230 235 - 240
Val Lys Glu val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 245 250 255
Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro 260 2S5 270
Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 275 280 285
PL 221 877 B1
189
Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Lsu Thr Lsu Asn Asn Gly 290 295 300
Ser Gin. Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro
305 310 315 320
Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr phe 325 330 335
Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Gly 340 345 350
Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg 355 360 365
Thr Gin Ser Asn Ala Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin Phe 370 375 380
Tyr Gin Gly Gly Pro Thr Thr Met Ala Glu Gin Ala Lys Asn Trp Leu 335 390 39S 400
Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gin. Gin Arg Val Ser Lys Thr Leu Asp Gin 405 410 415
Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu 420 425 430
Asn Gly Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His 435 440 445
Lys A.sp A.sp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe 450 455 460 '
Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met 465 470 475 480
Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu 485 490 495
Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala Ser Thr Ala Ala Gin 500 505 510
Thr Gin Val Val Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin 515 520 525
Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 530 535 540
190
PL 221 877 B1
Thr Asp 545 Gly Asn Phe His 550 Pro Ser Pro Leu Met 555 Gly Gly Phe Gly Leu 560
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala
565 570 575
Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys phe Ala Ser Phe Ile Thr
580 585 5 90
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin
595 600 605
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn
610 615 620
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val
625 630 635 640
Tyr Ser Glu Pro
<210> ’ 75
<211> 1 544
<212> PRT
<213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon 223.10
<220>
<221> cecha dowolna
<222> (434) . . (434)
<223> może być dowolnym aminokwasem
<400> 75
Lys Ala Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg
1 5 10 15
Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr
20 25 30
Ser Phe Gly Gly Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg
35 40 45
Val Leu Glu Pro Leu Gly Leu Val Glu Thr Pro Ala Lys Thr Ala Pro
50 55 60
Gly Lys Lys Arg Pro Val Asp Ser Pro Asp Ser Thr Ser Gly Ile Gly
65 70 75 eo
Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
35 90 95
PL 221 877 B1
191
192
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
193
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn SIO 615 620
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val 625 630 635 640
Tyr Ser Glu Pro <210» 76 <211» 644 <212» PRT <213» białko kapsydu serotypu AAV, klon 223.2 <400» 76
Lys Ala Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg
1 5 10 15
Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Phe Gin Glu Cys Leu Gin Glu Asp Thr
20 25 30
Ser Phe Gly Gly Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg
35 40 45
Val Leu Glu Pro Leu Gly Leu Val Glu Thr Pro Ala Lys Thr Ala Pro
50 55 60
Gly Lys Lys Arg Pro Val Asp Ser Pro Asp Ser Thr Ser Gly Ile Gly
65 70 75 80
Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
85 90 95
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro
100 105 110
Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Val Ala Gly Gly Gly
115 120 125
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala
130 135 140
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile
145 15 0 155 160
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu
165 170 175
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Gin Ser Ala Gly Ser Thr Asn Asp Asn Val
194
PL 221 877 B1
180 1Θ5 190
Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe
195 200 205
His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn
210 215 220
Trp Gly Phe Ara Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn f 1 _ x j-C Gin
225 230 235 240
Vał Lys Glu Val rhr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn
245 250 255
Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro
260 265 270
Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala
275 2Θ0 285
Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly
290 295 300
Ser Gin Ser Val Gly Arg ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro
305 310 315 320
Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe
325 330 335
Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp
340 345 350
Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg
355 360 365
Thr Gin Ser Asn Ala Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin Phe
370 375 3S0
Tyr Gin Gly Gly Pro Thr Thr Met Ala Glu Gin Ala Lys Asn Trp Leu
365 390 395 400
Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gin Gin Arg Val Ser Lys Thr Leu Asp Gin
405 410 415
Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu
420 425 430
Asn Gly Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His
¢35 440 445
PL 221 877 B1
195
Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Ser Pro Ser Ser Gly 460 Val Leu Ile Phe
450 455
Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met
465 470 475 480
Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu
485 490 495
Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala Ser Thr Ala Ala Gin
500 505 510
Thr Gin Val Val Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin
515 520 525
Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His
530 53Ξ 540
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu
545 550 555 560
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala
565 570 575
Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr
580 585 590
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin
595 600 605
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn
610 615 620
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val
625 630 635 640
Tyr Ser Glu Pro
<210» 77
<211» 644
<212» PRT
<213» białko kapsydu serotypu AAV, klon 223.7
<400» 77
Lys Ala Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg
1 5 10 15
196
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
197
198
PL 221 877 B1
Asn Arg Asp Yal Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 530 535 540
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 545 5S0 555 560
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 565 570 575
Asn Pro Pro Glu Vał Phe Thr Pro Ala Lys Tle Ala Ser Phe Ile Thr 580 SSS 590
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Yal Ser Yal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 595 600 605
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 610 615 620
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val 625 630 635 640
Tyr Ser Glu Pro <210> 70 <211> 644 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 223.6 <400> 78
Lys Ala Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg 15 10 15
Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr 20 25 30
Ser Phe Gly Gly Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg 35 40 45
Val Leu Glu Pro Leu Gly Leu val Glu Thr Pro Ala Lys Thr Ala Pro 50 55 60
Gly Lys Lys Arg Pro VaL Asp Ser Pro Asp Ser Thr Ser Gly Ile Gly 65 70 7Ξ 80
Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 85 90 95
Gly Asp Ser Glu Ser Yal Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro
PL 221 877 B1
199
200
PL 221 877 B1
355 360 365
Thr Gin 370 Ser Asn Ala Gly Gly 375 Thr Ala Gly Asn Arg 380 Glu Leu Gin Phe
Tyr 335 Gin Gly Gly Pro Thr 390 Thr Met Ala Glu Gin 395 Ala Lys Asn Trp Leu 400
Pro Gly Pro Cys Phe 405 Arg Gin Gin Arg Val 410 Ser Lys Thr Leu Asp 415 Gin
Asn Asn Asn Ser 420 Asn Phe Ala Trp Thr 425 Gly Ala Thr Lys Tyr 430 His Leu
Asn Gly Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His 435 440 445
Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe 450 455 460
Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met 465 470 475 490
Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu 485 490 495
Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala Ser Thr Ala Ala Gin 500 505 510
Thr Gin Val Val Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin 515 520 525
Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 530 535 540
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 545 550 555 560
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 565 570 575
Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Leu Ala ser Phe Ile Thr 580 585 590
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 595 600 605
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 610 615 620
PL 221 877 B1
201
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val
625 630 535 640
Tyr Ser Glu Pro
<210> 79
<211> 738
<212> PRT
<213> białka kapsydu serotypu AAV, klon 44.1
<400> 79
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn. Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala 85 Gly Asp Ann Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin. 120 Ala Lys Lys Arg val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 13S Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp 155 Ser Ser Thr Gly Ile 160
Gly Lys Lys Gly Gin 165 Gin Pro Ala Lys Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 175 Gin
Thr Gly Asp Ser 180 Glu Ser Val Pro Asp 185 Pro Gin Pro Ile Gly 190 Glu Pro
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
202
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
203
204
PL 221 877 B1
Ser 705 Asn Tyr Tyr Lys Ser 710 Thr Asn Val Asp Phe Ala 715 Val Asn Thr Asp 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile 725 Asn Leu <210> 60 <211> 733 <212> PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, <400> 80 Gly Thr Arg 730 klon 44.5 Tyr Leu Thr Arg 735
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu 10 Asp Asn Leu Ser 15
Glu Gly Ile Arg Glu 20 Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 30
Lys Ala Asn Gin Gin 35 Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu 50 Gly Pro Phe 55 Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His Asp 75 Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala 85 Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg 90 Tyr Asn His Ala 95
Asp Ala Glu Phe Gin 100 Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 110
Asn Leu Gly Arg Ala 115 Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 125
Leu Gly Leu Val Glu 130 Glu Gly Ala 135 Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 14 5 Val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp Ser 155 Ser Thr Gly Ile ISO
Gly Lys Lys Gly Gin ’ 165 Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu 170 Asn Phe Gly Gin 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro
PL 221 877 B1
205
180 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala ASp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser
210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His
245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp
260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn
275 280 285
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn
290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Pro Asn Phe Lys Leu Phe Asn
305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala
325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin
340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe
355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn
370 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr cys Leu Glu Tyr
385 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr
405 410 415
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser
420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu
435 440 445
206
PL 221 877 B1
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin. Gin Leu Leu 450 455 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 485 490 495
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 S20 S2S
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala 580 585 590
Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Yal 595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 675 680 6Θ5
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
PL 221 877 B1
207
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp 705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
Asn Leu
<210» <211» <212» <213» 81 738 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon 44.2
<400» 81
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp 155 Ser Ser Thr Gly Ile 160
Gly Lys Lys Gly Gin 165 Gin Pro Ala Lys Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 175 Gin
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Vai Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro 180 185 190
208
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
209
210
PL 221 877 B1
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp 705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
Asn Leu <210> 82 <211> 73S <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 29.3VP1 <400> 82
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Ala Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn A.la Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin. Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys A.rg
Pro 14 5 Val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp 155 Ser Thr Thr Gly Ile 160
Gly Lys Lys Gly Gin 165 Gin Pro Ala Lys Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 175 Gin
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro
PL 221 877 B1
211
ISO 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser
210 215 220
Ser Ser Gly Aan Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His
245 250 255
Leu. Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp
260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn
275 280 285
Arg Phe His Cys His phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn
290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn
305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala
325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin
340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala Arg Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe
355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn
370 375 330
Asn Gly Ser Gin Ala val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr
385 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr
405 410 415
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser
420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu
435 440 445
212
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
213
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Yal Asp Phe Ala Yal Asn Thr Asp
705 710 715 72 0
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 73S
Asn Leu
<210> 83
<211> 738
<212 > PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 29.5VP1
<400> 83
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Ala Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp 155 Ser Ser Thr Gly Ile 160
Gly Lys Lys Gly Gin 165 Gin Pro Ala Lys Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 175 Gin
214
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
215
216
PL 221 877 B1
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr
590 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn 7al Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp
705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser C-lu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 735
Asn Leu
<210> 1 94
<2T1> ' 738
<212? 1 PRT
<213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 42 . 15
<400? 1 34
Met Ala Al a Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
ΒΞ 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly A.rg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro va 1 Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
145 150 155 160
Gly Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Łys Arg Leu Asn Phe Gly Gin
PL 221 877 B1
217
218
PL 221 877 B1
420 425 430
Leu Asp Arg 435 Leu Met Asn Pro Leu 440 Ile Asp Gin Tyr Leu 445 Tyr Tyr Leu
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu
450 455 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp
455 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg val Ser Thr Thr Leu Ser
485 490 495
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His
500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr
515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met
530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val
545 550 S5S S60
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr
565 570 S7S
Glu Gin Tyr Gly v’ai Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala
5S0 585 590
Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val
595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile
610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe
625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro val
645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe
660 665 670
Tle Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu
PL 221 877 B1
219
675 680 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr
690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asm Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu
705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 735
Asn Leu <210» 35 <211> 738 <212> PRT
<213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon 42. 9
<400> 05
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
145 150 155 160
220
PL 221 877 B1
Gly Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro 180 135 ISO
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
195 200 205
Gly Ala Pro Met 210 Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 215 220
Ser Ser Gly Asn 225 Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 245 250 255
Leu Tyr Lys Gin 260 Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp 265 270
Asn Thr Tyr Phe 275 Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 280 285
Arg Pha His Cys 290 His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 295 300
Asn Asn Trp Gly 305 Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
Asn Asn Leu Thr 340 Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 345 350
Leu Pro Tyr Val 355 Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 360 365
Pro Ala Asp Val 370 Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr
335 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr
405 410 415
PL 221 877 B1
221
222
PL 221 877 B1
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu
67S 680 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr
690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu
705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 735
Asn Leu <210? 86 <211? 733 <212? PRT
<213? 1 białko kapsydu serotypu AAV, klon 42 .13
<400? 86
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lye Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
13 0 135 14 0
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
PL 221 877 B1
223
224
PL 221 877 B1
405 410 415
Pro Phe His Ser 420 Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu 425 Asp Arg Leu Met 430
Asn Pro Leu Ile 435 Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser 440 Arg Thr Gin Ser 445
Thr Gly Gly Thr 450 Ala Gly Thr 455 Gin Gin Leu Leu Phe 4 60 Ser Gin Ala Gly
Pro Asn Asn Met 465 Ser Ala Gin 470 Ala Lys Asn Trp Leu 475 Pro Gly Pro Cys 480
Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser 485 Thr Thr Val Ser Gin 490 Asn Asn Asn Ser 495
Asn Phe Ala Trp 500 Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu 505 Asn Gly Arg Asp 510
Ser Leu Val Asn 515 Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His 520 Lys Gly Asp Glu 525
Glu Arg Phe Phe 530 Pro Ser Ser 535 Gly Val Leu Met Phe 540 Gly Lys Gin Gly
Ala Gly Lys Asp 545 Asn Val Asp 550 Tyr Ser Ser Val Met 555 Leu Thr Ser Glu 560
Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn 565 Pro Val Ala Thr Glu 570 Gin Tyr Gly Val 575
Val Ala Asp Asn 580 Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala Pro 585 Ile Val Gly Ala 590
Val Asn Ser Gin 595 Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp 500 Gin Asn Arg Asp 605
Val Tyr Leu Gin 610 Gly Pro Ile 615 Trp Ala Lys Ile Pro 620 His Thr Asp Gly
Asn Phe His Pro 625 Ser Pro Leu 630 Met Gly Gly Phe Gly 635 Leu Lys His Pro 640
Pro Pro GLn Ile Leu Ile Lys 645 Asn Thr Pro Val Pro 650 Ala Asp Pro Pro 655
Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser
650 665 670
PL 221 877 B1
225
Th.r Gly Gin S75 Val Ser Val Glu Ile 680 Glu Trp Glu Leu Gin 685 Lys Glu Asn
Ser Lys 590 Arg Trp Asn Pro Glu 695 Ile Gin Tyr Thr Ser 700 Asn Tyr Tyr Lys
Ser 705 Thr Asn Val Asp Phe 710 Ala Val Asn Thr Glu 715 Gly Thr Tyr Ser Glu 720
Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Ser Leu
725 730 <210» 87 <211» 733 <212» PRT
<213» białko kapsydu serotypu AAV, klon 42, . 3A
<400» 87
Met Ala Ala Asp Gly His Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu
226
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
227
420 425 430
Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gin Ser
435 440 445
Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu Phe Ser Gin Ala Gly
450 455 460
Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys
465 470 475 480
Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser Gin Asn Asn Asn Ser
485 490 495
Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asp
500 505 510
Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His Lys Asp Asp Glu
515 520 525
Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met Phe Gly Lys Gin Gly
530 535 540
Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val Met Leu Thr Ser Glu
545 550 5 55 560
Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr Gly Val
565 570 575
Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly Ala
580 585 590
Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Tal Trp Gin Asn Arg Asp
595 600 605
Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly
610 615 62 0
Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro
625 630 635 640
Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro
645 650 655
Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser
660 665 670
Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn
675 680 685
228
PL 221 877 B1
Ser Lys 690 Arg Trp Asn Pro Glu 695 Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys 700
Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu
705 710 715 720
Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730
<210> 88
<211> 731
<212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.4
<400> 83
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30 '
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 14 0
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu
165 170 175
PL 221 877 B1
229
230
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
231
Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr
690 695 700
Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg
705 710 715 720
Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 <210» 99 <211» 731 <212» PRT
<213» białko kapsydu serotypu AAV, klon 42 ,5A
<400» 89
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asa Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 30
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Arg Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu
165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro pro Ala Ala Pro Ser
232
PL 221 877 B1
180 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala
195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp
210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr
2 2 5 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile
245 250 255
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser
260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser
275 280 285
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Arg Gly Phe Arg Pro
290 295 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr
305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile
325 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser
340 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile
355 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly
370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg
335 390 3 95 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe
405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro
420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly
435 440 445
PL 221 877 B1
233
Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu Phe Ser 450 455
Gin Ala Gly Pro Asn 460
Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro 465 470 475
Gly Pro Cys Tyr Arg 480
Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser Gin Asn 485 490
Asn Asn Ser Asn Phe 495
Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn 500 505
Gly Arg Asp Ser Leu 510
Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His Lys 515 520
Asp Asp Glu Glu Arg 525
Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met Phe Gly 530 535
Lys Gin Gly Ala Gly 540
Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val Met Leu 545 550 555
Thr Ser Glu Glu Glu 560
Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin 565 570
Tyr Gly Val Val Ala 575
Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala Pro Ile 580 585
Val Gly Ala Val Asn 590
Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Ala Trp Gin 595 600
Asn Arg Asp Val Tyr 605
Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 615
Thr Asp Gly Asn Phe 620
His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 625 630 635
Lys His Pro Pro Pro 64 0
Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650
Asp Pro Pro Thr Thr 655
Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr 660 665
Gin Tyr Ser Thr Gly 670
Gin Val Ser Yal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 675 680
Lys Glu Asn Ser Lys 685
Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 690 695
Tyr Tyr Lys Ser Thr 700
234
PL 221 877 B1
Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg 705 710 715 720
Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730
<210> 90
<211> 733
<212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42 .IB
<400> 90
Met Ala . Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Arg Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Aan Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60 ‘
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp SS 70 7S BO
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 no
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 ISO
Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser 130 135 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala
PL 221 877 B1
235
195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser Ser Gly Asn Trp
210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr
225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile
245 250 255
Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Gly
260 265 270
Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His
275 280 285
Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe
290 295 300
Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu
305 310 315 320
Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser
32S 330 335
Thr Ile Gin val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu
340 345 350
Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe
355 360 365
Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ala
370 375 380
Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met
3ΒΞ 390 395 400
Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Gin Phe Glu Asp Val
405 410 415
Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met
420 425 430
Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gin Ser
435 440 445
Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu Phe Ser Gin Ala Gly
450 455 450
236
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
237
Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu. Thr Arg Asn Leu 725 730 <210? 91 <211> 733 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.5B <400? 91
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Glu Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu. Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Lys Gin Leu Glu Gin 35 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 14 0 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Va 1 Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp 155 Ser Ser Thr Gly ile 160
Gly Lys Thr Gly Gin 165 Gin Pro Ala Lys Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 175 Gin
Thr Gly Asp Ser 180 Glu Ser Val Pro Asp 185 Pro Gin Pro Ile Gly 190 Glu Pro
Pro Ala Gly 195 Pro Ser Gly Leu Gly 200 Ser Gly Thr Met Ala 205 Ala Gly Gly
Gly Ala 210 Pro Met Ala Asp Asn 215 Asn Glu Gly Ala Asp 220 Gly Val Gly Ser
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
238
PL 221 877 B1
225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His
245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp
260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn
275 280 285
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn
290 295 3 00
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn
305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala
325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin
340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe
355 360 365
Pro Ala Asp Yal Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn
370 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr
385 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr
405 410 415
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser
420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu
435 440 445
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu
450 455 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp
465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Yal Ser Thr Thr Leu Ser
485 490 495
PL 221 877 B1
239
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 510 ’
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala 580 585 590
Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val 595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Łys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 675 6Θ0 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu 705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
Asn Leu
240
PL 221 877 B1
<210> <211> <212> <213> <400> Met Ala 1 92 738 PRT białko kapsydu serotypu AAV, 92 klon 43 . 1
Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Ala Asp Gly Tyr 5 Leu Pro Asp Trp 10 Leu
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Asp Leu Tire Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Ara Leu Gin Glu ASp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 14 0
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
145 ISO 155 160
Gly Lys Lys Gly His Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin
165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro ile Gly Glu Pro
180 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser
210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
225 230 235 240
PL 221 877 B1
241
242
PL 221 877 B1
500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr
515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met
530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val
545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro val Ala Thr
565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Thr Asn Gly Ala
SBC 585 590
Pro Ile Val Gly Thr Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val
5 95 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys i le
610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe
625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin. Ile Leu Val Ly3 Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser VaL Glu Tle Glu Trp Glu 675 680 S85
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu 705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
Asn Leu
<210> 93
<211> 73S
<212> PRT
PL 221 877 B1
243 <213» białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.12 <400» 93
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 SO
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly His Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro 130 135 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly 195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220 ' ’
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 225 230 235 240
244
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
245
246
PL 221 877 B1 <210? 94 <211? 738 <212? PET
<213? <400? Met Ala 1 białko kapsydu serotypu AAV, 94 klon 43 Trp Leu 10 . 5
Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Glu Asp Asn Leu Ser 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro C-ly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin. Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly His Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin
16S 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro
180 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala . Asp Gly Val Gly Ser
210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp : Leu 1 Gly . Asp . Arg ' Val
225 230 235 240
PL 221 877 B1
247
248
PL 221 877 B1
Gin Asn Asn Asa Ser Asn Phe Ala 500
Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 505 SIO
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val 515 520
Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe 530 535
Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys 545 550
Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 555 560
Mec Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile 565
Lys Thr Thr Asn Pro val Ala Thr 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp 530
Asn Leu Gin Gin Thr Asn Gly Ala 505 590
Pro Ile Val Gly Thr Val Asn Ser 595 600
Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val 505
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu SIO 615
Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His 625 630
Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin 645
Ile Leu Val Lys Asn Thr Pro Val 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe 660
Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin 675 680
Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg 690 695
Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn 705 710
Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro 725
Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 730 735
Asn Leu
PL 221 877 B1
249 <210» 95 <211» 738 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV8 <400» 95
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro 1 5
Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala 20
Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp 35 40
Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe 50 55
Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala 65 70
Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 75 80
Gin Gin Leu Gin Ala Gly Asp Asn 35
Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu 100
Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin 115 120
Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 125
Leu Gly Leu tal Glu Glu Gly Ala 130 135
Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg 145 150
Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 155 160
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala 165
Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro 180
Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro 185 190
Pro Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly 195 200
Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn 210 215
Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp
Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg fal
250
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
251
252
PL 221 877 B1
Asn Leu <210? 96 <211? 736 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.21 <400? 96
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 SO
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn. His Ala 35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 150 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 180 165 190
Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
PL 221 877 B1
253
254
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
255
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735
<210» 97
<211> 736
<212» PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.25
<400» 97
Met Ais i Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 ISO 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 180 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220
256
PL 221 877 B1
Ser 225 Gly Asn Trp His Cys 230 Asp Ser Thr Trp Leu 235 Gly Asp Arg Val Ile 240
Thr Thr Ser Thr Arg 245 Thr Trp Ala Leu Pro 250 Thr Tyr Asn Asn His 255 Leu
Tyr Lys Gin Ile 250 Ser Asn Gly Thr Ser 265 Gly Gly Ser Thr Asn 270 Asp Asn
Thr Tyr Phe 2 75 Gly Tyr Ser Thr Pro 280 Trp Gly Tyr Phe Asp 285 Phe Asn Arg
Phe His 290 Cys His Phe Ser Pro 295 Arg Asp Trp Gin Arg 300 Leu Ile Asn Asn
Asn 305 Trp Gly Phe Arg Pro 310 Lys Arg Leu Asn Phe 315 Lys Leu Phe Asn Ile 320
Gin val Lys Glu Val Thr Thr Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn
325 330 335
Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu 340 345 350
Pro Tyr Tal Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro ’ 355 360 365
Ala Asp Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn 370 375 380
Gly Ser Gin Ala Leu Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 385 390 395 400
Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gin Phe Ser Tyr Thr 405 410 415
Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu 420 425 430
Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Val 435 440 445
Arg Thr Gin Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gin Thr Leu Ala Phe Ser 450 455 460
Gin Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Asn Gin Ala Arg Asn Trp Val Pro 465 470 475 480
PL 221 877 B1
257
258
PL 221 877 B1 <210> 98 <211? 736 <212> PRT
<21 3> biał ko k apsy1 du s erot ypu AAV, kio n 43 .23
<40 0 > 93
Met Ala Ala Asp Gly Ι-Π- x/± Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Al S. Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
55 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly
145 150 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro
130 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly
195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala . Asp Gly Val Gly . Asn Ser
210 215 220
PL 221 877 B1
259
260
PL 221 877 B1
Gly Asn Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val 48S Ser Thr Thr Thr Asn Gin Asn Asn
490 Ala Ala Lys Phe Lys 510 495 Leu
Asn Ser Asn SOO Phe Ala Trp Thr Gly 505
Gly Arg Asp Ser Leu Met Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Ser His Lys
515 520 525
Asp Asp Asp Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly
530 535 540
Lys Gin Gly Ala Gly Asn Asp Gly fal Asp Tyr Ser Gin fal Leu Ile
545 550 555 560
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro fal Ala Thr Glu Glu
565 570 575
Tyr Gly Ala fal Ala Ile Asn Asn Gin Ala Ala Asn Thr Gin Ala Gin
580 535 590
Thr Gly Leu tal His Asn Gin Gly fal Ile Pro Gly Met fal Trp Gin
595 600 605
Asn. Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His
610 615 620
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu
625 630 635 640
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala
645 650 655
Asp Pro Pro Leu Thr Phe Asn Gin Ala Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr
560 665 670
Gin Tyr Ser Thr Gl'/ Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin
675 630 635
Lys Glu Asn. Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn
690 695 700
Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp phe Ala tal Asn Thr Glu Gly fal
705 710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735
PL 221 877 B1
261 <210» 99 <211» 736 <212» PRT <213» białko kapsydu serotypu AAV, <400» 99
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp 1 5
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu 20 25
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp ’ 35 40
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn 50 55
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu 65 70
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro 85
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin 100 105
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala 115 120
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys 130 135
Leu Val Glu Gin. Ser Pro Gin Glu Pro 145 150
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys 165
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro 180 135
Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn 195 200
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly 210 215
klon 43. ,20
Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Asp Ser 155 Ser Ser Gly Ile Gly 160
Arg 170 Leu Asn Phe Gly Gin 175 Thr
Gin Pro Leu Gly Glu 190 Pro Pro
Thr Met Ala Ser 205 Gly Gly Gly
Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser
220
262
PL 221 877 B1
Ser 225 Thr Gly Asn Trp His Cys Asp 230 Ser Thr Trp Leu 235 Gly Tyr Asp Asn Arg Asn Val His 255 Ile 240 Leu
Thr Arg 245
Thr Ser Thr Trp Ala Leu Pro 250 Thr
Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn
260 265 270
Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg
275 280 235
Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg ASp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn
290 295 300
Asn Trp aiy Phe Arg pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile
305 310 315 320
Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn
325 330 335
Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu
340 345 350
Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro
355 360 365
Ala Asp Val Phe Thr Val Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn
370 375 380
Gly Ser Gin Ala Leu Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe
335 390 395 400
Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gin Phe Ser Tyr Thr
405 410 415
Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu
420 425 430
Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Val
435 440 445
Arg Thr Gin Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gin Thr Leu Ala Phe Ser
450 455 460
Gin Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Asn Gin Ala Arg Asn Trp Val Pro
455 470 475 480
PL 221 877 B1
263
264
PL 221 877 B1 <210> 100 <211> 736 <212> PRT <213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV9 <4OO> 100
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 150 155 160
Lys Ser Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 180 185 190
Glu Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240
PL 221 877 B1
265
266
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
267 <213? białko kapsydu serotypu AAV, <400? 101
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp 1 5
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu 20 25
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp 35 40
Gly Tyr Lys Tyr Leu Arg Pro Phe Asn 50 55
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu 65 70
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro ΘΞ
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin ’ 100 105
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala 115 120
Leu Gly Leu Val Glu Glu Val Ala Lys 130 135
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr 145 150
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe 165
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly 190 185
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala 195 200
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val 210 215
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp 225 230
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn 245
klon 24. 1
Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 30
Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Gly Ile 155 Gly Lys Lys Gly Gin 160
Gly 170 Gin Thr Gly Asp Ser 175 Glu
Glu Pro Pro Ala Ala 190 Pro Ser
Gly Gly Gly Ala 205 Pro Met Ala
Gly Asn Ala 220 Ser Gly Asn Trp
Arg Val 235 Ile Thr Thr Ser Thr 240
Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile
250 255
268
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
269
Pro Gly Val 515 Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin phe Phe
520 525
Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys
530 535 540
Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr
545 550 555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu
565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly
530 5S5 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Cys Leu Gin Gly
595 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
645 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
690 695 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725
<210» 102
<211» 728
<212» PRT
<213» białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.2REAL
<400» 102
270
PL 221 877 B1
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 S0
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 30
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 ISO 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin. Thr Gly Asp Sar Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser 180 1B5 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala ' 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Yal Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
PL 221 877 B1
271
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn 260
Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe 275 280
Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser 285
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile 290 295
Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe 305 310
Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile 325
Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr 340
Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro 3S5 360
Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu 370 375
Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly 330
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu 385 390
Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser 405
Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin 420
Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr 435 440
Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe 450 455
His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu 465 470
Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 475 480
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser ~ 485
Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 490 495 ‘
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu 500
Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 505 510
272
PL 221 877 B1
Pro Gly Val 515 Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp 520 Asp Glu Asp 525 Gin Phe Phe
Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Glu Thr Gly Ala Ala Asn Lys
530 535 540
Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr
545 550 555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu
565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly
580 535 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly
595 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
645 650 65 5
Ala Lys Ptie Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 6 70
val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
690 695 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
<210> 103 <211> 729 <212=· PRT <213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon 7,2VP1 <400> 103
725
PL 221 877 B1
273
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Gly Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Arg Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn. Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Asn Gly Gin
145 150 155 160
Pro Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu
165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser
180 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala
195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp
210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr
225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile
245 250 255
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser
260 265 270
274
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
275
Pro Ile Asn Gly Yal Leu Yal Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys
530 535 540
Thr 545 Thr Leu Glu Asn Val Leu 550 Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr 555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu 565 Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn. Leu 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro 580 Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly 535 590
Ala Leu Pro 595 Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly 600 605
Pro Ile Trp 610 Ala Lys Ile Pro 615 His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser 620
Pro 625 Leu Met Gly Gly Phe Gly 630 Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro 645 Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile 660 Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser 665 670
Val Glu Ile 675 Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn 680 685
Pro Glu Ile 690 Gin Tyr Thr Ser 695 Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu 700
Phe Ala Val Łan Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly 705 710 715 720 Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 <210? 104 <211> 728 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 27.3YP1 <400? 104
Met 1 Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 5 10 15
276
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
277
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser 275 230 285
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 290 295 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Łeu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr 305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 325 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser 340 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 350 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly 370 375 380
Arg Ser Ser Phe Cys Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 390 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Val 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 435 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 500 505 510
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Leu 515 520 525
278
PL 221 877 B1
Pro Ile Asn 530 Gly Val Leu Val 535 Phe Gly Lys Thr Gly 54 0 Ala Ala Asn Lys
Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr
545 sso 555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu
565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Arg Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly
580 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly
595 600 605
Pro Ile Trp Ala Glu Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
62 5 630 635 540
Tle Lys Asn Thr pro val pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
64 5 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
690 695 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 <210> 105 <211> 723 <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 16.3VP1
<400> 105
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
PL 221 877 B1
279
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Aap Gly Arg Gly Leu 45 fal Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Glu Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Lys Gin Leu Glu Gin 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
Agp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala fal Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg fal 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu fal Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lye Lys Arg
Pro 14 5 Ile Glu Ser Pro Asp 150 Ser Ser Thr Gly Ile 155 Gly Lys Lys Gly Gin 160
Gin Pro Ala Lys Lys 165 Lys Leu Asn Phe Gly 170 Gin Thr Gly Asp Ser 175 Glu
Ser fal Pro Asp 180 Pro Gin Pro Leu Gly 185 Glu Pro pro Ala Ala 190 pro Ser
Gly Leu Gly 195 Ser Gly Thr Met Ala 200 Ala Gly Gly Gly Ala 205 Pro Met Ala
Asp Asn 210 Asn Glu Gly Ala Asp 215 Gly fal Gly Asn Ala 220 Ser Gly Asn Trp
His 225 Cys Asp Ser Thr Trp 230 Leu Gly Asp Arg Val 235 Ile Thr Thr Ser Thr 240
Arg Thr Trp Ala Leu 245 Pro Thr Tyr Asn Asn 250 His Leu Tyr Lys Gin 255 Ile
Ser Ser Gin Ser 260 Gly Ala Thr Asn Asp 265 Asn His Phe Phe Gly 270 Tyr Ser
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser
275 280 285
280
PL 221 877 B1 pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn. Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 290 295 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr 305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 325 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu. Gly Ser 340 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Met Gly 370 375 3Θ0
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 390 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe Kis Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 485 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 500 505 510
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Gly Gin Phe Phe 515 520 525
Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
PL 221 877 B1
281
Thr 545 Thr Leu Glu Asn Val 550 Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr
555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu
565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly
580 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly
595 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro val Pro Ala Asn Pro Pro Gly Val Phe Thr Pro
645 650 655
Ala Leu Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 S70
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
690 695 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
Ύ25 <210> 106 <211> 728 <212> PRT <213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon. 42.10 <400> 106
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
282
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
283
284
PL 221 877 B1
Thr Thr Leu 545 Glu Asn Val Leu Met 550 Thr Ser Glu Glu Glu 555 Ile Lys Thr 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu
565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn S62? Gin Gly
580 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly
595 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 63 5 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
645 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
690 6S5 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725
<210? 107
<211? 726
<212? PRT
<213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.3B
<400? 107
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp , Asn Łeu i Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile , Arg Glu Trp Trp Asp : Leu Lys 1 Pro Gly Ala ] Pro Lys Pro
23 30
PL 221 877 B1
285
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser 180 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser 260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe 275 280 235
Ser
286
PL 221 877 B1
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 290 295 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr
305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile
325 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser 340 345 350
Ala Kis Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly 370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 390 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 465 470 475 430
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Thr Ser Asn Phe Ala Trp 485 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 500 505 510
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe 515 520 525
Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr
PL 221 877 B1
287
288
PL 221 877 B1
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 95 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser 180 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser 260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser 275 280 285
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 290 295 300
PL 221 877 B1
289
290
PL 221 877 B1
Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 Glu Glu Tyr Gly 570 Val Val Ser Ser Asn 575 Leu
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly
590 5Θ5 590
Ala Leu Pro Gly Met val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly
595 600 605
Pro Ile Trp Ala Łys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
64 5 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 670
val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn val Glu
690 695 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Airg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 <210> 109 <211> 729 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu ΆΑ,ν, klon F1VP1 <400? 109
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn. Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
40 45
PL 221 877 B1
291
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala Θ5 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Ile Asp Ser Pro Asp 150 Ser Ser Thr Gly Ile 155 Gly Lys Lys Gly Gin 160
Gin Pro Ala Lys Lys 165 Lys Leu Asn Phe Gly 170 Gin Thr Gly Asp Ser 175 Glu
Ser Val Pro Asp ISO Pro Gin Pro Leu Gly 185 Glu Pro Pro Ala Ala 190 Pro Ser
Ser Val Gly 195 Ser Gly Thr Met Ala 200 Ala Gly Gly Gly Ala 205 Pro Met Ala
Asp Asn 210 Asn Glu Gly Ala Asp 215 Gly Val Gly Asn Ala 220 Ser Gly Asn Trp
His 225 Cys Asp Ser Thr Trp 230 Leu Gly Asp Arg Val 235 Ile Thr Thr Ser Thr 240
Arg Thr Trp Ala Leu 245 Pro Thr Tyr Asn Asn 250 His Leu Tyr Lys Gin 255 Ile
Ser Ser Ser Ser 260 Ser Gly Ala Thr Asn 265 Asp Asn His Tyr Phe 270 Gly Tyr
Ser Thr Pro 275 Trp Gly Tyr Phe Asp 280 Phe Asn Arg Phe His 285 Cys His Phe
Ser Pro 290 Arg Asp Trp Gin Arg 295 Leu Ile Asn Asn Asn 300 Trp Gly Phe Arg
Pro Lys Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val
305 310 315 320
292
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
293
Leu Gin Pro Ser Thr Ala Gly Pro Gin Ser Gin Thr Ile Asn Ser Gin 580 585 590
Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin 595 600 60S
Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro SIO 615 620
Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile 625 630 635 640
Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn. Pro Pro Glu Val Phe Thr 645 650 655
Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val 660 665 670
Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp 675 680 685
Asn. Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val 690 695 700
Glu Phe Ala Val Asn Pro Asp Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile 705 710 715 720
Gly Thr Arg Tyr Leu Pro Arg Asn Leu 725 <210? 110 <211? 729 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon F5VP1@3 <400? 110
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
294
PL 221 877 B1
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 14 0
Pro Ile Asp Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu
165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser
180 185 190
Ser Val Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Thr Ala
195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Yal Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp
210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly A-sp Arg Yal Ile Thr Thr Ser Thr
225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile
245 250 255
Ser Ser Ser Ser Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Tyr Phe Gly Tyr
260 265 270
Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe
275 280 285
Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg
290 295 300
Pro Lys Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Yal
305 310 315 320
Thr Thr Asn Asp Gly Yal Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr
325 330 335
PL 221 877 B1
295
296
PL 221 877 B1
Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin
595 600 605
Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro
610 615 620
Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Glu His Pro Pro Pro Gin Ile
625 630 635 640
Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr
645 650 655
Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val
660 665 670
Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp
S75 680 685
Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val
690 695 700
Glu Phe Ala Val Asn Pro Asp Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile
705 710 715 720
Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 <210> 111 <211> 729 <212> PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon F3VP1 <400? lii
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr A_sp
65 70 75 80
PL 221 877 B1
297
298
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
299
Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin
595 600 605
Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro
610 615 620
Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile
625 630 635 640
Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr
645 650 655
Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val
660 665 670
Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp
675 680 635
Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val
690 695 700
Glu Phe Ala Val Asn Pro Asp Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile
705 710 715 720
Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725
<210> ' 112
<211> ' 735
<212> : PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.6B
<400> 112
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr 65 70 75
Asp
300
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
301
302
PL 221 877 B1
Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn
595 600 605
Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr
SIO 615 620
Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Asp Gly Phe Gly Leu Lys
625 630 635 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn
645 650 655
Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin
660 665 670
Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys
575 680 685
Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr
690 695 700
Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr
705 710 715 720
Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735 <210> 123 <211> 685 <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42 . 12
<400> 113 Ala Asp Gly Tyr Leu Pro 5 Asp
Met 1 Ala Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn Gin 35 Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu Val 45 Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro Phe 55 Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala 70 Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn 85 Pro Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
PL 221 877 B1
303
304
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
305
Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr SIO 615 620
Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly phe Gly Leu Lys 625 630 635 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys 645 650 655
Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu 660 665 670
Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 675 690 685 <210» 114 <211» 724 <212» PRT <213» białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV5CAP <400» 114
Met Ser Phe Val Asp His Pro Pro Asp Trp Leu Glu Glu Val Gly Glu 15 10 15
Gly Leu Arg Glu Phe Leu Gly Leu Glu Ala Gly Pro Pro Lys Pro Lys 20 25 30
Pro Asn Gin Gin His Gin Asp Gin Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro Gly 35 40 45
Tyr Asn Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Arg Gly Glu Pro Val 50 55 60
Asn Arg Ala Asp Glu Val Ala Arg Glu His Asp Ile Ser Tyr Asn Glu 65 70 75 30
Gin Leu Glu Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp 85 90 95
Ala Glu Phe Gin Glu Lys Leu Ala Asp Asp Thr Ser Phe Gly Gly Asn 100 105 110
Leu Gly Lys Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro Phe 115 120 125
Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Thr Gly Lys Arg Ile 130 135 140
306
PL 221 877 B1
PL 221 877 B1
307
308
PL 221 877 B1
Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Thr Val Glu Met Glu 660 665 670
Trp Glu Leu Lys Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin 675 580 635
Tyr Thr Asn Asn Tyr Asn. Asp Pro Gin Phe Val Asp Phe Ala Pro Asp 690 695 700
Ser Thr Gly Glu Tyr Arg Thr Thr Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu 705 710 715 ' 720
Thr Arg Pro Leu <210? 115 <211? 9 <212? DNA <213? miejsce enzymu restrykcyjnego Dralll <400? 115 caccacgtc <210? 116 <211?
<212?
DNA <213? AV2cas <400? 116 cgcagagacc aaagttcaac tgaaacga <210? 117 <211? 255 <212? DNA <213? serotyp 10 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400? 117
ggtaattcct ccggaaattg geattgegat tccacatggc tgggcgacag agtcatcacc 60
accagcaccc gaacctgggt cctgcccacc tacaacaacc acatctacaa gcaaatctcc 120
agegagacag gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 180
tttgacttta acagattcca ctgccacttt tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 240
aacaactggg gatte 255
<210? 118 <211? 253 <212? DNA <213? serotyp 11 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400? 118 ggtaattcct ccggaaattg geattgegat tccacatggc tgggcgacag agtcatcacc
PL 221 877 B1
309
accagcaccc gaacctgggc cctgccaacc tacaacaacc acctctacaa acaaatctcc 12 0
agcgcttcaa cgggggccag caacgacaac cactactttg gctacagcac cccctggggg 180
tattttgact ttaacagatt ccactgccac ttctcaccac gtgactggca gcgactcatc 240
aacaacaact ggggattc 258
<210» 119 <211» 255 <212» DNA <213» serotyp 12 wirusa stowarzyszonego z adenowirusera <400» 119
ggtaattcct ccggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgaccg agtcattacc 60
accagcaccc ggacttgggc cctgcccacc tacaacaacc acctctacaa gcaaatctcc 120
agccaatcgg gtgccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ttgggggtat 180
tttgatttca acagattcca ctgccatttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 240
aacaactggg gattc 255
<210? 120 <211» 2205
<212» DNA <213» serotyp wirusa stowarzyszonego z adenowirusera, klon A3lvpl
<400» 120 atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaatcaga 60
cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccgccgaaac ctaaccaaca acaccgggac 120
gacagtaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 180
aaaggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240
caccagctca agcaagggga caacccgtac ctcaaataca accacgcgga cgctgaattt 300
caggagcgtc ttcaagaaga tacgtctttc gggggcaacc tcgggcgagc agtcttccag 360
gccaaaaaga gggtactcga gcctcttggt ctggttgagg aagctgttaa gacggctcct 420
ggaaaaaaga gacctataga gcagtctcct gcagaaccgg actcttcctc gggcatcggc 480
aaatcaggcc agcagcccgc taagaaaaga ctcaattttg gtcagactgg cgacacagag 540
tcagtcccag accctcaacc aatcggagaa ccccccgcag ccccctctgg tgtgggatct 600
aatacaatgg cttcaggcgg tggggcacca atggcagaca ataacgaagg cgccgacgga 660
gtgggtaatt cctcgggaaa ttggcattgc gattccacat ggatgggcga cagagttatc 720
accaccagca caagaacctg ggccctcccc acctacaata atcacctcta caagcaaatc 780
tccagcgaat cgggagccac caacgacaac cactacttcg gctacagcac cccctggggg 840
tattttgact ttaacagatt ccactgtcac ttctcaccac gtgactggca gcgactcatc 900
310
PL 221 877 B1 aaCaaCaBCt 3355^“”^-^5 RCCCaagaRS CtCaatttCa agCCCtiCHa catccuag~<
aagcragaccs cccaaaatca -aaaaccacg accatcccca atsaccttac caacaccatc
10;
caggtcttca cagactctga gtaccagctg ccctacgtcc ccggttcggc tcaccagggc
1030
1140 tgccttccgc cgt :&sc agacgccttc atgsttcctc agtacggcta cttgact
sscsst ęrcr c s gccaagcggt aggacgttct tcactctacc m-3” 5-5^5 ttttccccct » -t π λ Λ. i V »'
ggacgggaaa caacttcacc ttcagctaca cttttcaaga cgtgcctttc 1260
•cacagcagct acgcgcacag ccagagtctg gatcggctga tgaatcctcc cattgaccag 132C
cacctgtatt acctgagcaa aactcagggt acaagtggaa caacgcagca atcgagactg 1380
cagttcagcc aagctgggcc cagctccatg gctcagcagg ccaaaaactg gctaccggga 1440
cccagctscc gacagcagcg aatgtctaag acggctaatg acaacaacaa cagtgaattt 1500
gcttggactg cagccaccaa atattacctg aatggaagaa attccctggt caatcocggg 1560
cccccaatgg ccagtcacaa ggacgatgag caaaagtatt tccccatgca cggaaatctc 1620
aćctttggaa aacaaggcac aagaactacc aatgtggaca ttgaatcagt QCUi_ctu.i_£xC=; 1680
gacgaagaag aaatcagaac aactaatcct gcggctacag aacaatacgg acaggttgcc 1740
accaaccatc aC&QtCaC52 caccacagct tcctatggaa gtgtggacag ccsgggaatc 1800
t tac c tggsa tggtgtggca ggaccgccat gtctatctcc aaggtcccat tccggccaaa 1850
= —-r-^ł -= ' accc cgcacgcaca :atcct cccccgctca cgggaggcct tggaci caccctcctc cccagatcct gatcaaaaac acacctgtgc cagcgaatcc cgc:
accac:
ttcactcctg gaaagttcgc ctcgtccatt accc
gaaatagagt gggagctgca gaaagaaaac aacaaacgct ggaacccaga aattcagtac acctccaact acaacasgtc ggtgaatgtg gagtttaccg tggacgcaaa cggtgtttat tctgaacccc gccctattgg cactcgttac cttacccgga acttg

Claims (19)

1. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) obejmujący kapsyd AAV o sekwencji aminokwasowej AAV7 obejmującej aminokwasy 1 do 737 z Sek. NR ID.: 2 lub sekwencję, która w 95% lub więcej jest z nią identyczna, minigen mający odwrócone powtórzenia końcowe (ITR) AAV i gen homologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza.
2. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) według zastrz. 1, w którym kapsyd AAV ma białka kapsydowe vp1, białka kapsydowe vp2 i białka kapsydowe vp3, znamienny tym, że białka kapsydowe vp1 mają sekwencję, która w 95% lub więcej jest identyczna z aminokwasami 1 do 737 SEK. NR ID.: 2.
3. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) według zastrz. 1 lub zastrz. 2, znamienny tym, że białka kapsydowe vp1 mają sekwencję aminokwasową, która jest w co najmniej 99% identyczna z aminokwasami 1 do 737 z SEK. Nr ID.: 2.
4. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) według zastrz. 1-3, w którym kapsyd AAV ma białka kapsydowe vp1, białka kapsydowe vp2 i białka kapsydowe vp3, znamienny tym, że białka kapsydowe vp1 mają sekwencję aminokwasów od 1 do 737 SEK. NR ID.: 2.
5. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) według zastrz. 1-4, znamienny tym, że białka kapsydowe vp2 AAV mają sekwencję aminokwasową aminokwasów 138 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
6. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) według zastrz. 3-5, znamienny tym, że białka kapsydowe vp3 AAV mają sekwencję aminokwasową aminokwasów 203 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
7. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) według zastrz. 1 do 6, znamienny tym, że ITR pochodzą z AAV2.
8. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) obejmujący kapsyd AAV obejmujący co najmniej vp3 AAV7 mający sekwencję aminokwasową 203 do 737 z SEK. NR ID.: 2 lub sekwencję, która w 95% lub więcej jest z nią identyczna i minigen mający odwrócone powtórzenia końcowe (ITR) AAV i gen heterologiczny funkcjonalnie połączony z sekwencjami regulatorowymi, które kierują jego ekspresją w komórce gospodarza.
9. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) według zastrz. 8, w którym kapsyd AAV ma białka kapsydowe vp1, białka kapsydowe vp2 i białka kapsydowe vp3, znamienny tym, że białka kapsydowe vp1 mają sekwencję, która jest w 95% lub więcej identyczna z aminokwasami 203 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
10. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) według zastrz. 8, znamienny tym, że białka kapsydowe vp3 AAV mają sekwencję aminokwasową aminokwasów 203 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
11. Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV) według zastrz. 8-10, znamienny tym, że białka kapsydowe vp2 AAV mają sekwencję aminokwasową aminokwasów 138 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
12. Kompozycja, znamienna tym, że obejmuje AAV określony w zastrz. 1-11 i fizjologicznie kompatybilny nośnik.
13. Wyizolowane białko kapsydu obejmujące białko AAV7 wybrane z grupy składającej się z: białka kapsydowego vp1, aminokwasy (aa) 1 do 737 z SEK. NR ID.: 2;
białka kapsydowego vp2, (aa) 138 do 737 z SEK. NR ID.: 2; i białka kapsydowego vp3, (aa) 203 do 737 z SEK. NR ID.: 2.
14. Wyizolowana lub syntetyczna cząsteczka kwasu nukleinowego kodująca białko określone w zastrz. 13.
15. Wyizolowana lub syntetyczna cząsteczka kwasu nukleinowego kodująca fragment białka kapsydowego wirusa AAV 7, przy czym ta cząsteczka kwasu nukleinowego jest wybrana z grupy składającej się z:
vp1, nukleotydy (nt) 845 do 3061 z SEK. NR ID.: 59; vp2, (nt) 1256 do 3061 z SEK. NR ID.: 59; i vp3, (nt) 1454 do 3061 z SEK. NR ID.: 59.
16. Cząsteczka według zastrz. 14 lub 15, znamienna tym, że jest plazmidem.
17. Cząsteczka według zastrz. 14-16, znamienna tym, że obejmuje ponadto funkcjonalny gen rep AAV.
18. Sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV), obejmującego kapsyd AAV serotypu 7, znamienny tym, że obejmuje etap hodowania komórki gospodarza zawierającej (a) cząsteczkę określoną w zastrz. 14-16, która koduje kapsyd wirusa stowarzy312
PL 221 877 B1 szonego z adenowirusami; (b) funkcjonalny gen rep; (c) minigen obejmujący odwrócone powtórzenia końcowe (ITR) i transgen; i (d) geny adenowirusa kodujące wystarczające funkcje pomocnicze pozwalające na upakowanie minigenu do białka kapsydu AAV.
19. Komórka gospodarza in vitro zawierająca wirus stowarzyszony z adenowirusami określony w zastrz. 1-11 lub cząsteczkę określoną w zastrz. 13-16.
PL404537A 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem, kompozycja, wyizolowane białko kapsydu, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa, komórka gospodarza PL221877B1 (pl)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US35060701P 2001-11-13 2001-11-13
US34111701P 2001-12-17 2001-12-17
US37706602P 2002-05-01 2002-05-01
US38667502P 2002-06-05 2002-06-05

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL404537A1 PL404537A1 (pl) 2014-02-17
PL221877B1 true PL221877B1 (pl) 2016-06-30

Family

ID=27502639

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL409838A PL222683B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka,sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka
PL404537A PL221877B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem, kompozycja, wyizolowane białko kapsydu, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa, komórka gospodarza
PL397823A PL220644B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), kompozycja, wyizolowane białko kapsydowe, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania zrekombinowanego wirusa, komórka gospodarza
PL373864A PL217623B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Sposób wykrywania sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL409838A PL222683B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka,sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka

Family Applications After (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL397823A PL220644B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), kompozycja, wyizolowane białko kapsydowe, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania zrekombinowanego wirusa, komórka gospodarza
PL373864A PL217623B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Sposób wykrywania sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce

Country Status (22)

Country Link
US (15) US20030138772A1 (pl)
EP (4) EP1310571B1 (pl)
JP (6) JP4677187B2 (pl)
KR (2) KR101015854B1 (pl)
CN (6) CN103555677B (pl)
AT (2) ATE520707T1 (pl)
AU (1) AU2002361573B2 (pl)
BR (3) BR122016004944B8 (pl)
CA (6) CA3066428C (pl)
DE (1) DE60209193T2 (pl)
DK (1) DK1310571T3 (pl)
ES (3) ES2258601T3 (pl)
HU (2) HU229379B1 (pl)
IL (11) IL161827A0 (pl)
MX (3) MX346493B (pl)
NO (4) NO334379B1 (pl)
NZ (7) NZ532635A (pl)
PH (2) PH12014501487A1 (pl)
PL (4) PL222683B1 (pl)
SG (5) SG157224A1 (pl)
WO (1) WO2003042397A2 (pl)
ZA (1) ZA200403360B (pl)

Families Citing this family (638)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0932694A2 (en) 1996-09-11 1999-08-04 THE UNITED STATES GOVERNMENT as represented by THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Aav4 vector and uses thereof
DE69939169D1 (de) 1998-05-28 2008-09-04 Us Gov Health & Human Serv Aav5 vektoren und deren verwendung
WO2004060278A2 (en) 2002-12-06 2004-07-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals
US7226739B2 (en) 2001-03-02 2007-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc Methods for rapid detection and identification of bioagents in epidemiological and forensic investigations
US7666588B2 (en) 2001-03-02 2010-02-23 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA and characterization of mitochondrial DNA heteroplasmy
US7718354B2 (en) 2001-03-02 2010-05-18 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals
US20040121309A1 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Ecker David J. Methods for rapid detection and identification of bioagents in blood, bodily fluids, and bodily tissues
US20030027135A1 (en) 2001-03-02 2003-02-06 Ecker David J. Method for rapid detection and identification of bioagents
US7217510B2 (en) 2001-06-26 2007-05-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for providing bacterial bioagent characterizing information
US8073627B2 (en) 2001-06-26 2011-12-06 Ibis Biosciences, Inc. System for indentification of pathogens
CN103555677B (zh) 2001-11-13 2018-01-30 宾夕法尼亚大学托管会 检测和/或鉴定腺伴随病毒(aav)序列以及分离所鉴定的新型序列的方法
PT2573170T (pt) * 2001-12-17 2018-03-26 Univ Pennsylvania Sequências de um vírus adenoassociado (aav) de serotipo 9, vetor contendo as mesmas, e suas utilizações
WO2003052051A2 (en) 2001-12-17 2003-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) serotype 8 sequences
CA2426283C (en) 2002-04-29 2006-06-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for direct rescue and amplification of integrated viruses from cellular dna of tissues
US7419817B2 (en) 2002-05-17 2008-09-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services, Nih. Scalable purification of AAV2, AAV4 or AAV5 using ion-exchange chromatography
AU2003265855A1 (en) * 2002-08-28 2004-03-19 University Of Florida Modified aav
US8046171B2 (en) 2003-04-18 2011-10-25 Ibis Biosciences, Inc. Methods and apparatus for genetic evaluation
US8057993B2 (en) 2003-04-26 2011-11-15 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of coronaviruses
US8158354B2 (en) 2003-05-13 2012-04-17 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
US7964343B2 (en) 2003-05-13 2011-06-21 Ibis Biosciences, Inc. Method for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
WO2005017101A2 (en) 2003-05-19 2005-02-24 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH & HUMAN SERVICES, NATIONAL INSTITUTES OF HEALTH Avian adenoassociated virus (aaav) and uses thereof
JP2007524386A (ja) 2003-06-19 2007-08-30 アビジェン， インコーポレイテッド 減少した免疫反応性を有するａａｖビリオン、およびその使用
US9233131B2 (en) 2003-06-30 2016-01-12 The Regents Of The University Of California Mutant adeno-associated virus virions and methods of use thereof
US9441244B2 (en) 2003-06-30 2016-09-13 The Regents Of The University Of California Mutant adeno-associated virus virions and methods of use thereof
AU2010201278B2 (en) * 2003-09-01 2012-11-15 Academisch Medisch Centrum AAV vectors for in vivo gene therapy of rheumatoid arthritis
US8529885B2 (en) * 2003-09-01 2013-09-10 Academisch Medisch Centrum AAV vectors for in vivo gene therapy of rheumatoid arthritis
US8097416B2 (en) 2003-09-11 2012-01-17 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US8546082B2 (en) 2003-09-11 2013-10-01 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US8288523B2 (en) 2003-09-11 2012-10-16 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of bacteria
DK3211085T3 (da) * 2003-09-30 2021-06-21 Univ Pennsylvania Klader af adeno-associeret virus (aav), sekvenser, vektorer indeholdende disse og anvendelser deraf
AU2011250849B2 (en) * 2003-09-30 2013-09-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (AAV) clades, sequences, vectors containing same, and uses therefor
WO2005056807A2 (en) 2003-12-04 2005-06-23 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, National Institutes Of Health Bovine adeno-associated viral (baav) vector and uses thereof
US7666592B2 (en) 2004-02-18 2010-02-23 Ibis Biosciences, Inc. Methods for concurrent identification and quantification of an unknown bioagent
US8119336B2 (en) 2004-03-03 2012-02-21 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of alphaviruses
EP1742657B1 (en) 2004-04-28 2013-11-06 The Trustees of The University of Pennsylvania Immunization regimen with e4-deleted adenovirus prime and e1-deleted adenovirus boost
ES2361000T3 (es) 2004-04-28 2011-06-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Suministro secuencial de moléculas inmunogénicas mediante administraciones de un adenovirus y de un virus adeno-asociado.
EP2458619B1 (en) 2004-05-24 2017-08-02 Ibis Biosciences, Inc. Mass spectrometry with selective ion filtration by digital thresholding
US20050266411A1 (en) 2004-05-25 2005-12-01 Hofstadler Steven A Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA
US7811753B2 (en) 2004-07-14 2010-10-12 Ibis Biosciences, Inc. Methods for repairing degraded DNA
EP1771571A2 (en) * 2004-07-30 2007-04-11 Targeted Genetics Corporation Recombinant aav based vaccine methods
US7309589B2 (en) * 2004-08-20 2007-12-18 Vironix Llc Sensitive detection of bacteria by improved nested polymerase chain reaction targeting the 16S ribosomal RNA gene and identification of bacterial species by amplicon sequencing
WO2006135400A2 (en) 2004-08-24 2006-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapid identification of recombinant organisms
EP1804781A1 (en) * 2004-10-05 2007-07-11 Merz Pharma GmbH & Co.KGaA Novel cyclic and acyclic propenones for treating cns disorders
US8084207B2 (en) 2005-03-03 2011-12-27 Ibis Bioscience, Inc. Compositions for use in identification of papillomavirus
US8182992B2 (en) 2005-03-03 2012-05-22 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of adventitious viruses
US8999678B2 (en) * 2005-04-07 2015-04-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of increasing the function of an AAV vector
WO2006119432A2 (en) * 2005-04-29 2006-11-09 The Government Of The U.S.A., As Rep. By The Sec., Dept. Of Health & Human Services Isolation, cloning and characterization of new adeno-associated virus (aav) serotypes
EP1904655A2 (en) 2005-07-21 2008-04-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapid identification and quantitation of nucleic acid variants
WO2007100397A2 (en) * 2005-11-28 2007-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for use in identification of adventitious contaminant viruses
US7588772B2 (en) 2006-03-30 2009-09-15 Board Of Trustees Of The Leland Stamford Junior University AAV capsid library and AAV capsid proteins
EP2018421B1 (en) 2006-04-28 2012-12-19 The Trustees of the University of Pennsylvania Scalable production method for aav
EP2044199B1 (en) * 2006-07-25 2012-11-14 Celladon Corporation Extended antegrade epicardial coronary infusion of adeno-associated viral vectors comprising serca2a for gene therapy
EP2064332B1 (en) 2006-09-14 2012-07-18 Ibis Biosciences, Inc. Targeted whole genome amplification method for identification of pathogens
JP5680304B2 (ja) 2007-02-23 2015-03-04 アイビス バイオサイエンシズ インコーポレイティッド 迅速な法医学的ｄｎａ分析法
EP2623605B1 (en) * 2007-04-09 2018-11-28 University of Florida Research Foundation, Inc. RAAV vector compositions having tyrosine-modified capsid proteins and methods for use
US9611302B2 (en) 2007-04-09 2017-04-04 University Of Florida Research Foundation, Inc. High-transduction-efficiency RAAV vectors, compositions, and methods of use
US9725485B2 (en) 2012-05-15 2017-08-08 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV vectors with high transduction efficiency and uses thereof for gene therapy
US9598724B2 (en) 2007-06-01 2017-03-21 Ibis Biosciences, Inc. Methods and compositions for multiple displacement amplification of nucleic acids
EP2058401A1 (en) * 2007-10-05 2009-05-13 Genethon Widespread gene delivery to motor neurons using peripheral injection of AAV vectors
CN102159713A (zh) 2008-05-20 2011-08-17 Eos神经科学公司 用于递送光敏蛋白的载体和使用方法
US9217155B2 (en) 2008-05-28 2015-12-22 University Of Massachusetts Isolation of novel AAV'S and uses thereof
WO2010033625A1 (en) 2008-09-16 2010-03-25 Ibis Biosciences, Inc. Microplate handling systems and related computer program products and methods
EP2347254A2 (en) 2008-09-16 2011-07-27 Ibis Biosciences, Inc. Sample processing units, systems, and related methods
WO2010033599A2 (en) 2008-09-16 2010-03-25 Ibis Biosciences, Inc. Mixing cartridges, mixing stations, and related kits, systems, and methods
EP2396803A4 (en) 2009-02-12 2016-10-26 Ibis Biosciences Inc IONIZATION PROBE ASSEMBLIES
ES2724122T3 (es) 2009-04-30 2019-09-06 Univ Pennsylvania Composiciones para dirigir células de las vías respiratorias de conducción que comprenden construcciones de virus adenoasociado
WO2010138263A2 (en) 2009-05-28 2010-12-02 University Of Massachusetts Novel aav 's and uses thereof
WO2010143761A1 (ko) * 2009-06-12 2010-12-16 (주)바이오니아 미지시료 내 감염성 미생물을 신속하게 검출하는 방법
EP2454000A4 (en) 2009-07-17 2016-08-10 Ibis Biosciences Inc SYSTEMS FOR IDENTIFYING BIOLOGICAL SUBSTANCES
US8950604B2 (en) 2009-07-17 2015-02-10 Ibis Biosciences, Inc. Lift and mount apparatus
US20120244127A1 (en) 2009-10-01 2012-09-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV Vectors Expressing SEC10 for Treating Kidney Damage
US9890408B2 (en) 2009-10-15 2018-02-13 Ibis Biosciences, Inc. Multiple displacement amplification
SG10201908848RA (en) 2010-03-29 2019-10-30 Univ Pennsylvania Pharmacologically induced transgene ablation system
US9315825B2 (en) 2010-03-29 2016-04-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pharmacologically induced transgene ablation system
DK2826860T3 (en) 2010-04-23 2018-12-03 Univ Massachusetts CNS targeting AAV vectors and methods for their use
CA2833905C (en) 2010-04-23 2019-09-10 University Of Massachusetts Multicistronic expression constructs
EP2561075B1 (en) 2010-04-23 2018-06-27 University of Massachusetts Aav-based treatment of cholesterol-related disorders
US9309534B2 (en) 2010-07-12 2016-04-12 Universidad Autonoma De Barcelona Gene therapy composition for use in diabetes treatment
US8663624B2 (en) 2010-10-06 2014-03-04 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus virions with variant capsid and methods of use thereof
EP2699688A1 (en) 2011-04-20 2014-02-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regimens and compositions for aav-mediated passive immunization of airborne pathogens
EP3318634A1 (en) 2011-04-21 2018-05-09 University of Massachusetts Raav-based compositions and methods for treating diseases involving dominant-negative or gain of function mutations
DK4005603T3 (da) 2011-04-22 2024-11-25 Univ California Adeno-associerede virus-virioner med variant kapsid og fremgangsmåder til anvendelse heraf
US9169299B2 (en) 2011-08-24 2015-10-27 The Board Of Trustees Of The Leleand Stanford Junior University AAV capsid proteins for nucleic acid transfer
US20130136729A1 (en) * 2011-11-11 2013-05-30 University of Virginia Patent Foundation, d/b/a University of Virginia Licensing & Ventures Group Compositions and methods for targeting and treating diseases and injuries using adeno-associated virus vectors
WO2013123503A1 (en) 2012-02-17 2013-08-22 The Children's Hospital Of Philadelphia Aav vector compositions and methods for gene transfer to cells, organs and tissues
US10093947B2 (en) * 2012-02-28 2018-10-09 Cornell University AAV-directed persistent expression of an anti-nicotine antibody gene for smoking cessation
US10004811B2 (en) * 2012-04-13 2018-06-26 Cornell University Development of a highly efficient second generation nicotine-conjugate vaccine to treat nicotine addiction
US10294281B2 (en) 2012-05-15 2019-05-21 University Of Florida Research Foundation, Incorporated High-transduction-efficiency rAAV vectors, compositions, and methods of use
US12358954B2 (en) 2012-05-15 2025-07-15 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Capsid-modified rAAV vector compositions and methods therefor
EP2692868A1 (en) 2012-08-02 2014-02-05 Universitat Autònoma De Barcelona Adeno-associated viral (AAV) vectors useful for transducing adipose tissue
US9567376B2 (en) 2013-02-08 2017-02-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Enhanced AAV-mediated gene transfer for retinal therapies
DK2956477T4 (da) 2013-02-15 2024-04-15 Bioverativ Therapeutics Inc Optimeret faktor viii-gen
US8957044B2 (en) 2013-03-01 2015-02-17 Wake Forest University Health Sciences Systemic gene replacement therapy for treatment of X-linked myotubular myopathy (XLMTM)
SG10201707319UA (en) 2013-03-15 2017-10-30 Univ Pennsylvania Compositions and methods for treating mpsi
US9719106B2 (en) 2013-04-29 2017-08-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Tissue preferential codon modified expression cassettes, vectors containing same, and uses thereof
CA2907799A1 (en) 2013-05-31 2014-12-04 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus variants and methods of use thereof
CA3209883A1 (en) 2013-07-22 2015-01-29 The Children's Hospital Of Philadelphia Variant aav and compositions, methods and uses for gene transfer to cells, organs and tissues
HUE052814T2 (hu) 2014-01-31 2021-05-28 Temple Univ Of The Commonwealth System A szívelégtelenség terápiájához célfehérjeként alkamazott BAG3
GB201403684D0 (en) 2014-03-03 2014-04-16 King S College London Vector
US10072251B2 (en) 2014-02-19 2018-09-11 University Of Massachusetts Recombinant AAVS having useful transcytosis properties
WO2015138357A2 (en) 2014-03-09 2015-09-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of otc deficency
ES3042252T3 (en) 2014-03-17 2025-11-19 Adverum Biotechnologies Inc Compositions and methods for enhanced gene expression in cone cells
AU2015231294B2 (en) 2014-03-18 2020-10-29 University Of Massachusetts rAAV-based compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis
EP3628334B1 (en) 2014-03-21 2023-06-28 Genzyme Corporation Gene therapy for retinitis pigmentosa
EP2933335A1 (en) 2014-04-18 2015-10-21 Genethon A method of treating peripheral neuropathies and motor neuron diseases
WO2015164723A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and compositions for treating metastatic breast cancer and other cancers in the brain
WO2015164786A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 University Of Massachusetts Recombinant aav vectors useful for reducing immunity against transgene products
US11555059B2 (en) 2014-04-25 2023-01-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania LDLR variants and their use in compositions for reducing cholesterol levels
DK3142750T3 (da) 2014-05-13 2020-09-14 Univ Pennsylvania Sammensætninger omfattende aav, som udtrykker dobbelt-antistofkonstrukter og anvendelser deraf
WO2015187825A2 (en) 2014-06-03 2015-12-10 University Of Massachusetts Compositions and methods for modulating dysferlin expression
WO2015191508A1 (en) 2014-06-09 2015-12-17 Voyager Therapeutics, Inc. Chimeric capsids
EP2960336A1 (en) 2014-06-27 2015-12-30 Genethon Efficient systemic treatment of dystrophic muscle pathologies
US11008561B2 (en) 2014-06-30 2021-05-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor IX gene
CN107074805B (zh) 2014-07-03 2021-02-26 德州大学系统董事会 用于治疗疾病的gls1抑制剂
EP4012035B1 (en) 2014-09-16 2024-11-06 Genzyme Corporation Adeno-associated viral vectors for treating myocilin (myoc) glaucoma
WO2016044478A1 (en) 2014-09-16 2016-03-24 Genzyme Corporation Adeno-associated viral vectors for treating myocilin (myoc) glaucoma
WO2016054554A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 University Of Massachusetts Heterologous targeting peptide grafted aavs
EP3795580A1 (en) 2014-10-03 2021-03-24 University of Massachusetts High efficiency library-identified aav vectors
WO2016065001A1 (en) 2014-10-21 2016-04-28 University Of Massachusetts Recombinant aav variants and uses thereof
CN112553229A (zh) 2014-11-05 2021-03-26 沃雅戈治疗公司 用于治疗帕金森病的aadc多核苷酸
RU2020108189A (ru) 2014-11-14 2020-03-11 Вояджер Терапьютикс, Инк. Композиции и способы лечения бокового амиотрофического склероза (als)
MX2017006217A (es) 2014-11-14 2018-05-02 Voyager Therapeutics Inc Polinucleotidos moduladores.
EP3230441A4 (en) 2014-12-12 2018-10-03 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the production of scaav
EP3242945B1 (en) 2015-01-07 2021-09-01 Universitat Autònoma de Barcelona Single-vector gene construct comprising insulin and glucokinase genes
WO2016115503A1 (en) 2015-01-16 2016-07-21 Voyager Therapeutics, Inc. Central nervous system targeting polynucleotides
IL296391B2 (en) 2015-01-20 2024-06-01 Genzyme Corp Analytical ultracentrifugation for characterization of recombinant viral particles
US20180030096A1 (en) 2015-02-03 2018-02-01 University Of Florida Research Foundation, Inc. Recombinant aav1, aav5, and aav6 capsid mutants and uses thereof
JP6929791B2 (ja) 2015-02-09 2021-09-01 デューク ユニバーシティ エピゲノム編集のための組成物および方法
NZ772772A (en) 2015-02-10 2024-12-20 Genzyme Corp Enhanced delivery of viral particles to the striatum and cortex
SG11201706444TA (en) 2015-02-10 2017-09-28 Genzyme Corp VARIANT RNAi
US10584321B2 (en) 2015-02-13 2020-03-10 University Of Massachusetts Compositions and methods for transient delivery of nucleases
CN114480502A (zh) 2015-03-02 2022-05-13 阿德夫拉姆生物技术股份有限公司 用于将多核苷酸玻璃体内递送到视网膜视锥的组合物和方法
JP2018509164A (ja) 2015-03-10 2018-04-05 ザ・トラスティーズ・オブ・コロンビア・ユニバーシティ・イン・ザ・シティ・オブ・ニューヨーク 組換えＧｌｕｔ１アデノ随伴ウイルスベクターコンストラクトおよびＧｌｕｔ１発現を回復させる方法
WO2016154344A1 (en) 2015-03-24 2016-09-29 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus variants and methods of use thereof
TWI707951B (zh) 2015-04-08 2020-10-21 美商健臻公司 過大腺相關載體之製造
EP4491733A3 (en) 2015-04-23 2025-03-26 University of Massachusetts Modulation of aav vector transgene expression
CA3021949C (en) 2015-04-24 2023-10-17 University Of Massachusetts Modified aav constructs and uses thereof
EP3288594B1 (en) 2015-04-27 2022-06-29 The Trustees of The University of Pennsylvania Dual aav vector system for crispr/cas9 mediated correction of human disease
GB201508026D0 (en) 2015-05-11 2015-06-24 Ucl Business Plc Capsid
US11535665B2 (en) 2015-05-13 2022-12-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV-mediated expression of anti-influenza antibodies and methods of use thereof
WO2016186772A2 (en) 2015-05-16 2016-11-24 Genzyme Corporation Gene editing of deep intronic mutations
HUE068603T2 (hu) 2015-06-23 2025-01-28 Childrens Hospital Philadelphia Módosított IX-es faktor, valamint készítmények, eljárások és alkalmazások sejtekbe, szervekbe és szövetekbe történõ géntranszferhez
US10676735B2 (en) 2015-07-22 2020-06-09 Duke University High-throughput screening of regulatory element function with epigenome editing technologies
AU2016302335B2 (en) 2015-08-06 2022-08-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania GLP-1 and use thereof in compositions for treating metabolic diseases
CN108351350B (zh) 2015-08-25 2022-02-18 杜克大学 使用rna指导型内切核酸酶改善基因组工程特异性的组合物和方法
CN108137664B (zh) 2015-08-31 2021-11-26 宾夕法尼亚州大学信托人 用于治疗伴侣动物的aav-epo
US10988519B2 (en) 2015-09-24 2021-04-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Composition and method for treating complement-mediated disease
JP7064214B2 (ja) 2015-09-28 2022-05-10 ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル 抗体回避性ウイルスベクターのための方法および組成物
WO2017062750A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods useful in treating stargardt's disease and other ocular disorders
US11970710B2 (en) 2015-10-13 2024-04-30 Duke University Genome engineering with Type I CRISPR systems in eukaryotic cells
WO2017070525A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 University Of Massachusetts Methods and compositions for treating metabolic imbalance in neurodegenerative disease
US11426469B2 (en) 2015-10-22 2022-08-30 University Of Massachusetts Prostate-targeting adeno-associated virus serotype vectors
WO2017075335A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Voyager Therapeutics, Inc. Regulatable expression using adeno-associated virus (aav)
CA3003435A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Intrathecal administration of adeno-associated-viral vectors for gene therapy
HK1254836A1 (zh) 2015-10-30 2019-07-26 Nbe-Therapeutics Ag 抗-ror1抗体
AU2016362477A1 (en) 2015-12-02 2018-06-14 Voyager Therapeutics, Inc. Assays for the detection of AAV neutralizing antibodies
FR3044926B1 (fr) 2015-12-09 2020-01-31 Genethon Outils de therapie genique efficaces pour le saut de l'exon 53 de la dystrophine
US11015173B2 (en) 2015-12-11 2021-05-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for AAV1
WO2017100676A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for aav8
US11098286B2 (en) 2015-12-11 2021-08-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for AAV9
EP3387118B1 (en) 2015-12-11 2022-04-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for aavrh10
CA3008142A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating familial hypercholesterolemia
JP7057281B2 (ja) 2015-12-14 2022-04-19 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 眼疾患のための遺伝子療法
JP7061067B2 (ja) 2015-12-14 2022-04-27 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア クリグラー・ナジャー症候群の処置のための組成物
CA3008268A1 (en) 2015-12-15 2017-06-22 Genzyme Corporation Adeno-associated viral vectors for treating mucolipidosis type ii
BR112018012660B1 (pt) 2015-12-22 2023-12-19 Board Of Regents, The University Of Texas System Sal, solvato, ou polimorfo de um composto; polimorfo de composto sólido; composição; e uso de um sal, solvato ou polimorfo
MX2018008926A (es) 2016-01-20 2019-01-10 Scripps Research Inst Composiciones de anticuerpo contra ror1 y métodos relacionados.
KR20180118659A (ko) 2016-02-01 2018-10-31 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 최적화된 viii 인자 유전자
EP3411059A4 (en) * 2016-02-02 2019-10-16 University Of Massachusetts METHOD FOR INCREASING THE EFFECTIVENESS OF THE SYSTEMIC DELIVERY OF AVV GENES TO THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM
WO2017136500A1 (en) 2016-02-03 2017-08-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type i
EP3413928B1 (en) 2016-02-12 2022-04-20 University of Massachusetts Anti-angiogenic mirna therapeutics for inhibiting corneal neovascularization
US10729789B2 (en) * 2016-03-01 2020-08-04 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for adeno-associated virus mediated gene expression in myofibroblast-like cells
US11207426B2 (en) 2016-04-05 2021-12-28 University Of Massachusetts Compositions and methods for selective inhibition of grainyhead-like protein expression
WO2017180587A2 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
US20190127713A1 (en) 2016-04-13 2019-05-02 Duke University Crispr/cas9-based repressors for silencing gene targets in vivo and methods of use
AU2017248656B2 (en) * 2016-04-15 2023-07-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel AAV8 mutant capsids and compositions containing same
WO2017181113A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 The Trustees Of The University Of Pennsyvania Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type ii
WO2017181105A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 University Of Massachusetts Methods and compositions for treating metabolic imbalance
WO2017180857A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating hemophilia a
WO2017180861A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 The Trustees Of The University Of Pennsulvania Gene therapy for treating hemophilia b
IL322403A (en) 2016-04-15 2025-09-01 Univ Pennsylvania Preparations for the treatment of wet age-related macular degeneration
US11401527B2 (en) 2016-04-17 2022-08-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods useful for prophylaxis of organophosphates
US11299751B2 (en) 2016-04-29 2022-04-12 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
EP3448874A4 (en) 2016-04-29 2020-04-22 Voyager Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS FOR TREATING A DISEASE
GB201608046D0 (en) * 2016-05-09 2016-06-22 Cambridge Entpr Ltd And Syndey Children S Hospitals Network Randwick And Westmead Incorporating The Treatment of complement-mediated disorders
CN116333057A (zh) 2016-05-13 2023-06-27 4D分子治疗有限公司 腺相关病毒变体衣壳和其使用方法
AU2017267665C1 (en) 2016-05-18 2023-10-05 Voyager Therapeutics, Inc. Modulatory polynucleotides
BR112018073472A2 (pt) 2016-05-18 2019-08-27 Voyager Therapeutics, Inc. composições e métodos de tratamento da doença de huntington
CN109313018B (zh) * 2016-06-08 2021-12-10 索尼公司 成像控制装置和方法、以及车辆
WO2017218852A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 University Of Massachusetts Recombinant adeno-associated viruses for delivering gene editing molecules to embryonic cells
KR20190096329A (ko) 2016-07-05 2019-08-19 유니버시티 오브 매사추세츠 녹내장에서 신경보호 요법으로서 sfasl의 aav2-매개된 유전자 전달
KR102526506B1 (ko) 2016-07-08 2023-05-03 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 Rdh12가 연루된 장애 및 질환의 치료를 위한 방법 및 조성물
EP4275747A3 (en) 2016-07-19 2024-01-24 Duke University Therapeutic applications of cpf1-based genome editing
WO2018022511A1 (en) 2016-07-25 2018-02-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions comprising a lecithin cholesterol acyltransferase variant and uses thereof
IL263801B2 (en) 2016-07-26 2024-01-01 Biomarin Pharm Inc Novel adeno-associated virus capsid proteins
CA3029833A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus virions with variant capsid and methods of use thereof
US11698377B2 (en) 2016-08-15 2023-07-11 Genzyme Corporation Methods for detecting AAV
AU2017313917B2 (en) 2016-08-18 2023-12-21 The Regents Of The University Of California CRISPR-Cas genome engineering via a modular AAV delivery system
WO2018044933A1 (en) 2016-08-30 2018-03-08 The Regents Of The University Of California Methods for biomedical targeting and delivery and devices and systems for practicing the same
US10457940B2 (en) 2016-09-22 2019-10-29 University Of Massachusetts AAV treatment of Huntington's disease
EP3518985A4 (en) 2016-09-29 2020-08-05 University of Florida Research Foundation, Incorporated AAVRH.10 VARIANTS WITH HOST ANTIBODY EXHAUST CAPACITIES AND MODIFIED TISSUE TARGETING PROPERTIES
US11578340B2 (en) 2016-10-13 2023-02-14 University Of Massachusetts AAV capsid designs
AU2017345470B2 (en) 2016-10-19 2023-08-03 Adverum Biotechnologies, Inc. Modified AAV capsids and uses thereof
EP3548065B1 (en) 2016-12-01 2022-11-09 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Pharmaceutical compositions for the treatment of retinal degenerative diseases
WO2018112225A1 (en) * 2016-12-14 2018-06-21 The J. David Gladstone Institutes Methods and compositions for generating a deletion library and for identifying a defective interfering particle (dip)
EP3562494A4 (en) 2016-12-30 2020-08-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania GENE THERAPY FOR THE TREATMENT OF PHENYLKETONURIS
KR20190106990A (ko) 2017-01-20 2019-09-18 유니버시티 오브 피츠버그-오브 더 커먼웰쓰 시스템 오브 하이어 에듀케이션 제대혈 이식(ucbt) 및 증가된 갈락토세레브로시다아제(galc) 발현을 이용한 크라베병의 치료
KR20250022877A (ko) 2017-01-31 2025-02-17 리젠엑스바이오 인크. 완전히-인간 글리코실화된 인간 알파-l-이두로니다아제(idua)를 이용한 뮤코다당증 1형의 치료
KR20190118163A (ko) 2017-02-20 2019-10-17 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 가족성 고콜레스테롤혈증을 치료하기 위한 유전자 요법
JOP20190200A1 (ar) 2017-02-28 2019-08-27 Univ Pennsylvania تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي
US10786568B2 (en) 2017-02-28 2020-09-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV mediated influenza vaccines
SI3589730T1 (sl) 2017-02-28 2024-04-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-povezan virus (AAV) clade F vektor in njihova uporaba
CN119752819A (zh) 2017-03-01 2025-04-04 宾夕法尼亚州立大学托管会 用于眼部病症的基因疗法
WO2018158397A1 (en) 2017-03-02 2018-09-07 Genethon Method for removing anti-aav antibodies from a blood-derived composition
JP7341900B2 (ja) 2017-03-03 2023-09-11 オブシディアン セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫療法のためのｃｄ１９組成物及び方法
AU2018226857B2 (en) 2017-03-03 2025-01-02 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immunotherapy
CN118360335A (zh) 2017-04-05 2024-07-19 马萨诸塞大学 小基因治疗
US11499154B2 (en) 2017-04-10 2022-11-15 Genethon Antisense targeting dynamin 2 and use for the treatment of centronuclear myopathies and neuropathies
WO2018191666A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Regenxbio Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis ii with recombinant human iduronate-2 sulfatase (ids) produced by human neural or glial cells
US11879133B2 (en) 2017-04-24 2024-01-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for ocular disorders
CN111108198A (zh) 2017-05-05 2020-05-05 沃雅戈治疗公司 治疗亨廷顿病的组合物和方法
CA3061652A1 (en) 2017-05-05 2018-11-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als)
EP3622073A4 (en) 2017-05-09 2021-01-06 University of Massachusetts METHOD FOR TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS)
IL316926A (en) 2017-05-11 2025-01-01 Univ Pennsylvania Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinosis
CA3099990A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 University Of Massachusetts Viral vector production
CN108103058A (zh) * 2017-05-12 2018-06-01 北京五加和分子医学研究所有限公司 一种i型糖尿病的基因治疗药物
IL306098A (en) 2017-05-24 2023-11-01 Univ Barcelona Autonoma Viral expression vectors containing the coding sequence for FIBROBLAST GROWTH FACTOR 21 (FGF21)
CA3098592A1 (en) 2017-05-31 2018-12-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating peroxisomal disorders
BR112019025732A2 (pt) 2017-06-06 2020-06-30 University Of Massachusetts vetores de aav auto-reguladores para expressão segura de mecp2 na síndrome de rett
WO2018232149A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for ocular disorders
US10693918B2 (en) 2017-06-15 2020-06-23 Palo Alto Networks, Inc. Radio access technology based security in service provider networks
US10708306B2 (en) 2017-06-15 2020-07-07 Palo Alto Networks, Inc. Mobile user identity and/or SIM-based IoT identity and application identity based security enforcement in service provider networks
US10812532B2 (en) 2017-06-15 2020-10-20 Palo Alto Networks, Inc. Security for cellular internet of things in mobile networks
JOP20190269A1 (ar) 2017-06-15 2019-11-20 Voyager Therapeutics Inc بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون
US11050789B2 (en) 2017-06-15 2021-06-29 Palo Alto Networks, Inc. Location based security in service provider networks
US10721272B2 (en) 2017-06-15 2020-07-21 Palo Alto Networks, Inc. Mobile equipment identity and/or IOT equipment identity and application identity based security enforcement in service provider networks
US10834136B2 (en) 2017-06-15 2020-11-10 Palo Alto Networks, Inc. Access point name and application identity based security enforcement in service provider networks
EP4302768A3 (en) * 2017-06-22 2024-05-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for producing regulatory immune cells and uses thereof
BR112019019015A2 (pt) 2017-06-30 2020-04-14 Univ California vírions de vírus adeno-associado com capsídeos variantes e seus métodos de uso
AU2018298133A1 (en) 2017-07-06 2020-01-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV9-mediated gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type I
PL3648783T3 (pl) 2017-07-07 2024-11-18 Genethon Nowe polinukleotydy kodujące ludzkie białko fkrp
CN111132626B (zh) 2017-07-17 2024-01-30 沃雅戈治疗公司 轨迹阵列引导系统
WO2019028306A2 (en) 2017-08-03 2019-02-07 Voyager Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR ADMINISTRATION OF ADENO-ASSOCIATED VIRUSES
EP3665193A1 (en) 2017-08-07 2020-06-17 NBE Therapeutics AG Anthracycline-based antibody drug conjugates having high in vivo tolerability
EP3676373A4 (en) * 2017-08-28 2021-06-09 The Regents of The University of California Adeno-associated virus capsid variants and methods of use thereof
BR112020005436B1 (pt) 2017-09-20 2022-08-02 4D Molecular Therapeutics Inc Proteína do capsídeo de variante do vírus adenoassociado, virion do aav recombinante (raav) infeccioso, composições, composições farmacêuticas e usos de virion de raav ou de composições farmacêuticas
JP7397488B2 (ja) 2017-09-22 2023-12-13 ユニバーシティ オブ マサチューセッツ Ｓｏｄ１二重発現ベクターおよびその使用
WO2019060662A1 (en) 2017-09-22 2019-03-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania GENE THERAPY FOR THE TREATMENT OF MUCOPOLYSACCHARIDOSE TYPE II
MY205041A (en) 2017-09-22 2024-09-29 Genzyme Corp Variant rnai
AU2018338728B2 (en) 2017-09-29 2025-01-02 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Rescue of central and peripheral neurological phenotype of Friedreich's Ataxia by intravenous delivery
WO2019070891A1 (en) * 2017-10-03 2019-04-11 Prevail Therapeutics, Inc. GENE THERAPIES FOR LYSOSOMAL DISORDERS
US12441998B2 (en) 2017-10-12 2025-10-14 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York SLC2A1 lncRNA as a biologic and related treatments and methods
CN111479924B (zh) 2017-10-16 2024-06-14 沃雅戈治疗公司 肌萎缩性侧索硬化症(als)的治疗
US20200237799A1 (en) 2017-10-16 2020-07-30 Voyager Therapeutics, Inc. Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als)
CN111727201A (zh) 2017-10-18 2020-09-29 再生生物股份有限公司 完全人源翻译后修饰的抗体治疗剂
CA3079565A1 (en) 2017-10-18 2019-04-25 Regenxbio Inc. Treatment of ocular diseases and metastatic colon cancer with human post-translationally modified vegf-trap
US10722487B2 (en) 2017-10-18 2020-07-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Glutaminase inhibitor therapy
FI3717636T3 (fi) 2017-11-27 2023-06-01 4D Molecular Therapeutics Inc Adenoassosioidun viruksen kapsidivariantteja ja käyttö angiogeneesin estämisessä
CN111989396A (zh) 2017-11-30 2020-11-24 宾夕法尼亚州大学信托人 用于iiib型粘多糖贮积病的基因疗法
JP7389744B2 (ja) 2017-11-30 2023-11-30 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア ムコ多糖症ｉｉｉａ型のための遺伝子療法
BR112020012336A2 (pt) 2017-12-19 2021-03-30 Akouos, Inc. Administração de anticorpos terapêuticos mediada por aav para o ouvido interno
US10610606B2 (en) 2018-02-01 2020-04-07 Homology Medicines, Inc. Adeno-associated virus compositions for PAH gene transfer and methods of use thereof
US20190256867A1 (en) 2018-02-01 2019-08-22 Homology Medicines, Inc. Adeno-associated virus compositions for restoring pah gene function and methods of use thereof
CN112041437A (zh) 2018-02-19 2020-12-04 同源药物公司 用于恢复f8基因功能的腺相关病毒组合物和其使用方法
US12558434B2 (en) 2018-02-20 2026-02-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions for treatment of wet age-related macular degeneration
MX2020008932A (es) 2018-02-27 2020-10-01 Univ Pennsylvania Novedosos vectores de virus adenoasociado (aav), vectores de aav que tienen una desamidacion reducida de la capside y usos de estos.
WO2019173434A1 (en) 2018-03-06 2019-09-12 Voyager Therapeutics, Inc. Insect cell manufactured partial self-complementary aav genomes
KR20200135433A (ko) 2018-03-23 2020-12-02 유니버시티 오브 매사추세츠 골 장애 치료를 위한 유전자 치료제
MX2020010464A (es) 2018-04-03 2021-01-29 Vectores de virus que evitan anticuerpos.
US12091435B2 (en) 2018-04-03 2024-09-17 Ginkgo Bioworks, Inc. Antibody-evading virus vectors
JP7425738B2 (ja) 2018-04-03 2024-01-31 ギンコ バイオワークス インコーポレイテッド 眼組織を標的とするウイルスベクター
US12054724B2 (en) 2018-04-10 2024-08-06 President And Fellows Of Harvard College AAV vectors encoding clarin-1 or GJB2 and uses thereof
EP3781677A4 (en) 2018-04-16 2022-01-19 University of Massachusetts COMPOSITIONS AND METHODS FOR IMPROVED GENE EDITTING
US12460226B2 (en) 2018-04-16 2025-11-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treating duchenne muscular dystrophy
CA3096293A1 (en) 2018-04-27 2019-10-31 Rocket Pharmaceuticals, Ltd. Gene therapy for cns degeneration
US11472848B2 (en) 2018-04-27 2022-10-18 University Of Massachusetts AAV capsids identified by in vivo library selection
US20210231560A1 (en) 2018-04-29 2021-07-29 Regenxbio Inc. Systems and methods of spectrophotometry for the determination of genome content, capsid content and full/empty ratios of adeno-associated virus particles
CA3098565A1 (en) 2018-04-29 2019-11-07 Claire G. ZHANG Scalable clarification process for recombinant aav production
US20210207168A1 (en) 2018-05-08 2021-07-08 Rutgers, The State University Of New Jersey Aav-compatible laminin-linker polymerization proteins
JP2021522811A (ja) 2018-05-09 2021-09-02 ビオマリン プハルマセウトイカル インコーポレイテッド フェニルケトン尿症の治療方法
TW202005978A (zh) 2018-05-14 2020-02-01 美商拜奧馬林製藥公司 新穎肝靶向腺相關病毒載體
AU2019268330A1 (en) 2018-05-15 2020-11-26 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of Parkinson's disease
TW202015742A (zh) 2018-05-15 2020-05-01 美商航海家醫療公司 投遞腺相關病毒（ａａｖ）之組成物和方法
EP3793686A1 (en) 2018-05-16 2021-03-24 Voyager Therapeutics, Inc. Aav serotypes for brain specific payload delivery
WO2019222444A2 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Voyager Therapeutics, Inc. Directed evolution
US12163129B2 (en) 2018-06-08 2024-12-10 University Of Massachusetts Antisense oligonucleotides to restore dysferlin protein expression in dysferlinopathy patient cells
US20220403001A1 (en) 2018-06-12 2022-12-22 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy
US12060567B2 (en) 2018-06-13 2024-08-13 Voyager Therapeutics, Inc. Engineered untranslated regions (UTR) for AAV production
KR102930150B1 (ko) 2018-06-14 2026-02-25 리젠엑스바이오 인크. 재조합 aav 생성을 위한 음이온 교환 크로마토그래피
US20210254103A1 (en) 2018-07-02 2021-08-19 Voyager Therapeutics, Inc. Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord
GB201811368D0 (en) 2018-07-11 2018-08-29 Ucb Biopharma Sprl Antibody
CN112512596B (zh) 2018-07-12 2025-12-12 火箭制药有限公司 治疗danon病的基因治疗载体
AU2019304569B2 (en) 2018-07-17 2023-07-06 Helixmith Co., Ltd Treatment of neuropathy with DNA constructs expressing IGF-1 isoforms
MX2021000810A (es) 2018-07-24 2021-04-28 Voyager Therapeutics Inc Sistemas y metodos para producir formulaciones de terapia genetica.
US12188040B2 (en) * 2018-07-30 2025-01-07 Gene Therapy Research Institution Co., Ltd. Method for enhancing gene expression using AAV vector
MX2021001395A (es) 2018-08-03 2021-08-11 Genzyme Corp Arni variante contra alfa-sinucleína.
EP3833745A1 (en) 2018-08-10 2021-06-16 REGENXBIO Inc. Scalable method for recombinant aav production
KR20210102870A (ko) 2018-08-30 2021-08-20 테나야 테라퓨틱스, 인코포레이티드 미오카르딘 및 ascl1을 사용한 심장 세포 재프로그래밍
CA3113470A1 (en) 2018-09-28 2020-04-02 President And Fellows Of Harvard College Mutant reverse tetracycline transactivators for expression of genes
CN113453702A (zh) 2018-09-28 2021-09-28 哈佛大学的校长及成员们 细胞重编程以逆转衰老并促进组织和组织再生
EP3856762A1 (en) 2018-09-28 2021-08-04 Voyager Therapeutics, Inc. Frataxin expression constructs having engineered promoters and methods of use thereof
US12274733B2 (en) 2018-09-28 2025-04-15 President And Fellows Of Harvard College Cellular reprogramming to reverse aging and promote organ and tissue regeneration
JP7534290B2 (ja) 2018-10-01 2024-08-14 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア Ｇｍ１ガングリオシドーシスの治療に有用な組成物
JP2022513318A (ja) 2018-10-01 2022-02-07 ウルトラジェニックス ファーマシューティカル インコーポレイテッド プロピオン酸血症を処置するための遺伝子治療
TW202035689A (zh) 2018-10-04 2020-10-01 美商航海家醫療公司 測量病毒載體粒子的效價及強度之方法
WO2020072844A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Voyager Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acid constructs encoding aav production proteins
EP4461814A3 (en) 2018-10-12 2025-02-26 Genzyme Corporation Generation of improved human pah for treatment of severe pku by liver-directed gene replacement therapy
WO2020077165A1 (en) 2018-10-12 2020-04-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for delivery of aav
CN112912518A (zh) 2018-10-15 2021-06-04 再生生物股份有限公司 用于测量复制缺陷型病毒载体和病毒的感染性的方法
CN113166781A (zh) 2018-10-15 2021-07-23 沃雅戈治疗公司 在杆状病毒/Sf9系统中大规模生产rAAV的表达载体
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
CA3116334A1 (en) 2018-10-22 2020-04-30 University Of Rochester Genome editing by directed non-homologous dna insertion using a retroviral integrase-cas9 fusion protein
EP3870600A1 (en) 2018-10-24 2021-09-01 Obsidian Therapeutics, Inc. Er tunable protein regulation
EP3880255A1 (en) 2018-11-16 2021-09-22 Astellas Pharma Inc. Method for treating muscular dystrophy by targeting utrophin gene
WO2020102645A1 (en) * 2018-11-16 2020-05-22 Asklepios Biopharmaceutical, Inc. Therapeutic adeno-associated virus for treating pompe disease
EP3887522A1 (en) 2018-11-29 2021-10-06 University of Massachusetts Modulation of sptlc1 via recombinant adeno-associated vectors
WO2020140007A1 (en) 2018-12-28 2020-07-02 University Of Rochester Gene therapy for best1 dominant mutations
PL3906066T3 (pl) 2019-01-04 2024-09-02 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Konstrukty do terapii genowej do leczenia choroby wilsona
BR112021013715A2 (pt) 2019-01-14 2021-09-21 University Of Rochester Proteína de fusão, molécula de ácido nucleico, métodos para modular a clivagem, a poliadenilação, ou ambas, de um transcrito de rna, para visualizar rna nuclear e para diminuir o número de rna nuclear ou para clivar rna nuclear, e, uso da proteína de fusão
EP3911410A1 (en) 2019-01-18 2021-11-24 Voyager Therapeutics, Inc. Methods and systems for producing aav particles
KR20210130158A (ko) 2019-01-31 2021-10-29 오레곤 헬스 앤드 사이언스 유니버시티 Aav 캡시드의 전사 의존적 유도 진화를 사용하는 방법
US20220054655A1 (en) 2019-02-22 2022-02-24 University Of Massachusetts Oxr1 gene therapy
BR112021015817A2 (pt) 2019-02-22 2021-10-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Vírus adeno-associado recombinante para tratamento de neurodegeneração com início na idade adulta associado a grn
BR112021016501A2 (pt) 2019-02-25 2021-10-26 Novartis Ag Composições e métodos para tratar distrofia cristalina de bietti
CN113710693B (zh) 2019-02-25 2025-07-15 马萨诸塞大学 Dna结合结构域反式激活因子及其用途
US20220154211A1 (en) 2019-02-25 2022-05-19 Novartis Ag Compositions and methods to treat bietti crystalline dystrophy
TW202045728A (zh) 2019-02-26 2020-12-16 賓州大學委員會 用於治療克拉培氏病之組成物
WO2020176747A1 (en) 2019-02-28 2020-09-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Adeno-associated virus vectors for the delivery of therapeutics
JP7637060B2 (ja) 2019-03-04 2025-02-27 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア Ａｋｔ経路を標的とする神経保護遺伝子療法
JP7698583B2 (ja) 2019-03-21 2025-06-25 ギンコ バイオワークス インコーポレイテッド 組換えアデノ随伴ウイルスベクター
JP7635139B2 (ja) 2019-03-25 2025-02-25 ジェネトン オーバーラップａａｖベクターを使用する大きいサイズのクアシジストロフィンの産生
SG11202110607WA (en) 2019-04-01 2021-10-28 Tenaya Therapeutics Inc Adeno-associated virus with engineered capsid
EP3946467A1 (en) 2019-04-03 2022-02-09 REGENXBIO Inc. Gene therapy for eye pathologies
TW202102526A (zh) 2019-04-04 2021-01-16 美商銳進科斯生物股份有限公司 重組腺相關病毒及其用途
DK3953483T3 (da) 2019-04-11 2023-12-18 Regenxbio Inc Fremgangsmåder til størrelseskromatografi til karakterisering af sammensætninger af rekombinant adeno-associeret virus
US12553036B2 (en) 2019-04-12 2026-02-17 University Of Massachusetts GM3 synthase vectors and uses thereof
AU2020258483A1 (en) 2019-04-17 2021-11-11 Evox Therapeutics, Ltd. Compositions of exosomes and AAV
JP7630443B2 (ja) 2019-04-19 2025-02-17 レジェンクスバイオ インコーポレーテッド アデノ随伴ウイルスベクター製剤及び方法
CA3137135A1 (en) 2019-04-19 2020-10-22 University Of Massachusetts Gene therapies for stargardt disease (abca4)
WO2020219868A1 (en) 2019-04-24 2020-10-29 Regenxbio Inc. Fully-human post-translationally modified antibody therapeutics
WO2020219990A1 (en) 2019-04-26 2020-10-29 President And Fellows Of Harvard College Aav vectors encoding mini-pcdh15 and uses thereof
US20220243225A1 (en) 2019-04-29 2022-08-04 Voyager Therapeutics, Inc. SYSTEMS AND METHODS FOR PRODUCING BACULOVIRAL INFECTED INSECT CELLS (BIICs) IN BIOREACTORS
US12516351B2 (en) * 2019-04-29 2026-01-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV capsids and compositions containing same
AU2020270421A1 (en) 2019-05-03 2021-11-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of metachromatic leukodystrophy
EP3966227A1 (en) 2019-05-07 2022-03-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the vectored augmentation of protein destruction, expression and/or regulation
WO2020236815A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 University Of Massachusetts Minigene therapy
PH12021552887A1 (en) * 2019-05-24 2022-09-05 Regeneron Pharma Modified viral particles and uses thereof
PH12021552592A1 (en) 2019-05-28 2022-06-20 Modalis Therapeutics Corp Method for treating muscular dystrophy by targeting dmpk gene
EP3987024A4 (en) 2019-06-20 2023-11-01 University Of Massachusetts COMPOSITIONS AND METHODS FOR ENHANCED GENOMIC EDITING
EP3994253A1 (en) 2019-07-02 2022-05-11 M6P Therapeutics (Switzerland) LLC Vector compositions and methods of using same for treatment of lysosomal storage disorders
CA3137622A1 (en) 2019-07-10 2021-01-14 Masonic Medical Research Institute Vgll4 with ucp-1 cis-regulatory element and method of use thereof
US20220251567A1 (en) 2019-07-10 2022-08-11 Inserm (Institut National De La Santè Et De La Recherche Médicale) Methods for the treatment of epilepsy
JP7654626B2 (ja) 2019-07-11 2025-04-01 サントル ナショナル ドゥ ラ ルシェルシュ シアンティフィック 化学修飾型アデノ随伴ウイルス
EP3997226A1 (en) 2019-07-11 2022-05-18 Tenaya Therapeutics, Inc. Cardiac cell reprogramming with micrornas and other factors
US10653731B1 (en) * 2019-07-15 2020-05-19 Vigene Biosciences Inc. Recombinantly-modified adeno-associated virus (rAAV) having improved packaging efficiency
US10557149B1 (en) * 2019-07-15 2020-02-11 Vigene Biosciences, Inc. Recombinantly-modified adeno-associated virus helper vectors and their use to improve the packaging efficiency of recombinantly-modified adeno-associated virus
JP2022544015A (ja) 2019-07-23 2022-10-17 ユニバーシティ オブ ロチェスター ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓでの標的化されたＲＮＡ切断
US20220396806A1 (en) 2019-07-26 2022-12-15 Akouos, Inc. Methods of treating hearing loss using a secreted target protein
US20230042103A1 (en) 2019-07-26 2023-02-09 Regenxbio Inc. Engineered nucleic acid regulatory element and methods of uses thereof
WO2021030125A1 (en) 2019-08-09 2021-02-18 Voyager Therapeutics, Inc. Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors
WO2021030764A1 (en) * 2019-08-14 2021-02-18 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Aav capsid variants for gene therapy
EP4022070A1 (en) 2019-08-26 2022-07-06 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
CN114502197A (zh) 2019-08-26 2022-05-13 再生生物股份有限公司 用全人经翻译后修饰的抗VEGF Fab治疗糖尿病性视网膜病变
KR20220070443A (ko) 2019-08-27 2022-05-31 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 반복성 dna와 연관된 장애의 치료용 조성물 및 방법
US20220333133A1 (en) 2019-09-03 2022-10-20 Voyager Therapeutics, Inc. Vectorized editing of nucleic acids to correct overt mutations
WO2021046451A1 (en) 2019-09-06 2021-03-11 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions and methods for dhfr tunable protein regulation
AU2020346062A1 (en) 2019-09-13 2022-03-24 Rutgers, The State University Of New Jersey AAV-compatible laminin-linker polymerization proteins
JP7651562B2 (ja) 2019-09-19 2025-03-26 ジェネトン Ｆｋｒｐの心毒性を軽減する遺伝子治療発現系
WO2021062092A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Massachusetts Institute Of Technology Trans-activated functional rna by strand displacement and uses thereof
WO2021062096A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Massachusetts Institute Of Technology Microrna-based logic gates and uses thereof
TW202126284A (zh) 2019-09-30 2021-07-16 美商百歐維拉提夫治療公司 慢病毒載體配製物
WO2021067598A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Methods for improved therapeutic use of recombinant aav
US20240108669A1 (en) 2019-10-07 2024-04-04 Regenxbio Inc. Adeno-associated virus vector pharmaceutical composition and methods
US20230121437A1 (en) 2019-10-15 2023-04-20 University Of Massachusetts Rna editor-enhanced rna trans-splicing
EP4045664A1 (en) * 2019-10-16 2022-08-24 Wuxi Apptec (Shanghai) Co., Ltd. A novel aav variant
IL292297A (en) 2019-10-17 2022-06-01 Stridebio Inc Adeno-associated viral vectors for treatment of niemann-pick disease type c
CA3161154A1 (en) 2019-11-14 2021-05-20 Biomarin Pharmaceutical Inc. Treatment of hereditary angioedema with liver-specific gene therapy vectors
US20230016983A1 (en) 2019-11-19 2023-01-19 lNSERM (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTÉ ET DE LA RECHERCHE MÉDICALE) Antisense oligonucleotides and thier use for the treatment of cancer
EP4065596A2 (en) * 2019-11-28 2022-10-05 RegenxBio Inc. Microdystrophin gene therapy constructs and uses thereof
IL293684A (en) 2019-12-10 2022-08-01 Takeda Pharmaceuticals Co Adeno associated virus vectors for the treatment of hunter disease
KR20220128632A (ko) 2019-12-31 2022-09-21 스완바이오 테라퓨틱스 리미티드 개선된 aav-abcd1 구축물 및 부신백질이영양증 (ald) 및/또는 부신척수신경병증 (amn)의 치료 또는 예방을 위한 용도
TW202140791A (zh) 2020-01-13 2021-11-01 美商霍蒙拉奇醫藥公司 治療苯酮尿症之方法
BR112022014563A2 (pt) 2020-01-22 2022-09-13 Regenxbio Inc Método para tratamento de um sujeito humano diagnosticado com mucopolissacaridose i (mps i)
EP4096631A1 (en) 2020-01-29 2022-12-07 RegenxBio Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis ii with recombinant human iduronate-2-sulfatase (ids) produced by human neural or glial cells
EP4097238A1 (en) 2020-01-29 2022-12-07 REGENXBIO Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis iva
JP2023512071A (ja) 2020-01-30 2023-03-23 ウモジャ バイオファーマ， インコーポレイテッド 二特異性形質導入エンハンサー
CA3165057A1 (en) 2020-02-02 2021-08-05 James M. Wilson Compositions useful for treating gm1 gangliosidosis
US20230073250A1 (en) 2020-02-07 2023-03-09 University Of Rochester Ribozyme-mediated RNA Assembly and Expression
US20230078498A1 (en) 2020-02-07 2023-03-16 University Of Rochester Targeted Translation of RNA with CRISPR-Cas13 to Enhance Protein Synthesis
EP4103724A1 (en) 2020-02-14 2022-12-21 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Gene therapy for treating cdkl5 deficiency disorder
US20230089312A1 (en) 2020-02-25 2023-03-23 University Of Massachusetts Inducible single aav system and uses thereof
TW202142554A (zh) * 2020-02-25 2021-11-16 澳洲兒童醫學研究所 腺相關病毒蛋白殼多肽及載體
CN115552022A (zh) 2020-03-02 2022-12-30 特纳亚治疗股份有限公司 由心肌细胞表达的微rna控制的基因载体
US20240218367A1 (en) 2020-03-27 2024-07-04 University Of Rochester Targeted Destruction of Viral RNA by CRISPR-Cas13
WO2021195525A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 University Of Rochester Crispr-cas13 crrna arrays
CA3175034A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 UCB Biopharma SRL Autonomous knob domain peptides
TW202204377A (zh) 2020-03-31 2022-02-01 麻州大學 蛋白殼變體及其用途
WO2021202532A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Gene therapy for treating propionic acidemia
AR122409A1 (es) 2020-04-03 2022-09-07 Biomarin Pharm Inc Tratamiento de la fenilcetonuria con aav y formulaciones terapéuticas
US20230226223A1 (en) 2020-04-10 2023-07-20 Sola Biosciences Llc Compositions and Methods for the Treatment of Protein Aggregation Disorders
EP4135841A1 (en) 2020-04-15 2023-02-22 Voyager Therapeutics, Inc. Tau binding compounds
BR112022021134A2 (pt) 2020-04-20 2023-02-14 Tenaya Therapeutics Inc Vírus adeno-associado com capsídeo projetado
AU2021265088A1 (en) 2020-04-28 2022-11-03 Sola Biosciences Llc Compositions and methods for the treatment of TDP-43 proteinopathies
BR112022021786A2 (pt) 2020-05-12 2023-01-17 Univ Pennsylvania Composições úteis em tratamento de doença de krabbe
EP4162059A1 (en) 2020-05-12 2023-04-12 The Trustees of The University of Pennsylvania Compositions for drg-specific reduction of transgene expression
TW202208406A (zh) 2020-05-13 2022-03-01 美商阿科奧斯公司 用於治療ｋｃｎｑ４相關性聽力損失之組成物及方法
IL298128A (en) 2020-05-13 2023-01-01 Akouos Inc Compositions and methods for treating slc26a4-associated hearing loss
WO2021230385A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Astellas Pharma Inc. Method for treating muscular dystrophy by targeting utrophin gene
TW202208632A (zh) 2020-05-27 2022-03-01 美商同源醫藥公司 用於恢復ｐａｈ基因功能的腺相關病毒組成物及其使用方法
WO2021247995A2 (en) 2020-06-04 2021-12-09 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating neuropathic pain
CA3183251A1 (en) 2020-06-05 2021-12-09 Sola Biosciences Llc Compositions and methods for the treatment of synucleinopathies
IL299167A (en) 2020-06-17 2023-02-01 Univ Pennsylvania Compositions and methods for treating patients with gene therapy
WO2021255245A2 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Genethon Gene therapy expression system allowing an adequate expression in the muscles and in the heart of sgcg
WO2021262963A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods for the removal of free factor viii from preparations of lentiviral vectors modified to express said protein
CN116194587A (zh) 2020-07-10 2023-05-30 吉尼松公司 一种新的肌肉特异性启动子
WO2022011262A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and compositions for treating epilepsy
BR112023000578A2 (pt) 2020-07-13 2023-05-09 Univ Pennsylvania Composições úteis para tratamento de doença de charcot-marie-tooth
EP4182455A1 (en) 2020-07-15 2023-05-24 University of Rochester Targeted rna cleavage with dcasl3-rnase fusion proteins
WO2022017630A1 (en) 2020-07-23 2022-01-27 Ucl Business Ltd GENE THERAPY VECTOR FOR eEF1A2 AND USES THEREOF
WO2022026409A1 (en) 2020-07-27 2022-02-03 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of neurological disorders related to glucosylceramidase beta deficiency
US20230285596A1 (en) 2020-07-27 2023-09-14 Voyager Therapeutics, Inc Compositions and methods for the treatment of niemann-pick type c1 disease
WO2022032153A1 (en) 2020-08-06 2022-02-10 Voyager Therapeutics, Inc. Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors
KR20230042754A (ko) 2020-08-07 2023-03-29 아미쿠스 세라퓨틱스, 인코포레이티드 소포 표적화 단백질 및 이의 용도
CA3185267A1 (en) 2020-08-07 2022-02-10 Spacecraft Seven, Llc Plakophilin-2 (pkp2) gene therapy using aav vector
CN114075610B (zh) * 2020-08-11 2023-11-17 北京荷塘生华医疗科技有限公司 检测野生型腺相关病毒的通用引物及其应用
CA3188956A1 (en) 2020-08-14 2022-02-17 James M. Wilson Novel aav capsids and compositions containing same
CA3189878A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 Colin O'BANION Adeno-associated virus vectors for treatment of rett syndrome
GB202013194D0 (en) 2020-08-24 2020-10-07 Combigene Ab Gene therapy for lipodystrophy
EP4200429A1 (en) 2020-08-24 2023-06-28 The Trustees of The University of Pennsylvania Viral vectors encoding glp-1 receptor agonist fusions and uses thereof in treating metabolic diseases
IL300622A (en) 2020-08-26 2023-04-01 Univ Pennsylvania Recombinant adeno-associated virus for the treatment of adult-onset GRN-related neurodegeneration
WO2022056000A1 (en) 2020-09-09 2022-03-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods for treatment of duchenne muscular dystrophy
JP2023540960A (ja) 2020-09-10 2023-09-27 ルートビヒ－マキシミリアンズ－ウニベルジテート ミュンヘン 操作されたａａｖベクター
US12129287B2 (en) 2020-09-14 2024-10-29 President And Fellows Of Harvard College Recombinant adeno associated virus encoding clarin-1 and uses thereof
WO2022060915A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Regenxbio Inc. Vectorized lanadelumab and administration thereof
EP4214242A1 (en) 2020-09-15 2023-07-26 RegenxBio Inc. Vectorized antibodies for anti-viral therapy
US20230383278A1 (en) 2020-09-18 2023-11-30 The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services Novel adeno-associated viral (aav) vectors to treat hereditary methylmalonic acidemia (mma) caused by methylmalonyl-coa mutase (mmut) deficiency
US11401531B2 (en) 2020-09-24 2022-08-02 University Of Massachusetts AAV vectors encoding NF1 and uses thereof
JP2023544165A (ja) 2020-10-01 2023-10-20 ジェンザイム・コーポレーション 肝臓に向けられた遺伝子補充療法によってｐｋｕを処置するためのヒトｐａｈ発現カセット
US20240024508A1 (en) 2020-10-07 2024-01-25 Regenxbio Inc. Formulations for suprachoroidal administration such as high viscosity formulations
WO2022076591A1 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Regenxbio Inc. Formulations for suprachoroidal administration such as formulations with aggregate formation
MX2023003699A (es) 2020-10-07 2023-04-21 Regenxbio Inc Virus adenoasociados para el suministro ocular de genoterapia.
IL301947A (en) 2020-10-07 2023-06-01 Regenxbio Inc Formulations for suprachoroidal administration such as gel formulations
WO2022076750A2 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for cns or muscle delivery
KR20230083287A (ko) 2020-10-07 2023-06-09 리젠엑스바이오 인크. Cln2 질환의 안구 징후에 대한 유전자 요법
AU2021356684A1 (en) 2020-10-09 2023-05-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of fabry disease
US11781156B2 (en) 2020-10-09 2023-10-10 Tenaya Therapeutics, Inc. Plakophillin-2 gene therapy methods and compositions
CN115698304A (zh) 2020-10-09 2023-02-03 特纳亚治疗股份有限公司 亲斑蛋白-2基因疗法的方法和组合物
US20230383313A1 (en) 2020-10-18 2023-11-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Improved adeno-associated virus (aav) vector and uses therefor
WO2022094157A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Regenxbio Inc. Vectorized anti-cgrp and anti-cgrpr antibodies and administration thereof
TW202233841A (zh) 2020-10-28 2022-09-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 用於眼適應症之載體化抗ＴＮＦ－α抗體
WO2022094078A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of rett syndrome
CN116457373A (zh) 2020-10-29 2023-07-18 再生生物股份有限公司 用于眼部适应症的载体化TNF-α拮抗剂
EP4236974A2 (en) 2020-10-29 2023-09-06 RegenxBio Inc. Vectorized factor xii antibodies and administration thereof
WO2022098933A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods for treatment of dm1 with slucas9 and sacas9
CN112322791B (zh) * 2020-11-27 2023-10-27 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种新型鸭依赖属病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒
EP4256065A2 (en) 2020-12-01 2023-10-11 The Trustees of The University of Pennsylvania Novel compositions with tissue-specific targeting motifs and compositions containing same
AU2021391433A1 (en) 2020-12-01 2023-06-22 Akouos, Inc. Anti-vegf antibody constructs and related methods for treating vestibular schwannoma associated symptoms
KR20230128001A (ko) 2020-12-01 2023-09-01 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 엔젤만 증후군의 치료를 위한 조성물 및 이의 용도
KR20230120128A (ko) 2020-12-16 2023-08-16 리젠엑스바이오 인크. 재조합 바이러스 입자의 생산 방법
JP2024500786A (ja) 2020-12-29 2024-01-10 アコーオス インコーポレイテッド Ｃｌｒｎ１関連難聴及び／または視力低下を治療するための組成物及び方法
TW202241943A (zh) 2020-12-29 2022-11-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 Tau特異性抗體基因療法組合物、方法及其用途
CN116981697A (zh) 2021-01-14 2023-10-31 森迪生物科学公司 可分泌有效载荷调节
CA3205209A1 (en) 2021-01-21 2022-07-28 Regenxbio Inc. Improved production of recombinant polypeptides and viruses
WO2022159722A1 (en) 2021-01-22 2022-07-28 University Of Massachusetts Use of novel mirna-binding site cassettes for antigen-presenting cell detargeting of transgene expression by raav gene therapy vectors
US20240141375A1 (en) 2021-01-27 2024-05-02 Umoja Biopharma, Inc. Lentivirus for generating cells expressing anti-cd19 chimeric antigen receptor
EP4284335A1 (en) 2021-02-01 2023-12-06 RegenxBio Inc. Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinoses
WO2022173605A2 (en) 2021-02-10 2022-08-18 Regenxbio Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis ii with recombinant human iduronate-2-sulfatase (ids)
GB202101958D0 (en) 2021-02-12 2021-03-31 Ucl Business Ltd Gene therapy for dopamine transporter deficiency syndrome
AR124981A1 (es) 2021-02-26 2023-05-24 Takeda Pharmaceuticals Co Composición y métodos para el tratamiento de la enfermedad de fabry
WO2022182959A1 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods for treatment of myotonic dystrophy type 1 with crispr/slucas9
TW202302848A (zh) 2021-02-26 2023-01-16 美商維泰克斯製藥公司 以crispr/sacas9治療第1型肌強直性營養不良之組合物及方法
EP4301768A2 (en) 2021-03-03 2024-01-10 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
US20240141378A1 (en) 2021-03-03 2024-05-02 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
US20240159718A1 (en) 2021-03-22 2024-05-16 Genzyme Corporation Size exclusion chromatography analysis of empty and full aav capsids
WO2022204476A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Nucleotide editing to reframe dmd transcripts by base editing and prime editing
MX2023012052A (es) 2021-04-12 2024-03-15 Univ Pennsylvania Composiciones útiles para tratar la atrofia muscular espinal y bulbar (sbma).
EP4334334A1 (en) 2021-04-23 2024-03-13 The Trustees of The University of Pennsylvania Novel compositions with brain-specific targeting motifs and compositions containing same
AU2022261125A1 (en) 2021-04-23 2023-11-23 University Of Rochester Genome editing by directed non-homologous dna insertion using a retroviral integrase-cas fusion protein and methods of treatment
EP4330409A4 (en) 2021-04-26 2025-04-09 University of Massachusetts GENE THERAPIES FOR STARGARDT'S DISEASE (ABCA4)
WO2022229851A1 (en) 2021-04-26 2022-11-03 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for using slucas9 scaffold sequences
EP4329821A1 (en) 2021-04-26 2024-03-06 RegenxBio Inc. Microdystrophin gene therapy administration for treatment of dystrophinopathies
US20240218397A1 (en) 2021-05-04 2024-07-04 Regenxbio Inc. Novel aav vectors and methods and uses thereof
WO2022234519A1 (en) 2021-05-05 2022-11-10 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for using sacas9 scaffold sequences
US20240358857A1 (en) 2021-05-11 2024-10-31 Regenxbio Inc. Treatment of duchenne muscular dystrophy and combinations thereof
WO2022272296A2 (en) 2021-06-25 2022-12-29 Homology Medicines, Inc. Adeno-associated virus packaging systems
EP4363437A1 (en) 2021-07-01 2024-05-08 Amicus Therapeutics, Inc. Neurotensin variants and tagged proteins comprising neurotensin or sortilin propeptide
US20240316102A1 (en) 2021-07-01 2024-09-26 Indapta Therapeutics, Inc. Engineered natural killer (nk) cells and related methods
JP2024523707A (ja) 2021-07-08 2024-06-28 テナヤ セラピューティクス， インコーポレイテッド 遺伝子治療のための最適化された発現カセット
WO2023004331A1 (en) 2021-07-19 2023-01-26 New York University Auf1 combination therapies for treatment of muscle degenerative disease
AU2022318664A1 (en) 2021-07-30 2024-02-29 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating expression of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2)
WO2023010133A2 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating expression of frataxin (fxn)
WO2023018637A1 (en) 2021-08-09 2023-02-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Gene editing of regulatory elements
WO2023019226A1 (en) 2021-08-11 2023-02-16 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy
AU2022325955A1 (en) 2021-08-11 2024-02-08 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy to reduce instant blood mediated inflammatory reactions
KR20240073006A (ko) 2021-08-11 2024-05-24 사나 바이오테크놀로지, 인크. 동종이계 세포 요법을 위한 유전자 변형된 1차 세포
AU2022325231A1 (en) 2021-08-11 2024-02-08 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy to reduce complement-mediated inflammatory reactions
EP4396237A4 (en) 2021-08-31 2025-11-19 Scout Bio Inc Antigen-binding molecules and their uses
WO2023039444A2 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exon 51 for treatment of duchenne muscular dystrophy
AU2022356427A1 (en) 2021-09-30 2024-05-09 Akouos, Inc. Compositions and methods for treating kcnq4-associated hearing loss
TW202332472A (zh) 2021-10-01 2023-08-16 美商拜奧馬林製藥公司 利用ａａｖ基因療法載體進行之遺傳性血管水腫治療及治療性調配物
US20240384298A1 (en) 2021-10-02 2024-11-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel aav capsids and compositions containing same
WO2023060113A1 (en) 2021-10-05 2023-04-13 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
CN118202060A (zh) 2021-10-05 2024-06-14 再生生物股份有限公司 用于重组aav生产的组合物和方法
WO2023060272A2 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for cns tropic delivery
US20250001006A1 (en) 2021-10-07 2025-01-02 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for targeted delivery
US20250042958A1 (en) 2021-10-08 2025-02-06 Sola Biosciences Llc Compositions and methods for the treatment of proteopathies
EP4413023A1 (en) 2021-10-08 2024-08-14 SOLA Biosciences LLC Compositions and methods for the treatment of p53-mediated cancers
IL311786A (en) 2021-10-21 2024-05-01 Vertex Pharma hypoimmune cells
WO2023077092A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Regenxbio Inc. Engineered nucleic acid regulatory elements and methods and uses thereof
US20250295807A1 (en) 2021-11-15 2025-09-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions for drg-specific reduction of transgene expression
EP4437113A1 (en) 2021-11-23 2024-10-02 University of Massachusetts Gene therapy for spinal muscular atrophy
WO2023102442A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Jaguar Gene Therapy, Llc Gene therapy methods for treatment of diabetes
WO2023102517A1 (en) 2021-12-02 2023-06-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of fabry disease
MX2024007301A (es) 2021-12-17 2024-06-26 Tafalgie Therapeutics Peptidos y metodos para usar en el tratamiento del dolor.
AU2022423978A1 (en) 2021-12-28 2024-07-18 Chengdu Origen Biotechnology Co., Ltd. Modified aav capsid protein and use thereof
WO2023133593A2 (en) * 2022-01-10 2023-07-13 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Aav5 capsid variants
US20250177495A1 (en) 2022-01-10 2025-06-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of metachromatic leukodystrophy
EP4463135A2 (en) 2022-01-10 2024-11-20 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
AR128239A1 (es) 2022-01-10 2024-04-10 Univ Pennsylvania Composiciones y métodos útiles para el tratamiento de trastornos mediados por c9orf72
EP4215614A1 (en) 2022-01-24 2023-07-26 Dynacure Combination therapy for dystrophin-related diseases
KR20240137067A (ko) 2022-01-25 2024-09-19 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 개선된 심장 형질도입 및 간의 탈표적화를 위한 aav 캡시드
EP4473097A1 (en) 2022-02-02 2024-12-11 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
CA3243517A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Akouos, Inc. Anti-VEGF Antibody Constructions and Related Methods for the Treatment of Symptoms Associated with Acoustic Neuroma
WO2023154693A1 (en) 2022-02-08 2023-08-17 Voyager Therapeutics, Inc. Aav capsid variants and uses thereof
AU2023220128A1 (en) 2022-02-17 2024-08-22 Sana Biotechnology, Inc. Engineered cd47 proteins and uses thereof
WO2023156530A1 (en) 2022-02-17 2023-08-24 Lysogene Gene therapy for neurodegenerative diseases
WO2023172926A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exons for treatment of duchenne muscular dystrophy
EP4490292A1 (en) 2022-03-08 2025-01-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exon 44, 50, and 53 for treatment of duchenne muscular dystrophy
WO2023173123A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells and compositions and uses thereof
EP4493226A1 (en) 2022-03-13 2025-01-22 RegenxBio Inc. Modified muscle-specific promoters
US20250213727A1 (en) 2022-03-25 2025-07-03 Regenxbio Inc. Dominant-negative tumor necrosis factor alpha adeno-associated virus gene therapy
EP4504950A1 (en) 2022-04-01 2025-02-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Gene therapy for diseases with cns manifestations
CN119317645A (zh) 2022-04-06 2025-01-14 宾夕法尼亚州大学信托人 用于治疗her2阳性转移性乳腺癌及其他癌症的组合物和方法
WO2023196851A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 President And Fellows Of Harvard College Reversing aging of the central nervous system
CN119234040A (zh) 2022-04-06 2024-12-31 建新公司 Dm-1肌强直性营养不良的靶向基因疗法
TW202345913A (zh) 2022-04-06 2023-12-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 用於脈絡膜上投與之調配物諸如凝膠調配物
TW202404651A (zh) 2022-04-06 2024-02-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 用於脈絡膜上投與之調配物諸如形成聚集體之調配物
WO2023196892A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Passive immunization with anti- aav neutralizing antibodies to prevent off-target transduction of intrathecally delivered aav vectors
CA3247507A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Regenxbio Inc. PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING A RECOMMENDED ADENO-ASSOCIATED VIRUS (AAV) VECTOR WITH AN EXPRESSION CASSETTE ENCODED BY A TRANSGENE FOR SUPRACHOROID ADMINISTRATION
JP2025513835A (ja) 2022-04-11 2025-04-30 サントル ナショナル ドゥ ラ ルシェルシュ シアンティフィック 化学修飾型アデノ随伴ウイルス
EP4508062A1 (en) 2022-04-11 2025-02-19 Tenaya Therapeutics, Inc. Adeno-associated virus with engineered capsid
KR20250005214A (ko) 2022-04-13 2025-01-09 우니버시타트 아우토노마 데 바르셀로나 클로토 단백질을 발현시키는 유전자 요법을 통한 신경근 질환의 치료
WO2023201277A1 (en) 2022-04-14 2023-10-19 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for cns tropic delivery
EP4507741A1 (en) 2022-04-14 2025-02-19 RegenxBio Inc. Gene therapy for treating an ocular disease
CA3249261A1 (en) 2022-04-18 2023-10-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated COMPOSITIONS AND PROCESSES TO IMPROVE ADENE-ASSOCIATED VIRUS (AAV) THERAPY AND REDUCE AAV TROPISM TO THE LIVER
US20250288697A1 (en) 2022-05-03 2025-09-18 Regenxbio Inc. Vectorized anti-tnf-alpha inhibitors for ocular indications
TW202400803A (zh) 2022-05-03 2024-01-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 載體化抗補體抗體與補體劑及其投與
CA3255627A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 Novartis Ag NEW VP2 FUSION POLYPEPTIDES OF RECOMBINANT AAV
AR129441A1 (es) 2022-05-25 2024-08-28 Tafalgie Therapeutics Péptidos y métodos para el tratamiento del dolor
WO2023239627A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Regenxbio Inc. Methods for recombinant aav production
WO2023240236A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of spinal muscular atrophy related disorders
EP4544051A2 (en) 2022-06-24 2025-04-30 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for reducing low-density lipoprotein through targeted gene repression
WO2024006770A1 (en) * 2022-06-27 2024-01-04 Astellas Gene Therapies, Inc. Compositions and methods for the treatment of myotonic dystrophies
TW202417467A (zh) 2022-06-28 2024-05-01 美商航海家醫療公司 Ａａｖ蛋白殼變異體及其用途
CA3259982A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Indapta Therapeutics, Inc. COMBINATION OF MODIFIED NATURAL KILLER (NK) CELLS AND ANTIBODY THERAPY AND ASSOCIATED METHODS
AR129843A1 (es) 2022-07-06 2024-10-02 Voyager Therapeutics Inc Variantes de la cápside de aav y usos de estas
CA3261865A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Tune Therapeutics, Inc. TARGETED TRANSCRIPTIONAL ACTIVATION COMPOSITIONS, SYSTEMS AND METHODS
WO2024020352A1 (en) 2022-07-18 2024-01-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Tandem guide rnas (tg-rnas) and their use in genome editing
EP4558149A1 (en) 2022-07-21 2025-05-28 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and compositions for treating chronic pain disorders
WO2024026377A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Sana Biotechnology, Inc. Methods of transduction using a viral vector and inhibitors of antiviral restriction factors
CN115354049A (zh) * 2022-07-29 2022-11-18 中国科学院深圳先进技术研究院 一种基因递送系统在将目的基因经静脉注射递送至肝脏的应用
US20260055144A1 (en) 2022-08-24 2026-02-26 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses and uses thereof
TW202413648A (zh) 2022-08-25 2024-04-01 日商武田藥品工業股份有限公司 用於治療法布立氏病（ｆａｂｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）之組合物及方法
WO2024054983A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
TW202421788A (zh) 2022-09-22 2024-06-01 美商拜奧馬林製藥公司 用ａａｖ基因療法載體治療致心律不整性心肌病
TW202417631A (zh) 2022-09-22 2024-05-01 美商拜奧馬林製藥公司 用ａａｖ基因治療載體治療心肌病
US20260034250A1 (en) 2022-09-30 2026-02-05 Regenxbio Inc. Treatment of ocular diseases with recombinant viral vectors encoding anti-vegf fab
WO2024081746A2 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Regenxbio Inc. Engineered nucleic acid regulatory elements and methods and uses thereof
WO2024105638A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Recombinant aav vectors and methods for treatment of hunter syndrome
WO2024130070A2 (en) 2022-12-17 2024-06-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Recombinant aav capsids with cardiac- and skeletal muscle- specific targeting motifs and uses thereof
KR20250135916A (ko) 2022-12-17 2025-09-15 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 심장 및 골격근 특이적 표적화 모티프를 갖는 재조합 aav 돌연변이체 벡터 및 이를 포함하는 조성물
IT202200026595A1 (it) 2022-12-22 2024-06-22 Fond Telethon Ets Nuovi inibitori di regolatori epigenetici
WO2024146935A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Intravenous administration of antisense oligonucleotides for the treatment of pain
US12252518B2 (en) 2023-01-06 2025-03-18 Life Biosciences, Inc. Methods of treating non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy
WO2024151541A1 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Sana Biotechnology, Inc. Type-1 diabetes autoimmune mouse
JP2026504074A (ja) 2023-01-12 2026-02-03 ナント・ユニヴェルシテ 化学修飾されたアデノ随伴ウイルス
WO2024163678A2 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Tune Therapeutics, Inc. Fusion proteins and systems for targeted activation of frataxin (fxn) and related methods
WO2024163683A2 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Tune Therapeutics, Inc. Systems, compositions, and methods for modulating expression of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2) and x-inactive specific transcript (xist)
WO2024163012A1 (en) 2023-02-02 2024-08-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of neurological disorders related to glucosylceramidase beta deficiency
CN121195072A (zh) 2023-02-03 2025-12-23 詹森药业有限公司 用于帕金森病的基因治疗载体
GB202302480D0 (en) 2023-02-22 2023-04-05 Drishti Discoveries Ltd shRNA for the treatment of disease
CN116286988A (zh) * 2023-03-03 2023-06-23 西咸新区沣厚原创医药科技有限公司 一种稳定表达冠状病毒3cl蛋白酶的腺相关病毒体系、动物模型及构建方法和应用
WO2024192281A2 (en) 2023-03-15 2024-09-19 Regenxbio Inc. Exon skipping gene therapy constructs, vectors and uses thereof
WO2024196855A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 University Of Rochester Ribozyme-mediated rna assembly and expression
WO2024211780A1 (en) 2023-04-07 2024-10-10 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
WO2024215653A1 (en) 2023-04-10 2024-10-17 Tenaya Therapeutics, Inc. Guide rnas, vectors, and virions for targeting mutations in the pln gene
WO2024215655A1 (en) 2023-04-10 2024-10-17 Tenaya Therapeutics, Inc. Cardioprotective bag3 therapies
WO2024216244A2 (en) 2023-04-13 2024-10-17 Regenxbio Inc. Targeting aav capsids, methods of manufacturing and using same
CN116622908B (zh) * 2023-04-13 2024-02-06 武汉珈创生物技术股份有限公司 快速检测野生型腺相关病毒的引物探针、试剂盒及方法和应用
TW202509211A (zh) 2023-04-26 2025-03-01 法商賽諾菲公司 宿主細胞系以及鑑定和使用該等宿主細胞系之方法
WO2024228938A1 (en) * 2023-05-01 2024-11-07 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Modified aav p5 promoter for improved vector titer and purity
EP4704867A1 (en) 2023-05-03 2026-03-11 Sana Biotechnology, Inc. Methods of dosing and administration of engineered islet cells
CN121399470A (zh) 2023-05-03 2026-01-23 马尼福尔德生物技术有限公司 用于高通量蛋白质递送、筛选和检测的方法和组合物
WO2024233529A2 (en) 2023-05-07 2024-11-14 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
EP4709406A2 (en) 2023-05-11 2026-03-18 University Hospitals Cleveland Medical Center Anxiolytic therapy
WO2024233791A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 Seelos Therapeutics, Inc. Methods of treating neurodegenerative disorders
AU2024271004A1 (en) 2023-05-16 2026-01-15 Regenxbio Inc. Vectorized anti-complement antibodies and administration thereof
WO2024238859A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 Regenxbio Inc. Vectorized c5 inhibitor agents and administration thereof
WO2024238853A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 Regenxbio Inc. Adeno-associated viruses for ocular delivery of gene therapy
WO2024243236A2 (en) 2023-05-22 2024-11-28 Sana Biotechnology, Inc. Methods of delivery of islet cells and related methods
WO2024241176A1 (en) 2023-05-24 2024-11-28 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Recombinant aav vectors and methods for treatment of diseases with central nervous system disorders
CN121358869A (zh) 2023-05-25 2026-01-16 朱诺治疗学股份有限公司 Aav纯化方法
WO2024258961A1 (en) 2023-06-12 2024-12-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Aav gene therapy for mucopolysaccharidosis iiib
TW202516019A (zh) 2023-06-29 2025-04-16 賓州大學委員會 具中樞神經系統靶向模體的突變aav及含有其之組成物
WO2025008406A1 (en) 2023-07-04 2025-01-09 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of cancer
WO2025017168A1 (en) 2023-07-19 2025-01-23 Genethon Novel optimized utrophin micro-genes
WO2025017169A1 (en) 2023-07-20 2025-01-23 Genethon Novel mididystrophins
WO2025035143A1 (en) 2023-08-10 2025-02-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of spinal muscular atrophy
WO2025038430A1 (en) 2023-08-16 2025-02-20 Voyager Therapeutics, Inc. Aav capsid variants and uses thereof
WO2025072604A1 (en) 2023-09-28 2025-04-03 University Of Rochester Rna-editing gene therapy approaches for treating myotonic dystrophy type 1 (dm1)
WO2025075963A1 (en) 2023-10-02 2025-04-10 Regenxbio Inc. Methods and formulations for treating mucopolysaccharidosis ii-associated hearing loss with recombinant human iduronate-2-sulfatase
WO2025080780A1 (en) 2023-10-10 2025-04-17 University Of Rochester Delivery and expression of prime editing crispr systems
WO2025090962A1 (en) 2023-10-25 2025-05-01 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
WO2025090858A1 (en) 2023-10-27 2025-05-01 Biogen Ma Inc. Methods for identifying aav capsid variants with desired characteristics
WO2025102034A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for barth syndrome
WO2025106374A1 (en) 2023-11-13 2025-05-22 Juno Therapeutics, Inc. Aav production method
WO2025106661A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions with cardiac and skeletal musclespecific targeting motifs and uses thereof
WO2025108407A2 (en) 2023-11-23 2025-05-30 Neuexcell Therapeutics (Suzhou) Co., Ltd. Gene therapy compositions and methods for treating glioma
WO2025113676A1 (en) 2023-11-29 2025-06-05 Neuexcell Therapeutics (Suzhou) Co., Ltd. Compositions and methods for treating stroke in primates
WO2025128817A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Genzyme Corporation Artificial micrornas targeting tau
WO2025129157A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treatment of canavan disease
WO2025137219A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of disorders related to dystrophia myotonica protein kinase
WO2025147436A1 (en) 2024-01-03 2025-07-10 Voyager Therapeutics, Inc. Aav capsid variants and uses thereof
TW202548014A (zh) 2024-01-26 2025-12-16 美商健臻公司 靶向亨丁頓舞蹈症之人工ｍｉｃｒｏｒｎａ
WO2025160429A1 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Genzyme Corporation Artificial micrornas targeting snca
WO2025179007A1 (en) * 2024-02-21 2025-08-28 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus compositions and methods of use thereof for human cells
TW202548022A (zh) 2024-03-03 2025-12-16 美商帕西奇生物公司 用於治療神經退化性病症之重組腺相關病毒
WO2025217214A2 (en) 2024-04-08 2025-10-16 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses and uses thereof
TW202548025A (zh) 2024-04-08 2025-12-16 美商銳進科斯生物股份有限公司 載體化抗補體抗體與補體劑及其投與
WO2025214477A1 (en) 2024-04-12 2025-10-16 Skyline Therapeutics (Shanghai) Co., Ltd. Treatment of genetic cardiomyopathies with aav gene therapy vectors
CN118459608B (zh) * 2024-04-26 2025-01-24 泰州博莱得利生物科技有限公司 犬细小病毒特异性免疫制剂、制备方法和应用
WO2025237990A1 (en) 2024-05-14 2025-11-20 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of pulmonary fibrosis
WO2026006341A1 (en) 2024-06-24 2026-01-02 Regenxbio Inc. Microdystrophin gene therapy administration for treatment of dystrophinopathies
CN118460614B (zh) * 2024-07-05 2025-03-11 凌意(杭州)生物科技有限公司 一种腺相关病毒Cap蛋白的表达框
WO2026035687A1 (en) 2024-08-05 2026-02-12 University Of Rochester Compositions and methods for stitchr-mediated full-length scn5a expression in vivo
WO2026055342A1 (en) 2024-09-04 2026-03-12 Arsenal Biosciences, Inc. Synthetic pathway activators
CN120249230B (zh) * 2025-06-05 2025-11-07 鼐济医药科技(杭州)有限公司 一种用于同时生产多种重组腺相关病毒的方法
CN121142059B (zh) * 2025-11-17 2026-02-17 吉林农业大学 一种基于dia质谱技术评估微塑料神经毒性的方法及系统

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8929110D0 (en) * 1989-12-22 1990-02-28 3I Res Expl Ltd Polypeptides and dna encoding therefor
US5449616A (en) 1990-05-23 1995-09-12 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid encoding dystrophin-associated protein
US5173414A (en) * 1990-10-30 1992-12-22 Applied Immune Sciences, Inc. Production of recombinant adeno-associated virus vectors
CA2046745A1 (en) 1991-07-10 1993-01-11 Isaac Neuman Article including a container containing at least one precious stone
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5658785A (en) 1994-06-06 1997-08-19 Children's Hospital, Inc. Adeno-associated virus materials and methods
US6204059B1 (en) 1994-06-30 2001-03-20 University Of Pittsburgh AAV capsid vehicles for molecular transfer
US5856152A (en) * 1994-10-28 1999-01-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV vector and methods of use therefor
US6001650A (en) * 1995-08-03 1999-12-14 Avigen, Inc. High-efficiency wild-type-free AAV helper functions
CA2230758A1 (en) * 1995-09-08 1997-03-13 Genzyme Corporation Improved aav vectors for gene therapy
ATE264398T1 (de) * 1995-12-01 2004-04-15 Crucell Holland Bv Regulierte expression von proteinen in stabil transformierten säugetierzellen
US20020037867A1 (en) * 1999-02-26 2002-03-28 James M. Wilson Method for recombinant adeno-associated virus-directed gene therapy
US5866552A (en) * 1996-09-06 1999-02-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for expressing a gene in the absence of an immune response
AU4255397A (en) 1996-09-06 1998-03-26 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Chimpanzee adenovirus vectors
EP0950111A1 (en) 1996-09-06 1999-10-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods using cre-lox for production of recombinant adeno-associated viruses
EP0931158A1 (en) 1996-09-06 1999-07-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase
CN1233291A (zh) * 1996-09-06 1999-10-27 宾西法尼亚大学托管会 重组腺伴随病毒定向基因治疗的方法
EP0932694A2 (en) * 1996-09-11 1999-08-04 THE UNITED STATES GOVERNMENT as represented by THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Aav4 vector and uses thereof
EP0938578B1 (en) * 1996-12-05 2004-02-04 Crucell Holland B.V. Genetic modification of primate hemopoietic repopulating stem cells
US6039942A (en) * 1996-12-20 2000-03-21 Novo Nordick A/S Phytase polypeptides
US6156303A (en) 1997-06-11 2000-12-05 University Of Washington Adeno-associated virus (AAV) isolates and AAV vectors derived therefrom
US6251677B1 (en) 1997-08-25 2001-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof
CA2303768C (en) * 1997-09-19 2009-11-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and vector constructs useful for production of recombinant aav
EP1015619A1 (en) * 1997-09-19 2000-07-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and cell line useful for production of recombinant adeno-associated viruses
WO1999015677A1 (en) 1997-09-19 1999-04-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for gene transfer using bcl2 and compositions useful therein
US6953690B1 (en) 1998-03-20 2005-10-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses
DE69922934T2 (de) 1998-03-20 2005-12-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Zusammensetzungen und Verfahren zur helfer-freien Herstellung von rekombinanten Adeno-assoziierten Viren
DE69939169D1 (de) 1998-05-28 2008-09-04 Us Gov Health & Human Serv Aav5 vektoren und deren verwendung
WO2000011140A1 (en) 1998-08-20 2000-03-02 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Methods of augmenting mucosal immunity through systemic priming and mucosal boosting
US6759237B1 (en) * 1998-11-05 2004-07-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same
PT1127150E (pt) * 1998-11-05 2007-08-22 Univ Pennsylvania ''sequências de ácido nucleico do vírus adeno associado do serotipo 1, vectores e células hospedeiras que as contêm''
US6387368B1 (en) * 1999-02-08 2002-05-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof
JP4693244B2 (ja) * 1999-03-18 2011-06-01 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 組換えアデノ随伴ウイルスのヘルパー無しの生産のための組成物および方法
AU2409200A (en) 1999-06-02 2000-12-28 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Compositions and methods useful for production of recombinant viruses which require helper viruses
AU781478B2 (en) * 1999-08-20 2005-05-26 Johns Hopkins University School Of Medicine, The Methods and compositions for the construction and use of fusion libraries
US6365394B1 (en) * 1999-09-29 2002-04-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Cell lines and constructs useful in production of E1-deleted adenoviruses in absence of replication competent adenovirus
EP1218035A2 (en) * 1999-09-29 2002-07-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Rapid peg-modification of viral vectors
WO2001040455A2 (en) 1999-12-03 2001-06-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for increasing packaging and yields of recombinant adenoviruses using multiple packaging signals
US6821512B1 (en) 1999-12-03 2004-11-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for increasing packaging and yield of recombinant adenoviruses using multiple packaging signals
US20020045264A1 (en) * 2000-03-14 2002-04-18 During Matthew J. Production of chimeric capsid vectors
US6468524B1 (en) * 2000-03-22 2002-10-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services AAV4 vector and uses thereof
US6855314B1 (en) 2000-03-22 2005-02-15 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services AAV5 vector for transducing brain cells and lung cells
JP2004514407A (ja) 2000-04-28 2004-05-20 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 異種キャプシド中にシュードタイピングされたａａｖ５キャプシドおよびａａｖ５ベクターを含む組換えａａｖベクター
JP2004520812A (ja) * 2000-08-30 2004-07-15 ハプロゲン・エルエルシー 対立遺伝子を決定するための方法
US7749492B2 (en) 2001-01-05 2010-07-06 Nationwide Children's Hospital, Inc. AAV vectors and methods
US20020159978A1 (en) * 2001-02-06 2002-10-31 James Allen Muscle-directed gene transfer by use of recombinant AAV-1 and AAV-6 virions
CN103555677B (zh) 2001-11-13 2018-01-30 宾夕法尼亚大学托管会 检测和/或鉴定腺伴随病毒(aav)序列以及分离所鉴定的新型序列的方法
WO2003052051A2 (en) * 2001-12-17 2003-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) serotype 8 sequences
PT2573170T (pt) 2001-12-17 2018-03-26 Univ Pennsylvania Sequências de um vírus adenoassociado (aav) de serotipo 9, vetor contendo as mesmas, e suas utilizações
AU2002367943A1 (en) 2001-12-18 2003-12-22 University Of North Carolina At Chapel Hill Improved reagents and methods for producing parvoviruses
WO2003088899A2 (en) * 2002-04-05 2003-10-30 The Children's Hospital Of Philadelphia Methods for the production of chimeric adeno-associated virus (aav) vectors, compositions of chimeric aav vectors, and methods of use thereof
CA2426283C (en) * 2002-04-29 2006-06-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for direct rescue and amplification of integrated viruses from cellular dna of tissues
JP2007524386A (ja) 2003-06-19 2007-08-30 アビジェン， インコーポレイテッド 減少した免疫反応性を有するａａｖビリオン、およびその使用
DK3211085T3 (da) * 2003-09-30 2021-06-21 Univ Pennsylvania Klader af adeno-associeret virus (aav), sekvenser, vektorer indeholdende disse og anvendelser deraf
WO2006039218A2 (en) 2004-09-30 2006-04-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Perfusion circuit and use therein in targeted delivery of macromolecules
US8999678B2 (en) 2005-04-07 2015-04-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of increasing the function of an AAV vector
US7788045B2 (en) 2005-09-01 2010-08-31 Meditasks, Llc Systems and method for homeostatic blood states
EP2018421B1 (en) 2006-04-28 2012-12-19 The Trustees of the University of Pennsylvania Scalable production method for aav
JP2009102988A (ja) 2007-10-19 2009-05-14 Toyota Motor Corp 内燃機関の燃料噴射装置
US8236527B2 (en) 2008-03-14 2012-08-07 Humanzyme Limited Recombinant production of authentic human proteins using human cell expression systems
US20090280103A1 (en) 2008-04-04 2009-11-12 Martin Flueck Regulation of muscle repair
US8729041B2 (en) 2008-12-03 2014-05-20 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treating hepatic neoplasia
DK2826860T3 (en) 2010-04-23 2018-12-03 Univ Massachusetts CNS targeting AAV vectors and methods for their use
DK2731470T3 (da) 2011-07-15 2017-11-20 Kaercher Gmbh & Co Kg Alfred Rotationsbørste og fejemaskine med en rotationsbørste
US9434928B2 (en) 2011-11-23 2016-09-06 Nationwide Children's Hospital, Inc. Recombinant adeno-associated virus delivery of alpha-sarcoglycan polynucleotides
WO2013123503A1 (en) 2012-02-17 2013-08-22 The Children's Hospital Of Philadelphia Aav vector compositions and methods for gene transfer to cells, organs and tissues
WO2013170078A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Oregon Health & Science University Adeno associated virus plasmids and vectors
US9819463B2 (en) 2016-02-18 2017-11-14 Huawei Technologies Co., Ltd. Method and apparatus for transmitting data in a wireless communication system
SI3589730T1 (sl) 2017-02-28 2024-04-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-povezan virus (AAV) clade F vektor in njihova uporaba

Also Published As

Publication number Publication date
CA2864537A1 (en) 2003-05-22
US10308958B2 (en) 2019-06-04
SG10201506627PA (en) 2015-10-29
NZ548094A (en) 2008-07-31
KR101014207B1 (ko) 2011-02-14
HUP0600229A3 (en) 2010-01-28
NO336468B1 (no) 2015-08-31
CN105671005B (zh) 2020-09-15
US8524446B2 (en) 2013-09-03
CN103589692A (zh) 2014-02-19
PH12014501487B1 (en) 2015-12-07
CA2756866C (en) 2017-06-06
BR122016004546B8 (pt) 2021-07-27
PL409838A1 (pl) 2015-07-20
SG168422A1 (en) 2011-02-28
IL193525A0 (en) 2009-02-11
CA2756866A1 (en) 2003-05-22
EP1456419A4 (en) 2005-11-09
IL227866A0 (en) 2013-09-30
NO336801B1 (no) 2015-11-02
CN103555678B (zh) 2018-02-09
BR122016004944B8 (pt) 2021-07-27
JP2013013414A (ja) 2013-01-24
HU230406B1 (hu) 2016-04-28
CN102181480A (zh) 2011-09-14
NO20042183L (no) 2004-07-14
JP5969547B2 (ja) 2016-08-17
US11034977B2 (en) 2021-06-15
HK1068925A1 (en) 2005-05-06
IL213810A (en) 2014-08-31
DK1310571T3 (da) 2006-06-19
US20200087684A1 (en) 2020-03-19
CN102181480B (zh) 2016-01-27
KR101015854B1 (ko) 2011-02-23
NZ591012A (en) 2012-06-29
US20110263027A1 (en) 2011-10-27
NZ600121A (en) 2013-12-20
WO2003042397A3 (en) 2004-02-05
EP2338900A1 (en) 2011-06-29
KR20050058234A (ko) 2005-06-16
BR122016004944B1 (pt) 2016-11-22
EP1456419A2 (en) 2004-09-15
JP5140627B2 (ja) 2013-02-06
IL213810A0 (en) 2011-07-31
JP5669795B2 (ja) 2015-02-18
NO20140988L (no) 2004-07-14
CN103555677A (zh) 2014-02-05
DE60209193T2 (de) 2006-09-28
JP3958191B2 (ja) 2007-08-15
BRPI0214119B1 (pt) 2016-09-27
CA2945734C (en) 2020-02-25
US11034976B2 (en) 2021-06-15
US10544432B2 (en) 2020-01-28
CA3159060C (en) 2023-05-16
SG10202108118RA (en) 2021-08-30
EP1310571A2 (en) 2003-05-14
ATE317916T1 (de) 2006-03-15
NZ532635A (en) 2007-05-31
EP1310571B1 (en) 2006-02-15
PL397823A1 (pl) 2012-07-16
US20220213501A1 (en) 2022-07-07
US20190024117A1 (en) 2019-01-24
CA2945734A1 (en) 2003-05-22
BR122016004546B1 (pt) 2016-11-29
US20180030479A1 (en) 2018-02-01
ATE520707T1 (de) 2011-09-15
US11041171B2 (en) 2021-06-22
ZA200403360B (en) 2005-04-26
PL222683B1 (pl) 2016-08-31
IL161827A (en) 2009-11-18
CA3066428C (en) 2022-05-24
ES2439515T3 (es) 2014-01-23
HK1056198A1 (en) 2004-02-06
US20130045186A1 (en) 2013-02-21
IL233391A (en) 2016-12-29
PL217623B1 (pl) 2014-08-29
KR20100029134A (ko) 2010-03-15
IL258545A (en) 2018-06-28
CA2915124C (en) 2018-08-14
CA2915124A1 (en) 2003-05-22
IL234063A0 (en) 2014-09-30
IL221602A (en) 2015-09-24
EP2341068A1 (en) 2011-07-06
BRPI0214119B8 (pt) 2021-05-25
IL227866A (en) 2015-11-30
PH12014501487A1 (en) 2015-12-07
US10508286B2 (en) 2019-12-17
US20170240921A1 (en) 2017-08-24
MXPA04004600A (es) 2004-08-13
US10041090B2 (en) 2018-08-07
NO338362B1 (no) 2016-08-15
CN103555676B (zh) 2016-08-31
JP2016136953A (ja) 2016-08-04
ES2455126T3 (es) 2014-04-14
BR0214119A (pt) 2005-06-28
US10526617B2 (en) 2020-01-07
PL373864A1 (pl) 2005-09-19
CA2864537C (en) 2016-11-29
US20160097040A1 (en) 2016-04-07
CA3066428A1 (en) 2003-05-22
IL270065B2 (en) 2023-10-01
WO2003042397A2 (en) 2003-05-22
PL404537A1 (pl) 2014-02-17
AU2002361573B2 (en) 2008-06-12
CA2406745C (en) 2006-01-10
NO20131359L (no) 2004-07-14
NZ578982A (en) 2011-03-31
US8906675B2 (en) 2014-12-09
CA3159060A1 (en) 2003-05-22
NO20150196L (no) 2004-07-14
JP6212142B2 (ja) 2017-10-11
US20200080109A1 (en) 2020-03-12
US20200131534A1 (en) 2020-04-30
US20110151434A1 (en) 2011-06-23
JP2014239680A (ja) 2014-12-25
IL248724B (en) 2018-04-30
CA2465868A1 (en) 2003-05-22
IL270065A (pl) 2019-12-31
DE60209193D1 (de) 2006-04-20
US11377669B2 (en) 2022-07-05
IL233391A0 (en) 2014-08-31
PL220644B1 (pl) 2015-11-30
PH12016502583A1 (en) 2017-10-18
CA2465868C (en) 2017-02-28
NZ618298A (en) 2015-04-24
JP2005525086A (ja) 2005-08-25
IL221602A0 (en) 2012-10-31
CN103555676A (zh) 2014-02-05
IL161827A0 (en) 2005-11-20
JP2009195237A (ja) 2009-09-03
IL258545B (en) 2019-11-28
IL234063A (en) 2017-06-29
HU229379B1 (en) 2013-11-28
IL270065B1 (en) 2023-06-01
CN103589692B (zh) 2018-07-24
EP2341068B1 (en) 2013-09-25
HUP0600229A2 (en) 2006-06-28
MX346493B (es) 2017-03-21
JP4677187B2 (ja) 2011-04-27
JP2003235562A (ja) 2003-08-26
EP1310571A3 (en) 2003-08-13
SG157224A1 (en) 2009-12-29
CN103555678A (zh) 2014-02-05
US9790472B2 (en) 2017-10-17
NO334379B1 (no) 2014-02-24
SG10201912509RA (en) 2020-02-27
MX359371B (es) 2018-09-25
CA2406745A1 (en) 2003-05-13
EP2338900B1 (en) 2014-01-01
ES2258601T3 (es) 2006-09-01
IL248724A0 (en) 2017-01-31
US20170298388A1 (en) 2017-10-19
CN105671005A (zh) 2016-06-15
IL193525A (en) 2014-08-31
US20030138772A1 (en) 2003-07-24
US20210285012A1 (en) 2021-09-16
CN103555677B (zh) 2018-01-30
EP1456419B1 (en) 2011-08-17
US11499167B2 (en) 2022-11-15
US20220025401A1 (en) 2022-01-27
NZ564506A (en) 2009-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101015854B1 (ko) 아데노-결합 바이러스 (ａａｖ) 서열을 검출 및/또는확인하는 방법 및 그 방법에 의해 확인된 신규한 서열을분리하는 방법
CN1856576B (zh) 腺伴随病毒(aav)进化支、序列、含有这些序列的载体及它们的应用
AU2020201242B2 (en) ADENO-ASSOCIATED VIRUS cy.5 (AAVcy.5) SEQUENCES AND RECOMBINANT AAVs COMPRISING SAME
AU2002361573A1 (en) A method of detecting and/or identifying ADENO-associated virus (AAV) sequences and isolating novel sequences identified thereby
CN101426935B (zh) 检测和/或鉴定腺伴随病毒(aav)序列以及分离所鉴定的新型序列的方法
CA2465868E (en) A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby
HK40042488A (en) A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby
HK1068925B (en) A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby
HU230093B1 (hu) Eljárás adeno-asszociált vírus(AAV)szekvenciák detektálására és/vagy azonosítására, és az azzal azonosított új szekvenciák izolálására