EA017556B1 - Пептидомиметические ингибиторы протеазы - Google Patents

Пептидомиметические ингибиторы протеазы Download PDF

Info

Publication number
EA017556B1
EA017556B1 EA200701869A EA200701869A EA017556B1 EA 017556 B1 EA017556 B1 EA 017556B1 EA 200701869 A EA200701869 A EA 200701869A EA 200701869 A EA200701869 A EA 200701869A EA 017556 B1 EA017556 B1 EA 017556B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
group
optionally substituted
substituents
compound according
Prior art date
Application number
EA200701869A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200701869A1 (ru
Inventor
Роберт Эдвард Бабин
Шу Хьюи Чен
Джейсон Эрик Ламар
Нэнси Джун Снайдер
Ксиченг Дэвид Сун
Марк Джозеф Тебби
Франц Виктор
К. Мей Ванг
Ивонн Йи Май Йип
Иван Колладо
Кристина Гарсиа-Паредес
Реймонд Самьюэл Паркер III
Линг Дзин
Декьи Гуо
Джон Ирвин Гласс
Original Assignee
Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26923261&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA017556(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед filed Critical Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед
Publication of EA200701869A1 publication Critical patent/EA200701869A1/ru
Publication of EA017556B1 publication Critical patent/EA017556B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/212—IFN-alpha
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A61K38/215—IFN-beta
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/52—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring condensed with a ring other than six-membered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06052—Val-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/101—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
    • A61K38/095—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24211—Hepacivirus, e.g. hepatitis C virus, hepatitis G virus
    • C12N2770/24222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Indole Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)

Abstract

Данное изобретение касается пептидомиметических соединений, полезных в качестве ингибиторов протеазы (1), в частности в качестве ингибиторов сериновой протеазы, и, более конкретно, в качестве ингибиторов NS3 протеазы вируса гепатита С; их промежуточных соединений; их получения, включающего новые способы стереоселективного синтеза промежуточных соединений. Изобретение также касается фармацевтических композиций и способов применения соединений для ингибирования протеазы HCV или лечения пациентов, инфицированных HCV, или облегчения связанного с инфекцией физиологического состояния. Также разработаны фармацевтические комбинации, включающие в дополнение к одному или более ингибиторам сериновой протеазы HCV один или более интерферонов, обладающих анти-HCV активностью, и/или одно или более соединений, обладающих анти-HCV активностью, и фармацевтически приемлемый носитель, способы лечения или профилактики инфекции HCV у пациента с применением таких композиций. Настоящее изобретение также касается набора или фармацевтической упаковки для лечения или профилактики инфекции HCV у пациента.

Description

Данное изобретение касается пептидомиметических соединений и промежуточных соединений, их получения, включающего способы стереоселективного синтеза, фармацевтических композиций, содержащих пептидомиметические соединения, и применения пептидомиметических соединений или их композиций в качестве ингибиторов протеазы, в частности, в качестве ингибиторов сериновой протеазы, и, более конкретно, в качестве ингибиторов N83 протеазы вируса гепатита С (НСУ). Пептидомиметические соединения, в качестве ингибиторов N83 протеазы НСУ, в особенности полезны для нарушения жизненного цикла вируса гепатита С и для лечения или профилактики инфекции НСУ или вызванных ею физиологических состояний. Настоящее изобретение также касается способов комбинированной терапии для подавления репликации НСУ в клетках, либо для лечения или профилактики инфекции НСУ у пациентов путем применения пептидомиметических соединений или фармацевтических композиций, или наборов и фармацевтических упаковок из них. Настоящее изобретение в качестве фармацевтических композиций охватывает композиции, включающие ингибитор сериновой протеазы НСУ в сочетании с интерфероном, обладающим анти-НСУ активностью; ингибитор сериновой протеазы НСУ в сочетании с соединением, отличным от интерферона, обладающим анти-НСУ активностью; или ингибитор сериновой протеазы НСУ в сочетании как с интерфероном, обладающим анти-НСУ активностью, так и соединением, отличным от интерферона, обладающим анти-НСУ активностью. Кроме того, настоящее изобретение касается стереоселективных способов получения хиральных промежуточных соединений бициклопролината, используемых в синтезе пептидомиметических соединений.
Предпосылки изобретения
Заражение НСУ является и признается в качестве причины возникновения заболевания для большинства случаев, не относящихся к гепатитам А, В.
Считается, что 3% населения мира является носителями хронической формы НСУ [А. А1Ьег11 е1 а1., №Ц.1га1 Н181оту о! НераН18 С, 1. Нера1о1оду. 31, (8ирр1. 1), 17-24 (1999)]. Только в Соединенных Штатах процент заражения составляет 1,8% или 3,9 миллиона человек [М.1. А11ет, НераН18 С У1ти8 НГесйоп ίη 11е Ипйеб 81а1е8, 1. Нера1о1оду. 31, (8ирр1. 1), 88-91 (1999)]. Более чем у 70% из числа всех инфицированных пациентов обнаружена хроническая инфекция, которая считается основной причиной цирроза и печеночно-клеточного рака. [Ό. Ьауапейу, С1оЬа1 8игуе111апсе апб Соп1го1 о! НераИИк С, 1. Упа1 НераИ118, 6, 35-47 (1999)].
Репликация НСУ охватывает кодирование генома полипротеина из 3010-3033 аминокислот Ю.-Б. С1юо. е! а1., Сепебс ОгдашхаРоп апб Оп'егЩу о! Не НераН18 С У1ти8, Ргос. №111. Асаб. 8с1. И8А. 88, 2451-2455 (1991); N. Ка1о е1 а1., Мо1еси1аг С1ошпд о! 11е Нитап Нера1й18 С У1ги8 Сеноте Ртот 1арапе8е РаРеп18 тейй Коп-А, Коп-В НераН18, Ргос. №И. Асаб. 8с1. И8А. 87, 9524-9528 (1990); А. Такапихатеа е! а1., 81гис1иге апб ОгдатхаРоп о! Не Нера11118 С У1ги8 Сепоте 18о1а1еб Ргот Нитап Сатега, 1. У1го1., 65, 1105-1113 (1991)]. Предполагается, что неструктурированные (N8) протеины НСУ обуславливают основной каталитический механизм вирусной репликации. N8 протеины получают путем протеолитического расщепления полипротеина [К. Ваг1еп8с111адег е1 а1., №1181п.1с111га1 Рго1еш 3 о! Не НераН18 С Упи8 Епсобе8 а 8етте-Туре Рто1ета8е Еес.|шгеб !ог С1еауаде а1 Не N83/4 апб N84/5 1ипс1юп8, 1. Уио1., 67, 38353844 (1993); А. Сгакош е1 а1. С11агас1епхаРоп о! Не Нера1И8 С У1ти8-Епсобеб 8етте Рто1е1па8е: Пе1егтНаРоп о! Рго1ета8е-Оерепбеп1 Ро1урго1ет С1еауаде 8йе8, 1. Уио1., 67, 2832-2843 (1993); А. Сгакош е1 а1., Ехрге88юп апб 1бепРПсаРоп о! НераН18 С Упи8 Ро1урто1ет С1еауаде Ргобис18, 1. У1го1., 67, 1385-1395 (1993); Ь. Тоте1 е1 а1., N83 18 а 8етте рто1еа8е гес.|тгеб !ог ргосе88тд о! НераРР8 С у1ти8 ро1урто1ет, 1. У1го1., 67, 4017-4026 (1993)]. Показано, что фактически первые 181 аминокислоты N83 (остатков 10271207 вирусного полипротеина) содержат домен N83 сериновой протеазы, который процессирует все четыре нисходящих участка полипротеина НСУ [С. Ьш е1 а1., НераН18 С Упи8 N83 8етте Рто1ета8е: Тгап8С1еауаде Еес.|шгетеп18 апб Ргосе881пд Кте11с8, 1. Упо1., 68, 8147-8157 (1994)].
N8 3 (N83) протеин НСУ подавляет активность сериновой протеазы, что способствует процессингу основных вирусных ферментов и, таким образом, считается незаменимым для репликации вируса и инфективности. Заключение о незаменимости N83 протеазы сделано на основании того факта, что мутация в N83 протеазу вируса желтой лихорадки снижает вирусную инфективность [Т.1. С1атЬег8 е1 а1., ’Ένίбепсе 1На1 Не №1егтта1 Оотат о! Ноп81гис1ига1 Рго1еш N83 Ргот Уе11оте Бе\'ег У1ги8 18 а 8егте Рго1еа8е Ке8роп81Ь1е !ог 8йе-8ресШс С1еа\'аде8 т Не Уйа1 Ро1урго1еш, Ргос. №ι11. Асаб. 8ск И8А, 87, 8898-8902 (1990)]. Совсем недавно на модели шимпанзе было показано, что мутации по активному участку N83 протеазы НСУ могут полностью устранить инфекцию НСУ [СМ. К1се е1 а1. НераН18 С \'1П18-епсобеб епхутаРс асР\Не8 апб соп8ег\'еб КИА е1етеп18 ш Не 3’-поп1тап81а1еб гедюп аге е88епйа1 !ог νίιυ8 терИсайоп 1п \'Б'о. 1. У1го1., 74(4) 2046-51 (2000)]. N83 сериновая протеаза НСУ считается также незаменимой для репликации вируса, поскольку она и связанный с ней кофактор, М84А, способствуют процессингу всех вирусных ферментов. Очевидно, данный процессинг аналогичен процессингу, осуществляемому аспартил-протеазой вируса иммунодефицита человека (Н1У). В дополнение, продемонстрированное на человеке применение ингибиторов протеазы Н1У в качестве эффективных противовирусных средств показывает, что нарушение стадии процессинга протеаза-протеин в жизненном кольце вируса не приводит к терапевтически активным агентам. Следовательно, фермент протеаза является привлекательной мишенью с точки зрения обнаружения лекарственных средств.
- 1 017556
Описаны некоторые потенциальные ингибиторы протеазы НСУ. Публикации РСТ заявок под номерами МО 00/09558, МО 00/09543, МО 99/64442, МО 99/07733, МО 99/07734, МО 99/50230, МО 98/46630, МО 98/17679 и МО 97/43310, патент Соединенных Штатов Νο. 5990276, М. ЬЕпак-Вгипе! е! а1., В1оогд. Меб. СНет. Ье!!., 8, 1713-1718 (1998), М. Нап е! а1., Вюощ. Меб. СНет. Ье!!., 10, 711-713 (2000), В. Эшъбоп е! а1., Вюогд. Меб. СНет. Ьей., 10, 1571-1579 (2000), М. Штак-Вгипе! е! а1., Вюогд. Меб. СНет. Ье!!., 10, 2267-2270 (2000) и 8. ЬаР1ап!е е! а1., Вюогд. Меб. СНет. Ье!!., 10, 2271-2274 (2000), каждая ссылка описывает потенциальные ингибиторы N83 протеазы НСУ. К сожалению, отсутствуют ингибиторы сериновой протеазы, приемлемые в настоящее время в качестве анти-НСУ агентов.
Фактически, отсутствуют анти-НСУ методы лечения, за исключением интерферона-α, комбинации интерферон-а/рибавирин и, ставшего известным совсем недавно, пэгилированного интерферона-α. Однако показатели задержки ответа при лечении интерфероном-α и интерфероном-а/рибавирином являются низкими (<50%), а обнаруживаемые побочные действия значительные и тяжелые [М.А. Ма1кег, НераШБ С У1ГИ8: ап ОуеМете оГ Сиггеп! АрргоасНек апб Ргодгекк, ΌΌΤ, 4, 518-529 (1999); Ό. Могаброиг е! а1., Сиггеп! апб ЕуоМпд Тйегар1е8 Гог НераШБ С, Еиг. 1. 6айгоеп!его1. Нера!о1., 11, 1199-1202 (1999); Н.Ь.А. 1ап88еп е! а1., 8шс1бе А88ос1а!еб тейй А1Га-1п1егГегоп ТНегару Гог СНгошс У1га1 НераШБ, 1. Нера!о1., 21, 241-243 (1994) и Р.Е. Вепаи1! е! а1., 81бе еГГес!к оГ а1рНа ш!егГегоп, 8етшага ш Ыуег ЭБеаке 9, 273277, (1989)]. Кроме того, лечение интерфероном вызывает долговременное облегчение только в части случаев (~25%) [О. Мебапб, 1п!егГегоп ТНегару ш СНгошс НераШБ С У1ги8 ШГесбоп, ЕЕМ8 МюгоЫо1. Веу., 14, 279-288 (1994)]. Указанные выше проблемы, связанные с лечением интерфероном-α , привели к разработке и клиническому испытанию соединений, являющихся пэгилированными производными интерферона-а, которые обеспечивают улучшенные методы анти-НСУ лечения.
Ввиду сложившейся в настоящее время ситуации в отношении анти-НСУ лечения очевидно, что существует потребность в более эффективных и лучше переносимых методах лечения.
Кроме того, синтез комплексных пептидомиметических соединений долгое время был затруднен нестереоселективной природой большинства синтетических органических способов. Хорошо известно, что терапевтическая активность энантиомеров пептидомиметических соединений широко разнообразна.
Следовательно, большое преимущество дает разработка таких стереоспецифических способов син теза.
Предшествующие попытки синтеза хиральноспецифических промежуточных соединений бициклопролината, используемых в синтезе настоящих терапевтических ингибиторов пептидомиметической протеазы, оказались неудачными по причине того, что не были энантиоселективными или диастереоселективными, или представляли собой длинные обходные пути синтеза, или были непригодными для получения больших количеств продукта. Таким образом, существует также потребность в способах получения больших количеств бициклопролинатов диастереоселективным способом и в энантиомерно обогащенной форме.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение касается пептидомиметического соединения формулы 1
или его фармацевтически приемлемая соль, или сольват указанного соединения или его соли, где
К0 означает связь или дифторметилен;
В1 означает водород, С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы;
В2 означает С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или моноциклическую группу, необязательно замещенную 1-3 заместителями кольцевой группы;
В3 означает С1-С4 алкилметилен, С2-С4 алкенилметилен или С2-С4 алкинилметилен, каждый из которых необязательно замещен 1-3 заместителями алифатической группы;
В4 означает водород, С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы;
В5 означает С1-С4 алкилметилен, а С2-С4 алкенилметилен или С2-С4 алкинилметилен, каждый из которых необязательно замещен 1-3 заместителями алифатической группы;
В6 означает водород, С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы;
В7 означает С1-С4 алкилметилен, а С2-С4 алкенилметилен или С2-С4 алкинилметилен, каждый из ко
- 2 017556 торых необязательно замещен 1-3 заместителями алифатической группы, (5-6-членная циклическая группа)метилен, необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы, или необязательно замещенный моноциклический (арил или гетероарил)метилен;
В8 означает водород, С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы;
В9 означает С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или моноциклическую ароматическую группу, необязательно замещенную 1-3 заместителями кольцевой группы;
В10 означает водород, С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы;
означает:
необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы
необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы, или
необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы, где ненасыщенность находится в кольце, дистальном по отношению к кольцу, несущему Κ9-Ε-(Ν(Κ8)-Κ.7-ί.’(Θ)-)ιιΝ(Κ6)-Κ.5-ί.’(Θ)-Ν группу, и к которому присоединена группа -С(О)-Ы(В4)-В3-С(О)С(О)МВ2В1;
Ь означает -С(О)-, -ОС(О)-, -ЫВ10С(О)-, -8(О)2- или -ΝΡ|08(0)2-; и η равно 0 или 1; при условии, что следующие соединения:
исключены.
Изобретение также касается фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы 1, и способа применения соединения формулы 1 для ингибирования протеазы НСУ или лечения или профилактики инфекции НСУ у пациентов либо обусловленного инфекцией физиологического состояния.
Изобретение также касается стереоселективного способа получения хирального соединения бициклопролината, являющегося промежуточным соединением, используемым для получения соединения формулы 1. Способ синтеза включает стадии:
(а) расщепления и циклизации соединения формулы 24
(24) где
означает необязательно замещенный циклоалкил или необязательно замещенный конденсированный арилциклоалкил;
В11 означает -СО2В13;
В12 означает иминный аддукт глицинимида;
В13 означает кислотную защитную группу или необязательно замещенную алифатическую группу;
в условиях расщепления и циклизации, с образованием соединения формулы 25
- 3 017556 где К14 означает -ΟΘΝΚ15Κ15, -ΟΝ;
или -СО2К16;
К15 означает необязательно замещенную алифатическую группу;
К16 означает кислотную защитную группу, необязательно замещенную арильную группу или необязательно замещенную алифатическую группу; и (Ь) защиты азота лактамовой группы в соединении формулы 25 амидной защитной группой с образованием соединения формулы 26
где р0 означает амидную защитную группу;
К принимает вышеуказанные значения; и (с) восстановления соединения формулы 26 в условиях восстановления с образованием соединения формулы 27
где р0 и К14 принимают указанные выше значения; и (б) снятия защиты соединения формулы 27, в условиях для снятия защиты, с образованием соединение формулы 28
где К14 принимает указанные выше значения.
Изобретение также касается указанного выше способа синтеза, дополнительно включающего стадию, где соединение формулы 24 получают, осуществляя присоединение иминного соединения глицинимида к соединению формулы 29 по реакции Михаэля
где
означает необязательно замещенный циклоалкенил или необязательно замещенный конденсированный арилциклоалкенил;
К11 означает -СО2К13;
где соединение формулы 29 может быть получено этерификацией соединения формулы 29а
где
означает необязательно замещенный циклоалкенил или необязательно замещенный конденсированный арилциклоалкенил;
К11а означает -СНО, -СОК15, -С N или -СО1МК15К15 и
К15 принимает указанные выше значения.
- 4 017556
Следует отметить, что специалисту в данной области хорошо известно, что конверсия кетонов до сложных эфиров может быть осуществлена, например, по реакции Байера-Виллигера. Конверсия нитрилов и амидов до сложных эфиров может быть осуществлена, например, путем водного гидролиза с последующей этерификацией. Конверсия альдегидов до сложных эфиров может быть осуществлена, например, окислением альдегида с последующий этерификацией.
Другой аспект изобретения составляет соединение формулы 1, где заместители выбирают из комбинации указанных предпочтительных или заслуживающих особого внимания вариантов воплощения.
Еще один аспект изобретения составляет соединение формул 24-29, где заместители выбирают из комбинации указанных предпочтительных или заслуживающих особого внимания вариантов воплощения.
Еще один аспект изобретения составляют фармацевтические композиции, включающие, в дополнение к одному или более ингибиторам сериновой протеазы НСУ, один или более интерферонов или соединений, которые вызывают продуцирование интерферонов, обладающих анти-НСУ активностью, и/или одно или более соединений, обладающих анти-НСУ активностью, включая иммуномодуляторные соединения, такие как иммуностимулирующие цитокины, обладающие противовирусной активностью в отношении НСУ, и фармацевтически приемлемый носитель.
Другой аспект изобретения составляют способы лечения или профилактики инфекции НСУ у больного, включающий введение указанному пациенту фармацевтически эффективного количества комбинации из одного или более ингибиторов сериновой протеазы НСУ, одного или более интерферонов или соединений, которые вызывают продуцирование интерферонов, обладающих анти-НСУ активностью; и/или одного или более соединений, обладающих анти-НСУ активностью, включая иммуномодулирующие соединения, такие как иммуностимулирующие цитокины, обладающие противовирусной активностью в отношении НСУ.
Изобретение также касается применения одного или более ингибиторов сериновой протеазы НСУ в комбинации с одним или более интерферонами или соединениями, которые вызывают продуцирование интерферона, обладающего анти-НСУ активностью, и/или одного или более соединений, обладающих анти-НСУ активностью, включая иммуномодулирующие соединения, такие как иммуностимулирующие цитокины, обладающие противовирусной активностью в отношении НСУ, с целью получения лекарственного средства для лечения или профилактики НСУ инфекции у нуждающегося в этом пациента.
Настоящее изобретение также касается набора или фармацевтической упаковки для лечения или профилактики инфекции НСУ у пациента, где набор или фармацевтическая упаковка включает ряд отдельных контейнеров, где по меньшей мере один из указанных контейнеров содержит один или более ингибиторов сериновой протеазы НСУ (отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем) по меньшей мере еще один из указанных контейнеров содержит один или более интерферонов или соединений, вызывающих продуцирование интерферона, обладающего антиНСУ активностью (отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем), и, необязательно, по меньшей мере еще один из указанных контейнеров содержит одно или более соединений, обладающих анти-НСУ активностью (отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем), включая иммуномодулирующие соединения, такие как иммуностимулирующие цитокины, обладающие противовирусной активностью в отношении НСУ.
Количество ингибитора(ов) сериновой протеазы НСУ, интерферона(ов) или анти-НСУ соединения(ий) при любом из указанных выше применений может быть фармацевтически эффективным количеством, субклиническим анти-НСУ эффективным количеством, либо их комбинацией, при условии, что конечная комбинация ингибитора(ов) сериновой протеазы НСУ, интерферона(ов) или соединений, вызывающих продуцирование интерферона, обладающего анти-НСУ активностью, и/или анти-НСУ соединения(ий) включает фармацевтически эффективное количество соединений, которое эффективно в лечении или профилактике инфекции НСУ у пациента.
Краткое описание фигур
Указанные выше и другие аспекты, особенности и преимущества настоящего изобретения будут лучше поняты из последующего подробного описания, рассматриваемого в совокупности с приложенными чертежами, все из которых приведены только с целью иллюстрации и не ограничивают настоящее изобретение, где на фиг. 1 графически представлены вогнутые изоболические кривые, даваемые соединениями, используемыми в комбинации, являющимися антагонистическими, аддитивными и синергическими, согласно методам синергического расчета Сгесо, Рагк апб Ви81от ((1990) Αρρίίοαίίοη о£ а Иете Лрргоасй £ог Нэе ОнаШЦаПоп о£ Игид 8упегдщт 1о 111е СотЬшайоп о£ с18-И1атттеб1сЫогор1а1шит апб 1-β-ΌЛгаЬто£игапо8у1су1о8те, Сапсег Векеагсй, 50, 5318-5327);
на фиг. 2 показана геометрическая зависимость между а и величиной кривизны изоболы. Гипотетическая изобола при уровне эффекта Е=50% изображается прямолинейной изоболой, которая ожидается при аддитивности. М является точкой пересечения линии у=х и гипотетической изоболы. N является точкой пересечения линии у=х и прямолинейной изоболы. О означает исходную точку (0,0). 8 является
- 5 017556 мерой степени кривизны изоболы, где 8=0Ν/0Μ. ΟΝ означает расстояние от О до N и ОМ означает расстояние от О до М. Параметр а связан с 8 уравнением а =4(82-8);
на фиг. 3 приведены расчеты изобол по методу Огесо и др., см. выше, для комбинации соединения ЕС и интерферона-альфа 2В (8с11еппд-Р1оид11) с использованием 8 разбавлений каждого соединения согласно эксперименту 1;
на фиг. 4 приведены расчеты изобол по методу Огесо и др., см. выше, для комбинации соединения ЕС и интерферона-альфа 2А с использованием 8 разбавлений каждого соединения согласно эксперименту 2;
на фиг. 5 приведены расчеты изобол по методу Огесо и др., см. выше, для комбинации соединения ЕР и интерферона-альфа 2В (8с11егтд-Р1оид11) с использованием 8 разбавлений каждого соединения согласно эксперименту 3;
на фиг. 6 приведены расчеты изобол по методу Огесо и др., см. выше, для комбинации рибавирина и интерферона альфа-2В (8с11егтд-Р1оид11) с использованием 8 разбавлений каждого соединения согласно эксперименту 4;
на фиг. 7 показано ингибирование аккумуляции НСУ репликона РНК, вызванное обработкой содержащих репликон клеток либо (А) только рибавирином, либо (В) только интерфероном альфа-2В. Для обеих групп показаны как измеренное ингибирование, так и ингибирование с поправкой на цитотоксичность соединений.
Подробное описание изобретения
Содержание каждого из патентных документов и других приведенных ссылок полностью включено в данное описание посредством ссылок.
Как использовано выше и во всем описании изобретения, следует считать, что указанные ниже аббревиатуры, если не оговорено особо, имеют следующие значения:
Обозначение
АСЫ
ΑΙΒΝ
ВОС ИЛИ Вос
ВОР п-Ви3ЗпН Р-Ви СЬз хиральный РТС
Реагент или фрагмент ацетонитрил
2,2'-азобисизобутиронитрил трет-бутилкарбамат бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфонийгексафторфосфат гидрид три-н-бутилолова трет-бутил бензилкарбамат хиральный межфазный катализатор (хиральный МФК)
ΏΑ3Τ
ЦСС
БСМ
О1ВАЬ-Н
Д1С
ΌΙΡΕΑ
ΌΜΑΡ
ΏΜΡ реагент
ДМФ ДМСО
ЭА ΕΌΟΙ Экв.
ЕР
ЕС2О
ЕРОН
ЕРОАс
ЕР331
ЕМОС (диэтиламино)сератрифторид (Εύ2Ν8Ρ3) дициклокарбодиимид дихлорметан (СН2С12) диизобутилалюминийгидрид
1,3-диизопропилкарбодиимид диизопропилэтиламин
4-(Ν,Ν-диметиламино)пиридин реагент Десс-Мартина - периодинан (РегдосИпапе)
диме тилформамид диме тил сул ь ф о ксид элементный анализ
1-этил-З-(3-диметиламинопропил)карбодиимид ’НС1 эквивалент(ы) этил диэтиловый эфир этанол этилацетат триэтилсилан
9-флуоренилметоксикарбонил
- 6 017556
НОАЬ НОВТ Н05и ВЭЖХ БАН Ме Ме1 МеОН 1-гидрокси-7-азабензотриазол 1-гидроксибензотриазол Ν-гидроксисукцинамид высокоэффективная жидкостная хроматография литийалюмогидрид метил метилиодид метанол
МеОС (О) С1 момс1 МОМ метилхлорформиат метоксиметилхлорид метоксиметил
МС ЫаВН4 Иа2С4Н4Ое ΝΜΡ ЯМР Р- РуВОР масс-спектроскопия боргидрид натрия тартрат натрия Ν-метилпирролидинон ядерный магнитный резонанс полимерная связь бензотриазол-1илокситриспирролидинофосфонийгексафторфосфат
ΤΒϋ ОФ-ВЭЖХ 1,5,7-триазабицикло[4,4,0]дец-5-ен высокоэффективная жидкостная хроматография с обращенной фазой
ТВЗС1 ТСА ТРА Τί2Ο трет-бутилдиме тилсилилхлорид трихлоруксусная кислота трифторуксусная кислота трифлатангидрид (ангидрид трифторметансульфоновой кислоты)
ТГФ ТНР тех тетрагидрофуран тетрагидропиран тонкослойная хроматография
Как использовано выше и во всем описании изобретения, следует считать, что указанные ниже термины, если не оговорено особо, имеют следующие значения.
Кислотная биостера означает группу, обладающую химическими и физическими подобиями, обусловливающими биологические характеристики, близко схожие с карбоксильной группой (см., Ыршвкц Аппиа1 Веройз ίη Мебюша1 Сйет18йу, Вюйойепзт Ιη Эгид Ос5щп 21, 283 (1986); Уил, Н^айак 8екуе, Аррйсайоп Θί Вю18О81еи8т То №\ν Эгид Ое81дп 33, 576-579, (1993); 2йао, Ниахие ТопдЬао, Βίοίβοδ1ейс Кер1асетеп1 апб Оеуе1ортеп1 Οί Ьеаб Сотроипбз 1п Эгид Оезщп 34-38, (1995); Сгайат, Тйеосйет, Тйеоге11са1 81иШе8 Аррйей То Эгид Пе81дп:аЬ шйю Е1ес1тошс П181йЬи1юп8 1п Вю18о81ете8 343, 105-109, (1995)). Характерные примеры кислотных биостер включают -С(О)-ЫНОН, -С(О)-СН2ОН, -С(О)-СН28Н, -ί.’(Ο)-ΝΗ-ί.’Ν. сульфо, фосфоно, алкилсульфонилкарбамоил, тетразолил, арилсульфонилкарбамоил, Νметоксикарбамоил, гетероарилсульфонилкарбамоил, 3-гидрокси-3-циклобутен-1,2-дион, 3,5-диоксо1,2,4-оксадиазолидинил или гидроксигетероарил, такой как 3-гидроксиизоксазолил, 3-гидрокси-1метилпиразолил и тому подобное.
Кислотная функциональная группа означает группу, несущую кислотный водород. Характерные примеры кислотных функциональных групп включают карбоксил (-С(О)ОН), -С(О)-МНОН, -С(О)СН2ОН, -С(О)-СН28Н, -С(О)^Н-СН сульфо, фосфоно, алкилсульфонилкарбамоил, тетразолил, арилсульфонилкарбамоил, Ν-метоксикарбамоил, гетероарилсульфонилкарбамоил, 3-гидрокси-3-циклобутен1,2-дион, 3,5-диоксо-1,2,4-оксадиазолидинил или гидроксигетероарил, такой как 3-гидроксиизоксазолил, 3-гидрокси-1-метилпиразолил, имидазолил, меркапто и тому подобное, и подходящий гидрокси, такой как ароматический гидрокси, например гидроксифенил.
Кислотная защитная группа означает легко удаляемую группу, которая, как известно в данной области, защищает кислотный водород или карбоксильную группу от нежелательной реакции во время синтеза, например, блокирует или защищает кислотную функциональность в то время, как осуществляются взаимодействия, затрагивающие другие функциональные участки соединения, и может быть избирательно удалена. Такие кислотные защитные группы хорошо известны специалистам в данной области и широко используются для защиты карбоксильных групп, как описано в патенте США № 3840556 и 3719667, содержание которых включено в данное описание посредством ссылок. В отношении подходящих кислотных защитных групп см., Т.^. Стееп апб Р.С.МЛУий ш Рто1есйуе Сгоирз 1п Отдашс Сйет181ту 1ойп \УПеу апб Зопз, 1991. Кислотная защитная группа также включает описанную в данном описании неустойчивую к гидрированию кислотную защитную группу. Характерные примеры кислотных защитных групп включают сложные эфиры, такие как замещенные и незамещенные С1-8низшие алкиловые эфиры, например, метиловый, этиловый, трет-бутиловый, метоксиметиловый, метилтиометиловый, 2,2,2
- 7 017556 трихлорэтиловый и тому подобное, тетрагидропиранил, замещенный и незамещенный фенилалкил, такой как бензил и его замещенные производные, такие как алкоксибензильная или нитробензильная группы и тому подобное, циннамил, диалкиламиноалкил, например, диметиламиноэтил и тому подобное, триметилсилил, замещенные и незамещенные амиды и гидразиды, например амиды и гидразиды Ν,Νдиметиламина, 7-нитроиндола, гидразина, Ν-фенилгидразина и тому подобное, ацилоксиалкильные группы, такие как пивалоилоксиметил или пропионилоксиметил и тому подобное, ароилоксиалкил, такой как бензоилоксиэтил и тому подобное, алкоксикарбонилалкил, такой как метоксикарбонилметил, циклогексилоксикарбонилметил и тому подобное, алкоксикарбонилоксиалкил, такой как третбутилоксикарбонилоксиметил и тому подобное, алкоксикарбониламиноалкил, такой как третбутилоксикарбониламинометил и тому подобное, алкиламинокарбониламиноалкил, такой как метиламинокарбониламинометил и тому подобное, ациламиноалкил, такой как ацетиламинометил и тому подобное, гетероциклилкарбонилоксиалкил, такой как 4-метилпиперазинилкарбонилоксиметил и тому подобное, диалкиламинокарбонилалкил, такой как диметиламинокарбонилметил и тому подобное, (5-(низший алкил)-2-оксо-1,3-диоксолен-4-ил)алкил, такой как (5-трет-бутил-2-оксо-1,3-диоксолен-4-ил)метил и тому подобное, и (5-фенил-2-оксо-1,3-диоксолен-4-ил)алкил, такой как (5-фенил-2-оксо-1,3-диоксолен-4ил)метил и тому подобное.
Неустойчивая к кислоте аминозащитная группа означает указанную аминозащитную группу, которая легко удаляется при обработке кислотой, хотя остается сравнительно стабильной по отношению к другим реагентам. Предпочтительной неустойчивой к кислоте аминозащитной группой является ВОС.
Алифатический означает указанный в данном описании алкил, алкенил или алкинил.
Заместитель (заместители) алифатической группы означает заместители, присоединенные к указанной алифатической группе, включающие арил, гетероарил, гидрокси, алкокси, циклилокси, арилокси, гетероарилокси, ацил или его тиоксоаналог, циклилкарбонил или его тиоксоаналог, ароил или его тиоксо-аналог, гетероароил или его тиоксоаналог, ацилокси, циклилкарбонилокси, ароилокси, гетероароилокси, галоген, нитро, циано, карбокси (кислота), -ί.’(Ο)-ΝΗΟΗ. -С(О)-СН2ОН, -с(о)-СН28Н, -С(О)-кНСЛ, сульфо, фосфоно, алкилсульфонилкарбамоил, тетразолил, арилсульфонилкарбамоил, Νметоксикарбамоил, гетероарилсульфонилкарбамоил, 3-гидрокси-3-циклобутен-1,2-дион, 3,5-диоксо1,2,4-оксадиазолидинил или гидроксигетероарил, такой как 3-гидроксиизоксазолил, 3-гидрокси-1метилпиразолил, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил, гетероарилоксикарбонил, алкилсульфонил, циклилсульфонил, арилсульфонил, гетероарилсульфонил, алкилсульфинил, циклилсульфинил, арилсульфинил, гетероарилсульфинил, алкилтио, циклилтио, арилтио, гетероарилтио, циклил, арилдиазо, гетероарилдиазо, тиол, метилен (Н2С=), оксо (О=), тиоксо (8=), Υ1Υ2Ν-, У’У^^О)-, У!У^С(О)О-, Υ1Υ2NС(О)NΥ3-, Υ!Υ2Ν8Ο2- или Υ38Ο2ΝΥ!-, где В2 принимает указанные выше значения, Υ1 и Υ2 независимо означают водород, алкил, арил или гетероарил и Υ3 означает алкил, циклоалкиларил или гетероарил, или в случае, когда заместитель означает Υ1 Υ2Ν-, один из Υ1 и Υ2 может означать указанные ацил, циклилкарбонил, ароил, гетероароил, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил или гетероарилоксикарбонил, а другой из Υ1 и Υ2 имеет значения, указанные выше, или в случае, когда заместитель означает Υ!Υ2Ν^Ο)-, Υ1Υ2NС(О)О-, Υ!Υ2Ν^Ο)ΝΥ3- или Υ1 Υ2Ν8Ο2-, Υ1 и Υ2 могут вместе с атомом Ν, через который связан каждый из Υ1 и Υ2, образовывать 4-7 членный азагетероциклил или азагетероцикленил. Кислотными/амидными заместителями алифатических групп являются карбокси (кислота), ^(Ο)-ΝΗΟΗ, -С^-СНЮН, -С^-СЩЗН, ^(Ο)-ΝΗ-ΟΝ, сульфо, фосфоно, алкилсульфонилкарбамоил, тетразолил, арилсульфонилкарбамоил, Ν-метоксикарбамоил, гетероарилсульфонилкарбамоил, 3-гидрокси-3-циклобутен-1,2-дион, 3,5-диоксо-1,2,4-оксадиазолидинил или гидроксигетероарил, такой как 3-гидроксиизоксазолил, 3-гидрокси-1-метилпиразолил и Υ1Υ2NСΟ-. Некислотными полярными заместителями алифатических групп являются гидрокси, оксо (Ο=), тиоксо (8=), ацил или его тиоксо-аналог, циклилкарбонил или его тиоксо-аналог, ароил или его тиоксо-аналог, гетероароил или его тиоксо-аналог, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил, гетероарилоксикарбонил, ацилокси, циклилкарбонилокси, ароилокси, гетероароилокси, алкилсульфонил, циклилсульфонил, арилсульфонил, гетероарилсульфонил, алкилсульфинил, циклилсульфинил, арилсульфинил, гетероарилсульфинил, тиол, Υ!Υ2Ν-, Υ!Υ2Ν^Ο)-, Υ!Υ2Ν^Ο)Ο-, Υ!Υ2Ν^Ο)ΝΥ3- или Υ!Υ2Ν8Ο2-. Характерные примеры алифатических групп с алифатической группой в качестве заместителя включают метоксиметокси, метоксиэтокси, этоксиэтокси, (метокси, бензилокси, фенокси или этокси)карбонил(метил или этил), бензилоксикарбонил, пиридилметилоксикарбонилметил, метоксиэтил, этоксиметил, н-бутоксиметил, циклопентилметилоксиэтил, феноксипропил, феноксиаллил, трифторметил, циклопропилметил, циклопентилметил, карбокси(метил или этил), 2-фенетенил, бензилокси, 1- или 2-нафтилметокси, 4пиридилметилокси, бензилоксиэтил, 3-бензилоксиаллил, 4-пиридилметилоксиэтил, 4пиридилметилоксиаллил, бензил, 2-фенетил, нафтилметил, стирил, 4-фенил-1,3-пентадиенил, фенилпропинил, 3-фенилбут-2-инил, пирид-3-илацетиленил и хинолин-3-илацетиленил, 4-пиридилэтинил, 4пиридилвинил, тиенилэтенил, пиридилэтенил, имидазолилэтенил, пиразинилэтенил, пиридилпентенил, пиридилгексенил и пиридилгептенил, тиенилметил, пиридилметил, имидазолилметил, пиразинилметил, тетрагидропиранилметил, тетрагидропиранилметилоксиметил и тому подобное.
Ацил означает Н-СО- или (алифатическую или циклил)-СО-группу, где алифатическая группа
- 8 017556 принимает указанные значения. Предпочтительные ацилы содержат низший алкил. Характерные примеры ацильных групп включают формил, ацетил, пропаноил, 2-метилпропаноил, бутаноил, пальмитоил, акрилоил, пропиноил, циклогексилкарбонил и тому подобное.
Алкеноил означает алкенил-СО- группу, где алкенил принимает указанные значения.
Алкенил означает алифатическую углеводородную группу, содержащую углерод-углеродную двойную связь, указанная группа может быть линейной или разветвленной и содержать приблизительно
2-15 атомов углерода в цепи. Предпочтительные алкенильные группы содержат 2-12 атомов углерода в цепи и, более предпочтительно, 2-4 атома углерода в цепи. Разветвленный означает, что одна или более низших алкильных групп, таких как метил, этил или пропил, присоединены к линейной алкенильной цепи. Низший алкенил означает приблизительно 2-4 углеродных атома в цепи, которая может быть линейной или разветвленной. Характерные примеры алкенильных групп включают этенил, пропенил, нбутенил, изобутенил, 3-метилбут-2-енил, н-пентенил, гептенил, октенил, циклогексилбутенил, деценил и тому подобное. Замещенный алкенил означает указанную алкенильную группу, замещенную одним или более заместителями алифатической группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные значения. Примеры заместителей алкенильной алифатической группы включают галоген или циклоалкильные группы.
Алкенилокси означает алкенил-О-группу, где алкенильная группа является такой, как указано выше. Характерные примеры алкенилоксигрупп включают аллилокси, 3-бутенилокси и тому подобное.
Алкокси означает алкил-О- группу, где алкильная группа является такой, как указано выше. Характерные примеры алкоксигрупп включают метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси, гептокси и тому подобное.
Алкоксикарбонил означает алкил-О-СО- группу, где алкильная группа является такой, как указано выше. Характерные примеры алкоксикарбонильных групп включают метоксикарбонил, этоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил и тому подобное.
Алкил означает алифатическую углеводородную группу, которая может быть линейной или разветвленной и содержит приблизительно 1-20 атомов углерода в цепи. Предпочтительные алкильные группы содержат приблизительно 1-12 атомов углерода в цепи, более предпочтительным является указанный низший алкил. Разветвленный означает, что одна или более низших алкильных групп, таких как метил, этил или пропил, присоединены к линейной алкильной цепи. Низший алкил означает приблизительно 1-4 углеродных атома в цепи, которая может быть линейной или разветвленной. Замещенный алкил означает указанную выше алкенильную группу, замещенную одним или более заместителями алифатической группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные значения.
Алкилсульфинил означает алкил-8О- группу, где алкильная группа является такой, как указано выше. Предпочтительными группами являются те группы, в которых алкильная группа означает низший алкил.
Алкилсульфонил означает алкил-8О2- группу, где алкильная группа является такой, как указано выше. Предпочтительными группами являются те группы, в которых алкильная группа означает низший алкил.
Алкилсульфонилкарбамоил означает алкил-8О2-ХН-С(=О)- группу, где алкильная группа является такой, как указано выше. Предпочтительными алкилсульфонилкарбамоильными группами являются те группы, в которых алкильная группа означает низший алкил.
Алкилтио означает алкил-8-группу, где алкильная группа является такой, как указано выше. Характерные примеры алкилтиогрупп включают метилтио, этилтио, изопропилтио и гептилтио.
Алкинил означает алифатическую углеводородную группу, содержащую углерод-углеродную тройную связь, указанная группа может быть линейной или разветвленной и содержать приблизительно 2-15 атомов углерода в цепи. Предпочтительные алкинильные группы содержат приблизительно 2-12 атомов углерода в цепи и, более предпочтительно, 2-4 атома углерода в цепи. Разветвленный означает, что одна или более низших алкильных групп, таких как метил, этил или пропил, присоединены к линейной алкинильной цепи. Низший алкинил означает приблизительно 2-4 углеродных атома в цепи, которая может быть линейной или разветвленной. Алкинильная группа может быть замещена одним или более галогенами. Характерные примеры алкинильных групп включают этинил, пропинил, н-бутинил, 2бутинил, 3-метилбутинил, н-пентинил, гептинил, октинил, децинил и тому подобное. Замещенный алкинил означает указанный выше алкинил, замещенный одним или более заместителями алифатической группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения.
Аминозащитная группа означает легко удаляемую группу, используемую, как известно в данной области, для защиты азота амино- или амидной группы от нежелательного взаимодействия в ходе синтеза и пригодную для избирательного удаления. Применение амино/амидных защитных групп для защиты групп от нежелательного взаимодействия в ходе синтеза хорошо известно в данной области, и многие такие защитные группы описаны, например, в Т.У. Огееие и Р.О.М. Уи1я, РгсИссОус Огоиря ίη Огдаше 8уп111С51Я. 2ηά ебйюп, 1о1ш \УПеу & 8опя, №\ν Уогк (1991), включенном здесь посредством ссылки. Ами
- 9 017556 но/амидные защитные группы также включают неустойчивую к гидрированию амино/амидную защитную группу. Характерными примерами амино/амидных защитных групп являются ацил, включая формил, ацетил, хлорацетил, трихлорацетил, о-нитрофенилацетил, о-нитрофеноксиацетил, трифторацетил, ацетоацетил, 4-хлорбутирил, изобутирил, о-нитроциннамоил, пиколиноил, ацилизотиоцианат, аминокапроил, бензоил и тому подобное, и ацилокси, включая метоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил, 2,2,2-трифторэтоксикарбонил, 2-триметилсилилэтоксикарбонил, винилоксикарбонил, аллилоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил (ВОС), 1,1-диметилпропинилоксикарбонил, бензилоксикарбонил (ΟΒΖ), пнитробензилоксикарбонил, 2,4-дихлорбензилоксикарбонил и тому подобное.
Амидная защитная группа означает легко удаляемую группу, используемую, как известно в данной области, для защиты азота амидной группы от нежелательного взаимодействия в ходе синтеза и пригодную для избирательного удаления после превращения в амин. Применение амидных защитных групп для защиты групп от нежелательного взаимодействия в ходе синтеза хорошо известно, и многие такие защитные группы описаны, например, в Т.^. Сгееие и Р.С.М. ^и!б, РгоЮсОус СгоирБ ίη Огдаше 8уп111С515. 2пб ебйюп, 1ойп ^йеу & 8опб, Иете Уогк (1991), включенном в данное описание в качестве ссылки. Амидная защитная группа также включает неустойчивую к кислотам амидную защитную группу и неустойчивую к гидрированию амидную защитную группу. Характерные примерами амидных защитных групп являются о-нитроциннамоил, пиколиноил, аминокапроил, бензоил и тому подобное, и ацилокси, включая метоксикарбонил, 9-флуоренилметоксикарбонил, 2,2,2-трифторэтоксикарбонил, 2триметилсилилэтоксикарбонил, винилоксикарбонил, аллилоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил (ВОС), 1,1-диметилпропинилоксикарбонил, бензилоксикарбонил (ΟΒΖ), п-нитробензилоксикарбонил, 2,4-дихлорбензилоксикарбонил и тому подобное.
Аминокислота означает аминокислоту, выбранную из группы, включающей указанные природные и неприродные аминокислоты. Подразумевается также, что аминокислота включает аминокислоты с Ь или Ό стереохимией по α-углероду. Предпочтительными аминокислотами являются аминокислоты, имеющие α-аминогруппу. Аминокислоты могут быть нейтральными, положительно заряженными или отрицательно заряженными в зависимости от заместителей в боковой цепи. Нейтральная аминокислота означает аминокислоту, содержащую незаряженные заместители боковой цепи. Характерные примеры нейтральных аминокислот включают аланин, валин, лейцин, изолейцин, пролин, фенилаланин, триптофан, метионин, глицин, серин, треонин и цистеин. Положительная аминокислота означает аминокислоту, содержащую заместители боковой цепи, положительно заряженные при физиологическом рН. Характерные примеры положительных аминокислот включают лизин, аргинин и гистидин. Отрицательная аминокислота означает аминокислоту, содержащую заместители боковой цепи, несущие отрицательный заряд при физиологическом рН. Характерные примеры отрицательных аминокислот включают аспарагиновую кислоту и глутаминовую кислоту. Предпочтительными аминокислотами являются ааминокислоты. Характерными примерами природных аминокислот являются изолейцин, пролин, фенилаланин, триптофан, метионин, глицин, серин, треонин, цистеин, тирозин, аспарагин, глутамин, лизин, аргинин, гистидин, аспарагиновая кислота и глутаминовая кислота. Неприродная аминокислота означает аминокислоту, для которой отсутствует кодон нуклеиновой кислоты. Характерные примеры неприродных аминокислот включают, например, Ό-изомеры указанных выше природных а-аминокислот; А1Ь (аминомасляную кислоту), β-АФ (3-аминоизомасляную кислоту), Ννα (норвалин), β-ΑΙα, Ааб (2аминоадипиновую кислоту), βΑοά (3-аминоадипиновую кислоту), АЬи (2-аминомасляную кислоту), СаЬа (γ-аминомасляную кислоту), Аср (6-аминокапроновую кислоту), ЭЬи (2,4-диаминомасляную кислоту), ааминопимелиновую кислоту, ТМ8А (триметилсилил-А1а), а11е (аллоизолейцин), ΝΕ (норлейцин), третьей, СИ (цитрулин), Огп, Орт (2,2'-диаминопимелиновую кислоту), Эрг (2,3-диаминопропионовую кислоту), а- или β-№1, С1а (циклогексил-А1а), гидроксипролин, 8аг (саркозин) и тому подобное; циклические аминокислоты; Ν''-алкилированные аминокислоты, такие как МеС1у (№-метилглицин), Е1С1у (Ν'1этилглицин) и Е1Абп (№-этиласпарагин); и аминокислоты, в которых а-углерод несет два заместителя боковой цепи. Используемые в данном описании названия природных и неприродных аминокислот и их остатков соответствуют общепринятым названиям, рекомендуемым комитетом ИЮПАК по номенклатуре в органической химии и комитетом ИЮПАК-ИЮБ по биохимической номенклатуре, приведенным в Иотепс1а1шс о£ а-Атшо АсИб (КссоттепбайопБ, 1974) Вюейет1Бйу, 14(2), (1975). Это сделано с целью внесения определенности и отсутствия разночтений в отношении названий и аббревиатуры аминокислот и их остатков, используемых в данном описании и приложенных пунктах формулы изобретения.
Аминокислотная защитная группа означает группу, которая защищает кислотную или аминогруппу аминокислоты или другую реакционноспособную группу в боковой цепи аминокислоты, например, гидрокси или тиол. В отношении примеров соответственно защищенных производных боковых цепей аминокислот, см., Т.^. Сгееп апб Р.С.М. ^и!б ш РгоЮсОус СгоирБ ш Огдаше СНетЫгу 1о1т \УПеу и 8опб, 1991. Защитные группы для кислотной группы аминокислоты описаны, например, в разделах кислотная функциональная группа и неустойчивая к гидрированию кислотная защитная группа. Защитные группы для аминогруппы аминокислоты описаны, например, в разделах аминозащитная группа, неустойчивая к кислотам аминозащитная группа и неустойчивая к гидрированию аминоза
- 10 017556 щитная группа.
Аминокислотный остаток означает отдельные аминокислотные структурные единицы, включенные в соединение по изобретению.
Аминокислотная боковая цепь означает заместитель, находящийся на углероде между амино и карбокси группами в α-аминокислотах. Характерные примеры аминокислотных боковых цепей включают изопропил, метил и карбоксиметил для валина, аланина и аспарагиновой кислоты, соответственно.
Аминокислотный эквивалент означает аминокислоту, которая может быть замещена на другую аминокислоту в пептидах по изобретению без какой-либо утраты функции. Для выполнения таких замен осуществляют замещение подобных аминокислот на основе относительного подобия заместителей боковых цепей, например, в отношении размера, заряда, гидрофильности, гидропатичности и гидрофобности, как указано выше.
Ароматическая группа означает арил или гетероарил. Характерные примеры ароматических групп включают фенил, галогензамещенный фенил, азагетероарил и тому подобное.
Ароил означает арил-СО-группу, где арильная группа принимает указанные значения. Характерные примеры ароильных групп включают бензоил, 1-й 2-нафтоил и тому подобное.
Арил означает ароматическую моноциклическую или полициклическую кольцевую систему приблизительно из 6-14 атомов углерода, предпочтительно 6-10 атомов углерода. Понятие арил охватывает указанные конденсированный арилциклоалкенил, конденсированный арилциклоалкил, конденсированный арилгетероцикленил и конденсированный арилгетероциклил, присоединенные через их арильную группу. Арил является необязательно замещенным одним или более заместителями кольцевой группы, которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные значения. Характерные примеры арильных групп включают фенил или нафтил, или замещенный фенил, или замещенный нафтил. Замещенный арил означает указанную выше арильную группу, замещенную одним или более заместителями циклической группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения.
Арилдиазо означает арилдиазогруппу, где арильная и диазогруппы принимают указанные выше значения.
Арилен означает необязательно замещенную 1,2-, 1,3-, 1,4- двухвалентную арильную группу, где арильная группа принимает указанные выше значения. Характерные примеры ариленовых групп включают необязательно замещенный фенилен, нафтилен и инданилен. Заслуживающим особого внимания ариленом является необязательно замещенный фенилен. Замещенный арилен означает указанную выше ариленовую группу, замещенную одним или более заместителями циклической группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения.
Арилокси означает арил-О-группу, где арильная группа принимает указанные выше значения. Характерные примеры арилоксигрупп включают фенокси и 2-нафтилокси.
Арилоксикарбонил означает арил-О-СО-группу, где арильная группа принимает указанные выше значения. Характерные примеры арилоксикарбонильных групп включают феноксикарбонил и нафтоксикарбонил.
Арилсульфонил означает арил-8О2-группу, где арильная группа принимает указанные выше значения.
Арилсульфонилкарбамоил означает арил-8О2-ЛН-С (=О)-группу, где арильная группа принимает указанные выше значения. Характерным примером арилсульфонилкарбамоильной группы является фенилсульфонилкарбамоил.
Арилсульфинил означает арил-8О-группу, где арильная группа принимает указанные выше значения.
Арилтио означает арил-8-группу, где арильная группа принимает указанные выше значения. Характерные арилтиогруппы включают фенилтио и нафтилтио.
Основной атом азота означает §р2 или §р3 гибридизированный атом азота, имеющий несвязанную пару электронов, которая может быть протонирована. Характерные примеры основного атома азота включают необязательно замещенную имино, необязательно замещенную амино и необязательно замещенную амидиногруппы.
Карбокси означает НО(О)С-группу (карбоновой кислоты).
Связующий агент означает соединение, которое реагирует с гидроксильной группой карбоксильной группы, тем самым делая ее восприимчивой к нуклеофильной атаке. Характерные примеры связующих агентов включают Э1С, ЕЭСЕ ОСС и тому подобное.
Циклоалкенил означает неароматическую моно- или полициклическую кольцевую систему приблизительно из 3-10 атомов углерода, предпочтительно 5-10 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь. Понятие циклоалкенил охватывает указанный конденсированный арилциклоалкенил и конденсированный гетероарилциклоалкенил, когда связь осуществляется через циклоалкенильную группу. Предпочтительные размеры колец для кольцевой системы составляют приблизительно 5-6 атомов в кольце, и такие предпочтительные размеры колец называют также низшими. Замещенный циклоалкенил означает указанную выше циклоалкенильную группу,
- 11 017556 замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Характерные примеры моноциклического циклоалкенила включают циклопентенил, циклогексенил, циклогептенил и тому подобное. Характерным примером полициклического циклоалкенила является норборниленил.
Циклоалкил означает неароматическую моно- или полициклическую кольцевую систему приблизительно из 3-10 атомов углерода, предпочтительно 5-10 атомов углерода.
Предпочтительные размеры колец для кольцевой системы составляют приблизительно 5-6 атомов в кольце; и такие предпочтительные размеры колец называют также низшими. Понятие циклоалкил охватывает указанный выше конденсированный арилциклоалкил и конденсированный гетероарилциклоалкил, когда связь осуществляется через циклоалкенильную группу. Замещенный циклоалкил означает указанную выше циклоалкильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Характерные примеры моноциклического циклоалкила включают циклопентил, циклогексил, циклогептил и тому подобное. Характерные примеры полициклического циклоалкила включают 1-декалин, норборнил, адамант-(1- или 2-)ил и тому подобное.
Циклоалкилен означает двухвалентную указанную выше циклоалкильную группу, имеющую приблизительно 4-8 атомов углерода. Предпочтительные размеры колец для циклоалкилена составляют приблизительно 5-6 атомов в кольце; и такие предпочтительные размеры колец называют также низшими. Точки связывания по циклоалкенильной группе включают 1,1-, 1,2-, 1,3- или 1,4- схемы связывания, где подходящая стереохимическая взаимосвязь точек связывания представляет собой либо цис, либо транс конфигурации. Характерные примеры циклоалкиленовых групп включают (1,1-, 1,2- или 1,3-)циклогексилен и (1,1- или 1,2-)циклопентилен. Замещенный циклоалкилен означает указанную выше циклоалкиленовую группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения.
Циклический или циклил означает указанный циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклил или гетероцикленил. Термин низший, используемый в сочетании с термином циклический, имеет то же значение в отношении циклоалкила, циклоалкенила, гетероциклила или гетероцикленила.
Циклилокси означает циклил-О-группу, где циклильная группа является такой, как указано выше. Характерные примеры циклоалкоксигрупп включают циклопентилокси, циклогексилокси, хинуклидилокси, пентаметиленсульфидокси, тетрагидропиранилокси, тетрагидротиофенилокси, пирролидинилокси, тетрагидрофуранилокси или 7-оксабицикло[2,2,1]гептанилокси, гидрокситетрагидропиранилокси, гидрокси-7-оксабицикло[2,2,1]гептанилокси и тому подобное.
Циклилсульфинил означает циклил-8(О)-группу, где циклильная группа является такой, как указано выше.
Циклилсульфонил означает циклил-8 (О)2-группу, где циклильная группа является такой, как указано выше.
Циклилтио означает циклил-8-группу, где циклильная группа является такой, как указано выше. Диазо означает двухвалентную -Ν=Ν- группу.
Замещаемая группа означает группу, которая, когда связана с указанным Ь, становится способной к замещению под действием нуклеофильной атаки моно- или дизамещенной аминогруппы в присутствии или в отсутствии агента, облегчающего указанную атаку, например, связующего агента. Характерные примеры замещаемых групп включают гидрокси, алифатическую оксигруппу, галоген, Νоксисукцинимид, ацилокси и тому подобное.
Эффективное количество означает количество соединения/композиции по данному изобретению, эффективное для получения требуемого терапевтического действия.
Конденсированный арилциклоалкенил означает конденсированные указанные выше арил и циклоалкенил. Предпочтительными конденсированными арилциклоалкенилами являются те, в которых арил означает фенил, а циклоалкенил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце. Конденсированный арилциклоалкенил, как неустойчивый, может быть связан через любой способный к этому атом кольцевой системы. Замещенный конденсированный арилциклоалкенил означает указанную выше конденсированную арилциклоалкенильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Характерные примеры конденсированного арилциклоалкенила включают 1,2дигидронафтилен, инден и тому подобное.
Конденсированный арилциклоалкил означает конденсированные указанные выше арил и циклоалкил. Предпочтительными конденсированными арилциклоалкилами являются те, в которых арил означает фенил, а циклоалкил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце. Конденсированный арилциклоалкил, как неустойчивый, может быть связан через любой способный к этому атом кольцевой системы. Замещенный конденсированный арилциклоалкил означает указанную выше конденсированную арилциклоалкильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Характерные примеры конденсированного арилциклоалкила включают 1,2,3,4-тетрагидронафтилен и
- 12 017556 тому подобное.
Конденсированный арилгетероцикленил означает конденсированные указанные выше арил и гетероцикленил. Предпочтительными конденсированными арилгетероцикленилами являются те, в которых арил означает фенил, а гетероцикленил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце. Конденсированный арилгетероцикленил, как неустойчивый, может быть связан через любой способный к этому атом кольцевой системы. Использование аза-, окса- или тиа- в качестве приставки перед гетероцикленильной частью конденсированного арилгетероцикленила означает, что, по меньшей мере, атом азота, кислорода или серы, соответственно, присутствует в качестве входящего в кольцо атома. Замещенный конденсированный арилгетероцикленил означает указанную выше конденсированную арилгетероцикленильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Атом азота конденсированного арилгетероцикленила может быть основным атомом азота. Атом азота или серы гетероцикленильной части конденсированного арилгетероцикленила может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида, 8-оксида или 8,8-диоксида. Характерные примеры конденсированного арилгетероцикленила включают 3Н-индолинил, 1Н-2-оксохинолил, 2Н-1-оксоизохинолил, 1,2дигидрохинолинил, 3,4-дигидрохинолинил, 1,2-дигидроизохинолинил, 3,4-дигидроизохинолинил и тому подобное.
Конденсированный арилгетероциклил означает конденсированные указанные выше арил и гетероциклил. Предпочтительными конденсированными арилгетероциклилами являются те, в которых арил означает фенил, а гетероциклил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце. Конденсированный арилгетероциклил, как неустойчивый, может быть связан через любой способный к этому атом кольцевой системы. Использование аза-, окса- или тиа- в качестве приставки перед гетероциклильной частью конденсированного арилгетероциклила означает, что, по меньшей мере, атом азота, кислорода или серы, соответственно, присутствует в качестве входящего в кольцо атома. Замещенный конденсированный арилгетероциклил означает указанную выше конденсированную арилгетероциклильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Атом азота конденсированного арилгетероциклила может быть основным атомом азота. Атом азота или серы гетероциклильной части конденсированного арилгетероциклила может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида, 8-оксида или 8,8-диоксида. Характерные примеры конденсированных арилгетероциклильных кольцевых систем включают индолинил, 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин, 1,2,3,4тетрагидрохинолин, 1Н-2,3-дигидроизоиндол-2-ил, 2,3-дигидробенз[1]изоиндол-2-ил, 1,2,3,4тетрагидробенз[д]изохинолин-2-ил и тому подобное.
Конденсированный гетероарилциклоалкенил означает конденсированные указанные выше гетероарил и циклоалкенил.
Предпочтительными конденсированными гетероарилциклоалкенилами являются те, в которых гетероарил означает фенил, а циклоалкенил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце. Конденсированный гетероарилциклоалкенил, как неустойчивый, может быть связан через любой способный к этому атом кольцевой системы. Использование аза-, окса- или тиа- в качестве приставки перед гетероарильной частью конденсированного гетероарилциклоалкенила означает, что, по меньшей мере, атом азота, кислорода или серы, соответственно, присутствует в качестве входящего в кольцо атома. Замещенный конденсированный гетероарилциклоалкенил означает конденсированную гетероарилциклоалкенильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Атом азота конденсированного гетероарилциклоалкенила может быть основным атомом азота. Атом азота гетероарильной части конденсированного гетероарилциклоалкенила может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида. Характерные примеры конденсированного гетероарилциклоалкенила включают 5,6-дигидрохинолил, 5,6-дигидроизохинолил, 5,6-дигидрохиноксалинил, 5,6-дигидрохиназолинил, 4,5-дигидро-1н.-бензимидазолил, 4,5-дигидробензоксазолил и тому подобное.
Конденсированный гетероарилциклоалкил означает конденсированные указанные выше гетероарил и циклоалкил. Предпочтительными конденсированными гетероарилциклоалкилами являются те, в которых гетероарил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце и циклоалкил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце. Конденсированный гетероарилциклоалкил, как неустойчивый, может быть связан через любой способный к этому атом кольцевой системы. Использование аза-, окса- или тиа- в качестве приставки перед гетероарильной частью конденсированного гетероарилциклоалкила означает, что, по меньшей мере, атом азота, кислорода или серы, соответственно, присутствует в качестве входящего в кольцо атома. Замещенный конденсированный гетероарилциклоалкил означает указанную выше конденсированную гетероарилциклоалкильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Атом азота конденсированного гетероарилциклоалкила может быть основным атомом азота. Атом азота гетероарильной части конденсированного гетероарилциклоалкила может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида. Характерные примеры кон
- 13 017556 денсированного гетероарилциклоалкила включают 5,6,7,8-тетрагидрохинолинил, 5,6,7,8-тетрагидроизохинолил, 5,6,7,8-тетрагидрохиноксалинил, 5,6,7,8-тетрагидрохиназолил, 4,5,6,7-тетрагидро-1н.бензимидазолил, 4,5,6,7-тетрагидробензоксазолил, 1Н-4-окса-1,5-диазанафталин-2-онил, 1,3-дигидроимидизол[4,5]пиридин-2-онил и тому подобное.
Конденсированный гетероарилгетероцикленил означает конденсированные указанные выше гетероарил и гетероцикленил. Предпочтительными конденсированными гетероарилгетероцикленилами являются те, в которых гетероарил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце и гетероцикленил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце. Конденсированный гетероарилгетероцикленил, как неустойчивый, может быть связан через любой способный к этому атом кольцевой системы. Использование аза-, окса- или тиа- в качестве приставки перед гетероарильной или гетероцикленильной частью конденсированного гетероарилгетероцикленила означает, что, по меньшей мере, атом азота, кислорода или серы, соответственно, присутствует в качестве входящего в кольцо атома. Замещенный конденсированный гетероарилгетероцикленил означает указанную выше конденсированную гетероарилгетероцикленильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Атом азота конденсированного гетероарилазагетероцикленила может быть основным атомом азота. Атом азота или серы гетероарильной части конденсированного гетероарилгетероцикленила может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида. Атом азота или серы гетероарильной или гетероцикленильной части конденсированного гетероарилгетероцикленила может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида, 8-оксида или 8,8-диоксида. Характерные примеры конденсированного гетероарилгетероцикленила включают 7,8-дигидро[1,7]нафтиридинил, 1,2-дигидро[2,7]нафтиридинил, 6,7-дигидро-3Н-имидазо[4,5-с]пиридил, 1,2-дигидро-1,5-нафтиридинил, 1,2-дигидро-1,6-нафтиридинил, 1,2-дигидро-1,7-нафтиридинил, 1,2-дигидро-1,8-нафтиридинил, 1,2-дигидро-2,6-нафтиридинил и тому подобное.
Конденсированный гетероарилгетероциклил означает конденсированные указанные выше гетероарил и гетероциклил. Предпочтительными конденсированными гетероарилгетероциклилами являются те, в которых гетероарил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце и гетероциклил содержит приблизительно 5-6 атомов в кольце. Конденсированный гетероарилгетероциклил, как неустойчивый, может быть связан через любой способный к этому атом циклической системы. Использование аза-, окса- или тиа- в качестве приставки перед гетероарильной или гетероциклильной частью конденсированного гетероарилгетероциклила означает, что, по меньшей мере, атом азота, кислорода или серы, соответственно, присутствует в качестве входящего в кольцо атома. Замещенный конденсированный гетероарилгетероциклил означает указанную выше конденсированную гетероарилгетероциклильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Атом азота конденсированного гетероарилгетероциклила может быть основным атомом азота. Атом азота гетероарильной части конденсированного гетероарилгетероциклила может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида. Атом азота или серы гетероарильной или гетероциклильной части конденсированного гетероарилгетероциклила может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида, 8оксида или 8,8-диоксида. Характерные примеры конденсированного гетероарилгетероциклила включают 2,3-дигидро-1Н-пиррол[3,4-Ь]хинолин-2-ил,1,2,3,4-тетрагидробенз[Ь][1,7]нафтиридин-2-ил, 1,2,3,4-тетрагидробенз[Ь][1,6]нафтиридин-2-ил,1,2,3,4-тетрагидро-9Н-пиридо[3,4-Ь]индол-2-ил,1,2,3,4-тетрагидро-9Нпиридо[4,3-Ь]индол-2-ил,2,3-дигидро-1Н-пирроло[3,4-Ь]индол-2-ил, 1Н-2,3,4,5-тетрагидроазепино[3,4-Ь] индол-2-ил, 1Н-2,3,4,5-тетрагидроазепино[4,3-Ь]индол-3-ил, 1Н-2,3,4,5-тетрагидроазепино[4,5-Ь]индол-2ил, 5,6,7,8-тетрагидро[1,7]нафтиридил, 1,2,3,4-тетрагидро[2,7]нафтиридил, 2,3-дигидро[1,4]диоксино[2,3Ь]пиридил, 2,3-дигидро[1,4]диоксино[2,3-Ь]пиридил,3,4-дигидро-2Н-1-окса[4,Ь]диазанафталинил,4,5,6,7тетрагидро-3Н-имидазо[4,5-с]пиридил,6,7-дигидро[5,8]диазанафталинил,1,2,3,4-тетрагидро[1,5]нафтиридинил, 1,2,3,4-тетрагидро[1,6]нафтиридинил, 1,2,3,4-тетрагидро[1,7]нафтиридинил, 1,2,3,4-тетрагидро [1,8]нафтиридинил, 1,2,3,4-тетрагидро[2,6]нафтиридинил и тому подобное.
Галоген означает фтор, хлор, бром или иод. Предпочтительными являются фтор, хлор или бром, и, более желательны, фтор или хлор.
Гетероароил означает гетероарил-СО-группу, где гетероарильная группа принимает указанные выше значения. Характерные примеры гетероароильных групп включают тиофеноил, никотиноил, пиррол-2-илкарбонил, 1- и 2-нафтоил, пиридиноил и тому подобное.
Гетероарил означает ароматическую моноциклическую или полициклическую кольцевую систему из приблизительно 5-14 атомов углерода, предпочтительно 5-10 атомов углерода, где один или более атомов углерода в кольцевой системе заменены гетероэлементом (элементами), отличными от углерода, например азотом, кислородом или серой. Предпочтительно кольцевая система включает 1-3 гетероатома. Предпочтительные размеры колец кольцевой системы соответствуют приблизительно 5-6 атомам в кольце. Термин гетероарил охватывает указанные выше конденсированный гетероарилциклоалкенил, конденсированный гетероарилциклоалкил, конденсированный гетероарилгетероцикленил и конденсированный гетероарилгетероциклил, когда связь осуществляется через гетероарильную группу. Замещенный
- 14 017556 гетероарил означает указанную выше гетероарильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Использование аза-, окса- или тиа- в качестве приставки перед гетероарилом означает, что, по меньшей мере, атом азота, кислорода или серы, соответственно, присутствует в качестве входящего в кольцо атома. Атом азота гетероарила может быть основным атомом азота, и может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида. Характерные примеры гетероарильной и замещенной гетероарильной групп включают пиразинил, тиенил, изотиазолил, оксазолил, пиразолил, фуразанил, пирролил, 1,2,4-тиадиазолил, пиридазинил, хиноксалинил, фталазинил, имидазо[1,2-а]пиридин, имидазо [2,1-Ь]тиазолил, бензофуразанил, азаиндолил, бензимидазолил, бензотиенил, тиенопиридил, тиенопиримидил, пирролопиридил, имидазопиридил, бензоазаиндолил, 1,2,4-триазинил, бензотиазолил, фуранил, имидазолил, индолил, индолизинил, изоксазолил, изохинолинил, изотиазолил, оксадиазолил, пиразинил, пиридазинил, пиразолил, пиридил, пиримидинил, пирролил, хиназолинил, хинолинил, 1,3,4-тиадиазолил, тиазолил, тиенил, триазолил и тому подобное. Предпочтительной гетероарильной группой является пиразинил.
Гетероарилазо означает гетероарилазогруппу, где гетероарил и азогруппы принимают указанные значения.
Гетероарилдиил означает двухвалентную группу, полученную из гетероарила, где гетероарил принимает указанные значения. Характерным примером гетероарилдиильной группы является необязательно замещенный пиридиндиил.
Гетероарилсульфонилкарбамоил означает гетероарил-8Ο2-NН-С(=Ο)-группу, где гетероарильная группа принимает указанные значения.
Гетероцикленил означает неароматическую моноциклическую или полициклическую систему углеводородных колец из, приблизительно, 3-10 атомов углерода, предпочтительно, 5-10 атомов углерода, где один или более атомов углерода в кольцевой системе заменен гетероэлементом (элементами), отличными от углерода, например, азотом, кислородом или серой, и которая содержит по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь или углерод-азотную двойную связь. Предпочтительно кольцо включает 1-3 гетероатома. Предпочтительные размеры колец кольцевой системы соответствуют приблизительно 5-6 атомам в кольце, и такие предпочтительные размеры колец называются также низшими. Термин гетероцикленил охватывает указанные выше конденсированный арилгетероцикленил и конденсированный гетероарилгетероцикленил, когда связь осуществляется через гетероцикленильную группу. Использование аза-, окса- или тиа- в качестве приставки перед гетероцикленилом означает, что, по меньшей мере, атом азота, кислорода или серы, соответственно, присутствует в качестве входящего в кольцо атома. Замещенный гетероцикленил означает указанную выше гетероцикленильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Атом азота гетероцикленила может быть основным атомом азота. Атом азота или серы гетероцикленила может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида, 8-оксида или 8,8-диоксида. Характерные примеры азагетероцикленильных групп включают 1,2,3,4-тетрагидропиридин,1,2-дигидропиридил, 1,4-дигидропиридил, 1,2,3,6-тетрагидропиридин, 1,4,5,6-тетрагидропиримидин, 2-пирролинил, 3-пирролинил, 2имидазолинил, 2-пиразолинил и тому подобное. Характерные примеры оксагетероцикленильных групп включают 3,4-дигидро-2Н-пиран, дигидрофуранил и фтордигидрофуранил. Характерным примером полициклической оксагетероцикленильной группы является 7-оксабицикло [2,2,1]гептенил. Характерные примеры моноциклических тиагетероцикленильных групп включают дигидротиофенил и дигидротиопиранил.
Гетероциклил означает неароматическую насыщенную моноциклическую или полициклическую кольцевую систему приблизительно из 3-10 атомов углерода, предпочтительно 5-10 атомов углерода, где один или более атомов углерода в кольцевой системе заменены гетероэлементом (элементами), отличными от углерода, например, азотом, кислородом или серой.
Предпочтительно кольцевая система включает 1-3 гетероатома. Предпочтительные размеры колец кольцевой системы соответствуют приблизительно 5-6 атомам в кольце; и такие предпочтительные размеры колец называются также низшими. Термин гетероциклил охватывает указанные выше конденсированный гетероциклил и конденсированный гетероарилгетероциклил, когда связь осуществляется через гетероциклильную группу. Использование аза-, окса- или тиа- в качестве приставки перед гетероциклилом означает, что, по меньшей мере, атом азота, кислорода или серы, соответственно, присутствует в качестве входящего в кольцо атома. Замещенный гетероциклил означает указанную выше гетероциклильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 13), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Атом азота гетероциклила может быть основным атомом азота. Атом азота или серы гетероциклила может быть также, необязательно, окислен до соответствующего Ν-оксида, 8-оксида или 8,8-диоксида. Характерные примеры моноциклических гетероциклильных колец включают пиперидил, пирролидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, тиазолидинил, 1,3-диоксоланил, 1,4-диоксанил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиофенил, тетрагидротиопиранил и тому подобное.
- 15 017556 о й й 4—как замещенный моноциклический азагетероциклил замещен непосредственно или через связующую группу по меньшей мере одним заместителем, который означает, или включает, или замещен указанной выше ароматической группой; например, такой как арил, гетероарил, арилокси, гетероарилокси, ароил или его тиоксоаналог, гетероароил или его тиоксо-аналог, ароилокси, гетероароилокси, арилоксикарбонил, гетероарилоксикарбонил, арилсульфонил, гетероарилсульфонил, арилсульфинил, гетероарилсульфинил, арилтио, гетероарилтио, арилдиазо, гетероарилдиазо, Υ1Υ2Ν-, Υ1Υ2NС(О)-, У’У^КЩО)-, Υ1Υ2NС(О)NΥ3-или У'уАЩ- по меньшей мере один из У1 и У2 означает, включает или замещен арильной или гетероарильной группой. Предпочтительные связующие группы включают -С(О)-, -ОС(О)-, низший алкил, низший алкокси, низший алкенил, -О-, -8-, С(О)С(О)-, -8(О)-, -8(О)2-, -ΝΚ80-, где Я80 означает водород, алкил, циклоалкил, арил, аралкил, гетероциклил или гетероарил. В особенности предпочтительными мостиковыми группами являются -С(О)- и -ОС(О)-. Замещенный полициклический азагетероциклил означает указанную выше полициклическую азагетероциклильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения. Замещенный полициклический азагетероцикленил означает указанную выше полициклическую азагетероцикленильную группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения.
Гетероциклилен означает двухвалентную указанную выше гетероциклильную группу приблизительно из 4-8 атомов углерода. Предпочтительные размеры колец гетероциклилена соответствуют приблизительно 5-6 атомам в кольце; и такие предпочтительные размеры колец называются также как низшие. Точки связывания по циклоалкиленовой группе включают 1,1-, 1,2-, 1,3- или 1,4-примеры связывания, где подходящая стереохимическая взаимосвязь точек связывания представляет собой либо цис, либо транс конфигурации. Характерные примеры гетероциклиленовых групп включают (1,1-, 1,2- или 1,3)пиперидинилен и (1,1- или 1,2-)тетрагидрофуранилен. Замещенный гетероциклилен означает указанную выше гетероциклиленовую группу, замещенную одним или более заместителями кольцевой группы (предпочтительно 1-3), которые могут быть одинаковыми или различными и принимают указанные выше значения.
Гидрат означает сольват, где молекулой (молекулами) растворителя является Н2О.
Неустойчивая к гидрированию аминозащитная группа означает указанную выше аминозащитную группу, которая легко удаляется гидрированием, тогда как сравнительно устойчива к другим реагентам. Предпочтительной неустойчивой к гидрированию аминозащитной группой является СЬх.
Неустойчивая к гидрированию кислотная защитная группа означает указанную выше кислотную защитную группу, которая легко удаляется гидрированием, тогда как сравнительно устойчива к другим реагентам. Предпочтительной неустойчивой к гидрированию кислотной защитной группой является бензил.
Гигроскопичность означает сорбцию, выражаемую в количестве поглощенной или удерживаемой воды, достаточном для влияния на физические и химические свойства вещества (Еб§. 1. 8\\гагЬпск апб ЕС. Воу1ап, Епсус1ореб1а οί Рйагтасеибса1 Тесйпо1оду, 10, 33).
Иминное производное глицинимида означает иминное основание Шиффа на основе глицина, используемое в синтезе а-аминокислот, как природных, так и неприродных. Функциональная группа иминного сложного эфира может содержать один или более асимметрических центров, которые могут усиливать стереоиндукцию во время процесса образования связи. В дополнение, такие иминные производные глицинимида могут быть нанесены на полимерные основы, что облегчает комбинаторный синтез. Иминные производные глицинимида могут быть получены конденсацией глицинового эфира с соответствующим кетоном в присутствии кислотного катализатора. Реакции способствует удаление воды. Иминные производные глицинимида хорошо известны в данной области и используются в реакции присоединения Михаэля, например, как описано в СиШепа, 6., е! а1, ί. Отд. Сйет. 2000, 65, 7310-7322, включенном в данное описание посредством ссылки. Конкретные примеры иминных производных глицинимида по изобретению включают соединения, выбранные из группы, описываемой формулами:
где М* означает переходный металл, предпочтительно Си, более предпочтительно Си11. Я14 означает -СО2Я16, ^Ν
- 16 017556
или -СО1ЧК15К15;
К15 означает необязательно замещенную алифатическую группу;
К16 означает кислотную защитную группу, необязательно замещенный арил или необязательно замещенную алифатическую группу;
означает необязательно замещенный арил, необязательно замещенную алифатическую группу,
К17
К18
К17 означает водород, алкил или алкилтио; или необязательно замещенный арил;
и К18, взятые вместе с углеродом, к которому К17 и К18 присоединены, образуют структуры присоединения
означает твердую фазу.
Аддукт иминного производного глицинимида означает соединение, образующееся при отщеплении α-водорода относительно положения азота и карбонильной группы основания Шиффа, и используется для осуществления присоединения за счет образования связи. Конкретные примеры аддуктов иминного производного глицинимида по изобретению включают соединения, описываемые формулами, выбранными из группы
где К14, К17 и К18 принимают значения, указанные в определении иминного производного глицинимида.
Ν-оксисукцинимид означает группу следующей структуры
Ν-оксид означает группу следующей структуры
Термин пациент включает как человека, так и млекопитающих.
Пептидомиметический означает полимер, включающий аминокислотные остатки, присоединен ные друг к другу через амидные связи.
Фармацевтически приемлемый сложный эфир означает сложный эфир, гидролизующийся ίη νίνο, и включает те эфиры, которые легко распадаются в организме до исходного соединения или его соли. Подходящие сложноэфирные группы включают, например, группы, образованные фармацевтически приемлемыми алифатическими карбоновыми кислотами, в особенности, алкановыми, алкеновыми, цик лоалкановыми и алкандионовыми кислотами, в которых каждая алкильная или алкенильная группа преимущественно содержит не более 6 атомов углерода. Характерные примеры сложных эфиров включают формиаты, ацетаты, пропионаты, бутираты, акрилаты, этилсукциаты и тому подобное.
Фармацевтически приемлемые пролекарства, как использовано в данном описании, означают те пролекарства соединений по изобретению, которые эффективны по разумной биологической оценке и пригодны для использования в контакте с клетками человека или других млекопитающих, не являясь излишне токсичными, вызывающими раздражение, аллергическую реакцию и тому подобное, соответствующие разумному соотношению польза/риск, и эффективные в целях предусмотренного применения, а
- 17 017556 также цвитерионные формы, где возможно, соединений по изобретению. Термин пролекарство означает соединения, которые подвергаются быстрому превращению ίη νίνο, давая исходное соединение указанной выше формулы, например, за счет гидролиза в крови. Функциональные группы, которые могут быть быстро превращены путем метаболического расщепления ίη νίνο, образуют класс групп, реакционноспособных по отношению к карбоксильной группе соединений по изобретению. Указанные группы включают, но, не ограничиваясь ими, такие группы, как алканоил (такой как ацетил, пропаноил, бутаноил и тому подобное), незамещенный и замещенный ароил (такой как бензоил и замещенный бензоил), алкоксикарбонил (такой как этоксикарбонил), триалкилсилил (такой как триметил- и триэтилсилил), образующие сложные моноэфиры с дикарбоновыми кислотами (такими как янтарная) и тому подобное.
Из-за легкости, с какой метаболически расщепляемые группы соединений по настоящему изобретению расщепляются ίη νίνο, соединения, несущие такие группы, ведут себя как пролекарства. Соединения с метаболически расщепляемыми группами обладают тем преимуществом, что для них может быть характерна повышенная биодоступность, являющаяся результатом повышенной растворимости и/или скорости всасывания, обусловленных наличием в исходных соединениях метаболически расщепляемых групп. Подробный обзор представлен в ЭсЧдп о£ Ргобгидк, Н. Випбдаагб, еб., ЕГсуюг (1985); МеШобк ίη Еп7уто1оду; К. \У|ббег е1 а1, Еб., Асабетю Рге§8, 42, 309-396 (1985); А ТехФоок о£ Игид ОеЧдг! αη6 Эеνе1ορетеηΐ, К^οд8даа^б-^а^8еη амб Н. ВаЫадеб, еб., СНарЮг 5; ОеЧдг! амб Аррйсабот о£ Ргобгидк 113191 (1991); Абνаηсеб Эгид ИеНтегу Кег1е№, Н. Випбдагб, 8, 1-38, (1992); 1. РНагт. 8ск, 77, 285 (1988); СНет. РНагт. Ви11., Ν. Nакеуа е1 а1, 32, 692 (1984); Рго-бгидк а§ Nονе1 ОеФ'егу Зуйетк, Т. ШдисЫ аиб V. 81е11а, 14 А.С.8. Зутроыит 8епе5 аг1б ВюгетегЧЫе Сатега ίη Эгид Эе^дц Е.В. Воске, еб., Атепсаг1 Р11агтасеибса1 А88οс^аί^οη аг1б Ре^датοη Рге§8, 1987, включенных в данное описание посредством ссылок.
Термин фармацевтически приемлемые соли относится к сравнительно нетоксичным аддитивным солям соединений по настоящему изобретению с неорганическими и органическими кислотами и основаниями. Указанные соли могут быть получены ίη Цф во время окончательного выделения или очистки соединений. В частности, аддитивные соли кислот могут быть получены взаимодействием очищенного соединения в форме свободного основания с подходящей органической или неорганической кислотой и выделением полученной таким образом соли. Характерные примеры кислотно-аддитивных солей включают гидробромид, гидрохлорид, сульфат, бисульфат, фосфат, нитрат, ацетат, оксалат, валерат, олеат, пальмитат, стеарат, лаурат, борат, бензоат, лактат, фосфат, тозилат, цитрат, малеат, фумарат, сукцинат, тартрат, нафтилат, мезилат, глюкогептанат, лактобионат, сульфаматы, малонаты, салицилаты, пропионаты, метилен-бис-п-гидроксинафтоаты, гентизаты, изэтионаты, ди-п-толуоилтартраты, метансульфонаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, п-толуолсульфонаты, циклогексилсульфаматы, хинаты и лаурилсульфонаты, и тому подобное. См., например, З.М. Вегде, е1 а1., Рйагтасеибса1 ЗаЮ, ί. РНагт. Зск, 66, 1-19 (1977), включенный в данное описание посредством ссылки. Аддитивные соли оснований могут также быть получены взаимодействием очищенного соединения в форме кислоты с подходящим органическим или неорганическим основанием и выделением полученной таким образом соли. Основноаддитивные соли включают соли фармацевтически приемлемых металлов и аминов. Подходящие соли металлов включают соли натрия, калия, кальция, бария, цинка, магния и алюминия. Предпочтительны соли натрия и калия. Подходящие аддитивные соли неорганических оснований получают из оснований металлов, которые включают гидрид натрия, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид кальция, гидроксид алюминия, гидроксид лития, гидроксид магния, гидроксид цинка и тому подобное. Подходящие аддитивные соли аминных оснований получают из аминов, обладающих достаточной основностью для образования стабильной соли, указанные аддитивные соли предпочтительно включают те амины, которые часто используются в химии лекарственных препаратов по причине их низкой токсичности и приемлемости для применения в области медицины. Указанные амины включают аммиак, этилендиамин, Ν-метилглюкамин, лизин, аргинин, орнитин, холин, Ν,Ν'-дибензилэтилендиамин, хлорпрокаин, диэтаноламин, прокаин, Ν-бензилфенетиламин, диэтиламин, пиперазин, трис(гидроксиметил)аминометан, гидроксид тетраметиламмония, триэтиламин, дибензиламин, эфенамин, дегидроабиетиламин, Νэтилпиперидин, бензиламин, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний, метиламин, диметиламин, триметиламин, этиламин, основные аминокислоты, например, лизин и аргинин, и дициклогексиламин, и тому подобное.
Заместители кольцевой группы означают заместители, присоединенные к ароматическим или неароматическим кольцевым системам, включающие: арил, гетероарил, гидрокси, алкокси, циклилокси, арилокси, гетероарилокси, ацил или его тиоксоаналог, циклилкарбонил или его тиоксоаналог, ароил или его тиоксо-аналог, гетероароил или его тиоксоаналог, ацилокси, циклилкарбонилокси, ароилокси, гетероароилокси, галоген, нитро, циано, карбокси (кислота), -С(О)-ИНОН, -С(О)-СН2ОН, -С(О)-СН2ЗН, -С(О)-ИН-СЫ, сульфо, фосфоно, алкилсульфонилкарбамоил, тетразолил, арилсульфонилкарбамоил, Νметоксикарбамоил, гетероарилсульфонилкарбамоил, 3-гидрокси-3-циклобутен-1,2-дион, 3,5-диоксо1,2,4-оксадиазолидинил или гидроксигетероарил, такой как 3-гидроксиизоксазолил, 3-гидрокси-1метилпиразолил, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил, гетероарилоксикарбонил, алкилсульфонил, циклилсульфонил, арилсульфонил, гетероарилсульфонил, алкилсульфинил, циклилсульфинил, арилсульфинил, гетероарилсульфинил, алкилтио, циклилтио, арилтио, гетероарилтио, цик- 18 017556 лил, арилдиазо, гетероарилдиазо, тиол, Υ1Υ2Ν-, ¥!¥^С(О)-, ¥1¥2ЫС(О)О-, ¥1¥^С(О^¥3- или ¥1¥2№О2-, где Υ1, ¥2 и ¥3 независимо означают водород, алкил, арил или гетероарил, или в случае, когда заместитель означает ¥1¥2Ν-, один из ¥1 и ¥2 может означать указанные выше ацил, циклилкарбонил, ароил, гетероароил, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил или гетероарилоксикарбонил, а другой из ¥1 и ¥2 принимает значения указанные выше, или в случае, когда заместитель означает ¥!¥^С(О)-, ¥!¥^С(О)О-, ¥1¥^С(О^¥3- или ¥1 ¥Л>О·-, ¥' и ¥2 могут вместе с атомом Ν, через который связан каждый из ¥! и ¥2, образовывать 4-7-членный азагетероциклил или азагетероцикленил. Когда кольцевая система является насыщенной или частично насыщенной, заместители кольцевой группы дополнительно включают метилен (Н2С=), оксо (О=) и тиоксо (8=). Кислотными/амидными заместителями циклических групп являются карбокси (кислота), -С(О)-NНОН, -С(О)-СН2ОН, -С(О)СН28Н, -С(О)-МН-СН сульфо, фосфоно, алкилсульфонилкарбамоил, тетразолил, арилсульфонилкарбамоил, Ν-метоксикарбамоил, гетероарилсульфонилкарбамоил, 3-гидрокси-3-циклобутен-1,2-дион, 3,5диоксо-1,2,4-оксадиазолидинил или гидроксигетероарил, такой как 3-гидроксиизоксазолил, 3-гидрокси1-метилпиразолил и ¥1¥2ЫСО-. Некислотными полярными заместителями циклических групп являются гидрокси, оксо (О=), тиоксо (8=), ацил или его тиоксоаналог, циклилкарбонил или его тиоксо-аналог, ароил или его тиоксоаналог, гетероароил или его тиоксоаналог, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил, гетероарилоксикарбонил, ацилокси, циклилкарбонилокси, ароилокси, гетероароилокси, алкилсульфонил, циклилсульфонил, арилсульфонил, гетероарилсульфонил, алкилсульфинил, циклилсульфинил, арилсульфинил, гетероарилсульфинил, тиол, ¥!¥2Ν-, ¥1¥2ЫС(О)-, ¥!¥^С(О)О-, ¥1¥^С(О)К¥3 - или ¥'¥2ЖО;-.
Сольват означает физическую ассоциацию соединения по настоящему изобретению с одной или более молекулами растворителя. Физическая ассоциация включает образование водородной связи. В некоторых случаях сольват поддается выделению, например, когда одна или более молекул растворителя включены в кристаллическую решетку твердого кристаллического соединения. Понятие сольват охватывает как фазу раствора, так и поддающиеся выделению сольваты. Характерные примеры сольватов включают гидраты, этаноляты, метаноляты и тому подобное.
Варианты воплощения
В дополнение к приведенному описанию изобретения ниже приводятся связанные с ним конкретные и предпочтительные варианты воплощения.
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К0 означает связь.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда Ко означает дифторметилен.
Отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К1 означает водород или необязательно замещенную низшую алифатическую группу.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К1 означает водород или низший алкил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К1 означает водород. 2
Отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К2 означает необязательно замещенную низшую алифатическую группу или необязательно замещенную моноциклическую группу. 2
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К2 означает необязательно замещенный низший алкил, необязательно замещенный низший алкенил или необязательно замещенный моноциклический циклоалкил.
Еще один отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К2 означает карбоксиметил, 1-карбокси-2-фенилэтил, циклопропил, циклобутил, 1-циклогексилэтил, 1-фенилэтил, бут-2-ил, 1-пирид-4-илэтил, пропен-3-ил или 3-метилбут-2-ил; более предпочтительно циклопропил.
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К3 означает необязательно замещенный низшей алифатической группой метилен.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К3 означает необязательно замещенный галогеном низший (алкил или алкенил)метилен.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К3 означает пропилметилен, 2,2-дифторэтилметилен, 2,2,2-трифторметилен или пропен-3-илметилен; более предпочтительно К3 означает пропилметилен или 2,2-дифторэтилметилен; еще предпочтительней К3 означает пропилметилен.
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К4 означает водород или необязательно замещенную низшую алифатическую группу.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К4 означает водород или низший алкил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К4 означает водород. 5
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К5 означает необязательно
- 19 017556 замещенный, содержащий низшую алифатическую группу метилен.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К5 означает необязательно (фенил, карбокси, карбоксамидо или алкоксикарбонил)замещенный низший (алкил или алкенил)метилен.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К5 означает метилметилен, изопропилметилен, трет-бутилметилен, бут-2-илметилен, бутилметилен, бензилметилен, 3метилбутилметилен, 2-метилпропилметилен, карбоксиметилметилен, карбоксамидометилметилен, бензилоксикарбонилметилметилен, бензилоксикарбонилпропилметилен или фенилпропен-3-илметилен; более предпочтительно К5 означает изопропилметилен или трет-бутилметилен.
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К6 означает водород или необязательно замещенную низшую алифатическую группу.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К6 означает водород или низший алкил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К6 означает водород. 7
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К7 означает необязательно замещенный низшей алифатической группой метилен, необязательно замещенный низшей циклической группой метилен или необязательно замещенный моноциклический (арил или гетероарил)метилен.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К7 означает необязательно замещенный низший алкилметилен, необязательно замещенный низший циклоалкилметилен или необязательно замещенный фенилметилен.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К7 означает метилметилен, изопропилметилен, н-пропилметилен, фенилметилен, циклогексилметилен, циклопентилметилен, трет-бутилметилен, втор-бутилметилен, циклогексилметилметилен или фенилметилметилен; более предпочтительным является изопропилметилен, циклогексилметилен, циклопентилметилен, третбутилметилен или втор-бутилметилен.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет также случай, когда каждый из К3, К5 и К7 означает монозамещенный метилен.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет также случай, когда К3 означает монозамещенный метилен при (8) конфигурации углерода, соединенного с -С(О)-К0-С(О)-МК?К2 группой.
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К8 означает водород или необязательно замещенную низшую алифатическую группу.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К8 означает водород или низший алкил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К8 означает водород. 9
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К9 означает необязательно замещенную низшую алифатическую группу или необязательно замещенную моноциклическую ароматическую группу.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К9 означает необязательно замещенный низший алкил или необязательно замещенный моноциклический гетероарил.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К9 означает необязательно (карбокси, (низший алкил)8О2МН-, (низший алкил)НNСО-, гидрокси, фенил, гетероарил или (низший алкил)ОС(О)МН-)замещенный низший алкил или необязательно замещенный моноциклический гетероарил.
Еще один предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К9 означает низший алкил, замещенный (моно или ди)МеОС(О)ИН-; более предпочтительным является 1, 2ди(МеОС(О)ЯН)этил или 1-(МеОС(О)МН)этил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К9 означает (карбокси, (низший алкил)НNСО- или тетразолил)замещенный низший алкил; более предпочтительно 3карбоксипропил, 2-тетразол-5-илпропил, 3-(Ц-метилкарбоксамидо)пропил или 3-карбокси-2,2диметилпропил; еще предпочтительней 3-карбоксипропил, 2-тетразол-5-илпропил или 3-(Νметилкарбоксамидо)пропил.
Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К9 означает необязательно замещенный низший алкил; более предпочтительным является 1-гидрокси-2фенилэтил, метил, изопропил или трет-бутил; еще предпочтительней метил, изопропил или трет-бутил.
Еще один предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К9 выбирают из группы, включающей
- 20 017556
ζΧ и ноХХ
Еще один предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К9 означает пиразинил.
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К10 означает водород или необязательно замещенную низшую алифатическую группу.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К10 означает водород или низший алкил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К10 означает водород.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда щенный моноциклический азагетероциклил, означает замещенный пирролидинил.
, как заме-
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда , как замеОуО ό щенный моноциклический азагетероциклил, означает необязательно замещенный N или необяза<х ό тельно замещенный Ν , где Аг означает К2, который включает ароматическую группу; более предЛ ό
почтительным является необязательно замещенный Ν , еще предпочтительней необязательно замещенный
й 6 , еще предпочтительней ν-7 <А° о Г . Еще более предпочтительный необязательно замещенный N означает ν-7
ό или ΝДругой предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда или
как
- 21 017556 необязательно замещенный полициклический азагетероциклил, означает необязательно замещенный
У
N . Более предпочтительным является необязательно замещенный М Конкретными заместителями д для N являются гидрокси, фтор или оксо.
Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда как необязательно замещенный полициклический азагетероциклил, означает необязательно замещенный 86
N более предпочтительным является
еще предпочтительней
. Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда
как необязательно замещенный полициклический азагетероциклил, означает необязательно замещенный N .
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда -С(О)-^К4)-К3-
С(О)К0С(О)NК2К1 группа, присоединенная к связана α-углеродом с атомом азота.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда Ь означает -С(О)или -ОС(О)-.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда η равно 0.
Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда η равно 1.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К11 означает -СО2К13.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К12 означает
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К13 означает необязательно замещенную алифатическую группу.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К13 означает ал кильную группу.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К13 означает низший алкил.
Еще один предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К13 оз начает метил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К14 означает -СО2К16.
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К15 означает алкил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К15 означает низший алкил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К15 означает ме тил.
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К16 означает необязательно замещенную алифатическую группу.
Другой отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К16 означает ал кил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К16 означает низший алкил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К16 означает третВи.
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда К17 означает необязательно замещенный арил.
- 22 017556
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда В17 означает фенил.
Отдельный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда В18 означает необязательно замещенный арил.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда В18 означает фенил.
Особый вариант осуществления изобретения составляет случай, когда р0 выбирают из группы, включающей ВОС, СВ/ и ^Ο^κμ.
Предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет случай, когда р0 означает ВОС.
Понятно, что данное изобретение охватывает все уместные комбинации указанных выше отдельных и предпочтительных группировок.
Отдельные соединения по изобретению выбирают из группы соединений, обозначенных последовательно от А до РН, включающей
С,
Р,
- 23 017556
- 24 017556
- 25 017556
- 26 017556
- 27 017556
- 28 017556
- 29 017556
- 30 017556
- 31 017556
- 32 017556
- 33 017556
- 34 017556
- 35 017556
- 36 017556
- 37 017556
- 38 017556
- 39 017556
- 40 017556
- 41 017556
- 42 017556
- 43 017556
- 44 017556
- 45 017556
- 46 017556
- 47 017556
- 48 017556
- 49 017556
- 50 017556 или из фармацевтически приемлемой соли или пролекарства, или сольвата такого соединения, его соли или пролекарства.
Предпочтительным является соединение, выбранное из группы, включающей 8, и, ВХ, ΒΥ, ΒΖ, СЕ,
СУ, ΏΖ, ЕА, ЕС, ΕΙ, РН, Е^, ΕΟ, ΕΖ, ЕС- и ΕΝ, его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, или сольват такого соединения, его соль или пролекарство.
Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения состоит в выборе соединений из следующей группы:
- 51 017556
- 52 017556
- 53 017556
- 54 017556
- 55 017556
- 56 017556
- 57 017556
- 58 017556
или из фармацевтически приемлемой соли или пролекарства, или сольвата указанного соединения, его соли или пролекарства.
Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет соединение формулы
или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, или сольват указанного соединения, его соль или его пролекарство.
Еще один предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет соединение формулы 1, где
- 59 017556
К0 означает связь;
К1 означает водород;
К2 означает низший алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатических групп; или низший циклоалкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями циклических групп;
каждый из К3 и К5 независимо означает метилен, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатических групп;
К4, К6, К8 и К10 означают водород;
К7 означает метилен, замещенный циклоалкилом, низшим алкилом или арилом; или (1,1- или 12-)циклоалкенил, необязательно замещенный циклоалкилом, низшим алкилом или арилом;
К9 означает низший алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатических групп; или гетероарил, необязательно замещенный 1-3 заместителями циклических групп;
или гетероциклил, необязательно замещенный 1-3 заместителями циклических групп;
означает моноциклический азагетероциклил, полициклический азагетероциклил или поли циклический азагетероцикленил, необязательно замещенный 1-3 заместителями циклических групп; и Ь означает -С(О)-, -ОС(О)-.
Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет соединение, выбранное из группы, включающей:
о
С,
- 60 017556
- 61 017556
- 62 017556
- 63 017556
- 64 017556
- 65 017556
- 66 017556
- 67 017556
- 68 017556
- 69 017556
ст,
- 70 017556
- 71 017556
- 72 017556
- 73 017556
- 74 017556
- 75 017556
- 76 017556
- 77 017556
- 78 017556
или его фармацевтически приемлемая соль или пролекарство, или сольват указанного соединения, его соль или пролекарство.
Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет соединение формулы 1, где необязательно замещенная алифатическая группа, необязательно замещенная циклическая группа или необязательно замещенная ароматическая группа В9 замещена по меньшей мере одним гетероарильным заместителем.
Еще один предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет соединение формулы 1, где необязательно замещенная ароматическая группа В9 означает необязательно замещенный гетероарил.
Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет соединение формулы 1, где необязательно замещенная ароматическая группа В9 означает замещенный алкилгетероарил.
Другой предпочтительный вариант осуществления изобретения составляет соединение, где необязательно замещенная гетероарильная группа В9 означает пиразинил, тетразолил, хинолинил, имидазолил, изоксазолил и пирадонил, необязательно замещенный заместителем кольцевой группы.
Соединения по изобретению, необязательно, могут быть представлены в виде солей. Указанные соли, являющиеся фармацевтически приемлемыми, представляют особый интерес, поскольку они используются при применении указанных выше соединений в медицинских целях. Соли, которые фармацевтически не приемлемы, используются в способах получения для выделения и очистки и, в некоторых случаях, для разделения стереоизомерных форм соединений по изобретению. Последнее в особенности справедливо в отношении солей аминов, полученных из оптически активных аминов.
Когда соединение по изобретению содержит карбоксильную группу или достаточно кислотную биостеру, могут быть получены аддитивные соли с основаниями, которые являются просто более удобной формой для применения; и, на практике, использование солевой формы по существу равносильно применению в форме свободной кислоты.
Также, когда соединение по изобретению содержит основную группу или достаточно основную биостеру, могут быть получены аддитивные соли с кислотами, которые являются просто более удобной формой для применения; и, на практике, использование солевой формы по существу равносильно применению в форме свободного основания.
Предпочтительным вариантом осуществления способа по настоящему изобретению является лече
- 79 017556 ние пациента, страдающего от инфекции НСУ или связанных с инфекцией физиологических нарушений, включающее введение пациенту фармацевтически эффективного количества соединения формулы 1.
Другим предпочтительным вариантом осуществления терапевтического способа по настоящему изобретению является лечение пациента, страдающего от инфекции НСУ или связанных с инфекцией физиологических нарушений, включающее введение пациенту фармацевтически эффективного количества соединения формулы 1 в комбинации с фармацевтически эффективным количеством другого антиНСУ терапевтического средства.
Еще одна цель настоящего изобретения состоит в разработке фармацевтических композиций, включающих, в дополнение к одному или более ингибиторам сериновой протеазы НСУ, один или более интерферонов, обладающих анти-НСУ активностью, и/или одно или более соединений, обладающих антиНСУ активностью, включая иммуномодулирующие соединения, такие как иммуностимулирующие цитокины, обладающие противовирусной активностью в отношении НСУ, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
Еще одна цель изобретения состоит в разработке фармацевтической композиции, которая эффективна как сама по себе, так и при использовании в комбинированной терапии, поскольку включает совокупность активных ингредиентов, используемых в соответствии с изобретением.
Изобретение также касается наборов или отдельных упаковок, содержащих два или более активных ингредиентов, полезных для лечения или профилактики у пациентов инфекции НСУ. Набор может включать (отдельно или в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем), соединение формулы 1 и дополнительный активный ингредиент (отдельно или в сочетании с разбавителем или носителем) из другого анти-НСУ терапевтического средства.
Соединения формулы 1 могут быть получены путем применения или адаптации известных способов, как используемых для этого ранее и описанных в литературе, так и способов по настоящему изобретению.
Другая цель настоящего изобретения состоит в разработке способов лечения или профилактики инфекции НСУ у больного, включающих введение указанному пациенту фармацевтически эффективного количества комбинации из одного или более ингибиторов сериновой протеазы НСУ; одного или более интерферонов, обладающих анти-НСУ активностью; и/или одного или более соединений, обладающих анти-НСУ активностью, включая иммуномодулирующие соединения, такие как иммуностимулирующие цитокины, обладающие противовирусной активностью в отношении НСУ.
Другая цель настоящего изобретения состоит в применения одного или более ингибиторов сериновой протеазы НСУ в комбинации с одним или более интерферонами, обладающими анти-НСУ активностью, и/или одним или более соединениями, обладающими анти-НСУ активностью, включая иммуномодулирующие соединения, такие как иммуностимулирующие цитокины, обладающие противовирусной активностью в отношении НСУ, с целью получения лекарственного средства для лечения или профилактики НСУ инфекции у больного.
Настоящее изобретение также касается набора или фармацевтической упаковки для лечения или профилактики инфекции НСУ у пациента, где набор или фармацевтическая упаковка включает ряд отдельных контейнеров, где по меньшей мере один из указанных контейнеров содержит один или более ингибиторов сериновой протеазы НСУ, по меньшей мере еще один из указанных контейнеров содержит один или более интерферонов или соединений, вызывающих продуцирование интерферона, обладающего анти-НСУ активностью (отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем), и, необязательно, по меньшей мере еще один из указанных контейнеров содержит одно или более соединений, обладающих анти-НСУ активностью (отдельно или в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем или разбавителем), включая иммуномодулирующие соединения, такие как иммуностимулирующие цитокины, обладающие противовирусной активностью в отношении НСУ.
Еще одна цель настоящего изобретения состоит в разработке способа ингибирования репликации вируса гепатита С в клетках, включающего контактирование указанной клетки, ингибитора сериновой протеазы вируса гепатита С и, необязательно, интерферона или соединений, вызывающих продуцирование интерферона, обладающего активностью против вируса гепатита С.
Количество ингибитора(ов) сериновой протеазы НСУ, интерферона(ов) или анти-НСУ соединения(ий) при любом из указанных выше применений может быть фармацевтически эффективным количеством, субклиническим анти-НСУ эффективным количеством, либо их комбинацией, при условии, что конечная комбинация ингибитора(ов) сериновой протеазы НСУ, интерферона(ов) и/или анти-НСУ соединения(ий), включает фармацевтически эффективное количество соединений, которое эффективно в лечении или профилактике инфекции НСУ у пациента.
Еще одна цель изобретения состоит в разработке способа получения хирального соединения бициклопролината, полезного для получения соединения формулы 1.
Получение соединений по изобретению
Исходные вещества и промежуточные соединения для соединений по изобретению могут быть получены путем применения или адаптации известных способов, как, например, способы, описанные в стандартных примерах, или очевидными, химически эквивалентными им способами.
- 80 017556
Соединения по изобретению могут быть получены путем применения или адаптации известных способов, под которыми понимаются способы, используемые для этого ранее или описанные в литературе, например способами, описанными в КС. Ьатоск ίη СотргейеиДуе Отдашс ТтапДоттайопк, УСН риЬ118Йет8 (1989).
Соединение формулы 1, где переменные и группа быть получены обработкой соединения формулы 2,
принимают указанные значения, могут
где переменные и группа принимают указанные значения, соответствующим окисляющим агентом и в подходящих условиях. Характерным окисляющим агентом является ΌΜΡ реагент. Характерные условия включают окисление в соответствующем органическом растворителе, таком как дихлорметан, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 2, где переменные и группа
принимают указанные значения, может быть получено сочетанием соединения формулы 3, где переменные и группа ные значения, и соединения формулы 4,
принимают указан-
где переменные принимают указанные значения, с соответствующим связующим агентом и в подходящих условиях. Характерный связующий агент и условия включают использование О1С и ΗΘΆΐ в подходящем органическом растворителе, таком как ДМФ, приблизительно при 0°С, или использование РуВор и ΌΙΡΕΆ в подходящем органическом растворителе, таком как дихлорметан, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 3, где переменные и группа принимают указанные значения, может быть получено сочетанием соединения формулы 5, где переменные принимают указанные значения, и
ответствующим связующим агентом и в подходящих условиях связывания, с последующим использованием соответствующего агента для снятия защиты в подходящих для снятия защиты условиях. Характерные связующий агент и условия включают использование О1С или ОСС и НОЛ1 в подходящем органическом растворителе, таком как ДМФ, при температуре приблизительно от 0°С до комнатной. Снятие защиты осуществляют, используя соответствующий агент для снятия защиты, зависящий от природы
- 81 017556 защитного агента, т.е. от того, удаляется (неустойчив) он под действием кислоты, основания или в условиях гидрирования, и других реакционноспособных групп подвергаемого снятию защиты соединения, т.е. агент для снятия защиты выбирают так, чтобы выполнить снятие защиты без воздействия на другие реакционноспособные группы, за исключением случаев, когда сопутствующая реакция является желательной. Характерным кислотным защитным агентом является С1-С8-низший алкил; в частности, метил. Характерным агентом для снятия защиты является неорганическое основание, такое как гидроксид щелочного металла/ в частности, ЫаОН. Характерные условия снятия защиты включают снятие защиты в спиртовом растворителе, таком как метанол или этанол, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 5, где п равно 0 и остальные переменные принимают указанные значения, т.е., соединение 5а, может быть получено путем снятия защиты с соединения формулы 7
где Р2 означает кислотную защитную группу, и остальные переменные принимают указанные выше значения, с помощью соответствующего агента для снятия защиты и в подходящих условиях. Снятие защиты осуществляют, используя соответствующий агент для снятия защиты, зависящий от природы защитного агента, т.е. от того, удаляется (неустойчив) он под действием кислоты, основания или в условиях гидрирования, и других реакционноспособных групп подвергаемого снятию защиты соединения, т.е. агент для снятия защиты выбирают так, чтобы выполнить снятие защиты без воздействия на другие реакционноспособные группы, за исключением случаев, когда сопутствующая реакция является желательной. Характерным кислотным защитным агентом является С1-С8-низший алкил; в частности, метил. Характерным агентом для снятия защиты является неорганическое основание, такое как гидроксид щелочного металла; в частности, ЫаОН. Характерные условия снятия защиты включают снятие защиты в спиртовом растворителе, таком как метанол или этанол, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 7, где переменные принимают указанные значения, может быть получено ацилированием соединения формулы 8, где переменные принимают указанные значения, соединением формулы 9,
где М означает заменяемую группу, а остальные переменные принимают указанные выше значения, в подходящих условиях. Характерные условия связывания подразумевают использование О1С или ОСС и НОА1 в подходящем органическом растворителе, таком как ДМФ или дихлорметан, приблизительно при температуре от 0°С до комнатной, или использование РуВор и Э1РЕА в подходящем органическом растворителе, таком как ДМФ или дихлорметан, при температуре, близкой к комнатной; последние условия являются предпочтительными. Характерный Ь означает карбонил. Характерный М означает гидрокси или Ν-оксисукцинимид.
Соединение формулы 5, где п равно 1 и остальные переменные принимают указанные выше значения, т.е., соединение 5Ь, может быть получено снятием защиты с соединения формулы 10,
- 82 017556 где Р2 означает кислотную защитную группу и остальные переменные принимают указанные выше значения, с помощью подходящего агента для снятия защиты и в соответствующих условиях. Снятие защиты осуществляют, используя соответствующий агент для снятия защиты, зависящий от природы защитного агента, т. е. от того, удаляется (неустойчив) он под действием кислоты, основания или в условиях гидрирования, и других реакционноспособных групп подвергаемого снятию защиты соединения, т.е. агент для снятия защиты выбирают так, чтобы выполнить снятие защиты без воздействия на другие реакционноспособные группы, за исключением случаев, когда сопутствующая реакция является желательной. Характерным кислотным защитным агентом является С3-С8-низший алкил; в частности, метил. Характерным агентом для снятия защиты является неорганическое основание, такое как гидроксид щелочного металла; в частности, №1ОН. Характерные условия снятия защиты включают снятие защиты в спиртовом растворителе, таком как метанол или этанол, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 10, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено ацилированием соединения формулы 11, где переменные принимают указанные выше значения, с помощью соединения формулы 9, где переменные принимают указанные выше значения, в’-ьм 0 11
Условия связывания ίι η’'Ε'^ι<κγ·''Ν'Β.5'ΌΡΙ к’ 0 ю в подходящих условиях. Характерные условия связывания подразумевают использование О1С или ОСС и НОЛ! в подходящем органическом растворителе, таком как ДМФ или дихлорметан, приблизительно при температуре от 0°С до комнатной, или использование РуВор и ΌΙΡΕΛ в подходящем органическом растворителе, таком как ДМФ или дихлорметан, при температуре, близкой к комнатной; последние условия являются предпочтительными. Характерный Ь означает карбонил. Характерный М означает гидрокси или Ν-оксисукцинимид.
Соединение формулы 11, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено снятием защиты с соединения формулы 12,
где Р1 означает аминозащитную группу и остальные переменные принимают указанные выше значения, с помощью подходящего агента для снятия защиты и в соответствующих условиях. Снятие защиты осуществляют, используя соответствующий агент для снятия защиты, зависящий от природы аминозащитного агента, т. е. от того, удаляется (неустойчив) он под действием кислоты, основания или в условиях гидрирования, и других реакционноспособных групп подвергаемого снятию защиты соединения, т.е. агент для снятия защиты выбирают так, чтобы выполнить снятие защиты без воздействия на другие реакционноспособные группы, за исключением случаев, когда сопутствующая реакция является желательной. Характерным аминозащитным агентом является СЬх или ВОС; более предпочтителен СЬх. Характерным агентом для снятия защиты является кислота, такая как НС1, или Н2/Рб(ОН)2; более предпочтителен Н2/Рб(ОН)2. Характерные условия снятия защиты включают снятие защиты в спиртовом растворителе, таком как метанол или этанол, или алкилалканоатном растворителе, таком как этилацетат, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 12, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено сочетанием соединения формулы 13, где переменные принимают указанные выше значения, с соединением формулы 14, где переменные принимают указанные выше значения,
- 83 017556 в подходящих условиях. Характерные условия связывания подразумевают использование НОЛ!/О1С и ΌΙΡΕΆ в подходящем органическом растворителе, таком как ТГФ, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 4, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено снятием защиты с соединения формулы 15,
Условия снятия защиты
где переменные принимают указанные выше значения, с помощью подходящего агента для снятия защиты и в соответствующих условиях. Снятие защиты осуществляют, используя соответствующий агент для снятия защиты, зависящий от природы аминозащитного агента, т.е. от того, удаляется (неустойчив) он под действием кислоты, основания или в условиях гидрирования, и других реакционноспособных групп подвергаемого снятию защиты соединения, т.е. агент для снятия защиты выбирают так, чтобы выполнить снятие защиты без воздействия на другие реакционноспособные группы, за исключением случаев, когда сопутствующая реакция является желательной. Характерным аминозащитным агентом является СЬх или ВОС; более предпочтителен СЬх. Характерным агентом для снятия защиты является кислота, такая как НС1, или Н2/Рб(ОН)2; более предпочтителен Н2/Рб(ОН)2. Характерные условия снятия защиты включают снятие защиты в спиртовом растворителе, таком как метанол или этанол, или алкилалканоатном растворителе, таком как этилацетат, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 15, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено сочетанием соединения формулы 16, где переменные принимают указанные выше значения, с соединением формулы 17, где переменные принимают указанные выше значения,
.а*
Условия связывания
в подходящих условиях. Характерным аминозащитным агентом является СЬх или ВОС; более предпочтителен СЬх. Характерные условия связывания подразумевают использование НОВТ, РуВор и ΌΙΡΕΆ в подходящем органическом растворителе, таком как дихлорметан, при температуре приблизительно от 0°С до комнатной.
Соединение формулы 16, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено снятием защиты с соединения формулы 18,
Агент снятия кислотной защиты и условия
где остальные переменные принимают указанные выше значения, с помощью подходящего агента для снятия защиты и в соответствующих условиях. Снятие защиты осуществляют, используя соответствующий агент для снятия защиты, зависящий от природы кислотного защитного агента, т. е. от того, удаляется (неустойчив) он под действием кислоты, основания или в условиях гидрирования, и других реакционноспособных групп подвергаемого снятию защиты соединения, т.е. агент для снятия защиты выбирают так, чтобы выполнить снятие защиты без воздействия на другие реакционноспособные группы, за исключением случаев, когда сопутствующая реакция является желательной. Характерным аминозащитным агентом является СЬх. Характерным кислотным защитным агентом является С1-С8-низший алкил; в частности, метил. Характерным агентом для снятия защиты является неорганическое основание, такое
- 84 017556 как гидроксид щелочного металла; в частности, ЫаОН. Характерные условия снятия защиты включают снятие защиты в спиртовом растворителе, таком как метанол или этанол, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 18, где В0 означает связь, и остальные параметры принимают указанные выше значения, может быть получено путем защиты соединения формулы 20, где переменные принимают указанные выше значения, с помощью соединения формулы 19,
где переменные принимают указанные выше значения, в соответствующих условиях. Характерным аминозащитным агентом является СЬх или ВОС. Характерные условия связывания подразумевают использование подходящего органического растворителя, такого как дихлорметан, при температуре приблизительно от 0°С до комнатной.
Соединение формулы 20, где В4 означает водород, и остальные переменные принимают указанные выше значения, может быть получено гидрированием соединения формулы 21,
где переменные принимают указанные выше значения, с помощью гидрирующего агента и в подходящих условиях. Характерным гидрирующим агентом является Н2/Рб(ОН)2. Характерные условия гидрирования включают гидрирование в спиртовом растворителе, таком как метанол или этанол, или алкилалканоатном растворителе, таком как этилацетат, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 20, где В4 означает необязательно замещенную алифатическую группу, и остальные переменные принимают указанные выше значения, может быть получено алкилированием соединения 20', где переменные принимают указанные выше значения, с помощью соединения 22 (алкилирующего агента), где В4 означает необязательно замещенную алифатическую группу и О означает замещаемую группу, такую как галогениды, тозилаты или сульфонаты, в подходящих условиях.
Подходящие алкилирующие агенты включают алифатические (галогениды, тозилаты или сульфонаты). Подходящие условия алкилирования включают алкилирование в подходящем органическом растворителе, таком как спиртовой растворитель, например метанол или этанол, или простой эфирный растворитель, например диэтиловый эфир или тетрагидрофуран, приблизительно от комнатной температуры до температуры дефлегмации.
Соединение формулы 21, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено алкилированием соединения формулы 22, где переменная принимает указанные выше значения, с помощью соединения формулы 23,
где заместители В3' независимо означают указанные необязательно замещенную алифатическую группу, необязательно замещенную циклическую группу или необязательно замещенную ароматическую
- 85 017556 группу, в подходящих условиях. Характерные условия алкилирования включают алкилирование с применением сильного основания, такого как трет-бутилат калия, в спиртовом растворителе, таком как метанол или этанол, при температуре, близкой к комнатной.
Соединение формулы 24, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено осуществлением присоединения по Михаэлю к акцептору Михаэля формулы 29, где переменная принимает указанные выше значения, с помощью иминного производного глицинимида.
Условия присоединения по Михаэлю включают подходящие полярные растворители, гидроксиды щелочных металлов в качестве оснований и соответствующие температуры. В отношении присоединения по Михаэлю, см., Согеу, Е.Е; Ыое, М.С.; Хи, Е. Тейайебгоп Ьейег 1998, 39, 5347. В отношении синтеза с применением хиральных межфазных катализаторов, см., Согеу, Е.Е; Бое. М.С.; Хи, Е. 1. Ат. Сйет. 8ос. 1997, 119, 12414. Подходящие растворители включают ЭСМ, АСЫ или ΝυΑ. В зависимости от условий взаимодействия. Подходящие основания включают СТОН, ЫаОН, КОН и ЫОН. Подходящий интервал температур составляет приблизительно от -78 до 0°С, более предпочтительно приблизительно -60°С. Иминные глицинимиды, полезные по изобретению, приведены в данном описании. Предпочтительным иминным глицинимидом является трет-бутиловый эфир Ы-(дифенилметилен)глицина. Кроме того, условия присоединения по Михаэлю могут зависеть от наличия или отсутствия межфазного катализатора (МФК) (хирального и нехирального). Предпочтительным МФК является О-[9]-аллил-Ы-9антраценилметилцинхонидийбромид.
Соединение формулы 25, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено иминным расщеплением и циклизацией соединения формулы 24.
В отношении методик расщепления и циклизации, см., 1ау1бап, А.; 8сШег, К.; Рупе, 8. 8уп1ей 1996, 100; Тайиката, А.; Иап, М.; ОйЬа1аке, М.; Ка^а1аке, К.; Ецка1а, Т.; Маба, Е.; Капетазе, 8.; Каке1, 8. 1. Огд. С'йет. 1993, 58, 4221. Условия расщепления и циклизации включают использование полярных растворителей, кислотных реагентов и температур приблизительно в интервале от комнатной температуры до 150°С. Предпочтительные условия включают использование ЕЮН, АсОЫа и ЫН2ОН-НС1, и температуры, близкой к температуре кипения используемого растворителя.
Соединение формулы 26, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено защитой амида соединения формулы 25, где переменные принимают указанные выше значения, с помощью подходящей амидной защитной группы, такой как ВОС. Другие подходящие защитные группы включают ΟΒζ, -СО2алкил. См. также, Сгеепе, Т.М.; Р.С.М. ίη Рго!есйуе Сгоирз ίη Огдашс 8уп1Нез18, Мбеу, Νονν Уогк, 1991. в отношении других аминозащитных групп.Условия защиты включают применение апротонных полярных растворителей, органических оснований в качестве катализаторов и температур приблизительно в интервале 0-100°С. Предпочтительные условия включают использование АСЫ, диметиламинопиридина и температуры, близкой к комнатной.
Соединение формулы 27, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено восстановлением защищенного соединения формулы 26, где переменные принимают указанные выше значения.
- 86 017556
Фактически выполняют два восстановления. Первым является восстановление амида до гемиаминаля с использованием ΌΣΒΛΕΗ или супергидрида [Ь1ВЕ13Н]. Вторым является восстановление гемиаминаля до амина с использованием Εΐ38ίΗ и ΒΡ3·ΟΕΐ2. См. Со11або, I; Ехцисгга. Р; Ма1со. Α.Ι.; КиЫо, А., Р Огд. СНет. 1998, 63 1995-2001 и Ехциеега, 1.; Ребтеда1, С; Утите1адоуепа, В.; КиЫо, А.; Саггепо, М.С.; ЕкспЬапо, А.; Сагал Киапо, 1.Ь. 1. Огд. СНет. 1995, 60, 2925, в отношении условий восстановления. Другие стандартные условия превращения пироглютаматов в пирролидины состоят в использованием ВН3· 8Ме2.
Соединение формулы 28, где переменные принимают указанные выше значения, может быть получено снятием защиты с соединения формулы 27, где переменные принимают указанные выше значения.
См. С1Ь8оп, Р.С.; Вегте1ег, 8.С.; Каророй, Η., 1. Огд СНет. 1994, 59, 3216-3218. в отношении условий селективного удаления Ν-ВОС защитной группы в присутствии сложного трет-бутилового эфира. Каждому специалисту в данной области известно, что условия снятия защиты зависят от выбора защитной группы. Например, если используют СВ/, могут быть использованы условия гидрирования или основные условия. Например, если используют ВОС, то можно использовать 1н. НС1 в этилацетате. См. Сгеепе, Т.^.; Р.С.М. ш Рго1ес1Ае Сгоирк ш Огдашс ЗупШекщ, ХУПеу, Νο\ν Уогк, 1991.
Для специалиста в данной области ценно, что соединение формулы 3 может быть получено сочетанием соединения формулы 5 с соединением формулы 28 в указанных выше условиях.
Способы получения К3, К5 или К7, в виде необязательно замещенных этандиильных групп, включают способы, известные специалистам в данной области, например, способы, описанные в ТНе отдалю СНетМгу о£ р-Ьас1ат8 ебйеб Ьу С. Сеогд, УСН РиЬйкйега, 1пс. (1993), например, страницы 240-241 и 303-305.
Приведенные далее схемы 1-11 иллюстрируют разнообразные способы получения необязательно замещенных полициклических азагетероциклилов. Способы, приведенные ниже в виде схем, приемлемы также для других необязательно замещенных полициклических азагетероциклилов, включающих подобные совместимые заместители.
Схема 1
ВизБпН/ ΑΙΒΝ
Схема 2
- 87 017556
Схема 3
Схема 4
Меилтср
Схема 6
Схема 7
ТРгО/ОМАР
Схема 8
- 88 017556
Схема 9
Схема 10
Схема 11
- 89 017556
Соединение формулы 1, включающее группу, содержащую один или более атомов азота в кольце, предпочтительно имин (=Ν-), может быть превращено в соответствующее соединение, где один или более циклических атомов азота в группе окислены до Ν-оксида, преимущественно путем взаимодействия с перкислотой, например перуксусной кислотой в уксусной кислоте или м-хлорпероксибензойной кислотой в инертном растворителе, таком как дихлорметан, при температуре приблизительно в интервале от комнатной до температуры дефлегмации, предпочтительно при повышенной температуре.
При осуществлении приведенных ниже взаимодействий может возникнуть необходимость защиты реакционноспособных функциональных групп, например гидрокси-, амино-, имино-, тио- или карбоксигрупп во избежание их нежелательного участия в реакциях, когда требуется наличие указанных групп в конечном продукте. Могут быть использованы обычные защитные группы в соответствии со стандартными методиками, например, см., Т.У. Сгееп апб Р.О.М. \Уи15 ίη РгсИссНус Сгоирз ίη Огдаше СНетМгу 1о11п У11еу апб 8опз (1991); БЕЛУ. МеОш1е ίη РгсИссЕус Сгоирз ίη Огдаше СНетМгу Р1епит Ргезз, 1973.
Соединение, полученное указанными способами, может быть выделено из реакционной смеси общепринятыми способами. Например, соединение может быть выделено путем отгонки растворителя из реакционной смеси или, по необходимости, выливанием остатка после отгонки растворителя из реакционной смеси в воду с последующей экстракцией несмешивающимся с водой органическим растворителем и отгонкой растворителя из экстракта. Кроме того, продукт может быть, по желанию, дополнительно очищен различными подходящими способами, такими как перекристаллизация, переосаждение или различные хроматографические методы, в особенности, хроматографией на колонке или препаративной тонкослойной хроматографией.
Согласно еще одной отличительной особенности настоящего изобретения соединения по изобретению могут быть получены взаимным превращением соединений по изобретению.
В качестве примера взаимного превращения соединения формулы 1, содержащие сульфоксидные мостики, могут быть получены окислением соответствующих соединений, содержащих -8-связи. Например, окисление может обычно быть выполнено путем взаимодействия с перкислотой, например 3хлорпербензойной кислотой, предпочтительно в инертном растворителе, например дихлорметане, преимущественно при температуре, близкой к комнатной, или иначе, под действием кислого пероксомоносульфата калия в такой среде, как водный метанол забуференный приблизительно до рН 5, в интервале температур приблизительно от 0°С до комнатной температуры. Последний способ предпочтителен для соединений, содержащих неустойчивую к кислоте группу.
В качестве другого примера взаимного превращения соединения формулы 1, содержащие сульфоновые мостики, могут быть получены окислением соответствующих соединений, содержащих -8- или сульфоксидные мостики. Например, окисление может обычно быть выполнено путем взаимодействия с перкислотой, например 3-хлорпербензойной кислотой, предпочтительно в инертном растворителе, например дихлорметане, преимущественно при температуре, близкой к комнатной.
Очевидно, что определение ароматичности в отношении арилов и гетероарилов включает высокорезонансную ненасыщенную кольцевую структуру. Альтернативно, наличие двойных связей, где это указано, представляет одну из возможных структур описываемого соединения, но подразумевается, что она включает другие резонансные состояния, такие как протонированные и заряженные состояния, только одно из которых может быть показано.
Следует отметить, что соединения по настоящему изобретению имеют асимметрические центры. Такие асимметрические центры могут независимо иметь К или 8 конфигурацию. Для специалистов в данной области очевидно, что некоторые соединения по изобретению могут также обладать геометрической изомерией. Понятно, что настоящее изобретение включает отдельные геометрические изомеры, стереоизомеры и их смеси, включая рацемические смеси, соединений по изобретению. Такие изомеры могут быть выделены из их смесей путем применения или адаптации известных способов, например, хроматографическими методами и способами перекристаллизации, либо их раздельно получают из подходящих изомеров промежуточных соединений.
Применительно к данному описанию имеется в виду, что в перечень указанных групп входят их таутомерные формы, например тиоксо/меркапто или оксо/гидроксил.
Аддитивные соли кислот получают с соединениями по изобретению, в которых присутствуют основные функциональные группы, такие как амино, алкиламино или диалкиламино. Предпочтительны фармацевтически приемлемые, т.е. нетоксичные, аддитивные соли кислот. Выбранные соли подбирают таким образом, чтобы они были оптимально совместимы с обычными фармацевтическими наполнителями и подходили для перорального или парентерального введения. Кислотно-аддитивные соли соединений по настоящему изобретению могут быть получены взаимодействием свободного основания с подходящей кислотой, на основе применения или адаптации известных способов. Например, кислотноаддитивные соли соединений по настоящему изобретению могут быть получены либо растворением свободного основания в воде или водном спиртовом растворе, или других подходящих растворителях, содержащих соответствующую кислоту, и выделением соли путем упаривания раствора, или взаимодействием свободного основания и кислоты в органическом растворителе, в этом случае соль выделяется сразу либо может быть получена концентрированием раствора. Ряд подходящих кислот, используемых для
- 90 017556 получения таких солей, включает: хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, фосфорную кислоту, серную кислоту, различные органические карбоновые и сульфоновые кислоты, такие как уксусная кислота, лимонная кислота, пропионовая кислота, янтарная кислота, бензойная кислота, винная кислота, фумаровая кислота, миндальная кислота, аскорбиновая кислота, яблочная кислота, метансульфоновая кислота, толуолсульфоновая кислота, жирные кислоты. Например, используются такие соли органических кислот, как адипат, альгинат, аскорбат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, бисульфат, бутират, лактат, лаурат, лаурилсульфат, малат, гидроиодид, 2-гидроксиэтансульфонат, глицерофосфат, пикрат, пивалат, памоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, тиоцианат, 2-нафталинсульфонат, ундеканоат, никотинат, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, камфорат, камфорсульфонат и другие.
Соединения по настоящему изобретению могут быть регенерированы из солей на основе применения или адаптации известных способов. Например, соединения по изобретению могут быть восстановлены из их кислотно-аддитивных солей путем обработки их щелочью, например водным раствором бикарбоната натрия или водным раствором аммиака.
Соединения по настоящему изобретению могут быть регенерированы из основно-аддитивных солей на основе применения или адаптации известных способов. Например, соединения по изобретению могут быть восстановлены из их основно-аддитивных солей путем обработки их кислотой, например соляной кислотой.
Основно-аддитивные соли могут быть получены, когда соединение по изобретению содержит карбоксигруппу или достаточно кислотную биостеру. Основания, которые могут быть использованы для получения основно-аддитивных солей включают преимущественно основания, образующие при взаимодействии со свободной кислотой фармацевтически приемлемые соли, то есть соли, катионы которых в фармацевтических дозах не токсичны для пациента, так что положительные ингибирующие воздействия, присущие свободным основаниям, не ослабляются побочными действиями за счет катионов. Фармацевтически приемлемые соли, включая соли щелочных и щелочно-земельных металлов, охватываются объемом настоящего изобретения и включают соли, полученные с основаниями, такими как: гидрид натрия, гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид кальция, гидроксид алюминия, гидроксид лития, гидроксид магния, гидроксид цинка, аммиак, этилендиамин, Ν-метилглюкамин, лизин, аргинин, орнитин, холин, НИ-дибензилэтилендиамин. хлорпрокаин, диэтаноламин, прокаин, Ν-бензилфенетиламин, диэтиламин, пиперазин, трис(гидроксиметил)аминометан, гидроксид тетраметиламмония и тому подобное.
Соединения по настоящему изобретению удобно переводить в форму сольватов, либо они образуются по ходу осуществления способа по изобретению в виде сольватов (например, гидратов). Гидраты соединений по настоящему изобретению удобно получать перекристаллизацией из смеси водных/органических растворителей, используя такие органические растворители, как диоксан, тетрагидро фуран или метанол.
Исходные вещества и промежуточные соединения могут быть получены на основе применения или адаптации известных способов, например способов, описанных в стандартных примерах или используя их очевидные химические эквиваленты.
Соединения по изобретению, способы или методики их получения и биологическая активность станут более очевидными при анализе приведенных ниже примеров, которые представлены исключительно для иллюстрации и не рассматриваются, как ограничивающие объем изобретения.
Образцы анализированы путем ТСХ, ЯМР, ОТ-ПЦР или ЭА.
Пример 1. Соединения А-Е.
К ЭСМ раствору (10 мл) соединения χί (310 мг, 0,39 ммоль) добавляют ТЕА (4 мл). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 5 ч. По окончанию этого времени растворитель удаляют в вакууме. Полученный остаток очищают ВЭЖХ с обращенной фазой, получая 195 мг (68%) соединения А.
Следуя указанному выше способу и используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения В-Е:
- 91 017556
К ЭСМ раствору (10 мл) соединения χίί (350 мг, 0,56 ммоль) добавляют ΌΜΡ реагент (307 мг, 0,73 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 2 ч и затем гасят добавлением 10% Ыа28О3 в течение 30 мин. Реакционную смесь экстрагируют затем ЕЮАс (75 мл) и промывают насыщенным раствором соли. Органический слой сушат и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (80-90% ЕЮАс/гексаны), получая 248 мг (71%) соединения Р
Следуя указанному выше способу и используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения О-М:
- 92 017556
Пример 3. Соединения Ν-В.
К ЭСМ раствору (4 мл) соединения χίχ (~0,22 ммоль) добавляют ΌΜΡ реагент (146 мг, 0,34 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 2 ч реакцию гасят добавлением 10% №ь8О3. Реакционную смесь разбавляют затем ЭСМ. Органический слой отделяют и промывают дважды 10% №ь8О3 и насыщенным раствором соли. Полученный органический слой сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮАс), что дает 78 мг (56%) требуемого соединения Ν.
Следуя указанному выше способу и используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения О-В:
- 93 017556
Пример 4. Соединения 8-\ν.
К ЭСМ раствору (10 мл) соединения χχν (320 мг, 0,5 ммоль) добавляют ΌΜΡ реагент (272 мг, 0,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 2 ч и гасят 10% Мь8О3 в течение 20 мин. Образовавшуюся смесь затем экстрагируют Е!ОАс. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (80% ЕЮАс/гексаны), получая 170 мг (53%) соединения 8.
Следуя указанному выше способу и используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения Т-ν:
Пример 5. Соединения Х-АЭ.
К ЭСМ раствору (20 мл) соединения χχνί (400 мг, 0,6 ммоль) добавляют ΌΜΡ реагент (32 9 мг, 0,78 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, 1,5 ч и гасят 10% №28О3 в течение 20 мин. Образовавшуюся смесь затем экстрагируют ЕЮАс. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (70-100% ЕЮАс/гексаны), получая 210 мг (53%) соединения X.
Р
Следуя указанному выше способу и используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения У-АЭ:
- 94 017556
Соединение χχχίίί (150 мг; 0,076 ммоль) растворяют в 5 мл ТЕА и перемешивают в течение двух дней. Продукт очищают ОФ-ВЭЖХ, получая 40 мг (33% выход) соединения АЕ.
Следуя указанному выше способу и используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения АЕ-А1:
- 95 017556
Пример 7. Соединение АТ
Соединение χχχνίίί (180 мг, 0,21 ммоль) растворяют в чистом ТРА (5 мл) и оставляют на 3 дня при температуре, близкой к комнатной. По прошествии указанного времени реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают ВЭЖХ с обращенной фазой, получая 50 мг (32%) соединения АТ
Пример 8. Соединения АК-АМ.
Соединение χχχχίίί (150 мг; 0,16 ммоль) растворяют в 4,5 мл ТРА и перемешивают в течение трех дней. Продукт очищают ОФ-ВЭЖХ, получая 70 мг (54% выход) соединения АК.
Следуя указанному выше способу и используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения АЬ-АМ:
Пример 9. Соединения АК
Соединение 1п (80 мг) растворяют в 3 мл ТРА и 3 мл ЭСМ. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 5 ч. Растворитель удаляют упариванием. Полученный остаток очищают ВЭЖХ, получая 62 мг (83%) соединения АК
Соединение 1ш (160 мг; 0,2 ммоль) растворяют в 5 мл ЭСМ и добавляют ЭМР реагент (170 мг; 0,4 ммоль). Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 3 ч. Растворитель удаляют упариванием и остаток растворяют в смеси 50% ацетонитрил/вода и очищают ОФ-ВЭЖХ, получая
Соединение 1ίχ (162 мг; 0,22 ммоль) растворяют в 8 мл ЭСМ и добавляют ЭМР реагент (189 мг; 0,44 ммоль). Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 3 ч. Растворитель удаляют упариванием и продукт очищают ОФ-ВЭЖХ, получая 41 мг (25%) соединения АР.
- 96 017556
Пример 12. Соединения Ар.
Соединение 1х (70 мг; 0,09 ммоль) растворяют в 5 мл ТЕА и 5 мл ЭСМ. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 3 ч. Растворитель удаляют в вакууме и остаток растворяют в смеси 50% ацетонитрил/вода и лиофилизуют, получая соединение Ар в виде порошка.
°=?
Пример 13. Соединения АВ-ВС.
Соединение 1χνί (223 мг, 0,326 ммоль) перемешивают в растворе ТЕА (5 мл) и Όί’Μ (5 мл) 4 ч. ТСХ (силикагель: 2% МеОН/ЕЮАс) свидетельствует о полной конверсии в более медленно перемещающийся продукт. Растворитель удаляют при пониженном давлении и продукт лиофилизуют, получая 198 мг (97%) соединения АВ.
Следуя указанному выше способу и используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения А8-В6.
- 97 017556
- 98 017556
Пример 14. Соединения ВН-В8.
Соединение Ιχχίίί (150 мг, 0,15 ммоль) поглощают ЭСМ (3 мл). К указанному раствору добавляют ТРА (1,5 мл). Образовавшийся раствор перемешивают в течение ночи. По прошествии указанного времени реакционную смесь концентрируют в вакууме, получая остаток. Остаток очищают ВЭЖХ с обращенной фазой и лиофилизуют, получая 60 мг (50%) соединения ВН.
Следуя указанному выше способу и используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения В1-В8:
- 99 017556
- 100 017556
Пример 15. Соединения ВТ-Ви.
Следуя методике примера 12 и используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения ВТ-ВИ:
К дихлорметановому раствору (4,2 мл) соединения Ιχχνίί (143 мг, 0,21 ммоль) добавляют ΌΜΡ реагент (165 мг, 0,39 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 2 ч и гасят 10% №128О3 (водн.) в течение 20 мин. Полученную смесь экстрагируют Е1ОЛс. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Мд§О4 и концентрируют до желтого масла. Очистка хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮЛс) дает 124 мг (79%) соединения ВУ.
- 101 017556
Пример 17. Соединения ВХ-СА.
К дихлорметановому раствору (20 мл) соединения Ιχχχίχ (420 мг, 0,62 ммоль) добавляют ΌΜΡ реагент (342 мг, 0,81 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 1 ч и гасят 10% №138О3 в течение 20 мин. Образовавшуюся смесь затем экстрагируют ЕЮЛс. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (80% ЕЮЛс/гексан), получая 208 мг (50%) соединения по изобретению.
Следуя указанному выше способу, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения ВХ-СА:
р
Пример 18. Соединения СВ-СС.
К дихлорметановому раствору (6,5 мл) соединения Ιχχχνίί (200 мг, 0,3 ммоль) добавляют ΌΜΡ реагент (227 мг, 0,54 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 2 ч и гасят 10% №138О3 (водн.) в течение 20 мин. Полученную смесь экстрагируют ЕЮЛс. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Мд8О4 и концентрируют до желтого масла. Очистка хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮЛс) дает 138 мг (70%) соединения СВ.
Следуя указанному выше способу, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующее соединение СС:
Пример 19. Соединение СО.
Соединение Ιχχχχνίίί (40 мг, 0,05 ммоль) поглощают ТЕЛ (3 мл). Раствор перемешивают в течение двух ночей и концентрируют. Остаток очищают ВЭЖХ с обращенной фазой, получая 25 мг (74%) соединения СЭ.
- 102 017556
Пример 20. Соединение СЕ.
Следуя методике примера 17 и используя соответствующие исходные вещества, получают следующее соединение СЕ:
и
Следуя методике примера 14 щие соединения СЕ-СС:
используя соответствующие исходные вещества, получают следую-
Пример 22. Соединение СН.
Следуя методике примера 16 щее соединение СН:
используя соответствующие исходные вещества, получают следуюПример 23. Соединения С1-СМ.
Соединение ех1 (490 мг, 0,75 ммоль) растворяют в ЭСМ (6 мл). К указанному раствору добавляют ЭМР реагент (380 мг, 0,9 ммоль) и перемешивают 1 ч. Реакционную смесь гасят 10% раствором Ыа28О3 и затем органическую фазу промывают насыщенным №НСО3 и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы полученный остаток очищают хроматографией, используя 70% ЕЮАе/гексан, получают соединение С1 (325 мг, 66,4%).
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связан ным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения С1-СМ:
- 103 017556
Пример 24. Соединения ΟΝ.
К ЭСМ/ТГФ раствору (3 мл/3 мл) соединения схуш (335 мг, 0,46 ммоль) добавляют ΌΜΡ реагент (300 мг, 0,69 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и гасят 10% №ь8О3 (водн.) в течение 20 мин. Полученную смесь экстрагируют Е1ОАс. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли, сушат над Мд8О4 и концентрируют, получая желтое масло. Очистка хроматографией на силикагеле (80% ЕЮАс/гексаны) дает соединение СN (220 мг, 67%).
Пример 25. Соединения СО-СВ.
К ЭСМ/ТГФ раствору (1,5 мл/1,5 мл) соединения сх1х (164 мг, 0,25 ммоль) добавляют ЭМР реагент (159 мг, 0,38 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и гасят 10% №ь8О3 (водн.) в течение 20 мин. Полученную смесь экстрагируют Е1ОАс. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли, сушат над Мд8О4 и концентрируют до желтого масла. Очистка хроматографией на силикагеле (70% ЕЮАс/гексаны) дает соединение СО (100 мг, 61%).
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связанным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения СР-СВ:
- 104 017556
Пример 26. Соединения С8-СТ.
Соединение схх растворяют в ЭСМ (3 мл). К раствору добавляют ΌΜΡ реагент (180 мг, 0,41 ммоль) и затем перемешивают в течение 1 ч. Реакционную смесь гасят 10% Ν;·ι28Ο3 и затем органическую фазу промывают насыщенным NаΗСΟз и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы остаток очищают хроматографией, используя 100% ЕЮАс, и получают соединение С8 (95 мг, 43,7%).
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связанным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующее соединение СТ:
Пример 27. Соединения Е1, ЕК-ЕМ, ΕΟ-ΕΖ и ЕА-ЕС.
Соединение сххуш (356 мг, 0,52 ммоль) растворяют в ЭСМ (5 мл). К указанному раствору добавляют ΌΜΡ реагент (270 мг, 0,63 ммоль) и перемешивают 1 ч. Реакционную смесь гасят 10% Να28Ο3 и затем органическую фазу отделяют и промывают насыщенным NаΗСΟз и насыщенным раствором соли. После концентрирования органического растворителя остаток очищают хроматографией, используя 100% ЕЮАс, и получают следующее соединение (200 мг, 56,3%). Т.пл. 225-235°С.
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связанным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения Е1, ЕК-ЕМ, ΕΟ-ΕΖ и ЕА-ЕН:
вк.
ВЦ
вм.
во,
- 105 017556
- 106 017556
- 107 017556
Соединения СУ-ОС.
Соединение сххх (330 мг, 0,46 ммоль) растворяют в ЭСМ (5 мл). К указанному раствору добавляют ΌΜΡ реагент (240 мг, 0,56 ммоль) и перемешивают 1 ч. Реакционную смесь гасят 10% Ыа28О3 и органическую фазу промывают насыщенным ЫаНСО3 и насыщенным раствором соли.
После концентрирования органической фазы полученный остаток очищают хроматографией, используя 100% ЕЮАс, получают соединение сххх (280 мг, 85,9%).
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связанным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения С\У-ЭС:
Пример 29. Соединения ΌΌ-ΌΕ.
К ЭСМ раствору (6 мл) соединения сxxxν^^^ (400 мг, 0,57 ммоль) добавляют ΌΜΡ реагент (362 мг, 0,85 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и гасят 10% №ь8О3 (водн.) в течение 20 мин. Полученную смесь экстрагируют ΕЮАс. Экстрагированную органическую фазу промывают насыщенным раствором соли, сушат над Мд8О4 и концентрируют, получая желтое масло. Очистка на силикагеле (70% ΕЮАс/гексаны) дает соединение ΌΌ (201 мг, 51%).
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связанным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующее соединение ΌΕ:
- 108 017556
Пример 30. Соединение ΌΕ.
Соединение сххххш (165 мг, 0,24 ммоль) растворяют в ЭСМ (5 мл). К раствору добавляют ΌΜΡ реагент (125 мг, 0,29 ммоль) и перемешивают 1 ч. Реакционную смесь гасят 10% Ыа28Оз и органическую фазу промывают насыщенным ЫаНСО3 и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы полученный остаток очищают хроматографией, используя 70% ЕЮЛс/гексан, получают соединение ΌΕ (108 мг, 65,6%).
Пример 31. Соединения Ό6-Ό1.
К раствору соединения сП (0,350 г, 0,516 ммоль) в ЭСМ (15 мл), охлажденному на ледяной бане, добавляют ΌΜΡ реагент (0,281 г, 0,671 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, затем гасят 10% раствором №ь8О3 и перемешивают в течение 20 мин. Полученную смесь экстрагируют Όί'Μ (3х20 мл) и органический экстракт сушат ^дЗОД После фильтрования с целью удаления Μд8О4, фильтрат концентрируют и очищают хроматографией на колонке (70% этилацетат/гексаны), получая конечное соединение ΌΟ (0,265 г, 76%) в виде белого твердого вещества.
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связан ным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения ΌΗ-Ό1:
Пример 32. Соединения ΌΚ-ΌΝ.
Όί’Μ раствор соединения с1х (108 мг, 0,123 ммоль) обрабатывают ΌΜΡ реагентом (78 мг, 0,185 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч реакционную смесь разбавляют Е1ОЛс (50 мл) и затем гасят 10% №138О3. После перемешивания в течение 30 мин органическую фазу отделяют и промывают NаΗСО3 и насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (80% ЕЮЛс/гексан), что дает соединение ΌΚ (84 мг, 78%)
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связан ным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения ΌΕ-ΌΝ
- 109 017556
; и
Пример 33. Соединения ЭО-Э8.
ЕЮН раствор (10 мл) соединения Ηχίί (174 мг, 0,189 ммоль) гидрируют, используя Рб/С (30% экв., 60 мг, 10% содержание палладия) в течение 2,5 ч. Затем катализатор отфильтровывают. Полученный фильтрат концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают полупрепаративной хроматографией с обращенной фазой и лиофилизуют, получая соединение ЭО с 70% выходом
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связанным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения ЭР-Э8:
Пример 34. Соединение СА.
Соединение сКш (175 мг, 0,24 ммоль) поглощают ЭСМ (3 мл). К указанному раствору добавляют ЭМР реагент (120 мг, 0,28 ммоль) и перемешивают 1 ч. Реакционную смесь гасят 10% №ь8О3, и промывают насыщенным NаНСΟ3 и насыщенным раствором соли. Очистка 70% Е1ОАс дает соединение СА (134 мг, 75%).
Пример 35. Соединения СУ и ОТ-ЭХ.
К ЭСМ раствору (15 мл) Ηχχίί (290 мг, 0,43 ммоль) добавляют ЭМР реагент (239 мг, 0,56 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч и гасят 10% №ь8О3 в течение 20 мин. Образовавшуюся смесь затем экстрагируют ЕЮАс. Органический слой промывают насы
- 110 017556 щенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (8-100% ЕЮАс/гексан), получая соединение СУ (151 мг, 52%).
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связанным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения ИТ-ЭХ:
Соединение Ιχχχν (1,17 ммоль) поглощают ЭСМ (5 мл). К указанному раствору добавляют ЭМР реагент (545 мг, 1,3 ммоль) и перемешивают 1 ч. Реакционную смесь гасят Р-Ыа28О3 (1,5 ммоль/г полимера) и перемешивают 1 ч. Добавляют Р-ТВЭ полимерный поглотитель* (2,5 ммоль/г полимера) и перемешивают 45 мин. Полученную смесь фильтруют и очищают 50% ЕЮАс, получая соединение ΌΥ (440 мг, 50,2% за две стадии).
*Ссылка относительно Р-ТВЭ полимерного поглотителя: 1. Раг1о\г с1 а1. Тс1гаНсбгоп. 55, 6785-6796 (1999).
Пример 37. Соединение ΌΖ.
Исходное вещество, соединение Ηχχχχί (94 мг, 0,14 ммоль), растворяют в смеси ТГФ (10 мл) и ЭСМ (20 мл). Затем добавляют ЭМР реагент (118 мг, 0,28 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч реакционную смесь переносят в делительную воронку, содержащую Ότι 8ο1ν ТГФ (120 мл). Реакционную смесь промывают 10% №ь8О3 (50 мл) и затем насыщенным раствором соли (75 мл). Затем органический слой отделяют, сушат над Мд8О4 и растворитель удаляют при пониженном давлении. После хроматографии (силикагель: элюирование смесью 50% Ότι 8ο1ν ТГФ/ЕЮАс и затем 4% МеОН/ТГФ), фракции анализируют МС. Соответствующие фракции лиофилизуют, получая соединение ΌΖ (38,8 мг, 41%).
Пример 38. Соединения ЕА-ЕВ.
Исходное соединение Πχχχχν (185 мг, 0,26 ммоль) растворяют в ТГФ (20 мл). Затем добавляют
- 111 017556
ΌΜΡ реагент (219 мг, 0,52 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч ТСХ свидетельствует о завершении превращения в кетон (5% МеОН/ТГФ). Реакционную смесь переносят в делительную воронку, содержащую Ότι δοϊν ТГФ (120 мл). Реакционную смесь промывают 10% №ь8О3 (50 мл) и затем насыщенным раствором соли (75 мл). Затем органический слой отделяют, сушат над Мд8О4 и растворитель удаляют при пониженном давлении, получая остаток, который очищают хроматографией (силикагель: элюирование смесью 50% Ότι δοϊν ТГФ/ЕЮАс и затем 4% МеОН/ТГФ), и фракции контролируют по УФ и МС. Подходящие фракции лиофилизуют, получая соединение ЕА (159 мг, 88%).
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связанным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующее соединение ЕВ:
Пример 39. Соединения ЕС-ΕΌ.
К раствору соединения Οχχχχνίίί (0,341 г, 0,503 ммоль) в ЭСМ (15 мл), охлажденному на ледяной бане, добавляют ΌΜΡ реагент (0,277 г, 0,654 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, затем гасят 10% раствором №138О3, и перемешивают в течение 20 мин. Полученную смесь экстрагируют ЭСМ (3x20 мл) и органический экстракт сушат (Мд8О4). После фильтрования с целью удаления Мд8О4 фильтрат концентрируют и очищают хроматографией на колонке (70% ЕЮАс/гексан), получая соединение ЕС (0,183 г, 54%) в виде белого твердого вещества.
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связанным с получением его промежуточного соединения, но используя соответствующие исходные вещества, получают следующее соединение ΕΌ:
Пример 40. Соединения ЕЕ-ЕС.
Соединение ссп (290 мг, 0,37 ммоль) поглощают ЭСМ (5 мл). К указанному раствору добавляют ЭМР реагент (175 мг, 0,41 ммоль) и перемешивают 1 ч. Реакционную смесь гасят Р-Ыа28О3 (1,5 ммоль/г полимера) и перемешивают 1 ч. Погашенный ЭМР реагент поглощают Ρ-ΤΒΌ (2,5 ммоль/г полимера) и перемешивают 1 ч. Полученную смесь фильтруют и промывают ЭСМ, прежде чем сконцентрировать до остаточного продукта. Полученный остаток очищают 50% ЕЮАс/Гексан, получая соединение ЕЕ (440 мг, 28%).
Следуя указанному выше способу получения приведенного выше соединения и способам, связанным с получением его промежуточного соединения, но, используя соответствующие исходные вещества, получают следующие соединения ЕЕ-ЕС:
- 112 017556
К ЭСМ раствору (3 мл) соединения ссш (140 мг, 0,2 ммоль) добавляют ЭМР реагент (133 мг, 0,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и гасят 10% №38О3 (водн.) в течение 20 мин. Полученную смесь экстрагируют ЕЮАс. Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат над Мд8О4, концентрируют до желтого масла, которое очищают на силикагеле (70% ЕЮАс/гексан), и затем лиофилизуют, получая соединение ЕН (50 мг, 38%).
Пример 42. Соединение ЕЕ
Соединение 1хххш (520 мг, 1 ммоль) поглощают ЭСМ (5 мл). К указанному выше раствору добавляют РуВОР (624 мг, 1,2 ммоль) и перемешивают 5 мин. Соединение сбтш (300 мг, 1,2 ммоль) в ТГФ (5 мл) добавляют по каплям к указанному раствору, с последующим добавлением 01РЕА (0,22 мл, 1,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи в атмосфере азота. По прошествии указанного времени реакционную смесь разбавляют ЕЮАс, промывают насыщенным NаНСО3 и насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат Мд8О4, фильтруют и концентрируют, получая неочищенный промежуточный продукт сочетания сб1х.
Промежуточное соединение сб1х (~1 ммоль) поглощают ЭСМ (10 мл). К полученному раствору добавляют периодинан Десс-Мартина (466 мг, 1,1 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре реакционную смесь гасят полимерно-связанным №138О3 (740 мг, 1,5 ммоль ЭМР/г полимера) и перемешивают 45 мин. Затем реакционную смесь очищают от примесей с помощью полимера с полимерносвязанным ТВЭ (440 мг, 2,5 ммоль ЭМР/г полимера). Полученную смесь перемешивают 45 мин и затем фильтруют. Очистку выполняют в 5% ЕЮН/ЕЮАс, получая соединение Е1 (245 мг, 32% за 2 стадии). Литературная ссылка по методике обработки может быть найдена в Те1га11ебгог1 55 (1999) 67856796.
Пример 43. Соединение ЕЙ.
Промежуточное соединение сбтп (415 мг, 0,59 ммоль) поглощают ЭСМ (10 мл) и ТГФ (10 мл). Добавляют трет-ВиОН (300 мкл) с последующим добавлением периодинана Десс-Мартина (750 мг, 1,77 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 50 мин и затем гасят Р-Ыа28О3 (1,5 ммоль ЭМР/г полимера). После перемешивания в течение 20 мин при комнатной температуре реакционную смесь очищают от примесей с помощью Р-ΊΒΌ (2,5 ммоль ЭМР/г полимера). После перемешивания в течение 1 ч полученную смесь фильтруют и концентрируют. Продукт очищают хроматографией на силикагеле (50-70% ЕЮАс/гексан), получая соединение ЕN (220 мг, 53%).
В приведенной ниже табл. 1 приведены масс-спектральные [М], полученные для перечисленных соединений.
- 113 017556
Пример Найденная масса
А 733.3
В 747.2
С 657.2
ϋ 769.4
Е 733.4
Р 625.4
а 639.3
и 661.4
I 643.4
1 707.3
к 641.3
ъ 689.3
м 639.3
N 639.4
О 731.4
Р 687.4
о 653.4
в 701.4
8 639.3
Т 747.1
и 655.4
V 653.4
ν 703.4
X 661.3
Υ 647.3
ζ 663.3
АА 667.4
АВ 711.4
АС 725.4
АО 647.3
АЕ 779.4
АР 689.3
АО 671.4
АК 806.4
АН 687.5
ΑΙ 735.4
АГ 736.5
АМ 870.4
ΑΝ 813.3
АР 724.4
АО 653.4
АК 628.2
ΑΨ 642.2
АХ 614.2
ΑΥ 628.3
ВО 570.3
ВЕ 520.2
ВР 534.3
ВО 5843
ви 890.3
ВУ 685.4
вх 695.3
ΒΥ 697.3
ΒΖ 787.4
- 114 017556
СА СВ сс со СЕ СН а С1 СК СЕ СМ сы со СР со СК ст С8
СУ СУ сх СУ сг ВА вв ОС вв ВЕ
ВР во вн 01 ш вк ЛЬ вм ΏΝ ЛО ВР ВТ ли ον ОТУ лх ЛУ ΒΖ ЕА ЕВ ЕС ЕВ ЕЕ ЕЕ во ЕН ΕΙ ΕΪ ЕК ЕЬ ЕМ ΕΝ
ЕО ЕР ЕО ЕК Е8 ЕТ Εϋ БУ Е1У ЕХ ЕУ ΕΖ ЕВ ГС ЕВ ЕЕ РЕ ГС
701.3
669.4
733.5
643.3
653.5
749.4
653.3
717.5
683.4
669.3 6753
717.2
653.3 6833 6693
675.2 661.8 6393
7093 7433 6953
665.2 6813 6953 7013 6733 6933
757.4
682.3 6763
676.2 6923 6053
874.4 9243
924.2 952.7 830 8423
667.4 6393 7403 6843 6783 7493 6853 6493 7003
702.3 7303 7753 7493 7223 6653
796.4 7443 7303 7303
757.3 7033
7153
679.2 6513 7153 6683 7323 7433 6833
750.4
786.4 7443
780.4
693.4 6553 6553
774.4 6813 6673
- 115 017556
В табл. 2 приведены масс-спектры высокого разрешения (ВРМС) для следующих соединений. Таблица 2
Пример Молекулярная формула (М+1) Рассчитанный М3 (М+1) Найденная масса (М+1)
Ь С37Н52ЮО6 690.3979 690.3986
м СЗЗН5С№О6 640.3822 640.3822
Ζ С32Н48РЖ7О6 664.3634 664.3627
АВ С36Н48Е2М7Об 712.3634 712.3649
СЕ С34Н52М7О6 654.3979 654.3967
ΕΝ С35Н52К7О6Р2 704.3947 704.3945
ЕК €37Η63Ν6Ο88 751.4428 750.4350 (М)
ЕС 036Η59Ν6Ο8 703.4395 703.4382
СА С35Н50К7О6Г2 702.3790 702.3801
ΕΖ Ο40Η55Ν8Ο6Ε2 781.4213 781.4196
Εϋ С36Н52Н7О6Г2 716.3947 716.3929
СУ 035Η52Ν706 666.3979 666.3966
вх Ο37Η58Ν7Ο6 696.4448 696.4432
8 СЗЗН50Ч7О6 640.3823 640.3831
Е1 040Η57Ν806 745.4401 745.4417
ЕМ Ο35Η54Ν7Ο6 668.4136 668.4139
не обозначен €41Η58Ν7Ο6 744.4448 744.4691
Пример полупродукта 1. Соединение ίί.
К этанольному раствору (40 мл) соединения ί (8,1 г, 24,4 ммоль) добавляют NаВН4
(924 мг, 24,4 ммоль) при -10°С. Реакционную смесь перемешивают при указанной температуре в течение 30 мин и затем гасят АсОН (3 мл). Реакционную смесь разбавляют ЕЮЛс (250 мл) и промывают NаНСОз и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (50% ЕЮЛс/гексан), что дает 7,85 г (97%) соединения ίί.
Пример полупродукта 2. Соединение ίίί.
К ТГФ раствору (70 мл) соединения ίί (4,48 г, 13,4 ммоль) добавляют при 0°С NаН (699 мг, 60%, 17,42 ммоль). После перемешивания при указанной температуре в течение 40 мин добавляют чистый Ме1 (1,25 мл, 20,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. По прошествии указанного времени реакционную смесь осторожно гасят насыщенным раствором ΝΉ4α при 0°С. Реакционную смесь экстрагируют ЕьО и ЕЮЛс. Органический слой промывают водой, насыщенным раствором соли и сушат №28О4. Полученный таким образом органический слой концентрируют в вакууме, что дает ксантогенат, соединение ίίί.
Ксантогенат, соединение ίίί (~13,4 ммоль), растворяют в толуоле (100 мл). К указанному раствору добавляют ΛIΒN (216 мг, 1,34 ммоль). Образовавшийся раствор дегазируют сухим азотом и затем обрабатывают Н-Ви38пН (5,4 мл, 20,1 ммоль). Реакционную смесь нагревают до 90°С в течение 3 ч. По прошествии указанного времени реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (15-20% ЕЮЛс/гексан), что дает 2,8 г (66% в расчете на соединение ίί) соединения ίν.
- 116 017556
К этанольному раствору (21 мл) соединения ίν (1 г, 3,15 ммоль) добавляют Рб^НЦ/С (655 мг, 20%, 0,95 ммоль) в токе азота. Полученную реакционную смесь гидрируют стандартным способом (1,5 атм). Через 5 ч источник гидрирования удаляют и реакционную смесь фильтруют. Фильтраты концентрируют в вакууме, что дает свободный амин, соединение ν.
Пример полупродукта 5. Соединение νί.
К ЭСМ раствору (10 мл) соединения νίί (629 мг, 1,95 ммоль) добавляют,
V* при температуре, близкой к комнатной, ΗΟАΐ (265 мг, 1,95 ммоль) и затем 1 М раствор ОСС в ЭСМ (1,95 мл, 1,95 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин к ΗΟАΐ-активированной кислоте добавляют ЭСМ раствор (3 мл) соединения ν (1,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. По прошествии указанного времени реакционную смесь фильтруют через целит. Фильтраты разбавляют ЕЮАс (75 мл) и промывают водой и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (70-80% ЕЮАс/гексан), получая 620 мг (85%) соединения νί.
Пример полупродукта 6. Соединение νίίί.
К этанольному раствору (10 мл) соединения νί (615 мг, 1,26 ммоль) добавляют 2н. водный раствор NаΟΗ (1,26 мл, 2,52 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре, близкой к комнатной, и затем подкисляют до рН 3, используя Оо\гсх кислотные смолы. Твердые вещества отфильтровывают и фильтраты концентрируют в вакууме, получая остаток, который вновь растворяют в 1:1 СΗзСN/Η2Ο. Полученный раствор лиофилизуют, что дает 495 мг (85%) соединения νίίί.
Пример полупродукта 7. Соединение ίχ.
К ЭСМ раствору (10 мл) соединения νίίί (230 мг, 0,5 ммоль) добавляют РуВор (417 мг, 0,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 30 мин. К указанному раствору добавляют затем ТГФ раствор (5,25 мл) соединения х (263 мг, 0,75 ммоль)
с последующим добавлением Э1РЕА (0,174 мл, 1 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи и затем гасят водой (30 мл) в течение 30 мин. Реакционную смесь экстрагируют ЕЮАс (100 мл). Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮАс), получая ~400 мг (100%) соединения ίχ.
Пример полупродукта 8. Соединение χί.
К ЭСМ раствору (10 мл) соединения ίχ (396 мг, 0,5 ммоль) добавляют ЭМР реагент (278 мг, 0,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 1 ч и затем гасят 10% Να28Ο3, в течение 30 мин. Реакционную смесь экстрагируют затем ЕЮАс (75 мл) и промывают
- 117 017556 насыщенным раствором соли. Органический слой сушат и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (70% ЕЮАс/гексаны), получая 320 мг (81%) соединения χί.
Пример полупродукта 9. Соединение χίί.
К ЭСМ раствору (10 мл) соединения νίίί (230 мг, 0,5 ммоль) добавляют РуВор (417 мг, 0,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 30 мин. К указанному раствору добавляют ТГФ раствор (3,5 мл) соединения χίίί (140 мг, 0,75 ммоль)
с последующим добавлением 01РЕА (0,174 мл, 1 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи и затем гасят водой (30 мл) в течение 30 мин. Реакционную смесь экстрагируют ЕЮАс (75 мл). Органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮАс), получая с количественным выходом соединение χίί.
Пример полупродукта 10. Соединение ί'.
К метанольному раствору (30 мл) соединения ί (5 г, 15,1 ммоль) добавляют (ВОС)2О (3,3 г, 15,1 ммоль) и Н2/Рб(ОН)2/С (1,6 г, 10% Рб содержание). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 2 ч и затем фильтруют через целит дважды. Слой целита промывают ЭСМ. Объединенные фильтраты концентрируют в вакууме, получая маслянистый остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (40% ЕЮАс/гексаны), получая 3,8 г (85%) соединения ί'.
Пример полупродукта 11. Соединение И'.
К метанольному раствору (111 мл) соединения 1' (3,7 г, 12,5 ммоль) добавляют при 0°С ЫаВН4 (0,805 г, 21 ммоль). После перемешивания при 0°С в течение 2,5 ч, реакционный растворитель медленно упаривают в вакууме, получая остаток, который разбавляют ЕЮАс. Полученный раствор затем дважды промывают водой. Водный слой экстрагируют ЕЮАс. Объединенные органические слои сушат Мд8О4, фильтруют и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией, что дает 3,76 г (99%) соединения И'.
Пример полупродукта 12. Соединение χίν.
К ЭСМ раствору (180 мл) соединения ίί' (3,76 г, 12,3 ммоль) добавляют при 0°С ОМАР (5 г, 4 0,1 ммоль) и затем Т£2О (4 мл, 23,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 0°С в течение 1 ч и при температуре, близкой к комнатной, еще 1,5 ч. Реакционную смесь промывают затем дважды 5% №1НСО3 и сушат Мд8О4. Полученный таким образом органический слой концентрируют в вакууме, что дает неочищенный трифлат. Полученный трифлат (2,7 г, 6 ммоль) растворяют в ЭСМ (120 мл). К указанному раствору добавляют ОМАР (2,5 г, 20,5 ммоль). Полученную реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение ночи. По прошествии указанного времени реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и промывают дважды 5% №1НСО3. Реакционную смесь сушат Мд8О4, фильтруют и концентрируют в вакууме, получая коричневатый маслянистый остаток, который очищают (1% МсОН/ЭСМ). получая 500 мг (30%) соединения χίν.
- 118 017556
Пример полупродукта 13. Соединение χν.
Соединение χίν (500 мг, 1,8 ммоль) растворяют в 4н. НС1 в диоксане (6,75 мл). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, ~4 ч. По прошествии указанного времени, растворитель удаляют в вакууме. Полученный остаток растирают дважды с диэтиловым эфиром, получая почти с количественным выходом НС1-соль соединения χν.
Пример полупродукта 14. Соединение χνί.
К ТГФ раствору (7 мл) соединения νίί (579 мг, 1,8 ммоль) добавляют НОЛ1 (245 мг, 1,8 ммоль) и ОСС (1,8 мл, 1М в ЭСМ). Получают суспензию. После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 15 мин к указанной выше суспензии добавляют ТГФ раствор (6 мл) соединения χν (1,8 ммоль) и ОГРЕЛ (0,63 мл, 3,6 ммоль). Затем добавляют дополнительное количество ОГРЕЛ (0,8 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре, близкой к комнатной. По прошествии указанного времени полученные таким образом белые твердые вещества отфильтровывают. Белые твердые вещества промывают ТГФ. Объединенные фильтраты и промывные воды концентрируют в вакууме, получая неочищенный продукт, который очищают хроматографией на силикагеле (100% ЕЮЛс), что дает 665 мг (76%) соединения χνί.
Пример полупродукта 15. Соединение χνίί.
К этанольному раствору (8 мл) 7 (665 мг, 1,37 ммоль) добавляют 1н. водный ЫаОН (2,4 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре, близкой к комнатной, и затем подкисляют до рН 3, используя Όο\\όχ кислотные смолы. Твердые вещества фильтруют. Полученные фильтраты концентрируют в вакууме, получая бледно-желтый остаток, который вновь растворяют в 1:1 СН3СЫ/Н2О и лиофилизуют, получая 467 мг (74%) соединения χνίί.
Пример полупродукта 16. Соединение χίχ.
Όί’Μ раствор (4 мл) соединения χνίί (100 мг, 0,22 ммоль) обрабатывают РуВор (207 мг, 0,4 ммоль) при температуре, близкой к комнатной, в течение 20 мин. По прошествии указанного времени полученный раствор обрабатывают ТГФ раствором (2,6 мл) соединения χνίίί (65 мг, 0,32 ммоль).
и затем ОГРЕЛ (0,076 мл). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 7 ч реакционную смесь гасят водой. Реакционную смесь разбавляют ОСМ (60 мл). Органический слой отделяют, промывают дважды насыщенным раствором соли и сушат Мд8О4. После фильтрования, концентрирования и хроматографии на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮЛс) получают 148 мг (~100%) соединения χίχ.
Пример полупродукта 17. Соединение хх.
К ТГФ раствору (100 мл) Ы-СБх-Б-валина (14,4 г, 57,2 ммоль) добавляют НОВТ (7,72 г, 57,2 ммоль) и ЕОС'Ч (10,98 г, 57,2 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 20 мин, к полученному раствору добавляют ТГФ раствор (50 мл), содержащий гидрохлорид метилового
- 119 017556 эфира трет-Ь-лейцина (10,4 г, 57,2 ммоль) и ЭГРЕА (11,9 мл, 68,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. После стандартной водной обработки и хроматографии на силикагеле (30% ЕЮАс/гексаны) получают 14 г (64%) соединения хх.
Пример полупродукта 18. Соединение χχί.
К метанольному раствору (80 мл) хх (6,71 г, 17,7 ммоль) добавляют (в токе Ν2) Рб/С (1,88 г, 10% Рб содержание). Содержимое сосуда гидрируют (1 атм Н2) в течение ночи при температуре, близкой к комнатной. По прошествии указанного времени реакционную смесь фильтруют через слой целита и концентрируют в вакууме, что дает соответствующий неочищенный свободный амин для следующей стадии. ТГФ раствор указанного амина (~17,7 ммоль) добавляют к ТГФ (46 мл) и ДМФ (5 мл) раствору, содержащему 2-пиразинкарбоновую кислоту (2,85 г, 23 ммоль), НоЬЬй (3,12 г, 23 ммоль) и ЕЭС1 (4,41 г, 23 ммоль). К образовавшейся смеси добавляют затем Э1РЕА (3,08 г, 17,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре, близкой к комнатной, и затем гасят водой. Реакционную смесь экстрагируют ЕЮАс. Органический слой промывают насыщенным раствором соли и концентрируют в вакууме, что дает остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (40-50% ЕЮАс/гексан), получая 3,9 г (63%) соединения χχί.
Пример полупродукта 19. Соединение χχίί.
К метанольному раствору (40 мл) соединения χχί (4,67 г, 13,34 ммоль) добавляют 2н. ЫаОН (10 мл, 20 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 2 ч. По истечении указанного времени к реакционной смеси добавляют 2н. ЫаОН (3,3 мл, 6,67 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи, реакционную смесь подкисляют до рН 3, используя кислотную смолу. Реакционную смесь затем фильтруют и фильтраты концентрируют в вакууме, получая остаток, который растворяют в 1:1 СН3СЫ/Н2О для лиофилизации. Получают 4,15 г (93%) соединения χχίί.
Пример полупродукта 20. Соединение χχίίί.
ЭСМ раствор (10 мл) соединения χχίί (917 мг, 2,73 ммоль) обрабатывают НОА1 (371 мг, 2,73 ммоль) и ЭСС (2,73 мл, 1М, 2,73 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин реакционную смесь обрабатывают ТГФ раствором (10 мл) соединения ν (500 мг, 2,73 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи, отфильтровывают белые твердые вещества (мочевину). Фильтраты концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (60-70% ЕЮАс/гексан), что дает 1,06 г (77%) соединения χχίίί.
Пример полупродукта 21. Соединение χχίν.
Этанольный раствор (20 мл) соединения χχίίί (1,06 г, 2,11 ммоль) обрабатывают 2н. ЫаОН (2,11 мл, 4,23 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи, реакционную смесь подкисляют до рН 3 с помощью кислотной смолы. Твердые вещества отфильтровывают. Полученные фильтраты концентрируют в вакууме, что дает остаток, который лиофилизуют, получая ~1 г (100%) соединения χχίν.
Пример полупродукта 22. Соединение χχν.
ЭСМ раствор (10 мл) соединения χχίν (236,7 мг, 0,5 ммоль) обрабатывают РуВор (417 мг, 0,8 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 20 мин, реакционную смесь обрабатывают ДМФ раствором (5,6 мл) соединения χίίί (139,5 мг, 0,75 ммоль) и затем ЭГРЕА
- 120 017556 (0,174 мл, 1 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной в течение 8 ч, реакционную смесь гасят водой и экстрагируют ЕЮАс. Полученный органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮАс), получая ~320 мг (100%) соединения χχν.
Пример полупродукта 23. Соединение χχνί.
ЭСМ раствор (15 мл) соединения χχίν (355 мг, 0,7 5 ммоль) обрабатывают РуВор (622 мг, 1,2 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 20 мин, реакционную смесь обрабатывают ТГФ раствором (10 мл) соединения χχνίί'.
(156 мг, 0,75ммоль) и затем ΌΙΡΕΑ (0,26 мл, 1,5 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи, реакционную смесь гасят водой и экстрагируют ЕЮАс. Полученный органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (2% ЕЮН/ЕЮАс), получая ~400 мг (80%) соединения χχνί.
Пример полупродукта 24. Метил 5-цианопентаноат.
Цианид калия (4 г, 61,44 ммоль) растворяют в 70 мл воды и 200 мл метанола. К раствору добавляют 10 г (51,2 ммоль) метил 5-бромпентаноата и смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют досуха. К остатку добавляют 100 мл ЕЮАс для экстракции продукта. Органическую фазу трижды промывают водой, сушат и концентрируют, получая 5,37 г (74%) метил 5-цианопентаноата в виде масла.
Пример полупродукта 25. Метил 5-тетразол-5-илпентаноат.
Метил 5-цианопентаноат (4,8 г, 34 ммоль) растворяют в толуоле, добавляют триэтиламмонийхлорид (14 г, 102 ммоль) и азид натрия (6,63, 102 ммоль). Смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение ночи. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры, добавляют воду для экстракции (3x100 мл) метил-5-тетразол-5-илпентаноата из органической фазы. К водной фазе добавляют концентрированную НС1 для доведения рН до 2. Продукт экстрагируют из водного раствора с помощью ЕЮАс (3x50 мл). Органические фазы объединяют, сушат и концентрируют, получая 4,25 г (68%) метил 5-тетразол-5-илпентаноата.
Пример полупродукта 26. Метил 5-|П-(1,1-диметилбензил)тетразол-5-ил]пентаноат.
Метил 5-тетразол-5-илпентаноат (4,23 г, 23 ммоль) и трихлоруксусную кислоту (8,69 г, 53 ммоль) растворяют в 50 мл СНСЬ. К раствору добавляют по каплям а-метилстирол (2,72, 23 ммоль) и реакционную смесь оставляют перемешиваться при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс до 200 мл и органический слой промывают 10% водным КОН и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат, концентрируют. Продукт очищают флэш-хроматографией на колонке, получая 6,6 г (95%) метил 5-|П-(1,1-диметилбензил)тетразол-5-ил]пентаноата.
Пример полупродукта 27. 5-|П-(1,1-Диметилбензил)тетразол-5-ил]пентановая кислота.
Метил 5-|П-(1,1-диметилбензил)тетразол-5-ил]пентаноат (6,6 г, 21,8 ммоль) растворяют в метаноле (100 мл) и добавляют 23 мл 1н. водного №ЮН. Смесь перемешивают в течение ночи и концентрируют для удаления метанола. Остаток растворяют в воде (100 мл) и раствор нейтрализуют добавлением эквивалентного количества 1н. водной НС1. Продукт экстрагируют ЕЮАс (3x50 мл). Органическую фазу сушат и концентрируют, получая 4,75 г (75%) 5-|П-(1,1-диметилбензил)тетразол-5-ил]пентановой кислоты.
Пример полупродукта 28. Соединение χχνίίί 5-|П-(1,1-диметилбензил)тетразол-5-ил]пентановую кислоту.
(4,75 г, 16,5 ммоль) растворяют в ЭСМ (100 мл), добавляют 4,8 г (24,8 ммоль) ΕΌΕΙ и 6 мл ΌΙΡΕΑ. К смеси добавляют Ν-гидроксилсукцинимид (3,8 г, 33 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 3 ч при температуре, близкой к комнатной. Смесь разбавляют ЭСМ до 200 мл и раствор трижды промывают водой. Органическую фазу сушат и концентрируют, получая 4,79 г (75%) соединения χχνίίί.
- 121 017556
Пример полупродукта 29. Соединение χχίχ.
Дипептид Н-Уа1-Уа1-ОН (3,22 г, 14,9 ммоль) суспендируют в 50 мл Ν,Ν-диметилформамида (ДМФ) и добавляют 4,75 г (12,42 ммоль) соединения χχνίίί с последующим добавлением 3,4 мл (18,63 ммоль) диизопропилэтиламина (ΌΙΓΕΑ). Смесь нагревают до 40°С и перемешивают в течение ночи. Растворитель упаривают в вакууме. Остаток растворяют в ЕЮАс и промывают 1н. НС1 и насыщенным раствором соли, получая 5,52 г (91%) соединения χχίχ.
Пример полупродукта 30. Соединение ххх.
1,6 г (3,29 ммоль) соединения χχίχ растворяют в 20 мл ЭСМ, добавляют 3,3 мл 1 М раствора ОСС в ТГФ. К смеси добавляют 500 мг (2,73 ммоль) соединения ν. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Смесь разбавляют ЕЮАс до 100 мл и промывают 1н. НС1, NаΗСΟз и насыщенным раствором соли. Очищают хроматографией на колонке (50% ЕЮАс/гексан), получая 1,02 г (58%) соединения ххх.
XXX
Пример полупродукта 31. Соединение χχχί.
Соединение ххх (1,02 г, 1,57 ммоль) растворяют в 10 мл МеОН и добавляют 2 мл 1н. водного №ОН. Смесь перемешивают в течение ночи. Метанол удаляют упариванием и остаток растворяют в воде и нейтрализуют 2 мл НС1. Последующая экстракция ЕЮАс дает 1,00 г (~100%) соединения χχχί.
XXXI
Пример полупродукта 32. Соединение χχχίί.
Соединение χχχί (300 мг, 0,48 ммоль) и РуВор (300 мг, 0,58 ммоль) растворяют в 10 мл ЭСМ. К раствору добавляют соединение х (201 мг, 0,58 ммоль) и затем добавляют Э1РЕА (104 мкл). Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют затем ЕЮАс до 100 мл и промывают дважды 1н. НС1, дважды NаΗСΟз и трижды насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат и концентрируют. Остаток очищают хроматографией на колонке (100% ЕЮАс), получая 450 мг (98%) соединения χχχίί.
Пример полупродукта 33. Соединение χχχίίί.
Соединение χχχίί 360 мг (0,38 ммоль) растворяют в 8 мл ЭСМ и добавляют 240 мг (0,57 ммоль) ЭМР реагента. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 3 ч. Смесь разбавляют ЕЮАс до 50 мл и трижды промывают насыщенным раствором соли. Продукт очищают хрома
- 122 017556 тографией на колонке (25% этанол/ЕЮАс), получая 300 мг (83%) соединения χχχίίί.
Пример полупродукта 34. Соединение χχχίν. К ЭСМ раствору (10 мл) χχχν
(790 мг, 2,80 ммоль) добавляют РуВор (1,7 г, 3,36 ммоль) и НоЬЬй (450 мг, 3,36 ммоль). Образовавшийся раствор охлаждают до 0°С и обрабатывают ЭСМ раствором (3 мл) (8)-а-(4-пиридил)этиламина (410 мг, 3,36 ммоль). Затем добавляют Э1РЕА (0,5 мл, 3,36 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре, близкой к комнатной. По прошествии указанного времени реакционную смесь разбавляют ЕЮАс. Весь объем промывают насыщенным NаНСΟз и насыщенным раствором соли. Полученный таким образом органический слой сушат и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮАс), что дает 630 мг (58%) соединения χχχίν.
XXXIV
Примечание: (8)-а-(4-пиридил)этиламин получают из его соли, Ό-тартрата, путем промывки основанием (1н. №ЮН) и последующей экстракцией Е1ОАс. Степень выделения составляет 89%.
Пример полупродукта 35. Соединение χχχνί.
К метанольному раствору (15 мл) соединения χχχίν (630 мг, 1,64 ммоль) добавляют в атмосфере N Рб/С (150 мг, 10% содержание палладия). Реакционную смесь перемешивают в атмосфере Н2 в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют через слой СеН1е® 521. Фильтраты концентрируют в вакууме, получая 420 мг (~100%) соединения χχχνί.
Пример полупродукта 36. Соединение χχχνίί.
К ЭСМ раствору (3 мл) соединения χχχί (270 мг, 0,43 ммоль) добавляют РуВор (270 мг, 0,52 ммоль). Затем добавляют соединение χχχνί (160 мг, 0,64 ммоль) и Э1РЕА (0,09 мл, 0,52 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. По прошествии указанного времени реакционную смесь разбавляют Е1ОАс и промывают 0,1н. НС1, затем насыщенным №аНСО3 и насыщенным раствором соли. Полученный органический слой сушат и концентрируют, получая соединение χχχνίί (430 мг общей массой) для следующей стадии.
Пример полупродукта 37. Соединение χχχνίίί.
К ЭСМ раствору (3 мл) соединения χχχνίί (370 мг, 0,43 ммоль) добавляют ЭМР реагент (280 мг, 0,65 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 2 ч и затем гасят 10% №ь8О31. После перемешивания в течение 30 мин реакционную смесь экстрагируют ЕЮАс. Органический слой промывают насыщенным NаНСΟз и насыщенным раствором соли. Полученный органический слой сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮАс), что дает 180 мг (49% для 2-стадий) соединения χχχνίίί.
- 123 017556
Пример полупродукта 38. Соединение хххх.
Соединение χχίχ (2,5 г, 5 ммоль) растворяют в 40 мл ЭСМ, к раствору добавляют 5,1 мл 1 М раствора ОСС в ТГФ. К полученной смеси добавляют 1,08 г (3,53 ммоль) соединения χχχίχ. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи.
Смесь разбавляют ΕΐОАс до 100 мл, промывают последовательно 1н. НС1, ЫаНСО3 и насыщенным раствором соли и затем очищают хроматографией на колонке (80% ΕΐОАс/гексан), получая 2,59 г (95%) соединения хххх.
Пример полупродукта 39. Соединение χχχχί.
Соединение хххх (2,59 г, 3,35 ммоль) растворяют в 20 мл МеОН и добавляют 4 мл 1н. водного №1ОН. Смесь перемешивают в течение ночи и затем упаривают на роторном испарителе до получения остатка. Остаток растворяют в воде и нейтрализуют 2 мл НС1. Нейтрализованный раствор затем экстрагируют ΕΐОАс, получая 2,49 г (~100%) соединения χχχχί.
Пример полупродукта 40. Соединение χχχχίί.
Соединение χχχχί (847 мг, 1,16 ммоль) и 724 мг (1,39 ммоль) РуВор растворяют в 10 мл ЭСМ. К раствору добавляют соединение χίίί (260 мг, 1,39 ммоль) с последующим добавлением ΌΙΡΕΛ (209 мкл). Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют затем ΕΐОАс до 100 мл и промывают дважды 1н. НС1, дважды ЫаНСО3 и трижды насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат и концентрируют. Остаток очищают хроматографией на колонке (5% этанол^ЩА^, получая 930 мг (86%) соединения χχχχίί.
χχχχίί
Пример полупродукта 41. Соединение χχχχίίί.
Соединение χχχχίί (350 мг, 0,38 ммоль) растворяют в 10 мл ЭСМ и добавляют 242 мг (0,57 ммоль) ЭМР реагента. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение трех часов. Смесь разбавляют ΕΐОАс до 50 мл и промывают трижды насыщенным раствором соли. Продукт очищают хроматографией на колонке (100% ΕΐОАс), получая 180 мг (51%) соединения χχχχίίί.
- 124 017556
Пример полупродукта 42. Соединение χχχχν.
Н-Уа1-Уа1-ОН (5 г, 23 ммоль) суспендируют в 100 мл ДМФ, добавляют соединение χχχχίν
(8,3 г, 27,6 ммоль) и затем добавляют 6,2 мл (35,5 ммоль) Э1РЕА. Смесь перемешивают при 40°С в течение двух дней. Растворитель удаляют при глубоком вакууме, остаток растворяют в 100 мл ЕЮАс и промывают трижды 1н. НС1 и дважды насыщенным раствором соли. Получают 9,14 г (99%) соединения χχχχν.
χχχχν
Пример полупродукта 43. Соединение χχχχνί.
Соединение χχχχν (2,8 г, 7 ммоль) и 954 мг (7 ммоль) НОА1 растворяют в 100 мл ЭСМ. Добавляют 7 мл 1М ЭСС/ЭСМ. К реакционной смеси добавляют соединение χχχίχ (2,15 г) и реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Смесь концентрируют досуха и остаток растворяют в ЕЮАс и очищают хроматографией на колонке (100% ЕЮАс), получая 4,57 г (95%) соединения χχχχνί.
Пример полупродукта 44. Соединение χχχχνίί.
Соединение χχχχνί (4,57 г, 6,65 ммоль) растворяют в 10 мл ТРА и 10 мл ЭСМ. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 4 ч. Растворитель удаляют в вакууме и остаток растворяют в 50:50 смеси ацетонитрил/вода и лиофилизуют, получая соединение χχχχνίί в виде порошка.
Пример полупродукта 45. Соединение χχχχνίίί.
Соединение χχχχνίί (1 г, 1,59 ммоль) и 990 мг (2,28 ммоль) РуВор растворяют в 20 мл ЭСМ и добавляют 1,6 мл 1М метиламина в ТГФ. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 4 ч. Реакционную смесь разбавляют до 100 мл ЕЮАс и промывают 1н. НС1, №1НСО3 и насыщенным раствором соли. Остаток очищают флэш хроматографией на колонке (10% ЕЮН/ЕЮАс), получая 1 г (98%) соединения χχχχνίίί.
- 125 017556
Пример полупродукта 46. Соединение хххх1х.
Соединение хххх\зп (1 г, 1,55 ммоль) растворяют в 10 мл МеОН и добавляют 2 мл 1н. №1ОН. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Растворитель удаляют упариванием. Остаток растворяют в воде, нейтрализуют и экстрагируют Е1ОЛс, получая 960 мг (98%) соединения хххх1х.
Пример полупродукта 47. Соединение 11.
Соединение хххх1х (315 мг, 0,5 ммоль) и 312 мг (0,6 ммоль) РуВор растворяют в 10 мл Όί'Μ. Добавляют соединение 1 (56 мг, 0,6 ммоль) и 108 мкл ЭРЕЛ.
Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи и разбавляют до 100 мл Е1ОЛс и промывают 1н. НС1, NаΗСО3 и насыщенным раствором соли. Очищают хроматографией на колонке (15% Е1ОН/Е1ОЛс), получая 400 мг (92%) соединения 11.
Пример полупродукта 48. Соединение 1ίί.
Соединение 11 (400 мг, 0,46 ммоль) растворяют в 10 мл Όί’Μ и добавляют 292 мг (0,69 ммоль) ΌΜΡ реагента. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 3 ч. Растворитель удаляют упариванием и продукт очищают ОФ-ВЭЖХ, получая 130 мг (32%) соединения 1ίί.
Пример полупродукта 49. Соединение 1ш.
Соединение хххх1х (210 мг, 0,33 ммоль) и 208 мг (0,4 ммоль) РуВор растворяют в 10 мл Όί’Μ. К раствору добавляют соединение хш (154 мг, 0,83 ммоль) с последующим добавлением ОГГЕЛ (72 мкл, 0,4 ммоль). Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют до 100 мл с помощью Е1ОЛс, промывают 1н. НС1, NаΗСО3 и насыщенным раствором соли и затем очищают флэш хроматографией на колонке (10% ЕЮН/ЕЮЛс). получая 250 мг (95%) соединения 1ίίί.
- 126 017556
Пример полупродукта 50. Соединение 1ίν.
Соединение χχχχν (755 мг, 1,88 ммоль) и 255 мг (1,88 ммоль) НОА1 растворяют в 20 мл ЭСМ. Добавляют 1,88 мл 1 М ЭСС/ЭСМ. К реакционной смеси добавляют соединение ν (288 мг) и реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 2 ч. Смесь концентрируют досуха, остаток растворяют в ЕЮАс и очищают хроматографией на колонке (80% ЕЮАс/гексан), получая 800 мг (90%) соединения 1ίν.
Пример полупродукта 51. Соединение 1ν.
Соединение 1ίν (800 мг, 1,41 ммоль) растворяют в 10 мл МеОН и добавляют 2 мл ЫаОН. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Растворитель удаляют в вакууме, остаток растворяют в воде и нейтрализуют 2 мл 1н. НС1. Продукт экстрагируют ЕЮАс. Упаривание экстракционного растворителя дает 760 мг (~100%) 1ν.
Пример полупродукта 52. Соединение 1νίί.
Соединение 1ν (760 мг, 1,41 ммоль) и 880 мг (1,69 ммоль) РуВор растворяют в 5 мл ЭСМ. К раствору добавляют соединение 1νί
νί (530 мг, 2,12 ммоль) и затем добавляют 0,31 мг Э1РЕА. Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют до 100 мл ЕЮАс, промывают 1н. НС1, ЫаНСОз и насыщенным раствором соли, и затем очищают флэш хроматографией на колонке (100% ЕЮАс), получая 870 мг (80%) соединения 1νίί.
Пример полупродукта 53. Соединение 1νίίί.
Соединение 1νίί (350 мг, 0,45 ммоль) растворяют в 5 мл ТРА и 5 мл ЭСМ и смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 3 ч. Растворитель удаляют упариванием и продукт очищают ОФ-ВЭЖХ, получая 220 мг (69%) соединения 1νίίί.
- 127 017556
Пример полупродукта 54. Соединение ϊίχ.
Соединение ϊνίίί (200 мг, 0.28 ммоль) и 218 мг (0,42 ммоль) РуВор растворяют в 5 мл ЭСМ. Добавляют метиламин (0,28 мл 2 М раствора в ТГФ). Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Смесь разбавляют до 100 мл ЕЮАс, промывают 1н. НО, №1НСО3 и насыщенным раствором соли и затем очищают хроматографией на колонке (15% ЕЮН/ЕЮАс), получая 168 мг (79%) ϊίχ.
Пример полупродукта 55. Соединение Н.
Соединение ϊνίίί (200 мг, 0,26 ммоль) растворяют в 4 мл ЭСМ и добавляют 165 мг (0,39 ммоль) ЭМР реагента (реагент). Смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 3 ч. Растворитель удаляют упариванием. Остаток растворяют в смеси 50% ацетонитрил/вода, фильтруют и очищают ОФ-ВЭЖХ, получая 140 мг (70%) соединения ϊχ.
Пример полупродукта 56. Соединение ίί.
ЭСМ (30 мл) и раствор соединения ί (4 г, 12,1 ммоль) в ЕЮН (30 мл), в атмосфере Ν2, охлаждают до -10°С. Добавляют ΝαΒΗ·ι (458 мг, 12,1 ммоль) и раствор перемешивают при -10°С в течение 50 мин. Полная конверсия подтверждается появлением на ТСХ (50% ЕЮАс/гексан) более медленно движущегося пятна. Реакционную смесь осторожно гасят льдом и затем охлажденным насыщенным раствором ΝΗ4Ο (10 мл). Смесь выливают в ЭСМ (300 мл). Органический слой однократно промывают насыщенным раствором ΝΗ4Ο (60 мл) и дважды насыщенным раствором соли (60 мл). Затем органический слой отделяют, сушат над Мд§О4 и концентрируют в вакууме, получая 3,5 г соединения ίί (87%).
Пример полупродукта 57. Соединение ϊχί.
В круглодонной колбе на 250 мл, снабженной Н2 баллоном, этанольный раствор (50 мл) соединения ίί (3,5 г, 10,5 ммоль) гидрируют в стандартных условиях [20% Рб(ОН)2/С (1,47 г, 2,1 ммоль)] в течение 5 ч при температуре, близкой к комнатной. Катализатор отфильтровывают через целит и промывают ЭСМ. Растворитель удаляют затем при пониженном давлении, получая 2 г (96%) соединения ϊχί.
Пример полупродукта 58. Соединение ϊχίί.
В инертной атмосфере раствор соединения ϊχί (200 мг, 1 ммоль), соединения ϊχίίί.
(233 мг, 1,1 ммоль), НОА1 (1-гидрокси-7-азабензотриазола) (156 мг, 1,15 ммоль) в безводном ДМФ (6 мл) перемешивают в течение 20 мин. Затем температуру снижают до 0°С с последующим добавлением О1С (0,18 мл, 1,15 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре, близкой к комнатной. Раствор разбавляют ЕЮАс и затем промывают дважды 1н. НО, дважды насыщенным водным NаΗСО3 и насыщенным раствором соли. Органический слой отделяют, сушат над Мд§О4 и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток ЕЮАс/ОСМ), получая соединение ϊχίί с 45% выходом.
очищают хроматографией (силикагель: 70%
- 128 017556
Пример полупродукта 59. Соединение 1хЮ
Раствор соединения 1хи (777 мг, 2 ммоль) в диоксане (6 мл) и 0,5 М №1ОН (6 мл) перемешивают 5 ч при температуре, близкой к комнатной. Анализ ТСХ (100% ЕЮАс) показывает полноту конверсии до вещества, дающего остающееся на старте пятно. Реакционную смесь охлаждают на ледяной бане с последующим добавлением 1н. НС1 (4 мл). Затем добавляют твердый №С1 и всю смесь дважды экстрагируют ЕЮАс (2х 150 мл). Затем органические экстракты объединяют, сушат над МдЗО4 и растворитель удаляют при пониженном давлении, получая соединение 1\ίν с выходом 92%.
Пример полупродукта 60. Соединение 1хт.
В инертной атмосфере раствор соединения х (203 мг, 0,58 ммоль), соединения 1,\ίν (276 мг, 0,775 ммоль), НОА1 (1-гидрокси-7-азабензотриазола) (126 мг, 0,93 ммоль) в безводном ДМФ (6 мл) перемешивают в течение 20 мин. Затем температуру снижают до 0°С с последующим добавлением Э1С (0,14 мл, 0,93 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре, близкой к комнатной. Раствор разбавляют ЕЮАс и затем промывают дважды 1н. НС1, дважды насыщенным водным NаНСО3 и насыщенным раствором соли. Органический слой отделяют, сушат над МдЗО4 и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают хроматографией (силикагель: 50% ЕЮАс/ЭСМ - 80:19:1 ЕЮАС/ЭСМ/МеОН), получая соединение 1ху с выходом 62%.
Пример полупродукта 61. Соединение 1\νί.
В инертной атмосфере к раствору соединения 1ху (287 мг, 0,42 ммоль) в безводном ЭСМ (15 мл) добавляют ЭМР реагент (605 мг, 1,43 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при температуре, близкой к комнатной. (Примечаниеудвоенные количество ЭМР реагента и реакционное время являются гарантией того, что обе спиртовые группы полностью окисляются до соответствующих кетогрупп). Анализ ТСХ (силикагель: 2% МеОН/ЕЮАс) свидетельствует о полном превращении в более неподвижный продукт. Реакционную смесь разбавляют ЭСМ (150 мл) и затем промывают дважды 10% водным раствором сульфита натрия (2х50 мл), дважды насыщенным водным NаНСО3 и насыщенным раствором соли. Органический слой отделяют, сушат над МдЗО4 и растворитель удаляют при пониженном давлении. Остаток очищают хроматографией (силикагель: 50% ЕЮАс/ОСМ - 80:19:1 ЕЮАс/ЭСМ/ МеОН), получая соединение 1\νί с выходом 77%.
Пример полупродукта 62. Соединение 1,\νίί.
К ЭСМ раствору (60 мл) Ь-3-фенилмолочной кислоты (2 г, 12 ммоль) добавляют РуВОР (7,5 г, 14,4 ммоль). К указанному раствору добавляют ЭСМ раствор (20 мл), содержащий НС1-метиловый эфир Ьвалина (2,4 г, 14,4 ммоль) и 01РЕА (2,6 мл, 14,4 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре, близкой к комнатной. По прошествии указанного времени, реакционную смесь разбавляют ЕЮАс (30 мл), промывают NаНСО3 (30 мл) и насыщенным раствором соли (15 мл). Органический слой сушат над ^^О^ фильтруют и концентрируют. Очистка, осуществляемая в 50% ЕЮАс/гексан на силикагеле, дает 2,97 г (89%) соединения 1,\νίί.
Пример полупродукта 63. Соединение 1,\νίίί.
Соединение 1хтп (2,97 г, 10,6 ммоль) поглощают ЭСМ (50 мл) и охлаждают на ледяной бане. К указанному раствору добавляют ТВЗС1 (2,1 г, 13,8 ммоль) с последующим добавлением имидазола (0,94 г,
- 129 017556
13,8 ммоль). Образовавшийся раствор перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют затем ЕЮАс (50 мл), промывают NаΗСΟз и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат над Να28Ο4, фильтруют и концентрируют. Очистка, осуществляемая в 20% ЕЮАс/гексан на силикагеле, дает 3,79 г (90%) соединения Ιχνίίί.
Пример полупродукта 64. Соединение Ιχίχ.
К метанольному (50 мл) раствору соединения Ιχνίίί (3,78 г, 9,6 ммоль) добавляют 1н. водный NаΟΗ (14,4 мл, 14,4 ммоль). Образовавшийся раствор перемешивают в течение ночи. Растворитель частично удаляют в вакууме. рН реакционной смеси снижают затем до 3, используя водный раствор 1н. НС1. Раствор разбавляют ЕЮАс и насыщенным раствором соли. Требуемый продукт экстрагируют ЕЮАс (3х 50 мл). Органические слои объединяют, сушат над Να28Ο4, фильтруют и концентрируют, получая 3,5 г (96%) соединения Ιχίχ.
Пример полупродукта 65. Соединение 1хх.
К ЭСМ (15 мл) раствору, содержащему соединение Ιχίχ (1,1 г, 2,9 ммоль), добавляют ΗΟАΐ (0,44 г, 3,2 ммоль) с последующим добавлением 1 М раствора ОСС (3,2 мл, 3,2 ммоль) в ЭСМ. После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 20 мин, добавляют раствор соединения χχχίχ (970 мг, 3,2 ммоль) в ЭСМ (15 мл). Полученную реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Затем реакционную смесь разбавляют ЕЮАс (30 мл), фильтруют через рыхлый слой силикагеля, промывают 0,1н. НС1, NаΗСΟз и насыщенный раствором соли. Органический слой сушат над Να28Ο4, фильтруют и концентрируют в вакууме. Очистку осуществляют в 50% ЕЮАс/гексан на силикагеле, получая 1,5 г (77%) соединения 1хх.
Пример полупродукта 66. Соединение 1χχί.
К метанольному раствору (30 мл) соединения хх (1,5 г, 2,4 ммоль) добавляют 1н. водный NаΟΗ (3,6 мл, 3,6 ммоль). Образовавшийся раствор перемешивают в течение ночи. По прошествии указанного времени растворитель частично удаляют и рН реакционной смеси доводят до 3, используя 1н. водный НС1.
Реакционную смесь затем разбавляют ЕЮАс (50 мл) и насыщенным раствором соли (20 мл). Водный слой экстрагируют ЕЮАс (3х 50 мл). Органические слои объединяют, сушат над Να28Ο4, фильтруют и концентрируют, что дает 1,3 г (92%) соединения 1χχί.
Пример полупродукта 67. Соединение 1χχίί.
К раствору ЭСМ (2 мл), содержащему соединение 1χχί (180 мг, 0,28 ммоль), добавляют РуВОР (17 5 мг, 0,34 ммоль) и Э1РЕА (0,06 мл, 0,34 ммоль), затем ЭСМ раствор (3 мл) соединения х (150 мг, 0,41 ммоль). Образовавшийся раствор перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь затем разбавляют ЕЮАс (30 мл), промывают NаΗСΟз и насыщенным раствором соли.
Органический слой сушат над Να28Ο4, фильтруют и концентрируют.
Очистку осуществляют в 100% ЕЮАс на силикагеле, получая 270 мг (98%) соединения 1χχίί.
- 130 017556
Пример полупродукта 68. Соединение 1ххш.
К ЭСМ (3 мл) раствору соединения 1χχίί (270 мг, 0,27 ммоль) добавляют ΌΜΡ реагент (140 мг, 0,33 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 1,5 ч реакционную смесь гасят 10% №ь8О3 (10 мл). Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс (30 мл) и перемешивают 10 мин. Органический слой промывают NаНСΟ3 и насыщенным раствором соли. Органический слой сушат над №28О4, фильтруют и концентрируют. Очистку осуществляют в 60% ЕЮАс/гексан, получая 150 мг (56%) соединения 1χχίίί.
Пример полупродукта 69. Соединение 1χί.
К этанольному раствору (50 мл) соединения и (3,5 г, 10,5 ммоль) добавляют в токе азота Рб(ОН)2С (1,47 г, 20% Ρά содержание, 2,1 ммоль). Реакционную смесь гидрируют при давлении 1 атм. По окончанию гидрирования катализаторы фильтруют через рыхлый слой целита и промывают дихлорметаном. Фильтраты концентрируют в вакууме, получая 2 г (96%) соединения 1χί.
Пример полупродукта 70. Соединение 1χχίν.
К ДМФ раствору (60 мл) соединения νίί (9,1 г, 28,2 ммоль) добавляют НОА1 (4 г, 29,4 ммоль) и 1,3дииизопропилкарбодиимид (3,7 г, 29,4 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 30 мин, к указанному выше раствору добавляют ДМФ раствор (10 мл) соединения 1χί (5,1 г, 25,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. По прошествии указанного времени белые твердые вещества отфильтровывают. Фильтраты концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле, получая 9,5 г (67%) соединения 1χχίν.
Пример полупродукта 71. Соединение 1χχν.
К раствору соединения 1χχίν (1,5 г, 3 ммоль) в безводном ТГФ (25 мл) добавляют ΞΗΡι^Ν (0,78 мл, 4,5 ммоль) при температуре, близкой к комнатной. Смесь охлаждают до 0°С и добавляют по каплям МОМС1 (1,5 мл, 19,7 ммоль). Реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. Затем раствор разбавляют диэтиловым эфиром и промывают водой (3 раза). Водные слои дополнительно экстрагируют диэтиловым эфиром и все органические слои сушат над Мд§О4, затем концентрируют, получая желтое масло. Требуемый изомер соединения 1χχν
выделяют хроматографией на силикагеле (ЕЮАс/гексан 5/2) с 40% выходом при полном разделении диастереомеров.
Пример полупродукта 72. Соединение 1χχνί.
К раствору соединения 1χχν (502 мг, 0,9 ммоль) в Е1ОН (5 мл) добавляют по каплям 2н. водный №ОН (0,9 мл, 1,8 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь оставляют нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи. После завершения омыления раствор подкисляют до рН 3 с помощью ^ο\νеχ 50ν8Χ-200 кислотной смолы. Твердые вещества отфильтровывают и полученный фильтрат концентрируют в вакууме, получая маслянистый остаток, который лиофилизуют, что дает 370 мг (80%) соединения 1χχνί.
Пример полупродукта 73. Соединение 1χχνίί.
Дихлорметановый раствор (4 мл) соединения 1χχνί (110 мг, 0,21 ммоль) обрабатывают РуВОР (200
- 131 017556 мг, 0,38 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 30 мин, в реакционную смесь загружают ТГФ раствор (3,2 мл) соединения χίίί (60 мг, 0,32 ммоль) и затем Е!1Рг2Ы. После перемешивания в течение ночи при температуре, близкой к комнатной, реакционную смесь гасят водой и экстрагируют ЕЮЛс. Полученный органический слой промывают насыщенным раствором соли и сушат над Мд§О4, затем концентрируют до желтого масла. Очистка хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮЛс) дает 143 мг (100%) соединения Ιχχνίί.
Пример полупродукта 74. Соединение Ιχχνίίί.
К ТГФ раствору (50 мл) Н-СБд-ОН (5 г, 19,4 ммоль) добавляют НОВ! (2,63 г, 19,4 ммоль) и ЕОСГ (3,72 г, 19,4 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 20 мин, к указанному выше раствору добавляют ТГФ (19 мл) и ДМФ (10 мл) раствор, содержащий гидрохлорид метилового эфира трет-Ь-лейцина (19,4 ммоль) и ОГРЕЛ (6,75 мл, 38,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. Стандартная водная обработка и хроматография на силикагеле (15-20% ЕЮЛс/гексаны) дают 2,27 г (30%) соединения Ιχχνίίί.
Пример полупродукта 75. Соединение 1χχίχ.
К ТГФ раствору (12 мл) соединения 1χχνίίί (2,27 г, 5,91 ммоль) добавляют 4н. раствор НС1 в диоксане (7,38 мл, 29,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. По прошествии указанного времени растворитель удаляют при пониженном давлении, получая соединение 1χχίχ, которое используют непосредственно в последующей реакции.
Пример полупродукта 76. Соединение 1χχχ.
К ТГФ раствору соединения 1χχίχ (5,9 ммоль) добавляют ТГФ (20 мл) раствор, содержащий 2пиразинкарбоновую кислоту (878 мг, 7,08 ммоль), НОВ! (957 мг, 7,08 ммоль) и ЕОСГ (1,36 г, 7,08 ммоль). К образовавшейся смеси затем добавляют ОГРЕЛ (2,05 мл, 11,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре, близкой к комнатной, и затем гасят водой. Реакционную смесь экстрагируют Е!ОАс. Органический слой промывают насыщенным раствором соли и концентрируют в вакууме, что дает остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (40-50% Е!ОАс/гексаны), получая 1г (36%) соединения 1χχχ.
Пример полупродукта 77. Соединение 1χχχί.
К метанольному раствору (20 мл) соединения 1χχχ (1 г, 2,56 ммоль) добавляют 2н. ЫаОН (3,2 мл, 6,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. По прошествии указанного времени, реакционную смесь подкисляют до рН 3, используя 5н. НС1. Реакционную смесь разбавляют ЕЮЛс (75 мл) и промывают водой и насыщенным раствором соли. Полученный таким образом органический слой сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который растворяют в 1:1 СН3СЫ/Н2О для лиофилизации. Всего получают ~1 г (100%) соединения 1χχχί.
Пример полупродукта 78. Соединение Ιχχχίί.
Дихлорметановый раствор (10 мл) соединения 1χχχί (2,56 ммоль) обрабатывают НОА! (348 мг, 2,56
- 132 017556 ммоль) и ОСС (2,56 мл, 1М, 2,56 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин реакционную смесь обрабатывают ТГФ раствором (5 мл) соединения ν (2,56 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи, белые твердые вещества (мочевину) удаляют фильтрованием. Фильтраты концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле, что дает 1,4 г (100%) соединения 1χχχίί.
Пример полупродукта 79. Соединение 1χχχίίί.
Этанольный раствор (15 мл) соединения 1χχχίί (1,4 г, 2,58 ммоль) обрабатывают 2н. №ОН (2,58 мл, 5,17 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи, реакционную смесь подкисляют до рН3 с помощью кислотной смолы. Твердые вещества отфильтровывают. Полученные фильтраты концентрируют в вакууме, получая остаток, который лиофилизуют, получая 1,32 г (~100%) соединения 1χχχίίί.
Пример полупродукта 80. Соединение 1χχχίν.
Дихлорметановый раствор (15 мл) соединения 1χχχίίί (360 мг, 0,7 ммоль) обрабатывают РуВОР (582 мг, 1,12 ммоль). После перемешивания при температуре, близкой к комнатной, в течение 20 мин, реакционную смесь обрабатывают ТГФ раствором (10 мл) соединения χίίί (195,6 мг, 1,05 ммоль) и затем Э1РЕА (0,25 мл, 1,40 ммоль). После перемешивания в течение ночи при температуре, близкой к комнатной, реакционную смесь гасят водой и экстрагируют ЕЮАс. Полученный органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (3% ЕЮН/ЕЮАс), что дает 420 мг (88%) соединения 1χχχίν.
Пример полупродукта 81. Соединение И'.
Смесь безводного дихлорметана и диэтилового эфира (20 мл:20 мл) охлаждают до -78°С в атмосфере Ν2 (г). К раствору добавляют Т1С14 (1М в дихлорметане, 10 мл, 10 ммоль) и затем МеЫ (1,4 М в диэтиловом эфире, 7,1 мл, 10 ммоль), с последующим дополнительным перемешиванием еще в течение 30 мин при -78°С. Раствор соединения ί (2 г, 6 ммоль) в 10 мл дихлорметана по каплям добавляют к смеси при той же температуре, за 15 мин. Раствор медленно нагревают до -40°С в течение 10 мин и затем перемешивают при 0°С в течение 2 ч. Реакционную смесь гасят, выливая в смесь вода/диэтиловый эфир (1:1), и затем дают расслоиться. Водный слой дополнительно дважды экстрагируют диэтиловым эфиром. Все органические слои промывают водой, насыщенным раствором соли и сушат над Мд§О4, затем концентрируют до желтого масла. Требуемое соединение и' выделяют хроматографией на силикагеле (ЕЮАс/гексаны 2/1) с выходом 83%.
Пример полупродукта 82. Соединение 1χί'.
К соединению и' (1,7 г, 5 ммоль) добавляют 10 мас.% Рб на С (0,53 г, 0,5 ммоль) с последующим добавлением МеОН (17 мл). Газообразный водород продувают через реакционную смесь и давление газообразного водорода поддерживают во время реакции в течение ночи при 1 атм. Реакционную смесь затем фильтруют и концентрируют, получая 929 мг (87%) соединения 1χί' в виде бесцветного масла.
- 133 017556
Пример полупродукта 83. Соединение 1χχχν.
К ТГФ раствору (16 мл) соединения χχίί (1 г, 3 ммоль) добавляют при температуре, близкой к комнатной, НОА! (0,41 г, 3 ммоль) и затем 1М ОСС раствор дихлорметана (3 мл, 3 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин при температуре, близкой к комнатной, к полученной НОА!-активированной кислоте добавляют дихлорметановый раствор (6 мл) соединения 1χί'. Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи. По прошествии указанного времени реакционную смесь фильтруют через целит. Фильтрат разбавляют ΕΐОАс (120 мл), промывают водой и затем насыщенным раствором соли. Органический слой сушат и концентрируют до желтого масла, которое очищают хроматографией на силикагеле (100% ΕΐОАс), получая 1 г (65%) соединения 1χχχν.
Ιχχχν
Пример полупродукта 84. Соединение 1χχχνί.
К этанольному раствору (8 мл) соединения 1χχχν (920 мг, 1,7 ммоль) добавляют 2н. водный раствор №1ОН (1,7 мл, 3,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при температуре, близкой к комнатной, и затем подкисляют до рН 3 с помощью Όο\\Ό5 кислотной смолы. Твердые вещества отфильтровывают и фильтрат концентрируют, получая бесцветное масло, которое вновь растворяют в 1:1 СН3СЫ/Н2О и лиофилизуют, что дает 800 мг (93%) соединения 1χχχνί. ВЭЖХ дает единственный пик продукта.
Ιχχχνϊ
Пример полупродукта 85. Соединение 1χχχνίί.
К дихлорметановому раствору (4 мл) соединения 1χχχνί (150 мг, 0,3 ммоль) добавляют РуВОР (250 мг, 0,47 ммоль). Раствор перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение 30 мин. К указанному раствору добавляют раствор соединения χίίί (84 мг, 0,45 ммоль) в ТГФ (4,5 мл) с последующим добавлением Εΐ^Ρ^2N (0,1 мл, 0,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре, близкой к комнатной, в течение ночи и затем гасят водой (25 мл) за 30 мин. Смесь затем экстрагируют ΕΐОАс. Полученный органический слой промывают насыщенным раствором соли и сушат над Мд§О4, затем концентрируют до желтого масла. Очистка хроматографией на силикагеле (5% ΕΐОΗ/ΕΐОАс) дает 200 мг (100%) соединения 1χχχνίί.
Пример полупродукта 86. Соединение 1χχχίχ. Соединение 1χχχνίίί.
ιχχχνπι
Ν-СЬх-Ь-валин, (2,5 г, 9,9 ммоль) поглощают ТГФ (30мл) ΕΌί’Ι (2,29 г, 11,9 ммоль) и НОВТ (1,62 г, 11,9 ммоль) смешивают и смесь перемешивают пять мин. Добавляют гидрохлорид метилового эфира Ьтрет-лейцина (2,17 г, 11,9 ммоль) в ТГФ (23,9 мл) с последующим добавлением ^IΡΕА (2,1 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, промывают 1н. НС1, насыщенным бикарбонатом натрия и насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют. Концентрированный остаток очищают в смеси 25% этилацетат/гексан, получая 1,1 г (29%) соединения 1χχχίχ.
Пример полупродукта 87. Соединение 1χχχχ.
Соединение 1χχχίχ гидролизуют в стандартных условиях, используя метиловый спирт (0,3 М) и 1н. №ОН (1,5 экв.), получая 1,03 г (95%) соединения 1χχχχ.
- 134 017556
Пример полупродукта 88. Соединение Ιχχχχί.
Соединение Ιχχχχ (385мг, 1,06 ммоль) поглощают дихлорметаном (3мл). Добавляют ОСС (1,4 ммоль) с последующим добавлением НОА1 (190 мг, 1,4 ммоль). Затем добавляют соединение ν (260 мг, 1,4 ммоль) в дихлорметане (3 мл). Полученную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, фильтруют через силикагель и концентрируют. Остаток очищают в смеси 50% этилацетат/гексан, получая 440 мг (80%) соединения Ιχχχχί.
Пример полупродукта 89. Соединение Ιχχχχίί. Соединение Ιχχχχί гидролизуют в стандартных условиях, используя этиловый спирт (0,3 М) и 1н. ЫаОН (1,5 экв.), получая 390 мг соединения Ιχχχχίί.
Пример полупродукта 90. Соединение Ιχχχχίίί.
Соединение Ιχχχχίί (350 мг, 0,7 ммоль) поглощают дихлорметаном (3мл). Добавляют РуВОР (480 мг, 0,91 ммоль) с последующим добавлением соединения χίίί (170 мг, 0,91 ммоль). Добавляют Э1РЕА (0,16 мл, 0,91 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь концентрируют и очищают в 100% этилацетате, получая 420 мг (90%) соединения Ιχχχχίίί.
Пример полупродукта 91. Соединение Ιχχχχϊν.
Соединение Ιχχχχίίί гидрируют, используя 10% Рб/С (1% моль) в метиловом спирте в атмосфере водорода, получая 335 мг (100%) соединения Ιχχχχϊν.
Ιχχχχϊν
Пример полупродукта 92. Соединение Ιχχχχν.
Этил 1н.-тетразол-5-ацетат (5 г, 32 ммоль) поглощают хлороформом (80 мл). Добавляют трихлоруксусную кислоту (12,03 г, 73,65 ммоль) с последующим добавлением альфа-метилстирола (3,78 г, 32 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи. На следующий день раствор разбавляют этилацетатом, промывают 10% КОН и насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют, получая 8 г (96%) соответствующего Ν-защищенного этил тетразол-5-ацетата. Полученное вещество гидролизуют в стандартных условиях, используя этиловый спирт (0,3 М) и 1н. ЫаОН (3 экв.), и получают 7 г (99%) соединения Ιχχχχν.
Пример полупродукта 93. Соединение Ιχχχχνί.
Соединение Ιχχχχν (3,62 г, 14,7 ммоль) поглощают дихлорметаном (50 мл). Добавляют ЕЭС1 (4,32 г, 22,1 ммоль) и Э1РЕА (5,1 мл, 29,4 ммоль) и перемешивают в течение 5 мин. Добавляют Νгидроксисукцинимид (3,38 г, 29,4 ммоль) и перемешивают 3 ч. Реакционную смесь разбавляют дихлорметаном и промывают трижды водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют получая 3,66 г (73%) соединения Ιχχχχνί.
- 135 017556
Пример полупродукта 94. Соединение 1χχχχνίί.
Соединение 1χχχχίν (335 мг, 0,62 ммоль) и соединение 1χχχχνί (343 мг, 1 ммоль) поглощают дихлорметаном (6 мл). Добавляют Э1РЕА (0,17 мл, 1 ммоль) и реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом, промывают насыщенным бикарбонатом натрия, насыщенным раствором соли и концентрируют. Остаток очищают в смеси 5% этиловый спирт/этилацетат, получая 80 мг (16%) соединения 1χχχχνίί.
Пример полупродукта 95. Соединение 1χχχχνίίί.
Соединение 1χχχχνίί (80 мг, 0,11 ммоль) поглощают дихлорметаном (3 мл). Добавляют ЭМР реагент (55 мг, 0,13 ммоль) и перемешивают 1 ч. Реакционную смесь разбавляют этилацетатом и гасят 10% раствором сульфита натрия. Органическую фазу промывают насыщенным бикарбонатом натрия и насыщенным раствором соли. Органическую фазу концентрируют и полученный остаток очищают в 100% этилацетате, получая 40 мг (48%) соединения 1χχχχνίίί.
Пример полупродукта 96. Соединение χχχίχ.
Соединение 1с, метиловый эфир Ы-СЬ/М-гидрокси-Рго,
(2,1 г, 7,9 ммоль, полученное с ко-
личественным выходом из соединения с, ^СЬх-4-гидрокси-Рго ,) растворяют в ЭСМ (25 мл). К раствору добавляют СЭ1 (1,54 г, 9,5 ммоль) и Э1РЕА (1,7 мл, 9,5 ммоль) и перемешивают в течение 10 мин. К реакционной смеси добавляют по каплям 1,2,3,4-тетрагидроизохинолин (Т1ф) (1,2 мл, 9,5 ммоль) и перемешивают 5 ч. Органическую фазу промывают водой, 1н. НС1 и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы полученный остаток очищают хроматографией, используя 40% ЕЮАс/гексаны, получают соединение с1, метиловый эфир Ы-СЬ7-4-Т1р-карбонилокси-Рго, (2,5 г, 75%).
Соединение с1 (2,5 г, 5,9 ммоль) растворяют в МеОН (75 мл). Раствор продувают Ν2 и добавляют Рб/С (10%, 300 мг). Реакционную смесь продувают Н2 и перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют через целит и концентрируют, получая соединение χχχίχ, метиловый эфир 4-(Т1фкарбонилокси)-Рго, (1,49 г, 83%).
Пример полупродукта 97. Соединение νίί.
Соединение сп, метиловый эфир Н-пиразин-2-илкарбонил-Уа1-Уа1, (10,9 г, 32,4 ммоль)
растворяют в ТГФ (80 мл) и затем добавляют водный ЫаОН (48,6 мл, 48,6 ммоль). Полученную смесь перемешивают 48 ч и затем добавляют дополнительное количество №1ОН (16,3 мл, 16,3 ммоль) и смесь нагревают до 40°С в течение 3 ч. Затем рН реакционной смеси снижают до 3 и водную фазу экстрагируют ЕЮАс и затем концентрируют, получая неочищенное соединение νίί, Ы-пиразин-2илкарбонил-Уа1-Уа1 кислоту (10,6 г, 100%).
Пример полупродукта 98. Соединение сш.
Соединение сп (4,1 г, 12,7 ммоль) растворяют в ЭСМ (20 мл). К указанному раствору добавляют НОА1 (1,73 г, 12,7 ммоль) и ОСС (12,7 ммоль) и раствор перемешивают в течение 1 ч. К реакционной смеси добавляют соединение χχχίχ (3,22 г, 10,6 ммоль) в ЭСМ (10 мл). Полученную смесь перемешива
- 136 017556 ют в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь фильтруют через силикагель и концентрируют. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (градиент 50-80% смеси ЕЮАс/гексаны), получая соединение сш, метиловый эфир Ы-пиразин-2-илкарбонил-Уа1-Уа1-4-(Т1р-карбонилокси)-Рго, (5,27г, 81,7%).
Пример полупродукта 99. Соединение αν.
Соединение сш (650 мг, 1,29 ммоль) растворяют в ТГФ (5 мл). К раствору добавляют водный ЫаОН (1,42 мл, 1,42 ммоль) и затем перемешивают в течение ночи. Снижают РН раствора до 3 и органическую фазу выделяют и концентрируют, получая остаток. Остаток очищают, используя ВЭЖХ с обращенной фазой в смеси ацетонитрил/вода, и получают соединение сгу, Ы-пиразин-2-илкарбонил-Уа1-Уа1-4-(Т1ркарбонилокси)-Рго кислоту, (600 мг, 95%).
οΐν
Пример полупродукта 100. Соединение су.
Ν-Вос-Ь-трет-лейцин (2,3 г, 10 ммоль) и гидрохлорид метилового эфира Ь-трет-лейцина (2 г, 11 ммоль) объединяют в ДМФ (30 мл). Затем к раствору добавляют НОА! (1,6 г, 11,5 ммоль). Полученную смесь перемешивают в течение 20 мин в атмосфере Ν2 и затем температуру снижают до 0°С, затем добавляют Э1С (1,8 мл, 11,5 ммоль) и 2,4,6-коллидин (1,45 мл, 11 ммоль). Образовавшийся раствор перемешивают в течение ночи, позволяя нагреться до комнатной температуры. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс и органическую фазу промывают 1н. НС1, насыщенным ЫаНСО3 и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы, полученный остаток очищают хроматографией, используя градиент 20-30% смеси ЕЮАс/гексаны, и получают соединение су (3,3 г, 92%).
Пример полупродукта 101. Соединение σνί.
Соединение су (3,3 г, 9,2 ммоль) гидролизуют, используя диоксан (40 мл) и 0,5н. ЫаОН (37 мл, 18,4 ммоль), получая соединение аз (2,9 г, 92%).
Пример полупродукта 102. Соединение суй.
Соединение аз (2 г, 5,8 ммоль) и соединение ν (1 г, 5,5 ммоль) растворяют в ДМФ (20 мл). Затем к раствору добавляют НОА! (832 мг, 6,6 ммоль) и Э1С (1,1 мл, 6,6 ммоль). Образовавшийся раствор перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс и органическую фазу промывают 1н. НС1, насыщенным ЫаНСО3 и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы полученный остаток очищают хроматографией, используя градиент 20-30% смеси ЕЮАс/гексаны, и получают соединение суй (2,4 г, 81%).
Пример полупродукта 103. Соединение суш.
Соединение суй (2,4 г, 4,72 ммоль) растворяют в ЭСМ (10 мл). К раствору добавляют ТЕА (10 мл). Образовавшийся раствор перемешивают в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрируют, растворяют в ЕЮАс и затем органическую фазу промывают 1н. ЫаОН и насыщенным раствором соли. Органическую фазу концентрируют, получая соединение суш (1,084 г, 56,1%).
ονίΐί
Пример полупродукта 104. Соединение αχ.
2-Пиразинкарбоновую кислоту (181 мг, 1,46 ммоль) и соединение суш (541 мг, 1,325 ммоль) рас
- 137 017556 творяют в ДМФ (15 мл). К раствору добавляют НОА1 (207 мг, 1,52 ммоль) и Э1С (0,24 мл, 1,52 ммоль). Образовавшийся раствор перемешивают в течение ночи в атмосфере N2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс и органическую фазу промывают 1н. НС1, насыщенным NаНСΟз и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы полученный остаток очищают хроматографией, используя градиент 20-30-35% смеси ЕЮАс/гексаны, и получают соединение αχ (430 мг, 63%).
Пример полупродукта 105. Соединение сх.
Соединение αχ гидролизуют, используя Е1ОН (7 мл) и 1н. №ЮН (4,7 мл, 4,7 ммоль), и получают соединение сх (700 мг, 91,6%).
Пример полупродукта 106. Соединение сχ^.
Соединение сх (690 мг, 1,42 ммоль) растворяют в ЭСМ (9 мл). Затем к раствору добавляют РуВОР (890 мг, 1,7 ммоль) с последующим добавлением соединения χίίί'
(320 мг, 1,7 ммоль). К полученной смеси добавляют Э1РЕА (0,3 мл, 1,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере N2. Реакционную смесь разбавляют затем ЕЮАс, промывают насыщенным NаНСΟз и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы полученный остаток очищают хроматографией, используя 100% ЕЮАс, и получают соединение сχ^ (490 мг, 52,7%).
Пример полупродукта 107. Соединение сχ^ν. Соединение сχ^^ (1,2 г, 3,06 ммоль)
растворяют в МеОН (12 мл). После тщательного продувания N2, добавляют 10 мас.% Рб(ОН)2 на углероде (0,6г) и смесь гидрируют в течение ночи, затем полученную реакционную смесь анализируют ТСХ (30% ЕЮАс/гексаны). Раствор отделяют от твердого вещества фильтрованием и концентрируют до соответствующего соединения сχ^^^ со снятой защитой, в виде бесцветного масла (100%),
которое используют на следующей стадии без дополнительной очистки.
2-Пиразинкарбоновую кислоту (400 мг, 3,2 ммоль, 1,1 экв.) растворяют в ЭСМ/ТГФ (4 мл/4 мл) и затем добавляют НОА1 (440 мг, 3,2 ммоль) и ЭСС (343 мл, 1М в ЭСМ). После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 мин, соединение αχίίί (0,96 г, 3,2 ммоль), полученное ранее, растворяют в ЭСМ (6,4 мл) и добавляют к активированной смеси. После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь фильтруют через целит и соединение сχ^ν очищают хроматографией на колонке (30% ЕЮАс/гексаны)
получая белое твердое вещество (0,8 г, 80%).
Пример полупродукта 108. Соединение сχν.
Соединение сюу (0,8 г, 2,2 ммоль) растворяют в МеОН (10 мл) и затем добавляют 2н. №ЮН (водн.) (3,3 мл, 6,6 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем состав реакционной смеси анализируют ТСХ (50% ЕЮАс/гексаны). Подкисляют до рН 3 с помощью 5н. НС1 и
- 138 017556 разбавляют ЕЮАс с последующей экстракцией органической фазы. Экстрагированную органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над Мд§О4, получая концентрированием соединение сxν (0,74 г, 95%).
Пример полупродукта 109. Соединение сху1.
К ЭСМ раствору (6 мл) соединения сxν (0,74 г, 2,1 ммоль) при комнатной температуре добавляют НОА1 (290 мг, 2,1 ммоль), с последующим добавлением 1 М раствора ЭСС в ЭСМ (2,2 мл, 2,2 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин при комнатной температуре к полученной выше НОА1активированной кислоте добавляют ТГФ раствор (10,5 мл, 0,2 М) соединения ν (2,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. По прошествии указанного времени реакционную смесь фильтруют через целит. Фильтрат разбавляют ЕЮАс (120 мл) и промывают водой и насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат и концентрируют до желтого масла, которое очищают хроматографией на силикагеле (50% ЕЮАс/гексаны), получая соединение сху| (0,714 г, 66%).
Пример полупродукта 110. Соединение схуи.
К ЕЮН раствору соединения сху1 (0,7 г, 1,4 ммоль) добавляют 2н. водный раствор ЫаОН (2 мл, 4 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, затем подкисляют до рН3 с помощью 5н. НС1 и разбавляют ЕЮАс. с последующей экстракцией органической фазы. Экстрагированную органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над Мд§О4, получая концентрированием соединение схуи (95%).
οχνϋ
Пример полупродукта 111. Соединение схуш К ЭСМ/ТГФ раствору (10 мл/2 мл) соединения суй (300 мг, 0,6 ммоль) добавляют РуВОР (416 мг, 0,8 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. К указанному раствору затем добавляют соединение χχχνί' (200 мг, 0,8 ммоль),
χχχνί' с последующим добавлением Э1РЕА (0,22 мл, 1,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем гасят водой (25 мл) в течение 30 мин. Затем смесь экстрагируют ЕЮАс. Полученную органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над Мд§О4, затем концентрируют, получая желтое масло. Очистка хроматографией на силикагеле (3-5% ЕЮН/ЕЮАс) дает соединение схуш (335 мг, 76%).
οχνιιι
Пример полупродукта 112. Соединение сх1х.
К ЭСМ раствору (10 мл) соединения схуи (340 мг, 0,6 ммоль) добавляют РуВОР (47 0 мг, 0,9 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. К указанному раствору добавляют затем соединение хш' (170 мг, 0,9 ммоль), с последующим добавлением Э1РЕА (0,24 мл, 1,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем гасят водой (25 мл) в течение 30 мин. Смесь затем экстрагируют ЕЮАс. Полученную органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над Мд§О4, затем концентрируют до желтого масла. Очистка хроматографией на силикагеле (3-5% ЕЮН/ЕЮАс) дает соединение сх1х (164 мг, 36%).
- 139 017556
Пример полупродукта 113. Соединение хх.
№СЬ/-Ь-валин (6,28 г, 25 ммоль) растворяют в Όί’Μ (30 мл). К указанному раствору добавляют НОВТ (3,38 г, 25 ммоль) и ОСС (25 мл, 1М раствор) и перемешивают 5 мин. К полученной смеси добавляют гидрохлорид метилового эфира Ь-трет-лейцина (25 мл, 1М раствор) и перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют Е1ОЛс, промывают 1н. НС1, насыщенным NаΗСО3 и насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат над №28О4, фильтруют и концентрируют. Остаток очищают хроматографией, используя 20-30% ЕЮЛс/гексаны, и получают соединение хх (2,96 г, 31%).
Пример полупродукта 114. Соединение хх1.
Соединение хх (2,95 г, 7,8 ммоль) гидрируют, используя 10% Ρά/С (800 мг) в МеОН (40 мл) в атмосфере Н2, получают приведенный ниже соответствующий свободный амин (1,9 г, 100%).
2-Пиразинкарбоновую кислоту (970 мг, 7,8 ммоль) растворяют в Όί’Μ (20 мл). К указанному раствору добавляют РуВОР (4,06 г, 7,8 ммоль). К раствору добавляют свободный амин (1,9 г, 7,8 ммоль) в Όί'Μ (15 мл) и затем добавляют ЭРЕЛ (1,36 мл, 7,8 ммоль). Полученную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют Е1ОЛс и органическую фазу промывают насыщенным NаΗСО3 и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы остаток очищают хроматографией, используя 30-40% ЕЮЛс/гексаны, и получают соединение хх1 (2,07 г, 75,8%).
Пример полупродукта 115. Соединение ххп.
Соединение хх1 гидролизуют, используя МеОН (20 мл) и 1н. №1ОН (3 экв.), и получают соединение ххп (1,82 г, 93,9%).
Пример полупродукта 116. Соединение ххш.
Соединение ххп (8 95 мг, 2,66 ммоль) растворяют в Όί’Μ (10 мл). К раствору добавляют ОСС (3,2 ммоль) и затем НОЛ1 (435 мг, 3,2 ммоль). Затем добавляют соединение ν (3,2 ммоль) в ТГФ (16 мл). Полученную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮЛс, фильтруют через силикагель и концентрируют. Полученный остаток очищают хроматографией, используя 50% ЕЮЛс/гексаны, и получают соединение ххш (730 мг, 54,8%).
Пример полупродукта 117. Соединение ххР.
Соединение ххш гидролизуют, используя ЕЮН (5 мл) и 1н. №ЮН (1,5 экв.), и получают соединение ххп' (690 мг, 100%).
Пример полупродукта 118. Соединение схх.
Соединение ххп' (245 мг, 0,52 ммоль) растворяют в Όί’Μ (3 мл). К раствору добавляют РуВОР (330 мг, 0,62 ммоль) и затем добавляют соединение хш' (12 0 мг, 0,62 ммоль). К полученной смеси добавляют ЭРЕЛ (0,11 мл, 0,62 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮЛс и органическую фазу промывают насыщенным NаΗСО3 и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы остаток очищают хроматографией, используя 5% ЕЮН/ЕЮЛс, и получают соединение схх (220 мг, 60%).
Пример полупродукта 119. Соединение хш'.
Вос-ЫУЛ-ОН (24,96 г, 114,9 ммоль)
растворяют в ТГФ (200 мл). К раствору порциями добавляют ί’ΌΙ (22,35, 137,8 ммоль) и раствор перемешивают в течение 30 мин. НО-диметилгидроксиламингидрохлорид (12,33 г, 126,4 ммоль) растворяют в ДМФ (50 мл) и затем к раствору добавляют ЭРЕЛ (22 мл, 126,4 ммоль). ДМФ раствор оставляют
- 140 017556 перемешиваться при комнатной температуре в течение 20 мин и затем добавляют ТГФ раствор. Полученную смесь перемешивают в течение двух выходных дней в атмосфере Ν2. Реакционную смесь концентрируют в вакууме до общего объема 100 мл. Полученную органическую фазу промывают 1н. НС1, насыщенным NаΗСΟз и насыщенным раствором соли. Органическую фазу концентрируют, получая неочищенное соединение суу! (25,3г).
БАН (107,3 ммоль) добавляют в сухую круглодонную колбу на 1 л в атмосфере Ν2 в виде 1 М раствора в Е1Ю. Полученный раствор охлаждают до 0°С и затем добавляют по каплям соединение суу! (97,5 ммоль) в Е1Ю (100 мл). По завершении добавления полученную смесь перемешивают в течение 30 мин. Реакционную смесь гасят при 0°С медленным добавлением ЕЮАс (50 мл), с последующим медленным добавлением 5% раствора КΗ8Ο4 (50 мл). Образовавшуюся смесь перемешивают в течение 30 мин. Органическую фазу промывают 1н. НС1, насыщенным NаΗСΟз и насыщенным раствором соли. Органическую фазу концентрируют, получая неочищенное соединение суу!! (22,28г).
Соединение суу!! растворяют в МеОН (100 мл). Να282Ο4 (16,82 г, 96,6 ммоль) растворяют в воде (100 мл) и затем добавляют к раствору соединения суу!! при 0°С. Полученную смесь хранят в холодильнике (5°С) в течение ночи. К реакционной смеси добавляют КСN (7,53 г, 115,9 ммоль) в воде (100 мл) и перемешивают 1,5 ч при комнатной температуре. Соединение экстрагируют ЕЮАс (3χ100 мл). Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли (3х 50 мл), сушат над Μд8Ο4, фильтруют и концентрируют, получая неочищенное соединение сxx^^^ (15,86 г).
Соединение сxx^^^ (15,86 г) растворяют в диоксане (100 мл). К указанному раствору добавляют концентрированную НС1 (37%, 100 мл) с последующим добавлением анизола (10 мл) и нагревают до температуры кипения с обратным холодильником (110°С). Реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 ч. Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и растворитель удаляют в вакууме, получая сухую пасту. Остаток сушат в течение ночи в глубоком вакууме, получая неочищенное соединение сxx^ν.
Соединение сууг^' (69,6 ммоль) растворяют в ДМФ (60 мл) и ТГФ (60 мл). К смеси добавляют Ν(бензилоксикарбонилокси)сукцинимид (17,33 г, 69,6 ммоль), с последующим добавлением Э1РЕА (12,1 мл, 69,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Смесь концентрируют до остаточного объема (50 мл) и разбавляют ЕЮАс. Органическую фазу промывают 0,1н. НС1 (2х 100 мл) и насыщенным раствором соли, получая соединение сxxν (17,5 г, 54,2% за пять стадий).
Соединение сxxν (5,66 г, 20,14 ммоль) растворяют в ЭСМ (60 мл). К указанному раствору добавляют РуВОР (12,57 г, 24,2 ммоль) и НОВТ (3,27 г, 24,2 ммоль) и перемешивают 5 мин. Полученную смесь охлаждают до 0°С и затем добавляют циклопропиламин (1,67 мл, 24,2 ммоль) и Э1РЕА (4,2 мл, 24,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи, давая нагреться до комнатной температуры. Реакционную смесь промывают 0,1 н. НС1, насыщенным NаΗСΟз и насыщенным раствором соли. Органическую фазу затем концентрируют и очищают хроматографией, используя 70% ЕЮАс/гексаны, что дает соединение сууг! (3,18 г, 49,3%).
- 141 017556
Соединение сxxν^ (3,18 г, 9,94 ммоль) гидрируют, используя 10% Рб/С (600 мг) в МеОН (70 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Н2, фильтруют через целит и концентрируют, получая неочищенное соединение χίίί' (2,1 г, 100%).
Пример полупродукта 120. Соединение сxxν^^.
№СЬ/-Ь-циклогексилглицин (3 г, 10,3 ммоль) растворяют в ЭСМ (36 мл). К указанному раствору добавляют НОА1 (1,5 г, 11,28 ммоль) и ОСС (11,28 мл, 11,28 ммоль) и перемешивают 5 мин. К полученной смеси добавляют гидрохлорид метилового эфира Ь-трет-лейцина (103 мл, 1 М раствор, 10,3 ммоль) и перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь фильтруют через целит, промывают ЕЮАс и концентрируют до остатка, который очищают хроматографией, используя 20-30% ЕЮАс/гексаны, что дает соединение сxxν^^ (2,2 г, 52%).
Пример полупродукта 121. Соединение 1χχίχ'.
Соединение сxxν^^ (2,2 г, 5,2 ммоль) гидрируют, используя 20% Рб(ОН)2/С (1г) в МеОН (15 мл) в атмосфере Н2, и получают соединение 1χχίχ' (1,4 г, 98%).
Пример полупродукта 122. Соединение 1χχχ.
2-Пиразинкарбоновую кислоту (360 мг, 2,9 ммоль) растворяют в ЭСМ (10 мл). К раствору добавляют РуВОР (1,81 г, 3,5 ммоль). Затем к раствору добавляют соединение 1χχίχ' (825 мг, 2,9 ммоль) в ТГФ (10 мл), с последующим добавлением Э1РЕА (0,5 мл, 2,9 ммоль). Полученную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс и органическую фазу промывают насыщенным NаΗСОз и насыщенным раствором соли. Остаток, полученный от концентрирования органической фазы, очищают хроматографией, используя 30% ЕЮАс/гексаны, и получают соединение 1χχχ (780 мг, 69%).
Пример полупродукта 123. Соединение 1χχχί.
Соединение 1χχχ гидролизуют, используя МеОН (10 мл) и 1н. №ЮН (3 экв.), и получают соединение 1χχχί (615 мг, 81,8%).
Пример полупродукта 124. Соединение 1χχχίί.
Соединение 1χχχί (610 мг, 1,6 ммоль) растворяют в ЭСМ (10 мл). Затем к раствору добавляют ОСС (1,94 мл, 1,94 ммоль), с последующим добавлением НОА1 (270 мг, 1,94 ммоль). Затем к раствору добавляют соединение ν (1,94 ммоль) в ТГФ (19,4 мл). Полученную смесь перемешивают в течение двух ночей в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс, фильтруют через силикагель и концентрируют. Полученный остаток очищают хроматографией, используя 40% ЕЮАс/гексаны, и получают соединение 1χχχίί (450 мг, 83,4%).
Пример полупродукта 125. Соединение 1χχχίίί.
Соединение 1χχχί гидролизуют, используя ЕЮН (10 мл) и 1н. №ОН (3 экв.), и получают соединение 1χχχίίί (650 мг, 99%).
Пример полупродукта 126. Соединение сxxν^^^.
Соединение 1χχχίίί (400 мг, 0,78 ммоль) растворяют в ЭСМ (5 мл). К раствору добавляют РуВОР (610 мг, 1,2 ммоль), с последующим добавлением соединения χίίί' (230 мг, 1,2 ммоль). К полученной смеси добавляют Э1РЕА (0,2 мл, 1,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс и органическую фазу промывают насыщенным NаΗСОз и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы остаток очищают хроматографией при градиенте от 100% ЕЮАс до 5% смеси ЕЮН/ЕЮАс, получая соединение сxxν^^^ (365 мг, 68,7%).
- 142 017556
Пример полупродукта 127. Соединение сххх.
Соединение 1χχχίίί (365 мг, 0,7 ммоль) растворяют в ЭСМ (5 мл). К раствору добавляют РуВОР (440 мг, 0,84 ммоль), с последующим добавлением соединения сχχ^χ
(0,84 ммоль) в ТГФ (8,4 мл). К полученной смеси добавляют ЭШЕА (0,1 мл, 0,84 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс и органическую фазу промывают насыщенным NаНСΟ3 и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы, полученный остаток очищают хроматографией, используя 100% ЕЮАс, и получают соединение сххх (350 мг, 70%).
Пример полупродукта 128. Соединение сχχχ^.
Соединение сχχν (2,54 г, 9,05 ммоль) растворяют в ЭСМ (30 мл). К раствору добавляют РуВОР (5,65 г, 10,9 ммоль) и НОВТ (1,47 г, 10,9 ммоль) и перемешивают 5 мин. Реакционную смесь охлаждают до 0°С, затем добавляют (8)-(+)-3-метил-2-бутиламин (1,27 мл, 10,9 ммоль) и О1РЕА (1,9 мл, 10,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи, позволяя нагреться до комнатной температуры. Органическую фазу промывают 0,1н. НС1, насыщенным NаНСΟ3 и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы полученный остаток очищают хроматографией, используя 30% ЕЮАс/гексан, и получают соединение сχχχ^ (1,44 г, 45,5%).
Пример полупродукта 129. Соединение сχχ^χ.
Соединение сχχχ^ (1,3 г, 3,7 ммоль) гидрируют, используя 10% Ρά/С (500 мг) в МеОН (40 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Н2. Реакционную смесь фильтруют через целит и органическую фазу концентрируют, получая неочищенное соединение сχχ^χ (800 мг, 100%).
Пример полупродукта 130. Соединение сχχχ^ν. Соединение сχχχ^^ (1,6 г, 3,7 ммоль)
растворяют в МеОН (12 мл). После тщательного продувания Ν2 добавляют 10 мас.% Рб(ОН)2 на углероде (0,74 г) и смесь гидрируют в течение ночи, затем полученную реакционную смесь анализируют ТСХ (30% ЕЮАс/гексан). Раствор отделяют от твердого вещества фильтрованием и концентрируют, получая соединение сχχχ^^^
в виде бесцветного масла (100%), которое используют на следующей стадии без дополнительной очистки. 2-Пиразинкарбоновую кислоту (4 00 мг, 3,2 ммоль, 1,1 экв.) растворяют в ЭСМ/ТТФ (4мл/4 мл) и затем добавляют НОА1 (440 мг, 3,2 ммоль) и ОСС (3,3 мл, 1М в ЭСМ). После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 мин, соединение сχχχ^^^ (0,96 г, 3,2 ммоль), полученное выше, растворяют в ЭСМ (6,4 мл) и добавляют к активированной смеси. После перемешивания в течение 2 дней при комнатной температуре реакционную смесь фильтруют через целит и концентрируют до остатка, который очищают хроматографией на колонке (50% ЕЮАс/гексаны) и получают соединение сχχχ^ν в виде
- 143 017556 белого твердого вещества (1,06 г, 83%).
Пример полупродукта 131. Соединение сxxxν.
Соединение сxxx^ν (1,06 г, 2,6 ммоль) растворяют в МеОН (10 мл) и затем добавляют 2н./№1ОН (водн.) (4 мл, 8 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем полноту гидролиза контролируют ТСХ (50% ЕЮАс/гексаны). Раствор подкисляют до рН 3 с помощью 5н. НС1, разбавляют ЕЮАс и затем органическую фазу экстрагируют. Экстрагированную органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над Мд§О4, получая концентрированием соединение сxxxν (100%).
Пример полупродукта 132. Соединение сxxxν^.
К ЭСМ раствору (8 мл) соединения сxxxν (1,44 г, 3,7 ммоль) при комнатной температуре добавляют НОА1 (500 мг, 3,7 ммоль) и затем добавляют 1 М раствор ОСС в ЭСМ (3,7 мл, 3,7 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин при комнатной температуре к полученной НОА1-активированной кислоте добавляют ТГФ раствор (18,5 мл, 0,2 М) соединения ν (3,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют через целит. Фильтраты разбавляют ЕЮАс (120 мл) и промывают водой и насыщенным раствором соли. Органическую фазу сушат и концентрируют, получая желтое масло, которое очищают хроматографией на силикагеле (70% ЕЮАс/гексан) и получают соединение сxxxν^ (1 г, 71%).
Пример полупродукта 133. Соединение сxxxν^^.
К Е1ОН раствору (8 мл) соединения сxxxν^ (1 г, 1,8 ммоль) добавляют 2н. водный раствор №1ОН (2,7 мл, 5,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, затем подкисляют до рН 3 с помощью 5н. НС1, разбавляют ЕЮАс и затем органическую фазу экстрагируют. Экстрагированную органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над Мд§О4, получая концентрированием соединение сxxxν^^ (88%).
Пример полупродукта 133. Соединение сxxxν^^^.
К ЭСМ раствору (10 мл) соединения сxxxν^^ (350 мг, 0,6 ммоль) добавляют РуВОР (450 мг, 0,86 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. К указанному раствору затем добавляют соединение χίίί' (160 мг, 0,86 ммоль) с последующим добавлением Э1РЕА (0,23 мл, 1,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем гасят водой (25 мл) в течение 30 мин. Смесь экстрагируют затем ЕЮАс. Экстрагированную органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат над Мд§О4, затем концентрируют, получая желтое масло. Очистка хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮАс) дает соединение сxxxν^^^ (407 мг, 88%).
Пример полупродукта 134. Соединение сxxx^x.
5-Метилизоксазол-3-карбоновую кислоту (200 мг, 2,05 ммоль) растворяют в ЭСМ (5 мл). К раствору добавляют РуВОР (1,07 г, 2,05 ммоль). К раствору добавляют соединение 1χχίχ' (582 мг, 2,05 ммоль) в ЭСМ (5 мл), с последующим добавлением Э1РЕА (0,36 мл, 2,05 ммоль). Полученную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс и органическую фазу про
- 144 017556 мывают насыщенным NаΗСО3 и насыщенным раствором соли. Органическую фазу концентрируют и полученный остаток очищают хроматографией, используя 30% ЕЮАс/гексаны, что дает соединение сxxx^x (495 мг, 61,4%).
Пример полупродукта 135. Соединение схххх.
Соединение сxxx^x гидролизуют, используя МеОН (10 мл) и 1н. №ОН (3 экв.), и получают соединение схххх (430 мг, 90%).
Пример полупродукта 136. Соединение сxxxx^.
Соединение схххх (380 мг, 1 ммоль) растворяют в ЭСМ (5 мл). Затем к раствору добавляют ОСС (1,2 ммоль), с последующим добавлением НОА1 (165 мг, 1,2 ммоль). Затем добавляют соединение ν (1,2 ммоль) в ТГФ (12 мл). Полученную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс, фильтруют через силикагель и концентрируют. Полученный остаток очищают хроматографией, используя 35% ЕЮАс/гексаны, и получают соединение сxxxx^ (320 мг, 58%).
Пример полупродукта 137. Соединение сxxxx^^.
Соединение сxxxx^ гидролизуют, используя ЕЮН (10 мл) и 1н. №ЮН (3 экв.), и получают соединение сxxxx^^ (730 мг, 94,3%).
сххххИ
Пример полупродукта 138. Соединение сxxxx^^^.
Соединение сxxxx^^ (240 мг, 0,46 ммоль) растворяют в ЭСМ (5 мл). Затем к раствору добавляют РуВОР (295 мг, 0,56 ммоль), с последующим добавлением соединения χίίί' (110 мг, 0,56 ммоль). К полученной смеси добавляют Э1РЕА (0,1 мл, 0,56 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение двух ночей в атмосфере Ν2. Реакционную смесь разбавляют ЕЮАс и органическую фазу промывают насыщенным NаΗСО3 и насыщенным раствором соли. После концентрирования органической фазы полученный остаток очищают хроматографией, используя 90% ЕЮАс/гексаны, и получают соединение сxxxx^^^ (168 мг, 53%).
Пример полупродукта 139. Соединение сxxxx^ν.
К раствору №1ОН (2н., 42,1 мл, 84,2 ммоль) при 5°С добавляют Ь-аланин (5,00 г, 56,1 ммоль). После перемешивания в течение 10 мин одновременно добавляют по каплям метилхлорформиат (6,5 мл, 84,2 ммоль) и №ЮН (2н., 42,1 мл, 84,2 ммоль). Раствор перемешивают на ледяной бане в течение 2 ч, затем при комнатной температуре в течение 1 ч. Смесь промывают ЕьО (2x50 мл), водный слой нейтрализуют до рН ~2 с помощью 5н. НО и экстрагируют ЕЮАс (3x50 мл). Экстрагированную органическую фазу промывают насыщенным раствором соли, сушат Мд§О4 и концентрируют, получая соединение сxxxx^ν, н о Ξ сххххг-у Ν-карбометокси-Ь-аланин, (4,54 г, 54%) в виде бесцветного масла.
Пример полупродукта 140. Соединение сxxxxν^.
Раствор соединения сxxxxν (3,57 г, 9,44 ммоль)
- 145 017556
в ТГФ при 5°С обрабатывают НОА! (1,28 г, 9,44 ммоль) и затем добавляют ОСС (9,50 мл, 9,50 ммоль). После перемешивания на ледяной бане в течение 45 мин добавляют раствор соединения ν (104 мл, 10,4 ммоль) в ТГФ. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь охлаждают до 5°С и гасят насыщенным ЫаНСО3. После фильтрования с целью удаления осажденного ОСИ смесь растворяют в Е!ОАс (100 мл), промывают насыщенным ЫаНСО3, насыщенным раствором соли, затем сушат Мд§О4 и концентрируют до остатка, очищают хроматографией на колонке с силикагелем (25% Е!ОАс/гексаны), получая соединение сxxxxν^ (2,91 г, 57%) в виде смолистой пены.
Пример полупродукта 141. Соединение суш.
К раствору соединения сxxxxν^ в МеОН (25 мл), охлажденному на ледяной бане, в токе Ν2, медленно добавляют РП/С. Смесь гидрируют при 1 атм в течение ночи. Катализатор удаляют фильтрованием, фильтрат объединяют с 5 мл ДМФ и сушат в вакууме, получая соединение суш.
Пример полупродукта 142. Соединение сxxxxν^^.
Раствор соединения сxxxx^ν (0,298 г, 2,03 ммоль) и НОА! (0,276 г, 2,03 ммоль) в ТГФ, охлажденный на ледяной бане, обрабатывают ОСС (2,05 мл, 2,05 ммоль). После перемешивания на ледяной бане в течение 0,5 ч добавляют раствор соединения суш в ТГФ и затем добавляют ОГРЕА (0,39 мл, 2,2 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, затем охлаждают на ледяной бане и гасят насыщенным ЫаНСО3. Выпавший в осадок ОСИ фильтруют и фильтрат растворяют в Е!ОАс (100 мл). Органическую фазу промывают насыщенным ЫаНСО3, насыщенным раствором соли и затем сушат Мд§О4. После удаления органического растворителя остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (60% Е!ОАс/гексаны), получая соединение сxxxxν^^ (0,47 г, 48%) в виде смолистой пены.
Пример полупродукта 143. Соединение сxxxxν^^^.
К раствору соединения сxxxxν^^ (0,47 г, 0,847 ммоль) в Е!ОН (5 мл) при 5°С добавляют ЫаОН (2н., 1,31 мл, 2,62 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Раствор подкисляют до рН ~2 с помощью НС1 (1н.) и ЕЮН удаляют упариванием на роторном испарителе. Смесь экстрагируют ЕЮАс (3x30 мл), объединенный экстракт промывают насыщенным раствором соли и затем сушат Мд§О4. Растворитель удаляют и остаток сушат в вакууме, получая соединение сxxxxν^^^ (0,366 г, 82%) в виде смолистой пены.
Пример полупродукта 144. Соединение сП.
Раствор соединения сxxxxν^^^ (0,366 г, 0,718 ммоль) в ЭСМ охлаждают на ледяной бане и обрабатывают РуВор (0,599 г, 1,15 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 0,5 ч смесь охлаждают на ледяной бане и обрабатывают раствором соединения χίίί' (0,200 г, 1,08 ммоль) в ТГФ и Э1РЕА (0,250 мл, 1,44 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем гасят раствором ЫН4С1. Растворитель концентрируют и смесь растворяют в ЕЮАс (100 мл). Органическую фазу промывают насыщенным ЫаНСО3, насыщенным раствором соли и затем сушат Мд§О4. После удаления органического растворителя остаток очищают хроматографией на колонке (5% ЕЮН/ЕЮАс), получая соединение сП (0,35 г, 72%).
Пример полупродукта 145. Соединение суу!
К ТГФ раствору (85 мл) Ы-Вос-Ыуа-ОН (соединения 1) (8,68 г, 40 ммоль) добавляют СЭ1 (7,79 г, 48 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 мин полученный раствор обра
- 146 017556 батывают ДМФ раствором (25 мл), содержащим Ы,О-диметилгидроксиламингидрохлорид (4,25 г, 44 ммоль) и ОГРЕЛ (7,66 мл, 44 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь затем концентрируют в вакууме. Полученный остаток разбавляют ЕГОАс (300 мл). Полученный раствор последовательно промывают 0,1н. НС1 (50 мл), насыщенным ΝαНСО3 (3 х 50 мл) и насыщенным раствором соли. Органическую фазу концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (40% ЕГОАс/гексаны) и получают соединение сχχ^ (9,38 г, 94%).
Пример полупродукта 146. Соединение сχχ^^.
К диэтиловому (ЕГ2О) раствору (50 мл) соединения с-У-У! (9,38 г, 31,9 ммоль), охлажденному до 0°С, добавляют (медленно) ЬАН (34,7 мл, 1М, 34,7 ммоль). Во время добавления ЬАН температуру реакционной колбы поддерживают ниже 5°С. По завершению добавления к реакционной смеси добавляют ЕГОАс (20 мл), чтобы погасить избыток ЬАН. Водный КН8О4 (5%, 20 мл) добавляют затем каплям, чтобы поддерживать температуру ниже 5°С. Органическую фазу отделяют и затем промывают последовательно 1н. НС1 (3х30 мл), насыщенным ЫаНСО3 (3х30 мл) и насыщенным раствором соли. Органическую фазу концентрируют и сушат в вакууме, получая неочищенное соединение сχχ^^ (5,18 г, 69%).
Пример полупродукта 147. Соединение с1.
К суспензии Ζη (2,75 г, 42 ммоль) в ТГФ (25 мл) добавляют при кипячении с обратным холодильником 0,2 мл ЕГОС(О)СЕ2Вг. Затем медленно добавляют ТГФ раствор (25 мл) соединения сχχ^^ (3,05 г, 15,0 ммоль) и ЕГОС(О)СЕ2Вг (4,84 мл, 37,5 ммоль). По завершении добавления обоих реагентов реакционную смесь дополнительно нагревают до температуры кипения с обратным холодильником еще 30 мин. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и разбавляют ЭСМ (200 мл). Органическую фазу промывают 1н. КН8О4. Органическую фазу концентрируют и сушат в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (20% ЕГОАс/гексан), получая соединение с1 (2,78 г, 57%).
Данная методика, по существу, та же, что описана ТНайпуопдх еГ а1., Е Меб. СНет., 29, 2080-2087 (1986).
Пример полупродукта 148. Соединение с11.
ТГФ раствор (40 мл) соединения с1 (2,78 г, 8,53 ммоль) обрабатывают 1н. ЫаОН (12,8 мл, 12,8 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи растворитель частично удаляют в вакууме. Оставшуюся реакционную смесь разбавляют водой (50 мл) и лиофилизуют, получая неочищенное соединение с11 (2,82 г, >100%) в виде натриевой соли.
Данная методика, по существу, та же, что описана ТНайпуопдх еГ а1., Е Меб. СНет.. 29, 20802087(1986).
Пример полупродукта 149. Соединение сШ.
ЭСМ раствор (10 мл) неочищенного соединения с11 (516 мг, 1,61 ммоль) обрабатывают НОВТ (436 мг, 3,23 ммоль) и ΌΚ.' (0,328 мл, 2,09 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 мин реакционную смесь обрабатывают ЭСМ раствором (5 мл), содержащим ТкОН-соль бензилового эфира глицина (815 мг, 2,42 ммоль) и ИГРЕА (0,422 мл, 2,42 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 12 ч реакционную смесь гасят водой и экстрагируют ЕГОАс. Органическую фазу сушат, концентрируют в вакууме и очищают хроматографией на силикагеле (40% ЕГОАс/гексаны), получая соединение сШ (495 мг, 69%). !Н' ЯМР соединения с1и (400 МГц, СЭС13): δ 7,29-7,21 (м, 5Н), 5,16 (уш.с, 2Н), 4,89 (уш.с, 1Н), 4,20-3,90 (м, 4Н), 3,80 (уш.с, 1Н), 1,75-1,42 (м, 4Н), 1,38 (с, 9Н), 0,87 (м, 3Н).
Исходя из неочищенного соединения с11, соединения с1ш (83%) и сЮ (50%) получают способом, идентичным описанному для соединения сШ. 1Н ЯМР соединения с1ш (400 МГц, СИС13): δ 7,49 (уш.с, 1Н), 7,34-7,24 (м, 5Н), 5,13 (АВ кв, 6=12,2 Гц, Е=23,9 Гц, 2Н), 4,88 (уш.д, 1=8,8 Гц, 1Н), 4,53 (м, 1Н), 3,983,91 (м, 2Н), 3,82 (м, 1Н), 1,65-1,20 [м, 16Н, включая синглет при 1,37 (9Н)], 0,86 (т, 1=7,3 Гц, 3Н).
- 147 017556
Ή ЯМР соединения ς1ΐν (400 МГц, СОС13): δ 7,60-7,0 (м, 10Н), 5,30-5,0 (м, 2н.), 5,00-4,75 (м, 2Н), 4,15-3,70 (м, 3Н), 3,30-3,00 (м, 2Н), 1,75-1,20 [м, 13Н, включая синглет при 1,37 (9Н)], 0,86 (уш.с, 3Н).
Пример полупродукта 150. Соединение αν.
К ОСМ (10 мл) и ТГФ (5 мл) раствору неочищенного соединения с11 (1 г, 3,13 ммоль) добавляют НОВТ (634 мг, 4,69 ммоль) и ЕОС1 (781 мг, 4,07 ммоль), и затем (к)-а-метилбензиламин (0,604 мл, 4,69 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре и затем гасят водой. Реакционную смесь экстрагируют ЕЮЛс. Органическую фазу промывают насыщенным раствором соли и сушат №28О4. Органическую фазу концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (20% ЕЮЛс/гексаны) и получают соединение αν (459 мг, 37%). 1н· ЯМР соединения ςΐν (400 МГц, СОС13): δ 7,32-7,21 (м, 6Н), 5,0 (м, 1Н), 4,75 (м, 1Н), 3,94 (м, 2Н), 3,70 (м, 1Н), 1,65-1,15 [м, 16Н, включая дублет при 1,51 (1=6,8 Гц, 3Н), синглет при 1,39 (9Н)], 0,82 (м, 3Н).
Пример полупродукта 151. Соединение сЫ.
Соединение αν (220 мг, 0,55 ммоль) растворяют в 4н. НС1 в диоксане (10 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч и затем концентрируют в вакууме, получая неочищенное соединение сЮ (~100%) в виде НС1-соли.
Следуя методике, описанной для получения соединения сМ, соединения с1уи, с1уш и сйх получают с почти количественным выходом из неочищенного соединения с11.
Пример полупродукта 152. Соединение с1х.
ЭСМ раствор (4 мл) НС1-соли соединения νίί (96 мг, 0,144 ммоль) обрабатывают РуВОР (120 мг, 0,23 ммоль) и ОГРЕЛ (0,1 мл, 0,576 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 мин раствор обрабатывают ТГФ раствором (4 мл), содержащим соединение αν (0,288 ммоль) и ОГРЕЛ (0,2 мл, 1,152 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляют ЕЮЛс (50 мл) и органическую фазу промывают затем NаНСОз и насыщенным раствором соли. Органическую фазу концентрируют в вакууме и остаток очищают хроматографией на силикагеле (80% ЕЮЛс/гексаны), получая соединение с1х (113 мг, 89%).
- 148 017556
Пример полупродукта 153. Соединение сШ.
ЭСМ раствор (6 мл) соединения νίί (140 мг, 0,235 ммоль) обрабатывают РуВОР (196 мг, 0,376 ммоль) в течение 30 мин. Затем к полученному раствору добавляют ТГФ раствор (6 мл) соединения с1уи (~0,47 ммоль) и ^IΡΕА (0,327 мл, 1,88 ммоль).
Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и гасят водой (30 мин). Реакционную смесь экстрагируют Ε!ОАс (50 мл). Органическую фазу промывают NаΗСО3 и насыщенным раствором соли. Объединенные водные слои вновь экстрагируют Ε!ОАс (50 мл). Объединенные органические фазы сушат и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (80-100 смесь Ε!ОАс/гексаны) и получают соединение с!\1 (104 мг, 48%).
Пример полупродукта 154. Соединение ски.
К ЭСМ раствору (10 мл) соединения Οχι (280 мг, 0,304 ммоль) добавляют ЭМР реагент (193 мг, 0,456 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч и гасят 10% Ыа28О3. Органическую фазу промывают ЫаНСО3 и насыщенным раствором соли. Полученную органическую фазу сушат и концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (80-100% Ε!ОАс/гексаны) и получают соединение с1\й (271 мг, 97%).
Пример полупродукта 155. Соединение сЕш.
Соединение 1χχχίίί (220 мг, 0,43 ммоль) поглощают ЭСМ (5 мл). К ЭСМ раствору добавляют РуВОР (270 мг, 0,51 ммоль) и перемешивают 5 мин. К указанному раствору добавляют по каплям соединение χχχνί' (0,51 ммоль) в ТГФ (5,1 мл). К реакционной смеси добавляют ^IΡΕΛ (0,09 мл, 0,51 ммоль) и перемешивают в течение ночи в атмосфере Ν2. На следующий день реакционную смесь разбавляют Ε!ОАс, промывают насыщенным NаΗСО3, промывают насыщенным раствором соли. Очистка при градиенте смеси 70-90% Ε!ОАс/гексан дает соединение сбш (180 мг, 56%).
Пример полупродукта 156. Соединение сЫу.
Соединение сχχν (2,09 г, 7,4 ммоль) поглощают ЭСМ (20 мл). К указанному раствору добавляют РуВОР (4,64 г, 8,9 ммоль) и НОВ! (1,2 г, 8,9 ммоль) и перемешивают 5 мин. Полученную смесь охлаждают до 0°С и затем добавляют 8-(-)-а-метилбензиламин (1,15 мл, 8,9 ммоль) и ^IΡΕΛ (1,55 мл, 8,9 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи, давая нагреться до комнатной температуры. Реакционную смесь промывают 0,1н. НС1, насыщенным NаΗСО3 и насыщенным раствором соли. Очистка смесью 30% Ε!ОАс/гексаны дает соединение скгу (1,6 г, 56,3%).
Пример полупродукта 157. Соединение χχχνί'.
Соединение ο1χίν (1,48 г, 3,8 ммоль) гидрируют, используя 10% Рб/С (300 мг) в МеОН (50 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Н2. Реакционную смесь фильтруют через целит и концентрируют, получая соединение χχχνί' (895 мг, 94,2%).
Пример полупродукта 158. Соединение Οχνί.
К ЭСМ раствору (15 мл) соединения с!\у (2г, 8,2 ммоль)
добавляют НОА! (1,34г, 9,84 ммоль) и ОСС (9,84 мл, 1М, 9,84 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 мин к полученному выше раствору добавляют ТГФ раствор (9,84 мл), содержащий гидрохлорид метилового эфира трет-Ь-лейцина (9,84 ммоль) и ^IΡΕΛ (1,72 мл, 9,84
- 149 017556 ммоль). Затем добавляют при комнатной температуре ЭМАР (1 г, 8,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Последующие стандартная водная обработка и хроматография на силикагеле (20% Е1ОАс/гексаны) приводят к получению соединения Ηχνί (1,75 г, 58%).
Пример полупродукта 159. Соединение Πχνίί.
К ТГФ раствору (35 мл) соединения Πχνί (1,75 г, 4,73 ммоль) добавляют 4н. раствор НС1 в диоксане (11,8 мл, 47,3 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. По прошествии указанного времени растворитель удаляют при пониженном давлении, получая неочищенное соединение Πχνίί (~100%), которое вновь растворяют в ДМФ и используют непосредственно в последующей реакции.
Пример полупродукта 160. Соединение Πχνίίί.
К ЭСМ раствору (15 мл), содержащему 2-пиразинкарбоновую кислоту (44 7 мг, 3,6 ммоль), РуВОР (1,87 г, 3,6 ммоль) добавляют ДМФ раствор (15 мл) соединения Πχνίί (811 мг, 3 ммоль). К образовавшейся смеси затем добавляют Э1РЕА (0,63 мл, 3,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре и затем гасят водой. Реакционную смесь экстрагируют ЕЮАс. Органический слой промывают насыщенным раствором соли и концентрируют в вакууме, что дает остаток, который очищают хроматографией на силикагеле (40% ЕЮАс/гексаны) и получают соединение Πχνίίί (0,93 г, 82%).
οΙχνΙΗ
Пример полупродукта 161. Соединение Πχίχ.
К МеОН раствору (10 мл) соединения Πχνίίί (0,93 г, 2,47 ммоль) добавляют 2н. №ОН (3,71 мл, 7,41 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь подкисляют до рН 3, используя 1н. НС1. Реакционную смесь разбавляют Е1ОАс (75 мл) и промывают водой и насыщенным раствором соли. Полученный таким образом органический слой сушат и концентрируют в вакууме, получая соединение Πχίχ (~100%).
с!х1х
Пример полупродукта 162. Соединение Πχχ.
ЭСМ раствор (10 мл) соединения Ηχίχ (2,47 ммоль) обрабатывают НОА1 (436 мг, 3,21 ммоль) и ЭСС (3,2 мл, 1М, 3,2 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин реакционную смесь обрабатывают ТГФ раствором (13,6 мл) соединения ν (499 мг, 2,72 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи белые твердые вещества (мочевину) фильтруют. Фильтраты концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают хроматографией на силикагеле, получая соединение Ηχχ (0,99 г, 76%).
Пример полупродукта 163. Соединение Πχχί.
ЕЮН раствор (20 мл) соединения Ηχχ (0,99 г, 1,88 ммоль) обрабатывают 2н. №ЮН (2,81 мл, 5,63 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь подкисляют до рН 3 с помощью 1н. НС1. Реакционную смесь экстрагируют Е1ОАс (75 мл). Органический слой сушат и концентрируют в вакууме, получая соединение Ηχχί (7 72 мг, 82%).
- 150 017556
Пример полупродукта 164. Соединение с1хх1.
ЭСМ раствор (10 мл) соединения с1хх1 (290 мг, 0,58 ммоль) обрабатывают РуВОР (484 мг, 0,93 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 мин реакционную смесь обрабатывают ТГФ раствором (7,5 мл) соединения хш' (140 мг, 0,75 ммоль), затем ОГРЕА (0,13 мл, 0,75 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь гасят водой и экстрагируют ЕЮАс. Полученный органический слой промывают насыщенным раствором соли, сушат и концентрируют в вакууме. Полученный остаток очищают хроматографией на силикагеле (5% ЕЮН/ЕЮАс), получая соединение с1ххи 290 мг (75%).
Пример полупродукта 165. Соединение сГххЛ.
Соединение 1хххш (600 мг, 1,17 ммоль) поглощают ЭСМ (4 мл). Добавляют РуВОР (670 мг, 1,3 ммоль), перемешивают 5 мин и охлаждают до 0°С. К указанному раствору добавляют по каплям соединение с1ххш
(333 мг, 1,3 ммоль) в ТГФ (13 мл). К реакционной смеси добавляют ОГРЕА (0,23 мл, 1,3 ммоль) и дают нагреться до температуры окружающей среды, перемешивая в течение двух ночей. На следующий день реакционную смесь концентрируют и очищают, используя 2% ЕЮН/ЕЮАс, что дает неочищенное соединение с1ххЛ (900 мг, свыше 100%).
Пример полупродукта 166. Соединение с1хх\з.
Соединение сххх (3,01 г, 10,7 ммоль) поглощают ЭСМ (30 мл) и температуру снижают до -78°С. К указанному раствору добавляют РуВОР (6,1 г, 11,7 ммоль) и НОВТ (1,58 г, 11,7 ммоль) с последующим добавлением (З)-(+)-1-циклогексилэтиламина, соединения сГхху, (1,74 мл, 11,7 ммоль) и ОГРЕЛ (2,1 мл, 11,7 ммоль). Полученную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. На следующий день реакционную смесь разбавляют ЕЮАс, промывают 0,1н. НС1, насыщенным NаНСО3 и насыщенным раствором соли. Продукт очищают, используя 40% Е1ОАс/гексан, и получают 2г (47,8%) соединения с1хху1.
Пример полупродукта 167. Соединение с1ххш.
Соединение с1хху| (2 г, 5,13 ммоль) гидрируют, используя 10% Рб/С (500 мг) в МеОН (40 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере Н2. Реакционную смесь фильтруют через целит и концентрируют, получая соединение с1ххш (1,31 г, 99,8%).
Пример полупродукта 168. Соединение с1хх1х.
В круглодонной колбе в инертной атмосфере соединение с1ххуи [1-бензиловый эфир (З)-(-)-2-оксо1,5-имидазолиндикарбоновой кислоты]
- 151 017556 (290 мг, 1,1 ммоль) растворяют в безводном ДМФ (6 мл). Добавляют НОА1 (151 мг, 1,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 25 мин. Реакционную смесь охлаждают на ледяной бане. Затем добавляют Э1С (0,2 мл, 0,16 г, 1,2 ммоль) с последующим добавлением соединения Οχχνίίί (1 ммоль, 435 мг) в безводном ДМФ (4 мл). Реакционную смесь оставляют медленно нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение 2 дней. Затем реакционную смесь переносят в делительную воронку, содержащую 120 мл ЕЮАс, и промывают 2х 1н. НС1 (50 мл) и 1Х насыщенным раствором соли. Органический слой отделяют, сушат над Мд§О4. Растворитель упаривают при пониженном давлении и остаток очищают хроматографией на силикагеле (загружают в ИСМ и элюируют 30%, затем 50% ЕЮАс/ИСМ, затем 2% МеОН/ЕЮАс), получая продукт Οχχίχ (434 мг, 64%).
Пример полупродукта 169. Соединение Οχχχ.
Исходное вещество Οχχίχ (434 мг, 0,64 ммоль) растворяют в диоксане (6 мл) и 0,5М водном растворе №ОН (4 мл, 3 экв.). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи. ТСХ в 100% ЕЮАс (используют пятно РМА) показывает в дополнение к кислотному продукту на старте продукт с более быстрой фракцией. Реакционную смесь подкисляют до рН 2 с помощью 1н. НС1 и затем экстрагируют 2х ЕЮАс. К водному раствору добавляют твердый №1С1 для усиления экстракции. Органические экстракты затем объединяют, сушат над Мд§О4 и упаривают при пониженном давлении. МС показывает, что ΟΒΖ группа удаляется путем гидролиза. Полученное соединение Οχχχ (количественный выход) используют на следующей стадии как таковое.
Пример полупродукта 170. Соединение Οχχχί.
В круглодонной колбе в инертной атмосфере соединение Οχχχ (279 мг, 0,54 ммоль) растворяют в безводном ДМФ (6 мл). Добавляют НОА1 (82 мг, 0,65 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 25 мин. Реакционную смесь охлаждают затем на ледяной бане. Затем добавляют Э1С (0,11 мл, 0,65 ммоль), с последующим добавлением соединения χίίί' (0,7 ммоль) в безводном ДМФ (4 мл). Реакционную смесь оставляют медленно нагреваться до комнатной температуры и перемешивают 21 ч. Реакционную смесь затем выгружают в делительную воронку, содержащую 120 мл ЕЮАс, и промывают 2х 1н. НС1 (50 мл) и 1Х насыщенным раствором соли. Органический слой отделяют, сушат над Мд§О4. Растворитель упаривают при пониженном давлении и продукт очищают хроматографией на силикагеле (загружают в ИСМ и элюируют 50% ЕЮАс/ИСМ, затем 3% МеОН/ЕЮАс и затем 20% ЕЮН/ЕЮАс). После удаления растворителя остаток повторно растворяют в Όη 8ο1ν ТГФ и фильтруют для удаления силикагеля. Последующее удаление растворителя дает соединение Οχχχί (434 мг, 64% выход).
Пример полупродукта 171. Соединение Οχχχίίί.
В круглодонной колбе в инертной атмосфере 6-гидроксипиколиновую кислоту
(153 мг, 1,1 ммоль) растворяют в безводном ДМФ (6 мл). Добавляют НОА1 (151 мг, 1,2 ммоль) и затем реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 25 мин. Реакционную смесь охлаждают затем на ледяной бане. Добавляют Э1С (0,2 мл, 0,16 г, 1,2 ммоль) с последующим добавлением соединения Οχχχίί
- 152 017556 (1,0 ммоль, 435 мг) в безводном ДМФ (4 мл). Реакционную смесь оставляют медленно нагреваться до комнатной температуры и перемешивают 2 дня. Реакционную смесь затем выгружают в делительную воронку, содержащую 120 мл ЕЮАс, и промывают 2х 1н. НС1 (50 мл) и 1Χ насыщенным раствором соли. Органический слой отделяют, сушат над Мд§О4. Растворитель упаривают при пониженном давлении и продукт очищают хроматографией на силикагеле (загружают в ЭСМ, элюируют 30%, затем 50% ЕЮАс/ЭСМ и затем 2% МеОН/ЕЮАс), что позволяет собрать образовавшееся соединение с1хххш (314 мг, 56%).
Пример полупродукта 172. Соединение с1хххгу.
Исходное вещество с1хххш (314 мг, 0,56 ммоль) растворяют в диоксане (5 мл) и 0,5М ЫаОН (3,4 мл, 3 экв.). Реакцию осуществляют в течение ночи. ТСХ в 100% ЕЮАс (с применением УФ) свидетельствует о полной конверсии до кислотного продукта на старте с медленной фракцией. Реакционную смесь подкисляют до рН 2 с помощью 1н. НС1 и затем экстрагируют 2х ЕЮАс. К водной фазе добавляют твердый №С1 для усиления экстракции. Органические экстракты затем объединяют, сушат над Мд§О4 и затем упаривают при пониженном давлении, получая соединение с1хххгу (0,5 ммоль, 89%), которое используют на следующей стадии как таковое.
ςΐχχχίν
Пример полупродукта 173. Соединение с1ххху.
В круглодонной колбе в инертной атмосфере кислотное соединение с1хххгу (265мг, 0,5 ммоль) растворяют в безводном ДМФ (6 мл). Добавляют НОАТ (75,6 мг, 0,6 ммоль) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре 25 мин. Реакционную смесь охлаждают на ледяной бане. Затем добавляют Э1С (0,1 мл, 0,6 ммоль) с последующим добавлением соединения хш' (0,65 ммоль) в безводном ДМФ (4мл). Реакционную смесь оставляют медленно нагреваться до комнатной температуры и перемешивают в течение 21 ч. Реакционную смесь затем выгружают в делительную воронку, содержащую ЕЮАс (120 мл), и промывают 2х 1н. НС1 (50 мл) и 1х насыщенным раствором соли. Органический слой отделяют, сушат над Мд§О4. Растворитель упаривают при пониженном давлении и продукт очищают хроматографией на силикагеле (загружают в ЭСМ, элюируют 50% ЕЮАс/гексан, затем чистым ЕЮАс и затем 4% МеОН/ЕЮАс), получая продукт, соединение с1ххху (185 мг, 52%).
Пример полупродукта 174. Соединение сххххгу'.
К раствору Э-аланина (5 г, 56,1 ммоль) в 1н. ЫаОН (152 мл, 152 ммоль) при 0°С добавляют раствор МеОС(О)С1 (6,5 мл, 84,2 ммоль) в диэтиловом эфире (30 мл). Смесь перемешивают на ледяной бане в течение 3 ч и затем доводят до рН 9 с помощью 1н. ЫаОН. После перемешивания при комнатной температуре в течение 1 ч смесь промывают диэтиловым эфиром (3х 50 мл), подкисляют до рН ~2 с помощью 5н. НС1, экстрагируют ЕЮАс (5х50 мл). Органический экстракт промывают водой, насыщенным раствором соли и затем сушат (Мд§О4). Растворитель удаляют, получая соединение схххгу, Νметоксикарбонил-Э-аланин, в виде бесцветного масла (6,48 г, 79%).
и О .ΟγΚ/οΗ
О * οχχχίν
Пример полупродукта 175. Соединение с1ххху1.
Раствор Ν-метоксикарбонил-Э-аланина (0,193 г, 1,31 ммоль) и НОА1 (0,177 г, 1,31 ммоль) в ЭСМ (10 мл), охлажденный на ледяной бане, обрабатывают ЭСС (1,31 мл, 1,31 ммоль). После перемешивания на ледяной бане в течение 0,5 ч добавляют раствор полученного соединения с1хххи (0,88 ммоль) ТГФ (8,8 мл). Смесь нагревают до комнатной температуры и перемешивают в течение ночи, затем охлаждают на ледяной бане и гасят насыщенным раствором NаНСО3. Выпавшие осадки фильтруют и фильтрат поглощают ЕЮАс (100 мл). Органический слой промывают насыщенным раствором NаНСО3, насыщенным раствором соли и затем сушат (Мд§О4). После удаления растворителя остаток очищают хроматографией на колонке с силикагелем (60% ЕЮАс/гексан), получая соединение с1ххху1 в виде смолистой пены (0,321
- 153 017556 г, 68%).
Пример полупродукта 176. Соединение οΐχχχνΐΐ.
К раствору соединения с1xxxν^ (0,321 г, 0,597 ммоль) в ЕЮН (5 мл) при 5°С добавляют 2н. ЫаОН (1,05 мл, 2,1 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч. Раствор подкисляют до рН ~2 с помощью 1н. НС1 и ЕЮН удаляют упариванием на роторном испарителе. Смесь экстрагируют ЕЮАс (3x30 мл) и объединенный экстракт промывают насыщенным раствором соли и затем сушат (Мд8О4). Растворитель удаляют и остаток сушат в вакууме, получая соединение с1xxxν^^ в виде смолистой пены (0,235 г, 77%).
Пример полупродукта 177. Соединение с1xxxν^^^.
Раствор соединения с1xxxν^^ (0,363 г, 0,712 ммоль) в ИСМ (10 мл) охлаждают на ледяной бане и обрабатывают РуВОР (0,594 г, 1,14 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 0,5 ч смесь охлаждают на ледяной бане и обрабатывают раствором соединения χίίί' (1,1 ммоль) в ТГФ (11 мл) и ИГРЕА (0,249 мл, 1,42 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и гасят раствором ЫН4С1. Растворитель концентрируют и смесь поглощают ЕЮАс (100 мл). Органический слой промывают насыщенным раствором ЫаНСО3, насыщенным раствором соли и затем сушат (Мд8О4). После удаления растворителя остаток очищают хроматографией на колонке (5% ЕЮН/ЕЮАс), получая с1xxxν^^^ (0,341 г, 71%).
Пример полупродукта 178. Соединение с1xxx^x.
Диаминопропионовую кислоту (3 г, 28,7 ммоль) поглощают 1 М ЫаОН (86,2 мл, 86,2 ммоль), охлаждают до 0°С и затем добавляют МеОС(О)С1 (5,54 мл, 71,75 ммоль) в ЕеО (25 мл). Полученную смесь перемешивают в течение ночи при нагревании до комнатной температуры. Снижают рН реакционной смеси до 2 и водный слой экстрагируют 3х ЕЮАс. Экстракты объединяют, сушат над Ыа28О4, фильтруют и концентрируют, получая соединение с1xxx^x (3,09 г, 48,9%).
Пример полупродукта 179. Соединение αΐχχχχ.
Соединение ^χχχίχ (340 мг, 1,55 ммоль) поглощают ИСМ (4 мл). Добавляют ЭСС (1,7 ммоль) и НОА! (235 мг, 1,7 ммоль) с последующим добавлением соединения ^χχ^ (1,7 ммоль) в ИСМ (3,4 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи. На следующий день реакционную смесь фильтруют через рыхлый слой диоксида кремния и концентрируют. Очистку осуществляют в смеси 75% ЕЮАс/гексан, получая соединение Πχχχχ (715 мг, 72,4%).
Пример полупродукта 180. Соединение с1xxxx^.
Соединение Πχχχχ (715 мг, 1,12 ммоль) гидролизуют в стандартных условиях, используя ЕЮН (4 мл) и 1н. ЫаОН (3 экв.), получают соединение с1xxxx^ (600 мг, 88,0%).
- 154 017556
Пример полупродукта 181. Соединение Πχχχχίί.
Соединение Ηχχχχί (550 мг, 0,9 ммоль) поглощают ЭСМ (8 мл). Добавляют РуВОР (675 мг, 1,3 ммоль) с последующим добавлением соединения χίίί' (1,3 ммоль) в ТГФ (1,3 мл). Добавляют ЭШЕА (0,23 мл, 1,3 ммоль) и образовавшийся раствор перемешивают в течение ночи. На следующий день реакционную смесь разбавляют ЕЮАс, промывают насыщенным NаНСΟ3 и затем насыщенным раствором соли, затем концентрируют, получая остаток. Полученный остаток очищают, используя 5% ЕЮН/ЕЮАс, и получают соединение Πχχχχίί (290 мг, 41,5%).
Пример полупродукта 182. Соединение Πχχχχίίί.
Метиловый эфир СЬх-циклогексилглицин-трет-лейцина (7,36 г, 17,6 ммоль) гидролизуют в стандартных условиях, используя МеОН (60 мл) и 1н. №1ОН (52,8 мл, 3 экв.), и получают промежуточное соединение Ηχχχχίίί (92%).
Пример полупродукта 183. Соединение Πχχχχίν.
Соединение Πχχχχίίί (3,82 г, 9,46 ммоль) поглощают ЭСМ (30 мл). Добавляют ОСС (11,35 ммоль) в ЭСМ (11,35 мл), с последующим добавлением НОА! (1,54 г, 11,35 ммоль). Полученную смесь перемешивают 5 мин и добавляют соединение ν (9,46 ммоль) в ТГФ (40 мл). Полученную смесь перемешивают в течение ночи. На следующий день реакционную смесь разбавляют ЕЮАс, промывают 1н. НС1, насыщенным NаНСΟ3 и затем насыщенным раствором соли, затем концентрируют, получая остаток. Полученный остаток очищают на силикагеле при градиенте 20-30%, получая соединение Ηχχχχίν (3,03 г, 56,3%).
Пример полупродукта 183. Соединение Πχχχίί.
Соединение Ηχχχχίν (3,03 г, 5,33 ммоль) гидрируют, используя 10% Ρά/С (500 мг) в МеОН (30 мл), в атмосфере Н2 в течение 4 ч, получая соединение Ηχχχίί (2,3 г, 99%).
Пример полупродукта 184. Соединение Πχχχχν.
К раствору 1-амино-1-циклогексанкарбоновой кислоты (2,86 г, 20 ммоль) в МеОН (40 мл) добавляют по каплям 8ОС12 (3 мл) при 0°С. Смесь медленно нагревают до комнатной температуры и затем кипятят с обратным холодильником в течение 5 ч. Затем к прозрачному раствору добавляют ЕьО и отделяют осадок. Твердый продукт дополнительно сушат в вакууме, получая соединение Πχχχχν (95%) в виде белого порошка.
Пример полупродукта 185. Соединение Πχχχχνί.
2-Пиразинкарбоновую кислоту (1 г, 8 ммоль, 1 экв.) растворяют в ЭСМ (15 мл), добавляя НОЛ! (1,1 г, 8 ммоль) и ОСС (8 мл, 1 М) в ЭСМ. После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 мин к активированной смеси добавляют соединение Ηχχχχν (1,3 г, 8 ммоль). Затем добавляют ПЕГЕА (2 мл, 12 ммоль) с последующим добавлением ОМА? (1,5 г, 12 ммоль). После перемешивания в течение 3 дней при комнатной температуре реакционную смесь фильтруют через целит, концентрируют и очищают хроматографией на колонке (50% ЕЕОАс/гексан), получая требуемый продукт Ηχχχχνί в виде желтого масла (2,1 г, 100%).
- 155 017556
Пример полупродукта 186. Соединение ^χχχχνίί.
Соединение Οχχχχνί (1,06 г, 2,6 ммоль) растворяют в МеОН (30 мл) с добавлением 2н. NаΟΗ (водн.) (12 мл, 24 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, до тех пор, пока ТСХ (50% ЕЮАс/гексан) не укажет на полноту гидролиза. Затем раствор подкисляют до рН 3 с помощью 5н. НС1, разбавляют ЕЮАс и затем экстрагируют органический слой. Органический слой промывают затем насыщенным раствором соли и сушат над Μд§Ο4, получая концентрированием соединение ^χχχχνίί (84%).
ώχχχχνΗ
Пример полупродукта 187. Соединение ^χχχχνίίί.
Соединение Οχχχνίί (1,6 г, 6,4 ммоль) растворяют в ЭСМ (18 мл) и затем последовательно добавляют ΗΟАΐ (0,96 г, 7 ммоль) и ОСС (7 мл, 1М В ЭСМ), при комнатной температуре. После перемешивания при комнатной температуре в течение 20 мин к активированной смеси добавляют гидрохлорид метилового эфира Ь-трет-лейцина (7 мл, 1М В ТГФ). Затем добавляют Э1РЕА (1,2 мл, 7 ммоль) с последующим добавлением ОМАР (1,2 г, 9,8 ммоль). После перемешивания в течение 3 дней при комнатной температуре реакционную смесь фильтруют через целит, очищают хроматографией на колонке и концентрируют, получая соединение Οχχχχνίίί (60% ЕЮАс/гексан) в виде белого твердого вещества (1,74 г, 72%).
С1ХЮООХ
Пример полупродукта 188. Соединение сю.
Соединение Οχχχχνίίί (1,74 г, 4,6 ммоль) растворяют в МеОН (22 мл) с добавлением 2н. NаΟΗ (водн.) (7 мл, 14 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, до тех пор пока ТСХ (50% ЕЮАс/гексан) не укажет на полноту гидролиза. Раствор подкисляют до рН 3 с помощью 5н НС1, разбавляют ЕЮАс и затем органический слой экстрагируют. Органический слой промывают насыщенным раствором соли и сушат над Мд^/! и затем концентрируют, получая соединение сю (100%).
СЯС
Пример полупродукта 189. Соединение сс.
К ЭСМ раствору (15 мл) соединения сю (1,5 г, 4,1 ммоль) при комнатной температуре добавляют ΗΟАΐ (610 мг, 4,5 ммоль), с последующим добавлением 1 М раствора ОСС в ЭСМ (4,5 мл, 4,5 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин при комнатной температуре добавляют ТГФ раствор (20 мл, 0,2
М) соединения ν (4 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь фильтруют через целит. Фильтрат концентрируют до желтого масла, которое очищают хроматографией на силикагеле (50% ЕЮАс/гексан), получая соединение сс1 (660 мг,
32%).
Пример полупродукта 190. Соединение ссЕ
К ЕЮН раствору (6 мл) соединения сс (600 мг, 1,13 ммоль) добавляют 2н. NаΟΗ (1,7 мл, 3,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре, затем подкисляют до рН 3 с помощью 5н. НС1. Затем смесь разбавляют ЕЮАс с последующей экстракцией органического слоя. Затем органический слой промывают насыщенным раствором соли и сушат над Μд§Ο4, получая после концентрирования соединение сс1 (92%).
СС1
Пример полупродукта 191. Соединение сси.
К ЭСМ раствору (8 мл) сси (310 мг, 0,62 ммоль) добавляют РуВОР (420 мг, 0,8 ммоль). Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин. К указанному раствору затем добавляют соединение χίίί' (8 мл, 0,1 М) в ТГФ, с последующим добавлением Э1РЕА (0,23 мл, 1,3 ммоль). Реакцион
- 156 017556 ную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем гасят водой (25 мл) в течение 30 мин. Затем смесь экстрагируют ЕЮЛс. Полученный органический слой промывают насыщенным раствором соли и сушат над Μд§О4, затем концентрируют, получая желтое масло. Очистка хроматографией на силикагеле (3% ЕЮН/ЕЮАс) дает соединение сси (140 мг, 33%).
Пример полупродукта 192. Соединение ссхЛ.
К раствору соединения ссш, трет-бутилового эфира (Кдифенилметилен)глицина, (6 г, 0,0206 ммоль) и хирального РТС (1,08 г, 0,00206 ммоль) в сухом Όί’Μ (48 мл), в атмосфере Ν2, при -60°С, добавляют С§ОН-Н2О (6,9 г, 0,0412 ммоль). К реакционной смеси добавляют по каплям метиловый эфир 1карбокси-1-циклопентена (5,2 мл, 0,0412 ммоль) в 10 мл Όί'Μ. Смесь перемешивают в течение 4 дней при -60°С, затем разбавляют 200 мл Е12О и добавляют 15 мл насыщенного водного раствора ХН4С1. Фазы разделяют и органическую фазу промывают 15 мл воды и 15 мл насыщенного раствора соли. Водные фазы экстрагируют 100 мл Е12О. Органические фазы объединяют и сушат над №ь8О4. Неочищенный продукт, полученный удалением растворителя, растворяют в 100 мл Е1ОН и затем добавляют КН2ОН· НС1 (1,43 г, 0,0206 ммоль) и №1ОЛс (1,68 г, 0,0206 ммоль). Смесь нагревают до температуры кипения с обратным холодильником в течение 48 ч. Затем растворитель удаляют и полученный неочищенный остаток непосредственно очищают флэш хроматографией, элюируя смесью 30-50% ЕЮАс/гексан, получая соединение ссЛ (65%) в виде белого твердого вещества. С12Н^О3 (ММ=225,29); МС: т/ζ (М++1)=226,5. Энантиомерный избыток: 18% ее, определен хиральной ВЭЖХ.
Пример полупродукта 193. Соединение сс'.
К раствору соединения ссЛ (2 г, 0,0088 ммоль) в 60 мл ΑСN добавляют каталитическое количество ΌΜΛΡ (0,216 г, 0,0017 ммоль) и раствор ди-трет-бутилдикарбоната (2,49 г, 0,011 ммоль) в 30 мл АСК Смесь перемешивают в течение 14 ч при комнатной температуре, затем разбавляют 100 мл Όί'Μ и промывают насыщенным NаΗСО3 (10 мл) и насыщенным раствором соли (10 мл). Органическую фазу сушат над №ь8О4. Упаривание растворителя дает неочищенный продукт, который очищают на колонке с силикагелем, элюируя смесью 15% ЕЮАс/гексан, что дает соединение сс' (86%) в виде белого твердого вещества. С-11; \О, ММ=325,40 МС: т/ζ (М++1)=326,2
Пример полупродукта 194. Соединение сс\г
К раствору соединения сс' (1,7 г, 0,0052 ммоль) в 50 мл ТГФ (0,14 М) при -78°С добавляют ПГВЛЬН (7,8 мл, 0,0078 ммоль). Смесь перемешивают в течение 1 ч, затем добавляют 10 мл МеОН. Смесь разбавляют 25 мл ЕЮЛс и 25 мл насыщенного водного раствора тартрата натрия и затем перемешивают при комнатной температуре 1 ч. Фазы разделяют и водную фазу однократно экстрагируют 50 мл ЕЮЛс. Органические фазы объединяют и сушат над №ь8О4. Упаривание растворителя дает неочищенный остаток, который используют без очистки. Неочищенный продукт растворяют в 25 мл ЭСМ, добавляют Е1381 (0,84 мл, 0,0052 ммоль) и смесь охлаждают до -78°С, затем добавляют по каплям ВР3ОЕ12 (0,71 мл, 0,0061 ммоль). Спустя 30 мин добавляют Е1381 (0,84 мл) и ВР3ОЕ12 (0,71 мл) и смесь перемешивают в течение 2 ч при -78°С. Реакционную смесь гасят насыщенным водным NаΗСО3 (10 мл) и экстрагируют Όί’Μ (2x20 мл). Органические фазы объединяют и сушат над №ь8О4. Упаривание растворителя дает неочищенный остаток, который очищают флэш хроматографией, элюируя 13% смесью ЕЮЛс/гексан, и получают соединение сс\з (87%). С17Η29NО4 ММ=311,42 МС: т/ζ (М++1)=312,6.
Пример полупродукта 195. Соединение сс'и.
Соединение сс'1 (0,5 г, 0,0016 ммоль) растворяют в 8 мл раствора 1н. НС1 в ЕЮАс (получен барботированием НС1 через сухой ЕЮАс с последующим разбавлением до 1н. добавлением ЕЮАс). Смесь
- 157 017556 перемешивают 6 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляют в вакууме и полученный осадок растворяют в ЕьО. После перемешивания смеси в течение 15 мин растворитель удаляют при пониженном давлении. Полученное белое твердое вещество промывают ЕьО и соединение ссуп (0,27 г, 80% выход) отделяют фильтрованием. С!2Н2^О2 ММ 211,15 МС: т/ζ (М++1)=212, 6.
Пример полупродукта 196. Соединение ν.
К раствору соединения ссху1 (0,230 г, 0,74 ммоль) в ЭСМ (3,7 мл) добавляют ТЕЛ (2,85 мл). Смесь перемешивают в течение ночи, затем растворитель удаляют в вакууме досуха и остаток растворяют в ЕЮН (7,5 мл). Смесь охлаждают до 0°С, добавляют по каплям 8ОС12 (0,22 мл, 2,96 ммоль) и затем кипятят с обратным холодильником в течение 2 ч. ЕЮН удаляют при пониженном давлении и остаток растворяют в ЭСМ (10 мл). Образовавшийся раствор промывают дважды насыщенным водным раствором NаНСОз (5 мл). Фазы разделяют, органическую фазу сушат над №28О4 и растворитель удаляют в вакууме, получая соединение ν (80%) в виде масла. СюН^О2 М.М.: 183,25, МС: т/ζ (М*+1)=184,2.
Пример полупродукта 197. Соединение сб.
1-Бензилимидазол (6 г, 37,9 ммоль) поглощают ЕьО (180 мл). Образовавшийся раствор охлаждают до -60°С и обрабатывают н-ВиЬ1 (1,6 М, 24 мл). Реакционную смесь перемешивают 30 мин и затем через смесь барботируют СО2 в течение 15 мин. Осадок фильтруют, промывают ЕьО и затем поглощают Н2О. Полученный водный раствор подкисляют до рН 3 с помощью 5н НС1. Требуемый продукт, сб, выделяют после лиофилизации в виде белого твердого вещества.
Пример полупродукта 198. Соединение сб1.
ЭСМ раствор (100 мл) соединения ί (9,25 г, 27,9 ммоль) обрабатывают при 0°С ЭЛ8Т (9,2 мл, 69,8 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение ночи реакционную смесь резко охлаждают льдом и экстрагируют ЭСМ (200 мл). Органический слой промывают насыщенным раствором соли и концентрируют в вакууме. Остаток очищают хроматографией на силикагеле (30% ЕЮЛс/гексан) и получают 8,5 г (86%) требуемого фторированного промежуточного соединения. Часть полученного промежуточного соединения (4,5 г, 14,2 ммоль) растворяют в ЕЮН (75 мл). Образовавшийся раствор гидрируют в стандартных условиях, используя Рб(ОН)2/С (2,98 г, 20% Рб содержание, 4,26 ммоль). После перемешивания в течение ночи при комнатной температуре реакционную смесь фильтруют через целит. Фильтраты концентрируют в вакууме, получая соединение сб1 (2,5 г, 96%).
Пример полупродукта 199. Соединение сбп.
Раствор соединения сб (890 мг, 4,4 ммоль) поглощают ЭСМ (15 мл). Добавляют НОВТ (595 мг, 4,4 ммоль) и ОСС (4,4 ммоль, 1 М в ЭСМ) и перемешивают в течение 20 мин. К указанной смеси добавляют ЭСМ раствор (15 мл) 1хх1х' (990 мг, 3,5 ммоль). Полученную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере азота. Реакционную смесь разбавляют ЕЮЛс, промывают насыщенным NаНСОз и насыщенным раствором соли. Органический слой концентрируют в вакууме, получая остаток, который очищают в смеси 30% ЕЮЛс/гексан, получая соединение сби (666 мг, 41%).
Пример полупродукта 200. Соединение сбш.
Соединение сбш получают из соединения сбп в стандартных условиях гидролиза, используя метиловый спирт (10 мл) и 1н. №ЮН (3 экв.). Выделяют 565 мг соединения сбш (88%).
- 158 017556
Пример полупродукта 201. Соединение сбА.
Соединение ебш (1,24 ммоль) поглощают ЭСМ (5 мл). Добавляют ОСС (1,6 ммоль, 1М ЭСМ) с последующим добавлением НОАТ (1,6 ммоль). Полученную смесь перемешивают 20 мин и добавляют по каплям соединение еб1 (1,6 ммоль) в ТГФ (8 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи. Реакционную смесь фильтруют и промывают ЕЮАс. Объединенный органический слой промывают насыщенным NаΗСОз, насыщенным раствором соли, сушат над Мд8О4 и концентрируют. Очистку осуществляют в смеси 30% ЕЮАс/гексан, получая соединение ебК (565 мг, 70%).
Пример полупродукта 202. Соединение еб'.
Соединение еб' (565 мг, 0,86 ммоль) получают из соединения ебК в стандартных условиях гидролиза, используя этиловый спирт (10 мл) и 1н. №ЮН (3 экв.). Выделяют 490 мг (91%) соединения еб'.
Пример полупродукта 203. Соединение еб\з.
Соединение сбν (490 мг, 0,78 ммоль) поглощают ЭСМ (10 мл). К ЭСМ раствору добавляют РуВОР (520 мг, 1 ммоль) с последующим добавлением ТГФ раствора (10 мл) χίίί (186 мг, 1 ммоль). К реакционной смеси добавляют ΌΙΕΑ (0,18 мл, 1 ммоль) и перемешивают в течение ночи в атмосфере азота. На следующий день реакционную смесь разбавляют ЕЮАс, промывают насыщенным NаΗСОз и насыщенным раствором соли. Очистку осуществляют в 100% ЕЮАс, получая соединение еб\з (478 мг, 77%).
Пример полупродукта 204. Соединение ебун.
Соединение еб\з (478 мг, 0,6 ммоль) гидрируют, используя Рб(ОН)2/С (20% сухая основа, 100 мг), в МеОН (40 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере водорода. По прошествии указанного времени реакционную смесь фильтруют через целит и концентрируют, получая соединение сб'И (417 мг, 98%).
Пример полупродукта 205. Соединение сбx.
Соединение сxxν (поставляемое А1Ьапу Мо1ееи1аг Кекеагей 1пе., 1,5 г, 5,2 ммоль) поглощают ЭСМ (15 мл). К указанному раствору добавляют РуВОР (2,7 г, 5,2 ммоль) и НО8Т (7 00 мг, 5,2 ммоль). К указанному выше раствору добавляют ТГФ раствор (15 мл) (-)-а-(4-пиридил)зтиламина (640 мг, 5,2 ммоль) с последующим добавлением ΌΙΕΑ (0,93 мл, 5,2 ммоль). |(-)-а-(4-пиридил)этиламин получают из соли, тартрата (-)-а-(4-пиридил)этиламина (А1бг1сН), перемешиванием с 1н. №1ОН (2 экв.) в течение 1 ч и последующей экстракцией ЕЮАс (3х), 70% извлечение]. Реакционную смесь перемешивают в течение но- 159 017556 чи при комнатной температуре. Реакционную смесь промывают насыщенным NаΗСΟз и насыщенным раствором соли. Продукт очищают в 5% смеси ЕЮН/ЕЮАс, получая 2 г (99%) промежуточного соединения сбx.
с4х
Пример полупродукта 206. Соединение сб\зп.
Соединение сбx (2г, 5,2 ммоль) гидрируют, используя 10% Рб/С (500 мг) в МеОН (50 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи в атмосфере водорода. Продукт фильтруют через целит и концентрируют, получая соединение с6уш (1,3 г, 98%).
σάνίίί
Фармакология
Как указано в данном описании, соединения по изобретению полезны благодаря их способности ингибировать протеазу НСУ, а следовательно, полезны также для ингибирования репликации НСУ.
Следовательно, изобретение касается способа ингибирования протеазы НСУ, включающего контактирование анти-НСУ-протеаза-ингибирующего количества соединения формулы 1 с композицией, содержащей протеазу НСУ.
Кроме того, изобретение касается способа ингибирования репликации НСУ, включающего контактирование НСУ с эффективным количеством соединения формулы 1.
Далее, изобретение касается способа лечения пациента, страдающего от инфекции НСУ или подвергающегося воздействию инфекции НСУ, включающего введение пациенту фармацевтически эффективного количества соединения формулы 1. Следует понимать, что ссылки на лечение инфекции НСУ включают профилактическую терапию для подавления или остановки инфекции, а также лечение установленного острого или хронического инфекционного заболевания НСУ или физиологических состояний, вызванных инфекцией НСУ, обеспечивающие, по существу, излечивание пациента от инфекции, сдерживание степени (объема) заражения или улучшение связанных с ним физиологических состояний. Подразумевается, что эффективное количество определяет количество соединения по настоящему изобретению, эффективное по разумной биологической оценке, пригодное для использования в контакте с клетками человека или других млекопитающих, не являясь излишне токсичным, не вызывая раздражения, аллергической реакции и тому подобное, и соответствующее разумному соотношению польза/риск при лечении инфекции НСУ и, таким образом, обеспечивающее требуемый терапевтический эффект.
Рассматриваемые физиологические состояния включают некоторые, но не все, из возможных клинических состояний, при которых анти-НСУ лечение является оправданным. Специалистам в данной области хорошо известны обстоятельства, определяющие требуется ли анти-НСУ лечение.
Особый аспект изобретения составляет соединение по изобретению для введения в форме фармацевтической композиции, хотя соединение может быть введено и само по себе. Фармацевтическая композиция означает композицию, содержащую соединение формулы 1 и по меньшей мере один компонент, выбранный из группы, включающей: фармацевтически приемлемые носители, разбавители, создающие покрывающие оболочки средства, вспомогательные средства, эксципиенты или средства доставки, такие как консерванты, наполнители, дезинтеграторы, смачивающие средства, эмульгирующие средства, средства стабилизации эмульсии, суспендирующие средства, изотонические агенты, подсластители, корригенты, отдушки, красители, антибактериальные средства, противогрибковые средства, другие терапевтические средства, смазывающие средства, замедлители или промоторы адсорбции и средств доставки, в зависимости от способа введения и дозированных форм. Композиции могут быть представлены в форме таблеток, пилюль, гранул, порошков, водных растворов или суспензий, растворов для инъекции, эликсиров или сиропов. Характерные примеры суспендирующих средств включают этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбит и сложные сорбитановые эфиры, микрокристаллическую целлюлозу, алюминийметагидроксид, бентонит, агар-агар и трагакант, или смеси указанных веществ. Примеры антибактериальных и противогрибковых средств для предотвращения действия микроорганизмов включают парабены, хлорбутанол, фенол, сорбиновую кислоту и тому подобное. Характерные примеры изотонических средств включают сахара, хлорид натрия и тому подобное. Характерные примеры замедлителей адсорбции для пролонгирования всасывания включают моностеарат алюминия и желатин. Характерные примеры промоторов адсорбции для усиления всасывания включают диметилсульфоксид и родственные аналоги.
Характерные примеры носителей, разбавителей, растворителей, средств доставки, солюбилизирующих средств, эмульгаторов и стабилизаторов эмульсии включают воду, хлороформ, сахарозу, этанол,
- 160 017556 изопропиловый спирт, этилкарбонат, этилацетат, бензиловый спирт, тетрагидрофуриловый спирт, бензилбензоат, полиолы, пропиленгликоль, 1,3-бутиленгликоль, глицерин, полиэтиленгликоли, диметилформамид, Тетееп® 60, §рап® 80, цетостеариловый спирт, миристиловый спирт, моностеарат глицерина и натрийлаурилсульфат, сложные эфиры сорбитана и жирных кислот, растительные масла (такие как хлопковое масло, арахисовое масло, кукурузное масло, оливковое масло, касторовое масло и кунжутное масло) и пригодные для инъекции органические сложные эфиры, такие как этилолеат и тому подобное, или подходящие смеси указанных веществ. Характерные примеры эксципиентов включают лактозу, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, дикальцийфосфат. Характерные примеры дезинтеграторов включают крахмал, альгиновые кислоты и некоторые комплексные силикаты. Характерные примеры смазывающих средств включают стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоли высокой молекулярной массы.
В комбинации с соединением по настоящему изобретению можно использовать другие терапевтические средства, включая другие анти-НСУ средства. Некоторые характерные примеры известных антиНСУ средств включают иммуномодуляторные средства, такие как α-, β- или γ-интерфероны; пэгилированные производные соединения интерферона-α , другие противовирусные средства, такие как рибавирин и амантадин; другие ингибиторы протеазы гепатита С; ингибиторы других мишеней жизненного цикла НСУ, включающих геликазу, полимеразу, металлопротеазу, рибосомы внутреннего проникновения, или противовирусные соединения широкого спектра действия, такие как УХ-497, ингибитор клеточной инозинмонофосфатдегидрогеназы, ГМРОН, описанные в патенте Соединенных штатов Νο. 5807876 либо их комбинации. Терапевтические средства, используемые в комбинации с соединением по настоящему изобретению, могут быть введены раздельно, одновременно или последовательно.
Выбор материала в фармацевтической композиции, отличного от соединения формулы 1, обычно обусловлен химическими свойствами активного соединения, такими как растворимость, конкретным способом введения и мерами предосторожности, соблюдаемыми в фармацевтической практике. Например, эксципиенты, такие как лактоза, цитрат натрия, карбонат кальция, дикальцийфосфат, и дезинтеграторы, такие как крахмал, альгиновые кислоты и некоторые комплексные силикаты, объединенные со смазывающими средствами, такими как стеарат магния, лаурилсульфат натрия и тальк, могут быть использованы для получения таблеток.
Фармацевтические композиции могут быть представлены ассортиментом форм, таких как таблетки, пилюли, гранулы, порошки, водные растворы или суспензии, растворы для инъекции, эликсиры и сиропы.
Жидкая дозированная форма означает дозу активного соединения, предназначенную для введения пациенту в жидкой форме, например, фармацевтически приемлемые эмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры. В дополнение к активным соединениям жидкие дозированные формы могут содержать инертные разбавители, обычно используемые в данной области, такие как растворители, солюбилизирующие агенты и эмульгаторы.
Твердые композиции могут также быть использованы для заполнения мягких и твердых наполняемых желатиновых капсул, с применением таких эксципиентов, как лактоза или молочный сахар, а также полиэтиленгликоли высокой молекулярной массы и тому подобных.
Когда используют водные суспензии, они могут содержать эмульгирующие средства или агенты, способствующие образованию суспензий.
Масляная фаза эмульсионной фармацевтической композиции может быть составлена из известных ингредиентов известными способами. Хотя фаза может включать только вещество, способствующее эмульгированию (иначе называемое эмульгатором), предпочтительно фаза включает смесь из по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом либо как с жиром, так и с маслом. Предпочтительно, гидрофильный эмульгатор включают вместе с липофильным эмульгатором, действующим как стабилизатор. Предпочтительно также включать как масло, так и жир. Вместе эмульгатор (эмульгаторы) и стабилизатор (стабилизаторы) составляют пластичный материал, который вместе с маслом и жиром составляет эмульгирующую основу мази, образующую масляную дисперсную фазу композиций в виде крема.
По желанию, водная фаза основы крема может включать, например, по меньшей мере 30% мас./мас. многоатомного спирта, т.е. спирта с двумя или более гидроксильными группами, такого как пропиленгликоль, бутан-1,3-диол, маннит, сорбит, глицерин и полиэтиленгликоль (включая ПЭГ 400) и их смеси. Композиции местного применения предпочтительно включают соединение, которое усиливает всасывание или проникновение активного ингредиента через кожу или другие пораженные участки.
Выбор подходящих масел или жиров для композиции основан на достижении требуемых косметических свойств. Так, крем должен предпочтительно быть не жирным, не оставляющим пятна и смываемым продуктом с подходящей консистенцией, не допускающей вытекания из тюбиков или других контейнеров. Могут быть использованы линейные или разветвленные моно- или двухосновные сложные алкиловые эфиры, такие как диизопропилмиристат, децилолеат, изопропилпальмитат, бутилстеарат, 2этилгексилпальмитат или смесь разветвленных сложных эфиров, известная как Сгойашо! САР. Указан
- 161 017556 ные соединения могут быть использованы по отдельности или в комбинации, в зависимости от требуемых характеристик. Альтернативно, могут быть использованы липиды с высокой температурой плавления, такие как вазелиновое масло и/или вазелин, либо другие минеральные масла.
На практике соединение/фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть введены в подходящей композиции человеку или животным путем местного или системного введения, включающего пероральное, ингаляционное, ректальное, назальное, буккальное, подъязычное, вагинальное, введение в толстую кишку, парентеральное (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное, внутрикожное, подоболочечное и эпидуральное), внутриполостное и внутрибрюшинное. Очевидно, что предпочтительный способ введения может меняться в зависимости, например, от состояния реципиента.
Фармацевтически приемлемые дозированные формы означают дозированные формы соединения по изобретению и включают, например, таблетки, драже, порошки, эликсиры, сиропы, жидкие препараты, включая суспензии, спреи, таблетки для ингаляции, лепешки, эмульсии, растворы, гранулы, капсулы и суппозитории, а также жидкие препараты для инъекций, включая липосомные препараты. Методики и рецептура могут обычно быть взяты из Кеттд1оп'8 Рйагтасеибса1 8с1епсе8, Маск РиЬ118Ыпд Со., Еа81оп, РА, 1а1е81 ебйюп.
Композиции, подходящие для перорального введения могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы, облатки или таблетки, каждая из которых содержит заранее рассчитанное количество активного ингредиента; как порошок или гранулы/ как раствор или суспензия в водной жидкости или неводной жидкости; или как жидкая эмульсия по типу масло-в-воде или жидкая эмульсия по типу вода-в-масле. Активный ингредиент может также быть представлен в виде болюса, электуария или пасты.
Таблетка может быть получена прессованием или формованием, необязательно, с одним или более вспомогательными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть получены прессованием в подходящей машине активного ингредиента в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанного со связующим, смазывающим агентом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно-активным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть получены формованием в подходящей машине смеси порошкообразных соединений, увлажненных инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть, необязательно, покрыты оболочкой или разделены бороздками и могут быть составлены так, чтобы обеспечивалось замедленное или регулируемое высвобождение активного ингредиента.
Твердые композиции для ректального введения включают суппозитории, составленные известными способами и содержащие по меньшей мере одно соединение по изобретению.
По желанию и для более эффективного распределения соединения могут быть микроинкапсулированы в системах доставки замедленного высвобождения или мишененаправленных системах доставки, либо соединены с указанными системами, такими как биосовместимые биоразлагаемые полимерные матрицы (например, поли(б,1-лактид со-гликолид)), липосомы и микросферы, подкожно или внутримышечно впрыскиваемые способом, называемым подкожное или внутримышечное депо, обеспечивающим непрерывное замедленное высвобождение соединения (соединений) в течение 2 недель или дольше. Соединения могут быть стерилизованы, например, путем фильтрования через бактериальный фильтр или путем включения стерилизующих средств в форме стерильных твердых композиций, которые могут быть растворены в стерильной воде или некоторой другой стерильной, пригодной для инъекции среде непосредственно перед применением.
Композиции, подходящие для назального введения или введения путем ингаляции означают композиции, находящиеся в форме, пригодной для введения пациенту через нос или путем ингаляции. Композиция может содержать носитель, в форме порошка, с размером частиц, например, в пределах 1-500 мкм (включая размеры частиц в пределах 20-500 мкм с приращением в 5 мкм, такие как 30 мкм, 35 мкм и т.д.). Подходящие композиции, где носитель является жидким, для введения в качестве, например, назального спрея или капель для носа, включают водные или масляные растворы активного ингредиента. Композиции, подходящие для аэрозольного введения, могут быть получены общепринятыми способами и могут доставляться с другими терапевтическими средствами. Ингаляционную терапию легко осуществлять с помощью ингаляторов с отмеряемыми дозами.
Композиции, подходящие для перорального введения означают композиции, находящиеся в форме, пригодной для введения пациенту через рот. Композиции могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы, лепешки или таблетки, каждая из которых содержит заранее рассчитанное количество активного ингредиента; в виде порошка или гранул; в виде раствора или суспензии в водной жидкости или неводной жидкости; или в виде жидкой эмульсии масло-в-воде или жидкой эмульсии вода-в-масле. Активный ингредиент может также быть представлен в виде болюса, электуария или пасты.
Композиции, подходящие для парентельного введения означают композиции, находящиеся в форме, пригодной для введения пациенту, минуя пищеварительный тракт. Композиции являются стерильными и включают эмульсии, суспензии, водные и неводные растворы для инъекции, которые могут содержать суспендирующие средства и загустители, а также антиоксиданты, буферные растворы, бакте
- 162 017556 риостатические факторы и растворенные вещества, делающие композицию изотонической и имеющие рН, приведенный в соответствие с кровью предполагаемого реципиента.
Композиции, подходящие для ректального или вагинального введения означают композиции, находящиеся в форме, пригодной для введения пациенту прямокишечно или через влагалище. Композиция предпочтительно находится в форме суппозиториев, которые могут быть получены смешиванием соединений по настоящему изобретению с подходящими, не вызывающими раздражение эксципиентами или носителями, такими как масло какао, полиэтиленгликоль или воск для суппозиториев, являющихся твердыми при обычной температуре, но жидкими при температуре тела, и, поэтому, плавящимися в прямой кишке или влагалище и высвобождающими активный компонент.
Композиции, подходящие для системного введения означают композиции, находящиеся в форме, пригодной для общего введения в организм пациента. Композицию предпочтительно вводят путем инъекции, включая внутримышечную, внутривенную, внутрибрюшинную и подкожную. Для инъекции соединения по изобретению составляют в жидкие растворы, предпочтительно в физиологически совместимые буферные растворы, такие как раствор Хенке или раствор Рингера. В дополнение, соединения могут быть составлены в твердой форме и повторно растворены или суспендированы непосредственно перед применением. Включаются также лиофилизованные формы. Системное введение может также быть выполнено введением трансмукозальным или трансдермальным способами, либо соединение может быть введено перорально. Для введения через слизистую оболочку или через кожу в композиции используют пенетранты, способствующие проникновению через барьер вещества. Такие пенетранты обычно известны в данной области и включают, например, соли желчной кислоты и производные фусидовой кислоты для введения через слизистую оболочку. В дополнение, для усиления проникновения могут быть использованы детергенты. Трансмукозальное введение может быть произведено, например, путем применения спреев для носа или суппозиториев. Для перорального введения соединения составляют в общепринятые для перорального введения формы, такие как капсулы, таблетки и тоники.
Композиции, подходящие для местного применения означают составы, находящиеся в форме, пригодной для местного введения пациенту. Композиция для местного применения может быть представлен в виде мази, бальзамов, порошков, спреев и ингаляций, гелей (на водной и спиртовой основе), кремов, в том виде, как они известны в данной области, либо включенных в матриксную основу для нанесения на пластырь, что позволяет регулируемое высвобождение соединения через трансдермальный барьер. При составлении мази активные ингредиенты могут быть использованы с мазевой основой, либо парафиновой, либо смешиваемой с водой. Альтернативно, активные ингредиенты могут быть составлены в крем с основой для крема по типу масло-вводе. Композиции, подходящие для местного введения в глаз, включают глазные капли, где активный ингредиент растворен или суспендирован в подходящем носителе, в особенности водном растворителе для активного ингредиента. Композиции, подходящие для местного введения через рот, включают лепешки, содержащие активный ингредиент в ароматизированных основах, обычно сахаре и аравийской камеди или трагаканте; пастилки, содержащие активный ингредиент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахароза и аравийская камедь; и полоскания для рта, включающие активный ингредиент в подходящем жидком носителе.
Твердая дозированная форма означает, что дозированная форма соединения по изобретению является твердой, например, капсулы, таблетки, пилюли, порошки, драже или гранулы. В таких твердых дозированных формах соединение по изобретению является смешанным по меньшей мере с одним обычным инертным эксципиентом (или носителем), таким как цитрат натрия или дикальцийфосфат, или (а) наполнителями или сухими разбавителями, как, например, крахмал, лактоза, сахароза, глюкоза, маннит и кремниевая кислота, (Ь) связующими веществами, например карбоксиметилцеллюлозой, альгинатами, желатином, поливинилпирролидоном, сахарозой или аравийской камедью, (с) увлажнителями, как например, глицерин, (б) дезинтегрирующими средствами, как, например, агар-агар, карбонат кальция, картофельный крахмал или тапиока, альгиновая кислота, некоторые комплексные силикаты и карбонат натрия, замедлителями растворения, как, например, парафин, (ί) ускорителями всасывания, как например, четвертичные аммониевые соединения, (д) смачивающими средствами, как, например, цетиловый спирт и глицеринмоностеарат, (б) адсорбентами, как, например, каолин и бентонит, (1) смазывающими средствами, как например, тальк, стеарат кальция, стеарат магния, твердые полиэтиленгликоли, лаурилсульфат натрия, (]) веществами, делающими материал непрозрачным, (к) буферными агентами и агентами, высвобождающими соединение (соединения) по изобретению на определенном участке желудочнокишечного тракта отсроченным способом.
Фактические уровни дозы активного ингредиента (ингредиентов) в композициях по изобретению можно варьировать так, чтобы было получено количество активного ингредиента (ингредиентов), эффективное для получения требуемого терапевтического ответа для отдельного пациента при данной композиции и конкретном способе введения. Следовательно, выбранный для конкретного пациента уровень дозы зависит от ряда факторов, включающих требуемый терапевтический эффект, способ введения, требуемую длительность лечения, этиологию и тяжесть заболевания, состояние пациента, массу, пол, диету и возраст, тип и эффективность каждого активного ингредиента, скорость всасывания, метаболизм и экскрецию и другие факторы.
- 163 017556
Суммарная суточная доза соединений по данному изобретению, вводимая пациенту в виде разовых или разделенных доз, может составлять, например, приблизительно от 0,001 до 100 мг/кг массы тела ежедневно и предпочтительно 0,01-10 мг/кг/день. Например, для взрослого, дозы обычно составляют приблизительно от 0,01 до 100, предпочтительно приблизительно 0,01-10 мг/кг массы тела в день при ингаляции, приблизительно от 0,01 до 100, предпочтительно приблизительно 0,1-70, в особенности 0,510 мг/кг массы тела в день при пероральном введении и приблизительно от 0,01 до 50, предпочтительно приблизительно 0,01-10 мг/кг массы тела в день при внутривенном введении. Процент активного ингредиента в композиции может меняться, считается, что он должен составлять такую долю, чтобы можно было получить подходящую дозу. Дозированные единичные композиции могут содержать такое количество дозированных единиц, какое может быть использовано для получения суточной дозы. Обычно, несколько единичных дозированных форм может быть введено почти одновременно. Дозу можно вводить так часто, как это необходимо для получения требуемого терапевтического эффекта. Некоторые пациенты могут реагировать быстро на большую или меньшую дозу, и следует выбрать значительно более слабые достаточные поддерживающие дозы. Для других пациентов может быть необходимо долговременное лечение при норме 1-4 дозы в день, согласно физиологическим потребностям каждого отдельного пациента. Само собой разумеется, что иным пациентам потребуется прописать не более одной или двух доз в день.
Композиции могут быть получены в единичной дозированной форме любым из хорошо известных в области фармации способов. Такие способы включают стадию объединения активного ингредиента с носителем, состоящим из одного или более вспомогательных ингредиентов. Обычно составы получают равномерным и однородным смешиванием активного ингредиента с жидкими носителями или тонко измельченными твердыми носителями, либо с тем и другим, а затем, при необходимости, формованием продукта.
Композиции могут быть представлены в контейнерах с единичной или многократной дозой, например запаянных ампулах или пузырьках с резиновыми крышками, и могут храниться в сублимированном (лиофилизованном) состоянии, требующем только добавления стерильного жидкого носителя, например воды для инъекции, непосредственно перед применением. Приготовленные для немедленной инъекции растворы или суспензии могут быть получены из стерильных порошков, гранул и таблеток указанного выше типа.
Соединения, охватываемые объемом настоящего изобретения, обладают значительной фармакологической активностью согласно испытаниям, описанным в литературе и приведенным ниже, причем результаты испытаний считаются коррелируемыми с фармакологической активностью в организмах человека и других млекопитающих.
Методика ферментного анализа ΐη υϊΙιό Ингибирование N83 сериновой протеазы ИСУ
Домен N83 протеазы НСУ экспрессируют и очищают как описано ранее (УеПех. опубликованная РСТ заявка \¥О 98/17679; включенная в данное описание в качестве ссылки). Хромогенный пептидный субстрат, ЕИУУАЬиС-п-нитроанилид, и фрагмент кофактора Ν84Λ (-КК68УУГУ6КГУТ86К-) для N83 протеазы синтезированы на заказ Атепсап Рерйбе Сот (Са). Соединения по изобретению исследуют на их способность ингибировать активность N83 протеазы НСУ, используя спектрофотометрический анализ и ЕИУУАЬиС-п-нитроанилид в качестве субстрата. Испытание проводят в 96-луночном планшете для микротитрования, используя 8рес!гаМах 250 считывающее устройство (Мо1еси1аг Иеуюек, 8иппууа1е, СА), обеспечивающее возможность измерения кинетических параметров. Расщепление ЕИУУАЬиС-пнитроанилидного (500 мкМ) субстрата с помощью очищенной N83 протеазы НСУ (0,5 мкМ) проводят при 30°С в буферном растворе, содержащем 30 мкМ фрагмента №4А, 4 6 мМ Нерек, рН 8,0, 92 мМ №С1, 18% глицерина, 5 мМ ИТТ и 7,5 % ДМСО, в отсутствии или в присутствии испытуемого соединения. Реакцию контролируют по высвобождению рNА (п-нитроанилина) при 405 нм.
Определение кинетических параметров, включающих Утах, Кт и Утах/Кт, проводят в указанных выше условиях. Значения К1 рассчитывают из графика зависимости скорости от концентрации ингибитора, при фиксированных концентрациях фермента и субстрата, путем нелинейной подгонки данных методом наименьших квадратов по уравнению Моррисона для конкурентного ингибирования сильного связывания |Ч. Р. Моткоп, ВюсЫт. Βίορίινδ. Ас!а., 185, 269-286 (1969)]. Для этой цели используют РгБш программу (СгарБРаб 8ойгаге, Гпс.).
Описываемые ингибиторы сериновой протеазы НСУ могут быть использованы в комбинации с другими молекулами, которые непосредственно обладают анти-НСУ активностью или опосредованно проявляют анти-НСУ активность, либо для профилактического лечения пациентов при риске заражения инфекцией НСУ, либо для лечения уже заразившихся пациентов. Термин анти-НСУ активность означает способность молекулы, в случае наличия, полностью ингибировать или снижать накопление вирионов НСУ по сравнению с накоплением вирионов НСУ в отсутствии такой молекулы, и/или способность молекулы облегчать состояния или уменьшать интенсивность симтомов, связанных с инфекцией НСУ или патогенезом у пациентов. Молекулы, обладающие анти-НСУ активностью, включают такие молекулы, которые нарушают одну или более стадий развития инфекции НСУ или репликации, а также такие, кото
- 164 017556 рые вызывают иммуномодулирующие и антипролиферативные эффекты в клетках хозяина. Молекулы, обладающие анти-НСV активностью, могут ингибировать НСV-специфические репликативные события, такие как, но, не ограничиваясь ими, НСV-направленный синтез нуклеиновой кислоты или белка. Стадии репликации НСV, на которых могут действовать молекулы, обладающие анти-НСV активностью, могут включать проникновение в клетку (например, прикрепление, проникновение); декапсидацию и высвобождение генома НСV; репликацию генома НСV (например, репликацию вирусного генома РНК или цепи вирусного генома РНК; транскрипцию вирусной информационной РНК); трансляцию белков НСV; посттрансляцинную модификацию протеинов НСV (например, протеолитическое расщепление; гликозилирование); внутриклеточный транспорт вирусных протеинов; сборку компонентов вириона и высвобождение вирусных частиц (например, отделение дочерней клетки). Классы молекул, обладающих противовирусной активностью, включают, но не ограничиваясь ими, растворимые рецепторные ловушки и противорецепторные антитела; блокаторы ионных каналов, стабилизаторы капсидов и ингибиторы слитого белка; ингибиторы вирусных полимераз, обратной транскриптазы, геликазы, примазы или интегразы; антисенсорные олигонуклеотиды и рибозимы; иммуномодулирующие и иммуностимулирующие агенты, включающие цитокины, такие как интерфероны, а также белковые агонисты, стероиды и классические лекарства, такие как левамизол; ингибиторы регуляторных белков; ингибиторы протеазы; ингибиторы составного белка; и вируснейтрализующие антитела и цитотоксические лимфоциты. Термин анти-НСV эффективное количество или фармацевтически эффективное количество означает количество соединения или комбинации указанных выше соединений, эффективное для нормализации или улучшения состояний или уменьшения интенсивности симптомов, вызванных инфекцией НСV или сопутствующим патогенезом у пациентов, или снижения уровней вируса ίη νίίΐΌ или ίη νί\Ό. Применения ίη νίΙΐΌ включают систему анализа репликона, описанную ниже, где такие количества эффективны для снижения аккумуляции РНК репликона НСV и/или накопления белков, кодируемых составляющими их генами.
Соединения, обладающие анти-НСV активностью, предусмотренные для применения в композициях и способах комбинированной терапии, описываемых в данной заявке, включают, но, не ограничиваясь ими, иммуномодуляторные молекулы, включающие иммуномодулирующие цитокины и другие известные соединения, обладающие противовирусной активностью в отношении НСV, такие как различные противовирусные нуклеозиды и нуклеотиды.
Иммуномодулирующие молекулы, предусмотренные для применения в комбинации с описываемыми ингибиторами сериновой протеазы НСV, включают, но, не ограничиваясь ими, интерферон-альфа 2В (ΙηΐΐΌη А, Бсйегшд Р1оидН); ребатрон (Бсйегшд Р1оидН, интерферон-альфа 2В+рибавирин); пэгилированный интерферон альфа (Веббу, К.В. е( а1. ЕШсасу аг1б заГе(у о£ реду1а1еб (40-кб) НИегГегст а1рНа-2а сотрагеб \νίΦ ^ηΐе^Ге^οη а1рНа-2а ίη попсйФоЕс раЕегИз \νίΦ сНготс Нера(1118 С. НераЮ1оду 33, 433-438 (2001)); согласованный интерферон (Као, ЕН., СНет Р.Е, Ьа1, М.У. & СНет Ό.8. ЕГПсасу оГ соизспзиз ^ηΐе^Ге^οη ίη (Не (геаПпегИ оГ сНгошс Нера11118 С. ί. Саз(гоеШего1. НераЮ1. 15, 1418-1423 (2000)); интерферон-альфа 2А (ВоГсгоп А; ВосНе); лимфобластоидный или природный интерферон; интерферон (аи (С1ауейе, Р. е( а1. ШИбаи, а ηβ\ν ийегГегст 1уре I \νίΦ аиΐ^^еί^ον^^а1 асФйу. Ра(Но1. Вю1. (Рапе) 47, 553-559 (1999)); интерлейкин 2 (Όην® С.Ь., №1зоп, Ό.Β. & Веуез, С.В. ЕиФге орйош £ог Фе таηадетеηΐ о£ Нера11(18 С. Беттагз ίη ЬФег Э|зеазе 19, 103-112 (1999)); интерлейкин 6 (Оау1з, С.Ь., №1зоп, Ό.Β. & Веуез, С.В. РиФге орйош £ог Фе таηадетеηΐ о£ йераййз С. Беттагз ίη ЬВег О1зеазе 19, 103-112 (1999)); интерлейкин 12 (Όην® С.Ь., №1зоп, Э.В. & Веуез, С.В. Еи(иге орНопз £ог Фе таηадетеηΐ о£ Нера(1(18 С. Беттагз ίη ЬФег Э|зеазе 19, 103-112 (1999)); рибавирин и соединения, усиливающие развитие реакции типа 1 Т-хелперных клеток (Оау1з, С.Ь., №1зоп, Э.В. & Веуез, С.В. Еи(иге орНомз £ог Фе таηадетеηΐ о£ Нера(111з С. Беттагз ίη ЬФег Э|зеазе 19, 103-112 (1999)). Интерфероны могут снижать интенсивность вирусных инфекций, оказывая прямые антивирусные действия и/или модифицируя иммунный ответ на инфекцию. Антивирусные действия интерферонов часто опосредованы ингибированием проникновения и декапсидации, синтеза вирусной РНК, трансляции вирусных белков и/или вирусной сборки и высвобождения.
Композиции, стимулирующие синтез интерферона в клетках (Таζи1акНονа, Е.В., РагзНша, ОХ., Сизеу, Т.Б. & ЕгзНоу, Ε.Ι. Ρυ33ίηη Ехрепемсе ίη Бс^ееη^ηд, Ληа1уз^з, амб СНшса1 Лрр1^са(^οη о£ №уе1 [1ИегГегст Фбисегз. ί. ПйегГегст СуФкте Вез. 21, 65-73)) включают, но, не ограничиваясь ими, двунитевую РНК, отдельно или в сочетании с тобрамицином, и имиквимод (3М РНагтасеийса1з) (Баибег, Ό.Ν. 1ттиηοтοби1аΐο^у аг1б рНагтасо1одю ргорегйез о£ тш.|штоб. ί. Ат. Асаб. ЭегтаЮ1. 43, Б6-11 (2000)).
Другие известные соединения, обладающие или способные обладать антивирусной активностью в отношении НСV, обусловленной неиммуномодулирующими механизмами, включают, но, не ограничиваясь ими, рибавирин (Κ',’Ν Рйагтасеийса1з); ингибиторы инозин-5'-монофосфатдегидрогеназы (νΧ-497, разработанные νβΠβ\ РНагтасеийса1з); амантадин и римантадин (УонпоззН А.М. амб Реп11о, В.Р. ТНе го1ез о£ атайабте, птаФабше, игзобеохусНоНс ас1б, ЕШОз, а^е ог ίη сοтЬ^ηаΐ^οη \νίΦ а1рНа т1егГегстз, ίη Фе 1геа1тегИ о£ сНгошс Нера11(1з С. Беттагз ίη ЬВег Э|зеазе 19, 95-102 (1999)); ЬУ217896 (патент США 4835168) (Со1асшо, ЕМ. е( а1 Еνа1иаί^οη о£ Фе аШМиПие^а У1гиз ас!1х111ез о£ 1,3,4-Ф1аб1а7о1-2у1суаηат^бе (ЬУ217896) аг1б Из зобшт за11. Лηΐ^т^с^οЬ^а1 АдеФз & СйетоФегару 34, 2156-2163 (1990)) и метиловый эфир 9-гидроксиимино-6-метокси-1,4а-диметил-1,2,3,4,4а,9,10,10а-октагидрофенантрен-1карбоновой кислоты; гидрохлорид метилового эфира 6-метокси-1,4а-диметил-9-(4-метилпиперазин-1- 165 017556 илимино)-1,2,3,4,4а,9,10,10а-октагидрофенантрен-1-карбоновой кислоты; 1-(2-хлорфенил)-3-(2,2дифенилэтил)мочевина (патент США 6127422).
Составы, дозировка и способы введения указанных выше молекул либо представлены в приведенных ниже ссылках, либо хорошо известны в данной области, как, например, описано Е.С. Наубеп, ш Сообтап & СПтап'з ТНе РНагтасо1одюа1 Ваз1з о! ТНегареийсз, Νίπΐΐι Ебйюп, Нагбтап е! а1., Ебз., МсСга^-НШ, Ие\у Уогк (1996), СНар!ег 50, рр. 1191-1223 и приведенных там ссылках. Альтернативно, если соединение, обладающее НСУ-антивирусной активностью идентифицировано, фармацевтически активное количество такого соединения может быть определено на основании методик, хорошо известных специалисту в данной области. См., например, Вепе! е! а1., ш Сообтап & СПтап'з ТНе РНагтасо1од|са1 Ваз1з о! ТНегареийсз, ΝίπΐΗ Ебйюп, Нагбтап е! а1., Ебз., МсСга^-НШ, Ие\у Уогк (1996), СНар!ег 1, рр.
3-27 и приведенные там ссылки. Таким образом, подходящие композиции, пределы доз и схемы приема лекарственного средства для таких соединений легко могут быть определены стандартными способами.
Комбинации лекарственных средств по настоящему изобретению могут выпускаться для воздействия на клетку или клетки, или на организм в целом, либо в виде отдельных фармацевтически приемлемых композиций, вводимых одновременно или последовательно, либо композиций, содержащих более одного терапевтического средства, либо в виде набора из отдельного средства и композиций из ряда агентов. Независимо от введения такие комбинации лекарственных средств создают анти-НСУ эффективное количество компонентов.
Целый ряд других иммуномодуляторов и иммуностимуляторов, которые могут быть использованы в способе по настоящему изобретению, поступает в настоящее время в продажу и включает препараты под названием: АА-2С; адамантиламиддипептид; аденозиндеаминаза, Ег^оп; адъювант, АШапсе; адъюванты, К1Ь1; адъюванты, У^се^ Аб)иуа\; агеласфин-11; СПИД терапия, СЫгоп; алгалглюкан, 8ΚΙ; алгаммулин, Апи!есН; Апд1п1ус; антиклеточные факторы, Уеба; АпЕсой; антигастрин-17 иммуноген, Ар; система доставки антигена, Уас; антигенсодержащий состав, ШВС; анти СпКН иммуноген, АрН!оп; АпЕНегрт; АгЬ1бо1; азарол; Вау-у-8939; Вау-г-1005; ВСН-1393; Ве1а1есЕп; ВюзЕт; ВЬ-001; ВЬ-009; Вгопсоз1а1; СагИазРт; СЭК1-84-246; цефодизим; ингибиторы хемокина, 1СО8; СМУ белки, Сйу о! Норе; СИ-5888; цитокин-высвобождающий агент, 8ΐ; ИНЕА8, Рагаб1дт; Э18С ТА-Н8У; 107В; 101А; Ι01Ζ; натрий дитиокарб; ЕСА-10-142; ЕБ8-1; эндотоксин, ИоуагЕз; ЕСЕ-20696; ЕСЕ-24089; ЕСЕ-24578; ЕЬТ-3 лиганд, Iттиηеx; ЕК-900483; ЕК-900494; ЕК-901235; ЕТ8^п; С-протеины, Сабиз; глудапсин; глутаурин; гликофосфопептикал; СМ-2; СМ-53; СМЭР; вакцина фактора роста, Еп1геМ; Н-ВГС, NΑΒI; Н-СГС, NΑΒI; НАВ-439; вакцина НеНсоЬас1ег ру1оп; герпес-специфический иммунный фактор; НТУ терапия, ипйеб Вютеб; НурегСАМ+СЕ; IттиМаx; Гттип ВСС; иммунная терапия, СоппесЕуе; иммуномодулятор, Еуапз; иммуномодулятор, Иоуасе11; 1тгед-1; 1тгед-2; Гпботипе; инозин пранобекс; интерферон, Иопд-А (альфа2); интерферон, Сепеп!есН (гамма); интерферон, ИоуагЕз (альфа); интерлейкин-12, СепеЕсз Гпз; интерлейкин-15, Iттиηеx; интерлейкин-16, КезеагсН Сог; 18САК-1; 1005Х; Ь-644257; 1юотагазт1шс кислота; ЫроТНег; ЬК-409; ЬК-410; ЬР-2307; ЬТ (К1926); ЬМ-50020; МАР, 8Ыопод1; МИР производные, Мегск; метенкефалин, ТИ1; метилфурилбутиролактоны; МГМР; миримостим; ассоциированная бактериальная вакцина, Тегп; ММ-1; монилиастат; МРЬА, К1Ы; М8-705; мурабутид; мурабутид, Уасзуп; мурамилдипептидные производные; мурамилпептидные производные миелопид; -563; NΑСО8-6; ИН-765; И18У, Рго!еиз; ИРТ-16416; ИТ-002; РА-485; РЕЕА-814; белки, 8сюз; пептидогликан, РЕуа; РеЕНоп, Абуапсеб Р1ап!; РСМ производное, РНуа; заявки на регистрацию фармпрепаратов Но. 1099; Но. 1426; Но. 1549; Ио. 1585; Ио. 1607; Ио. 1710; Ио. 1779; Ио. 2002; Ио. 2060; Ио. 2795; Ио. 3088; Ио. 3111; Ио. 3345; Ио. 3467; Ио. 3668; Ио. 3998; Ио. 3999; Ио. 4089; Ио. 4188; Ио. 4451; Ио. 4500; Ио. 4689; Ио. 4833; Ио. 494; Ио. 5217; Ио. 530; пидотимод; пимелаутид; пинафид; РМЭ-589; подофиллотоксин, СопрНагт; РОЬ509; ро1у-ГСЬС; ро1у-1СЬС, Уатаза 8Ноуи; Ро1уА-Ро1уи; полисахарид А; протеин А, Вег1о.\ Вюзаепсе; Р834МО; Рзеиботопаз МАЬз, Теут; псомаглобин; РТЬ-78419; пирексол; пириферон; ретроген; ретропеп; КС-003; риностат; рифамаксил; КМ-06; роллин; ромуртид; Ки-40555; Ки-41821; КиЬе11а антитела, КезСо; 8-27609; 8В-73; 8ΌΖ-280-636; 8^Ζ-МК^-953; 8К&Е-107647; 8Ь04; 8Ь05; 8М-4333; солютеин; 8ΚΙ-62-834; 8КБ-172; 8Т-570; 8Т-789; стафаджлизат; стимулон; супрессии; Т-150К1; Т-ЬСЕЕ; табилаутид; темуртид; ТНегаб1дт-НВУ; ТНегаб1дт-НРУ; ТНегаб1дт-Н8У; ТНЕ, РНагт & ир)оНп; ТНЕ, Уеба; тималфазин; фракции тимусного гормона; тимокартин; тимолимфотропин; тимопентин; тимопентинаналоги; тимопентин, Рер!есН; тимозин фракция 5, альфа; тимостимулин; тимотринан; ТМО-232; ТО-115; фактор переноса, УЕадеп; туфтсин, 8е1ауо; убенимекс; ШзазЕИ; АИСС-; СЭ-4+; Со11ад+; СОБ8Е+; СОМ+; ЭА-А+; СА8Т-; СЕ-ТН+; СР-120-; 1Е+; 1Е-А+; 1Е-А-2+; 1Е-В+; 1Е-С+; 1Е-С-1В+; ГБ-2+; ГБ-12+; ВБ-15+; 1М+; ЬНКН-; ЫРСОК+Ь БУМ-В+; ЬУМ-ИК+; БУМ-Т+; ОР1+; РЕР+; РНС-МА+; КИА-8УИ-; 8У-СМ-; ТН-А-1+; ТН-5+; ТИЕ+; υΝ.
Характерные примеры нуклеозидных и нуклеотидных соединений, полезных по настоящему изобретению, включают, но, не ограничиваясь ими:
(+)-цис-5-фтор-1-2-(гидроксиметил)-[1,3-оксатиолан-5-ил]цитозин; (-)-2'-дезокси-3'-тиоцитидин-5'-трифосфат (3ТС);
(-)-цис-5-фтор-1-2-(гидроксиметил)-[1,3-оксатиолан-5-ил]цитозин (ЕТС); (-)-2',3'-дидеокси-3'-тиацитидин[(-)-8ббС];
- 166 017556
1-(2'-дезокси-2'-фтор-бета-О-арабинофуранозил)-5-иодцитозин (ЕЬАС); 1-(2'-дезокси-2'-фтор-бета-О-арабинофуранозил)-5-иодцитозинтрифосфат (Е1АСТР); 1-(2'-дезокси-2'-фтор-бета-О-арабинофуранозил)-5-метилурацил (ЕМАИ);
1- бета-Э-рибофуранозил-1,2,4-триазол-3-карбоксамид;
2',3'-дидезокси-3'-фтор-5-метилдексоцитидин (ЕббМеСу!); 2',3'-дидезокси-3'-хлор-5-метилдексоцитидин (С1ббМеСу1); 2',3'-дидезокси-3'-амино-5-метилдексоцитидин (АббМеСу!); 2',3'-дидезокси-3'-фтор-5-метилцитидин (ЕббМеСу!);
2',3'-дидезокси-3'-хлор-5-метилцитидин (С1ббМеСу1); 2',3'-дидезокси-3'-амино-5-метилцитидин (АббМеСу!);
2',3'-дидезокси-3'-фтортимидин (ЕббТМ);
2',3'-дидезокси-бета-Ь-5 -фторцитидин (бета-Ь-Е ббС);
2',3'-дидезокси-бета-Ь-5 -тиацитидин;
2',3'-дидезокси-бета-Ь-5 -цитидин (бета-Ь-ббС);
9-(1,3 -дигидрокси-2-пропоксиметил)гуанин;
2'-деокси-3'-тиа-5-фторцитозин;
3'-амино-5-метилдексоцитидин (АббМеСу!);
2- амино-1,9-[(2-гидроксиметил-1-(гидроксиметил)этокси)метил]-6Н-пурин-6-он(ганцикловир); 2-[2-(2-амино-9Н-пурин-9ил)этил]- 1,3-пропандилдиацетат (фамцикловир);
2-амино-1,9-дигидро-9-[(2-гидроксиэтокси)метил]-6Н-пурин-6-он (ацикловир);
9-(4-гидрокси-3 -гидроксиметилбут-1 -ил)гуанин (пенцикловир); 9-(4-гидрокси-3-гидроксиметилбут-1-ил)-6-дезоксигуаниндиацетат (фамцикловир); 3'-азидо-3'-дезокситимидин (ΑΖТ);
3'-хлор-5-метилдексоцитидин (С1ббМеСу1);
9-(2-фосфонилметоксиэтил)-2',6'-диаминопурин-2',3'-дидезоксирибозид;
9-(2-фосфонилметоксиэтил)аденин (РМЕА); ацикловиртрифосфат (АСУТР);
О-карбоциклил-2'-дезоксигуанозин (СбС); дидезоксицитидин; дидезоксицитозин (ббС); дидезоксигуанин (ббС); дидезоксиинозин(бб1); Е-5-(2-бромвинил)-2'-дезоксиуридинтрифосфат; фторарабинофуранозилиодурацил;
1- (2'-деокси-2'-фтор-1-бета-О-арабинофуранозил)-5-иодурацил (Е1АИ); ставудин; 9-бета-О-арабинофуранозил-9Н-пурин-6-аминмоногидрат (Ага-А);
9-бета-О-арабинофуранозил-9Н-пурин-6-амин-5'-монофосфатмоногидрат (Ага-АМР);
2- дезокси-3'-тиа-5-фторцитидин; 2',3'-дидезоксигуанин и 2',3'-дидезоксигуанозин.
Синтетические способы получения нуклеозидов и нуклеотидов, полезных в настоящем изобретении, хорошо известны в данной области и описаны в Ас1а ВюсЫт. Ро1., 43, 25-36 (1996); 8\\геб. Ыис1ео51бе5 Ыис1еоббе5 15, 361-378 (1996); 8упШе515 12, 1465-1479 (1995); СагЬойуб. Сйет. 27, 242-276 (1995); Сйет. Ыис1ео51бе5 ЫискоббеБ 3, 421-535 (1994); Алл. КеройБ ίη Меб. Сйет., Асабетк Ргсбб и Ехр. Орт. Ιη\Ό5ΐ. Όιυ§5 4, 95-115 (1995).
Химические реакции, описанные в приведенных выше ссылках, в целом обсуждаются в самом широком смысле их применения к синтезу соединений по данному изобретению. Иногда для некоторых из числа рассматриваемых в данном описании соединений данные реакции могут оказаться не применимы в том виде, как они описаны. Специалисты в данной области легко могут определить соединения, для которых возникает эта проблема. Во всех таких случаях либо реакции могут быть успешно осуществлены за счет обычных модификаций, известных специалисту в данной области, например, путем подходящей защиты мешающих групп, путем замены обычных реагентов на альтернативные, путем стандартного изменения реакционных условий и тому подобное, либо другие, описываемые или, наоборот, общеизвестные реакции могут быть применимы для получения соответствующих соединений по данному изобретению. Во всех препаративных способах все исходные вещества являются известными или их легко получить из известных исходных соединений.
Хотя нуклеозидные аналоги обычно используют в качестве антивирусных агентов как таковые, нуклеотиды (нуклеозидфосфаты) иногда должны быть превращены в нуклеозиды для облегчения их транспорта через клеточные мембраны. Примером химически модифицированного нуклеотида, способного к проникновению в клетки, является 3-1-3-гидрокси-2-фосфонилметоксипропилцитозин (НРМРС, С11еаб 8с1епсе5). Нуклеозидные и нуклеотидные соединения по настоящему изобретению, являющиеся кислотами, могут образовывать соли. Примеры включают соли с щелочными металлами или щелочноземельными металлами, такими как натрий, калий, кальций или магний, или с органическими основаниями или основные соли четвертичного аммония.
Иммуномодуляторы и иммуностимуляторы, используемые в способах комбинированной терапии по настоящему изобретению могут быть введены в количествах меньших, чем обычно принято в данной
- 167 017556 области. Например, интерферон альфа обычно вводят пациентам для лечения инфекции НСУ в количестве приблизительно от 1х 106 единиц/пациент три раза в неделю до 10х106 единиц/пациент три раза в неделю (81топ еГ а1., НераГо1оду 25: 445-448 (1997)). В способах и композициях по настоящему изобретению эта доза может быть в пределах приблизительно от 0,1х106 единиц/пациент три раза в неделю до 7,5х106 единиц/пациент три раза в неделю; более предпочтительно приблизительно от 0,5х106 единиц/пациент три раза в неделю до 5х106 единиц/пациент три раза в неделю; наиболее предпочтительно, приблизительно от 1 х 106 единиц/пациент три раза в неделю до 3х106 единиц/пациент три раза в неделю. Благодаря повышенной антивирусной эффективности в отношении вируса гепатита С иммуномодуляторов и иммуностимуляторов в присутствии ингибиторов сериновой протеазы НСУ по настоящему изобретению, могут быть использованы меньшие количества таких иммуномодуляторов/иммуностимуляторов в описываемых способах и композициях. Подобным образом, благодаря повышенной антивирусной эффективности в отношении вируса гепатита С данных ингибиторов сериновой протеазы НСУ по настоящему изобретению в присутствии иммуномодуляторов и иммуностимуляторов, могут быть использованы меньшие количества ингибиторов сериновой протеазы НСУ в описываемых способах и композициях. Такие уменьшенные количества могут быть определены стандартным контролем за титрами вируса гепатита С проходящих лечение больных. Это может быть выполнено, например, контролем за РНК НСУ в сыворотке пациентов по методикам слот-блоттинг, дот-блоттинг или ОТ-ПЦР, или путем определения поверхностных или других антигенов НСУ. Подобным образом можно проводить мониторинг пациентов во время комбинированной терапии с использованием описываемых ингибиторов сериновой протеазы НСУ и других соединений, обладающих анти-НСУ активностью, например нуклеозидных и/или нуклеотидных антивирусных агентов, для определения наименьших эффективных доз для каждого из используемых в комбинации соединений.
В описываемых способах комбинированной терапии нуклеозидные и/или нуклеотидные антивирусные соединения или их смеси могут быть введены пациенту в количестве в пределах приблизительно от 0,1 мг/пациент/день до 500 мг/пациент/день; предпочтительно от 10 мг/пациент/день до 300 мг/пациент/день; более предпочтительно приблизительно от 25 мг/пациент/день до 200 мг/пациент/день; еще более предпочтительно приблизительно от 50 мг/пациент/день до 150 мг/пациент/день и наиболее предпочтительно в пределах приблизительно от 1 мг/пациент/день до 50 мг/пациент/день.
Соединения могут быть введены пациенту в виде разовой дозы или пропорциональных многократных разделенных доз. В последнем случае дозированные единичные композиции могут содержать такое количество разделенных доз, которое может составлять суточную дозу. Общая суточная доза может также быть увеличена по усмотрению прописывающего лекарство врача за счет кратности приема доз в день.
Схему лечения зараженного инфекцией НСУ пациента с помощью соединений и/или композиций по настоящему изобретению выбирают с учетом различных факторов, включающих возраст, массу, пол, диету и состояние пациента, тяжесть заболевания, способ введения, исходя из фармакологических соображений, таких как активность, эффективность, фармакокинетика и токсилогические профили конкретных используемых соединений и в завимости от того, какая именно система доставки лекарственного средства используется. Введение описываемых лекарственных комбинаций обычно должно продолжаться в течение периода от нескольких недель до нескольких месяцев или лет, пока титры вируса не достигнут приемлемых уровней, указывающих, что инфекция контролируется или уничтожена. За пациентами, проходящими лечение описываемыми лекарственными комбинациями, может осуществляться стандартный контроль путем определения РНК вирусного гепатита в сыворотке пациентов по методикам слотблоттинг, дот-блоттинг или ОТ-ПЦР, или путем определения антигенов вируса гепатита С, таких как поверхностные антигены, в сыворотке для установления эффективности лечения. Постоянный анализ полученных указанными способами данных позволяет изменять схемы приема лекарственных средств в ходе лечения с целью введения в комбинацию оптимальных количеств каждого из компонентов, так, что за счет этого может быть сокращена длительность лечения. Таким образом, схему лечения/приема лекарства, можно рационально изменять по ходу курса терапии, с тем, чтобы вводить наименьшие количества каждого из используемых в комбинации антивирусных соединений, которые вместе обладают достаточной эффективностью против вируса гепатита С, и так, чтобы введение таких антивирусных соединений в комбинации продолжалось так долго, как это необходимо для успешного лечения инфекции.
Настоящее изобретение касается применения описываемых ингибиторов сериновой протеазы НСУ в различных комбинациях с вышеуказанными соединениями и соединениями подобных типов, обладающих анти-НСУ активностью, для лечения или предотвращения инфекций НСУ у пациентов. Например, один или более ингибиторов сериновой протеазы НСУ могут быть использованы в сочетании с: одним или более интерферонами или производными интерферона, обладающими анти-НСУ активностью; одним или более соединениями, не относящимися к классу интерферона, обладающими анти-НСУ активностью; или одним или более интерферонами или производными интерферона, обладающими антиНСУ активностью и одним или более соединениями, не относящимися к классу интерферона, обладающими анти-НСУ активностью. При использовании в комбинации для лечения или профилактики инфек
- 168 017556 ций НСУ у пациентов любой из описанных сейчас ингибиторов сериновой протеазы НСУ и указанных выше соединений, обладающих анти-НСУ активностью, может присутствовать в фармацевтически или анти-НСУ эффективном количестве. В силу аддитивных или синергических эффектов при использовании в указанных выше комбинациях каждое соединение может также присутствовать в субклиническом фармацевтически эффективном или анти-НСУ эффективном количестве, т.е. количестве, которое, если используется отдельно, обеспечивает пониженную фармацевтическую эффективность, недостаточную для полного ингибирования или снижения аккумуляции вирионов НСУ и/или облегчения состояния или уменьшения интенсивности симтомов, связанных с инфекцией НСУ или патогенезом у пациентов, по сравнению со случаем использования таких ингибиторов сериновой протеазы НСУ и соединений, обладающих анти-НСУ активностью, в фармацевтически эффективных количествах. В дополнение, настоящее изобретение касается применения комбинаций ингибиторов сериновой протеазы НСУ и соединений, обладающих анти-НСУ активностью, как указано выше, для лечения или профилактики инфекций НСУ, где один или более из указанных ингибиторов или соединений присутствуют в фармацевтически эффективном количестве, а другой (другие) присутствуют в субклиническом фармацевтически эффективном количестве или анти-НСУ эффективном количестве (количествах) в силу их аддитивных или синергических эффектов. Как используется в данном описании, термин аддитивный эффект описывает комбинированный эффект двух (или более) фармацевтически активных агентов, который равен сумме эффектов каждого отдельно взятого агента. Синергический эффект означает случай, при котором комбинированный эффект двух (или более) фармацевтически активных агентов выше, чем сумма эффектов каждого отдельно взятого агента.
Пример 42.
Стандартным способом лечения инфекции, вызванной вирусом гепатита С (НСУ), в настоящее время является лечение иммуномодулятором, альфа-интерфероном (Сйгоше Нераййк С: СштеШ ИЦеаке МападетеШ, и.8. Оераг1теп1 о£ НеаПН апб Нитап 8сгу1сск, №1Нопа1 1п8111и1е5 о£ НеаПН, 1999). Указанный способ лечения неэффективен для большинства пациентов с НСУ, у которых либо не наблюдается ответа, либо наблюдается рецидив даже после продолжительного лечения интерфероном. Кроме того, существуют тяжелые побочные эффекты, связанные с лечением интерфероном.
Ввиду настоятельной потребности в новых, более эффективных антивирусных лекарственных средствах для лечения инфицированных НСУ пациентов авторы данного изобретения разработали серию соединений, которые ингибируют сериновую протеазу НСУ (комплекс белков Ν83 и Ν84Α вируса НСУ). Указанные соединения можно использовать отдельно или совместно друг с другом и в комбинации с соединениями других классов для лечения или профилактики НСУ-инфекции. В данном примере описано тестирование двух представителей ингибиторов сериновой протеазы НСУ, т. е. соединения ЕР и соединения ЕС по отдельности и в комбинации с отдельными представителями группы интерферонов (интерфероном альфа-2 (8ейегтд-Р1оидй), интерфероном альфа-2А (РЕБ Вютебюа1 БаЬогаЮпек, №\ν Вгипк^юк, Ν1), интерфероном бета (Кекеагей И1адпок11ск 1пс, Иапбегк, Ν1) интерфероном овцы 1аи (Кекеагей И1адпок11ск 1пс, Иапбегк, Ν1)) на основе анализа субгеномного РНК-репликона НСУ (анализ репликонов) для определения того, согласованно ли действуют два соединения, снижая накопление РНК НСУ. При анализе репликонов измеряют количество субгеномной РНК НСУ (РНК репликона), остающееся в клетках, несущих репликон (Бойтапп е1 а1. 8с1епее 285:110-113 (1999)), после двух дней обработки лекарственным средством по сравнению с количеством РНК репликона в необработанных клетках. В данном анализе эффективность соединений в качестве антивирусных лекарственных средств против НСУ прямо пропорциональна уровню ингибирования накопления РНК репликона.
Два лекарственных средства тестируют в комбинациях в системе анализа репликонов ίη '11го с целью определения того, проявляют ли они при совместном использовании аддитивную или синергическую активность, направленную против НСУ. Анализ репликонов используют в качестве модели, заменяющей инфекцию НСУ ίη νίίΐΌ, для оценки комбинированных воздействий иммуномодулятора, например, интерферона-альфа 2В ((интрон А); 8ейегтд Р1оидй), и ингибитора сериновой протеазы НСУ например, соединения по изобретению. Как показано ниже, результаты свидетельствуют, что имеет место четкое синергическое действие указанных двух типов лекарственных средств, направленное против НСУ, которое измеряли с использованием формального математического анализа синергизма, исследуя их способность снижать уровни РНК НСУ в анализе репликонов.
Анализ репликонов
Анализ репликонов с использованием линии клеток, содержащих самореплицирующуюся субгеномную РНК НСУ (репликон), описан Бойтапп е1 а1. 8с1епее 285:110-113 (1999). Инвентарный номер в СепЬапк последовательности репликона, используемого в описанных в данной заявке экспериментах, указан в приведенном источнике информации как Α1242654. В данной статье описаны способы транскрипции ίη νίΐΐΌ РНК из кДНК репликона, трансфекции в клетки Ний7 РНК репликона путем электропорации и селекции клеток, содержащих РНК репликона, с использованием антибиотика С418. Клетки Ний7 являются линией клеток гепатомы, полученной Иг. Уййат Макоп в Ρоx Сйаке Сапсег Кекеагей Сеп1ег (РЫ1абе1рЫа). Указанные клетки общедоступны из Ρоx Сйаке и всесторонне описаны в научной литературе ^акаЬауакЫ е1 а1. Сапсег Кек. 42:3858-3863 (1982)). В описанных в данной заявке экспериментах
- 169 017556 всю матричную ДНК удаляют из транскрибированного ίη νίίΓΟ препарата РНК репликона перед электропорацией указанной РНК в клетки НиЙ7 путем многократной обработки ДНКазой (три последовательных обработки).
Анализ репликонов выполняют, как подробно описано ниже. Коротко, клетки, несущие репликон, помещают в 96-луночные планшеты при плотности 10000 клеток на лунку и инкубируют при 37°С. Клетки инкубируют в ЭМЕМ (минимальной основной среде Дульбекко), с добавлением 10% фетальной сыворотки теленка, глутамина, заменимых аминокислот и антибиотика С418 (0,25 мг/мл). После инкубации в течение ночи среду заменят ЭМЕМ, содержащей 2% фетальную сыворотку теленка и различные концентрации ингибитора сериновой протеазы, такого как соединение по изобретению, и/или интерферона, такого как интерферон-альфа 2В (интрон А, 8сйегшд Ρ1οι.^1ι). Каждое соединение тестируют при шести-восьми различных концентрациях. В качестве предельного значения концентраций выбирают высокие концентрации соединений, приводящие почти к полному ингибированию накопления РНК репликона РНК после двух дней обработки. Исходя из этих начальных концентраций, проводят серийные разведения так, чтобы пределы концентраций, исследуемых при анализе репликона включали концентрации, при которых соединения являются высокоэффективными, а также концентрации, при которых эффект незначителен. Каждую концентрацию ингибитора сериновой протеазы НСУ исследуют в отсутствии интерферона, а также с добавлением шести-восьми различных доз интерферона. Подобным образом интерферон исследуют в отсутствии каких-либо добавок ингибитора сериновой протеазы НСУ. После 48-часовой инкубации с соединениями среду удаляют из планшетов и суммарную клеточную РНК экстрагируют из клеток, используя набор КИеазу-96, выпускаемый Ц|адеп 1пс. (Уа1епс1а, СА). Затем полученную РНК анализируют посредством количественной ОТ-ПЦР или ТацМап® (АррНей ВюзузЕетз, Роз1ег С11у СА). Мишенью ТацМап® ОТ-ПЦР является ген устойчивости к неомицину в РНК репликона. Планшеты готовят так, чтобы получить 5 повторов каждого образца обработки лекарственным средством и 16 повторов необработанных образцов. Это обеспечивает высокую статистическую доверительность количественных данных ОТ-ПЦР.
Анализ результатов исследования репликона дает две величины, полезных для оценки эффективности потенциальных антивирусных агентов против НСУ. При каждой исследуемой концентрации соединения определяют уровень ингибирования накопления РНК репликона, вызванный соединением за два дня обработки, относительно количества РНК репликона в необработанных клетках. Результаты представляют как процент ингибирования. После получения серин результатов, определенных при обработке клеток в интервале концентраций, определяют значения 1С50, т.е., концентрацию соединения, при которой соединение снижает накопление РНК репликона на 50%. Путем повторных исследований ингибиторов сериновых протеаз НСУ в анализе репликонов установлено, что 1С50 имеет коэффициент вариации в процентах (%СУ или 100% х стандартное отклонение в 1С50/среднее 1С50) приблизительно 20%. 1С50 является значением, используемым для ранжирования отдельных соединений, исследуемых в данном анализе, на основании их эффективности в качестве антивирусных средств против НСУ. Простые определения 1С50 являются неадекватными для оценки полезности соединений, используемых в комбинации. Наиболее эффективный анализ совокупных данных, полученных с использованием всех комбинаций различных интерферонов и ингибиторов сериновой протеазы, требует оценки ингибирования в процентах, как показано в табл. 7, с использованием описанных ниже математических способов, предназначенных для определения того, является ли характер комбинированных обработок агонистическим, аддитивным или синергическим.
Подробности проведения анализа репликонов следующие.
Методика количественного анализа РНК репликона НСУ при анализе репликона НСУ с использованием ОТ-ПЦР ТацМап®
Анализ репликонов используют для оценки способности потенциальных антивирусных соединений, направленных против НСУ, ингибировать накопление молекул субгеномной РНК репликона НСУ в клетках линии Ни117 (Ъойтапп е! а1. Керйсайоп оЕ 8иЬдепот1с НераЕйЕз С Уииз КИАз ίη а НераЕота Се11 Ыпе. 8с1епсе 285, 110-113 (1999)). Указанный анализ включает три технологических этапа: (1) поддержание клеток, несущих репликон, подготовка планшетов для анализа и внесение соединений; (2) экстракцию суммарной клеточной РНК из клеток, несущих репликон, и (3) ОТ-ПЦР в режиме реального времени (ТацМап®) для измерения количества РНК репликона в каждом образце. Для выполнения анализа репликонов требуется, по меньшей мере, 4 дня; однако процесс можно прерывать и образцы между стадиями хранить замороженными. Каждый этап анализа описан ниже.
1. Поддержание клеток, несущих репликон, подготовка планшетов для анализа и внесение соединений.
1.1. Поддержание линии клеток, несущей репликон.
Линию клеток, используемую в анализе репликонов, получают, как описано Ьойтапп еЕ а1. (КерНсаЕоп оЕ 8иЬдепот1с Нера11118 С Уииз КИАз т а НераЕота Се11 Ыпе. 8аепсе 285, 110-113 (1999)). После инкубирования флаконов для культивирования клеток размером 150 см2 (Соз!аг), содержащих клетки, несущие репликон, при 37°С и 5% СО2 и образования слитого монослоя, клетки разводяют 1:10, об./об., в
- 170 017556 новых флаконах для культивирования клеток размером 150 см2. Средой является ИМЕМ, содержащая 10% фетальной сыворотки теленка (РВ8), 1Х заменимых аминокислот (ЫЕАА), 1Х глутамина (С1и) и 0,25 мг/мл С418. Проводят три серийных посева, каждый раз давая возможность клеткам образовать монослой, с последующим разведением клеток в новых флаконах для культивирования клеток размеров 150 см2. Затем полученные клетки, называемые «исходными клетками» делят на аликвотные пробы и хранят для последующего использования в анализе репликонов. Анализ, основанный на ТацМап® , выполняют для определения числа геномов репликона НСУ на клетку, который обнаруживает наличие ~150 копий репликона на клетку. Результат основан на отношении количества копий РНК репликона к двукратному количеству копий гена ароВ человека (число гаплоидных геномов).
1.1.1. Исходные клетки хранят в жидком Ν2. Что касается клеток, используемых в анализе репликонов, после 20 последовательных пассажей клетки отбрасывают, и оживляют новую партию после хранения в жидком Ν2.
1.2. Посев клеток в 96-луночные планшеты для анализа репликонов.
1.2.1. Для подготовки 96-луночных планшетов, флаконы размером 75 см2 на 75% занятые монослоем из содержащих репликон клеток, обрабатывают трипсином и клетки ресуспендируют в 10 мл среды А. Трипсинизацию проводят, удаляя среду, добавляя 1 мл смеси трипсин-ЕИТА 0,25%, мас./об. и затем удаляя трипсин-ЕИТА. Спустя 5-10 мин клетки снимаются со стенок флакона и их ресуспендируют в среде.
1.2.2. Клетки подсчитывают, используя гемоцитометр, и концентрацию клеток доводят до 105 клеток/мл.
1.2.3. Каждую лунку засевают 100 мкл суспензии клеток, используя многоканальную пипетку 1трас12 (МаМу), никогда не засевая более четырех 96-луночных планшетов одной клеточной суспензией.
1.2.4. 96-луночные планшеты инкубируют при 37°С в течение ночи.
1.3. Разведения соединений и внесение в планшеты с клетками, содержащими репликон.
1.3.1. Соединения-ингибиторы сериновой протеазы НСУ растворяют в диметилсульфоксиде (ДМСО) до конечной концентрации 20 мМ. Интерфероны суспендируют в забуференном фосфатом солевом растворе, содержащем 0,1% мас./об. бычьего сывороточного альбумина.
1.3.2. 20 мМ раствор соединения разбавляют до 1 мМ с помощью ДМСО.
1.3.3. 50 мкл соединения, растворенного в ДМСО, добавляют к 10 мл среды В (концентрация соединения равна 5 мМ и концентрация ДМСО равна теперь 0,5%), или 20 мкл из 1 мМ раствора соединения и 30 мкл ДМСО добавляют к 10 мл среды В (концентрация соединения составляет 2 мкМ).
1.3.4. Разбавление соединения до конечной концентрации завершают, смешивая раствор соединение/среда В со средой С (содержащей 0,5% ДМСО). Серийные (одно-пять) разведения соединения выполняют с помощью среды С в полипропиленовом 96-луночном блоке объемом 2 мл, получая требуемые конечные концентрации соединения.
1.3.5. Планшет с клетками вынимают из инкубатора с температурой 37°С и метят в верхнем правом углу крышки и на правой стороне основания. Среду сливают из 96-луночных планшетов.
1.3.6. 100 мкл растворов соединение/среда из каждой лунки 96-луночного блока для разбавлений добавляют к 96-луночному планшету для клеток, используя пипетку 1трас12.
1.3.7. 100 мкл среды С добавляют во все необработанные лунки согласно табл. 3 для тестирования соединений в 1, 3 или 6 различных концентрациях. Ийк означает холостую обработку клеток (добавляют ДМСО в тех же концентрациях, как и в обработанные клетки); Соп. означает концентрацию соединения.
- 171 017556
Таблица 3 соединения, повторов концентрации,
Соединение 1 5 в Соединение 2
1 2 3 4 7 8 9 10 11
А ипЬх τιπϋχ ип£х ипЪх χιηϋχ ипСх ипГх ипСх ипЪх ипЬх
П СОП. 1 соп. 1 СОП-1 соп. 1 соп.1 соп. 1 соп.1 соп. 1 соп. 1 соп.1
С СОП. 2 соп,2 СОП. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2
О СОП. 3 СОП.З СОП.З соп.З соп. 3 СОП.З СОП.З СОП.З соп. 3 СОП.З
Ξ СОИ, 4 соП.4 СОН. 4 СОП. 4 осп. 4 соп. 4 соп. 4 соп. 4 соп. 4 соп.4
Е сои ,5 соп. 5 СОП. 5 СОП. 5 СОП. 5 соп. 5 соп. 5 соп. 5 соп. 5 соп. 5
<5 СОП. 6 соп. 6 соп. б соп. б соп. б соп. б соп. $ соп, 6 соп. б соп. б
Н ипсх ипСх ипСх ипЪх ипЬх ипЪх ύηνχ ипЪх ипьх ипСх
4 соединения, 3 концентрации, 5 повторов 11
Соединение 1 5 6 Соединение 2 9 10
1 2 3 4 7 8
А ипЬх ипЪх ипЬх ипЪх ипЪх ипЪх ипЬ.ч ипЬх ипсх ипСх
0 соп. 1 осп. 1 соп. 1 соп. 1 соп. 1 соп.1 соп. 1 соп. 1 соп.1 соп. 1
С соп. 2 соп. 2 Соп. 2 соп. 2 СОП. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2
ϋ СОП.З соп.З соп.З соп. 3 соп. 3 соп. 3 соп. 3 соп. 3 соп.З соп.З
Б СОП.1 соп.1 соп. 1 СОП. 1 соп. 1 соп. 1 соп, 1 соп.1 соп.1 соп. 1
Р соп. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2 соп. 2 СОП. 2 соп. 2 соп. 2
(3 соп.З соп.З соп. 3 соп. 3 соп. 3 соп. 3 СОП.З соп. 3 соп.З соп.З
Н ипЬх ипЪх ипЪх ’ипЪх ипЪх ип^х ипЪх ЪШЬХ ипСх ипьх
Соединение 3 Соединение 4
16 соединений, 1 концентрация, 4 повтора 8 9 10 11
1 2 3 4 5 6 7
А ипЬх ορά 1 срй 2 ерй 3 срс! 4 сра 5 сра б сра 7 сра а ипЪх
В ипЪх срс! 1 срй 2 ерй 3 срс! 4 сра 5 сра 5 сра 7 сра я ип£х
С ипех срй 1 срсД 2 ерй 3 срй 4 сра 5 сра 6 сра 7 сра я ипЬх
ϋ цпЬх срй 1 ерй 2 ерй 3 срй 4 орд 5 сра б сра 7 сра 8 ипСх
Е ипЬх срй. 9 Срй 10 ерй 11 ορά 12 сра 13 сра 14 сра 15 сра 16 игХх
Р илсх срй 9 срс! 10 ерй 11 срй 12 сра 13 сра 14 сра 15 сра 1б ипЪх
С ипЪх ορά 9 ерй 10 ерй 11 срс! 12 сра 13 ορά 14 сра 15 сра хе ипСх
н ΌΠΐΧ срй 9 σρά 10 ерй 11 срс! 12 сра 13 сра 14 сра 15 сра те ипЪх
12 соединений , 1 концентрация, 5 повтора
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
А гшсх ипПХ ипЬх ипЬх ипЪх ипЪх ипех ипЬх ипех ипех
Ό срй 1 ορά 1 ерй 1 срс! 1 срс! 1 сра 7 сра 7 сра 7 сра 7 срй 7
С срй 2 срй 2 срЭ 2 срй 2 срс! 2 сра а сра з сра в сра 8 сра 8
0 αρά з срс! 3 ерй 3 срй 3 срй 3 сРа 9 сра 9 ерв 9 сра 9 сра 9
Е срй 4 срс! 4 ерй 4 срй 4 срй 4 сра ю сра ю сра ю сра ю сра ίο
Р срй 5 срй 5 сра 5 ορά 5 сра 5 сра ίί сра ίί сра ίί сра ίί сра ίί
С срй б сра б ерй б срй б срй б сра 12 ерй 12 ерд 12 сра 12 сра 12
н илЬх ЦпЬх ипех υηύχ ϋηϋχ тех ипьх Цпьх ЦпЬх ип1х
1.4. Планшеты инкубируют в течение 48 ч при 37°С и затем подвергают экстракции РНК.
Таблица 4. Сводные данные по оборудованию и вспомогательным материалам, используемым для культивирования клеток и подготовки соединений
8-канальная пипетка 1трасЪ2, 1250 мкл Кат. № 2004 МаСг1х
Полипропиленовая форма с глубокими лунками, объемом 2 мл, 96луночная, стерильная Кат. N1 4222 МаЬг1х
Емкости для реагентов объемом 25 мл, стерильные Кат. № 8096 Ма^гхх
Длинные наконечники для пипеток Х-Ъга, 1250 мкл Кат. № 8255 МаСгхх
96-луночный планшет Кат. № 3595 СоеРаг
Гемаци т оме т р ЫеиЬаиег усовершенствованный с яркими линиями глубиной 0,1 мм КехсЬегЪ
ΌΜΕΜ Кат. В 51444-79Р Ж
Ь-глутамин (<31и) Кат. № 12403-010 огвео-впь
Заменимые аминокислоты (ΝΕΑΑ) Кат. № 11140-050 О1ВСО-ВКЪ
Фетальная сыворотка теленка (РВ5) Кат. № 16250-078 ствсо-вкь
С418 Кат. № 55-0273 ΙηνίΡгоден
дмео Кат. № Ц-2650 81дта
Среда А ШЕМ, 10% ЕВ8, IX ΝΕΑΑ, IX С1и, 0,25 мг/мл С418
Среда В ΌΜΕΜ, 2¾ РВ8, IX ΝΕΑΑ, IX С1и
Среда С ЦМЕМ, 2% РВ8, IX ΝΕΑΑ, IX С1и, 0,5% ДМСО
Трипсин-ЕБТА 0,25% СТВСО-ВКЬ
- 172 017556
2. Экстракция суммарной клеточной РНК из клеток, несущих репликон.
2.1 Введение.
Целью методики является экстракция РНК из образцов культур тканей ίη νίΐΓο, таким образом, чтобы количественно извлечь вирусную или клеточную РНК, очищенную в достаточной степени для количественного анализа посредством ОТ-ПЦР НСУ.
Для того чтобы выявить разброс в эффективности экстракции РНК, к каждому образцу клеток перед экстракцией РНК добавляли стандартное количество вируса вирусной диареи крупного рогатого скота (ВУЭУ), РНК-вируса, обладающего некоторым сходством с НСУ. Таким образом, уровень РНК ВУЭУ, выявленный в конечной реакции многократной ОТ-ПЦР должен быть сходным во всех лунках в пределах вариабельности, связанной с анализом репликонов. Указанный внутренний контроль эффективности экстракции РНК обсуждается далее в приведенном ниже разделе ТадМап®.
Используемым способом экстракции РНК является способ К№а§у-96 производства О1адеп 1пс. (Уа1епс1а, СА). В указанном способе используют 96 миниколонок на основе диоксида кремния, которые располагают в порядке, совместимом с операциями, проводимыми на культурах ткани в 96 лунках. Способ экстракции РНК представляет собой модификацию способа Бума, при котором все клеточные белки и нуклеиновую кислоту, включая нуклеазы, сначала денатурируют сильной хаотропной солью (гуанидинтиоцианат). В такой среде нуклеиновые кислоты обладают высоким сродством к диоксиду кремния, материалу на дисках миниколонок; однако белки и другие загрязнители не связываются с диоксидом кремния и проходят через колонки. После промывки колонок растворами хаотропного агента/этанола образцы подсушивают и затем высвобождают нуклеиновую кислоту с колонки небольшим объемом воды.
Чтобы уменьшить вариабельность извлечения РНК НСУ, соблюдают осторожность при промывке колонок и выборе условий подсушивания. Присутствие небольшого количества этанола на колонке будет загрязнять конечную РНК и мешать в системе регистрации ОТ-ПЦР. Требуется осторожность на всех стадиях данной процедуры, поскольку исходные образцы могут быть биологически опасными, хаотропная соль может быть очень едкой и как в случае тиоцианата может образовывать ядовитый цианидный газ при возможности контактирования с кислой средой.
Таблица 5. Сводные данные по оборудованию и вспомогательным материалам, используемым в методике экстракции РНК НСУ
Набор Кпеаэу 96 (24) Кат. № 74183 фхадеп
Коллектор <2ΙΆν&ο 96 Кат. № 19504 21адеп
Центрифуга 4-15С для планшетов 2x96, 6000 х д Кат. № 81010 фхадеп
Тарельчатый ротор для планшетов 2x96 Кат. Ν’ 81031 фтадеп
Этиловый спирт РгооЕ 200
8-канальная пипетка 1шрасЬ2, 250 мкл Кат. № 2002 МаЕгФх
8-канальнал пипетка 1трасБ2, 1250 мкл Кат. № 2004 МаЕгГх
Полипропиленовый блок с глубокими лунками объемом 2 мл, 96-луночный, стерильный Кат. № 4222 Мабгтх
Емкости для реагентов объемом 25 мл, стерильные Кат. № 8096 МаРгтх
Длинные наконечники для пипеток Х-Ъга, 1250 мкл Кат. № 8255 МаРгФх
Наконечники для пипеток, 200 мкл Кат. № 7275 МаЕгФх
Среда МЕМ без сыворотки Кат. № 11095-80 СТВСОВЕЬ
2.2. Методика.
2.2.1. Лизис клеток.
2.2.1.1. Готовят лизирующий буфер: для одного 96-луночного планшета добавляют 150 мкл βмеркаптоэтанола (β-МЕ) и 1 мкл культуры ВУЭУ (культуру перед добавлением встряхивают) к 15 мл буфера КЕТ (компонент набора К№а§у, 01адеп). Указанную культуру получают инфицированием клеток МЭВК (клетки почки быка, #ССЬ-22, доступные из Американской коллекции типов культур Мапа88а8 УА) вирусом ВУЭУ и сбором культуры при достижении пика цитопатического действия (ЦПД). Полученная культура имеет инфекционный титр примерно равный 1х 107 БОЭ/мл. Это дает пороговый цикл ВУЭУ (С1) примерно 22 в анализе ТадМап® . Культуру ВУЭУ хранят в морозилке при -80°С.
2.2.1.2. Клетки промывают 150 мкл среды МЕМ без сыворотки (программа 4 для 8-канальной электронной пипетки Р1250.
- 173 017556
Наполнение 1250, распределение 150х8). В каждую лунку добавляют 150 мкл лизирующего буфера (программа та же).
2.2.1.3. РНК экстрагируют сразу же или клетки замораживают при -80°С.
2.2.2. Подготовка реагентов и материалов для экстракции РНК.
2.2.2.1. Отмечают № партии ВРЕ и набора В№а§у 96.
2.2.2.2. ВРЕ: 720 мл 100% этанола добавляют к одному флакону ВРЕ (01адеп) и тщательно перемешивают; флаконы с ВРЕ всегда хорошо встряхивают перед использованием.
2.2.2.3. 70% этанол: 150 мл воды, обработанной диэтилпирокарбонатом (ПЕРС), добавляют к 350 мл 100% этанола и тщательно перемешивают.
2.2.3. Получение РНК с помощью набора В№а§у 96.
2.2.3.1. Замороженные образцы размораживают при комнатной температуре в течение 40 мин. Одновременно для каждого планшета размораживают одну колонку для контролей экстракции (контроли экстракции: контроли экстракции В№а§у представляют собой набор из 8 пробирок, соединенных друг с другом. Внутри каждой пробирки находится 170 мкл лизата клеток с определенным соотношением позитивных и негативных по отношению к НСУ клеток. Сверху вниз соответственно располагаются по два контроля с низким, средним, высоким и нулевым количеством (см. раздел протокола 2.3 ниже).
2.2.3.2. Образцы перемешивают пипетированием 100 мкл вверх и вниз пять раз. Образец целиком переносят в колонки 1-10 формы с квадратными лунками объемом 2 мл Ма1п.\ (программа 1 на Р250: перемешивание 100х5, наполнение 170, очистка).
2.2.3.3. 150 мкл стандарта репликона переносят в колонку 11 (в колонке 12 нет образцов).
2.2.3.4. К каждому образцу добавляют 150 мкл 70% этанола (ЕЮН) (программа 4 на Р1250: наполнение 1250, распределение 150).
2.2.3.5. Планшет В№а§у 96, помеченный соответствующим номером планшета, помещают в вакуумный коллектор. Перемешивают и переносят смесь лизат/ЕЮН на планшет ВЫеаку 96 (программа 1 на Р1250: перемешивание 200, 5 раз, наполнение 330 и очистка). Любые неиспользуемые лунки заклеивают прозрачной лентой (поставляется Р1адеп), обычно колонку 12.
2.2.3.6. Применяют вакуум (примерно 800 мбар) для нанесения образца на миниколонки.
2.2.3.7. Планшет В№а§у-96 промывают 1000 мкл буфера В^1 (О1адеп)/лунку (программа 2 на Р1250: наполнение 1000, распределение 1000).
2.2.3.8. Применяют вакуум для того, чтобы буфер В^1 пошел сквозь фильтр до прекращения прохождения потока.
2.2.3.9. Планшет ВЫеа8у-96 промывают 1000 мкл буфера ВРЕ/лунка (программа 2 на Р1250).
2.2.3.10. Применяют вакуум для того, чтобы буфер ВРЕ прошел через фильтр.
2.2.3.11. Повторяют стадию 2.2.3.9.
2.2.3.12. Применяют вакуум для того, чтобы буфер ВРЕ прошел через фильтр, выдерживая под вакуумом в течение 3 мин.
2.2.3.13. Сушат планшет В№а§у 96: планшет В№а§у-96 помещают в многоместный держатель для микропробирок (поставляемый Р1адеп), покрывают пленкой АпРоге, которая прилагается, и полученный блок центрифугируют в течение 10 мин при 6000 х д (центрифуга 01адеп 81дта; 4-15°С).
2.2.3.15. Элюируют РНК из 96-луночного планшета ВЫеаку: планшет ВНеа5у-96 переносят на верх нового многоместного держателя для микропробирок. В середину каждой лунки добавляют 70 мкл воды, не содержащей РНКазы (программа 3 на Р1250: наполнение 850, распределение 70).
2.2.3.16. Инкубируют 1 мин при комнатной температуре и затем планшет покрывают свежей пленкой А1гРоге.
2.2.3.17. Блок центрифугируют в течение 4 мин при 6000х д в центрифуге 81дта 4-15°С. Элюированный объем составляет от 28 до 50 мкл.
2.2.3.18. Планшет ВЫеа8у-96 выбрасывают, а многоместный держатель пробирок закрывают крышками, прилагаемыми 01адеп (по 8 на полоске).
2.2.3.19. Элюированную РНК хранят при -80°С или сразу же подвергают анализу ТадМап® .
2.3 Подготовка контролей экстракции.
День 1.
2.3.1.1. Высевают 2,5х107 клеток, продуцирующих репликон, во флаконы для культуры тканей размером 150 см (Т-150).
2.3.1.2. Высевают 2,0х106 клеток Ний7 во флаконы для культуры тканей размером 75 см2 (Т-75).
2.3.1.3. Инкубируют в течение ночи при 37°С.
День 2.
2.3.1.4. Лизируют клетки лизирующим буфером.
2.3.1.5. Удаляют надосадок с клеток Ний 7 и клеток, продуцирующих репликон, и монослой промывают 10 мл бессывороточной среды (МЕМ).
2.3.1.6. К клеткам Ний7 добавляют 30 мл лизирующего буфера (1 мкл культуры ВУЛУ/15 мл лизирующего буфера), перемешивают многократным пипетированием и лизат клеток помещают в центри
- 174 017556 фужные пробирки для культуры ткани с коническим дном объемом 50 мл.
2.3.1.7. 10,5 мл лизирующего буфера добавляют к клеткам, продуцирующим репликон, перемешивают многократным пипетированием и лизат клеток помещают в центрифужные пробирки для культуры ткани с коническим дном объемом 15 мл.
2.3.2. Стандарт высокой экстракции: разносят аликвоты клеточного лизата продуцирующих репликон клеток объемом 170 мкл в 5 и 6 ряды двух держателей пробирок объемом 0,75 мл 1^311%.
2.3.3. Стандарт средней экстракции: 1,0 мл клеточного лизата продуцирующих репликон клеток добавляют к 9 мл лизата Ни117 и тщательно перемешивают. Разносят аликвоты указанной смести объемом 17 0 мкл в 3 и 4 ряды двух держателей для пробирок объемом 0,75 мл 1^111%.
2.3.4. Стандарт низкой экстракции: 50 мкл клеточного лизата продуцирующих репликон клеток добавляют к 10 мл лизата Ни117 и тщательно перемешивают. Разносят аликвоты указанной смести объемом 17 0 мкл в 1 и 2 ряды двух держателей для пробирок объемом 0,75 мл 1^111%.
2.3.5. Контроль нулевой экстракции: разносят аликвоты лизата клеток Ни117 объемом 170 мкл в 7 и 8 ряды двух держателей пробирок объемом 0,75 мл 1^111%.
2.3.6. Контроли хранят при -80°С.
3. ОТ-ПЦР Тас.|Мап® и анализ данных.
3.1. Введение: количественную ОТ-ПЦР в режиме реального времени используют для измерения количества РНК репликона НСУ в каждом образце. Указанную методику также называют основанным на ПЦР 5'-нуклеазным анализом и Тас.|Мап®. Прибор для анализа представляет собой систему регистрации последовательностей Лррйеб Вю8У81ет8 7700 Рп8т (Аррйеб Вю8у81ет8, Ро81ег Сйу, СА). Указанный прибор, по существу, является флуоресцентным спектрографом с временным мультиплексированием, связанным с термоциклером. Он контролирует накопление ПЦР-ампликона в каждой лунке 96луночного планшета с образцами в ходе процесса ПЦР.
3.2. Применение внутреннего контроля ВУЭУ. Как указано в предыдущем разделе, в каждый образец включают внутренний позитивный контроль. Контроль служит в качестве меры эффективности экстракции РНК и показывает, содержит ли образец загрязнения, которые ингибируют ПЦР ТацМап®. ВУЭУ смешивают с хаотропным буфером для лизиса клеток перед внесение лизирующего буфера в клетки. Хотя позитивный контроль имеется в каждом образце, анализ внутреннего позитивного контроля ВУЭУ проводят только в том случае, когда результаты анализа РНК репликона НСУ выпадают из ожидаемых пределов, что свидетельствует о том, что может существовать проблема, связанная с образцами. Система 7700 способна одновременно осуществлять мониторинг накопления двух разных ПЦРампликонов в одной и той же пробирке при использовании регистрирующих зондов, меченых двумя разными флуоресцентными репортерными красителями (мультиплексирование). Конкретные критерии, которые являются основанием для ТадМаи®-анализа внутреннего позитивного ВУЭУ-контроля планшета с образцами, описаны в разделе, посвященном анализу результатов (3.6).
3.3. Зонд и праймеры для ТадМап® РНК репликона НСУ.
Вследствие ожидаемой генетической стабильности и отсутствия общей вторичной структуры РНК в гене устойчивости к неомицину (пео), кодируемом репликоном, используют праймеры и зонд, которые связываются с данной областью. Указанный фрагмент РНК репликона простирается в пределах оснований 342-1193 репликона из 8001 пар оснований (8ЕО ΙΌ NΟ:1):
301 дСдсСЕдсда дбдссссддд аддЕсЕсдЕа дассдЕдсас саЕдадсасд ааЕссСааас
361 сбсааадааа аассааасдЕ аасассаасд ддсдсдссаЕ даЕЕдаасаа дасддаЕЕдс 421 асдсаддССс ьссддссдсЕ ЕдддСддада ддсеаъссдд сйаСдасЪдд дсасаасада 4В1 сааЕсддсед сЬсЪдаЪдсс дссдЕдЕЕсс ддсЕдЕсадс дсаддддсдс ссддЕЕсЪЬЬ 541 ЕПдСсаадас сдассЕдъсс ддЬдсссЕда аедаасЪдса ддасдаддса дсдсддеьас 601 сдфддсфддс сасдасдддс дЕЕссУЕдсд садсЕ-дЕдсЕ сдасдЕЕдЕс асЕдаадсдд 661 даадддасЕд дссдсЕаЕЕд ддсдаадЕдс сддддсадда СсЕссЕдЕса ЬсЕсассЕЕд 721 сЕссЕдссда дааадЕаЕсс аЕсаЕддсЕд аЪдсааЪдсд дсддсЕдсаЕ асдсЕЕдаЕс 781 сддсЕассЕд сссаЕЕсдас сассаадсда аасаЕсдсаЕ сдадсдадса сдЕасЕсдда 841 Еддаадссдд ЕсЕфдЕсдаь саддаЕдаЕс Еддасдаада дсаЕсадддд сЕсдсдссад 901 ссдаасСдЕЕ сдссаддсЕс ааддсдсдса Едсссдасдд сдаддаЕсЕс дЕсдЕдассс 961 аЕддсдаЕдс сЕдсЕЕдссд аайаЕсаьдд ЕддааааЕдд ССбСТГТТСТ ООАТТСАТСв прямом праймер
1021 аСТвТСЮССО ССТОСОТОТв СсддассдсЕ аЕсаддасаЕ адсдЕЕддсЕ асссдЕдаЕа ТадМап* лрсба
1081 ЕЪдсЕдаада дсТТбССбСС СААТОССсЕд ассдсЕЕссЕ сдЕдсЕЕЕас ддЕаЕсдссд обратный прайияр
1141 сЕсссдаЕЕс дсадсдсаЕс дссЕЕсЕаЕс дссрЕсЕЕда сдадЕЕсЕЕс ЕдадЕЕЕааа
3.4. Методики.
3.4.1. Способ получения 1Х исходных смесей для ОТ-ПЦР НЕО и ВУЭУ.
- 175 017556
Таблица 6. Сводные данные по оборудованию и вспомогательным материалам, используемым в методике экстракции РНК НСУ
Оборудование и вспомогательные материалы Порядковый Νο. Поставщик
Пипетка 0,5-10 мкл Серия 22 47 005-1 2000 ЕррепбогЕ
Пипетка 2-20 мкл Серия 22 47 015-5 2000 ЕррепйогР
Пипетка 10-100 мкл Серия 22 47 020-5 2000 ЕррепдогТ
Пипетка 50-200 мкл Серия 22 47 025-6 2000 Ерреп<4ог£
Пипетка юо-юоо мкл Серия 22 47 030-2 2000 ЕррепЗогЕ
Наконечники 1250 мкл Мабгхх Кат. Ν’ 8255 Мабгхх
Наконечники 200 мкл МаЬгхх Кат. К· 7275 Ма£г1х
Наконечники 10 мкл АНТ Кат. № 2140 Мо1еси1ах Вз.оргос1исЬэ
Наконечники 20 мкл АКТ Кат. № 2149Р Мо1еси1аг В1оргос1исбз
Наконечники 100 мкл АКТ Кат. № 2065Е Мо1еси1аг ВхорхосЬдсЬз
Наконечники 200 мкл АКТ Кат. № 2069 Мо1еси1аг ВхоргойисЬз
Наконечники 1000 мкл АКТ Кат. Ν* 207 9Е Мо1еси1аг ВхоргосГисЪз
Электронная пипетка, 1хпрасЬ2 Кат. № 2001 МаЪгтх
Микроцентрифужные пробирки, не содержащие РНКазы, 1,5 мл Кат. № 12450 АтЫоп
Полипропиленовые пробирки, 14 мл Кат. К· 352059 Ра1сод
Емкость для реагентов, 25 мп Кат. И· 8096 МаОгхх
Эб-луночный планшет для реакций Кат. № N801-0560 Αρρίίβά ВхозузЕетпз |
Оптические полоски с крышками Кат. № N80 1-0935 Αρρίιβά ВхозузДетз
Одноразовые стерильные покрытия Кат. № 9515-Е ВахЬег
Реагенты Порядковый Νο. Поставщик
Кислота 0,1н НС1 РхзЬег
ЕИАзе2ар Кат. Ν’ 97 80 АгоЫоп
НЫАее а'лтау Кат. № 7005 Мо1еси1аг ВхоргойисСз
10-рак, набор основных реагентов для ОТ-ПЦР ΕΖ, 5х реакционный буфер, 25 мМ ацетат магния, дезокси-НТФы. Кат. № 403028 АррИеб. Вхозуз^етз
Зонд VIС ΝΕΟ, 2 мкМ (_10х.), 550 мкл на аликвоту Кат. И» 450003, изготовлен на заказ, 5'-νιο-стс ТСС ссс ост ССС ТОТ СС-ТАМКА -3' (5Ξ0 ЕЮ ΝΟ: 2) Αρρίχβά ВхозуэРетз
Зонд У1С ВУОУ, 2 мкМ (=10х), 550 мкл на аликвоту (Уегдех) Кат. № 450003, изготовлен на заказ, В’-У1С-ССС ТС<3 ТСС АС0 ТОО САТ СТС 0А-ТАМВА-3' (5Е0 ИЗ ΝΟ: 3) Άρρίχβά вхозуздетз
Прямой праймер ΝΕΟ, 3 мкМ (=10х) смесь прямой/обратный праймер, 550 мкл на аликвоту Кат. №4304972, изготовлен на заказ, 5'-ССС СТТ ТТС ТСС АТТ САТ СС-3' (5Е0 ΙΟ ΝΟ: 4) Αρρίχβά Вхозузьегаз
Обратный праймер ΝΕΟ, 3 мкМ (=10х) смесь прямой/обратный праймер, 550 мкл на аликвоту Кат. №4304972, изготовлен на заказ, 5'-ССС АТТ ССС ССС САА- 3' (ЗЕ<2 Ιϋ ΝΟ: 5) Αρρίίβά Вхозузъетз
Прямой праймер Βνυν, 3 мкМ (=10х) смесь прямой/обратный праймер, 550 мкл на аликвоту изготовлен на заказ, 5'-САС ССТ АСТ ССТ САС ТСС ТТС С-3' (5Е0 10 N0: 6), масштаб 1,0 мкМ/очистка в геле ОИдоз еЬс
Обратный праймер Βνϋν, 3 мкМ (=10х) смесь прямой/обратный праймер, 550 мкл на аликвоту изготовлен на заказ, 5'-ССС СТС ТСС АСС АСС СТА ТО-3' (8Е0 10 N0: 7), масштаб 1,0 мкМ/очистка в геле ОЫдоз е£с
Стандарты РНК ΝΕΟ РНК, транскрибированная ίη νϊίχο с плазмидой, содержащей часть гена пео РНК репликона НСУ с использованием РНК-полимеразы Е7. Транскрибированную ίη νίΡτο РНК количественно оценивают на основе известной молекулярной массы транскриптов и УФ-оптической плотности раствора очищенного транскрипта. Полученную РНК разбавляют, делят на аликвоты и хранят при -80°С. Отдельные аликвоты размораживают для каждого анализа ТадМап®.
Подлежащие тестированию образцы РНК, выделенные из клеток, несущих репликон НСУ (раздел 2 данного протокола), 10 мкл/96-луночный планшет
Вода, не содержащая нуклеаз (не обработанная ИЕРС) Кат. № 9930 АтЫоп
- 176 017556
3.4.2. Подготовка реагентов для исходной смеси.
3.4.2.1. Очищают лабораторный стол в две стадии, указанные ниже, и протирают пипетки ΚΝΆ^ а\гау.
ВХАке 2ар (АтЬюп, Аикбп, ТХ).
^Аке А^ау (Мо1еси1аг Вюргобисб, 8ап О1едо, СА).
3.4.2.2. Открывают основные реагенты для ОТ-ПЦР ΕΖ (Аррбеб ВюкукЮшк) и помещают 5х буфер на лед, замороженные реагенты размораживают при комнатной температуре примерно в течение 15 мин и затем помещают их на лед. Один набор реагентов для ОТ-ПЦР ΕΖ можно использовать для анализа экстракций РНК в двух 96-луночных планшетах.
3.4.2.3. Вынимают одну пробирку с 2 мкМ зондом У1С (№О или ВУЭУ, 550 мкл на пробирку) из -20°С и помещают на лед.
3.4.2.4. Вынимают одну пробирку с 3 мкМ смесью прямого/обратного праймера (МО или ВУЭУ, 550 мкл на пробирку) из -20°С и помещают на лед.
3.4.2.5. Вынимают одну пробирку (30 мкл) стандартов РНК-транскриптов (108 копий/10 мкл) из -80°С и помещают на лед.
3.4.2.6. Берут одну пробирку с водой АтЬюи комнатной температуры.
3.4.3. Компоновка исходной смеси для реакции в одном 96-луночном планшете.
3.4.3.1. Используют пипетку на 1 мл, чтобы перенести 5х буфер (Аррбеб ВюкукЮшк) в пробирку объемом 14 мл; общий добавленный объем составляет 1100 мкл.
3.4.3.2. Используют пипетку на 1 мл, чтобы добавить 25 мМ Мп(ОАс)2 (Аррбеб ВюкукЮтк) в пробирку объемом 14 мл; общий добавленный объем составляет 660 мкл.
3.4.3.3. Используют пипетку на 200 мкл, чтобы добавить 165 мкл 10 мМ бАТР в пробирку объемом 14 мл. То же самое делают с 10 мМ бСТР, 20 мМ бИТР и 10 мМ бСТР.
3.4.3.4. Используют пипетку на 1 мл, чтобы добавить 550 мкл 10х 3 мкМ смеси прямой/обратный праймер.
3.4.3.5. Используют пипетку на 1 мл, чтобы добавить 550 мкл 10х 2 мкМ зонда.
3.4.3.6. Используют пипетку на 1 мл, чтобы добавить 220 мкл ДНК-полимеразы гТ!б (Аррбеб Вю8У81е1П8).
3.4.3.7. Используют пипетку на 100 мкл, чтобы добавить 55 мкл АтрΕ^а8е υΝΟ (Аррбеб Вюкук!етк).
3.4.3.8. Используют пипетку на 1 мл, чтобы добавить 605 мкл Н2О АтЬюп в пробирку объемом 14 мл; конечный объем составляет всего 4400 мкл.
3.4.3.9. Переносят 4400 мкл исходной смеси в емкость для реагентов объемом 25 мл.
3.4.3.10. Распределяют по 40 мкл на лунку во все 96 лунок, используя 8-канальную пипетку.
3.4.3.11. Переносят 10 мкл экстрагированных неизвестных образцов в лунки планшета для реакций, используя 8-канальную пипетку, колонку за колонкой, с 1 колонки по 11 колонку. После переноса каждую колонку закрывают крышками.
3.4.3.12. Добавляют 270 мкл Н2О АтЬюп к 30 мкл транскрипта РНК 108 копий/10 мкл для использования в случае стандартной кривой и перемешивают. Теперь имеется 107 копий стандартной РНК для количественного анализа репликона НСУ/10 мкл.
3.4.4. Установка АВ1 7700 для каждого прогона.
3.4.4.1. Перед каждым прогоном перезагружают компьютер для АВ1 7700 и заново компонуют рабочий стол.
3.4.4.2. Закрывают и удаляют любые лишние программы в накопителе на жестком диске; переполнения данных удаляют в корзину.
3.4.4.3. Открывают программу детектора последовательностей ν1.7 (компьютерная программа 8Ό8).
3.4.4.5. Открывают папку Ход анализа репликонов.
3.4.4.6. Открывают матричный диск Анализ репликонов. Условия термоциклера, запрограммированные на матрице, представляют собой следующее.
Стадия 1: 50°С в течение 2 мин. Стадия 2: 60°С в течение 30 мин. Стадия 3: 95°С в течение 5 мин. Стадия 4: 95°С в течение 15 с. Стадия 5: 60°С в течение 60 с.
Количество циклических повторов стадий 4-5: 40. Матричное устройство: диагностика: дополнительные опции. Выбранное представление: показ тке. Выбранное представление: показ наилучшей подгонки. Выбранное прочее: эталонный краситель ВОХ.
3.4.4.7. Файл сохраняют (но не сохраняют как) в папке Ход анализа репликонов.
3.4.4.8. Раскрывают установку: нажимают ΒυΝ.
3.5. Подготовка данных АВ17700 после выполнения анализа с использованием компьютерной программы 8О8.
3.5.1. Анализируемые планшеты вынимают из АВ17700 и выбрасывают, даже не открывая. Это значительно уменьшает лабораторные проблемы, связанные с перекрестным загрязнением ПЦР.
- 177 017556
3.5.2. Данные анализируют с использованием компьютерной программы системы регистрации последовательностей У1.7.
3.5.3. Пороговые уровни сначала устанавливают, используя установки по умолчанию.
3.5.4. Критерии выбраковки данных: данные отдельных точек или серин целых планшетов могут быть забракованы. Данные можно отбраковать в том случае, если имеется значительное отклонение от протокола, недостаток реагента или случайная ошибка, связанная с реагентом, или сбой в работе АВ17700. Для выбраковки каких-либо точек данных из очевидно нормального прохождения анализа, должен выполняться один или несколько из указанных критериев.
3.5.4.1. Расчеты порогового цикла. Обычно используют значения по умолчанию для компьютерной программы 8Ό8. Если С'1 наиболее концентрированного образца меньше 15, то при необходимости изменяют конечный предел порогового значения до более низкого значения, так чтобы С'1 образца с самой высокой концентрацией было выше, чем конечный предел. После выполнения такого изменения корректируют расчеты.
3.5.3.2. Решают вопрос о выбраковке всего неправильного прогона Таскан® , о котором свидетельствует отклонение от средних значений для наклона и отрезка, отсекаемого на оси у графиком, получаемым при анализе стандартов РНК иео.
Допустимыми пределами таких значений являются:
значения наклона должны быть в пределах от 3,0 до 3,6; количество циклов, соответствующее отрезку, отсекаемому на оси у, должно составлять от 36 до 41 цикла.
3.5.4.3. Отклоняющиеся от нормы отдельные лунки Таскан®® , о чем свидетельствует экстремальное значение Κη/ΔΚη, можно исключить перед анализом данных с тем, чтобы они не влияли на расчеты компьютерной программы 8Ό8.
3.5.4.4. Проверяют и регистрируют значения С'1 нематричных контролей и подтверждают, что они >7,0 С'1 (>100Х), выше, чем С'1 для любого обработанного соединением образца.
3.5.5. Значения С'1 стандартов РНК НСУ сравнивают с полученными ранее результатами.
3.5.6. Кривую для стандарта РНК НСУ сравнивают с полученными ранее результатами.
3.5.7. Если в отдельных лунках имеет место явная отклоняющаяся от нормы амплификация, то данные лунки идентифицируют и помечают.
3.5.8. Файл результаты экспортируют и переносят из компьютера 7700 в другой компьютер для анализа с использованием ΜίαοδοΕ Ехсе1.
3.5.9. Сообщают о любых из следующих изменений в приготовлениях реагентов или разведении.
Синтез нового зонда или праймера от поставщика. Новое разведение зонда или праймера и аликвоты. Новый препарат стандартов РНК-транскриптов.
Новое разведение стандартов РНК-транскриптов и аликвоты.
Новый вирусный препарат ВУЭУ.
Новый препарат стандартов колонки 11.
3.6. Анализ данных Та^Μаи®
3.6.1. Копируют и вставляют номер С'1 НСУ Та^Μаи® и количество копий из файла результатов Таскан®® в соответствующие ячейки ΜίαοδοΠ Ехсе1 тасго для анализа данных исследования репликонов, и запускают макрокоманду.
3.6.2. Копируют табл. результатов Та^Μаи® из макролиста на другой лист, вводят серийный номер соединения и номер партии.
3.6.3. На основе указанного листа ехсе1 будет рассчитано среднее значение, стандартное отклонение и процент СУ ингибирующей активности соединения, а также число копий НСУ, номер С'1 НСУ С'1 и номер С'1 ВУЭУ (если имеется) для всех точек разведения в 5 повторах и контроля, не содержащего соединения.
3.6.4. Критерии выбраковки данных и выполнения контрольного Таскан®® ВУЭУ. Проверяют все расчеты. Данные отдельных точек или серии целых планшетов могут быть забракованы. Данные можно отбраковать в том случае, если имеется значительное отклонение от протокола, недостаток реагента или случайная ошибка, связанная с реагентом, или сбой в работе АВ17700. Для выбраковки каких-либо точек данных из очевидно нормального прогона, должен выполняться один или несколько из указанных критериев. Стандартное отклонение ингибирования в процентах должно составлять менее 30% для активных соединений. %СУ количества копий НСУ должен составлять менее 30%. Стандартное отклонение С'1 НСУ всех образцов должно быть меньше 0,5; в большинстве образцов обычно оно составляет примерно от 0,1 до 0,3. Если стандартное отклонение С'1 НСУ составляет более 0,5, то возвращаются к табл. необработанных данных и поверяют номера С'1 5 повторов. Если номер С'1 для какой-либо одной лунки отличается на 2 С'1 от среднего номера С'1 5 повторов, то указанную лунку следует исключить из анализа. Если более 3 лунок (не в одной и той же колонке) имеют необычные номера С1, то необходимо провести анализ внутреннего контроля Таскан®® ВУЭУ. Если результаты, полученные для ВУЭУ неравномерны, то соединение необходимо тестировать заново.
- 178 017556
3.6.5. Расчет 1С50: копируют и вставляют данные среднего значения ингибирования и стандартного отклонения в сигмоидальную кривую доза-ответ с помощью устройства, рассчитывающего различные наклоны кривой, которое использует способы нелинейной регрессии. Используя указанное устройство, рассчитывают 1С50, используя каждый из двух способов: фиксирование только верхнего предела на уровне 100% ингибирования, или фиксирование верхнего предела на уровне 100% ингибирования и нижнего предела на уровне 0% ингибирования. Затем отмечают способ, который дает самую точную подгонку, для каждого соединения. Наиболее достоверное значение 1С50 получают из расчета с наименьшей стандартной ошибкой. Если 1С50, рассчитанные на основе указанных двух вариантов подгонки кривых, демонстрирует различие, превышающее однократное, или если 8Ό 1С50 больше чем 1С50, соединение следует тестировать заново с корректировкой концентраций.
Расчет влияния ингибиторов сериновой протеазы НСУ в комбинации с интерферонами
Влияние ингибитора сериновой протеазы НСУ (Н8Р1) и интерферона в комбинации можно оценить в анализе репликонов, получая кривую доза-ответ для Н8Р1 в присутствии различных уровней интерферона, или определяя кривую доза-ответ для интерферона в присутствии различных уровней Н8Р1. Цель заключается в том, чтобы оценить, будет ли иметь место большее или меньшее ингибирование накопления вирусной РНК, чем ожидалось бы, если бы два лекарственных средства оказывали аддитивное действие на РНК. Более конкретно, используют определение аддитивности по Бо\\'е ((1928) Э|е ОнапШайоп РгоЬ1ете бег Рйагтако1одю, ЕгдеЬп. Рйу8ю1, 27, 47-187). Аддитивность определяют следующим образом. Пусть ОЕ,шР означает концентрацию интерферона, результатом которой является эффект Е, и пусть ОЕ,Н8Р1 означает концентрацию ингибитора протеазы, результатом которой является эффект Е.
Тогда отсутствие взаимодействия или аддитивность Бо\\'е выражается следующим соотношением, где комбинация концентрации Όι ΙΝΡ и Ό2 Н8Р1 дает эффект Е.
Степень синергизма или антагонизма выражают кривыми изоэффекта или изоболами. Комбинация (Ό1,Ό2) представляет собой точку на графике, где на осях представлены концентрации интерферона и Н8Р1 (фиг. 1). Все такие комбинации, который дают уровень эффекта Е, образуют изоболу эффекта Е. Обязателен случай, когда (ПЕ,1МР,0) и (0, ЭЕ,Н8Р1) являются точками изоболы. Изоболы представляют собой прямые линии, связывающие точки (ПЕ,1МР,0) и (0, ОЕ,Н8Р1), когда удовлетворяется соотношение аддитивности (1).
Изоболы, вогнутые вверх, свидетельствуют о синергизме, а изоболы, вогнутые вниз, свидетельствуют об антагонизме. Следуя руководствам ВегепЬаит, М. С. ((1985) ТНе еxресΐеб еГГес( оГ а сотЫпайоп оГ адепй: (Не депега1 §о1ийоп. I ТНеог. Вю1., 114, 413-431) и Сгесо, Рагк апб Кийот ((1990) Аррйсайоп оГ а №\ν АрргоасН Гог (Не РиапЫайоп оГ Эгид 8упегд1§га (о (Не СотЫпайоп оГ с18-О1атттебюЫогор1айпит апб 1-В-Э-АгаЫпоГигапо8у1су1о81пе, Сапсег Кекеагсй, 50, 5318-5327), добавляют член к (1), чтобы рассчитать синергизм или антагонизм. Уравнение задает поверхность ответов, которую можно подогнать для контрольных процентных значений при всех комбинациях обработки. Точки контура из указанной подогнанной поверхности ответов представляют изоболы.
Модель поверхности ответов предполагает сигмоидальную зависимость доза-ответ для каждого соединения, определяемую (2).
Концентрации, которые дают конкретный уровень активности Е по отдельности, выражаются уравнениями (3).
Чтобы удовлетворять модели Сгесо е( а1. (1990), комбинированное действие лекарственных средств должно удовлетворять уравнению (4) для каждой комбинации лекарственных средств, которая дает уровень ответа Е.
Параметр а является мерой количества взаимодействия. Нулевое значение альфа означает отсутствие взаимодействия или аддитивность, так как уравнение сводится к (1) при а =0. Если даны 1С50, наклоны Хилла (т), максимальное значение (Εтаx) и минимальное значение (В), данное уравнение можно
- 179 017556 решить, получив эффект, являющийся результатом любой комбинации обработок [ЮТ] и [Н8РГ]. Следовательно, данное уравнение задает поверхность ответов. Если имеется эксперимент, где [ЮТ] и [Н8РГ] варьируют, то параметры можно выбрать с использованием нелинейной регрессии на основе метода взвешенных наименьших квадратов. Параметр а может быть связан с показателем синергизма 8 (Не^1е!!, Р. 8. (1969) Меакигетеп! оГ ро!епс1ек оГ Пгид т1х!игек. Вютейгск, 25, 477-487), который определяют непосредственно на основе изобол при 50% эффекте. 8 представляет собой отношение расстояния от начала координат до изоболы, определяющей аддитивность, к расстоянию от начала координат до изоболы подгоняемых данных, вдоль прямой, проходящей под углом в 45° относительно осей. (8=ОМОМ см. фиг. 2). Зависимость представляет собой а =4(82-8).
Способ, обсуждаемый в Сгесо е! а1. (1990), выше, для подгонки поверхности ответов и определения параметра синергизма а и уровня его значимости дает оценку степени синергизма в серии экспериментов, в которых тестируют Н8РГ в комбинации с несколькими различными интерферонами. Однако существует необходимость взвесить результаты наблюдений с более низкими оценками в большей степени, чем с более высокими оценками. Оценки прямо связаны с процентом в контроле, который представляет эффект Е. Используя способы, описанные в Сагго11, К! апП Кирей, Ό. ((1988) (ТгапкГогтайоп апП \Уе1д1йίη§ ίη Кедгеккюп, СНартап апП На11, №\ν Уогк), можно увидеть, что вариабельность от лунки к лунке увеличивается с увеличением квадрата среднего значения процента в контроле. Поэтому результатам наблюдений по одному приписывают веса по возведенному в квадрат подогнанному значению процента в контроле (Е). Дисперсия и взвешивание, используемые для анализа указанных экспериментов, не противоречат зависимостям изменчивости, наблюдаемым исследователями, изучающими способы анализа исследований радиолигандов (Ршпеу, Ό. I, (1976), КаПюйдапП Аккау, Вютейгск, 32, 721-740, и ИиП1еу, К. А. ЕП\\'агПк. Р., Екшк, К.Р., МсКт/1е. Г. С. М., КааЬ, С.М., КоПЬагП, Ό. апП КоПдегк, К.Р.С. (1985), СшПе1шек Гог Гттипоаккау Иа!а Ргосеккшд, Сйшса1 Сйет1к!гу, 31/8, 1264-1271).
Результаты
В исходном эксперименте ингибитор сериновой протеазы НСУ, соединение по изобретению, тестируют в пределах концентраций от 3 до 0,0123 мкМ, т.е. в 244-кратном диапазоне. Концентрации интерферона-альфа 2В варьируют от 30 единиц в образце до 0,0096 единиц в образце, т.е. в 3125-кратном диапазоне. Как показано в табл. 7, при использовании в качестве единственного лекарственного средства для обработки соединение по изобретению проявляет ГС50, равное 0,48 мкМ, а интерферон - ГС50, равное 2,19 ед. В пределах погрешности анализа репликонов, которое составляет примерно 20%, добавление интерферона-альфа 2В приводит к увеличению ингибирования накопления РНК репликона дозозависимым образом. Например, обработка клеток 0,333 мкМ соединения по изобретению приводит к 28% ингибированию накопления РНК репликона. Обработка клеток комбинацией 0,333 мкМ соединения по изобретению, что составляет 71% дозы ГС50 (0,469 мкМ), и 0,24 ед. интерферона-а 2В, что составляет 11% ГС50 интерферона-а 2В (2,05 мкМ) приводит к 49% ингибированию накопления РНК репликона. Таким образом, 71% дозы ГС50 одного соединения в комбинации с 11% другого приводит к 49% ингибированию накопления РНК репликона. Используя интуитивный подход к определению того, является ли комбинированная обработка синергической, или аддитивной, или антагонистической, можно предположить, что если бы эффект комбинированной обработки был только аддитивным, то следовало бы ожидать, что объединяемые фракции двух доз ГС50, необходимые для получения 49% ингибирования накопления РНК репликона, составляли бы 98%. Экспериментальные результаты авторов изобретения показывают, что уровень ингибирования накопления РНК репликона достигается с использованием 71% плюс 11%, т. е. 82% дозы ГС50, а не 98%, как рассчитано для случая аддитивных эффектов комбинированной обработки. Таким образом, при указанных концентрациях соединений эффект, по-видимому, является синергическим, так как используют меньшие дробные дозы ГС50 каждого соединения для получения 49% ингибирования РНК репликона НСУ, чем требовалось бы в случае использования любого из соединений по отдельности, когда было бы необходимо 98% доз ГС50. Представленные исходные результаты, полученные, как указано ранее, с использованием анализа репликона ш уйго и простого анализа аддитивности данных, полученных в данном анализе, показывают, что комбинированная обработка клеток, несущих репликон, ингибитором сериновой протеазы НСУ и интерфероном дает, по меньшей мере, аддитивный антивирусный эффект и, по-видимому, синергический антивирусный эффект.
Приведенные выше данные повторно анализировали, используя формальные математически способы, описанные выше для того, чтобы определить, является ли взаимоотношение между ингибитором сериновой протеазы НСУ по изобретению и интерфероном альфа-2В синергическим, аддитивным или антагонистическим. В табл. 7 суммированы дополнительные результаты, полученные в анализе репликонов после обработки клеток, содержащих репликон, в течение 48 ч различными ингибиторами сериновой протеазы НСУ согласно данному изобретению и несколькими разными интерферонами, отдельно или в комбинации. Авторы обращают внимание, что стандартное отклонение значений, измеренных для ингибирования РНК репликона НСУ в анализе репликона, составляет ~20%. Соединения тестируют в широком диапазоне концентраций и при более низких концентрациях соединения, которые не вызывают существенного ингибирования концентрации РНК репликона НСУ. Поскольку стандартное отклонение в
- 180 017556 анализе составляет ~20%, в некоторых точках данные будут давать отрицательные числа. Отрицательные числа ингибирования свидетельствуют о том, что в конкретном эксперименте в образцах, обработанных соединением, в среднем больше молекул РНК репликона НСУ, чем в ложно обработанных образцах.
Таблица 7. Ингибирование накопления РНК репликона после 48-часовой обработки ингибиторами сериновой протеазы НСУ и различными интерферонами отдельно или в комбинации Эксперимент 1
Соединение ЕС (мкМ)
13 0.75 0375 0.1875 0.0938 0.0469 0.0234 0
в 96% 93% 81% 56% 29% 23% 19% 1% 0
0.0492 96% 92% 80% 60% 31% 15% 19% 29% 6%
0.1229 96% 94% 78% 58% 32% 13% 20% 20% 4%
Интерферон альфа-2В 03072 97% 95% 82% 60% 38% 32% 34% 42% 23%
(единицы) №768 97% 95% 87% 66% 43% 41% 46% 43% 25%
1.92 98% 97% 90% 73% 62% 51% 54% 58% 47%
43 98% 97% 94% 87% 76% 73% 78% 76% 69%
12.0 98% 98% 96% 92% 86% 86% 86% 85% 84%
30.0 98% 98% 96% 96% 93% 92% 92% 95% 91%
Эксперимент 2
Соединение ЕС (мкМ)
3.0 13 0,75 0.375 0.1875 0.0938 0.0469 0.02344 О
0 96% 92% 81% 47% 28% 17% -1% -8% 0
0.0492 96% 93% 78% 58% 21% 8% -12% 10% -17%
0.1229 95% 93% 79% 64% 14% 5% 14% 7% -22%
Интерферон 03072 95% 91% 80% 64% 22% 15% 5% 2% -5%
ал-Фа-гд Л76# (единицы) 96% 95% 81% 64% 34% 21% 19% 20% 4%
132 96% 95% 88% 78% 44% 41% 19% 33% 21%
43 97% 95% 91% 85% 60% 58% 60% 53% 49%
12.0 97% 97% 95% 91% 77% 72% 76% 70% 71%
30.0 98% 98% 97% 94% 91% 86% 85% 85% 84%
Эксперимент 3
Соединение ЕР (мкН) « 4 2 1 03 035 0.125 0.0625 0
0 94% 96% 96% 92% 64% 36% 23% 8% 0
0.0492 95% 96% 96% 91% 67% 25% 28% 8% 3%
0.1229 95% 97% 96% 91% 65% 44% 4% 11% 4%
Интерферон 03072 95% 97% 96% 91% 71% 46% 20% 8% 20%
альфа~2В 0.7680 (единицы) 132 96% 97% 97% 93% 75% 49% 36% 24% 24%
96% 97% 97% 94% 82% 67% 49% 52% 54%
43 96% 98% 97% 96% 90% 79% 75% 75% 70%
12 97% 98% 98% 97% 94% 89% 89% 87% 83%
30 97% 98% 98% 98% 96% 94% 94% 95% 92%
Эксперимент 4
Рибавирин (мкН)
200 80 32 12.8 5.12 2.048 0.8192 03277 0
0 85% 62% 43% 3% 3% -17% -22% -6% 0
0.0492 87% 66% 48% 44% 11% -4% -10% 11« -7%
0.1229 84% 64% 53% 40% 26% -12% -5% 11% -9%
Интерферон 03072 86% 70% 62% 44% 28% 1% 6% 14% 7«
0.7680 90% 80% 72% 65% 38% 30% 28% 44% 29%
..... 1.92 93% 85% 77% 76% 61% 57% 58% 50% 46%
43 96% 92% 87% 83% 82% 74% 71% 77% 72%
12 97% 95% 93% 91% 90% 89% 90% 89% 85%
30 98% 97% 96% 95% 94% 94% 93% 95% 94%
- 181 017556
Как показано на фиг. 3-6, на которых графически изображены данные табл. 7, нанесенные с использованием описанного выше математического способа измерения синергизма, изоболические кривые для всех комбинаций ингибиторов сериновой протеазы НСУ и тестированных интерферонов вогнуты вверх, что свидетельствует о том, что антивирусное действие обработок в анализе репликонов является синергическим. Полученные результаты сведены в табл. 8, в которой показаны относительные уровни синергизма для комбинированной обработки и значения 1С50 для антивирусных соединений, используемых отдельно. Ключевыми элементами в табл. 9 являются значения а и значения р для определений. Элемент а является мерой максимального изгиба изоболической кривой для каждой комбинированной обработки. Значение а, равное нулю, свидетельствует об аддитивности, отрицательное значение свидетельствует об антагонизме и в случае комбинированной обработки ингибиторами сериновой протеазы НСУ и интерферонами, указанной выше, значение большее единицы свидетельствует о синергизме. Чем больше параметр а, тем больше синергизм. Как показано в табл. 9 для комбинаций ингибиторов сериновой протеазы НСУ и интерферонов, даже при игнорировании уровней значимости в каждом эксперименте, (-критерий на основании 9 экспериментов при среднем значении а, равном 0 (нет взаимодействия), имеет значение р, равное 0,00014, свидетельствуя о том, что результаты высоко достоверны.
Расчет синергизма методом Огесо КикЮт ( (1990) Аррйсайоп оГ а Νο\ν ЛрргоасН Гог 111е ОнапШабоп оГ Эгид 8упегд1кт !о 111е СотШпабоп оГ с15-О1аттШеб1сЫогор1а(тит апб 1-β-^-Л^аЬ^ηοГи^аηοκу1суΐοκ^ηе, Сапсег КекеагсЕ, 50, 5318-5327), используемый в данном анализе, является идеальным средством оценки характера экспериментальных данных, которые могут быть получены с использованием анализа репликонов НСУ. Существуют другие способы, которые применяют для исследования антивирусных соединений, такие как способ РгйсЕагб апб 8Шртап (РпсЕагб, М.К, апб 8Шртап, С. 1г., (1990) А 111гееб1тепкюпа1 тобе1 1о апа1ухе бгид-бгид ш(егасбопк (геу1е^), АнПуШИ Кек. 14: 181-206). Применение способа расчета синергизма этих авторов к данным, показанным в табл. 7, также свидетельствует о том, что комбинированная обработка клеток, несущих репликон, ингибитором сериновой протеазы НСУ и интерфероном приведет к синергическому ингибированию накопления РНК репликона НСУ (данные не показаны).
Таблица 8. Относительные уровни синергизма для комбинированной обработки и значения 1С50 для антивирусных соединений, используемых отдельно
Ингибитор Интерферон 1С5о ΙΝΓ 1С55 а (БЕ)1 Рсериновой (единицы) Η3ΡΙ значение протеазы НСУ (мкМ) «>0 (Η5ΡΙ)
Эксперимент 1 Соединение ЕС ΙΪΉ альфа-2В 2,53 0,384 0,516(0,10) <0,0001
Эксперимент 2 Соединение ЕС ΙΡΝ альфа-2А 5,50 0, 312 1,24(0,20) <0,0001
Эксперимент 3 Соединение ЕР ΙΕΝ альфа-2В 30,6 0,426 0,490(0,12) <0,0001
Эксперимент 4 Рибавирин ΙΕΝ альфа-2В 1,22 145 -0,24(0,067) 0,0004
\8Е) Стандартная ошибка
Другое измерение для оценки синергической природы анти-НСУ-лекарственной обработки с использованием ингибиторов сериновой протеазы НСУ и интерферонов состоит в использовании таких же способов, которые описаны выше, для оценки в анализе репликонов современной стандартной комбинированной терапии НСУ, т.е. интерферона альфа-2В в комбинации с рибавирином. На последней строке в табл. 8 показано, что параметр а для смеси интерферона альфа-2В и рибавирина является отрицательным числом, что свидетельствует о том, что существует небольшой антагонизм между двумя указанными лекарственными средствами. Это дополнительно подчеркивает значение описанных в данной заявке комбинированных обработок, в которых используются ингибитор сериновой протеазы НСУ в комбинации с интерферонами, так как указанные обработки бесспорно обеспечивают синергизм, тогда как стандартная комбинированная терапия, используемая в случае НСУ (интерферон альфа-2В в комбинации с рибавирином) не имеет синергического характера в анализе репликонов.
Приведенное выше сравнение комбинированных обработок с использованием описанных в данной заявке ингибиторов сериновой протеазы НСУ плюс интерфероны с рибавирином плюс интерферон в анализе репликонов явно свидетельствует о том, что первая обработка имеет синергический характер, а последняя - не имеет. Результаты экспериментов, полученные с использованием анализа репликонов, свидетельствуют о том, что гораздо меньшие дозы интерферона были бы эффективными в том случае, если интерферон использовать в комбинации с ингибитором сериновой протеазы НСУ, чем необходимо при использовании интерферона альфа-2В в комбинации с рибавирином. Анализ репликонов является полезной модельной системой для тестирования потенциальных анти-НСУ-соединений и в настоящее время широко признан как эффективное средство прогнозирования анти-НСУ-активности. Например, см. В1|§111 е! а1. (2000) ЕГПс1еп1 ШШабоп оГ НСУ КNЛ КерНсабоп ш Се11 СиИиге. 8с1епсе 8; 290: 1972-1974, и СЕипд е! а1. (2001) Нераббк С νίπικ герЕсабоп ίκ б1гесбу ийиЬНеб Ьу ΙΡΝ-α ш а Ги11-1епд111 Шпагу ехргекбоп кук(ет. Ргос. №11. Асаб. 8сЕ И.8.А. 98(17): 9847-52. Отдельно рибавирин обладает минимальной эффек
- 182 017556 тивностью в снижении накопления РНК репликона НСУ в анализе репликонов (табл. 7, эксперимент 4, и последняя строка табл. 8). Полученный результат видимо противоречит исследованиям ΐη νίνο, в которых сам по себе рибавирин в случае применения не имеет значимого терапевтического значения для лечения НСУ. Напротив, в анализе репликонов при корректировке на цитотоксичность, как обсуждается далее, рибавирин имеет 1С50, равную 145 мкМ. Полученный результат можно объяснить, приняв во внимание, что при анализе репликонов выполняют оценку высоких концентраций рибавирина, которые не возможны при терапии человека вследствие цитотоксичности ίη νίνο (Сйи1арий1 А. (2000) Абуегзе ейесГз апб о(йег 8аГе1у азрес18 о! (Не йераШк С апйупак. 1оигпа1 о! Сав1гоеп1его1оду апб НераЮ1оду. 15 8ирр1.: Е156-63).
Данная оценка настоятельно требует определения цитотоксичности рибавирина. Такая цитотоксичность имеет место у пациентов и в анализах на клетках (ЫчГГтап М. Ь., УегЬеке 8. В., К1тЬа11 Р. М. (2000) А1рйа йИегГегоп сотЬтеб \\йй г1Ьау1Г1п ро(еп!1а1е8 р^ο1^Ге^аι^νе 8иррге881оп Ьи( по! суЮкте ргобисйоп т тйодешсайу 8Йти1а1еб йитап 1утрйосу1е8. АпЙУ1га1 Везеагсй. 48(2): 91-9). В описанных в данной заявке экспериментах наблюдали и двумя способами измеряли цитотоксичность рибавирина в анализе репликонов. И в метаболическом ХТТ-анализе для определения жизнеспособности несущих репликон клеток (Воейт Ν.^., Вобдегз С. Н., На1йе1б 8. М., С1азеЬгоок А. Ь. (1991) Ап тргоуеб со1опте1пс аззау Гог се11 ргойГегайоп апб У!аЫй1у и(111хлпд (Не 1е1гахо1шт за11 ХТТ. 1оигпа1 о! 1ттипо1. МеШобз. 142(2): 25765) и в количественном ОТ-ПЦР анализе ТадМап® , в котором измеряют уровни мРНК глицеральдегид3-фосфатдегидрогеназы (САРЭН) в обработанных по сравнению с необработанными клетками в анализе репликонов (Вппк Ν., 8хате1 М., Уоипд А.В., \Уй1ет К.Р., Вегдетапп ί. (2000) Сотрагайуе диапИйсайоп оГ 1Ь-1Ье1а, 1Б-10, 1Ь-10г, ЮТЦрйа апб ЕЬ-7 тВNА 1еуек ш ИУ-1ггаб1а1еб йитап зкт ш у1уо. 1пйаттайоп Везеагсй. 49(6): 290-6) наблюдается значительная индуцированная рибавирином цитотоксичность, но ее корректируют следующим образом. Предполагается, что уровень мРНК САРЭН, которая конститутивно экспрессируется геном хаускипинга, одинаков во всех жизнеспособных клетках. На основе измерений уровней мРНК САРЭН в клетках, обработанных ингибитором транскрипции активномицином Ό, известно, что время полужизни мРНК САРЭН составляет только несколько часов (данные не показаны). Таким образом, допускается, как это делается другими авторами при использовании методики ТадМап® для определения уровней конкретных мРНК в клетках человека, что уровни мРНК САРЭН пропорциональны количеству жизнеспособных клеток (УСИ) в любом данном образце, при этом зависимость имеет вид УСN=2Λ(40-Сΐ мРНК САюН). Вычисляют УСN для каждой лунки образцов в анализе репликонов и затем делят число копий РНК репликона НСУ для конкретной лунки на УСN для данной лунки. После расчета указанное отношение используют вместо числа копий НСУ, чтобы рассчитать ингибирование (Среднее ингибирование с использованием отношения; фиг. 7.А). Без внесения поправки в результаты анализа репликонов на указанную цитотоксичность, такая цитотоксичность регистрируется как ложно позитивное ингибирование накопления РНК репликона НСУ. В анализе репликонов предполагается, что измеренное ингибирование накопления РНК репликона НСУ представляет собой сумму действительного ингибирования накопления РНК репликона НСУ и кажущегося ингибирования накопления РНК репликона НСУ вследствие цитотоксичности. Кроме того, на основании близкой корреляции измерений цитотоксичности с помощью ХТТ и с помощью измерения мРНК САРЭН в ТадМап® предполагается, что ингибирование накопления мРНК САРЭН, вызванное тестируемыми соединениями при анализе репликонов является надежной мерой кажущегося ингибирования накопления РНК-репликона НСУ вследствие цитотоксичности. Таким образом, истинную анти-НСУ-активность соединения в анализе репликонов, скорректированную на общую цитотоксичность, можно оценить путем деления количества молекул РНК-репликона НСУ, измеренного в каждом образце, на УСД таким образом, нормализуя количество жизнеспособных клеток в каждом образце. На фиг. 7А показана оценка с использованием данного способа истинной анти-НСУ-активности рибавирина в анализе репликонов (среднее ингибирование с использованием отношения). Оценка 1С50 для рибавирина лучше всего рассчитывается с использованием указанного способа. На фиг. 7А среднее исходное ингибирование показывает нескорректированную 1С50 для рибавирина, которая составляет примерно 80 мкМ, тогда как скорректированное значение 1С50, рассчитанное на основе кривой среднее ингибирование с использованием отношения, составляет примерно 145 мкМ. Следует отметить, что различие между скорректированным и измеренным ингибированием накопления РНК-репликона НСУ в результате обработки интерфероном альфа-2В (фиг. 7В) незначительно, учитывая ~20% %СУ в анализе репликонов. Подобно интерферону альфа-2В ингибиторы сериновой протеазы НСУ, тестированные в данном примере, не проявляли значительной цитотоксичности при используемых концентрациях. Это определяли с использованием ХТТ-анализов, в которых значения ТС50 для разных соединений составляют: ЕР>10 мкМ и ЕС>50 мкМ. Указанные значения ТС50 в 20-140 раз выше, чем значения 1С50, показанные в табл. 8. Таким образом, цитотоксичность указанных соединений не оказывает существенного влияния на накопление РНК НСУ в анализе репликонов в пределах точности анализа, так как указанная цитотоксичность имеет место только при концентрациях ингибитора сериновой протеазы НСУ значительно превышающих концентрации, тестированные при анализе репликонов.
- 183 017556
Выводы, касающиеся эффективности ингибиторов сериновой протеазы НСУ и интерферонов отдельно и в комбинации
Анти-НСУ-активности описанных в данной заявке ингибиторов сериновой протеазы НСУ и различных интерферонов, используемых отдельно в анализе репликонов НСУ, показаны в столбцах и строках для отдельных экспериментов, составляющих табл. 8, в которых применяли только одно антивирусное средство. В табл. 9 перечислены значения 1С50, измеренные для каждого антивирусного соединения в том случае, когда их тестировали по отдельности. Приведенные выше результаты, полученные с применением анализа репликонов ίη νίΐτο, также показали, что комбинированная обработка клеток, несущих репликон, ингибиторами сериновой протеазы НСУ согласно данному изобретению и различными интерферонами дает синергические антивирусные эффекты. Ожидается, что полученные эффекты в полной мере будут перенесены на эффективности ίη νίνο.
Комбинированная терапия с применением ингибиторов сериновой протеазы НСУ согласно данному изобретению имеет несколько основных преимуществ по сравнению с терапией отдельным лекарственным средством. Во-первых, при осуществлении лечения возможными более низкими дозами отдельных лекарственных средств, чем было бы возможно при отдельном использовании, можно ожидать снижения токсичности и побочных эффектов, связанных с лечением. Это особенно важно в случае терапии интерферонами, при которой побочные эффекты являются тяжелыми и, как было показано, пропорциональными дозе, вводимой пациентам. Приведенные выше результаты свидетельствуют о том, что дозу ингибитора сериновой протеазы НСУ по настоящему изобретению на уровне 1С95 можно комбинировать с дозой интерферона альфа, например, на уровне 1С50, и в результате терапия будет намного более эффективной, чем можно достичь с одним ингибитором сериновой протеазы НСУ, без нежелательных побочных эффектов, вызванных высокими дозами интерферона альфа. Второе основное преимущество комбинированной терапии состоит в том, что поскольку два лекарственных средства действуют независимо, то меньше вероятность развития мутантных штаммов НСУ, которые устойчивы к лечению. Развитие резистентности является основной заботой в случае РНК-вирусов, подобных НСУ. Вследствие высокой скорости их мутации такие вирусы могут быстро адаптироваться к окружающим стрессовым условиям. Третьим преимуществом комбинированной терапии может быть сниженная стоимость вследствие потребности в меньших количествах терапевтических средств, требуемых для эффективного лечения.
Дополнительные иммуностимуляторы, которые можно применять в способах, описанных в данной заявке, включают, например, альфа-интерферон 2А, интерферон-консенсус, интерферон 1аи, интерферон + рибавирин (ребатрон), пэгилированный интерферон и промоторы экспрессии гена интерферона. Ожидается, что анти-НСУ-активность указанных соединений будет повышена при использовании в комбинации с ингибиторами сериновой протеазы НСУ, такими как ингибиторы, описанные в данной заявке. Так как известно, что интерфероны активны ίη νίνο и в анализе репликонов, ожидается, что данные ингибиторы сериновой протеазы НСУ будут также активными ίη νίνο, и что более важно, будут обладать способностью вызывать синергическую активность при использовании в комбинации с интерферонами, стимуляторами иммунной системы или другими соединениями, обладающими антивирусной активностью, направленной против НСУ, которые действуют по механизму, отличному от ингибирования сериновой протеазы НСУ.
В наилучшем способе терапии НСУ в настоящее время используют интерферон альфа и нуклеозидный аналог рибавирин. Указанная обработка эффективна только в небольшой степени и дает существенные побочные эффекты, которые снижают адаптационную способность пациента (Сйгошс Нера11118 С: СиггеШ ЭЛеа^е Μаиадетеиΐ, и.З. ОераЛтеШ ο£ НеаИЪ ηηά Ηитаи Зегукек, Ν3ΐίοηη1 ИъШШех ο£ НеаИЪ, 1999). Кроме того, у пациентов с трансплантациями не ясно, как работает комбинация рибавирининтерферон, и в действительности может работать хуже, чем один интерферон (Сйгошс Нера11118 С: СиггеШ Ошеаке Μаиадетеиΐ, и.З. ОераПтеШ ο£ НеаИН ηηά Ηитаи Зегукек, Ν3ΐίοηη1 ИъШШех ο£ НеаНН, 1999).
Представленные выше результаты свидетельствуют о синергическом комбинированном действии в том случае, когда интерфероны используют с новым классом антивирусных средств против НСУ, ингибиторами сериновой протеазы согласно данному изобретению. Авторы вполне обоснованно ожидают, что описанные в данной заявке результаты ίη νίίτο приведут к более эффективному лечению пациентов с НСУ, чем возможно в настоящее время только с использованием одного интерферона. Субтерапевтические дозы интерферона смогут мобилизовать иммунную систему пациента для лучшей борьбы с вирусом, а ингибитор сериновой протеазы может атаковать непосредственно вирус, что обеспечит атаку на вирус по двум направлениям посредством разных механизмов действия. Таким образом, лечение НСУинфекции можно осуществлять при более низкой стоимости для пациента, как с точки зрения пониженных побочных эффектов, так и более низкой оплаты необходимых фармацевтических средств, так как для эффективной антивирусной терапии, направленной против НСУ, обоих лекарственных средств потребуется меньше.
Данное изобретение может быть реализовано в других конкретных формах, не отходя от сути или его важных отличительных признаков.
- 184 017556

Claims (137)

1. Соединение формулы 1 или его фармацевтически приемлемая соль, или сольват указанного соединения или его соли, где
К0 означает связь или дифторметилен;
К1 означает водород, С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы;
К2 означает С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или моноциклическую группу, необязательно замещенную 1-3 заместителями кольцевой группы;
К3 означает С1-С4 алкилметилен, С2-С4 алкенилметилен или С2-С4 алкинилметилен, каждый из которых необязательно замещен 1-3 заместителями алифатической группы;
К4 означает водород, С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы;
К5 означает С1-С4 алкилметилен, а С2-С4 алкенилметилен или С2-С4 алкинилметилен, каждый из которых необязательно замещен 1-3 заместителями алифатической группы;
К6 означает водород, С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы;
К7 означает С1-С4 алкилметилен, а С2-С4 алкенилметилен или С2-С4 алкинилметилен, каждый из которых необязательно замещен 1-3 заместителями алифатической группы, (5-6-членная циклическая группа)метилен, необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы, или необязательно замещенный моноциклический (арил или гетероарил)метилен,
К8 означает водород, С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы;
К9 означает С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или моноциклическую ароматическую группу, необязательно замещенную 1-3 заместителями кольцевой группы;
К10 означает водород, С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы;
означает N , необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы, ό
N , необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы, или , необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы, где ненасыщенность находится в кольце, дистальном по отношению к кольцу, несущему К9-Е-(И(К8)-К7-С(О)-)пИ(К6)-К5-С(О)-Ы группу, и к которому присоединена группа -С(О)-И(К4)-К3-С(О)С(О)ИК2К!;
Ь означает -С(О)-, -ОС(О)-, -ИК10С(О)-, -8(О)2- или -ИК108(О)2-; и п равно 0 или 1;
где:
а) заместители алифатической группы означают арил, гетероарил, гидрокси, алкокси, циклилокси, арилокси, гетероарилокси, ацил или его тиоксоаналог, циклилкарбонил или его тиоксоаналог, ароил или его тиоксоаналог, гетероароил или его тиоксоаналог, ацилокси, циклилкарбонилокси, ароилокси, гетероароилокси, галоген, нитро, циано, карбокси (кислота), -С(О)-ИНОН, -С(О)-СН2ОН, -С(О)-СН28Н, -С(О)-ИН-СИ, сульфо, фосфоно, алкилсульфонилкарбамоил, тетразолил, арилсульфонилкарбамоил, Νметоксикарбамоил, гетероарилсульфонилкарбамоил, 3-гидрокси-3-циклобутен-1,2-дион, 3,5-диоксо1,2,4-оксадиазолидинил или гидроксигетероарил, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикар
- 185 017556 бонил, гетероарилоксикарбонил, алкилсульфонил, циклилсульфонил, арилсульфонил, гетероарилсульфонил, алкилсульфинил, циклилсульфинил, арилсульфинил, гетероарилсульфинил, алкилтио, циклилтио, арилтио, гетероарилтио, циклил, арилдиазо, гетероарилдиазо, тиол, метилен (Н2С=), оксо (О=), тиоксо (8=), Υ1Υ2Ν-, Υ^ΝΟν)-, ΥΎ^ε^^-, ΥΎ^ϋ^ΝΥ3-, Υ УМО- или Υ^ΝΥ1-, где В2 принимает указанные выше значения, Υ1 и Υ2 независимо означают водород, алкил, арил или гетероарил, и Υ3 означает алкил, циклоалкил, арил или гетероарил, или в случае, когда заместитель означает ΥΙΥ2Ν-, один из Υ1 и Υ2 может означать указанные выше ацил, циклилкарбонил, ароил, гетероароил, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил или гетероарилоксикарбонил, а другой Υ1 или Υ2 принимает значения, указанные перед этим, или в случае, когда заместитель означает Υ1Υ2NС(О)-, Υ1Υ2NС(О)О-, Υ Υ NС(О)NΥ - или Υ Υ №О2-, Υ и Υ могут вместе с атомом Ν, через который связан каждый из Υ и Υ2, образовывать 4-7 членный азагетероциклил или азагетероцикленил;
b) ароматический означает ароматическую, моноциклическую или полициклическую кольцевую систему из 6-10 атомов углерода, или ароматическую, моноциклическую или полициклическую кольцевую систему из 5-14 атомов углерода, в которой один или несколько атомов кольца являются гетероатомом, каждая из которых необязательно замещена 1-3 заместителями кольцевой группы;
c) арил означает ароматическую моноциклическую или полициклическую кольцевую систему из 614 атомов углерода;
б) циклический означает неароматическую, моно- или полициклическую кольцевую систему из 310 атомов углерода; неароматическую, моно- или полициклическую кольцевую систему из 3-10 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь;
неароматическую, насыщенную моно- или полициклическую кольцевую систему из 3-10 атомов углерода, в которой один или несколько атомов кольца являются гетероатомом;
или неароматическую, насыщенную моно- или полициклическую кольцевую систему из 3-10 атомов углерода, в которой один или несколько атомов кольца являются гетероатомом и которая содержит по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь; каждая из которых необязательно замещена 1-3 заместителями кольцевой группы;
е) циклоалкенил означает неароматическую моно- или полициклическую кольцевую систему из 310 атомов углерода, которая содержит по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь;
ί) циклоалкил означает неароматическую моно- или полициклическую кольцевую систему из 3-10 атомов углерода;
д) циклил означает циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклил или гетероцикленил;
б) гетероарил означает ароматическую моноциклическую или полициклическую кольцевую систему из 5-14 атомов углерода, где один или более атомов углерода в кольцевой системе является/являются гетероэлементом (гетероэлементами), отличными от углерода.
ί) гетероцикленил означает неароматическую моноциклическую или полициклическую систему углеводородных колец из приблизительно 3-10 атомов углерода, где один или более атомов углерода в кольцевой системе является/являются гетероэлементом (гетероэлементами), отличными от углерода, и которая содержит по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь или углерод-азот двойную связь;
_)) гетероциклил означает неароматическую насыщенную моноциклическую или полициклическую кольцевую систему из приблизительно 3-10 атомов углерода, где один или более атомов углерода в кольцевой системе является/являются гетероэлементом (гетероэлементами), отличными от углерода;
k) необязательно замещенные ароматические группы означают арильную или гетероарильную группы, необязательно замещенные 1-3 заместителями кольцевой группы;
l) необязательно замещенные циклические группы означают циклоалкильную, циклоалкенильную, гетероциклильную или гетероцикленильную группы, необязательно замещенные 1-3 заместителями кольцевой группы;
т) необязательно замещенные (1,1- или 1,2-) циклоалкиленовые группы означают (1,1- или 1,2-) циклоалкиленовые группы, необязательно замещенные одним или более заместителями кольцевой группы;
п) необязательно замещенные (1,1- или 1,2-) гетероциклиленовые группы означают (1,1- или 1,2-) гетероциклиленовые группы, необязательно замещенные одним или более заместителями кольцевой группы;
о) каждый из заместителей кольцевой группы независимо означает арил, гетероарил, гидрокси, алкокси, циклилокси, арилокси, гетероарилокси, ацил или его тиоксоаналог, циклилкарбонил или его тиоксоаналог, ароил или его тиоксоаналог, гетероароил или его тиоксоаналог, ацилокси, циклилкарбонилокси, ароилокси, гетероароилокси, галоген, нитро, циано, карбокси (кислота), -С(О)-ИНОН, -С(О)-СН2ОН, -С(О)-СН28Н, -С(О)-ЫН-СН сульфо, фосфоно, алкилсульфонилкарбамоил, тетразолил, арилсульфонилкарбамоил, Ν-метоксикарбамоил, гетероарилсульфонилкарбамоил, 3-гидрокси-3-циклобутен-1,2-дион, 3,5-диоксо-1,2,4-оксадиазолидинил или гидроксигетероарил, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил, гетероарилоксикарбонил, алкилсульфонил, циклилсульфонил, арилсульфонил, гетероарилсульфонил, алкилсульфинил, циклилсульфинил, арилсульфинил, гетероарилсульфинил, алкилтио,
- 186 017556 циклилтио, арилтио, гетероарилтио, циклил, арилдиазо, гетероарилдиазо, тиол, Υ1Υ2Ν-, У1У2ИС(О)-, У1У2ИС(О)О-, Υ1Υ2NС(Ο)NΥ3- или Υ^Ν^;-, где Υ1, Υ2 и Υ3 независимо означают водород, алкил, арил или гетероарил, или в случае, когда заместитель означает Υ1 Υ2Ν-, один из Υ1 и Υ2 может означать указанные выше ацил, циклилкарбонил, ароил, гетероароил, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил или гетероарилоксикарбонил, а другой из Υ1 и Υ2 принимает значения, указанные перед этим, или в случае, когда заместитель означает Υ Υ ИС(О)-, Υ Υ ИС(О)О-, Υ Υ ИС(О)ИУ - или У’У^БОг-, Υ1 и Υ2 могут вместе с атомом Ν, через который связан каждый из Υ1 и Υ2, образовывать 4-7членный азагетероциклил или азагетероцикленил, или когда кольцевая система является насыщенной или частично насыщенной, заместители кольцевой группы дополнительно включают метилен (Н2С=), оксо (О=) и тиоксо (8=); и Υ1Υ2NСΟ; при условии, что следующие соединения:
исключены.
2. Соединение по п.1, где К0 означает связь.
3. Соединение по п.1 или 2, где каждый из заместителей кольцевой группы независимо означает арил, гетероарил, гидрокси, алкокси, циклилокси, арилокси, гетероарилокси, ацил или его тиоксоаналог, циклилкарбонил или его тиоксоаналог, ароил или его тиоксоаналог, гетероароил или его тиоксоаналог, ацилокси, циклилкарбонилокси, ароилокси, гетероароилокси, галоген, нитро, циано, карбокси (кислота), кислотную биостеру, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил, гетероарилоксикарбонил, алкилсульфонил, циклилсульфонил, арилсульфонил, гетероарилсульфонил, алкилсульфинил, циклилсульфинил, арилсульфинил, гетероарилсульфинил, алкилтио, циклилтио, арилтио, гетероарилтио, циклил, арилдиазо, гетероарилдиазо, тиол, Υ!Υ2Ν-, Υ^2^^)-, Υ^ΝΟΌ^-, Υ1Υ2NС(О)NУ3- или Υ^^^^, где Υ1, Υ2 и Υ3 независимо означают водород, алкил, арил или гетероарил, или в случае, когда заместитель означает Υ1Υ2Ν-, один из Υ1 и Υ2 может означать указанные выше ацил, циклилкарбонил, ароил, гетероароил, алкоксикарбонил, циклилоксикарбонил, арилоксикарбонил или гетероарилоксикарбонил, а другой из Υ1 и Υ2 принимает значения, указанные перед этим, или в случае, когда заместитель означает Υ!Υ2ΝΟΌ)-, Υ^2^^^-, Υ1Υ2NС(О)NУ3- или ΥΎΝ^-, Υ1 и Υ2 могут вместе с атомом Ν, через который связан каждый из Υ1 и Υ2, образовывать 4-7-членный азагетероциклил или азагетероцикленил, или когда кольцевая система является насыщенной или частично насыщенной, заместители кольцевой группы дополнительно включают метилен (Н2С=), оксо (О=) и тиоксо (8=).
4. Соединение по одному из пп.1-3, где К0 означает дифторметилен.
5. Соединение по одному из пп.1-4, где К1 означает водород или С1-С4 алкил.
6. Соединение по одному из пп.1-6, где К1 означает водород.
7. Соединение по одному из пп.1-6, где К2 означает С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкенил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, С2-С4 алкинил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или моноциклическую циклоалкильную группу, необязательно замещенную 1-3 заместителями кольцевой группы.
8. Соединение по одному из пп.1-7, где К2 означает карбоксиметил, 1-карбокси-2-фенилэтил, циклопропил, циклобутил, 1-циклогексилэтил, 1-фенилэтил, бут-2-ил, 1-пирид-4-илэтил, пропен-3-ил или 3метилбут-2-ил.
9. Соединение по одному из пп.1-8, где К3 означает необязательно замещенный галогеном (С1-С4 алкил или С2-С4 алкенил)метилен.
10. Соединение по одному из пп.1-9, где К3 означает пропилметилен, 2,2-дифторэтилметилен, 2,2,2трифторметилен или пропен-3-илметилен.
11. Соединение по п.10, где К3 означает пропилметилен или 2,2-дифторэтилметилен.
12. Соединение по п.11, где К3 означает пропилметилен.
13. Соединение по одному из пп.1-12, где К4 означает водород.
14. Соединение по одному из пп.1-13, где К5 означает необязательно (фенил, карбокси, карбоксамидо или алкоксикарбонил)замещенный (С1-С4 алкил или С2-С4 алкенил)метилен.
15. Соединение по одному из пп.1-14, где К5 означает метилметилен, изопропилметилен, трет- бутилметилен, бут-2-илметилен, бутилметилен, бензилметилен, 3-метилбутилметилен, 2метилпропилметилен, карбоксиметилметилен, карбоксамидометилметилен, бензилоксикарбонилметилметилен, бензилоксикарбонилпропилметилен или фенилпропен-3-илметилен.
16. Соединение по п.15, где К5 означает изопропилметилен или трет-бутилметилен.
17. Соединение по одному из пп.1-16, где К6 означает водород или С1-С4 алкил.
18. Соединение по п.17, где К6 означает водород.
19. Соединение по одному из пп.1-18, где К7 означает необязательно замещенный С1-С4 алкилмети
- 187 017556 лен, необязательно замещенный С5-С6 циклоалкилметилен или необязательно замещенный фенилметилен.
20. Соединение по одному из пп.1-19, где Я7 означает метилметилен, изопропилметилен, нпропилметилен, фенилметилен, циклогексилметилен, циклопентилметилен, трет-бутилметилен, вторбутилметилен, циклогексилметилметилен или фенилметилметилен.
21. Соединение по п.20, где Я7 означает изопропилметилен, циклогексилметилен, циклопентилметилен, трет-бутилметилен или втор-бутилметилен.
22. Соединение по одному из пп.1-21, где каждый из Я3, Я5 и Я7 означает монозамещенный мети- лен.
23. Соединение по одному из пп.1-22, где Я3 означает монозамещенный метилен и имеет (8) конфигурацию углерода, соединенного с -С(О)-Я0-С(О)-МЯ!Я2 группой.
24. Соединение по одному из пп.1-23, где Я8 означает водород или С1-С4 алкил.
25. Соединение по п.24, где Я8 означает водород.
26. Соединение по одному из пп.1-25, где Я9 означает С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, или моноциклический гетероарил, необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы.
27. Соединение по одному из пп.1-26, где Я9 означает необязательно (карбокси, (С1-С4 алкил)8О2ХН-, (С1-С4 алкил)НЫСО-, гидрокси, фенил, гетероарил или (С1-С4 алкил)ОС(О)ХН-) замещенный С1-С4 алкил или моноциклический гетероарил, необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы.
28. Соединение по одному из пп.1-27, где Я9 означает С1-С4 алкил, замещенный группой (моно или ди)МеОС(О)ЯН-.
29. Соединение по одному из пп.1-25, где Я9 означает (карбокси, (С1-С4 алкил)НЫСО- или тетразолил) замещенный С1-С4 алкил.
30. Соединение по одному из пп.1-25, где Я9 означает 3-карбоксипропил, 2-тетразол-5-илпропил, 3(Ы-метилкарбоксамидо)пропил или 3-карбокси-2,2-диметилпропил.
31. Соединение по одному из пп.1-25, где Я9 означает 3-карбоксипропил, 2-тетразол-5-илпропил или 3-(Ы-метилкарбоксамидо)пропил.
32. Соединение по одному из пп.1-25, где Я9 означает С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы.
33. Соединение по одному из пп.1-25, где Я9 означает 1-гидрокси-2-фенилэтил, изопропил или третбутил.
34. Соединение по одному из пп.1-25, где Я9 означает изопропил или трет-бутил.
35. Соединение по одному из пп.1-25, где Я9 выбирают из группы, включающей ,о но о
ΝΗ
Н Ν-Ν
36. Соединение по одному из пп.1-25, где Я9 означает пиразинил.
37. Соединение по одному из пп.1-36, где Я10 означает водород или С1-С4 алкил.
38. Соединение по одному из пп.1-37, где Я10 означает водород.
39. Соединение по одному из пп.1-38, где
О о у—х означает ν , необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы.
40. Соединение по одному из пп.1-39, где
- 188 017556
41. Соединение по одному из пп.1-38, где
Я означает N , необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы.
42. Соединение по п.41, где н
означает N , необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы.
43. Соединение по одному из пп.1-38, где означает и-' , необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы.
44. Соединение по одному из пп.1-43, где -ССО^ИСКУкЗ-ССО^С^ИКК1 группа, присоединен- ная к связана а -углеродом с атомом азота.
45. Соединение по одному из пп.1-44, где Ь означает -С(О)-или -ОС(О)-.
46. Соединение по одному из пп.1-45, где п равно 0.
47. Соединение по одному из пп.1-45, где п равно 1.
48. Соединение по п.1, которое выбирают из группы, включающей
- 189 017556
- 190 017556
- 191 017556
- 192 017556
- 193 017556 или фармацевтически приемлемую соль или сольват такого соединения или его соли.
49. Соединение по п.1 или 2, где
В0 означает связь;
В1 означает водород;
В2 означает С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы; или С5-С6 циклоалкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы;
каждый из В3 и В5 независимо означает С1-С4 алкилметилен, С2-С4 алкенилметилен или С2-С4 алкинилметилен, каждый из которых необязательно замещен 1-3 заместителями алифатической группы;
В4, В6, В8 и В10 означают водород;
В7 означает метилен, замещенный циклоалкилом, С1-С4 алкилом или арилом; или (1,1- или 1,2-) циклоалкенил, необязательно замещенный циклоалкилом, С1-С4 алкилом или арилом;
В9 означает С1-С4 алкил, необязательно замещенный 1-3 заместителями алифатической группы, гетероарил, необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы, или моноциклическую ароматическую группу, необязательно замещенную 1-3 заместителями кольцевой группы;
означает N , необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы,
N , необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы, или N, необязательно замещенный 1-3 заместителями кольцевой группы; и
Ь означает -С(О)- или -ОС(О)-.
50. Соединение по любому одному из пп.1, 2 или 49, где С1-С4 алкил, С2-С4 алкенил, С2-С4 алкинил или моноциклическая ароматическая группа в В9 замещена по меньшей мере одним гетероарильным заместителем.
51. Соединение по любому одному из пп.1, 2 или 49, где моноциклическая ароматическая группа в В9 необязательно замещена гетероарилом.
52. Соединение по любому одному из пп.1, 2 или 49, где С1-С4 алкил в В9 необязательно замещен алкилгетероарилом.
53. Соединение по п.1, выбранное из группы, включающей о
Е
О
- 194 017556
- 195 017556
- 196 017556 или его фармацевтически приемлемую соль, или сольват такого соединения или его соли.
54. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемое количество соединения по одному из пп.1-53 и фармацевтически приемлемый носитель.
55. Фармацевтическая композиция, содержащая ингибитор сериновой протеазы вируса гепатита С, имеющий структуру по одному из пп.1-53, интерферон, обладающий противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, и фармацевтически приемлемый носитель.
56. Фармацевтическая композиция по п.55, дополнительно содержащая соединение, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, где указанное соединение отлично от интерферона.
57. Фармацевтическая композиция, содержащая ингибитор сериновой протеазы вируса гепатита С, имеющий структуру по одному из пп.1-53, соединение, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, и фармацевтически приемлемый носитель, где указанное соединение отлично от интерферона.
58. Фармацевтическая композиция по п.56, где указанный ингибитор сериновой протеазы вируса гепатита С, указанный интерферон и указанное соединение, обладающее противовирусной активностью
- 197 017556 в отношении вируса гепатита С, каждый присутствует в количестве, выбранном из группы, включающей фармацевтически эффективное количество, субклиническое фармацевтически эффективное количество и их комбинацию.
59. Фармацевтическая композиция по п.58, где указанный интерферон выбирают из группы, включающей интерферон-а 2В, пэгилированный интерферон-а, согласованный интерферон, интерферон-а 2А, лимфобластоидный интерферон и интерферон-τ; и указанное соединение, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, выбирают из группы, включающей интерлейкин 2, интерлейкин 6, интерлейкин 12, соединения, усиливающие развитие реакции типа 1 Т-хелперных клеток, двунитевую РНК, двунитевую РНК, комплексно связанную с тобрамицином, имиквимод, рибавирин, ингибитор инозин-5'-монофосфатдегидрогеназы, амантадин и римантадин.
60. Применение соединения по одному из пп.1-53 для получения лекарственного средства для ингибирования протеазы НСУ.
61. Применение соединения по одному из пп.1-53 для получения лекарственного средства для лечения пациента, страдающего от инфекции НСУ или связанных с инфекцией физиологических состояний.
62. Применение соединения по одному из пп.1-53 в комбинации с фармацевтически эффективным количеством соудинения другого анти-НСУ терапевтического средства для получения лекарственного средства для лечения пациента, страдающего от инфекции НСУ или связанных с инфекцией физиологических состояний.
63. Применение по п.62, где анти-НСУ терапевтическим средством является интерферон или производное интерферона.
64. Применение соединения по одному из пп.1-53 в комбинации с интерфероном, обладающим противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, для получения лекарственного средства для лечения или профилактики инфекции, вызванной вирусом гепатита С, у нуждающегося в таком лечении пациента.
65. Применение соединения по одному из пп.1-53 в комбинации с соединением, обладающим противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, для получения лекарственного средства для лечения или профилактики инфекции, вызванной вирусом гепатита С, у нуждающегося в таком лечении пациента, где указанное соединение отлично от интерферона.
66. Применение соединения по одному из пп.1-53 в комбинации с интерфероном, обладающим противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, и соединением, обладающим противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, для получения лекарственного средства для лечения или профилактики инфекции, вызванной вирусом гепатита С, у нуждающегося в таком лечении пациента, где указанное соединение отлично от интерферона.
67. Применение по п.66, где соединение по одному из пп.1-58, указанный интерферон и указанное соединение, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, каждый присутствует в количестве, выбранном из группы, включающей фармацевтически эффективное количество, субклиническое фармацевтически эффективное количество и их комбинацию.
68. Применение по п.67, где указанный интерферон выбирают из группы, включающей интерферон-а 2В, пэгилированный интерферон-а, согласованный интерферон, интерферон-а 2А, лимфобластоидный интерферон и интерферон-τ; и указанное соединение выбирают из группы, включающей интерлейкин 2, интерлейкин 6, интерлейкин 12, соединение, усиливающее развитие реакции типа 1 Тхелперных клеток, двунитевую РНК, двунитевую РНК, комплексно связанную с тобрамицином, имиквимод, рибавирин, ингибитор инозин-5'-монофосфатдегидрогеназы, амантадин и римантадин.
69. Применение соединения по одному из пп.1-53 и интерферона, обладающего противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, для получения лекарственного средства для ингибирования репликации вируса гепатита С в клетке.
70. Применение по п.69, где указанное соединение по одному из пп.1-53 и указанный интерферон, обладающий противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, используются в комбинации с соединением, обладающим противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, где указанное соединение отлично от интерферона.
71. Применение соединения по одному из пп.1-53 и соединения, обладающего противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, где указанное соединение отлично от интерферона, для получения лекарственного средства для ингибирования репликации вируса гепатита С в клетке.
72. Применение по п.70, где указанный ингибитор сериновой протеазы вируса гепатита С, указанный интерферон и указанное соединение, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, каждый присутствует в количестве, выбранном из группы, включающей фармацевтически эффективное количество, субклиническое фармацевтически эффективное количество и их комбинацию.
73. Применение по п.72, где указанный интерферон выбирают из группы, включающей интерферон-а 2В, пэгилированный интерферон-а, согласованный интерферон, интерферон-а 2А, лимфобластоидный интерферон и интерферон-τ; и указанное соединение, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, выбирают из группы, включающей интерлейкин 2, интерлейкин 6, ин
- 198 017556 терлейкин 12, соединение, усиливающее развитие реакции типа 1 Т-хелперных клеток, двунитевую РНК, двунитевую РНК, комплексно связанную с тобрамицином, имиквимод, рибавирин, ингибитор инозин-5'монофосфатдегидрогеназы, амантадин и римантадин.
74. Набор, включающий ряд отдельных контейнеров, где по меньшей мере один из указанных контейнеров содержит ингибитор сериновой протеазы вируса гепатита С по одному из пп.1-53 и по меньшей мере еще один из указанных контейнеров содержит интерферон, обладающий противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С.
75. Набор, включающий ряд отдельных контейнеров, где по меньшей мере один из указанных контейнеров содержит ингибитор сериновой протеазы вируса гепатита С по одному из пп.1-53 и по меньшей мере еще один из указанных контейнеров содержит соединение, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, где указанное соединение отлично от интерферона.
76. Набор, включающий ряд отдельных контейнеров, где по меньшей мере один из указанных контейнеров содержит ингибитор сериновой протеазы вируса гепатита С по одному из пп.1-53 по меньшей мере еще один из указанных контейнеров содержит интерферон, обладающий противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, и по меньшей мере еще один из указанных контейнеров содержит соединение, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, где указанное соединение отлично от интерферона.
77. Набор по п.76, где указанный ингибитор сериновой протеазы вируса гепатита С, указанный интерферон и указанное соединение, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, каждый присутствует в количестве, выбранном из группы, включающей фармацевтически эффективное количество, субклиническое фармацевтически эффективное количество и их комбинацию.
78. Набор по п.77, где указанный интерферон выбирают из группы, включающей интерферон-а 2В, пэгилированный интерферон-а, согласованный интерферон, интерферон-а 2А, лимфобластоидный интерферон и интерферон-τ; и указанное соединение, обладающее противовирусной активностью в отношении вируса гепатита С, выбирают из группы, включающей интерлейкин 2, интерлейкин 6, интерлейкин 12, соединение, усиливающее развитие реакции типа 1 Т-хелперных клеток, двунитевую РНК, двунитевую РНК, комплексно связанную с тобрамицином, имиквимод, рибавирин, ингибитор инозин-5'монофосфатдегидрогеназы, амантадин и римантадин.
79. Соединение формулы 24 к12” н” (24) где
К11 означает -СО2К13;
К12 означает
К13 означает алифатическую группу;
К14 означает -СО1\1К15К15,
- 199 017556 или -СО2К16;
К15 означает алифатическую группу;
К16 означает алифатическую группу;
К17 означает арил;
К18 означает арил; или
К17 и К18, взятые вместе с атомом углерода, с которым К17 и
К18 связаны, образуют где алифатическая группа и арил имеют значения, определенные в п.1.
80. Соединение по п.79, где К13 означает С1-С20 алкильную группу.
81. Соединение по одному из пп.79-80, где К13 означает С1-С4 алкил.
82. Соединение по одному из пп.79-61, где К13 означает метил.
83. Соединение по одному из пп.79-82, где
К12 означает
84. Соединение по п.83, где К14 означает -СО2К16.
85. Соединение по п.83 или 84, где К16 означает С1-С20 алкил.
86. Соединение по одному из пп.83-85, где К16 означает С1-С4 алкил.
87. Соединение по одному из пп.83-86, где К16 означает трет-бутил.
88. Соединение по одному из пп.83-87, где К17 означает арил.
89. Соединение по одному из пп.83-88, где К17 означает фенил.
90. Соединение по одному из пп.83-89, где К18 означает арил.
91. Соединение по одному из пп.83-90, где К18 означает фенил.
92. Соединение по одному из пп.83-87, где К17 и К18, взятые вместе с атомом углерода, с которым К17 и К18 связаны, образуют
93. Соединение формулы 25 где означает
К14 означает -СОМК^К15, -ΟΝ, или -СО2К16;
К15 означает алифатическую группу; и
- 200 017556
Я16 означает алифатическую группу, где алифатическая группа имеет значения, определенные в п.1.
94. Соединение по п.93, где Я14 означает -СО2Я16.
95. Соединение по п.93 или 94, где Я16 означает Щ-С20 алкил.
96. Соединение по одному из пп.93-95, где Я16 означает С1-С4 алкил.
97. Соединение по одному из пп.93-96, где Я16 означает трет-бутил.
98. Соединение формулы 26 где означает р0 означает защитную группу амида; Я14 означает -СОЯК^Я15, -СЫ, или -СО2Я16;
Я15 означает алифатическую группу; и
Я16 означает алифатическую группу, где алифатическая группа имеет значения, определенные в п.1.
99. Соединение по п.98, где Я14 означает -СО2Я16.
100. Соединение по п.98 или 99, где Я16 означает С1-С20 алкил.
101. Соединение по одному из пп.98-100, где Я16 означает С1-С4 алкил.
102. Соединение по одному из пп.98-101, где Я16 означает трет-бутил.
103. Соединение по одному из пп.98-102, где р0 выбирают из группы, включающей ВОС, СВ/ и СО2 алкил.
104. Соединение по п.103, где р0 означает ВОС.
105. Соединение формулы 27 где означает незамещенное циклогептальное кольцо;
р0 означает защитную группу амида;
Я14 означает -СО2Я16 и
Я16 означает алифатическую группу, где алифатическая группа имеет значения, определенные в п.1.
106. Соединение по п.105, гле Я16 означает Щ-С20 алкил.
107. Соединение по п.105 или 106, где Я16 означает С1-С4 алкил.
108. Соединение по одному из пп.105-107, где Я16 означает трет-бутил.
109. Соединение по одному из пп.105-108, где р0 выбирают из группы, включающей ВОС, СВ/ и СО2 алкил.
110. Соединение по п.109, где р0 означает ВОС.
111. Способ получения хирального соединения бициклопролината формулы 28 включающий стадии:
- 201 017556 (а) расщепления и циклизации соединения формулы 24 где означает
В11 означает -СО2В13;
В12 означает
В13 ' означает алифатическую группу; В14 означает -(ΌΝΒ'ΊΒ15, -СМ;
или -СО2В16;
В15 означает алифатическую группу;
В16 означает алифатическую группу и
В17 означает арил;
В18 означает арил; или
1718 1718
В и В , взятые вместе с атомом углерода, с которым В и В связаны, образуют где алифатическая группа и арил имеют значения, определенные в п.1, в полярном растворителе в присутствии кислотного реагента, с образованием соединения формулы 25 (Ь) защиты азота лактамовой группы в соединении формулы 25 защитной группой амида в апротонном полярном растворителе в присутствии органического основания с образованием соединения формулы 26
- 202 017556 р’ <2β) где р0 означает амидную защитную группу;
(с) восстановления соединения формулы 26 с использованием ИГВАЬН или супергидрида и Εΐ38ίΗ и ВЕз-ОЕ12 с образованием соединения формулы 27 р
(27) (б) снятия защиты соединения формулы 27 в условиях для снятия соотвествующей защиты с образованием соединения формулы 28 н
112. Способ по п.111, где р
(С
К12 означает н’
1718 1718 и К и К , взятые вместе с атомо углерода, с которым К и К связаны, образуют
113. Способ по п.112, дополнительно включающий стадию, где соединение формулы 24 получают, осуществляя присоединение иминного соединения глицинимида к соединению формулы 29 по реакции Михаэля в апротонном полярном растворителе в присутствии гидроксида щелочного металла в качестве основания где (29>
где соединение формулы 29 может быть получено этерификацией соединения формулы 29а (2Эа) где К11а означает -СНО, -СОК15, -С=И или -СОИК 5К15.
114. Способ по п.113, где способ осуществляют в интервале температур от 0 до -78°С.
115. Способ по п.114, где способ осуществляют при -60°С.
116. Способ по п.115, где процесс катализируют с помощью хирального катализатора межфазового переноса.
117. Способ по п.115, где процесс катализируют с помощью нехирального катализатора межфазового переноса.
118. Способ по одному из пп.111-117, где защитная группа означает ВОС.
119. Способ по п.118, где К12 означает
120. Способ по п.119, где К12 означает
- 203 017556
121. Способ по п.118, где К12 означает трет-бутиловый эфир (И-дифенилметилен)глицина.
122. Способ по п.118, где соединение формулы 29 означает метиловый эфир 1-карбокси-1 циклопентена.
123. Способ по п.111, где К13 означает С1-С4 алкил.
124. Способ по п.123, где К13 означает метил.
125. Способ по п.111, где К14 означает СО2К16.
126. Способ по п.125, где К16 означает С1-С4 алкил.
127. Способ по п.126, где К16 означает трет-бутил.
128. Способ по п.111, где р0 означает бензилоксикарбонил.
129. Способ по п.118, где соединение формулы 29 означает метиловый эфир 1-карбокси-1 циклопентена.
130. Способ по
131. Способ по
132. Способ по
133. Способ по
134. Способ по
п.111, где соединение формулы 24 означает
п.113, где соединение формулы 29 означает
135. Способ по
136. Способ по п.111 для получения соединения
- 204 017556 и (б) снятия защиты соединения в условиях для снятия защиты с образованием соединения
- 205 017556
137. Соединение по п.92 структуры
- 206 017556
Интерферон альфа-2В (единицы)
EA200701869A 2000-08-31 2001-08-31 Пептидомиметические ингибиторы протеазы EA017556B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US22939800P 2000-08-31 2000-08-31
US27764101P 2001-03-21 2001-03-21

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200701869A1 EA200701869A1 (ru) 2008-02-28
EA017556B1 true EA017556B1 (ru) 2013-01-30

Family

ID=26923261

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200300318A EA011547B1 (ru) 2000-08-31 2001-08-31 Пептидомиметические ингибиторы протеазы
EA200701869A EA017556B1 (ru) 2000-08-31 2001-08-31 Пептидомиметические ингибиторы протеазы

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200300318A EA011547B1 (ru) 2000-08-31 2001-08-31 Пептидомиметические ингибиторы протеазы

Country Status (36)

Country Link
US (5) US7820671B2 (ru)
EP (9) EP1849797A3 (ru)
JP (4) JP4689938B2 (ru)
KR (10) KR20100042296A (ru)
CN (7) CN103232381A (ru)
AR (1) AR030591A1 (ru)
AT (2) ATE431358T1 (ru)
AU (2) AU8831801A (ru)
BR (1) BR0113666A (ru)
CA (2) CA2697205C (ru)
CL (1) CL2010000330A1 (ru)
CY (2) CY1109216T1 (ru)
CZ (1) CZ2003595A3 (ru)
DE (4) DE60143233D1 (ru)
DK (2) DK1878720T3 (ru)
DZ (1) DZ3438A1 (ru)
EA (2) EA011547B1 (ru)
EC (2) ECSP034493A (ru)
ES (4) ES2325481T3 (ru)
HR (1) HRP20030139B8 (ru)
HU (1) HUP0300855A3 (ru)
IL (6) IL154671A0 (ru)
LU (1) LU91960I2 (ru)
MX (1) MXPA03001780A (ru)
NO (4) NO329929B1 (ru)
NZ (2) NZ541302A (ru)
PE (1) PE20020474A1 (ru)
PL (1) PL211019B1 (ru)
PT (1) PT1320540E (ru)
SI (1) SI1320540T1 (ru)
SK (1) SK2492003A3 (ru)
SV (1) SV2003000617A (ru)
TW (6) TWI339661B (ru)
UA (2) UA81600C2 (ru)
WO (1) WO2002018369A2 (ru)
ZA (1) ZA200301641B (ru)

Families Citing this family (240)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2409985A3 (en) * 1996-10-18 2013-05-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors de serine proteases, especially of the NS3 protease of the hepatitis C virus
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
DE60111509T2 (de) * 2000-04-03 2006-05-11 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge Inhibitoren von Serin-Proteasen, insbesondere der Hepatitis-C-Virus NS23-Protease
MY164523A (en) 2000-05-23 2017-12-29 Univ Degli Studi Cagliari Methods and compositions for treating hepatitis c virus
NZ547204A (en) 2000-05-26 2008-01-31 Idenix Cayman Ltd Methods and compositions for treating flaviviruses and pestiviruses
US7244721B2 (en) 2000-07-21 2007-07-17 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
AU2001276988B2 (en) 2000-07-21 2007-01-25 Dendreon Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
MXPA03000626A (es) 2000-07-21 2004-07-30 Schering Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de la hepatitis c.
SV2003000617A (es) 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
GB2368339B (en) 2000-10-26 2002-09-18 Yissum Res Dev Co Complex incorporating a plurality of antioxidants
WO2003035060A1 (en) * 2001-10-24 2003-05-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine protease, particularly hepatitis c virus ns3-ns4a protease, incorporating a fused ring system
US7119072B2 (en) 2002-01-30 2006-10-10 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US7091184B2 (en) 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
US6642204B2 (en) 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
RU2004133044A (ru) * 2002-04-11 2006-01-27 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед (Us) Ингибиторы сериновых протеаз, в частности, протеазы ns3-ns4a hcv
WO2004032827A2 (en) * 2002-05-20 2004-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis c virus inhibitors
JP2005533817A (ja) 2002-06-28 2005-11-10 イデニクス（ケイマン）リミテツド フラビウィルス科ウィルス感染治療用の修飾２′および３′−ヌクレオシドプロドラッグ
US7608600B2 (en) 2002-06-28 2009-10-27 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Modified 2′ and 3′-nucleoside prodrugs for treating Flaviviridae infections
WO2004026896A2 (en) * 2002-09-23 2004-04-01 Medivir Ab Hcv ns-3 serine protease inhibitors
US20050075279A1 (en) 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
WO2004060346A2 (en) 2002-12-30 2004-07-22 Angiotech International Ag Drug delivery from rapid gelling polymer composition
AU2011203054B2 (en) * 2003-04-11 2012-04-26 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of Serine Proteases, Particularly HCV NS3-NS4A Protease
ATE547412T1 (de) * 2003-04-11 2012-03-15 Vertex Pharma Inhibitoren von serinproteasen, insbesondere hcv- ns3-ns4a-protease
WO2004092161A1 (en) * 2003-04-11 2004-10-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
JP4447603B2 (ja) 2003-05-21 2010-04-07 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎インヒビター化合物
ES2586668T5 (es) 2003-05-30 2024-11-12 Gilead Pharmasset Llc Análogos de nucleósidos fluorados modificados
UY28423A1 (es) 2003-07-18 2005-02-28 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas serinas, en especial proteasa ns3-ns4a del vhc.-
TWI359147B (en) 2003-09-05 2012-03-01 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hcv n
US20050120398A1 (en) * 2003-09-12 2005-06-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Animal model for HCV infection
US20050119189A1 (en) 2003-09-18 2005-06-02 Cottrell Kevin M. Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
PE20050431A1 (es) 2003-09-22 2005-07-19 Boehringer Ingelheim Int Peptidos macrociclicos activos contra el virus de la hepatitis c
ZA200602937B (en) * 2003-10-10 2007-06-27 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
JP2007532474A (ja) 2003-10-10 2007-11-15 バーテックス　ファーマシューティカルズ　インコーポレイテッド セリンプロテアーゼ、特にｈｃｖのｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼの阻害剤
US7491794B2 (en) 2003-10-14 2009-02-17 Intermune, Inc. Macrocyclic compounds as inhibitors of viral replication
ATE416789T1 (de) * 2003-10-27 2008-12-15 Vertex Pharma Kombinationen für die hcv-behandlung
JP4890254B2 (ja) 2003-10-27 2012-03-07 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｈｃｖｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼ耐性突然変異体
EP1944042A1 (en) 2003-10-27 2008-07-16 Vertex Pharmceuticals Incorporated Combinations for HCV treatment
US8187874B2 (en) 2003-10-27 2012-05-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
KR20060118532A (ko) 2003-12-11 2006-11-23 쉐링 코포레이션 Ｃ형 간염 바이러스 ｎｓ３／ｎｓ４ａ 세린 프로테아제의억제제
ES2358333T3 (es) 2004-01-21 2011-05-09 Boehringer Ingelheim International Gmbh Péptidos macrocíclicos con acción contra el virus de la hepatitis c.
EP2311851A3 (en) 2004-02-04 2011-05-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
ES2328589T3 (es) * 2004-02-27 2009-11-16 Schering Corporation Compuestos de la prolina 3,4(ciclopentil) fusionados como inhibidores de la proteasa serina ns3 del virus de la hepatitis c.
ATE514691T1 (de) * 2004-02-27 2011-07-15 Schering Corp Neue ketoamide mit cyclischen p4 als inhibitoren der ns3-serinprotease von hepatitis-c-virus
NZ549223A (en) * 2004-02-27 2010-10-29 Schering Corp Sulfur compounds as inhibitors of hepatitis C virus NS3 serine protease
WO2005085275A1 (en) 2004-02-27 2005-09-15 Schering Corporation Inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
EP1765283A4 (en) * 2004-06-08 2012-11-28 Vertex Pharma PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
ATE512971T1 (de) 2004-07-20 2011-07-15 Boehringer Ingelheim Int Peptidanaloga als hepatitis c-hemmer
UY29016A1 (es) 2004-07-20 2006-02-24 Boehringer Ingelheim Int Analogos de dipeptidos inhibidores de la hepatitis c
TW201300108A (zh) * 2004-10-01 2013-01-01 Vertex Pharma Ｃ型肝炎病毒（ｈｃｖ）ｎｓ３-ｎｓ４ａ蛋白酶抑制劑
MY141025A (en) * 2004-10-29 2010-02-25 Vertex Pharma Dose forms
EP2511257B1 (en) 2005-03-21 2015-06-17 Virobay, Inc. Composition comprising an alpha ketoamide compound as cysteine protease inhibitor
EP2047850A3 (en) * 2005-04-12 2009-07-29 Romark Laboratories, L.C. Methods for treating diseases through inhibition of the function of molecular chaperones such as protein disulfide isomerases , pharmaceutical compositions comprising them, and screening methods for identifying therapeutic agents
US7569600B2 (en) 2005-05-13 2009-08-04 Virochem Pharma Inc. Compounds and methods for the treatment of prevention of Flavivirus infections
US20060276404A1 (en) * 2005-06-02 2006-12-07 Anima Ghosal Medicaments and methods combining a HCV protease inhibitor and an AKR competitor
US8119602B2 (en) 2005-06-02 2012-02-21 Schering Corporation Administration of HCV protease inhibitors in combination with food to improve bioavailability
US20070004635A1 (en) * 2005-06-02 2007-01-04 Schering Corporation Method of treating interferon non-responders using HCV protease inhibitor
CN101212970B (zh) 2005-06-02 2010-07-21 先灵公司 Hcv蛋白酶抑制剂与表面活性剂的组合物
US7608592B2 (en) 2005-06-30 2009-10-27 Virobay, Inc. HCV inhibitors
ATE496908T1 (de) 2005-07-29 2011-02-15 Tibotec Pharm Ltd Makrocyclische inhibitoren des hepatitis-c-virus
ES2373685T3 (es) 2005-07-29 2012-02-07 Tibotec Pharmaceuticals Inhibidores macrocíclicos del virus de la hepatitis c.
DE602006019741D1 (de) 2005-07-29 2011-03-03 Medivir Ab Makrocyclische inhibitoren des hepatitis-c-virus
JO2768B1 (en) 2005-07-29 2014-03-15 تيبوتيك فارماسيوتيكالز ليمتد Large cyclic inhibitors of hepatitis C virus
PE20070210A1 (es) 2005-07-29 2007-04-16 Tibotec Pharm Ltd Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
PE20070211A1 (es) 2005-07-29 2007-05-12 Medivir Ab Compuestos macrociclicos como inhibidores del virus de hepatitis c
BRPI0614696A2 (pt) 2005-07-29 2011-04-12 Tibotec Pharm Ltd inibidores macrocìclicos de vìrus da hepatite c
PL1919904T3 (pl) 2005-07-29 2014-06-30 Janssen R&D Ireland Makrocykliczne inhibitory wirusa zapalenia wątroby typu C
EP2256113A1 (en) * 2005-08-02 2010-12-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
US8399615B2 (en) 2005-08-19 2013-03-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
BRPI0615029A2 (pt) * 2005-08-19 2009-06-16 Vertex Pharma processos e intermediários
US7964624B1 (en) 2005-08-26 2011-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7705138B2 (en) 2005-11-11 2010-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
KR20140098867A (ko) 2005-11-11 2014-08-08 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 Ｃ형 간염 바이러스 변이체
JP3975226B2 (ja) * 2006-01-11 2007-09-12 生化学工業株式会社 シクロアルキルカルボニルアミノ酸誘導体及びその製造方法
JP4047365B2 (ja) * 2006-01-11 2008-02-13 生化学工業株式会社 シクロアルカンカルボキサミド誘導体及びその製造方法
EP2036920B1 (en) * 2006-01-11 2011-05-18 Seikagaku Corporation Cycloalkylcarbonylamino acid ester derivative and process for producing the same
US8183413B2 (en) 2006-01-20 2012-05-22 Kaneka Corporation Process for production of β-amino-α-hydroxy carboxamide derivative
CA2643688A1 (en) 2006-02-27 2007-08-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
EP2007381A4 (en) 2006-03-06 2010-11-17 Abbott Lab COMPOSITIONS AND METHODS OF USING RITONAVIR FOR THE TREATMENT OF HEPATITIS C VIRUS
US20070244334A1 (en) * 2006-03-16 2007-10-18 Tanoury Gerald J Processes and intermediates for preparing steric compounds
KR20080112303A (ko) 2006-03-16 2008-12-24 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 중수소화 ｃ형 간염 프로테아제 억제제
EA018811B1 (ru) * 2006-03-20 2013-10-30 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Способы получения твердой дисперсии лекарственного средства и твердые дисперсии лекарственного средства, полученные этим способом
JP2009530382A (ja) * 2006-03-23 2009-08-27 シェーリング コーポレイション Ｈｃｖプロテアーゼインヒビターとｃｙｐ３ａ４インヒビターとの組み合わせ、および関連する処置方法
WO2007120595A2 (en) * 2006-04-11 2007-10-25 Novartis Ag Amines for the treatment of hcv
NZ571826A (en) 2006-04-11 2012-01-12 Novartis Ag HCV/HIV inhibitors and their uses
WO2007137080A2 (en) 2006-05-23 2007-11-29 Irm Llc Compounds and compositions as channel activating protease inhibitors
DE102006059317A1 (de) * 2006-07-04 2008-01-10 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von β-Amino-α-hydroxy-carbonsäureamiden
EP1886685A1 (en) 2006-08-11 2008-02-13 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods, uses and compositions for modulating replication of hcv through the farnesoid x receptor (fxr) activation or inhibition
US20120220520A1 (en) * 2006-10-17 2012-08-30 Van T Klooster Gerben Albert Eleutherius Bioavailable combinations for hcv treatment
ES2423219T3 (es) 2006-11-15 2013-09-18 Vertex Pharmaceuticals (Canada) Incorporated Análogos de tiofeno para el tratamiento o prevención de infecciones por flavivirus
KR20090079881A (ko) 2006-11-17 2009-07-22 티보텍 파마슈티칼즈 리미티드 Ｃ형 간염 바이러스의 마크로사이클릭 억제제
JP2010512317A (ja) * 2006-12-07 2010-04-22 シェーリング コーポレイション ｐＨ感受性マトリクス処方物
WO2008074035A1 (en) 2006-12-27 2008-06-19 Abbott Laboratories Hcv protease inhibitors and uses thereof
WO2008095058A1 (en) * 2007-02-01 2008-08-07 Taigen Biotechnology Co. Ltd. Hcv protease inhibitors
JP5554569B2 (ja) 2007-02-08 2014-07-23 ヤンセン・アールアンドデイ・アイルランド ピリミジン置換された大環状ｈｃｖ阻害剤
BRPI0807483A2 (pt) 2007-02-09 2014-05-13 Irm Llc Compostos e composições como inibidores de protease de ativação de canal
JP2010519329A (ja) 2007-02-27 2010-06-03 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド セリンプロテアーゼ阻害剤
DK2114924T3 (da) * 2007-02-27 2012-04-10 Vertex Pharma Co-krystaller og farmaceutiske sammensætninger omfattende disse
WO2008127613A1 (en) * 2007-04-11 2008-10-23 Scynexis, Inc. New pharmaceutical compositions
CA2686051A1 (en) 2007-05-04 2008-11-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Combination therapy for the treatment of hcv infection
EP2659885B1 (en) * 2007-08-03 2016-11-09 Biotron Limited Hepatitis C Antiviral Compositions and Methods
WO2009032198A1 (en) 2007-08-30 2009-03-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
NZ583825A (en) 2007-09-14 2012-06-29 Schering Corp Method of treating hepatitis C patients comprising an HCV protease inhibitor, an antiviral compound and an interferon
US20090082366A1 (en) * 2007-09-26 2009-03-26 Protia, Llc Deuterium-enriched telaprevir
AR068756A1 (es) 2007-10-10 2009-12-02 Novartis Ag Compuestos peptidicos, formulacion farmaceutica y sus usos como moduladores del virus de la hepatitis c
US8106059B2 (en) 2007-10-24 2012-01-31 Virobay, Inc. Substituted pyrazines that inhibit protease cathepsin S and HCV replication
WO2009055335A2 (en) * 2007-10-25 2009-04-30 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
PT2238142E (pt) 2007-12-24 2012-09-24 Janssen R & D Ireland Indoles macrocíclicos como inibidores do vírus da hepatite c
DE102008009761A1 (de) 2008-02-19 2009-08-27 Bayer Materialscience Ag Verfahren zur Herstellung von Isocyanaten
EP2101173A1 (en) 2008-03-14 2009-09-16 Vivalis In vitro method to determine whether a drug candidate active against a target protein is active against a variant of said protein
CN101580535B (zh) * 2008-05-16 2012-10-03 太景生物科技股份有限公司 丙型肝炎病毒蛋白酶抑制剂
JP2011525533A (ja) 2008-06-24 2011-09-22 コデクシス， インコーポレイテッド 実質的に立体異性的に純粋な縮合二環式プロリン化合物の調製のための生体触媒法
US8569337B2 (en) 2008-07-23 2013-10-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Tri-cyclic pyrazolopyridine kinase inhibitors
WO2010014744A1 (en) * 2008-07-29 2010-02-04 The Scripps Research Institute Inhibitors of hepatitis c virus infection
US8188137B2 (en) 2008-08-15 2012-05-29 Avila Therapeutics, Inc. HCV protease inhibitors and uses thereof
CA2745119A1 (en) 2008-12-03 2010-06-10 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of hcv ns5a
PE20150939A1 (es) 2008-12-03 2015-07-19 Presidio Pharmaceuticals Inc Inhibidores de la proteina no estructural 5a del virus de la hepatitis c
GB0900914D0 (en) 2009-01-20 2009-03-04 Angeletti P Ist Richerche Bio Antiviral agents
EP2396028A2 (en) 2009-02-12 2011-12-21 Vertex Pharmceuticals Incorporated Hcv combination therapies comprising pegylated interferon, ribavirin and telaprevir
PE20120773A1 (es) 2009-03-27 2012-07-19 Presidio Pharmaceuticals Inc Anillos triciclicos fusionados sustituidos como inhibidores del virus de hepatitis c
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
US8512690B2 (en) 2009-04-10 2013-08-20 Novartis Ag Derivatised proline containing peptide compounds as protease inhibitors
TW201113279A (en) 2009-06-23 2011-04-16 Gilead Sciences Inc Pharmaceutical compositions useful for treating HCV
SG179566A1 (en) 2009-09-15 2012-05-30 Taigen Biotechnology Co Ltd Hcv protease inhibitors
TWI404269B (zh) * 2009-09-18 2013-08-01 Advanced Connectek Inc High speed plug connector
UA108211C2 (ru) 2009-11-04 2015-04-10 Янссен Рід Айрленд Бензимидазолимидазольные производные
AU2010326225A1 (en) 2009-11-25 2012-06-07 Vertex Pharmaceuticals Incorporated 5-alkynyl-thiophene-2-carboxylic acid derivatives and their use for the treatment or prevention of flavivirus infections
KR20120118008A (ko) * 2009-12-18 2012-10-25 아이데닉스 파마슈티칼스, 인코포레이티드 5,5-융합 아릴렌 또는 헤테로아릴렌 간염 ｃ 바이러스 억제제
KR20120130173A (ko) 2009-12-24 2012-11-29 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 플라비바이러스 감염을 치료 또는 예방하기 위한 유사체들
US20110178107A1 (en) * 2010-01-20 2011-07-21 Taigen Biotechnology Co., Ltd. Hcv protease inhibitors
AU2011209051B2 (en) 2010-01-27 2015-01-15 AB Pharma Ltd. Polyheterocyclic compounds highly potent as HCV inhibitors
EP2528605A1 (en) 2010-01-29 2012-12-05 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Therapies for treating hepatitis c virus infection
WO2011112516A1 (en) 2010-03-08 2011-09-15 Ico Therapeutics Inc. Treating and preventing hepatitis c virus infection using c-raf kinase antisense oligonucleotides
WO2011119858A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
JP2013522375A (ja) 2010-03-24 2013-06-13 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド フラビウイルス感染を処置または予防するためのアナログ
JP2013522377A (ja) 2010-03-24 2013-06-13 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド フラビウイルス感染を処置または予防するためのアナログ
WO2011119860A1 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Analogues for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2011123586A1 (en) 2010-04-01 2011-10-06 Idenix Pharmaceuticals, Inc. Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
WO2011149856A1 (en) 2010-05-24 2011-12-01 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of hcv ns5a
AU2011261349A1 (en) 2010-06-03 2012-12-06 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
WO2011156545A1 (en) 2010-06-09 2011-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Viral dynamic model for hcv combination therapy
US20130157258A1 (en) 2010-06-15 2013-06-20 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hcv ns5b protease mutants
CA2803248A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2012006060A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2012006070A1 (en) 2010-06-28 2012-01-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compounds and methods for the treatment or prevention of flavivirus infections
WO2012009503A1 (en) 2010-07-14 2012-01-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Palatable pharmaceutical composition comprising vx-950
WO2012020036A1 (en) 2010-08-13 2012-02-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Hepatitis c virus inhibitors
CN103153978A (zh) 2010-08-17 2013-06-12 沃泰克斯药物股份有限公司 用于治疗或预防黄病毒科病毒感染的化合物和方法
CN105061534A (zh) 2010-09-22 2015-11-18 艾丽奥斯生物制药有限公司 取代的核苷酸类似物
CA2811799A1 (en) 2010-10-08 2012-04-12 Novartis Ag Vitamin e formulations of sulfamide ns3 inhibitors
WO2012054870A2 (en) 2010-10-21 2012-04-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Biomarkers for hcv infected patients
CA2815537A1 (en) 2010-10-26 2012-05-03 Presidio Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of hepatitis c virus
WO2012109646A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Treatment of hcv in hiv infection patients
WO2012107589A1 (en) 2011-02-11 2012-08-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical compositions for the treatment and prevention of hcv infections
WO2012123298A1 (en) 2011-03-11 2012-09-20 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
JP2014514295A (ja) 2011-03-31 2014-06-19 アイディニックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド ウイルス感染の治療のための化合物および薬学的組成物
WO2012151319A1 (en) 2011-05-02 2012-11-08 Virobay, Inc. Cathepsin inhibitors for the treatment of bone cancer and bone cancer pain
WO2012158513A1 (en) 2011-05-13 2012-11-22 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
CA2857705A1 (en) 2011-06-16 2012-12-20 AB Pharma Ltd. Macrocyclic heterocyclic compounds for inhibiting hepatitis c virus and preparation and use thereof
CN103732242A (zh) 2011-06-23 2014-04-16 迪格纳生物技术公司 用与IFN-α2b组合的IFN-α5在患者群体中治疗慢性丙型肝炎
WO2012175581A1 (en) 2011-06-24 2012-12-27 F. Hoffmann-La Roche Ag Antiviral compounds
TW201317223A (zh) 2011-07-26 2013-05-01 Vertex Pharma 噻吩化合物
WO2013016499A1 (en) 2011-07-26 2013-01-31 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods for preparation of thiophene compounds
EP2755985B1 (en) 2011-09-12 2017-11-01 Idenix Pharmaceuticals LLC Compounds and pharmaceutical compositions for the treatment of viral infections
EP2760827A4 (en) 2011-09-27 2015-06-24 Univ Kansas State ANTIVIRAL MEDIUM WITH A WIDE SPECTRUM AGAINST 3C OR 3C-SIMILAR PROTEASES FROM PICORNIVIRUS SUPERCLUSTS: PICORNIVERS, CALICIVIRES AND CORONA VIRUSES
US9180193B2 (en) 2011-10-10 2015-11-10 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
EA023649B1 (ru) 2011-10-14 2016-06-30 Бристол-Майерс Сквибб Кампани ЗАМЕЩЕННЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ТЕТРАГИДРОИЗОХИНОЛИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ФАКТОРА XIa
US9108951B2 (en) 2011-10-14 2015-08-18 Bristol-Myers Squibb Company Substituted 5,6,7,8-tetrahydro-1,6-naphthyridines as factor XIa inhibitors
WO2013056034A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Bristol-Myers Squibb Company Substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
SE1450131A1 (sv) 2011-10-21 2014-05-07 Abbvie Inc DAA-kombinationsbehandling (t.ex. med ABT-072 eller ABT-333)för användning vid behandling av HCV
ES2572328B1 (es) 2011-10-21 2017-08-24 Abbvie Inc. Combinación de al menos dos agentes antivirales de acción directa y ribavirina pero no interferón, para su uso en el tratamiento del vhc
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
EP2791161B1 (en) 2011-12-16 2016-02-10 F.Hoffmann-La Roche Ag Inhibitors of hcv ns5a
MX350809B (es) 2011-12-20 2017-09-20 Riboscience Llc Derivados nucleósidos con sustitución 2',4'-difluoro-2'-metilo como inhibidores de la replicación del arn del vhc.
WO2013092447A1 (en) 2011-12-20 2013-06-27 F. Hoffmann-La Roche Ag 4'-azido, 3'-fluoro substituted nucleoside derivatives as inhibitors of hcv rna replication
BR112014016157A8 (pt) 2011-12-28 2017-07-04 Janssen R&D Ireland derivados heterobicíclicos como inibidores de vhc
US20130195797A1 (en) 2012-01-31 2013-08-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated High potency formulations of vx-950
ITMI20120192A1 (it) 2012-02-13 2013-08-14 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di un inibitore delle proteasi virali e suoi intermedi
HK1205736A1 (en) * 2012-02-16 2015-12-24 阿奇克斯制药公司 Linear peptide antibiotics
EP2817291A1 (en) 2012-02-24 2014-12-31 F. Hoffmann-La Roche AG Antiviral compounds
ITMI20120359A1 (it) 2012-03-07 2013-09-08 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di intermedi utili nella preparazione di un inibitore delle proteasi virali
WO2013136265A1 (en) 2012-03-13 2013-09-19 Dipharma Francis S.R.L. Synthesis of an intermediate of an antiviral compound
ITMI20120391A1 (it) * 2012-03-13 2013-09-14 Dipharma Francis Srl Procedimento per la sintesi di un intermedio ciclopropilammidico utile nella preparazione di un inibitore delle proteasi virali
HK1206362A1 (zh) 2012-03-21 2016-01-08 Alios Biopharma, Inc. 硫代氨基磷酸酯核苷酸前藥的固體形式
WO2013142157A1 (en) 2012-03-22 2013-09-26 Alios Biopharma, Inc. Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
EP2844249A4 (en) 2012-05-02 2016-03-09 Univ Kansas State MACROCYCLIC AND PEPTIDOMIMETIC COMPOUNDS AS VIRUZIDES AGAINST 3C OR 3C LIKE PROTEASES OF PICORNIVERS, CALICIVIRES AND CORONA VIRUSES
ITMI20120800A1 (it) * 2012-05-10 2013-11-11 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di un intermedio utile nella preparazione di un inibitore delle proteasi virali
AR091192A1 (es) 2012-05-30 2015-01-21 Chemo Iberica Sa Procedimiento multicomponente para la preparacion de compuestos biciclicos
CN103450066B (zh) * 2012-05-30 2017-03-15 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 特拉匹韦中间体的制备方法
US20140010783A1 (en) 2012-07-06 2014-01-09 Hoffmann-La Roche Inc. Antiviral compounds
WO2014015217A1 (en) 2012-07-19 2014-01-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Biomarkers for hcv infected patients
WO2014033667A1 (en) 2012-08-30 2014-03-06 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of telaprevir
WO2014045263A2 (en) * 2012-09-24 2014-03-27 Dr. Reddy's Laboratories Limited Process for preparation of intermediates of telaprevir
US9920034B2 (en) 2012-10-12 2018-03-20 Bristol-Myers Squibb Company Crystalline forms of a factor XIa inhibitor
EP2906541B1 (en) 2012-10-12 2017-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Guanidine and amine substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
EP2906552B1 (en) 2012-10-12 2017-11-22 Bristol-Myers Squibb Company Guanidine substituted tetrahydroisoquinoline compounds as factor xia inhibitors
AU2013340559B2 (en) 2012-10-29 2018-03-15 Cipla Limited Antiviral phosphonate analogues and process for preparation thereof
ITMI20122036A1 (it) 2012-11-29 2014-05-30 Dipharma Francis Srl Sintesi di un intermedio di un composto antivirale
WO2014096374A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Sandoz Ag Process for the synthesis of pyrrolidines and pyrroles
BR112015017414A2 (pt) 2013-01-23 2017-07-11 Hoffmann La Roche derivados de triazol antivirais
CN103113288B (zh) * 2013-02-04 2015-05-20 苏州永健生物医药有限公司 一种八氢环戊烯并[c]吡咯羧酸衍生物的合成方法
WO2014134251A1 (en) 2013-02-28 2014-09-04 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Pharmaceutical compositions
RU2015136256A (ru) 2013-03-05 2017-04-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Противовирусные соединения
ES2712699T3 (es) 2013-03-25 2019-05-14 Bristol Myers Squibb Co Tetrahidroisoquinolinas que contienen azoles sustituidos como inhibidores del factor XIa
ITMI20130706A1 (it) 2013-04-30 2014-10-31 Dipharma Francis Srl Procedimento per la preparazione di un inibitore delle proteasi virali e suoi intermedi
US20180200280A1 (en) 2013-05-16 2018-07-19 Riboscience Llc 4'-Fluoro-2'-Methyl Substituted Nucleoside Derivatives as Inhibitors of HCV RNA Replication
CA2912684A1 (en) 2013-05-16 2014-12-04 Riboscience Llc 4'-azido, 3'-deoxy-3'-fluoro substituted nucleoside derivatives
MA38675A1 (fr) 2013-05-16 2017-12-29 Riboscience Llc Dérivés de nucléosides 4'-fluoro-2'-méthyle substitués utiles pour inhiber la replication de l'hepatite c (hcv)
CN104163851B (zh) * 2013-05-20 2019-03-05 湘北威尔曼制药股份有限公司 氟代的α-羰基类HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶抑制剂
CN103288671B (zh) * 2013-06-20 2014-10-29 上海步越化工科技有限公司 一种(3s)-3-氨基-n-环丙基-2-羟基己酰胺盐酸盐的合成方法
WO2014203208A1 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of telaprevir and intermediates thereof
WO2014203224A1 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Ranbaxy Laboratories Limited Process for the preparation of telaprevir and its intermediates
CN104292146B (zh) * 2013-06-24 2017-04-26 上海医药工业研究院 特拉匹韦中间体及其制备方法
CN104558106B (zh) * 2013-10-19 2019-12-10 广东东阳光药业有限公司 一种治疗丙肝药物的制备方法
CN104610272B (zh) * 2013-11-05 2017-03-29 上海唐润医药科技有限公司 环状黄酮或异黄酮类化合物及其用途
EP2899207A1 (en) 2014-01-28 2015-07-29 Amikana.Biologics New method for testing HCV protease inhibition
WO2015116885A1 (en) 2014-01-31 2015-08-06 Bristol-Myers Squibb Company Macrocycles with aromatic p2' groups as factor xia inhibitors
NO2760821T3 (ru) 2014-01-31 2018-03-10
CN104926712B (zh) * 2014-03-20 2018-03-23 上海医药工业研究院 合成特拉匹韦的中间体及其制备方法
CN104926831A (zh) * 2014-03-20 2015-09-23 上海医药工业研究院 合成特拉匹韦的中间体及其制备方法
MX392718B (es) 2014-07-07 2025-03-24 Halliburton Energy Services Inc Herramientas de fondo de pozo que comprenden elementos de sellado degradables en fluido acuoso.
CN107074821B (zh) 2014-09-04 2020-05-22 百时美施贵宝公司 为fxia抑制剂的二酰胺大环化合物
US9453018B2 (en) 2014-10-01 2016-09-27 Bristol-Myers Squibb Company Pyrimidinones as factor XIa inhibitors
CN108699105A (zh) 2016-03-04 2018-10-23 豪夫迈·罗氏有限公司 作为htra1抑制剂的新型二氟酮酰胺衍生物
HK1257565A1 (zh) 2016-03-04 2019-10-25 豪夫迈‧罗氏有限公司 作为htra1抑制剂的新型三氟甲基丙酰胺衍生物
JP7129703B2 (ja) 2016-04-28 2022-09-02 エモリー ユニバーシティー アルキン含有ヌクレオチド及びヌクレオシド治療組成物並びにそれらに関連した使用
CN109563033B (zh) * 2016-06-21 2023-04-04 奥瑞恩眼科有限责任公司 脂族脯氨酰胺衍生物
WO2017222914A1 (en) 2016-06-21 2017-12-28 Inception 4, Inc. Carbocyclic prolinamide derivatives
EA201990069A1 (ru) 2016-06-21 2019-06-28 ОРИОН ОФТАЛМОЛОДЖИ ЭлЭлСи Производные гетероциклического пролинамида
CN109661389A (zh) * 2016-08-23 2019-04-19 豪夫迈·罗氏有限公司 作为htra1抑制剂的新型二氟酮酰胺衍生物
AR112702A1 (es) 2017-09-21 2019-11-27 Riboscience Llc Derivados de nucleósidos sustituidos con 4’-fluoro-2’-metilo como inhibidores de la replicación de hcv arn
CN109337537B (zh) * 2018-09-26 2022-10-25 河北晨阳工贸集团有限公司 一种起重机专用单组分水性面漆及其制备方法
CN110668538B (zh) * 2019-09-20 2021-10-22 济南大学 一种聚合氯化钛的制备方法
CN115960088B (zh) * 2020-07-31 2024-07-26 四川大学 一种新型冠状病毒主蛋白酶的抑制剂及其制备方法和用途
CN114057702B (zh) * 2020-07-31 2022-09-30 四川大学 一种新型冠状病毒主蛋白酶的抑制剂及其制备方法和用途
US12083099B2 (en) 2020-10-28 2024-09-10 Accencio LLC Methods of treating symptoms of coronavirus infection with viral protease inhibitors
WO2023149981A1 (en) * 2022-02-07 2023-08-10 Purdue Research Foundation Compounds for the treatment of sars
CN114703003B (zh) * 2022-04-14 2023-04-28 上海绿晟环保科技有限公司 一种负载碳量子点的纳米材料润滑添加剂及其制备方法
CN115417790A (zh) * 2022-10-09 2022-12-02 山东大学 一类新型偶氮类发泡剂及合成方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998017679A1 (en) * 1996-10-18 1998-04-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
WO1999007734A2 (en) * 1997-08-11 1999-02-18 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor peptide analogues
WO2000009558A1 (en) * 1998-08-10 2000-02-24 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor peptides
RU98110973A (ru) * 1995-11-09 2000-03-27 Басф Аг Пептидные производные доластатина 15 и их применение

Family Cites Families (160)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3719667A (en) 1970-08-24 1973-03-06 Lilly Co Eli Epimerization of 6-acylamido and 6-imido penicillin sulfoxide esters
US3840556A (en) 1971-05-28 1974-10-08 Lilly Co Eli Penicillin conversion by halogen electrophiles and anti-bacterials derived thereby
DE3226768A1 (de) 1981-11-05 1983-05-26 Hoechst Ag, 6230 Frankfurt Derivate der cis, endo-2-azabicyclo-(3.3.0)-octan-3-carbonsaeure, verfahren zu ihrer herstellung, diese enthaltende mittel und deren verwendung
DE3211676A1 (de) 1982-03-30 1983-10-06 Hoechst Ag Neue derivate von cycloalka (c) pyrrol-carbonsaeuren, verfahren zu ihrer herstellung, diese enthaltende mittel und deren verwendung sowie neue cycloalka (c) pyrrol-carbonsaeuren als zwischenstufen und verfahren zu deren herstellung
US4499082A (en) 1983-12-05 1985-02-12 E. I. Du Pont De Nemours And Company α-Aminoboronic acid peptides
FR2570695A1 (fr) * 1984-09-27 1986-03-28 Synthelabo Diphenylazomethines a chaine ramifiee ou cyclique, leur preparation et leur application en therapeutique
FR2575753B1 (fr) 1985-01-07 1987-02-20 Adir Nouveaux derives peptidiques a structure polycyclique azotee, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent
US5496927A (en) 1985-02-04 1996-03-05 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
ATE71934T1 (de) * 1985-06-07 1992-02-15 Ici America Inc Selektionierte difluorverbindungen.
US4835168A (en) 1985-12-16 1989-05-30 Eli Lilly And Company Thiadiazole antiviral agents
US5231084A (en) 1986-03-27 1993-07-27 Hoechst Aktiengesellschaft Compounds having a cognition adjuvant action, agents containing them, and the use thereof for the treatment and prophylaxis of cognitive dysfuncitons
US5736520A (en) 1988-10-07 1998-04-07 Merrell Pharmaceuticals Inc. Peptidase inhibitors
NZ235155A (en) 1989-09-11 1993-04-28 Merrell Dow Pharma Peptidase substrates in which the carboxy terminal group has been replaced by a tricarbonyl radical
US5371072A (en) * 1992-10-16 1994-12-06 Corvas International, Inc. Asp-Pro-Arg α-keto-amide enzyme inhibitors
EP0604182B1 (en) 1992-12-22 2000-10-11 Eli Lilly And Company Inhibitors of HIV protease useful for the treatment of Aids
ES2317977T3 (es) 1992-12-29 2009-05-01 Abbott Laboratories Procedimientos e intermediarios para la preparacion de inhibidores de proteasa retrovirales.
US5384410A (en) 1993-03-24 1995-01-24 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Removal of boronic acid protecting groups by transesterification
US5656600A (en) 1993-03-25 1997-08-12 Corvas International, Inc. α-ketoamide derivatives as inhibitors of thrombosis
US5672582A (en) 1993-04-30 1997-09-30 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
IL110752A (en) 1993-09-13 2000-07-26 Abbott Lab Liquid semi-solid or solid pharmaceutical composition for an HIV protease inhibitor
US5559158A (en) 1993-10-01 1996-09-24 Abbott Laboratories Pharmaceutical composition
US5468858A (en) 1993-10-28 1995-11-21 The Board Of Regents Of Oklahoma State University Physical Sciences N-alkyl and n-acyl derivatives of 3,7-diazabicyclo-[3.3.1]nonanes and selected salts thereof as multi-class antiarrhythmic agents
IL111991A (en) 1994-01-28 2000-07-26 Abbott Lab Liquid pharmaceutical composition of HIV protease inhibitors in organic solvent
AU1615895A (en) 1994-03-31 1995-10-12 Bristol-Myers Squibb Company Imidazole-containing inhibitors of farnesyl protein transferase
US5756466A (en) 1994-06-17 1998-05-26 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5716929A (en) 1994-06-17 1998-02-10 Vertex Pharmaceuticals, Inc. Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5847135A (en) 1994-06-17 1998-12-08 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US6420522B1 (en) 1995-06-05 2002-07-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of interleukin-1β converting enzyme
US5861267A (en) 1995-05-01 1999-01-19 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Methods, nucleotide sequences and host cells for assaying exogenous and endogenous protease activity
US6037157A (en) 1995-06-29 2000-03-14 Abbott Laboratories Method for improving pharmacokinetics
JPH09124691A (ja) * 1995-08-25 1997-05-13 Green Cross Corp:The ペプチド化合物およびそれを含有する医薬組成物
AU715558B2 (en) 1995-11-23 2000-02-03 Merck Sharp & Dohme Limited Spiro-piperidine derivatives and their use as tachykinin antagonists
US6054472A (en) 1996-04-23 2000-04-25 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Inhibitors of IMPDH enzyme
US5807876A (en) 1996-04-23 1998-09-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of IMPDH enzyme
ZA972195B (en) 1996-03-15 1998-09-14 Du Pont Merck Pharma Spirocycle integrin inhibitors
TR199802136T2 (xx) 1996-04-23 2001-06-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated �MPDH enzimi inhibit�rleri olarak �re t�revleri.
US6127422A (en) 1996-05-06 2000-10-03 Eli Lilly And Company Anti-viral method
US5990276A (en) 1996-05-10 1999-11-23 Schering Corporation Synthetic inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
CA2254122A1 (en) 1996-05-10 1997-11-20 Schering Corporation Synthetic inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
CN1218479A (zh) 1996-05-17 1999-06-02 咨询卡有限公司 可固化的表面涂层组合物及其使用方法
EP0913389A4 (en) * 1996-06-28 2000-02-02 Nippon Chemiphar Co CYCLOPROPYLGLYCINE DERIVATIVES AND AGONISTS OF THE L-GLUTAMATE RECEPTOR TYPE OF METABOLITE REGULATION
US6245919B1 (en) 1996-06-28 2001-06-12 Haruhiko Shinozaki Cyclopropylglycine derivatives and agonists for metabotronic L-glutamate receptors
US6153579A (en) 1996-09-12 2000-11-28 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Crystallizable compositions comprising a hepatitis C virus NS3 protease domain/NS4A complex
ATE320432T1 (de) 1996-09-25 2006-04-15 Merck Sharp & Dohme Spiro-azacyclische derivate, deren herstellung und verwendung als tachykinin-antagonisten
US6348608B1 (en) 1996-10-08 2002-02-19 Yian Shi Catalytic asymmetric epoxidation
GB9623908D0 (en) 1996-11-18 1997-01-08 Hoffmann La Roche Amino acid derivatives
DE19648011A1 (de) 1996-11-20 1998-05-28 Bayer Ag Cyclische Imine
AU6701598A (en) 1997-03-14 1998-09-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of impdh enzyme
GB9707659D0 (en) 1997-04-16 1997-06-04 Peptide Therapeutics Ltd Hepatitis C NS3 Protease inhibitors
GB9708484D0 (en) 1997-04-25 1997-06-18 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
GB9711114D0 (en) 1997-05-29 1997-07-23 Merck Sharp & Dohme Therapeutic agents
JP4354632B2 (ja) * 1997-08-11 2009-10-28 ベーリンガー インゲルハイム （カナダ） リミテッド Ｃ型肝炎抑制剤ペプチド
US6767991B1 (en) 1997-08-11 2004-07-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis C inhibitor peptides
US6183121B1 (en) 1997-08-14 2001-02-06 Vertex Pharmaceuticals Inc. Hepatitis C virus helicase crystals and coordinates that define helicase binding pockets
US20040058982A1 (en) 1999-02-17 2004-03-25 Bioavailability System, Llc Pharmaceutical compositions
US20020017295A1 (en) 2000-07-07 2002-02-14 Weers Jeffry G. Phospholipid-based powders for inhalation
US6211338B1 (en) 1997-11-28 2001-04-03 Schering Corporation Single-chain recombinant complexes of hepatitis C virus NS3 protease and NS4A cofactor peptide
ES2281170T3 (es) 1998-03-31 2007-09-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibidores de serina proteasas, particularmente proteasa ns3 del virus de la hepatitis c.
US6518305B1 (en) * 1998-04-23 2003-02-11 Abbott Laboratories Five-membered carbocyclic and heterocyclic inhibitors of neuraminidases
US6251583B1 (en) 1998-04-27 2001-06-26 Schering Corporation Peptide substrates for HCV NS3 protease assays
GB9812523D0 (en) 1998-06-10 1998-08-05 Angeletti P Ist Richerche Bio Peptide inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
US6323180B1 (en) 1998-08-10 2001-11-27 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Hepatitis C inhibitor tri-peptides
DE19836514A1 (de) 1998-08-12 2000-02-17 Univ Stuttgart Modifikation von Engineeringpolymeren mit N-basischen Gruppe und mit Ionenaustauschergruppen in der Seitenkette
US6117639A (en) 1998-08-31 2000-09-12 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Fusion proteins, DNA molecules, vectors, and host cells useful for measuring protease activity
US6025516A (en) 1998-10-14 2000-02-15 Chiragene, Inc. Resolution of 2-hydroxy-3-amino-3-phenylpropionamide and its conversion to C-13 sidechain of taxanes
DE60039377D1 (de) 1999-02-09 2008-08-21 Pfizer Prod Inc Zusammensetzungen basischer Arzneistoffe mit verbesserter Bioverfügbarkeit
US20020042046A1 (en) 1999-02-25 2002-04-11 Vertex Pharmaceuticals, Incorporated Crystallizable compositions comprising a hepatitis C virus NS3 protease domain/NS4A complex
BR0009167A (pt) 1999-03-19 2001-12-26 Vertex Pharma Inibidores de enzima impdh
US6608027B1 (en) 1999-04-06 2003-08-19 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
US7122627B2 (en) 1999-07-26 2006-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Lactam inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protease
US20020183249A1 (en) 1999-08-31 2002-12-05 Taylor Neil R. Method of identifying inhibitors of CDC25
JP2003526634A (ja) 1999-12-03 2003-09-09 ブリストル−マイヤーズ スクイブ ファーマ カンパニー Ｃ型肝炎ウイルスＮＳ３プロテアーゼのα−ケトアミド阻害剤
US6365380B2 (en) * 2000-02-23 2002-04-02 Pcbu Services, Inc. Method for stereoselectively inverting a chiral center of a chemical compound using an enzyme and a metal catalyst
EP1261611A2 (en) 2000-02-29 2002-12-04 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Inhibitors of hepatitis c virus ns3 protease
DE60111509T2 (de) 2000-04-03 2006-05-11 Vertex Pharmaceuticals Inc., Cambridge Inhibitoren von Serin-Proteasen, insbesondere der Hepatitis-C-Virus NS23-Protease
SK14192002A3 (sk) 2000-04-05 2003-03-04 Schering Corporation Makrocyklické zlúčeniny, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie
HUP0302957A2 (hu) 2000-04-19 2003-12-29 Schering Corporation Hepatitis C vírus alkil- és aril-alanin P2 csoportokat tartalmazó makrociklusos NS-3 szerin proteáz inhibitorai
AU2001267886A1 (en) 2000-06-30 2002-01-14 Seikagaku Corporation Epoxycarboxylic acid amides, azides and amino alcohols and processes for preparation of alpha-keto amides by using them
AR029851A1 (es) 2000-07-21 2003-07-16 Dendreon Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c
AR034127A1 (es) 2000-07-21 2004-02-04 Schering Corp Imidazolidinonas como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de hepatitis c, composicion farmaceutica, un metodo para su preparacion, y el uso de las mismas para la manufactura de un medicamento
MXPA03000626A (es) 2000-07-21 2004-07-30 Schering Corp Nuevos peptidos como inhibidores de ns3-serina proteasa del virus de la hepatitis c.
US7244721B2 (en) 2000-07-21 2007-07-17 Schering Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
WO2002008251A2 (en) 2000-07-21 2002-01-31 Corvas International, Inc. Peptides as ns3-serine protease inhibitors of hepatitis c virus
AU2001276988B2 (en) 2000-07-21 2007-01-25 Dendreon Corporation Peptides as NS3-serine protease inhibitors of hepatitis C virus
US6777400B2 (en) 2000-08-05 2004-08-17 Smithkline Beecham Corporation Anti-inflammatory androstane derivative compositions
SV2003000617A (es) * 2000-08-31 2003-01-13 Lilly Co Eli Inhibidores de la proteasa peptidomimetica ref. x-14912m
US6939692B2 (en) 2000-09-12 2005-09-06 Degussa Ag Nucleotide sequences coding for the pknB gene
US6846806B2 (en) 2000-10-23 2005-01-25 Bristol-Myers Squibb Company Peptide inhibitors of Hepatitis C virus NS3 protein
MXPA03004299A (es) 2000-11-20 2004-02-12 Bristol Myers Squibb Co Inhibidores de tripeptido de hepatitis c.
HUP0303436A2 (hu) 2000-12-12 2004-01-28 Schering Corp. Diaril-peptidek mint a hepatitis C vírus NS3-szerin proteáz inhibitorai, ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények és alkalmazásuk
AU2002230764A1 (en) 2000-12-13 2002-06-24 Bristol-Myers Squibb Pharma Company Imidazolidinones and their related derivatives as hepatitis c virus ns3 protease inhibitors
US6653295B2 (en) 2000-12-13 2003-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of hepatitis C virus NS3 protease
NZ526703A (en) 2001-01-22 2004-12-24 Merck & Co Inc Nucleoside derivatives as inhibitors of RNA-dependent RNA viral polymerase
EP1356123A2 (en) 2001-01-30 2003-10-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated A quantitative assay for nucleic acids
GB0102342D0 (en) 2001-01-30 2001-03-14 Smithkline Beecham Plc Pharmaceutical formulation
CA2441688C (en) 2001-03-27 2014-01-21 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions and methods useful for hcv infection
GB0107924D0 (en) 2001-03-29 2001-05-23 Angeletti P Ist Richerche Bio Inhibitor of hepatitis C virus NS3 protease
JP2005500322A (ja) 2001-07-03 2005-01-06 アルタナ　ファルマ　アクチエンゲゼルシャフト ３−フェニルイソセリンの製法
MXPA04000293A (es) 2001-07-11 2004-05-04 Vertex Pharma Inhibidores de serina proteasa biciclica de puente.
US7029561B2 (en) 2001-07-25 2006-04-18 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Commerce Fluidic temperature gradient focusing
JP2003055389A (ja) 2001-08-09 2003-02-26 Univ Tokyo 錯体及びそれを用いたエポキシドの製法
US6824769B2 (en) 2001-08-28 2004-11-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Optimal compositions and methods thereof for treating HCV infections
WO2003035060A1 (en) 2001-10-24 2003-05-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine protease, particularly hepatitis c virus ns3-ns4a protease, incorporating a fused ring system
CA2465597A1 (en) 2001-11-14 2003-06-12 Ben Zion Dolitzky Amorphous and crystalline forms of losartan potassium and process for their preparation
CA2369711A1 (en) 2002-01-30 2003-07-30 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Macrocyclic peptides active against the hepatitis c virus
US7091184B2 (en) 2002-02-01 2006-08-15 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
CA2369970A1 (en) 2002-02-01 2003-08-01 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor tri-peptides
AR038375A1 (es) 2002-02-01 2005-01-12 Pfizer Prod Inc Composiciones farmaceuticas de inhibidores de la proteina de transferencia de esteres de colesterilo
US6642204B2 (en) 2002-02-01 2003-11-04 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis C inhibitor tri-peptides
RU2004133044A (ru) 2002-04-11 2006-01-27 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед (Us) Ингибиторы сериновых протеаз, в частности, протеазы ns3-ns4a hcv
JP2006507235A (ja) 2002-08-01 2006-03-02 フアーマセツト・インコーポレイテツド フラビウイルス科ウイルス感染治療のためのビシクロ［４．２．１］ノナン系を有する化合物
US20050075279A1 (en) 2002-10-25 2005-04-07 Boehringer Ingelheim International Gmbh Macrocyclic peptides active against the hepatitis C virus
CA2413705A1 (en) 2002-12-06 2004-06-06 Raul Altman Use of meloxicam in combination with an antiplatelet agent for treatment of acute coronary syndrome and related conditions
US7601709B2 (en) 2003-02-07 2009-10-13 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
US7098231B2 (en) 2003-01-22 2006-08-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
US7223785B2 (en) 2003-01-22 2007-05-29 Boehringer Ingelheim International Gmbh Viral polymerase inhibitors
US20040180815A1 (en) 2003-03-07 2004-09-16 Suanne Nakajima Pyridazinonyl macrocyclic hepatitis C serine protease inhibitors
JP2006517960A (ja) 2003-02-18 2006-08-03 ファイザー インコーポレイテッド Ｃ型肝炎ウイルスの阻害剤、それを使用する組成物および治療法
ATE486889T1 (de) 2003-03-05 2010-11-15 Boehringer Ingelheim Int Peptidanaloga mit inhibitorischer wirkung auf hepatitis c
WO2004101605A1 (en) 2003-03-05 2004-11-25 Boehringer Ingelheim International Gmbh Hepatitis c inhibiting compounds
ATE547412T1 (de) 2003-04-11 2012-03-15 Vertex Pharma Inhibitoren von serinproteasen, insbesondere hcv- ns3-ns4a-protease
WO2004092161A1 (en) 2003-04-11 2004-10-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hcv ns3-ns4a protease
JP4447603B2 (ja) 2003-05-21 2010-04-07 ベーリンガー インゲルハイム インターナショナル ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｃ型肝炎インヒビター化合物
UY28423A1 (es) 2003-07-18 2005-02-28 Vertex Pharma Inhibidores de proteasas serinas, en especial proteasa ns3-ns4a del vhc.-
WO2005018330A1 (en) 2003-08-18 2005-03-03 Pharmasset, Inc. Dosing regimen for flaviviridae therapy
TWI359147B (en) 2003-09-05 2012-03-01 Vertex Pharma Inhibitors of serine proteases, particularly hcv n
US20050120398A1 (en) 2003-09-12 2005-06-02 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Animal model for HCV infection
US20050119189A1 (en) 2003-09-18 2005-06-02 Cottrell Kevin M. Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
US6933760B2 (en) 2003-09-19 2005-08-23 Intel Corporation Reference voltage generator for hysteresis circuit
PE20050431A1 (es) 2003-09-22 2005-07-19 Boehringer Ingelheim Int Peptidos macrociclicos activos contra el virus de la hepatitis c
JP2007532474A (ja) 2003-10-10 2007-11-15 バーテックス　ファーマシューティカルズ　インコーポレイテッド セリンプロテアーゼ、特にｈｃｖのｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼの阻害剤
AR045870A1 (es) 2003-10-11 2005-11-16 Vertex Pharma Terapia de combinacion para la infeccion de virus de hepatitis c
US8187874B2 (en) 2003-10-27 2012-05-29 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Drug discovery method
ATE416789T1 (de) 2003-10-27 2008-12-15 Vertex Pharma Kombinationen für die hcv-behandlung
JP4890254B2 (ja) 2003-10-27 2012-03-07 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｈｃｖｎｓ３−ｎｓ４ａプロテアーゼ耐性突然変異体
ATE442355T1 (de) 2003-10-28 2009-09-15 Vertex Pharma Herstellung von 4,5-dialkyl-3-acylpyrrol-2- carbonsäurederivaten durch synthese nach fischer- fink und anschliebende acylierung
US20050119318A1 (en) 2003-10-31 2005-06-02 Hudyma Thomas W. Inhibitors of HCV replication
US7132504B2 (en) 2003-11-12 2006-11-07 Bristol-Myers Squibb Company Hepatitis C virus inhibitors
EP1689857A1 (en) 2003-12-01 2006-08-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Compositions comprising fetal liver cells and methods useful for hcv infection
ES2358333T3 (es) 2004-01-21 2011-05-09 Boehringer Ingelheim International Gmbh Péptidos macrocíclicos con acción contra el virus de la hepatitis c.
EP2311851A3 (en) 2004-02-04 2011-05-25 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly HCV NS3-NS4A protease
CN103319464A (zh) 2004-02-20 2013-09-25 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 病毒聚合酶抑制剂
US20050187192A1 (en) 2004-02-20 2005-08-25 Kucera Pharmaceutical Company Phospholipids for the treatment of infection by togaviruses, herpes viruses and coronaviruses
ES2328589T3 (es) 2004-02-27 2009-11-16 Schering Corporation Compuestos de la prolina 3,4(ciclopentil) fusionados como inhibidores de la proteasa serina ns3 del virus de la hepatitis c.
US7381827B2 (en) 2004-03-12 2008-06-03 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Processes and intermediates
WO2005107745A1 (en) 2004-05-06 2005-11-17 Schering Corporation An inhibitor of hepatitis c
EP1765283A4 (en) 2004-06-08 2012-11-28 Vertex Pharma PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS
WO2006026352A1 (en) 2004-08-27 2006-03-09 Schering Corporation Acylsulfonamide compounds as inhibitors of hepatitis c virus ns3 serine protease
US7863274B2 (en) 2005-07-29 2011-01-04 Concert Pharmaceuticals Inc. Deuterium enriched analogues of tadalafil as PDE5 inhibitors
EP2256113A1 (en) 2005-08-02 2010-12-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases
BRPI0615029A2 (pt) 2005-08-19 2009-06-16 Vertex Pharma processos e intermediários
AR055395A1 (es) 2005-08-26 2007-08-22 Vertex Pharma Compuestos inhibidores de la actividad de la serina proteasa ns3-ns4a del virus de la hepatitis c
US7705138B2 (en) 2005-11-11 2010-04-27 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Hepatitis C virus variants
CA2643688A1 (en) 2006-02-27 2007-08-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Co-crystals and pharmaceutical compositions comprising the same
US20070244334A1 (en) 2006-03-16 2007-10-18 Tanoury Gerald J Processes and intermediates for preparing steric compounds
KR20080112303A (ko) 2006-03-16 2008-12-24 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 중수소화 ｃ형 간염 프로테아제 억제제
EA018811B1 (ru) 2006-03-20 2013-10-30 Вертекс Фармасьютикалз Инкорпорейтед Способы получения твердой дисперсии лекарственного средства и твердые дисперсии лекарственного средства, полученные этим способом
CN101494979A (zh) 2006-03-20 2009-07-29 沃泰克斯药物股份有限公司 药物组合物
AU2007254990A1 (en) 2006-05-31 2007-12-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Oral controlled release formulations of an interleukin-1 beta converting enzyme inihibitor
JP2010519329A (ja) 2007-02-27 2010-06-03 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド セリンプロテアーゼ阻害剤

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU98110973A (ru) * 1995-11-09 2000-03-27 Басф Аг Пептидные производные доластатина 15 и их применение
WO1998017679A1 (en) * 1996-10-18 1998-04-30 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Inhibitors of serine proteases, particularly hepatitis c virus ns3 protease
WO1999007734A2 (en) * 1997-08-11 1999-02-18 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor peptide analogues
WO2000009558A1 (en) * 1998-08-10 2000-02-24 Boehringer Ingelheim (Canada) Ltd. Hepatitis c inhibitor peptides

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
C.J. BLANKLEY et al. Synthesis and Structure-Activity Relationships of Potent New Angiotensin Converting Enzyme Inhibitors Containing saturated Bicyclic Amino Acids Journal of Medicinal Chemistry, 1987, Vol. 30. No.6, стр. 992-994, соединения 16-18 *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2352804T3 (es) 2011-02-23
TW201022241A (en) 2010-06-16
EP1320540A2 (en) 2003-06-25
SV2003000617A (es) 2003-01-13
DK1878720T3 (da) 2011-01-24
NO20030928D0 (no) 2003-02-27
DE60138717D1 (de) 2009-06-25
KR20080096718A (ko) 2008-10-31
DZ3438A1 (fr) 2002-03-07
IL215892A (en) 2015-03-31
DK1320540T5 (da) 2012-05-29
ZA200301641B (en) 2004-06-21
CN1451014A (zh) 2003-10-22
IL154671A (en) 2011-11-30
TW201022242A (en) 2010-06-16
HK1163061A1 (en) 2012-09-07
ES2325481T9 (es) 2012-07-10
TW201022244A (en) 2010-06-16
HRP20030139B1 (hr) 2015-08-28
NO329929B1 (no) 2011-01-24
KR20100042296A (ko) 2010-04-23
UA99895C2 (ru) 2012-10-25
EP1320540B9 (en) 2012-03-21
NO330807B1 (no) 2011-07-18
CN102504014A (zh) 2012-06-20
CN100522991C (zh) 2009-08-05
IL215890A0 (en) 2011-12-29
NO20100999L (no) 2003-04-16
IL215891A0 (en) 2011-12-29
KR20080104382A (ko) 2008-12-02
EP1320540B1 (en) 2009-05-13
US8529882B2 (en) 2013-09-10
TW201022243A (en) 2010-06-16
HK1057758A1 (en) 2004-04-16
US8252923B2 (en) 2012-08-28
SK2492003A3 (en) 2004-11-03
CA2697205C (en) 2014-07-29
KR20030041981A (ko) 2003-05-27
KR20100043293A (ko) 2010-04-28
ES2489115T3 (es) 2014-09-01
PL365836A1 (en) 2005-01-10
KR100945975B1 (ko) 2010-03-09
HUP0300855A2 (hu) 2003-10-28
US20100137583A1 (en) 2010-06-03
CY1109216T1 (el) 2014-07-02
IL215891A (en) 2015-04-30
JP2012197289A (ja) 2012-10-18
TWI359144B (en) 2012-03-01
US20120282219A1 (en) 2012-11-08
KR20080007515A (ko) 2008-01-21
PT1320540E (pt) 2009-07-14
BR0113666A (pt) 2005-09-27
SI1320540T1 (sl) 2009-10-31
CN101633636B (zh) 2013-03-13
TWI359145B (en) 2012-03-01
ECSP034493A (es) 2003-04-25
EA200300318A1 (ru) 2004-02-26
KR100876472B1 (ko) 2008-12-31
NZ569670A (en) 2010-03-26
DE122012000015I1 (de) 2012-05-24
NO20100093L (no) 2003-04-16
KR100968295B1 (ko) 2010-07-07
AU8831801A (en) 2002-03-13
TWI378927B (en) 2012-12-11
AU2001288318B2 (en) 2007-09-06
WO2002018369A3 (en) 2002-08-15
KR20110088600A (ko) 2011-08-03
DE60143233D1 (de) 2010-11-18
DE20122915U1 (de) 2010-04-08
JP4689938B2 (ja) 2011-06-01
EP2371839A1 (en) 2011-10-05
NZ541302A (en) 2007-04-27
HUP0300855A3 (en) 2012-01-30
IL215892A0 (en) 2011-12-29
TWI319763B (en) 2010-01-21
US20050197299A1 (en) 2005-09-08
AR030591A1 (es) 2003-08-27
NO20030928L (no) 2003-04-16
EP1878720B1 (en) 2010-10-06
CA2419607C (en) 2012-03-13
CZ2003595A3 (cs) 2003-06-18
KR20080104383A (ko) 2008-12-02
EA011547B1 (ru) 2009-04-28
UA81600C2 (en) 2008-01-25
EA200701869A1 (ru) 2008-02-28
KR20080104384A (ko) 2008-12-02
JP2004517047A (ja) 2004-06-10
EP1849797A2 (en) 2007-10-31
TW200918523A (en) 2009-05-01
US20120064034A1 (en) 2012-03-15
CN1869061B (zh) 2013-04-24
ECSP077217A (es) 2007-04-26
CN101633636A (zh) 2010-01-27
CA2697205A1 (en) 2002-03-07
ATE431358T1 (de) 2009-05-15
IL154671A0 (en) 2003-09-17
NO2012006I2 (no) 2012-04-03
WO2002018369A8 (en) 2003-11-06
CN103232381A (zh) 2013-08-07
HK1114090A1 (en) 2008-10-24
EP1849797A3 (en) 2008-01-23
DK1320540T3 (da) 2009-07-27
WO2002018369A2 (en) 2002-03-07
CY2012007I2 (el) 2014-07-02
JP2007284444A (ja) 2007-11-01
AU2001288318C1 (en) 2002-03-13
ES2325481T3 (es) 2009-09-07
CN101696232A (zh) 2010-04-21
US7820671B2 (en) 2010-10-26
EP2368878A1 (en) 2011-09-28
HRP20030139A2 (en) 2005-04-30
IL185644A0 (en) 2008-01-06
PE20020474A1 (es) 2002-06-18
ES2450815T3 (es) 2014-03-25
EP1958956A2 (en) 2008-08-20
CA2419607A1 (en) 2002-03-07
HRP20030139B8 (hr) 2015-11-06
JP2011079835A (ja) 2011-04-21
MXPA03001780A (es) 2003-06-04
NO2012006I1 (no) 2012-04-30
KR20090120013A (ko) 2009-11-23
EP2368877B1 (en) 2014-05-07
PL211019B1 (pl) 2012-03-30
CL2010000330A1 (es) 2010-09-21
CN101693672B (zh) 2014-11-12
EP2368901A1 (en) 2011-09-28
CY2012007I1 (el) 2014-07-02
ATE483686T1 (de) 2010-10-15
CN101693672A (zh) 2010-04-14
EP1876173A1 (en) 2008-01-09
US20140294763A1 (en) 2014-10-02
JP5269035B2 (ja) 2013-08-21
EP2368877A1 (en) 2011-09-28
TWI339661B (en) 2011-04-01
EP1878720A1 (en) 2008-01-16
EP1958956B1 (en) 2013-12-11
EP1958956A3 (en) 2008-09-24
CN1869061A (zh) 2006-11-29
LU91960I2 (fr) 2012-05-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA017556B1 (ru) Пептидомиметические ингибиторы протеазы
AU2012201015B2 (en) Peptidomimetic protease inhibitors
AU2007240156A1 (en) Peptidomimetic protease inhibitors
HK1115886B (en) Peptidomimetic protease inhibitors
HK1108700A (en) Peptidomimetic protease inhibitors
HK1057758B (en) Peptidomimetic protease inhibitors
HK1114090B (en) Process for preparing chiral bicycloprolinates as intermediates for the preparation of peptidomimetic protease inhibitors
HK1163112A (en) Peptidomimetic protease inhibitors
HK1163062A (en) Peptidomimetic protease inhibitors
HK1114088A (en) Chiral intermediates for the preparation of peptidomimetic protease inhibitors
HK1163061B (en) Peptidomimetic protease inhibitors and intermediates for their preparation as treatment for hcv infection

Legal Events

Date Code Title Description
ND4A Extension of term of a eurasian patent
PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU