ES2423219T3 - Análogos de tiofeno para el tratamiento o prevención de infecciones por flavivirus - Google Patents

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Abstract

Un compuesto **Fórmula** o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

Description

Análogos de tiofeno para el tratamiento o prevención de infecciones por flavivirus.
La presente invención se refiere a compuestos novedosos y a un procedimiento para el tratamiento oprevención de infecciones por Flavivirus usando compuestos novedosos.
5 La hepatitis es una enfermedad que se produce en todo el mundo. Es generalmente de naturaleza viral, aunque hay otras causas conocidas. La hepatitis viral es con creces la forma más común de hepatitis. Casi 750.000estadounidenses son afectados por la hepatitis cada uno año, y de aquellos, más de 150.000 se infectan con el virusde la hepatitis C (“VHC”).
El VHC es un virus de ARN de cadena positiva que pertenece a la familia Flaviviridae y tiene una relación
10 muy estrecha con los pestivirus que incluyen virus de la peste porcina y virus de la diarrea viral bovina (VDVB). Se cree que el VHC se replica por la producción de un molde de ARN de cadena negativa complementaria. Debido a lafalta de sistema de replicación en cultivo eficiente para el virus, las partículas de VHC se aislaron de plasma humanoreunido y mostraron, por microscopía electrónica, que tenían un diámetro de aproximadamente 50-60 nm. El genoma del VHC es un ARN de sentido positivo monocatenario de aproximadamente 9.600 pb que codifica una
15 poliproteína de 3009-3030 aminoácidos, que se escinde co- y pos-traduccionalmente en proteínas virales maduras (núcleo, E1, E2, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A, NS5B). Se cree que las glucoproteínas estructurales, E1 y E2,están incorporadas en una envoltura lipídica viral y forman heterodímeros estables. También se cree que la proteínadel núcleo estructural interacciona con el genoma del ARN viral para formar la nucleocápside. Las proteínas noestructurales designadas NS2 a NS5 incluyen proteínas con funciones enzimáticas implicadas en la replicación de
20 virus y el procesamiento de proteínas que incluye una polimerasa, proteasa y helicasa.
La principal fuente de contaminación con VHC es la sangre. La magnitud de la infección por el VHC comoproblema de salud se ilustra por la prevalencia entre grupos de alto riesgo. Por ejemplo, 60% al 90% de hemofílicosy más del 80% de drogadictos intravenosos en países occidentales están crónicamente infectados por el VHC. Paradrogadictos intravenosos, la prevalencia varía de aproximadamente el 28% al 70% dependiendo de la población
25 estudiada. La proporción de nuevas infecciones por el VHC asociadas a post-transfusión se ha reducido últimamente sustancialmente debido a avances en las herramientas de diagnóstico usadas para cribar donantes de sangre.
La combinación de interferón PEGilado más ribavirina es el tratamiento de elección para infección por elVHC crónica. Este tratamiento no proporciona respuesta viral sostenida (SVR) en la mayoría de los pacientesinfectados con el genotipo más prevalente (1a y 1b). Además, efectos secundarios significativos evitan el
30 cumplimiento de la presente pauta y puede requerir reducción o suspensión de la dosis en algunos pacientes.
Por tanto, hay una gran necesidad de desarrollo de agentes antivirales para su uso en el tratamiento de o laprevención de infecciones por Flavivirus.
En un aspecto, la presente invención proporciona un compuesto de fórmula I:
35 o sales farmacéuticamente aceptables del mismo; en la que R1
es alquilo C1-6, cicloalquilo C3-6 o arilo C6-14 que está sustituido una o más veces con -NH(alquilo C1-4), -N(alquilo C1-4)2, hidroxilo, NH2, heterociclo de 3-12 miembros o NHSO2-arilo C6-18;
Z es H, halógeno, alquilo C1-6 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, alquenilo C2-6 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, o alquinilo C2-6 que está sin40 sustituir o sustituido una o más veces con R10;
X es
M es
R5
es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R13;
o ciclohexilo que está sustituido una o más veces con R14;
Y es COOR7, COCOOR7, P(O)ORaORb, S(O)OR7, S(O)2OR7, tetrazol, CON(R7)CH(R7)COOR7, CONR8R9, CON(R7)-SO2-R7, CONR7OH y halógeno;
R7, R8 y R9 son cada uno independientemente H, alquilo C1-12 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, alquenilo C2-12 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, alquinilo C2-12 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, arilo C6-14 que está sin sustituir osustituido una o más veces con R11, aralquilo C7-16 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11, heteroarilo de 5-12 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11, heteroaralquilo de 6-18 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11, heterociclo de 3-12 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R12, o heterocicloalquilo de 4-18 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R12, o R8 y R9 se toman conjuntamente con el átomo de nitrógeno para formar un heterociclo de 3 a 10miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R12 o un heteroarilo de 5-12 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11; y
Ra y Rb se eligen cada uno independientemente de H, alquilo C1-12 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, alquenilo C2-12 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, alquinilo C2-12 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, arilo C6-14 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11, aralquilo C7-16 que está sin sustituir o sustituido una
o más veces con R11, heteroarilo de 5-12 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11, heteroaralquilo de 6-18 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11, heterociclo de 3-12 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R12, o heterocicloalquilo de 4-18 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R12, o Ra y Rb se toman conjuntamente con los átomos de oxígeno para formar un heterociclode 5 a 10 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10 o un heteroarilo de 5-12 miembros que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11;
R10
es halógeno, oxo, -NH2, -NH(alquilo C1-4), -N(alquilo C1-4)2, -CONH2, -CONH(alquilo C1-4), CON(alquilo C1-4)2, -NHCOH, -N(alquil C1-4)COH, -N(alquil C1-4)CO-alquilo C1-4, -NHCO-alquilo C1-4, -C(O)H, -C(O)alquilo C1-4, carboxi, -C(O)O-alquilo C1-4, hidroxilo, alcoxi C1-4, nitro, nitroso, azido, ciano, -S(O)0-2H, -S(O)0-2-alquilo C1-4, -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-4), -SO2N(alquilo C1-4)2, -NHSO2H, -N(alquil C1-4)SO2H, -N(alquil C1-4)SO2-alquilo C1-4 o -NHSO2-alquilo C1-4;
R11
es halógeno, alquilo C1-6, alquilo C1-6 halogenado, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alcoxi C1-6, -NH2, NH(alquilo C1-4), -N(alquilo C1-4)2, -CONH2, -CONH(alquilo C1-4), -CON(alquilo C1-4)2, -NHCOH, N(alquil C1-4)COH, -N(alquil C1-4)CO-alquilo C1-4, -NHCO-alquilo C1-4, -C(O)H, -C(O)-alquilo C1-4, carboxi, -C(O)O-alquilo C1-4, hidroxilo, alcoxi C1-6, nitro, nitroso, azido, ciano, -S(O)0-2H, -S(O)0-2alquilo C1-4, -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-4), -SO2N(alquilo C1-4)2, -NHSO2H, -N(alquil C1-4)SO2H, N(alquil C1-4)SO2-alquilo C1-4 o -NHSO2-alquilo C1-4;
R12
es halógeno, oxo, alquilo C1-6, alquilo C1-6 halogenado, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, -NH2, NH(alquilo C1-4), -N(alquilo C1-4)2, -CONH2, -CONH(alquilo C1-4), -CON(alquilo C1-4)2, -NHCOH, N(alquil C1-4)COH, -N(alquil C1-4)CO-alquilo C1-4, -NHCO-alquilo C1-4, -C(O)H, -C(O)-alquilo C1-4, carboxi, -C(O)O-alquilo C1-4, hidroxilo, alcoxi C1-6, nitro, nitroso, azido, ciano, -S(O)0-2H, -S(O)0-2alquilo C1-4, -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-4), -SO2N(alquilo C1-4)2, -NHSO2H, -N(alquil C1-4)SO2H, N(alquil C1-4)SO2-alquilo C1-4 o -NHSO2-alquilo C1-4;
R13
es OH, halógeno, alquilo C1-6, alquilo C1-6 halogenado, alcoxi C1-6, alcoxi C1-6 halogenado, ciano, nitro, -NH2, -NH(alquilo C1-4), -N(alquilo C1-4)2, -CONH2, -CONH(alquilo C1-4), -CON(alquilo C1-4)2, -NHCOH, -N(alquil C1-4)COH, -N(alquil C1-4)CO-alquilo C1-4, -NHCO-alquilo C1-4, -C(O)H, -C(O)alquilo C1-4, carboxi, -C(O)O-alquilo C1-4, -5(O)0-2-alquilo C1-4, -SO2NH2, -SO2NH(alquilo C1-4), SO2N(alquilo C1-4)2, -N(alquil C1-4)SO2H, -N(alquil C1-4)SO2-alquilo C1-4, -NHSO2-alquilo C1-4, arilo C6-4, ariloxi C6-4 o ariloxi C6-14-alquilo C1-6;
R14
es OH, halógeno, alcoxi C1-6, alquilo C1-6, alquil C1-6-CO-NH-, alquil C1-6-CO-N(alquil C1-6)- oheteroarilo de 5 a 10 miembros; y
R14a
es alquilo C1-6, cicloalquilo C3-7, alquilo C1-6 halogenado, alquil C1-6-CO-, -S(O)0-2-alquilo C1-4, heteroarilo de 5 a 10 miembros o arilo C6-14.
una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Los compuestos de la presente invención son inhibidores de la polimerasa del VHC. Se ha encontrado
5 sorprendentemente que los compuestos según la presente invención y que tienen un patrón de sustitución específico presentan propiedades mejoradas con respecto a otros inhibidores de la polimerasa del VHC de tiofeno. Por tanto, se cree que los compuestos de la presente invención tienen excelentes posibilidades de tratamiento y prevención de infecciones por hepatitis C.
En otro aspecto se proporciona un procedimiento para tratar o prevenir una infección viral por Flaviviridae 10 en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto, composición o combinación de la invención.
En otro aspecto se proporciona una composición farmacéutica que comprende al menos un compuesto dela invención y al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
En otro aspecto se proporciona una combinación que comprende un compuesto de la invención y uno o
15 más agentes adicionales elegidos de inhibidores de la serina proteasa viral, inhibidores de la polimerasa viral, inhibidores de la helicasa viral, agentes inmunomuduladores, agentes antioxidantes, agentes antibacterianos,vacunas terapéuticas, agentes hepatoprotectores, agente antisentido, inhibidores de NS2/3 proteasa del VHC einhibidores de sitio interno de entrada al ribosoma (IRES).
En otro aspecto se proporciona el uso de un compuesto, composición o combinación de la invención para20 tratar o prevenir una infección viral por Flaviviridae en un paciente.
En otro aspecto adicional se proporciona el uso de un compuesto, composición o combinación de lainvención para inhibir o reducir la actividad de polimerasa viral en un paciente.
En otro aspecto adicional se proporciona el uso de un compuesto, composición o combinación de lainvención para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir una infección por Flaviviridae viral en un 25 paciente.
En una realización, los compuestos de la presente invención comprenden aquellos en los que las siguientesrealizaciones están presentes, tanto independientemente como en combinación.
Según un compuesto preferido o aspecto de procedimiento, los compuestos de la presente invención serepresentan por la fórmula IA:
o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; en la que cada uno de X, Y y R1 son como se han definido anteriormente.
Según otro compuesto preferido o aspecto de procedimiento, los compuestos de la presente invención serepresentan por la fórmula IB:
o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; en la que cada uno de X, Y, R1, R5 y R6 son como se han definido anteriormente.
Según otra realización, R1 en las fórmulas I, IA y IB es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6 que están sin sustituir o sustituidos una o más veces con -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo.
40 Según otra realización, R1 en las fórmulas I, IA y IB es alquilo C1-6 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con -NH2 NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo.
Según otra realización, R1 en las fórmulas I, IA y IB es alquilo C1-6.
Según otra realización, R1 en las fórmulas I, IA y IB es R1 es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec
butilo o terc-butilo.
Según otra realización, R1 en las fórmulas I, IA y IB es ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo.
Según otra realización, R1 en las fórmulas I, IA y IB es fenilo.
Según otra realización, Z en fórmula I es H, halógeno, o alquilo C1-6 que está sin sustituir o sustituido una o
más veces con R10. Según otra realización, Z en fórmula I es H, halógeno, o alquilo C1-4 que está sin sustituir o sustituido una o
más veces con R10.
Según otra realización, Z en fórmula I es H o alquilo C1-4.
Según otra realización, Z en fórmula I es H o metilo.
Según otra realización, Y en las fórmulas I, IA y IB es COOR7, y R7 es H, alquilo C1-12 que está sin sustituir
o sustituido una o más veces con R10, alquenilo C2-12 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, alquinilo C2-12 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, o arilo C6-14 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11.
Según otra realización, Y en las fórmulas I, IA y IB es COOR7, y R7 es H, alquilo C1-6 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, o arilo C6-14 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11.
Según otra realización, Y en las fórmulas I, IA y IB es COOR7, y R7 es H, alquilo C1-4 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R10, o fenilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con R11.
Según otra realización, Y en las fórmulas I, IA y IB es COOR7 y R7 es H, alquilo C1-4 o fenilo.
Según otra realización, Y en las fórmulas I, IA y IB es COOR7 y R7 es H, metilo o etilo.
Según otra realización, Y en las fórmulas I, IA y IB es COOR7 y R7 es H.
Según otra realización, R5 en las fórmulas I, IA y IB es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, halógeno, alquilo C1-6, alquilo C1-6 halogenado, alcoxi C1-6, alcoxi C1-6 halogenado, ciano, nitro, -NH2, -NH(alquilo C1-4) o -N(C1-4 alquilo)2.
Según otra realización, R5 en las fórmulas I, IA y IB es ciclohexilo que está sustituido en la posición 4. Según otra realización, en las fórmulas I, IA y IB, X es -NR6-CO-R5 y R5 es ciclohexilo que está sustituido en la posición 4 y el sustituyente en la posición 4 está en la posición trans con respecto al carbonilo. Según otra realización, R5 en las fórmulas I, IA y IB es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido en laposición 4 con OH, halógeno, alquilo C1-6, alquilo C1-6 halogenado, alcoxi C1-6, alcoxi C1-6 halogenado, ciano, nitro, -NH2, -NH(alquilo C1-4) o -N(alquilo C1-4)2. Según otra realización, en las fórmulas I, IA y IB, X es -NR6-CO-R5 y R5 es ciclohexilo que está sin sustituir
o sustituido en la posición 4 con OH, halógeno, alquilo C1-6, alquilo C1-6 halogenado, alcoxi C1-6, alcoxi C1-6 halogenado, ciano, nitro, -NH2, -NH(alquilo C1-4) o -N(alquilo C1-4)2, en las que el sustituyente en la posición 4 está en la posición trans con respecto al grupo carbonilo.
Según otra realización, R6 en las fórmulas I, IA y IB es R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, halógeno, alquilo C1-6 o alcoxi C1-6.
Según otra realización, R6 en las fórmulas I, IA y IB es ciclohexilo que está sustituido en la posición 4.
Según otra realización, R6 en las fórmulas I, IA y IB es ciclohexilo que está sustituido en la posición 4 y elsustituyente en la posición 4 está en la posición trans con respecto al grupo amino.
Según otra realización, R6 en las fórmulas I, IA y IB es ciclohexilo que está sustituido en la posición 4 con OH o alcoxi C1-6.
Según otra realización, R6 en las fórmulas I, IA y IB es
y R14a es alquilo C1-6, alquilo C1-6 halogenado, alquil C1-6-CO-, -S(O)0-2-alquilo C1-4, heteroarilo o arilo C6-14.
Según otra realización, R6 en las fórmulas I, IA y IB es
y R14a es alquilo C1-6, alquilo C1-6
halogenado, alquil C1-6-CO-, -S(O)0-2-alquilo C1-4, heteroarilo o arilo C6-4.
5 Según otra realización, R6 en las fórmulas I, IA y IB es
y R14a es metilo, etilo, propilo o isopropilo.
Según otra realización, en las fórmulas I o IB, R6 es ciclohexilo que está sustituido en la posición 4 con OH, alquilo C1-6 o alcoxi C1-6, en las que el sustituyente en la posición 4 está en la posición trans con respecto al grupo amino.
10 Según otra realización, en las fórmulas I o IB, R6 es ciclohexilo que está sustituido en la posición 4 con OH, alquilo C1-6 o alcoxi C1-6, en las que el sustituyente en la posición 4 está en la posición trans con respecto al grupo amino, y R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido en la posición 4 con OH, halógeno, alquilo C1-6, alquilo C1-6 halogenado, alcoxi C1-6, alcoxi C1-6 halogenado, ciano, nitro, -NH2, -NH(alquilo C1-4) o -N(alquilo C1-4)2, en las que el sustituyente en la posición 4 está en la posición trans con respecto al grupo carbonilo.
15 Según una realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6 que en cada caso está sin sustituir o sustituido una o más veces con -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo;
R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4;
20 R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, Hal (por ejemplo, F), alcoxi C1-4, alquilo C1-4, alquil C1-4-CO-NH-, alquil C1-4-CO-N(alquilo C1-4) o triazolilo; Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14. Según una realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
25 seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, Hal (por ejemplo, F), alcoxi C1-4, alquilo C1-4,
alquil C1-4-CO-NH-, alquil C1-4-CO-N(alquilo C1-4) o triazolilo;
30 Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14.
Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo;
R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido en la posición 4 con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido en la posición 4 con OH, Hal (por ejemplo, F), alcoxi C1-4, alquilo C1-4, alquil C1-4-CO-NH-, alquil C1-4-CO-N(alquilo C1-4) o triazolilo;
Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido en la posición 4 con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido en la posición 4 con OH, Hal (por ejemplo, F), alcoxi C1-4, alquilo C1-4,
alquil C1-4-CO-NH-, alquil C1-4-CO-N(alquilo C1-4) o triazolilo; Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 que está sin sustituir o sustituido una o más veces con -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, F, alcoxi C1-4, alquilo C1-4 o alquilo C1-4
halogenado; Y es COOR7; y R7 es H o alquilo C1-4. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, F, alcoxi C1-4 o alquilo C1-4; Y es COOR7; y R7 es H o alquilo C1-4. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:
R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6 que en cada caso está sin sustituir o sustituido una o más veces con - NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, F, alcoxi C1-4 o alquilo C1-4; Y es COOR7; y R7 es H o alquilo C1-4. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, F, alcoxi C1-4 o alquilo C1-4; Y es COOR7; y R7 es H o alquilo C1-4. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o
ciclohexilo que en cada caso está sin sustituir o sustituido una o más veces con -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, F, alcoxi C1-4, alquilo C1-4 o alquilo C1-4
halogenado; Y es COOR7; y R7 es H o alquilo C1-4. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:
R1 es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, F, alcoxi C1-4, alquilo C1-4 o alquilo C1-4
halogenado; Y es COOR7; y R7 es H o alquilo C1-4. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o
ciclohexilo que en cada caso está sin sustituir o sustituido una o más veces con -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, F, alcoxi C1-4, alquilo C1-4 o alquilo C1-4
halogenado; Y es COOH. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:
R1 es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo o ciclohexilo; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 o alcoxi C1-4; R6 es ciclohexilo que está sustituido una o más veces con OH, F, alcoxi C1-4, alquilo C1-4 o alquilo C1-4
halogenado; Y es COOH. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:
R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6 que en cada caso está sin sustituir o sustituido una o más veces con -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4;
R14a es alquilo C1-6, alquilo C1-6 halogenado, alquil C1-6-CO-, -S(O)0-2-alquilo C1-4, heteroarilo o arilo C6-14; Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14.
5 Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4;
10 R14a es alquilo C1-6, alquilo C1-6 halogenado, alquil C1-6-CO-, -S(O)0-2-alquilo C1-4, heteroarilo o arilo C6-14; Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:
15 R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6 que en cada caso está sin sustituir o sustituido una o más veces con -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4;
R14a es alquilo C1-6 o alquilo C1-6 halogenado;
20 Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6; 25 R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4;
R14a es alquilo C1-6 o alquilo C1-6 halogenado; Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14.
5 Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6 que en cada caso está sin sustituir o sustituido una o más veces con -NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo;
R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4;
10 R6 es R14a es alquilo C1-6; Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
15 seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4;
R14a es alquilo C1-6;
20 Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6 que en cada caso está sin sustituir o sustituido una o más veces con 25 NH2, NHCH3, N(CH3)2 o hidroxilo;
R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4;
R14a es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo; Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14. Según otra realización preferida de la invención, los compuestos de la presente invención están
seleccionados de los compuestos de fórmula (IB) y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que: R1 es alquilo C1-6 o cicloalquilo C3-6; R5 es ciclohexilo que está sin sustituir o sustituido una o más veces con OH, alquilo C1-4 y/o alcoxi C1-4;
R6 es R14a es metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo; Y es COOR7; y R7 es H, alquilo C1-12 o arilo C6-14. Según un aspecto de la invención, los compuestos de la invención están seleccionados de: ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-HIDROXI-CICLOHEXIL)-(TRANS-4-METIL-
CICLOHEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO;
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METOXI-CICLOHEXIL)-(TRANS-4-METIL- CICLOHEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO; ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METIL-CICLOHEXANOCARBONIL)-(CIS-4
[1,2,4]TRIAZOL-1-IL-CICLOHEXIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO;
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METIL-CICLOHEXANOCARBONIL)-(TRANS4[1,2,4]TRIAZOL-1-IL-CICLOHEXIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO; ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(CIS-4-HIDROXI-CICLOHEXIL)-(TRANS-4-METIL-
CICLOHEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO;
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METIL-CICLOHEXANOCARBONIL)-(1-METIL- PIPERIDIN-4-IL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO; CLORHIDRATO; ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METIL-CICLOHEXANOCARBONIL)-(4-CIS
[1,2,3]TRIAZOL-1-IL-CICLOHEXIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO;
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METIL-CICLOHEXANOCARBONIL)-(TRANS-4[1,2,3]TRIAZOL-1-IL-CICLOHEXIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO; y ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-FLUORO-CICLOHEXIL)-(TRANS-4-METIL-
CICLOHEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO. En una realización, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende almenos un compuesto según la invención descrito en el presente documento y al menos un vehículo o excipiente
farmacéuticamente aceptable.
En una realización, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende almenos un compuesto según la invención descrito en el presente documento y al menos un compuesto según lainvención descrito en el presente documento, y que comprende además administrar al menos un agente adicionalelegido de inhibidores de la serina proteasa viral, inhibidores de la polimerasa viral, inhibidores de la helicasa viral, agentes inmunomoduladores, agentes antioxidantes, agentes antibacterianos, vacunas terapéuticas, agenteshepatoprotectores, agentes antisentido, inhibidores de NS2/3 proteasa del VHC e inhibidores de sitio interno deentrada al ribosoma (IRES).
En otra realización se proporciona una combinación que comprende al menos un compuesto según lainvención descrito en el presente documento y uno o más agentes adicionales elegidos de inhibidores de la serinaproteasa viral, inhibidores de la polimerasa viral, inhibidores de la helicasa viral, agentes inmunomoduladores, agentes antioxidantes, agentes antibacterianos, vacunas terapéuticas, agentes hepatoprotectores, agenteantisentido, inhibidores de NS2/3 proteasa del VHC e inhibidores de sitio interno de entrada al ribosoma (IRES).
En una realización de combinación, el compuesto y agente adicional se administran secuencialmente.
En otra realización de combinación, el compuesto y agente adicional se administran simultáneamente.
Las combinaciones citadas anteriormente pueden presentarse convenientemente para su uso en forma deuna formulación farmacéutica y así formulaciones farmacéuticas que comprenden una combinación como se hadefinido anteriormente junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable comprenden por tanto otro aspecto de lainvención.
Los agentes adicionales para las composiciones y combinaciones incluyen, por ejemplo, ribavirina, amantadina, merimepodib, levovirina, viramidina y maxamina.
El término “inhibidor de serina proteasa viral” como se usa en el presente documento significa un agenteque es eficaz para inhibir la función de la serina proteasa viral que incluye serina proteasa del VHC en un mamífero.Los inhibidores de la serina proteasa del VHC incluyen, por ejemplo, aquellos compuestos descritos en losdocumentos WO 99/07733 (Boehringer Ingelheim), WO 99/07734 (Boehringer Ingelheim), WO 00/09558 (BoehringerIngelheim), WO 00/09543 (Boehringer Ingelheim), WO 00/59929 (Boehringer Ingelheim), WO 02/060926 (BMS), WO 2006039488 (Vertex), WO 2005077969 (Vertex), WO 2005035525 (Vertex), WO 2005028502 (Vertex), WO 2005007681 (Vertex), WO 2004092162 (Vertex), WO 2004092161 (Vertex), WO 2003035060 (Vertex), WO 03/087092 (Vertex), WO 02/18369 (Vertex) o WO98/17679 (Vertex).
El término “inhibidores de la polimerasa viral” como se usa en el presente documento significa un agenteque es eficaz para inhibir la función de una polimerasa viral que incluye una polimerasa del VHC en un mamífero.Inhibidores de la polimerasa del VHC incluyen no nucleósidos, por ejemplo, aquellos compuestos descritos en:
los documentos WO 03/010140 (Boehringer Ingelheim), WO 03/026587 (Bristol Myers Squibb); WO 02/100846 A1, WO 02/100851 A2, WO 01/85172 A1(GSK), WO 02/098424 A1 (GSK), WO 00/06529 (Merck), WO02/06246 A1 (Merck), WO 01/47883 (Japan Tabacco), WO 03/000254 (Japan Tabacco) y EP 1 256 628 A2(Agouron).
Además, otros inhibidores de VHC polimerasa también incluyen análogos de nucleósido, por ejemplo, aquellos compuestos descritos en: los documentos WO 01/90121 A2 (Idenix), WO 02/069903 A2 (Biocryst Pharmaceuticals Inc.) y WO 02/057287 A2 (Merck/Isis) y WO 02/057425 A2 (Merck/Isis).
Ejemplos específicos de inhibidores de nucleósido de una polimerasa del VHC incluyen R1626/R1479 (Roche), R7128 (Roche), MK-0608 (Merck), R1656 (Roche-Pharmasset) y valopicitabina (Idenix).
Ejemplos específicos de inhibidores de una polimerasa del VHC incluyen JTK-002/003 y JTK-109 (JapanTabacco), VHC-796 (Viropharma), GS-9190 (Gilead) y PF-868,554 (Pfizer).
El término “inhibidores de la helicasa viral” como se usa en el presente documento significa un agente quees eficaz para inhibir la función de una helicasa viral que incluye una helicasa de Flaviviridae en un mamífero.
“Agente inmunomodulador” como se usa en el presente documento significa aquellos agentes que soneficaces para mejorar o potenciar la respuesta del sistema inmunitario en un mamífero. Agentes inmunomoduladoresincluyen, por ejemplo, interferones de clase I (tales como interferones a, 1, 8 y 0, interferones 1, interferones consenso y asialo-interferones), interferones de clase II (tales como y-interferones) e interferones PEGilados.
El término “interferón de clase I” como se usa en el presente documento significa un interferón seleccionado de un grupo de interferones que se unen todos al tipo 1 de receptor. Éste incluye tanto interferones de clase Iproducidos naturalmente como sintéticamente. Ejemplos de interferón de clase I incluyen interferones a, 1, 8 y 0, interferones 1, interferones consenso y asialo-interferones. El término “interferón de clase II” como se usa en elpresente documento significa un interferón seleccionado de un grupo de interferones que se unen todos al tipo II dereceptor. Ejemplos de interferones de clase II incluyen interferones y.
Agentes antisentido incluyen, por ejemplo, ISIS-14803.
Ejemplos específicos de inhibidores de NS3 proteasa de VHC incluyen BILN-2061 (Boehringer Ingelheim) SCH-6 y SCH-503034/Boceprevir (Schering-Plough), VX-950/telaprevir (Vertex) y ITMN-B (InterMune), GS9132(Gilead), TMC-435350 (Tibotec/Medivir), ITMN-191 (InterMune), MK-7009 (Merck).
Inhibidores del sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) incluyen ISIS-14803 (ISIS Pharmaceuticals) y aquellos compuestos descritos en el documento WO 2006019831 (PTC therapeutics).
En una realización, el agente adicional es interferón a, ribavirina, Silybum marianum, interleucina-12, amantadina, ribozima, timosina, N-acetilcisteína o ciclosporina.
En una realización, el agente adicional es interferón a 1A, interferón a 1B, interferón a 2A o interferón a 2B.
El interferón está disponible en formas PEGiladas y no PEGiladas. Interferones PEGilados incluyen PEGASYSTM y Peg-intronTM.
La dosis recomendada de monoterapia con PEGASYSTM para hepatitis C crónica es 180 mg (vial de 1,0 ml
o jeringuilla precargada de 0,5 ml) una vez a la semana durante 48 semanas por administración subcutánea en elabdomen o muslo.
La dosis recomendada de PEGASYSTM cuando se usa en combinación con ribavirina para hepatitis Ccrónica es 180 mg (vial de 1,0 ml o jeringuilla precargada de 0,5 ml) una vez a la semana.
La dosis diaria de ribavirina es 800 mg a 1200 mg administrada por vía oral en dos dosis divididas. La dosisdebe individualizarse al paciente dependiendo de las características de la enfermedad inicial (por ejemplo, genotipo),respuesta a terapia y tolerabilidad de la pauta.
La dosis diaria de la pauta de PEG-IntronTM es 1,0 mg/kg/semana subcutáneamente durante un año. La dosis debe administrarse el mismo día de la semana.
Cuando se administra en combinación con ribavirina, la dosis recomendada de PEG-intrón es 1,5 microgramos/kg/semana.
En una realización, el inhibidor de serina proteasa viral es un inhibidor de serina proteasa de Flaviviridae.
En una realización, el inhibidor de la polimerasa viral es un inhibidor de la polimerasa de Flaviviridae.
En una realización, el inhibidor de helicasa viral es un inhibidor de la helicasa de Flaviviridae.
En otras realizaciones:
el inhibidor de la serina proteasa viral es inhibidor de la serina proteasa del VHC;
el inhibidor de la polimerasa viral es inhibidor de la polimerasa del VHC;
el inhibidor de la helicasa viral es inhibidor de la helicasa del VHC.
En una realización, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar o prevenir una infección viral por Flaviviridae en un huésped que comprende administrar al huésped una cantidad terapéuticamente eficaz deal menos un compuesto según la fórmula I.
En una realización, la infección viral se elige de infecciones por Flavivirus.
En una realización, la infección por Flavivirus es virus de la hepatitis C (VHC), virus de la diarrea viralbovina (VDVB), virus de la peste porcina, virus de la fiebre del dengue, virus de la encefalitis japonesa o virus de lafiebre amarilla.
En una realización, la infección viral por Flaviviridae es infección por virus de la hepatitis C (VHC).
En una realización, la presente invención proporciona un procedimiento para tratar o prevenir una infección viral por Flaviviridae en un huésped que comprende administrar al huésped una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto según la invención descrito en el presente documento, y que comprende ademásadministrar al menos un agente adicional elegido de inhibidores de la serina proteasa viral, inhibidores de lapolimerasa viral, inhibidores de la helicasa viral, agentes inmunomoduladores, agentes antioxidantes, agentes antibacterianos, vacunas terapéuticas, agentes hepatoprotectores, agentes antisentido, inhibidores de NS2/3 proteasa del VHC e inhibidores de sitio interno de entrada al ribosoma (IRES).
En una realización se proporciona un procedimiento para inhibir o reducir la actividad de la polimerasa viral en un huésped que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según la invención descrito en el presente documento.
En una realización se proporciona un procedimiento para inhibir o reducir la actividad de la polimerasa viral en un huésped que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según lainvención descrito en el presente documento y que comprende además administrar uno o más inhibidores de lapolimerasa viral.
En una realización, la polimerasa viral es un polimerasa viral por Flaviviridae.
En una realización, la polimerasa viral es una ARN-polimerasa dependiente de ARN.
En una realización, la polimerasa viral es polimerasa del VHC.
Las combinaciones citadas anteriormente pueden presentarse convenientemente para su uso en forma deuna formulación farmacéutica y así formulaciones farmacéuticas que comprenden una combinación como se hadefinido anteriormente junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable comprenden, por tanto, otro aspecto de lainvención.
Los componentes individuales para su uso en el procedimiento de la presente invención o combinacionesde la presente invención pueden administrarse tanto secuencialmente como simultáneamente en formulacionesfarmacéuticas separadas o combinadas.
En una realización, la presente invención proporciona el uso de un compuesto según la invención descritoen el presente documento para tratar o prevenir infección viral por Flaviviridae en un huésped.
En una realización, la presente invención proporciona el uso de un compuesto según la invención descritoen el presente documento para la fabricación de un medicamento para tratar o prevenir una infección por Flaviviridae viral en un huésped.
En una realización, la presente invención proporciona el uso de un compuesto según la invención descritoen el presente documento para inhibir o reducir la actividad de polimerasa viral en un huésped.
Se apreciará por aquellos expertos en la materia que los compuestos según la presente invención puedenexistir como estereoisómeros (por ejemplo, isómeros ópticos (+ y -), geométricos (cis y trans) y conformacionales(axiales y ecuatoriales). Todos aquellos estereoisómeros están incluidos en el alcance de la presente invención.
Se apreciará por aquellos expertos en la materia que los compuestos según la presente invención pueden contener un centro quiral. Los compuestos de fórmula pueden así existir en forma de dos isómeros ópticosdiferentes (es decir, enantiómeros (+) o (-)). Todos aquellos enantiómeros y mezclas de los mismos que incluyen mezclas racémicas están incluidos dentro del alcance de la invención. El único isómero o enantiómero óptico puedeobtenerse por procedimientos muy conocidos en la técnica tales como HPLC quiral, resolución enzimática y auxiliar quiral.
En una realización, los compuestos de la presente invención se proporcionan en forma de un único enantiómero libre al menos el 95%, al menos el 97% y al menos el 99% del enantiómero correspondiente.
En otra realización, los compuestos de la presente invención están en forma del enantiómero (+) libre almenos el 95% del enantiómero (-) correspondiente.
En otra realización, los compuestos de la presente invención are en forma del enantiómero (+) libre al menos el 97% del enantiómero (-) correspondiente.
En otra realización, los compuestos de la presente invención está en forma del enantiómero (+ )libre almenos el 99% del (-) enantiómero correspondiente.
En otra realización, los compuestos de la presente invención están en forma del enantiómero (-) libre al menos el 95% del enantiómero (+) correspondiente.
En otra realización, los compuestos de la presente invención están en forma del enantiómero (-) libre al menos el 97% del enantiómero (+) correspondiente.
En otra realización, los compuestos de la presente invención están en forma del enantiómero (-) libre al menos el 99% del enantiómero (+) correspondiente.
También se proporcionan sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente invención. Por el término sales farmacéuticamente aceptables de compuestos se indican aquellos derivados de ácidos y basesinorgánicos y orgánicos farmacéuticamente aceptables. Ejemplos de ácidos adecuados incluyen ácidos clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maleico, fosfórico, glicólico, láctico, salicílico, succínico, toluenop-sulfónico, tartárico, acético, trifluoroacético, cítrico, metanosulfónico, fórmico, benzoico, malónico, naftaleno-2sulfónico y bencenosulfónico. Otros ácidos tales como oxálico, aunque no son por sí mismos farmacéuticamenteaceptables, pueden ser útiles como productos intermedios en obtener los compuestos de la invención y sus sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables.
También están incluidas sales derivadas de aminoácidos (por ejemplo, L-arginina, L-Lisina).
Sales derivadas de bases apropiadas incluyen sales de metales alcalinos (por ejemplo, sodio, litio, potasio),metales alcalinotérreos (por ejemplo, calcio, magnesio), amonio, NR4+ (en la que R es alquilo C1-4), colina y trometamina.
Una referencia en lo sucesivo a un compuesto según la invención incluye ese compuesto y sus salesfarmacéuticamente aceptables.
En una realización de la invención, la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de sodio.
En una realización de la invención, la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de litio.
En una realización de la invención, la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de potasio.
En una realización de la invención, la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de trometamina.
En una realización de la invención, la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de L-arginina.
Se apreciará por aquellos expertos en la materia que los compuestos según la presente invención puedenexistir en diferentes formas polimórficas. Como se conoce en la técnica, el polimorfismo es una capacidad de uncompuesto para cristalizar como más de una especie cristalina o “polimórfica” distinta. Un polimorfo es una fasecristalina sólida de un compuesto con al menos dos disposiciones diferentes o formas polimórficas de esa moléculade compuesto en el estado sólido. Formas polimórficas de cualquier compuesto dado se definen por la mismafórmula o composición química y son tan distintas en estructura química como en estructuras cristalinas de doscompuestos químicos diferentes.
Se apreciará adicionalmente por aquellos expertos en la materia que los compuestos según la presenteinvención pueden existir en diferentes formas de solvato, por ejemplo, hidratos. Los solvatos de los compuestos dela invención también pueden formarse cuando las moléculas de disolvente se incorporan en la estructura de red cristalina de la molécula del compuesto durante el procedimiento de cristalización.
A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente es entendido por un experto habitual en la materia a la quepertenece la presente invención. En caso de conflicto, la presente memoria descriptiva, que incluye definiciones,controlará. Además, los materiales, procedimientos y ejemplos son solo ilustrativos y no está previsto que seanlimitantes.
El término “alquilo” representa un resto de hidrocarburo lineal, ramificado o cíclico. Los términos “alquenilo”y “alquinilo” representan un resto de hidrocarburo lineal, ramificado o cíclico que tiene uno o más dobles enlaces otriples enlaces en la cadena. Ejemplos de grupos alquilo, alquenilo y alquinilo incluyen, pero no se limitan a, metilo,etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, terc-pentilo, hexilo, isohexilo, neohexilo, alilo, vinilo, acetilenilo, etilenilo, propenilo, isopropenilo, butenilo, isobutenilo, hexenilo, butadienilo, pentenilo, pentadienilo, hexenilo, hexadienilo, hexatrienilo, heptenilo, heptadienilo, heptatrienilo, octenilo,octadienilo, octatrienilo, octatetraenilo, propinilo, butinilo, pentinilo, hexinilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclohexenilo,ciclohexadienilo y ciclohexilo. Cuando se indica “alquilo”, “alquenilo” y “alquinilo” pueden estar opcionalmentesustituidos tal como en el caso de haloalquilos en los que uno o más átomos de hidrógeno están sustituidos con unhalógeno, por ejemplo, un haluro de alquilo. Ejemplos de haloalquilos incluyen, pero no se limitan a, trifluorometilo,difluorometilo, fluorometilo, triclorometilo, diclorometilo, clorometilo, trifluoroetilo, difluoroetilo, fluoroetilo, tricloroetilo, dicloroetilo, cloroetilo, clorofluorometilo, clorodifluorometilo, diclorofluoroetilo. Aparte de los halógenos, cuando seindique, los grupos alquilo, alquenilo o alquinilo también pueden estar opcionalmente sustituidos con, por ejemplo, oxo, -NRdRe, -CONRdRe, =NO-Re, NRdCORe, carboxi, -C(=NRd)NReRf, azido, ciano, alquiloxi C1-6, alqueniloxi C2-6, alquiniloxi C2-6, -N(Rd)C(=NRe)-NRfRg, hidroxilo, nitro, nitroso, -N(Rh)CONRiRj, S(O)0-2Ra, C(O)Ra, C(O)ORa, NRaC(O)Rb, SO2NRaRb, NRaSO2Rb, NRaSO2NRbRc, CRaN=ORb y/o NRaCOORb en las que Ra-Rj son cada uno independientemente H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 o alquinilo C2-4.
Los términos “cicloalquilo” y “cicloalquenilo” representan un hidrocarburo cíclico de alquilo o alquenilo,respectivamente, y se indica que incluyen restos de hidrocarburo monocíclico (por ejemplo, ciclohexilo), espiro (porejemplo, espiro[2.3]hexanilo), condensado (por ejemplo, biciclo[4.4.0]decanilo) y unido por puentes (por ejemplo, biciclo[2.2.1]heptanilo).
Los términos “alcoxi”, “alqueniloxi” y “alquiniloxi” representan un resto alquilo, alquenilo o alquinilo,respectivamente, que está covalentemente unido al átomo adyacente mediante un átomo de oxígeno. Al igual quelos grupos alquilo, alquenilo y alquinilo, cuando se indique, los grupos alcoxi, alqueniloxi y alquiniloxi también puedenestar opcionalmente sustituidos. Ejemplos incluyen, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, isobutoxi, sec-butoxi, terc-butoxi, pentiloxi, isopentiloxi, neopentiloxi, terc-pentiloxi, hexiloxi, isohexiloxi, trifluorometoxi y neohexiloxi. Los grupos alcoxi, alqueniloxi y alquiniloxi pueden estar opcionalmente sustituidos con, por ejemplo, halógenos, oxo, -NRdRe, -CONRdRe, -NRdCORe, carboxi, -C(=NRd)NReRf, azido, ciano, N(Rd)C(=NRe)NRfRg, hidroxilo, nitro, nitroso, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, -N(Rh)CONRiRj, S(O)0-2Ra, C(O)Ra, C(O)ORa, =NO-Re, NRaC(O)Rb, SO2NRaRb, NRaSO2Rb, NRaSO2NRbRc, CRaN=ORb y/o NRaCOORb en las que Ra-Rj son cada uno independientemente H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 o alquinilo C2-4.
El término “arilo” representa un resto carbocíclico que contiene al menos un anillo tipo bencenoide (es decir,puede ser monocíclico o policíclico), y que cuando se indique puede estar opcionalmente sustituido con uno o mássustituyentes. Ejemplos incluyen, pero no se limitan a, fenilo, tolilo, dimetilfenilo, aminofenilo, anilinilo, naftilo, antrilo, fenantrilo o bifenilo. Los grupos arilo pueden estar opcionalmente sustituidos con, por ejemplo, halógenos, -NRdRe, -CONRdRe, -NRdCORe, carboxi, -C(=NRd)NReRf, azido, ciano, -N(Rd)C(=NRe)NRfRg, hidroxilo, nitro, nitroso, N(Rh)CONRiRj, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alquiloxi C1-6, alqueniloxi C2-6, alquiniloxi C2-6, S(O)0-2Ra, heteroarilo de 5-12 miembros opcionalmente sustituido o heteroaralquilo de 6-18 miembros opcionalmente sustituidoo, heterociclo de 3-12 miembros opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo de 4-18 miembros opcionalmente sustituido, C(O)Ra, C(O)ORa, NRaC(O)Rb, SO2NRaRb, NRaSO2Rb, NRaSO2NRbRc, CRaN=ORb y/o NRaCOORb en las que Ra-Rj son cada uno independientemente H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 o alquinilo C2-4.
El término “aralquilo” representa un grupo arilo unido al átomo adyacente por un alquilo, alquenilo oalquinilo. Al igual que los grupos arilo, cuando se indique, los grupos aralquilo también pueden estar opcionalmentesustituidos. Ejemplos incluyen, pero no se limitan a, bencilo, benzhidrilo, tritilo, fenetilo, 3-fenilpropilo, 2-fenilpropilo,4-fenilbutilo y naftilmetilo. Cuando se indique, los grupos aralquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con, por ejemplo, halógenos, -NRdRe, -CONRdRe, -NRdCORe, carboxi, -C(=NRd)NReRf, azido, ciano, -N(Rd)C(=NRe)NRfRg, hidroxilo, nitro, nitroso, -N(Rh)CONRiRj, alquilo C1-6, alquenilo C1-6, alquinilo C2-6, alquiloxi C1-6, alqueniloxi C2-6, alquiniloxi C2-6, S(O)0-2Ra, heteroarilo de 5-12 miembros opcionalmente sustituido o, heteroaralquilo de 6-18miembros opcionalmente sustituido o heterociclo de 3-12 miembros opcionalmente sustituido, heterocicloalquilo de4-18 miembros opcionalmente sustituido, C(O)Ra, C(O)ORa, NRaC(O)Rb, SO2NRaRb, NRaSO2Rb, NRaSO2NRbRc, CRaN=ORb y/o NRaCOORb en las que Ra-Rj son cada uno independientemente H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 o
5 10
25 30 35 40
45 50
alquinilo C2-4.
El término “heterociclo” representa un resto opcionalmente sustituido, no aromático, saturado o parcialmente saturado en el que dicho resto cíclico está interrumpido por al menos un heteroátomo seleccionado deoxígeno (O), azufre (S) o nitrógeno (N). Los heterociclos pueden ser anillos monocíclicos o policíclicos. Ejemplosincluyen, pero no se limitan a, azetidinilo, dioxolanilo, morfolinilo, morfolino, oxetanilo, piperazinilo, piperidilo, piperidino, ciclopentapirazolilo, ciclopentaoxazinilo, ciclopentafuranilo. Cuando se indique, los grupos heterocíclicospueden estar opcionalmente sustituido con, por ejemplo, halógenos, oxo, -NRdRe, -CONRdRe, =NO-Re, -NRdCORe, carboxi, -C(=NRd)NReRf, azido, ciano, -N(Rd)C(=NRe)NRfRg, hidroxilo, nitro, nitroso, -N(Rh)CONRiRj, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, aralquilo C7-12, arilo C6-12, alquiloxi C1-6, alqueniloxi C2-6, alquiniloxi C2-6, S(O)0-2Ra, arilo C6-10, ariloxi C6-10, aril C7-10-alquilo, aril C6-10-alquiloxi C1-10, C(O)Ra, C(O)ORa, NRaC(O)Rb, SO2NRaRb, NRaSO2Rb, NRaSO2NRbRc, CRaN=ORb y/o NRaCOORb en las que Ra-Rj son cada uno independientemente H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 o alquinilo C2-4.
El término “heterociclo-alquilo” representa un grupo heterociclo opcionalmente sustituido unido al átomoadyacente por un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo. Se entiende que en un resto heterociclo-alquilo de 5-18 miembros, 5-18 miembros representan los átomos que están presentes en tanto el resto de heterociclo como el grupo alquilo, alquenilo o alquinilo. Por ejemplo, los siguientes grupos están englobados por un heterociclo-alquilo de7 miembros (* representa el punto de unión):
Cuando se indique, los grupos heterociclo-alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos con, por ejemplo,halógenos, oxo, -NRdRe, -CONRdRe, -NRdCORe, carboxi, -C(=NRa)NReRf, azido, ciano, -N(Rd)C(=NRe)NRfRg, hidroxilo, nitro, nitroso, -N(Rh)CONRiRj, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alquiloxi C1-6, alqueniloxi C2-6, alquiniloxi C2-6, S(O)0-2Ra, arilo C6-10, ariloxi C6-10, aril C7-10-alquilo, aril C6-10-alquiloxi C1-10, C(O)Ra, C(O)ORa, NRaC(O)Rb, =NO-Re, SO2NRaRb, NRaSO2Rb, NRaSO2NRbRc, CRaN=ORb y/o NRaCOORb en las que Ra-Rj son cada uno independientemente H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 o alquinilo C2-4.
El término “heteroarilo” representa un resto cíclico aromático opcionalmente sustituido en el que dicho resto cíclico está interrumpido por al menos un heteroátomo seleccionado de oxígeno (O), azufre (S) o nitrógeno (N). Losheteroarilos pueden ser anillos monocíclicos o policíclicos. Ejemplos incluyen, pero no se limitan a, azepinilo,aziridinilo, azetilo, diazepinilo, ditiadiazinilo, dioxazepinilo, ditiazolilo, furanilo, isooxazolilo, isotiazolilo, imidazolilo, oxadiazolilo, oxiranilo, oxazinilo, oxazolilo, pirazinilo, piridazinilo, pirimidinilo, piridilo, piranilo, pirazolilo, pirrolilo, pirrolidinilo, tiatriazolilo, tetrazolilo, tiadiazolilo, triazolilo, tiazolilo, tienilo, tetrazinilo, tiadiazinilo, triazinilo, tiazinilo, tiopiranilo, furoisoxazolilo, imidazotiazolilo, tienoisotiazolilo, tienotiazolilo, imidazopirazolilo, pirrolopirrolilo, tienotienilo, tiadiazolopirimidinilo, tiazolotiazinilo, tiazolopirimidinilo, tiazolopiridinilo, oxazolopirimidinilo, oxazolopiridilo, benzoxazolilo, bencisotiazolilo, benzotiazolilo, imidazopirazinilo, purinilo, pirazolopirimidinilo, imidazopiridinilo, bencimidazolilo, indazolilo, benzoxatiolilo, benzodioxolilo, benzoditiolilo, indolizinilo, indolinilo, isoindolinilo, furopirimidinilo, furopiridilo, benzofuranilo, isobenzofuranilo, tienopirimidinilo, tienopiridilo, benzotienilo, benzoxazinilo, benzotiazinilo, quinazolinilo, naftiridinilo, quinolinilo, isoquinotinilo, benzopiranilo, piridopiridazinilo y piridopirimidinilo. Cuando se indique, los grupos heteroarilo pueden estar opcionalmente sustituidos con, por ejemplo, halógenos, -NRdRe, -CONRdRe, -NRdCORe, carboxi, -C(=NRd)NReRf, azido, ciano, -N(Rd)C(=NRe)NRfRg, hidroxilo, nitro, nitroso, -N(Rh)CONRiRj, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alquiloxi C1-6, alqueniloxi C2-6, alquiniloxi C1-6, S(O)0-2Ra, arilo C6-10, ariloxi C6-10, aril C7-10-alquilo, aril C6-10-alquiloxi C1-10, C(O)Ra, C(O)ORa, NRaC(O)Rb, SO2NRaRb, NRaSO2Rb, NRaSO2NRbRc, CRaN=ORb y/o NRaCOORb en la que Ra-Rj son cada uno independientemente H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 o alquinilo C2-4.
El término “heteroaralquilo” representa un grupo heteroarilo opcionalmente sustituido unido al átomo adyacente por un grupo alquilo, alquenilo o alquinilo. Cuando se indique, los grupos heteroaralquilo pueden estaropcionalmente sustituidos con, por ejemplo, halógenos, -NRdRe, -CONRdRe, -NRdCORe, carboxi, -C(=NRd)NReRf, azido, ciano, -N(Rd)C(=NRe)NRfRg, hidroxilo, nitro, nitroso, -N(Rh)CONRiRj, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alquiloxi C1-6, alqueniloxi C2-6, alquiniloxi C1-6, S(O)0-2Ra, arilo C6-10, ariloxi C6-10, aril C7-10-alquilo, aril C6-10-alquiloxi C110, C(O)Ra, C(O)ORa, NRaC(O)Rb, SO2NRaRb, NRaSO2Rb, NRaSO2NRbRc, CRaN=ORb y/o NRaCOORb en las que Ra-Rj son cada uno independientemente H, alquilo C1-4, alquenilo C2-4 o alquinilo C2-4. Se entiende que en un restoheteroaralquilo de 6-18 miembros, 6-18 miembros representa los átomos que están presentes en tanto el resto de heterociclo como los grupos alquilo, alquenilo o alquinilo. Por ejemplo, los siguientes grupos están englobados porun heteroaralquilo de 7 miembros (* representa el punto de unión):
“Átomo de halógeno” es específicamente un átomo de flúor, átomo de cloro, átomo de bromo o átomo de yodo.
El término “amidino” representa -C(=NRd)NReRf en la que Rd, Re y Rf están seleccionados cada uno independientemente de H, alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, arilo C6-12 y aralquilo C7-12, o Re y Rf se toman conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo de 4 a 10 miembros opcionalmentesustituido o un heteroarilo de 5-12 miembros opcionalmente sustituido.
El término “guanidino” representa -N(Rd)C(=NRe)NRfRg en la que Rd, Re, Rf y Rg están seleccionados cada uno independientemente de H, alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, arilo C6-12 y aralquilo C7-12, o Rf y Rg se toman conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo de 4 a 10 miembros opcionalmente sustituido o un heteroarilo de 5-12 miembros opcionalmente sustituido.
El término “amido” representa -CONRdRe y -NRdCORe en las que Rd y Re están seleccionados cada uno independientemente de H, alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, arilo C6-12 y aralquilo C7-12, o Rd y Re se toman conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos (o el átomo de nitrógeno y grupo CO en el caso de -NRdCORe)para formar un heterociclo de 4 a 10 miembros opcionalmente sustituido o un heteroarilo de 5-12 miembros opcionalmente sustituido.
El término “amino” representa un derivado de amoniaco obtenido sustituyendo uno o más átomos dehidrógeno e incluye -NRdRe en la que Rd y Re están seleccionados cada uno independientemente de H, alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, arilo C6-12 y aralquilo C7-12, o Rd y Re se toman conjuntamente con el nitrógeno al queestán unidos para formar un heterociclo de 4 a 10 miembros opcionalmente sustituido o un heteroarilo de 5-12miembros opcionalmente sustituido.
El término “sulfonamido” representa SO2NRdRe, y -NRdSO2Re en las que Rd y Re están seleccionados cada uno independientemente de H, alquilo C1-10, alquenilo C2-10, alquinilo C2-10, arilo C6-12 y aralquilo C7-12, o Rd y Re se toman conjuntamente con el nitrógeno al que están unidos para formar un heterociclo de 4 a 10 miembros opcionalmente sustituido o un heteroarilo de 5-12 miembros opcionalmente sustituido.
Cuando haya un átomo de azufre presente, el átomo de azufre puede estar en diferentes niveles deoxidación, es decir, S, SO o SO2. Todos aquellos niveles de oxidación están dentro del alcance de la presente invención.
El término “independientemente” significa que un sustituyente puede ser el mismo o una definición diferentepara cada artículo.
Los términos “huésped” o “paciente” significan hombre o mujer humano, por ejemplo, niño, adolescente o adulto.
Se apreciará que la cantidad de un compuesto de la invención requerida para su uso en el tratamientovariará no solo con el compuesto particular seleccionado, sino también con la vía de administración, la naturaleza dela afección para la que se requiere tratamiento y la edad y condición del paciente y será por último lugar a criterio delmédico adjunto o veterinario. En general, sin embargo, una dosis adecuada estará en el intervalo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 750 mg/kg de peso corporal por día, por ejemplo, en el intervalo de 0,5 a60 mg/kg/día, o, por ejemplo, en el intervalo de 1 a 20 mg/kg/día.
La dosis deseada puede presentarse convenientemente en una dosis única o como dosis divididas administradas a intervalos apropiados, por ejemplo, como dos, tres, cuatro o más dosis por día.
El compuesto se administra convenientemente en forma de dosificación unitaria; por ejemplo, que contiene 10 a 1500 mg, convenientemente 20 a 1000 mg, lo más convenientemente 50 a 700 mg de principio activo por forma de dosificación unitaria.
Idealmente, el principio activo debe administrarse para lograr concentraciones en plasma pico del compuesto activo de aproximadamente 1 a aproximadamente 75 μM, aproximadamente 2 a 50 μM, aproximadamente 3 a aproximadamente 30 μM. Esto puede lograrse, por ejemplo, por la inyección intravenosa deuna disolución al 0,1 al 5% del principio activo, opcionalmente en solución salina, o por vía oral administrada como un bolo que contiene aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg del principio activo. Pueden mantenerseniveles en sangre deseables por una infusión continua proporcionando aproximadamente 0,01 a aproximadamente5,0 mg/kg/hora o por infusiones intermitentes que contienen aproximadamente 0,4 a aproximadamente 15 mg/kg delprincipio activo.
Si los compuestos de la presente invención o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos se usanen combinación con un segundo agente terapéutico activo contra el mismo virus, la dosis de cada compuesto puede ser tanto la misma como diferenciarse de la de cuando el compuesto se usa solo. Dosis apropiadas serán fácilmente apreciadas por aquellos expertos en la materia.
Aunque es posible que, para su uso en terapia, un compuesto de la invención pueda administrarse como elproducto químico en bruto, es preferible presentar el principio activo como una composición farmacéutica. Así, lainvención proporciona además una composición farmacéutica que comprende compuestos de la presente invención
o un derivado farmacéuticamente aceptable de los mismos junto con uno o más vehículos farmacéuticamenteaceptables y, por tanto, opcionalmente, otros componentes terapéuticos y/o profilácticos. El (Los) vehículo(s) debe(n) ser “aceptable(s)” en el sentido de ser compatibles con los otros componentes de formulación y no perjudicial(es) para el receptor de los mismos.
Composiciones farmacéuticas incluyen aquellas adecuadas para administración oral, rectal, nasal, tópica(incluyendo bucal y sub-lingual), transdérmica, vaginal o parenteral (incluyendo intramuscular, sub-cutánea yintravenosa) o en una forma adecuada para administración por inhalación o insuflación. Las formulaciones puedenpresentarse convenientemente, cuando corresponda, en unidades de dosificación discretas y pueden prepararse porcualquiera de los procedimientos muy conocidos en la técnica de la farmacia. Todos los procedimientos incluyen laetapa de poner en asociación el compuesto activo con vehículos líquidos o vehículos sólidos finamente divididos oambos y luego, si fuera necesario, moldear el producto en la formulación deseada.
Las composiciones farmacéuticas adecuadas para administración por vía oral pueden presentarseconvenientemente como unidades discretas tales como cápsulas, sellos o comprimidos, cada uno de los cualescontiene una cantidad predeterminada del principio activo; como un polvo o gránulos; como una disolución, unasuspensión o como una emulsión. El principio activo también puede presentarse como un bolo, electuario o pasta.Los comprimidos y cápsulas para administración por vía oral pueden contener excipientes convencionales talescomo aglutinantes, cargas, lubricantes, disgregantes o agentes humectantes. Los comprimidos pueden recubrirse según procedimientos muy conocidos en la técnica. Preparaciones líquidas orales pueden estar en forma de, porejemplo, suspensiones, disoluciones, emulsiones, jarabes o elixires acuosos o aceitosos, o pueden presentarsecomo un producto seco para constitución con agua u otro vehículo adecuado antes de uso. Tales preparacioneslíquidas pueden contener aditivos convencionales tales como agentes de suspensión, agentes emulsionantes, vehículos no acuosos (que pueden incluir aceites comestibles), o conservantes.
Los compuestos según la invención también pueden formularse para administración parenteral (por ejemplo, mediante inyección, por ejemplo inyección en bolo o infusión continua) y pueden presentarse en forma dedosis unitaria en ampollas, jeringuillas precargadas, infusión de volumen pequeño o en recipientes de múltiples dosiscon un conservante añadido. Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, disoluciones oemulsiones en vehículos aceitosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación tales como agentes desuspensión, estabilizantes y/o dispersantes. Alternativamente, el principio activo puede estar en forma de polvo,obtenido por aislamiento aséptico de sólido estéril o por liofilización a partir de disolución, para constitución con unvehículo adecuado, por ejemplo, agua libre de pirógenos estéril, antes de uso.
Para administración tópica a la epidermis, los compuestos según la invención pueden formularse comopomadas, cremas o lociones, o como un parche transdérmico. Tales parches transdérmicos pueden contenerpromotores de la penetración tales como linalol, carvacrol, timol, citral, mentol y t-anetol. Las pomadas y cremaspueden formularse, por ejemplo, con una base acuosa o aceitosa con la adición de agentes espesantes y/ogelificantes adecuados. Las lociones pueden formularse con una base acuosa o aceitosa y en general tambiéncontendrán uno o más emulsionantes, estabilizantes, dispersantes, agentes de suspensión, espesantes o colorantes.
Composiciones adecuadas para administración tópica en la boca incluyen pastillas para chupar quecomprenden principio activo en una base aromatizada, normalmente sacarosa y goma arábiga o tragacanto; pastillasque comprenden el principio activo en una base inerte tal como gelatina y glicerina o sacarosa y goma arábiga; y enjuagues bucales que comprenden el principio activo en un vehículo líquido adecuado.
Composiciones farmacéuticas adecuadas para administración rectal en las que el vehículo es un sólido sepresentan, por ejemplo, como supositorios de dosis unitaria. Vehículos adecuados incluyen manteca de cacao y otros materiales comúnmente usados en la materia y los supositorios pueden formarse convenientemente por lamezcla del compuesto activo con el (los) vehículo(s) ablandado(s) o fundido(s), seguido de enfriamiento y moldeo enmoldes.
Composiciones adecuadas para administración vaginal pueden presentarse como pesarios, tampones,cremas, geles, pastas, espumas o esprays que contienen además del principio activo tales vehículos como seconocen en la técnica por ser apropiados.
Para administración intranasal, los compuestos de la invención pueden usarse como un espray líquido opolvo dispersable o en forma de gotas. Las gotas pueden formularse con una base acuosa o no acuosa quecomprende también uno o más dispersantes, solubilizantes o agentes de suspensión. Los esprays líquidos se administran convenientemente de envases presurizados.
Para administración por inhalación, los compuestos según la invención se administran convenientemente deun insuflador, nebulizador o un envase presurizado u otro medio conveniente de administración de un espray deaerosol. Los envases presurizados pueden comprender un propulsor adecuado tal como diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosolpresurizado, la unidad de dosificación puede determinarse proporcionando una válvula para administrar una cantidad dosificada.
Alternativamente, para administración por inhalación o insuflación, los compuestos según la invenciónpueden tomar la forma de una composición en polvo seco, por ejemplo, una mezcla en polvo del compuesto y una base de polvo adecuada tal como lactosa o almidón. La composición en polvo puede presentarse en forma dedosificación unitaria en, por ejemplo, cápsulas o cartuchos o, por ejemplo, gelatina o envases alveolados de los quepuede administrarse el polvo con la ayuda de un inhalador o insuflador.
Si se desea pueden emplearse las formulaciones anteriormente descritas adaptadas para dar la liberaciónsostenida del principio activo.
Un compuesto de fórmula (I) puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (II):
con un compuesto de fórmula:
10 bajo condiciones de acoplamiento de Sonogashira convencionales; en la que: X es como se ha definido anteriormente, por ejemplo, -NR6-CO-R5, R1, R6 y R5 son como se definen en el presente
documento, Pg1 es OH o un grupo protector de carboxilo, Hal es Cl, Br o I (por ejemplo, Br), En otra realización, Pg1 es metoxi o terc-butoxi. 15 En otra realización, Pg1 es metoxi. La reacción de acoplamiento de Sonogashira es un procedimiento bien establecido para producircompuestos que contienen acetileno. Condiciones para tal acoplamiento son muy conocidas en la técnica y puedenencontrarse, por ejemplo, en los ejemplos de la presente solicitud en Yamaguchi y col. (Synlett 1999, nº 5, 549-550)
o en Tykwinski y col., Angew. Chem. Int. Ed. 2003, 42, 1566-1568.
20 La presente invención también incluye productos intermedios que pueden ser útiles en la síntesis de los compuestos de fórmula (I). Ciertos productos intermedios se representan por la fórmula W
en la que: R2, H o grupo protector de amino (por ejemplo, Boc (terc-butoxicarbonilo), Cbz (benciloxicarbonilo)) y Pg1 es OH o
25 un grupo protector de carboxilo. En otra realización, Pg1 es metoxi o terc-butoxi. En otra realización, Pg1 es metoxi. En otra realización, R2 es H. En otra realización, R2 es Boc.
30 Productos intermedios específicos incluyen, pero no se limitan a, los compuestos enumerados en la Tabla
A:
Tabla A
Estructura
Nombre Nº
éster metílico de ácido 3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-5-yodo-tiofeno-2-carboxílico
3a
éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(4-[1,2,3]triazol-1-ilciclohexilamino)-tiofeno-2-carboxílico
4a
éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(4-[1,2,4]triazol-1-ilciclohexilamino)-tiofeno-2-carboxílico
5a
éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(tercbutoxicarbonil)amino-tiofeno-2-carboxílico 9a
éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-amino-tiofeno-2carboxílico 9b
éster metílico de ácido 3-[(trans-4-hidroxiciclohexil)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-5-yodo-tiofeno-2-carboxílico
10a
éster metílico de ácido 3-[(trans-4-hidroxiciclohexil)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-5-trimetil-silaniletinil-tiofeno-2-carboxílico
10b
Según otro aspecto de la presente invención se proporciona un procedimiento para la preparación de compuestos
de fórmula I en la que X que comprende usar un producto intermedio de fórmula 3a
o 10a o 10b. Según otro aspecto de la presente invención se proporciona un procedimiento para la preparación de
compuestos de fórmula I en la que X es
que comprende usar un producto intermedio de fórmula 3a o 10a o 10b.
Según otro aspecto de la presente invención se proporciona un procedimiento para la preparación decompuestos de fórmula I en la que R1 es 3,3-dimetil-but-1-inilo que comprende usar un producto intermedio defórmula 9a o 9b.
Según otro aspecto de la presente invención se proporciona un procedimiento para la preparación decompuestos de fórmula I en la que R1 es 3,3-dimetil-but-1-inilo y R6 es 4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexilo que comprende usar un producto intermedio de fórmula 4a.
Según otro aspecto de la presente invención se proporciona un procedimiento para la preparación decompuestos de fórmula I en la que R1 es 3,3-dimetil-but-1-inilo y R6 es 4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexilo que comprende usar un producto intermedio de fórmula 5a.
Los siguientes esquemas generales y ejemplos se proporcionan para ilustrar diversas realizaciones de lapresente invención y no deben considerarse limitantes en el alcance. Se apreciará por aquellos expertos en lamateria que otros compuestos de la presente invención pueden obtenerse sustituyendo los reactantes y/o condiciones de operación genéricamente o específicamente descritos usados en los siguientes ejemplos. Losprocedimientos de síntesis para obtener compuestos de tiofeno también se describen en las solicitudes de patentepatentes de de EE.UU. nº 6.881.741, USSN 10/730.272 presentada el 9 de diciembre de 2003, USSN 11/042.442presentada el 26 de enero de 2005, USSN 11/433.749 presentada el 15 de mayo de 2006, WO02/100851, US 20040116509, WO2004/052885, US 2005-0009804, WO2004/052879 y US 2004-0192707. En los documentos WO2006/072347 y documento WO 2006/072348 también se desvelan compuestos de tiofenoalquinilo.
En los ejemplos anteriores y en los siguientes ejemplos, todas las temperaturas se exponen sin corregir engrados Celsius; y, a menos que se indique lo contrario, todas las partes y porcentajes son en peso. Las siguientes abreviaturas pueden usarse del siguiente modo: Boc terc-butoxicarbonilo DCC 1,3-diciclohexilcarbodiimida DCE 1,2-dicloroetano DCM diclorometano DIPEA N,N-diisopropiletilamina DMF N,N-dimetilformamida EtOAc acetato de etilo Hal halógeno LAH hidruro de litio y aluminio MeOH metanol TFA ácido trifluoroacético THF tetrahidrofurano LDA diisopropilamida de litio CCF cromatografía en capa fina MR matraz redondo Las purificaciones por HPLC se realizaron todas usando una columna C18 de fase inversa empaquetadacon partículas de 5 μm. El diámetro de columna fue 19 mm y la longitud fue 100 mm. El eluyente fue un gradiente
apropiado de acetonitrilo y agua con una concentración de HCl 3 mM. Ejemplo 1:
Preparación de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico
Etapa I Una suspensión de éster metílico de ácido 3-amino-5-bromo-tiofeno-2-carboxílico (17,0 g, 72,0 mmoles) en
THF seco (21 ml) se trata con 1,4-ciclohexanodionamonoetilencetal (11,3 mg, 72,0 mmoles), seguido de dicloruro de
dibutil-litio (1,098 g, 3,6 mmoles). Después de 5 min se añade fenilsilano (9,74 ml, 79,2 mmoles) y la mezcla de
10 reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente. Después de la concentración, el residuo se disuelve en EtOAc, se lava con NaHCO3, luego salmuera. La fase orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra. El material en bruto se diluye en hexano (500 ml). Después de la filtración, las aguas madres se evaporan a sequedad dando éster metílico de ácido 5-bromo-3-(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilamino)-tiofeno-2-carboxílico (24,79 g, rendimiento del 92%). Ref: documento WO2004/052885
15 Etapa II
A- Preparación de cloruro de ácido trans-4-metilciclohexilocarboxílico:
Se añade gota a gota cloruro de oxalilo (2 M en DCM, 117 ml) a una suspensión de ácido trans-4
metilciclohexilocarboxílico (16,6 g, 117 mmoles) en DCM (33 ml) y DMF (0,1 ml), y la mezcla de reacción se agita 3 h
a temperatura ambiente. Se elimina el DCM a presión reducida y el residuo se co-evapora con DCM. El residuo se
20 disuelve en tolueno para preparar una disolución 1 M.
B- Preparación del compuesto diana:
La disolución 1 M de cloruro de ácido trans-4-metilciclohexilocarboxílico se añade a una disolución de éster
metílico de ácido 5-bromo-3-(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilamino)-tiofeno-2-carboxílico (24,79 g, 65 mmoles) en
tolueno (25 ml) seguido de piridina (5,78 ml, 71,5 mmoles). La mezcla resultante se agita entonces durante 16 h a
25 reflujo. La mezcla de reacción se diluye con tolueno (60 ml) y se enfría a 5 ºC. Después de la adición de piridina (12 ml) y MeOH (5,6 ml), la mezcla se agita 2 h a 5 ºC. La suspensión blanca se separa por filtración y el tolueno seañade a las aguas madres. La fase orgánica se lava con 10% de ácido cítrico, NaHCO3 sat ac., se seca (Na2SO4) yse concentra. El residuo se tritura en hexanol hirviendo (1500 ml). La mezcla de reacción se deja enfriar hastatemperatura ambiente. El matraz de reacción se sumerge en baño de hielo y se agita durante 30 min; se separa
30 sólido blanco por filtración y se lava con hexano frío (225 ml). El sólido se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice usando 20% de EtOAc:hexano como eluyente para proveer el compuesto final éster metílico de ácido 5bromo-3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (10,5 g,
10 15
20 25
30 35
32%).
Etapa III
Se disuelve éster metílico de ácido 5-bromo-3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (8,6 g, 17 mmoles) en tetrahidrofurano (100 ml) y se trata con disolución deHCl 3 N (50 ml). La reacción se agita a 40 ºC durante 3 h. La mezcla de reacción se evapora a presión reducida. El residuo se disuelve en EtOAc y se lava con disolución sat. ac. de NaHCO3. La fase orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra dando éster metílico de ácido 5-bromo-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)(4-oxo-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico como un sólido (7,4 g, 95%).
Etapa IV
A una disolución fría (0 ºC) de éster metílico de ácido 5-bromo-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(4-oxociclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (5,9 g, 12,9 mmoles) en 50 ml de MeOH bajo una atmósfera de N2 se añade en porciones NaBH4 (250 mg, 6,4 mmoles) (aprox. 30 min). Después de completarse la adición y de comprobarse para la completitud de reacción por CCF (hexano:EtOAc 1:1) se añaden 10 ml de 2% de HCl y se agita durante 15min. La mezcla de reacción se concentra a vacío a sequedad. La mezcla de reacción se recupera con agua (25 ml) y se extrae con EtOAC. Las fases orgánicas se combinan y se secan sobre MgSO4 y se concentran a sequedad. El residuo se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice usando EtOAc:hexano (1:1) como eluyente paraobtener éster metílico de ácido 5-bromo-3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexano-carbonil)-amino]tiofeno-2-carboxílico (4,5 g, rendimiento del 77%) como un sólido.
Etapa V
A una disolución de los compuestos éster metílico de ácido 5-bromo-3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (500 mg, 1,09 mmoles) y 3,3-dimetil-but-1-ino (385 mg, 4,69 mmoles) en DMF (0,5 ml) se añaden trietilamina (1,06 ml) y tris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (70 mg, 0,08 mmoles) y la mezcla de reacción se agita a condiciones de reflujo durante 16 h bajo una atmósfera de N2. Se eliminan DMF y trietilamina a presión reducida y el residuo se reparte entre agua y acetato de etilo. La fase orgánicase separa, se seca (Na2SO4), se concentra y el residuo se purifica por cromatografía en columna usando acetato de etilo y hexano (1:2) como eluyente para obtener éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-hidroxiciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico como un sólido, 330 mg (66%).
Etapa VI
Se disuelve éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (0,10 g, 0,22 mmoles) en una mezcla 3:2:1 de THF:metanol:H2O (5,0 ml) y se trata con una disolución 1 N de LiOH·H2O (0,65 ml, 0,65 mmoles). Después de 2 h de agitación a 60 ºC, la mezcla de reacción se concentra a presión reducida sobre un evaporador rotatorio. La mezcla se reparte entreacetato de etilo y agua. La fase de agua se acidifica usando HCl 0,1 N. La fase de EtOH se separa y se seca sobreNa2SO4. Filtración y eliminación del disolvente a presión reducida sobre un evaporador rotatorio seguido de purificación por cromatografía en columna usando metanol y diclorometano (1:9) como eluyente para obtener ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico como un sólido, 30 mg (30%). ESI-(M-H): 444,3.
Ejemplo 2:
Preparación de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metoxi-ciclohexil)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico
Etapa I:
A una disolución de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (0,200 g, 0,435 mmoles) en DMF seca (2,0 ml) se añadeyodometano (0,136 ml, 2,18 mmoles), la mezcla se enfría a 0 ºC y se añade NaH (suspensión al 60% en aceite, 35 mg, 0,87 mmoles) en porciones durante 5 min. La mezcla se agita a 0 ºC durante 1 h 40 min y se inactiva mediantela adición de agua y se acidifica con HCl 2 N. La mezcla se diluye con acetato de etilo y se lava con salmuera. Lafase orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4, se concentra a presión reducida. El residuo se purifica porcromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con 0�50% de acetato de etilo en hexano dando éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metoxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]tiofeno-2-carboxílico (65 mg, 32%).
Etapa II: Se hidroliza éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metoxi-ciclohexil)-(trans-4-metil
5 ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico de la Etapa I como se ha descrito previamente (Esquema 1, Etapa VI) dando ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metoxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]tiofeno-2-carboxílico como un sólido (65 mg, 32%). ESI-(M-H): 458,3.
Ejemplo 3:
Ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]10 tiofeno-2-carboxílico
Etapa I
Una suspensión de éster metílico de ácido 3-amino-tiofeno-2-carboxílico (5,0 g, 31,85 mmoles) en THFseco (9 ml) se trata con 1,4-ciclohexanodionamonoetilencetal (5,0 g, 32,05 mmoles), seguido de dicloruro de dibutil
15 litio (482 mg, 1,59 mmoles). Después de 5 min se añade fenilsilano (4,3 ml, 34,96 mmoles) y la mezcla de reacción se agita durante la noche a temperatura ambiente. Después de la concentración, el residuo se disuelve en EtOAc y se lava con NaHCO3 seguido de salmuera. La fase orgánica se separa, se seca (Na2SO4), se filtra y se concentra. El residuo se purifica por cromatografía en columna usando 30% de acetato de etilo en hexano como eluyente dandoéster metílico de ácido 3-(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilamino)-tiofeno-2-carboxílico (4,5 g, rendimiento del 47%).
20 Procedimiento alternativo:
Se disuelve éster metílico de ácido 3-amino-tiofeno-2-carboxílico (1 eq.) en diclorometano seguido de 1,4ciclohexanodionamonoetilenacetal (2 eq.) para obtener una disolución ligeramente amarilla. Esta disolución se añade a la suspensión de NaBH(OAc)3 (2,2 eq.) en diclorometano. Se añade gota a gota ácido acético (2,4 eq.)durante un periodo de 15 min. La suspensión resultante se agita a 20-25 ºC bajo N2 durante 24 h. La reacción se
25 inactiva añadiendo agua y se agita durante 1 h. La fase de diclorometano se separa, se trata de nuevo con agua y se agita durante otra 1 h. La fase de diclorometano se separa y se añade a una disolución saturada de NaHCO3, se agita a 20-25 ºC durante 20 min. Algo de los sólidos residuales blancos se filtran y luego la fase orgánica se separa, se seca (Na2SO4) y se evapora. Se añade metanol al residuo y se evapora a sequedad. El residuo se recoge en metanol y se agita durante 2 h a 0 ºC. La suspensión se filtra a vacío y la torta filtrada resultante se lava con metanolfrío. El sólido blanco se seca a vacío a 35-40 ºC durante aproximadamente 20 h proporcionando el compuesto deltítulo.
Etapa II
A- Preparación de cloruro de ácido trans-4-metilciclohexilcarboxílico:
Se añade gota a gota cloruro de oxalilo (2 M en diclorometano, 17 ml) a una suspensión de ácido trans-4metilciclohexilcarboxílico (2,3 g, 16,2 mmoles) en diclorometano (5 ml) y DMF (0,1 ml). La mezcla de reacción seagita durante 3 h a temperatura ambiente. Los volátiles se eliminan a presión reducida para obtener el cloruro deácido en bruto que se usa directamente para la siguiente reacción.
B- Se añade cloruro de ácido trans-4-metilciclohexilcarboxílico a una disolución de éster metílico de ácido 3-(1,4dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilamino)-tiofeno-2-carboxílico (2,4 g, 8,08 mmoles) en tolueno (18 ml) seguido de piridina (0,7ml). La mezcla resultante se agita entonces durante 16 h a reflujo. La mezcla de reacción se diluye con tolueno (7ml) y se enfría a 5 ºC. Después de la adición de piridina (1,5 ml) y MeOH (0,8 ml), la mezcla se agita 2 h a 5 ºC. Elsólido blanco se filtra y se lava con tolueno. El filtrado se lava con 10% de ácido cítrico, NaHCO3 ac., se seca (Na2SO4) y se concentra. El sólido se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice usando 20% deEtOAc:hexano como eluyente para obtener éster metílico de ácido 3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (2,3 g, 68%).
Procedimiento alternativo:
A una disolución de ácido trans-4-metilciclohexilcarboxílico (1,8 eq.) en tolueno bajo nitrógeno se añadeDMF anhidra. La mezcla de reacción se agita y se añade cloruro de tionilo (2,16 eq.) durante 3-5 min. La mezcla seagita entonces durante 3 h a ta. Cuando se completa la reacción se añade tolueno a la mezcla de reacción. Ladisolución se evapora entonces bajo presión de nitrógeno reducida para reducir a la mitad su volumen. La disoluciónse disuelve en tolueno para obtener una disolución de cloruro de ácido 1 N.
Se añaden éster metílico de ácido 3-(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ilamino)-tiofeno-2-carboxílico (1 eq.) ypiridina (2 eq.) a la disolución de cloruro de ácido (1 N). La mezcla de reacción se agita a reflujo durante 15 h. Una vez se ha completado la reacción, la mezcla de reacción se enfría a temperatura ambiente y luego se añadenmetanol y tolueno a la misma. La mezcla de reacción se agita durante 1 h a ta y se añade una disolución acuosasaturada de NaHCO3. La fase orgánica se separa, se seca (Na2SO4) y se evapora a aproximadamente 4 volúmenesde disolvente. A la disolución se añaden 4 volúmenes de heptano mientras se agita. El matraz de reacción sesumerge en un baño de hielo y se agita durante 120 min; se separa un sólido beis por filtración y se lava con heptano frío, luego se seca durante la noche en la estufa de vacío para obtener el compuesto del título.
Etapa III
Se añade gota a gota n-BuLi (2 eq.) durante 10 min a una disolución fría (-40 ºC) de diisopropilamina (1 eq.) en THF seco. La mezcla de reacción se agita a la misma temperatura durante 30 min. Entonces se añade gota agota una disolución de éster metílico de ácido 3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metil-ciclohexano-carbonil)amino]-tiofeno-2-carboxílico (1 eq.) en THF (35 min) manteniendo la temperatura interna a aproximadamente -40 ºC.La mezcla de reacción se agita durante 30 min y se añade gota a gota una disolución de yodo (2 eq.) en THF, seagita durante 30 min a la misma temperatura antes de añadirse una disolución sat. de NH4Cl. La mezcla de reacción se diluye con acetato de etilo y agua. La fase orgánica se separa y se lava con disolución al 5% de tiosulfato desodio. La fase orgánica se separa, se seca (Na2SO4) y se evapora a una suspensión y luego se añade heptano. Lasuspensión se agita a 0 ºC durante 30 min, se filtra y se lava con heptano para obtener éster metílico de ácido 3[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-5-yodo-tiofeno-2-carboxílico.
EM hallada (electropulverización): (M+H): 548,21
Etapa IV
En un MR de 25 ml bajo nitrógeno se toman éster metílico de ácido 3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-5-yodo-tiofeno-2-carboxílico (1 eq.), yoduro de cobre (0,025 eq.) ytris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) (0,01 eq.). Se añaden DMF, trietilamina (2,5 eq.) y 3,3-dimetil-but-1-ino (2 eq.)y la mezcla de reacción se agita a 40 ºC durante 2 h bajo una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se filtra sobre Celite y se lava con acetato de etilo. La disolución se diluye con agua y se extrae 2 veces con acetato de etilo. Lasfases orgánicas se combinan y se lavan 3 veces con agua. La fase orgánica se separa, se seca (Na2SO4), seevapora a aproximadamente 2 ml y luego se añaden 8 ml de heptano. Se evapora a 2-4 ml y se enfría en un bañode hielo. El sólido blanco formado se filtra, se lava con heptano y se seca en estufa para obtener éster metílico deácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2carboxílico.
Etapa V
Se disuelve éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (1 eq.) en tetrahidrofurano y se trata con disolución de HCl 3,6 N.La reacción se agita a 40 ºC durante 5 h. Entonces se añade agua y la mezcla de reacción se enfría a temperaturaambiente. La mezcla de reacción se extrae con acetato de etilo (2 × 50 ml). Los extractos combinados se lavan con 25 ml de NaHCO3 saturado acuoso y 2 × 50 ml de agua. La fase orgánica se concentra dando un aceite denso y seañaden 50 ml de heptano a la mezcla para precipitar el compuesto deseado que se filtra dando el éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(4-oxo-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico.
30 35
Etapa VI
Se disuelve éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(4-oxociclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (1 eq.) en THF. Se añade agua a la mezcla de reacción y se enfría a -25 ºC.Se añade en porciones NaBH4 (0,5 eq.) manteniendo la temperatura por debajo de -20 ºC. La mezcla se agita durante 2 h a -25 ºC, entonces se añade HCl 2 N y la disolución se calienta hasta temperatura ambiente. Las fases se separan y la fase acuosa se lava con EtOAC. Las fases orgánicas se combinan y se lavan con salmuera y sesecan sobre Na2SO4 y se concentran a sequedad dando éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(4hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico como una mezcla 93:7 de isómeros. La mezcla cis/trans en bruto se recristaliza en metanol para obtener >99% del isómero trans.
Etapa VII
Se sigue el mismo procedimiento que se ha informado anteriormente (Ejemplo 1, Etapa VI) para obtener ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2carboxílico.
EM hallada (electropulverización): (M-H): 444,3
Ejemplo 4:
Ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(cis-4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexil)amino]-tiofeno-2-carboxílico y ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexano-carbonil)-(trans-4[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico
Etapa I:
A una disolución de éster metílico de ácido 3-amino-5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-tiofeno-2-carboxílico (Ejemplo9) (0,387 g, 1,6 mmoles) y 4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexanona (0,27 g, 1,6 mmoles) en THF seco se añade diclorurode dibutil-litio (0,024 g, 0,080 mmoles) seguido de fenilsilano (0,276 ml, 2,2 mmoles). La mezcla se agita durante lanoche a temperatura ambiente. El disolvente se evapora a presión reducida, y el residuo se diluye con acetato deetilo. La fase orgánica se lava con agua y salmuera, se seca con sulfato de sodio, se filtra y se concentra a presión reducida. El residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice usando el gradiente 50-100% deacetato de etilo en hexano proporcionando éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(4-[1,2,3]triazol-1-ilciclohexilamino)-tiofeno-2-carboxílico.
Etapa II:
A una disolución de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexilamino)tiofeno-2-carboxílico (0,20 g, 0,50 mmoles) en tolueno (1 ml) se añade una disolución de cloruro de ácido trans-4metilciclohexilcarboxílico 1 M (1,0 ml, 1,0 mmoles) y piridina (0,046 ml, 0,58 mmoles). La mezcla se agita durante lanoche a 105 ºC y se diluye con acetato de etilo. La fase orgánica se lava con NaHCO3 sat (2 X) y salmuera. La faseorgánica se seca con sulfato de sodio, se filtra y se concentra bajo presión reducida. El residuo se purifica porcromatografía en columna de gel de sílice (20% de acetato de etilo/hexano al 100% de acetato de etilo seguido de 10% de MeOH/acetato de etilo) dando éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-(4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico.
Etapa III:
Se hidroliza éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(4[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (0,13 g, 0,25 mmoles) con hidróxido de litio como se hadescrito previamente (Ejemplo 1, Etapa VI) dando después de purificar por HPLC el isómero puro ácido 5-(3,3
5 dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(cis-4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico y ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(trans-4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]tiofeno-2-carboxílico.
EM hallada (electropulverización): (M+H): 497,4
Ejemplo 5:
10 Ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(cis-4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexil)amino]-tiofeno-2-carboxílico y ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexano-carbonil)-(trans-4[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico
Etapa I:
15 La aminación reductora de éster metílico de ácido 3-amino-5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-tiofeno-2-carboxílico (0,237 g, 1,0 mmoles) y 4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexanona (0,170 g, 1,0 mmoles) se realiza bajo las mismas condiciones previamente descritas usando dicloruro de dibutil-litio y fenilsilano dando éster metílico de ácido 5-(3,3dimetil-but-1-inil)-3-(4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexilamino)-tiofeno-2-carboxílico.
Etapa II:
20 Se acila éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexilamino)-tiofeno-2carboxílico (0,27 g, 0,70 mmoles) con cloruro de ácido trans-4-metilciclohexilcarboxílico como se ha descrito previamente dando éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(4[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico.
Etapa III:
25 Se hidroliza éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(4[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (0,244 g, 0,48 mmoles) con hidróxido de litio como se hadescrito previamente (Ejemplo 1, Etapa VI) dando después de purificar por HPLC el isómero puro ácido 5-(3,3dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(cis-4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico y ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(trans-4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]
30 tiofeno-2-carboxílico.
EM hallada (electropulverización): (M+H): 497,4
Ejemplo 6:
Ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(trans-4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexil)amino]-tiofeno-2-carboxílico
Etapa I:
A una disolución de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(cis-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (0,92 g, 2,0 mmoles) en 10 ml de CH2Cl2 se añade a 0 ºC cloruro de metanosulfonilo (0,31 ml, 4,0 mmoles) seguido de trietilamina (0,56 ml, 4,0 mmoles). La mezcla dereacción se agita a temperatura ambiente durante 24 h y se trata con agua. La fase acuosa se extrae 2 veces conCH2Cl2. La fase orgánica se seca con sulfato de sodio, se filtra y se concentra a presión reducida dando éstermetílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(cis-4-metansulfoniloxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)amino]-tiofeno-2-carboxílico.
Etapa II:
A una disolución de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(cis-4-metansulfoniloxi-ciclohexil)(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (1,16 g, 2,00 mmoles) en 10 ml de DMF se añadeazida de sodio (0,65 g, 10 mmoles). La mezcla de reacción se agita durante 48 h a 50 ºC. La mezcla se diluye conacetato de etilo, se lava 3 veces con agua y 1 vez con salmuera. La fase orgánica se seca con sulfato de sodio, sefiltra y se concentra bajo presión reducida dando éster metílico de ácido 3-[(trans-4-azido-ciclohexil)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-tiofeno-2-carboxílico.
Etapa III:
Una disolución de éster metílico de ácido 3-[(trans-4-azido-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)amino]-5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-tiofeno-2-carboxílico (1,0 g, 2,0 mmoles) en trimetilsililacetileno (1,4 ml, 10 mmoles)se trata en microondas a 120 ºC durante 2 h. La mezcla se concentra a presión reducida y el residuo se purifica porcromatografía en columna de gel de sílice (5% de acetato de etilo/hexano al 100% de acetato de etilo) proporcionando éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-{(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-[trans-4-(4trimetilsilanil-[1,2,3]triazol-1-il)-ciclohexil]-amino}-tiofeno-2-carboxílico.
Etapa IV:
A una disolución de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-{(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)[trans-4-(4-trimetilsilanil-[1,2,3]triazol-1-il)-ciclohexil]-amino}-tiofeno-2-carboxílico (0,48 g, 0,82 mmoles) en THF (2,0ml) se añade TBAF 1,0 M en THF (1,23 ml, 1,23 mmoles). La mezcla de reacción se agita durante 24 h y se tratacon agua y disolución saturada de cloruro de amonio. La fase acuosa se extrae con acetato de etilo. La faseorgánica se lava con salmuera, se seca con sulfato de sodio, se filtra y se concentra a presión reducida. El residuose purifica por cromatografía en columna de gel de sílice (50% de acetato de etilo/hexano al 100% de acetato de etilo) dando éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(trans-4[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico.
Etapa V:
Se hidroliza éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(trans-4[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (0,27 g, 0,52 mmoles) con hidróxido de litio como se hadescrito previamente (Ejemplo 1, Etapa VI) dando después de la purificación por HPLC ácido 5-(3,3-dimetil-but-1
inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(trans-4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico. EM hallada (electropulverización): (M+H): 497,4 Producto intermedio 2: 4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexanona
5 Etapa I:
Una mezcla de éster 1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ílico de ácido metanosulfónico (2,80 g, 11,9 mmoles) y azida de sodio (3,86 g, 59,3 mmoles) en 50 ml de DMF seca se agita durante 20 h a 100 ºC bajo nitrógeno. Lamezcla final se enfría a temperatura ambiente diluida con salmuera y se extrae con tres porciones de éter. Lasporciones orgánicas se combinan, se secan sobre Na2SO4 y se concentran dando 8-azido-1,4-dioxa
10 espiro[4.5]decano.
Etapa II:
Una mezcla de 8-azido-1,4-dioxa-espiro[4.5]decano (1,00 g, 5,43 mmoles) y 1-(trimetilsilil)propino (3,76 ml, 27,1 mmoles) se somete a microondas a 120 ºC durante 2 h. La mezcla se concentra a vacío para eliminar el exceso de 1-(trimetilsilil)propino y se obtiene 1-(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-4-trimetilsilanil-1H-[1,2,3]triazol en bruto.
15 Etapa III:
Una disolución de 1-(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-4-trimetilsilanil-1H-[1,2,3]-triazol (1,60 g, 5,68) en 41 ml de THF seco se trata mediante una disolución 1 M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF (9,0 ml, 9,0 mmoles). Lamezcla resultante se agita durante 48 h a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Se diluye con EtOAc, se lava concloruro de amonio acuoso saturado, agua y salmuera, se seca sobre Na2SO4 y se concentra dando 1-(1,4-dioxa
20 espiro[4.5]dec-8-il)-1H-[1,2,3]triazol.
Etapa IV:
Se somete 1-(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-1H-[1,2,3]triazol (1,06 g, 5,06 mmoles) al mismo procedimiento que para el producto intermedio 1 Etapa III proporcionando 4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexanona como un sólido blanco.
Producto intermedio 1: 4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexanona
Etapa I:
Se prepara éster 1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ílico de ácido metanosulfónico según: Cheng, Chen Yu; Wu,Shou Chien; Hsin, Ling Wei; Tam, S. William. Coll. Med., Natl. Taiwan Univ., Taipei, Taiwán. Journal of MedicinalChemistry (1992), 35(12), 2243-7.
Etapa II:
Una disolución de éster 1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-ílico de ácido metanosulfónico (567 mg, 2,40 mmoles) y 1,2,4-triazol (232 mg, 3,36 mmoles) en DMF seca (5,00 ml) se trata con hidruro de sodio al 60% (125 mg, 3,12mmoles) a temperatura ambiente bajo nitrógeno. La mezcla resultante se agita a 65 ºC durante 72 h. Se vierte enagua con hielo (75 ml), se extrae con 3 porciones de 75 ml de EtOAc. Las porciones orgánicas se combinan, se
5 secan sobre Na2SO4 anhidro y se concentran. El sólido se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice usando un gradiente de 100% de EtOAc al 5% de MeOH:EtOAc como eluyente para proveer el compuesto final 1(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-1H-[1,2,4]triazol como un sólido blanco.
Etapa III:
Se disuelve 1-(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-1H-[1,2,4]triazol (379 mg, 1,81 mmoles) en una mezcla 1:1 de
10 THF y disolución acuosa de HCl 3 N (9 ml). La mezcla resultante se agita a 40 ºC durante 5 h. La mayoría del THF se elimina a vacío, la mezcla restante se neutraliza entonces usando una disolución acuosa de NaOH 3 N hasta quese alcanza un pH básico. Se extrae con 3 porciones de 10 ml de diclorometano. Las porciones orgánicas secombinan, se secan sobre Na2SO4 anhidro y se concentran proporcionando 4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexanona como un sólido ceroso blanco.
15 Ejemplo 7:
Preparación de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-fluoro-ciclohexil)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico
A una suspensión de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(cis-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil
20 ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico (102 mg, 0,23 mmoles) en CH2Cl2 seco (2 ml) se añade DAST (trifluoruro de dietilaminoazufre) (90 μl, 0,69 mmoles), y la mezcla se agita durante 4 h a temperatura ambiente.Entonces se diluye con CH2Cl2, se añade agua a la mezcla y se agita vigorosamente durante 20 min. La fracciónorgánica se separa, se seca sobre Na2SO4, se concentra y el residuo se purifica por HPLC preparativa dando ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-fluoro-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico.
25 EM hallada (electropulverización): [M+H]: 448,30
Ejemplo 8:
Preparación de clorhidrato de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(1-metilpiperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxílico:
5 10
25 30
Etapa I:
A una disolución de éster metílico de ácido 3-(terc-butoxicarbonil)amino-5-bromo-tiofeno-2-carboxílico(4,566 g, 13,58 mmoles) en DMF seca (40 ml) se añaden yoduro de cobre (I) (52 mg, 0,27 mmoles), Pd2dba3 (622 mg, 0,68 mmoles) y trietilamina (9,46 ml, 67,9 mmoles), y la mezcla se desoxigena burbujeando nitrógeno a través de la disolución durante 10 min. Entonces se añaden terc-butilacetileno (6,62 ml, 54,32 mmoles) y BINAP (676 mg,1,09 mmoles) a la mezcla, y se calienta a 60 ºC durante la noche bajo nitrógeno. La mezcla se diluye con CH2Cl2 yse filtra a través de Celite lavando con CH2Cl2. El filtrado se lava con salmuera, se separa la fracción orgánica, se seca sobre Na2SO4, se concentra y el residuo se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con gradiente de EtOAc en hexano dando éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(tercbutoxicarbonil)amino-tiofeno-2-carboxílico.
RMN 1H (CDCl3) 5, ppm: 1,27 (s, 9H), 1,51 (s, 9H), 3,84 (s, 3H), 7,87 (s, 1H), 9,24 (s a, 1H)
EM hallada (electropulverización): [M+H] 338,17
Etapa II:
A una disolución de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(terc-butoxicarbonil)amino-tiofeno-2carboxílico (4,344 g, 9,58 mmoles) en CH2Cl2 (30 ml) se añade ácido trifluoroacético (30 ml), y la mezcla se agita atemperatura ambiente durante la noche. Entonces se evapora a sequedad, el residuo obtenido se redisuelve enCH2Cl2 y se lava con NaHCO3 acuoso y salmuera. La fracción orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4 y seconcentra dando 3,135 g de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-amino-tiofeno-2-carboxílico en bruto.
RMN 1H (CDCl3) 5, ppm: 1,28 (s, 9H), 3,80 (s, 3H), 5,36 (s a, 2H), 6,49 (s, 1H)
EM hallada (electropulverización): [M+H] 238,11
Etapa III:
A una disolución de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-amino-tiofeno-2-carboxílico (1,512 g,5,97 mmoles) y N-terc-butoxicarbonil-piperidin-4-ona (1,189 g, 5,97 mmoles) en 2 ml de THF seco se añade diclorurode dibutil-litio (181 mg, 0,60 mmoles), y la mezcla se agita durante 10 min a temperatura ambiente bajo nitrógeno. Entonces se añade fenilsilano (810 μl, 6,57 mmoles) y la mezcla se agita durante 24 h a temperatura ambiente. Seañaden 595 mg adicionales de N-terc-butoxicarbonil-piperidin-4-ona, 90 mg de dicloruro de dibutil-litio y 405 μl defenilsilano, y la mezcla se agita durante otras 24 h. Entonces, la mezcla se diluye con CH2Cl2, se lava con salmuera, la fracción orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4 y se concentra dando 5,142 g de éster metílico de ácido 5(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(N-terc-butoxicarbonil-piperidin-4-il)amino-tiofeno-2-carboxílico en bruto.
Etapa IV:
Se añaden cloruro de ácido trans-4-metilciclohexilcarboxílico (23,88 mmoles) y piridina (2,89 ml, 35,82mmoles) a una disolución de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(N-terc-butoxicarbonil-piperidin-4il)amino-tiofeno-2-carboxílico de la Etapa III (5,142 g) en tolueno seco (50 ml). La mezcla se somete a reflujo durante 24 h, luego se lleva a temperatura ambiente, y se añade cantidad adicional de piridina (1,0 ml) y MeOH (5 ml).Entonces la mezcla se diluye con CH2Cl2, se lava con salmuera, la fracción orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4 y se concentra dando 5,198 g de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil
5 ciclohexanocarbonil)-(N-terc-butoxicarbonil-piperidin-4-il)amino]-tiofeno-2-carboxílico en bruto que contiene cantidades variables de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)(piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxílico.
Etapa V: El producto de la Etapa IV (5,198 g) se disuelve en 30 ml de CH2Cl2 y se trata con 20 ml de ácido
10 trifluoroacético. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante la noche, luego se evapora a sequedad, el residuo obtenido se redisuelve en CH2Cl2 y se lava con NaHCO3 acuoso y salmuera. La fracción orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4 y se concentra dando 5,340 g de éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4metil-ciclohexanocarbonil)-(piperidin-4-il)amino]-tiofeno-2-carboxílico en bruto.
Etapa VI:
15 A una disolución del producto de la Etapa V (5,340 g) en 1,2-dicloroetano (60 ml) se añade formaldehído (1,94 ml de disolución acuosa al 37%, 23,88 mmoles), seguido de triacetoxiborohidruro de sodio (2,403 g, 11,34mmoles) en porciones durante 20 min. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante la noche, luego se añadeagua a la mezcla y se extrae con CH2Cl2. La fracción orgánica se lava con NaHCO3 acuoso y salmuera, se seca sobre Na2SO4, se concentra y se purifica por cromatografía en columna sobre gel de sílice eluyendo con 0-10% de
20 MeOH en CH2Cl2 dando éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(1metil-piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxílico.
Etapa VII:
El producto de la Etapa VI (281 mg, 0,61 mmoles) se hidroliza con hidróxido de litio como se ha descrito previamente (Ejemplo 1, Etapa VI) dando después de la purificación por HPLC clorhidrato de ácido 5-(3,3-dimetil25 but-1-inil)-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(1-metil-piperidin-4-il)-amino]-tiofeno-2-carboxílico.
EM hallada (electropulverización): [M+H]: 445,29
Ejemplo 9:
Ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexano-carbonil)-amino]tiofeno-2-carboxílico
Etapa I
Se disuelve éster metílico de ácido 3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)amino]-5-yodo-tiofeno-2-carboxílico (del Ejemplo 3) en tetrahidrofurano y se trata con disolución de HCl 3 N. La reacción se agita a 40 ºC durante 3 h. La mezcla de reacción se evapora a presión reducida. La mezcla se disuelveen EtOAc y se lava con disolución de NaHCO3 sat. ac. La fase orgánica se separa, se seca sobre Na2SO4, se filtra y se concentra para obtener el compuesto del título.
Etapa II
5 A una disolución fría (0 ºC) de éster metílico de ácido 5-yodo-3-[(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-(4-oxociclohexil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico en MeOH bajo una atmósfera de N2 se añade NaBH4 en porciones y se agita.Después de completarse la reacción se añade 2% de HCl y se agita durante 15 min. La mezcla de reacción seconcentra a vacío a sequedad. El residuo se reparte entre agua y EtOAC. La fase orgánica se separa, se seca sobreMgSO4 y se concentra a sequedad. El residuo se purifica por cromatografía en columna de gel de sílice usando
10 EtOAc:hexano como eluyente para obtener el compuesto del título.
Etapa III
A una disolución de éster metílico de ácido 3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)amino]-5-yodo-tiofeno-2-carboxílico y etinil-trimetil-silano en DMF se añaden trietilamina ytris(dibencilidenacetona)dipaladio (0) y la mezcla de reacción se agita a 60 ºC durante 16 h bajo una atmósfera de
15 N2. Se eliminan la DMF y la trietilamina a presión reducida y el residuo se reparte entre agua y acetato de etilo. La fase orgánica se separa, se seca (Na2SO4), se concentra y el residuo se purifica por cromatografía en columnausando acetato de etilo y hexano (1:2) como eluyente para obtener el compuesto del título.
Etapa IV Se toman éster metílico de ácido 3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-5
20 trimetil-silaniletinil-tiofeno-2-carboxílico y 2-cloro-2-metilpropano en diclorometano y se añade cloruro de aluminio recientemente sublimado a -78 ºC. La mezcla de reacción se agita a la misma temperatura durante 6 h. La mezclade reacción se vierte en agua, se diluye con diclorometano. La fase orgánica se separa, se seca (Na2SO4) y se concentra. El residuo se purifica por cromatografía en columna usando acetato de etilo y hexano para obtener elcompuesto del título. Ref.: J. Chem. Soc., Chem. Commun., 1982, 959-960.
25 Etapa V
Se disuelve éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metilciclohexanocarbonil)-amino]-tiofeno-2-carboxílico en una mezcla 3:2:1 de THF:metanol:H2O y se trata con una disolución 1 N de LiOH·H2O. Después de 2 h de agitación a 60 ºC, la mezcla de reacción se concentra a presiónreducida sobre un evaporador rotatorio. La mezcla se reparte entre acetato de etilo y agua. La fase de agua se
30 acidifica usando HCl 0,1 N. La fase de EtOH se separa y se seca sobre Na2SO4. El disolvente se elimina y el residuo se purifica por cromatografía en columna usando metanol y diclorometano (1:9) como eluyente para obtener elcompuesto del título.
Tabla 1 Lista de compuestos según la presente invención
Estructura
Nombre químico Masa*
1
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-HIDROXI-CICLOHEXIL)-(TRANS-4-METIL-CICLOHEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO (M-H):444,3
2
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METOXI-CICLOHEXIL)-(TRANS-4-METIL-CICLOHEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO (M-H):458,3.
3
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METILCICLOHEXANOCARBONIL)-(CIS-4-[1,2,4]TRIAZOL-1-IL-CICLOHEXIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO (M+H):497,4
4
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METILCICLOHEXANOCARBONIL)-(TRANS-4-[1,2,4]TRIAZOL-1-IL-CICLOHEXIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO (M+H):497,4
5
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(CIS-4-HIDROXICICLOHEXIL)-(TRANS-4-METIL-CICLOHEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO (M-H):444,52
6
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METIL-CICLOHEXANOCARBONIL)-(1-METIL-PIPERlDIN-4-IL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO; CLORHIDRATO (M+H):445,29
Estructura
Nombre químico Masa*
7
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METILCICLOHEXANOCARBONIL)-(4-CIS-[1,2,3]TRIAZOL-1-IL-CICLOHEXIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO (M+H):497,4
8
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-METILCICLOHEXANOCARBONIL)-(TRANS-4-[1,2,3]TRIAZOL-1-IL-CICLOHEXIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO (M+H):497,4
9
ÁCIDO 5-(3,3-DIMETIL-BUT-1-INIL)-3-[(TRANS-4-FLUORO-CICLOHEXIL)-(TRANS-4-METIL-CICLOHEXANOCARBONIL)-AMINO]-TIOFENO-2-CARBOXÍLICO (M+H):448,30
* los análisis de espectros de masas se registran usando espectrometría de masas por electropulverización.
Ejemplo 10: Evaluación de compuestos en el ensayo de ARN polimerasa dependiente de ARN del VHC
Se citan las siguientes referencias
5 1. Behrens, S., Tomei, L., De Francesco, R. (1996) EMBO 15, 12-22
2.
Harlow, E y Lane, D. (1988) Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbord. NY.
3.
Lohmann, V., Körner, F., Herian, U. y Bartenschlager, R. (1997) J. Virol. 71, 8416-8428
4.
Tomei, L., Failla, C., Santolini, E., De Francesco, R. y La Monica, N. (1993) J Virol 67, 4017-4026
10 Los compuestos se evalúan usando un ensayo de polimerasa in vitro que contiene ARN polimerasa dependiente de ARN del VHC recombinante purificado (proteína NS5B). NS5B del VHC se expresa en células deinsecto usando un baculovirus recombinante como vector. Los procedimientos experimentales usados para laclonación, expresión y purificación de la proteína NS5B del VHC se describen a continuación. Siguen detalles de losensayos de ARN polimerasa dependientes de ARN para probar los compuestos.
15 Expresión de la proteína NS5B del VHC en células de insecto:
El ADNc que codifica la proteína NS5B entera de la cepa VHC-Bk, genotipo 1b, se amplificó por PCR usando los cebadores NS5Nhe5' (5'-GCTAGCGCTAGCTCAATGTCCTACACATGG-3') y XhoNS53' (5'-CTCGAGCTCGAGCGTCCATCGGTTGGGGAG-3') y el plásmido pCD 3.8-9.4 como molde (Tomei y col., 1993). NS5Nhe5' y XhoNS53' contienen dos sitios NheI y XhoI (secuencias subrayadas), respectivamente, en su extremo
20 5'. El fragmento de ADN amplificado se clonó en el plásmido de expresión bacteriana pET-21 b (Novagen) entre los sitios de restricción NheI y XhoI, para generar el plásmido pET/NS5B. Este plásmido se usó después como molde para amplificar por PCR la región codificante de NS5B, usando los cebadores NS5B-H9 (5'-ATACATATGGCTAGCATGTCAATGTCCTACACATGG-3') y NS5B-R4 (5'-GGATCCGGATCCCGTTCATCGGTTGGGGAG-3'). NS5B-H9 se extiende una región de 15 nucleótidos en el
25 plásmido pET-21b, seguido del codón de iniciación de la traducción (ATG) y 8 nucleótidos correspondientes al extremo 5' de la región codificante de NS5B (nt. 7590-7607 en la secuencia de VHC con el número de accesoM58335). NS5B-R4 contiene dos sitios BamHI (subrayados) seguido de 18 nucleótidos correspondientes a la regiónalrededor del codón de terminación en el genoma de VHC (nt. 9365-9347). La secuencia amplificada, de 1,8 kb, sedigirió con NheI y BamHI y se ligó a un plásmido pBlueBacII previamente digerido (Invitrogen). El plásmido
30 recombinante resultante se designó pBac/NS5B. Se transfectaron células Sf9 con 3 μg de pBac/NS5B, junto con 1 μg de ADN de baculovirus linealizado (Invitrogen), como se describe en el protocolo del fabricante. Tras dos rondas de purificación en placa se aisló un baculovirus recombinante de NS5B, BacNS5B. La presencia de la proteínaNS5B recombinante se determinó por análisis de transferencia Western (Harlow y Lane, 1988) de células Sf9infectadas con BacNS5B usando un antisuero policlonal de conejo (anti-NS5B) producido contra una versión marcada con His de la proteína NS5B expresada en E. coli. Las infecciones de células Sf9 con este virus purificadoen placa se realizaron en matraces de agitación centrífuga de un litro a una densidad de células de 1,2 x 106 células/ml y una multiplicidad de infección de 5.
Preparación de una proteína NS5B recombinante soluble:
Células Sf9 se infectaron como se ha descrito anteriormente. Sesenta horas después de la infección, lascélulas se recogieron, luego se lavaron dos veces con solución salina tamponada con fosfato (PBS). Las proteínastotales se solubilizaron como se describe en Lohmann y col. (1997) con algunas modificaciones. En resumen, lasproteínas se extrajeron en tres Etapas, E1, E2, E3, usando tampones de lisis (TL) I, TLII y TLIII (Lohmann y col.,1997). La composición de TLII se modificó para contener 0,1% de Triton X-100 y NaCl 150 mM para reducir lacantidad de proteína NS5B solubilizada en esta etapa. Además, se evitó la sonicación de extractos celularesmediante el protocolo para preservar la integridad de la estructura de proteína.
Purificación de NS5B recombinante usando cromatografía de líquidos rápida de proteínas (FPLC):
Proteína NS5B soluble en la fracción S3 se diluyó para reducir la concentración de NaCl a 300 mM, luegose incubó por lotes con perlas de DEAE-Sepharose (Amersham-Pharmacia) durante 2 h a 4 ºC, como se ha descrito por Behrens y col. (1996). El material sin unir se eliminó por centrifugación durante 15 min a 4 ºC, a 25.000 rpmusando un rotor SW41 (Beckman). El sobrenadante se diluyó adicionalmente para reducir la concentración de NaCla 200 mM y posteriormente se cargó, con una velocidad de flujo de 1 ml/min, sobre una columna de heparinaHiTrap® de 5 ml (Amersham-Pharmacia) conectada a un sistema de FPLC® (Amersham-Pharmacia). Las proteínasunidas se eluyeron en fracciones de 1 ml usando un gradiente de NaCl continuo de 0,2 a 1 M durante un volumen de25 ml. Las fracciones que contenían NS5B se identificaron por electroforesis en gel de dodecilsulfato de sodiopoliacrilamida (SDS-PAGE), seguido de transferencia Western usando el antisuero anti-NS5B a una dilución de1:2000. Las fracciones positivas se reunieron y el tampón de elución se intercambió contra NaPO4 50 mM a pH 7,0,20% de glicerol, 0,5% de Triton X-100 y DTT 10 mM, usando una columna PD-10 (Amersham-Pharmacia). Lamuestra se cargó entonces sobre una columna HiTrap® SP de 1 ml (Amersham-Pharmacia), con una velocidad deflujo de 0,1 ml/min. Las proteínas unidas se eluyeron usando un gradiente continuo de NaCl 0 a 1 M durante unvolumen de 15 ml. Las fracciones eluidas se analizaron por SDS-PAGE y transferencia Western. Alternativamente, las proteínas se visualizaron, siguiendo SDS-PAGE, por tinción con plata usando el kit Silver Stain Plus (BioRad)como se ha descrito por el fabricante. Se probaron fracciones positivas para actividad de RdRp (véase másadelante) y las más activas se reunieron y se guardaron como una disolución al 40% de glicerol a -70 ºC.
Ensayo de proximidad de centelleo RdRp Flashplate de VHC in vitro (ENSAYO STREP-FLASH) usado para evaluar análogos:
Este ensayo consiste en medir la incorporación de UTP radiomarcado con [3H] en un molde-cebador poli rA/ oligo dT biotinilado, capturado sobre la superficie de Flashplates™ de microtitulación incorporadas con centelleanterecubierto con estreptavidina (NEN Life Science Products Inc, MA, EE.UU., SMP 103A). En resumen, una disolución de 400 ng/μl de polyrA (Amersham Pharmacia Biotech) se mezcló volumen a volumen con 5' biotina-oligo dT15 a 20 pmol/μl. El molde y los cebadores se desnaturalizaron a 95 ºC durante 5 minutos, luego se incubaron a 37 ºC durante 10 minutos. El molde-cebadores hibridados se diluyeron posteriormente en un tampón que contenía Tris-HCly se dejó que se unieran a Flashplates recubiertas con estreptavidina durante la noche. El material sin unir sedesechó; se añadieron compuestos en una disolución de 10 μl seguido de 10 μl de una disolución que conteníaMgCl2 50 mM, Tris-HCl 100 mM a pH 7,5, NaCl 250 mM y DTT 5 mM. La reacción enzimática se inició tras la adiciónde una disolución de 30 μl que contenía la enzima y sustrato para obtener las siguientes concentraciones: UTP 25μM, 1 μCi de [3H]-UTP y NS5B de VHC recombinante 100 nM. Las reacciones de RdRp se dejaron avanzar durante2 h a temperatura ambiente después de lo cual los pocillos se lavaron tres veces con 250 μl de disolución de NaCl0,15 M, se secaron al aire a 37 ºC y se contaron usando un contador de centelleo líquido (Wallac Microbeta Trilex,Perkin-Elmer, MA, EE.UU.).
Ejemplo 11
Cultivo celular para ensayo de replicación de ARN del VHC con indicador de luciferasa basado en células
Los compuestos de la presente invención son inhibidores de la polimerasa del VHC. Se ha encontradosorprendentemente que los compuestos según la presente invención y que tienen un patrón de sustitución específico presentan un índice terapéutico mejorado con respecto a otros análogos de tiofeno.
Líneas celulares de replicón Huh-7, 5.2 y ET que se derivan de la línea celular de hepatocarcinoma Huh-7se mantuvieron en cultivo como generalmente se describe en Krieger, N; Lohmann, V; Bartenschlager, R.Enhancement of hepatitis C virus RNA replication by cell culture-adaptive mutations. J. Virol. 2001, 75, 4614-4624. Las células Huh-7, 5.2 contienen la construcción de replicón altamente adaptado a cultivo celular I389luc-ubineo/NS3-3'/5.1 que lleva, además del gen neomicina, una copia integrada para el gen de luciferasa de luciérnaga(Krieger, N; Lohmann, V; Bartenschlager, R. Enhancement of hepatitis C virus RNA replication by cell cultureadaptive mutations. J. Virol. 2001, 75, 4614-4624). Esta línea celular permite la medición de replicación de ARN delVHC y la traducción midiendo actividad de luciferasa. Se ha mostrado previamente que la actividad de luciferasasigue estrechamente el nivel de ARN de replicón en estas células (Krieger, N; Lohmann, V; Bartenschlager, R. Enhancement of hepatitis C virus RNA replication by cell culture-adaptive mutation. J. Virol. 2001, 75, 4614-4624). La línea celular Huh-7, ET tiene las mismas características que aquellas mencionadas para la línea celular Huh-7, 5.2,excepto que las células ET son más robustas y contienen una mutación adaptativa en el gen NS4B del VHC en lugarde NS5A. Ambas líneas celulares se mantuvieron en cultivos a un nivel sub-confluente (<85%) ya que el nivel de ARN de replicón es el mayor en células activamente proliferantes. El medio de cultivo usado para el pase de célulasconsiste en DMEM (Gibco BRL Laboratories, Mississauga, ON, Canadá) complementado con 10% de suero bovinofetal con 1% de penicilina/estreptomicina, 1% de glutamina, 1% de piruvato de sodio, 1% de aminoácidos noesenciales y 350 ug/ml de concentración final de G418. Las células se incubaron a 37 ºC en una atmósfera de 5%de CO2 y se sometieron a pases dos veces a la semana para mantener la sub-confluencia.
Aproximadamente 3000 células Huh-7, 5.2 o ET viables (100 μl) se sembraron en placa por pocillo en unaplaca de microtitulación opaca blanca de 96 pocillos. El medio de cultivo celular usado para el ensayo fue el mismoque el que se ha descrito anteriormente, excepto que no contiene G418 ni rojo fenol. Después de un periodo deincubación de 3-4 horas a 37 ºC en una estufa de incubación con 5% de CO2, los compuestos (100 μl) se añadierona diversas concentraciones. Entonces, las células se incubaron adicionalmente durante 4 días a 37 ºC en una estufa de incubación con 5% de CO2. Después, los medios de cultivo se eliminaron y las células se lisaron mediante laadición de 95 μl del tampón luciferasa (sustrato luciferina en detergente tamponado). Los lisados celulares seincubaron a temperatura ambiente y se protegieron de la luz directa durante al menos 10 minutos. Las placas seleyeron para recuentos de luciferasa usando un luminómetro (Wallac MicroBeta Trilux, Perkin Elmer™, MA, EE.UU.).
Las concentraciones inhibidoras al 50% (CI50) para el efecto inhibidor se determinaron a partir de las curvasde dosis-respuesta usando once concentraciones por compuesto por duplicado. Las curvas se ajustaron a lospuntos de datos usando análisis de regresión no lineal, y las CI50 se interpolaron de la curva resultante usando elsoftware GraphPad Prism, versión 2.0 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, EE.UU.).
Ejemplo 12: Evaluación de compuestos en ensayo enzimático de la cepa BK de genotipo 1b de NS5B del VHCtruncada del extremo de 21 aminoácidos
Se citan las siguientes referencias:
o Tomei, L., Failla, C., Santolini, E., De Francesco, R. y La Monica, N. (1993) J Virol 67, 4017-4026
o Lesburg, C. A. y col. Crystal structure of the RNA-dependent RNA polymerase from hepatitis C virusreveals a fully encircled active site. Nat. Struct. Biol. 6, 937-943 (1999).
o Ferrari, E. y col. Characterization of soluble hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymeraseexpressed in Escherichia coli. J. Virol. 73, 1649-1654 (1999).
Los compuestos se evalúan usando un ensayo de polimerasa in vitro que contiene ARN polimerasadependiente de ARN del VHC recombinante purificado (proteína NS5B) expresada en células bacterianas. Losprocedimientos experimentales usados para la clonación, expresión y purificación de la proteína NS5B del VHC sedescriben a continuación. Siguen detalles de los ensayos de ARN polimerasa dependientes de ARN para probar los compuestos.
Expresión de la proteína NS5B del VHC en células de insecto:
Expresión y purificación de proteína NS5B del VHC
Una forma soluble recombinante que representa una enzima de la cepa BK de genotipo 1b de NS5B delVHC truncada del extremo C de 21 aminoácidos (Tomei y col., 1993) que contiene una marca de hexahistidina delextremo N se clonó y se expresó en BL21 de Escherichia coli (DE3). La enzima truncada se purificó como sedescribe en Lesburg y col. (1999) y Ferrari y col. (1999) con modificaciones menores. Brevemente, lisadosbacterianos solubles se cargaron sobre una columna de afinidad quelante de níquel HiTrap (GE Healthcare, Baied'Urfe, QC, Canadá). La enzima unida se eluyó usando un gradiente de imidazol. Entonces se eliminó el imidazol deltampón de las fracciones activas reunidas usando columnas de desalación PD-10 (GE Healthcare, Baie d'Urfe, QC, Canadá). Se logró más purificación ejecutando la preparación de proteínas a través de una columna HiTrap SPSepharose de intercambio catiónico (GE Healthcare, Baie d'Urfe, QC, Canadá) usando un gradiente de NaCl paraelución. Después, el tampón se cambió a Tris 10 mM a pH 7,5, 10% de glicerol, DTT 5 mM, NaCl 600 mM usandouna columna PD-10. Las fracciones positivas se probaron para actividad de polimerasa dependiente de ARN y lasfracciones más activas se reunieron y se almacenaron a -70 ºC.
Ensayo de NS5B in vitro
La medición del efecto inhibidor de compuestos sobre la actividad de polimerización de NS5B del VHC se realizó evaluando la cantidad de UTP radiomarcado incorporado por la enzima en un ARN recientemente sintetizadousando un molde/cebador de ARN homopolimérico. Brevemente, un cebador de oligonucleótido de ADN biotiniladoen 5' 15-mero (oligo dT) hibridado con un molde de poli rA ARN homopolimérico se captura sobre la superficie deperla recubierta con estreptavidina (GE Healthcare, Baie d'Urfe, QC, Canadá). Esencialmente, los compuestos seprobaron a una variedad de concentraciones (0,005 a 200 μM) en un volumen final de 50 μl de mezcla de reacciónconstituida por Tris-HCl 20 mM a pH 7,5, MgCl2 5 mM, DTT 1 mM, NaCl 50 mM, enzima NS5B purificada 50 nM, 250ng de poli rA/oligo dT15 (Invitrogen, Burlington, Ontario, Canadá), 15 μM de UTP no radiactivo y 1 μCi de [3H]UTP (3000 Ci/mmoles; GE Healthcare, Baie d'Urfe, QC, Canadá). La actividad de polimerización de la enzima NS5B deVHC se cuantifica midiendo la incorporación del sustrato [3H]UTP radiomarcado sobre el extremo de 3' del cebadoren crecimiento y la detección se logra contando la señal usando un contador de centelleo líquido (Wallac MicroBetaTrilux, Perkin Elmer™, MA, EE.UU.).
Ensayo de incorporación de [3H]timidina
Un total de 1.000 – 2.000 células/pocillo se siembran en placas de cultivo de 96 pocillos en un volumen de150 μl de DMEM (Life Technologies, Inc., Gaithersburg, Md.) complementado con 10% de SBF (HyCloneLaboratories, Inc., Logan, Utah) y glutamina 2 mM (Life Technologies, Inc.). Se añaden penicilina y estreptomicina
(Life Technologies, Inc.) a 500 U/ml y 50 μg/ml de concentraciones finales, respectivamente. Después de unaincubación de 18 h a 37 ºC en una atmósfera de 5% de CO2, el medio se elimina y se sustituye con compuestosdiluidos en medio de cultivo. Se prueban seis diluciones dobles seriadas de fármacos por triplicado. Después deotras 72 h de incubación se añade un volumen de 50 μl de 10 μCi/ml de disolución de [3H]metiltimidina (Amersham5 Life Science, Inc., Arlington Heights, III.; 2 Ci/mmoles) en medio de cultivo y las placas se incuban durante otras 18 h a 37 ºC. Entonces, las células se lavan con solución salina tamponada con fosfato (PBS), se tripsinan durante 2 miny se recogen sobre un filtro de fibra de vidrio usando un recolector de células Tomtec (Tomtec, Orange, Conn.). Losfiltros se secan a 37 ºC durante 1 h y se disponen en una bolsa con 4,5 ml de mezcla de centelleo líquida (WallacOy, Turku, Finlandia). La acumulación de [3H]metiltimidina, que representa células de replicación viable, se mide
10 usando un contador de centelleo líquido (1450-Microbeta; Wallac Oy). Ref. SOP: 265-162-03. Para este experimento, las líneas celulares usadas son: células Huh-7 ET (células derivadas de la línea celular Huh-7 (carcinoma hepatocelular, humanas) y que contienen un replicón sub-genómico del VHC), Molt-4 (sangre periférica,leucemia linfoblástica aguda, humanas), DU-145 (carcinoma de próstata, metástasis al cerebro, humanas), Hep-G2(carcinoma hepatocelular, humanas) y SH-SY5Y (neuroblastoma, humanas).
15 Análisis de datos
Las concentraciones citotóxicas al 50% (CC50) para la toxicidad de células se determinan a partir de curvas dosis-respuesta usando seis a ocho concentraciones por compuesto por triplicado. La curvas se ajustan a los puntosde datos usando análisis de regresión no lineal, y los valores de CI50 se interpolan de la curva resultante usando elsoftware GraphPad Prism, versión 2.0 (GraphPad Software Inc., San Diego, CA, EE.UU.).
20 TI: Relación de CC50/CI50 en células de replicón del VHC (células Huh-7 ET) del Ejemplo 12. Si los compuestos se prueban más de una vez se proporciona el promedio de TI.
La Tabla 2 enumera los índices terapéuticos (IT) de compuestos seleccionados representativos de lainvención con respecto a otros inhibidores de la polimerasa del VHC de tiofeno.
Tabla 2
Compuesto
IT
1
++++++
2
+++
3
++++++
4
++++
5
++++++
6
++++++
7
+++++
8
++++++
9
++++++
A
++
B
++
C
+
D
++++
E
+++
F
++
G
+++
H
+
I
++
IT +: <100
++:
100-1000
+++:
1000-2000
++++:
2000-4000
+++++:
4000-6000
5
++++++ : >6000
Los compuestos A a I pueden sintetizarse como se describe en las patentes de EE.UU. nº 6.881.741,WO02/100851, W02004/052885 o WO 2006/072347.
Ciertos compuestos según la presente invención y que tienen un patrón de sustitución específicos presentan una estabilidad de microsomas mejorada y/o inducción en hepatocitos humanos con respecto a otrosanálogos de tiofeno. Por ejemplo, los compuestos 1 y 2 mostraron mejor perfil de estabilidad y perfil de inducción demicrosomas con respecto al compuesto E.
Estabilidad en microsomas humanos y de rata
Cada compuesto se incuba en microsomas hepáticos (1,6 mg/ml) a 37 º bajo condiciones oxidativas y deglucuronidación (NADPH 1,5 mM y UDPGA 1,5 mM en tampón fosfato, pH = 7,4). Como controles se usan incubaciones que no contienen NADPH ni UDPGA. Los compuestos se incuban a 50 uM durante 0 y 60 minutos. Lareacción se detiene mediante la adición de un volumen igual de acetonitrilo. La mezcla se centrifuga y elsobrenadante se analiza por HPLC/UV o EM/EM. El porcentaje parental restante se corresponde con el área delcompuesto parental en la incubación de 60 minutos frente al área del compuesto parental en una incubación de 0minutos x100.
Inducción en hepatocitos humanos cultivados
La inducción se realiza en hepatocitos humanos criopreservados o recientemente cultivados. Las células secultivan sobre colágeno durante 48 horas. Tras este periodo, las células se dosifican con medios de incubaciónrecientemente enriquecidos que contenían el compuesto de prueba o el inductor de control positivo, rifampicina. Lasconcentraciones finales de los compuestos de prueba en las incubaciones son 1, 10 y 100 mM, mientras que elcontrol positivo se prueba a 10 mM. Los controles negativos (CN) consistieron en incubar las células con 0,1% decontenido final de DMSO. El tratamiento de células continúa durante un total de 48 horas con medios de incubación frescos enriquecidos con compuesto de prueba o inductor de control cambiado diariamente. Al final del periodo deinducción, los medios que contienen el inductor se eliminan y las células se lavan dos veces con 200 ul de tampónKrebs-Henseleit que contiene HEPES 12 mM, pH 7,4 (tampón KH). La inducción de CYP3A4 se mide entonces poractividad usando testosterona como sustrato y por niveles de ARNm. Para la actividad de CYP3A4, tampón KHfresco, enriquecido con testosterona 200 mM se añade y las células se incuban durante 30 minutos a 37 ºC. Al finaldel periodo de incubación, el medio se elimina y se analiza por HPEM/CL para la determinación de 6-betahidroxitestosterona. La inducción máxima (100% de inducción) se determina con el tratamiento con rifampicina 10mM. El potencial de compuestos de prueba para producir la inducción de CYP3A se describe como un porcentaje deinducción máxima obtenido con el inductor clásico. Para la determinación del nivel de ARNm se recogen hepatocitosy se prepara ARN total usando el kit de purificación Qiagen RNeasy (Mississauga, ON) según las instrucciones delfabricante. Los ADNc de los hepatocitos se sintetizan a partir de ARN total usando transcriptasa inversa M-MLV(Invitrogen, Carlbad, CA) con cebador universal (Roche Diagnostic, Alemania). El análisis de la expresión de ARNmespecífico en muestras de ARN total se realiza por PCR en tiempo real cuantitativa usando el sistema de detecciónde secuencias ABI Prism 7700 de Applied Biosystems. Los cebadores usados para CYP3A4 son 5'-TCA GCC TGG TGC TCC TCT ATC TAT-3' como cebador directo y 5'-AAG CCC TTA TGG TAG GAC AAA ATA TTT-3' como cebador inverso. La sonda usada fue 5'-/56-FAM/TCC AGG GCC CAC ACC TCT GCC T/36-TAMSp/ - 3'. Los datosse normalizan a 18S ARNm ribosómico (VIC) con detección en tiempo real. El análisis de datos y las pruebasestadísticas se realizan usando Microsoft Excel. Los resultados pueden informarse como veces de cambio de expresión génica en comparación con grupo de control según la siguiente fórmula:
MCt = Ct FAM - Ct VIC
MMCt = MCt Candidato a fármaco - MCt Control
Veces de inducción: 2 - MMCt
Los ejemplos anteriores pueden repetirse con éxito similar sustituyendo los reactantes y/o condiciones deoperación genéricamente o específicamente descritos de la presente invención con aquellos usados en los ejemplosprecedentes.
De la descripción anterior, un experto en la materia puede determinar fácilmente las características esenciales de la presente invención y puede hacer diversos cambios y modificaciones de la invención dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas.
LISTADO DE SECUENCIAS
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<120> Análogos de tiofeno para el tratamiento o prevención de infecciones por flavivirus
<130> 134 805
<150> US 60/858.939
<151>
<160> 7
<170> PatentIn versión 3.4
<210> 1
<211> 30
<212> ADN
<213> Artificial <220>
<223> Cebador de PCR NS5Nhe5'
<400> 1 gctagcgcta gctcaatgtc ctacacatgg 30
<210> 2
<211> 30
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador de PCR XhoNS53'
<400> 2 ctcgagctcg agcgtccatc ggttggggag 30
<210> 3
<211> 36
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador de PCR NS5B-H9
<400> 3 atacatatgg ctagcatgtc aatgtcctac acatgg 36
<210> 4
<211> 30
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador de PCR NS5B-R4
<400> 4 ggatccggat cccgttcatc ggttggggag 30
<210> 5
<211> 24
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador de PCR
<400> 5 tcagcctggt gctcctctat ctat 24
<210> 6
<211> 27
<212> ADN
<213> Artificial
<220>
<223> Cebador de PCR
<400> 6
5
aagcccttat ggtaggacaa aatattt 27
<210> 7
<211> 22
<212> ADN
<213> Artificial
10
<220>
<223> Sonda
<400> 7
tccagggccc acacctctgc ct
22

Claims (14)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto
    o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
  2. 2. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto según la reivindicación 1 y al menos un5 vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.
  3. 3.
    Una combinación farmacéutica que comprende el compuesto según la reivindicación 1 y al menos unagente adicional.
  4. 4.
    Una combinación farmacéutica según la reivindicación 3, en la que dicho al menos un agente adicional estáseleccionado de inhibidores de la serina proteasa viral, inhibidores de la polimerasa viral, inhibidores de la helicasa
    10 viral, agentes inmunomoduladores, agentes antioxidantes, agentes antibacterianos, vacunas terapéuticas, agentes hepatoprotectores, agentes antisentido, inhibidores de NS2/3 proteasa del VHC e inhibidores de sitio interno deentrada al ribosoma (IRES).
  5. 5. Una combinación farmacéutica según la reivindicación 4, en la que dicho al menos un agente adicional estáseleccionado de ribavirina e interferón-a.
    15 6. Una combinación farmacéutica según la reivindicación 4, en la que dicho al menos un agente adicional está seleccionado de ribavirina e interferón-a PEGilado.
  6. 7. El compuesto según la reivindicación 1 para su uso en un procedimiento para tratar una infección viral porhepatitis C en un huésped.
  7. 8. El compuesto para su uso según la reivindicación 7, procedimiento que comprende además administrar al20 menos un agente adicional.
  8. 9. El compuesto para su uso según la reivindicación 8, en la que dicho al menos un agente adicional estáseleccionado de inhibidores de la serina proteasa viral, inhibidores de la polimerasa viral, inhibidores de la helicasaviral, agentes inmunomoduladores, agentes antioxidantes, agentes antibacterianos, vacunas terapéuticas, agenteshepatoprotectores, agentes antisentido, inhibidores de NS2/3 proteasa del VHC e inhibidores de sitio interno de
    25 entrada al ribosoma (IRES).
  9. 10.
    El compuesto para su uso según la reivindicación 8, en la que dicho al menos un agente adicional estáseleccionado de ribavirina e interferón-a.
  10. 11.
    El compuesto para su uso de la reivindicación 8, en la que dicho al menos un agente adicional estáseleccionado de ribavirina e interferón-a PEGilado.
    30 12. El compuesto para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones 7 a 11 en el que dicho huésped es humano.
  11. 13. Un compuesto elegido de:
    éster metílico de ácido 3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-yodotiofeno-2-carboxílico;
    35 éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexilamino)-tiofeno-2-carboxílico;
    éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexilamino)-tiofeno-2-carboxílico;
    éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(terc-butoxicarbonil)amino-tiofeno-2-carboxílico;
    éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-amino-tiofeno-2-carboxílico;
    éster metílico de ácido 3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-5-yodo40 tiofeno-2-carboxílico; o
    éster metílico de ácido 3-[(trans-4-Hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-5-trimetilsilaniletinil-tiofeno-2-carboxílico.
  12. 14.
    El uso de un compuesto
    5
    éster metílico de ácido 3-[(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-(trans-4-metil-ciclo-hexanocarbonil)-amino]-5-yodotiofeno-2-carboxílico;
    éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(4-[1,2,3]triazol-1-il-ciclohexilamino)-tiofeno-2-carboxílico;
    éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(4-[1,2,4]triazol-1-il-ciclohexilamino)-tiofeno-2-carboxílico;
    éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-(terc-butoxicarbonil)amino-tiofeno-2-carboxílico;
    éster metílico de ácido 5-(3,3-dimetil-but-1-inil)-3-amino-tiofeno-2-carboxílico;
    10
    éster metílico de ácido tiofeno-2-carboxílico; o 3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-5-yodo
    éster metílico de ácido 3-[(trans-4-hidroxi-ciclohexil)-(trans-4-metil-ciclohexanocarbonil)-amino]-5-trimetilsilaniletinil-tiofeno-2-carboxílico
    para la síntesis de un compuesto como se define en la reivindicación 1.
    15
    15. Una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto
  13. 17.
    Una combinación farmacéutica que comprende
    a) el compuesto b) interferón-a PEGilado; y c) ribavirina.
  14. 18.
    La combinación farmacéutica de la reivindicación 17 para su uso en un procedimiento para tratar unainfección viral por hepatitis C en un huésped.
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