JP2011079835A - ペプチド模倣プロテアーゼインヒビター - Google Patents
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Abstract
【課題】Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染治療薬として有用なプロテアーゼインヒビター、特にＮＳ３セリンプロテアーゼインヒビターを提供する。
【解決手段】下式で示されるペプチド模倣化合物、もしくはその医薬的に許容しうる塩又はプロドラッグ。
【選択図】なし
【解決手段】下式で示されるペプチド模倣化合物、もしくはその医薬的に許容しうる塩又はプロドラッグ。
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Description
本発明は、ペプチド模倣化合物、その中間体、中間体への新規立体選択的プロセスを含むその製造方法、該ペプチド模倣化合物を含む医薬組成物およびプロテアーゼインヒビター、特にセリンプロテアーゼインヒビターとして、さらに詳しくはＣ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ３プロテアーゼインヒビターとしての該ペプチド模倣化合物または組成物の使用に関する。ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼインヒビターとしてのペプチド模倣化合物は、Ｃ型肝炎ウイルスのライフサイクルの妨害ならびにＨＣＶ感染またはそれに関連する生理的コンディションの治療または予防において特に有用である。また本発明は、該ペプチド模倣化合物または医薬組成物を用いる、細胞においてＨＣＶ複製を阻害するため、もしくはＨＣＶ感染を治療または予防するための併用療法、もしくはそのためのキットおよび医薬的パックに関する。本発明の医薬組成物としては、抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンと組み合わせたＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター；インターフェロン以外の抗ＨＣＶ活性をもつ化合物と組み合わせたＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター；または抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンおよびインターフェロン以外の抗ＨＣＶ活性をもつ化合物の両方と組み合わせたＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターを含む組成物が挙げられる。さらに本発明は、ペプチド模倣化合物の合成に有用なキラルビシクロプロリネート中間体を製造するための立体選択的方法に関する。
ＨＣＶによる感染は、人間における切実な医学的問題であり、現在、非Ａ型、非Ｂ型肝炎のほとんどの症例の原因となる病原体として認識されている。
ＨＣＶは、世界人口の３％が慢性的に感染していると考えられる[A. Alberti et al.，"Natural History of Hepatitis C,"J. Hepatology，31，(Suppl. 1)，17-24 (1999)]。合衆国単独では、感染率は、１.８％または３９０万人である[M. J. Alter,"Hepatitis C Virus Infection in the United States,"J. Hepatology，31，(Suppl. 1)，88-91 (1999)]。すべての感染患者のうち、７０％以上が肝硬変および肝細胞ガンの主たる原因であると考えられている慢性感染を発症している[D. Lavanchy,"Global Surveillance and Control of Hepatitis C,"J. Viral Hepatitis，6，35-47 (1999)]。
ＨＣＶの複製は、３０１０〜３０３３個のアミノ酸からなるポリタンパク質
をコードするゲノムを包含する[Q.-L. Chooら,"Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus"，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，88，2451-2455 (1991)；N. Katoら,"Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A，Non-B Hepatitis"，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，87,9524-9528 (1990)；A. Takamizawaら,"Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers"，J. Virol.，65，1105-1113 (1991)]。ＨＣＶ非構造的（nonstructural：ＮＳ）タンパク質は、ウイルスの複製にとって不可欠な触媒的機構を提供すると推定される。ＮＳタンパク質は、タンパク質分解的切断によって誘導される[R. Bartenschlagerら,"Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions"，J. Virol.，67，3835-3844 (1993)；A. Grakouiら"Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase: Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites"，J. Virol.，67，2832-2843 (1993)；A. Grakouiら，Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products"，J. Virol.，67,1385-1395 (1993)；L. Tomeiら,"NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein"，J. Virol.，67，4017-4026 (1993)]。事実、ＮＳ３の最初の１８１個のアミノ酸（ウイルスタンパク質の１０２７〜１２０７位の残基）が、４個の下流サイトすべてをプロセシングするＮＳ３のセリンプロテアーゼドメインを含むことが明らかにされている[C. Linら,"Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase: Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics"，J. Virol.，68，8147-8157 (1994)]。
ＨＣＶは、世界人口の３％が慢性的に感染していると考えられる[A. Alberti et al.，"Natural History of Hepatitis C,"J. Hepatology，31，(Suppl. 1)，17-24 (1999)]。合衆国単独では、感染率は、１.８％または３９０万人である[M. J. Alter,"Hepatitis C Virus Infection in the United States,"J. Hepatology，31，(Suppl. 1)，88-91 (1999)]。すべての感染患者のうち、７０％以上が肝硬変および肝細胞ガンの主たる原因であると考えられている慢性感染を発症している[D. Lavanchy,"Global Surveillance and Control of Hepatitis C,"J. Viral Hepatitis，6，35-47 (1999)]。
ＨＣＶの複製は、３０１０〜３０３３個のアミノ酸からなるポリタンパク質
をコードするゲノムを包含する[Q.-L. Chooら,"Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus"，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，88，2451-2455 (1991)；N. Katoら,"Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A，Non-B Hepatitis"，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，87,9524-9528 (1990)；A. Takamizawaら,"Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers"，J. Virol.，65，1105-1113 (1991)]。ＨＣＶ非構造的（nonstructural：ＮＳ）タンパク質は、ウイルスの複製にとって不可欠な触媒的機構を提供すると推定される。ＮＳタンパク質は、タンパク質分解的切断によって誘導される[R. Bartenschlagerら,"Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions"，J. Virol.，67，3835-3844 (1993)；A. Grakouiら"Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase: Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites"，J. Virol.，67，2832-2843 (1993)；A. Grakouiら，Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products"，J. Virol.，67,1385-1395 (1993)；L. Tomeiら,"NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein"，J. Virol.，67，4017-4026 (1993)]。事実、ＮＳ３の最初の１８１個のアミノ酸（ウイルスタンパク質の１０２７〜１２０７位の残基）が、４個の下流サイトすべてをプロセシングするＮＳ３のセリンプロテアーゼドメインを含むことが明らかにされている[C. Linら,"Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase: Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics"，J. Virol.，68，8147-8157 (1994)]。
ＨＣＶのＮＳタンパク質３（ＮＳ３）は、大部分のウイルス酵素のプロセシングに対して助力するセリンプロテアーゼ活性を含む。ＮＳ３プロテアーゼの不可欠性は、黄熱ウイルスＮＳ３プロテアーゼにおける突然変異が、ウイルスの伝染力を減少させるという事実から推断される[T. J. Chambersら，"Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein"，Proc. Natl. Acad. Sci. USA，87,8898-8902 (1990)]。さらに最近では、ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼの活性サイトにおける突然変異が、チンパンジーモデルにおいてＨＣＶの感染を完全に止めることが立証された[C. M. Riceら"Hepatitis C virus-encoded enzymatic activities and conserved RNA elements in the 3'-nontranslated region are essential for virus replication in vivo."J. Virol.，74 (4) 2046-51 (2000)]。ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼもまた、それ自体およびその関連する補因子であるＮＳ４Ａがすべてのウイルス酵素のプロセシングに対して助力するので、ウイルスの複製に不可欠であるとみなされる。このプロセシングは、ヒト免疫不全ウイルス（“ＨＩＶ”）のアスパルチルプロテアーゼによって行われるプロセシングに類似しているように見える。さらに、ヒトにおける強力な抗ウイルス薬としてのＨＩＶプロテアーゼインヒビターの使用が立証されていることは、ウイルスのライフサイクルにおけるプロテアーゼのタンパク質プロセシング段階を妨げることによって治療的に有効な作用薬が得られるということを立証する。したがって、酵素プロテアーゼは、薬品の発見にとって魅力的なターゲットである。
幾つかの強力なＨＣＶプロテアーゼインヒビターが記載されている。国際公開番号WO 00/09558，WO 00/09543，WO 99/64442，WO 99/07733，WO 99/07734，WO 99/50230，W098/46630，WO 98/17679 and WO 97/43310，米国特許番号 5,990,276，M. Llinas-Brunetら，Bioorg. Med. Chem. Lett.，8，1713-1718 (1998)，W. Hanら，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10,711-713 (2000)，R. Dunsdonら，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10，15711579 (2000)，M. Llinas-Brunetら，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10,2267-2270 (2000)，and S. LaPlanteら，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10,2271-2274 (2000)はそれぞれ、強力なＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼインヒビターを記載している。残念ながら、現在のところ、抗ＨＣＶ薬として利用可能なセリンプロテアーゼインヒビターはない。
実際のところ、インターフェロンα、インターフェロンα／リバビリン併用薬および最近のポリエチレングリコール付加（pegylated）インターフェロンαを除いては、抗ＨＣＶ療法はない。しかし、インターフェロンα療法およびインターフェロンα／リバビリンに対する持続性の応答率は低い（＜５０％）傾向にあり、該療法によって提示される副作用は、重大で重篤な傾向にある[M. A. Walker,"Hepatitis C Virus: an Overview of Current Approaches and Progress,"DDT，4，518-529 (1999)；D. Moradpourら,"Current and Evolving Therapies for Hepatitis C,"Eur. J. Gastroenterol. Hepatol.，11,1199-1202 (1999)；H. L. A. Janssenら,"Suicide Associated with Alfa-Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis,"J. Hepatol.，21，241-243 (1994)；および P. F. Renaultら，"Side effects of alpha interferon"，Seminars in Liver Disease 9，273-277，(1989)]。さらに、インターフェロン療法は、一部（〜２５％）の症例にのみ長期的緩解を起こすにすぎない[O. Weiland,"Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection"，FEMS Microbiol. Rev.，14，279-288 (1994)]。インターフェロンα療法に関する前述の問題から、ポリエチレングリコール付加誘導体化インターフェロンα化合物の開発および臨床試験に到っている。
WO 00/09558
WO 00/09543
WO 99/64442
WO 99/07733
WO 99/07734
WO 99/50230
W098/46630
WO 98/17679
WO 97/43310
米国特許番号 5,990,276
A. Albertiら.，J. Hepatology，31，(Suppl. 1)，17-24 (1999)
M. J. Alter, J. Hepatology，31，(Suppl. 1)，88-91 (1999)
D. Lavanchy, J. Viral Hepatitis，6，35-47 (1999)
Q.-L. Chooら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA，88，2451-2455 (1991)
N. Katoら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA，87,9524-9528 (1990)
A. Takamizawaら, J. Virol.，65，1105-1113 (1991)
R. Bartenschlagerら, J. Virol.，67，3835-3844 (1993)
A. Grakouiら J. Virol.，67，2832-2843 (1993)
A. Grakouiら，，J. Virol.，67,1385-1395 (1993)
L. Tomeiら, J. Virol.，67，4017-4026 (1993)
C. Linら, J. Virol.，68，8147-8157 (1994)
T. J. Chambersら， Proc. Natl. Acad. Sci. USA，87,8898-8902 (1990)
C. M. Riceら J. Virol.，74 (4) 2046-51 (2000)
M. Llinas-Brunetら，Bioorg. Med. Chem. Lett.，8，1713-1718 (1998)
W. Hanら，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10,711-713 (2000)
R. Dunsdonら，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10，15711579 (2000)
M. Llinas-Brunetら，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10,2267-2270 (2000)
S. LaPlanteら，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10,2271-2274 (2000)
M. A. Walker, DDT，4，518-529 (1999)
D. Moradpourら, Eur. J. Gastroenterol. Hepatol.，11,1199-1202 (1999)
H. L. A. Janssenら, J. Hepatol.，21，241-243 (1994)
P. F. Renaultら， Seminars in Liver Disease 9，273-277，(1989)]
O. Weiland, FEMS Microbiol. Rev.，14，279-288 (1994)
抗ＨＣＶ療法に関する現在の状況を考慮すると、より有効で、寛容性のよい療法の必要性があることは明らかである。
さらに、複合体ペプチド模倣化合物の合成は、ほとんどの有機合成方法が非立体選択的性質をもつことによって長い間妨げられている。したがって、このような立体特異的合成方法を提供することには、大きな利点がある。
本発明の治療力のあるペプチド模倣プロテアーゼインヒビターの合成に有用なキラル特異的ビシクロプロリネート中間体を合成する先の試みにとって、非エナンチオ選択的またはジアステレオ選択的または長い包囲的合成経路であること、もしくは生成物の大量生産にとって不適当であることが難問であった。したがって、ジアステレオ選択的作法およびエナンチオマーに富んだ形体での大量のビシクロプロリネートの製造方法の必要性もある。
さらに、複合体ペプチド模倣化合物の合成は、ほとんどの有機合成方法が非立体選択的性質をもつことによって長い間妨げられている。したがって、このような立体特異的合成方法を提供することには、大きな利点がある。
本発明の治療力のあるペプチド模倣プロテアーゼインヒビターの合成に有用なキラル特異的ビシクロプロリネート中間体を合成する先の試みにとって、非エナンチオ選択的またはジアステレオ選択的または長い包囲的合成経路であること、もしくは生成物の大量生産にとって不適当であることが難問であった。したがって、ジアステレオ選択的作法およびエナンチオマーに富んだ形体での大量のビシクロプロリネートの製造方法の必要性もある。
本発明は、式（１）：
［式中、Ｒ０は、結合またはジフルオロメチレン；
Ｒ１は、水素、必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基；
Ｒ２およびＲ９は、それぞれ独立して、必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基；
Ｒ３、Ｒ５およびＲ７は、それぞれ独立して、（必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基）（必要に応じて置換されたメチレンまたは必要に応じて置換されたエチレン）、必要に応じて置換された（１,１−または１,２−）シクロアルキレンまたは必要に応じて置換された（１,１−または１,２−）ヘテロシクリレン；
Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素または必要に応じて置換された脂肪族基；
は、置換単環式アザヘテロシクリルまたは必要に応じて置換された多環式アザヘテロシクリルもしくは必要に応じて置換された多環式アザヘテロシクレニル（ここで、不飽和は、Ｒ９−Ｌ−(Ｎ(Ｒ８)−Ｒ７−Ｃ(Ｏ)−)ｎＮ(Ｒ６)−Ｒ５−Ｃ(Ｏ)−Ｎ部分を有する環に遠位であって、−Ｃ−(Ｏ)−Ｎ−(Ｒ４)−Ｒ３−Ｃ(Ｏ)Ｃ(Ｏ)ＮＲ２Ｒ１部分に結合する環中にある）；
Ｌは、−Ｃ(Ｏ)−、−ＯＣ(Ｏ)−、−ＮＲ１０Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)２−または−ＮＲ１０Ｓ(Ｏ)２−；および
ｎは、０または１である；
ただし、
が、置換された
である場合、Ｌが−ＯＣ(Ｏ)−であり、Ｒ９が必要に応じて置換された脂肪族基、または少なくとも１つのＲ３、Ｒ５およびＲ７が、（必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基）（必要に応じて置換されたエタンジイル）、またはＲ４が必要に応じて置換された脂肪族基である］
で示されるペプチド模倣化合物もしくはその医薬的に許容しうる塩またはプロドラッグ、もしくはそのような化合物の溶媒和物、その塩またはプロドラッグに関する。
Ｒ１は、水素、必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基；
Ｒ２およびＲ９は、それぞれ独立して、必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基；
Ｒ３、Ｒ５およびＲ７は、それぞれ独立して、（必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基）（必要に応じて置換されたメチレンまたは必要に応じて置換されたエチレン）、必要に応じて置換された（１,１−または１,２−）シクロアルキレンまたは必要に応じて置換された（１,１−または１,２−）ヘテロシクリレン；
Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素または必要に応じて置換された脂肪族基；
Ｌは、−Ｃ(Ｏ)−、−ＯＣ(Ｏ)−、−ＮＲ１０Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)２−または−ＮＲ１０Ｓ(Ｏ)２−；および
ｎは、０または１である；
ただし、
で示されるペプチド模倣化合物もしくはその医薬的に許容しうる塩またはプロドラッグ、もしくはそのような化合物の溶媒和物、その塩またはプロドラッグに関する。
また本発明は、構造式：
［式中、Ｒ１は、水素、必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基；
Ｒ２およびＲ９は、それぞれ独立して、必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基；
Ｒ３、Ｒ５およびＲ７は、それぞれ独立して、（必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基）（必要に応じて置換されたメタンジイルまたは必要に応じて置換されたエタンジイル）；
Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素または必要に応じて置換された脂肪族基；
は、置換単環式アザヘテロシクリルまたは必要に応じて置換された多環式アザヘテロシクリルもしくは必要に応じて置換された多環式アザヘテロシクレニル（ここで、不飽和は、Ｒ９−Ｌ−(Ｎ(Ｒ８)−Ｒ７−Ｃ(Ｏ)−)ｎＮ(Ｒ６)−Ｒ５−Ｃ(Ｏ)−Ｎ部分を有する環に遠位であって、−Ｃ−(Ｏ)−Ｎ−(Ｒ４)−Ｒ３−Ｃ(Ｏ)Ｃ(Ｏ)ＮＲ２Ｒ１部分に結合する環中にある）；
Ｌは、−Ｃ(Ｏ)−、−ＯＣ(Ｏ)−、−ＮＲ１０Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)２−または−ＮＲ１０Ｓ(Ｏ)２−；および
ｎは、０または１である；
ただし、
が、置換された
である場合、Ｌが−ＯＣ(Ｏ)−であり、Ｒ９が必要に応じて置換された脂肪族基、または少なくとも１つのＲ３、Ｒ５およびＲ７が、（必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基）（必要に応じて置換されたエタンジイル）、またはＲ４が必要に応じて置換された脂肪族基である］
で示されるペプチド模倣化合物もしくはその医薬的に許容しうる塩またはプロドラッグ、もしくはそのような化合物の溶媒和物、その塩またはプロドラッグに関する。
Ｒ２およびＲ９は、それぞれ独立して、必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基；
Ｒ３、Ｒ５およびＲ７は、それぞれ独立して、（必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基）（必要に応じて置換されたメタンジイルまたは必要に応じて置換されたエタンジイル）；
Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８およびＲ１０は、それぞれ独立して、水素または必要に応じて置換された脂肪族基；
Ｌは、−Ｃ(Ｏ)−、−ＯＣ(Ｏ)−、−ＮＲ１０Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)２−または−ＮＲ１０Ｓ(Ｏ)２−；および
ｎは、０または１である；
ただし、
で示されるペプチド模倣化合物もしくはその医薬的に許容しうる塩またはプロドラッグ、もしくはそのような化合物の溶媒和物、その塩またはプロドラッグに関する。
また本発明は、化合物（１）を含む医薬組成物、およびＨＣＶプロテアーゼを阻害するか、または患者におけるＨＣＶ感染または感染に関連する生理的コンディションを治療または予防するための化合物（１）の使用方法に関する。
また本発明は、化合物（１）の製造に有用な中間体であるキラルビシクロプロリネート化合物を製造するための立体選択的方法に関する。該合成方法は、
（ａ）式（２４）：
［式中、
は、必要に応じて置換されたシクロアルキルまたは必要に応じて置換された縮合アリールシクロアルキル；
Ｒ１１は、−ＣＯ２Ｒ１３；
Ｒ１２は、イミン性グリシンイミド付加体；
Ｒ１３は、酸保護基または必要に応じて置換された脂肪族基である］
で示される化合物を、開裂および環化条件下で、開裂および環化して、式（２５）：
［式中、Ｒ１４は、−ＣＯＮＲ１５Ｒ１５、−ＣＮ、
または−ＣＯ２Ｒ１６；
Ｒ１５は、必要に応じて置換された脂肪族基；
Ｒ１６は、酸保護基、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換された脂肪族基である］
で示される化合物を形成し；次いで
（ｂ）化合物（２５）のラクタム部分の窒素をアミド保護基で保護して、式（２６）：
［式中、ｐ０は、アミド保護基；
Ｒ１４は、前記と同意義である］
で示される化合物を形成し；次いで
（ｃ）還元条件下で化合物（２６）を還元して、式（２７）：
［式中、ｐ０およびＲ１４は、前記と同意義である］
で示される化合物を形成し；次いで
（ｄ）脱保護条件下で化合物（２７）を脱保護して、式（２８）：
［式中、Ｒ１４は、前記と同意義である］
で示される化合物を形成する；
ステップを含む。
（ａ）式（２４）：
Ｒ１１は、−ＣＯ２Ｒ１３；
Ｒ１２は、イミン性グリシンイミド付加体；
Ｒ１３は、酸保護基または必要に応じて置換された脂肪族基である］
で示される化合物を、開裂および環化条件下で、開裂および環化して、式（２５）：
Ｒ１５は、必要に応じて置換された脂肪族基；
Ｒ１６は、酸保護基、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換された脂肪族基である］
で示される化合物を形成し；次いで
（ｂ）化合物（２５）のラクタム部分の窒素をアミド保護基で保護して、式（２６）：
Ｒ１４は、前記と同意義である］
で示される化合物を形成し；次いで
（ｃ）還元条件下で化合物（２６）を還元して、式（２７）：
で示される化合物を形成し；次いで
（ｄ）脱保護条件下で化合物（２７）を脱保護して、式（２８）：
で示される化合物を形成する；
ステップを含む。
また本発明は、式（２９）：
［式中、
は、必要に応じて置換されたシクロアルケニルまたは必要に応じて置換された縮合アリールシクロアルケニル；
Ｒ１１は、−ＣＯ２Ｒ１３である］
で示される化合物に、イミン性グリシンイミド化合物でマイケル付加を達成することによって、化合物（２４）を製造するステップをさらに含む上記合成方法に関する。
ここで、化合物（２９）は、式（２９ａ）：
［式中、
は、必要に応じて置換されたシクロアルケニルまたは必要に応じて置換された縮合アリールシクロアルケニル；
Ｒ１１ａは、−ＣＨＯ、−ＣＯＲ１５、−Ｃ≡Ｎまたは−ＣＯＮＲ１５Ｒ１５；および
Ｒ１５は、本明細書に記載する通りである］
で示される化合物をエステル化することによって製造される。
Ｒ１１は、−ＣＯ２Ｒ１３である］
で示される化合物に、イミン性グリシンイミド化合物でマイケル付加を達成することによって、化合物（２４）を製造するステップをさらに含む上記合成方法に関する。
ここで、化合物（２９）は、式（２９ａ）：
Ｒ１１ａは、−ＣＨＯ、−ＣＯＲ１５、−Ｃ≡Ｎまたは−ＣＯＮＲ１５Ｒ１５；および
Ｒ１５は、本明細書に記載する通りである］
で示される化合物をエステル化することによって製造される。
特に、当業者であれば、ケトンのエステルへの変換が、たとえば、ベイヤー−ビリジャー反応によって達成されることを理解しているであろう。ニトリルおよびアミドのエステルへの変換は、たとえば、水性加水分解、次いで、エステル化によって達成される。アルデヒドのエステルへの変換は、たとえば、アルデヒドの酸化、次いで、エステル化によって達成される。
本発明の別の態様は、置換基が、本明細書に記載する好ましいまたは特定の具体例の組み合わせから選択される化合物（１）である。
本発明の別の態様は、置換基が、本明細書に記載する好ましいまたは特定の具体例の組み合わせから選択される化合物（２４）〜（２９）である。
本発明の別の態様は、１種またはそれ以上のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターに加えて、１種またはそれ以上のインターフェロンまたは抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンの生成を誘発する化合物および／または１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物ならびに医薬的に許容しうる担体を含む医薬組成物である。
本発明の別の態様は、置換基が、本明細書に記載する好ましいまたは特定の具体例の組み合わせから選択される化合物（２４）〜（２９）である。
本発明の別の態様は、１種またはそれ以上のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターに加えて、１種またはそれ以上のインターフェロンまたは抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンの生成を誘発する化合物および／または１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物ならびに医薬的に許容しうる担体を含む医薬組成物である。
本発明の別の態様は、治療または予防を必要とする患者に医薬的有効量の１種またはそれ以上のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター；１種またはそれ以上のインターフェロンまたは抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンの生成を誘発する化合物；および／または１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物を投与することを含む、患者におけるＨＣＶ感染の治療または予防方法である。
また本発明は、治療または予防を必要とする患者におけるＨＣＶ感染の治療または予防のための医薬を製造するための、１種またはそれ以上のインターフェロンまたは抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンの生成を誘発する化合物および／または１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物の使用に関する。
また本発明は、治療または予防を必要とする患者におけるＨＣＶ感染の治療または予防のための医薬を製造するための、１種またはそれ以上のインターフェロンまたは抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンの生成を誘発する化合物および／または１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物の使用に関する。
また本発明は、患者におけるＨＣＶ感染を治療または予防するためのキットまたは医薬パックに関し、該キットまたは医薬パックは、複数のセパレート容器を含み、少なくとも１つの容器が１種またはそれ以上のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターを含み（単独または医薬的に許容しうる担体または希釈剤と組み合わせて）、少なくとも１つの別の容器が１種またはそれ以上のインターフェロンまたは抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンの生成を誘発する化合物を含み（単独または医薬的に許容しうる担体または希釈剤と組み合わせて）、および必要に応じて、少なくとも１つの別の容器が、１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物を含む（単独または医薬的に許容しうる担体または希釈剤と組み合わせて）。
いずれの前述の適用においても、ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター、インターフェロンまたは抗ＨＣＶ化合物の量は、ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター、インターフェロン、抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンの生成を誘発する化合物および／または抗ＨＣＶ化合物の最終的組み合わせが、患者におけるＨＣＶ感染の治療または予防に有効である医薬的有効量の化合物を含むということであれば、医薬的有効量、準臨床的抗ＨＣＶ有効量またはその組み合わせであることができる。
上記の態様および他の態様、特徴および本発明の利点は、次の詳細な記載および添付の図面から、よりよく理解されるであろう。それらはすべて説明の手段にすぎず、本発明に制限を加えるものではない。
（発明の詳細な記載）
本明細書に引用された各特許公報および他の文献の内容は、全体を参考文献として本発明に援用される。
上記および本明細書の記載を通して、以下の略語は、他に特記のない限り、以下の意味をもつと理解されたい：
名称 試薬または部分
ＡＣＮ アセトニトリル
ＡＩＢＮ ２,２'−アゾビスイソブチロニトリル
ＢＯＣまたはＢｏｃ tert−カルバミン酸ブチル
ＢＯＰ ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イル
オキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム
n−Ｂｕ３ＳｎＨ 水素化トリ−ｎ−ブチルチン
t−Ｂｕ tert−ブチル
Ｃｂｚ カルバミン酸ベンジル
キラルＰＴＣ キラル相間移動触媒
ＤＡＳＴ 三フッ化((ジエチルアミノ)イオウＥｔ２ＮＳＦ３)
ＤＣＣ ジシクロカルボジイミド
ＤＣＭ ジクロロメタン(ＣＨ２Ｃｌ２)
ＤＩＢＡＬ−Ｈ 水素化ジイソブチルアルミニウム
ＤＩＣ １,３−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ ４−(Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ)ピリジン
ＤＭＰ試薬 デス−マーチンペルヨージナン試薬
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＡ 元素分析
ＥＤＣＩ １−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)
カルボジイミド・ＨＣｌ
eq 当量
Ｅｔ エチル
Ｅｔ２Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＨ エタノール
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
Ｅｔ３Ｓｉ トリエチルシラン
ＦＭＯＣ ９−フルオレニルメトキシカルボニル
Ｈ−Ｃｈｇ−ＯＨ
ＨＯＡｔ １−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢＴ １−ヒドロキシベンズトリアゾール
ＨＯＳｕ Ｎ−ヒドロキシスクシンアミド
ＨＰＬＣ 高性能液体クロマトグラフィー
ＬＡＨ 水素化リチウムアルミニウム
Ｍｅ メチル
ＭｅＩ ヨウ化メチル
ＭｅＯＨ メタノール
ＭｅＯＣ(Ｏ)Ｃｌ クロロギ酸メチル
ＭＯＭＣｌ メトキシメチルクロリド
ＭＯＭ メトキシメチル
ＭＳ 質量分析
ＮａＢＨ４ 水素化ホウ素ナトリウム
Ｎａ２Ｃ４Ｈ４Ｏ６ 酒石酸ナトリウム
ＮＭＰ Ｎ−メチルピロリジン
ＮＭＲ 核磁気共鳴
Ｐ− ポリマー結合
ＰｙＢＯＰ ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イル−
オキシトリス−ピロリジノ−ホスホニウム
ＴＢＤ １,５,７−トリアゾビシクロ[４.４.０]−デク−５−エン
ＲＰ−ＨＰＬＣ 逆相−高性能液体クロマトグラフィー
ＴＢＳＣＩ tert−ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＣＡ トリクロロ酢酸
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
Ｔｆ２Ｏ トリフレート無水物
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＨＰ テトラヒドロピラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
本明細書に引用された各特許公報および他の文献の内容は、全体を参考文献として本発明に援用される。
上記および本明細書の記載を通して、以下の略語は、他に特記のない限り、以下の意味をもつと理解されたい：
名称 試薬または部分
ＡＣＮ アセトニトリル
ＡＩＢＮ ２,２'−アゾビスイソブチロニトリル
ＢＯＣまたはＢｏｃ tert−カルバミン酸ブチル
ＢＯＰ ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イル
オキシトリス(ジメチルアミノ)ホスホニウム
n−Ｂｕ３ＳｎＨ 水素化トリ−ｎ−ブチルチン
t−Ｂｕ tert−ブチル
Ｃｂｚ カルバミン酸ベンジル
キラルＰＴＣ キラル相間移動触媒
ＤＣＣ ジシクロカルボジイミド
ＤＣＭ ジクロロメタン(ＣＨ２Ｃｌ２)
ＤＩＢＡＬ−Ｈ 水素化ジイソブチルアルミニウム
ＤＩＣ １,３−ジイソプロピルカルボジイミド
ＤＩＰＥＡ ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＡＰ ４−(Ｎ,Ｎ−ジメチルアミノ)ピリジン
ＤＭＰ試薬 デス−マーチンペルヨージナン試薬
ＤＭＳＯ ジメチルスルホキシド
ＥＡ 元素分析
ＥＤＣＩ １−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)
カルボジイミド・ＨＣｌ
eq 当量
Ｅｔ エチル
Ｅｔ２Ｏ ジエチルエーテル
ＥｔＯＨ エタノール
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル
Ｅｔ３Ｓｉ トリエチルシラン
ＦＭＯＣ ９−フルオレニルメトキシカルボニル
Ｈ−Ｃｈｇ−ＯＨ
ＨＯＢＴ １−ヒドロキシベンズトリアゾール
ＨＯＳｕ Ｎ−ヒドロキシスクシンアミド
ＨＰＬＣ 高性能液体クロマトグラフィー
ＬＡＨ 水素化リチウムアルミニウム
Ｍｅ メチル
ＭｅＩ ヨウ化メチル
ＭｅＯＨ メタノール
ＭｅＯＣ(Ｏ)Ｃｌ クロロギ酸メチル
ＭＯＭＣｌ メトキシメチルクロリド
ＭＯＭ メトキシメチル
ＭＳ 質量分析
ＮａＢＨ４ 水素化ホウ素ナトリウム
Ｎａ２Ｃ４Ｈ４Ｏ６ 酒石酸ナトリウム
ＮＭＰ Ｎ−メチルピロリジン
ＮＭＲ 核磁気共鳴
Ｐ− ポリマー結合
ＰｙＢＯＰ ヘキサフルオロリン酸ベンゾトリアゾール−１−イル−
オキシトリス−ピロリジノ−ホスホニウム
ＴＢＤ １,５,７−トリアゾビシクロ[４.４.０]−デク−５−エン
ＲＰ−ＨＰＬＣ 逆相−高性能液体クロマトグラフィー
ＴＢＳＣＩ tert−ブチルジメチルシリルクロリド
ＴＣＡ トリクロロ酢酸
ＴＦＡ トリフルオロ酢酸
Ｔｆ２Ｏ トリフレート無水物
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
ＴＨＰ テトラヒドロピラン
ＴＬＣ 薄層クロマトグラフィー
上記および本明細書の記載を通して、以下の用語は、他に特記のない限り、以下の意味をもつと理解されたい：
「酸バイオアイソスター」は、概してカルボキシ基に類似した生物学的特性を生じさせる化学的および物理的類似性をもつ基を意味する[Lipinski，Annual Reports in Medicinal Chemistry,"Bioisosterism In Drug Design"21,283 (1986)；Yun，Hwahak Sekye，"Application Of Bioisosterism To New Drug Design"33，576-579，(1993)；Zhao，Huaxue Tongbao,"Bioisosteric Replacement And Development Of Lead Compounds In Drug Design" 34-38，(1995)；Graham，Theochem,"Theoretical Studies Applied To Drug Design:ab initio Electronic Distributions In Bioisosteres"343，105-109，(1995)を参照]。酸バイオアイソスターの例として、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＳＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−ＣＮ、スルホ、ホスホノ、アルキルスルホニルカルバモイル、テトラゾリル、アリールスルホニルカルバモイル、Ｎ−メトキシカルバモイル、ヘテロアリールスルホニルカルバモイル、３−ヒドロキシ−３−シクロブテン−１,２−ジオン、３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジニルまたは３−ヒドロキシイソキサゾリル、３−ヒドロキシ−１−メチルピラゾリルといったようなヒドロキシヘテロアリールなどが挙げられる。
「酸バイオアイソスター」は、概してカルボキシ基に類似した生物学的特性を生じさせる化学的および物理的類似性をもつ基を意味する[Lipinski，Annual Reports in Medicinal Chemistry,"Bioisosterism In Drug Design"21,283 (1986)；Yun，Hwahak Sekye，"Application Of Bioisosterism To New Drug Design"33，576-579，(1993)；Zhao，Huaxue Tongbao,"Bioisosteric Replacement And Development Of Lead Compounds In Drug Design" 34-38，(1995)；Graham，Theochem,"Theoretical Studies Applied To Drug Design:ab initio Electronic Distributions In Bioisosteres"343，105-109，(1995)を参照]。酸バイオアイソスターの例として、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＳＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−ＣＮ、スルホ、ホスホノ、アルキルスルホニルカルバモイル、テトラゾリル、アリールスルホニルカルバモイル、Ｎ−メトキシカルバモイル、ヘテロアリールスルホニルカルバモイル、３−ヒドロキシ−３−シクロブテン−１,２−ジオン、３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジニルまたは３−ヒドロキシイソキサゾリル、３−ヒドロキシ−１−メチルピラゾリルといったようなヒドロキシヘテロアリールなどが挙げられる。
「酸性官能基」は、酸性水素をもつ部分を意味する。酸性官能基の例として、カルボキシル(−Ｃ(Ｏ)ＯＨ)、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＳＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−ＣＮ、スルホ、ホスホノ、アルキルスルホニルカルバモイル、テトラゾリル、アリールスルホニルカルバモイル、Ｎ−メトキシカルバモイル、ヘテロアリールスルホニルカルバモイル、３−ヒドロキシ−３−シクロブテン−１,２−ジオン、３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジニルまたは３−ヒドロキシイソキサゾリル、３−ヒドロキシ−１−メチルピラゾリルといったようなヒドロキシヘテロアリール、イミダゾリル、メルカプトなど、およびヒドロキシフェニルといったような芳香族ヒドロキシなどの適当なヒドロキシが挙げられる。
「酸保護基」は、合成手順中に望ましくない反応からカルボキシル基の酸性水素を保護し（たとえば、化合物の他の官能性部分が関与している反応が行われている間、酸官能基をブロックまたは保護する）、選択的に除去しうることが当業界で公知である容易に除去しうる基を意味する。このような酸保護基は、当業者に公知であり、米国特許第３８４０５５６号および第３７１９６６７号（これらは全体を参考文献として本発明に援用される）に記載されているように、カルボキシル基の保護において広範囲に用いられている。適当な保護基は、、T. W. GreenおよびP. G. M. Wuts の"Protective Groups in Organic Chemistry"John Wiley and Sons，1991を参照のこと。酸保護基には、本明細書に定義する、ベンジルなどの水素添加不安定酸保護基も含まれる。酸保護基の例として、メチル、エチル、ｔ−ブチル、メトキシメチル、メチルチオメチル、２,２,２−トリクロロエチルといったような置換および非置換Ｃ１〜Ｃ８低級アルキル、テトラヒドロピラニル、ベンジルおよびアルコキシベンジルまたはニトロベンジルといったようなその置換誘導体などの置換および非置換フェニルアルキル、シンナミル、ジメチルアミノエチルなどのジアルキルアミノアルキル、トリメチルシリル、Ｎ,Ｎ−ジメチルアミンのアミドおよびヒドラジドなどの置換および非置換アミドおよびヒドラジド、７−ニトロインドール、ヒドラジン、Ｎ−フェニルヒドラジンなど、ピバロイルオキシメチルまたはプロピオニルオキシメチルなどのアシルオキシアルキル基、メトキシカルボニルメチル、シクロヘキシルオキシカルボニルメチルなどのアルコキシカルボニルアルキル、ｔ−ブチルオキシカルボニルオキシメチルなどのアルコキシカルボニルオキシアルキル、ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノメチルなどのアルコキシカルボニルアミノアルキル、メチルアミノカルボニルアミノメチルなどのアルキルアミノカルボニルアミノアルキル、アセチルアミノメチルなどのアシルアミノアルキル、４−メチルピペラジニルカルボニルオキシメチルなどの複素環式カルボニルオキシアルキル、ジメチルアミノカルボニルメチルなどのジアルキルアミノカルボニルアルキル、（５−ｔ−ブチル−２−オキソ−１,３−ジオキソレン−４−イル）メチルなどの（５−（低級アルキル）−２−オキソ−１,３−ジオキソレン−４−イル）アルキル、および（５−フェニル−２−オキソ−１,３−ジオキソレン−４−イル）メチルなどの（５−フェニル−２−オキソ−１,３−ジオキソレン−４−イル）アルキルなどのエステルが挙げられる。
「酸不安定アミン保護基」は、本明細書に定義する、他の試薬に対して相対的に安定である一方で、酸で処理することによって容易に除去しうるアミン保護基を意味する。好ましい酸不安定アミン保護基はＢＯＣである。
「酸不安定アミン保護基」は、本明細書に定義する、他の試薬に対して相対的に安定である一方で、酸で処理することによって容易に除去しうるアミン保護基を意味する。好ましい酸不安定アミン保護基はＢＯＣである。
「脂肪族」は、本明細書に定義する、アルキル、アルケニルまたはアルキニルを意味する。
「脂肪族基置換基」は、本明細書に定義する、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシ、アルコキシ、シクリルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルまたはそのチオキソ類縁体、シクリルカルボニルまたはそのチオキソ類縁体、アロイルまたはそのチオキソ類縁体、ヘテロアロイルまたはそのチオキソ類縁体、アシルオキシ、シクリルカルボニルオキシ、アロイルオキシ、ヘテロアロイルオキシ、ハロ、ニトロ、シアノ、カルボキシ（酸）、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＳＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−ＣＮ、スルホ、ホスホノ、アルキルスルホニルカルバモイル、テトラゾリル、アリールスルホニルカルバモイル、Ｎ−メトキシカルバモイル、ヘテロアリールスルホニルカルバモイル、３−ヒドロキシ−３−シクロブテン−１,２−ジオン、３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジニルまたは３−ヒドロキシイソキサゾリル、３−ヒドロキシ−１−メチルピラゾリルといったようなヒドロキシヘテロアリール、アルコキシカルボニル、シクリルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アルキルスルホニル、シクリルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、シクリルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、シクリルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、シクリル、アリールジアゾ、ヘテロアリールジアゾ、チオール、メチレン（Ｈ２Ｃ＝）、オキソ（Ｏ＝）、チオキソ（Ｓ＝）、Ｙ１Ｙ２Ｎ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)Ｏ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)ＮＹ３−、Ｙ１Ｙ２ＮＳＯ２−またはＹ３ＳＯ２ＮＹ１−[ここで、Ｒ２は、本明細書の定義の通り、Ｙ１およびＹ２は、独立して、水素、アルキル、アリールまたはヘテロアリール、ならびにＹ３は、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであるか、または置換基がＹ１Ｙ２Ｎ−の場合、一方のＹ１およびＹ２は、本明細書で定義する、アシル、シクリルカルボニル、アロイル、ヘテロアロイル、アルコキシカルボニル、シクリルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニルまたはヘテロアリールカルボニルであり、他方のＹ１およびＹ２は、前記と同意義であるか、もしくは置換基が、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)Ｏ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)ＮＹ３−またはＹ１Ｙ２ＮＳＯ２−である場合、Ｙ１およびＹ２は、Ｙ１およびＹ２が結合するＮ原子と一緒になって４〜７員のアザヘテロシクリルまたはアザヘテロシクレニルを形成する]などの脂肪族基に結合される置換基を意味する。酸性／アミド脂肪族基置換基は、カルボキシ（酸）、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＳＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−ＣＮ、スルホ、ホスホノ、アルキルスルホニルカルバモイル、テトラゾリル、アリールスルホニルカルバモイル、Ｎ−メトキシカルバモイル、ヘテロアリールスルホニルカルバモイル、３−ヒドロキシ−３−シクロブテン−１,２−ジオン、３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジニルまたは３−ヒドロキシイソキサゾリル、３−ヒドロキシ−１−メチルピラゾリルといったようなヒドロキシヘテロアリールおよびＹ１Ｙ２ＮＣＯ−である。非酸性極性脂肪族基置換基は、ヒドロキシ、オキソ（Ｏ＝）、チオキソ（Ｓ＝）、アシルまたはそのチオキソ類縁体、シクリルカルボニルまたはそのチオキソ類縁体、アロイルまたはそのチオキソ類縁体、ヘテロアロイルまたはそのチオキソ類縁体、アルコキシカルボニル、シクリルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アシルオキシ、シクリルカルボニルオキシ、アロイルオキシ、ヘテロアロイルオキシ、アルキルスルホニル、シクリルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、シクリルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、チオール、Ｙ１Ｙ２Ｎ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)Ｏ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)ＮＹ３−またはＹ１Ｙ２ＮＳＯ２−である。脂肪族基置換基をもつ脂肪族基の例として、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、エトキシエトキシ、（メトキシ−、ベンジルオキシ−、フェノキシ−またはエトキシ−）カルボニル（メチルまたはエチル）、ベンジルオキシカルボニル、ピリジルメチルオキシ−カルボニルメチル、メトキシエチル、エトキシメチル、ｎ−ブトキシメチル、シクロペンチルメチルオキシエチル、フェノキシプロピル、フェノキシアリル、トリフルオロメチル、シクロプピル−メチル、シクロペンチルメチル、カルボキシ（メチルまたはエチル）、２−フェネテニル、ベンジルオキシ、１−または２−ナフチルメトキシ、４−ピリジル−メチルオキシ、ベンジルオキシエチル、３−ベンジルオキシアリル、４−ピリジルメチル−オキシエチル、４−ピリジルメチル−オキシアリル、ベンジル、２−フェネチル、ナフチルメチル、スチリル、４−フェニル−１,３−ペンタジエニル、フェニル−プロピニル、３−フェニルブト−２−イニル、ピジド−３−イルアセチレニルおよびキノリン−３−イルアセチレニル、４−ピリジル−エチニル、４−ピリジルビニル、チエニルエテニル、ピリジルエテニル、イミダゾリル−エテニル、ピラジニルエテニル、ピリジルペンテニル、ピリジルヘキセニルおよびピリジルヘプテニル、チエニル−メチル、ピリジルメチル、イミダゾリルメチル、ピラジニルメチル、テトラヒドロピラニルメチル、テトラヒドロピラニルメチルオキシメチルなどが挙げられる。
「脂肪族基置換基」は、本明細書に定義する、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシ、アルコキシ、シクリルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルまたはそのチオキソ類縁体、シクリルカルボニルまたはそのチオキソ類縁体、アロイルまたはそのチオキソ類縁体、ヘテロアロイルまたはそのチオキソ類縁体、アシルオキシ、シクリルカルボニルオキシ、アロイルオキシ、ヘテロアロイルオキシ、ハロ、ニトロ、シアノ、カルボキシ（酸）、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＳＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−ＣＮ、スルホ、ホスホノ、アルキルスルホニルカルバモイル、テトラゾリル、アリールスルホニルカルバモイル、Ｎ−メトキシカルバモイル、ヘテロアリールスルホニルカルバモイル、３−ヒドロキシ−３−シクロブテン−１,２−ジオン、３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジニルまたは３−ヒドロキシイソキサゾリル、３−ヒドロキシ−１−メチルピラゾリルといったようなヒドロキシヘテロアリール、アルコキシカルボニル、シクリルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アルキルスルホニル、シクリルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、シクリルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、シクリルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、シクリル、アリールジアゾ、ヘテロアリールジアゾ、チオール、メチレン（Ｈ２Ｃ＝）、オキソ（Ｏ＝）、チオキソ（Ｓ＝）、Ｙ１Ｙ２Ｎ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)Ｏ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)ＮＹ３−、Ｙ１Ｙ２ＮＳＯ２−またはＹ３ＳＯ２ＮＹ１−[ここで、Ｒ２は、本明細書の定義の通り、Ｙ１およびＹ２は、独立して、水素、アルキル、アリールまたはヘテロアリール、ならびにＹ３は、アルキル、シクロアルキル、アリールまたはヘテロアリールであるか、または置換基がＹ１Ｙ２Ｎ−の場合、一方のＹ１およびＹ２は、本明細書で定義する、アシル、シクリルカルボニル、アロイル、ヘテロアロイル、アルコキシカルボニル、シクリルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニルまたはヘテロアリールカルボニルであり、他方のＹ１およびＹ２は、前記と同意義であるか、もしくは置換基が、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)Ｏ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)ＮＹ３−またはＹ１Ｙ２ＮＳＯ２−である場合、Ｙ１およびＹ２は、Ｙ１およびＹ２が結合するＮ原子と一緒になって４〜７員のアザヘテロシクリルまたはアザヘテロシクレニルを形成する]などの脂肪族基に結合される置換基を意味する。酸性／アミド脂肪族基置換基は、カルボキシ（酸）、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＳＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−ＣＮ、スルホ、ホスホノ、アルキルスルホニルカルバモイル、テトラゾリル、アリールスルホニルカルバモイル、Ｎ−メトキシカルバモイル、ヘテロアリールスルホニルカルバモイル、３−ヒドロキシ−３−シクロブテン−１,２−ジオン、３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジニルまたは３−ヒドロキシイソキサゾリル、３−ヒドロキシ−１−メチルピラゾリルといったようなヒドロキシヘテロアリールおよびＹ１Ｙ２ＮＣＯ−である。非酸性極性脂肪族基置換基は、ヒドロキシ、オキソ（Ｏ＝）、チオキソ（Ｓ＝）、アシルまたはそのチオキソ類縁体、シクリルカルボニルまたはそのチオキソ類縁体、アロイルまたはそのチオキソ類縁体、ヘテロアロイルまたはそのチオキソ類縁体、アルコキシカルボニル、シクリルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アシルオキシ、シクリルカルボニルオキシ、アロイルオキシ、ヘテロアロイルオキシ、アルキルスルホニル、シクリルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、シクリルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、チオール、Ｙ１Ｙ２Ｎ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)Ｏ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)ＮＹ３−またはＹ１Ｙ２ＮＳＯ２−である。脂肪族基置換基をもつ脂肪族基の例として、メトキシメトキシ、メトキシエトキシ、エトキシエトキシ、（メトキシ−、ベンジルオキシ−、フェノキシ−またはエトキシ−）カルボニル（メチルまたはエチル）、ベンジルオキシカルボニル、ピリジルメチルオキシ−カルボニルメチル、メトキシエチル、エトキシメチル、ｎ−ブトキシメチル、シクロペンチルメチルオキシエチル、フェノキシプロピル、フェノキシアリル、トリフルオロメチル、シクロプピル−メチル、シクロペンチルメチル、カルボキシ（メチルまたはエチル）、２−フェネテニル、ベンジルオキシ、１−または２−ナフチルメトキシ、４−ピリジル−メチルオキシ、ベンジルオキシエチル、３−ベンジルオキシアリル、４−ピリジルメチル−オキシエチル、４−ピリジルメチル−オキシアリル、ベンジル、２−フェネチル、ナフチルメチル、スチリル、４−フェニル−１,３−ペンタジエニル、フェニル−プロピニル、３−フェニルブト−２−イニル、ピジド−３−イルアセチレニルおよびキノリン−３−イルアセチレニル、４−ピリジル−エチニル、４−ピリジルビニル、チエニルエテニル、ピリジルエテニル、イミダゾリル−エテニル、ピラジニルエテニル、ピリジルペンテニル、ピリジルヘキセニルおよびピリジルヘプテニル、チエニル−メチル、ピリジルメチル、イミダゾリルメチル、ピラジニルメチル、テトラヒドロピラニルメチル、テトラヒドロピラニルメチルオキシメチルなどが挙げられる。
「アシル」は、Ｈ−ＣＯ−または（脂肪族またはシクリル）−ＣＯ−基を意味する（ここで、脂肪族基は、本明細書で定義する通りである）。好ましいアシルは、低級アルキルを含む。アシル基の例として、ホルミル、アセチル、プロパノイル、２−メチルプロパノイル、ブタノイル、パルミトイル、アクリロイル、プロピノイル、シクロヘキシルカルボニルなどが挙げられる。
「アルケノイル」は、アルケニル−ＣＯ−基を意味する（ここで、アルケニルは、本明細書で定義する通りである）。
「アルケノイル」は、アルケニル−ＣＯ−基を意味する（ここで、アルケニルは、本明細書で定義する通りである）。
「アルケニル」は、炭素−炭素二重結合を含み、炭素鎖に約２〜約１５個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルケニル基は、炭素鎖に２〜約１２個の炭素原子を有するものであり、約２〜約４個の炭素原子を有する炭素鎖が、より好ましい。分枝とは、１つまたはそれ以上のメチル、エチルまたはプロピルなどの低級アルキル基が、直線アルケニル鎖に結合していることを意味する。「低級アルケニル」は、直鎖または分枝鎖であってよい炭素鎖に約２〜約４個の炭素原子を有すること意味する。アルケニル基の例として、エテニル、プロペニル、ｎ−ブテニル、ｉ−ブテニル、３−メチルブト−２−エニル、ｎ−ペンテニル、ヘプテニル、オクテニル、シクロヘキシルブテニルおよびデセニルが挙げられる。「置換アルケニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「脂肪族基置換基」で置換された前記と同意義のアルケニル基を意味する。アルケニル脂肪族基置換基の例として、ハロまたはシクロアルキル基が挙げられる。
「アルケニルオキシ」は、アルケニル−Ｏ−基を意味する（ここで、アルケニル基は、本明細書で定義する通りである）。アルケニルオキシ基の例として、アリルオキシ、３−ブテニルオキシなどが挙げられる。
「アルコキシ」は、アルキル−Ｏ−基を意味する（ここで、アルキル基は、本明細書で定義する通りである）。アルコキシ基の例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ヘプトキシなどが挙げられる。
「アルコキシカルボニル」は、アルキル−Ｏ−ＣＯ−基を意味する（ここで、アルキル基は、本明細書で定義する通りである）。アルコキシカルボニル基の例として、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニルなどが挙げられる。
「アルコキシ」は、アルキル−Ｏ−基を意味する（ここで、アルキル基は、本明細書で定義する通りである）。アルコキシ基の例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、ｉ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ヘプトキシなどが挙げられる。
「アルコキシカルボニル」は、アルキル−Ｏ−ＣＯ−基を意味する（ここで、アルキル基は、本明細書で定義する通りである）。アルコキシカルボニル基の例として、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニルなどが挙げられる。
「アルキル」は、炭素鎖に約１〜約２０個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルキル基は、炭素鎖に１〜約１２個の炭素原子を有するものであり、本明細書に定義したような低級アルキルが、より好ましい。分枝とは、１つまたはそれ以上のメチル、エチルまたはプロピルなどの低級アルキル基が、直線アルキル鎖に結合していることを意味する。「低級アルキル」は、直鎖または分枝鎖であってよい炭素鎖に約１〜約４個の炭素原子を有すること意味する。「置換アルケニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「脂肪族基置換基」で置換された前記と同意義のアルキル基を意味する。
「アルキルスルフィニル」は、アルキル−ＳＯ−基を意味する（ここで、アルキル基は、前記と同意義である）。好ましい基は、アルキル基が低級アルキルである基である。
「アルキルスルホニル」は、アルキル−ＳＯ２−基を意味する（ここで、アルキル基は、前記と同意義である）。好ましい基は、アルキル基が低級アルキルである基である。
「アルキルスルホニルカルボニル」は、アルキル−ＳＯ２−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−基を意味する（ここで、アルキル基は、本明細書で定義する通りである）。好ましいアルキルスルホニルカルボニル基は、アルキル基が低級アルキルである基である。
「アルキルチオ」は、アルキル−Ｓ−基を意味する（ここで、アルキル基は、本明細書で定義する通りである）。アルキルチオ基の例として、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオおよびヘプチルチオが挙げられる。
「アルキルスルホニル」は、アルキル−ＳＯ２−基を意味する（ここで、アルキル基は、前記と同意義である）。好ましい基は、アルキル基が低級アルキルである基である。
「アルキルスルホニルカルボニル」は、アルキル−ＳＯ２−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−基を意味する（ここで、アルキル基は、本明細書で定義する通りである）。好ましいアルキルスルホニルカルボニル基は、アルキル基が低級アルキルである基である。
「アルキルチオ」は、アルキル−Ｓ−基を意味する（ここで、アルキル基は、本明細書で定義する通りである）。アルキルチオ基の例として、メチルチオ、エチルチオ、ｎ−プロピルチオおよびヘプチルチオが挙げられる。
「アルキニル」は、炭素−炭素三重結合を含み、炭素鎖に約２〜約１５個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の脂肪族炭化水素基を意味する。好ましいアルケニル基は、炭素鎖に２〜約１２個の炭素原子を有するものであり、約２〜約４個の炭素原子を有する炭素鎖が、より好ましい。分枝とは、１つまたはそれ以上のメチル、エチルまたはプロピルなどの低級アルキル基が、直線アルキニル鎖に結合していることを意味する。「低級アルキニル」は、直鎖または分枝鎖であってよい炭素鎖に約２〜約４個の炭素原子を有すること意味する。アルキニル基は、１つまたはそれ以上のハロで置換されてよい。アルキニル基の例として、エチニル、プロピニル、ｎ−ブチニル、２−ブチニル、３−メチルブチニル、ｎ−ペンチニル、ヘプチニル、オクチニル、デシニルなどが挙げられる。「置換アルキニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「脂肪族基置換基」で置換された前記と同意義のアルキニル基を意味する。
「アミン保護基」は、合成手順中に望ましくない反応からアミノまたはアミド基の窒素部分を保護し、選択的に除去しうることが当業界で公知である容易に除去しうる基を意味する。合成手順中に望ましくない反応から基を保護するためのアミン／アミド保護基の使用は、当業界で公知であり、たとえば、T. W. GreenおよびP. G. M. Wuts の"Protective Groups in Organic Synthesis"，2nd edition，John Wiley and Sons，1991（これは全体を参考文献として本発明に援用される。）に記載されているような多くの保護基が知られている。アミン／アミド保護基には、「酸不安定アミン／アミド保護基」および「水素添加不安定アミン／アミド保護基」も含まれる。アミン／アミド保護基の例は、ホルミル、アセチル、クロロアセチル、トリクロロアセチル、ｏ−ニトロフェニルアセチル、ｏ−ニトロフェノキシ−アセチル、トリフルオロアセチル、アセトアセチル、４−クロロブチリル、イソブチリル、ｏ−ニトロシンナモイル、ピコリノイル、アシルイソチオシアネート、アミノカプロイル、ベンゾイルなどのアシルおよびメトキシ−カルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、２,２,２−トリフルオロエトキシカルボニル、２−トリメチルシリルエトキシカルボニル、ビニルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、１,１−ジメチル−プロピニルオキシカルボニル、ベンジルカルボニル（ＣＢＺ）、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２,４−ジクロロ−ベンジルオキシカルボニルなどのアシルオキシである。
「アミド保護基」は、合成手順中に望ましくない反応からアミド基の窒素部分を保護し、選択的に除去しうることが当業界で公知である容易に除去しうる基を意味する。合成手順中に望ましくない反応から基を保護するためのアミド保護基の使用は、当業界で公知であり、たとえば、T. W. GreenおよびP. G. M. Wuts の"Protective Groups in Organic Synthesis"，2nd edition，John Wiley and Sons，1991（これは全体を参考文献として本発明に援用される。）に記載されているような多くの保護基が知られている。アミド保護基には、「酸不安定アミド保護基」および「水素添加不安定アミド保護基」も含まれる。アミド保護基の例は、ｏ−ニトロシンナモイル、ピコリノイル、アミノカプロイル、ベンゾイルなどおよびメトキシ−カルボニル、９−フルオレニルメトキシカルボニル、２,２,２−トリフルオロエトキシカルボニル、２−トリメチルシリルエトキシ−カルボニル、ビニルオキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）、１,１−ジメチル−プロピニルオキシカルボニル、ベンジルカルボニル（ＣＢＺ）、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２,４−ジクロロ−ベンジルオキシカルボニルなどのアシルオキシである。
「アミノ酸」は、天然および本明細書において定義する合成アミノ酸からなるグループから選ばれるアミノ酸を意味する。またアミノ酸は、α炭素においてＬまたはＤ立体化学を有するアミノ酸を包含することをも意味する。好ましいアミノ酸は、α−アミノ基を有するアミノ酸である。アミノ酸は、側鎖の置換基に応じて、中性、陽性または陰性となりうる。「中性アミノ酸」は、荷電していない側鎖置換基を含むアミノ酸を意味する。中性アミノ酸の例として、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニンおよびシステインが挙げられる。「陽性アミノ酸」は、側鎖置換基が生理的ｐＨにおいて陽性に荷電しているアミノ酸を意味する。陽性アミノ酸の例として、リシン、アルギニンおよびヒスチジンが挙げられる。「陰性アミノ酸」は、側鎖置換基が生理的ｐＨにおいて正味陰性荷電をもつアミノ酸を意味する。陰性アミノ酸の例として、アスパラギン酸およびグルタミン酸が挙げられる。好ましいアミノ酸は、α−アミノ酸である。天然のアミノ酸の例は、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸およびグルタミン酸である。「非天然アミノ酸」は、核酸コドンがないアミノ酸を意味する。非天然アミノ酸の例として、上記天然のα−アミノ酸のＤ−異性体；Ａｉｂ（アミノ酪酸）、βＡｉｂ（３−アミノ−イソ酪酸）、Ｎｖａ（ノルバリン）、β−Ａｉａ、Ａａｄ（２−アミノアジピン酸）、βＡａｄ（３−アミノアジピン酸）、Ａｂｕ（２−アミノ酪酸）、Ｇａｂａ（γ−アミノ酪酸）、Ａｃｐ（６−アミノカプロン酸）、Ｄｂｕ（２,４−ジアミノ酪酸）、α−アミノピメリン酸、ＴＭＳＡ（トリメチルシリル−Ａｌａ）、ａＩｌｅ（アロ−イソロイシン）、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、ｔｅｒｔ−Ｌｅｕ、Ｃｉｔ（シトルリン）、Ｏｒｎ、Ｄｐｍ（２,２'−ジアミノピメリン酸）、Ｄｐｒ（２,３−ジアミノプロピオン酸）、α−またはβ−Ｎａｌ、Ｃｈａ（シクロヘキシル−Ａｌａ）、ヒドロキシプロリン、Ｓａｒ（サルコシン）など；環式アミノ酸；ＭｅＧｌｙ（Ｎａ−メチルグリシン）、ＥｔＧｌｙ（Ｎａ−エチルグリシン）およびＥｔＡｓｎ（Ｎａ−エチルアスパラギン）などのＮａ−アルキル化アミノ酸；およびα炭素が２つの側鎖置換基をもつアミノ酸が挙げられる。本明細書で用いる天然および非天然アミノ酸およびそれらの残基の名称は、“α−アミノ酸命名法（１９７４年、勧告）”、Biochemistry、１４(２)、（１９７５年）に記載された、生化学命名法において、ＩＵＰＡＣ委員会およびＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ委員会によって提案された命名規則に従う。本明細書および請求の範囲で用いるアミノ酸およびそれらの残基の名称および略語が言及した命名とは相違する場合、異なる名称および略語が明白にされるであろう。
「アミノ酸保護基」は、アミノ酸の酸またはアミン部分もしくはヒドロキシまたはチオールなどのアミノ酸の側鎖上の他の反応性部分を保護する基を意味する。アミノ酸側鎖の「対応する保護誘導体」の例は、T. W. GreenおよびP. G. M. Wuts の"Protective Groups in Organic Chemistry"John Wiley and Sons，1991を参照のこと。アミノ酸中の酸基の保護基は、本明細書中、「酸性官能基」および「水素添加不安定酸保護基」のセクションで記載する。アミノ酸中のアミン基の保護基は、本明細書中、「アミン保護基」、「酸不安定アミン保護基」および「水素添加不安定アミン保護基」のセクションで記載する。
「アミノ酸残基」は、本発明化合物に結合した個々のアミノ酸ユニットを意味する。
「アミノ酸残基」は、本発明化合物に結合した個々のアミノ酸ユニットを意味する。
「アミノ酸側鎖」は、α−アミノ酸においてアミノおよびカルボキシキの間の炭素上に見出される置換基を意味する。アミノ酸側鎖の例として、バリン、アラニンおよびアスパラギン酸に対して、それぞれイソプロピル、メチルおよびカルボキシメチルが挙げられる。
「アミノ酸等価物」は、いずれの認めうる機能喪失もなく、本発明にしたがってペプチドにおいてもう１つのアミノ酸に置換されてよいアミノ酸を意味する。このような変更を行うにあたり、等価のアミノ酸の置換は、たとえば、大きさ、電荷、親水性、hydropathicityおよび疎水性といったような側鎖置換基の相対的類似性に基いて行われる。
「アミノ酸等価物」は、いずれの認めうる機能喪失もなく、本発明にしたがってペプチドにおいてもう１つのアミノ酸に置換されてよいアミノ酸を意味する。このような変更を行うにあたり、等価のアミノ酸の置換は、たとえば、大きさ、電荷、親水性、hydropathicityおよび疎水性といったような側鎖置換基の相対的類似性に基いて行われる。
「芳香族基」は、本明細書で定義するアリールまたはヘテロアリールを意味する。芳香族基の例として、フェニル、ハロ置換フェニル、アザヘテロアリールなどが挙げられる。
「アロイル」は、アリール−ＣＯ−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で記載する通りである）。アロイル基の例として、ベンゾイル、１−および２−ナフチルなどが挙げられる。
「アロイル」は、アリール−ＣＯ−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で記載する通りである）。アロイル基の例として、ベンゾイル、１−および２−ナフチルなどが挙げられる。
「アリール」は、約６〜約１４個の炭素原子、好ましくは約６〜約１０個の炭素原子を有する芳香族単環または多環式環系を意味する。アリールは、本明細書で定義する、縮合アリールシクロアルケニル、縮合アリールシクロアルキル、縮合アリールヘテロシクレニルおよび縮合アリールヘテロシクリルを包含し、そのアリール部分を介して結合する。アリールは、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上の「環式基置換基」で必要に応じて置換される。アリール基の例として、フェニルまたはナフチル、もしくは置換フェニルまたは置換ナフチルが挙げられる。「置換アリール」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義のアリール基を意味する。
「アリールジアゾ」は、アリール−ジアゾ−基を意味する（ここで、アリールおよびジアゾ基は、本明細書で定義する通りである）。
「アリーレン」は、必要に応じて置換された１,２−、１,３−、１,４−の二価アリール基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。アリーレン基の例として、必要に応じて置換されたフェニレン、ナフチレンおよびインダニレンが挙げられる。特に好ましいアリーレンは、必要に応じて置換されたフェニレンである。「置換アリーレン」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義のアリーレン基を意味する。
「アリールオキシ」は、アリール−Ｏ−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。アリールオキシ基の例として、フェノキシおよび２−ナフチルオキシが挙げられる。
「アリールオキシカルボニル」は、アリール−Ｏ−ＣＯ−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。アリールオキシカルボニル基の例として、フェノキシカルボニルおよびナフトキシカルボニルが挙げられる。
「アリーレン」は、必要に応じて置換された１,２−、１,３−、１,４−の二価アリール基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。アリーレン基の例として、必要に応じて置換されたフェニレン、ナフチレンおよびインダニレンが挙げられる。特に好ましいアリーレンは、必要に応じて置換されたフェニレンである。「置換アリーレン」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義のアリーレン基を意味する。
「アリールオキシ」は、アリール−Ｏ−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。アリールオキシ基の例として、フェノキシおよび２−ナフチルオキシが挙げられる。
「アリールオキシカルボニル」は、アリール−Ｏ−ＣＯ−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。アリールオキシカルボニル基の例として、フェノキシカルボニルおよびナフトキシカルボニルが挙げられる。
「アリールスルホニル」は、アリール−ＳＯ２−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。
「アリールスルホニルカルバモイル」は、アリール−ＳＯ２−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。アリールスルホニルカルバモイル基の例として、フェニルスルホニルカルバモイルが挙げられる。
「アリールスルフィニル」は、アリール−ＳＯ−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。
「アリールチオ」は、アリール−Ｓ−基を意味する（ここで、アルキル基は、本明細書で定義する通りである）。アリールチオ基の例として、フェニルチオおよびナフチルチオが挙げられる。
「アリールスルホニルカルバモイル」は、アリール−ＳＯ２−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。アリールスルホニルカルバモイル基の例として、フェニルスルホニルカルバモイルが挙げられる。
「アリールスルフィニル」は、アリール−ＳＯ−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で定義する通りである）。
「アリールチオ」は、アリール−Ｓ−基を意味する（ここで、アルキル基は、本明細書で定義する通りである）。アリールチオ基の例として、フェニルチオおよびナフチルチオが挙げられる。
「塩基性窒素原子」は、プロトン化される能力をもつ非結合電子対を有するｓｐ２またはｓｐ３ハイブリッド形成窒素原子を意味する。塩基性窒素原子の例として、必要に応じて置換されたイミノ、必要に応じて置換されたアミノおよび必要に応じて置換されたアミジノ基が挙げられる。
「カルボキシ」は、ＨＯ(Ｏ)Ｃ−(カルボン酸)基を意味する。
「カップリング剤」は、カルボキシ部分のヒドロキシル部分と反応することによって、該部分が求核性攻撃の影響を受けやすくなるようにする化合物を意味する。カップリング剤の例として、ＤＩＣ、ＥＤＣＩ、ＤＣＣなどが挙げられる。
「カルボキシ」は、ＨＯ(Ｏ)Ｃ−(カルボン酸)基を意味する。
「カップリング剤」は、カルボキシ部分のヒドロキシル部分と反応することによって、該部分が求核性攻撃の影響を受けやすくなるようにする化合物を意味する。カップリング剤の例として、ＤＩＣ、ＥＤＣＩ、ＤＣＣなどが挙げられる。
「シクロアルケニル」は、約３〜約１０個の炭素原子、好ましくは約５〜約１０個の炭素原子を有し、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含む非芳香族単環または多環式環系を意味する。シクロアルケニルは、本明細書で定義する、縮合アリールシクロアルケニルおよび縮合ヘテロアリールシクロアルケニルを包含し、そのシクロアルケニル部分を介して結合する。環系の環の好ましい大きさは、約５〜約６個の環原子であり、このような環の大きさを「低級」ともいう。「置換シクロアルケニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義のシクロアルケニル基を意味する。単環式シクロアルケニルの例として、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニルなどが挙げられる。
「シクロアルキル」は、約３〜約１０個の炭素原子、好ましくは約５〜約１０個の炭素原子を有する非芳香族単環または多環式環系を意味する。環系の環の好ましい大きさは、約５〜約６個の環原子であり、このような環の大きさを「低級」ともいう。シクロアルキルは、本明細書で定義する、縮合アリールシクロアルキルおよび縮合ヘテロアリールシクロアルキルを包含し、そのシクロアルキル部分を介して結合する。「置換シクロアルキル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義のシクロアルキル基を意味する。単環式シクロアルキルの例として、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルなどが挙げられる。
「シクロアルキレン」は、約４〜約８個の炭素原子を有する本明細書で定義する二価のシクロアルキル基を意味する。シクロアルキレンの好ましい環の大きさは、約５〜約６個の環原子であり、このような環の大きさを「低級」ともいう。シクロアルキレン基上の結合点として、１,１−、１,２−、１,３−または１,４−の結合形態が挙げられ、その場合、結合点の立体化学的関係は、シスまたはトランスのいずれかである。シクロアルキレン基の例として、(１,１−、１,２−または１,３−)シクロへキシレンおよび(１,１−または１,２−)シクロペンチレンが挙げられる。「置換シクロアルキレン」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義のシクロアルキレン基を意味する。
「環式」または「シクリル」は、本明細書で定義する、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクレニルを意味する。用語「環式」に関連して用いられる用語「低級」は、本明細書においてシクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロシクリルまたはヘテロシクレニルに関して注記されたものと同じである。
「シクリルオキシ」は、シクリル−Ｏ−基を意味する（ここで、シクリル基は、本明細書で記載する通りである）。シクロアルコキシ基の例として、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、キヌクリジルオキシ、ペンタメチレンスルフィドオキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、テトラヒドロチオフェニルオキシ、ピロリジニルオキシ、テトラヒドロフラニルオキシまたは７−オキサビシクロ[２.２.１]ヘプタニルオキシ、ヒドロキシテトラヒドロピラニルオキシ、ヒドロキシ−７−オキサビシクロ[２.２.１]ヘプタニルオキシなどが挙げられる。
「シクリルオキシ」は、シクリル−Ｏ−基を意味する（ここで、シクリル基は、本明細書で記載する通りである）。シクロアルコキシ基の例として、シクロペンチルオキシ、シクロヘキシルオキシ、キヌクリジルオキシ、ペンタメチレンスルフィドオキシ、テトラヒドロピラニルオキシ、テトラヒドロチオフェニルオキシ、ピロリジニルオキシ、テトラヒドロフラニルオキシまたは７−オキサビシクロ[２.２.１]ヘプタニルオキシ、ヒドロキシテトラヒドロピラニルオキシ、ヒドロキシ−７−オキサビシクロ[２.２.１]ヘプタニルオキシなどが挙げられる。
「シクリルスルフィニル」は、シクリル−Ｓ(Ｏ)−基を意味する（ここで、シクリル基は、本明細書で記載する通りである）。
「シクリルスルホニル」は、シクリル−Ｓ(Ｏ)２−基を意味する（ここで、シクリル基は、本明細書で記載する通りである）。
「シクリルチオ」は、シクリル−Ｓ−基を意味する（ここで、シクリル基は、本明細書で記載する通りである）。
「ジアゾ」は、二価の−Ｎ＝Ｎ−ラジカルを意味する。
「置換しうる部分」は、本明細書に定義するＬと会合する場合に、たとえば、カップリング剤などの求核性攻撃を促進する作用剤の存在または不在下で、モノまたはジ置換アミン部分による求核性攻撃によって置換されやすい基を意味する。置換しうる部分の例として、ヒドロキシ、脂肪族オキシ、ハロ、Ｎ−オキシスクシンイミド、アシルオキシなどが挙げられる。
「シクリルスルホニル」は、シクリル−Ｓ(Ｏ)２−基を意味する（ここで、シクリル基は、本明細書で記載する通りである）。
「シクリルチオ」は、シクリル−Ｓ−基を意味する（ここで、シクリル基は、本明細書で記載する通りである）。
「ジアゾ」は、二価の−Ｎ＝Ｎ−ラジカルを意味する。
「置換しうる部分」は、本明細書に定義するＬと会合する場合に、たとえば、カップリング剤などの求核性攻撃を促進する作用剤の存在または不在下で、モノまたはジ置換アミン部分による求核性攻撃によって置換されやすい基を意味する。置換しうる部分の例として、ヒドロキシ、脂肪族オキシ、ハロ、Ｎ−オキシスクシンイミド、アシルオキシなどが挙げられる。
「有効量」は、所望の治療効果を生じさせる効果のある本発明の化合物／組成物の量を意味する。
「縮合アリールシクロアルケニル」は、本明細書で定義する、縮合アリールおよびシクロアルケニルを意味する。好ましい縮合アリールシクロアルケニルは、そのアリールがフェニルであり、シクロアルケニルが、約５〜約６個の環原子からなる基である。可変基としての縮合アリールシクロアルケニルは、結合することが可能である環系のいずれかの原子を介して結合する。「置換縮合アリールシクロアルケニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の縮合アリールシクロアルケニル基を意味する。縮合アリールシクロアルケニルの例として、１,２−ジヒドロナフチレン、インデンなどが挙げられる。
「縮合アリールシクロアルケニル」は、本明細書で定義する、縮合アリールおよびシクロアルケニルを意味する。好ましい縮合アリールシクロアルケニルは、そのアリールがフェニルであり、シクロアルケニルが、約５〜約６個の環原子からなる基である。可変基としての縮合アリールシクロアルケニルは、結合することが可能である環系のいずれかの原子を介して結合する。「置換縮合アリールシクロアルケニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の縮合アリールシクロアルケニル基を意味する。縮合アリールシクロアルケニルの例として、１,２−ジヒドロナフチレン、インデンなどが挙げられる。
「縮合アリールシクロアルキル」は、本明細書で定義する、縮合アリールおよびシクロアルキルを意味する。好ましい縮合アリールシクロアルキルは、そのアリールがフェニルであり、シクロアルキルが、約５〜約６個の環原子からなる基である。可変基としての縮合アリールシクロアルキルは、結合することが可能である環系のいずれかの原子を介して結合する。「置換縮合アリールシクロアルキル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の縮合アリールシクロアルキル基を意味する。縮合アリールシクロアルキルの例として、１,２,３,４−テトラヒドロ−ナフチレンなどが挙げられる。
「縮合アリールヘテロシクレニル」は、本明細書で定義する、縮合アリールおよびヘテロシクレニルを意味する。好ましい縮合アリールヘテロシクレニルは、そのアリールがフェニルであり、ヘテロシクレニルが、約５〜約６個の環原子からなる基である。可変基としての縮合アリールヘテロシクレニルは、結合することが可能である環系のいずれかの原子を介して結合する。縮合アリールヘテロシクレニルのヘテロシクレニル部分の前の接頭語としてのアザ、オキサまたはチアという名称は、環原子として、いずれにせよ、それぞれ窒素、酸素またはイオウ原子が存在することを定義する。「置換縮合アリールヘテロシクレニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の縮合アリールヘテロシクレニル基を意味する。縮合アリールヘテロシクレニルの窒素原子は、塩基性窒素原子である。縮合アリールヘテロシクレニルのヘテロシクレニル部分の窒素またはイオウ原子は、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシド、Ｓ−オキシドまたはＳ,Ｓ−ジオキシドであってもよい。縮合アリールヘテロシクレニルの例として、３Ｈ−インドリニル、１Ｈ−２−オキソキノリル、２Ｈ−１−オキソキノリル、１,２−ジ−ヒドロキノリニル、３,４−ジヒドロキノリニル、１,２−ジヒドロイソキノリニル、３,４−ジヒドロイソキノリニルなどが挙げられる。
「縮合アリールヘテロシクリル」は、本明細書で定義する、縮合アリールおよびヘテロシクリルを意味する。好ましい縮合アリールヘテロシクリルは、そのアリールがフェニルであり、ヘテロシクリルが、約５〜約６個の環原子からなる基である。可変基としての縮合アリールヘテロシクリルは、結合することが可能である環系のいずれかの原子を介して結合する。縮合アリールヘテロシクリルのヘテロシクリル部分の前の接頭語としてのアザ、オキサまたはチアという名称は、環原子として、いずれにせよ、それぞれ窒素、酸素またはイオウ原子が存在することを定義する。「置換縮合アリールヘテロシクリル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の縮合アリールヘテロシクリル基を意味する。縮合アリールヘテロシクリルの窒素原子は、塩基性窒素原子である。縮合アリールヘテロシクリルのヘテロシクリル部分の窒素またはイオウ原子は、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシド、Ｓ−オキシドまたはＳ,Ｓ−ジオキシドであってもよい。縮合アリールヘテロシクリルの例として、インドリニル、１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン１,２,３,４−テトラヒドロキノリン、１Ｈ−２,３−ジヒドロイソインドール−２−イル、２,３−ジヒドロベンズ［ｆ］イソインドール−２−イル、１,２,３,４−テトラヒドロベンズ［ｇ］イソキノリン−２−イルなどが挙げられる。
「縮合ヘテロアリールシクロアルケニル」は、本明細書で定義する、縮合ヘテロアリールおよびシクロアルケニルを意味する。好ましい縮合ヘテロアリールシクロアルケニルは、そのヘテロアリールがフェニルであり、シクロアルケニルが、約５〜約６個の環原子からなる基である。可変基としての縮合ヘテロアリールシクロアルケニルは、結合することが可能である環系のいずれかの原子を介して結合する。縮合ヘテロアリールシクロアルケニルのヘテロシクリル部分の前の接頭語としてのアザ、オキサまたはチアという名称は、環原子として、いずれにせよ、それぞれ窒素、酸素またはイオウ原子が存在することを定義する。「置換縮合ヘテロアリールシクロアルケニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の縮合ヘテロアリールシクロアルケニル基を意味する。縮合ヘテロアリールシクロアルケニルの窒素原子は、塩基性窒素原子である。縮合ヘテロアリールシクロアルケニルのヘテロアリール部分の窒素原子は、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシドであってもよい。縮合ヘテロアリールシクロアルケニルの例として、５,６−ジヒドロイソキノリル、５,６−ジヒドロキノキサリニル、５,６−ジヒドロキナゾリニル、４,５−ジヒドロ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル、４,５−ジ−ヒドロベンゾキサゾリルなどが挙げられる。
「縮合ヘテロアリールシクロアルキル」は、本明細書で定義する、縮合ヘテロアリールおよびシクロアルキルを意味する。好ましい縮合ヘテロアリールシクロアルキルは、そのヘテロアリールが約５〜約６個の環原子からなり、シクロアルキルが約５〜約６個の環原子からなる基である。可変基としての縮合ヘテロアリールシクロアルキルは、結合することが可能である環系のいずれかの原子を介して結合する。縮合ヘテロアリールシクロアルキルのヘテロアリール部分の前の接頭語としてのアザ、オキサまたはチアという名称は、環原子として、いずれにせよ、それぞれ窒素、酸素またはイオウ原子が存在することを定義する。「置換縮合ヘテロアリールシクロアルキル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の縮合ヘテロアリールシクロアルキル基を意味する。縮合ヘテロアリールシクロアルキルの窒素原子は、塩基性窒素原子である。縮合ヘテロアリールシクロアルキルのヘテロアリール部分の窒素原子は、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシドであってもよい。縮合ヘテロアリールシクロアルキルの例として、５,６,７,８−テトラヒドロイソキノリル、５,６,７,８−テトラヒドロキノキサリニル、５,６,７,８−テトラヒドロキナゾリル、４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−ベンズイミダゾリル、４,５,６,７−テトラヒドロベンゾキサゾリル、１Ｈ−４−オキサ−１,５−ジアザナフタレン−２−オニル、１,３−ジヒドロイミジゾール−［４,５］−ピリジン−２−オニルなどが挙げられる。
「縮合ヘテロアリールヘテロシクレニル」は、本明細書で定義する、縮合ヘテロアリールおよびヘテロシクレニルを意味する。好ましい縮合ヘテロアリールヘテロシクレニルは、そのヘテロアリールが約５〜約６個の環原子からなり、ヘテロシクレニルが約５〜約６個の環原子からなる基である。可変基としての縮合ヘテロアリールヘテロシクレニルは、結合することが可能である環系のいずれかの原子を介して結合する。縮合ヘテロアリールヘテロシクレニルのヘテロアリールまたはヘテロシクレニル部分の前の接頭語としてのアザ、オキサまたはチアという名称は、環原子として、いずれにせよ、それぞれ窒素、酸素またはイオウ原子が存在することを定義する。「置換縮合ヘテロアリールヘテロシクレニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の縮合ヘテロアリールヘテロシクレニル基を意味する。縮合ヘテロアリールヘテロシクレニルの窒素原子は、塩基性窒素原子である。縮合ヘテロアリールヘテロシクレニルのヘテロアリール部分の窒素またはイオウ原子は、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシドであってもよい。縮合ヘテロアリールヘテロシクレニルのヘテロアリールまたはヘテロシクレニル部分の窒素またはイオウ原子は、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシド、Ｓ−オキシドまたはＳ,Ｓ−ジオキシドであってもよい。縮合ヘテロアリールヘテロシクレニルの例として、７,８−ジヒドロ［１,７］ナフチリジニル、１,２−ジヒドロ［２,７］ナフチリニニル、６,７−ジヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４,５−ｃ］ピリジル、１,２−ジヒドロ−１,５−ナフチリジニル、１,２−ジヒドロ−１,６−ナフチリジニル、１,２−ジヒドロ−１,７−ナフチリジニル、１,２−ジヒドロ−１,８−ナフチリジニル、１,２−ジヒドロ−２,６−ナフチリジニルなどが挙げられる。
「縮合ヘテロアリールヘテロシクリル」は、本明細書で定義する、縮合ヘテロアリールおよびヘテロシクリルを意味する。好ましい縮合ヘテロアリールヘテロシクリルは、そのヘテロアリールが約５〜約６個の環原子からなり、ヘテロシクリルが約５〜約６個の環原子からなる基である。可変基としての縮合ヘテロアリールヘテロシクリルは、結合することが可能である環系のいずれかの原子を介して結合する。縮合ヘテロアリールヘテロシクリルのヘテロアリールまたはヘテロシクリル部分の前の接頭語としてのアザ、オキサまたはチアという名称は、環原子として、いずれにせよ、それぞれ窒素、酸素またはイオウ原子が存在することを定義する。「置換縮合ヘテロアリールヘテロシクリル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の縮合ヘテロアリールヘテロシクリル基を意味する。縮合ヘテロアリールヘテロシクリルの窒素原子は、塩基性窒素原子である。縮合ヘテロアリールヘテロシクリルのヘテロアリール部分の窒素またはイオウ原子は、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシドであってもよい。縮合ヘテロアリールヘテロシクリルのヘテロアリールまたはヘテロシクリル部分の窒素またはイオウ原子は、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシド、Ｓ−オキシドまたはＳ,Ｓ−ジオキシドであってもよい。縮合ヘテロアリールヘテロシクリルの例として、２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロール［３,４−ｂ］キノリン−２−イル、１,２,３,４−テトラヒドロベンズ［ｂ］［１,７］ナフチリジン−２−イル、１,２,３,４−テトラヒドロベンズ［ｂ］［１,６］ナフチリジン−２−イル、１,２,３,４−テトラヒドロ−９Ｈ−ピリド［３,４−ｂ］インドール−２−イル、１,２,３,４−テトラヒドロ−９Ｈ−ピリド［４,３−ｂ］インドール−２−イル、２,３−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３,４−ｂ］インドール−２−イル、１Ｈ−２,３,４,５−テトラヒドロアゼピノ［３,４−ｂ］インドール−２−イル、１Ｈ−２,３,４,５−テトラヒドロアゼピノ［４,３−ｂ］インドール−３−イル、１Ｈ−２,３,４,５−テトラヒドロアゼピノ［４,５−ｂ］インドール−２−イル、５,６,７,８−テトラヒドロ［１,７］ナフチリジル、１,２,３,４−テトラヒドロ［２,７］ナフチリジル、２,３−ジヒドロ［１,４］ジオキシノ［２,３−ｂ］ピリジル、２,３−ジヒドロ［１,４］ジオキシノ［２,３−ｂ］ピリジル、３,４−ジヒドロ−２Ｈ−１−オキサ［４,６］ジアザナフタレニル、４,５,６,７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４,５−ｃ］ピリジル、６,７−ジヒドロ［５,８］ジアザナフタレニル、１,２,３,４−テトラヒドロ［１,５］ナフチリジニル、１,２,３,４−テトラヒドロ［１,６］ナフチリジニル、１,２,３,４−テトラヒドロ［１,７］ナフチリジニル、１,２,３,４−テトラヒドロ［１,８］ナフチリジニル、１,２,３,４−テトラヒドロ［２,６］ナフチリジニルなどが挙げられる。
「ハロ」は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを意味する。フルオロ、クロロまたはブロモが好ましく、フルオロまたはクロロがより好ましい。
「ヘテロアロイル」は、ヘテロアリール−ＣＯ−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で記載する通りである）。ヘテロアロイル基の例として、チオフェノイル、ニコチノイル、ピロール−２−イルカルボニル、１−および２−ナフトイル、ピリジノイルなどが挙げられる。
「ヘテロアロイル」は、ヘテロアリール−ＣＯ−基を意味する（ここで、アリール基は、本明細書で記載する通りである）。ヘテロアロイル基の例として、チオフェノイル、ニコチノイル、ピロール−２−イルカルボニル、１−および２−ナフトイル、ピリジノイルなどが挙げられる。
「ヘテロアリール」は、約５〜約１４個の炭素原子、好ましくは約５〜約１０個の炭素原子を有する芳香族単環または多環式環系であって、環系の１つまたはそれ以上の炭素原子が、たとえば、窒素、酸素またはイオウなどの炭素以外のヘテロ元素である環系を意味する。環系が１〜３個のヘテロ原子を含むのが好ましい。環系の環の好ましい大きさは、約５〜約６個の環原子である。ヘテロアリールは、本明細書で定義する、縮合ヘテロアリールシクロアルケニル、縮合ヘテロアリールシクロアルキル、縮合ヘテロアリールヘテロシクレニルおよび縮合ヘテロアリールヘテロシクリルを包含し、そのヘテロアリール部分を介して結合する。「置換ヘテロアリール」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義のヘテロアリール基を意味する。ヘテロアリールの前の接頭語としてのアザ、オキサまたはチアという名称は、環原子として、いずれにせよ、それぞれ窒素、酸素またはイオウ原子が存在することを定義する。ヘテロアリールの窒素原子は、塩基性窒素原子であり、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシドであってもよい。ヘテロアリールおよび置換ヘテロアリール基の例として、ピラジニル、チエニル、イソチアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、フラザニル、ピロリル、１,２,４−チアジアゾリル、ピリダジニル、キノキサリニル、フタラジニル、イミダゾ［１,２−ａ］ピリジン、イミダゾ［２,１−ｂ］チアゾリル、ベンゾフラザニル、アザインドリル、ベンズイミダゾリル、ベンゾチエニル、チエノピリジル、チエノピリミジル、ピロロピリジル、イミダゾピリジル、ベンゾアザインドリル、１,２,４−トリアジニル、ベンズチアゾリル、フラニル、イミダゾリル、インドリル、インドリジニル、イソキサゾリル、イソキノリニル、イソチアゾリル、オキサジアゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、ピラゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピロリル、キナゾリニル、キノリニル、１,３,４−チアジアゾリル、チアゾリル、チエニル、トリアゾリルなどが挙げられる。好ましいヘテロアリールは、ピラジニルである。
「ヘテロアリールジアゾ」は、ヘテロアリール−アゾ−基を意味する（ここで、ヘテロアリールおよびアゾ基は、本明細書で定義する通りである）。
「ヘテロアリールジイル」は、ヘテロアリールから誘導された二価のラジカルを意味する（ここで、ヘテロアリールは、本明細書で記載する通りである）。ヘテロアリールジイル ラジカルの例は、必要に応じて置換されたピリジンジイルである。
「ヘテロアリールスルホニルカルバモイル」は、ヘテロアリール−ＳＯ２−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−基を意味する（ここで、ヘテロアリール基は、本明細書で記載する通りである）。
「ヘテロアリールジイル」は、ヘテロアリールから誘導された二価のラジカルを意味する（ここで、ヘテロアリールは、本明細書で記載する通りである）。ヘテロアリールジイル ラジカルの例は、必要に応じて置換されたピリジンジイルである。
「ヘテロアリールスルホニルカルバモイル」は、ヘテロアリール−ＳＯ２−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−基を意味する（ここで、ヘテロアリール基は、本明細書で記載する通りである）。
「ヘテロシクレニル」は、約３〜約１０個の炭素原子、好ましくは約５〜約１０個の炭素原子を有する非芳香族単環または多環式炭化水素環系であって、環系の１つまたはそれ以上の炭素原子が、たとえば、窒素、酸素またはイオウなどの炭素以外のヘテロ元素であり、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合または炭素−窒素二重結合を含む環系を意味する。環系が１〜３個のヘテロ原子を含むのが好ましい。環系の環の好ましい大きさは、約５〜約６個の環原子であり、このような環の大きさを「低級」ともいう。ヘテロシクレニルは、本明細書で定義する、縮合アリールヘテロシクレニルおよび縮合ヘテロアリールヘテロシクレニルを包含し、そのヘテロシクレニル部分を介して結合する。ヘテロシクレニルの前の接頭語としてのアザ、オキサまたはチアという名称は、環原子として、いずれにせよ、それぞれ窒素、酸素またはイオウ原子が存在することを定義する。「置換ヘテロシクレニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義のヘテロシクレニル基を意味する。ヘテロシクレニルの窒素原子は、塩基性窒素原子である。ヘテロシクレニルの窒素またはイオウ原子は、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシド、Ｓ−オキシドまたはＳ,Ｓ−ジオキシドであってもよい。単環式アザヘテロシクレニル基の例として、１,２,３,４−テトラヒドロヒドロピリジン、１,２−ジヒドロピリジル、１,４−ジヒドロピリジル、１,２,３,６−テトラ−ヒドロピリジン、１,４,５,６−テトラヒドロピリミジン、２−ピロリニル、３−ピロリニル、２−イミダゾリニル、２−ピラゾリニルなどが挙げられる。オキサヘテロシクレニル基の例として、３,４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン、ジヒドロフラニルおよびフルオロジヒドロフラニルが挙げられる。多環式オキサヘテロシクレニル基の例として、７−オキサビシクロ［２.２.１］ヘプテニルが挙げられる。単環式チアヘテロシクレニル環の例として、ジヒドロチオフェニルおよびジヒドロチオピラニルが挙げられる。
「ヘテロシクリル」は、約３〜約１０個の炭素原子、好ましくは約５〜約１０個の炭素原子を有する非芳香族飽和単環または多環式環系であって、環系の１つまたはそれ以上の炭素原子が、たとえば、窒素、酸素またはイオウなどの炭素以外のヘテロ元素である環系を意味する。環系が１〜３個のヘテロ原子を含むのが好ましい。環系の環の好ましい大きさは、約５〜約６個の環原子であり、このような環の大きさを「低級」ともいう。ヘテロシクリルは、本明細書で定義する、縮合アリールヘテロシクリルおよび縮合ヘテロアリールヘテロシクリルを包含し、そのヘテロシクリル部分を介して結合する。ヘテロシクリルの前の接頭語としてのアザ、オキサまたはチアという名称は、環原子として、いずれにせよ、それぞれ窒素、酸素またはイオウ原子が存在することを定義する。「置換ヘテロシクリル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義のヘテロシクリル基を意味する。ヘテロシクリルの窒素原子は、塩基性窒素原子である。ヘテロシクリルの窒素またはイオウ原子は、必要に応じて酸化されて、対応するＮ−オキシド、Ｓ−オキシドまたはＳ,Ｓ−ジオキシドであってもよい。単環式ヘテロシクリル環の例として、ピペリジル、ピロリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、チアゾリジニル、１,３−ジオキソラニル、１,４−ジオキサニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチオフェニル、テトラヒドロチオピラニルなどが挙げられる。置換単環式アザヘテロシクリルとしての
は、直接またはリンカーを介して、たとえば、アリール、ヘテロアリール、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アロイルまたはそのチオキソ類縁体、ヘテロアロイルまたはそのチオキソ類縁体、アロイルオキシ、ヘテロアロイルオキシ、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アリールジアゾ、ヘテロアリールジアゾ、Ｙ１Ｙ２Ｎ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)Ｏ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)ＮＹ３−またはＹ１Ｙ２ＮＳＯ２（ここで、少なくとも１つのＹ１およびＹ２は、アリールまたはヘテロアリール部分であるか、または該部分を含むか、または該部分で置換される）などの本明細書に定義する、芳香族基であるか、または該基を含むか、または該基で置換される、少なくとも１つの置換基で置換される。好ましいリンカーとして、−Ｃ(Ｏ)−、−ＯＣ(Ｏ)−、低級アルキル、低級アルコキシ、低級アルケニル、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｃ(Ｏ)Ｃ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)−、−Ｓ(Ｏ)２−、−ＮＲ８０（ここで、Ｒ８０は、水素、アルキル、シクロアルキル、アリール、アラルキル、ヘテロシクリルまたはヘテロアリールである）が挙げられる。特に好ましいリンカーは、−Ｃ(Ｏ)−および−ＯＣ(Ｏ)−である。「置換多環式アザヘテロシクリル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の多環式アザヘテロシクリルを意味する。「置換多環式アザヘテロシクレニル」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義の多環式アザヘテロシクレニルを意味する。
「ヘテロシクリレン」は、約４〜約８個の炭素原子を有する本明細書で定義する二価のヘテロシクリル基を意味する。ヘテロシクリレンの好ましい環の大きさは、約５〜約６個の環原子であり、このような環の大きさを「低級」ともいう。ヘテロアルキレン基上の結合点として、１,１−、１,２−、１,３−または１,４−の結合形態が挙げられ、その場合、結合点の立体化学的関係は、シスまたはトランスのいずれかである。ヘテロシクリレン基の例として、(１,１−、１,２−または１,３−)ピペリジニレンおよび(１,１−または１,２−)テトラヒドロフラニレンが挙げられる。「置換ヘテロシクリレン」は、同種または異種であって、本明細書で定義する、１つまたはそれ以上（１〜３個が好ましい）の「環式基置換基」で置換された前記と同意義のヘテロシクリレン基を意味する。
「水和物」は、溶媒分子がＨ２Ｏである溶媒和物を意味する。
「水素添加不安定アミン保護基」は、他の試薬に対して相対的に安定である一方で、水素添加によって容易に除去される本明細書に定義するアミン保護基を意味する。好ましい水素添加不安定アミン保護基は、Ｃｂｚである。
「水素添加不安定酸保護基」は、他の試薬に対して相対的に安定である一方で、水素添加によって容易に除去される本明細書に定義する酸保護基を意味する。好ましい水素添加不安定酸保護基は、ベンジルである。
「吸湿性」は、物質の物理的または化学的特性に影響を及ぼすのに十分な、獲得された水の量または状態を含んでいる吸収を意味する(Eds. J. SwarbrickおよびJ. C. Boylan，Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，10,33)。
「水素添加不安定アミン保護基」は、他の試薬に対して相対的に安定である一方で、水素添加によって容易に除去される本明細書に定義するアミン保護基を意味する。好ましい水素添加不安定アミン保護基は、Ｃｂｚである。
「水素添加不安定酸保護基」は、他の試薬に対して相対的に安定である一方で、水素添加によって容易に除去される本明細書に定義する酸保護基を意味する。好ましい水素添加不安定酸保護基は、ベンジルである。
「吸湿性」は、物質の物理的または化学的特性に影響を及ぼすのに十分な、獲得された水の量または状態を含んでいる吸収を意味する(Eds. J. SwarbrickおよびJ. C. Boylan，Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，10,33)。
「イミン性グリシンイミド誘導体」は、天然または人工のα−アミノ酸の合成に有用なグリシンのイミン性シッフ塩基を意味する。イミン性エステル官能性は、結合形成プロセス中の立体導入（stereoinduction）を補助する、１つまたはそれ以上の不斉中心を含む。さらに、これらのイミン性グリシンイミド誘導体は、組み合わせ合成を促進するための高分子サポートに組み込まれる。イミン性グリシンイミド誘導体は、酸触媒の存在下、グリシンエステルを適当なケトンと縮合することによって製造される。反応は水分の除去によって促進される。イミン性グリシンイミド誘導体は、たとえば、Guillena,G.,ら，J. Org. Chem. 2000,65,7310-7322（これは全体を参考文献として本発明に援用される）に開示されているように、マイケル付加合成手順における使用が、当業界で公知である。本発明のイミン性グリシンイミド誘導体の特定の例として、式：
[式中、Ｍ＊は、遷移金属であり、ＣＵが好ましく、ＣＵＩＩがより好ましい；
Ｒ１４は、−ＣＯ２Ｒ１６、−ＣＮ、
または−ＣＯＮＲ１５Ｒ１５；
Ｒ１５は、必要に応じて置換された脂肪族基；
Ｒ１６は、酸保護基、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換された脂肪族基；
Ｒ１７は、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換された脂肪族基、
；
Ｒ１８は、水素、アルキルまたはアルキルチオ、もしくは必要に応じて置換されたアリール；
Ｒ１７およびＲ１８は、Ｒ１７およびＲ１８が結合する炭素と一緒になって、
であり；および
は固相である］
から選ばれるものが挙げられる。
Ｒ１４は、−ＣＯ２Ｒ１６、−ＣＮ、
Ｒ１５は、必要に応じて置換された脂肪族基；
Ｒ１６は、酸保護基、必要に応じて置換されたアリールまたは必要に応じて置換された脂肪族基；
Ｒ１７は、必要に応じて置換されたアリール、必要に応じて置換された脂肪族基、
Ｒ１８は、水素、アルキルまたはアルキルチオ、もしくは必要に応じて置換されたアリール；
Ｒ１７およびＲ１８は、Ｒ１７およびＲ１８が結合する炭素と一緒になって、
から選ばれるものが挙げられる。
「イミン性グリシン誘導付加体」は、シッフ塩基部分の窒素およびカルボニル部分に対するα−水素が除去され、それへの結合形成のためのアタッチメントを形成するのに用いられる場合において生じる化合物を意味する。本発明のイミン性グリシン付加誘導体の特定の例として、式：
[式中、Ｒ１４、Ｒ１７およびＲ１８は、イミン性グリシンイミド誘導体の定義で記載したものと同意義である]
から選ばれるものが挙げられる。
から選ばれるものが挙げられる。
「Ｎ−オキシスクシンイミド」は、次の構造：
で示される部分を意味する。
「Ｎ−オキシド」は、次の構造：
で示される部分をを意味する。
「Ｎ−オキシド」は、次の構造：
「患者」は、ヒトおよび他の哺乳動物の両方を含む。
「ペプチド模倣」は、アミド結合を介して結合したアミノ酸残基を含むポリマーを意味する。
「医薬的に許容しうるエステル」は、インビボで加水分解し、ヒトの体内で容易に分解して、親化合物またはその塩を残すエステルを意味する。適当なエステル基として、たとえば、医薬的に許容しうる脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカンジオン酸などが挙げられるが、各アルキルまたはアルケニル部分が、６個以下の炭素原子を有するのが好ましい。エステルの例として、ホルメート、アセテート、プロピオネート、ブチレート、アクリレート、エチルスクシネートなどが挙げられる。
「ペプチド模倣」は、アミド結合を介して結合したアミノ酸残基を含むポリマーを意味する。
「医薬的に許容しうるエステル」は、インビボで加水分解し、ヒトの体内で容易に分解して、親化合物またはその塩を残すエステルを意味する。適当なエステル基として、たとえば、医薬的に許容しうる脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカンジオン酸などが挙げられるが、各アルキルまたはアルケニル部分が、６個以下の炭素原子を有するのが好ましい。エステルの例として、ホルメート、アセテート、プロピオネート、ブチレート、アクリレート、エチルスクシネートなどが挙げられる。
本明細書で用いる「医薬的に許容しうるプロドラッグ」は、医学的評価の範囲内において、適切でない毒性、刺激、アレルギー応答などをともなうヒトおよび下等動物の組織と接触する使用に適しており、妥当な利点／リスク比に釣り合っており、意図する用途にとって有効である本発明化合物のプロドラッグならびに、可能であれば、本発明化合物の両性イオン体を意味する。用語「プロドラッグ」は、たとえば、血液中での加水分解などによって、インビボで急速に構造が変化して、前記式で示される親化合物を生じる化合物を意味する。代謝的開裂によって急速に構造が変化する官能基は、インビボで、本発明化合物のカルボキシル基と反応する種類の基を形成する。その例として、アルカノイル（アセチル、プロパノイル、ブタノイルなど）、非置換および置換アロイル（ベンゾイルおよび置換ベンゾイルなど）、アルコキシカルボニル（エトキシカルボニルなど）、トリアルキルシリル（トリメチル−およびトリエチルシリルなど）、ジカルボン酸で形成されたモノエステル（スクシニルなど）などの基が挙げられるが、これらに限定されるものではない。本発明化合物の代謝的に開裂しうる基は、インビボで容易に開裂されるので、このような基をもつ化合物はプロドラッグとして作用する。代謝的に開裂しうる基をもつ化合物は、代謝的に開裂しうる基が存在することによって親化合物に付与された増強された溶解度および／または吸収率の結果として、それらが、改善されたバイオアベイラビリティを示すという利点を有する。Design of Prodrugs，H. Bundgaard，ed.，Elsevier (1985)；Methods in Enzymology；K. Widderら，Ed.，Academic Press，42,309-396 (1985)；A Textbook of Drug Design and Development，Krogsgaard-Larsen and H. Bandaged，ed.，Chapter 5；"Design and Applications of Prodrugs" 113-191 (1991)；Advanced Drug Delivery Reviews，H. Bundgard，8，1-38，(1992)；J. Pharm. Sci.，77,285 (1988)；Chem. Pharm. Bull.，N. Nakeyaら，32,692 (1984)；Pro-drugs as Novel Delivery Systems，T. HiguchiおよびV. Stella，14 A. C. S. Symposium Series，and Bioreversible Carriers in Drug Design，E. B. Roche，ed.，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987(これらは全体を参考文献として本発明に援用される)において、徹底的な議論が提供される。
「医薬的に許容しうる塩」は、本発明化合物の非毒性の無機および有機酸付加塩および塩基付加塩を意味する。これらの塩は、本発明化合物の最終的単離および精製中にインシトゥにて製造することができる。さらに詳しくは、酸付加塩は、その遊離塩基体の精製化合物を適当な有機または無機酸と個々に反応させ、形成された塩を単離することによって製造することができる。酸付加塩の例として、臭化水素酸塩、塩酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、酢酸塩、蓚酸塩、バレリアン酸塩、オレイン酸塩、パルミチン酸塩、ステアリン酸塩、ラウリン酸塩、ホウ酸塩、安息香酸塩、乳酸塩、リン酸塩、トシレート、クエン酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、ナフチル酸塩、メシレート、グルコヘプトネート、ラクチオビオネート、スルファメート、マロン酸塩、サリチル酸塩、プロピオン酸塩、メチレン−ビス−β−ヒドロキシナフトエート、ゲンチシン酸塩、イセチオネート、ジ−ｐ−トルオイル酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファメートおよびキニン酸ラウリルスルホン酸塩などが挙げられる。たとえば、S. M. Bergeら,"Pharmaceutical Salts,"J. Pharm. Sci.，66,1-19 (1977)（これは全体を参考文献として本発明に援用される）を参照。酸付加塩は、その酸体の精製化合物を適当な有機または無機塩基と個々に反応させ、形成された塩を単離することによって製造することもできる。適当な金属塩として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウム、亜鉛、マグネシウムおよびアルミニウム塩が挙げられる。ナトリウムおよびカリウム塩が好ましい。適当な無機塩基付加塩は、水素化ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アルミニウム、水酸化リチウム、水酸化マグネシウム、水酸化亜鉛などの金属塩基から製造される。適当なアミン塩基付加塩は、安定な塩を形成するのに十分な塩基度をもつアミンから製造され、好ましくは、その低毒性および医学用途への許容性のために、薬品化学において頻繁に使用されるアミンが挙げられる。アンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、リシン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ,Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、水酸化テトラメチルアンモニウム、トリエチルアミン、ジベンジルアミン、エフェナミン、デヒドロアビエチルアミン、Ｎ−エチルピペリジン、ベンジルアミン、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、エチルアミン、リシンおよびアルギニンなどの塩基性アミノ酸およびジシクロヘキシルアミンなどである。
「環式基置換基」は、アリール、ヘテロアリール、ヒドロキシ、アルコキシ、シクリルオキシ、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アシルまたはそのチオキソ類縁体、シクリルカルボニルまたはそのチオキソ類縁体、アロイルまたはそのチオキソ類縁体、ヘテロアロイルまたはそのチオキソ類縁体、アシルオキシ、シクリルカルボニルオキシ、アロイルオキシ、ヘテロアロイルオキシ、ハロ、ニトロ、シアノ、カルボキシ（酸）、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＳＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−ＣＮ、スルホ、ホスホノ、アルキルスルホニルカルバモイル、テトラゾリル、アリールスルホニルカルバモイル、Ｎ−メトキシカルバモイル、ヘテロアリールスルホニルカルバモイル、３−ヒドロキシ−３−シクロブテン−１,２−ジオン、３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジニルまたは３−ヒドロキシイソキサゾリル、３−ヒドロキシ−１−メチルピラゾリルといったようなヒドロキシヘテロアリール、アルコキシカルボニル、シクリルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アルキルスルホニル、シクリルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、シクリルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、シクリルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、シクリル、アリールジアゾ、ヘテロアリールジアゾ、チオール、Ｙ１Ｙ２Ｎ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)Ｏ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)ＮＹ３−またはＹ１Ｙ２ＮＳＯ２[ここで、Ｙ１、Ｙ２およびＹ３は、独立して、水素、アルキル、アリールまたはヘテロアリールであるか、または置換基がＹ１Ｙ２Ｎ−の場合、一方のＹ１およびＹ２は、本明細書で定義する、アシル、シクリルカルボニル、アロイル、ヘテロアロイル、アルコキシカルボニル、シクリルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニルまたはヘテロアリールカルボニルであり、他方のＹ１およびＹ２は、前記と同意義であるか、もしくは置換基が、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)Ｏ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)ＮＹ３−またはＹ１Ｙ２ＮＳＯ２−である場合、Ｙ１およびＹ２は、Ｙ１およびＹ２が結合するＮ原子と一緒になって４〜７員のアザヘテロシクリルまたはアザヘテロシクレニルを形成する]などの芳香族または非芳香族環系に結合した置換基を意味する。環系が、飽和または部分飽和である場合、「環式基置換基」は、メチレン（Ｈ２Ｃ＝）、オキソ（Ｏ＝）およびチオキソ（Ｓ＝）をさらに含む。酸性／アミド環式基置換基は、カルボキシ（酸）、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＣＨ２ＳＨ、−Ｃ(Ｏ)−ＮＨ−ＣＮ、スルホ、ホスホノ、アルキルスルホニルカルバモイル、テトラゾリル、アリールスルホニルカルバモイル、Ｎ−メトキシカルバモイル、ヘテロアリールスルホニルカルバモイル、３−ヒドロキシ−３−シクロブテン−１,２−ジオン、３,５−ジオキソ−１,２,４−オキサジアゾリジニルまたは３−ヒドロキシイソキサゾリル、３−ヒドロキシ−１−メチルピラゾリルといったようなヒドロキシヘテロアリールおよびＹ１Ｙ２ＮＣＯ−である。非酸性極性環式基置換基は、ヒドロキシ、オキソ（Ｏ＝）、チオキソ（Ｓ＝）、アシルまたはそのチオキソ類縁体、シクリルカルボニルまたはそのチオキソ類縁体、アロイルまたはそのチオキソ類縁体、ヘテロアロイルまたはそのチオキソ類縁体、アルコキシカルボニル、シクリルオキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、ヘテロアリールオキシカルボニル、アシルオキシ、シクリルカルボニルオキシ、アロイルオキシ、ヘテロアロイルオキシ、アルキルスルホニル、シクリルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、シクリルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、チオール、Ｙ１Ｙ２Ｎ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)Ｏ−、Ｙ１Ｙ２ＮＣ(Ｏ)ＮＹ３−またはＹ１Ｙ２ＮＳＯ２−である。
「溶媒和物」は、本発明化合物と１つまたはそれ以上の溶媒分子との物理的会合を意味する。この物理的会合は、水素結合を含む。ある場合、たとえば、１つまたはそれ以上の溶媒分子が結晶性固体の結晶格子に組み込まれる場合には、溶媒和物を単離することができる。「溶媒和物」は、溶液相および単離しうる溶媒和物の両方を包含する。溶媒和物の例として、水和物、エタノール付加物、メタノール付加物などが挙げられる。
（具体例）
本明細書に記載する発明に関して、関連する特定および好ましい具体例を以下に記載する。
本発明の特定の具体例は、Ｒ０が結合である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ０がジフルオロメチレンである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ１が水素または必要に応じて置換された低級脂肪族基である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ１が水素または低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１が水素である場合である。
本明細書に記載する発明に関して、関連する特定および好ましい具体例を以下に記載する。
本発明の特定の具体例は、Ｒ０が結合である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ０がジフルオロメチレンである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ１が水素または必要に応じて置換された低級脂肪族基である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ１が水素または低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１が水素である場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ２が必要に応じて置換された低級脂肪族基または必要に応じて置換された単環式基である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ２が必要に応じて置換された低級アルキル、必要に応じて置換された低級アルケニルまたは必要に応じて置換された単環式シクロアルキルである場合である。
本発明のさらなる特定の具体例は、Ｒ２がカルボキシメチル、１−カルボキシ−２−フェニルエチル、シクロプロピル、シクロブチル、１−シクロヘキシルエチル、１−フェニルエチル、ブト−２−イル、１−ピリド−４−イルエチル、プロペン−３−イルまたは３−メチルブト−２−イル；より好ましくはシクロプロピルである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ２が必要に応じて置換された低級アルキル、必要に応じて置換された低級アルケニルまたは必要に応じて置換された単環式シクロアルキルである場合である。
本発明のさらなる特定の具体例は、Ｒ２がカルボキシメチル、１−カルボキシ−２−フェニルエチル、シクロプロピル、シクロブチル、１−シクロヘキシルエチル、１−フェニルエチル、ブト−２−イル、１−ピリド−４−イルエチル、プロペン−３−イルまたは３−メチルブト−２−イル；より好ましくはシクロプロピルである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ３が必要に応じて置換された低級脂肪族基メチレンである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ３が必要に応じてハロ置換された低級（アルキルまたはアルケニル）メチレンである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ３がプロピルメチレン、２,２−ジフルオロエチルメチレン、２,２,２−トリフルオロメチレンまたはプロペン−３−イルメチレン；より好ましくはＲ３がプロピルメチレンまたは２,２−ジフルオロエチルメチレン；さらに好ましくはＲ３がプロピルメチレンである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ３が必要に応じてハロ置換された低級（アルキルまたはアルケニル）メチレンである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ３がプロピルメチレン、２,２−ジフルオロエチルメチレン、２,２,２−トリフルオロメチレンまたはプロペン−３−イルメチレン；より好ましくはＲ３がプロピルメチレンまたは２,２−ジフルオロエチルメチレン；さらに好ましくはＲ３がプロピルメチレンである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ４が水素または必要に応じて置換された低級脂肪族基である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ４が水素または低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ４が水素である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ４が水素または低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ４が水素である場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ５が必要に応じて置換された低級脂肪族基メチレンである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ５が必要に応じて（フェニル、カルボキシ、カルボキサミドまたはアルコキシカルボニル）置換された低級（アルキルまたはアルケニル）メチレンである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ５がメチルメチレン、イソプロピルメチレン、ｔ−ブチルメチレン、ブト−２−イルメチレン、ブチルメチレン、ベンジルメチレン、３−メチルブチルメチレン、２−メチルプロピル−メチレン、カルボキシメチルメチレン、カルボキサミドメチルメチレン、ベンジルオキシカルボニルメチルメチレン、ベンジルオキシカルボニルプロピルメチレンまたはフェニルプロペン−３−イルメチレン；より好ましくはＲ５がイソプロピルメチレンまたはｔ−ブチル−メチレンである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ５が必要に応じて（フェニル、カルボキシ、カルボキサミドまたはアルコキシカルボニル）置換された低級（アルキルまたはアルケニル）メチレンである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ５がメチルメチレン、イソプロピルメチレン、ｔ−ブチルメチレン、ブト−２−イルメチレン、ブチルメチレン、ベンジルメチレン、３−メチルブチルメチレン、２−メチルプロピル−メチレン、カルボキシメチルメチレン、カルボキサミドメチルメチレン、ベンジルオキシカルボニルメチルメチレン、ベンジルオキシカルボニルプロピルメチレンまたはフェニルプロペン−３−イルメチレン；より好ましくはＲ５がイソプロピルメチレンまたはｔ−ブチル−メチレンである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ６が水素または必要に応じて置換された低級脂肪族基である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ６が水素または低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ６が水素である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ６が水素または低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ６が水素である場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ７が必要に応じて置換された低級脂肪族基メチレン、必要に応じて置換された低級環式基メチレンまたは必要に応じて置換された単環式（アリールまたはヘテロアリール）メチレンである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ７が必要に応じて置換された低級アルキルメチレン、必要に応じて置換された低級シクロアルキルメチレンまたは必要に応じて置換されたフェニルメチレンである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ７がメチルメチレン、イソプロピルメチレン、ｎ−プロピルメチレン、フェニルメチレン、シクロヘキシルメチレン、シクロペンチルメチレン、ｔ−ブチルメチレン、ｓ−ブチルメチレン、シクロヘキシルメチルメチレンまたはフェニルメチルメチレン；より好ましくはイソプロピルメチレン、シクロヘキシルメチレン、シクロペンチルメチレン、ｔ−ブチルメチレンまたはｓ−ブチルメチレンである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ７が必要に応じて置換された低級アルキルメチレン、必要に応じて置換された低級シクロアルキルメチレンまたは必要に応じて置換されたフェニルメチレンである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ７がメチルメチレン、イソプロピルメチレン、ｎ−プロピルメチレン、フェニルメチレン、シクロヘキシルメチレン、シクロペンチルメチレン、ｔ−ブチルメチレン、ｓ−ブチルメチレン、シクロヘキシルメチルメチレンまたはフェニルメチルメチレン；より好ましくはイソプロピルメチレン、シクロヘキシルメチレン、シクロペンチルメチレン、ｔ−ブチルメチレンまたはｓ−ブチルメチレンである場合である。
また本発明の好ましい具体例は、Ｒ３、Ｒ５およびＲ７がそれぞれ、モノ置換メチレンである場合である。
また本発明の好ましい具体例は、Ｒ３がモノ置換メチレンであり、−Ｃ(Ｏ)−Ｒ０−Ｃ(Ｏ)−ＮＲ１Ｒ２部分に結合した炭素原子において(Ｓ)配置をもつ場合である。
また本発明の好ましい具体例は、Ｒ３がモノ置換メチレンであり、−Ｃ(Ｏ)−Ｒ０−Ｃ(Ｏ)−ＮＲ１Ｒ２部分に結合した炭素原子において(Ｓ)配置をもつ場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ８が水素または必要に応じて置換された低級脂肪族基である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ８が水素または低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ８が水素である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ８が水素または低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ８が水素である場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ９が必要に応じて置換された低級脂肪族基または必要に応じて置換された単環式芳香族基である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ９が必要に応じて置換された低級アルキルまたは必要に応じて置換された単環式ヘテロアリールである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ９が必要に応じて（カルボキシ、（低級アルキル）ＳＯ２ＮＨ−、（低級アルキル）ＨＮＣＯ−、ヒドロキシ、フェニル、ヘテロアリールまたは（低級アルキル）ＯＣ(Ｏ)ＮＨ−）置換された低級アルキルまたは必要に応じて置換された単環式ヘテロアリールである場合である。
本発明のさらに好ましい具体例は、Ｒ９が（モノまたはジ）ＭｅＯＣ(Ｏ)ＮＨ−で置換された低級アルキル；より好ましくは１,２−ジ(ＭｅＯＣ(Ｏ)ＮＨ)エチルまたは１−(ＭｅＯＣ(Ｏ)ＮＨ)エチルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ９が（カルボキシ、（低級アルキル）ＨＮＣＯ−またはテトラゾリル）置換された低級アルキル；より好ましくは３−カルボキシプロピル、２−テトラゾール−５−イルプロピル、３−（Ｎ−メチルカルボキサミド）プロピルまたは３−カルボキシ−２,２−ジメチルプロピル；さらに好ましくは３−カルボキシプロピル、２−テトラゾール−５−イルプロピルまたは３−（Ｎ−メチルカルボキサミド）プロピルである場合である。
本発明の別の好ましい具体例は、Ｒ９が必要に応じて置換された低級アルキル；より好ましくは１−ヒドロキシ−２−フェニルエチル、メチル、イソプロピルまたはｔ−ブチル；さらに好ましくはメチル、イソプロピルまたはｔ−ブチルである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ９が必要に応じて置換された低級アルキルまたは必要に応じて置換された単環式ヘテロアリールである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ９が必要に応じて（カルボキシ、（低級アルキル）ＳＯ２ＮＨ−、（低級アルキル）ＨＮＣＯ−、ヒドロキシ、フェニル、ヘテロアリールまたは（低級アルキル）ＯＣ(Ｏ)ＮＨ−）置換された低級アルキルまたは必要に応じて置換された単環式ヘテロアリールである場合である。
本発明のさらに好ましい具体例は、Ｒ９が（モノまたはジ）ＭｅＯＣ(Ｏ)ＮＨ−で置換された低級アルキル；より好ましくは１,２−ジ(ＭｅＯＣ(Ｏ)ＮＨ)エチルまたは１−(ＭｅＯＣ(Ｏ)ＮＨ)エチルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ９が（カルボキシ、（低級アルキル）ＨＮＣＯ−またはテトラゾリル）置換された低級アルキル；より好ましくは３−カルボキシプロピル、２−テトラゾール−５−イルプロピル、３−（Ｎ−メチルカルボキサミド）プロピルまたは３−カルボキシ−２,２−ジメチルプロピル；さらに好ましくは３−カルボキシプロピル、２−テトラゾール−５−イルプロピルまたは３−（Ｎ−メチルカルボキサミド）プロピルである場合である。
本発明の別の好ましい具体例は、Ｒ９が必要に応じて置換された低級アルキル；より好ましくは１−ヒドロキシ−２−フェニルエチル、メチル、イソプロピルまたはｔ−ブチル；さらに好ましくはメチル、イソプロピルまたはｔ−ブチルである場合である。
本発明の別の好ましい具体例は、Ｒ９が
からなるグループから選ばれる場合である。
本発明のさらに別の好ましい具体例は、Ｒ９がピラジニルである場合である。
本発明のさらに別の好ましい具体例は、Ｒ９がピラジニルである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ１０が水素または必要に応じて置換された低級脂肪族基である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ１０が水素または低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１０が水素である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ１０が水素または低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１０が水素である場合である。
本発明の好ましい具体例は、置換単環式アザヘテロシクリルとしての
が置換ピロリジニルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、置換単環式アザヘテロシクリルとしての
が必要に応じて置換された
または必要に応じて置換された
[式中、Ａｒは芳香族部分を含むＲ２である]
；より好ましくは必要に応じて置換された
；さらに好ましくは必要に応じて置換された
である場合である。
本発明の好ましい具体例は、置換単環式アザヘテロシクリルとしての
；より好ましくは必要に応じて置換された
さらに好ましくは必要に応じて置換された
は
または
；よりさらに好ましくは
である。
本発明の別の好ましい具体例は、必要に応じて置換された多環式アザヘテロシクリルとしての
が必要に応じて置換された
；より好ましくは必要に応じて置換された
である場合である。
のための特定の置換基は、ヒドロキシ、フルオロまたはオキソである。
本発明の別の好ましい具体例は、必要に応じて置換された多環式アザヘテロシクレニルとしての
が必要に応じて置換された
；より好ましくは
；さらに好ましくは
である場合である。
本発明の別の好ましい具体例は、必要に応じて置換された多環式アザヘテロシクレニルとしての
が必要に応じて置換された
である場合である。
本発明の好ましい具体例は、
に結合した−Ｃ(Ｏ)−Ｎ(Ｒ４)−Ｒ３−Ｃ(Ｏ)Ｒ０Ｃ(Ｏ)ＮＲ２Ｒ１部分が窒素原子に対するα炭素に結合する場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｌが−Ｃ(Ｏ)−または−ＯＣ(Ｏ)−である場合である。
本発明の好ましい具体例は、ｎが０である場合である。
本発明の別の好ましい具体例は、ｎが１である場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１１が−ＣＯ２Ｒ１３である場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１２が
である場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｌが−Ｃ(Ｏ)−または−ＯＣ(Ｏ)−である場合である。
本発明の好ましい具体例は、ｎが０である場合である。
本発明の別の好ましい具体例は、ｎが１である場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１１が−ＣＯ２Ｒ１３である場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１２が
本発明の特定の具体例は、Ｒ１３が必要に応じて置換された脂肪族基である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ１３がアルキル基である場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１３が低級アルキルである場合である。
本発明の別の好ましい具体例は、Ｒ１３がメチルである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ１３がアルキル基である場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１３が低級アルキルである場合である。
本発明の別の好ましい具体例は、Ｒ１３がメチルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１４が−ＣＯ２Ｒ１６である場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ１５がアルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１５が低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１５がメチルである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ１５がアルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１５が低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１５がメチルである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ１６が必要に応じて置換された脂肪族基である場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ１６がアルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１６が低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１６がｔ−Ｂｕである場合である。
本発明の別の特定の具体例は、Ｒ１６がアルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１６が低級アルキルである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１６がｔ−Ｂｕである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ１７が必要に応じて置換されたアリールである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１７がフェニルである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ１８が必要に応じて置換されたアリールである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１８がフェニルである場合である。
本発明の特定の具体例は、ｐ０がＢＯＣ、ＣＢｚおよび−ＣＯ２アルキルからなるグループから選ばれる場合である。
本発明の好ましい具体例は、ｐ０がＢＯＣである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１７がフェニルである場合である。
本発明の特定の具体例は、Ｒ１８が必要に応じて置換されたアリールである場合である。
本発明の好ましい具体例は、Ｒ１８がフェニルである場合である。
本発明の特定の具体例は、ｐ０がＢＯＣ、ＣＢｚおよび−ＣＯ２アルキルからなるグループから選ばれる場合である。
本発明の好ましい具体例は、ｐ０がＢＯＣである場合である。
本発明が、本明細書に言及した特定および好ましい集団の適当な組み合わせのすべてに及ぶことが理解されよう。
本発明の特定の化合物は、
から連続的に構成される化合物Ａ〜ＦＨもしくはその医薬的に許容しうる塩またはプロドラッグ、もしくはそのような化合物の溶媒和物、その塩またはプロドラッグから選ばれる。
好ましい化合物は、Ｓ、Ｕ、ＢＷ、ＢＸ、ＢＹ、ＢＺ、ＣＥ、ＣＵ、ＣＷ、ＣＹ、ＤＺ、ＥＡ、ＥＣ、ＥＪ、ＦＨ、ＥＷ、ＥＯ、ＥＺ、ＦＧおよびＥＮ からなるグループから選ばれる化合物もしくはその医薬的に許容しうる塩またはプロドラッグ、もしくはそのような化合物の溶媒和物、その塩またはプロドラッグから選ばれる化合物である。
好ましい化合物は、Ｓ、Ｕ、ＢＷ、ＢＸ、ＢＹ、ＢＺ、ＣＥ、ＣＵ、ＣＷ、ＣＹ、ＤＺ、ＥＡ、ＥＣ、ＥＪ、ＦＨ、ＥＷ、ＥＯ、ＥＺ、ＦＧおよびＥＮ からなるグループから選ばれる化合物もしくはその医薬的に許容しうる塩またはプロドラッグ、もしくはそのような化合物の溶媒和物、その塩またはプロドラッグから選ばれる化合物である。
本発明の別の好ましい具体例は、以下の化合物：
もしくはその医薬的に許容しうる塩またはプロドラッグ、もしくはそのような化合物の溶媒和物、その塩またはプロドラッグから選ばれる
本発明の別の好ましい具体例は、式：
で示される化合物もしくはその医薬的に許容しうる塩またはプロドラッグ、もしくはそのような化合物の溶媒和物、その塩またはプロドラッグである。
本発明の別の好ましい具体例は、
Ｒ０が結合；
Ｒ１が水素；
Ｒ２が１〜３個の脂肪族基置換基で必要に応じて置換された低級アルキル；または１〜３個の環式基置換基で必要に応じて置換された低級シクロアルキル；
Ｒ３およびＲ５が、それぞれ独立して、１〜３個の脂肪族基置換基で必要に応じて置換されたメチレン；
Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８およびＲ１０が水素；
Ｒ７がシクロアルキル、低級アルキルまたはアリールで置換されたメチレン；またはシクロアルキル、低級アルキルまたはアリールで置換された（１,１−または１,２−）シクロアルケニル；
Ｒ９が１〜３個の脂肪族基置換基で必要に応じて置換された低級アルキル；または１〜３個の環式基置換基で必要に応じて置換されたヘテロアリール；または１〜３個の環式基置換基で必要に応じて置換されたヘテロ環式基；
が１〜３個の環式基置換基で必要に応じて置換された単環式アザヘテロシクリル、多環式アザヘテロシクリルまたは多環式アザヘテロシクレニル；および
Ｌが−Ｃ(Ｏ)−または−ＯＣ(Ｏ)−；
である化合物（１）である。
Ｒ０が結合；
Ｒ１が水素；
Ｒ２が１〜３個の脂肪族基置換基で必要に応じて置換された低級アルキル；または１〜３個の環式基置換基で必要に応じて置換された低級シクロアルキル；
Ｒ３およびＲ５が、それぞれ独立して、１〜３個の脂肪族基置換基で必要に応じて置換されたメチレン；
Ｒ４、Ｒ６、Ｒ８およびＲ１０が水素；
Ｒ７がシクロアルキル、低級アルキルまたはアリールで置換されたメチレン；またはシクロアルキル、低級アルキルまたはアリールで置換された（１,１−または１,２−）シクロアルケニル；
Ｒ９が１〜３個の脂肪族基置換基で必要に応じて置換された低級アルキル；または１〜３個の環式基置換基で必要に応じて置換されたヘテロアリール；または１〜３個の環式基置換基で必要に応じて置換されたヘテロ環式基；
Ｌが−Ｃ(Ｏ)−または−ＯＣ(Ｏ)−；
である化合物（１）である。
本発明の別の好ましい具体例は、
からなるグループから選ばれる化合物もしくはその医薬的に許容しうる塩またはプロドラッグ、もしくはそのような化合物の溶媒和物、その塩またはプロドラッグである。
本発明の別の好ましい具体例は、必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基であるＲ９が、少なくとも１つのヘテロアリール置換基で置換される化合物（１）である。
本発明の別の好ましい具体例は、必要に応じて置換された芳香族基であるＲ９が、必要に応じて置換されたヘテロアリールである化合物（１）である。
本発明の別の好ましい具体例は、必要に応じて置換された脂肪族基であるＲ９が、必要に応じて置換されたアルキルヘテロアリールである化合物（１）である。
本発明の別の好ましい具体例は、必要に応じて置換されたヘテロアリール基であるＲ９が、環式基置換基で必要に応じて置換されたピラジニル、テトラゾリル、キノリニル、イミダゾリル、イソキサゾリルおよびピリダニルである化合物（１）である。
本発明の別の好ましい具体例は、必要に応じて置換された芳香族基であるＲ９が、必要に応じて置換されたヘテロアリールである化合物（１）である。
本発明の別の好ましい具体例は、必要に応じて置換された脂肪族基であるＲ９が、必要に応じて置換されたアルキルヘテロアリールである化合物（１）である。
本発明の別の好ましい具体例は、必要に応じて置換されたヘテロアリール基であるＲ９が、環式基置換基で必要に応じて置換されたピラジニル、テトラゾリル、キノリニル、イミダゾリル、イソキサゾリルおよびピリダニルである化合物（１）である。
本発明化合物は、必要に応じて塩として供給される。医薬的に許容しうるこのような塩は、それらが医学目的での前述の化合物の投与において有用であるので、特に興味深いものである。医薬的に許容しうるものではない塩は、製造過程において、単離および精製の目的にとって、および幾つかの場合、本発明化合物の立体異性体の分離に用いるのに有用である。後者は、光学活性アミンから製造されたアミン塩について当てはまる。
本発明化合物がカルボキシ基もしくは十分に酸性のバイオアイソスターを含む場合、塩基付加塩が形成され、使用にとって、より便利である；実際に、塩体の使用は、本質的に遊離酸体の使用に相当する。
本発明化合物がカルボキシ基もしくは十分に酸性のバイオアイソスターを含む場合、塩基付加塩が形成され、使用にとって、より便利である；実際に、塩体の使用は、本質的に遊離酸体の使用に相当する。
本発明方法の好ましい具体例は、患者に医薬的有効量の化合物（１）を投与することを含む、ＨＣＶ感染もしくは該感染に関連する生理的コンディションに苦しむ患者を治療する方法である。
本発明方法の別の好ましい具体例は、患者に、医薬的有効量のもう１つの抗ＨＣＶ治療薬と組み合わせた医薬的有効量の化合物（１）を投与することを含む、ＨＣＶ感染もしくは該感染に関連する生理的コンディションに苦しむ患者を治療する方法である。
本発明方法の別の好ましい具体例は、患者に、医薬的有効量のもう１つの抗ＨＣＶ治療薬と組み合わせた医薬的有効量の化合物（１）を投与することを含む、ＨＣＶ感染もしくは該感染に関連する生理的コンディションに苦しむ患者を治療する方法である。
本発明の別の目的は、１種またはそれ以上のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターに加えて、１種またはそれ以上の抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンおよび／または１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物ならびに医薬的に許容しうる担体または希釈剤を含む医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、本発明にしたがって利用しうる多数の有効成分を含むという理由から、有益な併用療法における利用にとって有効な医薬組成物を提供することである。
本発明の別の目的は、本発明にしたがって利用しうる多数の有効成分を含むという理由から、有益な併用療法における利用にとって有効な医薬組成物を提供することである。
また本発明は、２種またはそれ以上の、患者のＨＣＶ感染を治療または予防するのに有用な有効成分を組み合わせるキットまたはシングルパッケージを提供する。キットは、（単独または医薬的に許容しうる担体または希釈剤と組み合わせて）、化合物（１）およびさらなる有効成分（単独または医薬的に許容しうる担体または希釈剤と組み合わせて）他の抗ＨＣＶ治療薬を提供する。
化合物（１）は、これまでに用いられた、あるいは文献に記載された公知の方法を応用または適用することによって、もしくは本発明にしたがった方法によって製造される。
化合物（１）は、これまでに用いられた、あるいは文献に記載された公知の方法を応用または適用することによって、もしくは本発明にしたがった方法によって製造される。
本発明の別の目的は、治療または予防を必要とする患者に医薬的有効量の１種またはそれ以上のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター；１種またはそれ以上の抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロン；および／または１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物を投与することを含む、患者におけるＨＣＶ感染の治療または予防方法を提供することである。
本発明の別の目的は、治療または予防を必要とする患者におけるＨＣＶ感染の治療または予防のための医薬を製造するための、１種またはそれ以上の抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンおよび／または１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物の使用である。
本発明の別の目的は、治療または予防を必要とする患者におけるＨＣＶ感染の治療または予防のための医薬を製造するための、１種またはそれ以上の抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンおよび／または１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物の使用である。
本発明のさらに別の目的は、患者におけるＨＣＶ感染を治療または予防するためのキットまたは医薬パックであり、該キットまたは医薬パックは、複数のセパレート容器を含み、少なくとも１つの容器が１種またはそれ以上のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターを含み（単独または医薬的に許容しうる担体または希釈剤と組み合わせて）、少なくとも１つの別の容器が１種またはそれ以上のインターフェロンまたは抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンの生成を誘発する化合物を含み（単独または医薬的に許容しうる担体または希釈剤と組み合わせて）、および必要に応じて、少なくとも１つの別の容器が、１種またはそれ以上のＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ免疫賦活性サイトカインといったような免疫調節性化合物などの抗ＨＣＶ活性をもつ化合物を含む（単独または医薬的に許容しうる担体または希釈剤と組み合わせて）。
本発明のまた別の目的は、細胞をＣ型肝炎ウイルスセリンプロテアーゼインヒビターおよび必要に応じてインターフェロンまたは抗Ｃ型肝炎ウイルス活性をもつインターフェロンの生成を誘発する化合物に接触させることを含む、細胞におけるＣ型肝炎ウイルスの複製を阻害する方法を提供することである。
いずれの前述の適用においても、ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター、インターフェロンまたは抗ＨＣＶ化合物の量は、ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター、インターフェロン、抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンの生成を誘発する化合物および／または抗ＨＣＶ化合物の最終的組み合わせが、患者におけるＨＣＶ感染の治療または予防に有効である医薬的有効量の化合物を含むということであれば、医薬的有効量、準臨床的抗ＨＣＶ有効量またはその組み合わせであることができる。
本発明のさらなる目的は、化合物（１）の製造に有用なキラルビシクロプロリネート化合物の製造方法を提供することである。
本発明のさらなる目的は、化合物（１）の製造に有用なキラルビシクロプロリネート化合物の製造方法を提供することである。
（本発明化合物の製造）
本発明化合物の出発物質および中間体は、たとえば、参考例において記載した方法またはそれらの明らかな化学的等価物などの公知の方法を応用または適用することによって製造することができる。
本発明化合物は、たとえば、R. C. Larock in Comprehensive Organic Transformations，VCH publishers (1989)に記載の方法などのこれまでに用いられた、あるいは文献に記載された方法といったような公知の方法を応用または適用することによって製造することができる。
本発明化合物の出発物質および中間体は、たとえば、参考例において記載した方法またはそれらの明らかな化学的等価物などの公知の方法を応用または適用することによって製造することができる。
本発明化合物は、たとえば、R. C. Larock in Comprehensive Organic Transformations，VCH publishers (1989)に記載の方法などのこれまでに用いられた、あるいは文献に記載された方法といったような公知の方法を応用または適用することによって製造することができる。
その可変基および
部分が明細書に記載の通りである化合物（１）は、
その可変基および
部分が明細書に記載の通りである式（２）で示される化合物を、適当な酸化剤および適当な条件下で処理することによって製造することができる。特定の酸化剤は、ＤＭＰ試薬である。特定の条件として、約室温にてジクロロメタンなどの適当な有機溶媒中で酸化を行うことが挙げられる。
その可変基および
部分が明細書に記載の通りである化合物（２）は、
その可変基および
部分が明細書に記載の通りである式（３）で示される化合物およびその可変基が明細書に記載の通りである式（４）で示される化合物を、適当なカップリング剤および適当な条件下でカップリングすることによって製造することができる。特定のカップリング剤および条件として、約０℃にてＤＭＦなどの適当な有機溶媒中でＤＩＣおよびＨＯＡｔを用いるか、または約室温にてジクロロメタンなどの適当な有機溶媒中でＰｙＢｏｐおよびＤＩＰＥＡを用いることが挙げられる。
その可変基および
部分が明細書に記載の通りである式（３）で示される化合物は、
その可変基が明細書に記載の通りである式（５）で示される化合物および
そのＰ２が酸保護基であり、
部分が明細書に記載の通りである式（６）で示される化合物を、適当なカップリング剤および適当な条件下でカップリングし、次いで、適当な脱保護剤および適当な脱保護条件下で処理することによって製造することができる。特定のカップリング剤および条件として、約０℃〜約室温にてＤＭＦまたはジクロロメタンなどの適当な有機溶媒中でＤＩＣまたはＤＣＣおよびＨＯＡｔを用いることが挙げられる。脱保護は、保護剤の性質、すなわち、酸、塩基または水素添加条件下で除去しうる（不安定）であるかどうか、および脱保護を受ける化合物中の他の反応性部分の性質に応じて、適当な脱保護剤を用いて行う（すなわち、付随反応が望まれない限り、他の反応性部分に影響を及ぼすことなく脱保護を行うように脱保護剤が選ばれる）。特定の酸保護剤は、Ｃ１〜Ｃ８低級アルキルである；より特定にはメチルである。特定の脱保護剤は、水酸化アルカリなどの無機塩基である；より特定にはＮａＯＨである。特定の脱保護条件は、約室温にてメタノールまたはエタノールなどのアルコール性溶媒中で脱保護を行うことを含む。
そのＰ２が酸保護基であり、
ｎが０であり、他の可変基が明細書に記載の通りである式（５）で示される化合物、すなわち、化合物（５ａ）は、
そのＰ２が酸保護基であり、他の可変基が明細書に記載の通りである式（７）で示される化合物を、適当な脱保護剤および適当な条件下で脱保護することによって製造することができる。脱保護は、保護剤の性質、すなわち、酸、塩基または水素添加条件下で除去しうる（不安定）であるかどうか、および脱保護を受ける化合物中の他の反応性部分の性質に応じて、適当な脱保護剤を用いて行う（すなわち、付随反応が望まれない限り、他の反応性部分に影響を及ぼすことなく脱保護を行うように脱保護剤が選ばれる）。特定の酸保護剤は、Ｃ１〜Ｃ８低級アルキルである；より特定にはメチルである。特定の脱保護剤は、水酸化アルカリなどの無機塩基である；より特定にはＮａＯＨである。特定の脱保護条件は、約室温にてメタノールまたはエタノールなどのアルコール性溶媒中で脱保護を行うことを含む。
その可変基が明細書に記載の通りである式（７）で示される化合物は、
その可変基が明細書に記載の通りである式（８）で示される化合物を、適当な条件下で、そのＭが置換可能な部分であり、他の可変基が明細書に記載の通りである式（９）で示される化合物でアシル化することによって製造することができる。特定のカップリング条件は、約０℃〜約室温にてＤＭＦまたはジクロロメタンなどの適当な有機溶媒中でＤＩＣまたはＤＣＣおよびＨＯＡｔを用いるか、または約室温にてジクロロメタンなどの適当な有機溶媒中でＰｙＢｏｐおよびＤＩＰＥＡを用いる；後者の条件が好ましい。特定のＬはカルボニルである。特定のＭはヒドロキシまたはＮ−オキシスクシンイミドである。
ｎが１であり、他の可変基が明細書に記載の通りである式（５）で示される化合物、すなわち、化合物（５ｂ）は、
そのＰ２が酸保護基であり、他の可変基が明細書に記載の通りである式（１０）で示される化合物を、適当な脱保護剤および適当な条件下で脱保護することによって製造することができる。脱保護は、酸保護剤の性質、すなわち、酸、塩基または水素添加条件下で除去しうる（不安定）であるかどうか、および脱保護を受ける化合物中の他の反応性部分の性質に応じて、適当な脱保護剤を用いて行う（すなわち、付随反応が望まれない限り、他の反応性部分に影響を及ぼすことなく脱保護を行うように脱保護剤が選ばれる）。特定の酸保護剤は、Ｃ１〜Ｃ８低級アルキルである；より特定にはメチルである。特定の脱保護剤は、水酸化アルカリなどの無機塩基である；より特定にはＮａＯＨである。特定の脱保護条件は、約室温にてメタノールまたはエタノールなどのアルコール性溶媒中で脱保護を行うことを含む。
その可変基が明細書に記載の通りである式（１０）で示される化合物は、
その可変基が明細書に記載の通りである式（１１）で示される化合物を、適当な条件下で、その可変基が明細書に記載の通りである式（９）で示される化合物でアシル化することによって製造することができる。特定のカップリング条件は、約０℃〜約室温にてＤＭＦまたはジクロロメタンなどの適当な有機溶媒中でＤＩＣまたはＤＣＣおよびＨＯＡｔを用いるか、または約室温にてジクロロメタンなどの適当な有機溶媒中でＰｙＢｏｐおよびＤＩＰＥＡを用いる；後者の条件が好ましい。特定のＬはカルボニルである。特定のＭはヒドロキシまたはＮ−オキシスクシンイミドである。
可変基が明細書に記載の通りである式（１１）で示される化合物は、
そのＰ１がアミン保護基であり、他の可変基が明細書に記載の通りである式（１２）で示される化合物を、適当な脱保護剤および適当な条件下で脱保護することによって製造することができる。脱保護は、アミン保護剤の性質、すなわち、酸、塩基または水素添加条件下で除去しうる（不安定）であるかどうか、および脱保護を受ける化合物中の他の反応性部分の性質に応じて、適当な脱保護剤を用いて行う（すなわち、付随反応が望まれない限り、他の反応性部分に影響を及ぼすことなく脱保護を行うように脱保護剤が選ばれる）。特定のアミン保護剤は、ＣｂｚまたはＢＯＣである；より特定にはＣｂｚである。特定の脱保護剤は、ＨＣｌなどの酸またはＨ２／Ｐｄ(ＯＨ)２である。特定の脱保護条件は、約室温にてメタノールまたはエタノールなどのアルコール性溶媒もしくは酢酸エチルなどのアルキルアルカノエート溶媒中で脱保護を行うことを含む。
その可変基が明細書に記載の通りである式（１２）で示される化合物は、
その可変基が明細書に記載の通りである式（１４）で示される化合物を、適当な条件下で、その可変基が明細書に記載の通りである式（１４）で示される化合物とカップリングすることによって製造することができる。特定のカップリング条件は、約室温にてＴＨＦなどの適当な有機溶媒中でＨＯＡｔ／ＤＩＣおよびＤＩＰＥＡを用いる。
可変基が明細書に記載の通りである式（４）で示される化合物は、
その可変基が明細書に記載の通りである式（１５）で示される化合物を、適当な脱保護剤および適当な条件下で脱保護することによって製造することができる。脱保護は、アミン保護剤の性質、すなわち、酸、塩基または水素添加条件下で除去しうる（不安定）であるかどうか、および脱保護を受ける化合物中の他の反応性部分の性質に応じて、適当な脱保護剤を用いて行う（すなわち、付随反応が望まれない限り、他の反応性部分に影響を及ぼすことなく脱保護を行うように脱保護剤が選ばれる）。特定のアミン保護剤は、ＣｂｚまたはＢＯＣである；より特定にはＣｂｚである。特定の脱保護剤は、ＨＣｌなどの酸またはＨ２／Ｐｄ(ＯＨ)２である。特定の脱保護条件は、約室温にてメタノールまたはエタノールなどのアルコール性溶媒もしくは酢酸エチルなどのアルキルアルカノエート溶媒中で脱保護を行うことを含む。
その可変基が明細書に記載の通りである式（１５）で示される化合物は、
その可変基が明細書に記載の通りである式（１６）で示される化合物を、適当な条件下で、その可変基が明細書に記載の通りである式（１７）で示される化合物とカップリングすることによって製造することができる。特定のアミン保護剤は、ＣｂｚまたはＢＯＣである；より特定にはＣｂｚである。特定のカップリング条件は、約０℃〜約室温にてジクロロメタンなどの適当な有機溶媒中でＨＯＢＴ、ＰｙＢｏｐおよびＤＩＰＥＡを用いる。
可変基が明細書に記載の通りである式（１６）で示される化合物は、
他の可変基が明細書に記載の通りである式（１８）で示される化合物を、適当な脱保護剤および適当な条件下で脱保護することによって製造することができる。脱保護は、酸保護剤の性質、すなわち、酸、塩基または水素添加条件下で除去しうる（不安定）であるかどうか、および脱保護を受ける化合物中の他の反応性部分の性質に応じて、適当な脱保護剤を用いて行う（すなわち、付随反応が望まれない限り、他の反応性部分に影響を及ぼすことなく脱保護を行うように脱保護剤が選ばれる）。特定のアミン保護剤は、Ｃｂｚである。特定の酸保護剤は、Ｃ１〜Ｃ８低級アルキルである；より特定にはメチルである。特定の脱保護剤は、水酸化アルカリなどの無機塩基である；より特定にはＮａＯＨである。特定の脱保護条件は、約室温にてメタノールまたはエタノールなどのアルコール性溶媒中で脱保護を行うことを含む。
Ｒ０が結合であり、他の可変基が明細書に記載の通りである式（１８）で示される化合物は、
その可変基が明細書に記載の通りである式（２０）で示される化合物を、適当な条件下で、その可変基が明細書に記載の通りである式（１９）で示される化合物で保護することによって製造することができる。特定のアミン保護剤は、ＣｂｚまたはＢＯＣである。特定のカップリング条件は、約０℃〜約室温にてジクロロメタンなどの適当な有機溶媒を用いる。
Ｒ４が水素であり、他の可変基が明細書に記載の通りである式（２０）で示される化合物は、
その可変基が明細書に記載の通りである式（２１）で示される化合物を、適当な水素添加剤および適当な条件下で水素添加することによって製造することができる。特定の水素添加剤は、Ｈ２／Ｐｄ(ＯＨ)２である。特定の水素添加条件は、約室温にてメタノールまたはエタノールなどのアルコール性溶媒もしくは酢酸エチルなどのアルキルアルカノエート溶媒中で脱水素添加を行うことを含む。
Ｒ４が必要に応じて置換された脂肪族基であり、他の可変基が明細書に記載の通りである式（２０）で示される化合物は、
可変基が明細書に記載の通りである式（２０'）で示される化合物を、適当な条件下で、Ｒ４が必要に応じて置換された脂肪族基であり、Ｑがハライド、トシレートまたはスルホネートなどの置換しうる基である式（２２）で示される化合物（アルキル化剤）でアルキル化することによって製造することができる。適当なアルキル化条件は、約室温〜約還流温度にてメタノールまたはエタノールなどのアルコール性溶媒もしくはエーテルまたはテトラヒドロフランなどのエーテル性溶媒などの適当な有機溶媒中でアルキル化を行うことを含む。
可変基が明細書に記載の通りである式（２１）で示される化合物は、
その可変基が明細書に記載の通りである式（２２）で示される化合物を、適当な条件下で、Ｒ３が独立して、本明細書に記載する、必要に応じて置換された脂肪族基、必要に応じて置換された環式基または必要に応じて置換された芳香族基である式（２３）で示される化合物でアルキル化することによって製造することができる。適当なアルキル化条件は、約室温にてメタノールまたはエタノールなどのアルコール性溶媒中カリウムｔ−ブトキシドなどの強塩基を用いてアルキル化を行うことを含む。
その可変基が明細書に記載の通りである式（２４）で示される化合物は、
その可変基が明細書に記載の通りである式（２９）で示されるマイケルアクセプターにおいて、イミン性グリシンイミド誘導体でマイケル付加を達成することによって製造することができる。マイケル付加は、適当な非プロトン性極性溶媒、アルカリ水酸化メチル塩基および適当な温度で行う。マイケル付加については、Corey，E. J.；Noe，M. C.；Xu，F. Tetrahedron Letter 1998,39,5347を参照。キラル相間移動触媒の合成については、Corey，E. J.；Noe，M. C.；Xu，F. J. Am. Chem. Soc. 1997,119,12414を参照。適当な溶媒として、反応条件に応じて、ＤＣＭ、ＡＣＮまたはＴＨＦが挙げられる。適当な塩基として、ＣｓＯＨ、ＮａＯＨ、ＫＯＨおよびＬｉＯＨが挙げられる。適当な温度は、約−７８℃〜約０℃の範囲であり、約−６０℃がより好ましい。本発明に有用なイミン性グリシンイミドは、本明細書に記載される。好ましいイミン性グリシンイミドは、Ｎ−(ジフェニルメチレン)グリシン・tert−ブチルエステルである。さらに、マイケル付加条件は、相間移動触媒（ＰＴＣ）（キラルおよび非キラル）の存在または不在に影響を受ける。好ましいＰＴＣは、Ｏ−[９]アリル−Ｎ−９−アントラセニルメチルシンコニジウムブロミドである。
その可変基が明細書に記載の通りである式（２５）で示される化合物は、式（２４）で示される化合物のイミン開裂および環化によって製造することができる。
開裂および環化手順については、Javidan，A.；Schfer，K.；Pyne，S. Synlett 1996,100；Tatsukawa，A.；Dan，M.；Ohbatake，M.；Kawatake，K.；Fukata，T.；Wada，E.；Kanemase，S.；Kakei，S. J. Org. Chem. 1993,58,4221を参照。開裂および環化条件として、極性溶媒、酸試薬および約室温〜約１５０℃の温度の使用が挙げられる。好ましい条件として、ＥｔＯＨ、ＡｃＯＮａおよびＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌ、ならびに使用した溶媒の約沸点の温度の使用が挙げられる。
その可変基が明細書に記載の通りである式（２６）で示される化合物は、その可変基が明細書に記載の通りである式（２５）で示される化合物のアミドを、ＢＯＣなどの適当なアミド保護基で保護することによって製造することができる。他の適当な保護基として、ＣＢｚ、−ＣＯ２アルキルが挙げられる。また、他のアミド保護基については、Greene，T. W.；P. G. M. in Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，New York，1991を参照。保護条件として、非プロトン性極性溶媒、触媒としての有機塩基および約０℃〜１００℃の温度の使用が挙げられる。好ましい条件として、ＡＣＮ、ジメチルアミノピリジンおよび約室温の温度が挙げられる。
その可変基が明細書に記載の通りである式（２７）で示される化合物は、その可変基が明細書に記載の通りである式（２６）で示される保護化合物を、還元することによって製造することができる。
実際、２つの還元が行われる。第１の還元は、ＤＩＢＡＬＨまたはスーパーハイドライド[ＬｉＢＥｔ３Ｈ]を用いる、アミドからヘミアミナールへの還元である。第２の還元は、Ｅｔ３ＳｉＨおよびＢＦ３・ＯＥｔ２を用いる、ヘミアミナールからアミンへの還元である。還元条件については、Collado，I；Ezquerra，J.；Mateo，A. I.；Rubio，A.，J. Org. Chem. 1998,63 1995-2001 and Ezqueera，J.；Pedregal，C.；Yruretagoyena，B.；Rubio，A.；Carreno，M. C.；Escribano，A.；Garcia Ruano，J. L. J. Org. Chem. 1995,60,2925を参照。ピログルタメートをピロリジンに転換するための他の通常の条件は、ＢＨ３・ＳＭｅ２の使用である。
その可変基が明細書に記載の通りである式（２８）で示される化合物は、その可変基が明細書に記載の通りである式（２７）で示される保護化合物を、脱保護することによって製造することができる。
tert−ブチルエステルの存在下でのＮ−ＢＯＣ保護基の選択的除去のための条件については、Gibson，F. G.；Benneier，S. C.；Rapoport，H.，J. Org Chem. 1994,59,3216-3218を参照。当業者であれば、脱保護条件が、保護基の選択に従属することを理解するであろう。たとえば、ＣＢｚを用いる場合、水素添加または塩基性条件を用いる。好ましくは、ＢＯＣを用いる場合、酢酸中の１ＮのＨＣｌを用いる。Greene，T. W.；P. G. M. in Protective Groups in Organic Synthesis，Wiley，New York，1991を参照。
当業者であれば、式（３）で示される化合物が、本明細書に記載する条件下で、式（５）で示される化合物を式（２８）で示される化合物とカップリングすることによって製造することができることを理解するであろう。
必要に応じて置換されたエタンジイル部分としてＲ３、Ｒ５またはＲ７を製造する方法として、"The organic Chemistry of P-Lactams" G. Georg編，VCH Publishers，Inc. (1993)，たとえば，pages 240-241 および 303-305に記載の方法などの当業者に公知の方法が挙げられる。
必要に応じて置換されたエタンジイル部分としてＲ３、Ｒ５またはＲ７を製造する方法として、"The organic Chemistry of P-Lactams" G. Georg編，VCH Publishers，Inc. (1993)，たとえば，pages 240-241 および 303-305に記載の方法などの当業者に公知の方法が挙げられる。
次の反応工程式１〜１１は、必要に応じて置換された多環式アザヘテロシクリルの種々の選別した製造方法の例示である。以下の反応工程式中の方法はまた、置換基などの適合性部分を含む他の必要に応じて置換された多環式アザヘテロシクリルに適用可能である。
１つまたはそれ以上の窒素環原子、好ましくはイミン（＝Ｎ−）を含む基を有する式（１）で示される化合物は、約室温〜還流温度にて（高温が好ましい）、好ましくは酢酸中の過酢酸またはジクロロメタンなどの不活性溶媒中のｍ−クロロペルオキシ安息香酸などの過酸と反応させることによって、該基の１つまたはそれ以上の窒素環原子が酸化されてＮ−オキシドになる対応する化合物に変換することができる。
後述の反応においては、たとえば、ヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基などの反応性官能基が最終生成物にあることが望ましい場合、反応中の不必要な参与を避けるために、これらを保護することが必要である。慣例の保護基は、たとえば、T. W. Green および P. G. M. Wuts in "Protective Groups in Organic Chemistry" John Wiley and Sons (1991)；J. F. W. McOmie in "Protective Groups in Organic Chemistry" Plenum Press，1973を参照して、標準的実施にしたがって使用する。
後述の反応においては、たとえば、ヒドロキシ、アミノ、イミノ、チオまたはカルボキシ基などの反応性官能基が最終生成物にあることが望ましい場合、反応中の不必要な参与を避けるために、これらを保護することが必要である。慣例の保護基は、たとえば、T. W. Green および P. G. M. Wuts in "Protective Groups in Organic Chemistry" John Wiley and Sons (1991)；J. F. W. McOmie in "Protective Groups in Organic Chemistry" Plenum Press，1973を参照して、標準的実施にしたがって使用する。
本明細書の記載にしたがって製造される化合物は、慣例の手段によって反応混合物から回収することができる。たとえば、該化合物は、反応混合物から溶媒を留去すること、あるいは必要であれば、反応混合物から溶媒を留去した後に残渣に水を注ぎ、次いで、水−混合できない有機溶媒で抽出し、次いで抽出物から溶媒を留去することによって回収することができる。さらに、要すれば、再結晶、再沈殿もしくは特にカラムクロマトグラフィーまたは薄層クロマトグラフィーといったような種々のクロマトグラフィー技術などの種々の適当な技術によって、該生成物をさらに精製することができる。
本発明のさらなる特徴にしたがって、本発明の他の化合物の相互変換によって、本発明化合物を製造することができる。
相互変換のプロセスの例として、−Ｓ−結合を含む対応する化合物を酸化することによって、スルホキシド結合を含む化合物（１）を製造することができる。好ましくは室温または室温に近い温度にて、好ましくはジクロロメタンなどの不活性溶媒中、たとえば３−クロロ過安息香酸などのペルオキシ酸との反応によって、あるいは別法として、約０℃〜室温の温度にて、約ｐＨ５に緩衝剤で処理された水性メタノールなどの媒体中のペルオキソ一硫酸水素カリウムによって、酸化を簡便に行うことができる。酸不安定基を含む化合物にとっては、後者の方法が好ましい。
相互変換のプロセスの例として、−Ｓ−結合を含む対応する化合物を酸化することによって、スルホキシド結合を含む化合物（１）を製造することができる。好ましくは室温または室温に近い温度にて、好ましくはジクロロメタンなどの不活性溶媒中、たとえば３−クロロ過安息香酸などのペルオキシ酸との反応によって、あるいは別法として、約０℃〜室温の温度にて、約ｐＨ５に緩衝剤で処理された水性メタノールなどの媒体中のペルオキソ一硫酸水素カリウムによって、酸化を簡便に行うことができる。酸不安定基を含む化合物にとっては、後者の方法が好ましい。
相互変換のほかの例として、−Ｓ−またはスルホキシド結合を含む対応する化合物を酸化することによって、スルホン結合を含む化合物（１）を製造することができる。好ましくは室温または室温に近い温度にて、好ましくはジクロロメタンなどの不活性溶媒中、たとえば３−クロロ過安息香酸などのペルオキシ酸との反応によって、酸化を簡便に行うことができる。
本明細書におけるアリールおよびヘテロアリールに関する芳香族性の意味が、いずれかの高い共鳴性不飽和環構造を含むことが理解されるであろう。別の意味として、二重結合の配置は、指示される場合、示された化合物についての１つのポテンシャル構造を表わし、それらのうちの１つのみが示される、化合物の他の共鳴状態ならびにプロトン化および荷電された化学種を含むことが理解されるであろう。
本明細書におけるアリールおよびヘテロアリールに関する芳香族性の意味が、いずれかの高い共鳴性不飽和環構造を含むことが理解されるであろう。別の意味として、二重結合の配置は、指示される場合、示された化合物についての１つのポテンシャル構造を表わし、それらのうちの１つのみが示される、化合物の他の共鳴状態ならびにプロトン化および荷電された化学種を含むことが理解されるであろう。
本発明の化合物が不斉中心を含みうることが理解されるであろう。これらの不斉中心は、独立して、ＲまたはＳ配置のいずれかである。当業者であれば、本発明のある化合物が、幾何学的異性体をも示し得ることが明らかであろう。本発明が、本発明化合物の個々の幾何学的異性体および立体異性体ならびにラセミ混合物といったようなその混合物を含むことが理解されよう。このような異性体は、クロマトグラフィー技術および再結晶技術などの公知の方法を応用または適用することによって、その混合物から分離することができるか、あるいはその中間体の適当な異性体から別々に製造される。
本明細書の目的において、tautermeric体が、チオキソ／メルカプトまたはオキソ／ヒドロキシルなどの基の詳説において包含されることが理解される。
本明細書の目的において、tautermeric体が、チオキソ／メルカプトまたはオキソ／ヒドロキシルなどの基の詳説において包含されることが理解される。
酸付加塩は、アミノ、アルキルアミノまたはジアルキルアミノ基などの塩基性基が存在する本発明化合物で形成される。医薬的に許容しうる、すなわち非毒性の酸付加塩が好ましい。選択される塩は、必要に応じて、慣例の医薬的ビヒクルに適合性であるように選択され、経口または非経口投与用に適合させられる。本発明化合物の酸付加塩は、公知の方法の応用または適用によって、遊離塩基と適当な酸の反応によって製造することができる。たとえば、本発明化合物の酸付加塩は、適当な酸を含む水または水性アルコール溶液または他の適当な溶媒に遊離塩基を溶解し、溶液の蒸発によって塩を単離するか、または有機溶媒中で遊離塩基と酸を反応させることのいずれかによって製造することができ、後者の場合、塩は、直接分離されるか、または溶液の濃縮によって得ることができる。このような塩の製造に用いるための適当な酸は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、酢酸、クエン酸、プロピオン酸、コハク酸、安息香酸、酒石酸、フマル酸、マンデル酸、アスコルビン酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、脂肪酸、アジペート、アルギネート、アスコルベート、アスパルテート、ベンゼンスルホネート、ベンゾエート、シクロペンタンプロピオネート、ジグルコネート、ドデシルスルフェート、ビスルフェート、ブチレート、ラクテート、ラウレート、ラウリルスルフェート、マレーエート、ヒドロヨージド、２−ヒドロキシ−エタンスルホネート、グリセロホスフェート、ピクレート、ピバレート、パモエート、ペクチネート、パースルフェート、３−フェニルプロピオネート、チオシアネート、２−ナフタレンスルホネート、ウンデカノエート、ニコチネート、ヘミスルフェート、ヘプトネート、ヘキサノエート、カンフォレート、カンファースルホネートなどといったような種々の有機カルボン酸およびスルホン酸である。
本発明化合物の酸付加塩は、公知の方法を応用または適用することによって、塩から再生することができる。たとえば、本発明の親化合物は、水性重炭酸ナトリウム溶液または水性アンモニア溶液などのアルカリで処理することによって、その酸付加塩から再生することができる。
本発明化合物は、公知の方法を応用または適用することによって、その塩基付加塩から再生することができる。たとえば、本発明の親化合物は、塩酸などの酸で処理することによって、その塩基付加塩から再生することができる。
本発明化合物は、公知の方法を応用または適用することによって、その塩基付加塩から再生することができる。たとえば、本発明の親化合物は、塩酸などの酸で処理することによって、その塩基付加塩から再生することができる。
塩基付加塩は、本発明化合物がカルボキシ基または十分に酸性のバイオアイソスターを含む場合に形成される。塩基付加塩を製造するために用いることができる塩基には、遊離塩基において内在する有益な阻害効果がカチオンに起因する副作用によって損なわれないように、好ましくは遊離酸と組み合わせた場合に医薬的に許容しうる塩、すなわち、そのカチオンが塩の医薬的用量において患者に対して非毒性である塩を生成するものが含まれる。本発明の範囲における、アルカリ金属またはアルカリ土類金属塩から誘導される塩といったような医薬的に許容しうる塩として、以下の塩基から誘導されるものが挙げられる：水素化ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アルミニウム、水酸化リチウム、水酸化マグネシウム、水酸化亜鉛、アンモニア、エチレンジアミン、Ｎ−メチル−グルカミン、リシン、アルギニン、オルニチン、コリン、Ｎ,Ｎ'−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、ジエタノールアミン、プロカイン、Ｎ−ベンジルフェネチルアミン、ジエチルアミン、ピペラジン、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、水酸化テトラメチルアンモニウムなど。
本発明化合物は、本発明のプロセスを通して、溶媒和物（たとえば水和物）として、簡便に製造または形成することができる。本発明化合物の水和物は、ジオキサン、テトラヒドロフランまたはメタノールなどの有機溶媒を用いて、水性／有機溶媒混合物から再結晶することによって簡便に製造することができる。
出発物質および中間体は、たとえば、参考例に記載した方法もしくはその明らかな化学的等価物などの公知の方法を応用または適用することによって製造することができる。
出発物質および中間体は、たとえば、参考例に記載した方法もしくはその明らかな化学的等価物などの公知の方法を応用または適用することによって製造することができる。
本発明化合物、方法または製造ならびにその生物活性は、以下の実施例における考察からより明らかとなるが、これらは説明としてのみ提出されるものであって、本発明の範囲を限定するものとみなされるべきではない。
サンプルは、ＴＬＣ、ＮＭＲ、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＥＡによって分析した。
サンプルは、ＴＬＣ、ＮＭＲ、ＲＰ−ＨＰＬＣまたはＥＡによって分析した。
実施例１−化合物A−E：
化合物xi(３１０mg,０.３９mmol)のDCM溶液(１０mL)にTFA(４mL)を加える。反応物を約室温にて５時間攪拌する。この時点で、溶媒を減圧除去する。得られる残渣を逆相ＨＰＬＣにて精製して、化合物A１９５mg(６８％)を得る。
化合物xi(３１０mg,０.３９mmol)のDCM溶液(１０mL)にTFA(４mL)を加える。反応物を約室温にて５時間攪拌する。この時点で、溶媒を減圧除去する。得られる残渣を逆相ＨＰＬＣにて精製して、化合物A１９５mg(６８％)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物B−Eを製造する：
実施例２−化合物F−M：
化合物xii(３５０mg,０.５６mmol)のDCM溶液(１０mL)にDMP試薬(３０７mg,０.７３mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３で３０分間処理して反応を停止する。次いで、反応混合物をEtOAc(７５mL)で抽出し、食塩水で洗浄する。有機層を乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８０−９０％EtOAc／ヘキサン)で精製して、化合物F２４８mg(７１％)を得る。
化合物xii(３５０mg,０.５６mmol)のDCM溶液(１０mL)にDMP試薬(３０７mg,０.７３mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３で３０分間処理して反応を停止する。次いで、反応混合物をEtOAc(７５mL)で抽出し、食塩水で洗浄する。有機層を乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８０−９０％EtOAc／ヘキサン)で精製して、化合物F２４８mg(７１％)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物G−Mを製造する：
実施例３−化合物N−R：
化合物xix(〜０.２２mmol)のDCM溶液(４mL)にDMP試薬(１４６mg,０.３４mmol)を加える。約室温にて２時間攪拌した後、１０％Na２SO３で処理して反応を停止する。次いで、反応混合物をDCMで希釈する。有機層を分離し、１０％Na２SO３（２回）および食塩水で洗浄する。得られる有機層を乾燥し、濃縮して、残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、所望の化合物N７８mg(５６％)を得る。
化合物xix(〜０.２２mmol)のDCM溶液(４mL)にDMP試薬(１４６mg,０.３４mmol)を加える。約室温にて２時間攪拌した後、１０％Na２SO３で処理して反応を停止する。次いで、反応混合物をDCMで希釈する。有機層を分離し、１０％Na２SO３（２回）および食塩水で洗浄する。得られる有機層を乾燥し、濃縮して、残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、所望の化合物N７８mg(５６％)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物O−Rを製造する：
実施例４−化合物S−W：
化合物xxv(３２０mg,０.５mmol)のDCM溶液(１０mL)にDMP試薬(２７２mg,０.６５mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３で２０分間処理して反応を停止する。次いで、得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物S１７０mg(５３％)を得る。
化合物xxv(３２０mg,０.５mmol)のDCM溶液(１０mL)にDMP試薬(２７２mg,０.６５mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３で２０分間処理して反応を停止する。次いで、得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物S１７０mg(５３％)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物T−Wを製造する：
実施例５−化合物X−AD：
化合物xxvi(４００mg,０.６mmol)のDCM溶液(２０mL)にDMP試薬(３２９mg,０.７８mmol)を加える。反応物を約室温にて１.５時間攪拌し、１０％Na２SO３で２０分間処理して反応を停止する。次いで、得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(７０−１００％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物X２１０mg(５３％)を得る。
化合物xxvi(４００mg,０.６mmol)のDCM溶液(２０mL)にDMP試薬(３２９mg,０.７８mmol)を加える。反応物を約室温にて１.５時間攪拌し、１０％Na２SO３で２０分間処理して反応を停止する。次いで、得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(７０−１００％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物X２１０mg(５３％)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物Y−ADを製造する：
実施例６−化合物AE−AI：
化合物xxxiii(１５０mg；０.０７６mmol)を５mLのTFAに溶解し、２日間攪拌する。生成物をRP−HPLCで精製して、化合物AE４０mg(３３％収率)を得る。
化合物xxxiii(１５０mg；０.０７６mmol)を５mLのTFAに溶解し、２日間攪拌する。生成物をRP−HPLCで精製して、化合物AE４０mg(３３％収率)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物AF−AIを製造する：
実施例７−化合物AJ：
化合物xxxviii(１８０mg,０.２１mmol)を希釈しないTFA(５mL)に溶解し、約室温にて３日間放置する。この時点で、反応混合物を減圧濃縮して残渣を得、逆相ＨＰＬＣにて精製して、化合物AJ５０mg(３２％)を得る。
化合物xxxviii(１８０mg,０.２１mmol)を希釈しないTFA(５mL)に溶解し、約室温にて３日間放置する。この時点で、反応混合物を減圧濃縮して残渣を得、逆相ＨＰＬＣにて精製して、化合物AJ５０mg(３２％)を得る。
実施例８−化合物AK−AM：
化合物xxxxiii(１５０mg,０.１６mmol)を４.５mLのTFAに溶解し、３日間攪拌する。生成物をRP−HPLCで精製して、化合物AK７０mg(５４％収率)を得る。
化合物xxxxiii(１５０mg,０.１６mmol)を４.５mLのTFAに溶解し、３日間攪拌する。生成物をRP−HPLCで精製して、化合物AK７０mg(５４％収率)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物AL−AMを製造する：
実施例９−化合物AN：
化合物lii(８０mg)を３mLのTFA３mLのDCMに溶解する。混合物を約室温にて５時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去する。得られる残渣をHPLCで精製して、化合物AN６２mg(８３％)を得る。
化合物lii(８０mg)を３mLのTFA３mLのDCMに溶解する。混合物を約室温にて５時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去する。得られる残渣をHPLCで精製して、化合物AN６２mg(８３％)を得る。
実施例１０−化合物AO：
化合物liii(１６０mg,０.２mmol)を５mLのDCMに溶解し、DMP試薬(１７０mg；０.４mmol)を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去し、残渣を５０％アセトニトリル／水に溶解し、RP−HPLCにて精製して、化合物AO５１mg(３２％)を得る。
化合物liii(１６０mg,０.２mmol)を５mLのDCMに溶解し、DMP試薬(１７０mg；０.４mmol)を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去し、残渣を５０％アセトニトリル／水に溶解し、RP−HPLCにて精製して、化合物AO５１mg(３２％)を得る。
実施例１１−化合物AP：
化合物lix(１６２mg,０.２２mmol)を８mLのDCMに溶解し、DMP試薬(１８９mg,０.４４mmol)を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去し、生成物をRP−HPLCで精製して、化合物AP４１mg(２５％)を得る。
化合物lix(１６２mg,０.２２mmol)を８mLのDCMに溶解し、DMP試薬(１８９mg,０.４４mmol)を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去し、生成物をRP−HPLCで精製して、化合物AP４１mg(２５％)を得る。
実施例１２−化合物AQ：
化合物lx(７０mg,０.０９mmol)を５mLのTFAおよび５mLのDCMに溶解する。混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を減圧除去して、残渣を５０％アセトニトリル／水に溶解し、凍結乾燥して、化合物AQを粉末で得る。
化合物lx(７０mg,０.０９mmol)を５mLのTFAおよび５mLのDCMに溶解する。混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を減圧除去して、残渣を５０％アセトニトリル／水に溶解し、凍結乾燥して、化合物AQを粉末で得る。
実施例１３−化合物AR−BG：
化合物lxvi(２２３mg,０.３２６mmol)をTFA(５mL)およびDCM(５mL)の溶液中、４時間攪拌する。TLC(シリカゲル：２％MeOH／EtOAc)により、より遅く移動する生成物への完全な転換が示される。溶媒を減圧除去し、生成物を凍結乾燥して、化合物AR１９８mg(９７％)を得る。
化合物lxvi(２２３mg,０.３２６mmol)をTFA(５mL)およびDCM(５mL)の溶液中、４時間攪拌する。TLC(シリカゲル：２％MeOH／EtOAc)により、より遅く移動する生成物への完全な転換が示される。溶媒を減圧除去し、生成物を凍結乾燥して、化合物AR１９８mg(９７％)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物AS−BGを製造する：
実施例１４−化合物BＨ−BS：
化合物lxxiii(１５０mg,０.１５mmol)をDCM(３mL)に加える。この溶液に、TFA(１.５mL)を加える。得られる溶液を一夜攪拌する。この時点で、反応物を減圧濃縮して、残渣を得る。残渣を逆相ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥して、化合物BH６０mg(５０％)を得る。
化合物lxxiii(１５０mg,０.１５mmol)をDCM(３mL)に加える。この溶液に、TFA(１.５mL)を加える。得られる溶液を一夜攪拌する。この時点で、反応物を減圧濃縮して、残渣を得る。残渣を逆相ＨＰＬＣにて精製し、凍結乾燥して、化合物BH６０mg(５０％)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物BI−BSを製造する：
実施例１５−化合物BT−BU：
実施例１２の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物BT−BUを製造する：
実施例１２の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物BT−BUを製造する：
実施例１６−化合物BV：
化合物lxxvii(１４３mg,０.２１mmol)のジクロロメタン溶液(４.２mL)にDMP試薬(１６５mg,０.３９mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物BV１２４mg(７９％)を得る。
化合物lxxvii(１４３mg,０.２１mmol)のジクロロメタン溶液(４.２mL)にDMP試薬(１６５mg,０.３９mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物BV１２４mg(７９％)を得る。
実施例１７−化合物BW−CA：
化合物lxxxix(４２０mg,０.６２mmol)のジクロロメタン溶液(２０mL)にDMP試薬(３４２mg,０.８１mmol)を加える。反応物を約室温にて１時間攪拌し、１０％Na２SO３で２０分間処理して反応を停止する。次いで、得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物BW２０８mg(５０％)を得る。
化合物lxxxix(４２０mg,０.６２mmol)のジクロロメタン溶液(２０mL)にDMP試薬(３４２mg,０.８１mmol)を加える。反応物を約室温にて１時間攪拌し、１０％Na２SO３で２０分間処理して反応を停止する。次いで、得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物BW２０８mg(５０％)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物BX−CAを製造する：
実施例１８−化合物CB−CC：
化合物lxxxvii(２００mg,０.３mmol)のジクロロメタン溶液(６.５mL)にDMP試薬(２２７mg,０.５４mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物CB１３８mg(７０％)を得る。
化合物lxxxvii(２００mg,０.３mmol)のジクロロメタン溶液(６.５mL)にDMP試薬(２２７mg,０.５４mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物CB１３８mg(７０％)を得る。
上記の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の化合物CCを製造する：
実施例１９−化合物CD：
化合物lxxxxviii(４０mg,０.０５mmol)をTFA(３mL)に加える。溶液を２日間攪拌し、濃縮する。残渣を逆相HPLCにて精製して、化合物CD２５mg(７４％)を得る。
化合物lxxxxviii(４０mg,０.０５mmol)をTFA(３mL)に加える。溶液を２日間攪拌し、濃縮する。残渣を逆相HPLCにて精製して、化合物CD２５mg(７４％)を得る。
実施例２０−化合物CE：
実施例１７の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の化合物CEを製造する：
実施例１７の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の化合物CEを製造する：
実施例２１−化合物CF−CG：
実施例１４の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物CF−CGを製造する：
実施例１４の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物CF−CGを製造する：
実施例２２−化合物CH：
実施例１６の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物CHを製造する：
実施例１６の方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物CHを製造する：
実施例２３−化合物CI−CM：
化合物cxi(４９０mg,０.７５mmol)をDCM(６mL)に溶解する。この溶液にDMP試薬(３８０mg,０.９mmol)を加え、１時間攪拌する。反応混合物を１０％Na２SO３溶液で処理して反応を停止し、次いで、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を７０％EtOAc／ヘキサンでクロマトグラフィー精製して、化合物CI(３２５mg,６６.４％)を得る。
化合物cxi(４９０mg,０.７５mmol)をDCM(６mL)に溶解する。この溶液にDMP試薬(３８０mg,０.９mmol)を加え、１時間攪拌する。反応混合物を１０％Na２SO３溶液で処理して反応を停止し、次いで、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を７０％EtOAc／ヘキサンでクロマトグラフィー精製して、化合物CI(３２５mg,６６.４％)を得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物CJ−CMを製造する：
実施例２４−化合物CN：
化合物cxviii(３３５mg,０.４６mmol)のDCM／THF溶液(３mL／３mL)にDMP試薬(３００mg,０.６９mmol)を加える。反応混合物を室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機相を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物CN(２２０mg,６７％)を得る。
化合物cxviii(３３５mg,０.４６mmol)のDCM／THF溶液(３mL／３mL)にDMP試薬(３００mg,０.６９mmol)を加える。反応混合物を室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機相を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物CN(２２０mg,６７％)を得る。
実施例２５−化合物CO−CR：
化合物cxix(１６４mg,０.２５mmol)のDCM／THF溶液(１.５mL／１.５mL)にDMP試薬(１５９mg,０.３８mmol)を加える。反応混合物を室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機相を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物CO(１００mg,６１％)を得る。
化合物cxix(１６４mg,０.２５mmol)のDCM／THF溶液(１.５mL／１.５mL)にDMP試薬(１５９mg,０.３８mmol)を加える。反応混合物を室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機相を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物CO(１００mg,６１％)を得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物CP−CRを製造する：
実施例２６−化合物CS−CT：
化合物cxxをDCM(３mL)に溶解する。溶液にDMP試薬(１８０mg,０.４１mmol)を加え、次いで、１時間攪拌する。反応混合物を１０％Na２SO３で処理して反応を停止し、次いで、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、残渣を１００％EtOAcでクロマトグラフィー精製して、化合物CS(９５mg,４３.７％)を得る。
化合物cxxをDCM(３mL)に溶解する。溶液にDMP試薬(１８０mg,０.４１mmol)を加え、次いで、１時間攪拌する。反応混合物を１０％Na２SO３で処理して反応を停止し、次いで、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、残渣を１００％EtOAcでクロマトグラフィー精製して、化合物CS(９５mg,４３.７％)を得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の化合物CTを製造する：
実施例２７−化合物CU，EI，EK−EM，EO−EZおよびFA−FG：
化合物cxxviii(３５６mg,０.５２mmol)をDCM(５mL)に溶解する。この溶液にDMP試薬(２７０mg,０.６３mmol)を加え、１時間攪拌する。反応混合物を１０％Na２SO３で処理して反応を停止し、次いで、有機相を分離し、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機溶媒を濃縮した後、残渣を１００％EtOAcでクロマトグラフィー精製して、化合物CU(２００mg,５６.３％)を得る。mp２２５〜２３５℃。
化合物cxxviii(３５６mg,０.５２mmol)をDCM(５mL)に溶解する。この溶液にDMP試薬(２７０mg,０.６３mmol)を加え、１時間攪拌する。反応混合物を１０％Na２SO３で処理して反応を停止し、次いで、有機相を分離し、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機溶媒を濃縮した後、残渣を１００％EtOAcでクロマトグラフィー精製して、化合物CU(２００mg,５６.３％)を得る。mp２２５〜２３５℃。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物EI、EK−EM、EO−EZおよびFA−FHを製造する：
実施例２８−化合物CV−DC：
化合物cxxx(３３０mg,０.４６mmol)をDCM(５mL)に溶解する。この溶液にDMP試薬(２４０mg,０.５６mmol)を加え、１時間攪拌する。反応混合物を１０％Na２SO３で処理して反応を停止し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。
有機相を濃縮した後、得られる残渣を１００％EtOAcでクロマトグラフィー精製して、化合物cxxx(２８０mg,８５.９％)を得る。
化合物cxxx(３３０mg,０.４６mmol)をDCM(５mL)に溶解する。この溶液にDMP試薬(２４０mg,０.５６mmol)を加え、１時間攪拌する。反応混合物を１０％Na２SO３で処理して反応を停止し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。
有機相を濃縮した後、得られる残渣を１００％EtOAcでクロマトグラフィー精製して、化合物cxxx(２８０mg,８５.９％)を得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物CW−DCを製造する：
実施例２９−化合物DＤ−DE：
化合物cxxxviii(４００mg,０.５７mmol)のDCM溶液(６mL)にDMP試薬(３６２mg,０.８５mmol)を加える。反応混合物を室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SＯ３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲル(７０％EtOAc／ヘキサン)で精製して、化合物DD(２０１mg,５１％)を得る。
化合物cxxxviii(４００mg,０.５７mmol)のDCM溶液(６mL)にDMP試薬(３６２mg,０.８５mmol)を加える。反応混合物を室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SＯ３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲル(７０％EtOAc／ヘキサン)で精製して、化合物DD(２０１mg,５１％)を得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の化合物DEを製造する：
実施例３０−化合物DF：
化合物cxxxxiii(１６５mg,０.２４mmol)をDCM(５mL)に溶解する。溶液にDMP試薬(１２５mg,０.２９mmol)を加え、１時間攪拌する。反応混合物を１０％Na２SO３で処理して反応を停止し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を７０％EtOAc／ヘキサンでクロマトグラフィー精製して、化合物DF(１０８mg,６５.６％)を得る。
化合物cxxxxiii(１６５mg,０.２４mmol)をDCM(５mL)に溶解する。溶液にDMP試薬(１２５mg,０.２９mmol)を加え、１時間攪拌する。反応混合物を１０％Na２SO３で処理して反応を停止し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を７０％EtOAc／ヘキサンでクロマトグラフィー精製して、化合物DF(１０８mg,６５.６％)を得る。
実施例３１−化合物DG−DJ：
氷浴で冷却したDCM(１５mL)中の化合物cil(０.３５０g,０.５１６mmol)の溶液にDMP試薬(０.２８１g,０.６７１mmol)を加える。混合物を室温にて２時間攪拌し、次いで、１０％Na２SO３溶液で処理して反応を停止し、２０分間攪拌する。得られる混合物をDCM(３x２０mL)で抽出し、有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥する。硫酸マグネシウムを濾去した後、濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー(７０％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して、最終化合物DG(０.２６５g,７６％)を白色固体で得る。
氷浴で冷却したDCM(１５mL)中の化合物cil(０.３５０g,０.５１６mmol)の溶液にDMP試薬(０.２８１g,０.６７１mmol)を加える。混合物を室温にて２時間攪拌し、次いで、１０％Na２SO３溶液で処理して反応を停止し、２０分間攪拌する。得られる混合物をDCM(３x２０mL)で抽出し、有機抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥する。硫酸マグネシウムを濾去した後、濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー(７０％酢酸エチル／ヘキサン)にて精製して、最終化合物DG(０.２６５g,７６％)を白色固体で得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物DＨ−DJを製造する：
実施例３２−化合物DK−DN：
化合物clx(１０８mg,０.１２３mmol)のDCM溶液をDMP試薬(７８mg,０.１８５mmol)で処理する。室温にて１時間攪拌した後、反応混合物をEtOAc(５０mL)で希釈し、次いで、１０％Na２SO３で処理して反応を停止する。３０分間攪拌した後、有機相を分離し、NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物DK(８４mg,７８％)を得る。
化合物clx(１０８mg,０.１２３mmol)のDCM溶液をDMP試薬(７８mg,０.１８５mmol)で処理する。室温にて１時間攪拌した後、反応混合物をEtOAc(５０mL)で希釈し、次いで、１０％Na２SO３で処理して反応を停止する。３０分間攪拌した後、有機相を分離し、NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物DK(８４mg,７８％)を得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の化合物DL−DNを製造する：
実施例３３−化合物DO−DS：
化合物clxii(１７４mg,０.１８９mmol)のEtOH溶液(１０mL)をPd／C(３０％eq.,６０mg,１０％パラジウム含有)を用いて２.５時間水素添加する。次いで、触媒を濾去する。得られる濾液を減圧濃縮して、残渣を得、セミプレパラティブ逆相クロマトグラフィーにて精製し、凍結乾燥して、化合物DOを７０％収率で得る。
化合物clxii(１７４mg,０.１８９mmol)のEtOH溶液(１０mL)をPd／C(３０％eq.,６０mg,１０％パラジウム含有)を用いて２.５時間水素添加する。次いで、触媒を濾去する。得られる濾液を減圧濃縮して、残渣を得、セミプレパラティブ逆相クロマトグラフィーにて精製し、凍結乾燥して、化合物DOを７０％収率で得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物DP−DSを製造する：
実施例３４−化合物CW：
化合物clxiii(１７５mg,０.２４mmol)をDCM(３mL)に加える。この溶液にDMP試薬(１２０mg,０.２８mmol)を加え、１時間攪拌する。１０％Na２SO３で処理して反応を停止し、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。７０％EtOAcで精製して、化合物CW(１３４mg,７５％)を得る。
化合物clxiii(１７５mg,０.２４mmol)をDCM(３mL)に加える。この溶液にDMP試薬(１２０mg,０.２８mmol)を加え、１時間攪拌する。１０％Na２SO３で処理して反応を停止し、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。７０％EtOAcで精製して、化合物CW(１３４mg,７５％)を得る。
実施例３５−化合物CYおよびDT−DX：
clxxii(２９０mg,０.４３mmol)のDCM溶液(１５mL)にDMP試薬(２３９mg,０.５６mmol)を加える。反応物を１時間攪拌し、１０％Na２SO３で２０分間処理して反応を停止する。次いで、得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８−１００％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物CY(１５１mg,５２％)を得る。
clxxii(２９０mg,０.４３mmol)のDCM溶液(１５mL)にDMP試薬(２３９mg,０.５６mmol)を加える。反応物を１時間攪拌し、１０％Na２SO３で２０分間処理して反応を停止する。次いで、得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８−１００％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物CY(１５１mg,５２％)を得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の後続する化合物DT−DXを製造する。
実施例３６−化合物DY：
化合物lxxxv(１.１７mmol)をDCM(５mL)に加える。この溶液にDMP試薬(５４５mg,１.３mmol)を加え、１時間攪拌する。P−Na２SO３(１.５mmol／樹脂g)で処理して反応を停止し、１時間攪拌する。P−TBDスカベンジャー樹脂＊(２.５mmol／樹脂g)を加える、４５分間攪拌する。得られる混合物を濾過し、５０％EtOAcで精製して、化合物DY(４４０mg,５０.２％、2段階で)を得る。
＊P−TBDスカベンジャー樹脂についての文献： J。Parlowら Tetrahedron,５５,６７８５−６７９６(１９９９)。
化合物lxxxv(１.１７mmol)をDCM(５mL)に加える。この溶液にDMP試薬(５４５mg,１.３mmol)を加え、１時間攪拌する。P−Na２SO３(１.５mmol／樹脂g)で処理して反応を停止し、１時間攪拌する。P−TBDスカベンジャー樹脂＊(２.５mmol／樹脂g)を加える、４５分間攪拌する。得られる混合物を濾過し、５０％EtOAcで精製して、化合物DY(４４０mg,５０.２％、2段階で)を得る。
＊P−TBDスカベンジャー樹脂についての文献： J。Parlowら Tetrahedron,５５,６７８５−６７９６(１９９９)。
実施例３７−化合物DZ：
出発物質化合物clxxxxi(９４mg,０.１４mmole)をTHF(１０mL)およびDCM(２０mL)の混合物に溶解する。次いで、DMP試薬(１１８mg,０.２８mmol)を加える。室温にて２時間攪拌後、反応物をDri Solv THF(１２０mL)を入れた分液ロートに入れる。反応物を１０％Na２SO３(５０mL)、次いで、食塩水(７５mL)で洗浄する。次いで、有機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去する。クロマトグラフィー(シリカゲル：５０％Dri Solv THF／EtOAc、次いで、４％MeOH／THFで溶離)した後、MSにて画分を調べる。適当な画分を凍結乾燥して、化合物DZ(３８.８mg,４１％)を得る。
出発物質化合物clxxxxi(９４mg,０.１４mmole)をTHF(１０mL)およびDCM(２０mL)の混合物に溶解する。次いで、DMP試薬(１１８mg,０.２８mmol)を加える。室温にて２時間攪拌後、反応物をDri Solv THF(１２０mL)を入れた分液ロートに入れる。反応物を１０％Na２SO３(５０mL)、次いで、食塩水(７５mL)で洗浄する。次いで、有機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去する。クロマトグラフィー(シリカゲル：５０％Dri Solv THF／EtOAc、次いで、４％MeOH／THFで溶離)した後、MSにて画分を調べる。適当な画分を凍結乾燥して、化合物DZ(３８.８mg,４１％)を得る。
実施例３８−化合物EA−EB：
出発化合物clxxxxv(１８５mg,０.２６mmol)をTHF(２０mL)に溶解する。次いで、DMP試薬(２１９mg,０.５２mmol)を加える。室温にて１時間攪拌後、TLC(５％MeOH／THF)により、ケトンへの完全な転換が示される。反応物をDri Solv THF(１２０mL)を入れた分液ロートに入れる。反応物を１０％Na２SO３(５０mL)、次いで、食塩水(７５mL)で洗浄する。次いで、有機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去して残渣を得、クロマトグラフィー(シリカゲル：５０％Dri Solv THF／EtOAc、次いで、４％MeOH／THFで溶離)にて精製した後、ＵＶおよびMSにて画分を調べる。適当な画分を凍結乾燥して、化合物EA(１５９mg,８８％)を得る。
出発化合物clxxxxv(１８５mg,０.２６mmol)をTHF(２０mL)に溶解する。次いで、DMP試薬(２１９mg,０.５２mmol)を加える。室温にて１時間攪拌後、TLC(５％MeOH／THF)により、ケトンへの完全な転換が示される。反応物をDri Solv THF(１２０mL)を入れた分液ロートに入れる。反応物を１０％Na２SO３(５０mL)、次いで、食塩水(７５mL)で洗浄する。次いで、有機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去して残渣を得、クロマトグラフィー(シリカゲル：５０％Dri Solv THF／EtOAc、次いで、４％MeOH／THFで溶離)にて精製した後、ＵＶおよびMSにて画分を調べる。適当な画分を凍結乾燥して、化合物EA(１５９mg,８８％)を得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の化合物EBを製造する：
実施例３９−化合物EC−ED：
氷浴で冷却したDCM(１５mL)中の化合物clxxxxviii(０.３４１g,０.５０３mmol)の溶液にDMP試薬(０.２７７g,０.６５４mmol)を加える。混合物を室温にて２時間攪拌し、次いで、１０％Na２SO３溶液で処理して反応を停止し、２０分間攪拌する。得られる混合物をDCM(３x２０mL)で抽出し、有機抽出物を乾燥（硫酸マグネシウム）する。硫酸マグネシウムを濾去した後、濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー(７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物EC(０.１８３g,５４％)を白色固体で得る。
氷浴で冷却したDCM(１５mL)中の化合物clxxxxviii(０.３４１g,０.５０３mmol)の溶液にDMP試薬(０.２７７g,０.６５４mmol)を加える。混合物を室温にて２時間攪拌し、次いで、１０％Na２SO３溶液で処理して反応を停止し、２０分間攪拌する。得られる混合物をDCM(３x２０mL)で抽出し、有機抽出物を乾燥（硫酸マグネシウム）する。硫酸マグネシウムを濾去した後、濾液を濃縮し、カラムクロマトグラフィー(７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物EC(０.１８３g,５４％)を白色固体で得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の化合物EDを製造する：
実施例４０−化合物BE−EG：
化合物ccii(２９０mg,０.３７mmol)をDCM(５mL)に加える。この溶液にDMP試薬(１７５mg,０.４１mmol)を加え、１時間攪拌する。P−Na２SO３(１.５mmol／樹脂g)で処理して反応を停止し、１時間攪拌する。反応を停止されたDMP試薬をP−TBD(２.５mmol／樹脂g)で清掃し、１時間攪拌する。得られる混合物を濾過し、DCMで濯いだ後、濃縮して残渣を得る。得られる残渣を５０％EtOAc／ヘキサンで精製して、化合物EE(４４０mg,２８％)を得る。
化合物ccii(２９０mg,０.３７mmol)をDCM(５mL)に加える。この溶液にDMP試薬(１７５mg,０.４１mmol)を加え、１時間攪拌する。P−Na２SO３(１.５mmol／樹脂g)で処理して反応を停止し、１時間攪拌する。反応を停止されたDMP試薬をP−TBD(２.５mmol／樹脂g)で清掃し、１時間攪拌する。得られる混合物を濾過し、DCMで濯いだ後、濃縮して残渣を得る。得られる残渣を５０％EtOAc／ヘキサンで精製して、化合物EE(４４０mg,２８％)を得る。
上記の化合物の製造方法および中間体の製造に関連する方法にしたがって、適当な出発物質を用い、以下の化合物EF−EGを製造する：
実施例４１−化合物EH：
化合物cciii(１４０mg,０.２mmol)のDCM溶液(３mL)にDMP試薬(１３３mg,０.３mmol)を加える。反応物を室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得、シリカゲル(７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製し、凍結乾燥した後、化合物EH(５０mg,３８％)を得る。
化合物cciii(１４０mg,０.２mmol)のDCM溶液(３mL)にDMP試薬(１３３mg,０.３mmol)を加える。反応物を室温にて２時間攪拌し、１０％Na２SO３(aq.)で２０分間処理して反応を停止する。得られる混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得、シリカゲル(７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製し、凍結乾燥した後、化合物EH(５０mg,３８％)を得る。
実施例４２−化合物EJ：
化合物ixxxiii(５２０mg,１mmol)にDCM(５mL)を加える。上記溶液にPyBOP(６２４mg,１.２mmol)を加え、５分間攪拌する。この溶液にTHE(５mL)中の化合物cdviii(３００mg,１.２mmol)、次いで、DIPEA(０.２２mL,１.２mmol)を滴下する。反応物を窒素下、室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、濃縮して、粗カップル中間体cdixを得る。
この中間体cdix(~１mmol)をDCM(１０mL)に加える。この溶液にデス−マーチン・パーヨージナン(４６６mg,１.１mmol)を加える。室温にて１時間攪拌した後、ポリマー結合Na２SO３(７４０mg,１.５mmol DMP／樹脂g)で処理して反応を停止し、４５分間攪拌する。次いで、ポリマー結合TBD樹脂(４４０mg,２.５mmol DMP／樹脂g)で反応混合物を清掃する。得られる混合物を４５分間攪拌し、次いで、濾過する。５％EtOH／EtOAc中で精製して、化合物EJ(２４５mg,３２％、２段階で)を得る。
ワークアップ手順についての文献は、Tetrahedron ５５(１９９９)６７８５−６７９６である。
化合物ixxxiii(５２０mg,１mmol)にDCM(５mL)を加える。上記溶液にPyBOP(６２４mg,１.２mmol)を加え、５分間攪拌する。この溶液にTHE(５mL)中の化合物cdviii(３００mg,１.２mmol)、次いで、DIPEA(０.２２mL,１.２mmol)を滴下する。反応物を窒素下、室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、濃縮して、粗カップル中間体cdixを得る。
ワークアップ手順についての文献は、Tetrahedron ５５(１９９９)６７８５−６７９６である。
実施例４３−化合物EN：
中間体化合物cdvii(４１５mg,０.５９mmol)をDCM(１０mL)およびTHF(１０mL)に加える。t−BuOH(３００μL)を加え、次いで、デス−マーチン・パーヨージナン(７５０mg,１.７７mmol)を加える。反応物を５０分間攪拌し、次いで、P−Na２SO３(１.５mmol DMP／樹脂g)で処理して反応を停止する。室温にて２０分間攪拌した後、反応混合物をP−TBD(２.５mmol DMP／樹脂g)で清掃する。１時間攪拌した後、得られる混合物を濾過し、濃縮する。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(５０％〜７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物EN(２２０mg,５３％)を得る。
中間体化合物cdvii(４１５mg,０.５９mmol)をDCM(１０mL)およびTHF(１０mL)に加える。t−BuOH(３００μL)を加え、次いで、デス−マーチン・パーヨージナン(７５０mg,１.７７mmol)を加える。反応物を５０分間攪拌し、次いで、P−Na２SO３(１.５mmol DMP／樹脂g)で処理して反応を停止する。室温にて２０分間攪拌した後、反応混合物をP−TBD(２.５mmol DMP／樹脂g)で清掃する。１時間攪拌した後、得られる混合物を濾過し、濃縮する。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(５０％〜７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物EN(２２０mg,５３％)を得る。
下記TABLE１に示すように、以下の化合物について、質量分析値［Ｍ］を得た。
下記TABLE２に示すように、以下の化合物の高分解能質量分析値を得た。
中間体実施例１−化合物ii
化合物i(８.１g,２４.４mmol)
のエタノール溶液(４０mL)に−１０℃にてNaBH４(９２４mg,２４.４mmol)を加える。反応物をその温度にて３０分間攪拌し、次いで、AcOH(３mL)で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAc(２５０mL)で希釈し、NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物ii７.８５g(９７％)を得る。
化合物i(８.１g,２４.４mmol)
中間体実施例２−化合物iii
化合物ii(４.４８g,１３.４mmol)のTHF溶液(７０mL)に０℃にてNaH(６９９mg,６０％,１７.４２mmol)を加える。その温度にて４０分間攪拌した後、希釈しないMeI(１.２５mL,２０.１mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、０℃にてNH４Clの飽和溶液で注意深く処理して反応を停止する。反応混合物をEt２OおよびEtOAcで抽出する。有機層を水、食塩水で洗浄し、Na２SO４で乾燥する。このようにして得られた有機層を減圧濃縮して、キサンタン化合物iiiを得る。
化合物ii(４.４８g,１３.４mmol)のTHF溶液(７０mL)に０℃にてNaH(６９９mg,６０％,１７.４２mmol)を加える。その温度にて４０分間攪拌した後、希釈しないMeI(１.２５mL,２０.１mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、０℃にてNH４Clの飽和溶液で注意深く処理して反応を停止する。反応混合物をEt２OおよびEtOAcで抽出する。有機層を水、食塩水で洗浄し、Na２SO４で乾燥する。このようにして得られた有機層を減圧濃縮して、キサンタン化合物iiiを得る。
中間体実施例３−化合物iv
キサンタン化合物iii(~１３.４mmol)をトルエン(１００mL)に溶解する。この溶液に、AIBN(２１６mg,１.３４mmol)を加える。得られる溶液を乾燥窒素で脱ガスし、次いで、n−Bu３SnH(５.４mL,２０.１mmol)で処理する。反応混合物を９０℃にて３時間加熱する。この時点で、反応物を室温に冷却し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(１５−２０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物iv２.８g(６６％、化合物iiからの総収率)を得る。
キサンタン化合物iii(~１３.４mmol)をトルエン(１００mL)に溶解する。この溶液に、AIBN(２１６mg,１.３４mmol)を加える。得られる溶液を乾燥窒素で脱ガスし、次いで、n−Bu３SnH(５.４mL,２０.１mmol)で処理する。反応混合物を９０℃にて３時間加熱する。この時点で、反応物を室温に冷却し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(１５−２０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物iv２.８g(６６％、化合物iiからの総収率)を得る。
中間体実施例４−化合物v
化合物iv(１g,３.１５mmol)のエタノール溶液(２１mL)に窒素気流下、Pd(OH)２／C(６５５mg,２０％,０.９５mmol)を加える。得られる反応混合物を標準的水素添加(１.５気圧)に付す。５時間後、水素源を除去し、反応物を濾過する。濾液を減圧濃縮して、遊離アミン化合物vを得る。
化合物iv(１g,３.１５mmol)のエタノール溶液(２１mL)に窒素気流下、Pd(OH)２／C(６５５mg,２０％,０.９５mmol)を加える。得られる反応混合物を標準的水素添加(１.５気圧)に付す。５時間後、水素源を除去し、反応物を濾過する。濾液を減圧濃縮して、遊離アミン化合物vを得る。
中間体実施例５−化合物vi
化合物vii(６２９mg,１.９５mmol)
のDCM溶液(１０mL)に室温にてHOAt(２６５mg,１.９５mmol)、次いで、DCM(１.９５mL,１.９５mmol)中の１Ｍ DCC溶液を加える。３０分間攪拌した後、上記HOAt活性化酸に化合物v(１.５mmol)のDCM溶液(３mL)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応物をセライトで濾過する。濾液をEtOAc(７５mL)で希釈し、水および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(７０−８０％EtOAc／ヘキサン)tにて精製して、化合物vi６２０mg(８５％)を得る。
化合物vii(６２９mg,１.９５mmol)
中間体実施例６−化合物viii
化合物vi(６１５mg,１.２６mmol)のエタノール溶液(１０mL)に２N NaOH水溶液(１.２６mL,２.５２mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、Dowex酸性樹脂を用いてｐＨ３に酸性化する。固体を濾去し、濾液を減圧濃縮して、残渣を得、CH３CN／H２O（１：１）に再溶解する。この溶液を凍結乾燥して、化合物viii４９５mg(８５％)を得る。
化合物vi(６１５mg,１.２６mmol)のエタノール溶液(１０mL)に２N NaOH水溶液(１.２６mL,２.５２mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、Dowex酸性樹脂を用いてｐＨ３に酸性化する。固体を濾去し、濾液を減圧濃縮して、残渣を得、CH３CN／H２O（１：１）に再溶解する。この溶液を凍結乾燥して、化合物viii４９５mg(８５％)を得る。
中間体実施例７−化合物ix
化合物viii(２３０mg,０.５mmol)のDCM溶液(１０mL)にPyBop(４１７mg,０.８mmol)を加える。反応物を約室温にて３０分間攪拌する。この溶液に、化合物x(２６３mg,０.７５mmol)
のTHF溶液(５.２５mL)、次いで、DIPEA(０.１７４mL,１mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、水(３０mL)で３０分間処理して反応を停止する。反応混合物EtOAc(１００mL)で抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物ix〜４００mg(１００％)を得る。
化合物viii(２３０mg,０.５mmol)のDCM溶液(１０mL)にPyBop(４１７mg,０.８mmol)を加える。反応物を約室温にて３０分間攪拌する。この溶液に、化合物x(２６３mg,０.７５mmol)
中間体実施例８−化合物xi
化合物ix(３９６mg,０.５mmol)のDCM溶液(１０mL)にDMP試薬(２７８mg,０.６５mmol)を加える。反応物を約室温にて１時間攪拌し、１０％Na２SO３で３０分間処理して反応を停止する。次いで、反応混合物をEtOAc(７５mL)で抽出し、食塩水で洗浄する。有機層を乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物xi,３２０mg(８１％)を得る。
化合物ix(３９６mg,０.５mmol)のDCM溶液(１０mL)にDMP試薬(２７８mg,０.６５mmol)を加える。反応物を約室温にて１時間攪拌し、１０％Na２SO３で３０分間処理して反応を停止する。次いで、反応混合物をEtOAc(７５mL)で抽出し、食塩水で洗浄する。有機層を乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物xi,３２０mg(８１％)を得る。
中間体実施例９−化合物xii
化合物viii(２３０mg,０.５mmol)のDCM溶液(１０mL)にPyBop(４１７mg,０.８mmol)を加える。反応物を約室温にて３０分間攪拌する。この溶液に、化合物xiii(１４０mg,０.７５mmol)
のTHF溶液(３.５mL)、次いで、DIPEA(０.１７４mL,１mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、水(３０mL)で３０分間処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAc(７５mL)で抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、定量的収率で化合物xiiを得る。
化合物viii(２３０mg,０.５mmol)のDCM溶液(１０mL)にPyBop(４１７mg,０.８mmol)を加える。反応物を約室温にて３０分間攪拌する。この溶液に、化合物xiii(１４０mg,０.７５mmol)
中間体実施例１０−化合物i'
化合物i(５g,１５.１mmolのメタノール溶液(３０mL))に(BOC)２O(３.３g,１５.１mmol)およびH２／Pd(OH)２／C(１.６g,１０％Pd含量)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、次いで、セライトで２回濾過する。セライトパッドをDCMで濯ぐ。合わせた濾液を減圧濃縮して、油状残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(４０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物i'３.８g(８５％)を得る。
化合物i(５g,１５.１mmolのメタノール溶液(３０mL))に(BOC)２O(３.３g,１５.１mmol)およびH２／Pd(OH)２／C(１.６g,１０％Pd含量)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、次いで、セライトで２回濾過する。セライトパッドをDCMで濯ぐ。合わせた濾液を減圧濃縮して、油状残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(４０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物i'３.８g(８５％)を得る。
中間体実施例１１−化合物ii'
化合物i'(３.７g,１２.５mmol)のメタノール溶液(１１１mL)に０℃にてNaBH４(０.８０５g,２１mmol)を加える。０℃で２.５時間攪拌した後、反応溶媒をゆっくりと減圧蒸発して残渣を得、EtOAcで希釈する。次いで、この溶液を水で２回洗浄する。水層をEtOAcで抽出する。合わせた有機層を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、減圧濃縮して、残渣を得、クロマトグラフィーにて精製して、化合物ii'３.７６g(９９％)を得る。
化合物i'(３.７g,１２.５mmol)のメタノール溶液(１１１mL)に０℃にてNaBH４(０.８０５g,２１mmol)を加える。０℃で２.５時間攪拌した後、反応溶媒をゆっくりと減圧蒸発して残渣を得、EtOAcで希釈する。次いで、この溶液を水で２回洗浄する。水層をEtOAcで抽出する。合わせた有機層を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、減圧濃縮して、残渣を得、クロマトグラフィーにて精製して、化合物ii'３.７６g(９９％)を得る。
中間体実施例１２−化合物xiv
化合物ii'(３.７６g,１２.３mmol)のDCM溶液(１８０mL)に０℃にてDMAP(５g,４０.１mmol)、次いで、Tf２Ｏ(４mL,２３.７mmol)を加える。反応物を０℃にて１時間、約室温にてさらに１.５時間攪拌する。次いで、反応混合物を５％NaHCO３で２回洗浄し、MgSO４で乾燥する。このように得られた有機層を減圧濃縮して粗トリフレートを得る。得られるトリフレート(２.７g,６mmol)をDCM(１２０mL)に溶解する。この溶液に、DMAP(２.５g,２０.５mmol)を加える。得られる反応混合物を一夜加熱還流する。この時点で、室温に冷却し、５％NaHCO３で２回洗浄する。反応混合物を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、減圧濃縮して、褐色がかった油状残渣を得、精製(１％MeOH／DCM)して、化合物xiv５００mg(３０％)を得る。
化合物ii'(３.７６g,１２.３mmol)のDCM溶液(１８０mL)に０℃にてDMAP(５g,４０.１mmol)、次いで、Tf２Ｏ(４mL,２３.７mmol)を加える。反応物を０℃にて１時間、約室温にてさらに１.５時間攪拌する。次いで、反応混合物を５％NaHCO３で２回洗浄し、MgSO４で乾燥する。このように得られた有機層を減圧濃縮して粗トリフレートを得る。得られるトリフレート(２.７g,６mmol)をDCM(１２０mL)に溶解する。この溶液に、DMAP(２.５g,２０.５mmol)を加える。得られる反応混合物を一夜加熱還流する。この時点で、室温に冷却し、５％NaHCO３で２回洗浄する。反応混合物を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、減圧濃縮して、褐色がかった油状残渣を得、精製(１％MeOH／DCM)して、化合物xiv５００mg(３０％)を得る。
中間体実施例１３−化合物xv
化合物xiv(５００mg,１.８mmol)をジオキサン(６.７５mL)中の４N HClに溶解する。反応物を約室温にて〜４時間攪拌する。この時点で、溶媒を減圧除去する。得られる残渣をジエチルエーテルで２回トリチュレートして、ほとんど定量的収率の化合物xvのHCl塩を得る。
化合物xiv(５００mg,１.８mmol)をジオキサン(６.７５mL)中の４N HClに溶解する。反応物を約室温にて〜４時間攪拌する。この時点で、溶媒を減圧除去する。得られる残渣をジエチルエーテルで２回トリチュレートして、ほとんど定量的収率の化合物xvのHCl塩を得る。
中間体実施例１４−化合物xvi
化合物vii(５７９mg,１.８mmol)のTHF溶液(７mL)にHOAt(２４５mg,１.８mmol)およびDCC(１.８mL,１Ｍ DCM溶液)を加える。懸濁液が得られる。約室温にて１５分間攪拌した後、上記懸濁液に化合物xv(１.８mmol)のTHF溶液(６mL)およびDIPEA(０.６３mL,３.６mmol)を加える。後で、追加のDIPEA(０.８mL)を加える。反応混合物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で形成された白色固体を濾去する。白色固体をTHFで濯ぐ。合わせた濾液と洗液を減圧濃縮して、粗生成物を得、シリカゲルクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物xvi６６５mg(７６％)を得る。
化合物vii(５７９mg,１.８mmol)のTHF溶液(７mL)にHOAt(２４５mg,１.８mmol)およびDCC(１.８mL,１Ｍ DCM溶液)を加える。懸濁液が得られる。約室温にて１５分間攪拌した後、上記懸濁液に化合物xv(１.８mmol)のTHF溶液(６mL)およびDIPEA(０.６３mL,３.６mmol)を加える。後で、追加のDIPEA(０.８mL)を加える。反応混合物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で形成された白色固体を濾去する。白色固体をTHFで濯ぐ。合わせた濾液と洗液を減圧濃縮して、粗生成物を得、シリカゲルクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物xvi６６５mg(７６％)を得る。
中間体実施例１５−化合物xvii
７(６６５mg,１.３７mmol)のエタノール溶液(８mL)に０℃にて１N水性NaOH(２.４mmol)を加える。反応物を一夜約室温にて攪拌し、次いで、Dowex酸性樹脂を用いてｐＨ３に酸性化する。固体を濾過する。得られる濾液を減圧濃縮して、淡黄色残渣を得、CH３CN／H２O（１：１）に再溶解し、凍結乾燥して、化合物xvii４６７mg(７４％)を得る。
７(６６５mg,１.３７mmol)のエタノール溶液(８mL)に０℃にて１N水性NaOH(２.４mmol)を加える。反応物を一夜約室温にて攪拌し、次いで、Dowex酸性樹脂を用いてｐＨ３に酸性化する。固体を濾過する。得られる濾液を減圧濃縮して、淡黄色残渣を得、CH３CN／H２O（１：１）に再溶解し、凍結乾燥して、化合物xvii４６７mg(７４％)を得る。
中間体実施例１６−化合物xix
化合物xvii(１００mg,０.２２mmol)のDCM溶液(４mL)を室温にて２０分間PyBop(２０７mg,０.４mmol)で処理する。この時点で、上記溶液を化合物xviii(６５mg,０.３２mmol)
のTHF溶液(２.６mL)o、次いで、DIPEA(０.０７６mL)で処理する。約室温にて７時間攪拌した後、反応物を水で処理して反応を停止する。反応混合物をDCM(６０mL)で希釈する。有機層を分離し、食塩水で２回洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）する。濾過、濃縮、シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)により、化合物xix１４８mg(〜１００％)を得る。
化合物xvii(１００mg,０.２２mmol)のDCM溶液(４mL)を室温にて２０分間PyBop(２０７mg,０.４mmol)で処理する。この時点で、上記溶液を化合物xviii(６５mg,０.３２mmol)
中間体実施例１７−化合物xx
N−Cbz−L−バリン(１４.４g,５７.２mmol)のTHF溶液(１００mL)にHOBT(７.７２g,５７.２mmol)およびEDCI(１０.９８g,５７.２mmol)を加える。約室温にて２０分間攪拌した後、上記溶液にtert−L−ロイシンメチルエステル塩酸塩(１０.４g,５７.２mmol)およびDIPEA(１１.９mL,６８.７mmol)を含むTHF溶液(５０mL)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。標準的水性処理およびシリカゲルクロマトグラフィー(３０％EtOAc／ヘキサン)を行って、化合物xx１４g(６４％)を得る。
N−Cbz−L−バリン(１４.４g,５７.２mmol)のTHF溶液(１００mL)にHOBT(７.７２g,５７.２mmol)およびEDCI(１０.９８g,５７.２mmol)を加える。約室温にて２０分間攪拌した後、上記溶液にtert−L−ロイシンメチルエステル塩酸塩(１０.４g,５７.２mmol)およびDIPEA(１１.９mL,６８.７mmol)を含むTHF溶液(５０mL)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。標準的水性処理およびシリカゲルクロマトグラフィー(３０％EtOAc／ヘキサン)を行って、化合物xx１４g(６４％)を得る。
中間体実施例１８−化合物xxi
xx(６.７１g,１７.７mmol)のメタノール溶液(８０mL)にPd／C(１.８８g,１０％Pd含量)を加える(N２気流下)。反応容器を一夜約室温にて水素添加(１気圧 H２)に付す。この時点で、反応混合物をセライトパッドで濾過し、減圧濃縮して、ジクロロメタン工程に用いる対応する粗遊離アミンを得る。このアミン(〜１７.７mmol)のTHF溶液を２−ピラジンカルボン酸(２.８５g,２３mmol)、ホビット（Hobbit）(３.１２g,２３mmol)およびEDCI(４.４１g,２３mmol)を含むTHF(４６mL)およびDMF(５mL)溶液に加える。次いで、得られる混合物にDIPEA(３.０８g,１７.７mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、水で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(４０−５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物xxi３.９g(６３％)を得る。
xx(６.７１g,１７.７mmol)のメタノール溶液(８０mL)にPd／C(１.８８g,１０％Pd含量)を加える(N２気流下)。反応容器を一夜約室温にて水素添加(１気圧 H２)に付す。この時点で、反応混合物をセライトパッドで濾過し、減圧濃縮して、ジクロロメタン工程に用いる対応する粗遊離アミンを得る。このアミン(〜１７.７mmol)のTHF溶液を２−ピラジンカルボン酸(２.８５g,２３mmol)、ホビット（Hobbit）(３.１２g,２３mmol)およびEDCI(４.４１g,２３mmol)を含むTHF(４６mL)およびDMF(５mL)溶液に加える。次いで、得られる混合物にDIPEA(３.０８g,１７.７mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、水で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(４０−５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物xxi３.９g(６３％)を得る。
中間体実施例１９−化合物xxii
化合物xxi(４.６７g,１３.３４mmol)のメタノール溶液(４０mL)に２N NaOH(１０mL,２０mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌する。この時点で、反応混合物に追加量の２N NaOH(３.３mL,６.６７mmol)を加える。約室温にて一夜攪拌した後、酸性樹脂を用いて反応物をｐＨ３に酸性化する。次いで、反応物を濾過し、濾液を減圧濃縮して残渣を得、凍結乾燥のためにCH３CN／H２O（１：１）に溶解する。化合物xxii４.１５g(９３％)を得る。
化合物xxi(４.６７g,１３.３４mmol)のメタノール溶液(４０mL)に２N NaOH(１０mL,２０mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌する。この時点で、反応混合物に追加量の２N NaOH(３.３mL,６.６７mmol)を加える。約室温にて一夜攪拌した後、酸性樹脂を用いて反応物をｐＨ３に酸性化する。次いで、反応物を濾過し、濾液を減圧濃縮して残渣を得、凍結乾燥のためにCH３CN／H２O（１：１）に溶解する。化合物xxii４.１５g(９３％)を得る。
中間体実施例２０−化合物xxiii
化合物xxii(９１７mg,２.７３mmol)のDCM溶液(１０mL)をHOAt(３７１mg,２.７３mmol)およびDCC(２.７３mL,１M,２.７３mmol)で処理する。３０分間攪拌した後、反応混合物を化合物v(５００mg,２.７３mmol)のTHF溶液(１０mL)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、白色固体（尿素）を濾過する。濾液を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(６０−７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物xxiii１.０６g(７７％)を得る。
化合物xxii(９１７mg,２.７３mmol)のDCM溶液(１０mL)をHOAt(３７１mg,２.７３mmol)およびDCC(２.７３mL,１M,２.７３mmol)で処理する。３０分間攪拌した後、反応混合物を化合物v(５００mg,２.７３mmol)のTHF溶液(１０mL)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、白色固体（尿素）を濾過する。濾液を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(６０−７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物xxiii１.０６g(７７％)を得る。
中間体実施例２１−化合物xxiv
化合物xxiii(１.０６g,２.１１mmol)のエタノール溶液(２０mL)を２N NaOH(２.１１mL,４.２３mmol)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、酸性樹脂で反応混合物をｐＨ３に酸性化する。固体を濾去する。得られる濾液を減圧濃縮して残渣を得、凍結乾燥して、化合物xxiv〜１g(１００％)を得る。
化合物xxiii(１.０６g,２.１１mmol)のエタノール溶液(２０mL)を２N NaOH(２.１１mL,４.２３mmol)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、酸性樹脂で反応混合物をｐＨ３に酸性化する。固体を濾去する。得られる濾液を減圧濃縮して残渣を得、凍結乾燥して、化合物xxiv〜１g(１００％)を得る。
中間体実施例２２−化合物xxv
化合物xxiv(２３６.７mg,０.５mmol)のDCM溶液(１０mL)をPyBop(４１７mg,０.８mmol)で処理する。約室温にて２０分間攪拌した後、反応混合物を化合物xiii(１３９.５mg,０.７５mmol)のDMF溶液(５.６mL)、次いで、DIPEA(０.１７４mL,１mmol)で処理する。約室温にて８時間攪拌した後、水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物xxv〜３２０mg(１００％)を得る。
化合物xxiv(２３６.７mg,０.５mmol)のDCM溶液(１０mL)をPyBop(４１７mg,０.８mmol)で処理する。約室温にて２０分間攪拌した後、反応混合物を化合物xiii(１３９.５mg,０.７５mmol)のDMF溶液(５.６mL)、次いで、DIPEA(０.１７４mL,１mmol)で処理する。約室温にて８時間攪拌した後、水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物xxv〜３２０mg(１００％)を得る。
中間体実施例２３−化合物xxvi
化合物xxiv(３５５mg,０.７５mmol)のDCM溶液(１５mL)をPyBop(６２２mg,１.２mmol)で処理する。約室温にて２０分間攪拌した後、反応混合物を化合物xxvii'(１５６mg,０.７５mmol)
のTHF溶液(１０mL)、次いで、DIPEA(０.２６mL,１.５mmol)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(２％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物xxvi〜４００mg(８０％)を得る。
化合物xxiv(３５５mg,０.７５mmol)のDCM溶液(１５mL)をPyBop(６２２mg,１.２mmol)で処理する。約室温にて２０分間攪拌した後、反応混合物を化合物xxvii'(１５６mg,０.７５mmol)
中間体実施例２４：５−シアノペンタン酸メチル
シアン化カリウム(４g,６１.４４mmol)を７０mLの水および２００mLのメタノールに溶解する。溶液に５−ブロモペンタン酸メチル１０g(５１.２mmol)を加え、混合物を一夜還流する。反応混合物を濃縮乾固する。残渣に１００mLのEtOAcを加え、生成物を抽出する。有機層を水で３回洗浄し、乾燥し、濃縮して、５−シアノプロペン酸メチル５.３７g(７４％)を油状物で得る。
シアン化カリウム(４g,６１.４４mmol)を７０mLの水および２００mLのメタノールに溶解する。溶液に５−ブロモペンタン酸メチル１０g(５１.２mmol)を加え、混合物を一夜還流する。反応混合物を濃縮乾固する。残渣に１００mLのEtOAcを加え、生成物を抽出する。有機層を水で３回洗浄し、乾燥し、濃縮して、５−シアノプロペン酸メチル５.３７g(７４％)を油状物で得る。
中間体実施例２５：５−テトラゾール−５−イルペンタン酸メチル
５−シアノペンタン酸メチル(４.８g,３４mmol)をトルエンに溶解し、塩化トリエチルアンモニウム(１４g,１０２mmol)およびナトリウムアジド(６.６３,１０２mmol)を加える。混合物を一夜加熱還流する。反応混合物を室温まで冷却し、水(３x１００mL)を加えて有機層から５−テトラゾール−５−イルペンタン酸メチルを抽出する。水層に濃ＨＣｌを加えてｐＨ２に調節する。水溶液から生成物をEtOAc(３x５０mL)で抽出する。有機層を合わせ、乾燥し、濃縮して、５−テトラゾール−５−イルペンタン酸メチル４.２５g(６８％)を得る。
５−シアノペンタン酸メチル(４.８g,３４mmol)をトルエンに溶解し、塩化トリエチルアンモニウム(１４g,１０２mmol)およびナトリウムアジド(６.６３,１０２mmol)を加える。混合物を一夜加熱還流する。反応混合物を室温まで冷却し、水(３x１００mL)を加えて有機層から５−テトラゾール−５−イルペンタン酸メチルを抽出する。水層に濃ＨＣｌを加えてｐＨ２に調節する。水溶液から生成物をEtOAc(３x５０mL)で抽出する。有機層を合わせ、乾燥し、濃縮して、５−テトラゾール−５−イルペンタン酸メチル４.２５g(６８％)を得る。
中間体実施例２６：５−[N−(１,１−ジメチルベンジル)テトラゾール−５−イル]ペンタン酸メチル
５−テトラゾール−５−イルペンタン酸メチル(４.２３g,２３mmol)およびトリクロロ酢酸(８.６９g,５３mmol)を５０mLのCHCl３に溶解する。溶液にα−メチルスチレン(２.７２,２３mmol)を滴下し、反応混合物を室温にて一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈して２００mL,にし、有機層を１０％水性KOHおよび食塩水で洗浄する。有機層を乾燥し、濃縮する。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにて精製して、５−[N−(１,１−ジメチルベンジル)テトラゾール−５−イル]ペンタン酸メチル６.６g(９５％)を得る。
５−テトラゾール−５−イルペンタン酸メチル(４.２３g,２３mmol)およびトリクロロ酢酸(８.６９g,５３mmol)を５０mLのCHCl３に溶解する。溶液にα−メチルスチレン(２.７２,２３mmol)を滴下し、反応混合物を室温にて一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈して２００mL,にし、有機層を１０％水性KOHおよび食塩水で洗浄する。有機層を乾燥し、濃縮する。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーにて精製して、５−[N−(１,１−ジメチルベンジル)テトラゾール−５−イル]ペンタン酸メチル６.６g(９５％)を得る。
中間体実施例２７：５−[N−(l,１−ジメチルベンジル)テトラゾール−５−イル]ペンタン酸
５−[N−(１,１−ジメチルベンジル)テトラゾール−５−イル]ペンタン酸メチル(６.６g,２１.８mmol)をメタノール(１００mL)に溶解し、２３mLの１N水性NaOHを加える。混合物を一夜攪拌し、濃縮してメタノールを除去する。残渣を水(１００mL)に溶解し、溶液に当量の１N水性HCを加えて中和する。生成物をEtOAc(３x５０mL)で抽出する。有機層を乾燥し、濃縮して、５−[N−(１,１−ジメチルベンジル)テトラゾール−５−イル]ペンタン酸４.７５g(７５％)を得る。
５−[N−(１,１−ジメチルベンジル)テトラゾール−５−イル]ペンタン酸メチル(６.６g,２１.８mmol)をメタノール(１００mL)に溶解し、２３mLの１N水性NaOHを加える。混合物を一夜攪拌し、濃縮してメタノールを除去する。残渣を水(１００mL)に溶解し、溶液に当量の１N水性HCを加えて中和する。生成物をEtOAc(３x５０mL)で抽出する。有機層を乾燥し、濃縮して、５−[N−(１,１−ジメチルベンジル)テトラゾール−５−イル]ペンタン酸４.７５g(７５％)を得る。
中間体実施例２８−化合物xxviii
５−[N−(１,１−ジメチルベンジル)テトラゾール−５−イル]ペンタン酸(４.７５g,１６.５mmol)をDCM(１００mL)に溶解し、４.８g(２４.８mmol)のEDCIおよび６mLのDIPEAを加える。混合物に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド(３.８g,３３mmol)を加える。反応混合を約室温にて３時間攪拌する。混合物をDCMで希釈して２００mLにし、溶液を水で３回洗浄する。有機層を乾燥し、濃縮して、化合物xxviii４.７９g(７５％)を得る。
５−[N−(１,１−ジメチルベンジル)テトラゾール−５−イル]ペンタン酸(４.７５g,１６.５mmol)をDCM(１００mL)に溶解し、４.８g(２４.８mmol)のEDCIおよび６mLのDIPEAを加える。混合物に、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド(３.８g,３３mmol)を加える。反応混合を約室温にて３時間攪拌する。混合物をDCMで希釈して２００mLにし、溶液を水で３回洗浄する。有機層を乾燥し、濃縮して、化合物xxviii４.７９g(７５％)を得る。
中間体実施例２９−化合物xxix
ジペプチドＨ−Val−Val−OH(３.２２g,１４.９mmol)を５０mLのN,N−ジメチルホルムアミド(DMF)に懸濁し、化合物xxviii４.７５g(１２.４２mmol)、次いで、ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)３.４mL(１８.６３mmol)を加える。混合物を４０℃まで温め、一夜攪拌する。溶媒を高減圧蒸発する。残渣をEtOAcに溶解し、１N HClおよび食塩水で洗浄して、化合物xxix５.５２g(９１％)を得る。
ジペプチドＨ−Val−Val−OH(３.２２g,１４.９mmol)を５０mLのN,N−ジメチルホルムアミド(DMF)に懸濁し、化合物xxviii４.７５g(１２.４２mmol)、次いで、ジイソプロピルエチルアミン(DIPEA)３.４mL(１８.６３mmol)を加える。混合物を４０℃まで温め、一夜攪拌する。溶媒を高減圧蒸発する。残渣をEtOAcに溶解し、１N HClおよび食塩水で洗浄して、化合物xxix５.５２g(９１％)を得る。
中間体実施例３０−化合物xxx
化合物xxix１.６g(３.２９mmol)を２０mLのDCMに溶解し、DCCの１M THF溶液３.３mLを加える。混合物に、化合物v５００mg(２.７３mmol)を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。混合物をEtOAcで１００mLに希釈し、１N HCl、NaHCO３および食塩水で洗浄する。カラムクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物xxx１.０２g(５８％)を得る。
化合物xxix１.６g(３.２９mmol)を２０mLのDCMに溶解し、DCCの１M THF溶液３.３mLを加える。混合物に、化合物v５００mg(２.７３mmol)を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。混合物をEtOAcで１００mLに希釈し、１N HCl、NaHCO３および食塩水で洗浄する。カラムクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物xxx１.０２g(５８％)を得る。
中間体実施例３１−化合物xxxi
化合物xxx(１.０２g,１.５７mmol)をMeOH１０mLに溶解し、１N 水性NaOH２mLを加える。混合物を一夜攪拌する。メタノールを蒸発除去し、残渣を水に溶解し、HCl２mLで中和する。EtOAcで抽出を行い、化合物xxxi１.００g(〜１００％)を得る。
化合物xxx(１.０２g,１.５７mmol)をMeOH１０mLに溶解し、１N 水性NaOH２mLを加える。混合物を一夜攪拌する。メタノールを蒸発除去し、残渣を水に溶解し、HCl２mLで中和する。EtOAcで抽出を行い、化合物xxxi１.００g(〜１００％)を得る。
中間体実施例３２−化合物xxxii
化合物xxxi(３００mg,０.４８mmol)およびPyBop(３００mg,０.５８mmol)を１０mLのDCMに溶解する。溶液に、化合物x(２０１mg,０.５８mmol)を加え、次いで、DIPEA(１０４μl)を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。次いで、反応混合物をEtOAcで希釈して１００mLにし、１N HClで２回、NaHCO３で２回および食塩水で３回洗浄する。有機層を乾燥し、濃縮する。残渣をカラムクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物xxxii４５０mg(９８％)を得る。
化合物xxxi(３００mg,０.４８mmol)およびPyBop(３００mg,０.５８mmol)を１０mLのDCMに溶解する。溶液に、化合物x(２０１mg,０.５８mmol)を加え、次いで、DIPEA(１０４μl)を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。次いで、反応混合物をEtOAcで希釈して１００mLにし、１N HClで２回、NaHCO３で２回および食塩水で３回洗浄する。有機層を乾燥し、濃縮する。残渣をカラムクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物xxxii４５０mg(９８％)を得る。
中間体実施例３３−化合物xxxiii
化合物xxxii３６０mg(０.３８mmol)を８mLのDCMに溶解し、２４０mg(０.５７mmol)のDMP試薬を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。混合物をEtOAcで希釈して５０mLにし、食塩水で３回洗浄する。生成物をカラムクロマトグラフィー(２５％エタノール／EtOAc)にて精製して、化合物xxxiii３００mg(８３％)を得る。
化合物xxxii３６０mg(０.３８mmol)を８mLのDCMに溶解し、２４０mg(０.５７mmol)のDMP試薬を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。混合物をEtOAcで希釈して５０mLにし、食塩水で３回洗浄する。生成物をカラムクロマトグラフィー(２５％エタノール／EtOAc)にて精製して、化合物xxxiii３００mg(８３％)を得る。
中間体実施例３４−化合物xxxiv
xxxv(７９０mg,２.８０mmol)
のDCM溶液(１０mL)にPyBop(１.７g,３.３６mmol)およびHobbit(４５０mg,３.３６mmol)を加える。得られる溶液を０℃に冷却し、(s)−α−(４−ピリジル)エチルアミン(４１０mg,３.３６mmol)のDCM溶液(３mL)で処理する。続いて、これにDIPEA(０.５mL,３.３６mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応混合物をEtOAcで希釈する。全体を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。このようにして得た有機層を乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物xxxiv６３０mg(５８％)を得る。
注記：(s)−α−(４−ピリジル)エチルアミンは、そのＤ−酒石酸塩から、塩基洗浄(１N NaOH)に引き続いてEtOAc抽出を行うことによって得られる。回収率は、８９％である。
xxxv(７９０mg,２.８０mmol)
中間体実施例３５−化合物xxxvi
化合物xxxiv(６３０mg,１.６４mmol)のメタノール溶液(１５mL)にN２下、Pd／C(１５０mg,１０％パラジウム含有)を加える。反応物をH２下で一夜攪拌する。反応混合物をセライト（登録商標）５２１パッドで濾過する。濾液を減圧濃縮して、化合物xxxvi４２０mg(〜１００％)を得る。
化合物xxxiv(６３０mg,１.６４mmol)のメタノール溶液(１５mL)にN２下、Pd／C(１５０mg,１０％パラジウム含有)を加える。反応物をH２下で一夜攪拌する。反応混合物をセライト（登録商標）５２１パッドで濾過する。濾液を減圧濃縮して、化合物xxxvi４２０mg(〜１００％)を得る。
中間体実施例３６−化合物xxxvii
化合物xxxi(２７０mg,０.４３mmol)のDCM溶液(３mL)にPyBop(２７０mg,０.５２mmol)を加える。これに続いて、化合物xxxvi(１６０mg,０.６４mmol)およびDIPEA(０.０９mL,０.５２mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応物をEtOAcで希釈し、０.１N HCl、次いで、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。得られる有機層を乾燥し、濃縮して、次工程のための化合物xxxvii(４３０mg、全量）を得る
化合物xxxi(２７０mg,０.４３mmol)のDCM溶液(３mL)にPyBop(２７０mg,０.５２mmol)を加える。これに続いて、化合物xxxvi(１６０mg,０.６４mmol)およびDIPEA(０.０９mL,０.５２mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応物をEtOAcで希釈し、０.１N HCl、次いで、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。得られる有機層を乾燥し、濃縮して、次工程のための化合物xxxvii(４３０mg、全量）を得る
中間体実施例３７−化合物xxxviii
化合物xxxvii(３７０mg,０.４３mmol)のDCM溶液(３mL)にDMP試薬(２８０mg,０.６５mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、次いで、１０％Na２SO３で処理して反応を停止する。３０分間攪拌した後、反応物をEtOAcで抽出する。有機層を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。得られる有機層を乾燥し、濃縮して、残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物xxxviii１８０mg(４９％、２段階について)を得る。
化合物xxxvii(３７０mg,０.４３mmol)のDCM溶液(３mL)にDMP試薬(２８０mg,０.６５mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌し、次いで、１０％Na２SO３で処理して反応を停止する。３０分間攪拌した後、反応物をEtOAcで抽出する。有機層を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。得られる有機層を乾燥し、濃縮して、残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物xxxviii１８０mg(４９％、２段階について)を得る。
中間体実施例３８−化合物xxxx
化合物xxix(２.５g,５mmol)をDCM４０mLに溶解し、溶液にDCCの１M THF溶液５.１mLを加える。混合物に、化合物xxxix１.０８g(３.５３mmol)
を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。混合物をEtOAcで希釈して、１００mLにし、１N HCl、NaHCO３および食塩水で連続的に洗浄し、次いで、カラムクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物xxxx２.５９g(９５％)を得る。
化合物xxix(２.５g,５mmol)をDCM４０mLに溶解し、溶液にDCCの１M THF溶液５.１mLを加える。混合物に、化合物xxxix１.０８g(３.５３mmol)
中間体実施例３９−化合物xxxxi
化合物xxxx(２.５９g,３.３５mmol)を２０mL MeOHに溶解し、１N 水性NaOH４mLを加える。混合物を一夜攪拌し、次いで、回転蒸発により残渣を得る。残渣を水に溶解し、HCl（２mL）で中和する。次いで、中和された溶液をEtOAcで抽出して、化合物xxxxi２.４９g(〜１００％)を得る。
化合物xxxx(２.５９g,３.３５mmol)を２０mL MeOHに溶解し、１N 水性NaOH４mLを加える。混合物を一夜攪拌し、次いで、回転蒸発により残渣を得る。残渣を水に溶解し、HCl（２mL）で中和する。次いで、中和された溶液をEtOAcで抽出して、化合物xxxxi２.４９g(〜１００％)を得る。
中間体実施例４０−化合物xxxxii
化合物xxxxi(８４７mg,１.１６mmol)およびPyBop７２４mg(１.３９mmol)を１０mLのDCMに溶解する。溶液に、化合物xiii(２６０mg,１.３９mmol)を加え、次いで、DIPEA(２０９gμｌ）を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。次いで、反応混合物をEtOAcで希釈して１００mLにし、１N HClで２回、NaHCO３で２回および食塩水で３回洗浄する。有機層を乾燥し、濃縮する。残渣をカラムクロマトグラフィー(５％エタノール／EtOAc)にて精製して、化合物xxxxii９３０mg(８６％)を得る。
化合物xxxxi(８４７mg,１.１６mmol)およびPyBop７２４mg(１.３９mmol)を１０mLのDCMに溶解する。溶液に、化合物xiii(２６０mg,１.３９mmol)を加え、次いで、DIPEA(２０９gμｌ）を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。次いで、反応混合物をEtOAcで希釈して１００mLにし、１N HClで２回、NaHCO３で２回および食塩水で３回洗浄する。有機層を乾燥し、濃縮する。残渣をカラムクロマトグラフィー(５％エタノール／EtOAc)にて精製して、化合物xxxxii９３０mg(８６％)を得る。
中間体実施例４１−化合物xxxxiii
化合物xxxxii(３５０mg,０.３８mmol)を１０mLのDCMに溶解し、DMP試薬２４２mg(０.５７mmol)を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。混合物をEtOAcで希釈して５０mLにし、食塩水で３回洗浄する。生成物をカラムクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物xxxxiii１８０mg(５１％)を得る。
化合物xxxxii(３５０mg,０.３８mmol)を１０mLのDCMに溶解し、DMP試薬２４２mg(０.５７mmol)を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。混合物をEtOAcで希釈して５０mLにし、食塩水で３回洗浄する。生成物をカラムクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物xxxxiii１８０mg(５１％)を得る。
中間体実施例４２−化合物xxxxv
Ｈ−Val−Val−OH(５g,２３mmol)を１００mL DMFに懸濁し、,化合物xxxxiv(８.３g,２７.６mmol)
を加え、次いで、DIPEA６.２mL(３５.５mmol)を加える。混合物を４０℃にて２日間攪拌する。溶媒を高減圧除去し、残渣を１００mLのEtOAcに溶解し、１N HClで３回および食塩水で２回洗浄する。化合物xxxxv９.１４g(９９％)を得る。
Ｈ−Val−Val−OH(５g,２３mmol)を１００mL DMFに懸濁し、,化合物xxxxiv(８.３g,２７.６mmol)
中間体実施例４３−化合物xxxxvi
化合物xxxxv(２.８g,７mmol)およびHOAt９５４mg(７mmol)を１００mLのDCMに溶解する。７mLの１Ｍ DCC／DCMを加える。反応混合物に化合物xxxix(２.１５g)を加え、反応混合物を約室温にて一夜攪拌する。混合物を濃縮乾固し、残渣をEtOAcに溶解し、カラムクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物xxxxvi４.５７g(９５％)を得る。
化合物xxxxv(２.８g,７mmol)およびHOAt９５４mg(７mmol)を１００mLのDCMに溶解する。７mLの１Ｍ DCC／DCMを加える。反応混合物に化合物xxxix(２.１５g)を加え、反応混合物を約室温にて一夜攪拌する。混合物を濃縮乾固し、残渣をEtOAcに溶解し、カラムクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物xxxxvi４.５７g(９５％)を得る。
中間体実施例４４−化合物xxxxvii
化合物xxxxvi(４.５７g,６.６５mmol)を１０mLのTFAおよび１０mLのDCMに溶解し、混合物を約室温にて４時間攪拌する。溶媒を減圧除去し、残渣を、アセトニトリル／水（５０：５０）に溶解し、凍結乾燥して、化合物xxxxviiを粉末で得る。
化合物xxxxvi(４.５７g,６.６５mmol)を１０mLのTFAおよび１０mLのDCMに溶解し、混合物を約室温にて４時間攪拌する。溶媒を減圧除去し、残渣を、アセトニトリル／水（５０：５０）に溶解し、凍結乾燥して、化合物xxxxviiを粉末で得る。
中間体実施例４５−化合物xxxxviii
化合物xxxxvii(１g,１.５９mmol)およびPyBop９９０mg(２.２８mmol)を２０mLのDCMに溶解し、１.６mLの１Ｍ メチルアミン／THFを加える。混合物を約室温にて４時間攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈して１００mLにし、１N HCl、NaHCO３および食塩水で洗浄する。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー(１０％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物xxxxviii１g(９８％)を得る。
化合物xxxxvii(１g,１.５９mmol)およびPyBop９９０mg(２.２８mmol)を２０mLのDCMに溶解し、１.６mLの１Ｍ メチルアミン／THFを加える。混合物を約室温にて４時間攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈して１００mLにし、１N HCl、NaHCO３および食塩水で洗浄する。残渣をフラッシュカラムクロマトグラフィー(１０％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物xxxxviii１g(９８％)を得る。
中間体実施例４６−化合物xxxxix
化合物xxxxviii(１g,１.５５mmol)をMeOH１０mLに溶解し、１N NaOH２mLを加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。溶媒を蒸発除去する。残渣を水に溶解し、中和し、EtOAcで抽出して、化合物xxxxix９６０mg(９８％)を得る。
化合物xxxxviii(１g,１.５５mmol)をMeOH１０mLに溶解し、１N NaOH２mLを加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。溶媒を蒸発除去する。残渣を水に溶解し、中和し、EtOAcで抽出して、化合物xxxxix９６０mg(９８％)を得る。
中間体実施例４７−化合物li
化合物xxxxix(３１５mg,０.５mmol)およびPyBop３１２mg(０.６mmol)を１０mLのDCMに溶解する。化合物１(５６mg,０.６mmol)
および１０８μlのDIPEAを加える。混合物を約室温にて一夜攪拌し、EtOAcで希釈して１００mLにし、１N HCl、NaHCO３および食塩水で洗浄する。カラムクロマトグラフィー(１５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物li４００mg(９２％)を得る。
化合物xxxxix(３１５mg,０.５mmol)およびPyBop３１２mg(０.６mmol)を１０mLのDCMに溶解する。化合物１(５６mg,０.６mmol)
中間体実施例４８−化合物lii
化合物li(４００mg,０.４６mmol)を１０mLのDCMに溶解し、DMP試薬２９２mg(０.６９mmol)を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去し、生成物をRP−HPLCで精製して、化合物lii１３０mg(３２％)を得る。
化合物li(４００mg,０.４６mmol)を１０mLのDCMに溶解し、DMP試薬２９２mg(０.６９mmol)を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去し、生成物をRP−HPLCで精製して、化合物lii１３０mg(３２％)を得る。
中間体実施例４９−化合物liii
化合物xxxxix(２１０mg,０.３３mmol)およびPyBop２０８mg(０.４mmol)を１０mLのDCMに溶解する。溶液に化合物xiii(１５４mg,０.８３mmol)を加え、次いで、DIPEA(７２μl,０.４mmol)を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈して１００mLにし、１NのHCl、NaHCO３および食塩水で洗浄し、次いで、フラッシュカラムクロマトグラフィー(１０％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物liii２５０mg(９５％)を得る。
化合物xxxxix(２１０mg,０.３３mmol)およびPyBop２０８mg(０.４mmol)を１０mLのDCMに溶解する。溶液に化合物xiii(１５４mg,０.８３mmol)を加え、次いで、DIPEA(７２μl,０.４mmol)を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈して１００mLにし、１NのHCl、NaHCO３および食塩水で洗浄し、次いで、フラッシュカラムクロマトグラフィー(１０％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物liii２５０mg(９５％)を得る。
中間体実施例５０−化合物liv
化合物xxxxv(７５５mg,１.８８mmol)およびHOAt２５５mg(１.８８mmol)を２０mLのDCMに溶解する。１.８８mLの１M DCC／DCMを加える。反応混合物に化合物v(２８８mg)を加え、反応混合物を約室温にて２時間攪拌する。混合物を濃縮乾固し、残渣をEtOAcに溶解し、カラムクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物liv８００mg(９０％)を得る。
化合物xxxxv(７５５mg,１.８８mmol)およびHOAt２５５mg(１.８８mmol)を２０mLのDCMに溶解する。１.８８mLの１M DCC／DCMを加える。反応混合物に化合物v(２８８mg)を加え、反応混合物を約室温にて２時間攪拌する。混合物を濃縮乾固し、残渣をEtOAcに溶解し、カラムクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物liv８００mg(９０％)を得る。
中間体実施例５１−化合物lv
化合物liv(８００mg,１.４１mmol)を１０mLのMeOHに溶解し２mLのNaOHを加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。溶媒を減圧除去し、残渣を水に溶解し、２mLの１N HClで中和する。生成物をEtOAcで抽出する。抽出溶媒を蒸発して、lv７６０mg(〜１００％)を得る。
化合物liv(８００mg,１.４１mmol)を１０mLのMeOHに溶解し２mLのNaOHを加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。溶媒を減圧除去し、残渣を水に溶解し、２mLの１N HClで中和する。生成物をEtOAcで抽出する。抽出溶媒を蒸発して、lv７６０mg(〜１００％)を得る。
中間体実施例５２−化合物lvii
化合物lv(７６０mg,１.４１mmol)およびPyBop８８０mg(１.６９mmol)を５mLのDCMに溶解する。溶液に化合物lvi(５３０mg,２.１２mmol)
を加え、次いで、０.３１のDIPEAを加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで１００mLに希釈し、１NのHCl、NaHCO３および食塩水で洗浄し、次いで、フラッシュカラムクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物lvii８７０mg(８０％)を得る。
化合物lv(７６０mg,１.４１mmol)およびPyBop８８０mg(１.６９mmol)を５mLのDCMに溶解する。溶液に化合物lvi(５３０mg,２.１２mmol)
中間体実施例５３−化合物lviii
化合物lvii(３５０mg,０.４５mmol)を５mLのTFAおよび５mLのDCMに溶解し、混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去し、生成物をRP−HPLCにて精製して、化合物lviii２２０mg(６９％)を得る。
化合物lvii(３５０mg,０.４５mmol)を５mLのTFAおよび５mLのDCMに溶解し、混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去し、生成物をRP−HPLCにて精製して、化合物lviii２２０mg(６９％)を得る。
中間体実施例５４−化合物lix
化合物lviii(２００mg,０.２８mmol)およびPyBop２１８mg(０.４２mmol)を５mLのDCMに溶解する。メチルアミン(０.２８mLの２M THF溶液)を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。混合物をEtOAcで希釈して１００mLにし、１NのHCl、NaHCO３および食塩水で洗浄し、次いで、カラムクロマトグラフィー(１５％EtOH／EtOAc)にて精製して、lix１６８mg(７９％)を得る。
化合物lviii(２００mg,０.２８mmol)およびPyBop２１８mg(０.４２mmol)を５mLのDCMに溶解する。メチルアミン(０.２８mLの２M THF溶液)を加える。混合物を約室温にて一夜攪拌する。混合物をEtOAcで希釈して１００mLにし、１NのHCl、NaHCO３および食塩水で洗浄し、次いで、カラムクロマトグラフィー(１５％EtOH／EtOAc)にて精製して、lix１６８mg(７９％)を得る。
中間体実施例５５−化合物lx
化合物lviii(２００mg,０.２６mmol)をDCM４mLに溶解し、DMP試薬１６５mg(０.３９mmol)を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去する。残渣を５０％アセトニトリル／水に溶解し、濾過し、RP−HPLCにて精製して、化合物lx１４０mg(７０％)を得る。
化合物lviii(２００mg,０.２６mmol)をDCM４mLに溶解し、DMP試薬１６５mg(０.３９mmol)を加える。混合物を約室温にて３時間攪拌する。溶媒を蒸発によって除去する。残渣を５０％アセトニトリル／水に溶解し、濾過し、RP−HPLCにて精製して、化合物lx１４０mg(７０％)を得る。
中間体実施例５６−化合物ii
DCM(３０mL)および化合物i(４g,１２.１mmol)のEtOH(３０mL)溶液を窒素下、〜１０℃以下に冷却する。NaBH４(４５８mg,１２.１mmol)を加え、溶液を１０℃にて５０分間攪拌する。TLC(５０％EtOAc／ヘキサン)により、より遅く移動する点への完全な転換が示される。反応物を注意深く氷、次いで、冷飽和NH４Cl溶液(１０mL)で処理して反応を停止する。混合物をDCM(３００mL)に加える。有機層を飽和NH４C１溶液(６０mL)で１回および食塩水(６０mL)で２回洗浄する。次いで、有機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、減圧濃縮して、化合物ii３.５g(８７％)を得る。
DCM(３０mL)および化合物i(４g,１２.１mmol)のEtOH(３０mL)溶液を窒素下、〜１０℃以下に冷却する。NaBH４(４５８mg,１２.１mmol)を加え、溶液を１０℃にて５０分間攪拌する。TLC(５０％EtOAc／ヘキサン)により、より遅く移動する点への完全な転換が示される。反応物を注意深く氷、次いで、冷飽和NH４Cl溶液(１０mL)で処理して反応を停止する。混合物をDCM(３００mL)に加える。有機層を飽和NH４C１溶液(６０mL)で１回および食塩水(６０mL)で２回洗浄する。次いで、有機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、減圧濃縮して、化合物ii３.５g(８７％)を得る。
中間体実施例５７−化合物lxi
H２バルーンを備えた２５０mLの丸底フラスコ中で、化合物ii(３.５g,１０.５mmol)のエタノール溶液(５０mL)を約室温にて、標準的水素添加条件[２０％Pd(OH)２／C(１.４７g,２.１mmol)]に５時間付す。触媒をセライトで濾去し、DCMで洗浄する。次いで、溶媒を減圧除去して、化合物lxi２g(９６％)を得る。
H２バルーンを備えた２５０mLの丸底フラスコ中で、化合物ii(３.５g,１０.５mmol)のエタノール溶液(５０mL)を約室温にて、標準的水素添加条件[２０％Pd(OH)２／C(１.４７g,２.１mmol)]に５時間付す。触媒をセライトで濾去し、DCMで洗浄する。次いで、溶媒を減圧除去して、化合物lxi２g(９６％)を得る。
中間体実施例５８−化合物lxii
不活性雰囲気下、無水DMF(６mL)中の化合物lxi(２００mg,１mmol)、化合物lxiii,(２３３mg,１.１mmol)、
HOAt(１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール(１５６mg,１.１５mmol)の溶液を２０分間攪拌する。次いで、温度を０℃以下にし、次いで、DIC(０.１８mL,１.１５mmol)を添加する。反応物を約室温にて一夜攪拌する。溶液をEtOAcで希釈し、次いで、１N HClで２回、飽和水性NaHCO３で２回および食塩水で洗浄する。有機層を分離し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去する。残渣をクロマトグラフィー(シリカゲル：７０％EtOAc／DCM)にて精製して、４５％収率にて化合物lxiiを得る。
不活性雰囲気下、無水DMF(６mL)中の化合物lxi(２００mg,１mmol)、化合物lxiii,(２３３mg,１.１mmol)、
中間体実施例５９−化合物lxiv
ジオキサン(６mL)および０.５M NaOH(６mL)中の化合物lxii(７７７mg,２mmol)の溶液を約室温にて５時間攪拌する。TLC(１００％EtOAc)による検査より、もとのスポットにおける完全な転換が示される。反応物を氷浴で冷却し、次いで、１N HCl(４mL)を加える。次いで、固体NaClを加え、全混合物をEtOAc(２X１５０mL)で２回抽出する。次いで、有機抽出物を合わせ、乾燥(硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去して、化合物lxivを９２％収率で得る。
ジオキサン(６mL)および０.５M NaOH(６mL)中の化合物lxii(７７７mg,２mmol)の溶液を約室温にて５時間攪拌する。TLC(１００％EtOAc)による検査より、もとのスポットにおける完全な転換が示される。反応物を氷浴で冷却し、次いで、１N HCl(４mL)を加える。次いで、固体NaClを加え、全混合物をEtOAc(２X１５０mL)で２回抽出する。次いで、有機抽出物を合わせ、乾燥(硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去して、化合物lxivを９２％収率で得る。
中間体実施例６０−化合物lxv
不活性雰囲気下、無水DMF(６mL)中の化合物x(２０３mg,０.５８mmol)、化合物lxiv(２７６mg,０.７７５mmol)、HOAt(１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール)(１２６mg,０.９３mmol)の溶液を２０分間攪拌する。次いで、温度を０℃まで下げ、次いで、DIC(０.１４mL,０.９３mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。溶液をEtOAcで希釈し、次いで、１N HClで２回、飽和水性NaHCO３で２回および食塩水で洗浄する。有機層を分離し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去する。残渣をクロマトグラフィー(シリカゲル：５０％EtOAc／DCMから８０：１９：１EtOAC／DCM／MeOH)にて精製して、化合物lxvを６２％収率で得る。
不活性雰囲気下、無水DMF(６mL)中の化合物x(２０３mg,０.５８mmol)、化合物lxiv(２７６mg,０.７７５mmol)、HOAt(１−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール)(１２６mg,０.９３mmol)の溶液を２０分間攪拌する。次いで、温度を０℃まで下げ、次いで、DIC(０.１４mL,０.９３mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。溶液をEtOAcで希釈し、次いで、１N HClで２回、飽和水性NaHCO３で２回および食塩水で洗浄する。有機層を分離し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去する。残渣をクロマトグラフィー(シリカゲル：５０％EtOAc／DCMから８０：１９：１EtOAC／DCM／MeOH)にて精製して、化合物lxvを６２％収率で得る。
中間体実施例６１−化合物lxvi
不活性雰囲気下、無水DCM(１５mL)中の化合物lxv(２８７mg,０.４２mmol)の溶液にDMP試薬(６０５mg,１.４３mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌する。(注記−DMP試薬の量および反応時間の倍加は、両方のアルコール基が完全に酸化されて対応するケト基になることを確実にするべきである)。TLC(シリカゲル：２％MeOH／EtOAc)による検査により、より速い生成物への完全な転換が示される。反応物をDCM(１５０mL)で希釈し、次いで、１０％水性亜硫酸ナトリウム溶液(２X５０mL)で２回、飽和水性NaHCO３で２回および食塩水で洗浄する。有機層を分離し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去する。残渣をクロマトグラフィー(シリカゲル：５０％EtOAC／DCMから８０：１９：１EtOAC／DCM／MeOH)にて精製して、化合物lxviを７７％収率で得る。
不活性雰囲気下、無水DCM(１５mL)中の化合物lxv(２８７mg,０.４２mmol)の溶液にDMP試薬(６０５mg,１.４３mmol)を加える。反応物を約室温にて２時間攪拌する。(注記−DMP試薬の量および反応時間の倍加は、両方のアルコール基が完全に酸化されて対応するケト基になることを確実にするべきである)。TLC(シリカゲル：２％MeOH／EtOAc)による検査により、より速い生成物への完全な転換が示される。反応物をDCM(１５０mL)で希釈し、次いで、１０％水性亜硫酸ナトリウム溶液(２X５０mL)で２回、飽和水性NaHCO３で２回および食塩水で洗浄する。有機層を分離し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、溶媒を減圧除去する。残渣をクロマトグラフィー(シリカゲル：５０％EtOAC／DCMから８０：１９：１EtOAC／DCM／MeOH)にて精製して、化合物lxviを７７％収率で得る。
中間体実施例６２−化合物lxvii
L−３ フェニル乳酸(２g,１２mmol)のDCM溶液(６０mL)にPyBOP(７.５g,１４.４mmol)を加える。この溶液に、L−バリンメチルエステルHCl(２.４g,１４.４mmol)を含むDCM溶液(２０mL)およびDIPEA(２.６mL,１４.４mmol)を加える。得られる反応混合物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応物をEtOAc(３０mL)で希釈し、NaHCO３(３０mL)および食塩水(１５mL)で洗浄する。有機層を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。５０％EtOAc／ヘキサン：シリカゲルにて精製を行い、化合物lxvii２.９７g(８９％)を得る。
L−３ フェニル乳酸(２g,１２mmol)のDCM溶液(６０mL)にPyBOP(７.５g,１４.４mmol)を加える。この溶液に、L−バリンメチルエステルHCl(２.４g,１４.４mmol)を含むDCM溶液(２０mL)およびDIPEA(２.６mL,１４.４mmol)を加える。得られる反応混合物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応物をEtOAc(３０mL)で希釈し、NaHCO３(３０mL)および食塩水(１５mL)で洗浄する。有機層を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。５０％EtOAc／ヘキサン：シリカゲルにて精製を行い、化合物lxvii２.９７g(８９％)を得る。
中間体実施例６３−化合物lxviii
化合物lxvii(２.９７g,１０.６mmol)をDCM(５０mL)に加え、氷浴で冷却する。この溶液にTBSCl(２.１g,１３.８mmol)、次いで、イミダゾール(０.９４g,１３.８mmol)を加える。得られる溶液を一夜攪拌する。次いで、反応物をEtOAc(５０mL)で希釈し、NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。２０％EtOAc／ヘキサン：シリカゲルにて精製を行い、化合物lxviii３.７９g(９０％)を得る。
化合物lxvii(２.９７g,１０.６mmol)をDCM(５０mL)に加え、氷浴で冷却する。この溶液にTBSCl(２.１g,１３.８mmol)、次いで、イミダゾール(０.９４g,１３.８mmol)を加える。得られる溶液を一夜攪拌する。次いで、反応物をEtOAc(５０mL)で希釈し、NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。２０％EtOAc／ヘキサン：シリカゲルにて精製を行い、化合物lxviii３.７９g(９０％)を得る。
中間体実施例６４−化合物lxix
化合物lxviii(３.７８g,９.６mmol)のメタノール(５０mL)溶液に１N 水性NaOH(１４.４mL,１４.４mmol)を加える。得られる溶液を一夜攪拌する。溶媒を部分的に減圧除去する。次いで、１N HCl水溶液を用いて反応混合物のｐＨを３まで下げる。溶液をEtOAcおよび食塩水で希釈する。所望の生成物をEtOAc(３x５０ml)で抽出する。有機層を合わせ、乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮して、化合物lxix３.５g(９６％)を得る。
化合物lxviii(３.７８g,９.６mmol)のメタノール(５０mL)溶液に１N 水性NaOH(１４.４mL,１４.４mmol)を加える。得られる溶液を一夜攪拌する。溶媒を部分的に減圧除去する。次いで、１N HCl水溶液を用いて反応混合物のｐＨを３まで下げる。溶液をEtOAcおよび食塩水で希釈する。所望の生成物をEtOAc(３x５０ml)で抽出する。有機層を合わせ、乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮して、化合物lxix３.５g(９６％)を得る。
中間体実施例６５−化合物lxx
化合物lxix(１.１g,２.９mmol)を含むDCM(１５mL)溶液にHOAt(０.４４g,３.２mmol)、次いで、DCCの１M DCM溶液(３.２mL,３.２mmol)を加える。約室温にて２０分間攪拌した後、化合物xxxix(９７０mg,３.２mmol)のDCM(１５mL)溶液を加える。この反応物を窒素下、一夜攪拌する。次いで、反応物をEtOAc(３０mL)で希釈し、シリカゲルパッドで濾過し、０.１N HCl、NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、減圧濃縮する。５０％EtOAc／ヘキサン：シリカゲルにて精製を行い、化合物lxx１.５g(７７％)を得る。
化合物lxix(１.１g,２.９mmol)を含むDCM(１５mL)溶液にHOAt(０.４４g,３.２mmol)、次いで、DCCの１M DCM溶液(３.２mL,３.２mmol)を加える。約室温にて２０分間攪拌した後、化合物xxxix(９７０mg,３.２mmol)のDCM(１５mL)溶液を加える。この反応物を窒素下、一夜攪拌する。次いで、反応物をEtOAc(３０mL)で希釈し、シリカゲルパッドで濾過し、０.１N HCl、NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、減圧濃縮する。５０％EtOAc／ヘキサン：シリカゲルにて精製を行い、化合物lxx１.５g(７７％)を得る。
中間体実施例６６−化合物lxxi
化合物xx(１.５g,２.４mmol)のメタノール溶液(３０mL)に１N 水性NaOH(３.６mL,３.６mmol)を加える。得られる溶液を一夜攪拌する。この時点で、溶媒を部分的に除去し、１N水性HClを用いて反応混合物のｐＨを３に調節する。次いで、反応物をEtOAc(５０mL)および食塩水(２０mL)で希釈する。水性層をEtOAc(３x５０mL)で抽出する。有機層を合わせ、乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮して、化合物lxxi１.３g(９２％)を得る。
化合物xx(１.５g,２.４mmol)のメタノール溶液(３０mL)に１N 水性NaOH(３.６mL,３.６mmol)を加える。得られる溶液を一夜攪拌する。この時点で、溶媒を部分的に除去し、１N水性HClを用いて反応混合物のｐＨを３に調節する。次いで、反応物をEtOAc(５０mL)および食塩水(２０mL)で希釈する。水性層をEtOAc(３x５０mL)で抽出する。有機層を合わせ、乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮して、化合物lxxi１.３g(９２％)を得る。
中間体実施例６７−化合物lxxii
化合物lxxi(１８０mg,０.２８mmol)を含むDCM(２mL)の溶液にPyBOP(１７５mg,０.３４mmol)およびDIPEA(０.０６mL,０.３４mmol)、次いで、化合物x(１５０mg,０.４１mmol)のDCM溶液(３mL)を加える。得られる溶液を窒素下、一夜攪拌する。次いで、反応物をEtOAc(３０mL)で希釈し、NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。１００％EtOAc：シリカゲルにて精製を行い、化合物lxxii２７０mg(９８％)を得る。
化合物lxxi(１８０mg,０.２８mmol)を含むDCM(２mL)の溶液にPyBOP(１７５mg,０.３４mmol)およびDIPEA(０.０６mL,０.３４mmol)、次いで、化合物x(１５０mg,０.４１mmol)のDCM溶液(３mL)を加える。得られる溶液を窒素下、一夜攪拌する。次いで、反応物をEtOAc(３０mL)で希釈し、NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。１００％EtOAc：シリカゲルにて精製を行い、化合物lxxii２７０mg(９８％)を得る。
中間体実施例６８−化合物lxxiii
化合物lxxii(２７０mg,０.２７mmol)のDCM(３mL)溶液にDMP試薬(１４０mg,０.３３mmol)を加える。約室温にて１.５時間攪拌した後、１０％Na２SO３(１０mL)処理して反応を停止する。反応物をEtOAc(３０mL)で希釈し、１０分間攪拌する。有機層をNaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。６０％EtOAc／ヘキサンにて精製を行い、化合物lxxiii１５０mg(５６％)を得る。
化合物lxxii(２７０mg,０.２７mmol)のDCM(３mL)溶液にDMP試薬(１４０mg,０.３３mmol)を加える。約室温にて１.５時間攪拌した後、１０％Na２SO３(１０mL)処理して反応を停止する。反応物をEtOAc(３０mL)で希釈し、１０分間攪拌する。有機層をNaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。６０％EtOAc／ヘキサンにて精製を行い、化合物lxxiii１５０mg(５６％)を得る。
中間体実施例６９−化合物lxi
化合物ii(３.５g,１０.５mmol)のエタノール溶液(５０mL)に窒素気流下、Pd(OH)２／C(１.４７g,２０％Pd含量,２.１mmol)を加える。反応物を１気圧下で水素添加に付す。完了後、触媒をセライトパッドで濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。濾液を減圧濃縮して、化合物lxi２g(９６％)を得る。
化合物ii(３.５g,１０.５mmol)のエタノール溶液(５０mL)に窒素気流下、Pd(OH)２／C(１.４７g,２０％Pd含量,２.１mmol)を加える。反応物を１気圧下で水素添加に付す。完了後、触媒をセライトパッドで濾過し、ジクロロメタンで洗浄する。濾液を減圧濃縮して、化合物lxi２g(９６％)を得る。
中間体実施例７０−化合物lxxiv
化合物vii(９.１g,２８.２mmol)のDMF溶液(６０mL)にHOAt(４g,２９.４mmol)および１,３−ジイソプロピルカルボジイミド(３.７g,２９.４mmol)を加える。約室温にて３０分間攪拌した後、上記溶液に化合物lxi(５.１g,２５.６mmol)のDMF溶液(１０mL)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、白色固体を濾去する。濾液を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィーにて精製して、化合物lxxiv９.５g(６７％)を得る。
化合物vii(９.１g,２８.２mmol)のDMF溶液(６０mL)にHOAt(４g,２９.４mmol)および１,３−ジイソプロピルカルボジイミド(３.７g,２９.４mmol)を加える。約室温にて３０分間攪拌した後、上記溶液に化合物lxi(５.１g,２５.６mmol)のDMF溶液(１０mL)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、白色固体を濾去する。濾液を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィーにて精製して、化合物lxxiv９.５g(６７％)を得る。
中間体実施例７１−化合物lxxv
無水THF(２５mL)中の化合物lxxiv(１.５g,３mmol)の溶液に約室温にてEtiPr２N(０.７８mL,４.５mmol)を加える。混合物を０℃に冷却し、MOMCl(１.５mL,１９.７mmol)を滴下する。反応物を室温まで温め、一夜攪拌する。次いで、溶液をエーテルで希釈し、水(３回)で洗浄する。水性層をさらにエーテルで抽出し、すべての有機層を乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(EtOAc／ヘキサン５／２)によって、化合物lxxvの所望の異性体を４０％収率で十分に分離されたジアステレオマーとして単離する。
無水THF(２５mL)中の化合物lxxiv(１.５g,３mmol)の溶液に約室温にてEtiPr２N(０.７８mL,４.５mmol)を加える。混合物を０℃に冷却し、MOMCl(１.５mL,１９.７mmol)を滴下する。反応物を室温まで温め、一夜攪拌する。次いで、溶液をエーテルで希釈し、水(３回)で洗浄する。水性層をさらにエーテルで抽出し、すべての有機層を乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(EtOAc／ヘキサン５／２)によって、化合物lxxvの所望の異性体を４０％収率で十分に分離されたジアステレオマーとして単離する。
中間体実施例７２−化合物lxxvi
EtOH(５mL)中の化合物lxxv(５０２mg,０.９mmol)の溶液に２N 水性NaOH(０.９mL,１.８mmol)を０℃にて滴下する。反応物を室温まで温め、一夜攪拌する。鹸化が完了した後、Dowex ５０W８X−２００酸性樹脂でｐＨ３まで溶液を酸性化する。固体を濾去し、得られる濾液を減圧濃縮して、油状残渣を得、凍結乾燥して、化合物lxxvi３７０mg(８０％)を得る。
EtOH(５mL)中の化合物lxxv(５０２mg,０.９mmol)の溶液に２N 水性NaOH(０.９mL,１.８mmol)を０℃にて滴下する。反応物を室温まで温め、一夜攪拌する。鹸化が完了した後、Dowex ５０W８X−２００酸性樹脂でｐＨ３まで溶液を酸性化する。固体を濾去し、得られる濾液を減圧濃縮して、油状残渣を得、凍結乾燥して、化合物lxxvi３７０mg(８０％)を得る。
中間体実施例７３−化合物lxxvii
化合物lxxvi(１１０mg,０.２１mmol)のジクロロメタン溶液(４mL)をPyBOP(２００mg,０.３８mmol)で処理する。約室温にて３０分間攪拌した後、反応混合物に化合物xiii(６０mg,０.３２mmol)のTHF溶液(３.２mL)、次いで、EtiPr２Nを加える。約室温にて一夜攪拌した後、水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物lxxvii１４３mg(１００％)を得る。
化合物lxxvi(１１０mg,０.２１mmol)のジクロロメタン溶液(４mL)をPyBOP(２００mg,０.３８mmol)で処理する。約室温にて３０分間攪拌した後、反応混合物に化合物xiii(６０mg,０.３２mmol)のTHF溶液(３.２mL)、次いで、EtiPr２Nを加える。約室温にて一夜攪拌した後、水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物lxxvii１４３mg(１００％)を得る。
中間体実施例７４−化合物lxxviii
Ｈ−Chg−OH ２(５g,１９.４mmol)のTHF溶液(５０mL)にHOBt(２.６３g,１９.４mmol)およびEDCI(３.７２g,１９.４mmol)を加える。約室温にて２０分間攪拌した後、上記溶液にtert−L−ロイシンメチルエステル−塩酸塩(１９.４mmol)およびDIPEA(６.７５mL,３８.８mmol)を含むTHF(１９mL)およびDMF(１０mL)溶液を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。標準的水性処理およびシリカゲルクロマトグラフィー(１５−２０％EtOAc／ヘキサン)を行って、化合物lxxviii２.２７g(３０％)を得る。
Ｈ−Chg−OH ２(５g,１９.４mmol)のTHF溶液(５０mL)にHOBt(２.６３g,１９.４mmol)およびEDCI(３.７２g,１９.４mmol)を加える。約室温にて２０分間攪拌した後、上記溶液にtert−L−ロイシンメチルエステル−塩酸塩(１９.４mmol)およびDIPEA(６.７５mL,３８.８mmol)を含むTHF(１９mL)およびDMF(１０mL)溶液を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。標準的水性処理およびシリカゲルクロマトグラフィー(１５−２０％EtOAc／ヘキサン)を行って、化合物lxxviii２.２７g(３０％)を得る。
中間体実施例７５−化合物lxxix
化合物lxxviii(２.２７g,５.９１mmol)のTHF溶液(１２mL)にジオキサン中の４N HCl溶液(７.３８mL,２９.５mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、溶媒を減圧除去し、化合物lxxixを得、次反応に直接用いる。
化合物lxxviii(２.２７g,５.９１mmol)のTHF溶液(１２mL)にジオキサン中の４N HCl溶液(７.３８mL,２９.５mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、溶媒を減圧除去し、化合物lxxixを得、次反応に直接用いる。
中間体実施例７６−化合物lxxx
化合物lxxix(５.９mmol)のTHF溶液に、２−ピラジンカルボン酸(８７８mg,７.０８mmol)、HOBt(９５７mg,７.０８mmol)およびEDCI(１.３６g,７.０８mmol)を含むTHF(２０mL)溶液を加える。次いで、得られる混合物にDIPEA(２.０５mL,１１.８mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、水で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、減圧濃縮し、残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(４０−５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物lxxx１g(３６％)を得る。
化合物lxxix(５.９mmol)のTHF溶液に、２−ピラジンカルボン酸(８７８mg,７.０８mmol)、HOBt(９５７mg,７.０８mmol)およびEDCI(１.３６g,７.０８mmol)を含むTHF(２０mL)溶液を加える。次いで、得られる混合物にDIPEA(２.０５mL,１１.８mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、水で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、減圧濃縮し、残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(４０−５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物lxxx１g(３６％)を得る。
中間体実施例７７−化合物lxxxi
化合物Lxxx(１g,２.５６mmol)のメタノール溶液(２０mL)に２N NaOH(３.２mL,６.４mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、５N HClを用いて反応物をｐＨ３まで酸性化する。反応物をEtOAc(７５mL)で希釈し、水および食塩水で洗浄する。このように得られた有機層を乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、凍結乾燥のためにCH３CN／H２O（１：１）に溶解する。全部で〜１g(１００％)の化合物lxxxiを得る。
化合物Lxxx(１g,２.５６mmol)のメタノール溶液(２０mL)に２N NaOH(３.２mL,６.４mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、５N HClを用いて反応物をｐＨ３まで酸性化する。反応物をEtOAc(７５mL)で希釈し、水および食塩水で洗浄する。このように得られた有機層を乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、凍結乾燥のためにCH３CN／H２O（１：１）に溶解する。全部で〜１g(１００％)の化合物lxxxiを得る。
中間体実施例７８−化合物lxxxii
化合物lxxxi(２.５６mmol)のジクロロメタン溶液(１０mL)をHOAt(３４８mg,２.５６mmol)およびDCC(２.５６mL,１M,２.５６mmol)で処理する。３０分間攪拌した後、反応混合物を化合物v(２.５６mmol)のTHF溶液(５mL)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、白色固体(尿素)を濾去する。濾液を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィーにて精製して、化合物lxxxii１.４g(１００％)を得る。
化合物lxxxi(２.５６mmol)のジクロロメタン溶液(１０mL)をHOAt(３４８mg,２.５６mmol)およびDCC(２.５６mL,１M,２.５６mmol)で処理する。３０分間攪拌した後、反応混合物を化合物v(２.５６mmol)のTHF溶液(５mL)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、白色固体(尿素)を濾去する。濾液を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィーにて精製して、化合物lxxxii１.４g(１００％)を得る。
中間体実施例７９−化合物lxxxiii
化合物lxxxii(１.４g,２.５８mmol)のエタノール溶液(１５mL)を２N NaOH(２.５８mL,５.１７mmol)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、酸性樹脂で反応混合物をｐＨ３まで酸性化する。固体を濾去する。得られる濾液を減圧濃縮して残渣を得、凍結乾燥して、化合物lxxxiii１.３２g(〜１００％)を得る。
化合物lxxxii(１.４g,２.５８mmol)のエタノール溶液(１５mL)を２N NaOH(２.５８mL,５.１７mmol)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、酸性樹脂で反応混合物をｐＨ３まで酸性化する。固体を濾去する。得られる濾液を減圧濃縮して残渣を得、凍結乾燥して、化合物lxxxiii１.３２g(〜１００％)を得る。
中間体実施例８０−化合物lxxxiv
化合物lxxxiii(３６０mg,０.７mmol)のジクロロメタン溶液(１５mL)をPyBOP(５８２mg,１.１２mmol)で処理する。約室温にて２０分間攪拌した後、反応混合物を化合物xiii(１９５.６mg,１.０５mmol)のTHF溶液(１０mL)、次いで、DIPEA(０.２５mL,１.４０mmol)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(３％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物lxxxiv４２０mg(８８％)を得る。
化合物lxxxiii(３６０mg,０.７mmol)のジクロロメタン溶液(１５mL)をPyBOP(５８２mg,１.１２mmol)で処理する。約室温にて２０分間攪拌した後、反応混合物を化合物xiii(１９５.６mg,１.０５mmol)のTHF溶液(１０mL)、次いで、DIPEA(０.２５mL,１.４０mmol)で処理する。約室温にて一夜攪拌した後、水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(３％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物lxxxiv４２０mg(８８％)を得る。
中間体実施例８１−化合物ii"'
無水ジクロロメタンおよびエーテルの混合物(２０mL：２０mL)を窒素（ガス）下、−７８℃に冷却する。溶液にTiCl４(１Ｍジクロロメタン溶液,１０mL,１０mmol)を加え、次いで、−７８℃にてさらに３０分間攪拌しながら連続的にMeLi(１.４Mエーテル溶液,７.１mL,１０mmol)を加える。１０mLのジクロロメタン中の化合物i(２g,６mmol)溶液を同じ温度で１５分間にわたって混合物に滴下する。溶液をゆっくりと１０分間−４０℃まで温め、次いで、０℃にて２時間攪拌する。混合物を水／エーテル混合物(１：１)に注ぎ入れて反応を停止し、次いで、層を分離する。水性層をエーテルでさらに２回抽出する。すべての有機層を水、食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(EtOAc／ヘキサン＝２／１)によって所望の化合物ii"'を８３％収率で単離する。
無水ジクロロメタンおよびエーテルの混合物(２０mL：２０mL)を窒素（ガス）下、−７８℃に冷却する。溶液にTiCl４(１Ｍジクロロメタン溶液,１０mL,１０mmol)を加え、次いで、−７８℃にてさらに３０分間攪拌しながら連続的にMeLi(１.４Mエーテル溶液,７.１mL,１０mmol)を加える。１０mLのジクロロメタン中の化合物i(２g,６mmol)溶液を同じ温度で１５分間にわたって混合物に滴下する。溶液をゆっくりと１０分間−４０℃まで温め、次いで、０℃にて２時間攪拌する。混合物を水／エーテル混合物(１：１)に注ぎ入れて反応を停止し、次いで、層を分離する。水性層をエーテルでさらに２回抽出する。すべての有機層を水、食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(EtOAc／ヘキサン＝２／１)によって所望の化合物ii"'を８３％収率で単離する。
中間体実施例８２−化合物lxi'
化合物ii"'(１.７g,５mmol)に１０wt％Pd／C(０.５３g,０.５mmol)を加え、次いで、MeOH(１７mL)を加える。反応混合物に水素ガスをフラッシュし、反応のために水素ガスを１気圧で一夜維持する。次いで、反応混合物を濾過し、濃縮して、化合物lxi'９２９mg(８７％)を無色油状物で得る。
化合物ii"'(１.７g,５mmol)に１０wt％Pd／C(０.５３g,０.５mmol)を加え、次いで、MeOH(１７mL)を加える。反応混合物に水素ガスをフラッシュし、反応のために水素ガスを１気圧で一夜維持する。次いで、反応混合物を濾過し、濃縮して、化合物lxi'９２９mg(８７％)を無色油状物で得る。
中間体実施例８３−化合物lxxxv
化合物xxii(１g,３mmol)のTHF溶液(１６mL)に約室温にてHOAt(０.４１g,３mmol)、次いで、ジクロロメタンの１Ｍ DCC溶液(３mL,３mmol)を加える。約室温にて３０分間攪拌した後、上記HOAt−活性化酸に化合物lxi'のジクロロメタン溶液(６mL)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応物をセライトで濾過する。濾液をEtOAc(１２０mL)で希釈し、水、次いで、食塩水で洗浄する。有機層を乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得、シリカゲルクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物lxxxv１g(６５％)を得る。
化合物xxii(１g,３mmol)のTHF溶液(１６mL)に約室温にてHOAt(０.４１g,３mmol)、次いで、ジクロロメタンの１Ｍ DCC溶液(３mL,３mmol)を加える。約室温にて３０分間攪拌した後、上記HOAt−活性化酸に化合物lxi'のジクロロメタン溶液(６mL)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応物をセライトで濾過する。濾液をEtOAc(１２０mL)で希釈し、水、次いで、食塩水で洗浄する。有機層を乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得、シリカゲルクロマトグラフィー(１００％EtOAc)にて精製して、化合物lxxxv１g(６５％)を得る。
中間体実施例８４−化合物lxxxvi
化合物lxxxv(９２０mg。１.７mmol)のエタノール溶液(８mL)に２N NaOH水溶液(１.７mL,３.４mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、Dowex酸性樹脂でｐＨ３まで酸性化する。固体を濾去し、濾液を濃縮して、無色油状物を得、CH３CN／H２O（１：１）に再溶解し、凍結乾燥して、化合物lxxxvi８００mg(９３％)を得る。HPLCにより、単一生成物ピークが示される。
化合物lxxxv(９２０mg。１.７mmol)のエタノール溶液(８mL)に２N NaOH水溶液(１.７mL,３.４mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、Dowex酸性樹脂でｐＨ３まで酸性化する。固体を濾去し、濾液を濃縮して、無色油状物を得、CH３CN／H２O（１：１）に再溶解し、凍結乾燥して、化合物lxxxvi８００mg(９３％)を得る。HPLCにより、単一生成物ピークが示される。
中間体実施例８５−化合物lxxxvii
化合物lxxxvi(１５０mg,０.３mmol)のジクロロメタン溶液(４mL)にPyBOP(２５０mg,０.４７mmol)を加える。溶液を約室温にて３０分間攪拌する。次いで、この溶液に、化合物xiii(８４mg,０.４５mmol)のTHF(４.５mL)溶液、次いで、EtiPr２N(０.１mL,０.６mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、水(２５mL)で３０分間処理して反応を停止する。次いで、混合物をEtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物lxxxvii２００mg(１００％)を得る。
化合物lxxxvi(１５０mg,０.３mmol)のジクロロメタン溶液(４mL)にPyBOP(２５０mg,０.４７mmol)を加える。溶液を約室温にて３０分間攪拌する。次いで、この溶液に、化合物xiii(８４mg,０.４５mmol)のTHF(４.５mL)溶液、次いで、EtiPr２N(０.１mL,０.６mmol)を加える。反応物を約室温にて一夜攪拌し、次いで、水(２５mL)で３０分間処理して反応を停止する。次いで、混合物をEtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物lxxxvii２００mg(１００％)を得る。
中間体実施例８６−化合物lxxxix
化合物lxxxviii、N−Cbz−L−バリン(２.５g,９.９mmol)
をTHF(３０mL)に加える。EDCI(２.２９g,１１.９mmol)およびHOBT(１.６２g,１１.９mmol)を加え、混合物を５分間攪拌する。L−tert−ロイシンメチルエステル塩酸塩(２.１７g,１１.９mmol)をTHF(２３.９mL)、次いで、DIPEA(２.１mL)に加える。反応混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、１N HCl、飽和重炭酸ナトリウムおよび食塩水で洗浄する。有機相を乾燥（硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。濃縮した残渣を２５％酢酸エチル／ヘキサンで精製して、化合物lxxxix１.１g(２９％)を得る。
化合物lxxxviii、N−Cbz−L−バリン(２.５g,９.９mmol)
中間体実施例８７−化合物lxxxx
化合物Lxxxixを標準的条件下、メチルアルコール(０.３M)および１N NaOH(１.５eq)を用いて加水分解して、化合物lxxxx１.０３g(９５％)を得る。
化合物Lxxxixを標準的条件下、メチルアルコール(０.３M)および１N NaOH(１.５eq)を用いて加水分解して、化合物lxxxx１.０３g(９５％)を得る。
中間体実施例８８−化合物lxxxxi
化合物lxxxx(３８５mg,１.０６mmol)をジクロロメタン(３mL)に加える。DCC(１.４mmol)、次いで、HOAt(１９０mg,１.４mmol)を加える。次いで、化合物v(２６０mg,１.４mmol)をジクロロメタン(３mL)に加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応物を酢酸エチルで希釈し、シリカゲルで濾過し、濃縮する。残渣を５０％酢酸エチル／ヘキサンで精製して、化合物lxxxxi４４０mg(８０％)を得る。
化合物lxxxx(３８５mg,１.０６mmol)をジクロロメタン(３mL)に加える。DCC(１.４mmol)、次いで、HOAt(１９０mg,１.４mmol)を加える。次いで、化合物v(２６０mg,１.４mmol)をジクロロメタン(３mL)に加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応物を酢酸エチルで希釈し、シリカゲルで濾過し、濃縮する。残渣を５０％酢酸エチル／ヘキサンで精製して、化合物lxxxxi４４０mg(８０％)を得る。
中間体実施例８９−化合物lxxxxii
標準的条件下、エチルアルコール(０.３M)および１N NaOH(１.５eq)を用いて化合物lxxxxiを加水分解して化合物lxxxxii３９０mgを得る。
標準的条件下、エチルアルコール(０.３M)および１N NaOH(１.５eq)を用いて化合物lxxxxiを加水分解して化合物lxxxxii３９０mgを得る。
中間体実施例９０−化合物lxxxxiii
化合物lxxxxii(３５０mg,０.７mmol)をジクロロメタン(３mL)に加える。PyBOP(４８０mg,０.９１mmol)、次いで、化合物xiii(１７０mg,０.９１mmol)を加える。DIPEA(０.１６mL,０.９１mmol)を加え、反応混合物を一夜攪拌する。反応混合物を濃縮し、１００％酢酸エチルで精製して、化合物lxxxxiii４２０mg(９０％)を得る。
化合物lxxxxii(３５０mg,０.７mmol)をジクロロメタン(３mL)に加える。PyBOP(４８０mg,０.９１mmol)、次いで、化合物xiii(１７０mg,０.９１mmol)を加える。DIPEA(０.１６mL,０.９１mmol)を加え、反応混合物を一夜攪拌する。反応混合物を濃縮し、１００％酢酸エチルで精製して、化合物lxxxxiii４２０mg(９０％)を得る。
中間体実施例９１−化合物lxxxxiv
水素下、メチルアルコール中の１０％Pd／C(１％mol)を用いて、化合物lxxxxiiiを水素添加し、化合物lxxxxiv３３５mg(１００％)を得る。
水素下、メチルアルコール中の１０％Pd／C(１％mol)を用いて、化合物lxxxxiiiを水素添加し、化合物lxxxxiv３３５mg(１００％)を得る。
中間体実施例９２−化合物lxxxxv
１Ｈ−テトラゾール−５−酢酸エチル(５g,３２mmol)をクロロホルム(８０mL)に加える。トリクロロ酢酸(１２.０３g,７３.６５mmol)、次いで、アルファメチルスチレン(３.７８g,３２mmol)を加える。反応混合物を一夜攪拌する。翌日、溶液を酢酸エチルで希釈し、１０％KOHおよび食塩水で洗浄する。有機相を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、濃縮して、対応するN−保護テトラゾール−５−酢酸エチル８g(９６％)を得る。この物質をエチルアルコール(０.３M)および１N NaOH(３eq)を用いて標準的加水分解条件に付して、化合物lxxxxv７g(９９％)を得る。
１Ｈ−テトラゾール−５−酢酸エチル(５g,３２mmol)をクロロホルム(８０mL)に加える。トリクロロ酢酸(１２.０３g,７３.６５mmol)、次いで、アルファメチルスチレン(３.７８g,３２mmol)を加える。反応混合物を一夜攪拌する。翌日、溶液を酢酸エチルで希釈し、１０％KOHおよび食塩水で洗浄する。有機相を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、濃縮して、対応するN−保護テトラゾール−５−酢酸エチル８g(９６％)を得る。この物質をエチルアルコール(０.３M)および１N NaOH(３eq)を用いて標準的加水分解条件に付して、化合物lxxxxv７g(９９％)を得る。
中間体実施例９３−化合物lxxxxvi
化合物lxxxxv(３.６２g,１４.７mmol)をジクロロメタン(５０mL)に加える。EDCI(４.３２g,２２.１mmol)およびDIPEA(５.１mL,２９.４mmol)を加え、５分間攪拌する。N−ヒドロキシスクシンイミド(３.３８g,２９.４mmol)を加え、３時間攪拌する。反応物をジクロロメタンで希釈し、水で３回洗浄する。有機相を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、濃縮して、化合物lxxxxvi３.６６g(７３％)を得る。
化合物lxxxxv(３.６２g,１４.７mmol)をジクロロメタン(５０mL)に加える。EDCI(４.３２g,２２.１mmol)およびDIPEA(５.１mL,２９.４mmol)を加え、５分間攪拌する。N−ヒドロキシスクシンイミド(３.３８g,２９.４mmol)を加え、３時間攪拌する。反応物をジクロロメタンで希釈し、水で３回洗浄する。有機相を乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、濃縮して、化合物lxxxxvi３.６６g(７３％)を得る。
中間体実施例９４−化合物lxxxxvii
化合物lxxxxiv(３３５mg,０.６２mmol)および化合物lxxxxvi(３４３mg,１mmol)をジクロロメタン(６mL)に加える。DIPEA(０.１７mL,１mmol)を加え、反応混合物を一夜攪拌する。反応物を酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、食塩水で洗浄し、濃縮する。残渣を５％エチルアルコール／酢酸エチルで精製して、化合物lxxxxvii８０mg(１６％)を得る。
化合物lxxxxiv(３３５mg,０.６２mmol)および化合物lxxxxvi(３４３mg,１mmol)をジクロロメタン(６mL)に加える。DIPEA(０.１７mL,１mmol)を加え、反応混合物を一夜攪拌する。反応物を酢酸エチルで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム、食塩水で洗浄し、濃縮する。残渣を５％エチルアルコール／酢酸エチルで精製して、化合物lxxxxvii８０mg(１６％)を得る。
中間体実施例９５−化合物lxxxxviii
化合物lxxxxvii(８０mg,０.１１mmol)をジクロロメタン(３mL)に加える。DMP試薬(５５mg,０.１３mmol)を加え、１時間攪拌する。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、亜硫酸ナトリウム１０％溶液で処理して反応を停止する。有機相を飽和重炭酸ナトリウムおよび食塩水で洗浄する。有機相を濃縮し、得られる残渣を１００％酢酸エチルで精製して、化合物lxxxxviii４０mg(４８％)を得る。
化合物lxxxxvii(８０mg,０.１１mmol)をジクロロメタン(３mL)に加える。DMP試薬(５５mg,０.１３mmol)を加え、１時間攪拌する。反応混合物を酢酸エチルで希釈し、亜硫酸ナトリウム１０％溶液で処理して反応を停止する。有機相を飽和重炭酸ナトリウムおよび食塩水で洗浄する。有機相を濃縮し、得られる残渣を１００％酢酸エチルで精製して、化合物lxxxxviii４０mg(４８％)を得る。
中間体実施例９６−化合物xxxix
化合物ic、N−Cbz−４−ヒドロキシ Pro メチルエステル
(２.１g,７.９mmol、化合物c、N−Cbz−４−ヒドロキシPro
から定量的収率に製造される)をDCM(２５mL)に溶解する。溶液にCDI(１.５４g,９.５mmol)およびDIPEA(１.７mL,９.５mmol)を加え、１０分間攪拌する。反応混合物に１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン(TIQ)(１.２mL,９.５mmol)を滴下し、５時間攪拌する。有機相を水、１N HClおよび食塩水で洗浄する。３つの有機相を濃縮し、得られる残渣を４０％EtOAc／ヘキサンでクロマトグラフィーにて精製して、化合物ci,N−Cbz−４TIQカルボニルオキシ−Pro メチルエステル(２.５g,７５％)を得る。
化合物ci(２.５g,５.９mmol)をMeOH(７５mL)に溶解する。溶液をN２でフラッシュし、Pd／C(１０％,３００mg)を加える。反応混合物をＨ２でフラッシュし、一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して、化合物化合物xxxix,４−(TIQ−カルボニルオキシ)−Pro メチルエステル(１.４９g,８３％)を得る。
化合物ic、N−Cbz−４−ヒドロキシ Pro メチルエステル
中間体実施例９７−化合物vii
化合物cii,N−ピラジン−２−イルカルボニル−Val−Valメチル エステル
(１０.９g,３２.４mmol)をTHF(８０mL)に溶解し、次いで、水性NaOH(４８.６mL,４８.６mmol)を加える。得られる混合物を４８時間攪拌し、次いで、追加のNaOH(１６.３mL,１６.３mmol)を加え、混合物を４０℃で３時間攪拌する。次いで、反応混合物のｐＨを３まで下げ、水性相をEtOAcで抽出し、次いで、濃縮して、粗化合物vii,N−ピラジン−２−イルカルボニル−Val−Val 酸(１０.６g,１００％)を得る。
化合物cii,N−ピラジン−２−イルカルボニル−Val−Valメチル エステル
中間体実施例９８−化合物ciii
化合物cii(４.１g,１２.７mmol)をDCM(２０mL)に溶解する。この溶液にHOAt(１.７３g,１２.７mmol)およびDCC(１２.７mmol)を加え、溶液を１時間攪拌する。DCM(１０mL)中、化合物xxxix(３.２２g,１０.６mmol)を反応混合物に加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をシリカゲルで濾過し、濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(５０％〜８０％EtOAc／ヘキサン勾配)にて精製して、化合物ciii,N−ピラジン−２−イルカルボニル−Val−Val−４−(TIQカルボニルオキシ)−Pro メチル エステル,(５.２７g,８１.７％).を得る。
化合物cii(４.１g,１２.７mmol)をDCM(２０mL)に溶解する。この溶液にHOAt(１.７３g,１２.７mmol)およびDCC(１２.７mmol)を加え、溶液を１時間攪拌する。DCM(１０mL)中、化合物xxxix(３.２２g,１０.６mmol)を反応混合物に加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をシリカゲルで濾過し、濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(５０％〜８０％EtOAc／ヘキサン勾配)にて精製して、化合物ciii,N−ピラジン−２−イルカルボニル−Val−Val−４−(TIQカルボニルオキシ)−Pro メチル エステル,(５.２７g,８１.７％).を得る。
中間体実施例９９−化合物civ
化合物ciii(６５０mg,１.２９mmol)をTHF(５mL)に溶解する。溶液に水性NaOH(１.４２mL,１.４２mmol)を加え、次いで、一夜攪拌する。溶液のｐＨを３まで下げ、有機相を単離し、濃縮して残渣を得る。残渣をアセトニトリル／水による逆相HPLCを用いて精製して、化合物civ,N−ピラジン−２−イルカルボニル−Val−Val−４−(TIQカルボニルオキシ)−Pro 酸(６００mg,９５％)を得る。
化合物ciii(６５０mg,１.２９mmol)をTHF(５mL)に溶解する。溶液に水性NaOH(１.４２mL,１.４２mmol)を加え、次いで、一夜攪拌する。溶液のｐＨを３まで下げ、有機相を単離し、濃縮して残渣を得る。残渣をアセトニトリル／水による逆相HPLCを用いて精製して、化合物civ,N−ピラジン−２−イルカルボニル−Val−Val−４−(TIQカルボニルオキシ)−Pro 酸(６００mg,９５％)を得る。
中間体実施例１００−化合物cv
N−Boc−L−tert−ロイシン(２.３g,１０mmol)およびL−tert−ロイシンメチルエステル塩酸塩(２g,１１mmol)をDMF(３０mL)中で合わせる。次いで、溶液にHOAt(１.６g,１１.５mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、２０分間攪拌し、次いで、０℃に冷却した後、DIC(１.８mL,１１.５mmol)および２,４,６−コリジン(１.４５mL,１１mmol)を加える。得られる溶液を室温まで温め、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を２０％−３０％EtOAc／ヘキサン勾配によるクロマトグラフィーにて精製して、化合物cv(３.３g,９２％)を得る。
N−Boc−L−tert−ロイシン(２.３g,１０mmol)およびL−tert−ロイシンメチルエステル塩酸塩(２g,１１mmol)をDMF(３０mL)中で合わせる。次いで、溶液にHOAt(１.６g,１１.５mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、２０分間攪拌し、次いで、０℃に冷却した後、DIC(１.８mL,１１.５mmol)および２,４,６−コリジン(１.４５mL,１１mmol)を加える。得られる溶液を室温まで温め、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を２０％−３０％EtOAc／ヘキサン勾配によるクロマトグラフィーにて精製して、化合物cv(３.３g,９２％)を得る。
中間体実施例１０１−化合物cvi
ジオキサン(４０mL)およびNaOH(３７mL,１８.４mmol)を用いて、化合物cv(３.３g,９.２mmol)を加水分解して、化合物cvi(２.９g,９２％)を得る。
ジオキサン(４０mL)およびNaOH(３７mL,１８.４mmol)を用いて、化合物cv(３.３g,９.２mmol)を加水分解して、化合物cvi(２.９g,９２％)を得る。
中間体実施例１０２−化合物cvii
化合物cvi(２g,５.８mmol)および化合物v(１g,５.５mmol)をDMF(２０mL)に溶解する。次いで、HOAt(８３２mg,６.６mmol)およびDIC(１.１mL,６.６mmol)を溶液に加える。得られる溶液を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で有機相を洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を２０％−３０％EtOAc／ヘキサン勾配にてクロマトグラフィー精製して、化合物cvii(２.４g,８１％)を得る。
化合物cvi(２g,５.８mmol)および化合物v(１g,５.５mmol)をDMF(２０mL)に溶解する。次いで、HOAt(８３２mg,６.６mmol)およびDIC(１.１mL,６.６mmol)を溶液に加える。得られる溶液を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で有機相を洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を２０％−３０％EtOAc／ヘキサン勾配にてクロマトグラフィー精製して、化合物cvii(２.４g,８１％)を得る。
中間体実施例１０３−化合物cviii
化合物cvii(２.４g,４.７２mmol)をDCM(１０mL)に溶解する。溶液にTFA(１０mL)を加える。得られる溶液を４時間攪拌する。反応混合物を濃縮し、EtOAcに溶解し、次いで、１N NaOHおよび食塩水で有機相を洗浄する。有機相を濃縮して、化合物cviii(１.０８４g,５６.１％)を得る。
化合物cvii(２.４g,４.７２mmol)をDCM(１０mL)に溶解する。溶液にTFA(１０mL)を加える。得られる溶液を４時間攪拌する。反応混合物を濃縮し、EtOAcに溶解し、次いで、１N NaOHおよび食塩水で有機相を洗浄する。有機相を濃縮して、化合物cviii(１.０８４g,５６.１％)を得る。
中間体実施例１０４−化合物cix
２−ピラジンカルボン酸(１８１mg,１.４６mmol)および化合物cviii(５４１mg,１.３２５mmol)をDMF(１５mL)に溶解する。溶液にHOAt(２０７mg,１.５２mmol)およびDIC(０.２４mL,１.５２mmol)を加える。得られる溶液を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で有機相を洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を２０％−３０％−３５％EtOAc／ヘキサン勾配にてクロマトグラフィー精製して、化合物cix(４３０mg,６３％)を得る。
２−ピラジンカルボン酸(１８１mg,１.４６mmol)および化合物cviii(５４１mg,１.３２５mmol)をDMF(１５mL)に溶解する。溶液にHOAt(２０７mg,１.５２mmol)およびDIC(０.２４mL,１.５２mmol)を加える。得られる溶液を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で有機相を洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を２０％−３０％−３５％EtOAc／ヘキサン勾配にてクロマトグラフィー精製して、化合物cix(４３０mg,６３％)を得る。
中間体実施例１０５−化合物cx
EtOH(７mL)および１N NaOH(４.７mL,４.７mmol)を用いて化合物cixを加水分解して、化合物cx(７００mg,９１.６％)を得る。
EtOH(７mL)および１N NaOH(４.７mL,４.７mmol)を用いて化合物cixを加水分解して、化合物cx(７００mg,９１.６％)を得る。
中間体実施例１０６−化合物cxi
化合物cx(６９０mg,１.４２mmol)をDCM(９mL)に溶解する。次いで、溶液にPyBOP(８９０mg,１.７mmol)を加え、次いで、化合物xiii'(３２０mg,１.７mmol)を加える。
得られる混合物にDIPEA(０.３mL,１.７mmol)を加える。反応混合物を窒素下、一夜攪拌する。次いで、反応混合物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３,および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を１００％EtOAcでクロマトグラフィー精製して、化合物cxi(４９０mg,５２.７％)を得る。
化合物cx(６９０mg,１.４２mmol)をDCM(９mL)に溶解する。次いで、溶液にPyBOP(８９０mg,１.７mmol)を加え、次いで、化合物xiii'(３２０mg,１.７mmol)を加える。
中間体実施例１０７−化合物cxiv
化合物cxii(１.２g,３.０６mmol)をMeOH(１２mL)に溶解する。
N２で完全にフラッシュした後、１０wt％Pd(OH)２／炭素(０.６g)を加え、混合物を一夜水素添加すると、TLC(３０％EtOAc／ヘキサン)により、完全な反応混合物が示される。溶液を濾過して固体物質から単離し、濃縮して対応する脱保護された化合物cxiii(１００％)を無色油状物で得る。
これをさらに精製することなく次工程に用いる。
２−ピラジンカルボン酸(４００mg,３.２mmol,１.１eq)をDCM／THF(４mL／４mL)に溶解し、次いで、HOAt(４４０mg,３.２mmol)およびDCC(３４３mL,１Ｍ DCM溶液)を加える。室温にて２０分間攪拌後、前述のように得られた化合物cxiii(０.９６g,３.２mmol)をDCM(６.４mL)に溶解し、活性化混合物に加える。室温にて一夜攪拌した後、反応混合物をセライトで濾過し、化合物cxivをカラムクロマトグラフィー(３０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、白色固体(０.８g,８０％)を得る。
化合物cxii(１.２g,３.０６mmol)をMeOH(１２mL)に溶解する。
２−ピラジンカルボン酸(４００mg,３.２mmol,１.１eq)をDCM／THF(４mL／４mL)に溶解し、次いで、HOAt(４４０mg,３.２mmol)およびDCC(３４３mL,１Ｍ DCM溶液)を加える。室温にて２０分間攪拌後、前述のように得られた化合物cxiii(０.９６g,３.２mmol)をDCM(６.４mL)に溶解し、活性化混合物に加える。室温にて一夜攪拌した後、反応混合物をセライトで濾過し、化合物cxivをカラムクロマトグラフィー(３０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、白色固体(０.８g,８０％)を得る。
中間体実施例１０８−化合物cxv
化合物cxiv(０.８g,２.２mmol)をMeOH(１０mL)に溶解し、次いで、２N NaOH(aq)(３.３mL,６.６mmol)を加える。溶液を室温にて一夜攪拌すると、TLC(５０％EtOAc／ヘキサン)により、完全な反応混合物が示される。５N HClにより、ｐＨ３に酸性化し、EtOAcで希釈した後、有機相を抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物cxv(０.７４,９５％)を得る。
化合物cxiv(０.８g,２.２mmol)をMeOH(１０mL)に溶解し、次いで、２N NaOH(aq)(３.３mL,６.６mmol)を加える。溶液を室温にて一夜攪拌すると、TLC(５０％EtOAc／ヘキサン)により、完全な反応混合物が示される。５N HClにより、ｐＨ３に酸性化し、EtOAcで希釈した後、有機相を抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物cxv(０.７４,９５％)を得る。
中間体実施例１０９−化合物cxvi
化合物cxv(０.７４g,２.１mmol)のDCM溶液(６mL)に室温にてHOAt(２９０mg,２.１mmol)を加え、次いで、DCM中の１Ｍ DCC溶液(２.２mL,２.２mmol)を加える。室温にて３０分間攪拌した後、上記HOAt−活性化酸に化合物v(２.１mmol)のTHF溶液(１０.５mL,０.２M)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応混合物をセライトで濾過する。濾液をEtOAc(１２０mL)で希釈し、水および食塩水で洗浄する。有機相を乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxvi(０.７１４g,６６％)を得る。
化合物cxv(０.７４g,２.１mmol)のDCM溶液(６mL)に室温にてHOAt(２９０mg,２.１mmol)を加え、次いで、DCM中の１Ｍ DCC溶液(２.２mL,２.２mmol)を加える。室温にて３０分間攪拌した後、上記HOAt−活性化酸に化合物v(２.１mmol)のTHF溶液(１０.５mL,０.２M)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌する。この時点で、反応混合物をセライトで濾過する。濾液をEtOAc(１２０mL)で希釈し、水および食塩水で洗浄する。有機相を乾燥し、濃縮して、黄色油状物を得、シリカゲルクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxvi(０.７１４g,６６％)を得る。
中間体実施例１１０−化合物cxvii
化合物cxvi(０.７g,１.４mmol)のEtOH溶液に２N NaOH水溶液(２mL,４mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、５N HClでｐＨ３まで酸性化し、EtOAcで希釈して、有機相を抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物cxvii(９５％)を得る。
化合物cxvi(０.７g,１.４mmol)のEtOH溶液に２N NaOH水溶液(２mL,４mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、５N HClでｐＨ３まで酸性化し、EtOAcで希釈して、有機相を抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物cxvii(９５％)を得る。
中間体実施例１１１−化合物cxviii
化合物cvii(３００mg,０.６mmol)のDCM／THF溶液(１０mL／２mL)にPyBOP(４１６mg,０.８mmol)を加える。溶液を室温にて３０分間攪拌する。次いで、この溶液に化合物xxxvi'(２００mg,０.８mmol)、
次いで、DIPEA(０.２２mL,１.２mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水で３０分間処理して反応を停止する(２５mL)。次いで、混合物をEtOAcで抽出する。得られる有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(３−５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物cxviii(３３５mg,７６％)を得る。
化合物cvii(３００mg,０.６mmol)のDCM／THF溶液(１０mL／２mL)にPyBOP(４１６mg,０.８mmol)を加える。溶液を室温にて３０分間攪拌する。次いで、この溶液に化合物xxxvi'(２００mg,０.８mmol)、
中間体実施例１１２−化合物cxix
化合物cxvii(３４０mg,０.６mmol)のDCM溶液(１０mL)にPyBOP(４７０mg,０.９mmol)を加える。溶液を室温にて３０分間攪拌する。次いで、この溶液に、化合物xiii'(１７０mg,０.９mmol)、次いで、DIPEA(０.２４mL,１.２mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水で３０分間処理して反応を停止する(２５mL)。次いで、混合物をEtOAcで抽出する。得られる有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(３−５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物cxix(１６４mg,３６％)を得る。
化合物cxvii(３４０mg,０.６mmol)のDCM溶液(１０mL)にPyBOP(４７０mg,０.９mmol)を加える。溶液を室温にて３０分間攪拌する。次いで、この溶液に、化合物xiii'(１７０mg,０.９mmol)、次いで、DIPEA(０.２４mL,１.２mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水で３０分間処理して反応を停止する(２５mL)。次いで、混合物をEtOAcで抽出する。得られる有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(３−５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物cxix(１６４mg,３６％)を得る。
中間体実施例１１３−化合物xx
N−Cbz−L−バリン(６.２８g,２５mmol)をDCM(３０mL)に溶解する。この溶液にHOBT(３.３８g,２５mmol)およびDCC(２５mL,１M溶液)を加え、５分間攪拌する。この混合物にL−tert−ロイシンメチルエステル塩酸塩(２５mL,１M溶液)を加え、窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。残渣を２０％−３０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物xx(２.９６g,３１％)を得る。
N−Cbz−L−バリン(６.２８g,２５mmol)をDCM(３０mL)に溶解する。この溶液にHOBT(３.３８g,２５mmol)およびDCC(２５mL,１M溶液)を加え、５分間攪拌する。この混合物にL−tert−ロイシンメチルエステル塩酸塩(２５mL,１M溶液)を加え、窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮する。残渣を２０％−３０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物xx(２.９６g,３１％)を得る。
中間体実施例１１４−化合物xxi
MeOH(４０mL)中、Ｈ２下、１０％Pd／C(８００mg)を用いて化合物xx(２.９５g,７.８mmol)を水素添加して、以下の対応する遊離アミン(１.９g,１００％)を得る。
２−ピラジン−カルボン酸(９７０mg,７.８mmol)をDCM(２０mL)に溶解する。この溶液にPyBOP(４.０６g,７.８mmol)を加える。溶液に、DCM(１５mL)中の遊離アミン(１.９g,７.８mmol)を加え、次いで、DIPEA(１.３６mL,７.８mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、残渣を３０％−４０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物xxi(２.０７g,７５.８％)を得る。
MeOH(４０mL)中、Ｈ２下、１０％Pd／C(８００mg)を用いて化合物xx(２.９５g,７.８mmol)を水素添加して、以下の対応する遊離アミン(１.９g,１００％)を得る。
中間体実施例１１５−化合物xxii
MeOH(２０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて化合物xxiを加水分解して、化合物xxii(１.８２g,９３.９％)を得る。
MeOH(２０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて化合物xxiを加水分解して、化合物xxii(１.８２g,９３.９％)を得る。
中間体実施例１１６−化合物xxiii
化合物xxii(８９５mg,２.６６mmol)をDCM(１０mL)に溶解する。溶液にDCC(３.２mmol)を加え、次いで、HOAt(４３５mg,３.２mmol)を加える。次いで、THF(１６mL)中の化合物v(３.２mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、シリカゲルで濾過し、濃縮する。得られる残渣を５０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物xxiii(７３０mg,５４.８％)を得る。
化合物xxii(８９５mg,２.６６mmol)をDCM(１０mL)に溶解する。溶液にDCC(３.２mmol)を加え、次いで、HOAt(４３５mg,３.２mmol)を加える。次いで、THF(１６mL)中の化合物v(３.２mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、シリカゲルで濾過し、濃縮する。得られる残渣を５０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物xxiii(７３０mg,５４.８％)を得る。
中間体実施例１１７−化合物xxiv
EtOH(５mL)および１N NaOH(１.５eq)を用いて化合物xxiiiを加水分解して、化合物xxiv(６９０mg,１００％)を得る。
EtOH(５mL)および１N NaOH(１.５eq)を用いて化合物xxiiiを加水分解して、化合物xxiv(６９０mg,１００％)を得る。
中間体実施例１１８−化合物cxx
化合物xxiv(２４５mg,０.５２mmol)をDCM(３mL)に溶解する。溶液にPyBOP(３３０mg,０.６２mmol)を加え、次いで、化合物xiii'(１２０mg,０.６２mmol)を加える。得られる混合物にDIPEA(０.１１mL,０.６２mmol)を加える。反応混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、残渣を５％EtOH／EtOAcにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxx(２２０mg,６０％)を得る。
化合物xxiv(２４５mg,０.５２mmol)をDCM(３mL)に溶解する。溶液にPyBOP(３３０mg,０.６２mmol)を加え、次いで、化合物xiii'(１２０mg,０.６２mmol)を加える。得られる混合物にDIPEA(０.１１mL,０.６２mmol)を加える。反応混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、残渣を５％EtOH／EtOAcにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxx(２２０mg,６０％)を得る。
中間体実施例１１９−化合物xiii'
Boc−NVA−OH(２４.９６g,１１４.９mmol)をTHF(２００mL)に溶解する。
溶液にCDI(２２.３５,１３７.８mmol)を少しずつ加え、溶液を３０分間攪拌する。N,O−ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩(１２.３３g,１２６.４mmol)をDMF(５０mL)に溶解し、次いで、溶液にDIPEA(２２mL,１２６.４mmol)を加える。DMF溶液を室温にて２０分間攪拌し、次いで、THF溶液に加える。得られる混合物を窒素下、週末にわたって攪拌する。反応混合物を全体積１００mLまで減圧濃縮する。この有機相を１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮して、粗化合物cxxi(２５.３g)を得る。
乾燥した１−L丸底フラスコに、窒素下、LAH(１０７.３mmol)の１Ｍ Et２O溶液を加える。この溶液を０℃まで冷却し、次いで、化合物cxxi(９７.５mmol)をEt２O(１００mL)に滴下する。添加完了後、得られる混合物を３０分間攪拌する。反応混合物に０℃にて、ゆっくりとEtOAc(５０mL)、次いで、５％KHSO４(５０mL)溶液を加えて反応を停止する。この混合物を３０分間攪拌する。有機相を１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮して、粗化合物cxxii(２２.２８g)を得る。
化合物cxxiiをMeOH(１００mL)に溶解する。Na２S２O４(１６.８２g,９６.６mmol)を水(１００mL)に溶解し、次いで、化合物cxxiiの溶液に０℃にて加える。この混合物を冷蔵庫(５℃)に一夜保管する。反応混合物に、水(１００mL)中のKCN(７.５３g,１１５.９mmol)を加え、室温にて１.５時間攪拌する。化合物をEtOAc(３x１００mL)で抽出する。有機相を食塩水(３x５０mL)で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、濾過し、濃縮して、粗化合物cxxiii(１５.８６g)を得る。
化合物cxxiii(１５.８６g)をジオキサン(１００mL)に溶解する。この溶液に濃ＨＣｌ(３７％,１００mL)、次いで、アニソール(１０mL)を加え、還流(１１０℃)を行う。反応物を１.５時間攪拌する。反応混合物を室温に冷却した時、溶媒を減圧除去して、乾燥ペースト状物を得る。残渣を一夜高減圧乾燥して、粗化合物cxxivを得る。
化合物cxxiv(６９.６mmol)をDMF(６０mL)およびTHF(６０mL)に溶解する。混合物にN−(ベンジル−オキシカルボニルオキシ)スクシンイミド(１７.３３g,６９.６mmol)を加え、次いで、DIPEA(１２.１mL,６９.６mmol)を加える。反応混合物窒素下、一夜攪拌する。混合物を濃縮して、体積を減らし(５０mL)、EtOAcで希釈する。有機相を０.１N HCl(２x１００mL)および食塩水で洗浄して、化合物cxxv(１７.５g,５４.２％、５段階にわたって)を得る。
化合物cxxv(５.６６g,２０.１４mmol)をDCM(６０mL)に溶解する。この溶液にPyBOP(１２.５７g,２４.２mmol)およびHOBT(３.２７g,２４.２mmol)を加え、５分間攪拌する。得られる混合物を０℃まで冷却し、次いで、シクロプロピルアミン(１.６７mL,２４.２mmol)およびDIPEA(４.２mL,２４.２mmol)を加える。反応混合物を室温まで温め、一夜攪拌する。反応混合物を０.１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。次いで、有機相を濃縮し、７０％EtOAc／ヘキサンを用いてクロマトグラフィー精製し、化合物cxxvi(３.１８g,４９.３％)を得る。
MeOH(７０mL)中の１０％Pd／C(６００mg)を用いて、化合物cxxvi(３.１８g,９.９４mmol)を水素添加する。反応混合物をＨ２下、一夜攪拌し、セライトで濾過し、濃縮して、粗化合物xiii'(２.１g,１００％)を得る。
Boc−NVA−OH(２４.９６g,１１４.９mmol)をTHF(２００mL)に溶解する。
中間体実施例１２０−化合物cxxvii
N−Cbz−L−シクロヘキシルグリシン(３g,１０.３mmol)をDCM(３６mL)に溶解する。この溶液にHOAt(１.５g,１１.２８mmol)およびDCC(１１.２８mL,１１.２８mmol)を加え、５分間攪拌する。この混合物に、L−tert−ロイシンメチルエステル塩酸塩(１０３mL,１M溶液,１０.３mmol)を加え、窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過し、EtOAcで濯ぎ、濃縮して残渣を得、２０％−３０％EtOAc／ヘキサンを用いてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxvii(２.２g,５２％)を得る。
N−Cbz−L−シクロヘキシルグリシン(３g,１０.３mmol)をDCM(３６mL)に溶解する。この溶液にHOAt(１.５g,１１.２８mmol)およびDCC(１１.２８mL,１１.２８mmol)を加え、５分間攪拌する。この混合物に、L−tert−ロイシンメチルエステル塩酸塩(１０３mL,１M溶液,１０.３mmol)を加え、窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過し、EtOAcで濯ぎ、濃縮して残渣を得、２０％−３０％EtOAc／ヘキサンを用いてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxvii(２.２g,５２％)を得る。
中間体実施例１２１−化合物lxxix'
Ｈ２下、MeOH(１５mL)中の２０％Pd(OH)２／C(１g)を用いて化合物cxxvii(２.２g,５.２mmol)を水素添加して、化合物lxxix'(１.４g,９８％)を得る。
Ｈ２下、MeOH(１５mL)中の２０％Pd(OH)２／C(１g)を用いて化合物cxxvii(２.２g,５.２mmol)を水素添加して、化合物lxxix'(１.４g,９８％)を得る。
中間体実施例１２２−化合物lxxx
２−ピラジンカルボン酸(３６０mg,２.９mmol)をDCM(１０mL)に溶解する。溶液にPyBOP(１.８１g,３.５mmol)を加える。次いで、溶液にTHF(１０mL)中の化合物lxxix'(８２５mg,２.９mmol)を加え、次いで、DIPEA(０.５mL,２.９mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮して得られる残渣を３０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物lxxx(７８０mg,６９％)を得る。.
２−ピラジンカルボン酸(３６０mg,２.９mmol)をDCM(１０mL)に溶解する。溶液にPyBOP(１.８１g,３.５mmol)を加える。次いで、溶液にTHF(１０mL)中の化合物lxxix'(８２５mg,２.９mmol)を加え、次いで、DIPEA(０.５mL,２.９mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮して得られる残渣を３０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物lxxx(７８０mg,６９％)を得る。.
中間体実施例１２３−化合物lxxxi
MeOH(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物lxxxを加水分解して、化合物lxxxi(６１５mg,８１.８％)を得る。
MeOH(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物lxxxを加水分解して、化合物lxxxi(６１５mg,８１.８％)を得る。
中間体実施例１２４−化合物lxxxii
化合物lxxxi(６１０mg,１.６mmol)をDCM(１０mL)に溶解する。次いで、溶液にDCC(１.９４mL,１.９４mmol)を加え、次いで、HOAt(２７０mg,１.９４mmol)を加える。次いで、溶液にTHF(１９.４mL)中の化合物v(１.９４mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、二夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、シリカゲルで濾過し、濃縮する。得られる残渣を４０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物lxxxii(４５０mg,８３.４％)を得る。
化合物lxxxi(６１０mg,１.６mmol)をDCM(１０mL)に溶解する。次いで、溶液にDCC(１.９４mL,１.９４mmol)を加え、次いで、HOAt(２７０mg,１.９４mmol)を加える。次いで、溶液にTHF(１９.４mL)中の化合物v(１.９４mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、二夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、シリカゲルで濾過し、濃縮する。得られる残渣を４０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物lxxxii(４５０mg,８３.４％)を得る。
中間体実施例１２５−化合物lxxxiii
EtOH(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物lxxxiを加水分解して、化合物lxxxiii(６５０mg,９９％)を得る。
EtOH(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物lxxxiを加水分解して、化合物lxxxiii(６５０mg,９９％)を得る。
中間体実施例１２６−化合物cxxviii
化合物lxxxiii(４００mg,０.７８mmol)をDCM(５mL)に溶解する。溶液に、PyBOP(６１０mg,１.２mmol)、次いで、化合物xiii'(２３０mg,１.２mmol)を加える。得られる混合物に、DIPEA(０.２mL,１.２mmol)を加える。反応混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、残渣を、１００％EtOAc〜５％EtOH／EtOAc勾配にてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxviii(３６５mg,６８.７％)を得る。
化合物lxxxiii(４００mg,０.７８mmol)をDCM(５mL)に溶解する。溶液に、PyBOP(６１０mg,１.２mmol)、次いで、化合物xiii'(２３０mg,１.２mmol)を加える。得られる混合物に、DIPEA(０.２mL,１.２mmol)を加える。反応混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、残渣を、１００％EtOAc〜５％EtOH／EtOAc勾配にてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxviii(３６５mg,６８.７％)を得る。
中間体実施例１２７−化合物cxxx
化合物lxxxiii(３６５mg,０.７mmol)をDCM(５mL)に溶解する。溶液に、PyBOP(４４０mg,０.８４mmol)を加え、次いで、THF(８.４mL)中の化合物cxxix(０.８４mmol)を加える。
得られる混合物に、DIPEA(０.１mL,０.８４mmol)を加える。反応混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を１００％EtOAcにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxx(３５０mg,７０％)を得る。
化合物lxxxiii(３６５mg,０.７mmol)をDCM(５mL)に溶解する。溶液に、PyBOP(４４０mg,０.８４mmol)を加え、次いで、THF(８.４mL)中の化合物cxxix(０.８４mmol)を加える。
中間体実施例１２８−化合物cxxxi
化合物cxxv(２.５４g,９.０５mmol)をDCM(３０mL)に溶解する。溶液にPyBOP(５.６５g,１０.９mmol)およびHOBT(１.４７g,１０.９mmol)を加え、５分間攪拌する。得られる混合物を０℃まで冷却した後、(S)−(+)−３−メチル−２−ブチルアミン(１.２７mL,１０.９mmol)およびDIPEA(１.９mL,１０.９mmol)を加える。反応混合物を室温まで温め、一夜攪拌する。有機相を０.１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を３０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxxi(１.４４g,４５.５％)を得る。
化合物cxxv(２.５４g,９.０５mmol)をDCM(３０mL)に溶解する。溶液にPyBOP(５.６５g,１０.９mmol)およびHOBT(１.４７g,１０.９mmol)を加え、５分間攪拌する。得られる混合物を０℃まで冷却した後、(S)−(+)−３−メチル−２−ブチルアミン(１.２７mL,１０.９mmol)およびDIPEA(１.９mL,１０.９mmol)を加える。反応混合物を室温まで温め、一夜攪拌する。有機相を０.１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を３０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxxi(１.４４g,４５.５％)を得る。
中間体実施例１２９−化合物cxxix
MeOH(４０mL)中の１０％Pd／C(５００mg)を用いて化合物cxxxi(１.３g,３.７mmol)を水素添加する。反応混合物をＨ２下、一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過し、有機相を濃縮して、粗化合物cxxix(８００mg,１００％)を得る。
MeOH(４０mL)中の１０％Pd／C(５００mg)を用いて化合物cxxxi(１.３g,３.７mmol)を水素添加する。反応混合物をＨ２下、一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過し、有機相を濃縮して、粗化合物cxxix(８００mg,１００％)を得る。
中間体実施例１３０−化合物cxxxiv
化合物cxxxii(１.６g,３.７mmol)をMeOH(１２mL)に溶解する。
N２で完全にフラッシュした後、１０wt％Pd(OH)／炭素(０.７４g)を加え、混合物を一夜水素添加すると、TLC(３０％EtOAc／ヘキサン)により、完全な反応混合物が示される。濾過によって固体物質から溶液を単離し、濃縮して、化合物cxxxiii(１００％)を無色油状物で得、これをさらに精製することなく次工程に用いる。
２−ピラジンカルボン酸(４００mg,３.２mmol,１.１eq)をDCM／THF(４mL／４mL)に溶解し、次いで、HOAt(４４０mg,３.２mmol)およびDCC(３.３mL,１
M DCM溶液)を加える。室温にて２０分間攪拌後、前述のように得られた化合物cxxxiii(０.９６g,３.２mmol)をDCM(６.４mL)に溶解し、活性化混合物に加える。室温にて２日間攪拌した後、反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して得られる残渣をカラムクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxxxiv(１.０６g,８３％)を白色固体で得る。
化合物cxxxii(１.６g,３.７mmol)をMeOH(１２mL)に溶解する。
M DCM溶液)を加える。室温にて２０分間攪拌後、前述のように得られた化合物cxxxiii(０.９６g,３.２mmol)をDCM(６.４mL)に溶解し、活性化混合物に加える。室温にて２日間攪拌した後、反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して得られる残渣をカラムクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxxxiv(１.０６g,８３％)を白色固体で得る。
中間体実施例１３１−化合物cxxxv
化合物cxxxiv(１.０６g,２.６mmol)をMeOH(１０mL)に溶解し、次いで、２N NaOH(aq)(４mL,８mmol)を加える。溶液を室温にて一夜攪拌すると、完全な加水分解がTLC(５０％EtOAc／ヘキサン)によって示される。５N HClで溶液をペまで酸性化し、EtOAcで希釈し、次いで、有機相を抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物cxxxv(１００％)を得る。
化合物cxxxiv(１.０６g,２.６mmol)をMeOH(１０mL)に溶解し、次いで、２N NaOH(aq)(４mL,８mmol)を加える。溶液を室温にて一夜攪拌すると、完全な加水分解がTLC(５０％EtOAc／ヘキサン)によって示される。５N HClで溶液をペまで酸性化し、EtOAcで希釈し、次いで、有機相を抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物cxxxv(１００％)を得る。
中間体実施例１３２−化合物cxxxvi
化合物cxxxv(１.４４g,３.７mmol)のDCM溶液(８mL)に室温にてHOAt(５００mg,３.７mmol)を加え、次いで、DCM中の１Ｍ DCC溶液(３.７mL,３.７mmol)を加える。室温にて３０分間攪拌した後、上記HOAt−活性化酸に化合物v(３.７mmol)のTHF溶液(１８.５mL,０.２M)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過する。濾液をEtOAc(１２０mL)で希釈し、水および食塩水で洗浄する。有機相を乾燥し、濃縮して得られた黄色油状物をシリカゲルクロマトグラフィー(７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxxxvi(１g,７１％)を得る。
化合物cxxxv(１.４４g,３.７mmol)のDCM溶液(８mL)に室温にてHOAt(５００mg,３.７mmol)を加え、次いで、DCM中の１Ｍ DCC溶液(３.７mL,３.７mmol)を加える。室温にて３０分間攪拌した後、上記HOAt−活性化酸に化合物v(３.７mmol)のTHF溶液(１８.５mL,０.２M)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過する。濾液をEtOAc(１２０mL)で希釈し、水および食塩水で洗浄する。有機相を乾燥し、濃縮して得られた黄色油状物をシリカゲルクロマトグラフィー(７０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxxxvi(１g,７１％)を得る。
中間体実施例１３３−化合物cxxxvii
化合物cxxxvi(１g,１.８mmol)のEtOH溶液(８mL)に２N NaOH水溶液(２.７mL,５.４mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、５N HClでｐＨ３まで酸性化し、EtOAcで希釈し、次いで、有機相を抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物cxxxvii(８８％)を得る。
化合物cxxxvi(１g,１.８mmol)のEtOH溶液(８mL)に２N NaOH水溶液(２.７mL,５.４mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、５N HClでｐＨ３まで酸性化し、EtOAcで希釈し、次いで、有機相を抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物cxxxvii(８８％)を得る。
中間体実施例１３３−化合物cxxxviii
化合物cxxxvii(３５０mg,０.６mmol)のDCM溶液(１０mL)にPyBOP(４５０mg,０.８６mmol)を加える。溶液を室温にて３０分間攪拌する。次いで、この溶液に、化合物xiii'(１６０mg,０.８６mmol)、次いで、DIPEA(０.２３mL,１.３mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水で３０分間処理して反応を停止する(２５mL)。次いで、混合物をEtOAcで抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物cxxxviii(４０７mg,８８％)を得る。
化合物cxxxvii(３５０mg,０.６mmol)のDCM溶液(１０mL)にPyBOP(４５０mg,０.８６mmol)を加える。溶液を室温にて３０分間攪拌する。次いで、この溶液に、化合物xiii'(１６０mg,０.８６mmol)、次いで、DIPEA(０.２３mL,１.３mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水で３０分間処理して反応を停止する(２５mL)。次いで、混合物をEtOAcで抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）した後、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物cxxxviii(４０７mg,８８％)を得る。
中間体実施例１３４−化合物cxxxix
５−メチルイソキサゾール−３−カルボン酸(２００mg,２.０５mmol)をDCM(５mL)に溶解する。溶液にPyBOP(１.０７g,２.０５mmol)を加える。溶液にDCM(５mL)中の化合物lxxix'(５８２mg,２.０５mmol)を加え、次いで、DIPEA(０.３６mL,２.０５mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮し、得られる残渣を３０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxxix(４９５mg,６１.４％)を得る。
５−メチルイソキサゾール−３−カルボン酸(２００mg,２.０５mmol)をDCM(５mL)に溶解する。溶液にPyBOP(１.０７g,２.０５mmol)を加える。溶液にDCM(５mL)中の化合物lxxix'(５８２mg,２.０５mmol)を加え、次いで、DIPEA(０.３６mL,２.０５mmol)を加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮し、得られる残渣を３０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxxix(４９５mg,６１.４％)を得る。
中間体実施例１３５−化合物cxxxx
MeOH(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物cxxxixを加水分解して、化合物cxxxx(４３０mg,９０％)を得る。
MeOH(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物cxxxixを加水分解して、化合物cxxxx(４３０mg,９０％)を得る。
中間体実施例１３６−化合物cxxxxi
化合物cxxxx(３８０mg,１mmol)をDCM(５mL)に溶解する。次いで、溶液にDCC(１.２mmol)を加え、次いで、HOAt(１６５mg,１.２mmol)を加える。次いで、化合物v(１.２mmol)をTHF(１２mL)に加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、シリカゲルで濾過し、濃縮する。得られる残渣を３５％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxxxi(３２０mg,５８％)を得る。
化合物cxxxx(３８０mg,１mmol)をDCM(５mL)に溶解する。次いで、溶液にDCC(１.２mmol)を加え、次いで、HOAt(１６５mg,１.２mmol)を加える。次いで、化合物v(１.２mmol)をTHF(１２mL)に加える。得られる混合物を窒素下、一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、シリカゲルで濾過し、濃縮する。得られる残渣を３５％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxxxi(３２０mg,５８％)を得る。
中間体実施例１３７−化合物cxxxxii
EtOH(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物cxxxxiを加水分解して、化合物cxxxxii(７３０mg,９４.３％)を得る。
EtOH(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物cxxxxiを加水分解して、化合物cxxxxii(７３０mg,９４.３％)を得る。
中間体実施例１３８−化合物cxxxxiii
化合物cxxxxii(２４０mg,０.４６mmol)をDCM(５mL)に溶解する。次いで、溶液にPyBOP(２９５mg,０.５６mmol)を加え、次いで、化合物xiii'(１１０mg,０.５６mmol)を加える。得られる混合物にDIPEA(０.１mL,０.５６mmol)を加える。反応混合物を窒素下、二夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を９０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxxxiii(１６８mg,５３％)を得る。
化合物cxxxxii(２４０mg,０.４６mmol)をDCM(５mL)に溶解する。次いで、溶液にPyBOP(２９５mg,０.５６mmol)を加え、次いで、化合物xiii'(１１０mg,０.５６mmol)を加える。得られる混合物にDIPEA(０.１mL,０.５６mmol)を加える。反応混合物を窒素下、二夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、有機相を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を濃縮した後、得られる残渣を９０％EtOAc／ヘキサンにてクロマトグラフィー精製して、化合物cxxxxiii(１６８mg,５３％)を得る。
中間体実施例１３９−化合物cxxxxiv
NaOH(２N,４２.１mL,８４.２mmol)の溶液に５℃にてL−アラニン(５.００g,５６.１mmol)を加える。１０分間攪拌後、クロロギ酸メチル(６.５mL,８４.２mmol)およびNaOH(２N,４２.１mL,８４.２mmol)を同時に滴下する。溶液を氷浴で２時間、次いで、室温にて１時間攪拌する。混合物をEt２O(２x５０mL)洗浄し、水性層を５N HClでpH〜２まで中和し、EtOAc(３x５０mL)で抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物cxxxxiv,N−カルボメトキシ−L−アラニン,(４.５４g,５４％)を無色油状物で得る。
NaOH(２N,４２.１mL,８４.２mmol)の溶液に５℃にてL−アラニン(５.００g,５６.１mmol)を加える。１０分間攪拌後、クロロギ酸メチル(６.５mL,８４.２mmol)およびNaOH(２N,４２.１mL,８４.２mmol)を同時に滴下する。溶液を氷浴で２時間、次いで、室温にて１時間攪拌する。混合物をEt２O(２x５０mL)洗浄し、水性層を５N HClでpH〜２まで中和し、EtOAc(３x５０mL)で抽出する。抽出した有機相を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物cxxxxiv,N−カルボメトキシ−L−アラニン,(４.５４g,５４％)を無色油状物で得る。
中間体実施例１４０−化合物cxxxxvi
THF中の化合物cxxxxv(３.５７g,９.４４mmol)の溶液を５℃にてHOAt(１.２８g,９.４４mmol)で処理し、次いで、DCC(９.５０mL,９.５０mmol)を加える。
氷浴中で４５分間攪拌後、THF中の化合物v(１０４mL,１０.４mmol)の溶液を加える。混合物を室温にて一夜攪拌する。混合物を５℃に冷却し、飽和NaHCO３で処理して反応を停止する。沈殿したDCUを濾去した後、混合物をEtOAc(１００mL)に溶解し、飽和NaHCO３、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して残渣を得、シリカカラムクロマトグラフィー(２５％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxxxxvi(２.９１g,５７％)をゴム性泡状物で得る。
THF中の化合物cxxxxv(３.５７g,９.４４mmol)の溶液を５℃にてHOAt(１.２８g,９.４４mmol)で処理し、次いで、DCC(９.５０mL,９.５０mmol)を加える。
中間体実施例１４１−化合物cviii
窒素気流下、氷浴で冷却したMeOH(２５mL)中の化合物cxxxxviの溶液にPd／Cをゆっくりと加える。混合物を１気圧で一夜水素添加する。触媒を濾去し、濾液を５mL DMFと合わせ、減圧乾燥して、化合物cviiiを得る。
窒素気流下、氷浴で冷却したMeOH(２５mL)中の化合物cxxxxviの溶液にPd／Cをゆっくりと加える。混合物を１気圧で一夜水素添加する。触媒を濾去し、濾液を５mL DMFと合わせ、減圧乾燥して、化合物cviiiを得る。
中間体実施例１４２−化合物cxxxxvii
氷浴で冷却したTHF中の化合物cxxxxiv(０.２９８g,２.０３mmol)およびHOAt(０.２７６g,２.０３mmol)の溶液をDCC(２.０５mL,２.０５mmol)で処理する。氷浴中で０.５時間攪拌後、THF中の化合物cviiiの溶液を加え、次いで、DIPEA(０.３９mL,２.２mmol)を加える。混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、氷浴中で冷却し、飽和NaHCO３で処理して反応を停止する。沈殿したDCUを濾過し、濾液をEtOAc(１００mL)に溶解する。有機相を飽和NaHCO３、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。有機溶媒を除去した後、残渣をシリカカラムクロマトグラフィー(６０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxxxxvii(０.４７g,４８％)をゴム性泡状物で得る。
氷浴で冷却したTHF中の化合物cxxxxiv(０.２９８g,２.０３mmol)およびHOAt(０.２７６g,２.０３mmol)の溶液をDCC(２.０５mL,２.０５mmol)で処理する。氷浴中で０.５時間攪拌後、THF中の化合物cviiiの溶液を加え、次いで、DIPEA(０.３９mL,２.２mmol)を加える。混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、氷浴中で冷却し、飽和NaHCO３で処理して反応を停止する。沈殿したDCUを濾過し、濾液をEtOAc(１００mL)に溶解する。有機相を飽和NaHCO３、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。有機溶媒を除去した後、残渣をシリカカラムクロマトグラフィー(６０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxxxxvii(０.４７g,４８％)をゴム性泡状物で得る。
中間体実施例１４３−化合物cxxxxviii
EtOH(５mL)中の化合物cxxxxvii(０.４７g,０.８４７mmol)の溶液に５℃にてNaOH(２N,１.３１mL,２.６２mmol)を加える。混合物を室温にて４時間攪拌する。溶液をHCl(１N)でpH〜２まで酸性化し、EtOHを回転蒸発にて除去する。混合物をEtOAc(３x３０mL)で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を除去し、残渣を減圧乾燥して、化合物cxxxxviii(０.３６６g,８２％)をゴム性泡状物で得る。
EtOH(５mL)中の化合物cxxxxvii(０.４７g,０.８４７mmol)の溶液に５℃にてNaOH(２N,１.３１mL,２.６２mmol)を加える。混合物を室温にて４時間攪拌する。溶液をHCl(１N)でpH〜２まで酸性化し、EtOHを回転蒸発にて除去する。混合物をEtOAc(３x３０mL)で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を除去し、残渣を減圧乾燥して、化合物cxxxxviii(０.３６６g,８２％)をゴム性泡状物で得る。
中間体実施例１４４−化合物cil
DCM中の化合物cxxxxviii(０.３６６g,０.７１８mmol)の溶液を氷浴で冷却し、PyBop(０.５９９g,１.１５mmol)で処理する。室温にて０.５時間攪拌後、混合物を氷浴で冷却し、THF中の化合物xiii'(０.２００g,１.０８mmol)の溶液およびDIPEA(０.２５０mL,１.４４mmol)で処理する。混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、NH４Cl溶液で処理して反応を停止する。溶媒を濃縮し、混合物をEtOAc(１００mL)に溶解する。有機相を飽和NaHCO３、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。有機溶媒を除去した後、残渣をカラムクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物cil(０.３５g,７２％)を得る。
DCM中の化合物cxxxxviii(０.３６６g,０.７１８mmol)の溶液を氷浴で冷却し、PyBop(０.５９９g,１.１５mmol)で処理する。室温にて０.５時間攪拌後、混合物を氷浴で冷却し、THF中の化合物xiii'(０.２００g,１.０８mmol)の溶液およびDIPEA(０.２５０mL,１.４４mmol)で処理する。混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、NH４Cl溶液で処理して反応を停止する。溶媒を濃縮し、混合物をEtOAc(１００mL)に溶解する。有機相を飽和NaHCO３、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。有機溶媒を除去した後、残渣をカラムクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物cil(０.３５g,７２％)を得る。
中間体実施例１４５−化合物cxxi
N−Boc−Nva−OH(化合物１)(８.６８g,４０mmol)のTHF溶液(８５mL)にCDI(７.７９g,４８mmol)を加える。室温にて３０分間攪拌後、上記溶液をN,O−ジメチル−ヒドロキシルアミン塩酸塩(４.２５g,４４mmol)およびDIPEA(７.６６mL,４４mmol)を含むDMF溶液(２５mL)で処理する。反応混合物を室温にて一夜攪拌する。次いで、反応混合物を減圧濃縮する。得られる残渣をEtOAc(３００mL)で希釈する。この溶液を０.１N HCl(５０mL)、飽和NaHCO３(３x５０mL)および食塩水で連続的に洗浄する。有機相を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(４０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxxi(９.３８g,９４％)を得る。
N−Boc−Nva−OH(化合物１)(８.６８g,４０mmol)のTHF溶液(８５mL)にCDI(７.７９g,４８mmol)を加える。室温にて３０分間攪拌後、上記溶液をN,O−ジメチル−ヒドロキシルアミン塩酸塩(４.２５g,４４mmol)およびDIPEA(７.６６mL,４４mmol)を含むDMF溶液(２５mL)で処理する。反応混合物を室温にて一夜攪拌する。次いで、反応混合物を減圧濃縮する。得られる残渣をEtOAc(３００mL)で希釈する。この溶液を０.１N HCl(５０mL)、飽和NaHCO３(３x５０mL)および食塩水で連続的に洗浄する。有機相を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(４０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cxxi(９.３８g,９４％)を得る。
中間体実施例１４６−化合物cxxii
０℃に冷却した化合物cxxi(９.３８g,３１.９mmol)のジエチル Et２O溶液(５０mL)にLAH(３４.７mL,１M,３４.７mmol)をゆっくりと加える。LAHの添加中、反応フラスコの温度を５℃以下に維持する。添加完了後、反応物にEtOAc(２０mL)を加えて過剰のLAHを停止する。次いで、温度を５℃以下に維持するために、水性KHSO４(５％,２０mL)を滴下様式で加える。有機相を分離し、次いで、１N HCl(３x３０mL)、飽和NaHCO３(３x３０mL)および食塩水で連続的に洗浄する。有機相を濃縮し、減圧乾固して、粗化合物cxxii(５.１８g,６９％)を得る。
０℃に冷却した化合物cxxi(９.３８g,３１.９mmol)のジエチル Et２O溶液(５０mL)にLAH(３４.７mL,１M,３４.７mmol)をゆっくりと加える。LAHの添加中、反応フラスコの温度を５℃以下に維持する。添加完了後、反応物にEtOAc(２０mL)を加えて過剰のLAHを停止する。次いで、温度を５℃以下に維持するために、水性KHSO４(５％,２０mL)を滴下様式で加える。有機相を分離し、次いで、１N HCl(３x３０mL)、飽和NaHCO３(３x３０mL)および食塩水で連続的に洗浄する。有機相を濃縮し、減圧乾固して、粗化合物cxxii(５.１８g,６９％)を得る。
中間体実施例１４７−化合物cl
Zn(２.７５g,４２mmol)のTHF(２５mL)懸濁液に０.２mLのEtOC(O)CF２Brを還流しながら加える。次いで、これに化合物cxxii(３.０５g,１５.０mmol)のTHF溶液(２５mL)およびEtOC(O)CF２Br(４.８４mL,３７.５mmol)をゆっくりと加える。両試薬の添加完了後、反応混合物をさらに３０分間還流する。反応混合物を室温に冷却し、DCM(２００mL)で希釈する。有機相を１N KHSO４で洗浄する。有機相を濃縮し、減圧乾固して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(２０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cl(２.７８g,５７％)を得る。
この調製物は、Thaisrivongsら,J. Med. Chem.,２９,２０８０−２０８７(１９８６)に開示されたものと本質的に同じである。
Zn(２.７５g,４２mmol)のTHF(２５mL)懸濁液に０.２mLのEtOC(O)CF２Brを還流しながら加える。次いで、これに化合物cxxii(３.０５g,１５.０mmol)のTHF溶液(２５mL)およびEtOC(O)CF２Br(４.８４mL,３７.５mmol)をゆっくりと加える。両試薬の添加完了後、反応混合物をさらに３０分間還流する。反応混合物を室温に冷却し、DCM(２００mL)で希釈する。有機相を１N KHSO４で洗浄する。有機相を濃縮し、減圧乾固して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(２０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cl(２.７８g,５７％)を得る。
中間体実施例１４８−化合物cli
化合物cl(２.７８g,８.５３mmol)のTHF溶液(４０mL)を１N NaOH(１２.８mL,１２.８mmol)で処理する。室温にて一夜攪拌後、溶媒を部分的に減圧除去する。残りの反応混合物を水(５０mL)で希釈し、凍結乾燥して粗化合物cli(２.８２g,＞１００％)をそのナトリウム塩で得る。
この調製物は、Thaisrivongsら,J. Med. Chem.,２９,２０８０−２０８７(１９８６)に開示されたものと本質的に同じである。
化合物cl(２.７８g,８.５３mmol)のTHF溶液(４０mL)を１N NaOH(１２.８mL,１２.８mmol)で処理する。室温にて一夜攪拌後、溶媒を部分的に減圧除去する。残りの反応混合物を水(５０mL)で希釈し、凍結乾燥して粗化合物cli(２.８２g,＞１００％)をそのナトリウム塩で得る。
中間体実施例１４９−化合物clii
粗化合物cli(５１６mg,１.６１mmol)のDCM溶液(１０mL)をHOBT(４３６mg,３.２３mmol)およびDIC(０.３２８mL,２.０９mmol)で処理する。室温にて３０分間攪拌後、反応混合物をグリシンベンジルエステル−TsOH塩(８１５mg,２.４２mmol)およびDIPEA(０.４２２mL,２.４２mmol)を含むDCM溶液(５mL)で処理する。室温にて１２時間攪拌後、反応混合物を水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。有機相を乾燥し、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(４０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clii(４９５mg,６９％)を得る。
化合物cliiの１H NMR(４００MHz,CDCl３)：δ７.２９−７.２１(m,５H),５.１６(bs,２H),４.８９(bs,１H),４.２０−３.９０(m,４H),３.８０(bs,１H),１.７５−１.４２(m,４H),１.３８(s,９H),０.８７(m,３H)
化合物cliiについて記載した方法と同様にして、粗化合物cliから出発して、化合物cliii(８３％)およびcliv(５０％)を製造する。
化合物cliiiの'H NMR(４００MHz,CDC１３)：δ７.４９(bs,１H),７.３４−７.２４(m,５H),５.１３(AB q,J=１２.２Hz,J'=２３.９Hz,２H),４.８８(bd,J=８.８Hz,１H),４.５３(m,１H),３.９８−３.９１(m,２H),３.８２(m,１H),１.６５−１.２０[m,１６H,１.３７(９H)に一重線を含む],０.８６(t,J=７.３Hz,３H)。
化合物clivの１H NMR(４００MHz,CDCIs)：δ７.６０−７.０(m,１０H),５.３０−５.００(m,２H),５.００４.７５(m,２H),４.１５−３.７０(m,３H),３.３０−３.００(m,２H),１.７５−１.２０[m,１３H,に一重線を含む１.３６(９H)],０.８６(bs,３H)
粗化合物cli(５１６mg,１.６１mmol)のDCM溶液(１０mL)をHOBT(４３６mg,３.２３mmol)およびDIC(０.３２８mL,２.０９mmol)で処理する。室温にて３０分間攪拌後、反応混合物をグリシンベンジルエステル−TsOH塩(８１５mg,２.４２mmol)およびDIPEA(０.４２２mL,２.４２mmol)を含むDCM溶液(５mL)で処理する。室温にて１２時間攪拌後、反応混合物を水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。有機相を乾燥し、減圧濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィー(４０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clii(４９５mg,６９％)を得る。
化合物cliiの１H NMR(４００MHz,CDCl３)：δ７.２９−７.２１(m,５H),５.１６(bs,２H),４.８９(bs,１H),４.２０−３.９０(m,４H),３.８０(bs,１H),１.７５−１.４２(m,４H),１.３８(s,９H),０.８７(m,３H)
化合物cliiiの'H NMR(４００MHz,CDC１３)：δ７.４９(bs,１H),７.３４−７.２４(m,５H),５.１３(AB q,J=１２.２Hz,J'=２３.９Hz,２H),４.８８(bd,J=８.８Hz,１H),４.５３(m,１H),３.９８−３.９１(m,２H),３.８２(m,１H),１.６５−１.２０[m,１６H,１.３７(９H)に一重線を含む],０.８６(t,J=７.３Hz,３H)。
中間体実施例１５０−化合物clv
粗化合物cli(１g,３.１３mmol)のDCM(１０mL)およびTHF(５mL)溶液にHOBT(６３４mg,４.６９mmol)およびEDCI(７８１mg,４.０７mmol)、次いで、(s)−α−メチルベンジルアミン(０.６０４mL,４.６９mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAcで抽出する。有機相を食塩水で洗浄し、乾燥（硫酸ナトリウム）する。有機相を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(２０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clv(４５９mg,３７％)を得る。
化合物clvの１H NMR(４００MHz,CDC１３)：δ７.３２−７.２１(m,６H),５.００(m,１H),４.７５(m,１H),３.９４(m,２H),３.７０(m,１H),１.６５−１.１５[m,１６H,１.５１(J=６.８Hz,３H)に二重線を含む,１.３９(９H)に一重線を含む],０.８２(m,３H)
粗化合物cli(１g,３.１３mmol)のDCM(１０mL)およびTHF(５mL)溶液にHOBT(６３４mg,４.６９mmol)およびEDCI(７８１mg,４.０７mmol)、次いで、(s)−α−メチルベンジルアミン(０.６０４mL,４.６９mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAcで抽出する。有機相を食塩水で洗浄し、乾燥（硫酸ナトリウム）する。有機相を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(２０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clv(４５９mg,３７％)を得る。
化合物clvの１H NMR(４００MHz,CDC１３)：δ７.３２−７.２１(m,６H),５.００(m,１H),４.７５(m,１H),３.９４(m,２H),３.７０(m,１H),１.６５−１.１５[m,１６H,１.５１(J=６.８Hz,３H)に二重線を含む,１.３９(９H)に一重線を含む],０.８２(m,３H)
中間体実施例１５１−化合物clvi
化合物clv(２２０mg,０.５５mmol)を４N HClのジオキサン溶液(１０mL)に溶解する。反応混合物を室温にて２時間攪拌し、次いで、減圧濃縮して、粗化合物clvi(〜１００％)をその塩酸塩で得る。
化合物clviについて記載した手順にしたがって、粗化合物cliから化合物clvii、clviiiおよびclixをほとんど定量的収量にて調製する。
化合物clv(２２０mg,０.５５mmol)を４N HClのジオキサン溶液(１０mL)に溶解する。反応混合物を室温にて２時間攪拌し、次いで、減圧濃縮して、粗化合物clvi(〜１００％)をその塩酸塩で得る。
中間体実施例１５２−化合物clx
化合物vii(９６mg,０.１４４mmol)のHCl塩のDCM溶液(４mL)をPyBOP(１２０mg,０.２３mmol)およびDIPEA(０.１mL,０.５７６mmol)で処理する。室温にて３０分間攪拌後、溶液を化合物clv(０.２８８mmol)およびDIPEA(０.２mL,１.１５２mmol)を含むTHF溶液(４mL)で処理する。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、反応混合物をEtOAc(５０mL)で希釈し、次いで、有機相をNaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clx(１１３mg,８９％)を得る。
化合物vii(９６mg,０.１４４mmol)のHCl塩のDCM溶液(４mL)をPyBOP(１２０mg,０.２３mmol)およびDIPEA(０.１mL,０.５７６mmol)で処理する。室温にて３０分間攪拌後、溶液を化合物clv(０.２８８mmol)およびDIPEA(０.２mL,１.１５２mmol)を含むTHF溶液(４mL)で処理する。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、次いで、反応混合物をEtOAc(５０mL)で希釈し、次いで、有機相をNaHCO３および食塩水で洗浄する。有機相を減圧濃縮し、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clx(１１３mg,８９％)を得る。
中間体実施例１５３−化合物clxi
化合物vii(１４０mg,０.２３５mmol)のDCM溶液(６mL)をPyBOP(１９６mg,０.３７６mmol)で３０分間処理する。次いで、上記溶液に化合物clvii(〜０.４７mmol)のTHF溶液(６mL)およびDIPEA(０.３２７mL,１.８８mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、水(３０分間)で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAc(５０mL)で抽出する。有機相をNaHCO３および食塩水洗浄する。合わせた水性層をEtOAc(５０mL)で逆抽出する。合わせた有機相を乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８０−１００ EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clxi(１０４mg,４８％)を得る。
化合物vii(１４０mg,０.２３５mmol)のDCM溶液(６mL)をPyBOP(１９６mg,０.３７６mmol)で３０分間処理する。次いで、上記溶液に化合物clvii(〜０.４７mmol)のTHF溶液(６mL)およびDIPEA(０.３２７mL,１.８８mmol)を加える。反応混合物を室温にて一夜攪拌し、水(３０分間)で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAc(５０mL)で抽出する。有機相をNaHCO３および食塩水洗浄する。合わせた水性層をEtOAc(５０mL)で逆抽出する。合わせた有機相を乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(８０−１００ EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clxi(１０４mg,４８％)を得る。
中間体実施例１５４−化合物clxii
化合物clxi(２８０mg,０.３０４mmol)のDCM溶液(１０mL)にDMP試薬(１９３mg,０.４５６mmol)を加える。反応混合物を室温にて３時間攪拌し、１０％Na２SO３で処理して反応を停止する。有機相をNaHCO３および食塩水で洗浄する。得られる有機相を乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(８０−１００％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clxii(２７１mg,９７％)を得る。
化合物clxi(２８０mg,０.３０４mmol)のDCM溶液(１０mL)にDMP試薬(１９３mg,０.４５６mmol)を加える。反応混合物を室温にて３時間攪拌し、１０％Na２SO３で処理して反応を停止する。有機相をNaHCO３および食塩水で洗浄する。得られる有機相を乾燥し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(８０−１００％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clxii(２７１mg,９７％)を得る。
中間体実施例１５５−化合物clxiii
化合物lxxxiii(２２０mg,０.４３mmol)をDCM(５mL)に加える。PyBOP(２７０mg,０.５１mmol)をDCM溶液に加え、５分間攪拌する。この溶液にTHF(５.１mL)中の化合物xxxvi'(０.５１mmol)を滴下する。反応混合物にDIPEA(０.０９mL,０.５１mmol)を加え、窒素下、一夜攪拌する。翌日、反応混合物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３洗浄し、食塩水で洗浄する。７０％〜９０％EtOAc／ヘキサン勾配にて精製して、化合物clxiii(１８０mg,５６％)を得る。
化合物lxxxiii(２２０mg,０.４３mmol)をDCM(５mL)に加える。PyBOP(２７０mg,０.５１mmol)をDCM溶液に加え、５分間攪拌する。この溶液にTHF(５.１mL)中の化合物xxxvi'(０.５１mmol)を滴下する。反応混合物にDIPEA(０.０９mL,０.５１mmol)を加え、窒素下、一夜攪拌する。翌日、反応混合物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３洗浄し、食塩水で洗浄する。７０％〜９０％EtOAc／ヘキサン勾配にて精製して、化合物clxiii(１８０mg,５６％)を得る。
中間体実施例１５６−化合物clxiv
化合物cxxv(２.０９g,７.４mmol)をDCM(２０mL)に加える。この溶液にPyBOP(４.６４g,８.９mmol)およびHOBt(１.２g,８.９mmol)を加え、５分間攪拌する。得られる混合物を０℃まで温度を下げ、S(−)−α−メチルベンジルアミン(１.１５mL,８.９mmol)およびDIPEA(１.５５mL,８.９mmol)を加える。反応物を室温まで温め、一夜攪拌する。反応混合物を０.１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。３０％EtOAc／ヘキサンにて精製して、化合物clxiv(１.６g,５６.３％)を得る。
化合物cxxv(２.０９g,７.４mmol)をDCM(２０mL)に加える。この溶液にPyBOP(４.６４g,８.９mmol)およびHOBt(１.２g,８.９mmol)を加え、５分間攪拌する。得られる混合物を０℃まで温度を下げ、S(−)−α−メチルベンジルアミン(１.１５mL,８.９mmol)およびDIPEA(１.５５mL,８.９mmol)を加える。反応物を室温まで温め、一夜攪拌する。反応混合物を０.１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。３０％EtOAc／ヘキサンにて精製して、化合物clxiv(１.６g,５６.３％)を得る。
中間体実施例１５７−化合物xxxvi'
MeOH(５０mL)中の１０％Pd／C(３００mg)を用いて、化合物clxiv(１.４８g,３.８mmol)を水素添加する。反応混合物をＨ２下、一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して、化合物xxxvi'(８９５mg,９４.２％)を得る。
MeOH(５０mL)中の１０％Pd／C(３００mg)を用いて、化合物clxiv(１.４８g,３.８mmol)を水素添加する。反応混合物をＨ２下、一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して、化合物xxxvi'(８９５mg,９４.２％)を得る。
中間体実施例１５８−化合物clxvi
化合物clxv(２g,８.２mmol)のDCM溶液(１５mL)にHOAt(１.３４g,９.８４mmol)およびDCC(９.８４mL,１M,９.８４mmol)を加える。
室温にて２０分間攪拌後、上記溶液に、tert−L−ロイシンメチルエステル塩酸塩(９.８４mmol)およびDIPEA(１.７２mL,９.８４mmol)を含むTHF溶液(９.８４mL)を加える。次いで、室温にてDMAP(１g,８.２mmol)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌する。標準的水性処理およびシリカゲルクロマトグラフィー(２０％EtOAc／ヘキサン)を行って、化合物clxvi(１.７５g,５８％)を得る。
化合物clxv(２g,８.２mmol)のDCM溶液(１５mL)にHOAt(１.３４g,９.８４mmol)およびDCC(９.８４mL,１M,９.８４mmol)を加える。
中間体実施例１５９−化合物clxvii
化合物clxvi(１.７５g,４.７３mmol)のTHF溶液(３５mL)に４N HClのジオキサン溶液(１１.８mL,４７.３mmol)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌する。この時点で、溶媒を減圧除去して、粗clxvii(〜１００％)を得、DMFに再溶解して、次反応に直接用いる。
化合物clxvi(１.７５g,４.７３mmol)のTHF溶液(３５mL)に４N HClのジオキサン溶液(１１.８mL,４７.３mmol)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌する。この時点で、溶媒を減圧除去して、粗clxvii(〜１００％)を得、DMFに再溶解して、次反応に直接用いる。
中間体実施例１６０−化合物clxviii
２−ピラジンカルボン酸(４４７mg,３.６mmol)、PyBOP(１.８７g,３.６mmol)を含むDCM溶液(１５mL)に化合物clxvii(８１１mg,３mmol)のDMF溶液(１５mL)を加える。次いで、得られる混合物にDIPEA(０.６３mL,３.６mmol)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(４０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clxviii(０.９３g,８２％)を得る。
２−ピラジンカルボン酸(４４７mg,３.６mmol)、PyBOP(１.８７g,３.６mmol)を含むDCM溶液(１５mL)に化合物clxvii(８１１mg,３mmol)のDMF溶液(１５mL)を加える。次いで、得られる混合物にDIPEA(０.６３mL,３.６mmol)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水で処理して反応を停止する。反応混合物をEtOAcで抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィー(４０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clxviii(０.９３g,８２％)を得る。
中間体実施例１６１−化合物clxix
化合物clxviii(０.９３g,２.４７mmol)のMeOH溶液(１０mL)に２N NaOH(３.７１mL,７.４１mmol)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌する。次いで、１N HClを用いて反応物をｐＨ３まで酸性化する。反応物をEtOAc(７５mL)で希釈し、水および食塩水で洗浄する。このように得られた有機層を乾燥し、減圧濃縮して、化合物clxix(〜１００％)を得る。
化合物clxviii(０.９３g,２.４７mmol)のMeOH溶液(１０mL)に２N NaOH(３.７１mL,７.４１mmol)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌する。次いで、１N HClを用いて反応物をｐＨ３まで酸性化する。反応物をEtOAc(７５mL)で希釈し、水および食塩水で洗浄する。このように得られた有機層を乾燥し、減圧濃縮して、化合物clxix(〜１００％)を得る。
中間体実施例１６２−化合物clxx
化合物clxix(２.４７mmol)のDCM溶液(１０mL)をHOAt(４３６mg,３.２１mmol)およびDCC(３.２mL,１M,３.２mmol)で処理する。３０分間攪拌した後、反応混合物を化合物v(４９９mg,２.７２mmol)のTHF溶液(１３.６mL)で処理する。室温にて一夜攪拌後、白色固体(尿素)を濾過する。濾液を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィーにて精製して、化合物clxx(０.９９g,７６％)を得る。
化合物clxix(２.４７mmol)のDCM溶液(１０mL)をHOAt(４３６mg,３.２１mmol)およびDCC(３.２mL,１M,３.２mmol)で処理する。３０分間攪拌した後、反応混合物を化合物v(４９９mg,２.７２mmol)のTHF溶液(１３.６mL)で処理する。室温にて一夜攪拌後、白色固体(尿素)を濾過する。濾液を減圧濃縮して残渣を得、シリカゲルクロマトグラフィーにて精製して、化合物clxx(０.９９g,７６％)を得る。
中間体実施例１６３−化合物clxxi
化合物clxx(０.９９g,１.８８mmol)のEtOH溶液(２０mL)を２N NaOH(２.８１mL,５.６３mmol)で処理する。室温にて一夜攪拌後、反応混合物を１N HClでｐＨ３まで酸性化する。反応混合物をEtOAc(７５mL)で抽出する。有機層を乾燥し、減圧濃縮して、化合物clxxi(７７２mg,８２％)を得る。
化合物clxx(０.９９g,１.８８mmol)のEtOH溶液(２０mL)を２N NaOH(２.８１mL,５.６３mmol)で処理する。室温にて一夜攪拌後、反応混合物を１N HClでｐＨ３まで酸性化する。反応混合物をEtOAc(７５mL)で抽出する。有機層を乾燥し、減圧濃縮して、化合物clxxi(７７２mg,８２％)を得る。
中間体実施例１６４−化合物clxxi
化合物clxxi(２９０mg,０.５８mmol)のDCM溶液(１０mL)をPyBOP(４８４mg,０.９３mmol)で処理する。室温にて２０分間攪拌後、反応混合物を化合物xiii'(１４０mg,０.７５mmol)のTHF溶液(７.５mL)、次いで、DIPEA(０.１３mL,０.７５mmol)で処理する。室温にて一夜攪拌した後、水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物clxxii２９０mg(７５％)を得る。
化合物clxxi(２９０mg,０.５８mmol)のDCM溶液(１０mL)をPyBOP(４８４mg,０.９３mmol)で処理する。室温にて２０分間攪拌後、反応混合物を化合物xiii'(１４０mg,０.７５mmol)のTHF溶液(７.５mL)、次いで、DIPEA(０.１３mL,０.７５mmol)で処理する。室温にて一夜攪拌した後、水で処理して反応を停止し、EtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、乾燥し、減圧濃縮する。得られる残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物clxxii２９０mg(７５％)を得る。
中間体実施例１６５−化合物clxxiv：
化合物lxxxiii(６００mg,１.１７mmol)をDCM(４mL)に加える。PyBOP(６７０mg,１.３mmol)を加え、５分間攪拌し、０℃に冷却する。この溶液にTHF(１３mL)中の化合物clxxiii(３３３mg,１.３mmol)を滴下する。
反応混合物にDIPEA(０.２３mL,１.３mmol)を加え、周囲温度になるようにして、二夜攪拌する。翌日、反応物を濃縮し、２％EtOH／EtOAcにて精製して、粗化合物clxxiv(９００mg,１００％超過)を得る。
化合物lxxxiii(６００mg,１.１７mmol)をDCM(４mL)に加える。PyBOP(６７０mg,１.３mmol)を加え、５分間攪拌し、０℃に冷却する。この溶液にTHF(１３mL)中の化合物clxxiii(３３３mg,１.３mmol)を滴下する。
中間体実施例１６６−化合物clxxxv
化合物cxxv(３.０１g,１０.７mmol)をDCM(３０mL)に加え、温度を−７８℃まで下げる。この溶液にPyBOP(６.１g,１１.７mmol)およびHOBT(１.５８g,１１.７mmol)を加え、次いで、(S)−(+)−l−シクロヘキシルエチルアミン,化合物clxxv,(１.７４mL,１１.７mmol)およびDIPEA(２.１mL,１１.７mmol)を加える。得られる混合物を室温にて一夜攪拌する。翌日、反応混合物をEtOAcで希釈し、０.１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。生成物を４０％EtOAc／ヘキサンにて精製して、２g(４７.８％)の化合物clxxviを得る。
化合物cxxv(３.０１g,１０.７mmol)をDCM(３０mL)に加え、温度を−７８℃まで下げる。この溶液にPyBOP(６.１g,１１.７mmol)およびHOBT(１.５８g,１１.７mmol)を加え、次いで、(S)−(+)−l−シクロヘキシルエチルアミン,化合物clxxv,(１.７４mL,１１.７mmol)およびDIPEA(２.１mL,１１.７mmol)を加える。得られる混合物を室温にて一夜攪拌する。翌日、反応混合物をEtOAcで希釈し、０.１N HCl、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。生成物を４０％EtOAc／ヘキサンにて精製して、２g(４７.８％)の化合物clxxviを得る。
中間体実施例１６７−化合物clxxiii
MeOH(４０mL)中の１０％Pd／C(５００mg)を用いて、化合物clxxvi(２g,５.１３mmol)を水素添加する。反応混合物をＨ２下、一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して、化合物clxxiii(１.３１g,９９.８％)を得る。
MeOH(４０mL)中の１０％Pd／C(５００mg)を用いて、化合物clxxvi(２g,５.１３mmol)を水素添加する。反応混合物をＨ２下、一夜攪拌する。反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して、化合物clxxiii(１.３１g,９９.８％)を得る。
中間体実施例１６８−化合物clxxix
不活性雰囲気下、丸底フラスコ中、化合物clxxvii[(S)−(−)−２−オキソ １,５イミダゾリンジカルボン酸 １−ベンジルエステル](２９０mg,１.１mmol)を無水DMF(６mL)に溶解する。
HOAt(１５１mg,１.２mmol)を加え、反応物を室温にて２５分間攪拌する。次いで、反応物を氷浴で冷却する。次いで、DIC(０.２mL,０.１６g,１.２mmol)を加え、次いで、無水DMF(４mL)中の化合物clxxviii(１mmol,４３５mg.)を加える。反応物をゆっくりと室温まで昇温し、２日間攪拌する。次いで、反応物を１２０mLのEtOAcを入れた分液ロートに入れ、１N HCl(５０mL)で２回および食塩水で１回洗浄する。有機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）する。溶媒を減圧蒸発し、残渣をクロマトグラフィー／シリカゲル(DCMをロードし、３０％、次いで、５０％EtOAc／DCM、次いで、２％MeOH／EtOAcで溶離)にて精製して、生成物clxxix(４３４mg,６４％)を得る。
不活性雰囲気下、丸底フラスコ中、化合物clxxvii[(S)−(−)−２−オキソ １,５イミダゾリンジカルボン酸 １−ベンジルエステル](２９０mg,１.１mmol)を無水DMF(６mL)に溶解する。
中間体実施例１６９−化合物clxxx
出発物質clxxix(４３４mg,０.６４mmol)をジオキサン(６mL)および０.５M 水性NaOH溶液(４mL,３eq)に溶解する。反応を一夜行う。１００％EtOAcにおけるTLC(PMA染色を用いる)により、起点における予期した酸生成物に加えて、より速い移動生成物が示される。１N HClで反応混合物をｐＨ２まで酸性化し、次いで、EtOAcで２回抽出する。水溶液に固体NaClを加えて抽出を促進する。次いで、有機抽出物を合わせ、乾燥(硫酸マグネシウム）し、減圧蒸発する。MSから、加水分解によってCBZ基が除去されたことが示される。得られる化合物clxxx(定量的収率)を次ステップに用いる。
出発物質clxxix(４３４mg,０.６４mmol)をジオキサン(６mL)および０.５M 水性NaOH溶液(４mL,３eq)に溶解する。反応を一夜行う。１００％EtOAcにおけるTLC(PMA染色を用いる)により、起点における予期した酸生成物に加えて、より速い移動生成物が示される。１N HClで反応混合物をｐＨ２まで酸性化し、次いで、EtOAcで２回抽出する。水溶液に固体NaClを加えて抽出を促進する。次いで、有機抽出物を合わせ、乾燥(硫酸マグネシウム）し、減圧蒸発する。MSから、加水分解によってCBZ基が除去されたことが示される。得られる化合物clxxx(定量的収率)を次ステップに用いる。
中間体実施例１７０−化合物clxxxi
不活性雰囲気下、丸底フラスコ中、化合物clxxx(２７９mg,０.５４mmol)を無水DMF(６mL)に溶解する。HOAt(８２mg,０.６５mmol)を加え、反応物を室温にて２５分間攪拌する。次いで、反応物を氷浴で冷却する。次いで、DIC(０.１１mL,０.６５mmol)を加え、次いで、無水DMF(４mL)中の化合物xiii'(０.７mmol)を加える。反応物を室温まで昇温させ、２１時間攪拌する。次いで、反応物を１２０mLのEtOAcを入れた分液ロートに入れ、１N HCl(５０mL)で２回および食塩水で１回洗浄する。有機層を分離し、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を減圧蒸発し、生成物をクロマトグラフィー／シリカゲル(DCMをロードし、５０％EtOAc／ヘキサン、次いで、３％MeOH／EtOAc、次いで、２０％EtOH／EtOAcで溶離)にて精製する。溶媒を除去した後、残渣をDri Solv THEに再溶解し、シリカゲルを濾去する。次いで、溶媒を除去して、化合物clxxxi(４３４mg,６４％収率)を得る。
不活性雰囲気下、丸底フラスコ中、化合物clxxx(２７９mg,０.５４mmol)を無水DMF(６mL)に溶解する。HOAt(８２mg,０.６５mmol)を加え、反応物を室温にて２５分間攪拌する。次いで、反応物を氷浴で冷却する。次いで、DIC(０.１１mL,０.６５mmol)を加え、次いで、無水DMF(４mL)中の化合物xiii'(０.７mmol)を加える。反応物を室温まで昇温させ、２１時間攪拌する。次いで、反応物を１２０mLのEtOAcを入れた分液ロートに入れ、１N HCl(５０mL)で２回および食塩水で１回洗浄する。有機層を分離し、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を減圧蒸発し、生成物をクロマトグラフィー／シリカゲル(DCMをロードし、５０％EtOAc／ヘキサン、次いで、３％MeOH／EtOAc、次いで、２０％EtOH／EtOAcで溶離)にて精製する。溶媒を除去した後、残渣をDri Solv THEに再溶解し、シリカゲルを濾去する。次いで、溶媒を除去して、化合物clxxxi(４３４mg,６４％収率)を得る。
中間体実施例１７１−化合物clxxxiii
不活性雰囲気下、丸底フラスコ中、６−ヒドロキシピコリン酸(１５３mg,１.１mmol)を無水DMF(６mL)に溶解する。
HOAt(１５１mg,１.２mmol)を加え、次いで、反応物を室温にて２５分間攪拌する。次いで、反応物を氷浴で冷却する。次いで、DIC(０.２mL,０.１６g,１.２mmol)を加え、次いで、無水DMF(４mL)中の化合物clxxxii(１.０mmol,４３５mg.)を加える。
反応物を室温まで昇温させ、２日間攪拌する。次いで、反応物を１２０mLのEtOAcを含む分液ロートに入れ、１N HCl(５０mL)で２回、食塩水で１回洗浄する。有機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）する。溶媒を減圧蒸発し、生成物をクロマトグラフィー／シリカゲル(DCMをロードし、３０％、次いで、５０％EtOAc／DCM、次いで、２％MeOH／EtOAcで溶離)にて精製して、回収して化合物clxxxiii(３１４mg,５６％)を得る。
不活性雰囲気下、丸底フラスコ中、６−ヒドロキシピコリン酸(１５３mg,１.１mmol)を無水DMF(６mL)に溶解する。
中間体実施例１７２−化合物clxxxiv
出発物質clxxxiii(３１４mg,０.５６mmol)をジオキサン(５mL)および０.５M NaOH(３.４mL,３eq)に溶解する。反応物を一夜行う。１００％EtOAcにおけるTLC(UVを用いる)により、起点における遅移動生成物への完全な転換が示される。１N HClで反応物をｐＨ２まで酸性化し、次いで、EtOAcで２回抽出する。水性層に固体NaClを加えて抽出を促進する。次いで、有機抽出物を合わせ、乾燥（硫酸マグネシウム）し、次いで、減圧蒸発して、化合物clxxxiv(０.５mmol,８９％)を得、次ステップに用いる。
出発物質clxxxiii(３１４mg,０.５６mmol)をジオキサン(５mL)および０.５M NaOH(３.４mL,３eq)に溶解する。反応物を一夜行う。１００％EtOAcにおけるTLC(UVを用いる)により、起点における遅移動生成物への完全な転換が示される。１N HClで反応物をｐＨ２まで酸性化し、次いで、EtOAcで２回抽出する。水性層に固体NaClを加えて抽出を促進する。次いで、有機抽出物を合わせ、乾燥（硫酸マグネシウム）し、次いで、減圧蒸発して、化合物clxxxiv(０.５mmol,８９％)を得、次ステップに用いる。
中間体実施例１７３−化合物clxxxv
不活性雰囲気下、丸底フラスコ中、酸化合物clxxxiv(２６５mg,０.５mmol)を無水DMF(６mL)に溶解する。HOAT(７５.６mg,０.６mmol)を加え、反応物を室温にて２５分間攪拌する。次いで、反応物を氷浴で冷却する。次いで、DIC(０.１mL,０.６mmolを加え、次いで、無水DMF(４mL)中の化合物xiii'(０.６５mmol)を加える。反応物を室温まで昇温させ、２１時間攪拌する。次いで、反応物をEtOAc(１２０mL)を入れた分液ロートに入れ、１N HCl(５０mL)で２回および食塩水で１回洗浄する。有機層を分離し、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を減圧蒸発し、生成物をクロマトグラフィー／シリカゲル(DCMをロードし、５０％EtOAc／ヘキサン、次いで、純EtOAc、次いで、４％EtOH／EtOAcで溶離)にて精製して、化合物clxxxv(１８５mg,５２％)を得る。
不活性雰囲気下、丸底フラスコ中、酸化合物clxxxiv(２６５mg,０.５mmol)を無水DMF(６mL)に溶解する。HOAT(７５.６mg,０.６mmol)を加え、反応物を室温にて２５分間攪拌する。次いで、反応物を氷浴で冷却する。次いで、DIC(０.１mL,０.６mmolを加え、次いで、無水DMF(４mL)中の化合物xiii'(０.６５mmol)を加える。反応物を室温まで昇温させ、２１時間攪拌する。次いで、反応物をEtOAc(１２０mL)を入れた分液ロートに入れ、１N HCl(５０mL)で２回および食塩水で１回洗浄する。有機層を分離し、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を減圧蒸発し、生成物をクロマトグラフィー／シリカゲル(DCMをロードし、５０％EtOAc／ヘキサン、次いで、純EtOAc、次いで、４％EtOH／EtOAcで溶離)にて精製して、化合物clxxxv(１８５mg,５２％)を得る。
中間体実施例１７４−化合物cxxxxiv'
１N NaOH(１５２mL,１５２mmol)中のＤ−アラニン(５g,５６.１mmol)の溶液に０℃にてジエチルエーテル(３０mL)中のMeOC(O)Cl(６.５mL,８４.２mmol)の溶液を加える。混合物を氷浴で３時間攪拌し、次いで、１N NaOHでｐＨ９に調節する。室温にて１時間攪拌した後、混合物をエーテル(３x５０mL)で洗浄し、５N HClでｐＨ〜２に酸性化し、EtOAc(５x５０mL)で抽出する。有機抽出物を水、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を除去して、化合物cxxxiv,N−メトキシカルボニル−Ｄ−アラニン,(６.４８g,７９％)を無色油状物で得る。
１N NaOH(１５２mL,１５２mmol)中のＤ−アラニン(５g,５６.１mmol)の溶液に０℃にてジエチルエーテル(３０mL)中のMeOC(O)Cl(６.５mL,８４.２mmol)の溶液を加える。混合物を氷浴で３時間攪拌し、次いで、１N NaOHでｐＨ９に調節する。室温にて１時間攪拌した後、混合物をエーテル(３x５０mL)で洗浄し、５N HClでｐＨ〜２に酸性化し、EtOAc(５x５０mL)で抽出する。有機抽出物を水、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を除去して、化合物cxxxiv,N−メトキシカルボニル−Ｄ−アラニン,(６.４８g,７９％)を無色油状物で得る。
中間体実施例１７５−化合物clxxxvi
氷浴で冷却したDCM(１０mL)中のN−メトキシカルボニル−Ｄ−アラニン(０.１９３g,１.３１mmol)およびHOAt(０.１７７g,１.３１mmol)の溶液をDCC(１.３１mL,１.３１mmol)で処理する。氷浴中で０.５時間攪拌後、THF(８.８mL)中の調製した化合物clxxxii(０.８８mmol)の溶液を加える。混合物を室温まで温め、一夜攪拌し、次いで、氷浴で冷却し、飽和NaHCO３溶液で処理して反応を停止する。沈殿を濾過し、濾液にEtOAc(１００mL)を加える。有機層を飽和NaHCO３溶液、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を除去した後、残渣をシリカカラムクロマトグラフィー(６０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clxxxvi(０.３２１g,６８％)をゴム性泡状物で得る。
氷浴で冷却したDCM(１０mL)中のN−メトキシカルボニル−Ｄ−アラニン(０.１９３g,１.３１mmol)およびHOAt(０.１７７g,１.３１mmol)の溶液をDCC(１.３１mL,１.３１mmol)で処理する。氷浴中で０.５時間攪拌後、THF(８.８mL)中の調製した化合物clxxxii(０.８８mmol)の溶液を加える。混合物を室温まで温め、一夜攪拌し、次いで、氷浴で冷却し、飽和NaHCO３溶液で処理して反応を停止する。沈殿を濾過し、濾液にEtOAc(１００mL)を加える。有機層を飽和NaHCO３溶液、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を除去した後、残渣をシリカカラムクロマトグラフィー(６０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物clxxxvi(０.３２１g,６８％)をゴム性泡状物で得る。
中間体実施例１７６−化合物clxxxvii
EtOH(５mL)中の化合物clxxxvi(０.３２１g,０.５９７mmol)の溶液に５℃にて２N NaOH(１.０５mL,２.１mmol)を加える。混合物を室温にて４時間攪拌する。１N HClで溶液をｐＨ~２に酸性化し、EtOHを回転蒸発にて除去する。混合物をEtOAc(３x３０mL)で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を除去し、残渣を減圧乾燥して、化合物clxxxvii(０.２３５g,７７％)を泡状物で得る。
EtOH(５mL)中の化合物clxxxvi(０.３２１g,０.５９７mmol)の溶液に５℃にて２N NaOH(１.０５mL,２.１mmol)を加える。混合物を室温にて４時間攪拌する。１N HClで溶液をｐＨ~２に酸性化し、EtOHを回転蒸発にて除去する。混合物をEtOAc(３x３０mL)で抽出し、合わせた抽出物を食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を除去し、残渣を減圧乾燥して、化合物clxxxvii(０.２３５g,７７％)を泡状物で得る。
中間体実施例１７７−化合物clxxxviii
DCM(１０mL)中の化合物clxxxvii(０.３６３g,０.７１２mmol)の溶液を氷浴で冷却し、PyBOP(０.５９４g,１.１４mmol)で処理する。室温にて０.５時間攪拌後、混合物を氷浴で冷却し、THF(１１mL)中の化合物xiii'(１.１mmol)の溶液およびDIPEA(０.２４９mL,１.４２mmol)で処理する。混合物を室温にて一夜攪拌し、NH４Cl溶液で処理して反応を停止する。溶媒を濃縮し、混合物をEtOAc(１００mL)に加える。有機層を飽和NaHCO３溶液、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を除去した後、残渣をカラムクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、clxxxviii(０.３４１g,７１％)を得る。
DCM(１０mL)中の化合物clxxxvii(０.３６３g,０.７１２mmol)の溶液を氷浴で冷却し、PyBOP(０.５９４g,１.１４mmol)で処理する。室温にて０.５時間攪拌後、混合物を氷浴で冷却し、THF(１１mL)中の化合物xiii'(１.１mmol)の溶液およびDIPEA(０.２４９mL,１.４２mmol)で処理する。混合物を室温にて一夜攪拌し、NH４Cl溶液で処理して反応を停止する。溶媒を濃縮し、混合物をEtOAc(１００mL)に加える。有機層を飽和NaHCO３溶液、食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）する。溶媒を除去した後、残渣をカラムクロマトグラフィー(５％EtOH／EtOAc)にて精製して、clxxxviii(０.３４１g,７１％)を得る。
中間体実施例１７８−化合物clxxxix
ジアミノプロピオン酸(３g,２８.７mmol)を１Ｍ NaOH(８６.２mL,８６.２mmol)に加え、０℃に冷却し、次いで、MeOC(O)Cl(５.５４mL,７１.７５mmol)をEt２O(２５mL)に加える。得られる混合物を室温まで温めながら一夜攪拌する。反応混合物のｐＨを２まで下げ、水性層をEtOAcで３回抽出する。抽出物を合わせ、乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮して、化合物clxxxix(３.０９g,４８.９％)を得る。
ジアミノプロピオン酸(３g,２８.７mmol)を１Ｍ NaOH(８６.２mL,８６.２mmol)に加え、０℃に冷却し、次いで、MeOC(O)Cl(５.５４mL,７１.７５mmol)をEt２O(２５mL)に加える。得られる混合物を室温まで温めながら一夜攪拌する。反応混合物のｐＨを２まで下げ、水性層をEtOAcで３回抽出する。抽出物を合わせ、乾燥(硫酸ナトリウム）し、濾過し、濃縮して、化合物clxxxix(３.０９g,４８.９％)を得る。
中間体実施例１７９−化合物cc
化合物clxxxix(３４０mg,１.５５mmol)をDCM(４mL)に加える。DCC(１.７mmol)およびHOAt(２３５mg,１.７mmol)を加え、次いで、DCM(３.４mL)中の化合物clxxxii(１.７mmol)を加える。反応混合物を一夜攪拌する。翌日、反応混合物をシリカパッドで濾過し、濃縮する。７５％EtOAc／ヘキサンにて精製を行い、化合物clxxxx(７１５mg,７２.４％)を得る。
化合物clxxxix(３４０mg,１.５５mmol)をDCM(４mL)に加える。DCC(１.７mmol)およびHOAt(２３５mg,１.７mmol)を加え、次いで、DCM(３.４mL)中の化合物clxxxii(１.７mmol)を加える。反応混合物を一夜攪拌する。翌日、反応混合物をシリカパッドで濾過し、濃縮する。７５％EtOAc／ヘキサンにて精製を行い、化合物clxxxx(７１５mg,７２.４％)を得る。
中間体実施例１８０−化合物clxxxxi
標準的条件下、EtOH(４mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物clxxxx(７１５mg,１.１２mmol)を加水分解して、化合物clxxxxi(６００mg,８８.０％)を得る。
標準的条件下、EtOH(４mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物clxxxx(７１５mg,１.１２mmol)を加水分解して、化合物clxxxxi(６００mg,８８.０％)を得る。
中間体実施例１８１−化合物clxxxxii
化合物clxxxxi(５５０mg,０.９mmol)をDCM(８mL)に加える。PyBOP(６７５mg,１.３mmol)を加え、次いで、THF(１.３mL)中の化合物xiii'(１.３mmol)を加える。DIPEA(０.２３mL,１.３mmol)を加え、得られる溶液を一夜攪拌する。翌日、反応物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３、次いで、食塩水で洗浄した後、濃縮して、残渣を得る。得られる残渣を５％EtOH／EtOAcにて精製して、化合物clxxxxii(２９０mg,４１.５％)を得る。
化合物clxxxxi(５５０mg,０.９mmol)をDCM(８mL)に加える。PyBOP(６７５mg,１.３mmol)を加え、次いで、THF(１.３mL)中の化合物xiii'(１.３mmol)を加える。DIPEA(０.２３mL,１.３mmol)を加え、得られる溶液を一夜攪拌する。翌日、反応物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３、次いで、食塩水で洗浄した後、濃縮して、残渣を得る。得られる残渣を５％EtOH／EtOAcにて精製して、化合物clxxxxii(２９０mg,４１.５％)を得る。
中間体実施例１８２−化合物clxxxxiii
標準的条件下、MeOH(６０mL)および１N NaOH(５２.８mL,３eq)を用いて、Cbz−シクロヘキシグリシン−tert−ロイシンメチルエステル(７.３６g,１７.６mmol)を加水分解して、中間体clxxxxiii(９２％)を得る。
標準的条件下、MeOH(６０mL)および１N NaOH(５２.８mL,３eq)を用いて、Cbz−シクロヘキシグリシン−tert−ロイシンメチルエステル(７.３６g,１７.６mmol)を加水分解して、中間体clxxxxiii(９２％)を得る。
中間体実施例１８３−化合物clxxxxiv
化合物clxxxxiii(３.８２g,９.４６mmol)をDCM(３０mL)に加える。DCM(１１.３５mL)中のDCC(１１.３５mmol)を加え、次いで、HOAt(１.５４g,１１.３５mmol)を加える。得られる混合物を５分間攪拌し、THF(４０mL)中の化合物v(９.４６mmol)を加える。得られる混合物を一夜攪拌する。翌日、反応混合物をEtOAcで希釈し、１N HCl、飽和NaHCO３次いで、食塩水で洗浄した後、濃縮して残渣を得る。得られる残渣を２０％〜３０％勾配／シリカゲルにて精製して、化合物clxxxxiv(３.０３g,５６.３％)を得る。
化合物clxxxxiii(３.８２g,９.４６mmol)をDCM(３０mL)に加える。DCM(１１.３５mL)中のDCC(１１.３５mmol)を加え、次いで、HOAt(１.５４g,１１.３５mmol)を加える。得られる混合物を５分間攪拌し、THF(４０mL)中の化合物v(９.４６mmol)を加える。得られる混合物を一夜攪拌する。翌日、反応混合物をEtOAcで希釈し、１N HCl、飽和NaHCO３次いで、食塩水で洗浄した後、濃縮して残渣を得る。得られる残渣を２０％〜３０％勾配／シリカゲルにて精製して、化合物clxxxxiv(３.０３g,５６.３％)を得る。
中間体実施例１８３−化合物clxxxii
Ｈ２下、MeOH(３０mL)中の１０％Pd／C(５００mg)を用いて、化合物clxxxxiv(３.０３g,５.３３mmol)を４時間水素添加して、化合物clxxxii(２.３g,９９％)を得る。
Ｈ２下、MeOH(３０mL)中の１０％Pd／C(５００mg)を用いて、化合物clxxxxiv(３.０３g,５.３３mmol)を４時間水素添加して、化合物clxxxii(２.３g,９９％)を得る。
中間体実施例１８４−化合物clxxxxv
MeOH(４０mL)中の１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸(２.８６g,２０mmol)の溶液にSOCl２(３mL)を０℃にて滴下する。混合物をゆっくりと室温まで温め、次いで、５時間還流する。次いで、透明な溶液にEt２Ｏを加え、沈殿を単離する。固体をさらに減圧乾燥して、化合物clxxxxv(９５％)を白色粉末で得る。
MeOH(４０mL)中の１−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸(２.８６g,２０mmol)の溶液にSOCl２(３mL)を０℃にて滴下する。混合物をゆっくりと室温まで温め、次いで、５時間還流する。次いで、透明な溶液にEt２Ｏを加え、沈殿を単離する。固体をさらに減圧乾燥して、化合物clxxxxv(９５％)を白色粉末で得る。
中間体実施例１８５−化合物clxxxxvi
２−ピラジンカルボン酸(１g,８mmol,１eq)をDCM(１５mL)に溶解し、HOAt(１.１g,８mmol)およびDCM中のDCC(８mL,１ M)を加える。室温にて２０分間攪拌後、活性化混合物に化合物clxxxxv(１.３g,８mmol)を加える。DIPEA(２mL,１２mmol)を連続的に加え、次いで、DMAP(１.５g,１２mmol)を加える。室温にて３日間攪拌した後、反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して、所望の生成物clxxxxviをカラムクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、黄色油状物(２.１g,１００％)を得る。
２−ピラジンカルボン酸(１g,８mmol,１eq)をDCM(１５mL)に溶解し、HOAt(１.１g,８mmol)およびDCM中のDCC(８mL,１ M)を加える。室温にて２０分間攪拌後、活性化混合物に化合物clxxxxv(１.３g,８mmol)を加える。DIPEA(２mL,１２mmol)を連続的に加え、次いで、DMAP(１.５g,１２mmol)を加える。室温にて３日間攪拌した後、反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して、所望の生成物clxxxxviをカラムクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、黄色油状物(２.１g,１００％)を得る。
中間体実施例１８６−化合物clxxxxvii
化合物clxxxxvi(１.０６g,２.６mmol)をMeOH(３０mL)に溶解し、２N NaOH(aq)(１２mL,２４mmol)を加える。溶液を室温にて一夜攪拌すると、TLC(５０％EtOAc／ヘキサン)により、完全な加水分解が示される。次いで、５N HClによって溶液をｐＨ３に酸性化し、EtOAcで希釈し、次いで、有機層を抽出する。有機層を食塩水で連続的に洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物clxxxxvii(８４％)を得る。
化合物clxxxxvi(１.０６g,２.６mmol)をMeOH(３０mL)に溶解し、２N NaOH(aq)(１２mL,２４mmol)を加える。溶液を室温にて一夜攪拌すると、TLC(５０％EtOAc／ヘキサン)により、完全な加水分解が示される。次いで、５N HClによって溶液をｐＨ３に酸性化し、EtOAcで希釈し、次いで、有機層を抽出する。有機層を食塩水で連続的に洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、濃縮して、化合物clxxxxvii(８４％)を得る。
中間体実施例１８７−化合物clxxxxviii
化合物clxxxvii(１.６g,６.４mmol)をDCM(１８mL)に溶解し、次いで、HOAt(０.９６g,７mmol)およびDCC(７mL,１Ｍ DCM溶液)を室温にて連続的に加える。室温にて２０分間攪拌した後、活性化混合物にL−tert−ロイシンメチルエステル塩酸塩(７mL,１Ｍ THF溶液)を加える。DIPEA(１.２mL,７mmol)を連続的に加え、次いで、DMAP(１.２g,９.８mmol)を加える。室温にて３日間攪拌した後、反応混合物をセライトで濾過し、カラムクロマトグラフィー(６０％EtOAc／ヘキサン)にて精製し、濃縮して、化合物clxxxxviii(１.７４g,７２％)を白色固体で得る。
化合物clxxxvii(１.６g,６.４mmol)をDCM(１８mL)に溶解し、次いで、HOAt(０.９６g,７mmol)およびDCC(７mL,１Ｍ DCM溶液)を室温にて連続的に加える。室温にて２０分間攪拌した後、活性化混合物にL−tert−ロイシンメチルエステル塩酸塩(７mL,１Ｍ THF溶液)を加える。DIPEA(１.２mL,７mmol)を連続的に加え、次いで、DMAP(１.２g,９.８mmol)を加える。室温にて３日間攪拌した後、反応混合物をセライトで濾過し、カラムクロマトグラフィー(６０％EtOAc／ヘキサン)にて精製し、濃縮して、化合物clxxxxviii(１.７４g,７２％)を白色固体で得る。
中間体実施例１８８−化合物cic
化合物clxxxxviii(１.７４g,４.６mmol)をMeOH(２２mL)に溶解し、２N NaOH(aq)(７mL,１４mmol)を加える。溶液を室温にて一夜攪拌すると、TLC(５０％EtOAc／ヘキサン)により、完全な加水分解が示される。５N HClによって溶液をｐＨ３に酸性化し、EtOAcで希釈し、次いで、有機層を抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、次いで、濃縮して、化合物cic(１００％)を得る。
化合物clxxxxviii(１.７４g,４.６mmol)をMeOH(２２mL)に溶解し、２N NaOH(aq)(７mL,１４mmol)を加える。溶液を室温にて一夜攪拌すると、TLC(５０％EtOAc／ヘキサン)により、完全な加水分解が示される。５N HClによって溶液をｐＨ３に酸性化し、EtOAcで希釈し、次いで、有機層を抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、乾燥(硫酸マグネシウム）し、次いで、濃縮して、化合物cic(１００％)を得る。
中間体実施例１８９−化合物cc
化合物cic(１.５g,４.１mmol)のDCM溶液(１５mL)に室温にてHOAt(６１０mg,４.５mmol)、次いで、DCM中の１Ｍ DCC溶液(４.５mL,４.５mmol)を加える。室温にて３０分間攪拌した後、次いで、化合物v(４mmol)のTHF溶液(２０mL,０.２M)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌し、次いで、反応物をセライトで濾過する。濾液を濃縮して得た黄色油状物をシリカゲルクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cci(６６０mg,３２％)を得る。
化合物cic(１.５g,４.１mmol)のDCM溶液(１５mL)に室温にてHOAt(６１０mg,４.５mmol)、次いで、DCM中の１Ｍ DCC溶液(４.５mL,４.５mmol)を加える。室温にて３０分間攪拌した後、次いで、化合物v(４mmol)のTHF溶液(２０mL,０.２M)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌し、次いで、反応物をセライトで濾過する。濾液を濃縮して得た黄色油状物をシリカゲルクロマトグラフィー(５０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、化合物cci(６６０mg,３２％)を得る。
中間体実施例１９０−化合物cci
化合物cc(６００mg,１.１３mmol)のEtOH溶液(６mL)に２N NaOH(１.７mL,３.４mmol)を加える。反応物を室温にて２時間攪拌し、次いで、５N HClによってｐＨ３に酸性化する。次いで、混合物をEtOAcで希釈し、次いで、有機層を抽出する。続いて、有機層を食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮してして、化合物cci(９２％)を得る。
化合物cc(６００mg,１.１３mmol)のEtOH溶液(６mL)に２N NaOH(１.７mL,３.４mmol)を加える。反応物を室温にて２時間攪拌し、次いで、５N HClによってｐＨ３に酸性化する。次いで、混合物をEtOAcで希釈し、次いで、有機層を抽出する。続いて、有機層を食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮してして、化合物cci(９２％)を得る。
中間体実施例１９１−化合物ccii
ccii(３１０mg,０.６２mmol)のDCM溶液(８mL)にPyBOP(４２０mg,０.８mmol)を加える。溶液を室温にて３０分間攪拌する。次いで、この溶液に、THF中の化合物xiii'(８mL,０.１M)を加え、次いで、DIPEA(０.２３mL,１.３mmol)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水(２５mL)で３０分間処理して反応を停止する。次いで、混合物をEtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(３％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物ccii(１４０mg,３３％)を得る。
ccii(３１０mg,０.６２mmol)のDCM溶液(８mL)にPyBOP(４２０mg,０.８mmol)を加える。溶液を室温にて３０分間攪拌する。次いで、この溶液に、THF中の化合物xiii'(８mL,０.１M)を加え、次いで、DIPEA(０.２３mL,１.３mmol)を加える。反応物を室温にて一夜攪拌し、次いで、水(２５mL)で３０分間処理して反応を停止する。次いで、混合物をEtOAcで抽出する。得られる有機層を食塩水で洗浄し、次いで、乾燥(硫酸マグネシウム）し、濃縮して、黄色油状物を得る。シリカゲルクロマトグラフィー(３％EtOH／EtOAc)にて精製して、化合物ccii(１４０mg,３３％)を得る。
中間体実施例１９２−化合物ccxiv
無水DCM(４８mL)中の化合物cciii,tert−ブチル(N−ジフェニルメチレン)−グリシンエステル,(６g,０.０２０６mmol)およびキラルPTC(１.０８g,０.００２０６mmol)の溶液に、窒素雰囲気下、−６０℃にてCsOH・H２O(６.９g,０.０４１２mmol)を加える。反応混合物にDCM１０mL中の１−カルボキシ−l−シクロペンテンメチルエステル(５.２mL,０.０４１２mmol)を滴下する。混合物を−６０℃にて４日間攪拌し、次いで、２００mLのEt２Oで希釈し、１５mLの飽和NH４Cl水溶液を加える。相を分離し、有機相を１５mLの水および１５mLの食塩水で洗浄する。水性相を１００mLのEt２Oで抽出する。有機相を合わせ、乾燥（硫酸ナトリウム）する。溶媒を除去して粗生成物を得、１００mLのEtOHに溶解し、次いで、NH２OH・HCl(１.４３g,０.０２０６mmol)およびNaOAc(１.６８g,０.０２０６mmol)を加える。混合物を４８時間還流する。次いで、溶媒を除去し、得られた粗残渣を３０％−５０％EtOAc／ヘキサンで溶離するフラッシュクロマトグラフィーで直接精製して、化合物cciv(６５％)を白色固体で得る。C１２H１９NO３(MW=２２５.２９)；MS：m／z(M++１)=２２６.５。エナニオマー過剰：１８％ee,キラルHPLCにより測定。
無水DCM(４８mL)中の化合物cciii,tert−ブチル(N−ジフェニルメチレン)−グリシンエステル,(６g,０.０２０６mmol)およびキラルPTC(１.０８g,０.００２０６mmol)の溶液に、窒素雰囲気下、−６０℃にてCsOH・H２O(６.９g,０.０４１２mmol)を加える。反応混合物にDCM１０mL中の１−カルボキシ−l−シクロペンテンメチルエステル(５.２mL,０.０４１２mmol)を滴下する。混合物を−６０℃にて４日間攪拌し、次いで、２００mLのEt２Oで希釈し、１５mLの飽和NH４Cl水溶液を加える。相を分離し、有機相を１５mLの水および１５mLの食塩水で洗浄する。水性相を１００mLのEt２Oで抽出する。有機相を合わせ、乾燥（硫酸ナトリウム）する。溶媒を除去して粗生成物を得、１００mLのEtOHに溶解し、次いで、NH２OH・HCl(１.４３g,０.０２０６mmol)およびNaOAc(１.６８g,０.０２０６mmol)を加える。混合物を４８時間還流する。次いで、溶媒を除去し、得られた粗残渣を３０％−５０％EtOAc／ヘキサンで溶離するフラッシュクロマトグラフィーで直接精製して、化合物cciv(６５％)を白色固体で得る。C１２H１９NO３(MW=２２５.２９)；MS：m／z(M++１)=２２６.５。エナニオマー過剰：１８％ee,キラルHPLCにより測定。
中間体実施例１９３−化合物ccv
６０mLのACN中の化合物cciv(２g,０.００８８mmol)の溶液に、触媒量のDMAP(０.２１６g,０.００１７mmol)および３０mLのACN中のジ−tert−ブチル−ジ−カーボネート(２.４９g,０.０１１mmol)の溶液を加える。混合物を室温にて１４時間攪拌し、次いで、１００mLのDCMで希釈し、飽和NaHCO３(１０mL)および食塩水(１０mL)で洗浄する。有機相を乾燥（硫酸ナトリウム）する。溶媒を蒸発して、粗生成物を得、１５％EtOAc／ヘキサンで溶離するシリカゲルカラムにて精製して、化合物ccv(８６％)を白色固体で得る。C１７H２７NO５ MW=３２５,４０ MS：m／z(M++１)=３２６.２
６０mLのACN中の化合物cciv(２g,０.００８８mmol)の溶液に、触媒量のDMAP(０.２１６g,０.００１７mmol)および３０mLのACN中のジ−tert−ブチル−ジ−カーボネート(２.４９g,０.０１１mmol)の溶液を加える。混合物を室温にて１４時間攪拌し、次いで、１００mLのDCMで希釈し、飽和NaHCO３(１０mL)および食塩水(１０mL)で洗浄する。有機相を乾燥（硫酸ナトリウム）する。溶媒を蒸発して、粗生成物を得、１５％EtOAc／ヘキサンで溶離するシリカゲルカラムにて精製して、化合物ccv(８６％)を白色固体で得る。C１７H２７NO５ MW=３２５,４０ MS：m／z(M++１)=３２６.２
中間体実施例１９４−化合物ccvi
５０mLのTHF(０.１４M)中の化合物ccv(１.７g,０.００５２mmol)の溶液に−７８℃にてDIBAL−H(７.８mL,０.００７８mmol)を加える。混合物を１時間攪拌し、次いで、１０mLのMeOHを加える。混合物を２５mLのEtOAcおよび２５mLの飽和酒石酸ナトリウム水溶液で希釈し、次いで、室温にて１時間攪拌する。相を分離し、水性相を５０mLのEtOAcで１回抽出する。有機相を合わせ、乾燥（硫酸ナトリウム）する。溶媒を蒸発して、粗残渣を得、精製することなく用いる。粗物質を２５mLのDCMに溶解し、Et３Si(０.８４mL,０.００５２mmol)を加え、次いで、混合物を−７８℃に冷却した後、BP３OEt２(０.７１mL,０.００６１mmol)を滴下する。３０分後、Et３Si(０.８４mL)およびBF３OEt２(０.７１mL)を加え、混合物を−７８℃にて２時間攪拌する。次いで、反応物を飽和水性NaHCO３(１０mL)で処理して反応を停止し、DCM(２x２０mL)で抽出する。有機相を合わせ、乾燥（硫酸ナトリウム）する。溶媒を蒸発して粗残渣を得、１３％EtOAc／ヘキサンで溶離するフラッシュクロマトグラフィーにて精製して、化合物ccvi(８７％)を得る。C１７H２９NO４ MW=３１１,４２ MS：m／z(M++１)=３１２.６
５０mLのTHF(０.１４M)中の化合物ccv(１.７g,０.００５２mmol)の溶液に−７８℃にてDIBAL−H(７.８mL,０.００７８mmol)を加える。混合物を１時間攪拌し、次いで、１０mLのMeOHを加える。混合物を２５mLのEtOAcおよび２５mLの飽和酒石酸ナトリウム水溶液で希釈し、次いで、室温にて１時間攪拌する。相を分離し、水性相を５０mLのEtOAcで１回抽出する。有機相を合わせ、乾燥（硫酸ナトリウム）する。溶媒を蒸発して、粗残渣を得、精製することなく用いる。粗物質を２５mLのDCMに溶解し、Et３Si(０.８４mL,０.００５２mmol)を加え、次いで、混合物を−７８℃に冷却した後、BP３OEt２(０.７１mL,０.００６１mmol)を滴下する。３０分後、Et３Si(０.８４mL)およびBF３OEt２(０.７１mL)を加え、混合物を−７８℃にて２時間攪拌する。次いで、反応物を飽和水性NaHCO３(１０mL)で処理して反応を停止し、DCM(２x２０mL)で抽出する。有機相を合わせ、乾燥（硫酸ナトリウム）する。溶媒を蒸発して粗残渣を得、１３％EtOAc／ヘキサンで溶離するフラッシュクロマトグラフィーにて精製して、化合物ccvi(８７％)を得る。C１７H２９NO４ MW=３１１,４２ MS：m／z(M++１)=３１２.６
中間体実施例１９５−化合物ccvii
化合物ccvi(０.５g,０.００１６mmol)を８mLのEtOAc中の１N HCl(無水EtOAcに無水HClを通気し、次いで、さらなるEtOAcで１Nに希釈することによって製造)に溶解する。混合物を室温にて６時間攪拌する。溶媒を減圧除去し、得られる沈殿をEt２Oに溶解する。混合物を１５分間攪拌した後、溶媒を減圧除去する。得られる白色固体をEt２Oで洗浄し、濾過によって化合物ccvii(０.２７g,８０％収率)を単離する。C１２H２１NO２ MW ２１１,１５ MS：m／z(M++１)=２１２.６
化合物ccvi(０.５g,０.００１６mmol)を８mLのEtOAc中の１N HCl(無水EtOAcに無水HClを通気し、次いで、さらなるEtOAcで１Nに希釈することによって製造)に溶解する。混合物を室温にて６時間攪拌する。溶媒を減圧除去し、得られる沈殿をEt２Oに溶解する。混合物を１５分間攪拌した後、溶媒を減圧除去する。得られる白色固体をEt２Oで洗浄し、濾過によって化合物ccvii(０.２７g,８０％収率)を単離する。C１２H２１NO２ MW ２１１,１５ MS：m／z(M++１)=２１２.６
中間体実施例１９６−化合物v
DCM(３.７mL)中の化合物ccxvi(０.２３０g,０.７４mmol)の溶液にTFA(２.８５mL)を加える。混合物を一夜攪拌し、次いで、溶媒を減圧除去して乾固し、残渣をEtOH(７.５mL)に溶解する。混合物を０℃にて冷却し、SOC1２(０.２２mL,２.９６mmol)を滴下し、次いで、２時間還流する。EtOHを減圧除去し、残渣をDCM(１０mL)に溶解する。得られる溶液を飽和NaHCO３水溶液(５mL)で２回洗浄する。相を分離し、有機相を乾燥（硫酸ナトリウム）し、溶媒を減圧除去して、化合物v(８０％)を油状物で得る。C１０H１７NO２ M.W.：１８３.２５ MS：m／z(M++１)=１８４.２
DCM(３.７mL)中の化合物ccxvi(０.２３０g,０.７４mmol)の溶液にTFA(２.８５mL)を加える。混合物を一夜攪拌し、次いで、溶媒を減圧除去して乾固し、残渣をEtOH(７.５mL)に溶解する。混合物を０℃にて冷却し、SOC1２(０.２２mL,２.９６mmol)を滴下し、次いで、２時間還流する。EtOHを減圧除去し、残渣をDCM(１０mL)に溶解する。得られる溶液を飽和NaHCO３水溶液(５mL)で２回洗浄する。相を分離し、有機相を乾燥（硫酸ナトリウム）し、溶媒を減圧除去して、化合物v(８０％)を油状物で得る。C１０H１７NO２ M.W.：１８３.２５ MS：m／z(M++１)=１８４.２
中間体実施例１９７−化合物cd
１−ベンジルイミダゾール(６g,３７.９mmol)をEt２O(１８０mL)に加える。得られる溶液を−６０℃まで冷却し、n−BuLi(１.６M,２４mL)で処理する。反応物を３０分間攪拌し、次いで、混合物にCO２を１５分間通気する。沈殿を濾過し、Et２Oで濯ぎ、次いで、H２Oに加える。この水溶液を５N HClでｐＨ３まで酸性化する。凍結乾燥して、所望の生成物を白色固体で得る。
１−ベンジルイミダゾール(６g,３７.９mmol)をEt２O(１８０mL)に加える。得られる溶液を−６０℃まで冷却し、n−BuLi(１.６M,２４mL)で処理する。反応物を３０分間攪拌し、次いで、混合物にCO２を１５分間通気する。沈殿を濾過し、Et２Oで濯ぎ、次いで、H２Oに加える。この水溶液を５N HClでｐＨ３まで酸性化する。凍結乾燥して、所望の生成物を白色固体で得る。
中間体実施例１９８−化合物cdi
化合物i(９.２５g,２７.９mmol)のDCM溶液(１００mL)をDAST(９.２mL,６９.８mmol)で０℃にて処理する。室温にて一夜攪拌後、氷で処理して反応を停止し、DCM(２００mL)で抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、減圧濃縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(３０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、８.５g(８６％)の所望のフッ素化中間体を得る。この中間体(４.５g,１４.２mmol)の一部をEtOH(７５mL)に溶解する。この溶液をPd(OH)２／C(２.９８g,２０％Pd含量,４.２６mmol)を用いる標準的水素添加条件に付す。室温にて一夜攪拌した後、反応混合物をセライトで濾過する。濾液を減圧濃縮して、化合物cdi(２.５g,９６％)を得る。
化合物i(９.２５g,２７.９mmol)のDCM溶液(１００mL)をDAST(９.２mL,６９.８mmol)で０℃にて処理する。室温にて一夜攪拌後、氷で処理して反応を停止し、DCM(２００mL)で抽出する。有機層を食塩水で洗浄し、減圧濃縮する。残渣をシリカゲルクロマトグラフィー(３０％EtOAc／ヘキサン)にて精製して、８.５g(８６％)の所望のフッ素化中間体を得る。この中間体(４.５g,１４.２mmol)の一部をEtOH(７５mL)に溶解する。この溶液をPd(OH)２／C(２.９８g,２０％Pd含量,４.２６mmol)を用いる標準的水素添加条件に付す。室温にて一夜攪拌した後、反応混合物をセライトで濾過する。濾液を減圧濃縮して、化合物cdi(２.５g,９６％)を得る。
中間体実施例１９９−化合物cdii
cd(８９０mg,４.４mmol)の溶液にDCM(１５mL)を加える。HOBT(５９５mg,４.４mmol)およびDCC(４.４mmol,１Ｍ DCM溶液)を加え、２０分間攪拌する。この混合物にlxxix'(９９０mg,３.５mmol)のDCM溶液(１５mL)を加える。得られる混合物を窒素下一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を減圧濃縮して残渣を得、３０％EtOAc／ヘキサンにて精製して、化合物cdii(６６６mg,４１％)を得る。
cd(８９０mg,４.４mmol)の溶液にDCM(１５mL)を加える。HOBT(５９５mg,４.４mmol)およびDCC(４.４mmol,１Ｍ DCM溶液)を加え、２０分間攪拌する。この混合物にlxxix'(９９０mg,３.５mmol)のDCM溶液(１５mL)を加える。得られる混合物を窒素下一夜攪拌する。反応混合物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。有機層を減圧濃縮して残渣を得、３０％EtOAc／ヘキサンにて精製して、化合物cdii(６６６mg,４１％)を得る。
中間体実施例２００−化合物cdiii
標準的加水分解条件下、メチルアルコール(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物cdiiiを化合物cdiiから製造する。５６５mgの化合物cdiii(８８％)を回収する。
標準的加水分解条件下、メチルアルコール(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物cdiiiを化合物cdiiから製造する。５６５mgの化合物cdiii(８８％)を回収する。
中間体実施例２０１−化合物cdiv
化合物cdiii(１.２４mmol)をDCM(５mL)に加える。DCC(１.６mmol,１Ｍ DCM)を加え、次いで、HOAT(１.６mmol)を加える。得られる混合物を２０分間攪拌し、化合物cdi(１.６mmol)をTHF(８mL)に滴下する。反応物を一夜攪拌する。反応物を濾過し、EtOAcで濯ぐ。合わせた有機層を飽和NaHCO３、食塩水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、濃縮する。３０％EtOAc／ヘキサンで精製を行い、化合物cdiv(５６５mg,７０％)を得る。
化合物cdiii(１.２４mmol)をDCM(５mL)に加える。DCC(１.６mmol,１Ｍ DCM)を加え、次いで、HOAT(１.６mmol)を加える。得られる混合物を２０分間攪拌し、化合物cdi(１.６mmol)をTHF(８mL)に滴下する。反応物を一夜攪拌する。反応物を濾過し、EtOAcで濯ぐ。合わせた有機層を飽和NaHCO３、食塩水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）し、濃縮する。３０％EtOAc／ヘキサンで精製を行い、化合物cdiv(５６５mg,７０％)を得る。
中間体実施例２０２−cdv
標準的加水分解条件下、エチルアルコール(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物cdivから化合物cdv(５６５mg,０.８６mmol)を製造する。４９０mg(９１％)の化合物cdvを回収する。
標準的加水分解条件下、エチルアルコール(１０mL)および１N NaOH(３eq)を用いて、化合物cdivから化合物cdv(５６５mg,０.８６mmol)を製造する。４９０mg(９１％)の化合物cdvを回収する。
中間体実施例２０３−cdvi
化合物cdv(４９０mg,０.７８mmol)をDCM(１０mL)に加える。DCM溶液にPyBOP(５２０mg,１mmol)を加え、次いで、xiii(１８６mg,１mmol)のTHF溶液(１０mL)を加える。反応混合物にDIEA(０.１８mL,Immol)を加え、窒素下、一夜攪拌する。翌日、反応物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。１００％EtOAcにて精製を行い、化合物cdvi(４７８mg,７７％)を得る。
化合物cdv(４９０mg,０.７８mmol)をDCM(１０mL)に加える。DCM溶液にPyBOP(５２０mg,１mmol)を加え、次いで、xiii(１８６mg,１mmol)のTHF溶液(１０mL)を加える。反応混合物にDIEA(０.１８mL,Immol)を加え、窒素下、一夜攪拌する。翌日、反応物をEtOAcで希釈し、飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。１００％EtOAcにて精製を行い、化合物cdvi(４７８mg,７７％)を得る。
中間体実施例２０４−cdvii
MeOH(４０mL)中のPd(OH)２／C(２０％無水塩基,１００mg)を用いて、化合物cdvi(４７８mg,０.６mmol)を水素添加する。反応混合物を水素下、一夜攪拌する。この時点で、反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して、化合物cdvii(４１７mg,９８％)を得る。
MeOH(４０mL)中のPd(OH)２／C(２０％無水塩基,１００mg)を用いて、化合物cdvi(４７８mg,０.６mmol)を水素添加する。反応混合物を水素下、一夜攪拌する。この時点で、反応混合物をセライトで濾過し、濃縮して、化合物cdvii(４１７mg,９８％)を得る。
中間体実施例２０５−cdx
化合物cxxv(Albany Molecular Research Inc.から購入,１.５g,５.２mmol)をDCM(１５mL)に加える。この溶液にPyBOP(２.７g,５.２mmol)およびHOBT(７００mg,５.２mmol)を加える。上記溶液に(−)−アルファ−(４−ピリジル）エチルアミン(６４０mg,５.２mmol)のTHF溶液(１５mL)を加え、次いで、DIEA(０.９３mL,５.２mmol)を加える。[(−)−alpha−(４−ピリジル）エチルアミンは、(−)−alpha−(４−ピリジル）エチルアミンの酒石酸塩(Aldrich)を１N NaOH(２eq)とともに１時間攪拌し、次いで、EtOAc(３x)で抽出して得る。７０％収率]反応物を室温にて一夜攪拌する。反応混合物を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。生成物を５％EtOH／EtOAcにて精製して、２g(９９％)の中間体化合物cdxを得る。
化合物cxxv(Albany Molecular Research Inc.から購入,１.５g,５.２mmol)をDCM(１５mL)に加える。この溶液にPyBOP(２.７g,５.２mmol)およびHOBT(７００mg,５.２mmol)を加える。上記溶液に(−)−アルファ−(４−ピリジル）エチルアミン(６４０mg,５.２mmol)のTHF溶液(１５mL)を加え、次いで、DIEA(０.９３mL,５.２mmol)を加える。[(−)−alpha−(４−ピリジル）エチルアミンは、(−)−alpha−(４−ピリジル）エチルアミンの酒石酸塩(Aldrich)を１N NaOH(２eq)とともに１時間攪拌し、次いで、EtOAc(３x)で抽出して得る。７０％収率]反応物を室温にて一夜攪拌する。反応混合物を飽和NaHCO３および食塩水で洗浄する。生成物を５％EtOH／EtOAcにて精製して、２g(９９％)の中間体化合物cdxを得る。
中間体実施例２０６−cdviii
MｅOH(５０mL)中の１０％Pd／C(５００mg)を用いて、化合物cdx(２g,５.２mmol)を水素添加する。反応混合物水素下、一夜攪拌する。生成物をセライトで濾過し、濃縮して、化合物cdviii(１.３,g９８％)を得る。
MｅOH(５０mL)中の１０％Pd／C(５００mg)を用いて、化合物cdx(２g,５.２mmol)を水素添加する。反応混合物水素下、一夜攪拌する。生成物をセライトで濾過し、濃縮して、化合物cdviii(１.３,g９８％)を得る。
（薬理）
ＨＣＶプロテアーゼを阻害できることにとって有用である本明細書に記載する本発明化合物は、それゆえに、ＨＣＶ複製を阻害するのにも有用である。
したがって、本発明は、抗ＨＣＶプロテアーゼ阻害量の化合物１をＨＣＶプロテアーゼを含む組成物に接触させることを含むＨＣＶプロテアーゼを阻害する方法に関する。
さらに別の本発明は、ＨＣＶを有効量の化合物１に接触させることを含むＨＣＶの複製を阻害する方法に関する。
さらにまた別の本発明は、患者に医薬的有効量の化合物１を投与することを含むＨＣＶ感染に罹っている患者を治療する方法に関する。本明細書においてＨＣＶ感染の治療が意味するものは、患者の感染を本質的に治療し、感染の程度を阻止し、あるいは関連する生理的コンディションを改善するための、感染を予防または阻止するための予防的療法ならびに確立した急性または慢性ＨＣＶ感染もしくはＨＣＶ感染に関連する生理的コンディションの治療を包含すると理解すべきである。「有効量」は、妥当な生物学的判断の範囲内において効果的であり、不都合な毒性、刺激、アレルギー応答などを伴うことなく、ヒトまたは他の哺乳動物の細胞に接触させて用いるのに適しており、ＨＣＶ感染の治療において妥当な利点／リスク比に釣り合っており、したがって所望の治療効果を生み出す本発明化合物の量を意味する。
本明細書でもちいる生理的コンディションとは、抗ＨＣＶ治療が保証される起こり得る臨床的状態の幾つか（すべてではない）を包含する。この分野における専門家であれば、抗ＨＣＶ治療のいずれかを必要とする環境に対して十分に認識している。
ＨＣＶプロテアーゼを阻害できることにとって有用である本明細書に記載する本発明化合物は、それゆえに、ＨＣＶ複製を阻害するのにも有用である。
したがって、本発明は、抗ＨＣＶプロテアーゼ阻害量の化合物１をＨＣＶプロテアーゼを含む組成物に接触させることを含むＨＣＶプロテアーゼを阻害する方法に関する。
さらに別の本発明は、ＨＣＶを有効量の化合物１に接触させることを含むＨＣＶの複製を阻害する方法に関する。
さらにまた別の本発明は、患者に医薬的有効量の化合物１を投与することを含むＨＣＶ感染に罹っている患者を治療する方法に関する。本明細書においてＨＣＶ感染の治療が意味するものは、患者の感染を本質的に治療し、感染の程度を阻止し、あるいは関連する生理的コンディションを改善するための、感染を予防または阻止するための予防的療法ならびに確立した急性または慢性ＨＣＶ感染もしくはＨＣＶ感染に関連する生理的コンディションの治療を包含すると理解すべきである。「有効量」は、妥当な生物学的判断の範囲内において効果的であり、不都合な毒性、刺激、アレルギー応答などを伴うことなく、ヒトまたは他の哺乳動物の細胞に接触させて用いるのに適しており、ＨＣＶ感染の治療において妥当な利点／リスク比に釣り合っており、したがって所望の治療効果を生み出す本発明化合物の量を意味する。
本明細書でもちいる生理的コンディションとは、抗ＨＣＶ治療が保証される起こり得る臨床的状態の幾つか（すべてではない）を包含する。この分野における専門家であれば、抗ＨＣＶ治療のいずれかを必要とする環境に対して十分に認識している。
本発明化合物は単独で投与してもよいが、本発明の別の態様は、医薬組成物の形態において投与される本発明化合物を提供する。「医薬組成物」は、化合物１および投与様式の性質および投与剤形に応じた、保存剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、乳剤安定剤、懸濁剤、等張剤、甘味料、風味剤、芳香剤、着色剤、抗バクテリア剤、抗菌剤、抗真菌剤、他の治療剤、滑沢剤、吸着遅延または促進剤および調合剤といったような医薬的に許容しうる担体、希釈剤、コーティング剤、アジュバント、賦形剤またはビヒクルを含むグループから選ばれる少なくとも１つの成分を含む組成物を意味する。該組成物は、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、水溶液剤または懸濁剤、注射液、エリキシル剤またはシロップ剤の剤形をとることができる。懸濁剤の例として、エトキシル化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトールおよびソルビタンエステル、微結晶セルロース、メタ水酸化アルミニウム、ベントナイト、寒天およびトラガカントゴムまたはこれらの物質の混合物が挙げられる。微生物の活動を妨げるための抗菌剤および抗真菌剤の例として、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などが挙げられる。等張剤の例として、糖質、塩化ナトリウムなどが挙げられる。吸収を延長する吸着遅延剤の例として、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンが挙げられる。吸収を増進する吸着促進剤の例として、ジメチルスルホキシドおよび関連類縁体が挙げられる。担体、希釈剤、溶媒、ビヒクル、可溶化剤、乳化剤および乳剤安定剤の例として、水、クロロホルム、スクロース、エタノール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、テトラヒドロフルフリルアルコール、安息香酸ベンジル、ポリオール、プロピレングリコール、１,３−ブチレングリコール、グリセロール、ポリエチレングリコール、ジメチルホルムアミド、Tween（登録商標）６０、Span（登録商標）８０、セトステアリルアルコール、ミリスチルアルコール、モノステアリン酸グリセリルおよびラウリル硫酸ナトリウム、ソルビタンの脂肪酸エステル、植物油（綿実油、グラウンドナッツ油、トウモロコシ胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油およびゴマ油など）およびオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルまたはこれらの物質の適当な混合物が挙げられる。賦形剤の例として、ラクトース、乳糖、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸ジカルシウムが挙げられる。滑沢剤の例として、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、タルクならびに高分子量ポリエチレングリコールが挙げられる。
他の抗ＨＣＶ薬などの他の治療薬を本発明化合物と組み合わせて用いてもよい。公知の抗ＨＣＶ薬の例のいくつかとして、α−、β−またはγ−インターフェロンなどの免疫調節薬；ポリエチレングリコール付加（pegylated）誘導体化インターフェロンα化合物、リバビリンおよびアマンタジンなどの他の抗ウイルス薬；Ｃ型肝炎プロテアーゼの他のインヒビター；ヘリカーゼ、ポリメラーゼ、メタロプロテアーゼ、内部リボソームエントリーなどのＨＣＶライフサイクルにおける他の標的のインヒビター、またはＶＸ−４９７などの広域スペクトル抗ウイルス化合物、細胞イノシンモノリン酸デヒドロゲナーゼのインヒビター，ＩＭＰＤＨ，米国特許第５８０７８７６号に含まれる；またはその組み合わせが挙げられる。本発明化合物と組み合わせて用いる治療薬は、別時、同時または連続的に投与することができる。
化合物１以外の医薬組成物の構成要素の選択は、一般に、溶解度、投与の特定の様式および医薬的実施において挙行されるべき準備などの活性化合物の化学的特性にしたがって決定される。たとえば、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸ジカルシウムなどの賦形剤およびデンプン、アルギン酸および特定のケイ酸複合体などの崩壊剤ならびにステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクなどの滑沢剤を錠剤の製造に用いることができる。
医薬組成物は、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、水溶液剤または懸濁剤、注射液、エリキシル剤またはシロップ剤などの種々組み合わせた剤形で提供することができる。
化合物１以外の医薬組成物の構成要素の選択は、一般に、溶解度、投与の特定の様式および医薬的実施において挙行されるべき準備などの活性化合物の化学的特性にしたがって決定される。たとえば、ラクトース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸ジカルシウムなどの賦形剤およびデンプン、アルギン酸および特定のケイ酸複合体などの崩壊剤ならびにステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウムおよびタルクなどの滑沢剤を錠剤の製造に用いることができる。
医薬組成物は、錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、水溶液剤または懸濁剤、注射液、エリキシル剤またはシロップ剤などの種々組み合わせた剤形で提供することができる。
「液体投与剤形」は、患者に投与されるべき活性化合物の投与が、たとえば、医薬的に許容しうる乳剤、液剤、懸濁剤、シロップ剤およびエリキシル剤などの液体の形態であることを意味する。活性化合物に加えて、液体投与剤形は、溶媒、可溶化剤および乳化剤などの当業界で通例用いられる不活性希釈剤を含むことができる。
固体組成物は、ラクトースまたは乳頭ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いる軟および硬充填ゼラチンカプセルにおいて充填剤として用いることもできる。
水性懸濁剤を用いる場合、乳化剤または懸濁促進剤を含むことができる。
固体組成物は、ラクトースまたは乳頭ならびに高分子量ポリエチレングリコールなどの賦形剤を用いる軟および硬充填ゼラチンカプセルにおいて充填剤として用いることもできる。
水性懸濁剤を用いる場合、乳化剤または懸濁促進剤を含むことができる。
乳剤医薬組成物の油相は、公知の様式で公知の成分から構成される。該相は、１つの乳化剤（emulgentとしても知られている）のみを含むが、少なくとも１つの乳化剤と脂肪もしくは油または脂肪および油の両方との混合物を含むのが望ましい。安定化剤として作用する親油性乳化剤とともに親水性乳化剤を含むのが好ましい。また、油および脂肪の両方を含むのが好ましい。安定化剤とともに、あるいは無しで、両乳化剤は、乳化ワックスを形成し、油および脂肪と一緒になって、クリーム製剤の油性分散相を形成する乳化軟膏基剤を形成する。
要すれば、クリーム基剤の水相が、たとえば、少なくとも３０ｗ／ｗ％の多価アルコール、すなわち、プロピレングリコール、ブタン、１,３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００など）およびその混合物といったような２つまたはそれ以上の水酸基を含むアルコールなどを含んでもよい。局所用製剤は、要すれば、皮膚または他の患部領域への有効成分の吸収または浸透を増進する化合物を含んでもよい。
要すれば、クリーム基剤の水相が、たとえば、少なくとも３０ｗ／ｗ％の多価アルコール、すなわち、プロピレングリコール、ブタン、１,３−ジオール、マンニトール、ソルビトール、グリセロールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００など）およびその混合物といったような２つまたはそれ以上の水酸基を含むアルコールなどを含んでもよい。局所用製剤は、要すれば、皮膚または他の患部領域への有効成分の吸収または浸透を増進する化合物を含んでもよい。
製剤用の適当な油または脂肪の選択は、所望の美容特性を達成することに基く。したがって、クリーム剤は、好ましくは、チューブまたは他の容器から漏れないように適度の粘りをもち、べたつかず、色が着かず、洗浄可能な製品であるべきである。ミリスチン酸ジイソプロピル、オレイン酸デシル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、パルミチン酸２−エチルヘキシルまたはCrodamol CAPとして知られる分枝鎖エステルの混合物といったような直鎖または分子鎖のモノまたはジ塩基性アルキルエステルを用いることができる。これらは、要求される特性に応じて、単独または組み合わせて用いることができる。別法として、白色軟パラフィンおよび／または液体パラフィンもしくは他の鉱物油などの高融点脂質を用いることができる。
実施において、本発明化合物／医薬組成物は、経口、吸入、直腸、経鼻、バッカル、舌下、膣、結腸、非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、くも膜下腔内および硬膜外など）、大槽内および腹膜内などの局所または全身投与によって、ヒトまたは動物に適当な製剤で投与することができる。好ましい経路は、たとえばレシピエントのコンディションに応じて変化することが理解されるであろう。
「医薬的に許容しうる投与剤形」は、本発明化合物の投与剤形を意味し、たとえば、錠剤、糖衣錠、散剤、エリキシル剤、シロップ剤、懸濁剤などの液体製剤、スプレー剤、吸入錠剤、ロゼンジ、乳剤、液剤、顆粒剤、カプセル剤および座剤ならびにリポソーム製剤などの注射用製剤が挙げられる。技術および製剤は、一般に、Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.，Easton，PA，最新版に記載されている。
「経口投与に適した製剤」は、それぞれ予め決定された量の有効成分を含んでいるカプセル剤、カシェ剤または錠剤；水性または非水性液中の液剤または懸濁剤；または水中油型液体乳剤または油中水型液体乳剤などの別個の単位として提供される。有効成分は、ボーラス、舐剤またはペースト剤として提供されてもよい。
「経口投与に適した製剤」は、それぞれ予め決定された量の有効成分を含んでいるカプセル剤、カシェ剤または錠剤；水性または非水性液中の液剤または懸濁剤；または水中油型液体乳剤または油中水型液体乳剤などの別個の単位として提供される。有効成分は、ボーラス、舐剤またはペースト剤として提供されてもよい。
錠剤は、必要に応じて１種またはそれ以上の付属成分とともに、打錠または成形によって製造される。打錠錠剤は、必要に応じて結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、界面活性剤または分散剤と混合した、粉末または顆粒などの自由流動体における有効成分を適当な機械で打錠することによって製造される。成形錠剤は、湿らせた粉末状化合物と不活性液体希釈剤の混合物を適当な機械で成形することによって製造される。錠剤は、必要に応じて、コーティングを行うか、または刻み目を入れることができ、有効成分の遅延または制御放出を提供するように製剤することができる。
直腸投与用固体組成物として、公知の方法にしたがって製剤され、少なくとも１種の本発明化合物を含んでいる座剤が挙げられる。
直腸投与用固体組成物として、公知の方法にしたがって製剤され、少なくとも１種の本発明化合物を含んでいる座剤が挙げられる。
要すれば、およびより有効な分配のために、化合物を、生体適合性、生体分解性ポリマーマトリックス（ポリ(ｄ,ｌ−ラクチド ｃｏ−グリコリド)など）、リポソームおよびマイクロスフィアなどの遅延放出または標的化デリバリーシステムにおいてマイクロカプセル化することができ、２週間またはそれ以上の期間中化合物の持続的な遅延放出を提供する皮下または筋肉内デポと呼ばれる技術によって皮下または筋肉内に注入することができる。化合物は、たとえば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、または使用直前に滅菌水または他の滅菌注射用媒体に溶解することができる滅菌固体組成物の形体に滅菌剤を組み込むことによって滅菌する。
「経鼻または吸入投与に適した製剤」は、経鼻または吸入によって患者に投与されるのに適した剤形である製剤を意味する。該製剤は、たとえば粒子径１〜５００ミクロン（３０ミクロン、３５ミクロンなど、５ミクロンずつ増大する２０〜５００ミクロンの範囲の粒子径を含む）の粉末状の担体を含む。たとえば経鼻スプレーまたは点鼻液として投与するための、担体が液体である適当な製剤として、有効成分の水性または油性溶液が挙げられる。エアロゾル投与に適した製剤は、慣例の方法にしたがって製造することができ、他の治療薬とともにデリバリーすることができる。吸入療法は、計量用量吸入器によって容易に投与される。
「経口投与に適した製剤」は、経口で患者に投与されるのに適した剤形である製剤を意味する。該製剤は、それぞれ予め決定された量の有効成分を含んでいるカプセル剤、カシェ剤または錠剤；水性または非水性液中の液剤または懸濁剤；または水中油型液体乳剤または油中水型液体乳剤などの別個の単位として提供される。有効成分は、ボーラス、舐剤またはペースト剤として提供されてもよい。
「非経口投与に適した製剤」は、非経口で患者に投与されるのに適した剤形である製剤を意味する。該製剤は、滅菌性であり、乳液、懸濁液、水性および非水性注射用液剤が挙げられ、懸濁補助剤および濃化剤ならびに抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および製剤を等張性にする溶質を含み、レシピエントの血液に適するように調節されたｐＨを有する。
「非経口投与に適した製剤」は、非経口で患者に投与されるのに適した剤形である製剤を意味する。該製剤は、滅菌性であり、乳液、懸濁液、水性および非水性注射用液剤が挙げられ、懸濁補助剤および濃化剤ならびに抗酸化剤、緩衝液、静菌剤および製剤を等張性にする溶質を含み、レシピエントの血液に適するように調節されたｐＨを有する。
「直腸または膣投与に適した製剤」は、経直腸または経膣で患者に投与されるのに適した剤形である製剤を意味する。該製剤は、本発明化合物を、常温では固形であるが、体温では液体であり、したがって直腸または膣内で融けて有効成分を放出する、カカオ脂、ポリエチレングリコールまたは座剤ワックスなどの適当な非刺激性賦形剤または担体と混合することによって製造することができる座剤の剤形であるのが好ましい。
「全身投与に適した製剤」は、患者に全身投与されるのに適した剤形である製剤を意味する。該製剤は、経筋肉、静脈内、腹膜内および皮下などの注射によって投与されるのが好ましい。注射のために、本発明化合物を、液体製剤として、好ましくは、ハンクス液またはリンゲル液などの生理的適合性緩衝液剤として製剤する。さらに、本発明化合物を固体剤形で製剤し、使用直前に再溶解または懸濁してもよい。凍結乾燥形態も含まれる。また全身投与は、経粘膜または経皮手段によって行うことができ、あるいは本発明化合物を経口投与することもできる。経粘膜または経皮投与では、浸透されるべきバリヤーに対して適当な浸透剤を製剤に用いる。このような浸透剤は一般に当業界で公知であり、経粘膜投与用には、胆汁酸およびフシジン酸誘導体が挙げられる。さらに、界面活性剤を用いて浸透を促進することもできる。経粘膜投与は、経鼻スプレーまたは座剤などを用いてもよい。経口投与には、本発明化合物を、カプセル剤、錠剤およびトニックなどの慣例の経口投与剤形に製剤する。
「局所投与に適した製剤」は、患者に局所投与されるのに適した剤形である製剤を意味する。該製剤は、一般に当業界で公知の局所軟膏、膏薬、散剤、スプレー剤および吸入剤、ゲル剤（水性またはアルコール基剤）、クリーム剤として、または経皮バリヤーを通して化合物を制御放出させるパッチとして適用するためのマトリックス基剤に配合して提供される。軟膏に製剤する場合、有効成分は、パラフィン系または水混和性軟膏基剤のいずれかとともに用いる。別法として、有効成分を水中油型クリーム基剤を用いてクリーム剤に製剤してもよい。眼における局所投与に適した製剤として、有効成分を適当な担体、特に水性溶媒に溶解または懸濁する点眼液が挙げられる。口腔における局所投与に適した製剤として、香味基剤、通常スクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカントゴムなどの基剤中に有効成分を含むロゼンジ；ゼラチンおよびグリセリン、またはスクロースおよびアラビアゴムなどの不活性基剤中に有効成分を含む香錠；ならびに適当な液体担体中に有効成分を含む洗口剤が挙げられる。
「固体投与剤形」は、本発明化合物の投与剤形が、たとえばカプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、糖衣錠または顆粒剤などの固体剤形であることを意味する。このような固体剤形では、本発明化合物を、少なくとも１種の、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸ジカルシウムなどの不活性な通例の賦形剤（または担体）、または(ａ)デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトールおよびケイ酸などの充填剤または増量剤、(ｂ)カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロースおよびアラビアゴムなどの結合剤、(ｃ)グリセロールなどのヒューメクタント（保湿成分）、(ｄ)寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ケイ酸塩複合体および炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、(ｅ)パラフィンなどの溶液リターダ、(ｆ)４級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、(ｇ)セチルアルコールオヨビモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、(ｈ)カオリンおよびベントナイトなどの吸着剤、(ｉ)タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムなどの滑沢剤、(ｊ)不透明化剤、(ｋ)緩衝剤、および遅延様式で腸管の特定の部分において本発明化合物を放出する作用剤と混合する。
本発明組成物中の有効成分の実際の用量レベルは、患者にとって特定の組成物および投与方法に対する所望の治療的応答を得るのに効果的である有効成分の量が得られるように変化する。したがって、いずれかの特定の患者のための選ばれた用量レベルは、所望の治療効果、投与経路、所望の治療期間、疾患の病因および重篤度、患者のコンディション、体重、性別、食餌および年齢、各有効成分のタイプおよび効能、吸収率、代謝および／または排出ならびにその他の因子などの因子に応じて変化する。
１回または分割投与にて患者に投与される本発明化合物の総１日用量は、たとえば、約０.００１〜約１００ｍｇ／体重ｋｇ／日、好ましくは０.０１〜１０ｍｇ／ｋｇ／日という量である。たとえば、成人では、用量は、一般に、吸入によって約０.０１〜約１０ｍｇ／体重ｋｇ／日、経口投与によって約０.０１〜約１００、好ましくは０.１〜７０、より好ましくは０.５〜１０ｍｇ／体重ｋｇ／日および静脈内投与によって約０.０１〜約５０、好ましくは０.０１〜１０ｍｇ／体重ｋｇ／日である。組成物中の有効成分のパーセンテージは、適当な用量が得られるような割合を構成すべきであるが、様々である。用量単位の組成物は、１日用量を作成するのに用いることができるように、その約数などのような量を含む。幾つかの単位用量剤形が、ほぼ同時に投与されるのは明らかである。用量は、所望の治療効果が得られるように、必要な頻度で投与される。より高用量あるいは低用量ですぐに応答する患者もおり、適切な維持用量が少なくてよい患者もいる。他の患者にとっては、各特定の患者の生理的要求にしたがって、１日当たり１〜４回の投与における長期治療を行うことが必要である。他の患者にとっては、１日当たり１回または２回用量以下を処方することが必要であることは言うまでもない。
製剤は、製薬業界で公知の方法のいずれかによって、単位投与剤形で製造することができる。このような方法は、有効成分と、１種またはそれ以上の付属成分を含む担体を混合するステップを含む。一般に、製剤は、有効成分を、液体担体または微細に分割された固体担体もしくはその両方と均質に十分に混合し、次いで、要すれば、製品を形作ることによって製造される。
製剤は、密閉アンプルおよびエラストマーの栓をもつバイアルなどの単位用量または複数用量容器に入れた状態で提供され、用時に注射用水などの滅菌液担体の添加を必要とするのみである凍結乾燥状態で保管される。即時の注射溶液および懸濁液は、先に記載した滅菌散剤、顆粒剤および錠剤から製造される。
本発明の範囲に属する化合物は、文献および以下に記載する試験にしたがって目覚しい薬理活性を示し、試験結果は、ヒトおよび他の哺乳動物において薬理活性と相互関係にあると考えられる。
製剤は、密閉アンプルおよびエラストマーの栓をもつバイアルなどの単位用量または複数用量容器に入れた状態で提供され、用時に注射用水などの滅菌液担体の添加を必要とするのみである凍結乾燥状態で保管される。即時の注射溶液および懸濁液は、先に記載した滅菌散剤、顆粒剤および錠剤から製造される。
本発明の範囲に属する化合物は、文献および以下に記載する試験にしたがって目覚しい薬理活性を示し、試験結果は、ヒトおよび他の哺乳動物において薬理活性と相互関係にあると考えられる。
インビトロ酵素アッセイ方法
ＨＣＶ ＮＳ３セリンプロテアーゼ
ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼドメインは、これまでに発現され、精製されている（Vertex，PCT公開公報 W098/17679；これは全体を参考文献として本発明に援用される）。色素生産性ペプチド基質であるＥＤＶＶＡbuＣ−p−ニトロアニリドおよびＮＳ３プロテアーゼに対するＮＳ４Ａ補因子フラグメント（-ＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＶＬＳＧＫ−）を、American Peptide Com (Ca)において注文合成した。ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ活性を阻害する能力について、基質としてＥＤＶＶＡbuＣ−p−ニトロアニリドを用いる分光測光法アッセイを用いて、本発明化合物を試験した。SpectraMax 250 リーダー (Molecular Devices，Sunnyvale，CA)を用い、９６ウエルのマイクロ滴定プレートにて、動力学的能力についてアッセイを行った。３０μＭのＮＳ４Ａフラグメント、４６ｍＭのHepes、ｐＨ８.０、９２ｍＭのＮａＣｌ、１８％グリセロール、５ｍＭのＤＴＴおよび７.５％のＤＭＳＯを含む緩衝液中、３０℃にて、試験化合物の不在または存在下にて、精製ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ（０.５μＭ）によるＥＤＶＶＡbuＣ−p−ニトロアニリド（５００μＭ）基質の切断を行った。４０５ｎｍにおけるｐＮＡ（ｐ−ニトロアニリン）の放出をモニターした。
ＨＣＶ ＮＳ３セリンプロテアーゼ
ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼドメインは、これまでに発現され、精製されている（Vertex，PCT公開公報 W098/17679；これは全体を参考文献として本発明に援用される）。色素生産性ペプチド基質であるＥＤＶＶＡbuＣ−p−ニトロアニリドおよびＮＳ３プロテアーゼに対するＮＳ４Ａ補因子フラグメント（-ＫＫＧＳＶＶＩＶＧＲＩＶＬＳＧＫ−）を、American Peptide Com (Ca)において注文合成した。ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ活性を阻害する能力について、基質としてＥＤＶＶＡbuＣ−p−ニトロアニリドを用いる分光測光法アッセイを用いて、本発明化合物を試験した。SpectraMax 250 リーダー (Molecular Devices，Sunnyvale，CA)を用い、９６ウエルのマイクロ滴定プレートにて、動力学的能力についてアッセイを行った。３０μＭのＮＳ４Ａフラグメント、４６ｍＭのHepes、ｐＨ８.０、９２ｍＭのＮａＣｌ、１８％グリセロール、５ｍＭのＤＴＴおよび７.５％のＤＭＳＯを含む緩衝液中、３０℃にて、試験化合物の不在または存在下にて、精製ＨＣＶ ＮＳ３プロテアーゼ（０.５μＭ）によるＥＤＶＶＡbuＣ−p−ニトロアニリド（５００μＭ）基質の切断を行った。４０５ｎｍにおけるｐＮＡ（ｐ−ニトロアニリン）の放出をモニターした。
上記条件下、Ｖmax、ＫmおよびＶmax／Ｋmなどの動力学的パラメーターの測定を行った。Ｋi値は、密接結合競合的阻害について、モリソンの方程式に対するデータの非線形最小二乗値によって、酵素および濃度を一定にして、速度ｖｓ[インヒビター]プロットから計算する[J. F. Morrison，Biochim. Biophys. Acta.，185,269-286 (1969)]。この方法には、プリズムプログラム(GraphPad Software，Inc.)を用いる。
本明細書に開示するＨＣＶ セリンプロテアーゼインヒビターは、ＨＣＶ感染にかかるリスクをもつ患者において予防的に、またはすでに感染している患者を治療するためのいずれかにおいて、抗ＨＣＶ活性を直接示すか、または間接的に導き出す他の分子と組み合わせて用いることができる。用語「抗ＨＣＶ活性」は、存在する場合に、完全にＨＣＶビリオンの蓄積を阻害するか、またはこのような分子の不在下におけるＨＣＶビリオン蓄積と比較して減少させる分子の能力および／またはＨＣＶ感染または病原に関連するコンディションまたは症状を軽減するかまたは寛解させる分子の能力を意味する。抗ＨＣＶ活性をもつ分子として、ＨＣＶ感染または複製における１つまたはそれ以上のステップを破壊する分子、ならびに宿主細胞における免疫調節および抗増殖作用を引き出す分子が挙げられる。抗ＨＣＶ活性をもつ分子は、ＨＣＶ誘導核酸またはタンパク質合成など（これらに限定されるものではない）のＨＣＶ特異的複製イベントを阻止することができる。抗ＨＣＶ活性をもつ分子が作用できるＨＣＶ複製の段階として、細胞侵入（付着、貫通など）；ＨＣＶゲノムの脱殻および放出；ＨＣＶゲノムの複製（ウイルスＲＮＡゲノムのいずれかの複製；ウイルスメッセンジャーＲＮＡの転写など）；ＨＣＶタンパク質の翻訳；ＨＣＶタンパク質の翻訳後修飾（タンパク質分解的切断；グリコシル化など）；ウイルスタンパク質の細胞内輸送；ビリオン成分の組み立て；およびウイルス粒子の放出（出芽など）が挙げられる。抗ウイルス活性をもつ分子のクラスとして、可溶性受容体デコイおよび抗受容体抗体；イオンチャネルブロッカー；キャプシドスタビライザーおよび融合タンパク質インヒビター；ウイルスポリメラーゼ、逆転写酵素、ヘリカーゼ、プライマーゼまたはインテグラーゼのインヒビター；アンチセンスオリゴヌクレオチドおよびリボザイム；インターフェロンといったようなサイトカインならびにペプチドアゴニスト、ステロイドおよびレバミソールといったようなクラシック薬物などの免疫調節および免疫刺激剤；調節タンパク質のインヒビター；プロテアーゼインヒビター；組み立てタンパク質インヒビター；および抗ウイルス抗体および細胞毒性リンパ球が挙げられるが、これらに限定されるものではない。用語「抗ＨＣＶ有効量」または「医薬的有効量」は、患者におけるＨＣＶ感染に関連するコンディションまたは症状または関連する病因を減少または寛解するのに有効な、またはインビトロもしくはインビボにてウイルスレベルを減少するのに有効な化合物または本明細書に開示する化合物の組み合わせの量を意味する。インビトロ適用には、以下に記載するレプリコンアッセイシステムが含まれ、このような量は、ＨＣＶレプリコンＲＮＡ蓄積および／またはそれに含まれる遺伝子によってコードされるタンパク質の蓄積を減少するのに有効である。
本明細書に開示の組成物および併用療法における使用を企図される抗ＨＣＶ活性をもつ化合物として、免疫刺激性サイトカインなどの免疫調節分子および種々の抗ウイルスヌクレオシドおよびヌクレオチドなどのＨＣＶ抗ウイルス活性をもつことが知られている他の化合物が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
本明細書に開示するＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターと組み合わせにおける使用を企図される免疫調節分子として、インターフェロンα−２Ｂ（イントトロンＡ、Schering Plough）；レバトロン（Schering Plough、インターフェロンα−２Ｂ＋リバビリン）；ポリエチレングリコール付加（pegylated）インターフェロンα（Reddy，K. R.ら Efficacy and safety of pegylated (40-kd) interferon alpha-2a compared with interferon alpha-2a in noncirrhotic patients with chronic hepatitis C. Hepatology 33,433-438 (2001)）；コンセンサスインターフェロン（Kao，J. H.，Chen，P. J.，Lai，M. Y. & Chen，D. S. Efficacy of consensus interferon in the treatment of chronic hepatitis C. J. Gastroenterol. Hepatol. 15,1418-1423 (2000)）；インターフェロンα−２Ａ（ロフェロンＡ；Roche）；リンパ芽球腫または“天然”インターフェロン；インターフェロンτ（Clayette，P.ら IFN-tau，a new interferon type I with antiretroviral activity. Pathol. Biol. (Paris) 47,553-559 (1999)）；インターロイキン２（Davis，G. L.，Nelson，D. R. & Reyes，G. R. Future options for the management of hepatitis C. Seminars in Liver Disease 19,103-112 (1999)）；インターロイキン６（Davis，G. L.，Nelson，D. R. & Reyes，G. R. Future options for the management of hepatitis C. Seminars in Liver Disease 19,103-112 (1999)）；インターロイキン１２（Davis，G. L.，Nelson，D. R. & Reyes，G. R. Future options for the management of hepatitis C. Seminars in Liver Disease 19,103-112 (1999)）；リバビリン；および１型ヘルパーＴ細胞応答の発達を増強する化合物（Davis，G. L.，Nelson，D. R. & Reyes, G. R. Future options for the management of hepatitis C. Seminars in Liver Disease 19,103-112 (1999)）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。インターフェロンは、抗ウイルス活性を直接発揮すること、および／または感染に対する免疫応答を変化させることによって、ウイルス感染を寛解する。インターフェロンの抗ウイルス効果は、しばしば、ウイルス貫通または脱殻の阻害、ウイルスＲＮＡの合成、ウイルスタンパク質の翻訳および／またはウイルス組み立ておよび放出を通して媒介される。
細胞におけるインターフェロンの合成を刺激する化合物（Tazulakhova，E. B.，Parshina，O. V.，Gusev，T. S. & Ershov，F. I. Russian Experience in Screening，Analysis，and Clinical Application of Novel Interferon Induces. J. Interferon Cytokine Res. 21,65-73)）として、単独またはトブラマイシンと組み合わせた二本鎖ＲＮＡおよびイミクイモド（Imiquimod）(3M Pharmaceuticals) (Sauder，D. N. Immunomodulatory and pharmacologic properties of imiquimod. J. Am. Acad. Dermatol. 43，S6-11 (2000))が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
非免疫調節メカニズムによるＨＣＶ抗ウイルス活性をもつことがわかっているか、またはもつかもしれない他の化合物として、リバビリン(ICN Pharmaceuticals)；イノシン５'−モノリン酸デヒドロゲナーゼインヒビター（VX-497，being developed by Vertex Pharmaceuticals）；アマンタジンおよびリマンタジン（Younossi，A. M. and Perillo，R. P. The roles of amantadine，rimantadine，ursodeoxycholic acid，NSAIDs，alone or in combination with alpha interferons，in the treatment of chronic hepatitis C. Seminars in Liver Disease 19，95-102 (1999)）；ＬＹ２１７８９６（U. S.特許 4,835,168) (Colacino，J. M.ら Evaluation of the anti-influenza virus activities of 1，3,4-thiadiazol-2-ylcyanamide (LY217896) and its sodium salt. Antimicrobial
Agents & Chemotherapy 34,2156-2163 (1990)）；および９−ヒドロキシイミノ−６−メトキシ−１,４ａ−ジメチル−１,２,３,４,４ａ,９,１０,１０ａ−オクタヒドロ−フェナントレン−１−カルボン酸メチルエステル；６−メトキシ−１,４ａ−ジメチル−９−（４−メチル−ピペラジン−１−イルイミノ）−１,２,３,４,４ａ,９,１０,１０ａ−オクタヒドロ−フェナントレン−１−カルボン酸メチルエステル・塩酸塩；１−（２−クロロ−フェニル）−３−（２,２−ジフェニル−エチル）ウレア（U. S. 特許 6,127,422）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
Agents & Chemotherapy 34,2156-2163 (1990)）；および９−ヒドロキシイミノ−６−メトキシ−１,４ａ−ジメチル−１,２,３,４,４ａ,９,１０,１０ａ−オクタヒドロ−フェナントレン−１−カルボン酸メチルエステル；６−メトキシ−１,４ａ−ジメチル−９−（４−メチル−ピペラジン−１−イルイミノ）−１,２,３,４,４ａ,９,１０,１０ａ−オクタヒドロ−フェナントレン−１−カルボン酸メチルエステル・塩酸塩；１−（２−クロロ−フェニル）−３−（２,２−ジフェニル−エチル）ウレア（U. S. 特許 6,127,422）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
先の分子についての製剤、用量および投与経路は、以下に引用する文献に記載されているか、または、たとえば、F. G. Hayden，in Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics，Ninth Edition，Hardmanら，Eds.，McGraw-Hill，New York (1996)，Chapter 50，pp. 1191-1223（これらは全体を参考文献として本発明に援用される）に開示されているように当業界において公知である。別法として、ＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ化合物がいったん同定されると、当業者に公知である技術を用いて、その化合物の医薬的有効量を決定することができる。たとえば、Benetら，in Goodman & Gilman's The Phannacological Basis of Therapeutics，Ninth Edition，Hardmanら，Eds.，McGraw-Hill，New York (1996)，Chapter 1，pp. 3-27（これらは全体を参考文献として本発明に援用される）を参照。したがって、このような化合物の適当な製剤、用量範囲および投与処方は、ルーチン的方法によって容易に決定することができる。
本発明の併用医薬は、１つの細胞もしくは複数の細胞、またはヒトの患者に、同時または連続的に投与される別個の医薬的に許容しうる製剤において、あるいは１種以上の治療薬を含む製剤、または単剤または多剤製剤の取り合わせのいずれかにおいて提供される。しかし、投与されると、これらの併用薬剤は、抗ＨＣＶ有効量の成分を形成する。
現在、多数の他の本発明方法に用いることができる免疫調節剤および免疫刺激剤が利用可能であり、ＡＡ−２Ｇ；アダマンチルアミド；ジペプチド；アデノシンデアミナーゼ，Enzon；アジュバント，Alliance；アジュバント，Ribi；アジュバント，Vaxcel；アジュバックス（Adjuvax）；アジェラスフィン（agelasphin）−１１；エイズ療法，Chiron；アルガル・グルカン，SRI；アルガムリン，Anutech；アンギンリク（Anginlyc）；抗細胞因子，Yeda；アンチコート；アンチガストリン−１７イムノゲン，Ap；抗原デリバリーシステム，Vac；抗原製剤，IDBC；抗ＧｎＲＨイムノゲン，Aphton；アンチヘルピン（Antiherpin）；アルビドール（Arbidol）；アザロール（azarole）；Ｂａｙ−ｑ−８９３９；Ｂａｙ−ｒ−１００５；ＢＣＨ−１３９３；ベタフェクチン；ビオスティム（Biostim）；ＢＬ−００１；ＢＬ−００９；ブロンコスタット；カンタスティム（Cantastim）；ＣＤＲＩ−８４−２４６；セフォジザイム（cefodizime）；ケモカインインヒビター，ICOS；ＣＭＶペプチド，City of Hope；ＣＮ−５８８８；サイトカイン放出剤,St；ＤＨＥＡＳ，Paradigm；ＤＩＳＣ ＴＡ−ＨＳＶ；Ｊ０７Ｂ；Ｉ０１Ａ；Ｉ０１Ｚ；ジチオカルブ（ditiocarb）ナトリウム；ＥＣＡ−１０−１４２；ＥＬＳ−１；エンドトキシン，Novartis；ＦＣＥ−２０６９６；ＣＥ−２４０８９；ＦＣＥ−２４５７８；ＦＬｔ−３リガンド，Immunex；ＦＲ−９００４８３；ＦＲ−９００４９４；ＦＲ−９０１２３５；ＦＴＳ−Ｚｎ；Ｇタンパク質，Cadus；グルダプチン（gludapcin）；グルタウリン（glutaurine）；グリコホスホペプチカル（glycophosphopeptical）；ＧＭ−２；ＧＭ−５３；ＧＭＤＰ；成長因子ワクチン，EntreM；Ｈ−ＢＩＧ，NABI；Ｈ−ＣＩＧ，NABI；ＨＡＢ−４３９；ヘリコバクターピロリワクチン；ヘルペス特異的免疫因子；ＨＩＶ療法，United Biomed；ＨｙｐｅｒＧＡＭ＋ＣＦ；イムマックス（ImmuMax）；Ｉｍｍｕｎ ＢＣＧ；免疫療法，Connective；免疫調節剤，Evans；免疫調節剤，Novacell；ｉｍｒｅｇ−１；ｉｍｒｅｇ−２；インドムン（Indomune）；イノシン・プラノベックス（inosine pranobex）；インターフェロン，Dong-A (α２)；インターフェロン，Genentech (γ)；インターフェロン，Novartis (α)；インターロイキン−１２，Genetics Ins；インターロイキン−１５，Immunex；インターロイキン−１６，Research Cor；ＩＳＣＡＲ−１；Ｊ００５ｘ；Ｌ−６４４２５７；リコマラスミン酸（licomarasminic acid）；ＬｉｐｏＴｈｅｒ；ＬＫ−４０９；ＬＫ−４１０；ＬＰ−２３０７；ＬＴ (Ｒ１９２６)；ＬＷ−５００２０；ＭＡＦ，塩野義；ＭＤＰ誘導体，Merck；met-エンケファリン，TNI；メチルフリルブチロラクトン；ＭＩＭＰ；ミリモスティム（mirimostim）；混合細菌ワクチン，Tem；ＭＭ−１；モニリアスタット（moniliastat）；ＭＰＬＡ，Ribi；ＭＳ−７０５；ムラブチド（murabutide）；ムラブチド，Vacsyn；ムラミルジペプチド誘導体；ムラミルペプチド誘導体ミエロピド；−５６３；ＮＡＣＯＳ−６；ＮＨ−７６５；ＮＩＳＶ，Proteus；ＮＰＴ−１６４１６；ＮＴ−００２；ＰＡ−４８５；ＰＥＦＡ−８１４；ペプチド，Scios；ペプチドグリカン，Pliva；ペルソン（Perthon），Advanced Plant；ＰＧＭ誘導体，Pliva；ファーマコプロジェクト（Pharmaprojects）Ｎｏ．１０９９；Ｎｏ．１４２６；Ｎｏ．１５４９；Ｎｏ．１５８５；Ｎｏ．１６０７；Ｎｏ．１７１０；Ｎｏ．１７７９；Ｎｏ．２００２；Ｎｏ．２０６０；Ｎｏ．２７９５；Ｎｏ．３０８８；Ｎｏ．３１１１；Ｎｏ．３３４５；Ｎｏ．３４６７；Ｎｏ．３６６８；Ｎｏ．３９９８；Ｎｏ．３９９９；Ｎｏ．４０８９；Ｎｏ．４１８８；Ｎｏ．４４５１；Ｎｏ．４５００；Ｎｏ．４６８９；Ｎｏ．４８３３；Ｎｏ．４９４；Ｎｏ．５２１７；Ｎｏ．５３０；ピドチモド（pidotimod）；ピメラウチド（pimelautide）；ピナフィド（pinafide）；ＰＭＤ−５８９；ポドフィロトキシン（podophyllotoxin），Conpharm；ＰＯＬ−５０９；ポリ−ＩＣＬＣ；ポリ−ＩＣＬＣ，ヤマサ醤油；ポリＡ−ポリＵ；ポリサッカライドＡ；プロテインＡ,Berlox Bioscience；ＰＳ３４ＷＯ；シュードモナスＭＡｂｓ，帝人；ソーマグロビン（Psomaglobin）；ＰＴＬ−７８４１９；ピレキソール（Pyrexol）；ピリフェロン（pyriferone）；レトロゲン（Retrogen）；レトロペップ（Retropep）；ＲＧ−００３；ライノスタット（Rhinostat）；リファマキシル（rifamaxil）；ＲＭ−０６；ロリン（Rollin）；ロムルチド（romurtide）；ＲＵ−４０５５５；ＲＵ−４１８２１；風疹抗体，ResCo；Ｓ−２７６０９；ＳＢ−７３；ＳＤＺ−２８０−６３６；ＳＤＺ−ＭＲＬ−９５３；ＳＫ＆Ｆ−１０７６４７；ＳＬ０４；ＳＬ０５；ＳＭ−４３３３；ソルテイン（Solutein）；ＳＲＩ−６２−８３４；ＳＲＬ−１７２；ＳＴ−５７０；ＳＴ−７８９；スタファージ（staphage）溶解液；スティムロン（Stimulon）；サプレシン（suppressin）；Ｔ−１５０Ｒ１；Ｔ−ＬＣＥＦ；タビローチド（tabilautide）；テムルチド（temurtide）；セラダイム（Theradigm）−ＨＢＶ；セラダイム−ＨＰＶ；セラダイム−ＨＳＶ；ＴＨＦ，Pharm & Upjohn；ＴＨＦ,Yeda；サイマルファシン（thymalfasin）；胸腺ホルモンフラクション；サイモカルチン（thymocartin）；サイモリンホトロピン（thymolymphotropin）；サイモペンチン（thymopentin）；サイモペンチン類縁体；サイモペンチン，Peptech；thymosin fraction 5，Alpha；thymostimulin；thymotrinan；TMD-232；TO-115；転移因子，Viragen；タフツシン（tuftsin），Selavo；ユベニメックス（ubenimex）；アルサスタット（Ulsastat）；ＡＮＧＧ−；ＣＤ−４＋；Ｃｏｌｌａｇ＋；ＣＯＬＳＦ＋；ＣＯＭ＋；ＤＡ−Ａ＋；ＧＡＳＴ−；ＧＦ−ＴＨ＋；ＧＰ−１２０−；ＩＦ＋；ＩＦ−Ａ＋；ＩＦ−Ａ−２＋；ＩＦ−Ｂ＋；ＩＦ−Ｇ＋；ＩＦ−Ｇ−１Ｂ＋；ＩＬ−２＋；ｉＬ−１２＋；ＩＬ−１５＋；ＩＭ＋；ＬＨＲＨ−；ＬＩＰＣＯＲ＋Ｌ ＬＹＭ−Ｂ＋；ＬＹＭ−ＮＫ＋；ＬＹＭ−Ｔ＋；ＯＰＩ＋；ＰＥＰ＋；ＰＨＧ−ＭＡ＋；ＲＮＡ−ＳＹＮ−；ＳＹ−ＣＷ-；ＴＨ−Ａ−１＋；ＴＨ−５＋；ＴＮＦ＋；ＵＮが挙げられる。
代表的な本発明に有用なヌクレオシドおよびヌクレオチド化合物として、(+)−cis−５−フルオロ−１−[２−(ヒドロキシ−メチル)−[１,３−オキサチオラン−５−イル]シトシン；(−)−２'−デオキシ−３'−チオシチジン−５'−トリホスフェート(３ＴＣ)；(−)−cis−５−フルオロ−１−[２−(ヒドロキシ−メチル)−[１,３−オキサチオラン−５−イル]シトシン(ＦＴＣ)；(−)２',３',[(−)−SddC]；１−(２'−デオキシ−２'−フルオロ−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル)−５−ヨードシトシン(ＦＩＡＣ)；１−(２'−デオキシ−２'−フルオロ−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル)−５−ヨードシトシン・トリホスフェート；１−(２'−デオキシ−２'−フルオロ−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル)−５−メチルウラシル(ＦＭＡＵ)；１−ベータ−Ｄ−リボフラノシル−１,２,４−トリアゾール−３−カルボキサミド；２',３'−ジデオキシ−３'−フルオロ−５−メチル−デキソシチジン；２',３'−ジデオキシ−３'−クロロ−５−メチル−デキソシチジン(ClddMeCyt)；２',３'−ジデオキシ−３'−アミノ−５−メチル−デキソシチジン；２',３'−ジデオキシ−３'−フルオロ−５−メチル−シチジン(FddMeCyt)；２',３'−ジデオキシ−３'−クロロ−５−メチル−シチジン(ClddMeCyt)；２',３'−ジデオキシ−３'−アミノ−５−メチル−シチジン(AddMeCyt)；２',３'−ジデオキシ−３'−フルオロチミジン(FddThd)；２',３'−ジデオキシ−ベータ−Ｌ−５−フルオロシチジン(ベータ−Ｌ−FddC)；２',３'−ジデオキシ−ベータ−Ｌ−５−チアシチジン；２',３'−ジデオキシ−ベータ−Ｌ−５−シチジン(ベータ−Ｌ−ddC)；９−(１,３−ジヒドロキシ−２−プロポキシメチル)グアニン；２'−デオキシ−３'−チア−５−フルオロシトシン；３'−アミノ−５−メチル−デキソシチジン(AddMeCyt)；２−アミノ−１,９−[(２−ヒドロキシメチル−１−(ヒドロキシメチル)エトキシ]メチル]−６Ｈ−プリン−６−オン(ガンシクロビル)；２−[２−(２−アミノ−９Ｈ−プリン−９y)エチル]−１,３−プロパンジル・ジアセテート；２−アミノ−１,９−ジヒドロ−９−[(２−ヒドロキシ−エトキシ)メチル]６Ｈ−プリン−６−オン(アシクロビル)；９−(４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−ブト−１−イル)グアニン(ペンシクロビル)；９−(４−ヒドロキシ−３−ヒドロキシメチル−ブト−１−イル)−６−デオキシ−グアニン・ジアセテート(ファムシクロビル)；３'−アジド−３'−デオキシチミジン(ＡＺＴ)；３'−クロロ−５−メチル−デキソシチジン(ClddMeCyt)；９−(２−ホスホニル−メトキシエチル)−２',６'−ジアミノプリン−２',３'−ジデオキシリボシド；９−(２−ホスホニルメトキシエチル)アデニン(ＰＭＥＡ)；アシクロビル・トリホスフェート；Ｄ−カルボサイクリック−２'−デオキシグアノシン(CdG)；ジデオキシ−シチジン；ジデオキシ−シトシン；ジデオキシ−グアニン(ddG)；ジデオキシ−イノシン(ddI)；Ｅ−５−(２−ブロモビニル)−２'−デオキシウリジン トリホスフェート；フルオロ−アラビノフラノシル−ヨードウラシル；１−(２'−デオキシ−２'−フルオロ−l−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル)−５−ヨード−ウラシル(ＦｌＡＵ)；スタブジン；９−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル−９Ｈ−プリン−６−アミン・一水和物；９−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル−９Ｈ−プリン−６−アミン−５'−モノホスフェート・一水和物(Ara−AMP)；２−デオキシ−３'−チア−５−フルオロシチジン；２',３'−ジデオキシ−グアニン；および２',３'−ジデオキシ−グアノシンが挙げられるが、これらに限定されるものではない。
本発明に有用なヌクレオシドおよびヌクレオチドの製造のための合成方法は、Acta Biochim. Pol.,43,25-36(1996)；Swed. Nucleosides Nucleotides 15，361-378(1996)；Synthesis 12，1465-1479(1995)；Carbohyd. Chem. 27，242-276(1995)；Chem. Nucleosides Nucleotides 3，421-535(1994)；Ann. Reports in Med. Chem., Academic Press；およびExp. Opin. Invest. Drugs 4,95−115(1995）に開示されているように、当業界で公知である。
上記引用文献に記載された化学反応は、一般に、本発明化合物の製造に対して、それらの最も広い適用に関して開示されている。反応は、本明細書に開示された化合物の範囲内に含まれる各化合物に対しては、記載されたように適用可能でないこともある。このような事態が生じる化合物は、当業者には容易に見分けられる。そのような場合すべて、たとえば、妨害基の適当な保護、別の慣例の試薬への交換、反応条件のルーチン的変更などの当業者に公知の慣例の変更を加えることによって反応を首尾よく行うことができるか、あるいは、本明細書に開示もしくはその他の慣例の他の反応を本発明の対応する化合物の製造に適用するかのいずれかである。すべての予備的方法において、すべての出発物質は公知であるか、または公知の出発物質から容易に製造できる。
一般に、抗ウイルス薬として、ヌクレオシド類縁体が用いられるが、ヌクレオチド（リン酸ヌクレオシド）は、その細胞膜を通る輸送を促進するために、ヌクレオシドに変換しなければならないことがある。細胞に入ることが可能な化学的に修飾されたヌクレオチドの例は、Ｓ−１−３−ヒドロキシ−２−ホスホニルメトキシプロピル・シトシン(ＨＰＭＰＣ，Gilead Sciences)である。酸である本発明のヌクレオシドおよびヌクレオチド化合物は、塩を形成することができる。例として、ナトリウム、カリウム、カルシウムもしくはマグネシウムなどのアルカリ金属またはアルカリ土類金属あるいは有機塩基または塩基性４級アンモニウム塩との塩が挙げられる。
本発明の併用療法に有用な免疫調節剤および免疫刺激剤は、当業界の慣例よりも低用量で投与することができる。たとえば、インターフェロンαは、代表的には、週３回約１×１０６ユニット／ヒト〜週３回約１０×１０６ユニット／ヒトの量でＨＣＶ感染の治療のためにヒトに投与される(Simonら,Hepatology 25: 445-448(1997))。本発明の方法および化合物において、この用量は、週３回約０.１×１０６ユニット／ヒト〜週３回約７.５×１０６ユニット／ヒト；より好ましくは、週３回約０.５×１０６ユニット／ヒト〜週３回約５×１０６ユニット／ヒト；最も好ましくは、週３回約１×１０６ユニット／ヒト〜週３回約３×１０６ユニット／ヒトの範囲である。本発明のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターの存在下における免疫調節剤および免疫刺激剤のＣ型肝炎ウイルス抗ウイルス有効性の増大により、これらの免疫調節剤および免疫刺激剤の量を減らして、本明細書に開示の方法および組成物に用いることができる。同様に、免疫調節剤および免疫刺激剤の存在下における本発明のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターのＣ型肝炎ウイルス抗ウイルス有効性の増大により、これらのＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターの量を減らして、本明細書に開示の方法および組成物に用いることができる。このような量の減少は、治療を受けている感染した患者におけるＣ型肝炎ウイルス力価のルーチンモニタリングによって決定することができる。これは、たとえば、スロット−ブロット、ドット−ブロットまたはＲＴ−ＰＣＲ技術による患者の血清のＨＣＶ ＲＮＡのモニタリングによって、またはＨＣＶ表面または他の抗原の測定によって行うことができる。同様に、本明細書に開示のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターおよびたとえば、ヌクレオシドおよび／またはヌクレオチド抗ウイルス薬などの抗ＨＣＶ活性をもつ他の化合物を用いる併用療法中に、患者をモニタリングして、併用使用時の各化合物の最低用量を決定することができる。
本明細書に開示の併用療法において、ヌクレオシドまたはヌクレオチド抗ウイルス化合物またはその混合物は、約０.１ｍｇ／ヒト／日〜約５００ｍｇ／ヒト／日；好ましくは、約１０ｍｇ／ヒト／日〜約３００ｍｇ／ヒト／日；さらに好ましくは、約２５ｍｇ／ヒト／日〜約２００ｍｇ／ヒト／日；さらにより好ましくは、約５０ｍｇ／ヒト／日〜約１５０ｍｇ／ヒト／日；および最も好ましくは、約１ｍｇ／ヒト／日〜約５０ｍｇ／ヒト／日の量でヒトに投与することができる。
化合物の用量は、１回用量または釣り合った複数回のサブ用量にて患者に投与することができる。後者の場合、用量単位組成物は、このような量のその約数を含んで、１日用量を作成することができる。薬物を処方されるヒトにとって望ましい場合、毎日の複数回用量が、合計１日用量を増やすこともできる。
本発明化合物および／または組成物によるＨＣＶ感染患者を治療するための養生法は、年齢、体重、性別、食餌および患者の医学的コンディション、感染の重篤度、投与経路、使用した特定の化合物の活性、効力、薬物動態および毒物学フロフィールなどの薬理学的考慮、ならびにドラッグデリバリーシステムを利用するかどうかなどの種々の因子にしたがって選ばれる。本明細書に開示の併用薬の投与は、一般に、ウイルス力価が、感染がコントロールされたかまたは根絶されたことを示す許容しうるレベルに達するまで、数週間から数ヶ月もしくは数年の期間にわたって継続されるべきである。スロット−ブロット、ドット−ブロットまたはＲＴ−ＰＣＲ技術による患者の血清における肝炎ウイルスＲＮＡの測定によって、または血清中の表面抗原などのＣ型肝炎ウイルス抗原の測定によって、本明細書に開示の併用薬による治療を受ける患者をルーチン的にモニターして、療法の効能を決定することができる。これらの方法によって得られたデータの継続的分析から、併用薬中の各成分の最適量が投与されることになり、また治療の継続期間を決定することもできるので、療法中の治療養生法の変更が可能になる。このように、治療養生法／投与計画は、一緒になって十分な抗Ｃ型肝炎ウイルス効果を示す、組み合わせて用いる抗ウイルス化合物のそれぞれの最低量が投与されるように、およびこのような抗ウイルス化合物の併用投与が感染を首尾よく治療するのに必要な長さだけ継続されるように、治療の過程を通じて合理的に変更することができる。
本発明は、患者におけるＨＣＶ感染を治療または予防するための抗ＨＣＶ活性をもつ前述の化合物および類似のタイプの化合物との種々の組み合わせにおける本明細書に開示するＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターの使用を包含する。たとえば、１種またはそれ以上の抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンまたはインターフェロン誘導体；もしくは１種またはそれ以上の抗ＨＣＶ活性をもつ非インターフェロン化合物；または１種またはそれ以上の抗ＨＣＶ活性をもつインターフェロンまたはインターフェロン誘導体；および１種またはそれ以上の抗ＨＣＶ活性をもつ非インターフェロン化合物と組み合わせて、１種またはそれ以上のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターを用いることができる。ヒト患者におけるＨＣＶ感染を治療または予防するために併用して用いる場合、本明細書に開示したＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターおよび抗ＨＣＶ活性をもつ先述の化合物のいずれもが、医薬的または抗ＨＣＶ的有効量にて提供することができる。その相加的および相乗的効果により、上述の併用薬として用いる場合、各成分を準臨床的医薬的または抗ＨＣＶ的有効量、すなわち、もし単独で用いるならば、ＨＣＶビリオンの蓄積を完全に阻止するかまたは減少させること、および／または患者におけるＨＣＶ感染に関連するコンディションもしくは症状または病因を減少または寛解させることにおいて、医薬的有効量で用いた場合のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターおよび抗ＨＣＶ活性をもつ化合物と比較して、低下した医薬的有効性しか提供しない量で提供することもできる。さらに、本発明は、をＨＣＶ感染の治療または予防するためのＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターおよび上述の抗ＨＣＶ活性をもつ化合物の組み合わせの使用を包含し、ここで、１種またはそれ以上のこれらのインヒビターまたは化合物は医薬的有効量で存在し、およびその相加的および相乗的効果により一方または両方が準臨床的医薬的有効量または抗ＨＣＶ的有効量で存在する。本明細書で用いる用語「相加的効果」は、２種（またはそれ以上）の医薬的活性薬の組み合わせた効果が、各作用薬単独で得られる効果の総和に等しいことを意味する。相乗的効果とは、２種（またはそれ以上）の医薬的活性薬の組み合わせた効果が、各作用薬単独で得られる効果の総和よりも大きいことを意味する。
実施例４２
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染に対する現在の標準的療法は、免疫調節剤αインターフェロンを用いる治療である(Chronic Hepatitis C: Current Disease Management, U. S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, 1999)。この療法は、長期インターフェロン療法の後でさえも無応答または再発のいずれかを示す大部分のＨＣＶ患者にとって効果がない。さらに、インターフェロン療法に関連する重篤な副作用がある。
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染に対する現在の標準的療法は、免疫調節剤αインターフェロンを用いる治療である(Chronic Hepatitis C: Current Disease Management, U. S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, 1999)。この療法は、長期インターフェロン療法の後でさえも無応答または再発のいずれかを示す大部分のＨＣＶ患者にとって効果がない。さらに、インターフェロン療法に関連する重篤な副作用がある。
ＨＣＶ感染患者を治療するための新たな、より効果的な抗ウイルス薬に対する緊急の必要性を考慮して、本発明者らは、ＨＣＶのセリンプロテアーゼ（ＨＣＶウイルスタンパク質ＮＳ３およびＮＳ４Ａの複合体）を阻害する一連の化合物を開発した。これらの化合物は、単独で、互いに一緒にして、およびＨＣＶ感染を治療または予防するための他のクラスの化合物と組み合わせて用いることができる。本実施例は、２つの化合物がＨＣＶ ＲＮＡ蓄積を減少するために協力して作用するかどうかを決定するためのＨＣＶサブゲノムＲＮＡレプリコンアッセイ（レプリコンアッセイ）において、３つの代表的ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター、すなわち、化合物ＣＵ、化合物ＥＰおよび化合物ＥＣを、単独で、または一群のインターフェロン（インターフェロンα−２Ｂ(Schering Plough)、インターフェロンα−２Ａ(PBL Biomedical Laboratories, New Brunswick, NJ)、インターフェロンβ(Research Diagnostics Inc, Flanders, NJ)およびヒツジインターフェロンτ(Research Diagnostics Inc, Flanders, NJ)）の個々のメンバーと組み合わせて用いた実験を記載する。レプリコンアッセイは、薬物処置の２日後に、無処置細胞中のレプリコンＲＮＡの量に相関する、レプリコン細胞に残っているＨＣＶサブゲノムＲＮＡ（レプリコンＲＮＡ）の量を測定する(Lohmannら Science 285: 110-113 (1999))。このアッセイでは、ＨＣＶ抗ウイルス薬としての化合物の効力は、レプリコンＲＮＡ蓄積の阻害のレベルに正比例する。
一緒に用いる場合に、それらが相加的または相乗的抗ＨＣＶ活性を示すかどうかを決定するために、インビトロレプリコンアッセイにおいて、２つの薬剤を組み合わせて試験する。たとえばインターフェロンα−２Ｂ（イントロンＡ；Schering Plough)などの免疫調節剤とたとえば化合物ＣＵなどのＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターの組み合わせ効果を評価するために、インビトロＨＣＶ感染の代理モデルとしてレプリコンアッセイを利用する。以下に示すように、レプリコンアッセイにおけるＨＣＶ ＲＮＡレベルを減少させる能力を分析するための正確な数学的決定を用いて測定した結果から、これらの２つのタイプの薬剤の明らかな相乗的抗ＨＣＶ効果があることが証明される。
一緒に用いる場合に、それらが相加的または相乗的抗ＨＣＶ活性を示すかどうかを決定するために、インビトロレプリコンアッセイにおいて、２つの薬剤を組み合わせて試験する。たとえばインターフェロンα−２Ｂ（イントロンＡ；Schering Plough)などの免疫調節剤とたとえば化合物ＣＵなどのＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターの組み合わせ効果を評価するために、インビトロＨＣＶ感染の代理モデルとしてレプリコンアッセイを利用する。以下に示すように、レプリコンアッセイにおけるＨＣＶ ＲＮＡレベルを減少させる能力を分析するための正確な数学的決定を用いて測定した結果から、これらの２つのタイプの薬剤の明らかな相乗的抗ＨＣＶ効果があることが証明される。
レプリコンアッセイ
自己複製ＨＣＶサブゲノムＲＮＡ（レプリコン）を含む細胞系を用いるレプリコンアッセイが、Lohmannら Science 285: 110-113 (1999)に記載されている。本明細書に記載した実験に用いたレプリコンの配列に対するGenbank受託番号は、この参考文献にＡＪ２４２６５４として記載されている。この文献は、レプリコンｃＤＮＡからのＲＮＡのインビトロ転写、Ｈｕｈ７細胞へのレプリコンＲＮＡの電気穿孔によるトランスフェクションおよび抗生物質Ｇ４１８を用いるレプリコンＲＮＡを含む細胞の選択のための方法を開示している。Ｈｕｈ７細胞は、Fox Chase Cancer Research Center (Philadelphia)のDr. William Masonから入手した肝臓ガン細胞系である。これらの細胞は、Fox Chaseから公的に入手可能であり、科学文献に広範に記載されている（Nakabayashiら Cancer Res. 42: 3858-3863 (1982)）。本明細書に記載した実験では、インビトロ転写されたレプリコンＲＮＡ調製品からすべてのテンプレートＤＮＡを除去した後、ＤＮアーゼでの多重処理によって、このＲＮＡをＨｕｈ７細胞に電気穿孔する。
自己複製ＨＣＶサブゲノムＲＮＡ（レプリコン）を含む細胞系を用いるレプリコンアッセイが、Lohmannら Science 285: 110-113 (1999)に記載されている。本明細書に記載した実験に用いたレプリコンの配列に対するGenbank受託番号は、この参考文献にＡＪ２４２６５４として記載されている。この文献は、レプリコンｃＤＮＡからのＲＮＡのインビトロ転写、Ｈｕｈ７細胞へのレプリコンＲＮＡの電気穿孔によるトランスフェクションおよび抗生物質Ｇ４１８を用いるレプリコンＲＮＡを含む細胞の選択のための方法を開示している。Ｈｕｈ７細胞は、Fox Chase Cancer Research Center (Philadelphia)のDr. William Masonから入手した肝臓ガン細胞系である。これらの細胞は、Fox Chaseから公的に入手可能であり、科学文献に広範に記載されている（Nakabayashiら Cancer Res. 42: 3858-3863 (1982)）。本明細書に記載した実験では、インビトロ転写されたレプリコンＲＮＡ調製品からすべてのテンプレートＤＮＡを除去した後、ＤＮアーゼでの多重処理によって、このＲＮＡをＨｕｈ７細胞に電気穿孔する。
以下に詳述するとおりレプリコンアッセイを行う。簡単にいうと、レプリコン細胞を１００００細胞／ウエルの密度で９６ウエルのトレイに置き、３７℃でインキュベートする。１０％ウシ胎児血清、グルタミン、非必須アミノ酸および抗生物質Ｇ４１８（０.２５ｍｇ／ｍｌ）を補足したＤＭＥＭ（ダルベッコの最小必須培地）で細胞をインキュベートする。一夜インキュベートした後、２％ウシ胎児血清および種々の濃度の化合物ＣＵなどのセリンプロテアーゼインヒビターおよび／またはインターフェロンα−２Ｂ（イントロンＡ；Schering Plough)などのインターフェロンを含むＤＭＥＭと培地を交換する。６〜８通りの異なる濃度で各化合物を試験する。濃度範囲の１つの極値に対して、処置の２日後におけるレプリコンＲＮＡ蓄積のほとんど完全な阻害をもたらす高濃度の化合物を選択する。これらの出発濃度から、レプリコンアッセイにおいて試験される濃度範囲が、化合物が非常に有効である濃度ならびに有意な効果がない濃度を含むように一連の希釈を行う。いずれのインターフェロンも加えることなく、および６〜８種類の異なるインターフェロン用量を加えて、各ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター濃度を試験する。同様に、いずれのＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターも加えることなくインターフェロンを試験する。化合物のインキュベーションの４８時間後、プレートから培地を除去し、ＲＮeasy−９６キット（Qiagen Inc.，Valencia, CA）を用いて、全部の細胞ＲＮＡを細胞から抽出する。次いで、定量的ＲＴ−ＰＣＲまたはTaqMan（登録商標）（Applied Biosystems, Foster City CA）によって、このＲＮＡを分析する。TaqMan（登録商標）ＲＴ−ＰＣＲの標的は、レプリコンＲＮＡ中のネオマイシン耐性遺伝子である。各薬剤処置サンプルの複製物が５個および無処置サンプルの複製物が１６個あるようにプレートを配列する。このことは、定量的ＲＴ−ＰＣＲデータにおける統計的信頼度をより高める。
レプリコンアッセイデータの分析から、有望な抗ＨＣＶウイルス薬の効力の評価において有用な２つの値が得られる。試験した各化合物濃度において、無処置細胞におけるレプリコンＲＮＡの量と比較して、２日間の処置中に化合物によって引き起こされたレプリコンＲＮＡ蓄積における阻害レベルを決定する。これを阻害パーセントとして記録する。濃度範囲における細胞の処置によって生じた一連のデータポイントが得られると、ＩＣ５０値、すなわち、ＨＣＶレプリコンＲＮＡ蓄積が化合物によって５０％減じられる化合物の濃度がもたらされる。レプリコンアッセイにおけるＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターの繰り返し試験を通して、ＩＣ５０が約２０％の変動係数パーセント（ＣＶ％またはＩＣ５０／平均ＩＣ５０における標準偏差×１００％）をもつことが決定される。ＩＣ５０は、ＨＣＶ抗ウイルス薬としてのその効力に基いて、本アッセイにおいて試験した個々の化合物を順位付けるのに用いる値である。単純なＩＣ５０決定は、組み合わせて用いた化合物の有用性を評価するには不適切である。異なるインターフェロンおよびセリンプロテアーゼインヒビターすべての組み合わせを用いて生じたデータアレイの最も有効な分析は、併用治療がアゴニスト的、相加的または相乗的であるかどうかを決定するように設計される以下に記載する数学的方法を用いるTABLE７に示すような阻害パーセントの評価を必要とする。
レプリコンアッセイの詳細を以下に示す。
レプリコンアッセイの詳細を以下に示す。
TaqMan（登録商標）ＲＴ−ＰＣＲを用いるＨＣＶレプリコンアッセイにおけるHCVレプリコンＲＮＡの定量的分析のための方法
レプリコンアッセイを用いて、Ｈｕｈ７細胞系における有望なＨＣＶ抗ウイルス化合物のＨＣＶサブゲノムＲＮＡレプリコン分子の蓄積を阻害する能力を測定する(Lohmannら Replication of Subgenomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line. Science 285,110-113 (1999))。本アッセイは、３つの操作上の構成部分を含む：（１）レプリコン細胞の維持、アッセイプレートの設置および化合物の適用；（２）レプリコン細胞からの全部の細胞ＲＮＡの抽出；および（３）各サンプル中のレプリコンＲＮＡの量を測定するための即時ＲＴ−ＰＣＲ（TaqMan（登録商標））。レプリコンアッセイは、行うのに少なくとも４日間を必要とする；しかし、プロセスは中断することができ、ステップ間のサンプルは凍結することができる。各アッセイ構成部分を以下に記載する。
レプリコンアッセイを用いて、Ｈｕｈ７細胞系における有望なＨＣＶ抗ウイルス化合物のＨＣＶサブゲノムＲＮＡレプリコン分子の蓄積を阻害する能力を測定する(Lohmannら Replication of Subgenomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line. Science 285,110-113 (1999))。本アッセイは、３つの操作上の構成部分を含む：（１）レプリコン細胞の維持、アッセイプレートの設置および化合物の適用；（２）レプリコン細胞からの全部の細胞ＲＮＡの抽出；および（３）各サンプル中のレプリコンＲＮＡの量を測定するための即時ＲＴ−ＰＣＲ（TaqMan（登録商標））。レプリコンアッセイは、行うのに少なくとも４日間を必要とする；しかし、プロセスは中断することができ、ステップ間のサンプルは凍結することができる。各アッセイ構成部分を以下に記載する。
１．レプリコン細胞の維持、アッセイプレートの設置および化合物の適用
１．１． レプリコン細胞系の維持
Lohmannら(Replication of Subgenomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line. Science 285,110-113 (1999))の記載にしたがって、レプリコンアッセイに用いる細胞系を作成する。レプリコン細胞を入れた１５０ｃｍ２の細胞培養フラスコ（Costar）を３７℃、５％ＣＯ２下にてインキュベートし、集密になった後、細胞を１：１０ｖ／ｖに希釈して、新たな１５０ｃｍ２の培養フラスコに入れる。培地は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１Ｘ非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、１Ｘグルタミン（Ｇｌｕ）および０.２５ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を含むＤＭＥＭである。３回の一連の培養を行い、各回細胞を集密にし、次いで、希釈して、新たな１５０ｃｍ２の培養フラスコに入れる。次いで、「起源細胞」と称されるこれらの細胞をアリコートにし、将来的にレプリコンアッセイで使用するために保管する。TaqMan（登録商標）に基く分析を行って、細胞当たりのＨＣＶレプリコンゲノムの数を決定すると、細胞当たり〜１５０コピーのレプリコンの存在が示される。これは、ヒトapoＢ遺伝子のコピー（単相体ゲノムの数）の２倍に対するレプリコンＲＮＡのコピーの比率に基く。
１．１．１． 起源細胞を液体窒素中に保管する。レプリコンアッセイに用いた細胞について、２０回の培養後、細胞を捨て、次いで、新鮮なロットを液体窒素保管から復活させる。
１．１． レプリコン細胞系の維持
Lohmannら(Replication of Subgenomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line. Science 285,110-113 (1999))の記載にしたがって、レプリコンアッセイに用いる細胞系を作成する。レプリコン細胞を入れた１５０ｃｍ２の細胞培養フラスコ（Costar）を３７℃、５％ＣＯ２下にてインキュベートし、集密になった後、細胞を１：１０ｖ／ｖに希釈して、新たな１５０ｃｍ２の培養フラスコに入れる。培地は、１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、１Ｘ非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）、１Ｘグルタミン（Ｇｌｕ）および０.２５ｍｇ／ｍｌのＧ４１８を含むＤＭＥＭである。３回の一連の培養を行い、各回細胞を集密にし、次いで、希釈して、新たな１５０ｃｍ２の培養フラスコに入れる。次いで、「起源細胞」と称されるこれらの細胞をアリコートにし、将来的にレプリコンアッセイで使用するために保管する。TaqMan（登録商標）に基く分析を行って、細胞当たりのＨＣＶレプリコンゲノムの数を決定すると、細胞当たり〜１５０コピーのレプリコンの存在が示される。これは、ヒトapoＢ遺伝子のコピー（単相体ゲノムの数）の２倍に対するレプリコンＲＮＡのコピーの比率に基く。
１．１．１． 起源細胞を液体窒素中に保管する。レプリコンアッセイに用いた細胞について、２０回の培養後、細胞を捨て、次いで、新鮮なロットを液体窒素保管から復活させる。
１．２． レプリコンアッセイのための９６ウエルプレートへの細胞のプレーティング
１．２．１． ９６ウエルプレートの調製のために、７５％集密な７５ｃｍ２フラスコのレプリコン含有細胞をトリプシン処理し、次いで、１０ｍｌの培地Ａに懸濁する。培地を除去し、０２５ｗ／ｖ％のトリプシン−ＥＤＴＡを加え、次いでトリプシン−ＥＤＴＡを除去することによって、トリプシン処理を行う。５〜１０分後、細胞をフラスコから出し、培地に懸濁する。
１．２．２． 血球計を用いて細胞を計数し、次いで、細胞濃度を１０５細胞／ｍｌに調節する。
１．２．３． インパクト(Impact)２マルチチャンネルピペット（Matrix）を用いて、各ウエルに１００μｌの細胞懸濁液を播種する。１つの細胞懸濁液から４個の９６ウエルプレート以上プレーティングしてはならない。
１．２．４． ９６ウエルプレートを３７℃にて一夜インキュベートする。
１．２．１． ９６ウエルプレートの調製のために、７５％集密な７５ｃｍ２フラスコのレプリコン含有細胞をトリプシン処理し、次いで、１０ｍｌの培地Ａに懸濁する。培地を除去し、０２５ｗ／ｖ％のトリプシン−ＥＤＴＡを加え、次いでトリプシン−ＥＤＴＡを除去することによって、トリプシン処理を行う。５〜１０分後、細胞をフラスコから出し、培地に懸濁する。
１．２．２． 血球計を用いて細胞を計数し、次いで、細胞濃度を１０５細胞／ｍｌに調節する。
１．２．３． インパクト(Impact)２マルチチャンネルピペット（Matrix）を用いて、各ウエルに１００μｌの細胞懸濁液を播種する。１つの細胞懸濁液から４個の９６ウエルプレート以上プレーティングしてはならない。
１．２．４． ９６ウエルプレートを３７℃にて一夜インキュベートする。
１．３． 化合物の希釈およびレプリコン細胞トレーへの適用
１．３．１． ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解して、最終濃度を２０ｍＭにする。０.１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミンを含むリン酸緩衝生理食塩水にインターフェロンを懸濁する。
１．３．２． ＤＭＳＯで希釈して、２０ｍＭの化合物溶液を１ｍＭにする。
１．３．３． ＤＭＳＯに溶解した化合物５０μｌを１０ｍｌの培地Ｂに加えるか（化合物濃度は５ｍＭであり、ＤＭＳＯ濃度は０.１％である）、または。１ｍＭの化合物２０μｌおよび３０μｌのＤＭＳＯを１０ｍｌの培地Ｂに加える（化合物濃度は２μＭである）。
１．３．４． 化合物／培地Ｂ溶液と培地Ｃ（０.５％のＤＭＳＯを含む）と混合することによって、最終濃度への化合物の希釈を完了する。２ｍｌポリプロピレン９６ウエルブロックにおいて、一連の１〜５個の化合物の希釈物を培地Ｃを用いて作成し、所望の最終濃度の化合物を得る。
１．３．５． ３７℃のインキュベーターから細胞プレートを外し、フタの表面の右コーナーおよび底面の右側部にラベルをつける。
１．３．６． インパクト２ピペットを用いて、９６ウエル希釈ブロックの各ウエルからの化合物／培地の溶液１００μｌを９６ウエルプレートに加える。
１．３．７． １、３または６通りのいずれかの異なる濃度において化合物を試験するためのTABLE３にしたがって、すべての無処置ウエルに培地Ｃ１００μｌを加える。
１．３．１． ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解して、最終濃度を２０ｍＭにする。０.１ｗ／ｖ％ウシ血清アルブミンを含むリン酸緩衝生理食塩水にインターフェロンを懸濁する。
１．３．２． ＤＭＳＯで希釈して、２０ｍＭの化合物溶液を１ｍＭにする。
１．３．３． ＤＭＳＯに溶解した化合物５０μｌを１０ｍｌの培地Ｂに加えるか（化合物濃度は５ｍＭであり、ＤＭＳＯ濃度は０.１％である）、または。１ｍＭの化合物２０μｌおよび３０μｌのＤＭＳＯを１０ｍｌの培地Ｂに加える（化合物濃度は２μＭである）。
１．３．４． 化合物／培地Ｂ溶液と培地Ｃ（０.５％のＤＭＳＯを含む）と混合することによって、最終濃度への化合物の希釈を完了する。２ｍｌポリプロピレン９６ウエルブロックにおいて、一連の１〜５個の化合物の希釈物を培地Ｃを用いて作成し、所望の最終濃度の化合物を得る。
１．３．５． ３７℃のインキュベーターから細胞プレートを外し、フタの表面の右コーナーおよび底面の右側部にラベルをつける。
１．３．６． インパクト２ピペットを用いて、９６ウエル希釈ブロックの各ウエルからの化合物／培地の溶液１００μｌを９６ウエルプレートに加える。
１．３．７． １、３または６通りのいずれかの異なる濃度において化合物を試験するためのTABLE３にしたがって、すべての無処置ウエルに培地Ｃ１００μｌを加える。
１．４ プレートを４８時間３７℃にてインキュベートし、次いで、ＲＮＡ抽出に付す。
２．レプリコン細胞からの全部の細胞ＲＮＡの抽出
２．１． 序論
工程の目的は、ウイルスまたは細胞ＲＮＡが定量的に回収され、定量的ＨＣＶ ＲＴ−ＰＣＲアッセイ分析にとって十分に純粋であるように、インビトロ組織培養サンプルからＲＮＡを抽出することである。
ＲＮＡ抽出の効率における変動が検出されるように、ＲＮＡ抽出の前に、各細胞サンプルに、ＨＣＶに幾らかの類似性をもつＲＮＡウイルスであるウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）の標準量を加える。したがって、最終的マルチプルＲＴ−ＰＣＲ反応において検出されたＢＶＤＶ ＲＮＡ検出のレベルは、すべてのウエルにおいて、レプリコンアッセイに関連する可変性限界内で一致すべきである。このＲＮＡ抽出効率内部コントロールを下記のTaqMan（登録商標）セクションでさらに議論する。
使用したＲＮＡ抽出アプローチは、Qiagen Inc. (Valencia, CA)製のＲＮeasy−９６法である。この方法は、９６ウエル組織培養操作に適合するように配置される９６シリカベースミニカラムを用いる。ＲＮＡ抽出技術は、すべての細胞タンパク質および核酸ならびにヌクレアーゼを強力なカオトロピック塩（チオシアン酸グアニジウム）で最初に変性するＢｏｏｍ法の変法である。この環境において、核酸は、ミニカラムディスク中の物質であるシリカに対して強い親和性をもつ；しかし、タンパク質および他の夾雑物は、シリカに結合せず、カラムを通り抜ける。カオトロピック／エタノール溶液でカラムを洗浄した後、サンプルをある程度乾燥し、次いで、少量の水でカラムから核酸を放出させる。
ＨＣＶ ＲＮＡの回収の可変性を低下させるために、カラムを洗浄し、半乾き状態になるように注意する。カラム内に少量のエタノールが存在すると、最終的ＲＮＡが汚染され、ＲＴ−ＰＣＲ検出システムが妨害される。出発サンプルが生物学的に危険であり、カオトロピック塩が、非常に焼灼性であり、チオシアン酸塩として酸性環境に接触させると、有毒なシアニドを生成しうるので、この工程のすべての段階において注意が必要である。
２．１． 序論
工程の目的は、ウイルスまたは細胞ＲＮＡが定量的に回収され、定量的ＨＣＶ ＲＴ−ＰＣＲアッセイ分析にとって十分に純粋であるように、インビトロ組織培養サンプルからＲＮＡを抽出することである。
ＲＮＡ抽出の効率における変動が検出されるように、ＲＮＡ抽出の前に、各細胞サンプルに、ＨＣＶに幾らかの類似性をもつＲＮＡウイルスであるウシウイルス性下痢ウイルス（ＢＶＤＶ）の標準量を加える。したがって、最終的マルチプルＲＴ−ＰＣＲ反応において検出されたＢＶＤＶ ＲＮＡ検出のレベルは、すべてのウエルにおいて、レプリコンアッセイに関連する可変性限界内で一致すべきである。このＲＮＡ抽出効率内部コントロールを下記のTaqMan（登録商標）セクションでさらに議論する。
使用したＲＮＡ抽出アプローチは、Qiagen Inc. (Valencia, CA)製のＲＮeasy−９６法である。この方法は、９６ウエル組織培養操作に適合するように配置される９６シリカベースミニカラムを用いる。ＲＮＡ抽出技術は、すべての細胞タンパク質および核酸ならびにヌクレアーゼを強力なカオトロピック塩（チオシアン酸グアニジウム）で最初に変性するＢｏｏｍ法の変法である。この環境において、核酸は、ミニカラムディスク中の物質であるシリカに対して強い親和性をもつ；しかし、タンパク質および他の夾雑物は、シリカに結合せず、カラムを通り抜ける。カオトロピック／エタノール溶液でカラムを洗浄した後、サンプルをある程度乾燥し、次いで、少量の水でカラムから核酸を放出させる。
ＨＣＶ ＲＮＡの回収の可変性を低下させるために、カラムを洗浄し、半乾き状態になるように注意する。カラム内に少量のエタノールが存在すると、最終的ＲＮＡが汚染され、ＲＴ−ＰＣＲ検出システムが妨害される。出発サンプルが生物学的に危険であり、カオトロピック塩が、非常に焼灼性であり、チオシアン酸塩として酸性環境に接触させると、有毒なシアニドを生成しうるので、この工程のすべての段階において注意が必要である。
２．２・ 方法
２．２．１． 細胞溶解
２．２．１．１． 細胞溶解緩衝液の調製：１つの９６ウエルプレート当たり、β−メルカプトエタノール（β−ＭＥ）１５０μｌおよびＢＶＤＶストック１μｌ（添加前にストックをボルテックスする）をＲＬＴ緩衝液（ＲＮeasy キット；Qiagenの成分）１５ｍｌに加える。このストックは、ＭＤＢＫ細胞（ウシ腎細胞、＃ＣＣＬ−２２、American Type Culture Collection, Manassas VAから入手可能）をＢＶＤＶに感染させ、ピーク細胞変性効果（ＣＰＥ）時に採集することによって調製する。このストックは、およそ１×１０７ｐｆｕ／ｍｌの感染力価をもつ。このことは、TaqMan（登録商標）アッセイにおいて、ＢＶＤＶに約２２という閾値サイクルを与える。ＢＶＤＶストックは、−８０℃のフリーザーで貯蔵ずる。
２．２．１．２． 無血清ＭＥＭ培地１５０μｌで細胞を洗浄する（８チャンネル電動ピペットＰ１２５０におけるプログラム４：Fill１２５０、Disp１５０×８）。各ウエルに溶解緩衝液１５０μｌを加える（同じプログラム）。
２．２．１．３． ＲＮＡをただちに抽出するか、または−８０℃で凍結する。
２．２．２． ＲＮＡ抽出用試薬および材料の調製
２．２．２．１． ＲＰＥおよびＲＮeasy９６キットのロット＃を記録する。
２．２．２．２． ＰＲＥ：１瓶のＰＲＥ（Qiagen）に１００％エタノール７２０ｍｌを加え、十分に混合する；ＰＲＥの瓶は使用するまで常に振とうしておく。
２．２．２．３． ７０％エタノール：１００％エタノール３５０ｍｌにピロカルボン酸ジエチル（ＤＥＰＣ）水溶液１５０ｍｌを加え、十分に混合する。
２．２．３． ＲＮeasy９６キットにおけるＲＮＡの調製
２．２．３．１． 室温にて４０分間凍結サンプルを解凍する。同時に、抽出コントロール１カラムを各プレート用に解凍する（抽出コントロール：ＲＮeasy抽出コントロールは、すべて一緒に連結された８個のチューブからなるセットである。各チューブの内部には、一定の比率のＨＣＶポジティブおよびネガティブ細胞を含む細胞溶解液１７０μｌが入っている。それぞれ２つのチューブは、ＬＯＷ、ＭＥＤＩＵＭ、ＨＩＧＨおよびＺＥＲＯのコントロールを含む）（以下のセクション２．３のプロトコルを参照）。
２．２．３．２． １００μｌのピペット中を５回上下させることによってサンプルを混合する。２ｍｌのマトリックス・スクエア−ウエルブロックのカラム１−１０に全サンプルを移す（Ｐ２５０におけるプログラム１：Mix１００×５、Fill１７０、パージ）。
２．２．３．３． レプリコン標準１５０ｍｌをカラム１１に移す（カラム１２はサンプルなし）。
２．２．３．４． 各サンプルに７０％エタノール１５０μｌを加える（Ｐ１２５０におけるプログラム４：Fill１２５０、Disp１５０）。
２．２．３．５． 適当なプレート番号をラベル付けしたＲＮeasy−９６プレートを真空マニホルドに置く。溶解液／エタノールを混合し、ＲＮeasy−９６プレートに移す（Ｐ１２５０におけるプログラム１：Mix２００、Times５、Fill３３０およびパージ）。使用しないウエルは、透明テープ（Qiagen配給）で密閉する；通例カラム１２。
２．２．３．６． サンプルをミニカラムにロードするために吸引（およそ８００mbar）を行う。
２．２．３．７． １ウエル当たり１０００μｌのＲＷ１緩衝液（Qiagen）でＲＮeasy−９６プレートを洗浄する（Ｐ１２５０におけるプログラム２：Fill１０００、Disp１０００）。
２．２．３．８． ＲＷ１緩衝液を通してフィルターに吸引を行い、フロースルーを空にする。
２．２．３．９． １０００μｌのＲＰＥ緩衝液／ウエルでＲＮeasy−９６プレートを洗浄する（Ｐ１２５０におけるプログラム２）。
２．２．３．１０． ＲＰＥ緩衝液を通しフィルターに吸引を行う。
２．２．３．１１． ステップ２．２．３．９を繰り返す。
２．２．３．１２． ＲＰＥ緩衝液を通しフィルターに吸引を行い、吸引を３分間維持する。
２．２．３．１３． ＲＮeasy−９６プレートを乾燥する：ＲＮeasy−９６プレートをコレクション・マイクロチューブ・ラック（Qiagen供給）に置き、供給されたＡｉｒＰｏｒｅテープでカバーし、次いで、ユニットを６０００×ｇで１０分間遠心分離する（Qiagen Sigma遠心分離機；４−１５Ｃ）。
２．２．３．１５． ＲＮeasy−９６プレートからＲＮＡを溶離する：ＲＮeasy−９６プレートを新たなコレクション・マイクロチューブ・ラックの上段に移す。各ウエルの真中に無ＲＮアーゼ水７０μｌを加える（Ｐ１２５０におけるプログラム３：Fill８５０、Disp７０）。
２．２．３．１６． 室温にて１分間インキュベートし、次いで、プレートを新たなＡｉｒＰｏｒｅテープでカバーする。
２．２．３．１７． 次いで、Sigma４−１５Ｃ遠心分離機にて６０００×ｇで４分間ユニットを遠心分離する。溶出した体積は２８μｌおよび５０μｌの間である。
２．２．３．１８． ＲＮeasy−９６プレートを捨て、コレクション・チューブ・ラックにQiagen提供の栓で封をする（ストリップ当たり８）。
２．２．３．１９． 溶出したＲＮＡは、−８０℃で貯蔵するか、またはただちにTaqMan（登録商標）アッセイで分析する。
２．２．１． 細胞溶解
２．２．１．１． 細胞溶解緩衝液の調製：１つの９６ウエルプレート当たり、β−メルカプトエタノール（β−ＭＥ）１５０μｌおよびＢＶＤＶストック１μｌ（添加前にストックをボルテックスする）をＲＬＴ緩衝液（ＲＮeasy キット；Qiagenの成分）１５ｍｌに加える。このストックは、ＭＤＢＫ細胞（ウシ腎細胞、＃ＣＣＬ−２２、American Type Culture Collection, Manassas VAから入手可能）をＢＶＤＶに感染させ、ピーク細胞変性効果（ＣＰＥ）時に採集することによって調製する。このストックは、およそ１×１０７ｐｆｕ／ｍｌの感染力価をもつ。このことは、TaqMan（登録商標）アッセイにおいて、ＢＶＤＶに約２２という閾値サイクルを与える。ＢＶＤＶストックは、−８０℃のフリーザーで貯蔵ずる。
２．２．１．２． 無血清ＭＥＭ培地１５０μｌで細胞を洗浄する（８チャンネル電動ピペットＰ１２５０におけるプログラム４：Fill１２５０、Disp１５０×８）。各ウエルに溶解緩衝液１５０μｌを加える（同じプログラム）。
２．２．１．３． ＲＮＡをただちに抽出するか、または−８０℃で凍結する。
２．２．２． ＲＮＡ抽出用試薬および材料の調製
２．２．２．１． ＲＰＥおよびＲＮeasy９６キットのロット＃を記録する。
２．２．２．２． ＰＲＥ：１瓶のＰＲＥ（Qiagen）に１００％エタノール７２０ｍｌを加え、十分に混合する；ＰＲＥの瓶は使用するまで常に振とうしておく。
２．２．２．３． ７０％エタノール：１００％エタノール３５０ｍｌにピロカルボン酸ジエチル（ＤＥＰＣ）水溶液１５０ｍｌを加え、十分に混合する。
２．２．３． ＲＮeasy９６キットにおけるＲＮＡの調製
２．２．３．１． 室温にて４０分間凍結サンプルを解凍する。同時に、抽出コントロール１カラムを各プレート用に解凍する（抽出コントロール：ＲＮeasy抽出コントロールは、すべて一緒に連結された８個のチューブからなるセットである。各チューブの内部には、一定の比率のＨＣＶポジティブおよびネガティブ細胞を含む細胞溶解液１７０μｌが入っている。それぞれ２つのチューブは、ＬＯＷ、ＭＥＤＩＵＭ、ＨＩＧＨおよびＺＥＲＯのコントロールを含む）（以下のセクション２．３のプロトコルを参照）。
２．２．３．２． １００μｌのピペット中を５回上下させることによってサンプルを混合する。２ｍｌのマトリックス・スクエア−ウエルブロックのカラム１−１０に全サンプルを移す（Ｐ２５０におけるプログラム１：Mix１００×５、Fill１７０、パージ）。
２．２．３．３． レプリコン標準１５０ｍｌをカラム１１に移す（カラム１２はサンプルなし）。
２．２．３．４． 各サンプルに７０％エタノール１５０μｌを加える（Ｐ１２５０におけるプログラム４：Fill１２５０、Disp１５０）。
２．２．３．５． 適当なプレート番号をラベル付けしたＲＮeasy−９６プレートを真空マニホルドに置く。溶解液／エタノールを混合し、ＲＮeasy−９６プレートに移す（Ｐ１２５０におけるプログラム１：Mix２００、Times５、Fill３３０およびパージ）。使用しないウエルは、透明テープ（Qiagen配給）で密閉する；通例カラム１２。
２．２．３．６． サンプルをミニカラムにロードするために吸引（およそ８００mbar）を行う。
２．２．３．７． １ウエル当たり１０００μｌのＲＷ１緩衝液（Qiagen）でＲＮeasy−９６プレートを洗浄する（Ｐ１２５０におけるプログラム２：Fill１０００、Disp１０００）。
２．２．３．８． ＲＷ１緩衝液を通してフィルターに吸引を行い、フロースルーを空にする。
２．２．３．９． １０００μｌのＲＰＥ緩衝液／ウエルでＲＮeasy−９６プレートを洗浄する（Ｐ１２５０におけるプログラム２）。
２．２．３．１０． ＲＰＥ緩衝液を通しフィルターに吸引を行う。
２．２．３．１１． ステップ２．２．３．９を繰り返す。
２．２．３．１２． ＲＰＥ緩衝液を通しフィルターに吸引を行い、吸引を３分間維持する。
２．２．３．１３． ＲＮeasy−９６プレートを乾燥する：ＲＮeasy−９６プレートをコレクション・マイクロチューブ・ラック（Qiagen供給）に置き、供給されたＡｉｒＰｏｒｅテープでカバーし、次いで、ユニットを６０００×ｇで１０分間遠心分離する（Qiagen Sigma遠心分離機；４−１５Ｃ）。
２．２．３．１５． ＲＮeasy−９６プレートからＲＮＡを溶離する：ＲＮeasy−９６プレートを新たなコレクション・マイクロチューブ・ラックの上段に移す。各ウエルの真中に無ＲＮアーゼ水７０μｌを加える（Ｐ１２５０におけるプログラム３：Fill８５０、Disp７０）。
２．２．３．１６． 室温にて１分間インキュベートし、次いで、プレートを新たなＡｉｒＰｏｒｅテープでカバーする。
２．２．３．１７． 次いで、Sigma４−１５Ｃ遠心分離機にて６０００×ｇで４分間ユニットを遠心分離する。溶出した体積は２８μｌおよび５０μｌの間である。
２．２．３．１８． ＲＮeasy−９６プレートを捨て、コレクション・チューブ・ラックにQiagen提供の栓で封をする（ストリップ当たり８）。
２．２．３．１９． 溶出したＲＮＡは、−８０℃で貯蔵するか、またはただちにTaqMan（登録商標）アッセイで分析する。
２．３． 抽出コントロールの調製
第１日
２．３．１．１． ２.５×１０７個のレプリコン酸性細胞を１５０ｃｍ２の組織培養フラスコ（Ｔ−１５０）に播く。
２．３．１．２． ２.０×１０６個のＨｕｈ７細胞を７５ｃｍ２の組織培養フラスコ（Ｔ−７５）に播く。
２．３．１．３． ３７℃にて一夜インキュベートする。
第２日
２．３．１．４． 細胞を溶解緩衝液に溶解する。
２．３．１．５． Ｈｕｈ７およびレプリコン産生細胞から上清を除去し、１０ｍｌの無血清培地（ＭＥＭ）で単層を洗浄する。
２．３．１．６． Ｈｕｈ７細胞に溶解緩衝液（溶解緩衝液１５ｍｌ当たり、ＢＶＤＶストック１μｌを含む）３０ｍｌを加え、繰り返しピペット操作によって混合し、次いで、５０ｍｌ円錐ボトム組織培養遠心チューブに細胞溶解液を入れる。
２．３．１．７． レプリコン産生細胞に溶解緩衝液１０.５ｍｌを加え、繰り返しピペット操作によって混合し、次いで、５０ｍｌ円錐ボトム組織培養遠心チューブに細胞溶解液を入れる。
２．３．２． ＨＩＧＨ抽出標準用：レプリコン産生細胞溶解液１７０μｌのアリコートを２つのマトリックス０.７５ｍｌチューブ・ラックの５および６列に入れる。
２．３．３． ＭＥＤＩＵＭ抽出標準用：Ｈｕｈ７溶解液９ｍｌにレプリコン産生細胞溶解液１.０ｍｌを加え、十分に混合する。この混合物１７０μｌのアリコートを２つのマトリックス０.７５ｍｌチューブ・ラックの３および４列に入れる。
２．３．４． ＬＯＷ抽出標準用：Ｈｕｈ７溶解液１０ｍｌにレプリコン産生細胞溶解液５０μｌを加え、十分に混合する。この混合物１７０μｌのアリコートを２つのマトリックス０.７５ｍｌチューブ・ラックの１および２列に入れる。
２．３．５． ＺＥＲＯ抽出標準用：Ｈｕｈ７細胞溶解液１７０μｌのアリコートを２つのマトリックス０.７５ｍｌチューブ・ラックの７および８列に入れる。
２．３．６ コントロールを−８０℃にて貯蔵する。
第１日
２．３．１．１． ２.５×１０７個のレプリコン酸性細胞を１５０ｃｍ２の組織培養フラスコ（Ｔ−１５０）に播く。
２．３．１．２． ２.０×１０６個のＨｕｈ７細胞を７５ｃｍ２の組織培養フラスコ（Ｔ−７５）に播く。
２．３．１．３． ３７℃にて一夜インキュベートする。
第２日
２．３．１．４． 細胞を溶解緩衝液に溶解する。
２．３．１．５． Ｈｕｈ７およびレプリコン産生細胞から上清を除去し、１０ｍｌの無血清培地（ＭＥＭ）で単層を洗浄する。
２．３．１．６． Ｈｕｈ７細胞に溶解緩衝液（溶解緩衝液１５ｍｌ当たり、ＢＶＤＶストック１μｌを含む）３０ｍｌを加え、繰り返しピペット操作によって混合し、次いで、５０ｍｌ円錐ボトム組織培養遠心チューブに細胞溶解液を入れる。
２．３．１．７． レプリコン産生細胞に溶解緩衝液１０.５ｍｌを加え、繰り返しピペット操作によって混合し、次いで、５０ｍｌ円錐ボトム組織培養遠心チューブに細胞溶解液を入れる。
２．３．２． ＨＩＧＨ抽出標準用：レプリコン産生細胞溶解液１７０μｌのアリコートを２つのマトリックス０.７５ｍｌチューブ・ラックの５および６列に入れる。
２．３．３． ＭＥＤＩＵＭ抽出標準用：Ｈｕｈ７溶解液９ｍｌにレプリコン産生細胞溶解液１.０ｍｌを加え、十分に混合する。この混合物１７０μｌのアリコートを２つのマトリックス０.７５ｍｌチューブ・ラックの３および４列に入れる。
２．３．４． ＬＯＷ抽出標準用：Ｈｕｈ７溶解液１０ｍｌにレプリコン産生細胞溶解液５０μｌを加え、十分に混合する。この混合物１７０μｌのアリコートを２つのマトリックス０.７５ｍｌチューブ・ラックの１および２列に入れる。
２．３．５． ＺＥＲＯ抽出標準用：Ｈｕｈ７細胞溶解液１７０μｌのアリコートを２つのマトリックス０.７５ｍｌチューブ・ラックの７および８列に入れる。
２．３．６ コントロールを−８０℃にて貯蔵する。
３．TaqMan（登録商標）ＲＴ−ＰＣＲおよびデータ分析
３．１． 序論：リアルタイム定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いて、各サンプル中のＨＣＶレプリコンＲＮＡの量を測定する。この技術は、ＰＣＲ−ベース５'ヌクレアーゼアッセイおよびTaqMan（登録商標）とも呼ばれている。分析器具は、Applied Biosystems ７７００ プリズム配列検出システム(Applied Biosystems, Foster City, CA)である。この器具は、本質的に、熱サイクラーを組み合わせた時間−多重レーザー誘導蛍光分光計である。それは、ＰＣＲプロセスの過程を通して、９６ウエルサンプルトレーの各ウエル中のＰＣＲアンプリコンの蓄積をモニターする。
３．１． 序論：リアルタイム定量的ＲＴ−ＰＣＲを用いて、各サンプル中のＨＣＶレプリコンＲＮＡの量を測定する。この技術は、ＰＣＲ−ベース５'ヌクレアーゼアッセイおよびTaqMan（登録商標）とも呼ばれている。分析器具は、Applied Biosystems ７７００ プリズム配列検出システム(Applied Biosystems, Foster City, CA)である。この器具は、本質的に、熱サイクラーを組み合わせた時間−多重レーザー誘導蛍光分光計である。それは、ＰＣＲプロセスの過程を通して、９６ウエルサンプルトレーの各ウエル中のＰＣＲアンプリコンの蓄積をモニターする。
３．２． ＢＶＤＶ内部コントロールの使用：先のセクションで述べたように、内部ポジティブコントロールをすべてのサンプルに組み入れる。これは、ＲＮＡ抽出効率の測定器として働き、TaqMan（登録商標）を阻害する汚染物質をサンプルが含むかどうかを示す。ＢＶＤをカオトロピック細胞溶解緩衝液と混合した後、細胞緩衝液を細胞に適用する。ポジティブコントロールはすべてのサンプルに含まれるが、ＢＶＤＶ内部ポジティブコントロールアッセイは、サンプルに問題がある可能性を示唆する、ＨＣＶレプリコンＲＮＡアッセイデータが予期される限界の外側に入った場合のみに行う。２つの異なる蛍光リポーター着色料で標識された検出プローブを用いることによって（「多重」）、７７００装置は同時に、同じチューブ中の２つの異なるＰＣＲアンプリコンの蓄積をモニターすることが可能である。サンプルプレートのＢＶＤＶ内部ポジティブコントロールについてのTaqMan（登録商標）分析を誘発する特異的基準は、データ分析セクション（３．６）に記載する。
３．３． ＨＣＶレプリコンＲＮＡ TaqMan（登録商標）プローブおよびプライマー：レプリコンにコードされたネオマイシン耐性遺伝子（neo）中のＲＮＡ二次構造の予期される遺伝安定性および一般的欠如のために、その領域に結合するプライマーおよびプローブを採用する。レプリコンＲＮＡのこのセグメントは、８００１塩基対レプリコンの３４２−１１９３塩基から伸びる（配列番号１）。
３．４． 方法
３．４．１． ＮＥＯおよびＢＶＤＶ ＲＴ−ＰＣＲのための１ｘマスターミックスの調製方法
３．４．１． ＮＥＯおよびＢＶＤＶ ＲＴ−ＰＣＲのための１ｘマスターミックスの調製方法
３．４．２． マスターミックス用試薬の調製
３．４．２．１． 以下の２つのステップにしたがってベンチを清掃し、ピペットからＲＮＡアーゼをふき取る。
RNAse Zap (Ambion, Austin, TX)
RNAse Away (Molecular Bioproducts, San Diego, CA)
３．４．２．２． コアのＥＺ ＲＴ−ＰＣＲ試薬(Applied Biosystems)を開封し、５ｘ緩衝液を氷上に置く。１つのＥＺ ＲＴ−ＰＣＲ試薬キットを用いて、２つの９６−ウエルＲＮＡ抽出を分析することができる。
３．４．２．３． −２０℃から２μＭ ＶＩＣプローブの１つのチューブ（ＮＥＯまたはＢＶＤＶ、チューブ当たり５５０μｌ）を取り、氷上に置く。
３．４．２．４． −２０℃から３μＭ フォワード／リバースプライマーの１つのチューブ（ＮＥＯまたはＢＶＤＶ、チューブ当たり５５０μｌ）を取り、氷上に置く。
３．４．２．５． −８０℃から標準ＲＮＡ転写物の１つのチューブ（３０μｌ）（１０８コピー／１０μｌ）を取り、氷上に置く。
３．４．２．６． 室温のAmbion水の１つのチューブを取る。
３．４．２．１． 以下の２つのステップにしたがってベンチを清掃し、ピペットからＲＮＡアーゼをふき取る。
RNAse Zap (Ambion, Austin, TX)
RNAse Away (Molecular Bioproducts, San Diego, CA)
３．４．２．２． コアのＥＺ ＲＴ−ＰＣＲ試薬(Applied Biosystems)を開封し、５ｘ緩衝液を氷上に置く。１つのＥＺ ＲＴ−ＰＣＲ試薬キットを用いて、２つの９６−ウエルＲＮＡ抽出を分析することができる。
３．４．２．３． −２０℃から２μＭ ＶＩＣプローブの１つのチューブ（ＮＥＯまたはＢＶＤＶ、チューブ当たり５５０μｌ）を取り、氷上に置く。
３．４．２．４． −２０℃から３μＭ フォワード／リバースプライマーの１つのチューブ（ＮＥＯまたはＢＶＤＶ、チューブ当たり５５０μｌ）を取り、氷上に置く。
３．４．２．５． −８０℃から標準ＲＮＡ転写物の１つのチューブ（３０μｌ）（１０８コピー／１０μｌ）を取り、氷上に置く。
３．４．２．６． 室温のAmbion水の１つのチューブを取る。
３．４．３． ９６−ウエルプレート反応用マスター混合物の組み立て
３．４．３．１． １ｍｌピペットを使用して、５ｘ緩衝液(Applied Biosystems)を１４ｍｌチューブへ移す；加えた総量は１１００μｌである。
３．４．３．２． １ｍｌピペットを使用して、２５ｍＭのＭｎ(ＯＡｃ)２(Applied Biosystems)を１４ｍｌチューブへ移す；加えた総量は６６０μｌである。
３．４．３．３． ２００μｌピペットを使用して、１０ｍＭのｄＡＴＰ１６５μｌを１４ｍｌチューブへ移す。１０ｍＭのｄＣＴＰ、２０ｍＭのｄＵＴＰおよび１０ｍＭのｄＧＴＰについて同様にする。
３．４．３．４． １ｍｌピペットを使用して、５５０μｌの１０ｘ３μＭフォワード／リバースプライマーミックスを加える。
３．４．３．５． １ｍｌピペットを使用して、５５０μｌの１０ｘ２μＭプローブを加える。
３．４．３．６． １ｍｌピペットを使用して、２２０μｌのrTthＤＮＡポリメラーゼ(Applied Biosystems)を加える。
３．４．３．７． １００μｌピペットを使用して、５５μｌのAmpEraseＵＮＧ(Applied Biosystems)を加える。
３．４．３．８． １ｍｌピペットを使用して、６０５μｌのAmbionＨ２Ｏを１４ｍｌチューブに加える；最終体積は４４００μｌである。
３．４．３．９． ４４００μｌのマスターミックスを２５ｍｌの試薬リザーバーに移す。
３．４．３．１０． ８チャンネルピペットを用いて９６ウエルすべてに、ウエル当たり４０μｌを分配する。
３．４．３．１１． カラム１からカラム１１まで、順次カラムに、８チャンネルピペットを用いて反応プレートのウエルに抽出された道のサンプル１０μｌを移す。移した後、各カラムに栓をする。
３．４．３．１２． 標準曲線に用いるために、２７０μｌのAmbionＨ２Ｏを３０μｌの１０８コピー／１０μｌＲＮＡ転写物に加え、混合する。ここで、１０７コピーのＨＣＶレプリコン定量標準ＲＮＡ／１０μｌが存在する。
３．４．３．１． １ｍｌピペットを使用して、５ｘ緩衝液(Applied Biosystems)を１４ｍｌチューブへ移す；加えた総量は１１００μｌである。
３．４．３．２． １ｍｌピペットを使用して、２５ｍＭのＭｎ(ＯＡｃ)２(Applied Biosystems)を１４ｍｌチューブへ移す；加えた総量は６６０μｌである。
３．４．３．３． ２００μｌピペットを使用して、１０ｍＭのｄＡＴＰ１６５μｌを１４ｍｌチューブへ移す。１０ｍＭのｄＣＴＰ、２０ｍＭのｄＵＴＰおよび１０ｍＭのｄＧＴＰについて同様にする。
３．４．３．４． １ｍｌピペットを使用して、５５０μｌの１０ｘ３μＭフォワード／リバースプライマーミックスを加える。
３．４．３．５． １ｍｌピペットを使用して、５５０μｌの１０ｘ２μＭプローブを加える。
３．４．３．６． １ｍｌピペットを使用して、２２０μｌのrTthＤＮＡポリメラーゼ(Applied Biosystems)を加える。
３．４．３．７． １００μｌピペットを使用して、５５μｌのAmpEraseＵＮＧ(Applied Biosystems)を加える。
３．４．３．８． １ｍｌピペットを使用して、６０５μｌのAmbionＨ２Ｏを１４ｍｌチューブに加える；最終体積は４４００μｌである。
３．４．３．９． ４４００μｌのマスターミックスを２５ｍｌの試薬リザーバーに移す。
３．４．３．１０． ８チャンネルピペットを用いて９６ウエルすべてに、ウエル当たり４０μｌを分配する。
３．４．３．１１． カラム１からカラム１１まで、順次カラムに、８チャンネルピペットを用いて反応プレートのウエルに抽出された道のサンプル１０μｌを移す。移した後、各カラムに栓をする。
３．４．３．１２． 標準曲線に用いるために、２７０μｌのAmbionＨ２Ｏを３０μｌの１０８コピー／１０μｌＲＮＡ転写物に加え、混合する。ここで、１０７コピーのＨＣＶレプリコン定量標準ＲＮＡ／１０μｌが存在する。
３．４．４． 各実行のためのＡＢＩ７７００のセットアップ
３．４．４．１． 各実行の前に、ＡＢＩ７７００についてコンピューターをリブートし、デスクトップを再建する。
３．４．４．２． クローズし、ハードドライブからいずれかの余分なプログラムを除去する；オーバーランデータを破壊する。
３．４．４．３． シーケンス・ディテクター・ｖ１.７プログラム（SDS software）を開く。
３．４．４．５． “レプリコンアッセイラン”ホルダーを開く。
３．４．４．６． “レプリコンアッセイラン”テンプレートプレートを開く。テンプレートにプログラムされた熱サイクラー条件は以下の通りである：
ステージ１：５０℃で２分
ステージ２：６０℃で３０分
ステージ３：９５℃で５分
ステージ４：９５℃で１５秒
ステージ５：６０℃で６０秒
ステージ４−５のサイクル繰り返し数：４０
テンプレートインスツルメント：診断：アドバンスト・オプション：
セレクト・ビュー：ディスプレー・ｍｓｅ
セレクト・ビュー：ディスプレー・ベスト・フィット
セレクト・ミサレイニャス（miscellaneous）：レファレンス・ダイ・ＲＯＸ
３．４．４．７． “レプリコンアッセイラン”ホルダーにファイルを“セーブ”（“セーブ・アズ”ではない）
３．４．４．８． セットアップの表示：ヒット・ＲＵＮ
３．４．４．１． 各実行の前に、ＡＢＩ７７００についてコンピューターをリブートし、デスクトップを再建する。
３．４．４．２． クローズし、ハードドライブからいずれかの余分なプログラムを除去する；オーバーランデータを破壊する。
３．４．４．３． シーケンス・ディテクター・ｖ１.７プログラム（SDS software）を開く。
３．４．４．５． “レプリコンアッセイラン”ホルダーを開く。
３．４．４．６． “レプリコンアッセイラン”テンプレートプレートを開く。テンプレートにプログラムされた熱サイクラー条件は以下の通りである：
ステージ１：５０℃で２分
ステージ２：６０℃で３０分
ステージ３：９５℃で５分
ステージ４：９５℃で１５秒
ステージ５：６０℃で６０秒
ステージ４−５のサイクル繰り返し数：４０
テンプレートインスツルメント：診断：アドバンスト・オプション：
セレクト・ビュー：ディスプレー・ｍｓｅ
セレクト・ビュー：ディスプレー・ベスト・フィット
セレクト・ミサレイニャス（miscellaneous）：レファレンス・ダイ・ＲＯＸ
３．４．４．７． “レプリコンアッセイラン”ホルダーにファイルを“セーブ”（“セーブ・アズ”ではない）
３．４．４．８． セットアップの表示：ヒット・ＲＵＮ
３．５． ＳＤＳソフトウェアを用いる実行後のＡＢＩ７７００データの調製
３．５．１． ＡＢＩ７７００からアッセイプレートを除去し、けっして開封することなく捨てる。このことは、ＰＣＲ相互汚染に関する実験室の問題を大きく減少させる。
３．５．２． シーケンス・ディテクター・システム・ソフトウェア・Ｖ１.７を用いてデータを分析する。
３．５．３． デフォルト・セッティングを用いて閾値レベルを最初に設定する。
３．５．４． データ拒否基準：全プレートのデータポイントまたは列を拒否することができる。もし、プロトコルからの重大な逸脱、試薬の失敗もしくは事故、またはＡＢＩ７７００の故障があったならば、データを捨てることができる。明らかに正常な実行からのいずれかのデータポイントを拒否するには、これらの基準のうちの１つまたはそれ以上を満たさなければならない。
３．５．４．１． 閾値サイクル計算。通常、ＳＤＳソフトウェアに対するデフォルト値を用いる。もし、最も濃縮したサンプルのＣｔが１５以下ならば、最高濃度のサンプルのＣｔがストップ値以上であるように、より低い値に対して必要とされる閾値ストップ限界を変更する。この変更を行った後、計算をアップデイトする。
３．５．４．２． neoＲＮＡ標準の分析によって作成された線の勾配およびｙ軸切片について平均値からの偏位によって指示される全く異常なTaqMan（登録商標）実行を拒否することを考慮する。このような値についての許容範囲は：
勾配値は、３.０および３.６の間であるべきである。
ｙ切片サイクルは、３６および４１サイクルの間であるべきである。
３．５．４．３． 極端なＲｎ／デルタＲｎによって示される異常な独特のTaqMan（登録商標）ウエルがＳＤＳソフトウェアの計算に影響を及ぼさないように、データ分析の前に、それらを削除することができる。
３．５．４．４． テンプレートのないコントロールＣｔ値を検討し、記録し、それらが、いずれかの化合物で処理されたサンプルのＣｔよりも高い値である＞７.０Ｃｔ（＞１００Ｘ）であることを確認する。
３．５．５． ＨＣＶ ＲＮＡ標準Ｃｔ値を先の結果と比較する。
３．５．６． ＨＣＶ ＲＮＡ標準曲線を先の結果と比較する。
３．５．７． もし、個々のウエルにおいて異常な増殖が明らかであるならば、それらのウエルを同定し、注目する。
３．５．８． マイクロソフト・エクセルを用いる分析のために、７７００コンピューターから他のコンピューターへ“結果”ファイルをエクスポートし、転送する。
３．５．９． 使用した試薬調製または希釈における以下の変更のいずれかが報告される。
ベンダーからの新規プローブまたはプライマー合成。
新規プローブまたはプライマーの希釈およびアリコート。
新規標準ＲＮＡ転写物の調製。
新規標準ＲＮＡ転写物の希釈およびアリコート。
新規ＢＶＤＶウイルスの調製。
新規カラム１１標準の調製。
３．５．１． ＡＢＩ７７００からアッセイプレートを除去し、けっして開封することなく捨てる。このことは、ＰＣＲ相互汚染に関する実験室の問題を大きく減少させる。
３．５．２． シーケンス・ディテクター・システム・ソフトウェア・Ｖ１.７を用いてデータを分析する。
３．５．３． デフォルト・セッティングを用いて閾値レベルを最初に設定する。
３．５．４． データ拒否基準：全プレートのデータポイントまたは列を拒否することができる。もし、プロトコルからの重大な逸脱、試薬の失敗もしくは事故、またはＡＢＩ７７００の故障があったならば、データを捨てることができる。明らかに正常な実行からのいずれかのデータポイントを拒否するには、これらの基準のうちの１つまたはそれ以上を満たさなければならない。
３．５．４．１． 閾値サイクル計算。通常、ＳＤＳソフトウェアに対するデフォルト値を用いる。もし、最も濃縮したサンプルのＣｔが１５以下ならば、最高濃度のサンプルのＣｔがストップ値以上であるように、より低い値に対して必要とされる閾値ストップ限界を変更する。この変更を行った後、計算をアップデイトする。
３．５．４．２． neoＲＮＡ標準の分析によって作成された線の勾配およびｙ軸切片について平均値からの偏位によって指示される全く異常なTaqMan（登録商標）実行を拒否することを考慮する。このような値についての許容範囲は：
勾配値は、３.０および３.６の間であるべきである。
ｙ切片サイクルは、３６および４１サイクルの間であるべきである。
３．５．４．３． 極端なＲｎ／デルタＲｎによって示される異常な独特のTaqMan（登録商標）ウエルがＳＤＳソフトウェアの計算に影響を及ぼさないように、データ分析の前に、それらを削除することができる。
３．５．４．４． テンプレートのないコントロールＣｔ値を検討し、記録し、それらが、いずれかの化合物で処理されたサンプルのＣｔよりも高い値である＞７.０Ｃｔ（＞１００Ｘ）であることを確認する。
３．５．５． ＨＣＶ ＲＮＡ標準Ｃｔ値を先の結果と比較する。
３．５．６． ＨＣＶ ＲＮＡ標準曲線を先の結果と比較する。
３．５．７． もし、個々のウエルにおいて異常な増殖が明らかであるならば、それらのウエルを同定し、注目する。
３．５．８． マイクロソフト・エクセルを用いる分析のために、７７００コンピューターから他のコンピューターへ“結果”ファイルをエクスポートし、転送する。
３．５．９． 使用した試薬調製または希釈における以下の変更のいずれかが報告される。
ベンダーからの新規プローブまたはプライマー合成。
新規プローブまたはプライマーの希釈およびアリコート。
新規標準ＲＮＡ転写物の調製。
新規標準ＲＮＡ転写物の希釈およびアリコート。
新規ＢＶＤＶウイルスの調製。
新規カラム１１標準の調製。
３．６．TaqMan（登録商標）データ分析
３．６．１． TaqMan（登録商標）ＨＣＶ Ｃｔ数をコピーおよびペーストし、TaqMan（登録商標）結果ファイルからの数をレプリコンアッセイデータ分析マイクロソフト・エクセルマクロの適当なセルへコピーし、マクロを実行する。
３．６．２． マクロシートからのTaqMan（登録商標）結果テーブルを他のシートへコピーし、化合物のシリアル番号およびロット番号を入力する。
３．６．３． このエクセルシートから、化合物の阻害活性の平均、標準偏差およびＣＶパーセンテージならびに５つの複製物および非化合物処理コントロールにおけるすべての希釈ポイントのＨＣＶコピー数、ＨＣＶ Ｃｔ数およびＢＶＤＶ Ｃｔ数（もし、利用可能ならば）が計算される。
３．６．４． データ拒否の基準およびＢＶＤＶコントロールTaqMan（登録商標）のインプリメンテーション。すべての計算をチェックする。全プレートのデータポイントまたは列を拒否することができる。もし、プロトコルからの重大な逸脱、試薬の失敗もしくは事故、またはＡＢＩ７７００の故障があったならば、データを捨てることができる。明らかに正常な実行からのいずれかのデータポイントを拒否するには、これらの基準のうちの１つまたはそれ以上を満たさなければならない。阻害パーセンテージの標準偏差は、活性化合物において３０％以下であるべきである。ＨＣＶコピー数のＣＶ％は、３０％以下であるべきである。すべてのサンプルのＨＣＶ Ｃｔの標準偏差は、０.５以下であるべきである；これは、通常、大部分のサンプルにおいて約０.１〜０.３である。もし、ＨＣＶ Ｃｔ標準偏差が０.５以上であるならば、原データテーブルに戻り、５複製物のＣｔ数をチェックする。もし、いずれか１つのウエルのＣｔ数が５複製物の平均Ｃｔ数と２Ｃｔ相異するならば、このウエルは、分析から削除すべきである。もし、３個以上のウエル（同じカラムでない）が普通でないＣｔ数をもつならば、TaqMan（登録商標）内部コントロールアッセイを行うべきである。もし、ＢＶＤＶデータが不規則性を示すならば、化合物を再度試験すべきである。
３．６．５． ＩＣ５０計算：平均阻害および標準偏差のデータを、非線形回帰法を用いる可変勾配電卓をもつＳ字容量反応曲線にコピーおよびペーストする。この手段を用いて、２つの方法の両方を用いることによってＩＣ５０を計算する：１００％阻害のみでトップを固定するか、または１００％阻害でトップおよび０％阻害でボトムを固定する。次いで、各化合物について最も明確な適合を付与する該方法が報告される。最も信頼性のあるＩＣ５０は、最も低い標準誤差をもつ計算から得られる。もし、ＩＣ５０のＳＤがＩＣ５０よりも大きいならば、調節された濃度において化合物を再度試験すべきである。
３．６．１． TaqMan（登録商標）ＨＣＶ Ｃｔ数をコピーおよびペーストし、TaqMan（登録商標）結果ファイルからの数をレプリコンアッセイデータ分析マイクロソフト・エクセルマクロの適当なセルへコピーし、マクロを実行する。
３．６．２． マクロシートからのTaqMan（登録商標）結果テーブルを他のシートへコピーし、化合物のシリアル番号およびロット番号を入力する。
３．６．３． このエクセルシートから、化合物の阻害活性の平均、標準偏差およびＣＶパーセンテージならびに５つの複製物および非化合物処理コントロールにおけるすべての希釈ポイントのＨＣＶコピー数、ＨＣＶ Ｃｔ数およびＢＶＤＶ Ｃｔ数（もし、利用可能ならば）が計算される。
３．６．４． データ拒否の基準およびＢＶＤＶコントロールTaqMan（登録商標）のインプリメンテーション。すべての計算をチェックする。全プレートのデータポイントまたは列を拒否することができる。もし、プロトコルからの重大な逸脱、試薬の失敗もしくは事故、またはＡＢＩ７７００の故障があったならば、データを捨てることができる。明らかに正常な実行からのいずれかのデータポイントを拒否するには、これらの基準のうちの１つまたはそれ以上を満たさなければならない。阻害パーセンテージの標準偏差は、活性化合物において３０％以下であるべきである。ＨＣＶコピー数のＣＶ％は、３０％以下であるべきである。すべてのサンプルのＨＣＶ Ｃｔの標準偏差は、０.５以下であるべきである；これは、通常、大部分のサンプルにおいて約０.１〜０.３である。もし、ＨＣＶ Ｃｔ標準偏差が０.５以上であるならば、原データテーブルに戻り、５複製物のＣｔ数をチェックする。もし、いずれか１つのウエルのＣｔ数が５複製物の平均Ｃｔ数と２Ｃｔ相異するならば、このウエルは、分析から削除すべきである。もし、３個以上のウエル（同じカラムでない）が普通でないＣｔ数をもつならば、TaqMan（登録商標）内部コントロールアッセイを行うべきである。もし、ＢＶＤＶデータが不規則性を示すならば、化合物を再度試験すべきである。
３．６．５． ＩＣ５０計算：平均阻害および標準偏差のデータを、非線形回帰法を用いる可変勾配電卓をもつＳ字容量反応曲線にコピーおよびペーストする。この手段を用いて、２つの方法の両方を用いることによってＩＣ５０を計算する：１００％阻害のみでトップを固定するか、または１００％阻害でトップおよび０％阻害でボトムを固定する。次いで、各化合物について最も明確な適合を付与する該方法が報告される。最も信頼性のあるＩＣ５０は、最も低い標準誤差をもつ計算から得られる。もし、ＩＣ５０のＳＤがＩＣ５０よりも大きいならば、調節された濃度において化合物を再度試験すべきである。
インターフェロンとの併用におけるＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターの効果の計算
ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター（ＨＳＰＩ）およびインターフェロンの併用効果は、種々のレベルのインターフェロンの存在下におけるＨＳＰＩについての用量反応曲線を作成することによって、あるいは、種々のレベルのＨＳＰＩの存在下におけるインターフェロンについての用量反応曲線を決定することによって、レプリコンアッセイにおいて評価することができる。目的は、２つの薬剤がＲＮＡにおいて相加的効果を生み出す場合に予測されるよりも多いかまたは少ないウイルスＲＮＡ蓄積の阻害があるかどうかを評価することである。さらに詳しくは、Lowe ((1928) Die Quantitation Probleme der Pharmakologic, Ergebn. Physio., 27,47-187) の相加性の定義を用いる。これは、以下のように定義される。ＤＥ，ＩＮＦは効果Ｅが得られるインターフェロンの濃度であり、ＤＥ，ＨＳＰＩは効果Ｅが得られるプロテアーゼインヒビターの濃度である。
次いで、相互作用またはLoweの相加性がないことは、濃度Ｄ１のＩＮＦとＤ２のＨＳＰＩの組み合わせが、効果Ｅを生み出すという関係によって定義される。
ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター（ＨＳＰＩ）およびインターフェロンの併用効果は、種々のレベルのインターフェロンの存在下におけるＨＳＰＩについての用量反応曲線を作成することによって、あるいは、種々のレベルのＨＳＰＩの存在下におけるインターフェロンについての用量反応曲線を決定することによって、レプリコンアッセイにおいて評価することができる。目的は、２つの薬剤がＲＮＡにおいて相加的効果を生み出す場合に予測されるよりも多いかまたは少ないウイルスＲＮＡ蓄積の阻害があるかどうかを評価することである。さらに詳しくは、Lowe ((1928) Die Quantitation Probleme der Pharmakologic, Ergebn. Physio., 27,47-187) の相加性の定義を用いる。これは、以下のように定義される。ＤＥ，ＩＮＦは効果Ｅが得られるインターフェロンの濃度であり、ＤＥ，ＨＳＰＩは効果Ｅが得られるプロテアーゼインヒビターの濃度である。
相乗的作用または拮抗的作用の程度は、アイソ効果曲線またはアイソボールという用語で表わされる。組み合わせ（Ｄ１、Ｄ２）は、軸がインターフェロンおよびＨＳＰＩの濃度であるグラフ上のポイントである（図２）。効果レベルＥを生み出すこのような組み合わせすべてはＥ効果アイソボールを形成する。それは、必然的に、(ＤＥ，ＩＮＦ，０)および(０，ＤＥ，ＨＳＰＩ)が、アイソボール上のポイントである場合である。アイソボールは、相加的関係（１）が満足される場合に、ポイント(ＤＥ，ＩＮＦ，０)と(０，ＤＥ，ＨＳＰＩ)とを連結する直線である。
下に凸のアイソボールは、相乗的作用を示し、上に凸のアイソボールは、拮抗的作用を示す。Berenbaum, M. C. ((1985) The expected effect of a combination of agents: the general solution. J. Theor. Biol., 114,413-431)およびGreco, Park and Rustom ((1990) Application of a New Approach for the Quantitation of Drug Synergism to the Combination of cis-Diamminedichloroplatinum and 1-β-D-Arabinofuranosylcytosine, Cancer Research, 50,5318-5327)のガイドラインにしたがって、相乗的作用または拮抗的作用を説明するために、用語を（１）に加える。方程式は、すべての処理組み合わせにおいてコントロールパーセントの値に適合することができる反応面を定義する。この適合された反応面からの輪郭プロットがアイソボールである。
反応面モデルは、各化合物について、（２）によって定義されたＳ字の用量反応を仮定する。
活性Ｅ単独の特定のレベルを付与する濃度は、（３）によって付与される。
Grecoら(1990)のモデルを満たすために、次いで、薬剤の併用作用は、反応レベルＥを生み出す薬剤の組み合わせ毎に、方程式（４）を満たさなければならない。
パラメーターαは、相互作用の量を測定する。α＝０である場合、方程式は（１）に戻るので、αのゼロ値は相互作用または相加性がないことを意味する。ＩＣ５０、ヒル勾配（ｍ）、最大値（Ｅmax）および最小値（Ｂ）が与えられたとすると、この方程式を解いて、いずれかの処置組み合わせ[ＩＮＦ]および[ＨＳＰＩ]から得られる効果をえることができる。したがって、この方程式は、反応面を定義する。[ＩＮＦ]および[ＨＳＰＩ]が変化する実験が与えられたとすると、非線形加重最小二乗回帰を用いてパラメーターを選択することができる。パｒメーターαは、相乗作用尺度Ｓに関連づけることができ（Hewlett, P. S. (1969) Measurement of potencies of drug mixtures. Biometrics, 25, 477-487）、５０％効果におけるアイソボールから直接得られる。Ｓは、軸から４５度の直線に沿った、適合されたデータのアイソボールへのオリジンからの距離に対する、相加性を定義しているアイソボールへのオリジンからの距離の比率である。（Ｓ＝ＯＮ／ＯＭ、図３参照）。関係は、α＝４(Ｓ２−Ｓ)である。
反応面を適合させ、相乗パラメーターαおよびその有意レベルを決定するための上記Grecoら(1990)に議論されている方法に続いて、数種の異なるインターフェロンと組み合わせてＨＳＰＩを試験する一連の実験において相乗作用の程度を評価する。しかし、より高いカウントでの観察よりもより低いカウントでの観察に加重する必要がある。カウントは、効果Ｅであるコントロールパーセントに直接関係する。Carroll, R. J. and Rupert, D. ((1988) (Transformation and Weighting in Regression, Chapman and Hall, New Yorkに記載の方法を用いて、ウエル−ウエル可変性が、平均コントロールパーセント二乗値を増加することを確かめることができる。したがって、観察は、二乗された適合されたコントロールパーセント値（Ｅ）を越えたものによって加重される。これらの実験を分析するのに用いた平方偏差および加重は、放射性リガンドアッセイの分析方法を研究している研究者によって観察された可変性関係に一致する（Finney, D. J., (1976), Radioligand Assay, Biometrics, 32,721-740, および Dudley, R. A. Edwards, P., Ekins, R. P., McKinzie, 1. G. M., Raab, G. M., Rodbard, D. and Rodgers, R. P. C. (1985), Guidelines for Immunoassay Data Processing, Clinical Chemistry, 31/8, 1264-1271）。
結果
最初の実験において、ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター化合物ＣＵを、３μＭ〜０.０１２３μＭの濃度範囲、すなわち、２４４倍の範囲にわたって試験する。インターフェロンα−２Ｂの濃度は、３０ユニット／サンプル〜０.００９６ユニット／サンプル、すなわち、３１２５倍の範囲で変化する。TABLE７に示すように、単剤治療として用いた場合、化合物ＣＵは、０.４８μＭというＩＣ５０を示し、インターフェロンのＩＣ５０は、２.１９Ｕである。およそ２０％であるレプリコンアッセイの精度の範囲内において、インターフェロンα−２Ｂの添加により、用量依存的様式でレプリコンＲＮＡ蓄積の阻害が増加する。たとえば、０.３３３μＭの化合物ＣＵで細胞を処理すると、レプリコンＲＮＡ蓄積が２８％阻害される。ＩＣ５０用量（０.４６９μＭ）の７１％である０.３３３μＭの化合物ＣＵおよびＩＣ５０用量（２.０５μＭ）の１１％である０.２４Ｕのインターフェロンα−２Ｂの組み合わせで細胞を処理すると、レプリコンＲＮＡ蓄積が４９％阻害される。このように、一方のＩＣ５０用量の７１％と他方のＩＣ５０用量の１１％を併用すると、レプリコンＲＮＡ蓄積が４９％阻害される。併用処置が相乗的であるか、相加的であるか、または拮抗的であるかどうかを決定するための直感的アプローチを用いて、併用処置の効果が相加的にすぎないかどうかを予測することができ、レプリコンＲＮＡ蓄積の４９％阻害を得るのに必要な９８％であるべき２つのＩＣ５０用量の組み合わせたフラクションが予期される。我々の実験結果から、レプリコンＲＮＡ蓄積の阻害のレベルが、併用処置の相加的効果について予測されたような９８％よりもむしろ７１％プラス１１％、すなわち、ＩＣ５０用量の８２％を用いて達成されることが証明される。このように、化合物のこれらの濃度において、ＨＣＶレプリコンＲＮＡの４９％阻害を得るために、ＩＣ５０用量の９８％が必要であるいずれかの化合物単独において必要な用量と比較して、各化合物のＩＣ５０用量のより少ないフラクション用量を用いるので、効果は相乗的であることが明らかである。この併用処置の結果をTABLE８に示し、図１に図示する。
最初の実験において、ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター化合物ＣＵを、３μＭ〜０.０１２３μＭの濃度範囲、すなわち、２４４倍の範囲にわたって試験する。インターフェロンα−２Ｂの濃度は、３０ユニット／サンプル〜０.００９６ユニット／サンプル、すなわち、３１２５倍の範囲で変化する。TABLE７に示すように、単剤治療として用いた場合、化合物ＣＵは、０.４８μＭというＩＣ５０を示し、インターフェロンのＩＣ５０は、２.１９Ｕである。およそ２０％であるレプリコンアッセイの精度の範囲内において、インターフェロンα−２Ｂの添加により、用量依存的様式でレプリコンＲＮＡ蓄積の阻害が増加する。たとえば、０.３３３μＭの化合物ＣＵで細胞を処理すると、レプリコンＲＮＡ蓄積が２８％阻害される。ＩＣ５０用量（０.４６９μＭ）の７１％である０.３３３μＭの化合物ＣＵおよびＩＣ５０用量（２.０５μＭ）の１１％である０.２４Ｕのインターフェロンα−２Ｂの組み合わせで細胞を処理すると、レプリコンＲＮＡ蓄積が４９％阻害される。このように、一方のＩＣ５０用量の７１％と他方のＩＣ５０用量の１１％を併用すると、レプリコンＲＮＡ蓄積が４９％阻害される。併用処置が相乗的であるか、相加的であるか、または拮抗的であるかどうかを決定するための直感的アプローチを用いて、併用処置の効果が相加的にすぎないかどうかを予測することができ、レプリコンＲＮＡ蓄積の４９％阻害を得るのに必要な９８％であるべき２つのＩＣ５０用量の組み合わせたフラクションが予期される。我々の実験結果から、レプリコンＲＮＡ蓄積の阻害のレベルが、併用処置の相加的効果について予測されたような９８％よりもむしろ７１％プラス１１％、すなわち、ＩＣ５０用量の８２％を用いて達成されることが証明される。このように、化合物のこれらの濃度において、ＨＣＶレプリコンＲＮＡの４９％阻害を得るために、ＩＣ５０用量の９８％が必要であるいずれかの化合物単独において必要な用量と比較して、各化合物のＩＣ５０用量のより少ないフラクション用量を用いるので、効果は相乗的であることが明らかである。この併用処置の結果をTABLE８に示し、図１に図示する。
インビトロレプリコンアッセイおよびそのアッセイによって生成されたデータの単純相加性分析を利用して早期に述べた通り誘導されたこれらの最初の結果から、ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターおよびインターフェロンによるレプリコン細胞の併用処置が、少なくとも相加的抗ウイルス効果をもたらし、おそらく相乗的抗ウイルス効果をもたらすことが証明される。
ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターＣＵおよびインターフェロンα−２Ｂの間の関係が相乗的、相加的または拮抗的であるかどうかを決定するために、先のデータを上述の公式の数学的手段を用いて分析した。再分析したデータをTABLE８に数字で示し、図４に図示する。
ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターＣＵおよびインターフェロンα−２Ｂの間の関係が相乗的、相加的または拮抗的であるかどうかを決定するために、先のデータを上述の公式の数学的手段を用いて分析した。再分析したデータをTABLE８に数字で示し、図４に図示する。
TABLE８は、レプリコン含有細胞を、単独または組み合わせて、種々の本発明ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターおよび数種の異なるインターフェロンで４８時間処置した後にレプリコンアッセイで得られたさらなる結果をまとめたものである。我々は、レプリコンアッセイにおけるＨＣＶレプリコンＲＮＡの阻害について測定された値の標準偏差が〜２０％であることを指摘する。広い濃度範囲にわたって、および有意なＨＣＶレプリコンＲＮＡの独活の阻害を引き起こさない低い化合物濃度において化合物を試験する。アッセイの標準偏差が〜２０％であるので、いくつかのデータポイントではマイナスの数が生じる。マイナスの阻害数は、特定の実験において、偽処理サンプル中よりも、化合物処理サンプル中に、平均して、より多くのＨＣＶレプリコンＲＮＡ分子があることを示す。
相乗性を測定するための上述の数学的方法を用いてプロットしたTABLE８のデータを図示する図４〜１３に示すように、試験したＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターとインターフェロンのすべての組み合わせについてのアイソボール曲線は下に凸であり、レプリコンアッセイにおける抗ウイルス効果が相乗的であることを示す。これらの結果を表にしたTABLE９は、併用処置についての相乗性の相対的レベルおよび個別に用いた抗ウイルス化合物についてのＩＣ５０値を示す。TABLE９における重要な要素は、α値であり、決定のためのｐ値である。αという用語は、各併用処置についてのアイソボールの最大感染の尺度である。α値のゼロは相加作用を示し、マイナス値は拮抗作用を示し、上記のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターとインターフェロンの併用処置の場合、１以上の値は相乗作用を示す。α値が大きいほど相乗作用が大きい。ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターとインターフェロンの併用についてTABLE９に示すように、各実験における有意レベルを無視してさえも、０である平均α値（相互作用なし）についての９の実験に基いたｔ検定は、０.０００１４というｐ値をもち、このことは、その結果が高度に有意であることを示す。
この分析に用いたGreco Rustom ((1990) Application of a New Approach for the Quantitation of Drug Synergism to the Combination of cis-Diamminedichloroplatinum and 1-β-D-Arabinofuranosylcytosine, Cancer Research, 50,5318-5327)の方法に基いた相乗作用の計算は、ＨＣＶレプリコンアッセイを用いて生み出すことができるこの種の実験データの評価のための理想的な手段である。Pritchard and Shipman (Prichard, M. N., および Shipman, C. Jr., (1990)"A three-dimensional model to analyze drug-drug interactions (review),"Antiviral Res. 14: 181-206)といったような抗ウイルス化合物の研究に適用される他の方法がある。TABLE８に示されるデータに対してそれらの相乗作用計算法を適用しても、ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターとインターフェロンによるレプリコン細胞の併用処置が、ＨＣＶレプリコンＲＮＡ蓄積の相乗的阻害をもたらすことが示される（データ示さず）。
本発明セリンプロテアーゼインヒビターとインターフェロンを用いる抗ウイルス薬剤処置の相乗的性質を評価する他の測定は、レプリコンアッセイにおいて、上記と同じ方法を用いてＨＣＶに対する現行の標準的併用療法、すなわち、インターフェロンα−２Ｂとリバビリンを併用する方法を評価することである。TABLE９の最終行は、インターフェロンα−２Ｂとリバビリンの混合物についてのαパラメーターがマイナスの数であり、これらの２つの薬剤の間に小さな拮抗作用があることを示している。このことは、さらに、本発明ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターとインターフェロンの処置が明白に相乗作用を生み出すことにおける、これらを併用して用いる本明細書に開示の併用処置の有意性を強調するのに対して、ＨＣＶに対する使用における標準的併用療法（インターフェロンα−２Ｂとリバビリンの併用）は、レプリコンアッセイにおいて相乗的ではない。
レプリコンアッセイにおいて、本発明ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターとインターフェロンを用いる併用処置に対するリバビリンとインターフェロンを用いる併用処置の前述の比較は、明らかに、前者が相乗的であるのに対して、後者がそうではないことを示す。レプリコンアッセイを用いて得られた実験結果は、もしインターフェロンをＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターと併用するならば、インターフェロンが、インターフェロンα−２Ｂをリバビリンと併用する場合に必要な量よりも、より少ない用量で有効であることを示す。レプリコンアッセイは、可能性のある抗ＨＣＶ化合物を試験するのに有用なモデルシステムであり、現在、化合物の抗ウイルス活性の有効な予言者として信頼されている。たとえば、Blightら (2000) Efficient Initiation of HCV RNA Replication in Cell Culture. Science 8 ; 290: 1972-1974, および Chungら (2001) Hepatitis C virus replication is directly inhibited by IFN-a in a full-length binary expression system. Proc. Nat. Acad. Sci. U. S. A. 98 (17): 9847-52を参照。リバビリン単独では、レプリコンアッセイにおいて、ＨＣＶレプリコンＲＮＡの蓄積を減少させることにおいてわずかに有効である（TABLE８、実験例１０およびTABLE９の最終行）。この結果は、ＨＣＶの治療に対してリバビリン自体を用いる場合、それが有意な治療的有用性をもたないというインビボ研究との明らかな不一致をもたらす。対照的に、以下に論じる細胞毒性について補正するレプリコンアッセイにおいて、リバビリンのＩＣ５０は１４５μＭである。この結果は、レプリコンアッセイが、インビボ毒性のためにヒト療法には不可能である高濃度のリバビリンの評価を可能にするということを認識することによって説明することができる（Chutaputti A. (2000) Adverse effects and other safety aspects of the hepatitis C antivirals. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 15 Suppl : E156-63）。
この評価は、リバビリンの細胞毒性の査定を必然的に必要とする。このような毒性は、患者および細胞アッセイにおいて生じる（Shiffman M. L., Verbeke S. B., Kimball P. M.(2000) Alpha interferon combined with ribavirin potentiates proliferative suppression but not cytokine production in mitogenically stimulated human lymphocytes. Antiviral Research. 48 (2): 91-9）。本明細書に開示する実験において、レプリコンアッセイにおけるリバビリン毒性は、２つの方法で観察され、測定される。レプリコン細胞の生存能力を決定する両方のＸＴＴ代謝アッセイ（Roehm N. W., Rodgers G. H., Hatfield S. M., Glasebrook A. L. (1991) An improved colorimetric assay for cell proliferation and viability utilizing the tetrazolium salt XTT. Journal of Immunol. Methods. 142 (2): 257-65）およびレプリコンアッセイにおいて処置対非処置細胞中のグリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＧＡＰＤＨ）ｍＲＮＡレベルを測定するTaqMan（登録商標）定量的ＲＴ−ＰＣＲ（Brink N., Szamel M., Young A. R., Wittern K. P., Bergemann J. (2000) Comparative quantification of IL-lbeta, IL-10, IL-lOr, TNFalpha and IL-7 mRNA levels in UV-irradiated human skin in vivo. Inflamation Research. 49 (6): 290-6）において、有意なリバビリン誘発細胞毒性が観察されるが、以下のように補正される。恒常的に発現しているハウスキーピング遺伝子であるＧＡＰＤＨｍＲＮＡのレベルは、すべての生存可能な細胞において同じであると仮定される。転写インヒビターアクチノマイシンＤで処置した細胞中のＧＡＰＤＨｍＲＮＡのレベルの測定から、ＧＡＰＤＨｍＲＮＡの半減期が２、３週間であることがわかる（データ示さず）。したがって、ヒト細胞中の特定のｍＲＮＡのレベルを決定するためにTaqMan（登録商標）技術を用いて他者によって行われたように、ＧＡＰＤＨｍＲＮＡレベルが、いずれのサンプルにおいても、ＶＣＮ＝２∧(４０−ＣｔＧＡＰＤＨｍＲＮＡ)という関係で生存可能細胞数（ＶＣＮ）に比例することが仮定される。各レプリコンアッセイサンプルウエルについてＶＣＮを計算し、次いで、特定のウエルについてのＨＣＶレプリコンＲＮＡコピー数をそのウエルについてのＶＣＮで割る。いったん計算すると、阻害を計算するために、ＨＣＶコピー数の代りにこの比率を用いる（比率を用いる平均阻害；図１４のＡ）。この細胞毒性についてレプリコンアッセイデーターを補正しない場合、このような細胞毒性は、ＨＣＶ ＲＮＡレプリコン蓄積の偽陽性阻害として読み取られる。レプリコンアッセイにおいて、測定されたＨＣＶ ＲＮＡレプリコン蓄積の阻害が、実際のＨＣＶ ＲＮＡレプリコン蓄積の阻害と毒性による見かけのＨＣＶ ＲＮＡレプリコン蓄積の阻害の総和であることが仮定される。さらに、細胞毒性のＸＴＴおよびTaqMan（登録商標）測定の綿密な補正に基づいて、レプリコンアッセイにおいて試験された化合物によって引き起こされたＧＡＰＤＨｍＲＮＡの蓄積の阻害が、毒性による見かけのＨＣＶ ＲＮＡレプリコン蓄積の阻害の信頼できる測定であることが仮定される。したがって、一般的毒性について補正されたレプリコンアッセイにおける真の化合物の抗ＨＣＶ活性は、各サンプルにおいて測定されたＨＣＶレプリコンＲＮＡ分子の数をＶＣＮで割って、各サンプル中の生存可能細胞の数に対して標準化することによって評価することができる。この方法を用いて、図１４のＡは、レプリコンアッセイにおける真のリバビリンの抗ＨＣＶ活性の評価を示す（比率を用いる平均阻害）。リバビリンについてのＩＣ５０の評価は、この方法を用いて最適に計算される。図１４のＡにおいて、“もとの平均阻害”は、未補正のリバビリンについてのＩＣ５０の評価を示し、約８０μＭであるが、“比率を用いる平均阻害”曲線から計算された補正されたＩＣ５０値は、約１４５μＭである。インターフェロンα−２Ｂ処置の結果としての補正されたＨＣＶ ＲＮＡレプリコン蓄積の阻害と測定されたＨＣＶ ＲＮＡレプリコン蓄積の阻害の間の差異（図１４のＢ）が、レプリコンアッセイの〜２０％ＣＶのために有意でないことに留意。インターフェロンα−２Ｂのように、本実施例において試験されたＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターは、採用した濃度において有意な細胞毒性を示さない。これは、ＸＴＴアッセイを用いて決定され、種々の化合物についてのＴＣ５０値は、次のとおりである：ＣＵ＝６４.７μＭ、ＥＰ＞１０μＭおよびＥＣ＞５０μＭ。これらのＴＣ５０値は、TABLE９に示すＩＣ５０値よりも、２０〜１４０倍大きい。したがって、このような細胞毒性は、レプリコンアッセイにおいて試験した濃度より高いＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター濃度においてのみ生じるので、アッセイの精度の範囲内において、これらの化合物の細胞毒性はレプリコンアッセイにおけるＨＣＶ ＲＮＡ蓄積の阻害において有意な効果をもたない。
個別または併用におけるＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターおよびインターフェロンの効果に関する結論
ＨＣＶレプリコンアッセイにおいて単独で用いた場合の本発明ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターおよび種々のインターフェロンの抗ＨＣＶ活性を１種の抗ウイルス薬のみを用いるTABLE８に示す個々の実験のカラムおよびラインに示す。TABLE９は、単独で試験した場合の各抗ウイルス化合物について測定されたＩＣ５０値を挙げる。前述の結果もまた、本発明のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターと種々のインターフェロンによるレプリコン細胞の併用処置が、相乗的抗ウイルス効果をもたらすことを証明する。これらの効果が、インビボ有効性に転換されることは、十分に予期される。
ＨＣＶレプリコンアッセイにおいて単独で用いた場合の本発明ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターおよび種々のインターフェロンの抗ＨＣＶ活性を１種の抗ウイルス薬のみを用いるTABLE８に示す個々の実験のカラムおよびラインに示す。TABLE９は、単独で試験した場合の各抗ウイルス化合物について測定されたＩＣ５０値を挙げる。前述の結果もまた、本発明のＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターと種々のインターフェロンによるレプリコン細胞の併用処置が、相乗的抗ウイルス効果をもたらすことを証明する。これらの効果が、インビボ有効性に転換されることは、十分に予期される。
本発明ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターを用いる併用療法は、単剤療法を凌ぐ幾つかの大きな利点をもつ。第１に、単独で用いる場合よりも低用量で個々の薬剤を処置することを可能にすることによって、処置に関連する毒性および副作用の減少が期待される。このことは、副作用が重篤であり、患者に投与された用量に比例することがわかっているインターフェロン療法の場合に特に重要である。前述のデータは、ＩＣ９５レベルにおける化合物ＣＵなどのＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターの用量が、たとえば、ＩＣ５０などのレベルにおけるインターフェロンαの用量と組み合わせることができ、その結果として、高用量のインターフェロンαによって引き起こされる副作用なしで、ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビター単独で達成されるよりも有効な療法が得られることを示す。併用療法の第２の大きな利点は、２つの薬剤が独立して作用するので、突然変異ＨＣＶ菌株の発生する機会が、より少ないことである。耐性の発生は、ＨＣＶのようなＲＮＡウイルスに対する大きな懸念である。それらの突然変異の割合が高いゆえに、このようなウイルスは、急速に環境ストレスに順応することができる。併用療法の第３の利点は、有効な処置に必要な治療薬の量が少なくてよいため、コストを抑えることができることである。
本明細書に開示の方法に用いうる他の免疫調節剤として、たとえば、インターフェロンα−２Ａ、コンセンサスインターフェロン、インターフェロンτ、インターフェロン＋リバビリン（レバトロン：Rebatron）、ポリエチレングリコール付加（pegylated）インターフェロンおよびインターフェロン遺伝子発現プロモーターが挙げられる。本明細書に開示したようなＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターと併用した場合に、これらの化合物の抗ＨＣＶ活性が、改善されるであろうということは十分に予想される。インターフェロンはインビボおよびレプリコンアッセイにおいて活性があることが知られているので、本発明ＨＣＶセリンプロテアーゼインヒビターもまたインビボで活性があること、および、さらに重要なことには、インターフェロン、その免疫系刺激剤またはＨＣＶセリンプロテアーゼの阻害以外のメカニズムで作用するＨＣＶ抗ウイルス活性をもつ他の化合物相乗的活性を引き出す能力をもつことが期待される。
ＨＣＶに対する現在の最適の療法は、インターフェロンαおよびヌクレオシド類縁体リバビリンである。この処置は、わずかにしか有効でなく、患者のコンプライアンスを減少させる有意な副作用をもたらす（Chronic Hepatitis C: Current Disease Management, U. S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, 1999）。さらに、移植患者においては、リバビリン−インターフェロン併用が有効に作用するかどうかは不明であり、実際のところ、インターフェロン単独よりも有害である（Chronic Hepatitis C: Current Disease Management, U. S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, 1999）。
上に示した結果から、新規なクラスのＨＣＶ抗ウイルス薬である本発明セリンプロテアーゼインヒビターとともにインターフェロンを用いる場合の相乗的併用効果が証明される。本明細書に開示したインビトロにおける結果が、インターフェロン単独を用いて現在可能であるＨＣＶ患者の治療よりも、さらに有効な治療を導くことが十分に予測される。治療量以下の用量のインターフェロンは、よりうまくウイルスと戦うように患者の免疫系を起動することができ、セリンプロテアーゼインヒビターは、作用の異なるメカニズムを介してウイルスを直接攻撃して、ウイルスに二面攻撃を与えることができる。このように、効果的なＨＣＶ抗ウイルス療法のために必要な両方の薬剤がより少なくてすむので、副作用の減少および必須の医薬作用剤に対する支払いの低下の両方に関して、患者にとって減少した損失でＨＣＶ感染の治療を達成することができる。
本発明は、その趣旨および本質的特性から逸脱することなく、他の特別の形体で具体化することができる。
本発明は、その趣旨および本質的特性から逸脱することなく、他の特別の形体で具体化することができる。
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