TWI359145B - Process for preparing intermediates of peptidomime - Google Patents

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Description

1359145 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係針對擬肽化合物及其中間物，其製備，包括中 間物之立體選擇性合成方法，含有此擬肽化合物之醫藥組 合物，及此擬肽化合物或其組合物作為蛋白酶抑制劑，特 別是作為絲胺酸蛋白酶抑制劑，且更特別是作為c型肝炎 病毒（"HCV”）NS3蛋白酶抑制劑之用途。此擬肽化合物， 作為HCVNS3蛋白酶抑制劑，特別可用於干擾C型肝炎病 毒之生命期，及用於治療或預防HCV感染，或與其有關聯 之生理學症狀。本發明亦針對組合治療之方法，使用擬肽 化合物或醫藥組合物或供其使用之套件與醫藥包裝，用於 抑制細胞中之HCV複製，或用於治療或預防病人中之HCV 感染。根據本發明，被包含作為醫藥組合物者，係為包含 HCV絲胺酸蛋白酶之抑制劑，且併用具有抗-HCV活性之 干擾素；HCV絲胺酸蛋白酶之抑制劑，且併用不為干擾素 而具有抗-HCV活性之化合物；或HCV絲胺酸蛋白酶之抑 制劑，且併用具有抗-HCV活性之干擾素，及不為干擾素 而具有抗HCV活性之化合物。再者，本發明係針對製備對 掌性雙環脯胺酸酯中間物之立體選擇性方法，該中間物可 用於合成擬肽化合物。 【先前技術】 被HCV感染為一種令人嘆為觀止之人類醫療問題，且目 前被認為是大部份非A型、非B型肝炎病例之病因劑。 HCV被認為係以慢性方式感染3%世界人口 [A.Alberti等 143112.doc 1359145 人，”C型肝炎之自然歷史"，肝病學期刊，31(補充1)，17-24(1999)]。僅在美國中之感染率，即為1.8%或3百9十萬人 [M.J. Alter，"在美國中之C型肝炎病毒感染"，肝病學期 刊，31(補充1),88-91(1999)]。在受感染之所有病人中，超 過70%會發展慢性感染，咸認其係為肝硬化與肝細胞癌之 一項主要原因[D.Lavanchy，”C型肝炎之全球監督與防治”， 病毒肝炎期刊，6, 35-47(1999)]。
HCV之複製係涵蓋3010-3033胺基酸之多蛋白之基因組 編碼[Q.-L.Choo等人，”C型肝炎病毒之基因機體形成與多 樣性"，Proc. Natl· Acad. Sci. USA，88),2451-2455(1991); N.Kato等人，”得自患有非A型、非B型肝炎之曰本病人之 人類C型肝炎病毒基因組之分子無性繁殖”，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87，9524-9528(1990) ; A. Takamizawa等 人，"自人類載體單離之C型肝炎病毒基因組之結構與機體 形成"，J. Virol·，65，1105-1113(1991)]。HCV 非結構（NS) 蛋白質係被假設會對病毒複製提供必須之催化手段。NS蛋 白質係藉由多蛋白之蛋白分解分裂而衍生[R.Bartenschlager 等人，”C型肝炎病毒之非結構蛋白質3，會使得為在NS3/4 與NS4/5接合處分裂所需要之絲胺酸型蛋白酶編碼”，J. Virol·，67, 3835-3844(1993) ; A.Grakoui等人，"C型肝炎病 毒編碼之絲胺酸蛋白酶之特徵鑒定：蛋白酶依存性多蛋白 分裂位置之測定，’，J. Virol·，67，2832-2843(1993); A.Grakoui等人，"C型肝炎病毒多蛋白分裂產物之表現與 識別”，J. Virol·，67，1385-1395(1993) ; L. Tomei等人， 143112.doc 1359145 "NS3為處理C型肝炎病毒多蛋白所需要之絲胺酸蛋白酶”， - J. Virol·，67，4017-4026(1993)]。事實上，NS3之最初 181 個胺基酸（此病毒多蛋白之殘基1027-1207)已被証實包含 NS3之絲胺酸蛋白酶功能部位，其會處理HCV多蛋白之所 有四個下游位置[C.Lin等人，"C型肝炎病毒NS3絲胺酸蛋 白酶：轉移分裂要求條件與處理動力學"，J. Viro丨.，68， 8147-8157(1994)]。 HCVNS蛋白質3(NS3)含有絲胺酸蛋白酶活性，其會幫助 處理大部份病毒酶，且因此被認為是病毒複製與感染性所 · 必須的。NS3蛋白酶之必要性，係推論自以下事實，在黃 熱病病毒NS3蛋白酶上之突變，會降低病毒感染性[T. J. Chambers等人，"得自黃熱病病毒之非結構蛋白質NS3之N-末端功能部位之証據，係為負責病毒多蛋白中之位置專一 分裂之絲胺酸蛋白酶"，Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 87， 8 898-8902(1990)]。最近，已証實在HCVNS3蛋白酶之活性 位置處之突變，可在黑猩猩模式中完全免除HCV感染 [C.M.Rice等人，"C型肝炎病毒編碼之酵素活性及在3'-非 ® 轉譯區域中之保守RNA元素，係為活體内病毒複製所必須 的，·，J. Virol·，74(4)2046-51(2000)]。HCVNS3 絲胺酸蛋白 酶亦被認為是病毒複製所必須的，因其及其有關聯之輔因 子NS4A會幫助處理所有病毒酶。此處理似乎類似藉由人 類免疫不全病毒（"HIV”）天門冬胺醯基蛋白酶所進行者。 此外，HI V蛋白酶抑制劑在人體中作為有效抗病毒劑之經 証實用途，係証實在病毒生命期中插入蛋白酶蛋白質處理 143112.doc 1359145 階段，確實會造成治療活性劑。因此，此蛋白酶係為藥物 發現之吸引人標的。 數種可能之HCV蛋白酶抑制劑已被描述。PCT公報案號 WO00/09558, WO00/09543, W099/64442, WO99/07733,
WO99/07734, W099/50230, WO98/46630, W098/17679 及 \^〇97/43310，美國專利案號5,990,276，^.1^11&3-8|'111^1等 人，Bioorg. Med. Chem. Lett.，及，1713-1718(1998)，W. Han等人，Bioorg. Med. Chem. Lett·，10，711-713(2000)， R· Dunsdon 等人，Bioorg. Med. Chem. Lett.，10，1571-1579(2000), M. Llinas-Brunet等人，Bioorg. Med. Chem. Lett·，10, 2267-2270(2000)及 S.LaPlante 等人，Bioorg. Med. Chem. Lett·，10, 2271-2274(2000)，各描述可能之 HCVNS3蛋白酶抑制劑。很不幸地，目前沒有絲胺酸蛋白 酶抑制劑可有效作為抗-HCV齊）。
事貫上’除了干擾素_α、干擾素-α/三嗤核:組合及最近 之經PEG化之干擾素_α以外，並沒有抗_HCV治療劑。但 是’關於干擾素-α治療劑與干擾素_α/三唑核苷之持續回應 率’有很低（<5〇%)傾向，且藉由此等治療劑顯示之副作 用’有很顯著且嚴重之傾向[M. A. Walker，"C型肝炎病 毒：目前研究途徑與發展之綜觀，，，DDT，4，518- 529(1999) ; D. Moradpour等人，"C型肝炎之現行與發展中 之療法'’’£|11*.1.〇38卜061^61*〇1.116卩3(〇1.，11，1199- 1202(1999) ’ H. L. A_ Janssen等人，"慢性病毒肝炎之α-干 擾素療法所伴隨之自殺”，j. Hepato丨.，21，241-243 143112.doc 1359145 (1994);及P. F. Renault等人，"α-干擾素之副作用"，肝病 討論會9, 273-277,（1989)]。再者，干擾素療法只在少部份 (〜25%)病例中引致長期減輕[〇· Weiland，"在慢性c型肝炎 病毒感染中之干擾素療法”，FEMSMicrobio丨.Rev” 14, 279-288(1994)]。前述關於干擾素_α療法之問題，甚至已 導致經PEG化之經衍化干擾素_α化合物作為經改良抗_hcV 治療劑之發展與臨床研究。 鑒於目前關於抗-HCV治療劑之狀況，顯然仍需要更有 效且更良好被容許之療法。 再者，複雜擬肽化合物之合成，長久以來一直被大部份 合成有機方法之非立體選擇性質所阻擾。習知擬肽化合物 之對掌異構物之治療活性’會廣泛地改變。因&，提供此 種立體特異性合成方法，是極為有利的。 以對掌性方式合成可用於本發明治療用擬肽蛋白酶抑制 劑合成之專一雙環脯胺酸酯中間物之先前嘗試，已遭遇到 非對掌選擇性或非對映異構選擇性或長的涵蓋之合成途 佐’或不適合製備大量產物。因屮，介亡+ # m 因此，亦有需要一種以非對 映異構選擇性方式及對掌显槿 /、構上备含形式，以製備大量雙 環脯胺酸酯之方式〇 【發明内容】 本發明係關於式1擬肽化合物
143112.doc 1 1359145 其中： rg為一個鍵結或二氟亞甲基； R1為氫、視情況經取代之脂族基團、視情況經取代之環 狀基團或視情況經取代之芳族基團； R2與R9各獨立為視情況經取代之脂族基團、視情況經取 代之環狀基團或視情況經取代之芳族基團； R、R5及R7各獨立為（視情況經取代之脂族基團 '視情 況經取代之環狀基團或視情況經取代之芳族基團）（視情況 經取代之亞曱基或視情況經取代之次乙基）、視情況經取 代之（1，1 -或1，2-)次環院基或視情況經取代之（1，1 _或1，2_)次 雜環基； R、R、R8及R1 G各獨立為氫或視情況經取代之脂族基 圑； 〇 為經取代之單環狀氮雜環基或視情況經取代之多 環狀氮雜環基’或視情況經取代之多環狀氮雜環烯基，其 中不飽和性係在遠離帶有 R9_L_(N(R8)_R7_c(〇)_)nN(R6)_R5_c(〇)_N 部份基團之環之環中，且_C(〇)_N(R4)_R3_c(〇)c(〇)nr2r1 部份基團係連接於其上； L為-C(O)-、-0C(0)-、-NRwC(0).、_S(〇)2_4_nr1〇s(〇)2· ;及 n為0或1，或 其藥學上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之溶劑 合物’其鹽或其前體藥物， 143112.doc -9- 1359145 其條件是 〇 為經取代之
時，則L為-OC(O)-，且R 為視情況經取代之脂族，或至少一個R3、R5及R7為（視情 況經取代之脂族基團、視情況經取代之環狀基團或視情況 經取代之芳族基團）（視情況經取代之乙烷二基），或R4為視 情況經取代之脂族。 本發明亦提供一種具有下列化學式之化合物：
其中： R1為氫 '視情況經取代之脂族基團、視情況經取代之環 狀基團或視情況經取代之芳族基團； R2及R9各獨立為視情況經取代之脂族基團、視情況經取 代之環狀基團或視情況經取代之芳族基團； R、R及R7各獨立為（視情況經取代之脂族基團、視情 况經取代之環狀基團或視情況經取代之芳族基團）（視情況 經取代之曱烷二基或視情況經取代之乙烷二基）； R4、R6、R8 及 Rl0 各獨立為氫或視情況經取代之脂族基 〇.. 乂-乂為經取代之單環狀氮雜環基或視情況經取代之多 狀氣雜％基、或視情況經取代之多環狀氮雜環烯基，其 143112.doc 1359145 中不餘和性係在遠離帶有 R9_L (N(R8)_R7_C(〇)_)nN(R6)_R5_C(〇)_N 部分基團之環之環中，且_c(〇)_n(r4)_r3_c(〇)c(〇)nr2r1 部分基團係連接於其上； L為-C(O)-、_0C⑼_、_NRl〇c⑼、_s(〇h 或 _NRl〇s(〇)厂 :及
η為0或1，或 八醫藥上可接文之鹽或前體藥物，或此種化合物之溶劑合 物，其鹽或其前體藥物， 其條件是 〇 當V—/為經取代之 為視情況經取代之脂族，
時，則L為-〇C(〇)-，且R9 少—個r3 ' R5及R7為（視情 況經取代之I旨録團、視情驗取狀環狀㈣或視情況 經取代之芳«團）(視情賴取代 情況經取代之脂族。 ）為視
本發明亦針對一種包含式1化合物之醫藥組合物，及使 用式1化合物以抑制Hcv蛋白酶或治療或預防病人中之 HCV感染或與該錢有關聯生理學症狀之方法。 本發明亦針對立體選擇性方法，用以製備 成 胺酸酯化合物，其係為可用於 旱丨又％脯 表備式1化合物之中 此合成方法包括以下步驟： β纪。
使式24化合物分裂與環化
(24) I431l2.doc 其中： C)為視情況經取代之環烷基或視情況經取代之掮合 芳基環烷基； R11 為-C〇2r13 ; R12為亞胺性甘胺醯亞胺加成物； R13為酸保護基或視情況經取代之脂族基團； 於分裂與環化條件下進行，以形成式25化合物
R15為視情況經取代之脂族基團； R16為酸保護基、視情況經取代之芳基或視情況經取代 之脂族基團；及 (b)以醯胺保護基，保護式25化合物中之内醯胺部份 基團之氮，以形成式26化合物 143ll2.doc •12·
(26) 1359145 其中： pG為醯胺保護基； R14係如本文中所述；及 (c) 使式26化合物，在還原條件下還原，以形成式27 化合物
(27) 其中： pQ與R14均如本文中所述；及 (d) 使式27化合物，於去除保護條件下去除保護，以 形成式28化合物
(28) 其中： R14係如本文中所述。 143112.doc -13 - 1359145 本發明亦針對上述合成方法，進一步包括以下步驟，其 中式24化合物係經由以亞胺性甘胺酿亞胺化合物，於式29 化合物上達成Michael加成而製成
其中： 為視情況經取代之環烯基或視情況經取代之稠合 芳基環烯基； R11 為-C02R13 ; 其中： 式29化合物可經由使式29a化合物酯化而製成
其中： 〇 為視情況經取代之環稀基或視情況經取代之稠合 芳基環烯基； R1U&-CH0、-COR15、-Csn或-CONR15R15 ;及 Ris係如本文中所述。 值得注意的是，熟諳此藝者將明瞭酮類之酯化作用可藉 由例如Bayer-Villiger反應而達成。將腈類與酿胺類轉化為 143ll2.doc •14· 員可，，’二由例如水溶液水解，接著進一步酯化而達成。將 頦轉化為S曰類可藉由例如醛之氧化作用，接著酯化而 成。 本發明之另—方面為式1化合物，其中取代基係選自如 本文中定義之較佳或特定具體實施例之組合。 本發明之另—方面為式24-29化合物，其中取代基係選 自如本文中定義之較佳或特定具體實施例之組合。 本毛月之另一方面為醫藥組合物，其除了一或多種Hey 絲胺酸蛋白酶抑制劑以夕卜，包含_或多種干擾素或會引致 顯不抗-HCV活性之干擾素產生之化合物，及/或一或多種 八有抗HCV #性之化合物，包括免疫調節化合物譬如顯 不HCV抗病秦活性之免疫刺激細胞活素，及藥學上可接受 之載劑。 本發明之另一方面為在有需要之病人中治療或預防HCV 感染之方法，其包括對該病人投予藥學上有效量之組合， 此組合為一或多種HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑；一或多種干 擾素或會引致顯示抗_HCV活性之干擾素產生之化合物； 及/或或夕種具有抗-HCV活性之化合物，包括免疫調節 化合物，譬如顯示HCV抗病毒活性之免疫刺激細胞活素。 本發明亦針對一或多種HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑，且併 用一或多種干擾素或會引致顯示抗_HCV活性之干擾素產 生之化合物，及/或一或多種具有抗_1^(:¥活性之化合物， 包括免疫調節化合物，譬如顯示HCV抗病毒活性之免疫刺 激細胞活素，於藥劑製備上之用途，該藥劑係在有需要之 1431I2.doc 15 1359145 病人中用於治療或預防HCV感染。 本發明亦針對在病人中治療或預防Hcv感染之套件或醫 藥包裝，其中該套件或醫藥包裝包含許多個別容器，其中 至少一個該容器含有一或多種HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑 (單獨或併用藥學上可接受之載劑或稀釋劑），至少另一個 該容器含有一或多種干擾素或會引致顯示抗_Hcv活性之 干擾素產生之化合物（單獨或併用藥學上 稀釋劑)，及視情況，至少另一個該容器含有一或= 有抗-HCV活性之化合物（單獨或併用藥學上可接受之載劑 或稀釋劑），包括免疫調節化合物，譬如顯示hcv抗病毒 活性之免疫刺激細胞活素。 HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑、干擾素或抗_hcv化合物在 任何前述應用中之量’可為藥學上有效量，亞臨床抗- HCV有效量或其組合，只要Hcv絲胺酸蛋白酶抑制劑、干 擾素或會引致顯示抗-HCV活性之干擾素產生之化合物及/ 或抗-HCV化合物之最後組合，包含藥學上有效量之化合 物，有效用以治療或預防病人中之HCV感染即可。 〇 【實施方式】 本文中所引用各專利文件及其他參考資料之内容，均以 其全文併於本文供參考。 當於上文及在整個本發明之說明文中使料，下列縮 寫’除非另有指出，否則應明瞭係具有下述意義： 名稱 試劑或片段 ACN 乙腈 143112.doc 1359145 AIBN 2,2'·偶氮雙異丁腈 BOC或Boc 胺基曱酸第三-丁酯 BOP 六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基參（二甲胺基）媾 n-Bu3SnH 氫化三-正-丁基錫 t-Bu 第三-丁基
Cbz 胺基甲酸芊酯 對掌性PTC 對掌性相轉移觸媒
DAST 三氟化（二乙胺基）硫（Et2NSF3) DCC 二環碳化二亞胺 DCM 二氯甲烷（CH2C12) DIBAL-H 氫化二異丁基鋁 DIC 1，3-二異丙基碳化二亞胺 DIPEA 二異丙基乙胺
DMAP 4-(N，N-二甲胺基）吡啶- DMP試劑 Dess-Martin過埃烧試劑
143112.doc 17 1359145 DMF 二甲基曱醯胺 DMSO 二曱亞戚 EA 元素分析 EDCI 1-乙基-3-(3-二曱胺基丙基）碳化二亞胺HC1 eq 當量 Et 乙基 Et20 乙醚 EtOH 乙醇 EtOAc 醋酸乙酯 Et3Si 二乙基石夕烧 FMOC 9-苐基甲氧羰基 H-Chg-OH ρ H2N 人||^OH 0 HOAt 1-羥基-7-氮苯并三唑 HOBT 1-羥基苯并三唑 HOSu N-羥基琥珀醯胺 HPLC 高性能液相層析法 LAH 裡铭針 Me 曱基 Mel 碘化甲烷 MeOH 曱醇
Me0C(0)Cl氯甲酸甲酯 M0MC1 甲氧基氣化曱烷 143112.doc • 18· MOM 甲氡基曱基 MS 質量光譜 NaBH4 硼氫化鈉
Na2C4H406酒石酸鈉 NMP Ν-甲基四氫ρ比洛酮 NMR 核磁共振 P- 聚合體鍵結 PyBOP 六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基參-四氫吡咯基-鱗 TBD 1,5,7-三氮雙環并[4.4.0]-癸-5-烯 RP-HPLC 逆相-高壓液相層析法 TBSC1 氣化第三-丁基二曱基矽烷 TCA 三氯醋酸 TFA 三氟醋酸 Tf20 三氟曱烷磺酸酐 THF 四氫吱喃 ΤΗΡ 四氫喊喃 TLC 薄層層析法 1359145 當於上文及在整個本發明之說明文中使用時，下列術 語，除非另有指出，否則應明瞭係具有下述意義：- "酸生物電子等排體”係意謂與羧基具有化學與物理類似 性，產生廣泛類似生物學性質之基團（參閱Lipinski,醫藥化 學年報，"於藥物設計上之生物同電異素M，21, 283 (1986) ; Yun, Hwahak Sekye，”生物同電異素之應用於新 穎藥物設計 ”B，576-579,（1993) ; Zhao, Huaxue Tongbao， 143112.doc -19· 1359145 "鉛化合物在藥物設計上之生物電子等排體置換與發展” 34-38，（1995) ; Graham, Theochem，”應用於藥物設計之理 論研究：於生物電子等排體中之從頭電子分佈"343，105-109,（1995))。舉例之酸生物電子等排體包括-C(0)-NH0H、 -C(0)-CH2〇H、-C(0)-CH2SH、-C(0)-NH-CN、磺酸基、 膦酸基、烷基磺醯基胺曱醯基、四唑基、芳基磺醯基胺曱 醯基、N-曱氧基胺甲醯基、雜芳基磺醯基胺曱醯基、3-羥 基-3·環丁烯-1,2-二酮、3,5-二酮基-1，2,4-氧二唑啶基或羥 基雜芳基，譬如3-羥基異哼唑基、3-羥基-1-曱基吡唑基 等。 "酸性官能基”係意謂一種帶有酸性氫之部份基團。舉例 之酸官能基包括羧基(-C(O)OH)、-C(0)NH0H-、-C(0)-CH2OH、 -C(0)-CH2SH、-C(0)-NH-CN、磺基、磷基、烷基磺醯基 胺甲醯基、四唑基、芳基磺醯基胺甲醯基、N-曱氧基胺甲 醯基、雜芳基磺醯基胺曱醯基、3-羥基-3-環丁烯-1，2-二 酮、3,5-二酮基-1，2,4-噁二唑烷基或羥基雜芳基如3-羥基 異噁唑基、3-羥基-1 -甲基吡唑基、咪唑基.、酼基等，及適 當羥基，譬如芳族羥基，例如羥笨基。 π酸保護基”係意謂一種易於移除之基團，其係為此項技 藝中已知’用以保護羧基之酸性氫，以防止合成程序期間 不期望之反應，例如阻斷或保護酸官能基，而同時進行涉 及此化合物其他官能性位置之反應，並可選擇性移除。此 種酸保護基係為熟諳此藝者所習知，已被廣泛地使用於缓 基之保護’如在美國專利3,840,556與3,719,667中所述者， 143112.doc • 20· 1359145 其揭示内㈣併於本文供參考。關於適#料護基，可參 閱T· W. Green與P. G.M. WUts "有機化學中之保護基"J〇hn
Wiley & Sons，1991。酸保護基亦包括如本文中定義之氫 化作用不安定酸保護基。舉例之酸保録包括醋類譬如 經取代與未經取代之Cis低碳烷基，例如曱基、乙基、第 丁基、甲氧基甲基 '甲硫基甲基、2,2,2_三氣乙基等， 四氫哌喃基，經取代與未經取代之苯基烷基，譬如芊基， 及其經取代之衍生物，譬如烷氧基芊基或硝基芊基等，桂 皮基，二烷胺基烷基，例如二甲胺基乙基等，三甲基矽烷 基，經取代與未經取代之醯胺與醯肼，例如n，n-二甲胺、 7-硝基峭哚、肼、N-苯基胼等之醯胺與醯肼，醯氧基烷 基，譬如二甲基乙醯基氧基甲基或丙酿氧基甲基等，芳醯 基氧基烷基，譬如苯甲醯氧基乙基等，烷氧羰基烷基，譬 如曱氧羰基甲基 '環己基氧基羰基甲基等，烷氧羰基氧基 烷基，譬如第二-丁氧羰基氧基甲基等，烷氧羰基胺基烷 基，譬如第二-丁氧羰基胺基甲基等，院胺基羰基胺基烷 基，譬如曱胺基.基胺基曱基等，酿基胺基烧基，.譬如乙 醯胺基T基等’雜環基羰基氧基烷基，譬如4_曱基六氫 p比°井基-羰基氧基甲基等，二烷胺基羰基烷基，譬如二曱 胺基羰基-甲基等，（5-(低碳烷基）-2-酮基-i，3-二氧伍圜烯· 4-基）烧基，譬如（5-第三-丁基_2_酮基_1，3_二氧伍圜烯_4_ 基）甲基等，及（5-苯基-2-酮基-1,3-二氧伍圜烯基）烷 基’譬如（5-苯基-2-酮基-1，3-二氧伍圜烯_4_基）曱基等。 酸不女疋性胺保s蒦基”係意謂如本文中定義之胺保護 1431l2.doc 1359145 基，其可容易地經由以酸處理而被移除，同時對其他試劑 保持相對安定。較佳酸不安定之胺保護基為B〇C。 月曰知"係意謂如本文中芩義之院基、烯基或炔基。 "脂族基團取代基"係意謂連接至如本文中定義之脂族基 團之取代基，包括芳基、雜芳基、羥基、烷氧基、環基氧 基、芳氧基、雜芳基氧基、醯基或其硫酮基類似物、環基 斂基或其硫酮基類似物、芳醯基或其硫酮基類似物、雜芳 醯基或其硫酮基類似物、醯氧基、環基羰基氧基、芳醯基 氧基' 雜芳酿基氧基、齒基、墙基、氰基、緩基（酸）、 -C(0)NHOH-、-C(0)-CH20H、-C(0)-CH2SH、-C(0)-NH-CN、 %基、麟基、烧基續酿基胺甲醯基、四e坐基、芳基續酿基 胺曱醯基、Ν-曱氧基胺甲醯基、雜芳基磺醯基胺曱醯基、 3-羥基-3-環丁烯_1，2_二酮、3,5-二酮基_ι，2,4-。惡二峻燒基 或經基雜芳基如3-羥基異噁唑基、3_羥基_丨_甲基吡唑基、 燒氧羰基、環基氧基羰基 '芳氧基羰基、雜芳基氧基幾 基、烷基磺醯基、環基磺醯基、芳基磺醯基、雜芳基確醯 基、院基亞續酿基、壞基亞續酿基、芳基亞續酿基、雜芳 基亞磺醯基、烷硫基、環基硫基、芳基硫基、雜芳基硫 基、環基、芳基重氮基'雜芳基重氮基、硫醇、亞甲基 (H2c=)、酮基（0=)、硫_基（8=)、Yi2]^-、、 744(:(0)0-、Y^hCCC^NY3·、YiY2NS〇2〜^Y3s〇2NYL ’其中R2係如本文定義’ Y1與Y2係獨立為氫、烷基、芳基 或雜芳基，及Υ3為烷基、環烷基、芳基或雜芳基，或關於 其中取代基為YifN·之情況，則Υ1與γ2之一可為如本文中 H3112.doc -22- 1359145 定義之醯基、環基羰甚、：¾:納* 丞叛暴方醯基、雜芳醯基、烷氧羰基、 核基氧基㈣、芳氧基絲或雜芳基氧錢基，而γΐ_2 中之另-個係如先前定義，於其中取代基為 YY2NC(〇)_、、Υ1Υ_0)ΝΥ3·或 YVNSOr之情況，γ%γ2亦可和¥1與丫2所經過而連接之 Ν原子-起採用，而形成4至7員氮雜環基或氮雜環稀基。 酸性/酿胺脂族基團取代基係為缓基（酸）、_c(〇)nh〇h_、
-c(o)-CH2〇H、、_c(〇) NH CN、磺基、磷 基、烷基磺醯基胺甲醯基、四唑基、芳基磺醢基胺曱醯 基、N-甲氧基胺甲醯基、雜芳基磺醯基胺甲醯基、羥 基-3-環丁烯-l，2-二酮、3,5_二酮基_i，2,4•噁二唑烷基或羥 基雜芳基如3 -羥基異噁唑基、3_羥基_丨_曱基吡唑基及 YiYhCO-。非酸性極性脂族基團取代基為羥基、酮棊 (〇=)、硫酮基（s=)、醯基或其硫酮基類似物、環基数基或 其硫鋼基類似物、芳醯基或其硫酮基類似物、雜芳醯基或 其硫酮基類似物、烷氧羰基、環基氧基羰基、芳氧基幾 基、雜芳基氡基羰基、醯氧基、環基羰基氧基、芳醯基氧 基、雜方醯·基氧基、烧基續酿基、環基；5黃醯基、芳基項酉藍 基、雜芳基磺醯基、烷基亞磺醯基、環基亞磺醯基、芳基 亞磺醯基、雜芳基亞磺醯基、硫醇、、 Y'Y2NC(0). 、 ¥^^0(0)0- 、 yYnc^cony3-或 Y1 Y2NS02-。舉例之帶有脂族基團取代基之脂族基團，包 括甲氧基曱氧基、甲氧基乙氧基、乙氧基乙氧基，（甲氧 基-、苄氧基-、苯氧基-或乙氧基-)羰基（曱基或乙基），苄 143112.doc .23· 1359145 氧羰基、吡啶基曱氡基-羰基曱基、甲氧基乙基、乙氧基 曱基 '正-丁氧基甲基、環戊基曱氧基乙基、苯氧基丙 基、笨氡基稀丙基、二氟曱基、環丙基甲基、環戊基曱 基、羧基（曱基或乙基）、2-苯乙烯基、苄氧基、〗_或2莕 基-曱氧基、4-吡啶基-甲基氧基、苄氧基乙基、3_芊氧基 烯丙基、4-吡啶基甲基-氧基乙基、4_吡啶基甲基氧基烯 丙基、苄基、2-苯乙基、萘基甲基、苯乙烯基、4_苯基· 1，3-戊二烯基、苯基·丙炔基、3_苯基丁 _2炔基、吡啶_3_ 基乙炔基及喳，林-3-基乙炔基、4-吡啶基，乙炔基、4_p比咬 基乙烯基、嘧吩基乙烯基、吡啶基乙烯基、咪唑基_乙烯 基、吡π井基乙烯基、吡啶基戊烯基、吡啶基己烯基及吡啶 基庚稀基、ρ塞吩基-甲基、ρ比咬基甲基、σ米吐基甲基、 ρ比畊基曱基、四氫旅喃基曱基、四氫喊喃基-甲基氧基甲 基等。 酿基係意s胃H-CO-或（脂族或環基）_c〇-，其中脂族基 團係如本文中所述。較佳醯基含有低碳烷基。舉例之醯基 包括甲醯基、乙醯基、丙醯基、2-曱基丙醯基、丁醯基、 棕櫚醯基 '丙烯酸基、丙炔醯基、環己幾基等。 "烯酿基"係意謂烯基-C0-基團，其中烯基係如本文定 義。 "稀基"係意謂含有一個碳-碳雙鍵之脂族烴基，且其可為 直鏈或分枝狀，具有約2至約15個碳原子在此鏈中《較佳 烯基具有2至約12個碳原子在此鏈中；且更佳為約2至約4 個碳原子在此鏈中。分枝狀係意謂一或多個低碳烷基，譬 1431l2.doc • 24- 1359145 如甲基、乙基或丙基，被連接至線性烯基鏈。"低碳烯基" 係意謂約2至約4個碳原子在此鏈中，其可為直鏈或分枝 狀。舉例之烯基包括乙烯基、丙烯基、正_ 丁烯基、異丁 烯基、3-甲基丁 _2-烯基、正-戊烯基、庚烯基、辛烯基、 環己基丁烯基、癸烯基等。"經取代之烯基"意謂如上所述 之烯基經一或多個"脂族基團取代基"取代（較佳為丨至3 個），其可為相同或不同，且如本文所定義者。例舉之烯 基脂族基團取代基包括鹵素或環烷基團。 烯氧基"係意謂烯基_〇_基團，其中烯基係如本文中所 述。舉例之烯氧基包括烯丙氧基、3_丁烯基氧基等。 烷氧基”係意謂烷基_〇_基團，其中烷基係如本文中所 述。舉例之院氧基包括甲氧基、乙氧基、正·丙氧基、異_ 丙氧基、正-丁氧基、庚氧基等。 •’烷氧羰基"係意謂烷基-0_C0_基團，其中烷基係如本文 定義。舉狀Mm基包括甲氧絲、乙氧減、第三_ 丁氧羰基等。 "院基"係意謂脂族烴基’其可為直鏈或分枝狀，具有約
鏈中’其可為直鏈或分枝狀。”經取代之 述之烷基被一或多個"脂族取代基"（較佳 其可為相同或不同，且如本文所定義者。 143112.doc -25. 1359145 ••烧基亞磺醯基"係意謂烷基_so-基團，其中烷基係如上 文定義。較佳基團為其中烷基為低碳烷基者。 "烧基磺醯基"係意謂烷基-S02-基團，其中烷基係如上文 定義。較佳基團為其中烷基為低碳烷基者。 "烧基磺醯基胺曱醯基"係意謂烷基_s〇2_nh_c(=〇)-基 團’其中坑基係如本文中所述。較佳烷基磺醯基胺曱醯基 係為其中统基為低碳烧基者。 "炫硫基”係意謂烷基-S-基團，其中烷基係如本文中所 述°舉例之烷硫基包括曱硫基、乙硫基、異-丙硫基及庚 硫基。 ”炔基係意謂含有一個碳-碳參鍵之脂族烴基，且其可為 直鏈或分枝狀’具有約2至約15個碳原子在此鏈中。較佳 快基具有2至約12個碳原子在此鏈中；且更佳為約2至約4 個碳原子在此鏈中。分枝狀係意謂一或多個低碳烷基，譬 如曱基 '乙基或丙基，被連接至線性炔基鏈。"低碳炔基，， 係思、s胃約2至約4個碳原子在此鏈中，其可為直鏈或分枝 狀。此炔基可被一或多個函基取代。舉例之炔基包括乙炔 基、丙炔基、正-丁炔基、2_ 丁炔基、3·曱基丁炔基、正-戊炔基、庚炔基、辛炔基、癸炔基等。”經取代之炔基，，意 明如上所述之炔基經一或多個"脂族基團取代基，，取代（較佳 為1至3個），其可為相同或不同，且如本文所定義者。 "胺保護基"係意謂易於移除之基團，其係為此項技藝中 已知，用以保護胺基或醯胺基之氮部份基團，以在合成程 序期間防止不期望之反應，並可選擇性地移除。胺/醯胺 143ll2.doc •26· 1359145 保護基之利用，係為此項技藝中所習知，用以保護基團， 以在合成程序期間防止不期望反應，且許多此種保護基係 為已知，例如T· W· Greene與R G. Μ· Wuts，有機合成之保 濩基，第 2版（John Wiley & Sons, New York (1991))，併於 本文供參考。胺/醯胺保護基亦包括"酸不安定性胺/醯胺保 護基"與"氫化作用不安定性胺/醯胺保護基"。舉例之胺/醯 胺保護基係為醯基，包括甲醯基、乙醯基、氯基乙醯基、 二氣基乙醯基、鄰-硝基苯基乙醯基、鄰_硝基笨氧基-乙醯 基、二氟乙醯基、乙醯乙醯基、4_氣基丁醯基、異丁醯 基、鄰-硝基桂皮醯基、甲基吡啶醯基、醯基異硫氰酸 酯、胺基己醯基、苯甲醯基等，及醯氧基，包括甲氧羰 基第基甲氧羰基、2,2,2-三氟乙氧羰基、2-三甲基石夕燒 基乙氧基羰基 '乙烯基氧基羰基、烯丙氧基羰基、第三_ 丁氧羰基（BOC)、1，1-二曱基_丙炔基氧基羰基、苄氧羰基 (CBZ)、對-硝基芊氧羰基、2，心二氣芊氧羰基等。 ”醯胺保護基"係意謂易於移除之基團，其係為此項技藝 中已知，用以保護醯胺基之氮部份基團，以在合成程序期 間防止不期望之反應，並可在其轉化成胺之後，選擇性地 移除。醯胺保護基之利用係為此項技藝中所習知，用以保 護基團，以在合成程序期間防止不期望之反應，且許多此 種保護基係為已知，例如T. W (^“以與p G M Wuts，有 機合成之保護基，第2版（J〇hn Wiley & s〇ns，New Y〇rk (1991))，併於本文供參考，醯胺保護基亦包括"酸不安定 性醯胺保護基"與"氫化作用不安定性醯胺保護基"。舉例 143112.doc •27· 1359145 之醯胺保護基係為鄰-硝基桂皮醯基、甲基吡啶醯基、胺 基己酿基、苯甲酿基等，及釀氧基，包括曱氧幾基、9_第 基曱氧羰基、2,2,2-三氟乙氧羰基、2-三甲基矽烷基乙氧 基羰基、乙烯基氧基羰基、烯丙氧基羰基、第三_ 丁氧幾 基（BOC)、1，1-二甲基-丙炔基氧基羰基、芊氧羰基 (CBZ)、對-硝基苄氧羰基' 2,4-二氯-苄氧羰基等。 胺基酸’’係意謂一種選自包括如本文中定義之天然與非 天然胺基酸類之胺基酸。胺基酸亦意謂包括在心碳處具有 L或D立體化學之胺基酸。較佳胺基酸為具有α•胺基者。胺 基酸可為中性、正或負，依側鏈中之取代基而定。"中性 胺基酸"係意謂含有未帶電荷之側鏈取代基之胺基酸。舉 例之中性胺基酸包括丙胺酸 '纈胺酸、白胺酸、異白胺 酸、脯胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、曱硫胺酸、甘胺酸、絲 胺酸、蘇胺酸及半胱胺酸。”正胺基酸"係意謂其中側鏈取 代基在生理pH下係為帶正電荷之胺基酸。舉例之正胺基酸 包括離胺酸、精胺酸及組胺酸。，，負胺基酸"係意謂其中側 鏈取代基在生理pH下帶有淨負電荷之胺基酸。舉例之負胺 基酸包括天門冬胺酸與麩胺酸。較佳胺基酸為α_胺基酸。 舉例之天然胺基酸為異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、色胺 酸、甲硫胺酸、甘胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、半胱胺酸、酪 胺酸天冬素、挞酿胺、離胺酸、精胺酸、組胺酸 '天門 冬胺酸及麩胺酸。|，非天然胺基酸，，係意謂沒有核酸密碼子 胺基自文舉例之非天然胺基酸包括例如，如上文指出之 天」α胺基馱之0·異構物；Aib(胺基丁酸）、pAib(3-胺基· 143ll2.doc _ 28 · 1359145 異丁酸）、Nva(正纈胺酸）、β-Ala ' Aad(2-胺基己二酸）、 PAad (3-胺基己二酸）' Abu(2-胺基丁酸）' GabaQ-胺基丁 酸）、Acp(6·胺基己酸）、Dbu(2,4-二胺基丁酸）、α-胺基庚 二酸、TMSΑ(三曱基矽烷基-Ala) ' alle(別-異白胺酸）、 Nle(正白胺酸）、第三-Leu、Cit(瓜胺酸）、〇rn、Dpm(2,2，-一胺基庚一酸）、Dpr(2,3-二胺基丙酸）、α-或β-Nal、 Cha(環己基-Ala)、羥脯胺酸、Sar(肌胺酸）等；環狀胺基 酸；Na-院基化胺基酸，譬如MeGly(Na-曱基甘胺酸）' EtGly(Na-乙基甘胺酸）及EtAsn(Na-乙基天冬素）；及其中α_ 碳帶有兩個側鏈取代基之胺基酸。於本文中所使用天然與 非天然胺基酸及其殘基之名稱，係遵照由IUPAC委員會關 於有機化學之命名法，及IUPAC-IUB委員會關於生物化學 命名法，如在”α_胺基酸之命名法（建議，1974)"， Biochemistry，14(2)，（1975)所提出者中所建議之命名慣 例。在本專利說明書及隨文所附申請專利範圍中所採用之 胺基酸及其殘基之名稱與縮寫和其中所指出者不同之範圍 下’不同名稱與縮寫將會進行澄清。 胺基酸保護基"係意謂一種基團，其會保護胺基酸之酸 或胺部份’或在胺基酸側鏈上之其他反應性部份，例如經 基或硫醇。關於胺基酸側鏈之”相應經保護衍生物"之實 例，可參閱T. W. Green與P. G. M. Wuts”有機化學中之保護 基’’（John Wiley & Sons，1991卜關於胺基酸中酸基之保護 基，係描述於本文中，例如在”酸性官能基”與，•氫化作用 不安定性酸保護基"之段落中。關於胺基酸中胺基之保護 143112.doc •29- 1359145 基，係描述於本文中，例如在”胺保護基"、"酸不安定性 胺保護基"及”氫化作用不安定性胺保護基"之段落中。 '•胺基酸殘基"係意謂被併入本發明化合物中之個別胺基 酸單位。 胺基酸側鏈"係意謂在α_胺基酸中之胺基與缓基間之碳 上發現之取代基。舉例之α_胺基酸側鏈，對於纈胺酸、丙 胺酸及天門冬胺酸，個別包括異丙基、甲基及羧甲基。 "胺基酸等效物”係意謂一種胺基酸，其可用以取代根據 本發明肽中之另一種胺基酸，而無任何可感覺得到之功能 損失。在施行此種改變時，類似胺基酸之取代，係以側鏈 取代基之相對類似性為基礎施行，例如關於大小電荷、 親水性、水療性及疏水性，如本文中所述。 "芳族基團”係意謂如本文中定義之芳基或雜芳基。舉例 之芳族基團包括苯基、齒基取代之笨基、氮雜芳基等。 "芳醯基"係意謂芳基_co_基團’其中芳基係如本文中所 述。舉例之芳醯基包括苯曱醯基、^與孓莕甲醯基等。 ••芳基，，係意謂芳族單環狀或多環狀環系統，具有約6至 :14個碳原子，較佳為約6至約1〇個碳原+。被芳基所涵 蓋者，係為稠合芳基環烯基、稠合芳基環烷基、稠合芳基 雜環焊基及稍合芳絲環基，如本文^義，當經過其芳 基。P伤基團結合時。此芳基係視情況被一或多個"環基取 代基"取代’其可為相同或不同，且均如本文定義二例 之芳基包括苯基«基’或苯基經取代或莕基經取代。" 經取代之芳基"意謂如上所述之芳基經一或多個"環基取代 143.112.doc •30· 基"取代（較佳為1至3個），其可為相同或不同，且如本文所 定義者。 ”芳基重氮基”係意謂芳基-重氮基，其中芳基與重氮基均 如本文定義。 •'次芳基”係意謂視情況經取代之1,2-、1,3-、1，4-、二價 芳基，其中芳基係如本文定義。舉例之次芳基包括視情況 經取代之次笨基、次莕基及次氫茚基。特定次芳基為視情 況經取代次苯基。"經取代之次芳基"意謂如上所述之次芳 基經一或多個"環基取代基"（較佳為1至3個）取代，其可為 相同或相異，且如本文所定義者。 "芳氧基”係意謂芳基-0-基團，其中芳基係如本文定 義。舉例之芳氧基包括苯氧基與2-莕氧基。 ”芳氧基羰基”係意謂芳基-0-CO-基團，其中芳基係如本 文定義。舉例之芳氧基羰基包括苯氧基羰基與莕氧基羰 基。 ”芳基磺醯基'1係意謂芳基-so2-基團，其中芳基係如本文 定義。 ”芳基磺醯基胺曱醯基”係意謂芳基-so2-nh-c(=o)-基 團，其中芳基係如本文中所述。舉例之芳基磺醯基胺曱醯 基為苯基磺醯基胺甲醯基。 ”芳基亞磺醯基”係意謂芳基-S0-基團，其中芳基係如本 文定義。 "芳基硫基"係意謂芳基-S-基團，其中芳基係如本文中所 述。舉例之芳基硫基包括苯硫基與萘基硫基。 143112.doc -31 - 1359145 "鹼性氮原子"係意謂sp2或sp3雜化之氮原子，具有未辞 合之電子對，其能夠被質子化。舉例之鹼性氤原子包括視 情況經取代之亞胺基、視情況經取代之胺基及視情況經取 代之甲脒基。 ”羧基"係意謂HO(0)C-(羧酸）基。 "偶合劑"係意謂一種會與羧基部份基團之羥基部份反 應’於是使其容易接受親核性攻擊之化合物。舉例之偶合 劑包括 DIC、EDCI、DCC等。 "環烯基"係意謂非芳族單·或多環狀環系統，具有約3至 約10個碳原子，較佳為約5至約10個碳原子，且其含有至 少一個碳-碳雙鍵。被環烯基所涵蓋者，係為稠合芳基環 烯基與稠合雜芳基環烯基，如本文中定義，當經過其環烯 基部份基團結合時。此環系統環之較佳環大小，係包含 約5至約6個環原子；且此種較佳環大小亦被稱為"低碳"。 經取代之環烯基"意謂如上所述之環烯基被一或多個”環 基取代基"取代（較佳為丨至3個），其可為相同或不同，且係 如本文所定義者。舉例之單環狀環烯基包括環戊烯基、環 己烯基、環庚烯基等。舉例之多環狀環烯基為正葙烯基。 "環烷基”係意謂非芳族單-或多環狀環系統’具有約3至 ，力10個故原子’較佳為約5至約10個碳原子此環系統環 之較佳環大小，係包含約5至約6個環原子；且此種較佳環 t小亦被稱為"低碳"。被環烷基所涵蓋者，係為稠合芳基 衣烷基與稠合雜芳基環烷基’如本文中定彡，當經過其環 燒基部份基團結合時。"經取代之環院基"意謂如上所述之 143112.doc -32- 1359145 環燒基被-或多個·.環基取代基"取代（較佳為⑴個），立 可為相同或不同，且係如本文定義。舉例之單環狀環院基 〇括環戍基、環己基、環庚基等。舉例之多環狀環院基包 括1-十氫萘、正福基、金鋼烷_(1•或2)基等。
"次環炫基"係意謂如本文中定義之二價環貌基，且有約 4至約8個碳原子。次環烧基之較佳環大小，包括約5至約6 個壤原子；且此種較佳環大小亦被稱為"低碳於次環烷 二=之、”點’包括1，1_、1，2_、1，3_或1，4結合樣式，且 之情況下’結合點之立體化學關係，係為順式或反 式。舉例之切燒基包師m或13):欠環己基與 (ι，ι-或1，2-)次環戊基經取代之次環烧基"意謂如上所述 之次環烷基經一或多個"環基取代基”取代(較佳為U 3 個），其可為相同或不同，且如本文所定義者。·"、 "環狀”或”環基，，係意謂如本文中定義之環燒基、環婦 基、雜環基或雜環晞基。"低碳"一詞，當伴隨著環狀一^ ==係與本文關於環料、環稀基、雜環基或雜 基所指出者相同。 ”環基氧基"係意謂環基基團，其中環基係如本文中 所述。舉例之環院氧基包括環戍氧基、環己氧基”奎唆基 氧五亞甲基硫化氧基、四氫喊鳴基氧基、四氯苯硫基 乳四氫^各基氧基m南基氧基或7·氧雙環并 [2.2.1]庚貌基氧基、經基四氫❹基氧基、經基 并[2·2.1]庚烷基氧基等。 乳又衣 ”環基亞石黃酿基"係意謂環基_s(0)_基團，其中環基係如 143112.doc • 33 - 1359145 本文中所述。 "環基石黃醯基"係意謂環基娜)2·基團，其中環基係如本 文中所述。 "環基硫基"係意謂環基_s•，其中環基係如本文中所述。 重氮基係忍謂二價_N=N-基團。 ，，可置換之部份基图"係意謂—種基團，在與如本文中定 義之L有關聯之情況中’其易遭受到親核性攻擊，被單-或 二取代之胺部份基團置換，於-種有助於該攻擊之作用劑 例如偶合劑存在或不存在下進行。舉例之可置換部份基團 包括羥基、脂族氧基、齒基、N_ λ 乳悬·琥珀醯亞胺、醯氧基 等。 "有效量"係意謂根據本發明之化合物/組合物 要治療效果之量。 η ，，稠合芳基環稀基，，係意謂如本文t定義之稠合芳基㈣ 烯基。較佳稠合芳基環縣係為其中^基為笨基，^ 烯基由約5至約6個環原子所組成者。作為變數 ^ 環烯基，可經料Μ之任何能料合之料 H 土 "經取代之稍合芳基輯基”意謂如上所述之_合芳^说 基經一或多個"環基取代基，，取代（較佳為！至3個），二讀 相同或不Θ，且如本文所定義者。舉例人:可為 包括以二氫次茶基、次⑨基等。 。方“烯基 '•稠合芳基環烷基"係意謂如本文中定 ^ 烧基。較佳稠合芳基環⑨基為其中之芳 方基與環 基由約5至約6個環原子所組成者 二本基’且環烷 今支數之稠合芳基環 I43112.doc -34- 1359145 ’元基彳經過电系統之任何能夠結合之原子進行結合。" 二取代：稠合芳基環烷基"意謂如上所述之稠合芳基環烷 基』一或多個"環基取代基"取代（較佳為！至3個）’以為 =或不同，且如本文所定義者。舉例之稠合芳細基 匕栝1，2,3,4-四氫次萘基等。 心稍合芳基雜環婦基係意謂如本文t定義之祠合芳基與 : 。較佳稠合芳基雜環烯基為其中之芳基為苯基， 且雜壞稀基由约 人— * 、.，、辰原子所組成者。作為變數之稠 &方基雜料基，可經過環系統之任何能夠結合之原子進 仃結合。在掏合芳基雜環烯基之雜環埽基部份之前，作為 :首之氣、氧或硫名稱，係定義至少一個氮、氧或硫原 立個別存在作為環原子。"經取代之狗合芳基雜環稀基" 思謂如上所述之稍合芳基雜環婦基經一或多個"環基取代 基"取代（較佳為1至3個），其可為相同或不同，且如本文所 疋義者。心芳基雜環料之㈣子，可祕性氮原子。 稠合芳基雜環稀基之雜環婦基部份之氮或硫原子，亦可視 情況被氧化成其相應之队氧化物、S-氧化物或s，s_二氧化 物。舉例之稠合芳基雜環烤基包括3H-二氫♦果基、削_ 酮基4：淋基、2H-1-酮其gu » 酊基異喹啉基、1,2-二氫喹啉基、3,4- 二氫峻琳基m異料基、3紅氫異心林基等。 稠口方基雜％基，，係意謂如本文中定義之稍合芳基與雜 環基。較佳_合芳基雜環基為其中之芳基為笨基，且雜環 基由、’勺5至4 6個原子所組成者。作為變數之稍合芳基雜 環基’可經過環系統之任何能夠結合之原子進行結合。在 143112.doc -35- ⑴ 9145 稠合芳基雜環基之雜環基部份之前，作為字首之氮、氣或 =名稱，係定義至少一個氮、氧或硫原子，個別存在作= 2原子》”經取代之稠合芳基雜環基"意謂如上所述之稠合 芳基雜環基經一或多個"環基取代基"取代（較佳為〗至口3 個）’其可為相同或不同，且如本文所定義者。稠合芳旯 ，環基之氮原子，可為驗性氮原子。稠合芳基雜環基之^ 核基部份之氮或硫原子，亦可視情況被氧化成其相應之… 氧b物S_氧化物或S，S_二氧化物。舉例之稠合芳基雜環 基環系統包括二氫啕哚基、^3〆·四氫異喳啉、 四，喹啉、m-2,3-二氫異巧哚·2_基、2，弘二氫苯并闳，異 吲哚-2-基、1，2,3,4·四氫苯并[g]異喳啉基_2_基等。 ”稠合雜芳基環烯基”係意謂如本文中定義之稠合雜芳基 與環烯基。較佳稠合雜芳基環烯基為其中之雜芳基為苯 基，且環烯基由約5至約6個環原子所組成者。作為^數之 稠合雜芳基環烯基，可經過環系統之任何能夠結合之原子 進行結合。在稠合雜芳基環烯基之雜芳基部份之前，作為 子首之氮、氧或硫名稱’係定義至少一個氮、氧或硫原 子，個別存在作為環原子。"經取代之稠合雜芳基環烯基" π如上所述之稿合雜芳基環晞基經一或多個"環基取代 基"取代（較佳為1至3個），其可為相同或不同，且如本文所 定義者。稠合雜芳基環烯基之氮原子可為鹼性氮原子。稠 合雜芳基環烯基之雜芳基部份之氮原子，亦可視情況被氧 化成其相應之氧化物。舉例之稠合雜芳基環烯基包括 5,6-二氫七林基、5,6·二氫異如林基、5,6_二氫+^林基、 143112.doc -36 · 1359145 5苯6并基、4,5·二氫_1H•笨并咪哇基、4,5-二-氯 本开^。坐基等。 與二其雜。方基％烷基係意謂如本文中定義之稠合雜芳基 '元 '較佳稠合雜芳基環垸基為其中之雜芳基由約5 至約6個環原子所組成，而環炫基由約5至約6個環原子所 、且j作為纽之稍合雜芳基我基，可經過環系統之任 何能夠結合之斤子土隹奸么士人 如 原子進订結合。在稠合雜芳基環烷基之雜芳
土：伤之刖’作為字首之氮、氧或硫名稱，係定義至少一 個亂、氧或硫原子’個別存在作為環原子。"經取代之稍 合雜芳基環院基”意謂如上所述之稠合雜芳基環院基經一 或多個"環基取代基”取代（較佳為⑴個），其可為相同或 不同’且如本文料義者。祸合雜芳基環烧基之氮原子可 為鹼性氮原子。稠合雜芳基環烷基之雜芳基部份之氮原 子，亦可視情況被氧化成其相應之义氧化物。舉例之稠合 雜芳基環院基，包括5,6,7,8四氫料基、5,6,7,8_四氯: 喹啉基、5,6,7,8-四氫喹喏啉基、5,6,7,8•四氫喳唑基、 4,5,6’7-四氫-1H-苯并咪唑基、4,5,6,7•四氫苯并吟唑基、 1H-4-氧-二氮茶·2•嗣基、1>3_二氯味。坐小^卜比 酮基等。 "稠合雜芳基雜環烯基|，係意謂如本文中定義之稍合雜芳 基與雜環烯基。較佳稠合雜芳基雜環烯基為其中之雜芳基 由約5至約6個環原子所組成，而雜環烯基由約5至約6個環 原子所組成者。作為變數之稠合雜芳基雜環烯基，可經= 環系統之任何能夠結合之原子進行結合。在稠合雜芳基雜 143112.doc •37· 1359145 土,雜芳基或雜環烯基部份之前，作為字首之氣、氧 ’係定義至少—個氮、氧或硫原子，個別存在作 為壞原子。”經取代之料㈣基料縣,,意謂如上所述 =稠合雜方基雜環婦基經—或多個，，環基取代基"取代（較佳 =個)，其可為相同或不同，且如本文所定義者。稠 二方t氮雜環烯基之氮原子’可為鹼性氮原子。稠合雜 仆I甘衣土之雜芳基部份之氮或硫原子’亦可視情況被氧 :相應之N-氧化物。稠合雜芳基雜環基之雜芳基或雜 :土 #份之氮或硫原子’亦可視情況被氧化成其相應之N_ =、S·氧化物或s，s•二氧化物。舉例之稠合雜芳基雜 =烯基，包括7,8-二氫Π，7_基、W二氫[2,7]·崎咬 :6,7-—氫_3H•味β坐并[4,5_小比咬基、1,二氫— Μ·嗉啶 :、Μ·二氫-1，6-喑咬基、❻二氫-1，7-嗉啶基、i，二 氫-1，8·嗉啶基、i，2_二氫_2,6_喑啶基等。 稠合雜芳基雜環基”係意謂如本文中定義之稠合雜芳基 與雜環基。較佳柄合雜芳基雜環基為其中之雜芳基由約5 去約個％原子所組成，而雜環基由約5至約6個環原子所 組成者。作為變數之稠合雜芳基雜環基，可經 任何能夠結合之原子進行結合以之 在稠合雜方基雜環基之 雜方基或雜環基部份之前’作為字首之氮、氧或硫名 係疋義至少一個氮、氧或硫原子，個別存在作為環 ”子。”經取代之稠合雜芳基雜環基，，意謂如上所述之稠入 雜芳基雜環基經-或多，環基取代基，，取代(較佳為 個）’其可為相同或不同，且如本文所定義者。稍合雜芳 143112.doc -38· 1359145 二：A二二氮原子可為鹼性氮原子。稠合雜芳基雜環基之 二氧之氮或硫原子’亦可視情況被氧化成其相應之 N-减物。料”基料基之料基或雜環基部份之氮 或石'原子，亦可視情況被氧化成其相應之N-氧化物、
化物或S’S-一氧化物。舉例之稠合雜芳基雜環基，包括 2’3_ LA °各[3，叫如林I基、以从四氫苯并 隊辦m 1 2 3 4四氫料咖咐Μ基、 1，2,3,4 四氫-9Η-峨咬并[3,4_b]p?Ili朵_2_基、四氯 _ 9H-㈣并[4,3_b]♦朵·2_基、2,3_二氫孤比洛并从 b] fi木2基1H—2,3,45四氫一氮七園婦并[ΜΑ㈣n 基、1只-2,3,4,5-四_氫_氮七圜烯并[4,3烟11朵_3_基、出· 2’3’4’5-四氫-氮七圜婦并[4,5仲㈣·2·基、5,6,7,8_四-氯 [1，7]4啶基、1，2,3,心四氫[2,7]嗉啶基、2,3二氫[I〆]二氧 陸圜烯并U，3咖。定基、2,3-二氫[Μ]二氧陸圜稀并[2,3_ w咬基 、4,5,6,7 四氣 _ 3H-咪吐并^[4,5〇比咬基、6 7·二氫[5,8]二氮萘基、 1，2,3,4-四風[1，5]·嗉啶基、四氫以別嗉啶基、 1，2,3,4-四氬[1，7]嗉啶基、四氫以…喑啶基、 1，2,3,4*四氳[2,6]喑啶基等。 '，函基’'係意1胃氟基、氣基、絲或峨基嘯佳為氣基、 氣基或漠·基，而更佳為氟基或氯基。 "雜芳醯基"係意謂雜芳基_c〇_基團，其中雜芳基係如本 文中所述。舉例之雜芳醯基包括硫苯甲醯基、菸鹼醯基、 吡咯-2-基羰基、1-與2-莕甲醯基、吡啶醯基等。 •39· 143I12.doc 1359145 雜方基"係意謂芳族單環狀或多環狀環系統，具有約5 至約14個碳原子，較佳為約5至約1〇個碳原子其中在此 %系統中之—或多個碳原子係為碳以外之雜元素，例如 氮、氧或硫。此環系統較佳含有丨至3個雜原子。此環系統 %之較佳ί哀大小，係包含約5至約6個環原子。被雜芳基所 涵蓋者，係為稠合雜芳基環烯基、稠合雜芳基環烷基、稠 合雜芳基雜環烯基及稠合雜芳基雜環基，如本文中定義， δ經過其雜芳基部份基圏結合時。經取代之"雜芳基"意味 如上所述之雜芳基被一或多個"環基取代基"取代（較佳為1 至3個）其可為相同或不同，且係如本文所定義者。於雜 芳基則作為字首之氮、氧或硫名稱，係定義至少一個氮、 氧或硫原子，個別存在作為環原子。雜芳基之氮原子可為 鹼性氮原子，且亦可視情況被氧化成其相應之Ν-氧化物。 舉例之雜芳基與經取代之雜芳基，包括吡畊基、噻吩基、 異嘍唑基、噚唑基、吡唑基、呋咕基、吡咯基、丨，2,4_嘍 一唑基、嗒畊基、喳喏啉基、呔啡基、咪唑并[l，2-a]吡 啶米唑并[2,1 -b]»塞唑基、苯并呋咕基、氮吲哚基、苯并 米唑基、苯并P塞吩基、嘍吩并吡啶基、喳吩并嘧啶基、吡 各并P比疋基、咪°坐并？比咬基、苯并氮4丨嗓基、1，2,4-三11 井 基、笨并噻唑基、呋喃基、咪唑基、蜊哚基、啕π并基、異 气唑基、異喹啉基、異嚙唑基、噚二唑基、吡哜基、嗒啡 基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基；吡咯基、喳唑啉基、喹啉 基、1，3,4·嘍二唑基、嘍唑基、嘧吩基、三唑基等。較佳 雜芳基為1»比并基。 143II2.doc •40· 1359145
^芳基重氮基"係意謂雜芳基·偶氮基·，其中雜芳基與 偶氛基均如本文定義Q ”雜芳二基”係意㈣生自雜芳基之二價基團，其中雜芳 基係如本文中所述。舉例之雜芳二基為視情況經取代 啶二基。 装”雜芳基㈣基胺f酿基"係意謂雜芳基别2·贿-c(脅 土團，其中雜芳基係如本文中所述。 "雜環餘W料料環狀❹環㈣環系統，具 有約3至約職碳原子，較佳為約5至約1〇個碳原子立中 2此環系統中之一或多個礙原子為碳以外之雜元素，例如 氮、氧或硫原子，且其含有至少-個碳-碳雙鍵或碳-氮雔 鍵。此環系統較佳含有⑴個雜原子。此環系統環之較佳 ’係包含約如6個環原子；且此種較佳環大小亦 被稱為”低碳"。被雜環稀基所涵蓋者為稍合 與稍合㈣基雜料基，如本文中定義，當= 基部份基團結合時。於雜環烯基之前作為字首之氮、故 係定義至少一個氛、氧或硫原子，個別存在二 壞，經取代之雜環縣"意謂如上所述之雜環稀基經 =夕個"環基取代基,，取代（較佳為⑽^其可為相同 或不同’且如本文所定義者。雜環稀基之氮原子可為鹼性 氮2子。雜環稀基之氮或硫原子，亦可視h 相應之N-氧化物、s-氧化物或s，s-二氧化物。舉例之單； =氮雜環縣包括似心四氯峨。定、α二氣以基衣 ，-虱吡啶土、i’2’3’6-四氫吡啶、Μ，5,6，氫-嘧啶、
4J 143112.doc ^59145 2-二氫吡咯基、3-二氫吡咯基、2_二氫咪唑基、 唾基等。舉例之氧雜環稀基包括3,4.二氯部·喊喃;·= 呋福基及氣基二氬吱畴基。舉例之多環狀氧雜環稀j 氧雙環并[2.2.1J庚婦基。舉例土一 二—一“基…狀硫雜環婦基環包括
"雜環基，，係意謂非㈣飽和單環狀或多環狀環系統，且 有約3至㈣個碳4子’較佳為約5至約咖碳原子，q 二此環系統令之一或多個碳原子係為碳以外之雜元素:、例 如氮、氧或硫。此環系統較佳含有】至3個雜原子。此環系 ::之較佳環大小，係包含約5至約6個環肩子，·且此種較 3大小亦被稱為”低碳”。被雜環基所涵蓋纟，係為稠合 2基雜環基與稠合雜芳基雜環基，如本文中定義，當經過 ，、雜％<基部份基團結合時。於雜環基之前，作為字首之 =、氧或硫名稱，係定義至少一個氮'氧或硫原子，個別 ί在作為環原子。"經取代之雜環基"意謂如上所述之雜環 基經—或多個"環基取代基"取代（較佳為】至，
=或不同.，…文所定義者。雜環基之氮原子;為： -原子雜核基之氮或硫原子，亦可視情況被氧化成其 相應之Ν·氧化物、化物或s，s•二氧化物。舉例之單環 狀雜環基環，包括六氫峨咬基、四氫❸各基 '六氫 基、嗎福淋基、硫代嗎福淋基、ΐ嗤咬基、U3-二氧伍圜 基、1，心二氧陸園基、四氫咬％基、四氫苯硫基、四氫硫 代底南基等。作為經取代之單環狀I雜環基時，係 143112.doc •42· 1359145
直接或經過連結基，被至少-個取代基團取代，此部份美 _為或涵蓋’或係被如本文巾定義之芳族基團取 如方基、雜方基、芳氧基、雜芳基氧基、芳醯基或其硫酮 基類似物、雜芳醯基或其硫酮基類似物、芳醯基氧基、雜 芳醯基氧基、芳氧基羰基、雜芳基氧基羰基、芳‘磺： 基、雜芳基俩基、芳基亞糾基、雜芳基亞相基、芳 基基、雜芳基硫基、芳基重氮基、雜芳基重氮基、 Y|Y^2N- . Y^Y^C(O)- . Y*Y^NC(0)0- . Υ*Υ^Ν0(Ο)ΝγΙ^ YYNSCV’其中至少—個γ1#γ2係為、涵蓋或係被芳基 或雜芳基部份基團取代。較佳之連結基包括<(0)_、七 、低碳烷基、低碳烷氧基、低碳烯基、_〇_、 、-S(O)-、_S(0)2_、_nr80_(其中r80為氫、烷基、環烷基、
芳基、芳烷基、雜環基或雜芳基）。特別較佳之連結基 為-C(O)-及-0C(0)…，，經取代之多環狀氮雜環基"意謂如上 所述之多環狀氮雜環基經一或多個"環基取代基"取代（較佳 為1至3個）’其可為相同或不同，且如本文所定義者。"經 取代之多環狀氮雜環烯基"意謂如上所述之多環狀氛雜環 烯基經一或多個"環基取代基”取代（較佳為1至3個），其可 為相同或不同，且如本文所定義者。 _人_ %基"係意謂如本文中定義之二價雜環基，具有約 4至約8個碳原子。次雜環基之較佳環大小，係包含約5至 約6個環原子；且此種較佳環大小亦被稱為|，低碳"。於次 %烷基上之結合點，包括1，1_、1，2-、1，3-或ι，4-結合樣 式，且在合適之情況下，結合點之立體化學關係，係為順 143112.doc •43- 1359145 式或反式。舉例之次雜環基包括（1，1- ' 1，2-或1，3-)次六氫 P比咬基與（丨，1·或1，2-)次四氫呋喃基。"經取代之次雜環基，， 意謂如上所述之次雜環基經一或多個"環基取代基"取代（較 佳為1至3個），其可為相同或不同’且如本文所定義者。 "水合物"係意謂溶劑合物，其中溶劑分子為h2〇。 "氫化作用不安定性胺保護基"係意謂如本文中定義之胺 保護基’其易於藉氳化作用移除，而同時對其他試劑保持 相對安定性。較佳氫化作用不安定性胺保護基為Cbz。 氫化作用不安定性酸保護基"係意謂如本文中定義之酸 保護基’其易於藉氫化作用移除’而同時對其他試劑保持 相對安定性。較佳氫化作用不安定性酸保護基為苄基。 吸濕性"係意謂吸著作用’其意謂水之吸取量或狀態足 以影嚮物質之物理或化學性質（J. c B〇yian 編著’醫藥技術百科全書，1〇, 33)。 "亞胺性甘胺醯亞胺衍生物"係意謂甘胺酸之亞胺性 Schiff氏鹼，其可用於合成α_胺基酸，天然與非天然兩 者。亞胺酯官能性可含有一或多個不對稱中心，其可在鍵 結形成程序期間幫助立體誘導。此外，此等亞胺性甘胺酿 亞胺衍生物可併入聚合體載體中，以幫助結合合成。亞胺 性甘胺醯亞胺衍生物可經由使甘胺酸酯與適當酮，於酸性 觸媒存在下縮合而製成。反應係藉助於水之移除。亞胺性 甘胺醯亞胺衍生物係為此項技藝中所習知，供使用於 Michael加成合成程序中，例如由GuiUena，G等人，】〇rg Chem. 2000, 65’ 7310-7322所揭示者，併於本文供參考。 143112.doc 1359145 根據本發明之亞胺性甘胺醯亞胺衍生物之特定實例 選自下式之一者 包括
0
其中： M*為過渡金屬，較佳為CU，更佳為CU1
R16為酸保護基，視情況經取代之芳基或視情；兄 之脂族基團； R17為視情況經取代之芳基，視情況經取 團， 經取代 代之脂 族基
R18為氫、烷基或烷硫基；或視情況經取代之芳基· R17與R18係和該R17與R18所連接之碳一起採用 143112.doc -45- 1359145
，或;及 ⑤為固相。 "亞胺性甘胺醯亞胺衍生之加成物”係意謂所形成之化合 物’其中對於Schiff氏鹼部份之氮與羰基部份基團之α-氫 係被移除，並用於形成供鍵結形成於其上之連接處。根據 本發明亞胺性甘胺醯亞胺衍生加成物之特定實例，包括選 自下式之一者
及R係被疋義為如在本文亞胺性甘胺酿亞胺衍 生物定義中所述者。 Ν-氧基琥站酿亞胺"将音抑 絲日士 兄妝係，¾、明一種具有下列結構之部份基
N-乳化物"係意謂一種具有下列結構之部份基團 "病人"包括人類及其他哺乳動物兩者。 、
’’擬肽•’係意謂一種聚人鞞 ^ . A
^ ^ ^ ° ，/、匕3胺基酸殘基，經過 鍵結接合在一起。 143112.doc •46- 1359145 ”藥學上可接受之醋··係指會在活體内水解之醋類，且包 括易在人類體中分解而留下母體化合物或其鹽者。適當醋 基包括例如衍生自藥學上可接受之脂族缓酸類者，特別是 烧酸、烯酸、環烧酸及烧二酸，其中各烧基或縣部份基 子。舉例之酯類包括甲酸 丙烯酸酯、乙基破珀酸酯
團可有利地具有不超過6個碳原 酉旨、醋酸g旨、丙酸g旨、丁酸醋、 等。 於本文中使用之”藥學上可接受之前體藥物"，係指本發 明化合物之前體藥物，其在安全可靠醫療判斷範圍内係適 用於與人類及低等動物之組織接觸，而無不當毒性、刺激 性、過敏性回應等，伴隨著合理利益/風險比，及對於其 所意欲之用途有效，以及在可能之情況下為本發明化合物 之兩性離子形式。"前體藥物"一詞係指會在活體内迅速地 轉又而產生上式母體化合物之化合物，例如經由在血液 中水解。可於活體内藉由代謝分裂而迅速地轉變之官能 基，係構成與本發明化合物之羧基具有反應性之基團種 類。其包括但不限於以下基團，譬如烷醯基（譬如乙醯 基、丙醯基、丁醯基等），未經取代與經取代之芳醯基（譬 如苯曱醯基與經取代之苯曱醯基）、烷氧羰基（譬如乙氧羰 基）' 三烧基矽烷基（譬如三曱基-與三乙基矽烷基）、與二 缓酸（％·如號站醯基）形成之單酯類等。由於本發明化合物 之可以代謝方式分裂之基團，易於在活體内分裂，故帶有 此種基團之化合物係充作前體藥物。帶有此等可以代謝方 式分裂基團之化合物’具有之優點是，其可顯示經改良之 143112.doc •47- 1359145 生物利用性，由於母體化合物所賦予之提高的溶解度及/ 或吸收速率所造成，而此係由於可以代謝方式分裂之基團 存在所致。充分討論係提供於前體藥物之設計，H Bundgaard 編著，Elsevier (1985);酶學上之方法，K. Wldder等人編著’大學出版社，42，309-396(1985);藥物 •又。十與發展之教科書，Kr〇gSgaard_Larsen與H. Bandged編 著’第5章；"前體藥物之設計與應用"113191 (1991);先 進藥物傳輸回顧，H.Bundgard，8，1_38，（1992) ; j pharm
Sci” 77, 285(1988) ; Chem. Pharm. Bull.，N. Nakeya等人， 32, 692(1984);作為新穎傳輸系統之前體藥物，T mguchi 與V. Stella，14 A.C.S.論集系列，及藥物設計上之生物可逆 載體，E.B.Roche編著，美國醫藥協會與Pergam〇n出版 社’ 1987，其係併於本文供參考。 藥學上可接文之鹽”係指本發明化合物之相對無毒性無 機與有機酸加成鹽及鹼加成鹽。此等鹽可在化合物之最後 單離與純化期間當場製成。特定言之，酸加成鹽可經由個 別使已經純化之化合物，呈其自由態鹼形式，與適當有機 或無機酸反應，及單離如此形成之鹽而製成。舉例之酸加 成鹽，包括氫溴酸鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、酸性硫酸鹽、磷 酸鹽、硝酸鹽 '醋酸鹽、草酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚 酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、苯曱酸鹽、乳酸 鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、順丁烯二酸鹽、反 丁烯二酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽' $酸鹽、曱烷磺酸 鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽、胺基續酸鹽、丙二酸鹽、柳 143112.doc -48- 1359145 酸鹽、丙酸鹽、亞曱基_雙_卜羥基萘甲酸鹽、龍膽酸鹽、 羥乙碩酸鹽、二·對·甲苯甲醯基酒石酸鹽、甲烷磺酸鹽、 乙烧續酸鹽 '苯續酸鹽、對_甲苯姐鹽、環己基胺基確 酸鹽及金雞鈉酸月桂基磺酸鹽等。參閱，例如S MBerge 等人，'醫藥鹽，'，J· Pharm. Sci·, 66，1-19(1977)，其係併 於本文供參考 '鹼加成鹽亦可經由個別使已經純化之化合 物，呈其酸形式，與適當有機或無機鹼反應，及單離如此 形成之鹽而製成。鹼加成鹽包括藥學上可接受之金屬與胺 鹽。.適當金屬鹽包括納、卸、詞、類、辞、鎂及銘鹽。鈉 與鉀鹽為較佳。適當無機鹼加成鹽係製自金屬鹼，其包括 氫化鈉、氫氡化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣、氫氧化鋁、氫 氧化鋰、氫氧化鎂、氫氧化辞等。適當胺鹼加成鹽係製自 胺類’其具有足夠驗度以形成安定鹽，且較佳係包括常用 於醫藥化學之胺類，因其具有低毒性及對於醫藥用途之可 接文性。其係為氨、乙二胺、N_曱基·葡萄糖胺、離胺 酸、精胺酸、鳥胺酸、膽鹼、N，N，-二芊基乙二胺、氯普 魯卡因、二乙醇胺、普魯卡因、N•芊基苯乙胺、二乙胺、 六氫吡畊、參（羥甲基）_胺基甲烷、氫氡化四甲基銨、三乙 胺、二芊胺、麻黃胺、脫氫松香胺、N_乙基六氫吡啶、芊 胺、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二曱胺、三曱胺、乙 胺，鹼性胺基酸，例如離胺酸與精胺酸，及二環己基胺 等。 " ”環基取代基"係意謂連接至芳族或㈣族環系統之取代 基，其包括芳基、雜芳基、羥基、烷氧基、環基氧基芳 143112.doc •49· 1359145 氧基、雜芳基氧基、醯基或其硫酮基類似物、環基羰基或 其疏酮基類似物'芳醯基或其硫酮基類似物、雜芳醯基或 其硫酮基類似物、醯氧基、環基羰基氧基、芳醯基氧基、 雜芳醯基氧基、自基、硝基 '氰基、羧基（酸）、_c(〇)nh〇h_ 、-C(0)-CH20H、-C(0)-CH2SH、-C(0)-NH-CN、磺基' 磷基、烷基磺醯基胺曱醯基、四唑基、芳基磺醯基胺甲醯 基、冰甲氧基胺甲醯基、雜芳基磺醯基胺曱醯基、弘羥 基-3-環丁烯-1，2-二酮、3,5_二㈣·以斗噁二唑烷基或羥 基雜芳基如3-羥基異噁唑基、3_羥基_丨_曱基吡唑基、烷氧 幾基、環基氧基誠、芳氧基幾基、雜芳絲基幾基、烷 基磺醯基、環基磺醯基、芳基磺醯基、雜芳基磺醯基、烷 基亞磺醯基、環基亞磺醯基、芳基亞磺醯基、雜芳基亞碏 醯基、烧硫基、環基硫基、芳基硫基、雜芳基硫基、環 基、芳基重氮基、雜芳基重氮基、硫醇、γϋ、 YYNC(0)-、YlY2NC(〇)〇_、γ1γ2Ν(：⑼Νγ3 或 Υ1Υ2则2·，其中γ1、^γ3獨立為氫、⑥基、芳基或雜 芳基，或對其中取代基為Υϋ而言，則¥1與^之一可為 如本文中定義之Si基、環基縣、芳醯基、雜芳醢基、烧 氧幾基、環基氧基㈣、芳氧_基或㈣基氧基幾基， 而…中之另-個係如先前定義，或對其中取 YYNC(0)_、YVNC(⑽…⑼州、或 作则2_而言，以以可和該以〜過其上而連接 原子射木用而形成4至7員氮雜環基或氮雜環烯 基。當環系統為飽和或部份飽和時，••環基取代基"進一步 -5〇 - I431I2.doc 1359145 包括亞甲基（h2c=)、酮基（0=)及硫酮基（s=)。酸性/醯胺環 基取代基係為羧基（酸）、-C(0)NH0H-、-C(0)-CH20H、 -C(0)-CH2SH、-C(0)-NH-CN、磺基、磷基、烷基磺醯基 胺甲醯基、四唑基、芳基磺醯基胺甲醯基、N-甲氧基胺曱 醯基、雜芳基磺醯基胺曱醯基、3-羥基-3-環丁烯-1,2-二 酮、3,5-二酮基-1,2,4-噁二唑烷基或羥基雜芳基如3-羥基 異噁唑基' 3-羥基-1-甲基吡唑基及YWWCO-。非酸性極 性環基取代基係為羥基、酮基（0=)、硫酮基（S = )、醯基或 其硫酮基類似物、環基羰基或其硫酮基類似物、芳醯基或 其硫酮基類似物、雜芳醯基或其硫酮基類似物、烷氧羰 基、環基氧基羰基、芳氧基羰基、雜芳基氧基羰基、醯氧 基、環基羰基氧基、芳醯基氧基、雜芳醯基氧基、烷基磺 醯基、環基績醯基、芳基續醯基、雜芳基磺醯基、烧基亞 磺醯基、環基亞磺醯基、芳基亞磺醯基、雜芳基亞磺醯 基、硫醇、、YiY2NC(0)-、YkSNCCO)。-、 yYnccc^ny3-或YYNSOs-。 ”溶劑合物”係意謂本發明化合物與一或多種溶劑分子之 物理締合作用。此物理缔合作用包括氫鍵。於某些情況 中，溶劑合物能夠單離，例如當一或多個溶劑分子被併入 結晶性固體之晶格中時。"溶劑合物”涵蓋溶液相與可單離 之溶劑合物。舉例之溶劑合物包括水合物、乙醇化物、甲 醇化物等。 具體實施例 參考本文中所述之本發明，下文係為與其相關之特定且 143112.doc •51 - 1359145 較佳之具體實施例β 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中Ro為一 鍵結》 /、 钓一個 係為其中R0為二 根據本發明之另一項特定具體實施例 氟亞甲基。
根據本發明之—項特定具體實施例，係為其中Ri為氫戈 視情況經取代之低碳脂族基團。 S 根據本發明之另—項特定具體實施例，係為其中 ^ 或低碳烷基》 ‘’氣 根據本發明之—項較佳具體實施例，係為其中R1為氫。 根據本發明之—項特定具體實施例，係為其中R2為視情 況經取代之低碳脂族基團或視情況經取代之單環狀基團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R2為視 情況經取狀低碳院基、視情況經取代之低碳烯基或視情 況經取代之單環狀環烷基。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中Μ為羧 甲基、1-羧基-2-苯基乙基、環丙基、環丁基、卜環己基乙 基、1-苯基乙基、丁 _2_基、卜吡啶_4_基乙基、丙烯_3_基 或3·甲基丁-2-基；更佳為環丙基。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R3為視情 況經取代之低碳脂族基團亞曱基。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R3為視 情況經自基取代之低碳（烷基或烯基）亞曱基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R3為丙基 143112.doc •52- 1359145 亞甲基、2,2-二氟乙基亞甲基、2,2,2-三氟亞甲基或丙烯_ 基亞甲基；更佳R3為丙基亞甲基或2,2_二氟乙基亞甲 基；更佳R3為丙基亞甲基。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R4為氫或 視情況經取代之低碳脂族基團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R4為氫 或低烧基。 根據本發明之一項較佳具體實施例’係為其中r4為氫。 • 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R5為視情 況經取代之低碳脂族基團亞曱基。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R5為視 情況經（苯基、羧基、羧醯胺基或烷氧羰基）取代之低碳（烷 基或烯基）亞甲基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中r5為甲基 亞曱基、異丙基亞曱基、第三-丁基亞甲基、丁 -2-基亞甲 基、丁基亞甲基、苄基亞曱基、3-曱基丁基亞甲基、2_甲 基丙基亞曱基、叛曱基亞甲基、缓酿胺基曱基亞甲基、字 氧羰基曱基亞甲基、芊氧羰基丙基亞曱基或笨基丙烯-3_基 亞曱基；更佳R5為異丙基亞曱基或第三_ 丁基_亞曱基。 根據本發明之一項特定具體實施例’係為其中R6為氫或 視情況經取代之低碳脂族基團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R6為氢 或低碳烷基" 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中r6為氫。 143112.doc •53· 1359145 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R7係視情 況經取代之低碳脂族基團亞曱基、視情況經取代之低碳環 狀基團亞曱基或視情況經取代之單環狀（芳基或雜芳基）亞 甲基。 根據本發明之另—項特定具體實施例係為其中R7為視 It况經取代之低碳烷基亞▼基、視情況經取代之低碳環烷 基亞甲基或視情況經取代之苯基亞甲基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R7為曱基 亞甲基、異丙基亞甲基、正_丙基亞甲基、苯基亞甲基' 環己基亞曱基、環戊基亞曱基、第三_ 丁基亞曱基 '第二_ 丁基亞甲基、環己基甲基亞甲基或苯基曱基亞甲基；更佳 為異丙基亞甲基、環已基亞曱基、環戊基亞甲基、第三_ 丁基亞甲基或第二-丁基亞甲基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，亦為其中各R3、R5 及R7為單取代之亞曱基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，亦為其中r3為單取 =之亞甲基，且在連接至_C(0)_R〇_c(0)_NRlR2部份基團之 碳上具有（S)組態。 根據本發明之一項待定具體實施例，係為其中Μ為氫或 視情況經取代之低碳脂族基團。 係為其中R8為氫 根據本發明之另一項特定具體實施例 或低碳烷基。 根據本發明之一 根據本發明之一 ’ 7 IV & j 項特定具體實施例’係為其中R9為 143112.doc 1359145 況經取代之低碳脂族基團或視情況經取代之單環狀芳族基 團。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R9為視 情況經取代之低碳烷基或視情況經取代之單環狀雜芳基。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R9為視 情況經（羧基、（低碳烷基）S〇2NH-、（低碳烷基）HNC〇-、羥 基、苯基 '雜芳基或（低碳烷基）〇C(〇)NH-)取代之低碳烷 基或視情況經取代之單環狀雜芳基。 • 根據本發明之另外一項較佳具體實施例，係為其中R9為 被（單-或二-)Me0C(0)NH-取代之低碳烷基；更佳為12_二 (MeOC(O)NH)乙基或 i_(Me0C(0)NH)乙基》 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R9為經 (羧基、（低碳烷基）HNCO-或四唑基）取代之低碳烷基；更 佳3-羧基丙基、2_四唑_5_基丙基、3(N_甲基羧醯胺基）丙 基或3·羧基-2,2-二甲基丙基；更佳為3_羧基丙基、2四唑_ 5-基丙基或3-(N-甲基羧醯胺基）丙基。 籲 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中R9為視 情況經取代之低碳烷基；更佳為卜羥基_2_苯基乙基、甲 基、異丙基或第三-丁基；更佳為甲基、異丙基或第三-丁 基。 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中R9係選 自包括 143112.doc -55-
1359145 根據本發明之又再另一項較佳具體實施例，係為其中R9 為。比p井基。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R1Q為氫 或視情況經取代之低碳脂族基圑。 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R1G為 氫或低碳烷基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R1()為 143112.doc -56- 1359145 氫。 Ο 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中\ 夕為 經取代之單環狀氮雜環基時，係為經取代之四氫Ρ比洛基 〇 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中
Ar 經取代之單環狀氮雜環基時，係為視情況經取代之 0^0
Ν
0 0 或視情況經取代之〇 ，其中Ar為R2，包括芳族部份基
Ar >人。 團；更佳為視情況經取代之、j ;進一步較佳為視情況
N
Ar Q人0 N- 經取代之
Ar0^0 0 一。 其他較佳視情況經取代Μ N一或
N 〇人〇
N 人
N
又更佳為 或
Ν 143112.doc -57- 1359145 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為发 /^\ 當為視情況經取代之多環狀氮雜環基時， 、 1 货、為視情況經取 代之 -N-;更佳為視情況經取代之^^ 特定取代基為羥基、氟基或酮基β 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中 當為視情況經取代之多環狀氮雜環烯基時， Π 係為視情況經 〇 ^ ，-、〜N ;更佳為0 ;進一步較佳為” _ 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中 當為視情況經取代之多環狀氮雜環烯基時 r 係為視情況經
取代之、 根據本發明之一項較佳具體實施例’係 係 〇 之-C^OhNCR’-R^c^COROc^CONR^R1 邹份其團， 連接對氮原子為α之碳。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中L 為-C(〇)·或 _〇c(〇)·。 根據本發明之-項較佳具體實施例，係為其中η為〇。 根據本發明之另一項較佳具體實施例，係為其中…。 143112.doc -58- 1359145 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R"為 -C〇2R13。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中Rl 2為 R1' 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中RU為視 情;兄經取代之脂族基團。
R14 根據本發明之另—項特定具體實施例’係為其中為 烷基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中R13為低 碳烷基。 根據本發明之另—項較佳具體實施例，係為其中為 甲基。
根據本發明之 為 'C〇2R16 〇 根據本發明之—項特定具體實施例，係為其中 項較佳具體實施例，係為其中Rl 基 為燒 根據本發明 碳烷基 之—項較佳具體實施例，係為其中Ri5為 低 根據本發明之 基 根據本發明 之 情況經取代之脂族 項較佳具體實施例，係為其中Rl5為甲 項特定具體實施例，係為其中R1 6為視 143] I2.doc •59- 1359145 根據本發明之另一項特定具體實施例，係為其中R!6為 院基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中rM為低 故统基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中為第 二 'Bu。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中為視 情況經取代之芳基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中Rl7為笨 基。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中R 1 8為視 情況經取代之芳基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中r1 8為笨 基。 根據本發明之一項特定具體實施例，係為其中p0係選自 包括BOC、CBz及_(：02烷基。 根據本發明之一項較佳具體實施例，係為其中p〇為 BOC。 應明瞭的是’本發明係涵蓋本文中所指稱之特定與較佳 基團群之所有適當組合。
根據本發明之特定化合物，係選自連續包括下列之化合 物 A-FH 143J12.doc • 60 - 1359145
143112.doc -61 · 1359145
143112.doc ·62· 1359145
143112.doc ·63· 1359145
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143112.doc -67- 1359145
143112.doc -68- 1359145
F
Me BA,
BB,
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BC,
BF, 143112.doc -69- 1359145
143112.doc ·70· 1359145
143112.doc -71 - 1359145
BY, 143112.doc ·72· 1359145
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143112.doc •80- 1359145
143112.doc -81- 1359145
-82 - 143112.doc 1359145
ΕΚ, 143112.doc 83- 1359145
EM,
EP, 143112.doc -84- 1359145
EQ,
EU, 143112.doc -85 - 1359145
143112.doc -86- 1359145
143112.doc •87- 1359145
或其醫藥上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之溶劑 合物，其鹽或其前體藥物。 較佳化合物為 S、U、BW、BX、BY、BZ、CE、CU、 CW、CY、DZ、EA、EC、EJ、FH、EW、EO、EZ ' FG及 εν，其藥學上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之 溶劑合物、其鹽或其前體藥物。 本發明另一較佳具體實施例係選自下列之化合物：
AN, 143112.doc * 88 - 1359145
143112.doc -89- 1359145
143112.doc ·90· 1359145
F
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143112.doc •92- 1359145
143112.doc -93- 1359145
143112.doc •94- 1359145
EC, I43l12.doc -95- 1359145
143112.doc ·96· 1359145
143112.doc 97 ·
或其醫藥上可桩兵 人此 接又之麗或别體藥物，或此種化合物之溶劑 σ ’其鹽或其前體藥物β
，/、w藥上可接受之鹽或前體藥物，或此種化合物之溶劑 合物’其鹽或其前體藥物。
本發明另一較佳具體實施例為式丨之化合物，其中： rq為一個鍵結； R為氫；
R為視情況經1至3個脂族基團取代基取代之低碳烷基； 或視情況經1至3個環狀基團取代基取代之低碳環烷基； R3及R5各獨立為視情況經1至3個脂族基團取代基取代之 亞曱基； R4、R6、R8 及 R1。為氫； R7為經環烷基、低碳烷基或芳基取代之亞曱基；或經環 烷基、低碳烷基或芳基取代之（1,1-或1,2-)環烯基； R9為視情況經1至3個脂族基團取代基取代之低碳烷基； 143ll2.doc -98- 1359145 或視情況經1至3個環狀基團取代基取代之雜芳基；或視情 況經1至3個環狀基團取代基取代之雑環基； Ο 為視情況經1至3個環狀基團取代基取代之單環狀 氮雜環基、多環狀氮雜環基、或多環狀氮雜環烯基；及 L為-C(0)-、-0C(0)-。 本發明另一較佳具體實施例係選自由下列組成之群之化 合物：
143112.doc •99- 1359145
-100- 143112.doc 1359145
143112.doc -101 - 1359145
143112.doc -102- 1359145
143112.doc •103- 1359145
143112.doc 104. 1359145
143112.doc 105 - 1359145
143112.doc •106· 1359145
143112.doc •107- 1359145
143112.doc •108· 1359145
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DC. 143112.doc -110- 1359145
143112.doc -Ill - 1359145
143112.doc -112- 1359145
143112.doc -113- 1359145
DY, Η
EA,
143112.doc •114· 1359145
EM,
EO, 143112.doc -115- 1359145
EP,
ES,
ET,
EU,
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或其醫藥上可接受之鹽或前體藥物’或此種化合物之溶劑 合物，其鹽或其前體藥物。 143112.doc -118- 1359145 本發明另-較佳具體實施例為式ι之化合物其中h 視情況經取代之脂族基團、視情況經取代之環狀基围或視 情況經取代之㈣基團聽至少_個㈣基取代基取代。 本發明另—較佳具體實施例為式k化合物，其中Rk 視情況經取代之芳錄團為視情缝取狀雜芳基。
本發明另-較佳具體實施例為式k化合物，其中尺9之 視情況經取代之脂族基團為視情況經取代之院基雜芳基。 本發明另一較佳具體實施例為一化合物，其中R9之視情 況經取代之雜芳基團為視情況經一個環基取代基取代之 吡畊基、四唑基、喳啉基、咪唑基、異呤唑基及吡咚基 (pyradonyl) 〇
本發明化合物係視情況以鹽提供。醫藥上可接受之鹽， 係為特別令人感興趣的，因其可用於投予前述化合物，以 供醫療目的使用。非醫藥上可接受之鹽，可用於製程中， 供單離與純化目的使用，而於一些情況中，係用於分離本 發明化合物之立體異構物形式。後者對於製自光學活性胺 類之胺鹽，特別是真實的。 在本發明化合物含有叛基或足夠酸性生物電子等排體之 情況中’鹼加成鹽可以形成，且僅只是較合宜形式以供使 用；而實際上，此鹽形式之使用’本性上係相當於自由態 酸形式之使用。 而且，在本發明化合物含有驗性基團或足夠驗性生物電 子等排體之情況中，酸加成鹽可以形成，且僅只是較合宜 形式，以供使用；而實際上，此鹽形式之使用’本性上係 143112.doc • 119, 1359145 相當於自由態鹼形式之使用。 根據本發明方法之一項較佳具體實施例，係為治療患有 HCV感染或與該感染有關聯生理學病症之病人，其包括對 該病人投予藥學上有效量之式丨化合物。 根據本發明治療方法之另一項較佳具體實施例，係為治 療患有HCV感染或輿該感染有關聯生理學病症之病人，其 包括對該病人投予藥學上有效量之式1化合物，且併用藥 學上有效量之另一種抗-HCV治療劑。 本發明之另一項目的係為提供醫藥組合物，其除了一或 多種HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑以外，包含一或多種顯示 抗-HCV活性之干擾素，及/或一或多種具有抗HCV活性之 化合物，包括免疫調節化合物，譬如顯示Hcv抗病毒活性 之免疫刺激細胞活素，及藥學上可接受之載劑或稀釋劑。 本毛月之另項目的係為提供一種醫藥組合物，其本身 且自行地，有效用於㈣之組合療法，因其包含許多可根 據本發明使用之活性成份。 本發明亦提供套件或單—包裝，其係組合㈣或多種可 用於治療或肋病人中之HCV感染之活性成份4件可提 供（單獨或併用藥學上可接受之錘纆勒丨―、讲a、』 接又之稀釋劑或載劑）式1化合物， 及另外之活性成份(單獨或併用稀釋劑或載劑)與其他 抗-HCV治療劑。 …、 稭由應用或修改已知方法，如迄今所使 或在文獻中所述者’或藉由此處根據本發明之方法製備 本發明之另-項目的係為在有需要之病人中提供治療 I43112.doc 1359145 預防hcv感染之方法’其包括對該病人投予藥學上有效量 之組合，此組合為一或多種Hcv絲胺酸蛋白酶抑制劑；一 或多種顯示抗-HCV活性之干擾素；及/或一或多種具有 抗-HCV活性之化合物，包括免疫調節化合物，譬如顯示 HCV抗病毒活性之免疫刺激細胞活素。 本發明之另-項目的係為一或多種Hcv絲胺酸蛋白酶抑 制劑，且併用一或多種顯示抗Hcv活性之干擾素，及/戋 -或多種具有抗-HCV活性之化合物’包括免疫調節化合 物，譬如顯示HCV抗病毒活性之免疫刺激細胞活素，於藥 劑製備上之用途，該藥劑係在有需要之病人中用於治療或 預防HCV感染。 ' / 本發明之另一項目的係為在病人中治療或預防HCV感染 之套件或醫藥包裝’其中該套件或醫藥包裝包含許多個別 容器，其中至少一個該容器含有一或多種Hcv絲胺酸蛋白 酶抑制劑，至少另一個該容器含有一或多種干擾素或會引 致顯示抗-HCV活性之干擾素產生之化合物（單獨或併用藥 學上可接受之載劑或稀釋劑）’及視情況’至少另—個今 容器含有一或多種具有抗_HCV活性之化合物（單獨或併用 樂學上可接党之載劑或稀釋劑），包括免疫調節化合物， 譬如顯示HCV抗病毒活性之免疫刺激細胞活素。 本發明之又另一項目的係為提供一種抑制c型肝炎病毒 在細胞中複製之方法’其包括使該細胞、C型肝炎病毒絲 胺酸蛋白酶抑制劑及視情況選用之干擾素或會引致具有 抗-C型肝炎病毒活性之干擾素產生之化合物接觸。 143112.doc -121 - 1359145 HCV絲胺酸蛋白酶抑翻麻丨 ^ 仰制劑、干擾素或抗-HCV化合物在 任何前述應用中之量…藥學上有效量、亞最適宜 抗-HCV有效量或其組合，只要hcv蛋白酶抑制劑、干挎 素及/或抗-HCV化合物之最後組合包含藥學上有效量之： 合物’有效用於治療或預防病人中之⑽❹即可。 本發明之進-步目的係、為提供—種製備對掌性雙環捕胺 酸醋化合物之方法，該化合物可用於製備式i化合物。 本發明化合物之製備 本發明化合物之起始物質與中間物，可藉由應用或修改 已知方法製成’例如按參考實例中所述之方法或其顯著化 學等效方法。 本發明化合物可藉由應用或修改已知方法製成，其係意 謂迄今所使用或在文獻中所述之方法，例如由RX La_k 在綜合有機轉變，VCH出版社（1989)中所述者。 一種式1化合物，其中變數及其〇部份基團，均 如本文中所述，其可經由以適當氧化劑及在適當條件下， 處理式2化合物而製成， 143IJ2.doc
氧化劑
1359145 其中變數及其〇部份基團，均如本文中所述。一種特 絲化劑為讀試劑。特㈣件包括在適當有機溶劑譬如 一虱甲烷中，於約室溫下，進行氧化作用。 -種式2化合物’其中變數及其〇部份基團，均如 本文中所述’其可經由以適當偶合劑及在適當條件下，使 式3化合物’其中變數及其〇部份基團，均如本文中 所述，與式4化合物偶合而製成，其中變數均如本文中所 述0
偶合劑與 條件
R1 特定偶合劑與條件包括使用DIC與HOAt，在適當有機溶 劑譬如DMF中，於約〇°C下，或使用pyB〇I^DIpEA，在適 當有機溶劑譬如二氣曱烷中，於約室溫下。 一種式3化合物’其中變數及其
部份基團 ’均如 本文中所述，其可經由以適當偶合劑及在適當偶合條件 下，使式5化合物，其中變數均如本文中所述，與式6化合 143112.doc -123 - 1359145 物偶合’其中p2為酸保護基
r9"l^n^Y^ R8 0 5 條件 2.酸去除保護 劑與條件
而其部份基團係如本文中所述，接著為適當去除保 護劑及在適當去除保護條件下製成。特定偶合劑與條件， 包括使用DIC或DCC與HOAt，在適當有機溶劑譬如dmf咬 二氣甲烷中，於約〇°C至約室溫下。去除保護作用係使用 適當去除保護劑進行，其係依保護劑之性質，意即其在 酸、鹼或氫化作用條件下是否可移除（不安定），及在進行 去保護作用之化合物中之其他反應性部份基團而定，意即 去除保護劑係經選擇，以進行去保護作用，而不會影嚮其 他反應性部份基團，除非共同反應是所想要的。特定酸保 護劑為〇：,至(：8低碳院基；更特別是甲《。特定去除保護劑 為無機驗’譬如驗金屬氫氧化物；更特別是㈣心特定 去保護作用條件，係包括在醇性溶劑中，譬如甲醇或乙 醇，於約室溫下進行去保護作用。 一種式5化合物，其中n為〇 ^ 丑具他變數均如本文中所 143112.doc •124· 1359145
述’意即化合物5 a，其可么·δ 士 w、岛私丄A 八』絰由以適當去除保護劑及在適當 條件下，使式7化合物去除保護而製成，
R 9.L* R 0 酸去除保護 劑與條件
R
R。 I R5」
0H 5a 其tP2為酸保護基’且其他變數均如本文中所述。去除保 2作用係、使用適當去除保護劑進行，其係依保護劑之性 質’意即其在酸、驗或氫化作用條件下，是否可移除（不 安疋）’及在進行去保護作用之化合物中之其他反應性部 份基團而定，意即去除保護劑係經選擇，以進行去保護作 用，而不會影嚮其他反應性部份基團，除非共同反應是所 想要的。特定酸保護劑為Ci至Cs低碳烷基；更特別是甲 基。特定去除保護劑為無機鹼，譬如鹼金屬氫氧化物；更 特別是NaOH。特定去保護作用條件係包括在醇性溶劑 中’譬如曱醇或乙醇，於約室溫下進行去保護作用。 一種式7化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 以式9化合物’其中Μ為可置換之部份基團，且其他變數 均如本文中所述，在適當條件下，使式8化合物醯基化而 製成’其中變數均如本文中所述。 • J25- 143112.doc 1359145 R Ο ,L-M + H』、RA〇p2 9 偶合條件 R 0
R 9.L^N'R5^〇P2 特定偶合條件係使用DIC或DCC與HOAt，在適當有機溶 劑譬如DMF或二氣甲烷中，於約〇。〇至約室溫下，或
PyBOP與DIPEA，在適當有機溶劑譬如dmF或二氯甲烷 中’於約室溫下；且較佳為後述條件。特定L為羰基。特 定Μ為羥基或N_氧基琥珀醯亞胺。 一種式5化合物，其中11為1，且其他變數均如本文中所 述，思即化合物5b，其可經由以適當去除保護劑及在適當 條件下，使式1G化合物去除保護而製成，纟中酸保護 基’且其他變數均如本文中所述。 7 R6 0
r9，Hn、r5V 10 酸去除保護 劑與條件 r9，l、;rv^Ah R 0 去除保護作用係使用適當去除保護劑 護劑之性質，意即錢、驗或氫化作2，其係依酸保 Μ牛下，是否可移 143112.doc '、（女疋）及在進行去保護作用之化合物中之其他反應 &部&基團而 意即去除保護劑係經選擇，以進行去保 °又作用，而不會影嚮其他反應性部份基團，除非共同反應 是所想要的。特枝保護料C1K8低碳録；更特別是 甲基。特&去除保護劑為無機驗，譬如驗金屬氫氧化物； 更特別疋NaOH。特去保護作用條件係包括在醇性溶劑 中’譬如甲醇或乙醇’於約室溫下進行去保護作用。 一種式10化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 乂式9化&物，其中變數均如本文中所述，在適當條件 下，使式11化合物醯基化而製成，其中變數均如本文中所 述0
+ Η
OPJ 偶合條件
特定偶合條件係使用Die或DCC與HOAt，在適當有機溶 劑譬如DMF或二氣甲烷中，於約〇。〇至約室溫下，或PyB〇p 與DIPEA ’在適當有機溶劑譬如DMF或二氣甲烷中，於約 室溫下；且較佳為後述條件。特定L為羰基。特定μ為經 基或Ν-氧基號J0g藍亞胺。 一種式11化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 143112.doc -127- 1359145
Re PS:RV^N、R 人OP2 Ο 12 Η、〆' R8 胺去除保護條件 R6 0 V^N'R 人 OP2 11 去除保護制係使㈣當去除保㈣進行，其係依胺保 濩劑之性質，意即在酸、鹼或氫化作用條件下，是否可移 除（不安定），及在進行去保護作用之化合物中之其他反應 性部份基團而定，意即去除保護劑係經選擇，以進行去保 護作用，而不會影嚮其他反應性部份基團，除非共同反應 係為所想要的。特定胺保護劑為01)2或B0C ;更特別是 Cbz。特定去除保護劑為酸，譬如HC14H2/pd(〇H)〆更特 別是H2/Pd(OH)广特定去保護作用條件係包括在醇性溶 劑，譬如曱醇或乙醇，或烷酸烷酯溶劑，譬如醋酸乙酯 中’於約室溫下，進行去保護作用。 一種式12化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 使式13化合物，其中變數均如本文中所述，與式u仡合 物，其中變數均如本文中所述，在適當條件下偶合而製 成0 I43112.doc -128- 1359145
Yx: Η** R Ο PS;V%^ 特定偶合條件係使用軌啸與DIPEA，在適當有機溶 劑譬如THF中，於約室溫下。
式4化合物’其中變數均如本文中所述，其可缍由以南 當去除保護劑及在適當條件下，使式化合物叫除保護: 製成’其中變數均如本文中所述。
I 去除保護條件
I
偶合條件
V 去除保護作用係使用適當去除保護劑進行，其係依胺保 護劑之性質’ t即在酸、驗或氫化作用條件下，是否可移 除（不安定），及在進行去保護作用之化合物中之其他反應 性部份基團而定，意即去除保護劑係經選擇，以進行去保 蠖作用，而不會影嚮其他反應性部份基團，除非共同反應 係為所想要的。特定胺保護劑為Cbz或B0C ;更特別是 Cbz。特定去除保護劑為酸，譬如HC1或H2/pd(〇H)^更特 別是H2/Pd(OH)2。特定去保護作用條件係包括在醇性溶劑 143112.doc -129· 1359145 譬如曱醇或乙醇，或烷酸烷酯溶劑，譬如醋酸乙酯中，於 約室溫下，進行去保護作用。 一種式15化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 使式16化σ物，其中變數均如本文中所述，與式17化合 物’其中變數均如本文中所述，在適當條件下偶合而製 成。
特定胺保護劑為(：匕2：或B0C ;更特別是Cbz。特定偶合條 件係使用HOBT、PyBop&DIPEA，在適當有機溶劑譬H 氯甲烷中，於約o°c至約室溫下。 一種式16化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 以適當去除保護劑及在適當條件下，使式18化合物去除保 護而製成，其中其他變數均如本文中所述。 ” p,-N^YRVop2 R4 OH 〇 18 酸去除保護劑 與條件
pk^RYRY0H R4 OH 0 16 143112.doc .130· 1359145 . = 用適當去除保護劑進行，其係依酸保 質’忍即在酸、鹼或氫化作用條件下，是否可移 除（不技），及在進行去保護作用之化合物中之其他反應 性部份基團而定，t即錯保護㈣經選擇，以進行去保 護作用，而不會影嚮其他反應性部份基團，除非共同反應 係為所想要的。特定胺保護劑為Cbz。特定酸保護劑為a 至〇8低碳烧基；更特別〇基。特定去除保護劑為無機
鹼，譬如鹼金屬氫氧化物；更特別是Na〇I^特定去保蠖 作用條件係包括在醇性溶劑譬如曱醇或乙醇中，於約室溫 下進行去保護作用。 孤 一種式18化合物’其中R〇為一個鍵結’且其他變數均如 本文中所述，其可經由以式19化合物，其中變數均如本文 中所述’在適當條件下，保護式20化合物而製成，其中變 數均如本文t所述。
特定胺保護劑為Cbz或BOC。特定偶合條件係使用適當 有機溶劑，譬如二氣曱烷，於約〇°C至約室溫下。 一種式20化合物，其中R4為氫’且其他變數均如本文中 143112.doc -131 - 丄359145 所述，其可經由以適當氫化劑及在適當條件下，使式2 1化 合物氫化而製成，其中變數均如本文中所述。
氫化條件 ΎγΛ〇ρ2 R4 OH 20 特定氫化劑為HVPdCOH)2。特定氫化條件，係包括在醇 性溶劑’譬如甲醇或乙醇，或燒酸烧酯溶劑，譬如醋酸乙 酯中’於約室溫下進行氫化作用。 一種式20化合物’其中R4為視情況經取代之脂族，且其 他變數均如本文中所述，其可經由以化合物22(烷基化 劑）’其中R4為視情況經取代之脂族，且q為可置換基團， 譬如齒根、甲笨續酸根或確酸根，在適當條件下，使化合 物20坑基化而製成’其中變數均如本文中所述.。
適當烷基化劑包括脂族（卣化物、甲苯磺酸酯或磺酸 酯）。適當烷基化條件包括在適當有機溶劑，譬如醇性溶 劑，例如甲醇或乙醇，或含醚溶劑，例如醚或四氫呋喃 143112.doc •132· 1359145 中，於約室溫至約回流下，進行烷基化作用。 一種式21化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 以式23化合物，其中R3'係獨立為視情況經取代之脂族基 團、視情況經取代之環狀基團或視情況經取代之芳族基 團，如本文中所述，在適當條件下，使式22化合物烷基化 而製成，其中變數係如本文中所述。
H^or + 〇-nxhr3r3· 0 22 0 23
特定烷基化條件係包括使用強鹼，譬如第三-丁醇鉀， 在醇性溶劑，譬如甲醇或乙醇中，於約室溫下進行烷基 化。
一種式24化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 以亞胺性甘胺醯亞胺衍生物，在式29之Michael接受劑上 達成Michael加成而製成，其中變數係如本文中所述。
(29)
Michael加成條件
㈣ 143112.doc -133 - 1359145
Michael加成係包括適當非質子性極性溶劑、驗金屬甲 醇驗及適當溫度。關於Michael加成，可參閱Corey, E· J.; Noe，M. C· ; Xu，F. Tetrahedron Letter 1998，39，5347。關 於對掌性相轉移觸媒之合成，可參閱Corey, E. J. ; Noe，Μ. C. ; Xu，F. J_ Am. Chem· Soc. 1997，119, 12414。適當溶劑 包DCM、ACN或THF，依反應條件而定。適當鹼包括 CsOH、NaOH、KOH及LiOH。適當溫度範圍從約-78°C至 約0°C，更特別是在約-60°C下。可用於本發明之亞胺性甘 胺醯亞胺類，係描述本文中。較佳亞胺性甘胺醯亞胺為N-(二苯亞曱基）甘胺酸第三-丁酯。此外，Michael加成條件 可使用或未使用相轉移觸媒（PTC)(對掌性與非對掌性）而達 成。較佳PTC為溴化鄰-[9]烯丙基-N-9-蒽基曱基金雞尼丁 鹽。 一種式25化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 式24化合物之亞胺分裂與環化而製成。
關於分裂與環化程序，可參閱Javidan，A. ; Schfer，K.; Pyne, S. Synlett 1996, 100 ; Tatsukawa, A. ; Dan, M.; Ohbatake, M· ; Kawatake, K. ; Fukata, T. ; Wada, E.; 143112.doc -134- 1359145
Kanemase，S. ; Kakei，S. J. Org. Chem. 1993, 58，4221 0 分 裂與環化條件包括使用極性溶劑、酸試劑及約室溫至約 150°C之溫度。較佳條件包括使用EtOH、AcONa及 NH20H.HC1，及溫度為所使用溶劑之約沸點。
一種式26化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 以適當醯胺保護基，譬如BOC，保護式25醯胺化合物而製 成，其中變數均如本文中所述。其他適當保護基包括 CBz、-C02烷基。亦參閱Greene, T. W. ; P. G. M.有機合成 之保護基，Wiley，New York，1991，關於其他胺保護基。 保護條件包括使用非質子性極性溶劑，有機鹼作為觸媒， 及溫度約0°C -l〇〇°C。較佳條件包括使用CAN、二甲胺基 及溫度約室溫。
入 a，‘
一種式27化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 使已經保護之式26化合物還原而製成，其中變數均如本文 中所述。
143112.doc -135- 1359145 事實上完成兩次還原作用。第一次還原作用為醯胺成為 半胺醛，使用DIBALH或超氫化物[LiBEt3H]。第二次還原 作用為半胺醛成為胺，使用Et3SiH與BF3 . OEt2。關於還 原條件，可參閱 Collado, I ; Ezquerra, J. ; Mateo, A. I.; Rubio, A.，L Org. Chem. 1998, 631995-2001，與 Ezqueera， J. ; Pedregal，C. ; Yruretagoyena，B. ; Rubio, A. ; Carreno, M. C. ； Escribano, A. ； Garcia Ruano, J. L. J. Org. Chem. 1995, 60, 2925。關於使焦麩胺酸酯轉化成四氫吡咯之其他 常用條件，係為使用BH，SMe2。 一種式28化合物，其中變數均如本文中所述，其可經由 使式27化合物去除保護而製成，其中變數均如本文中所 述。
<27> 一·^去除保護條件 <2β> 參閱 Gibson, F. G. ; Bermeier，S· C. ; R.apoport，H.，J. Org Chem. 1994，59, 3216-3218，關於第三-丁酯存在下， 選擇性移除N-BOC保護基之條件。熟諳此藝者明瞭去除保 護條件係依保護基之選擇而定。例如，若使用CBz，則可 使用氫化作用或鹼性條件。較佳情況是，若使用BOC，則 可使用醋酸乙酯中之1 N HC1。參閱Greene, T. W. ; P. G. Μ.有機合成之保護基（Wiley，New York, 1991)。 本技藝中一般技術人士當知式3化合物可藉由使式5化合 143II2.doc •136· 1359145 物與式28化合物在如上所述之條件下偶合而製備。 製備當R3、R5或R7為視情況經取代之乙烷二基部份基團 時之方法，包括熟諳此藝者所已知者，例如在”β-内醯胺 之有機化學"中所述之方法（由G. Georg編著，VCH出版公 司（1993)，例如第 240-241 與 303-305 頁）。 下列圖式1-11係舉例說明各種製備視情況經取代之多環 狀氮雜環基之方法。在下文圖式中之方法，亦可應用於包 含可相容類似取代基之其他視情況經取代之多環狀氮雜環 基。 圖式1
143112.doc -137- 1359145 圖式2 Ο
OH
DAST
圖式3 Ο ..Jl^SePh ) LDA, PhSeBr /—'\ / Η20/ρΛ <
QbZN >....../ -► CbzN^^ -►CbzN, 、v0^ OC(S)SMe 〇
O NaBH4 OH
CbzN、
Bu3SnH/A 旧 N ^-CbzN,
NaH/CS/Mel
CbzN、 o
h2 Pd(OHVC HN、 143112.doc •138- 1359145 圖式4
圖式5
圖式7
143112.doc -139- 1359145 圖式8
CH2l2/Zn
MCPBA
R3N3 或:NH
圖式9
圖式10
cxxv
PyBOP HOBT
DIEA 98% 以D-酒石酸鹽 構自Aldrich
143112.doc -140- 1359145 圖式11
包含一種含有一或多個氮環原子之基團，較佳為亞胺 (=N-)之式1化合物，可轉化成其相應之化合物，其中該基 團之一或多個氮環原子係被氧化成N-氧化物，較佳係經由 與過酸，例如過醋酸在醋酸中，或間-氣過氧苯曱酸於惰 性溶劑譬如二氯曱烷中，在溫度從約室溫至回流，較佳係 143112.doc -141 - 1359145 於1¾溫下反應。 在後文所述之反應中，可能必須保護反應性官能基，例 如羥基、胺基、亞胺基、硫基或羧基，在想要其留在最後 產物中之情況下，係為避免其不期望地參與反應。習用保 護基可根據標準實務使用，關於實例可參閱T.W.Green與P. G. M. Wuts，M有機化學中之保護基”（John Wiley & Sons (1991)) ; J. F. W. Me 〇mie，"有機化學中之保護基•’ (Plenum 出版社，1973)。 按本文中所述製成之化合物，可藉習用方式，自反應混 鲁 合物回收《例如，化合物可以下述方式回收’自反應混合 物德出溶劑’或若必要’則在自反應混合物餾出溶劑後， 將殘留物傾倒至水中’接著以水不可溶混之有機溶劑萃 取，及自萃液餾出溶劑《此外，若需要，可將產物藉各種 驾知技術進一步純化，譬如再結晶作用、再沉澱或各種層 析技術，特別是管柱層析或預備薄層層析法。 根據本發明之另一項特徵，本發明化合物可經由本發明 其他化合物之相互轉化而製成。 · 、下it作為相互轉化方法之實例，含有亞楓鍵結之式1 化合物，可經由相應含有鍵結之化合物之氧化作用而 製成。例如，此氧化作用可合宜地以下述方式進行，經由 與過氧酸反應’例如3_氯過苯甲酸，較佳係於惰性溶劑 中’例如二氯甲垸’較佳係在於或接近室溫，或者，利用 氫過氧單硫酸鉀，在媒曾 ^ , ^ ^ 仕姝買中，譬如經緩衝至約pH5之甲醇 水溶液’在約〇t與室溫間 ,,... . ^ ι丨〈皿度下。此後述方法對於含 143112.doc •142· 1359145 有酸不安定基團之化合物，係為較佳的。 以下述作為相互轉化方法 为項貝例，含有颯鍵結之 式1化合物，可藉由相A合右 “ 祁應3有-s或亞颯鍵結之化合物之氧 化作用而製成。例如，此氧 乳 .c 虱匕作用可合宜地利用與過氧酸 广例如3-氯過苯甲酸，較佳係於惰性溶劑中，例如 一乳f燒’較佳係在於或接近室溫進行。
應明瞭的是’此處關於芳基與雜芳基芳香性之指稱，係 匕括任何高度地共振之不飽和環結構。或者，雙鍵之安 置，在顯示之情況下，係、表示關於所料化合物之_種可 能結構，但應明瞭係包括此化合物之其他共振狀態，以及 質子化與荷電物種，只有其中-種可能顯示。 應明瞭的疋’本發明化合物可含有不對稱中心。此等不 對稱:心可獨立呈無論是Rsts組態。熟諳此藝者將顯而易 見的是，某些本發明化合物亦可顯示幾何異構現象。應明 奢的疋’本發明包括根據本發明化合物之個別幾何里構物 與立體異構物及其混合物，包括消旋混合物。此種異構物 可藉由應用或修改已知方法，與其混合物分離，例如層析 技術與再結晶技術，或其係個別地製自其中間物之里 構物。 田〆、 對本文之目的而言，應明瞭的是，互變異構形式係包含 在特定基團例如硫鲖基/毓基或酮基/羥基之敘述中。 酸加成鹽係以其中存在鹼性官能基譬如胺基、烷胺基哎 —烷胺基之本發明化合物形成。藥學上可接受，意即無毒 性之酸加成鹽，係為較佳的，所選擇之鹽，係經最適宜地 H31J2.doc -143- 1359145 選擇為可與習用醫藥媒劑相容，且適合口服或非經腸投 藥。本發明化合物之酸加成鹽，可藉由應用或修改已知方 法’經由自由態鹼與適當酸之反應而製成。例如，本發明 化合物之酸加成鹽’可以下述任一方式製成，使自由態鹼 溶於含有適當酸之水或醇水溶液或其他適當溶劑中，並藉 由蒸發溶液分離此鹽，或經由在有機溶劑中使自由態鹼與 酸反應’於此種情況中，鹽係直接分離，或可經由使溶液 濃縮而獲得。用於製備此種鹽之一些適當酸，係為鹽酸、 氫漠酸、磷酸、硫酸，各種有機羧酸及續酸，譬如醋酸、 檸檬酸、丙酸、琥珀酸、苯甲酸、酒石酸、反丁烯二酸、 笨乙醇酸、抗壞企酸、蘋果酸、甲烧續酸、甲笨續酸、脂 肪酸類，己二酸鹽、海藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬胺酸 鹽、苯磺酸鹽、苯曱酸鹽、環戊烷丙酸鹽、二葡萄糖酸 鹽、十二基硫酸鹽、酸性硫酸鹽、丁酸鹽、乳酸鹽、月桂 酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、氫破酸鹽、2_羥基.乙烧 %酸鹽、甘油麟酸鹽、苦味酸鹽、三曱基醋酸鹽、雙經黎 酸鹽、果膠酯酸鹽、過硫酸鹽、3_笨基丙酸鹽、硫氰酸 鹽、2-莕磺酸鹽、十一烷酸鹽、菸鹼酸鹽、半硫酸鹽、庚 糖酸鹽、己酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦續酸鹽及其他。 本發明化合物之酸加成鹽，可藉由應用或修改已知方 法’自其鹽再生。例如，本發明之母體化合物可經由以鹼 處理，例如碳酸氫鈉水溶液或氨水溶液，自其酸加成鹽再 生。 本發明化合物可藉由應用或修改已知方法，自其鹼加成 143112.doc 1359145 鹽再生。例如，本發明之母體化合物 理’自其驗加成鹽再生。
驗加成鹽可在本發明化合物含有幾基或足夠酸性生物電 子等排體之情況下形成。可用以製傷驗加成鹽之驗類，包 括較佳為當與自由態酸合併時，會產生藥學上可接受之鹽 2 ’意即該鹽之陽離子在該鹽之醫藥劑量下，對病人為益 毒性，因此在自由祕中固有之_抑制作用，不會被可 歸因於該陽離子之副作用而受損害。藥學上可接受之踏， 包括衍生自鹼金屬與鹼土金屬鹽者，在本發明之範圍：包 括衍生自下㈣者：氫化鈉、氫氧化鈉、氫氧切 '氣氧 化約、氫氧化紹、絲化鐘、氫氧化鎂、氫氧化辞'氨、 乙二胺、N·’基葡萄糖胺、離胺酸、精胺酸、烏胺 鹼、Ν，Ν·-二宇基乙二胺、氯普魯卡因、三乙醇胺、: 卡因、Ν-爷基苯乙胺、二乙胺、六氯峨，、參(經甲基二 基甲烷、氫氧化四甲基銨等。
可以酸例如鹽酸處 、本發明化合物可合宜地在本發明方法期間，被製成或妒 成溶劑合物（例如水合物）。本發明化合物之水合物可人二 地自水溶液/有機溶劑混合物，藉再結晶而製成使^宜 有機溶劑，譬如二氧陸圜、四氫呋喃或曱醇。 用之 起始物質與中間物可藉由應用或修改已知方法製成 如按參考實例中所述或其顯而易見之化學等效方法。例 本發明化合物、其方法或製備法及其生物活性將 述實例之檢視，而變得更清楚明白，其僅被提 ^下 η 為 明’而非欲被視為限制本發明之範圍β I43112.doc -145· 1359145 試樣係藉TLC、NMR、RP-HPLC或EA分析。 實例1 -化合物A-E : 於化合物xi(310毫克，〇·39毫莫耳）之DCM溶液（1〇毫升） 中’添加TFA(4毫升）。將此反應物於約室溫下授拌$小 時。此時於真空中移除溶劑。將所形成之殘留物藉逆相 HPLC純化，獲得195毫克（68%)化合物A，
按照上述方法，並使用適當起始物質，製備下列速續化 合物B-E :
143112.doc -146· 1359145 實例2·化合物F-M : 於化合物xii(350毫克，0.56毫莫耳）之DCM溶液（10毫升） 中，添加DMP試劑（307毫克’ 0·73毫莫耳）。將反應物於約 室溫下攪拌2小時，然後以10% Na2S03，使反應淬滅，歷 經30分鐘。接著將反應混合物以EtOAc(75毫升）萃取，並 以鹽水洗滌。使有機層乾燥，及在真空中濃縮。將所形成 之殘留物以矽膠層析（80-90% EtOAc/己烷）純化，獲得248 宅克（71 % )化合物f
按照上述方法，並使用適當起始物質，製備下列速續化 合物G-Μ :
143112.doc •147·
1359145 實例3-化合物N-R :
於化合物xix(〜0.22毫莫耳）之DCM溶液（4毫升）中，添加 DMP試劑（146毫克，0.34毫莫耳）。於約室溫下攪拌2小時 後，以10% Na2S〇3使反應淬滅。接著以DCM稀釋此反應 混合物。分離有機層’並以10% NaaSO3洗滌兩次，及以鹽 水洗滌。使所形成之有機層脫水乾燥，並在真空中濃縮， 獲得殘留物，使其藉矽膠層析純化（5% EtOH/EtOAc)，以 提供78毫克（5 6%)所要之化合物N
143I12.doc -148- 1359145
按^上述方法’並使用適當起始物質，製備下列連續化 合物O-R :
實例4-化合物S-W : 於化合物xxv(320毫克，〇.5毫莫耳）之DCM溶液（10毫升） 中’添加DMP試劑（272毫克’ 0.65毫莫耳p將此反應物於 約室溫下攪拌2小時，並以1〇% Na2S03使反應淬滅，歷經 20分鐘》接著將所形成之混合物以EtOAc萃取。有機層以 鹽水洗滌’脫水乾燥’及在真空中濃縮。將所形成之殘留 物藉矽膠層析純化（80% EtOAc/己烷），獲得170毫克（53〇/〇) 化合物S， 143112.doc •149·
1359145 按照上述方法，並使用適當起始物質，製備下列連續化 合物τ-w :
實例5-化合物X-AD: 於化合物xxvi(4〇0毫克’ 0.6毫莫耳）之DCM溶液（20毫升） 中’添加DMP試劑（329毫克，0.78毫莫耳）。將此反應物於 約室溫下搜拌1.5小時，並以10% NajO3使反應淬滅，μ 經20分鐘《接著將所形成之混合物，以Et〇 Ac萃取。古换 層以鹽水洗滌，脫水乾燥，及在真空中濃縮。將所形成之 143112.doc •150· 1359145 殘留物藉矽膠層析純化（70-100% EtOAc/己烷），獲得210毫 克（53%)化合物X，
按照上述方沐·，& m * I 击亚使用適當起始物質，製備下列連續化 合物Y-AD: '
143112.doc -151 - 1359145
NV 實例6-化合物ae-AI :
使化合物xxxiii(150毫克；0.076毫莫耳）溶於5毫升TFA 中’並攪拌兩天。產物藉RP-HPLC純化，產生40毫克（33% 產率）化合物AE，
按照上述方法，並使用適當起始物質，製備下列連續化 合物AF-AI :
143112.doc • 152-
1359145 實例7-化合物AJ : 使化合物XXXviii(l80毫克，〇21毫莫耳）溶於純TFA(5毫 升）中，並在約室溫下留置3天。此時，使反應混合物在真 空中濃縮，而得殘留物，使其藉逆相HpLC純化，獲得5〇 毫克（32%)化合物AJ，
實例8-化合物AK-AM : 使化合物xxxxiii(150毫克；0.16毫莫耳）溶於4.5毫升TFA 中，並攪拌三天。藉RP-HPLC純化產物，產生70毫克（54% 產率）化合物AK，
按照上述方法，並使用適當起始物質，製備下列連續化 合物AL-AM : 143112.doc -153-
1359145 實例9-化合物： 使化合物lii(80毫克）溶於3毫升TFA與3毫升DCM中。將 此逐合物於約室溫下攪拌5小時。藉蒸發移除溶劑。將所 形成之殘留物藉HPLC純化，產生62毫克（83%)化合物 AN，
實例10-化合物AO ·· 使化合物liii(160毫克，0.2¾莫耳）溶於5毫升中， 並添加DMP試劑（170毫克；0.4毫莫耳）^將此混合物於約 室溫下攪拌三小時。藉蒸發移除溶劑，並使殘留物溶於 50%乙腈/水中，及藉由RP-HPLC純化，產生51毫克（32%) 化合物AO， 143112.doc -154-
1359145 實例11-化合物AP : 使化合物lix(162毫克；〇_22毫莫耳）溶於8毫升DCM中， 並添加DMP試劑（189毫克；〇.44毫莫耳）》將此混合物於約 室溫下攪拌3小時。藉蒸發移除溶劑，並藉rP_hplC純化 產物，產生41毫克（25%)化合物AP，
實例12-化合物AQ : 使化合物lx(70毫克；0.09毫莫耳）溶於5毫升TFA與5毫升 DCM中。將此混合物於約室溫下攪拌3小時。藉真空移除 溶劑，並使殘留物溶於50%乙腈/水中，及束乾而產生化合 物AQ，為粉末，
143112.doc -155- 1359145 實例13-化合物AR-BG : 、 將化合物lxvi(223毫克，0.326毫莫耳）於tfa(5毫升）與 DCM (5毫升）之溶液中攪拌4小時。TLC(矽膠：2% MeOH/ EtOAc)顯示完全轉化成較緩慢產物。在減壓下移除溶劑， 並使產物凍乾，獲得198毫克（97%)化合物AR，
按照上述方法，並使用適當起始物質，製備下列連續化 合物AS-BG :
143112.doc •156· 1359145
143112.doc •157·
1359145 實例14-化合物BH-BS : 使化合物lxxiii(150毫克，〇·15毫莫耳）溶於DCM(3毫升） 中。於此溶液中添加TFA(1.5毫升）。將所形成之溶液攪拌 過夜。此時，使反應物在真空中濃縮，而得殘留物。藉逆 相HPLC純化殘留物並凍乾，獲得6〇毫克（50%)化合物 143112.doc •158· 1359145 BH，
按照上述方法，並使用適當起始物質 合物BI-BS : 製備下列連續化
143112.doc
1359145
實例15-化合物BT-BU : 按照實例12之方法，並使用適當起始物質，製備下列連 續化合物BT-BU : 143112.doc •160- 1359145
實例1 6-化合物BV : 於化合物lxxvii(143毫克’ 0.21毫莫耳）之二氣曱烧溶液 (4.2毫升）中’添加DMP試劑（165毫克，0·39毫莫耳）。將此 反應物於約室溫下攪拌2小時，並以10% Na2S03(水溶液） 使反應淬滅’歷經20分鐘。將所形成之混合物以EtOAc萃 取。有機層以鹽水洗滌，以MgS04脫水乾燥，及濃縮成黃 色油。藉矽膠層析（5。/。EtOH/EtOAc)純化，產生124毫克 (79%)化合物BV，
貫例17-化合物BW-CA : 於化合物lxxxix(420毫克，0.62毫莫耳）之二氣曱烷溶液 (20毫升）中，添加DMp試劑（342毫克，〇 81毫莫耳）。將此 反應物於約室溫下攪拌1小時，並以1〇% Na2S〇3使反應淬 143112.doc -161 - 1359145 滅，歷經20分鐘。接著將所形成之混合物以EtOAc萃取。 有機層以鹽水洗滌’脫水乾燥，及在真空中濃縮。將所形 成之殘留物藉矽膠層析純化（80% EtOAc/己烷），獲得208 毫克（50%)化合物BW，
〔Cyj ·，、、 按照上述方法’但使用適當起始物質，製備下列連續化 合物BX-CA :
ί.ΛΗ ΗΝ ην
143112.doc •162· 1359145 實例18-化合物CB-CC : 於化合物lxxxvii(200毫克，0.3毫莫耳）之二氯甲烧溶液 (6.5毫升）中，添加DMP試劑（227毫克，0.54毫莫耳）。將此 反應物於約室温下攪拌2小時，並以10% Na2S03(水溶液） 使反應淬滅，歷經20分鐘。將所形成之混合物以EtOAc萃 取。有機層以鹽水洗滌，以MgS04脫水乾燥，及濃縮成黃 色油。藉矽膠層析（5% EtOH/EtOAc)純化，產生138毫克 (70%)化合物CB，
按照上述方法，但使用適當起始物質，製備下列化合物 CC ：
實例19-化合物CD : 使化合物lxxxxviii(40毫克，0.05毫莫耳）溶於TFA(3毫 升）中。將此溶液攪拌兩夜，及濃縮。於逆相HPLC上純化 殘留物，獲得25毫克（74。/〇)化合物CD，
143112.doc - 163 - 1359145 實例20-化合物CE : 製備下列化 按照實例17之方法，並使用適當起始物質， 合物CE :
實例21 -化合物CF-CG : 製備下列連 按照實例14之方法，並使用適當起始物質 續化合物CF-CG :
實例22-化合物: ，製備下列化 按照實例16之方法，並使用適當起始物質 合物CH :
1359145
實例23-化合物CI-CM 使化合物cxi(490毫克，〇·75亳莫耳）溶於DCM(6毫升） 中。將DMP試劑（380毫克，0.9毫莫耳）添加至此溶液中， 並攪拌1小時。以10% NaJO3溶液，使反應混合物淬滅， 接著將有機相以飽和NaHC03與鹽水洗滌。在濃縮有機相 之後’將所形成之殘留物，藉由7〇% EtOAc/己烷，以層析 方式純化，產生化合物CI(325毫克，66.4%)。
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質製備下列連續化合 物 CJ-CM :
143112.doc -165- 1359145
實例24-化合物CN 於化合物cxviii(335毫克，0.46毫莫耳）之DCM/THF溶液 (3毫升/3毫升）中，添加DMP試劑（300毫克，0.69毫莫耳）。 將此反應混合物於室溫下攪拌2小時，並以10% Na2S03(水 溶液）使反應淬滅’歷經20分鐘。將所形成之混合物以 EtOAc萃取。有機相以鹽水洗務，以]^§8〇4脫水乾燥，及 濃縮而產生黃色油。藉矽膠層析（8〇% EtOAc/己烷）純化， 產生化合物CN(220毫克，67%)。
0.25宅莫耳）之DCM/THF溶液 實例25-化合物CO-CR 於化合物cxix(164毫克， 0.38毫莫 並以10% (1.5毫升/1.5毫升）中，添加DMp試劑〇59毫克，〇38毫莫 耳）。將此反應混合物於室溫下攪拌2小時，並以丨㈣ 143112.doc -166 · 1359145
NasSO3(水溶液）使反應淬滅，歷經2〇分鐘。將所形成之混 合物以EtOAc萃取。有機相以鹽水洗滌，以MgS〇4脫水乾 燥’及濃縮成黃色油。藉矽膠層析（7〇% EtOAc/己烷）純 化，產生化合物CO( 1〇〇毫克，61°/。）。
φ 按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列連續化合 物 CP-CR :
實例26-化合物CS-CT 使化合物cxx溶於DCM(3毫升）中。將DMP試劑（180毫 143112.doc • 167- 1359145 克’ 0.41毫莫耳）添加至溶液中，然後授拌】小時。以㈣ Na2S03使反應混合物浮滅，然後將有機相以飽和⑺3 ”里水洗滌。在濃縮有機相之後，殘留物藉由 EtOAc以層析方式純化，產生化合物cS(95毫克，43刀％)。
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列化合物 CT ··
實例 27-化合物 CU、El、EK-EM、EO-EZ及 FA-FG 使化合物cxxviii(356毫克，0.52毫莫耳）溶於DCM(5毫 升）中。將DMP試劑（270毫克，0.63毫莫耳）添加至此溶液 中，並攪拌1小時。以1 〇% Na2S03使反應混合物淬滅，接 著分離有機相，並以飽和NaHC03與鹽水洗滌。在濃縮有 機溶劑之後，殘留物藉由100% EtOAc以層析方式純化， 產生化合物CU(200毫克，56.3%)。熔點225-235°C。 143112.doc • 168 * 1359145
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列連續化合 物 ΕΙ、ΕΚ-ΕΜ、EO-EZ及 FA-FH :
EK
143112.doc -169- 1359145
143112.doc -170· 1359145
EW, 143112.doc -171 - 1359145
143112.doc -172- 1359145
143112.doc •173· 1359145
實例28-化合物CV-DC 使化合物cxxx(330毫克’ 0.46毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將DMP試劑（240毫克，0.56毫莫耳）添加至此溶液中， 並攪拌1小時。以10°/。Na2S〇3使反應混合物淬滅，並將有 機相以飽和NaHC03與鹽水洗滌。在濃縮有機相之後，將 所形成之殘留物藉由1 〇〇% EtOAc以層析方式純化，產生 化合物 cxxx (280毫克，85.9°/〇)。
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列速續化合 物 CW-DC :
1431I2.doc •174- 1359145
143112.doc -175 1359145
實例29-化合物DD-DE 於化合物cxxXviii(4〇〇毫克，〇·57毫莫耳）之dCM溶液（6 毫升）中，添加DMP試劑（362毫克，〇·85毫莫耳）。將此反 應混合物於室溫下攪拌2小時，並以丨〇% Na2s〇3(水溶液） 使反應淬滅，歷經20分鐘。以EtOAc萃取所形成之混合 物。將所萃取之有機相以鹽水洗滌，以MgS04脫水乾燥， 及濃縮而產生黃色油。藉由矽膠（7〇% Et〇Ac/己烷）純化， 產生化合物DD (201毫克，51%)。
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列化合物 DE ：
實例30-化合物DF 使化合物cxxxxiii(165毫克，0.24毫莫耳）溶於DCM(5毫 升）中。將DMP試劑（125毫克’ 0.29毫莫耳）添加至此溶液 中’並攪拌1小時。以10% NaJO3使反應混合物淬滅，並 將有機相以飽和NaHC〇3與鹽水洗滌。在濃縮有機相之 143112-doc • 176· 1359145 後’將所形成之殘留物藉由70% EtOAc/己炫，以層析方式 純化，產生化合物DF(108毫克，65.6%)。
實例31-化合物DG-DJ
於化合物cil(0.：350克，〇.516毫莫耳）在dCM(15毫升） 中’藉由冰浴冷卻之溶液内，添加DMp試劑（〇 28丨克， 0.671毫莫耳）。將混合物於室溫下攪拌2小時，然後以1〇0/〇 NadCh溶液，使反應淬滅並攪拌2〇分鐘。將所形成之混合 物以DCM (3x20毫升）萃取’並使有機萃液脫水乾燥 (MgS04) »在過濾以移除MgS〇4之後，使濾液濃縮，並藉 官柱層析純化（70%醋酸乙酯/己烷），產生最後化合物 DG(0.265克，76°/。）’為白色固體。
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法’但使用適當起始物質，製備下列連續化合 物 DH-DJ : 143112.doc -177- 1359145
實例32-化合物DK-DN 將化合物clx(l〇8毫克，0.123毫莫耳）iDCM溶液以 DMP試劑（78毫克，0.185毫莫耳）處理。在室溫下攪拌！小 時後’以EtOAc(50毫升）稀釋反應混合物，然後以ι〇% NhSO3使反應淬滅。在攪拌30分鐘後，分離有機相，並以 NaHC〇3與鹽水洗滌。使有機相脫水乾燥及在真空中濃 縮，獲得殘留物’將其藉矽膠層析純化（8〇% Et〇Ac/己 烷）’產生化合物DK (84毫克，78%)。
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列化合物 143112.doc • 178- 1359145
DL-DN。
實例33-化合物DO-DS
將化合物clxii(l74毫克，0.189毫莫耳）之EtOH溶液（10毫 升），使用卩(!/0：(3 0。/〇當量，60毫克’10%把含量）氫化2.5小 濃縮，產 ，而得化 時。然後，濾出觸媒。將所形成之濾液在真空中 生殘留物，使其藉半預備逆相層析純化，並凍乾 合物DO，70%產率。
143112.doc •179· 1359145 按照上述關於製備上述化人鉍— 制址社 化σ物之方法，及相關於製備其 中間物之方法’但使用適當起妒铷 ，β痒仏入 吟雜物質，製備下列連續化合 物 DP-DS。
實例34·化合物CW: 使化合物clxiii(175毫克’ 0.24毫莫耳）溶於dCM(3毫升） 143112.doc .180- 1359145 中。將DMP試劑（120毫克，0.28毫莫耳）添加至此溶液令， 並授摔1小時。以10% NaJO3使反應淬滅，並以飽和 NaHC03與鹽水洗蘇。藉由70% EtOAc純化，產生化合物 CW(134毫克，75%)。 實例35-化合物CY與DT-DX : 於clxxu(290毫克，0_43毫莫耳）之DCM溶液（15毫升） 中，添加DMP試劑（239毫克，0.56毫莫耳）。將反應物於室
溫下攪拌1小時，並以1〇% Ν&δ〇3使反應淬滅，歷經2〇分 鐘。接著將所形成之混合物以Et〇Ac萃取。有機層以鹽水 洗務，脫水乾燥，及在真空中濃縮。將所形成之殘留物藉 夕勝層析純化（8_1QQ% Et〇Ae/己烧），獲得化合物 毫克，52%)。 孜照上述關於製備 m心丨1" 方法，及相關於製備其 方法但使用適當起始物質，製備下列連續化合 物 DT-DX。
143112.doc 1359145
實例36-化合物DY : 使化合物lxxxv(1.17毫莫耳）溶於DCM(5毫升）中。將 DMP試劑（545毫克’ 1·3毫莫耳）添加至此溶液中，並搜拌j 小時。以P-NaJOKl .5毫莫耳/克樹脂）使反應淬滅，並授 拌一小時。添加P-TBD清除劑樹脂*(2·5毫莫耳/克樹脂）， 並攪拌45分鐘。過濾所形成之混合物，並藉由5〇% Et〇Ae 純化，獲得化合物DY(440毫克，50.2%，歷經兩個步驟）。 *關於P-TBD清除劑樹脂之參考資料：j.pari〇w等人， Tetrahedron, 55,6785-6796(1999) 0
1431l2.doc -182- 1359145 實例37-化合物DZ : 使起始物質化合物clxxxxi(94毫克，0.14毫莫耳）溶於 THF (10毫升）與DCM(20毫升）之混合物中。然後，添加 DMP試劑（118毫克，0.28毫莫耳）。在室溫下攪拌ΐ小時 後，將反應傾倒於含有Dri Solv THF(120毫升）之分液漏斗 中。將反應物以10% Na2SO3(50毫升），然後以鹽水（75毫 升）洗蘇。接著，使有機層分離，以MgS〇4脫水乾燥，及 在減壓下移除溶劑。於層析（矽膠：以50% Dri Solv THF/ EtOAc，然後以4% MeOH/THF溶離）後，藉MS查核溶離 份。使適當溶離份凍乾，產生化合物DZ(38.8毫克， 41%)。 Η
N Η 實例38-化合物ΕΑ-ΕΒ : 使起始化合物clxxxxv(185毫克，0.26毫莫耳）溶於 THF(20毫升）中。然後，添加DMP試劑（219毫克，0·52毫莫 耳）。在室溫下攪拌1小時後。TLC顯示完全轉化成酮（5% Me〇H/THF)。將反應物傾倒於含有Dri Solv THF( 120毫升） 之分液漏斗中。將反應物以10% Na2SO3(50毫升），然後以 鹽水（75毫升）洗滌。接著，分離有機層，以MgS04脫水乾 燥，及藉由減壓移除溶劑，產生殘留物，使其藉層析純化 143112.doc -183- 1359145 (矽膠：以 50% Dri Solv THF/EtOAc，然後以 4% MeOH/THF溶離），及藉UV與MS查核溶離份。使適當溶離 份凍乾，產生化合物EA( 159毫克，88%)。
按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列化合物 EB :
實例39-化合物EC-ED : 於化合物clxxxxviii(0.341克，0.503毫莫耳）在DCM(15毫 升）中，於冰浴中冷卻之溶液内，添加DMP試劑（0.277克， 0.654毫莫耳）。將混合物於室溫下攪拌2小時，然後以1 0% Na2S03溶液使反應淬滅，並攪拌20分鐘。將所形成之混合 物以DCM(3x20毫升）萃取，並使有機萃液脫水乾燥 (MgS〇4)。在過濾以移除MgS04後，使濾液濃縮，並藉管 柱層析純化（70% EtOAc/己烷），獲得化合物EC(0.183克， 54%)，為白色固體。 1431I2.doc • ] 84 · 丄以丄45
及相關於製備其 製備下列化合物 按照上述關於製備上述化合物之方法 中間物之方法，但使用適當起始物質， ED ：
實例40-化合物EE-EG ··
使化合物ccii(290毫克，0.37毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將DMP試劑（175毫克’ 0.41毫莫耳）添加至此溶液中， 並攪拌1小時。以P-Na2S〇3(1.5毫莫耳/克樹脂）使反應淬 滅’並攪拌1小時。將已淬滅之DMP試劑，以P-TBD(2.5毫 莫耳/克樹脂）清除，並攪拌1小時。在濃縮成殘留物之前， 將所形成之混合物過濾，以DCM沖洗。將所形成之殘留物 藉由50% EtOAc/hex純化，產生化合物EE(440毫克，
143112.doc -185· 1359145 按照上述關於製備上述化合物之方法，及相關於製備其 中間物之方法，但使用適當起始物質，製備下列化合物 EF-EG :
實例41-化合物EH : 於化合物cciii(140毫克，0.2毫莫耳）之DCM溶液（3毫升） 中，添加DMP試劑（133毫克，〇.3毫莫耳將反應物於室 溫下攪拌2小時，並以10% NajO3(水溶液）使反應淬滅， 歷經20分鐘。將所形成之混合物以Et〇Ac萃取。有機層以 鹽水洗滌，以MgSCU脫水乾燥，濃縮成黃色油，將其藉由 矽膠（70% EtOAc/己烷）純化，並於凍乾後，產生化合物 EH(50毫克，38%)。
實例42-化合物EJ 使化合物ixxxiii(520毫克，1毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將PyBOP(624毫克1.2毫莫耳）添加至上述溶液中並 143112.doc •186· 1359145 攪拌5分鐘。將在THF(5毫升）中之化合物cdviii(300毫克， 1.2毫莫耳）逐滴添加至此溶液中，接著為DIPEA(0.22毫 升，1.2毫莫耳）。將反應物於室溫及氮氣下攪拌過夜。此 時，將反應物以EtOAc稀釋，以飽和NaHC03與鹽水洗滌。 有機相以MgS04脫水乾燥，過濾及濃縮，而得粗製偶合中 間物cdix。
cdix 使此中間物cdix (〜1毫莫耳）溶於DCM(10毫升）中。將 Dess-Martin過碘烷（466毫克，1.1毫莫耳）添加至此溶液 中。在室溫下攪拌1小時後，以聚合體結合之Na2SO3(740 毫克，1.5毫莫耳DMP/克樹脂）使反應淬滅，並攪拌45分 鐘。然後，將反應混合物以聚合體結合之TBD樹脂（440毫 克，2.5毫莫耳DMP/克樹脂）去雜。將所形成之混合物攪拌 45分鐘，然後過濾。在5% EtOH/ EtOAc中達成純化，產生 化合物EJ(245毫克，32%，歷經2個步驟）。關於處理程序 之文獻參考資料，可參閱Tetrahedron 55 (1999) 6785-6796 °
143112.doc -187· 1359145 實例43-化合物ΕΝ 使中間化合物cdvii(41 5毫克，0.59毫莫耳）溶於DCM(1 〇 毫升）與THF(10毫升）中。添加t-BuOH(300微升），接著為 Dess-Martin過埃烧（750毫克，1.77毫莫耳）。將反應物授拌 50分鐘，然後以P-Na2S03(1.5毫莫耳DMP/克樹脂）使反應 淬滅。於室溫下攪拌20分鐘後，以P-TBD(2.5毫莫耳DMP/ 克樹脂），使反應混合物去雜。攪拌1小時後，將所形成之 混合物過濾及濃縮。產物藉矽膠層析純化（5〇%至70〇/〇
EtOAc/己烷），產生化合物EN(220毫克，53%)。
對於下列化合物獲得質譜[M]，如下表1中所示 表1 LY# 實例 實測之質量 A 733.3 B 747.2 C 657.2 D 769.4 E 733.4 F 625.4 G 639.3 Η 661.4 I 643.4 J 707.3 K 641.3 143112.doc • 188· 1359145
L Μ N Ο P Q R S Tu Vw X Yz AA AB AC AD AE AF AG
AI AJ
AP AQ
AW 689.3 639.3 639.4 731.4 687.4 653.4 701.4 639.3 747.1 655.4 653.4 703.4 661.3 647.3 663.3 667.4 711.4 725.4 647.3 779.4 689.3 671.4 806.4 687.5 735.4 736.5 870.4 813.3 724.4 653.4 628.2 642.2 143112.doc -189- 1359145 ΑΧ 614.2 AY 628.3 BD 570.3 BE 520.2 BF 534.3 BG 584.3 BU 890.3 BV 685.4 BW 679.3 BX 695.3 BY 697.3 BZ 787.4 CA 701.3 CB 669.4 CC 733.5 CD 643.3 CE 653.5 CH 749.4 Cl 653.3 CJ 717.5 CK 683.4 CL 669.3 CM 675.2 CN 717.2 CO 653.3 CP 683.3 CQ 669.3 CR 675.2 CT 661.8 CS 639.3 CU 679.2 cv 709.3
143112.doc •190- 1359145
cw 743.3 cx 695.3 CY 665.2 cz 681.3 DA 695.3 DB 701.2 DC 673.3 DD 693.3 DE 757.4 DF 682.3 DG 676.3 DH 676.2 DI 692.5 DJ 605.2 DK 874.4 DL 924.5 DM 924.2 DN 952.7 DO 830 DP 842.5 DT 667.4 DU 639.2 DV 740.3 DW 684.2 DX 678.5 DY 749.3 DZ 685.3 EA 649.3 EB 700.3 EC 702.3 ED 730.3 EE 775.3 143112.doc 1359145 EF 749.3 EG 722.3 EH 665.2 El 796.4 EJ 744.3 ΕΚ 730.5 EL 730.5 EM 757.3 ΕΝ 703.5 EO 715.5 EP 679.2 EQ 651.3 ER 715.3 ES 668.5 ET 732.5 EU 743.3 EV 683.3 EW 750.4 EX 786.4 EY 744.5. EZ 780.4 FB 693.4 FC 655.3 FD 655.3 FE 774.4 FF 681.5 FG 667.5
獲得下列化合物之高解析度質譜（HRMS)，係如表2中所 示。 143112.doc •192· 1359145 表2 實例 分子式 (M+l) 計算之MS (M+l) 實測之質量 (M+l) L C37H52N706 690.3979 690.3986 Μ C33H50N7O6 640.3822 640.3822 Ζ C32H48F2N706 664.3634 664.3627 ΑΒ C36H48F2N706 712.3634 712.3649 CE C34H52N706 654.3979 654.3967 ΕΝ C35H52N706F2 704.3947 704.3945 ΕΚ C37H63N608S 751.4428 750.4350 (M) EC C36H59N608 703.4395 703.4382 CA C35H50N7O6F2 702.3790 702.3801 EZ C40H55N8O6F2 781.4213 781.4196 • EU C36H52N706F2 716.3947 716.3929 CY C35H52N706 666.3979 666.3966 BX C37H58N706 696.4448 696.4432 S C33H50N7O6 640.3823 640.3831 • BW C36H54N706 680.4136 680.4126 CU C36H54N706 680.4136 680.4128 EJ C40H57N8O6 745.4401 745.4417 EM C35H54N706 668.4136 668.4139 無 C41H58N706 744.4448 744.4691
中間物實例1-化合物ii 於化合物i(8.1克，24.4毫莫耳）之乙醇溶液（40毫升）中， 在-10°C下添加NaBH4(924毫克，24·4毫莫耳）。 Ο
將反應物在該溫度下攪拌30分鐘，然後以AcOH(3毫升） 使反應淬滅。將反應混合物以EtOAc(250毫升）稀釋，並以 NaHC03與鹽水洗滌。使有機層脫水乾燥，及在真空中濃 縮，產生殘留物，將其藉矽膠層析純化（50% EtOAc/己 烷），以提供7.85克（97%)化合物ii， 143112.doc -193 - 明 9145
中間物實例2-化合物iii 於化合物ii(4.48克’ 13.4毫莫耳）之thF溶液（70毫升） 中，在0。(：下添加NaH(699毫克，6〇0/。，I? 42毫莫耳）。在 該溫度下擾拌40分鐘後’添加純Mel( 1.25毫升，20.1毫莫 耳）。將此反應物於約室溫下攪拌過夜。此時，小心地以 飽和NACl溶液，在〇t下，使反應淬滅。將反應混合物以 與EtOAc萃取。有機層以水與鹽水洗滌，並以Na2S〇4 脫水乾燥。將如此獲得之有機層在真空中濃縮，以提供黃 酸酯化合物iii，
中間物貫例3 -化合物iv 使黃酸酯化合物iii(〜13.4毫莫耳）溶於甲苯（1〇〇毫升） 中。於此溶液中添加AIBN(216毫克，1.34毫莫耳）。將所 形成之溶液以乾燥氮脫氣，然後以n_Bu3；§nH(5.4毫升， 20.1毫莫耳）處理。將反應混合物在9〇艺下加熱3小時。此 時’使反應物冷卻至室溫，及在真空中濃縮。將所形成之 143112.doc • 194- 1359145 殘留物以矽膠層析純化（15-20% EtOAc/己烷），提供2.8克 (得自化合物Π，整體為66%)化合物iv，
中間物實例4-化合物v
於化合物iv(l克，3_15毫莫耳）之乙醇溶液（21毫升）中， 在氮氣流下，添加pd(〇H)2/C(655毫克，2〇%，〇 95毫莫 耳）°使所形成之反應混合物接受標準氫化作用（丨5大氣 壓）。5小時後，移除氫來源，並將反應物過濾。於真空中 濃縮濾液’提供自由態胺化合物v，
中間物貫例5-化合物vi 於化合物νιι(629*克，i.95毫莫耳）iDCM溶液（1〇毫升） 中，在約室溫下
添加HOAK265毫克，h95毫莫耳），及接著為在dcm中 之1 M DCC溶液（1.95毫升，195毫莫耳）。授拌3〇分鐘後， 143112.doc -195- 1359145 將化合物ν(1·5毫莫耳）之DCM溶液（3毫升）添加至上述H〇At 活化之酸中。將此反應物於約室溫下攪拌過夜。此時，使 反應物經過石夕藻土過濾'。將遽液以EtOAc(75毫升）稀釋， 並以水及鹽水洗條。使有機層脫水乾燥，及在真空中濃 縮。所形成之殘留物藉矽膠層析純化（70_80% EtOAc/己 烷）’而得620毫克（85%)化合物vi，
中間物實例6 -化合物v i i i 於化合物vi(615毫克，1·26毫莫耳）之乙醇溶液（1〇毫升） 中’添加2NNaOH水溶液（l·26毫升，2.52毫莫耳）β將反 應物在約室溫下攪拌過夜，然後使用Dowex酸性樹脂，酸 化至pH3。將固體濾除，並使濾液在真空中濃縮，而得殘 留物，使其再溶解於1 : lCH3CN/H2〇中。使此溶液接受冷 凍乾燥，提供495毫克（85%)化合物viii，
中間物實例7-化合物ix 於化合物viii(230毫克，0.5毫莫耳）之DCM溶液（10毫升） 中，添加PyBOP(417毫克，0.8毫莫耳p將此反應物於約 至溫下攪拌30分鐘。然後，於此溶液中添加化合物x(263 143112.doc •196- 1359145 毫克，0.75毫莫耳）之THF溶液（5.25毫升），及接著
為DIPEA(0.174毫升，1毫莫耳）。將反應物於約室溫下 攪拌過夜，然後以水（30毫升），使反應淬滅，歷經30分 鐘。將反應混合物以EtOAc( 100毫升）萃取。有機層以鹽水 洗滌並脫水乾燥，及在真空中濃縮，而得殘留物，使其經 由矽膠層析純化（5% EtOH/EtOAc)，獲得〜400毫克（100%) 化合物ix，
中間物實例8-化合物xi 於化合物ix(396毫克，0·5毫莫耳）之DCM溶液（10毫升） 中，添加DMP試劑（278毫克，0.65毫莫耳）。將反應物於約 室溫下攪拌1小時，然後以10% Na2S03使反應淬滅，歷經 3 0分鐘。接著將反應混合物以EtOAc(75毫升）萃取，及以 鹽水洗滌。使有機層脫水乾燥，及在真空中濃縮。將所形 成之殘留物以矽膠層析（70% EtOAc/己烷）純化，獲得320 毫克（81%)化合物xi， 143112.doc -197- 1359145
中間物實例9-化合物xii 於化合物viii(230毫克，0.5毫莫耳^DCM溶液（1〇毫升） 中，添加PyBOP(417毫克，0_8毫莫耳）。將反應物於約室 溫下攪拌3〇分鐘。然後’於此溶液中添加化合物χΠί(14〇 毫克’ 0.75毫莫耳）之THF溶液（3.5毫升）
及接著為DIPEA(0.174毫升，1毫莫耳p將此反應物於 約室溫下攪拌過夜’然後以水（3〇毫升）使反應淬滅，歷經 30分鐘。將反應混合物以Et〇Ac(75毫升）萃取。有機層以 鹽水洗滌並脫水乾燥，及在真空中濃縮，而得殘留物，使 其經由矽膠層析純化（5% EtOH/EtOAc)，以定量產率獲得 化合物xii，
中間物實例10-化合物i 143112.doc -198 1359145 於化合物ι(5克，15.1¾莫耳）之曱醇溶液（3〇毫升）中添 加（B0C)20(3.3 克，15.1 毫莫耳mH2/pd(〇H)2/c(l6克， 10% Pd含量）。將反應物於約室溫下攪拌2小時，然後經過 矽藻土過濾兩次。將矽藻土床以DCM沖洗。使合併之減液 在真空中濃縮’產生油狀殘留物，將其藉矽膠層析純化 (40%丑1〇八〇/己烷）’獲得3.8克（85%)化合物11，
中間物實例11-化合物ii’
於化合物ί’（3·7克’ 12.5毫莫耳）之甲醇溶液（U1毫升） 中，在0°C下，添加NaBH4(0.805克，21毫莫耳）。在〇°c 下，搜拌2.5小時後，於真空中慢慢地蒸發反應溶劑，產 生殘留物，將其以EtOAc稀釋。然後，將此溶液以水洗務 兩次。水層以EtOAc萃取。將合併之有機層以MgS04脫水 乾燥，及過濾，並在真空中濃縮，產生殘留物，將其以層 析純化，提供3.76克（99%)化合物ii·，
OH
中間物實例12-化合物xiv 於化合物ii'(3.76克，12·3毫莫耳）之DCM溶液（180毫升） 143112.doc • 199- 1359145 中，在0°C下添加DMAP(5克，40.1毫莫耳），接著為Tf20(4 毫升，23.7毫莫耳）。將反應物在0°C下攪拌1小時，及在約 室溫下，再攪拌1.5小時。然後，將反應混合物以5% NaHC03洗滌兩次，並以MgS04脫水乾燥。使如此獲得之 有機層在真空中濃縮，提供粗製三氟甲烷磺酸鹽。使所形 成之三氟甲烷磺酸鹽（2.7克，6毫莫耳）溶於DCM(120毫升） 中。於此溶液中添加DMAP(2.5克，20.5毫莫耳）。將所形 成之反應混合物加熱至回流過夜。此時，使反應物冷卻至 室溫，並以.5% NaHC03洗滌兩次。將反應混合物以MgS04 脫水乾燥，過濾，及在真空中濃縮，產生褐色油狀殘留 物，使其純化（1% MeOH/DCM)獲得500毫克（30%)化合物 xiv，
中間物實例13 -化合物xv 使化合物xiv(5 00毫克，1.8毫莫耳）溶於二氧陸圜中之4 N HC1(6.75毫升）内。將反應物於約室溫下攪拌〜4小時。此 時，於真空中移除溶劑。將所形成之殘留物以乙醚滴定兩 次，以幾乎定量產率獲得化合物xv之HC1鹽，
143112.doc -200 - 1359145 中間物實例14-化合物xvi
於化合物vii(579毫克，1·8毫莫耳）之THF溶液（7毫升） 中，添加HOAt(245毫克，1.8毫莫耳）與DCC(1_8毫升，1 Μ 在DCM中）。形成懸浮液。在約室溫下攪拌15分鐘後，將 化合物χν(1_8毫莫耳）與DIPEA(0.63毫升，3.6毫莫耳）之 THF溶液（6毫升）添加至上述懸浮液中。稍後添加另外之 DIPEA(0.8毫升）。將反應混合物於約室溫下攪拌過夜。此 時，將如此形成之白色固體濾出。以THF沖洗白色固體。 將合併之濾液與洗液在真空中濃縮，而得粗產物，將其藉 矽膠層析純化（100% EtOAc)，提供665毫克（76%)化合物 xvi 5
中間物實例15 -化合物xvii
於7(665毫克，1·37毫莫耳）之乙醇溶液（8毫升）中，在 0°C下添加1 N NaOH水溶液（2.4毫莫耳）。將反應物在約室 溫下攪拌過夜，然後使用Dowex酸性樹脂酸化至pH3。將 固體過濾。使所形成之濾液在真空中濃縮，而得淡黃色殘 留物，使其再溶解於1 : 1CH3CN/H20中，及凍乾而得467 毫克（74%)化合物xvii，
143112.doc -201 - 1359145 中間物實例16-化合物xix 將化合物xvii(100毫克，0.22毫莫耳）之DCM溶液（4毫升） 以PyBop(207毫克，0·4毫莫耳）在約室溫下處理20分鐘。此 時，將上述溶液以化合物xviii(65毫克，0·32毫莫耳）之 THF溶液（2.6毫升），接著以DIPEA(0.076毫升）處理。
於約室溫下攪拌7小時後，以水使反應淬滅。將反應混 合物以DCM(60毫升）稀釋。分離有機層，並以鹽水洗滌兩 次，且以MgS〇4脫水乾燥。過濾，濃縮及矽膠層析（5%
EtOH/ EtOAc)，獲得 148 毫克（〜100%)化合物 xix。
中間物實例17-化合物XX 於N-Cbz-L-纈胺酸（14.4克，57.2毫莫耳）之THF溶液（100 毫升）中，添加HOBT(7.72克，57·2毫莫耳）與EDCI(10.98 克，57.2毫莫耳）。於約室溫下攪拌20分鐘後，將含有第 三-L-白胺酸甲酯鹽酸鹽（10.4克，57.2毫莫耳）之THF溶液 (50毫升）與DIPEA (11.9毫升，68.7毫莫耳）加入上述溶液 中。將此反應物於約室溫下攪拌過夜。於標準水溶液處理 及矽膠層析（30% EtOAc/己烷）後，獲得14克（64%)化合物 143112.doc -202- XX °
1359145 中間物實例1 8-化合物xxi 於χχ(6·71克，17.7毫莫耳）之甲醇溶液（80毫升）中添加 (於Ν2氣流下）Pd/C(1.88克，10% Pd含量）。使反應容器， 在約室溫下接受氫化作用（1大氣壓H2)過夜。此時，將反 應混合物經過矽藻土墊過濾，及在真空中濃縮，以提供其 相應之粗製自由態胺，供下一步驟使用。將此胺（〜1 7.7毫 莫耳）之THF溶液，添加至THF(46毫升）與DMF(5毫升）之溶 液中，其中含有2-吡畊羧酸（2.85克，23毫莫耳）、Hobbit (3.12克，23毫莫耳）及£0(：1(4.41克，23毫莫耳）。然後， 於所形成之混合物中，添加DIPEA(3.08克，17.7毫莫耳）。 將反應物在約室溫下攪拌過夜，然後以水使反應淬滅。將 反應混合物以EtOAc萃取。有機層以鹽水洗滌，及在真空 中濃縮，以提供殘留物，使其藉矽膠層析純化（40-50% EtOAc/己烧），以提供3.9克（63%)化合物xxi，
中間物實例1 9-化合物xxii 143112.doc -203 - 1359145 於化合物xxi(4.67克，13.34毫莫耳）之甲醇溶液（4〇毫升） 中’添加2 N Na〇H(10毫升，20毫莫耳）。將此反應物於約 室溫下攪拌2小時。此時，將另一數量之2 N Na〇H(3 3亳 升’ 6.67毫莫耳）添加至此反應混合物中。於約室溫下檀拌 過夜後，使用酸性樹脂將反應物酸化至pH3。然後將反應 物過濾’並在真空中濃縮濾液’產生殘留物，使其溶於 1 : lCH3CN/H2〇中，以供凍乾。獲得4 15克（93%)化合物
中間物實例20-化合物xxiii 將化合物xxii(917毫克，2.73毫莫耳）之〇〇^溶液（10毫 升）以HOAt(371毫克，2.73毫莫耳）與DCC(2.73毫升，1 Μ，2.73毫莫耳）處理。在攪拌30分鐘後’將反應混合物以 化合物ν (500毫克，2_73毫莫耳）之THF溶液（10毫升）處 理。於約室溫下授拌過夜後’過渡白色固體（膽）。在真空 中濃縮濾液，而得殘留物，將其藉矽膠層析純化（60-70% EtOAc/己烷），以提供1.06克（77%)化合物xxiii，
中間物實例21 -化合物xxiv 將化合物xxiii(1.06克’ 2·11毫莫耳）之乙醇溶液（2〇毫升） 143112.doc •204· 1359145 以2 N NaOH(2.11毫升，4·23毫莫耳）處理。於約室溫下攪 拌過夜後，以酸性樹脂使反應混合物酸化至pH3。濾除固 體。將所形成之濾液在真空中濃縮，而得殘留物，使其凍 乾，獲得〜1克（100%)化合物xxiv，
中間物實例22-化合物xxv 將化合物xxiv(236.7毫克，0.5毫莫耳）之DCM溶液（10毫 升）以PyBop(417毫克，0.8毫莫耳）處理。於約室溫下攪拌 20分鐘後，將反應混合物以化合物xiii(139.5毫克，0.75毫 莫耳）之DMF溶液（5.6毫升），接著以DIPEA(0.174毫升，1 毫莫耳）處理。於約室溫下攪拌8小時後，以水使反應淬 滅，並以EtO Ac萃取。將所形成之有機層以鹽水洗滌，並 乾燥，及在真空中濃縮，獲得殘留物，將其藉矽膠層析砘 化（5% EtOH/ EtOAc)而得 ~320 毫克（100%)化合物 xxv，
中間物實例23-化合物XXvi 將化合物xxiv(355毫克，0.75毫莫耳）之DCM溶液（15毫 升）以PyBop(622毫克，1.2毫莫耳）處理。於約室溫下攪拌 143112.doc -205 - 1359145 20分鐘後，將反應混合物以化合物xxvii'(156毫克，0.75毫 莫耳）之THF溶液（10毫升），接著以DIPEA(0.26毫升，1.5毫 莫耳）處理。
於約室溫下攪拌過夜後，以水使反應淬滅，並以EtOAc 萃取。將所形成之有機層以鹽水洗滌並乾燥，及在真空中 濃縮，獲得殘留物，藉矽膠層析純化（2% EtOH/EtOAc)而 得〜400毫克（80%)化合物xxvi，
中間物實例24-5-氰基戊酸曱酯 使氰化鉀（4克，61.44毫莫耳）溶於70毫升水與200毫升曱 醇中。於此溶液中，添加10克（5 1.2毫莫耳）5-溴基戊酸曱 酯添加，並使混合物回流過夜。將反應混合物濃縮至乾 燥。於此殘留物中，添加100毫升EtOAc以萃取產物。將有 機物質以水洗滌三次，脫水乾燥及濃縮，產生5.37克 (74%)5-氰基戊酸曱酯，為油狀物。 中間物實例25-5-四唑-5-基戊酸曱酯 使5-氰基戊酸曱酯（4.8克，34毫莫耳）溶於甲苯中，添加 143112.doc -206- 1359145 二乙基乳化紅（14克’ 102宅莫耳）與豐氣化納（6.63，ι〇2毫 莫耳）。將混合物加熱至回流過夜。使反應混合物冷卻至 室溫’添加水，以自有機物質中萃取（3xl 〇〇毫升）5四唑_ 5-基戊酸曱酯。於水相中，添加濃HC1，以調整？1^至2。將 產物以EtOAc(3x50毫升），自水溶液萃取。合併有機相， 脫水乾燥及濃縮，產生4.25克（68%)5-四唑-5-基戊酸甲 酉旨。 中間物實例26-5-[Ν-(1，1-二甲基芊基）四哇_5_基]戊酸甲酉旨 使5-四唑-5-基戊酸曱酯（4.23克，23毫莫耳）與三氣醋酸 (8.69克，53毫莫耳）溶於50毫升CDCI3中。將α-甲基苯乙烯 (2.72,23毫莫耳）逐滴加入溶液中，並將反應混合物於約室 溫下攪拌過夜。將反應混合物以Et〇 Ac稀釋至200毫升，並 將有機層以10% K0H水溶液及鹽水洗滌。使有機層脫水乾 燥’濃縮。產物藉急驟式管柱層析純化，產生6.6克 (95%)5-[>^-(1，1-二曱基苄基）四唑_5_基]戊酸甲酯。 中間物實例27-5-[Ν-(1，1-二甲基苄基）四唑_5_基]戊酸 使5-[Ν-(1，1-二曱基苄基）四唑-5_基]戊酸曱酯（6 6克， 21.8毫莫耳）溶於曱醇（1〇〇毫升）中，並添加23毫升1]^ NaOH水溶液。將混合物攪拌過夜，及濃縮，以移除曱 醇。使殘留物溶於水（1〇〇毫升）中，並藉由添加相同當量之 1 N HC1水溶液，使溶液中和。產物以Et〇Ac萃取（3χ5〇毫 升）。使有機相乾燥及濃縮，產生4.75克（75%)5-[1^-(1，1-二 曱基苄基）四唑-5-基]戍酸。 中間物貫例28-化合物χχνiii 143112.doc -207- 1359145 使5-[1^-(1，1-二曱基芊基）四唑-5-基]戊酸（4.75克，16.5 毫莫耳）溶於DCM(100毫升）中，添加4.8克（24.8毫莫 耳）EDCI與6毫升DIPEA。添加N-羥基琥珀醯亞胺（3.8克， 33毫莫耳）至混合物中。將反應混合物於約室溫下攪拌三 小時。將混合物以DCM稀釋至200毫升，並將此溶液以水 洗滌三次。使有機物質乾燥及濃縮，產生4.79克（75%)化 合物 xxviii，
中間物實例29-化合物xxix 使二肽H-Val-Val-OH(3.22克，14.9毫莫耳）懸浮於50毫升 Ν,Ν-二甲基曱醯胺（DMF)中，並在添加3.4毫升（18.63毫莫 耳）二異丙基乙胺（DIPEA)之後，添加4.75克（12.42毫莫耳） 化合物xxviii。使混合物溫熱至40°C，並擾拌過夜。在高 真空下蒸發溶劑。使殘留物溶於EtOAc中，並以1 N HC1與 鹽水洗蘇，產生5.52克（91%)化合物xxix，
1431l2.doc 208 - 1359145 中間物實例30-化合物xxx 使1.6克（3.29毫莫耳）化合物乂乂1乂溶於20毫升〇€]\4中，添 加THF中之3.3毫升1 M DCC溶液。於混合物中添加500毫 克（2.73毫莫耳）化合物ν。將此混合物於約室溫下攪拌過 夜。將混合物以EtOAc稀釋至100毫升，並以1 N HC1、 NaHC03及鹽水洗滌。藉管柱層析純化（50% EtOAc/己 烧），產生1.02克（58%)化合物xxx，
XXX 中間物實例3 1 -化合物xxxi
使化合物χχχ(1·02克，1.57毫莫耳）溶於10毫升MeOH 中，並添加2毫升1 N NaOH水溶液。將混合物攪拌過夜。 藉蒸發移除甲醇，並使殘留物溶於水中，且以2毫升HC1中 和。在以EtOAc萃取之後，獲得100克（〜100%)化合物 xxxi °
中間物實例32-化合物xxxii 使化合物xxxi(300毫克，0.48毫莫耳）與PyBop(300毫 143112.doc - 209 - 1359145 克，0.58毫莫耳）溶於10毫升DCM中。於此溶液中，添加 化合物x(201毫克，0.58毫莫耳），然後添加DIPEA(104微 升）。將此混合物於約室溫下攪拌過夜。然後，將反應混 合物以EtOAc稀釋至100毫升，並以1 N HC1洗滌兩次，以 NaHC03兩次，及以鹽水三次。使有機物質脫水乾燥，及 濃縮。殘留物藉管柱層析純化（100% EtOAc)產生450毫克 (98%)化合物 xxxii，
中間物實例3 3 -化合物xxxiii 使化合物xxxii3 60毫克（0.3 8毫莫耳）溶於8毫升DCM中， 並添加240毫克（0.57毫莫耳）DMP試劑。將此混合物於約室 溫下攪拌三小時。將混合物以EtOAc稀釋至50毫升，並以 鹽水洗滌三次。產物藉管柱層析純化（25°/。乙醇/EtOAc)產 生300毫克（83%)化合物xxxiii，
中間物實例34-化合物xxxiy 143112.doc -210- 1359145 於χχχν(790毫克，2.80毫莫耳）之0014溶液（10毫升）中， 添加？丫8(^(1.7克，3.36毫莫耳）與11〇131)^(450毫克，3.36毫 莫耳）。
使所形成之溶液冷卻至〇°C，並以（s)-a-(4-吡啶基）乙胺 (410毫克，3.36毫莫耳）之DCM溶液（3毫升）處理。接著添 加DIPEA (0.5毫升，3.36毫莫耳）。將反應物在約室溫下攪 拌過夜。此時，將反應混合物以EtOAc稀釋。將整體以飽 和NaHC03與鹽水洗滌。使如此獲得之有機層乾燥，及在 真空中濃縮。所形成之殘留物藉矽膠層析純化（5% EtOH/ EtOAc)，以提供630毫克（58%)化合物xxxiv，
註：（s)-a-(4-吡啶基）乙胺係經由鹼洗（1 N NaOH)及接著 EtOAc萃取，得自其D-酒石酸鹽。回收率為89%。 中間物實例35-化合物xxxvi 於化合物xxxiv(630毫克，1.64毫莫耳）之甲醇溶液（15毫 升）中，在N2下，添加Pd/C(150毫克，10%鈀含量）。將反 應物於H2下攪拌過夜。使反應混合物經過Celite®521墊片 過濾。在真空中濃縮濾液，提供420毫克（〜100%)化合物 xxxvi 5 143112.doc •211 ·
1359145 中間物實例36-化合物xxxvii 於化合物xxxi(270毫克，0.43毫莫耳）之DCM溶液（3毫升） 中，添加PyBop(270毫克，0.52毫莫耳）。接著添加化合物 xxxvi(160毫克，0.64毫莫耳）與DIPEA(0.09毫升，0.52毫莫 耳）。將此反應物於約室溫下攪拌過夜。此時，將反應物 以EtOAc稀釋，並以0.1 N HC1，接著以飽和NaHC03及鹽 水洗滌。使所形成之有機層脫水乾燥，及濃縮，而得化合 物xxxvii (總質量430毫克），以供下一步驟使用
中間物實例3 7-化合物XXXviii 於化合物xxxvii(370毫克，0.43毫莫耳）之DCM溶液（3毫 升）中，添加DMP試劑（280毫克，0.65毫莫耳）。將此反應 物於約室溫下攪拌2小時，然後以10% Na2S03使反應淬 滅。在攪拌30分鐘後，將反應物以EtOAc萃取。有機層以 飽和NaHC03與鹽水洗滌。使所形成之有機層乾燥，及在 143112.doc -212- 1359145 真空中濃縮，獲得殘留物，使其藉矽膠層析純化（5% EtOH/EtOAc)，提供1 80毫克（49%，歷經2-步驟）化合物 xxxviii 5
中間物實例3 8-化合物xxxx 使化合物xxix(2.5克，5毫莫耳）溶於40毫升DCM中，將 5.1毫升1 Μ在THF中之DCC溶液添加至此溶液中。於此混 合物中，添加1.0 8克（3.53毫莫耳）化合物xxxix。將此混合 物於約室溫下攪拌過夜。
將混合物以EtOAc稀釋至100毫升，相繼以1 N HC1、 NaHC03及鹽水洗滌，然後藉管柱層析純化（80% EtOAc/己 烧），產生2.5 9克（95。/〇)化合物乂乂乂父，
143112.doc -213 - 1359145 中間物實例39-化合物xxxxi 使化合物xxxx(2.59克，3.35毫莫耳）溶於20毫升1^〇11 中，並添加4毫升1 N NaOH水溶液。將混合物攪拌過夜， 然後迴轉蒸發而留下殘留物。使殘留物溶於水中，並以2 毫升HC1中和。然後，將已中和之溶液以EtOAc萃取，產 生2.49克（〜100%)化合物xxxxi，
中間物實例40-化合物xxxxii 使化合物xxxxi(847毫克，1.16¾莫耳）與724毫克（1.39毫 莫耳）PyBop溶於10毫升DCM中。於此溶液中，添加化合物 xiii(260毫克，1.39毫莫耳），然後添加DIPEA(209微升）。 將此混合物於約室溫下攪拌過夜。接著，將反應混合物以 EtOAc稀釋至100毫升，並以1 N HC1洗滌兩次，以NaHC03 兩次，及以鹽水三次。使有機物質脫水乾燥及濃縮。使殘 留物藉管柱層析純化（5%乙醇/EtOAc)，產生930毫克（86%) 化合物xxxxii，
143112.doc -214· 1359145 中間物實例41 -化合物xxxxiii 使化合物xxxxii(350毫克，0.38毫莫耳）溶於10毫升DCM 中，並添加242毫克（0.57毫莫耳）DMP試劑。將此混合物於 約室溫下攪拌三小時。將混合物以EtOAc稀釋至50毫升， 並以鹽水洗滌三次。使產物藉管柱層析純化（100% EtOAc) 產生180毫克（51%)化合物xxxxiii，
中間物實例42-化合物xxxxv
使H-Val-Val-OH(5克，23毫莫耳）懸浮於100毫升DMF 中，添加化合物乂乂父父丨¥(8.3克，27.6毫莫耳）， I 〇 xxxxiv
然後添加6.2毫升（3 5.5毫莫耳）DIPEA。將混合物於40°c 下攪拌兩天。在高真空下移除溶劑，並使殘留物溶於100 毫升EtOAc中，並以1 N HC1洗滌三次，及以鹽水兩次。獲 得9.14克（99%)化合物乂乂乂乂¥。
143112.doc •215· 1359145 中間物實例43 -化合物xxxxvi 使化合物xxxxv(2.8克，7毫莫耳）與954毫克（7毫莫 耳）HOAt溶於100毫升DCM中。添加7毫升1 M DCC/DCM。 於此反應混合物中，添加化合物xxxix(2.15克），並將此反 應混合物於約室溫下攪拌過夜。使混合物濃縮至乾涸，並 使殘留物溶於EtOAc中，及藉管柱層析純化（1 00% EtOAc) 產生4.57克（95%)化合物xxxxvi，
中間物實例44-化合物xxxxvii 使化合物xxxxvi(4.57克，6.65毫莫耳）溶於10毫升丁卩八與 1 0毫升DCM中。將此混合物於約室溫下攪拌4小時。藉真 空移除溶劑，並使殘留物溶於50 : 50乙腈/水中，及凍 乾，產生粉末化合物xxxxvii，
中間物實例45-化合物xxxxviii 使化合物父乂乂乂乂叫1克，1.59毫莫耳）與990毫克（2.28毫莫 143112.doc -216- 1359145 耳）PyBop溶於20毫升DCM中，並添加1.6毫升1 Μ在THF中 之甲胺。將此混合物於約室溫下攪拌4小時。將反應混合 物以EtOAc稀釋至100毫升，並以1 N HC1、NaHC03及鹽水 洗滌。殘留物藉急驟式管柱層析純化（10% EtOH/EtOAc)產 生1克（98%)化合物父乂乂乂¥出，
中間物實例46-化合物xxxxix 使化合物xxxxviii(l克，1.55毫莫耳）溶於10毫升MeOH 中，並添加2毫升1 N NaOH。將此混合物於約室溫下攪拌 過夜。藉蒸發移除溶劑。使殘留物溶於水中，中和並以 EtOAc萃取，產生960毫克（98%)化合物xxxxix，
中間物實例47-化合物li 使化合物xxxxix(315毫克，0.5毫莫耳）與312毫克（0·6毫 莫耳）PyBop溶於10毫升DCM中。添加化合物1(56毫克， 〇·6毫莫耳）與108微升DIPEA。 143112.doc -217- 1359145
t 將混合物在約室溫下攪拌過夜，並以EtOAc稀釋至100 毫升，及以1 N HC1、NaHC03及鹽水洗滌。藉管柱層析純 化（15% EtOH/EtOAc)產生 400 毫克（92%)化合物 li，
中間物實例48-化合物lii 使化合物li(400毫克，0.46毫莫耳）溶於10毫升DCM中， 並添加292毫克（0.69毫莫耳）DMP試劑。將此混合物於約室 溫下攪拌3小時。藉蒸發移除溶劑，並藉RP-HPLC純化產 物，產生130毫克（32%)化合物lii，
中間物實例49-化合物liii 使化合物xxxxix(210毫克，0·33毫莫耳）與208毫克（0·4毫 莫耳）PyBop溶於10毫升DCM中。添加化合物xiii(154毫 克，0.83毫莫耳）至此溶液中，接著添加DIPEA(72微升， 143112.doc -218- 1359145 0.4毫莫耳）。將此混合物於約室溫下攪拌過夜。將反應混 合物以EtOAc稀釋至100毫升，以1 N HC1、NaHC03及鹽水 洗滌，然後藉急驟式管柱層析純化（10% EtOH/EtOAc)產生 250毫克（95%)化合物liii，
中間物實例50-化合物liv 使化合物xxxxv(755毫克，1.88毫莫耳）與255毫克（1.88毫 莫耳）HOAt溶於20毫升DCM中。添加1.88毫升1 Μ DCC/DCM。於反應混合物申，添加化合物ν(288毫克），並 將此反應混合物於約室溫下攪拌2小時。使混合物濃縮至 乾涸，並使殘留物溶於EtOAc中，及藉管柱層析純化（80% EtOAc/己烷），產生800毫克（90%)化合物liv，
中間物實例51-化合物lv 使化合物liv(800毫克，1.41毫莫耳）溶於10毫升MeOH 中，並添加2毫升NaOH。將此混合物於約室溫下攪拌過 143112.doc -219- 1359145 夜。藉真空移除溶劑，並使殘留物溶於水中 τ，及以2毫升1 N HC1中和。將產物以Et〇Ac萃取。蒸發萃取溶劑，獲得 760毫克（~1〇〇%)1ν，
中間物實例52-化合物lvii
使化合物lv(760毫克，1_41毫莫耳）與88〇毫克（1 69毫莫 耳）PyBop溶於5毫升DCM中。將化合物lvi(53〇毫克，2 12 毫莫耳）添加至此溶液中’然後添加0.3 1毫升DIPEA。 將此混合物於約室溫下攪拌過夜。將反應混合物以 EtOAc稀釋至100毫升，以1 N HCM、NaHC03及鹽水洗滌， 然後藉急轉式管柱層析純化（100% EtOAc)產生870毫克 (80°/〇)化合物 lvii，
中間物實例53-化合物lviii 143112.doc •220- 1359145 使化合物lvii(350毫克，0.45毫莫耳）溶於5毫升TFA與5 毫升DCM中，並將此混合物於約室溫下攪拌3小時。藉蒸 發移除溶劑，並藉RP-HPLC純化產物，產生220毫克（69%) 化合物lviii，
中間物實例54-化合物lix 使化合物lviii(200毫克，0.28毫莫耳）與218毫克（0.42毫 莫耳）PyBop溶於5毫升DCM中。添加甲胺（0.28毫升，2M， 在THF中）。將此混合物於約室溫下攪拌過夜。將混合物以 EtOAc稀釋至100毫升，以1 N HC1、NaHC03及鹽水洗滌， 然後藉管柱層析純化（15% EtOH/EtOAc)產生168毫克 (79%)lix，
中間物實例55-化合物lx 使化合物lviii(200毫克，0.26毫莫耳）溶於4毫升DCM 中，並添加165毫克（0.39毫莫耳）DMP試劑。將此混合物於 143112.doc -221 - 1359145 約室溫下攪拌3小時《藉蒸發移除溶劑。使殘留物溶於 50¾乙腈/水中’並藉由rP_hPlc過濾純化，產生140毫克 (70%)化合物ιχ，
中間物實例56-化合物ii 使化合物i(4克，12.1毫莫耳）之DCM(30毫升）與EtOH(30 毫升）溶液’於N2下冷卻至-l〇°C。添加NaBH4(458毫克， 12.1毫莫耳），並將此溶液於-1〇»c下攪拌5〇分鐘。 TLC(50% EtOAc/己烷）顯示全部轉化成較缓慢之流動點。 以冰，然後以冷飽和NH4C1溶液（10毫升），使反應小心地 淬滅。將混合物傾倒於DCM(3 00毫升）中。將有機層以飽 和ΝΗβΙ溶液（60毫升）洗滌一次，及以鹽水兩次（6〇毫升）。 然後使有機層分離，以MgS〇4脫水乾燥，及在真空中濃 縮’產生3.5克化合物丨丨（87〇/〇) 中間物實例57-化合物lxi 在裝有H2氣之250毫升圓底燒瓶中，使化合物ϋ(3.5克， 10.5毫莫耳）之含乙醇溶液（50毫升）接受標準氫化條件[2〇〇/〇 Pd(〇H)2/C(l.47克，2.1毫莫耳）]，在約室溫下歷經5小時。 經過矽藻土濾出觸媒，並以DCM洗滌。然後，在減壓下移 除溶劑，產生2克（96%)化合物lxi， I431I2.doc •222· 1359145
中間物貫例58-化合物ΐχϋ 在惰性大氣下，將化合物lxi(2〇〇毫克，1毫莫耳）、化合 物 lxiii
OH Ixiii (233毫克’ 1·1耄莫耳）、H〇At(l-經基-7-氮苯并三 。坐）（156毫克’ 1.15毫莫耳）在無水DMF(6毫升）中之溶液， 搜拌20分鐘。然後’使溫度降至〇〇c，接著添加DIC(〇 18 毫升’ 1 · 15毫莫耳）^將反應物在約室溫下攪拌過夜。將此 溶液以EtOAc稀釋，然後以i n HC1洗滌兩次，以飽和 NaHC03水溶液兩次，及以鹽水洗滌。分離有機層，以 MgS〇4脫水乾燥，及在減壓下移除溶劑。將殘留物藉層析
(矽膠：70% EtOAc/DCM)純化，以45%產率獲得化合物 lxii 〇
OH
中間物實例59-化合物lxiv 將在二氧陸圜（6毫升）中之化合物lxii(777毫克，2毫莫 耳）溶液與0.5 M NaOH(6毫升），於約室溫下攪拌5小時。 143112.doc -223 - 1359145 藉TLC (100% EtOAc)檢視，顯示完全轉化成一個光點，在 起點處。將反應物以冰浴冷卻下來，接著添加1 N HC1(4 毫升）。然後添加固體NaCn，並將整體混合物以EtOAc萃取 兩次（2x150毫升）。然後，合併有機萃液，以MgS04脫水 乾燥，及在減壓下移除溶劑，以92%產率獲得化合物 lxiv °
0H
中間物實例60-化合物lxv 在惰性大氣下，將化合物x(203毫克，0.58毫莫耳）、化 合物lxiv(276毫克，0.775毫莫耳）、HOAt(l-羥基-7-氮苯并 三唑）（126毫克，0.93毫莫耳）在無水DMF(6毫升）中之溶 液，攪拌20分鐘。然後，使溫度降至0°C .，接著添加 DIC(0.14毫升，0.93毫莫耳）。將反應物在約室溫下攪拌過 夜。將溶液以EtOAc稀釋，然後以1 N HC1洗滌兩次，以飽 和NaHC〇3水溶液兩次，及以鹽水洗滌。分離有機層，以 MgS〇4脫水乾燥，及在減壓下移除溶劑。將殘留物藉層析 純化（矽膠：50% EtOAc/DCM 至 80 : 19 : lEtOAC/DCM/ MeOH)，以62%產率獲得化合物lxv。 143112.doc - 224 - 1359145
中間物實例61-化合物lxvi
在惰性大氣下，於化合物lxv(287毫克，0.42毫莫耳）在 無水DCM(15毫升）中之溶液内，添加DMP試劑（605毫克， 1.43毫莫耳）。將反應物在約室溫下攪拌2小時。（註-DMP 試劑之量與反應時間加倍，係為確保兩個醇基完全被氧化 成其相應之酮基）。藉TLC(矽膠·· 2% MeOH/EtOAc)檢視， 顯示.完全轉化成較快速產物。將反應物以DCM稀釋（150毫 升），然後以10°/◦亞硫酸鈉水溶液洗滌兩次（2X50毫升），以 飽和NaHC〇3水溶液兩次，及以鹽水洗滌。分離有機層， 以]\4§304脫水乾燥，及在減壓下移除溶劑。將殘留物藉層
析純化（矽膠：50% fitOAC/DCM至 80: 19: lEtOAC/DCM/ MeOH)，以77%產率獲得化合物lxvi。
中間物實例62-化合物lxvii 於L-3苯基乳酸（2克，12毫莫耳）之DCM溶液（60毫升） 中，添加PyBop(7.5克，14.4毫莫耳）。於此溶液中，添加 143112.doc -225 - 1359145 含有L-纈胺酸曱酯HC1(2.4克，14.4毫莫耳）與DIPEA(2.6毫 升’ 14.4毫莫耳）之DCM溶液（20毫升）。將所形成之反應混 合物於約室溫下攪拌過夜。此時，將反應物以EtOAc稀釋 (3〇毫升），以NaHCO3(30毫升）與鹽水（15毫升）洗滌。將有 機層以Na2S04乾燥’過濾及濃縮。於矽膠上，在5〇〇/0
EtOAe/己烷中，達成純化’獲得2.97克（89%)化合物 lxvii，
lxvii
中間物實例63-化合物lxviii 使化合物lxvii(2.97克，10·6毫莫耳）溶於DCM(50毫升） 中’並以冰浴冷卻。於此溶液中添加TBSC1(2.1克，13.8毫 莫耳），接著為咪唑（0.94克，13.8毫莫耳將所形成之溶
液攪拌過夜。然後，將反應物以EtOAc(50毫升）稀釋，以 NaHC〇3與鹽水洗滌。將有機層以NajCU脫水乾燥，過據 及濃縮。在20% EtOAc/己烷中，於矽夥上，達成純化，獲 得 3.79克（90%)化合物 lxviii。
中間物實例64-化合物lxix 於化合物lxviii(3.78克，9.6毫莫耳）之甲醇（5〇毫升）溶液 中，添加1 N NaOH水溶液（14_4毫升，14.4毫莫耳）。將所 143112.doc •226· 1359145 形成之溶液攪拌過夜。於真空中部份移除溶劑。然後，使 用1 N HC1水溶液，使反應混合物之pH值降至3。將此溶液 以EtOAc與鹽水稀釋。將所要之產物以EtOAc萃取（3x50毫 升）。合併有機層，以Na2S04脫水乾燥，過濾及濃縮，而 得3.5克（96%)化合物1乂1乂，
中間物實例65-化合物lxx
於含有化合物lxix(l_l克，2.9毫莫耳）之DCM(15毫升）溶 液中，添加11〇八40.44克，3.2毫莫耳），接著為〇(：(：(3.2毫 升，3.2毫莫耳）在DCM中之1 Μ溶液。於約室溫下攪拌20 分鐘後，添加化合物xxxix(970毫克，3.2毫莫耳）之 DCM(15毫升）溶液。將此反應物於化下攪拌過夜。然後， 將反應物以EtOAc(30毫升）稀釋，經過矽膠墊過濾，以0.1 N HC1、NaHC03及鹽水洗滌。將有機層以Na2S04乾燥，過 濾，及在真空中濃縮。在50% EtOAc/己烷中，於矽膠上， 達成純化，獲得1.5克（77%)化合物lxx，
中間物實例66-化合物lxxi 143112.doc -227- 於化合物xx(1.5克，2.4毫莫耳）之曱醇溶液（30毫升）中， 添加1 N NaOH水溶液（3.6毫升，3.6毫莫耳）。將所形成之 溶液攪拌過夜。此時，部份移除溶劑，並使用1 N HC1水 溶液，使反應混合物之pH值調整至3。然後，將反應物以 EtOAc (50毫升）與鹽水（20毫升）稀釋。將水層以EtOAc萃取 (3x50毫升）。將有機層合併，以Na2S04脫水乾燥，過濾及 濃縮，提供1.3克（92%)化合物lxxi，
中間物實例67-化合物lxxii 於含有化合物lxxi(180毫克，0.28毫莫耳）之DCM(2毫升） 溶液内，添加PyBop(175毫克，0.34毫莫耳）與DIPEA(0.06 毫升，0.34毫莫耳），接著為化合物x(l 50毫克，0.41毫莫 耳）之DCM溶液（3毫升）。將所形成之溶液，於N2下攪拌過 夜。然後，將反應物以EtOAc(30毫升）稀釋，以NaHC03與 鹽水洗滌。將有機層以Na2S04脫水乾燥，過濾及濃縮。在 100% EtOAc中，於矽膠上達成純化，獲得270毫克（98%) 化合物lxxii， 143112.doc -228- 1359145
乂 中間物實例68-化合物lxxiii 於化合物lxxii(270毫克，0.27毫莫耳）2DCM(3毫升）溶 液中’添加DMP試劑（140毫克’ 0.33毫莫耳）。於約室溫下 攪拌1.5小時後’以10% NhSO3使反應淬滅（1〇毫升）。將反 應物以EtOAc稀釋（30毫升）並攪拌10分鐘。有機層以 NaHC〇3與鹽水洗蘇。將有機層以NajO4乾燥，過渡及濃 縮。在60% EtOAc/己烷中，達成純化，獲得15〇毫克（56〇乂)
中間物實例69-化合物lxi 於化合物ii(3.5克，10.5毫莫耳）之乙醇溶液（5〇毫升）中， 在氮氣流下，添加Pd(OH)2/C(1.47克，20% Pd含量，2 1毫 莫耳）。使反應物在1大氣壓力下，接受氩化作用。於完成 143112.doc -229· 1359145 時’將觸媒經過石夕藻土墊過濾’並以二氣曱烷洗滌。在真 空中濃縮濾液，而得2克（96%)化合物lxi。 中間物實例70-化合物lxxiv 於化合物vii(9.1克，28.2毫莫耳）之0]^1?溶液（6〇毫升） 中，添加HOAt(4克，29.4毫莫耳）與1，3_雙丙基碳化二亞胺 (3.7克，29.4毫莫耳卜於約室溫下攪拌3〇分鐘後，將化合 物lxi(5.1克，25.6毫莫耳）之〇1^?溶液（1〇毫升）添加至上述 溶液中。將此反應物於約室溫下攪拌過夜。此時，滤除白 色固體。在真空中濃縮濾液，而得殘留物，將其藉矽膠層 析純化，獲得9.5克（67%)化合物lxxiv，
中間物實例71 -化合物Ιχχν 於化合物lxxiv(1.5克，3毫莫耳）在無水THF(25毫升）中之 溶液内，在約室溫下，添加EtiPr2N(〇 78毫升，4 5毫莫 耳）。使混合物冷卻至0 C，並以逐滴方式添加m〇MC1( 1.5 毫升，19.7毫莫耳）。使反應物溫熱至室溫，並攪拌過夜。 然後，將此溶液以醚稀釋，並以水洗滌（3次）。將水層進一 步以趙萃取，並使所有之有機層以MgS〇4脫水乾燥，然後 濃縮而得黃色油。藉矽膠層析（Et〇Ac/己烷5/2)，以4〇%產 率，分離化合物Ιχχν所要之異構物，且明顯地分離非對映 異構物。 143112.doc -230-
OMOM
中間物實例72-化合物lxxvi 於化合物lxxv(502毫克，0.9毫莫耳）在EtOH(5毫升）中之 溶液内，在〇°C下逐滴添加2 N NaOH水溶液（0.9毫升，1.8 毫莫耳）。使反應物溫熱至室溫，並攪拌過夜。於皂化作 用完成時，以Dowex50W8X-200睃性樹脂，使溶液酸化至 pH3。濾除.固體，並在真空中濃縮所形成之濾液，而得油 狀殘留物，使其凍乾而得370毫克（80%)化合物lxxvi，
OMOM
中間物實例73-化合物lxxvii 將化合物lxxvi(110毫克，0.21毫莫耳）之二氣甲烷溶液（4 毫升）以卩丫8〇?(2〇0毫克，0.3 8毫莫耳）處理。於約室溫下攪 拌30分鐘後，在反應混合物中添加化合物xiii(60毫克， 0.32毫莫耳）之THF溶液（3·2毫升），接著為EtiPr2N。於攪拌 過夜後，在約室溫下以水使反應淬滅，並以EtOAc萃取。 將所形成之有機層以鹽水洗滌並以MgS〇4脫水乾燥，然後 濃縮成黃色油。藉矽膠層析純化（5°/。EtOH/EtOAc)產生143 毫克（100%)化合物lxxvii， 143112.doc -231 - 1359145
中間物實例74-化合物lxxviii 於H-CHg-OH2(5克，19·4毫莫耳）之THF溶液（50毫升） 中，添加 HOBt(2.63 克 ’ 19.4毫莫耳）與 EDCI(3.72 克，19.4 毫莫耳）。於約室溫下攪拌20分鐘後，將含有第三_L_白胺 酸甲酯鹽酸鹽（I9,4毫莫耳）與DIPEA(6_75毫升，38.8毫莫 籲 耳）之THF(19毫升）與DMF(10毫升）溶液，添加至上述溶液 中。將反應物於約室溫下授拌過夜。標準水溶液處理及石夕 膠層析（15-20% EtOAc/己烷）’獲得2.27克（30%)化合物 lxxviii »
lxxviii 中間物實例75-化合物ixxix 於化合物iXXViii(2.27克，5·91毫莫耳）之THF溶液（12毫 升）中，添加二氧陸圜中之4 N HC1溶液（7 38毫升，Μ 5毫 莫耳）。將反應物於約室溫下攪拌過夜。此時，在減壓下 移除浴劑，產生化合物1χχίχ，將其直接使用於下一反應。 143II2.doc -232 1359145
中間物實例76-化合物lxxx
於化合物lxxix(5.9毫莫耳）之THF溶液中，添加含有2-吡畊羧酸（878毫克，7_08毫莫耳）、：《〇31(957毫克，7.08毫 莫耳）及EDCI(1.36克，7.08毫莫耳）之1'1^(20毫升）溶液。 然後，在所形成之混合物中，添加DIPEA(2.05毫升，11.8 毫莫耳）。將反應物在約室溫下攪拌過夜，然後以水使反 應淬滅。將反應混合物以EtOAc萃取。有機層以鹽水洗 滌，及在真空中濃縮，以提供殘留物，將其藉矽膠層析純 化（40-5 0% EtOAc/己烷），以提供1克（36%)化合物lxxx，
lxxx 中間物實例77-化合物lxxxi 於化合物lxxx(l克，2.56毫莫耳）之曱醇溶液（20毫升） 中，添加2 N NaOH(3.2毫升，6.4毫莫耳）。將此反應物於 約室溫下攪拌過夜。此時，使用5 N HC1，使反應物酸化 至pH3。將反應物以EtOAc稀釋（75毫升），並以水及鹽水洗 滌。使如此獲得之有機層脫水乾燥，及在真空中濃縮，獲 得殘留物，使其溶於1 : 1CH3CN/H20中，以供冷凍乾燥。 143112.doc - 233 - 1359145 總計獲得〜1克（100%)化合物lxxxi β
中間物實例78-化合物lxxxii 將化合物lxxxi(2.56毫莫耳）之二氯甲烷溶液（10毫升）以 HOAt(348 毫克，2.56 毫莫耳）及 DCC(2.56 毫升，1 Μ，2.56 毫莫耳）處理。在攪拌30分鐘後，將反應混合物以化合物 ν(2·56毫莫耳）之THF溶液（5毫升）處理。於約室溫下攪拌過 夜後’藉過濾移除白色固體（脲）。在真空中濃縮濾液，而 得殘留物，使其藉矽膠層析純化，提供1 4克（1〇〇%)化合 物 lxxxii，
中間物實例"79-化合物丨xxxiii 將化合物uxxii(1.4克’ 2·58毫莫耳）之乙醇溶液（i5毫升） 5·Π毫莫耳）處理。於約室溫下授
以 2 N NaOH(2.58毫升， 拌過夜後，以酸性掩f· . 143112.doc •234· 1359145
lxxxiii 中間物實例80-化合物lxxxiv 將化合物lxxxiii(360毫克，0·7毫莫耳）之二氯曱烧溶液 (15毫升）以PyBop(582毫克，1.12毫莫耳）處理。於約室溫 下搜摔20分鐘後’將反應混合物以化合物χϋΐ( 195 6毫克， 1.05毫莫耳）之THF溶液（10毫升），接著以DIPEA(0 25毫 升’ 1.40毫莫耳）處理。於約室溫下攪拌過夜後，以水使反 應淬滅，並以EtOAc萃取。將所形成之有機層以鹽水洗 條，並乾燥，及在真空中濃縮，獲得殘留物，使其藉石夕膠 層析純化（3% EtOH/EtOAc)，而得420毫克（88%)化合物 lxxxiv >
中間物實例81-化合物ii，，， 使無水二氯甲烷與醚（20毫升：2〇毫升）之混合物，於 N2(氣肢）下冷卻至78。〇。於此溶液中，添加丁^丨以μ，在 二氣曱烷中，10毫升，10毫莫耳），然後添加MeLi(1 4 M在醚中，7.1毫升，10毫莫耳），接著於-78°C下再攪拌 刀鐘將化合物i(2克，6毫莫耳）在1〇毫升二氯甲院中之 143112.doc • 235 · 溶液，逐滴添加至該混合物中，於相同溫度下歷經1 5分 鐘。將此溶液慢慢溫熱至_4(TC，歷經1〇分鐘，然後在〇°C 下攪拌2小時。藉由將混合物傾倒至水/醚混合物（1 : 1) 中’使反應淬滅，然後使液層分離❶將水層進一步以醚萃 取兩次。將全部有機層以水、鹽水洗滌，並以MgS04脫水 乾燥，然後濃縮成黃色油。藉矽膠層析（EtOAc/己烷2/1)， 分離所要之化合物_ii，"，83%。
中間物實例82-化合物lxi· 於化合物iin’（1.7克’ 5毫莫耳）中添加1〇重量％ pd/C(0.53 克’ 0.5¾:莫耳）’接者添加MeOH( 17亳升）。使氫氣溢流經 過反應混合物’並保持鼠氣’以在1大氣壓下反應過夜。 然後，將反應混合物過濾及濃縮，而得929毫克（87%)化合 物lxi’，為無色油。
中間物實例83-化合物lxxxv 於化合物xxii(l克’ 3¾莫耳）之thf溶液（16毫升）中，在 約室溫下添加HOAt(0.41克，3毫莫耳），及接著為二氣甲 烷之1 M DCC溶液（3毫升’ 3毫莫耳）。在約室溫下攪拌3〇 分鐘後，將化合物bd'之二氯曱烷溶液（6毫升）添加至上述 143112.doc •236. 1359145 HOAt活化之酸中。將反應物於約室溫下攪拌過夜。此 時，使反應物經過矽藻土過濾。將濾液以EtOAc(120毫升） 稀釋，並以水，然後以鹽水洗滌。使有機層脫水乾燥及濃 縮成黃色油，使其藉矽膠層析純化（100% EtOAc)，產生1 克（65%)化合物lxxxv，
中間物實例84-化合物lxxxvi 於化合物lxxxv(920毫克，1.7毫莫耳）之乙醇溶液（8毫升） 中，添加2 N NaOH水溶液（1.7毫升，3.4毫莫耳）。將反應 物在約室溫下攪拌過夜，然後藉由Dowes酸性樹脂，酸化 至pH3。濾除固體，並使濾液濃縮，獲得無色油，使其再 溶解於1 : 1CH3CN/H20中，並凍乾而提供800毫克（93%)化 合物lxxxvi。HPLC顯示單一產物♦。
Ixxxvi 中間物實例85-化合物Ixxxvii 於化合物lxxxvi(150毫克，0.3毫莫耳）之二氯曱烷溶液（4 毫升）中，添加PyBop(250毫克，0.47毫莫耳）。將此溶液於 約室溫下攪拌30分鐘。然後，於此溶液中添加化合物 xiii(84毫克，0.45毫莫耳）之THF(4.5毫升）溶液，接著為 EtiPr2N(0.1毫升，0.6毫莫耳）。將此反應物於約室溫下攪 143112.doc -237 - 1359145 拌過夜，然後以水（25毫升）使反應淬滅，歷經30分鐘。接 著以EtOAc萃取混合物。將所形成之有機層以鹽水洗滌， 並以MgS04脫水乾燥，然後濃縮成黃色油。藉矽膠層析純 化（5% EtOH/ EtOAc)產生 200 毫克（100%)化合物 lxxxvii，
中間物實例86-化合物lxxxix 使化合物lxxxviii，N-Cbz-L-纈胺酸（2.5克，9.9毫莫耳）溶 於THF(30毫升）中。
添加 EDCI(2.29 克，11_9 毫莫耳）與 HOBt(1.62 克，11.9 毫 莫耳），並將混合物攪拌五分鐘。在THF(23.9毫升）中添加 L-第三-白胺酸曱酯鹽酸鹽（2.17克，11.9毫莫耳），接著為 DIPEA(2.1毫升）。將反應混合物於氮氣下攪拌過夜。將反 應混合物以醋酸乙酯稀釋，以1 N HC1、飽和碳酸氫鈉及 鹽水洗滌。將有機相以硫酸鈉脫水乾燥，過濾及濃縮。使 濃縮殘留物在25%醋酸乙酯/己烷中純化，而得1.1克（29%) 化合物lxxxix， 143112.doc -238- 1359145
中間物實例87-化合物lxxxx 使化合物lxxxix在標準條件下，使用曱醇（0.3 Μ)與1 N NaOH (1.5當量）水解，而得1.03克（95%)化合物lxxxx，
中間物實例88-化合物lxxxxi 使化合物lxxxx(385毫克，1.06毫莫耳）溶於二氣曱烷（3毫 升）中。添加DCC(1.4毫莫耳），接著為HOAt(190毫克，1.4 毫莫耳）。然後，在二氯甲烷（3毫升）中添加化合物v(260毫 莫耳）。將所形成之混合物於氮氣下攪拌過夜。將反應物 以醋酸乙酯稀釋，經過矽膠過濾及濃縮。使殘留物在50%
醋酸乙酯/己烷中純化，而得440毫克（80%)化合物lxxxxi，
中間物實例89-化合物lxxxxii 使化合物lxxxxi在標準條件下，使用乙醇（0.3 Μ)與1 N NaOH (1.5當量）水解，而得390毫克化合物lxxxxii， 143112.doc -239 -
1359145 中間物實例90-化合物lxxxxiii 使化合物lxxxxii(350毫克，0.7毫莫耳）溶於二氣曱烷（3 毫升）中。添加PyBOP(480毫克，0.91毫莫耳），接著為化 合物xiii (170毫克，0.91毫莫耳）。添加DIPEA(0.16毫升， 0.91毫莫耳），並將反應混合物攪拌過夜。使反應混合物濃 縮，並在100%醋酸乙酯中純化，而得420毫克（90°/〇)化合 物 lxxxxiii，
中間物實例9 1 -化合物lxxxxiv 使用10% Pd/C(l%莫耳），在甲醇中，於氫氣下，使化合 物lxxxxiii氫化，而得335毫克（100%)化合物lxxxxiv，
中間物實例92-化合物lxxxxv 使1H-四唑-5-醋酸乙酯（5克，32毫莫耳）溶於氯仿（80毫 升）中。添加三氣醋酸（12.03克，73.65毫莫耳），接著為α曱 143112.doc -240- 1359145 基苯乙烯（3.78克，32毫莫耳）。將反應混合物攪拌過夜。 隔天，以醋睃乙酯稀釋此溶液，以10% KOH及鹽水洗滌。 使有機相以硫酸鎂脫水乾燥，過濾及濃縮，而得8克（96%) 相應經N-保護之四唑-5-醋酸乙酯。使用乙醇（0.3 M)與1 N NaOH(3當量），使此物質接受標準水解條件，而得7克 (99%)化合物 lxxxxv，
lxxxxv 中間物實例93-化合物lxxxxvi 使化合物1χχχχν(3·62克，14.7毫莫耳）溶於二氣曱烷（50 毫升）中。添加EDCI(4.32克，22.1毫莫耳）與DIPEA(5.1毫 升，29.4毫莫耳），並攪拌五分鐘。添加N-羥基琥珀醯亞胺 (3.38克，29.4毫莫耳），並攪拌三小時。將反應物以二氣 曱烧稀釋，並以水洗蘇三次。有機相以硫酸納脫水乾燥， 過渡及濃縮，而得3.66克（73%)化合物lxxxxvi，
中間物實例94-化合物lxxxxvii 使化合物lxxxxiv(335毫克，0.62毫莫耳）與化合物 lxxxxvi(343毫克，1毫莫耳）溶於二氣曱烧（6毫升）中。添加 143112.doc •24卜 1359145 DIPEA(0.17毫升，1毫莫耳），並將反應混合物攪拌過夜。 將反應物以醋酸乙酯稀釋，以飽和碳酸氫鈉、鹽水洗滌， 及濃縮。使殘留物在5%乙醇/醋酸乙酯中純化，獲得80毫 克（16%)化合物 lxxxxvii，
中間物實例95-化合物lxxxxviii 使化合物lxxxxvii (80毫克，0.11毫莫耳）溶於二氣曱烧（3 毫升）中。添加DMP試劑（55毫克，0.13毫莫耳）並攪拌一小 時。將反應混合物以醋酸乙酯稀釋，並以1 0%亞硫酸鈉溶 液，使反應淬滅。有機相以飽和碳酸氫鈉及鹽水洗滌。使 有機相濃縮，並將所形成之殘留物在100%醋酸乙酯中純 化，而得40毫克（48%)化合物lxxxxviii，
中間物實例96-化合物xxxix 使化合物ic,N-Cbz-4-經基Pro甲酯 143112.doc -242- 1359145
OH (2.1克，7.9毫莫耳，以定量產率製自化合物(：,：^-(^2-4-羥基Pro)溶於DCM(25毫升）中。
OH
CbzN^/
〇夂OH
OMe ic
C 將CDI(1.54克，9_5毫莫耳）與DIPEA(1.7毫升，9.5毫莫 耳）添加至該溶液中，並攪拌10分鐘。將1，2,3,4-四氫異 喳啉（TIQ) (1.2毫升，9.5毫莫耳）逐滴添加至反應混合物 中，並攪拌五小時。有機相以水、1 N HC1及鹽水洗滌。 在使有機相濃縮之後，藉由40% EtOAc/己烷，使所形成之 殘留物以層析方式純化，產生化合物ci,N-Cbz-4-TIQ羰基 氧基-Pro甲酯（2.5克，75%)。
ci 使化合物ci(2.5克，5.9毫莫耳）溶於MeOH(75毫升）中。 將此溶液以N2溢流，並添加Pd/C(10%，300毫克）。將反應 混合物以H2溢流，並攪拌過夜。使反應混合物經過矽藻土 過渡，及濃縮，產生化合物xxxix,4-(TIQ-幾基氧基）-Pro甲 143112.doc -243 - 1359145 酯（1.49克，83%)。 中間物實例97-化合物vii 使化合物cii，N-吡畊-2-基羰基-Val-Val曱酯（10.9克，32.4 毫莫耳）溶於THF(80毫升）中，然後添加NaOH水溶液（48.6 毫升，48.6毫莫耳）。
將所形成之混合物攪拌48小時，然後添加另外之 鲁 Na〇H( 16_3毫升’ 16.3毫莫耳），並將混合物加熱至40°C， 歷經三小時。然後，使反應混合物之pH值降至3，並將水 相以EtOAc萃取，然後濃縮，產生粗製化合物vii,N-吡畊_ 2-基羰基-Val-Val 酸（10.6 克，100%)。 中間物實例98-化合物ciii 使化合物cii(4.1克，12.7毫莫耳）溶於DCM(20毫升）中。 將HOAt(1.73克，12.7毫莫耳）與DCC(12.7毫莫耳）添加至此 溶液中，並將此溶液攪拌一小時。將化合物xxxix(3 22 # 克，10.6毫莫耳）添加至DCM中之反應混合物（1〇毫升）内。 將所形成之混合物於N2下攪拌過夜。使反應混合物經過石夕 膠過濾及濃縮。所形成之殘留物藉矽膠層析純化（5〇%至 80% EtOAc/己烷梯度液），產生化合物cin，N_吡唯_2_基幾 基-¥&1-乂31-4-(丁1()羰基氧基）_?1*〇甲酯（5.27克，81.70/0)。 143112.doc •244·
1359145 中間物實例99-化合物Civ 使化合物ciii(650毫克，丨.29毫莫耳）溶於THF(5毫升） 中。將NaOH水溶液（1.42毫升，1_42毫莫耳）添加至溶液 中’然後攪拌過夜《使溶液之pH值降至3，並分離有機 相’及濃縮’產生殘留物。殘留物使用逆相HPlc在乙腈/ 水中純化，產生化合物civ,N-吡畊_2_基羰基_Val_Val_4_ (TIQ赛基氧基）-Pro酸（600毫克，95%)。
中間物實例100-化合物CV 使N_Boc-L-第三-白胺酸（2·3克，1〇毫莫耳）與1_第三·白 胺酸甲酯鹽酸鹽（2克，11毫莫耳）合併在DMF(3〇毫升）中。 然後’將HOAt(1.6克’ 11.5毫莫耳）添加至溶液中。將所形 成之混合物於A下攪拌20分鐘，然後降至〇°c，於其中添 加DIC (1.8毫升，11.5毫莫耳）與2,4,6-三甲基吡啶（1 45毫 升’ 11毫莫耳）。將所形成之溶液攪拌過夜，且溫熱至室 143112.doc -245 - 1359145 溫。將反應混合物以EtOAc稀釋，並將有機相以i NHCl、 飽和NaHC〇3及鹽水洗蘇。在濃縮有機相之後，將所形成 之殘留物藉由20%-30%Et〇AC/己烷梯度液，以層析方式純 化，產生化合物cv(3.3克，92°/〇)。
中間物實例101-化合物 cvi 使用二氧陸圜（40毫升）與〇.5 N Na〇H(37毫升，i8 4毫莫 耳）’使化合物cv(3.3克，9.2毫莫耳）水解，產生化合物 cvi(2‘9克，92%) °
中間物實例102-化合物cvii 使化合物cvi(2克，5.8毫莫耳）與化合物ν(ι克，$ 5毫莫 耳）溶於DMF(2〇毫升）中。_，將H〇At(832^，以毫 莫耳）與DIC(1.1毫升，6·6毫莫耳）添加至該溶液令。將所 形成之★液於A下攪拌過夜。將反應混合物以稀 釋，並將有機相以1 Ν ΉΤ1丨< χγ TT/r^ n HC1、飽和NaHC03及鹽水洗滌。在 濃縮有機相之後，將所并；# ^ 灯所形成之殘留物，藉由20%-30%
EtOAc/ 己烧梯度液，.7 a ^ _l-,, 以層析方式純化，產生化合物 cvii(2.4克，81%)。 143112.doc •246· 1359145
中間物實例103-化合物cviii 使化合物cvii(2.4克，4.72毫莫耳）溶於DCM(i〇毫升） 中L將TFA(10毫升）添加至溶液中。將所形成之溶液攪拌4 小蛉。使反應混合物濃縮，溶於Et〇Ac中然後將有機相
以1 N NaOH與鹽水洗務。使有機相濃縮，產生化合物⑺出 (1-084克，56.1%)。
中間物實例104-化合物cix 使2-吡畊羧酸（181毫克，1.46毫莫耳）與化合物cviii(541 毫克，1.325毫莫耳）溶於DMF(15毫升）中。將11〇^(2〇7毫 克’ 1.52毫莫耳）與DIC(〇 24毫升’丨52毫莫耳）添加至該溶 液中。將所形成之溶液於N2下攪拌過夜。將反應混合物以 EtOAc稀釋’並將有機相以1 n HC1、飽和NaHC03及鹽水 洗條。在浪縮有機相之後，將所形成之殘留物，藉由2〇%_ 3 0%_3 5% EtO Ac/己烷梯’度液，以層析方式純化，產生化合 物 cix(430毫克，63%)。 143112.doc -247·
1359145 中間物實例10 5 -化合物cx 使用EtOH(7毫升）與1 N NaOH(4.7毫升，4.7毫莫耳），使 化合物cix水解，產生化合物cx(700毫克，91.6%)。
中間物實例106-化合物cxi 使化合物cx(690毫克，1.42毫莫耳）溶於DCM(9毫升） 中。然後，將PyBOP(890毫克，1.7毫莫耳）添力σ至溶液 中，接著添加化合物xiii'(320毫克，1.7毫莫耳）。
於所形成之混合物中添加DIPEA(0.3毫升，1.7毫莫耳）。 將反應混合物於N2下攪拌過夜。然後，將反應混合物以 EtOAc稀釋，以飽和NaHC03與鹽水洗滌。在濃縮有機相之 後，將所形成之殘留物藉由100% EtOAc以層析方式純 化，產生化合物cxi(490毫克，52.7%)。 143112.doc -248- 1359145
n力 中間物實例1 07-化合物cxiv 使化合物cxii(l_2克，3_06毫莫耳）溶於MeOH(12毫升） 中〇
0 CbzHN^^J^
cxii 在以N2徹底溢流後，添加10重量％ Pd(OH)2/碳（0.6 克），並使混合物氫化過夜，藉TLC(3 0% EtOAc/己烷）証實 完全反應混合物。藉過濾，使溶液與固體物質分離，並濃 縮成其相應之經去除保護化合物cxiii，為無色油（100%) 〇
將其使用於下一步驟，無需進一步純化。 使2-吡畊羧酸（400毫克，3.2毫莫耳，1.1當量）溶於DCM/ THF(4毫升/4毫升）中，然後添加HOAt(440毫克，3.2毫莫 耳）與DCC(343毫升，1 Μ，DCM)。在室溫下攪拌20分鐘 後，使先前獲得之化合物cxiii(0.96克，3.2毫莫耳）溶於 DCM (6.4毫升）中，並添加至該經活化之混合物中。於室 143112.doc -249- 1359145 溫下攪拌過夜後，使反應混合物經過矽藻土過濾，並使化 合物cxiv藉管柱層析純化（30% EtOAc/己烷）
產生白色固體（0.8克，8〇%)。 中間物實例108-化合物cxv 使化合物cxiv(0.8克，2.2毫莫耳）溶於MeOH(10毫升） 中，然後添加2 N NaOH(水溶液）（3.3毫升，6.6毫莫耳）。 將此溶液在室溫下攪拌過夜，此時反應混合物之完成係藉 TLC (50% EtOAc/己烷）指示。藉5 N HC1酸化至pH3及以 EtOAc稀釋後，接著為有機相之萃取。將已萃取之有機相 以鹽水洗滌，並以MgS04脫水乾燥，於濃縮後產生化合物 cxv (0.74,95〇/〇) 〇
中間物實例109-化合物cxvi 於化合物cxv(0.74克，2.1毫莫耳）之DCM溶液（6毫升） 中，在室溫下添加HOAt(290毫克，2.1毫莫耳），接著添加 DCM中之1 M DCC溶液（2.2毫升，2.2毫莫耳）。在室溫下 攪拌30分鐘後，將化合物乂(2.1毫莫耳）之丁11?溶液（10.5毫 升，0.2 Μ)添加至上述HOAt活化之酸中。將反應混合物在 143112.doc •250- 1359145 室溫下攪拌過夜。此時，使反應混合物經過矽藻土過濾。 將濾液以EtOAc (120毫升）稀釋，並以水及鹽水洗滌。使 有機相乾燥，及濃縮成黃色油，使其藉碎膠層析純化（5 0 % EtOAc/己烧），產生化合物cxvi(0.714克，66%)。
中間物實例110-化合物cxvii 於化合物cxvi(0.7克，1.4毫莫耳）之EtOH溶液中，添加2 N NaOH水溶液（2毫升，4毫莫耳）。將反應混合物於室溫下 攪拌過夜，然後藉由5 N HC1酸化至pH3，並以EtOAc稀 釋，接著萃取有機相。將已萃取之有機相以鹽水洗滌，並 以MgS04脫水乾燥，於濃縮後，產生化合物cxvii(；95°/〇：)。
中間物實例111 -化合物cxviii 於化合物cvii(300毫克，0.6毫莫耳）之DCM/THF溶液（10 毫升/ 2毫升）中，添加PyBOP(416毫克，0_8毫莫耳）。將此 溶液於室溫下攪拌30分鐘。然後，於此溶液中添加化合物 xxxvi'(200毫克，0.8毫莫耳），接著為DIPEA(0.22毫升， 1.2毫莫耳）。 143112.doc -251 -
1359145 將反應混合物在室溫下攪拌過夜，然後以水（25毫升）使 反應淬滅，歷經30分鐘。接著以EtOAc萃取混合物。將所 形成之有機相以鹽水洗滌，並以MgS04脫水乾燥，然後濃 縮，產生黃色油。藉矽膠層析純化（3-5% EtOH/EtOAc)產 生化合物cxviii(335毫克，76%)。
中間物實例112-化合物cxix 於化合物cxvii(340毫克，0.6毫莫耳）之DCM溶液（10毫 升）中，添加PyBOP(470毫克，0.9毫莫耳）。將此溶液於室 溫下攪拌30分鐘。然後，於此溶液中添加化合物xiii'(170 毫克，〇·9毫莫耳），接著為DIPEA(0.24毫升，1.2毫莫 耳）。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，然後以水（25毫升） 使反應淬滅，歷經3 0分鐘。然後，以EtOAc萃取混合物。 將所形成之有機相以鹽水洗滌，並以MgS04脫水乾燥，然 後濃縮成黃色油。藉矽膠層析純化（3-5% EtOH/EtOAc)產 生化合物cxix(164毫克，36%)。 143112.doc -252 - 1359145
中間物貫例113 ·化合物χχ 使义(^2-[-纈胺酸（6.28克，25毫莫耳）溶於〇〇^(30毫 升）中。將ΗΟΒΤ(3·38克，25毫莫耳）與DCC(25毫升，1 Μ 溶液）添加至此溶液中，並攪拌五分鐘。將L_第三·白胺酸 甲0曰鹽酸鹽（25窀升，1 ]v[溶液）添加至此混合物中，並於 N2下攪拌過夜。將反應混合物以Et〇Ac稀釋，以1 N HC1、飽和NaHC〇3及鹽水洗滌。將有機相以Na2S〇4脫水 乾燥，過濾及濃縮。殘留物藉由2〇%_3〇% Et〇Ac/己烷，以 層析方式純化’產生化合物xx(2.96克，3 1%)。 中間物實例114-化合物 xxi 使用10% Pd/C(800毫克），在Me〇H(4〇毫升）中，於Hz 下使化合物xx(2.95克，7.8毫莫耳）氫化，產生下列相應 自由態胺（1.9克，100%)。
使2-吡畊羧酸（970毫克，7.8毫莫耳）溶於DCM(20毫升） 中。WPyBOP(4.06克，7.8毫莫耳）添加至此溶液中。將自 由惑胺（1.9克，7.8毫莫耳）在Dcm(15毫升）中，添加至該溶 液中，接著添加DIPEA(1.36毫升’7.8毫莫耳）。將所形成 之混合物於N2下攪拌過夜。將反應混合物以Et〇Ac稀釋， U3ll2.doc -253- 1359145 並將有機相以飽和NaHC03與鹽水洗滌。在濃縮有機相之 後，將殘留物藉由30^-40% EtOAc/己烷，以層析方式純 化，產生化合物xxi(2.07克，75.8%)。
中間物實例115-化合物xxii 使用MeOH(20毫升）與1 N NaOH(3當量），使化合物xxi水 解，產生化合物xxii(1.82克，93.9%)。
中間物實例116-化合物xxiii 使化合物xxii(895毫克，2.66毫莫耳）溶於〇(：^(10毫升） 中。將DCC(3.2毫莫耳）添加至此溶液中，然後添加 110入1(435毫克，3.2毫莫耳）。接著添加丁1^(16毫升）中之 化合物v(3.2毫莫耳）。將所形成之混合物於N2下攪拌過 夜。將反應混合物以EtOAc稀釋，經過矽膠過濾及濃縮。 將所形成之殘留物，藉由50% EtOAc/己烷，以層析方式純 化，產生化合物xxiii(730毫克，54.8%)。 中間物實例11 7-化合物XXiv 使用EtOH(5毫升）與1 N NaOH(1.5當量），使化合物xxiii 水解，產生化合物xxiv(690毫克，100%)。 中間物實例118-化合物cxx 143112.doc -254 - 使化合物xxiv(245毫克，0.52毫莫耳）溶於DCM(3毫升） 中。將PyBOP(330毫克，0.62毫莫耳）添加至該溶液中，然 後添加化合物xiii'( 120毫克，0.62毫莫耳）。於所形成之混 合物中，添加DIPEA(0.11毫升，0.62毫莫耳）。將反應混合 物於N2下攪拌過夜。將反應混合物以EtOAc稀釋，並將有 機相以飽和NaHC03與鹽水洗滌。在濃縮有機相之後，將 殘留物藉由5% EtOH/EtOAc，以層析方式純化，產生化合 物 cxx(220 毫克，60%)。
中間物實例119-化合物xiii· 使 Boc-NVA-OH(24.96 克，114.9毫莫耳）溶於 THF(200 毫 升）中。將CDI(22.35克，137.8毫莫耳）分次添加至該溶液 中，並將此溶液攪拌30分鐘。
使N，0-二甲基羥胺鹽酸鹽（12.33克，126.4毫莫耳）溶於 DMF (50毫升）中，然後將DIPEA(22毫升，126.4毫莫耳）添 加至該溶液中。將DMF溶液在室溫下攪拌20分鐘，然後添 加至THF溶液中。將所形成之混合物於N2下攪拌度過週 末。使反應混合物在真空中濃縮成100毫升總體積。將此 143112.doc -255 - 1359145 有機相以1 N HCl、飽和NaHC03及鹽水洗滌。使有機相濃 縮，產生粗製化合物cxxi(25.3克
將LAH(107.3毫莫耳）於N2下，添加至乾燥1升圓底燒瓶 内’在lMEhO溶液中。使此溶液降至〇〇c ,然後，逐滴添 加Et2〇(l〇〇毫升）中之化合物cxxi(97.5毫莫耳）。於添加完 成時’將所形成之混合物攪拌30分鐘。在〇°C下，藉由慢 慢添加EtOAc(50毫升），接著慢慢添加5% khs〇4(50毫升） 溶液’使反應混合物淬滅。將此混合物攪拌3〇分鐘。有機 相以1 N HC1、飽和NaHC〇3及鹽水洗滌。使有機相濃縮， 產生粗製化合物cxxii(22.28克）。
入。人S ' cxxii 使化合物cxxii溶於MeOH(l〇0毫升）中。使1^282〇4(16 u 克，96.6毫莫耳）溶於水（1〇0毫升）中，然後添加至化合物 cxxii在0°C下之溶液中。將此混合物儲存於冷藏室（5充）中 過夜。將水（100毫升）t之KCN(7·53克，us 9毫莫耳）添力 至反應混合物並在室溫下搜拌。小時。將化合：:;
EtOAc萃取（3x100毫升）。有機相以鹽水洗滌（3χ5〇毫升）， 以MgS〇4脫水乾燥，過濾及濃縮，產 座生祖製化合物 cxxiii(15.86克）。 143112.doc -256- 1359145
cxxiii 使化合物cxxiii(15.86克）溶於二氧陸圜（100毫升）中。將 濃HC1(37%，100毫升）添加至此溶液中，接著為曱苯醚（10 毫升），並建立回流（110°C )。將反應物攪拌1.5小時。當反 應混合物冷卻至室溫時，於真空中移除溶劑，產生無水糊 劑。使殘留物在高真空下乾燥過夜，產生粗製化合物 cxxiv °
使化合物cxxiv(69.6毫莫耳）溶於DMF(60毫升）與THF(60 毫升）中。將N-(苄基氧基羰基氧基）琥珀醯亞胺（17.33克， 69.6毫莫耳）添加至混合物中，接著添加DIPEA(12.1毫升， 69.6毫莫耳）。將反應混合物於N2下攪拌過夜。使混合物濃 縮至減少之體積（50毫升），並以EtOAc稀釋。有機相以0.1 N HC1 (2x 1 00毫升）及鹽水洗務，產生化合物cxxv(l 7.5 克，54.2%，歷經五個步驟）。
0H CXXV 使化合物cxxv(5.66克，20.14毫莫耳）溶於00\4(60毫升） • 143112.doc -257 - 1359145 中。將 PyBOP(12.57 克，24.2 毫莫耳）與 ΗΟΒΤ(3·27 克， 24.2毫莫耳）添加至此溶液中，並攪拌五分鐘。使所形成之 混合物降至Ot，然後添加環丙基胺（1.67毫升，24.2毫莫 耳）與DIPEA(4.2毫升，24·2毫莫耳）。將反應混合物攪拌過 夜，溫熱至室溫。將反應混合物以0.1 N HC1、飽和 NaHC03及鹽水洗滌。然後，使有機相濃縮，並使用70% EtOAc/己烧，以層析方式純化，產生化合物cxxvi(3.1 8 克，49.3%)。
cxxvi Η 使用10% Pd/C(600毫克），在MeOH(70毫升）中，使化合 物〇乂乂乂丨（3.18克，9.94毫莫耳）氫化。將反應混合物於112下 攪拌過夜，經過矽藻土過濾及濃縮，產生粗製化合物 xiii，（2.1 克，100%) 〇
中間物實例120-化合物cxxvii 使N-Cbz-L-環己基甘胺酸（3克，10.3毫莫耳）溶於 DCM(36毫升）中。將HOAt(1.5克，11.28毫莫耳）與 DCC(11.28毫升，11.28毫莫耳）添加至此溶液中，並攪拌五 分鐘。將L-第三-白胺酸曱酯鹽酸鹽（103毫升，1 Μ溶液， 143112.doc -258 - 1359145 10.3毫莫耳）添加至此混合物中，並於N2下攪拌過夜。使反 應混合物經過矽藻土過濾，以EtOAc沖洗，及濃縮成殘留 物，將其使用20%-30%EtOAc/己烷，以層析方式純化，產 生化合物 cxxvii(2.2克，52%)。
中間物實例12 1 -化合物lxxix' 使用 20% ΪΜ(0Η)2/(：(1 克），在 MeOH(15 毫升）中，於 H2 下，使化合物cxxvii(2.2克，5.2毫莫耳）氫化，產生化合物 lxxix'(1.4克，98%) 〇
中間物實例122-化合物lxxx 使2-吡畊羧酸（360毫克，2.9毫莫耳）溶於DCM(10毫升） 中。將PyB0P(1.81克，3.5毫莫耳）添加至該溶液中。然 後，將THF(10毫升）中之化合物lxxix'(825毫克，2.9毫莫 耳）添加至該溶液中，接著添加DIPEA(0.5毫升，2.9毫莫 耳）。將所形成之混合物於N2下攪拌過夜。以EtO Ac稀釋反 應混合物，並將有機相以飽和NaHC03鹽水洗滌。將有機 相之濃縮所形成之殘留物，藉由3 0% EtO Ac/己烷，以層析 143112.doc - 259 - 方式純化，產生化合物lxxx(780毫克，69%)。 中間物實例123-化合物lxxxi 使用MeOH(10毫升）與1 N NaOH(3當量），使化合物lxxx 水解，產生化合物lxxxi(615毫克，81.8%)。 中間物實例124-化合物lxxxii 使化合物lxxxi(610毫克，1.6毫莫耳）溶於DCM(10毫升） 中。然後，將DCC(1.94毫升，1.94毫莫耳）添加至該溶液 中，接著添加HOAt(270毫克，1.94毫莫耳）。然後，將 THF( 19.4毫升）中之化合物v( 1.94毫莫耳）添加至該溶液 中。將所形成之混合物於N2下攪拌兩夜。將反應混合物以 EtOAc稀釋，經過矽膠過濾及濃縮。將所形成之殘留物藉 由40% EtOAc/己烷，以層析方式純化，產生化合物 lxxxii(450毫克，83.4%)° 中間物實例125-化合物lxxxiii 使用EtOH(10毫升）與1 N NaOH(3當量），使化合物lxxxi 水解，產生化合物lxxxiii(650毫克，99%)。 中間物實例126-化合物cxxviii 使化合物lxxxiii(400毫克，0.78毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將PyBOP(610毫克，1.2毫莫耳）添加至該溶液中，接 著為化合物xiii'(230毫克，1.2毫莫耳）。於所形成之混合物 中，添加DIPEA(0.2毫升，1.2毫莫耳）。將反應混合物於N2 下攪拌過夜。將反應混合物以EtOAc稀釋，並將有機相以 飽和NaHC03鹽水洗滌。在濃縮有機相之後，將殘留物藉 由100% EtOAc至5% EtOH/EtOAc梯度液，以層析方式純 143112.doc -260- 1359145 化，產生化合物cxxviii(365毫克，68.7%)。
中間物實例127-化合物cxxx
使化合物lxxxiii(365毫克，0.7毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將PyBOP(440毫克，0.84毫莫耳）添加至該溶液中，接 著添加THF(8.4毫升）中之化合物cxxix(0.84毫莫耳）。
於所形成之混合物中，添加DIPEA(0.1毫升，0.84毫莫 耳）。將反應混合物於N2下攪拌過夜。以EtOAc稀釋反應混 合物，並將有機相以飽和NaHC03鹽水洗滌。在濃縮有機 相之後，將所形成之殘留物藉由100% EtOAc，以層析方 式純化，產生化合物cxxx(350毫克，70%)。
中間物實例128-化合物cxxxi 143112.doc -261 - 1359145 使化合物cxxv(2.54克，9.05毫莫耳）溶於001^1(30毫升） 中。將？丫80?(5_65克，10.9毫莫耳）與11031'(1.47克，10.9 毫莫耳）添加至該溶液中，並攪拌五分鐘。使所形成之混 合物降至0°C，於其中添加（S)-(+)-3-曱基-2-丁胺（1.27毫 升，10.9毫莫耳）與01?£八（1.9毫升，10.9毫莫耳）。將反應 混合物攪拌過夜，並溫熱至室溫。將有機相以0.1 N HC1、 飽和NaHC03鹽水洗滌。在濃縮有機相之後，將所形成之 殘留物藉由30% EtOAc/己烷，以層析方式純化，產生化合 物 cxxxi(1.44克，45.5%)。
中間物實例129-化合物cxxix 使用10% Pd/C(500毫克），在MeOH(40毫升）中，使化合 物〇乂乂乂丨（1.3克，3.7毫莫耳）氫化。將反應混合物於112下攪 拌過夜。使反應混合物經過矽藻土過濾，並使有機相濃 縮，產生粗製化合物cxxix(800毫克，100%)。
中間物實例13 0-化合物cxxxiv 使化合物cxxxii(l_6克，3.7毫莫耳）溶於1^^011(12毫升） 143112.doc -262-
1359145 以N2徹底溢流後，添加10重量％ Pd(OH)2/碳（0.74克）， 並使混合物氫化過夜，此時藉TLC(30% EtOAc/己烷）証實 完全反應混合物。藉過濾使溶液自固體物質分離，及濃 縮，產生化合物cxxxiii，為無色油（1 00%)，將其使用於下 一步驟，無需進一步純化。
使2-吡畊羧酸（400毫克，3·2毫莫耳，1.1當量）溶於 DCM/THF (4毫升/4毫升）中，然後添加HOAt(440毫克，3.2 毫莫耳）與DCC(3.3毫升，1 Μ，在DCM中）。在室溫下攪拌 20分鐘後，使先前獲得之化合物〇&乂\^丨(0.96克，3.2毫莫 耳）溶於DCM (6.4毫升）中，並添加至經活化之混合物中。 在室溫下攪拌2天後，使反應混合物經過矽藻土過濾，及 濃縮成殘留物，使其藉管柱層析純化（50% EtOAc/己烷）， 產生化合物cxxxiv，為白色固體（1.06克，83%)。
143112.doc •263 - 1359145 中間物實例13 1 -化合物cxxxv 使化合物cxxxiv(1.06克，2·6毫莫耳）溶於MeOH(10毫升） 中，然後添加2 N NaOH(水溶液）(4毫升，8毫莫耳）。將此 溶液在室溫下攪拌過夜，此時藉TLC(50% EtOAc/己烷）指 示完成水解作用。藉由5 N HC1使溶液酸化至pH3，以 EtOAc稀釋，.然後萃取有機相。將已萃取之有機相以鹽水 洗滌，並以MgS04脫水乾燥，於濃縮後產生化合物 cxxxv( 100%) 0
中間物實例132-化合物cxxxvi 於化合物cxxxv(1.44克，3.7毫莫耳）之DCM溶液（8毫升） 中，在室溫下，添加110八1(500毫克，3.7毫莫耳），然後添 加DCM中之1 M DCC溶液（3.7毫升，3.7毫莫耳）。在室溫 下攪拌30分鐘後，將化合物ν(3.7毫莫耳）之THF溶液（18.5 毫升，0.2 Μ)添加至上述HOAt活化之酸中。將反應混合物 在室溫下攪拌過夜。使反應混合物經過矽藻土過濾。濾液 以EtOAc( 120毫升）稀釋，並以水及鹽水洗滌。使有機相脫 水乾燥及濃縮，產生黃色油，使其藉石夕膠層析純化（70% EtOAc/己烧），產生化合物cxxxvi( 1克，7 1 %)。 143112.doc -264-
1359145 中間物實例1 3 3 -化合物cxxxvii 於化合物cxxxvi(l克，1.8毫莫耳）之EtOH溶液（8毫升） 中，添加2 N NaOH水溶液（2.7毫升，5.4毫莫耳）。將反應 混合物於室溫下攪拌過夜，然後藉由5 N HC1酸化至pH3， 以EtOAc稀释，然後萃取有機相。將已萃取之有機相，以 鹽水洗滌，並以MgS04脫水乾燥，於濃縮後，產生化合物 cxxxvii(88%) °
cxxxvii 中間物實例1 3 3 -化合物cxxxviii 於化合物cxxxvii(350毫克，0.6毫莫耳）之DCM溶液（10毫 升）中，添加PyBOP(450毫克，0·86毫莫耳）。將此溶液於 室溫下攪拌30分鐘。然後，於此溶液中添加化合物 xiii’（160毫克，0.86毫莫耳），接著為DIPEA(0·23毫升，l·3 毫莫耳）。將反應混合物在室溫下攪拌過夜，然後以水（25 毫升）使反應淬滅，歷經30分鐘。然後，以EtOAc萃取混合 物。將已萃取之有機相以鹽水洗滌，並以MgS04脫水乾 燥，然後濃缩，產生黃色油。藉矽膠層析純化（5% EtOH/ 143112.doc - 265 - 1359145
EtOAc)產生化合物 cxxxviii(407毫克，88%)。
κ Η 〇Η 中間物實例134-化合物cxxxix 使5-曱基異哼唑-3-羧酸（200毫克，2.05毫莫耳）溶於 DCM(5毫升）中。將PyBOP(1.07克，2.05毫莫耳）添加至該 溶液中。將DCM(5毫升）中之化合物lxxix'(582毫克，2.05 毫莫耳）添加至該溶液中，接著添加DIPEA(0.36毫升，2.05 毫莫耳）。將所形成之混合物於N2下攪拌過夜。以EtOAc稀 釋反應混合物，並將有機相以飽和NaHC03與鹽水洗滌。 使有機相濃縮，並將所形成之殘留物藉由30% EtOAc/己 烧，以層析方式純化，產生化合物cxxxix(495毫克， 61.4%)。
中間物實例1 3 5 -化合物cxxxx 使用MeOH(10毫升）與1 N NaOH(3當量）使化合物cxxxix 水解，產生化合物cxxxx(430毫克，90%)。 143112.doc -266- 1359145
中間物實例136-化合物cxxxxi
使化合物cxxxx(38〇毫克，1毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。然後，將DCC(1.2毫莫耳）添加至該溶液中，接著添加 HOAt (165毫克，1.2毫莫耳）。接著添加THF(12毫升）中之 化合物v( 1.2毫莫耳）。將所形成之混合物於N2下攪拌過 夜。將反應混合物以EtOAc稀釋，經過矽膠過濾及濃縮。 將所形成之殘留物藉由35% EtOAc/己烷，以層析方式純 化，產生化合物cxxxxi(320毫克，58%)。
中間物實例13 7-化合物cxxxxii 使用EtOH( 1 0毫升）與1 N NaOH(3當量），使化合物 cxxxxi水解，產生化合物cxxxxii(730毫克，94.3%)°
cxxxxii 143112.doc -267- 中間物實例13 8-化合物cxxxxiii 使化合物cxxxxii(240毫克，0.46毫莫耳）溶於DCM(5毫 升）中。然後，將PyBOP(295毫克，0.56毫莫耳）添加至該 溶液中，接著添加化合物xiii'(ll〇毫克，0.56毫莫耳）。於 所形成之混合物中，添加DIPEA(0.1毫升，0.56毫莫耳）。 將反應混合物於N2下攪拌兩夜。以EtOAc稀釋反應混合 物，並將有機相以飽和NaHC03與鹽水洗滌。在濃縮有機 相之後，將所形成之殘留物藉由90% EtOAc/己烷，以層析 方式純化，產生化合物cxxxxiii(l68毫克，53%)。
中間物實例139-化合物cxxxxiv 於NaOH溶液（2 N，42.1毫升，84.2毫莫耳）中，在5°C 下，添加L-丙胺酸（5.00克，56.1毫莫耳）。在攪拌10分鐘 後，同時逐滴添加氣甲酸曱酯（6.5毫升，84.2毫莫耳）與 NaOH(2 N，42.1毫升，84.2毫莫耳）。將此溶液於冰浴中 攪拌2小時，然後在室溫下1小時。將混合物以Et2〇洗滌 (2x50毫升），以5 N HC1使水層中和至pH~2，並以EtOAc萃 取（3x50毫升）。將已萃取之有機相以鹽水洗滌，藉MgS〇4 脫水乾燥及濃縮，產生化合物cxxxxi,N-曱氧幾基-L-丙胺 酸（4.54克，54%)，為無色油。 143112.doc -268- 1359145
Ο " 中間物實例140-化合物cxxxxvi 將化合物cxxxxv(3.57克，9.44毫莫耳）在1"1^中之溶液，
於5°C下，以HOAt(1.28克，9.44毫莫耳）處理，然後添加 DCC(9.50毫升，9.50毫莫耳）。於冰浴中攪拌45分鐘後， 添加化合物v( 104毫升，10.4毫莫耳）在THF中之溶液。將 混合物在室溫下攪拌過夜。使混合物冷卻至5°C，並以飽 和NaHC03使反應淬滅。在過濾以移除已沉澱之DCU後， 使混合物溶於EtOAc(100毫升）中，以飽和NaHC03、鹽水 洗滌，然後藉MgS04脫水乾燥，及濃縮成殘留物，藉由矽 膠管柱層析純化（25% EtOAc/己烷），產生化合物 cxxxxvi(2_91克，57%)，為膠黏泡珠物。
cxxxxvi 中間物實例141-化合物cviii 於N2氣流，在藉由冰浴冷卻之化合物cxxxxvi於 MeOH(25毫升）中之溶液内，慢慢添加Pd/C。使混合物在1 大氣壓下氫化過夜。藉過濾移除觸媒，將濾液與5毫升 143112.doc -269· DMF合併’及在真空下乾燦，產生化合物cviii。 中間物實例142-化合物cxxxxvii 於化合物 cxxxxiv(0,298 克，2.03毫莫耳）與 HOAt(0.276 克，2.03毫莫耳）在THF中，於冰浴中冷卻之溶液内，以 DCC(2.05毫升，2·05毫莫耳）處理。於冰浴中擾拌〇.5小時 後，添加化合物cviii在THF中之溶液，然後添加 DIPEA(0.39毫升，2.2毫莫耳）。將混合物在室溫下攪拌過 夜’然後在冰浴中冷卻’並以飽和NaHC03使反應淬滅。 過濾已沉澱之DCU，並使濾液溶於EtOAc(100毫升）中。有 機相以飽和NaHC03 '鹽水洗滌，然後藉MgS04脫水乾 燥。在移除有機溶劑後，使殘留物藉矽膠管柱層析純化 (60% EtOAc/己烧），產生化合物 cxxxxvii(0.47 克，48%)， 為膠黏泡沫物。
中間物實例143-化合物cxxxxviii 於化合物cxxxxvii(0_47克，0.847毫莫耳）在EtOH(5毫升） 中之溶液内，在5°C下添加NaOH(2 N，1.31毫升，2.62毫 莫耳）。將混合物於室溫下攪拌4小時《以HC1(1N)使溶液 酸化至pH〜2，並藉迴轉式蒸發移除EtOH。將混合物以 EtOAc萃取（3x30毫升），並將合併之萃液以鹽水洗滌，然 後藉MgS04脫水乾燥。移除溶劑，並使殘留物在真空下乾 燥，產生化合物cxxxxviii(0.366克，82%)，為膠黏泡末 143112.doc •270· 1359145 物。
中間物實例144-化合物cil
使化合物cxxxxviii(0.366克，0.718毫莫耳）在DCM中之 溶液，在冰浴中冷卻，並以PyBOP(0.599克，1.15毫莫耳） 處理。在室溫下攪拌0.5小時後，將混合物藉冰浴冷卻， 並以化合物xiii'(0.200克，1.08毫莫耳）在THF中之溶液， 及DIPEA(0.250毫升，1.44毫莫耳）處理。將混合物在室溫 下攪拌過夜，然後以NH4C1溶液使反應淬滅。使溶劑濃 縮，並使混合物溶於EtOAc( 1 00毫升）中。有機相以飽和 NaHC〇3、鹽水洗滌，然後藉MgS04脫水乾燥。在移除有 機溶劑後，將殘留物藉管柱層析純化（5% EtOH/EtOAc)， 產生化合物cil(0.35克，72%)
中間物實例145-化合物cxxi 於1^-：6〇〇卞乂3-011(化合物1)(8.68克，40毫莫耳）之7^?溶 液（85毫升）中，添加CDI(7.79克，48毫莫耳）。在室溫下攪 拌3 0分鐘後，將上述溶液以含有Ν,Ο-二甲基羥胺鹽酸鹽 143112.doc -271 - 1359145 (4.25克，44毫莫耳）之DMF溶液（25毫升）及DIPEA(7.66毫 升，44毫莫耳）處理。將反應混合物於室溫下攪拌過夜。 然後，使反應混合物在真空中濃縮。將所形成之殘留物以 EtOAc稀釋（300毫升）。將此溶液相繼以0·1 N HC1(50毫 升）、飽和NaHCO3(3x50毫升）及鹽水洗滌。使有機相在真 空中濃縮，產生殘留物，將其以矽膠層析純化（40% EtOAc/己烧）成為化合物cxxi(9_38克，94%)。 中間物實例146-化合物cxxii 於經冷卻至0°C之化合物cxxi(9.38克，31·9毫莫耳）之 Et20溶液（50毫升）中，添加（慢慢地）LAH(34.7毫升，1 Μ，34.7毫莫耳）。在LAH添加期間，使燒瓶之反應溫度保 持低於5°C。於添加完成時，將EtOAc(20毫升）添加至反應 物中，以使過量LAH淬滅。然後以逐滴方式添加KHS04水 溶液（5%，20毫升），以保持溫度低於5 °C。分離有機相， 然後相繼以1 N HCl(3x30毫升）、飽和NaHCO3(3x30毫升） 及鹽水洗滌。使有機相濃縮，並在真空中乾燥，產生粗製 化合物 cxxii (5· 18克，69%)。 中間物實例147-化合物cl 於Zn(2.75克，42毫莫耳）之THF(25毫升）懸浮液中，在回 流下添加0.2毫升Et0C(0)CF2Br。接著慢慢添加化合物 cxxii (3.05 克，15.0 毫莫耳）與 Et0C(0)CF2Br(4.84 毫升， 3 7.5毫莫耳）之THF溶液（25毫升）。於兩種試劑添加完成 時，使反應混合物進一步回流3 0分鐘。使反應混合物冷卻 至室溫，並以DCM(200毫升）稀釋。將有機相以1 N KHS04 143112.doc -272- 1359145 洗滌。使有機相濃縮，並在真空中乾燥，產生殘留物，使 其藉矽膠層析純化（20% EtOAc/己烷），產生化合物cl(2.78 克，57%)。
此製備法基本上係與由Thaisrivongs等人，J. Med. Chem., 29, 2080-2087(1986)所揭示者相同。 中間物實例148-化合物cli 將化合物cl(2_78克，8.53毫莫耳）之THF溶液（40毫升）， 以lNNaOH(12·8毫升，12.8毫莫耳）處理。在室溫下攪拌 過夜後，於真空中部份移除溶劑。將殘留反應混合物以水 (50毫升）稀釋，及凍乾，產生粗製化合物cli(2.82克， >100%)，為其鈉鹽。
OH 〇 BocHN. Λ. A ONa
三 FF 此製備法基本上係與由Thaisrivongs等人，J. Med. Chem.，29, 20 80-2087 (1986)所揭示者相同。 中間物實例149-化合物clii 將粗製化合物cli(516毫克，1.61毫莫耳）之DCM溶液（10 毫升），以HOBT(436毫克，3.23毫莫耳）及DIC(0.328毫 升，2.09毫莫耳）處理。在室溫下攪拌30分鐘後，將反應混 143112.doc - 273 - 1359145 合物以含有甘胺酸芊酯_Ts0H鹽（815毫克，2·42毫莫耳）之 DCM溶液（5毫升）及DIPEA(0.422毫升，2.42.毫莫耳）處理。 在室溫下攪拌12小時後，以水使反應混合物淬滅，並以 EtOAc萃取《使有機相脫水乾燥，及在真空中濃縮，並藉 石夕夥層析純化（40% EtOAc/己烧），產生化合物ciii(495毫 克，69%)。 化合物 clii之1H NMR (400 MHz，CDC13) : δ 7.29-7 21 (m，5Η)，5·16 (bs，2Η)，4.89 (bs，1Η)，4.20-3.90 (m，4Η)， 3.80 (bs, 1H), 1.75-1.42 (m, 4H), 1.38 (s, 9H), 〇.87 (m, 3H).
自粗製化合物cli開始，cliii(83°/。）與cliv(50%)係以關於 化合物clii所述之相同方法製成。 化合物 cliii 之1H NMR (400 MHz，CDC13) : δ 7.49 (bs 1H)，7.34-7.24 (m，5H)，5.13 (ABq，J=12.2 Hz，J，=23.9 Hz， 2H)，4.88 (bd，J=8.8 Hz，1H)，4.53 (m，1H)，3.98-3.9! (m 2H)，3.82 (m，1H)，ι·65~1·20 [m，16H，包含單峰在 137 (9H)]} 0.86 (t, J=7.3 Hz, 3H).
143112.doc -274- 化合物 cliv 之1η NMR (400 MHz, CDC13) : δ 7.60-7.0 (m， WH)，5.30-5.00 2H)，5.00-4.75 (m，2H)，4.15-3.70 (m， 3H)’ 3.30-3.00 (m，2h)，1.75-1.20 [m，13H，包含單夺在 1.36 (9H)]，〇·86 (bs，3H)
中間物實例15〇_化合物clv 於粗製化合物cli(l克，3.13毫莫耳）之DCM(10毫升）與 THF (5毫升）溶液中’添加h〇BT(634毫克，4.69毫莫耳）與 EDCI (781毫克，4·07毫莫耳），及接著為（s)-a_曱基芊胺 (0.604毫升，4.69毫莫耳）。將反應混合物於室溫下授拌過 仪’然後以水使反應淬滅。將反應混合物以EtOAc萃取。 有機相以鹽水洗滌，並藉NaaSO4脫水乾燥。使有機相在真 空中濃縮，產生殘留物’使其藉矽膠層析純化（2〇% EtOAc/己烷），產生化合物civ(459毫克，37%)。化合物civ 之1H NMR (400 MHz，CDC13) : δ 7.32-7.21 (m, 6H)，5·〇〇 (m, 1H), 4.75 (m, 1H), 3.94 (m, 2H), 3.70 (m, 1H), 1.65-1.15 [m，16H，包含雙峰在 1.51 (J=6.8 Hz，3H)，單峰在 1.39 (9H)]，0.82 (m，3H).
143112.doc •275- 1359145 中間物實例15 1 -化合物civi 使化合物clv(220毫克，0.55毫莫耳）溶於二氧陸圜（1〇毫 升）中之4 N HC1内。將反應混合物於室溫下攪拌2小時， 然後在真空中濃縮，獲得粗製化合物clvi(〜1〇〇%)，為其 HC1 鹽。
按照關於製備化合物clvi所述之程序，化合物clvii，clviH 及clix係以幾乎定量產率’製自粗製化合物cli。
中間物實例152-化合物clx 將化合物vii之HC1鹽（96毫克，0.144毫莫耳）之Dcm溶液 (4毫升）’以PyBOP(120毫克，0.23毫莫耳）&DIpEA(〇」毫 143ll2.doc -276- 1359145 升’ 0.576毫莫耳）處理。在室溫下搜拌3〇分鐘後，將溶液 以3有化合物clv(0.288毫莫耳）之THF溶液Η毫升）及 DIPEA(0.2毫升’ 毫莫耳）處理。將反應混合物在室溫 下攪拌過夜。然後，將反應混合物以Et〇Ac(5〇毫升）稀 釋，接著將有機相以NaHC03與鹽水洗滌。使有機相在真 空中濃縮，並使殘留物藉矽膠層析純化（8〇% Et〇Ac/己 炫）’產生化合物clx⑴3毫克，89%)。
中間物實例153-化合物Clxi 將化合物νιι(140毫克，0.235毫莫耳）之DCM溶液（6毫 升），以PyBOP(196毫克，〇.376毫莫耳）處理3〇分鐘。然 後，將化合物clvii(〜0.47毫莫耳）之THF溶液（6毫升）與 DIPEA(0.327毫升，1.88毫莫耳）添加至上述溶液中。將反 應混合物在室溫下攪拌過夜，並以水使反應淬滅（3〇分 鐘）。將反應混合物以Et〇Ac(50毫升）萃取。有機相以 NaHC〇3與鹽水洗滌。將合併之水層以Et〇Ac(5〇毫升）逆萃 取。使合併之有機相脫水乾燥，及在真空中濃縮。將所形 成之殘留物藉矽膠層析純化（8〇_1〇〇Et〇Ac/己烷）’產生化 合物 clxi(l〇4毫克，48〇/〇)。 143112.doc -277. 1359145
中間物實例154-化合物clxii 於化合物clxi(280毫克，0.304毫莫耳）之DCM溶液（10毫 升）中，添加DMP試劑（193毫克，0.456毫莫耳）。將反應混 合物於室溫下攪拌3小時，並以10% NazSOs使反應浮滅。 有機相以NaHC〇3與鹽水洗滌。使所形成之有機相脫水乾 燥’及在真空中濃縮，產生殘留物，使其以矽膠層析純化 (80-100% EtOAc/己烧），產生化合物clxii(271毫克， 97%) 〇
中間物實例155-化合物clxiii 使化合物lxxxiii(220毫克，0.43毫莫耳）溶於DCM(5毫升） 中。將PyBOP(270毫克，0.51毫莫耳）添加至該DCM溶液 中，並攪拌5分鐘。將THF(5.1毫升）中之化合物xxxvi,(〇 51 毫莫耳）逐滴添加至此溶液中。將DIPEA(0.09毫升，〇 5 1毫 莫耳）添加至反應混合物中，並於N2下攪拌過夜。隔天， 將反應混合物以EtOAc稀釋，以飽和NaHC〇3洗務，以鹽水 143112.doc -278- 1359145 洗滌。藉由70%至90% EtOAc/己烷梯度液純化，產生化合 物 clxiii(180毫克，56°/。）。
中間物實例156-化合物clxiv 使化合物cxxv(2.09克，7·4毫莫耳）溶於DCM(20毫升） 中。將？丫80卩(4_64克，8.9毫莫耳）與11081;(1.2克，8.9毫莫 耳）添加至此溶液中，並攪拌五分鐘。使所形成之混合物 降至0°(：，於其中添加8(-)-〇1-曱基苄胺（1.15毫升，8.9毫莫 耳）與DIPEA (1.55毫升’ 8.9毫莫耳）。將反應物攪拌過 夜，且溫熱至室溫。將反應混合物以0.1 N HC1、飽和 NaHC03及鹽水洗滌。藉由30% EtOAc/己烷純化，產生化 合物 clxiv(1.6克，56.3%)。
clxiv 中間物實例15 7-Κ$*χχχνΓ 使用10% Pd/C(300毫克），在MeOH(50毫升）中，使化合 物clxiv(1.48克’ 3.8毫莫耳）氫化。將反應混合物於h2下攪 拌過夜。使反應混合物經過矽藻土過濾，及濃縮，而得化 143112.doc - 279- 1359145 合物 xxxvi'(895 毫克，94.20/〇)° 中間物實例158-化合物clxvi : 於化合物clxv(2克’ 8.2毫莫耳）之〇0^[溶液（15毫升）中， 添加HOAt(1.34克’ 9.84毫莫耳）與dCC(9.84毫升，1 Μ， 9.84毫莫耳）。
〇 clxv 在室溫下授拌20分鐘後，將含有第三_l-白胺酸曱酯_鹽 酿鹽（9.84毫莫耳）之THF溶液（9.84毫升）及DIPEA(1.72毫 升’ 9.84毫莫耳）添加至上述溶液中。然後，在室溫下添力口 DM AP(1克’ 8.2毫莫耳）。將反應物在室溫下搜拌過夜。按 照標準水溶液處理，及石夕膠層析（2〇% EtOAc/己烧），獲得 化合物 clxvi(1.75 克，58%)。
中間物實例159-化合物clxvii : 於化合物clxvi(1.75克’ 4.73毫莫耳）之丁册溶液（35毫升） 中’添加一氧陸圜中之4 N HC1溶液（11.8毫升，47.3毫莫 耳）將反應物在室溫下授掉過夜。此時，在減壓下移除 溶劑，產生粗製clxvii(〜100%)，使其再溶於DMF中，並直 接使用於下一反應。 143112.doc •280· 1359145
中間物實例160-化合物clxviii : 在含有2-吡啡羧酸（447毫克，3.6毫莫耳）、pyB〇P(1 87 克，3.6毫莫耳）之DCM溶液（15毫升）中，添加化合物 clxvii(811毫克，3毫莫耳）之DMF溶液（15毫升）。然後，在 所形成之混合物中’添加DIPEA(0.63毫升，3.6毫莫耳）。 將反應物於室溫下攪拌過夜，然後以水使反應淬滅。將反 應混合物以EtOAc萃取。有機層以鹽水洗滌，及在真空中 濃縮，以提供殘留物，使其藉矽膠層析純化（4〇% Et〇Ac/ 己烧）’產生化合物clxviii(0.93克，82%)。
中間物實例161-化合物clxix : 於化合物Clxvm(0.93克，2.47毫莫耳）之]^〇出容液（1〇毫 升）中，添加2 N NaOH(3.71毫升，7.41毫莫耳）。將反應物 在室溫下攪拌過夜。然後，使用1 N HCi，使反應物酸化 至PH3。將反應物以Et〇Ac(75毫升）稀釋，並以水及鹽水洗 滌。使如此獲得之有機層脫水乾燥，及在真空中濃縮，獲 仵化合物clxix(〜1〇〇%)。 143112.doc -281 -
1359145 中間物實例162-化合物clxx : 將化合物clxix(2.47毫莫耳）之DCM溶液（10毫升）以HOAt (436毫克，3.21毫莫耳）及DCC(3.2毫升，1 Μ，3.2毫莫耳） 處理。在攪拌30分鐘後，將反應混合物以化合物ν(499毫 克，2.72毫莫耳）之THF溶液（13.6毫升）處理。在室溫下攪 拌過夜後，將白色固體（脲）過濾。在真空中濃縮濾液，而 得殘留物，使其藉碎膠層析純化，產生化合物clxx(0.99 克，76〇/〇)。
中間物實例163-化合物clxxi : 將化合物clxx(0.99克，1.88毫莫耳）之EtOH溶液（20毫升） 以2NNaOH(2.81毫升，5·63毫莫耳）處理。在室溫下攪拌 過夜後，以1 N HC1，使反應混合物酸化至pH3。將反應混 合物以EtOAc(75毫升）萃取。使有機層脫水乾燥，及在真 空中濃縮，獲得化合物clxxi(772毫克，82%)。
143112.doc - 282 - 1359145 中間物實例164-化合物clxxi :
將化合物clxxi(290毫克，0.58毫莫耳）之DCM溶液（10毫 升）以PyBOP(484毫克，0.93毫莫耳）處理。在室溫下攪拌 20分鐘後，將反應混合物以化合物xiii'(140毫克，0.75毫 莫耳）之THF溶液（7.5毫升），接著以DIPEA(0.13毫升，0.75 毫莫耳）處理。於室溫下攪拌過夜後，以水使反應淬滅， 並以EtO Ac萃取。將所形成之有機層以鹽水洗滌，並脫水 乾燥及在真空中濃縮。所形成之殘留物藉矽膠層析純化 (5% EtOH/EtOAc)，產生化合物clxxii290 毫克（75%)。
中間物實例165-化合物clxxiv :
使化合物lxxxiii(600毫克，1.17毫莫耳）溶於DCM(4毫升） 中。添加PyBOP(670毫克，1.3毫莫耳），攪拌五分鐘，並 冷卻至0°C。將THF(13毫升）中之化合物clxxiii(333毫克， 1.3毫莫耳）逐滴添加至此溶液中。
將DIPEA(0.23毫升，1.3毫莫耳）添加至反應混合物中， 並使其溫熱至環境溫度，且攪拌兩夜。隔天，使反應物濃 縮，並藉由2% EtOH/EtOAc純化，獲得粗製化合物 143112.doc -283 - 1359145 clxxiv(900毫克，超過 100%)。
中間物實例166-化合物clxxxv : 使化合物cxxv(3.01克’ 10_7毫莫耳）溶於DCM(30毫升） 中’並使溫度降至-78°C。將PyB〇P(6.1克，11.7毫莫耳）與 HOBT (1.58克，11.7毫莫耳）添加至此溶液中，接著為 (S)-(+)-l-環己基乙胺，化合物clxxv(1.74毫升，11.7毫莫耳） 與DIPEA(2.1毫升，11.7毫莫耳）。將所形成之混合物於室 溫下攪拌過夜。隔天’將反應混合物以EtOAc稀釋，以〇. 1 N HC1、飽和NaHC〇3及鹽水洗滌。將產物以40% EtOAc/ 己烧純化’獲得2克（47.8%)化合物(51乂乂\^。
中間物實例167-化合物clxxiii : 使用10% Pd/C(500毫克）’在MeOH(40毫升）中，使化合 物clxxvi(2克’ 5.13¾莫耳）氫化。將反應混合物於h2下授 拌過夜。使反應混合物經過矽藻土過濾，及濃縮而得化合 物 clxxiii(1.31 克，99.8%)。 中間物實例168-化合物clxxix : 143112.doc •284· 1359145 -、瓶中於惰性大氣柳WAA V 11 2·鋼 於無水DMF(6毫升）中 Η 〇5^Ν 基_1，5-味唾淋二羧酸1-芊酯](290毫克，1.1毫莫耳）溶
°=( y-oH ο ο clxxvii 添加HOAt(151毫克’ 1.2毫莫耳），並將反應物於室溫下 搜拌25分鐘。然後，於冰浴中使反應冷卻下來。然後，添 加DIC (0.2毫升’ 〇.16克，ι·2毫莫耳），接著添加無水 DMF(4毫升）中之化合物莫耳，435毫克）。使反 應物慢慢升至室溫，並攪拌2天。然後，將反應物傾倒在 含有120毫升EtOAc之分液漏斗中，並以1 n HC1(50毫升） 洗滌2次，及以鹽水洗滌1次。分離有機層，以MgS04脫水 乾燥。在減壓下蒸發溶劑，並使殘留物於矽膠上藉層析純 化（負載於DCM中’並以30%，然後50% EtOAc/DCM，然 後2% MeOH/EtOAc溶離）’產生產物cixxix(434毫克， 64%) 〇
143112.doc •285 · 1359145 中間物實例169-化合物clxxx :
使起始物質clxxix(434毫克’ 0_64毫莫耳）溶於二氧陸圜 (6毫升）與0.5 M NaOH水溶液（4毫升，3當量）中。反應係操 作過夜。在100% EtOAc(使用PMA染色）之TLC顯示除了預 期之酸產物在起點以外’有較快速流動之產物。以1 N HC1使反應混合物酸化至ρΗ2，然後以EtOAc萃取2Χ。將固 體NaCl添加至水溶液中’以幫助萃取。然後，將有機萃液 合併’以MgSCU脫水乾燥，及在減壓下蒸發^ MS顯示CBZ 基團係被水解移除。將所形成之化合物C1XXX(定量產率）使 用於下一步驟中。
中間物實例170-化合物Clxxxi : 在圓底燒瓶中，於惰性大氣下，使化合物clxxx(279毫 克，0.54毫莫耳）溶於無水DMF(6毫升）中。添加HOAt(82毫 克’ 0.65毫莫耳）’並將反應物於室溫下攪拌25分鐘。然 後’使反應於冰 >谷中冷卻下來。接著添加Dic(0.11毫升， 0.65毫莫耳），然後添加無水dmF(4毫升）中之化合物 xiii'(0.7毫莫耳）。使反應物慢慢升至室溫，並攪拌21小 時。然後’將反應物傾倒在含有12〇毫升EtOAc之分液漏斗 中’並以1 N HC1(50毫升）洗滌2次，及以鹽水1次》分離有 143112.doc •286- 1359145 機層，以MgS04脫水乾燥。藉減壓蒸發溶劑，並使產物於 矽膠上藉層析純化（負載於DCM中，並以50% EtOAc/己 烷，然後3% MeOH/EtOAc，然後20% EtOH/EtOAc 溶離）。 移除溶劑後，使殘留物再溶解於Dri Solv THF中，及過濾 以移除任何矽膠。然後，移除溶劑，產生化合物 clxxxi(434毫克，64%產率）。
中間物實例171 -化合物clxxxiii : 在圓底燒#瓦中，於惰性大氣下，使6 -經基p比π定缓酸（1 5 3 毫克，1.1毫莫耳）溶於無水DMF(6毫升）中。
添加HOAt(151毫克，1.2毫莫耳），然後將反應物於室溫 下攪拌25分鐘。接著於冰浴中使反應冷卻下來。然後，添 加DIC(0.2毫升，0.16克，1.2毫莫耳），接著添加無水 DMF(4毫升）中之化合物clxxxii(1.0毫莫耳，435毫克）。
143112.doc - 287- 1359145 使反應物慢慢升至室溫，並攪拌2天。然後，將反應物 傾倒在含有120毫升EtOAc之分液漏斗中，並以1 N HC1(50 毫升）洗滌2次，及以鹽水1次。分離有機層，以MgS04脫 水乾燥。藉減壓溶劑蒸發，並使產物於矽膠上藉層析純化 (負載於DCM中，以30%，然後50% EtOAc/DCM，接著2% MeOH/EtOAc溶離），產生戶斤收集之化合物clxxxiii(3 14毫 克，56%)。
中間物實例1 72-化合物clxxxiv ·· 使起始物質clxxxiii(314毫克，0·56毫莫耳）溶於二氧陸 圜（5毫升）與0_5 M NaOH(3.4毫升，3當量）中。此反應係操 作過夜。在100°/。EtOAc中之TLC(使用UV)顯示完全轉化成 缓慢流動之酸產物，在起點。以1 N HC1使反應物酸化至 pH2，然後以EtOAc萃取2次。將固體NaCl添加至水溶液 中，以幫助萃取。然後，將有機萃液合併，以MgS04脫水 乾燥，接著在減廢下蒸發，產生化合物clxxxiv(0.5毫莫 耳，89%)，將其使用於下一步驟中。 ο
clxxxiv 143112.doc -288- 1359145 中間物實例1 73-化合物clxxxv : 在圓底燒瓶中，於惰性大氣下，使酸化合物clxxxiv(265 毫克，0.5毫莫耳）溶於無水DMF(6毫升）中。添加HOAT (75_6毫克，0.6毫莫耳），並將反應物於室溫下攪拌25分 鐘。然後，於冰浴中使反應冷卻下來。然後，添加 DIC(0.1毫升，0.6毫莫耳），接著添加無水DMF(4毫升）中 之化合物xiii'(0.65毫莫耳）。使反應物慢慢升至室溫，並攪 拌21小時。然後，將反應物傾倒在含有EtOAc(120毫升）之 分液漏斗中，並以1 N HC1(50毫升）洗滌2次，及以鹽水1 次。分離有機層，以MgS04脫水乾燥。藉減壓溶劑蒸發， 並使產物於矽膠上藉層析純化（負載於DCM中，以50% EtOAc/己烷，然後以純EtOAc，接著以4% MeOH/EtOAc溶 離），產生產物化合物clxxxv (185毫克，52°/〇)。
中間物實例174-化合物cxxxxiv1 於D-丙胺酸（5克，56.1毫莫耳）在1 N NaOH(152毫升， 152毫莫耳）中之溶液内，在0°C下，添加Me0C(0)Cl(6.5毫 升，84.2毫莫耳）在乙醚（30毫升）中之溶液。將混合物於冰 浴中攪拌3小時，然後以1 N NaOH調整至pH9。在室溫下 攪拌1小時後，將混合物以醚洗滌（3x50毫升），以5 N HC1 酸化至pH〜2，以EtOAc萃取（5x50毫升）。將有機萃液以 143112.doc - 289 - 1359145 水、鹽水洗滌，然後脫水乾燥（MgS04)。移除溶劑，產生 化合物〇\乂乂丨¥，>^-曱氧羰基-0-丙胺酸，為無色油（6.48克， 79%) °
中間物實例1 75-化合物clxxxvi : 於N-甲氧羰基-D-丙胺酸（0.193克，1.31毫莫耳）與 HOAt(0.177克，1.31毫莫耳）在DCM(10毫升）中，於冰浴中 冷卻之溶液内，以DCC(1.31毫升，1.31毫莫耳）處理。於 冰浴中撥拌0.5小時後，添加所製成化合物clxxxii(0.88毫 莫耳）在THF(8.8毫升）中之溶液。使混合物溫熱至室溫，並 攪拌過夜，然後於冰浴中冷卻，並以飽和NaHC03溶液， 使反應淬滅。過濾沉澱物，並使濾液溶於EtOAc(100毫升） 中。將有機層以飽和NaHC03溶液鹽、水洗滌，然後脫水 乾燥（MgS04)。移除溶劑後，使殘留物藉矽膠管柱層析純 化（60% EtOAc/己院），產生化合物clxxxvi，為膠黏泡沐物 (0.321 克，68%)。
中間物實例176-化合物clxxxvii : 於化合物clxxxvi(0.321克，0.597毫莫耳）在EtOH(5毫升） 143112.doc -290- 1359145 中之溶液内，於5°C下，添加2NNaOH(1.05毫升，2.1毫莫 耳）。將混合物於室溫下攪拌4小時。以1 N HCH吏溶液酸 化至pH〜2，並藉迴轉式蒸發移除EtOH。將混合物以EtO Ac 萃取（3x30毫升），並將合併之萃液以鹽水洗滌，然後脫水 乾燥（MgS04)。移除溶劑，並使殘留物在真空下乾燥，獲 得化合物(：1乂乂乂¥丨丨，為膠黏泡珠物（0.23 5克，77°/〇)。
clxxxvii 中間物實例177-化合物clxxxviii : 使化合物clxxxvii(0.363克，0.712毫莫耳）在DCM(10毫 升）中之溶液，在冰浴中冷卻，並以PyBOP(0.594克，1.14 毫莫耳）處理。在室溫下攪拌0.5小時後，使混合物於冰浴 中冷卻，並以化合物xiii’（l.l毫莫耳）在THF(11毫升）中之 溶液，及DIPEA(0.249毫升，1.42毫莫耳）處理。將混合物 在室溫下攪拌過夜，並以NH4C1溶液，使反應淬滅。使溶 劑濃縮，並使混合物溶於EtOAc(100毫升）中。將有機層以 飽和NaHC03溶液、鹽水洗滌，然後脫水乾燥（MgS04)。移 除溶劑後，使殘留物藉管柱層析純化（5% EtOH/EtOAc)， 獲得 clxxxviii(0.341 克，71°/〇)。 中間物實例178-化合物clxxxix : 使二胺基丙酸（3克，28.7毫莫耳）溶於lMNaOH(86.2毫 143112.doc -291 - 1359145 升，86·2毫莫耳）中，並冷卻至0°C，然後添加Et20(25毫 升）中之Me0C(0)Cl(5.54毫升，71.75毫莫耳）。將所形成之 混合物攪拌過夜，溫熱至室溫。使反應混合物之pH值降至 2，並將水層以EtOAc萃取3次。將萃液合併，並以Na2S04 脫水乾燥，過遽及濃縮，產生化合物clxxxix(3.09克， 48.9%)。
0H clxxxix 中間物實例179-化合物cc : 使化合物clxxxix(340毫克，1.55毫莫耳）溶於DCM(4毫 升）中。添加DCC(1.7毫莫耳）與HOAt(235毫克，1.7毫莫 耳），接著為DCM(3_4毫升）中之化合物clxxxii(1.7毫莫 耳）。將反應混合物攪拌過夜。隔天，使反應混合物經過 矽膠墊片過濾，及濃縮。在75% EtOAc/己烷中達成純化， 獲得化合物clxxxx(715毫克，72.4%)。
clxxxx 中間物實例1 80-化合物clxxxxi : 在標準條件下，使用EtOH(4毫升）與1 N NaOH(3當量）， 143112.doc -292- 1359145 使化合物clxxxx(715毫克，1.12毫莫耳）水解，產生化合物 clxxxxi (600毫克，88.0%) 0
中間物實例1 8 1 -化合物clxxxxii :
使化合物clxxxxi(550毫克，0.9毫莫耳）溶於DCM(8毫升） 中。添加PyBOP(675毫克，1.3毫莫耳），接著為THF(1.3毫 升）中之化合物xiii'(1.3毫莫耳）。添加DIPEA(0.23毫升， 1.3毫莫耳），並將所形成之溶液攪拌過夜。隔天，將反應 物以EtOAc稀釋，以飽和NaHC03，然後以鹽水洗滌，接著 濃縮，產生殘留物。使所形成之殘留物藉由5% EtOH/ EtOAc純化，產生化合物clxxxxii(290毫克，41.5%)。
中間物實例182-化合物clxxxxiii : 在標準條件下，使用MeOH(60毫升）與1 N NaOH(52.8毫 升，3當量），使Cbz-環己基甘胺酸-第三-白胺酸曱酯（7.36 克，17.6毫莫耳）水解，回’收所產生之中間物clxxxxiii 143112.doc -293 -
1359145 中間物實例1 83-化合物clxxxxiv : 使化合物clxxxxiii(3.82克，9.46毫莫耳）溶於〇〇]\4(30毫 升）中。添加DCM(11.35毫升）中之DCC(11.35毫莫耳），接 著添加HOAt( 1.54克，11.35毫莫耳）。將所形成之混合物攪 拌五分鐘，並添加THF(40毫升）中之化合物v(9.46毫莫 耳）。將所形成之混合物攪拌過夜。隔天，將反應混合物 以EtOAc稀釋，以1 N HC1，飽和NaHC03，然後以鹽水洗 滌，接著濃縮，產生殘留物。使所形成之殘留物藉由20% 至30%梯度液，於ί夕膠上純化，獲得化合物clxxxxiv(3.03 克，56.3%)。
中間物實例1 83-化合物clxxxii : 使用10% Pd/C(500毫克），在MeOH(30毫升）中，於Η 下，使化合物clxxxxiv(3.03克，5.33毫莫耳）氫化4小時， 產生化合物 clxxxii(2.3克，99°/〇)。 中間物實例1 84-化合物clxxxxv : 143112.doc -294- 1359145 於1-胺基-1-環己烷羧酸（2.86克，20毫莫耳）在]\^〇11(40 毫升）中之溶液内，在0°C下逐滴添加S0C12(3毫升）。使混 合物慢慢溫熱至室溫，然後回流5小時。接著將醚添加至 該透明溶液中，並分離沉澱物。使固體在真空下進一步乾 燥，產生化合物clxxxxv(95%)，為白色粉末。
中間物實例1 85-化合物clxxxxvi :
藉由添加DCM中之HOAt(l.l克，8毫莫耳）與DCC(8毫 升，1 M)，使2-吡畊羧酸（1克，8毫莫耳，1當量）溶於 DCM( 1 5毫升）中。在室溫下攪拌20分鐘後，將化合物 clxxxxv( 1.3克，8毫莫耳）添加至該經活化之混合物中。添 加DIPEA(2毫升，12毫莫耳），接著為DMAP(1.5克，12毫 莫耳）。在室溫下攪拌3天後，使反應混合物經過矽藻土過 濾，濃縮，並將所要之產物clxxxxvi藉管柱層析純化（50°/〇 EtOAc/己烷），為黃色油（2.1克，100%)。
中間物實例1 86-化合物clxxxxvii : 藉由添加2 N NaOH(水溶液）（12毫升，24毫莫耳），使化 合物clxxxxvi(1.06克，2.6毫莫耳）溶於]\^〇叫30毫升）中。 在TLC(50°/。EtOAc/己烷）顯示完全水解之前，將此溶液在 143112.doc -295 - 1359145 室溫下攪拌過夜。該溶液以5 N HC1酸化至pH3，並以 EtOAc稀釋之後，萃取有機層。接著以鹽水洗滌有機層， 並使用MgS04脫水乾燥，於濃縮後，以84%產率獲得化合 物 clxxxxvii 0
中間物實例1 87-化合物clxxxxviii :
使化合物clxxxxvii (1.6克，6.4毫莫耳）溶於DCM(18毫 升）中，且接著在室溫下添加HOAt(0.96克，7毫莫耳）與 DCC(7毫升，1 Μ，在DCM中）。在室溫下攪拌20分鐘後， 將L-第三-白胺酸曱酯鹽酸鹽（7毫升，1 Μ在THF中）添加至 經活化之混合物中。接著添加DIPEA( 1.2毫升，7毫莫 耳），及隨後添加DMAP (1.2克，9.8毫莫耳）。在室溫下攪 拌3天後，使反應混合物經過矽藻土過濾，藉管柱層析純 化並濃縮產生化合物clxxxxviii(60% EtOAc/己炫），為白色 固體（1_74克，72%)。
clxxxxviii 中間物實例188-化合物cic : 使化合物clxxxxviii(1.74克，4.6毫莫耳）溶於MeOH(22毫 升）中，並添加2 N NaOH(水溶液）(7毫升，14毫莫耳）。在 143112.doc -296- 1359145 TLC(50% EtOAc/己烧）顯示完全水解之前，將此.、容液在室 溫下攪拌過夜。該溶液以5 N HC1酸化至pH3，並以Et〇Ac 稀釋之後，萃取有機層。接著以鹽水洗滌有機層，並使用 MgS〇4脫水乾燥，於濃縮後產生化合物cic(100%)。
中間物實例189-化合物cc : 於化合物cic(1.5克，4.1毫莫耳）之DCM溶液（15毫升） 中，在室溫下，添加HO At(6 10毫克，4.5毫莫耳），接著為 DCM中之1 M DCC溶液（4_5毫升，4·5毫莫耳）。在室溫下 擾拌30分鐘後’接著添加化合物ν(4毫莫耳）之thf溶液（2〇 毫升’ 0.2 Μ)。將反應物在室溫下攪拌過夜。然後，使反 應物經過矽藻土過濾。使濾液濃縮成黃色油，使其藉矽膠 層析純化（50% EtOAc/己烷），產生化合物cc (66〇毫克， 32%) 〇
中間物實例190-化合物 cci : 於化合物CC (600毫克，1.13毫莫耳）2Et〇H溶液（6毫升） 中’添加2 N NaOH(1.7毫升，3.4毫莫耳）。將反應物在室 溫下攪拌2小時，然後藉5 N HC1酸化至PH3。然後，將混 143112.doc •297· 1359145 合物以EtOAc稀釋’接著萃取有機層。接著，將有機層以 鹽水洗滌，然後以MgS04脫水乾燥，於濃縮後，產生二合 物 cci(92%)。
中間物實例191 -化合物ccii :
於cci(310^克’ 0.62毫莫耳）之DCM溶液（8毫升）中，添 加PyBOP(420毫克’ 0.8毫莫耳）^將此溶液於室溫下攪拌 30分鐘。然後，於此溶液中添加THF中之化合物xiii，（8毫 升，0.1 M) ’接著添加DIPEA(0.23毫升，1.3毫莫耳）。將 反應物在室溫下攪拌過夜，然後以水（25毫升）使反應淬滅 30分鐘。然後以EtOAc萃取混合物。將所形成之有機層以 鹽水洗滌，然後在濃縮之前，以MgS04脫水乾燥，產生黃
色油。藉矽膠層析純化（3% EtOH/EtOAc)產生化合物 ccii(140毫克，33%)。
中間物實例192-化合物cciv 於化合物cciii、（N_二苯亞甲基甘胺酸第三-丁酯（6 克，0.0206毫莫耳）與對掌性pTC(l08克，0.00206毫莫耳） 在無水DCM(48毫升）中之溶液内，於大氣及-60°C下， 143H2.doc -298- 1359145 添加CsOH’H2〇(6.9克，0.0412毫莫耳）。於反應混合物中 逐滴添加10毫升DCM中之1-羧基-1-環戊烯曱酯（5.2毫升， 0.0412毫莫耳將混合物在_6〇艽下攪拌4天，然後以2〇〇 宅升EtzO稀釋’並添加15毫升飽和NH4C1水溶液。分離液 相’並將有機相以15毫升水及丨5毫升鹽水洗滌。將水相以 100耄升Et；2〇萃取。合併有機相，並以Na2s〇4水乾燥。藉 由移除溶劑’獲得粗產物，溶於10〇毫升Et0H中，然後添 加 NH2〇H HCl(1.43 克，0.0206 毫莫耳）與 NaOAc(1.68 克， 〇.0206毫莫耳）。使混合物回流48小時。然後，移除溶劑， 並將所獲得之粗製殘留物直接藉急驟式層析純化，以3〇%_ 5〇% EtOAc/己烷溶離’產生化合物cciv(65%)，為白色固 體。C12H19N03(MW=225.29) ; MS : m/z (M++l)=226.5。 對掌異構物過量：1 8%ee ’藉對掌性HPLC測得。 £ 〇 N^C02t-Bu Η cciv 中間物貫例193-化合物ccv 於化合物cciv(2克，0.0088毫莫耳）在60毫升ACN中之溶 液内，添加催化量之DMAP(0.216克，0.0017毫莫耳），及 二石反酸二_第三_丁酯（2.49克，〇.〇11毫莫耳）在3〇毫升八(^ 中之溶液。將混合物在室溫下攪拌14小時，然後以1〇〇毫 升DCM稀釋，並以飽和NaHC〇3(l〇毫升）及以鹽水（1〇毫升） 洗務。有機相以NaJO4脫水乾燥。蒸發溶劑，產生粗產 143112.doc -299- 1359145 物，使其在矽膠管柱上純化，以15% EtOAc/己烷溶離，獲 得化合物ccv (86%)，為白色固體。C17H27N05，MW= 325.40 > MS ： m/z (M++l)=326.2
中間物實例194-化合物ccvi 於化合物ccv(1.7克，0.0052毫莫耳）在50毫升THF(0.14 Μ)中之溶液内，在-78°C下，添加DIBAL-H(7.8毫升， 0.0078毫莫耳）。將混合物攪拌1小時，然後添加10毫升 MeOH。將混合物以25毫升EtOAc及25毫升飽和酒石酸鈉 水溶液稀釋，然後於室溫下攪拌一小時。分離液相，並將 水相以50毫升EtOAc萃取一次。將有機相合併，並以 Na2S04脫水乾燥。蒸發溶劑，獲得粗製殘留物，使用之而 無需任何純化。使粗製物溶於25毫升DCM中，添加Et3Si (0.84毫升，0.0052毫莫耳），然後使混合物在-78°C下冷 卻，接著逐滴添加BF3OEt2(0.71毫升，0.0061毫莫耳）。30 分鐘後，添加Et3Si(0.84毫升）與BF3OEt2(0_71毫升），並將 混合物攪拌2小時至-78°C。接著，以飽和NaHC03水溶液 (10毫升）使反應淬滅，並以DCM萃取（2x20毫升）。合併有 機相，並以Na2S04脫水乾燥。蒸發溶劑，獲得粗製殘留 物，使其藉急驟式層析純化，以13% EtOAc/己烷溶離，產 生化合物ccvi(87%)。C17H29N04，MW=311.42，MS : m/z 143112.doc •300- 1359145 (M++l)=312.6 Ο 、人 C02t-Bu
I
BOC ccvi 中間物實例195-化合物ccvii
使化合物ccvi(0.5克，0.0016毫莫耳）溶於EtOAc中之8毫 升1 N HC1(經由使無水HC1起泡至無水Et〇Ac中，然後以另 外之EtOAc稀釋至1N而製成）中。將混合物在室溫下搜拌6 小時。於真空中移除溶劑，並使所形成之沉澱物溶於玢2〇 中β將昆合物攪拌1 5分鐘後’在減壓下移除溶劑。將所形 成之白色固體以EhO洗滌，並藉過濾分離化合*ccvii(〇 27 克，80% 產率）’ C12H21N02，MW 211.15，MS : m/z (Μ++1)=212.6
H*HCI ccvii 中間物實例196-化合物v 於化合物CCXvi(0.230克，〇74毫莫耳）在（：^〇：12(3 7毫升. 中之溶液内，添加TFA(2.85毫升）。將混合物攪拌過夜， 然後於真空中移除溶劑至乾酒，並使殘留物溶於⑽叩」 毛升）中使扣口物在〇 C下冷卻，並逐滴添加S⑽2(〇二2 毫升’ 2.96毫莫耳）’然後回流2小_。於減壓下移除 143112.doc 1359145
EtOH，並使殘留物溶於CH2C12(10毫升）中。將所形成之溶 液以飽和NaHC03水溶液（5毫升）洗滌兩次❶分離液相，並 使有機相以Na2S04脫水乾燥，及在真空中移除溶劑，產生 化合物 v(80°/〇)為油。C1()H17N02，M. W. : 183.25，MS : m/z(M++l)=l 84.2 中間物實例197-化合物Cd 使1-苄基咪唑（6克，37.9毫莫耳）溶於£12〇(180毫升）中。 使所形成之溶液降至-60°C，並以n-BuLi(1.6 Μ，24毫升） 處理。將反應物攪拌30分鐘，然後使C02起泡通過混合物 15分鐘。將沉澱物過濾’以Et20沖洗，然後溶於H20中。 以5 N HC1使此水溶液酸化至ph=3。於冷凍乾燥後，分離 所要之產物cd，為白色固體。
中間物實例198-化合物cdi 將化合物i(9.25克’ 27_9毫莫耳）之DCM溶液（100毫升）， 在〇°C下，以DAST(9.2毫升，69.8毫莫耳）處理。在室溫下 攪拌過夜後，以冰使反應淬滅，並以DCM(200毫升）萃 取。將有機層以鹽水洗滌，及在真空中濃縮。使殘留物以 矽膠層析純化（30°/。EtOAc/己烷），產生8.5克（86%)所要之 氟化中間物。使一部份此中間物（4.5克，14.2毫莫耳）溶於 143112.doc •302- 1359145
EtOH(75毫汁）中。使此溶液接受標準氫化條件，使用 Pd(OH)2/C(2.98克，20% Pd含量，4.26毫莫耳）。於室溫下 攪拌過夜後，使反應混合物經過矽藻土過濾。在真空中濃 縮濾液，產生化合物cdi(2.5克，96%)。
cdi 中間物實例199-化合物cdii
於化合物cd(890毫克，4.4毫莫耳）溶於DCM(15毫升）中 之溶液内，添加HOBT(595毫克，4.4毫莫耳）與0(：(：(4.4毫 莫耳，1 Μ在DCM中），並攪拌20分鐘。將ixxix\990毫 克，3.5毫莫耳）之DCM溶液（15毫升）添加至此混合物中。 將所形成之混合物於氮氣下攪拌過夜。將反應混合物以 EtOAc稀釋，以飽和NaHC03與鹽水洗滌。使有機層在真空 中濃縮，而得殘留物，使其在30% EtOAc/己烷中純化，產 生化合物cdii(666毫克，41%)。
中間物實例200-化合物cdiii 143112.doc -303 - 1359145 化合物cdm係於標準水解條件下，使用曱醇（1〇毫升）與1 N NaOH(3當量），製自化合物cdi。回收565毫克化合物 cdiii (88%)。
中間物實例201-化合物Cdiv 使化合物cdiii(l_24毫莫耳）溶於DCM(5毫升）中。添加 DCC (1.6毫莫耳，1MDCM)，接著為HOAT(1.6毫莫耳）。 將所形成之混合物攪拌20分鐘，並逐滴添加THF(8毫升）中 之化合物cdi(1.6毫莫耳）。將反應物攪拌過夜。過濾反應 物’並以EtOAc沖洗。將合併之有機層以飽和NaHC03、鹽 水洗滌，以MgSCU脫水乾燥’及濃縮。在π% EtOAc/己烧 中達成純化’產生化合物cdiv(565毫克，70%)。
143112.doc •304 - 1359145 中間物實例202-cdv 化合物cdv(565毫克，〇·86毫莫耳）係於標準水解條件 下，使用乙醇（10毫升）與i N Na0H(3當量），製自化合物 cdiv。回收490毫克（91%)化合物cdv。
cdv 中間物實例203-cdvi 使化合物cdvi(490毫克，〇,78毫莫耳）溶於DCM(1〇毫升） 中。將PyBOP(520毫克，1毫莫耳）添加至該DCM溶液中， 接著為xiii(186毫克，1毫莫耳）之THF溶液（1〇毫升）。將 DIE Α(0· 1 8¾升，1毫莫耳）添加至反應混合物中，並於氮 氣下攪拌過夜。隔天，將反應物以Et〇Ac稀釋，以飽和 NaHC〇3與鹽水洗滌。在100% Et〇Ac中達成純化，產生化 合物 cdvi(478 毫克，77%)。
cdvi 143112.doc - 305 - 1359145 中間物實例204-cdvii 使用Pd(OH)2/C(20%，以乾重為基準，100毫克）在 MeOH(40毫升）中，使化合物cdvi(478毫克，0.6毫莫耳）氫 化。將反應混合物於氫下攪拌過夜。此時，使反應混合物 經過石夕藻土過遽及濃縮，產生化合物cdvii(417毫克，
中間物實例205-cdx 使化合物〇乂父¥(購自八15丑11丫1分子研究公司，1.5克，5.2毫 莫耳）溶於DCM(15毫升）中。將PyBOP(2.7克，5.2毫莫耳） 與HOBT(700毫克，5·2毫莫耳）添加至此溶液中。將（-)-α-(4-吡啶基）乙胺（640毫克，5.2毫莫耳）之THF溶液（15毫升） 添加至上述溶液中，接著為DIEA(0.93毫升，5.2毫莫耳）。 (-)-α-(4-吡啶基）乙胺，係得自（-)-α-(4_吡啶基）乙胺之酒石 酸鹽（Aldrich)，其方式是與1 N NaOH(2當量）攪拌1小時， 接著以EtOAc萃取（3x)(70%回收）。 將反應物於室溫下攪拌過夜。將反應混合物以飽和 NaHC〇3與鹽水洗滌。使產物在5% EtOH/EtOAc中純化， 產生2克（99%)中間化合物cdx。 143112.doc -306- 1359145
中間物實例206-cdviii 使用10% Pd/C(500毫克）在MEOH(50毫升）中，使化合物 cdx(2克，5.2毫莫耳）氫化。將反應混合物於氫下攪拌過 夜。使產物經過石夕藻土過濾、，及濃縮，而得化合物
cdviii 藥理學 根據本發明之化合物，如本文中所述，可用於抑制HCV 蛋白酶，因此亦可用於抑制HCV複製。 因此，此處本發明係針對抑制HCV蛋白酶之方法，其包 括使抗-HCV蛋白酶抑制量之式1化合物與包含HCV蛋白酶 之組合物接觸。 此處之又另一發明係針對一種抑制HCV複製之方法，其 包括使HCV與有效量之式1化合物接觸。再者，此處之另 一發明係針對一種治療患有或遭受HCV感染之病人之方 法，其包括對該病人投予藥學上有效量之式1化合物。於 本文中指稱治療HCV感染，應明瞭係包括預防療法，以防 止或抑制感染，以及治療已建立之急性或慢性HCV感染或 143112.doc -307· 1359145 與HCV感染有關聯之生理學症狀，以基本上治癒感染之病 人，抑制感染程度（量），或改善與其有關聯之生理學症 狀 有>丈里係意欲說明本發明化合物之量，在合理生物 學判斷之範圍内有效，適用於與人類及其他哺乳動物之細 胞接觸，而無不當毒性、刺激性、過敏性回應等，且在治 療HCV感染上，伴隨著合理利益/風險比，及因此產生所 要之治療效果。 本文中所討論之生理學症狀，包括一部份，但並非所有 其中抗-HCV治療被認為正當之可能臨床狀況。在此領域 中有經驗者，係極明瞭需要任一種抗_HCV治療之狀況。 本發明之一個特定方面’係提供根據本發明之化合物係 欲以"J·藥組合物之形式投藥，惟此化合物可單獨投藥。 醫藥組合物"係意謂一種組合物，其包含式丨化合物，及 至少一種成份’選自包括藥學上可接受之載劑、稀釋劑、 塗層、佐劑、賦形劑或媒劑，譬如防腐劑、填料、崩解 劑、潤濕劑、乳化劑、乳化安定劑、懸浮劑、等滲劑、增 甜劑、矯味劑、芳香劑、著色劑、抗細菌劑、抗真菌劑、 其他治療劑、潤滑劑、吸附延遲或促進劑及分配劑，依投 藥模式與劑量形式之性質而定。此等組合物可呈現片劑、 丸劑、顆粒、粉末、水溶液或懸浮液、可注射溶液、酏劑 或糖漿形式。舉例之懸浮劑包括乙氧基化異硬脂基醇類、 聚氧化乙烯花楸醇及花楸聚糖酯類、微晶性纖維素、偏氫 氧化鋁、膨土、瓊脂及西黃蓍樹膠，或此等物質之混合 物。舉例之用以防止微生物作用之抗細菌劑與抗真菌劑， 143112.doc •308· 1359145
包括對經基笨甲酸酿類、氣丁醇、紛、花楸酸等。舉例之 4渗劑’包括糖類、氣化鈉等。舉例之延長吸收之吸附延 遲劑，包括單硬脂_與日轉。舉例之加強吸收之吸附促 進劑，包括二甲亞磯及相關類似物。舉例之載劑、稀釋 劑、溶劑、媒劑、促溶劑、乳化劑及乳化安定劑，包括 水、氯仿、嚴糖、乙醇、異丙醇、碳酸乙醋、醋酸乙醋、 爷醇、四氫吱°南甲醇、苯甲酸爷醋、多元醇、丙二醇、 ，丁醇甘油、聚乙二醇、二甲基甲酿胺、⑧ 二、如⑽80、綠壤硬脂基醇、+四烧醇、單硬脂酸甘油 S曰及月桂基^酸鈉、花楸聚糖之脂肪酸酯類、植物油(嬖 如棉軒油、、花生油、玉米胚芽油、撖欖油、萬麻油及芝麻 油）’及可注射有機酯類’譬如油酸乙酯等，或此等物質 之適當混合物。舉例之賦形劑，包括乳糖、乳糖、檸檬酸 納、碳酸妈、璃酸二的。舉例之崩解劑，包括澱粉、海藻 酸類及某些複雜㈣鹽。舉例之潤滑劑，包括硬脂酸I 月桂基硫酸鈉、滑石，以及高分子量聚乙二醇。 ' 其他治療劑可與本發明化合物合併使用包括九 赠劑…些舉例之已知抗術劑，包括免疫調節劑^ 言如心、β4γ-干擾素；經觸化之衍生干擾素…化合 物’其他抗病毒劑，譬如三唑核苷與金剛胺；c型肝 白酶之其他抑制劑；在Hcv生命期中其他標的之抑制劑， 包括解螺旋酶、聚合酶' 金屬蛋.白酶、内部核糖體進入 物’或廣效抗病毒化合物，譬如νχ.497,—種細胞纖维拉 嘗单填酸鹽脫氫酶（IMPDH)之抑制劑，被美國專^ 1431J2.doc •309- 1359145 5,807,876所涵蓋；或其組合。可與本發明化合物併用之治 療劑可分別、同時或順序投藥， 在醫藥組合物中’式1化合物以外之物質之選擇，通常 係根據活性化合物之化學性質，譬如溶解度，特定投藥模 式，及在醫藥實務中欲被遵守之規定作決定β例如，賦形 劑，譬如乳糖、擰檬酸鈉、碳酸鈣、磷酸二鈣，及崩解 劑，譬如澱粉、海藻酸及某些複合矽酸鹽，與潤滑劑’壁 如硬脂酸鎂、月桂基硫酸鈉及滑石併用，可用於製備片 劑。 此等醫藥組合物可以各式各樣形式呈現，譬如片劑、丸 劑、顆粒、粉末、水溶液或懸浮液、可注射溶液、醜劑或 糖栽。 旦，，液體劑量形式”係意謂欲被投予病人之活性化合物劑 量，係呈液體形式，例如藥學上可接受之乳化液' 溶液、 懸浮液、糖漿及酿劑1 了活性化合物以外，液體劑量形 式可含有常用於此項技藝中之.降，地雄链^由， π仪％〒之惰性稀釋劑，譬如溶劑、促 溶劑及乳化劑。 亦可採用固體组合物，在齡，地伽成新+ 在軟性與硬質充填明膠膠囊中， 作為填料，使用之賦形劑链 μ〜d s如礼糖或牛奶糖，以及高分 量聚乙二醇等。 當使用含水懸浮液時，兑可冬 ” 了 3有礼化劑或有助於懸浮之 ’自已知成份構 為乳化作用劑 乳化醫藥組合物之油相’可以已知方式 成 。雖然此相可以僅包合受丨 I 3礼化劑（另稍 143112.doc -310- 1359145 (emulgent))，但一般期望包含至少一種乳化劑與脂肪或 油，或與脂肪及油兩者之混合物。較佳係包含親水性乳化 劑，以及充作安定劑之親脂性乳化劑。亦較佳係包含油與 脂肪。乳化劑與安定劑—起或未使用安定劑’構成乳化用 蠟，而與油及脂肪一起之方式，係構成乳化軟膏基料其 係形成乳膏配方之油性分散相。 若需要，乳膏基料之水相，可包括例如至少3〇% w/w多 羥醇，意即具有兩個或多個羥基之醇，譬如丙二醇、丁烷 1，3-二醇、甘露醇、花楸醇、甘油及聚乙二醇（包括pEG 4〇〇)及其混合物。局部配方可能期望包含會加強活性成份 吸收或浸透經過皮膚或其他受感染區域之化合物。 供配方用之適當油類或脂肪類，其選擇係以達成所要之 美觀性質為基礎°因此，乳膏較佳應為不油腻、非污染性 及可洗務之產4勿，具有適當稠度，以避免自管件或其他容 器漏可使用直鏈或分枝鏈、單或二元烧基醋類，譬 如肉五地S夂一異丙酯、油酸癸酯、棕櫚酸異丙酯、硬脂酸 丁 S曰、棕櫚酿2·乙基己S旨，或分枝鏈醋類之摻合物，稱為
Crodamol CAP。其可單獨或合併使用，依所需要之性質而 定。或者’可使用高熔點脂質，譬如白色軟性石蠟及/或 液態石蠟或其他礦油。 貝用上，本發明之化合物/醫藥組合物可以適當配方， 藉由局部或系統投藥’投予人類與動物，包括口腔、吸 入、直腸、鼻、面頻、舌下、陰道、結腸、非經腸（包括 皮下肌内、靜脈内、皮内、鞘内及硬膜外）、腦池内及 143I12.doc -311 - 1359145 腹膜腔内。應明瞭的是，較佳途徑可隨著例如接受者之症 狀而改變。 藥學上可接受之劑量形式"係指本發明化合物之劑量形 弋 ^括例如片劑、糖衣錠、粉末、酏劑 '糖漿，液體 製劑’包括懸浮液，喷霧劑、吸人片冑 '鍵劑、乳化液、 溶液、顆粒、膠囊及栓劑，以及注射用之液體製劑，包脂 質體製劑。技術與調配方法可—般性地參閱最新版之 Remington氏醫藥科學，Mack出版公司（East〇n，pA)。 適於口服投藥之配方"可以不連續單位呈現，譬如朦 囊、扁囊劑或片劑，各含有預定量之活性成份；成為粉末 或顆粒，成為溶液或懸浮液，在水性液體或非水性液體 中；或成為油在水中型液體乳化液，或水在油中型液體乳 化液活性成伤亦可呈現為大丸劑 '添劑或糊劑。 片劑可藉由壓縮或模製製成，視情況使用一或多種辅助 成份。壓縮片劑可經由將呈自由流動形式之活性成份，譬 如粉末或顆粒，在適當機器中壓縮而製成，視情況與黏合 劑、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性或分散劑混 合。模製片劑可經由將已使用惰性液體稀釋劑濕潤之粉末 狀化合物之混合物’在適當機器中模製而製成。此等片劑 可視情況經塗覆或刻劃’並可經調配，以提供其中活性成 份之緩慢或受控釋出。 供直腸投藥之固體組合物’包括根據已知方法調配且含 有至少一種本發明化合物之栓劑。 若需要且為更有效分佈，可將此等化合物微包膠在於或 143112.doc •312· 1359145 連附至缓k釋出或標的傳輸系統，譬如生物可相办 可降解之聚合體基質(例如聚((1，丨_内交醋共_乙交：、生： 質體及微球體，及藉由被稱為皮下或肌内積 ）月曰 , 技'術，以 皮下方式或肌内方式注射，以提供此等化 _ , 切 < 連續緩愒 釋出，歷經2週或較長時間。此等化合物可經滅菌，尹 經過細菌保留濾器過濾，或經由在無菌固體組合物形^如 擦入殺菌劑，其可在即將使用之前，溶於無菌I或某=1 他無囷可注射媒質中。 "適用於鼻或吸入投藥之配方"係意謂呈適合以鼻方式或 猎吸入方式投予病人形式之配方。此配方可含有載劑，： 粉末形式，具有粒子大小例如在丨至5〇〇微米之範圍内（包 括粒子大小在20與500微米間之範圍内，呈5微米之增量匕 譬如30微米，35微米等其中載劑為液體，以例噴 霧劑或以鼻滴劑供投藥之適當配方，係包含活性成份:水 性或油性溶液。適於氣溶膠投藥之配方，可根據 製成’並可與其他、治療劑-起傳輸。吸人療法可容易地藉 由經計量之劑量吸入器投藥。 ”適於口服投藥之配方"係意謂I適合經口投予病人形式 之配方。此等配方可呈現*連續單位，#如膠囊、扁囊劑 或片劑，各含有敎量之活性成份；成為粉末或顆粒；成 為溶液或懸浮液，在水性液體或非水性液體中；或成為油 在水中型液體乳化液，或水在油中型液體乳化液。活性成 伤亦可呈現為大丸劑、舔劑或糊劑。 π適於非經腸投藥之配方"係意謂呈適合以非經腸方式投 143112.doc -313 - 1359145 ii的’且包括乳化 其可含有懸浮劑與 ’及使得配方具有 ，並具有經適當調 予病人形式之配方。此等配方係為無 液'懸浮液、水性與非水性注射溶液， 增稍劑’及抗氧化劑、緩衝劑、制菌劑 與所意欲接受者之血液呈等滲性之溶質 整之pH值。 "適於直腸或陰道投藥找方”係意謂呈適合以直腸方式 或以陰道方式投予病人形式之配方。此配方較佳係呈检劑 形式’其可經由將本發明化合物與適#無刺激性賦形劑或 載劑譬如可可旦脂、聚乙二醇或栓劑蠟混合而製成，其在 一般溫度下為固體’但在體溫下為液體，因此會在直腸或 陰道腔中熔解，並釋出活性成份。 適於系統投藥之配方π係意謂呈適合以系統方式投予病 人形式之配方。此配方較佳係藉由注射投藥，包括經由肌 肉、靜脈内、腹膜腔内及皮下。對注射而言，係將本發明 化合物調配在液體溶液中’較佳係在生理學上可相容之緩 衝劑中’譬如Hank氏溶液或林格氏溶液。此外，可將此等 化5物調配成固體形式’並在即將使用之前再溶解或懸 浮。經凍乾形式亦包括在内。系統投藥亦可藉由經黏膜或 經皮方式，或此等化合物可經口投藥。對於經黏膜或經皮 投藥而言，係於配方_使用對於欲被滲透之障壁適合之浸 透劑。此種浸透劑係為此項技藝中一般已知的，且包括例 如供經黏膜投藥用之膽汁鹽與梭鏈孢酸衍生物。此外，可 使用清潔劑以幫助滲透。經黏膜投藥可經由使用例如鼻喷 霧劑或栓劑。對口服投藥而言’可將化合物調配成習用口 143I12.doc -314· 1359145 服投藥形式，譬如膠囊、片劑及補藥。 "適用於4料藥之配方”係意謂呈適合以局部方式产予 病人形式之配方。此配方可呈現為局部軟膏、藥二 末、噴霧劑及吸入藥、凝膠（水或醇系）、乳膏，1 y
項技藝中-般已知的，或被摻人基料中，以供塗敷於= 上，其允許受控釋出化合物經過經皮障壁。當經調配在軟 :中時，活性成份可與無論是石犧或水可溶混之軟膏基^ 一起採用。或者，活性成份可與油在水中型乳膏基料Γ_ 起調配在乳膏中。適合局部投予眼睛之配方，包括滴眼 d，其中係使活性成份溶解或懸浮於適當載劑申尤其是 供活性成份用之水性溶劑。適合局部投予嘴巴之配方，包 括錠m含活性成份，㈣味基料中，通常為薦糖= 阿拉伯膠或西黃箸樹膠；軟錠劑，其包含活性成份，在情 性基料中，譬如明膠與甘油，或蔗糖與阿拉伯膠；及漱口 水，其包含活性成份，在適當液體載劑中。
固體劑量形式"係意謂本發明化合物之劑量形式為固體 形式，例如膠囊、片劑、丸劑、粉末、糖衣錠或顆粒。在 此種固體劑量形式中，係將本發明化合物與至少一種惰性 習用賦形劑（或載劑）譬如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，或下述物 貝互/吧，（a)填料或增量劑，例如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄 糖、甘露醇及矽酸，黏合劑，例如羧曱基纖維素、海藻 酉文鹽、明膠、聚乙烯基四氫吡咯酮、蔗糖與阿拉伯膠，（c) 保濕劑，例如甘油，（d)崩解劑，例如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴 薯或木薯澱粉、海藻酸、某些複合矽酸鹽及碳酸鈉，（e)溶 】431】2.doc •315· 1359145 :阻滞劑，例如石壤，吸收加速劍，例如四級錄化合 物，⑷潤濕劑，例如録蟻醇與單硬脂酸甘油醋 附
劑’例如高嶺土與膨土，⑴潤、、A ^ ⑴潤滑劑，例如滑石、硬脂酸 •、硬脂㈣、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉，⑴遮光 衝Γ及以延遲方式在腸道之某-部份釋出本發 明化合物之作用劑。 活性成份在本發明組合物中之實際劑量程度，可以改 =獲得活性聽之量，其係針對特定组合物與投藥方 對病人有效獲得所要之治療回應。因此，對特定病人 所選擇之劑量程度係依所要之治療效果、投藥途徑、所要 之治療期間、疾狀病因學與嚴重性、病人之症狀 2、性別、飲食與年齡、各活性成份之種類及功效、吸收 率'代謝及/或排泄及其他因素而定。 旦以單-或分離劑量投予病人之本發明化合物之總曰服劑 =’其置可為例如每天約0.001至約1〇〇毫克/公斤體重，且 較佳為〇.〇1至10毫克/公斤/天。例如，在成人中此劑量 通常為每天藉由吸入約0.01至約100，㈣為約〇〇1至㈣ 宅克/公斤體重’ #天藉口服投藥為約〇〇1至約1〇〇，較俨 為0·1至70’更尤其是〇.5至10毫克/公斤體重，及每天^ 脈内投藥為約0.01至約50,較佳為001至10毫克心體 重。活性成份在組合物中之百分比，可以改變，惟其應構 成某一比例，以致將獲得適當劑量。劑量單位組合物=含 有其約數之量’其可用以構成日服劑量。顯而易見的是Υ 數個單位劑量形式可大約同時投藥。劑量可按需要而頰繁 143112.doc *316- 1359145 地投藥，以獲得所要之治療效果。有些病人可對較古〆 低劑量迅速地回應，及可發現遠為較弱之維持足較 對其他病人可能必須在每天〗至4份劑量 ^里0 G平下，有長期 治療’根據各特定病人之生理睪雲車旦a — 子而要里而定。而對於其他 =更不用說了，其將必須開立每天不大於—或兩份劑 此等配方可藉製藥技藝Μ習知之任何方法，以單 量形式製成。此種方法包括使活性成份與構成—或多_ 助成份之載劑產生結合之步驟。一般而言，此等配方係哩 由均句且密切地使活性成份與液體載劑或細分固體載劑或 兩者產生結合，然後若必要則使產物成形而製成。 此等配方可呈現於單位劑量或多劑量容器中，例如密封 安親叛與具有彈性農早夕f π ^ m·生基子之小玻疏，並可儲存於康乾條件 下，在即將使用之前，僅需要添加無菌液體載劑，例如注 射用水。臨時注射溶液與懸浮液可製自前文所述種類之益 菌粉末、顆粒及片劑。 · 在本發明ia圍内之化合物’根據文獻及下文所述之試 驗’顯7F顯著藥理學活性’咸信該試驗結果係與在人類及 其他哺乳動物中之藥理學活性有關聯。 活體外酶檢測程序 HCVNS3絲胺酸蛋白酶之抑制 HCVNS3蛋白酶功能部位係按以前所述進行表現與純化 ^tex，PCT公報w〇 9δ/ΐ7679;其係併於本文供參考）。 仏NS3蛋白酶用之產色肽受質EDVVAbuC-對-硝基醯基苯 1431l2.doc -317· 1359145 胺，及NS4A輔因子片段（-KKGSVVIVGRIVLSGK-)，倍、由 美國肽公司（Ca)定製合成。使用分光光度測定檢測，並以 EDVVAbuC-對-硝基醯基苯胺作為受質，測試本發明化合 物抑制HCVNS3蛋白酶活性之能力。此檢測係在96-井微滴 定板上，使用具有動力學能力之Spectra Max 250讀取器 (分子裝置，Sunnyvale, CA)操作。EDVVAbuC-對·硝基酸 基苯胺（500 μΜ)受質，藉由已純化HCVNS3蛋白酶（0.5 μΜ)之分裂，係於30°C下，在測試化合物不存在或存在 下，在缓衝劑中施行，其中含有30 μΜ NS4A片段，46 mM Hepes，pH8,〇，92 mM NaCl，18%甘油，5 mM DTT 及 7.5〇/0 DMSO。監測此反應關於PNA(對-硝基苯胺）在405毫微米下 之釋出。 動力學參數，包括Vmax，Km& Vmax/Km，其測定係在如上 述之條件下施行。Ki值係計算自速率對[抑制劑]圖形，在 固定濃度之酶與受質下，藉由數據對Morrison方程式關於 緊密結合競爭性抑制之非線性最小平方吻合[j.F.Morrison， Biochim. Bi0phyS· Aeta·，185, 269-286 (1969)]。Prism程 式（GraphPad軟體公司）係使用於此程序。 於本文令揭示之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑，可與直接顯 示或間接引出抗_HCV活性之其他分子合併使用，以預防 病人感染HCV或治療已遭感染之病人。"抗-HCV活性"一 詞，係指一種分子，當存在時，完全抑制或降低HCV病毒 粒子蓄積之能力，與此種分子不存在下之HCV病毒粒子蓄 積作比較，及/或一種分子降低或改善與病人中之HCV感 143112.doc -318- 1359145 染或發病有關聯症狀或病徵之能力。具有抗-HCV活性之 分子，包括會使HCV感染或複製中之一或多個步驟瓦解 者，以及會在宿主細胞中引起免疫調節與抗增生作用者。 具有抗-HCV活性之分子，可抑制HCV專一複製事件，譬 如但不限於HCV導引之核酸或蛋白質合成。具有抗-HC V 活性分子可發生作用之HCV複製階段，包括細胞進入（例 如連附；穿透）；HCV基因組之脫殼與釋出；HCV基因組 之複製（例如，病毒RNA基因組任一股線之複製；病毒信 使RNA之轉錄）；HCV蛋白質之轉譯；HCV蛋白質之轉譯 後變性（例如蛋白分解之分裂作用；糖基化作用）；病毒蛋 白質之胞内輸送；病毒粒子成份之組裝；及病毒粒子之釋 出（例如出芽）。具有抗病毒活性之分子之種類，包括但不 限於可溶性受體德夸菌素與抗受體抗體；離子通道阻斷 劑、衣殼安定劑及融合蛋白質抑制劑；病毒聚合酶、反轉 錄酶、解螺旋酶、引導RNA合成酶或整合酶之抑制劑；反 有意義寡核苷酸與核糖酵素；免疫調節與免疫刺激劑，包 括細胞活素，譬如干擾素，以及妝催動劑，類固醇，及古 典藥物，譬如左旋四咪唑；調節蛋白質之抑制劑；蛋白酶 抑制劑；組裝蛋白質抑制劑；及抗病毒抗體與細胞毒性淋 巴細胞。”抗-HCV有效量"或"藥學上有效量"一詞，係指如 本文中所揭示化合物或化合物組合之量，有效降低或改善 病人中與HCV感染有關聯或與相關病因有關聯之症狀或病 徵，或降低活體外或活體内之病毒含量。活體外應用包括 下述之複製子檢測系統，其中該等量對於降低HCV複製子 143112.doc -319- 1359145 RNA畜積及/或其中所含基因編碼之蛋白質蓄積係有效 者。 意欲使用於本文中所揭不之組合物與組合治療方法中之 具有抗-HCV活性之化合物，包括但不限於免疫調節分 子，包括免疫刺激細胞活素’及其他已知具有HCV抗病毒 活性之化合物，譬如各種抗病毒核站與核答酸。 意欲與本文中所揭示之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑合併使 用之免疫調節分子，包括但不限於干擾素-a2B(Intr〇nA，
Schering Plough) ; Rebatron (Schering Plough，干擾素- ct2B +三唑核甞）；經PEG化之干擾素a(Reddy，K. R_等人， 與干擾素a-2a比較，在患有慢性c型肝炎之非硬變病人 中’經PEG化之（40-kd)干擾素a-2a之功效與安全性，肝病 學期刊 ’ 33，433-438 (2001));同感干擾素（Ka〇，j η., Chen Ρ· J” Lai, M_ Y_ & Chen, D. S. ’ 同感干擾素在慢性 c 型肝炎治療上之功效 ’ J. Gastroenterol. Hepatol. 15，141 1423 (2000));干擾素-a2A(Roferon A ; Roche);類淋巴胚 細胞或"天然"干擾素；干擾素T(Clayeue，P.等人，ΙΙ?Ν-τ， 一種具有抗反轉錄酶病毒活性之新穎干擾素類型Path〇1
Biol. (Paris) 47, 553-559 (1999));間白血球活素2 (Davis， G. L·, Nelson, D. R. & Reyes，G. R” C型肝炎處理之未來選 擇性’肝病討論會，19，103_U2 (1999));間白血球活素6 (Davis’ G. L.，Nelson，D. R· & Reyes，G. R.，c型肝炎處理 之未來選擇性，肝病討論會，19，103-112 (1999));間白 血球活素 12 (Davis, G. L” Nelson, D. R. & Reyes，g R q 143112.doc -320- 1359145 型肝炎處理之未來選擇性，肝病討論會，19，103-112 (1999));三唑核苷；及會加強類型1輔助T細胞回應發展之 化合物（Davis, G. L., Nelson，D. R. & Reyes, G. R.，C型肝 炎處理之未來選擇性，肝病討論會，19, 103-112 (1999) )。干擾素可藉由施加直接抗病毒作用及/或藉由改 變對感染之免疫回應，而改善病毒感染。干擾素之抗病毒 作用，通常係經過病毒穿透或脫殼之抑制，病毒RNA之合 成，病毒蛋白質之轉譯及/或病毒組裝與釋出作媒介。
會刺激干擾素在細胞中合成之化合物（Tazulakhova，E. B·，Parshina，Ο. V.，Gusev, T. S. & Ershov，F. I.，在新穎干 擾素誘生劑之篩檢、分析及臨床應用上之俄國經驗，J. Interferon Cytokine Res. 21, 65-73))，係包括但不限於雙 股RNA，單獨或與托伯拉徽素（tobramycin)複合，及依米 奎莫得（Imiquimod)(3M醫藥）（Sauder, D. N.，依米奎莫得之 免疫調節與藥理學性質，J. Am. Acad. Dermatol. 43, S6-11
(2000) )。 已知具有或可由於非免疫調節機制而具有HCV抗病毒活 性之其他化合物，包括但不限於三唑核甞（ICN醫藥）；纖 維核苷5'-單磷酸脫氫酶抑制劑（VX-497，其係由Vertex醫 藥所發展）；金剛胺與金剛烧乙胺（Younossi, A. M.與 Perillo, R. P.，金剛胺、金剛烧乙胺、烏索去氧膽酸、 NS AID，單獨或併用α干擾素，在慢性C型肝炎治療上之角 色，肝病討論會，19，95-102 (1999)) ; LY217896(美國專 利 4,835，168)(Colacino，J. M.等人，1,3,4-噻二唑-2-基氰 143112.doc -321 - 1359145 胺（LY217896)及其鈉鹽之抗流行性感冒病毒活性評估，抗 微生物劑與化學療法，34, 2156-2163 (1990));及9-經基亞 胺基-6-曱氧基-l，4a-二曱基-i，2,3,4,4a，9，l〇，i〇a_八氫-菲·卜 羧酸甲酯；6-甲氧基-l，4a-二甲基-9-(4-曱基-哌畊基亞 胺基）-1,2,3,4,4&，9，10，10&-八風-并-1-缓酸曱酉旨鹽酸鹽；ι_ (2-乳-本基）-3-(2,2-聯苯基-乙基）-脈（美國專利6，127,422)。 關於前述分子之配方、劑量及投藥途徑，係無論是陳述 於下文所引用之參考資料中，或為此項技藝中所習知，譬 如揭示於F· G, Hayden，Goodman & Gilman之治療學之藥理 學基礎，第九版，Hardman等人編著，Me Graw-Hill，New York (1996)，第50章，第1191-1223頁，及其中引述之參 考資料。或者，一旦顯示HCV抗病毒活性之化合物已被確 認，則該化合物之藥學上有效量，可使用熟練技師所習知 之技術測得。應指出者為例如Benet等人，Goodman & Gilman之治療學之藥理學基礎，第九版，Hardman等人編 著 ’ Me Graw-Hill, New York (1996)，第 1章，第 3-27 頁， 及其中引述之參考資料。因此，此種化合物之適當調配 法、劑量範圍及劑量服用法，可容易地藉由例行方法測 得。 本發明之藥物組合，可提供予一種細胞或多種細胞，或 予人類病患，無論是呈個別藥學上可接受之配方，同時或 相繼地投予，含有一種以上治療劑之配方，或藉由單一藥 劑與多重藥劑配方之各種配合。但是，經投予後，此等藥 物組合係形成諸成份之抗-HCV有效量。 143112.doc -322· 1359145 目前有很大數目之其他免疫調節劑與免疫刺激劑可使用 於本發明方法中，包括：
AA-2G
金鋼烷基醯胺二肽 腺誓脫胺酶，Enzon 佐劑，Alliance 佐劑，Ribi 佐劑，Vaxcel Adjuvax agelasphin-11 AIDS療法，Chiron 藻聚葡糖，SRI algammulin, Anutech Anginlyc 抗細胞因子，Yeda Anticort
抗胃泌素-17免疫原，Ap 抗原傳輸系統，Vac
抗原配方，IDBC antiGnRH免疫原，Aphton
Antiherpin
Arbidol azarole
Bay-q-8939 143112.doc -323 - 1359145
Bay-r-1005 BCH-1393
Betafectin
Biostim BL-001 BL-009
Broncostat
Cantastim CDRI-84-246 cefodizime 化學細胞活素抑制劑，ICOS CMV肽，霍普（Hope)市 CN-5888 細胞活素釋出劑，St DHEAS, Paradigm
DISCTA-HSV
J07B
101A
101Z ditiocarb 納 ECA-10-142 ELS-1 内毒素，Novartis FCE-20696 - 324- 143112.doc 1359145 FCE-24089 FCE-24578 FLT-3 配位體，Immunex FR-900483 FR-900494 FR-901235 FTS-Zn G-蛋白質，Cadus
gludapcin glutaurine.
糖墙肤 GM-2 GM-53 GMDP
生長因子疫苗，EntreM H-BIG，NABI H-CIG, NABI HAB-439 幽門螺旋桿菌疫苗 濕疹專一免疫因子 HIV療法，UnitedBiomed
HyperGAM+CF
ImmuMax
ImmunBCG 143I12.doc -325 1359145 免疫療法，Connective 免疫調節劑，Evans 免疫調節劑，Novacell imreg-1 imreg-2
Indomune 纖維核嘗pranobex 干擾素，Dong-A(a2) 干擾素，Genentech(y) 干擾素，Novartis(a) 間白血球活素-12, Genetic sins 間白血球活素-15, Immunex 間白血球活素-16，ResearchCor ISCAR-1
J005X L-644257 licomarasminic 酸
LipoTher LK-409 LK-410 LP-2307 LT(R1926) LW-50020 MAF, Shionogi 143112.doc - 326- 1359145 MDP衍生物，Merck
met-腦啡肽，TNI 甲基呋喃基丁内脂
MIMP mirimostim 混合菌苗，Tem MM-1 moniliastat
MPLA，Ribi MS-705 murabutide murabutide, Vacsyn 胞壁醯基二肽衍生物 胞壁醯基肽衍生物 myelopid
-563 NACOS-6 NH-765 NISV, Proteus NPT-16416 NT-002 PA-485 PEFA-814 月太，Scios -327 143112.doc 1359145 肽聚醣，Pliva Perthon, Advanced Plant PGM衍生物，Pliva 醫藥計劃編號1099 ;編號1426 ;編號1549 ;編號1585 ;編 號1607 ;編號1710 ;編號1779 ;編號2002 ;編號2060 ;編 號2795 ;編號3088 ;編號3111 ;編號3345 ;編號3467 ;編 號3668 ;編號3998 ;編號3999 ;編號4089 ;編號4188 ;編 號4451 ;編號4500 ;編號4689 ;編號4833 ;編號494 ;編 號5217 ;編號530 ; pidotimod pimelautide pinafide PMD-589 鬼臼素，Conpharm POL-509
poly-ICLC poly-ICLC, Yamasa Shoyu
polyA-polyU
多醣A
蛋白質 A，BerloxBioscience PS34WO 假單胞菌屬MAbs, Teijin
Psomaglobin PTL-78419 143112.doc - 328- 1359145
Pyrexol pyriferone
Retrogen
Retropep RG-003
Rhinostat rifamaxil RM-06
Rollin romurtide RU-40555 RU-41821 風療抗體’ ResCo S-27609 SB-73
SDZ-280-636 SDZ-MRL-953 SK&F-107647 SL04 SL05 SM-4333
Solutein SRI-62-834 SRL-172 143112.doc - 329- 1359145 ST-570 ST-789 staphage溶胞產物
Stimulon 抑制素 T-150R1
T-LCEF tabilautide
temurtide
Theradigm-HB V
Theradigm-HPV
Theradigm-HSV THF, Pharm&Upjohn THF, Yeda thymalfasin 胸腺激素溶離份
thymocartin thy mo lymph o tropin thymopentin thymopentin類似物 thymopentin,Peptech 胸腺素溶離份5，a thymostimulin thymotrinan 143112.doc -330- 1359145 TMD-232 TO-115 轉移因子，Viragen tuftsin, Selavo ubenimex
Ulsastat ANGG- CD-4 +
Collag+ COLSF+ COM+ DA-A+ GAST- GF-TH+ GP-120-
IF+ IF-A+ IF-A-2 + IF-B + IF-G+ IF-G-1B + IL-2 + IL-12+ IL-15+ -331 - 143112.doc 1359145 LHRH- LIPCOR+ LYM-B + LYM-NK+ LYM-T+ OPI+ PEP + PHG-MA+ RNA-SYN-SY-CW-TH-A-1 + TH-5 + TNF +
UN 可用於本發明.之代表性核苷與核苷酸化合物，包括但不 限於： (+)-順式-5-氟基-1-[2-(羥基-曱基）-[1,3-氧硫伍圜-5-基]胞 响咬； (-)-2'-去氧-31-硫胞嘧啶核苷-5'-三磷酸（3TC); (-)-順式-5-氟基-1-[2-(羥基-曱基）-[1，3-氧硫伍圜-5-基]胞嘧 啶（FTC); (-)-2',31,.一 去乳-31 -硫胞0^ 咬核甘[(-)-SddC]， 1-(2’-去氧-2’-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基）-5-破基胞嘧啶 143112.doc - 332 - 1359145 (FIAC)； 1 -(2'-去氧-2’-氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基）_5_碘基胞嘧啶三磷 酸（FIACTP); 卜(2’-去氧-2、氟-β-D-阿拉伯呋喃糖基）_5_甲基尿嘧啶 (FMAU)； Ι-β-D-咬味核糖基_ι，2,4-三唾-3-缓酿胺； 2·，3·-二去氧-3’-氟基-5-甲基-去氧胞嘧啶核甞（FddMeCyt); 2·，3’-二去氧·3、氯基-5-甲基-去氧胞嘧啶核 苷（ClddMeCyt); 2’，3·-二去氧-3'-胺基-5-甲基-去氧胞嘧啶核 芬（AddMeCyt); 2'，3·-二去氧-3'-氟基-5-甲基-胞嘧啶核:y：(FddMeCyt); 2·，3'-二去氧-3’-氣基-5-甲基-胞嘧啶核：yr(clddMeCyt); 2’，3’-二去氧-3’-胺基-5-甲基-胞嘧啶核甞（AddMeCyt); 2·，31-—去氧-3'-氟基胸芬（FddThd); 2’，3’-二去氧-0-1^-5-說基胞咳唆核誓（0_乙_?(1(1(1；); 2'，3'-二去氧-p-L-5-硫胞喊咬核嘗； 2'，3’-二去氧-p-L-5-胞嘧啶核:y：(p_L_ddC); 9-(l，3-二羥基-2-丙氧基甲基）鳥嘌呤； 2·-去氧-3’-p塞-5-1基胞嘧啶； 3'-胺基-5-甲基-去氧胞嘧啶核苷（AddMeCyt); 2-胺基-l，9-[(2-羥甲基(羥曱基）乙氧基]曱基]_6H-嘌呤_ 6-¾ (gancyclovir)； 二醋酸2-[2-(2·胺基-9H-嘌呤-9-基）乙基]-1，3-丙烷二基酯 H3112.doc - 333 - 1359145 (famciclovir)；
2-胺基-1，9-二氯羥基-乙氧基）曱基]6H-嘌呤-6-酮 (acyclovir) I 9-(4-經基-3-經曱基·丁 _1-基）鳥嗓吟（pencici〇vir); 9-(4-羥基-3-羥曱基-丁 -1-基）-6-去氧鳥嘌呤二醋酸鹽 (famciclovir); 3'-疊氮基-3’-去氧胸腺嘧啶核：y：(AZT); 3’-氯基-5-甲基·去氧胞嘧啶核:yr(ciddMeCyt); 9-(2-膦酸基-甲氧基乙基）_2，，6，_二胺基嘌呤-2，，3，-二去氧核 籲 糖核苷； 9-(2-膦酸基曱氧基乙基）腺嘌呤（PMeA); 阿環維爾（acyclovir)三璃酸（ACVTP); D-碳環族-2'-脫氧鳥：y：(cdG); 二去氧-胞嘧啶核：y：; 二去氧-胞喊咬（ddC); 二去氧-鳥嘌呤（ddG); =去氧_纖維核：y：(ddi) ; · Ε·5-(2-溴基乙烯基）_2，_去氧脲菩三磷酸； 敗-阿拉伯呋喃糖基_碘尿嘧啶； 1 (2 -去氧氟基- ΐ-β-D-阿拉伯呋喃糖基）_5_碘-尿嘧啶 (FIAU)； 史 ^^五定（stavudine); 9-P-D-阿拉伯呋喃糖基_9H_嘌呤_6_胺單水合物（Ara_A); 9-P-D-阿拉伯呋喃糖基_9H-嘌呤_6•胺巧，-單磷酸鹽單水合 M3112.doc -334- 1359145 物（Ara-AMP); 2-去氧-31-硫-5-說基胞喷咬核替； 2'，3·-二去氧-鳥嘌呤；及 2'，3匕二去氧-烏嘌呤核糖智：。 製備可用於本發明之核苷與核铝酸之合成方法，係為此 項技藝中所習知，如在ActaBiochim.Pol.，43,25-36(1996); Swed.核苷核苷酸 15,361_378(1996);合成 12 1465·
1479(1995) ; Carbohyd· Chem.27,242-276(1995) ; Chem.核 甘核 AS文3,421-535(1994) ; Ann. ReportsinMed.Chem.，大學 出版社，及 Exp.Opin.Invest.Drugs4,95-115(1995)中所揭示 者。 於上文引述之參考資料中所述之化學反應，係一般性地
以其最廣義應用於製備本發明化合物之觀點作揭示。有 時，此等反應可能不能如所述應用於被包含在本文中所揭 示化合物範圍内之每一種化合物。會發生此種情況之化合 物，將容易地被熟諳此藝者察覺。在所有此種情況中，任 一反應均可成功地藉熟諳此藝者所已知之習用修正法施 行，例如，藉由干擾基團之適當保護，藉由改變成替代之 習用試劑’藉由反應條件之例行修正等，或本文中所揭示 之其他反應或者其他習用反應’將可應用於製備相應之本 發明化合物》在所有製備方法中，所有起始物質均為已 知，或可容易地製自已知起始物質。 雖然通常採用料類似物本身作為抗病毒劑，但有時必 須使核纽⑽料酸）轉化成料，巧助其輸送越過細 143112.doc - 335 - 1359145 胞膜。能夠進入細胞中之以化學方式改質之核苷酸，其實 例為S-1-3-經基-2·膦酸基甲氧基丙基胞d密咬 (HPMPC，Gilead Science) »為酸類之本發明核苷與核芬酸 化合物’可形成鹽。其實例包括與鹼金屬或鹼土金屬譬如 納、鉀、鈣或鎮之鹽，或與有機鹼之鹽，或鹼性四級錢 鹽。 可用於本發明組合療法之免疫調節劑與免疫刺激劑，可 以低於此項技藝中習用之量投藥。例如，典型上係將干擾 素α投予人類，用於治療HCV感染，其量為約1χ1〇6個單位/ 人’每週三次，至約ΙΟχΙΟ6個單位/人，每週三次（Sim〇n· 人，肝病學期刊，25 : 445-448(1997))。在本發明之方法 與組合物中，此劑量之範圍可在約〇.1χ1〇6個單位/人，每 週三次’至約7·5χ106個單位/人，每週三次；更佳為約 0_5xl 06個單位/人，每週三次，至約5χ1〇6個單位/人，每週 三次；最佳為約lxl〇6個單位/人，每週三次，至約3χΐ〇6個 單位/人，每週三次。於本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑 存在下，由於免疫調節劑與免疫刺激劑之加強之c型肝炎 病毒抗病毒有效性，故可採用減少量之此等免疫調節劑/ 免疫刺激劑，於本文中所揭示之方法與組合物中。類似 地，由於本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑之c型肝炎病毒 抗病毒有效性在免疫調節劑與免疫刺激劑存在下有所加 強，故於本文所揭示之方法與組合物中可採用減少量之此 等HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑。此種減少之量可藉由例行龄 測受感染而接受治療之病人巾之c型肝炎病毒滴定度而測 143112.doc -336- 1359145 得。這可藉由例如監測病人血清中之HCVRNA，藉由槽缝 沾吸、點沾吸或RT_PCR技術，或藉由度量HCV表面或其 他抗原進行。病人可在採用本文中所揭示之HCV絲胺酸蛋 白酶抑制劑及其他具有抗_HCV活性之化合物（例如核誓及/ 或核芸酸抗病毒劑）之組合療法期間，以類似方式監測， 以測定當合併使用時，每一種之最低有效劑量。 在本文中所揭示之組合治療方法中，核苷或核苷酸抗病 毒化合物或其混合物，可投予人類，其量之範圍為約〇 3 毫克/人/天至約500毫克/人/天；較佳為約1〇毫克/人/天至 、·勺300毫克/人/天；更佳為約25毫克/人/天至約2〇〇毫克/人/ 天；又更佳為約50毫克/人/天至約uo毫克/人/天；且最佳 係在約1毫克/人/天至約50毫克/人/天之範圍内。 化&物之劑量可以單一劑量或以成比例之多重亞劑量投 予病人。於後述情況中，劑量單位組合物可含有此種其約 數之量，以構成曰服劑量。每天之多劑量亦可增加總曰服 劑量’若這是開立藥物之人員所想要的。 以本發明化合物及/或組合物治療患有hcv感染病人之 服用法，係根據多種因素作選擇，包括病人之年齡、體 重、性別、飲食及醫療狀態，感染之嚴重性，投藥途徑， 藥理學考罝，譬如所採用特定化合物之活性、功效、藥物 動力學及毒物學作用形態，及是否利用藥物傳輸系統。於 本文中所揭物組合之投藥’通常應持續歷經數週至數 月或數年期間，直到病毒滴定度達到可接受之程度，這顯 不感染已被控制或根除。接受本文令所揭示藥物組合治療 1431I2.doc •337· ㈣145
之病人’可例行性地猎由度量病人血清中之肝炎病毒RN A 進行監測’其方式是槽缝沾吸、點沾吸或RT-PCR技術， 或藉由度量血清中之C型肝炎病毒抗原，譬如表面抗原， 以測定治療之有效性。藉此等方法所獲得數據之連續分 析，允許修正治療期間之治療服用法，因此係投予各成份 在組合中之最適宜量，且因此亦可測得治療延續時間。因 此，治療服用法/服藥時間表可在治療過程中合理地修 正，以致使用於組合中一起顯示令人滿意抗<型肝炎病毒 有效性之各抗病毒化合物之最低量係被投予，且因此在組 合中之此種抗病毒化合物之投藥，係僅持續長達必須成功 地治療感染之時間。
本發明係涵蓋本文中所揭示之HCV絲胺酸蛋白酶抑制 劑，與前述及類似型式之具有抗_^1(：¥活性之化合物以 各種組合，以治療或預防病人中之Hcv感染之用途。例 如 或夕種HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑可併用：一或多種 具有抗-HCV活性之干擾素或干擾素衍生物；一或多種具 有抗视V活性之非干擾素化合物；或-或多種具有抗· HCV活性之干擾素或干擾素衍生物，與一或多種具有抗_ HCV活性之非干擾素化合物。當合併使用以治療或預防人 類病患中之H C V感染時，任何目前揭示之h c v絲胺酸蛋白 酶抑制劑與前述具有抗_HCV活性之化合物，彳以藥學上 或抗-HCV有效之量存在^由於其加成或增效作用，故當 使用' 上述組合中時，各亦可以亞臨床藥學上有效或抗_ 有效之里存在’意即與此種Hcv絲胺酸蛋白酶抑制劑 143112.doc •338· 1359145 及具有抗-HCV活性之化合物，當以藥學上有效量使用時 作比較’若單獨使用時，在病人中完全抑制或降低Hcv病 毒粒子之蓄積及/或降低或改善與HCV感染或病因有關聯 症狀或病徵上，提供減少醫藥有效性之量。此外，本發明 係涵蓋如前述HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與具有抗_HCv活 性之化合物之組合，以治療或預防HCV感染之用途，其中 一或多種此等抑制劑或化合物，係以藥學上有效量存在， 而其他係以亞臨床藥學上有效或抗_HCV有效之量存在， 此係由於其加成或增效作用。於本文中使用之"加成作用" 一詞’係說明兩種（或更多種）醫藥活性劑之合併作用，其 係等於各藥劑單獨給予作用之總和。增效作用係為其中兩 種（或更多種）醫藥活性劑之合併作用，大於各藥劑單獨給 予作用之總和。 實例42 c型肝炎病毒（HCV)感染之現行標準療法，係以免疫調 即劑α-干擾素治療（慢性c型肝炎：流行疾病管理，美國國 豕衛生研究所，衛生與人類服務部門，1999)。此療法在 大部份HCV病人中無效，其顯示無論是沒有回應或甚至在 長期干擾素治療後復發。此外，有嚴重副作用伴隨著干擾 素療法。 & 鑒於對新穎更有效抗病毒藥物以治療HCV感染病人之迫 -要本案龟明人已發展出一系列化合物，以抑制hcv 之絲胺酸蛋白酶（HCV病毒蛋白質NS3與NS4A之複徵）。此 等化。物可單冑，彼此一起，及與其他種類之用以治療或 143112.doc •339· 1359145 預防HCV感染之化合物合併使用。此實例係描述測試三種 代表性HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑，意即化合物CU、化合 物EP及化合物EC，單獨及併用一組干擾素之個別成員（干 擾素a-2B(Schering-Plough)，干擾素a-2A(PBL生物醫學實 驗室，New Brunswick，NJ)，干擾素β(研究診斷劑公司， Flanders，NJ)及羊干擾素τ(研究診斷劑公司，Flanders， NJ))，在HCV亞基因組RNA複製子檢測（複製子檢測）中， 以測定兩種化合物是否協力發生作用以減少HCVRNA蓄 積。複製子檢測係度量HCV亞基因組RNA(複製子RNA)在 藥物治療兩天後，留在複製子細胞中之量（Lohmann等人， Science285 : 110-113 (1999))，相對於複製子 RNA在未經 處理之細胞中之量。在此項檢測中，化合物作為HCV抗病 毒藥物之功效，係直接正比於抑制複製子RNA蓄積之程 度。 將兩種藥物以組合方式在活體外複製子檢測系統中測 試，以測定當一起使用時，其是否顯示加成或增效抗-HCV活性。複製子檢測係被採用作為活體外HCV感染之替 代模式，以評估免疫調節劑之合併作用，例如干擾素-α2Β((插入序列A) ; Schering Plough)，與HCV絲胺酸蛋白 酶抑制劑，例如化合物CU。如下文所示，.當使用正式數 學增效測定法度量，以分析其在複製子檢測中降低 HCVRNA含量之能力時，其結果証實此兩種類型之藥物有 明顯增效抗-HCV作用。 複製子檢測 143112.doc • 340- 採用含有自身複製HCV亞基因組RNA(複製子）之細胞系 之複製子檢測，係描述於Lohmann等人，Science285 : 110-1 13 (1999)中。使用於本文所述實驗中之複製子之順 序，其基因銀行登記號碼，在此參考資料中係被列示為 AJ242654。此論文揭示之方法，係關於RNA從複製子 cDNA之活體外轉錄，複製子RNA藉由電擊穿孔之轉移感 染至Huh7細胞中，及使用抗生素G4 1 8選擇含有複製子 RNA之細胞。Huh7細胞為肝細胞瘤細胞系，得自FoxChase 癌症研究中心（Philadelphia)之William Mason博士。此等細 胞係公開地可得自FoxChase，且已被廣泛地描述於科學文 獻（Nakabayashi 等人，CancerRes.42 : 3858-3863(1982)) 中。在本文所述之實驗中，係將所有模板DNA在RNA電擊 穿孔至Huh7細胞中之前，經由以DNase多重處理（三次連續 處理），移離活體外轉錄複製子RNA製劑。 複製子檢測係按下文詳述施行。簡言之，係將複製子細 胞置於96井盤中，其密度為每井10,000個細胞，並於37°C 下培養。細胞係在補充10%牛胎兒血清、麩醯胺、非必須 胺基酸及抗生素G418(0.25毫克/毫升）之DMEM(Dulbecco之 最少必須培養基）中培養。於過夜培養後，將培養基以含 有2%牛胎兒血清，及不同濃度之絲胺酸蛋白酶抑制劑， 譬如化合物CU，及/或干擾素，譬如干擾素-α2Β(插入序列 A, Schering Plough)之DMEM置換。每一種化合物係在六 至八種不同濃度下測試。對濃度範圍之一個極端，係選擇 高濃度化合物，其會在兩天處理後，造成幾乎完全抑制複 143112.doc •341 - 製子RNA蓄積。自此等起始濃度，進行連續稀釋，因此在 複製子檢測中測試之濃度範圍，係包括化合物為高度有效 下之濃度，以及沒有顯著作用下之濃度。各HCV絲胺酸蛋 白酶抑制劑濃度，係在無任何外加干擾素下，以及添加六 至八種不同干擾素劑量下測試。同樣地，干擾素係在無任 何外加HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑下測試。使用化合物進行 48小時培養後，將培養基自板移除，並使用由Qiagen公司 (Valencia，CA)所製造之RNeasy-96套件，自細胞中萃取出 全部細胞RNA。然後，將此RNA藉定量RT-PCR或Taq Man ⑧（應用生物系統，FosterCity，CA)分析。Taq Man® RT-PCR標的為在複製子RNA中之新黴素抗藥性基因。板係經 設計，因此各藥物處理試樣有5個複製物，而未經處理試 樣有16個複製物。這允許在定量RT-PCR數據中有較大統 計可信度。 複製子檢測數據之分析，產生兩個數值，其可用於評估 潛在HCV抗病毒劑之功效。在所測試之各化合物濃度中， 係測定兩天治療期間因化合物所造成抑制複製子RNA蓄積 之程度，相對於複製子RNA在未經處理細胞中之量。其係 以抑制百分比作報告。當在一範圍之濃度下藉由細胞處理 所產生之一系列數據點已被獲得時，即產生IC5〇值，意即 HCV複製子RNA蓄積被該化合物減少50%下之化合物濃 度。經過HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑在複製子檢測中之重複 測試，測定出IC50具有百分比變易係數（％CV或100%xIC5〇/ 平均IC50中之標準偏差）為約20%。IC5〇為用以將此項檢測 143112.doc • 342· 1359145 中測試之個別化合物分等級之數值，以其作為HCV抗病毒 劑之功效為基礎。簡易IC50測定不適合用以評估使用於組 合中之化合物利用性。使用不同干擾素與絲胺酸蛋白酶抑 制劑之所有组合，所產生數據陣列之最有效分析，需要評 估百分比抑制作用，如表4中所示，使用下文所述之數學 方法，其係經設計以測定組合治療是否為催動性、加成性 或增效性。 複製子檢測之細節係如下述。 HCV複製子RNA在HCV複製子檢測中，使用Taq Man® RT-PCR定量分析之程序 此複製子檢測係用以度量潛在HCV抗病毒化合物抑制 HCV亞基因組RNA複製子分子在Huh7細胞系中蓄積之能力 (Lohmann等人，亞基因組C型肝炎病毒RNA在肝細胞瘤細 胞系中之複製，Science285, 110-1 13 (1999))。此檢測包含 三種操作組份：（1)複製子細胞維護，檢測板設立及化合物 施用；（2)全部細胞RNA自複製子細胞之萃取；及（3)即時 RT-PCR (Taq Man®)以度量複製子RNA於各試樣中之量。 複製子檢測需要施行至少4天；但是，此程序可中斷，並 使試樣在兩步驟之間冷凍。各檢測組份係描述於下文。 1.複製子細胞維護，檢測板設立及化合物施用 1.1複製子細胞系維護 使用於複製子檢測中之細胞系，係按Lohmann等人所述 製成（亞基因組C型肝炎病毒RNA在肝細胞瘤細胞系中之複 製，Science285, 1 10-113 (1999))。在將含有複製子細胞之 143112.doc • 343 - 1359145 150平方公分細胞培養燒瓶（c〇sUr)於37。〇與❶下培養 且變成融合後，將細胞在新的150平方公分細胞培養燒瓶 中稀釋1 : ΙΟν/ν。培養基為含有10%牛胎兒血清（FBS)、1χ 非必須胺基酸（ΝΕΑΑ)、IX麩醯胺（Gin)及0.25毫克/毫升 G418之DMEM。進行三個序列繼代，每次允許細胞變成融 合，接著將細胞稀釋至新的150平方公分細胞培養燒瓶 中。然後，將此等被稱為"原始細胞"之細胞，分成數液 份，並儲存以供未來使用於複製子檢測中。進行Taq Man® 為基礎之分析，以測定每細胞之11(：¥複製子基因組數目，鲁 其顯現出每細胞有〜丨50份複製之複製子存在。這是以複製 子RNA之複製份數對人類ap〇B基因之兩倍複製份數（單倍 體基因組數目）之比例為基礎。 1.M將原始細胞儲存於液態乂中。對使用於複製子檢 測中之細胞而言，係在20次序列繼代後，將細胞捨棄，並 使新批次自液態n2儲存十復活。 1.2將細胞覆蓋於96_井盤中供複製子檢測 HI.為製備96-井板，使含複製子之細胞之75%融合 _ 75平方公分燒瓶進行胰蛋白酶化，並再懸浮於⑺毫升培養 基A中。胰蛋白酶化係以下述方式進行，移除培養基，添 加1毫升胰蛋白酶-EDTA 〇.25% w/v，然後移除胰蛋白 酶-EDTA ^ 5-10分鐘後，使細胞自燒瓶釋出，並再懸浮於 培養基中。 1 ·2·2.使用血球計’計數細胞，並將細胞濃度調整至 1〇5個細胞/毫升。 143112.doc •344- 1359145 1.2.3. 使用Impact2多通道吸量管（Matrix)，將各井以 100微升細胞懸浮液接種，但絕不從單一細胞懸浮液覆蓋 超過四個96 -井板。 1.2.4. 將96-井板在37°C下培養過夜。 1·3·化合物稀釋並施加至複製子細胞盤
1.3.1· 使HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑化合物溶於二甲亞 石風（DMSO)中，至最後濃度為20 mM。使干擾素懸浮於含 有0.1%w/v牛血清白蛋白之磷酸鹽緩衝鹽水溶液中。 1.3.2.以DMSO將此20 mM化合物溶液稀釋至1 mM。 1.3.3.將已溶於DMSO中之50微升化合物，添加至1〇 毫升培養基B*(化合物濃度為5 mM，而DMSO濃度現在為 0.5%)，或將20微升1 mM化合物與30微升DMSO添加至1〇 毫升培養基B中（化合物濃度為2 μΜ)。
1 · 3 · 4.化合物稀釋至最後濃度係經由將化合物/培養基 Β溶液與培養基C(含有〇 5% DMS〇)混合而完成。化合物之 序歹〗至五稀釋液，係以培養基C在2毫升聚丙缔9 6-井板 塊中施行，以獲得所要之最後化合物濃度。 ^3·5·將細胞板移離培養器，並在蓋子之頂部右 角洛及底部右側上作標記。將培養基倒出96_井板。 13'6·將得自96·井稀釋板塊各井之100微升化合物/培 養基溶液’使用ImPact2吸量管，添加至96-井細胞板。 '3·7·根據表3，將1〇〇微升培養基C添加至所有未經 處理之井中，以測試化合物，在無論是i、⑷種不同濃 度下。’’Untx"係指與在經處理細胞中相同濃度下添加之模 H3112.doc -345· 1359145 倣處理細胞（DMSO) ; "Con."係指化合物濃度。 表3 2種化合物，6種濃度，5種複製物
化合物1 化合物2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx B con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l C con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 D con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 E con. 4 con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 con.4 F con.5 con.5 con.5 con.5 con.5 con.5 con.5 con.5 con.5 con.5 G con. 6 con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 con.6 Η untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx 4種化合物，3種濃度，5種複製物 化合物1 化合物2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx B con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l C con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 D con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 E con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l con.l F con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 con.2 G con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 con.3 H untx untx untx untx Unix untx untx untx untx untx 化合物3 化合物4 143112.doc -346- 1359145
16種化合物，1種濃度，4種複製物 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A untx cpdl cpd2 cpd3 cpd4 cpd5 cpd6 cpd7 cpd8 untx B untx cpdl cpd2 cpd3 cpd4 cpd5 cpd6 cpd7 cpd8 untx C untx cpdl cpd2 cpd3 cpd4 cpd5 cpd6 cpd7 cpd8 untx D untx cpdl cpd2 cpd3 cpd4 cpd5 cpd6 cpd7 cpd8 untx E untx cpd9 cpdlO cpdll cpdl 2 cpdl 3 cpdl 4 cpdl 5 cpdl 6 untx F untx cpd9 cpdlO cpdll cpdl 2 cpdl 3 cpdl 4 cpdl 5 cpdl 6 untx G untx cpd9 cpdlO cpdll cpdl 2 cpdl 3 cpdl 4 cpdl 5 cpdl 6 untx Η untx cpd9 cpdlO cpdll cpdl 2 cpdl 3 cpdl 4 cpdl 5 cpdl 6 untx 12種化合物，1種濃度，5種複製物 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx B cpdl cpdl cpdl cpdl cpdl cpd7 cpd7 cpd7 cpd7 cpd7 C cpd2 cpd2 cpd2 cpd2 cpd2 cpd8 cpd8 cpd8 cpd8 cpd8 D cpd3 cpd3 cpd3 cpd3 cpd3 cpd9 cpd9 cpd9 cpd9 cpd9 E cpd4 cpd4 cpd4 cpd4 cpd4 cpdlO cpdlO cpdlO cpdlO cpdlO F cpd5 cpd5 cpd5 cpd5 cpd5 cpdll cpdll cpdll cpdll cpdll G cpd6 cpd6 cpd6 cpd6 cpd6 cpdl 2 cpdl 2 cpdl 2 cpdl 2 cpdl 2 H untx untx untx untx Untx untx untx untx untx untx 143112.doc - 347- 1359145 1·4·將板在37°C下培養48小時，然後使其接受RNA萃取 表4
用於細胞培養與化合物設立之設備與供應源之摘述 8通道Impact2吸量管，1250微升 目錄編號2004 Matrix 2宅升聚丙稀深井板塊，96-井，無菌 目錄編號4222 Matrix 25毫升試劑儲槽，無菌 目錄編號8096 Matrix 1250微升X-tra長吸量管端 目錄編號8255 Matrix 96-井板 目錄編號3595 Costar 血球計 明亮線條改良型 NeubauerO. 1 毫米深 Reichert DMEM 目錄編號51444-79P JRH L-麩醯胺(Glu) 目錄編號12403-010 GIBCO-BRL 非必須胺基酸(NEAA) 目錄編號11140-050 GIBCO-BRL 牛胎兒血清(FBS) 目錄編號16250· 078 GIBCO-BRL G418 目錄編號55-0273 invitrogen DMSO 目錄編號D-2650 Sigma 培養基A DMEM，10%FBS, 1XNEAA，lXGlu, 0.25毫克/毫升G418 培養基B DMEM, 2% FBS, 1XNEAA, lXGlu 培養基C DMEM，20/〇 FBS, 1XNEAA，lXGlu, 0.5% DMSO 胰蛋白酶-EDTA0.25% GIBCO-BRL 143112.doc •348- 1359145 2.全部細胞RNA自複製子細胞之萃取 2.1引進 此程序之目標是從活體外組織培養試樣中萃取RNA，以 致病毒或細胞RNA係定量地回收，且足夠純以藉由定量 HC VRT-PCR檢測進行分析。 為允許偵測RNA萃取效率上之偏差，將標準量之牛病毒 性腹瀉病毒（BVDV)，一種具有部份類似HCV之RNA病 毒，在RN A萃取之前，添加至各細胞試樣中。因此，在最 後多重RT-PCR反應中檢出之BVDVRNA含量，在所有井中 應為一致，在與複製子檢測有關聯之變化性範圍内。此 RNA萃取效率内部控制，係進一步討論於下文Taq Man®段 落中。 所使用之RNA萃取方式，係為由Qiagen公司（Valencia， CA)所產生之RNeasy-96方法。此方法採用96支以矽石基料 之微小管柱，置於可與96-井組織培養操作相容之陣列 中。此RNA萃取技術為Boom方法之修正，其中所有細胞 蛋白質與核酸，包括核酸酶，係首先以強促溶鹽（胍硫氰 酸鹽）變性。在此環境中，核酸對矽石（在微小管柱圓盤中 之材料）具有強親和力；但是，蛋白質及其他污染物不會 結合至矽石，且會通過管柱。在以促溶/乙醇溶液洗滌管 柱後，使試樣部份乾燥，然後小體積水，使核酸釋離管 柱。 為減少在回收HCVRNA時之變化性，應小心進行管柱洗 滌與部份乾燥條件。少量乙醇存在於管柱上，會污染最後 143112.doc - 349· 1359145 RNA，及干擾RT-PCR偵測系統。在此程序之所有階段 中，均需要留心，因為起始試樣可能是生物危險的’促溶 鹽為高度腐蝕性，且成為硫氰酸鹽’若使其與酸性環境接 觸，其可產生有毒氰化物氣體。 表5
HCVRNA萃取程序所需要設備與供應源之摘述 RNeasy 96套件(24) 目錄編號74183 Qiagen QIAvac96 歧管 目錄編號19504 Qiagen 離心機4-15C，供2x96板用，6000x克 目錄編號81010 Qiagen 板轉子，供2x96板用 目錄編號81031 Qiagen 200標準純度乙醇 8通道Impact2吸量管，250微升 目錄編號2002 Matrix 8通道Impact2吸量管，1250微升 目錄編號2004 Matrix 2毫升聚丙烯深井板塊，96-井，無菌 目錄編號4222 Matrix 25毫升試劑儲槽，無菌 目錄編號8096 Matrix 1250微升X-tra長吸量管端 目錄編號8255 Matrix 200微升吸量管端 目錄編號7275 Matrix 不含血清MEM培養基 目錄編號11095-80 GIBCOBRL 2.2程序： 2.2.1細胞溶解 2.2.1.1.製備溶胞缓衝劑：對一個96-井板，添加150微 升β-巯基乙醇（β-ΜΕ)與1微升BVDV儲備液（於添加前，使 儲備液渦旋）至1 5毫升RLT緩衝劑（RNeasy套件之一種成 143II2.doc •350· 1359145 份，Qiagen)中。此儲備液係經由以BVDV感染MDBK細胞 (牛腎臟細胞’ #CCL-22，可得自美國培養物類型收集處 (Manassas VA))而製成，並在尖峰細胞病變作用下採集培 養物（CPE)。此儲備液具有感染滴定度為大約毫 升。這在Taq Man®檢測中’獲得BVI)V低限循環（Ct)為約 22。BVDV儲備液係儲存於-80°C冷康庫中。 2.2.1.2. 將細胞以150微升不含血清之mem培養基洗務 (程序4，在8通道電子吸量管P1250上··充填125〇，Disp 150x8)。將150微升溶胞緩衝劑添加至各井（相同程序）。 2.2_1.3·立即萃取RNA，或使細胞在_8〇°c下冷束。 2.2.2. 製備供RNA萃取之試劑與物料。 2.2.2.1. §己下RPE與RNeasy 96套件之批號。
2.2.2.2. RPE ··將720毫升1〇〇%乙醇添加至一瓶RpE (Qiagen)中’並充分混合；在使用之前，將RpE瓶一直充 分振盪。 2.2.2.3. 70%乙醇：將15〇毫升焦碳酸二乙酯⑴Epc)水添 加至350毫升1〇〇%乙醇中，並充分混合。 2.2.3. 以 RNeasy 96套件製備 rna 2.2.3.1.使冷凍之試樣在室溫下解凍4〇分鐘。同時，對 各板’使一支管柱之萃取對照物解凍（萃取對照物： RNeasy萃取對照物為一組8支管子，全部連接在一起。各 管子内部為170微升細胞溶胞產物，具有某一比例之Hcv 陽性與陰性細胞。從頂部至底部，為兩組各為低、中、高 及零數目之對照物。（參閱下文擬案之段落2.3)。 I43II2.doc -351 · 1359145 2.2.3.2. 以吸量管吸取100微升上下五次，使試樣混合。 將全部試樣轉移至2毫升Matrix方形井板塊之管柱ι_1〇(程 序1在P250上：混合100x5，充填170，沖洗）。 2.2.3.3. 將150微升複製子標準物轉移至管柱u(無試樣 在管柱12中）。 2.2.3.4. 將150微升70%乙醇（EtOH)添加至各試樣（程序4 在 P1250 上：充填 1250, Displ50)。 2.2.3.5. 將以適當板號標記之RNeasy 96板，置於真空歧 管中。將溶胞產物/EtOH混合並轉移至RNeasy 96板（程序1 在P1250上··混合200，次數5，充填330，及沖洗）。將任 何未使用之井，以透明膠帶（由Qiagen提供）密封，通常為 管柱12。 2.2.3.6. 施加真空（大約800毫巴）以裝填試樣至微小管 柱。 2.2.3.7. 將 RNeasy-96板以 1〇〇〇微升 RW1 緩衝劑（Qiagen)/ 井洗滌（程序2在P1250上：充填1000，Disp 1000)。 2.2·3·8.施加真空至濾器，經過RW1缓衝劑，並排空流 經物。 2.2.3.9.將RNeasy-96板以1〇〇〇微升RPE緩衝劑/井洗滌 (程序2在P1250上）。 2-2.3.10. 對濾器施加真空，經過RPE缓衝劑。 2.2.3.11. 重複步驟 2.2.3.9 2.2.3.12. 對濾器施加真空，經過RPE緩衝劑，保持所 施加之真空3分鐘。 143112.doc •352 - 1359145 2-2.3.13.使RNeasy 96板乾燥：將1^以^_96板置於收 集微試管掛架（由Qiagen提供）上，以所提供之AirP〇re膠帶 覆蓋，並將此單元在6000x克下離心10分鐘（Qiagen Sigma 離心機；4-15°C )。 2.2.3.15·自 RNeasy 96-井板溶離出 RNA :將 RNeasy_ 96板轉移至新的收集微試管掛架之頂部。將7〇微升不含 RNaSe之水添加至各井之中間（程序3在pi25〇上：充填 850 ’ Disp70)。 2.2.3.16.在室溫下培養1分鐘，然後將新的AirPore膠 帶放置在板上。 2.2.3.17·然後，將此單元在600〇x克下，於Sigma4_ 15C離心機中離心4分鐘。度量所溶離之體積，係在28微升 與50微升之間。 2·2_3·18·將RNeasy-96板拋棄，並將收集試管掛架以 Qiagen提供之罩蓋密封（每片條8個）〇 2.2.3.19.將已溶離之RNA儲存於-8(TC下，或立即在 Taq Man®檢測中分析。 2.3萃取對照物製備 第1天 2.3.1.1.將2_5xl07個會產生複製子之細胞，平敷在ι5〇 平方公分組織培養燒瓶（τ_丨5 〇)中。 2.3_ 1.2·將2.0χ106個Huh7細胞平敷在75平方公分組織培 養燒瓶（T-75)中。 2-3.1.3在37°C下培養過夜。 143112.doc -353 - ⑴ 9145 第2天 2.3.1.4.以溶胞緩衝劑，使細胞溶解。 2·3·1·5·自Huh7與會產生複製子之細胞，移除上層清 液並以10毫升不含血清之培養基（MEM)洗務單層。 2·3.1_6·添加30毫升溶胞緩衝劑（具有丨微升BVDV儲備液 715毫升溶胞緩衝劑）至Huh7細胞中，藉由重複以吸量管吸 取進行混合，及將細胞溶胞產物放置在5〇毫升圓錐形底之 組織培養離心管中。 2·3.1.7·將10.5毫升溶胞緩衝劑添加至會產生複製子之 細胞中，藉由重複以吸量管吸取進行混合，及將細胞溶胞 產物放置在15毫升圓錐形底之組織培養離心管中。 2·3·2· 對於高萃取標準物：取170微升會產生複製子之 細胞溶胞產物液份，成為兩個Matrix〇.75毫升試管掛架之 橫列5與6。 2.3.3·對於中等萃取標準物：將1.〇毫升會產生複製子 之細胞溶胞產物’添加至9毫升Huh7溶胞產物中，並充分 /昆合。取170#升此混合物之液份’至兩個Matrjx〇.75毫升 試管掛架之橫列3與4中。 2-3.4.對於低萃取標準物：將50微升會產生複製子之 細胞溶胞產物’添加至10毫升Huh7溶胞產物中，並充分混 合。取170微升此混合物之液份，至兩個Matrix〇 75毫升試 管掛架之橫列1與2。 2.3.5.零萃取對照物：取170微升Huh7細胞溶胞產物 之液份’至兩個Matrix0.75毫升試管掛架之橫列7與8。 143H2.doc •354 . 2.3.6. 將對照物儲存於-80°C下β 3. Taq Man®RT-PCR與數據分析 3.1引進：使用即時定量RT-PCR，以度量HCV複製子RNA 於各試樣中之量。此項技術亦被稱為PCR系5’核酸酶檢 測，及Taq Man®。分析儀器為應用生物系統7700 Prism順 序偵測系統（應用生物系統公司，FosterCity，CA)。此儀器基 本上為時間-多重雷射-引致之螢光光譜儀，與熱循環器聯 結。其係監測PCR放大區，在整個PCR程序過程中，於96-井試樣盤之各井中之蓄積。 3.2. BVDV内部對照物之利用：如前一段落中所指出者， 係將内部正對照物摻入每一試樣中。其係充作RNA萃取效 率之度暈物，且若試樣含有污染物，則其証實會抑制Taq Man® PCR。在施加溶胞缓衝劑至細胞之前，將BVDV與 促溶細胞溶胞缓衝劑混合。雖然正對照物係在每一試樣 中，但BVDV内部正對照物檢測，僅在HCV複製子RNA檢 測數據落在所預期範圍之外時才施行，這指出試樣可能有 問題。此7700能夠在相同試管中，利用標記兩種不同螢光 報告染料之偵測探測物，同時監測兩個不同PCR放大區之 蓄積（”多重化"）。引出試樣板BVDV内部正對照物之Taq Man®分析之特定規範，係描述在關於數據分析之段落 (3.6)中。 3.3 HCV複製子RNATaq Man®探測物與引物。由於在複 製子中編碼之新黴素抗藥性基因（neo)中，所預期之基因安 定性及一般缺乏RNA二級結構，故採用會結合在該區域中 143112.doc - 355 - 1359145 之引物與探測物。複製子RNA之此片段，係自8001鹼基對 複製子之鹼基342-1193延伸（順序識別碼：1): 301 gtgcttgcga gtgccccggg aggtctcgta gaccgtgcac catgagcacg aatcctaaac 361 ctcaaagaaa aaccaaacgt aacaccaacg 421 acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga 481 caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc 541 ttgtcaagac cgacccgtcc ggtgccctga 601 cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg 661 gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc 721 ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg 781 cggctacctg cccattcgac caccaagcga 841 tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc 901 ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca 961 atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg 1021 aCTGTGGCCG GCTGGGT6TG Gcggaccgct 探測物 1081 ttgctgaaga gcTTGGCGGC QJUlTGGGctg 1141 ctcccgatcc gcagcgcatc gccttctatc
ggcgcgccat gattgaacaa gatggattgc ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt atgaactgca ggacgaggca gcgcggctat cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgacc aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc tggaaaatgg CCGCTTTTCT GGATTCATCG i句51物 atcaggacat agcgttggct acccgtgata accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg gccttcttga cgagttcttc tgagtttaaa 3.4.程序 3.4.1. 製備ΝΕΟ與BVDVRT-PCR之lx主混合物之方法 表6 製備RT-PCR10-板主混合物之設備與供應源之摘述 設備與供應源 定購編號 供應商 0.5-10微升吸量管 2247005-12000 系列 Eppendorf 2-20微升吸量管 2247015-92000 系列 Eppendorf 10-100微升吸量管 2247020-52000 系列 Eppendorf 50-200微升吸量管 2247025-62000 系列 Eppendorf 100-1000微升吸量管 2247030-22000 系列 Eppendorf 1250微升Matrix尖端 目錄編號8255 Matrix 200微升Matrix尖端 目錄編號7275 Matrix 10微升ART尖端 目錄編號2140 分子生物產物 20微升ART尖端 目錄編號2149P 分子生物產物 -356· 143112.doc 100微升ART尖端 目錄編號2065E 分子生物產物 200微升ART尖端 目錄編號2069 分子生物產物 1000微升ART尖端 目錄編號2079E 分子生物產物 電子吸量管，Impact2 目錄編號2001 Matrix 1.5毫升不含RNase微試管 目錄編號12450 Ambion 14毫升聚丙烯試管 目錄編號352059 Falcon 25毫升試劑儲槽 目錄編號8096 Matrix 96-井反應板 目錄編號N801-0560 應用生物系統 光學罩蓋片條 目錄編號N801-0935 應用生物系統 用後即棄無菌長袍 目錄編號9515-E Baxter 試劑 定購编號 供應商 酸 0.1NHC1 Fisher RNAseZap 目錄編號9780 Ambion RNAse去除劑 目錄編號7005 分子生物產物 10-pak,EZRT-PCR核芯試劑套 件，5x反應緩衝劑，25 mM 醋酸錳，去氧NTP 目錄編號403028 應用生物系統 VICNEO探測物，2 μΜ (=10χ)，每液份550微升 目錄編號450003，定製， 5'-VIC-CTGTGGCCGGCT GGGTGTGG-TAMRA-3' (順序識別碼：2；) 應用生物系統 VICBVDV探測物，2 μΜ (=10χ)，每液份550微升 (Vertex) 目錄編號450003，定製， 5'-VIC-CCCTCG TCCAC GTGGCAT CTCGA-TAM RA-3'(順序識別碼：3) 應用生物系統 143112.doc -357- 1359145 ΝΕΟ正向引物，3 μΜ (=l〇x) 正向/逆向引物混合物，每液 份550微升 目錄編號4304972，定 製，5，-CCGCTTTTCTG GATTCATCG-3、順序識 別碼：4) 應用生物系統 ΝΕΟ逆向引物，3 μΜ(=1〇χ) 正向/逆向引物混合物，每液 份550微升 目錄編號4304972，定 製，5I-CCCATTCGCCG CCAA-3 (J噴別石焉：5) 應用生物系統 BVDV正向引物，3μΜ (=1 Οχ)正向/逆向引物混合 物，每液份550微升 定製，5'-CAGGGTAGTC GTCAGTGGTTC G-3'(順 序識別碼：6)，1.0 μΜ等 級w/凝膠純化 Oligos 等 BVDV逆向引物，3μΜ (=1 Οχ)正向/逆向引物混合 物，每液份550微升 定製，5'-GGCCTCTGCA GCACCCTATC-3,（順序識 別碼·· 7)，1.0 μΜ等級w/ 凝膠純化 Oligos 等 NEORNA標準物 活體外轉錄之RNA，使用T7RNA聚合酶，得 自含有HCV複製子RNA之新基因部份之質 粒。以轉錄本之已知分子量，及已純化轉錄 溶液之UV-吸光率為基礎，將此活體外轉錄之 RNA定量。將此RNA稀釋、分成數液份及儲 存在-80 C下。針對各Taq Man®檢測，使個別 液份解束。 欲被測試之RNA試樣，係單 離自HCV複製子細胞(此擬案 之段落2)，10微升/96-井板 不含核酸酶之水(未經DEPC 處理） 目錄編號9930 Ambion 3.4.2. 製備主混合物用之試劑 3.4.2.1.根據下文兩個步驟清理工作台，並以RNAse去 除劑擦拭吸量管。 RNAseZap(Ambion, Austin, TX) 143112.doc •358- 1359145 RNAse去除劑（分子生物產物（SanDiego，CA)) 3.4.2.2. 打開核芯EZRT-PCR試劑（應用生物系統），並將 5x缓衝劑置於冰上，使已冷凍之試劑，在室溫下解凍約15 分鐘，然後將其置於冰上。一個EZRT-PCR試劑套件，可 用以分析兩個96-井RNA萃取物。 3.4.2.3. 自-20°C，取用一支2 pMVIC探測物試管（ΝΕΟ或 BVDV，每試管550微升），並放置在冰上。 3.4.2.4. 自-20°C，取用一支3 μΜ正向/逆向引物混合物 試管（ΝΕΟ或BVDV，每試管550微升），並放置在冰上。 3.4.2.5. 自-80°C，取用一支標準RNA轉錄本（1〇8複製物 /10微升）之試管（3 0微升），並放置在冰上。 3.4.2.6. 取用一支室溫Ambion水之試管。 3.4.3. 供一個96-井板反應用之主混合物之組裝 3.4.3.1·使用1毫升吸量管，轉移5x緩衝劑（應用生物系 統）至14毫升試管；所添加之總體積為1100微升。 3.4.3.2.使用1毫升吸量管’將25 mM Mn(OAc)2(應用生 物系統）添加至14毫升試管中；所添加之總體積為66微 升。 3.4_3.3•使用200微升吸量管，將165微升10 mM dATP添 加至14毫升試管中。對1〇 dCTP、20 mM dUTP及10 mM dGTP進行相同作業。 3.4.3.4. 使用1毫升吸量管，添加55〇微升ι〇χ3 正向/ 逆向引物混合物。 3.4.3.5. 使用1毫升吸量管，添加55〇微升ι〇χ2 探測 143112.doc •359- 1359145 物。 3.4.3.6. 使用1毫升吸量管，添加220微升rTth DNA聚合 酶（應用生物系統）。 3.4.3.7. 使用100微升吸量管，添加55微升Amp Erase UNG (應用生物系統）。 3.4.3.8. 使用1毫升吸量管，添加605微升Ambion H20至 14毫升試管中；最後體積為總共4400微升。 3.4.3.9. 轉移4400微升主混合物至25毫升試劑儲槽。 3.4.3.10. 對全部96井’使用8-通道吸量管，每井分配 _ 40微升。 3.4.3.11. 使用8-通道吸量管，一管柱接著一管柱，從管 柱1至管柱11 ’轉移1 〇微升經萃取之未知試樣，至反應板 之井中。轉移後，將各管柱封端。 3.4.3· 12. 添加270微升AmbionH20至3 0微升1 08複製物/ 10微升RNA轉錄本中’供使用於標準曲線，並混合。目前 有HCV複製子定量標準RNA/10微升之1〇7個複製物。 3.4.4. 安裝ABI7700以供各操作使用 籲 3.4.4.1每次操作之前’再次靴式啟動ABI7700用之電 腦，及重建桌上。 3.4.4.2自硬碟機關閉及移除任何多餘程式；將資料超 轉至廢棄處。 3,4.4_3開啟順序偵測器vl.7程式（SDS軟體）。 3-4.4.5開啟"複製子檢測操作"名摺。 3.4.4.6開啟"複製子檢測"模板。被程式化至模板中之 143112.doc •360· 1359145 熱循環器條件如下： 階段1 : 50°C 2分鐘 階段2 : 60°C 30分鐘 階段3 : 95°C 5分鐘 階段4 : 95°C 15秒 階段5 : 60°C 60秒 階段4-5之循環重複次數：40 模板儀器：診斷：高階選擇： 選擇視圖：顯示器mse。 選擇視圖：顯示器最良好吻合。 選擇雜項：參考染料ROX。 3.4.4.7在”複製子檢測操作”名摺中，，儲存"（並非"以其本 身儲存"）檔案。 '、 3.4.4.8顯示安裝：按操作 3.5於一次操作後，使用SDS軟體，準備八幻77〇〇數據。 3.5.1. 將檢測板移離ABI7700，並拋棄而未曾打開。 這大為降低關於PCR交叉污染之實驗室問題。 3.5.2. 數據係使用順序偵測器系統軟體v 1.7分析。 3.5.3. 低限含量係首先使用預設裝置設定。 3.5.4. 數據捨棄規範：可將數據點或一系列之整個板 捨棄右與擬案已有顯著偏差，試劑失效或不幸事故，或 ABI770G操作故障，則可將數據拋棄。對於來自顯然正常 操作之任何數據點之排除，必須符合一或多個此等規範。 3.5.4.1.低限循環計算。正常地使用SDS軟體之預設 143112.doc -361 · 1359145 值。若最濃試樣之Ct低於15，則按需要將低限值終止極限 改變成較低數值，以致使最高濃度試樣之Ct大於終止值。 在施行此改變後，更新計算值。 3.5.3.2. 當與藉由新RNA標準物之分析所產生線條之斜 率與y-軸截距之平均值，顯示有偏差時，考慮捨棄整個異 常Taq Man®操作。此等數值可接受之範圍為： 斜率值應在3.0與3·6之間 y-截距循環應在36與41循環之間。 3.5.3.3. 由極端RnMRn顯示迷行之個別Taq ，可 在數據分析之前刪除，因此其不會影嚮SDS軟體計算。 3.5.3.4. 檢查與記錄無模板對照物Ct值，並確認其高於 任何化合物處理試樣Ct為>7.0Ct(> 1OOX)。 3.5.5. 將HCVRNA標準Ct值與先前結果比較。 3.5.6. 將HCVRNA標準曲線與先前結果比較。 3.5.7. 若迷行擴大作用在個別井中很顯著，則確認及 記下此等井。 3.5.8. 將此"結果"檔案輸出，並從7700電腦轉移至另 一部電腦，以使用MicrosoftExcel進行分析。 3.5.9. 於所使用試劑製劑或稀釋上之任何下列改變， 均作報告。 來自賣方之新探測物或引物合成。 新探測物或引物稀釋與液份。 新標準RNA轉錄本製劑。 新標準RNA轉錄本稀釋與液份。 1431J2.doc •362 - 1359145 新BVDV病毒製劑。 新管柱11標準製劑。 3.6 Taq Man®數據分析 3.6.1. 將Taq Man⑧HCVCt數與得自Taq Man®結果檔 案之複製數，複製與貼放至適當細胞複製子檢測數據分析 Microsoft Excel巨集指令中，並操作此巨集。 3.6.2. 從巨集表單複製Taq Man®結果表至另一表單’ 輸入化合物序號及批號。 3.6.3自此excel表單，計算化合物抑制活性之平均、標 準偏差及百分比CV，以及在5個複製物及無化合物對照組 中所有稀釋點之HCV複製數、HCVCt數及BVDV Ct數（若可 取得時）。 3.6.4.關於BVDV對照Taq Man®之數據排除與施行之 規範。檢查所有計算值。數據點或一系列整個板可以捨 棄。若與擬案有顯著偏差’試劑失效或不幸事故，或 ABI7700操作故障’則數據可以拋棄。關於來自顯然正常 操作之任何數據點之排除，則必須符合一或多個此等規 範°抑制百分比之標準偏差’在活性化合物中應低於 3 0。/。。HCV複製數之％CV ’應低於3〇%。所有試樣之 HCVCt之標準偏差’應低於0.5，這在大部份試樣中通常為 約0.1至0·3❹若HCVCt標準偏差大於0.5，則返回原始數據 表’並檢查5次複製物之Ct數。若任一個井之ct數，與5個 複製物之平均Ct數，差別2Ct，則此井應自分析中省略。 若大於3個井（並非在相同管柱上）具有不尋常(^數，則應進 143112.doc -363 - 1359145 行BVDVTaq Man®内部對照物檢測。若BVDV數據顯示不 規則性，則化合物應再一次測試。 3.6.5. IC50計算：將平均抑制與標準偏差之數據複製 與貼放至具有可變斜率計算器之S形劑量回應中，其係使 用非線性回歸方法。使用此項工具，利用兩種方法計算 IC5〇 :僅使頂部固定在1〇〇%抑制下，或使頂部固定在 100%抑制下，且底部在0%抑制下。然後對各化合物，報 告賦予最明顯吻合之方法。最可信賴之IC5〇，係來自具有 最低標準誤差之計算值。若計算自此兩種曲線吻合選擇性 之IC5〇，顯示超過一倍差異，或若IC50SD大於IC5〇，則化 合物應在調整濃度下，再一次測試。 HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素組合作用之計算 HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑（HSPI)與干擾素在組合中之作 用，可在複製子檢測中評估，其方式是於不同含量之干擾 素存在下，產生HSPI之劑量回應曲線，或於不同含量之 HSPI存在下，測定干擾素之劑量回應曲線。其目的係為評 估，與若兩種藥物對於RNA產生加成作用所預期者比較， 是否有較多或較少抑制病毒RNA蓄積之作用。更明確言 之，係使用Lowe之加成性定義（（1928) Die Quantitation Probleme der Pharmakologic, Ergebn. Physiol., 27，47-187)。其係定義如下。令DE，INF為會造成作用E之干擾素濃 度，及令DE，HSPI為會造成作用E之蛋白酶抑制劑濃度。則 由下列關係式，定義無交互作用或Lowe加成性，其中INF 之濃度〇1與118?1之濃度D2之組合，會產生作用E。 143112.doc -364- 1359145
a) :效或拮抗作用之程度’係以等作用曲線或等效線為觀 點不。組合（D1，D2)為在圖表上之-個點，纟t軸為干 擾素與HSPI之濃度（圖2)。會產生作用程度£之所有此種组 合，係形成E作用等效線。㈣⑽，〇)與（〇，DEHspi)為在等 • 也線上之點’即必須是此種情況。當滿足加成關係⑴時， 等效線為連接點（D啊，〇)與（〇，de，hspi)之直線。 凹口朝上之等效線表示增效，而凹口朝下之等效線表示 拮抗作肖。按照Berenbau mM· c ((i985)藥劑組合之預期 作用··-般解答。j· Theor. Bi〇1，⑴，413，與&⑽
Paru細她（1 "0)定量藥物增效作用之新途徑應用至順 式-二胺二氯基鉑與Ι-β-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶之組合， 癌症研究（CancerResearch) 50, 53 18_5327)之指引，增加一 • 項至⑴，以說明增效或拮抗作用。此方程式係定義-個回 應表面，其可在所有治療組合中吻合百分比對照值。來自 此吻合回應表面之輪廓圖形，係為等效線。 此回應表面模式係對各化合物假定s形劑量回應，由（2) 定義。
^max + B
[Drug]T /C50 , 143112.doc -365- (2) (3)1359145 獲得單獨活性E特定程度之濃度，係設定為（3) de.
INF IC50
WF
E-B \Mmn max
De, HSPt = 7C50
HSPI
E-B
V/m3W £ + 5 對於會產生回應程度E之藥物之每一組合而言，為滿足 Greco等人（1990)之模式，則藥物之組合作用必須滿足方程 式⑷ + 7C50 isr [INF] · + Ε· \ ϊ/m^f f ICSOhspi E-B a[INF][HSPI]
[HSPI] E-B (4) 1C50inf 1C50hspi
E-B
E -E + B 參數α係度量交互作用之量。零值α係意謂無交互作用或 加成性，因為當α=0時，方程式減為（1)。在給予IC5Q、Hill 斜率（m)、最大值（Emax)及最小值（B)下，此方程式可以解 出，而得由於任何治療組合[INF]與[HSPI]所造成之作用。 因此，此方程式係定義回應表面。設若一個實驗，其中 [INF]與[HSPI]係經改變，則此等參數可使用非線性加權最 小平方回歸以選擇。參數α可與增效度量值S產生關聯 (Hewlett, P. S. (1969)藥物混合物功效之度量，生物統計 學，25，477-487)，其係直接取自50%作用下之等效線。S 為沿著與軸呈45度之線條，自源點至界定加成性之等效線 之距離，對自源點至吻合數據之等效線之距離之比例 143112.doc -366 - 1359145 (S=ON/OM ’ 參閱圖 3)。此關係為 a=4(S2-S)。 上文關於吻合回應表面及測定具有其有意義程度之增效 參數a，係遵照Greco等人（1990)所討論之方法，以評估在 一系列實驗中，測試HSPI併用數種不同干擾素之增效程 度。但是，仍需要將具有較低計數之觀察值加權，超過具 有較高計數者。此等計數係直接與對照物百分比有關聯， 其係為作用E。利用Carroll, R. J.與RUpert，d.中所述之方 法（（1988)(於回歸上之轉換與加權，Chapman與HaU, New York)，可明瞭井對井變化性，係隨著平均對照物百分比 值之平方而增加。因此，此等觀察值係以一除以已被平方 之吻合對照物百分比值（E)作加權。用以分析此等實驗之 方差與加權，係與藉由研究人員探查關於分析放射配位體 檢測之方法所發現之變化性關係一致（Finney, D. j (1976)，放射配位體檢測，生物統計學，32，721_74〇，及 Dudley, R. A. Edwards, P., Ekinsm, R. p., McKinzie, I.G.M.
Raab, G. M·，Rodbard，D.及 Rodgers, R.P.C· (1985)，免疫檢 測數據處理之指弓丨，臨床化學，31/8,1264-1271)。 結果 在一項最初實驗中，係測試HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑化 合物CU ’涵蓋之濃度範圍從3 μΜ至0.123 μΜ，意即244倍 挑圍。干擾素-α2Β濃度係從每試樣3 0單位，改變至每1式樣 0.0096單位，意即3125倍範圍。如表7中所示，當作為單 一樂物治療使用時，化合物CU顯示1(：5〇為0.48 μΜ，而干 擾素ICm為2· 19U。在複製子檢測之精密度内，其係為大約 143112.doc •367- 1359145 20%，添加干擾素-α2Β會造成以劑量依存方式，增加複製 子RNA蓄積之抑制。例如，以0.333 μΜ化合物CU治療細 胞，會造成複製子RNA蓄積之28%抑制。0.333 μΜ化合物 CU，其係為IC5〇劑量之71% (0.469 μΜ)，與0.24U之干擾 素-〇128，其係為干擾素-〇1231(：5〇之11%(2.〇5 01^)，以其組 合治療細胞，會造成複製子RNA蓄積之49%抑制。因此， 一個IC50劑量之7 1 %，併用另一個之11 %，會造成複製子 RNA蓄積之49%抑制。以直覺方式判定組合治療是否為協 乘性、加成性或拮抗性，則吾人將預期若組合治療之作用 僅為加成性，為獲得複製子RNA蓄積之49%抑制，所需要 IC5G劑量之合併分率係為98%。吾人之實驗結果証實，複 製子RNA蓄積之抑制程度，係使用71%加上11%達成，意 即IC50劑量之82%，而非如組合治療加成作用所預測之 98%。因此，在此等化合物濃度下，此作用顯示係為協乘 的，因為獲得HCV複製子RNA之49%抑制所使用之各化合 物IC50劑量之分率劑量，係小於各化合物單獨所需者，其 將需要98%之IC5〇劑量。此組合治療之結果係示於表7 中，並以圖形方式示於圖1中。 表7 以化合物CU與干擾素-α2Β，個別或組合治療48小時後， 複製子RNA蓄積之抑制 143112.doc -368- 1359145 干擾素-α2Β(單位） 化合物CU (濃度） 30 U 6U 1.2 U 0.24 U 0.048 U 0.0096 U ου 3μΜ 99% 99% 99% 99% 98% 98% 98% 1 μΜ 99% 98% 96% 95% 92% 93% 88% 0.333 μΜ 94% 87% 66% 49% 33% 27% 28% 0.1111 μΜ 93% 79% 46% 29% 12% 15% 11% 0.0370 μΜ 92% 78% 44% 21% 2% 7% 8% 0.0123 μΜ 92% 78% 44% 20% 19% 19% 5% ΟμΜ 89% 73% 38% 16% 8% 12% 0% 如前所述，經由利用活體外複製子檢測及由該檢測所得 數據之簡易加成性分析所衍生之此等初步結果，証實複製 子細胞以HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素之組合治療， 會產生至少加成之抗病毒作用，且多半為協乘之抗病毒作 用0 前述數據已使用上述正式數學工具再分析，以測定HCV 絲胺酸蛋白酶抑制劑CU與干擾素α-2Β間之關係，是否為增 效、加成或拮抗。再分析之數據係以數字方式顯示於表8 中，並以圖形方式示於圖4中。 表8摘錄含複製子之細胞，以本發明之各種HCV絲胺酸 蛋白酶抑制劑及數種不同干擾素，個別或組合治療48小時 後，在複製子檢測中所獲得之進一步結果。吾人指出，於 複製子檢測中測得之HCV複製子’RNA抑制值之標準差為約 20%。化合物係經廣泛濃度測試，在較低之化合物濃度下 並未造成顯著之HCV複製子RNA濃度抑制。由於該檢測之 標準差為約20%，某些數據點會產生負數。在特定實驗中 143112.doc -369- 1359145 之負抑制數表示在經化合物處理之樣本中平均有較經偽處 理之樣本中為多之HCV複製子RNA分子。 表8 以HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑及不同干擾素，個別或組合治 療48小時後，複製子RNA蓄積之抑制 實驗1 IFN π-2Β (單位） 30.00 6.00 1.20 0.24 0.048 0.0096 0.000 0.000 Β9% 73% 38% 16% 8% 12% 0% 化合物 0.012 92% 78% 44% 20% 19% 19% 5% CU 0.037 92% 78% 44% 21% 2% 7% 8% (μΜ) 0.111 93% 79% 46% 29% 12% 15% 11% 0.333 94% 87% 66% 49% 33% 21% 28% 1.000 99% 98% 96% 95% 92% 93% 88% 3.000 99% 99% 99% 99% 98% 98% 98% 實驗2 IFN a •2A (單位） 30 6 1.2 0.24 0.048 0.0096 0 0 86% 61% 21% 4% *7% 5% 0% 化合物 0.0123 87% 66% 11% •23% 8% 8% 10% CU 0.37 85% 62% 13% •2% 0% • 1% 1% (μΜ) 0.1111 87% 68% 37% 20% -6% 12% 10% 0.333 92% 11% . 58% 41% 26% 25% 44% 1 98% 96% 90% 86% 84% 83% 85% 3 99% 99% 98% 98% 98% 98% 98% - 370 · 143112.doc 1359145 實驗3 化合物CU ( μΜ) 3 1.5 0.75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.0234 0 0 9δ% 93% 62% 23% 12% •2% -4% -2% 0 0.049 98% 95^〇 70% 39% 12% 2% 6% 9% 3% 干擾素 0.123 98% 95% 70% 43% 15% 7% 2% 5% 2% α-2Β 0.307 98% 95% 73% 46% 16% 14% 7% 19% -3% (單位） 0.768 98% 95% 82% 56% 43% 34% 28% 32% 28% 1.920 98% 98% 87% 71% 51% 54% 49% 52% 45% 4.8 99% 98% 92% 82% 74% 71% 69% 71% 59% 12.0 99% 98% 96% 89% 87% 85% 85% 85% 80% 30.0 99% 99% 98% 95% 93% 92% 92% 93% 89%
實驗4 化合物CU ( μΜ)
3 1.5 0.75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.0234 0 0 98% 94% 74% 38% 17% 3% -1% 6% 0% 0.049 98% 93% 607。 22% 29% 21% -9% -6% 6% 干擾素 0.123 98% 93% 67% 29% 21% 12% 3% 2% -8% α-2Α 0.307 98% 93% 66% 29% 22% 4% .-3% -4% 10% (單位） 0.768 98% 95% 67% 46% 24% 21% 20% 9% 15% 1.920 98% 96% 73% 48% 43% 44% 27% 33% 29% 4.8 98% 97% 82% 61% 61% 59% 52% 55% 43% 12,0 99% 98% 91% 75% 76% 72% 71% 74% 73% 30.0 99% 98% 96% 89% 86% 85% 84% 84% 83% -371 - 143112.doc 1359145 實驗5 化合物CU ( μΜ) 3 1.5 0.75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.0234 0 98% 95% 65% 24% -1% -14% -14% -12% 0 97% 95% 72% 41% 17% 119b 12% 6% 17% 97% 95% 71% 40% 31% 18% 18% 11% 4% 98% 96% 75% 44% 38% 25% 34% 18% 17% 98% 96% 82% 61% 42% 37% 25% 26% 36% 98% 97% 84% 64% 59% 61% 56% 51% 53% 98% 98% 90% 79% 72% 68% 65% 68% 68% 98% 98% 93% 87% 80% 80% 74% 11% 82% 98% 98% 95% 92% 86% 87% 86% 86% 87% 0.0 0.9375 1.875 羊干擾素3.7S r (單位> 7.5 15 30 60 120 實驗6 化合物EC ( μΜ) 3 1.5 0.75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.0234 0 0 96% 93% 81% 56% 29% 23% 19% 1% 0 0.0492 96% 92% 80% 60% 31% 15% 19% 29% 6% 干擾素 0.1229 96% 94% 78% 58% 32% 13% 20% 20% 4% (X-1B 0.3072 97% -95% 82% 60% 38% 32% 34% 42% 23% (單位） 0.768 97% 95% 87% 66% 43% 41% 46% 43% 25% 1.92 98% 97% 90% 73% 62% 51% 54% 58% 47% 4.8 98% 97% 94% 87% 76% 73% 78% 76% 69% 12.0 98% 98% 96% 92% 86% 86% 86% 85% 84% 30.0 98% 98% 96% 96% 93% 92% 92% 95% 91% 372- 143112.doc 1359145 實驗7 化合物EC ( μΜ) 3.0 1.5 0.75 0375 0.1875 0.0938 0.0469 0.02344 0 0 9b% 92% 81% 47% 28% 17% •1% -8% 0 0.0492 96% 93% 78% 58% 21% 8Ψα -12% 10% -17% 干擾素 0.1229 95% 93% 79% 64% 14% 5% 14% 1% -22% α·2Α 0.3072 95% 91% 80% 64% 22% 15% 5% 2% -5% (單位） 0.768 96% 95% 81% 64% 34% 21% 19% 20% 4% 1.92 96% 95% 88% 78% 44% 41% 19% 33% 21% 4.8 97% 95% 91% 85% 60% 58% 60% 53% 49% 12.0 97% 97% 95% 91% 11% 72% 76% 70% 71% 30.0 98% 98% 97% 94% 91% 86% 85% 85% 84%
實驗8 化合物CU (μΜ) 3.0 1.5 0.75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.02344 0 0 0.2344 干擾素θ 0·4_ (單位）0.937S 1.875 3,75 7.5 15.0
91% 95% 77% 34% 16% 6% -7% 0% 0 9S% 97% 83% 49% 31% 19% -21% -7% 1% 98% 96% 84% 56% 39% 21% 10% -3% 21% 98% 97% 91% 73% 54% 42% 31% 15% 30% 98% 98% 95% 80% 65% 58% 65% 60% 60% 98% 98% 97% 92% 86% 81% 77% 73% 79% 99% 98% 98% 96% 93% 93% 93% 90% 92% 99% 99% 99% 97% 97% 96% 97% 95% 96% 99% 99% 99% 99% 98% 99% 98% 98% 97% 30.0 373 - 143112.doc 1359145 實驗9 化合物EP ( μΜ) 8 4 2 1 0.5 0.2S 0.125 0.0625 0 0 94% 96% 96% 92% 64% 36% 23% 8% 0 干擾素 0.0492 95% 96% 96% 91% 67% 25% 28% 8% 3% α-2Β 0.1229 95% 97% 96% 91% 65% 44% 4% 11% 4% (單位） 0.3072 95% 97% 96% 91% 71% 46% 20% 8% 20% 0.7680 96% 97% 97% 93% 75% 49% 36% 24% 24% 1.92 96% 97% 97% 94% 82% 67% 49% 52% 54% 4.8 96% 98% 97% 96% 90% 79% 75% 75% 70% 12 97% 98% 98% 97% 94% 89% 89% 87% 83% 30 97% 98% 98% 98% 96% 94% 94% 95% 92% 實驗10 三唑核站（μΜ) 200 80 32 12.8 5.12 2.048 0.8192 0.3277 0 0 85% 62% 43% 3% -8% -17% -22% -6% 0 干擾素 0.0492 .87% 66% 48% 44% 11% -4% •10% 11% -7% a-TB 0.1229 84% 64% 53% 40% 26% •12% -5% 11% -9% (單位） 0.3072 86% 70% 62% 44% 28% 1% 6% 14% 1% 0.7680 90% 80% 72% 65% 38% 30% 28% 44% 29% 1.92 93% 85% 77% 76% 61% 57% 58% 50% 46% 4.8 96% 92% 87% 83% 82% 74% 71% 77% 12% 12 91% 95% 93% 91% 90% 89% 90% 89% 85% 30 98% 97% 96% 95% 94% 94% 93% 95% 94% .374· 143112.doc 如圖4-13令所示，其以圖 用上述數學方法作圖^7；^48中之數據’使 HCV蜉胺酴 X里增效作用，關於所測試 HCV絲胺酸蛋白酶抑 線，均為凹口朝上，4之所有組合之等效線曲 作用在複製子檢财治療之抗病毒 八仏療^ S的°此等結果係表列於表9中，其顯示組 相對程度，及個別使用抗病毒化合物之仏 值。於表9中之主要構件為^
詞為對各组“恭η 用於測疋之Ρ·值。α一 主一 ，。療之等效線最大轉折之度量。禮為零， :::成性，負值表示拮抗作用，而如在上文所示贈絲 义蛋白酶抑制劑與干擾素組合治療之情況中，大於一之 數值表示增效作用。α參數愈大，增效仙愈大。如表9中 ，於HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素之組合所示，即使 忽視各實驗巾之有意義程度，以對於平均禮為〇(無交互 乍用）之9-人實驗為基礎^試驗，具有ρ_值為&刚μ，這 表不其結果是高度顯著的。
本分析中所用之協乘性計算法係基於Grec〇 Rust〇m之方 法((1990)將—種定量藥物協乘性之新方法應用於順式-二 胺一氯始與阿拉伯糖基呋喃糖基胞嘧啶之組合，癌 症研九，50，53 18-5327)，其為評估使用HCV複製子檢測 所產生之實驗數據之理想工具。尚有其他應用於抗病毒化 _ 物研九之方法’例如 pritchard及 shipman(Pritchard, M. Ν·及Shipman, C. jr. (1990)"分析藥物-藥物交互作用之三維 模型（總覽抗病毒研究14 : 181-206).。將其協乘性計算 方法應用於表8中所示數據，亦顯示以HCV絲胺酸蛋白酶 H3112.doc •375- 1359145 抑制劑與干擾素之組合治療複製子細胞，會導致HCV複製 子RNA蓄積之協乘性抑制（數據未示）。 表9 組合治療增效作用之相對程度及個別使用之抗病毒化合物 之1<：50值 絲胺酸 蛋白酶 抑制劑 干擾素 IC50INF (單位） IC50HSPI (μΜ) a (SE)1 P-值 a>0 實驗1 化合物CU IFNa-2B 2.05 0.469 0.477(0.09) <0.0001 實驗2 化合物CU IFNa-2A 3.72 0.446 0.770(0.12) <0.0001 實驗3 化合物CU IFNa-2B 2.36 0.587 0.730(0.08) <0.0001 實驗4 化合物CU IFNa-2A 5.67 0.633 0.438(0.08) <0.0001 實驗5 化合物CU IFNt 13.22 0.605 0.328(0.07) <0.0001 實驗6 化合物EC IFNa-2B 2.53 0.384 0.516(0.10) <0.0001 實驗7 化合物EC IFNa-2A 5.50 0.312 1.24(0.20) <0.0001 實驗8 化合物CU IFNP 1.82 0.466 0.551(0.09) <0.0001 實驗9 化合物EP IFNa-2B 3.06 0.426 0.490(0.12) <0.0001 實驗10 三唑核苷 IFNa-2B 1.22 145 -0.24(0.067) 0.0004 ^SE)標準誤差 使用本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素，評估 抗-HCV藥物治療增效性質之另一種度量方式，是使用上 述相同方法，以在複製子檢測中評估對於HCV之現行標準 143112.doc -376- 1359145 組合療法，意即干擾素α_2Β併用三唑核芸。表1〇之最後一 行’顯示干擾素α·2Β與三唑核:y：混合物參數，係為負 數’這表示有少量拮抗作用在此兩種藥物之間。這進一步 強調在本文中揭示之組合治療，採用本發明HCV絲胺酸蛋 白酶抑制劑且併用干擾素之重要性，係在於此等治療藥品 明白地產生增效作用，然而使用於HCV之標準組合療法 (干擾素α-2Β併用三唾核:y：)在複製子檢測中並非增效性。 採用本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑加上干擾素，對三 唑核苷加上干擾素之組合治療，在複製子檢測中之前文比 較’係明白地顯示前者為增效性，而後者則不是。使用複 製子檢測所獲传之貫驗結果顯示’若干擾素與Hey絲胺酸 蛋白酶抑制劑合併使用，則與當干擾素α·2Β與三唑核甞合 併使用時所需要者相較，遠為較低劑量之干擾素是有效 的。複製子檢測為一種有用模式系統，其中係為測試潛在 抗-HCV化合物’且目前廣泛地被倚賴作為化合物抗_Hcv 活性之有效預測方式。應指出的是，例如等人 (2000)在細胞培養物中HCVRNA複製之有效引發， Science^ 290 : 1972_1974，及 Chung 等人（2〇〇i)c型肝炎 病毒複製係直接被IFN_a在全長二元表現系統中抑制，
Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 98(17): 9847-52。單獨之三 唑核甞，在降低HCV複製子RNA於複製子檢測中之蓄積 上，係為最低限度地有效（表8實驗1〇，及表9最後一行）。 此結果係顯然與活體内研究衝突，其中當獨自使用時，三 唑核：y：對於hcvs#，未有顯著治療價值。對照上而言， 143112.doc •377· 1359145 在複製子檢測中，矯正如下文所討論之細胞毒性.，三唑核 甞具有IC5〇為145 μΜ。此結果可解釋為明瞭複製子檢測允 許評估高三唑核替濃度，而由於活體内細胞毒性，故其在 人類治療上是不可能的（ChutaputtiA.(2000)C型肝炎抗病毒 劑之不利作用及其他安全方面，胃腸病學與肝病學期刊， 15 Suppl : E156-63)。 此評估必然需要評估三唑核苷之細胞毒性。此種毒性係 發生在病人中，及在細胞檢測中（Shiffman M. L.，Verbeke S. B·，Kimball Ρ. Μ. (2000) α-干擾素併用三。坐核芬，在以 有絲分裂原方式刺激之人類淋巴細胞中，會加強增生抑 制，而非細胞活素產生，抗病毒研究，48(2) : 91-9)。在 本文所揭示之實驗中，.於複製子檢測中之三0坐核答細胞毒 性，係以兩種方式觀察與度量。在測定複製子細胞存活力 之ΧΤΤ代謝檢測（Roehm N. W.，Rodgers G. Η.，Hatfield S. M.，Glasebrook A. L. (1991)—種利用四銼鹽XTT對於細胞 增生與存活力之經改良比色檢測，免疫方法期刊， 142(2) : 257-65)，及在經處理對未經處理細胞中，於複製 子檢測中，度量甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH)mRNA含量 之Taq Man⑧定量 RT-PCR檢測（Brink N., Szamel M·，Young A. R·，Wittem K. P.，Bergemann J. (2000)在 UV-照射人類皮 膚中，於活體内之 IL-Ιβ，IL-10，IL-10r，TNFa 及 IL-7mRNA 含量之比較定量，發炎研究期刊，49(6) : 2906)兩者中’ 發現顯著三唑核苷所引致之細胞毒性，但按下述改正。假 定GAPDH mRNA(其係為一種構成上表現之管理基因）之含 143112.doc •378- 1359145 量，在所有存活細胞中均為相同。自以轉錄抑制劑放線菌 素D處理之細胞中之GAPDH mRNA含量之度量值，得知 GAPDH mRNA之半生期只有數小時（數據未示出）。因此， 如由其他人使用Taq Man®技術測定mRNA在人類細胞中之 含量所達成者，假設GAPDH mRNA含量，在任何特定試 樣中，係與存活細胞數（VCN)成正比，具有關係式為 VCN=2A(40-CtGAPDH mRNA)。VCN係對各複製子檢測試 樣井進行計算，然後吾人將特定井之HCV複製子RNA複製 數，除以該井之VCN。一旦計算後，使用此比例代替HCV 複製數，以計算抑制（”平均抑制使用比例"；圖14.A)。無 需針對此細胞毒性校正複製子檢測數據，將此種細胞毒性 讀取為HCVRNA複製子蓄積之偽陽性抑制。在複製子檢測 中，假定HCVRNA複製子蓄積所度量之抑制，係為 HCVRNA複製子蓄積之實際抑制與HCVRNA複製子蓄積之 表觀抑制（由於細胞毒性所致）之總和。以細胞毒性之XTT 與Taq Man® GAPDH mRNA度量值之密切關係為基礎，進 一步假定，因複製子檢測所測試之化合物所造成之 GAPDH mRNA蓄積之抑制，係為由於細胞毒性所致 HCVRNA複製子蓄積之表觀抑制之可信賴度量。因此，化 合物在複製子檢測中，經一般細胞毒性校正之真實 抗-HCV活性，可經由將各試樣中度量之HCV複製子RNA 分子數目，除以VCN作估計，因此正規化成為各試樣中存 活細胞之數目。使用此方法，圖14·Α顯示在複製子檢測 中，真實三唑核苷抗-HCV活性之估計（”平均抑制使用比例”）。 143112.doc •379- 1359145 二咬核芬ic5。之估計，係最良好地使用此方法計算而得。 於圖M.A中，"平均最初抑制,，係說明三。坐核|之未經校正 IC5。’其係大約8〇 μΜ’然而計算自"平均抑制使用比例”曲 線之工校正IC5。值，係為大約145 μΜ。應注意的是，在 HCVRNA複製子畜積之經校正與經度量抑制之間由於干 擾素MB治療所造成之差異⑷4.Β)，#於複製子㈣％ CV之〜20%，故係為無意義的。類似干擾素α2Β，在本發 明實例甲測試之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑，在所採用之濃 度下，並未顯示顯著細胞毒性。此係使用χττ檢測測定， 其中各種化合物之TC50值為：cu=64.7 μΜ，Ερ>.1〇卜1^及 EC>50 μΜ。此等TC50值係大於表9中所示之ICs〇值2〇ΐ4〇 倍。因此，此等化合物之細胞毒性，在複製子檢測中，於 此檢測之精密度内’對於HCVRNA蓄積未具有顯著作用， 因為此種細胞毒性僅發生在HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑濃度 顯著大於在複製子檢測中所測試者之情況下。 關於HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與干擾素個別與組合功效之 結論 本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與各種干擾素，當單獨 使用於HCV複製子檢測中時，其抗-HCV活性係示於構成 表8之個別實驗之搁與行中’其僅採用一種抗病毒劑。表9 列出針對各抗病毒化合物’當單獨測試時所度量之ic50 值。經由使用活體外複製子檢測，所衍生之前述結果，亦 証實複製子細胞以本發明之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑與各 種干擾素之組合治療，會產生増效抗病毒作用。完全預 143112.doc -380- 1359145 期’此等作用將轉化成活體内有效性。 採用本發明HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑之組合療法，具有 勝過單一藥物療法之數種主要優點。首先，與若單獨使用 ^所可能使用者相較，可使用較低劑量之個別藥物，以施 行冶療，則吾人將預期降低與治療有關聯之毒性及副作 用。這在干擾素治療之情況中，是特別重要的，其中副作 用很嚴重，且顯示係與投予病人之劑量成正比。前述數據 指出’可將—定劑量（如於IC：95水平之cu)之HCV絲胺酸蛋 白酶抑制劑與—定劑量（如於ICS()水平）之干擾素α併用，其 結果為較在無高劑量干擾素α之逆向副作用存在下由hcv 絲胺酸蛋白酶抑制劑單獨所達成者更為有效之治療β組合 療法之第二個主要利益，是因為兩種藥物獨立發生作用， 會抵抗治療之突變型HCV菌株’只有較少發展機會。抗藥 性之發展’係為RNA病毒’例如HCV之主要顧慮。由於其 高突變率，故此種病毒可迅速地適應環境壓力。組合療法 之第三個利益’可為降低成本，此係由於有效治療所需要 之治療劑量較低所致。 可採用於本文所揭示方法中之其他免疫調節劑，包括例 如a干擾素2Α，同感干擾素，τ干擾素，干擾素+三唑核 ^(Rebatron)，經PEG化之干擾素，及干擾素基因表現之啟 動子《完全預期的是，當併用HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑， 譬如於本文中揭示者，此等化合物之抗_HCv活性將會改 良。由於已知干擾素在活體内及在複製子檢測中係為活性 的，故預期本發明之HCV絲胺酸蛋白酶抑制劑於活體内亦 143112.doc «381 - 1359145 為活性的，且更重要的是，當併用干擾素，其免疫系統刺 激子或其他具有HCV抗病毒活性之化合物（其係藉由抑制 HCV絲胺酸蛋白酶以外之機制發生作用）時，能夠引出增 效活性。 HCV之最良好現行療法，係採用干擾素α與核苷類似物 二唑核甞·》此治療僅為最低限度有效，且會造成減少病人 順應性之顯著副作用（慢性c型肝炎：流行疾病管理，美國 國家衛生研究所，衛生與人類服務部門，1999) ^此外， 在移植病人中，三唑核：y：_干擾素組合作用並不明瞭，且 事貝上可能比單獨之干擾素更差（慢性C型肝炎：流行疾病 管理，美國國家衛生研究所，衛生與人類服務部門， 1999)。 上文呈現之結果，証實當干擾素與新穎種類之Hcv抗病 毒劑，本發明之一種絲胺酸蛋白酶抑制劑，一起使用時， 有增效組合作用。吾人完全預期，於本文中所揭示之活體 外結果，與目前單獨使用干擾素所可能達成者相較，會導 致HCV病人之更有效治療。干擾素之亞治療劑量，可使病 人之免疫系統活動，以更良好地與病毒搏鬥，且絲胺酸蛋 白酶抑制劑可直接攻擊病毒’經由不同機制作用，以雙叉 狀攻擊’處理病毒。Hcv感染之治療，因此可在對病人降 低成本下達成，此係以減少副作用及所必須藥劑之較低支 付為觀點，因有效HCV抗病毒治療僅需要較少之兩種藥 物。 ’、 本發明可在未偏離其精神或基本特質下，以其他特定形 143112.doc -382- 1359145 式具體表現。 【圖式簡單說明】 本發明之上述與其他方面、特徵及優點，將自下文詳述 並搭配附圖而更為明瞭’其全部僅為說明而給予，並非本 發明之限制，其中： 圖1顯示含複製子之細胞，以化合物CU與干擾素_α2Β個 別或合併處理48小時後，HCV複製子RNA蓄積之抑制。 圖2係以圖形方式說明藉由使用於組合中之化合物所顯 不之等效線凹度，根據Greco、Park及Rustom之增效計算 方法（（1990)—種定量藥物增效作用之新穎研究途徑於順 式-二胺二氯鉑與丨— β-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶組合上之應 用’癌症研究（CancerResearch)，50，5318-5327)，其係為 拮抗、加成及增效。 圖3顯示α與在等效線中之曲率量間之幾何關係。於 50°/。作用程度下之假設等效線，係以直線等效線顯示，其 係為在加成性上所預期的❶M為線y = x與假設等效線之交 點。N為線y=x與直線等效線之交點^ 〇為原點（〇,〇)。3給 予等效線中曲率量之度量值，其中s=ON/〇Me 0N為0至N 之距離，而0]^為0至厘之距離。參數〇1係藉由等式 S)而與S產生關聯。 圖4顯不使用Greco專人如如文出處之方法，對於化合物 CU與干擾素a_2B(Schering-Plough)之組合，使用實驗丄中 各化合物之6種稀釋液之等效線計算值。 圖5顯示使用（^6(：0等人如前文出處之方法，對於化合物 143112.doc •383 - 切 9145 /、干擾素α-2 A之組合’使用貫驗2各化合物之6種稀釋 液之等效線計算值。 圖6顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合物 CU與干擾素a-2B(Schering-Plough)之組合，使用實驗3各 化合物之8種稀釋液之等效線計算值。 圖7顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合物 CU$干擾素a-2A之組合，使用實驗4各化合物之8種稀釋 液之等效線計算值。 圖8顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合物
ClJ與得自羊之干擾素τ之組合，使用實驗5各化合物之8種 稀釋液之等效線計算。 圖9顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合物 EC與干擾素a_2B(Schering-Plough)之組合，使用實驗6各 化合物之8種稀釋液之等效線計算值。 圖1 〇顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合 物EC與干擾素a-2A之組合，使用實驗7各化合物之8種稀 釋液之等效線計算值。 圖11顯示使用Greco等人如前文出處之方法，對於化合 物CU與干擾素β之組合，使用實驗8各化合物之8種稀釋液 之等效線計算值。 圖12顯示使用Greco等人如前文出處之方法對於化合 物EP與干擾素a_2B(Schering-Plough)之組合，使用實驗9 各化合物之8種稀释液之等效線計算值。 圖13顯示使用Greco等人如前文出處之方法對於三唑 143112.doc -384- 1359145 核嘗與干擾素a-2B(Schering-Plough)之組合，使用實驗10 各化合物之8種稀釋液之等效線計算值。 圖14顯示抑制因為以無論是單獨之（A)三唑核苷或單獨 之（B)干擾素a-2B處理複製子細胞所造成之HCV複製子 RNA蓄積。在兩個板面中，係顯示所度量之抑制，以及針 對化合物之細胞毒性所校正之抑制。 143112.doc 385 - 序列表 <110>美商維泰克斯製藥公司 <120>擬肽蛋白酶抑制劑 <130> 223306/00-131/120312 <140> US 10/344,112 <141〉 2004-12-17 <150> PCT/US01/026008 <151> 2001-08-31 <150> US 60/229398 <151> 2000-08-31 <150> US 60/277641 <151> 2001-03-21 <160> 7 <170〉 Patentln version 3.5 <210> 1 <211> 900 <212> DNA <213> 未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及引子 <400> 1 gtgcttgcga gtgccccggg aggtctcgta gaccgtgcac catgagcacg aatcctaaac 60 ctcaaagaaa aaccaaacgt aacaccaacg ggcgcgccat gattgaacaa gatggattgc 120 acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg ctatgactgg gcacaacaga 180 caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc gcaggggcgc ccggttcttt 240 ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca ggacgaggca gcgcggctat 300 cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct cgacgttgtc actgaagcgg 360 gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga tctcctgtca tctcaccttg 420 ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg gcggctgcat acgcttgatc 480 cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat cgagcgagca cgtactcgga 540 tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga gcatcagggg ctcgcgccag 600 ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg cgaggatctc gtcgtgaccc 660 atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg ccgcttttct ggattcatcg 720 actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat agcgttggct acccgtgata 780 ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct cgtgctttac ggtatcgccg 840 ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga cgagttcttc tgagtttaaa 900 143〗12-序列表.doc 1359145 <210> 2 <211〉 20 <212> DMA <213〉未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及弓| 子 <400> 2 ctgtggccgg ctgggtgtgg <210> 3 <211> 23 <212> DNA <213> 未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及弓 1 子 <400> 3 ccctcgtcca cgtggcatct cga <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213〉未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及弓|子 <400> 4 ccgcttttct ggattcatcg <210> 5 <211> 15 <212> DNA <213> 未知 <220〉 <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及弓|子 <400〉 5 cccattcgcc gccaa <210> 6 <211> 22 <212> DNA <213> 未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及弓| 子 <400> 6 cagggtagtc gtcagtggtt eg 143112·序列表.doc 1359145 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> 未知 <220> <223> HCV Replicon RNA TaqMan 探針及弓|子 <400> 7 ggcctctgca gcaccctatc 1431】2-序列表.doc

Claims (1)

1359145 第099107492號專利申請案 中文申請專利範圍替換本(1〇P.^1〇L月.：U= 公告本· 七、申脅奪科範窗： 卜C〇净， 1. 一種製備式28對掌性雙環脯胺酸酯化合物之~— Η (2β) 其包括以下步驟： (a)於分裂與環化條件下，使式24化合物分裂與環化 (24)
143112-1001024.doc
1359145 R15為脂族基團； R16為脂族基團；及 R17為芳基； R18為芳基；或 R17與R18和該R17與R18所連接之碳一起採用而為 Λ 1 ;以形成式25化合物
143112-1001024.doc -2- 1359145 (b)以醯胺保護基保護式25化合物之内醯胺部份基團之 氮，以形成式26化合物
其中： p。為酿胺保護基； (c)於還原條件下， 合物 使式26化合物還原，以形成式27化
及 (d)於去除保護條件下，使式27化合物去除保護，以形 成式28化合物
2.根據申請專利範圍第1項之方法，其申： 143112-1001024.doc 1359145
R17與R18和該R17與R18所連接之碳一起採用而為 為。 3.根據申請專利範圍第2項之方法，其進一步包括以下步 驟：其中式24化合物係經由以亞胺性甘胺酿亞胺化合 物，於式29化合物上’達成Michael加成而製成 (29) 其中： 其中： 式29化合物可經由使式29a化合物酯化而製成 Q \r，.· (29a> 其中： riKH〇'_〇)RI5、an 或 _c〇nr15r15。 4. 根據申請專利範圍第3項之方法 78°C間之溫度下進行。 其中此方法係在〇。(：與_ 143112-1001024.doc 1359145 下進行 5.根據巾料利範㈣4項之方法，其中此方法係在_贼 6. 根據申請專利範圍第5項之方 万法，其中此方法係藉對掌 性相轉移觸媒催化。 7. 根據申請專利範圍第5項之 〜 項之方法’其巾此方法係藉非對 旱性相轉移觸媒催化。 8. 根據申請專利範圍第丨至7項中 基為BOC。 ‘ 任項之方法，其中保護
法，其中R12為 法，其中R1 為 U·根據申請專利範圍第8項之方法，其中R、(N-二苯亞甲 基）-甘胺酸第三-丁酯。 .根據f請專利範圍第旧之方法，其tRl3^_L 13. 根據申請專利範圍第12項之方法，" 某 14. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中R、CO二。 15. 根據申請專利範圍第14項之方法，其 基0 143112-1001024.doc 1359145 三- π根據f請專利範圍第15項之方法其tRl6為第 基。 17. 根據申請專利範圍第1項之方法，其中P。為爷氧幾基。 18. 根據申請專利範圍第8項之方法，其中式29化合物為！, 基-1-環戊烯甲酯。
物為 20.根據申請專利範圍第1項之方法
其中式25化合物為 21.根據申請專利範圍第1項之方法
其中式26化合物為 其中式27化合物為 22.根據申請專利範圍第1項之方法 143112-1001024.doc 1359145
23.根據申請專利範圍第i項之方法其中式28化合
物為 24. 申凊專利範圍第丄項之方法其中式29化合物為 C〇2Me 〇 25.根據申請專利範圍第1項之方法，其包括以下步驟： (a)於分裂與環化條件下，使以下化合物分裂與環化
以形成以下化合物
(b)以芊氧羰基保護以下化合物之内醯胺部份基團之氮 143112-1001024.doc 1359145
， 以形成以下化合物
(d)於去除保護條件下，使以下化合物去除保護 143112-1001024.doc 1359145
143112-1001024.doc
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