ES2325481T3 - Inhibidores peptidomimeticos de proteasa. - Google Patents

Inhibidores peptidomimeticos de proteasa. Download PDF

Info

Publication number
ES2325481T3
ES2325481T3 ES01968040T ES01968040T ES2325481T3 ES 2325481 T3 ES2325481 T3 ES 2325481T3 ES 01968040 T ES01968040 T ES 01968040T ES 01968040 T ES01968040 T ES 01968040T ES 2325481 T3 ES2325481 T3 ES 2325481T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
compound
mmol
interferon
hepatitis
baselineskip
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES01968040T
Other languages
English (en)
Other versions
ES2325481T9 (es
Inventor
Robert Edward Babine
Shu-Hui Chen
Jason Eric Lamar
Nancy June Snyder
Xicheng Sun
Mark Joseph Tebbe
Frantz Victor
Q. May Wang
Yvonne Yee Mai Yip
Ivan Collado
Cristina Garcia-Paredes
Raymond Samuel Parker, Iii
Ling Jin
Deqi Guo
John Irvin Glass
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Vertex Pharmaceuticals Inc
Original Assignee
Vertex Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26923261&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=ES2325481(T3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Vertex Pharmaceuticals Inc filed Critical Vertex Pharmaceuticals Inc
Application granted granted Critical
Publication of ES2325481T3 publication Critical patent/ES2325481T3/es
Publication of ES2325481T9 publication Critical patent/ES2325481T9/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/215—IFN-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/52—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring condensed with a ring other than six-membered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06052—Val-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A61K38/095—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
    • C12N2770/24222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Abstract

Un compuesto ** ver fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable o profármaco del mismo, o un solvato de dicho compuesto, su sal o su profármaco.

Description

Inhibidores peptidomiméticos de proteasa.
La presente invención se refiere a compuestos peptidomiméticos y a composiciones farmacéuticas que contienen los compuestos peptidomiméticos, y al uso de los compuestos peptidomiméticos o composiciones de los mismos en la preparación de un medicamento para inhibir la proteasa, particularmente la serina proteasa y más particularmente la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C ("HCV"). Los compuestos peptidomiméticos, como inhibidores de la proteasa NS3 de HCV, son particularmente útiles a la hora de interferir con el ciclo de vida del virus de la hepatitis C y en el tratamiento o prevención de una infección por HCV o afecciones fisiológicas asociadas con ella. La presente invención también se refiere al uso de los compuestos peptidomiméticos o composiciones farmacéuticas o kits y paquetes farmacéuticos de los mismos en la preparación de un medicamento para terapia de combinación para inhibir la replicación de HCV en células, o para tratar o prevenir una infección por HCV en pacientes. De acuerdo con la presente invención se incluyen como composiciones farmacéuticas las que comprenden un inhibidor de serina proteasa de HCV junto con un interferón que tiene actividad anti-HCV; un inhibidor de serina proteasa de HCV junto con un compuesto, distinto de un interferón, que tiene actividad anti-HCV; o un inhibidor de serina proteasa de HCV junto con un interferón que tiene actividad anti-HCV y un compuesto, distinto de un interferón, que tiene actividad anti-HCV. Los compuestos peptidomiméticos pueden prepararse usando procedimientos estereoselectivos para preparar intermedios de bicicloprolinato quirales útiles en la síntesis de los compuestos peptidomiméticos.
La infección por el HCV es un problema médico humano fascinante y actualmente se ha reconocido como el agente causante de la mayoría de los casos de hepatitis no A y no B.
Se cree que el HCV infecta crónicamente al 3% de la población mundial [A, Alberti y col., "Natural History of Hepatitis C. J. Hepatology, 31, (Supl. 1), 17-24 (1999)]. Sólo en los Estados Unidos el índice de infección es del 1,8% o de 3,9 millones de personas [M.J. After, Hepatitis C Virus Infection in the United States". J. Hepatology, 31, (Supl. 1), 88-91(1999)]. De todos los pacientes infectados, alrededor del 70% desarrollan una infección crónica que se cree que es una causa fundamental de cirrosis y carcinoma hepatocelular. [D. Lavanchy, "Global Surveillance and Control of Hepatitis C, "J. Viral Hepatitis, 6, 35-47 (1999)].
La replicación del VHC incluye la codificación genómica de una poliproteína de 3010-3033 aminoácidos [Q.-L. Choo, et al., "Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 2451-2455 (1991); N. Kato et al., "Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A, Non-B Hepatitis", Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 9524-9528 (1990); A. Takamizawa et al., "Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers", J. Virol., 65, 1105-1113 (1991)]. Se supone que las proteínas no estructurales (NS) del VHC proporcionan la maquinaria catalítica esencial para la replicación viral. Las proteínas NS se obtienen por escisión proteolítica de la poliproteína [R. Bartenschlager et al., "Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions", J. Virol., 67, 3835-3844 (1993); A. Grakoui et al. "Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase: Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites", J. Virol., 67, 2832-2843 (1993); A. Grakoui et al., Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products'', J. Virol., 67, 1385-1395 (1993); L. Tomei et al., "NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein", J. Virol., 67, 4017-4026 (1993)]. De hecho, se ha demostrado que los primeros 181 aminoácidos de NS3 (restos 1027-1207 de la poliproteína viral) contienen el dominio de serina proteasa de NS3 que procesa los cuatro sitios cadena abajo de la poliproteína de VHC [C. Lin et al., "Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase: Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics", J. Virol., 68, 8147-8157 (1994)]. La proteína 3 NS del VHC (NS3) contiene una actividad serina proteasa que ayuda al procesamiento de la mayoría de las enzimas virales y, por lo tanto, se considera esencial para la replicación e infectividad viral. La esencialidad de la proteasa NS3 se dedujo del hecho de que mutaciones en la proteasa NS3 del virus de la fiebre amarilla reducen la infectividad viral [F.J. Chambers et al., "Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein". Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87, 8898-8902 (1990)]. Más recientemente, se demostró que mutaciones en el sitio activo de la proteasa NS3 de VHC podían anular completamente la infección por VHC en un modelo de chimpancé [C.M. Rice et al. "Hepatitis C virus-encoded enzymatic activities and conserved RNA elements in the 3'-nontranslated region are essential for virus replication in vivo". J. Virol., 74(4) 2046-51 (2000)]. La proteasa de serina NS3 de VHC también se considera esencial para la replicación viral tal cual y su cofactor asociado, NS4A, ayuda al procesamiento de todas las enzimas virales. Este procesamiento parece ser análogo al realizado por la aspartil proteasa del virus de la inmunodeficiencia humana ("VIH"). Además, el uso demostrado de inhibidores de proteasas de VIH como potentes agentes antivirales en el ser humano demuestra que la interrupción de una etapa de procesamiento de proteína proteasas en el ciclo de vida viral produce agentes terapéu-
ticamente activos. Por consiguiente, la enzima proteasa es una diana atractiva para el descubrimiento de fármacos.
Se han descrito varios posibles inhibidores de proteasas de VHC. Las Publicaciones PCT Número WO 00/09558, WO 00/09543, WO 99/64442, WO 99/07733, WO 99/07734, WO 99/50230, W098/46630, WO 98/17679 y WO 97/43310, la Patente de Estados Unidos Nº 5.990.276, M. Llinás-Brunet et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 8, 1713-1718 (1998), W. Han et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, 711-713 (2000). R. Dunsdon et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, 1571-1579 (2000), M. Llinás-Brunet et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, 2267-2270 (2000) y S. LaPlante et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 10, 2271-2274 (2000) describen, cada uno, posibles inhibidores de la proteasa NS3 de VHC. Desafortunadamente, actualmente no se dispone de inhibidores de serina proteasa como agentes anti-VHC.
De hecho, no existen terapias anti-VHC excepto el interferón-\alpha, la combinación de interferón-\alpha/ribavirina y, más recientemente, el interferón-\alpha pegilado. Sin embargo, los porcentajes de respuesta sostenida para las terapias de interferón-\alpha e interferón-\alpha/ribavirina tienden a ser bajos (<50%) y los efectos secundarios presentados por las terapias tienden a ser significativos y severos [M.A. Walker,"Hepatitis C Virus: an Overview of Current Approaches and Progress," DDT, 4, 518-529 (1999); D. Moradpour et al., "Current and Evolving Therapies for Hepatitis C", Eur. J. Gastroenterol. Hepatol., 11, 1199-1202 (1999); H.L.A. Janssen et al., "Suicide Associated with Alfa-Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis", J. Hepatol., 21, 241-243 (1994); y P.F. Renault et al., "Side effects of alpha interferon", Seminars in Liver Disease 9, 273-277 (1989)]. Además, las terapias con interferón sólo inducen remisión a largo plazo en únicamente una fracción (\sim25%) de los casos [O. Weiland, "Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection", FEMS Microbiol. Rev., 14, 279-288 (1994)]. Los problemas mencionados anteriormente con las terapias de interferón-\alpha han llevado al estudio clínico y al desarrollo de compuestos de interferón-\alpha modificados pegilados como agentes terapéuticos mejorados contra el VHC. En vista de la situación actual en relación con las terapias anti-VHC está claro que existe la necesidad de terapias más eficaces y mejor toleradas. Además, la síntesis de compuestos peptidomiméticos complejos ha estado obstaculizada durante mucho tiempo por la naturaleza no estereoselectiva de la mayoría de los procedimientos orgánicos sintéticos. Es bien sabido que la actividad terapéutica de los enantiómeros de los compuestos peptidomiméticos varía ampliamente. Por lo tanto, es muy beneficioso proporcionar estos procedimientos sintéticos estereoespecíficos. Los intentos previos de sintetizar intermedios de bicicloprolinato quiralmente específicos útiles en la síntesis de los presentes inhibidores de proteasa peptidomiméticos terapéuticos han tenido el inconveniente de ser no enatioselectivos o diastereoselectivos, o implicar rutas sintéticas largas, o ser poco adecuados para preparar grandes cantidades de producto. De esta manera, también existe la necesidad de un medio para preparar grandes cantidades de bicicloprolinatos de una manera diastereoselectiva y en una forma enantioméricamente enriquecida.
Sumario de la invención
La presente invención se refiere a un compuesto
1
o sales farmacéuticamente aceptables y profármacos del mismo, solvatos de dicho compuesto, sus sales y sus profármacos, y
2
o sales farmacéuticamente aceptables y profármacos del mismo, solvatos de dicho compuesto, sus sales y sus profármacos.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende un compuesto BW o CU y el uso del compuesto BW o CU en la preparación de un medicamento para inhibir la proteasa de HCV, o tratar o prevenir una infección por HCV en pacientes o una afección fisiológica relacionada con la infección. Se describe un procedimiento estereoselectivo para preparar un compuesto de bicicloprolinato quiral que es un intermedio útil en la preparación de un compuesto BW y CU. El procedimiento sintético comprende las etapas de:
\newpage
(a) escindir y ciclar un compuesto de fórmula 24
3
\quad
en la que:
1000
\quad
es cicloalquilo opcionalmente sustituido o arilcicloalquilo opcionalmente sustituido condensado;
\quad
R^{11} es -CO_{2}R^{13};
\quad
R^{12} es un aducto de glicinimida imínica;
\quad
R^{13} es un grupo protector de ácido o un grupo alifático opcionalmente sustituido;
\quad
en condiciones de escisión y ciclación para formar un compuesto de fórmula 25
4
\quad
en la que:
\quad
R^{14} es -CONR^{13}R^{15}, -CN;
5
\quad
o -CO_{2}R^{16};
\quad
R^{15} es un grupo alifático opcionalmente sustituido:
\quad
R^{16} es un grupo protector de ácido, arilo opcionalmente sustituido o un grupo alifático opcionalmente sustituido; y
\newpage
(b) proteger el nitrógeno del resto lactama del compuesto de fórmula 25 con un grupo protector de amida para formar un compuesto de fórmula 26
\vskip1.000000\baselineskip
6
\quad
en la que:
\quad
p^{O} es un grupo protector de amida;
\quad
R^{14} es como se describe en el presente documento; y
\vskip1.000000\baselineskip
(c) reducir el compuesto de fórmula 26 en condiciones de reducción para formar un compuesto de fórmula 27
\vskip1.000000\baselineskip
7
\quad
en la que:
\quad
P^{O} y R^{14} son como se describen en el presente documento: y
\vskip1.000000\baselineskip
(d) desproteger el compuesto de fórmula 27 en condiciones de desprotección para formar un compuesto de fórmula 28
\vskip1.000000\baselineskip
8
\quad
en la que:
\quad
R^{14} es como se describe en el presente documento.
\vskip1.000000\baselineskip
La invención también se refiere al procedimiento sintético anterior que comprende adicionalmente la etapa en la que el compuesto de fórmula 24 se prepara realizando una adición de Michael con un compuesto de glicinimida imínica sobre un compuesto de fórmula 29
9 
\newpage
en la que:
1001
es cicloalquenilo opcionalmente sustituido o arilcicloalquenilo condensado opcionalmente sustituido;
R^{11} es -CO_{2}R^{13};
donde:
el compuesto de fórmula 29 puede prepararse por esterificación de un compuesto de fórmula 29a
10
en la que:
11
es cicloalquenilo opcionalmente sustituido o arilcicloalquenilo condensado opcionalmente sustituido;
R^{11a} es -CHO, -COR^{15}, -C\equivN o -CONR^{15}R^{15}; y
R^{15} es como se describe en este documento.
\vskip1.000000\baselineskip
Particularmente, un especialista en la técnica conocerá que la conversión de cetonas en ésteres puede realizarse, por ejemplo, por una reacción de Bayer-Villiger. La conversión de nitrilos y amidas en ésteres puede realizarse, por ejemplo, por hidrólisis acuosa seguido de esterificación adicional. La conversión de aldehídos en ésteres puede realizarse, por ejemplo, por oxidación del aldehído seguido de esterificación.
Otro aspecto de la invención son composiciones farmacéuticas que comprenden, además de uno o más de los inhibidores de la serina proteasa de HCV BW y CU, uno o más interferones o compuestos que inducen la producción de interferones que muestran actividad anti-HCV y/o uno o más compuestos que tienen actividad anti-HCV, incluyendo compuestos inmunomoduladores tales como citoquinas inmunoestimuladoras que muestran actividad antiviral de HCV, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
Otro aspecto de la invención es el uso de los compuestos BW y CU para la preparación de un medicamento para tratar o prevenir una infección por HCV en un paciente que lo necesita, que comprende administrar a dicho paciente una cantidad farmacéuticamente eficaz de una combinación de uno o más de los inhibidores de la serina proteasa de HCV BW y CU: uno o más interferones o compuestos que inducen la producción de un interferón que muestran actividad anti-HCV; y/o uno o más compuestos que tienen actividad anti-HCV, incluyendo compuestos inmunomoduladores tales como citoquinas inmunoestimuladoras que muestran actividad antiviral de HCV.
La invención también se refiere al uso de uno o más de los inhibidores de la serina proteasa de HCV BW y CU junto con uno o más interferones o compuestos que inducen la producción de un interferón que muestran actividad anti-HCV y/o uno o más compuestos que tienen actividad anti-HCV, incluyendo compuestos inmunomoduladores tales como citoquinas inmunoestimuladoras que muestran actividad antiviral de HCV, para preparar un medicamento para tratar o prevenir una infección por HCV en un paciente que lo necesita.
La presente invención también se refiere a un kit o paquete farmacéutico para tratar o prevenir una infección por HCV en un paciente, en el que el kit o paquete farmacéutico comprende una pluralidad de recipientes separados, donde al menos uno de dichos recipientes contiene uno o más de los inhibidores de la serina proteasa de HCV BW y CU (solo o junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable), al menos otro de dichos recipientes contiene uno o más interferones o compuestos que inducen la producción de un interferón que muestran actividad anti-HCV, (solo o junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable) y, opcionalmente, al menos otro de dichos recipientes contiene uno o más compuestos que tienen actividad anti-HCV (solo o junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable), incluyendo compuestos inmunomoduladores tales como citoquinas inmunoestimuladoras que muestran actividad antiviral de HCV.
La cantidad del inhibidor(es) de la serina proteasa de HCV, interferón(es) o compuesto(s) anti-HCV en cualquiera de las aplicaciones anteriores puede ser una cantidad farmacéuticamente eficaz, una cantidad subclínica eficaz anti-HCV o combinaciones de las mismas, siempre que la combinación final de inhibidor(es) de la serina proteasa de HCV, interferón(es) o compuestos que inducen la producción de un interferón que muestra actividad anti-HCV, y/o compuesto(s) anti-HCV, comprenda una cantidad farmacéuticamente eficaz de compuestos que sea eficaz en el tratamiento o prevención de una infección por HCV en un paciente.
Breve descripción de los dibujos
Lo anterior y otros aspectos, características y ventajas de la presente invención se entenderán mejor a partir de la siguiente descripción detallada tomada junto con los dibujos adjuntos, todos ellos dados únicamente a modo de ilustración, y que no son limitantes de la presente invención, en el que:
La Figura 1 muestra la inhibición de la acumulación de ARN del replicón de VHC después de 48 horas de tratamiento de células que contienen replicón con el Compuesto CU e interferón alfa-2B, individualmente o en combinación.
La Figura 2 muestra gráficamente la concavidad del isobol mostrada por compuestos usados en combinación que son antagonistas, aditivos y sinérgicos de acuerdo con los procedimientos de cálculo de sinergia de Greco, Park y Rustom ((1990) Application of a New Approach for the Quantitation of Drug Synergism to the Combination of cis-Diamminedichloroplatinum and 1-\beta-D-Arabinofuranosylcytosine, Cancer Research, 50, 5318-5327).
La Figura 3 muestra la relación geométrica entre \alpha y la cantidad de curvatura en el isobol. Se representa un isobol hipotético al nivel de efecto E=50% con un isobol de línea recta que se esperaría con aditividad. M es el punto de intersección de la línea y = x y el isobol hipotético, N es el punto de intersección de la línea y = x y el isobol de línea recta, O es el origen (0.0), S proporciona una medida de la cantidad de curvatura en el isobol, donde S = ON/OM. ON es la distancia de O a N y OM es la distancia de O a M. El parámetro a está relacionado con S por la ecuación \alpha = 4(S^{2} - S).
La Figura 4 muestra los cálculos de isobol usando el procedimiento de Greco et al., supra, para la combinación del compuesto CU y el interferón alfa-2B (Schering-Plough) usando 6 diluciones de cada compuesto en el Experimento 1.
La Figura 5 muestra los cálculos de isobol usando el procedimiento de Greco et al., supra, para la combinación del compuesto CU y el interferón alfa-2A usando 6 diluciones de cada compuesto en el Experimento 2.
La Figura 6 muestra los cálculos de isobol usando el procedimiento de Greco et al., supra, para la combinación del compuesto CU y el interferón alfa-2B (Schering-Plough) usando 8 diluciones de cada compuesto en el Experimento 3.
La Figura 7 muestra los cálculos de isobol usando el procedimiento de Greco et al., supra, para la combinación del compuesto CU y el interferón alfa-2A usando 8 diluciones de cada compuesto en el Experimento 4.
La Figura 8 muestra los cálculos de isobol usando el procedimiento de Greco et al., supra, para la combinación del compuesto CU y el interferón tau ovino usando 8 diluciones de cada compuesto en el Experimento 5.
La Figura 9 muestra los cálculos de isobol usando el procedimiento de Greco et al., supra, para la combinación del compuesto EC y el interferón alfa-2B (Schering-Plough) usando 8 diluciones de cada compuesto en el Experimento 6.
La Figura 10 muestra los cálculos de isobol usando el procedimiento de Greco et al., supra, para la combinación del compuesto EC y el interferón alfa-2A usando 8 diluciones de cada compuesto en el Experimento 7.
La Figura 11 muestra los cálculos de isobol usando el procedimiento de Greco et al., supra, para la combinación del compuesto CU y el interferón beta usando 8 diluciones de cada compuesto en el Experimento 8.
La Figura 12 muestra los cálculos de isobol usando el procedimiento de Greco et al., supra, para la combinación del compuesto EP y el interferón alfa-2B (Schering-Plough) usando 8 diluciones de cada compuesto en el Experimento 9.
Figura 13 muestra los cálculos de isobol usando el procedimiento de Greco et al., supra, para la combinación de ribavirina e interferón alfa-2B (Schering-Plough) usando 8 diluciones de cada compuesto en el Experimento 10.
La Figura 14 muestra la inhibición de la acumulación de ARN de replicón de VHC causada por tratamiento de células que contienen replicón con (A) ribavirina sola o (B) interferón alfa-2B solo. En los dos paneles se muestra la inhibición medida así como la inhibición corregida en relación con la citotoxicidad de los compuestos.
Descripción detallada de la invención
Los contenidos de cada uno de los documentos de patente y otras referencias citadas en este documento se incorporan en este documento como referencia en su totalidad.
Como se han usado anteriormente y como se usan a lo largo de la descripción de la invención, se entenderá que las siguientes abreviaturas, a menos que se indique otra cosa, tienen los siguientes significados:
\vskip1.000000\baselineskip
12
13
14
Como se han usado anteriormente y como se usan a lo largo de la descripción de la invención, se entiende que las siguientes expresiones y términos, a menos que se indique otra cosa, tienen los siguientes significados:
"Ácido bioisóstero" se refiere a un grupo que tiene similitudes químicas y físicas que producen propiedades biológicas muy similares a un grupo carboxi (véase Lipinski, Annual Reports in Medicinal Chemistry, "Bioisosterism In Drug Design" 21, 283 (1986); Yun, Hwahak Sekye. "Application Of Biolsosterism To New Drug Design", 33, 576-579, (1993): Zhao, Huaxue Tongbao, "Bioisosteric Replacement And Development Of Lead Compounds In Drug Design" 34-38, (1995): Graham. Theochem, "Theoretical Studies Applied To Drug Design:ab initio Electronic Distributions In Bio-isosteres" 343, 105-109, (1995)). Los ácidos bioisósteros ejemplares incluyen -C(O)-NHOH, -C(O)-CH_{2}-OH, -C(O)-CH_{2}SH, -C(O)-NH-CN, sulfo, fosfono, alquilsulfonilcarbamoílo, tetrazolilo, arilsulfonilcarbamoílo, N-metoxicarbamoílo, heteroarilsulfonilcarbamoílo, 3-hidroxi-3-ciclobuteno-1,2-diona, 3,5-dioxo-1,2,4-oxadiazolidinilo o hidroxiheteroarilo tal como 3-hidroxiisoxazolilo, 3-hidroxi-1-metilpirazolilo y similares.
"Grupo funcional ácido" se refiere a un resto que tiene un hidrógeno ácido. Los grupos funcionales ácidos ejemplares incluyen carboxilo (-C(O)OH), -C(O)-NHOH, -C(O)-CH_{2}OH, -C(O)-CH_{2}SH, -C(O)-NH-CN, sulfo, fosfono, alquilsulfonilcarbamoílo, tetrazolilo, arilsulfonilcarbamoílo, N-metoxicarbamoílo, heteroarilsulfonilcarbamoílo, 3-hidroxi-3-ciclobuteno-1,2-diona, 3,5-dioxo-1,2,4-oxadiazolidinilo o hidroxiheteroarilo tal como 3-hidroxiisoxazolilo, 3-hidroxi-1-metilpirazolilo, imidazolilo, mercapto y similares, y un hidroxi apropiado tal como un hidroxi aromático, por ejemplo, hidroxifenilo.
"Grupo protector de ácido" se refiere a un grupo fácilmente retirable que se sabe en la técnica que protege a un hidrógeno ácido de un grupo carboxilo frente a una reacción indeseable durante los procedimientos sintéticos, por ejemplo, para bloquear o proteger la funcionalidad ácida mientras se realizan las reacciones que implican otros sitios funcionales del compuesto, y que puede retirarse de forma selectiva. Dichos grupos protectores de ácido se conocen bien por los especialistas en la técnica, y se han usado ampliamente en la protección de grupos carboxilo, como se describe en las Patentes de Estados Unidos Nº 3.840.556 y 3.719.667, cuyas divulgaciones se incorporan en este documento por referencia. Para grupos protectores de ácido adecuados, véase T.W. Green y P.G.M. Wuts en "Protective Groups in Organic Chemistry" John Wiley y Sons, 1991. El grupo protector de ácido también incluye un grupo protector de ácido lábil a la hidrogenación como se define en este documento. Los grupos protectores de ácido ejemplares incluyen ésteres tales como alquilo inferior C_{1-R} sustituido y sin sustituir, por ejemplo, metilo, etilo, t-butilo, metoximetilo, metiltiometilo, 2,2,2-tricloroetilo y similares, tetrahidropiranilo, fenilalquilo sustituido y sin sustituir tal como bencilo y derivados sustituidos de los mismos tales como grupos alcoxibencilo o nitrobencilo y similares, cinnamilo, dialquilaminoalquilo, por ejemplo, dimetilaminoetilo y similares, trimetilsililo, amidas e hidrazidas sustituidas y sin sustituir, por ejemplo, amidas e hidrazidas de N,N-dimetilamina, 7-nitroindol, hidrazina, N-fenilhidrazina y similares, grupos aciloxialquilo tales como pivaloiloximetilo o propioniloximetilo y similares, aroiloxialquilo tal como benzoiloxietilo y similares, alcoxicarbonilalquilo tal como metoxicarbonilmetilo, ciclohexiloxicarbonilmetilo y similares, alcoxi-carboniloxialquilo tal como t-butiloxicarboniloximetilo y similares, alcoxicarbonilaminoalquilo tal como t-butiloxi-carbonilaminometilo y similares, alquilaminocarbonilaminoalquilo, tal como metilaminocarbonilaminometilo y similares, acilaminoalquilo tal como acetilaminometilo y similares, heterociclilcarboniloxialquilo tal como 4-metil-piperazinil-carboniloximetilo y similares, dialquilaminocarbonilalquilo tal como dimetilaminocarbonil-metilo y similares, (5-(alquil inferior)-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)alquilo tal como (5-t-butil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo y similares, y (5-fenil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)alquilo tal como (5-fenil-2-oxo-1,3-dioxolen-4-il)metilo y similares.
"Grupo protector de amina lábil para ácidos" se refiere a un grupo protector de amina como se define en este documento que se retira fácilmente por tratamiento con un ácido mientras sigue siendo relativamente estable a otros reactivos. Un grupo protector de amina lábil para ácidos preferido es BOC.
"Alifático" se refiere a alquilo, alquenilo o alquinilo como se define en este documento.
"Sustituyente(s) de grupo alifático" se refieren a sustituyentes unidos a un grupo alifático como se define en este documento incluyendo arilo, heteroarilo, hidroxi, alcoxi, cicliloxi, ariloxi, heteroariloxi, acilo o su análogo tioxo, ciclilcarbonilo o su análogo tioxo, aroílo o su análogo tioxo, heteroaroílo o su análogo tioxo, aciloxi, ciclilcarboniloxi, aroiloxi, heteroaroiloxi, halo, nitro, ciano, carboxi (ácido), -C(O)-NHOH, -C(O) CH_{2}OH, -C(O)-CH_{2}SH, -C(O)-NH-CN, sulfo, fosfono, alquilsulfonilcarbamoílo, tetrazolilo, arilsulfonilcarbamoílo, N-metoxicarbamoílo, heteroaril-sulfonilcarbamoílo, 3-hidroxi-3-ciclobuteno-1,2-diona, 3,5-dioxo-10,2,4-oxadiazolidinilo o hidroxiheteroarilo tal como 3-hidroxiisoxazolilo, 3-hidroxi-1-metilpirazolilo, alcoxicarbonilo, cicliloxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilsulfonilo, ciclilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, ciclilsulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinil alquiltio, cicliltio, ariltio, heteroariltio, ciclilo, arildiazo, heteroarildiazo, tiol, metileno (H_{2}C=), oxo (O=), tioxo (S=), Y^{1}Y^{2}N-, Y^{1}Y^{2}NC(O)-, Y^{1}Y^{2}NC(O)O-, Y^{1}Y^{2}NC(O)NY^{3}-, Y^{1}Y^{2}NSO_{2}-, o Y^{3}SO_{2}NY^{1}- donde R^{2} es como se define en este documento, Y^{1} e Y^{2} son independientemente hidrógeno, alquilo, arilo o heteroarilo, e Y^{3} es alquilo, cicloalquilo arilo o heteroarilo, o para cuando el sustituyente es Y^{1}Y^{2}N-, entonces uno de Y^{1} e Y^{2} puede ser acilo, ciclilcarbonilo, aroílo, heteroaroílo, alcoxicarbonilo, cicliloxicarbonilo, ariloxicarbonilo o heteroariloxicarbonilo, como se define en este documento, y el otro de Y^{1} e Y^{2} es como se ha definido previamente, o para cuando el sustituyente es Y^{1}Y^{2}NC(O)-, Y^{1}Y^{2}NC(O)O-, Y^{1}Y^{2}NC(O)NY^{3}- o Y^{1}Y^{2}NSO_{2}-, Y^{1} e Y^{2} también pueden tomarse junto con el átomo de N a través del cual Y^{1} e Y^{2} están unidos para formar un azaheterociclilo o azaheterociclenilo de 4 a 7 miembros. Son sustituyentes de grupo alifático ácidos/de amida carboxi (ácido), -C(O)-NHOH, -C(O)-CH_{2}OH, -C(O)-CH_{2}SH, -C(O)=NH-CN, sulfo, fosfono, alquilsulfonilcarbamoílo, tetrazolilo, arilsulfonilcarbamoílo, N-metoxicarbamoílo, heteroarilsulfonilcarbamoílo, 3-hidroxi-3-ciclobuteno-1,2-diona, 3,5-dioxo-1,2,4-oxadiazolidinilo o hidroxiheteroarilo tal como 3-hidroxiisoxazolilo, 3-hidroxi-1-metilpirazolilo e Y^{1}Y^{2}NCO-. Son sustituyentes de grupo alifático no ácido polar hidroxi, oxo (O=), tioxo (S=), acilo o su análogo tioxo, ciclilcarbonilo o su análogo tioxo, arilo o su análogo tioxo, heteroaroílo o su análogo tioxo, alcoxicarbonilo, cicliloxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, aciloxi, ciclilcarboniloxi, aroiloxi, heteroaroiloxi, alquilsulfonilo, ciclilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, ciclilsulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, tiol, Y^{1}Y^{2}N-, Y^{1}Y^{2}NC(O)-, Y^{1}Y^{2}NC(O)O)-, Y^{1}Y^{2}NC(O)NY^{3}- o Y^{1}Y^{2}NSO_{2}-. Los grupos alifáticos ejemplares que tienen un sustituyente de grupo alifático incluyen metoximetoxi, metoxietoxi, etoxietoxi, (metoxi-, benciloxi-, fenoxi- o etoxi-) carbonil(metilo o etilo), benciloxicarbonilo, piridilmetiloxi-carbonilmetilo, metoxietilo, etoximetilo, n-butoximetilo, ciclopentilmetiloxietilo, fenoxipropilo, fenoxialilo, trifluorometilo, ciclopropil-metilo, ciclopentilmetilo, carboxi(metilo o etilo), 2-fenetenilo, benciloxi, 1- o 2-naftil-metoxi, 4-piridil-metiloxi, henciloxietilo, 3-benciloxialilo, 4-piridilmetil-oxietilo, 4-piridilmetil-oxialilo, bencilo, 2-fenetilo, naftilmetilo, estirilo, 4-fenil-1,3-pentadienilo, fenil-propinilo, 3-fenilbut-2-inilo, pirid-3-ilacetilenilo y quinolin-3-ilacetilenilo, 4-piridil-etinilo, 4-piridilvinilo, tieniletenilo, piridiletenilo, imidazolil-etenilo, piraziniletenilo, piridilpentenilo, piridilhexenilo y piridilheptenilo, tienilmetilo, piridilmetilo, imidazolilmetilo, pirazinilmetilo, tetrahidropiranilmetilo, tetrahidropiranil metiloximetilo y similares.
"Acilo" se refiere a un grupo H-CO- o (alifático o ciclilo)-CO- en el que el grupo alifático es como se describe en este documento. Los acilo preferidos contienen un alquilo inferior. Los grupos acilo ejemplares incluyen formilo, acetilo, pmpanoílo, 2-metilpropanoílo, butanoílo, palmitoilo, acriloilo, propinoílo, ciclohexilcarbonilo y similares.
"Alquenoílo" se refiere a un grupo alquenil-CO- en el que el alquenilo es como se define en este documento.
"Alquenilo" se refiere a un grupo hidrocarbonado alifático que contiene un doble enlace carbono-carbono, que puede ser lineal o ramificado y que tiene de aproximadamente 2 a aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquenilo preferidos tienen de 2 a aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena; y más preferiblemente de aproximadamente 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo se unen a una cadena alquenilo lineal. "Alquenilo inferior" significa de aproximadamente 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena que puede ser lineal o ramificada. Los grupos alquenilo ejemplares incluyen etenilo, propenilo, n-butenilo, i-butenilo, 3-metilbut-2-enilo, n-pentenilo, heptenilo, octenilo, ciclohexilbutenilo, decenilo y similares. "Alquenilo sustituido" se refiere a un grupo alquenilo como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes de grupo alifático" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. Los sustituyentes de grupo alifático alquenilo ejemplares incluyen grupos halo o cicloalquilo.
"Alqueniloxi" se refiere a un grupo alquenil-O- en el que el grupo alquenilo es como se describe en este documento. Los grupos alqueniloxi ejemplares incluyen aliloxi, 3-buteniloxi y similares.
"Alcoxi" se refiere a un grupo alquil-O- donde el grupo alquilo es como se describe en este documento. Los grupos alcoxi ejemplares incluyen metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, heptoxi y similares.
"Alcoxicarbonilo" se refiere a un grupo alquil-O-CO-, en el que el grupo alquilo es como se define en este documento. Los grupos alcoxicarbonilo ejemplares incluyen metoxicarbonilo, etoxicarbonilo, t-butiloxicarbonilo y similares.
"Alquilo" se refiere a un grupo hidrocarbonado alifático que puede ser lineal o ramificado y que tiene de aproximadamente 1 a aproximadamente 20 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquilo preferidos tienen de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena, prefiriéndose más alquilo inferior como se define en este documento. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo están unidos a una cadena alquilo lineal. "Alquilo inferior" significa de aproximadamente 1 a aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena que puede ser lineal o ramificada. "Alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes de grupo alifático" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes, y son como se definen en este documento.
"Alquilsulfinilo" se refiere a un grupo alquil-SO- en el que el grupo alquilo es como se ha definido anteriormente. Los grupos preferidos son aquellos en los que el grupo alquilo es alquilo inferior.
\newpage
"Alquilsulfonilo" se refiere a un grupo alquil-SO_{2} en el que el grupo alquilo es como se ha definido anteriormente. Los grupos preferidos son aquellos en los que el grupo alquilo es alquilo inferior.
"Alquilsulfonilcarbamoílo" se refiere a un grupo alquil-SO_{2}.NH-C(=O)- en el que el grupo alquilo es como se describe en este documento. Los grupos alquilsulfonilcarbamoílo preferidos son aquellos en los que el grupo alquilo es alquilo inferior.
"Alquiltio" se refiere a un grupo alquil-S- en el que el grupo alquilo es como se describe en este documento. Los grupos alquiltio ejemplares incluyen metiltio, etiltio, i-propiltio y heptiltio.
"Alquinilo" se refiere a un grupo hidrocarbonado alifático que contiene un triple enlace carbono-carbono, que puede ser lineal o ramificado y que tiene de aproximadamente 2 a aproximadamente 15 átomos de carbono en la cadena. Los grupos alquinilo preferidos tienen de 2 a aproximadamente 12 átomos de carbono en la cadena; y más preferiblemente de aproximadamente 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena. Ramificado significa que uno o más grupos alquilo inferior tales como metilo, etilo o propilo están unidos a una cadena alquinilo lineal. "Alquinilo inferior" significa de aproximadamente 2 a aproximadamente 4 átomos de carbono en la cadena que puede ser lineal o ramificada. El grupo alquinilo puede estar sustituido con uno o más halo. Los grupos alquinilo ejemplares incluyen etinilo, propinilo, n-butinilo, 2-butinilo, 3-metilbutinilo, n-pentinilo, heptinilo, octinilo, decinilo y similares. "Alquinilo sustituido" se refiere a alquinilo como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes de grupo alifático" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes, y son como se definen en este documento.
"Grupo protector de amina" se refiere a un grupo que puede retirarse fácilmente que se sabe en la técnica que protege a un resto nitrógeno de un grupo amino o amida frente a una reacción indeseable durante procedimientos sintéticos y que puede retirarse de forma selectiva. El uso de grupos protectores de amina/amida se conoce bien en la técnica para grupos protectores frente a reacciones indeseables durante un procedimiento sintético y se conocen muchos grupos protectores de este tipo, por ejemplo, T.W. Greene y P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Syntheses, 2ª edición, John Wiley y Sons, Nueva York (1991), incorporado en este documento como referencia. El grupo protector de amina/amida también incluye "grupo protector de amina/amida lábil a ácidos" y "grupo protector de amina/amida lábil a la hidrogenación". Son grupos protectores de amina/amida ejemplares acilo, incluyendo formilo, acetilo, cloroacetilo, tricloroacetilo, o-pnitrofenilacetilo, o-pnitrofenoxi-acetilo, trifluoroacetilo, acetoacetilo, 4-clorobutilo, isobutirilo, o-pnitrocinnainoílo, picolinoílo, acilisotiocianato, aminocaproílo, benzoílo y similares, y aciloxi incluyendo metoxi-carbonilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo, 2,2,2-trifluoroetoxicarbonilo, 2-trimetilsililetoxi-carbonilo, viniloxicarbonilo, aliloxicarbonilo, t-butiloxicarbonilo (BOC), 1,1-dimetil-propiniloxicarbonilo, benciloxicarbonilo (CBZ), p-nitrobenciloxicarbonilo, 2,4-dicloro-benciloxicarbonilo y similares.
"Grupo protector de amida" se refiere a un grupo que puede retirarse fácilmente que se sabe en la técnica que protege a un resto nitrógeno de un grupo amida frente a una reacción indeseable durante procedimientos sintéticos y que puede retirarse de forma selectiva después de su conversión en la amina. El uso de grupos protectores de amida se conoce bien en la técnica para grupos protectores frente a reacciones indeseables durante un procedimiento sintético y se conocen muchos grupos protectores de este tipo, por ejemplo, T.W. Greene y P.G.M. Wuts. Protective Groups in Organic Synthesis, 2ª edición, John Wiley y Sons, Nueva York (1991), incorporado en este documento como referencia. Grupo protector de amida también incluye "grupo protector de amida lábil a ácidos" y "grupo protector de amida lábil a la hidrogenación". Son grupos protectores de amida ejemplares o-pnitrocinnamoílo, picolinoílo, aminocaproílo, benzoílo y similares, y aciloxi incluyendo metoxi-carbonilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo, 2,2,2-trifluoroetoxicarbonilo, 2-trimetilsililetoxi-carbonilo, viniloxicarbonilo, aliloxicarbonilo, t-butitoxicarbonilo (BOC), 1,1-dimetil-propiniloxicarbonilo, benciloxicarbonilo (CBZ), p-nitrobenciloxicarbonilo, 2,4-dicloro-henciloxicarbonilo y similares.
"Aminoácido" se refiere a un aminoácido seleccionado entre el grupo constituido por aminoácidos naturales y no naturales como se define en este documento. Un aminoácido también pretende incluir aminoácidos que tienen la estereoquímica L o D en el carbono \alpha. Los aminoácidos preferidos son los que poseen un grupo \alpha-amino. Los aminoácidos pueden ser neutros, positivos o negativos dependiendo de los sustituyentes de su cadena lateral. "Aminoácido neutro" se refiere a un aminoácido que contiene sustituyentes de la cadena lateral no cargados. Los aminoácidos neutros ejemplares incluyen alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, tripfófano, metionina, glicina, serina, treonina y cisteína. "Aminoácido positivo" se refiere a un aminoácido en el que los sustituyentes de la cadena lateral están cargados positivamente a pH fisiológico. Los aminoácidos positivos ejemplares incluyen lisina, arginina e histidina. "Aminoácido negativo" se refiere a un aminoácido en el que los sustituyentes de la cadena lateral tienen una carga neta negativa a pH fisiológico. Los aminoácidos negativos ejemplares incluyen ácido aspártico y ácido glutámico. Son aminoácidos preferidos \alpha-aminoácidos. Son aminoácidos naturales ejemplares isoleucina, prolina, fenilalanina, tripfófano, metionina, glicina, serina, treonina, cisteína, tirosina, asparagina, glutamina, lisina, arginina, histidina, ácido aspártico y ácido glutámico. "Aminoácido no natural" se refiere a un aminoácido para el que no hay ningún codón de ácido nucleico. Los aminoácidos no naturales ejemplares incluyen, por ejemplo, los isómeros D de los \alpha-aminoácidos naturales que se han indicado anteriormente; Aib (ácido aminobutírico), \betaAib (ácido 3-amino-isobutírico), Nva (norvalina), \beta-Ala, Aad (ácido 2-aminoadípico), \betaAad (ácido 3-aminoadípico), Abu (ácido 2-aminobutírico), Gaba (ácido \gamma-aminobutírico), Acp (ácido 6-aminocaproico), Dbu (ácido 2,4-diaminobutírico), ácido \alpha-aminopimélico, TMSA (trimetilsilil-Ala), alle (alo-isoleucina), Nle (norleucina), terc-Leu, Cit (citrulina), Orn, Dpm (ácido 2,2'-diaminopiméjico), Dpr (ácido 2,3-diaminopropiónico), \alpha- o \beta-NaI, Cha (ciclohexil-Ala), hidroxiprolina, Sar (sarcosina), y similares; aminoácidos cíclicos; aminoácidos N^{a}-alquilados tales como MeGly (N^{a}-metilglicina), EtGly (N^{a}-etilglicina) y EtAsn (N^{a}-etilasparagina); y aminoácidos en los que el \alpha-carbono tiene dos sustituyentes en la cadena lateral. Los nombres de los aminoácidos natural y no naturales y restos de los mismos usados en este documento siguen las convenciones de nombrado sugeridas por la IUPAC Commission on the Nomenclature of Organic Chemistry y la IUPAC-IUB Commission on Biochemical Nomenclature que se exponen en "Nomenclature of \alpha-Amino Acids (Recommendations, 1974) "Biochemistry, 14(2), (1975). Cuando los nombres y abreviaturas de aminoácidos y restos de los mismos empleados en esta memoria descriptiva y en las reivindicaciones adjuntas difieren de los señalados, se especificarán de forma más clara los nombres y abreviaturas diferentes.
"Grupo protector de aminoácidos" se refiere a un grupo que protege a un resto ácido o amina del aminoácido u otro resto reactivo en la cadena lateral de un aminoácido, por ejemplo hidroxi o tiol. Para ejemplos de "derivados protegidos correspondientes" de cadenas laterales de aminoácidos, véase F.W. Green y P.G.M. Wuts en "Protective Groups in Organic Chemistry" John Wiley y Sons. 1991. Los grupos protectores para un grupo ácido en un aminoácido se describen en este documento, por ejemplo en las secciones "grupo funcional ácido" y "grupo protector ácido lábil a la hidrogenación". Los grupos protectores para un grupo amina en un aminoácido se describen en este documento, por ejemplo en las secciones "grupo protector de amina", "grupo protector de amina lábil a ácidos" y "grupo protector de amina lábil a la hidrogenación".
"Resto de aminoácidos" se refiere a las unidades de aminoácidos individuales incorporadas en el compuesto de la invención.
"Cadena lateral de aminoácidos" se refiere a sustituyente que se encuentra en el carbono que está entre los grupos amino y carboxi en \alpha-aminoácidos. Las cadenas laterales de aminoácidos ejemplares incluyen isopropilo, metilo y carboximetilo para valina, alanina y ácido aspártico, respectivamente.
"Equivalente de aminoácido" se refiere a un aminoácido que puede estar sustituido por otro aminoácido en los péptidos de acuerdo con la invención sin ninguna pérdida de función apreciable. A la hora de realizar tales cambios, se realizan sustituciones de dichos aminoácidos basándose en la similitud relativa de los sustituyentes de cadena lateral, por ejemplo con respecto al tamaño, carga, hidrofilicidad, hidropaticidad e hidrofobicidad como se describe en este documento.
"Grupo aromático" se refiere a arilo o heteroarilo como se define en este documento. Los grupos aromáticos ejemplares incluyen fenilo, halo fenilo sustituido, azaheteroarilo y similares.
"Aroílo" se refiere a un grupo aril-CO- en el que el grupo arilo es como se describe en este documento. Los grupos aroílo ejemplares incluyen benzoílo, 1- y 2-naftoílo y similares.
"Arilo" se refiere a un sistema de anillos monocíclicos o multicíclicos, aromáticos, de aproximadamente 6 a aproximadamente 14 átomos de carbono, preferiblemente de aproximadamente 6 a aproximadamente 10 átomos de carbono. Por arilo se incluyen arilcicloalquenilo condensado, arilcicloalquilo condensado, ariltheterociclenilo condensado y arilheterociclilo condensado como se definen en este documento cuando se unen a través del resto arilo de los mismos. El arilo está opcionalmente sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" que pueden ser iguales o diferentes, y son como se definen en este documento. Los grupos arilo ejemplares incluyen fenilo o naftilo, o fenilo sustituido o naftilo sustituido. "Arilo sustituido" se refiere a un grupo arilo como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento.
"Arildiazo" se refiere a un grupo aril-diazo- en el que los grupos arilo y diazo son como se definen en este documento.
"Arileno" se refiere a un grupo arilo bivalente 1,2-, 1,3-, 1,4-, opcionalmente sustituido, en el que el grupo arilo es como se define en este documento. Los grupos arileno ejemplares incluyen fenileno opcionalmente sustituido, naftileno e indanileno. Un arileno particular es fenileno opcionalmente sustituido.
"Arileno sustituido" se refiere a un grupo arileno como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento.
"Ariloxi" se refiere a un grupo aril-O- en el que el grupo arilo es como se define en este documento. Los grupos ariloxi ejemplares incluyen fenoxi y 2-naftiloxi.
"Ariloxicarbonilo" se refiere a un grupo aril-O-CO- en el que el grupo arilo es como se define en este documento. Los grupos ariloxicarbonilo ejemplares incluyen fenoxicarbonilo y naftoxicarbonilo.
"Arilsulfonilo" se refiere a un grupo aril-SO_{2}, en el que el grupo arilo es como se define en este documento.
"Arilsulfonilcarbamoílo" se refiere a un grupo aril-SO_{2},NH-C(=O)- en el que el grupo arilo es como se describe en este documento. Un grupo arilsulfonilcarbamoílo ejemplar es fenilsulfonilcarbamoílo.
"Arilsulfinilo" se refiere a un grupo aril-SO- en el que el grupo arilo es como se define en este documento.
"Ariltio" se refiere a un grupo aril-S- en el que el grupo arilo es como se describe en este documento. Los grupos ariltio ejemplares incluyen feniltio y naftiltio.
"Átomo de nitrógeno básico" se refiere a un átomo de nitrógeno hibridizado sp^{2} o sp^{3} que tiene un par de electrones no unidos que es capaz de protonarse. Los átomos de nitrógeno básicos ejemplares incluyen grupos imino opcionalmente sustituido, amino opcionalmente sustituido y amidino opcionalmente sustituido.
"Carboxi" se refiere a un grupo HO(O)C-(ácido carboxílico).
"Agente de acoplamiento" se refiere a un compuesto que reacciona con el resto hidroxilo de un resto carboxi haciéndolo de esta manera susceptible al ataque nucleofílico. Los agentes de acoplamiento ejemplares incluyen DIC, EDCI, DCC y similares.
"Cicloalquenilo" se refiere a un sistema de anillos mono- o multicíclicos, no aromáticos, de aproximadamente 3 a aproximadamente 10 átomos de carbono, preferiblemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 átomos de carbono, y que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono. Por cicloalquenilo se incluyen arilcicloalquenilo condensado y heteroarilcicloalquenilo condensado como se define en este documento cando se unen a través del resto cicloalquenilo de los mismos. Los tamaños de anillo preferidos de los anillos del sistema de anillos incluyen de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo; y dichos tamaños de anillo preferidos también se denominan "inferior". "Cicloalquenilo sustituido" se refiere a un grupo cicloalquenilo como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. Los cicloalquenilos monocíclicos ejemplares incluyen ciclopentenilo, ciclohexenilo, cicloheptenilo y similares. Un cicloalquenilo multicíclico ejemplar es norbornilenilo.
"Cicloalquilo" se refiere a un sistema de anillos mono- o multicíclicos, no aromáticos, de aproximadamente 3 a aproximadamente 10 átomos de carbono, preferiblemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 átomos de carbono. Los tamaños de anillo preferidos de los anillos del sistema de anillos incluyen de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo; y dichos tamaños de anillo preferidos también se denominan "inferior". Por cicloalquilo se incluyen arilcicloalquilo condensado y heteroarilcicloalquilo condensado como se define en este documento cuando se unen a través del resto cicloalquilo de los mismos. "Cicloalquilo sustituido" se refiere a un grupo cicloalquilo como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. Los cicloalquilos monocíclicos ejemplares incluyen ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo y similares. Los cicloalquilos multicíclicos ejemplares incluyen 1-decalina, norbornilo, adamant-(1- o 2-)ilo y similares.
"Cicloalquileno" se refiere a un grupo cicloalquilo bivalente como se define en este documento que tiene de aproximadamente 4 a aproximadamente 8 átomos de carbono. Los tamaños de anillo preferidos del cicloalquileno incluyen de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo; y dichos tamaños de anillo preferidos también se denominan "inferior". Los puntos de unión en el grupo cicloalquileno incluyen patrones de unión 1,1-, 1,2-, 1,3- o 1,4-, y donde sea aplicable la relación estereoquímica de los puntos de unión es cis o trans. Los grupos cicloalquileno ejemplares incluyen (1,1-, 1,2- o 1,3-)ciclohexileno y (1,1- o 1,2-)ciclopentileno. "Cicloalquileno sustituido" se refiere a un grupo cicloalquileno como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento.
"Cíclico" o "ciclilo" se refiere a cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclilo o heterociclenilo como se define en este documento. El término "inferior" como se usa con respecto al término cíclico es el mismo que se ha indicado en este documento con respecto al cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclilo o heterociclenilo.
"Cicliloxi" se refiere a un grupo ciclil-O- en el que el grupo ciclilo es como se describe en este documento. Los grupos cicloalcoxi ejemplares incluyen ciclopentiloxi, ciclohexiloxi, quinuclidiloxi, pentametilenosulfuroxi, tetrahidropiraniloxi, tetrahidrotiofeniloxi, pirrolidiniloxi, tetrahidrofuranoiloxi o 7-oxabiciclo [2.2.1]heptaniloxi, hidroxitetrahidropiraniloxi, hidroxil-7-oxabiciclo[2.2.1]heptaniloxi y similares.
"Ciclilsulfinilo" se refiere a un grupo ciclil-S(O)- en el que el grupo ciclilo es como se describe en este documento.
"Ciclilsulfonilo" se refiere a un grupo ciclil-S(O)_{2} en el que el grupo ciclilo es como se describe en este documento.
"Cicliltio" se refiere a un grupo ciclil-S- en el que el grupo ciclilo es como se describe en este documento.
"Diazo" se refiere a un radical -N=N- bivalente.
"Resto desplazable" se refiere a un grupo que, cuando se asocia con L como se define en este documento, se somete a desplazamiento por ataque nucleofílico mediante un resto amina mono- o di-sustituida con o sin presencia de un agente que facilita dicho ataque, por ejemplo, un agente de acoplamiento. Los restos desplazables ejemplares incluyen hidroxi, oxi alifático, halo, N-oxisuccinimida, aciloxi y similares.
"Cantidad eficaz" se refiere a una cantidad de un compuesto/composición de acuerdo con la presente invención eficaz en la producción del efecto terapéutico deseado.
"Arilcicloalquenilo condensado" se refiere a un arilo y cicloalquenilo condensados como se definen en este documento. Son arilcicloalquenilos condensados preferidos aquellos en los que el arilo de los mismos es fenilo y el cicloalquenilo consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. Un arilcicloalquenilo condensado como una variable puede unirse a través de cualquier átomo del sistema de anillos del mismo capaz de ello. "Arilcicloalquenilo condensado sustituido" se refiere a un grupo arilcicloalquenilo condensado como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. Los arilcicloalquenilo condensados ejemplares incluyen 1,2-dihidronaftileno, indeno y similares.
"Arilcicloalquilo condensado" se refiere a arilo y cicloalquilo condensados como se definen en este documento. Son arilcicloalquilos condensados preferidos aquellos en los que el arilo de los mismos es fenilo y el cicloalquilo consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. Un arilcicloalquilo condensado como una variable puede unirse a través de cualquier átomo del sistema de anillos del mismo capaz de ello. "Arilcicloalquilo condensado sustituido" se refiere a un grupo arilcicloalquilo condensado como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. Arilcicloalquilo condensado ejemplar incluye 1,2,3,4-tetrahidro-naftileno y similares.
"Arileterociclenilo condensado" se refiere a un arilo y heterociclenilo condensados como se define en este documento. Son arilheterociclenilos condensados preferidos aquellos en los que el arilo de los mismos es fenilo y el heterociclenilo consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. Un arilheterociclenilo condensado como una variable puede unirse a través de cualquier átomo del sistema de anillos del mismo capaz de ello. La designación de aza, oxa o tia como prefijo antes de la porción heterociclenilo del arilheterociclenilo condensado define que está presente al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, respectivamente, como un átomo del anillo. "Arilheterociclenilo condensado sustituido" se refiere a un grupo arilheterociclenilo condensado como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. El átomo de nitrógeno de un arilheterociclilenilo condensado puede ser un átomo de nitrógeno básico. El átomo de nitrógeno o azufre de la porción heterociclenilo del arilheterociclenilo condensado también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido, S-óxido o S,S-dióxido correspondiente. Los arilheterociclenilos condensados ejemplares incluyen 3H-indolinilo, 1H-2-oxoquinolilo, 2H-1-oxoisoquinolilo, 1,2-dihidroquinolinilo, 3,4-dihidroquinolinilo, 1,2-dihidroisoquinolinilo, 3,4-dihidroisoquinolinilo y similares.
"Arilheterociclilo condensado" se refiere a acrilo y heterociclilo condensados como se definen en este documento. Son arilheterociclilos condensados preferidos aquellos en los que el arilo de los mismos es fenilo y el heterociclilo consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. Un arilheterociclilo condensado como una variable puede unirse a través de cualquier átomo del sistema de anillos del mismo capaz de ello. La designación de aza, oxa o tia como prefijo antes de la porción heterociclilo del arilheterociclilo condensado define que está presente al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, respectivamente, como un átomo del anillo. "Arilheterociclilo condensado sustituido" se refiere a un grupo arilheterociclilo condensado como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. El átomo de nitrógeno de un arilheterociclilo condensado puede ser un átomo de nitrógeno básico. El átomo de nitrógeno o azufre de la porción heterociclilo del arilheterociclilo condensado también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido. S-óxido o S,S-dióxido correspondiente. Los sistemas de anillos arilheterociclilo condensado ejemplares incluyen indolinilo, 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina, 1,2,3,4-tetrahidroquinolina, 1H-2,3-dihidroisoindol-2-ilo, 2,3-dihidrobenz[f]isoindol-2-ilo, 1,2,3,4-tetrahidrobenz[g]-isoquinolin-2-ilo y similares.
"Heteroarilcicloalquenilo condensado" se refiere a un heteroarilo y cicloalquenilo condensados como se definen en este documento. Los heteroarilcicloalquenilos condensados preferidos son aquellos en los que el heteroarilo de los mismos es fenilo y el cicloalquenilo consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. Un heteroarilcicloalquenilo condensado como una variable puede unirse a través de cualquier átomo del sistema de anillos del mismo capaz de ello. La designación de aza, oxa o tia como prefijo antes de la porción heteroarilo del heteroarilcicloalquenilo condensado define que está presente al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, respectivamente, como un átomo del anillo. "Heteroarilcicloalquenilo condensado sustituido" se refiere a un grupo heteroarilcicloalquenilo condensado como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 30 que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. El átomo de nitrógeno de un heteroarilcicloalquenilo condensado puede ser un átomo de nitrógeno básico. El átomo de nitrógeno de la porción heteroarilo del heteroarilcicloalquenilo condensado también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido correspondiente. Los heteroarilcicloalquenilo condensados ejemplares incluyen 5,6-dihidroquinolilo, 5,6-dihidroisoquinolilo, 5,6-dihidroquinoxalinilo, 5,6-dihidroquinazolinilo, 4,5-dihidro-1H-bencimidazolilo, 4,5-dihidrobenzoxazolilo y similares.
"Heteroarilciclualquilo condensado" se refiere a heteroarilo y cicloalquilo condensados como se definen en este documento. Son heteroarilcicloalquilos condensados preferidos aquellos en los que el heteroarilo de los mismos consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo y el cicloalquilo consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. Un heteroarilcicloalquilo condensado como una variable puede unirse a través de cualquier átomo del sistema de anillos del mismo capaz de ello. La designación de aza, oxa o tia como prefijo antes de la porción heteroarilo del heteroarilcicloalquilo condesado define que está presente al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, respectivamente, como un átomo del anillo. "Heteroarilcicloalquilo condensado sustituido" se refiere a un grupo heteroarilcicloalquilo condensado como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. El átomo de nitrógeno de un heteroarilcicloalquilo condensado puede ser un átomo de nitrógeno básico. El átomo de nitrógeno de la porción heteroarilo del heteroarilcicloalquilo condensado también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido correspondiente. Los heteroarilcicloalquilos condensados ejemplares incluyen 5,6,7,8-tetrahidroquinolinilo, 5,6,7,8-tetrahidroisoquinolilo, 5,6,7,8-tetrahidroquinoxalinilo, 5,6,7,8-tetrahidroquinazolilo, 4,5,6,7-tetrahidro-1H-bencimidazolilo, 4,5,6,7-tetrahidrobenzoxazolilo, 1H-4-oxa-1,5-diazanaftalen-2-onilo, 1,3-dihidroimidizol-[4,5]-piridina-2-onilo y similares.
"Heteroarilheterociclenilo condensado" se refiere a un heteroarilo y heterociclenilo condensados como se definen en este documento. Son heteroarilheterociclenilos condensados preferidos aquellos en los que el heteroarilo de los mismos consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo y el heterociclenilo consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. Un heteroarilheterociclenilo condensado como una variable puede unirse a través de cualquier átomo del sistema de anillos del mismo capaz de ello. La designación de aza, oxa o tia como prefijo antes de la porción heteroarilo o heterociclenilo del heteroarilheterociclenilo condensado define que está presente al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, respectivamente, como un átomo del anillo. "Heteroarilheterociclenilo condensado sustituido" se refiere a un grupo heteroarilheterociclenilo condensado como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. El átomo de nitrógeno de un heteroarilazaheterociclenilo condensado puede ser un átomo de nitrógeno básico. El átomo de nitrógeno o azufre de la porción hereroarilo del heteroarilheterociclilo condensado también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido correspondiente.
El átomo de nitrógeno o azufre de la porción heteroarilo o heterociclilo del heteroarilheterociclilo condensado también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido, S-óxido o S,S-dióxido correspondiente. Los heteroarilheterociclenilo condensados ejemplares incluyen 7,8-dihidro[1,7]naftiridinilo, 1,2-dihidro[2,7]-naftiridinilo, 6,7-dihidro-3H-imidazo[4,5-c]piridilo, 1,2-dihidro-1,5-naftiridinilo, 1,2-dihidro-1,6-naftiridinilo, 1,2-dihidro-1,7-naftiridinilo, 1,2-dihidro 1,8-naftiridinilo, 1,2-dihidro-2,6-naftiridinilo y similares.
"Heteroarilheterociclilo condensado" se refiere a heteroarilo y heterociclilo condensados como se definen en este documento. Son heteroarilheterociclilos condensados preferidos aquellos en los que el hereroarilo de los mismos consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo y el heterociclilo consta de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. Un heteroarilheterociclilo condensado como una variable puede unirse a través de cualquier átomo del sistema de anillos del mismo capaz de ello. La designación de aza, oxa o tia como prefijo antes de la porción heteroarilo o heterociclilo del heteroarilheterociclilo condensado define que está presente al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, respectivamente, como un átomo del anillo. "Heteroarilheterociclilo condensado sustituido" se refiere a un grupo heteroarilheterociclilo condensado como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. El átomo de nitrógeno de un heteroarilheterociclilo condensado puede ser un átomo de nitrógeno básico. El átomo de nitrógeno o azufre de la porción heteroarilo del heteroarilheterociclilo condensado también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido correspondiente. El átomo de nitrógeno o azufre de la porción heteroarilo o heterociclilo del heteroarilheterociclilo condensado también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido, S-óxido o S,S-dióxido correspondiente. Los heteroarilheterociclilos condensados ejemplares incluyen 2,3-dihidro-1H-pirrol [3,4-b]quinolin-2-ilo, 1,2,3,4-tetrahidrobenz[b][1,7]naftiridin-2-ilo, 1,2,3,4-tetrahidrobenz[b][1,6]naftiridin-2-ilo, 1,2,3,4-tetrahidro-9H-pirido[3,4-b]indol-2-ilo, 1,2,3,4-tetrahidro-9H-pirido[4,3-b]indol-2-ilo, 2,3-dihidro-1H-pirrolo [3,4-b]indol-2-ilo, 1H-2,3,4,5-tetrahidroazepino[3,4-b]indol-2-ilo, 1H-2,3,4,5-tertra-hidroazepino[4,3-b]indol-3-ilo, 1H-2,3,4,5-tetrahidroazepino[4,5-b]indol-2-ilo, 5,6,7,8-tetrahidro[1,7]naftiridilo, 1,2,3,4-tetrahidro[2,7]naftiridilo, 2,3-dihidro[1,4]dioxino[2,3-b]piridilo, 2,3-dihidro-[1,4]dioxino[2,3-b]piridilo, 3,4-dihidro-2H-1-oxa[4,6]diazanaftalenilo, 4,5,6,7-tetrahidro-3H-imidazo[4,5-c]piridilo, 6,7-dihidro[5,8]diazanaftalenilo, 1,2,3,4-tetrahidro[1,5]-naftiridinilo, 1,2,3,4-tetrahidro[1,6]naftiridinilo, 1,2,3,4-tetrahidro[1,7]naftiridinilo, 1,2,3,4-tetrahidro[1,8]naftiridinilo, 1,2,3,4-tetrahidro[2,6]naftiridinilo y similares.
"Halo" se refiere a fluoro, cloro, bromo o yodo. Se prefieren fluoro, cloro o bromo, y se prefieren más fluoro o cloro.
"Heteroaroílo" se refiere a un grupo heteroaril-CO- en el que el grupo heteroarilo es como se describe en este documento. Los grupos heteroaroílo ejemplares incluyen tiofenoílo, nicotinoílo, pirrol-2-ilcarbonilo, 1- y 2-naftoílo, piridinoílo y similares.
"Heteroarilo" se refiere a un sistema de anillos monocíclicos o multicíclicos, aromáticos, de aproximadamente 5 a aproximadamente 14 átomos de carbono, preferiblemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 átomos de carbono, en el que uno o más de los átomos de carbono del sistema de anillos es o son elementos hetero distintos de carbono, por ejemplo nitrógeno, oxígeno o azufre. Preferiblemente, el sistema de anillos incluye de 1 a 3 heteroátomos. Los tamaños de anillo preferidos de los anillos del sistema de anillos incluyen de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo. Por heteroarilo se incluyen heleroarilcicloalquenilo condensado, heteroarilcicloalquilo condensado, heteroarilhetereciclenilo condensado y heteroarilheterociclilo condensado como se define en este documento cuando se unen a través del resto heteroarilo de los mismos. "Heteroarilo condensado" se refiere a un grupo heteroarilo como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. La designación de aza, oxa o tia como prefijo antes de heteroarilo define que está presente al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, respectivamente, como un átomo del anillo. Un átomo de nitrógeno de un heteroarilo puede ser un átomo de nitrógeno básico también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido correspondiente. Los grupos heteroarilo y heteroarilo sustituido ejemplares incluyen pirazinilo, tienilo, isotiazolilo, oxazolilo, pirazolilo, furazanilo, pirrolilo, 1,2,4-tiadiazolilo, piridazinilo, quinoxalinilo, ftalazinilo, imidazo[1,2-a]piridina, imidazo[2,1-b]tiazolilo, benzofurazanilo, azaindolilo, bencimidazolilo, benzotienilo, tienopiridilo, tienopirimidilo, pirrolopiridilo, imidazopiridilo, benzoazaindolilo, 1,2,4-triazinilo, benzotiazolilo, furanilo, imidazolilo, indolilo, indolizinilo, isoxazolilo, isoquinolinilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, pirazinilpiridazinilo, pirazolilo, piridilo, pirimidinilo, pirrolilo, quinazolinilo, quinolinilo,
1,3,4-tiadiazolilo, tiazolilo, tienilo, triazolilo y similares. Un grupo heteroarilo preferido es pirazinilo.
"Heteroarildiazo" se refiere a un grupo heteroaril-azo- en el que los grupos heteroarilo y azo son como se definen en este documento.
"Heteroarildiilo" se refiere a un radical bivalente obtenido a partir de un heteroarilo, donde el heteroarilo es como se describe en este documento. Un radical heteroarildiilo ejemplar es piridinadiilo opcionalmente sustituido.
"Heteroarilsulfonilcarbamoílo" se refiere a un grupo heteroaril-SO_{3}-NH-C(=O)- en el que el grupo heteroarilo es como se describe en este documento.
"Heterociclenilo" se refiere a un sistema de anillos hidrocarbonados, monocíclicos o multicíclicos, no aromáticos, de aproximadamente 3 a aproximadamente 10 átomos de carbono, preferiblemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 átomos de carbono, en el que uno o más de los átomos de carbono del sistema de anillos es o son elementos hetero distintos de carbono, por ejemplo átomos de nitrógeno, oxígeno o azufre, y que contiene al menos un doble enlace carbono-carbono o un doble enlace carbono-nitrógeno. Preferiblemente, el anillo incluye de 1 a 3 heteroátomos. Los tamaños de anillo preferidos de los anillos del sistema de anillos incluyen de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo; y dichos tamaños de anillo preferidos también se denominan "inferior". Por heterociclenilo se incluyen arilheterociclenilo condensado y heteroarilheterociclenilo condensado como se define en este documento cuando se unen a través del resto heterociclenilo de los mismos. La designación de aza, oxa o tia como prefijo antes de heterociclenilo define que está presente al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, respectivamente, como un átomo del anillo. "Heterociclenilo sustituido" se refiere a un grupo heterociclenilo como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. El átomo de nitrógeno de un heterociclenilo puede ser un átomo de nitrógeno básico. El átomo de nitrógeno o azufre del heterociclenilo también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido, S-óxido o S,S-dióxido correspondiente. Los grupos azaheterociclenilo monocíclico ejemplares incluyen 1,2,3,4-tetrahidrohidropiridina, 1,2-dihidropiridilo, 1,4-dihidropiridilo, 1,2,3,6-tetrahidropiridina, 1,4,5,6-tetrahidropirimidina, 2-pirrolinilo, 3-pirrolinilo, 2-imidazolinilo, 2-pirazolinilo y similares. Los grupos oxaheterociclenilo ejemplares incluyen 3,4-dihidro-2H-pirano, dihidrofuranilo y fluorodihidrofuranilo. Un grupo oxaheterociclenilo multicíclico ejemplar es 7-oxabiciclo[2.2.1]heptenilo. Los anillos de tiaheterociclenilo monocíclico ejemplares incluyen dihidrotiofenilo y dihidrotiopiranilo.
"Heterociclilo" se refiere a un sistema de anillos monocíclicos o multicíclicos, saturados, no aromáticos, de aproximadamente 3 a aproximadamente 10 átomos de carbono, preferiblemente de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 átomos de carbono, en el que uno o más de los átomos de carbono del sistema de anillos es o son elementos hetero distintos de carbono, por ejemplo nitrógeno, oxígeno o azufre. Preferiblemente, el sistema de anillos contiene de 1 a 3 heteroátomos. Los tamaños de anillo preferidos de los anillos del sistema de anillos incluyen de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo; y dichos tamaños de anillo preferidos también se denominan "inferior". Por heterociclilo se incluyen arilheterociclilo condensado y heteroarilheterociclilo condensado como se define en este documento cuando se unen a través del resto heterociclilo de los mismos. La designación de aza, oxa o tia como prefijo antes de heterociclilo define que está presente al menos un átomo de nitrógeno, oxígeno o azufre, respectivamente, como un átomo del anillo. "Heterociclilo sustituido" se refiere a un grupo heterociclilo como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. El átomo de nitrógeno de un heterociclilo puede ser un átomo de nitrógeno básico. El átomo de nitrógeno o azufre del heterociclilo también puede estar opcionalmente oxidado para dar el N-óxido, S-óxido o S,S-dióxido correspondiente. Los anillos heterociclilo monocíclico ejemplares incluyen piperidilo, pirrolidinilo, piperazinilo, morfolinilo, tiomorfolinilo, tiazolidinilo, 1,3-dioxolanilo, 1,4-dioxanilo, tetrahidrofuranilo, tetrahidrotiofenilo, tetrahidrotiopiranilo y similares,
15
ya que el azaheterociclilo monocíclico sustituido está sustituido directamente o a través de un enlazador mediante al menos un sustituyente que es, o incluye, o está sustituido con un grupo aromático como se define en este documento; por ejemplo arilo, heteroarilo, ariloxi, heteroariloxi, aroílo o su análogo tioxo, heteroaroílo o su análogo tioxo, aroiloxi, heteroaroiloxi, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, ariltio, heteroariltio, arildiazo, heteroarildiazo, Y^{1}Y^{2}N-, Y^{1}Y^{2}NC(O)-, Y^{1}Y^{2}NC(O)O-, Y^{1}Y^{2}NC(O)NY^{3}- o Y^{1}Y^{2}NSO_{2}- donde al menos uno de Y^{1} y Y^{2} está incluido o está sustituido con un resto arilo o heteroarilo. Los enlazadores preferidos incluyen -C(O)-, -OC(O)-, alquilo inferior, alcoxi inferior, alquenilo inferior, -O-, -S-. -C(O)C(O)-, -S(O)-, -S(O)_{2}-, NR^{80}-, donde R^{80} es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, arilo, aralquilo, heterociclilo o heteroarilo. Son enlazadores particularmente preferidos -C(O)- y -OC(O)-. "Azaheterociclilo multicíclico sustituido" se refiere a un grupo azaheterociclilo multicíclico como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento. "Azaheterociclenilo multicíclico sustituido" se refiere a un grupo azaheterociclenilo multicíclico como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes del grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento.
"Heterociclileno" se refiere a un grupo heterociclilo bivalente como se define en este documento que tiene de 4 a aproximadamente 8 átomos de carbono. Los tamaños de anillo preferidos del heterociclileno incluyen de aproximadamente 5 a aproximadamente 6 átomos en el anillo; y dichos tamaños de anillo preferidos también se denominan "inferior". Los puntos de unión en el grupo cicloalquileno incluyen patrones de unión 1,1-, 1,2-, 1,3- o 1,4-, y cuando sea aplicable la relación estereoquímica de los puntos de unión es cis o trans. Los grupos heterociclileno ejemplares incluyen (1,1-, 1,2- o 1,3-)piperidinileno y (1,1- o 1,2-)tetrahidrofuranoileno. "Heterociclileno sustituido" se refiere a un grupo heterociclileno como se ha definido anteriormente que está sustituido con uno o más "sustituyentes el grupo del anillo" (preferiblemente de 1 a 3) que pueden ser iguales o diferentes y son como se definen en este documento.
"Hidrato" se refiere a un solvato en el que la molécula o moléculas de disolvente es/son H_{2}O.
"Grupo protector de amina lábil a la hidrogenación" se refiere a un grupo protector de amina como se define en este documento que se retira fácilmente por hidrogenación mientras permanece relativamente estable a otros reactivos. Un grupo protector de amina lábil a la hidrogenación es Cbz.
"Grupo protector de ácido lábil a la hidrogenación" se refiere a un grupo protector de ácido como se define en este documento que se retira fácilmente por hidrogenación mientras que permanece relativamente estable a otros reactivos. Un grupo protector de ácido lábil a la hidrogenación es bencilo.
"Higroscopicidad" significa sorción, vaciado de una cantidad adquirida o estado de agua suficiente para afectar a las propiedades físicas o químicas de la sustancia (Eds. J. Swarbrick y J.C. Boylan, Encyclopedia of Pharmaceutical Technolog 10, 33).
"Derivado de glicinimida imínica" se refiere a una base imínica de Schiff de una glicina que es útil en la síntesis de alfaminoácidos, tanto naturales como no naturales. La funcionalidad de éster imínico puede contener uno o más centros asimétricos que pueden facilitar la estereoinducción durante el procedimiento de formación de enlaces. Además, estos derivados de glicinimida imínica pueden incorporarse en soportes poliméricos para facilitar la síntesis combinatoria. Los derivados de glicinimida imínica pueden prepararse por condensación de un éster de glicina con la cetona apropiada en presencia de un catalizador ácido. La reacción se facilita por la retirada del agua. Los derivados de glicinimida imínica se conocen bien en la técnica para usarse en procedimientos sintéticos de Adición de Michael, por ejemplo, como se describe por Guillena, G., y col., J. Org. Chem., 2000, 65, 7310-7322, incorporado en este documento como referencia. Los ejemplos particulares de derivados de glicinimida imínica de acuerdo con la invención incluyen uno seleccionado entre
\vskip1.000000\baselineskip
16 
\newpage
el grupo de fórmulas
17
en las que:
\quad
M* es un metal de transición, preferiblemente CU, más preferiblemente CU''.
\quad
R^{14} es -CO_{2}R^{16}, -CN,
18 
\vskip1.000000\baselineskip
19 
\vskip1.000000\baselineskip
20
\quad
o -CONR^{15}R^{15};
\quad
R^{15} es un grupo alifático opcionalmente sustituido;
\quad
R^{16} es un grupo protector de ácido, arilo opcionalmente sustituido o un grupo alifático opcionalmente sustituido;
\quad
R^{17} es arilo opcionalmente sustituido, un grupo alifático opcionalmente sustituido,
21
\quad
R^{18} es hidrógeno, alquilo o alquiltio; o arilo opcionalmente sustituido;
\quad
R^{17} y R^{18} tomados junto con el carbono al que R^{17} y R^{18} están unidos
22
\quad
y \code{s} es una fase sólida;
\quad
"Aducto del derivado de glicinimida imínica" se refiere al compuesto resultante en el que se retira un \alpha-hidrógeno para el nitrógeno y un resto carbonilo de la porción base de Schiff y se usa para formar una unión para la formación del enlace. Los ejemplos particulares de aductos del derivado de glicinimida imínica de acuerdo con la invención incluyen uno seleccionado del grupo de fórmulas
23 
\vskip1.000000\baselineskip
24 
\vskip1.000000\baselineskip
25
en las que:
\quad
R^{14}, R^{17} y R^{18} se definen como se ha descrito en la definición del derivado de glicina imínica en este documento.
"N-oxisticeinimida" se refiere a un resto de la siguiente estructura
26
"N-óxido" se refiere a un resto de la siguiente estructura
27
"Paciente" incluye tanto seres humanos como otros mamíferos.
"Peptidomimético" se refiere a un polímero que incluye restos de aminoácidos unidos a través de enlaces amida.
"Éster farmacéuticamente aceptable" se refiere a ésteres que se hidrolizan in vivo e incluyen los que se descomponen fácilmente en el cuerpo humano para dejar el compuesto de partida o una sal del mismo. Los grupos éster adecuados incluyen, por ejemplo, los obtenidos as partir de ácidos carboxílicos alifáticos farmacéuticamente aceptables, particularmente ácidos alcanoico, alquenoico, cicloalcanoico y alcanodioico, en los que cada resto alquilo o alquenilo ventajosamente no tiene más de 6 átomos de carbono. Los ésteres ejemplares incluyen formiatos, acetatos, propionatos, butiratos, acrilatos, etilsuccinatos y similares.
"Profármacos farmacéuticamente aceptables", como se usa en este documento, se refiere a los profármacos de los compuestos de la presente invención que, dentro del alcance del juicio médico, son adecuados para el uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales inferiores con una toxicidad indebida, irritación, respuesta alérgica y similares en proporción con una relación beneficio/riesgo razonable, y eficaces para su uso pretendido, así como las formas zwiteriónicas, cuando sea posible, de los compuestos de la invención. El término "profármaco" se refiere un compuestos que se transforman fácilmente in vivo para producir el compuesto de partida de la fórmula anterior, por ejemplo por hidrólisis en sangre. Los grupos funcionales que pueden transformarse rápidamente por escisión metabólica in vivo forman una clase de grupos reactivos con el grupo carboxilo de los compuestos de la presente invención. Incluyen, pero sin limitación, grupos tales como alcanoílo (tal como acetilo, propanoílo, butanoílo y similares), aroílo sin sustituir y sustituido (tal como benzoílo y benzoílo sustituido), alcoxicarbonilo (tal como etoxicarbonilo), trialquilsililo (tal como trimetil- y trietilsililo), monoésteres formados con ácidos dicarboxílicos (tal como succinilo) y similares. Debido a la facilidad con la que se escinden los grupos metabólicamente escindibles de los compuestos de la presente invención in vivo, los compuestos que tienen dichos grupos actúan como profármacos. Los compuestos que tienen los grupos metabólicamente escindibles tienen la ventaja de que pueden mostrar una mayor biodisponibilidad como resultado de una mayor solubilidad y/o velocidad de absorción conferida al compuesto de partida gracias a la presencia del grupo escindible metabólicamente. Se proporciona un análisis minucioso en Design of Prodrugs, H. Bundgaard, ed., Elsevier (1985); Methods in Enzymology: K. Widder y col., Ed., Academic Press, 42, 309-396 (1985); A Textbook of Drug Design and Developement. Krogsgaard-Larsen and H. Bandaged, ed., Capítulo 5; "Design and Applicationsof Prodrugs" 113-191(1991); Advanced Drug Delivery Reviews, H. Bundgard, 8, 1-38, (1992); J. Pharm. Sci.. 77, 285 (1988); Chem. Pharm. Bull., N. Nakeya y col. 32, 692 (1984); Pro-drugs as Novel Delivery Systems. T. Higuchi y V. Stella. 14 A.C.S. Symposium Series, and Bioreversible Carriers in Drug Design. E.B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association and Pergamon Press. 1987, que se incorporan en este documento como referencia.
"Sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a las sales de adición de ácidos inorgánicas u orgánicas, relativamente no tóxicas, de compuestos de la presente invención. Estas sales pueden prepararse in situ durante el aislamiento y purificación finales de los compuestos. En particular, las sales de adición de ácidos pueden prepararse haciendo reaccionar por separado el compuesto purificado en su forma de base libre con un ácido orgánico o inorgánico adecuado y aislando la sal formada de esta manera. Las sales de adición de ácidos ejemplares incluyen las sales bromhidrato, clorhidrato, sulfato, bisulfato, fosfato, nitrato, acetato, oxalato, valerato, oleato, palmitato, estearato, laurato, borato, benzoato, lactato, fosfato, tosilato, citrato, maleato, fumarato, succinato, tartrato, naftilato, mesilato, glucoheptonato, lactiobionato, sulfamatos, malonatos, salicilatos, propionatos, metileno-bis-\beta-hidroxinaftoatos, gentisatos, isetionatos, di-p-toluoiltartratos, metanosulfonatos, etanosulfonatos, bencenosulfonatos, p-toluenosulfonatos, ciclohexilsulfamatos y quinatoslaurilsulfonatos y similares. Véase, por ejemplo S.M. Berge, y col., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977) que se incorpora en este documento como referencia. También pueden prepararse sales de adición de bases haciendo reaccionar por separado el compuesto purificado en su forma de ácido con una base orgánica o inorgánica adecuada y aislando la sal formada de esta manera. Las sales de adición de bases incluyen sales de metales y aminas farmacéuticamente aceptables. Las sales de metales adecuadas incluyen las sales de sodio, potasio, calcio, bario, cinc, magnesio y aluminio. Se prefieren las sales de sodio y potasio. Las sales de adición de bases inorgánicas adecuadas se preparan a partir de bases de metales que incluyen hidruro sódico, hidróxido sódico, hidróxido potásico, hidróxido de calcio, hidróxido de aluminio, hidróxido de litio, hidróxido de magnesio, hidróxido de cinc y similares. Las sales de adición de aminas adecuadas se preparan a partir de aminas que tienen suficiente basicidad para formar una sal estable, y preferiblemente incluyen las aminas que se usan habitualmente en la química medicinal debido a su baja toxicidad y aceptabilidad para uso médico. Amoniaco, etilendiamina, N-metil-glucamina, lisina, arginina, ornitina, colina, N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, dietanolamina, procaína, N-bencilfenetilamina, dietilamina, piperazina, tris(hidroximetil)-aminometano, hidróxido de tetrametilanimonio, trietilalnina, dibencilamina, efenamina, deshidroabietilamina, N-etilpiperidina, bencilamina, tetrametilamonio, tetraetilamonio, metilamina, dimetilamina, trimetilamina, etilamina, aminoácidos básicos, por ejemplo, lisina y arginina, y diciclohexilamina y
similares.
"Sustituyentes del grupo del anillo" se refiere a sustituyentes unidos a sistemas de anillos aromáticos o no aromáticos incluyendo arilo, heteroarilo, hidroxi, alcoxi, cicliloxi, ariloxi, heteroariloxi, acilo o su análogo tioxo, ciclilcarbonilo o su análogo tioxo, aroílo o su análogo tioxo, heteroaroílo o su análogo tioxo, aciloxi, ciclilcarboniloxi, aroiloxi, heteroaroiloxi, halo, nitro, ciano, carboxi (ácido), -C(O)-NHOH, -C(O)-CH_{2}OH, -C(O)-CH_{3}SH, -C(O)-NH-CN, sulfo. fosfono, alquilsulfonilcarbamoílo, tetrazolilo, arilsulfonilcarbamoílo, N-metoxicarbamoílo, heteroarilsulfonilcarbamoílo, 3-hidroxi-3-ciclobuteno-1,2-diona, 3,5-dioxo-1,2,4-oxadiazolidinilo o hidroxiheteroarilo tal como 3-hidroxiisoxazolilo, 3-hidroxi-1-metilpirazolilo, alcoxicarbonilo, cicliloxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, alquilsulfonilo, ciclilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, ciclilsulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, alquiltio, cicliltio, ariltio, heteroariltio, ciclilo, arildiazo, heteroarildiazo, tiol, Y^{1}Y^{2}N-, Y^{1}Y^{2}C(O)-, Y^{1}Y^{2}NC(O)O-, Y^{1}Y^{2}NC(O)NY^{3}- o Y^{1}Y^{2}NS_{2}-, donde Y^{1}, Y^{2} e Y^{3} son independientemente hidrógeno, alquilo, arilo o heteroarilo, o para cuando el sustituyente es Y^{1}Y^{2}N-, entonces uno de Y^{1} e Y^{2} puede ser acilo, ciclilcarbonilo, aroílo, heteroaroílo, alcoxicarbonilo, cicliloxicarbonilo, ariloxicarbonilo o heteroariloxicarbonilo, como se define en este documento, y el otro de Y^{1} e Y^{2} es como se ha definido previamente, o para cuando el sustituyente es Y^{1}Y^{2}NC(O)-, Y^{1}Y^{2}NC(O)O-, Y^{1}Y^{2}NC(O)NY^{3}- o Y^{1}Y^{2}NSO_{2}-, Y^{1} e Y^{2} también pueden tomarse junto con el átomo de N a través del cual Y^{1} e Y^{2} se unen para formar un azaheterociclilo o azaheterociclenilo de 4 a 7 miembros. Cuando un sistema de anillos está saturado o parcialmente saturado, los "sustituyentes del grupo del anillo" incluyen además metileno (H_{2}C=), oxo (O=) y tioxo (S=). Son sustituyentes de ácidos/amidas del grupo del anillo carboxi (ácido), -C(O)-NHOH, C(O)-CH_{2}OH-C(O)-CH_{2}SH, -C(O)-NH-CN, sulfo, fosfono, alquilsulfonilcarbamoílo, tetrazolilo, arilsulfonilcarbamoílo, N-metoxicarbamoílo, heteroarilsulfonilcarbamoílo, 3-hidroxi-3-ciclobuteno-1,2-diona, 3,5-dioxo-1,2,4-oxadiazolidinilo o hidroxiheteroarilo tal como 3-hidroxiisoxazolilo, 3-hidroxil-1-metilpirazolilo e Y^{1}Y^{2}NCO-. Son sustituyentes no ácidos polares del grupo del anillo hidroxi, oxo (O=), tioxo (S=), acilo o su análogo tioxo, ciclilcarbonilo o su análogo tioxo, aroílo o su análogo tioxo, heteroaroílo o su análogo tioxo, alcoxicarbonilo, cicliloxicarbonilo, ariloxicarbonilo, heteroariloxicarbonilo, aciloxi, ciclilcarboniloxi, aroiloxi, heteroaroiloxi, alquilsulfonilo, ciclilsulfonilo, arilsulfonilo, heteroarilsulfonilo, alquilsulfinilo, ciclilsulfinilo, arilsulfinilo, heteroarilsulfinilo, tiol, Y^{1}Y^{2}N-, Y^{1}Y^{2}NC(O)-, Y^{1}Y^{2}NC(O)O-, Y^{1}Y^{2}NC(O)NY^{3}- o Y^{1}Y^{2}NSO_{2}-.
"Solvato" se refiere a la asociación física de un compuesto de la presente invención con una o más moléculas de disolventes. Esta asociación física incluye unión de hidrógeno. En ciertos casos, el solvato podrá aislarse, por ejemplo cuando se incorporan una o más moléculas de disolventes en la estructura reticular cristalina del sólido cristalino. "Solvato" incluye tanto solvatos en fase de solución como aislables. Los solvatos ejemplares incluyen hidratos, etanolatos, metanolatos y similares.
Los compuestos particulares de acuerdo con la invención son los compuestos BW y CU.
Los compuestos de la invención se suministran opcionalmente en forma de sales. Esas sales que son farmacéuticamente aceptables son de particular interés ya que son útiles en la administración de los compuestos anteriores para fines médicos. Las sales que no son farmacéuticamente aceptables son útiles en procedimientos de fabricación, para fines de aislamiento y purificación, y en algunos casos, para el uso en la separación de formas estereoisoméricas de los compuestos de la presente invención. Esto último es particularmente cierto para sales de aminas preparadas a partir de aminas ópticamente activas.
Cuando el compuesto de la invención contiene un grupo carboxi, o un bioisóstero suficientemente ácido, pueden formarse sales de adición de bases y son simplemente una forma más conveniente para el uso; y en la práctica, el uso de la forma de sal supone intrínsecamente el uso de la forma de ácido libre.
Además, cuando el compuesto de la invención contiene un grupo básico, o un bioisóstero suficientemente básico, pueden formarse sales de adición de ácidos y son simplemente una forma más conveniente para el uso; y en la práctica, el uso de la forma de sal supone intrínsecamente el uso de la forma de base libre.
Una realización preferida del uso de un compuesto de acuerdo con la invención en un procedimiento para el tratamiento de un paciente que padece una infección por HCV o afecciones fisiológicas relacionadas con la infección que comprende administrar al paciente una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto BW o CU.
Otra realización preferida del uso de un compuesto de acuerdo con la invención en un procedimiento terapéutico es para el tratamiento de un paciente que padece una infección por HCV o afecciones fisiológicas relacionadas con la infección que comprende administrar una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto BW o CU junto con una cantidad farmacéuticamente eficaz de otro agente terapéutico anti-HCV al paciente.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar composiciones farmacéuticas que comprendan, además de uno o más inhibidores de la serina proteasa de HCV, uno o más interferones que muestran actividad anti-HCV y/o uno o más compuestos que tienen actividad anti-HCV, incluyendo compuestos inmunomoduladores tales como citoquinas inmunoestimuladoras que muestran actividad antiviral de HCV, y un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable.
Es otro objeto de la invención proporcionar una composición farmacéutica que sea eficaz, en y por sí misma, para la utilización en una terapia de combinación beneficiosa debido a que incluye una pluralidad d ingredientes activos que pueden utilizarse de acuerdo con la invención.
La invención también proporciona kits o paquetes individuales que combinan dos o más ingredientes activos útiles en el tratamiento o prevención de una infección por HCV en un paciente. Un kit puede proporcionar (solo o junto con un diluyente o vehículo farmacéuticamente aceptable), el compuesto de BW o CU y el ingrediente activo adicional (solo o junto con un diluyente o vehículo) distinto de un agente terapéutico anti-HCV.
Los compuestos BW y CU pueden prepararse por aplicación o adaptación de procedimientos conocidos como los usados hasta ahora o descritos en la bibliografía, o por procedimientos de acuerdo con la presente invención que se encuentran en este documento.
Otro objeto de la presente invención es proporcionar medicamentos útiles en procedimientos de tratamiento o prevención de una infección por HCV en un paciente que lo necesita, que comprenden administrar a dicho paciente una cantidad farmacéuticamente eficaz de una combinación de uno o más inhibidores de la serina proteasa de HCV; uno o más interferones que muestran actividad anti-HCV; y/o uno o más compuestos que tienen actividad anti-HCV, incluyendo compuestos inmunomoduladores tales como citoquinas inmunoestimuladoras que muestran actividad antiviral para HCV.
Otro objeto de la presente invención es el uso de uno o más inhibidores de la serina proteasa de HCV junto con uno o más interferones que muestran actividad anti-HCV y/o uno o más compuestos que tienen actividad anti-HCV, incluyendo compuestos inmunomoduladores tales como citoquinas inmunoestimuladoras que muestran actividad antiviral de HCV, para preparar un medicamento para tratar o prevenir una infección por HCV en un paciente que lo necesita.
Un objeto adicional de la presente invención es un kit o paquete farmacéutico para tratar o prevenir una infección por HCV en un paciente, donde el kit o paquete farmacéutico comprende una pluralidad de recipientes separados, donde al menos uno de dichos recipientes contiene uno o más inhibidores de la serina proteasa de HCV, al menos otro de dichos recipientes contiene uno o más interferones o compuestos que inducen la producción de un interferón que muestran actividad anti-HCV (solo o junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable), y, opcionalmente, al menos otro de dichos recipientes contiene uno o más compuestos que tienen actividad anti-HCV (solo o junto con un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable), incluyendo compuestos inmunomoduladores tales como citoquinas inmunoestimuladoras que muestran actividad antiviral para HCV.
Otro objeto más de la presente invención es proporcionar medicamentos útiles en un procedimiento de inhibición de la replicación del virus de la hepatitis C en una célula, que comprende poner en contacto dicha célula, un inhibidor de la serina proteasa del virus de la hepatitis C y opcionalmente un interferón o compuestos que inducen la producción de un interferón que tienen actividad anti-virus de la hepatitis C.
La cantidad del inhibidor(es) de la serina proteasa de HCV, interferón(es) o compuesto(s) anti-HCV en cualquiera de las solicitudes anteriores puede ser una cantidad farmacéuticamente eficaz, una cantidad eficaz anti-HCV subóptima o combinaciones de las mismas, de manera que la combinación final de inhibidor(es) de la proteasa de HCV, interfe-
rón(es) y/o compuesto(s) anti-HCV comprenda una cantidad farmacéuticamente eficaz de compuestos que sea eficaz en el tratamiento o prevención de una infección por HCV en un paciente.
Es un objeto adicional de la invención proporcionar un procedimiento para preparar un compuesto de bicicloproinato quiral que sea útil en la preparación de los compuestos de acuerdo con la invención.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación de Compuestos de la Invención
Los materiales de partida e intermedios de los compuestos de la invención pueden prepararse por aplicación o adaptación de procedimientos conocidos, por ejemplo, procedimientos como los descritos en los Ejemplos de Referencia o sus equivalentes químico obvios.
Los compuestos de la invención pueden prepararse por aplicación o adaptación de procedimientos conocidos, por los que se entienden procedimientos usados hasta ahora o descritos en la bibliografía, por ejemplo, los descritos por R.C. Larock en Comprehensive Organic Transformations. VCH publishers (1989).
Un compuesto de fórmula I.
\vskip1.000000\baselineskip
28 
\newpage
en la que las variables y el resto
29
de las mismas son como se describen en este documento, pueden prepararse por tratamiento de un compuesto de fórmula 2, en la que las variables
30
y el resto
31
de las mismas son como se describen en este documento, con un agente oxidante apropiado y en condiciones apropiadas. Un agente oxidante particular es reactivo de DMP. Las condiciones particulares incluyen realizar la oxidación en un disolvente orgánico apropiado tal como diclorometano aproximadamente a la temperatura ambiente.
En un compuesto peptidomimético de fórmula I
32
R^{0} es un enlace de difluorometileno;
R^{1} es hidrógeno, un grupo alifático opcionalmente sustituido, un grupo cíclico opcionalmente sustituido o un grupo aromático opcionalmente sustituido;;
cada uno de R^{2} y R^{9} es independientemente un grupo alifático opcionalmente sustituido, un grupo cíclico opcionalmente sustituido o un grupo aromático opcionalmente sustituido;
cada uno de R^{3}, R^{5} y R^{7} es independientemente (grupo alifático opcionalmente sustituido, grupo cíclico opcionalmente sustituido o grupo aromático opcionalmente sustituido) (metileno opcionalmente sustituido o etileno opcionalmente sustituido), (1,1- o 1,2-)cicloalquileno opcionalmente sustituido o (1,1- o 1,2-)heterociclileno opcionalmente sustituido;
cada uno de R^{4}, R^{6}, R^{8} y R^{10} es independientemente hidrógeno o un grupo alifático opcionalmente sustituido;
33
es azaheterociclilo monocíclico sustituido o azaheterociclilo multicíclico opcionalmente sustituido, o azaheterociclenilo multicíclico opcionalmente sustituido donde la insaturación está en el anillo distal con respecto al anillo que tiene el R^{9}-L-(N(R^{8})-R^{7}-C(O)-)_{n}N(R^{6})-R^{5}-C(O)-N y al que está unido el resto -C(O)-N(R^{4})-R^{3}-C(O)C(O)NR^{2}R^{1}: L es -C(O)-, -OC(O)-, -NR^{10}C(O)-, -S(O)_{2}- o -NR^{10}S(O)_{2}-: y
n es 0 ó 1, o
una sal farmacéuticamente aceptable o profármaco del mismo, o un solvato de dicho compuesto, su sal o su profármaco,
con la condición de que
cuando
34
es
35
sustituido
entonces L sea -OC(O) y R^{9} sea un grupo alifático opcionalmente sustituido, o al menos uno de R^{3}, R^{5} y R^{7} sea (grupo alifático opcionalmente sustituido, grupo cíclico opcionalmente sustituido o grupo aromático opcionalmente sustituido) (etandiilo opcionalmente sustituido), o R^{4} sea un grupo alifático opcionalmente sustituido.
La presente invención también proporciona un compuesto que tiene la fórmula estructural:
36
en la que:
R^{1} es hidrógeno, un grupo alifático opcionalmente sustituido, un grupo cíclico opcionalmente sustituido o un grupo aromático opcionalmente sustituido;
cada uno de R^{2} y R^{9} es independientemente un grupo alifático opcionalmente sustituido, un grupo cíclico opcionalmente sustituido o un grupo aromático opcionalmente sustituido;
cada uno de R^{3}, R^{5} y R^{7} es independientemente (grupo alifático opcionalmente sustituido, grupo cíclico opcionalmente sustituido o grupo aromático opcionalmente sustituido) (metandiilo opcionalmente sustituido o etandiilo opcionalmente sustituido);
cada uno de R^{4}, R^{6}, R^{8} y R^{10} es independientemente hidrógeno o un grupo alifático opcionalmente sustituido;
37
es azeheterociclilo monocíclico sustituido o azahetereociclilo multicíclico opcionalmente sustituido, o azaheterociclenilo multicíclico opcionalmente sustituido donde la insaturación está en el anillo distal con respecto al anillo que tiene el resto R^{9}-L-(N(R^{8})-R^{7}-C(O)-)_{n}N(R^{6)}-R^{5}-C(O)-N y al que está unido el resto -C(O)-N(R^{4})-R^{3}-C(O)C(O)NR^{2}R^{1};
L es -C(O)-, -OC(O)-, NR^{10}C(O)-, -S(O)_{2}- o -NR^{10}S(O)_{2}; y
una sal farmacéuticamente aceptable o profármaco del mismo, o un solvato de dicho compuesto, su sal o su profármaco,
con la condición de que
cuando
38
es
39
sustituido
el L sea -OC(O)- y R^{9} sea un grupo alifático opcionalmente sustituido, o al menos uno de R^{3}, R^{3} y R^{7} sea (grupo alifático opcionalmente sustituido, grupo cíclico opcionalmente sustituido o grupo aromático opcionalmente sustituido) (etandiilo opcionalmente sustituido) o R^{4} sea un grupo alifático opcionalmente sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{0} es un enlace.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{0} es difluorometileno.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{1} es hidrógeno o un grupo alifático inferior opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{1} es hidrógeno o alquilo inferior.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{1} es hidrógeno.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{2} es un grupo alifático inferior opcionalmente sustituido o un grupo monocíclico opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{2} es carboximetilo, 1-carboxi-2-feniletilo, ciclopropilo, ciclobutilo, 1-ciclohexiletilo, 1-feniletilo, but-2-ilo, 1-pirid-4-iletilo, propen-3-ilo o metilbut-2-ilo; más preferiblemente ciclopropilo.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{3} es un grupo metileno alifático inferior opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{3} es (alquilo o alquenil)metileno inferior opcionalmente halo-sustituido.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{3} es propilmetileno, 2,2-difluoroetilmetileno, 2,2,3-trifluorometileno o propen-3-ilmetileno; se prefiere más que R^{3} sea propilmetileno o 2,2-difluoroetilmetileno, prefiriéndose más que R^{3} sea propilmetileno.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{4} es hidrógeno o un grupo alifático inferior opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{4} es hidrógeno o alquilo inferior.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{4} es hidrógeno.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{5} es un grupo metileno alifático inferior opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{5} es (alquil o alquenil)metileno inferior opcionalmente sustituido con (fenilo, carboxi, carboxamido o alcoxicarbonilo).
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{5} es metilmetileno, isopropilmetileno, t-butil-metileno, but-2-ilmetileno, butilmetileno, bencilmetileno, 3-metilbutilmetileno, 2-metilpropil-metileno, carboximetilmetileno, carboxamidometilmetileno benciloxicarbonilmetilmetileno, benciloxicarbonilpropilmetileno, o fenilpropen-3-ilmetileno; más preferiblemente R^{5} es isopropilmetileno o t-butilmetileno.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{6} es hidrógeno o un grupo alifático inferior opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{6} es hidrógeno o alquilo inferior.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{6} es hidrógeno.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{7} es un grupo metileno alifático inferior opcionalmente sustituido, un grupo metileno cíclico inferior opcionalmente sustituido o un (aril o heteroaril)metileno monocíclico opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{7} es alquilmetileno inferior opcionalmente sustituido, cicloalquilmetileno inferior opcionalmente sustituido o fenilmetileno opcionalmente sustituido.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{7} es metilmetileno, isopropilmetileno, n-propilmetileno, fenilmetileno, ciclohexilmetileno, ciclopentilmetileno, t-butilmetileno, s-butilmetileno, ciclohexilmetilmetileno o fenilmetilmetileno, más preferiblemente es isopropilmetileno, ciclohexilmetileno, ciclopentilmetileno, t-butilmetileno o s-butilmetileno.
Una realización preferida de acuerdo con la invención también es aquella en la que cada uno de R^{3}, R^{5} y R^{7} es metileno monosustituido.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es también aquella en la que R^{3} es metileno monosustituido y tiene una configuración (S) en el carbono unido al resto -C(O)-R^{0}-C(O)-NR^{1}R^{2}.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{8} es hidrógeno o un grupo alifático inferior opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{8} es hidrógeno o alquilo inferior.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{8} es hidrógeno.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{9} es un grupo alifático inferior opcionalmente sustituido o un grupo aromático monocíclico opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{9} es alquilo inferior opcionalmente sustituido o heteroarilo monocíclico opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{9} es alquilo inferior opcionalmente sustituido con (carboxi, (alquil inferior)SO_{2}NH-, (alquil inferior)HNCO-, hidroxi, fenilo, heteroarilo o (alquil inferior)OC(O)NH-), o heteroarilo monocíclico opcionalmente sustituido.
Una realización preferida adicional de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{9} es alquilo inferior sustituido con (mono- o di-)MeOC(O)NH-; más preferiblemente es 1,2-di(MeOC(O)NH)etilo o 1-(MeOC(O)NH)etilo.
Una realización preferida de acuerdo con la presente invención es aquella en la que R^{9} es alquilo inferior sustituido con (carboxi, (alquil inferior)HNCO- o tetrazolilo); más preferiblemente es 3-carboxipropilo, 2-tetrazol-5-ilpropilo, 3-(N-metilcarboxamido)propilo o 3-carboxi-2,2-dimetilpropilo; más preferiblemente es 3-carboxipropilo, 2-tetrazol-5-ilpropilo o 3-(N-metilcarboxamido)propilo.
Otra realización preferida de la invención es aquella en la que R^{9} es alquilo inferior opcionalmente sustituido; más preferiblemente es 1-hidroxi-2-phenytetilo, metilo, isopropilo o t-butilo; más preferiblemente es metilo, isopropilo o t-butilo.
Otra realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{9} se selecciona entre el grupo constituido por
\vskip1.000000\baselineskip
40
41 
\vskip1.000000\baselineskip
42 
\vskip1.000000\baselineskip
43 
\vskip1.000000\baselineskip
44 
\vskip1.000000\baselineskip
45
Otra realización preferida más de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{9} es pirazinilo. Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{10} es hidrógeno o un grupo alifático inferior opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{10} es hidrógeno o alquilo inferior.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{10} es hidrógeno.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que
46
como un azaheterociclilo monocíclico sustituido es pirrolidinilo sustituido.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que
47
como un azaheterociclilo monocíclico sustituido es
48
opcionalmente sustituido o
49
opcionalmente sustituido
\vskip1.000000\baselineskip
en el que Ar es R^{2} que comprende un resto aromático; más preferiblemente es
\vskip1.000000\baselineskip
50
opcionalmente sustituido
\vskip1.000000\baselineskip
aún más preferiblemente es
51
opcionalmente sustituido
\vskip1.000000\baselineskip
Aún más preferiblemente
\vskip1.000000\baselineskip
52
opcionalmente sustituido es
53 
\vskip1.000000\baselineskip
opcionalmente sustituido;
\vskip1.000000\baselineskip
aún más preferiblemente
\vskip1.000000\baselineskip
54 
\vskip1.000000\baselineskip
Otra realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que
\vskip1.000000\baselineskip
55 
\vskip1.000000\baselineskip
como un azaheterociclilo multicíclico opcionalmente sustituido es
\vskip1.000000\baselineskip
56 
\vskip1.000000\baselineskip
opcionalmente sustituido;
\vskip1.000000\baselineskip
más preferiblemente es
57 
\vskip1.000000\baselineskip
opcionalmente sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
Son sustituyentes particulares para
58
hidroxi, fluoro u oxo.
\vskip1.000000\baselineskip
Otra realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que
59
como un azaheterociclenilo multicíclico opcionalmente sustituido es
60
opcionalmente sustituido;
\vskip1.000000\baselineskip
más preferiblemente es
61
aún más preferiblemente es
62 
\vskip1.000000\baselineskip
Otra realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que
63
como un azaheterociclenilo multicíclico opcionalmente sustituido es
64
opcionalmente sustituido.
\vskip1.000000\baselineskip
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que el resto -C(O)-N(R^{4})-R^{3}-C(O)R^{0}C(O)NR^{2}R^{1} unido a
65
está unido con el carbono \alpha al átomo de nitrógeno.
\vskip1.000000\baselineskip
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que L es -C(O)- o -OC(O)-.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que n es 0.
Otra realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que n es 1.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{11} es -CO_{2}R^{13}.
\newpage
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{12} es
66 
\vskip1.000000\baselineskip
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{13} es un grupo alifático opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{13} es un grupo alquilo.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{13} es alquilo inferior.
Otra realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{13} es metilo.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{14} es -CO_{2}R^{16}.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{15} es alquilo.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{15} es alquilo inferior.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{15} es metilo.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{16} es un grupo alifático opcionalmente sustituido.
Otra realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{16} es alquilo.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{10} es alquilo inferior.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{16} es t-Bu.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{17} es arilo opcionalmente sustituido.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{17} es fenilo.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{18} es arilo opcionalmente sustituido.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que R^{18} es fenilo.
Una realización particular de acuerdo con la invención es aquella en la que p^{0} se selecciona entre el grupo constituido por BOC, CBz y -CO_{2}alquilo.
Una realización preferida de acuerdo con la invención es aquella en la que p^{0} es BOC.
Debe apreciarse que la presente invención incluye todas las combinaciones apropiadas de las agrupaciones particulares y preferidas indicada en este documento.
Un compuesto de fórmula 2, en la que las variables y el resto
67 
\vskip1.000000\baselineskip
de las mismas son como se describen en este documento, puede prepararse por acoplamiento de un compuesto de fórmula 3, en la que las variables y el resto
\vskip1.000000\baselineskip
68 
\newpage
de las mismas son como se describen en este documento, y un compuesto de fórmula 4, en la que
\vskip1.000000\baselineskip
69 
\vskip1.000000\baselineskip
y las variables de los mismos son como se describen en este documento, con un agente de acoplamiento apropiado y en condiciones apropiadas. El agente y las condiciones de acoplamiento particulares incluyen el uso de DIC y HOAt en un disolvente orgánico apropiado tal como DMF a aproximadamente 0ºC o usando PyBop y DIPEA en un disolvente orgánico apropiado tal como diclorometano aproximadamente a la temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 3, en la que las variables y el resto
\vskip1.000000\baselineskip
70 
\vskip1.000000\baselineskip
de las mismas son como se describen en este documento, puede prepararse por acoplamiento de un compuesto de fórmula 5, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, y un compuesto de fórmula 6, en la que P^{2} es un grupo protector de ácido
71 
\vskip1.000000\baselineskip
y el resto
\vskip1.000000\baselineskip
72
del mismo es como se describe en este documento, con un agente de acoplamiento apropiado y en condiciones de acoplamiento apropiadas, seguido de un agente de desprotección apropiado y en condiciones de desprotección apropiadas. El agente y las condiciones de acoplamiento particulares incluyen el uso de DIC o DCC y HOAt en un disolvente orgánico apropiado tal como DMF o diclorometano de aproximadamente 0ºC a aproximadamente la temperatura ambiente. La desprotección se realiza usando un agente de desprotección apropiado que depende de la naturaleza del agente protector, es decir, si puede retirarse (lábil) en condiciones ácidas, básicas o de hidrogenación, y de los otros restos reactivos del compuesto que experimenta la desprotección, es decir, se elige un agente de desprotección para realizar la desprotección sin afectar a los otros restos reactivos a menos que se desee una reacción simultánea. Un agente protector de ácido particular es alquilo inferior de C_{1} a C_{8}; más particularmente metilo. Un agente de desprotección particular es una base inorgánica tal como un hidróxido alcalino; más particularmente NaOH. Las condiciones de desprotección particulares incluyen realizar la desprotección en un disolvente alcohólico tal como metanol o etanol aproximadamente a la temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 5, en la que n es 0 y las otras variables son como se describen en este documento, es decir, compuesto 5a, puede prepararse por desprotección de un compuesto de fórmula 7,
\vskip1.000000\baselineskip
73
en la que P^{2} es un ácido grupo protector y las otras variables de la misma son como se describen en este documento, con un agente de desprotección apropiado y en condiciones apropiadas. La desprotección se realiza usando un agente de desprotección apropiado que depende de la naturaleza del agente protector, es decir, si puede retirarse (lábil) en condiciones ácidas, básicas o de hidrogenación, y de los otros restos reactivos del compuesto que experimenta la desprotección, es decir, se elige un agente de desprotección para realizar la desprotección sin afectar a los otros restos reactivos a menos que se desee una reacción simultánea. Un agente protector de ácido particular es alquilo inferior de C_{1} a C_{8}; más particularmente metilo. Un agente de desprotección particular es una base inorgánica tal como un hidróxido alcalino; más particularmente NaOH. Las condiciones de desprotección particulares incluyen realizar la desprotección en un disolvente alcohólico tal como metanol o etanol aproximadamente a la temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 7, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, puede prepararse por acilación de un compuesto de fórmula 8, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, con un compuesto de fórmula 9, en la que M es un resto desplazable y las otras variables
\vskip1.000000\baselineskip
74
del mismo son como se describen en este documento, en condiciones apropiadas. Las condiciones de acoplamiento particulares usan DIC o DCC y HOAt en un disolvente orgánico apropiado tal como DMF o diclorometano de aproximadamente 0ºC a aproximadamente la temperatura ambiente, o PyBop y DIPEA en un disolvente orgánico apropiado tal como DMF o diclorometano aproximadamente a la temperatura ambiente; y preferiblemente las últimas condiciones. Un L particular es carbonilo. Un M particular es hidroxi o N-oxisuccinimida.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 5, en la que n es 1 y las otras variables son como se describen en este documento, es decir, compuesto 5b, puede prepararse por desprotección de un compuesto de fórmula 10, en la que P^{2} es un grupo protector de ácido
\vskip1.000000\baselineskip
75 
\vskip1.000000\baselineskip
y las otras variables de la misma son como se describen en este documento, con un agente de desprotección apropiado y en condiciones apropiadas. La desprotección se realiza usando un agente de desprotección apropiado que depende de la naturaleza del agente protector de ácido, es decir, si puede retirarse (lábil) en condiciones ácidas, básicas o de hidrogenación, y de los otros restos reactivos del compuesto que experimenta la desprotección, es decir, se elige un agente de desprotección para realizar la desprotección sin afectar a los otros restos reactivos a menos que se desee una reacción simultánea. Un agente protector de ácido particular es alquilo inferior de C_{1} a C_{8}; más particularmente metilo. Un agente de desprotección particular es una base inorgánica tal como un hidróxido alcalino; más particularmente NaOH. Las condiciones de desprotección particulares incluyen realizar la desprotección en un disolvente alcohólico tal como metanol o etanol aproximadamente a la temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 10, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, puede prepararse por acilación de un compuesto de fórmula 11, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, con un compuesto de fórmula 9, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento,
\vskip1.000000\baselineskip
76 
\vskip1.000000\baselineskip
en condiciones apropiadas. Las condiciones de acoplamiento particulares usan DIC o DCC y HOAt en un disolvente orgánico apropiado tal como DMF o diclorometano de aproximadamente 0ºC a aproximadamente la temperatura ambiente, o PyBop y DIPEA en un disolvente orgánico apropiado tal como DMP o diclorometano aproximadamente a la temperatura ambiente; y preferiblemente las últimas condiciones. Un L particular es carbonilo. Un M particular es hidroxi o N-oxisuccinimida.
\newpage
Un compuesto de fórmula 11, en la que las variables son como se describen en este documento, puede prepararse por desprotección de un compuesto de fórmula 12, en la que P^{1} es una grupo protector de amina
77
y las otras variables de la misma son como se describen en este documento, con un agente de desprotección apropiado y en condiciones apropiadas. La desprotección se realiza usando un agente de desprotección apropiado que depende de la naturaleza del agente protector de amina. es decir, si puede retirarse (lábil) en condiciones ácidas, básicas o de hidrogenación, y de los otros restos reactivos del compuesto que experimenta la desprotección, es decir, se elige un agente de desprotección para realizar la desprotección sin afectar a los otros restos reactivos a menos que se desee una reacción simultánea. Un grupo protector de amina particular es Cbz o BOC; más particularmente Cbz. Un agente de desprotección particular es un ácido tal como HCl o H_{2}/Pd(OH)_{2}; más particularmente H_{2}/Pd(OH)_{2}. Las condiciones de desprotección particulares incluyen realizar la desprotección en un disolvente alcohólico tal como metanol o etanol o un disolvente de alcanoato de alquilo tal como acetato de etilo aproximadamente a la temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 12, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, puede prepararse por acoplamiento un compuesto de fórmula 13, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, con un compuesto de fórmula 14, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento,
78
en condiciones apropiadas. Las condiciones de acoplamiento particulares usan HOAt/DIC y DIPEA en un disolvente orgánico apropiado tal como THF aproximadamente a la temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 4, en la que las variables son como se describen en este documento, puede prepararse por desprotección de un compuesto de fórmula 15, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento,
79
con un agente de desprotección apropiado y en condiciones apropiadas. La desprotección se realiza usando un agente de desprotección apropiado que depende de la naturaleza del agente protector de amina, es decir, si puede retirarse (lábil) en condiciones ácidas, básicas o de hidrogenación, y de los otros restos reactivos del compuesto que experimenta la desprotección, es decir, se elige un agente de desprotección para realizar la desprotección sin afectar a los otros restos reactivos a menos que se desee una reacción simultánea. Un agente protector de amina particular es Cbz o BOC; más particularmente Cbz. Un agente de desprotección particular es un ácido tal como HCl o H_{2}/Pd(OH)_{2}; más particularmente H_{2}/Pd(OH)_{2}. Las condiciones de desprotección particulares incluyen realizar la desprotección en un disolvente alcohólico tal como metanol o etanol o un disolvente de alcanoato de alquilo tal como acetato de etilo aproximadamente a la temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 15, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, puede prepararse por acoplamiento un compuesto de fórmula 16, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, con un compuesto de fórmula 17, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento
\vskip1.000000\baselineskip
80 
\vskip1.000000\baselineskip
en condiciones apropiadas. Un agente protector de amina particular es Cbz o BOC; más particularmente Cbz. Las condiciones de acoplamiento particulares usan HOBT, PyBop y DIPEA en un disolvente orgánico apropiado tal como diclorometano de aproximadamente 0ºC a aproximadamente la temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 16, en la que las variables son como se describen en este documento puede prepararse por desprotección de un compuesto de fórmula 18, en la que las otras variables de la misma son
\vskip1.000000\baselineskip
81 
\vskip1.000000\baselineskip
como se describen en este documento, con un agente de desprotección apropiado y en condiciones apropiadas. La desprotección se realiza usando un agente de desprotección apropiado que depende de la naturaleza del agente protector de ácido, es decir, si puede retirarse (lábil) en condiciones ácidas, básicas o de hidrogenación, y de los otros restos reactivos del compuesto que experimenta la desprotección, es decir, se elige un agente de desprotección para realizar la desprotección sin afectar a los otros restos reactivos a menos que se desee una reacción simultánea. Un agente protector de amina particular es Cbz. Un agente protector de ácido particular es alquilo inferior de C_{1} a C_{8}; más particularmente metilo. Un agente de desprotección particular es una base inorgánica tal como un hidróxido alcalino; más particularmente NaOH. Las condiciones de desprotección particulares incluyen realizar la desprotección en un disolvente alcohólico tal como metanol o etanol aproximadamente a la temperatura ambiente.
\newpage
Un compuesto de fórmula 18, en la que R^{0} es un enlace y las otras variables de la misma son como se describen en este documento, puede prepararse por protección de un compuesto de fórmula 20, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, con un compuesto de fórmula 19, en la que
\vskip1.000000\baselineskip
82
las variables de la misma son como se describen en este documento, en condiciones apropiadas. Un agente protector de amina particular es Cbz o BOC. Las condiciones de acoplamiento particulares usan un disolvente orgánico apropiado tal como diclorometano de aproximadamente 0ºC a aproximadamente la temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 20, en la que R^{4} es hidrógeno y las otras variables son como se describen en este documento, puede prepararse por hidrogenación de un compuesto de fórmula 21, en la que
\vskip1.000000\baselineskip
83
las variables de la misma son como se describen en este documento, con un agente de hidrogenación apropiado y en condiciones apropiadas. Un agente de hidrogenación particular es H_{2}/Pd(OH)_{2}. Las condiciones de hidrogenación particulares incluyen realizar la hidrogenación en un disolvente alcohólico tal como metanol o etanol o un disolvente de alcanoato de alquilo tal como acetato de etilo aproximadamente a la temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula 20 en la que R^{4} es un grupo alifático opcionalmente sustituido y las otras variables son como se describen en este documento puede prepararse por alquilación del compuesto 20' en el que las variables son como se describen en este documento con el compuesto 22 (agente de alquilación) en el que R^{4} es un grupo alifático opcionalmente sustituido y Q es un grupo desplazable tal como haluros, tosilatos o sulfonatos, en condiciones apropiadas.
\vskip1.000000\baselineskip
84
Los agentes de alquilación apropiados incluyen grupos alifáticos (haluros, tosilatos o sulfonatos). Las condiciones de alquilación apropiadas incluyen realizar la alquilación en un disolvente orgánico apropiado tal como un disolvente alcohólico, por ejemplo, metanol o etanol, o un disolvente entérico, por ejemplo, éter o tetrahidrofurano de aproximadamente la temperatura ambiente a aproximadamente la temperatura de reflujo.
Un compuesto de fórmula 21, en la que las variables son como se describen en este documento, puede prepararse por alquilación de un compuesto de fórmula 22, en la que la variable de la misma es como se describe en este documento, con un compuesto de fórmula 23, en la que los R^{3} son independientemente un grupo alifático opcionalmente sustituido
85
un grupo cíclico opcionalmente sustituido o un grupo aromático opcionalmente sustituido como se describe en este documento, en condiciones apropiadas. Las condiciones de alquilación particulares incluyen realizar la alquilación usando una base fuerte tal como t-butóxido potásico en un disolvente alcohólico tal como metanol o etanol aproximadamente a la temperatura ambiente.
Un compuesto de fórmula 24 en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, puede prepararse realizando una adición de Michael sobre un aceptor de Michael de fórmula 29, en la que la variable de la misma es como se describe en este documento, con un derivado de glicinimida imínica.
86
Condiciones de Adición de Michael
87
Las adiciones de Michael comprenden disolventes apróticos polares apropiados, bases de hidróxido de metal alcalino y temperaturas apropiadas. Para las adiciones de Michael, véase Corey, E.J.; Noe, M.C.; Xu, F. Tetrahedron Letter 1998, 39, 5347. Para la síntesis de catalizadores de transferencia de fase quiral, véase Corey, E.J.; Noe, M.C.; Xu, F. J. Am. Chem. Soc. 1997, 119, 12414. Los disolventes apropiados incluyen DCM, ACN o THF dependiendo de las condiciones de reacción. Las bases apropiadas incluyen CsOH, NaOH, KOH y LiOH. Las temperaturas apropiadas varían de aproximadamente -78ºC a aproximadamente 0ºC, más particularmente a aproximadamente -60ºC. Las glicinimidas imínicas útiles en la invención se describen en este documento. Una glicinimida imínica preferida es éster terc-butílico de N-(difenilmetileno)glicina. Además, las condiciones de adición de Michael pueden influenciarse con o sin un catalizador de transferencia de fase (PTC) (quiral y no quiral). Un PTC preferido es bromuro de O-[9]alil-N-9-antracenilmetilcinconidio.
Un compuesto de fórmula 25, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, puede prepararse por escisión de imina y ciclación del compuesto de fórmula 24,
88
Para los procedimientos de escisión y ciclación, véase Javidan. A.; Schfer, K.; Pyne, S. Synlett 1996, 100: Tatsukawa, A.; Dan. M.; Ohbatake, M.; Kawatake, K.; Fukata, T.; Wada, E.; Kanemase, S.; Kakei, S. J. Org. Chem. 1993, 58, 4221. Las condiciones de escisión y ciclación incluyen el uso de disolventes polares, reactivos ácidos y temperaturas de aproximadamente la temperatura ambiente a aproximadamente 150ºC. Las condiciones preferidas incluyen el uso de EtOH, AcONa y NH_{2}OH\cdotHCl, y una temperatura de aproximadamente el punto de ebullición para el disolvente usado.
Un compuesto de fórmula 26, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, puede prepararse por protección de la amida del compuesto de fórmula 25, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, con un grupo protector de amida adecuado tal como BOC. Otros grupos protectores adecuados incluyen CBz, -CO_{2}alquilo. Véase también Greene, T.W.; P.G.M. en Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, Nueva York, 1991 para otros grupos protectores de amina. Las condiciones de protección incluyen el uso de disolventes apróticos polares, bases orgánicas como catalizadores, y temperaturas de aproximadamente 0ºC-100ºC. Las condiciones preferidas incluyen el uso de ACN, dimetil amino piridina y una temperatura de aproximadamente la temperatura ambiente.
89
Un compuesto de fórmula 27, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, puede prepararse por reducción del compuesto protegido de fórmula 26, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento.
90
De hecho, se realizan dos reducciones. La primera reducción es de la amida para dar el hemiaminal usando DIBALH o superhidruro [LiBEtH]. La segunda reducción es del hemiaminal para dar la amina usando Et_{3}SiH y BF_{3}\cdotOEt_{2}. Véase Collado, I; Ezquerra, J.; Mateo, A.I.; Rubio, A., J. Org. Chem. 1998, 63 1995-2001 y Ezqueera, J.; P-edregal, C.; Yruretagoyena, B.; Rubio, A.; Carreno, M.C.; Escribano, A.; Garcia Ruano, J.L. J. Org. Chem. 1995, 60, 2925 para las condiciones reductoras. Otras condiciones habituales para convertir piroglutamatos en pirrolidinas son el uso de BH_{3}\cdotSMe_{2}.
Un compuesto de fórmula 28, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento, puede prepararse por desprotección del compuesto de fórmula 27, en la que las variables de la misma son como se describen en este documento.
91
Véase Gibson, F.G.; Bermeier, S.C.; Rapoport, H., J. Org Chem. 1994, 59, 3216-3218 para las condiciones de retirada selectiva del grupo protector de N-BOC en presencia de éster terc-butílico. Un especialista en la técnica conocerá qué condiciones de desprotección dependerán de la elección del grupo protector. Por ejemplos, si se usa CBz, pueden usarse condiciones básicas o de hidrogenación. Preferiblemente, se usa BOC, puede usarse HCl 1 N en acetato de etilo. Véase Greene, T.W.; P.G.M. en Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, Nueva York, 1991.
La persona especialista en la técnica apreciará que un compuesto de fórmula 3 puede prepararse por acoplamiento un compuesto de fórmula 5 con un compuesto de fórmula 28 en las condiciones descritas anteriormente en este documento.
Los procedimientos para preparar R^{3}, R^{5} o R^{7} como restos etandiilo opcionalmente sustituido incluyen los conocidos por los especialistas en la técnica, por ejemplo, los procedimientos descritos The organic Chemistry of \beta-Lactams'' editado por G. Georg, VCH Publishers. Inc. (1993). por ejemplo, páginas 240-241 y 303-20 305.
Los esquemas 1-11 que se muestran a continuación ejemplifican procedimientos proporcionados para preparar un azaheterociclilo multicíclico opcionalmente sustituido. Los procedimientos de los siguientes esquemas también pueden aplicarse a otros azaheterociclilos multicíclicos opcionalmente sustituidos que comprenden sustituyentes compatibles del mismo tipo.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema 1
\vskip1.000000\baselineskip
92 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema 2
\vskip1.000000\baselineskip
1002 
\newpage
Esquema 3
93 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema 4
1003 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema 5
1004 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema 6
94 
\newpage
Esquema 7
1005 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema 8
1006 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema 9
95 
\newpage
Esquema 10
1007 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema 11
96 
\vskip1.000000\baselineskip
Un compuesto de fórmula I que incluye un grupo que contiene uno o más átomos de nitrógeno en el anillo, preferiblemente imina (=N-), puede convertirse en el compuesto correspondiente en el que uno o más átomos de nitrógeno del anillo del grupo se oxidan para dar un N-óxido, preferiblemente por reacción con un perácido, por ejemplo ácido peracético en ácido acético o ácido m-cloroperoxibenzoico en un disolvente inerte tal como diclorometano, a una temperatura de aproximadamente temperatura ambiente a la temperatura de reflujo, preferiblemente a temperatura elevada.
En las reacciones que se describen a continuación en este documento, puede ser necesario proteger grupos funcionales reactivos, por ejemplo grupos hidroxi, amino, imino, tio o carboxi, donde éstos se desean en el producto final, para evitar su participación indeseada en las reacciones. Pueden usarse grupos protectores convencionales de acuerdo con la práctica convencional, para ejemplos, véase T.W. Green y P.G.M. Wuts en "Protective Groups in Organic Chemistry" John Wiley y Sons (1991); J.F. W. MrOmie en "Protective Groups in Organic Chemistry" Plenum Press, 1973.
Un compuesto que se prepara como se describe en este documento puede recuperarse de la mezcla de reacción por medios convencionales. Por ejemplo, los compuestos pueden recuperarse mediante retirada por destilación del disolvente a partir e la mezcla de reacción o, si es necesario, después de la retirada por destilación del disolvente a partir de la mezcla de reacción, vertiendo el residuo en agua seguido de extracción con un disolvente orgánico inmiscible en agua y retirando por destilación el disolvente del extracto. Además, si se desea, el producto puede purificarse adicionalmente por diversas técnicas, tales como recristalización, reprecipitación o diversas técnicas cromatográficas, concretamente cromatografía en columna o cromatografía preparativa de capa fina.
De acuerdo con una característica adicional de la presente invención, los compuestos de la invención pueden prepararse por interconversión de otros compuestos de la invención.
Como un ejemplo del procedimiento de interconversión, los compuestos de fórmula I que contienen enlaces sulfóxido pueden prepararse por oxidación de los compuestos correspondientes que contienen enlaces S. Por ejemplo, la oxidación puede realizarse convenientemente por medio de reacción con un peroxiácido, por ejemplo, ácido 3-cloroperbenzoico, preferiblemente en un disolvente inerte, por ejemplo, diclorometano, preferiblemente a o casi a la temperatura ambiente, o como alternativa por medio de hidrogenoperoxomonosulfato potásico en un medio tal como metanol acuoso, tamponado a aproximadamente pH 5, a temperaturas comprendidas entre aproximadamente 0ºC y la temperatura ambiente. Este último procedimiento se realiza para compuestos que contienen un grupo lábil a ácidos.
Como otro ejemplo del procedimiento de interconversión, los compuestos de fórmula I que contienen enlaces sulfona pueden prepararse por oxidación de compuestos correspondientes que contienen enlaces -S- o sulfóxido. Por ejemplo, la oxidación puede realizarse convenientemente por medio de reacción con un peroxiácido, por ejemplo, ácido 3-cloroperbenzoico, preferiblemente en un disolvente inerte, por ejemplo, diclorometano, preferiblemente a o casi a la temperatura ambiente.
Se entenderá que la designación de la aromaticidad con respecto a arilos y heteroarilos en este documento incluye cualquier estructura de anillos insaturados muy resonante. Como alternativa, la situación de los dobles enlaces, cuando se indica, representa una estructura potencial para el compuesto representado pero se entenderá que incluye otros estados resonantes del compuesto así como especies protonadas y cargadas, aunque sólo puede repesentarse una de ellas.
Se apreciará que los compuestos de la presente invención pueden contener centros asimétricos. Estos centros asimétricos pueden estar independientemente en la configuración R o S. Será evidente para los especialistas en la técnica que ciertos compuestos de la invención también pueden mostrar isomería geométrica. Debe apreciarse que la presente invención incluye isómeros geométricos y estereoisómeros individuales y mezclas de los mismos, incluyendo mezclas racémicas, de compuestos de acuerdo con la invención. Dichos isómeros pueden separarse de sus mezclas, por aplicación o adaptación de procedimientos conocidos, por ejemplo técnicas cromatográficas y técnicas de recristalización, o se preparan por separado a partir de los isómeros apropiados de sus intermedios.
Para el propósito de este documento, se entiende que las formas tautoméricas se incluyen en la indicación de un grupo dado, por ejemplo, tioxo/mercapto o oxo/hidroxilo.
Las sales de adición de ácidos se forman con los compuestos de la invención en los que está presente una función básica tal como un grupo amino, alquilamino o dialquilamino. Se prefieren sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables, es decir, no tóxicas. Las sales elegidas se seleccionan óptimamente para que sean compatibles con los vehículos farmacéuticos habituales y se adaptan para la administración oral o parenteral. Pueden prepararse sales de adición de ácidos de los compuestos de la presente invención por reacción de la base libre con el ácido apropiado, por aplicación o adaptación de procedimientos conocidos. Por ejemplo, las sales de adición de ácidos de los compuestos de la presente invención puede prepararse disolviendo la base libre en agua o en una solución alcohólica acuosa u otros disolventes adecuados que contienen el ácido apropiado y aislando la sal por evaporación de la solución, o haciendo reaccionar la base libre y el ácido en un disolvente orgánico, en cuyo caso la sal se separa directamente o puede obtenerse por concentración de la solución. Algunos ácidos adecuados para el uso en la preparación de dichas sales son ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, diversos ácidos carboxílicos y sulfónicos orgánicos, tales como ácido acético, ácido cítrico, ácido propiónico, ácido succínico, ácido benzoico, ácido tartárico, ácido fumárico, ácido mandélico, ácido ascórbico, ácido málico, ácido metanosulfónico, ácido toluenosulfónico, ácidos grasos, adipato, alginato, ascorbato, aspartato, bencenosulfonato, benzoato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, bisulfato, butirato, lactato, laurato, laurilsulfato, malato, yodhidrato, 3-hidroxi-etanosulfonato, glicerofosfato, picrato, pivalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, tiocianato, 2-naftalenosulfonato, undecanoato, nicotinato, hemisulfato, heptonato, hexanoato, canforato, canforsulfonato, y otros.
Las sales de adición de ácidos de los compuestos de la presente invención pueden regenerarse a partir de las sales por aplicación o adaptación de procedimientos conocidos. Por ejemplo, los compuestos de partida de la invención pueden regenerarse a partir de sus sales de adición de ácidos por tratamiento con un álcali, por ejemplo, solución acuosa de bicarbonato sódico o solución acuosa de amoniaco.
Los compuestos de la presente invención pueden regenerarse a partir de sus sales de adición de bases por aplicación o adaptación de procedimientos conocidos. Por ejemplo, compuestos de partida de la invención pueden regenerarse a partir de sus sales de adición de bases por tratamiento con un ácido, por ejemplo, ácido clorhídrico.
Pueden formarse sales de adición de bases cuando el compuesto de la invención contiene un grupo carboxi, o un bioisóstero suficientemente ácido. Las bases que pueden usarse para preparar las sales de adición de bases incluyen preferiblemente las que producen, cuando se combinan con el ácido libre, sales farmacéuticamente aceptables, es decir, sales cuyos cationes no son tóxicos para el paciente a dosis farmacéuticas de las sales, de manera que los efectos inhibidores beneficiosos inherentes a la base libre no se vean afectados negativamente por los efectos secundarios atribuibles a los cationes. Las sales farmacéuticamente aceptables, incluyendo las obtenidas a partir de sales de metales alcalinos y alcalinotérreos, dentro del alcance de la invención, incluyen las obtenidas a partir de las siguientes bases: hidruro sódico, hidróxido sódico, hidróxido potásico, hidróxido de calcio, hidróxido de aluminio, hidróxido de litio, hidróxido de magnesio, hidróxido de cinc, amoniaco, etilendiamina, N-metil-glucamina, lisina, arginina, ornitina, colina, N,N-dibenciletilendiamina, cloroprocaína, dietanolamina, procaína, N-bencilfenetilamina, dietilamina, piperazina, tris(hidroximetil)-aminometano, hidróxido de tetrametilaminonio y similares.
Los compuestos de la presente invención pueden prepararse convenientemente, o formarse durante el procedimiento de la invención, en forma de solvatos (por ejemplo, hidratos). Los hidratos de los compuestos de la presente invención pueden prepararse convenientemente por recristalización en una mezcla de disolventes acuosos/orgánicos, usando disolventes orgánicos tales como dioxano, tetrahidrofurano o metanol.
Los materiales de partida e intermedios pueden prepararse por aplicación o adaptación de procedimientos conocidos, por ejemplo procedimientos como los descritos en los Ejemplos de Referencia o sus equivalentes químicos obvios.
Los compuestos de la invención, sus procedimientos de preparación y su actividad biológica se verán más claramente a partir del examen de los siguientes ejemplos que se presentan únicamente como una ilustración y no deben considerarse como limitación del ámbito de la invención.
Las muestras se analizaron por TLC, RMN, RP-HPLC o AE.
Los compuestos de la invención, sus procedimientos de preparación y su actividad biológica se verán más claramente a partir del examen de los siguientes ejemplos que se presentan únicamente como una ilustración y no deben considerarse como limitación del ámbito de la invención.
Las muestras se analizaron por TLC, RMN, RP-HPLC o AE.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo I Compuestos de comparación A-E
A una solución en DCM (10 ml) del compuesto xi (310 mg, 0,39 mmol) se le añade TFA (4 ml). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 5 horas. En este momento, el disolvente se retira al vacío. El residuo resultante se purifica por HPLC de fase inversa para dar 195 mg (68%) del compuesto A.
\vskip1.000000\baselineskip
97 
\newpage
Siguiendo el procedimiento anterior y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes compuestos consecutivos B-E:
\vskip1.000000\baselineskip
98 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 2 Compuestos de comparación F-M
A una solución en DCM (10 ml) del compuesto xii (350 mg, 0,56 mmol) se le añade reactivo de DMP (307 mg, 0,73 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 2 horas y después se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% durante 30 minutos. Después, la mezcla de reacción se extrae con EtOAc (75 ml) y se lava con salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra al vacío. El residuo resultante se purifica con cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 80-90%/Hexanos), dando 248 mg (71%) del compuesto F
99
Siguiendo el procedimiento anterior y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes ejemplos consecutivos G-M:
100
1100 
\vskip1.000000\baselineskip
101 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 3 Compuestos de comparación N-R
A una solución en DCM (4 ml) del compuesto xix (-0,22 mmol) se le añade reactivo de DMP (146 mg, 0,34 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 2 horas, la reacción se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10%. Después. la mezcla de reacción se diluye con DCM. La fase orgánica se separa y se lava dos veces con Na_{2}SO_{3} al 10% y salmuera. La fase orgánica resultante se seca y se concentra al vacío, dando un residuo, que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc), proporcionando 78 mg (56%) del compuesto deseado N
\vskip1.000000\baselineskip
102 
\newpage
Siguiendo el procedimiento anterior y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes ejemplos consecutivos O-R:
\vskip1.000000\baselineskip
103 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 4 Compuestos de comparación S-W
A una solución en DCM (10 ml) del compuesto xxv (320 mg, 0,5 mmol) se le añade reactivo de DMP (272 mg, 0,65 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 2 horas y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% durante 20 minutos. Después, la mezcla resultante se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera, se seca y se concentra al vacío. El residuo resultante se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 80%/Hexanos), dando 170 mg (53%) del compuesto S.
\vskip1.000000\baselineskip
104 
\newpage
Siguiendo el procedimiento anterior y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes ejemplos consecutivos T-W:
\vskip1.000000\baselineskip
105 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 5 Compuestos de comparación X-AD
A una solución en DCM (20 ml) del compuesto xxvi (400 mg, 0,6 mmol) se le añade reactivo de DMP (329 mg, 0,78 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 1,5 horas y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% durante 20 minutos. Después, la mezcla resultante se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera, se seca y se concentra al vacío. El residuo resultante se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 70-100%/Hexanos), dando 210 mg (53%) del compuesto X.
\vskip1.000000\baselineskip
106 
\newpage
Siguiendo el procedimiento anterior y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes ejemplos consecutivos Y-AD:
107 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 6 Compuestos de comparación AE-A1
El compuesto xxxiii (150 mg; 0,76 mmol) se disuelve en 5 ml de TFA y se agita durante dos días. El producto se purifica por RP-HPLC para producir 40 mg (33% de rendimiento) del compuesto AE.
\vskip1.000000\baselineskip
108 
\newpage
Siguiendo el procedimiento anterior y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes ejemplos consecutivos AF-AI:
109
Ejemplo 7 Compuesto de comparación AJ
El compuesto xxxviii (180 mg, 0,21 mmol) se disuelve en TFA puro (5 ml) y se deja durante 3 días aproximadamente a la temperatura ambiente. En este momento, la mezcla de reacción se concentra al vacío, dando un residuo, que se purifica por HPLC de fase inversa, dando 50 mg (32%) del compuesto AJ,
110
Ejemplo 8 Compuestos de comparación AK-AM
El compuesto xxxxiii (150 mg; 0,16 mmol) se disuelve en 4,5 ml de TFA y se agita durante tres días. El producto se purifica por RP-HPLC para producir 70 mg (54% de rendimiento) del compuesto AK,
111
Siguiendo el procedimiento anterior y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes ejemplos consecutivos AL-AM:
\vskip1.000000\baselineskip
112 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 9 Compuestos de comparación AN
El compuesto lii (80 mg) se disuelve en 3 ml de TFA y 3 ml de DCM. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 5 horas. El disolvente se retira por evaporación. El residuo resultante se purifica por HPLC, produciendo 62 mg (83%) del compuesto AN.
\vskip1.000000\baselineskip
113 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 10 Compuestos de comparación AO
El compuesto liii (160 mg; 0,2 mmol) se disuelve en 5 ml de DCM y se añade reactivo de DMP (170 mg; 0,4 mmol). La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante tres horas. El disolvente se retira por evaporación y el residuo se disuelve en acetonitrilo al 50%/agua y se purifica por RP-HPLC, produciendo 51 mg (32%) del compuesto AO,
\vskip1.000000\baselineskip
114 
\newpage
Ejemplo 11 Compuestos de comparación AP
El compuesto lix (162 mg; 0,22 mmol) se disuelve en 8 ml de DCM y se añade reactivo de DMP (189 mg; 0,44 mmol). La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se retira por evaporación y el producto se purifica por RP-HPLC, produciendo 41 mg (25%) del compuesto AP,
115
Ejemplo 12 Compuestos de comparación AQ
El compuesto lx (70 mg; 0,09 mmol) se disuelve en 5 ml de TFA y 5 ml de DCM. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se retira al vacío y el residuo se disuelve en acetonitrilo al 50%/agua y se liofiliza, produciendo el compuesto AQ en forma de un polvo,
116
Ejemplo 13 Compuestos de comparación AR-BG
El compuesto lxvi (223 mg, 0,326 mmol) se agita en una solución de TFA (5 ml) y DCM (5 ml) durante 4 horas. El análisis por TLC (gel de sílice: MeOH al 2%/EtOAc) muestra la completa conversión en el producto más lento. El disolvente se retira a presión reducida y el producto se liofiliza, dando 198 mg (97%) del compuesto AR.
117
Siguiendo el procedimiento anterior y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes ejemplos consecutivos AS-BG:
118
119
120 
\newpage
121 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 14 Compuestos de comparación BH-BS
El compuesto lxxiii (150 mg, 0,15 mmol) se recoge en DCM (3 ml). A esta solución se le añade TFA (1,5 ml). La solución resultante se agita durante una noche. En este momento, la reacción se concentra al vacío, dando un residuo. El residuo se purifica por HPLC de fase inversa y se liofiliza, dando 60 mg (50%) del compuesto BH,
\vskip1.000000\baselineskip
122 
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento anterior y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes ejemplos consecutivos BI-BS:
\vskip1.000000\baselineskip
123
124
125 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 15 Compuestos de comparación BT-BU
Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 12 y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes compuestos consecutivos BT-BU:
\vskip1.000000\baselineskip
126 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 16 Compuesto de comparación BV
A una solución en diclorometano (4,2 ml) del compuesto lxxvii (143 mg, 0,21 mmol) se le añade reactivo de DMP (165 mg, 0,39 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 2 horas y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% (ac.) durante 20 minutos. La mezcla resultante se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera, se seca sobre MgSO_{4} y se concentra para dar un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc) produce 124 mg (79%) del compuesto BV.
\vskip1.000000\baselineskip
127 
\newpage
Ejemplo 17 Compuesto BW y compuestos de comparación BX-CA
A una solución en diclorometano (20 ml) del compuesto lxxxix (420 mg, 0,62 mmol) se le añade reactivo de DMP (342 mg, 0,81 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 1 hora y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% durante 20 minutos. Después, la mezcla resultante se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera, se seca y se concentra al vacío. El residuo resultante se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 80%/Hexanos), dando 208 mg (50%) del compuesto BW,
\vskip1.000000\baselineskip
128 
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento anterior pero usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes ejemplos consecutivos BX-CA:
\vskip1.000000\baselineskip
129 
\newpage
Ejemplo 18 Compuestos de comparación CB-CC
A una solución en diclorometano (6,5 ml) del compuesto lxxxvii (200 mg, 0,3 mmol) se le añade reactivo de DMP (227 mg, 0,54 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 2 horas y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% (ac.) durante 20 minutos. La mezcla resultante se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera, se seca sobre MgSO_{4} y se concentra para dar un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc) produce 138 mg (70%) del compuesto CB,
\vskip1.000000\baselineskip
130
Siguiendo el procedimiento anterior pero usando los materiales de partida apropiados, se prepara el siguiente compuesto CC:
131 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 19 Compuesto de comparación CD
El compuesto lxxxxviii (40 mg, 0,05 mmol) se recoge en TFA (3 ml). La solución se agita durante dos noches y se concentra. El residuo se purifica por HPLC de fase inversa, dando 25 mg (74%) del compuesto CD.
132 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 20 Compuesto de comparación CE
Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 17 y usando los materiales de partida apropiados, se prepara el siguiente compuesto CE:
133 
\newpage
Ejemplo 21 Compuestos de comparación CF-CG
Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 14 y usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes ejemplos consecutivos CF-CG:
\vskip1.000000\baselineskip
134 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 22 Compuesto de comparación CH
Siguiendo el procedimiento del Ejemplo 16 y usando los materiales de partida apropiados, se prepara el siguiente compuesto CH:
\vskip1.000000\baselineskip
135 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 23 Compuestos de comparación CI-CM
El compuesto cxi (490 mg, 0,75 mmol) se disuelve en DCM (6 ml). A esta solución se le añade reactivo de DMP (380 mg, 0,9 mmol) y se agita durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactiva con una solución al 10% de Na_{2}SO_{3}, y después la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 70%/hexanos, produciendo el compuesto CI (325 mg, 66,4%).
\vskip1.000000\baselineskip
136 
\newpage
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes compuestos consecutivos CJ-CM:
137
138
Ejemplo 24 Compuestos de comparación CN
A una solución en DCM/THF (3 ml/3 ml) del compuesto exviii (335 mg, 0,46 mmol) se le añade reactivo de DMP (300 mg, 0,69 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 2 horas y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% (ac.) durante 20 minutos. La mezcla resultante se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera, se seca sobre MgSO_{4} y se concentra, produciendo un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 80%/hexanos) produce el compuesto CN (220 mg, 67%).
139
Ejemplo 25 Compuestos de comparación CO-CR
A una solución en DCM/THF (1,5 ml/1,5 ml) del compuesto cxix (164 mg, 0,25 mmol) se le añade reactivo de DMP (159 mg, 0,38 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 2 horas y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% (ac.) durante 20 minutos. La mezcla resultante se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera, se seca sobre MgSO_{4} y se concentra, dando un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 70%/hexanos) produce el compuesto CO (100 mg, 61%).
140
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados se preparan los siguientes compuestos consecutivos CP-CR:
141 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 26 Compuestos de comparación CS-CT
El compuesto cxx se disuelve en DCM (3 ml), a la solución se le añade reactivo de DMP (180 mg, 0,41 mmol) y después se agita durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactiva con Na_{2}SO_{3} al 10% y después la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo se purifica cromatográficamente con EtOAc al 100%, produciendo el compuesto CS (95 mg, 43,7%).
142
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando el material de partida apropiado, se prepara el siguiente compuesto CT:
143
Ejemplo 27 Compuesto CU y compuestos de comparación EI, EK-EM, EO-EZ y FA-FG
El compuesto cxxviii (356 mg, 0,52 mmol) se disuelve en DCM (5 ml), a esta solución se le añade reactivo de DMP (270 mg, 0,63 mmol) y se agita durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactiva con Na_{2}SO_{3} al 10% y después la fase orgánica se separa y se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración del disolvente orgánico, el residuo se purifica cromatográficamente con EtOAc al 100%, produciendo el compuesto CU (200 mg, 56,3%), p.f. 225-235ºC.
144
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes compuestos consecutivos EI, EK-EM, EO-EZ y FA-FH:
145
1450 
\vskip1.000000\baselineskip
146
147
148
149
150 
\newpage
Ejemplo 28 Compuestos de comparación CV-DC
El compuesto cxxx (330 mg, 0,46 mmol se disuelve en DCM (5 ml), a esta solución se le añade reactivo de DMP (240 mg, 0,56 mmol) y se agita durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactiva con Na_{2}SO_{3} al 10% y la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera.
Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 100%, produciendo el compuesto cxxx (280 mg, 85,9%).
151
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes compuestos consecutivos CW-DC:
152
153
Ejemplo 29 Compuestos de comparación DD-DE
A una solución en DCM (6 ml) del compuesto cxxxviii (400 mg, 0,57 mmol) se le añade reactivo de DMP (362 mg, 0,85 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 2 horas y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% (ac.) durante 20 minutos. La mezcla resultante se extrae con EtOAc. La fase orgánica extraída se lava con salmuera, se seca sobre MgSO_{4} y se concentra, produciendo un aceite de color amarillo. La purificación con gel de sílice (EtOAc al 70%/hexanos) produce el compuesto DD (201 mg, 51%).
154
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados se prepara el siguiente compuesto DE:
155
Ejemplo 30 Compuesto de comparación DF
El compuesto cxxxxiii (165 mg, 0,24 mmol) se disuelve en DCM (5 ml). a la solución se le añade reactivo de DMP (125 mg, 0,29 mmol) y se agita durante 1 hora. La mezcla de reacción se inactiva con Na_{2}SO_{3} al 10% y la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 70%/hexanos, produciendo el compuesto DF (108 mg, 65,6%).
156
Ejemplo 31 Compuestos de comparación DG-DJ
A una solución del compuesto cil (0,350 g, 0,516 mmol) en DCM (15 ml) enfriada en un baño de hielo se le añade reactivo de DMP (0,281 g, 0,671 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 2 horas, después se inactiva con una solución al 10% de Na_{2}SO_{3} y se agita durante 20 minutos. La mezcla resultante se extrae con DCM (3 x 20 ml) y el extracto orgánico se seca (MgSO_{4}). Después de la filtración para retirar el MgSO_{4}, el filtrado se concentra y se purifica por cromatografía en columna (Acetato de etilo al 70%/Hexanos), produciendo el compuesto final DG (0,265 g, 76%) en forma de un sólido de color blanco.
157
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes compuestos consecutivos DH-DJ:
158
Ejemplo 32 Compuestos de comparación OK-DN
Una solución en DCM del compuesto clx (108 mg, 0,123 mmol) se trata con reactivo de DMP (78 mg, 0,185 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la mezcla de reacción se diluye con EtOAc (50 ml) y después se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10%. Después de agitar durante 30 minutos, la fase orgánica se separa y se lava con NaHCO_{3} y salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra al vacío, dando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 80%/hexanos), produciendo el compuesto DK (84 mg, 78%).
\vskip1.000000\baselineskip
159 
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes compuestos DL-DN.
\vskip1.000000\baselineskip
160 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 33 Compuestos de comparación DO-DS
Una solución en EtOH (10 ml) del compuesto clxii (174 mg, 0,189 mmol) se hidrogena usando Pd/C (30% equiv., 60 mg, contenido de paladio del 10%) durante 2,5 horas. Después, el catalizador se retira por filtración. El filtrado resultante se concentra al vacío, produciendo un residuo que se purifica por cromatografía semi-preparativa de fase inversa y se liofiliza, produciendo el compuesto DO con un rendimiento del 70%.
\vskip1.000000\baselineskip
161 
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes compuestos consecutivos DP-DS.
\vskip1.000000\baselineskip
162
163
Ejemplo 34 Compuesto de comparación CW
El compuesto clxiii (175 mg, 0,24 mmol) se recoge en DCM (3 ml). A esta solución se le añade agente DMP (120 mg, 0,28 mmol) y se agita durante 1 hora. La reacción se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% y se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. La purificación por EtOAc al 70% produce el compuesto CW (134 mg, 75%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 35 Compuestos de comparación CY y DT-DX
A una solución en DCM (15 ml) de clxxii (290 mg, 0,43 mmol) se le añade reactivo de DMP (239 mg, 0,56 mmol). La reacción se agita a temperatura ambiente durante 1 hora y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% durante 20 minutos. Después, la mezcla resultante se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera, se seca y se concentra al vacío. El residuo resultante se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 8-100%/Hexanos), dando el compuesto CY (151 mg, 52%).
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes compuestos consecutivos DT-DX.
164
1640
Ejemplo 36 Compuestos de comparación DY
El compuesto lxxxv (1,17 mmol) se recoge en DCM (5 ml). A esta solución se le añade reactivo de DMP (543 mg, 1,3 mmol) y se agita durante 1 hora. La reacción se interrumpe con P-Na_{2}SO_{3} (1,5 Mmol/g de resina) y se agita durante una hora. Se añade resina eliminadora P-TBD* (2,5 mmol/g de resina) y se agita durante 45 minutos. La mezcla resultante se filtra y se purifica con EtOAc al 50%, dando el compuesto DY (440 mg, 50,2% en dos etapas).
*Referencia para la resina eliminadora P-TBD: J. Parlow y col. Tetrahedron, 55, 6785-6796 (1999).
165
Ejemplo 37 Compuesto de comparación DZ
El compuesto material de partida clxxxxi (94 mg, 0,14 mmol) se disuelve en una mezcla de THF (10 ml) y DCM (20 ml). Después, se añade reactivo de DMP (118 mg, 0,28 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 2 horas. La reacción se vierte en un embudo de decantación que contiene Dri Solv THF (120 ml). La reacción se lava con Na_{2}SO_{3} al 10% (50 ml) y después con salmuera (75 ml). Después, la fase orgánica se separa, se seca sobre MgSO_{4} y el disolvente se retira a presión reducida. Después se realiza la cromatografía (gel de sílice: elución con Dri Solv THF al 50%/EtOAc, y después MeOH al 4%/THF). Las fracciones se comprueban mediante análisis por EM. Las fracciones apropiadas se liofilizan, produciendo el compuesto DZ (38,8 mg, 41%).
166
Ejemplo 38 Compuestos de comparación EA-EB
El compuesto de partida clxxxxv (185 mg, 0,26 mmol) se disuelve en THF (20 ml). Después, se añade el reactivo de DMP (219 mg, 0,52 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, el análisis por TLC muestra la conversión completa en la cetona (MeOH al 5%/THF). La reacción se vierte en un embudo de decantación que contiene Dri Solv THF (120 ml). La reacción se lava con Na_{2}SO_{3} al 10% (50 ml) y después con salmuera (75 ml). Después, la fase orgánica se separa, se seca sobre MgSO_{4} y el disolvente se retira a presión reducida, produciendo un residuo que se purifica por cromatografía (gel de sílice: elución con Dri Solv THF al 50%/EtOAc, y después MeOH al 4%/THF) y las fracciones se comprueban mediante análisis por UV y EM. Las fracciones apropiadas se liofilizan, produciendo el compuesto EA (159 mg, 88%).
167
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados, se prepara el siguiente compuesto EB:
168
Ejemplo 39 Compuestos de comparación EC-ED
A una solución del compuesto clxxxxviii (0,341 g, 0,503 mmol) en DCM (15 ml) enfriada en un baño de hielo se le añade reactivo de DMP (0,277 g, 0,654 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 2 horas, después se inactiva con una solución al 10% de Na_{2}SO_{3} y se agita durante 20 minutos. La mezcla resultante se extrae con DCM (3 x 20 ml) y el extracto orgánico se seca (MgSO_{4}). Después de la filtración para retirar el MgSO_{4}, el filtrado se concentra y se purifica por cromatografía en columna (EtOAc al 70%/Hexano), dando el compuesto EC (0,183 g, 54%) en forma de un sólido de color blanco.
169
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados, se prepara el siguiente compuesto ED:
170
Ejemplo 40 Compuestos de comparación EE-EG
El compuesto ccii (290 mg, 0,37 mmol) se recoge en DCM (5 ml). A esta solución se le añade reactivo de DMP (175 mg, 0,41 mmol) y se agita durante 1 hora. La reacción se interrumpe con P-Na_{2}SO_{3} (1,5 mmol/g de resina) y se agita durante 1 hora. El reactivo de DMP inactivado se elimina con P-TBD (2,5 mmol/g de resina) y se agita durante 1 hora. La mezcla resultante se filtra y se aclara con DCM antes de concentrarse para dar un residuo. El residuo resultante se purifica con EtOAc al 50%/Hex, produciendo el compuesto EE (440 mg, 28%).
\vskip1.000000\baselineskip
171 
\vskip1.000000\baselineskip
Siguiendo el procedimiento anterior para preparar el compuesto anterior y procedimientos relacionados para preparar el intermedio del mismo, pero usando los materiales de partida apropiados, se preparan los siguientes compuestos EF-EG:
172 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 41 Compuesto de Comparación EH
A una solución en DCM (3 ml) del compuesto cciii (140 mg, 0,2 mmol) se le añade reactivo de DMP (133 mg, 0,3 mmol). La reacción se agita a temperatura ambiente durante 2 horas y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% (ac.) durante 20 minutos. La mezcla resultante se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera, se seca sobre MgSO_{4} y se concentra, dando un aceite de color amarillo que se purifica con gel de sílice (EtOAc al 70%/hexano), y después se liofiliza, produciendo el compuesto EH (50 mg, 38%).
173
Ejemplo 42 Compuesto de comparación EJ
El compuesto ixxxiii (520 mg, 1 mmol) se recoge en DCM (5 ml). A la solución anterior se le añade PyBOP (624 mg, 1,2 mmol) y se agita durante 5 minutos. A esta solución se le añade gota a gota el compuesto cdviii (300 mg, 1,2 mmol) en THF (5 ml), seguido de DIPEA (0,22 ml, 1,2 mmol). La reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche, en atmósfera de nitrógeno. En este momento, la reacción se diluye con EtOAc y se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. La fase orgánica se seca con MgSO_{4}, se filtra y se concentra, dando el intermedio acoplado en bruto cdix.
174
Este intermedio cdix (-1 mmol) se recoge en DCM (10 ml). A esta solución se le añade Peryodinano de Dess-Martin (-166 mg, 1,1 mmol). Después de agitar durante 1 hora a temperatura ambiente, la reacción se interrumpe con Na_{2}SO_{3} unido a polímero (740 mg, 1,5 mmol DMP/g de resina) y se agita durante 45 minutos. Después, la mezcla de reacción se elimina con resina TBD unida a polímero (440 mg, 2,3 mmol DMP/g de resina). La mezcla resultante se agita durante 45 minutos y después se filtra. La purificación se consigue en EtOH al 5%/EtOAc, produciendo el compuesto EJ (245 mg, 32% en 2 etapas). Puede encontrarse una referencia bibliográfica para el procedimiento de trabajo en Tetrahedron 55 (1999) 6785-6796.
175 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 43 Compuesto de comparación EN
El compuesto intermedio cdvii (415 mg, 0,59 mmol) se recoge en DCM (10 ml) y THF (10 ml) y se añade t-BuOH (300 \mul) seguido de Peryodinano de Dess-Martin (750 mg, 1,77 mmol). La reacción se agita durante 50 minutos y después se interrumpe con P-Na_{2}SO_{3} (1,5 mmol DMP/g de resina). Después de agitar durante 20 minutos a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se elimina con P-TBD (2,5 mmol DMP/g de resina). Después de agitar durante 1 hora, la mezcla resultante se filtra y se concentra. El producto se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc del 50% al 70%/Hexanos), produciendo el compuesto EN (220 mg, 53%).
176 
\vskip1.000000\baselineskip
Se obtuvieron Espectros de Masas [M] para los siguientes compuestos como se muestra en la siguiente Tabla I.
TABLA 1
177
178
179
180
181 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Los Espectros de Masas de Alta Resolución (EMAR) de los siguientes compuestos se obtuvieron como se muestra en la Tabla 2.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
182 
\newpage
Ejemplo Intermedio 1 - compuesto ii
A una solución en etanol (40 ml) del compuesto i (8,1 g, 24,4 mmol)
183
se le añade NaBH_{4} (924 mg, 24,4 mmol) a -10ºC. La reacción se agita a esa temperatura durante 30 minutos y después se interrumpe con AcOH (3 ml). La mezcla de reacción se diluye con EtOAc (250 ml), y se lava con NaHCO_{3} y salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra al vacío, produciendo un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 50%/Hexanos), proporcionando 7,85 g (97%) del compuesto ii,
\vskip1.000000\baselineskip
184 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 2 - compuesto iii
A una solución en THF (70 ml) del compuesto ii (4,48 g, 13,4 mmol) se le añade a 0ºC NaH (699 mg, 60%, 17,42 mmol). Después de agitar a esa temperatura durante 40 minutos, se añade Met puro (1,25 ml, 20,1 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. En este momento, la reacción se interrumpe cuidadosamente con una solución saturada de NH_{4}Cl a 0ºC. La mezcla de reacción se extrae con Et_{2}O y EtOAc. La fase orgánica se lava con agua y salmuera y se seca con Na_{2}SO_{4}. La fase orgánica obtenida de esta manera se concentra al vacío, proporcionando el compuesto xantano iii.
\vskip1.000000\baselineskip
185 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 3 - compuesto iv
El compuesto de xantano iii (\sim13,4 mmol) se disuelve en tolueno (100 ml). A esta solución se le añade AIBN (216 mg, 1,34 mmol). La solución resultante se desgasifica con nitrógeno seco y después se trata con n-Bu_{3}SnH (5,4 ml, 20,1 mmol). La mezcla de reacción se calienta a 90ºC durante 3 horas. En este momento, la reacción se enfría a temperatura ambiente y se concentra al vacío. El residuo resultante se purifica con cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 15-20%/Hexanos), proporcionando 2,8 g (66% total del compuesto ii) del compuesto iv,
186 
\newpage
Ejemplo Intermedio 4 - compuesto v
A una solución en etanol (31 ml) del compuesto iv (1 g, 3,15 mmol) se le añade Pd(OH)_{2}/C (655 mg, 20%, 0,95 mmol) en una corriente de nitrógeno. La mezcla de reacción resultante se somete a hidrogenación convencional (1,5 atm). Después de 5 horas, la fuente de hidrógeno se retira y la reacción se filtra. Los filtrados se concentran al vacío, proporcionando el compuesto de amina libre v,
\vskip1.000000\baselineskip
187 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 5 - compuesto vi
A una solución en DCM (10 ml) del compuesto vii (629 mg, 1,95 mmol) se le añade aproximadamente a la temperatura ambiente
\vskip1.000000\baselineskip
188 
\vskip1.000000\baselineskip
HOAt (265 mg, 1,95 mmol) seguido de una solución 1 M de DCC en DCM (1,95 15 ml, 1,95 mmol). Después de agitar durante 30 minutos, al ácido activado con HOAt anterior se le añade una solución en DCM (3 ml) del compuesto v (1,5 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. En este momento, la reacción se filtra a través de Celite. Los filtrados se diluyen con EtOAc (75 ml) y se lavan con agua y salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra al vacío. El residuo resultante se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 70-80%/Hexanos), produciendo 620 mg (85%) del compuesto vi,
\vskip1.000000\baselineskip
189 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 6 - compuesto viii
A una solución en etanol (10 ml) del compuesto vi (615 mg, 1,26 mmol) se le añade una solución acuosa 2 N de NaOH (1,26 ml, 2,52 mmol). La reacción se agita durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente y después se acidifica a pH 3 usando resinas ácidas Dowex. Los sólidos se retiran por filtración y los filtrados se concentran al vacío, dando un residuo que se disuelve de nuevo en 1:1 de CH_{3}CN/H_{2}O. Esta solución se somete a liofilización, proporcionando 495 mg (85%) del compuesto viii,
\vskip1.000000\baselineskip
190 
\newpage
Ejemplo Intermedio 7 - compuesto ix
A una solución en DCM (10 ml) del compuesto viii (230 mg, 0,5 mmol) se le añade PyBop (417 mg, 0,8 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, a esta solución se le añade una solución en THF (5,25 ml) del compuesto x (263 mg, 0,75 mmol) seguido de
191
DIPEA (0,174 ml, 1 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche y después se interrumpe con agua (30 ml) durante 30 minutos. La mezcla de reacción se extrae con EtOAc (100 ml). La fase orgánica se lava con salmuera, se seca y se concentra al vacío, produciendo un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc), dando 400 mg (100%) del compuesto ix,
192
Ejemplo Intermedio 8 - compuesto xi
A una solución en DCM (10 ml) del compuesto ix (396 mg, 0,5 mmol) se le añade reactivo de DMP (278 mg, 0,65 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 1 hora y después se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% durante 30 minutos. Después, la mezcla de reacción se extrae con EtOAc (75 ml) y se lava con salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra al vacío. El residuo resultante se purifica con cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 70%/Hexanos), dando 320 mg (81%) del compuesto xi,
193
Ejemplo Intermedio 9 - compuesto xii
A una solución en DCM (10 ml) del compuesto viii (230 mg, 0,5 mmol) se le añade PyBop (417 mg, 0,8 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, a esta solución se le añade una solución en THF (3,5 ml) del compuesto xiii (140 mg, 0,75 mmol) y
194
seguido de DIPEA (0,174 ml, 1 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche y después se interrumpe con agua (30 ml) durante 30 minutos. La mezcla de reacción se extrae con EtOAc (75 ml). La fase orgánica se lava con salmuera, se seca y se concentra al vacío, produciendo un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc), dando el compuesto xii con rendimiento cuantitativo,
195
Ejemplo Intermedio 10 - compuesto i'
A una solución en metanol (30 ml) del compuesto i (5 g, 15,1 mmol) se le añaden (BOC)_{2}O (3,3 g, 15,1 mmol) y H_{2}/Pd(OH)_{2}/C (1,6 g, contenido de Pd al 10%). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 2 horas y después se filtra dos veces a través de Celite. El lecho de Celite se aclara con DCM. Los filtrados combinados se concentran al vacío, produciendo un residuo oleoso que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 40%/Hexanos), dando 3,8 g (85%) del compuesto i',
196 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 11 - compuesto ii'
A una solución en metanol (111 ml) del compuesto i' (3,7 g, 12,5 mmol) se le añade a 0ºC NaBH_{4} (0,805 g, 21 mmol). Después de agitar a 0ºC durante 2,5 horas, el disolvente de la reacción se evapora lentamente al vacío, produciendo un residuo que se diluye con EtOAc. Después, esta solución se lava con agua dos veces. La fase acuosa se extrae con EtOAc. Las fases orgánicas combinadas se secan con MgSO_{4}, se filtra y se concentra al vacío, produciendo un residuo que se purifica con cromatografía, proporcionando 3,76 g (99%) del compuesto ii',
197 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 12 - compuesto xiv
A una solución en DCM (180 ml) del compuesto ii' (3,76 g, 12,3 mmol) se le añade a 0ºC DMP (5 g, 40,1 mmol) seguido después de de TTO_{2} (4 ml, 23,7 mmol). La reacción se agita a 0ºC durante 1 hora y aproximadamente a la temperatura ambiente durante 1,5 horas más. Después, la mezcla de reacción se lava dos veces con NaHCO_{3} al 5% y se seca con MgSO_{4}. La fase orgánica obtenida de esta manera se concentra al vacío, proporcionando el triflato en bruto. El triflato resultante (2,7 g, 6 mmol) se disuelve en DCM (120 ml). A esta solución se le añade DMAP (2,5 g, 20,5 mmol). La mezcla de reacción resultante se calienta a reflujo durante una noche. En este momento, la reacción se enfría a temperatura ambiente y se lava dos veces con NaHCO_{3} al 5%. La mezcla de reacción se seca con MgSO_{4}, se filtra y se concentra al vacío, produciendo un residuo oleoso de color parduzco que se purifica (MeOH al 1%/DCM), dando 500 mg (30%) del compuesto xiv,
198
Ejemplo Intermedio 13 - compuesto xv
El compuesto xiv (500 mg, 1,8 mmol) se disuelve en HCl 4 N en dioxano (6,75 ml). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante \sim4 horas. En este momento, el disolvente se retira al vacío. El residuo resultante se valora dos veces con éter dietílico, dando la sal HCl del compuesto xv con rendimiento casi cuantitativo,
199 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 14 - compuesto xvi
A una solución en THF (7 ml) del compuesto vii (579 mg, 1,8 mmol) se le añaden HOAt (245 mg, 1,8 mmol) y DCC (1,8 ml, 1 M en DCM). Se produce como resultado una suspensión. Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 15 minutos, a la suspensión anterior se le añade una solución en THF (6 ml) del compuesto xv (1,8 mmol) y DIPEA (0,63 ml, 3,6 mmol). Después se añade más cantidad de DIPEA (0,8 ml). La mezcla de reacción se agita durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente. En ese momento, los sólidos de color blanco formados de esta manera se retiran por filtración. Los sólidos de color blanco se aclaran con THF. Los filtrados y los lavados combinados se concentran al vacío, dando el producto en bruto que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 100%), proporcionando 665 mg (76%) del compuesto xvi.
200 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 15 - compuesto xvii
A una solución en etanol (8 ml) de 7 (665 mg, 1,37 mmol) se le añade NaOH acuoso 1 N (2,4 mmol) a 0ºC. La reacción se agita durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente y después se acidifica a pH 3 usando resinas ácidas Dowex. Los sólidos se filtran. Los filtrados resultantes se concentran al vacío, dando un residuo de color amarillo pálido que se disuelve de nuevo en 1:1 de CH_{3}CN/H_{2}O y se liofiliza, dando 467 mg (74%) del compuesto xvii,
201 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 16 - compuesto xix
Una solución en DCM (4 ml) del compuesto xvii (100 mg, 0,22 mmol) se trata con PyBop 5 (207 mg, 0,4 mmol) aproximadamente a la temperatura ambiente durante 20 minutos. En este momento, la solución anterior se trata con una solución en THF (2,6 ml) del compuesto xviii (65 mg, 0,32 mmol), seguido de DIPEA
202
(0,076 ml). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 7 horas, la !reacción se interrumpe con agua. La mezcla de reacción se diluye con DCM (60 ml). La fase orgánica se separa y se lava dos veces con salmuera y se seca con MgSO_{4}. Después de la filtración, se concentra y se cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc), obteniendo 148 mg (\sim100%) del compuesto xix.
203
Ejemplo Intermedio 17 - compuesto xx
A una solución en THF (100 ml) de N-Cbz-L-valina (14,4 g, 57,2 mmol) se le añaden HOBT (7,72 g, 57,2 mmol) y EDCl (10,98 g, 57,2 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 20 minutos, a la solución anterior se le añade una solución en THF (50 ml) que contiene clorhidrato de éster metílico de terc-L-Leucina (10,4 g, 57,2 mmol) y DIPEA (11,9 ml, 68,7 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. Después del tratamiento acuoso convencional y la cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 30%/Hexanos), se obtienen 14 g (64%) del compuesto xx.
204
Ejemplo Intermedio 18 - compuesto xxi
A una solución en metanol (80 ml) de xx (6,71 g, 17,7 mmol) se le añade (en una corriente de N_{2}) Pd/C (1,88 g, contenido de Pd al 10%). El recipiente de reacción se somete a hidrogenación (1 atm H_{2}) durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente. En este momento, la mezcla de reacción se filtra a través de una capa de Celite y se concentra al vacío, proporcionando la amina libre en bruto correspondiente para la siguiente etapa. Una solución en THF de esta amina (\sim17,7 mmol) se añade a una solución en THF (46 ml) y DMF (5 ml) que contiene ácido 2-pirazinacarboxílico (2,85 g, 23 mmol), Hobbit (3,12 g, 23 mmol) y EDCl (4,41 g, 23 mmol). Después, a la mezcla resultante se le añade PIPEA (3,08 g, 17,7 mmol). La reacción se agita durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente y después se interrumpe con agua. La mezcla de reacción se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera y se concentra al vacío, proporcionando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 40-50%/Hexanos), proporcionando 3,9 g (63%) del compuesto xxi,
205
Ejemplo Intermedio 19 - compuesto xxii
A una solución en metanol (40 ml) del compuesto xxi (4,67 g, 13,34 mmol) se le añade NaOH 2 N (10 ml, 20 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 2 horas. En este momento, a la mezcla de reacción se le añade una cantidad adicional de NaOH 2 N (3,3 ml, 6,67 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche, la reacción se acidifica a pH 3 usando resina ácida. Después, la reacción se filtra y los filtrados se concentran al vacío, produciendo un residuo que se disuelve en 1:1 de CH_{3}CN/H_{2}O para la liofilización, y se obtienen 4,15 g (93%), del compuesto xxii.
206
Ejemplo Intermedio 20 - compuesto xxiii
Una solución en DCM (10 ml) del compuesto xxii (917 mg, 2,73 mmol) se trata con HOAt (371 mg, 2,73 mmol) y DCC (2,73 ml, I M, 2,73 mmol). Después de agitar durante 30 minutos, la mezcla de reacción se trata con una solución en THF (10 ml) del compuesto v (500 mg, 2,73 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche, los sólidos de color blanco (urea) se filtran. Los filtrados se concentran al vacío, dando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 60-70%/Hexanos), proporcionando 1,06 g (77%) del compuesto xxiii,
207
Ejemplo Intermedio 21 - compuesto xxiv
Una solución en etanol (20 ml) del compuesto xxiii (1,06 g, 2,11 mmol) se trata con NaOH 2 N (2,11 ml, 4,23 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche, la mezcla de reacción se acidifica a pH 3 con resina ácida. Los sólidos se retiran por filtración. Los filtrados resultantes se concentran al vacío, dando un residuo que se liofiliza, dando 1 g (100%) del compuesto xxiv,
208
Ejemplo Intermedio 22 - compuesto xxv
Una solución en DCM (10 ml) del compuesto xxiv (236,7 mg, 0,5 mmol) se trata con PyBop (417 mg, 0,8 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 20 minutos, la mezcla de reacción se trata con una solución en DMF (5,6 ml) del compuesto xiii (139,5 mg, 0,75 mmol), seguido de DIPEA (0,174 ml, 1 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 8 horas, la reacción se interrumpe con agua y se extrae con EtOAc. La fase orgánica resultante se lava con salmuera, se seca y se concentra al vacío, dando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc), produciendo \sim320 mg (100%) del compuesto xxv,
209
Ejemplo Intermedio 23 - compuesto xxi
Una solución en DCM (15 ml) del compuesto xxiv (355 mg, 0,75 mmol) se trata con PyBop (622 mg, 1,2 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 20 minutos, la mezcla de reacción se trata con una solución en THF (10 ml) del compuesto xxvii' (156 mg, 0,75 mmol), seguido de DIPEA (0,26 ml, 1,5 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche, la reacción se interrumpe con agua y se extrae con EtOAc. La fase orgánica resultante se lava con salmuera, se seca y se concentra al vacío, dando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (2% EtOH/EtOAc), produciendo \sim400 mg (80%) del compuesto xxvi,
210
Ejemplo Intermedio 24 - Metil 5-cianopentanoato
Se disuelve cianuro potásico (4 g, 61,44 mmol) en 70 ml de agua y 200 ml de metanol. A la solución se le añaden 10 g (51,2 mmol) de 5-bromopentanoato de metilo y la mezcla se calienta a reflujo durante una noche. La mezcla de reacción se concentra a sequedad. Al residuo se le añaden 100 ml de EtOAc para extraer el producto. La fase orgánica se lava tres veces con agua, se seca y se concentra, produciendo 5,37 g (74%) de 5-cianopentanoato de metilo en forma de un aceite.
211 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 25 - 5-Tetrazol-5-ilpentanoato de metilo
Se disuelve 5-cianopentanoato de metilo (4,8 g, 34 mmol) en tolueno y se añade cloruro de trietilamonio (14 g, 103 mmol) y azida sódica (6,63, 102 mmol). La mezcla se calienta a reflujo durante una noche. La mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se añade agua para extraer (3 x 100 ml) el 5-tetrazol-5-ilpentanoato de metilo de la fase orgánica. A la fase acuosa se le añade HCl concentrado para ajustar el pH a 2. El producto se extrae de la solución acuosa con EtOAc (3 x 50 ml). La fase orgánica se combina, se seca y se concentra, produciendo 4,25 g (68%) de 5-tetrazol-5-ilpentanoato de metilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 26 - 5-[N-(1,1-Dimetilbencil)tetrazol-5-il]pentanoato de metilo
Se disuelven 5-tetrazol-5-ilpentanoato de metilo (4,23 g, 23 mmol) y ácido tricloroacético (8,69 g, 53 mmol) en 50 ml de CHCl_{3}. A la solución se le añade gota a gota \alpha-metilestireno (2,72, 23 mmol), y la mezcla de reacción se deja en agitación aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 200 ml y la fase orgánica se lava con KOH acuoso al 10% y salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra. El producto se purifica por cromatografía en columna ultrarrápida, produciendo 6,6 g (95%) de 5-[N-(1,1-dimetilbencil)tetrazol-5-il]pentanoato de metilo.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 27 - Ácido 5-[N-(1,1-dimetilbencil)tetrazol-5-il]pentanoico
Se disuelve 5-[N-(1,1-dimetilbencil)tetrazol-5-il]pentanoato de metilo (6,6 g, 21,8 mmol) en metanol (100 ml) y se añaden 23 ml de NaOH acuoso 1 N. La mezcla se agita durante una noche y se concentra para retirar el metanol. El residuo se disuelve en agua (100 ml) y la solución se neutraliza mediante la adición del mismo equivalente de HCl acuoso 1 N. El producto se extrae con EtOAc (3 x 50 ml). La fase orgánica se seca y se concentra, produciendo 4,75 g (75%) de ácido 5-[N-(1,1-dimetilbencil)tetrazol-5-il]pentanoico.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 28 - compuesto xxxviii
Se disuelve ácido 5-[N-(1,1-dimetilbencil)tetrazol-5-il]pentanoico (4,75 g, 16,5 mmol) en DCM (100 ml) y se añaden 4,8 g (24,8 mmol) de EDCl y 6 ml de DIPEA. A la mezcla se le añade N-hidroxilsuccinimida (3,8 g, 33 mmol). La mezcla de reacción se agita durante tres horas aproximadamente a la temperatura ambiente. La mezcla se diluye con DCM hasta alcanzar un volumen de 200 ml y la solución se lava tres veces con agua. La fase orgánica se seca y se concentra, produciendo 4,79 g (75%) del compuesto xxxviii,
\vskip1.000000\baselineskip
212 
\newpage
Ejemplo Intermedio 29 - compuesto xxix
El dipéptido H-Val-Val-OH (3,22 g, 14,9 mmol) se suspende en 50 ml de N,N-dimetilformamida (DMF) y se añaden 4,75 g (12,42 mmol) del compuesto xxviii seguido de la adición de 3,4 ml (18,63 mmol) de diisopropiletilamina (DIPEA). La mezcla se calienta hasta 40ºC y se agita durante una noche. El disolvente se evapora a alto vacío. El residuo se disuelve en EtOAc y se lava con HCl 1 N y salmuera, produciendo 5,52 g (91%) del compuesto xxix,
213 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 30 - compuesto xxx
Se disuelven 1,6 g (3,29 mmol) del compuesto xxix en 20 ml de DCM y se añaden 3,3 ml de una solución 1 M de DCC en THF. A la mezcla se le añaden 500 mg (2,73 mmol) del compuesto v. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 100 ml y se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} y salmuera. Se purificó por cromatografía en columna (EtOAc al 50%/hexano), produciendo 1,02 g (58%) del compuesto xxx.
214 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 31 - compuesto xxxi
El compuesto xxx (1,02 g, 1,57 mmol) se disuelve en 10 ml de MeOH y se añaden 2 ml de NaOH acuoso 1 N.. La mezcla se agita durante una noche. El metanol se retira por evaporación y el residuo se disuelve en agua y se neutraliza con 2 ml de HCl. Después de la extracción con EtOAc, se produce 1,00 g (\sim100%) del compuesto xxxi.
215 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 32 - compuesto xxxxii
El compuesto xxxi (300 mg, 0,48 mmol) y PyBop (300 mg, 0,58 mmol) se disuelven en 10 ml de DCM. A la solución se le añade el compuesto x (201 mg, 0,58 mmol) y después se añade DIPEA (104 \mul). La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. Después, la mezcla de reacción se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 100 ml y se lava dos veces con HCl 1 N, dos veces con NaHCO_{3} y tres veces con salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra. El residuo se purifica por cromatografía en columna (EtOAc al 100%), produciendo 450 mg (98%) del compuesto xxxii.
216 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 33 - compuesto xxxiii
El compuesto xxxii 360 mg (0,38 mmol) se disuelve en 8 ml de DCM y se añaden 240 mg (0,57 mmol) de reactivo de DMP. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante tres horas. La mezcla se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 50 ml y se lava tres veces con salmuera. El producto se purifica por cromatografía en columna (etanol al 25%/EtOAc), produciendo 300 mg (83%) del compuesto xxxiii,
217 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 34 - compuesto xxxiv
A una solución en DCM (10 ml) de xxxv (790 mg, 2,80 mmol) se le añaden PyBop (1,7 g, 3,36 mmol)
218
y Hobbit (450 mg, 3,36 mmol). La solución resultante se enfría a 0ºC y se trata con una solución en DCM (3 ml) de (s)-\alpha-(4-piridil)etilamina (410 mg, 3,36 mmol). Esto se sigue de la adición de DIPEA (0,5 ml, 3,36 mmol). La reacción se agita durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente. En este momento, la mezcla de reacción se diluye con EtOAc. Todo se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. La fase orgánica obtenida de esta manera se seca y se concentra al vacío. El residuo resultante se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc), proporcionando 630 mg (58%) del compuesto xxxiv,
219 
\vskip1.000000\baselineskip
Nota: la (s)-\alpha-(4-piridil)etilamina se obtiene de su sal D-tartrato por lavado con una base (NaOH 1 N) y posterior extracción con EtOAc. La tasa de recuperación es del 89%.
Ejemplo Intermedio 35 - compuesto xxxvi
A una solución en metanol (15 ml) del compuesto xxxiv (630 mg, 1,64 mmol) se le añade en atmósfera de N_{2} Pd/C (150 mg, contenido de paladio al 10%). La reacción se agita en atmósfera de H_{2} durante una noche. La mezcla de reacción se filtra a través de una capa de Celite® 521. Los filtrados se concentran al vacío, proporcionando 420 mg (\sim100%) del compuesto xxxvi.
\vskip1.000000\baselineskip
220 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 36 - compuesto xxxvii
A una solución en DCM (3 ml) del compuesto xxxi (270 mg, 0,43 mmol) se le añade PyBop (270 mg, 0,52 mmol). Esto se sigue de la adición del compuesto xxxvi (160 mg, 0,64 mmol) y DIPEA (0,09 ml, 0,52 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. En este momento, la reacción se diluye con EtOAc y se lava con HCl 0,1 N, seguido de NaHCO_{3} saturado y salmuera. La fase orgánica resultante se seca y se concentra, dando el compuesto xxxvii (masa total de 430 mg) para la siguiente etapa
\vskip1.000000\baselineskip
221 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 37 - compuesto xxxviii
A una solución en DCM (3 ml) del compuesto xxxvii (370 mg, 0,43 mmol) se le añade reactivo de DMP (280 mg, 0,65 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 2 horas y después se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10%. Después de agitar durante 30 minutos, la reacción se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. La fase orgánica resultante se seca y se concentra al vacío, dando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc), proporcionando 180 mg (49% en 2 etapas) del compuesto xxxviii.
\vskip1.000000\baselineskip
222 
\newpage
Ejemplo Intermedio 38 - compuesto xxxx
El compuesto xxix (2,5 g, 5 mmol) se disuelve en 40 ml de DCM. A la solución se le añaden 5,1 ml de una solución 1 M de DCC en THF. A la mezcla se le añaden 1,08 g (3,53 mmol) del compuesto xxxix. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche.
223
La mezcla se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 100 ml, se lava secuencialmente con HCl 1 N, NaHCO_{3} y salmuera y después se purifica por cromatografía en columna (EtOAc al 80%/hexano), produciendo 2,59 g (95%) del compuesto xxxx,
224
Ejemplo Intermedio 39 - compuesto xxxxi
El compuesto xxxx (2,59 g, 3,35 mmol) se disuelve en 20 ml de MeOH y se añaden 4 ml de NaOH acuoso 1 N.. La mezcla se agita durante una noche y después se evapora por rotación, dejando un residuo. El residuo se disuelve en agua y se neutraliza con EtOAc, produciendo 2,49 g (\sim100%) del compuesto xxxxi,
225
Ejemplo Intermedio 40 - compuesto xxxxii
El compuesto xxxxi (847 mg, 1,16 mmol) y 724 mg (1,39 mmol) de PyBop se disuelven en 10 ml de DCM. A la solución se le añade el compuesto xiii (260 mg, 1,39 mmol) y después se sigue de la adición de DIPEA (209 \mul). La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. Después, la mezcla de reacción se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 100 ml y se lava dos veces con HCl 1 N, dos veces con NaHCO_{3} y tres veces con salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra. El residuo se purifica por cromatografía en columna (etanol al 5%/EtOAc), produciendo 930 mg (86%) del compuesto xxxxii,
226
Ejemplo Intermedio 41 - compuesto xxxxiii
El compuesto xxxxii (350 mg, 0,38 mmol) se disuelve en 10 ml de DCM y se añaden 242 mg (0,57 mmol) de reactivo de DMP. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante tres horas. La mezcla se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 50 ml y se lava tres veces con salmuera. El producto se purifica por cromatografía en columna (EtOAc al 100%), produciendo 180 mg (51%) del compuesto xxxxiii.
227 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 42 - compuesto xxxxv
Se suspende H-Val-Val-OH (5 g, 23 mmol) en 100 ml de DMF, se añade el compuesto xxxxiv
228
(8,3 g, 27,6 mmol) y después se añaden 6,2 ml (35,5 mmol) de DIPEA. La mezcla se agita a 40ºC durante dos días. El disolvente se retira a alto vacío y el residuo se disuelve en 100 ml de EtOAc y se lava tres veces con HCl 1 N y dos veces con salmuera. Se producen 9,14 g (99%) del compuesto xxxxv.
229 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 43 - compuesto xxxxvi
Se disuelven el compuesto xxxxv (2,8 g, 7 mmol) y 954 mg (7 mmol) de HOAt en 100 ml de DCM. Se añaden 7 ml de DCC 1 M/DCM. A la mezcla de reacción se le añade el compuesto xxxix (2,15 g) y la mezcla de reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se concentra a sequedad y el residuo se disuelve en EtOAc y se purifica por cromatografía en columna (EtOAc al 100%), produciendo 4,57 g (95%) del compuesto xxxxvi,
230 
\newpage
Ejemplo Intermedio 44 - compuesto xxxxvii
El compuesto xxxxvi (4,57 g, 6,65 mmol) se disuelve en 10 ml de TFA y 10 ml de DCM. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 4 horas. El disolvente se retira al vacío y el residuo se disuelve en 50:50 de acetonitrilo/agua y se liofiliza, produciendo el compuesto xxxxvii en forma de un polvo
\vskip1.000000\baselineskip
231 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 45 - compuesto xxxxviii
El compuesto xxxxvii (1 g, 1,59 mmol) y 990 mg (2,28 mmol) de PyBop se disuelven en 20 ml de DCM y se añaden 1,6 ml de metilamina 1 M en THF. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 100 ml y se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} y salmuera. El residuo se purifica por cromatografía en columna ultrarrápida (EtOH al 10%/EtOAc), produciendo 1 g (98%) del compuesto xxxxviii,
\vskip1.000000\baselineskip
232 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 46 - compuesto xxxxii
El compuesto xxxxviii (1 g, 1,55 mmol) se disuelve en 10 ml de MeOH y se añaden 2 ml de NaOH 1 N.. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se retira por evaporación. El residuo se disuelve en agua, se neutraliza y se extrae con EtOAc, produciendo 960 mg (98%) del compuesto xxxxix.
\vskip1.000000\baselineskip
233 
\newpage
Ejemplo Intermedio 47 - compuesto li
El compuesto xxxxix (315 mg, 0,5 mmol) y 312 mg (0,6 mmol) de PyBop se disuelven en 10 ml de DCM. Se añaden compuesto 1 (56 mg, 0,6 mmol) y 108 \mul de DIPEA. La mezcla
\vskip1.000000\baselineskip
234
se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche y se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 100 ml y se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} y salmuera. Se purifica por cromatografía en columna (EtOH al 15%/EtOAc), produciendo 400 mg (92%) del compuesto li,
235 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 48 - compuesto lii
El compuesto li (400 mg, 0,46 mmol) se disuelve en 10 ml de DCM y se añaden 292 mg (0,69 mmol) reactivo de DMP. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se retira por evaporación y el producto se purifica por RP-HPLC, produciendo 130 mg (32%) del compuesto lii,
236 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 49 - compuesto liii
El compuesto xxxxii (210 mg, 0,33 mmol) y 208 mg (0,4 mmol) de PyBop se disuelven en 10 ml de DCM. A la solución se le añade el compuesto xiii (154 mg, 0,83 mmol) seguido de la adición de DIPEA (72 \mul, 0,4 mmol). La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 100 ml, se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} y salmuera y después se purifica por cromatografía en columna ultrarrápida (EtOH al 10%/EtOAc), produciendo 250 mg (95%) del compuesto liii,
\vskip1.000000\baselineskip
237 
\newpage
Ejemplo Intermedio 50 - compuesto liv
El compuesto xxxxv (755 mg, 1,88 mmol) y 255 mg (1,88 mmol) de HOAt se disuelven en 20 ml de DCM y se añaden 1,88 ml de DCCDCM 1 M. A la mezcla de reacción se le añade el compuesto v (288 mg) y la mezcla de reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 2 horas. La mezcla se concentra a sequedad y el residuo se disuelve en EtOAc y se purifica por cromatografía en columna (EtOAc al 80%/Hexanos), produciendo 800 mg (90%) del compuesto liv,
238
Ejemplo Intermedio 51 - compuesto Iv
El compuesto liv (800 mg, 1,41 mmol) se disuelve en 10 ml de MeOH y se añaden 2 ml de NaOH. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. El disolvente se retira al vacío y el residuo se disuelve en agua y se neutraliza con 2 ml HCl 1 N. El producto se extrae con EtOAc. La evaporación del disolvente de extracción produce 760 mg (\sim100%) de lv,
239
Ejemplo Intermedio 52 - compuesto lvii
El compuesto lv (760 mg, 1,41 mmol) y 880 mg (1,69 mmol) de PyBop se disuelven en 5 ml de DCM. A la solución se le añade el compuesto lvi (530 mg, 2,12 mmol) y se añade
240
DIPEA. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 100 ml, se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} y salmuera y después se purifica por cromatografía en columna ultrarrápida (EtOAc al 100%), produciendo 870 mg (80%) del compuesto lvii,
241
Ejemplo Intermedio 53 - compuesto lviii
El compuesto lvii (350 mg, 0,45 mmol) se disuelve en 5 ml de TFA y 5 ml de DCM y la mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se retira por evaporación y el producto se purifica por RP-HPLC, produciendo 220 mg (69%) del compuesto lviii.
242 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 54 - compuesto lix
El compuesto viii (200 mg, 0,28 mmol) y 218 mg (0,42 mmol) de PyBop se disuelven en 5 ml de DCM. Se añade metilamina (0,28 ml de 2 M en THF). La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se diluye con EtOAc hasta alcanzar un volumen de 100 ml, se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} y salmuera y después se purifica por cromatografía en columna (EtOH al 15%/EtOAc), produciendo 168 mg (79%) de lix,
243 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 55 - compuesto lx
El compuesto lviii (200 mg, 0,26 mmol) se disuelve en 4 ml de DCM y se añaden 165 mg (0,39 mmol) de reactivo de DMP. La mezcla se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 3 horas. El disolvente se retira por evaporación. El residuo se disuelve en acetonitrilo al 30%/agua, se filtra y se purifica por RP-HPLC, produciendo 140 mg (70%) del compuesto lx,
244 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 56 - compuesto ii
Una solución en DCM (30 ml) y EtOH (30 ml) del compuesto i (4 g, 12,1 mmol), en atmósfera de N_{2} se enfría a -10ºC. Se añade NaBH_{4} (458 mg, 12,1 mmol) y la solución se agita a -10ºC durante 50 minutos. El análisis por TLC (EtOAc al 50%/Hexano) muestra la conversión total en una mancha de realización más lenta. La reacción se interrumpe cuidadosamente con hielo y después con una solución fría saturada de NH_{4}Cl (10 ml). La mezcla se vierte en DCM (300 ml). La fase orgánica se lava una vez con una solución saturada de NH_{4}Cl (60 ml) y dos veces con salmuera (60 ml). Después, la fase orgánica se separa, se seca sobre MgSO_{4} y se concentra al vacío, produciendo 3,5 g del compuesto ii (87%).
\newpage
Ejemplo Intermedio 57 - compuesto lxi
En un matraz de fondo redondo de 250 ml equipado con un globo de H_{2}, una solución etanólica (50 ml) del compuesto ii (3,5 g, 10,5 mmol) se somete a condiciones de hidrogenación convencionales [Pd(OH)_{2} al 20%/C (147 g, 2, mmol)] durante 5 horas aproximadamente a la temperatura ambiente. El catalizador se retira por filtración a través de Celite y se lava con DCM. Después, el disolvente se retira a presión reducida, produciendo 2 g (96%) del compuesto lxi.
245 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 58 - compuesto lxii
En una atmósfera inerte, una solución del compuesto lxi (200 mg, 1 mmol), el compuesto lxiii,
246 
\vskip1.000000\baselineskip
(233 mg, 1,1 mmol) y HOAt (1-hidroxi-7-azabenzotriazol) (156 mg, 1,15 mmol) en DMF anhidra (6 ml) se agita durante 20 minutos. Después, la temperatura se disminuye hasta 0ºC, seguido de la adición de DIC (0,18 ml, 1,15 mmol). La reacción se agita durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente. La solución se diluye con EtOAc y después se lava dos veces con HCl 1 N, dos veces con NaHCO_{3} acuoso saturado y con salmuera. La fase orgánica se separa, se seca sobre MgSO_{4} y el disolvente se retira a presión reducida. El residuo se limpia por cromatografía (gel de sílice: EtOAc al 70%/DCM), dando el compuesto lxii con un rendimiento del 45%.
247 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 59 - compuesto lxiv
Una solución del compuesto lxii (777 mg, 2 mmol) en dioxano (6 ml) y NaOH 0,5 M (6 ml) se agita durante 5 horas aproximadamente a la temperatura ambiente El examen por TLC (EtOAc al 100%) muestra la conversión completa en una mancha al principio. La reacción se enfría con un baño de hielo seguido de la adición de HCl 1 N (4 ml). Después, se añade NaCl sólido y toda la mezcla se extrae dos veces con EtOAc (2 x 150 ml). Después, los extractos orgánicos se combinan, se secan sobre MgSO_{4} y el disolvente se retira a presión reducida, dando el compuesto lxiv con un rendimiento del 92%.
248 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 60 - compuesto lxv
En una atmósfera inerte, una solución del compuesto x (203 mg, 0,58 mmol), el compuesto lxiv (276 mg, 0,775 mmol) y HOAt (1-hidroxi-7-azabenzotriazol) (126 mg, 0,93 mmol) en DMF anhidra (6 ml) se agita durante 20 minutos. Después, la temperatura se disminuye hasta 0ºC, seguido de la adición de DIC (0,14 ml, 0,93 mmol). La reacción se agita durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente. La solución se diluye con EtOAc y después se lava dos veces con HCl 1 N, dos veces con NaHCO_{3} acuoso saturado y salmuera. La fase orgánica se separa, se seca sobre MgSO_{4} y el disolvente se retira a presión reducida. El residuo se purifica por cromatografía (gel de sílice: de EtOAc al 50%/DCM a 80:19:1 de EtOAc/DCM/MeOH), dando el compuesto lxv con un rendimiento del 62%.
249
Ejemplo Intermedio 61 - compuesto lxvi
En una atmósfera inerte, a una solución del compuesto lxv (287 mg, 0,42 mmol) en DCM anhidro (15 ml) se le añade el reactivo CMP (605 mg, 1,43 mmol). La reacción se agita durante 2 horas aproximadamente a la temperatura ambiente. (Nota - La duplicación de la cantidad de reactivo de DMP y el tiempo de reacción se realiza para garantizar que los dos grupos alcohol se oxidan completamente para dar los grupos ceto correspondientes). El examen por TLC (gel de sílice: MeOH al 2%/EtOAc) muestra la completa conversión en el producto más rápido. La reacción se diluye con DCM (150 ml) y después se lava dos veces con una solución acuosa al 10% de sulfito sódico (2 x 50 ml), dos veces con NaHCO_{3} acuoso saturado y con salmuera. La fase orgánica se separa, se seca sobre MgSO_{4} y el disolvente se retira a presión reducida. El residuo se purifica por cromatografía (gel de sílice: de EtOAc al 50%/DCM a 80:19:1 de EtOAc/DCM/MeOH), dando el compuesto lxvi con un rendimiento del 77%.
250
Ejemplo Intermedio 62 - compuesto lxvii
A una solución en DCM (60 ml) de ácido L-3 fenil láctico (2 g, 12 mmol) se le añade PyBOP (7,5 g, 14,4 mmol). A esta solución se le añade una solución en DCM (20 ml) que contiene éster metílico de L-valina HCl (2,4 g, 14,4 mmol) y DIPEA (2,6 ml, 14,4 mmol). La mezcla de reacción resultante se agita durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente. En este momento, la reacción se diluye con EtOAc (30 ml) y se lava con NaHCO_{3} (30 ml) y salmuera (15 ml). La fase orgánica se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra. La purificación se realiza en EtOAc al 50%/Hex sobre gel de sílice, dando 2,97 g (89%) del compuesto lxvii,
251
Ejemplo Intermedio 63 - compuesto lxviii
El compuesto lxvii (2,97 g, 10,6 mmol) se recoge en DCM (50 ml) y se enfría con un baño de hielo. A esta solución se le añade TBSCl (2,1 g, 13,8 mmol) seguido de imidazol (0,94 g, 13,8 mmol). La solución resultante se agita durante una noche. Después, la reacción se diluye con EtOAc (50 ml) y se lava con NaHCO_{3} y salmuera. La fase orgánica se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra. La purificación se realiza en EtOAc al 20%/Hexano sobre gel de sílice, dando 3,79 g (90%) del compuesto lxviii,
252
Ejemplo Intermedio 64 - compuesto lxix
A una solución en metanol (50 ml) del compuesto lxviii (3,78 g, 9,6 mmol) se le añade NaOH acuoso 1 N (14,4 ml, 14,4 mmol). La solución resultante se agita durante una noche. El disolvente se retira parcialmente al vacío. Después, el pH de la mezcla de reacción se disminuye hasta 3 usando una solución acuosa 1 N de HCl. La solución se diluye con EtOAc y salmuera. El producto deseado se extrae con EtOAc (3 x 50 ml). Las fases orgánicas se combinan, se secan sobre Na_{2}SO_{4}, se filtran y se concentran, dando 3,5 g (96%) del compuesto lxix.
\vskip1.000000\baselineskip
253 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 65 - compuesto lxx
A una solución en DCM (15 ml) que contiene el compuesto lxix (1,1 g, 2,9 mmol) se le añade HOAt 20 (0,44 g, 3,2 mmol) seguido de una solución 1 M de DCC (13,2 ml, 3,2 mmol) en DCM. Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 20 minutos, se añade una solución en DCM (15 ml) del compuesto xxxix (970 mg, 3,2 mmol). Esta reacción se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. Después, la reacción se diluye con EtOAc (30 ml), se filtra a través de una capa de gel de sílice y se lava con HCl 0,1 N, NaHCO_{3} y salmuera. La fase orgánica se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra al vacío. La purificación se realiza en EtOAc al 50%/Hex sobre gel de sílice, dando 1,5 g (77%) del compuesto lxx,
\vskip1.000000\baselineskip
254 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 66 - compuesto lxxi
A una solución en metanol (30 ml) del compuesto xx (1,5 g, 2,4 mmol) se le añade NaOH acuoso 1 N (3,6 ml, 3,6 mmol). La solución resultante se agita durante una noche. En este momento, el disolvente se retira parcialmente y el pH de la mezcla de reacción se ajusta a 3 usando HCl acuoso 1 N. Después, la reacción se diluye con EtOAc (50 ml) y salmuera (20 ml). La fase acuosa se extrae con EtOAc (3 x 50 ml). Las fases orgánicas se combinan, se secan sobre Na_{2}SO_{4}, se filtran y se concentran, proporcionando 1,3 g (92%) del compuesto lxxi,
\vskip1.000000\baselineskip
255 
\newpage
Ejemplo Intermedio 67 - compuesto lxxii
A una solución de DCM (2 ml) que contiene el compuesto lxxi (180 mg, 0,28 mmol) se le añaden PyBOP (175 mg, 0,34 mmol) y DIPEA (0,06 ml, 0,34 mmol), seguido de una solución en DCM (3 ml) del compuesto x (150 mg, 0,41 mmol). La solución resultante se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. Después, la reacción se diluye con EtOAc (30 ml) y se lava con NaHCO_{3} y salmuera. La fase orgánica se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra. La purificación se realiza en EtOAc al 100% sobre gel de sílice, dando 270 mg (98%) del compuesto lxxii,
256
Ejemplo Intermedio 68 - compuesto lxxiii
A una solución en DCM (3 ml) del compuesto lxxii (270 mg, 0,27 mmol) se le añade reactivo de DMP (140 mg, 0,33 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 1,5 horas, la reacción se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10% (10 ml). La reacción se diluye con EtOAc (30 ml) y se agita durante 10 minutos. La fase orgánica se lava con NaHCO_{3} y salmuera. La fase orgánica se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra. La purificación se realiza en EtOAc al 60%/Hex., dando 150 mg (56%) del compuesto lxxiii,
257
Ejemplo Intermedio 69 - compuesto lxi
A una solución en etanol (50 ml) del compuesto ii (3,5 g, 10,5 mmol) se le añade, en una atmósfera de nitrógeno, Pd(OH)_{2}/C (1,47 g, contenido del Pd al 20%, 2,1 mmol). La reacción se somete a hidrogenación a una presión de 1 atm. Después de que se complete, los catalizadores se filtran a través de una capa de Celite y se lavan con diclorometano. Los filtrados se concentran al vacío, dando 2 g (96%) del compuesto lxi.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 70 - compuesto lxxiv
A una solución en DMF (60 ml) del compuesto vii (9,1 g, 28,2 mmol) se le añaden HOAt (4 g, 29,4 mmol) y 1,3-diisopropilcarbodiimida (3,7 g, 29,4 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 30 minutos, a la solución anterior se le añade una solución en DMF (10 ml) del compuesto lxi (5,1 g, 25,6 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. En este momento, los sólidos de color blanco se retiran por filtración. Los filtrados se concentran al vacío, dando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice, dando 9,5 g (67%) del compuesto lxxiv,
258
Ejemplo Intermedio 71 - compuesto lxxv
A una solución del compuesto lxxiv (1,5 g, 3 mmol) en THF anhidro (25 ml) se le añade EtiPr_{2}N (0,78 ml, 4,5 mmol) aproximadamente a la temperatura ambiente. La mezcla se enfría a 0ºC y se añade gota a gota MOMCl (1,5 ml, 19,7 mmol). La reacción se deja calentar a temperatura ambiente y se agita durante una noche. Después, la solución se diluye con éter y se lava con agua (3 times). Las fases acuosas se extraen adicionalmente con éter y todas las fases orgánicas se secan sobre MgSO_{4} antes de concentrarse, produciendo un aceite de color amarillo. El isómero deseado del compuesto lxxv se aísla por cromatografía sobre gel de sílice (5/2 de EtOAc/Hexanos
\vskip1.000000\baselineskip
259 
\vskip1.000000\baselineskip
con un rendimiento del 40% con separación limpia de los diastereómeros.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 72 - compuesto lxxvi
A una solución del compuesto lxxv (502 mg, 0,9 mmol) en EtOH (5 ml) se le añade gota a gota NaOH acuoso 2 N (0,9 ml, 1,8 mmol) a 0ºC. La reacción se deja calentar a temperatura ambiente y se agita durante una noche. Después de que se complete la saponificación, la solución se acidifica a pH 3 con resina ácida Dowex 50W8X-200. Los sólidos se retiran por filtración y el filtrado resultante se concentra al vacío, dando un residuo oleoso que se liofiliza, dando 370 mg (80%) del compuesto lxxvi.
\vskip1.000000\baselineskip
260 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 73 - compuesto lxxvii
Una solución en diclorometano (4 ml) del compuesto lxxvi (110 mg, 0,21 mmol) se trata con PyBOP (200 mg, 0,38 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 30 minutos, la mezcla de reacción se carga con una solución en THF (3,2 ml) del compuesto xiii (60 mg, 0,32 mmol), seguido de EtiPr_{2}N. Después de agitar durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente, la reacción se interrumpe con agua y se extrae con EtOAc. La fase orgánica resultante se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}, antes de concentrarse para dar un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc) produce 143 mg (100%) del compuesto lxxvii,
\vskip1.000000\baselineskip
261
Ejemplo Intermedio 74 - compuesto Ixxviii
A una solución en THF (50 ml) de H-Chg-OH 2 (5 g, 19,4 mmol) se le añaden HOBt (2,63 g, 19,4 mmol) y EDCl (3,72 g, 19,4 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 20 minutos, a la solución anterior se le añade una solución en THF (19 ml) y DMF (10 ml) que contiene clorhidrato de éster metílico de terc-L-Leucina (19,4 mmol) y DIPEA (6,75 ml, 38,8 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. El tratamiento acuoso convencional y la cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 15 - 20%/Hexanos) producen 2,27 g (30%) del compuesto lxxviii.
262
Ejemplo Intermedio 75 - compuesto lxxix
A una solución en THF (12 ml) del compuesto lxxviii (2,27 g, 5,91 mmol) se le añade una solución 4 N de HCl en dioxano (7,38 ml, 29,5 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. En este momento, el disolvente se retira a presión reducida, produciendo el compuesto Ixxix que se usa directamente para la siguiente reacción.
263
Ejemplo Intermedio 76 - compuesto lxxx
Una solución en THF del compuesto lxxix (5,9 mmol) se añade a una solución en THF (20 ml) que contiene ácido 2-pirazinacarboxílico (878 mg, 7,08 mmol), HOBt (957 mg, 7,08 mmol) y EDCl (1,36 g, 7,08 mmol). Después, a la mezcla resultante se le añade DIPEA (2,05 ml, 11,8 mmol). La reacción se agita durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente y después se interrumpe con agua. La mezcla de reacción se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera y se concentra al vacío, proporcionando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 40-50%/Hexanos), proporcionando 1 g (36%) del compuesto lxxx,
264
Ejemplo Intermedio 77 - compuesto lxxxi
A una solución en metanol (20 ml) del compuesto Ixxx (1 g, 256 mmol) se le añade NaOH 2 N 3,2 ml, 6,4 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. En este momento, la reacción se acidifica a pH 3 usando HCl 5 N.. La reacción se diluye con EtOAc (75 ml) y se lava con agua y salmuera. La fase orgánica obtenida de esta manera se seca y se concentra al vacío, dando un residuo que se disuelve en 1:1 de CH_{3}CN/H_{2}O para la liofilización. Se obtiene un total de \sim1 g (100%) del compuesto lxxxi.
265
Ejemplo Intermedio 78 - compuesto Ixxxii
Una solución en diclorometano (10 ml) del compuesto lxxxi (2,56 mmol) se trata con HOAt (348 mg, 2,56 mmol) y DCC (2,56 ml, 1 M, 2,56 mmol). Después de agitar durante 30 minutos, la mezcla de reacción se trata con una solución en THF (5 ml) del compuesto v (2,56 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche, los sólidos de color blanco (urea) se retiran por filtración. Los filtrados se concentran al vacío, dando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice, proporcionando 1,4 g (100%) del compuesto Ixxxii.
\vskip1.000000\baselineskip
266 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 79 - compuesto lxxxiii
Una solución en etanol (15 ml) del compuesto lxxxii (1,4 g, 2,58 mmol) se trata con NaOH 2 N (2,58 ml, 5,17 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche, la mezcla de reacción se acidifica a pH 3 con resina ácida. Los sólidos se retiran por filtración. Los filtrados resultantes se concentran al vacío, dando un residuo que se liofiliza, dando 1,32 g (\sim100%) del compuesto Ixxxiii,
\vskip1.000000\baselineskip
267 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 80 - compuesto lxxxiv
Una solución en diclorometano (15 ml) del compuesto Ixxxiii (360 mg, 0,7 mmol) se trata con PyBOP (582 mg, 1,12 mmol). Después de agitar aproximadamente a la temperatura ambiente durante 20 minutos, la mezcla de reacción se trata con una solución en THF (10 ml) del compuesto xiii (195,6 mg, 1,05 mmol), seguido de DIPEA (0,25 ml, 1,40 mmol). Después de agitar durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente, la reacción se interrumpe con agua y se extrae con EtOAc. La fase orgánica resultante se lava con salmuera, se seca y se concentra al vacío, dando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 3%/EtOAc), produciendo 420 mg (88%) del compuesto Ixxxiv,
\vskip1.000000\baselineskip
268 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 81 - compuesto ii'''
Una mezcla de diclorometano anhidro y éter (20 ml:20 ml) se enfría a -78ºC en atmósfera de N_{2} (g). A la solución se le añade TiCl_{4} (1 M en diclorometano, 10 ml, 10 mmol) y después se añade MeLi (1,4 M en éter, 7,1 ml, 10 mmol) con agitación durante 30 minutos más a -78ºC. A la mezcla se le añade gota a gota una solución del compuesto i (2 g, 6 mmol) en 10 ml de diclorometano a la misma temperatura durante 15 minutos. La solución se calienta lentamente a -40ºC durante 10 minutos y después se agita a 0ºC durante 2 horas. La reacción se interrumpe vertiendo la mezcla en una mezcla de agua/éter (1:1) y después las fases se dejan separar. La fase acuosa se extrae adicionalmente dos veces con éter. Todas las fases orgánicas se lavan con agua y salmuera y se secan sobre MgSO_{4} antes de concentrarse para dar un aceite de color amarillo. El compuesto ii''' deseado se aísla por cromatografía sobre gel de sílice (2/1 de EtOAc/Hexanos) con un rendimiento del 83%
269 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 82 - compuesto lxi'
Al compuesto ii''' (1,7 g, 5 mmol) se le añade Pd al 10% en peso sobre C (0,53 g, 0,5 mmol), seguido de la adición de MeOH (17 ml). Se pasa gas hidrógeno a través de la mezcla de reacción y el gas hidrógeno se mantiene para la reacción a 1 atm durante una noche. Después, la mezcla de reacción se filtra y se concentra, dando 929 mg (87%) del compuesto lxi' en forma de un aceite incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
270 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 83 - compuesto lxxxv
A una solución en THF (16 ml) del compuesto xxii (1 g, 3 mmol) se le añade aproximadamente a la temperatura ambiente HOAt (0,41 g, 3 mmol) seguido de una solución 1 M en DCC de diclorometano (3 ml, 3 mmol). Después de agitar durante 30 minutos aproximadamente a la temperatura ambiente, al ácido activado con HOAt anterior se le añade una solución en diclorometano (6 ml) del compuesto lxi'. La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche. En este momento, la reacción se filtra a través de Celite. El filtrado se diluye con EtOAc (120 ml) y se lava con agua y después con salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra, dando un aceite de color amarillo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 100%), produciendo 1 g (65%) del compuesto lxxxv.
271 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 84 - compuesto Ixxxvi
A una solución en etanol (8 ml) del compuesto lxxxv (920 mg, 1,7 mmol) se le añade una solución acuosa 2 N de NaOH (1,7 m, 3,4 mmol). La reacción se agita durante una noche aproximadamente a la temperatura ambiente y después se acidifica a pH 3 con resina ácida Dowex. Los sólidos se retiran por filtración y el filtrado se concentra, dando un aceite incoloro, que se disuelve de nuevo en 1:1 de CH_{3}CN/H_{2}O y se liofiliza, proporcionando 800 mg (93%) del compuesto Ixxxvi. El análisis por HPLC muestra un solo pico de producto.
272 
\newpage
Ejemplo Intermedio 85 - compuesto Ixxxvii
A una solución en diclorometano (4 ml) del compuesto Ixxxvi (150 mg, 0,3 mmol) se le añade PyBOP (250 mg, 0,47 mmol). La solución se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, a esta solución se le añade una solución en THF (4,5 ml) del compuesto xiii (84 mg, 0,45 mmol) seguido de EtiPr_{2}N (0,1 ml, 0,6 mmol). La reacción se agita aproximadamente a la temperatura ambiente durante una noche y después se interrumpe con agua (25 ml) durante 30 minutos. Después, la mezcla se extrae con EtOAc. La fase orgánica resultante se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}, antes de concentrarse para dar un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc) produce 200 mg (100%) del compuesto lxxxvii,
\vskip1.000000\baselineskip
273 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 86 - compuesto lxxxix
El compuesto lxxxviii, N-Cbz-L-Valina, (2,5 g, 9,9 mmol) se recoge en THF (30 ml).
\vskip1.000000\baselineskip
274 
\vskip1.000000\baselineskip
Se añaden EDCl (2,29 g, 11,9 mmol) y HOBT (1,62 g, 11,9 mmol) y la mezcla se agita durante cinco minutos. Se añade clorhidrato de éster metílico de L-terc-Leucina (2,17 g, 11,9 mmol) en THF (23,9 ml) seguido de DIPEA (2,1 ml). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se diluye con acetato de etilo y se lava con HCl 1 N, bicarbonato sódico saturado y salmuera. La fase orgánica se seca sobre sulfato sódico, se filtra y se concentra. El residuo concentrado se purifica en acetato de etilo al 25%/hexano, produciendo 1,1 g (29%) del compuesto lxxxix,
\vskip1.000000\baselineskip
275 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 87 - compuesto lxxxx
El compuesto Ixxxix se hidroliza en condiciones convencionales usando alcohol metílico (0,3 M) y NaOH 1 N (1,5 equiv.), produciendo 1,03 g (95%) del compuesto lxxxx,
\vskip1.000000\baselineskip
276
Ejemplo Intermedio 88 - compuesto lxxxxi
El compuesto lxxxx (385 mg, 1,06 mmol) se recoge en diclorometano (3 ml). Se añade DCC (1,4 mmol) seguido de HOAt (190 mg, 1,4 mmol). Después, se añade el compuesto v (260 mg, 1,4 mmol) en diclorometano (3 ml). La mezcla resultante se agita durante una noche en atmósfera de nitrógeno. La reacción se diluye con acetato de etilo, se filtra a través de gel de sílice y se concentra. El residuo se purifica en acetato de etilo al 50%/hexano, produciendo 440 mg (80%) del compuesto lxxxxi,
277
Ejemplo Intermedio 89 - compuesto lxxxxii
El compuesto lxxxxi se hidroliza en condiciones convencionales usando alcohol etílico (0,3 M) y NaOH 1 N (1,5 equiv.), produciendo 390 mg del compuesto lxxxxii,
278
Ejemplo Intermedio 90 - compuesto lxxxxiii
El compuesto lxxxxii (350 mg, 0,7 mmol) se recoge en diclorometano (3 ml). Se añade PyBOP 15 (480 mg, 0,91 mmol) seguido del compuesto xiii (170 mg, 0,91 mmol). Se añade DIPEA (0,16 ml, 0,91 mmol) y mezcla de reacción se agita durante una noche. La mezcla de reacción se concentra y se purifica en acetato de etilo al 100%, produciendo 420 mg (90%) del compuesto lxxxxiii,
279
Ejemplo Intermedio 91 - compuesto lxxxxiv
El compuesto lxxxxiii se hidrogena usando Pd al 10%/C (1% en mol) en alcohol metílico en atmósfera de hidrógeno, produciendo 335 mg (100%) del compuesto lxxxxiv.
280
Ejemplo Intermedio 92 - compuesto lxxxxv
Se recoge 1H-tetrazol-5-acetato de etilo (5 g, 32 mmol) en cloroformo (80 ml). Se añade ácido tricloroacético (12,03 g, 73,65 mmol) seguido de alfa metil estireno (3,78 g, 32 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche. Al día siguiente, la solución se diluye con acetato de etilo y se lava con KOH al 10% y salmuera. La fase orgánica se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra, produciendo 8 g (96%) del tetrazol-5-acetato de etilo N-protegido correspondiente. Este material se somete a condiciones de hidrólisis convencionales usando alcohol etílico (0,3 M) y NaOH 1 N (3 equiv.), produciendo 7 g (99%) del compuesto lxxxxv.
281
Ejemplo Intermedio 93 - compuesto lxxxxvi
El compuesto lxxxxv (3,62 g, 14,7 mmol) se recoge en diclorometano (50 ml). Se añaden EDCl (4,32 g, 22,1 mmol) y DIPEA (5,1 ml, 29,4 mmol) y se agita durante cinco minutos. Se añade N-hidroxi succinimida (3,38 g, 29,4 mmol) y se agita durante tres horas. La reacción se diluye con diclorometano y se lava tres veces con agua. La fase orgánica se seca sobre sulfato sódico, se filtra y se concentra, produciendo 3,66 g (73%) del compuesto lxxxxvi,
282 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 94 - compuesto Ixxxvii
El compuesto lxxxxiv (335 mg, 0,62 mmol) y el compuesto lxxxxvi (343 mg, 1 mmol) se recogen en diclorometano (6 ml). Se añade DIPEA (0,17 ml, 1 mmol) y mezcla de reacción se agita durante una noche. La reacción se diluye con acetato de etilo, se lava con bicarbonato sódico saturado y salmuera y se concentra. El residuo se purifica en alcohol etílico al 5%/acetato de etilo, dando 80 mg (16%) del compuesto lxxxxvii,
283 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 95 - compuesto lxxxxviii
El compuesto lxxxxvii (80 mg, 0,11 mmol) se recoge en diclorometano (3 ml). Se añade reactivo de DMP (55 mg, 0,13 mmol) y se agita durante una hora. La mezcla de reacción se diluye con acetato de etilo y se interrumpe con una solución al 10% de sulfito sódico. La fase orgánica se lava con bicarbonato sódico saturado y salmuera. La fase orgánica se concentra y el residuo resultante se purifica en acetato de etilo al 100%, produciendo 40 mg (48%) del compuesto lxxxxviii,
284 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 96 - compuesto xxxix
Se prepara el compuesto ic, éster metílico de N-Cbz-4-Hidroxi Pro, (2,1 g, 7,9 mmol)
285
con rendimiento cuantitativo a partir del compuesto c, N-Cbz-4-hidroxi Pro), se disuelve en DCM
286
(25 ml), a la solución se le añaden CDI (1,54 g, 9,5 mmol) y DIPEA (1,7 ml, 9,5 mmol) y se agita durante 10 minutos. A la mezcla de reacción se le añade gota a gota 1,2,3,4-tetrahidroisoquinolina (TIQ) (1,2 ml, 9,5 mmol) y se agita durante cinco horas. La fase orgánica se lava con agua, HCl 1 N y salmuera. Después de la concentración de las fases orgánicas, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 40%/Hexanos, produciendo el compuesto ci, éster metílico de N-Cbz-4- TIQcarboniloxi-Pro, (2,5 g, 75%).
287
El compuesto ci (2,5 g, 5,9 mmol) se disuelve en MeOH (75 ml). La solución se lava abundantemente con N_{2} y se añade Pd/C (al 10%, 300 mg). La mezcla de reacción se lava abundantemente con H_{2} y se agita durante una noche. La mezcla de reacción se filtra a través de Celite y se concentra, produciendo el compuesto xxxix, 4-(TIQ-carboniloxi)-Pro, éster metílico, (1,49 g, 83%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 97 - compuesto vii
El compuesto cii, éster metílico de N-pirazin-2-ilcarbonil-Val-Val, (10,9 g, 32,4 mmol)
288
se disuelve en THF (80 ml) y después se añade NaOH acuoso (48,6 ml, 48,6 mmol). La mezcla resultante se agita 48 horas y después se añade más cantidad de NaOH (16,3 ml, 16,3 mmol) y la mezcla se calienta a 40ºC durante tres horas. Después, el pH de la mezcla de reacción se disminuye hasta 3 y la fase acuosa se extrae con EtOAc y después se concentra, produciendo el compuesto vii en bruto, ácido N-pirazin-2-ilcarbonil-Val-Val (10,6 g, 100%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 98 - compuesto ciii
El compuesto cii (4,1 g, 12,7 mmol) se disuelve en DCM (20 ml). A esta solución se le añaden HOAt (1,73 g, 12,7 mmol) y DCC (12,7 mmol) y la solución se agita durante una hora. A la mezcla de reacción se le añade el compuesto xxxix (3,22 g, 10,6 mmol) en DCM (10 ml). La mezcla resultante se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se filtra a través de gel de sílice y se concentra. El residuo resultante se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (gradiente de EtOAc del 50% al 80%/Hexanos), produciendo el compuesto ciii, éster metílico de N-pirazin-2-ilcarbonil-Val-Val-4-(TIQ carboniloxi)-Pro, (5,27 g, 81,7%).
289
Ejemplo Intermedio 99 - compuesto civ
El compuesto ciii (650 mg, 1,29 mmol) se disuelve en THF (5 ml). A la solución se le añade NaOH acuoso (1,42 ml, 1,42 mmol) y después se agita durante una noche. El pH de la solución se disminuye hasta 3 y la fase orgánica se aísla y se concentra, produciendo un residuo. El residuo se purifica usando HPLC de fase inversa en acetonitrilo/agua, produciendo el compuesto civ, ácido N-pirazin-2-ilcarbonil-Val-Val-4-(TIQ carboniloxi)-Pro, (600 mg, 95%).
290 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 100 - compuesto cv
Se combinan N-Boc-L-terc-Leucina (2,3 g, 10 mmol) y clorhidrato de éster metílico de L-terc-Leucina (2 g, 11 mmol) en DMF (30 ml). Después, a la solución se le añade HOAt (1,6 g, 11,5 mmol). La mezcla resultante se agita durante 20 minutos en atmósfera de N_{2} y después se disminuye su temperatura hasta 0ºC, después de lo cual se añaden DIC (1,8 ml, 11,5 mmol) y 2,4,6-colidina (1,45 ml, 11 mmol). La solución resultante se agita durante una noche con calentamiento a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y la fase orgánica se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con un gradiente de EtOAc al 20% - 30%/hexanos, produciendo el compuesto cv (3,3 g, 92%).
291 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 101 - compuesto cvi
El compuesto cv (3,3 g, 9,2 mmol) se hidroliza usando dioxano (40 ml) y NaOH 0,5 N (37 ml, 18,4 mmol), produciendo el compuesto cvi (2,9 g, 92%).
292 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 102 - compuesto cvii
El compuesto cvi (2 g, 5,8 mmol) y el compuesto v (1 g, 5,5 mmol) se disuelven en DMF (20 ml). Después, a la solución se le añaden HOAt (832 mg, 6,6 mmol) y DIC (1,1 ml, 6,6 mmol). La solución resultante se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y la fase orgánica se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con un gradiente de EtOAc al 20%-30%/hexanos, produciendo el compuesto cvii (2,4 g, 81%).
293 
\newpage
Ejemplo Intermedio 103 - compuesto cviii
El compuesto cvii (2,4 g, 4,72 mmol) se disuelve en DCM (10 ml). A la solución se le añade TFA (10 ml). La solución resultante se agita durante 4 horas. La mezcla de reacción se concentra, se disuelve en EtOAc y después la fase orgánica se lava con NaOH 1 N y salmuera. La fase orgánica se concentra, produciendo el compuesto cviii (1,084 g, 56,1%).
294 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 104 - compuesto cix
Se disuelven ácido 2-pirazinacarboxílico (181 mg, 146 mmol) y el compuesto cviii (541 mg, 1,325 mmol) en DMF (15 ml). A la solución se le añaden HOAt (207 mg, 1,52 mmol) y DIC (0,24 ml, 1,52 mmol). La solución resultante se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y la fase orgánica se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con un gradiente de EtOAc al 20%-30%-35%/hexanos, produciendo el compuesto cix (430 mg, 63%).
295 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 105 - compuesto cx
El compuesto cix se hidroliza usando EtOH (7 ml) y NaOH 1 N (4,7 ml, 4,7 mmol), produciendo el compuesto cx (700 mg, 9 1,6%).
296 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 106 - compuesto cxi
El compuesto cx (690 mg, 1,42 mmol) se disuelve en DCM (9 ml). Después, a la solución se le añade PyBOP (890 mg, 1,7 mmol), seguido de la adición de Compuesto xiii' (320 mg,
297
1,7 mmol). A la mezcla resultante se le añade DIPEA (0,3 ml, 1,7 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. Después. la mezcla de reacción se diluye con EtOAc y se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 100%, produciendo el compuesto cxi (490 mg, 52,7%).
298 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 107 - compuesto cxiv
El compuesto cxii (1,2 g, 3,06 mmol) se disuelve en MeOH (12 ml). Después del lavado abundante y minucioso
299
con N_{2}, se añade Pd(OH)_{2} al 10% en peso sobre carbono (0,6 g) y la mezcla se hidrogena durante una noche, después de lo cual se muestra la mezcla de reacción completa por TLC (EtOAc al 30%/hexanos). La solución se aísla del material sólido por filtración y se concentra, dando el compuesto desprotegido correspondiente exiii en forma de un aceite incoloro (110%)
300
que se usa en la siguiente etapa sin purificación adicional.
Se disuelve ácido 2-pirazinacarboxílico (400 mg, 3,2 mmol, 1,1 equiv.) en DCM/THF (4 ml/4 ml) y después se añaden HOAt (440 mg, 3,2 mmol) y DCC (343 ml, 1 M en DCM). Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 minutos, el compuesto cxiii (0,96 g, 3,2 mmol) obtenido previamente se disuelve en DCM (6,4 ml) y se añade a la mezcla activada. Después de agitar durante una noche a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtra a través de Celite y el compuesto cxiv se purifica por cromatografía en columna (EtOAc al 30%/hexanos)
301
produciendo un sólido de color blanco (0,8 g, 80%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 108 - compuesto cxv
El compuesto cxiv (0,8 g, 2,2 mmol) se disuelve en MeOH (10 ml) y después se añade NaOH 2 N (ac.) (3,3 ml, 6,6 mmol). La solución se agita a temperatura ambiente durante una noche, después de lo cual se indica que la mezcla de reacción se ha completado por TLC (EtOAc al 50%/hexanos). Se realiza la acidificación a pH 3 con HCl 5 N y se diluye con EtOAc, seguido de extracción de la fase orgánica. La fase orgánica extraída se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}, produciendo el compuesto cxv (0,74, 95%) después de la concentración.
302
Ejemplo Intermedio 109 - compuesto cxvi
A una solución en DCM (6 ml) del compuesto cxv (0,74 g, 2,1 mmol) a temperatura ambiente se le añade HOAt (290 mg, 2,1 mmol), seguido de la adición de una solución 1 M de DCC en DCM (2,2 ml, 2,2 mmol). Después de agitar durante 30 minutos a temperatura ambiente, al ácido activado con HOAt anterior se le añade una solución en THF (10,5 ml, 0,2 M) del compuesto v (2,1 mmol).
La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche. En este momento, la mezcla de reacción se filtra a través de celite. El filtrado se diluye con EtOAc (120 ml) y se lava con agua y salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra, dando un aceite de color amarillo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 50%/hexanos), produciendo el compuesto cxvi (0,714 g, 66%).
303 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 110 - compuesto cxvii
A una solución en EtOH del compuesto cxvi (0,7 g, 1,4 mmol) se le añade una solución acuosa 2 N de NaOH (2 ml, 4 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche a temperatura ambiente, después se acidifica a pH 3 con HCl 5 N y se diluye con EtOAc, seguido de extracción de la fase orgánica. La fase orgánica extraída se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}, produciendo el compuesto cxvii (95%) después de la concentración.
304 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 111 - compuesto cxviii
A una solución en DCM/THF (10 ml/2 ml) del compuesto cvii (300 mg, 0,6 mmol) se le añade PyBOP (416 mg, 0,8 mmol). La solución se agita a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, a esta solución se le añade el compuesto xxxvi' (200 mg, 0,8 mmol), seguido de DIPEA
305
(0,22 ml, 1,2 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche y después se interrumpe con agua (25 ml) durante 30 minutos. Después, la mezcla se extrae con EtOAc. La fase orgánica resultante se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}, antes de concentrarse, produciendo un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 3-5%/EtOAc) produce el compuesto cxviii (335 mg, 76%).
306
Ejemplo Intermedio 112 - compuesto cxix
A una solución en DCM (10 ml) del compuesto cxvii (340 mg, 0,6 mmol) se le añade PyBOP (470 mg, 0,9 mmol). La solución se agita a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, a esta solución se le añade el compuesto xiii' (170 mg, 0,9 mmol), seguido de DIPEA (0,24 ml, 1,2 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche y después se interrumpe con agua (25 ml) durante 30 minutos. Después, la mezcla se extrae con EtOAc. La fase orgánica resultante se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}, antes de concentrarse para dar un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 3-5%/EtOAc) produce el compuesto cxix (164 mg, 36%).
307 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 113 - compuesto xx
Se disuelve N-Cbz-L-Valina (6,28 g, 25 mmol) en DCM (30 ml). A esta solución se le añaden HOBT (3,38 g, 25 mmol) y DCC (25 ml, solución 1 M) y se agita durante cinco minutos. A esta mezcla se le añade clorhidrato de éster metílico de L-terc-Leucina metil (25 ml, solución 1 M) y se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} saturado y salmuera. La fase orgánica se seca sobre Na_{2}SO_{4}, se filtra y se concentra. El residuo se purifica cromatográficamente con EtOAc al 20%-30%/hexanos, produciendo el compuesto xx (2,96 g, 31%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 114 - compuesto xxi
El compuesto xx (2,95 g, 7,8 mmol) se hidrogena usando Pd al 10%/C (800 mg) en MeOH (40 ml) en atmósfera de H_{2}, produciendo la amina libre correspondiente que se muestra a continuación (1,9 g, 100%).
308
Se disuelve ácido 2-pirazina-carboxílico (970 mg, 7,8 mmol) en DCM (20 ml). A esta solución se le añade PyBOP (4,06 g, 7,8 mmol). A la solución se le añade la amina libre (1,9 g, 7,8 mmol) en DCM (15 ml) y después se añade DIPEA (1,36 ml, 7,8 mmol). La mezcla resultante se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo se purifica cromatográficamente con EtOAc al 30%-40%/Hexanos, produciendo el compuesto xxi (2,07 g, 75,8%).
309 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 115 - compuesto xxii
El compuesto xxi se hidroliza usando MeOH (20 ml) y NaOH 1 N (3-equiv.), produciendo el compuesto xxii (1,82 g, 93,9%).
310
Ejemplo Intermedio 116 - compuesto xxiii
El compuesto xxii (895 mg, 2,66 mmol) se disuelve en DCM (10 ml). A la solución se le añade DCC (3,2 mmol) y después se añade HOAt (435 mg, 3,2 mmol). Después, se añade el compuesto v (3,2 mmol) en THF (16 ml). La mezcla resultante se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc, se filtra a través de gel de sílice y se concentra. El residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 50%/hexanos, produciendo el compuesto xxiii (730 mg, 54,8%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 117 - compuesto xxiv
El compuesto xxiii se hidroliza usando EtOH (5 ml) y NaOH 1 N (1,5 equiv.) para producir el compuesto xxiv (690 mg, 100%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 118 - compuesto cxx
El compuesto xxiv (245 mg, 0,52 mmol) se disuelve en DCM (3 ml). A la solución se le añade PyBOP (330 mg, 0,62 mmol) y después se añade el compuesto xiii' (120 mg, 0,62 mmol). A la mezcla resultante se le añade DIPEA (0,11 ml, 0,62 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo se purifica cromatográficamente con EtOH al 5%/EtOAc, produciendo el compuesto cxx (220 mg, 60%).
311 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 119 - compuesto xiii'
Se disuelve Boc-NVA-OH (24,96 g, 114,9 mmol) en THF (200 ml). A la solución se le añade en porciones CDI (22,35,
312
137,8 mmol) y la solución se agita durante 30 minutos. Se disuelve clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (12,33 g, 126,4 mmol) en DMF (50 ml) y después a la solución se le añade DIPEA (22 ml, 126,4 mmol). La solución de DMP se deja en agitación a temperatura ambiente durante 20 minutos y después se añade a una solución de THF. La mezcla resultante se agita durante el fin de semana en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se concentra al vacío hasta alcanzar un volumen total de 100 ml. Esta fase orgánica se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} saturado y salmuera. La fase orgánica se concentra, produciendo el compuesto cxxi en bruto (25,3 g).
313
Se añade LAH (107,3 mmol) a un matraz de fondo redondo seco de 1 l en atmósfera de N_{2} en una solución 1 M de Et_{2}O. Esta solución se disminuye hasta 0ºC y después se añade gota a gota el compuesto cxxi (97,5 mmol) en Et_{2}O (100 ml). Después de que se complete la adición, la mezcla resultante se agita durante 30 minutos. La mezcla de reacción se inactiva a 0ºC mediante la adición lenta de EtOAc (50 ml), seguido de la adición lenta de una solución al 5% de KHSO (50 ml). Esta mezcla se agita durante 30 minutos. La fase orgánica se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} saturado y salmuera. La fase orgánica se concentra, produciendo el compuesto cxxii en bruto (22,28 g).
314
El compuesto cxxii se disuelve en MeOH (100 ml). Se disuelve Na_{2}S_{2}O_{4} (16,82 g, 96,6 mmol) en agua (100 ml) y después se añade a la solución del compuesto cxxii a 0ºC. Esta mezcla se almacena en el frigorífico (5ºC) durante una noche. A la mezcla de reacción se le añade KCN (7,53 g, 115,9 mmol) en agua (100 ml) y se agita durante 1,5 horas a temperatura ambiente. El compuesto se extrae con EtOAc (3 x 100 ml). La fase orgánica se lava con salmuera (3 x 50 ml), se seca sobre MgSO_{4}, se filtra y se concentra, produciendo el compuesto cxxiii en bruto (15,86 g).
315
El compuesto cxxiii (15,86 g) se disuelve en dioxano (100 ml). A esta solución se le añade HCl concentrado (al 37%, 100 ml) seguido de anisol (10 ml) y se establece calentamiento a reflujo (110ºC). La reacción se agita durante 1,5 horas. Cuando la mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y el disolvente se retira al vacío, produciendo una pasta seca. El residuo se seca durante una noche a alto vacío, produciendo el compuesto cxxiv en bruto.
316
El compuesto cxxiv (69,6 mmol) se disuelve en DMF (60 ml) y THF (60 ml). A la mezcla se le añade N-(benciloxicarboniloxi)succinimida (17,33 g, 69,6 mmol), seguido de la adición de DIPEA (12,1 ml, 69,6 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla se concentra a un volumen reducido (50 ml) y se diluye con EtOAc. La fase orgánica se lava con HCl 0,1 N (2 x 100 ml) y salmuera, produciendo el compuesto cxxv (17,5 g, 54,2% en cinco etapas).
317
El compuesto cxxv (5,66 g, 20,14 mmol) se disuelve en DCM (60 ml). A esta solución se le añaden PyBOP (12,57 g, 24,2 mmol) y HOBT (3,27 g, 24,2 mmol) y se agita durante cinco minutos. La mezcla resultante se disminuye hasta 0ºC y después se añaden ciclopropilamina (1,67 ml, 24,2 mmol) y DIPEA (4,2 ml, 24,2 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche con calentamiento a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lava con HCl 0,1 N, NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después, la fase orgánica se concentra y se purifica cromatográficamente usando EtOAc al 70%/Hexanos, produciendo el compuesto cxxi (3,18 g, 49,3%).
318
El compuesto cxxvi (3,18 g, 9,94 mmol) se hidrogena usando Pd al 10%/C (600 mg) en MeOH (70 ml). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de H_{2}, se filtra a través de celite y se concentra, produciendo el compuesto xiii' en bruto (2,1 g, 100%).
319 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 120 - compuesto cxxvii
Se disuelve N-Cbz-L-Ciclohexilglicina (3 g, 10,3 mmol) en DCM (36 ml). A esta solución se le añaden HOAt (1,5 g, 11,28 mmol) y DCC (11,28 ml, 11,28 mmol) y se agita durante cinco minutos. A esta mezcla se le añade clorhidrato de éster metílico de L-terc-Leucina (103 ml, solución 1 M, 10,3 mmol) y se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se filtra a través de celite, se aclara con EtOAc y se concentra para dar un residuo que se purifica cromatográficamente usando EtOAc al 20% - 30%/hexanos, produciendo el compuesto cxxvii (2,2 g, 52%).
320 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 121 - compuesto lxxix'
El compuesto cxxvii (2,2 g, 5,2 mmol) se hidrogena usando Pd(OH)_{2} al 20%/C (1 g) en MeOH (15 ml) en atmósfera de H_{2}, produciendo el compuesto lxxix' (1,4 g, 98%).
321 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 122 - compuesto lxxx
Se disuelve ácido 2-pirazinacarboxílico (360 mg, 2,9 mmol) en DCM (10 ml). A la solución se le añade PyBOP (1,81 g, 3,5 mmol). Después, a la solución se le añade el compuesto lxxix' (825 mg, 2,9 mmol) en THF (10 ml), seguido de la adición de DIPEA (0,5 ml, 2,9 mmol). La mezcla resultante se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. El residuo resultante de la concentración de la fase orgánica se purifica cromatográficamente con EtOAc al 30%/Hexanos, produciendo el compuesto lxxx (780 mg, 69%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 123 - compuesto lxxxi
El compuesto lxxx se hidroliza usando MeOH (10 ml) y NaOH 1 N (3 equiv.), produciendo el compuesto lxxxi (615 mg, 81,8%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 124 - compuesto lxxxii
El compuesto lxxxi (610 mg, 1,6 mmol) se disuelve en DCM (10 ml). Después, a la solución se le añade DCC (1,94 ml, 1,94 mmol), seguido de la adición de HOAt (270 mg, 1,94 mmol). Después, a la solución se le añade el compuesto v (1,94 mmol) en THF (19,4 ml). La mezcla resultante se agita durante dos noches en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc, se filtra a través de gel de sílice y se concentra. El residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 40%/hexanos, produciendo el compuesto lxxxii (450 mg, 83,4%).
\newpage
Ejemplo Intermedio 125 - compuesto lxxxiii
El compuesto lxxxi se hidroliza usando EtOH (10 ml) y NaOH 1 N (3 equiv.) para producir el compuesto lxxxiii (650 mg, 99%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 126 - compuesto cxxviii
El compuesto lxxxiii (400 mg, 0,78 mmol) se disuelve en DCM (5 ml). A la solución se le añade PyBOP (610 mg, 1,2 mmol), seguido del compuesto xiii' (230 mg, 1,2 mmol). A la mezcla resultante se le añade DIPEA (0,2 ml, 1,2 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo se purifica cromatográficamente con un gradiente de EtOAc al 100% a EtOH al 5%/EtOAc, produciendo el compuesto cxxviii (365 mg, 68,7%).
322
Ejemplo Intermedio 127 - compuesto cxxx
El compuesto lxxxiii (365 mg, 0,7 mmol) se disuelve en DCM (5 ml). A la solución se le añade PyBOP (440 mg, 0,84 mmol), seguido de la adición del compuesto cxxix
323
(0,84 mmol) en THF (8,4 ml). A la mezcla resultante se le añade DIPEA (0,1 ml, 0,84 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 100%, produciendo el compuesto cxxx (350 mg, 70%).
324
Ejemplo Intermedio 128 - compuesto cxxxi
El compuesto cxxv (2,54 g, 9,05 mmol) se disuelve en DCM (30 ml). A la solución se le añaden PyBOP (5,65 g, 10,9 mmol) y HOBT (1,47 g, 10,9 mmol) y se agita durante cinco minutos. La mezcla resultante se disminuye hasta 0ºC, después de lo cual se añaden (S)-(+)-3-Metil-2-butilamina (1,27 ml, 10,9 mmol) y DIPEA (1,9 ml, 10,9 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche con calentamiento a temperatura ambiente. La fase orgánica se lava con HCl 0,1 N, NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 30%/hexanos, produciendo el compuesto cxxxi (1,44 g, 45,5%).
325
Ejemplo Intermedio 129 - compuesto cxxix
El compuesto cxxxi (1,3 g, 3,7 mmol) se hidrogena usando Pd al 10%/C (500 mg) en MeOH (40 ml). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de H_{2}. La mezcla de reacción se filtra a través de celite y la fase orgánica se concentra, produciendo el compuesto cxxix en bruto (800 mg, 100%).
\vskip1.000000\baselineskip
326 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 130 - compuesto cxxxiv
El compuesto cxxxii (1,6 g, 3,7 mmol) se disuelve en MeOH (12 ml). Después del lavado abundante y minucioso
\vskip1.000000\baselineskip
327 
\vskip1.000000\baselineskip
con N_{2}, se añade Pd(OH)_{2} al 10% en peso sobre carbono (0,74 g) y la mezcla se hidrogena durante una noche, después de lo cual se muestra una mezcla de reacción completa por TLC (EtOAc al 30%/hexanos). La solución se aísla del material sólido por filtración y se concentra, produciendo el compuesto cxxxiii en forma de un aceite incoloro (100%) que se usa en la siguiente etapa
\vskip1.000000\baselineskip
328 
\vskip1.000000\baselineskip
sin purificación adicional. Se disuelve ácido 2-pirazinacarboxílico (400 mg, 3,2 mmol, 1,1 equiv.) en DCM/THF (4 ml/4 ml) y después se añaden HOAt (440 mg, 3,2 mmol) y DCC (3,3 ml, 1 M en DCM). Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 minutos, el compuesto cxxxiii (0,96 g, 3,2 mmol) obtenido previamente se disuelve en DCM (6,4 ml) y se añade a la mezcla activada. Después de agitar durante 2 días a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtra a través de Celite y se concentra para dar un residuo que se purifica por cromatografía en columna (EtOAc al 50%/hexanos), produciendo el compuesto cxxxiv en forma de un sólido de color blanco (1,06 g, 83%).
\vskip1.000000\baselineskip
329 
\newpage
Ejemplo Intermedio 131 - compuesto cxxxv
El compuesto cxxxiv (1,06 g, 2,6 mmol) se disuelve en MeOH (10 ml) y después se añade NaOH 2 N (ac.) (4 ml, 8 mmol). La solución se agita a temperatura ambiente durante una noche, después de lo cual se indica que la hidrólisis se ha completado por TLC (EtOAc al 50%/hexanos). La solución se acidifica a pH 3 con HCl 5 N, se diluye con EtOAc y después la fase orgánica se extrae. La fase orgánica extraída se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}, produciendo el compuesto cxxxv (100%) después de la concentración.
\vskip1.000000\baselineskip
330 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 132 - compuesto cxxxvi
A una solución en DCM (8 ml) del compuesto cxxxv (1,44 g, 3,7 mmol) a temperatura ambiente se le añade HOAt (500 mg, 3,7 mmol), y después se añade una solución 1 M de DCC en DCM (3,7 ml, 3,7 mmol). Después de agitar durante 30 minutos a temperatura ambiente, al ácido activado con HOAt anterior se le añade una solución en THF (18,5 ml, 0,2 M) del compuesto (3,7 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla de reacción se filtra a través de Celite. Los filtrados se diluyen con EtOAc (120 ml) y se lavan con agua y salmuera. La fase orgánica se seca y se concentra, produciendo un aceite de color amarillo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 70%/hexanos), produciendo el compuesto cxxxvi (1 g, 71%).
\vskip1.000000\baselineskip
331 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 133 - compuesto cxxxvii
A una solución en EtOH (8 ml) del compuesto cxxxvi (1 g, 1,8 mmol) se le añade una solución acuosa 2 N de NaOH (2,7 ml, 5,4 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche a temperatura ambiente, después se acidifica a pH 3 con HCl 5 N, se diluye con EtOAc y después la fase orgánica se extrae. La fase orgánica extraída se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}, produciendo el compuesto cxxxvii (88%) después de la concentración.
\vskip1.000000\baselineskip
332 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 133 - compuesto cxxxviii
A una solución en DCM (10 ml) del compuesto cxxxvii (350 mg, 0,6 mmol) se le añade PyBOP (450 mg, 0,86 mmol). La solución se agita a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, a esta solución se le añade el compuesto xiii' (160 mg, 0,86 mmol) seguido de DIPEA (0,23 ml, 1,3 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche y después se interrumpe con agua (25 ml) durante 30 minutos. Después, la mezcla se extrae con EtOAc. La fase orgánica extraída se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4} antes de concentrarse, produciendo un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc) produce el compuesto cxxxviii (407 mg, 88%).
333 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 134 - compuesto cxxxix
Se disuelve ácido 5-metilisoxazol-3-carboxílico (200 g, 2,05 mmol) en DCM (5 ml). A la solución se le añade PyBOP (1,07 g, 2,05 mmol). A la solución se le añade el compuesto lxxix' (582 mg, 2,05 mmol) en DCM (5 ml), seguido de la adición de DIPEA (0,36 ml, 2,05 mmol). La mezcla resultante se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. La fase orgánica se concentra, y el residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 30%/hexanos, produciendo el compuesto cxxxix (495 mg, 61,4%).
334 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 135 - compuesto cxxxx
El compuesto cxxxix se hidroliza usando MeOH (10 ml) y NaOH 1 N (3 equiv.), produciendo el compuesto cxxxx (430 mg, 90%).
335 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 136 - compuesto cxxxxi
El compuesto cxxxx (380 mg, 1 mmol) se disuelve en DCM (5 ml). Después, a la solución se le añade DCC (1,2 mmol), seguido de la adición de HOAt (165 mg, 1,2 mmol). Después, se añade el compuesto v (1,2 mmol) en THF (12 ml). La mezcla resultante se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc, se filtra a través de gel de sílice y se concentra. El residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 35%/hexanos, produciendo el compuesto cxxxxi (320 mg, 58%).
336 
\newpage
Ejemplo Intermedio 137 - compuesto cxxxxii
El compuesto cxxxxi se hidroliza usando EtOH (10 ml) y NaOH 1 N (3 equiv.), produciendo el compuesto cxxxxii (730 mg, 94 3%).
337
Ejemplo Intermedio 138 - compuesto cxxxxiii
El compuesto cxxxxii (240 mg, 0,46 mmol) se disuelve en DCM (5 ml). A la solución se le añade PyBOP (295 mg, 0,56 mmol), seguido de la adición del compuesto xiii' (110 mg, 0,56 mmol). A la mezcla resultante se le añade DIPEA (0,1 ml, 0,56 mmol). La mezcla de reacción se agita durante dos noches en atmósfera de N_{2}. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. Después de la concentración de la fase orgánica, el residuo resultante se purifica cromatográficamente con EtOAc al 90%/hexanos, produciendo el compuesto cxxxxiii (168 mg, 53%).
338
Ejemplo Intermedio 139 - compuesto cxxxxiv
A una solución de NaOH (2 N, 42,1 ml, 84,2 mmol) a 5ºC se le añade L-alanina (5,00 g, 56,1 15 mmol). Después de agitar durante 10 minutos, se añaden simultáneamente gota a gota cloroformiato de metilo (6,5 ml, 84,2 mmol) y NaOH (2 N, 42,1 ml, 84,2 mmol). La solución se agita en un baño de hielo durante 2 horas y después a temperatura ambiente durante 1 hora. La mezcla se lava con Et_{2}O (2 x 50 ml) y la fase acuosa se neutraliza a pH \sim2 con HCl 5 N y se extrae con EtOAc (3 x 50 ml). La fase orgánica extraída se lava con salmuera, se seca con MgSO_{4} y se concentra para producir
339
el compuesto cxxxxiv, N-carbometoxi-L-alanina, (4,54 g, 54%) en forma de un aceite incoloro.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 140 - compuesto cxxxxvi
Una solución del compuesto cxxxxv (3,57 g, 9,44 mmol) en THF a 5ºC se trata con HOAt
\vskip1.000000\baselineskip
340 
\vskip1.000000\baselineskip
(1,28 g, 9,44 mmol) y después se añade DCC (9,50 ml, 9,50 mmol). Después de agitar en un baño de hielo durante 45 minutos, se añade una solución del compuesto v (104 ml, 10,4 mmol) en THF. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante una noche. La mezcla se enfría a 5ºC y se interrumpe con NaHCO_{3} saturado. Después de la filtración para retirar el DCU precipitado, la mezcla se disuelve en EtOAc (100 ml), se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera y después se seca con MgSO_{4} y se concentra para dar un residuo que se purifica por cromatografía en columna de sílice (EtOAc al 25%/Hexanos), produciendo el compuesto cxxxxvi (2,91 g, 57%) en forma de una espuma gomosa.
\vskip1.000000\baselineskip
341 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 141 - compuesto cviii
A una solución del compuesto cxxxxvi en MeOH (25 ml) enfriada con un baño de hielo en una corriente de N_{2} se le añade lentamente Pd/C. La mezcla se hidrogena a 1 atm durante una noche. El catalizador se retira por filtración y el filtrado se combina con 5 ml de DMF y se seca al vacío, produciendo el compuesto cviii.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 142 - compuesto cxxxxvii
Una solución del compuesto cxxxxiv (0,298 g, 2,03 mmol) y HOAt (0,276 g, 2,03 mmol) en THF enfriada en un baño de hielo se trata con DCC (2,05 ml, 2,05 mmol). Después de agitar en un baño de hielo durante 0,5 horas, se añade una solución del compuesto cviii en THF y después se añade DIPEA (0,39 ml, 2,2 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante una noche, después se enfría en un baño de hielo y se interrumpe con NaHCO_{3} saturado. El DCU precipitado se filtra y el filtrado se disuelve en EtOAc (100 ml). La fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera y después se seca con MgSO_{4}. Después de la retirada del disolvente orgánico, el residuo se purifica por cromatografía en columna de sílice (EtOAc al 60%/Hexanos), produciendo el compuesto cxxxxvii (0,47 g, 48%) en forma de una espuma gomosa.
\vskip1.000000\baselineskip
342 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 143 - compuesto cxxxxviii
A una solución del compuesto cxxxxvii (0,47 g, 0,847 mmol) en EtOH (5 ml) a 5ºC se le añade NaOH (2 N, 1,31 ml, 2,62 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 4 horas. La solución se acidifica a pH \sim2 con HCl (1 N) y el EtOH se retira por evaporación rotatoria. La mezcla se extrae con EtOAc (3 x 30 ml) y el extracto combinado se lava con salmuera y después se seca con MgSO_{4}. El disolvente se retira y el residuo se seca al vacío, produciendo el compuesto cxxxxviii (0,366 g, 82%) en forma de una espuma gomosa.
\vskip1.000000\baselineskip
343 
\newpage
Ejemplo Intermedio 144 - compuesto cil
Una solución del compuesto cxxxxviii (0,366 g, 0,718 mmol) en DCM se enfría en un baño de hielo y se trata con PyBop (0,599 g, 1,15 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 0,5 horas, la mezcla se enfría con un baño de hielo y se trata con una solución del compuesto xiii' (0,200 g, 1,08 mmol) en THF y DIPEA (0,250 ml, 1,44 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante una noche y después se interrumpe con una solución de NH_{4}Cl. El disolvente se concentra y la mezcla se disuelve en EtOAc (100 ml). La fase orgánica se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera, y después se seca con MgSO_{4}. Después de la retirada del disolvente orgánico, el residuo se purifica por cromatografía en columna (EtOH al 5%/EtOAc), produciendo el compuesto cil (035 g, 72%)
\vskip1.000000\baselineskip
344 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 145 - compuesto cxxi
A una solución en THF (85 ml) de N-Boc-Nva-OH (compuesto 1) (8,68 g, 40 mmol) se le añade CDI (7,79 g, 48 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, la solución anterior se trata con una solución en DMF (25 ml) que contiene clorhidrato de N,O-dimetilhidroxilamina (4,25 g, 44 mmol) y DIPEA (7,66 ml, 44 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche a temperatura ambiente. Después, la mezcla de reacción se concentra al vacío. El residuo resultante se diluye con EtOAc (300 ml). Esta solución se lava secuencialmente con HCl 0,1 N (50 ml), NaHCO_{3} saturado (3 x 50 ml) y salmuera. La fase orgánica se concentra al vacío, produciendo un residuo que se purifica con cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 40%/Hexanos) para dar el compuesto cxxi (9,38 g, 94%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 1-16 - compuesto cxxii
A una solución en dietil Et_{2}O (50 ml) del compuesto cxxi (9,38 g, 31,9 mmol) enfriada a 0ºC se le añade (lentamente) LAH (34,7 ml, 1 M, 34,7 mmol). La temperatura del matraz de reacción se mantiene por debajo de 5ºC durante la adición de LAH. Después de que se complete la adición, a la reacción se le añade EtOAc (20 ml) para inactivar el exceso de LAH. Después, se añade gota a gota KHSO_{4} acuoso (al 5%, 20 ml) con el fin de mantener la temperatura por debajo de 5ºC. La fase orgánica se separa y después se lava secuencialmente con HCl 1 N (3 x 30 ml), NaHCO_{3} saturado (3 x 30 ml) y salmuera. La fase orgánica se concentra y se seca al vacío, produciendo el compuesto cxxii en bruto (5,18 g, 69%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 147 - compuesto cl
A una suspensión en THF (25 ml) de Zn (2,75 g, 42 mmol) se le añaden a la temperatura de reflujo 0,2 ml de EtOC(O)CF_{2}Br. Esto se sigue de la adición lenta de una solución en THF (25 ml) del compuesto cxxii (3,05 g, 15,0 mmol) y EtOC(O)CF_{2}Br (4,84 ml, 37,5 mmol). Después de que se complete la adición de los dos reactivos, la mezcla de reacción se calienta a reflujo adicionalmente durante 30 minutos. La mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y se diluye con DCM (200 ml). La fase orgánica se lava con KHSO_{4} 1 N. La fase orgánica se concentra y se seca al vacío, produciendo un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 20%/Hexano), produciendo el compuesto cl (2,78 g, 57%).
\vskip1.000000\baselineskip
345 
\vskip1.000000\baselineskip
Esta preparación es esencialmente la misma que la descrita por Thaisrivongs y col., J. Med. Chem. 29, 2080-2087 (1986).
\newpage
Ejemplo Intermedio 148 - compuesto cli
Una solución en THF (40 ml) del compuesto et (2,78 g, 8,53 mmol) se trata con NaOH 1 N (12,8 ml, 12,8 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante una noche, el disolvente se retira parcialmente al vacío. La mezcla de reacción restante se diluye con agua (50 ml) y se liofiliza, produciendo el compuesto cli en bruto (2,82 g, >100%) en forma de su sal sódica.
346
Esta preparación es esencialmente la misma que la descrita por Thaisrivongs y col., J. Med. Chem. 29, 2080-2087 (1986).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 149 - compuesto clii
Una solución en DCM (10 ml) del compuesto cli en bruto (516 mg, 1,61 mmol) se trata con HOBT (436 mg, 3 mmol) y DIC (0,328 ml, 2,09 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, la mezcla de reacción se trata con una solución en DCM (5 ml) que contiene sal TsOH de éster bencílico de glicina (815 mg, 2,42 mmol) y DIPEA (0,422 ml, 2,42 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 12 horas, la mezcla de reacción se inactiva con agua y se extrae con EtOAc. La fase orgánica se seca y se concentra al vacío y se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 40%/hexanos), produciendo el compuesto clii (495 mg, 69%), ^{1}H RMN del compuesto clii (400 MHz. CDCl_{3}: \delta 7,29-7,21 (m, 5H), 5,16 (s a, 2H), 4,89 (s a, 1H), 4,20-3,90 (m, 4H) 3,80 (s a, 1H), 1,75-1,42 (m, 4H), 1,38 (s, 9H), 0,87 (m, 3H).
347
Partiendo del compuesto cli en bruto, se preparan los compuestos cliii (al 83%) y cliv (al 50%) mediante un procedimiento idéntico al descrito para el compuesto clii.
^{1}H RMN del compuesto cliii (400 MHz, CDCl_{3}: \delta 7,49 (s a, 1H), 7,34-7,24 (m, 5H), 5,13 (AB c, J = 12,2 Hz, J^{-} = 23,9 Hz, 2H), 4,88 (d a, J = 8,8 Hz, 1H), 4,53 (m, 1H), 3,98-3,91 (m, 2H), 3,82 (m, 1H), 1,65-1,20 [m 16H, incluyendo un singlete a 1,37 (9H)], 0,86 (t, J = 7,3 Hz, 3H).
348
^{1}H RMN del compuesto cliv (400 MHz, CDCl_{3})\beta\delta 7,60-7,0 (m, 10H), 5,30-5,00 (m, 2H), 5,00-4,75 (m, 2H), 4,15-3,70 (m, 3H), 3,30-3,00 (m, 2H), 1,75-1,20 [m, 13H, incluyendo un singlete a 1,36 (9H)], 0,86 (s a, 3H).
349 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 150 - compuesto clv
A una solución en DCM (10 ml) y THF (5 ml) del compuesto cli en bruto (1 g, 3,13 mmol) se le añaden HOBT (634 mg, 4,69 mmol), EDCl (781 mg, 4,07 mmol) y después (s)-\alpha-metilbencilamina (0,604 ml, 4,69 mmol). La mezcla de reacción se agita durante una noche a temperatura ambiente y después se interrumpe con agua. La mezcla de reacción se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera y se seca con Na_{2}SO_{4}. La fase orgánica se concentra al vacío, produciendo un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 20%/hexanos), produciendo el compuesto clv (459 mg, 37%), ^{1}H RMN del compuesto clv (400 MHz, CDCl_{3}): \delta 7,32-7,21 (m, 6H), 5,00 (m, 1H), 4,75 (m, 1H), 3,94 (m, 2H) 3,70 (m, 1H) 1,65-1,15 [m, 16H, incluyendo un doblete a 1,51 (J = 6,8 Hz, 3H), singlete a 1,39 (9H)], 0,82 (m, 3H).
350 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 151 - compuesto clvi
El compuesto clv (220 mg, 0,55 mmol) se disuelve en HCl 4 N en dioxano (10 ml). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 2 horas y después se concentra al vacío, dando el compuesto clvi en bruto (\sim100%) en forma de su sal HCl.
351
Siguiendo el procedimiento descrito para preparar el compuesto clvi, se preparan los compuestos clvii, clviii y clix con un rendimiento casi cuantitativo a partir del compuesto cli en bruto.
352 
\newpage
Ejemplo Intermedio 152 - compuesto clx
Una solución en DCM (4 ml) de la sal HCl del compuesto vii (96 mg, 0,144 mmol) se trata con PyBOP (120 mg, 0,23 mmol) y DIPEA (0,1 ml, 0,576 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 30 minutos, la solución se trata con una solución en THF (4 ml) que contiene el compuesto clv (0,288 mmol) y DIPEA (0,2 ml, 1,152 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche. Después, la mezcla de reacción se diluye con EtOAc (50 ml) y después la fase orgánica se lava con NaHCO_{3} y salmuera. La fase orgánica se concentra al vacío y el residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 80%/hexanos), produciendo el compuesto clx (113 mg, 89%).
353 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 153 - compuesto clxi
Una solución en DCM (6 ml) del compuesto vii (140 mg, 0,235 mmol) se trata con PyBOP (196 mg, 0,376 mmol) durante 30 minutos. Después, a la solución anterior se le añade una solución en THF (6 ml) del compuesto clvii (\sim0,47 mmol) y DIPEA (0,327 ml, 1,88 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche y se interrumpe con agua (30 minutos). La mezcla de reacción se extrae con EtOAc (50 ml). La fase orgánica se lava con NaHCO_{3} y salmuera. Las capas acuosas combinadas se extraen de nuevo con EtOAc (50 ml). Las fases orgánicas combinadas se secan y se concentran al vacío. El residuo resultante se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (80-100 EtOAc/hexanos), produciendo el compuesto clxi (104 mg, 48%).
354 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 154 - compuesto clxii
A una solución en DCM (10 ml) del compuesto clxi (280 mg, 0,304 mmol) se le añade reactivo de DMP (193 mg, 0,456 mmol). La mezcla de reacción se agita a temperatura ambiente durante 3 horas y se interrumpe con Na_{2}SO_{3} al 10%. La fase orgánica se lava con NaHCO_{3} y salmuera. La fase orgánica resultante se seca y se concentra al vacío, produciendo un residuo que se purifica con cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 80-100%/hexanos), produciendo el compuesto clxii (271 mg, 97%).
355 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 155 - compuesto clxiii
El compuesto lxxxiii (220 mg, 0,43 mmol) se recoge en DCM (5 ml). A la solución en DCM se le añade PyBOP (270 mg, 0,51 mmol) y se agita durante 5 minutos. A esta solución se le añade gota a gota el compuesto xxxvi (0,51 mmol) en THF (5,1 ml). A la mezcla de reacción se le añade DIPEA (0,09 ml, 0,51 mmol) y se agita durante una noche en atmósfera de N_{2}. Al día siguiente, la mezcla de reacción se diluye con EtOAc, se lava con NaHCO_{3} saturado y se lava con salmuera. La purificación con un gradiente de EtOAc del 70% al 90%/Hexano produce el compuesto clxiii (180 mg, 56%).
356 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 156 - compuesto clxiv
El compuesto cxxv (2,09 g, 7,4 mmol) se recoge en DCM (20 ml). A esta solución se le añaden PyBOP (4,64 g, 8,9 mmol) y HOBt (1,2 g, 8,9 mmol) y se agita durante cinco minutos. La mezcla resultante se disminuye hasta 0ºC, momento en el que se añaden S(-)-\alpha-metilbencilamina (1,15 ml, 8,9 mmol) y DIPEA (1,55 ml, 8,9 mmol). La reacción se agita durante una noche con calentamiento a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lava con HCl 0,1 N, NaHCO_{3} sat. y salmuera. La purificación con EtOAc al 30%/Hexanos produce el compuesto clxiv (1,6 g, 56,3%).
357 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 157 - compuesto xxxvi'
El compuesto clxiv (1,48 g, 3,8 mmol) se hidrogena usando Pd al 10%/C (300 mg) en MeOH (50 ml). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de H_{2}. La mezcla de reacción se filtra a través de celite y se concentra, dando el compuesto xxxvi (895 mg, 94,2%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 158 - compuesto clxvi
A una solución en DCM (15 ml) del compuesto clxv (2 g, 8,2 mmol) se le añaden HOAt (1,34 g,
358
9,84 mmol) y DCC (9,84 ml, 1 M, 9,84 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 minutos, a la solución anterior se le añade una solución en THF (9,84 ml) que contiene clorhidrato de éster metílico de terc-L-Leucina (9,84 mmol) y DIPEA (1,72 ml, 9,84 mmol). Después, se añade DMAP (1 g, 8,2 mmol) a temperatura ambiente. La reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche. Después del tratamiento acuoso convencional y la cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 20%/Hexanos), se obtiene el compuesto clxvi (1,75 g, 58%).
359 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 159 - compuesto clxvii
A una solución en THF (35 ml) del compuesto clxvi (1,75 g, 4,73 mmol) se le añade una solución 4 N de HCl en dioxano (11,8 ml, 47,3 mmol). La reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche. En este momento, el disolvente se retira a presión reducida, produciendo clxvii en bruto (\sim100%), que se disuelve de nuevo en DMF y se usa directamente en la siguiente reacción.
360 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 160 - compuesto clxviii
A una solución en DCM (15 ml) que contiene ácido 2-pirazinacarboxílico (447 mg, 3,6 mmol) y PyBOP (1,87 g, 3,6 mmol) se le añade una solución en DMF (15 ml) del compuesto clxvii (811 mg, 3 mmol). Después, a la mezcla resultante se le añade DIPEA (0,63 ml, 3,6 mmol). La reacción se agita durante una noche a temperatura ambiente y después se interrumpe con agua. La mezcla de reacción se extrae con EtOAc. La fase orgánica se lava con salmuera y se concentra al vacío, proporcionando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 40%/Hexanos), produciendo el compuesto clxviii (0,93 g, 82%).
361 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 161 - compuesto clxix
A una solución en MeOH (10 ml) del compuesto clxviii (0,93 g, 2,47 mmol) se le añade NaOH 2 N (3,71 ml, 7,41 mmol). La reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche. Después, la reacción se acidifica a pH 3 usando HCl 1 N.. La reacción se diluye con EtOAc (75 ml) y se lava con agua y salmuera. La fase orgánica obtenida de esta manera se seca y se concentra al vacío, dando el compuesto clxix (\sim100%).
362 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 162 - compuesto clxx
Una solución en DCM (10 ml) del compuesto clxix (2,47 mmol) se trata con HOAt (436 mg, 3,21 mmol) y DCC (3,2 ml, 1 M, 3,2 mmol). Después de agitar durante 30 minutos, la mezcla de reacción se trata con una solución en THF (13,6 ml) del compuesto v (499 mg, 2,72 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante una noche, los sólidos de color blanco (urea) se filtran. Los filtrados se concentran al vacío, dando un residuo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice, produciendo el compuesto clxx (0,99 g, 76%).
363 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 163 - compuesto clxxi
Una solución en EtOH (20 ml) del compuesto clxx (0,99 g, 1,88 mmol) se trata con NaOH 2 N (2,81 ml, 5,63 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante una noche, la mezcla de reacción se acidifica a pH 3 con HCl 1 N. La mezcla de reacción se extrae con EtOAc (75 ml). La fase orgánica se seca y se concentra al vacío, dando el compuesto clxxi (772 mg, 82%).
364 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 164 - compuesto clxxi
Una solución en DCM (10 ml) del compuesto clxxi (290 mg, 0,58 mmol) se trata con PyBOP (484 mg, 0,93 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 minutos, la mezcla de reacción se trata con una solución en THF (7,5 ml) del compuesto xiii' (140 mg, 0,75 mmol), seguido de DIPEA (0,13 ml, 0,75 mmol). Después de agitar durante una noche a temperatura ambiente, la reacción se interrumpe con agua y se extrae con EtOAc. La fase orgánica resultante se lava con salmuera, se seca y se concentra al vacío. El residuo resultante se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 5%/EtOAc), produciendo el compuesto clxxii 290 mg (75%).
365 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 165 - compuesto clxxiv
El compuesto lxxxiii (600 mg, 1,17 mmol) se recoge en DCM (4 ml). Se añade PyBOP (670 mg, 1,3 mmol), se agita durante cinco minutos y se enfría a 0ºC. A esta solución se le añade gota a gota el compuesto clxxiii (333 mg, 1,3 mmol)
366
en THF (1,3 ml). A la mezcla de reacción se le añade DIPEA (0,23 ml, 1,3 mmol) y se deja calentar a temperatura ambiente con agitación durante dos noches. Al día siguiente, la reacción se concentra y se purifica con EtOH al 2%/EtOAc, dando el compuesto clxxiv en bruto (900 mg, exceso del 100%).
367 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 166 - compuesto clxxxv
El compuesto cxxv (3,01 g,10,7 mmol) se recoge en DCM (30 ml) y la temperatura se disminuye hasta \sim78ºC. A esta solución se le añaden PyBOP (6,1 g, 11,7 mmol) y HOBT (1,58 g, 11,7 mmol) seguido de (S)-(+)-1-ciclohexiletilamina, compuesto clxxv, (1,74 ml, 11,7 mmol) y DIPEA (2,1 ml, 11,7 mmol). La mezcla resultante se agita durante una noche a temperatura ambiente. Al día siguiente, la mezcla de reacción se diluye con EtOAc y se lava con HCl 0,1 N, NaHCO_{3} saturado y salmuera. El producto se purifica en EtOAc al 40%/Hex, dando 2 g (47,8%) del compuesto clxxvi.
368 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 167 - compuesto clxxiii
El compuesto clxxvi (2 g, 5,13 mmol) se hidrogena usando Pd al 10%/C (500 mg) en MeOH (40 ml). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de H_{2}. La mezcla de reacción se filtra a través de celite y se concentra, dando el compuesto clxxiii (1,31 g, 99,8%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 168 - compuesto clxxix
En un matraz de fondo redondo en una atmósfera inerte, se disuelve en compuesto clxxvii [1-bencil éster del ácido (S)-(-)-2-oxo-1,5-imidazolina dicarboxílico]
369
(290 mg, 1,1 mmol) en DMF anhidra (6 ml). Se añade HOAt (151 mg, 1,2 mmol) y la reacción se agita a temperatura ambiente durante 25 minutos. Después, la reacción se enfría en un baño de hielo. Después, se añade DIC (0,2 ml, 0,16 g, 1,2 mmol) seguido de la adición del compuesto clxxviii (1 mmol, 435 mg.) en DMF anhidra (4 ml). Se deja que la reacción alcance lentamente la temperatura ambiente y se agita durante 2 días. Después, la reacción se vierte en un embudo de decantación que contiene 120 ml de EtOAc y se lava 2 veces con HCl 1 N (50 ml) y 1 vez con salmuera. La fase orgánica se separa y se seca sobre MgSO_{4}. El disolvente se evapora a presión reducida y el residuo se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (cargado en DCM y eluyendo con EtOAc al 30% y después al 50%/DCM y después con MeOH al 2%/EtOAc), produciendo el producto clxxix (434 mg, 64%).
370 
\newpage
Ejemplo Intermedio 169 - compuesto clxxx
El material de partida clxxix (434 mg, 0,64 mmol) se disuelve en dioxano (6 ml) y una solución acuosa 0,5 M de NaOH (4 ml, 3 equiv.). La reacción se deja proceder durante una noche. El análisis por TLC en EtOAc al 100% (usando tinción con PMA) muestra además del producto ácido esperado del principio, un producto de realización más rápida. La mezcla de reacción se acidifica a pH 2 con HCl 1 N y después se extrae 2 veces con EtOAc. A la solución acuosa se le añade NaCl sólido para facilitar la extracción. Después, los extractos orgánicos se combinan, se secan sobre MgSO_{4} y se evaporan a presión reducida. El análisis por EM indica que el grupo CBZ se retira por hidrólisis. El compuesto resultante clxxx (rendimiento cuantitativo) se usa tal cual en la siguiente etapa.
371
Ejemplo Intermedio 170 - compuesto clxxxi
En un matraz de fondo redondo en una atmósfera inerte, el compuesto clxxx (279 mg, 0,54 mmol) se disuelve en DMF anhidra (6 ml). Se añade HOAt (82 mg, 0,65 mmol) y la reacción se agita a temperatura ambiente durante 25 minutos. Después, la reacción se enfría en un baño de hielo. Después, se añade DIC (0,11 ml, 0,65 mmol), seguido de la adición del compuesto xiii' (0,7 mmol) en DMF anhidra (4 ml). Se deja que la reacción alcance lentamente la temperatura ambiente y se agita durante 21 horas. Después, la reacción se vierte en un embudo de decantación que contiene 120 ml de EtOAc y se lava 2 veces con HCl 1 N (50 ml) y 1 vez con salmuera. La fase orgánica se separa y se seca sobre MgSO_{4}. El disolvente se evapora a presión reducida y el producto se limpia por cromatografía sobre gel de sílice (cargado en DCM y eluyendo con EtOAc al 50%/Hexano, después MeOH al 3%/EtOAc, después EtOH al 20%/EtOAc). Después de la retirada del disolvente, el residuo se disuelve de nuevo en Dri Solv THF y se filtra para retirar cualquier cantidad residual de gel de sílice. Después, la retirada del disolvente produce el compuesto clxxxi (434 mg, 64% de rendimiento).
372
Ejemplo Intermedio 171 - compuesto clxxxiii
En un matraz de fondo redondo en una atmósfera inerte, se disuelve 6-hidroxi picolínico
373
(153 mg, 1,1 mmol) en DMF anhidra (6 ml). Se añade HOAt (151 mg, 1,2 mmol) y después la reacción se agita a temperatura ambiente durante 25 minutos. Después, la reacción se enfría en un baño de hielo. Después, se añade DIC (0,2 ml, 0,16 g, 1,2 mmol) seguido de la adición del compuesto clxxxii (1,0 mmol, 435 mg.) en DMF anhidra (4 ml).
374
Se deja que la reacción alcance lentamente la temperatura ambiente y se agita durante 2 días. Después, la reacción se vierte en un embudo de decantación que contiene 120 ml de EtOAc y se lava 2 veces con HCl 1 N (50 ml) y 1 vez con salmuera. La fase orgánica se separa y se seca sobre MgSO_{4}. El disolvente se evapora a presión reducida y el producto se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (cargado en DCM, eluyendo con EtOAc al 30 y después al 50%/DCM, y después con MeOH al 2%/EtOAc), produciendo el compuesto clxxxiii recogido (314 mg, 56%).
375
Ejemplo Intermedio 172 - compuesto clxxxiv
El material de partida clxxxiii (314 mg, 0,56 mmol) se disuelve en dioxano (5 ml) y NaOH 0,5 M (3,4 ml, 3 equiv.). La reacción se realiza durante una noche. El análisis por TLC en EtOAc al 100% (usando UV) muestra la conversión completa en el producto ácido de realización lenta en el origen. La reacción se acidifica a pH 2 con HCl 1 N y después se extrae 2 veces con EtOAc. Se añade NaCl sólido para facilitar la extracción. Después, los extractos orgánicos se combinan, se secan sobre MgSO_{4} y después se evaporan a presión reducida, produciendo el compuesto clxxxiv (0,5 mmol. 89%) que se usa tal cual en la siguiente etapa.
376
Ejemplo Intermedio 173 - compuesto clxxxv
En un matraz de fondo redondo en una atmósfera inerte, el compuesto ácido clxxxiv (265 mg, 0,5 mmol) se disuelve en DMF anhidra (6 ml). Se añade HOAT (75,6 mg, 0,6 mmol) y la reacción se agita a temperatura ambiente durante 25 minutos. Después, la reacción se enfría en un baño de hielo. Después, se añade DIC (0,1 ml, 0,6 mmol) seguido de la adición del compuesto xiii (0,65 mmol) en DMF anhidra (4 ml). Se deja que la reacción alcance lentamente la temperatura ambiente y se agita durante 21 horas. Después, la reacción se vierte en un embudo de decantación que contiene EtOAc (120 ml) y se lava 2 veces con HCl 1 N (50 ml) y 1 vez con salmuera. La fase orgánica se separa y se seca sobre MgSO_{4}. El disolvente se evapora a presión reducida y el producto se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (cargado en DCM, eluyendo con EtOAc al 50%/Hexano, después con EtOAc puro y después con MeOH al 4%/EtOAc), produciendo el producto compuesto clxxxv (185 mg, 52%).
377
Ejemplo Intermedio 174 - compuesto cxxxxiv'
A una solución de D-alanina (5 g, 56,1 mmol) en NaOH 1 N (152 ml, 152 mmol) a 0ºC se le añade una solución de MeOC(O)Cl (6,5 ml, 84,2 mmol) en éter dietílico (30 ml). La mezcla se agita en un baño de hielo durante 3 horas y después se ajusta a pH 9 con NaOH 1 N. Después de agitar a temperatura ambiente durante 1 hora, la mezcla se lava con éter (3 x 50 ml), se acidifica a pH \sim2 con HCl 5 N y se extrae con EtOAc (5 x 50 ml). El extracto orgánico se lava con agua y salmuera y después se seca (MgSO_{4}). El disolvente se retira, produciendo el compuesto cxxxiv, N-metoxicarbonil-D-alanina, en forma de un aceite incoloro (6,48 g, 79%).
378 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 175 - compuesto clxxxvi
Una solución de N-metilcarbonil-D-alanina (0,193 g, 1,31 mmol) y HOAt (0,177 g, 1,31 mmol) en DCM (10 ml) enfriada en un baño de hielo se trata con DCC (1,31 ml, 1,31 mmol). Después de agitar en un baño de hielo durante 0,5 horas, se añade una solución del compuesto clxxii preparado (0,88 mmol) en THF (8,8 ml). La mezcla se calienta a temperatura ambiente y se agita durante una noche, después se enfría en un baño de hielo y se interrumpe con una solución saturada de NaHCO_{3}. Los precipitados se filtran y el filtrado se recoge en EtOAc (100 ml). La fase orgánica se lava con una solución saturada de NaHCO_{3} y salmuera y después se seca (MgSO_{4}). Después de la retirada del disolvente, el residuo se purifica por cromatografía en columna de sílice (EtOAc al 60%/Hexano), produciendo el compuesto clxxxvi en forma de una espuma gomosa (0,32 1 g, 68%).
379
Ejemplo Intermedio 176 - compuesto clxxxvii
A una solución del compuesto clxxxvi (0,321 g, 0,597 mmol) en EtOH (5 ml) a 5ºC se le añade NaOH 2 N (1,05 ml, 2,1 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 4 horas. La solución se acidifica a pH \sim2 con HCl 1 N y el EtOH se retira por evaporación rotatoria. La mezcla se extrae con EtOAc (3 x 30 ml) y el extracto combinado se lava con salmuera y después se seca MgSO_{4}. El disolvente se retira y el residuo se seca al vacío, dando el compuesto clxxxvii en forma de una espuma gomosa (0,235 g, 77%).
380
Ejemplo Intermedio 177 - compuesto clxxxviii
Una solución del compuesto clxxxvii (0,363 g, 0,712 mmol) en DCM (10 ml) se enfría en un baño de hielo y se trata con PyBOP (0,594 g 1,14 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante 0,5 horas, la mezcla se enfría en un baño de hielo y se trata con una solución del compuesto xiii' (1,1 mmol) en THF (11 ml) y DIPEA (0,249 ml, 1,42 mmol). La mezcla se agita a temperatura ambiente durante una noche y se interrumpe con una solución de NH_{4}Cl. El disolvente se concentra y la mezcla se recoge en EtOAc (100 ml). La fase orgánica se lava con una solución saturada de NaHCO_{3} y salmuera y después se seca (MgSO_{4}). Después de la retirada del disolvente, el residuo se purifica por cromatografía en columna (EtOH al 5%/EtOAc), dando clxxviii (0,341 g, 71%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 178 - compuesto clxxxix
Se recoge ácido diaminopropiónico (3 g, 28,7 mmol) en NaOH 1 M (86,2 ml, 86,2 mmol), se enfría a 0ºC y después se añade MeOC(O)Cl (5,54 ml, 71,75 mmol) en Et_{2}O(25 ml). La mezcla resultante se agita durante una noche con calentamiento a temperatura ambiente. El pH de la mezcla de reacción se disminuye hasta 2 y la fase acuosa se extrae 3 veces con EtOAc. Los extractos se combinan y se secan sobre Na_{2}SO_{4}, se filtran y se concentran, produciendo el compuesto clxxxix (3,09 g, 48,9%).
381
Ejemplo Intermedio 179 - compuesto cc
El compuesto clxxxix (340 mg, 1,55 mmol) se recoge en DCM (4 ml). Se añaden DCC (1,7 mmol) y HOAt (235 mg 1,7 mmol) seguido del compuesto clxxxii (1,7 mmol) en DCM (3,4 ml). La mezcla de reacción se agita durante una noche. Al día siguiente, la mezcla de reacción se filtra a través de una capa de sílice y se concentra. La purificación se realiza en EtOAc al 75%/Hex, dando el compuesto clxxxx (715 mg, 72,4%).
382
Ejemplo Intermedio 180 - compuesto cixxxxi
El compuesto clxxxx (715 mg, 1,12 mmol) se hidroliza en condiciones convencionales, usando EtOH (4 ml) y NaOH 1 N (3 equiv.), produciendo el compuesto clxxxi (600 mg, 88,0%).
383
Ejemplo Intermedio 181 - compuesto clxxxxii
El compuesto clxxxxi (550 mg, 0,9 mmol) se recoge en DCM (8 ml). Se añade PyBOP (675 mg, 1,3 mmol) seguido del compuesto xiii' (1,3 mmol) en THF (1,3 ml). Se añade DIPEA (0,23 ml, 1,3 mmol) y la solución resultante se agita durante una noche. Al día siguiente, la reacción se diluye con EtOAc y se lava con NaHCO_{3} saturado y después con salmuera, antes de concentrarse, produciendo un residuo. El residuo resultante se purifica con EtOH al 5%/EtOAc, produciendo el compuesto clxxxxii (290 mg, 41,5%).
384
Ejemplo Intermedio 182 - compuesto clxxxxiii
Se hidroliza éster metílico de Cbz-ciclohexiglicina-terc-leucina (7,36 g, 17,6 mmol) en condiciones convencionales usando MeOH (60 ml) y NaOH 1 N (52,8 ml, 3 equiv.), produciendo intermedio clxxxxiii (92%).
385 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 183 - compuesto clxxxxiv
El compuesto clxxxxiii (3,82 g, 9,46 mmol) se recoge en DCM (30 ml). Se añade DCC (11,35 mmol) en DCM (11,35 ml), seguido de la adición de HOAt (1,54 g, 11,35 mmol). La mezcla resultante se agita cinco minutos y se añade el compuesto v (9,46 mmol) en THF (40 ml). La mezcla resultante se agita durante una noche. Al día siguiente, la mezcla de reacción se diluye con EtOAc y se lava con HCl 1 N, NaHCO_{3} saturado y después con salmuera, antes de concentrarse, produciendo un residuo. El residuo resultante se purifica con un gradiente del 20% al 30% sobre gel de sílice, dando el compuesto clxxxxiv (3,03 g, 56,3%).
\vskip1.000000\baselineskip
386 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 183 - compuesto clxxxii
El compuesto clxxxxiv (3,03 g, 5,33 mmol) se hidrogena usando Pd al 10%/C (500 mg) en MeOH (30 ml) en atmósfera de H_{2} durante 4 horas, produciendo el compuesto clxxxii (2,3 g, 99%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 184 - compuesto clxxxxv
A una solución de ácido 1-amino-1-ciclohexanocarboxílico (2,86 g, 20 mmol) en MeOH (40 ml) se le añade gota a gota SOCl_{2} (3 ml) a 0ºC. La mezcla se calienta lentamente a temperatura ambiente y después se calienta a reflujo durante 5 horas. Después, a la solución transparente se le añade Et_{2}O y el precipitado se aísla. El sólido se seca adicionalmente al vacío, produciendo el compuesto clxxxxv (95%) en forma de un polvo de color blanco.
\vskip1.000000\baselineskip
387 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 185 - compuesto clxxxxvi
Se disuelve ácido 2-pirazinacarboxílico (1 g, 8 mmol, 1 equiv.) en DCM (15 ml) con la adición de HOAt (1,1 g, 8 mmol) y DCC (8 ml, 1 M) en DCM. Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 minutos, a la mezcla activada se le añade el compuesto clxxxxv (1,3 g, 8 mmol). Posteriormente, se añade DHPEA (2 ml, 12 mmol), seguido de DMAP (1,5 g, 12 mmol). Después de agitar durante 3 días a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtra a través de celite, se concentra y el producto deseado clxxxxvi se purifica por cromatografía en columna (EtOAc al 50%/hexano) en forma de un aceite de color amarillo (2,1 g, 100%).
\vskip1.000000\baselineskip
388 
\newpage
Ejemplo Intermedio 186 - compuesto clxxxxvii
El compuesto clxxxvi (1,06 g, 2,6 mmol) se disuelve en MeOH (30 ml) con la adición de NaOH 2 N (ac.) (12 ml, 24 mmol). La solución se agita a temperatura ambiente durante una noche antes de que el análisis por TLC (EtOAc al 50%/hexano) indique que la hidrólisis se ha completado. Después, la solución se acidifica a pH 3 con HCl 5 N y se diluye con EtOAc y seguido de extracción de la fase orgánica. Posteriormente, la fase orgánica se lava con salmuera y se seca sobre MgSO_{4}, produciendo el compuesto clxxxxvii (84%) después de la concentración.
389
Ejemplo Intermedio 187 - compuesto clxxxviii
El compuesto clxxxvii (1,6 g, 6,4 mmol) se disuelve en DCM (18 ml) y después se añaden HOAt (0,96 g, 7 mmol) y DCC (7 ml, 1 M en DCM) a temperatura ambiente. Después de agitar a temperatura ambiente durante 20 minutos, a la mezcla activada se le añade clorhidrato de éster metílico de L-terc-leucina (7 ml, 1 M en THF). Posteriormente, se añade DIPEA (1,2 ml, 7 mmol), seguido de DMAP (1,2 g, 9,8 mmol). Después de agitar durante 3 días a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtra a través de celite, se purifica por cromatografía en columna y se concentra, produciendo el compuesto clxxxxviii (EtOAc al 60%/hexano) en forma de un sólido de color blanco (1,74 g, 72%).
390
Ejemplo Intermedio 188 - compuesto cic
El compuesto clxxxxviii (1,74 g, 4,6 mmol) se disuelve en MeOH (22 ml) con adición de NaOH 2 N (ac.) (7 ml, 14 mmol). La solución se agita a temperatura ambiente durante una noche antes de que el análisis por TLC (EtOAc al 30%/hexano) indique que la hidrólisis se ha completado. La solución se acidifica a pH 3 con HCl 5 N y se diluye con EtOAc y después se extrae la fase orgánica. La fase orgánica se lava con salmuera, se seca sobre MgSO_{4} y después se concentra, produciendo el compuesto cic (100%).
391
Ejemplo Intermedio 189 - compuesto cc
A una solución en DCM (15 ml) del compuesto cic (1,5 g, 4,1 mmol) a temperatura ambiente se le añade HOAt (10 mg, 4,5 mmol), seguido de una solución 1 M de DCC en DCM (4,5 ml, 4,5 mmol). Después de agitar durante 30 minutos a temperatura ambiente, y después se añade una solución en THF (20 ml, 0,2 M) del compuesto v (4 mmol). La reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche. Después, la reacción se filtra a través de celite. El filtrado se concentra para dar un aceite de color amarillo que se purifica por cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 50%/hexano), produciendo el compuesto cci (660 mg, 32%).
1008
Ejemplo Intermedio 190 - compuesto cci
A una solución en EtOH (6 ml) del compuesto cc (600 mg, 1,13 mmol) se le añade NaOH 2 N (1,7 ml, 3,4 mmol). La reacción se agita durante 2 horas a temperatura ambiente y después se acidifica a pH 3 con HCl 5 N. Después, la mezcla se diluye con EtOAc, seguido de la extracción de la fase orgánica. Posteriormente, la fase orgánica se lava con salmuera y después se seca sobre MgSO_{4}, produciendo el compuesto cci (92%) después de la concentración.
392 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 191 - compuesto ccii
A una solución en DCM (8 ml) de ccii (310 mg, 0,62 mmol) se le añade PyBOP (420 mg, 0,8 mmol). La solución se agita a temperatura ambiente durante 30 minutos. Después, a esta solución se le añade el compuesto xiii' (8 ml, 0,1 M) en THF, seguido de la adición de DIPEA (0,23 ml, 1,3 mmol). La reacción se agita a temperatura ambiente durante una noche y después se interrumpe con agua (25 ml) durante 30 minutos. Después, la mezcla se extrae con EtOAc. La fase orgánica resultante se lava con salmuera y después se seca sobre MgSO_{4} antes de concentrarse, produciendo un aceite de color amarillo. La purificación por cromatografía sobre gel de sílice (EtOH al 3%/EtOAc) produce el compuesto ccii (140 mg, 33%).
393 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 192 - compuesto ccxiv
A una solución del compuesto cciii, (N-difenilmetileno)-glicina éster de terc-butilo, (6 g, 0,0206 mmol) y PTC quiral (1,08 g, 0,00206 mmol) en DCM seco (48 ml), en atmósfera de N_{2}, a -60ºC, se le añade CsOH\cdotF_{2}O (6,9 g, 0,0412 mmol). A la mezcla de reacción se le añade gota a gota éster metílico de 1-carboxi-1-ciclopenteno (5,2 ml, 0,0412 mmol) en 10 ml de DCM. La mezcla se agita durante 4 días a -60ºC y después se diluye con 200 ml de Et_{2}O y se añaden 15 ml de una solución acuosa saturada de NH_{4}Cl. Las fases se separan y la fase orgánica se lava con 15 ml de agua y 15 ml de salmuera. Las fases acuosas se extraen con 100 ml de Et_{2}O. Las fases orgánicas se unen y se secan sobre Na_{2}SO_{4}. El producto en bruto se obtiene por retirada del disolvente, se disuelve en 100 ml de EtOH y después se añaden NH_{2}OH\cdotHCl (1,43 g, 0,0206 mmol) y NaOAc (1,68 g, 0,0206 mmol). La mezcla se calienta a reflujo durante 48 horas. Después, el disolvente se retira y el residuo en bruto obtenido se purifica directamente por cromatografía ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 30%-50%/hexano, produciendo el compuesto cciv (65%) en forma de un sólido de color blanco. C_{12}H_{19}NO_{3} (PM = 225,29): EM: m/z (M^{+} 1) = 226,5. Exceso Enantiomérico: 18% de ee, determinado por HPLC quiral.
394 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 193 - compuesto ccv
A una solución del compuesto cciv (2 g, 0,0088 mmol) en 60 ml de ACN se le añaden una cantidad catalítica de DMAP (0,216 g, 0,0017 mmol) y una solución de dicarbonato de di-terc-butilo (2,49 g, 0,011 mmol) en 30 ml de ACN La mezcla se agita durante 14 horas a temperatura ambiente, después se diluye con 100 ml de DCM y se lava con NaHCO_{3} saturado (10 ml) y con salmuera (10 ml). La fase orgánica se seca sobre Na_{2}SO_{4}. La evaporación del disolvente produce un producto en bruto que se purifica sobre una columna de gel de sílice eluyendo con EtOAc al 15%/hexano, dando el compuesto ccv (86%) en forma de un sólido de color blanco. C_{17}H_{27}NO_{5} PM = 325,40 EM: m/z (M^{+} + 1) = 326,2
395 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 194 - compuesto ccvi
A una solución del compuesto ccv (1,7 g, 0,0032 mmol) en 50 ml de THF (0,14 M) a -78ºC se le añade DIBAL-H (7,8 ml, 0,0078 mmol). La mezcla se agita durante 1 hora y después se añaden 10 ml de MeOH. La mezcla se diluye con 25 ml de EtOAc y 25 ml de una solución acuosa saturada de tartrato sódico, y después se agita a temperatura ambiente durante una hora. Las fases se separan y la fase acuosa se extrae una vez con 50 ml de EtOAc. La fase orgánicas se combinan y se secan sobre Na_{2}SO_{4}. La evaporación del disolvente da un residuo en bruto que se usa sin purificación. El producto en bruto se disuelve en 25 ml de DCM, se añade Et_{3}Si (0,84 ml, 0,0052 mmol) y después la mezcla se enfría a -78ºC antes de la adición gota a gota de BF_{3}OEt_{2} (0,71 ml, 0,0061 mmol). Después de 30 minutos, se añaden Et_{3}Si (0,84 ml) y BF_{3}OEt_{2} (0,71 ml) y la mezcla se agita durante 2 horas a -78ºC. Después, la reacción se interrumpe con NaHCO_{3} acuoso saturado (10 ml) y se extrae con DCM (2 x 20 ml). La fase orgánicas se combinan y se secan sobre Na_{2}SO_{4}. La evaporación del disolvente da un residuo en bruto que se purifica por cromatografía ultrarrápida eluyendo con EtOAc al 13%/hexano, produciendo el compuesto ccvi (87%). C_{17}H_{29}NO_{4} PM = 311,42 EM: m/z (M^{+} + 1) = 312,6
396 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 195 - compuesto ccvii
El compuesto ccvi (0,5 g, 0,0016 mmol) se disuelve en 8 ml de HCl 1 N en EtOAc (preparado burbujeando HCl seco en EtOAc seco y después diluyéndolo a 1 N con más cantidad de EtOAc). La mezcla se agita durante 6 horas a temperatura ambiente. El disolvente se retira al vacío y el precipitado resultante se disuelve en Et_{2}O. Después de agitar la mezcla durante 15 minutos, el disolvente se retira a presión reducida. El sólido de color blanco resultante se lava con Et_{2}O y el compuesto ccvii (0,27 g, 80% de rendimiento) se aísla por filtración. C_{12}H_{21}NO_{2} PM 211,15 EM: m/z (M^{+} + 1) = 212,6
397 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 196 - compuesto v
A una solución del compuesto ccxvi (0,230 g, 0, 74 mmol) en DCM (3,7 ml) se le añade TFA (2,85 ml). La mezcla se agita durante una noche, después el disolvente se retira al vacío a sequedad y el residuo se disuelve en EtOH (7,5 ml). La mezcla se enfría a 0ºC, se añade gota a gota SOCl_{2} (0,22 ml, 2,96 mmol) y después se calienta a reflujo durante 2 horas. El EtOH se retira a presión reducida y el residuo se disuelve en DCM (10 ml). La solución resultante se lava dos veces con una solución saturada acuosa de NaHCO_{3} (5 ml). Las fases se separan, la fase orgánica se seca sobre Na_{2}SO_{4} y el disolvente se retira al vacío, produciendo el compuesto \mu (80%) en forma de un aceite. C_{10}H_{17}NO_{2} PM: 183,25 MS: m/z (M^{+} + 1) 184,2.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 197 - compuesto cd
Se recoge 1-bencilimidazol (6 g, 37,9 mmol) en Et_{2}O (180 ml). La temperatura de la solución resultante se disminuye hasta -60ºC y se trata con n-BuLi (1,6 M, 24 ml). La reacción se agita durante 30 minutos y después se burbujea CO_{2} a través de la mezcla durante 15 minutos. El precipitado se filtra, se aclara con Et_{2}O y después se recoge en H_{2}O. Esta solución acuosa se acidifica a pH 3 con HCl 5 N. El producto deseado, cd, se aísla después de la liofilización en forma de un sólido de color blanco.
\vskip1.000000\baselineskip
398 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 198 - compuesto cdi
Una solución en DCM (100 ml) del compuesto i (9,25 g, 27,9 mmol) se trata a 0ºC con DAST (9,2 ml, 69,8 mmol). Después de agitar a temperatura ambiente durante una noche, la reacción se interrumpe con hielo y se extrae con DCM (200 ml). La fase orgánica se lava con salmuera y se concentra al vacío. El residuo se purifica con cromatografía sobre gel de sílice (EtOAc al 30%/hexanos), produciendo 8,5 g (86%) del intermedio fluorado deseado. Una porción de este intermedio (4,5 g, 14,2 mmol) se disuelve en EtOH (75 ml). Esta solución se somete a condiciones de hidrogenación convencionales usando Pd (OH)_{2}/C (2,98 g, contenido de Pd al 20%, 4,26 mmol). Después de agitar durante una noche a temperatura ambiente, la mezcla de reacción se filtra a través de Celite. Los filtrados se concentran al vacío, produciendo el compuesto cdi (2,5 g, 96%).
\vskip1.000000\baselineskip
399 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 199 - compuesto cdii
A una solución del compuesto cd (890 mg, 4,4 mmol) recogido en DCM (15 ml) se le añaden HOBT (595 mg, 4,4 mmol) y DCC (4,4 mmol, I M en DCM) y se agita durante 20 minutos. A esta mezcla se le añade una solución en DCM (15 ml) de lxxix' (990 mg, 3,5 mmol). La mezcla resultante se agita durante una noche en atmósfera de nitrógeno. La mezcla de reacción se diluye con EtOAc y se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. La fase orgánica se concentra al vacío, dando un residuo, que se purifica en EtOAc al 30%/Hexanos, produciendo el compuesto cdii (666 mg, 41%).
\vskip1.000000\baselineskip
400 
\newpage
Ejemplo Intermedio 200 - compuesto cdviii
El compuesto cdiii se prepara a partir del compuesto cdii en condiciones de hidrólisis convencionales usando alcohol metílico (10 ml) y NaOH 1 N (3 equiv.). Se recuperan 565 mg del compuesto cdiii (88%).
\vskip1.000000\baselineskip
401 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 201 - compuesto cdiv
El compuesto cdiii (124 mmol) se recoge en DCM (5 ml). Se añade DCC (1,6 mmol, DCM 1 M) seguido de HOAT (1,6 mmol). La mezcla resultante se agita 20 minutos y
\vskip1.000000\baselineskip
402 
\vskip1.000000\baselineskip
se añade gota a gota el compuesto cdi (1,6 mmol) en THF (8 ml). La reacción se agita durante una noche. La reacción se filtra y se aclara con EtOAc. La fase orgánica combinada se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera, se seca sobre MgSO_{4} y se concentra. La purificación se realiza en EtOAc al 30%/Hexanos, produciendo el compuesto cdiv (565 mg, 70%).
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo Intermedio 202 - cdv
El compuesto cdv (565 mg, 0,86 mmol) se prepara a partir del compuesto cdiv en condiciones de hidrólisis convencionales usando alcohol etílico (10 ml) y NaOH 1 N (3 equiv.). Se recuperan 490 mg (91%) del compuesto cdv.
\vskip1.000000\baselineskip
403 
\newpage
Ejemplo Intermedio 203 - cdvi
El compuesto cdv (490 mg, 0,78 mmol) se recoge en DCM (10 ml). A la solución en DCM se le añade PyBOP (520 mg, 1 mmol) seguido de una solución en THF (10 ml) de xiii (186 mg, 1 mmol). A la mezcla de reacción se le añade DIEA (0,18 ml, 1 mmol) y se agita durante una noche en atmósfera de nitrógeno. Al día siguiente, la reacción se diluye con EtOAc y se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. La purificación se realiza en EtOAc al 100%, produciendo el compuesto cdvi (478 mg, 77%).
404
Ejemplo Intermedio 204 - cdvii
El compuesto cdvi (478 mg, 0,6 mmol) se hidrogena usando Pd(OH_{2})/C (base seca al 20%, 100 mg) en MeOH (40 ml). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de hidrógeno. En este momento, la mezcla de reacción se filtra a través de Celite y se concentra, produciendo el compuesto cdvii (417 mg, 98%).
405
Ejemplo Intermedio 205 - cdx
El compuesto cxxv (adquirido en Albany Molecular Research Inc., 15 g, 5,2 mmol) se recoge en DCM (15 ml). A esta solución se le añaden PyBOP (2,7 g, 5,2 mmol) y HOBT (700 mg, 5,2 mmol). A la solución anterior se le añade una solución en THF (15 ml) de (-)-alfa-(4-piridil)etil amina (640 mg, 5,2 mmol), seguido de DIEA (0,93 ml, 5,2 mmol). [La (-)-alfa-(4-piridil)etil amina se obtiene a partir de la sal tartrato de (-)-alfa-(4-piridil)etil amina (Aldrich) por agitación con NaOH 1 N (2 equiv.) durante 1 hora seguido de extracción con EtOAc (3 x), recuperación del 70%]. La reacción se agita durante una noche a temperatura ambiente. La mezcla de reacción se lava con NaHCO_{3} saturado y salmuera. El producto se purifica en EtOH al 5%/EtOAc, produciendo 2 g (99%) del compuesto intermedio cdx.
406
Ejemplo Intermedio 206 - cdviii
El compuesto cdx (2 g, 5,2 mmol) se hidrogena usando Pd al 10%/C (500 mg) en MeOH (50 ml). La mezcla de reacción se agita durante una noche en atmósfera de hidrógeno. El producto se filtra a través de celite y se concentra, dando el compuesto cdviii (1,3 g, 98%).
407
Farmacología
Los compuestos de acuerdo con la invención descritos en este documento son útiles porque pueden inhibir la proteasa de VHC y, por lo tanto, también son útiles para inhibir la replicación del VHC.
Por consiguiente, una invención del presente documento se refiere al uso de los compuestos de acuerdo con la invención en la fabricación de un medicamento para inhibir proteasas de VHC que comprende poner en contacto una cantidad inhibidora anti-proteasa de VHC de un compuesto BW o CU con una composición que comprende proteasa de VHC.
Otra invención del presente documento se refiere al uso de los compuestos de acuerdo con la invención en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación de VHC, que comprende poner contacto VHC con una cantidad eficaz de un compuesto BW o CU. Además, otra invención del presente documento se refiere al uso de los compuestos de acuerdo con la invención en la fabricación de un medicamento para tratar a un paciente que padece o está expuesto a una infección por VHC, que comprende administrar al paciente una cantidad farmacéuticamente eficaz de compuesto BW o CU. Debe entenderse que las referencias en este documento al tratamiento de una infección por VHC incluyen terapia profiláctica para prevenir o inhibir la infección así como el tratamiento de una infección aguda o crónica por VHC establecida o situaciones fisiológicas asociadas con la infección por VHC para curar la infección en el paciente, inhibir el grado (cantidad) de infección o mejorar las condiciones fisiológicas asociadas con dicha infección. Se entiende que "cantidad eficaz" describe una cantidad del compuesto de la presente invención eficaz dentro del alcance de un criterio biológico razonable, adecuada para uso en contacto con las células de seres humanos y otros mamíferos sin toxicidad indebida, irritación, respuesta alérgica y similares, y que está proporcionada con una relación razonable de beneficios/riesgos en el tratamiento de una infección por VHC y, por lo tanto, que produce el efecto terapéutico deseado.
Las situaciones fisiológicas descritas en este documento incluyen algunas, pero no todas las situaciones clínicas posibles en las que se justifica un tratamiento anti-VHC. Los especialistas en este campo serán conscientes de las circunstancias que requieren un tratamiento anti-VHC.
Un aspecto particular de la invención proporciona un compuesto de acuerdo con la invención que deberá administrarse en forma de una composición farmacéutica, aunque el compuesto puede administrarse solo. "Composición farmacéutica" significa una composición que comprende un compuesto BW o CU y al menos un componente seleccionado entre el grupo que comprende soportes, diluyentes, recubrimientos, adyuvantes, excipientes, o vehículos farmacéuticamente aceptables, tales como agentes conservantes, cargas, agentes disgregantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes estabilizadores de la emulsión, agentes de suspensión, agentes isotónicos, agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes de perfume, agentes colorantes, agentes antibacterianos, agentes antifúngicos, otros agentes terapéuticos, agentes lubricantes, agentes para promover o retrasar la adsorción y agentes de distribución, dependiendo de la naturaleza del modo de administración y las formas farmacéuticas. Las composiciones pueden presentarse en forma de comprimidos, píldoras, gránulos, polvos, soluciones o suspensiones acuosas, soluciones inyectables, elixires o jarabes. Los ejemplos de agentes de suspensión incluyen alcoholes isoestearílicos etoxilados, polioxietilen-sorbitol y ésteres de sorbitano, celulosa microcristalina, metahidróxido de aluminio, bentonita, agar-agar y tragacanto, o mezclas de estas sustancias. Los ejemplos de agentes antibacterianos y antifúngicos para la prevención de la acción de microorganismos incluyen parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico y similares. Los ejemplos de agentes isotónicos incluyen azúcares, cloruro sódico y similares. Los ejemplos de agentes para retrasar la adsorción para prolongar la absorción incluyen monoestearato de aluminio y gelatina. Los ejemplos de agentes promotores de la adsorción para mejorar la absorción incluyen dimetil sulfóxido y análogos relacionados. Los ejemplos de soportes, diluyentes, disolventes, vehículos, agentes solubilizantes, emulsionantes y estabilizadores de la emulsión incluyen agua, cloroformo, sacarosa, etanol, alcohol isopropílico, carbonato de etilo, acetato de etilo, alcohol bencílico, alcohol tetrahidrofurfurílico, polioles de benzoato de bencilo, propilenglicol, 1,3-butilenglicol, glicerol, polietilenglicoles, dimetilformamida, Tween® 60, Span® 80, alcohol cetoestearílico, alcohol miristílico, monoestearato de glicerilo y lauril sulfato sódico, ésteres de ácidos grasos de sorbitán, aceites vegetales (tales como aceite de algodón, aceite de cacahuete, aceite de germen de maíz, aceite de oliva, aceite de ricino y aceite de sésamo) y ésteres orgánicos inyectables tales como oleato de etilo y similares, o mezclas adecuadas de estas sustancias. Los excipientes ilustrativos incluyen lactosa, azúcar de la leche, citrato sódico, carbonato cálcico y fosfato dicálcico. Los ejemplos de agentes disgregantes incluyen almidón, ácidos algínicos y ciertos silicatos complejos. Los ejemplos de lubricantes incluyen estearato de magnesio, laurilsulfato sódico, talco, así como polietilenglicoles de alto peso molecular.
Pueden usarse otros agentes terapéuticos en combinación con un compuesto de la presente invención, incluyendo otros agentes anti-VHC. Algunos ejemplos de agentes anti-VHC conocidos incluyen agentes inmunomoduladores tales como interferones \alpha, \beta o \gamma; compuestos de interferón-\alpha modificados pegilados, otros agentes antivirales tales como ribavirina y amantadina; otros inhibidores de proteasas de hepatitis C; inhibidores de otras dianas en el ciclo de vida del VHC incluyendo la helicasa, polimerasa, metaloproteasa, la entrada de ribosomas internos o compuestos antivirales de amplio espectro tales como VX 497, un inhibidor de la inosina monofosfato deshidrogenasa celular, IMPDH, mencionado por la Patente de Estados Unidos Nº 5.807.876; o combinaciones de los mismos. Los agentes terapéuticos usados en combinación con un compuesto de la presente invención pueden administrarse por separado de forma simultánea o secuencial.
\newpage
La elección de un material en la composición farmacéutica distinto del compuesto BW o CU generalmente se determina de acuerdo con propiedades químicas del compuesto activo tales como solubilidad, el modo particular de administración y las disposiciones a cumplir en la práctica farmacéutica. Por ejemplo, para preparar comprimidos pueden usarse excipientes tales como lactosa, citrato sódico, carbonato cálcico, fosfato dicálcico y agentes disgregantes tales como almidón, ácidos algínicos y ciertos silicatos complejos combinados con lubricantes tales como estearato de magnesio, lauril sulfato sódico y talco.
Las composiciones farmacéuticas pueden presentarse en formas diversas tales como comprimidos, píldoras, gránulos, polvos, soluciones o suspensiones acuosas, soluciones inyectables, elixires o jarabes.
"Forma de dosificación líquida" significa que la dosis del compuesto activo a administrar al paciente está en forma líquida, por ejemplo, emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables. Además de los compuestos activos, las formas de dosificación líquidas pueden contener diluyentes inertes usados comúnmente en la técnica tales como disolventes, agentes solubilizantes y emulsionantes.
También pueden emplearse composiciones sólidas como cargas en cápsulas de gelatina rellenas blandas y duras usando excipientes tales como lactosa o azúcar de la leche, así como polietilenglicoles de alto peso molecular y similares.
Cuando se usan suspensiones acuosas, pueden contener agentes emulsionantes o un agente que facilite la suspensión.
La fase oleosa de la composición farmacéutica en emulsión puede constituirse a partir de ingredientes conocidos de una manera conocida. Aunque la fase puede comprender simplemente un emulsionante (conocido de otra manera como emulgente), deseablemente comprende una mezcla de al menos un emulsionante con una grasa o un aceite o tanto con una grasa como con un aceite. Preferiblemente, se incluye un emulsionante hidrófilo junto con un emulsionante lipófilo que actúa como estabilizante. También se prefiere incluir tanto un aceite como una grasa. Conjuntamente, el o los emulsionantes con o sin el o los estabilizantes constituyen la cera emulsionante, y éstos junto con el aceite y la grasa constituyen la base de pomada emulsionante que forma la fase dispersa oleosa de las formulaciones en crema.
Si se desea, la fase acuosa de la base de crema puede incluir, por ejemplo, al menos un 30% p/p de un alcohol polihidroxílico, es decir, un alcohol que tiene dos o más grupos hidroxilo tal como propilenglicol, butano-1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol y polietilenglicol (incluyendo PEG 400) y mezclas de los mismos. Las formulaciones tópicas deseablemente pueden incluir un compuesto que aumenta la absorción o penetración del ingrediente activo a través de la piel u otras áreas afectadas.
La elección de los aceites o grasas adecuados para una formulación se basa en conseguir las propiedades cosméticas deseadas. De esta manera, la crema preferiblemente debe ser no grasa, no debe manchar y debe ser un producto lavable con consistencia adecuada para evitar las fugas desde tubos u otros recipientes. Pueden usarse ésteres alquílicos mono o dibásicos de cadena lineal o ramificada tales como miristato de diisopropilo, oleato de decilo, palmitato de isopropilo, estearato de butilo, palmitato de 2-etilhexilo o una mezcla de ésteres de cadena ramificada conocida como Crodamol CAP. Éstos pueden usarse solos o en combinación dependiendo de las propiedades necesarias. Como alternativa, pueden usarse lípidos con un alto punto de fusión tales como parafina blanda blanca y/o parafina líquida u otros aceites minerales.
En la práctica, un compuesto/composición farmacéutica de la presente invención puede administrarse en una formulación adecuada a seres humanos y animales mediante administración tópica o sistémica, incluyendo la vía oral, por inhalación, rectal, nasal, bucal, sublingual, vaginal, colónica, parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal y epidural), intracisternal e intraperitoneal. Se apreciará que la vía preferida puede variar, por ejemplo, con el estado del receptor.
"Formas de dosificación farmacéuticamente aceptables" se refiere a formas de dosificación del compuesto de la invención e incluye, por ejemplo, comprimidos, grageas, polvos, elixires, jarabes, preparaciones líquidas, incluyendo suspensiones, pulverizaciones, inhaladores, comprimidos, pastillas, emulsiones, soluciones, gránulos, cápsulas y supositorios, así como preparaciones líquidas para inyección, incluyendo preparaciones de liposomas. Pueden encontrarse técnicas y formulaciones, en general, en Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, PA, última edición.
Las "formulaciones adecuadas para administración oral" pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas, obleas o comprimidos que contienen, cada uno, una cantidad predeterminada del ingrediente activo; como un polvo o gránulos; como una solución o una suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite. Los ingredientes activos también pueden presentarse como un bolo, electuario o pasta.
Un comprimido puede obtenerse por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes auxiliares. Los comprimidos de compresión pueden prepararse comprimiendo en una máquina adecuada el ingrediente activo en una forma fluida tal como un polvo o gránulos, opcionalmente mezclado con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, conservante, tensioactivo o agente de dispersión. Los comprimidos moldeados pueden obtenerse por moldeo en una máquina adecuada de una mezcla de los compuestos en polvo humedecidos con un diluyente líquido inerte. Los comprimidos opcionalmente pueden recubrirse o marcarse y se pueden formular para proporcionar la liberación lenta o controlada del ingrediente activo contenido en los mismos.
Las composiciones sólidas para administración rectal incluyen supositorios formulados de acuerdo con procedimientos conocidos y que contienen al menos un compuesto de la invención.
Si se desea, y para una distribución más eficaz, los compuestos pueden microencapsularse o unirse a un sistema de liberación lenta o de liberación dirigida tal como una matriz polimérica biodegradable biocompatible (por ejemplo, poli(d,l-lactida co-glicolida)), liposomas y microesferas e inyectarse por vía subcutánea o intramuscular por una técnica denominada depósito subcutáneo o intramuscular para proporcionar la liberación lenta continua del compuesto o los compuestos durante un período de 2 semanas o más. Los compuestos pueden esterilizarse, por ejemplo, por filtración a través de un filtro que retiene bacterias o incorporando agentes de esterilización en forma de composiciones sólidas estériles que pueden disolverse en agua estéril, o algún otro medio inyectable estéril inmediatamente antes del uso.
"Formulaciones adecuadas para administración nasal o por inhalación" significa formulaciones que están en una forma adecuada para administrarse por vía nasal o por inhalación a un paciente. La formulación puede contener un vehículo, en forma de polvo, que tiene un tamaño de partículas, por ejemplo, en el intervalo de 1 a 500 micrómetros (incluyendo tamaños de partículas en un intervalo comprendido entre 20 y 500 micrómetros en incrementos de 5 micrómetros tales como 30 micrómetros, 35 micrómetros, etc.). Las formulaciones adecuadas en las que el vehículo es un líquido para la administración, por ejemplo, como una pulverización nasal o como gotas nasales, incluyen soluciones acuosas u oleosas del ingrediente activo. Pueden prepararse formulaciones adecuadas para la administración en aerosol de acuerdo con procedimientos convencionales y pueden administrarse con otros agentes terapéuticos. La terapia por inhalación se administra fácilmente por medio de inhaladores dosificadores.
"Formulaciones adecuadas para administración oral" significa formulaciones que están en una forma adecuada para administrarse por vía oral a un paciente. Las formulaciones pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas, obleas o comprimidos que contienen, cada uno, una cantidad predeterminada del ingrediente activo; como un polvo o gránulos, como una solución o suspensión en un líquido acuoso o un líquido no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión líquida de agua en aceite. El ingrediente activo también puede presentarse como un bolo, electuario o pasta.
"Formulaciones adecuadas para administración parenteral" significa formulaciones que están en una forma adecuada para administrarse por vía parenteral a un paciente. Las formulaciones son estériles e incluyen emulsiones, suspensiones, soluciones de inyección acuosas y no acuosas que puede contener agentes de suspensión y agentes espesantes y anti-oxidantes, tampones, bacteriostatos y solutos que hacen que la formulación sea isotónica y tienen un pH ajustado de forma adecuada, con la sangre del receptor para el que están destinadas.
"Formulaciones adecuadas para administraciones rectales o vaginales" se refiere a formulaciones que están en una forma adecuada para administrarse por vía rectal o vaginal a un paciente. La formulación preferiblemente está en forma de supositorios que pueden prepararse mezclando los compuestos de la presente invención con excipientes o vehículos no irritantes adecuados tales como manteca de cacao, polietilenglicol o una cera de supositorio, que son sólidos a las temperaturas normales pero líquidos a la temperatura ambiente y, por lo tanto, se funden en el recto o en la cavidad vaginal y liberan el componente activo.
"Formulaciones adecuadas para administración sistémica" significa formulaciones que están en una forma adecuada para administrarse por vía sistémica a un paciente. La formulación preferiblemente se administra por inyección, incluyendo inyección intransmuscular, intravenosa, intraperitoneal y subcutánea. Para la inyección, los compuestos de la invención se formulan en soluciones líquidas, preferiblemente en tampones fisiológicamente compatibles tales como solución de Hank o solución de Ringer. Además, los compuestos pueden formularse en forma sólida y redisolverse o suspenderse inmediatamente antes del su uso. También se incluyen formas liofilizadas. La administración sistémica también puede ser por medios transmucosos o transdérmicos, o los compuestos pueden administrarse por vía oral. Para la administración transmucosa o transdérmica, en la formulación se usan penetrantes apropiados para la barrera a atravesar. Estos penetrantes se conocen generalmente en la técnica e incluyen, por ejemplo, sales biliares y derivados de ácido fusídico para la administración transmucosa. Además, pueden usarse detergentes para facilitar la infiltración. La administración transmucosa puede realizarse por medio del uso de pulverizaciones nasales, por ejemplo, o supositorios. Para administración oral, los compuestos se formulan en formas de administración oral convencionales tales como cápsulas, comprimidos y tónicos.
"Formulaciones adecuadas para administración tópica" significa formulaciones que están en una forma adecuada para administrarse tópicamente a un paciente. La formulación puede presentarse como una pomada tópica, ungüentos, polvos, pulverizaciones e inhalantes, geles (basados en agua o alcohol) o cremas, como se conoce generalmente en la técnica, o puede incorporarse en una base de matriz para la aplicación en un parche, lo cual permite la liberación controlada del compuesto a través de la barrera transdérmica. Cuando se formulan en una pomada, los ingredientes activos pueden emplearse con una base de pomada parafínica o miscible con agua. Como alternativa, los ingredientes activos pueden formularse en una crema con una base de crema de aceite en agua. Las permutaciones adecuadas para la administración tópica en el ojo incluyen gotas oftálmicas en las que el ingrediente activo se disuelve o suspende en un vehículo adecuado, especialmente un disolvente acuoso para el ingrediente activo. Las formulaciones adecuadas para la administración tópica en la boca incluyen grageas que comprenden el ingrediente activo en una base aromatizada, normalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto; pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina o sacarosa y goma arábiga; y colutorios que comprenden el ingrediente activo en un vehículo líquido adecuado.
"Forma de dosificación sólida" significa que la forma de dosificación del compuesto de la invención es una forma sólida, por ejemplo cápsulas, comprimidos, píldoras, polvos, grageas o gránulos. En estas formas de dosificación sólidas, el compuesto de la invención se mezcla con al menos un excipiente inerte habitual (o vehículo) tal como citrato sódico o fosfato dicálcico o (a) cargas o diluyentes tales como, por ejemplo, almidones, lactosa, sacarosa, glucosa, manitol y ácido silícico, (b) aglutinantes tales como, por ejemplo, carboximetilcelulosa, alginatos, gelatina, polivinilpirrolidona, sacarosa y goma arábiga, (c) humectantes tales como, por ejemplo, glicerol, (d) agentes disgregantes tales como, por ejemplo, agar-agar, carbonato cálcico, almidón de patata o tapioca, ácido algínico, ciertos silicatos complejos y carbonato sódico, (e) retardadores de la solución tales como, por ejemplo, parafina, (f) aceleradores de la absorción tales como, por ejemplo, compuestos de amonio cuaternario, (g) agentes humectantes tales como, por ejemplo, alcohol cetílico y monoestearato de glicerol, (h) adsorbentes tales como, por ejemplo, caolín y bentonita, (i) lubricantes tales como, por ejemplo, talco, estearato cálcico, estearato de magnesio, polietilenglicoles sólidos, lauril sulfato sódico, (j) agentes opacificadores, y (k) agentes tamponantes y agentes que liberan el o los compuesto de la invención en una cierta parte del tracto intestinal de una manera retardada.
Los niveles de dosificación reales del ingrediente o ingredientes activos en las composiciones de la invención pueden variarse para obtener una cantidad de ingrediente o ingredientes activos que sea eficaz para obtener una respuesta terapéutica deseada para una composición y procedimiento de administración particular para un paciente. Un nivel de dosificación seleccionado para cualquier paciente particular, por lo tanto, depende de una diversidad de factores que incluyen el efecto terapéutico deseado, la vía de administración, la duración deseada del tratamiento, la etiología y la gravedad de la enfermedad, el estado del paciente, el peso, sexo, dieta y edad, el tipo y potencia de cada ingrediente activo, las velocidades de absorción, metabolismo y/o excreción y otros factores.
La dosis diaria total de los compuestos de la presente invención administrada a un paciente en una sola dosis o en dosis divididas puede estar en cantidades, por ejemplo, de aproximadamente 0,001 a aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal al día y preferiblemente de 0,01 a 10 mg/kg/día. Por ejemplo, en un adulto, las dosis generalmente son de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100, preferiblemente de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal al día por inhalación, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100, preferiblemente de 0,1 a 70, más especialmente de 0,5 a 10 mg/kg de peso corporal al día por administración oral y de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 50, preferiblemente de 0,01 a 10 mg/kg de peso corporal al día por administración intravenosa. El porcentaje de ingrediente activo en una composición puede variarse, aunque debe constituir una proporción tal que se obtenga una dosificación adecuada. Las composiciones de dosificación unitaria pueden contener tales cantidades o submúltiplos de las mismas como pueden usarse para constituir la dosis diaria. Evidentemente, pueden administrarse varias formas de dosificación unitarias aproximadamente al mismo tiempo. Una dosificación puede administrarse tan frecuentemente como sea necesario para obtener el efecto terapéutico deseado. Algunos pacientes pueden responder rápidamente a una dosis mayor o menor y pueden encontrar adecuadas dosis de mantenimiento mucho más débiles. Para otros pacientes, puede ser necesario tener tratamientos a largo plazo en una proporción de 1 a 4 dosis al día de acuerdo con los requisitos fisiológicos de cada paciente particular. No necesita decirse que, para otros pacientes, no será necesario prescribir más de una o dos dosis al día.
Las formulaciones pueden prepararse en forma de dosificación unitaria por cualquiera de los procedimientos bien conocidos en la técnica de la farmacia. Estos procedimientos incluyen la etapa de asociar el ingrediente activo con el vehículo que constituye uno o más ingredientes auxiliares. En general, las formulaciones se preparan asociando uniforme e íntimamente el ingrediente activo con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos, o ambos, y después si es necesario dando forma al producto.
Las formulaciones pueden presentarse en recipientes de una sola dosis o de múltiples dosis, por ejemplo, ampollas y viales cerrados herméticamente con tapones elastoméricos y pueden almacenarse en un estado secado por congelación (liofilizado) que sólo necesita la adición del vehículo líquido estéril, por ejemplo, agua para inyección, inmediatamente antes del uso. Pueden prepararse soluciones y suspensiones de inyección extemporáneas a partir de un polvo, gránulos y comprimidos estériles del tipo descrito previamente.
Los compuestos dentro del alcance de la presente invención presentan actividades farmacológicas destacadas de acuerdo con los ensayos descritos en la bibliografía y más adelante, donde los resultados de dichos ensayos se cree que se correlacionan con la actividad farmacológica en seres humanos y otros mamíferos.
Procedimiento de ensayo enzimático in vitro Inhibición de la Serina Proteasa NS3 de VHC
Se expresó el dominio de proteasa NS3 de VHC y se purificó como se ha descrito previamente (Vertex, publicación PCT W098/17679; que se incorpora en este documento por referencia). El sustrato peptídico cromogénico EDVVAbuC-p-nitroanilida y el fragmento de cofactor NS4A (-KKGSVVIVGRIVLSGK-) para la proteasa NS3 se sintetizó por encargo por American Peptide Corn (Ca). Los compuestos de la presente invención se ensayaron con respecto a su capacidad de inhibir la actividad proteasa NS3 de VHC usando un ensayo espectrofotométrico con EDVVAbuC-p-nitroanilida como sustrato. El ensayo se realizó en una placa de microtitulación de 96 pocillos usando un lector SpectraMax250 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA) con capacidad cinética. La escisión del sustrato EDVVAbuC-p-nitroanilida (500 \muM) por la proteasa NS3 de VHC purificada (0,5 \muM) se realizó a 30ºC en el tampón que contenía fragmento de NS4A 30 \muM, Hepes 46 mM, pH 8,0, NaCl 92 mM, glicerol al 18%, DTT 5 mM y DMSO al 7,5% en ausencia o presencia del compuesto de ensayo. La reacción se controló con respecto a la liberación de pNA (p-nitroanilina) a 405 nm.
La determinación de los parámetros cinéticos incluyendo Vmax, K_{m} y V_{max}/K_{m} se realiza en las condiciones descritas anteriormente. Los valores de Ki se calculan a partir de los gráficos de velocidad frente [inhibidor] a concentraciones fijas de enzima y sustrato, por medio de un ajuste no lineal de mínimos cuadrados de los datos a la ecuación de Morrison para una inhibición competitiva de unión fuerte [J. F. Morrison, Biochem. Biophys. Acta. 185 269-286 (1969)]. Para este procedimiento se usa el programa Prism (GraphPad Software, Inc.).
Los inhibidores de serina proteasa de VHC descritos en este documento pueden usarse en combinación con otras moléculas que presentan directamente o inducen indirectamente una actividad anti-VHC profilácticamente en pacientes con riesgo de contraer una infección por VHC o para tratar pacientes que ya están infectados. La expresión "anti-actividad de VHC" se refiere a la capacidad de una molécula, cuando está presente, de inhibir completamente o reducir la acumulación de viriones de VHC en comparación con la acumulación de viriones de VHC en ausencia de dicha molécula, y/o la capacidad de una molécula de reducir o mejorar afecciones o síntomas asociados con la infección o patogénesis por VHC en pacientes. Las moléculas que tienen actividad anti-VHC incluyen las que interrumpen una o más etapas en la infección o replicación por VHC, así como las que inducen acciones inmunomoduladoras y antiproliferativas en las células hospedadoras. Las moléculas que tienen actividad anti-VHC pueden inhibir acontecimientos de replicación específicos de VHC tales como, pero sin limitación, síntesis de proteínas o de ácidos nucleicos dirigida a VHC. Las etapas de replicación de VHC en las que pueden actuar moléculas que tienen actividad anti-VHC incluyen la entrada en la célula (por ejemplo unión; penetración); descapsulación y liberación del genoma de VHC; replicación del genoma de VHC (por ejemplo replicación de cualquier cadena del genoma de ARN viral; transcripción del ARN mensajero viral); traducción de proteínas de VHC; modificación postraduccional de proteínas de VHC (por ejemplo, escisión proteolítica; glicosilación); transporte intracelular de proteínas virales; montaje de los componentes del virión; y liberación de partículas virales (por ejemplo, gemación). Las clases de moléculas que tienen actividad antiviral incluyen, pero sin limitación, receptores "señuelo" solubles y anticuerpos anti-receptor; bloqueantes de canales iónicos, estabilizadores de la cápsida e inhibidores de proteínas de fusión; inhibidores de polimerasas virales, transcriptasa inversa, helicasa, primasa o integrasa; oligonucleótidos antisentido y ribozimas; agentes inmunomoduladores e inmunoestimuladores, incluyendo citoquinas tales como interferones, así como agonistas peptídicos, esteroides y fármacos clásicos tales como levamisol; inhibidores de proteínas reguladoras; inhibidores de proteasa; inhibidores del ensamblaje de proteínas; y anticuerpos antivirales y linfocitos citotóxicos. La expresión "cantidad eficaz anti-VHC" o "cantidad farmacéuticamente eficaz" se refiere a una cantidad de un compuesto, o combinación de compuestos como se describen en este documento, eficaz para reducir o mejorar las afecciones o síntomas asociados con la infección por VHC o la patogénesis asociada en pacientes, o para reducir los niveles virales in vitro o in vivo. Las aplicaciones in vitro incluyen el Sistema de Ensayo de Replicón descrito más adelante donde dichas cantidades son eficaces para reducir la acumulación
de ARN del replicón de VHC y/o la acumulación de proteínas codificadas por genes contenidos en su interior.
Los compuestos que tienen actividad anti-VHC contemplados para uso en las composiciones y procedimientos de terapia combinada descritos en este documento incluyen, pero sin limitación, moléculas inmunomoduladoras, incluyendo citoquinas inmunoestimuladoras y otros compuestos que se sabe que tienen actividad antiviral para VHC, tales como diversos nucleósidos y nucleótidos antivirales.
Las moléculas inmunomoduladoras contempladas para uso en combinación con los inhibidores de serina proteasa de VHC descritos en este documento incluyen, pero sin limitación, interferón-alfa 2B (Intron A. Schering Plough); Rebatron (Schering Plough. Interferon-alfa 2B + Ribavirina); interferón alfa pegilado (Reddy, K.R. et al. Efficacy and safety of pegylated (40-kd) interferon alpha-2a compared with interferon alpha-2a in noncirrhotic patients with chronic hepatitis C. Hepatology 33. 433-438 (2001)), interferón consenso (Kao, J. H., Chen, P. J., Lai, M. Y. & Chen, D. S. Efficacy of consensus interferon in the treatment of chronic hepatitis C. J. Gastroenterol, Hepatol, 15, 1418-1423 (2000)); interferón alpha-2A (Roferon A; Roche); linfoblastoide o interferón "natural"; interferón tau (Clayette, P. et al. IFN-tau, a new interferon type I with antiretroviral activity, Pathol. Biol. (Paris) 47, 553-559 (1999)); interleuquina 2 (Davis, G.L., Nelson, D.R. & Reyes, G.R. Future options for the management of hepatitis C. Seminars in Liver Disease 19, 103-112 (1999)); Interleuquina 6 (Davis, G.L., Nelson, D.R. & Reyes, G.R. Future options for the management of hepatitis C. Seminars in Liver Disease 19, 103-112 (1999)); interleuquina 12 (Davis, G.L., Nelson, D.R. & Reyes, G.R. Future options for the management of hepatitis C. Seminars in Liver Disease 19, 103-112 (1999)); ribavirina y compuestos que potencian la aparición de una respuesta de células T coadyuvantes de tipo I (Davis, G.L., Nelson, D.R. & Reyes, G.R. Future options for the management of hepatitis C. Seminars in Liver Disease 19, 103-112 (1999)). Los interferones pueden mejorar las infecciones virales ejerciendo efectos antivirales directos y/o modificando la respuesta inmune a la infección. Los efectos antivirales de los interferones a menudo están mediados por la inhibición de la penetración viral o la descapsulación, síntesis del ARN viral, traducción de proteínas virales y/o el ensamblaje y la liberación de virus.
Los compuestos que estimulan la síntesis de interferón en las células (Tazulakhova, E.B., Parshina, O.V., Gusev, T.S. & Ershov, F.I. Russian Experience in Screening, Analysis, and Clinical Application of Novel Interferon Inducers. J. Interferon Cytakine Res. 21, 65-73)) incluyen, pero sin limitación, ARN bicatenario, solo o en combinación con tobramicina e imiquimod (3M Pharmaceuticals) (Sauder, D.N. Immunomodulatory and pharmacologic properties of imiquimod. J. Am. Acad. Dermatol. 43, S6-11 (2000)).
Otros compuestos que se sabe que tienen o que puedan tener actividad antiviral contra VHC gracias a mecanismos no inmunomoduladores incluyen, pero sin limitación, ribavirina (ICN Pharmaceuticals); inhibidores de inosina 5'-monofosfato deshidrogenasa (VX-497, que se está desarrollando por Vertex Pharmaceuticals; amantadina y rimantadina (Younossi, A.M. and Perillo, R.P. The roles of amantadine, rimantadine, ursodeoxycholic acid, NSAIDs, alone or in combination with alpha interferons, in the treatment of chronic hepatitis C. Seminars in Liver Disease 19, 95-102 (1999)); LY217896 (Patente de Estados Unidos 4.835.168) (Colacino, J.M. et al. Evaluation of the anti-influenza virus activities of 1,3,4-thiadiazol-2-ylcyanamide (1.Y217896) and its sodium salt. Amimicrobial Agents & Chemotherapy 34, 2156-2163 (1990)) y éster metílico del ácido 9-hidroxiimino-6-metoxi-1,4a-dimetil-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidro-fenantreno-1-carboxilico; clorhidrato de éster metílico del ácido 6-metoxi-1,4a-dimetil-9-(4-metil-piperazina-1-ilimino)-1,2,3,4,4a,9,10,10a-octahidrofenantreno-1-carboxílico; 1-(2-cloro-fenil)-3-(2,2-difenil-etil)-urea (Patente de Estados Unidos Nº 6.127.422).
Las formulaciones, dosis y vías de administración para las moléculas anteriores se enseñan en las referencias citadas más adelante o son bien conocidas en la técnica como se describe, por ejemplo, en F.G. Hayden, en Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, Novena Edición, Hardman et al., Eds., McGraw-Hill, New York (1996). Capítulo 50, páginas 1191-1223, y las referencias citadas en este documento. Como alternativa, una vez que se ha identificado un compuesto que presenta actividad antiviral contra VHC, puede determinarse una cantidad farmacéuticamente eficaz de ese compuesto usando técnicas que son bien conocidas para el especialista en la técnica. Véase, por ejemplo, Benet et al, en Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics. Novena Edición, Hardman et al, Eds., McGraw-Hill, New York (1996). Capítulo 1, páginas 3-27, y las referencias citadas en este documento. De esta manera, las formulaciones, intervalos de dosificación y regímenes de dosificación apropiados de dicho compuesto pueden determinarse fácilmente por procedimientos rutinarios.
Las combinaciones de fármacos de la presente invención pueden proporcionarse a una célula o células, o a un paciente humano, en formulaciones farmacéuticamente aceptables separadas administradas simultánea o secuencialmente, en formulaciones que contienen más de un agente terapéutico, o por una diversidad de formulaciones de un solo agente o múltiples agentes. Sin embargo, estas combinaciones de fármacos una vez administradas forman una cantidad eficaz de componentes contra VHC.
Actualmente se dispone de un gran número de otros inmunomoduladores e inmunoestimuladores que pueden usarse en los procedimientos de la presente invención e incluyen: AA-2G: dipéptido de adamantilamida; adenosina desaminasa. Enzon; adyuvante, Alliance; adyuvantes, Ribi; adyuvantes. Vaxcel; Adjuvax; agelasphin-11; terapia para el SIDA. Chiron; algal glucan, SRI; algammulin. Anutech; Anginlyc; factores anticelulares, Yeda; Anticort; inmunógeno antigastrin-17, Ap: sistema de liberación de antígeno. Vac; formulación de antígeno, IDBC; inmunógeno antiGnRH, Aphton; Antiherpin; Arbidol; azarole; Bay-q-8939; Bayr-1005; BCH-1393; Betafectin; Biostim; BL-001, BL-009; Broncostat; Cantastim; CDR1-84-246; cefodizime; inhibidores de quimioquinas. ICOS; péptidos de CMV, City of Hope; CN-5888; agente de liberación de citoquinas, St; DHEAS, Paradigm; DISC TA-HSV; JO7B; IOIA; IOIZ; ditiocarb sódico, ECA-10-142; ELS-1; endotoxina, Novartis, FCE-20696; FCE-24089; FCE-24578; ligando FLT-3, Immune; FR-900483; FR-900494; FR-901235; proteínas G FTS-Zn, Cadus; gludapcin; glutaurina; glycophosphopeptical; GM-2; MM-53; GMDP; vacuna de factor de crecimiento, EntreM; H-BIG, NABI; H-CIG, NABI; HAB-439; vacuna de Helicobacter pylori, factor inmune específico de herpes; terapia para VIH, United Biomed; HyperGAM+CF; Immu-Max; Immun BCG; terapia inmune, Connective; inmunomodulador, Evans; inmunomoduladores, Novacell; imreg-1; imreg-2; Indomune; inosine pranobex; interferón, Dong-A (alfa2); interferón, Genentech (gamma), interferón, Novartis (alfa), interleuquina-12, Genetics Ins; interleuquina-15, Immunex; interleuquina-16, Research Cor; ISCAR-1; JOO5X, L-644257; ácido licomarasmínico; LipoTher, L-409, LK-410, LP-2307; LT(R1926), LW-50020, MAF, Shionogi; derivados de MDP, Merck, met-encefalina, TNT; metilfurilbutirolactonas; MIMP; mirimostim; vacuna bacteriana mixta, Tem; MM1; moniliastat; MPLA, Ribi; EM-705; murabutide; murabutide, Vacsyn; derivado de muramil dipéptido; derivados de muramil péptido myelopid; -563; NACOS-6; NH-765; NISV, Proteus; NPT- 16416; NT-002, AP-485; PEFA-814; péptidos, Scios; peptidoglicano, Pliva; Perthon, Advanced Plant; derivado de PGM, Pliva; Pharmaprojects Nº 1099; Nº 1426; Nº 1349; Nº 1585; Nº 1607; Nº 1710; Nº 1779; Nº 2002; Nº 2060; Nº 2795; Nº 3088; Nº 3111; Nº 3345; Nº 3467; Nº 3668; Nº 3998; Nº 3999; Nº 4089; Nº 4188; Nº 4451; Nº 4500; Nº 4689; Nº 4833; Nº 494; Nº 5217; Nº 530; pidotimod; pimelautide; pinafide; ipodofilotoxina PMD-589, Conpharm; POL-509; poly-ICLC; poly-ICLC, Yamasa Shoyu; polisacárido A PolyA-PolyU; proteína A, Berlox Bioscience; PS34WO: MAb de Pseudomonas, Teijin; Psomaglobin; PTL-78419 Pyrexol; piriferona; Retrogen; Retropep; RG-003; Rhinostat; rifamaxil; RM-06; Rollin; romurtide; RU-40555: RU-41821: anticuerpos de Rubella. ResCo; S-27609; SB-73; SDZ-280-636; SDZ-MRL-953: SK&F-107647: SL04: SL05: SM-4333: Solutein: SRI-62-834: SRL-172; ST-570; ST-789; staphage lysate; Stimulon; supresina; T-150RI: T-LCEF; tabilautide; temurtide; Theradigm-HBV; Theradigm-HPV; Theradigm-HSV; THF. Pharm & Upjohn; THF. Yeda; thymalfasin; fracciones de hormona tímica; thymocartin; timolinfotropina; timopentina; analogos de timopentina; timopentina, Peptech: fracción de timosina 5, Alpha; timoestimulina; timotrinan; TMD-23; TO-115; factor de transferencia, Viragen; tuftsin. Selavo; ubenimex; Ulsastat; ANGG-; CD-4+; Collag+; COLSF+; COM+: DA-A+; GAST-; GF-TH+; GP-120-; IF+; IF-A+; IF-A-2+; IF-B+; LP-G-+-; IF-G-1B+; IL-2+; IL-12+; IL-15+; IM+; LHRH-; LIPCOR+L LYM-B+; LYM-Nk+; LYM-T+; OPI+; PEP+; PHG-MA+: RNA-SYN-; SY-CW-; TH-A-1+; TH-5+; THF+; UN.
Los compuestos nucleosídicos y nucleotídicos representativos útiles en la presente invención incluyen, pero sin limitación: (+)-cis-5-fluoro-1-[2-(hidroxi-metil)-1,3-oxatiolan-5-il]citosina; (-)-2'-desoxi-3'-tincitidina-5'-trifosfato (3TC); (-)-cis-5-fluoro-1-[2-(hidroxi-metil)-[1,3-oxatiolan-5-il]citosina (FTC); (-) 2',3',didesoxi-3'-tiacitidina[(-)-Sddc]; 1-(2'-desoxi-2'-fluoro-beta-D-arabinofuranosil)-5-yodocitosina (FIAC); 1-(2'-desoxi-2'-fluoro-beta-D-arabinofuranosil)-5-yodocitosinatrifosfato (FIACTP); 1-(2'-desoxi-2'-fluoro-beta-D-arabinofuranosil-5-metiluracilo (FMAU); 1-beta-D-ribofuranosil-1,2,4-triazol-3-carboxamida; 2',3'-didesoxi-3'fluoro-5-metil-dexocitidina (FddMeCyt); 2',3'-didesoxi-3'-cloro-5-metil-dexocitidina (ClddMeCyt); 2',3'-didesoxi-3'-amino-5-metil-dexocitidina (AddMeCyt); 2',3'-didesoxi-3'-fluoro-5-metil-citidina (FddMeCyt); 2',3'-didesoxi-3'-cloro-5-metil-citidina (ClddMeCyt); 2',3'-didesoxi-3'-amino-5-metil-citidina (AddMeCyt); 2',3'-didesoxi-3'-fluorotimidina (FddThd); 2',3'-didesoxi-beta-L-5-fluorocitidina (beta-L-FddC); 2',3'-didesoxi-beta-L-5-tiacitidina; 2',3'-didesoxi-beta-L-5-citidina (beta-L-ddC); 9-(1,3-dihidroxi-3-propoximetil)guanina; 2'-desoxi-3'-tia-5-fluorocitosina-3-amino-5-metil-dexocitidina (AddMeCyt); 2-amino-1,9-[(2-hidroximetil-1-(hidroximetil)etoxi]metil)-6H-purina-6 ona (ganciclovir); diacetato de 2-(2-amino-9H-purin-9-iletil)-1,3-propandil (famciclovir); 2-amino-1,9-dihidro-9-[(2-hidroxi-etoxi)metil]6H-purina-6-ona (aciclovir); 9-(4-hidroxi-3-hidroximetil-but-1-il)guanina (penciclovir); diacetato de 9-(4-hidroxi-3-hidroximetil-but-1-il)-6-desoxi-guanina (famciclovir); 3'-ácido-3'-desoxitimidina (AZT); 3'-cloro-5-metil-dexocitidina (ClddMeCyt); 9-(2-fosfonilo-metoxietil)-2',6'-diaminopurina-2',3'-didesoxirribósido; 9-(2-fofonilmetiloxietil)adenina (PMEA); aciclovir trifosfato (ACVTP); D-carbociclo-2-desoxiguanosina (CJG); didesoxi-citidina; didesoxi-citosina (ddC); didesoxi-guanina (DDG); didesoxi-inosina (ddI); E-5-(2-bromovinil)-2-desoxiuridina trifosfato; fluoro-arabinofuranosil-yodouracilo; 1-(2'-desoxi-2'-fluoro-1-beta-D-arabinofuranosil)-5-indo-uracilo (FIAU); estavudina: 9-beta-D-arabinofuranosil-9H-purina-6-amina monohidrato (Ara-A); 9-beta-D-arabinofuranosil-9H-purina-6-amino-5'-monofosfato monohidrato (Ara-AMP); 2-desoxi-3'-tia-5-fluorocitidina; 2',3'-didesoxi-guanina; y 2',3-didesoxi-guanosina.
\vskip1.000000\baselineskip
Los procedimientos de síntesis para la preparación de nucleósidos y nucleótidos útiles en la presente invención son bien conocidos en la técnica como se describe en Acta Biochim. Pol., 43, 25-36 (1996); Swed. Nucleosides Nucleolides 15, 361-378 (1996), Synthesis 12, 1465-1479 (1995); Carbohyd. Chem. 27, 242-276 (1995); Chem. Nucleosides Nucleotides 3, 421-535 (1994), Ann. Reports in Med. Chem., Academic Press; and Exp. Opin. Invest. Drugs 4. 95-115 (1995).
Las reacciones químicas descritas en las referencias citadas anteriormente generalmente se describen en términos de su aplicación más amplia a la preparación de los compuestos de la presente invención. Ocasionalmente, las reacciones pueden no ser aplicables como se describe a cada compuesto incluido dentro del alcance de los compuestos descritos en este documento. Los compuestos para los que esto ocurre se reconocerán fácilmente por los especialistas en la técnica. En todos estos casos, las reacciones pueden realizarse satisfactoriamente por modificaciones convencionales conocidas para los especialistas en la técnica, por ejemplo, por medio de una protección apropiada de grupos interferentes, por cambio a reactivos convencionales alternativos, por modificación rutinaria de las condiciones de reacción y similares, o a la preparación de los compuestos correspondientes de la presente invención serán aplicables otras reacciones descritas en este documento o convencionales de otra forma. En todos los procedimientos preparativos, todos los materiales de partida son conocidos o se pueden preparar fácilmente a partir de materiales de partida conocidos.
Aunque los análogos de nucleósidos generalmente se emplean como agentes antivirales tal cual, los nucleótidos (nucleósido fosfatos) algunas veces tienen que convertirse en nucleósidos para facilitar su transporte a través de las membranas celulares. Un ejemplo de un nucleótido modificado químicamente capaz de entrar en las células es S-1-3-hidroxi-2-fosfonilmetoxipropilcitosina HPMPC, Gilead Sciences). Los compuestos nucleosídicos y nucleotídicos de la presente invención que son ácidos pueden formar sales. Los ejemplos incluyen sales con metales alcalinos o metales alcalinotérreos tales como sodio, potasio, calcio o magnesio, o sales con bases orgánicas o sales básicas de amonio cuaternario.
\newpage
Los inmunomoduladores e inmunoestimuladores útiles en los procedimientos de terapia combinada de la presente invención pueden administrarse en cantidades menores que las que son convencionales en la técnica. Por ejemplo, el interferón alfa típicamente se administra a seres humanos para el tratamiento de infecciones por VHC en una cantidad de aproximadamente 1 x 10^{6} unidades/persona tres veces por semana a aproximadamente 10 x 10^{6} unidades/persona tres veces por semana (Simon et al., Hepatology 25:445-448 (1997)). En los procedimientos y composiciones de la presente invención, esta dosis puede estar en el intervalo de aproximadamente 0,1 x 10^{6} unidades/persona tres veces por semana a aproximadamente 7,5 x 10^{6} unidades/persona tres veces por semana; más preferiblemente de aproximadamente 0,5 x 10^{6} unidades/persona tres veces por semana a aproximadamente 5 x 10^{6} unidades/persona tres veces por semana; más preferiblemente de aproximadamente 1 x 10^{6} unidades/persona tres veces por semana a aproximadamente 3 x 10^{6} unidades/persona tres veces por semana. Debido a la mayor eficacia antiviral contra el virus de la hepatitis C de los inmunomoduladores e inmunoestimuladores en presencia de los inhibidores de la serina proteasa de VHC de la presente invención, en los procedimientos y composiciones descritos en este documento pueden emplearse cantidades reducidas de estos inmunomoduladores/inmunoestimuladores. De forma similar, debido a la mayor eficacia antiviral contra el virus de la hepatitis C de los inhibidores de serina proteasa de VHC de la presente invención en presencia de inmunomoduladores e inmunoestimuladores, en los procedimientos y composiciones descritos en el presente documento pueden emplearse cantidades reducidas de estos inhibidores de serina proteasa de VHC. Estas cantidades reducidas pueden determinarse por un control rutinario de los títulos de virus de hepatitis C en pacientes infectados sometidos a terapia. Esto puede realizarse, por ejemplo, controlando el ARN de VHC en el suero de los pacientes por transferencia en ranura (slot-blot), transferencia puntual (dot-blot) o técnicas de RT-PCR, o por medición de antígenos de la superficie de VHC u otros antígenos. De forma similar, puede controlarse a los pacientes durante la terapia combinada empleando los inhibidores de serina proteasa de VHC descritos en este documento y otros compuestos que tienen actividad anti-VHC, por ejemplo, agentes antivirales nucleosídicos y/o nucleotídicos, para determinar las menores dosis eficaces de cada uno cuando se usan en combinación.
En los procedimientos de terapia de combinada descritos en el presente documento, los compuestos antivirales nucleosídicos o nucleotídicos, o mezclas de los mismos, pueden administrarse a los seres humanos en una cantidad en el intervalo de aproximadamente 0,1 mg/persona/día a aproximadamente 500 mg/persona/día; preferiblemente de aproximadamente 10 mg/persona/día a aproximadamente 300 mg/persona/día; más preferiblemente de aproximadamente 25 mg/persona/día a aproximadamente 200 mg/persona/día; incluso más preferiblemente de aproximadamente 50 mg/persona/día a aproximadamente 150 mg/persona/día; y aún más preferiblemente en el intervalo de aproximadamente 1 mg/persona/día a aproximadamente 50 mg/persona/día.
Las dosis de los compuestos pueden administrarse a un paciente en una sola dosis o en múltiples subdosis proporcionadas. En el último caso, las composiciones de dosificación unitaria pueden contener tales cantidades o submúltiplos de las mismas para constituir la dosis diaria. Múltiples dosis al día también pueden aumentar la dosis diaria total si esto se desea por la persona que receta el fármaco.
El régimen para tratar a un paciente que padece una infección por VHC con los compuestos y/o composiciones de la presente invención se selecciona de acuerdo con una diversidad de factores, incluyendo la edad, peso, sexo, dieta y situación médica del paciente, la gravedad de la infección, la vía de administración, consideraciones farmacológicas tales como la actividad, eficacia, farmacocinética y perfiles toxicológicos de los compuestos particulares empleados, y si se utiliza un sistema de administración de fármaco. La administración de las combinaciones de fármaco descritas en este documento debe continuarse generalmente durante un período de varias semanas a varios meses o años hasta que los títulos de virus alcancen niveles aceptables, que indiquen que la infección se ha controlado o erradicado. Los pacientes sometidos a tratamiento con las combinaciones de fármacos descritas en este documento pueden controlarse rutinariamente mediendo el ARN del virus de la hepatitis en el suero de los pacientes por técnicas de transferencia por ranuras, transferencia puntual o RT-PCR o midiendo los antígenos del virus de la hepatitis C, tales como antígenos superficiales, en el suero para determinar la eficacia de la terapia. El análisis continuo de los datos obtenidos por estos procedimientos permite la modificación del régimen de tratamiento durante la terapia de forma que se administren cantidades óptimas de cada componente en la combinación, y de esta forma también puede determinarse la duración del tratamiento. De esta manera, el régimen de tratamiento/programa de dosificación puede modificarse racionalmente durante el transcurso de la terapia de forma que se administren las menores cantidades de cada uno de los compuestos antivirales usados en combinación que conjuntamente presentan eficacia contra el virus de la hepatitis C satisfactoria y de forma que la administración de esos compuestos antivirales en combinación se continúe sólo cuando sea necesario para tratar satisfactoriamente la infección.
La presente invención incluye el uso de inhibidores de serina proteasa de VHC descritos en este documento en diversas combinaciones con los tipos anteriores y similares de compuestos que tienen actividad anti-VHC para tratar o prevenir infecciones por VHC en pacientes. Por ejemplo, pueden usarse uno o más inhibidores de serina proteasa de VHC en combinación con: uno o más interferones o derivados de interferón que tienen actividad anti-VHC; uno o más compuestos distintos de interferón que tienen actividad anti-VHC; uno o más interferones o derivados de interferón que tienen actividad anti-VHC y uno o más compuestos no interferón que tienen actividad anti-VHC. Cuando se usan en combinación para tratar o prevenir una infección por VHC en un paciente humano, cualquiera de los inhibidores de serina proteasa de VHC descritos en el presente documento y los compuestos anteriores que tienen actividad anti-VHC pueden estar presentes en una cantidad farmacéutica o eficaz contra VHC. Gracias a sus efectos aditivos o sinérgicos, cuando se usan en las combinaciones descritas anteriormente, cada uno también puede estar presente en una cantidad subclínica farmacéuticamente eficaz o eficaz anti-VHC, es decir, una cantidad que si se usa sola, proporciona una eficacia farmacéutica en la inhibición completa o reducción de la acumulación de viriones de VHC y/o en la reducción o mejora de las afecciones o síntomas asociados con la infección o la patogénesis de VHC en los pacientes menor que dichos inhibidores de serina proteasa de VHC y compuestos que tienen actividad anti-VHC cuando se usan en cantidades farmacéuticamente eficaces. Además, la presente invención incluye el uso de combinaciones de inhibidores de serina proteasa de VHC y compuestos que tienen actividad anti-VHC como se ha descrito anteriormente para tratar o prevenir infecciones por VHC, dónde uno o más de estos inhibidores o compuestos está presente en una cantidad farmacéuticamente eficaz y el otro u otros inhibidores o compuestos están presentes en una cantidad farmacéuticamente eficaz subclínica o una cantidad eficaz anti-VHC debido a sus efectos aditivos o sinérgicos. Como se usa en este documento, el término "efecto aditivo" describe el efecto combinado de dos (o más) agentes farmacéuticamente activos que es igual a la suma del efecto de cada agente administrado individualmente. Un efecto sinérgico es uno en que el efecto combinado de dos (o más) agentes farmacéuticamente activos es mayor que la suma del efecto de cada agente administrado solo.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 42
La terapia actual convencional para la infección por el virus de la hepatitis C (VHC) es el tratamiento con el inmunomodulador alfa-interferón (Chronic Hepatitis C: Current Disease Management, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, 1999). Esta terapia es ineficaz en la mayoría de los pacientes con VHC, que no muestran respuesta o presentan una recaída después de una terapia prolongada con interferón. Además, hay varios efectos secundarios severos asociados con la terapia con interferón. En vista de la apremiante necesidad de nuevos fármacos antivirales más eficaces para tratar pacientes infectados con VHC, los presentes inventores han desarrollado una serie de compuestos que inhiben la serina proteasa de VHC (un complejo de proteínas NS3 y NS4A del virus VHC). Estos compuestos pueden usarse solos, juntos entre sí y en combinación con otras clases de compuestos para tratar o prevenir la infección por VHC. Este ejemplo describe el ensayo de tres inhibidores representativos de serina proteasa de VHC, es decir, el Compuesto CU, el Compuesto Comparativo EP y el Compuesto Comparativo EC, solos y en combinación con miembros individuales de una serie de interferones (interferón alfa-2B (Schering Plough), interferón alfa-2A (PBL Biomedical Laboratories. New Brunswick. NJ), interferón beta (Research Diagnostics Inc, Flandes, NJ) e interferón ovino tau (Research Diagnostics Inc, Flandes. NJ)) en un ensayo de replicón de ARN subgenómico de VHC (Replicon Assay) para determinar si los dos compuestos actúan de acuerdo para disminuir la acumulación de ARN de VHC. El Ensayo de Replicón mide la cantidad o el ARN subgenómico de VHC (replicón R que queda en las células que contienen replicón (Lohmann et al. Sciences 285: 110-113 (1999)) después de dos días de tratamiento con fármaco con respecto a la cantidad de ARN de replicón en las células no tratadas. En este ensayo la potencia de los compuestos como fármacos antivirales contra VHC es directamente proporcional al nivel de inhibición de acumulación del ARN del replicón.
Los dos fármacos se ensayan en combinaciones en el sistema de Ensayo de Replicón in vitro para determinar si, cuando se usan juntos, presentan actividad anti-VHC aditiva o sinérgica. El Ensayo de Replicón se emplea como un modelo sustituto para la infección por VHC in vitro para evaluar los efectos combinados del inmunomodulador, por ejemplo, interferón-alfa 2B ((Intron A), Schering Plough) y el inhibidor de serina proteasa de VHC, por ejemplo Compuesto CU. Como se muestra más adelante, los resultados demuestran que hay un claro efecto sinérgico anti-VHC de estos dos tipos de fármacos, que se mide usando determinaciones matemáticas formales de sinergia para analizar su capacidad para reducir los niveles de ARN de VHC en el Ensayo de Replicón.
\vskip1.000000\baselineskip
El Ensayo de Replicón
El Ensayo de Replicón que emplea una línea celular que contiene el ARN subgenómico de VHC auto-replicativo (replicón) se describe en Lohmann et al. Science 285:110-113 (1999). El número de acceso del Genbank para la secuencia del replicón usado en los experimentos descritos en este documento se presenta en esta referencia como AJ242654. Este documento describe procedimientos para la transcripción in vitro de ARN a partir del ADNc del replicón, la transfección del ARN del replicón en células Huh7 por electroporación y la selección de las células que contienen el ARN del replicón usando el antibiótico G418. Las células Huh7 son una línea celular de hepatoma obtenidas del Dr. William Mason en Fox Chase Cancer Research Center (Philadelfia). Estas células están disponibles públicamente en Fox Chase y se han descrito extensivamente en la bibliografía científica (Nakabayashi et al. Cancer Res. 42:3858-3863 (1982)). En los experimentos descritos en este documento, todo el ADN de la plantilla se retira de la preparación de ARN de replicón transcrito in vitro antes de la electroporación de este ARN en células Huh7 por múltiple tratamiento con DNasa (tres tratamientos secuenciales).
El Ensayo de Replicón se realiza como se describe con detalle más adelante. En resumen, se ponen células de replicón en bandejas de 96 pocillos a una densidad de 10.000 células por pocillo y se incuban a 37ºC. Las células se incuban en DMEM (Medio Esencial Mínimo de Dulbecco) suplementado con suero bovino fetal al 10%, glutamina, aminoácidos no esenciales y el antibiótico G418 (0,25 mg/ml). Después de la incubación durante una noche, el medio se reemplaza por DMEM que contiene suero bovino fetal al 2% y diversas concentraciones del inhibidor de serina proteasa, tal como el Compuesto CU, y/o un interferón tal como el interferón alfa 2B (Intron A, Schering Plough). Cada compuesto se ensaya a seis-ocho concentraciones diferentes. Para un extremo del intervalo de concentraciones, se seleccionan concentraciones elevadas de los compuestos que darán como resultado una inhibición casi completa de la acumulación de ARN del replicón después de dos días de tratamiento. A partir de estas concentraciones de partida, se realizan diluciones seriadas de forma que los intervalos de concentraciones ensayados en el Ensayo de Replicón incluyan concentraciones a las que los compuestos son muy eficaces, así como concentraciones a las que no hay un efecto significativo. Cada concentración de inhibidor de serina proteasa de VHC se ensaya sin ningún interferón añadido, así como con la adición de seis a ocho dosis de interferones diferentes. De forma similar, el interferón se ensaya sin ningún inhibidor de serina proteasa de VHC añadido. Después de 48 horas de incubación con los compuestos, el medio se retira de las placas y se extrae el ARN celular total de las células usando el kit RNeasy-96 fabricado por Qiagen Inc. (Valencia CA). Este ARN después se analiza por RT-PCR cuantitativa, o TaqMan® (Applied Biosystems, Foster City CA). La diana de RT-PCR TaqMan® es el gen de resistencia a neomicina en el ARN del replicón. Las placas se configuran de forma que haya 5 réplicas de cada muestra de tratamiento de fármaco y 16 réplicas de las muestras no tratadas. Esto permite mayor confianza estadística en los datos de la RT-PCR cuantitativa.
El análisis de los datos del Ensayo de Replicón produce dos valores que son útiles para evaluar la potencia de posibles agentes antivirales contra VHC. A cada concentración de compuesto ensayada, se determina el nivel de inhibición en la acumulación de ARN de replicón causada por el compuesto durante dos días de tratamiento con respecto a la cantidad de ARN de replicón en las células no tratadas. Esto se presenta como porcentaje de inhibición. Cuando se ha obtenido una serie de puntos de datos generados por tratamientos de las células a un intervalo de concentraciones, se generan valores de CI_{50}, es decir, la concentración de compuesto a la que la acumulación de ARN de replicón de VHC se reduce en un 50% por el compuesto. Por medio del ensayo repetido de los inhibidores de serina proteasa de VHC en el Ensayo de Replicón, se determina que la CI_{50} tiene un porcentaje de coeficiente de variación (%CV o 100% x desviación típica en CI_{50}/CI_{50} media) de aproximadamente un 20%. La CI_{50} es el valor usado para clasificar los compuestos individuales ensayados en este ensayo basándose en su potencia como agentes antivirales contra VHC. Las determinaciones sencillas de la CI_{50} son inadecuadas para evaluar la utilidad de los compuestos usados en combinación. El análisis más eficaz de la serie de datos generados usando todas las combinaciones de interferones diferentes e inhibidores de serina proteasa requiere la evaluación del porcentaje de inhibiciones que se muestra en la Tabla 7 usando procedimientos matemáticos descritos más adelante que están diseñados para determinar si los tratamientos combinados son agonistas, aditivos o sinérgicos.
A continuación se proporcionan detalles del Ensayo de Replicón:
\vskip1.000000\baselineskip
Procedimiento para el Análisis Cuantitativo de ARN de Replicón de VHC en el Ensayo de Replicón de VHC Usando RT-PCR TaqMan®
El ensayo de replicón se usa para medir la capacidad de posibles compuestos antivirales contra VHC para inhibir la acumulación de una molécula de replicón de ARN subgenómico de VHC en una línea celular Huh7 (Lohmann et al. Replication of Subgenomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line. Science 285, 110-113 (1999)). Este ensayo comprende tres componentes funcionales: (1) el mantenimiento de las células de replicón, la preparación de las placas de ensayo y la aplicación del compuesto; (2) extracción del ARN celular total de las células de replicón; y (3) RT-PCR a tiempo real (TaqMan®) para medir la cantidad de ARN de replicón en cada muestra. El Ensayo de Replicón requiere al menos 4 días para realizarse; sin embargo, el procedimiento puede interrumpirse y las muestras congelarse entre las etapas. Cada componente de ensayo se describe más adelante.
\vskip1.000000\baselineskip
1. Mantenimiento de la célula de replicón, preparación de las placas de ensayo y aplicación del compuesto 1.1 Mantenimiento de la línea de células de replicón
La línea celular usada en el Ensayo de Replicón se produce como se describe en Lohmann et al. (Replication of Subgenomic Hepatitis C Virus RNAs in a Hepatoma Cell Line. Science 285, 110-113 (1999)). Después se incuban matraces de cultivo de células de 150 cm^{2} (Costar) que contienen células de replicón a 37ºC y con 5% de CO_{2} hasta la confluencia, las células se diluyen 1:10, v/v, en matraces de cultivo de células de 150 cm^{2} limpios. El medio es DMEM que contiene suero bovino fetal al 10% (FBS), aminoácidos no esenciales 1X (NEAA), glutamina 1X (Glu) y G418 a 0,25 mg/ml. Se realizan tres pases seriados, cada vez dejando que las células alcancen la confluencia, seguido de dilución de las células en matraces de cultivo de células de 150 cm^{2} limpios. Estas células, denominadas "células originales", después se reparten en alícuotas y se almacenan para el uso futuro en el Ensayo de Replicón. El análisis basado en TaqMan® se realiza para determinar el número de genomas de replicón de VHC por célula, que revela la presencia de \sim150 copias del replicón por célula. Esto se basa en la relación de copias de ARN de replicón con respecto al doble de las copias del gen apoB humano (número de genomas haploides).
1.1.1 Las células originales se almacenan en N_{2} líquido. Para las células usadas en el Ensayo de Replicón, después de 20 pases seriados, las células se abandonan y se revive un lote nuevo a partir del almacenamiento en N_{2} líquido.
\vskip1.000000\baselineskip
1.2 Cultivo de células en bandejas de 96 pocillos para el Ensayo de Replicón
1.2.1. Para la preparación de placas de 96 pocillos, se tripsiniza un matraz de 75 cm^{2} con una confluencia del 75% de células que contienen replicón, y se resuspenden en 10 ml de Medio A. La tripsinización se realiza retirando el medio, añadiendo 1 ml de tripsina-EDTA al 0,25%, p/v, y después retirando la tripsina-EDTA. Después de 5-10 minutos, las células se liberan del matraz y se resuspenden en medio.
1.2.2. Las células se cuentan usando un hemacitómetro, y la concentración celular se ajusta a 10^{5} células/ml.
1.2.3. Cada pocillo se siembra con 100 \mul de suspensión celular usando una pipeta multicanal Impact2 (Matrix), nunca cultivando más de cuatro placas de 96 pocillos desde una sola suspensión celular.
1.2.4. Se incuban placas de 96 pocillos a 37ºC durante una noche.
\vskip1.000000\baselineskip
1.3. Dilución de compuesto y aplicación en bandejas de células de replicón
1.3.1. Se disuelven compuestos inhibidores de serina proteasa de VHC en dimetilsulfóxido (DMSO) a una concentración final de 20 mM. Los interferones se suspenden en solución salina tamponada con fosfato que contiene albúmina de suero bovino al 0,1% p/v.
1.3.2. La solución de compuesto 20 mM se diluye a 1 mM con DMSO.
1.3.3. Se añaden 50 \mul de compuesto disuelto en DMSO en 10 ml de Medio B (la concentración del compuesto es 5 mM y la concentración de DMSO es ahora de 0,5%) o se añaden 20 \mul de compuesto 1 mM y 30 \mul de DMSO a 10 ml de Medio B (la concentración de compuesto es de 2 \muM).
1.3.4. La dilución de compuesto hasta la concentración final se completa mezclando compuesto/solución de Medio B con Medio C (contiene DMSO al 0,5%). Se realizan de una a cinco diluciones seriadas del compuesto con Medio C en un bloque de polipropileno de 2 ml de 96 pocillos para obtener las concentraciones finales deseadas de compuesto.
1.3.5. La placa celular se retira del incubador de 37ºC y se marca en la esquina superior derecha de la tapa y en el lado derecho de la base. El medio se vierte de las placas de 96 pocillos.
1.3.6. Se añaden 100 \mul de soluciones de compuesto/medio de cada pocillo del boque de dilución 96 pocillos a la placa de células de 96 pocillos usando una pipeta Impact2.
1.3.7. Se añaden 100 \mul de medio C a todos los pocillos no tratados de acuerdo con la Tabla 3 para ensayar compuestos a 1,3 ó 6 concentraciones diferentes. "Untx" se refiere a las células tratadas de forma simulada (DMSO añadido a la misma concentración que en las células tratadas) "Con". se refiere a la concentración de compuesto.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 3
408
409
410
1.4. Las placas se incuban durante 48 horas a 37ºC y después a someten a extracción de ARN 
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 4
411 
\vskip1.000000\baselineskip
2. Extracción de ARN celular total a partir de células que contienen replicón 2.1 Introducción
El objetivo del procedimiento es extraer ARN a partir de muestras de cultivo de tejidos in vitro de forma que el ARN viral o celular se recupere cuantitativamente y sea suficientemente puro para analizarse por un ensayo de RT-PCR de VHC cuantitativo.
Para permitir la detección de variaciones en la eficacia de la extracción del ARN, se añaden cantidades convencionales de virus de la diarrea viral bovina (BVDV) un virus de ARN con alguna similitud con VHC, a cada muestra de células antes de la extracción del ARN. De esta manera, el nivel de ARN de BVDV detectado en la reacción RT-PCR múltiple final debe ser consistente entre todos los pocillos dentro de los límites de variabilidad asociados con el Ensayo de Replicón. Este control interno de eficacia de extracción de ARN se discute adicionalmente en la sección de TaqMan® presentada más adelante.
La estrategia de extracción de ARN usada es el procedimiento RNeasy fabricado por Qiagen Inc. (Valencia, CA). Este procedimiento emplea 96 minicolumnas basadas en sílice que están colocadas en una matriz compatible con operaciones de cultivo de tejidos de 96 pocillos. La tecnología de extracción de ARN es una modificación del procedimiento de Boom en el que todas las proteínas y ácidos nucleicos celulares, incluyendo las nucleasas, primero se desnaturalizan con una sal caotrópica fuerte (tiocianato de guanidinio). En este medio, los ácidos nucleicos tienen una fuerte afinidad por la sílice, el material presente en los discos de las minicolumnas; sin embargo, las proteínas y otros contaminantes no se unen a la sílice y pasan a través de las columnas. Después de lavar las columnas con soluciones caotrópicas/etanol, las muestras se secan parcialmente y el ácido nucleico después se libera de la columna en un pequeño volumen de agua.
Para reducir la variabilidad en la recuperación del ARN de VHC, debe tenerse cuidado con las condiciones de lavado y secado parcial de la columna. En todas las fases de este procedimiento es necesaria la presencia de una pequeña cantidad de etanol porque las muestras de partida pueden llevar riesgos biológicos, la sal caotrópica es muy cáustica y, como un tiocianato, puede generar gas cianuro venenoso si se deja en contacto con medios ácidos.
TABLA 5
412
2.2 Procedimiento 2.2.1 Lisis Celular
2.2.1.1. Preparar tampón de lisis: Para una placa de 96 pocillos, añadir 150 \mul de B-mercaptoetanol (B-ME) y 1 \mul de solución madre de BVDV (agitar vorticialmente la solución madre antes de la adición) a 15 ml de tampón RLT (un componente del kit RNeasy. Qiagen). Esta solución madre se prepara infectando células MDBK (células de riñón de bovino nº CCL-22, disponibles en la Colección Americana de Cultivos Tipo. Manassas VA) con BVDV y recogiendo el cultivo al efecto citopático máximo (CPE). Esta solución madre tiene un título infeccioso de aproximadamente 1x10^{7} ufc/ml. Esto proporciona a BVDV un ciclo umbral (C_{t}) de aproximadamente 22 en el ensayo TaqMan®. La solución madre de BVDV se almacena en un congelador a -80ºC.
2.2.1.2. Las células se lavan con 10 \mul de medio MEM sin suero (programa 4 en una pipeta electrónica de 8 canales. P1250: rellenar 1250, Disp 150 x 8). Se añaden 150 \mul de tampón de lisis a cada pocillo (mismo programa).
2.2.1.3. Se extrae ARN inmediatamente, o las células se congelan a -80ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
2.2.2. Preparación de reactivos y materiales para la extracción del ARN
2.2.2.1. Anotar el número de lote del RPE y del Kit RNeasy 96.
2.2.2.2. RPE: se añaden 720 ml de etanol al 100% a un frasco de RPE (Qiagen) y se mezcla bien; los frascos de RPE siempre se agitan bien antes del uso.
2.2.2.3. Se añade etanol al 70%:150 ml de dietilpirocarbonato (DEPC) acuoso a 350 ml de etanol al 100% y se mezcla bien.
\vskip1.000000\baselineskip
2.2.3. Preparación de ARN con el kit RNeasy 96
2.2.3.1. Las muestras congeladas se descongelan a temperatura ambiente durante 40 minutos. Al mismo tiempo, se descongela una columna de controles de extracción para cada placa (Controles de Extracción: los controles de extracción RNeasy son una serie de 8 tubos todos conectados entre sí. Dentro de cada tubo hay 170 \mul de lisado celular con una cierta relación entre células positivas y negativas para VHC. Desde la parte superior a la inferior hay dos de cada uno de los siguientes controles: bajo, medio, alto y cero, respectivamente. (Véase la sección 2.3 del protocolo mostrado más adelante)).
2.2.3.2. Las muestras se mezclan aspirando y liberando cinco veces con una pipeta 100 \mul. La muestra entera se transfiere a las columnas 1-10 del bloque de pocillos cuadrados de Matrix de 2 ml (programa I en P250: Mezcla 100 x 5, Relleno 170, Purga).
2.2.3.3. Se transfieren 150 \mul del patrón de replicón a la columna 11 (sin muestras en la columna 12).
2.2.3.4. Se añaden 150 \mul de etanol (EtOH) al 70% a cada muestra (programa 4 en P1250: Relleno 1250, Disp 150).
2.2.3.5. Una placa de RNeasy 96 marcada con el número de placa apropiado se pone en el colector de vacío. Se mezcla y se transfiere el lisado/EtOH a la placa RNeasy 96 (programa I en P1250: Mezcla 200, Tiempos 5, Relleno 330 y Purga). Todos los pocillos que no se hayan usado se cierran herméticamente con una cinta transparente (suministrada por Qiagen), normalmente en la columna 12.
2.2.3.6. Se aplica vacío (aproximadamente 800 mbar) para cargar la muestra en las mini-columnas.
2.2.3.7. La placa RNeasy-96 se lava con 1000 \mul de tampón RW1 (Qiagen)/pocillo (programa 2 en P1250: Relleno 1000, Disp 1000).
2.2.3.8. Se aplica vacío al filtro a través del tampón RW1 y se vacía el flujo.
2.2.3.9. La placa RNeasy-96 se lava con 1000 \mul de tampón RPE/pocillo (programa 2 en P1250).
2.2.3.10. Se aplica vacío para filtrar a través del tampón RPE.
2.2.3.11. Repetir la etapa 2.2.3.9
2.2.3.12. Se aplica vacío al filtro a través del tampón RPE, manteniendo el vacío aplicado durante 3 minutos.
\newpage
\global\parskip0.950000\baselineskip
2.2.3.13. Secar la placa RNeasy-96: la placa RNeasy-96 se pone en una rejilla de microtubos de recogida (suministrada por Qiagen), se cubre con la cinta AirPore suministrada y la unidad se centrifuga durante 10 min a 6000 x g (Centrífuga Qiagen Stigma; 4-15ºC).
2.2.3.15. Eluir el ARN de la placa de 96 pocillos RNeasy: la placa RNeasy se transfiere a la parte superior de una nueva rejilla de microtubos de recogida. Se añaden 70 \mul de agua sin RNasa en la mitad de cada pocillo (programa 3 en P1250: Relleno 850, Disp 70).
2.2.3.16. Incubar 1 minuto a temperatura ambiente y después poner una cinta AirPore limpia sobre la placa.
2.2.3.17. La unidad después se centrifuga durante 4 minutos a 6000 x g en un centrífuga Stigma 4-15C. El volumen eluido mide entre 28 \mul y 50 \mul.
2.2.3.18. Se desecha la placa RNeasy-96 y la rejilla de tubos de recogida se cierra herméticamente con las tapas proporcionadas por Qiagen (8 por tira).
2.2.3.19. El ARN eluido se almacena a -80º C o se analiza inmediatamente en el ensayo TaqMan®.
\vskip1.000000\baselineskip
2.3 Preparación de Controles de Extracción
Día 1
2.3.1.1. Cultivar 2,5 x 10^{7} células productoras de replicón en un matraz de cultivo de tejidos de 150 cm^{2} (T-130).
3.3.1.3. Cultivar 2,0 x 10^{0} células Huh7 en un matraz de cultivo de tejidos de 75 cm^{2} (T-75).
2.3.1.3 Incubar durante una noche a 37ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
Día 2
2.3.1.4. Lisar las células con tampón de lisis.
2.3.1.5. Retirar el sobrenadante de las células Huh7 y las células productoras de replicón y lavar la monocapa con 10 ml de medio sin suero (MEM).
2.3.1.6. Añadir 30 ml de tampón de lisis (con 1 \mul de solución madre de BVDV/15 ml de tampón de lisis) a las células Huh7, mezclar pipeteando de forma repetida y poner el lisado celular en un tubo de centrífuga de cultivo de tejidos de fondo cónico de 50 ml.
2.3.1.7. Añadir 10,5 ml de tampón de lisis a las células productoras de replicón, mezclar pipeteando repetidamente y poner el lisado celular en un tubo de centrífuga de cultivo de tejidos de fondo cónico de 15 ml.
2.3.2. Para el patrón de extracción de HJGH: recoger alícuotas de 170 \mul de células productoras de replicón y lisarlas en las filas 5 y 6 de dos rejillas de tubos de 0,75 ml Matrix.
2.3.3. Para el patrón de extracción MEDIO: Añadir 1,0 ml del lisado de células productoras de replicón a 9 ml del lisado de Huh7 y mezclar bien. Añadir una alícuota de 170 \mul de esta mezcla a las filas 3 y 4 de dos rejillas de tubos de 0,75 ml Matrix.
2.3.4. Para el patrón de extracción BAJO: Añadir 50 \mul del lisado de células productoras de replicón a 10 ml del lisado de Huh7 y mezclar bien. Añadir alícuotas de 17,0 \mul de esta mezcla a las filas 1 y 2 de dos rejillas de tubos de 0,75 ml Matrix.
2.3.5. Control de extracción CERO: añadir alícuotas de 170 \mul del lisado de células Huh7 a las filas 7 y 8 de dos rejillas de tubo de 0,75 ml Matrix.
2.3.6. Almacenar los controles a -80ºC.
\vskip1.000000\baselineskip
3. RT-PCR TaqMan y Análisis de Datos
3.1 Introducción: Se usa RT-PCR cuantitativa a tiempo real para medir la cantidad de ARN de replicón de VHC en cada muestra. Esta tecnología también se denomina ensayo de nucleasa 5' basado en PCR y TaqMan®. El instrumento analítico es el Applied Biosystems 7700 Prism Sequence Detection System (Applied Biosystems, Foster City, CA). Este instrumento es esencialmente un espectrógrafo de fluorescencia inducido por láser multiplexado en tiempo acoplado con un aparato de ciclos térmicos. Controla la acumulación de amplicón de PCR en cada pocillo de una bandeja de muestras de 96 pocillos a lo largo del transcurso del procedimiento de PCR.
\global\parskip1.000000\baselineskip
3.2. Uso de control interno de BVDV: Como se ha mencionado en la sección previa, en todas las muestras se incorpora un control positivo interno. Sirve como medida de la eficacia de la extracción del ARN y demuestra si la muestra contiene contaminantes que inhiban la PCR TaqMan®. BVDV se mezcla con el tampón de lisis celular caotrópico antes de aplicar el tampón de lisis a las células. Aunque en todas las muestras está el control positivo, el ensayo del control positivo interno de BVDV sólo se realiza cuando los datos del ensayo de ADN de replicón de VHC están fuera de los límites esperados, lo que sugiere que podría haber un problema con las muestras. El 7700 puede controlar simultáneamente la acumulación de dos amplicones de PCR diferentes en el mismo tubo usando sondas de detección marcadas con dos colorantes indicadores fluorescentes diferentes ("multiplexación"). Los criterios específicos que inducen un análisis TaqMan® para el control positivo interno de BVDV de una placa de muestras se describen en la sección de análisis de datos (3.6).
3.3 ARN de replicón de VHC, sonda y cebadores de TaqMan®. Debido a la estabilidad genética esperada y a la falta general de ARN, se emplean la estructura secundaria del gen de resistencia a neomicina (neo) codificado en el replicón, cebadores y una sonda que se une a esa región. Este segmento del ARN del replicón se extiende desde la base 342-1193 del replicón de 8001 pares de bases. (SEC ID Nº: 1):
413 
\vskip1.000000\baselineskip
3.4. Procedimientos 3.4.1. Procedimiento para preparar mezclas maestras 1x para RT-PCR de NEO y BVDV 
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 6
414
415
416 
\vskip1.000000\baselineskip
3.4.2. Preparación de Reactivos para la Mezcla Maestra
3.4.2.1. Limpiar el banco de trabajo siguiendo las dos etapas indicadas a continuación y limpiar las pipetas con RNAse away.
RNAse Zap (Ambion. Austin. TX)
RNAse Away (Molecular Bioproducts. San Diego, CA)
3.4.2.2. Abrir los reactivos nucleares de EZ RT-PCR (Applied Biosystems) y poner el tampón 5x en hielo, descongelar los reactivos congelados a temperatura ambiente durante aproximadamente 15 minutos y después ponerlos en hielo. Un kit de reactivos EZ RT-PCR puede usarse para analizar dos extracciones de ARN de 96 pocillos.
3.4.2.3. Coger un tubo de sonda VIC 2 \muM (NEO o BVDV, 550 \mul por tubo) a -20ºC y ponerlo en hielo.
3.4.2.4. Coger un tubo de mezcla de cebador directo/inverso 3 \muM (NEO o BVDV, 550 \mul por tubo) a -20ºC y ponerlo en hielo.
3.4.2.5. Coger un tubo (30 \mul) de transcrito de ARN patrón (10^{8} copias/10 \mul) a -80ºC y ponerlo en hielo.
3.4.2.6. Coger un tubo de agua Ambion a temperatura ambiente.
\vskip1.000000\baselineskip
3.4.3. Montaje de mezcla maestra para una reacción en placa 96 de pocillos
3.4.3.1. Usar una pipeta de 1 ml para transferir tampón 5x (Applied Biosystems) a un tubo de 14 ml; el volumen total añadido es 1100 \mul.
3.4.3.2. Usar una pipeta de 1 ml para añadir Mn(OAc)_{2} 25 mM (Applied Biosystems) a un tubo de 14 ml; el volumen total añadido es 660 \mul.
3.4.3.3. Usar una pipeta de 200 \mul para añadir 165 \mul de dATP 10 mM al tubo de 14 ml. Hacer lo mismo para dCTP 10 mM, dUTP 20 mM y dGTP y 10 mM.
3.4.3.4. Usar una pipeta de 1 ml para añadir 550 \mul de mezcla de cebador directo/inverso 10x3M.
3.4.3.5. Usar una pipeta de 1 ml para añadir 550 \mul de sonda 10x2 \muM.
3.4.3.6. Usar una pipeta de 1 ml para añadir 220 \mul de ADN polimerasa de rTth (Applied Biosystems).
3.4.3.7. Usar una pipeta de 100 \mul, para añadir 55 \mul de AmpErase UNG (Applied Biosystems).
3.4.3.8. Usar una pipeta de 1 ml para añadir 605 \mul de H_{2}O Ambion al tubo de 14 ml: el volumen final es de 4400 \mul en total.
3.4.3.9. Transferir los 4400 \mul de mezcla maestra a un depósito de reactivo de 25 ml.
3.4.3.10. Distribuir 40 \mul por pocillo en los 96 pocillos usando una pipeta de 8 canales.
3.4.3.11. Transferir 10 \mul de muestras desconocidas extraídas a pocillos de la placa de reacción usando una pipeta de 8 canales, columna por columna, de la columna 1 a la columna 11. Tapar cada columna después de la transferencia.
3.4.3.12. Añadir 270 \mul de H_{2}O Ambion a los 30 \mul de 10^{8} copias/10 \mul de transcrito de ARN para uso en la curva patrón y mezclar. Ahora hay 10^{7} copias del ARN del patrón de cuantificación del replicón de VHC/10 \mul.
\vskip1.000000\baselineskip
3.4.4. Preparación del ABI 7700 para cada ensayo
3.4.4.1 Antes de cada ensayo, reiniciar el ordenador para el ABI 7700 y reconstruir el escritorio.
3.4.4.2 Cerrar y retirar cualquier programa redundante del disco duro, eliminar los datos sobrantes.
3.4.4.3 Abrir el programa Secuence Detector v1.7 (SDS software).
3.4.4.5 Abrir la carpeta "Replicon Assay Runs".
\newpage
\global\parskip0.950000\baselineskip
3.4.4.6 Abrir la placa de plantilla de "Ensayo de Replicón". Las condiciones de los ciclos térmicos programadas en la plantilla son las siguientes:
\quad
Etapa I: 50ºC durante 2 minutos.
\quad
Etapa 2: 60ºC durante 30 minutos.
\quad
Etapa 3: 95ºC durante 5 minutos.
\quad
Etapa 4: 95ºC durante 15 segundos.
\quad
Etapa 5: 60ºC durante 60 segundos.
\quad
Número de repetición de ciclos de las etapas: 4-5: 40.
\quad
Instrumento de plantilla: diagnóstico: opciones avanzadas:
\quad
Selección de vistas: mostrar mse.
\quad
Selección de vistas: mostrar el mejor ajuste.
\quad
Selección de misceláneo: colorante de referencia ROX.
\vskip1.000000\baselineskip
3.4.4.7 "Grabar" (no "grabar como") el archivo en la carpeta de "Ejecución de Ensayo de Replicón".
3.4.4.8 Mostrar el setup: presionar EJECUTAR.
\vskip1.000000\baselineskip
3.5 Preparar los datos AB17700 después de una ejecución usando el software SDS
3.5.1. Las placas de ensayo se retiran del AB17700 y se desechan sin haberse abierto. Esto reduce en gran medida lo problemas de laboratorio con la contaminación cruzada de la PCR.
3.5.2. Los datos se analizan usando el software Sequence Detector System V1.7.
3.5.3. Los niveles umbral se establecen inicialmente usando parámetros por defecto.
3.5.4. Criterios de rechazo de datos: pueden rechazarse puntos de datos o series de placas enteras. Si ha habido una desviación significativa del protocolo, fallo del reactivo o contratiempos, o fallos en la ejecución del ABI 770, los datos deben descartarse. Para rechazar cualquier punto de datos de una ejecución aparentemente normal, deben cumplirse uno o más de estos criterios.
3.5.4.1. Cálculos del ciclo umbral. Normalmente usar los valores por defecto para el software SDS. Si el Ct de la muestra más concentrada es menor de 15, cambiar el límite de parada del valor umbral cuando sea necesario a un valor menor de forma que el Ct de la muestra de mayor concentración sea mayor que el valor de parada. Actualizar los cálculos después de hacer este cambio.
3.5.3.2. Considerar el rechazo de un ensayo TaqMan® anormal entero como se indica por una desviación de los valores medios para la pendiente y la intersección con el eje y de la línea generada por análisis de los patrones de ARN de neo. Los intervalos aceptables para estos valores son:
\quad
Los valores dependientes deben estar comprendidos entre 3,0 y 3,6
\quad
Los ciclos de intersección con el eje y deben estar comprendidos entre 36 y 41 ciclos.
\vskip1.000000\baselineskip
3.5.4.3. Los pocillos TaqMan® individuales aberrantes indicados por Rn/\DeltaRn extremos pueden suprimirse antes del análisis de los datos de forma que no afecten a los cálculos del software de SDS.
3.5.4.4. Examinar y registrar los valores de Ct de control sin plantilla y confirmar que son >7,0 Cr (> 100X) mayores que el Ct para cualquier muestra tratada con compuesto.
3.5.5. Los valores de Ct de patrones de ARN de VHC se comparan con resultados previos.
3.5.6. La curva patrón de ARN de VHC se compara con resultados previos.
3.5.7. Si es evidente una amplificación aberrante en pocillos individuales, esos pocillos se identifican y se anotan.
3.5.8. El archivo de "resultados" se exporta y se transfiere desde el ordenador 7700 a otro ordenador para el análisis usando Microsoft Excel.
\global\parskip1.000000\baselineskip
3.5.9. Se presenta cualquiera de los siguientes cambios en preparaciones de reactivos o diluciones usadas.
\quad
Síntesis de nueva sonda o cebador del vendedor.
\quad
Dilución y alícuotas de nueva sonda o cebador.
\quad
Preparación de nuevos transcritos de ARN de plantilla.
\quad
Dilución y alícuotas de transcritos de ARN de plantilla.
\quad
Nueva preparación viral de BVDV.
\quad
Nueva preparación de 11 patrones de columna.
\vskip1.000000\baselineskip
3.6 Análisis de datos TaqMan®
3.6.1. Copiar y pasar el número de Ct de VHC de TaqMan® y el número de copias del archivo de resultados de TaqMan® a las celdas apropiadas del macro de Microsoft Excel del análisis de datos de Ensayo de Replicón, y ejecutar el macro.
3.6.2. Copiar la tabla de resultados TaqMan® de la hoja de macro en otra hoja, introducir el número de serie del compuesto y el número de lote.
3.6.3 A partir de esta hoja de Excel, se calcularán la media, desviación típica y CV en porcentaje de la actividad inhibidora del compuesto, así como el número de copias de VHC, el número de Ct de VHC y el número de Ct de BVDV (si está disponible) de todos los puntos de dilución en 5 réplicas y en un control sin compuesto.
3.6.4. Criterios para el rechazo de datos y realización de TaqMan® de control de BVDV. Comprobar todos los cálculos. Los puntos de datos o series de placas enteras pueden rechazarse. Si hay una desviación significativa del protocolo, fallo del reactivo o contratiempos, o fallo de la ejecución de ABI 7700, los datos deben desecharse. Para rechazar cualquier punto de datos de un ensayo aparentemente normal, deben satisfacerse uno o más de estos criterios. La desviación típica del porcentaje de inhibición debe ser menor del 30% en los compuestos activos. El % CV del número de copias de VHC debe ser menor del 30%. La desviación típica de Ct de VHC de todas las muestras debe ser menor de 0,5; esto es normalmente de aproximadamente 0,1 a 0,3 en la mayoría de las muestras. Si la desviación típica de Ct de VHC es mayor de 0,5, volver a la tabla de datos de partida y comprobar el número de Ct de 5 réplicas. Si el número de Ct de cualquier pocillo es 2 Ct diferente del número medio de Ct de 5 réplicas, entonces este pocillo debe omitirse del análisis. Si más de 3 pocillos (no en la misma columna) tienen números de Ct inusuales, entonces debe realizarse el ensayo de control interno del TaqMan® de BVDV. Si los datos de BVDV muestran irregularidad, entonces el compuesto debe ensayarse de nuevo.
3.6.5. Cálculo de CI_{50}: Copiar y pasar los datos de inhibición media y desviación típica a una dosis-respuesta sigmoidea con un calculador de pendientes variables que usa métodos de regresión no lineal. Usando esta herramienta, calcular el valor de CI_{50} usando los dos métodos: fijar el máximo a un 100% de inhibición únicamente o fijar el máximo a un 100% de inhibición y el mínimo a un 0% de inhibición. Después se presenta para cada compuesto el método que proporciona el ajuste más claro. El valor de CI_{50} más fiable procede del cálculo que tiene el menor error típico. Si los valores de CI_{50} calculados a partir de estas dos opciones de ajuste de curva muestran más de una diferencia de una vez, o si el CI_{50} de SD es mayor que el CI_{50}, el compuesto debe ensayarse de nuevo a las concentraciones ajustadas.
\vskip1.000000\baselineskip
Cálculo del Efecto de Inhibidores de Serina Proteasa de VHC en Combinación con Interferones
El efecto de un inhibidor de serina proteasa de VHC (HSPI) y un interferón en combinación puede evaluarse en el Ensayo de Replicón generando una curva de dosis-respuesta para el HSPI en presencia de diversos niveles de interferón o determinando una curva de dosis respuesta para un interferón en presencia de varios niveles de HSPI. El objetivo es evaluar si hay más o menos inhibición de la acumulación de ARN viral de la que sería de esperar si los dos fármacos produjeran efectos aditivos en el ARN. Más específicamente, se usa la definición de aditividad de Lowe ((1928) Die Quantitation Probleme der Pharmakologic Ergebn. Plysiol., 27, 47-187). Ésta se define como se indica a continuación. Supongamos que D_{E.INF} es la concentración de interferón que produce un efecto E y supongamos que D_{E.HSPI} es la concentración de inhibidor de proteasa que produce un efecto E.
Entonces no hay interacción o la aditividad de Lowe se define por la siguiente relación, donde la combinación de concentración D de U y D de HSPI produce el efecto E.
418 
\newpage
Después, la falta de interacción o aditividad de Lowe se define por la siguiente relación, donde la combinación de concentración D_{1} de INF y D_{2} de HSPI produce el efecto E.
El grado de sinergia o antagonismo se expresa en términos de curvas de iso-efecto o Isoboles. La combinación (D1, D2) es un punto en un gráfico en el que los ejes son las concentraciones de interferón y HSPI (Fig. 2). Todas estas combinaciones que producen un nivel de efecto E forman el efecto E Isobol. Necesariamente (D_{E.INF},0) y (0,D_{E.HSPI}) son puntos en el Isobol. Los Isoboles son líneas rectas que conectan puntos (D_{E.INF},0) y (0,D_{E.ISPI}) cuando se satisface la relación de aditividad (1).
Los Isoboles cóncavos hacia arriba indican sinergia, y los Isoboles cóncavos hacia abajo indican antagonismo. Siguiendo las directrices de Berenbaum, M.C. ((1985) The expected effect of a combination of agents: the general solution. J. Theor. Biol., 114, 413-431), y Greco, Park and Rustom ((1990) Application of a New Approach for the Quantitation of Drug Synergism to the Combination of cis-Diamminedichloroplatinum and 1-\beta-D Arabinofuranosylcytosine. Cancer Research. 50, 5318-5327) se añade un término para (I) justificar la sinergia o el antagonismo. La ecuación define una superficie de respuesta que puede ajustarse a los valores de control en porcentaje a todas las combinaciones de tratamiento. Los gráficos del contorno de esta superficie de respuesta ajustada son los Isoboles.
El modelo de superficie de respuesta asume una respuesta a la dosis sigmoidea para cada compuesto definida por (2).
419 
\vskip1.000000\baselineskip
Las concentraciones que proporcionan un nivel de actividad E especificado solo se proporcionan por (3)
420 
\vskip1.000000\baselineskip
Para cumplir el modelo de Greco et al. (1990), la acción combinada de los fármacos debe satisfacer la ecuación (4) para cada combinación de fármacos que produce el nivel de respuesta E.
421 
\vskip1.000000\baselineskip
El parámetro a mide la cantidad de interacción. Un valor cero de alfa significa que no hay interacción o aditividad ya que la ecuación se reduce a (I) cuando \alpha=0. Dados los valores de CI_{50}, las pendientes de Hill (m), el valor máximo (Emax) y el valor mínimo (B), esta ecuación puede solucionarse para proporcionar el efecto resultante de cualquier combinación de tratamiento [INF] y [HSPI]. Por lo tanto, esta ecuación define una superficie de respuesta. Dado un experimento en el que se varían [INF] y [HSPI], los parámetros pueden elegirse usando regresión de mínimos cuadrados ponderada no lineal. El parámetro \alpha puede relacionarse con una medida de sinergia S (Hewlett, P. S. (1969) Measurement of potencies of drug mixtures, Biometrics, 25, 477-487) que se toma directamente a partir de los Isoboles a un efecto del 50%. S es la relación de la distancia desde el origen al Isobol que define la aditividad, a la distancia desde el origen al Isobol de los datos ajustados, a lo largo de la línea a 45 grados de los ejes. (S=ON/OM véase la Figura 3). La relación es \alpha = 4 (S^{2}-S).
El método descrito en Greco et al. (1990) anteriormente para ajustar la superficie de respuesta y determinar el parámetro de sinergia \alpha con su nivel de significado se sigue para evaluar el grado de sinergia en una serie de experimentos ensayando HSPI en combinación con varios interferones diferentes. Sin embargo, existe la necesidad de ponderar observaciones con menos recuentos más que las que tienen mayores recuentos. Los recuentos se relacionan directamente con el porcentaje de control, que es el efecto E. Usando métodos descritos en Carroll, R.J. y Rupert, D. ((1988) (Transformation and Weighting in Regression, Chapman and Hall, New York) puede verse que la variabilidad de un pocillo a otro aumenta con el cuadrado del porcentaje medio del valor de control. Por lo tanto, las observaciones se ponderan por uno con respecto al cuadrado del valor de control en porcentaje (E) ajustado. La varianza y ponderación usadas para analizar estos experimentos es coherente con relaciones de variabilidad observadas por los investigadores que investigan métodos para el analizar ensayos de radioligando (Finney, D.J., (1976), Radioligand Assay, Biometrics, 32, 721-740, and Dudley, R. A. Edwards, P., Ekins, R. P.. McKinzie, I. G. M., Raab, G.M., Rodbard. D. and Rodgers, R. P. C. (1985), Guidelines for Immunoassay Data Processing, Clinical Chemistry, 31/8. 1264-1271).
\vskip1.000000\baselineskip
Resultados
En un experimento inicial, se ensaya el inhibidor de serina proteasa de VHC, Compuesto CU, en un intervalo de concentraciones de 3 \muM a 0,0123 \muM, es decir, un intervalo de 244 veces. Las concentraciones de interferón-alfa 2B varían de 30 unidades por muestra a 0,0096 unidades por muestra, es decir, un intervalo de 3125 veces. Como se muestra en la Tabla 7, cuando se usa como un solo tratamiento de fármaco, el Compuesto CU presenta un valor de CI_{50} de 0,48 \muM y el interferón CI_{50} es 2,19 U. Dentro de la precisión del Ensayo de Replicón, que es de aproximadamente un 20%, la adición del interferón alfa 2B produce un aumento en la inhibición de la acumulación de ARN del replicón de una manera dependiente de la dosis. Por ejemplo, el tratamiento de las células con Compuesto CU 0,333 \muM produce una inhibición del 28% de la acumulación de ARN del replicón. El tratamiento de las células con una combinación de Compuesto CU 0,333 \muM, que es un 71% de la dosis de CI_{50} (0,469 \muM) y 0,24 U de interferón alfa 2B, que es un 11% de la CI_{50} del interferón alfa 2B (2,05 \muM) produce una inhibición del 49% de la acumulación de ARN del replicón. De esta manera, el 71% de una dosis CI_{50} en combinación con el 11% de la otra produce una inhibición del 49% de la acumulación de ARN del replicón. Usando una estrategia intuitiva para determinar si un tratamiento combinado es sinérgico o aditivo o antagonista, se podría predecir que si el efecto del tratamiento combinado fuera sólo aditivo, sería de esperar que las fracciones combinadas de las dos dosis de CI_{50} necesitaran obtener una inhibición del 49% de la acumulación del ARN del replicón para ser del 98%. Los resultados experimentales de los presentes solicitantes demuestran que el nivel de inhibición de la acumulación de ARN del replicón se consigue usando el 71% más el 11%, es decir, el 82% de la dosis de CI_{50} en lugar del 98%, como se predice para los efectos aditivos del tratamiento combinado. De esta manera, a estas concentraciones de compuestos, el efecto parece ser sinérgico porque se usan dosis fraccionales más pequeñas de la dosis de CI_{50} de cada compuesto para obtener una inhibición del 49% del ARN del replicón de VHC que la que se requeriría con cada compuesto solo, donde se necesitaría el 98% de las dosis CI_{50}. Los resultados de este tratamiento combinado se muestran en la Tabla 8 y gráficamente en la Figura 1.
TABLA 7
422
Estos resultados iniciales, obtenidos como se ha indicado anteriormente por medio del uso del Ensayo de Replicón in vitro y un análisis de aditividad sencillo de los datos generados por ese ensayo, demuestran que el tratamiento combinado de células de replicón con un inhibidor de serina proteasa de VHC y un interferón produce al menos un efecto antiviral aditivo y probablemente un efecto antiviral sinérgico.
Los datos anteriores se han reanalizado usando las herramientas matemáticas formales descritas anteriormente para determinar si la relación entre el inhibidor de la serina proteasa de VHC CU y el interferón alfa-2B es sinérgica, aditiva o antagonista. Los datos reanalizados se muestran numéricamente en la Tabla 8 y gráficamente en la Figura 4.
\newpage
La Tabla 8 resume resultados adicionales obtenidos en el Ensayo de Replicón después del tratamiento de las células que contienen replicón durante 48 horas con diversos inhibidores de serina proteasa de VHC de la presente invención y varios interferones diferentes, individualmente o en combinación. Se indica que la desviación típica de los valores medidos para la inhibición del ARN del replicón de VHC en el Ensayo de Replicón es del -20%. Los compuestos se ensayan en un amplio intervalo de concentraciones y a concentraciones de compuesto menores que no producen una inhibición significativa de la concentración de ARN del replicón de VHC. A causa de la desviación típica del \sim 20% del ensayo, algunos puntos de datos generarán números negativos. Los números de inhibición negativos indican en un experimento particular que hay en promedio más moléculas de ARN de replicón de VHC en las muestras tratadas con el compuesto que en las muestras tratadas de forma simulada.
TABLA 8
424
425
426
427 
\vskip1.000000\baselineskip
Como se muestra en las Figuras 4-13, que representan gráficamente los datos de la Tabla 8 representados usando el método matemático descrito anteriormente para medir la sinergia, la curvas Isobol para todas las combinaciones de inhibidores de serina proteasa de VHC e interferones ensayadas son cóncavas hacia arriba, indicando que el efecto antiviral de los tratamientos en el Ensayo de Replicón es sinérgico. Estos resultados se presentan en la Tabla 9, que muestra los niveles relativos de sinergia para el tratamiento combinado y los valores de CI_{50} para los compuestos antivirales usados individualmente. Los elementos clave en la Tabla 9 son los valores \alpha, y los valores p para las determinaciones. El término a es una medida de la inflexión máxima de las Isoboles para cada tratamiento combinado. Un valor \alpha de cero indica aditividad, un valor negativo indica antagonismo y como ocurre en los tratamientos combinados con los inhibidores de serina proteasa de VHC y los interferones mostrados anteriormente, un valor mayor de uno indica sinergia. Cuanto mayor es el parámetro a, mayor es la sinergia. Como se muestra en la Tabla 9 para las combinaciones de inhibidores de serina proteasa de VHC e interferones, incluso ignorando los niveles de significado en cada experimento, un ensayo t basado en los 9 experimentos para el valor alfa medio de 0 (sin interacción) tiene un valor de p de 0,00014, indicando que los resultados son muy significativos.
El cálculo de sinergia basado en el método de Greco Rustom ((1990) Application of a New Approach for the Quantitation of Drug Synergism to the Combination of cis Diaminedichloroplatinium and 1-\beta-D-Arabinofuranosyl-cytosine, Cancer Research, 50, 5318-5327) usado en este análisis es una herramienta ideal para la evaluación del tipo de datos experimentales que pueden generarse usando el Ensayo de Replicón de VHC. Hay otros métodos que se aplican a estudios de compuestos antivirales tales como Pritchard y Shipman (Prichard, M. N., y Shipman, C. Jr., (1990) "A three-dimensional model to analyze drug-drug interactions (review), "Antiviral Res. 14: 181-206). La aplicación de su método de cálculo de sinergia a los datos mostrados en la Tabla 8 también indica el tratamiento combinado de las células de replicón con un inhibidor de serina proteasa de VHC e interferón que producen una inhibición sinérgica de la acumulación de ARN del replicón de VHC (datos no mostrados).
TABLA 9
428 
\newpage
Otra medida para evaluar la naturaleza sinérgica del tratamiento con fármaco anti-VHC usando los presentes inhibidores de serina proteasa de VCH e interferones es usar los mismos métodos que se han descrito anteriormente para evaluar la terapia combinada convencional actual para el VHC, es decir, el interferón alfa-2B en combinación con Ribavirina en el Ensayo de Replicón. La última línea de la Tabla 9 demuestra que el parámetro \alpha para una mezcla de interferón alfa-2B y Ribavirina es un número negativo, que indica que hay una pequeña cantidad de antagonismo entre estos dos fármacos. Esto subraya además el significado de los tratamientos combinados descritos en este documento que emplean los presentes inhibidores de serina proteasa de VHC en combinación con interferones, ya que estos tratamientos producen claramente sinergia, mientras que la terapia combinada convencional en uso para VHC (interferón alfa-2B en combinación con Ribavirina) no es sinérgica en el Ensayo de Replicón.
La comparación anterior de los tratamientos combinados que emplean los presentes inhibidores de serina proteasa de VHC más interferones frente a Ribavirina más interferón en el Ensayo de Replicón indica claramente que los primeros son sinérgicos, mientras que el último no lo es. Los resultados experimentales obtenidos usando el Ensayo de Replicón indican que sería eficaz una dosis mucho menor de interferón si el interferón se usara en combinación con un inhibidor de serina proteasa de VHC, en comparación con la dosis que se necesita cuando el interferón alfa-2B se usa en combinación con ribavirina. El Ensayo de Replicón es un sistema modelo útil en el que se ensayan posibles compuestos anti-VHC y actualmente se considera en sentido amplio un agente de predicción eficaz de actividad anti-VHC. Véase, por ejemplo, Blight et al. (2000) Efficient Initiation of HCV RNA Replication in Cell Culture. Science 8; 290:1972-1974, and Chung et al. (2001) Hepatitis C virus replication is directly inhibited by IFN-\alpha in a full-length binary expression system. Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 98 (17):9847-52. La ribavirina sola es marginalmente eficaz para reducir la acumulación de ARN de replicón de VHC en el Ensayo de Replicón (Tabla 8, Experimento 10 y última línea de la Tabla 9). Este resultado está en aparente conflicto con los estudios in vivo en los que, cuando se usa por sí misma, la ribavirina no tiene ningún valor terapéutico significativo para el tratamiento de VHC. Por el contrario, en el ensayo de replicón, con corrección en relación con la citotoxicidad como se describe más adelante, la ribavirina tiene un valor de CI_{50} de 145 \muM. Este resultado puede explicarse reconociendo que el Ensayo de Replicón permite la evaluación de altas concentraciones de Ribavirina que no serían posibles en terapia humana debido a la citotoxicidad in vivo (Chutaputti A. (2000) Adverse effects and other safety aspects of the hepatitis C antivirals. Journal of Gastroenterology and Hepatology, 15 Suppl:E156-63).
Esta evaluación necesariamente requiere la determinación de la citotoxicidad de la ribavirina. Esta toxicidad se produce en pacientes y en ensayos celulares (Shiffman M. L., Verbeke S. B., Kimball P. M. (2000) Alpha interferon combined with ribavirin potentiates proliferative suppression but not cytokine production in mitogenically stimulated human lymphocytes. Antiviral Research. -18(2):91-9). En los experimentos descritos en este documento, la citotoxicidad de la ribavirina en el Ensayo de Replicón se observa y se mide de dos formas. Tanto en el ensayo metabólico de XTT para determinar la viabilidad de las células con replicón (Roehm NW., Rodgers G. H., Hatfield S. M., Glasebrook A. L. (1991) An improved colorimetric assay for cell proliferation and viability utilizing the tetrazolium salt XTT. Journal of Immunol Methods. 142(2):237-65) como en el ensayo de RT-PCR cuantitativo TaqMan® que mide los niveles de ARNm de la gliceraldehído-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) en células tratadas frente a no tratadas en el Ensayo de Replicón (Brink N. Szamel M., Young A.R., Wittern K.P., Bergemann J. (2000) Comparative quantification of IL-lbeta. IL-10, IL-10r, TNFalpha and IL-7 mRNA levels in UV-irradiated human skin in vivo. Inflamation Research, 49(6):290-6), se observa una citotoxicidad significativa inducida por ribavirina, pero se corrige como se indica a continuación. Se supone que el nivel de ARNm de GAPDH, que es un gen de mantenimiento (constitutivo) expresado constitutivamente, es igual en todas las células viables. Se sabe por medidas de los niveles de ARNm de GAPDH en células tratadas con el inhibidor de la transcripción actinomicina D que la semivida del ARNm de GAPDH es tan sólo de unas pocas horas (datos no mostrados). De esta manera, se postula, como se hace por otros usando la tecnología TaqMan® para determinar los niveles de ARNm particulares en células humanas, que los niveles de ARNm de GAPDH son proporcionales a los números de células viables (VCN) en cualquier muestra dada, con la relación de VCN = 2^(40-Ct_{CAPDHmRNA}). El VCN se calcula para cada uno de los pocillos de muestra del Ensayo de Replicón y después se divide el número de copias de ARN de replicón de VHC para un pocillo específico por el VCN para ese pocillo. Una vez calculada, esta relación se usa en lugar del número de copias de VHC para calcular la inhibición ("Inhibición media usando relación": Fig. 14A). Sin corregir los datos del Ensayo de Replicón para esta citotoxicidad, dicha citotoxicidad se lee como una inhibición falsa positiva de la acumulación del replicón de ARN de VHC. En el Ensayo de Replicón, se supone que la inhibición medida de la acumulación del replicón de ARN de VHC es la suma de la inhibición real de la acumulación del replicón de ARN de VHC y la inhibición aparente de la acumulación del replicón de ARN de VHC debido a citotoxicidad. Además, se supone que, basándose en la correlación de las mediciones de ARNm de GAPDH TaqMan® y XTT como medidas de citotoxicidad, la inhibición de la acumulación del ARNm de GAPDH causada por compuestos ensayados en el Ensayo de Replicón es una medida fiable de la inhibición aparente de la acumulación del replicón de ARN de VHC debido a la citotoxicidad. De esta manera, la verdadera actividad anti-VHC de un compuesto en el Ensayo de Replicón corregida con respecto a la citotoxicidad general puede estimarse dividiendo el número de moléculas de ARN de replicón de VHC medidas en cada muestra por el VCN, normalizándose de esta manera con respecto al número de células viables en cada muestra. Usando este método, la Fig. 14A muestra una estimación de la verdadera actividad anti-VHC de ribavirina en el Ensayo de Replicón ("Inhibición media usando la relación"). La estimación de la CI_{50} para la Ribavirina se calcula mejor usando este método. En la Fig. 14A, la "Inhibición media original" muestra el valor de CI_{50} no corregido para la Ribavirina, que es aproximadamente 80 \muM, mientras que el valor de CI_{50} calculado corregido a partir de la curva de "Inh. Media. usando la relación" es aproximadamente 145 \muM. Obsérvese que la diferencia entre la inhibición corregida y medida de la acumulación del replicón de ARN de VHC como resultado del tratamiento con interferón alfa-2B (Fig. 14B) es insignificante en vista del % CV de \sim20% del Ensayo de Replicón. Al igual que el interferón alfa-2B, los inhibidores de serina proteasa de VHC ensayados en el presente ejemplo no muestran una citotoxicidad significativa a las concentraciones empleadas. Esto se determina usando ensayos XTT, en los que los valores de TC_{50} para los diversos compuestos son: CU = 64,7 \muM, EP> 10 \muM y EC> 50 \muM. Estos valores de TC_{50} son de 20-140 veces mayores que los valores de CI_{50} mostrados en la Tabla 9. De esta manera, la citotoxicidad de estos compuestos no tiene un efecto significativo sobre la acumulación de ARN de VHC en el Ensayo de Replicón dentro de la precisión del ensayo porque dicha citotoxicidad se produce únicamente a las concentraciones de inhibidor de serina proteasa de VHC significativamente mayores que las ensayadas en el Ensayo de Replicón.
\vskip1.000000\baselineskip
Conclusiones en Relación con la Eficacia de Inhibidores de Serina Proteasa de VHC e Interferones, Individualmente y en Combinación
Las actividades anti-VHC de los presentes inhibidores de serina proteasa de VHC y diversos interferones cuando se usan solos en el Ensayo de Replicón de VHC se muestran en las columnas y líneas de los experimentos individuales que constituyen la Tabla 8 que emplea sólo el agente antiviral. La Tabla 9 indica los valores de CI_{50} medidos para cada compuesto antiviral cuando se ensaya solo. Los resultados anteriores, obtenidos por el uso del Ensayo de Replicón in vitro, también demuestran que el tratamiento combinado de las células de replicón con los inhibidores de serina proteasa de VHC de la presente invención y diversos interferones produce efectos antivirales sinérgicos. Es de esperar que estos efectos se traduzcan en una eficacia in vivo.
La terapia combinada que emplea inhibidores de serina proteasa de VHC de la presente invención posee varias ventajas importantes con respecto a la terapia con un solo fármaco. En primer lugar, haciendo posible el tratamiento con dosis menores de los fármacos individuales que las que se emplearían si se usaran solos, sería de esperar una reducción en toxicidad y efectos secundarios asociados con el tratamiento. Esto es especialmente importante en el caso de la terapia con interferón, donde los efectos secundarios son severos, y se ha demostrado que son proporcionales a la dosis administrada a los pacientes. Los datos anteriores indican que una dosis de inhibidor de serina proteasa de VHC tal como CU a un nivel de CI_{95} podía combinarse con una dosis de interferón alfa, por ejemplo, al nivel de CI_{50}, y el resultado sería una terapia mucho más eficaz que la que podría conseguirse con el inhibidor de serina proteasa de VHC solo sin los efectos adversos producidos por altas dosis de interferón alfa. Un segundo efecto beneficioso importante de la terapia combinada es que, como los dos fármacos actúan independientemente, existe menos probabilidad de desarrollo de cepas mutantes de VHC que resistan al tratamiento. El desarrollo de resistencia es una preocupación importante con los virus de ARN tales como VHC. Debido a su alta tasa de mutación, estos virus pueden adaptarse fácilmente a condiciones de estrés ambiental. Un tercer efecto beneficioso de la terapia combinada puede ser el coste reducido, debido a la necesidad de menores cantidades de agentes terapéuticos para conseguir un tratamiento eficaz.
Otros inmunomoduladores que pueden emplearse en los métodos descritos en la presente invención incluyen, por ejemplo, el interferón alfa 2A, interferón consenso, interferón tau, interferón + Ribavirina (Rebatron), interferón pegilado y promotores de la expresión de genes de interferón. Se prevé adicionalmente que la actividad anti-VHC de estos compuestos se mejorará cuando se usen en combinación con inhibidores de serina proteasa de VHC tales como los descritos en este documento. Como se sabe que los interferones son activos in vivo y en el Ensayo de Replicón, es de esperar que los presentes inhibidores de serina proteasa de VHC también sean activos in vivo, y lo que es más importante, sean capaces de inducir actividad sinérgica cuando se usan en combinación con interferones, estimuladores del sistema inmune de los mismos u otros compuestos que tengan actividad antiviral contra VHC que actúan por un mecanismo distinto de la inhibición de la serina proteasa de VHC.
La mejor terapia actual para VHC emplea interferón alfa y el análogo de nucleósido Ribavirina. Este tratamiento sólo es marginalmente eficaz y produce efectos secundarios significativos que reducen el seguimiento de la terapia por parte de los pacientes (Chronic Hepatitis C: Current Disease Management, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, 1999). Además, en pacientes con trasplantes, no está claro si funcionan las combinaciones de ribavirina-interferón y, de hecho, pueden ser peores que el interferón solo (Chronic Hepatitis C: Current Disease Management, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health, 1999).
Los resultados presentados anteriormente demuestran un efecto combinado sinérgico cuando se usan interferones con una nueva clase de antivirales contra VHC, los inhibidores de serina proteasa de la presente invención. Es de esperar que los resultados in vitro descritos en este documento conduzcan a un tratamiento más eficaz de los pacientes con VHC que el que se puede conseguir actualmente usando el interferón solo. Las dosis subterapéuticas del interferón podrían movilizar el sistema inmune del paciente para luchar mejor contra el virus, y el inhibidor de serina proteasa podría atacar al virus directamente, proporcionando al virus un ataque a dos bandas por mecanismos de acción diferentes. De esta forma, se podría conseguir un tratamiento de la infección por VHC a un coste reducido para el paciente en términos de la disminución de efectos secundarios y menores pagos por agentes farmacéuticos necesarios, ya que se necesitan menos cantidades de los dos fármacos para conseguir una terapia antiviral eficaz contra el VHC.
\global\parskip0.000000\baselineskip
<110> Vertex Pharmaceuticals Incorporation
\vskip0.400000\baselineskip
<120> INHIBIDORES DE PROTEASA PEPTIDOMIMÉTICOS
\vskip0.400000\baselineskip
<130> EP 01968040.4
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<170> Patentln versión 3.5
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 900
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> virus de la Hepatitis C
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
430 
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 28
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> ser humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (2)..(2)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> a representa inosina
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
431 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 31
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> ser humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> misc_feature
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (2)..(2)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> a representa inosina
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
432 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> ser humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
433 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> ser humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
434 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 22
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> ser humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
435 
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 20
\vskip0.400000\baselineskip
<212> ADN
\vskip0.400000\baselineskip
<213> ser humano
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\hskip1cm
436

Claims (27)

1. Un compuesto
437
o una sal farmacéuticamente aceptable o profármaco del mismo, o un solvato de dicho compuesto, su sal o su profármaco.
\vskip1.000000\baselineskip
2. Un compuesto
438
o una sal farmacéuticamente aceptable o profármaco del mismo, o un solvato de dicho compuesto, su sal o su profármaco.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad farmacéuticamente aceptable del compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2 y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
4. Una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, un interferón que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C, y un vehículo farmacéuticamente aceptable.
5. La composición farmacéutica de la reivindicación 4, que comprende además un compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C, en la que dicho compuesto es distinto de un interferón.
6. Una composición farmacéutica, que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, un compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C, y un vehículo farmacéuticamente aceptable, en la que dicho compuesto es distinto de un interferón.
7. La composición farmacéutica de la reivindicación 5, en la que dicho compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, dicho interferón y dicho compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C está cada uno presente en una cantidad seleccionada entre el grupo constituido por una cantidad farmacéuticamente eficaz, una cantidad subclínica farmacéuticamente eficaz y una combinación de las mismas.
8. La composición farmacéutica de la reivindicación 7, en la que dicho interferón se selecciona entre el grupo constituido por interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón consenso, interferón alfa 2A, interferón limboblastoide e interferón tau; y dicho compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C se selecciona entre el grupo constituido por interleuquina 2, interleuquina 6, interleuquina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de células T helper de tipo I, ARN bicatenario, ARN bicatenario en combinación con tobramicina, Imiquimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadina y rimantadina.
9. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 ó 2 en la fabricación de un medicamento para inhibir la proteasa de HCV.
10. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 ó 2 en la fabricación de un medicamento para tratar a un paciente que padece una infección por HCV o afecciones fisiológicas relacionadas con la infección.
11. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 ó 2 junto con una cantidad farmacéuticamente eficaz de un compuesto de otro agente terapéutico anti-HCV, en la fabricación de un medicamento para tratar a un paciente que padece una infección por HCV o afecciones fisiológicas relacionadas con la infección.
12. El uso de la reivindicación 11 en el que el agente terapéutico anti-HCV es interferón o un interferón derivatizado.
13. Uso del compuesto de la reivindicación 1 ó 2 en combinación con un interferón que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C para preparar un medicamento para el tratamiento o prevención de una infección por el virus de la hepatitis C en un paciente que lo necesita.
14. Uso del compuesto de la reivindicación 1 a 2 en combinación con un compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C para preparar un medicamento para el tratamiento o prevención de una infección por el virus de la hepatitis C en un paciente que lo necesita, en la que dicho compuesto es distinto de un interferón.
15. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 ó 2 junto con un interferón que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C y un compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C para preparar un medicamento para el tratamiento o prevención de una infección por el virus de la hepatitis C en un paciente que lo necesita, en la que dicho compuesto es distinto de un interferón.
16. El uso de la reivindicación 15, en la que dicho compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, dicho interferón y dicho compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C está cada uno presente en una cantidad seleccionada entre el grupo constituido por una cantidad farmacéuticamente eficaz, una cantidad subclínica farmacéuticamente eficaz y una combinación de las mismas.
17. El uso de la reivindicación 16, donde dicho interferón se selecciona entre el grupo constituido por interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón consenso, interferón alfa 2A, interferón limboblastoide e interferón tau; y dicho compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C se selecciona entre el grupo constituido por interleuquina 2, interleuquina 6, interleuquina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de células T helper de tipo I, ARN bicatenario, ARN bicatenario complejado con bramicina, Imiquimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadina, y rimantadina.
18. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 ó 2 y un interferón que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C, en la preparación de un medicamento para inhibir la replicación del virus de la hepatitis C en una célula.
19. El uso de la reivindicación 18, que comprende adicionalmente poner en contacto dicha célula con un compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C, en la que dicho compuesto es distinto de un interferón.
20. Uso de un compuesto de la reivindicación 1 ó 2, y un compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C, en la que dicho compuesto es distinto de un interferón, en la fabricación de un medicamento para inhibir la replicación del virus de la hepatitis C en una célula.
21. El uso de la reivindicación 19, en la que dicho inhibidor de la serina proteasa del virus de la hepatitis C, dicho interferón y dicho compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C está cada uno presente en una cantidad seleccionada entre el grupo constituido por una cantidad farmacéuticamente eficaz, una cantidad subclínica farmacéuticamente eficaz y una combinación de las mismas.
22. El uso de la reivindicación 21, en la que dicho interferón se selecciona entre el grupo constituido por interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón consenso, interferón alfa 2A, interferón limboblastoide e interferón tan; y dicho compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C se selecciona entre el grupo constituido por interleuquina 2, interleuquina 6, interleuquina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de células T helper de tipo I, ARN bicatenario, ARN bicatenario complejado con bramicina, Imiquimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadina y rimantadina.
23. Un kit o paquete farmacéutico que comprende una pluralidad de recipientes separados, en la que al menos uno de dichos recipientes contiene un inhibidor de la serina proteasa del virus de la hepatitis C de la reivindicación 1 ó 2 y al menos otro de dichos recipientes contiene un interferón que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C.
24. Un kit o paquete farmacéutico que comprende una pluralidad de recipientes separados, en la que al menos uno de dichos recipientes contiene un inhibidor de la serina proteasa del virus de la hepatitis C de la reivindicación 1 ó 2 y al menos otro de dichos recipientes contiene un compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C, en la que dicho compuesto es distinto de un interferón.
25. Un kit o paquete farmacéutico que comprende una pluralidad de recipientes separados, en la que al menos uno de dichos recipientes contiene un inhibidor de la serina proteasa del virus de la hepatitis C de la reivindicación 1 ó 2, al menos otro de dichos recipientes contiene un interferón que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C, y al menos otro de dichos recipientes contiene un compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C, en la que dicho compuesto es distinto de un interferón.
26. El kit o paquete farmacéutico de la reivindicación 25, en el que dicho inhibidor de la serina proteasa del virus de la hepatitis C, dicho interferón y dicho compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C está cada uno presente en una cantidad seleccionada entre el grupo constituido por una cantidad farmacéuticamente eficaz, una cantidad subclínica farmacéuticamente eficaz y una combinación de las mismas.
27. El kit o paquete farmacéutico de la reivindicación 26 en el que dicho interferón se selecciona entre el grupo constituido por interferón alfa 2B, interferón alfa pegilado, interferón consenso, interferón alfa 2A, interferón limboblastoide e interferón tau; y dicho compuesto que tiene actividad anti-virus de la hepatitis C se selecciona entre el grupo constituido por interleuquina 2, interleuquina 6, interleuquina 12, un compuesto que potencia el desarrollo de una respuesta de células T helper de tipo I, ARN bicatenario, ARN bicatenario complejado con tobramicina, Imiquimod, ribavirina, un inhibidor de inosina 5'-monofosfato deshidrogenasa, amantadina y rimantadina.
ES01968040T 2000-08-31 2001-08-31 Inhibidores peptidomimeticos de proteasa. Expired - Lifetime ES2325481T3 (es)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US22939800P 2000-08-31 2000-08-31
US229398P 2000-08-31
US27764101P 2001-03-21 2001-03-21
US277641P 2001-03-21
PCT/US2001/026008 WO2002018369A2 (en) 2000-08-31 2001-08-31 Peptidomimetic protease inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
ES2325481T3 true ES2325481T3 (es) 2009-09-07
ES2325481T9 ES2325481T9 (es) 2012-07-10

Family

ID=26923261

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES10185132.7T Expired - Lifetime ES2489115T3 (es) 2000-08-31 2001-08-31 Inhibidores de la proteasa peptidomiméticos y compuestos intermedios para su preparación como tratamiento para infección por VHC
ES07012483.9T Expired - Lifetime ES2450815T3 (es) 2000-08-31 2001-08-31 Inhibidores peptidomiméticos de proteasa
ES01968040T Expired - Lifetime ES2325481T3 (es) 2000-08-31 2001-08-31 Inhibidores peptidomimeticos de proteasa.
ES07012485T Expired - Lifetime ES2352804T3 (es) 2000-08-31 2001-08-31 Procedimiento para preparar bicicloprolinatos quirales como intermedios para la preparación de inhibidores de proteasa peptidomiméticos.

Family Applications Before (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES10185132.7T Expired - Lifetime ES2489115T3 (es) 2000-08-31 2001-08-31 Inhibidores de la proteasa peptidomiméticos y compuestos intermedios para su preparación como tratamiento para infección por VHC
ES07012483.9T Expired - Lifetime ES2450815T3 (es) 2000-08-31 2001-08-31 Inhibidores peptidomiméticos de proteasa

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES07012485T Expired - Lifetime ES2352804T3 (es) 2000-08-31 2001-08-31 Procedimiento para preparar bicicloprolinatos quirales como intermedios para la preparación de inhibidores de proteasa peptidomiméticos.

Country Status (37)

Country Link
US (5) US7820671B2 (es)
EP (9) EP1958956B1 (es)
JP (4) JP4689938B2 (es)
KR (10) KR100876472B1 (es)
CN (7) CN101693672B (es)
AR (1) AR030591A1 (es)
AT (2) ATE483686T1 (es)
AU (2) AU8831801A (es)
BR (1) BR0113666A (es)
CA (2) CA2697205C (es)
CL (1) CL2010000330A1 (es)
CY (2) CY1109216T1 (es)
CZ (1) CZ2003595A3 (es)
DE (4) DE60143233D1 (es)
DK (2) DK1878720T3 (es)
DZ (1) DZ3438A1 (es)
EA (2) EA011547B1 (es)
EC (2) ECSP034493A (es)
ES (4) ES2489115T3 (es)
HK (3) HK1057758A1 (es)
HR (1) HRP20030139B8 (es)
HU (1) HUP0300855A3 (es)
IL (6) IL154671A0 (es)
LU (1) LU91960I2 (es)
MX (1) MXPA03001780A (es)
NO (4) NO329929B1 (es)
NZ (2) NZ569670A (es)
PE (1) PE20020474A1 (es)
PL (1) PL211019B1 (es)
PT (1) PT1320540E (es)
SI (1) SI1320540T1 (es)
SK (1) SK2492003A3 (es)
SV (1) SV2003000617A (es)
TW (6) TWI339661B (es)
UA (2) UA81600C2 (es)
WO (1) WO2002018369A2 (es)
ZA (1) ZA200301641B (es)

Families Citing this family (237)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU227742B1 (en) * 1996-10-18 2012-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
AU2001251165A1 (en) * 2000-04-03 2001-10-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
WO2001092282A2 (en) 2000-05-26 2001-12-06 Idenix (Cayman) Limited Methods and compositions for treating flaviviruses and pestiviruses
HUP0303358A3 (en) 2000-07-21 2005-10-28 Schering Corp Novel peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus and pharmaceutical compositions containing them
KR100904788B1 (ko) 2000-07-21 2009-06-25 쉐링 코포레이션 Ｃ형 간염 바이러스의 ｎｓ3-세린 프로테아제억제제로서의 신규한 펩티드
US7244721B2 (en) 2000-07-21 2007-07-17 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
SV2003000617A (es) 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
GB2368339B (en) 2000-10-26 2002-09-18 Yissum Res Dev Co Complex incorporating a plurality of antioxidants
JP4460294B2 (ja) * 2001-10-24 2010-05-12 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 縮合環系を組み込んだ、セリンプロテアーゼ、特にｃ型肝炎ウイルスｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼの阻害剤
US7119072B2 (en) 2002-01-30 2006-10-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US6642204B2 (en) 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US7091184B2 (en) 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
EP2468744A2 (en) * 2002-04-11 2012-06-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
ES2361011T3 (es) * 2002-05-20 2011-06-13 Bristol-Myers Squibb Company Inhibidores del virus de la hepatitis c.
US7608600B2 (en) 2002-06-28 2009-10-27 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Modified 2′ and 3′-nucleoside prodrugs for treating Flaviviridae infections
ES2469569T3 (es) 2002-06-28 2014-06-18 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Prof�rmacos de nucle�sidos modificados en 2' y 3' para el tratamiento de infecciones de Flaviviridae
WO2004026896A2 (en) * 2002-09-23 2004-04-01 Medivir Ab Hcv ns-3 serine protease inhibitors
US20050075279A1 (en) 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
JP2006516548A (ja) 2002-12-30 2006-07-06 アンジオテック インターナショナル アクツィエン ゲゼルシャフト 迅速ゲル化ポリマー組成物からの薬物送達法
WO2004092161A1 (en) * 2003-04-11 2004-10-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
AU2011203054B2 (en) * 2003-04-11 2012-04-26 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of Serine Proteases, Particularly HCV NS3-NS4A Protease
JP2006526011A (ja) * 2003-04-11 2006-11-16 バーテックス　ファーマシューティカルズ　インコーポレイテッド セリンプロテアーゼ（特に、ｈｃｖｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼ）のインヒビター
JP4447603B2 (ja) 2003-05-21 2010-04-07 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎インヒビター化合物
LT2604620T (lt) 2003-05-30 2016-09-12 Gilead Pharmasset Llc Modifikuoti fluorintų nukleozidų analogai
PE20050251A1 (es) 2003-07-18 2005-04-13 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas serinas, en especial proteasa ns3-ns4a del vhc
AR045596A1 (es) 2003-09-05 2005-11-02 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas de serina en particular proteasa ns3-ns4a del vhc
NZ545871A (en) * 2003-09-12 2010-04-30 Vertex Pharma Animal model for protease activity and liver damage
JP4685775B2 (ja) 2003-09-18 2011-05-18 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド セリンプロテアーゼ、とりわけｈｃｖｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼの阻害剤
CA2541634A1 (en) 2003-10-10 2005-04-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
ZA200602937B (en) * 2003-10-10 2007-06-27 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
WO2005043118A2 (en) 2003-10-27 2005-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
EP1944042A1 (en) 2003-10-27 2008-07-16 Vertex Pharmceuticals Incorporated Combinations for HCV treatment
CA2551074A1 (en) 2003-10-27 2005-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hcv ns3-ns4a protease resistance mutants
ZA200603863B (en) * 2003-10-27 2007-11-28 Vertex Pharma Combination for HCV treatment
WO2005058821A1 (en) * 2003-12-11 2005-06-30 Schering Corporation Inhibitors of hepatitis c virus ns3/ns4a serine protease
EP1730167B1 (en) 2004-01-21 2011-01-12 Boehringer Ingelheim International GmbH Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
US7683033B2 (en) 2004-02-04 2010-03-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
WO2005087730A1 (en) * 2004-02-27 2005-09-22 Schering Corporation 3,4-(cyclopentyl)-fused proline compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease
TW200529822A (en) * 2004-02-27 2005-09-16 Schering Corp Novel ketoamides with cyclic p4's as inhibitors of ns3 serine protease of hepatitis c virus
TW200536528A (en) 2004-02-27 2005-11-16 Schering Corp Novel inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
PT1730110E (pt) * 2004-02-27 2010-09-14 Schering Corp Compostos de enxofre como inibidores de serina-protease ns3 do vírus da hepatite c
SG153800A1 (en) * 2004-06-08 2009-07-29 Vertex Pharma Pharmaceutical compositions
UY29016A1 (es) 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
CA2573346C (en) 2004-07-20 2011-09-20 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibitor peptide analogs
KR20130083938A (ko) * 2004-10-01 2013-07-23 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 Ｈｃｖ ｎｓ3-ｎｓ4ａ 프로테아제 저해
TW201424733A (zh) 2004-10-29 2014-07-01 Vertex Pharma 劑量型式
KR101447897B1 (ko) 2005-03-21 2014-10-07 비로베이, 인코포레이티드 시스테인 단백질분해효소 억제제로서의 알파 케토아미드화합물
CA2604640A1 (en) * 2005-04-12 2006-10-19 Romark Laboratories L.C. Methods for treating diseases through interruption of protein maturation, compounds that inhibit the function of molecular chaperones such as protein disulfide isomerases or interfere with glycosylation, pharmaceutical compositions comprising them, and screening methods for identifying therapeutic agents
JP5030947B2 (ja) 2005-05-13 2012-09-19 ヴァイロケム・ファーマ・インコーポレーテッド フラビウイルス感染の治療及び予防のための化合物及び方法
WO2006130686A2 (en) 2005-06-02 2006-12-07 Schering Corporation Hcv protease inhibitors in combination with food
BRPI0610737A2 (pt) 2005-06-02 2010-07-20 Schering Corp formulações farmacêuticas e métodos de tratamento usando as mesmas
WO2006130666A2 (en) * 2005-06-02 2006-12-07 Schering Corporation Medicaments and methods combining a hcv protease inhibitor and an akr competitor
US20070004635A1 (en) * 2005-06-02 2007-01-04 Schering Corporation Method of treating interferon non-responders using HCV protease inhibitor
US7608592B2 (en) 2005-06-30 2009-10-27 Virobay, Inc. HCV inhibitors
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
WO2007014923A1 (en) 2005-07-29 2007-02-08 Tibotec Pharmaceuticals Ltd. Macrocyclic inhibitors of hepatitis c virus
DK1919904T3 (da) 2005-07-29 2014-04-07 Janssen R & D Ireland Makrocykliske inhibitorer af hepatitis-c-virus
TWI375670B (en) 2005-07-29 2012-11-01 Tibotec Pharm Ltd Macrocylic inhibitors of hepatitis c virus
PE20070210A1 (es) 2005-07-29 2007-04-16 Tibotec Pharm Ltd Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
JO2768B1 (en) 2005-07-29 2014-03-15 تيبوتيك فارماسيوتيكالز ليمتد Large cyclic inhibitors of hepatitis C virus
PT1912997E (pt) 2005-07-29 2011-12-19 Tibotec Pharm Ltd Inibidores macrocíclicos do vírus da hepatite c
MX2008001402A (es) 2005-07-29 2008-04-04 Tibotec Pharm Ltd Inhibidores macrociclicos del virus de la hepatitis c.
EP2256113A1 (en) * 2005-08-02 2010-12-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
KR20140069370A (ko) 2005-08-19 2014-06-09 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 방법 및 중간체
US8399615B2 (en) 2005-08-19 2013-03-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7964624B1 (en) 2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
US7705138B2 (en) 2005-11-11 2010-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
CA2629343A1 (en) 2005-11-11 2007-05-24 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c virus variants
JP4047365B2 (ja) * 2006-01-11 2008-02-13 生化学工業株式会社 シクロアルカンカルボキサミド誘導体及びその製造方法
US8829209B2 (en) * 2006-01-11 2014-09-09 Seikagaku Corporation Cycloalkylcarbonylamino acid ester derivative and process for producing the same
JP3975226B2 (ja) * 2006-01-11 2007-09-12 生化学工業株式会社 シクロアルキルカルボニルアミノ酸誘導体及びその製造方法
JP5260062B2 (ja) * 2006-01-20 2013-08-14 株式会社カネカ β−アミノ−α−ヒドロキシ酸アミド誘導体の製造法
CA2643688A1 (en) 2006-02-27 2007-08-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
CA2645684A1 (en) 2006-03-06 2007-09-13 Abbott Laboratories Compositions and methods of use of ritonavir for treating hcv
AU2007227580A1 (en) * 2006-03-16 2007-09-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates for preparing steric compounds
EP1993994A2 (en) * 2006-03-16 2008-11-26 Vertex Pharmceuticals Incorporated Deuterated hepatitis c protease inhibitors
EA018811B1 (ru) 2006-03-20 2013-10-30 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Способы получения твердой дисперсии лекарственного средства и твердые дисперсии лекарственного средства, полученные этим способом
WO2007111866A2 (en) * 2006-03-23 2007-10-04 Schering Corporation Combinations of hcv protease inhibitor(s) and cyp3a4 inhibitor(s), and methods of treatment related thereto
WO2007120595A2 (en) * 2006-04-11 2007-10-25 Novartis Ag Amines for the treatment of hcv
RU2448976C2 (ru) 2006-04-11 2012-04-27 Новартис Аг Ингибиторы hcv/вич и их применение
KR101069051B1 (ko) 2006-05-23 2011-09-29 아이알엠 엘엘씨 채널 활성화 프로테아제 억제제로서의 화합물 및 조성물
DE102006059317A1 (de) 2006-07-04 2008-01-10 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von β-Amino-α-hydroxy-carbonsäureamiden
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
US20120220520A1 (en) * 2006-10-17 2012-08-30 Van T Klooster Gerben Albert Eleutherius Bioavailable combinations for hcv treatment
SG176488A1 (en) 2006-11-15 2011-12-29 Virochem Pharma Inc Thiophene analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
EA200970493A1 (ru) 2006-11-17 2009-10-30 Тиботек Фармасьютикалз Лтд. Макроциклические ингибиторы вируса гепатита с
US20100081672A1 (en) 2006-12-07 2010-04-01 Schering Corporation Ph sensitive matrix formulation
WO2008074035A1 (en) 2006-12-27 2008-06-19 Abbott Laboratories Hcv protease inhibitors and uses thereof
WO2008095058A1 (en) * 2007-02-01 2008-08-07 Taigen Biotechnology Co. Ltd. Hcv protease inhibitors
BRPI0807087A2 (pt) 2007-02-08 2014-06-10 Tibotec Pharm Ltd Inibidores de hcv macrocíclicos substituídos de pirimidina
EP2117537A1 (en) 2007-02-09 2009-11-18 Irm Llc Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors
GEP20125645B (en) 2007-02-27 2012-09-25 Vertex Pharma Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
MX2009009176A (es) 2007-02-27 2009-09-28 Vertex Pharma Inhibidores de serina-proteasas.
WO2008127613A1 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 Scynexis, Inc. New pharmaceutical compositions
CN102872461A (zh) 2007-05-04 2013-01-16 弗特克斯药品有限公司 用于治疗hcv感染的组合治疗
ES2563477T3 (es) * 2007-08-03 2016-03-15 Biotron Limited Composiciones antivirales para tratar la hepatitis C a base de 5-(1-metilpirazol-4-il)2-naftoilguanidina y 2'-C-metiladenosina o 2'-C-metilcitidina
JP5443360B2 (ja) * 2007-08-30 2014-03-19 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 共結晶体およびそれを含む医薬組成物
JP2010539165A (ja) 2007-09-14 2010-12-16 シェーリング コーポレイション Ｃ型肝炎患者を処置する方法
US20090082366A1 (en) * 2007-09-26 2009-03-26 Protia, Llc Deuterium-enriched telaprevir
AR068756A1 (es) 2007-10-10 2009-12-02 Novartis Ag Compuestos peptidicos, formulacion farmaceutica y sus usos como moduladores del virus de la hepatitis c
EP2215076A4 (en) * 2007-10-24 2012-05-02 Virobay Inc COMPOUNDS CAPABLE OF INHIBITING CATHEPSIN S PROTEASE AND HCV REPLICATION
US20090111757A1 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
ES2389994T3 (es) 2007-12-24 2012-11-05 Janssen R&D Ireland Indoles macrocíclicos como inhibidores del virus de la hepatitis C
DE102008009761A1 (de) 2008-02-19 2009-08-27 Bayer Materialscience Ag Verfahren zur Herstellung von Isocyanaten
EP2101173A1 (en) 2008-03-14 2009-09-16 Vivalis In vitro method to determine whether a drug candidate active against a target protein is active against a variant of said protein
CN101580535B (zh) * 2008-05-16 2012-10-03 太景生物科技股份有限公司 丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂
ES2438576T3 (es) 2008-06-24 2014-01-17 Codexis, Inc. Procesos biocatalíticos para la preparación de compuestos de prolina bicíclica fusionada considerablemente pura estereoméricamente
US8569337B2 (en) 2008-07-23 2013-10-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Tri-cyclic pyrazolopyridine kinase inhibitors
WO2010014744A1 (en) * 2008-07-29 2010-02-04 The Scripps Research Institute Inhibitors of hepatitis c virus infection
US8188137B2 (en) 2008-08-15 2012-05-29 Avila Therapeutics, Inc. HCV protease inhibitors and uses thereof
AU2009322393B2 (en) 2008-12-03 2017-02-02 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of HCV NS5A
BRPI0922364A2 (pt) 2008-12-03 2017-08-29 Presidio Pharmaceuticals Inc Composto, composição farmacêutica e uso de um composto
GB0900914D0 (en) 2009-01-20 2009-03-04 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
EP2396028A2 (en) 2009-02-12 2011-12-21 Vertex Pharmceuticals Incorporated Hcv combination therapies comprising pegylated interferon, ribavirin and telaprevir
BRPI1012282A2 (pt) 2009-03-27 2015-09-22 Presidio Pharmaceuticals Inc inibidores de anel fundidos da hepatite c.
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
US8512690B2 (en) 2009-04-10 2013-08-20 Novartis Ag Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors
AR077138A1 (es) 2009-06-23 2011-08-03 Gilead Sciences Inc Composiciones farmaceuticas utiles para tratar el vhc
SI2477980T1 (sl) 2009-09-15 2017-01-31 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Inhibitorji HCV proteaze
TWI404269B (zh) * 2009-09-18 2013-08-01 Advanced Connectek Inc High speed plug connector
UA108211C2 (uk) 2009-11-04 2015-04-10 Янссен Рід Айрленд Бензімідазолімідазольні похідні
MX2012006026A (es) 2009-11-25 2012-08-15 Vertex Pharma Derivados de acido 5-alquinil-tiofen-2-carboxilico y usos para tratamiento o prevencion de infecciones por flavivirus.
JP2013514982A (ja) * 2009-12-18 2013-05-02 イデニク プハルマセウティカルス，インコーポレイテッド ５，５−縮合アリーレン又はヘテロアリーレンｃ型肝炎ウイルス阻害剤
CN102883718A (zh) 2009-12-24 2013-01-16 顶点制药公司 用于治疗或预防黄病毒感染的类似物
US20110178107A1 (en) * 2010-01-20 2011-07-21 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
RU2535664C2 (ru) 2010-01-27 2014-12-20 Аб Фарма Лтд Полигетероциклические соединения, используемые в качестве высокоэффективных ингибиторов вируса гепатита с
SG182589A1 (en) 2010-01-29 2012-08-30 Vertex Pharma Therapies for treating hepatitis c virus infection
WO2011112516A1 (en) 2010-03-08 2011-09-15 Ico Therapeutics Inc. Treating and preventing hepatitis c virus infection using c-raf kinase antisense oligonucleotides
EP2550268A1 (en) 2010-03-24 2013-01-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
TW201139438A (en) 2010-03-24 2011-11-16 Vertex Pharma Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
AU2011232348A1 (en) 2010-03-24 2012-10-11 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of Flavivirus infections
JP2013522375A (ja) 2010-03-24 2013-06-13 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド フラビウイルス感染を処置または予防するためのアナログ
AR094621A1 (es) 2010-04-01 2015-08-19 Idenix Pharmaceuticals Inc Compuestos y composiciones farmacéuticas para el tratamiento de infecciones virales
US8877707B2 (en) 2010-05-24 2014-11-04 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of HCV NS5A
JP2013528624A (ja) 2010-06-03 2013-07-11 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 方法および中間体
WO2011156545A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Viral dynamic model for hcv combination therapy
EP2582717A2 (en) 2010-06-15 2013-04-24 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hcv ns5b polymerase mutants
WO2012006060A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2012006055A2 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2012006070A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
TW201208704A (en) 2010-07-14 2012-03-01 Vertex Pharma Palatable pharmaceutical composition
WO2012020036A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Hepatitis c virus inhibitors
EP2606041A2 (en) 2010-08-17 2013-06-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flaviviridae viral infections
SG188497A1 (en) 2010-09-22 2013-05-31 Alios Biopharma Inc Substituted nucleotide analogs
WO2012048235A1 (en) 2010-10-08 2012-04-12 Novartis Ag Vitamin e formulations of sulfamide ns3 inhibitors
WO2012054870A2 (en) 2010-10-21 2012-04-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Biomarkers for hcv infected patients
CN103269586B (zh) 2010-10-26 2015-07-15 普雷西迪奥制药公司 丙型肝炎病毒抑制剂
WO2012109646A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Treatment of hcv in hiv infection patients
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
WO2012123298A1 (en) 2011-03-11 2012-09-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
US9243025B2 (en) 2011-03-31 2016-01-26 Idenix Pharmaceuticals, Llc Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
US8680152B2 (en) 2011-05-02 2014-03-25 Virobay, Inc. Cathepsin inhibitors for the treatment of bone cancer and bone cancer pain
CN103814001A (zh) 2011-05-13 2014-05-21 弗特克斯药品有限公司 方法和中间体
AU2012269643A1 (en) 2011-06-16 2014-02-06 AB Pharma Ltd. Macrocyclic heterocyclic compound for inhibiting hepatitis C virus and preparation and use thereof
BR112013032188A2 (pt) 2011-06-23 2016-12-20 Digna Biotech Sl composição, produto e método para tratar pacientes com hepatite c crônica
WO2012175581A1 (en) 2011-06-24 2012-12-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
TW201317223A (zh) 2011-07-26 2013-05-01 Vertex Pharma 噻吩化合物
WO2013016499A1 (en) 2011-07-26 2013-01-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods for preparation of thiophene compounds
EP2755985B1 (en) 2011-09-12 2017-11-01 Idenix Pharmaceuticals LLC Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
CA2850003C (en) 2011-09-27 2020-01-07 Kansas State University Research Foundation Broad-spectrum antivirals against 3c or 3c-like proteases of picornavirus-like supercluster: picornaviruses, caliciviruses and coronaviruses
CA2847083A1 (en) 2011-10-10 2013-04-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
IN2014CN02805A (es) 2011-10-14 2015-07-03 Bristol Myers Squibb Co
EP2899183B1 (en) 2011-10-14 2018-09-19 Bristol-Myers Squibb Company Substituted Tetrahydroisoquinoline Compounds as Factor Xia Inhibitors
AR088456A1 (es) 2011-10-14 2014-06-11 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de tetrahidroisoquinolina sustituidos como inhibidores del factor xia
TW201600087A (zh) 2011-10-21 2016-01-01 艾伯維有限公司 治療ｃ型肝炎病毒（ｈｃｖ）的方法
DK2583677T1 (da) 2011-10-21 2015-01-19 Abbvie Inc Fremgangsmåder til behandling af HCV omfattende mindst to direktevirkende antivirale midler, ribavirin, men ikke inteferon
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
ES2564906T3 (es) 2011-12-16 2016-03-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Inhibidores de NS5A del VHC
MX350810B (es) 2011-12-20 2017-09-20 Riboscience Llc Derivados de los nucleosidos sustituidos en 4 '-azido, 3 '-fluoro como inhibidores de la replicacion del rna del vhc.
PE20141423A1 (es) 2011-12-20 2014-10-16 Hoffmann La Roche Derivados nucleosidos con sustitucion 2',4'-difluoro-2'-metilo como inhibidores de la replicacion del arn del vhc
RU2621734C1 (ru) 2011-12-28 2017-06-07 Янссен Сайенсиз Айрлэнд Юси Гетеробициклические производные в качестве ингибиторов hcv
WO2013116339A1 (en) 2012-01-31 2013-08-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated High potency formulations of vx-950
ITMI20120192A1 (it) 2012-02-13 2013-08-14 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di un inibitore delle proteasi virali e suoi intermedi
MX357561B (es) * 2012-02-16 2018-07-13 Rqx Pharmaceuticals Inc Antibióticos peptídicos lineales.
JP6092261B2 (ja) 2012-02-24 2017-03-08 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 抗ウイルス化合物
ITMI20120359A1 (it) 2012-03-07 2013-09-08 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di intermedi utili nella preparazione di un inibitore delle proteasi virali
WO2013136265A1 (en) 2012-03-13 2013-09-19 Dipharma Francis S.R.L. Synthesis of an intermediate of an antiviral compound
ITMI20120391A1 (it) * 2012-03-13 2013-09-14 Dipharma Francis Srl Procedimento per la sintesi di un intermedio ciclopropilammidico utile nella preparazione di un inibitore delle proteasi virali
US8916538B2 (en) 2012-03-21 2014-12-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of a thiophosphoramidate nucleotide prodrug
WO2013142157A1 (en) 2012-03-22 2013-09-26 Alios Biopharma, Inc. Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
CA2872147A1 (en) 2012-05-02 2013-11-07 Kansas State University Research Foundation Macrocyclic and peptidomimetic compounds as broad-spectrum antivirals against 3c or 3c-like proteases of picornaviruses, caliciviruses and coronaviruses
ITMI20120800A1 (it) * 2012-05-10 2013-11-11 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di un intermedio utile nella preparazione di un inibitore delle proteasi virali
WO2013178682A2 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Chemo Ibérica, S.A. Multicomponent process for the preparation of bicyclic compounds
CN103450066B (zh) * 2012-05-30 2017-03-15 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 特拉匹韦中间体的制备方法
US20140010783A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
WO2014015217A1 (en) 2012-07-19 2014-01-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Biomarkers for hcv infected patients
WO2014033667A1 (en) 2012-08-30 2014-03-06 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of telaprevir
WO2014045263A2 (en) * 2012-09-24 2014-03-27 Dr. Reddy's Laboratories Limited Process for preparation of intermediates of telaprevir
US9920034B2 (en) 2012-10-12 2018-03-20 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of a factor XIa inhibitor
EP2906541B1 (en) 2012-10-12 2017-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Guanidine and amine substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
WO2014059202A1 (en) 2012-10-12 2014-04-17 Bristol-Myers Squibb Company Guanidine substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
US9227990B2 (en) 2012-10-29 2016-01-05 Cipla Limited Antiviral phosphonate analogues and process for preparation thereof
ITMI20122036A1 (it) 2012-11-29 2014-05-30 Dipharma Francis Srl Sintesi di un intermedio di un composto antivirale
WO2014096374A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Sandoz Ag Process for the synthesis of pyrrolidines and pyrroles
EP2948440B1 (en) 2013-01-23 2017-04-12 F. Hoffmann-La Roche AG Antiviral triazole derivatives
CN103113288B (zh) * 2013-02-04 2015-05-20 苏州永健生物医药有限公司 一种八氢环戊烯并[c]吡咯羧酸衍生物的合成方法
WO2014134251A1 (en) 2013-02-28 2014-09-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions
MX2015011193A (es) 2013-03-05 2015-11-13 Hoffmann La Roche Compuestos antivirales.
WO2014160668A1 (en) 2013-03-25 2014-10-02 Bristol-Myers Squibb Company Tetrahydroisoquinolines containing substituted azoles as factor xia inhibitors
ITMI20130706A1 (it) 2013-04-30 2014-10-31 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di un inibitore delle proteasi virali e suoi intermedi
UA123533C2 (uk) 2013-05-16 2021-04-21 Рібосаєнс Ллс 4'-фтор-2'-метилзаміщені нуклеозидні похідні
US20180200280A1 (en) 2013-05-16 2018-07-19 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-Methyl Substituted Nucleoside Derivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication
WO2014193663A1 (en) 2013-05-16 2014-12-04 Riboscience Llc 4'-azido, 3'-deoxy-3'-fluoro substituted nucleoside derivatives
CN104163851B (zh) * 2013-05-20 2019-03-05 湘北威尔曼制药股份有限公司 氟代的α-羰基类HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂
CN103288671B (zh) * 2013-06-20 2014-10-29 上海步越化工科技有限公司 一种(3s)-3-氨基-n-环丙基-2-羟基己酰胺盐酸盐的合成方法
WO2014203224A1 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of telaprevir and its intermediates
WO2014203208A1 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of telaprevir and intermediates thereof
CN104292146B (zh) * 2013-06-24 2017-04-26 上海医药工业研究院 特拉匹韦中间体及其制备方法
CN104558106B (zh) * 2013-10-19 2019-12-10 广东东阳光药业有限公司 一种治疗丙肝药物的制备方法
CN104610272B (zh) * 2013-11-05 2017-03-29 上海唐润医药科技有限公司 环状黄酮或异黄酮类化合物及其用途
EP2899207A1 (en) 2014-01-28 2015-07-29 Amikana.Biologics New method for testing HCV protease inhibition
NO2760821T3 (es) 2014-01-31 2018-03-10
US9777001B2 (en) 2014-01-31 2017-10-03 Bristol-Myers Squibb Company Macrocycles with aromatic P2′ groups as factor xia inhibitors
CN104926712B (zh) * 2014-03-20 2018-03-23 上海医药工业研究院 合成特拉匹韦的中间体及其制备方法
CN104926831A (zh) * 2014-03-20 2015-09-23 上海医药工业研究院 合成特拉匹韦的中间体及其制备方法
CA2948465C (en) 2014-07-07 2018-07-17 Halliburton Energy Services, Inc. Downhole tools comprising aqueous-degradable sealing elements
JP6526796B2 (ja) 2014-09-04 2019-06-05 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｆｘｉａ阻害剤であるジアミドマクロ環
US9453018B2 (en) 2014-10-01 2016-09-27 Bristol-Myers Squibb Company Pyrimidinones as factor XIa inhibitors
WO2017148964A1 (en) 2016-03-04 2017-09-08 F. Hoffmann-La Roche Ag New trifluoromethylpropanamide derivatives as htra1 inhibitors
CN108699105A (zh) 2016-03-04 2018-10-23 豪夫迈·罗氏有限公司 作为htra1抑制剂的新型二氟酮酰胺衍生物
JP7129703B2 (ja) 2016-04-28 2022-09-02 エモリー ユニバーシティー アルキン含有ヌクレオチド及びヌクレオシド治療組成物並びにそれらに関連した使用
JP7164521B2 (ja) 2016-06-21 2022-11-01 オリオン・オフサルモロジー・エルエルシー 炭素環式プロリンアミド誘導体
HUE064412T2 (hu) 2016-06-21 2024-03-28 Orion Ophthalmology LLC Heterociklusos prolinamid-származékok
MX2018016102A (es) * 2016-06-21 2019-08-29 Orion Ophthalmology LLC Derivados alifaticos de prolinamida.
JP2019526563A (ja) 2016-08-23 2019-09-19 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｈｔｒａ１阻害剤としての新規ジフルオロケタミド誘導体
CN111194217B (zh) 2017-09-21 2024-01-12 里伯赛恩斯有限责任公司 作为hcv rna复制抑制剂的4’-氟-2’-甲基取代的核苷衍生物
CN109337537B (zh) * 2018-09-26 2022-10-25 河北晨阳工贸集团有限公司 一种起重机专用单组分水性面漆及其制备方法
CN110668538B (zh) * 2019-09-20 2021-10-22 济南大学 一种聚合氯化钛的制备方法
CN115960088A (zh) * 2020-07-31 2023-04-14 四川大学 一种新型冠状病毒主蛋白酶的抑制剂及其制备方法和用途
CN114057702B (zh) * 2020-07-31 2022-09-30 四川大学 一种新型冠状病毒主蛋白酶的抑制剂及其制备方法和用途
WO2023149981A1 (en) * 2022-02-07 2023-08-10 Purdue Research Foundation Compounds for the treatment of sars
CN114703003B (zh) * 2022-04-14 2023-04-28 上海绿晟环保科技有限公司 一种负载碳量子点的纳米材料润滑添加剂及其制备方法
CN115417790A (zh) * 2022-10-09 2022-12-02 山东大学 一类新型偶氮类发泡剂及合成方法

Family Cites Families (163)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3719667A (en) 1970-08-24 1973-03-06 Lilly Co Eli Epimerization of 6-acylamido and 6-imido penicillin sulfoxide esters
US3840556A (en) 1971-05-28 1974-10-08 Lilly Co Eli Penicillin conversion by halogen electrophiles and anti-bacterials derived thereby
DE3226768A1 (de) 1981-11-05 1983-05-26 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Derivate der cis, endo-2-azabicyclo-(3.3.0)-octan-3-carbonsaeure, verfahren zu ihrer herstellung, diese enthaltende mittel und deren verwendung
DE3211676A1 (de) 1982-03-30 1983-10-06 Hoechst Ag Neue derivate von cycloalka (c) pyrrol-carbonsaeuren, verfahren zu ihrer herstellung, diese enthaltende mittel und deren verwendung sowie neue cycloalka (c) pyrrol-carbonsaeuren als zwischenstufen und verfahren zu deren herstellung
US4499082A (en) 1983-12-05 1985-02-12 E. I. Du Pont De Nemours And Company α-Aminoboronic acid peptides
FR2570695A1 (fr) * 1984-09-27 1986-03-28 Synthelabo Diphenylazomethines a chaine ramifiee ou cyclique, leur preparation et leur application en therapeutique
FR2575753B1 (fr) 1985-01-07 1987-02-20 Adir Nouveaux derives peptidiques a structure polycyclique azotee, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US5496927A (en) 1985-02-04 1996-03-05 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
ATE71934T1 (de) * 1985-06-07 1992-02-15 Ici America Inc Selektionierte difluorverbindungen.
US4835168A (en) 1985-12-16 1989-05-30 Eli Lilly And Company Thiadiazole antiviral agents
US5231084A (en) 1986-03-27 1993-07-27 Hoechst Aktiengesellschaft Compounds having a cognition adjuvant action, agents containing them, and the use thereof for the treatment and prophylaxis of cognitive dysfuncitons
US5736520A (en) 1988-10-07 1998-04-07 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
NZ235155A (en) 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical
US5371072A (en) * 1992-10-16 1994-12-06 Corvas International, Inc. Asp-Pro-Arg α-keto-amide enzyme inhibitors
EP0604182B1 (en) 1992-12-22 2000-10-11 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of Aids
EP0727419B1 (en) 1992-12-29 2002-02-27 Abbott Laboratories Intermediates for the preparation of retroviral protease inhibiting compounds
US5384410A (en) 1993-03-24 1995-01-24 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Removal of boronic acid protecting groups by transesterification
US5656600A (en) * 1993-03-25 1997-08-12 Corvas International, Inc. α-ketoamide derivatives as inhibitors of thrombosis
US5672582A (en) 1993-04-30 1997-09-30 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
IL110752A (en) 1993-09-13 2000-07-26 Abbott Lab Liquid semi-solid or solid pharmaceutical composition for an HIV protease inhibitor
US5559158A (en) 1993-10-01 1996-09-24 Abbott Laboratories Pharmaceutical composition
US5468858A (en) 1993-10-28 1995-11-21 The Board Of Regents Of Oklahoma State University Physical Sciences N-alkyl and n-acyl derivatives of 3,7-diazabicyclo-[3.3.1]nonanes and selected salts thereof as multi-class antiarrhythmic agents
IL111991A (en) 1994-01-28 2000-07-26 Abbott Lab Liquid pharmaceutical composition of HIV protease inhibitors in organic solvent
RU95104898A (ru) 1994-03-31 1996-12-27 Бристоль-Мейерз Сквибб Компани (US) Имидазолсодержащие ингибиторы фарнезид-протеинтрансферазы, способ лечения связанных с ней заболеваний
US5847135A (en) 1994-06-17 1998-12-08 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6420522B1 (en) 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5716929A (en) 1994-06-17 1998-02-10 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5756466A (en) 1994-06-17 1998-05-26 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5861267A (en) 1995-05-01 1999-01-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods, nucleotide sequences and host cells for assaying exogenous and endogenous protease activity
US6037157A (en) 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics
JPH09124691A (ja) * 1995-08-25 1997-05-13 Green Cross Corp:The ペプチド化合物およびそれを含有する医薬組成物
EP1019410A1 (en) 1995-11-23 2000-07-19 MERCK SHARP &amp; DOHME LTD. Spiro-piperidine derivatives and their use as tachykinin antagonists
US6054472A (en) 1996-04-23 2000-04-25 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of IMPDH enzyme
US5807876A (en) 1996-04-23 1998-09-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of IMPDH enzyme
ZA972195B (en) 1996-03-15 1998-09-14 Du Pont Merck Pharma Spirocycle integrin inhibitors
IL126674A (en) 1996-04-23 2005-08-31 Vertex Pharma Use of cyclic and heterocyclic compounds for preparing pharmaceutical compositions inhibiting impdh activity, pharmaceutical compositions containing the same and novel thiazole and oxazole urea derivatives
US6127422A (en) 1996-05-06 2000-10-03 Eli Lilly And Company Anti-viral method
JPH11513890A (ja) 1996-05-10 1999-11-30 シェーリング コーポレイション Ｃ型肝炎ウイルスｎｓ３プロテアーゼの合成インヒビター
US5990276A (en) 1996-05-10 1999-11-23 Schering Corporation Synthetic inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
JP3982638B2 (ja) 1996-05-17 2007-09-26 データカード コーポレーション 硬化形トップコート組成およびその使用方法
EP0913389A4 (en) * 1996-06-28 2000-02-02 Nippon Chemiphar Co CYCLOPROPYLGLYCINE DERIVATIVES AND AGONISTS OF THE L-GLUTAMATE RECEPTOR TYPE OF METABOLITE REGULATION
US6245919B1 (en) * 1996-06-28 2001-06-12 Haruhiko Shinozaki Cyclopropylglycine derivatives and agonists for metabotronic L-glutamate receptors
US6153579A (en) 1996-09-12 2000-11-28 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Crystallizable compositions comprising a hepatitis C virus NS3 protease domain/NS4A complex
ATE320432T1 (de) 1996-09-25 2006-04-15 Merck Sharp & Dohme Spiro-azacyclische derivate, deren herstellung und verwendung als tachykinin-antagonisten
AU4898797A (en) 1996-10-08 1998-05-05 Colorado State University Research Foundation Catalytic asymmetric epoxidation
HU227742B1 (en) 1996-10-18 2012-02-28 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
GB9623908D0 (en) 1996-11-18 1997-01-08 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
DE19648011A1 (de) 1996-11-20 1998-05-28 Bayer Ag Cyclische Imine
JP4327910B2 (ja) 1997-03-14 2009-09-09 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｉｍｐｄｈ酵素のインヒビター
GB9707659D0 (en) 1997-04-16 1997-06-04 Peptide Therapeutics Ltd Hepatitis C NS3 Protease inhibitors
GB9708484D0 (en) 1997-04-25 1997-06-18 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
GB9711114D0 (en) 1997-05-29 1997-07-23 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
DK1003775T3 (da) * 1997-08-11 2005-05-30 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Hepatitis C-inhibitorpeptider
JP4452401B2 (ja) * 1997-08-11 2010-04-21 ベーリンガー インゲルハイム （カナダ） リミテッド Ｃ型肝炎ウイルス阻害ペプチドアナログ
US6767991B1 (en) 1997-08-11 2004-07-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptides
US6183121B1 (en) 1997-08-14 2001-02-06 Vertex Pharmaceuticals Inc. Hepatitis C virus helicase crystals and coordinates that define helicase binding pockets
US20040058982A1 (en) 1999-02-17 2004-03-25 Bioavailability System, Llc Pharmaceutical compositions
US20020017295A1 (en) 2000-07-07 2002-02-14 Weers Jeffry G. Phospholipid-based powders for inhalation
AU1416099A (en) 1997-11-28 1999-06-16 Schering Corporation Single-chain recombinant complexes of hepatitis c virus ns3 protease and ns4a cofactor peptide
DE69934104T2 (de) 1998-03-31 2007-06-28 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge Inhibitoren von serinproteasen, insbesondere von hepatitis c virus ns3 protease
US6518305B1 (en) * 1998-04-23 2003-02-11 Abbott Laboratories Five-membered carbocyclic and heterocyclic inhibitors of neuraminidases
US6251583B1 (en) 1998-04-27 2001-06-26 Schering Corporation Peptide substrates for HCV NS3 protease assays
GB9812523D0 (en) 1998-06-10 1998-08-05 Angeletti P Ist Richerche Bio Peptide inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US6323180B1 (en) 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
AR022061A1 (es) * 1998-08-10 2002-09-04 Boehringer Ingelheim Ca Ltd Peptidos inhibidores de la hepatitis c, una composicion farmaceutica que los contiene, el uso de los mismos para preparar una composicion farmaceutica, el uso de un producto intermedio para la preparacion de estos peptidos y un procedimiento para la preparacion de un peptido analogo de los mismos.
DE19836514A1 (de) 1998-08-12 2000-02-17 Univ Stuttgart Modifikation von Engineeringpolymeren mit N-basischen Gruppe und mit Ionenaustauschergruppen in der Seitenkette
US6117639A (en) 1998-08-31 2000-09-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Fusion proteins, DNA molecules, vectors, and host cells useful for measuring protease activity
US6025516A (en) 1998-10-14 2000-02-15 Chiragene, Inc. Resolution of 2-hydroxy-3-amino-3-phenylpropionamide and its conversion to C-13 sidechain of taxanes
EP1027885B1 (en) 1999-02-09 2008-07-09 Pfizer Products Inc. Basic drug compositions with enhanced bioavailability
US20020042046A1 (en) 1999-02-25 2002-04-11 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Crystallizable compositions comprising a hepatitis C virus NS3 protease domain/NS4A complex
JP4184610B2 (ja) 1999-03-19 2008-11-19 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｉｍｐｄｈ酵素のインヒビター
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US7122627B2 (en) 1999-07-26 2006-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Lactam inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protease
US20020183249A1 (en) 1999-08-31 2002-12-05 Taylor Neil R. Method of identifying inhibitors of CDC25
US6774212B2 (en) 1999-12-03 2004-08-10 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Alpha-ketoamide inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
US6365380B2 (en) * 2000-02-23 2002-04-02 Pcbu Services, Inc. Method for stereoselectively inverting a chiral center of a chemical compound using an enzyme and a metal catalyst
WO2001064678A2 (en) 2000-02-29 2001-09-07 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
AU2001251165A1 (en) 2000-04-03 2001-10-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
ES2317900T3 (es) 2000-04-05 2009-05-01 Schering Corporation Inhibidores de serina proteasa ns3 macrociclicos del virus de la hepatitis c que comprenden fragmentos n-ciclicas p2.
CN1432022A (zh) 2000-04-19 2003-07-23 先灵公司 含有烷基和芳基丙氨酸p2部分的丙型肝炎病毒的大环ns3－丝氨酸蛋白酶抑制剂
WO2002002546A1 (fr) 2000-06-30 2002-01-10 Seikagaku Corporation Amides d'acide carboxylique, azides et amino-alcools et procedes de preparation de $g(a)-ceto amides a l'aide de ces derniers
HUP0303358A3 (en) 2000-07-21 2005-10-28 Schering Corp Novel peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus and pharmaceutical compositions containing them
AR029851A1 (es) 2000-07-21 2003-07-16 Dendreon Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c
US7244721B2 (en) 2000-07-21 2007-07-17 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
KR100904788B1 (ko) 2000-07-21 2009-06-25 쉐링 코포레이션 Ｃ형 간염 바이러스의 ｎｓ3-세린 프로테아제억제제로서의 신규한 펩티드
AR034127A1 (es) 2000-07-21 2004-02-04 Schering Corp Imidazolidinonas como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c, composicion farmaceutica, un metodo para su preparacion, y el uso de las mismas para la manufactura de un medicamento
WO2002008251A2 (en) 2000-07-21 2002-01-31 Corvas International, Inc. Peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus
US6777400B2 (en) 2000-08-05 2004-08-17 Smithkline Beecham Corporation Anti-inflammatory androstane derivative compositions
SV2003000617A (es) * 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
US6939692B2 (en) 2000-09-12 2005-09-06 Degussa Ag Nucleotide sequences coding for the pknB gene
US6846806B2 (en) 2000-10-23 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protein
AU2002248147B2 (en) 2000-11-20 2006-04-06 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C tripeptide inhibitors
KR20030091946A (ko) 2000-12-12 2003-12-03 쉐링 코포레이션 Ｃ형 간염 바이러스의 ｎｓ3-세린 프로테아제억제제로서의 디아릴 펩티드
US6653295B2 (en) 2000-12-13 2003-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
AU2002230764A1 (en) 2000-12-13 2002-06-24 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Imidazolidinones and their related derivatives as hepatitis c virus ns3 protease inhibitors
SI1355916T1 (sl) 2001-01-22 2007-04-30 Merck & Co Inc Nukleozidni derivati kot inhibitorji RNA-odvisne RNA virusne polimeraze
GB0102342D0 (en) 2001-01-30 2001-03-14 Smithkline Beecham Plc Pharmaceutical formulation
CA2436518A1 (en) 2001-01-30 2002-08-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated A quantitative assay for nucleic acids
CA2441688C (en) 2001-03-27 2014-01-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods useful for hcv infection
GB0107924D0 (en) 2001-03-29 2001-05-23 Angeletti P Ist Richerche Bio Inhibitor of hepatitis C virus NS3 protease
CA2450545A1 (en) 2001-07-03 2003-01-16 Altana Pharma Ag Process for the production of 3-phenylisoserine
DE60217114T2 (de) 2001-07-11 2007-10-25 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge Verbrückte bizyklische serinproteaseinhibitoren
US7029561B2 (en) 2001-07-25 2006-04-18 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Commerce Fluidic temperature gradient focusing
JP2003055389A (ja) 2001-08-09 2003-02-26 Univ Tokyo 錯体及びそれを用いたエポキシドの製法
US6824769B2 (en) 2001-08-28 2004-11-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Optimal compositions and methods thereof for treating HCV infections
JP4460294B2 (ja) 2001-10-24 2010-05-12 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド 縮合環系を組み込んだ、セリンプロテアーゼ、特にｃ型肝炎ウイルスｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼの阻害剤
JP2006504618A (ja) 2001-11-14 2006-02-09 テバ ファーマシューティカル インダストリーズ リミティド 非結晶性及び結晶性ロサルタン・カリウム、及びそれらの調製方法
CA2369711A1 (en) 2002-01-30 2003-07-30 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
AR038375A1 (es) 2002-02-01 2005-01-12 Pfizer Prod Inc Composiciones farmaceuticas de inhibidores de la proteina de transferencia de esteres de colesterilo
CA2369970A1 (en) 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
US6642204B2 (en) 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US7091184B2 (en) 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
EP2468744A2 (en) 2002-04-11 2012-06-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
BR0313164A (pt) 2002-08-01 2007-07-17 Pharmasset Inc compostos com o sistema biciclo[4.2.1] nonano para o tratamento de infecções por flaviviridae
US20050075279A1 (en) 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
CA2413705A1 (en) 2002-12-06 2004-06-06 Raul Altman Use of meloxicam in combination with an antiplatelet agent for treatment of acute coronary syndrome and related conditions
US7601709B2 (en) 2003-02-07 2009-10-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US7223785B2 (en) 2003-01-22 2007-05-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
US7098231B2 (en) 2003-01-22 2006-08-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
US20040180815A1 (en) 2003-03-07 2004-09-16 Suanne Nakajima Pyridazinonyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
WO2004073599A2 (en) 2003-02-18 2004-09-02 Pfizer Inc. Inhibitors of hepatitis c virus, compositions and treatments using the same
JP4550824B2 (ja) 2003-03-05 2010-09-22 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎抑制化合物
ATE486889T1 (de) 2003-03-05 2010-11-15 Boehringer Ingelheim Int Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c
WO2004092161A1 (en) 2003-04-11 2004-10-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
JP2006526011A (ja) 2003-04-11 2006-11-16 バーテックス　ファーマシューティカルズ　インコーポレイテッド セリンプロテアーゼ（特に、ｈｃｖｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼ）のインヒビター
JP4447603B2 (ja) 2003-05-21 2010-04-07 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎インヒビター化合物
PE20050251A1 (es) 2003-07-18 2005-04-13 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas serinas, en especial proteasa ns3-ns4a del vhc
WO2005018330A1 (en) 2003-08-18 2005-03-03 Pharmasset, Inc. Dosing regimen for flaviviridae therapy
AR045596A1 (es) 2003-09-05 2005-11-02 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas de serina en particular proteasa ns3-ns4a del vhc
NZ545871A (en) 2003-09-12 2010-04-30 Vertex Pharma Animal model for protease activity and liver damage
JP4685775B2 (ja) 2003-09-18 2011-05-18 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド セリンプロテアーゼ、とりわけｈｃｖｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼの阻害剤
US6933760B2 (en) 2003-09-19 2005-08-23 Intel Corporation Reference voltage generator for hysteresis circuit
UY28525A1 (es) 2003-09-22 2005-04-29 Boehringer Ingelheim Int Péptidos macrociclicos activos contra en virus de la hepatitis c
CA2541634A1 (en) 2003-10-10 2005-04-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
AR045870A1 (es) 2003-10-11 2005-11-16 Vertex Pharma Terapia de combinacion para la infeccion de virus de hepatitis c
ZA200603863B (en) 2003-10-27 2007-11-28 Vertex Pharma Combination for HCV treatment
CA2551074A1 (en) 2003-10-27 2005-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hcv ns3-ns4a protease resistance mutants
WO2005043118A2 (en) 2003-10-27 2005-05-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
EP1678134B1 (en) 2003-10-28 2009-09-09 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Preparation of 4,5-dialkyl-3-acyl-pyrrole-2-carboxylic acid derivatives by fischer-fink type synthesis and subsequent acylation
US20050119318A1 (en) 2003-10-31 2005-06-02 Hudyma Thomas W. Inhibitors of HCV replication
US7132504B2 (en) 2003-11-12 2006-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
US20050287514A1 (en) 2003-12-01 2005-12-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods useful for HCV infection
EP1730167B1 (en) 2004-01-21 2011-01-12 Boehringer Ingelheim International GmbH Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
US7683033B2 (en) 2004-02-04 2010-03-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
NZ549079A (en) 2004-02-20 2010-08-27 Boehringer Ingelheim Int Viral polymerase inhibitors
US20050187192A1 (en) 2004-02-20 2005-08-25 Kucera Pharmaceutical Company Phospholipids for the treatment of infection by togaviruses, herpes viruses and coronaviruses
WO2005087730A1 (en) 2004-02-27 2005-09-22 Schering Corporation 3,4-(cyclopentyl)-fused proline compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease
PL1725548T3 (pl) 2004-03-12 2015-08-31 Vertex Pharma Sposoby i związki pośrednie do wytwarzania acetali asparaginowych jako inhibitorów kaspazy
US20050249702A1 (en) 2004-05-06 2005-11-10 Schering Corporation (1R,2S,5S)-N-[(1S)-3-amino-1-(cyclobutylmethyl)-2,3-dioxopropyl]-3-[(2S)-2-[[[(1,1-dimethylethyl)amino]carbonyl]amino]-3,3-dimethyl-1-oxobutyl]-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane-2-carboxamide as inhibitor of hepatitis C virus NS3/NS4a serine protease
SG153800A1 (en) 2004-06-08 2009-07-29 Vertex Pharma Pharmaceutical compositions
CA2577812A1 (en) 2004-08-27 2006-03-09 Schering Corporation Acylsulfonamide compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease
US7863274B2 (en) 2005-07-29 2011-01-04 Concert Pharmaceuticals Inc. Deuterium enriched analogues of tadalafil as PDE5 inhibitors
EP2256113A1 (en) 2005-08-02 2010-12-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
KR20140069370A (ko) 2005-08-19 2014-06-09 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 방법 및 중간체
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7705138B2 (en) 2005-11-11 2010-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
CA2643688A1 (en) 2006-02-27 2007-08-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
EP1993994A2 (en) 2006-03-16 2008-11-26 Vertex Pharmceuticals Incorporated Deuterated hepatitis c protease inhibitors
AU2007227580A1 (en) 2006-03-16 2007-09-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates for preparing steric compounds
EA018811B1 (ru) 2006-03-20 2013-10-30 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Способы получения твердой дисперсии лекарственного средства и твердые дисперсии лекарственного средства, полученные этим способом
EP2001498A4 (en) 2006-03-20 2013-01-23 Vertex Pharma PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
WO2007142951A2 (en) 2006-05-31 2007-12-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Oral controlled release formulations of an interleukin-1 beta converting enzyme inihibitor
MX2009009176A (es) 2007-02-27 2009-09-28 Vertex Pharma Inhibidores de serina-proteasas.

Also Published As

Publication number Publication date
EP1320540B9 (en) 2012-03-21
DK1320540T3 (da) 2009-07-27
ATE483686T1 (de) 2010-10-15
US8529882B2 (en) 2013-09-10
DK1878720T3 (da) 2011-01-24
CN101633636B (zh) 2013-03-13
US20120282219A1 (en) 2012-11-08
TWI359145B (en) 2012-03-01
IL154671A (en) 2011-11-30
KR20090120013A (ko) 2009-11-23
EA200300318A1 (ru) 2004-02-26
EP1320540A2 (en) 2003-06-25
ZA200301641B (en) 2004-06-21
CN101633636A (zh) 2010-01-27
PL365836A1 (en) 2005-01-10
PT1320540E (pt) 2009-07-14
KR20080104383A (ko) 2008-12-02
HK1114090A1 (en) 2008-10-24
NO20100093L (no) 2003-04-16
NO2012006I2 (no) 2012-04-03
EP1878720A1 (en) 2008-01-16
NZ569670A (en) 2010-03-26
EP2368878A1 (en) 2011-09-28
DK1320540T5 (da) 2012-05-29
EP1876173A1 (en) 2008-01-09
NZ541302A (en) 2007-04-27
KR20110088600A (ko) 2011-08-03
IL215890A0 (en) 2011-12-29
KR100945975B1 (ko) 2010-03-09
EP1849797A3 (en) 2008-01-23
TWI319763B (en) 2010-01-21
ES2450815T3 (es) 2014-03-25
US7820671B2 (en) 2010-10-26
EA011547B1 (ru) 2009-04-28
CY2012007I2 (el) 2014-07-02
NO20030928D0 (no) 2003-02-27
US20120064034A1 (en) 2012-03-15
IL215891A0 (en) 2011-12-29
EP1958956A2 (en) 2008-08-20
NO2012006I1 (no) 2012-04-30
AR030591A1 (es) 2003-08-27
HRP20030139B8 (hr) 2015-11-06
US20100137583A1 (en) 2010-06-03
DE60143233D1 (de) 2010-11-18
DE60138717D1 (de) 2009-06-25
ES2489115T3 (es) 2014-09-01
CN1869061B (zh) 2013-04-24
UA81600C2 (en) 2008-01-25
EP1958956B1 (en) 2013-12-11
IL215891A (en) 2015-04-30
IL185644A0 (en) 2008-01-06
HRP20030139B1 (hr) 2015-08-28
NO330807B1 (no) 2011-07-18
WO2002018369A2 (en) 2002-03-07
CA2419607C (en) 2012-03-13
ES2352804T3 (es) 2011-02-23
CN102504014A (zh) 2012-06-20
KR20080104382A (ko) 2008-12-02
CN103232381A (zh) 2013-08-07
NO20030928L (no) 2003-04-16
EP2368877B1 (en) 2014-05-07
TW201022241A (en) 2010-06-16
NO329929B1 (no) 2011-01-24
CN101696232A (zh) 2010-04-21
WO2002018369A8 (en) 2003-11-06
LU91960I2 (fr) 2012-05-21
PL211019B1 (pl) 2012-03-30
AU2001288318C1 (en) 2002-03-13
IL215892A (en) 2015-03-31
KR20100042296A (ko) 2010-04-23
CN100522991C (zh) 2009-08-05
CZ2003595A3 (cs) 2003-06-18
KR100876472B1 (ko) 2008-12-31
SV2003000617A (es) 2003-01-13
HK1057758A1 (en) 2004-04-16
JP2012197289A (ja) 2012-10-18
CL2010000330A1 (es) 2010-09-21
DZ3438A1 (fr) 2002-03-07
DE20122915U1 (de) 2010-04-08
CA2697205C (en) 2014-07-29
EP1320540B1 (en) 2009-05-13
CA2419607A1 (en) 2002-03-07
IL154671A0 (en) 2003-09-17
EP2371839A1 (en) 2011-10-05
HRP20030139A2 (en) 2005-04-30
EP2368877A1 (en) 2011-09-28
ECSP077217A (es) 2007-04-26
CN1451014A (zh) 2003-10-22
HUP0300855A3 (en) 2012-01-30
TW201022242A (en) 2010-06-16
EP1849797A2 (en) 2007-10-31
HK1163061A1 (en) 2012-09-07
AU8831801A (en) 2002-03-13
CN101693672B (zh) 2014-11-12
ECSP034493A (es) 2003-04-25
US8252923B2 (en) 2012-08-28
EA200701869A1 (ru) 2008-02-28
EP1958956A3 (en) 2008-09-24
KR20080096718A (ko) 2008-10-31
KR100968295B1 (ko) 2010-07-07
DE122012000015I1 (de) 2012-05-24
EP1878720B1 (en) 2010-10-06
KR20080104384A (ko) 2008-12-02
SI1320540T1 (sl) 2009-10-31
TWI339661B (en) 2011-04-01
CY2012007I1 (el) 2014-07-02
TWI378927B (en) 2012-12-11
JP5269035B2 (ja) 2013-08-21
UA99895C2 (uk) 2012-10-25
WO2002018369A3 (en) 2002-08-15
BR0113666A (pt) 2005-09-27
PE20020474A1 (es) 2002-06-18
KR20080007515A (ko) 2008-01-21
AU2001288318B2 (en) 2007-09-06
JP2004517047A (ja) 2004-06-10
ATE431358T1 (de) 2009-05-15
TW201022243A (en) 2010-06-16
EP2368901A1 (en) 2011-09-28
TW201022244A (en) 2010-06-16
NO20100999L (no) 2003-04-16
CY1109216T1 (el) 2014-07-02
KR20030041981A (ko) 2003-05-27
KR20100043293A (ko) 2010-04-28
HUP0300855A2 (hu) 2003-10-28
JP4689938B2 (ja) 2011-06-01
JP2011079835A (ja) 2011-04-21
CA2697205A1 (en) 2002-03-07
MXPA03001780A (es) 2003-06-04
SK2492003A3 (en) 2004-11-03
IL215892A0 (en) 2011-12-29
ES2325481T9 (es) 2012-07-10
JP2007284444A (ja) 2007-11-01
US20140294763A1 (en) 2014-10-02
CN101693672A (zh) 2010-04-14
EA017556B1 (ru) 2013-01-30
TW200918523A (en) 2009-05-01
US20050197299A1 (en) 2005-09-08
CN1869061A (zh) 2006-11-29
TWI359144B (en) 2012-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2325481T3 (es) Inhibidores peptidomimeticos de proteasa.
AU2007240156B2 (en) Peptidomimetic protease inhibitors