PL217623B1 - Sposób wykrywania sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce - Google Patents

Sposób wykrywania sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce

Info

Publication number
PL217623B1
PL217623B1 PL373864A PL37386402A PL217623B1 PL 217623 B1 PL217623 B1 PL 217623B1 PL 373864 A PL373864 A PL 373864A PL 37386402 A PL37386402 A PL 37386402A PL 217623 B1 PL217623 B1 PL 217623B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
aav
sequences
region
seq
aav2
Prior art date
Application number
PL373864A
Other languages
English (en)
Other versions
PL373864A1 (pl
Inventor
Guangping Gao
James M. Wilson
Mauricio Alvira
Original Assignee
Univ Pennsylvania
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27502639&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=PL217623(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Univ Pennsylvania filed Critical Univ Pennsylvania
Publication of PL373864A1 publication Critical patent/PL373864A1/pl
Publication of PL217623B1 publication Critical patent/PL217623B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C07K14/01—DNA viruses
    • C07K14/015—Parvoviridae, e.g. feline panleukopenia virus, human parvovirus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4846—Factor VII (3.4.21.21); Factor IX (3.4.21.22); Factor Xa (3.4.21.6); Factor XI (3.4.21.27); Factor XII (3.4.21.38)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C12N15/864—Parvoviral vectors, e.g. parvovirus, densovirus
    • C12N15/8645—Adeno-associated virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6816—Hybridisation assays characterised by the detection means
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • C12Y304/21022—Coagulation factor IXa (3.4.21.22)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14151—Methods of production or purification of viral material
    • C12N2750/14152—Methods of production or purification of viral material relating to complementing cells and packaging systems for producing virus or viral particles
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14161—Methods of inactivation or attenuation
    • C12N2750/14162—Methods of inactivation or attenuation by genetic engineering
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14171—Demonstrated in vivo effect
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/48—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating transport or export of RNA, e.g. RRE, PRE, WPRE, CTE
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/80—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates
    • C12N2830/85—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates mammalian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
    • C12N2830/80—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates
    • C12N2830/90—Vector systems having a special element relevant for transcription from vertebrates avian
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)

Description

Opis wynalazku
Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), członek rodziny Parwowirusów, jest małym, pozbawionym otoczki dwudziestościennym wirusem mającym genomy jednoniciowego liniowego DNA o wielkości od 4,7 kilo par zasad (kb) do 6 kb. AAV przypisano do rodzaju Dependowirus, ponieważ wirusa tego odkryto jako zanieczyszczenie w oczyszczonych hodowlach adenowirusa. Cykl życiowy AAV obejmuje fazę latentną, w której genomy AAV po infekcji są integrowane w specyficzne miejsce w chromosomach gospodarza, oraz fazę zakaźną, w której po zakażeniu adenowirusem lub wirusem opryszczki zwykłej zintegrowane genomy są wycinane, replikowane i pakowane do zakaźnych wirusów. Właściwości braku patogeniczności, szerokiego zakresu gospodarzy infekcji, w tym komórek nie dzielących się, oraz potencjalna specyficzna co do miejsca integracja do chromosomu sprawiają, że AAV jest atrakcyjnym narzędziem przenoszenia genów.
Ostatnie badania sugerują, że wektory AAV mogą być korzystnymi nośnikami dla terapii genowej. Dotychczas wyizolowano i dobrze scharakteryzowano 6 różnych serotypów AAV od człowieka i naczelnych innych niż człowiek (NHP). Spośród nich, ludzki serotyp 2 jest pierwszym AAV opracowanym jako wektor do przenoszenia genów; stosowano go szeroko w doświadczeniach nad skutecznym przenoszeniem genów do różnych docelowych tkanek i modeli zwierzęcych. Trwają badania kliniczne nad doświadczalnym zastosowaniem wektorów opartych na AAV2 w modelach niektórych chorób ludzkich, w tym chorób takich, jak mukowiscydoza i hemofilia B. Pożądane są oparte na AAV konstrukty do dostarczania genów.
Niniejszy wynalazek dotyczy sposobu wykrywania sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce, który obejmuje etapy:
(a) poddania próbki zawierającej DNA amplifikacji przez łańcuchową reakcję polimerazy PCR przy wykorzystaniu pierwszego zestawu starterów, które specyficznie amplifikują pierwszy region sekwencji kwasu nukleinowego AAV; przy czym pierwszy region ma zmienną sekwencję oflankowaną przez co najmniej 18 par zasad o wysoce konserwatywnej sekwencji na jej końcu 5' i co najmniej 18 par zasad o wysoce konserwatywnej sekwencji na jej końcu 3', a te pary zasad są wysoce konserwatywne względem dopasowania do co najmniej AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6.
(b) ewentualnie poddania DNA dalszej amplifikacji przy wykorzystaniu drugiego zestawu starterów, które specyficznie amplifikują drugi region, który obejmuje pierwszy region sekwencji AAV oraz sekwencje w kierunku 5' od pierwszego regionu tak, że uzyskuje się sekwencje wydłużania 5' AAV, które przyłączają się do końca 5' sekwencji AAV amplifikowanych przez startery dla pierwszego regionu;
(c) ewentualnie poddania DNA dalszej amplifikacji przy wykorzystaniu trzeciego zestawu starterów, które specyficznie amplifikują trzeci region, który obejmuje pierwszy region sekwencji AAV oraz sekwencje w kierunku 3' od pierwszego regionu tak, że uzyskuje się sekwencje wydłużania 3' AAV, które przyłączają się do końca 3' sekwencji AAV amplifikowanych przez startery dla pierwszego regionu, przy czym każdy z tych regionów jest wyznaczony w oparciu o dopasowanie sekwencji kwasu nukleinowego z co najmniej AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6 i każdy z tych regionów obejmuje sekwencje kwasu nukleinowego wysoce konserwatywne na odcinku co najmniej 18 par zasad na końcu 5', i ewentualnie sekwencje zmienne pośrodku oraz sekwencje wysoce konserwatywne na odcinku co najmniej 18 par zasad na końcu 3' sekwencji regionu, względem sekwencji co najmniej AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6; oraz, każdy z zestawów starterów składa się ze startera 5' i startera 3';
obecność amplifikowanej sekwencji wskazuje na obecność AAV w próbce, a porównanie różnic między amplifikowanymi sekwencjami i sekwencjami AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6 wskazuje na obecność nieznanych AAV.
Korzystnie porównanie obejmuje etap porównywania wzorów enzymów restrykcyjnych dla amplifikowanych sekwencji z wzorami enzymów restrykcyjnych dla AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6.
Korzystnie w sposobie w etapie (a) amplifikacji podlega gen kapsydu pełnej długości, a amplifikowana sekwencja obejmuje gen kapsydu AAV i gen rep. AAV.
Korzystnie DNA został wyekstrahowany z grupy złożonej z komórek, hodowli komórkowej, tkanki, hodowli tkankowej i płynów biologicznych.
Korzystnie pierwszy region jest wysoce konserwatywny na długości co najmniej około 25 par zasad na końcu 5' regionu, końcu 3' regionu lub obu, korzystniej co najmniej około 30 par zasad na końcu 5' regionu, końcu 3' regionu lub obu.
PL 217 623 B1
Korzystnie wysoce konserwatywne sekwencje pierwszego regionu wykazują co najmniej 80% identyczności pomiędzy dopasowanymi serotypami AAV na końcu 5' regionu, końcu 3' regionu lub obu, korzystniej co najmniej 90% identyczności pomiędzy dopasowanymi serotypami AAV na końcu 5' regionu, końcu 3' regionu lub obu.
Korzystnie zmienne sekwencje pośrodku pierwszego regionu wykazują mniej niż 70% identyczności pomiędzy dopasowanymi AAV.
Korzystnie pierwszy region obejmuje pozycje od około 2800 bp do około 3200 bp AAV1, SEKW. NR ID.: 6; oraz odpowiadające im pary zasad w innych AAV.
Korzystniej pierwszy region ma długość 257 bp i obejmuje pozycje od 2886 do około 3143 AAV1, SEKW. NR ID.: 6; oraz odpowiadające im pary zasad w innych AAV.
Korzystnie starterami są AV1ns mający sekwencję nukleotydów od 1398 do 1423 SEKW. NR ID: 6 i AV2cas mający SEKW. NR ID.: 7.
Korzystnie pierwszy zestaw starterów umożliwiający izolację sekwencji pełnej długości kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem z próbki
- przy czym pierwszy zestaw starterów obejmuje starter 5' skierowany do regionu umiejscowionego w środku genu rep AAV, oparty na wcześniej określonym regionie konserwatywnym i starter 3' skierowany do regionu poniżej genu cap AAV, oparty na wcześniej określonym konserwatywnym regionie AAV. Korzystnie próbka zawiera AAV wintegrowany w chromosom.
Korzystnie próbki zawierają tkankę ludzką.
Korzystnie próbka zawiera pro wirusowe sekwencje AAV.
Korzystnie pierwszy region jest regionem charakterystycznym.
Korzystnie pary zasad tych wysoce konserwatywnych sekwencji są wysoce konserwatywne względem dopasowania do AAV 1, 2, 3, 4, 5 i 6 i AAV izolowanych z genów od gęsi i kaczek.
Korzystnie sekwencja zmienna jest sekwencją hiperzmienną.
Korzystnie pierwszy region obejmuje długość do 10 kilo par zasad.
Korzystnie pierwszy region obejmuje fragment 3,1 kilo par zasad obejmujący pełnej długości sekwencję cap.
Zatem wynalazek dostarcza nowego sposobu wykrywania sekwencji AAV z komórkowych DNA różnych tkanek ludzkich i naczelnych innych niż człowiek (NHP) przy zastosowaniu analizy bioinformatycznej, opartej na PCR amplifikacji genów i techniki klonowania, w oparciu o naturę latencji i integracji AAV w nieobecności współzakażenia wirusem pomocniczym.
KRÓTKI OPIS RYSUNKÓW
Figury 1A do 1AAAR dostarczają dopasowania (liniowania) sekwencji nukleotydowych kodujących co najmniej białka cap serotypów AAV. Sekwencje pełnej długości obejmujące ITR, region rep i region kapsydu dostarczono dla nowego serotypu 7 AAV [SEKW. NR ID.: 1] oraz dla opublikowanego uprzednio AAV1 [SEKW. NR ID.: 6], AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i AAV3 [SEKW. NR ID.: 8]. Nowe serotypy AAV8 [SEKW. NR ID.: 4] i AAV9 [SEKW. NR ID.: 5] są przedmiotem równocześnie złożonych zgłoszeń. Do innych nowych klonów dostarczonych w tym dopasowaniu należą: 42-2 [SEKW. NR ID.: 9], 42-8 [SEKW. NR ID.: 27], 42-15 [SEKW. NR ID.: 28], 42-5b [SEKW. NR ID.: 29], 42-1b [SEKW. NR ID.: 30]; 42-13 [SEKW. NR ID.: 31], 42-3a [SEKW. NR ID.: 32], 42-4 [SEKW. NR ID.: 33], 42-5a [SEKW. NR ID.: 34], 42-10 [SEKW. NR ID.: 35], 42-3b [SEKW. NR ID.: 36], 42-11 [SEKW. NR ID.: 37], 42-6b [SEKW. NR ID.: 38], 43-1 [SEKW. NR ID.: 39], 43-5 [SEKW. NR ID.: 40], 43-12 [SEKW. NR ID.: 41], 43-20 [SEKW. NR ID.: 42], 43-21 [SEKW. NR ID.: 43], 43-23 [SEKW. NR ID.: 44], 43-25 [SEKW. NR ID.: 45], 44.1 [SEKW. NR ID.: 47], 44.5 [SEKW. NR ID.: 47], 223.10 [SEKW. NR ID.: 48], 223.2 [SEKW. NR ID.: 49], 223.4 [SEKW. NR ID.: 50], 223.5 [SEKW. NR ID.: 51], 223.6 [SEKW. NR ID.: 52], 223.7 [SEKW. NR ID.: 53], A3.4 [SEKW. NR ID.: 54], A3.5 [SEKW. NR ID.: 55], A3.7 [SEKW. NR ID.: 56], A3.3 [SEKW. NR ID.: 57], 42.12 [SEKW. NR ID.: 58], 44.2 [SEKW. NR ID.: 59]. Sekwencje nukleotydowe charakterystycznych regionów AAV10 [SEKW. NR ID.: 117], AAV11 [SEKW. NR ID.: 118] i AAV12 [SEKW. NR ID.: 119] dostarczono na tym rysunku. Przedstawiono na nim krytyczne elementy struktury genomów AAV. Przerwy oznaczono kropkami. 3' ITR AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] przedstawiono w tej samej konfiguracji, jak w opublikowanych sekwencjach. TRS oznacza końcowe miejsce rozwiązania (terminal resolution site). Zauważmy, że AAV7 jest jedynym opisanym AAV wykorzystującym GTG jako kodon inicjacyjny VP3.
Figury 2A do 2F to dopasowanie sekwencji aminokwasowych białek kapsydu vp1 opublikowanych uprzednio serotypów AAV1 [SEKW. NR ID.: 64], AAV2 [SEKW. NR ID.: 70], AAV3 [SEKW. NR ID.: 71], AAV4 [SEKW. NR ID.: 63], AAV5 [SEKW. NR ID.: 114], i AAV6 [SEKW. NR ID.: 65] i nowych
PL 217 623 B1 sekwencji AAV, w tym: C1 [SEKW. NR ID.: 60], C2 [SEKW. NR ID.: 61], C5 [SEKW. NR ID.: 62], A3-3 [SEKW. NR ID.: 66], A3-7 [SEKW. NR ID.: 67], A3-4 [SEKW. NR ID.: 68], A3-5 [SEKW. NR ID.: 69], 3.3b [SEKW. NR ID.: 62], 223.4 [SEKW. NR ID.: 73], 223-5 [SEKW. NR ID.: 74], 223-10 [SEKW. NR ID.: 75], 223-2 [SEKW. NR ID.: 76], 223-7 [SEKW. NR ID.: 77], 223-6 [SEKW. NR ID.: 78], 44-1 [SEKW. NR ID.: 79], 44-5 [SEKW. NR ID.: 80], 44-2 [SEKW. NR ID.: 81], 42-15 [SEKW. NR ID.: 84], 42-8 [SEKW. NR ID.: 85], 42-13 [SEKW. NR ID.: 86], 42-3A [SEKW. NR ID.: 87], 42-4 [SEKW. NR ID.: 88], 42-5A [SEKW. NR ID.: 89], 42-1B [SEKW. NR ID.: 90], 42-5B [SEKW. NR ID.: 91], 43-1 [SEKW. NR ID.: 92], 43-12 [SEKW. NR ID.: 93], 43-5 [SEKW. NR ID.: 94], 43-21 [SEKW. NR ID.: 96], 43-25 [SEKW. NR ID.: 97], 43-20 [SEKW. NR ID.: 99], 24.1 [SEKW. NR ID.: 101], 42.2 [SEKW. NR ID.: 102], 7.2 [SEKW. NR ID.: 103], 27.3 [SEKW. NR ID.: 104], 16.3 [SEKW. NR ID.: 105], 42.10 [SEKW. NR ID.: 106], 42-3B [SEKW. NR ID.: 107], 42-11 [SEKW. NR ID.: 108], F1 [SEKW. NR ID.: 109], F5 [SEKW. NR ID.: 110], F3 [SEKW. NR ID.: 111], 42-6B [SEKW. NR ID.: 112], 42-12 [SEKW. NR ID.: 113].
Nowe serotypy AAV8 [SEKW. NR ID.: 95] i AAV9 [SEKW. NR ID.: 100] są przedmiotem równocześnie złożonych wniosków patentowych.
Figury 3A do 3C dostarczają sekwencji aminokwasowych białek rep AAV7 [SEKW. NR ID.: 3].
W niniejszym wynalazku twórcy znaleźli sposób, który wykorzystuje zdolność wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) do wniknięcia do jądra i pod nieobecność współzakażenia wirusem pomocniczym, integracji z DNA komórki i ustanowienia zakażenia latentnego. Sposób ten wykorzystuje strategię opartą na łańcuchowej reakcji polimerazy (PCR) w celu wykrywania, identyfikacji sekwencji AAV z DNA komórek człowieka i naczelnych innych niż człowiek, a także z innych źródeł. Sposób ten nadaje się też do identyfikacji i/lub izolacji innych zintegrowanych sekwencji wirusowych i niewirusowych tak, jak opisano to poniżej.
Sekwencje kwasów nukleinowych można zidentyfikować zgodnie ze sposobem ujawnionym w tym wynalazku. Jednym z takich wirusów stowarzyszonych z adenowirusem jest nowy serotyp, nazwany tu serotypem 7 (AAV7). Do innych nowych serotypów dostarczonych tu należą AAV10, AAV11 i AAV12. Ujawnione są także fragmenty tych sekwencji AAV. Wśród szczególnie pożądanych fragmentów AAV, które mogą być wykrywane są sekwencje kodujące białka cap, w tym vp1, vp2, vp3, regiony hiperzmienne, białka rep, w tym rep 78, rep 68, rep 52 i rep 40, oraz sekwencje kodujące te białka. Każdy z tych fragmentów można z łatwością wykorzystać w różnorodnych systemach wektorowych i komórkach gospodarza. Fragmenty takie można wykorzystać osobno, w połączeniu z innymi sekwencjami i fragmentami AAV, lub w połączeniu z innymi elementami z sekwencji wirusowych z AAV lub nie z AAV. W jednym szczególnie korzystnym wykonaniu, wektor zawiera sekwencje cap i/lub rep AAV.
Jak tu opisano, dostosowania wykonywane są z zastosowaniem dowolnego z szeregu dostępnych publicznie lub handlowo programów do wielokrotnego dostosowania sekwencji takich, jak „Clustal W”, dostępny przez serwery Web w Internecie. Alternatywnie, stosowane są także narzędzia z pakietu Vector NTI. W dziedzinie znanych jest także wiele algorytmów, które można zastosować do mierzenia identyczności sekwencji nukleotydowej obejmujących zawarte w opisanych powyżej programach. W innym przykładzie, sekwencje polinukleotydowe mogą być porównywane przy pomocy Fasta, programu w GCG wersja 6.1. Fasta dostarcza dostosowań i procentowej identyczności sekwencji regionów najlepszego zachodzenia między sekwencją zapytania i przeszukiwaną. Na przykład, procentowa identyczność sekwencji między sekwencjami nukleotydowymi może być wyznaczona z zastosowaniem Fasta z domyślnymi parametrami (długość słowa 6 i parametr NOPAM dla macierzy podobieństwa), jak dostarczone w GCG wersja 6.1. Podobne programy są dostępne też dla sekwencji aminokwasowych, np. program „Clustal X”. Ogólnie, wszystkie te programy są stosowane z ustawieniami domyślnymi, chociaż specjalista w dziedzinie może w miarę potrzeby zmienić te ustawienia. Alternatywnie, specjalista w dziedzinie może wykorzystać inny algorytm lub program komputerowy, który dostarcza co najmniej stopnia identyczności lub dopasowania, jak dostarczone przez odnośnikowe algorytmy i programy.
Termin „znacząca homologia” lub „znaczące podobieństwo” w odniesieniu do kwasu nukleinowego lub jego fragmentu wskazuje, że przy optymalnym dostosowaniu z odpowiednim kwasem nukleinowym (lub jego nicią komplementarną) z odpowiednimi insercjami lub delecjami nukleotydowymi, występuje identyczność sekwencji nukleotydowej w co najmniej około 95 do 99% dopasowanych sekwencji. Korzystnie, homologia zachodzi na całej długości sekwencji, lub jej otwartej ramki odczytu, lub innego odpowiedniego fragmentu, który ma długość co najmniej 15 nukleotydów. Przykłady odpowiednich dopasowań są tu opisane.
PL 217 623 B1
Termin „znacząca homologia” lub „znaczące podobieństwo” w odniesieniu do sekwencji aminokwasów lub jej fragmentów wskazuje, że przy optymalnym dopasowaniu z inną sekwencją aminokwasów z odpowiednimi insercjami lub delecjami aminokwasów, występuje identyczność sekwencji aminokwasowej w co najmniej około 95 do 99% dopasowanych sekwencji. Korzystnie, homologia zachodzi na całej długości sekwencji, lub jej białka, np. białka cap, białka rep, lub jej fragmentu, który ma długość co najmniej 8 aminokwasów, lub korzystniej, co najmniej 15 aminokwasów. Przykłady odpowiednich dopasowań są tu opisane.
Termin „wysoce konserwatywne” oznacza co najmniej 80% identyczności, korzystnie co najmniej 90% identyczności, a korzystniej co najmniej 97% identyczności. Specjalista łatwo wyznaczy identyczność przy pomocy algorytmów i programów komputerowych znanych specjalistom w dziedzinie.
Termin „procentowa identyczność sekwencji” lub „identyczne” w kontekście sekwencji kwasów nukleinowych odnosi się do reszt w obu sekwencjach, które są takie same przy dopasowaniu dla maksymalnej zgodności. Długość porównywania sekwencji może obejmować całą długość genomu, całą długość sekwencji kodującej gen, lub w razie potrzeby, fragment o długości co najmniej 500 do 5000 nukleotydów. Jednak może być również konieczna identyczność pomiędzy mniejszymi fragmentami, np. co najmniej dziewięciu nukleotydów, zwykle co najmniej 20 do 24 nukleotydów, co najmniej 28 do 32 nukleotydów, co najmniej 36 lub więcej nukleotydów. Podobnie „procentową identyczność sekwencji” można łatwo wyznaczyć dla sekwencji aminokwasowych, na całej długości białka, lub jego fragmentu. Odpowiednio, fragment ma długość co najmniej 8 aminokwasów i może dochodzić do około 700 aminokwasów. Przykłady odpowiednich fragmentów są tu opisane.
Sekwencje AAV i ich fragmenty są przydatne w wytwarzaniu rAAV i są również przydatne jako antysensowne wektory dostarczania, wektory do terapii genowej lub wektory szczepionkowe. Jak tu opisano, wektory zawierające białka kapsydu AAV szczególnie dobrze nadają się do zastosowań, w których przeciwciała neutralizujące zmniejszają skuteczność wektorów opartych na innych serotypach AAV, jak również innych wektorów wirusowych. Wektory rAAV są szczególnie korzystne przy ponownym podawaniu rAAV i powtórnej terapii genowej.
Te i inne wykonania i zalety wynalazku są opisane bardziej szczegółowo poniżej. W użytym w tym opisie i zastrzeżeniach znaczeniu, terminy „obejmujący” i „zawierający” i ich odmiany, obejmują inne składniki, elementy, liczby całkowite, etapy i im podobne. Przeciwnie, termin „złożone” i jego odmiany wyłącza inne składniki, elementy, liczby całkowite, etapy i im podobne.
I. Sposób według wynalazku
A. Wykrywanie sekwencji przez klonowanie molekularne
W jednym z aspektów, wynalazek dostarcza sposobu wykrywania docelowych sekwencji kwasu nukleinowego w próbce. Sposób ten szczególnie dobrze nadaje się do wykrywania sekwencji wirusowych wintegrowanych do chromosomu komórki, np. między innymi wirusów stowarzyszonych z adenowirusem (AAV). W użytym tu znaczeniu, próbką jest dowolne źródło zawierające kwasy nukleinowe, np. tkanka, hodowla tkankowa, komórki, hodowla komórek i płyny biologiczne, w tym ale nie wyłącznie, mocz i krew. Tymi sekwencjami kwasów nukleinowych mogą być DNA lub RNA z plazmidów, naturalny DNA lub RNA z dowolnego źródła obejmującego bakterie, drożdże, wirusy i wyższe organizmy, takie, jak rośliny lub zwierzęta. DNA lub RNA jest ekstrahowany z próbki przy zastosowaniu szeregu technik znanych specjalistom takich, jak te opisane przez Sambrooka, Molecular Cloning, A Laboratory Manual (New York: Cold Spring Harbor Laboratory). Pochodzenie próbki i sposób, w wyniku którego uzyskuje się kwasy nukleinowe do zastosowania w sposobie według tego wynalazku, nie stanowią ograniczenia niniejszego wynalazku. Ewentualnie, sposób według wynalazku można przeprowadzić bezpośrednio na źródle DNA, lub na kwasach nukleinowych uzyskanych (np. wyekstrahowanych) ze źródła.
Sposób według wynalazku obejmuje poddanie próbki zawierającej DNA amplifikacji przez łańcuchową reakcję polimerazy (PCR) przy zastosowaniu pierwszego zestawu starterów specyficznych dla pierwszego regionu dwuniciowych sekwencji kwasów nukleinowych, uzyskując tym samym amplifikowane sekwencje.
W użytym tu znaczeniu, każdy z „regionów” jest wyznaczony w oparciu o dopasowanie sekwencji kwasów nukleinowych przynajmniej dwóch serotypów (np. AAV), gdzie każdy z tych regionów jest złożony z sekwencji mających koniec 5' wysoce konserwatywny, środek, który jest zmienny, i koniec 3', który jest wysoce konserwatywny, przy czym każdy jest konserwatywny lub zmienny w stosunku do sekwencji co najmniej dwóch dopasowanych serotypów AAV. Koniec 5' i koniec 3' są wysoce konserwatywne na odcinku co najmniej 18 par zasad (bp). Jedna lub obie sekwencje na 5' lub 3' końcu są
PL 217 623 B1 wysoce konserwatywne na odcinku ponad 18 bp, ponad 25 bp, ponad 30 bp lub ponad 50 bp przy końcu 5'. Jednak jedna lub dwie sekwencje na końcu 5' lub 3' mogą. W odniesieniu do regionu zmiennego nie ma wymogu dla konserwatywnych sekwencji, sekwencje te mogą być względnie konserwatywne lub mogą mieć mniej niż 90, 80 lub 70% identyczności między dopasowanymi serotypami lub szczepami.
Każdy z regionów może obejmować długość od około 100 bp do około 10 kilo par zasad. Jednak, jest szczególnie pożądane, aby jeden z tych regionów był „regionem charakterystycznym”, tj. regionem, który jest wystarczająco niepowtarzalny, aby jednoznacznie zidentyfikować amplifikowaną sekwencję jako pochodzącą z docelowego źródła. Na przykład, w jednym z wykonań, pierwszy region ma około 250 bp długości, i jest wystarczająco niepowtarzalny wśród znanych sekwencji AAV, że dodatnio identyfikuje amplifikowany region jako pochodzący z AAV. Ponadto, sekwencje zmienne w tym regionie są wystarczająco niepowtarzalne, aby można było je zastosować do identyfikacji serotypu, z którego pochodzą amplifikowane sekwencje. Po amplifikacji (a tym samym wykryciu), sekwencje mogą być zidentyfikowane przez konwencjonalne trawienie enzymami restrykcyjnymi i porównanie z wzorami trawienia restrykcyjnego dla tego regionu w AV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, lub AAV6, lub w AAV7, AAV10, AAV11, AAV12, lub którymkolwiek z nowych serotypów. Przy dostarczonych tu wskazówkach specjalista z łatwością zidentyfikuje takie regiony wśród innych zintegrowanych wirusów, aby umożliwić łatwe wykrywanie i identyfikację takich sekwencji. Następnie można zaprojektować optymalny zestaw ogólnych starterów zlokalizowanych w wysoce konserwatywnych końcach i zbadać go pod kątem wydajnej amplifikacji wybranego regionu z próbek. Ten aspekt wynalazku można łatwo dostosować do zestawu diagnostycznego do wykrywania obecności sekwencji docelowych (np. AAV) i do identyfikacji serotypu AAV, przy zastosowaniu standardów, do których należą wzory restrykcyjne serotypów AAV opisane tu lub wyizolowane przy zastosowaniu opisanych tu technik. Na przykład, szybką identyfikację, lub serotypowanie molekularne produktów PCR można osiągnąć przez trawienie produktów PCR i porównywanie wzorów restrykcyjnych.
Zatem, w jednym wykonaniu, „region charakterystyczny” dla AAV obejmuje około 2800 do 3200 bp AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] i odpowiednie pary zasad w AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6. Korzystniej, obszar ten obejmuje około 250 bp zlokalizowanych między 2886 bp do około 3143 bp AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] i odpowiednie pary zasad w AAV2 [SEKW. NR ID.: 7], AAV3 [SEKW. NR ID.: 8] i innych serotypach AAV. Patrz Fig. 1. Dla umożliwienia szybkiego wykrycia AAV w próbce wykorzystywane są startery specyficznie amplifikujące ten region charakterystyczny. Niniejszy wynalazek nie jest jednak ograniczony do konkretnych sekwencji zidentyfikowanych tu dla regionu charakterystycznego AAV, gdyż specjalista może z łatwością zmienić ten region tak, aby obejmował on krótszy fragment, lub dłuższy fragment tego regionu charakterystycznego.
Startery PCR wytwarzane są z zastosowaniem technik znanych specjalistom. Każdy zestaw starterów PCR złożony jest ze startera 5' i startera 3'. Patrz np. cytowany tu Sambrook i wsp. Termin „starter” odnosi się do oligonukleotydu, który działa jako punkt inicjacji syntezy, gdy umieszczony jest w warunkach, w których indukowana jest synteza produktu wydłużania startera komplementarnego do nici kwasu nukleinowego. Starter korzystnie jest jednoniciowy. Jednak, gdy stosowany jest starter dwuniciowy, to zanim zostanie on użyty do wytworzenia produktów wydłużania, jest traktowany w celu rozdzielenia nici. Startery mogą mieć od około 15 do 25 nukleotydów, a korzystnie co najmniej 18 nukleotydów. Jednak dla pewnych zastosowań wykorzystywane są krótsze nukleotydy, np. 7 do 15 nukleotydów.
Startery wybiera się tak, aby były wystarczająco komplementarne do różnych nici każdej konkretnej sekwencji, która ma być amplifikowana, aby hybrydyzowały z ich odpowiednimi nićmi. Sekwencja startera nie musi zatem dokładnie odzwierciedlać sekwencji amplifikowanego regionu. Na przykład, do końca 5' startera można dołączyć niekomplementarny fragment nukleotydowy, przy zachowaniu pełnej komplementarności z nicią pozostałej sekwencji startera. Alternatywnie, niekomplementarne zasady lub dłuższe sekwencje mogą być wplecione w starter, pod warunkiem że sekwencja startera ma wystarczającą komplementarność do sekwencji amplifikowanej nici, aby z nią hybrydyzować i tworzyć matrycę do syntezy produktu wydłużania drugiego startera.
Startery PCR dla regionu charakterystycznego oparte są na wysoce konserwatywnych sekwencjach dwóch lub więcej dopasowanych sekwencji (np. dwóch lub więcej serotypów AAV). Startery mogą uwzględniać niecałkowitą identyczność między dwoma lub więcej dopasowanymi serotypami AAV na końcu 5' lub w środku. Sekwencje na końcu 3' starterów odpowiadają jednak regionowi dwóch lub więcej dopasowanych serotypów AAV, w którym występuje pełna identyczność na odcinku co
PL 217 623 B1 najmniej pięciu, a korzystnie co najmniej dziewięciu par zasad, a korzystniej na odcinku co najmniej 18 par zasad na końcu 3' starterów. Koniec 3' starterów jest zatem złożony z sekwencji o 100% identyczności z dopasowywanymi sekwencjami na długości co najmniej pięciu nukleotydów. Można jednak ewentualnie wykorzystać jeden, dwa lub więcej zdegenerowanych nukleotydów na końcu 3' startera.
Na przykład, zestaw starterów dla charakterystycznego regionu AAV zaprojektowano w oparciu o następujący unikatowy region w kapsydzie AAV. Starter 5' był oparty na nukleotydach 2867-2891 AAV2 [SEKW. NR ID.: 7], 5'-GGTAATTCCTCCGGAAATTGGCATT-3'. Patrz Fig. 1. Starter 3' zaprojektowano w oparciu o nukleotydy 3096-3122 AAV2 [SEKW. NR ID.: 7], 5'-GACTCATCAACAACAACTGGGGATTC-3'. Specjalista mógłby jednak z łatwością zaprojektować startery w oparciu o odpowiedni region AAV1, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6 lub w oparciu o dostarczoną tu informację o AAV7, AAV10, AAV11, AAV12 lub inny nowy AAV. Ponadto, przy zastosowaniu technik znanych specjalistom można łatwo zaprojektować jeszcze inne zestawy starterów do amplifikacji tego regionu charakterystycznego.
B. Izolacja sekwencji docelowych
Jak tu opisano, dostarczono pierwszego zestawu starterów, który specyficznie amplifikuje region charakterystyczny sekwencji docelowej, np. serotypu AAV, dla umożliwienia wykrycia celu. W sytuacji, gdy żądane są dalsze sekwencje, np. gdy zidentyfikuje się nowy serotyp AAV, region charakterystyczny może być wydłużony. Zatem w wynalazku można wykorzystywać ponadto jeden lub więcej dodatkowych zestawów starterów.
Odpowiednio, te zestawy starterów zaprojektowane są tak, aby obejmowały albo starter 5' albo 3' z pierwszego zestawu starterów i drugi starter unikatowy dla pierwszego zestawu starterów tak, aby zestaw starterów amplifikował region położony w stronę 5' lub 3' regionu charakterystycznego przyłączający się do końca 5' lub 3' regionu charakterystycznego. Na przykład, pierwszy zestaw starterów składa się ze startera 5' P1, i startera 3' P2 do amplifikacji regionu charakterystycznego. W celu wydłużenia regionu charakterystycznego na końcu 3', drugi zestaw starterów składa się ze startera P1 i startera 3' P4 i amplifikuje region charakterystyczny i ciągłe sekwencje poniżej regionu charakterystycznego. W celu wydłużenia regionu charakterystycznego na końcu 5' trzeci zestaw starterów składa się ze startera 5' P5 i startera P2 tak, że region charakterystyczny i ciągłe sekwencje powyżej regionu charakterystycznego są amplifikowane. Te etapy wydłużania są powtarzane (lub wykonywane w tym samym czasie) w miarę potrzeby. Następnie produkty wyizolowane z tych etapów amplifikacji są łączone z zastosowaniem konwencjonalnych etapów w celu wytworzenia wyizolowanej sekwencji o żądanej długości.
Drugi i trzeci zestaw starterów projektuje się, podobnie jak dla zestawu starterów dla regionu charakterystycznego tak, aby amplifikować region mający wysoce konserwatywne sekwencje wśród sekwencji dopasowanych. Odniesienie do terminu „drugi” lub „trzeci” zestaw starterów jest poczynione jedynie dla celu omówienia, bez względu na to, w jakiej kolejności startery te są dodawane do mieszaniny reakcyjnej albo wykorzystywane do amplifikacji. Region amplifikowany przez drugi zestaw starterów wybrany jest tak, aby po namnożeniu jego koniec 5' łączył się z końcem 3' regionu charakterystycznego. Podobnie, region amplifikowany przez trzeci zestaw starterów wybrany jest tak, aby po amplifikacji jego koniec 3' łączył się z końcem 5' regionu charakterystycznego. Można zaprojektować dodatkowe zestawy starterów tak, aby amplifikowane przez nie regiony przyłączały się do końca 5' albo końca 3' produktów wydłużania utworzonych przez drugi lub trzeci zestaw starterów lub przez kolejne zestawy starterów.
Na przykład, gdy sekwencją docelową jest AAV, pierwszy zestaw starterów (P1 i P2) jest stosowany do amplifikacji regionu charakterystycznego z próbki. W jednym żądanym wykonaniu, ten region charakterystyczny leży w kapsydzie AAV. Drugi zestaw starterów (P1 i P4) wykorzystywany jest do wydłużenia końca 3' regionu charakterystycznego do miejsca w sekwencji AAV, które znajduje się tuż przed 3' ITR AAV, tj. dostarczając produktu wydłużania zawierającego cały koniec 3' kapsydu AAV, gdy stosuje się region charakterystyczny jako kotwicę. W jednym wykonaniu starter P4 odpowiada nukleotydom 4435 do 4462 AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i odpowiadającym im sekwencjom w innych serotypach AAV. Powoduje to amplifikację regionu około 1,6 kb, który zawiera region charakterystyczny 0,25 kb. Trzeci zestaw starterów (P3 i P2) jest stosowany do wydłużenia końca 5' regionu charakterystycznego do miejsca w sekwencji AAV, które znajduje się na końcu 3' genów rep, tj. dostarczając produktu wydłużania zawierającego cały koniec 5' kapsydu AAV, gdy stosuje się region charakterystyczny jako kotwicę. W jednym z wykonań starter P3 odpowiada nukleotydom 1384 do 1409 AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i odpowiadającym im sekwencjom w innych serotypach AAV. Powodu8
PL 217 623 B1 je to amplifikację regionu około 1,7 kb, który zawiera region charakterystyczny 0,25 kb. Ewentualnie, stosowany jest czwarty zestaw starterów, dla dalszego wydłużenia produktu wydłużania zawierającego cały koniec 5' kapsydu AAV tak, aby zawierał też sekwencje rep. W jednym z wykonań, starter P5 odpowiada nukleotydom 108 do 133 AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i odpowiadającym im sekwencjom w innych serotypach AAV i jest stosowany razem ze starterem P2.
Po zakończeniu pożądanej liczby etapów wydłużania, różne produkty wydłużania są łączone z wykorzystaniem regionu charakterystycznego jako kotwicy lub znacznika dla skonstruowania pełnej sekwencji. W dostarczonym tu przykładzie uzyskiwane są, sekwencje AAV zawierające przynajmniej pełny gen cap. Możliwe jest uzyskanie dłuższych sekwencji, zależnie od liczby przeprowadzonych etapów wydłużania.
Odpowiednio, produkty wydłużania składane są w pełną sekwencję AAV przy wykorzystaniu sposobów znanych specjalistom. Na przykład, produkty wydłużania mogą być strawione DraIII, który przecina w miejscu DraIII zlokalizowanym w regionie charakterystycznym, dostarczając fragmentów restrykcyjnych, które są ponownie ligowane, aby dostarczyć produktów zawierających (co najmniej) pełny gen cap AAV. Jednak można też wykorzystać inne odpowiednie techniki składania produktów wydłużania w pełną sekwencję. Patrz, ogólnie, cytowany tu Sambrook i wsp.
Jako alternatywy dla opisanych powyżej wielu etapów wydłużania, inne wykonanie wynalazku dostarcza bezpośredniej amplifikacji fragmentu 3,1 kb co pozwala na wyizolowanie sekwencji cap pełnej długości. Dla bezpośredniej amplifikacji fragmentu cap pełnej długości o wielkości 3,1 kb z DNA z tkanki NHP i krwi, zidentyfikowano w genomach AAV dwa inne wysoce konserwatywne regiony do zastosowania w amplifikacji PCR dużych fragmentów. Stosowany jest starter z regionem konserwatywnym zlokalizowanym w środku genu rep (AV1ns: 5'-GCTGCGTCAACTGGACCAATGAGAAC-3', nukleotydy SEKW. NR ID.: 6) w połączeniu ze starterem 3' zlokalizowanym w innym konserwatywnym regionie poniżej genu Cap (AV2cas: 5'-CGCAGAGACCAAAGTTCAACTGAAACGA-3', SEKW. NR ID.: 7) dla amplifikacji sekwencji AAV zawierających pełnej długości cap AAV. Typowo, po amplifikacji produkty są klonowane i przeprowadzana jest analiza sekwencji z dokładnością > 99,9%. Przy zastosowaniu tego sposobu, twórcy wyizolowali co najmniej 50 klonów kapsydu, które następnie scharakteryzowano. Wśród nich 37 klonów pochodziło z tkanek makaka rezusa (rh.1 - rh.37), 6 klonów z makaków jawajskich (cy.1 - cy.6), 2 klony z pawianów (bb.1 i bb.2) i 5 klonów z szympansów (ch.1 - ch.5). Klony te zidentyfikowane są w innym miejscu tego opisu wraz z gatunkiem zwierzęcia, u którego zostały zidentyfikowane i tkankami zwierzęcia, w których zlokalizowane były te nowe sekwencje.
II. Zestaw diagnostyczny
Zestaw diagnostyczny do wykrywania w próbce obecności znanych lub nieznanych wirusów stowarzyszonych z adenowirusem (AAV) może zawierać pierwszy zestaw starterów PCR 5' i 3' specyficznych dla regionu charakterystycznego sekwencji nukleotydowej AAV. Alternatywnie, lub dodatkowo taki zestaw może zawierać pierwszy zestaw starterów PCR 5' i 3' specyficznych dla fragmentu 3,1 kb, który zawiera pełną sekwencję nukleotydową kapsydu AAV tu zidentyfikowaną (np. startery AV1ns i AV2cas). Ewentualnie zestaw może zawierać ponadto dwa lub więcej dodatkowych zestawów starterów 5' i 3' tak, jak tu opisano, i/lub sondy PCR. Te startery i sondy są stosowane zgodnie ze sposobem według niniejszego wynalazku i amplifikują obszary charakterystyczne każdego serotypu AAV, np. przy zastosowaniu ilościowego PCR.
Taki zestaw może zawierać ponadto jeden lub więcej enzymów restrykcyjnych, standardów serotypów AAV dostarczających ich „charakterystycznych analiz trawienia enzymami restrykcyjnymi” i/lub środków do wyznaczania serotypu wykrytego AAV.
Ponadto, zestawy mogą zawierać instrukcje, kontrolę negatywną i/lub pozytywną, pojemniki, rozcieńczalniki i bufory do próbki, schematy wskaźnikowe do porównania charakterystyk, jednorazowe rękawiczki, instrukcje dekontaminacji, aplikatory lub pojemniki i zbiorniki do przygotowania próbki, a także dowolne pożądane odczynniki, w tym podłoża, odczynniki do płukania i odczynniki do zatężania. Takie odczynniki mogą z łatwością być wybrane spośród opisanych tu odczynników i spośród konwencjonalnych odczynników do zatężania. W jednym wykonaniu, odczynnik do płukania jest izotonicznym jałowym roztworem soli, który buforowano do pH fizjologicznego, takim jak roztwór soli buforowanej fosforanem (PBS); odczynnikiem do elucji jest PBS zawierający 0,4 M NaCl, oraz odczynniki i przyrządy do zatężania. Na przykład, specjalista w dziedzinie zauważy, że odczynniki takie, jak glikol polietylenowy (PEG) lub NH4SO4 mogą być przydatne, oraz przyrządy, takie jak filtry. Na przykład, filtr z błoną 100 K zatężyłby rAAV.
PL 217 623 B1
Ujawnione tu zestawy są przydatne do przeprowadzania sposobów tu opisanych i do badania biodystrybucji, epidemiologii, sposobu przenoszenia nowych serotypów AAV u człowieka i NHP.
Sposób według niniejszego wynalazku umożliwia zatem wykrycie, docelowych sekwencji AAV zwłaszcza wintegrowanych sekwencji AAV. W jednym godnym uwagi przykładzie sposób według wynalazku ułatwił analizę przez twórców sklonowanych sekwencji AAV, która ujawniła heterogeniczność sekwencji prowirusowych między sklonowanymi fragmentami od różnych zwierząt, z których wszystkie były odmienne od znanych sześciu serotypów AAV, gdzie większość zmienności była zlokalizowana w hiperzmiennych regionach białka kapsydu. Zaskakujące zróżnicowanie sekwencji AAV zaobserwowano w klonach wyizolowanych ze źródeł pojedynczych tkanek, takich jak węzły chłonne od jednego osobnika rezusa. Heterogenność tę najlepiej wyjaśnić przez obserwowaną ewolucję sekwencji AAV u pojedynczych zwierząt spowodowaną częściowo przez częstą rekombinację homologiczną między ograniczoną liczbą współzakażających wirusów rodzicielskich. Badania te sugerują ewolucję sekwencji szeroko rozpowszechnionego wirusa podczas naturalnej infekcji AAV, która przypuszczalnie prowadzi do utworzenia rojów quasi-gatunków, które różnią się od siebie ciągiem hiperzmiennych regionów kapsydu. Jest to pierwszy przykład szybkiej ewolucji molekularnej wirusa DNA w sposób, który dotychczas uważano za ograniczony do wirusów RNA.
Dostarczone są sekwencje kilku nowych serotypów AAV wykrytych sposobem według wynalazku oraz charakterystyka tych serotypów.
III. Nowe serotypy AAV
A. Sekwencje nukleotydowe
Dostarczono sekwencje nukleotydowe nowych serotypów AAV zidentyfikowanych sposobami ujawnionymi w wynalazku. Patrz SEKW. NR ID.: 1, 9-59 i 117-120. Patrz też Fig. 1 i lista sekwencji.
Dla nowego serotypu AAV7 sekwencje pełnej długości, w tym 5' ITR AAV, kapsyd, rep i 3' ITR AAV dostarczono w SEKW. NR ID.: 1.
Dla innych nowych serotypów AAV dostarczono fragment około 3,1 kb wyizolowany zgodnie ze sposobem ujawnionym w wynalazku. Fragment ten zawiera sekwencje kodujące pełnej długości białko kapsydu i całość lub część sekwencji kodujących białko rep. Sekwencje te obejmują klony zidentyfikowane poniżej.
Dla jeszcze innych nowych serotypów AAV dostarczono region charakterystyczny kodujący białko kapsydu. Na przykład, sekwencje nukleotydowe AAV10 obejmują te przedstawione na Fig. 1 [patrz, SEKW. NR ID.: 117, która obejmuje 255 zasad]. Sekwencje nukleotydowe AAV11 obejmują sekwencje DNA przedstawione na Fig. 1 [patrz, SEKW. NR ID.: 118, która obejmuje 258 zasad]. Sekwencje nukleotydowe AAV12 obejmują sekwencje DNA przedstawione na Fig. 1 [patrz, SEKW. NR ID.: 119, która obejmuje 255 zasad]. Przy zastosowaniu opisanej powyżej metodologii, dalsze sekwencje AAV10, AAV11 i AAV12 mogą być łatwo zidentyfikowane i wykorzystane do szeregu różnych celów, w tym opisanych tu dla AAV7 i innych nowych serotypów.
Na Figurze 1 dostarczono sekwencje AAV od naczelnych innych niż człowiek (NHP) zgodnie z dotychczas opublikowanymi serotypami AAV, AAV1 [SEKW. NR ID.: 6], AAV2 [SEKW. NR ID.: 7] i AAV3 [SEKW. NR ID.: 8]. Te nowe sekwencje NHP obejmują te dostarczone w następującej Tabeli 1, które są zidentyfikowane przez numer klonu:
T a b e l a 1
Sekwencja Klon numer Źródło
Cap AAV Gatunek Tkanka SEKW. NR ID (DNA)
Rh. 1 Klon 9 (AAV 9) Rezus Serce 5
Rh. 2 Klon 43.1 Rezus MLN 39
Rh. 3 Klon 43.5 Rezus MLN 40
Rh. 4 Klon 43.12 Rezus MLN 41
Rh. 5 Klon 43.20 Rezus MLN 42
PL 217 623 B1 cd. tabeli 1
Rh. 6 Klon 43.21 Rezus MLN 43
Rh. 7 Klon 43.23 Rezus MLN 44
Rh. 8 Klon 43.25 Rezus MLN 45
Rh. 9 Klon 44.1 Rezus Wątroba 46
Rh. 10 Klon 44.2 Rezus Wątroba 59
Rh. 11 Klon 44.5 Rezus Wątroba 47
Rh. 12 Klon 42.1B Rezus MLN 30
Rh. 13 Klon 42.2 Rezus MLN 9
Rh. 14 Klon 42.3A Rezus MLN 32
Rh. 15 Klon 42.3B Rezus MLN 36
Rh. 16 Klon 42.4 Rezus MLN 33
Rh. 17 Klon 42.5A Rezus MLN 34
Rh. 18 Klon 42.5B Rezus MLN 29
Rh. 19 Klon 42.6B Rezus MLN 38
Rh. 20 Klon 42.8 Rezus MLN 27
Rh. 21 Klon 42.10 Rezus MLN 35
Rh. 22 Klon 42.11 Rezus MLN 37
Rh. 23 Klon 42.12 Rezus MLN 58
Rh. 24 Klon 42.13 Rezus MLN 31
Rh. 25 Klon 42.15 Rezus MLN 28
Rh. 26 Klon 223.2 Rezus Wątroba 49
Rh. 27 Klon 223.4 Rezus Wątroba 50
Rh. 28 Klon 223.5 Rezus Wątroba 51
Rh. 29 Klon 223.6 Rezus Wątroba 52
Rh. 30 Klon 223.7 Rezus Wątroba 53
Rh. 31 Klon 223.10 Rezus Wątroba 48
Rh. 32 Klon C1 Rezus Śledziona, dwunastnica, nerka i wątroba 19
Rh. 33 Klon C3 Rezus 20
Rh. 34 Klon C5 Rezus 21
Rh. 35 Klon F1 Rezus Wątroba 22
Rh. 36 Klon F3 Rezus 23
Rh. 37 Klon F5 Rezus 24
PL 217 623 B1 cd. tabeli 1
Cy. 1 Klon 1.3 Makak Krew 14
Cy. 2 Klon 13.3B Makak Krew 15
Cy. 3 Klon 24.1 Makak Krew 16
Cy. 4 Klon 27.3 Makak Krew 17
Cy. 5 Klon 7.2 Makak Krew 18
Cy. 6 Klon 16.3 Makak Krew 10
bb. 1 Klon 29.3 Pawian Krew 11
bb. 2 Klon 29.5 Pawian Krew 13
Ch. 1 Klon A3.3 Szympans Krew 57
Ch. 2 Klon A3.4 Szympans Krew 54
Ch. 3 Klon A3.5 Szympans Krew 55
Ch. 4 Klon A3.7 Szympans Krew 56
Nowy klon NHP wytworzono włączając fragmenty kapsydu dwóch adenowirusów szympansa do konstruktu AAV2 rep. Ten nowy klon, A3.1 nazwano też Ch.5 [SEKW. NR ID.: 20]. Ponadto, ujawniono dwie sekwencje ludzkiego AAV, nazwane H6 [SEKW. NR ID.: 25] i H2 [SEKW. NR ID.: 26].
Sekwencje kwasu nukleinowego AAV ujawnione w niniejszym wynalazku obejmują ponadto nić, która jest komplementarna do nici dostarczonych w sekwencjach przedstawionych na Fig. 1 i w Liście Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120], sekwencjach kwasu nukleinowego, zarówno sekwencjach RNA i cDNA odpowiadających sekwencjom dostarczonym na Fig. 1 i w Liście Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120] i ich niciom komplementarnym. Do tych sekwencji nukleotydowych włączone są także naturalne warianty i skonstruowane modyfikacje sekwencji z Fig. 1 i Listy Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120] i ich nici komplementarne. Do modyfikacji takich należą, na przykład, znane w technice znaczniki, metylacja i podstawienie jednego lub więcej naturalnie występujących nukleotydów nukleotydem zdegenerowanym.
Nowe sekwencje kwasu nukleinowego obejmują również sekwencje o homologii lub identyczności ponad 85%, ponad 90%, lub przynajmniej 98 do 99% względem sekwencji w tym sekwencji z Fig. 1 i Listy Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120]. Terminy te są stosowane zgodnie z podaną tu definicją.
Wynalazek ujawnia także fragmenty nowych sekwencji AAV zidentyfikowanych opisanym tu sposobem. Odpowiednie fragmenty mają długość co najmniej 15 nukleotydów i obejmują fragmenty funkcjonalne, tzn. fragmenty, które mają znaczenie biologiczne. W jednym wykonaniu, fragmentami tymi są fragmenty nowych sekwencji z Fig. 1 i Listy Sekwencji [SEKW. NR ID.: 1,9-59, 117-120], ich nici komplementarne, i komplementarne do nich cDNA i RNA.
Przykłady odpowiednich fragmentów dostarczono z uwzględnieniem położenia tych fragmentów w AAV1, AAV2 lub AAV7. Jednakże, przy zastosowaniu dostarczonego tu dopasowania (uzyskanego z zastosowaniem programu Clustal W przy domyślnych ustawieniach) do tworzenia dopasowania z innymi nowymi serotypami ujawnionymi w tym wynalazku, specjalista bez trudu zidentyfikuje dokładne pozycje nukleotydowe kodonów start i stop dla pożądanych fragmentów.
Do przykładów odpowiednich fragmentów należą sekwencje kodujące trzy białka zmienne (vp) kapsydu AAV będące wariantami alternatywnego składania: vp1 [np. nt 825 do 3049 RAV7, SEKW. NR ID: 1]; vp2 [np. nt 1234-3049 AAV7, SEKW. NR ID: 1]; i vp3 [np. nt 1434-3049 AAV1, SEKW. NR ID: 1]. Godne uwagi jest to, że AAV7 ma nietypowy kodon start GTG. Za wyjątkiem kilku genów typu house-keeping, takiego kodonu start nie opisano dotychczas w wirusach DNA. Uważano, że kodony start dla vp1, vp2 i vp3 innych serotypów AAV są takie, że umożliwiają mechanizmowi komórkowemu komórki gospodarza, w której przebywają, wytworzenie vp1, vp2 i vp3 w stosunku odpowiednio 10%:10%:80%, w celu umożliwienia wydajnego złożenia wirionu. Stwierdzono jednak, że wirion AAV7 składa się wydajnie, nawet z tym rzadkim kodonem start GTG. Twórcy przewidują zatem, że konieczna jest zmiana kodonu start vp3 innych serotypów AAV tak, aby zawierały ten rzadki kodon start GTG, w celu poprawy wydajności pakowania, zmiany struktury wirionu i/lub zmiany położenia epitopów (np.
PL 217 623 B1 epitopów dla przeciwciał neutralizujących) innych serotypów AAV. Kodony start mogą być zmienione przy pomocy konwencjonalnych technik, w tym np. mutagenezy ukierunkowanej. Zatem zmienione wiriony AAV mogą być dowolnego wybranego serotypu, złożone z vp3, i/lub ewentualnie vp1 i/lub vp2 z kodonem start zamienionym na GTG.
Inne odpowiednie fragmenty AAV obejmują fragment zawierający kodon start białka kapsydu AAV [np. nt 468 do 3090 AAV7, SEKW. NR ID: 1, nt 725 do 3090, SEKW. NR ID: 1, i odpowiednie regiony innych serotypów AAV]. Jeszcze inne fragmenty AAV7 i innych nowych serotypów AAV zidentyfikowanych przy pomocy opisanych tu sposobów obejmują fragmenty kodujące białka rep, w tym rep78 [np. kodon inicjacyjny 334 z Fig. 1 dla AAV7], rep68 [kodon inicjacyjny 334 z Fig. 1 dla AAV7], rep52 [kodon inicjacyjny 1006 z Fig. 1 dla AAV7] i rep40 [kodon inicjacyjny 1006 z Fig. 1 dla AAV7]. Inne fragmenty będące przedmiotem zainteresowania obejmują odwrócone końcowe powtórzenia ITR AAV 5' [nt 1 do 107 z Fig. 1 dla AAV7]; ITR AAV 3' [nt 4704 do 4721 z Fig. 1 dla AAV7]; sekwencje P19, sekwencje P40 AAV, miejsce wiązania rep i końcowe miejsce rozwiązania (TRS Terminal Resolute Site). Jeszcze inne odpowiednie fragmenty będą oczywiste dla specjalisty. Odpowiednie regiony w innych nowych serotypach ujawnionych w wynalazku mogą być łatwo wyznaczone przez odniesienie do Figury 1, lub przy zastosowaniu konwencjonalnych technik dopasowania z dostarczonymi tu sekwencjami.
Poza włączeniem sekwencji nukleotydowych dostarczonych na figurach i w Liście Sekwencji są również cząsteczki kwasów nukleinowych i sekwencje, które zaprojektowano dla wyrażania sekwencji aminokwasowych, białek i peptydów serotypów AAV ujawnionych w niniejszym wynalazku. Zatem ujawniono sekwencje nukleotydowe, które kodują następujące nowe sekwencje aminokwasowe AAV: C1 [SEKW. NR ID: 60], C2 [SEKW. NR ID: 61], C5 [SEKW. NR ID: 62], A3-3 [SEKW. NR ID: 66], A3-7 [SEKW. NR ID: 67], A3-4 [SEKW. NR ID: 68], A3-5 [SEKW. NR ID: 69], 3.3b [SEKW. NR ID: 62], 223.4 [SEKW. NR ID: 73], 223-5 [SEKW. NR ID: 74], 223-10 [SEKW. NR ID: 75], 223-2 [SEKW. NR ID: 76], 223-7 [SEKW. NR ID: 77], 223-6 [SEKW. NR ID: 78], 44-1 [SEKW. NR ID: 79], 44-5 [SEKW. NR ID: 80], 44-2 [SEKW. NR ID: 81], 42-15 [SEKW. NR ID: 84], 42-8 [SEKW. NR ID: 85], 42-13 [SEKW. NR ID: 86], 42-3A [SEKW. NR ID: 87], 42-4 [SEKW. NR ID: 88], 42-5A [SEKW. NR ID: 89], 42-1B [SEKW. NR ID: 90], 42-5B [SEKW. NR ID: 91], 43-1 [SEKW. NR ID: 92], 43-12 [SEKW. NR ID: 93], 43-5 [SEKW. NR ID: 94], 43-21 [SEKW. NR ID: 96], 43-25 [SEKW. NR ID: 97], 43-20 [SEKW. NR ID: 99], 24.1 [SEKW. NR ID: 101], 42.2 [SEKW. NR ID: 102], 7.2 [SEKW. NR ID: 103], 27.3 [SEKW. NR ID: 104], 16.3 [SEKW. NR ID: 105], 42.10 [SEKW. NR ID: 106], 42-3B [SEKW. NR ID: 107], 42-11 [SEKW. NR ID: 108], F1 [SEKW. NR ID: 109], F5 [SEKW. NR ID: 110], F3 [SEKW. NR ID: 111], 42-6B [SEKW. NR ID: 112], i/lub 42-12 [SEKW. NR ID: 113] i sztuczne serotypy AAV wytworzone przy pomocy tych sekwencji i/lub ich charakterystycznych fragmentów.
W użytym tu znaczeniu, sztuczne serotypy AAV obejmują, między innymi, AAV z białkiem kapsydu nie występującym naturalnie. Taki sztuczny kapsyd może być wytworzony dowolną odpowiednią techniką przy wykorzystaniu nowej sekwencji AAV (np. fragmentu białka kapsydu vp1) w połączeniu z heterologicznymi sekwencjami, które można uzyskać z innego serotypu AAV (znanego lub nowego), nieciągłej części tego samego serotypu AAV, innego niż AAV źródła wirusowego, lub ze źródła nie będącego wirusem. Sztuczny serotyp AAV może być, między innymi, chimerycznym kapsydem AAV, zrekombinowanym kapsydem AAV lub „humanizowanym” kapsydem AAV.
B. Sekwencje aminokwasowe AAV, białka i peptydy
W wynalazku ujawniono białka i ich fragmenty kodowane przez sekwencje nukleotydowe zidentyfikowanych tu nowych serotypów AAV, w tym np. AAV7 [nt 825 do 3049 AAV7, SEKW. NR. ID.: 1] i inne dostarczone tu nowe serotypy. Białka kapsydu nowych serotypów, w tym: H6 [SEKW. NR ID: 25], H2 [SEKW. NR ID: 26], 42-2 [SEKW. NR ID: 9], 42-8 [SEKW. NR ID: 27], 42-15 [SEKW. NR ID: 28], 42-5b [SEKW. NR ID: 29], 42-1b [SEKW. NR ID: 30], 42-13 [SEKW. NR ID: 31], 42-3a [SEKW. NR ID: 32], 42-4 [SEKW. NR ID: 33], 42-5a [SEKW. NR ID: 34], 42-10 [SEKW. NR ID: 35], 42-3b [SEKW. NR ID: 36], 42-11 [SEKW. NR ID: 37], 42-6b [SEKW. NR ID: 38], 43-1 [SEKW. NR ID: 39], 43-5 [SEKW. NR ID: 40], 43-12 [SEKW. NR ID: 41], 43-20 [SEKW. NR ID: 42], 43-21 [SEKW. NR ID: 43], 43-23 [SEKW. NR ID: 44], 43-25 [SEKW. NR ID: 45], 44.1 [SEKW. NR ID: 47], 44.5 [SEKW. NR ID: 47], 223.10 [SEKW. NR ID: 48], 223.2 [SEKW. NR ID: 49], 223.4 [SEKW. NR ID: 50], 223.5 [SEKW. NR ID: 51], 223.6 [SEKW. NR ID: 52], 223.7 [SEKW. NR ID: 53], A3.4 [SEKW. NR ID: 54], A3.5 [SEKW. NR ID: 55], A3.7 [SEKW. NR ID: 56], A3.3 [SEKW. NR ID: 57], 42.12 [SEKW. NR ID: 58], i 44.2 [SEKW. NR ID: 59] mogą zatem być łatwo wytworzone przy zastosowaniu konwencjonalnych technik z otwartych ramek odczytu dostarczonych przez wymienione powyżej klony.
PL 217 623 B1
Ujawniono ponadto serotypy AAV wytworzone przy zastosowaniu sekwencji nowych serotypów AAV, które są wytworzone przy zastosowaniu technik syntezy rekombinacji lub innych znanych specjalistom. Wspomniane mogą być również sekwencje aminokwasowe, peptydy i białka wytworzone innymi sposobami znanymi w technice, w tym np. przez syntezę chemiczną, przez innymi technikami syntezy lub innymi sposobami. Na przykład, sekwencje każdej spośród C1 [SEKW. NR ID: 60], C2 [SEKW. NR ID: 61], C5 [SEKW. NR ID: 62], A3-3 [SEKW. NR ID: 66], A3-7 [SEKW. NR ID: 67], A3-4 [SEKW. NR ID: 68], A3-5 [SEKW. NR ID: 69], 3.3b [SEKW. NR ID: 62], 223.4 [SEKW. NR ID: 73], 223-5 [SEKW. NR ID: 74], 223-10 [SEKW. NR ID: 75], 223-2 [SEKW. NR ID: 76], 223-7 [SEKW. NR ID: 77], 223-6 [SEKW. NR ID: 78], 44-1 [SEKW. NR ID: 79], 44-5 [SEKW. NR ID: 80], 44-2 [SEKW. NR ID: 81], 42-15 [SEKW. NR ID: 84], 42-8 [SEKW. NR ID: 85], 42-13 [SEKW. NR ID: 86], 42-3A [SEKW. NR ID: 87], 42-4 [SEKW. NR ID: 88], 42-5A [SEKW. NR ID: 89], 42-1B [SEKW. NR ID: 90], 42-5B [SEKW. NR ID: 91], 43-1 [SEKW. NR ID: 92], 43-12 [SEKW. NR ID: 93], 43-5 [SEKW. NR ID: 94], 43-21 [SEKW. NR ID: 96], 43-25 [SEKW. NR ID: 97], 43-20 [SEKW. NR ID: 99], 24.1 [SEKW. NR ID: 101], 42.2 [SEKW. NR ID: 102], 7.2 [SEKW. NR ID: 103], 27.3 [SEKW. NR ID: 104], 16.3 [SEKW. NR ID: 105], 42.10 [SEKW. NR ID: 106], 42-3B [SEKW. NR ID: 107], 42-11 [SEKW. NR ID: 108], F1 [SEKW. NR ID: 109], F5 [SEKW. NR ID: 110], F3 [SEKW. NR ID: 111], 42-6B [SEKW. NR ID: 112], i/lub 42-12 [SEKW. NR ID: 113] mogą być łatwo wytworzone przy zastosowaniu szeregu różnych technik.
Odpowiednie techniki wytwarzania są dobrze znane specjalistom. Patrz np. Sambrook i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (Cold Spring Harbor, NY). Alternatywnie, peptydy mogą być też syntetyzowane przy pomocy dobrze znanych sposobów syntezy peptydów w fazie stałej (Merrifield, J. Am. Chem. Soc., 85: 2149 (1962); Stewart i Young, Solid Phase Peptide Synthesis (Freeman, San Francisco, 1969) ss. 27-62). Te i inne odpowiednie sposoby wytwarzania są znane specjalistom i nie stanowią ograniczenia niniejszego wynalazku.
Szczególnie pożądane białka obejmują białka kapsydu AAV, które są kodowane przez zidentyfikowane powyżej sekwencje nukleotydowe. Sekwencje wielu spośród białek kapsydu dostarczono w dopasowaniu na Fig. 2 i/lub w Liście Sekwencji, SEKW. NR ID.: 2 i 60 do 115, które są tu niniejszym włączone przez referencję. Kapsyd AAV składa się z trzech białek vp1, vp2 i vp3, które są wariantami alternatywnego składania. Pełnej długości sekwencja dostarczona na tych figurach jest to sekwencją vp1. Na podstawie numeracji kapsydu AAV7 [SEKW. NR ID.: 2], sekwencje vp2 obejmują aminokwasy 138-737 AAV7, zaś sekwencje vp3 obejmują aminokwasy 203-737 AAV7. Na podstawie tych informacji specjalista może bez trudu określić położenie białek vp2 i vp3 dla innych nowych serotypów.
Inne pożądane białka i fragmenty białek kapsydu obejmują stałe i zmienne regiony, położone między regionami hiperzmiennymi (HPV) i sekwencje samych regionów HPV. Algorytm opracowany dla określenia regionów dywergencji sekwencji w AAV2 wykazał 12 regionów hiperzmiennych (HVR), z których 5 nakłada się, lub stanowi część czterech wcześniej opisanych regionów zmiennych. [Chiorini i wsp., J. Virol, 73: 1309-19 (1999); Rutledge i wsp., J. Virol., 72: 309-319]. Przy zastosowaniu tego algorytmu i/lub opisanych tu technik dopasowania określane są HVR nowych serotypów AAV. Na przykład, względem numeracji vp1 AAV2 [SEKW. NR ID.: 70], HVR zlokalizowane są następująco: HVR1, aa 146-152; HVR2, aa 182-186; HVR3, aa 262-264; HVR4, aa 381-383; HVR5, aa 450-474; HVR6, aa 490-495; HVR7, aa 500-504; HVR8, aa 514-522; HVR9, aa 534-555; HVR10, aa 581-594; HVR11, aa 658-667; i HVR12, aa 705-719. Przy zastosowaniu dopasowywania, przygotowanego według konwencjonalnych sposobów, oraz dostarczonych tu nowych sekwencji [patrz, np. Figura 2], można łatwo wyznaczyć położenie HVR w nowych serotypach AAV ujawnionych w wynalazku. Na przykład, przy wykorzystaniu Figury 2 można z łatwością stwierdzić, że dla AAV7 [SEKW. NR ID.: 2] HVR1 jest zlokalizowany w aa 146-152; HVR2 jest zlokalizowany w 182-187; HVR3 jest zlokalizowany w aa 263-266, HVR4 jest zlokalizowany w aa 383-385, HVR5 jest zlokalizowany w aa 451- 475; HVR6 jest zlokalizowany w aa 491-496 z AAV7; HVR7 jest zlokalizowany w aa 501-505; HVR8 jest zlokalizowany w aa 513-521; HVR9 jest zlokalizowany w 533-554; HVR10 jest zlokalizowany w aa 583-596; HVR11 jest zlokalizowany w aa 660-669; HVR12 jest zlokalizowany w aa 707-721. Z zastosowaniem dostarczonej tu informacji z łatwością można wyznaczyć HVR dla innych nowych serotypów.
Dodatkowo zidentyfikowano w kapsydzie aminokwasowe kasety identyczności. Kasety te są szczególnie interesujące, gdyż są przydatne do konstruowania sztucznych serotypów, np. przez wymianę kasety HVR1 wybranego serotypu na kasetę HVR1 innego serotypu. Niektóre spośród tych kaset identyczności zaznaczono na Fig. 2. Patrz Fig. 2 dostarczająca dopasowania CIustal X, które ma przedstawioną pod sekwencjami linijkę, poczynając od pierwszej pozycji oznaczonej 1. Linia nad
PL 217 623 B1 linijką jest stosowana do zaznaczenia silnie konserwatywnych pozycji. Wykorzystywane są trzy znaki (*, :, .). „*” oznacza pozycje zawierające jeden, w pełni konserwatywny aminokwas. „:” oznacza, że grupa „silna” jest w pełni konserwatywna. „·” oznacza, że grupa „słabsza” jest w pełni zachowywana. Są to grupy o dodatniej wartości występujące w macierzy Gonnet Pam250. Grupy silne zdefiniowane są przez silną wartość >0,5, zaś grupy słabe są zdefiniowane przez słabą wartość <0,5.
Dodatkowo, przykłady innych odpowiednich fragmentów kapsydów AAV obejmują według numeracji AAV2 [SEKW. NR ID.: 70], aa 24-42, aa 25-28; aa 81-85; aa 133-165; aa 134-165; aa 137143; aa 154-156; aa 194-208; aa 261-274; aa 262-274; aa 171-173; aa 413-417; aa 449-478; aa 494525; aa 534-571; aa 581-601; aa 660-671; aa 709-723. Do jeszcze innych żądanych fragmentów należą, na przykład, dla AAV7 aminokwasy 1 do 184 SEKW. NR ID.: 2, aminokwasy 199 do 259; aminokwasy 274 do 446; aminokwasy 603 do 659; aminokwasy 670 do 706; aminokwasy 724 do 736; aa 185 do 198; aa 260 do 273; aa 447 do 477; aa495 do 602; aa 660 do 669; i aa 707 do 723. Jeszcze inne pożądane fragmenty, według numeracji AAV7 [SEKW. NR ID.: 2], wybrane są z grupy złożonej z aa 185 do 198; aa 260 do 273; aa 447 to 477; aa 495 do 602; aa 660 do 669; i aa 707 do 723. Stosując dostarczone tu dopasowanie wykonane przy użyciu programu Clustal X przy domyślnych ustawieniach, lub przy zastosowaniu innego dostępnego w handlu lub publiczne programu przy domyślnych ustawieniach, specjalista łatwo określi odpowiadające im fragmenty nowych kapsydów AAV.
Innymi pożądanymi białkami są białka rep AAV [aa 1 do 623 SEKW. NR ID.: 3 dla AAV7] i ich funkcjonalne fragmenty obejmujące np. aa 1 do 171, aa 172 do 372, aa 373 do 444, aa 445 do 623 SEKW. NR ID.: 3. Odpowiednio, fragmenty takie mają przynajmniej 8 aminokwasów długości. Patrz Fig. 3. Porównywalne regiony mogą być zidentyfikowane we fragmentach innych nowych AAV, z zastosowaniem technik opisanych tu i znanych w dziedzinie. Ponadto, fragmenty o innych żądanych długościach mogą być łatwo wykorzystane. Fragmenty takie mogą być wytworzone przez rekombinację lub innymi odpowiednimi środkami, np. przez syntezę chemiczną.
Sekwencje, białka i fragmenty mogą być wytworzone dowolnymi odpowiednimi środkami, w tym rekombinacją, syntezą chemiczną lub innym środkami syntezy. Takie sposoby wytwarzania są znane specjalistom.
IV. Wytwarzanie rAAV z nowymi kapsydami AAV
Można wykryć nowe serotypy AAV typu dzikiego których sekwencje są wolne od DNA i/lub materiału komórkowego, z którym te wirusy są połączone w naturze. W innym aspekcie, dostarczono cząsteczek, które wykorzystują nowe sekwencje AAV ujawnione w wynalazku, w tym ich fragmenty, do wytwarzania cząsteczek przydatnych do dostarczania heterologicznych genów lub innych sekwencji kwasów nukleinowych do komórki docelowej.
Cząsteczki zawierające sekwencje nowego serotypu AAV obejmują dowolne elementy genetyczne (wektory), które mogą być dostarczone do komórki gospodarza, np. nagi DNA, plazmid, fag, transpozon, kosmid, episom, białko w niewirusowym nośniku dostarczania (np. nośniku opartym na lipidach), wirus itp., które przenoszą niesione w nich sekwencje. Wybrany wektor może być dostarczony dowolnym odpowiednim sposobem, w tym przez transfekcję, elektroporację, dostarczenie liposomów, techniki fuzji błonowej, opłaszczone DNA kulki o dużej prędkości, infekcję wirusową i fuzję protoplastów. Sposoby użyte do skonstruowania dowolnego wykonania wynalazku są znane specjalistom w dziedzinie manipulacji kwasami nukleinowymi i obejmują inżynierię genetyczną, inżynierię rekombinacyjną i techniki syntetyczne. Patrz, np. Sambrook i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY.
W jednym wykonaniu, wektory zawierają sekwencje kodujące nowy kapsyd AAV (np. kapsyd AAV7, kapsyd AAV 44-2 (rh.10), kapsyd AAV10, kapsyd AAV11, kapsyd AAV12), lub fragment jednego lub więcej z tych kapsydów. Alternatywnie, wektory mogą zawierać samo białko kapsydu lub jego fragment.
Ewentualnie, wektory mogą zawierać sekwencje kodujące białka rep AAV. Takie sekwencje rep mogą pochodzić z tego samego serotypu AAV, co dostarczający sekwencji cap. Alternatywnie, wektorami są te, w których sekwencje rep pochodzą z serotypu AAV różniącego się od serotypu dostarczającego sekwencji cap. W jednym wykonaniu sekwencje rep i cap są wyrażane z oddzielnych źródeł (np. oddzielnych wektorów, lub komórki gospodarza i wektora). W innym wykonaniu, te sekwencje rep są wyrażane z tego samego źródła co sekwencje cap. W tym wykonaniu, sekwencje rep mogą być połączone w ramce z sekwencjami cap innego serotypu AAV tworząc chimeryczny wektor AAV. Ewentualnie, wektory zawierają ponadto minigen obejmujący wybrany transgen otoczony ITR 5' AAV i ITR 3' AAV.
PL 217 623 B1
Zatem w jednym wykonaniu, opisane tu wektory zawierają sekwencje nukleotydowe kodujące pełny kasyd AAV, który może pochodzić z pojedynczego serotypu AAV (np. AAV7 lub innego nowego AAV). Alternatywnie, wektory te zawierają sekwencje kodujące sztuczne kapsydy, które zawierają jeden lub więcej fragmentów kapsydu AAV7 (lub innego nowego AAV) połączone z białkami kapsydu heterologicznego AAV lub nie AAV (lub ich fragmentami). Te sztuczne białka kapsydu są wybrane z nieciągłych części kapsydu AAV7 (lub innego nowego AAV) lub z kapsydów innych serotypów AAV. Przykładowo, może być pożądana modyfikacja obszarów kodujących jeden lub więcej vp1 AAV, np. w jednym lub więcej obszarów nadzmiennych (tzn. HPV1-12), lub vp2 i/lub vp3. W innym przykładzie, może być pożądana zmiana kodonu start białka vp3 na GTG. Modyfikacje te mogą mieć na celu zwiększenie ekspresji, wydajności i/lub ulepszenie oczyszczania w wybranych systemach ekspresyjnych lub też inny pożądany cel (np. zmianę tropizmu lub zmianę epitopów dla przeciwciał neutralizujących).
Opisane tu wektory, np. plazmidowe, są przydatne w szeregu zastosowań, lecz szczególnie dobrze nadają się do wykorzystania do wytwarzania rAAV zawierającego kapsyd obejmujący sekwencje AAV lub jej fragment. Te wektory, obejmujące rAAV, ich elementy, konstrukcję i zastosowania są tu opisane szczegółowo.
Sposób wytwarzania kapsydu zrekombinowanego wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) o serotypie AAV7 (lub innego nowego AAV), lub jego części obejmuje hodowanie komórki gospodarza zawierającej sekwencję kwasu nukleinowego kodującą białko kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) serotypu 7 (lub innego nowego AAV), lub jego fragment tak, jak tu zdefiniowano; funkcjonalny gen rep; minigen złożony, minimalnie, z odwróconych końcowych powtórzeń (ITR) AAV i transgenu; oraz odpowiednie funkcje pomocnicze dla umożliwienia pakowania minigenu do białka kapsydu AAV7 (lub innego nowego AAV).
Składniki wymagane w hodowli w komórce gospodarza do pakowania minigenu AAV do kapsydu AAV mogą być dostarczone do komórki gospodarza in trans. Alternatywnie, dowolny jeden lub więcej z wymaganych składników (np. minigen, sekwencje rep, sekwencje cap, i/lub funkcje pomocnicze) może być dostarczony przez stabilną komórkę gospodarza, którą zmieniono tak, by zawierała jeden lub więcej wymaganych składników przy użyciu sposobów znanych specjalistom. Najodpowiedniej, taka stabilna komórka gospodarza będzie zawierać wymagany składnik (-i) pod kontrolą indukowalnego promotora. Wymagany składnik (-i) może jednak być pod kontrolą promotora konstytutywnego. Przykłady odpowiednich promotorów indukowalnych i konstytutywnych dostarczono tu przy omówieniu elementów regulacyjnych odpowiednich do zastosowania razem z transgenem. Wybrana stabilna komórka gospodarza może zawierać wybrany składnik (-i) pod kontrolą promotora konstytutywnego i inny wybrany składnik (i) pod kontrolą jednego lub więcej indukowalnych promotorów. Na przykład, stabilna komórka gospodarza może być wytworzona z komórki pochodzącej z komórek 293 (zawierających funkcje pomocnicze E1 pod kontrolą promotora konstytutywnego), lecz zawierającej białka rep i/lub cap pod kontrolą promotorów indukowalnych. Jeszcze inne stabilne komórki gospodarza mogą być wytworzone przez specjalistę.
Minigen, sekwencje rep, sekwencje cap, i funkcje pomocnicze wymagane do wytworzenia rAAV mogą być dostarczone do pakującej komórki gospodarza w postaci dowolnego elementu genetycznego, który przenosi niesione w sobie sekwencje. Wybrany element genetyczny może być dostarczony dowolnym odpowiednim sposobem, w tym tu opisanymi. Sposoby zastosowane w dowolnym wykonaniu są znane specjalistom w dziedzinie manipulacji kwasami nukleinowymi i obejmują inżynierię genetyczną, inżynierię rekombinacyjną i techniki syntetyczne. Patrz, np. Sambrook i wsp., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY. Podobnie, sposoby wytwarzania wirionów rAAV są dobrze znane i wybór odpowiedniego sposobu nie stanowi ograniczenia niniejszego wynalazku, patrz, np. K. Fisher i wsp., J. Virol., 70: 520-532 (1993) i patent USA nr 5,478,745.
A. Minigen
Minigen składa się z, minimalnie, transgenu i jego sekwencji regulatorowych, oraz odwróconych końcowych powtórzeń 5' i 3' AAV (ITR). To ten minigen jest pakowany do białka kapsydowego i dostarczany do wybranej komórki gospodarza.
1. Transgen
Transgen jest to sekwencja nukleotydowa, heterologiczna względem sekwencji wektorowych otaczających transgen, która koduje polipeptyd, białko lub inny będący przedmiotem zainteresowania
PL 217 623 B1 produkt. Kodująca sekwencja kwasu nukleinowego jest funkcjonalnie połączona ze składnikami regulatorowymi w sposób, który pozwala na transkrypcję transgenu i/lub wyrażanie w komórce gospodarza.
Skład sekwencji transgenu będzie zależał od zastosowania, do którego będzie przeznaczony uzyskany wektor. Przykładowo, jeden z typów sekwencji transgenu zawiera sekwencję reporterową, która po wyrażeniu wytwarza wykrywalny sygnał. Do takich sekwencji reporterowych należą, między innymi, sekwencje DNA kodujące β-laktamazę, β-galaktozydazę (lacZ), alkaliczną fosfatazę, kinazę tymidynową, zielone białko fluoryzujące (GFP), acetylotransferazę chloramfenikolu (CAT), lucyferazę, białka związane z błoną, w tym, przykładowo, CD2, CD4, CD8, białko hemaglutyniny wirusa grypy i inne dobrze znane w dziedzinie, dla których istnieją lub mogą być wytworzone konwencjonalnymi środkami skierowane przeciwko nim przeciwciała o wysokim powinowactwie, oraz białka fuzyjne obejmujące związane z błoną białko odpowiednio połączone z domeną znacznika antygenowego z, między innymi, hemaglutyniny lub Myc.
Te sekwencje kodujące, przy połączeniu z elementami regulatorowymi kontrolującymi ich ekspresję, dostarczają sygnały wykrywalne konwencjonalnymi środkami, w tym oznaczeniami enzymatycznymi, radiograficznymi, kolorymetrycznymi, fluorescencją lub innymi oznaczeniami spektrograficznymi, oznaczeniami sortowania komórek aktywowanego przez fluorescencję i oznaczeniami immunologicznymi, w tym immunoenzymatycznym (ELISA), radioimmunologicznym (RIA) i immunohistochemią. Na przykład, gdy sekwencją znacznikową jest gen LacZ, obecność wektora niosącego sygnał jest wykrywana przez oznaczenia aktywności beta-galaktozydazy. Gdy transgenem jest zielone białko fluoryzujące lub lucyferaza, wektor niosący sygnał może być oznaczany wizualnie przez wytwarzanie barwy lub światła w luminometrze.
Jednak transgenem jest nieznacznikowa sekwencja kodująca produkt, który jest przydatny w biologii i medycynie taki, jak białka, peptydy, RNA, enzymy lub RNA katalityczne. Do przydatnych cząsteczek RNA należą tRNA, dsRNA, rybosomalne RNA, katalityczne RNA i RNA antysensowne. Jednym z przykładów użytecznej sekwencji RNA jest sekwencja hamująca ekspresję docelowej sekwencji kwasu nukleinowego u leczonego zwierzęcia.
Transgen może być wykorzystany do skorygowania lub złagodzenia defektu genu, do których mogą należeć defekty genów, w których prawidłowe geny są wyrażane na niższym, niż prawidłowy poziomie, lub defekty, w których nie jest wyrażany funkcjonalny produkt genu. Korzystny typ transgenu koduje białko lub polipeptyd terapeutyczny wyrażany w komórce gospodarza. Można stosować wiele transgenów, np. do poprawienia lub złagodzenia defektu genowego powodowanego brakiem białka złożonego z wielu podjednostek. W pewnych sytuacjach osobny transgen może być zastosowany do kodowania każdej podjednostki białka, lub kodowania różnych peptydów lub białek. Jest to konieczne, gdy wielkość DNA kodującego podjednostkę białkową jest duża, np. dla immunoglobuliny, czynnika wzrostu pochodzenia płytkowego lub białka dystrofiny. Aby komórka wytwarzała białko złożone z wielu podjednostek, infekuje się ją zrekombinowanym wirusem zawierającym każdą z różnych podjednostek. Alternatywnie, różne podjednostki białka mogą być kodowane przez ten sam transgen. W tym przypadku, pojedynczy transgen zawiera DNA kodujący każdą z podjednostek, gdzie DNA dla każdej z podjednostek jest oddzielony wewnętrznym miejscem przyłączenia rybosomu (IRES). Jest to pożądane, gdy wielkość DNA kodującego każdą z podjednostek jest niewielka, np. całkowita wielkość DNA kodującego podjednostki i IRES wynosi poniżej pięciu kilo par zasad. Jako alternatywę dla IRES, DNA można przedzielić sekwencjami kodującymi peptyd 2A, który sam się przecina w procesie posttranslacyjnym. Patrz np., M. L. Donelly i wsp., J. Gen. Virol., 78 (pt 1): 13-21 (Styczeń 1997); Furler S. i wsp., Gene Ther., 8 (11): 864-873 (Czerwiec 2001); Klump H., i wsp., Gene Ther., 8 (10): 811-817 (Maj 2001). Ten peptyd 2A jest znacząco mniejszy niż IRES, co czyni go szczególnie przydatnym w zastosowaniach, gdzie czynnikiem ograniczającym jest przestrzeń. Wybrany transgen może jednak kodować dowolny czynny biologicznie produkt lub inny produkt, np. produkt pożądany w celu badań.
Odpowiednie transgeny mogą być bez trudu wybrane przez specjalistę.
2. Elementy regulatorowe
Obok głównych elementów zidentyfikowanych powyżej dla minigenu, wektor zawiera także niezbędne konwencjonalne elementy kontrolne, które są funkcjonalnie połączone z transgenem w sposób umożliwiający jego transkrypcję, translację i/lub ekspresję w komórce stransfekowanej wektorem plazmidowym lub zainfekowanej wirusem. W użytym tu znaczeniu, „funkcjonalnie połączone” sekwencje obejmują zarówno sekwencje kontrolujące ekspresję ciągłe z genem będącym przedmiotem zainteresowania oraz sekwencje kontrolne działające in trans lub na odległość kontrolując gen będący przedmiotem zainteresowania.
PL 217 623 B1
Do sekwencji kontrolujących ekspresję należą odpowiednie sekwencje inicjacji transkrypcji, terminacji, promotorowe i wzmacniaczy; wydajne sygnały obróbki RNA, takie jak sygnały składania i poliadenylacji (poliA); sekwencje stabilizujące mRNA cytoplazmatyczne; sekwencje wzmacniające wydajność translacji (tzn. sekwencja najwyższej zgodności Kozak); sekwencje wzmacniające stabilność białka; oraz, gdy jest to pożądane, sekwencje wzmacniające wydzielanie kodowanego produktu. Duża liczba sekwencji kontrolujących ekspresję, w tym promotorów natywnych, konstytutywnych, indukowalnych i/lub swoistych tkankowo jest znana w dziedzinie i może być wykorzystana.
Do przykładów promotorów konstytutywnych należą, między innymi, retrowirusowy promotor LTR wirusa mięsaka Rousa (RSV) (ewentualnie ze wzmacniaczem RSV), promotor cytomegalowirusa (CMV) (ewentualnie ze wzmacniaczem CMV) [patrz, np. Boshart i wsp., Cell, 41: 521-530 (1985)], promotor SV40, promotor reduktazy dihydrofolanu, promotor β-aktyny, promotor kinazy fosfoglicerolowej (PGK) oraz promotor EF1a [Invitrogen].
Promotory indukowalne umożliwiają regulację ekspresji genów i mogą być regulowane przez związki dostarczane z zewnątrz, czynniki środowiskowe, takie jak temperatura, lub obecność konkretnego stanu fizjologicznego, np. fazy ostrej, konkretnego stanu różnicowania komórki, lub tylko w komórkach dzielących się. Indukowalne promotory i indukowalne systemy dostępne są z wielu źródeł handlowych, w tym, między innymi, Invitrogen, Clontech i Ariad. Wiele innych systemów zostało opisanych i mogą one być łatwo wybrane przez specjalistę. Do przykładów indukowalnych promotorów regulowanych przez związki dostarczane z zewnątrz należą indukowany przez cynk promotor metalotioneiny (MT) owcy, indukowany przez deksametazon (Dex) promotor mysiego wirusa nowotworu sutka (MMTV), system promotora polimerazy T7 [WO 98/10088]; owadzi promotor ekdyzonu [No i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: 3346-3351 (1996)], system reprymowany przez tetracyklinę [Gossen i wsp., Proc. Natl. Acad Sci. USA, 89: 5547-5551 (1992)], system indukowany przez tetracyklinę [Gossen i wsp., Science, 268: 1766-1769 (1995), patrz też Harvey i wsp., Curr. Opin. Chem. Biol., 2: 512-518 (1998)], system indukowany przez RU486 [Wang i wsp., Nat. Biotech., 15: 239-243 (1997) i Wang i wsp., Gene Ther., 4: 432-441 (1997)] oraz system indukowany przez rapamycynę [Magari i wsp., J. Clin. Invest., 100: 2865-2872 (1997)]. Jeszcze innymi typami indukowalnych promotorów, które mogą być użyteczne w tym kontekście, są promotory regulowane przez specyficzny stan fizjologiczny, np. temperaturę, fazę ostrą, konkretny stan różnicowania komórki, lub tylko w komórkach dzielących się.
W innym wykonaniu użyty będzie natywny promotor transgenu. Natywny promotor może być korzystny gdy ekspresja transgenu musi naśladować ekspresję natywną. Natywny promotor może być użyty gdy ekspresja transgenu musi być regulowana czasowo lub rozwojowo, lub w sposób swoisty tkankowo, lub w odpowiedzi na konkretne bodźce transkrypcyjne. W dalszym wykonaniu, inne natywne elementy kontroli ekspresji takie, jak elementy wzmacniaczy, miejsca poliadenylacji lub sekwencje najwyższej zgodności Kozak mogą być także wykorzystane do naśladowania natywnej ekspresji.
Inne wykonanie transgenu obejmuje transgen funkcjonalnie połączony z promotorem swoistym tkankowo. Na przykład, jeżeli pożądana jest ekspresja w mięśniu szkieletowym, zastosowany powinien być promotor aktywny w mięśniu. Należą do nich promotory genów kodujących szkieletową β-aktynę, lekki łańcuch 2A miozyny, dystrofinę, mięśniową kinazę kreatyny, a także syntetyczne promotory mięśniowe o aktywnościach wyższych, niż w naturalnie występujących promotorach (patrz Li i wsp., Nat. Biotech., 17: 241-245 (1999)). Przykłady promotorów swoistych tkankowo znane są dla wątroby (albumina, Miyatake i wsp., J. Virol., 71: 5124-32 (1997); rdzeniowy promotor wirusa zapalenia wątroby typu B, Sandig i wsp., Gene Ther., 3: 1002-9 (1996); alfa-fetoproteina (AFP), Arbuthnot i wsp., Hum. Gene Ther., 7: 1503-14 (1996)), osteokalcyna kości (Stein i wsp., Mol. Biol. Rep., 24: 185-96 (1997)); sialoproteina kości (Chen i wsp., J. Bone. Miner. Res., 11: 654-64 (1996)), limfocytów (CD2, Hansal i wsp., J. Immunol., 161: 1063-8 (1998); ciężki łańcuch immunoglobuliny; łańcuch a receptora komórek T), neuronów takie, jak promotor swoistej dla neuronów enolazy (NSE) (Andersen i wsp., Cell. Mol. Neurobiol., 13: 503-15 (1993)), genu lekkiego łańcucha neurofilamentu (Piccioli i wsp., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 5611-5 (1991)), oraz swoistego dla neuronów genu vgf (Piccioli i wsp., Neuron, 15: 373-84 (1995)) i inne.
Ewentualnie, plazmidy niosące użyteczne terapeutycznie transgeny mogą także zawierać markery selekcyjne lub geny reporterowe, do których mogą należeć geny kodujące oporność na, między innymi, genetycynę, hygromycynę lub puromycynę. Takie selekcyjne geny reporterowe lub markerowe (umieszczone poza genomem wirusa, który ma być odzyskany) mogą być wykorzystane do sygnalizacji obecności plazmidów w komórkach bakterii, np. przez oporność na ampicylinę. Do innych składni18
PL 217 623 B1 ków plazmidu może należeć miejsce startu replikacji. Wybór tych i innych promotorów i elementów wektorowych jest konwencjonalny i dostępnych jest wiele takich sekwencji [patrz np., Sambrook i wsp., i cytowane tam referencje].
Połączenie transgenu, promotora/wzmacniacza, oraz ITR 5' i 3' dla ułatwienia jest tu nazywane „mini genem”. Projektowanie takiego minigenu może być przeprowadzone za pomocą konwencjonalnych technik.
3. Dostarczenia minigenu do pakującej komórki gospodarza.
Minigen może być niesiony w dowolnym odpowiednim wektorze, np. plazmidzie, który jest dostarczany do komórki gospodarza. Plazmidy mogą być skonstruowane tak, aby nadawały się do replikacji i ewentualnie, integracji w komórkach prokariotycznych, komórkach ssaków lub w obu typach. Plazmidy te (lub inne wektory niosące 5' ITR AAV-heterologiczna cząsteczka-3' ITR) zawierają sekwencje umożliwiające replikację minigenu w eukariontach i/lub prokariontach oraz markery selekcyjne dla tych systemów. Do markerów selekcyjnych lub genów reporterowych należeć mogą geny kodujące oporność na, między innymi, genetycynę, hygromycynę lub puromycynę. Plazmidy mogą także zawierać pewne selekcyjne geny markerowe lub reporterowe, które można zastosować do sygnalizacji obecności wektorów w komórkach bakterii, takie jak oporność na ampicylinę. Do innych składników plazmidu może należeć miejsce startu replikacji oraz amplikon, taki jak system amplikonu wykorzystujący antygen jądrowy wirusa Epsteina Barra. Ten system amplikonu, lub inne podobne składniki amplikonu pozwalają na replikację episomalną w komórce w wysokiej liczbie kopii. Korzystnie, cząsteczka niosąca minigen jest transfekowana do komórki, gdzie może występować przejściowo. Alternatywnie, minigen (niosący 5' ITR AAV-heterologiczna cząsteczka-3' ITR) może być stabilnie zintegrowany do genomu komórki gospodarza, albo do chromosomu, albo jako episom. W niektórych wykonaniach minigen może być obecny w wielu kopiach, ewentualnie w postaci konkatamerów w układzie głowa do głowy, głowa do ogona lub ogon do ogona. Odpowiednie techniki transfekcji są znane i mogą łatwo być wykorzystane do dostarczenia minigenu do komórki gospodarza.
Ogólnie, przy dostarczaniu wektora obejmującego minigen przez transfekcję, wektor dostarczany jest w ilości od około 5 gg do około 100 gg DNA, a korzystnie około 10 do około 50 gg DNA do około 1 x 104 do około 1 x 1013 komórek, a korzystnie około 105 komórek. Względne stosunki ilości DNA wektora do komórek gospodarza mogą jednak być zmienione, biorąc pod uwagę takie czynniki, jak wybrany wektor, sposób dostarczenia i wybrane komórki gospodarza.
B. Sekwencje Rep i Cap
Poza minigenem, komórka gospodarza zawiera sekwencje kierujące wyrażaniem nowego białka kapsydu AAV (np. kapsydu AAV7 lub innego nowego AAV lub sztucznego białka kapsydu obejmującego fragment jednego lub więcej tych kapsydów) w komórce gospodarza oraz sekwencje rep tego samego serotypu, co serotyp ITR AAV znajdujących się w minigenie. Sekwencje cap i rep AAV mogą być niezależnie uzyskane ze źródła AAV jak opisano powyżej i mogą być wprowadzane do komórki gospodarza dowolnym sposobem znanym specjaliście tak, jak opisano powyżej. Ponadto, przy pseudotypowaniu nowego kapsydu AAV, sekwencje kodujące każde z niezbędnych białek rep mogą być dostarczone przez ten sam serotyp AAV, lub sekwencje kodujące białka rep mogą być dostarczone przez inne serotypy AAV (np. AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6 lub jeden z nowych zidentyfikowanych tu serotypów). Na przykład, sekwencje rep78/68 mogą pochodzić z AAV2, podczas gdy sekwencje rep52/40 mogą pochodzić z AAV1.
W jednym wykonaniu komórka gospodarza stabilnie zawiera białko kapsydu pod kontrolą odpowiedniego promotora takiego, jak opisane powyżej. W tym wykonaniu, białko kapsydu jest wyrażane pod kontrolą promotora indukowalnego. W innym wykonaniu, białko kapsydu jest dostarczane do komórki gospodarza in trans. Przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, białka kapsydu mogą być dostarczane przez plazmid, który zawiera sekwencje niezbędne do kierowania ekspresją wybranego białka kapsydu w komórce gospodarza. Przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, plazmid niosący białko kapsydu niesie też inne sekwencje wymagane do pakowania rAAV, np. sekwencje rep.
W innym wykonaniu komórka gospodarza stabilnie zawiera sekwencje rep pod kontrolą odpowiedniego promotora takiego, jak opisane powyżej. W tym wykonaniu, niezbędne białka rep są wyrażane pod kontrolą promotora indukowalnego. W innym wykonaniu, białka rep są dostarczane do komórki gospodarza in trans. Przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, białka rep mogą być dostarczane przez plazmid, który zawiera sekwencje niezbędne do kierowania ekspresją wybranych
PL 217 623 B1 białek rep w komórce gospodarza. Przy dostarczaniu do komórki gospodarza in trans, plazmid niosący białko kapsydu niesie też inne sekwencje wymagane do pakowania rAAV, np. sekwencje rep i cap.
W jednym z wykonań, sekwencje rep i cap mogą być zatem transfekowane do komórki gospodarza na jednej cząsteczce kwasu nukleinowego i istnieć stabilnie w komórce w postaci episomu. W innym wykonaniu, sekwencje rep i cap są stabilnie zintegrowane z genomem komórki. W innym wykonaniu sekwencje rep i cap są przejściowo wyrażane w komórce gospodarza. Na przykład, użyteczna w takiej transfekcji cząsteczka kwasu nukleinowego obejmuje, od 5' do 3', promotor, ewentualnie łącznik między promotorem a początkiem sekwencji genu rep, sekwencję genu rep AAV oraz sekwencję genu cap AAV.
Ewentualnie, sekwencje rep i/lub cap mogą być dostarczone na wektorze zawierającym inne sekwencje DNA, które mają być wprowadzone do komórek gospodarza. Na przykład, wektor może zawierać konstrukt rAAV obejmujący minigen. Wektor może obejmować jeden lub więcej genów kodujących funkcje pomocnicze, np. adenowirusowe białka E1, E2a i E4ORF6, oraz gen RNA VAI.
Promotor wykorzystany w tym konstrukcie może być dowolnym z konstytutywnych, indukowalnych lub natywnych promotorów znanych specjalistom lub omówionych powyżej. W jednym wykonaniu zastosowany jest promotor P5 AAV. W innym korzystnym wykonaniu, promotor rep jest promotorem indukowalnym, jak omówiono to powyżej w związku z elementami regulacyjnymi transgenu. Jednym z korzystnych promotorów do wyrażania rep jest promotor T7. Wektor obejmujący gen rep regulowany przez promotor T7 oraz gen cap jest transfekowany lub transformowany do komórki, która konstytutywnie albo indukowalnie wyraża polimerazę T7. Patrz WO 98/10088, opublikowany 12 marca 1998.
Łącznik jest ewentualnym elementem konstrukcji wektora. Łącznik jest to sekwencja DNA umieszczona między promotorem a kodonem start ATG genu rep. Łącznik może mieć dowolny pożądany charakter; tzn. może być losową sekwencją nukleotydową lub alternatywnie, może on kodować produkt genu takiego, jak gen markerowy. Łącznik może zawierać geny, które typowo zawierają miejsca start/stop i poliA. Łącznik może być niekodującą sekwencją DNA z prokarionta lub eukarionta, powtarzalną sekwencją niekodującą, sekwencją kodującą bez sygnałów kontroli translacji lub sekwencją kodującą z sygnałami kontroli translacji. Dwoma przykładowymi źródłami sekwencji łącznikowej są m.in. sekwencje drabinki faga λ oraz sekwencje drabinki drożdży, dostępne w handlu, np. z Gibco lub Invitrogen. Łącznik może mieć dowolną długość wystarczającą do obniżenia ekspresji produktów genów rep78 i rep8, pozostawiając ekspresję produktów genów rep52, rep40 oraz cap na normalnym poziomie. Długość łącznika może zatem wynosić od około 10 bp do około 10,0 kb, korzystnie w zakresie od około 100 bp do około 8,0 kb. Dla zmniejszenia prawdopodobieństwa rekombinacji, łącznik korzystnie ma długość poniżej 2 kb.
Chociaż cząsteczka(-i) dostarczające rep i cap mogą występować w komórce gospodarza przejściowo (tzn. przez transfekcję), korzystne jest, aby jedno lub więcej spośród białek rep i cap oraz promotor(-y) kontrolujący ich ekspresję były stabilnie wyrażane w komórce gospodarza, np. jako episom lub przez integrację do chromosomu komórki gospodarza. Konstrukty takie są wytwarzane konwencjonalnymi technikami inżynierii genetycznej lub inżynierii rekombinacyjnej. Podczas, gdy ten opis dostarcza ilustrujących przykładów konkretnych konstruktów, przy wykorzystaniu dostarczonej tu informacji specjalista może wybrać i zaprojektować inne odpowiednie konstrukty stosując wybór łączników, promotorów P5 i innych elementów, w tym co najmniej jeden sygnał start i stop translacji, oraz ewentualny dodatek miejsc poliadenylacji.
W innym wykonaniu białko rep lub cap może być stabilnie dostarczane przez komórkę gospodarza.
C. Funkcje pomocnicze
Pakująca komórka gospodarza wymaga też funkcji pomocniczych dla pakowania rAAV. Ewentualnie, funkcje te mogą być dostarczane przez wirusa opryszczki. Najkorzystniej, niezbędne funkcje pomocnicze są wszystkie dostarczane przez źródło adenowirusa pochodzącego od człowieka lub naczelnego innego niż człowiek, takiego jak opisane powyżej i/lub dostępne z szeregu źródeł, w tym American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, VA (USA). Komórce gospodarza dostarcza się i/lub zawiera ona produkt genu E1a, produkt genu E1b, produkt genu E2a i/lub produkt genu E4 ORF6. Komórka gospodarza może zawierać inne geny adenowirusowe takie, jak RNA VAI, geny te nie są jednak niezbędne. Żadne inne geny lub funkcje genów adenowirusa nie są obecne w komórce gospodarza.
Przez „DNA adenowirusa wyrażający produkt genu E1a” rozumie się dowolną sekwencję adenowirusa kodującą E1a lub funkcjonalną część E1a. DNA adenowirusa wyrażający produkt genu E2a oraz DNA adenowirusa wyrażający produkt genu E4 ORF6 są definiowane podobnie. Włączone są tu
PL 217 623 B1 dowolne allele lub inne modyfikacje genu adenowirusa lub jego funkcjonalnej części. Modyfikacje takie mogą być celowo wprowadzone przy pomocy konwencjonalnych technik inżynierii genetycznej lub mutagenezy w celu wzmocnienia w jakiś sposób funkcji adenowirusa, lub mogą być jego naturalnie występującymi wariantami allelicznymi. Takie modyfikacje i sposoby manipulowania DNA dla uzyskania tych funkcji genów adenowirusa są znane specjalistom.
Produkty genów adenowirusa E1a, E1b, E2a i/lub E4ORF6, a także dowolne inne pożądane funkcje pomocnicze mogą być dostarczone przy zastosowaniu dowolnych środków pozwalających na ich wyrażanie w komórce. Każda z sekwencji kodujących te produkty może być na osobnym wektorze, lub też jeden lub więcej genów może być na tym samym wektorze. Wektorem może być dowolny wektor znany w dziedzinie lub ujawniony powyżej, w tym plazmid, kosmid i wirus. Wprowadzenie do komórki gospodarza można osiągnąć dowolnymi środkami znanymi w dziedzinie lub ujawnionymi powyżej, w tym między innymi, przez transfekcję, elektroporację, dostarczenie liposomów, techniki fuzji błon, opłaszczone DNA kulki o dużej prędkości, infekcję wirusową i fuzję protoplastów. Jeden lub więcej genów adenowirusa może być stabilnie zintegrowanych do genomu komórki gospodarza, stabilnie wyrażanych w postaci episomów, lub wyrażanych przejściowo. Wszystkie produkty genów mogą być wyrażane przejściowo, na episomie lub stabilnie wintegrowane, albo niektóre spośród produktów genów mogą być wyrażane stabilnie, podczas gdy inne wyrażane przejściowo. Ponadto, promotory każdego z genów adenowirusa mogą być wybrane niezależnie spośród promotorów, konstytutywnych, promotorów indukowalnych lub natywnych promotorów adenowirusowych. Promotory mogą być regulowane przez specyficzny stan fizjologiczny organizmu lub komórki (np. przez stan różnicowania lub w dzielących się lub będących w spoczynku komórkach) lub przez dodane z zewnątrz czynniki, przykładowo.
D. Komórki gospodarza i pakujące linie komórkowe
Sama komórka gospodarza może być wybrana spośród wszystkich organizmów biologicznych, w tym komórek prokariotycznych (np. bakteryjnych) i komórek eukariotycznych, w tym komórek owadzich, komórek drożdży i komórek ssaków. Szczególnie pożądane komórki gospodarza wybrane są z dowolnego gatunku ssaka, w tym, między innymi, komórek takich, jak A549, WEHI, 3T3, 10T1/2, BHK, MDCK, COS 1, COS 7, BSC 1, BSC 40, BMT 10, VERO, WI38, HeLa, komórki 293 (które wyrażają funkcjonalne E1 adenowirusa), Saos, C2C12, komórki L, HT1080, HepG2 i pierwotne komórki fibroblastów, hepatocytów i mioblastów pochodzące od ssaków, w tym od człowieka, małpy, myszy, szczura, królika i chomika. Wybór gatunku ssaka dostarczającego komórek, ani typ komórki komórki ssaka, tzn. fibroblast, hepatocyt, komórka nowotworowa itp. nie jest ograniczeniem wynalazku. Najbardziej pożądane komórki nie niosą żadnych genów adenowirusa poza E1, E2a i/lub E4 ORF6, ani nie zawierają żadnych innych genów wirusowych, które mogłyby spowodować rekombinację homologiczną lub zanieczyszczenie wirusem podczas wytwarzania rAAV; są one także zdolne do infekcji lub transfekcji DNA oraz wyrażania stransfekowanego DNA. W korzystnym wykonaniu, komórka gospodarza posiada rep i cap stabilnie wtransfekowane do komórki.
Jedną z użytecznych komórek gospodarza jest komórka gospodarza stabilnie stransformowana sekwencjami kodującymi rep i cap i stransfekowana DNA adenowirusa E1, E2a i E4ORF6 oraz konstruktem niosącym minigen tak, jak opisano powyżej. Podobnie, mogą być zastosowane komórki stabilnie wyrażające rep i/lub cap, takie, jak B-50 (PCT/US98/19463), lub opisane w Patencie USA nr 5,658,785. Inna pożądana komórka gospodarza zawiera minimalny adenowirusowy DNA wystarczający do wyrażania E4 ORF6. Jeszcze inne linie komórkowe można skonstruować wykorzystując nowe sekwencje rep AAV i/lub nowe sekwencje cap AAV.
Przygotowanie komórki gospodarza obejmuje techniki takie, jak składanie wybranych sekwencji DNA. Składanie to można przeprowadzić z zastosowaniem konwencjonalnych technik. Techniki takie obejmują cDNA i klonowanie genomowe, które są dobrze znane i opisane w Sambrook i wsp., cytowanym powyżej, zastosowanie nakładających się sekwencji oligonukleotydowych genomów adenowirusa i genomów AAV, w połączeniu z łańcuchową reakcją polimerazy, metody syntetyczne i dowolne inne odpowiednie sposoby, które dostarczają pożądaną sekwencję nukleotydową.
Wprowadzania cząsteczek (jak plazmidy i wirusy) do komórki gospodarza można dokonać z zastosowaniem technik znanych specjaliście i omawianych w tym opisie. Stosowane są standardowe techniki transfekcji, np. transfekcja CaPO4 lub elektroporacja, i/lub infekcja hybrydowymi wektorami adenowirus/AAV do linii komórkowych, takich jak ludzka zarodkowa linia komórek nerki HEK 293 (linia ludzkich komórek nerki zawierających funkcjonalny gen E1 adenowirusa dostarczający działających w układzie trans białek E1).
PL 217 623 B1
Te nowe oparte na AAV wektory, które są wytworzone przez specjalistę, są korzystne dla dostarczania genów do wybranych komórek gospodarza i pacjentów poddanych terapii genowej, ponieważ nie odnaleziono w populacji ludzkiej przeciwciał neutralizujących przeciwko AAV7. Ponadto, początkowe badania wykazują brak przeciwciał neutralizujących w populacjach makaka i szympansa oraz mniej niż 15% reaktywności krzyżowej AAV7 u rezusów, gatunku, z którego wyizolowano ten serotyp. Specjalista z łatwością może wytworzyć inne wektory wirusowe rAAV zawierające dostarczone tu białka kapsydu AAV7 przy zastosowaniu szeregu technik znanych specjalistom. Podobnie można wytworzyć jeszcze inne wektory wirusowe rAAV zawierające sekwencję AAV7 i kapsydy AAV innego serotypu. Podobne korzyści związane są z użyciem wektorów opartych na innych nowych AAV.
Zatem specjalista z łatwością zrozumie, że sekwencje AAV7 mogą być z łatwością dostosowane do zastosowania w tych i innych systemach wektorów wirusowych do dostarczania genów in vitro, ex vivo lub in vivo. Podobnie, specjalista może łatwo wybrać inne fragmenty nowego genomu AAV do zastosowania w szeregu systemów wektorowych opartych na rAAV, ale nie na rAAV. Do takich systemów wektorowych mogą między innymi należeć np. lentiwrusy, retrowirusy, wirusy ospy, wirusy krowianki i systemy adenowirusowe. Wektory można wytworzyć z zastosowaniem sekwencji nukleotydowych i aminokwasowych nowych AAV. Wektory takie są przydatne dla różnych celów, w tym, do dostarczania cząsteczek terapeutycznych i do stosowania w reżimach szczepień. Szczególnie pożądane do dostarczania cząsteczek terapeutycznych są zrekombinowane AAV zawierające kapsydy nowych AAV. Te, lub inne konstrukty wektorowe zawierające nowe sekwencje AAV mogą być stosowane w reżimach szczepień, np. do współ-dostarczania cytokiny, lub do dostarczania samego immunogenu.
V. Zrekombinowane wektory i ich zastosowania
Przy zastosowaniu opisanych tu technik specjalista może wytworzyć rAAV mający kapsyd nowego serotypu lub nowy kapsyd zawierający jeden lub więcej nowych fragmentów serotypu AAV wykrytego sposobem według wynalazku. W jednym wykonaniu, może być zastosowany pełnej długości kapsyd z pojedynczego serotypu, np. AAV7 [SEKW. NR. ID.: 2]. W innym wykonaniu można wytworzyć pełnej długości kapsyd zawierający jeden lub więcej fragmentów nowego serotypu sfuzowanych z sekwencjami z innego wybranego serotypu AAV. Na przykład, rAAV może zawierać jeden lub więcej nowych sekwencji regionów hiperzmiennych z serotypu AAV. Alternatywnie, unikatowe serotypy AAV można zastosować w konstruktach zawierających inne sekwencje wirusowe lub niewirusowe.
Specjalista z łatwością zauważy, że pewne serotypy będą być szczególnie dobrze dostosowane do pewnych zastosowań. Na przykład, wektory oparte na kapsydach AAV7 są szczególnie przydatne do stosowania w mięśniach, podczas gdy wektory oparte na kapsydach rh.10 (44-2) są szczególnie przydatne do stosowania w płucach. Zastosowania takich wektorów nie są w ten sposób ograniczone i specjalista może wykorzystać te wektory do dostarczania do innych typów komórek, tkanek lub narządów. Ponadto, wektory oparte na innych kapsydach mogą być stosowane do dostarczania do tych, lub innych komórek, tkanek lub narządów.
A. Dostarczanie transgenu
Sposób dostarczania transgenu do gospodarza obejmuje transfekcję lub infekcję wybranej komórki gospodarza wektorem wytworzonym z sekwencji AAV. Sposoby dostarczania są dobrze znane specjalistom i nie stanowią ograniczenia niniejszego wynalazku.
Sposób wprowadzania za pośrednictwem AAV transgenu do gospodarza obejmuje transfekcję lub infekcję wybranej komórki gospodarza zrekombinowanym wektorem wirusowym zawierającym wybrany transgen pod kontrolą sekwencji kierujących ekspresją jego oraz białek kapsydu AAV.
Ewentualnie, próbka od gospodarza może być najpierw zbadana pod kątem obecności przeciwciał przeciwko wybranemu serotypowi AAV. Specjalistom jest dobrze znanych szereg różnych formatów oznaczeń do wykrywania przeciwciał neutralizujących. Patrz np. Fisher i wsp., Nature Med., 3 (3): 306-312 (marzec 1997) i W. C. Manning i wsp., Human Gene Therapy, 9: 477-485 (1 marzec, 1998). Wyniki tego oznaczenia mogą być wykorzystane do określania, który wektor AAV zawierający białka kapsydu konkretnego serotypu będzie korzystny do dostarczenia, np. na podstawie nieobecności przeciwciał neutralizujących swoistych wobec tego serotypu kapsydu.
W jednym aspekcie tego sposobu, dostarczenie wektora z wybranymi białkami kapsydu AAV może poprzedzać lub następować po dostarczeniu genu za pośrednictwem wektora z białkiem kapsydu AAV innego serotypu. Podobnie, dostarczenie wektora z innymi nowymi białkami kapsydu AAV może poprzedzać lub następować po dostarczeniu genu za pośrednictwem wektora z białkiem kapsydu AAV innego serotypu. Dostarczenie genów za pośrednictwem wektorów rAAV może zatem być
PL 217 623 B1 stosowane do wielokrotnego dostarczania genów do wybranej komórki gospodarza. Podawane później wektory rAAV niosą ten sam transgen, co pierwszy wektor rAAV, lecz zawierają białka kapsydu serotypów różnych od tego z pierwszego wektora. Na przykład, jeżeli pierwszy wektor ma białka kapsydu AAV7 [SEKW. NR ID.: 2], podawane później wektory mogą mieć białka kapsydu wybrane spośród innych serotypów, w tym, AAV1, AAV2, AAV3A, AAV3B, AAV4, AAV6, AAV10, AAV11, i AAV12, lub któregokolwiek z innych nowych kapsydów AAV zidentyfikowanych tu, w tym między innymi: A3.1, H2, H6, C1, C2, C5, A3-3, A3-7, A3-4, A3-5, 3.3b, 223.4, 223-5, 223-10, 223-2, 223-7, 223-6, 44-1,
44-5, 44-2, 42-15, 42-8, 42-13, 42-3A, 42-4, 42-5A, 42-1B, 42-5B, 43-1, 43-12, 43-5, 43-21, 43-25, 4320, 24.1, 42.2, 7.2, 27.3, 16.3, 42.10, 42-3B, 42-11, F1, F5, F3, 42-6B, i/lub 42-12.
Opisane powyżej zrekombinowane wektory mogą być dostarczone do komórek gospodarza zgodnie z opublikowanymi sposobami. rAAV zawieszony w zgodnym fizjologicznie nośniku, może być podany pacjentowi - człowiekowi lub ssakowi innemu niż człowiek. Odpowiednie nośniki mogą być łatwo wybrane przez specjalistę zgodnie ze wskazaniami ukierunkowania przeniesienia wirusa. Na przykład, jednym z odpowiednich nośników jest sól fizjologiczna, która może być formułowana z szeregiem roztworów buforujących (np. sól fizjologiczna buforowana fosforanem). Do innych przykładowych nośników należą jałowy roztwór soli fizjologicznej, laktoza, sacharoza, fosforan wapnia, żelatyna, dekstran, agar, pektyna, olej z orzeszków ziemnych, olej sezamowy i woda. Ewentualnie, kompozycje mogą zawierać, poza rAAV i nośnikiem(-ami) inne konwencjonalne składniki farmaceutyczne, takie jak środki konserwujące lub chemiczne środki stabilizujące. Do odpowiednich przykładowych środków konserwujących należą chlorobutanol, sorbat potasu, kwas sorbinowy, ditlenek siarki, galusan propylu, parabeny, etylowanilina, gliceryna, fenol i parachlorofenol. Do odpowiednich chemicznych środków stabilizujących należą żelatyna i albumina.
Wektory wirusowe są podawane w ilościach wystarczających do stransfekowania komórki i dostarczenia odpowiedniego poziomu przeniesienia i ekspresji genu dla uzyskania korzyści terapeutycznej bez szkodliwych skutków ubocznych lub z dopuszczalnymi medycznie skutkami fizjologicznymi, które mogą być określone przez specjalistę w dziedzinie medycyny. Do konwencjonalnych i dopuszczalnych farmaceutycznie dróg podawania należą, między innymi, bezpośrednie podanie do wybranego narządu (np. do żyły wrotnej do wątroby), doustne, inhalacja (w tym droga wewnątrznosowa i wewnątrztchawicza), dooczne, dożylne, domięśniowe, podskórne, śródskórne i inne pozajelitowe drogi podawania. Gdy jest to pożądane można łączyć różne drogi podawania.
Dawkowanie wektora wirusowego będzie zależeć głównie od czynników takich, jak leczone schorzenie, wiek, waga i zdrowie pacjenta i może zatem zmieniać się zależnie od pacjenta. Na przykład, skuteczne terapeutycznie dawkowanie wektora wirusowego u człowieka mieści się z reguły w przedziale od około 1 ml do około 100 ml roztworu zawierającego stężenia od około 1 x 109 do 1 x 1016 genomów wektora wirusowego. Korzystna dawka u człowieka może wynosić od około 1 x 1013 do około 1 x 1016 genomów AAV. Dawkowanie będzie dostosowane do zrównoważenia korzyści terapeutycznej z jakiekolwiek skutkami ubocznymi, a dawkowanie to może zmieniać się w zależności od celu terapeutycznego, w którym stosowany jest zrekombinowany wektor. Poziom ekspresji transgenu można monitorować w celu wyznaczenia częstości dawkowania uzyskanych wektorów wirusowych, korzystnie wektorów AAV zawierających minigen. Ewentualnie, reżimy dawkowania podobne do opisanych tu dla celów terapeutycznych mogą być stosowane do immunizacji przy zastosowaniu opisanych tu kompozycji.
Przykłady produktów terapeutycznych i produktów immunogennych do dostarczania wektorami zawierającymi AAV dostarczone są poniżej. Wektory te mogą być stosowane w szeregu różnych reżimów terapeutycznych lub szczepień tak, jak tu opisano. Dodatkowo, wektory te mogą być dostarczane w połączeniu z jednym lub więcej innymi wektorami lub składnikami czynnymi w żądanym reżimie terapeutycznym i/lub szczepień.
B. Transgeny terapeutyczne
Do użytecznych produktów terapeutycznych kodowanych przez transgen należą hormony i czynniki wzrostu i różnicowania, w tym, ale nie wyłącznie, insulina, glukagon, hormon wzrostu (GH), hormon przytarczycy (PTH), czynnik uwalniający hormon wzrostu (GRF), hormon folikulotropowy (FSH), hormon luteinizujący (LH), ludzka gonadotropina kosmówkowa (hCG), naczyniowośródbłonkowy czynnik wzrostu (VEGF), angiopoetyny, angiostatyna, czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów i makrofagów (GCSF), erytropoetyna (EPO), czynnik wzrostu tkanki łącznej (CTGF), zasadowy czynnik wzrostu fibroblastów (bFGF), kwaśny czynnik wzrostu fibroblastów (aFGF), naskórkowy czynnik wzrostu (EGF), transformujący czynnik wzrostu a (TGFa), płytkowy czynnik wzrostu
PL 217 623 B1 (PDGF), insulinopodobne czynniki wzrostu I i II (IGF-I i IGF-II), dowolny z nadrodziny transformujących czynników wzrostu β, w tym TGFβ, aktywiny, inhibiny lub dowolne z białek morfogenezy kości (BMP) BMP 1-15, dowolny z rodziny czynników wzrostu i różnicowania (NDF) hereguliny/neureguliny/ARIA/neu, czynnik wzrostu nerwu (NGF), czynnik neutroficzny pochodzenia mózgowego (BDNF), neurotrofiny NT-3 i NT-4/5, rzęskowy czynnik neurotroficzny (CNTF), czynnik neutroficzny pochodzący z linii komórek gleju (GDNF), neurturyna, agrina, dowolny z rodziny semaforyn/kolapsyn, netryna-1 i netryna-2, czynnik wzrostu hepatocytów (HGF), efryny, noggina, sonic hedgehog i hydroksylaza tyrozynowa.
Do innych użytecznych produktów transgenu należą białka regulujące układ odpornościowy, w tym, między innymi, cytokiny i limfokiny, takie jak trombopoetyna (TPO), interleukiny (IL) IL-1 do IL-25 (w tym, IL-2, IL-4, IL-12 i IL-18), białko chemoatrakcji monocytów, czynnik hamujący białaczkę, czynnik stymulujący wzrost kolonii granulocytów i makrofagów, ligand Fas, czynnik martwicy nowotworów a i β, interferony a, β i γ, czynnik komórek macierzystych, ligand flk-2/flt3. Użyteczne są również produkty genów wytwarzane przez ludzki układ odpornościowy. Należą do nich, ale nie wyłącznie, immunoglobuliny IgG, IgM, IgA, IgD i IgE, chimeryczne immunoglobuliny, humanizowane przeciwciała, przeciwciała jednołańcuchowe, receptory limfocytów T, chimeryczne receptory limfocytów T, jednołańcuchowe receptory limfocytów T, cząsteczki MHC klasy I i II, a także skonstruowane metodami inżynierii immunoglobuliny i cząsteczki MHC. Do użytecznych produktów genów należą także białka regulujące dopełniacz, takie jak białka regulujące dopełniacz, białko kofaktora błonowego (MCP), czynnik przyspieszający rozpad (DAF), CR1, CF2 i CD59.
Do jeszcze innych użytecznych produktów genów należą dowolne spośród receptorów hormonów, czynników wzrostu, cytokin, limfokin, białek regulatorowych i białek układu odpornościowego. Receptory regulacji cholesterolu obejmują receptor lipoproteiny o małej gęstości (LDL), receptor lipoproteiny o wysokiej gęstości (HDL), receptor lipoproteiny o bardzo małej gęstości (VLDL) i receptor usuwający resztki. Produktami genów także mogą być przedstawiciele nadrodziny receptorów hormonów sterydowych, w tym receptory glukokortykoidów i receptory estrogenów, receptory witaminy D i inne receptory jądrowe. Dodatkowo, do użytecznych produktów genów należą czynniki transkrypcyjne, takie jak jun, fos, max, mad, czynnik odpowiedzi na surowicę (SRF), AP-1, AP-2, myb, MyoD i miogenina, białka zawierające ETS-box, TFE3, E2F, ATF1, ATF2, ATF3, ATF4, ZF5, NFAT, CREB, HNF-4, C/EBP, SP1, białka wiążące motyw CCAAT, czynnik regulacji przez interferon (IRF-1), białko guza Wilmsa, białko wiążące ETS, STAT, białka wiążące motyw GATA, np. GATA-3 i rodzina forkhead białek z motywem uskrzydlonej helisy.
Inne użyteczne produkty genów obejmują karbamoilo syntetazę I, transkarbamylazę ornityny, syntetazę argininobursztynianową, liazę argininobursztynianową, arginazę, hydrolazę fumaroilooctooctanową, hydroksylazę fenyloalaninową, alfa-1 antytrypsynę, glukozo-6-fosfatazę, deaminazę porfobilinogenową, czynnik VIII, czynnik IX, syntazę beta-cystationu, dekarboksylazę rozgałęzionych ketokwasów, albuminę, dehydrogenazę izowalerylo-CoA, karboksylazę propionylo-CoA, mutazę metylomalonylo CoA, dehydrogenazę glutarylo CoA, insulinę, beta-glukozydazę, karboksylazę pirogronianową, fosforylazę wątrobową, kinazę fosforylazową, dekarboksylazę glicynową, białko H, białko T, transbłonowy regulator mukowiscydozy (CFTR) i sekwencję cDNA dystrofiny. Do jeszcze innych użytecznych produktów genów należą enzymy, takie jakie mogą być przydatne w terapii zastępczej, która jest użyteczna w szeregu schorzeń wynikających z defektu aktywności enzymu. Na przykład, enzymy zawierające mannozo-6-fosforan mogą być przydatne w leczeniu chorób magazynowania lizosomalnego (np. odpowiedni gen kodujący β-glukuronidazę (GUSB)).
Do innych użytecznych produktów genów należą polipeptydy niewystępujące naturalnie, takie jak polipeptydy chimeryczne lub hybrydowe mające sekwencję aminokwasową niewystępującą naturalnie, zawierającą insercje, delecje lub podstawienia aminokwasowe. Na przykład , jednołańcuchowe immunoglobuliny wytworzone metodami inżynierii mogły by być przydatne u pewnych pacjentów z obniżoną odpornością. Inne typy sekwencji genowych niewystępujących naturalnie obejmują cząsteczki antysensowne i katalityczne kwasy nukleinowe, takie jak rybozymy, które mogłyby być stosowane do zmniejszenia nadekspresji cząsteczki docelowej.
Zmniejszenie, i/lub regulacja ekspresji genu są szczególnie pożądane przy leczeniu schorzeń hiperproliferacyjnych cechujących się hiperproliferacją komórek tak, jak w chorobie nowotworowej i łuszczycy. Docelowe polipeptydy obejmują polipeptydy, które są wytwarzane wyłącznie lub na wyższych poziomach w komórkach hiperproliferujących w porównaniu z komórkami prawidłowymi. Do antygenów docelowych należą polipeptydy kodowane przez onkogeny, takie jak myb, myc, fyn i gen
PL 217 623 B1 translokacji bcr/abl, ras, src, P53, neu, trk i EGRF. W dodatku do produktów onkogenów jako antygeny docelowe są stosowane docelowe polipeptydy do reżimów leczenia przeciwnowotworowego i ochronnego obejmujące regiony zmienne przeciwciał wytwarzanych przez chłoniaki limfocytów B oraz regiony zmienne receptorów T chłoniaków limfocytów T, które, w niektórych wykonaniach, są też stosowane jako antygeny docelowe w chorobach autoimmunologicznych. Jako polipeptydy docelowe mogą być użyte inne polipeptydy związane z nowotworami takie, jak polipeptydy, których podwyższony poziom stwierdzany jest w komórkach nowotworowych, jak polipeptyd rozpoznawany przez przeciwciało monoklonalne 17-1A oraz polipeptydy wiążące kwas foliowy.
Do innych odpowiednich polipeptydów i białek terapeutycznych należą te, które mogą być przydatne w leczeniu osobników cierpiących na choroby i schorzenia autoimmunologiczne nadając szeroką odpowiedź odporności ochronnej przeciwko celom związanym z odpowiedzią autoimmunologiczną, w tym receptorom komórkowym i komórkom wytwarzającym przeciwciała skierowane przeciwko „swoim” celom. Do chorób autoimmunologicznych, w których pośredniczą limfocyty T należą reumatoidalne zapalenie stawów (RA), stwardnienie rozsiane (MS), zespół Sjorgena, sarkoidoza, cukrzyca insulinozależna (IDDM), autoimmunologiczne zapalenie tarczycy (wole Hashimoto), reaktywne zapalenie stawów, zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa, twardzina skóry, zapalenie wielomięśniowe, zapalenie skórno-mięśniowe, łuszczyca, zapalenie naczyń, ziarniniak Wegenera, choroba Crohna i wrzodziejące zapalenie okrężnicy. Każda z tych chorób cechuje się występowaniem receptorów limfocytów T (TCR), które wiążą się z antygenami endogennymi i zapoczątkowują kaskadę zapalną związaną z chorobą autoimmunologiczną.
C. Transgeny immunogenne
Alternatywnie lub dodatkowo, wektory mogą zawierać sekwencje AAV oraz transgen kodujący peptyd, polipeptyd lub białko wywołujące odpowiedź immunologiczną przeciwko wybranemu immunogenowi. Na przykład, immunogeny mogą być wybrane spośród szeregu rodzin wirusów. Do przykładów celowych rodzin wirusów, przeciwko którym celowa byłaby odpowiedź immunologiczna należą: rodzina pikornawirusów, która zawiera rodzaje rhinowirusów, odpowiedzialnych za około 50% przypadków przeziębienia, rodzaj enterowirusów, do którego należą poliowirusy, wirusy Coxsackie, echowirusy oraz enterowirusy ludzkie, takie jak wirus zapalenia wątroby typu A oraz rodzaj aptowirusów, które są odpowiedzialne za pryszczycę, głównie u zwierząt innych niż człowiek. W rodzinie pikornawirusów do antygenów docelowych należą VP1, VP2, VP3, VP4 i VPG. Inna rodzina wirusów obejmuje rodzinę kaliciwirusów, która obejmuje grupę wirusów Norwalk, które są istotnym czynnikiem sprawczym epidemicznego zapalenia żołądka i jelit. Jeszcze inną rodziną wirusów celową w zastosowaniu do kierowania antygenów do indukowania odpowiedzi immunologicznej u ludzi i innych zwierząt jest rodzina togawirusów, do której należy rodzaj alfawirus, który obejmuje wirusy Sindbis, wirus RossRiver, wirusy zapalenia mózgu koni i wirus Wenezuelski, Wschodni i Zachodni, oraz rubiwirus, w tym wirus różyczki. Do rodziny Flaviviridae należą wirusy denga, żółtej febry, japońskiego zapalenia mózgu, zapalenia mózgu St. Louis i wirusy kleszczowego zapalenia mózgu. Inne antygeny docelowe mogą być wytworzone z rodziny wirusa zapalenia wątroby typu C lub koronawirusów, która obejmuje szereg wirusów zwierząt innych niż człowiek, takich jak zakaźny wirus zapalenia oskrzeli (drobiu), wirus zapalenia żołądka i jelit świń, wirus hemaglutynacyjnego zapalenia mózgu i rdzenia świń, wirus zakaźnego zapalenia otrzewnej kotów, jelitowy koronawirus kotów, koronawirus psów oraz ludzkie koronawirusy dróg oddechowych, które mogą powodować przeziębienia i/lub zapalenie wątroby inne niż typu A, B lub C. W rodzinie koronawirusów do antygenów docelowych należą E1 (zwany również M lub białkiem macierzy), E2 (zwany również S lub białkiem iglicy), E3 (zwany również HE lub hemaglutyno-elterozą), glikoproteina (niewystępująca u wszystkich koronawirusów) lub N (nukleokapsyd). Jeszcze inne antygeny mogą być skierowane przeciwko rodzinie rabdowirusów, do której należy rodzaj vesiculovirus (np. wirus pęcherzykowatego zapalenia jamy ustnej) i z rodzaju Iyssavirus (np. wścieklizny). W rodzinie rabdowirusów odpowiednie antygeny mogą pochodzić z białka G lub białka N. Rodzina filowirusów, do której należą wirusy gorączki krwotocznej takie, jak Marburg lub Ebola może być odpowiednim źródłem antygenów. Do rodziny paramyksowirusów należy wirus grypy rzekomej typu 1, wirus grypy rzekomej typu 3, wirus grypy rzekomej bydła typu 3, rubulawirus (wirus świnki), wirus grypy rzekomej typu 2, wirus grypy rzekomej typu 4, wirus choroby Newcastle kurcząt, wirus księgosuszu bydła, morbiliwirus, w tym wirus odry i nosówki psów oraz pneumowirus, w tym syncytjalny wirus oddechowy. Wirus grypy zaliczany jest do grupy orthomyksowirusów i jest odpowiednim źródłem antygenu (np. białko HA, białko N1). Do rodziny bunyawirusów należą rodzaje bunyawirus (zapalenie mózgu Kalifornia, La Crosse), flebowirus (gorączka Rift Valley), hantawirus (puremala jest
PL 217 623 B1 wirusem gorączki krwotocznej), nairowirus (choroba owiec Nairobi) i szereg niesklasyfikowanych bungawirusów. Rodzina arenawirusów dostarcza źródła antygenów przeciwko wirusowi LCM i gorączki Lassa. Do rodziny reowirusów należą rodzaje reowirus, rotawirus (powodujący ostre zapalenie żołądka i jelit u dzieci), orbiwirusy i kultiwirusy (gorączka kleszczowa Colorado, Lebombo (ludzie), zapalenie mózgu koni, niebieski język).
Do rodziny retrowirusów należy podrodzina onkowirusów, która obejmuje, takie wirusy chorób ludzkich i weterynaryjnych, jak wirus białaczki kotów HTLVI i HTLVII, lentiwirusów (obejmująca ludzki wirus braku odporności (HIV), małpi wirus braku odporności (SIV), koci wirus braku odporności (FIV), wirus zakaźnej anemii koni i spumawirus). Dla HIV i SIV opisano wiele odpowiednich antygenów, które można łatwo wybrać. Przykłady odpowiednich antygenów HIV i SIV obejmują między innymi, białka gag, pol, Vif, Vpx, VPR, Env, Tat i Rev oraz różne ich fragmenty. Ponadto opisano wiele modyfikacji tych antygenów. Odpowiednie do tego celu antygeny są znane specjalistom. Na przykład, można wybrać sekwencję kodującą, między innymi białkami, gag, pol, Vif i Vpr, Env, Tat i Rev. Patrz np. modyfikowane białko gag opisane w Patencie USA nr 5,972,596. Patrz też białka SIV i HIV opisane przez
D. H. Barouch i wsp. J. Virol., 75 (5): 2462-2467 (marzec 2001) i R. R. Amara, i wsp., Science, 292: 69-74 (6 kwietnia 2001). Białka te lub ich podjednostki mogą być dostarczone same, lub w kombinacji za pośrednictwem osobnych wektorów lub na jednym wektorze.
Rodzina papovawirusów obejmuje podrodziny poliomawirusów (wirusy BKU i JCU) oraz podrodzinę papillomawirusów (związaną z nowotworami lub złośliwym rozwojem brodawczaków). Rodzina adenowirusów obejmuje wirusy (EX, AD7, ARD, O.B.), które wywołują choroby dróg oddechowych i/lub zapalenie jelita. Do rodziny parwowirusów należą koci parworwirus (zapalenie jelita kotów), wirus leukocytopenii kotów, psi parwowirus i parwowirus świń. Do rodziny herpeswirusów należy podrodzina alphaherpesvirinae obejmująca rodzaje simplexvirus (HSVI, HSVII), varicellovirus (wścieklizna rzekoma, półpasiec) oraz podrodzina betaherpesvirinae obejmująca rodzaj cytomegalowirus (HCMV, muromegalovirus) i podrodzina gammaherpesvirinae obejmująca rodzaje lymphocryptovirus, EBV (chłoniak Burkitta), wirus zapalenia nosa i tchawicy, wirus choroby Mareka i rhadinovirus. Do rodziny pokswirusów należy podrodzina chordopoxvirinae obejmująca rodzaje orthopoxvirus (ospa (ospa prawdziwa) i krowianka (ospa bydlęca)), parapoxvirus, avipoxvirus, capripoxvirus, leporipoxvirus, suipoxvirus i podrodzina entomopoxvirinae. Do rodziny hepadnawirusów należy wirus zapalenia wątroby typu B. Jednym z niesklasyfikowanych wirusów, który może być odpowiednim źródłem antygenów jest wirus zapalenia wątroby delta. Jeszcze inne źródła wirusowe mogą obejmować wirus zakaźnej choroby kaletki ptaków i wirus zespołu oddechowego i rozrodczego świń. Do rodziny alfawirusów należy wirus zapalenia tętnicy koni i różne wirusy zapalenia mózgu.
Immunogeny są użyteczne do immunizacji człowieka lub innego niż człowiek zwierzęcia przeciwko innym patogenom obejmującym bakterie, grzyby, mikroorganizmy pasożytnicze lub pasożyty wielokomórkowe zakażające człowieka i inne kręgowce, lub komórce nowotworowej lub komórce guza. Przykłady patogenów bakteryjnych obejmują patogenne gram-dodatnie ziarniaki, w tym pneumokoki, gronkowce i paciorkowce. Patogenne gram-ujemne ziarniaki obejmują meningokoki i gonokoki. Patogenne jelitowe laseczki gram-ujemne obejmują enterobacteriaceae; pseudomonas, acinetobacteria i eikenella; melioidoza; salmonella; shigella; pałeczki hemofilne; moraxella; H. ducreyi (wywołująca wrzód weneryczny); pałeczkę brucelozy; Francisella tularensis (wywołująca tularemię); yersinia (pasteurella); Streptobacillus moniliformis (zarazek gorączki ukąszenia szczura) i śrubowiec; gram dodatnie laseczki obejmują pałeczkę listeriozy; włoskowiec różycy; Corynebacterium diphtheria (błonica); cholerę; B. anthracis (wąglik); donovanozę (ziarniak pachwinowy); i bartonellozę. Do chorób wywoływanych przez patogenne bakterie beztlenowe należą tężec, botulizm, zakażenia innymi laseczkami; gruźlica; trąd i inne mykobakterie. Do chorób wywoływanych przez patogenne krętki należy kiła, krętkowica, frambezja, pinta i kiła endemiczna oraz leptospiroza. Do innych zakażeń wywoływanych przez wyższe bakterie patogenne i grzyby patogenne należą promienica; nocardioza; kryptokokoza, drożdżyca wywołana przez Blastomyces, histoplasmoza i kokcydioidomykoza; kandydoza, grzybica kropidlakowa, mukormykoza; sporotrychoza; parakokcydioidomykoza, petriellidioza, torulopsoza, mycetoma i chromoblastomykoza i grzybica skóry. Do zakażeń riketsjami należą dur plamisty, gorączka plamista Gór Skalistych, gorączka Q i zakażenie Rickettsia akari. Do przykładów zakażeń mikoplazmami i chlamydiami należą mykoplazma zapalenia płuc, ziarnica weneryczna pachwin, papuzica i okołoporodowe zakażenia chlamydiami. Do patogennych eukariontów należą patogenne pierwotniaki i robaki, zaś do wywoływanych przez nie zakażeń należą pełzakowica, malaria, leiszmanioza, trypanosomato26
PL 217 623 B1 za, toksoplazmoza, Pneumocystis carinii, Trichans, Toxoplasma gondii, babeszjoza, lamblioza, włośnica, filarioza, schistosomatoza, zakażenia nicieniami, przywrami i tasiemcami.
Wiele spośród tych organizmów i/lub wytwarzanych przez nie toksyn zostało zidentyfikowane przez Centra Zwalczania Chorób Zakaźnych [Centers for Disease Control (CDC), Department of Heath and Human Services, USA] jako czynniki mające potencjalne zastosowanie w atakach biologicznych. Na przykład, niektóre z tych czynników biologicznych obejmują Bacillus anthracis (wąglik), Clostridium botulinum i jego toksynę (botulizm), Yersinia pestis (dżuma), ospę prawdziwą, Francisella tularensis (tularemia) i wirusową gorączkę krwotoczną, z których wszystkie są obecnie zaliczane do czynników kategorii A; Coxiella burnetti (gorączka Q); Brucella species (bruceloza), Burkholderia mallei (nosacizna), Ricinus communis i jego toksyna (rycyna, toksyna rącznika), Clostridium perfringens i jego toksyna (toksyna epsilon), Staphylococcus species i ich toksyny (enterotoksyna B), z których wszystkie są obecnie zaliczane do kategorii B; oraz wirus Nipan i hantawirusy, które są obecnie zaliczane do kategorii C. Ponadto, inne organizmy, które są tak zaliczane lub zaliczane inaczej mogą być zidentyfikowane i/lub zastosowane w tym celu w przyszłości. Łatwo można zauważyć, że wektory wirusowe i inne konstrukty tu opisane są przydatne w dostarczaniu antygenów z tych organizmów, wirusów, ich toksyn lub innych produktów ubocznych, co zapobiegnie i/lub wyleczy zakażenie lub inne niepożądane reakcje na te czynniki biologiczne.
Podanie wektorów w celu dostarczenia immunogenów przeciwko zmiennemu regionowi limfocytów T wywołuje odpowiedź immunologiczną, w tym CTL dla wyeliminowania tych limfocytów T. W reumatoidalnym zapaleniu stawów (RA) scharakteryzowano kilka konkretnych regionów zmiennych receptorów limfocytów T (TCR) związanych z chorobą. Do tych TCR należą V-3, V-14, V-17 i Va-17. Dostarczenie sekwencji kwasu nukleinowego kodującej przynajmniej jeden z tych polipeptydów wywoła zatem odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciwko limfocytom T związanym z RA. W stwardnieniu rozsianym (MS) scharakteryzowano kilka konkretnych regionów zmiennych receptorów limfocytów T (TCR) związanych z chorobą. Do tych TCR należą V-7 i Va-10. Dostarczenie sekwencji kwasu nukleinowego kodującej przynajmniej jeden z tych polipeptydów wywoła zatem odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciwko limfocytom T związanym z MS. W twardzinie skóry scharakteryzowano kilka konkretnych regionów zmiennych receptorów limfocytów T (TCR) związanych z chorobą. Do tych TCR należą V-6, V-8, V-14 i Va-16, Va-3C, Va-1, Va-14, Va-15, Va-16, Va-28 i Va-12. Dostarczenie sekwencji kwasu nukleinowego kodującej przynajmniej jeden z tych polipeptydów wywoła zatem odpowiedź immunologiczną skierowaną przeciwko limfocytom T związanym z twardziną skóry.
Ewentualnie, wektory zawierające sekwencje AAV można dostarczyć z zastosowaniem reżimu dawki podstawowej i dawki przypominającej. Szereg takich reżimów opisano w dziedzinie i można je łatwo wybrać. Patrz np., WO 00/11140.
Takie reżimy dawki podstawowej i dawki przypominającej typowo obejmują podanie wektora opartego na DNA (np. plazmidu) dla przygotowania układu odpornościowego na drugie, przypominające podanie tradycyjnego antygenu, takiego jak białko lub zrekombinowany wirus niosący sekwencje kodujące taki antygen. Sposób taki zapoczątkowuje i wzmocnią odpowiedź immunologiczną na wybrany antygen zawierający dostarczenie wektora plazmidowego DNA niosącego ten antygen, z późniejszym przypomnieniem, np. wektorem zawierającym sekwencje AAV.
Reżim dawki podstawowej i dawki przypominającej obejmuje wyrażanie multiprotein z nośnika podstawowego i przypominającego. Patrz np., R.R. Amara, Science, 292: 69-74 (6 kwietnia 2001), opisujący reżim multiproteinowy dla wyrażania podjednostek białkowych użyteczny do wytwarzania odpowiedzi immunologicznej przeciwko HIV i SIV. Przykładowo dawka podstawowa DNA może dostarczać Gag, Pol, Vif, VPX i Vpr oraz Env, Tat i Rev z pojedynczego transkryptu. Alternatywnie, dostarczane są Gag i Pol SIV oraz Env HIV-I.
Reżimy dawki podstawowej i dawki przypominającej nie są jednak ograniczone do immunizacji przeciwko HIV lub dostarczania tych antygenów. Na przykład, dawka podstawowa może obejmować dostarczenie w pierwszym szympansim wektorze oraz przypomnienie w drugim wektorze szympansim, lub kompozycją zawierającą sam antygen w postaci białka. Reżim dawki podstawowej i dawki przypominającej może dostarczyć ochronną odpowiedź immunologiczną przeciwko wirusowi, bakterii lub innemu organizmowi, z którego pochodzi antygen. W innym żądanym wykonaniu, reżim dawki podstawowej i dawki przypominającej dostarcza efektu terapeutycznego, który może być zmierzony przy pomocy konwencjonalnych oznaczeń wykrywających obecność schorzenia, przeciwko któremu stosowana jest terapia.
PL 217 623 B1
Szczepionka podstawowa może być podana w różnych miejscach ciała w sposób zależny od dawki, który zależy od antygenu, przeciwko któremu skierowana jest pożądana odpowiedź immunologiczna i nie jest ograniczany ilością lub miejscem wstrzyknięcia, ani nośnikiem farmaceutycznym. Etap podstawowy obejmuje raczej reżimy terapeutyczne obejmujące jedną dawkę lub dawkowanie co godzina, dzień, tydzień lub miesiąc lub rok. Na przykład, ssaki mogą otrzymać jeden lub dwa zastrzyki podstawowe zawierające od około 10 μg do około 50 μg plazmidu w nośniku. Korzystna ilość podstawowa lub dawkowanie kompozycji podstawowej szczepionki DNA wynosi od około 1 μg do 10000 μg szczepionki DNA. Dawki mogą się wahać od około 1 μg do 10000 μg DNA na kg masy ciała pacjenta. Ilość lub miejsce wstrzyknięcia są korzystnie wybierane zależnie od rodzaju i stanu szczepionego ssaka.
Jednostka dawkowania szczepionki DNA odpowiednia do dostarczenia antygenu ssakowi jest tu opisana. Szczepionka DNA jest przygotowywana do podania przez zawieszenie lub rozpuszczenie w farmaceutycznie lub fizjologicznie dopuszczalnym nośniku, takim jak izotoniczna sól, roztwór soli izotonicznych lub inne formulacje, które będą oczywiste dla specjalisty w dziedzinie takiego podawania. Odpowiedni nośnik będzie oczywisty dla specjalisty i będzie w dużej części zależał od drogi podawania. Kompozycje mogą być podawane ssakowi zgodnie z opisanymi powyżej drogami, w formulacji o przedłużonym uwalnianiu wykorzystującej ulegający biodegradacji bio-zgodny polimer lub przez podanie domiejscowe z zastosowaniem micelli, żeli i liposomów.
Ewentualnie, etap piętnowania obejmuje także podanie razem z kompozycją podstawowej szczepionki DNA odpowiedniej ilości adiuwanta, takiego jak tu określone.
Kompozycja przypominająca jest podawana około 2 do około 27 tygodni po podaniu podstawowej szczepionki DNA pacjentowi - ssakowi. Podawanie kompozycji przypominającej osiąga się stosując skuteczną ilość kompozycji szczepionki przypominającej zawierającej lub zdolnej do dostarczenia tego samego antygenu, co podawany przez podstawową szczepionkę DNA. Kompozycja przypominająca może składać się ze zrekombinowanego wektora wirusowego pochodzącego z tego samego źródła, lub z innego źródła. Alternatywnie, „kompozycja przypominająca” może być kompozycją zawierającą ten sam antygen, który kodowany jest przez podstawową szczepionkę DNA, lecz w postaci białka lub peptydu, która to kompozycja indukuje odpowiedź immunologiczną u gospodarza. Kompozycja szczepionki przypominającej obejmuje kompozycję zawierającą sekwencję DNA kodującą antygen pod kontrolą sekwencji regulatorowej kierującej jego ekspresją w komórce ssaka, np. wektory takie, jak dobrze znane wektory bakteryjne lub wirusowe. Podstawowym wymogiem wobec szczepionki przypominającej jest to, aby antygen kompozycji szczepionki był tym samym antygenem, lub antygenem reagującym krzyżowo, co antygen kodowany przez szczepionkę DNA.
Odpowiednio, wektory są także dobrze przystosowane do stosowania w reżimach wykorzystujących wektory inne niż AAV, a także białka, peptydy i/lub inne użyteczne biologicznie związki terapeutyczne lub immunogenne. Reżimy te są szczególnie dobrze przystosowane do dostarczania genów dla celów terapeutycznych i dla immunizacji obejmującej wzbudzanie odporności ochronnej. Zastosowania takie będą oczywiste dla specjalisty.
Ponadto, wektor zku dostarcza skutecznego nośnika transferu genów, który może dostarczać wybrany transgen do wybranej komórki gospodarza in vivo lub ex vivo, nawet gdy organizm ma przeciwciała neutralizujące przeciwko jednemu lub więcej serotypom AAV. Wektor (np. rAAV) i komórki miesza się ex vivo; zainfekowane komórki hoduje się z wykorzystaniem konwencjonalnych metod; zaś transdukowane komórki ponownie wprowadza się pacjentowi. Ponadto, wektory mogą być także wykorzystane do wytwarzania żądanego produktu genu in vitro. Dla wytwarzania in vitro żądany produkt (np. białko) można uzyskać z żądanej hodowli po transfekcji komórek gospodarza rAAV zawierającym cząsteczkę kodującą żądany produkt i hodowli komórek w warunkach pozwalających na ekspresję. Wyrażany produkt można następnie oczyścić i wyizolować według potrzeby. Odpowiednie techniki transfekcji, hodowli komórek, oczyszczania i izolacji są znane specjalistom.
Następujące przykłady ilustrują kilka aspektów i wykonań wynalazku.
PRZYKŁADY
P r z y k ł a d 1: Amplifikacje PCR, klonowanie i charakterystyka nowych sekwencji AAV
Tkanki naczelnych innych niż człowiek przeszukano pod kątem obecności sekwencji AAV stosując metodę PCR opartą na oligonukleotydach komplementarnych do wysoce konserwatywnych sekwencji znanych AAV. Odcinek sekwencji obejmujący pozycje od 2886 do 3143 AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] wybrano jako amplikon PCR, w którym region hiperzmienny białka kapsydu (Cap), który jest niepowtarzalny w każdym znanym serotypie AAV, nazwany tu „regionem charakterystycznym”, jest
PL 217 623 B1 otoczony przez sekwencje konserwatywne. W dalszej analizie wykazano, że ten region charakterystyczny jest zlokalizowany pomiędzy konserwatywnymi aminokwasami łączącymi region hiperzmienny 3.
Wstępny przegląd krwi obwodowej szeregu gatunków naczelnych innych niż człowiek ujawnił wykrywalne AAV u podgrupy zwierząt gatunków, takich jak rezusy, makaki jawajskie, szympansy i pawiany. Nie wykryto jednak sekwencji AAV u niektórych innych badanych gatunków, w tym makaków japońskich, lapunderów i sajmiri. Dokładniejszą analizę rozmieszczenia wektorów przeprowadzono w tkankach rezusów z kolonii University of Pennsylvania i Tulane odzyskanych po sekcji. Ujawniła ona sekwencje AAV w szeregu różnych tkanek.
A. Amplifikacja regionu charakterystycznego AAV
Sekwencje DNA AAV1-6 i AAV wyizolowane od osobników Goose i Duck dopasowano do siebie przy użyciu „Clustal W” z domyślnymi ustawieniami. Dopasowanie AAV1-6, w tym informację dla nowego AAV7 dostarczono na Fig. 1. Porównano podobieństwa sekwencji między AAV.
W trakcie badania twórcy zidentyfikowali region 257 bp rozciągający się od pozycji 2886 do 3143 AAV1 [SEKW. NR ID.: 6] i odpowiadający mu region w genomach AAV2-6 [patrz Fig. 1]. Region ten jest położony w genie kapsydu AAV i ma wysoce konserwatywne sekwencje na końcu 5' i 3' oraz stosunkowo zmienną sekwencję pośrodku. Ponadto, region ten zawiera miejsce rozpoznawane przez enzym restrykcyjny DraIII (CACCACGTC, SEKW. NR ID.: 15). Twórcy stwierdzili, że region ten służy jako swoista charakterystyczna cecha każdego znanego typu DNA AAV. Innymi słowy, po reakcjach PCR, trawieniu endonukleazami specyficznymi dla każdego znanego serotypu i analizie elektroforetycznej w żelu, regiony te można wykorzystać do ostatecznej identyfikacji amplifikowanego DNA, jako pochodzącego z serotypu 1, 2, 3, 4, 5, 6 lub innego serotypu.
Startery zaprojektowano, walidowano i dokonano optymalizacji warunków PCR posługując się kontrolami DNA AAV1, 2 i 5. Startery bazowały na sekwencji AAV2: starter 5', 1S: bp 2867-2891 AAV2 (SEKW. NR ID.: 7) i starter 3', 18as: bp 3095-3121 AAV2 (SEKW. NR ID.: 7).
Posługując się opisaną powyżej strategią przebadano DNA komórkowe z różnych tkanek, w tym z krwi, mózgu, wątroby, płuca, jądra itd., od różnych rezusów. Wyniki ujawniły, że DNA z różnych tkanek tych małp powodowało silne amplifikacje PCR. Dalsze analizy restrykcyjne produktów PCR wykazały, że amplifikowano je z sekwencji AAV innych od wszystkich opublikowanych sekwencji AAV.
Produkty PCR (wielkości około 255 bp) z DNA szeregu różnych tkanek małp sklonowano i zsekwencjonowano. Bioinformatyczne badanie tych nowych sekwencji AAV wykazało, że są to nowe sekwencje genu kapsydu AAV i różnią się od siebie. Fig. 1 obejmuje dopasowanie nowych regionów charakterystycznych AAV z AAV10-12 [odpowiednio SEKW. NR ID.: 117, 118 i 119]. Analizę wielokrotnego dopasowania sekwencji przeprowadzono przy pomocy programu Clustal W (1.81). Procent identyczności sekwencji między regionami charakterystycznymi AAV 1-7 i AAV 10-12 podano poniżej.
T a b e l a 1. Sekwencje do analizy
Sekwencja # Serotyp AAV Wielkość (bp)
1 AAV1 258
2 AAV2 255
3 AAV3 255
4 AAV4 246
5 AAV5 258
6 AAV6 258
7 AAV7 258
10 AAV10 255
11 AAV11 258
12 AAV12 255
PL 217 623 B1
T a b e l a 3. Dopasowanie parami (procent identyczności)
AAV2 AAV3 AAV4 AAV5 AAV6 AAV7 AAV10 AAV11 AAV12
AAV1 90 90 81 76 97 91 93 94 93
AAV2 93 79 78 90 90 93 93 92
AAV3 80 76 90 92 92 92 92
AAV4 76 81 84 82 81 79
AAV5 75 78 79 79 76
AAV6 91 92 94 94
AAV7 94 92 92
AAV10 95 93
AAV11 94
Wyizolowano i zsekwencjonowano ponad 300 klonów zawierających sekwencje nowych serotypów AAV obejmujące wybrany region 257 bp. Bioinformatyczna analiza tych ponad 300 klonów sugeruje, że ten region 257 bp jest krytyczny w roli dobrego znacznika lub sekwencji charakterystycznej dla szybkiej izolacji i identyfikacji nowego serotypu AAV.
B. Zastosowanie regionu charakterystycznego do amplifikacji PCR
Region charakterystyczny 257 bp wykorzystano jako kotwicę PCR do wydłużenia amplifikacji w kierunku 5' w genomie dla pokrycia regionu połączenia genów rep i cap (pozycje 1398 bp - 3143 bp, SEKW. NR ID.: 6) i w kierunku 3 w genomie dla uzyskania całej sekwencji genu cap (pozycje 2866 bp - 4600 bp, SEKW. NR ID.: 6). Amplifikacje w PCR przeprowadzono z zastosowaniem standardowych warunków, w tym denaturacji w 95°C przez 0,5-1 min, przyłączania starterów w 60-65°C przez 0,5-1 min i wydłużania w 72°C przez 1 min na kb, przy całkowitej liczbie cykli amplifikacji w zakresie od 28 do 42.
Przy zastosowaniu dopasowanych sekwencji, jak opisano w punkcie A, zidentyfikowano dwa inne stosunkowo konserwatywne regiony w sekwencji położonej w końcu 3' genów rep i 5' regionu 257 bp i w sekwencji poniżej fragmentu 257 bp, lecz przed 3' ITR AAV. Zaprojektowano dwa nowe zestawy starterów i dokonano optymalizacji warunków PCR dla uzyskania całego kapsydu i części sekwencji rep nowych serotypów AAV. Konkretniej, dla amplifikacji 5'; starterem 5', AV1Ns, był GCTGCGTCAACTGGACCAATGAGAAC [nt 1398-1423 AAV1 SEKW. NR ID.: 6] a starterem 3' był zidentyfikowany powyżej 18as. Dla amplifikacji 3', starterem 5' był zidentyfikowany powyżej 1s, zaś starterem 3' był AV2Las, TCGTTTCAGTTGAACTTTGGTCTCTGCG [nt 4435-4462 AAV2 SEKW. NR ID.: 7].
W tych amplifikacjach PCR, regionu 257 bp użyto w charakterze kotwicy PCR i znacznika dla wytworzenia nakładających się fragmentów dla skonstruowania kompletnego genu kapsydu przez połączenie w miejscu DraIII w regionie charakterystycznym po amplifikacji fragmentów wydłużania 5' i 3 uzyskanych tak, jak tu opisano. Konkretniej, dla wytworzenia całego genu cap AAV7 trzy produkty amplifikacji (a) sekwencje regionu charakterystycznego; (b) sekwencje wydłużania 5'; i (c) sekwencje wydłużania 3' wklonowano w szkielet plazmidu pCR4-Topo [Invitrogen] zgodnie z instrukcjami wytwórcy. Następnie plazmidy strawiono DraIII i zrekombinowano dla odtworzenia pełnego genu cap.
W trakcie tych prac wyizolowano i przeanalizowano około 80% sekwencji kapsydów AAV7 i AAV8. Wykryto także nowy serotyp, AAV9, od osobnika małpy #2.
Przy wykorzystaniu opisanych powyżej warunków PCR, pozostałą część sekwencji genu rep dla AAV7 wyizolowano i sklonowano z zastosowaniem starterów amplifikujących pozycje 108 bp do 1461 bp genomu AAV (obliczone na podstawie numeracji AAV2, SEKW. NR ID.: 7). Klon ten zsekwencjonowano w celu skonstruowania pełnego genomu AAV7 bez ITR.
C. Bezpośrednia amplifikacja fragmentu Cap długości 3,1 kb
W celu bezpośredniej amplifikacji fragmentu Cap pełnej długości 3,1 kb z DNA z tkanki i krwi NHP zidentyfikowano dwa inne wysoce konserwatywne regiony w genomach AAV do wykorzystania w amplifikacji dużych fragmentów w PCR. Wybrano starter w konserwatywnym regionie zlokalizowanym w środku genu rep (AV1ns: 5' GCTGCGTCAACTGGACCAATGAGAAC 3', nt 1398-1423 z SEKW. NR ID.: 6) w połączeniu ze starterem 3' zlokalizowanym w innym konserwatywnym regionie poniżej genu Cap (AV2cas: 5' CGCAGAGACCAAAGTTCAACTGAAACGA 3', SEKW. NR ID.: 7) dla
PL 217 623 B1 amplifikacji fragmentów cap pełnej długości. Produkty PCR klonowano systemem Topo zgodnie ze wskazaniami producenta (Invitrogen), zaś analizę sekwencji przeprowadzono przez Qiagengenomics (Qiagengenomics, Seattle, WA) z dokładnością >99,9%. W sumie wyizolowano i scharakteryzowano 50 klonów kapsydu. Wśród nich 37 klonów pochodziło z tkanek rezusa (rh.1-rh.37), 6 klonów z tkanek makaka jawajskiego (cy.1-cy.6), 2 klony z tkanek pawianów (bb.1 i bb.2) i 5 klonów z tkanek szympansów (ch.1-ch.5).
Aby wykluczyć możliwość, że zróżnicowanie sekwencji nowej rodziny AAV jest artefaktem PCR, takim jak składanie fragmentów genów w PCR przez wydłużania nakładających się fragmentów różnych niepełnych matryc DNA z sekwencjami homologicznymi, lub wynikiem procesów rekombinacji w bakteriach, przeprowadzono serię doświadczeń w identycznych warunkach dla amplifikacji VP1 z zastosowaniem całkowitych DNA komórkowych. Najpierw zmieszano nienaruszone plazmidy AAV7 i AAV8 w równomolarnym stosunku, po czym rozcieńczono je metodą seryjnych rozcieńczeń. Seryjnie rozcieńczone mieszaniny wykorzystano jako matryce dla amplifikacji PCR fragmentów VP1 o długości 3,1 kb przy zastosowaniu uniwersalnych starterów i identycznych warunków PCR, jak użyte do amplifikacji DNA, aby sprawdzić, czy nie powstają jakiekolwiek hybrydowe produkty PCR. Mieszaninę transformowano do bakterii i izolowano transformanty poszukując klonów hybrydowych, które mogłyby pochodzić z procesu rekombinacji w komórkach bakterii. W innym doświadczeniu przecięliśmy plazmidy AAV7 i AAV8 enzymami Msp I, Ava I i HaeI, z których wszystkie wielokrotnie tną oba genomy w różnych pozycjach, zmieszaliśmy mieszaniny po trawieniu w różnych kombinacjach i zastosowaliśmy do amplifikacji fragmentów VP1 w tych samych warunkach, aby zbadać, czy można wytworzyć jakiekolwiek produkty PCR przez wydłużanie nakładających się sekwencji niepełnych sekwencji AAV. W innym doświadczeniu mieszaninę oczyszczonych z żelu fragmentów 5' 1,5 kb VP1 AAV7 i 3' 1,7 kb VP1 AAV8, które nakładają się w regionie charakterystycznym rozcieńczono seryjnie i zastosowano do amplifikacji PCR w obecności lub nieobecności 200 ng DNA komórkowego wyizolowanego z małpiej linii komórek, w której w analizie TaqMan nie wykryto sekwencji AAV. W żadnym z tych doświadczeń nie wykazano skutecznego wytwarzania za pośrednictwem PCR nakładających się sekwencji w warunkach amplifikacji Cap z genomowego DNA (dane nie przedstawione). W celu dalszego potwierdzenia zaprojektowano 3 pary starterów, które były zlokalizowane w różnych HVR i specyficzne dla sekwencji wariantów klonu 42s z rezusa F953, w różnych kombinacjach dla amplifikacji krótszych fragmentów z DNA węzła chłonnego krezki (MLN) z F593, z którego wyizolowano klon 42s. Wszystkie warianty sekwencji zidentyfikowane w klonach Cap pełnej długości odnaleziono w tych krótszych fragmentach (dane nie przedstawione).
P r z y k ł a d 2: Wirusy stowarzyszone z adenowirusami podlegają znaczącej ewolucji u naczelnych podczas naturalnych zakażeń
Analiza sekwencji wybranych izolatów AAV ujawniła zróżnicowanie w całym genomie, najbardziej skoncentrowane w regionach hiperzmiennych białek kapsydu. Dane epidemiologiczne wskazują, że wszystkie znane serotypy są endemiczne u naczelnych, aczkolwiek izolacja izolatów klinicznych była ograniczona do AAV2 i AAV3 z wymazów z odbytu i gardła ludzkich niemowląt oraz AAV5 z kłykciny kończystej człowieka. Zakażeniom AAV nie towarzyszyły żadne znane następstwa kliniczne.
W próbie lepszego zrozumienia biologii AAV, jako modele wykorzystano inne niż człowiek naczelne dla scharakteryzowania następstw naturalnych zakażeń. Tkanki od innych niż człowiek naczelnych badano pod kątem obecności sekwencji AAV przy wykorzystaniu sposobu PCR według wynalazku w oparciu o oligonukleotydy komplementarne do wysoce konserwatywnych regionów i znanych AAV (patrz Przykład 1). Jako amplikon PCR wybrano ciąg sekwencji AAV rozciągających się od pozycji 2886 do pozycji 3143 AAV1 [SEKW. NR ID.: 6], w którym zachowywane sekwencje są flankowane przez region hiperzmienny unikatowy dla każdego znanego serotypu AAV, nazwany tu „regionem charakterystycznym”.
Wstępne badanie krwi obwodowej szeregu gatunków naczelnych, innych niż człowiek, w tym rezusów, makaków jawajskich, szympansów i pawianów, ujawniło wykrywalne AAV u podgrupy zwierząt ze wszystkich gatunków. Dokładniejszą analizę rozmieszczenia wektora przeprowadzono w tkankach rezusów kolonii University of Pennsylvania i Tulane pozyskanych po sekcji. Badanie to ujawniło sekwencje AAV w szeregu różnych tkanek.
Amplifikowane sekwencje charakterystyczne subklonowano do plazmidów i pojedyncze transformanty poddano analizie sekwencji. Ujawniła ona znaczącą zmienność w sekwencji nukleotydowej klonów pochodzących od różnych zwierząt. Zmienność w sekwencji charakterystycznej odnotowano także w klonach uzyskanych od pojedynczych zwierząt. Tkanki zebrane od dwóch zwierząt, u których
PL 217 623 B1 zidentyfikowano unikatowe sekwencje charakterystyczne (tzn. okrężnica z 98E044 i serce z 98E056) poddano dalszej charakteryzacji przez wydłużenie sekwencji amplifikowanej w PCR przy pomocy oligonukleotydów komplementarnych do wysoce konserwatywnych sekwencji. W ten sposób zrekonstruowano pełne struktury prowirusowe dla genomów wirusa z obu tkanek, jak tu opisano. Prowirusy te różnią się od innych znanych AAV największym zróżnicowaniem sekwencji zaobserwowanym w regionach genu Cap.
Przeprowadzono dodatkowe doświadczenia dla potwierdzenia, że sekwencje AAV rezydujące w tkance naczelnego, innego niż człowiek, stanowiły prowirusowe genomy zakaźnych wirusów, które można odzyskać tworząc wiriony.
DNA genomowy z tkanki wątroby zwierzęcia 98E056, w którym wykryto sekwencję charakterystyczną AAV8 strawiono endonukleazą, która nie ma miejsca w sekwencji AAV i transfekowano do komórek 293 plazmidem zawierającym pozbawiony E1 genom ludzkiego adenowirusa serotypu 5, jako źródłem funkcji pomocniczych. Uzyskany lizat pasażowano jednokrotnie w komórkach 293, a następnie odzyskano i przeanalizowano pod kątem obecności białek Cap AAV z zastosowaniem szeroko reagującego poliklonalnego przeciwciała przeciwko białkom Cap iż pod kątem obecności i ilości sekwencji DNA z amplifikowanego w PCR prowirusa, z którego pochodził AAV8. Transfekcja trawionego endonukleazą DNA z serca i adenowirusowego plazmidu pomocniczego dała duże ilości wirusa AAV8, co wykazano wykrywając białka Cap analizą Western i wykazując obecność 104 genomów wektora AAV8 na komórkę 293. Z preparatu na dużą skalę przygotowano lizaty i oczyszczono AAV przez sedymentację w chlorku cezu. Oczyszczony preparat wykazywał obecność dwudziestościennych struktur o wielkości 26 nm wyglądających identycznie, jak struktury AAV serotypu 2. Transfekcja samym pomocniczym adenowirusem nie dała białek ani genomów AAV, co wyklucza zanieczyszczenie jako źródło odzyskanego AAV.
Dla dalszego scharakteryzowania między- i wewnątrz-osobniczej zmienności sekwencji charakterystycznej AAV wybrane tkanki poddano wydłużonej PCR dla amplifikacji pełnych otwartych ramek odczytu Cap.
Uzyskane fragmenty wklonowano do plazmidów bakteryjnych i wyizolowano oraz w pełni zsekwencjonowano pojedyncze transformanty. Analiza ta obejmowała węzły chłonne krezki od trzech rezusów (Tulane/V223 - 6 klonów; Tulane/T612 - 7 klonów; Tulane/F953 - 14 klonów), wątrobę od dwóch rezusów (Tulane/V251 - 3 klony; Penn/00E033 - 3 klony), śledzionę od jednego rezusa (Penn/97E043 - 3 klony), serce od jednego rezusa (IHGT/98E046 - 1 klon), krew obwodową od jednego szympansa (New Iberia/X133 - 5 klonów), sześć makaków jawajskich (Charles River/A1378, A3099, A3442, A2821, A3242 - w sumie 6 klonów) i jednego pawiana (SFRB/8644 - 2 klony). Spośród 50 klonów zsekwencjonowanych od 15 różnych zwierząt, 30 uznano za niepowtarzające się na podstawie ustalenia co najmniej 7 różnic aminokwasowych między nimi. Niepowtarzające się klony VP1 ponumerowano w kolejności izolacji, z prefiksem wskazującym gatunek naczelnego innego niż człowiek, od którego pochodziły. Związki strukturalne między tymi 30 niepowtarzającymi się klonami oraz opisanymi wcześniej 8 serotypami AAV określono z zastosowaniem programu SplitsTree [Huson,
D. H. SplitsTree: analyzing and visualizing evolutionary data. Bioinformatics 14, 68-73 (1998)] z wdrożeniem metody rozkładu dzielonego (split decomposition). Analiza przedstawia homoplazję między zestawem sekwencji w postaci przypominającej drzewo sieci, raczej niż w postaci rozdwajającego się drzewa. Korzyścią jest tu możliwość wykrycia zgrupowań, które są wynikiem konwergencji i przedstawienia związków filogenetycznych nawet, gdy są zaburzone przez zdarzenia równoległe. Dla wyjaśnienia ewolucji AAV konieczna będzie rozległa analiza filogenetyczna, podczas gdy tu zamiarem było jedynie pogrupowanie klonów według podobieństwa sekwencji.
W celu potwierdzenia, że nowe sekwencje VP1 pochodziły z zakaźnych genomów wirusowych, komórkowe DNA z tkanek o wysokiej zawartości DNA wirusowego strawiono endonukleazą, która nie powinna przecinać wewnątrz AAV i transfekowano do, komórek 293, po czym zakażano je adenowirusem. Spowodowało to odzyskanie i amplifikację genomów AAV z DNA z tkanek dwóch różnych zwierząt (dane nie przedstawione).
Sekwencje VP1 nowych AAV poddano dalszej charakteryzacji pod kątem charakteru i lokalizacji zmienności sekwencji aminokwasowej. Wykazano, że wszystkie 30 klonów VP1 różni się od siebie o ponad 1% sekwencji aminokwasowej po dopasowaniu i podsumowaniu zmienności w każdej pozycji. Algorytm opracowany dla wyznaczenia obszarów dywergencji sekwencji wykazał obecność 12 regionów hiperzmiennych (HVR), z których 5 nakłada się lub stanowi część 4 opisanych uprzednio regionów zmiennych [Kotin, cytowane powyżej; Rutledge, cytowane powyżej]. Wierzchołki bliższe osi
PL 217 623 B1 trzykrotnej zawierają większość zmienności (HVR5-10). Co ciekawe, pętle zlokalizowane na osi dwui pięciokrotnej także wykazują znaczną zmienność. HVR1 i 2 występują w N-końcowej części białka kapsydu, która nie jest rozstrzygnięta w strukturze rentgenowskiej, co sugeruje, że N-koniec białka VP1 jest eksponowany na powierzchni wirionu.
W celu ilościowego oznaczenia sekwencji AAV z tkanek 21 rezusów zastosowano PCR w czasie rzeczywistym stosując startery i sondy komplementarne do wysoce konserwatywnych sekwencji Rep (jeden zestaw) i Cap (dwa zestawy) znanych AAV. Każdy punkt danych przedstawia analizę DNA z tkanki pojedynczego zwierzęcia. Potwierdziło to szeroki zakres występowania sekwencji AAV, chociaż rozmieszczenie ilościowe różniło się pomiędzy pojedynczymi osobnikami. Pochodzenie zwierząt i wcześniejsza historia leczenia nie wydawały się wpływać na rozmieszczenie sekwencji AAV u rezusów. Trzy różne zestawy starterów i sond zastosowane do ilościowego oznaczenia AAV dały zgodne wyniki. Najwyższe poziomy AAV konsekwentnie znajdowano w krezkowych węzłach chłonnych, ze średnią 0,01 kopii na genom diploidalny dla 13 zwierząt z dodatnim wynikiem. Wątroba i śledziona również zawierały znaczną ilość wirusowego DNA. Stwierdzono przykłady bardzo znacznej ilości AAV, jak w sercu rezusa 98E056, śledzionie rezusa 97E043 i wątrobie rezusa RQ4407, w których wykazano odpowiednio 1,5; 3 i 20 kopii sekwencji AAV na genom diploidalny. Stosunkowo niski poziom DNA wirusa odnotowano w mononukleocytach krwi obwodowej, co sugeruje, że wyniki dla tkanek nie są spowodowane obecnością resztkowych składników krwi (dane nie przedstawione). Należy zauważyć, że sposób ten nie koniecznie wychwyci wszystkie AAV rezydujące u naczelnych innych niż człowiek, ponieważ do wykrycia konieczna jest wysoka homologia zarówno do oligonukleotydów, jak i do sondy PCR czasu rzeczywistego. Ponadto tkanki zwierząt o wysokiej zawartości DNA AAV przeanalizowano pod kątem stanu molekularnego DNA za pomocą technik hybrydyzacji DNA i jego rozmieszczenia w komórce przez hybrydyzację in situ.
Rodzaj zmienności sekwencji ujawniony w prowirusowych fragmentach AAV wyizolowanych od różnych zwierząt i z tkanek tego samego zwierzęcia przypomina ewolucję zachodzącą u wielu wirusów RNA podczas pandemii, a nawet podczas zakażenia jednego osobnika. W niektórych sytuacjach ideę wirusa typu dzikiego zastąpiono występowaniem rojów quasi-gatunków ewoluujących w wyniku szybkiej replikacji i mutacji w obecności presji doboru. Jednym z przykładów jest zakażenie HIV, ewoluujące w odpowiedzi na presję immunologiczną i farmakologiczną. Do wysokiej częstości mutacji u wirusów RNA przyczynia się kilka mechanizmów, w tym niska wierność i brak zdolności korekcyjnych odwrotnej transkryptazy oraz rekombinacja niehomologiczna i homologiczna.
Dowody na powstawanie quasi-gatunków AAV zilustrowano w tych badaniach przez systematyczne sekwencjonowanie wielu sklonowanych fragmentów prowirusowych. Rzeczywiście, nie można było odnaleźć dwóch identycznych sekwencji wśród wszystkich wydłużonych klonów wyizolowanych od tego samego zwierzęcia bądź różnych. Istotnym mechanizmem dla tej ewolucji sekwencji wydaje się być wysoka częstość rekombinacji homologicznej między bardziej ograniczoną liczbą wirusów rodzicielskich. Ostatecznym efektem jest częsta wymiana regionów hiperzmiennych białka Cap prowadząca do powstania szeregu chimer, które mogą mieć różny tropizm i swoistość serologiczną (tzn. zdolność do uniknięcia odpowiedzi immunologicznej, zwłaszcza w odniesieniu do przeciwciał neutralizujących). Mechanizmy, przez które może zachodzić rekombinacja homologiczna nie są jasne. Jedną z możliwości jest to, że nici + i - różnych jednoniciowych genomów AAV łączą się podczas replikacji tak, jak opisano to przy wysokiej krotności zakażenia rekombinantami AAV. Nie jest jasne, czy inne mechanizmy przyczyniają się do ewolucji sekwencji w zakażeniach AAV. Ogólna częstość mutacji zachodzących podczas replikacji AAV wydaje się być stosunkowo niska, a dane nie wskazują na to, aby błędy replikacji pojawiały się często. Opisano jednak znaczne rearanżacje genomu AAV podczas zakażenia litycznego, prowadzące do tworzenia się defektywnych cząstek przeszkadzających. Niezależnie od mechanizmów prowadzących do dywergencji sekwencji, z nielicznymi wyjątkami, struktury vp1 quasi-gatunków pozostają nietknięte, bez przesunięć ramki odczytu ani mutacji typu nonsens, co sugeruje wpływ doboru współzawodniczego wirusów o najkorzystniejszym profilu dopasowania na dynamikę populacji.
Badania te mają implikacje dla kilku obszarów biologii i medycyny. Koncepcja szybkiej ewolucji wirusów, uprzednio uważana za własność wyłącznie wirusów RNA, powinna być uwzględniona dla wirusów DNA, które klasycznie charakteryzowano oznaczeniami serologicznymi. Istotnym będzie opracowanie dla parworwirusów nowego sposobu opisywania izolatów wirusowych, który obejmie złożoność ich struktury i biologii, podobnie jak w przypadku HIV, który znajduje się w kategorii ogólnych rodzin o podobnej strukturze i funkcji zwanych kladami. Alternatywną strategią jest kontynuacja
PL 217 623 B1 podziału izolatów ze względu na swoistość serologiczną i opracowanie kryteriów opisu wariantów w obrębie grup serologicznych.
P r z y k ł a d 3: Wektorologia zrekombinowanych genomów AAV wyposażonych w ITR AAV2 przy zastosowaniu chimerycznych plazmidów zawierających rep AAV2 i nowe geny cap AAV dla badań serologicznych i transferu genów w różnych modelach zwierzęcych
Chimeryczne konstrukty pakujące tworzy się przez fuzję rep AAV2 z sekwencjami cap nowych serotypów AAV. Te chimeryczne konstrukty pakujące są stosowane początkowo do pseudotypowania zrekombinowanych genomów AAV niosących ITR AAV2 przez potrójną transfekcję w komórkach 293 z zastosowaniem plazmidu pomocniczego Ad5. Te pseudotypowane wektory są następnie stosowane do oceny działania w opartych na transdukcji badaniach serologicznych i oceny skuteczności transferu genów nowych serotypów AAV w różnych modelach zwierzęcych, w tym NHP i gryzoniach, zanim te nowe serotypy całych i zakaźnych wirusów zostaną wyizolowane
A. pAAV2GFP
Plazmid AAV2 zawierający ITR AAV2 i zielone białko fluoryzujące wyrażane pod kontrolą promotora konstytutywnego. Plazmid ten zawiera następujące elementy: ITR AAV2, promotor CMV i sekwencje kodujące GFP.
B. Klonowanie plazmidu trans
Dla skonstruowania chimerycznego plazmidu trans do wytwarzania zrekombinowanych pseud otypowanych wektorów AAV7, plazmid p5E18 (Xiao i wsp., 1999, J. Virol 73: 3994-4003) częściowo strawiono XhoI w celu zlinearyzowania plazmidu jedynie w miejscu XhoI w pozycji 2169 bp. Końce po trawieniu XhoI wypełniono następnie i ponownie zligowano. Tak zmodyfikowany plazmid p5E18 strawiono w całkowitym trawieniu Xba I i Xho I dla usunięcia sekwencji genu cap i zastąpiono ją wyizolowanym z plazmidu pCRAAV7 6-5+15-4 fragmentem Spe I/Xho I o długości 2267 bp zawierającym gen cap AAV7.
Uzyskany plazmid zawiera sekwencje rep AAV2 kodujące Rep78/68 pod kontrolą promotora P5 AAV2 i sekwencje rep AAV2 kodujące Rep52/40 pod kontrolą promotora P19 AAV2. Sekwencje kapsydu AAV7 są pod kontrolą promotora P4 0 AAV1, zlokalizowanego w sekwencjach Rep. Plazmid ten zawiera ponadto łącznik 5' z ORF rep.
C. Wytwarzanie pseudotypowanego rAAV
Cząstki rAAV (wektor AAV2 w kapsydzie AAV7) są wytwarzane przy zastosowaniu metody wolnej od adenowirusa. W skrócie, plazmid cis (plazmid pAAv2.1 IacZ zawierający IRT AAV) i plazmid trans pCRAAV7 6-5+15-4 (zawierający rep AAV2 i cap AAV7) i plazmid pomocniczy odpowiednio, były jednocześnie kotransfekowane do komórek 293 w stosunkach odpowiednio 1:1:2 przez strącanie fosforanem wapnia.
Do konstrukcji plazmidów pomocniczych pAd zakupiono plazmid pBG10 z Microbix (Kanada). Fragment RsrII zawierający L2 i L3 usunięto z pBHG10 uzyskując pierwszy plazmid pomocniczy pAdAF13. Plazmid AdAF1 skonstruowano klonując fragment Asp700/Sall z delecją Pmel/Sgfl wyizolowany z pBHG10 do Bluescript. W pAdAF1 usunięte są MLP, L2, L2 i L3. Dalsze delecje fragmentu NruI o wielkości 2,3 kb a następnie fragmentu RsRII/NruI o wielkości 0,5 kb wytworzyły odpowiednio plazmidy pomocnicze pAdAF5 i pAdAF6. Plazmid pomocniczy nazwany pAF6 dostarcza niezbędnych funkcji pomocniczych E2A i E4 ORF6 nie dostarczanych przez wyrażającą E1 komórkę pomocniczą, pozbawiony jest jednak adenowirusowych białek kapsydu i funkcjonalnych regionów E1.
Typowo 50 μg DNA (cis:trans:pomocniczy) transfekowano do szalki hodowlanej o średnicy 150 mm. Komórki 293 zbierano 72 godziny po transfekcji, sonikowano i traktowano 0,5% deoksycholanu sodu (37°C przez 10 min.) Lizaty komórkowe poddawano następnie dwóm rundom oczyszczania na gradiencie CsCl. Frakcje pików zawierające wektory rAAV zbierano, łączono i dializowano wobec PBS.
P r z y k ł a d 4: Stworzenie zakaźnych klonów niosących całe nowe serotypy AAV dla zbadania podstawowej wirusologii w liniach komórek pochodzących od człowieka i NHP i oceny patogenezy nowych serotypów AAV u NHP i w innych modelach zwierzęcych
Dla osiągnięcia tego celu zastosowano system kroczenia po genomie (genome walker) w celu uzyskania sekwencji końcowych 5' i 3' (ITR) oraz pełnej konstrukcji klonów zawierających pełne genomy nowych serotypów AAV.
W skrócie, przy zastosowaniu dostępnego w handlu zestawu Universal Genome Walker [Clontech] DNA genomowe z tkanek małp lub linii komórkowych, które zidentyfikowano pozytywnie na obecność sekwencji AAV7 trawiono endonukleazami Dra I, EcoR V, Pvu II i Stu I i zligowano z adaptorem Genome Walker Adaptor, tworząc 4 osobne biblioteki systemu Genome Walker (Genome Walker Libraries, GWL). Stosując DNA z GWL jako matryce AAV7 i przylegające sekwencje genomowe
PL 217 623 B1 amplifikuje się przez PCR przy pomocy startera adaptorowego 1 (AP1, dostarczony z zestawem) i swoistego dla AAV7 startera 1, po czym przez kolejny, zagnieżdżony PCR z zastosowaniem startera adaptorowego 2 (AP2) i innego swoistego dla AAV7 startera 2, z których oba są wewnętrzne w stosunku do pierwszego zestawu starterów. Główne produkty PCR z zagnieżdżonego PCR są klonowane i charakteryzowane przez analizę sekwencji.
W tym doświadczeniu startery pokrywające 257 bp lub inny fragment charakterystyczny rodzajowego genomu AAV są stosowane do amplifikacji w PCR komórkowych DNA wyekstrahowanych z linii komórkowych pochodzących od człowieka i NHP dla identyfikacji i scharakteryzowania latentnych sekwencji AAV. Zidentyfikowane latentne genomy AAV odzyskuje się z dających pozytywny sygnał linii komórkowych przy zastosowaniu pomocniczych adenowirusów różnych gatunków i szczepów.
W celu wyizolowania zakaźnych klonów AAV z pochodzących z linii komórkowych NHP, żądaną linię uzyskuje się z ATCC i przeszukuje przez PCR dla zidentyfikowania amplikonu 257 bp, tzn. regionu charakterystycznego. Produkt PCR o długości 257 bp klonuje się i poddaje identyfikacji serotypu przez analizę sekwencji. Dla tych linii komórkowych zawierających AAV7 komórki są zakażane SV-15, małpim adenowirusem nabytym z ATCC, ludzkim Ad5, lub transfekowane plazmidem niosącym ludzkie geny Ad odpowiadające za funkcje pomocnicze dla AAV. 48 godzin po infekcji lub transfekcji komórki są zbierane i przygotowywany jest DNA Hirt do klonowania genomu AAV7 według Xiao i wsp., 1999, J. Virol, 73: 3994-4003.
P r z y k ł a d 5 - Wytwarzanie wektorów AAV
Strategię pseudotypowania podobną do użytej w Przykładzie 3 dla AAV1/7 zastosowano do wytworzenia wektorów AAV2 pakowanych z białkami kapsydu AAV1, AAV5 i AAV8. W skrócie, zrekombinowane genomy AAV wyposażone w ITR AAV2 pakowano przez potrójną transfekcję komórek 293 plazmidem cis, adenowirusowym plazmidem pomocniczym i chimerycznym konstruktem pakującym, w którym gen rep AAV2 jest połączony z genami cap nowych serotypów AAV. Dla stworzenia chimerycznych konstruktów pakujących zniszczono miejsce Xho I w pozycji 3169 bp plazmidu p5E18 a zmodyfikowany plazmid strawiono Xba I i Xho I w całkowitym trawieniu z usunięciem genu cap AAV2 i zastąpieniem go fragmentem Spe I/Xho I długości 2267 zawierającym gen cap AAV8 [Xiao i wsp., 1999, J. Virol, 73: 3994-4003]. Podobną strategię klonowania zastosowano dla utworzenia chimerycznych plazmidów pakujących AAV2/1 i AAV2/5. Wszystkie zrekombinowane wektory oczyszczono standardową metodą sedymentacji w CsCI2, z wyjątkiem AAV2/2, który oczyszczono przez jednoetapową chromatografię na heparynie.
Miana kopii genomu (GC) wektorów AAV określono analizą TaqMan przy zastosowaniu sond i starterów rozpoznających region poli A SV40 tak, jak opisano uprzednio [Gao, G., i wsp., (2000) Hum Gene Ther 11, 2079-91].
Dla każdego serotypu skonstruowano wektory do szeregu badań in vitro i in vivo. Osiem różnych kaset transgenicznych włączono do wektorów i wytworzono zrekombinowane wirusy dla każdego serotypu. Odzyskiwanie wirusów, w oparciu o liczbę kopii genomu, podsumowano w Tabeli 4 poniżej. Wydajność uzyskania wektora była wysoka dla każdego serotypu bez powtarzalnych różnic między serotypami. Dane przedstawione w tabeli to średnia liczba kopii genomu z odchyleniem standardo13 wym x 1013 wielu serii produkcyjnych transfekcji 50 szalek (150 mm).
T a b e l a 4. Wytwarzanie zrekombinowanych wektorów
AAV2/1 AAV2/2 AAV2/5 AAV2/7 AAV2/8
CMV LacZ 7,30±4,33 (n=9) 4,49±2,89 (n=6) 5,19±5,19 (n=8) 3,42 (n=1) 0,87 (n=1)
CMV EGFP 6,43±2,42 (n=2) 3,39±2,42 (n=2) 5,55±6,49 (n=4) 2,98±2,66 (n=2) 3,74±3,88 (n=2)
TBG LacZ 4,18 (n=1) 0,23 (n=1) 0,704±0,43 (n=2) 2,16 (n=1) 0,532 (n=1)
Alb A1AT 4,75±0,75 (n=2) 4,77 (n=1) 4,09 (n=1) 5,04 (n=1) 2,02 (n=1)
CB A1AT 0,567 (n=1) 0,438 (n=1) 2,82 (n=1) 2,78 (n=1) 0,816±0,679 (n=2)
TBG rgCG 8,51±6,65 (n=6) 3,47±2,09 (n=5) 5,26±3,85 (n=4) 6,52±3,85 (n=4) 1,83±0,98 (n=5)
CBG cFIX 1,24±1,29 (n=3) 0,63±0,394 (n=6) 3,74±2,48 (n=7) 4,05 (n=1) 15,8±15,0 (n=5)
PL 217 623 B1
P r z y k ł a d 6 - Serologiczna analiza pseudotypowanych wektorów
Myszom C57BL/6 wstrzyknięto domięśniowo wektory różnych serotypów AAVCBA1AT (5 x 1011 GC) i 34 dni później pobrano próbki surowicy. Aby zbadać neutralizującą i neutralizującą krzyżowo aktywność surowic względem każdego serotypu AAV surowice przebadano w oznaczeniu przeciwciał neutralizujących opartym na transdukcji [Gao, G. P., i wsp., (1996) J Virol 70, 8934-43]. Konkretniej, obecność przeciwciał neutralizujących wyznaczono oznaczając zdolność surowicy do hamowania transdukcji komórek 84-31 przez wirusy reporterowe (AAVCMVEGFP) różnych serotypów. Konkretnie, wirus reporterowy AAVCMVEGFP każdego serotypu [przy krotności infekcji (MOI) prowadzącej do transdukcji 90% komórek wskaźnikowych] preinkubowano ze zinaktywowaną cieplnie surowicą od zwierząt, które otrzymały różne serotypy AAV lub od myszy nie stykających się z antygenem (naiwnych). Po 1-godzinnej inkubacji w 37°C wirusy dodano do komórek 84-31 w płytkach 96-studzienkowych na 48 lub 72 godziny, zależnie od serotypu wirusa. Ekspresję GFP mierzono za pomocą FluoroImagin (Molecular Dynamics) i oznaczano ilościowo za pomocą oprogramowania Image Quant. Miana przeciwciał neutralizujących podawano jako najwyższe rozcieńczenie surowicy, które hamowało transdukcję do mniej niż 50%.
Dostępność wektorów wyrażających GFP uprościła opracowanie oznaczenia przeciwciał neutralizujących opartego na hamowaniu transdukcji w permisywnej linii komórkowej (tzn. komórkach 293 stabilnie wyrażających E4 z Ad5). Surowice przeciwko wybranym serotypom AAV wytworzono przez domięśniowe wstrzyknięcie zrekombinowanych wirusów. Oznaczono neutralizację transdukcji AAV przez rozcieńczenia 1:20 i 1:80 surowic odpornościowych (patrz Tabela 5 poniżej). Surowice odpornościowe przeciwko AAV1, AAV2, AAV5 i AAV8 neutralizowały transdukcję serotypu, przeciwko któremu wytworzono surowicę odpornościową (AAV5 i AAV8 w mniejszym stopniu niż AAV1 i AAV2), lecz nie innego serotypu (tzn. nie było dowodów na neutralizację krzyżową, co sugeruje, że AAV 8 jest w istocie unikatowym serotypem).
T a b e l a 5. Analiza serologiczna nowych serotypów AAV % infekcji komórek 84-31 wirusem AAVCMVEGFP
AAV2/1 AAV2/2 AAV2/5 AAV2/7 AAV2/8
Rozcieńczenie Rozcieńczenie Rozcieńczenie Rozcieńczenie Rozcieńczenie
surowicy surowicy surowicy surowicy surowicy
Surowce Wektor 1:20 1:80 1:20 1:80 1:20 1:80 1:20 1:80 1:20 1:80
immunizujący
Grupa 1 AAV2/1 0 0 100 100 100 100 100 100 100 100
Grupa 2 AAV2/2 100 100 0 0 100 100 100 100 100 100
Grupa 3 AAV2/5 100 100 100 100 16,5 16,5 100 100 100 100
Grupa 4 AAV2/7 100 100 100 100 100 100 61,5 100 100 100
Grupa 5 AAV2/8 100 100 100 100 100 100 100 100 26,3 60
Surowice ludzkie od 52 zdrowych osobników przebadano pod kątem neutralizacji przeciwko wybranym serotypom. Żadna z próbek surowicy nie neutralizowała AAV2/7 i AAV2/8, podczas gdy wektory AAV2/2 i AAV2/1 były neutralizowane w odpowiednio 20% i 10% surowic. Frakcja połączonej ludzkiej IgG reprezentująca zbiór 60 000 pojedynczych próbek nie neutralizowała AAV2/7 i AAV2/8, podczas gdy wektory AAV2/2 i AAV2/1 były neutralizowane przy mianie surowicy wynoszącym odpowiednio 1/1280 i 1/640.
P r z y k ł a d 7 - Badanie in vivo różnych serotypów wektorów AAV
W tym badaniu 7 zrekombinowanych genomów AAV: AAV2CBhA1AT, AAV2AlbhA1AT, AAV2CMVrhCG, AAV2TBGrhCG, AAV2TBGcFIX, AAV2CMVLacZ i AAV2TBGLacZ zapakowano z białkami kapsydu różnych serotypów. We wszystkich konstruktach kasety minigenu otoczono ITR AAV2. Jako genów reporterowych użyto cDNA antytrypsyny ludzkiej (A1AT) [Xiao, W. , i wsp. , (1999) J Virol 73, 3994-4003], podjednostki β gonadotropiny kosmówkowej małpy rezusa (CG) [Zoltick, P. W. & Wilson, J. M. (2000) Mol Ther 2, 657-9], psiego czynnika IX [Wang, L., i wsp., (1997) Proc Natl Acad Sci USA 94, 11563-6] i bakteryjnej β-galaktozydazy (tj. LacZ). Dla transferu genów skierowanego do wątroby do kierowania ekspresją genów specyficznie w wątrobie użyto albo promotora mysiego genu
PL 217 623 B1 albuminy (Alb) [Xiao, W. (1999), cytowane powyżej] albo promotora ludzkiego genu globuliny wiążącej hormon tarczycy (TBG) [Wang (1997), cytowane powyżej]. W doświadczeniach transferu genów skierowanego do mięśni do kierowania ekspresją genów użyto albo wczesnego promotora cytomegalowirusa (CMV) albo promotora β-aktyny kurzej ze wzmacniaczem CMV (CB).
Dla transferu genów skierowanego do mięśni wektory wstrzykiwano do prawego przedniego mięśnia piszczelowego nagich myszy NCR lub C57BL/6 (Taconic, Germantown, NY) w wieku 4-6 tygodni. W badaniach transferu genów skierowanego do wątroby dokonywano wlewu wektorów do żyły wrotnej myszy NCR nagich lub C57BL/6 (Taconic, Germantown, NY) w wieku 7-9 tygodni. Próbki surowicy pobierano wewnątrzoczodołowo w różnych punktach czasowych po podaniu wektora. Tkanki mięśni i wątroby pobrano od zwierząt, które otrzymały wektory IacZ w różnych punktach czasowych dla uzyskania skrawków kriogennych i wybarwienia histochemicznego Xgal. W ponownym doświadczeniu myszy C56BL/6 początkowo otrzymały domięśniowo wektory AAV2/1, 2/2, 2/5, 2/7 i 2/8 CBA1AT, po czym monitorowano ekspresję genu A1AT przez 7 tygodni. Następnie zwierzętom podano do żyły wrotnej AAV2/8TBGcFIX i badano ekspresję genu cFIX.
Dla ilościowego oznaczenia poziomów osoczowych białek hA1AT, rhCG i cFIX przeprowadzono oznaczeniami opartymi na teście ELISA tak, jak opisano poprzednio [Gao, G. P., i wsp., (1996) J Virol, 8934-43; Zoltick, P. W. & Wilson, J. M. (2000) Mol Ther 2, 657-9; Wang, L., i wsp., Proc Natl Acad Sci USA 94, 11563-6]. Doświadczenia ukończono gdy zwierzęta uśmiercono w celu pobrania tkanek mięśni i wątroby do ekstrakcji DNA i ilościowej analizy liczby kopii genomu wektora obecnego w tkankach docelowych metodą TaqMan z zastosowaniem tych samych zestawów starterów i sond, co przy miareczkowaniu preparatów wektora [Zhang, Y., i wsp., (2001) Mol Ther 3, 697-707].
Wydajność działania wektorów opartych na nowych serotypach oceniono w mysich modelach transferu genów skierowanego do mięśni i do wątroby i porównano z wektorami opartymi na znanych serotypach AAV1, AAV2 i AAV5. Wektory wyrażające białka wydzielane na zewnątrz komórki - (alfaantytrypsynę (A1AT) i gonadotropinę kosmówkową (CG)) zastosowano do ilościowego oznaczenia względnych wydajności transdukcji między różnymi serotypami za pomocą analizy surowic w ELISA. Rozmieszczenie komórkowe transdukcji wewnątrz narządu docelowego oceniono z zastosowaniem wektorów wyrażających IacZ i histochemii X-gal.
Działanie wektorów AAV w mięśniu szkieletowym przeanalizowano po bezpośrednim wstrzyknięciu do przedniego mięśnia piszczelowego. Wektory zawierały ten sam genom oparty na AAV2 z promotorem najwcześniejszego genu CMV lub wzmocnionym CMV promotorem β-aktyny kierującym ekspresją transgenu. Wcześniejsze badania wykazały, że immunokompetentne myszy C57BL/6 wywołują humoralną odpowiedź immunologiczną przeciwko ludzkiemu białku A1AT wyrażanemu z wektorów AAV [Xiao, W., i wsp. , (1999) J Virol 73, 3994- 4003].
W każdym ze szczepów wektor AAV2/1 wytwarzał najwyższy poziom A1AT, zaś wektor AAV2/2 - najniższy, natomiast wektory AAV2/7 i AAV2/8 wykazywały pośrednie poziomy ekspresji. Szczytowy poziom CG 28 dni po wstrzyknięciu myszom nu/nu NCR wykazywał najwyższą wartość dla AAV2/7 a najniższą dla AAV2/2, przy pośrednich wartościach dla AAV2/8 i AAV2/1. Wstrzyknięcie wektorów AAV2/1 i AAV2/7 IacZ dawało ekspresję genu w miejscu wstrzyknięcia we wszystkich włóknach mięśniowych, przy czym znacząco mniej włókien dodatnich pod względem IacZ zaobserwowano dla wektorów AAV2/2 i AAV2/8. Dane te wskazują, że wydajność transdukcji wektorami AAV2/7 w mięśniu szkieletowym jest podobna do uzyskiwanej dla AAV2/1, który wśród opisanych wcześniej serotypów jest najwydajniejszy w mięśniu szkieletowym [Xiao, W. (1999), cytowane powyżej; Chao, H., i wsp., (2001) Mol Ther 4, 217-22; Chao, H., i wsp., (2000) Mol Ther 2, 619-23].
Podobne mysie modele stosowano do oceny transferu genów skierowanego do wątroby. Identyczne dawki wektorów na podstawie liczby kopii genomu podawano we wlewie do żył wrotnych myszy, które następnie analizowano pod kątem ekspresji transgenu. Każdy wektor zawierał genom oparty na AVV2 wykorzystujący opisane uprzednio specyficzne dla wątroby promotory (tzn. promotor albuminy lub globuliny wiążącej hormon tarczycy) kierujące ekspresją transgenu. Konkretniej, kasety
CMVCG i TBGCG użyto do transferu genów skierowanego odpowiednio do mięśni i wątroby. Poziomy 3 rhCG określono w jednostkach względnych (RU x 103). Dane pochodziły z oznaczeń próbek surowicy zebranych w dniu 28 po podaniu wektora (4 zwierzęta na grupę). Jak przedstawiono w Tabeli 3, wpływ białek kapsydu na wydajność transdukcji wektorów A1AT u myszy nu/nu i C57BL/6 oraz wektorów CG u myszy C57BL/6 był zgodny (patrz Tabela 6).
PL 217 623 B1
T a b e l a 6. Ekspresja podjednostki β gonadotropiny kosmówkowej małpy rezus (rhCG)
Wektor Miesień Watroba
AAV2/1 4,5 ± 2,1 1,6 ± 1,0
AAV2 0,5 ± 0,1 0,7 ± 0,3
AAV2/5 ND* 4,8 ± 0,8
AAV2/7 14,2 ± 2,4 8,2 ± 4,3
AAV2/8 4,0 ± 0,7 76,0 ± 22,8
* Nie określone w tym doświadczeniu.
We wszystkich przypadkach wektory AAV2/8 dawały najwyższy poziom ekspresji transgenu, który był w zakresie od 16 do 110 razy większy niż uzyskany dla wektorów AAV2/2; ekspresja z wektorów AAV2/5 i AAV2/7 miała wartość pośrednią, przy czym wyższą dla AAV2/7 niż AAV2/5. Analiza wybarwionych X-Gal skrawków wątroby zwierząt, które otrzymały odpowiednie wektory IacZ wykazała korelację między liczbą transdukowanych komórek a ogólnym poziomem ekspresji transgenu. DNA wyizolowane z wątrób myszy C57BL/6, które otrzymały wektory A1AT przebadano pod kątem ilości DNA wektora przy zastosowaniu technologii PCR w czasie rzeczywistym.
Ilość DNA wektora stwierdzona w wątrobie 56 dni po wstrzyknięciu korelowała z poziomami ekspresji transgenu (patrz Tabela 7). Dla tego doświadczenia do PCR TaqMan zastosowano zestaw sondy i starterów rozpoznających region poliA SV40 genomu wektora. Przedstawione wartości są średnimi z odchyleniami standardowymi. Zwierzęta uśmiercono w 56 dniu w celu pobrania tkanek wątroby do ekstrakcji DNA. Badania te wskazują, że AAV8 jest najwydajniejszym wektorem dla skierowanego do wątroby transferu genów ze względu na zwiększoną liczbę transdukowanych hepatocytów.
T a b e l a 7. Analiza PCR w czasie rzeczywistym ilości wektorów AAV w wątrobie myszy nu/nu po wstrzyknięciu 1x1011 kopii genomu wektora
Wektory AAV/dawka
Kopie genomu na komórkę
AAV2/1AlbA1AT
AAV2AlbA1AT
AAV2/5AlbA1AT
AAV2/7AlbA1AT
AAV2/8AlbA1AT
0,6 ± 0,36 0,003 ± 0,001 0,83 ± 0,64 2,2 ± 1,7 18 ± 11
Opisane powyżej dane serologiczne sugerują, że wektor AAV2/8 nie powinien być neutralizowany in vivo po immunizacji innymi serotypami. Myszy C57BL/6 otrzymały do żyły wrotnej iniekcje wektora AAV2/8 wyrażającego psi czynnik IX (1011 kopii genomu) 56 dni po otrzymaniu domięśniowych iniekcji wektorów A1AT różnych serotypów. Wysoki poziom ekspresji czynnika IX uzyskano 14 dni po wlewie AAV2/8 do zwierząt naiwnych (17±2 μg/ml, n=4), który nie różnił się znacząco od poziomu zaobserwowanego u zwierząt immunizowanych AAV2/1 (31±23 μg/ml, n=4), AAV2/2 (16 μg/ml, n=2) i AAV2/7 (12 μg/ml, n=2). Stanowi to przeciwieństwo sytuacji zaobserwowanej u zwierząt immunizowanych AAV2/8, którym podawano we wlewie wektor AAV2/8 z czynnikiem IX, u których nie zaobserwowano wykrywalnego czynnika IX (<0,1 μg/ml, n=4).
Oligonukleotydy komplementarne do konserwatywnych regionów genu cap amplifikowały sekwencje rezusów stanowiące unikatowe AAV. Identyczne sekwencje charakterystyczne cap odnaleziono w wielu tkankach rezusów pochodzących z co najmniej dwóch różnych kolonii. Pełnej długości otwarte ramki odczytu rep i cap wyizolowano i zsekwencjonowano z pojedynczych źródeł. Jedynie otwarte ramki odczytu cap nowych AAV były niezbędne do oceny ich potencjału jako wektorów, ponieważ wektory z kapsydami AAV7 lub AAV8 wytworzono wykorzystując ITR i rep z AAV2. Uprościło to także porównanie różnych wektorów, ponieważ właściwy genom wektora jest identyczny w różnych serotypach wektora. W istocie wydajność zrekombinowanych wektorów wytworzonych w tym podejściu nie wykazywała różnic dla różnych serotypów.
Wektory oparte na AAV7 i AAV8 wydają się być immunologicznie różne (tzn. nie są neutralizowane przez przeciwciała wytworzone przeciwko innym serotypom). Ponadto, surowice ludzkie nie
PL 217 623 B1 neutralizują transdukcji przez wektory AAV7 i AAV8, co stanowi istotną przewagę nad obecnie opracowywanymi AAV pochodzącymi od ludzi, przeciwko którym u znaczącej części populacji ludzkiej występuje istniejąca wcześniej odporność, która jest neutralizująca [Chirmule, N., i wsp., (1999) Gene Ther 6, 1574-83].
Tropizm każdego z nowych wektorów jest korzystny dla zastosowań in vivo. Wektory AAV2/7 wydają się transdukować do mięśni szkieletowych równie wydajnie, jak AAV2/1, który jest serotypem nadającym najwyższy poziom transdukcji w mięśniu szkieletowym spośród zbadanych do tej pory AAV naczelnych [Xiao, W., cytowane powyżej; Chou (2001), cytowane powyżej i Chou (2000), cytowane powyżej]. Co ważne, AAV2/8 dostarcza istotnej przewagi w porównaniu z innymi serotypami w odniesieniu do transferu genów do wątroby, który dotychczas był stosunkowo zawodny w kategoriach ilości stabilnie transdukowanych hepatocytów. AAV2/8 powtarzalnie osiągał 10 do 100-krotną poprawę wydajności transferu genów w porównaniu z innymi wektorami. Podstawa poprawionej wydajności AAV2/8 jest niejasna, choć przypuszczalnie jest ona związana z pobieraniem przez inny receptor, który jest bardziej aktywny na bocznej podstawnej powierzchni hepatocytów. Ta poprawiona wydajność będzie bardzo przydatna w opracowywaniu skierowanego do wątroby transferu genów, gdzie liczba transdukowanych komórek jest krytyczna tak, jak w schorzeniach cyklu mocznikowego i rodzinnej hipercholesterolemii.
Zaprezentowano nowe podejście do wykrywania nowych AAV, oparte na odzyskiwaniu sekwencji genomowych przez PCR. Amplifikowane sekwencje były łatwo włączone do wektorów i przebadane na zwierzętach. Brak uprzedniej odporności przeciwko AAV7 i korzystny tropizm wektorów wobec mięśni wskazuje, że AAV7 jest odpowiedni do wykorzystania jako wektor w terapii genowej człowieka i innych zastosowaniach in vivo. Podobnie, brak uprzedniej odporności przeciwko innym serotypom AAV i ich tropizm czyni je użytecznymi do dostarczania cząsteczek terapeutycznych i innych użytecznych cząsteczek.
P r z y k ł a d 9 - Badania tropizmu tkankowego
W projekcie schematu wysoko wydajnego przeszukiwania funkcjonalnego nowych konstruktów AAV na szeroką skalę wybrano niespecyficzny względem tkanki i wysoce aktywny promotor CB (wzmocniony CMV promotor kurzej β-aktyny) do kierowania ekspresją łatwo wykrywalnego i oznaczalnego ilościowo genu - ludzkiego genu a-antytrypsyny. Zatem dla każdego nowego klonu AAV potrzeba wykonać tylko jeden wektor do badania transferu genów skierowanego do trzech różnych tkanek: wątroby, płuca i mięśni, dla zbadania tropizmu tkankowego konkretnego konstruktu AAV. Następująca tabela podsumowuje dane uzyskane z 4 nowych wektorów AAV w badaniach tropizmu tkankowego (AAVCBA1AT), w których stwierdzono, że nowy klon kapsydu AAV - 44.2 jest bardzo silnym nośnikiem transferu genów we wszystkich 3 tkankach, ze szczególnie dużą przewagą w tkance płuca. Tabela 8 przedstawia dane (w μg A1AT/ml surowicy) w 14 dniu badania.
T a b e l a 8
Wektor Tkanka docelowa
Płuco Wątroba Mięsień
AAV2/1 ND ND 45 ± 11
AAV2/5 0,6 ± 0,2 ND ND
AAV2/8 ND 84 ± 30 ND
AAV2/rh.2 (43.1) 14 ± 7 25 ± 7,4 35 ± 14
AAV2/rh.10 (44.2) 23 ± 6 53 ± 19 46 ± 11
AAV2/rh.13 (42.2) 3,5 ± 2 2 ± 0,8 3,5 ± 1,7
AAV2/rh.21 (42.10) 3,1 ± 2 2 ± 1,4 4,3 ± 2
Dla potwierdzenia lepszego tropizmu AAV 44.2 w tkance płuca przeprowadzono kilka innych doświadczeń. Najpierw wektor AAV niosący minigen CC10hA1AT dla ekspresji specyficznie w płucach pseudotypowano kapsydami nowych AAV i podano zwierzętom pozbawionym odporności (nagie NCR) w takiej samej objętości (50 μl każdego z oryginalnych preparatów) przez wstrzyknięcie dotchawicze tak, jak przedstawiono w następującej tabeli. W Tabeli 9, 50 μl każdego oryginalnego preparatu na mysz, nagie NCR, granica wykrywalności >0,033 μg/ml, dzień 28.
PL 217 623 B1
T a b e l a 9
Wektor Całkowite GC w 50 μ! wektora μg A1AT/ml dla 50 μl wektora μς A1AT/ml na 1 x 1011 wektora Względny transfer genu w porównaniu z rh.10 (klon 44.2)
2/1 3 x 1012 2,60,5 0,09 ± 0,02 2,2
2/2 5,5 x 1011 <0,03 <0,005 <0,1
2/5 3,6 x 1012 0,65 ± 0,16 0,02 ± 0,004 0,5
2/7 4,2 x 1012 1 ± 0,53 0,02 ± 0,01 0,5
2/8 7,5 x 1011 0,9 ± 0,7 0,12 ± 0,09 2,9
2/ch.5 (A.3.1) 9 x 1012 1 ± 0,7 0,01 ± 0,008 0,24
2/rh.8 (43.25) 4,6 x 1012 26 ± 21 0,56 ± 0,46 13,7
2/rh.10 (44.2) 2,8 x 1012 115 ± 38 4,1 ± 1,4 100
2/rh.13 (42.2) 6 x 1012 7,3 ± 0,8 0,12 ± 0,001 2,9
2/rh.21 (42.10) 2,4 x 1012 9 ± 0,9 0,38 ± 0,04 9,3
2/rh.22 (42.11) 2,6 x 1012 6 ± 0,4 0,23 ± 0,02 5,6
2/rh.24 (42.13) 1,1 x 1011 0,4 ± 0,3 0,4 ± 0,3 1
Wektory podano także zwierzętom immunokompetentnym (C57BL/6) w jednakowej liczbie kopii
genomu (1 x 1011 GC) jak przedstawiono w Tabeli 10 granica wykrywalności >0,033 μg/ml). T a b e l a (1 x 1011 GC na zwierzę, C57BL/6, dzień 14 10
Wektor AAV μ9 A1AT/ml na 1 x 1011 wektora Względny transfer genu w porównaniu z rh.10 (klon 44.2)
2/1 0,076 ± 0,031 2,6
2/2 0,1 ± 0,09 3,4
2/5 0,0840 ± 0,033 2,9
2/7 0,33 ± 0,01 11
2/8 1,92 ± 1,3 2,9
2/ch.5 (A.3.1) 0,048 ± 0,004 1,6
2/rh.8 (43.25) 17 ± 0,7 58
2/rh.10 (44.2) 2,93 ± 1,7 100
2/rh.13 (42.2) 0,45 ± 0,15 15
2/rh.21 (42.10) 0,86 ± 0,32 29
2/rh.22 (42.11) 0,38 ± 0,18 13
2/rh.24 (42.13) 0,3 ± 0,19 10
Dane z obu doświadczeń potwierdzają doskonały tropizm klonu 44.2 w transferze genów skierowanym do płuca.
Co ciekawe, skuteczność klonu 44.2 w transferze genów skierowanym do wątroby i mięśni była również znakomita, zbliżona do AAV8 najskuteczniejszego w transdukcji do wątroby i AAV1 najskuteczniejszego w transdukcji do mięśni, co sugeruje, że ten nowy AAV ma jakieś intrygujące znaczenie biologiczne.
W celu zbadania właściwości serologicznych tych nowych AAV, stworzono pseudotypowane wektory AAVGFP do immunizacji królików i transdukcji in vitro komórek 84-31 w obecności i nieobecności surowic odpornościowych przeciwko różnym kapsydom. Dane podsumowano poniżej:
PL 217 623 B1
T a b e l a 11a. Oznaczenia krzyżowych NAB w komórkach 8431 i koinfekcja adenowirusem (Adv)
Surowica królika Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z: 1010 GC rh.24
109 GC rh.13 109 GC rh.21 109 GC rh.22
immunizowanego: AAV2/42.2 AAV2/42.10 AAV2/42.11 AAV2/42.13
AAV2/1 1/20 1/20 1/20 brak NAB
AAV2/2 1/640 1/1280 1/5120 brak NAB
AAV2/5 brak NAB 1/40 1/160 brak NAB
AAV2/7 1/81920 1/81920 1/40960 1/640
AAV2/8 1/640 1/640 1/320 1/5120
Ch.5 AAV2/A3 1/20 1/160 1/640 1/640
rh.8 AAV2/43.25 1/20 1/20 1/20 1/320
rh.10 AAV2/44.2 brak NAB brak NAB brak NAB 1/5120
rh.13 AAV2/42.2 1/5120 1/5120 1/5120 brak NAB
rh.21 AAV2/42.10 1/5120 1/10240 1/5120 1/20
rh.22 AAV2/42.11 1/20480 1/20480 1/40960 brak NAB
rh.24 AAV2/43.13 brak NAB 1/20 1/20 1/5120
T a b e l a 11b. Oznaczenie krzyżowych NAB w komórkach 8431 i koinfekcja Adv Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z:
Surowica królika immunizowanego 109 GC rh. 12 AAV2/42.1B 1010 GC ch5 AAV2/A3 1010 GC rh.8 AAV2/43.25 109 GC rh.10 AAV2/44.2 109 GC rh.20 AAV2/42.8.2
AAV2/1 brak NAB 1/20480 brak NAB 1/80 ND
AAV2/2 1/20 brak NAB brak NAB brak NAB ND
AAV2/5 brak NAB 1/320 brak NAB brak NAB ND
AAV2/7 1/2560 1/640 1/60 1/81920 ND
AAV2/8 1/10240 1/2560 1/2560 1/81920 ND
ch.5 AAV2/A3 1/1280 1/10240 ND 1/5120 1/320
rh.8 AAV2/43.25 1/1280 ND 1/20400 1/5120 1/2560
rh.10 AAV2/44.2 1/5120 ND ND 1/5120 1/5120
rh.13 AAV2/42.2 1/20 ND ND brak NAB 1/320
rh.21 AAV2/42.10 1/20 ND ND 1/40 1/80
rh.22 AAV2/42.11 brak NAB ND ND ND brak NAB
rh.24 AAV2/43.13 1/5120 ND ND ND 1/2560
PL 217 623 B1
T a b e l a 12
Miano surowic królika Miano po dawce przypominającej
Wektor Miano d21
ch.5 AAV2/A3 1/10240 1/40960
rh.8 AAV2/43.25 1/20400 1/163840
rh.10 AAV2/44.2 1/10240 1/527680
rh.13 AAV2/42.2 1/5120 1/20960
rh.21 AAV2/42.10 1/20400 1/81920
rh.22 AAV2/42.11 1/40960 ND
rh.24 AAV2/43.13 1/5120 ND
T a b e l a 13a. Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z GFP:
109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę 109 GC/studzienkę
AAV2/1 AAV2/2 AAV2/5 AAV2/7 AAV2/8 AAV2/A3
# 128 >200 95 56 13 1
GFU/pole 83 >200 65 54 11 1
T a b e l a 13b. Infekcja w komórkach 8431 (koinfekowanych Adv) z GFP:
10 9 GC/stu- dzienkę rh.8 AAV2/43.25 10 9 GC/stu- dzienkę rh.10 AAV2/44.2 10 9 GC/stu- dzienkę rh.13 AAV2/42.2 10 9 GC/stu- dzienkę rh.21 AAV2/42.10 10 9 GC/stu- dzienkę rh.22 AAV2/42.11 10 9 GC/stu- dzienkę rh.24 AAV2/42.13 10 9 GC/stu- dzienkę rh.12 AAV2/42.1B
# 3 13 54 62 10 3 18
GFU/ 2 12 71 60 14 2 20
pole 48 47 16 3 12
P r z y k ł a d 10 - Mysi model rodzinnej hipercholesterolemii
Następujące doświadczenie wykazuje, że konstrukt AAV2/7 według wynalazku dostarcza receptora LDL i wyraża receptor LDL w ilości wystarczającej do zmniejszenia poziomu cholesterolu i trójglicerydów w osoczu w zwierzęcych modelach rodzinnej hipercholesterolemii.
A. Konstrukcja wektora
Wektory AAV upakowane kapsydami AAV7 lub AAV8 skonstruowano przy wykorzystaniu strategii pseudotypowania [Hildinger M, i wsp., J Virol 2001; 75: 6199-6203]. Zrekombinowane genomy AAV z odwróconymi powtórzeniami końcowymi (ITR) AAV2 pakowano przez potrójną transfekcję komórek 293 plazmidem cis, adenowirusowym plazmidem pomocniczym oraz chimerycznym konstruktem pakującym - fuzją kapsydów nowych serotypów AAV z genem rep AAV2. Chimeryczny plazmid pakujący skonstruowano tak, jak opisano poprzednio [Hildinger i wsp., cytowane powyżej]. Zrekombinowane wektory oczyszczono standardową metodą sedymentacji w CsCl2. Dla określenia wydajności przeprowadzono analizę TaqMan (Applied Biosystems) z zastosowaniem sond i starterów rozpoznających region poli(A) SV40 wektorów [Gao GP, i wsp., Hum Gene Ther. 2000 10 października; 11 (15): 2079-91]. Uzyskane wektory wyrażają transgen pod kontrolą promotora ludzkiego genu globuliny wiążącej hormon tarczycy (TBG).
B. Zwierzęta
Myszy pozbawione receptora LDL w tle C57BL/6 nabyto z Jackson Laboratory (Bay Harbor, ME, USA) i utrzymywano jako kolonię rozrodczą. Myszom dawano nieograniczony dostęp do wody i podawano bogatą w tłuszcz dietę Western (wysoki % cholesterolu) począwszy od trzech tygodni
PL 217 623 B1 przed infekcją. W dniu -7 oraz w dniu 0 pobrano krew przez skrwawienie zaoczodołowe i oznaczono profil lipidowy. Myszy losowo podzielono na siedem grup. Wektor wstrzyknięto do żyły wrotnej tak, jak opisano uprzednio [Chen SJ i wsp., Mol Therapy 2000; 2 (3), 256-261]. W skrócie, myszy znieczulono ketaminą i ksylazyną. Przeprowadzono laparotomię i odsłonięto żyłę wrotną. Za pomocy igły 30 G wstrzyknięto odpowiednią dawkę wektora rozcieńczonego w 100 μΙ PBS bezpośrednio do żyły wrotnej. W miejscu wstrzyknięcia zastosowano ucisk by zapewnić zatrzymanie krwawienia. Ranę zamknięto i opatrzono, a myszy starannie obserwowano kolejnego dnia. Cotygodniowe skrwawienia przeprowadzano począwszy od dnia 14 po skierowanym do wątroby transferze genów dla zmierzenia poziomu lipidów krwi. Dwa zwierzęta z każdej grupy uśmiercono w punktach czasowych -6 tydzień i 12 tydzień po wstrzyknięciu wektora dla zbadania wielkości płytek miażdżycowych oraz ekspresji wektora. Pozostałe myszy uśmiercono w tygodniu 20 w celu zmierzenia płytek i określenia ekspresji transgenu.
T a b e l a 14
Wektor dawka n
Grupa 1 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1012 gc 12
Grupa 2 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1011 gc 12
Grupa 3 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1011 gc 12
Grupa 4 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1012 gc 12
Grupa 5 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1011 gc 12
Grupa 6 AAV2/7-TBG-hLDLr 1 x 1011 gc 12
Grupa 7 AAV2/7-TBG-LacZ 1 x 1011 gc 16
C. Analiza lipoprotein osocza i funkcji wątroby
Próbki krwi pobrano ze splotu zaoczodołowego po 6 godzinnym okresie postu. Surowicę oddzielono od osocza przez wirowanie. Ilość lipoprotein osocza i transaminaz wątroby w surowicy wykryto z zastosowaniem automatycznego analizatora chemii klinicznej (ACE, Schiapparelli Biosystems, Alpha Wassermann).
D. Wykrywanie ekspresji transgenu
Ekspresję receptora LDL oceniono barwieniem immunofluorescencyjnym i analizą Western blot. Do analizy Western blot zamrożoną tkankę wątroby homogenizowano z buforem do lizy (20 mM Tris, pH 7,4, 130 mM NaCl, 1% Triton X 100, inhibitor proteazy (kompletny, pozbawiony EDTA, Roche, Mannheim, Niemcy). Stężenie białka określono stosując zestaw Micro BCA Protein Assay Reagent Kit (Pierce, Rockford, IL). 40 μg białka rozdzielano na żelach 4-15% Tris-HCI Ready (Biorad, Hercules, CA) i przenoszono na filtr nitrocelulozowy (Invitrogen). Dla wytworzenia przeciwciał przeciwko recepto13 rowi hLDL królikowi wstrzyknięto dożylnie preparat AdhLDLr (1 x 1013 GC). Cztery tygodnie później pozyskano surowicę królika i wykorzystano do analizy Western. Jako przeciwciało pierwszorzędowe wykorzystano rozcieńczenie 1:100 surowicy, po czym zastosowano skoniugowane z HRP IgG antykrólik i detekcję chemiluminescencyjną ECL (zestaw ECL Western Blot Detection Kit, Amersham, Arlington Heights, IL).
E. Immunocytochemia
Dla określenia ekspresji receptora LDL w zamrożonych skrawkach wątroby przeprowadzono analizę immunocytochemiczną. 10 μm skrawki z kriostatu utrwalano w acetonie przez 5 minut albo pozostawiano nieutrwalone. Blokowanie uzyskiwano przez 1 godzinną inkubację z 10% surowicą kozią. Skrawki inkubowano następnie przez godzinę z pierwszorzędowym przeciwciałem w temperaturze pokojowej. Królicze poliklonalne przeciwciało przeciwko ludzkiemu LDL (Biomedical Technologies Inc., Stoughton, MA) zostało użyte w rozcieńczeniu zgodnym z zaleceniami wytwórcy. Skrawki przepłukano PBS i inkubowano z rozcieńczonym 1:100 kozim przeciwciałem anty-królik skoniugowanym z fluoresceiną (Sigma, St. Louis, MO). Próbki ostatecznie badano pod mikroskopem fluorescencyjnym Nikon Microphot-FXA. We wszystkich przypadkach po inkubacji skrawki intensywnie płukano w PBS. Na negatywne kontrole składały się preinkubacja w PBS, pominięcie pierwszorzędowego przeciwciała i zamiana pierwszorzędowego przeciwciała na dopasowane izotypowo przeciwciało kontrolne z nieimmunizowanej kontroli. Wspomniane powyżej trzy typy kontroli przeprowadzono dla każdego z doświadczeń tego samego dnia.
PL 217 623 B1
F. Wydajność transferu genów
Tkankę wątroby pozyskano po uśmierceniu myszy w wyznaczonych punktach czasowych. Tkankę błyskawicznie zamrożono w ciekłym azocie i przechowywano w -80°C do dalszej obróbki. DNA ekstrahowano z tkanki wątroby z zastosowaniem zestawu QIAmp DNA Mini (QIAGEN GmbH, Niemcy) według protokołu wytwórcy. Liczbę kopii genomu wektorów AAV w tkance wątroby oznaczono przy użyciu analizy TaqMan z zastosowaniem sond i starterów rozpoznających ogon poli(A) SV40 tak, jak opisano powyżej.
G. Pomiar płytek miażdżycowych
Dla ilościowego oznaczenia płytek miażdżycowych w aorcie myszy znieczulano (10% ketamina i ksylazyna, ip), otwierano klatkę piersiową i poddawano perfuzji lodowatym roztworem soli buforowanej fosforanem przez lewy przedsionek. Następnie, starannie pobierano aortę, przecinano wzdłuż linii brzusznej od łuku aorty do tętnic udowych i utrwalano w formalinie. Bogate w lipidy płytki miażdżycowe wybarwiano Sudanem IV (Sigma, Niemcy) i rozpinano aortę na płaskiej czarnej woskowej powierzchni. Obraz utrwalono kolorową kamerą wideo Sony DXC-960 MD. Powierzchnię płytek jak również całkowitą powierzchnię aorty określano za pomocą sytemu analizy obrazu Phase 3 Imaging Systems (Media Cybernetics).
H. Klirens I135 LDL
125
Zbadano dwa zwierzęta z każdej grupy doświadczalnej. Dawkę wyznakowanego I125 LDL (uprzejmie udostępnionego przez Dana Radera, U Penn) wlewano powoli przez żyłę ogonową w ciągu
125 sek (1 000 000 zliczeń [I ]-LDL rozcieńczonych w 100 μl jałowego PBS na zwierzę). W punktach czasowych 3 min, 30 min, 1,5 godz., 3 godz., 6 godz. po wstrzyknięciu pobierano próbkę krwi przez splot zaoczodołowy. Osocze oddzielono od krwi i zliczono 10 μl osocza w liczniku gamma. Ostatecznie na podstawie danych klirensu lipoprotein obliczono metabolizm w jednostce czasu (ang. „fractional catabolic rate”).
I. Ocena nagromadzenia lipidów w wątrobie
Przeprowadzono barwienie czerwienią oleistą (Oil Red) zamrożonych skrawków wątroby dla określenia nagromadzenia lipidów. Zamrożone skrawki wątroby krótko przepłukano w destylowanej wodzie, po czym inkubowano przez 2 minuty w absolutnym glikolu propylenowym. Skrawki wybarwiano następnie w roztworze czerwieni oleistej (0,5% w glikolu propylenowym) przez 16 godzin, po czym barwiono kontrastowo roztworem hematoksyliny Mayera przez 30 sekund i osadzano w ogrzanym roztworze galaretki glicerynowej.
Dla ilościowego określenia cholesterolu i zawartości trójglicerydów w wątrobie, skrawki wątroby homogenizowano i inkubowano w mieszaninie chloroform/metanol (2:1) przez noc. Po dodaniu 0,05% H2SO4 i odwirowaniu przez 10 minut zebrano dolną warstwę każdej próbki, podzielono na dwie porcje i wysuszono w atmosferze azotu. Do pomiaru cholesterolu wysuszone lipidy pierwszej porcji rozpuszczano w 1% Triton X-100 w chloroformie. Po rozpuszczeniu roztwór suszono w atmosferze azotu. Po rozpuszczeniu lipidów w ddH2O i inkubacji przez 30 minut w 37°C całkowite stężenie cholesterolu mierzono przy zastosowaniu zestawu Total Cholesterol Kit (Wako Diagnostics). Dla drugiej porcji wysuszone lipidy rozpuszczano w alkoholowym roztworze KOH i inkubowano w 60°C przez 30 minut. Następnie dodawano 1M MgCl2, po czym inkubowano na lodzie przez 10 minut i wirowano przy 14 000 rpm przez 30 minut. Ostatecznie w supernatancie oznaczano trójglicerydy (Wako Diagnostics).
Wszystkie wektory pseudotypowane w kapsydzie AAV2/8 lub AAV2/7 obniżały całkowity cholesterol, LDL i trójglicerydy w porównaniu z kontrolą. Te wektory doświadczalne poprawiały także fenotyp hipercholesterolemii w sposób zależny od dawki. Obniżenie powierzchni płytek u myszy z AAV2/8 i AAV2/7 zaobserwowano u traktowanych myszy w pierwszym teście (2 miesiące) i obserwowano utrzymywanie się tego efektu przez cały czas trwania doświadczenia (6 miesięcy).
P r z y k ł a d 10 - Ekspresja funkcjonalnego czynnika IX i poprawa w hemofilii
A. Myszy z nokautem
Ekspresję funkcjonalnego psiego czynnika IX (FIX) zbadano u myszy z hemofilią B. Skonstruowano wektory z kapsydami AAV1, AAV2, AAV5, AAV7 lub AAV8 dla dostarczenia konstruktu 5' ITR AAV2 - promotor specyficzny dla wątroby [LSP] - FIX psa - element post-regulacyjny wirusa zapalenia wątroby świstaka amerykańskiego (woodchuck hepatitis post-regulatory element - WPRE) - ITR 3' AAV2. Wektory skonstruowano tak, jak opisano to w Wang i wsp., Molecular Therapy 2: 154-158, przy zastosowaniu odpowiednich kapsydów.
Myszy z nokautem skonstruowano tak, jak opisano w Wang i wsp., 1997. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 11563-11566. Model ten blisko naśladuje fenotypy hemofilii B u człowieka.
PL 217 623 B1
Wektory różnych serotypów (AAV1, AAV2, AAV5, AAV7 i AAV8) dostarczano w pojedynczym zastrzyku do żyły wrotnej do wątroby dorosłych myszy C57BL/6 cierpiących na hemofilię w dawce 1x1011 GC/mysz dla pięciu różnych serotypów, zaś jedna grupa otrzymała AAV8 w mniejszej dawce 1x1010 GC/mysz. Grupie kontrolnej wstrzyknięto 1x1011 GC AAV2/8 TBG LacZ3. Każda grupa składała się z 5-10 samców i samic myszy. Myszy skrwawiano co dwa tygodnie po podaniu wektorów.
1. ELISA
Stężenie psiego FIX w osoczu myszy określono za pomocą oznaczenia ELISA swoistego wobec psiego czynnika IX , przeprowadzanego zasadniczo tak, jak opisano w Axelrod i wsp, 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87: 5173-5177 z modyfikacjami. Jako pierwszorzędowego przeciwciała użyto przeciwciała owcy przeciwko psiemu czynnikowi IX (Enzyme Research Laboratories), zaś jako drugorzędowego przeciwciała użyto przeciwciała królika przeciwko psiemu czynnikowi IX (Enzyme Research Laboratories). Począwszy od dwóch tygodni po wstrzyknięciu wykryto podwyższone poziomy cFIX w osoczu dla wszystkich wektorów doświadczalnych. Podwyższone poziomy utrzymywały się na poziomie terapeutycznym przez cały czas trwania doświadczenia, tzn. do 12 tygodni. Za poziom terapeutyczny uważa się 5% poziomu prawidłowego, czyli około 250 ng/ml.
Najwyższy poziom ekspresji zaobserwowano dla konstruktów AAV2/8 (przy 1011) i AAV2/7 z utrzymującym się ponad fizjologicznym poziomem cFIX (dziesięciokrotnie wyższym, niż poziom prawidłowy. Poziomy ekspresji dla AAV2/8 (1011) były w przybliżeniu dziesięciokrotnie większe, niż obserwowane dla AAV2/2 i AAV2/8 (1010). Najniższy poziom ekspresji, choć ciągle w granicach poziomu terapeutycznego, zaobserwowano dla AAV2/5.
2. Oznaczenie czasu częściowej tromboplastyny po aktywacji (aPTT) in vitro
Aktywność funkcjonalnego czynnika IX w osoczu myszy z nokautem FIX określono za pomocą oznaczenia czasu częściowej tromboplastyny po aktywacji (aPTT) in vitro. Próbki krwi myszy pobrano ze splotu zaoczodołowego do 1/10 objętości buforu cytrynianowego. Oznaczenie aPTT przeprowadzono tak, jak opisano to w Wang i wsp., 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 11563-11566.
Czasy krzepnięcia w aPTT w próbkach osocza wszystkich myszy, którym wstrzyknięto wektor były w prawidłowym zakresie (około 60 sek.) przy pomiarze dwa tygodnie po wstrzyknięciu i utrzymywały się w prawidłowym, lub niższym niż prawidłowy zakresie przez okres badania (12 tygodni).
Najniższe utrzymujące się czasy krzepnięcia zaobserwowano u zwierząt otrzymujących AAV2/8 (1011) i AAV2/7. Do tygodnia 12 AAV2/2 również indukował czas krzepnięcia podobny do obserwowanego dla AAV2/8 i AAV2/7. Ten krótszy czas krzepnięcia nie był jednak obserwowany dla AAV2/2 przed tygodniem 12, podczas gdy obniżone czasy krzepnięcia (w zakresie 25 - 40 sek.) obserwowano dla AAV2/8 i AAV2/7 począwszy od drugiego tygodnia.
Obecnie przeprowadza się barwienie immunohistochemiczne tkanek wątroby pobranych od niektórych z leczonych myszy. Około 70-80% hepatocytów wybarwia się dodatnio pod kątem psiego FIX u myszy, której wstrzyknięto wektor AAV2/8.cFIX.
B. Psy cierpiące na hemofilię B
Psy mające mutację w domenie katalitycznej genu F.IX, która, na podstawie badań modelowych, wydaje się destabilizować białko, cierpią na hemofilię B [Evans i wsp., 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 10095-10099]. Grupę takich psów utrzymywano przez ponad dwadzieścia lat w University of North Carolina, Chapel Hill. Parametry hemostatyczne tych psów są dobrze opisane i obejmują brak antygenu osocza F.IX, czasy krzepnięcia całej krwi ponad 60 minut, podczas gdy u zdrowych psów wynoszą one 6-8 minut, a przedłużony czas częściowej tromboplastyny po aktywacji 50-80 sekund, podczas gdy u zdrowych psów wynosi on 13-28 sekund. Psy te cierpią na nawracające samorzutne krwotoki. Zazwyczaj poważne epizody krwawienia są z sukcesem leczone pojedynczym dożylnym wlewem 10 ml/kg prawidłowego osocza psa; niekiedy dla powstrzymania krwawienia konieczne są powtórne wlewy.
Czterem psom wstrzykn ięto do żyły wrotnej AAV.cFIX zgodnie z poniższym schematem. Pierwszy pies otrzymał pojedynczy zastrzyk AAV2/2.cFIX w dawce 3,7x1011 kopii genomu (GC)/kg. Drugi pies otrzymał pierwszy zastrzyk AAV2/2.cFIX (2,8x1011 GC/kg), po czym drugi zastrzyk AAV2/7.cFIX (2,3x1013 GC/kg) w dniu 1180. Trzeci pies otrzymał pojedynczy zastrzyk AAV2/2.cFIX w dawce 4,6x1012 GC/kg. Czwarty pies otrzymał zastrzyk AAV2/2.cFIX (2,8x1012 GC/kg) oraz zastrzyk w dniu 995 AAV2/7.CFIX (5x1012 GC/kg).
Podbrzusze cierpiących na hemofilię psów otwiera się chirurgicznie i aseptycznie pod ogólnym znieczuleniem i podaje się do żyły wrotnej pojedynczą dawkę wektora. Zwierzęta chroni się przed krwotokiem w czasie około operacyjnym przez dożylne podanie prawidłowego osocza psa. Pies jest
PL 217 623 B1 usypiany, intubowany dla uzyskania znieczulenia ogólnego, a podbrzusze golone i przygotowywane. Po otwarciu podbrzusza śledziona jest przesuwana w pole operacyjne. Lokalizowana jest żyła śledzionowa i umieszcza się luźno szew w pobliżu małego dystalnego nacięcia w żyle. Do żyły szybko wprowadza się igłę, po czym luzuje się szew i przewleka kaniulę 5F do miejsca w żyle w pobliżu odgałęzienia żyły wrotnej. Po zabezpieczeniu hemostazy i napełnieniu balonika cewnika do żyły wrotnej wlewa się około 5,0 ml wektora rozcieńczonego w PBS w czasie 5 minut. Następnie opróżnia się balonik, usuwa kaniulę i zabezpiecza hemostazę żylną. Następnie umieszcza się śledzionę z powrotem na miejscu, przyżega krwawiące naczynia i zamyka ranę operacyjną. Po dobrym zniesieniu operacji zwierze jest ekstubowane. Próbki krwi analizuje się tak, jak opisano. [Wang i wsp., 2000, Molecular Therapy 2: 154-158].
Oczekiwane są wyniki wskazujące na poprawę lub częściową poprawę dla AAV2/7.
Wszystkie publikacje cytowane w tym opisie są włączone tu przez odniesienie. Podczas, gdy wynalazek opisano w odniesieniu do szczególnie korzystnych wykonań, należy zauważyć, że modyfikacje mogą być wprowadzone bez odejścia od ducha wynalazku. Modyfikacje takie mają wejść w zakres zastrzeżeń.
PL 217 623 B1
LISTA SEKWENCJI <11O> The Trustees of The University of Pennsylvania Gao, Guangping Wilson, James M.
Alvira, Maurioio <120> Sposób wykrywania i/lub identyfikacji sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) oraz izolowania nowych sekwencji w ten sposób zidentyfikowanych
<130> UPN-02735PCT
<150> US 60/350,607
<151> 2001-11-13
<150> US 60/341,117
<151> 2001-12-17
<150> US 60/377,066
<151> 2002-05-01
<150> US 60/386,675
<151> 2002-06-05
<I60> 120
<170> Patent w wersji 3.1
<210> 1 '
<211> 4721
<212> ONA
<213> serotyp 7 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem
<400> 1
ttggccactc cctctatgcg cgctcgctcg ctcggtgggg cctgcggacc aaaggtccgc 60
agacggcaga gctctgctct gccggcccca ccgagcgagc gagcgcgcat agagggagtg 120
gceaactcea tcacfcagggg taccgcgaag cgcetcccac gctgccgcgt cagcgctgac 180
gtaaatcacg tcatagggga gfcggtcctgt attagetgtc acgtgagtgc ttttgcgaca 240
ttttgcgaca ccacgtggcc afctfcgaggta tatatggccg agtgagcgag caggatctcc 300
attttgaccg cgaaatttga acgagcagca gccatgccgg gtttctacga gatcgtgatc 360
aaggtgccga gcgacctgga cgagcacctg ccgggcattt ctgactcgtt tgtgaactgg 420
gtggccgaga aggaatggga gctgcccccg gattctgaca tggatctgaa tctgatcgag 480
caggcacccc tgaccgtggc cgagaagctg c agcgcga c t tcctggtcca a* t g c c tgc 540
gtgagtaagg ccccggaggc cctgttcttt gt.tcagttcg acf&acjęjgccja gagctacttc 600
caccttcacg ttctggtgga gaccacgggg gtcaagtcca tggtgctagg ccgcttcctg 660
agtcagattc gggagaagct ggtccagacc atctaccgcg gggtcgagcc cacgctgccc 720
PL 217 623 B1
aactggttcg eggtgaccaa gacgcgtaat ggcgccggcg gggggaacaa ggtggtggac 780
gagtgctaca tccccaacta cctcctgccc aagacccagc ccgagctgca gtgggcgtgg 840
actaacatgg aggagtatat aagcgcgtgt ttgaacctgg ccgaacgcaa acggctcgtg 900
gcgcagcacc tgacccacgt cagccagacg caggagcaga acaaggagaa tctgaacccc 360
aattctgacg cgcccgtgat caggtcaaaa acctccgcgc gctacatgga gctggtcggg 1020
tggctggtgg accggggcat cacctccgag aagcagtgga tecaggagga ecaggcctcg 1080
tacatctcct tcaacgccgc ctccaactcg cggtcccaga tcaaggccgc gctggacaat 1140
gccggcaaga tcatggcgct gaccaaat cc gcgcccgact acctggtggg gccctcgctg 1200
cccgcggaca ttaaaaccaa ccgcatctac cgcatcctgg ag ctgaacgg gtacgatcct 1260
gcctacgccg gctccgtctt tctcggctgg gc cc ag aa aa agttcgggaa gcgcaacacc 1320
atctggctgt ttgggcccgc caccaccggc aagaccaaca ttgcggaagc catcgcccac 1380
gccgtgccct tctacggctg cgtcaactgg accaatgaga actt.tccctt caacgattgc 1440
gtcgacaaga tggtgatctg gtgggaggag ggcaagatga cggccaaggt cgtggagtcc 1500
gccaaggcca ttctcggcgg cagcaaggtg cgcgtggacc aaaagtgcaa gtcgtccgcc 1560
cagatcgacc ccacccccgt gatcgtcacc tccaacacca acatgtgcgc cgtgattgac 1620
gggaacagca ccaccttcga gcaccagcag ccgttgcagg accggatgtt caaatttgaa 1600
ctcaoccgcc gtctggagca cgactttggc aaggtgacga agcaggaagt caaagagttc 1740
ttccgctggg ccagtgatca cgtgaccgag gtggcgcatg agttctacgt cagaaagggc 1800
ggagccagca aaagacccgc ccccgatgac gcggatataa gcgagcccaa gcgggcctgc 1860
ccctcagtcg cggatccatc gacgtcagac gcggaaggag ctccggtgga ctttgccgac 1920
aggtaccaaa acaaatgttc tcgtcacgcg ggcatgattc agatgctgtt tccctgcaaa 1980
acgtgegaga gaatgaatca gaatttcaac atttgcttca cacacggggt cagagactgt 2040
ttagagtgtt tccccggcgt gtcagaatct caaccggtcg tcagaaaaaa gacgtatcgg 2100
aaactctgcg cgattcatca tctgctgggg cgggcgcccg agattgcttg ctcggcctgc 2160
gacctggtca acgtggacct ggacgactgc gtttctgagc aataaatgac ttaaaccagg 2220
tatggctgcc gatggttatc ttccagattg gctcgaggac aacctctctg agggcattcg 2280
cgagtggtgg gacctgaaac ctggagcccc gaaacccaaa gccaaccagc aaaagcagga 2340
caacggccgg ggtetggtgc ttcctggcta caagtacctc ggacccttca acggactcga 2400
caagggggag cccgfccaacg cggcggacgc olCJCCfCJCC c t c a, g C 3. C CJ & G 3. aggcctacga 2460
cc agcagctc aaagcgggtg acaatccgta cctgcggtat aaccacgccg acgccgagtt 2520
tcaggagcgt ctgcaagaag atacgtcatt tgggggcaac ctcgggcgag cagtctteca 2580
ggccaagaag cgggttctcg aaccfcctcgg tctggttgag gaaggcgcta agacggctcc 2640
PL 217 623 B1
tgcaaagaag agaccggtag agccgtcacc tcagcgttcc cccgactcct ccacgggcat 2700
cggcaagaaa ggccagcagc ccgccagaaa gagactcaat ttcggtcaga ctggcgactc 2760
agagtcagtc cccgaccctc aacctctcgg agaacctcca gcagcgccct ctagtgtggg 2820
atctggtaca gtggctgcag gcggtggcgc acca&tggca gacaataacg sag9t9ccga 2880
cggagtgggt aatgcctcag gaaattggca ttgcgattcc acatggctgg gegacagagt 2940
cattaccacc agcacccgaa cctgggcect gcce&cctac aacaaccacc tctacaagca 3000
aatctccagt gaaactgcag gtagtaccaa cgacaacacc tacttcggct acagcacccc 3060
ctgggggtat tttgacttta acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg 3120
actcatcaac aacaactggg gattccggcc caagaagctg cggttcaagc tctteaacat 3180
ccaggtcaag gaggtcacga cgaatgacgg cgttacgacc atcgctaata accttaccag 3240
cacgattcag gtattctcgg actcggaata ccagctgccg tacgtcctcg gctctgcgca 3300
ccagggctgc ctgcctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acggctacct 3360
gactctcaac aatggcagtc agtctgtggg acgttcctcc ttctactgcc tggagtactt 3420
cccctctcag atgctgagaa cgggcaacaa ctttgagttc agctacagct tcgaggacgt 3480
gcctttccac agcagctacg cacacagcca gagcctggac cggctgatga atcccctcat 3S40
cgaccagtac ttgtactacc tggccagaac acagagtaac ceaggaggca cagctggcaa 3600
tcgggaactg cagttttacc agggcgggcc ttcaactatg gccgaacaag ccaagaattg 3660
gttacctgga ccttgcttcc ggcaacaaag agtcfcccaaa acgctggatc aaaacaaeaa 3720
cagcaacttt gcttggactg gtgccaccaa atatcacctg aacggcagaa actcgttggt 37B0
taatcccggc gtcgccatgg caactcacaa ggacgacgag gaccgctttt teecatccag 3840
cggagtcctg atttttggaa aaactggagc aactaacaaa actacattgg aaaatgtgtt 3900
aatgacaaat gaagaagaaa ttcgtcctac taatcctgta gccacggaag aatacgggat 3960
agtcagcagc aacttacaag cggctaatac tgcagcccag acaeaagttg tcaacaacca 4020
gggagcctta cctggcatgg tctggcagaa ccgggacgtg tacctgcagg gtcccatctg 4080
ggceaagatt cctcacacgg atggcasctt tcacccgtct cctttgatgg gcggctfctgg 4140
acfctaaacat ccgcctcctc agatcctgat caagaacact cccgttcccg ctaatcctcc 4200
ggaggtgttt actcctgcca agtttgcttc gttcatcaca cagtacagca ccggacaagt 4260
cagcgtggaa atcgagtggg agctgcagaa ggaaaacagc aagcgctgga acccggagat 4320
tcagtacacc tccaactttg aaaagcagac tggtgtggac tttgccgttg acagccaggg 4380
tgtttactct gagcctcgcc ctattggcac tcgttacctc aeeegtaatc tgtaattgca 4440
tgttaatcaa taaaccggtt gattcgtttc agttgaactt tggtctcctg tgcttcttat . 4500
cttatcggtt tccatagcaa ctggttacac attaactgct tgggtgcgct tcacgataag 4560
PL 217 623 B1 aacactgacg tcaccgcggt acccctagtg atggagttgg ccactcccfcc tatgcgcgct 4620 cgctcgctcg gtggggcctg cggaccaaag gtccgcagac ggcagagctc tgctctgccg 4680 gccccaccga gcgagcgagc gcgcatagag ggagtggcca a 4721 <210> 2 <211> 737 <212 > PRT <213> białko kapsydu serotypu 7 wirusa stowarzyszonego a adenowirusem <400> Z
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Siu Asp Asn Leu Ser 1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Siu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn. Gin Gin Lys Gin Asp Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala val Phe Gin Ala Lys Lys Arg val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Ala Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly Gin Gin. Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro 180 IBS 190
Pro Ala Ala Pro Ser Ser Val Gly Ser Gly Thr Val Ala Ala Gly Gly 195 200 205
PL 217 623 B1
aiy Ala 210 Pro Met Ala Asp Asn 215 Asn Glu Qiy Ala Asp 220 Gly Val Giy Asn
Ala 225 Ser Gly Aen TrP His 230 cys Asp Ser Thr Trp 235 Leu Gly Asp Arg Val 240
Ile Thr Thr Ser Thr 245 Arg Thr Trp Ala Leu 250 Pro Thr Tyr Asn Asn 255 His
Leu Tyr Lys Gin 260 Ile Ser Ser Glu Thr 265 Ala Gly Ser Thr Asn 270 Asp Asn
Thr Tyr Phe 275 Gly Tyr Ser Thr Pro 280 Trp Gly Tyr Phe Asp 28Ξ Phe Asn Arg
Phe His 290 Cys His Phe Ser Pro 2 95 Arg Asp Trp Gin Arg 300 Leu Ile Asn Asn
Asn 305 Trp Gly Phe Arg Pro 310 Lys Łys Leu Arg Phe 315 Lys Leu Phe Asn Ile 320
Gin Val Lys Glu Val 325 Thr Thr Asn Asp Gly 330 Val Thr Thr Ile Ala 335 Asn
Asn Leu Thr Ser 340 Thr Ile Gin Val Phe 345 Ser Asp Ser Glu Tyr 350 Gin Leu
Pro Tyr Val 355 Leu Gly Ser Ala His 3S0 Gin Gly Cys Leu Pro 365 Pro Phe Pro
Ala Asp 370 Val Phe Met Ile Pro 375 Gin Tyr Gly Tyr Leu 380 Thr Leu Asn Asn
Gly 385 Ser Gin Ser Val Gly 330 Arg Ser Ser Phe Tyr 335 Cys Leu Glu Tyr Phe 400
Pro Ser Gin Met Leu 405 Arg Thr Gly Asn Asn 410 Phe Glu Phe Ser Tyr 415 Ser
Phe Glu Asp Val 420 Pro Phe His Ser Ser 425 Tyr Ala His Ser Gin 430 Ser Leu
Asp Arg Leu 435 Met Asn Pro Leu Ile 44 0 Asp Gin Tyr Leu Tyr 445 Tyr Leu Ala
Arg 450 Gin Ser Asn Pro Gly 455 Gly Thr Ala Gly Asn 460 Arg Glu Leu Gin
Phe 465 Tyr Gin Gly Gly Pro 470 Ser Thr Met Ala Glu 475 Gin Ala Lys Asn Trp 480
PL 217 623 B1
Leu Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gin Gin Arg Val Ser Lya Thr Leu Asp 485 490 495
Gin Asn Asn Asn Ser Asa Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 510
Len Asn Gly Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile 530 535 540
Phe Gly Lys Thr Gly Ala Thr Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Vał Leu 545 550 555 560
Met Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu 565 570 575
Glu Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala Asn Thr Ala Ala 580 585 590
Gin Thr Gin Val Val Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp 595 600 605
Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro 610 615 620
His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly 625 630 635 640
Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro 645 650 655
Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile 660 665 670
Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu 675 630 635
Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser 690 695 700
Asn Phe Glu Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly 705 710 715 720
Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn 725 730 735
PL 217 623 B1
Leu <210> 3 < 211 > 623 <212> PRT <213> białko rep serotypu 7 wirusa stowarzyszonego s adenowirusem <400> 3
Met Pro Gly Phe Tyr Glu Ile Val Ile Lys Val Pro Ser Asp Leu Asp 15 10 15
Glu His Leu Pro Gly Ile Ser Asp Ser Phe Val Asn Trp Val Ala Glu 20 25 30
Lys Glu Trp Glu Leu Pro Pro Asp Ser Asp Met Asp Leu Asn Leu Ile 35 40 45
Glu Gin Ala Pro Leu Thr Val Ala Glu Lys Leu Gin Arg Asp Phe Leu 50 55 60
Val Gin Trp Arg Arg Val Ser Lye Ala Pro Glu Ala Leu Phe Phe Val 65 70 75 80
Gin Phe Glu Lys Gly Glu Ser Tyr Phe His Leu His Val Leu Val Glu 85 90 95
Thr Thr Gly Val Lys Ser Met Val Leu Gly Arg Phe Leu Ser Gin Ile 100 105 110
Arg Glu Lys Leu Val Gin Thr Ile Tyr Arg Gly Val Glu Pro Thr Leu 115 120 125
Pro Asn Trp Phe Ala Val Thr Lys Thr Arg Asn Gly Ala Gly Gly Gly 130 135 140
Asn Lys Val Val Asp Glu Cys Tyr Ile Pro Asn Tyr Leu Leu Pro Lys 145 150 155 ISO
Thr Gin Pro Glu Leu Gin Trp Ala Trp Thr Asn Met Glu Glu Tyr Ile 165 170 175
Ser Ala Cys Leu Asn Leu Ala Glu Arg Lys Arg Leu Val Ala Gin His 180 185 190
Leu Thr His Val Ser Gin Thr Gin Glu Gin Asn Lys Glu Aen Leu Asn 195 200 205
Pro Aan Ser Asp Ala Pro Val Ile Arg Ser Lys Thr Ser Ala Arg Tyr 210 215 220
PL 217 623 B1
Met Glu Leu Val Gly Trp Leu Val Asp Arg Gly ile Thr Ser Glu Lys
225 230 235 240
Gin Trp Ile Gin. Glu Asp Gin Ala Ser Tyr Ile Ser Phe Asn Ala Ala
245 250 255
Ser Asn Ser Arg Ser Gin Ile Lys Ala Ala Leu Asp Asn Ala Gly Lys 2S0 265 270
Ile Met Ala Leu Thr Lys Ser Ala Pro Asp Tyr Leu Val Gly Pro Ser 275 280 285
Leu Pro Ala Asp Ile Lys Thr Asn Arg Ile Tyr Arg Ile Leu Glu Leu 290 295 300
Asn Gly Tyr Asp Pro Ala Tyr Ala Gly Ser Val Phe Leu Gly Trp Ala 305 310 315 320
Gin Lys Lys Phe Gly Lys Arg Asn Thr Ile Trp Leu Phe Gly Pro Ala 325 330 335
Thr Thr Gly Lys Thr Asn Ile Ala Glu Ala Ile Ala His Ala Val Pro 340 345 350
Phe Tyr Gly Cys Val Asn Trp Thr Asn Glu Asn Phe Pro Phe Asn Asp 355 360 3S5
Cys Val Asp Lys Met Val Ile Trp Trp Glu Glu Gly Lys Met Thr Ala 370 375 380
Lys val val Glu Ser Ala Lys Ala Ile Leu Gly Gly Ser Lys Val Arg 385 390 395 400
Val Asp Gin Lys Cys Lys Ser Ser Ala Gin Ile Asp Pro Thr Pro Val 405 410 415
Ile Val Thr Ser Asn Thr Asn Met Cys Ala Val Ile Asp Gly Asn Ser 420 425 430
Thr Thr Phe Glu His Gin Gin Pro Leu Gin Asp Arg Met Phe Lys Phe 435 440 445
Glu Leu Thr Arg Arg Leu Glu His Asp Phe Gly Lys Val Thr Lys Gin 450 455 460
Glu Val Lys Glu Phe Phe Arg Trp Ala Ser Asp His Val Thr Glu Val 465 470 475 480
PL 217 623 B1
Ala His Glu Phe Tyr 485 Val Arg Lys ciy Gly 490 Ala Ser Lys Arg Pro 495 Ala
Pro Asp Asp Ala 500 Asp Ile Ser Glu Pro 505 Lys Arg Ala Cys Pro 510 Ser Val
Ala Asp Pro 515 Ser Thr Ser Asp Al ęŁ 520 Glu Gly Ala Pro val 525 Asp Phe Ala
Asp Arg 530 Tyr Gin Asn Lys Cys Ser Arg Ala Gly 540 Met Ile Gin Met
Leu 545 Phe Pro Cys Lys Thr 550 Cys Glu Arg Met Asn 555 Gin Asn Phe Asn Ile 560
Cys Phe Thr Hr s Gly 565 Val Arg Asp Cys Leu 570 Glu cys Phe Pro Gly 575 Val
Ser Glu Ser Gin 580 Pro Val val Arg Lys 585 Lys Thr Tyr Arg Lys 590 Leu Cys
Ala Ile His 595 His Leu Leu Gly Arg 600 Ala Pro Glu Ile Ala 605 Cys Ser Ala
cys Asp Leu Val Asn Val Asp Leu Asp Asp cys Val Ser Glu Gin
610 615 620 <210> 4 <211> 4393 <212> DNA <2Ι3> serotyp 8 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 4
cagagaggga gtggccaact ccatcactag gggtagcgcg a&gcgcctce cacgctgccg 60
cgtcagcgct gacgtaaatt acgtcatagg ggagtggtcc tgtattagct gtcacgtgag 120
tgcttttgcg gcattttgcg acaccacgtg gccatttgag gtatatatgg ccgagtgagc 180
gagcaggatc tccattttga ocgcgaaatt tgaacgagca gcagccatgc cgggcttcta 240
cgagatcgtg atcaaggtgc cgagcgacct ggacgagcac ctgccgggca tttctgactc 300
gtt tgtgaac tgggtggccg agaaggaatg ggagctgccc ccggattctg acatggatcg 360
gaatctgatc gagcaggcac ccctgaccgt ggccgagaag ctgcagcgcg acttcctggt 420
ccaatggcgc cgcgtgagta eicjcyc c c 3, gg ccctcttc tttgttcagt tcgagaaggg 480
cgagagctac tttcacctgc acgtfcctggt cgagaccacg ggggtcaagt ccatggtgct 540
aggccgcttc ctgagtcaga ttcgggaaaa gcttggtcca gaccatctac ccgcggggtc 600
gagccccacc ttgcecaact ggttcgcggt gaccaaagac gcggtaatgg cgccggcggg 660
PL 217 623 B1
ggggaacaag gtggtggacg agtgctacat ccccaactac ctcctgccca agactcagcc 720
cgagctgcag tgggcgtgga ctaacatgga ggagtatata agcgcgtgct tgaacctggc 780
cgagcgcaaa cggctcgtgg cgcagcacct gacccacgt c agccagacgc agcjagcagaa 840
caaggagaat ctgaacccca attctgacgc gcccgtgatc aggtcaaaaa cctccgcgcg 900
ctatatggag ctggtegggt ggctggtgga ccggggcatc a c c t c cgag a agcagfcggat 960
ccaggaggac caggcctcgt acatchcctt caacgccgcc tccaactcgc ggtcccagat 1020
caaggccgcg ctggacaatg ccggcaagat catggcgctg accaaatccg cgcccgacta 1080
cctggtgggg C C 1 C ccgcggacat tacccagaac cgcatctacc gcatcctcgc 114 0
tctcaacggc tacgaccctg cctacgccgg ctccgtcttt ctcggctggg ctcagaaaaa 1200
gttcgggaaa cgcaacacca Łctggctgtt tggacccgcc accaccggca agaccaacat 1260
tgcggaagcc atcgcccacg ccgtgccctt ctacggctgc gtcaactgga ccaatgagaa 1320
ctttcccttc aatgattgcg tcgacaagać ggtgafcctgg tgggaggagg gcaagatgac 1380
ggccaaggtc gtggagtccg ccaaggccat tctcggcggc agcaaggtgc gcgtggacca 1440
aaagtgcaag tcgtccgccc agatcgaccc cacccccgtg atcgtcacct ccaacaccaa 1500
catgtgcgcc gtgattgacg ggaacagcac caccttcgag caccagcagc ctctccagga 1560
ccggatgttt aagttcgaac tcacccgccg tctggagcac gactttggca aggtgacaaa 1620
gcaggaagtc aaagagttct tccgctgggc cagtgatcac gtgaccgagg tggcgcatga 1680
gfctttacgtc agaaagggcg gagccagcaa aagacccgcc cccgatgacg cggataaaag 1740
cgagcccaag cgggcctgcc cctcagtcgc ggatccatcg acgtcagacg cggaaggagc 1800
tccggtggac tttgccgaca ggtaccaaaa caaatgttct cgtcacgcgg gcatgcttca 1B60
gatgctgttt ccctgcaaaa cgtgcgagag aatgaatcag aatttcaaca tttgcttcac 1920
acacggggtc agagactgct cagagtgttt ccccggcgtg tcagaatctc aaccggtegt 1980
cagaaagagg acgtatcgga aactctgtgc gattcatcat ctgctggggc gggctcccga 2040
gattgcttgc tcggcctgcg atctggtcaa cgtggacctg gatgactgtg tttctgagca 2100
ataaatgact taaaccaggt atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca 2160
acetctctga gggcattcgc gagtggtggg cgctgaaacc tggagccccg aagcccaaag 2220
ccaaccagca C O cy CZf cy t c t gg t g c t tcctggctac aagtacctcg 2280
gacccttcaa cggactcgac aagggggagc ccgtcaacgc ggcggacgca gcggccctcg 2340
agcacgacaa ggcctacgac cagcagctgc aggcgggtga caatccgtac ctgcggtata 2400
accacgccga cgccgagttt caggagcgtc tgcaagaaga tacgtctttt gggggcsacc 24 60
tcgggcgage agtcttccag gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggttgagg 2 520
aaggcgctaa gacggctcct ggaaagaaga gaccggtaga gccatcaccc cagcgttctc 2580
PL 217 623 B1
cagactcctc tacgggcatc ggcaagaaag gccaacagcc cgccagaaaa agactcaatt 2640
ttggtcagac tggcgactca gagtcagttc cagaccctca acctctcgga gaacctccag 2700
cagcgcectc tggtgtggga cctaatacaa tggctgcagg cggtggcgca ccaatggcag 2750
acaataaega aggcgccgac ggagtgggta gttcctcggg aaattggcat tgcgattcca 2820
catggctggg cgacagagtc atcaccacca gcacccgaac ctgggccctg cccacctaca 2880
acaaccacct ctacaagcaa atctccaacg ggacatcggg aggagccacc aacgacaaca 2940
cctacttcgg ctacageacc ccctgggggt attttgactt taacagattc cactgccact 3000
tttcaceacg hgactggcag cgactcs.ca acaacaactg gggattccgg cccaagagac 3050
tcagcttcaa gctcttcaac atccaggtca aggaggtcac gcagaatgaa ggcaccaaga 3120
ccatcgccaa taacctcacc agcaccatcc aggtgtttac ggactcggag taccagctgc 3180
cgtacgtfcct cggctctgcc iu (u tu ca C—j c| cj c: L. gcctgcctcc gttcccggcg gacgtgttca 3240
tgattcccca gtacggctac ctaacactea acaacggfcag tcaggccgtg ggacgctcct 3300
ccttctactg cctggaatac tttccttcgc agatgctgag aaccggcaac aacttccagt 3360
ttacttacac cttcgaggac gtgcctttcc acagcagcta cgcccacagc cagagcttgg 3420
accggctgat gaatcctctg attgaccagt acctgtacta cttgtctcgg actcaaacaa 3480
caggaggcac ggcaaatacg cagactctgg gcttcagcca aggtgggcct aatacaatgg 3540
ccaatcaggc aaagaacfcgg ctgccaggac cctgttaccg ccaacaacgc gtctcaacga 3600
caaccgggca aaacaacaat agcaactttg cctggactgc tgggaccaaa taccatctga 3660
atggaagaaa ttcattggct aatcctggca tcgctatggc aacacacaaa gacgacgagg 3720
agcgtttttt tcccagtaac gggatcctga tttttggcaa acaaaatgct gccagagaca 3780
atgcggatta cagcgatgtc atgctcacca gcgaggaaga aatcaaaacc actaaccctg 3840
tggctacaga ggaatacggt atcgtggcag ataacttgca gcagcaaaac acggctcctc 3900
aaattggaac tgtcaacagc cagggggcct tacccggtat 99tctggcag aaccgggacg 3960
t gt acctgca gggtcccatc tgggccaaga ttcctcacac gg&cggc&ćtc ttccacccgt 4020
ctccgctgat gggcggcttt ggcctgaaac atcctccgcc tcagatcctg atcaagaaca 4080
cgcctgtacc tgcggatcct ccgaccacct tcaaccagtc aaagctgaac tctttcatca 4140
cgcaatacag esc c gtcagcgtgg ^k. kk U ggagctgcag aaggaaaaca 4200
gcaagcgctg gaaccccgag atccagtaca cctccaacta ctacaaatct acaagtgtgg 4260
actttgctgt taatacagaa ggcgtgtact ctgaaccccg ccccattggc acccgttacc 4320
tcacccgt aa tctgtaattg cct^ttaatc aataaaccgg ttgafctcgtt tcagttgaac 4380
tttggtctct gcg 4393
PL 217 623 B1 <210> 5 <211> 4385 <212> DNA <213> serotyp 9 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 5
cagagaggga gtggccaact ccafccactag gggtaatcgc gaagcgcctc ccacgctgcc 50
gogtcagcgc tgacgtagat tacgtcatag gggagtggtc ctgtattagc tgtcacgtga 12 0
gtgcttttgc gacattttgc gaeaccacat ggccatttga ggtatatatg gecgagtgag ISO
cgagcaggat ctccattttg accgcgaaat ttgaacgagc agcagccatg ccgggcttct 240
acgagattgt gatcaaggtg ccgagcgacc tggacgagca cctgccgggc atttctgact 300
cttttgtgaa ctgggtggcc gagaaggaat gggagctgcc cccggattct gacatggatc 360
ggaatctgat cgagcaggca cccctgaccg t ggc cgagaa gctgcagcgc gacttcctgg 420
tccaatggcg ccgcgtgagt aaggccccgg aggccctctt ctttgttcag ttcgagaagg 480
gcgagagcta ctttcacctg cacgttctgg tcgagaccac gggggtcaag tccatggtgc 540
taggccgctt cctgagtcag attcgggaga agctggtcca gaccatctac cgcgggatcg 600
agccgaccct gcccaactgg ttcgcggtga ccaagacgcg taatggegcc ggcgggggga 660
acaaggtggt ggacgagtgc tacatcccca actacctcct gcccaagact cagcccgagc 72 0
tgcagtgggc gtggactaac atggaggagt at ataagcgc gtgcttgaac ctggccgagc 780
gcaaacggct cgtggcgcag cacctgaccc acgtcagcca gacgcaggag cagaacaagg 84 0
agaatctgaa ccccaattct gacgcgcccg tgatcaggtc aaaaacctcc gcgcgctaca 900
tggagctggt cgggtggctg gtggaccggg gcatcacctc cgagaagcag tggatccagg 960
aggaccaggc ctcgtacatc tccttcaacg ccgcctccaa ctcgcggtcc cagatcaagg 1020
ccgcgctgga caatgccggc aagatcatgg cgctgaccaa atccgcgccc gactacctgg 1080
taggcccttc acttccggtg gacattacge agaaccgcat ctaccgcatc ctgcagctca 1140
acggctacga ccctgcctac gccggctccg tctttctcgg ctgggcacaa aagaagttcg 1200
ggaaacgcaa caccatctgg ctgtttgggc cggccaccac gggaaagacc aacatcgcag 1260
aagccattgc ccacgccgtg cccttctacg gctgcgtcaa ctggaccaat gagaactttc 1320
ccttcaacga ttgcgtcgac aagatggtga tetggfcggga ggagggcaag atgacggcca 1380
aggtcgtgga gtccgccaag gccattctcg scggcagcaa ggtgcgcgtg gaccaaaagt 1440
gcaagtcgtc cgcccagatc gaccccactc ccgtgatcgt cacctccaac accaaeatgt 1500
gcgccgtgat tgacgggaac agcaceacct tcgagcacca geagccfcctc caggaccgga 1560
tgtttaagtt cgaact c acc cgccgtctgg agcacgactt tggcaaggtg acaaagcagg 1620
aagtcaaaga gttcttccgc tgggccagtg atcacgtgac cgaggtggcg catgagtttt 1680
acgtcagaaa gggcggagcc (zi* (z (zł a ća ja ol cz ccgcccccga tgacgcggat aaaagcgagc 1740
PL 217 623 B1
ccaagcgggc ctgcccctca gtcgcggatc r· a Ψ· z» L—· t- L-· ¢3- L- H—| L- t— cl cl 0 £[ C ξ-J ot cl ggagctccgg 1800
tggactttgę cgacaggtac caaaacaaat gttctcgtca cgcgggcatg cttcagatgc 1860
tgcttccctg caaaacgtgc gagagaatga atcagaattt caacatttgc ttcacacacg 1920
gggtcagaga ctgctcagag tgtttccccg gcgtgtcaga atctcaaccg gtcgfccagaa 1980
agaggacgta tcggaaactc tgtgcgattc 3 Ελ i ł-ct1 Ή ¢3.1— C3> L- L— LJμ. ggggcgggcfc cccgagattg 2040
cttgctcggc ctgcgatctg gtcaacgtgg acctggatga ctgtgtttct gagcaataaa 2100
tgacttaaac caggtatgge tgccgatggt tatcttccag attggctcga ggacaaccfcc 2150
tetgagggca ttcgegagtg gfcgggcgctg aaacctggag ccccgaagcc caaagccaac 2220
cagcaaaagc aggacgacgg ccggggtctg gtgcttcctg gctacaagta cctcggaccc 2280
ttcaacggac tcgacaaggg ggagcccgtc aacgcggcgg acgcagcggc cctcgagcac 2340
ggcaaggcct acgaccagca gctgcaggcg ggtgacaatc cgtacctgcg gtataaccac 2400
gccgacgccg agtttcagga gcgtctgcaa gaagatacgt cttttggggg caaccfccggg 2460
cgagcagtct tccaggccaa gaagcgggtt ctcgaacctc tcggtctggt tgaggaaggc 2520
gctaagacgg ctcctggaaa gaagagaccg gtagagccat caccccagcg ttctccagac 25S0
tcctctacgg gcatcggcaa gaaaggecaa cagcccgcca gaaaaagact caatfcttggt 2640
cagactggcg actcagagtc agttccagac cctcaacctc tcggagaacc tccagcagcg 2700
ccctctggtg tgggacctaa tacaatggct gcaggcggtg gcgcaccaat ggcagacaat 2750
aacgaaggcg ccgacggagt gggtaat tcc tcgggaaatt ggcattgcga ttccacatgg 2820
ctgggggaca gagtcatcac caccagcacc cgaacctggg cattgcccac ctacaacaae 2880
cacctctaca agcaaatctc caatggaaca tcgggaggaa gcaccaacga caacacctac 2940
tttggctaca gcaccccctg ggggtatttt gacttcaaca gattccactg ccacttotca 3000
ccacgtgact ggcagcgact catcaacaac aactggggat tccggccaaa gagactcaac 3060
ttcaagctgt tcaacatcca ggtcaaggag gttacgacga acgaaggcac caagaccatc 3120
gccaataacc ttaccagcac cgtccaggtc tttacggact cggagtacca gctaccgtac 3180
gtcctaggct ctgcccacca aggatgcctg ccaccgtttc etgcagacgt cttcatggtt 3240
cctcagfcacg gctaccfcgac gctcaacaat ggaagtcaag cgttaggacg ttcttctttc 3300
tactgtctgg aatacttccc ttctcagatg ctgagaaccg gcaacaactt tcagttcagc 3360
tacactttcg aggacgtgcc tttccacagc agctacgcac acagccagag tctagatcga 3420
ctgatgaacc ccctcatcga ccagtaccta tactacctgg tcagaacaca gacaactgga 3480
actgggggaa ctcaaaettt ggcattcagc caagcaggcc ctagctcaat ggccaatcag 3540
gctagaaact gggtacccgg gccttgctac cgtcagcagc gcgtctccac aaccaccaac 3600
caaaataaca acagcaactt tgcgtggacg ggagctgcta aattcaagct gaacgggaga 3660
PL 217 623 B1
gactcgctaa tgaatcctgg c g t gg c t a t c/ gcatcgcaca aagacgacga ggaccgcttc 3720
tttccatcaa gtggcgttct catatttggc aagcaaggag ccgggaacga tggagtcgac 3780
tacagccagg tgctgattac agatgaggaa gaaattaaag ccacca&ccc tgtagccaca 3840
gaggaatacg gagcagtggc catcaacaac caggccgcta acacgcaggc gcaaactgga 3900
cttgtgcata accagggagt tattcctggt atggtctggc agaaccggga cgtgtacctg 3960
cagggcccta 1ttgggc taa aatacctcac acagatggca actttcaccc gtctcctctg 4020
atgggtggat ttggactgaa acaeccacct ccacagattc t a. a tt tacaccagtg 4080
ccggcagatc ctcctcttae cttcaatcaa gccaagctga actctttcat cacgcagtac 4140
agcacgggac aagtcagcgt ggaaatcgag tgggagctgc Π ci SIC/cl cagcaagcgc 4200
tggaatccag agatccagta tacttcaaac tactacaaat ctacaaatgt ggactttgct 4260
gtcaatacca aaggtgttta ctctgagcct cgccccattg gtactcgtta cctcacccgt 4320
aafcttgtaat tgcctgttaa tcaataaacc ggttaattcg tttcagttga actttggtct 4380
ctgcg 4365 <210> 6 <211> 4718
<212> DNA <213> serotyp 1 wirusa stowarzyszonego z adenowirusetn
<400> 6 ttgcccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcggtgggg cctgcggacc aaaggtccgc 60
agacggcaga gctctgctct gccggcccca ccgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 12 0
ggcaactcca tcactagggg taatcgcgaa gcgcctccca cgctgccgcg tcagcgctga 180
cgtaaattac gtcatagggg agtggtcctg tattagctgt cacgtgagtg cttttgcgac 240
attttgcgac accacgtggc catttagggt atatatggcc gagtgagcga gcaggatctc 300
cattttgacc gcgaaatttg aacgagcagc agccatgccg ggcttctacg agatcgtgat 360
caaggtgccg agcgacctgg acgagcacct gccgggcatt tctgactcgt ttgtgagctg 420
ggtggccgag aaggaatggg agctgccccc ggattctgac atggatctga atctgattga 480
gcaggcaccc ctgaecgtgg ccgagaagct gcagcgcgac tfccctggtcc aatggcgccg 540
cgtgagtaag gccccggagg ccctcttctt tgttcagttc gagaagggcg agtcctactt 600
ccacctccat attetggtgg agaccacggg ggtcaaatcc atggtgctgg gccgctfccct 660
gagtcagatt agggacaagc tggtgcagac catctaccgc gggatcgagc cgaccctgcc 720
c aactggttc gcggtgacca agacgcgtaa tggcgcegga ggggggaaca aggtggtgga 760
cgagtgctac atccccaact accfccctgcc caagactcag cccgagctgc agtgggcgtg 840
cf cic t cŁticx ci 1 cf gaggagfcata taagcgcctg tttgaacctg g c c ej a.cj c g c a. aacggctcgt 900
ggcgcagcac ctgacccacg tcagccagac ccaggagcag aacaaggaga afcctgaaccc 960
PL 217 623 B1
caattctgac gcgcctgtca tccggtcaaa aacctccgcg cgctacatgg agctggtcgg 1020
gtggctggtg gaccggggca tcacctccga gaagcagtgg atccaggagg accaggcctc 1080
gtacatctcc ttcaacgccg cttccaactc gcggtcccag atcaaggccg ctctggacaa '' 1140
tgccggcaag atcatggcgc tgaccaaatc cgcgcccgac tacctggtag gccccgctcc 1200
gcccgcggac attaaaacca accgcatcta ccgcatcctg gagctgaacg gctacgaacc 1260
tgcctacgcc ggctccgtct ttctcggctg ggcecagaaa aggttcggga agcgcaacac 1320
catctggctg tttgggccgg ccaccacggg caagaccaac atcgcggaag ccatcgccca 13 80
cgccgtgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag aactttccct tcaatgattg 1440
cgfccgacaag atggtgatct ggtgggagga gggcaagatg acggccaagg tcgtggagtc 1500
i™* Lj t— d. cx^j Lr L? attctcggcg gcagcaaggt gcgcgtggac caaaagtgca agtcgtccgc 1560
ccagatcgac cccacccccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 1620
cgggaacagc accaccttcg agcaccagca gccgttgcag gaccggatgt tcaaatttga 1680
actcacccgc cgtctggagc atgactttgg caaggtgaca aagcaggaag tcaaagagtt 1740
cttccgctgg gcgcaggatc acgtgaccga sgtggcgcat gagttctacg tcagaaaggg 1800
tggagccaac aaaagacccg cccccgatga cgcggataaa agcgagccca agcgsracctg 1860
cccctcagtc gcggatccat cgacgtcaga cgcggaagga gctccggtgg actttgccga 1920
caggtaccaa aacaaatgtt ctcgtcacgc gggcatgctt cagatgctgt ttccctgcaa 1980
gacatgcgag agaatgaatc agaatttcaa catttgcttc acgcacggga cgagagactg 2040
ttcagagtgc ttccccggcg tgtcagaatc tcaaccggtc gtcagaaaga ggacgtatcg 2100
gaaactctgt gccattcatc atctgctggg gcgggctccc gagattgctt gctcggcctg 2160
cgatctggtc aacgtggacc tggatgactg tgtttctgag caataaatga cttaaaccag 2220
gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga caacctctct gagggcattc 2280
gcgagtggtg ggacttgaaa ccfcggagccc cgaagcccaa agccaaccag caaaagcagg 2340
acgacggccg gggtctggtg cttcctggct acaagtacct cggacccttc aacggactcg 2400
acaaggggga gcccgtcaac gcggcggacg cagcggccct cgagcacgac aaggcctacg 2460
accagcagct caaagcgggt gacaatccgt acctgcggta taaccacgcc gacgccgagt 2520
ttcaggagcg tctgcaagaa gatacgtctt ttgggggcaa cctcgggcga gcagtcttcc 2580
aggccaagaa gcgggttctc gaacctctcg gtctggttga ggaaggcgct aagacggctc 2640
ctggaaagaa acgtccggta gagcagtcgc cacaagagcc agactcctcc tcgggcatcg 2700
gcaagacagg ccagcagccc gctaaaaaga gactcaattt tggtcagact ggcgactcag 2760
agtcagtccc cgatccacaa cctctcggag aacctccagc aacccccgct gctgtgggac 2820
ctaetacaat ggcttcaggc ggtggcgcac caatggcaga caataacgaa ggcgccgacg 2880
PL 217 623 B1
gagtgggtaa tgcctcagga aattggcafct gcgattccac atggctgggc gacagagtca 2940
tcaccaccag cacccgcacc tgggccttgc ccacctacaa taaccacctc tacaagcaaa 3000
tctccagtgc ttcaacgggg gccagcaacg acaaccacta cttcggctac agcaccccct 3060
gggggtattt tgatttcaac agattccact gccacttttc accacgtgac tggcagcgac 3120
t c a t c aa caattgggga fcfcccggccca agagactcaa cttcaaactc ttcaacatcc 3180
aagtcaagga ggtcacgacg aatgatggcg tcacaaccat cgctaataac cttaccagca 3240
cggttcaagt cttctcggac tcggagtacc agcttccgta cgtcctcggc tctgcgcacc 3300
agggctgcct ccctccgttc ccggcggacg tgttcatgat tccgcaatac ggctacctga 3360
cgctcaacaa tggcagccaa gccgtgggac gttcatcctt ttactgcctg gaatatttcc 3420
cttctcagat gctgagaacg ggcaacaact ttaccttcag ctacaccttt gaggaagtgc 3480
ctttccacag cagctacgcg cacagccaga gcctggaccg gcfcgatgaat cctctcatcg 3540
accaatacct gtattacctg aacagaactc aaaatcagtc cggaagtgcc caaaacaagg 3S00
acttgctgtt tagccgtggg tctccagctg gcatgtctgt tcagcccaaa aactggctac 3660
ctggaccctg ttatcggcag cagcgcgttt ctaaaacaaa aacagacaac aacaacagca 3720
attttacctg gactggtgct tcaaaatata acctcaatgg gcgtgaatcc atcatcaacc 3780
ctggcactgc tatggcctca cacaaagacg acgaagacaa gttctttccc atgagcggtg 3840
tcatgatttt tggaaaagag sgcgccggag cttcaaacac tgcafctggac aatgtcatga 3900
ttacagacga agaggaaatt aaagccacta accctgtggc caccgaaaga tttgggaccg 3960
tggcagtcaa tttccagagc agcagcacag accctgcgac cggagatgtg catgctatgg 4020
gagcattacc tggcatggtg tggcaagata gagacgtgta cctgcagggt cccattfcggg 4080
ccaaaattcc tcacacagat ggacactttc acccgtctcc tcttatgggc ggctttggac 4140
tcaagaacce gcctcctcag atcctcatca aaaacacgcc tgttcctgcg aatcctccgg 4200
cggagttttc agctacaaag tttgcttcat tcatcaccca atactccaca ggacaagtga 4260
gtgfcggaaat tgaatgggag ctgcagaaag aaaacagcaa gcgctggaat cccgaagtge 4320
agtacacatc caattatgca aaatctgcca acgttgafctfc tactgtggac aacaatggac 4380
tttatactga gcctcgcccc attggcaccc gfctaccttae ccgtcccctg taattacgtg 4440
ttaatcaata aaccggttga ttcgtfctcag ttgaactttg gtctcctgtc cttcttatct 4500
tatcggttac catggttata gcttacacat taactgcttg gttgcgctfcc gcgataaaag 4560
acttacgtca tcgggttacc cctagtgatg gagttgccca ct c c c t c t c t gcgcgctcgc 4620
tcgctcggtg gggcctgcgg accaaaggtc cgcagacggc agagctctgc tctgccggcc 4680
ccaccgagcg agcgagcgcg cagagaggga gtgggcaa 4718
PL 217 623 B1 <21G> 7 <211> 4675 <212> DKĄ <213> serotyp 2 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 7
ttggccactc cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc 60
cgacgcccgg gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg 120
gccaactcca tcactagggg ttcctggagg ggtggagtcg tgacgtgaat tacgtcatag 180
ggttagggag gtcctgtatt agaggtcacg tgagtgtttt gcgacatttt gcgacaccat 240
gtggfccacgc tgggtattta agcccgagtg agcacgcagg gtctccatfct tgaagcggga 300
ggtttgaacg cgcagccgce atgccggggt tttacgagat tgtgattaag gtccccagcg 360
accttgacgg gcatctgccc ggcatttctg acagctttgt gaactgggtg gccgagaagg 420
aatgggagtt gccgccagat tctgacatgg atctgaatct gattgagcag gcacccctga 430
ccgtggccga gaagctgcag cgcgactttc tgacggaatg gcgccgtgtg agtaaggccc 540
cggaggccct tttctttgtg caatttgaga agggagagag ctacttccac atgcacgtgc eoo
tcgtggaaac caccggggtg aaatccatgg ttttgggacg tttcctgagt cagattcgcg S60
aaaaactgat tcagagaatt taccgcggga tcgagccgac tttgccaaac tggttcgcgg 720
tcacaaagac cagaaatggc gccggaggcg ggaacaaggt ggtggatgag tgctacatcc 780
ccaattactt gctccccaaa acccagcctg agctccagtg ggcgtggact aatatggaac 840
agtatttaag cgcctgtttg aatctcacgg agcgtaaacg gttggtggcg cagcatctga 900
cgcacgtgtc gcagacgcag gagcagaaca aagagaatca gaatcccaat tctgatgcgc 960
cggtgatcag atcaaaaact tcagccaggt acatggagct ggtcgggtgg ctcgtggaca 1020
aggggattac ctcggagaag cagtggatcc aggaggacca ggcctcatac atctccttca 1030
atgcggcctc caactcgcgg tcccaaatca aggctgcctt ggacaatgcg ggaaagatta 1140
tgagcctgac taaaaccgcc cccgactacc tggtgggcca gcagcccgtg gaggacattt 1200
ccagcaatcg gatttataaa attttggaac taaacgggta cgatccccaa tatgcggctt 1260
ccgtctttcfc gggatgggcc acgaaaaagt tcggcaagag gaacaccatc tggctgtttg 1320
ggcctgcaac taccgggaag accaacatcg cggaggccat agcccacact gtgcccttct 13 6 0
acgggtgcgfc aaactggacc aatgagaact t1 c cc11 caa cgactgtgtc gacaagatgg 144 0
tgatctggtg ggaggagggg aagatgaccg ccaaggtcgt ggagtcggcc aaagccattc 1500
tcggaggaag caaggtgcgc gtggaccaga aatgcaagtc ctcggcccag atagacccga 156 o
ctcccgtgat cgtcacctcc aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg aactcaacga 162 0
ccttcgaaca ccagcagccg ttgcaagacc ggatgttcaa atttgaactc aeccgccgtc 1680
tggatcatga ctttgggaag gtcaccaagc aggaagtcaa agactttttc cggtgggcaa 1740
PL 217 623 B1
aggatcacgt ggttgaggtg gagcatgaat tctacgtcaa aaagggtgga cL 1800
gacccgcccc cagtgacgca gatataagtg agcccaaacg ggtgcgcgag tcagttgcgc 1860
agccatcgac gfccagacgcg gaagcttcga tcaactacgc agacaggtac caaaacaaat 1920
gttctcgtca cgtgggcatg aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga 1980
atcagaattc aaatatctgc ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg 2040
tgtcagaatc tcaacccgtt tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc 2100
atcatatcat gggaaaggtg ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt 2160
tggatgactg catctttgaa caataaatga tttaaatcag gtatggctgc cgatggttat 2220
cttccagatt ggctcgagga cactctctcfc gaaggaataa gacagtggtg gaagctcaaa 2290
cctggcccac caccaccaaa gcccgcagag cggcataagg acgacagcag gggtcttgtg 2340
cttcctgggt acaagtacct cggacccttc aacggactcg acaagggaga gccggtcaac 2400
gaggcagacg ccgcggccct cgagcacgta caaagcctac gaccggcagc tcgacagcgg 2460
agacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgcggag tttcaggagc gccttaaaga 2520
agafcacgtct tttgggggca acctcggacg agcagtcttc caggcgaaaa agagggttct 2580
tgaacctctg ggcctggttg aggaacctgt taagacggct ccgggaaaaa agaggccggt 2640
agagcactct cctgtggagc cagactcctc ctogggaacc ggaaaggcgg gccagcagcc 2700
tgcaagaaaa agattgaatt ttggtcagac tggagacgca gactcagtac ctgaececca 2760
gcctctcgga cagccaccag cagccccctc tggtctggga actaatacga tggctacagg 2820
cagtggcgca ccaatggcag acaataacga gggcgccgac ggagtgggta attcctccgg 2830
aaattggcat tgcgattcca catggatggg cgacagagtc atcaccacca gcacccgaac 2940
ctgggccctg cccacctaca acaaccacct ctacaaacaa atttccagcc aatcaggagc 3000
ctcgaacgac aatcactact ttggctacag caccccttgg gggtattttg acttcaacag 3060
attccactgc cacttttcac cacgtgactg gcaaagactc atcaacaaca actggggatt 3120
ccgacccaag agactcaact tcaagctctt taacattcaa gtcaaagagg tcacgcagaa 3180
fcgacggtaeg acgacgattg ccaataacct taccagcacg gttcaggtgt fctactgactc 3240
ggagtaccag ctcccgtacg tcctcggctc ggcgcatcaa ggatgcctcc cgccgttccc 3300
agcagacgtc ttcatggtgc cacagtatgg ataectcacc ctgaacaacg ggagtcaggc 3360
agtaggacgc tcttcatttt actgcctgga gtactttcct tctcagatgc tgcgtaccgg 3420
aaacaacttt accttcagct acacttttga ggacgttcct ttccacagea gctacgctca 3480
cagccagagt ctggaccgtc tcatgaatcc tctcatcgac cagtacctgt attacttgag 3540
C «tej a.sę sasc actccaagtg gaaccaccac gcagtcaagg cttcagtttt ctcaggc cgg 3600
agcgagtgac attcgggacc agtctaggaa ctggcttcct ggaccctgtt accgccagca 3660
PL 217 623 B1
gcgagtatca aagacatctg cggataaeaa caacagtgaa tactcgtgga ctggagctac 3720
caagtaccaę ctcaatggca gagactctct ggtgaatccg gccatggcaa gecacaagga 3780
cgatgaagaa aagttttttc ctcagagcgg ggttctcatc tttgggaagc aaggctcaga 3640
gaaaacaaat gtgaacattg aaaaggtcat gat ta cagac gaagaggaaa tcggaacaac 3900
caatcccgtg gctacggagc agtatggtfcc tgtatctacc aacctccaga gaggcaacag 3960
acaagcagct accgcagatg tcaacacaca aggcgttctt ccaggcatgg tctggcagga 4020
cagagatgtg taccttcagg ggcccatctg ggcaaagatt ccacacacgg acggacattt 4080
tcacccctct cccctcatgg gtggattcgg acttaaacac cctcctccac agattctcat 4140
caagaacacc ccggtacctg cgaatccttc gaccaccttc agtgcggcaa a9tttgcttc 4200
cttcatcaca cagtactcca cgggacacgg fccagcgtgga gatcgagtgg Sagctgcaga 4260
aggaaaacag caaacgctgg aatcccgaaa ttcagtacac ttccaactac aacaagtctg 4320
ttaatcgtgg acttaccgtg t sic t ćj^^t g gcgtgtattc agagcctcgc cccattggca 4380
ccagatacct gactcgtaat ctgtaattgc ttgttaatca ataaaccgtt taattcgttt 4440
cagttgaact ttggtctctg cgtatttctt tcttatctag tttccatggc tacgtagata 4500
agtagcatgg cgggttaatc attaactaca aggaacccct agtgatggag ttggccactc 4560
cctctctgcg cgctcgctcg ctcactgagg ccgggcgacc aaaggtcgcc cgacgcccgg 4620
gctttgcccg ggcggcctca gtgagcgagc gagcgcgcag agagggagtg gccaa 4675
<210> 8 <211> 4726 <212> DNA <213> serotyp 3 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 8
ttggccactc cctctatgcg cactcgctcg ctcggtgggg cctggcgacc aaaggtcgcc 60
agacggacgt gctttgcacg tccggcccca ccgagcgagc gagtgcgcat agagggagtg 120
gccaactcca tcactagagg tatggcagtg acgtaacgcg aagcgcgcga agcgagacca 180
cgcctaccag ctgcgtcagc agtcaggtga cccttttgcg acagtttgcg acaccacgtg 24 0
gccgctgagg gtatatattc tcgagtgagc gaaccaggag ctccattttg accgcgaaat 300
ttgaacgagc agcagccatg ccggggttct acgagattgt cctgaaggtc ccgagtga.cc 360
tggacgagcg cctgccgggc atttctaact cgtttgttaa ctgggtggcc gagaaggaat 420
gggacgtgcc gccggattct gacatggatc egaatetgat tgagcaggca cccctgaccg 480
tggccgaaaa gcttcagcgc gagttcctgg tggagtggcg ccgcgtgagt aaggceccgg 540
aggccctctt ttttgtccag ttcgaaaagg gggagaccta cttccacctg cacgtgctga 600
ttgagaccat cggggtcaaa tccatggtgg tcggccgcta cgtgagccag attaaagaga 660
agctggtgac ccgcatctac cgcggggtcg agccgcagct tccgaactgg ttcgcggtga 720
PL 217 623 B1
ccaaaacgcg aaatggcgcc gggggcggga acaaggtggt ggacgactgc tacatcccca 780
actacctgct ceecaagacc cagcccgagc t c cagtgggc gtggactaac atggaccagt 64 0
atttaagcgc ctgtttgaat ctcgcggagc gtaaacggct ggtggcgcag catctgacgc 900
acgtgtcgca gacgcaggag cagaacaaag agaatcagaa ccccaattct gacgcgccgg 560
tcatcaggtc aaaaacctca gccaggtaca tggagctggt cgggtggctg gtggaccgcg 1020
ggatcacgtc agaaaagcaa tggattcagg aggaccaggc etcgtaeatc tccttcaacg 1060
ccgcctccaa ctcgcggtcc cagatcaagg ccgcgctgga caatgcctcc aagatcatga 1140
gcctgacaaa gacggctccg gactacctgg tgggcagcaa cccgccggag gacattacca 1200
aaaatcggat ctaccaaatc ctggagctga acgggtacga tccgcagtac gcggcctccg 1260
tcttcctggg ctgggcgcaa aagaagttcg ggaagaggaa caccatctgg ctctttgggc 1320
cggccacgac gggtaaaaec aacatcgcgg aagccatcgc ccacgccgtg cccttctacg 1380
gctgcgtaaa ctggaccaat gagaactttc ccttcaacga ttgcgtcgac aagatggtga 1440
tctggtggga ggagggeaag atgacggcca aggtcgtgga gagcgccaag gccattctgg 1500
gcggaagcaa ggtgcgcgtg gaccaaaagt gcaagtcatc ggcccagatc gaacccactc 1560
ccgtgatcgt cacctccaac accaacatgt gcgccgtgat taacgggaac agcaccacct 1620
tcgagcatca gcagccgctg caggaccgga tgtttgaatt tgaacttacc cgccgtttgg 1660
accatgactt tgggaaggtc accaaacagg aagtaaagga ctttttccgg tgggcttccg 1740
atcacgtgac tgacgtggct catgagttct acgtcagaaa gggtggagct aagaaacgcc 1300
ccgcctccaa tgacgcggat gtaagcgagc caaaacggga gtgcacgtca cttgcgcagc 1S60
cgacaacgtc agacgcggaa gcaccggcgg actacgcgga caggtaccaa aacaaatgtt 1320
ctcgtcacgt gggcatgaat etgatgcttt ttccctgtaa aacatgcgag agaatgaatc 1980
aaatttccaa tgtctgtttt acgcatggtc aaagagactg tggggaatgc ttccctggaa 2040
tgtcagaatc tcaacccgtt tctgtcgtca aaaagaagac ttatcagaaa ctgtgfcccaa 2100
ttcatcatat cctgggaagg gcacccgaga ttgcctgttc ggcctgcgat ttggccaatg 2160
tggacttgga tgactgtgtt tctgagcaat aaatgactta aaccaggtat ggctgctgac 2220
ggttatcttc cagattggct cgaggacaac ctttctgaag gcattcgtga gtggtgggct 2280
ctgaaacctg gagtccctca acccaaagcg aaccaacaac aceaggacaa ccgtcggggt 2340
cttgtgcttc cgggttacaa atacctcgga cccggtaacg gactcgacaa aggagagccg 2400
gtcaacgagg cggacgcggc agccctcgaa cacgacaaag cttacgacca gcagctcaag 2460
gccggtgaca acccgtacct caagtacaac cacgccgacg ccgagtttca ggagcgtctt 2520
caagaagata cgtcttttgg gggcaacctt 99cagagcag tcttccaggc caaaaagaęg 2580
atccttgagc ctcttggtct ggttgaggaa gcagctaaaa cggctcctgg aaagaagggg 2640
PL 217 623 B1
gctgtagatc agtctcctca ggaaccggac tcatcatctg gtgttggcaa atcgggcaaa 2700
cagcctgcca gaaaaagact aaatttcggt cagactggag actcagagtc agtcceagac 2760
cctcaacctc tcggagaacc accagcagcc □ccacaagtt tgggatctaa tacaatggct 2820
tcaggcggtg gcgcaccaat ggcagacaat aacgagggtg ccgatggagt gggt&attcc 2880
tcaggaaatt ggcattgcga ttcccaatgg ctgggcgaca gagtcatcac caccagcacc 2940
agaacctggg ccctgcccac ttacaacaac catctctaca agcaaatctc cagccaatca 3000
ggagcttcaa acgacaacca ctactttggc tacagcaccc cttgggggta ttttgacttt 3060
aacagattcc actgccaett ctcaccacgt gacfcggcagc gactcattaa caacaacfcgg 3120
ggattccggc ccaagaaact cagcttcaag ctcttcaaca tccaagttag aggggtcacg 3100
cagaacgatg gcacgacgac tattgccaat aaccttacca gcacggttca agtgtttacg 3240
gactcggagt atcagctccc gtacgtgctc gggtcggcgc accaaggctg tctcccgccg 3300
tttccagcgg acgtcttcat ggtccctcag tatggatacc tcaccctgaa caacggaagt 3360
caagcggtgg gacgctcatc cttttactgc ctggagtact tcccttcgca gatgctaagg 3420
actggaaata acttccaatfc cagctatacc ttcgaggatg taccttttca cagcagetac 3480
gctcacagcc agagtttgga tcgcttgatg aatcctcfcta ttgatcagta tctgtactac 3540
ctgaacagaa cgcaaggaac aacctctgga acaaccaacc aatcacggct gctttttagc 3600
caggctgggc cteagtctat gtctttgcag gccagaaatt ggctacctgg gccctgctac 3660
cggcaacaga gactttcaaa gactgctaac gacaacaaca acagtaactt tccttggaca 3720
gcggccagca aatatcatct caatggccgc gactcgctgg tgaatccagg accagctatg 3780
gccagtcaca aggacgatga agaaaaattt ttccctatgc acggcaatct aatatttggc 3840
aaagaaggga caacggcaag taacgcagaa tfcagataatg taafcgattac ggatgaagaa 3900
gagattcgta ccaccaatcc tgtggcaaca gagcagtatg gaactgtggc aaataacttg 3960
cagagctcaa atacagctcc cacgactgga actgtcaatc atcagggggc cttaccfcggc 4020
atggtgtggc aagatcgtga cgtgtacctt caaggaccta tctgggcaaa gattcctcac 4080
acggatggac actttcatcc fctctcctctg afcgggaggct ttggactgaa acatccgect 4140
cctcaaatca tgatcaaaaa fcactccggta ccggcaaatc ctccgacgac tttcagcccg 4200
gccaagfcttg cttcatttat cactcagtac tccactggac aggtcagcgt ggaaattgag 4260
t99gagctac agaaagaaaa cagcaaacgt tggaatccag agattcagta cacttccaac 4320
t ac aac aaejfc ctgttaatgt ggactttacfc gfcagacacta atggtgttta tagtgaacct 4380
cgccctattg gaacccggta tctcacacga aacttgtgaa tcctggttaa tcaataaacc 444 0
gtttaattcg tttcagttga actttggctc ttgtgcactfc ctttatcttt atcttgtttc 4500
catggctact gcgtagatsa gcagcggcct gcggcgcttg cgcttcgcgg tttacaactg 4560
PL 217 623 B1
ctggttaata tttaactctc C gł F. ęLćiZ fc- tagtgatgga gttggccact ccctctatgc 4620
gcactcgctc gcfccggtggg gcctggcgac caaaggtcgc cagacggacg tgctttgcac 4680
gtccggcccc accgagcgag cgagtgcgca tagagggagt ggccaa 4726
<21G> 9 <211> 3098 <212> DNA <213-· nowy serotyp AAV, klon 42 .2
<400> 9 gaafcfccgccc ttfcctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgfccgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagc 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg 180
cccagatcga C C C· ELO C· C gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gctgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agecgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aacfccacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgfccag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgacc gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaagggag agccggtcaa cgaggcagac gccgcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gacaagcagc tcgagcaggg ggacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cetggaaaga agagacccat agaatccccc gactcctcca cgggcatcgg caagaaaggc 1320
cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaacttt gggcagactg gcgactcaga gtcagtgccc 1380
gaccccca&c ctctcggaga acctcccgcc gcgccetcag gt ctgggafc c tggtacaatg 1440
gctgcaggcg gtggcgcacc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtaat 1500
PL 217 623 B1
gcctccggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat caccaccagc 156 0
acccgcacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcagat atcaagtcag 1620
agcggggcta ccaacgacaa ccacttcttc ggctacagca ccccctgggg ctattttgac 1630
ttcaacagat tccactgcca cttctcacca cgtgactggc agcgactcat caacaacaac 1740
tggggattcc ggcccagaaa gctgcggttc & ag fc fc g fc· fc c a. a o a t c o ^Łc^c^t caaggaggtc 1800
aogacgaacg acggcgttac gaccatcgct aataacctta ccagcacgat tcaggtcttc 1SS0
tcggactcgg agtaccaact gccgtacgtc ctcggctctg cgcaccaggg ctgcctccct 1920
ccgttccctg cggacgtgtt catgattcct cagtacggat atctgactct aaacaacggc 1980
agtcagtctg tgggacgttc ctccttctac tgcctggagt actttcctto teagatgcfcg 2040
agaacgggca ataactttga attcagctac acctfctgagg aagtgccttt ccacagcagc 2100
tatgcgcaca gccagagcct ggaccggctg atgaatcccc tcatcgacca gtacctgtac 2160
tacctggccc ggacccagag cactacgggg tccacaaggg agctgcagtt ccatcaggct 2220
gggcccaaca ccatggccga gcaatcaaag aactggctgc ccggaccctg ttatcggcag 2280
cagagactgt caaaaaacat agacagcaac aacaacagta actttgcctg gaccggggcc 2340
actaaatacc atctgaatgg tagaaattca ttaaccaacc cgggcgtagc catggccacc 2400
aacaaggacg acgaggacca gttctttocc atcaaoggag tgctggtttt tggcgaaacg 2460
ggggctgcca acaagacaac gctggaaaac gtgctaatga ccagcgagga ggagatcaaa 2520
accaccaatc ecgtggctac agaagaatac ggtgtggtct ccagcaacct gcaatcgtct 2580
acggccggac cccagacaca gactgtcaac agccaggggg ctctgcccgg catggtctgg 2640
cagaaccggg acgtgtacct gcagggtccc atctgggcca aaattcctca cacggacggc 2700
aactttcacc cgtctcccct gatgggcgga tttggactca aacacccgcc tcctcaaatt 2760
ctcatcaaaa acaccccggt acctgctaat cctccagagg tgtttactcc tgccaagttt 2820
gcctcattta tcacgcagta cagcaccggc caggtcagcg tggagatcga gtgggaactg 2880
cagaaagaaa acagcaaacg ctggaatcca gagattcagt acacctcaaa ttatgccaag 2940
tctaataatg tggaatttgc tgtcaacaac gaaggggttt atactgagcc tcgccccatt 3000
ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa ttgcctgtta atcaataaac cggttaatto 3060
gfcttcagttg aactttggtc Łctgcgaagg gcgaattc 3093
<21G> IG <211> 3098 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 16.3 <40G> 10 gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga atcaaccggt ttattgatta 60 acaagtaatt acaggttacg ggtgaggtaa cgggtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 120
PL 217 623 B1
accccttcgt tgttgacagc aaattccaca ttattagact tggcataatt tgaggtgtac 180
tgaatctctg gattccagcg tttgcfcgttt tctttctgca gttcccactc gatctccacg 24 0
ctgacctggc cggtgctgta ctgcgtgata aatgaggcaa actaggcagg agtaaacacc 300
cctggaggat tagcaggtac cggggtgttt ttgatgagaa tttgaggagg cgggtgtttg 360
agtccaaatc cgcccatcag gggagacggg tgaaagttgc cgtccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag gtacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc gggcagagcc 480
ccctggctgt tgacagtctg tgtctggggt ccggccgtag acgattgcag gtfcgctggag 540
3c cne a.cccjt attcttctgt agccacggga t tgg fcggt 11 tgatctcctc ctcgctggtc 600
attagcacgt tttccagcgt tgtcttgttg gcagcccccg ttttgccaaa aaccagcact 660
ccgttgatgg gaaagaactg gccctcgtcg tcctfcgttgg tggccatggc tacgcccggg 720
ttggttaatg aatttctacc attcagatgg tafcttagtgg ccccggtcca ggcaaagtta. 780
ctgttgttgt tgctgtctat gttttttgac agtctctgct gccgataaca gggtccgggc 340
agccagttct ttgattgctc ggccatggtg ttgggcccag cctgatggaa ctgcagctcc 900
cttgtggacc ccgtagtgct ctgggtccgg gccaggtagt acaggtactg gtcgatgagg 960
ggattcatca gccggtccag gctctggctg tgcgcatagc tgctgtggaa aggcacfctcc 1020
tcaaaggtgt agctgaattc aaagttattg cccgttctca. gcatctgaga aggaaagtac 1080
tccaggcagt agaaggagga acgtcccata gactgactgc cgttgtttag agtcagafcat 1140
ccgtactgag gaatcatgaa cacgtccgca gggaacggag ggaggcagcc ctggtgcgca 1200
gagccgagga cgtacggcag ttggtactcc gagtccgaga agacctgaat cgtgctggta 1260
aggtfcattag cgatggtcgt aacgccgtcg ttcgtcgfcga cetccttgac ctggatgttg 1320
aacaacttga accgcagctt tctgggccgg aatccccagt tgttgttgat gagtcgctgc 1380
cagtcacgtg gtgagaagtg gcagtggaat ctgttgaagt caaaatagcc ccasgg9gtg 1440
ctgtagccga agaagtggtt gtcgttggta gccccgctct gacttgatat ctgcttgtag 1500
aggtggttgt tgtaggtggg cagggcccag gtgcgggtgc tggtggtgat gactctgtcg 1560
cccagccatg tggaatcgca atgccaattt ccggaggcat tacccactcc gtcggcgcct 1620
tcgttattgt ctgccattgg tgcgccaccg cctgcagcca ttgtaccaga tcccagacct 1680
gagggcgcgg cgggaggttc tecgagaggt tgggggtcgg gcactgactc tgagtcgcca 1740
gtctgcccaa agttgagctfc ctttttagcg ggctgctggc ctttcttgcc gatgcccgtg 1800
gaggagtcgg gggattctafc gggtctcttc tttccaggag ccgtcttagc gccttcctca 1860
accagaccga gaggttcgag aacccgcttc ttggcctgga agactgctcg cccgaggttg 1920
cccccaaaag acgtatcttc ttgaagacgc tcctgaaact cagcgtcggc gtggttgtac 1980
ttgaggtacg ggttgtcccc ctgctcgagc tgcttgtcgt asgccttgtc gtgctcgagg 2040
PL 217 623 B1
gccgcggcgt cfcgcctcgtt gaccggctct cccttgtcga gtccgttgaa gggtccgagg 2100
Łacttgtagc caggaagcac cagaccccgg ccgfccgfc cc t gcttttgctg gttggctttg 2160
ggtttcgggg ctccaggttt caagtcccac cactcgcgaa tgccctcaga gaggttgtcc 2220
tcgagccaat ctggaagata accatcggca gccatacctg gtttaagtca tttattgctc 2260
agaaacacag tcatccaggt ccacgttgac cagatcgcag gccgagcaag caatctcggg 2340
agcccgcccc agcagatgat gaatggcaca gagtttccga tacgtcctct ttctgacgac 2400
cggttgagat tctgacacgc cggggaaaca ttctgaacag tctctggtcc cgtgcgtgaa 2460
gcaaatgttg aaattctgat tcattctctc gcatgtcttg cagggaaaca gcafccfcgaag 2520
c a tg cccgcg t gac gaga a c atttgttttg gtacctgtcg gcaaagtcca ccggagctcc 2580
ttccgcgtct gacgtcgatg gatccgcgac tgaggggcag gcccgcttgg gctcgctttt 2640
atccgcgtca tcgggggcgg gcctcttgtt ggctccaccc tttctgacgt agaactcatg 2700
cgecacctcg gtcacgtgat cctgcgccca gcggaagaac tctttgactt cctgctttgt 2760
caccttgcca aagtcctgct ccagacggcg ggtgagttca aatttgaaca tccggtcttg 2820
taacggctgc tggtgctcga aggtggtgct gttcccgtca. atcacggcgc acatgttggt 2880
gttggaagtg acgatcacgg gggtgggatc gatctgggcg gacgacttgc acttttggtc 2940
cacgcgcacc ttgctgccgc cgagaafcggc cttggcggac tccacgacct tggccgtcat 3000
cttgccctcc tcccaccaga tcaccatctt gtcgacgcaa tcgttgaagg gaaagtfcctc 3060
attggtccag ttgacgcagc cgtagaaagg gcgaattc 3098
<210> 11 <211> 3121
<212> DNA e213> nowy serotyp AAV, klon 29. 3
<400> 11 gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga atcaaccggt ttattgatta 60
acaagcaatt acagattacg ggfcgaggtaa cgggtgccga tggggcgagg ctcagaataa 120
gtgccatctg tgttaacagc aaagtccaca tttgtagatt tgtagtagtt ggaagtgtat 130
tgaatctctg ggttccagcg tttgctgttt tctttctgca gctcccattc aatttccacg 240
ctgacctgtc cggtgctgta ctgcgtgatg aacgacgcca gcttagcttg actgaaggta 300
gttggaggat ccgcgggaac aggtgtattc ttaatcagga tctgaggagg cgggtgtttc 350
agtccaaagc cccccatcag cggcgaggga tgaaagtttc cgtccgtgtg aggaatcttg 420
gcccagatag gaccctgcag gtacacgtcc cggtfcctgcc agaccatgcc aggtaaggct 480
ccttgacfcgt tgacggcccc tacaatagga gcggcgtttt gctgttgcag gttatcggcc 540
accacgccgt actgttctgt ggccactggg t tggfcgg111 taatttcttc ctcactggtt 600
PL 217 623 B1
agcataacgc tgctatagtc cacgttgcct tttccagctc 0 fcCjfc ζ* ζ* aaacattaag 560
actccgctgg acggaaaaaa tcgctcttcg tcgtccttgt gggttgccat agcgacaccg 720
ggatttacca gagagtctct gccattcaga tgatacttgg tggcaccggt ccaggcaaag 780
ttgc tgt tgt tattttgcga cagtgtcgtg gagacgcgtt gctgccggta gcagggcccg 840
ggtagccagt ttttggcctg agccgacatg ttattaggcc cggcctgaga aaatagcaac 900
tgctgagttc ctgcggtacc tcccgtggac tgagtccgag acaggtagta caggtactgg 960
tcgatgaggg ggttcatcag ccggtccagg ctttggctgt gcgcgtagct gc tgtgaaaa 102 0
ggcacgtcct caaactggta gctgaactca aagttgttgc ccgttctcag catttgagaa 1080
ggaaagtacfc ccaggcagta C[3i3.CJCJęiCJija,e!, cggcccacgg cctgactgcc attgttcaga 1140
gtcaggtacc cgtactgagg aatcatgaag acgtccgccg ggaacggagg caggcagccc 1200
tggcgcgcag agccgaggac gtacgggagc tggtattccg agtccgtaaa gacctgaatc 1260
gtgctggtaa ggttattggc gatggtcttg gtgcctfccafc tctgcgtgac ctccttgacc 1320
tggatgttga agagcttgaa gttgagtctc ttgggccgga atccccagtt gttgttgatg 1380
agtcgctgcc agtcacgtgg tgagaagtgg cagtggaatc tgttaaagtc aaaatacccc 144 0
cagggggtgc tgtagccgaa gtaggtgttg tcgttggtgc ttcctcccga agtcccgttg 1500
gagatttgct tgtagaggtg gttgttgtag gtggggaggg cccaggttcg ggtgctggtg 1560
gtgatgactc tgtcgcccag ccatgtggaa tcgcaatgcc aatttcctga ggaactaccc 1620
actccgtcgg cgccttcgtt attgtctgcc attggagcgc caccgcctgc agccattgta 1680
ccagatccca gaccagaggg gcctgcgggg ggttctccga ttggttgagg 9t«999Cact 1740
gactctgagt cgccagtctg cccaaagttg agtctctttt tcgcgggctg ctggcctttc 1800
ttgccgatgc ccgtagtgga gtctggagaa cgctggggtg atggctctac cggtctcfctc 1S60
tttccaggag ccgtcttagc gccttcctca accagaccga gaggttcgag aacccgcttc 1920
ttggcctgga agactgctcg tccgaggttg cccccaaaag acgtatcttc ttgcagacgc 1980
tcctgaaact cggcgtcggc gtggttatac cgcaggtacg gattgtcacc cgctttgagc 2040
tgctggtcgt aggccttgtc gtgctcgagg gccgctgcgt ccgccgcgtt gacgggctcc 2100
cccttgtcga gtccgttgaa gggtccgagg tacttgtagc caggaagcac cagaccccgg 2160
ccgtcgtcct gcttttgctg gttggctttg ggcttcgggg ctccaggttt cagcgcccac 2220
cactcgcgaa tgccctcaga gaggttgtcc tcgagccaat ctggaagata accatcggca 2230
gceatacctg atctaaatca tfctattgttc aaagatgcag tcatccaaat ccacattgac 2340
cagatcgcag gcagtgcaag cgtctggcac ctttcccatg atatga tgaa tgtagcacag 2400
tttctgatac gcetttttga cgacagaaac gggttgagat tctgacacgg gaaagcactc 2460
taaacagtct ttctgtccgt gagtgaagca gatatttgaa ttctgattca fctctctcgca 2520
PL 217 623 B1
ttgtctgcag ggaaacagea tcagattcat g c c c a a gfcg a cgagaacatt fcgfctttggta 2530
cctgtccgcg tagttgatcg aag-cttccgc gtctgacgtc gatggctgcg caactgactc 2640
gcgcacccgt tfcgggctcac ttatatctgc gtcactgggg gcgggtcttt fccttggctcc 2700
accctttttg acgtagaatt catgcfcccac ctcaaccacg tgatcctttg cccaccggaa 27S0
aaagtctttg acttcctgct tggtgacctt cccaaagfcca tgatccagac ggcgggtgag 2320
ttcaaatttg aacatccggt cfctgcaacgg ctgctggtgt tcgaaggtcg ttgagttccc 2080
gtcaatcacg gcgcacatgt tggtgttgga ggtgacgatc acgggagtcg ggtctatctg 2940
ggccgaggac ttgcatttct ggtzccacgcg caccttgctt cctccgagaa tggctttggc 3000
cgactccacg accttggcgg fccafcctfcccc ctcctcccac cagatcacca tcttgtcgac 3060
acagtcgttg aagggaaagt fccfccafcfcggfc ccagttgacg cagccgtaga agggcgaatt 3120
ο 3121 <210> 12 <211> 3121
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 29. .4
<400> 12 gaattcgccc ttctacggot gcgtcaactg gaccaatgag aactttccct tcaacgactg 60
tgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga ggggaagatg accgccaagg tcgtggagtc 120
ggocaaagcc afctctcggag gaagcaaggt gcgcgtggac cagaaafcgca agtcctcggc 180
ccagatagac ccgactcccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 240
cgggaacfcca acgaccttcg aacaccagca gccgttgcaa gaccggatgt tcaaatttga 300
actcacccgc cgtctggatc atgactttgg gaaggtcacc aagcaggaag tcaaagactt 3S0
tttccggtgg gcaaaggatc acgtggttga ggtggagcac gaattctacg tcaaaaaggg 420
tggagccaag aaaagacccg cccccagtga cgcagatata agtgagccca aacgggtgcg 480
cgagtcagtt gcgcagccat cgacgtcaga cgcggaagct tcgatcaact acgcagacag 540
gtaccaaaac aaatgttctc gtcacgcggg catgaafcctg atgctgtttc cctgcagaca 600
atgcgagaga atgaatcaga attcaaatat ctgcttcact cacggacaga aagactgttt 660
agagtgcttt cccgtgtcag aatctcaacc cgtttctgtc gtcaaaaagg cgtatcagaa 720
actgtgctac attcafccata tcatgggaaa ggtgccagac gcttgcactg cctgcgatct 780
ggtcgatgtg gatttggafcg actgcatctt tgaacaataa atgatttaaa tcaggtatgg 840
ctgccgatgg fctatcttcca gattggctcg aggacaacct ctctgagggc attcgcgagt 900
ggtgggcgct gaaacctgga gccccgaagc ccaaagccaa ccagcaaaag caggacggcg 960
C-^^^^jfc c fc ggtgcttcot ggctacaagt ac ot cggacc cttcaacgga ctcgacaagg 1020
gggsgcccgt caacgcggcg gacgcagcgg ccctcgagca cgacaaggcc tacgaccagc 1080
PL 217 623 B1
agctcaaagc gggtgacaat ccęjta.ccfcęjc ggtataacca cgccgacgcc gagtttcagg 114 0
aęjcgfccŁ.gca agaagatacg fccttfctęjijcjcj gcaacctcgg gcgagcagtc ttccaggcca 1200
agaagcgggt tctcgaacct cfccggtcfcgęj ttgaggaagg cgctaagacg gctcctggaa 1260
agaag-aga.ee ggtagagcca tcaccccagc gttctccaga ctcctctacg ggeateggea 1220
agaaaggcca geage ccgcg aaaaagagac tcaactttgg gcagactggc gactcagagt 1380
eagtgcccga c c c t c a a c c a atcggagaac cccccgcagg cccctctggt etgggatctg 1440
gtacaafcggc tgcaggcggt ggcgctccaa tggcagacaa taacgaaggc geegaeggag 1500
tgggtagttc ctcaggaaat tggcattgcg attccacatg gctgggcgac tgagtcatca 156 0
ccaccagcac ccgaacctgg gccctcccca cctacaacaa ccacctctac aagcaaatct 1620
ccaacgggac ttcgggagga agcaccaacg acaacaccta cttcggctae agcaccccct 1680
gggggtattt tgactttaac agattccact gccacttctc accacgtgac tggcagcgac 1740
tcatcaacaa caactgggga ttccggccca agagactcaa cttcaagctc ttcaacatcc 1600
aggtcaagga ggtcacgcag aatgaaggca ccaagaccat cgccaataac cttaccagca 1860
cgattcaggt ctttacggac tcggaatacc agctcccgta cgtcctcggc tctgcgcacc 1920
agggctgcct gcctccgttc ccggcggacg tetteatgat tcctcagtac gggtacctga 19ΘΟ
ctctgaacaa tggcagtcag gccgtgggcc gttcctcctt ctactgcctg gagtactttc 2040
cttctcaaat gctgagaacg ggcaacaact ttgagttcag ctaccagttt gaggacgtgc 2100
cttttcacag cagctacgcg cacagccaaa gcctggaccg gctgatgaac cccctcatcg 2160
accagtacct gtactacctg tctcggactc agtccacggg aggtaccgca ggaactcagc 2220
agttgetatt ttctcaggcc gggcctaata acatgtcggc tcaggccaaa aactggctac 2280
ccgggccctg ctaccggcag taacgcgtct ccacgacact gtcgcaaaat aacaacagca 2340
actttgtctg gaccggtgcc accaagtatc atctgaatgg cagagactct ctggtagatc 2400
ccggtgtcgc tatggcaacc cacaaggacg acgaagagcg attttttccg tccagcggag 2460
tcataatgtt tgggaaacag ggagetggaa aagacaacgt ggactatagc agcgtcatgc 2520
taaccagtga ggaagaaatt aaaaccacca acccagtggc cacagaacag tacggcgtgg 2580
tggccgataa cctgcaacag caaaacgccg ctcctattgt aggggccgtc aacagtcaag 2640
gagccttacc tggcatggtc tggcagaacc gggacgtgta cctgcagggt cctacctggg 2700
ccaagattcc tcacacggac ggaaactttc atccctcgcc gctgatggga ggctttggac 2760
tgaaacaccc gcctcctcag atcctgatta agaatacacc tgttcccgcg gatcctccaa 2 320
ctaccttcag tcaagctaag ctggcgtcgt tcatcacgca gtacagcacc ggacaggtca 2380
gcgtggaaat tgaatgggag ctgcaggaag aaaacagcaa acgctggaac ccagagattc 2940
^3. ^3 (C C ^3 t caactactac aaatctacaa atgtggactt tgctgttaac acagatggca 3000
PL 217 623 B1
cttattctga gcctcgcccc atcggcaccc gttacctcac ccgtaatctg taattgcttg 3060
ttaatcaata aaccggttga ttcgtttcag ttgaactttg gtetctgcga agggcgaatt 3120
c 3121
<210> 13 < 211 > 3121 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 29,5 <4C0> 13
gaattcgccc ttcgcgagac caaagttcaa ctgaaacgaa tcaaccggtt tattgattaa 60
caagcaatta cagattacgg gtgaggtaac gggtgccgat ggggcgaggc fccagaataag 120
tgccatctgt gttaacagca aagtccacat ttgtagattt gtagtagttg gaagtgtatt 180
gaatctctgg gttccagcgt ttgctgtttt ctttctgcag ctcccattca atttccacgc 240
tgacctgtcc ggtgctgtac tgcgtgatga acgacgccag cttagcttga ctgaaggtag 300
ttggaggatc cgcgggaaca ggtgtattct taateaggat ctsaggaggc gggtgtfctca 360
gtccaaagcc tcccatcagc ggcgagggat gaaagtttcc gtccgtgtga ggaatcttgg 420
cccagatagg accctgcagg tacacgtccc ggttctgcca gaccatgcoa ggtaaggctc 460
cttgactgtt gacggcccct acaataggag cggcgttttg ctgttgcagg ttatcggcca 540
ccacgccgta ctgttctgtg gccactgggt tggtggtttt aatttcttcc tcactggtta 600
gcataacgct gctatagtcc acgttgtctt ttccagctcc ctgtttccca aacattaaga 660
ctccgctgga cggaaaaaat cgctcttcgt cgtccttgtg ggttgccata gcgacaccgg 720
gatttaccag agagtctctg ccattcagat gatacttggt ggcaccggtc caggcaaagt 780
tgctgttgtc attttgcgac agtgtcgtgg agacgcgttg ctgccggtag cagggcccgg 840
gtagccagtt tttggectga gccgaeatgt tattaggccc ggcctgagaa aatagcaact S00
gctgagttcc tgcggtacct cccgtggact gagtccgaga caggtagtac aggtactggt 960
cgatgagggg gttcatcagc cggtccaggc tttggctgtg cgcgtagctg ctgtgaaaag 1020
gcacgtcctc aaactggtag ctgaactcaa agttgttgcc cgttctcagc atttgagaag 10Θ0
gaaagtactc caggcagfcag aaggaggaac ggcccacggc ctgactgcca ttgttcagag 1140
tcaggtaccc gtactgagga atcatgaaga cgtccgccgg gaacggaggc aggcagccct 12 00
ggtgcgcaga tacgggagct ggtattccga gtc cgtaaag acctgaat cg 12S0
tgctggtaag gttattggcg atggtcttgg tgccttcatt ctgcgtgacc tccttgacct 1320
ggatgttgaa gagcttgaag ttgaggctct tgggccggaa tccecagttg ttgttgatga 1380
gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttaaagtca aaataccccc 1440
agggggtgct gtagccgaag taggtgttgt cgttggtgct tccteccgaa gfccccgttgg 1500
PL 217 623 B1
agatttgctt gtagaggtgg ttgttgtagg tgggSiaoggc ccaggttcgg gtgctggtgg 1560
tgatgactcc gtcgcccagc catgtggaat cgcaatgcca atttcctgag gaactaccca 1620
ctccgtcggc gccttcgtfca ttgtctgcca ttggagcgcc accgcctgca gecattgtae 1680
cagatcccag accagagggg C C gttctccgati tggttgaggg tcgggcactg 1740
actctgagtc gccagtctgc ccaaagttga gtctcttttt cgcgggctgc tggcctttct 1800
tgccgatgcc cgtagaggag tctggagaac gctggggtga tggctctacc ggtctctfcct 1860
ttccaggagc cgtcttagcg ccttcctcaa ccagaccgag aggttcgaga acccgcttct 1920
tggcctggaa gactgctcgc ccgaggttgc ccccaaaaga cgtatcttct tgcagacgct 1980
cctgaaactc ggcgtcggcg tggttatacc gcaggtacgg attgtcaccc gctttgagct 2040
gctggtcgta ggccttgtcg tgctcgaggg ccgctgcgtc cgccgcgttg acgggctccc 2100
ccttgtcgag tccgttgaag ggtccgaggt acttgtagcc aggaagcacc agaccccggc 2160
cgtcgtcctg cttttgctgg ttggctttgg gcttcggggc tccaggtttc agcgcccacc 2220
actcgcgaat gccctcagag aggttgtcct cgagccaatc tggaagataa ccatcggcag 2280
ccatacctga tttaaatcat ttattgttca aagatgcagt catccaaatc cacattgacc 2340
agatcgcagg cagtgcaagc gtctggcacc tttcccatga tatgatgaat gtagcacagt 2400
ttctgatacg cctttttgac gacagaaacg ggttgagatt ctgacacggg aaagcactct 2460
aaacagtctt tctgtccgtg agtgaagcag atatttgaat tctgattcat tctctcgcat 2520
tgtctgcagg gaaacagcat cagattcatg cccacgtgac gagaacattt gttttggtac 2580
ctgtctgcgt agttgatcga agcttccgcg tetgacgtcg atggctgcgc aactgactcg 2640
cgcacccgtt tgggctcact tatatctgcg tcactggggg cgggtctttt cttggctcca 2700
ccctttttga egtagaattc atgctccacc tcaaccacgt gatcctttgc ccaccggaaa 2760
aagtctttga cttcctgctt ggtgaccttc ccaaagtcat gatccagacg gcgggtgagt 2320
tcaaatttga acatccggtc ttgoaacggc tgctggtgtt cgaaggtcgt tgagttcccg 23S0
teaatcacgg cgcacatgtt ggtgttggag gtgacgatca cgggagtcgg gtctatctgg 2 94 0
gccgaggact tgcatttctg gtccacgcgc accttgcttc ctccgagaat ggctttggcc 3000
gac t c c ac g a cctfcggcggt catcttccce tcctcccacc agatcaccat cttgtcgaca 3060
cagtcgttga agggaaagtt ctcattggtc cagttgacgc agccgtagaa agggcgaatt 312 0
c 3121 e210> 14 <211> 3131 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 1-3 <400> 14 gcggccgcga attcgccctt ggctgcgtca actggaccaa tgagaacttt cccttcaatg 60
PL 217 623 B1
attgcgtcga aaagafcggtg atctggtggg aggagggcaa gatgacggcc aaggtcgtgg 120
agtccgccaa ggccatrfccfcc ggcggcagca aggtgcgcgt ggaccaaaag tgcaagtegt 180
ccgcccagat cgaccccacc eccgtgatcg tcacctccaa caccaacatg tgcgccgtga 240
ttgacgggaa cagcaccacc tfccgagcacc agcagcctct ccaggaccgg atgtttaagt 300
tcgaactcac ccgccgtcfcg gagcacgact ttggcaaggt gacaaagcag gaagtcaaag 350
agttcttccg ctgggccagfc gatcacgtga ccgaggtggc gcatgagttt tacgtcagaa 420
agggcggagc cagcaaaaga ccc gc ccccg atgacgcgga taaaagcgag cccaagcggg 480
cctgcccctc agt^gcggat ccatcgacgt cagacgcgga aggagctccg gtggactttg 540
ccgscaggta cc&aaacaaa tgttctcgtc acgcgggcat gcttcagatg ctgtttccct 600
gca aaacgtg cg&gagaatg aatcggaatt tcaacatttg cttcacacac ggggtcagag 660
actgctcaga gfcgfctfccccc ggcgfcgtcag aatctcaacc ggtcgtcaga aagaggacgfc 720
atcggaaact ccgtgcgafcfc catcatctgc tggggcgggc tcccgagatt gcttgctcgg 780
cctgcgatct ggtcaacgtg gacctggafcg actgtgtttc tgagcaataa atgacttaaa 840
ccaggtatgg ctgccgatgg ttatcttcca gattggctcg aggacaacct ctctgagggc 900
attcgcgagt ggtgggcgcfc gaaacctgga gccccgaagc ccaaagccaa ccagcaaaag 960
caggacgacg gccggggtct ggtgcttcct ggctacaagt acctcggacc cttcaacgga 1020
ctcgacaagg gggagcccgfc caacgcggcg gacgcagcgg ccctcgagca cgacaaggct 1080
tacgaccagc agctgcaggc gggtgacaat ccgtacctgc ggtataacca cgccgacgcc 1140
gagtttcagg agcgtctgca agaagatacg tcttttgggg gcaacctcgg gcgagcagtc 1200
ttccaggcca agaagcgggt tctcgaacct ctcggtctgg ttgaggaagg cgctaagacg 1260
gctcctggaa agaagagacc ggtagagcca tcaccccagc gttctccaga ctcctctacg 1320
ggcatcggca agaaaggcca acagcccgcc agaaaaagac tcaattttgg tcagactggc 1380
gactcagagt cagttccaga ccctcaacct ctcggagaac ctccagcagc gccctctggt 1440
gtgggaccta atacaatggc tgcaggcggt ggcgcaccaa tggcagacaa taacgaaggc 1500
gccgacggag tgggtagttc ctcgggaaat tggcattgcg attccacatg gctgggcgac 1560
agagtcatca ccaccagcac ccgaacctgg gccctgccca cctacaacaa ccacctctac 1620
aagcaaatct ccaacgggac atcgggagga gccaccaacg acaacaccta cttcggctac 1680
agcaccccct gggggtattt tgactttaac agattccact gccacctttc accacgtgac 174 0
tggcagcgac tcatcaacaa caactgggga ttccgaccca agagactcag cttcaagctc 1800
ttcaacatcc aggtcaagga ggtcacgcag aatgaaggca ccaagaccat cgccaataac 1860
ctcaccagca ccatccaggt gtttacggac tcggagtacc agctgccgta cgttctcggc 1920
tctgtccacc agggcfcgcct cy c c t c cgt fc c ccggcggacg tgttcatgat tccccagtac 1980
PL 217 623 B1
ggctacctaa cactcaacaa cggtagtcag gccgtgggac Cj ę t t c c tt ctactgcctg 2040
gaatactttc cttcgcagat gctgagaacc ggcaacaact tccagtttac ttacaccttc 2100
gaggacgtgc ctttccacag cagctacgcc cacagctaga gcttggaccg gcfcgatgaat 2160
cctctgatfcg accagtacct ej t eł c b. a tctcggacfcc a&acaacagg aggcacggca 2220
aatacgcaga ctctgggctt cagccaaggt gggcctaata caatggccaa tcaggcaaag 2280
aactggctgc caggaccctg ttaccgccaa caacgcgtct caacgacaac cgggcaaaac 2340
aacaatagca actttgcctg gactgctggg accaaatacc atctgaatgg aagaaattca 2400
fctggctaatc ctggcatcgc tatggcaaca cacaaagacg acgaggagcg tttttttccc 2460
agtaacggga tcctgatttt tggcaaacaa aatgctgcca gagacaatgc ggattacagc 2520
gatgtcatgc tcaccagcga ggaagaaatc aaaaccacta accctgtggc tacagaggaa 2530
tacggfcatcg tggcagataa cttgcagcag caaaacacgg ctcctcaaat tggaactgtc 2640
aacagccagg gggccttacc cggtatggtc tggcagaacc gggacgtgta cctgcagggt 2700
cccatctggg ccaagatfccc tcacacggac ggcaacttcc acccgtctcc gctgatgggc 2760
ggctttggcc tgaaacafccc tccgcctcag atcctgatca agaacacgcc tgtacctgcg 2620
gatcctccga ccaccttcaa ccagtcaaag c t a &.c 11 tcatcacgca atacagcacc 26B0
ggacaggtca gcgtggaaat tgaatgggag ctgcagaagg aaaacagcaa gcgctggaac 2940
cccgagatcc agtacacctc caactactac aaatctataa gtgtggactt tgctgfctaat 3000
acagaaggcg tgtactctga accccgcccc attggcaccc gttacctcac ccgtaatctg 3060
taafcfcgccfcg ttaatcaata aaccggttga ttegtttcag ttgaactttg gtctctgcga 312 0
agggcgaatt c 3131
<210> 15 <211> 3127 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 13 ~3b
<4Q0> 15 gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat caaccggttt 60
attgattaac atgcaattac agattacggg tgaggtaacg agtgccaata gggcgaggct 12 0
cagagtaaac accctggctg tcaacggcaa agtccacacc agtctgcttt tcaaagttgg ISO
aggtgtactg aatctceggg tcccagcget tgctgttttc ctfcctgcagc tcccactcga 240
tttccacgct gacttgtccg gtgctgtact gtgfcgatgaa cgaagcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc cggaggatta gcgggaacgg gagtgttctt gatcaggatc tgaggaggcg 360
gatgtfctaag tccaaagccg cccatcaaag gagacgggtg aaagttgcca tccgtgtgag 420
gaatcttggc ccagatggga ccctgcaggt acacgtcccg gfctctgccag accatgccag 480
PL 217 623 B1
gtuaggcfccc c t gg tt g tt g acaacttgtg tctgggctgc agtattagcc gcttgtaagt 540
tgctgctgac tat cccgtat tcttccgtgg ctaeaggatt agtaggacga atttcttctt 600
catttgtcat taacacattt tccaatgtag t t 1t gttagt tgctccagtt tttccaaaaa S60
teaggacttcc gctggatggg aaaaagcggt cctcgtcgtc cttgtgagtt gccatggcga 720
cgccgggatt aaccaacgag tttctgccgt tcaggtgata tttggtggca ccagtccaag 780
caaagttgct gttgttgttt tgatccagcg fcfcttggagac cctttgttgc cggaagcagg S40
gtccaggtaa ccaattcttg gcttgttcgg ccatagttga a.gcjcccgccc tggtaaaact 900
gcagttcccg attgccagct gtgcctcctg ggtcactctg tgttctggcc aggtagtaca 960
agtactggtc gatgagggga ttcatcagcc ggtccaggct ctggctgtgt gcgtagctgc 1020
tgtggaaagg cacgtcctcg aagctgtagc tgaactcaaa gttgttgccc gttctcagca 1080
tctgagaggg gaagtactcc aggcagtaga aggaggaacg tcccacagac tgactgccat 1140
tgttgagagt caggtagccg tactgaggaa tcatgaagac gtccgceggg aacggaggca 1200
ggcagccctg gtgcgcagag ccgaggacgt acggcagctg gtattccgag tccgagaata 12 60
cctgaatcgt gctggtaagg ttattagcga tggtcgtaac gcegtcattc gtegtgacct 1320
ccttgacctg gatgttgaag agcttgaacc gcagcttctt gggccggaat ccccagttgt 1380
tgttgatgag tcgctgccag tcacgtggtg agaagfcggca gtggaatctg ttaaagtcaa 1440
aataccccca gggggtgctg tagccgaagt aggtgttgfcc gttggtacta cctgcagttt 1500
cactggagat ttgctcgtag aggtggttgt tgtaggtggg cagggcccag gttcgggtgc 1560
tggtggtaat gactctgtcg cccagccatg tggaatcgca atgccaattt cctgaggcat 1620
tacecaetcc gtcggcacct tcgttattgt cfcgccattgg tgcgccaccg cctgcagcca 1630
ctgtaccaga tcccacacta gagggcgctg ctggaggttc tccgagaggt tgagggtcgg 1740
ggactgactc tgagtcgcca gtctgaccga aattgagtct ctttctggcg ggctgctggc 1800
ccttcttgcc gatgcccgtg gaggagtcgg gggaacgctg aggtgacggc tctaccggtc 1860
tcttctttgc aggagccgtc Łtagcgectt cctcaaccag accgagaggt tcgagaaccc 1920
gcttcttggc etggaagact gctcgcccga ggttgccccc aaatgacgta tcttcttgca 1980
gacgctcctg aaactcggcg tcggcgfcggt tataccgcag gtacgggttg tcacccgcat 2040
tgagetgctg gtcgtaggcc ttgtcgtgct cgagggccgc fcgcgtccgcc gcgttgacgg 2100
gctccccctt gtcgagtccg ttgaagggtc cgaggtactt gtagccagga agcaccagac 2160
cccggccgtt gtcctgcttt tgctggttgg cttfcgggttt cggggctcca ggtfcfecaggt 2220
cccaccactc gcgaatgccc tcagagaggt tgtcctcgag ccaatcfcgga agataaccat 2280
cggcagccat acctgattta aatcatttat tgttcaaaga tgcagtcatc caaatccaca 2340
ttgaccagat cgcaggcagt gcaagcgtct ggcacctttc ccatgatatg atgaatgtag 2400
PL 217 623 B1
cacagtttct gatacgcctt tttgacgaca gaaacgggtt tagattctga cacgggaaag 2460
cactctaaac agtcfcfctcfcg tccgtgagtg aagcagatat ttgaattctg attcattctc 2520
t C t^3 fc c fcgcagggaaa c agcat caga ttcatgccca cgfcgacgaga acatttgttt 2580
tggtacctgt ctgcgtagtt gatcgaagct tccgcgtctg acgtcgatgg ctgcgcaact 2640
gactcgcgca cccgfc fcfcggg ctcacttata tctgcgtcac tgggggcggg fcctttfcctfcg 2700
gctccaccet Łtfcfcgacgfca gaattcatgc tccacctcaa ccacgtaatc ctttgcccac 2760
cggaaaaagt ctttgacfctc ctgcfctggtg accttcccaa agtcatgatc cagacggcgg 2820
gtgagttoaa atttgaacat ccggtcttgc aacggctgct ggfcgttcgaa ggtcgttgag 2880
ttcccgtcga tcacggogca catgttggtg ttggagatga cgatcgcggg agtcgggtct 2940
atctgggccg aggacttgca tttctggtcc acgcgcacct tgcttcctcc gagaatggcfc 3000
ttggccgact ccaogacctt ggcggtcatc ttcccctcct cccaccagat caccatcttg 3060
tcgacacagt c g11 gaaggg aaagttetca ttggtccagt tgacgcagcc gtagaaaggg 3120
cgaattc 3127 <210> 16 <211> 3106
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 24- -1
<400> 16 gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagtteaac tgaaacgaat caaccggttfc 60
attgattaac aagtaattac aggttacggg tgaggtaacg ggtgccaatg sggcgaggct 120
csgfcataaac cccttcgtfcg ttgacagcaa attccacatt attagacttg gcataatttg 180
aggtgtactg aatctctgga ttccagcgtt tgctgttttc tttctgcagt tcccactcga 240
tctccacgct gacctggccg gtgctgtact gcgtgataaa tgaggcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc tggaggatta gcaggtaccg gggtgtfcttt gatgagaatt tgaggaggcg 360
ggtgtttgag tccaaatccg cccatcaggg gagacgggtg aaagttgccg tccgtgtgag 420
gaattttggc ccagatggga ccctgcaggc acacgtcccg gttctgccag accatgccgg 430
gcagagcccc ctggctgttg acagtctgtg tctggggtcc ggccgtagac gattgcaggt 540
tgctggagac cacaccgtat tcttctgtag ccacgggatt ggtggttttg atctcctcct 600
cgctggtcat tagcacgttt tccagcgttg tcttgttggc agcccccgtt ttgccaaaaa 660
ccagcactcc gttgatggga aagaactggt cctcgtcgtc cttgttggtg gccatggcta 720
cgcccgggtt ggttaatgaa tttctaccat tcagatggta tttagtggcc ccggtccagg 780
caaagttact gfctgttgttg cfcgtctatgt tttttgacag tctctgctgc cgataaeagg 840
gtccgggcag ccagttcttt gattgctcgg ccatggtgtt gggcccagcc tgatggaact 900
gcagctccct tgtggacccc gtagtgctct gggtccgggc caggtagtac aggtactggt 960
PL 217 623 B1
cgatgagggg attcatcagc cggtctaggc tctggctgtg cacatagctg ctgtggaaag 1020
gcacttcctc aaaggtgtag ctgaattcaa. agttattgcc cgttctcagc atctgagaag 1080
gaaagtactc caggcagtag aaggaggaac gtcccacaga ctgactgccg ttgtttagag 114 0
tcagatatcc gtactgagga atcatgaaca cgtccgcagg gaacggaggg aggcagccct 1200
ggtgcgcaga gccgaggacg tacggcagtt ggtactccga gtccgagaag aectgaatcg 1260
tgctggtaag gttattagcg atggtcgtaa cgccgtcgtt cgtcgtgacc tccttgacct 1320
ggatgttgaa caacttgaac cgcagctttc tgggccggaa tccccagttg ttgttgatga. 1380
gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttgaagtca aaafcagcccc 1440
agggggtgct gtagctgaag aagtggttgt cgttggtagc cccgctctga cttgatatct 1500
gcttgtagag gtggttgttg taggtgggca gggcccaggt gcgggtgctg gtggtgatga 1560
ctctgtcgcc cagccatgtg gaatcgcaat gccaatttcc ggaggcatta cccactccgt 1620
cggcgcctfcc gttattgtct gccattggtg cgccaccgcc tgcagccatt gtaccagatc 1630
ccagacctga gggcgcggcg ggaggttctc cgagaggttg ggggtcgggc actgactctg 1740
agtcgccagt ctgcccaaag ttgagcttct ttttagcggg ctgctggcct ttcttgccga 1800
tgcccgtgga ggagtcgggg gattctatgg gtctcttctt tccaggagcc gtcttagcga 1860
cttcctcaac cagaccgaga ggttcgagaa cccgcttctt ggcctggaag actgctcgcc 1920
cgaggttgcc cccaaaagac gtatcttctt gaagacgctc ctgaaactcg gcgtcggcgt 1980
ggttgtactt gaggtacggg ttgtccccct gctcgagctg cttgtcgtag gccttgtcgt 2040
gctcgagggc cgcggcgtct gcctcgttga ccggctctcc cttgtcgagt ccgttgaagg 2100
gtctgaggta cttgtagcca ggaagcacca gaccccggcc gtcgtcctgc ttttgctggt 2160
tggctttggg tttcggggct ccaggtttca agtcccacca ctcgcgaatg ccctcagaga 2220
ggttgtcctc gagccaatct ggaagataac catcggcagc catacctggt ttaagtcatt 2280
tattgeteag aaacacagtc atccaggtcc acgttgacca gatcgcaggc egagcaagca 2340
atctcgggag cccgccccag cagatgatga atggcacaga gtttccgata cgtcctcttt 2400
ctgacgaccg gttgagattc tgacacgccg gggaaacatt ctgaacagtc tctggtcccg 2460
tgcgtgaagc aaatgttgaa attctgattc actctctcgc atgtcttgca gggaaacagc 2520
atctgaagca tgcccgcgtg acgagaacat ttgttttggt acctgtcggc aaagtccacc 2580
ggagctcctt ccgcgtctga cgtcgatgga ttcgcgactg aggggcaggc ccgcttgggc 2640
tcgcttttat ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ccccaccctt tctgaegtag 2700
aacccatgcg ccacctcggt cacgtgatcc tgcgcccagc ggaagaacct tttgacttcc 2760
tgctttgtca ccttgccaaa gttatgctcc agacggcggg tgggttcaaa tttgaacatc 2820
cggtcctgca acggctgctg gtgctcgaag gtggcgctgt tcccgtcaat cacggcgcac 2880
PL 217 623 B1
atgttggtgt tggaggtgac ggtcacgggg gtggggtcga tctgggcgga cgacttgcac 2940
ttttggtcca cgcgcacctt gctgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg 3000
gccgtcatct tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cggcgcaate gttgaaggga 3050
aagttctcat tggtccagtt gacgcagccg tagaaagggc gaat tc 3106
<210> 17 <211> 3102 <212? DNA <213> nowy genotyp AAV, klon 27- 3
<400> 17 gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat caaccggttt 60
attgattaac aagtaatfcac aggttacggg tgaggtaacg ggtgccaatg gggcgaggct 120
cagtataaac. cccttcgttg ttgaeagcaa attccacatt attagacttg gcataatttg 180
aggfgtactg aatctctgga ttccagcgtt tgctgttttc tttctgcagt tcccactcga 240
tctccacgct gacctggccg gtgctgtact gcgtgataaa tgaggcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc tggaggatta gcaggtaccg gggtgttttt gatgagaatt tgaggaggcg 360
ggtgtttgag tccaaatccg cccatcaggg gagacgggtg aaagttgccg tccgtgtgag 420
gaatttcggc ccagatggga ccctgcaggt acacgtcccg gttctgccag accatgccgg 480
gcagagcccc ctggctgttg acagtctgtg tccggggtcc ggccgtagac gattgcaggt 540
tgctggagac cacaccgtat tcttctgtag ccacgggatt ggtggttttg atctcctcct 600
cgctggtcat tagcacgttt tccagcgttg tcttgttggc agcccccgtt ttgccaaaaa 660
ccagcactcc gttgatggga aggaactggt cctcgtcgtc cttgttggtg gccatggcta 720
cgcccgggtt ggttaatgaa tttctaccat tcagatggta tttagtggcc ccggtccagg 780
caaagttact gttgttgttg ctgtctatgt tttttgacag tctctgctgc cgataacagg 840
gtccgggcag ccagttcttt gattgctcgg ccacggtgtt gggcccagcc tgatggaact 900
gcagctccct tgtggacccc gtagtgctct 9991CC999C caggtagtac aggtactggt 960
cgatgagggg attcatcagc cggtccaggc tctggctgtg cgcatagctg ctgtggaaag 1020
gcacttcctc aaaggtgtag ctgaattcaa agttattgcc cgttctcagc atctgagaag 1080
gaaagtactc caggcagcag aaggaggaac gtcccacaga ctgactgccg ttgtttagag 1140
tcagatatcc gtactgagga atcatgaaca cgtccgcagg gaacggaggg aggcagccct 1200
ggtgcgcaga gccgaggacg tacggcagtt ggtactccga gtccgagaag acctgaatcg 1260
tgctggtaag gttattagcg atggtcgtaa ocjO e 9-1. 11 cgtcgtga cc tccttgacct 1320
ggatgttgaa caacttgaac cgcagctttc tgggccggaa tccccagttg ttgttgatga 1380
gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttgaagt ca aaatagcccc 1440
PL 217 623 B1
3.t2. cŁC^ C clcIlCjfccjcj*tej fc t£1GJC CCC^-JC tLC Ł-CJel C iH ciI? i ę11? 1500
gcttgtagag gtggttgttg taggtgggca gggcccaggt gcgggtgctg gtggtgatga 1560
ctctgtcgcc cagccatgtg gaatcgcaat gccaatttcc ggaggcatta cccactccgt 1620
cggcgccttc gttattgtct gccattggtg cgccaccgcc tgcagccatt gtaccagatc 1680
ccagacctga gggcgcggcg ggaggttctc cgagaggttg ggggtcgggc actgactctg 1740
agtcgccagt ctgcccaaag ttgagcttct ttttagcggg ctgctggcct ttcttgccga 180 0
tgcccgtgga ggagtcgggg gattctatgg gtctcttctt tccggaagcc gtcttagcgc 1860
cttcctcaac cagaccgaga ggttcgagaa cccgcttctt ggcctggaag actgctcgcc 1920
cgaggttgcc cccaaaagac gtatcttctt gaagacgctc ctgaaactcg gcgtcggcgt 1980
ggttgtactt gaggtacggg ttgtccccct gctcgagctg cttgtcgtag gccttgtcgt 2 04 0
gctcgagggc cgcggcgtct gcctcgttga ccggctctcc cttgtcgagt ccgttgaagg 2100
gtccgaggta cttgtagcca ggaagcacca gaccccggcc gtcgtcctgc ttttgctggt 2160
tggctttggg tttcggggct ccaggtttca agtcccacca ctcgcgaatg ccctcagaga 2220
ggttgtcctc gagccaatcfc ggaagataac catcggcagc catacctggt ttaagtcatt 2280
tattgctcag aaacacagtc atccaggtcc acgttgacca gatcgcaggc cgagcaagca 2340
atctcgggag cccgccccag cagatgatga atggcacaga gtttccgata cgtcctcttt 2400
ctgacgaccg gttgagattc tgacacgccg gggaaacatt ctgaacagtc tctggtcccg 24S0
tgcgtgaagc aaatgttgaa attctgattc attctctcgc atgtcttgca gggaaacagc 2520
atctgaagca tgcccgcgtg acgagaa.cat ttgttttggt acctgtcggc aaągtccacc 2580
ggagctccfct ccgcgtctga cgfccgatgga tccgcgactg aggggcaagc ccgcttgggc 2640
tcgcttttat ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ctccaccctt tctgacgtag 2700
aactcatgcg ccacctcggt cacgtgatcc tgcgcccagc ggaagaactc tttgacttcc 2760
tgctttgtca ccttgccaaa gtcatgctcc agacggcggg tgagttcaaa tttgaacatc 2820
cggtcttgta acggctgctg gtgctcgaag gtggtgctgt tcccgtcaat cacggcgcac 2 880
atgttggtgt tggaagtgac gatcacgggg gtgggatcga tctgggcgga cgacttgcac 2940
ttttggtcca cgcgcacctt gctgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg 3000
gccgtcatct tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatc gttgaaggga 3060
aagttctcat tggtccagtt gacgcagccg aagggcgaat tc 3102
<210> 1Θ <211> 3106 <212 > DNA <213 > nowy serotyp AAV, klon 7-2 <4G0s· 18 gcggccgcga attcgccctt cgcagagacc aaagttcaac tgaaacgaat cagccggttt S0
PL 217 623 B1
attgattaac aagtaattac aggttacggg tgaggtaacg ggtgccaatg gggcgaggct 120
cagtataaac cccttcgttg ttgacagcaa attccacatt attagacttg gcataatttg ieo
aggtgtactg aat cfcetgga ttccagcgtt tgctgttttc tttctgcagt tcccactcga 240
tctccacgcfc gacctggccg gtgctgtact gcgtgataaa tg&ggcaaac ttggcaggag 300
taaacacctc tggaggatta gcaggtaccg gggtgttttt gatgagaatt tgaggaggcg 360
ggtgtttgag tccaaatccg cccatcaggg gagacgggtg aaagttgccg tccgtgtgag 420
gaattttggc ccagatggga ccctgcaggt acacgtcccg gttctgccag accatgccgg 480
gcagagcccc ctggctgttg acagtctgtg tctggggtcc ggccgtagac gattgcaggt 540
tgctggagac cacaccgtat tcttctgtag ccacgggatt ggtggttttg atctcctcct 600
cgctggtcat tagcacgttt tccagcgttg tcttgttggc agcccccgfct ttgccaaaaa 660
ccagcactcc gttgatggga aagaactggt cctcgtcgtc cttgttggtg gccatggcfca 720
egcccgggtt ggttaatgaa tttctaccat tcagatggta tttagtggcc ccggtccagg 780
caaagttact gttgttgttg ctgtctatgfc tttttgacag tctctgctgc cgataacagg 840
gtccgggcag ccagttcttt gafctgctcgg ccatggtgtt gggcccagcc tgatggaact 900
gcagctccct tgtggacccc gtagtgctct gggtccgggc caggtagfcac aggtactggt 960
cgatgagggg attcatcagc cggtccaggc tctggctgtg cgcatagctg ctgtggaaag 1020
gcacttcctc aaaggtgtag ctgaattcaa agttatcgcc cgttctcagc atctgagaag 1080
gaaagtactc caggcagtag aaggaggaac gtcccacaga ctgactgccg ttgtttagag 1140
tcagatatcc gtactgagga atcatgaaca cgtccgcagg gaacggaggg aggcagccct 1200
ggtgcgcaga gtcgaggacg tacggcagtt ggtactccga gtccgagaag acctgaatcg 1.260
tgctggtaag gttattagcg atggtcgtaa cgccgtcgtt cgtcgtgacc tccttgacct 1320
ggatgttgaa caacttgaac cgcagctttc tgggccggaa Łccccagttg ttgtfcgatga 1380
gtcgctgcca gtcacgtggt gagaagtggc agtggaatct gttgaagtca aaatagcccc 1440
agggggtgct gtagccgaag aagtggttgt cgttggtagc cccgctctga cttgatatct 1500
gcttgtagag gfcggttgttg taggtgggca gggcccaggt gcgggtgctg gtggtgatga 1560
ctctgtcgcc cagccatgtg gaatcgcaat gccaatttcc ggaggcatta cccactccgt 1620
cggcgcctfcc gttattgtct gccat tggtg cgccaccgcc tg cagcc att gtaccagatc 1680
ccagacctga gggcgcggcg ggaggttctc cgagaggttg ggggtcgggc actgactctg 1740
agtcgccagt ctgcccaaag ttgagcttct ttttagcggg cggctggccg ttcttgccga 1800
tgcccgtgga ggagtegggg gattctafcgg gtctcttctt tccaggagcc gtcttagcgc 1860
cttcctcaac cagaccgaga ggttcgagaa cccgcttctt ggccfcggaag actgctcgcc 1920
cgaggttgcc cccaaaagac gtatcttctt gaagacgctc ctgaaactcg gcgtcggcgt 1980
PL 217 623 B1
ggttgtactt gaggtacggg ttgtccccct gctcgagcfcg cttgtcgtag gccttgtcgt 2040
gctcgagggc cgcggcgtct gcctcgttga ccggctctcc cttgtcgagt ccgttgaagg 2100
gtccgaggta cctgtagcca ggaagcacca gaccccggcc gtcgtcctgc ttttgctggt 2160
tggctttggg tttcggggct ccaggtttca agtcccacca ctcgcgaatg ccctcagaga 2220
ggttgccctc gagccaatct ggaagataac catcggcagc catacctggt ttaagtcatt 2280
tattgctcag aaacacagtc atccaggtcc acgttggcca gatcgcaggc cgagcaagca 2340
atctcgggag cccgccccag cagatgatga atggcacaga gtttccgata cgtcctcttt 2400
ctgacgaccg gttgagat tc tgacacgccg gggaaacatt ctgaacagtc tctggtcccg 2460
tgcgtgaagc aaatgttgaa attctgattc attctctcgc atgtcttgca ggggaacagc 2520
at ctgaagca tgcccgcgtg acgagaacat ttgttttggt acctgtcggc aaagtccacc 2580
ggagctcctt ccgcgtctga cgtcgatgga tccgcgacfcg aggggcaggc ccgcttgggc 2640
tcgcttttat ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ctccaccctt tctgacgtag 2700
aactcatacg ccacctcggt cacgtgatcc tgcgcccagc ggaagaactc tttgacttcc 2760
tgctttgtca ccttgccaaa gtcatgctcc agacggcggg tgagttcaaa tttgaacatc 2820
cggtcttgta acggctgctg gtgctcgaag gtggtgctgt tcccgtcaat cacggcgcac 2880
atgttggtgt tggaagtgac gatcacgggg gtgggatcga tctgggcgga cgacttgcac 2940
ttttggtcca cgcgcacott gctgccgccg agaatggcct fcijęjcgaactc cacgaccttg 3000
gccgtcatcc tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatc gttgaaggga 3060
aagttctcat tggtccagtt gacgcagccg tagaaagggc gaattc 3106
<210> 19 <211> 3105 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon Cl <400> 19
gaattcgccc ttgctgcgtc aactggacca atgagaactt tcccttcaac gattgcgtcg 60
acaagatggt gatctggtgg gaggagggca agatgaccgc caaggtcgtg gagtccgcca 12 0
aggccattct gggcggaagc aaggtgcgcg tggaccaaaa gtgcaagtc a tcggcccaga 180
tcgaccccac gcccgtgatc gtcacctcca acaccaacat gtgcgccgtg atcgacggga 240
acagcaccac cttcgagcac cagcagccgc tgcaggaccg catgttcaag ttcgagctca 300
cccgccgtct ggagcacgac tttggcaagg tgaccaagca ggaagtcaaa gagttcttcc 360
gctgggctca ggatcacgtg actgaggtgg cgcatgagtt ctacgtcaga aagggcggag 420
ccaccaaaag acccgccccc agtgacgcgg atataagcga gcccaagcgg gcctgcccct 480
cagttgcgga gccatcgacg tcagacgcgg aagcaccggt ggactttgcg gacaggtacc 540
PL 217 623 B1
aaaacaaatg ttctcgtcac gcgggcatgc ttcagatgct gtttccctgc aagacatgcg 600
agagaatgaa tcagaatttc aacgtctgct tcacgcacgg ggtcagagac tgctcagagt 660
gcttccccgg cgcgtcagaa tctcaacccg tcgtcagaaa aaagacgtat cagaaactgt 720
gcgcgattca tcatctgctg gggcgggcac ccgagattgc gtgttcggcc cgcgatctcg 780
tcaacgtgga cttggatgac tgtgtttctg agcaataaat gacttaaacc aggtatggct 84 0
gctgacggtt atcttccaga ttggctcgag *4 Cl Lr CSt-U L·· ctgagggcat tcgcgagtgg 900
tgggacetga aacctggagc ccccaagccc aaggccaacc agcagaagca ggacgacggc 960
cggggtctgg tgcttcctgg ctacaagtac ctcggaccct tcaacggact cgacaagggg 1020
gageccgtca acgcggcgga cgcagcggcc ctcgagcacg acaaggccta cgaccagcag 1080
ctcaaagcgg gtgacaatcc gtacctgcgg t ataaccacg ccgacgccga gtttcaggag 1140
cgtctgcaag aagatacgte ttttgggggc aacctcgggc gagcagtett ccaggccaag 12 0 0
aagagggtac tcgaacctct gggcctggtt gaagaaggtg ctaagacggc tccfcggaaag 1260
aagagaccgt tagagtcacc acaagagccc gactcctcct caggaatcgg caaaaaaggc 1320
aaacaaccag ccaaaaagag actcaacttt gaagaggaca ctggagccgg agacggaccc 1380
cctgaaggat cagataecag cgccatgtct tcagacattg aaatgcgtgc agcaccgggc 144 0
ggaaatgctg tcgatgcggg acaaggttcc gatggagtgg gtaatgcctc gggtgattgg 1500
cattgcgatt ccacctggtc tgagggcaag gtcacaacaa cctcgaccag aacctgggtc 1560
ttgcccacct acaacaacca cttgtacctg cggctcggaa caacatcaaa cagcaacacc 1620
tacaacggat tctccacccc ctggggatac tttgacttta acagattcca ctgtcacttc 1680
tcaccacgtg actggcaaag actcatcaac aacaactggg gactacgacc aaaagccatg 1740
cgcgttaaaa tcttcaatat ccaagttaag gaggtcacaa cgtcgaacgg cgagactacg iaoo
gtcgctaata accttaccag cacggttcag atatttgcgg aetcgtcgta tgagctcccg 1860
tacgtgatgg acgctggaca agagggaagt ctgtctcctt tccccaatga cgtcttcatg 1920
gtgcctcaat atggctactg tggcattgtg actggcgaaa atcagaacca gacggacaga 1980
aatgctttct actgcctgga gtattttcct tcacaaatgc tgagaactgg caataacttt 2040
gaaatggc tt acaactttgg gaaggtgccg £ ^Mi tgtatgctta cagccagage 2100
ccggacagac tgatgaafccc cctcctggac cagtacctgt ggcacttaca gtcgaccacc 2160
tctggagaga ctctgaatca aggcaatgca 3 C 3.3. C C 3. <2 2Lt t tggaaaaat caggagtgga 2220
gactttgcct tttacagaaa gaactggctg cctgggcctt gtgttaaaca gcagagactc 2280
tcaaaaactg ccagtcaaaa ttacaagatt cctgccagcg ggggcaacgc tctgttaaag 2340
tatgacaccc actatacctt aaacaaccgc tggagcaaca tagcgcctgg acctceaatg 2400
gcaacagctg gaccttcaga tggggacttc clCJCcŁclCC^CCC agctcatctt ccctggacca 2460
PL 217 623 B1
tcagtcaccg gaaacacaac aacctcagca aacaatctgt tgtttacatc agaagaagaa 252 0
attgctgccą ccaacccaag agacacggac a tgtttggtc agattgctga caataatcag 2580
aatgctacaa ctgctcccat aaccggcaac gtgactgcta tgggagtgct fccctggcatg 2 64 0
gtgtggcaaa acagagacat ttactaccaa gggccaattt gggccaagat cccacacgcg 2700
gacggacatt ttcatccttc accgctaatt ggcggttttg gactgaaaca tccgcctccc 2760
cagatattta tcaaaaacac ccccgtacct gccaatcctg cgacaacctt cactgcagcc 2 82 0
agagtggact ctttcatcac acaatacagc accggccagg tcgctgttca gattgaatgg 2880
gaaatcgaaa aggaacgctc caaacgctgg aatcctgaag tgeagtttac ttcaaactat 2940
cttctatgtt gtgggctccc gatacaactg ggaagtatac agagccgcgg 3000
gttattggct ctcgttattt gactaatcat ttgtaactgc ctagttaatc aataaaccgt 3060
gtgattcgtt tcagttgaac tttggtctct gcgaagggcg aattc 31.05
<210> 20 <211> 3105 <212-· DWA <213> nowy serotyp AAV, klon C3 <400> 20
gaattcgccc t fcgctgcgtc aactggacca atgagaactt tcccttcaac gattgcgtcg 60
acaagatggt gatctggtgg gaggagggca agatgaccgc caaggtcgtg gagtccgcca 120
aggccattct gggcggaagc aaggtgcgcg tggaccaaaa gtgcaagtca tcggcccaga 180
tcgaccccac gcccgtgatc gtcacctcca acaccaacat gtgcgccgtg atcgacggga 240
acagcaccac cttcgagcac cagcagccgc tgcaggaccg catgttcaag ttcgagctca 300
cccgccgtct ggagcacgac tttggcaagg tgaccaagca ggaagtcaaa gagttcttcc 360
gctgggctca ggatcacgtg actgaggtgg cgcatgagtt ctacgtcaga aagggcggag 420
ccaccaaaag acccgccccc agtgacgcgg atataagcga gcccaagcgg gcctgcccct 480
cagttgcgga gccatcgacg tcagacgcgg aagcaccggt ggactttgcg gacaggtacc 540
aaaacaaatg ttctcgtcac gcgggcatgc ttcagatgct gtttccctgc aagacatgcg 600
agagaatgaa tcagaatttc aacgtctgct tcacgcacgg ggtcagagac tgctcagagt 660
gcttccccgg cgcgtcagaa tctcaacccg tcgtcagaaa aaagacgtat cagaaactgt 720
gcgcgattca tcatctgctg gggcgggcac ccgagattgc gtgttcggcc tgcgatctcg 780
tcaacgtgga cttggatgac tgtgtttctg agcaataaat gacttaaacc aggtatggct B40
gctgacggtt atcttccaga ttggctcgag gacaacctct ctgagggcat tcgcgagtgg 900
tgggacctga aacctggagc ccccaagctc aaggccaacc agcagaagca ggacgacggc 9S0
cggggtCtgg tgcttcctgg ctaeaagtac ctcggaccct tccacggact cgacaagggg 1020
gagcccgtca acgcggcgga cgcagcggcc ctcgagcacg acaaggcct a cgaccagcag 10S0
PL 217 623 B1
ctcaaagcgg gtgacaatcc gtacctgcgg tataaccacg ccgacgccga gtttcaggag 1140
egtcfcgcaag aagatacgtc ttttgggggc aacctcgggc gagcagfccfct ccaggcaaag 1200
aagagggtac t c g aa ccact gggcctggtt gaagaaggtg c taagacggc tcctggaaag 1260
aagagaccgt tagagteaec acaagagccc gactcctcet caggaatcgg caaaaaaggc 1320
aaacaaccag ccaaaaagag actcaacttfc gaagaggaca ctggagccgg agacggaccc 1380
ectgaaggat cagataccag cgccatgtct tcagacattg aaatgcgtgc agcaccgggc 1440
ggaaatgctg tcgatgcggg acaaggttcc gatggagtgg gtaatgcctc gggtgattgg 1500
cattgcgatt ccacctggtc tgagggcaag gtcaeaacaa cetcgaccag aacctgggtc 1560
fctgcccacct acaacaacca cttgtacctg cggctcggaa caacatcaaa cagcaacacc 1620
fcacaacggat tctccacccc ctggggatac tttgacttta acagattcca ctgtcacttc 1630
tcaccacgtg actggcaaag acfccatcaac aaeaactggg gactacgacc aaaagccatg 1740
cgcgttaaaa tcttcaatat ccaagttaag gaggtcacaa cgtcgaacgg cgagactacg 1300
gtcgctaata accttaccag cacggttcag atatttgcgg actcgtcgta tgagctcccg 1860
tacgfcgatgg acgctggaca agagggaagt ctgectcctt tccccaatga cgtcttcatg 1920
gtgcctcaat atggctactg tggcattgtg actggcgaaa atcagaacca gacggacaga 1980
aatgctttct actgcctgga gtattttcct tcacaaatgc tgagaactgg caataacttt 2040
gaaafcggctt acaactttga gaaggtgccg ttccactcaa tgtatgctca cagccagagc 2100
cfcggacagac tgatgaatcc cctcctggac cagtacctgt ggcacttaca gtcgaccacc 2160
tctggagaga ctctgaatca aggcaatgca gcaaccacat ttggaaaaat caggagtgga 2220
gactttgcct fcttacagaaa gaactggctg cctgggcctt gtgttaaaca gcagagattc 2280
tcaaaaactg ccagtcaaaa ttacaagatt cctgccagcg ggggcaacgc tctgttaaag 2340
tatgacaccc actatacctt aaacaaccgc tggagcaaca tagcgcctgg acctccaatg 2400
gcaacagctg gaccttcaga tgggg&ctte agcaacgccc agctcatctt ccctggacca 2460
tcagtcaccg gaaacacaac aacctcagca aacaatctgt tgtttacatc agaaggagaa 2520
attgctgcca ccaacccaag agacacggac atgtttggtc agattgctga caataatcag 2580
aatgctacaa ctgcfccccat aaccggcaac gtgactgcta tgggagtgct tcctggcatg 2640
gtgtggcaaa acagagacat ttactaccaa gggccaattt gggccaagat cccacacgcg 2700
gacggacatt ttcatccttc accgctaatt ggcggttttg gactgaaaca tccgcctccc 2760
cagatafcfcfca tcaaaaacac ccccgtacct gccaatcctg cgacaacctt cactgcagcc 2820
agagtggact ctttcatcac acaatacagc accggccagg tcgctgttca gattgaatgg 2Θ80
gaaatcgaaa aggaacgcfcc C elci elC CJ C aatcctgaag tgcagtttac ttcaaactat 2940
gggaaccagt cttctatgtt gtgggctccc gatacaactg ggaagtatac agagccgcgg 3000
PL 217 623 B1
gttattggct ctcgttattt gactaatcat ttgtaactgc ctagttaatc aataaaccgt 3060
gtgattcgtt tcagttgaac tttggtctct gcgaagggcg aattc 3105
<210> 21 <211> 3105 <212> DNA <213> nowy aerotyp AAV, klon CS <400> 21 gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga atcacacggt ttattgatta 60
actaggcagt tacaaatgat tagtcaaata acgagagcca ataacccgcg gctctgtata 120
cttcccagtt gtatcgggag cccacaacat agaagactgg ttcccacagt ttgaagtaaa 180
ctgcacttca ggattccagc gtttggagcg ttccttttcg atttcccatt caatc tgaac 240
agcgacctgg ccggtgctgt attgtgtgat gaaagagtcc actctggctg cagtgaaggt 300
tgtcgcagga taggcaggta cgggggtgtt tttgataaat atctggggag gcggatgttt 3S0
cagtccaaaa ccgccaatta gcggtgaagg atgaaaatgt ccgtccgcgt gtgggatctt 420
ggcccaaatt ggcccttggt agtaaatgtc tctgttttgc cacaccatgc caggaagcac 480
tcccatagca gtcacgttgc cggttatggg agcagttgta gcattctgat tattgtcagc 540
aatctgacca aacatgtccg tgtctcttgg gttggtggca gcaatttctt cttctgatgt 600
aaacaacaga ttgtttgctg aggttgttgt gtttccggtg actgatggtc cagggaagat 660
gagctgggcg ttgctgaagt ccccatctga aggtccagct gttgccattg gaggtccagg 720
cgctatgttg ctccagcggt tgtttaaggt atagtgggtg tcatacttta acagagcgtt 780
gcccccgctg gcaggaatct tgtaattttg actggcagtt tttgagaafcc tctgctgttt 840
aacacaaggc ccaggcagcc agttctttct gtaaaaggca aagtctccac tcctgatttt 900
tccaaatgtg gttgctgcat tgccttgatt cagagtctct ccagaggtgg tcgactgtaa 960
gtgccacagg tactggtcca ggaggggatt catcagtccg tccaggctct ggctgtgagc 1020
atacattgag tggaacggca ccttctcaaa gttgtaagcc gtttcaaagt tattgccagt 1080
tctcagcatt tgtgaaggaa aatactccag gcagtagaaa gcatttctgt ccgtctggtt 1140
ctgattttcg ccagtcacaa tgccacagta gccatattga ggcaccatga agacgtcatt 1200
ggggaaagga ggcagacttc cctcttgtcc agcgtccatc acgtacggga gctcatacga 1260
cgagtccgca aatatctgaa ccgtgctggt aaggttatta gcgaccgtag tctcgccgtt 1320
cgacgttgtg acctccttaa cttggatatt gaagatttta acgcgcatgg cttttggtcg 1380
tagtccccag ttgttgttga tgagtctttg ccagtcacgt ggtgagaagt gacagtggaa 1440
tctgttaaag tcaaagtatc cccagggggt ggagaatccg ttgtaggtgt tgctgtttga 1500
tgttgttccg agccgcaggt acaagtggtt gttgtaggtg ggcaagaccc aggttctggt 1560
cgaggttgtt gtgaccttgc cctcagacca ggtggaatcg /** Ά SI +“ CTi*** i** a Λ f* ca. o. dsit t cacccgaggc 1620
PL 217 623 B1
attacccact ccatcggaac cttgtcccgc atcgacagca tttccgcccg ejfcgctgcacg 1680
catttcaatg tctgaagaca tggcgctggt atctgatcct tcagggggtc cgtctccggc 1740
tccagtgtcc fc c11caaagt tgagtctctt tttggctggt tgtttgcctt ttttgccgat 1800
tcctgaggag gagtcgggct cttgtggtga ctctaacggt ctcttctttc caggagccgt 18S0
cttagcacct tcttcaacca ggcccagagg ttcgagtacc etettettgg cctggaagac 1920
tgctcgcccg aggttgcccc caaaagacgt atettettge agacgctcct gaaactcggc 1980
gtcggcgtgg tfcataccgca ggtacggatt gtcacccgct ttgagctgct ggtcgtaggc 2040
cttgtcgtgc tcgagggccg ctgcgtccgc cgcgttgacg t C C C O C fc· tgtcgagtcc 2100
gttgaagggt ccgaggta ct cgtagccagg aagcaccaga ccccggccgt cgtcctgctt 2150
ctgctggttg gccttgggct tgggggctcc aggtttcagg tcccaccact cgcgaatgcc 2220
ctcagagagg ttgtcctcga gccaatctgg aagataaccg tcagcagcca tacctggttt 2280
aagtcattta ttgctcagaa acacagtcat ccaagtccac gttgacgaga tcgcaggccg 2340
aacacgcaat ctcgggtgcc cgccccagca gatgatgaat cgcgcacagt ttctgatacg 2400
tcttttttct gacgacgggt tgagattctg acgcgccggg gaagcactct gagcagtctc 2460
tgaccccgtg cgtgaagcag acgttgaaat tctgattcat tctctcgcat gtcttgcagg 2520
gaaacagcat ctgaagcatg cccgcgtgac gagaacattt gttttggtac etgtccgcaa 2550
ggtccaccgg tgcttccgcg tetgacgtcg atggctccgc aactgagggg caggcccgct 2640
tgggctcgct tatatccgcg tcactggggg cgggtctttt ggtggctccg ccctttcfcga 2700
cgtagaactc atgcgccacc tcagtcacgt gatcctgagc ccagcggaag aactctttga 2750
cttcctgctt ggtcaccttg ccaaagtcgt gctccagacg gcgggtgagc tcgaacttga 2820
acatgcggtc ctgcagcggc tgctggtgct cgaaggtggt gctgttcccg tcgatcacgg 2380
cgcacatgtt ggtgttggag gtgacgatca cgggcgtggg gtcgatctgg gccgatgact 2940
tgcacttttg gtccacgcgc accttgcttc cgcccagaat ggccttggcg gactccacga 3000
ccttggcggt catcttgccc tcctcccacc agatcaccat cttgtcgacg caatcgttga 3060
agggaaagtt ctcattggtc cagttgacgc agcaagggcg aatte 3105
<210> 22 <211> 3094
<212> <213> DNA now. r serotyp AAV, klon. FI
<400> 22
gaattcgccc ttgctgcgtc aactggacca agagaacttt cccttcaacg attgcgtega 60
caagatggtg s t cfcggisggg eigga,gggc«ia gafcga. eggee aaggtcgtgg agtccgccaa 120
agccattctg ggcggaagca aggtgcgcgt cgaccaaaag tgcaagtcct cggcccagat 180
PL 217 623 B1
cgatcccacc eccgtgatcg tcacctccaa caccaacatg tgcgccgtga tcgacgggaa 240
cagcaccacę tfccgagcacc ageageegtt gcaggaccgg at g 11 c a aa t ttgaactcac 300
ccgccgfcctg gaacacgact ttggcaaggt gaccaagcag gaagtcaaag agttcttccg 360
ctgggcfcagt gatcacgtga ctgaggtgac gcafcgagfctc tacgtcagaa acjcjgccjęja.cfc 420
cagcaaaaga cccgcccccg atgacgcgga tataagcgag cccaagcggg cctgtccctc 480
agtcacggac ccatcgacgt cagacgcgga aggagctccg gtggactttg ccgacaggta 540
ccaaaacaaa tgttctcgtc acgcgggcat gcttcagatg ctgtttccct gcaaaacgtg 600
cgagagaatg aateagaatt tcaacatttg cttcacgcac ggggtcagag actgtttaga 660
atgtttcccc ggcgfcgtcag aatctcaacc ggtcgtcaga aaaaagacgt atcggaagct 720
gtgtgcgatt catcatctgc tggggcgggc acccgagatt gcttgctcgg cctgcgacct 780
ggtcaacgtg gacctggacg actgtgtttc tgagcaataa atgacttaaa ccgggtatgg 840
ctgccgatgg ttatcttcca gattggctcg aggacaacct ctctgagggc attcgcgagt 900
ggtgggacct gaaacctgga gccccgaaac ccaaagccaa ccagcaaaag caggacgacg 960
gccggggtct ggtgcttcct ggctacaagt acctcggacc cttcaacgga ctcgacaagg 1020
gggagcccgt caacgcggcg gacgcagcgg ccctcgagca cgacaaggcc tacgaccagc 1080
agctcaaagc gggtgacaat ccgtacctgc ggtataacca cgccgacgcc gagtttcagg 1140
agcgtctgca agaagatacg tcatttgggg gcaacctcgg gcgagcagtc ttccaggcca 1200
agaagcgggt tctcgaacct ctcggtctgg ttgaggaagg cgctaagacg gctcctggaa 126 0
agaagagacc catagactct ccagactcct ccacgggcat cggcaaaaaa ggccagcagc 1320
ccgctaaaaa gaagctcaat tttggtcaga ctggcgactc agagtcagtc cccgaccctc 1380
aacctcttgg agaacctcca gcagcgccct ctagtgtggg atctggtaca atggctgcag 1440
gcggtggcgc accaatggca gacaataacg aaggtgccga cggagtgggt aatgcctcag 1500
gaaattggca ttgcgattcc acatggctgg gcgacagagt catcaccacc agcaccagaa 1560
cctgggccct ccccacctac aacaaccacc tctacaagca aatctccagc ageageteag 1620
gagccaccaa tgacaaccac tacttcggcfc acagcacccc ctgggggtat tttgacttta 16 80
acagattcca etgceacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac aacaactggg 1740
gattccggcc caagaagctg cggttcaagc tcfctcaacat ccaggtcaag gaggtcacaa 1800
cgaafcgacgg cgfccacgacc ategetaata accttaccag cacggttcag gtcttctcgg 1860
actcggaata ccagctgccg tacgtcctcg gctctgcgca ccagggcfcgc ctgcctccgt 1920
tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acggctacct gactctgaac aacggcagcc 1980
aatcggtggg CCy 11. ęct cc ttctacfcgcc acx fc fc fc. fc. cccctcfccaa atgctgagaa 2040
cgggcaacaa ctttgagttc agttacagct tcgaggacgt gcctttccac agcagctacg 2100
PL 217 623 B1
cgcacagcca gagcctagac cggctgatga accctctcat cgaccagtac ctgtactacc 2160
tggcccggac ccagagcacc acgggttcca ccagggaact gcaatttcat caagctgggc 2220
ccaatactat ggccgagcag tcaaagaact ggctgcctgg accctgctat aggcaacagg 2280
gactgtcaaa gaacttggac tttaacaaca acageaattt tgcctggact gctgccacta 2340
aatatcatct gaatggcaga aactctttga ccaatcctgg cattcccatg gcaaccaaca 2400
aggatgatga ggaccagttc tttcccatca acggggfcact ggtttttggc aagacgggag 2460
ctgccaacaa aactacgctg gaaaacgt tc tgatgaccag cgaggaggag atcaagacca 2520
ctaaccctgt ggctacagaa gaatacggtg tggtctccag caacctgcag ccgtctacag 2580
ccgggcctca atcacagact atcaacagcc agggagcact gcctggeatg gtctggcaga 2640
accgggacgt gtatcfcgcag ggtcccatct gggccaaaat tcctcacacg gatggcaact 2700
ttcacccgtc tcctctgatg ggcggttttg gactcaaaca cccgcctcca cagatcctga 2760
tcaaaaacac acctgtacct gctaatcctc cggaggtgtt tactcctgcc aagtttgcct 2920
ccttcatcae gcagtacagc accggacaag fccagcgtgga aatcgagtgg gagcfcgcaga 2380
aagaaaacag caagcgctgg aacccagaaa ttcagtatac fctccaattat gccaagtcta 2 94 0
ataatgttga atttgctgtg aaccctgatg gtgtttatac tgagcctcgc cccattggca 3000
ctcgttacct cccccgtaat ctgtaattgc ttgttaatca ataaaccggt tgattcgttt 3060
cagttgaact ttggtctctg cgaagggcga attc 3094
<210> 23 <211> 3095 <212 > DNA <213> nowy serotyp AAV, klon E3 <4O0> 23
gaafctcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga atcaaccggt ttattgatta 60
acaagcaatt acagattacg ggtgaggtaa cgagtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 120
acaccatcag ggttcacagc aaattcaaca ttattagact tggcataatt ggaagtatac 130
tgaatttctg ggttccagcg cttgctgttt tctttctgca gctcccactc gatttccacg 240
ctgacttgfcc cggtgctgta ctgcgtgatg aaggaggcaa acttggcagg agtaaacacc 300
tccggaggat tagcaggtac aggtgtgttt ttgatcagga tctgtggagg cgggtgtttg 360
agtccaaaa c cgcccatcag aggagacggg tgaaagttgc catccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag tl. SC S.C CJ t C O cggttctgcc agaccatgcc aggcagtgct 480
ccctggctgt tgatagtctg tgattgaggc ccggctgtag acgactgcag gttgctggag 540
accacaccgt attcttctgt agccacaggg ttagtggtct tgatctcctc ctcgctggtc 600
atcagaacgt tttccagcgt agtfcttgttg gcagctcccg tcttgccaaa aaccagtacc 660
PL 217 623 B1
ccgttgatgg gaaagaactg gtcctcatca tccttgttgg ttgccatggg aatgccagga 720
ttggtcaaag agtttctgcc attcagatga tatttagtgg cagcagtcca ggca&aat;fc.g 780
ctgttgttgt taaagtccaa gttctttgac agtctctgtt gcctatagca gggtccaggc 840
agccagttct ttgactgctc ggccatagta ttgggcccag cttgatgaaa t fcgcagfctcc 900
ctggtggaac ccgtggtgct ctgggtccgg gccaggtagt acaggtactg gtcgatgaga 960
gggttcatca gccggtctag gctctggctg tgcgcgtagc tgctgtggaa aggcacgtcc 1020
tcgaagctgt aactgaactc aaagttgttg cccgttctca gcatfctgaga 1080
tccaggcagt agaaggagga acggcccacc gattggctgc cgttgtccag agfcc aggt ag 1140
ccgtactgag gaatcatgaa gacgtccgcc gggaacggag gcaggcagcc ctggtgcgca 1200
gagccgagga cgtacggcag ctggtattcc gagtccgaga agacctgaac cgtgctggta 1260
aggttattag cgatggtcgt gacgccgtca ttcgttgtga cctccttgac ctggatgttg 1320
aggagcttga accgcagctt cttgggccgg aatccccagt tgttgttgat gagfccgctgc 1380
cagtcacgtg gtgagaagtg gcagtggaat ctgttaaagt caaaataccc ccagggggtg 1440
ctgtagccga agtagtggtt gtcattggtg gctcctgagc tgctgctgga gatttgcttg 1500
tagaggtggt tgttgtaggt ggggagggcc caggttctgg tgctggtggfc gatgactctg 1560
tcgcccagcc atgtggaatc gcaatgccaa tttcctgagg cattacccac tccgtcggca 1620
ccttcgttat tgtctgccat tggtgcgcca ccgcctgcag ccattgtacc agatcccaca 1680
ctagagggcg ctgctggagg ttctccaaga ggttgagggt cggggactga ctctgagtcg 1740
ccagtctgac caaaattgag cttcttttta gcgggctgct ggcctttttt gccgatgccc 1800
gtggaggagt ctggagagcc tatgggtctc ttctttccag gagccgtctt agcgccttcc 1860
tcaaccagac cgagaggttc gągaacccgc ttcttggcct ggaagactgc tcgcccgagg 1920
ttgcccccaa atgacgtatc ttcttgcaga cgctcctgaa actcggcgtc ggcgtggtta 1980
taccgcaggt acggattgtc acecgctttg agctgctggt cgtaggcctt gtcgtgctcg 2040
agggccgctg cgtccgccgc gttgacgggc tcccccttgt cgagtccgtt gaagggtccg 2100
aggtacttgt agccaggaag caccagaccc cggccgtcgt cctgcttttg ctggttggct 2160
ttgggtttcg gggctccagg tttcaggtcc caccactcgc gaatgccctc agagaggttg 2220
tcctcgagcc aatctggaag ataaccatcg gcagccatac ctggtttaag tcatttattg 2280
eteagaaaca cagtcgt cca ggtccacgtt gaccaggtcg C 3. ĆJCJ C C Cf <3 CJ C aagcaatctc 2340
gggtgcccgc cccagcagat gatgaatcgc acacagcttc cgatacgtct tttttctgac 2400
gaccggttga gattctgaca cgccggggaa acattctaaa cagtctctga ccccgtgcgt 2460
gaagcaaatg ttgaaattct gattcattct ctcgcacgtt ttgcagggaa acagcacctg 2520
aagcatgccc gcgtgacgag aacatttgtt ttggtacctg tcggcaaagt C C ctC 2580
PL 217 623 B1
tccttccgcg tctgacgtcg atgggtccgt gactgaggga cgggcccgct tgggctcgct 2540
tatatccgcg teateggggg cgggtctttt gctggctccg ccctttetga cgtagaactc 2700
atgcgtcacc tcagtcacgt gatcactagc ccagcggaag aactctttga cttcctgctt 2760
tgtcaccttg ccaaagtcgt gttccagacg gcgggtgagt tcaaatttga acatccggtc 2820
ctgcaacggt tgctggtgct cgaaggtggt gctgttcccg fccgatcacgg cgcacatgtt 2830
ggtgttggag gtgacgatca ^99999^-999 atcgatctgg gcggacgact tgcacttttg 2940
gtccacgcgc accttgctgc cgccgagaat ggccttggcg gactccacga ccttggccgt 3000
catcttgccc tcctccca.cc agatcaccat cttgtegacg caatcgttga agggaaagtt 3060
ctcattggtc cagttgacgc agcaagggcg aattc 3095
<210> 24 <211> 3095 <212> DNA <213> nowy aerotyp AAV, klon F5 <400> 24
gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga <3, fc C ćt 3 C C Cf<3 fc ttattgatta 60
acaagcaatt acagattacg ggtgaggtaa cgagtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 120
acaccatcag ggttcacagc aaattcaaca ttattagact tggcataatt ggaagtatac 180
tgaatttctg ggttccagcg cttgctgttt tctttctgca gctcccactc gatttccacg 240
ctgacttgtc cggtgctgta ctgcgtgatg aaggaggcaa acttggcagg agtaaacacc 300
tccggaggat tagcaggtac aggtgtgttt ttgatcagga tctgtggagg cgggtgttcg 360
agtccaaaac cgcccatcag aggagacggg tgaaagttgc catccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag atacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc aggcagtgct 480
ccctggctgt tgatagtctg tgattgaggc ccggctgtag acgactgcag gttgctggag 540
accacaccgt attct tctgt agccacaggg ttagtggtct tgatctcctc ctcgctggtc 600
atcagaacgt tttccagcgt agttttgttg gcagctcccg tcttgccaaa aaccagtacc 660
ccgttgatgg gaaagaactg gt cctcatca tccttgttgg ttgccatggg aatgccagga 720
ttggtcaaag agtttctgcc attcagatga tatttagtgg cagcagtcca ggcaaaattg 780
ctgttgttgt taaagtccaa gttctttgac agtctctgtt gcctatagca gggtccaggc 840
agccagttct t tg acfccjctc ggceatagta ttgggcccag cttgatgaaa ttgcagttcc 900
ctggtggaac ccgtggfcgct ctgggtcegg gccaggtagt acaggtactg gtcgatgaga 960
gggttcatca gccggfcct&g gctctggctg tgcgcgtagc tgctgtggaa aggcacgtcc 102 0
tcgaagctgt aactgaactc aaagttgttg cccgttctca gcatttgaga ggggaaatat 1 OSO
tccaggcagt agaaggagga acggcccacc gattggctgc cgttgttcag agtcaggtag 1140
PL 217 623 B1
ccgtactgag gaatcatgaa gacgtccgcc gggaacggag gcaggcagcc ctggtgcgca 1200
gagccgagga, cgtacggcag ctggtattcc gagtccgaga agacctgaac cgtgctggta 12 60
aggttattag cgatggtcgt gacgccgtca ttcgttgtga cctccttgac ctggatgttg 1320
aagagcttga accgcagctt cttgggccgg aatccccagt tgttgttgat gagtcgctgc 13 30
cagtcacgtg gtgagaagtg gcagtggaat ctgttaaagt caaaataccc ccagggggtg 1440
ctgtagccga agtagtggtt gtcattggtg gctcctgagc tgctgctgga gatttgcttg 1500
tagaggtggt tgttgtaggt ggggagggcc caggttctgg tgctggtggt gatgactctg 1560
tcgcccagcc atgtggaatc gcaatgccaa tttcctgagg cattacccac tccgtcggca 1620
ccttcgttat tgtctgccęjt tggtgcgcca ccgcctgcag ccattgtacc agatcccaca 1630
ctagagggcg ctgctggagcj ttctccaaga ggttgagggt cggggactga ctctgagtcg 1740
ccagtctgac caaa&ttgag cttcttttta gcgggctgct ggcctttttt gccgatgccc 1800
gtggaggagt ctggagagtc tatgggtctc ttctttccag gagccgtctt agcgccttcc 1860
tcaaccagac cgagaggttc gagaacccgc ttcttggcct ggaagactgc tcgcccgagg 1920
ttgcccccaa atgacgtatc ttettgcagg cgctcctgaa actcggcgtc ggcgtggtta 1930
taccgcaggt acggattgtc acccgctttg agctgctggt cgtaggcctt gtcgtgctcg 2040
agggccgctg cgtccgccgc gttgacgggc tcccccttgfc cgagtccgtt gaagggtccg 2100
aggtacttgt agccaggaag caccagaccc cggccgtcgt cctgcttttg ctggttggct 2160
ttgggtttcg gggctccagg tttcaggtcc caccactcgc gaatgccctc agagaggttg 2220
tcctcgagcc aatctggaag ataaccatcg gcagccatac ctggtttaag ccatttattg 2230
ctcagaaaca cagtcgtcca ggtccacgtt gaccaggtcg caggccgagc aggcaatctc 2340
gggtgcccgc cccagcagat gatgaatcgc acacagcttc cgatacgtct tttttctgac 2400
gaccggttga gattctgaca cgccggggaa acattctaaa cagtctctga ccccgtgcgt 2460
gaagcaaatg ttgaaattct gattcattct ctcgcacgtt ttgcagggaa acagcatctg 2520
aagcatgccc gcgtggcgag aaeatttgtt ttggtacctg tcggcaaagt ccaecggagc 2580
tccttccgcg tctgacgtcg atgggtccgt gactgaggga caggcccgct tgegctcgct 2640
tatatccgcg tcatcggggg cgggtctttt gctggctccg ccctfctctga cgtagaactc 2700
atgcgtcacc tcagtcacgt gatcactagc ccagcggaag aactctttga cttcctgctt 2760
tgtcaccttg ccaaagtcgt gttccagacg gcgggtgagt tcaaatttga acatccggtc 2820
ctgcaacggc tgctggtgct cgaaggtggt gctgttcccg tcgatcacgg cgcgcatgtt 2880
ggtgttggag gtgacgatca cgggggtggg atcgatctgg gcggacgact tgcacttfctg 2940
gtccacgcgc accttgctgc cgccgagaat ggccttggcg gactccacga ccttggccgt 3000
catcttgccc tcctcccacc agatcaccat cttgtcgacg caatcgttga agggaaagtt 3060
PL 217 623 B1 ctcattggtc cagttgacgc agcaagggcg aatte 3095 <21Q> 25 <211> 3142 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon H6 <400> 25
aaaacgacgg gccagtgatt gtaatacgac fccactatagg gcgaaattga aattagcggc 60
egegaatteg cctttcgcag agaccaaagt tcaactgaaa cgaattaaac ggtttattga 120
ttaacaagca a 11 a. ag 11 acgagteagg tatctggtgc caatggggcg aggctctgaa 180
tacacaccat tagtgtccac agtaaagtcc acattaacag acttgttgta gttggaagtg 340
tactgaattt cgggattcca gcgtttgctg ttctccttct gcagctccca ctcgatctcc 300
acgctgacct gtcccgtgga atactgtgtg atgaaagaag caaacttggc agaactgaag 360
tttgtgggag gattggctgg aacgggagtg tttttgatca tgatctgagg aggcgggtgt 420
ttgagtccaa aacctcccat cagtggagaa ggatgaaagt gtccatcggt gtgaggaatc 480
Łtggcccaaa. tgggtccctg caggtacacg tctcgatcct gccacaccat accaggtaac 540
gctccttggt gattgacagt tccagtagtt ggaccagtgfc ttgagttttg caaattattt 600
gacacagtcc cgtactgctc cgtagccacg ggattggtgg ccctgatttc ttetteatet 660
gtaatcatga cattttccaa atccgcgtcg tfcggcatttg tfcccttgttt accaaatatę 720
agggttccat gcatggggaa aaacttttcfc tcgfccatcct tgtgactggc catagctggt 730
cctggattaa ccaacgagtc ccggccattt agatgatact ttgtagctgc agtccaggga 840
aagttgctgt tgttgttgtc gtttgcctgt tttgacagac gctgctgtct gtagcaaggt 900
ccaggcagcc agtttttagc ttgaagagac atgttggttg gtccagcttg gctaaacagt 960
agccgagact gctgaagagt tccactattt gtttgtgtct tgtteagata atacaggtac 1020
tggtcgatca gaggatteat cagccgatcc agactctggc tgtgagcgta gctgctgtgg 3080
aaaggcacgt cttcaaaagt gtagctgaac tgaaagttgt ttccagtacg cagcatctga 1140
gaaggaaagt actccaggca gtaaaaggaa gagcgtccta ccgcctgact cccgttgttc 1200
agggtgaggt atccatactg tgggaccatg aagacgtccg ctggaaacgg cgggaggeat 1260
ccttgatgcg ccgagcccag gacgtacggg agctggtact ccgagtcagt aaacacctga 1320
accgtgctgg taaggttatt ggcaatcgtc ej t oojiz 3. c i— cattctgcgt gacctctttg 13 80
acttgaatat taaagagctt gaagttgagt cttttgggcc ggaatccccg gttgttgttg 1440
acgagtcttt gccagtcacg tggtgaaaag tggcagtgga atctgttgaa gtcaaaatac 1500
ccccaggggg tgctgtagcc aaagtagtgg ttgtcgttgc tggctcctga ttggctggag 1560
atfctgcttgt agaggtggtt gttgtatgtg ggcagggccc aggttcgggt gctggtggtg 1620
PL 217 623 B1
atgactctgt cgcccagcca ttgggaatcg caatgccaat ttcctgagga attacccact 1680
ccatcggcac cctcgttatt gtctgccatt ggtgcgccac tgcctgtagc cattgtagta 1740
gatcccagac cagagggggc tgctggtggc tgtccgagag gctgggggtc aggtacggag 1800
fccfcgcgtctc cagtctgacc aaaa11t a at ctttttcttg caggctgctg gaccgctttt 1860
ccggttcccg aggaggagfcc t c t c c a c a ggagagtgct ctaccggcct cttttttccc 1920
ggagecgtct taaeaggctc ctcaaccagg cccagaggtt c aagaac cct ctttttcgcc 1980
tggaagactg ctcgtccgag gfctgccccca aaagacgtat cttctttaag gcgctcctga 2040
aactctgcgt cggcgtggtt gfcaettgagg tacgggttgt ctccgctgtc gagctgccgg 2100
tcgtaggcct tgtcgtgctc gagggccgcg gcgtctgcct cgttgaccgg ctcccccttg 2150
tcgagtccgt tgaagggtcc gaggtacttg tacccaggaa gcacaagacc cctgcfcgtcg 2220
tccttatgcc gctctgcggg ctttggtggt ggtgggccag gtttgagctt ccaccactgt 2280
cttattcctt cagagagagt gtcctcgagc caatctggaa gataaccatc ggcagccata 2340
cctgatttaa atcatttatt gttcagagat gcagteatcc aaatccacat tgaccagate 2400
gcaggcagtg caagcgtctg gcacctttcc catgatatga tgaatgtagc acagtttctg 2460
atacgccttt ttgacgacag aaacgggttg agattctgac acgggaaagc actctaaaca 2520
gtctttctgt ccgtgagtga agcagatatt tgaattctga ttcattctct cgcattgfcct 2580
gcagggaaac agcafccagat tcatgcccac gtgacgagaa catttgtfctt ggtacctgtc 2640
cgcgtagttg atcgaagctt ccgcgtctga cgtcgatggc tgcgcaactg actcgcgcgc 2700
ccgtttgggc tcacttatat ctgcgtcact gggggcgggt cttttcttag ctccaccctt 2760
tttgacgtag aattcatgct ccacctcaac cacgtgatcc tttgcccacc ggaaaaagtc 2820
tttcacttcc tgcttggtga cctttccaaa gtcatgatcc agacggcggg taagttęaaa 2880
tttgaacatc cggtcttgca acggctgctg gtgctcgaag gtcgttgagt tcccgtcaat 294 0
cacggcgcac atgttggtgt tggaggtgac gatcacggga gtcgggtcta tctgggccga 3000
ggacttgcat ttctggtcca cacgcacctt gcttcctcca agaatggctt tggccgactc 3050
cacgaccttg gcggtcatct tcccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatg 3120
gtaaaaggaa agttctcatt gg 3142
<210> 25 <211> 3075
<212> DNA
<213> nowy serotyp AAV, klon H2
<400> 26
tęajgasctfcfc cctttcaacg attgcgtcgg acaagatggt gatctggtgg gaggagggga 60
agatgaccgc caaggtcgtg gagtcggcca aagccattct tggaggaagc aaggtgcgtg 120
PL 217 623 B1
tggaccagaa atgcaagtcc tcggcccaga tagacccgac tcccgtgatc gtcacctcca 180
acaccaacafc. cffcgcgccgfcg attgacggga actcaacgac cttcgagcac cagcagccgt 240
tgcaagaccg gatgttcaaa tttgaactta cccgccgtct ggatcatgac fcttggaaagg 300
tcaccaagca ggaagtgaaa gactttfctcc ggtgggcaaa ggatcacgtg gttgaggtgg 360
agcatgaatt cfcacgtcaaa aagggtggag ctaagaaaag acccgccccc agtgacgcag 420
atataagtga gcccaaacgg gcgcgcgagt cagttgcgca gccatcaacg tcagacgcgg 430
aagcttcgat caactacgcg gacaggtacc aaaaacaaat gttctcgtca cgtgggcatg 540
aatctgatgc tgtttccctg cagacaatgc gagagaatga atc'agaattc aaatatctgc 600
ttcactcacg gacagaaaga ctgtttagag tgctttcccg tgtcagaatc tcaacccgtt 660
tctgtcgtca aaaaggcgta tcagaaactg tgctacattc atcatatcat gggaaaggtg 720
ccagacgctt gcactgcctg cgatctggtc aatgtggatt tggatgactg catctctgaa 780
caataaatga tttaaatcag gtatggctgc egatgg11a t cctccagatt ggctcgagga 840
cactctctct gaagggataa gacagtggtg gaagctcaaa cctggcccac caccaccaaa 900
gcccgcagag cggcataagg acgacagcag gggtcttgtg cttcctgggt acaagtacct 360
cggacccttc aacggactcg acaaggggga gccggtcaac gaggcagacg ccgcggccct 1020
cgagcacgac aaggcctacg accggcagct cgacagcgga gacaacccgt acctcaagta 1080
caaccacgcc gacgcagagt ttcaggagcg ccttaaagaa gatacgtctt ttgggggcaa 1140
cctcggacga gcagtcttcc aggcgaaaaa gagggttctt gaacctcfcgg gcctggttga 1200
ggaacctgtt aagacggctc cgggaaaaaa gaggccggta gagcactctc ctgtggagcc 1260
agactcctcc tcgggaaccg gaaaagcggg ccagcggcct gcaagaaaaa gatfcaaafctt 1320
tggtcagact ggagacgcag actccgtacc tgacccccag cctctcggac agccaccagc 1380
agccccctct ggtctgggafc ctactacaat ggctacaggc agtggcgcac caatggcaga 1440
caataacgag ggtgccgatg gagtgggtaa ttcctcagga aattggcatt gcgattccca 1500
atggctgggc gacagagtca tcaccaccag cacccgaacc tgggccctgc ccacafcacaa 1560
caaccacctc tacaagcaaa tctccagcca ateaggagee agcaacgaca accactactt 1620
tggctacagc accccctggg ggtattttga cttcaacaga ttccactgee acttttcacc 1680
acgtgactgg caaagactca t caac aacaa ctggggattc — ej, Ł—. V—11—. t—. t— d. d.%tk i—t gactcaactt 1740
caagctcttt aatattcaag tcaaagaggt cacgcagaat gacggtacga cgacgattgc 1800
caataacctt accagcacgg ttcaggtgtt tactgactcg gagtaccagc tcccgtacgt 1860
cctgggctcg gcgcatcaag gatgcctccc gccgtttcca gcggacgtct tcatggtccc 1920
acagtat<j<ja t cl C C fc C 3. o c c tgaacaacgg gagtcaggcg gfcaggacgct cfctcctttta 1980
ctgcctggag tactttcctt ctcagatgct gcgtactgga aacaactttc agtteageta 2040
PL 217 623 B1
cacttttgaa gacgtgcctt tccacagcag ctacgctcac agccagagtc tggatcggct 2100
gafcgaatcct ctgatcgacc agtacctgta ttatctgaac aagacacaaa caaatagtgg 2160
aactcttcag cagtctcggc fcacfcgfcttag ccaagctgga ccaaccaaca tgtctcttca 2220
a CJ ΙΕ ΙΕ El El El El 1..’ tggctgcctg gaccttgcta cagacagcag cgtctgtcaa aacaggcaaa 2280
cgacaacaac aacagcaact ttccctggae tgcagctaca aagtatcatc taaatggccg 2340
ggactcgttg gttaatccag gaccagctat ggccagtcac aaggatgacg aagaaaagtt 2400
tttccccatg catggaaccc tgatatttgg taaacaagga acaaatgcca acgacgęgga 2460
ttfcggaaaat gtcatgatta cagatgaaga agaaatcagg gccaccaatc ccgtggctac 2520
ggagcagtac gggactgtgt caaataattt gcaaaactca aacactggtc caactactgg 2580
aactgtcaat cgccaaggag cgttacctgg tatggtgtgg caggatcgag acgtgtacct 2640
gcagggaccc atttgggcca agattcctca caccgatgga cactttcatc cttctccact 2700
gatgggaggt tttggactca aacacccgcc tcctcagatc atgatcaaaa acactcccgt 2760
tccagccaat cctcccacaa acttcagttc tgccaagttt gcttctttca tcacacagta 2820
ttccacggga caggtcagcg tggagatcga gtgggagctg cagaaggaga acagcaaacg 2880
ctggaatccc gaaattcagt acacttccaa ctacaacaag tctgttaatg tggactttac 2940
tgtggacact aatggtgtgt attcagagcc tcgccccatt ggcaccagat acctgactcg 3000
taatctgtaa ttgcttgtta atcaataaac cgtttaattc gtttcagttg aactttggtc 3060
tctgcgaagg gcgaa 3075
<210> 27 <211> 3128 <212> DNA <213> 42.8 <4Q0> 27
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag Stcgtggagt 12 0
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agecgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
fccttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgćga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
PL 217 623 B1
gttcagaatg tttccccggc gtgteagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catetgctag ggcgggctcc egagattget tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaaectctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt tcjgc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt c h a a z*· z** ta 4A- Łw d d»w· d iw- 4-^ Iw- cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcfcgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg ageagtette 1200
caggccaaga agcgggttct c gaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagceatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcecgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gcfcccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggegacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccaccfc acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1300
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tacctgactc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agtteageta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcat cgacc agtacctgta ctacctgtct cggacfccagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2280
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgt c tc ca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcttggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacgcac aaggacgacg aagagegatt ttttccatcc 2460
agcggagtct tgatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga etatageage 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaatcaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2580
100
PL 217 623 B1
ggcgtggtgg ccgataacct CJCciaG 3CJC3.3. aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttaccfcgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtaect gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacggc aactttcatc cttcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt fceccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agccaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg atgggagctg cagaaagaga acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000
gagggtactt attcagagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa 30S0
ttgcctgtta atcaataaac cggctaattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattc <210> 28 <211> 3128
<212 > DNA <213s nowy serotyp AAV, klon 42 .15
<400> 28 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgaeaa gatggtgatc tgSftgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 12 0
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggascag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag catgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 460
gceectcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcgcggg accagagact 560
gtteagaatg tttcccgggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 84 0
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcetggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
PL 217 623 B1
101
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
t ttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactca aetttgggca gactggcgac 13Θ0
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 144 0
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gcfcccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaatfcgg cattgcgatt c c ac a t c t gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc c C c q c a c c t acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc accaaogaca acacct actt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaaeaga ttccactgcc aettctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactfc caagctcttc 18QQ
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcccgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tacctgactc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaafcgcg gagaacgggc aacaactfctg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcat agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2280
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcttggac cggtgccacc aagtatcafcc tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacgcac aaggacgacg aagagcgatt ttttccatcc 2460
agcggagtct tgatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaatcaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccfctacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggfcccfc 2700
atctgggcca agattcctca cacggacggc aactttcatc cttcgccgct gatgggaggc 2750
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgafctaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agccaagctg gcgtcgtfcca tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaga acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000
102
PL 217 623 B1
gaęjggfc actt attcagagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa 3060
fcfcgccfccjtteL d Su· tu* dct t* dci cggttaattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattc <210> 29 <211> 3197 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42. Sb 3128
<400> 29 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa tj a t gcy t ga t c tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtegtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc g c c^j t a t tej 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agecgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgćga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 650
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 760
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaagggag agccggtcaa cgaggcagac gccgcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gacaagcagc tcgagcaggg ggacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggage gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactea actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc cfc t cc aa t gg c agacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggegcicaga. 1560
gtcatcacca ccaęfcaccccf aacctgggcc cfcccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
PL 217 623 B1
103
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc 3, C C 3 3 cgći,G 3 acacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggfcatfcfcfcga c fc fc taacaga fctccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggfc cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
3 c c3 ęc(3 ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 192 0
gcgc&ccagg gctgcctgcc tccgttcccg nr^ rtasi fnt· r*ł” d L* twj Lr L.I Lr tcatgattcc t cagtacggg 1980
fc3cC tg3cfcc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt ccfcccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaacfcttg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agfcacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattfctc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggecaaaaac 2280
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcttggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacgcac aaggacgacg aagagcgatt ttttccatcc 2460
agcggagtct tgatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaatcaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccfctacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacggc aactttcatc cttcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agccaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaga acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000
gagggfcacfcfc attcagagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa 3060
ttgcctgfcta atcaataaac cggttaattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattcgt ttaaacctgc aggactagtc cctttagtga gggttaattc tgagcttggc 3180
gtaatcatgg gtcafcag 3197
<210> 30 <211> 2501 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42,Ib <400> 30 gaattcgccc ttggctgcgt caactggacc aatgagaact ttcccttcaa cgattgcgtc 60
104
PL 217 623 B1
gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc aagatgacgg ccaaggtcgt ggagtccgcc 120
aaggccafctg atcatctgct ggggcgggct cccgagattg cttgctcggc ctgcgatctg 180
gtcaacgtgg acctggatga ctgtgtttct gagcaataaa tgacttaaac caggtatgge 240
tgccgatggt tatcttccag attggctcga ggacaaccfcc tetgagggca ttcgegagtg 300
gtgggacttg agacctggag ccccgaaacc caaagccaac cagcaaaagc aggacgacgg 360
ccggggtctg gtgcttcctg gctacaagta cctcggaccc ttcaacggac tcgacaaggg 420
agagccggtc aacgaggcag acgccgcggc cctcgagcac gacaaggccfc acgacaagca 480
gctcgagcag ggggacaacc cgtacctcaa gtacaaccac cjOcęfacgccg agtttcagga 540
gcgtcttcaa gaagatacgt cttttggggg caacctcggg cgagcagtct tccaggccaa 600
gaagcgggtt ctcgaacctc tcggtctggt tgaggaaggc gctaagacgg ctcctggaaa 660
gaagagaccc atagaatccc ccgactcctc cacgggcatc ggcaagaaag gccagcagcc 720
cgctaaaaag agactcaact ttgggcagac tggcgactca gagtcagtgc ccgaccctca 780
accaatcgga gaaccecccg caggcccctc tggtctggga tctggcacaa tggctgcagg 840
cggtggcgct ccaatggcag acaataacga aggcgccgac ggagtgggta gttcctcagg 900
aaattggcat tgcgattcca catggctggg cgacagagtc atcaccacca gcacccgaac 960
ctgggccctc cccacctaca acaaccaccfc ctacaagcaa afcctccaacg ggacatcggg 1020
aggaagcacc aacgacaaca cctacttcgg ctacagcacc ccctgggggt attttgactt 1080
taacagattc cactgccact tctcaccacg tgactggcag cgactcatca acaacaactg 1140
gggattccgg cccaagagac tcaacttcaa gctcttcaac atccaggtca aggaggtcac 1200
gcagaatgaa ggcaccaaga ccatcgceaa taaccttacc agcacgattc aggtctttac 1260
ggactcggaa taccagctcc cgtacgtcct cggctctgcg caccagggct gcctgcctcc 1320
gttcccggcg gacgtcttca tgattcctca gtacgggtac ctgactctga acaacggcag 1380
tcaggccgtg ggccgttcct ccttctactg cctggagtac tttccttctc aaatgctgag 1440
aacgggcaac aactttgagt tcagctacca gtttgaggac gtgccttttc acagcagcta 1500
tgcgcacagc caaagcctgg accggctgat gaaccccctc atcgaccagt acctgtacta 1560
cctgtctcgg actcagtcca cgggaggtac cgcaggaact cagcagttgc tattttctca 1620
ggccgggcct aataacatgt cggctcaggc caaaaactgg ctacccgggc cctgctaccg 1680
gtctccacga cagtgtcgca aaataacaac agcaactttg cttggaccgg 1740
tgccaccaag tatcatctga atggcagaga ctctctggta aatcccggtg tcgctatggc 1800
aacgcacaag ggcgacgaag agcgattttt tccatccagc ggagtcttga tgtttgggaa 1360
acagggagct ggaaaagaca acgtagacta tagcagcgtt atgctaacca gtgaggaaga 1920
aatcaaaacc accaacccag tggccacaga acagtacggc gtggtggccg ataacctgca 1980
PL 217 623 B1
105
acageaaaac gccgctccta ttgtaggggc cgtcaacagt caaggagcct tacctggcat 2040
ggtctggcag aaccgggacg tgtacctgca gggtcctatc tgggccaaga ttcctcacac 2100
ggacggcaac tttcatcctt cgccgctgat gsgagscttt ggactgaaac acccgcctcc 2160
tcagatcctg afcfcaagaafca cacctg L. fc c c cgcggafccct ccaactacct tcagtcaagc 2220
caagctggcg tcgttcatca cgcagtacag caccggacag gfccagcgtgg aaattgaatg 2280
ggagctgcag aaagagaaca gcaagcgctg gaacccagag attcagtata cttccaacta 2340
ctacaaatct acaaatgtgg actttgctgt caatactgag ggtacttatfc cagagcctcg 2400
ccccattggc acccgttacc tcacccgtaa cctgtaatfcg cctgtfcaatc aataaaccgg 2460
ttgattcgtt tcagttgaac tttggtctca agggcgaatt c 2501
<210> 31 <211> 3113
<212> DMA
<213> nowy serotyp AAV, klon 42, .13
<400> 31 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattetcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgfcceg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag catgacttfcg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactfctgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatetggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta t c 11 ccaga t tggctcgagg aeaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
ga caaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
106
PL 217 623 B1
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaagą agagacccat agaatccccc gactcctcca cgggcatcgg caagaaaggc 13 20
cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaacttt gggtagactg gcgactcaga gtcagtgccc 1380
gaccctcaac caatcggaga accccccgca ggcccctctg gtctgggatc tggtacaatg 144 0
gctgcaggcg gtggcgctcc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtagt 1500
tcctcaggaa attggcat tg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat caccaccagc 1Ξ60
acecgaacct gggccctccc cacctacaac aaccacctet aeaagcaaat ctccaacggg 1620
acatcgggag gaagcaccaa tacttcggct SCa^C^CCCC ctgggggtat 1680
tttgacttta acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 1740
aacaactggg gattccggcc caagagactc aacttcaagc tcttcaacat ccaggtcaag 1800
gaggtcacgc agaatgaagg caccaagacc atcgccaata accttaccag cacgattcag 1860
gtctttacgg actcggaata ccagctcccg tacgtcctcg gctctgcgca ccagggctgc 192 0
ctgcctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acgggtacct gactctgaac 1980
aacggcagtc aggccgtggg ccgttcctcc ttctactgcc tggagt ac11 tccttctcaa 2040
atgctgagaa cgggcaacaa ctttgagttc agctaccagt ttgaggacgt gccttttcac 2100
agcagctatg cgcacagcca aagcctggac cggctgatga accccctcat cgaccagtac 2160
ctgtactacc tgtctcggac tcagtccacg ggaggtaccg caggaactca gcagttgcta 2220
ttttctcagg ccgggcctaa taacatgtcg gctcaggcca aaaactggct acccgggccc 2280
tgctaccggc agcaacgcgt ctccacgaca gtgtcgcaaa ataacaacag caactttgct 2340
tggaccggtg ccaccaagta tcatctgaat ggcagagact ctctggtaaa tcccggtgtc 2400
gctatggcaa cgcacaaggg cgacgaagag cgattttttc catccagcgg agtcttgatg 2460
tttgggaaac agggagctgg aaaagacaac gtggactata gcagcgttat gctaaccagt 2 52 0
gaggaagaaa tcaaaaccac caacccagtg gccacagaac agtacggcgt ggtggccgat 2580
aacctgcaac agcaaaacgc cgctcctatt gtaggggccg tcaacagtca aggagcctta 2640
cctggcatgg tctggcagaa ccgggacgtg tacctgcagg gtcctatctg ggccaagatt 2700
cctcacacgg acggcaactt fccatccttcg ccgctgatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
ccgcctcctc agatcctgat taagaataca cctgttcccg cggatcctcc aactaccttc 2820
agtcaagcca agctggcgtc gttcateacg cagtacagca ccggacaggt cagcgtggaa 2880
attgaatggg agctgcagaa agagaacagc aagcgctgga acccagagat tcagtatact 2940
tccaactact acaaatctac aaatgtggac tttgctgtca atactgaggg tacttattca 3000
gagcctcgcc ccattggcac ccgttacctc acccgtagcc tgtaattgcc tgttaatcaa 3060
taaaccggtt gattcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa t tc 3113
PL 217 623 B1
107 <210> 32 <211> 3113 <212 ·> DNĄ <213> nowy serotyp AAV, klon 42.3a <400> 32
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaafcga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag Gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgegtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgafcegfcca cttccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaaeag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag catgactttg geaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcagga fc cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag asgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg etfcccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca gcatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc egagattget tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtca tcttccagat tggctcgagg acaaectctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg ageagtette 1200
caggecaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagacccafc agaatccccc gactcctcca cgggcatcgg caagaaaggc 1320
cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaacttt gggcagactg gcgactcaga gtcagtgccc 1380
gaccctcaac caatcggaga accccccgca ggcccctctg gtctgggatc tggtacaatg 144 0
gctgcaggcg gtggcgctcc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtagt 15 0 0
tcctcaggaa attggcattg cgattccaca tagctgggcg acagagtcafc caccaccagc 1560
acccgaacct gggccctccc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat ctccaacggg 1620
acafccgggag gaagcaccaa cgacaacacc tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 1680
tttgacttta a cagat tcc a ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 174 0
108
PL 217 623 B1
aacagctggg gattccggcc caagagactc aacttcaagc tcttcaacat ccaggfccaag 18QQ
gaggtcacgc ags.atgaa.gg caccaagacc atcgccaata accttaccag cacgattcag 1860
gtctttacgg actcggaata ccagctcccg tacgtcctcg gctetgcgca ccagggctgc 1920
ctgcctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagt acgggtacct gactctgaac 1980
aacggcagtc aggccgtggg ccgttcctcc ttctactgcc tggagtactfc tccttctcaa 2040
atgctgagaa cgggcaacaa ctttgagttc agctaccagt ttgaggacgt gccttttcac 2100
agcagctacg cgcacagcca •SI Si +- d y-M ct ciyt- y d cggctgatga accccctcat cgaccagtac 2160
ctgtactacc tgtctcggac tcagtccacg ggaggtaccg caggaactca gcagttgcta 2220
ttttctcagg ccgggcctaa taacatgtcg gctcaggcca aaaactggct acecgggccc 2280
tgctaccggc agcaacgcgt ctccacgaca ctgtcgcaaa ataacaacag caactttgct 2340
tggaceggtg ccaccaagta tcatctgaat ggcagagacfc cfcctggtaaa tcccggtgtc 2400
gctatggcaa cgcacaagga cgacgaagag cgattttttc cafcccagcgg agtcttgatg 2460
tttgggaaac agggagctgg aaaagacaac gtggactata gcagcgttat gctaaccagt 2520
gaggaagaaa tcaaaaccac caacccagtg gccacagaac agtacggcgt ggtgsccgat 2580
aacctgcaac agcaaaacgc cgctcctatt gtaggggccg tcaacagtca aggagcctta 2640
cctggcatgg tctggcagaa ccgggacgtg tacctgcagg gtcctatctg ggccaagatt 2700
cctcacacgg acggeaaett tcatccttcg cegctgatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
ccgcctcctc agatcctgat taagaataca ectgttcccg cggatcctcc aactaccttc 2820
agtcaagcca agctggcgtc gttcatcacg cagtacagca ccggacaggt cagcgtggaa 2880
attgaatggg agctgcagaa agagaacagc aagcgctgga acccagagat tcagtatact 2940
tccaactact acaaatctac aaatgtggac tttgctgtca atactgaggg tacttattca 3000
gagcctcgcc ccattggcac ccgttacctc acccgtaacc tgtaattgcc tgttaatcaa 3060
taaaccggtt aattcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttc 3113
<210> 33 <211> 2504
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42, ,4
<400> 33 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattcatcat ctgctggggc gggcteccga gattgcttgc tcggcctgcg 160
atctggt caa cgtggacctg gatgactgtg t ttctgagca ataaatgact t- c c t- 240
atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca sc ct ctotga gggcattcgc 300
gagtggtggg acttgaaacc tggagccccg aaacccaaag ccaaccagca aaagcaggac 360
PL 217 623 B1
109
gacggccggg gtcfcggtgct tcctggctac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 420
aagggagagę cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 4 30
aagcagcfccg agcaggggga caacccgtac ct ca. ag tac a accacgccga cgccgagfctt 540
caggagcgtc ttcaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tcgggcgagc agtcttccag 600
gccaagaagc gggttctcga accfcctcggt ctggttgagg aaggcgctaa gacggctcct 660
ggaaagaaga gacccataga atcccccgac tcctccacgg gcatcggcaa gaaaggccag 720
cagcccgcta aaaagaagct caactttggg cagactggcg actcagagtc agtgcccgac 730
cctcaaccaa tcggagaacc ccccgcaggc ccctctggtc tgggatctgg tacaatggct 840
geaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt gggtaatgcc 900
tccggaaatt ggcattgcga ttccacatgg etgggcgaea gagtcatcac caccagcacc 960
cgcacctggg ccctgcccac ctacaacaac cacctctaca agcagatatc aagtcagagc 1020
ggggętacca acgacaacca cttcttcggc tacagcaccc tctggggcta ttttgacttc 1080
aacagattcc actgccactt ctcatcacgt gactggcagc gactcatcaa caacaactgg 1140
ggattccggc c ca agagact caacttcaag ctctfccaaca tccaggtcaa ggaggtcacg 1200
cagaatgaag gcaccaagac catcgccaat aaccfctacca gcacgattca ggtctttacg 12S0
gactcggaat accggcCccc gtacgtcctc ggctctgcgc accagggctg cctgcctccg 1320
ttcccggcgg acgtcttcat gattcctcag tacgggtacc tgactctgaa caacggcagt 1380
caggccgtgg gccgttcctc cttctactgc ctggagtact ttccttctca aatgctgaga 1440
acgggcaaca actttgagtt cagctaccag tttgaggacg tgccttttca cagcagctac 1500
gcgcacagcc aaagcctgga ccggctgatg aaceccetca tcgaccagta cctgtactac 1560
ctgtctcgga ctcagtccac gggaggtacc gcaggaactc agcagttgct attttctcag 1S20
gccgggccta afcaacatgtc ggctcaggcc aaaaactggc tacccgggcc ctgctaccgg 1580
cagcaacgcg tctccacgac actgtcgcaa aataaraaca gcaactttgc ttggaccggt 1740
gccaccaagt atcatctgaa tggcagagac tctctggtaa atcccggtgt cgctatggca 1600
acgcacaagg acgacgaaga gcgatttttt ccatccagcg gagtcttgat gtttgggaaa 1850
cagggagctg gaaaagacaa cgtggactat ageagcgtta tgctaaccag tgaggaagaa 192 0
atcaaaacca ccaacccagt ggccacagaa cagtacggcg tggtggccga taacctgcaa 1980
cagcaaaacg ccgcfccctat tgtaggggcc gtcaacagtc aaggagcctt acctggcatg 2040
gtctggcaga accgggacgt gtacctgcag ggtcctatct gggccaagat tcctcacacg 2100
gacggcaact ttcatccttc gccgctgatg ggaggctttg gactgaaaca cccgcctcct 2160
cagatcctga ttaagaatac gcggat cc tc caactacctfc cagtcaagcc 2220
aagccggcgfc cgttcateac gcagtacagc accggacagg tcagcgtgga aattgaatgg 2280
110
PL 217 623 B1 gagctgcaga aagagaacag caagcgctgg aacccagaga ttcagtatac ttccaactac 2340 tacaaatcta caaatgtgga ctttgctgtc aatactgagg gtacttattc agagcctcgc 2400 cccattggca cccgttacct cacccgtaac ctgtaatfcgc ctgttaafcca ataaaccggt 24S0 taattcgtfct cagttgaact ttggtctctg cgaagggcga attc 2504 <210> 34 <211> 310S < 212 > DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42.Sn <400> 34
gaattcgccc ttctacggct gcgtcaactg g C— a<^^—tf a.c/ aactttccct tcaacgattg 60
cgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga gggcaagatg acggccaagg tcgtggagtc 120
cgccaaggcc attctcggcg gcagcaaggt gcgcgtggac caaaagtgca aatcgtccgc 1Θ0
ccagatcgac cccacccccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 240
cgggaacagc accaccttcg agcaccagca gccgttgcag gaccggatgt tcaaatttga 300
actcacccgc cgtctggagc atgactttgg caaggcgaca aagcaggaag tcaaagagtt 360
cttccgctgg gcgcaggatc acgtgaecga ggtggcgcat gagttctacg tcagaaaggg 420
tggagccaac aagagacccg cccccgatga cgcggataaa agcgagccca agcgggeccg 480
cccctcagtc gcggatccat cgacgtcaga cgcggaagga gctccggtgg actttgccga 540
caggtaccaa aacaaatgtt ctcgtcacgc gggcatgctt cagatgcfcgt ttccctgcaa 600
aacatgcgag agaatgaatc agaatttcaa catttgcttc acgcacggga ccagagactg 660
ttcagaatgt ttccccggcg tgtcagaatc tcaaccggtc gtcagaaaga ggacgtatcg 720
gaaacfcctgt gccattcatc atctgctggg gtgggctccc gagattgctt gctcggcctg 730
cgatctggtc aacgtggacc tggatgactg tgtttctgag caataaatga cttaaaccag 840
gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga caacctctct gagggcattc SCO
gcgagtggtg ggsct tC35S cctggagccc cgaaaeceaa agccaaccag caaaagcagg 960
acgacggccg gggtctggtg cttcctggct acaagtacct cggacccttc aacggactcg 1020
acaagggaga gccggtcaac gaggcagacg ccgcggccct cgagcacgac aaggcctacg 1080
acaagcagct cgagcagggg gacaacccgt accteaagta caaccacgcc gacgccgagt 1140
ttcaggagcg tcttcaagaa gatacgtctt ttgggggcaa cctcgggcga gcagtcttcc 1200
gggccaagaa gcgggttctc gaacctctcg gtctggttga ggaaggcgct aagacggctc 12S0
ctggaaagaa gagacccata gaatcccccg actcctccac gggcatcggc aagaaaggcc 1320
agcagcccgc taaaaagaag ctcaactttg ggcagactgg cgactcagag tcagtgcccg 1380
acccccaacc tctcggagaa cctcccgccg cgccctcagg tctgggatct ggtacaatgg 144 0
ctgcaggcgg tggcgcacca atggcagaca ataacgaagg cgccgacgga gtgggtaatg 1500
PL 217 623 B1
111
cctccggaaa ttggcattgc gattccacat ggctgggcga cagagtcatc accaccagca 1560
cccgcacctg ggccctgccc acctacaaca accacctcta caagcagata tcaagtcaga 1620
gcggggctac caacgacaac cacttcttcg gctacagcac cccctggggc tattttgact 1680
tcaacagatt ccactgccac ttctcaccac gtgactggca gcgactcatc aacaacaacc 1740
ggggattccg gcccagaaag ctgcggttca agttgttcaa catccaggtc aaggaggtea 1S00
cgacgaacga cggcgttacg accatcgcta ataaccttac cagcacgatt caggtcttct 1860
cggactcgga gtaccaactg cegtacgtcc tcggctctgc gcaccagggc tgcctccctc 1920
cgttccctgc ggacgtgttc atgattcctc agtacggata tctgactcta aacaacggca 1980
gtcagtctgt gggacgttcc tccttctact gcctggagta ctttcctfcct cagatgctga 2040
gaacgggcaa taactttgaa ttcagctacc agfcfc tgagga cgtgcccttc cacagcagct 2100
acgcgcacag ccaaagcctg gaccggctga tgaaccccct catcgaccag tacctgtact 2160
acctgtctcg gactcagtcc acgggaggta ccgcaggaac tcagcagttg ctattttctc 2220
eŁCjcjccęjęięfCC taataacatg tcggctcagg ccaaaaactg gctacccggg ccctgctacc 2280
ggcagcaacg cgtctccacg acactgtcgc aaaataacas cagcaacttt gcttggaccg 2340
gtgccaocaa gtatcatctg aatggcagag actctctggt aaatcccggt gtcgctatgg 2400
caacgcacaa ggacgacgaa gagcgatttt ttccatccag cggagtcttg atgtttggga 2460
aacagggagc tggaaaagac aacgtggact atagcagcgt tatgctaacc agtgaggaag 2520
aaatcaaaac caccaaccca gtggccacag aacagtacgg cgtggtggcc gataacctgc 2580
aacagcaaaa cgccgctcct attgtagggg ccgtcaacag tcaaggagcc ttacctggca 2640
tggcctggca gaaccgggac gtgtacctgc agggtectat ctgggccaag attcctcaca 2700
cggacggcaa ctttcatcct tcgccgctga tgggaggctt tggactgaaa cacccgcctc 2760
ctcagatcct gattaagaat acacctgttc ccgcggatcc tccaactacc ttcagtcaag 2320
ccaagctggc gtcgttcatc acgcagtaca gcaccggaca ggtcagcgtg gaaattgaat 2880
gggagctgca gaaagagaac agcaagcgct ggaacccaga gattcagtat acttccaact 2940
actacaaatc tacaaatgtg gactttgctg tcaatactga gggtacttat tcagagcctc 3000
gccccattgg cacccgttac ctcacccgta acctgtaatt gcctgttaat caataaaccg 3060
gttaattcgt fctcagttgaa ctttggtctc tgcgaagggc gaattc 3106
<210> 35 <211? 2489
<212? DNA
<2 13 > nowy serotyp AAV, klon 42.10
<400> 35
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtgaagt 120
112
PL 217 623 B1
ccgccaaggc cattcatcat ctgctggggc gggctcccga gattgettge tcggcctgcg 180
atctggtcaa cgtggacctg gatgactgtg ttfcctgagca ataaatgact taaaccaggt 240
atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca acctctctga gggeattege 300
gagtggtggg acttgaaacc tggagccccg aaacccaaag ccaaccagca aaagcaggac 360
gacggccggg gtctggtgct tcctggctac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 420
aagggagagc cggtcaaega ggcagacgcc gcggccctcg ctg o 3 o g 3 c 3 3 ggcctacgac 480
aagcagctcg agcaggggga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga egeegagttt 540
caggagcgtc ttcaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tegggegage agtcttccag 600
gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggttgagg aaggcgctaa gacggctccfc 660
ggaaagaaga gacccataga atcccccgac tcctccacgg gcatcggcag gaaaggccag 720
cagcccgcta aaaagaagcfc caactttggg cagactggcg actcagagtc agfcgcccgac 780
cctcaaccaa tcggagaacc ccccgcaggc ccctctggtc tgggatctgg tacaatggct 840
gcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt gggtaatgcc 900
tccggaaatt ggeattgega ttccacatgg ctgggcgaca gagtcatcac caccagcacc 960
cgcacctggg ccctgcccac ctacaacaac cacctctaca ageagatate aagtcagagc 1020
ggggctacca acgacaacca cttcttcggc tacagcaccc cctggggcta ttttgacttc 1080
aacagattcc actgccactt ctcaccacgt gactggcagc gacteatcaa caacaactgg 1140
ggattccggc ccagaaagct gcggttcaag ttgttcaaca tccaggtcaa ggaggtcacg 1200
acgaacgacg gcgttacgac catcgccaat aaccttacca gcacgattca ggtcttctcg 1260
gactcggagt accaactgcc gtacgtcctc ggctctgcgc accagggctg cctccctccg 1320
ttccctgcgg acgtgttcat gattcctcag taeggatate tgactctaaa caacggcagt 1380
cagtctgtgg gacgttcctc cttctactgc ctggagtact ttccttctca gatgetgaga 1440
acgggcaata actttgaatt cagctacacc tttgaggaag tgcctttcca cagcagctat 1500
gcgcacagcc agagcctgga ccggctgatg aatcccctca tcgaccagta cctgtactac 1560
ctggcccgga cccagagcac tacggggtcc acaagggagc tgcagttcca tcaggctggg 1620
cccaacacca tggeegagea atcaaagaac tggctgcccg gaccctgtta teggeageag 1680
agactgtcaa .4. ił ^ł ćł c ił. t a -r+ O Zif ΊΪ Uł Ί» Ul r~* Itw 0.^4 L d d w- d d w aacagtaact ttgcctggac cggggccact 1740
aaataccate tgaatggtag 3el9tfcC3tfc3 accaacccgg gcgtagccat ggccaccaac 1B00
aaggacgacg aggaccagtt ctttcccatc aacggagtgc tggtttttgg caaaacgggg 1860
gc fcgccaaca agacaacgct cfcja a a a c 91 ej ctaatgacca gcgaggagga gatcaaaacc X 92 0
accaatcccg tggctacaga agaatacggt gtggtctcca gcaacctgca atcgtctacg 1930
gccggacccc agacacagac tgtcaacagc cagggggctc tgcccggcat ggtctggcag 2040
PL 217 623 B1
113
aaccgggacg tgtacctgca gggtcccatc tgggccaaaa ttcctcacac ggacggcaac 2100
tttcacccgt ctcccctgat gggcggattt ggactcaaac acccgcctcc tcaaattctc 21S0
atcaaaaaca ccccggtacc tgctaatcct ccagaggtgt ttactcctgc caagtttgcc 2220
tcatttatca cgcagtacag caccggccag gtcagcgtgg agatcgagtg ggaactgcag 2280
aaagaaaaca gcaaacgctg gaatccagag attcagtaca cctcaaatta tgccaagtct 2340
aataatgtgg aatttgctgt caacaacgaa ggggtttata ctgagcctcg ccccattggc 2400
acccgttacc t cac ccgtaa cctgtaattg cctgttaatc aataaaccgg ttaattcgtt 2460
tcagttgaac tttggtcaag ggcgaattc 2489
<210> 36 <211? 2495
<212> DBA <213> nowy serotyp AAV, klon 42. 3b
<400> 36 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact agaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgaeaa gatggtgatc tg^tgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattcatcat ctgctggggc gggctcccga gattgettge tcggcctgcg 180
atctggtcaa cgtggacctg gatgactgtg tttctgagca ataaatgact taaaccaggt 240
atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca acctctctga gggeattege 300
gagtggtggg acttgaaacc tggagccccg aaacccaaag ccaaccagca aaagcaggac 360
gacggccggg gtctggtgct tcctggctac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 420
aagggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa ggcctacgac 480
aageageteg agcaggggga caacccgtac ctcaagtaca accacgccga egeegagttt 540
caggagcgtc ttcaagaaga tacgtctttt gggggcaacc tegggegage agtcttccag 600
gccaagaagc gggttctcga acctctcggt ctggttgagg aaggcgctaa gacggctcct 660
ggaaagaaga gacccataga atcccccgac tcctccacgg gcatcggcaa gaaaggccag 720
cagcccgcta aaaagaagct caactttggg cagactggcg actcagagtc agtgcccgac 780
cctcaaccaa tcggagaacc ccccgcaggc ccctctggtc tgggatctgg tacaatggct 840
gcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt gggtaatgcc 300
tccggaaatt ggeattgega ttccacatgg ctgggcgaca CJ3,Cft C 3.fc C3 C caccagcacc 960
cgcacctggg ccctgcccac ctacaacaac cacctctaca ageagatate aagtcagagc 1020
ggggctacca acgacaacca ctt cttcggc tacagcaccc cctggggcta ttttgacttc 1080
aacagattcc actgccactt ctcaccacgt gactggcagc gactcatcaa caacaactgg 1140
ggattccggc ccagaaagct gcggttcaag t tc^t t c a ac. a tccaggtcaa ggaggtcacg 1200
acgaaegacg gcgttacgac catcgctaat aaccttacca gcacgattca ggtcttctcg 1260
114
PL 217 623 B1
gactcggagt accaactgcc gtacgtcctc ggctctgcgc accagggctg cetccctccg 1320
ttccctgcgg acgtgttcat gattcctcag tacggatatc tgactctaaa caacggcagt 1380
cagtctgtgg gacgttcctc cttctactgc ctggagtact fctccttctca gatgctgaga 1440
acgggcaata actttgaatt cagctacacc tttgaggaag tgcctttcca cagcagctat 1500
gcgcacagcc agagcctgga ccggctgatg aatcccctca tcgaccagta cctgtactac 1560
ctggcccgga cccagagcac tacggggtcc acaagggagc tgcagttcca tcaggctggg 162 0
cccaacacca tggccgagca atcaaagaac tggctgcccg gaccctgtta tcggcagcag 1680
agactgtcaa aaaacataga cagcaacaac accagtaact tfcgcctggac cggggccact 1740
aaataccatc tgaatggtag aaattcatta accaacccgg gcgtagccat ggccaccaac 1300
aaggacgacg aggaccagtt ctttcccatc aacggagtgc tggtttttgg caaaacgggg 1860
gctgccaaca agacaacgct ggaaaacgtg ctaatgacca gcgaggagga gatcaaaasc 1920
accaatcccg tggctacaga acagtacggt gtggtctcca gcaacctgca atcgtctacg 1980
gccggacccc agacacagac tgtcaacagc cagggggctc tgcccggcat ggtctggcag 2040
aaccgggacg tgtacctgca gggtcccatc tgggccaaaa ttcctcacac ggacggcaac 2100
tttcacccgt ctcccctgat gggcggattt ggactcaaac acccgcctcc tcaaattctc 2160
atcaaaaaca ccccggfcacc tgctaatcct ccagaggtgt ttactcctgc caagfcttgcc 2220
tcatttatca cgcagtacag caccggccag gtcagcgtgg agatcgagtg ggaactgcag 2280
aaagaaaaca gcaaacgctg gaatccagag attcagtaca cctcaaatta tgccaagtct 2340
aataatgtgg aatttgctgt caacaacgaa ggggtttata ctgagcctcg ccccattggc 2400
acccgttacc tcacccgtaa cctgtaattg cctgtfcaatc aataaaccgg ttaattcgtt 2460
tcagttgaac tttggtctct gcgaagggcg aattc 2495
<210> 37 <211> 3098
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 42. .11
<400> 37 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 12 0
ccgccaaggc cattetcggc tgcgcgtgga ccaa aa.gfcgc a ag t c 11 ccg ISO
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cttccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
PL 217 623 B1
115
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgea 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accggagacfc 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 730
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacetctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagec CCCJeleleLCCCSl aagccaacca gcaaaagcag 96 0
cjcicgscęęjcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 102 0
gacaagggag agccggtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataacc&cgc cgacgccgag 114 0
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagacccat agaatccccc gactccfccca cgggcatcgg caagaaaggc 1320
cagcagcccg ctaaaaagaa gctcaactfct gggcagactg gcgactcaga gtcagtgccc 1380
gaccctcaac caatcggaga ęiccccccęjca. ggcccctctg gtctgggatc tggtacaatg 1440
gctgcaggcg gtggcgctcc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg agtgggtaat 1500
gcctccggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat caccaccagc 1560
acccgcacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcagat atcaagtcag 1620
agcggggcta ccaacgacaa ccacttcttc ggctacagca ccccctgggg ctattttgac 1680
ttcaacagat tccactgcca cttctcacca cgtgactggc agcgacfccat caacaacaac 1740
tggggattcc ggcccagaaa gctgcggttc aagttgttca acatccaggt caaggaggtc 1800
acgacgaacg acggcgttac gaccatcgcfc aataacctta ccagcaegat tcaggtcttc 1860
tcggactcgg agtaccaact gccgtacgtc ctcggctctg cgcaccaggg ctgcctccct 1920
ccgttccctg cggacgtgtt catgattcct cagtacggat atctgactct aaacaacggc 1980
agtcagtctg tgggacgttc ctccttctac tgcctggagt actttccttc tcagatgctg 2040
agaacgggca ataactttga afctcagctac acctttgagg aagtgccttt ccacagcagc 2100
tatgcgcaca gccagagcc t ggaccggctg atgaatcccc t ca tcgac ca gtacctgtac 2160
tacctggccc ggacccagag cactacgggg fcccacaaggg agctgcagfct ccatcaggct 2220
gggcccaaca ccatggccga gcaatcaaag aactggctgc ccggaccctg ttatcggcgg 2280
cagagactgt caaaagacat agacagcaac aacaaeagta actttgcctg gaccggggcc 2340
actaaatacc atctgaatgg tagaaattca ttaaccaacc cgggcgtagc catggccacc 2400
116
PL 217 623 B1
aacaaggacg acgaggacca gttctttccc atcaacggag tgctggtttt tggcaaaacg 2460
ggggctgcca acaagacaac gctggaaaac gtgctaatga ccagcgagga ggagatcaaa 2520
ac c ac c a at o ccgtggctac agaagaatac ggtgtggt c t ccagcaacct gcaatcgtct 2580
acggccggac cccagacaca gactgtcaac agccaggggg ctctgcccgg catggtctgg 2640
cagaaccggg acgtgtacct gcagggtccc atctgggcca aaattcctca cacggacggc 2700
aactttcacc cgtctcccct gatgggcgga tttggactca aacacccgcc tcctcaaatt 2760
ctcatcaaaa acaccccggt acctgctaat cctccagagg tgtttactcc tgccaagttt 2520
gcctcattta tcacgcagta cagcaccggc caggtcagcg tggagatcga gtgggaactg 2880
cagaaagaga acagcaaacg ctggaatcca gagattcagt acacctcaaa ttatgccaag 2940
tctaataatg tggaatttgc tgtcaacaac gaaggggttt atactgagcc tcgccccatt 3000
ggcacccgtt acctcacccg taacctgtaa ttacttgtta atcaataaac cggttgattc 3060
gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg gcgaattc 3098
<210> 38 <211> 3276
<212> DNA -.212.- nowy serotyp AAV, klon 42, 6a
<400> 38 gaattcgccc ttcgcagaga ccaaagttca actgaaacga afctaaccggt ttattgatta 60
acaggcaatt acaggttacg ggtgaggtaa cgggtgccaa tggggcgagg ctcagtataa 120
accccttcgt tgttgacagc aaattccaca ttattagact tggcataatt tgaggtgtac 180
tgaatctctg gattccagcg tttgctgttt tctttctgca gttcccactc gatctccacg 240
ctgacctggc cggtgctgta ctgcgtgata aatgaggcaa acttggcagg agtaaacacc 300
tctggaggat tagcaggtac cggggtgttt ttgatgagaa tttgaggagg cgggtgtttg 360
agtccaaatc cgtccatcag gggagacggg tgaaagttgc cgtccgtgtg aggaattttg 420
gcccagatgg gaccctgcag gtacacgtcc cggttctgcc agaccatgcc gggcagagcc 480
ccctggctgt tgacagtctg tgtctggggt ccggccgtag acgattgcag gttgctggag 540
accacaccgt attcttctgt agccacggga ttggtggttt tgatctectc ctcgctggtc 600
attagcacgt tttccagcgt tgtcttgttg gcagcccccg ttttgccaaa aaccagcact 660
ccgttgatgg gaaagaactg gtcctcgtcg tccttgttgg tggecatgge t ac gc c ccjg 720
ttggttaatg aatttctacc attcagatgg tatttagtgg ccccggtcca ggcaaagtta 780
ctgttgttgt tgctgtctat gttttttgac agtctctgct gccgataaca gggtccgggc 840
agccagttct ttgattgctc ggccatggtg ttgggcccag cctgatggaa ctgcagctcc 900
cttgtggacc ccgtagtgct ctgggtccgg gccaggtagt acaggtactg gtcgatgagg 960
gga t1cat ca gccggtccag gctctggcta tg cgc at agc tgctgtggaa aggcacttcc 102 0
PL 217 623 B1
117
tcaaaggtgt agctgaattc aaagttattg cccgttctca gcat ctgaga aggaaagtac 1080
tccaggcagt agaaggagga acgtcccaca gactgactgc cgttgtttag agtcagatat 1140
ccgtactgag gaatcatgaa cacgfcccgca gggaacggag ggaggcagcc ctggtgcgca 1200
gagccgagga cgtacggcag ttggtactcc gagtccgaga agacctgaat cgtgctggta 1260
aggttatfcag cgatggtcgt aacgccgtcg tccgtcgtga cctccttgac ctggatgttg 1320
aacaacttga accgcagctt tctgggccgg aatccccagt tgttgttgat gagtcgctgc 1380
cagtcacgtg gtgagaagtg gcagtggaat ctgttaaagt caaaataccc ccagggggtg 1440
ctgtagccga agtaggtgtt gtcgttggtg cttc ctcccg atgtcccgtt ggagatttgc 1500
ttgtagaggt ggttgttgta ggtggggagg gcccaggttc gggtgctggt ggtgatgact 1560
ctgtcgccca gccatgtgga atcgcaatgc caatttcctg aggaactacc cactccgtcg 1620
gcgccttcgt tattgtctgc cattggagcg ccaccgcctg cagccattgt accagatccc 1680
agaccagagg ggcctgcggg gggttctccg attggttgag ggtcgggcac tgactctgag 1740
tcgccagfcct gcccaaagtt gagtctcttt ttcgcgggct gctggcctgt cttgccgatg 1800
cccgtagagg agtctggaga acgc tggggt gatggctcta ccggtctctt ctttccagga 1860
gccgtcttag cgccttcctc aaccagaccg agaggttcga gaacccgctt cttggcctgg 1920
aagactgctc gcccgaggtt gcccccaaaa gacgtatctt cttgaagacg ctcctgaaac 1980
tcggcgtcgg cgtggtfcgta cttgaggtac gggttgtccc cctgctcgag ctgcttgtcg 2040
taggccttgt cgtgctcgag ggccgcggcg tctgcctcgt tgaccggctc tcccttgtcg 2100
agtccgttga agggtccgag gtacttgtag ccaggaagca ccagaccccg gccgtcgtcc 2160
tgcttttgct ggttggctfct gggtttcggg gctccaggtt tcaagtccca ccactcgcga 2220
atgccetcag agaggttgtc ctcgagccaa tctggaagat aaccatcggc agccatacct 2230
ggtttaagtc atttattgct cagaaacaca gtcatccagg tccacgttga ccagatcgca 2340
ggccgagcaa gcaatctcgg gagcccgccc cagcagatga tgaatggcac agagtttccg 2400
atacgtcctc tttctgacga ccggttgaga ttctgacacg ccggggaaac attctgaaca 2460
gtctctggtc ccgtgcgtga agcaaatgtt gaaattctga ttcattctct cgcatgtctt 2520
gcagggaaac agcatctgaa gcatgcccgc gtgacgagaa cacttgtttt ggtacctgtc 2580
ggcaaagtcc accggagctc cttccgcgtc tgacgtcgat ggatgcaaaa tgtcgcaaaa 2640
gcactcacgt gacagctaat acaggaccac tcccctatga cgtgatttac gtcagcgcta 2700
tgcccgcgtg acgagaacat ttgttttggt acctgtcggc aaagfccca.cc ggagctcctfc 27S0
ccgcgtctga cgtcgatgga tccgcgactg aggggcaggc ccgcttgggc tegcfcfct tat 2820
ccgcgtcatc gggggcgggt ctcttgttgg ctccaccctt tctgacgtag aactcatgcg 2880
ccacctcggt c3.cęjŁc}e3.Łcc tgcgcccagc ggaagaactc tttgacttcc tgctttgtca 2940
ccttgccaaa gtcatgctcc agacggcggg tgagttcaaa tttgaacatc cggtcctgca 3000
118
PL 217 623 B1
acggctgctg gtgctcgaag gtggtgctgt tcccgtcaat cacggcgcac atgttggtgt 3060
tggaagtgac gatcacgggg gtgggatcga tctgggcgga agacttgcac ttttggtcca 3120
cgcgcacctt gctgccgccg agaatggcct tggcggactc cacgaccttg gccgtcatct 3180
tgccctcctc ccaccagatc accatcttgt cgacgcaatc gttgaaggga aagttctcat 3240
tggtccagtt gacgcagccg tagaaagggc gaattc 3276
<210> 39 <211> 3084 <212> DNA <213> 43.1 <400> 39
gaattcgccc tttctacggc tgcatcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgaeaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg ISO
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaagttcg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac caagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gcggagccag caaaagaccc gcccccgatg aegeggatat aagcgagccc aagcgggcct 430
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
aaacgtgcga gaaaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg gtcagagact 660
gctcagaatg tttccccggt gcatcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aaaacgtatc 720
agaaactgtg tgccattcat catctgctgg ggcgggcacc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctggacgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggcttgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacctgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcetggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg ageagtette 1200
caggccaaga a^gggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca cctcagcgtt cccccgactc ctccacgggc 1320
atcggcaaga aaggccacca gcccgcgaga aagagactga actttgggca gactggcgac 1380
PL 217 623 B1
119
tcggagtcag tccccgaccc tcaaccaatc ggagaaccac cagcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcafccac c a ccagcacccg aacctgggcc ctgcccaccfc acaacaacca tctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc actaacgaca acacctactt tggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga cttcaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaataa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtgtt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt ccccggctct 1920
w y a3. t— c* y m — — , J-e A- i—fc k. tMw v t u. i fc c ac^*fc fc c c c cj C(CQCJiłCC{fc ct tcatgattcc fccagtacggg 1980
tatctgaccc taaacaatgg cagtcaggct gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggaa 2040
tacttccctt ctcaaatgct gaggacgggc aacaactttg aattcagcta caccttcgag 2100
gacgtgcctt tccacagcag ctacgcgcac agccagagcc tggaccggct gatgaaccct 2160
cfccatcgacc agtacctgta ttacttatcc agaactcagt ccacaggagg aactcaaggt 2220
actcagcaat tgttatfcttc tcaagccggg cccgeaasca tgtcggcfcca ggccaagaac 2280
tggctacctg gaccgtgtta ccgtcagcaa cgagtttcca cgacactgtc gcaaaacaac 2340
aacagcaatt ttgcttggac cggtgccacc aagtatcacc tgaatggcag agactccctg 24 00
gttaatcccg gcgttgccat ggctacccac aaggacgacg aggagcgctt cttcccgtca 2460
agcggagttc taatgtttgg caagcagggg gctggaaaag acaatgtgga ctacagcagc 2520
gtgatgctca ccagcgaaga agaaattaaa actactaacc cagtggctac agagcagtat 2580
ggtgtggtgg cagacaacct gcagcagacc aacggagctc ccatfcgtggg aactgtcaac 2640
agccaggggg ccttacctgg tatggtctgg caaaaccggg acgtgfcacct gcagggcccc 2700
atctgggcca aaattcetca cacggacggc saetttcatc cttcgccget gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctggtgaaaa acactcctgt tcctgcggat 2820
cctccgacca ccttcagcca ggccaagctg gcttctttta tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaatcga atgggagctg cagaaagaaa acagcaagcg ctggaaccca 2940
gagattcagt atacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgtcaatact 3000
gagggtactt attcagagcc tcgccccatt ggcactcgtt atctcacccg taatctgtaa 3060
ttgcttgtta atcaataaac cggt 3084
<210> 40
<211> 2370
<212> DNA
<213> nowy serotyp AAV, klon 43
<400> 40
120
PL 217 623 B1
gsiettt CgCCC ttt ctsicggc tgCCjfcCełetCt ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagfc 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggafcg ttcaagttcg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac caagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgc tg 39^^oaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 42 0
gcggagccag caaaagaccc gcccccgatg acgcggatat aagcgagccc aagcgggcct 4 90
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaągg agctccggtg gactttgccg 54 0
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cggg c a tgct tcagacgctg tttccctgca 600
aaacgfcgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg gtcagagact S60
gctcagaatg tttccccggt gcatcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aaaacgtatc 720
agaaactgtg tgccattcat catctgctgg ggcgggcacc cgagattgct tgctcggcct 730
gcgatctggt caacgtggac ctggacgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 640
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggcttgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacctgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct ttfcgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggcfc 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca cctcagcgtt cccccgactc ctccacgggc 1320
atcggcaaga aaggccacca gcccgcgaga aagagactga actttgggca gactggcgac 1380
teggagtcag tccccgaccc tcaaccaatc ggagaaccac cagcaggccc ctetggtetg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctgcccacct acaacaacca tctctacaag 1620
caaatctcca acgggacatc gggaggaagc actaacgaca acacctactt tggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga cttcaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaaeaataa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtgtt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gcfcgccfcccc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtaeggg 1980
PL 217 623 B1
121
tatctgaccc taaacaatgg cagtcaggct gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggaa 2040
tacttccctt ctcaaatgct gsggacgggc aacaactttg aattcagcta caccttcgag 2100
gacgtgcctt tccacagcag ctacgcgcac agccagagcc tggaccggct gatgaaccct 2160
ctcatcgacc agtacctgta ttacttatcc agaactcagt ccacaggagg aactcaaggt 2220
actcagcaat tgttattttc tcaagccggg cccgcaaaca tgtyggctca ggccaagaac 2280
tggctacctg gaccgtgtta ccgtcagcaa cgagtttcca cg&eaetgtc gcaaaacaac 2340
aacagcaatt ttgctggacc ggtgccacca 2370
<210> 41 <211> 3123 <212> DNA <213> 43.12 <400> 41
gaattcgccc ttggctgcgt caactggacc aatgagaact ttcccfctcaa cgattgcgtc 60
gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc aagatgacgg ccaaggtcgt ggagtccgcc 120
aaggccattc tcggcggcag caaggtgcgc gtggaccaaa agtgcaagtc gtccgcccag 180
atcgacccca cccccgtgat cgtcacctcc aacaccaaca tgtgcgccgt gattgacggg 240
aacagcacca ccttcgagca ccagcagccg ttgcaggaec ggatgtfccaa gttcgaactc 300
acccgccgtc tggagcacga ctttggcaag gtgaccaagc aggaagtcaa agagttcttc 360
cgctgggcgc aggatcacgt gaccgaggtg gcgcatgagt tctacgtcag aaagggcgga 420
gccagcaaaa gacccgcccc cgatgacgcg gatataagcg agcccaagcg ggcctgcccc 480
tcagtcgcgg atccatcgac gtcagacgcg gaaggagctc cggtggactt tgccgacagg 540
taccaaaaca aatgttctcg tcacgcgggc atgctccaga tgctgtttcc ctgcaaaacg 600
tgcgagagaa tgaatcagaa tttcaacatt tgcttcacgc acggggtcag agacfcgctca 660
gaatgtttec ccggtgcatc agaatctcaa ccggtcgtca gaaaaaaaac gtatcagaaa 720
ctgtgtgcca ttcatcatct gctggggcgg gcacccgaga ttgcttgctc ggcctgcgat 7S0
ctggtcaacg tggacctgga cgactgtgtt tctgagcaat aaatgactta aaccaggtat 840
ggctgccgat ggttatcttc cagattggct tgaggacaac etctctgagg gcattcgcga 900
gtggtgggac ctgaaacctg gagccccgaa acccaaagcc aaccagcaaa agcaggacga 960
cggccggggt ctggtgcttc ctggctacaa gtacctcgga cccttcaacg gactcgacaa 1020
gggggagccc gtcaacgcgg cggacgcagc ggccctcgag cacgacaagg cctacgacca 1080
gcagctcaaa gcgggtgaca atccgtacct gcggtataac cacgccgacg ccgagtttca 1140
ggagcgtctg caagaagata cgtcttttgg gggcaacctc gggcgagcag tcttccaggc 1200
caagaagcgg gttctcgaac ctctcggtct ggttgaggaa ggcgctaaga cggctcctgg 1260
122
PL 217 623 B1
saagaagaga ccggtagagc catcacctca gcgttccccc gactcctcca cgggcatcgg 1320
caagaaaggc caccagcccg cgagaaagag actgaacttt gggcagactg gcgactcgga 1380
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 1440
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgctcc aatggcagac aataacgaag gcgccgacgg 1500
agtgggtagt tcctcaggaa attggcattg cgattccaca tsgctgggcg acagagtcafc 15G0
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccatctct acaagcaaat 1620
ctccaacggg acatcgggag gaageactaa cgacaacacc tactttggct acagcacccc 1680
etyyggyLat tttgacttca acagattcca ctgccacttc tcaccacgtg actggcagcg 1740
actcatcaac aat aac tggg gafctccggcc caagagactc aacttcaagc tcttcaacat 1800
ccaggtcaag gaggtcacgc agaatgaagg caccaagacc atcgccaata accttaccag 1860
cacgattcag gtgtttacgg actcggaata ccagctcccg tacgtcctcg gctctgcgca 1920
ccagggctgc ctccctccgt tcccggcgga cgtcttcatg attcctcagfc acgggtatct 19Θ0
gaccctaaac aatggcagtc aggctgtggg ccgttcctcc ttctactgcc tggaatactt 2040
cccttctcaa atgctgagga cgggcaacaa ctttgaattc agctacacct tcgaggacgt 2100
gcctttccac agcagctacg cgcacagcca gagcctggac cggctgatga accctctcat 2160
cgaccagtac ctgtattact tatccagaac tcagtccaca ggaggaactc aaggtactca 2220
gcaattgtfca ttttctcaag ccgggcccgc aaacatgtcg gctcaggcca agaactggct 2280
acctggaccg tgttaccgtc agcaacgagt ttccacgaca ctgtcgcaaa acaacaacag 2340
caattttgct tggaccggtg ccaccaagta tcacctgaafc ggcagagact ccctggttaa 2400
tcccggcgtt gccatggcfca cccacaagga cgacgaggag cgcttcttcc cgtcaagcgg 2460
agttctaatg tttggcaagc agggggctgg aaaagacaat gtggactaca gcagcgtgat 2520
gctcaccagc gaagaagaaa ttaaaactac taacccagtg gctacagagc agtatggtgt 2560
ggtggcagac aacctgcagc agaccaacgg agctcccatt gtgggaactg tcaacagcca 2640
gggggcctta cctggtatgg tctggcaaaa ccgggacgfcg fcacctgcagg gccccatctg 2700
ggccaaaatt cctcacacgg acggcaactt tcatccttcg ccgctgatgg gaggctttgg 2760
actgaaacac ccgcctcctc agatcctggt gaaaaacact cctgttcctg cggatcctcc 2820
gaccaccttc agccaggcca agctggcttc ttttatcacg cagtacagca ccggacaggt 28B0
cagcgtggaa atcgaatggg agctgcagaa agaaaacagc aagcgctgga acccagagat 2940
tcagtatact tccaactact acaaatctac aaatgtggac tttgctgtca atactgaggg 3 000
fc5Ł(2tt.-elfcfc,Ccl gagcctcgcc ccattggcac tcgttatcfcc acccgtaatc tgtaattgct 3060
fcgttaatcaa taaaccggtt aattcgtttc agttgaactt tggtctctgc 3120
ttc 3123
PL 217 623 B1
123 <210> 42 <211> 3122 <212> DNĄ <213> 43,20 <400> 42
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgtgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag cgccaccttc gagcaccagc agecgttgca ggaccggatg ttcaaafcttg 3Q0
aactcacccg cegtetggag catgactttg gcaaggtgac gaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttccac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggatat aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gacfcttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatfctgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgcgattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 730
gcgatctggt caaegtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaaccfcctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag S60
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaagcctac 1030
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataatcacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1250
cctggaaaga agagactggt agagcagtcg ccacaagagc cagactcctc ctcgggcatc 1320
ggcaagacag gccagcagcc cgctaaaaag agactcaatt ttggtcagac tggcgactca 1380
gagtcagfccc ccgacccaca acctctcgga gaacctccag cagccccctc aggtctggga 1440
cctaatacaa tggcttcagg cggtggcgct ccaatggcag acaataaega &ggcgccgac 1500
ggagtgggta attcctcggg aaattggcat tgcgattcca catggctggg ggae&gagtc 1560
3t CHCCclCCei gcacccgaac ctgggccctg CC CcŁCCteŁCH acaaccacct ctacaagcaa 1620
atctccaacg gcacctcggg aggaagcacc aacgacaaca cctattttgg ctacageacc 1680
ccctgggggt attttgactt caac agattc cactgtcact tttcaccacg tgactggcaa 1740
124
PL 217 623 B1
cgactcatca acaacaattg gggattccgg cccaaaagac tcaacttcaa gcfcgtfccaac 1800
a t c cacfcjfc ca aggaagtcac gacgaacgaa ggcaccaaga ccatcgccaa taatctcacc 1860
acjcaccęjtęjc aggtctttac ggactcggag taccagtt ac cgtacgtgct aggatccgct 192 0
caccagggafc gtctgcctcc gttcccggcg gacgtcttca cggttcctca gtacggctat 1980
ttaactttaa acaatggaag ccaagccctg ggacgttcct ccttctactg tctggagtat 2040
ttcccatcgc agatgctgag aaccggcaac aactttcagt tcagctacac cttcgaggac 2100
gtgcctttcc acagcagcta cgcgcacagc cagagcctgg acaggctgat gaatcccctc 2160
atcgaccagt acctgtacta c c t^^ t c. ^łg a acgcaaacga ctggaactgg agggacgcag 2220
actctggcat tcagccaagc gggtcctagc tcaatggcca accaggctag aaattgggtg 2280
cccggacctt gctaccggca gcagegcgtc Łccacgacaa ccaaccagaa caacaacagc 2340
aactttgcct ggacgggagc tgccaagttt aagctgaacg gccgagactc tctaatgaat 2400
ccgggcgtgg caatggcttc ccacaaggat gacgacgacc gcttettccc ttcgagcggg 2460
gtcctgattt ttggcaagca aggagccggg aacgatggag tggattacag ccaagtgctg 2520
attacagatg aggaagaaat caaggctacc aaccccgtgg ccacagaaga atatggagca 2580
gtggccatca acaaccaggc cgccaatacg caggcgcaga ccggactcgt gcacaaccag 2640
ggggtgattc ccggcatggt gtggcagaat agagacgtgt acctgcaggg tcccatctgg 2700
gccaaaattc ctcacacgga cggcaacttt cacccgtctc ccctgatggg cggctttgga 2760
ctgaagcacc cgcctcctca aattctcatc aagaacacac eggttccagc ggacccgccg 2320
ettaecttca accaggccaa gctgaactct ttcatcacgc agtacagcac cggacaggfcc 2380
agcgtggaaa tcgagtggga gctgcagaaa gaaaacagca aacgctggaa tccagagatt 2940
caatacactt ccaactacta caaatctaca aatgtggact ttgctgtcaa cacggaagga 3000
gtttatagcg agcctcgccc cattggcacc cgttacctca cccgcaacct gtaattacat 3060
gttaatcaat aaaccggtta attcgtttca gttgaacttt ggtctctgcg aagggcgaat 3120
tc 3122 <210> 43 <211> 3117
<212> DNA <213> 43.21
<400? 43 gaattcgccc ttggctgcgt caactggacc aatgagaact ttcccttcaa cgattgcgtc 60
gacaagatgg tgatctggtg ggaggagggc aagatgacgg ccaaggtcgt ggagtccgcc 12 0
aaggccattc tcggcggcag caaggtgcgt gtggaccaaa agtgcaagtc ttccgcccag 180
atcgatccca cccccgtgat cgtcacctcc aacaccaaca t g t g tcjc c g t gattgacggg 240
9. a. c <a. 3 C cl c c a. ccttcgagca ccagcagccg ttgcaggacc ggatgttcaa atttgaactc 300
PL 217 623 B1
125
acccgccgtc tggagcatga ctttggcaag gtgacgaagc aggaagtcaa agagttcttc 360
cgctgggcgc aggatcacgt gaccgaggtg gcgcatgagt tccacgtcag aaagggtgga 420
gccnncnngn gacccgcccc cgatgacgcg gatataagcg agcccaagcg ggcctgcccc 480
tcagfccgcgg atccatcgac gteagacgcg gaaggagcfcc cggtggactt tgccgacagg 540
U- Liłi L— Lr- GL i—ttiL fct. aatgttctcg tcacgcgggc atgcttcaga tgctgtttcc ctgcaagaca 600
tgcgagagaa fcgaatcagaa fcfctcaacatfc tgcttcacgc acgggaccag agactgttca 660
gaatgtttce ccggcgtgtc agaatctcaa ccggtcgtca gaaagaggac gtatcggaaa 720
ctctgtgcga fctcafccatct gctggggcgg gctcccgaga ttgettgctc ggcctgcgat 760
ctcjgfc c aacc^ tggacctgga fcgactgtgtt tctgagcaat aaatgactta aaccaggtat 840
ggctgccgat ggttatcttc cagattggct cgaggacaac ctctctgagg gcattcgcga 900
gtggtgggac ttgaaacctg gagccccgaa acccaaagcc aaccagcaaa agcaggacga 960
cggccggggt ctggtgcttc c tggc tacaa gtacctcgga cccttcaacg gactcgacaa 1020
gggggagccc gtcaacgcgg cggacgcagc ggccctcgag cacgacaaag cctacgacca 1080
gcagctcaaa gcgggtgaca atccgfcacct gcggtataat cacgccgacg ccgagtttca 1140
ggagcgtcfcg caagaagata cgtcttttgg gggcaacctc gggcgagcag tcttccaggc 1200
caagaagcgg gttctcgaac ctctcggtct ggttgaggaa ggcgctaaga cggctcctgg 1260
aaagaagaga ccggtagagc agtcgccaca agagccagac tcctcctcgg gcatcggcaa 1320
gacaggccag cagcccgcta aaaagagact caattttggt cagactggcg actcagagtc 1380
agtccccgac ccacaacctc tcggagaacc tccagcagcc ccctcaggtc tgggacctaa 1440
tacaatggct tcaggcggtg gcgctccaat ggcagacaat aacgaaggcg ccgacggagt 1500
gggtaattcc tcgggaaatt ggcattgcga ttccacatgg ctgggggaca gagtcatcac 1560
caccagcacc cgaacctggg ccctgcccac ctacaacaac cacctctaca agcaaatctc 1620
caacggcacc tcgggaggaa gcaccaacga caacacctat tttggctaca gcaccccctg 1680
ggggtatttt gacttcaaca gattccactg tcacttttca ccacgtgact ggcaacgact 1740
catcaacaac aattggggat tccggcccaa aagactcaac ttcaagctgt tcaacatcca 1800
ggtcaaggaa gtcacgacga acgaaggcac caagaccatc gccaataatc tcaccagcac 1860
cgtgcgggtc tttacggact cggagtacca gttaccgtac gtgctaggafc ccgctcacca 1920
gggatgtctg cctccgttcc c c g t cttcatggtt cctcagtacg gctatttaae 1980
tttaaacaat ggaagccaag ccctgggacg fctcctccttc tactgtctgg agtatttccc 2040
atcgcagatg ctgagaaccg gcaacaactt tcagttcagc tacaccttcg aggacgtgcc 2100
tttecacagc agctacgcgc acagccagag cctggacagg ctgatgaatc ccctcatcga 2160
ccagtacctg tactacctgg tcagaacgca aacgactgga actggaggga cgcagactct 2220
126
PL 217 623 B1
ggcattcagc caagcgggtc ctagctcaat ggccaaccag gctagaaatt gggtgcccgg 2280
accttgctac cggcagcagc gcgtctccac gacaaccaac cagagcaaca acagcaactt 2340
tgcctggacg ggagctgcca agtttaagct gaacggccga gactctctaa tgaatccggg 2400
cgtggcaatg gettcccaca aggatgacga cgaccgcttc ttcccttcga gcggggtcct 2460
gatttttggc aagcaaggag ccgggaacga tggagtggat tacagccaag tgctgattac 2520
agatgaggaa gaaatcaagg ctaccaaccc cgtggccaea gaagaatatg gagcagtggc 2580
catcaacaac caggccgcca atacgcaggc gcagaccgga ctcgtgcaca accagggggt 2640
gattcccggc atggtgtggc agaatagaga cgtgtacctg cagggtccca tctgggccaa 2700
aattcctcac acggacggca actttcaccc gtctcccctg atgggcggct ttggactgaa 2760
gcacccgcct cctcaaattc tcatcaagaa cacaccggtt ccagcggacc cgccgcttac 2820
cttaaaccag gccaagctga actctttcat cacgcagtac agcaccggac aggtcagcgt 2 880
ggaaatcgag tgggagctgc agaaagsass C3gC3.33.CgC tggaatccag agatteaata 2940
cacttccaac tactacaaat ctacaaatgt ggactttgct gtcaacacgg aaggagttta 3000
t agcgagcc t cgccccattg gcacccgtta cc t c ac ccgc aacctgtaat tacatgttaa 3060
tcaataaacc ggttaattcg tttcagttga actttggtct ctgcgaaggg egaatte 3117
<210> 44 <211> 3121 <212> DNA <213> 43.23 <400> 44
gaattcgccc ttctacggct gcgtcaactg gaccaatgag aactttccct tcaacgattg 60
cgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga gggcaagatg acggccaagg tcgtggagtc 120
cgccaaggcc attctcggcg gcagcaaggt gcgtgtggac caaaagtgca agtcttccgc 180
ccagatcgat cccacccccg tgatcgtcac ctccaacacc aacatgtgcg ccgtgattga 240
cgggaacagc accaccttcg agcaccagca gccgttgcag gaccggatgt tcaaatttga 300
actcacccgc cgtctggagc atgactttgg caaggtgacg aagcaggaag tcaaagagtt 360
cttccgctgg gcgcaggatc acgtgaccga ggtggcgcat gagttccacg t cagaaaggg 420
tggcgccaac aagagacccg cccccgatga egeggatata agcgagccca agcgggcctg 480
cccctcagtc gcggatccat cgacgtcaga cgcggaagga gctccggtgg actttgccga 540
caggtaccaa aacaaatgtt ctcgtcacgc gggcatgctt cagatgctgt ttccctgcaa 600
gacatgcgag agaatgaatc agaatttcaa catttgcttc acgcacggga ccagagactg 6S0
ttcagaatgt ttccccggcg tgtcagaatc tcaaccggtc gtcagaaaga ggacgtatcg 720
gaaactctgt gegatteate atctgctggg gcgggctccc gagattgctt gctcggcctg 780
PL 217 623 B1
127
cgatctggtc aacgtggacc tggatgactg tgtttctgag caataaatga cttaaaccag 840
gtatggctgc cgatggttat cttccagatt ggctcgagga caacctctct gagggcattc 900
gcgagtggtg ggacttgaaa cctggagccc cgaaacccaa agccaaccag caaaagcagg 960
acgacggccg gggtctggtg cttcctggct acaagtacct cggacccttc aacggactcg 1020
acaaggggga gcccgtcaac gcggcggacg cagcggccct cgagcacgac aaagcctacg 1080
accagcagct caaagcgggt gacaatccgt acctgcggta taatcacgcc gacgccgagt 1140
ttcaggagcg tctgcaagaa gatacgtcct ttgggggcaa ccfccgggcga gcagtcttcc 1200
aggccaagaa gcgggttctc gaacctctcg gtctggttga ggaaggcgct aagacggctc 1260
ctggaaagaa gagaccggta gagcagtcgc cacaagagcc agactcctcc tcgggcatcg 1320
gc33g3cagg ccagcagccc gctaaaaaga gactcaafcfct tggtcagact ggcgactcag 13 8 0
agtcagtccc cgacccacaa cctctcggag aacctccagc agccccctca ggtctgggac 1440
C fc ^3 cLfc ^3 C ¢1 fc ggcttcaggc ggtggcgctc caatggcaga caataacgaa ggcgccgacg 1500
gagtgggtaa ttcctcggga aattggcatt gcgattccac atggctgggg gacagagtca 1560
tcaccaccag cacccgaacc tgggccctgc ccacctacaa caaccacctc tacaagcaaa 1620
tctccaacgg cacctcggga ggaagcacca acgacaacac ctattttggc tacagcaccc 1680
cctgggggta fctttgacttc aacagattcc actgtcactt ttcaccaegt gactggcaac 1740
gactcatcaa caacaattgg ggattccggc ccaaaagact caacttcaag ctgttcaaca 1800
tccaggtcaa ggaagtcacg acgaacgaag gcaccaagac catcgccaat aatctcacca 1B60
gcaccgtgca ggtctttacg gacttggagt accagttacc gtacgtgcta ggafcccgctc 1920
accagggatg tctgcctccg ttcccggcgg acgtcttcat ggttcctcag fcacggctatt 1980
taactttaaa caatggaagc caagccctgg gacgttcctc cttctactgt ctggagtatt 2040
tcccatcgca gatgccgaga accggcaaca actttcagfcfc eagctacacc ttcgaggacg 2100
tgcctttcca cagcagctac gcgcacagcc agagcctgga caggctgatg aatcccctca 2160
tcgaccagta cctgtactac ctggtcagaa cgcaaacgac tggaactgga gggacgcaga 2220
ctctggcatt cagccaagcg ggtcctagct caatggccaa ccaggctaga aattgggtgc 2280
ccggaccttg ctaccggcag cagcgcgtct ccacgacaac caaccagaac aacaacagca 2340
aetttgcctg gacgggagct gccaagttta agctgaacgg ccgagactcfc cfcaatgaatc 2400
c gggcgtggc aatggcttcc cacaaggatg acgacgaccg cttcttccct tcgagcgggg 2460
tcctgatttt tggcaagcaa ggagccggga acgatggagt ggattacagc caagtgctga 2520
ttacagatga ggaagaaafcc aaggctacca accccgtggc cacagaagaa tatggagcag 2580
tggccatcaa caaccaggcc gccaatacgc aggcgcagac cggactcgtg cacaaccagg 2640
gggtgattcc cggcafcggtg tggcagaata gagacgtgta cctgcagggt cccatctggg 2700
128
PL 217 623 B1
ccaaaattcc tcacacggac ggcaactttc aęęcgtctcc cctgatgggc ggctttggac 2760
tgaagcaccc gcctcctcaa attctcatca agaacacacc ggttccagcg gacccgccgc 2820
ttacctŁcaa ccaggccasg ctgaac tctt fccatcacgca gtacagcacc ggacaggtca 2360
gcgtggaaat cgagtgggag ctgcagaaag aaaacagcaa acgctggaat c cagagat tc 2940
aatacacttc caactactac aaatctacaa atgtggactt tgctgtcaac acggaaggag 3000
tttatagcga gcctcgcccc attggcaccc gttacctcac ccgcaacctg taattacatg 3060
ttaatcaata aaccggttaa ttcgtttcag ttgaactttg gtctctgcga agggcgaatt 312 0
C 3121 <210> 45 <211> 3122 <212> DNA <213> 43.25 <400> 45
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 12 0
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgtgtgga ccaaaagtgc aagtcttccg 180
cccagatcga tcccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agecgttgca ggaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg cegtetggag catgactttg gcaaggtgac gaagcaggaa gtcaaagggt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttccac gtgcgagccc 420
aagcgggcct gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag accagaaagg gtggagccaa 4S0
caagagaccc gcccccgatg acgcggatat aagcggaagg agctccggtg gactttgccg S40
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgcgattcat catctgctgg ggcgggctcc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caaegtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacctctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaagcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataatcacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
PL 217 623 B1
129
cctggaaaga agagaccggt agagcagtcg ccacaagagc cagactcctc ctcgggcatc 132 0
ggcaagacag gcc3.3c3.9cc cgctaaaaag agactcaatt ttggtcagac tggcgactca 1380
gagt cagfcc c ccgacccaca acctctcgga gaacctccag cagccccctc aggtctggga 1440
cctaatacaa tggcttcagg cggtggcgct ccaatggcag acaataacga aggcgccgac 1500
ggagtgggta atfccctcggg aaattggcat tgcgattcca catggatggg ggacagagtc 1560
atcaccacca gcacccgaac ctgggccctg cccacctaca acaaccacct ctacaagcaa 1620
atctccaacg gcacctcggg aggaagcacc aacgacaaca cctattttgg ctacagcacc 1680
ccctgggggt attttgactt cascagattc cactgtcact tttcaccacg tgactggcaa 1740
egactcafcca acaacaattg gggattccgg cccaaaagac tcaacttcaa c t gt fc c aac 1800
atccaggtca aggaagtcac gacgaacgaa ggcaccaaga ccatcgccaa taatctcacc 1860
agcaccgtgc aggtctttac ggacfccggag taccagttac cgtacgtgct aggatccgct 192 0
caccagggat gtctgcctcc gttcccggcg gacgtcttca tggttcctca gtacggctat 1930
ttaactttaa acaatggaag ccaagccctg ggacgttcct ccttctactg tctggagtat 2040
ttcccatcgc agatgctgag aaccggcaac aactttcagt tcagctacac cttcgaggac 2100
gtgcctttcc acagcagcta cgcgcacagc cagagcctgg acaggctgat gaatcccctc 2160
atcgaccagt accfcgtacta ccfcggtcaga acgcaaacga ctggaactgg agggacgcag 2220
actctggcat tcagccaagc gggtcctagc tcaatggcca accaggctag aaattgggtg 2280
cccggacctt gctaccggca gcagcgcgtc tccacgacaa ccaaccagaa caacaacagc 2340
aactttgcct ggacgggagc tgccaagttt aagctgaacg gccgagactc tctaatgaat 2400
ccgggcgtgg caatggcttc ccacaaggat gacgacgacc gcttcttccc ttcgagcggg 2460
gtcctgattt ttggcaagca aggagccggg aacgatggag tggattacag ccaagtgctg 2520
attacagatg aggaagaaat caaggctacc aaccccgtgg ccacagaaga atatggagca 25Θ0
gtggccatca acaaccaggc cgccaatacg caggcgcaga ccggactcgt gcacaaccag 2640
ggggtgattc ccggcatggt gtggcagaat agagacgtgt acctgcaggg tcccatctgg 2700
gccaaaattc ctcacacgga cggcaacttt cacccgtctc ccctgatggg cggctttgga 2760
ctgaagcacc cgcctcctca aattctcatc aagaacacac cggttccagc ggacccgccg 2820
ctfcaccttca accaggccaa gctgaactct ttcatcacgc agtacagcac cggacaggtc 2880
agcgtggaaa tcgagtggga gctgcagaaa gaaaacagca aacgctggaa tccagagatt 2940
caatacactt ccaactacta caaatctaca aatgtggact ttgctgtcaa cacggagggg 3000
gtttatagcg agcctcgccc cattggcacc cgttacctca cccgcaacct gtaattacat 3060
gttaatcaat aaaccggtta attcgtttca gttgaactt t ggtctctgcg aagggcgaat 3120
tc 3122
130
PL 217 623 B1 <210> 46 <211> 3128 <212> DNA <213> 44.1 <400> 46
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatgttgatc tgHtgęgags- agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaaag tgcgegtgga ccaaaagtgc aagccgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgafcegfcca cctccaacac caacatgtgc gecgtgattg 240
acgggaaeag caccaccttc gagcaccagc agccgttgcg ggaccggatg ttcaagtttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactfcfcg geaaggtgac aaagcaggaa gtcagagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca cgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
aaacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgett cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aagacgtatc 720
ggaaactctg tgegatteat catctgctgg ggcgggcacc egagattget tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctagatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca B40
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaaectctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 10B0
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct 11 tgggggc a acctcgggcg ageagtette 1200
caggecaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagceatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga aaggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcecgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gcfcccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg c a fctgegatfc ccacatggct gggegacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
0 cL fc O fc O aegggacttc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
PL 217 623 B1
131
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tacctgactc tgaacaatgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg c c *t a. oi. *t a. a^c a. tgtcggctca ggccaaaaac 2280
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacccac aaggacgacg aagagcgatt 2400
ttgcctggac cggtgccacc aagtatcatc tgaatggcag agactctctg ttttccgtcc 2460
^gsggagtct taatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaattaaa accacca.acc cagtggccac ggaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtacct gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacgga aactttcatc cctcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agctaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaaa acagcaaacg ctggaaccca 2940
gagattcaat acacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggacttcgc tgttaacaca 3000
gatggcactt attctgagcc tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taatctgtaa 3060
ttgctcgtta atcaataaac cggttgattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattc 3128 <210> 47 <211> 3128
<212> DNA <213> 44,5
<400> 47 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt €0
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaaag tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtegtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttgca ggaccggatg ttcaagtttg 3C0
132
PL 217 623 B1
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcagagagt 350
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca cgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggata.a aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgea SOO
aaacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 6S0
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt tgtcagaaaa aagacgtatc 720
ggaaactctg tgcgattcat catctgctgg Ggcgggcacc cgagattgct tgctcggcct 780
gcgatctggt caacgtggac ctagatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacetctc tgagggcatt 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 960
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc tacaagtacc tcggaccctt caacggactc 1020
gacaaggggg agcccgtcaa cgcggcggac gcagcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc cgacgccgag 1140
tttcaggagc gtctgcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg agcagtcttc 1200
caggccaaga agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga aaggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 1440
ggatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtagttcctc aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggcgacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
caaatctcca acgggacttc gggaggaagc accaacgaca acacctactt cggctacagc 16B0
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttecactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gacccaactt caagctcttc 1800
aaeatceagg teaaggaggt eacgeagaa t gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt cctcggctct 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tacctgactc tgaacaatgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agtteageta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gatgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctgtct cggactcagt ccacgggagg taccgcagga 2220
actcagcagt tgctattttc tcaggccggg cctaataaca tgtcggctca ggccaaaaac 2280
PL 217 623 B1
133
tggctacccg ggccctgcta ccggcagcaa cgcgtctcca cgacactgtc gcaaaataac 2340
aacagcaact ttgcctggac cggtgccacc aagtatcate tgaatggcag agactctctg 2400
gtaaatcccg gtgtcgctat ggcaacccac aaggacgacg aagagcgatt ttttccgtcc 2460
agcggagtct taatgtttgg gaaacaggga gctggaaaag acaacgtgga ctatagcagc 2520
gttatgctaa ccagtgagga agaaattaaa accaccaacc cagtggccac agaacagtac 2580
ggcgtggtgg ccgataacct gcaacagcaa aacgccgctc ctattgtagg ggccgtcaac 2640
agtcaaggag ccttacctgg catggtctgg cagaaccggg acgtgtaect gcagggtcct 2700
atctgggcca agattcctca cacggacgga aactttcatc cctcgccgct gatgggaggc 2760
tttggactga aacacccgcc tcctcagatc ctgattaaga atacacctgt tcccgcggat 2820
cctccaacta ccttcagtca agctaagctg gcgtcgttca tcacgcagta cagcaccgga 2880
caggtcagcg tggaaattga atgggagctg cagaaagaaa acagcaaacg ctggaaccca 2940
gagattcaat acacttccaa ctactacaaa tctacaaatg tggactttgc tgttaacaca 3000
gatggcactt attetgagee tcgccccatt ggcacccgtt acctcacccg taatctgtaa 3060
ttgcttgtta atcaataaac cggttgattc gtttcagttg aactttggtc tctgcgaagg 3120
gcgaattc 3128 <210> 48 <211> 1933 <212? DNA <213? nowy serotyp AAV, klon 223.10 <220?
<221> cecha dowolna <222> {1302) . . {1302) <223> może być a, c, g lub t <400? 48
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
ageagtette caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggt ctggttg agacgccagc 180
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acecgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctet aeaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat tteggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
134
PL 217 623 B1
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggtgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gttcatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacetac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat gnaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagt ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gagtgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
gtacacctce aactttgaca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1920
ttactctgag cct 1933
<210> 49 <211> 1933 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 223.2 <400> 49
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggagt gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
agcagtcttc caggccaaaa agcgggttct cgaac c tc? tt ggtctggttg agacgccagc 180
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
PL 217 623 B1
135
tggtacaatg gttgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat. gcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acecgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctet aeaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat tteggctaca gcaccccctg SOO
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 560
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac t tc aagetet tcaacateca 720
ggtcaaggag gtcacgaega atgacggtgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 340
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gtteatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg 'agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttctccc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacgccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact iw« fa, iw fał CIS·. U. ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gagtgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
gtacacctcc aactttgaca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1920
ttactctgag cct 1933
<210> 50 <211> 1933 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 223.4 <400> 50 caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60 cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
136
PL 217 623 B1
ag c a cj fc c fc fc c caggccaaaa agagggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc 180
fcaagacggca. cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcafccgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttfc gggeagactg gcgactcaga 300
gccagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aafcaacgagg gcgccgacgg 420
agfcgggtaat gcctcaggaa aUuyyCaCty egattccaca cggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagcfccaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggfccaaggag gtcacgacga atgacggcgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggacfc cggaafcatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 640
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gtteatgatt ccgcagtacg gataccfcgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgct 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctgggccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaafct cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaa11c gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtcfc ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagt ttgcfctcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gaatgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc eagagattca 1860
gtacacctcc aactttgaca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1920
ttactctgag cct 1933
<210> 51 <211» 1933
PL 217 623 B1
137 <212 > DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 223.5 <400> 51
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
ageagtette caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc 160
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gccagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca cggctgggcg acagagtcafc 460
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
tafccaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggcgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gtteatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctgggccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ct99caatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta acaaccaggg 15 60
agccttacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaagt t fc c^o fc. fc c c 11 catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gaatgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
138
PL 217 623 B1 gtacacctcc aactttgaca aacagactgg agtggacttt gctgttgaca gccagggtgt 1920
Łtactctgag cct 1933 <210> 52 <211> 1933 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 223.6 <400> 52
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
CCJ3CJ tttcaggage gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
agcagtcttc caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc 180
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aatagcgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gc ctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 4 80
C SC CSC C StCJC acccgaacct gggccctgcc cacctacaac aaccacctct acaagcaaat 540
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact 660
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggtgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggact cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gtteatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg ttcctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaecttcg aggacgtgec 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacttgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag ttttatcagg gcggacctac caecatggcc gaacaagcaa agaactggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaata ccatttaaat ggaagaaatt cattggttaa 1320
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggafctgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ct agcaccgc CCC3^3 C3 caagttgtta acaaccaggg 1560
agccttacct ggcatggtct cjciCctcjeieiCCCf ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
PL 217 623 B1
139
caagattcct cacacggacg gcaactttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtfctact cctgccaagc ttgcttcctt cafccacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgtfcgagatc gagtgggagc tgcagaaaga gaacagcaag cgctggaacc cagagattca 1860
gtacacctcc aactfctgaca aacagactgg agtggacfctt gctgttgaca 9«agggtgt 1920
ttactcfcgag cct 1933
<210> 53 <211> 1933 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon 223.7 <400> 53
caaggcctac gaccagcagc tcaaagcggg tgacaatccg tacctgcggt ataaccacgc 60
cgacgccgag tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg 120
agcagtcttc caggccaaaa agcgggttct cgaacctctt ggtctggttg agacgccagc 180
taagacggca cctggaaaga agcgaccggt agactcgcca gactccacct. cgggcatcgg 240
caagaaaggc cagcagcccg cgaaaaagag actcaacttt gggcagactg gcgactcaga 300
gtcagtcccc gaccctcaac caatcggaga accaccagca ggcccctctg gtctgggatc 360
tggtacaatg gctgcaggcg gtggcgcacc aatggctgac aataacgagg gcgccgacgg 420
agtgggtaat gcctcaggaa attggcattg cgattccaca tggctgggcg acagagtcat 480
caccaccagc acccgaacct gggccctgcc caectacaac aaccacctct acaagcaaat Ξ40
ctccagtcag tcagcaggga gcaccaacga taacgtctat ttcggctaca gcaccccctg 600
ggggtatttt gacttcaaca gattccattg ccacttctca ccacgtgact ggcagcgact S60
tatcaacaac aactggggat tccggcccaa gaagctcaac ttcaagctct tcaacatcca 720
ggtcaaggag gtcacgacga atgacggcgt cacaaccatc gctaataacc ttaccagcac 780
ggttcaggtc ttttcggacc cggaatatca actgccgtac gtcctcggct ccgcgcacca 840
gggctgcctg cctccgttcc cggcagacgt gttcatgatt ccgcagtacg gatacctgac 900
tctgaacaat ggcagccaat cggtaggccg tfccctccttc tactgcctgg agtactttcc 960
ttctcagatg ctgagaacgg gcaacaactt cacctttagc tacaccttcg aggacgtgcc 1020
tttccacagc agctacgcgc acagccagag tctggaccgg ctgatgaatc ccctcatcga 1080
ccagtacctg tactacfctgg ccagaacaca gagcaacgca ggaggtactg ctggcaatcg 1140
ggaactgcag tfcttatcagg gcggacctac caccatggcc gaacaagcaa agaaetggct 1200
gcccggacct tgcttccggc aacagagagt atccaagacg ctggatcaaa ataacaacag 1260
caactttgcc tggactggtg ccacaaaats c c at 11 a ggaagaaatt cattggttaa 1320
140
PL 217 623 B1
tcccggtgtc gccatggcaa cccacaagga cgacgaggaa cgcttcttcc cttcgagcgg 1380
agttctaatt tttggcaaaa ctggagcagc taataaaact acattagaaa acgtgctcat 1440
gacaaatgaa gaagaaattc gtcctaccaa cccggtagct accgaggaat acgggattgt 1500
aagcagcaac ttgcaggcgg ctagcaccgc agcccagaca caagttgtta aca&ccaggg 1560
ageettacct ggcatggtct ggcagaaccg ggacgtgtac ctgcaaggtc ccatttgggc 1620
caagattcct cacacggacg gca&ctttca cccgtctcct ctaatgggtg gctttggact 1680
gaaacacccg cctccccaga tcctgatcaa aaacacaccg gtacctgcta atcctccaga 1740
agtgtttact cctgccaaga ttgcttcctt catcacgcag tacagcaccg ggcaagtcag 1800
cgttgagatc gagtgggagc tgcagaaaga CJ33C3CJC33CJ cgctggaacc cagagattca 1860
gtacacctcc aactttgaca aacagactgg agtggacttt getgttgaca gccagggtgt 1920
ttactctgag cct 1.93 3
<210 > 54 <211> 3123
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon A3. .4
<400> 54 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga aaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggaaagat gaccgccaag gtcgtggaat 12 0
ctgccaaagc cattctgggt ggaagcaagg ttcgtgtgga ccagaaatgc aagtcttcgg 180
cccagatcga cccgactccg gtgattgtca cctctaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acggaaaetc gaccaccttc gagcaccagc agccgttgca agaccggatg ttcaaatttg 300
aacttacccg ccgtttggat catgactttg ggaaggtcac caagcaggaa gtcaaagact 360
ttttccggtg ggctcaagat cacgtgactg aggtggagca tgagttctac gtcaaaaagg 420
gtggagccaa gaaaaggccc gcccccgatg atgtatatat aaatgagccc aagcgggcgc 480
gcgagtcagt tgcgcagcca tcgacgtcag acgcggaagc ttcgataaac tacgcgggca 540
ggtaccaaaa caaatgttct cgtcacgtgg gcatgaatct gatgctgttt ccctgtcgac SOO
aatgcgaaag aatgaatcag aattcaaata tctgcttcac acacgggcaa aaagactgtt 660
tggaatgctt tcccgtgtca gaatctcaac ccgtttctgt cgtcagaaaa acgtatcaga 720
aactttgtta cattcatcat atcatgggaa aagaaccaga cgcctgcact gcctgcgacc 780
tggtaaatgt ggacttggat gactgtattt ctgagcaata aatgacttaa atcaggtatg 840
gctgctgacg gttatcttcc agat tggctc gaggacactc tctctgaagg aatcagacag 900
tggtggaagc tcaaacctgg cccaccaccg ccgaaaccta acc2acaaca ccgggacgac 960
agtaggggtc ttcjtcjcŁfccC tgggtacaag tacctcggac cctfccaacgg actcgacaaa 1020
ggagagccgg tcaacgaggc agacgccgcg gccctcgagc acgacaaagc ctacgaccac 1080
PL 217 623 B1
141
cagctcaagc aaggggacaa cccgtacctc aaatacaacc acgcggacgc tgaatttcag 1140
gagcgtcttc aagaagatac gtctttcggg ggcaacctcg ggcgagcagt cttccaggcc 1200
aaaaagaggg tactcgagcc tcttggtctg gttgaggaag ctgttaagac ggctcctgga 1260
aaaaagagac ctatagagca gtctcctgca gaaccggact cttcctcggg catcggcgaa 1320
tcaggccagc agcccgctaa gaaaagactc aattttggtc agactggcga cacagagtca 1380
gtcccagacc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcagccc cctctggtgt gggatctaat 1440
acaatggctt c aggcggtgg ggcaccaatg gcagacgata acgaaggcgc cgacggagtg 1500
ggtaattcct cgggaaattg gcattgcgat tccacatgga tgggcgacag agttatcacc 1560
accagcacaa gaacctgggc cctccccacc tacaataatc acctctacaa gcaaatctcc 1620
agcgaatcgg gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctggagg-ac 1680
tttgacttta acagattcca ctgtcacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 1740
aacaactggg gatttagacc caagaaactc aatttcaagc tcttcaacat ccaagtcaag 1800
gaggtcacgc agaatgatgg aaccacgacc atcgccaata accttaccag cacggtgcag 1860
gtcttcacag actctgagta ceagctgccc tacgtcctcg gttcggctca ccagggctgc 1920
cttccgccgt tcecagcaga cgtcttcatg attcctcagt acggctactt gactctgaac 1380
aatggcagcc aagcggtagg acgttcttca ttctactgtc tagagtattt tccctctcag 2040
atgctgagga cgggaaacaa cttcaccttc agctacactt ttgaagacgt gcctttccac 2100
agcagctacg cgcacagcca gagtctggat cggctgatga atcctctcat tgaccagtac 2160
ctgtattacc tgagcaaaac tcagggtaca agtggaacaa cgcagcaatc gagactgcag 2220
ttcagccaag ctgggcctag ctccatggct cagcaggcca aaaactggct accgggaccc 2280
agctaccgac agcagcgaat gtctaagacg gctaatgaca acaacaacag tgaatttgct 2340
tggactgcag ccaccaaata ttacctgaat ggaagaaatt ctctggtcaa tcccgggccc 2400
ccaatggcca gtcacaagga cgatgaggaa aagtatttcc ccatgcacgg aaatctcatc 2460
tttggaaaac aaggcacagg aactaccaat gtggacattg aatcagtgct tattacagac 2520
gaagaagaaa tcagaacaac taatcctgtg gctacagaac aatacggaca ggttgccacc 2580
aaccatcaga gtcaggacac cacagcttcc tatggaagtg tggacagcca gggaatctta 2640
cctggaatgg tgtggcagga ccgcgatgtc tatcttcaag gtcccatttg ggccaaaact 2700
cctcacacgg acggacactt tcatccttct ccgctcatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
cctcctcccc agatcctgat caaaaacaca cctgtgccag cgaatcccgc gaccactttc 2820
actcctggaa agtttgcttc gttcattacc cagtatteca ccggacaggt cagcgtggaa 2830
a t agag t ggg agctgcagaa agaaaacagc aaacgctgga acccagaaat tcagtacacc 2940
tccaactaca acaagtcggt gaatgtggag tttaccgtgg acgcaaacgg tgtttattct 3000
gaaccccgcc ctattggcac tcgttacctt acccggaact tgtaatttcc tgttaatgaa 3060
142
PL 217 623 B1 taaaccgatt tatgcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttcgcggccg eta <210> 55 <2łl> 3113 <212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon A3.5 <400> 55
3120
3123
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga aaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgaeaa gatggtgatc tggtgggagg agggaaagat gaccgccaag gtcgtggaat 120
ctgceaaagc cattctgggt ggaageaagg ttcgtgtgga ccagaaatgc aagtcttcgg 180
cccagatcga cccgactccg Stgattgtca cctctaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acggaaactc gaccaccttc gagcaccagc agccgttgca agaccggatg ttcaaatttg 300
aacttacccg ccgtttggat catgactttg ggaaggtcac caagcaggaa gtcaaagact 360
ttttccggtg ggc tcaagat cacgtgactg aggtggagca tgagttctac gtcaaaaagg 420
gtggagccaa gaaaaggccc gcccccgatg atgtatatat aaatgagccc aagcgggcgc 480
gcgagtcagt tgcgcagcca tcgacgtcag acgcggaagc ttcgataaac tacgcggaca 540
ggtaccaaaa caaatgttct cgtcacgtgg gcatgaatct gatgctgttt ccctgtcgac 600
aatgcgaaag aatgaatcag aattcaaata tctgcttcac acacgggcaa aaagactgtt 660
tggaatgctt tcccgtgtca gaatctcaac ccgttcctgt cgtcagaaaa acgtatcaga 720
aactttgtta cattcatcat atcatgggaa aagtaccaga cgcctgcact gcctgcgacc 7S0
tggtaaatgt ggacttggat gactgtattt ctgagcaata aatgacttaa atcaggtatg 840
gctgctgacg gttatcttcc agattggctc gaggacactc tctctgaagg aatcagacag 900
tggtggaagc tcaaacctgg cccaccaccg ccgaaaccta accaacaaca ccgggacgac 960
agtaggggtc ttgtgcttcc tgggtacaag tacctcggac ccttcaacgg actcgacaaa 1020
ggagagccgg tcaacgaggc agacgccgcg gccctcgagc acgacaaagc ctacgaccac 1080
cagctcaagc aaggggacaa cccgtacctc aaatacaacc acgcggacgc tgaatttcag 1140
gagcgtcttc aagaagatac gtctttcggg ggcaacctcg ggcgagcagt cttccaggcc 1200
aaaaagaggg tactcgagcc tcttggtctg gttgaggaag ctgttaagac ggctcctgga 1260
aaaaagagac etatagagea gtctcctgca gaaccggact cttcctcggg catcggcaaa 1320
tcaggccagc agcccgctaa gaaaagactc aafctttggtc agactggcga c acagagtca 1380
gtcccagacc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcagccc cctctggtgt gggatctaat 1440
acaatggctt caggcggtgg ggcaccaatg gcagacaata acgaaggcgc cgacggagtg 1500
ggtaattcct egggaaattg geattgegat tccacafcgga tgggcgacag agttatcacc 1560
accagcacaa gaacctgggc cctccccacc tacaataatc acctctacaa gcaaatctcc 1620
PL 217 623 B1
143
agcgaatcgg gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 1630
tttgacttta acagattcca ctgtcacttc tcaccacgtg actggcagcg actcafccaat 1740
aacaactggg gatttagacc caagaaactc aatttcaagc tcttcaacat ccaagtcaag 1300
gaggtcacgc agaatgatgg aaccacgacc atcgccaata accttaccag cacggtgcag 1360
gfccttcacag actctgagta ccagctgccc tacgtcctcg gttcggctca ccagggctgc 1920
cttccgccgt tcccagcaga cgtcttcatg attcctcagfc acggctactt gactctgaac 1980
aatggcagcc aagcggtagg acgttcttca ttctactgtc tccctctcag 2040
atgctgagga cgggaaacaa cttcaccttc agctacactt ttgaagacgt gcctttccac 2100
agcagctacg cgcacagcca gagtc tggat cggctgatga afcccfccfceafc tgaccagtac 2160
ctgtattacc tgagcaaaac tcagggtaca cgcagcaatc gagactgcag 2220
ttcaaccaag ctgggcctag ctccatggct cagcaggcca aaaactggct accgggaccc 2280
agc taccgac agcagcgaat gtctaagacg gctaatgaca acaacaacag tgaatttgct 2340
fcggactgcag ccaccaaata ttacccgaat ggaagaaatt ctctggfccaa tcccgggccc 2400
ccaatggcca gtcacaagga cgatgaggaa aagtatttcc ccatgcacgg aaatctcatc 2460
tttggaaaac aaggcacagg aactaccaat gtggacattg aatcagtgct tattacagac 2520
gaagaagaaa tcagaacgac taatcctgtg gctacagaac aatacggaca ggttgccacc 2580
aaccgtcaga gtcagaacac cacagcttcc tatggaagtg tggacagcca gggaatctta 2640
cctggaatgg tgtggcagga ccgcgatgtc tatcttcaag gtcccatttg ggccaaaact 2700
cctcacacgg acggacacfct tcatccttcfc ccgctcatgg gaggctttgg actgaaacac 2750
cctcctcccc agatcctgat caaaaacaca cctgtgccag cgaatcccgc gaccactttc 2320
actcctggaa agtttgcttc gttcattacc cagtattcca ccggacaggt cagcgtggaa 2830
atagagtggg agctgcagaa agaaaacagc aaacgctgga acccggaaat tcagtacacc 2940
tccaactaca acaagtcggt gaatgtggag tttaccgtgg acgcaaacgg tgtttattct 3000
gaaccccgcc ctattggcae tcgfctacctt acccggaact tgtaatttcc tgttaatgaa 3060
taaaccgatt tatgcgtttc agttgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttc 3113
<210> 56 <211> 3122
< 212 > DNA <213> nowy serotyp AAV, klon A3, .7
<400> 56 agcggccgcg aattcgccct ttctacggct gcgtcaacfcg gaccaatgaa aacttfcccct 60
tcaacgattg cgtcgacaag atggtgatct ggtgggagga gggaaagatg accgccaagg 12 0
tcgtggaatc tgccaaagcc attctgggtg gaagcaaggt tcgtgtggac cagaaatgca 130
144
PL 217 623 B1
ggtcttcggc ccagatcgac ccgactccgg tgattgtcac ctctaacacc aacatgtgcg 240
ccgtgattgą cggaaactcg accaccttcg SCfCcŁCCclCJCSt. gccgttgcaa gaccggatgt 300
tcaaatttga acttacccgc cgtttggate atgactttgg gaaggtcacc aagcaggaag 360
tcaaagactt tttccggtgg gctcaagatc acgtgactga ggtggagcat gagttctacg 420
tcaaaaaggg tggagccaag aaaaggcccg cccccgatga tgtatatata aatgagccca 480
agcgggcgcg cgagtcagtt gcgcagccat cgacgtcaga cgcggaagct tcgataaact 540
acgcggacag gtac caaaac aaatgttctc gtcacgtggg catgaatctg atgctgtttc 600
cctgtcgaca atgcgaaaga atgaatcaga ίΕ t· CE cl ^3. t cl ctgcttcaca cacgggcaaa 660
aagactgttt ggaatgcttt cccgtgtcag aatctcaacc cgtttctgtc gtcagaaaaa 720
cgtatcagaa actttgttac attcatcata tcatgggaaa agtaccagac gcctgcactg 780
cctgcgacct ggtaaatgtg gacttggatg actgtatttc tgagcaataa atgacttaaa 840
tcaggtatgg ctgctgacgg ttatcttcca gattggctcg aggacactct ctctgaagga 900
atcagacagt ggtggaagct caaacctggc ccaccaccgc cgaaacctaa ccaacaacac 960
cgggacgaca gtaggggtct tgtgcttcct gggtacaagt acctcggacc cttcaaegga 1020
ctcgacaaag gagagccggt caacgaggea gacgccgcgg ccctcgagca cgacaaagcc 1080
tacgaccacc agctcaagca aggggacaac ccgtacctca aatacaacca cgcggacgct 1140
gaatttcagg agcgtcttca agaagatacg tctttcgggg gcaacctcgg gcgagcagtc 1200
ttccaggcca aaaagagggt actcgagcct cttggtctgg ttgaggaagc tgttaagacg 1260
gctcctggaa aaaagagacc tatagagcag tctcctgcag aaccggactc ttcctcgggc 1320
atcggcaaat caggccagca gcccgctaag aaaagactca attttggtca gactggcgac 1380
acagagtcag tcccagaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcagcccc ctctggtgtg 1440
ggatctaata caatggcttc aggcggtggg gcaecaatgg cagacaataa cgaaggcgcc 1500
gacggagtgg gtaattcctc gggaaattgg cattgcgatt ccacatggat gggcgacaga 1560
gttatcacca ccagcacaag aacctgggcc ctccccacct acaataatcg cctctacaag 1620
caaatctcca gcgaatcggg agccaccaac gacaaccact acttcggcta cagcaccccc 1630
tgggggtatt ttgactttaa cagattccac tgtcacttct caccacgtga ctggcagcga 1740
ctcatcaaca acaactgggg atttagaccc aagaaactca atttcaagct cttcaacatc 1800
caagtcaagg aggtcacgca gaatgatgga accacgacca tcgccaataa ccttaccagc 1860
acggtgcagg tcttcacaga ctctgagtac cagctgccct acgtcctcgg ttcggctcac 1920
cagggctgcc ttccgccgtt cccagcagac gtcttcatga ttcctcagta cggctacttg 1930
actctgaaca atggcagcca agcggtagga cgttcttcat tctactgtct agagtatttt 2040
ccctctcaga tgctgaggac gggaaacaac ttcaccttca gc tacac111 tgaagacgtg 2100
cctttccaca gcagctacgc gcacagccag agtctggatc ggctgatgaa tcctctcatt 2160
PL 217 623 B1
145
gaccagtacc tgtattacct gagcaaaact cagggtacaa gtggaacaac gcagcaatcg 2220
agactgcagt tcagccaagc tgggcctagc tccatggctc agcaggccaa aaactggcta 2280
ccgggaccca gctaccgaca gcagcgaatg tctaagacgg ctaatgacaa caacaacagt 2340
gaatttgctt ggactgcagc caccaaatat tacctgaatg gaagaaattc tctggtcaat 2400
cccgggcccc caatggccag tcacaaggac gatgaggaaa agtatttccc catgcacgga 24S0
aatctcatct ttggaaaaca aggcacagga actaccaatg tggacattga atcagtgctt 2520
attacagacg aagaagaaat cagaacaact aatcctgtgg ctacagaaca atacggacag 2580
gttgccacca accatcagag tcagaacacc acagcttcct atggaagtgt ggacagccag 2640
ggaatcttac ctggaatggt gtggcaggac cgcgatgtct atcttcaagg tcccatttgg 2700
gccaaaactc ctcacacgga cggacacttt catccttctc cgctcatggg aggctttgga 2760
ctgaaacacc ctcctcccca gatcctgatc aaaaacacac ctgtgccagc gaatcccgcg 2820
accactttca ctcctggaaa gtttgcttcg ttcattaccc agtattccac cggacaggtc 28ΘΟ
agcgtggaaa tagagtggga gctgcagaaa gaaaacagca aacgctggaa cccagaaatt 2940
cagtacacct ccaactacaa caagtcggtg aatgtggagt ttaccgtgga cgcaaacggt 3000
gtttattctg aaccccgccc tattggcact cgttacctta cccggaactt gtaatttcct 3060
gttaatgaafc aaaccgattt atgcgtttca gttgaacttt ggtctctgcg aagggcgaat 3120
tc 3122 <210> 57 ' <211> 3123
<212> DNA <213> nowy serotyp AAV, klon A3 . 3
<400> 57 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga aaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc fcsgtgggagg agggaaagat gaccgccaag gtegtggaat 120
ctgccaaagc cattctgggt ggaggcaagg ttcgtgtgga ccagaaatgc aagtcttcgg 180
cccagatcga cccgactccg gfcgattgtca cctctaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acggaaactc gaccaccttc gagcaccagc agccgttgca agaccggatg ttcaaatttg 300
aacttacccg ccgtttggat catgacfcfctg ggaaggtcac caagcaggaa gtcaaagact 360
ttttccggfcg ggctcaagat cacgtgacrg aggtggagca tgagttctac gtcaaaaagg 420
gtggagccaa gaaaaggccc gcc ccegatg atgtatatat cy aagcgggcgc 480
gcgagtcagt tgcgcagcca tcgacgtcag acgcggaagc ttcgataaac tacgcggaca 540
ggtaccaaaa caaatgttct cgfccacgtgg gcatgaatct gatgctgttt ccctgtcgac 600
aatgcgaaag aatgaatcag aattcaaata tctgcttcac acacgggcaa aaagactgtt S60
146
PL 217 623 B1
tggaatgctt t c cccjfc g fc c a gaatctcaac ccgtttctgt cgtcagaaaa acgtatcaga 720
aactttgttą cattcatcat atcatgggaa aagtaccaga cgcctgcact gcctgcgacc 730
tggtaaatgt ggacttggat gactgtattt ctgagcaata aatgacttaa atcaggtatg 840
gctgctgacg gttatcttcc agattggctc gaggacactc tctctgaagg aatcagacag 900
tggtggaagc tcaaacctgg CCCaCCaCCg ccgaaaccta sccaacaaea ccgggacgac 960
agtaggggtc ttgtgcttcc tgggtacaag tacctcggac ccttcaacgg actcgacaaa 1020
ggagagccgg tcaacgaggc agacgccgcg gccctcgagc acgacaaagc ctacgaccac 1080
cagctcaagc aaggggacaa cccgtacctc aaatacaacc ctcgcz gg*ctC g c tgaatttcag 1140
gagcgtcttc aagaagatac gtctttcggg ggcaacctcg ggcgagcagt cttccaggcc 1200
HeleIćlelCJelgCjg tactcgagcc t c fc t ggt ctg gttgaggaag ctgttaagac ggctcctgga 1260
aa.aaaga.gac etatagagea gtctcctgca gaaccggact ctfccctcggg catcggcaaa 1320
tcaggccagc agcccgctaa gaaaagactc aattttggtc agactggcga cacagagtca 1330
gtcccaggcc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcagccc cctctggtgt gggafcctaat 1440
acaatggctt caggcggtgg ggcaccaatg gcagacaata acgaaggcgc cgacggagtg 1500
ggCaattcct cgggaaattg gcattgcgafc tccacatgga tgggcgacag agttatcacc 1560
accagcacaa gaacctgggc cctccccacc tacaataatc acctctacaa gcaaatctcc 1620
agcgaatcgg gagccaccaa cgacaaccac taettegget acagcacccc ctggsggtat isao
tttgacttta acagattcca ctgtcacttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 1740
aaeaactggg gatttagacc caagaaactc aatttcaagc tcttcaacat ccaagtcaag 1800
gaggtcacgc agaatgatgg aaccacgacc atcgccaata accttaccag cgcggtgcag 1860
gtcttcacag actctgagta ccagctgccc tacgtcctcg gttcggctca ccagggctgc 1920
cttccgccgt tcccagcaga cgtcttcatg attcctcagt aeggetaett gactctgaac 1980
aatggcagcc aagcggtagg acgttcttca ttctactgtc tagagtattt tccctctcag 2040
atgctgagga cgggaaacaa cttcaccttc agetacactt ttgaagacgt gcctttccac 2100
agcagctacg cgescagcca gagtctggat cggctgatga atcctctcat tgaccagtac 2160
ctgtattacc tgagcaaaac tcagggtaca agtggaacaa cgcagcaatc gagactgcag 2220
ttcagccaag ctgggcctag ctccatggct cagcaggcca aaaactggct accgggaccc 2280
agctaccgac agcagcgaat gtctaagacg gctaatgaca acaacaacag tgaatttgct 2340
tggactgcag ccaccaaata ttacctgaat ggaagaaafct ctctggtcaa tcccgggccc 2400
ccagfcggcca gtcacaagga cgatgaggaa aagtatttcc ccatgcacgg aaateteate 2460
tttggaaaac aaggcacagg aactaccaat gtggacattg aatcagtgct tattacagac 2520
gaagaagaaa tcagaaeaac taatcctgtg gctacagaac aatacggaca ggttgccac c 2580
aaccatcaga gtcagaacac cacagcttcc tatggaagfcg tggacagcca gggaatctta 2640
PL 217 623 B1
147
cctggaatgg tgtggcagga c cg c cja t ej fc c tatcttcaag gtcccatttg ggccaaaact 2700
cctcacacgg acggacactt tcatccttcfc ccgctcatgg gaggctttgg actgaaacac 2760
cctcctcccc agatcctgat caaaaacaca cctgtgccag cgaatcccgc gaccactttc 2820
netcctggaa agtttgcttc gfctcattacc tagtat.tcca cctgacaggt cagcgtggaa 2880
atagagtggg agctgcagaa ag&a&ac&gc aaacgctgga acccagaaat tcagtacacc 2940
tccaactaca acaagtcggt gaatgfcggag tttaccgtgg acgcaaacgg tgtttattct 3000
gaaccccgcc ctattggcac tcgttacctt acccggaact fcgtaatttcc tgttaatgaa 3060
taagccgatt tatgcgtttc agtfcgaactt tggtctctgc gaagggcgaa ttcgtttaaa 3120
CCt 3123 <210> 58 <211> 2969
<212> DNA <213> 42.12
<400> 58 gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgtcgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaagg tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
acgggaacag caccaccttc gagcaccagc agccgttaca agaccggatg ttcaaatttg 300
aactcacccg ccgtctggag cacgactttg gcaaggtgac aaagcaggaa gtcaaagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca tgagttctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 430
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgea 600
agacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaag aggacgtatc 720
ggaaactctg tgccatteat c a t c t gc t g^3 gg cggg etc c cgagattgct tgctcggcct 7B0
gcgatctggt caacgtggac ctggatgact gtgtttctga gcaataaatg acttaaacca 840
ggtatggctg ccgatggtta tcttccagat tggctcgagg acaacetctc tgagggcatc 900
cgcgagtggt gggacttgaa acctggagcc ccgaaaccca aagccaacca gcaaaagcag 950
gacgacggcc ggggtctggt gcttcctggc t acaagtac c t cgg a ccc11 caacggactc 1020
gacaagggag agccggtcaa cgaggcagac gccgcggccc tcgagcacga caaggcctac 1080
gacaagcagc tcgagcaggg ggacaacccg tacctcaagt acaaccacgc cgacgccgag 1140
148
PL 217 623 B1
tttcaggagc gtcttcaaga agatacgtct tttgggggca acctcgggcg ageagtette 1200
caggccaaga, agcgggttct cgaacctctc ggtctggttg aggaaggcgc taagacggct 1260
cctggaaaga agagaccggt agagccatca ccccagcgtt ctccagactc ctctacgggc 1320
atcggcaaga caggccagca gcccgcgaaa aagagactca actttgggca gactggcgac 1380
tcagagtcag tgcccgaccc tcaaccaatc ggagaacccc ccgcaggccc ctctggtctg 144 0
SSatctggta caatggctgc aggcggtggc gctccaatgg cagacaataa cgaaggcgec 1500
gacggagtgg gtagtt cct c aggaaattgg cattgcgatt ccacatggct gggegacaga 1560
gtcatcacca ccagcacccg aacctgggcc ctccccacct acaacaacca cctctacaag 1620
caaat ct c ca acgggacatc gggaggaagc accaacgaca acacctactt cggctacagc 1680
accccctggg ggtattttga ctttaacaga ttccactgcc acttctcacc acgtgactgg 1740
cagcgactca tcaacaacaa ctggggattc cggcccaaga gactcaactt caagctcttc 1800
aacatccagg tcaaggaggt cacgcagaat gaaggcacca agaccatcgc caataacctt 1860
accagcacga ttcaggtctt tacggactcg gaataccagc tcccgtacgt ccteggetet 1920
gcgcaccagg gctgcctgcc tccgttcccg gcggacgtct tcatgattcc tcagtacggg 1980
tacctgactc tgaacaacgg cagtcaggcc gtgggccgtt cctccttcta ctgcctggag 2040
tactttcctt ctcaaatgct gagaacgggc aacaactttg agttcagcta ccagtttgag 2100
gacgtgcctt ttcacagcag ctacgcgcac agccaaagcc tggaccggct gacgaacccc 2160
ctcatcgacc agtacctgta ctacctggcc cggacccaga gcactacggg gtccacaagg 2220
gggctgcagt tccatcaggc tgggcccaac accatggccg agcaatcaaa gaactggctg 2280
cccggaccct gttatcggca gcagagactg tcaaaaaaca tagacagcaa caacaacagt 2340
aactttgcct ggaccggggc cactaaatac catctgaatg gtagaaattc attaaccaac 2400
ccgggcgtag ccatggccac caacaaggac gacgaggacc agttctttcc catcaacgga 2460
gtgctggttt ttggcaaaac gggggctgcc aacaagacaa cgctggaaaa egtgctaatg 2520
accagcgagg aggagatcaa aaccaccaat cccgtggcta cagaagaata C99tgtggtc 2580
tccagcaacc tgcaatcgtc tacggccgga ccccagacac agactgtcaa cagccagggg 2640
gctctgcccg gcatggtctg gcagaaccgg gacgtgtacc tgcagggtcc catctgggcc 2700
aaaattcctc acacggacgg caacttteac ccgtctcccc tgatgggcgg atttggactc 2760
aaacacccgc ctcctcaaat tctcatcaag tatactteca actactacaa atctacaaat 2820
gtggactttg ctgtcaatac tgagggtact tattcagagc ctcgccccat tggcacccgt 2880
tacctcaccc gtaacctgta attgcctgtt aatcaataaa ccggttaatt cgtttcagtt 2940
gaactttggt ctctgcgaag ggcgaattc 2 969
<210> 59 <211> 3129
PL 217 623 B1
149 <212> DNA <213> 44.2 <400> 59
gaattcgccc tttctacggc tgcgtcaact ggaccaatga gaactttccc ttcaacgatt 60
gcgt cgacaa gatggtgatc tggtgggagg agggcaagat gacggccaag gtcgtggagt 120
ccgccaaggc cattctcggc ggcagcaaag tgcgcgtgga ccaaaagtgc aagtcgtccg 180
cccagatcga ccccaccccc gtgatcgtca cctccaacac caacatgtgc gccgtgattg 240
aC999aaoa3 caccaccttc gagcaccagc agecgttgca ggaccggatg ttcaagtttg 300
aactcacccg cegtetggag cacgactttg gca aggtgac aaagcaggaa gtcagagagt 360
tcttccgctg ggcgcaggat cacgtgaccg aggtggcgca egagt t ctac gtcagaaagg 420
gtggagccaa caagagaccc gcccccgatg acgcggataa aagcgagccc aagcgggcct 480
gcccctcagt cgcggatcca tcgacgtcag acgcggaagg agctccggtg gactttgccg 540
acaggtacca aaacaaatgt tctcgtcacg cgggcatgct tcagatgctg tttccctgca 600
aaacatgcga gagaatgaat cagaatttca acatttgctt cacgcacggg accagagact 660
gttcagaatg tttccccggc gtgtcagaat ctcaaccggt cgtcagaaaa aagacgtatc 720
ggaaactctg tgcgattcat catctgctgg gggcgggcac ccgagattgc ttgctcggcc 780
tgcgatctgg tcaacgtgga cctagatgac tgtgtttctg agcaataaat gacttaaacc 840
aggtatggct gccgatggtt atcttccaga ttggctcgag gacaacctct Ctgagggcat 900
tcgcgagtgg tgggacttga aacctggagc cccgaaaccc aaagccaacc agcaaaagca 960
ggadg&cggc tggggtctgg tgcttcctgg ctacaagtac ctcggaccct tcaacggact 1020
cgacaagggg gagcccgtca aegeggegga cgcagcggcc ctcgagcacg acaaggeeta 1080
cgaccagcag etcaaagcgg gtgacaatcc gtacctgcgg tataaccacg ccgacgccga 1140
gtttcaggag cgtctgcaag aagatacgtc ttttgggggc aacctcgggc gageagtett 1200
ccaggccaag aagcgggttc tcgaacctct cggtctggtt gaggaaggcg ctaagacggc 1260
ttctggaaag aagagaccgg tagagccatc accccagcgt tctccagact cctctacggg 1320
catcggcaag aaaggccagc agcccgcgaa aaagagactc aactttgggc agactggcga 1380
ctcagagtca gtgcccgacc ctcaaccaat cggagaaccc cccgcaggce cctctggtct 1440
gggatctggt acaatggctg caggcggtgg cgctccaatg gcagacaata acgaaggcgc 1500
cgacggagtg ggtagttcct caggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgacag 1560
agtcatcacc accagcaccc gaacctgggc cctccccacc tacaacaacc acctctacaa 1620
gcaaatctcc aacgggactt cgggaggaag caccaacgac aacacctact tcggctacag 1680
caccccctgg gggtattttg actttaacag attccactgc cacttctcac cacgtgactg 1740
gcagcgactc atcaacaaca actggggatt ccggccciasg agactcaact t caagctc11 1800
caacatccag gtcaaggagg tcacgcagaa tgaaggcacc aagaccatcg ccaataacct 1860
150
PL 217 623 B1
taccagcacg attcaggtct ttacggactc ggaataccag ctcccgtacg tcctcggctc 1920
tgcgcaccag ggctgcctgc ctccgttccc ggcggacgtc ttcatgattc ctcagtacgg 1980
gtacctgact ctgaacaatg gcagtcaggc cgtgggccgt tcctccttct actgcctgga 2040
gtactttcct tctcaaatgc tgagaacggg caacaacttt gagttcagct accagtttga 2100
ggacgtgcct tttcacagca gctacgcgca cagccaaagc ctggaccggc tgatgaaccc 2160
cctcatcgac cagtacctgt actacctgtc tcggactcag tccacgggag gtaccgcagg 2220
aactcagcag ttgctatttt ctcaggccgg gcctaataac atgtcggctc aggccaaaaa 2230
ctggctaccc gggccctgct accggcagca acgcgtctcc acgacactgt cgcaaaataa 2340
caacagcaac tttgcctgga ccggtgccac caagtatcat ctgaatggca gagactctet 2400
ggtaaatccc ggtgtcgcta tggcaaccca caaggacgac gaagagcgat tttttccgtc 2460
cagcggagtc ttaatgtttg ggaaacaggg agctggaaaa gacaacgtgg actatagcag 2520
cgttatgcta accagtgagg aagaaattaa aaccaccaac ccagtggcca cagaacagta 2580
cggcgtggtg gccgataacc tgcaacagca aaacgccgct cctattgtag gggccgtcaa 2640
cagtcaagga gcottacctg gcatggtctg gcagaaccgg gacgtgtacc tgcagggtcc 2700
tatctgggcc aagattcctc acacggacgg aaactttcat ccctcgccgc tgatgggagg 27S0
ctttggactg aaacacccgc ctcctcagat cctgattaag aatacacctg ttcccgcgga 2820
tcctccaact accttcagtc aagctaagct ggcgtcgttc atcacgcagt acagcaccgg 2330
acaggtcagc gtggaaattg aatgggagct gcagaaagaa aacagcaaac gctggaaccc 2940
agagattcaa tacacttcca actactacaa atctacaaat gtggactttg ctgttaacac 3000
agatggcact tattctgagc ctcgccccat cggcacccgt tacctcaccc gtaatctgta 3060
attgcttgtt aatcaataaa ccggttgatt cgtttcagtt gaactttggt ctctgcgaag 3120
ggcgaattc 3129
<210> <211> <212> <213> 60 733 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon C1VP1
<4 00> 60
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
PL 217 623 B1
151
152
PL 217 623 B1
Lys Ile Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu 305 , 310 315 320
Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Ile Phe Ala Asp 325 330 335
Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gin Glu Gly Ser 340 345 350
Leu Ser Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr 355 360 365
Cys Gly Ile Val Thr Gly Glu Asn Gin Asn Gin Thr Asp Arg Asn Ala 370 375 380
Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn 385 390 395 400
Asn Phe Glu Met Ala Tyr Asn Phe Gly Lys Val Pro Phe His Ser Met 405 410 415
Tyr Ala Tyr Ser Gin Ser Pro Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Leu Asp 420 425 430
Gin Tyr Leu Trp His Leu Gin Ser Thr Thr Ser Gly Glu Thr Leu Asn 435 440 445
Gin Gly Asn Ala Ala Thr Thr Phe Gly Lys Ile Arg Ser Gly Asp Phe 450 455 460
Ala Phe Tyr Arg Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys val Lys Gin Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Thr Ala Ser Gin Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Ser Gly 485 490 495
Gly Asn Ala Leu Leu Lys Tyr Asp Thr His Tyr Thr Leu Asn Asn Arg 500 505 510
Trp Ser Asn Ile Ala Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro Ser 515 520 525
Asp Gly Asp Phe Ser Asn Ala Gin Leu Ile Phe Pro Gly Pro Ser Val 530 535 540
Thr Gly Asn Thr Thr Thr Ser Ala Asn Asn Leu Leu Phe Thr Ser Glu 545 550 555 560
PL 217 623 B1
153
Glu Glu Ile Ala Ala 565 Thr Asn Pro Arg
Ile Ala Asp Asn 580 Asn Gin Asn Ala 585
Val Thr Ala 595 Met Gly Val Leu Pro 600 Gly
Ile Tyr 610 Tyr Gin Gly Pro Ile 615 Trp Ala
His 625 Phe His Pro Ser Pro 630 Leu Ile Gly
Pro Pro Gin ile Phe 645 Ile Lys Asn Thr
Thr Thr Phe Thr 5 60 Ala Ala Arg Val Asp 665
Thr Gly Gin 675 Val Ala Val Gin ile 680 Glu
Ser Lys 690 Arg Trp Asn Pro Glu 695 Val Gin
Gin 705 Ser Ser Met Leu Trp 710 Ala Pro Asp
Pro Arg Val Ile Gly Ser Arg Tyr Leu
725
Asp Thr Asp Met Phe Gly Gin 570 575
Thr Ala Pro Ile Thr Gly Asn 590
Met Val Trp Gin Asn Arg Asp 605
Lys Ile Pro His Ala Asp Gly 620
Gly Phe Gly Leu Lys His Pro 635 640
Pro Val Pro Ala Asn Pro Ala 6Ξ0 S55
Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser S70
Trp Glu Ile Glu Lys Glu Arg 685
Phe Thr Ser Asn Tyr Gly Asn 700
Thr Thr Gly Lys Tyr Thr Glu 715 720
Thr Asn His Leu 730 <210? 61 <211? 733 <212> ΡΚ.Τ <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon C2VP1
<400> 61 Asp
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro
Glu Gly Ile Arg Glu 20 Trp Trp Asp Leu 25
Lys Ala Asn Gin Gin 35 Lys Gin Asp 40 Asp
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe His
Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 10 15
Lys Pro Gly Ala Pro Lys Leu 30
Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 4 5
Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
154
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
155
Thr Thr Vąl Ala Asn 325 Asn Leu Thr Ser Thr 330 Val Gin Ile Phe Ala 335 Asp
Ser Ser Tyr Glu 340 Leu Pro Tyr Val Met 345 Asp Ala Gly Gin Glu 350 Gly Ser
Leu Pro Pro 355 Phe Pro Asn Asp Val 360 Phe Met Val Pro Gin 365 Tyr Gly Tyr
Cys Gly 37G Ile Val Thr Gly Glu 375 Asn Gin Asn Gin Thr 380 Asp Arg Asn Ala
Phe 3S5 Tyr cys Leu Glu Tyr 390 Phe Pro Ser Gin Met 395 Leu Arg Thr Gly Asn 400
Asn phe Glu Met Ala 405 Tyr Asn Phe Glu Lys 410 Val Pro Phe His Ser 415 Met
Tyr Ala His Ser 420 Gin Ser Leu Asp Arg 425 Leu Met Asn Pro Leu 430 Leu Asp
Gin Tyr Leu 435 Trp His Leu Gin Ser 440 Thr Thr Ser Gly Glu 445 Thr I.j o u Asn
Gin Gly 450 Asn Ala Ala Thr Thr 455 Phe Gly Lys Ile Arg 460 Ser Gly Asp Phe
Ala 465 Phe Tyr Arg Lys Asn 470 Trp Leu Pro Gly Pro 475 Cys Val Lys Gin Gin 480
Arg Phe Ser Lys Thr 485 Ala Ser Gin Asn Tyr 490 Lys Tle Pro Ala Ser 495 Gly
Gly Asn Ala Leu 500 Leu Lys Tyr Asp Thr 505 His Tyr Thr Leu Asn 510 Asn Arg
Trp Ser Asn 515 Ile Ala Pro Gly Pro 520 Pro Met Ala Thr Ala 525 Gly Pro Ser
Asp Gly 530 Asp Phe Ser Asn Ala 535 Gin Leu Ile Phe Pro 540 Gly Pro Ser Val
Thr 545 Gly Asn Thr Thr Thr 550 Ser Ala Asn Asn Leu Leu Phe Thr Ser Glu 560
Gly Glu Ile Ala Ala Thr Asn Pro Arg Asp Thr Asp Met Phe Gly Gin
565 570 575
156
PL 217 623 B1
Ile Ala Asp Asn Asn Gin Asn Ala Thr Thr Ala Pro Ile Thr Gly 590 Asn
580 585
Val Thr Ala Met Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp
595 600 605
Ile Tyr Tyr Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Ala Asp Gly
610 615 62 0
His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro
625 630 635 640
Pro pro Gin Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Ala
645 650 655
Thr Thr Phe Thr Ala Ala Arg Val Asp Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser
660 665 670
Thr Gly Gin Val Ala Val Gin Ile Glu Trp Glu Ile Glu Lys Glu Arg
675 680 685
Ser Lys Arg Arg Asn Pro Glu Val Gin Phe Thr Ser Asn Tyr Gly Asn
690 695 700
Gin Ser Ser Met Leu Trp Ala Pro Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Thr Glu
705 710 715 720
Pro Arg Val Ile Gly Ser Arg Tyr Leu Thr Asn His Leu
725 730
<210> 62
<211> 733
<212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon C5VP1®2
<400> 62
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Glu Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
PL 217 623 B1
157
158
PL 217 623 B1
Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gin Glu Gly Ser 340 345 350
Leu Pro Pro Phe Pro Asn Asp Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr 355 360 365
Cys Gly Ile Val Thr Gly Glu Asn Gin Asn Gin Thr Asp Arg Asn Ala 370 375 330
Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn 385 390 395 400
Asn Phe Glu Thr Ala Tyr Asn Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser Met 405 410 415
Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Gly Leu Met Asn Pro Leu Leu Asp 420 425 430
Gin Tyr Leu Trp His Leu Gin Ser Thr Thr Ser Gly Glu Thr Leu Asn 435 440 445
Gin Gly Asn Ala Ala Thr Thr Phe Gly Lys Tle Arg Ser Gly Asp Phe 450 455 460
Ala Phe Tyr Arg Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Val Lys Gin Gin 465 470 475 480
Arg Phe Ser Lys Thr Ala Ser Gin Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Ser Gly 485 490 495
Gly Asn Ala Leu Leu Lys Tyr Asp Thr His Tyr Thr Leu Asn. Asn Arg 500 505 510
Trp Ser Asn Ile Ala Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro Ser 515 520 525
Asp Gly Asp Phe Ser Asn Ala Gin Leu Ile Phe Pro Gly Pro Ser Val 530 535 540
Thr Gly Asn Thr Thr Thr Ser Ala Asn Asn Leu Leu Phe Thr Ser Glu 545 550 555 560
Glu Glu Ile Ala Ala Thr Asn Pro Arg Asp Thr Asp Met Phe Gly Gin 565 570 575
Ile Ala Aap Asn Asn Gin Asn Ala Thr Thr Ala Pro Ile Thr Gly Asn 580 585 590
PL 217 623 B1
159
Val Thr Ala Met Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp 595 600 605
Ile Tyr Tyr Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Ala Asp Gly 610 615 620
His Phe His Pro Ser Pro Len Ile Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro 625 630 S35 640
Pro Pro Gin Ile Phe Ile Lyg Asn Thr Pro Val Pro Ala Tyr Pro Ala 645 650 655
Thr Thr Phe Thr Ala Ala Arg Val Asp Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser 660 665 670
Thr Gly Gin Val Ala Val Gin Ile Glu Trp Glu Ile Glu Lys Glu Arg 675 680 685
Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gin Phe Thr Ser Asn Cys Gly Asn 690 695 700
Gin Ser Ser Met Leu Trp Ala Pro Asp Thr Thr Gly Lys Tyr Thr Glu 705 710 715 720
Pro Arg Val Ile Gly Ser Arg Tyr Leu Thr Asn His Leu 725 730
<210> 63
<211> 734
<212> PRT
<213> capsid protein of AAV serotype, clone AAV4VP1
<400j 63
Met Thr Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser Glu
Gly Val Arg Glu Trp Trp Ala Leu Gin Pro Gly Ala Pro Lys Pro Lys 20 25 30
Ala Asn Gin Gin His Gin Asp Asn Ala Arg Gly Leu Val Leu Pro Gly 35 40 45
Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro Val 50 55 60
Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp Gin 65 70 7E 80
Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala Asp
160
PL 217 623 B1
85 90 95
Ala Glu Phe Gin Gin Arg Leu Gin Gly Asp Thr Ser Phe Gly Gly Asn
100 105 110
Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro Leu
115 120 125
Gly Leu Val Glu Gin Ala Gly Glu Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg Pro
130 135 140
Leu Ile Glu Ser pro Gin Gin pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Qiy Lys
145 150 155 ISO
Lys dy Lys Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Val Phe Glu Asp Glu Thr
165 17 0 175
Gly Ala Gly Asp Gly Pro Pro Glu Gly Ser Thr Ser Gly Ala Met Ser
180 185 190
Asp Asp Ser Glu Met Arg Ala Ala Ala Gly Gly Ala Ala Val Glu Gly
195 20 0 205
Gly Gin. Gly Ala Asp Gly vai Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys
210 215 220
Asp Ser Thr Trp Ser Glu Gly His Val Thr Thr Thr Ser Thr Arg Thr
225 230 235 240
Trp vał Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Arg Leu Gly Glu
245 250 255
Ser Leu Gin Ser Asn Thr Tyr Asn Gly Phe Ser Thr Pro Trp Gly Tyr
2S0 265 270
Phe Asp Piie Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin
275 280 285
Arg Leu ile Asn Asn Asn Trp Gly Met Arg Pro Lys Ala Met Arg Val
290 295 300
Lys Ile Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Ser Asn Gly Glu
305 310 315 320
Thr Thr Val Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin ile Phe Ala Asp
325 330 335
Ser Ser Tyr Glu Leu Pro Tyr Val Met Asp Ala Gly Gin Glu Gly Ser
340 345 350
PL 217 623 B1
161
Leu Pro Pro 355 Phe Pro Asn. ASP Val 360 Phe Met Val Pro Gin 365 Tyr Gly Tyr
Cys Gly Leu Val Thr Gly Asn Thr Ser Gin Gin Gin Thr Asp Arg Asn
370 375 380
Ala Phe Tyr Cys Leu Glu Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly
385 390 395 400
Asn Asn Phe Glu Ile Thr Tyr Ser Phe Glu Lys Val Pro Phe His Ser
405 410 415
Met Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu ASp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile
420 425 430
Asp Gin Tyr Leu Trp Gly Leu Gin Ser Thr Thr Thr Gly Thr Thr Leu
435 44 0 445
Aeh Ala Gly Thr Ala Thr Thr Asn Phe Thr Lys Leu Arg Pro Thr Asn
450 455 460
Phe Ser Asn Phe Lys Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Ser Ile Lys Gin
465 470 475 480
Gin Gly Phe Ser Lys Thr Ala Asn Gin Asn Tyr Lys Ile Pro Ala Thr
485 490 495
Gly Ser Asp Ser Leu Ile Lys Tyr Glu Thr His Ser Thr Leu Asp Gly
500 505 510
Arg Trp Ser Ala Leu Thr Pro Gly Pro Pro Met Ala Thr Ala Gly Pro
515 520 525
Ala Asp Ser Lys Phe Ser Asn Ser Gin Leu Ile Phe Ala Gly Pro Lys
530 535 540
Gin Asn Gly Asn Thr Ala Thr Val Pro Gly Thr Leu Ile Phe Thr Ser
545 550 555 560
Glu Glu Glu Leu Ala Ala Thr Asn Al a Thr Asp Thr Asp Met Trp Gly
565 57Q 575
Ann. Leu Pro Gly Gly Asp Gin Ser Asn Ser Asn Leu Pro Thr Val Asp
580 585 590
Arg Leu Thr Ala Leu Gly Ala Val Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg
595 600 605
162
PL 217 623 B1
Asp Ile 610 Tyr Tyr Gin Gly Pro 615 Ile Trp Ala Lys Ile 620 Pro His Thr Asp
Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Ile Giy Gly Phe Gly Leu Lys His
62 5 630 635 640
Pro Pro Pro Gin. Ile Phe Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro
645 650 655
Al a Thr Thr Phe Ser Ser Thr Pro Val Asn cj s r Phe Ue Thr Gin Tyr
660 665 670
Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Gin Ile Asp Trp Glu Ile Gin Lys Glu
675 680 685
Arg Ser Łys Arg Trp Asn Pro Glu Val Gin Phe Thr Ser Asn Tyr Gly
690 695 700
Gin. Gin Asn Ser Leu Leu Trp Ala Pro Asp Ala Ala Gly Lys Tyr Thr
705 710 715 720
Glu Pro Arg Ala Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr His His Leu
725 730 <210> 64 <211> 736 <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV1
<400> 64
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn. Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
PL 217 623 B1
163
164
PL 217 623 B1
Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Len Thr Leu Asn Ann Gly 370 375 380
Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu. Tyr Phe Pro 385 390 395 400
Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe 405 410 415
Glu Glu Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp 420 425 430
Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Asn Arg 435 440 445
Thr Gin Asn Gin Ser Gly Ser Ala Gin Asn Lys Asp Leu Leu Phe Ser 450 455 460
Arg Gly Ser Pro Ala Gly Met Ser Val Gin Pro Lys Asn Trp Leu Pro 465 470 475 480
Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Lys Thr Lys Thr Asp Asn 4Θ5 490 495
Asn Asn Ser Asn Phe Thr Trp Thr Gly Ala Ser Lys Tyr Asn Leu Asn 500 505 510
Gly Arg Glu Ser ile ile Asn Pro Gly Thr Ala Met Ala Ser His Lys 515 520 525
Asp Asp Glu Asp Lys Phe Phe Pro Met Ser Gly Val Met Ile Phe Gly 530 535 540
Lys Glu Ser Ala Gly Ala Ser Asn Thr Ala Leu Asp Asn Val Met Ile 545 550 555 560
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Arg 565 570 575
Phe Gly Thr Val Ala Val Asn Phe Gin Ser Ser Ser Thr Asp Pro Ala 580 585 590
Thr Gly Asp Val His Ala Met Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin 595 600 605
Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 615 620
PL 217 623 B1
165
Thr 62 5 Asp Gly His Phe His 630 Pro Ser Pro Leu Met 63 5 Gly Gly Phe Gly Leu 640
Lys Asn Pro Pro Pro 645 Gin Ile Leu Ile Lys 650 Asn Thr Pro Val Pro 655 Ala
Asn Pro Pro Ala 660 Glu Phe Ser Ala Thr 665 Lys Phe Ala Ser Phe 670 Ile Thr
Gin Tyr Ser g g Thr Gly Gin Val Ser 680 Val Glu Ile Glu Trp 685 Glu Leu Gin
Lys Glu 690 Asn Ser Lys Arg Trp 695 Asn Pro Glu Val Gin 700 Tyr Thr Ser Asn
Tyr 705 Ala Lys Ser Ala Asn 710 Val Asp Phe Thr Val 71Ξ Asp Asn Asn Gly Leu 720
Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg pro Leu
725 730 735 <210> 65 <211> 736 <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV6VP1
<400> 65
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Łys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn. Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
166
PL 217 623 B1
115 120
125
Phe Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala 130 135
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu 145 150
Lya Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 14 0
Pro Asp Ser Ser Ser Gły Ile Gly 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys 165
Lys Arg Łeu Asn Phe Gly Gin Thr 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp 180
Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 185 190
Ala Thr Pro Ala Ala Val Gly Pro 195 200
Thr Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu 210 215
Gly Ala Asp Gły Val Gly Asn Ala 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser 225 230
Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala 245
Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 250 255
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Ala Ser 260
Thr Gly Ala Ser Asn Asp Asn His 265 270
Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp 275 280
Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 285
His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp 290 295
Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn 300
Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu 305 310
Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin 31S 320
Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp 325
Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 330 335
Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe 340
Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro 345 350
Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin 3SS 360
Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 365
Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr 370 375
Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 380
PL 217 623 B1
167
168
PL 217 623 B1
Lys His Pro Pro Pro 645 Gin Ile Leu I le Lys 650 Asn Thr Pro Val Pro 655 Ala
Asn Pro Pro Al a 660 Glu Phe Ser Ala Thr 665 Lys Phe Ala Ser Phe 670 Ile Thr
Gin Tyr Ser 675 Thr Gly Gin Val Ser 680 Val Glu Ile Glu Trp fOC O O -L> Glu Leu Gin
Lys Glu 690 Asn Ser Lys Arg Trp 695 Asn Pro Glu Val Gin 700 Tyr Thr Ser Asn
Tyr 705 Ala Lys Ser Ala Asn 710 Val Asp Phe Thr Val 715 Asp Asn Asn Gly Leu 720
Tyr Thr Glu Pro Arg Pro ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Pro Leu
725 730 735 <210> 66 <211> 735 <212> PRT
<213? białko kapsydu serotypu AAV, klon A3, 3
<400> 66
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
His Gin Leu Lys Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
PL 217 623 B1
169
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Val Lys Thr Ala. Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Gin Ser Pro Ala Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 150 155 160
Lys Ser Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Pbe Gly Gin Thr 165 170 175
Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Gly Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro ISO 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220 ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Glu Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Tyr 260 265 270
Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 275 230 235
Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 290 295 300
Gly Phe Arg Pro Lys Lye Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val 305 310 31S 320
Lys Glu Val Thr Gin Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 325 330 335
Thr Ser Ala Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr 340 345 350
Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 355 360 3S5
Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 370 375 380
170
PL 217 623 B1
Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe 385 . 390
Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 395 400
Gin Met Len Arg Thr Gly Asn Asn 405
Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 410 415
Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr 420
Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg 425 430
Leu Met Asn Pro Leu Tle Asp Gin 435 440
Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Lys Thr 445
Gin Gly Thr Ser Gly Thr Thr Gin 450 455
Gin Ser Arg Leu Gin Phe Ser Gin 460
Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Gin 46S 470
Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly 475 480
Pro Ser Tyr Arg Gin Gin Arg Met 485
Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn Asn 490 495
Asn Ser Glu Phe Ala Trp Thr Ala 500
Ala Thr Lys Tyr Tyr Leu Asn Gly 505 510
Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly 515 520
Pro Pro Val Ala Ser His Lys Asp 525
Asp Glu Glu Lys Tyr Phe Pro Met 530 535
His Gly Asn Leu Ile Phe Gly Lys 540
Gin Gly Thr Gly Thr Thr Asn Val 545 550
Asp Ile Glu Ser Val Leu Ile Thr 555 560
Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr S65
Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr S70 575
Gly Gin Val Ala Thr Asn His Gin 580
Ser Gin Asn Thr Thr Ala Ser Tyr 585 590
Gly Ser Val Asp Ser Gin Gly Ile 595 600
Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asp 605
Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro 610 615
Ile Trp Ala Lys Thr Pro His Thr 620
Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro 625 630
Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys 635 640
PL 217 623 B1
171
His Pro Pro Pro Gin 645 Ile Leu Ile Lys Asn 650 Thr Pro Val Pro 1- 655 Asn
Pro Ala Thr Thr 660 Phe Thr Pro Gly Lys 665 Phe Ala Ser Phe Ile 670 Thr Gin
Tyr Ser Thr 675 Gly Gin Val Ser Val 6S0 Glu Ile Glu Trp Glu 685 Leu Gin Lys
Glu Asn 590 Ser Lys Arg Trp Asn 695 Pro Glu Ile Gin Tyr 700 Thr Ser Asn Tyr
Asn 705 Lys Ser Val Asn Val 710 Glu Phe Thr Val Asp 715 Ala Asn Gly Val Tyr 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735 <210> 67 <211> 735 <212> PRT
<213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon A3. 7
<400> 67
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
His Gin Leu Lys Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg val Leu Glu Pro
115 120 12 5
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
172
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
173
Gin Met Lęu Arg Thr 405 Gly Asn Asn Phe Thr 410 Phe Ser Tyr Thr Phe 415 Glu
Asp Vał Pro Phe 420 His Ser Ser Tyr Ala 425 His Ser Gin Ser Leu 430 Asp Arg
Leu Met Asn 435 Pro Leu ile Asp Gin 440 Tyr Leu Tyr Tyr Leu 445 Ser Lys Thr
Gin Gly 450 Thr Ser Gly Thr Thr 4S5 Gin Gin Ser Arg 460 Gin Phe Ser Gin
Ala 465 Gly Pro Ser Ser Met 470 Ala Gin Gin Ala Lys 475 Asn Trp Leu Pro Gly 4 BO
Pro Ser Tyr Arg Gin 485 Gin Arg Met Ser Lys 490 Thr Ala Asn Asp Asn 495 Asn
Asn Ser Glu Phe 500 Ala Trp Thr Ala Ala 505 Thr Lys Tyr Tyr Leu 510 Asn Gly
Arg Asn Ser 515 Leu Val Asn Pro Gly 520 Pro Pro Met Ala Ser 525 His Lys Asp
Asp Glu 530 Glu Lys Tyr Phe Pro 535 Met His Gly Asn Leu 540 Ile Phe Gly Lys
Gin 545 Gly Thr Gly Thr Thr 550 Asn Val Asp Ile Glu 555 Ser Val Leu Ile Thr 560
Asp Glu Glu Glu Ile 565 Arg Thr Thr Asn Pro 570 Val Ala Thr Glu Gin 575 Tyr
Gly Gin Val Ala 580 Thr Asn His Gin Ser 585 Gin Asn Thr Thr Ala 590 Ser Tyr
Gly Ser Val 595 Asp Ser Gin Gly ile 600 Leu Pro Gly Met Val 605 Trp Gin Asp
Arg Asp 610 Val Tyr Leu Gin Gly 615 Pro Ile Trp Ala Lys 620 Thr Pro His Thr
Asp 625 Gly His Phe His Pro 630 ser Pro Leu Met Gly 635 Gly Phe Gly Leu Lys 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn
64S 650 655
174
PL 217 623 B1
Pro Ala Thr Thr 660 Phe Thr Pro Gly Lys 665 Phe Ala Ser Phe Ile 670 Thr Gin
Tyr Ser Thr 675 Gly Gin Val Ser Val 680 Glu Ile Glu Trp Glu 685 Leu Gin Lys
Glu Asn. 690 Ser Lys Arg Trp Asn 695 Pro Glu Ile Gin 700 Thr Ser Asn Tyr
Asn 705 Lys Ser Val Asn Val 710 Glu Phe Thr Val f*Sp 715 Ala Asn Gly Val Tyr 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735 <210> 6Θ <211> 735 <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon A3. .4
<400> 68
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
His Gin Leu Lys Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Ile Glu Gin Ser Pro Ala Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly
PL 217 623 B1
175
176
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
177
Tyr Ser Thr 675 Gly Gin Val Ser Val 680 Glu Ile Glu Trp Glu 685 Leu Gin Lys
□ lu Asn 690 Ser Lys Arg Trp Asn 695 Pro Glu I le Gin. Tyr 700 Thr Ser Asn Tyr
Asn 705 Lys Ser Vetl Asn val 710 Glu Phe Thr Val Asp / μ,ΰ Ala Asn Gly Val Tyr 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735 <210> 69 <211> 735 <212> PRT
<213? białko kapsydu serotypu AAV, klon A3, .5
<400> 69
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Asn Gin Gin His Arg Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Abp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
His Gin Leu Lys Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Ile Glu Gin Ser Pro Ala Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly
145 1Ξ0 15 S ISO
Lys Ser Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
178
PL 217 623 B1
165 170 175
Gly Asp Thr Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro I ie Gly Glu Pro Pro
180 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Ser Asn Thr Met Ala Ser Gly Gły Gly
195 2 00 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser
210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile
225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu
245 250 7 5 5
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Glu Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Tyr
260 265 270
Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His
275 280 285
Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp
290 295 300
Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val
305 310 315 320
Lys Glu val Thr Gin Asn Asp Gly Thr Thr Thr ile Ala Asn Asn Leu
325 330 335
Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr
340 34S 350
Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp
355 360 3 65
Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser
370 375 380
Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser
385 390 395 400
Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Thr Phe Glu
405 410 415
ASp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg
420 425 430
PL 217 623 B1
179
Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Lys Thr 435 440 445
Gin. Gly Thr Ser Gly Thr Thr Gin Gin Ser Arg Leu Gin Phe Asn Gin 450 455 460
Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Gin Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly 465 470 475 480
Pro Ser Tyr Arg Gin Gin Arg Met Ser Lys Thr Ala Asn Asp Asn Asn 485 490 495
Asn Ser Glu Phe Ala Trp Thr Ala Ala Thr Lys Tyr Tyr Pro Asn Gly 500 505 510
Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Pro Met Ala Ser His Lys Asp 515 520 525
Asp Glu Glu Lys Tyr Phe Pro Met His Gly Asn Leu Ile Phe Gly Lys 530 535 S40
Gin Gly Thr Gly Thr Thr Asn Val Asp Ile Glu Ser Val Leu Ile Thr 545 550 555 560
Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr 565 570 575
Gly Gin Val Ala Thr Asn Arg Gin Ser Gin Asn Thr Thr Ala Ser Tyr 580 585 590
Gly Ser Val Asp Ser Gin Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asp 595 600 605
Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Thr Pro His Thr 610 615 620
Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys 625 630 635 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn 645 650 655
Pro Ala Thr Thr Phe Thr Pro Gly Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin 660 665 670
Tyr Ser Thr Gly Gin Vał Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys 675 680 685
180
PL 217 623 B1
Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn ’Jby^
β 90 $ 95 700
Asn. lyyS Ser Val Asn Val Glu Phe Thr Val Asp Ala Asn Gly Val
705 710 715 720
Ser Gin, Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735 <210> 70 <211> 735 <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV2
<400> 70
Met Ala Ala Aep Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Gin Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro
20 25 30
Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Aep Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Arg Gin Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly
145 150 155 160
Lys Ala Gly Gin Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
165 170 175
Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Gin Pro Pro
PL 217 623 B1
181
182
PL 217 623 B1
Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr 43.5 440 445
Asn Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gin Ser Arg Leu Gin Phe Ser Gin 450 455 460
Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gin Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly 465 470 475 480
Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Vał Ser Lys Thr Ser Ala Agp Asn Asn 485 490 495
Asn Ser Glu Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly 500 505 510
Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp 515 520 525
Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Gin Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys 530 535 540
Gin Gly Ser Glu Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr 545 550 555 560
Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr 565 570 575
Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gin Arg Gly Asn Arg Gin Ala Ala Thr 580 585 590
Ala Asp Val Asn Thr Gin Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asp 595 600 605
Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr 610 615 620
Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys 625 630 635 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn 645 650 655
Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin 660 665 670
Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys 675 680 685
PL 217 623 B1
183
Glu Asn Ser Lys Arg Trp Aen Pro Glu Ile Gin Tyr 700 Thr Ser Asn Tyr
€90 . 695
Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly val Tyr
705 710 715 720
Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735 <210> 71 <211> 736 <λ1^> FR1
<213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV3
<400> 71
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Val Pro Gin Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin His Gin Asp Asn Arg Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Gly Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
Ξ0 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Ile Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Ala Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Gly
130 135 140
Ala Val Asp Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Val Gly
145 150 1Ξ5 160
Lys Ser Gly Lys Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr
165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro
184
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
185
186
PL 217 623 B1
Tyr Asn Lys 705 . Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val
710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735 <210> 72 <211> 737 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 3.3bVPl <400> 72
Met Ala Ala 1 Asp Gly Tyr Leu Pro 5 Asp Trp Leu Glu 10 Asp Asn Leu Ser 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp 20 Leu Lys Pro Gly 25 Ala Pro Lys Pro 30
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asn Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 45
Gly Tyr Lys 50 Tyr Leu Gly Pro Phe 55 Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val Asn Ala 65 Ala Asp Ala Ala Ala 70 Leu Glu His Asp 75 Lys Ala Tyr Asp BO
Gin. Gin Leu Asn Ala Gly Asp Asn 85 Pro Tyr Leu Arg 90 Tyr Asn His Ala 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu 100 Gin Glu Asp Thr 105 Ser Phe Gly Gly 110
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 125
Leu Gly Leu 130 Val Glu Glu Gly Ala 135 Lys Thr Ala Pro 140 Ala Lys Lys Arg
Pro Val Glu 145 Pro Ser Pro Gin Arg 150 Ser Pro Asp Ser 155 Ser Thr Gly Ile 160
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala 165 Arg Lys Arg Leu 170 Asn Phe Gly Gin 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro ISO Asp Pro Gin Pro 185 Leu Gly Glu Pro 190
PL 217 623 B1
187
188
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
189
Asn Phe Glu Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly 705 . 710 715 720
Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn 725 730 735
Leu
<210> 73 klon 223-4
<211> <212> <213> 644 PRT białka kapsydu serotypu AAV,
<400> 73
Lys Ala Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg
10 15
Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr 20 25 30
Ser Phe Gly Gly Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg 35 40 45
Val Leu Glu Pro Leu Gly Leu Vał Glu Thr Pro Ala Lys Thr Ala Pro 50 55 60
Gly Lys Lys Arg Pro Vai Asp Ser Pro Asp Ser Thr Ser Gly Ile Gly 65 70 75 80
Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr Θ5 90 95
Gly Asp Ser Glu Pro Vał Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro 100 105 110
Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly 115 120 125
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 130 135 140
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Arg Leu Gly Asp Arg Val Ile 145 150 155 160
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 165 170 175
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Gin Ser Ala Gly Ser Thr Asn Asp Asn Val
190
PL 217 623 B1
180 185 190
Tyr Phe Gly 195 Tyr Ser Thr Pro Trp 200 Gly Tyr Phe Asp Phe 205 Asn Arg Phe
His Cys 210 His Phe Ser Pro Arg 215 Asp Trp Gin Arg Leu 220 Ile Asn Asn. Asn
Trp 225 Gly Phe Arg Pro Lys 230 Lys Leu Asn Phe Lys 235 Leu Phe Asn Ile Gin 240
Val Lys Glu Val Thr 245 Thr Asn Asp Gly Val 250 Thr Thr Ile Ala Asn 255 Asn
Leu Thr Ser Thr 260 Val Gin Val Phe Ser 265 Asp Ser Glu Tyr Gin 270 Leu Pro
Tyr val Leu 275 Gly Ser Ala His G1 n 2S0 Gly Cys Leu Pro Pro 285 Phe Pro Ala
Asp Val 290 Phe Met Ile Pro Gin. 295 Tyr Gly Tyr Leu Thr 300 Leu Asn Asn Gly
Ser 305 Gin Ser Val Gly Arg 310 Ser Ser Phe Tyr Cys 315 Leu Glu Tyr Phe Pro 320
Ser Gin Met Leu Arg 325 Thr Gly Asn Asn Phe 330 Thr Phe Ser Tyr Thr 335 Phe
Glu Asp Val Pro 340 Phe His Ser Ser Tyr 345 Ala His Ser Gin Ser 350 Leu Gly
Arg Leu Met 355 Asm. pro Leu Ile Asp 360 Gin Leu Tyr Tyr 365 Leu Ala Arg
Thr Gin 370 Ser Asn Ala Gly Gly 375 Thr Ala Gly Asn Arg 380 Glu Leu Gin Phe
Tyr 385 Gin Gly Gly Pro Thr 390 Thr Met Ala Glu Gin 395 Ala Lys Asn Trp Leu 400
Pro GlY Pro Cys Phe 405 Arg Gin Gin Arg Val 410 Ser Lys Thr Leu Asp 415 Gin
As u Asn Asn Ser 420 Asn Phe Ala Trp Thr 425 Gly Ala Thr Lys Tyr 430 His Leu
Asn Gly Arg 435 Asn Ser Leu Val Asn 440 pro Gly Val Ala Met 445 Ala Thr His
PL 217 623 B1
191
Lys Asp 450 Asp Glu Glu Arg Phe 455 Phe Pro Ser Ser Gly 460 Val Leu Ile Phe
Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met
465 470 475 480
Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu
485 490 495
Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala Ser Thr Ala Ala Gin
500 505 510
Thr Gin Val Val Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin
515 520 525
Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His
530 535 540
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu
545 550 555 560
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala
565 570 575
Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr
580 585 590
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin
595 600 605
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn
610 615 620
Phe Asp Lye Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala val Asp Ser Gin Gly Val
625 630 635 64 0
Tyr Ser Glu Pro
<210> 74 <211> 644 <212> ΡΗΤ
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 223 .5
<400> 74
Lys Ala Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Aan Pro Tyr Leu Arg
1 5 10 15
Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr
192
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
193
Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 290 295 300
Ser Gin Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro 305 310 315 320
Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe 325 330' 335
Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Gly 340 345 350
Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg 355 360 365
Thr Gin Ser Asn Ala Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin Phe 370 375 380
Tyr Gin Gly Gly Pro Thr Thr Met Ala Glu Gin Ala Lys Asn Trp Leu 385 390 395 400
Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gin Gin Arg Val Ser Lys Thr Leu Asp Gin 405 410 415
Asn Aan Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu 420 425 430
Asn Gly Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His 435 440 445
Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe 450 455 460
Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met 465 470 475 480
Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu 485 490 495
Tyr Gly Ile val Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala Ser Thr Ala Ala Gin 500 505 510
Thr Gin Val Val Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin 515 520 525
Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 530 535 540
194
PL 217 623 B1
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met 5S 5 Gly Gly Phe Gly Leu 560
545 . 550
Lys His Pro Pro Pro Gin 565 Ile Leu Ile Lys 570 Asn Thr Pro val Pro Ala 575
Asn Pro Pro Glu Val Phe 580 Thr Pro Ala Lys 585 Phe Ala Ser Phe Ile Thr 590
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin 595 Val Ser 600 Val Glu ile Glu Trp Glu Leu Gin 605
Lys Glu Asn Ser Lys Arg 610 Trp Asn 615 Pro Glu ile Gin 620 Tyr Thr Ser Asn
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp 625 630 635 Tyr Ser Glu Pro <210> 75 <211> 644 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 223.10 <220> <221? cecha dowolna <222> (434)..(434) <223> może być dowolnym aminokwasem <400> 75 Ser Gin Gly Val 640
Lys 1 Ala Tyr Asp Gin Gin 5 Leu Lys Ala Gly 10 Asp Asn Pro Tyr Leu Arg 15
Tyr Asn His Ala Asp Ala 20 Glu Phe Gin Glu 25 Arg Leu Gin Glu Asp Thr 30
Ser Phe Gly Gly Asn Leu 35 Gly Arg 40 Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg 45
Val Leu Glu Pro Leu Gly 50 Leu Val 55 Glu Thr Pro Ala 60 Lys Thr Ala Pro
Gly 65 Lys Lys Arg Pro Val 70 Asp Ser Pro Asp Ser Thr Ser Gly Ile Gly 80
Lys Lys Gly Gin Gin Pro 85 Ala Lys Lys Arg 90 Leu Asn Phe Gly Gin Thr 95
PL 217 623 B1
195
196
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
197
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 610 . 615 620
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val 625 630 635 640
Tyr Ser Glu Pro
<210> 76
<211> 644
<212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 223.2
<4 00> 76
Lys Ala Tyr Asp Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg
5 10 15
Tyr Asn His Ala Asp Ala Glu Phe Gin Glu Cys Leu Gin Glu Asp Thr 20 25 30
Ser Phe Gly Gly Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg 35 40 45
Val Leu Glu Pro Leu Gly Leu Val Glu Thr Pro Ala Lys Thr Ala Pro 50 55 60
Gly Lys Lys Arg Pro Val Asp Ser Pro Asp Ser Thr Ser Gly Ile Gly 65 70 75 80
Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 85 90 95
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Aap Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro 100 105 110
Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gły Thr Met Val Ala Gly Gly Gly 115 120 125
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 130 135 140
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 245 150 155 160
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 165 170 175
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Gin Ser Ala Gly Ser Thr Asn Asp Asn Val
198
PL 217 623 B1
180 185 190
Tyr Phe Gly 195 Tyr Ser Thr Pro Trp 200 Gly Tyr Phe Asp Phe 205 Asn Arg Phe
His Cys 210 His Phe Ser Pro Arg 215 Asp Trp Gin Arg Leu 220 Ile Asn Asn Asn
Trp 225 Gly Phe Arg Pro hys 230 hys Leu Asn Phe Lys 235 Leu Phe Asn Ile Gin 240
Val Lys Glu Val Thr 245 Thr Asn Asp Gly Val 250 Thr Thr I le Ala Asn 255 Asn
Leu Thr Ser Thr 2S0 Val Gin Val Phe Ser 265 ASP Ser Glu Tyr Gin 270 Leu Pro
Tyr Val Leu 275 Gly Ser Ala His Gin 200 Gly Cys Leu Pro Pro 285 Phe Pro Ala
Asp Val 290 Phe Met Ile Pro Gin 295 Tyr Gly Tyr Leu Thr 300 Leu Asn Asn
Ssr 305 Gin Ser Val Gly Arg 310 Ser Ser Phe Tyr Cys 315 Leu Glu Tyr Phe Pro 320
Ser Gin Met Leu Arg 325 Thr Gly Asn Asn Phe 330 Thr Phe Ser Tyr Thr 335 Phe
Glu Asp Val Pro 340 Phe His Ser Ser Tyr 345 Ala His Ser Gin Ser 350 Leu Asp
Arg Leu Met 355 Asn Pro Leu Ile Asp 360 Gin Tyr Leu Tyr Tyr 365 Leu Ala Arg
Thr Gin 370 Ser Asn Ala Gly Gly 375 Thr Ala Gly Asn Arg 380 Glu Leu Gin Phe
Tyr 385 Gin Gly Gly Pro Thr 390 Thr Met Ala Glu Gin 3 95 Ala Lys Asn Trp Leu 400
Pro Gly Pro Cys Phe 405 Arg Gin Gin Arg Val 410 Ser Lys Thr Leu Asp 415 Gin
Asn Asn Asn Ser 420 Asn Phe Ala Trp Thr 425 Gly Ala Thr Lys Tyr 430 His Leu
Asn Gly Arg 435 Asn Ser Leu Val Asn 440 Pro Gly Val Ala Met 445 Tkis. Thr His
PL 217 623 B1
199
Lys Asp Asp 450 . Glu Glu Arg Phe 455 Ser Pro Ser Ser Gly 460 Val Leu Ile Phe
Gly 465 Lys Thr Gly Ala Ala 470 Asn Lys Thr Thr Leu Glu 475 Asn Val Leu Met 480
Thr Asn Glu Glu Glu 485 Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val 490 Ala Thr Glu 495 Glu
Tyr Gly Ile val Ser 500 Ser Asn Leu Gin Ala Ala Ser 505 Thr Ala 510 Ala Gin
Thr Gin Val 515 UslI As n Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly 520 Met 525 Val Trp Gin
Asn Arg Asp 530 Val Tyr Leu Gin 535 Gly Pro Ile Trp Ala 540 Lys Ile Pro Hi s
Thr 545 Asp Gly Asn Phe His 550 Pro Ser Pro Leu Met Gly 555 Gly Phe Gly Leu 560
Lys His Pro Pro Pro 565 Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr 570 Pro val Pro 575 Ala
Asn Pro Pro Glu Val 580 Phe Thr Pro Ala Lyg Phe Ala 585 Ser Phe 590 Ile Thr
Gin. Tyr Ser 595 Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu 600 Trp 605 Glu Leu Gin
Lys Glu Asn 610 Ser Lys Arg 615 Asn Pro Glu Ile Gin 620 Tyr Thr Ser Asn
Phe Asp Lys Gin Thr Gly Val Asp Phe Ala Val Asp 625 630 S35 Tyr Ser Glu Pro <210» 77 <211> 644 <212> PET <213> białko kapsydu serotypu aav, klon 223.7 <400> 77 Ser Gin Gly Val 640
Lys 1 Ala Tyr Asp Gin 5 Gin Leu Lye Ala Gly Asp Asn 10 Pro Tyr Leu 15 Arg
200
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
201
Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 275 280 235
Asp Val Phe Met Ile Pro Gin. Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 290 295 300
Ser Gin Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro 305 310 315 320
Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe 325 330 335
Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp 340 345 350
Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg 355 360 365
Thr Gin Ser Asn Ala Gly Gly Thr Ala Gly Asn Arg Glu Leu Gin Phe 370 375 380
Tyr Gin Gly Gly Pro Thr Thr Met Ala Glu Gin Ala Lys Asn Trp Leu 335 390 395 400
Pro Gly Pro Cys Phe Arg Gin Gin Arg Val Ser Lys Thr Leu Asp Gin 405 410 415
Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu 420 425 430
Asn Gly Arg Asn Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His 435 440 445
Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu He Phe 450 455 460
Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys Thr Thr Leu Glu Aan Val Leu Met 465 470 475 430
Thr Asn Glu Glu Glu Ile Arg Pro Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu 485 490 495
Tyr Gly Ile Val Ser Ser Asn Leu Gin Ala Ala Ser Thr Ala Ala Gin 500 505 510
Thr Gin Val Val Asn Asn Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin 515 520 525
202
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
203
100
105
110
Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly 115 120 125
Ala Pro Met Ala Asp Asn Ser Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala 130 135 140
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 145 150 155 160
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 165 170 175
Tyr Lys Gin Ile Ser Ser Gin Ser Ala Gły Ser Thr Asn Asp Αεη Val 180 185 190
Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe 195 200 205
His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn 210 215 220
Trp Gly Phe Arg Pro Lys Lys Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin 225 230 235 240
Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn 245 250 255
Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro 260 265 270
Tyr val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala 275 280 285
Asp Val Phe Met ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly 290 295 300
Ser Gin Ser Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro 305 310 315 320
Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe 325 330 335
Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp 340 345 350
Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg
204
PL 217 623 B1
355 360 365
Thr Gin 370 Ser Asn Ala Gly Gly 375 Thr Ala Gly Asn Arg 380 Glu Leu Gin Phe
Tyr 385 Gin Gly Gly Pro Thr 390 Thr Met Ala Glu Gln 395 Ala Lys Asn Trp Leu 400
Pro Gly Pro Cys Phe 405 Arg Gin Gin Arg Val 410 Ser Lys Thr Leu Asp 415 Gin
Asn Asn Asn Ser 420 Asn Phe Ala Trp Thr 425 Gly Ala Thr Lys Tyr 430 His Leu
Asn Gly Arg 435 Asn Ser Leu Val Asn 440 Pro Gly Val Ala Met 5 Ala Thr His
Lys Asp 450 Asp Glu Glu Arg Phe 455 Phe Pro Ser Ser Gly 460 Val Leu Ile Phe
Gly 465 Lys Thr Gly Ala Ala 470 Asn Lys Thr Thr Leu 475 Glu Asn Val Leu Met 480
Thr Asn Glu Glu Glu 485 Ile Arg Pro Thr Asn 490 Pro Val Ala Thr Glu 495 Glu
Tyr Gly Ile Val 500 Ser Ser Asn Leu Gin 505 Ala Ala Ser Thr Ala 510 Ala Gin
Thr Gin Val 515 Val Asn Asn Gin Gly 520 Ala Leu Pro Gly Met 525 Val Trp Gin
Asn Arg 530 Asp Val Tyr Leu Gin 535 Gly Pro Ile Trp Ala 540 Lys Ile Pro His
Thr 545 Asp Gly Asn Phe His 550 Pro Ser Pro Leu Met 555 Gly Gly Phe Gly Leu 560
Lys His Pro Pro Pro 565 Gin Ile Leu Ile Lys 570 Asn Thr Pro Val Pro 575 Ala
Asn Pro Pro Glu 500 Val Phe Thr Pro Ala 585 Lys Leu Ala Ser Phe 590 Ile Thr
Gin Tyr Ser 595 Thr Gly Gin Val Ser 600 Val Glu Ile Glu Trp 605 Glu Leu Gin
Lys Glu 610 Asn Ser Lys Arg Trp 615 Asn Pro Glu Ile Gin 620 Tyr Thr Ser Asn
PL 217 623 B1
205
Phe Asp Lys 625 Gin Thr Gly 630 Val Asp Phe Ala Val Asp Ser Gin Gly Val
635 64 0
Tyr Ser Olu Pro
<21O> 79
<211> 730
<212> PRT
<213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 44.1
<400> 79
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 25
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Tup Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 3 0
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 12 5
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin
1SS 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro
130 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
206
PL 217 623 B1
195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp 260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 275 2S0 285
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn 305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 385 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
PL 217 623 B1
207
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu 450 . 455 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 430
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 485 490 495
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala 580 585 590
Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val 595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val 645 650 65S
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 675 680 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
208
PL 217 623 B1
Ser 705 Asn Tyr Tyr Lys Ser 710 Thr Asn Val Aap Phe Ala Val Asn Thr Asp
715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 735
Asn Leu
<210> 80
<211> 738
<212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 44 .5
<400> 80
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 12S
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Głn Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin
165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro
PL 217 623 B1
209
180 185 190
Pro Ala Giy 195 Pro Ser Giy Leu Gly 200 Ser Gly Thr Met Ala 205 Al a Gly Gly
Gly Ala 210 Pro Met Al a Asp Asn 215 Asn Glu Giy Ala Asp 220 Gly Val Gly Ser
Ser 225 Ser Gly Asn Trp His 230 Cys Asp Ser Thr Trp 235 Leu Gly Asp Arg Val 240
Ile Thr Thr Ser Thr 245 Arg Thr Trp Ala Leu 250 Pro Thr Tyr Asn Aen 255 His
Leu Tyr Lys Gin 260 ile Ser Asn Gly Thr 265 Ser Gly Gly Ser Thr 270 Asn Asp
Asn. Thr Tyr 275 Phe Gly Tyr Ser Thr 280 Pro Trp Gly Tyr Phe 285 Asp Phe Asn
Arg Phe 290 His Cys His Phe Ser 295 Pro Arg Asp Trp Gin 300 Arg Leu Ile Asn
Asn. 305 Asn Trp Gly Phe Arg 310 Pro Lys Arg Pro Asn 315 Phe Lys Leu Phe Asn 320
Ile Gin Val Lys Glu 325 Val Thr Gin Asn Glu 330 Gly Thr Lys Thr Ile 335 Ala
Asn Asn Leu Thr 340 Ser Thr Ile Gin Val 345 Phe Thr Asp Ser Glu 350 Tyr Gin
Leu Pro Tyr 355 Val Leu Gly Ser Ala 360 His Gin Gly Cys Leu 365 Pro Pro Phe
Pro Ala 370 Asp Val Phe Met Ile 375 Pro Gin Tyr Gly Tyr 380 Leu Thr Leu Asn
Asn 385 Gly Ser Gin Ala Val 390 Gly Arg Ser Ser Phe 395 Tyr Cys Leu Glu Tyr 400
Phe Pro Ser Gin Met 405 Leu Arg Thr Gly Asn 410 Asn Phe Glu Phe Ser 415 Tyr
Gin Phe Glu Asp 420 val Pro Phe His Ser 425 Ser Tyr Ala His Ser 430 Gin Ser
Leu Asp Arg 435 Leu Met Asn Pro Leu 440 ile Asp Gin Tyr Leu 445 Tyr Tyr Leu
210
PL 217 623 B1
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu 450 . 455 450
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 485 490 495
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala 580 535 590
Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Vał 595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 S40
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lye Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 675 680 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
PL 217 623 B1
211
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp 705 . 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
Asn Leu <210> 81 <211 > 738 <212> PRT <213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon 44.2 <400> 81
Met 1 Ala Ala AsP siy 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp siy Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala 85 Gly Aep Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 12 0 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro 14 0 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp 155 Ser Ser Thr Gly Ile 160
Gly Lys Lys Gly Gin 165 Gin Pro Ala Lys Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 175 Gin
Thr siy Asp Ser 180 Glu Ser Val Pro Asp 185 Pro Gin Pro Ile Gly 190 Glu Pro
212
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
213
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu 450 . 455 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn. Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 485 490 495
Gin Asn. Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 SIO
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 52S
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 S60
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala 580 585 590
Pro Ile Val Gly Ala Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Tal 595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 675 680 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
214
PL 217 623 B1
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp 705 . 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
Asn Leu <210> 32 <211> 738 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 29.3VP1 <400> 32
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Ala Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Άερ 4 0 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys oiy Glu Pro
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp SO
Gin Gin Leu Lys Ala 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 12 0 Ala Lys Lys Arg Val 12 5 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp 155 Ser Thr Thr Gly Ile 160
Gly Lys Lys Gly Gin 165 Gin Pro Ala Lys Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 17 5 Gin
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp pro Gin Pro Ile Giy Glu Pro
PL 217 623 B1
215
1Θ0 135 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly
195 200 205
Gly Al a Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser
210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr iyr Asn Asn His
245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp
260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn
275 280 285
Arg Phe His Cyg His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn
290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn
305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala
325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin
340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala Arg Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe
355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn
370 375 360
Asn Gly Ser Gin Al a Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr
385 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr
405 410 415
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser
420 4 2 5 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu
435 440 445
216
PL 217 623 B1
Ser Arg Thr Gin. Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu 450 . 455 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Aan Aan Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 485 490 495
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 SIO
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Aan Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Gly Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala 530 535 590
Pro Ile Val Gly Ala val Asn ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val 595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Vał Glu Ile Glu Trp Glu 675 630 635
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
PL 217 623 B1
217
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Asp 705 . 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735 <210> 83 <211> 738 <212 > PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 29,5VP1 <400> 83
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp As n Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Ala Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu dy 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 14 0 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp 155 Ser Ser Thr Gly Ile 160
Gly Lye Łys Gly Głn 165 Gin Pro Ala Lys Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 175 Gin
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro
218
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
219
220
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
221
165
Thr Gly Asp Ser Glu 180
Pro Ala Gly Pro Ser 195
Gly Ala Pro Met Ala 210
Ser Ser Gly Asn Trp 225
Ile Thr Thr Ser Thr 245
Leu Tyr Lys Gin Ile 260
Asn Thr Tyr Phe Gly 275
Arg Phe His Cys His 290
Asn Asn Trp Gly Phe 305
Ile Gin Val Lys Glu 325
Asn Asn Leu Thr Ser 340
Leu Pro Tyr Val Leu 355
Pro Ala Asp Val Phe 370
Asn Gly Ser Gin Ala 385 phe Pro Ser Gin Met 405
Gin Phe Glu Asp Val
222
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
223
675 S80 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin ΤΤγχ* Thr
690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Vał Asp Phe Ala val Asn Thr Glu
70S 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 735
Asn Leu <210> 85 <211> 73S <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42. 8
<400> 85
Met Ala Ala Aep Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 SO
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile
145 150 155 160
224
PL 217 623 B1
Gly Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro ISO 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly 195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp 260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 275 280 285
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn 305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 385 390 335 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
PL 217 623 B1
225
Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser . 420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu 450 45Ξ 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 485 490 495
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His 500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Wal Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Wal 545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Wal Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala 580 585 590
Pro Ile Wal Gly Ala Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val 595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Wal Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
226
PL 217 623 B1
ile Thr Gin 675 Tyr Ser Thr dy Gin 680 Val Ser val Glu Ile 685 Glu Trp Glu
Leu Gin 690 Lys Glu Asn Ser Lys 695 Arg Trp Asn Pro Glu 700 Ile Gin Tyr Thr
Ser 705 Asn Tyzc Lys Ser 710 Thr Asn Val Asp Phe 715 Ala Val Asn Thr Glu 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro 13- s Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 735
Asn Leu <210> 86 <211> 733 <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42. 13
<400» 86
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Iłe Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lye Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Vał Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
PL 217 623 B1
227
145 ΙΞΟ 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Aep Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser ISO 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Aap Gly Val Gly Ser Ser Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Aap Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Gly 260 265 270
Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His 275 280 2S5
Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe 290 295 300
Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Wal Lys Glu 305 310 315 320
Wal Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser 325 330 335
Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Wal Leu 340 345 350
Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp wal Phe 355 360 365
Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ala 370 375 380
Wal Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met 385 390 395 400
Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Gin Phe Glu Asp Wal
228
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
229
Thr Gly Gin 675 Val Ser Val Glu Ile 680 Glu Trp Glu Leu Gin 685 Lys Glu Asn
Ser Lys 690 Arg Trp Asn Pro Glu 695 Ile Gin Tyr Thr Ser 700 Asn Tyr Tyr Lys
Ser 705 Thr Asn ίϊ jL Asp Phe 710 Ala Val Asn Thr Glu 715 Gly Thr Tyr Ser Glu 720
Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Ser Leu
725 730 <210> 87 <211> 733 <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42. 3A
<400> 87
Met Ala Ala Asp Gly His Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gły Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu
230
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
231
232
PL 217 623 B1
Ser Lys Arę Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr 700 Tyr Lys
590 €95
Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala. Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu
705 710 715 720
Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 <210> 88 <211> 731 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.4 <40G> 88
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
PL 217 623 B1
233
234
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
235
Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr
690 695 700
Asn val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg
705 710 715 720
Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Σιΐϊΐι Thr Arg Asn Leu
725 730 <210> 89 <211> 731 <212 > PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42. 5A
<400> 89
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala
85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly
100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Arg Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro
115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg
130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Aep Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin
145 150 15S 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu
165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser
236
PL 217 623 B1
180 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Al a Pro Met Ala
195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Al a Ser Gly Asn Trp
210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg val Ile Thr Thr Ser Thr
225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile
245 250 255
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn His Phe Phe Gly Tyr Ser
260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg phe His cys His Phe Ser
275 280 285
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Arg Gly Phe Arg Pro
290 295 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr
305 310 315 320
Thr Asn ASp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile
325 330 335
Gin val Phe Ser Aep ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser
340 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile
355 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly
370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Sar Gin Met Leu Arg
385 390 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Gin Phe Glu Asp Val Pro Phe
405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro
420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly
435 440 445
PL 217 623 B1
237
Gly Thr Ala Gly Thr Gin Głn Leu Leu Phe Ser Gin, Ala Gly Pro Asn 450 . 455 460
Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg 465 470 475 4S0
Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe 485 490 495
Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu 500 505 510
Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr His Lys Asp Asp Glu Glu Arg 515 520 525
Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met Phe Gly Lys Głn Gly Ala Gly 530 535 540
Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu 545 550 555 5S0
Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr Gly val Val Ala 565 570 575
Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly Ala Val Asn 580 585 590
Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Ala Trp Gin Asn Arg Asp Vał Tyr 595 600 605
Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe 610 615 620
His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gły Leu Lys His Pro Pro Pro 625 630 635 640
Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr 645 650 655
Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly 660 665 S70
Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys 675 680 685
Arg Trp Asn Pro Glu ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr 690 695 700
238
PL 217 623 B1
Asn Val Asp Phe Ala Wal Asn Thr Glu 705 , 710
Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg
715 720
Asn Leu
730
<210> 90
<211> 733
<212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu aav,
<400> 90
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp
5
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu 20 25
Lys Ala Asn Głn Gin Lys Głn Asp Asp 35 40
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn 50 55
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu 65 70
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro 85
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin 100 105
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala 115 120
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys 130 · 135
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr 145 150
Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe 165
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly 180 185
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala
klon 42. IB
Trp 10 Leu. Glu Aep Asn Leu 15 Ser
Arg Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Gly Ile 155 Gly Lys Lys Gly Gin 160
Gly 170 Gin Thr Gly Asp Ser 175 Glu
Glu Pro Pro Ala Gly 190 Pro Ser
Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala
PL 217 623 B1
239
195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser Ser Ser Gly Asn Trp
210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr
225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile
245 250 255
Ser Asn Gly Thr Ser Gly ci? Ser Thr Asn Asp Asn Thr Tyr Phe Gly
260 265 270
Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe ASp Phe Asn Arg Phe His Cys His
275 280 235
Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe
290 29Ξ 300
Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu
305 310 315 320
Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser
325 330 335
Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu
340 345 350
Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe
355 360 365
Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ala
370 375 380
Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met
385 390 395 400
Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Gin Phe Glu Asp Val
405 410 415
Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met
420 425 430
Asn Pro Leu ile Asp Gin Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr Gin £ c*^ t*
435 44 0 445
Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu Phe Ser Gin Ala Gly
450 455 460
240
PL 217 623 B1
Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala 465 . 470
Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys 475 480
Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr 495
Thr Val Ser Gin Asn Asn Asn. Ser 490 495
Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr 500
Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asp 505 510
Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala 515 520
Met Ala Thr His Lys Gly Asp Glu
CT c T rft
Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly 530 535
Val Leu Met Phe Gly Lys Gin Gly 540
Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr 545 550
Ser Ser Val Met Leu Thr Ser Glu 5SS 560
Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro 565
Val Ala Thr Glu Gin Tyr Gly Val 570 575
Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin 580
Asn Ala Ala Pro Ile Val Gly Ala 585 590
Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro 595 600
Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp 605
Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp 610 615
Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly 620
Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met 625 530
Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro 635 640
Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn 645
Thr Pro Val Pro Ala Asp Pro Pro 650 655
Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu 660
Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser 665 670
Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile 675 680
Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn 685
Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile 690 695
Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Tyr Lys 700
Ser Thr Asn val Asp Phe Ala Val 705 710
Asn Thr Glu Gly Thr Tyr Ser Glu 715 720
PL 217 623 B1
241
Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu , 725 730 <210? 91 <211? 738 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.5B <400? 91
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Aep 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Glu Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Lys Gin Leu Glu Gin 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 12 0 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 160
Gly Lys Thr Gly Gin 165 Gin Pro Ala Lys Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 175 Gin
Thr Gly Asp Ser 180 Glu Ser Val Pro Asp 185 Pro Gin Pro Ile Gly 190 Glu Pro
Pro Ala Gly 195 Pro Ser Gly Leu Gly 200 Ser Gly Thr Met Al a 205 Ala Gly Gly
Gly Ala 210 Pro Met Ala Asp Asn 215 Asn Glu Gly Ala Asp 220 Gly Vał Gly Ser
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
242
PL 217 623 B1
225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His
245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp
260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Giy Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn
275 280 285
Arg Phe his Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn
290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn
305 310 315 320
I le Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala
325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin
340 345 350
Leu Pro Tyr val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe
355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn
370 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr
385 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr
405 410 415
Gin Phe Glu Asp val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser
420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu
435 440 445
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gin Gin Leu Leu
450 455 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Asn Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp
465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser
485 490 495
PL 217 623 B1
243
244
PL 217 623 B1 <21Q> 92 <211> 738 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.1 <400> 92
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lyg Pro Gly Ala Pro Lys 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Aap Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr 65 70 75
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His 35 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly 100 105 110
Aen Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys 130 135 140
Pro Val Glu Pro ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser ser Thr Gly 145 150 155
Gly Lys Lys Gly His Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gły Glu 180 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala. Ala Gly 195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly 210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg 225 230 235
Ser
Pro
Pro
Pro
Asp
Ala
Gly
Pro
Arg
Ile
160
Gin
Pro
Gly
Ser
Val 24 0
PL 217 623 B1
245
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp 245
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly 260
Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 250 255
Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr 275 280
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro 290 295
Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 285
Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lye 305 310
Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin 325
Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin 340
Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 345 350
Leu Pro Tyr Val Pro Gly Ser Ala 355 360
His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro 370 375
Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 380
Asn Gly Ser Głn Ala Val Gly Arg 385 390
Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr 405
Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 410 415
Thr Phe Glu Asp val Pro Phe His 420
Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu 435 440
Ile Asp Głn Tyr Leu Tyr Tyr Leu 445
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly 4S0 455
Thr Gin Gly Thr Gin Gin Leu Leu 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Ala Asn 465 47Q
Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin 485
Głn Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala
Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 490 495
Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His
246
PL 217 623 B1
500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val &la Met Ala Thr
515 520 52 5
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Vai Leu Met
530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val
545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr
565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Thr Asn Gły Ala
580 C DC _l 0 2 590
Pro Ile Val Gly Thr Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val
595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile
610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe
625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Val Lys Asn Thr Pro val
645 650 655
pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lye Leu Ala Ser Phe
660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu
675 6Θ0 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr
690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu
705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg
725 730 735
Asn Leu
<210> 93
<211> 738
<212> PRT
PL 217 623 B1
247 <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.12 <400> 93
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly His Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro 180 185 190
Pro Ala Gly Pro Ser Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly 195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 225 230 235 240
248
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
249
250
PL 217 623 B1 <2jO> 94 <211> 738 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 43,5 <400> 94
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro ASP Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Giy Ala Pro 30 Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 14 0 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Val Glu Pro Ser Pro 150 Gin Arg Ser Pro Asp 155 Ser Ser Thr Gly Ile 160
aiy Lys Lys Gly His 165 Gin Pro Ala Arg Lys 170 Arg Leu Asn Phe Gly 175 Gin
Thr Giy Asp Ser 180 Glu Ser Wał Pro Asp 185 Pro Gin Pro Ile Gly 190 Glu Pro
Pro Ala Gly 195 Pro Ser Giy Leu Gly 200 Ser Gly Thr Met Ala 205 Ala Gly Gly
Gly Ala 210 Pro Met Ala Asp Asn. 215 Asn G łu Gly Ala Asp 220 Gly 37 i. Gly Ser
Ser 225 Ser Gly Asn Trp His 230 Cys Asp Ser Thr Trp 235 Leu Gly Asp Arg Wal 240
PL 217 623 B1
251
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His . 245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp 260 265 270
Asn Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 275 280 235
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn 305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 330
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 385 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr 405 410 415
Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
Ser Arg Thr Gin Ser Thr Gly Gly Thr Gin Gly Thr Gin Gin Leu Leu 450 455 460
Phe Ser Gin Ala Gly Pro Ala Asn Met Ser Ala Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Leu Ser 485 490 495
252
PL 217 623 B1
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His . 500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Met 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Gly Ala Gly Lys Asp Asn Val Asp Tyr Ser Ser Val 545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 570 575
Glu Gin Tyr Gly Val Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Thr Asn Gly Ala 580 585 590
Pro Ile Val Gly Thr Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val 595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Val Lys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Ser Gin Ala Lys Leu Ala Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 675 680 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu 705 710 715 720
Gly Thr Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
Asn Leu
PL 217 623 B1
253 <210> 95 <211> 738 <212> PRT, <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon ΑΜ8 <400> 95
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Ala Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Gin Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Pro Ser Pro Gin Arg Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile 145 150 155 160
Gly Lys Lys Gly Gin Gin Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin 165 170 175
Thr Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro 180 185 190
Pro Ala Ala Pro Ser Gly Val Gly Pro Asn Thr Met Ala Ala Gly Gly 195 200 205
Gly Ala Pro Met Ala Asp Asn. Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Ser 210 215 220
Ser Ser Gly Asn. Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val
254
PL 217 623 B1
225 230 235 240
Ile Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His 245 250 255
Leu Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ala Thr Asn Asp 260 265 270
Aan Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn 275 280 285
Arg Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn 290 295 300
Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Ser Phe Lya Leu Phe Asn 305 310 315 320
Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Gin Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala 325 330 335
Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin 340 345 350
Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe 355 360 365
Pro Ala Asp Val Phe Met Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn 370 375 380
Asn Gly Ser Gin Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr 385 390 395 400
Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gin Phe Thr Tyr 405 410 415
Thr Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser 420 425 430
Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu 435 440 445
Ser Arg Thr Gin Thr Thr Gly Gly Thr Ala Asn Thr Gin Thr Leu Gly 450 455 460
Phe Ser Gin Gly Gly Pro Asn Thr Met Ala Asn Gin Ala Lys Asn Trp 465 470 475 480
PL 217 623 B1
255
Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Thr Gly . 485 490 495
Gin Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Ala Gly Thr Lys Tyr His 500 505 510
Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Ala Asn Pro Gly ile Ala Met Ala Thr 515 520 525
His Lys Asp Asp Glu Glu Arg Phe Phe Pro Ser Asn Gly Ile Leu Ile 530 535 540
Phe Gly Lys Gin Asn Ala Ala Arg Asp Asn Ala Asp Tyr Ser Asp Val 545 550 555 560
Met Leu Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 570 575
Glu Glu Tyr Gly Ile Val Ala Asp Asn Leu Gin Gin Gin Asn Thr Ala 580 585 590
Pro Gin Ile Gly Thr Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Vał 595 600 605
Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile 610 615 620
Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe 625 630 635 640
Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val 645 650 655
Pro Ala Asp Pro Pro Thr Thr Phe Asn Gin Ser Lys Leu Asn Ser Phe 660 665 670
Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu 675 680 685
Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr 690 695 700
Ser Asn Tyr Tyr Lys Ser Thr Ser Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu 705 710 715 720
Gly Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg 725 730 735
256
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
257
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255
Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn 260 265 270
Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 275 280 285
Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn 290 295 300
Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Len Phe Asn Ile 305 310 315 320
Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn 325 330 335
Asn Leu Thr Ser Thr Val Arg Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu 340 345 350
Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 355 360 365
Ala Asp Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn 370 375 380
Gly Ser Gin Ala Leu Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe 385 390 395 400
Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gin Phe Ser Tyr Thr 405 410 415
Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu 420 425 430
Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Val 435 440 445
Arg Thr Gin Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gin Thr Leu Ala Phe Ser 450 455 460
258
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
259
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735
<210> 97 <211> 736 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 43,25
<400> 97
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu. Gly ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly .Ais Pro 30 Lys Pro
Łys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly LtSU 45 val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys ^11 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 14 0 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Val Glu Gin Ser Pro 150 Gin Glu Pro Asp Ser 155 Ser Ser Gly Ile Gly 160
Lys Thr Gly Gin Gin 165 Pro Ala Lys Lys Arg 170 Leu Asn Phe Gly Gin 175 Thr
Gly Asp Ser Glu 130 Ser Val Pro Asp Pro 165 Gin Pro Leu Gly Glu 190 Pro Pro
Ala Ala Pro 135 Ser Gly Leu Gly Pro 200 Asn Thr Met Ala Ser 205 Gly Gly Gly
Ala pro 210 Met Ala Asp Asn Asn 215 Glu Gly Ala Asp Gly 220 val Gly Asn Ser
260
PL 217 623 B1
Ser 225 Gly Asn Trp His Cys 230 Asp Ser Thr Trp Leu 235 Gly Asp Arg val Ile 240
Thr Thr Ser Thr Arg 245 Thr Trp Ala Leu Pro 250 Thr Tyr Asn Asn His 255 Leu
Tyr Lys Gin Ile 260 Ser Asn Gly Thr Ser 265 Gly Gly Ser Thr Asn 270 Asp Asn
Thr Tyr Phe 275 Gly Tyr Ser Thr Pro 280 Trp Gly Tyr Phe Asp 285 Phe Asn Arg
Phe His 290 g His Phe Ser Pro 295 Arg Asp Trp Gin 300 Leu Ile Asn Asn
Asn 305 Trp Gly Phe Arg Pro 310 Lye Arg Ij u U Asn Phe 315 Lys Leu Phe Asn Ile 320
Gin Val Lys Glu Val 325 Thr Thr Asn Glu Gly 330 Thr Lys Thr Ile Ala 335 Asn
Asn Leu Thr Ser 340 Thr val Gin Val Phe 345 Thr Asp Ser Glu Tyr 350 Gin Leu
Pro Tyr Val 355 Leu Gly Ser Ala His 360 Gin Gly Cys Leu Pro 365 Pro Phe Pro
Ala Asp 370 val Phe Met Val Pro 375 Gin Tyr Gly Tyr Leu 380 Thr Leu Asn Asn
Gly 385 Ser Gin Ala Leu Gly 390 Arg Ser Ser Phe Tyr 395 Cye Leu Glu Tyr Phe 400
Pro Ser Gin Met Leu 405 Arg Thr Gly Asn Asn 410 Phe Gin Phe Ser Tyr 415 Thr
Phe Glu Asp Val 420 Pro Phe His Ser Ser 425 Tyr Ala His Ser Gin 430 Ser Leu
Asp Arg Leu 435 Met Asn Leu Ile 440 Asp Gin Tyr Leu 445 Leu val
Arg Thr 450 Gin Thr Thr Gly Thr 455 Gly Gly Thr Gin Thr 460 Leu Ala Phe Ser
Gin 465 Ala Gly Pro Ser Ser 470 Met Ala Asn Gin Ala 475 Arg Asn Trp Val Pro 480
PL 217 623 B1
261
Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Thr Asn Gin Asn . 485 490 495
Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Ala Lys Phe Lys Leu Asn 500 505 510
Gly Arg Asp Ser Leu Met Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Ser His Lys 515 520 525
Asp Asp Asp Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly 530 535 540
Lys Gin Gly Ala Gly Asn Asp Gly Val Asp Tyr Ser Gin Val Leu Ile 545 550 555 5S0
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu 565 570 575
Tyr Gly Ala Vał Ala Ile Asn Asn Gin Ala Ala Asn Thr Gin Ala Gin 580 585 590
Thr Gly Leu Vał His Asn Gin Gly Val Ile Pro Gly Met Val Trp Gin 595 600 605
Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 615 620
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 625 630 635 640
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650 655
Asp Pro Pro Leu Thr Phe Asn Gin Ala Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 660 665 670
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 675 680 685
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 690 695 700
Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val 705 710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu f Z3 / JU f li □
262
PL 217 623 B1
<210> <211» <212 > <213» 98 736 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.23
<400» 98
Met Ala i Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 150 155 160
Lys Thr Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 180 185 190
Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Met Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220
PL 217 623 B1
263
264
PL 217 623 B1
Gly Pro Cys Tyr Arg 485 Gin Gin Arg Val Ser 490 Thr Thr Thr Asn Gin 495 Asn
Αεη Asn Ser Asn 500 Phe Ala Trp Thr Gly 505 Ala Ala Lys Phe Lys 510 Leu Asn
Gly Arg Asp 515 Ser Leu Met Asn Pro 520 Gly Val Ala Met Ala 525 Ser His Lys
Asp Asp 530 ASP Asp Arg Phe Phe 535 Pro Ser Ser Gly Val 540 Leu Ile Phe Gly
Lys 545 Gin Gly Ala Gly Asn 550 Asp Gly vai Asp Tyr 555 Ser Gin Val Leu Ile 560
Thr Asp Glu Glu Glu 565 Ile Lys Ala Thr Asn 570 Pro Val Ala Thr Glu 575 Glu
Tyr Gly Ala Val 580 Ala Ile Asn Asn Gin 585 Ala Ala Asn Thr Gin 590 Ala Gin
Thr Gly Leu 595 Val His Asn Gin Gly 600 Val Ile Pro Gly Met 605 Val Trp Gin
Asn Arg 610 Asp val Tyr Leu Gin 615 Gly Pro Ile Trp Ala 620 Lys Ile Pro His
Thr 625 Asp Gly Asn Phe His 630 Pro Ser Pro Leu Met 635 Giy Gly Phe Gly Leu 640
Lys His Pro Pro Pro 645 Gin Ile Leu Ile Lys 650 Asn Thr Pro Val Pro 655 Ala
Asp Pro Pro Leu 660 Thr Phe Asn Gin Ala 665 Lys Leu Asn Ser Phe 670 Ile Thr
Gin Tyr Ser 675 Thr Gly Gin Val Ser 680 Val Glu Ile Glu Trp 685 Glu Leu Gin
Lys Glu 690 Asn Ser Lys Arg Trp 695 Asn Pro Glu ile Gin 700 Tyr Thr Ser Asn
Tyr 705 Tyr Lys Ser Thr Asn 710 Val Asp Phe Ala Val 715 Asn Thr Glu Gly Val 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 730 735
PL 217 623 B1
265 <210» 99 <211> 736 <212» PRT <213» białko kapsydu serotypu AAV, klon 43.20 <400> 99
Met 1 Ala Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu 15 Ser
Glu Gly Z le Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Al a Pro Lys Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 4 0 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Gin Gin Leu Lys Ala 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gln 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 13 0 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Leu 145 Val Glu Gin Ser Pro ISO Gin Glu Pro Asp Ser 155 Ser Ser Gly Ile Gly 160
Lys Thr Gly Gin Gin 165 Pro Ala Lys Lys Arg 170 Leu Asn Phe Gly Gin 175 Thr
Gly Asp Ser Glu 180 Ser Val Pro Asp Pro 185 Gin Pro Leu Gly Glu 190 Pro Pro
Ala Ala Pro 195 Ser Gly Leu Gly Pro 200 Asn Thr Met Ala Ser 205 Gly Gly Gly
Ala Pro Met Ala Asp As n Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly n Ser
210 215 220
266
PL 217 623 B1
Ser Gly Asn Trp 225 His Cys 230 Arg Thr 245 Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val 235 Ile 240 Leu
Thr Thr Ser Thr Trp Ala Leu Pro 250 Thr Tyr Aen Asn His 255
Tyr Lys Gin ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn
260 265 270
Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp siy Tyr Phe Asp Phe Asn Arg
275 280 285
Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn
290 295 300
Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile
305 310 315 320
Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn
325 330 335
Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu
340 345 350
Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro
355 360 365
Ala Asp Val Phe Thr Val Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn
370 375 380
Gly Ser Gin Ala Leu Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe
385 390 395 400
Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gln Phe Ser Tyr Thr
405 410 415
Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu
420 425 430
Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Val
435 440 445
Arg Thr Gin Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gin Thr Leu Ala Phe Ser
450 455 460
Gin Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Asn Gin Ala Arg Asn Trp Val Pro
465 470 475 480
PL 217 623 B1
267
Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Thr Asn Gin Asn 485 490 495
Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Ala Lys Phe Lys Leu Asn 500 505 510
Gly Arg Asp Ser Leu Met Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Ser His Lys SIS 520 525
Asp Asp Asp Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly S30 535 540
Lys Gin Gly Ala Gly Asn Asp Gly Val Asp Tyr Ser Gin Val Leu Ile 545 550 555 560
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu 565 570 575
Tyr Gly Ala Val Ala Ile Asn Asn Gin Ala Ala Asn Thr Gin Ala Gin 580 585 590
Thr Gly Leu Val His Asn Gin Gly Val Ile Pro Gly Met Val Trp Gin 595 600 605
Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 615 620
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 625 630 635 640
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650 655
Asp Pro Pro Leu Thr Phe Asn Gin Ala Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 660 665 670
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 675 680 685
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 690 695 700
Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val 705 710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735
268
PL 217 623 B1 <210> 100 <211> 736 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon AAW9 <400> 100
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 23 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Głn Asp Asp Gly Arg Gly Leu wal Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu Hig Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Wal Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Val Glu Gin Ser Pro Gin Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Ile Gly 145 150 155 160
Lys Ser Gly Gin Gin Pro Ala Lys Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gin Thr 165 170 175
Gly Asp Ser Glu Ser Wal Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro 180 185 190
Glu Ala Pro Ser Gly Leu Gly Pro Asn Thr Ket Ala Ser Gly Gly Gly 195 200 205
Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220
Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Wal Ile 225 230 235 240
PL 217 623 B1
269
Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255
Tyr Lys Gin Ile Ser Asn Gly Thr Ser Gly Gly Ser Thr Asn Asp Asn 260 265 270
Thr Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg 275 280 285
Phe His Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn 290 295 300
Asn Trp Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile 305 310 315 320
Gin Val Lys Glu Val Thr Thr Asn Glu Gly Thr Lys Thr Ile Ala Asn 325 330 335
Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gin Leu 340 345 350
Pro Tyr Val Leu Gly Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro 355 360 365
Ala Asp Val Phe Met Val Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn 370 375 380
Gly Ser Gin Ala Leu Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cyg Leu Glu Tyr Phe 385 390 395 400
Pro Ser Gin Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Gin Phe Ser Tyr Thr 405 410 415
Phe Glu Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu 420 425 430
Asp Arg Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Val 435 440 445
Arg Thr Gin Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gin Thr Leu Ala Phe Ser 450 455 460
Gin Ala Gly Pro Ser Ser Met Ala Asn Gin Ala Arg Asn Trp Vał Pro 465 470 475 480
Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin Arg Val Ser Thr Thr Thr Asn Gin Asn 485 490 495
270
PL 217 623 B1
Asn. Asn Ser Asn Phe Ala Trp Thr Gly Ala Ala Lys Phe Lys Leu Asn . 500 50Ξ 510
Gly Arg Asp Ser Leu Met Asn Pro Gly Val Ala Met Ala Ser His Lys 515 520 525
Asp Asp Glu Asp Arg Phe Phe Pro Ser Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly 530 535 540
Lys Gin Gly Ala Gly Asn Asp Gly Val Asp Tyr Ser Gin Val Leu ile 545 550 555 560
Thr Asp Glu Glu Glu Ile Lys Ala Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu 565 570 575
Tyr Gly Ala val Ala Ile Asn Asn Gin Ala Ala Asn Thr aln Ala Gin 560 565 590
Thr Gly Leu Val His Asn Gin Gly Val Ile Pro Gly Met Val Trp Gin 595 600 605
Asn Arg Asp Vał Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 615 620
Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu 625 630 635 640
Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650 655
Asp Pro Pro Leu Thr Phe Asn Gin Ala Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 660 665 670
Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin 675 630 635
Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn 690 695 700
Tyr Tyr Lys Ser Thr Asn Val Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Wal 705 710 715 720
Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735 <210> 101 <211> 723 <212> PRT
PL 217 623 B1
271 <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 24.1 <400> 101.
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Arg Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lya Gly Glu Pro 50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Val Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser 180 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
272
PL 217 623 B1
Ser Ser Gin Ser 260 Gly Al a Thr Asn Asp 265 Asn His Phe Phe Ser 270 Tyr Ser
Thr Pro Trp 275 Gly Tyr Phe Asp Phe 280 Asn Arg Phe His Cys 205 His Phe Ser
Pro Arg 290 Aep Trp Gin Arg Leu 295 Ile Asn Asn Asn Trp 300 Gly Phe Arg Pro
Arg 305 Lys Leu Arg Phe Lye 310 Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr 32 0
Thr Asn Asp Gly Vał 325 Thr Thr Ile Ala Asn 330 Asn Leu Thr Ser Thr Ile
Gin Val Phe Ser 340 Asp Ser Glu Tyr Gin 345 Leu Pro Tyr Val Leu 350 Gly Ser
Ala His Gin 355 Gly Cys Leu Pro Pro 360 Phe Pro Ala Asp Val 365 Phe Met Ile
Pro Gin 3 70 Tyr Gly Tyr Leu Thr 375 Leu Asn Asn Gly Ser 380 Gin Ser Val Gly
Arg 385 Ser Ser Phe Tyr Cys 390 Leu Glu Tyr Phe Pro 395 Ser Gin Met Leu Arg 400
Thr Gly Asn Asn Phe 405 Glu Phe Ser Tyr Thr 410 Phe Glu Glu Val Pro 415 Phe
His Ser Ser Tyr 420 Val His Ser Gin Ser 425 Leu Asp Arg Leu Met 430 Asn Pro
Leu Ile Asp 435 Gin Tyr Leu Tyr Tyr 440 Leu Ala Arg Thr Gin 445 Ser Thr Thr
Gly Ser 450 Thr Arg Glu Leu Gin 455 Phe His Gin Ala Gly 460 Pro Asn Thr Met
1 465 Glu Gin Ser Lys Asn 470 Trp Leu Pro Gly Pro 475 Cys Tyr Arg Gin Gin 480
Akcj Leu Ser Lys Asn 485 Ile Asp Ser Asn Asn 490 Asn Ser Asn Phe Ala 495 Trp
Thr Gly Ala Thr 500 Lys Tyr His Leu Asn 505 Gly Arg Asn Ser Leu 510 Thr Asn
PL 217 623 B1
273
Pro Gly Val Ala 515 Met Ala 520 Lys Asp Asp Glu Asp 525 Gin Phe Phe
Pro Ile Asn Gly 530 Val Leu Val Phe 535 Gly Lys Thr Gly Ala 540 Ala Asn Lys
545 Thr Leu Glu Asn Val 550 Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu 555 Ile Lys Thr 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 Glu Glu Tyr Gly val Val Ser 570 Ser Asn 575 Leu
Gin Ser Ser Thr 530 Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn 5S5 Ser 590 Gin Gly
Ala Leu Pro Gly 595 Met Vał Trp Gin 600 Asn Arg Asp Val Cys 605 Leu Gin Gly
Pro Ile Trp Ala 610 Lys Ile Pro His 615 Thr Asp Gly Asn Phe 620 Hie Pro Ser
Pro 625 Leu Met Gly Gly Phe 630 Gly Leu Lys His Pro Pro Pro 635 Gin Ile Leu 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val 64 Ξ Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val £50 Phe Thr 655 Pro
Ala Lys Phe Ala 660 Ser Phe ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly 665 Gin 670 Val Ser
Val Glu Ile Glu 675 Trp Glu Leu Gin 680 Lys Glu Asn Ser Lys 685 Arg Trp Asn
Pro Glu Ile Gin 69G Tyr Thr Ser Asn 695 Tyr Ala Lys Ser Asn 700 Asn Val Glu
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg 705 710 715 Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 <210> 102 <211> 72B <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.2REAL Pro Ile Gly 720
<400> 102
274
PL 217 623 B1
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 1. 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Sly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 £0
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 00
Lys Gin Leu Glu Gin Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 35
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Leu Gly Glu Pro Pro Ala Ala Pro Ser 180 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
PL 217 623 B1
275
276
PL 217 623 B1
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe
520 525
Pro Ile Asn Gly val Leu Val Phe Gly Glu Thr Gly Ala Ala Asn Lys
530 535 540
Thr Thr Leu Glu Asn Wal Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr
545 550 555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Wal Val Ser Ser Asn Leu
565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Wal Asn Ser Gin Gly
580 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Wał Trp Gin Asn Arg Asp Wal Tyr Leu Gin Gly
595 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
645 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin wal Ser
660 665 670
Wal Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
690 695 700
Phe Ala Val- Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu. Thr Arg Asrt Leu
725
<210> : 103
<211> 728
<212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAW, klon 7.2VP1
<400> 103
PL 217 623 B1
277
Mx5t 1 Al a Ala Asp Giy 5 Tyr Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Gly Asn Leu 15 Ser
GlU Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lys Pro
Łys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Ij ¢1U Pro
Gly Ty^· 50 Ai”9 Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Val 65 Asn Glu Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Lys Gin Leu Glu Gin 05 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ale Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 110 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Ile Glu Ser Pro Asp 150 Ser Ser Thr Gly Ile 155 Gly Lys Asn Gly Gin 160
Pro Pro Ala Lys Lys 165 Łys Leu Asn Phe Gly 170 Gin Thr Gly Asp Ser 175 Glu
Ser Val Pro Asp ISO Pro Gin pro Leu Gly 155 Glu Pro Pro Ala Ala 190 Pro Ser
Gly Leu Gly 195 Ser Gly Thr Met 200 Ala Gly Gly Gly Ala 205 Pro Met Ala
Asp Asn 210 Asn Glu Gly Ala Asp 215 Gly Val Gly Asn Ala 220 Ser Gly Asn. Trp
His 225 Cys Asp Ser Thr Trp 230 Leu Gly Asp Arg Val 235 Ile Thr Thr Ser Thr 240
Arg Thr Trp Ala Leu 245 Pro Thr Tyr Asn Asn 250 His Leu Tyr Lys Gin 255 Ile
Ser Ser Gin Ser 260 Gly Ala Thr Asn Asp 265 Asn His Phe Phe Gly 270 Tyr Ser
278
PL 217 623 B1
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser 275 280 285
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Aen Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 290 295 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr 305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 325 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser 340 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val Gly 370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 390 395 400
Thr Gly Asp Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 485 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Aen 500 SOS 510
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe 515 520 525
PL 217 623 B1
279
Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr 545 550 555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu 565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly 580 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly 595 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser 610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu 625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu val Phe Thr Pro 645 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser 660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn 675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu 690 695 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly 705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 <210> 104 <211> 728 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 27.3VP1 <4Q0> 104
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15 10 15
280
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
281
282
PL 217 623 B1
Pro Ile 530 Asn Gly Val Leu Val 535 Phe Gly Lys Thr Gly Ala 540 Ala Asn Lys
Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr
545 550 555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val vał Ser Ser As n Leu
565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Arg Thr Gin Thr val Asn Ser Gin Gly
580 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly
595 600 605
Pro Ile Trp Ala Glu Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
645 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lye Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Thr Ser Asn Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
690 695 700
Phe Al a Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 <210> 105 <211? 728 <212> PRT
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 16.3VP1
<400> 105
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
PL 217 623 B1
283
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro 30 Lya Pro
Lys Ala Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly Lsu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
val 65 Asn Glu Ala Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Aap Lys Ala Tyr Asp 80
Lys Gin Leu Glu Gin B5 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Lys Tyr Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly 115 Arg Ala Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lye Thr Ala Pro 14 0 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 ile Glu Ser Pro Aep 150 Ser Ser Thr Gly Ile 155 Gly Lys Lys Gly Gin 160
Gin Pro Ala Lys Lys 165 Lys Leu Asn Phe Gly 170 Gin Thr Gly Asp Ser 175 Glu
Ser Val Pro Asp 180 Pro Gin Pro Leu Gly 185 Glu Pro Pro Ala Ala 190 Pro Ser
Gly Leu Gly 195 Ser Gly Thr Met Ala 200 Ala Gly Gly Gly Ala 205 Pro Met Ala
Asp Asn 210 Asn Glu Gly Ala Asp 215 Gly Val Gly Asn Ala 220 Ser Gly Asn Trp
His 225 Cys Asp Ser Thr Trp 230 Leu Gly Asp Arg Val 235 Ile Thr Thr Ser Thr 240
Arg Thr Trp Ala Leu 245 Pro Thr Tyr Asn Asn 250 His Leu Tyr Lys Gin 255 Ile
ser Ser Gin Ser 260 Gly Ala Thr Asn Asp 265 Asn His Phe Phe siy 270 rpy^j* Ser
Thr Pro Trp 275 Gly Tyr Phe Asp Phe 280 Asn Arg Phe His Cys 285 His Phe Ser
284
PL 217 623 B1
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 290 295 300
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr 305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 325 330 335
Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly Ser 340 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Aen Asn Gly Ser Gin Ser Met Gly 370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 390 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 485 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 500 505 510
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Gly Gin Phe Phe 515 520 525
Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
PL 217 623 B1
285
Thr 545 Thr Leu Glu Asn Val 550 Leu Met Thr Ser Glu 555 Glu Glu Ile Lys Thr 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu
565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ger Gin Gly
580 585 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin ciy
595 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Gly Val Phe Thr Pro
645 650 655
Ala Leu Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 S80 6B5
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
690 695 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 <210> 106 <211> 728 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.10 <400> 106
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 1 5-10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
286
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
287
288
PL 217 623 B1
Thr 545 Thr Leu Glu Asn Val 550 Leu Met Thr Ser Glu 555 Glu Glu I le Lys Thr 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn Leu
565 570 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly
580 S 35 590
Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly
595 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro val Pro 1 Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
645 650 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
690 695 700
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
72Ξ <210> 107 <211> 723 <212 > PRT <213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.3B <400> 107
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 1 S 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
PL 217 623 B1
289
Lys A1 Asn 35 Gin Gin Lys Gin Asp 40 Asp Gly Arg Gly 45 Val Leu Pro
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
Vał 65 Asn Glu Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
Lys Gin Leu Glu Gin 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Lys Tyi? Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Giy Gly
Asn Len Gly 115 Arg Ala Wal Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu. Gly 130 Leu Val Glu Glu Gly 13 5 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Ile Glu Ser Pro Asp 150 Ser Ser Thr Gly Ile 155 Gly Lys Lys Gly Gin 160
Gin Pro Ala Lys Lys 165 Lys Leu Asn Phe Gly 170 Gin Thr Gly Asp Ser 175 Glu
Ser Wal Pro Asp 180 Pro Gin Pro Ile Gły 185 Glu Pro Pro Ala Gly 190 Pro Ser
Gly Leu Gly 195 Ser Gly Thr Met Ala 200 Ala Gly Gly Gly Ala 205 Pro Met Ala
Asp Asrt 210 Asn Glu Gly Ala ASp 21S Gly wal Gly Asn Ala 220 Ser Gly Asn Trp
His 225 Cys Asp Ser Thr Trp 230 Leu Gly Asp Arg val 235 ile Thr Thr Ser Thr 240
Arg Thr Ttp Ala Leu 245 Pro Thr Tyr Asn Asn 250 His Leu Tyr Lys Gin 255 Ile
Ser Ser Gin Ser 260 Gly Ala Thr Asn Asp 265 Asn His Phe Phe Gly 270 Tyr Ser
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Aep Phe Asn Arg Phe His Cye His Phe Ser
275 280 235
290
PL 217 623 B1
Pro Arg 290 Asp Trp Gin Arg Leu 295 Ile Asn Asn Asn Trp 300 Gly Phe Arg Pro
Arg 305 Lys Leu Arg Phe Lys 310 Leu Phe Asn Ile Gin 315 Val Lys Glu Val Thr 320
Thr Asn Asp Gly Val 325 Thr Thr Ile Ala Asn 330 Asn Leu Thr Ser Thr 335 Ile
Gin Val Phe Ser 340 Asp Ser Glu Tyr Gin 345 Leu Pro Val Leu 350 Gly Ser
Ala His Gin 355 Gly Cys Leu Pro Pro 360 Phe Pro Ala Asp val 365 Phe Met Ile
Pro Gin 370 Tyr Gly Tyr Leu Thr 375 Leu Asn Asn Gly Ser 380 Gin Ser Val Gly
Arg 385 Ser Ser Phe Tyr Cys 390 Leu Glu Tyr Phe Pro 395 Ser Gin Met Leu Arg 400
Thr Gly Asn Asn phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe
405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Asn Ile Asp Ser Asn Asn Thr Ser Asn Phe Ala Trp 485 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 500 505 510
Pro Gly Val Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe 515 520 525
Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr
PL 217 623 B1
291
545 5S0 555 560
Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gin Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn 575 Leu
565 570
Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Thr Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly
530 585 590
Ala Leu Pro Gly Met val Trp Gin Asn Arg Asp Val Leu Gin Gly
5 95 600 605
Pro Ile Trp Ala Lys ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser
610 615 620
Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile Leu
625 630 635 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr Pro
645 650 €55
Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser
660 665 670
Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn
675 680 685
Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val Glu
S90 695 700
Phe Ala val Asn Asn Glu Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro ile Gly
705 710 715 720
Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725 <210> 103 <211> 723 <212> ΡΚΤ
<213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42 .11
<400> 103
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Łys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
40 45
292
PL 217 623 B1
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 . 55 60
Val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80
Gin Gin Leu Lys Ala Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Arg Tyr Asn His Ala 85 90 95
Asp Ala Glu Phe Gin Glu Arg Leu Gin Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110
Asn Leu Gly Arg Ala Vał Phe Gin Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125
Leu Gly Leu Val Glu Glu Gly Ala Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140
Pro Ile Glu Ser Pro Asp Ser Ser Thr Gly Ile Gly Lys Lys Gly Gin 145 150 155 160
Gin Pro Ala Lys Lys Lys Leu Asn Phe Gly Gin Thr Gly Asp Ser Glu 165 170 175
Ser Val Pro Asp Pro Gin Pro Ile Gly Glu Pro Pro Ala Gly Pro Ser ISO 185 190
Gly Leu Gly Ser Gly Thr Met Ala Ala Gly Gly Gly Ala Pro Met Ala 195 200 205
Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asn Trp 210 215 220
His Cys Asp Ser Thr Trp Leu Gly Asp Arg Val Ile Thr Thr Ser Thr 225 230 235 240
Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu Tyr Lys Gin Ile 245 250 255
Ser Ser Gin Ser Gly Ala Thr Asn Asp Asn. His Phe Phe Gly Tyr Ser 260 265 270
Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Cys His Phe Ser 275 280 285
Pro Arg Asp Trp Gin Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp Gly Phe Arg Pro 290 295 300
PL 217 623 B1
293
Arg Lys Leu Arg Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr 305 310 315 320
Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Ile 325 330 335
Gin Wal Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Wal Leu Gly Ser 340 345 350
Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met Ile 355 360 365
Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Wal Gly 370 375 380
Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu Arg 385 390 395 400
Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Thr Phe Glu Glu Val Pro Phe 405 410 415
His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn Pro 420 425 430
Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr Thr 435 440 445
Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr Met 450 455 460
Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Arg Gin 465 470 475 480
Arg Leu Ser Lys Asp Ile Asp Ser Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala Trp 485 490 495
Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr Asn 500 505 510
Pro Gly Wal Ala Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe Phe 515 520 525
Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn Lys 530 535 540
Thr Thr Leu Glu Asn Wal Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys Thr 545 550 555 560
294
PL 217 623 B1
Thr Asn Pro Val Ala Thr 565 Glu Glu Tyr Gly 570 Val Val Ser Ser Asn Leu 575
Gin Ser Ser Thr Ala Gly 580 Pro Gin Thr 585 Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly 590
Ala Leu Pro 595 Gly Met Val Trp Gin 600 Asn Arg Asp Val Tyr 605 Leu Gin Gly
Pro Ile Trp 610 Ala Lys Ile Pro 615 His Thr Asp Gly Asn 620 Phe His Pro Ser
Pro Leu Met 625 Gly Gly Phe 630 Giy Leu Lys His Pro Pro 635 Pro Gin Ile Leu 640
Ile Lys Asn Thr Pro Val 645 Pro Ala Asn Pro 650 Pro Glu Val Phe Thr Pro 655
Ala Lys Phe Ala Ser Phe 660 Ile Thr Gin 665 Tyr Ser Thr Gly Gin Val Ser 670
Val Glu Ile 675 Glu Trp Glu Leu Gin 6S0 Lys Glu Asn Ser Lys 685 Arg Trp Asn
Pro Glu Ile 630 Gin Tyr Thr Ser 695 Asn Tyr Ala Lys Ser 700 Asn Asn Val Glu
Phe Ala Val Asn Asn Glu Gly Val Tyr 705 710 Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 <210> 103 <211? 729 <212? PRT <213? białko kapsydu serotypu AAV, <400> 109 Thr Glu Pro 715 klon P1VP1 Arg Pro Ile Gly 720
Met Ala Ala 1 Asp Gly Tyr 5 Leu Pro Asp Trp 10 Leu Glu Asp Asn Leu Ser 15
Glu Gly He Arg Glu Trp 20 Trp Asp Leu 25 Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 30
Lys Ala Asn 3 5 Gin Gin Lys Gin ASP 40 Asp Gly Arg Gly Leu 45 Val Leu Pro
PL 217 623 B1
295
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu Asp 60 Lys Gly Glu Pro
val 63 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu GlU His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp SO
Gin Gin Lys Ala 85 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Tyr Aan His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly Arg 115 Ala val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pm
Leu Gly 130 Leu val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 140 Gly Lys Lys Arg
Pro 145 Ile Asp Ser Pro Asp 150 Ser Ser Thr ciy Ile 155 Gly Lys Lys Gly Gin 160
Gin Pro Al a Lys Lys 165 Lys Leu Asn Phe Giy 170 Gin Thr Gly Asp Ser 175 Glu
Ser Val Pro Asp 180 pro Gin Pro Leu Gly 185 Glu Pro Pro Ala Al a 190 Pro Ser
Ser Val Gly 195 Ser Gly Thr Met Ala 200 Ala Gly Gly Gly Ala 205 Pro Met Ala
Asp Asn 210 Asn Glu Gly Ala Asp 215 Gly Val Gly Asn Ala 220 Ser Gly Asn Trp
His 225 Cys Asp Ser Thr Trp 230 Leu Gly Asp Arg Val 235 Ile Thr Thr Ser Thr 240
Arg Thr Trp Ala Leu 245 Pro Thr Tyr Asn Asn 250 His Leu Tyr Lys Gin 255 Ile
Ser Ser Ser Ser 260 Ser Gly Ala Thr Asn 265 Asp Asn His Tyr Phe 270 Gly Tyr
ser Thr Pro 275 Trp Gly Tyr Phe Asp 280 Phe Asn Arg Phe His 285 Cys His Phe
Ser Pro 290 Arg a-sp Trp Gin Arg 29S Leu Ile Asn Asn Asn 300 Trp Gly Phe Arg
Pro 305 Lys Lys Leu Arg Phe 310 Lys Leu Phe Asn Ile 315 Gin Val Lys Glu Val 320
296
PL 217 623 B1
Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr 323 330 335
Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly 340 345 350
Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met 355 360 365
Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gin Ser Val 370 375 3Θ0
Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu 335 390 395 400
Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Ser Phe Glu Asp Val Pro 405 410 415
Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn 420 425 430
Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr 435 440 445
Thr Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr 4S0 455 460
Met Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin 465 470 475 430
Gin Gly Leu Ser Lys Asn Leu Asp Phe Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala 485 490 495
Trp Thr Ala Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr 500 505 510
Asn Pro Gly Ile Pro Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe 515 520 525
Phe Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn 530 535 540
Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys 545 550 555 560
Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn 565 570 575
PL 217 623 B1
297
Leu Gin Pro Ser Thr Ala Gly Pro Gin Ser Gin Thr Ile Asn Ser Gin 590
590 585
Gly Ala Leu Pro 595 Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp 600 Wal 605 Tyr Leu Gin
Gly Pro Ile Trp SIO Ala Lys Ile 615 Pro His Thr Asp Gly 620 Asn Phe His Pro
Ser 625 Pro Leu Met Gly Gly 630 Phe Gly Leu Lys His Pro 635 Pro Pro Gin Ile 640
Leu Ile Lys Asn Thr pro 645 Wal Pro Ala Asn Pro Pro 650 Glu Val Phe Thr 655
Pro Ala Lys Phe SSO Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser 665 Thr Gly Gin Val 670
Ser Wal Głu Ile 675 Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn 680 Ser 685 Lys Arg Trp
Asn Pro Głu Ile 690 Gin Tyr Thr 695 Ser Asn Tyr Ala Lys 700 Ser Asn Asn Val
Glu Phe Ala Val Asn Pro Asp Gly Val Tyr Thr Glu Pro 705 710 715 Gly Thr Arg Tyr Leu Pro Arg Asn Leu 725 <210> 110 <211> 729 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon F5WP1S3 <400> 110 Arg Pro Ile 720
Met 1 Ala Ala Asp Gly Tyr 5 Leu Pro Asp Trp Leu Glu 10 ASP Asn Leu Ser 15
Glu Gly Ile Arg 20 Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly 25 Ala Pro Lys Pro 30
Lys Ala Asn Gin 35 Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly 40 Leu 45 Val Leu Pro
Gly Tyr Lys Tyr 50 Leu Gly Pro 55 Phe Asn Gly Leu A3p 60 Lys Gly Glu Pro
298
PL 217 623 B1
Val 65 Asn Ala Ala Asp Ala 70 Ala Ala Leu Glu His 75 Asp Lys Ala Tyr Asp 80
αΐπ Gin Leu Lys Ala 35 Gly Asp Asn Pro Tyr 90 Leu Arg Asn His 95 Ala
Asp Ala Glu Phe 100 Gin Glu Arg Leu Gin 105 Glu Asp Thr Ser Phe 110 Gly Gly
Asn Leu Gly Arg 115 a Val Phe Gin 120 Ala Lys Lys Arg Val 125 Leu Glu Pro
Leu Gly 13 0 Leu Val Glu Glu Gly 135 Ala Lys Thr Ala Pro 14 0 Gly Lya Lys Arg
Pro 145 Ile Asp Ser Pro Asp 150 Ser Ser Thr Gly Ile 155 Gly Lys Lys Gly Gin 160
Gin Pro Ala Lys Lys 165 Lys Leu Asn Phe Gly 170 Gin Thr Gly Asp Ser 175 Glu
Ser Val Pro Asp 1Θ0 Pro Gin Pro Leu Gly 185 Glu Pro Pro Ala Ala 190 Pro Ser
Ser Val Gly 195 Ser Gly Thr Met Ala 200 Ala Gly Gly Gly Ala 205 Pro Thr Ala
Asp Asn 210 Asn Glu Gly Ala Asp 215 Gly Val Gly Asn Ala 22 0 Ser Gly Asn Trp
His 225 Cye Asp Ser Thr Trp 230 Leu Gly Aap Arg Val 235 Ile Thr Thr Ser Thr 240
Arg Thr Trp Ala Leu 245 Pro Thr Tyr Asn Asn 250 His Leu Tyr Lys Gin 2 55 Ile
Ser Ser Ser Ser 260 Ser Gly Ala Thr Asn 265 Asp Asn His Tyr Phe 270 Gly Tyr
Ser Thr Pro 275 Trp Gly Tyr Phe Asp 230 Phe Asn Arg Phe His 285 Cys His Phe
Ser Pro 230 Arg Asp Trp Gin Arg 295 Leu Tle Asn Asn Asn 300 Trp ciy Phe Arg
Pro 305 Lys Lys Leu Arg Phe 310 Lys Leu Phe Asn Ile 315 Gin Val Lys Glu Val 320
Thr Thr Asn Asp Gly Val Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr
325 330 335
PL 217 623 B1
299
Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly 340 34S 350
Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met 355 360 365
Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser Gla Ser Val 370 375 380
Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu 385 390 395 400
Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Ser Phe Glu Aso Val Pro 405 410 415
Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn 420 425 430
Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr 435 440 445
Thr Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr 450 455 460
Met Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin 465 470 475 480
Gin Arg Leu Ser Lys Asn Leu Asp Phe Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala 485 490 495
Trp Thr Ala Ala Thr Lya Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr 500 505 510
Asn Pro Gly Ile Pro Met Ala Thr Aen Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe 515 520 525
Phe Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn 530 535 540
Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys 545 550 555 560
Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn 565 570 575
Leu Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Ser Gin Thr Ile Asn Ser Gin 580 585 - 590
300
PL 217 623 B1
Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin 595 600 605
Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro 610 615 620
Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Glu His Pro Pro Pro Gin Ile 625 630 635 640
Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Glu Val Phe Thr 645 650 655
Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Val 660 €65 670
Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp 675 600 685
Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val 690 695 700
Glu Phe Ala Val Asn Pro Asp Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile 705 710 715 720
Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725
<210> <211> <212 > <213> 111 729 PRT białko kapsydu serotypu AAV, klon P3VP1
<400> 111
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60 val Asn Ala Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp g5 70 75 80
PL 217 623 B1
301
302
PL 217 623 B1
Val Gin Val Phe Ser Asp Ser Glu Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Leu Gly 340 34S 350
Ser Ala His Gin Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp Val Phe Met 355 360 365
Ile Pro Gin Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asp Asn Gly Ser Gin Ser Val 370 375 380
Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Gin Met Leu 385 390 395 400
Arg Thr Gly Asn Asn Phe Glu Phe Ser Tyr Ser Phe Glu Asp Val Pro 405 410 415
Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gin Ser Leu Asp Arg Leu Met Asn 420 425 430
Pro Leu Ile Asp Gin Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ala Arg Thr Gin Ser Thr 435 440 445
Thr Gly Ser Thr Arg Glu Leu Gin Phe His Gin Ala Gly Pro Asn Thr 450 455 460
Met Ala Glu Gin Ser Lys Asn Trp Leu Pro Gly Pro Cys Tyr Arg Gin 465 470 475 480
Gin Arg Leu Ser Lys Asn Leu Asp Phe Asn Asn Asn Ser Asn Phe Ala 485 490 495
Trp Thr Ala Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly Arg Asn Ser Leu Thr 500 505 510
Asn Pro Gly Ile Pro Met Ala Thr Asn Lys Asp Asp Glu Asp Gin Phe 515 520 525
Phe Pro Ile Asn Gly Val Leu Val Phe Gly Lys Thr Gly Ala Ala Asn 530 535 540
Lys Thr Thr Leu Glu Asn Val Leu Met Thr Ser Glu Glu Glu Ile Lys 545 550 555 5S0
Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Glu Tyr Gly Val Val Ser Ser Asn 565 570 575
Leu Gin Ser Ser Thr Ala Gly Pro Gin Ser Gin Thr Ile Asn Ser Gin 580 585 590
PL 217 623 B1
303
Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn Arg Asp Val Tyr Leu Gin
595 600 605
Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly Asn Phe His Pro
610 615 620
Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gin Ile
625 630 635 640
Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Pro Głu Val Phe Thr
645 650 655
Pro Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin Tyr Ser Thr Gly Gin Wal
660 665 670
Ser val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp
675 680 685
Asn Pro Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr Ala Lys Ser Asn Asn Val
690 695 700
Glu Phe Ala Val Asn Pro Asp Gly Val Tyr Thr Glu Pro Arg Pro Ile
705 710 715 720
Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu
725
<210> 112
<211> 735
<212> PRT
<213 > białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.6B
<400> 112
Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser
1 5 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin Lys Gin Asp Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro
35 40 45
Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro
50 55 60
Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp
65 70 75 80
304
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
305
306
PL 217 623 B1
Gin Thr Val Asn Ser Gin Gly Ala Leu Pro Gly Met Val Trp Gin Asn
595 600 605
Arg Asp 610 Val Tyr Leu Gin Gly Pro 615 Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr 620
Asp Gly 625 Asn Phe His PfO 5θΧ 630 Leu Met Asp Gly Phe Gly Leu Lys 635 640
His Pro Pro Pro Gin S45 Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn 650 655
Pro Pro Glu Val Phe 660 Thr Pro Ala Łys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gin 665 670
Tyr Ser Thr Gly Gin 675 Val Ser Val 680 Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gin Lys 685
Glu Asn 690 Ser Lys Arg Trp Asn Pro 695 Glu Ile Gin Tyr Thr Ser Asn Tyr 700
Ala Lys 705 Ser Asn Asn Val Glu Phe 710 Ala Val Asn Asn Glu Gly val Tyr 715 720
Thr Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735 <210> 113 <211> 635 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon 42.12 <400> 113
Met Ala 1 Ala Asp Gly 5 Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Asn Leu Ser 10 15
Glu Gly Ile Arg Glu 20 Trp Trp Asp Leu Lys Pro Gly Ala Pro Lys Pro 25 30
Lys Ala Asn Gin Gin 35 Lys Głn Asp 40 Asp Gly Arg Gly Leu Val Leu Pro 45
Gly Tyr 50 Lys Tyr Leu Gly Pro Phe 55 Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 60
Val Asn 65 Glu Ala Asp Ala Ala Ala 70 Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 75 80
Lys Gin Leu Glu Gin 85 Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 90 95
PL 217 623 B1
307
308
PL 217 623 B1
PL 217 623 B1
309
Arg Asp Val Tyr Leu Gin Gly Pro Ile Trp Ala Lys 620 Ile Pro His Thr
610 SIS
Asp 625 Gly Asn Phe His Pro Ser Pro 630 Leu Met Gly 635 Gly Phe Gly Leu Lys 640
His Pro Pro Pro Gin Ile Leu Ile 645 Lys Tyr 650 Thr Ser Asn Tyz* Tyr 655 Lys
Ser Thr Asn Vał Asp Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Thr 660 665 Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 675 630 685 <210? 114 <211? 724 <212> PRT <213> białko kapsydu serotypu AAV, klon AAV5CAP <400> 114 Tyr 670 Ser Glu
Met 1 Ser Phe Val Asp His Pro Pro 5 Asp Trp 10 Leu Glu Glu Val Gly 15 Glu
Gly Leu Arg Glu Phe Leu Gly Leu 20 Glu Ala 25 Gly Pro Pro Lys 30 Pro Lys
Pro Asn Gin Gin His Gin Asp Gin 35 40 Ala Arg Gly Leu Val 45 Leu Pro Gly
Tyr Asn 50 Tyr Leu Gly Pro Gly Asn 55 Gly Leu Asp Arg 60 Gly Glu Pro Val
Asn 65 Arg Ala Asp Glu Val Ala Arg 70 Glu His Asp 75 Ile Ser Tyr Asn Glu 80
Gin Leu Glu Ala Gly Asp Asn Pro 85 Tyr Leu 90 Lys Tyr Asn His Ala 95 Asp
Ala Glu Phe Gin Glu Lys Leu Ala 100 Asp Asp 105 Thr Ser Phe Gly 110 Gly Asn
Leu Gly Lys Ala Val Phe Gin Ala 1X5 120 Lys Lys Arg Val Leu 125 Pro Phe
Gly Leu 130 Val Glu Glu Gly Ala Lys 13 5 Thr Ala Pro Thr 14 0 Gly Lys Arg Ile
310
PL 217 623 B1
Asp Asp His Phe Pro Lys Arg Lys Lys Ala Arg Thr Glu Glu Asp Ser 145 150 155 160
Lys Pro Ser Thr Ser Ser Asp Ala Glu Ala Gly Pro Ser Gly Ser Gin 165 170 175
Gin Leu Gin Ile Pro Ala Gin Pro Ala Ser Ser Leu Gly Ala Asp Thr 180 185 ISO
Met Ser Ala Gly Gly Gly Gly Pro Leu Gly Asp Asn Asn Gin Gly Ala 195 200 205
Asp Gly Val Gly Asn Ala Ser Gly Asp Trp His Cys Asp Ser Thr Trp 210 215 220
Met Gly Asp Arg Val Val Thr Lys Ser Thr Arg Thr Trp Val Leu Pro 225 230 235 240
Ser Tyr Asn Asn His Gin Tyr Arg Glu Ile Lys Ser Gly Ser Val Asp 245 250 255
Gly Ser Asn Ala Asn Ala Tyr Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr 260 265 270
Phe Asp Phe Asn Arg Phe His Ser His Trp Ser Pro Arg Asp Trp Gin 275 280 285
Arg Leu Ile Asn Asn Tyr Trp Gly Phe Arg Pro Arg Ser Leu Arg Val 290 295 300
Lys Ile Phe Asn Ile Gin Val Lys Glu Val Thr Val Gin Asp Ser Thr 305 310 315 320
Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu Thr Ser Thr Val Gin Val Phe Thr Asp 325 330 335
Asp Asp Tyr Gin Leu Pro Tyr Val Val Gly Asn Gly Thr Glu Gly Cys 340 345 350
Leu Pro Ala Phe Pro Pro Gin. Val Phe Thr Leu Pro Gin Tyr Gly Tyr 355 360 365
Ala Thr Leu Asn Arg Asp Asn Thr Glu Asn Pro Thr Glu Arg Ser Ser 370 375 380
Phe Phe Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser Lys Met Leu Arg Thr Gly Asn 385 390 395 400
PL 217 623 B1
311
312
PL 217 623 B1
Ser Phe ile Thr 660 Gin Tyr Ser Thr Gly 665 Gin Val Thr Val Glu 670 Met Glu
Trp Glu Leu Lys Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gin
675 680 685
Tyr Thr Asn Asn Tyr Asn Asp Pro Gin Phe Val Asp Phe Ala Pro Asp
690 695 700
Ser* Thr Gly Glu Tyr Arg Thr Th.r Arg Pro Ile Giy Thr Arg Tyr Leu
705
710
715
720
Thr Arg Pro Leu <210> 115 <211> 9 <212 > DNA <213> miejsce enzymu restrykcyjnego Dralll <4O0> 115 caccacgtc <210> 116 <211> 28 <212> DNA <213> AV2caa <400? 116 cgcagagacc aaagttcaac tgaaacga <210> 117 <211> 255 <212> DNA <213?· serotyp 10 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 117
ggtaattcct eeggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgacag agtcatcacc 60
accagcaccc gaacctgggt cctgcccacc tacaacaacc acatctacaa gcaaatctcc 120
agcgagacag gagccaccaa cgacaaccac tacttcggct acagcacccc ctgggggtat 180
tttgacttta acagattcca ctgccacttt tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 240
aacaactggg gatte 255
<210> 118 <211> 258 <212> DNA <213> serotyp 11 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem <400> 118 ggtaattcct eeggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgacag agtcatcacc
PL 217 623 B1
313
accagcaccc gaacctgggc cctgccaacc tacaacaacc acctctacaa acaaatctcc 120
agcgctfccaa cgggggccag caacgacaac cactactttg gctacagcac cccctggggg 180
tat 11> tgac t ttaacagatt ccaetgccac ttctcaccac gtgactggca gcgactcatc 240
aacaacaact ggggattc 258
<210> 119 <211> 255 <212 > DNA <213> serotyp 12 wirusa stowarzyszonego z adenowirusem
<400> 119 ggtaattcct ccggaaattg gcattgcgat tccacatggc tgggcgaccg agtcattaec 60
accagcaccc ggacttgggc cctgcccacc tacaacaacc acctctacaa gcaaatctcc 120
agccaatcgg gtgccaccaa cgacaaccac tac 11cggct acagcacccc ttgggggtat ISO
tttgatttca acagattcca ctgccatttc tcaccacgtg actggcagcg actcatcaac 240
aacaactggg gattc 255
<210> 120 <211> 2205 <212> DNA <213 > serotyp wirusa stowarzyszonego 2 adenowirusem, kłonA3.1vpi
<400> 120 atggctgccg atggttatct tccagattgg ctcgaggaca ctctctctga aggaatcaga 60
cagtggtgga agctcaaacc tggcccacca ccgccgaaac ctaaccaaca acaccgggac 120
gacagtaggg gtcttgtgct tcctgggtac aagtacctcg gacccttcaa cggactcgac 130
aaaggagagc cggtcaacga ggcagacgcc gcggccctcg agcacgacaa agcctacgac 240
caccagctca agcaagggga caacccgtac ctcaaataca accacgcgga cgctgaattt 300
caggagcgtc ttcaagaaga tacgtctttc gggggcaacc tcgggcgagc agtcttccag 360
gccaaaaaga gggtactcga gcctcttggt ctggttgagg aagctgttaa gacggctcct 420
ggaaaaaaga gacctataga gcagtctcct gcagaaccgg actcttcctc gggcatcggc 480
aaatcaggcc agcagcccgc taagaaaaga ctcaattttg gtcagactgg cgacacagag 540
tcagtcccag accctcaacc aatcggagaa ccccccgcag cccectctgg tgtgggatct 600
aatacaatgg cttcaggcgg tggggcacca atggcagaca ataacgaagg cgccgaegga 660
gtgggtaatt cctcgggaaa ttggcattgc gattccacat ggatgggcga cagagttatc 720
accaccagca caagaacctg ggccctcccc acctacaata atcacctcta caagcaaatc 780
tccagcgaat cgggagccac caacgacaac cactacttcg gctacagcac cccctggggg 840
tattttgact ttaacagatt ccactgtcac ttctcaccac gtgactggca gcgactcatc 900
314
PL 217 623 B1
aacaacaact ggggatttag acccaagaaa ctcaatttca agctcttcaa catccaagtc 960
aaggaggtcą cgcagaatga tggaaccacg accatcgcca ataaccttac cagcacggtg 1020
caggtcttca cagactctga gtaccagctg ccctacgtcc tcggttcggc tcaccagggc 1080
tgccttccgc cgttcccagc agacgtcttc d 7}^ t- LL· V UL agtacggcta cttgactctg 1140
aacaatggca gccaagcggt aggacgttct tcattctact gtctagagta ttttccctct 1200
cagatgctga ggacgggaaa caacttcacc ttcagctaca cttttgaaga cgtgcctttc 1260
cacagcagct acgcgcacag ccagagtctg gatcggctga tgaatcctct cattgaccag 1320
tacctgtatt acctgagcaa aactcagggt acaagtggaa caacgcagca atcgagactg 1380
cagttcagcc aagctgggcc tagctccatg gctcagcagg ccaaaaactg gctaccggga 1440
cccagctacc gacagcagcg aatgtctaag acggctaatg acaacaacaa cagtgaattt 1500
gcttggactg cagccaccaa ci 't ci 13 t a CE CE t· tj aatggaagaa attctctggt caatcccggg 1560
cccccaatgg ccagtcacaa ggacgatgag gaaaagtatt tccccatgca cggaaatctc 1620
atctttggaa aacaaggcac aggaactacc aatgtggaca ttgaatcagt gcttattaca 1680
gacgaagaag aaatcagaac aactaatcct gtggctacag aacaatacgg acaggttgcc 1740
accaaccatc agagtcagaa caccacagct tcctatggaa gtgtggacag ccagggaatc 1800
ttacctggaa tggtgtggca ggaccgcgat gtctatcttc aaggtcccat ttgggccaaa 1860
actcctcaca cggacggaca ctttcatcct tcfcccgctca tgggaggctt tggactgaaa 1920
caccctcctc cccagatcct gatcaaaaac acacctgtgc cagcgaatcc cgcgaccact 1980
ttcactcctg gaaagtttgc ttcgttcatt acccagtatt ccaccggaca ggtcagcgtg 2040
gaaatagagt gggagctgca gaaagaaaac agcaaacgct ggaacccaga aattcagtac 2100
acctccaact acaacaagtc ggtgaatgtg gagtttaccg tggacgcaaa cggtgtttat 2160
tctgaacccc gccctattgg cactcgttac cttacccgga acttg 2205
PL 217 623 B1
315
Zastrzeżenia patentowe

Claims (22)

1. Sposób wykrywania sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce, znamienny tym, że obejmuje etapy:
(a) poddania próbki zawierającej DNA amplifikacji przez łańcuchową reakcję polimerazy PCR przy wykorzystaniu pierwszego zestawu starterów, które specyficznie amplifikują pierwszy region sekwencji kwasu nukleinowego AAV; przy czym pierwszy region ma zmienną sekwencję oflankowaną przez co najmniej 18 par zasad o wysoce konserwatywnej sekwencji na jej końcu 5' i co najmniej 18 par zasad o wysoce konserwatywnej sekwencji na jej końcu 3', a te pary zasad są wysoce konserwatywne względem dopasowania do co najmniej AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6, (b) ewentualnie poddania DNA dalszej amplifikacji przy wykorzystaniu drugiego zestawu starterów, które specyficznie amplifikują drugi region, który obejmuje pierwszy region sekwencji AAV oraz sekwencje w kierunku 5' od pierwszego regionu tak, że uzyskuje się sekwencje wydłużania 5' AAV, które przyłączają się do końca 5' sekwencji AAV amplifikowanych przez startery dla pierwszego regionu;
(c) ewentualnie poddania DNA dalszej amplifikacji przy wykorzystaniu trzeciego zestawu starterów, które specyficznie amplifikują trzeci region, który obejmuje pierwszy region sekwencji AAV oraz sekwencje w kierunku 3' od pierwszego regionu tak, że uzyskuje się sekwencje wydłużania 3' AAV, które przyłączają się do końca 3' sekwencji AAV amplifikowanych przez startery dla pierwszego regionu, przy czym każdy z tych regionów jest wyznaczony w oparciu o dopasowanie sekwencji kwasu nukleinowego z co najmniej AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6 i każdy z tych regionów obejmuje sekwencje kwasu nukleinowego wysoce konserwatywne na odcinku co najmniej 18 par zasad na końcu 5', i ewentualnie sekwencje zmienne pośrodku oraz sekwencje wysoce konserwatywne na odcinku co najmniej 18 par zasad na końcu 3' sekwencji regionu, względem sekwencji co najmniej AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6; oraz, każdy z zestawów starterów składa się ze startera 5' i startera 3';
obecność amplifikowanej sekwencji wskazuje na obecność AAV w próbce, a porównanie różnic między amplifikowanymi sekwencjami i sekwencjami AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6 wskazuje na obecność nieznanych AAV.
2. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że porównanie obejmuje etap porównywania wzorów enzymów restrykcyjnych dla amplifikowanych sekwencji z wzorami enzymów restrykcyjnych dla AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5 i AAV6.
3. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że w etapie (a) amplifikacji podlega gen kaspydu pełnej długości.
4. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że amplifikowana sekwencja obejmuje gen kapsydu AAV i gen rep. AAV.
5. Sposób według zastrz. 1 lub zastrz. 2, znamienny tym, że DNA został wyekstrahowany z grupy złożonej z komórek, hodowli komórkowej, tkanki, hodowli tkankowej i płynów biologicznych.
6. Sposób według zastrz. 1 lub zastrz. 2, znamienny tym, że pierwszy region jest wysoce konserwatywny na długości co najmniej około 25 par zasad na końcu 5' regionu, końcu 3' regionu lub obu.
7. Sposób według zastrz. 1 lub zastrz. 2, znamienny tym, że pierwszy region jest wysoce konserwatywny na długości co najmniej około 30 par zasad na końcu 5' regionu, końcu 3' regionu lub obu.
8. Sposób według zastrz. 1 lub zastrz. 2, znamienny tym, że wysoce konserwatywne sekwencje pierwszego regionu wykazują co najmniej 80% identyczności pomiędzy dopasowanymi serotypami AAV na końcu 5' regionu, końcu 3' regionu lub obu.
9. Sposób według zastrz. 8, znamienny tym, że wysoce konserwatywne sekwencje pierwszego regionu wykazują co najmniej 90% identyczności pomiędzy dopasowanymi serotypami AAV na końcu 5' regionu, końcu 3' regionu lub obu.
10. Sposób według zastrz. 1 lub zastrz. 2, znamienny tym, że zmienne sekwencje pośrodku pierwszego regionu wykazują mniej niż 70% identyczności pomiędzy dopasowanymi AAV.
11. Sposób według zastrz. 1 lub zastrz. 2, znamienny tym, że pierwszy region obejmuje pozycje od około 2800 bp do około 3200 bp AAV1, SEKW. NR ID.: 6; oraz odpowiadające im pary zasad w innych AAV.
12. Sposób według zastrz. 11, znamienny tym, że pierwszy region ma długość 257 bp i obejmuje pozycje od 2886 do około 3143 AAV1, SEKW. NR ID.: 6; oraz odpowiadające im pary zasad w innych AAV.
316
PL 217 623 B1
13. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że starterami są AV1ns mający sekwencję nukleotydów od 1398 do 1423 SEKW. NR ID: 6 i AV2cas mający SEKW. NR ID :7.
14. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że pierwszy zestaw starterów umożliwia izolację sekwencji pełnej długości kapsydu wirusa stowarzyszonego z adenowirusem z próbki - przy czym pierwszy zestaw starterów obejmuje starter 5' skierowany do regionu umiejscowionego w środku genu rep AAV, oparty na wcześniej określonym regionie konserwatywnym i starter 3' skierowany do regionu poniżej genu cap AAV, oparty na wcześniej określonym konserwatywnym regionie AAV.
15. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że próbka zawiera AAV wintegrowany w chromosom.
16. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że próbki zawierają tkankę ludzką.
17. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że próbka zawiera pro wirusowe sekwencje AAV.
18. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że pierwszy region jest regionem charakterystycznym.
19. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że pary zasad tych wysoce konserwatywnych sekwencji są wysoce konserwatywne względem dopasowania do AAV1, 2, 3, 4, 5 i 6 i AAV izolowanych z genów od gęsi i kaczek.
20. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że sekwencja zmienna jest sekwencją hiperzmienną.
21. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że pierwszy region obejmuje długość do 10 kilo par zasad.
22. Sposób według zastrz. 1, znamienny tym, że pierwszy region obejmuje fragment 3,1 kilo par zasad obejmujący pełnej długości sekwencję cap.
PL373864A 2001-11-13 2002-11-12 Sposób wykrywania sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce PL217623B1 (pl)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US35060701P 2001-11-13 2001-11-13
US34111701P 2001-12-17 2001-12-17
US37706602P 2002-05-01 2002-05-01
US38667502P 2002-06-05 2002-06-05

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL373864A1 PL373864A1 (pl) 2005-09-19
PL217623B1 true PL217623B1 (pl) 2014-08-29

Family

ID=27502639

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL409838A PL222683B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka,sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka
PL404537A PL221877B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem, kompozycja, wyizolowane białko kapsydu, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa, komórka gospodarza
PL397823A PL220644B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), kompozycja, wyizolowane białko kapsydowe, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania zrekombinowanego wirusa, komórka gospodarza
PL373864A PL217623B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Sposób wykrywania sekwencji wirusa stowarzyszonego z adenowirusem (AAV) w próbce

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL409838A PL222683B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Rekombinowane wirusy stowarzyszone z adenowirusem (AAV), sposoby ich wytwarzania, pakująca komórka gospodarza, kompozycja zawierająca wirus, zastosowanie wirusa, wyizolowane wirusy AAV, białka,sztuczne białka kapsydu, cząsteczki, komórki gospodarza, sposoby dostarczania transgenu, sposób identyfikacji serotypu, zestaw diagnostyczny, sposób izolacji nowych wirusów, rekombinowana komórka
PL404537A PL221877B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem, kompozycja, wyizolowane białko kapsydu, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania rekombinowanego wirusa, komórka gospodarza
PL397823A PL220644B1 (pl) 2001-11-13 2002-11-12 Wirus stowarzyszony z adenowirusem (AAV), kompozycja, wyizolowane białko kapsydowe, wyizolowane lub syntetyczne cząsteczki kwasu nukleinowego, sposób wytwarzania zrekombinowanego wirusa, komórka gospodarza

Country Status (22)

Country Link
US (15) US20030138772A1 (pl)
EP (4) EP1310571B1 (pl)
JP (6) JP4677187B2 (pl)
KR (2) KR101015854B1 (pl)
CN (6) CN103555677B (pl)
AT (2) ATE520707T1 (pl)
AU (1) AU2002361573B2 (pl)
BR (3) BR122016004944B8 (pl)
CA (6) CA3066428C (pl)
DE (1) DE60209193T2 (pl)
DK (1) DK1310571T3 (pl)
ES (3) ES2258601T3 (pl)
HU (2) HU229379B1 (pl)
IL (11) IL161827A0 (pl)
MX (3) MX346493B (pl)
NO (4) NO334379B1 (pl)
NZ (7) NZ532635A (pl)
PH (2) PH12014501487A1 (pl)
PL (4) PL222683B1 (pl)
SG (5) SG157224A1 (pl)
WO (1) WO2003042397A2 (pl)
ZA (1) ZA200403360B (pl)

Families Citing this family (638)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0932694A2 (en) 1996-09-11 1999-08-04 THE UNITED STATES GOVERNMENT as represented by THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Aav4 vector and uses thereof
DE69939169D1 (de) 1998-05-28 2008-09-04 Us Gov Health & Human Serv Aav5 vektoren und deren verwendung
WO2004060278A2 (en) 2002-12-06 2004-07-22 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals
US7226739B2 (en) 2001-03-02 2007-06-05 Isis Pharmaceuticals, Inc Methods for rapid detection and identification of bioagents in epidemiological and forensic investigations
US7666588B2 (en) 2001-03-02 2010-02-23 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA and characterization of mitochondrial DNA heteroplasmy
US7718354B2 (en) 2001-03-02 2010-05-18 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid identification of pathogens in humans and animals
US20040121309A1 (en) 2002-12-06 2004-06-24 Ecker David J. Methods for rapid detection and identification of bioagents in blood, bodily fluids, and bodily tissues
US20030027135A1 (en) 2001-03-02 2003-02-06 Ecker David J. Method for rapid detection and identification of bioagents
US7217510B2 (en) 2001-06-26 2007-05-15 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for providing bacterial bioagent characterizing information
US8073627B2 (en) 2001-06-26 2011-12-06 Ibis Biosciences, Inc. System for indentification of pathogens
CN103555677B (zh) 2001-11-13 2018-01-30 宾夕法尼亚大学托管会 检测和/或鉴定腺伴随病毒(aav)序列以及分离所鉴定的新型序列的方法
PT2573170T (pt) * 2001-12-17 2018-03-26 Univ Pennsylvania Sequências de um vírus adenoassociado (aav) de serotipo 9, vetor contendo as mesmas, e suas utilizações
WO2003052051A2 (en) 2001-12-17 2003-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) serotype 8 sequences
CA2426283C (en) 2002-04-29 2006-06-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for direct rescue and amplification of integrated viruses from cellular dna of tissues
US7419817B2 (en) 2002-05-17 2008-09-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Department Of Health And Human Services, Nih. Scalable purification of AAV2, AAV4 or AAV5 using ion-exchange chromatography
AU2003265855A1 (en) * 2002-08-28 2004-03-19 University Of Florida Modified aav
US8046171B2 (en) 2003-04-18 2011-10-25 Ibis Biosciences, Inc. Methods and apparatus for genetic evaluation
US8057993B2 (en) 2003-04-26 2011-11-15 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of coronaviruses
US8158354B2 (en) 2003-05-13 2012-04-17 Ibis Biosciences, Inc. Methods for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
US7964343B2 (en) 2003-05-13 2011-06-21 Ibis Biosciences, Inc. Method for rapid purification of nucleic acids for subsequent analysis by mass spectrometry by solution capture
WO2005017101A2 (en) 2003-05-19 2005-02-24 THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH & HUMAN SERVICES, NATIONAL INSTITUTES OF HEALTH Avian adenoassociated virus (aaav) and uses thereof
JP2007524386A (ja) 2003-06-19 2007-08-30 アビジェン， インコーポレイテッド 減少した免疫反応性を有するａａｖビリオン、およびその使用
US9233131B2 (en) 2003-06-30 2016-01-12 The Regents Of The University Of California Mutant adeno-associated virus virions and methods of use thereof
US9441244B2 (en) 2003-06-30 2016-09-13 The Regents Of The University Of California Mutant adeno-associated virus virions and methods of use thereof
AU2010201278B2 (en) * 2003-09-01 2012-11-15 Academisch Medisch Centrum AAV vectors for in vivo gene therapy of rheumatoid arthritis
US8529885B2 (en) * 2003-09-01 2013-09-10 Academisch Medisch Centrum AAV vectors for in vivo gene therapy of rheumatoid arthritis
US8097416B2 (en) 2003-09-11 2012-01-17 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US8546082B2 (en) 2003-09-11 2013-10-01 Ibis Biosciences, Inc. Methods for identification of sepsis-causing bacteria
US8288523B2 (en) 2003-09-11 2012-10-16 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of bacteria
DK3211085T3 (da) * 2003-09-30 2021-06-21 Univ Pennsylvania Klader af adeno-associeret virus (aav), sekvenser, vektorer indeholdende disse og anvendelser deraf
AU2011250849B2 (en) * 2003-09-30 2013-09-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (AAV) clades, sequences, vectors containing same, and uses therefor
WO2005056807A2 (en) 2003-12-04 2005-06-23 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services, National Institutes Of Health Bovine adeno-associated viral (baav) vector and uses thereof
US7666592B2 (en) 2004-02-18 2010-02-23 Ibis Biosciences, Inc. Methods for concurrent identification and quantification of an unknown bioagent
US8119336B2 (en) 2004-03-03 2012-02-21 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of alphaviruses
EP1742657B1 (en) 2004-04-28 2013-11-06 The Trustees of The University of Pennsylvania Immunization regimen with e4-deleted adenovirus prime and e1-deleted adenovirus boost
ES2361000T3 (es) 2004-04-28 2011-06-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Suministro secuencial de moléculas inmunogénicas mediante administraciones de un adenovirus y de un virus adeno-asociado.
EP2458619B1 (en) 2004-05-24 2017-08-02 Ibis Biosciences, Inc. Mass spectrometry with selective ion filtration by digital thresholding
US20050266411A1 (en) 2004-05-25 2005-12-01 Hofstadler Steven A Methods for rapid forensic analysis of mitochondrial DNA
US7811753B2 (en) 2004-07-14 2010-10-12 Ibis Biosciences, Inc. Methods for repairing degraded DNA
EP1771571A2 (en) * 2004-07-30 2007-04-11 Targeted Genetics Corporation Recombinant aav based vaccine methods
US7309589B2 (en) * 2004-08-20 2007-12-18 Vironix Llc Sensitive detection of bacteria by improved nested polymerase chain reaction targeting the 16S ribosomal RNA gene and identification of bacterial species by amplicon sequencing
WO2006135400A2 (en) 2004-08-24 2006-12-21 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapid identification of recombinant organisms
EP1804781A1 (en) * 2004-10-05 2007-07-11 Merz Pharma GmbH & Co.KGaA Novel cyclic and acyclic propenones for treating cns disorders
US8084207B2 (en) 2005-03-03 2011-12-27 Ibis Bioscience, Inc. Compositions for use in identification of papillomavirus
US8182992B2 (en) 2005-03-03 2012-05-22 Ibis Biosciences, Inc. Compositions for use in identification of adventitious viruses
US8999678B2 (en) * 2005-04-07 2015-04-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of increasing the function of an AAV vector
WO2006119432A2 (en) * 2005-04-29 2006-11-09 The Government Of The U.S.A., As Rep. By The Sec., Dept. Of Health & Human Services Isolation, cloning and characterization of new adeno-associated virus (aav) serotypes
EP1904655A2 (en) 2005-07-21 2008-04-02 Isis Pharmaceuticals, Inc. Methods for rapid identification and quantitation of nucleic acid variants
WO2007100397A2 (en) * 2005-11-28 2007-09-07 Isis Pharmaceuticals, Inc. Compositions for use in identification of adventitious contaminant viruses
US7588772B2 (en) 2006-03-30 2009-09-15 Board Of Trustees Of The Leland Stamford Junior University AAV capsid library and AAV capsid proteins
EP2018421B1 (en) 2006-04-28 2012-12-19 The Trustees of the University of Pennsylvania Scalable production method for aav
EP2044199B1 (en) * 2006-07-25 2012-11-14 Celladon Corporation Extended antegrade epicardial coronary infusion of adeno-associated viral vectors comprising serca2a for gene therapy
EP2064332B1 (en) 2006-09-14 2012-07-18 Ibis Biosciences, Inc. Targeted whole genome amplification method for identification of pathogens
JP5680304B2 (ja) 2007-02-23 2015-03-04 アイビス バイオサイエンシズ インコーポレイティッド 迅速な法医学的ｄｎａ分析法
EP2623605B1 (en) * 2007-04-09 2018-11-28 University of Florida Research Foundation, Inc. RAAV vector compositions having tyrosine-modified capsid proteins and methods for use
US9611302B2 (en) 2007-04-09 2017-04-04 University Of Florida Research Foundation, Inc. High-transduction-efficiency RAAV vectors, compositions, and methods of use
US9725485B2 (en) 2012-05-15 2017-08-08 University Of Florida Research Foundation, Inc. AAV vectors with high transduction efficiency and uses thereof for gene therapy
US9598724B2 (en) 2007-06-01 2017-03-21 Ibis Biosciences, Inc. Methods and compositions for multiple displacement amplification of nucleic acids
EP2058401A1 (en) * 2007-10-05 2009-05-13 Genethon Widespread gene delivery to motor neurons using peripheral injection of AAV vectors
CN102159713A (zh) 2008-05-20 2011-08-17 Eos神经科学公司 用于递送光敏蛋白的载体和使用方法
US9217155B2 (en) 2008-05-28 2015-12-22 University Of Massachusetts Isolation of novel AAV'S and uses thereof
WO2010033625A1 (en) 2008-09-16 2010-03-25 Ibis Biosciences, Inc. Microplate handling systems and related computer program products and methods
EP2347254A2 (en) 2008-09-16 2011-07-27 Ibis Biosciences, Inc. Sample processing units, systems, and related methods
WO2010033599A2 (en) 2008-09-16 2010-03-25 Ibis Biosciences, Inc. Mixing cartridges, mixing stations, and related kits, systems, and methods
EP2396803A4 (en) 2009-02-12 2016-10-26 Ibis Biosciences Inc IONIZATION PROBE ASSEMBLIES
ES2724122T3 (es) 2009-04-30 2019-09-06 Univ Pennsylvania Composiciones para dirigir células de las vías respiratorias de conducción que comprenden construcciones de virus adenoasociado
WO2010138263A2 (en) 2009-05-28 2010-12-02 University Of Massachusetts Novel aav 's and uses thereof
WO2010143761A1 (ko) * 2009-06-12 2010-12-16 (주)바이오니아 미지시료 내 감염성 미생물을 신속하게 검출하는 방법
EP2454000A4 (en) 2009-07-17 2016-08-10 Ibis Biosciences Inc SYSTEMS FOR IDENTIFYING BIOLOGICAL SUBSTANCES
US8950604B2 (en) 2009-07-17 2015-02-10 Ibis Biosciences, Inc. Lift and mount apparatus
US20120244127A1 (en) 2009-10-01 2012-09-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV Vectors Expressing SEC10 for Treating Kidney Damage
US9890408B2 (en) 2009-10-15 2018-02-13 Ibis Biosciences, Inc. Multiple displacement amplification
SG10201908848RA (en) 2010-03-29 2019-10-30 Univ Pennsylvania Pharmacologically induced transgene ablation system
US9315825B2 (en) 2010-03-29 2016-04-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Pharmacologically induced transgene ablation system
DK2826860T3 (en) 2010-04-23 2018-12-03 Univ Massachusetts CNS targeting AAV vectors and methods for their use
CA2833905C (en) 2010-04-23 2019-09-10 University Of Massachusetts Multicistronic expression constructs
EP2561075B1 (en) 2010-04-23 2018-06-27 University of Massachusetts Aav-based treatment of cholesterol-related disorders
US9309534B2 (en) 2010-07-12 2016-04-12 Universidad Autonoma De Barcelona Gene therapy composition for use in diabetes treatment
US8663624B2 (en) 2010-10-06 2014-03-04 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus virions with variant capsid and methods of use thereof
EP2699688A1 (en) 2011-04-20 2014-02-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Regimens and compositions for aav-mediated passive immunization of airborne pathogens
EP3318634A1 (en) 2011-04-21 2018-05-09 University of Massachusetts Raav-based compositions and methods for treating diseases involving dominant-negative or gain of function mutations
DK4005603T3 (da) 2011-04-22 2024-11-25 Univ California Adeno-associerede virus-virioner med variant kapsid og fremgangsmåder til anvendelse heraf
US9169299B2 (en) 2011-08-24 2015-10-27 The Board Of Trustees Of The Leleand Stanford Junior University AAV capsid proteins for nucleic acid transfer
US20130136729A1 (en) * 2011-11-11 2013-05-30 University of Virginia Patent Foundation, d/b/a University of Virginia Licensing & Ventures Group Compositions and methods for targeting and treating diseases and injuries using adeno-associated virus vectors
WO2013123503A1 (en) 2012-02-17 2013-08-22 The Children's Hospital Of Philadelphia Aav vector compositions and methods for gene transfer to cells, organs and tissues
US10093947B2 (en) * 2012-02-28 2018-10-09 Cornell University AAV-directed persistent expression of an anti-nicotine antibody gene for smoking cessation
US10004811B2 (en) * 2012-04-13 2018-06-26 Cornell University Development of a highly efficient second generation nicotine-conjugate vaccine to treat nicotine addiction
US10294281B2 (en) 2012-05-15 2019-05-21 University Of Florida Research Foundation, Incorporated High-transduction-efficiency rAAV vectors, compositions, and methods of use
US12358954B2 (en) 2012-05-15 2025-07-15 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Capsid-modified rAAV vector compositions and methods therefor
EP2692868A1 (en) 2012-08-02 2014-02-05 Universitat Autònoma De Barcelona Adeno-associated viral (AAV) vectors useful for transducing adipose tissue
US9567376B2 (en) 2013-02-08 2017-02-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Enhanced AAV-mediated gene transfer for retinal therapies
DK2956477T4 (da) 2013-02-15 2024-04-15 Bioverativ Therapeutics Inc Optimeret faktor viii-gen
US8957044B2 (en) 2013-03-01 2015-02-17 Wake Forest University Health Sciences Systemic gene replacement therapy for treatment of X-linked myotubular myopathy (XLMTM)
SG10201707319UA (en) 2013-03-15 2017-10-30 Univ Pennsylvania Compositions and methods for treating mpsi
US9719106B2 (en) 2013-04-29 2017-08-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Tissue preferential codon modified expression cassettes, vectors containing same, and uses thereof
CA2907799A1 (en) 2013-05-31 2014-12-04 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus variants and methods of use thereof
CA3209883A1 (en) 2013-07-22 2015-01-29 The Children's Hospital Of Philadelphia Variant aav and compositions, methods and uses for gene transfer to cells, organs and tissues
HUE052814T2 (hu) 2014-01-31 2021-05-28 Temple Univ Of The Commonwealth System A szívelégtelenség terápiájához célfehérjeként alkamazott BAG3
GB201403684D0 (en) 2014-03-03 2014-04-16 King S College London Vector
US10072251B2 (en) 2014-02-19 2018-09-11 University Of Massachusetts Recombinant AAVS having useful transcytosis properties
WO2015138357A2 (en) 2014-03-09 2015-09-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of otc deficency
ES3042252T3 (en) 2014-03-17 2025-11-19 Adverum Biotechnologies Inc Compositions and methods for enhanced gene expression in cone cells
AU2015231294B2 (en) 2014-03-18 2020-10-29 University Of Massachusetts rAAV-based compositions and methods for treating amyotrophic lateral sclerosis
EP3628334B1 (en) 2014-03-21 2023-06-28 Genzyme Corporation Gene therapy for retinitis pigmentosa
EP2933335A1 (en) 2014-04-18 2015-10-21 Genethon A method of treating peripheral neuropathies and motor neuron diseases
WO2015164723A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and compositions for treating metastatic breast cancer and other cancers in the brain
WO2015164786A1 (en) 2014-04-25 2015-10-29 University Of Massachusetts Recombinant aav vectors useful for reducing immunity against transgene products
US11555059B2 (en) 2014-04-25 2023-01-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania LDLR variants and their use in compositions for reducing cholesterol levels
DK3142750T3 (da) 2014-05-13 2020-09-14 Univ Pennsylvania Sammensætninger omfattende aav, som udtrykker dobbelt-antistofkonstrukter og anvendelser deraf
WO2015187825A2 (en) 2014-06-03 2015-12-10 University Of Massachusetts Compositions and methods for modulating dysferlin expression
WO2015191508A1 (en) 2014-06-09 2015-12-17 Voyager Therapeutics, Inc. Chimeric capsids
EP2960336A1 (en) 2014-06-27 2015-12-30 Genethon Efficient systemic treatment of dystrophic muscle pathologies
US11008561B2 (en) 2014-06-30 2021-05-18 Bioverativ Therapeutics Inc. Optimized factor IX gene
CN107074805B (zh) 2014-07-03 2021-02-26 德州大学系统董事会 用于治疗疾病的gls1抑制剂
EP4012035B1 (en) 2014-09-16 2024-11-06 Genzyme Corporation Adeno-associated viral vectors for treating myocilin (myoc) glaucoma
WO2016044478A1 (en) 2014-09-16 2016-03-24 Genzyme Corporation Adeno-associated viral vectors for treating myocilin (myoc) glaucoma
WO2016054554A1 (en) 2014-10-03 2016-04-07 University Of Massachusetts Heterologous targeting peptide grafted aavs
EP3795580A1 (en) 2014-10-03 2021-03-24 University of Massachusetts High efficiency library-identified aav vectors
WO2016065001A1 (en) 2014-10-21 2016-04-28 University Of Massachusetts Recombinant aav variants and uses thereof
CN112553229A (zh) 2014-11-05 2021-03-26 沃雅戈治疗公司 用于治疗帕金森病的aadc多核苷酸
RU2020108189A (ru) 2014-11-14 2020-03-11 Вояджер Терапьютикс, Инк. Композиции и способы лечения бокового амиотрофического склероза (als)
MX2017006217A (es) 2014-11-14 2018-05-02 Voyager Therapeutics Inc Polinucleotidos moduladores.
EP3230441A4 (en) 2014-12-12 2018-10-03 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the production of scaav
EP3242945B1 (en) 2015-01-07 2021-09-01 Universitat Autònoma de Barcelona Single-vector gene construct comprising insulin and glucokinase genes
WO2016115503A1 (en) 2015-01-16 2016-07-21 Voyager Therapeutics, Inc. Central nervous system targeting polynucleotides
IL296391B2 (en) 2015-01-20 2024-06-01 Genzyme Corp Analytical ultracentrifugation for characterization of recombinant viral particles
US20180030096A1 (en) 2015-02-03 2018-02-01 University Of Florida Research Foundation, Inc. Recombinant aav1, aav5, and aav6 capsid mutants and uses thereof
JP6929791B2 (ja) 2015-02-09 2021-09-01 デューク ユニバーシティ エピゲノム編集のための組成物および方法
NZ772772A (en) 2015-02-10 2024-12-20 Genzyme Corp Enhanced delivery of viral particles to the striatum and cortex
SG11201706444TA (en) 2015-02-10 2017-09-28 Genzyme Corp VARIANT RNAi
US10584321B2 (en) 2015-02-13 2020-03-10 University Of Massachusetts Compositions and methods for transient delivery of nucleases
CN114480502A (zh) 2015-03-02 2022-05-13 阿德夫拉姆生物技术股份有限公司 用于将多核苷酸玻璃体内递送到视网膜视锥的组合物和方法
JP2018509164A (ja) 2015-03-10 2018-04-05 ザ・トラスティーズ・オブ・コロンビア・ユニバーシティ・イン・ザ・シティ・オブ・ニューヨーク 組換えＧｌｕｔ１アデノ随伴ウイルスベクターコンストラクトおよびＧｌｕｔ１発現を回復させる方法
WO2016154344A1 (en) 2015-03-24 2016-09-29 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus variants and methods of use thereof
TWI707951B (zh) 2015-04-08 2020-10-21 美商健臻公司 過大腺相關載體之製造
EP4491733A3 (en) 2015-04-23 2025-03-26 University of Massachusetts Modulation of aav vector transgene expression
CA3021949C (en) 2015-04-24 2023-10-17 University Of Massachusetts Modified aav constructs and uses thereof
EP3288594B1 (en) 2015-04-27 2022-06-29 The Trustees of The University of Pennsylvania Dual aav vector system for crispr/cas9 mediated correction of human disease
GB201508026D0 (en) 2015-05-11 2015-06-24 Ucl Business Plc Capsid
US11535665B2 (en) 2015-05-13 2022-12-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV-mediated expression of anti-influenza antibodies and methods of use thereof
WO2016186772A2 (en) 2015-05-16 2016-11-24 Genzyme Corporation Gene editing of deep intronic mutations
HUE068603T2 (hu) 2015-06-23 2025-01-28 Childrens Hospital Philadelphia Módosított IX-es faktor, valamint készítmények, eljárások és alkalmazások sejtekbe, szervekbe és szövetekbe történõ géntranszferhez
US10676735B2 (en) 2015-07-22 2020-06-09 Duke University High-throughput screening of regulatory element function with epigenome editing technologies
AU2016302335B2 (en) 2015-08-06 2022-08-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania GLP-1 and use thereof in compositions for treating metabolic diseases
CN108351350B (zh) 2015-08-25 2022-02-18 杜克大学 使用rna指导型内切核酸酶改善基因组工程特异性的组合物和方法
CN108137664B (zh) 2015-08-31 2021-11-26 宾夕法尼亚州大学信托人 用于治疗伴侣动物的aav-epo
US10988519B2 (en) 2015-09-24 2021-04-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Composition and method for treating complement-mediated disease
JP7064214B2 (ja) 2015-09-28 2022-05-10 ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル 抗体回避性ウイルスベクターのための方法および組成物
WO2017062750A1 (en) 2015-10-09 2017-04-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods useful in treating stargardt's disease and other ocular disorders
US11970710B2 (en) 2015-10-13 2024-04-30 Duke University Genome engineering with Type I CRISPR systems in eukaryotic cells
WO2017070525A1 (en) 2015-10-22 2017-04-27 University Of Massachusetts Methods and compositions for treating metabolic imbalance in neurodegenerative disease
US11426469B2 (en) 2015-10-22 2022-08-30 University Of Massachusetts Prostate-targeting adeno-associated virus serotype vectors
WO2017075335A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Voyager Therapeutics, Inc. Regulatable expression using adeno-associated virus (aav)
CA3003435A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Intrathecal administration of adeno-associated-viral vectors for gene therapy
HK1254836A1 (zh) 2015-10-30 2019-07-26 Nbe-Therapeutics Ag 抗-ror1抗体
AU2016362477A1 (en) 2015-12-02 2018-06-14 Voyager Therapeutics, Inc. Assays for the detection of AAV neutralizing antibodies
FR3044926B1 (fr) 2015-12-09 2020-01-31 Genethon Outils de therapie genique efficaces pour le saut de l'exon 53 de la dystrophine
US11015173B2 (en) 2015-12-11 2021-05-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for AAV1
WO2017100676A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for aav8
US11098286B2 (en) 2015-12-11 2021-08-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for AAV9
EP3387118B1 (en) 2015-12-11 2022-04-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Scalable purification method for aavrh10
CA3008142A1 (en) 2015-12-11 2017-06-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating familial hypercholesterolemia
JP7057281B2 (ja) 2015-12-14 2022-04-19 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 眼疾患のための遺伝子療法
JP7061067B2 (ja) 2015-12-14 2022-04-27 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア クリグラー・ナジャー症候群の処置のための組成物
CA3008268A1 (en) 2015-12-15 2017-06-22 Genzyme Corporation Adeno-associated viral vectors for treating mucolipidosis type ii
BR112018012660B1 (pt) 2015-12-22 2023-12-19 Board Of Regents, The University Of Texas System Sal, solvato, ou polimorfo de um composto; polimorfo de composto sólido; composição; e uso de um sal, solvato ou polimorfo
MX2018008926A (es) 2016-01-20 2019-01-10 Scripps Research Inst Composiciones de anticuerpo contra ror1 y métodos relacionados.
KR20180118659A (ko) 2016-02-01 2018-10-31 바이오버라티브 테라퓨틱스 인크. 최적화된 viii 인자 유전자
EP3411059A4 (en) * 2016-02-02 2019-10-16 University Of Massachusetts METHOD FOR INCREASING THE EFFECTIVENESS OF THE SYSTEMIC DELIVERY OF AVV GENES TO THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM
WO2017136500A1 (en) 2016-02-03 2017-08-10 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type i
EP3413928B1 (en) 2016-02-12 2022-04-20 University of Massachusetts Anti-angiogenic mirna therapeutics for inhibiting corneal neovascularization
US10729789B2 (en) * 2016-03-01 2020-08-04 University Of Virginia Patent Foundation Compositions and methods for adeno-associated virus mediated gene expression in myofibroblast-like cells
US11207426B2 (en) 2016-04-05 2021-12-28 University Of Massachusetts Compositions and methods for selective inhibition of grainyhead-like protein expression
WO2017180587A2 (en) 2016-04-11 2017-10-19 Obsidian Therapeutics, Inc. Regulated biocircuit systems
US20190127713A1 (en) 2016-04-13 2019-05-02 Duke University Crispr/cas9-based repressors for silencing gene targets in vivo and methods of use
AU2017248656B2 (en) * 2016-04-15 2023-07-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel AAV8 mutant capsids and compositions containing same
WO2017181113A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 The Trustees Of The University Of Pennsyvania Gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type ii
WO2017181105A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 University Of Massachusetts Methods and compositions for treating metabolic imbalance
WO2017180857A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating hemophilia a
WO2017180861A1 (en) 2016-04-15 2017-10-19 The Trustees Of The University Of Pennsulvania Gene therapy for treating hemophilia b
IL322403A (en) 2016-04-15 2025-09-01 Univ Pennsylvania Preparations for the treatment of wet age-related macular degeneration
US11401527B2 (en) 2016-04-17 2022-08-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods useful for prophylaxis of organophosphates
US11299751B2 (en) 2016-04-29 2022-04-12 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions for the treatment of disease
EP3448874A4 (en) 2016-04-29 2020-04-22 Voyager Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS FOR TREATING A DISEASE
GB201608046D0 (en) * 2016-05-09 2016-06-22 Cambridge Entpr Ltd And Syndey Children S Hospitals Network Randwick And Westmead Incorporating The Treatment of complement-mediated disorders
CN116333057A (zh) 2016-05-13 2023-06-27 4D分子治疗有限公司 腺相关病毒变体衣壳和其使用方法
AU2017267665C1 (en) 2016-05-18 2023-10-05 Voyager Therapeutics, Inc. Modulatory polynucleotides
BR112018073472A2 (pt) 2016-05-18 2019-08-27 Voyager Therapeutics, Inc. composições e métodos de tratamento da doença de huntington
CN109313018B (zh) * 2016-06-08 2021-12-10 索尼公司 成像控制装置和方法、以及车辆
WO2017218852A1 (en) 2016-06-15 2017-12-21 University Of Massachusetts Recombinant adeno-associated viruses for delivering gene editing molecules to embryonic cells
KR20190096329A (ko) 2016-07-05 2019-08-19 유니버시티 오브 매사추세츠 녹내장에서 신경보호 요법으로서 sfasl의 aav2-매개된 유전자 전달
KR102526506B1 (ko) 2016-07-08 2023-05-03 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 Rdh12가 연루된 장애 및 질환의 치료를 위한 방법 및 조성물
EP4275747A3 (en) 2016-07-19 2024-01-24 Duke University Therapeutic applications of cpf1-based genome editing
WO2018022511A1 (en) 2016-07-25 2018-02-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions comprising a lecithin cholesterol acyltransferase variant and uses thereof
IL263801B2 (en) 2016-07-26 2024-01-01 Biomarin Pharm Inc Novel adeno-associated virus capsid proteins
CA3029833A1 (en) 2016-07-29 2018-02-01 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus virions with variant capsid and methods of use thereof
US11698377B2 (en) 2016-08-15 2023-07-11 Genzyme Corporation Methods for detecting AAV
AU2017313917B2 (en) 2016-08-18 2023-12-21 The Regents Of The University Of California CRISPR-Cas genome engineering via a modular AAV delivery system
WO2018044933A1 (en) 2016-08-30 2018-03-08 The Regents Of The University Of California Methods for biomedical targeting and delivery and devices and systems for practicing the same
US10457940B2 (en) 2016-09-22 2019-10-29 University Of Massachusetts AAV treatment of Huntington's disease
EP3518985A4 (en) 2016-09-29 2020-08-05 University of Florida Research Foundation, Incorporated AAVRH.10 VARIANTS WITH HOST ANTIBODY EXHAUST CAPACITIES AND MODIFIED TISSUE TARGETING PROPERTIES
US11578340B2 (en) 2016-10-13 2023-02-14 University Of Massachusetts AAV capsid designs
AU2017345470B2 (en) 2016-10-19 2023-08-03 Adverum Biotechnologies, Inc. Modified AAV capsids and uses thereof
EP3548065B1 (en) 2016-12-01 2022-11-09 INSERM - Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Pharmaceutical compositions for the treatment of retinal degenerative diseases
WO2018112225A1 (en) * 2016-12-14 2018-06-21 The J. David Gladstone Institutes Methods and compositions for generating a deletion library and for identifying a defective interfering particle (dip)
EP3562494A4 (en) 2016-12-30 2020-08-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania GENE THERAPY FOR THE TREATMENT OF PHENYLKETONURIS
KR20190106990A (ko) 2017-01-20 2019-09-18 유니버시티 오브 피츠버그-오브 더 커먼웰쓰 시스템 오브 하이어 에듀케이션 제대혈 이식(ucbt) 및 증가된 갈락토세레브로시다아제(galc) 발현을 이용한 크라베병의 치료
KR20250022877A (ko) 2017-01-31 2025-02-17 리젠엑스바이오 인크. 완전히-인간 글리코실화된 인간 알파-l-이두로니다아제(idua)를 이용한 뮤코다당증 1형의 치료
KR20190118163A (ko) 2017-02-20 2019-10-17 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 가족성 고콜레스테롤혈증을 치료하기 위한 유전자 요법
JOP20190200A1 (ar) 2017-02-28 2019-08-27 Univ Pennsylvania تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي
US10786568B2 (en) 2017-02-28 2020-09-29 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV mediated influenza vaccines
SI3589730T1 (sl) 2017-02-28 2024-04-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-povezan virus (AAV) clade F vektor in njihova uporaba
CN119752819A (zh) 2017-03-01 2025-04-04 宾夕法尼亚州立大学托管会 用于眼部病症的基因疗法
WO2018158397A1 (en) 2017-03-02 2018-09-07 Genethon Method for removing anti-aav antibodies from a blood-derived composition
JP7341900B2 (ja) 2017-03-03 2023-09-11 オブシディアン セラピューティクス， インコーポレイテッド 免疫療法のためのｃｄ１９組成物及び方法
AU2018226857B2 (en) 2017-03-03 2025-01-02 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions and methods for immunotherapy
CN118360335A (zh) 2017-04-05 2024-07-19 马萨诸塞大学 小基因治疗
US11499154B2 (en) 2017-04-10 2022-11-15 Genethon Antisense targeting dynamin 2 and use for the treatment of centronuclear myopathies and neuropathies
WO2018191666A1 (en) 2017-04-14 2018-10-18 Regenxbio Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis ii with recombinant human iduronate-2 sulfatase (ids) produced by human neural or glial cells
US11879133B2 (en) 2017-04-24 2024-01-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for ocular disorders
CN111108198A (zh) 2017-05-05 2020-05-05 沃雅戈治疗公司 治疗亨廷顿病的组合物和方法
CA3061652A1 (en) 2017-05-05 2018-11-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (als)
EP3622073A4 (en) 2017-05-09 2021-01-06 University of Massachusetts METHOD FOR TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS)
IL316926A (en) 2017-05-11 2025-01-01 Univ Pennsylvania Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinosis
CA3099990A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 University Of Massachusetts Viral vector production
CN108103058A (zh) * 2017-05-12 2018-06-01 北京五加和分子医学研究所有限公司 一种i型糖尿病的基因治疗药物
IL306098A (en) 2017-05-24 2023-11-01 Univ Barcelona Autonoma Viral expression vectors containing the coding sequence for FIBROBLAST GROWTH FACTOR 21 (FGF21)
CA3098592A1 (en) 2017-05-31 2018-12-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treating peroxisomal disorders
BR112019025732A2 (pt) 2017-06-06 2020-06-30 University Of Massachusetts vetores de aav auto-reguladores para expressão segura de mecp2 na síndrome de rett
WO2018232149A1 (en) 2017-06-14 2018-12-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for ocular disorders
US10693918B2 (en) 2017-06-15 2020-06-23 Palo Alto Networks, Inc. Radio access technology based security in service provider networks
US10708306B2 (en) 2017-06-15 2020-07-07 Palo Alto Networks, Inc. Mobile user identity and/or SIM-based IoT identity and application identity based security enforcement in service provider networks
US10812532B2 (en) 2017-06-15 2020-10-20 Palo Alto Networks, Inc. Security for cellular internet of things in mobile networks
JOP20190269A1 (ar) 2017-06-15 2019-11-20 Voyager Therapeutics Inc بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون
US11050789B2 (en) 2017-06-15 2021-06-29 Palo Alto Networks, Inc. Location based security in service provider networks
US10721272B2 (en) 2017-06-15 2020-07-21 Palo Alto Networks, Inc. Mobile equipment identity and/or IOT equipment identity and application identity based security enforcement in service provider networks
US10834136B2 (en) 2017-06-15 2020-11-10 Palo Alto Networks, Inc. Access point name and application identity based security enforcement in service provider networks
EP4302768A3 (en) * 2017-06-22 2024-05-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for producing regulatory immune cells and uses thereof
BR112019019015A2 (pt) 2017-06-30 2020-04-14 Univ California vírions de vírus adeno-associado com capsídeos variantes e seus métodos de uso
AU2018298133A1 (en) 2017-07-06 2020-01-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV9-mediated gene therapy for treating mucopolysaccharidosis type I
PL3648783T3 (pl) 2017-07-07 2024-11-18 Genethon Nowe polinukleotydy kodujące ludzkie białko fkrp
CN111132626B (zh) 2017-07-17 2024-01-30 沃雅戈治疗公司 轨迹阵列引导系统
WO2019028306A2 (en) 2017-08-03 2019-02-07 Voyager Therapeutics, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR ADMINISTRATION OF ADENO-ASSOCIATED VIRUSES
EP3665193A1 (en) 2017-08-07 2020-06-17 NBE Therapeutics AG Anthracycline-based antibody drug conjugates having high in vivo tolerability
EP3676373A4 (en) * 2017-08-28 2021-06-09 The Regents of The University of California Adeno-associated virus capsid variants and methods of use thereof
BR112020005436B1 (pt) 2017-09-20 2022-08-02 4D Molecular Therapeutics Inc Proteína do capsídeo de variante do vírus adenoassociado, virion do aav recombinante (raav) infeccioso, composições, composições farmacêuticas e usos de virion de raav ou de composições farmacêuticas
JP7397488B2 (ja) 2017-09-22 2023-12-13 ユニバーシティ オブ マサチューセッツ Ｓｏｄ１二重発現ベクターおよびその使用
WO2019060662A1 (en) 2017-09-22 2019-03-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania GENE THERAPY FOR THE TREATMENT OF MUCOPOLYSACCHARIDOSE TYPE II
MY205041A (en) 2017-09-22 2024-09-29 Genzyme Corp Variant rnai
AU2018338728B2 (en) 2017-09-29 2025-01-02 Centre National De La Recherche Scientifique (Cnrs) Rescue of central and peripheral neurological phenotype of Friedreich's Ataxia by intravenous delivery
WO2019070891A1 (en) * 2017-10-03 2019-04-11 Prevail Therapeutics, Inc. GENE THERAPIES FOR LYSOSOMAL DISORDERS
US12441998B2 (en) 2017-10-12 2025-10-14 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York SLC2A1 lncRNA as a biologic and related treatments and methods
CN111479924B (zh) 2017-10-16 2024-06-14 沃雅戈治疗公司 肌萎缩性侧索硬化症(als)的治疗
US20200237799A1 (en) 2017-10-16 2020-07-30 Voyager Therapeutics, Inc. Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als)
CN111727201A (zh) 2017-10-18 2020-09-29 再生生物股份有限公司 完全人源翻译后修饰的抗体治疗剂
CA3079565A1 (en) 2017-10-18 2019-04-25 Regenxbio Inc. Treatment of ocular diseases and metastatic colon cancer with human post-translationally modified vegf-trap
US10722487B2 (en) 2017-10-18 2020-07-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Glutaminase inhibitor therapy
FI3717636T3 (fi) 2017-11-27 2023-06-01 4D Molecular Therapeutics Inc Adenoassosioidun viruksen kapsidivariantteja ja käyttö angiogeneesin estämisessä
CN111989396A (zh) 2017-11-30 2020-11-24 宾夕法尼亚州大学信托人 用于iiib型粘多糖贮积病的基因疗法
JP7389744B2 (ja) 2017-11-30 2023-11-30 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア ムコ多糖症ｉｉｉａ型のための遺伝子療法
BR112020012336A2 (pt) 2017-12-19 2021-03-30 Akouos, Inc. Administração de anticorpos terapêuticos mediada por aav para o ouvido interno
US10610606B2 (en) 2018-02-01 2020-04-07 Homology Medicines, Inc. Adeno-associated virus compositions for PAH gene transfer and methods of use thereof
US20190256867A1 (en) 2018-02-01 2019-08-22 Homology Medicines, Inc. Adeno-associated virus compositions for restoring pah gene function and methods of use thereof
CN112041437A (zh) 2018-02-19 2020-12-04 同源药物公司 用于恢复f8基因功能的腺相关病毒组合物和其使用方法
US12558434B2 (en) 2018-02-20 2026-02-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions for treatment of wet age-related macular degeneration
MX2020008932A (es) 2018-02-27 2020-10-01 Univ Pennsylvania Novedosos vectores de virus adenoasociado (aav), vectores de aav que tienen una desamidacion reducida de la capside y usos de estos.
WO2019173434A1 (en) 2018-03-06 2019-09-12 Voyager Therapeutics, Inc. Insect cell manufactured partial self-complementary aav genomes
KR20200135433A (ko) 2018-03-23 2020-12-02 유니버시티 오브 매사추세츠 골 장애 치료를 위한 유전자 치료제
MX2020010464A (es) 2018-04-03 2021-01-29 Vectores de virus que evitan anticuerpos.
US12091435B2 (en) 2018-04-03 2024-09-17 Ginkgo Bioworks, Inc. Antibody-evading virus vectors
JP7425738B2 (ja) 2018-04-03 2024-01-31 ギンコ バイオワークス インコーポレイテッド 眼組織を標的とするウイルスベクター
US12054724B2 (en) 2018-04-10 2024-08-06 President And Fellows Of Harvard College AAV vectors encoding clarin-1 or GJB2 and uses thereof
EP3781677A4 (en) 2018-04-16 2022-01-19 University of Massachusetts COMPOSITIONS AND METHODS FOR IMPROVED GENE EDITTING
US12460226B2 (en) 2018-04-16 2025-11-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treating duchenne muscular dystrophy
CA3096293A1 (en) 2018-04-27 2019-10-31 Rocket Pharmaceuticals, Ltd. Gene therapy for cns degeneration
US11472848B2 (en) 2018-04-27 2022-10-18 University Of Massachusetts AAV capsids identified by in vivo library selection
US20210231560A1 (en) 2018-04-29 2021-07-29 Regenxbio Inc. Systems and methods of spectrophotometry for the determination of genome content, capsid content and full/empty ratios of adeno-associated virus particles
CA3098565A1 (en) 2018-04-29 2019-11-07 Claire G. ZHANG Scalable clarification process for recombinant aav production
US20210207168A1 (en) 2018-05-08 2021-07-08 Rutgers, The State University Of New Jersey Aav-compatible laminin-linker polymerization proteins
JP2021522811A (ja) 2018-05-09 2021-09-02 ビオマリン プハルマセウトイカル インコーポレイテッド フェニルケトン尿症の治療方法
TW202005978A (zh) 2018-05-14 2020-02-01 美商拜奧馬林製藥公司 新穎肝靶向腺相關病毒載體
AU2019268330A1 (en) 2018-05-15 2020-11-26 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of Parkinson's disease
TW202015742A (zh) 2018-05-15 2020-05-01 美商航海家醫療公司 投遞腺相關病毒（ａａｖ）之組成物和方法
EP3793686A1 (en) 2018-05-16 2021-03-24 Voyager Therapeutics, Inc. Aav serotypes for brain specific payload delivery
WO2019222444A2 (en) 2018-05-16 2019-11-21 Voyager Therapeutics, Inc. Directed evolution
US12163129B2 (en) 2018-06-08 2024-12-10 University Of Massachusetts Antisense oligonucleotides to restore dysferlin protein expression in dysferlinopathy patient cells
US20220403001A1 (en) 2018-06-12 2022-12-22 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy
US12060567B2 (en) 2018-06-13 2024-08-13 Voyager Therapeutics, Inc. Engineered untranslated regions (UTR) for AAV production
KR102930150B1 (ko) 2018-06-14 2026-02-25 리젠엑스바이오 인크. 재조합 aav 생성을 위한 음이온 교환 크로마토그래피
US20210254103A1 (en) 2018-07-02 2021-08-19 Voyager Therapeutics, Inc. Treatment of amyotrophic lateral sclerosis and disorders associated with the spinal cord
GB201811368D0 (en) 2018-07-11 2018-08-29 Ucb Biopharma Sprl Antibody
CN112512596B (zh) 2018-07-12 2025-12-12 火箭制药有限公司 治疗danon病的基因治疗载体
AU2019304569B2 (en) 2018-07-17 2023-07-06 Helixmith Co., Ltd Treatment of neuropathy with DNA constructs expressing IGF-1 isoforms
MX2021000810A (es) 2018-07-24 2021-04-28 Voyager Therapeutics Inc Sistemas y metodos para producir formulaciones de terapia genetica.
US12188040B2 (en) * 2018-07-30 2025-01-07 Gene Therapy Research Institution Co., Ltd. Method for enhancing gene expression using AAV vector
MX2021001395A (es) 2018-08-03 2021-08-11 Genzyme Corp Arni variante contra alfa-sinucleína.
EP3833745A1 (en) 2018-08-10 2021-06-16 REGENXBIO Inc. Scalable method for recombinant aav production
KR20210102870A (ko) 2018-08-30 2021-08-20 테나야 테라퓨틱스, 인코포레이티드 미오카르딘 및 ascl1을 사용한 심장 세포 재프로그래밍
CA3113470A1 (en) 2018-09-28 2020-04-02 President And Fellows Of Harvard College Mutant reverse tetracycline transactivators for expression of genes
CN113453702A (zh) 2018-09-28 2021-09-28 哈佛大学的校长及成员们 细胞重编程以逆转衰老并促进组织和组织再生
EP3856762A1 (en) 2018-09-28 2021-08-04 Voyager Therapeutics, Inc. Frataxin expression constructs having engineered promoters and methods of use thereof
US12274733B2 (en) 2018-09-28 2025-04-15 President And Fellows Of Harvard College Cellular reprogramming to reverse aging and promote organ and tissue regeneration
JP7534290B2 (ja) 2018-10-01 2024-08-14 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア Ｇｍ１ガングリオシドーシスの治療に有用な組成物
JP2022513318A (ja) 2018-10-01 2022-02-07 ウルトラジェニックス ファーマシューティカル インコーポレイテッド プロピオン酸血症を処置するための遺伝子治療
TW202035689A (zh) 2018-10-04 2020-10-01 美商航海家醫療公司 測量病毒載體粒子的效價及強度之方法
WO2020072844A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Voyager Therapeutics, Inc. Engineered nucleic acid constructs encoding aav production proteins
EP4461814A3 (en) 2018-10-12 2025-02-26 Genzyme Corporation Generation of improved human pah for treatment of severe pku by liver-directed gene replacement therapy
WO2020077165A1 (en) 2018-10-12 2020-04-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for delivery of aav
CN112912518A (zh) 2018-10-15 2021-06-04 再生生物股份有限公司 用于测量复制缺陷型病毒载体和病毒的感染性的方法
CN113166781A (zh) 2018-10-15 2021-07-23 沃雅戈治疗公司 在杆状病毒/Sf9系统中大规模生产rAAV的表达载体
UY38407A (es) 2018-10-15 2020-05-29 Novartis Ag Anticuerpos estabilizadores de trem2
CA3116334A1 (en) 2018-10-22 2020-04-30 University Of Rochester Genome editing by directed non-homologous dna insertion using a retroviral integrase-cas9 fusion protein
EP3870600A1 (en) 2018-10-24 2021-09-01 Obsidian Therapeutics, Inc. Er tunable protein regulation
EP3880255A1 (en) 2018-11-16 2021-09-22 Astellas Pharma Inc. Method for treating muscular dystrophy by targeting utrophin gene
WO2020102645A1 (en) * 2018-11-16 2020-05-22 Asklepios Biopharmaceutical, Inc. Therapeutic adeno-associated virus for treating pompe disease
EP3887522A1 (en) 2018-11-29 2021-10-06 University of Massachusetts Modulation of sptlc1 via recombinant adeno-associated vectors
WO2020140007A1 (en) 2018-12-28 2020-07-02 University Of Rochester Gene therapy for best1 dominant mutations
PL3906066T3 (pl) 2019-01-04 2024-09-02 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Konstrukty do terapii genowej do leczenia choroby wilsona
BR112021013715A2 (pt) 2019-01-14 2021-09-21 University Of Rochester Proteína de fusão, molécula de ácido nucleico, métodos para modular a clivagem, a poliadenilação, ou ambas, de um transcrito de rna, para visualizar rna nuclear e para diminuir o número de rna nuclear ou para clivar rna nuclear, e, uso da proteína de fusão
EP3911410A1 (en) 2019-01-18 2021-11-24 Voyager Therapeutics, Inc. Methods and systems for producing aav particles
KR20210130158A (ko) 2019-01-31 2021-10-29 오레곤 헬스 앤드 사이언스 유니버시티 Aav 캡시드의 전사 의존적 유도 진화를 사용하는 방법
US20220054655A1 (en) 2019-02-22 2022-02-24 University Of Massachusetts Oxr1 gene therapy
BR112021015817A2 (pt) 2019-02-22 2021-10-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Vírus adeno-associado recombinante para tratamento de neurodegeneração com início na idade adulta associado a grn
BR112021016501A2 (pt) 2019-02-25 2021-10-26 Novartis Ag Composições e métodos para tratar distrofia cristalina de bietti
CN113710693B (zh) 2019-02-25 2025-07-15 马萨诸塞大学 Dna结合结构域反式激活因子及其用途
US20220154211A1 (en) 2019-02-25 2022-05-19 Novartis Ag Compositions and methods to treat bietti crystalline dystrophy
TW202045728A (zh) 2019-02-26 2020-12-16 賓州大學委員會 用於治療克拉培氏病之組成物
WO2020176747A1 (en) 2019-02-28 2020-09-03 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Adeno-associated virus vectors for the delivery of therapeutics
JP7637060B2 (ja) 2019-03-04 2025-02-27 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア Ａｋｔ経路を標的とする神経保護遺伝子療法
JP7698583B2 (ja) 2019-03-21 2025-06-25 ギンコ バイオワークス インコーポレイテッド 組換えアデノ随伴ウイルスベクター
JP7635139B2 (ja) 2019-03-25 2025-02-25 ジェネトン オーバーラップａａｖベクターを使用する大きいサイズのクアシジストロフィンの産生
SG11202110607WA (en) 2019-04-01 2021-10-28 Tenaya Therapeutics Inc Adeno-associated virus with engineered capsid
EP3946467A1 (en) 2019-04-03 2022-02-09 REGENXBIO Inc. Gene therapy for eye pathologies
TW202102526A (zh) 2019-04-04 2021-01-16 美商銳進科斯生物股份有限公司 重組腺相關病毒及其用途
DK3953483T3 (da) 2019-04-11 2023-12-18 Regenxbio Inc Fremgangsmåder til størrelseskromatografi til karakterisering af sammensætninger af rekombinant adeno-associeret virus
US12553036B2 (en) 2019-04-12 2026-02-17 University Of Massachusetts GM3 synthase vectors and uses thereof
AU2020258483A1 (en) 2019-04-17 2021-11-11 Evox Therapeutics, Ltd. Compositions of exosomes and AAV
JP7630443B2 (ja) 2019-04-19 2025-02-17 レジェンクスバイオ インコーポレーテッド アデノ随伴ウイルスベクター製剤及び方法
CA3137135A1 (en) 2019-04-19 2020-10-22 University Of Massachusetts Gene therapies for stargardt disease (abca4)
WO2020219868A1 (en) 2019-04-24 2020-10-29 Regenxbio Inc. Fully-human post-translationally modified antibody therapeutics
WO2020219990A1 (en) 2019-04-26 2020-10-29 President And Fellows Of Harvard College Aav vectors encoding mini-pcdh15 and uses thereof
US20220243225A1 (en) 2019-04-29 2022-08-04 Voyager Therapeutics, Inc. SYSTEMS AND METHODS FOR PRODUCING BACULOVIRAL INFECTED INSECT CELLS (BIICs) IN BIOREACTORS
US12516351B2 (en) * 2019-04-29 2026-01-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania AAV capsids and compositions containing same
AU2020270421A1 (en) 2019-05-03 2021-11-18 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of metachromatic leukodystrophy
EP3966227A1 (en) 2019-05-07 2022-03-16 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the vectored augmentation of protein destruction, expression and/or regulation
WO2020236815A1 (en) 2019-05-20 2020-11-26 University Of Massachusetts Minigene therapy
PH12021552887A1 (en) * 2019-05-24 2022-09-05 Regeneron Pharma Modified viral particles and uses thereof
PH12021552592A1 (en) 2019-05-28 2022-06-20 Modalis Therapeutics Corp Method for treating muscular dystrophy by targeting dmpk gene
EP3987024A4 (en) 2019-06-20 2023-11-01 University Of Massachusetts COMPOSITIONS AND METHODS FOR ENHANCED GENOMIC EDITING
EP3994253A1 (en) 2019-07-02 2022-05-11 M6P Therapeutics (Switzerland) LLC Vector compositions and methods of using same for treatment of lysosomal storage disorders
CA3137622A1 (en) 2019-07-10 2021-01-14 Masonic Medical Research Institute Vgll4 with ucp-1 cis-regulatory element and method of use thereof
US20220251567A1 (en) 2019-07-10 2022-08-11 Inserm (Institut National De La Santè Et De La Recherche Médicale) Methods for the treatment of epilepsy
JP7654626B2 (ja) 2019-07-11 2025-04-01 サントル ナショナル ドゥ ラ ルシェルシュ シアンティフィック 化学修飾型アデノ随伴ウイルス
EP3997226A1 (en) 2019-07-11 2022-05-18 Tenaya Therapeutics, Inc. Cardiac cell reprogramming with micrornas and other factors
US10653731B1 (en) * 2019-07-15 2020-05-19 Vigene Biosciences Inc. Recombinantly-modified adeno-associated virus (rAAV) having improved packaging efficiency
US10557149B1 (en) * 2019-07-15 2020-02-11 Vigene Biosciences, Inc. Recombinantly-modified adeno-associated virus helper vectors and their use to improve the packaging efficiency of recombinantly-modified adeno-associated virus
JP2022544015A (ja) 2019-07-23 2022-10-17 ユニバーシティ オブ ロチェスター ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓでの標的化されたＲＮＡ切断
US20220396806A1 (en) 2019-07-26 2022-12-15 Akouos, Inc. Methods of treating hearing loss using a secreted target protein
US20230042103A1 (en) 2019-07-26 2023-02-09 Regenxbio Inc. Engineered nucleic acid regulatory element and methods of uses thereof
WO2021030125A1 (en) 2019-08-09 2021-02-18 Voyager Therapeutics, Inc. Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors
WO2021030764A1 (en) * 2019-08-14 2021-02-18 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Aav capsid variants for gene therapy
EP4022070A1 (en) 2019-08-26 2022-07-06 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
CN114502197A (zh) 2019-08-26 2022-05-13 再生生物股份有限公司 用全人经翻译后修饰的抗VEGF Fab治疗糖尿病性视网膜病变
KR20220070443A (ko) 2019-08-27 2022-05-31 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 반복성 dna와 연관된 장애의 치료용 조성물 및 방법
US20220333133A1 (en) 2019-09-03 2022-10-20 Voyager Therapeutics, Inc. Vectorized editing of nucleic acids to correct overt mutations
WO2021046451A1 (en) 2019-09-06 2021-03-11 Obsidian Therapeutics, Inc. Compositions and methods for dhfr tunable protein regulation
AU2020346062A1 (en) 2019-09-13 2022-03-24 Rutgers, The State University Of New Jersey AAV-compatible laminin-linker polymerization proteins
JP7651562B2 (ja) 2019-09-19 2025-03-26 ジェネトン Ｆｋｒｐの心毒性を軽減する遺伝子治療発現系
WO2021062092A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Massachusetts Institute Of Technology Trans-activated functional rna by strand displacement and uses thereof
WO2021062096A1 (en) 2019-09-26 2021-04-01 Massachusetts Institute Of Technology Microrna-based logic gates and uses thereof
TW202126284A (zh) 2019-09-30 2021-07-16 美商百歐維拉提夫治療公司 慢病毒載體配製物
WO2021067598A1 (en) 2019-10-04 2021-04-08 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Methods for improved therapeutic use of recombinant aav
US20240108669A1 (en) 2019-10-07 2024-04-04 Regenxbio Inc. Adeno-associated virus vector pharmaceutical composition and methods
US20230121437A1 (en) 2019-10-15 2023-04-20 University Of Massachusetts Rna editor-enhanced rna trans-splicing
EP4045664A1 (en) * 2019-10-16 2022-08-24 Wuxi Apptec (Shanghai) Co., Ltd. A novel aav variant
IL292297A (en) 2019-10-17 2022-06-01 Stridebio Inc Adeno-associated viral vectors for treatment of niemann-pick disease type c
CA3161154A1 (en) 2019-11-14 2021-05-20 Biomarin Pharmaceutical Inc. Treatment of hereditary angioedema with liver-specific gene therapy vectors
US20230016983A1 (en) 2019-11-19 2023-01-19 lNSERM (INSTITUT NATIONAL DE LA SANTÉ ET DE LA RECHERCHE MÉDICALE) Antisense oligonucleotides and thier use for the treatment of cancer
EP4065596A2 (en) * 2019-11-28 2022-10-05 RegenxBio Inc. Microdystrophin gene therapy constructs and uses thereof
IL293684A (en) 2019-12-10 2022-08-01 Takeda Pharmaceuticals Co Adeno associated virus vectors for the treatment of hunter disease
KR20220128632A (ko) 2019-12-31 2022-09-21 스완바이오 테라퓨틱스 리미티드 개선된 aav-abcd1 구축물 및 부신백질이영양증 (ald) 및/또는 부신척수신경병증 (amn)의 치료 또는 예방을 위한 용도
TW202140791A (zh) 2020-01-13 2021-11-01 美商霍蒙拉奇醫藥公司 治療苯酮尿症之方法
BR112022014563A2 (pt) 2020-01-22 2022-09-13 Regenxbio Inc Método para tratamento de um sujeito humano diagnosticado com mucopolissacaridose i (mps i)
EP4096631A1 (en) 2020-01-29 2022-12-07 RegenxBio Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis ii with recombinant human iduronate-2-sulfatase (ids) produced by human neural or glial cells
EP4097238A1 (en) 2020-01-29 2022-12-07 REGENXBIO Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis iva
JP2023512071A (ja) 2020-01-30 2023-03-23 ウモジャ バイオファーマ， インコーポレイテッド 二特異性形質導入エンハンサー
CA3165057A1 (en) 2020-02-02 2021-08-05 James M. Wilson Compositions useful for treating gm1 gangliosidosis
US20230073250A1 (en) 2020-02-07 2023-03-09 University Of Rochester Ribozyme-mediated RNA Assembly and Expression
US20230078498A1 (en) 2020-02-07 2023-03-16 University Of Rochester Targeted Translation of RNA with CRISPR-Cas13 to Enhance Protein Synthesis
EP4103724A1 (en) 2020-02-14 2022-12-21 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Gene therapy for treating cdkl5 deficiency disorder
US20230089312A1 (en) 2020-02-25 2023-03-23 University Of Massachusetts Inducible single aav system and uses thereof
TW202142554A (zh) * 2020-02-25 2021-11-16 澳洲兒童醫學研究所 腺相關病毒蛋白殼多肽及載體
CN115552022A (zh) 2020-03-02 2022-12-30 特纳亚治疗股份有限公司 由心肌细胞表达的微rna控制的基因载体
US20240218367A1 (en) 2020-03-27 2024-07-04 University Of Rochester Targeted Destruction of Viral RNA by CRISPR-Cas13
WO2021195525A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 University Of Rochester Crispr-cas13 crrna arrays
CA3175034A1 (en) 2020-03-27 2021-09-30 UCB Biopharma SRL Autonomous knob domain peptides
TW202204377A (zh) 2020-03-31 2022-02-01 麻州大學 蛋白殼變體及其用途
WO2021202532A1 (en) 2020-03-31 2021-10-07 Ultragenyx Pharmaceutical Inc. Gene therapy for treating propionic acidemia
AR122409A1 (es) 2020-04-03 2022-09-07 Biomarin Pharm Inc Tratamiento de la fenilcetonuria con aav y formulaciones terapéuticas
US20230226223A1 (en) 2020-04-10 2023-07-20 Sola Biosciences Llc Compositions and Methods for the Treatment of Protein Aggregation Disorders
EP4135841A1 (en) 2020-04-15 2023-02-22 Voyager Therapeutics, Inc. Tau binding compounds
BR112022021134A2 (pt) 2020-04-20 2023-02-14 Tenaya Therapeutics Inc Vírus adeno-associado com capsídeo projetado
AU2021265088A1 (en) 2020-04-28 2022-11-03 Sola Biosciences Llc Compositions and methods for the treatment of TDP-43 proteinopathies
BR112022021786A2 (pt) 2020-05-12 2023-01-17 Univ Pennsylvania Composições úteis em tratamento de doença de krabbe
EP4162059A1 (en) 2020-05-12 2023-04-12 The Trustees of The University of Pennsylvania Compositions for drg-specific reduction of transgene expression
TW202208406A (zh) 2020-05-13 2022-03-01 美商阿科奧斯公司 用於治療ｋｃｎｑ４相關性聽力損失之組成物及方法
IL298128A (en) 2020-05-13 2023-01-01 Akouos Inc Compositions and methods for treating slc26a4-associated hearing loss
WO2021230385A1 (en) 2020-05-15 2021-11-18 Astellas Pharma Inc. Method for treating muscular dystrophy by targeting utrophin gene
TW202208632A (zh) 2020-05-27 2022-03-01 美商同源醫藥公司 用於恢復ｐａｈ基因功能的腺相關病毒組成物及其使用方法
WO2021247995A2 (en) 2020-06-04 2021-12-09 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating neuropathic pain
CA3183251A1 (en) 2020-06-05 2021-12-09 Sola Biosciences Llc Compositions and methods for the treatment of synucleinopathies
IL299167A (en) 2020-06-17 2023-02-01 Univ Pennsylvania Compositions and methods for treating patients with gene therapy
WO2021255245A2 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Genethon Gene therapy expression system allowing an adequate expression in the muscles and in the heart of sgcg
WO2021262963A1 (en) 2020-06-24 2021-12-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods for the removal of free factor viii from preparations of lentiviral vectors modified to express said protein
CN116194587A (zh) 2020-07-10 2023-05-30 吉尼松公司 一种新的肌肉特异性启动子
WO2022011262A1 (en) 2020-07-10 2022-01-13 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) Methods and compositions for treating epilepsy
BR112023000578A2 (pt) 2020-07-13 2023-05-09 Univ Pennsylvania Composições úteis para tratamento de doença de charcot-marie-tooth
EP4182455A1 (en) 2020-07-15 2023-05-24 University of Rochester Targeted rna cleavage with dcasl3-rnase fusion proteins
WO2022017630A1 (en) 2020-07-23 2022-01-27 Ucl Business Ltd GENE THERAPY VECTOR FOR eEF1A2 AND USES THEREOF
WO2022026409A1 (en) 2020-07-27 2022-02-03 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of neurological disorders related to glucosylceramidase beta deficiency
US20230285596A1 (en) 2020-07-27 2023-09-14 Voyager Therapeutics, Inc Compositions and methods for the treatment of niemann-pick type c1 disease
WO2022032153A1 (en) 2020-08-06 2022-02-10 Voyager Therapeutics, Inc. Cell culture medium for use in producing gene therapy products in bioreactors
KR20230042754A (ko) 2020-08-07 2023-03-29 아미쿠스 세라퓨틱스, 인코포레이티드 소포 표적화 단백질 및 이의 용도
CA3185267A1 (en) 2020-08-07 2022-02-10 Spacecraft Seven, Llc Plakophilin-2 (pkp2) gene therapy using aav vector
CN114075610B (zh) * 2020-08-11 2023-11-17 北京荷塘生华医疗科技有限公司 检测野生型腺相关病毒的通用引物及其应用
CA3188956A1 (en) 2020-08-14 2022-02-17 James M. Wilson Novel aav capsids and compositions containing same
CA3189878A1 (en) 2020-08-19 2022-02-24 Colin O'BANION Adeno-associated virus vectors for treatment of rett syndrome
GB202013194D0 (en) 2020-08-24 2020-10-07 Combigene Ab Gene therapy for lipodystrophy
EP4200429A1 (en) 2020-08-24 2023-06-28 The Trustees of The University of Pennsylvania Viral vectors encoding glp-1 receptor agonist fusions and uses thereof in treating metabolic diseases
IL300622A (en) 2020-08-26 2023-04-01 Univ Pennsylvania Recombinant adeno-associated virus for the treatment of adult-onset GRN-related neurodegeneration
WO2022056000A1 (en) 2020-09-09 2022-03-17 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods for treatment of duchenne muscular dystrophy
JP2023540960A (ja) 2020-09-10 2023-09-27 ルートビヒ－マキシミリアンズ－ウニベルジテート ミュンヘン 操作されたａａｖベクター
US12129287B2 (en) 2020-09-14 2024-10-29 President And Fellows Of Harvard College Recombinant adeno associated virus encoding clarin-1 and uses thereof
WO2022060915A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Regenxbio Inc. Vectorized lanadelumab and administration thereof
EP4214242A1 (en) 2020-09-15 2023-07-26 RegenxBio Inc. Vectorized antibodies for anti-viral therapy
US20230383278A1 (en) 2020-09-18 2023-11-30 The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services Novel adeno-associated viral (aav) vectors to treat hereditary methylmalonic acidemia (mma) caused by methylmalonyl-coa mutase (mmut) deficiency
US11401531B2 (en) 2020-09-24 2022-08-02 University Of Massachusetts AAV vectors encoding NF1 and uses thereof
JP2023544165A (ja) 2020-10-01 2023-10-20 ジェンザイム・コーポレーション 肝臓に向けられた遺伝子補充療法によってｐｋｕを処置するためのヒトｐａｈ発現カセット
US20240024508A1 (en) 2020-10-07 2024-01-25 Regenxbio Inc. Formulations for suprachoroidal administration such as high viscosity formulations
WO2022076591A1 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Regenxbio Inc. Formulations for suprachoroidal administration such as formulations with aggregate formation
MX2023003699A (es) 2020-10-07 2023-04-21 Regenxbio Inc Virus adenoasociados para el suministro ocular de genoterapia.
IL301947A (en) 2020-10-07 2023-06-01 Regenxbio Inc Formulations for suprachoroidal administration such as gel formulations
WO2022076750A2 (en) 2020-10-07 2022-04-14 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for cns or muscle delivery
KR20230083287A (ko) 2020-10-07 2023-06-09 리젠엑스바이오 인크. Cln2 질환의 안구 징후에 대한 유전자 요법
AU2021356684A1 (en) 2020-10-09 2023-05-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of fabry disease
US11781156B2 (en) 2020-10-09 2023-10-10 Tenaya Therapeutics, Inc. Plakophillin-2 gene therapy methods and compositions
CN115698304A (zh) 2020-10-09 2023-02-03 特纳亚治疗股份有限公司 亲斑蛋白-2基因疗法的方法和组合物
US20230383313A1 (en) 2020-10-18 2023-11-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Improved adeno-associated virus (aav) vector and uses therefor
WO2022094157A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 Regenxbio Inc. Vectorized anti-cgrp and anti-cgrpr antibodies and administration thereof
TW202233841A (zh) 2020-10-28 2022-09-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 用於眼適應症之載體化抗ＴＮＦ－α抗體
WO2022094078A1 (en) 2020-10-28 2022-05-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of rett syndrome
CN116457373A (zh) 2020-10-29 2023-07-18 再生生物股份有限公司 用于眼部适应症的载体化TNF-α拮抗剂
EP4236974A2 (en) 2020-10-29 2023-09-06 RegenxBio Inc. Vectorized factor xii antibodies and administration thereof
WO2022098933A1 (en) 2020-11-06 2022-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods for treatment of dm1 with slucas9 and sacas9
CN112322791B (zh) * 2020-11-27 2023-10-27 福建省农业科学院畜牧兽医研究所 一种新型鸭依赖属病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒
EP4256065A2 (en) 2020-12-01 2023-10-11 The Trustees of The University of Pennsylvania Novel compositions with tissue-specific targeting motifs and compositions containing same
AU2021391433A1 (en) 2020-12-01 2023-06-22 Akouos, Inc. Anti-vegf antibody constructs and related methods for treating vestibular schwannoma associated symptoms
KR20230128001A (ko) 2020-12-01 2023-09-01 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 엔젤만 증후군의 치료를 위한 조성물 및 이의 용도
KR20230120128A (ko) 2020-12-16 2023-08-16 리젠엑스바이오 인크. 재조합 바이러스 입자의 생산 방법
JP2024500786A (ja) 2020-12-29 2024-01-10 アコーオス インコーポレイテッド Ｃｌｒｎ１関連難聴及び／または視力低下を治療するための組成物及び方法
TW202241943A (zh) 2020-12-29 2022-11-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 Tau特異性抗體基因療法組合物、方法及其用途
CN116981697A (zh) 2021-01-14 2023-10-31 森迪生物科学公司 可分泌有效载荷调节
CA3205209A1 (en) 2021-01-21 2022-07-28 Regenxbio Inc. Improved production of recombinant polypeptides and viruses
WO2022159722A1 (en) 2021-01-22 2022-07-28 University Of Massachusetts Use of novel mirna-binding site cassettes for antigen-presenting cell detargeting of transgene expression by raav gene therapy vectors
US20240141375A1 (en) 2021-01-27 2024-05-02 Umoja Biopharma, Inc. Lentivirus for generating cells expressing anti-cd19 chimeric antigen receptor
EP4284335A1 (en) 2021-02-01 2023-12-06 RegenxBio Inc. Gene therapy for neuronal ceroid lipofuscinoses
WO2022173605A2 (en) 2021-02-10 2022-08-18 Regenxbio Inc. Treatment of mucopolysaccharidosis ii with recombinant human iduronate-2-sulfatase (ids)
GB202101958D0 (en) 2021-02-12 2021-03-31 Ucl Business Ltd Gene therapy for dopamine transporter deficiency syndrome
AR124981A1 (es) 2021-02-26 2023-05-24 Takeda Pharmaceuticals Co Composición y métodos para el tratamiento de la enfermedad de fabry
WO2022182959A1 (en) 2021-02-26 2022-09-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods for treatment of myotonic dystrophy type 1 with crispr/slucas9
TW202302848A (zh) 2021-02-26 2023-01-16 美商維泰克斯製藥公司 以crispr/sacas9治療第1型肌強直性營養不良之組合物及方法
EP4301768A2 (en) 2021-03-03 2024-01-10 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
US20240141378A1 (en) 2021-03-03 2024-05-02 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
US20240159718A1 (en) 2021-03-22 2024-05-16 Genzyme Corporation Size exclusion chromatography analysis of empty and full aav capsids
WO2022204476A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Nucleotide editing to reframe dmd transcripts by base editing and prime editing
MX2023012052A (es) 2021-04-12 2024-03-15 Univ Pennsylvania Composiciones útiles para tratar la atrofia muscular espinal y bulbar (sbma).
EP4334334A1 (en) 2021-04-23 2024-03-13 The Trustees of The University of Pennsylvania Novel compositions with brain-specific targeting motifs and compositions containing same
AU2022261125A1 (en) 2021-04-23 2023-11-23 University Of Rochester Genome editing by directed non-homologous dna insertion using a retroviral integrase-cas fusion protein and methods of treatment
EP4330409A4 (en) 2021-04-26 2025-04-09 University of Massachusetts GENE THERAPIES FOR STARGARDT'S DISEASE (ABCA4)
WO2022229851A1 (en) 2021-04-26 2022-11-03 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for using slucas9 scaffold sequences
EP4329821A1 (en) 2021-04-26 2024-03-06 RegenxBio Inc. Microdystrophin gene therapy administration for treatment of dystrophinopathies
US20240218397A1 (en) 2021-05-04 2024-07-04 Regenxbio Inc. Novel aav vectors and methods and uses thereof
WO2022234519A1 (en) 2021-05-05 2022-11-10 Crispr Therapeutics Ag Compositions and methods for using sacas9 scaffold sequences
US20240358857A1 (en) 2021-05-11 2024-10-31 Regenxbio Inc. Treatment of duchenne muscular dystrophy and combinations thereof
WO2022272296A2 (en) 2021-06-25 2022-12-29 Homology Medicines, Inc. Adeno-associated virus packaging systems
EP4363437A1 (en) 2021-07-01 2024-05-08 Amicus Therapeutics, Inc. Neurotensin variants and tagged proteins comprising neurotensin or sortilin propeptide
US20240316102A1 (en) 2021-07-01 2024-09-26 Indapta Therapeutics, Inc. Engineered natural killer (nk) cells and related methods
JP2024523707A (ja) 2021-07-08 2024-06-28 テナヤ セラピューティクス， インコーポレイテッド 遺伝子治療のための最適化された発現カセット
WO2023004331A1 (en) 2021-07-19 2023-01-26 New York University Auf1 combination therapies for treatment of muscle degenerative disease
AU2022318664A1 (en) 2021-07-30 2024-02-29 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating expression of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2)
WO2023010133A2 (en) 2021-07-30 2023-02-02 Tune Therapeutics, Inc. Compositions and methods for modulating expression of frataxin (fxn)
WO2023018637A1 (en) 2021-08-09 2023-02-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Gene editing of regulatory elements
WO2023019226A1 (en) 2021-08-11 2023-02-16 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy
AU2022325955A1 (en) 2021-08-11 2024-02-08 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy to reduce instant blood mediated inflammatory reactions
KR20240073006A (ko) 2021-08-11 2024-05-24 사나 바이오테크놀로지, 인크. 동종이계 세포 요법을 위한 유전자 변형된 1차 세포
AU2022325231A1 (en) 2021-08-11 2024-02-08 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells for allogeneic cell therapy to reduce complement-mediated inflammatory reactions
EP4396237A4 (en) 2021-08-31 2025-11-19 Scout Bio Inc Antigen-binding molecules and their uses
WO2023039444A2 (en) 2021-09-08 2023-03-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exon 51 for treatment of duchenne muscular dystrophy
AU2022356427A1 (en) 2021-09-30 2024-05-09 Akouos, Inc. Compositions and methods for treating kcnq4-associated hearing loss
TW202332472A (zh) 2021-10-01 2023-08-16 美商拜奧馬林製藥公司 利用ａａｖ基因療法載體進行之遺傳性血管水腫治療及治療性調配物
US20240384298A1 (en) 2021-10-02 2024-11-21 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Novel aav capsids and compositions containing same
WO2023060113A1 (en) 2021-10-05 2023-04-13 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
CN118202060A (zh) 2021-10-05 2024-06-14 再生生物股份有限公司 用于重组aav生产的组合物和方法
WO2023060272A2 (en) 2021-10-07 2023-04-13 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for cns tropic delivery
US20250001006A1 (en) 2021-10-07 2025-01-02 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for targeted delivery
US20250042958A1 (en) 2021-10-08 2025-02-06 Sola Biosciences Llc Compositions and methods for the treatment of proteopathies
EP4413023A1 (en) 2021-10-08 2024-08-14 SOLA Biosciences LLC Compositions and methods for the treatment of p53-mediated cancers
IL311786A (en) 2021-10-21 2024-05-01 Vertex Pharma hypoimmune cells
WO2023077092A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Regenxbio Inc. Engineered nucleic acid regulatory elements and methods and uses thereof
US20250295807A1 (en) 2021-11-15 2025-09-25 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions for drg-specific reduction of transgene expression
EP4437113A1 (en) 2021-11-23 2024-10-02 University of Massachusetts Gene therapy for spinal muscular atrophy
WO2023102442A1 (en) 2021-11-30 2023-06-08 Jaguar Gene Therapy, Llc Gene therapy methods for treatment of diabetes
WO2023102517A1 (en) 2021-12-02 2023-06-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of fabry disease
MX2024007301A (es) 2021-12-17 2024-06-26 Tafalgie Therapeutics Peptidos y metodos para usar en el tratamiento del dolor.
AU2022423978A1 (en) 2021-12-28 2024-07-18 Chengdu Origen Biotechnology Co., Ltd. Modified aav capsid protein and use thereof
WO2023133593A2 (en) * 2022-01-10 2023-07-13 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Aav5 capsid variants
US20250177495A1 (en) 2022-01-10 2025-06-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions useful in treatment of metachromatic leukodystrophy
EP4463135A2 (en) 2022-01-10 2024-11-20 Sana Biotechnology, Inc. Methods of ex vivo dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
AR128239A1 (es) 2022-01-10 2024-04-10 Univ Pennsylvania Composiciones y métodos útiles para el tratamiento de trastornos mediados por c9orf72
EP4215614A1 (en) 2022-01-24 2023-07-26 Dynacure Combination therapy for dystrophin-related diseases
KR20240137067A (ko) 2022-01-25 2024-09-19 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 개선된 심장 형질도입 및 간의 탈표적화를 위한 aav 캡시드
EP4473097A1 (en) 2022-02-02 2024-12-11 Sana Biotechnology, Inc. Methods of repeat dosing and administration of lipid particles or viral vectors and related systems and uses
CA3243517A1 (en) 2022-02-02 2023-08-10 Akouos, Inc. Anti-VEGF Antibody Constructions and Related Methods for the Treatment of Symptoms Associated with Acoustic Neuroma
WO2023154693A1 (en) 2022-02-08 2023-08-17 Voyager Therapeutics, Inc. Aav capsid variants and uses thereof
AU2023220128A1 (en) 2022-02-17 2024-08-22 Sana Biotechnology, Inc. Engineered cd47 proteins and uses thereof
WO2023156530A1 (en) 2022-02-17 2023-08-24 Lysogene Gene therapy for neurodegenerative diseases
WO2023172926A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exons for treatment of duchenne muscular dystrophy
EP4490292A1 (en) 2022-03-08 2025-01-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Precise excisions of portions of exon 44, 50, and 53 for treatment of duchenne muscular dystrophy
WO2023173123A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Sana Biotechnology, Inc. Genetically modified cells and compositions and uses thereof
EP4493226A1 (en) 2022-03-13 2025-01-22 RegenxBio Inc. Modified muscle-specific promoters
US20250213727A1 (en) 2022-03-25 2025-07-03 Regenxbio Inc. Dominant-negative tumor necrosis factor alpha adeno-associated virus gene therapy
EP4504950A1 (en) 2022-04-01 2025-02-12 Takeda Pharmaceutical Company Limited Gene therapy for diseases with cns manifestations
CN119317645A (zh) 2022-04-06 2025-01-14 宾夕法尼亚州大学信托人 用于治疗her2阳性转移性乳腺癌及其他癌症的组合物和方法
WO2023196851A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 President And Fellows Of Harvard College Reversing aging of the central nervous system
CN119234040A (zh) 2022-04-06 2024-12-31 建新公司 Dm-1肌强直性营养不良的靶向基因疗法
TW202345913A (zh) 2022-04-06 2023-12-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 用於脈絡膜上投與之調配物諸如凝膠調配物
TW202404651A (zh) 2022-04-06 2024-02-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 用於脈絡膜上投與之調配物諸如形成聚集體之調配物
WO2023196892A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Passive immunization with anti- aav neutralizing antibodies to prevent off-target transduction of intrathecally delivered aav vectors
CA3247507A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 Regenxbio Inc. PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING A RECOMMENDED ADENO-ASSOCIATED VIRUS (AAV) VECTOR WITH AN EXPRESSION CASSETTE ENCODED BY A TRANSGENE FOR SUPRACHOROID ADMINISTRATION
JP2025513835A (ja) 2022-04-11 2025-04-30 サントル ナショナル ドゥ ラ ルシェルシュ シアンティフィック 化学修飾型アデノ随伴ウイルス
EP4508062A1 (en) 2022-04-11 2025-02-19 Tenaya Therapeutics, Inc. Adeno-associated virus with engineered capsid
KR20250005214A (ko) 2022-04-13 2025-01-09 우니버시타트 아우토노마 데 바르셀로나 클로토 단백질을 발현시키는 유전자 요법을 통한 신경근 질환의 치료
WO2023201277A1 (en) 2022-04-14 2023-10-19 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses for cns tropic delivery
EP4507741A1 (en) 2022-04-14 2025-02-19 RegenxBio Inc. Gene therapy for treating an ocular disease
CA3249261A1 (en) 2022-04-18 2023-10-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated COMPOSITIONS AND PROCESSES TO IMPROVE ADENE-ASSOCIATED VIRUS (AAV) THERAPY AND REDUCE AAV TROPISM TO THE LIVER
US20250288697A1 (en) 2022-05-03 2025-09-18 Regenxbio Inc. Vectorized anti-tnf-alpha inhibitors for ocular indications
TW202400803A (zh) 2022-05-03 2024-01-01 美商銳進科斯生物股份有限公司 載體化抗補體抗體與補體劑及其投與
CA3255627A1 (en) 2022-05-06 2023-11-09 Novartis Ag NEW VP2 FUSION POLYPEPTIDES OF RECOMBINANT AAV
AR129441A1 (es) 2022-05-25 2024-08-28 Tafalgie Therapeutics Péptidos y métodos para el tratamiento del dolor
WO2023239627A2 (en) 2022-06-08 2023-12-14 Regenxbio Inc. Methods for recombinant aav production
WO2023240236A1 (en) 2022-06-10 2023-12-14 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of spinal muscular atrophy related disorders
EP4544051A2 (en) 2022-06-24 2025-04-30 Tune Therapeutics, Inc. Compositions, systems, and methods for reducing low-density lipoprotein through targeted gene repression
WO2024006770A1 (en) * 2022-06-27 2024-01-04 Astellas Gene Therapies, Inc. Compositions and methods for the treatment of myotonic dystrophies
TW202417467A (zh) 2022-06-28 2024-05-01 美商航海家醫療公司 Ａａｖ蛋白殼變異體及其用途
CA3259982A1 (en) 2022-06-30 2024-01-04 Indapta Therapeutics, Inc. COMBINATION OF MODIFIED NATURAL KILLER (NK) CELLS AND ANTIBODY THERAPY AND ASSOCIATED METHODS
AR129843A1 (es) 2022-07-06 2024-10-02 Voyager Therapeutics Inc Variantes de la cápside de aav y usos de estas
CA3261865A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Tune Therapeutics, Inc. TARGETED TRANSCRIPTIONAL ACTIVATION COMPOSITIONS, SYSTEMS AND METHODS
WO2024020352A1 (en) 2022-07-18 2024-01-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Tandem guide rnas (tg-rnas) and their use in genome editing
EP4558149A1 (en) 2022-07-21 2025-05-28 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Methods and compositions for treating chronic pain disorders
WO2024026377A1 (en) 2022-07-27 2024-02-01 Sana Biotechnology, Inc. Methods of transduction using a viral vector and inhibitors of antiviral restriction factors
CN115354049A (zh) * 2022-07-29 2022-11-18 中国科学院深圳先进技术研究院 一种基因递送系统在将目的基因经静脉注射递送至肝脏的应用
US20260055144A1 (en) 2022-08-24 2026-02-26 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses and uses thereof
TW202413648A (zh) 2022-08-25 2024-04-01 日商武田藥品工業股份有限公司 用於治療法布立氏病（ｆａｂｒｙ ｄｉｓｅａｓｅ）之組合物及方法
WO2024054983A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Voyager Therapeutics, Inc. Controlled expression of viral proteins
TW202421788A (zh) 2022-09-22 2024-06-01 美商拜奧馬林製藥公司 用ａａｖ基因療法載體治療致心律不整性心肌病
TW202417631A (zh) 2022-09-22 2024-05-01 美商拜奧馬林製藥公司 用ａａｖ基因治療載體治療心肌病
US20260034250A1 (en) 2022-09-30 2026-02-05 Regenxbio Inc. Treatment of ocular diseases with recombinant viral vectors encoding anti-vegf fab
WO2024081746A2 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Regenxbio Inc. Engineered nucleic acid regulatory elements and methods and uses thereof
WO2024105638A1 (en) 2022-11-18 2024-05-23 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Recombinant aav vectors and methods for treatment of hunter syndrome
WO2024130070A2 (en) 2022-12-17 2024-06-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Recombinant aav capsids with cardiac- and skeletal muscle- specific targeting motifs and uses thereof
KR20250135916A (ko) 2022-12-17 2025-09-15 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실베니아 심장 및 골격근 특이적 표적화 모티프를 갖는 재조합 aav 돌연변이체 벡터 및 이를 포함하는 조성물
IT202200026595A1 (it) 2022-12-22 2024-06-22 Fond Telethon Ets Nuovi inibitori di regolatori epigenetici
WO2024146935A1 (en) 2023-01-06 2024-07-11 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Intravenous administration of antisense oligonucleotides for the treatment of pain
US12252518B2 (en) 2023-01-06 2025-03-18 Life Biosciences, Inc. Methods of treating non-arteritic anterior ischemic optic neuropathy
WO2024151541A1 (en) 2023-01-09 2024-07-18 Sana Biotechnology, Inc. Type-1 diabetes autoimmune mouse
JP2026504074A (ja) 2023-01-12 2026-02-03 ナント・ユニヴェルシテ 化学修飾されたアデノ随伴ウイルス
WO2024163678A2 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Tune Therapeutics, Inc. Fusion proteins and systems for targeted activation of frataxin (fxn) and related methods
WO2024163683A2 (en) 2023-02-01 2024-08-08 Tune Therapeutics, Inc. Systems, compositions, and methods for modulating expression of methyl-cpg binding protein 2 (mecp2) and x-inactive specific transcript (xist)
WO2024163012A1 (en) 2023-02-02 2024-08-08 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of neurological disorders related to glucosylceramidase beta deficiency
CN121195072A (zh) 2023-02-03 2025-12-23 詹森药业有限公司 用于帕金森病的基因治疗载体
GB202302480D0 (en) 2023-02-22 2023-04-05 Drishti Discoveries Ltd shRNA for the treatment of disease
CN116286988A (zh) * 2023-03-03 2023-06-23 西咸新区沣厚原创医药科技有限公司 一种稳定表达冠状病毒3cl蛋白酶的腺相关病毒体系、动物模型及构建方法和应用
WO2024192281A2 (en) 2023-03-15 2024-09-19 Regenxbio Inc. Exon skipping gene therapy constructs, vectors and uses thereof
WO2024196855A2 (en) 2023-03-17 2024-09-26 University Of Rochester Ribozyme-mediated rna assembly and expression
WO2024211780A1 (en) 2023-04-07 2024-10-10 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
WO2024215653A1 (en) 2023-04-10 2024-10-17 Tenaya Therapeutics, Inc. Guide rnas, vectors, and virions for targeting mutations in the pln gene
WO2024215655A1 (en) 2023-04-10 2024-10-17 Tenaya Therapeutics, Inc. Cardioprotective bag3 therapies
WO2024216244A2 (en) 2023-04-13 2024-10-17 Regenxbio Inc. Targeting aav capsids, methods of manufacturing and using same
CN116622908B (zh) * 2023-04-13 2024-02-06 武汉珈创生物技术股份有限公司 快速检测野生型腺相关病毒的引物探针、试剂盒及方法和应用
TW202509211A (zh) 2023-04-26 2025-03-01 法商賽諾菲公司 宿主細胞系以及鑑定和使用該等宿主細胞系之方法
WO2024228938A1 (en) * 2023-05-01 2024-11-07 St. Jude Children's Research Hospital, Inc. Modified aav p5 promoter for improved vector titer and purity
EP4704867A1 (en) 2023-05-03 2026-03-11 Sana Biotechnology, Inc. Methods of dosing and administration of engineered islet cells
CN121399470A (zh) 2023-05-03 2026-01-23 马尼福尔德生物技术有限公司 用于高通量蛋白质递送、筛选和检测的方法和组合物
WO2024233529A2 (en) 2023-05-07 2024-11-14 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
EP4709406A2 (en) 2023-05-11 2026-03-18 University Hospitals Cleveland Medical Center Anxiolytic therapy
WO2024233791A1 (en) 2023-05-11 2024-11-14 Seelos Therapeutics, Inc. Methods of treating neurodegenerative disorders
AU2024271004A1 (en) 2023-05-16 2026-01-15 Regenxbio Inc. Vectorized anti-complement antibodies and administration thereof
WO2024238859A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 Regenxbio Inc. Vectorized c5 inhibitor agents and administration thereof
WO2024238853A1 (en) 2023-05-16 2024-11-21 Regenxbio Inc. Adeno-associated viruses for ocular delivery of gene therapy
WO2024243236A2 (en) 2023-05-22 2024-11-28 Sana Biotechnology, Inc. Methods of delivery of islet cells and related methods
WO2024241176A1 (en) 2023-05-24 2024-11-28 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Recombinant aav vectors and methods for treatment of diseases with central nervous system disorders
CN121358869A (zh) 2023-05-25 2026-01-16 朱诺治疗学股份有限公司 Aav纯化方法
WO2024258961A1 (en) 2023-06-12 2024-12-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Aav gene therapy for mucopolysaccharidosis iiib
TW202516019A (zh) 2023-06-29 2025-04-16 賓州大學委員會 具中樞神經系統靶向模體的突變aav及含有其之組成物
WO2025008406A1 (en) 2023-07-04 2025-01-09 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of cancer
WO2025017168A1 (en) 2023-07-19 2025-01-23 Genethon Novel optimized utrophin micro-genes
WO2025017169A1 (en) 2023-07-20 2025-01-23 Genethon Novel mididystrophins
WO2025035143A1 (en) 2023-08-10 2025-02-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of spinal muscular atrophy
WO2025038430A1 (en) 2023-08-16 2025-02-20 Voyager Therapeutics, Inc. Aav capsid variants and uses thereof
WO2025072604A1 (en) 2023-09-28 2025-04-03 University Of Rochester Rna-editing gene therapy approaches for treating myotonic dystrophy type 1 (dm1)
WO2025075963A1 (en) 2023-10-02 2025-04-10 Regenxbio Inc. Methods and formulations for treating mucopolysaccharidosis ii-associated hearing loss with recombinant human iduronate-2-sulfatase
WO2025080780A1 (en) 2023-10-10 2025-04-17 University Of Rochester Delivery and expression of prime editing crispr systems
WO2025090962A1 (en) 2023-10-25 2025-05-01 Regenxbio Inc. Compositions and methods for recombinant aav production
WO2025090858A1 (en) 2023-10-27 2025-05-01 Biogen Ma Inc. Methods for identifying aav capsid variants with desired characteristics
WO2025102034A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for barth syndrome
WO2025106374A1 (en) 2023-11-13 2025-05-22 Juno Therapeutics, Inc. Aav production method
WO2025106661A1 (en) 2023-11-14 2025-05-22 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions with cardiac and skeletal musclespecific targeting motifs and uses thereof
WO2025108407A2 (en) 2023-11-23 2025-05-30 Neuexcell Therapeutics (Suzhou) Co., Ltd. Gene therapy compositions and methods for treating glioma
WO2025113676A1 (en) 2023-11-29 2025-06-05 Neuexcell Therapeutics (Suzhou) Co., Ltd. Compositions and methods for treating stroke in primates
WO2025128817A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 Genzyme Corporation Artificial micrornas targeting tau
WO2025129157A1 (en) 2023-12-15 2025-06-19 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for treatment of canavan disease
WO2025137219A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Voyager Therapeutics, Inc. Compositions and methods for the treatment of disorders related to dystrophia myotonica protein kinase
WO2025147436A1 (en) 2024-01-03 2025-07-10 Voyager Therapeutics, Inc. Aav capsid variants and uses thereof
TW202548014A (zh) 2024-01-26 2025-12-16 美商健臻公司 靶向亨丁頓舞蹈症之人工ｍｉｃｒｏｒｎａ
WO2025160429A1 (en) 2024-01-26 2025-07-31 Genzyme Corporation Artificial micrornas targeting snca
WO2025179007A1 (en) * 2024-02-21 2025-08-28 The Regents Of The University Of California Adeno-associated virus compositions and methods of use thereof for human cells
TW202548022A (zh) 2024-03-03 2025-12-16 美商帕西奇生物公司 用於治療神經退化性病症之重組腺相關病毒
WO2025217214A2 (en) 2024-04-08 2025-10-16 Regenxbio Inc. Recombinant adeno-associated viruses and uses thereof
TW202548025A (zh) 2024-04-08 2025-12-16 美商銳進科斯生物股份有限公司 載體化抗補體抗體與補體劑及其投與
WO2025214477A1 (en) 2024-04-12 2025-10-16 Skyline Therapeutics (Shanghai) Co., Ltd. Treatment of genetic cardiomyopathies with aav gene therapy vectors
CN118459608B (zh) * 2024-04-26 2025-01-24 泰州博莱得利生物科技有限公司 犬细小病毒特异性免疫制剂、制备方法和应用
WO2025237990A1 (en) 2024-05-14 2025-11-20 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Antisense oligonucleotides and their use for the treatment of pulmonary fibrosis
WO2026006341A1 (en) 2024-06-24 2026-01-02 Regenxbio Inc. Microdystrophin gene therapy administration for treatment of dystrophinopathies
CN118460614B (zh) * 2024-07-05 2025-03-11 凌意(杭州)生物科技有限公司 一种腺相关病毒Cap蛋白的表达框
WO2026035687A1 (en) 2024-08-05 2026-02-12 University Of Rochester Compositions and methods for stitchr-mediated full-length scn5a expression in vivo
WO2026055342A1 (en) 2024-09-04 2026-03-12 Arsenal Biosciences, Inc. Synthetic pathway activators
CN120249230B (zh) * 2025-06-05 2025-11-07 鼐济医药科技(杭州)有限公司 一种用于同时生产多种重组腺相关病毒的方法
CN121142059B (zh) * 2025-11-17 2026-02-17 吉林农业大学 一种基于dia质谱技术评估微塑料神经毒性的方法及系统

Family Cites Families (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8929110D0 (en) * 1989-12-22 1990-02-28 3I Res Expl Ltd Polypeptides and dna encoding therefor
US5449616A (en) 1990-05-23 1995-09-12 University Of Iowa Research Foundation Nucleic acid encoding dystrophin-associated protein
US5173414A (en) * 1990-10-30 1992-12-22 Applied Immune Sciences, Inc. Production of recombinant adeno-associated virus vectors
CA2046745A1 (en) 1991-07-10 1993-01-11 Isaac Neuman Article including a container containing at least one precious stone
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
US5478745A (en) 1992-12-04 1995-12-26 University Of Pittsburgh Recombinant viral vector system
US5658785A (en) 1994-06-06 1997-08-19 Children's Hospital, Inc. Adeno-associated virus materials and methods
US6204059B1 (en) 1994-06-30 2001-03-20 University Of Pittsburgh AAV capsid vehicles for molecular transfer
US5856152A (en) * 1994-10-28 1999-01-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV vector and methods of use therefor
US6001650A (en) * 1995-08-03 1999-12-14 Avigen, Inc. High-efficiency wild-type-free AAV helper functions
CA2230758A1 (en) * 1995-09-08 1997-03-13 Genzyme Corporation Improved aav vectors for gene therapy
ATE264398T1 (de) * 1995-12-01 2004-04-15 Crucell Holland Bv Regulierte expression von proteinen in stabil transformierten säugetierzellen
US20020037867A1 (en) * 1999-02-26 2002-03-28 James M. Wilson Method for recombinant adeno-associated virus-directed gene therapy
US5866552A (en) * 1996-09-06 1999-02-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for expressing a gene in the absence of an immune response
AU4255397A (en) 1996-09-06 1998-03-26 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Chimpanzee adenovirus vectors
EP0950111A1 (en) 1996-09-06 1999-10-20 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods using cre-lox for production of recombinant adeno-associated viruses
EP0931158A1 (en) 1996-09-06 1999-07-28 The Trustees Of The University Of Pennsylvania An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase
CN1233291A (zh) * 1996-09-06 1999-10-27 宾西法尼亚大学托管会 重组腺伴随病毒定向基因治疗的方法
EP0932694A2 (en) * 1996-09-11 1999-08-04 THE UNITED STATES GOVERNMENT as represented by THE DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES Aav4 vector and uses thereof
EP0938578B1 (en) * 1996-12-05 2004-02-04 Crucell Holland B.V. Genetic modification of primate hemopoietic repopulating stem cells
US6039942A (en) * 1996-12-20 2000-03-21 Novo Nordick A/S Phytase polypeptides
US6156303A (en) 1997-06-11 2000-12-05 University Of Washington Adeno-associated virus (AAV) isolates and AAV vectors derived therefrom
US6251677B1 (en) 1997-08-25 2001-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof
CA2303768C (en) * 1997-09-19 2009-11-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and vector constructs useful for production of recombinant aav
EP1015619A1 (en) * 1997-09-19 2000-07-05 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Methods and cell line useful for production of recombinant adeno-associated viruses
WO1999015677A1 (en) 1997-09-19 1999-04-01 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for gene transfer using bcl2 and compositions useful therein
US6953690B1 (en) 1998-03-20 2005-10-11 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for helper-free production of recombinant adeno-associated viruses
DE69922934T2 (de) 1998-03-20 2005-12-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Zusammensetzungen und Verfahren zur helfer-freien Herstellung von rekombinanten Adeno-assoziierten Viren
DE69939169D1 (de) 1998-05-28 2008-09-04 Us Gov Health & Human Serv Aav5 vektoren und deren verwendung
WO2000011140A1 (en) 1998-08-20 2000-03-02 The Wistar Institute Of Anatomy And Biology Methods of augmenting mucosal immunity through systemic priming and mucosal boosting
US6759237B1 (en) * 1998-11-05 2004-07-06 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus serotype 1 nucleic acid sequences, vectors and host cells containing same
PT1127150E (pt) * 1998-11-05 2007-08-22 Univ Pennsylvania ''sequências de ácido nucleico do vírus adeno associado do serotipo 1, vectores e células hospedeiras que as contêm''
US6387368B1 (en) * 1999-02-08 2002-05-14 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Hybrid adenovirus-AAV virus and methods of use thereof
JP4693244B2 (ja) * 1999-03-18 2011-06-01 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 組換えアデノ随伴ウイルスのヘルパー無しの生産のための組成物および方法
AU2409200A (en) 1999-06-02 2000-12-28 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Compositions and methods useful for production of recombinant viruses which require helper viruses
AU781478B2 (en) * 1999-08-20 2005-05-26 Johns Hopkins University School Of Medicine, The Methods and compositions for the construction and use of fusion libraries
US6365394B1 (en) * 1999-09-29 2002-04-02 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Cell lines and constructs useful in production of E1-deleted adenoviruses in absence of replication competent adenovirus
EP1218035A2 (en) * 1999-09-29 2002-07-03 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Rapid peg-modification of viral vectors
WO2001040455A2 (en) 1999-12-03 2001-06-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for increasing packaging and yields of recombinant adenoviruses using multiple packaging signals
US6821512B1 (en) 1999-12-03 2004-11-23 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for increasing packaging and yield of recombinant adenoviruses using multiple packaging signals
US20020045264A1 (en) * 2000-03-14 2002-04-18 During Matthew J. Production of chimeric capsid vectors
US6468524B1 (en) * 2000-03-22 2002-10-22 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services AAV4 vector and uses thereof
US6855314B1 (en) 2000-03-22 2005-02-15 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services AAV5 vector for transducing brain cells and lung cells
JP2004514407A (ja) 2000-04-28 2004-05-20 ザ・トラステイーズ・オブ・ザ・ユニバーシテイ・オブ・ペンシルベニア 異種キャプシド中にシュードタイピングされたａａｖ５キャプシドおよびａａｖ５ベクターを含む組換えａａｖベクター
JP2004520812A (ja) * 2000-08-30 2004-07-15 ハプロゲン・エルエルシー 対立遺伝子を決定するための方法
US7749492B2 (en) 2001-01-05 2010-07-06 Nationwide Children's Hospital, Inc. AAV vectors and methods
US20020159978A1 (en) * 2001-02-06 2002-10-31 James Allen Muscle-directed gene transfer by use of recombinant AAV-1 and AAV-6 virions
CN103555677B (zh) 2001-11-13 2018-01-30 宾夕法尼亚大学托管会 检测和/或鉴定腺伴随病毒(aav)序列以及分离所鉴定的新型序列的方法
WO2003052051A2 (en) * 2001-12-17 2003-06-26 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-associated virus (aav) serotype 8 sequences
PT2573170T (pt) 2001-12-17 2018-03-26 Univ Pennsylvania Sequências de um vírus adenoassociado (aav) de serotipo 9, vetor contendo as mesmas, e suas utilizações
AU2002367943A1 (en) 2001-12-18 2003-12-22 University Of North Carolina At Chapel Hill Improved reagents and methods for producing parvoviruses
WO2003088899A2 (en) * 2002-04-05 2003-10-30 The Children's Hospital Of Philadelphia Methods for the production of chimeric adeno-associated virus (aav) vectors, compositions of chimeric aav vectors, and methods of use thereof
CA2426283C (en) * 2002-04-29 2006-06-27 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method for direct rescue and amplification of integrated viruses from cellular dna of tissues
JP2007524386A (ja) 2003-06-19 2007-08-30 アビジェン， インコーポレイテッド 減少した免疫反応性を有するａａｖビリオン、およびその使用
DK3211085T3 (da) * 2003-09-30 2021-06-21 Univ Pennsylvania Klader af adeno-associeret virus (aav), sekvenser, vektorer indeholdende disse og anvendelser deraf
WO2006039218A2 (en) 2004-09-30 2006-04-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Perfusion circuit and use therein in targeted delivery of macromolecules
US8999678B2 (en) 2005-04-07 2015-04-07 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Method of increasing the function of an AAV vector
US7788045B2 (en) 2005-09-01 2010-08-31 Meditasks, Llc Systems and method for homeostatic blood states
EP2018421B1 (en) 2006-04-28 2012-12-19 The Trustees of the University of Pennsylvania Scalable production method for aav
JP2009102988A (ja) 2007-10-19 2009-05-14 Toyota Motor Corp 内燃機関の燃料噴射装置
US8236527B2 (en) 2008-03-14 2012-08-07 Humanzyme Limited Recombinant production of authentic human proteins using human cell expression systems
US20090280103A1 (en) 2008-04-04 2009-11-12 Martin Flueck Regulation of muscle repair
US8729041B2 (en) 2008-12-03 2014-05-20 The Johns Hopkins University Compositions and methods for treating hepatic neoplasia
DK2826860T3 (en) 2010-04-23 2018-12-03 Univ Massachusetts CNS targeting AAV vectors and methods for their use
DK2731470T3 (da) 2011-07-15 2017-11-20 Kaercher Gmbh & Co Kg Alfred Rotationsbørste og fejemaskine med en rotationsbørste
US9434928B2 (en) 2011-11-23 2016-09-06 Nationwide Children's Hospital, Inc. Recombinant adeno-associated virus delivery of alpha-sarcoglycan polynucleotides
WO2013123503A1 (en) 2012-02-17 2013-08-22 The Children's Hospital Of Philadelphia Aav vector compositions and methods for gene transfer to cells, organs and tissues
WO2013170078A1 (en) 2012-05-09 2013-11-14 Oregon Health & Science University Adeno associated virus plasmids and vectors
US9819463B2 (en) 2016-02-18 2017-11-14 Huawei Technologies Co., Ltd. Method and apparatus for transmitting data in a wireless communication system
SI3589730T1 (sl) 2017-02-28 2024-04-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Adeno-povezan virus (AAV) clade F vektor in njihova uporaba

Also Published As

Publication number Publication date
CA2864537A1 (en) 2003-05-22
US10308958B2 (en) 2019-06-04
SG10201506627PA (en) 2015-10-29
NZ548094A (en) 2008-07-31
KR101014207B1 (ko) 2011-02-14
HUP0600229A3 (en) 2010-01-28
NO336468B1 (no) 2015-08-31
CN105671005B (zh) 2020-09-15
US8524446B2 (en) 2013-09-03
CN103589692A (zh) 2014-02-19
PH12014501487B1 (en) 2015-12-07
CA2756866C (en) 2017-06-06
BR122016004546B8 (pt) 2021-07-27
PL409838A1 (pl) 2015-07-20
SG168422A1 (en) 2011-02-28
IL193525A0 (en) 2009-02-11
CA2756866A1 (en) 2003-05-22
EP1456419A4 (en) 2005-11-09
IL227866A0 (en) 2013-09-30
NO336801B1 (no) 2015-11-02
CN103555678B (zh) 2018-02-09
BR122016004944B8 (pt) 2021-07-27
JP2013013414A (ja) 2013-01-24
HU230406B1 (hu) 2016-04-28
CN102181480A (zh) 2011-09-14
NO20042183L (no) 2004-07-14
JP5969547B2 (ja) 2016-08-17
US11034977B2 (en) 2021-06-15
HK1068925A1 (en) 2005-05-06
IL213810A (en) 2014-08-31
DK1310571T3 (da) 2006-06-19
US20200087684A1 (en) 2020-03-19
CN102181480B (zh) 2016-01-27
KR101015854B1 (ko) 2011-02-23
NZ591012A (en) 2012-06-29
US20110263027A1 (en) 2011-10-27
NZ600121A (en) 2013-12-20
WO2003042397A3 (en) 2004-02-05
EP2338900A1 (en) 2011-06-29
KR20050058234A (ko) 2005-06-16
BR122016004944B1 (pt) 2016-11-22
EP1456419A2 (en) 2004-09-15
JP5140627B2 (ja) 2013-02-06
IL213810A0 (en) 2011-07-31
JP5669795B2 (ja) 2015-02-18
NO20140988L (no) 2004-07-14
CN103555677A (zh) 2014-02-05
DE60209193T2 (de) 2006-09-28
JP3958191B2 (ja) 2007-08-15
BRPI0214119B1 (pt) 2016-09-27
CA2945734C (en) 2020-02-25
US11034976B2 (en) 2021-06-15
US10544432B2 (en) 2020-01-28
CA3159060C (en) 2023-05-16
SG10202108118RA (en) 2021-08-30
EP1310571A2 (en) 2003-05-14
ATE317916T1 (de) 2006-03-15
NZ532635A (en) 2007-05-31
EP1310571B1 (en) 2006-02-15
PL397823A1 (pl) 2012-07-16
US20220213501A1 (en) 2022-07-07
US20190024117A1 (en) 2019-01-24
CA2945734A1 (en) 2003-05-22
BR122016004546B1 (pt) 2016-11-29
US20180030479A1 (en) 2018-02-01
ATE520707T1 (de) 2011-09-15
US11041171B2 (en) 2021-06-22
ZA200403360B (en) 2005-04-26
PL222683B1 (pl) 2016-08-31
IL161827A (en) 2009-11-18
CA3066428C (en) 2022-05-24
ES2439515T3 (es) 2014-01-23
HK1056198A1 (en) 2004-02-06
US20130045186A1 (en) 2013-02-21
IL233391A (en) 2016-12-29
KR20100029134A (ko) 2010-03-15
IL258545A (en) 2018-06-28
CA2915124C (en) 2018-08-14
CA2915124A1 (en) 2003-05-22
IL234063A0 (en) 2014-09-30
IL221602A (en) 2015-09-24
EP2341068A1 (en) 2011-07-06
BRPI0214119B8 (pt) 2021-05-25
IL227866A (en) 2015-11-30
PL221877B1 (pl) 2016-06-30
PH12014501487A1 (en) 2015-12-07
US10508286B2 (en) 2019-12-17
US20170240921A1 (en) 2017-08-24
MXPA04004600A (es) 2004-08-13
US10041090B2 (en) 2018-08-07
NO338362B1 (no) 2016-08-15
CN103555676B (zh) 2016-08-31
JP2016136953A (ja) 2016-08-04
ES2455126T3 (es) 2014-04-14
BR0214119A (pt) 2005-06-28
US10526617B2 (en) 2020-01-07
PL373864A1 (pl) 2005-09-19
CA2864537C (en) 2016-11-29
US20160097040A1 (en) 2016-04-07
CA3066428A1 (en) 2003-05-22
IL270065B2 (en) 2023-10-01
WO2003042397A2 (en) 2003-05-22
PL404537A1 (pl) 2014-02-17
AU2002361573B2 (en) 2008-06-12
CA2406745C (en) 2006-01-10
NO20131359L (no) 2004-07-14
NZ578982A (en) 2011-03-31
US8906675B2 (en) 2014-12-09
CA3159060A1 (en) 2003-05-22
NO20150196L (no) 2004-07-14
JP6212142B2 (ja) 2017-10-11
US20200080109A1 (en) 2020-03-12
US20200131534A1 (en) 2020-04-30
US20110151434A1 (en) 2011-06-23
JP2014239680A (ja) 2014-12-25
IL248724B (en) 2018-04-30
CA2465868A1 (en) 2003-05-22
IL270065A (pl) 2019-12-31
DE60209193D1 (de) 2006-04-20
US11377669B2 (en) 2022-07-05
IL233391A0 (en) 2014-08-31
PL220644B1 (pl) 2015-11-30
PH12016502583A1 (en) 2017-10-18
CA2465868C (en) 2017-02-28
NZ618298A (en) 2015-04-24
JP2005525086A (ja) 2005-08-25
IL221602A0 (en) 2012-10-31
CN103555676A (zh) 2014-02-05
IL161827A0 (en) 2005-11-20
JP2009195237A (ja) 2009-09-03
IL258545B (en) 2019-11-28
IL234063A (en) 2017-06-29
HU229379B1 (en) 2013-11-28
IL270065B1 (en) 2023-06-01
CN103589692B (zh) 2018-07-24
EP2341068B1 (en) 2013-09-25
HUP0600229A2 (en) 2006-06-28
MX346493B (es) 2017-03-21
JP4677187B2 (ja) 2011-04-27
JP2003235562A (ja) 2003-08-26
EP1310571A3 (en) 2003-08-13
SG157224A1 (en) 2009-12-29
CN103555678A (zh) 2014-02-05
US9790472B2 (en) 2017-10-17
NO334379B1 (no) 2014-02-24
SG10201912509RA (en) 2020-02-27
MX359371B (es) 2018-09-25
CA2406745A1 (en) 2003-05-13
EP2338900B1 (en) 2014-01-01
ES2258601T3 (es) 2006-09-01
IL248724A0 (en) 2017-01-31
US20170298388A1 (en) 2017-10-19
CN105671005A (zh) 2016-06-15
IL193525A (en) 2014-08-31
US20030138772A1 (en) 2003-07-24
US20210285012A1 (en) 2021-09-16
CN103555677B (zh) 2018-01-30
EP1456419B1 (en) 2011-08-17
US11499167B2 (en) 2022-11-15
US20220025401A1 (en) 2022-01-27
NZ564506A (en) 2009-09-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101015854B1 (ko) 아데노-결합 바이러스 (ａａｖ) 서열을 검출 및/또는확인하는 방법 및 그 방법에 의해 확인된 신규한 서열을분리하는 방법
CN1856576B (zh) 腺伴随病毒(aav)进化支、序列、含有这些序列的载体及它们的应用
AU2020201242B2 (en) ADENO-ASSOCIATED VIRUS cy.5 (AAVcy.5) SEQUENCES AND RECOMBINANT AAVs COMPRISING SAME
CN101426935B (zh) 检测和/或鉴定腺伴随病毒(aav)序列以及分离所鉴定的新型序列的方法
CA2465868E (en) A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby
HK40042488A (en) A method of detecting and/or identifying adeno-associated virus (aav) sequences and isolating novel sequences identified thereby
HU230093B1 (hu) Eljárás adeno-asszociált vírus(AAV)szekvenciák detektálására és/vagy azonosítására, és az azzal azonosított új szekvenciák izolálására