EA019341B1 - Фосфорамидаты нуклеозидов - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к соединениям общей формулы I, обладающим антивирусной активностью. Описана возможность использования указанных соединений и композиций на их основе для лечения вирусных заболеваний, в частности вируса гепатита С.

Description

(57) Изобретение относится к соединениям общей формулы I, обладающим антивирусной активностью. Описана возможность использования указанных соединений и композиций на их основе для лечения вирусных заболеваний, в частности вируса гепатита С.

019341 Β1 к®

I

Настоящее изобретение было подано 23 декабря 2009 года как Международная патентная заявка по системе РСТ патент РСТ от имени компании РНагшаккеР 1пс., национальной корпорации США, для всех стран, кроме США, и от имени Мю11ае1Йокер11 8оДа и ЛиДа Эи, оба граждане США, Ре1уиап Аапд, гражданина Китая и Э11апара1ап Надага1йпат, гражданина США, только для США.

Заявление об установлении приоритета

Настоящее изобретение заявляет о приоритете на основании предварительной заявки на патент США № 61/140423, поданной 23 декабря 2008 года, содержание которой включено путем отсылки в полном объеме.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к фосфорамидатам нуклеозидов и их использованию в качестве средств для лечения вирусных заболеваний. Данные соединения являются ингибиторами РНКзависимых РНК репликаций вирусов и пригодны в качестве ингибиторов полимеразы Ν85Β вируса гепатита С, ингибиторов репликации вируса гепатита С и для лечения заболевания гепатитом С у млекопитающих.

Сведения о предшествующем уровне техники

Инфекционное заболевание, вызываемое вирусом гепатита С (ИСУ), является основным заболеванием, приводящим к хроническим болезням печени, таким как цирроз и гепатоцеллюлярный рак у значительного количества инфицированных людей, которое оценивается на уровне 2-15% от мирового населения. Только в США по данным Центра по контролю заболеваний США количество инфицированных оценивается в 4,5 млн человек. По данным Всемирной организации здравоохранения во всем мире насчитывается более 200 млн инфицированных человек, при этом ежегодно инфицируется не менее 3-4 млн человек. Среди инфицированных около 20% человек вылечивают вирус, а остальные могут сохранять НСУ всю оставшуюся жизнь. У десяти-двадцати процентов хронически инфицированных людей в конечном итоге развивается разрушающий печень цирроз или рак. Вирусное заболевание передается парентерально через зараженную кровь и продукты крови, загрязненные иглы или половым путем, а также вертикально от инфицированных матерей или матерей-носителей к их потомству. Существующие способы лечения инфекции НСУ, ограниченные иммунотерапией с использованием только рекомбинантного интерферона-α или в сочетании с нуклеозидным аналогом рибавирином, имеют ограниченное клиническое преимущество. Кроме того, не существует общепризнанной вакцины для НСУ. Поэтому существует острая необходимость в улучшенных терапевтических средствах, эффективно борющихся с хроническими инфекциями НСУ.

Вирус НСУ представляет собой оболочечный вирус, содержащий плюс-цепь РНК с одной олигорибонуклеотидной геномной последовательностью из около 9600 оснований, в которой закодирован полипротеин из около 3010 аминокислот. Белковые продукты гена НСУ состоят из структурных белков С, Е1 и Е2, а также неструктурных белков N82, N83, Ν84Α и Ν84Β, Ν85Α и Ν85Β. Неструктурные белки предположительно обеспечивают каталитический механизм репликации вируса. Протеаза Ν83 высвобождает Ν85Β, РНК-зависимую РНК полимеразу из полипротеиновой цепочки. Полимераза Ν85Β НСУ необходима для синтеза двухцепочечной РНК из одноцепочечной вирусной РНК, которая служит в качестве шаблона в репликационном цикле НСУ. Поэтому полимераза Ν85Β рассматривается как важный компонент репликационного комплекса НСУ (К. 1кЫ, е1 а1., Неро1о1оду, 1999, 29: 1227-1235; У. Ьойтапп, е1 а1., У1го1оду, 1998, 249: 108-118). Ингибирование полимеризы Ν85Β НСУ предотвращает образование двухцепочечной РНК НСУ и, таким образом, представляет собой многообещающий подход к разработке НСУ-специфичных антивирусных средств.

НСУ принадлежит к значительно более крупному семейству вирусов, имеющих много общих особенностей.

Вирусы Р1ау1У1Г1Йае.

Семейство вирусов Иаутпйае включает не менее трех разных родов: рекДу1гикек, которые вызывают заболевания коров и свиней; Дау1угикек, которые вызывают в основном такие заболевания, как лихорадка Денге и желтая лихорадка; а также йерас1У1гикек, единственный вид которых представляет собой вирус гепатита С (НСУ). Род ίΡινίνίπικ включает более 68 членов, разделенных на группы на основе серологического родства (Сайкйег е1 а1., 1. Сеп. Упо1., 1993, 70, 37-43). Клинические симптомы варьируются и включают лихорадку, энцефалитную и геморрагическую лихорадку (Р1е1йк У1го1оду, редакторы: Р1е1йк, Β.Ν., Кшре, Э.М. и Но\\!еу, Р.М., Ырршсой-Кауеп РиЫййегк, Филадельфия, Пенсильвания, 1996, глава 31, 931-959). Вирусы Д1ау1уиикек, обусловливающие глобальные проблемы, связанные с болезнями человека, включают вирус геморрагической лихорадки Денге (ЭНР), вирус желтой лихорадки, шоковый синдром и вирус японского энцефалита (НаШеай, 8.В., Кеу. 1пДес1. Όίκ., 1984, 6, 251-264; На1к1еай, 8.В., 8с1епсе, 239:476-481, 1988; МопаФ, Т.Р., Хем Епд. 1. Мей, 1988, 319, 641-643).

Род рекЙУ1гик включает вирус диареи скота (НУОУ), вирус классической лихорадки свиней (С8РУ, известный также как вирус чумы свиней) и вирус пограничной болезни (РЭУ) овец (Моепшд, У. е1 а1. Айу. У1Г. Кек., 1992, 41, 53-98). Инфицирование домашнего скота (коровы, свиньи и овцы) вирусами рекΐίνίιυκ вызывает существенные экономические потери во всем мире. ΒУ^У вызывает вирусную диарею крупного рогатого скота и имеет большое экономическое значение для промышленного животноводства

- 1 019341 (Меуегк, С. и Τΐιίοΐ. Н.Б, Абуапсек ίη У1ги5 Кекеагсй, 1996, 47, 53-118; Моепшд V., е! а1., Лбу. У1г. Кек. 1992, 41, 53-98). Вирусы рек!Мтикек человека не были описаны так полно, как вирусы рекЕззгикек животных. Однако серологические исследования показали существенное воздействие рекйу1тик на человека.

Вирусы рекйупикек и йерасМтикек являются близкородственными вирусными группами семейства Р1ау1ушбае. К другим близкородственным вирусам этого семейства относятся вирус СΒV-Α, СΒV-Αподобные агенты, вирус СВАВ и СΒV-С (также известный как вирус гепатита С, НОУ). Группа йерасМтик (вирус гепатита С; НСУ) состоит из ряда близкородственных, но генотипно различимых вирусов, поражающих человека. Существует не менее 6 генотипов НСУ и более 50 подтипов. Из-за сходства рек!Мтикек и йерасМтикек вкупе со слабой способностью йерасМтикек к эффективному выращиванию в клеточной культуре, для изучения вируса НСУ часто используется заменитель - вирус диареи скота (ВУОУ).

Генетическая организация рекйуйикек и йерасМтикек очень похожа. Эти вирусы, содержащие плюсцепь РНК, обладают одной большой открытой рамкой считывания (ОКТ), кодирующий все белки вируса, необходимые для его репликации. Эти белки представлены полипротеином, который процессируется во время и после трансляции как клеточными, так и кодируемыми вирусом протеиназами для создания зрелых белков вируса. Белки вируса, отвечающие за репликацию вирусного генома РНК, расположены в непосредственной близости от карбоксильного конца. Две трети открытой рамки считывания называются неструктурными белками. Генетическая структура и полипротеиновая обработка неструктурной белковой части ОКТ очень схожи для рекЕзтгнкек и йерасМтикек. Как для рек!Мтикек, так и для йерасМтикек последовательность зрелых неструктурных белков от аминного конца кодирующей области неструктурного белка к карбоксильному концу ОКТ состоит из р7, N82, N83, Ν84Α, Ν84Β, Ν85Α и Ν85Β.

Неструктурные белки вирусов рек!Мтикек и йерасМтикек имеют общие домены последовательностей, являющиеся характерными для специфических функций белка. Например, белки N83 вирусов обеих групп имеют аминокислотную последовательность фрагментов, характерную для сериновых протеиназ и геликаз (СотЬа1епуа е! а1., №!ите, 1988, 333, 22; Вахап и Нейепск У1то1оду, 1989, 171, 637-639; СогЬа1епуа е! а1., М.1с1ею Ас1б Кек., 1989, 17, 3889-3897). Аналогично, белки Ж5В вирусов рек!Мтикек и йерасМтикек имеют фрагменты, характерные для РНК-зависимых РНК-полимераз (Коошп, Ε.ν. апб ЭоЦа, ν.ν., Спг. Кеу. Вюсйет. Мо1ес. Вю1., 1993, 28, 375-430).

Фактические роли и функции неструктурных белков вирусов рекЕуйнкек и йерасМтикек в жизненном цикле вирусов являются прямо аналогичными. В обоих случаях серин-протеиназа N83 полностью отвечает за протеолитический процессинг полипротеиновых предшественников, находящихся в ОКТ по ходу транскрипции относительно нее (Аккегсйеп апб Со11е!!, Ато1оду, 1991, 184, 341-350; Ваг1епксй1адег е! а1., 1. νπΌ1., 1993, 67, 3835-3844; Ескай е! а1. Вюсйеш. Вюрйук. Кек. Сотт., 1993, 192, 399-406; Сгакош е! а1., 1. νίΐΌ1., 1993, 67, 2832-2843; Сгакош е! а1., Ргос. N311. Асаб 8ск И8А, 1993, 90, 10583-10587; НгркаФ е! а1., 1. Аго1. 1993, 67, 4665-4675; Тоте е! а1., 1. Аго1., 1993, 67, 4017-4026). Белок Ж4А в обоих случаях действует как кофактор с сериновой протеазой N83 (Вайепксй1адет е! а1., 1. Ато1., 1994, 68, 5045-5055; ЕаШа е! а1., 1. Ато1., 1994, 68, 3753-3760; Хи е! а1., 1. Ато1., 1997, 71:53 12-5322). Белок N83 обоих вирусов действует также как геликаза (К1т е! а1., Вюсйет. Вюрйук. Кек. Сотт., 1995, 215, 160-166; Лп и Ре!егкоп, Агсй. Вюсйет. Вюрйук., 1995, 323, 47-53; Ааггепег и Со11ей, 1. Аго1., 1995, 69, 1720-1726). Наконец, белки Ж5В вирусов рекЕуйнкек и йерасМтикек обладают предсказанной активностью РНКзависимых РНК-полимераз (Вейгепк е! а1., ЕМВО, 1996, 15, 12-22; Ьесйтапп е! а1., 1. Аго1., 1997, 71, 8416-8428; Уиап е! а1., Вюсйет. Вюрйук. Кек. Сотт., 1997, 232, 231-235; Надебот, РСТ АО 97/12033; 2йопд е! а1., 1. Ато1., 1998, 72, 9365-9369).

В настоящее время существует ограниченный набор средств для лечения пациентов, инфицированных вирусом гепатита С. Общепризнанный терапевтический способ, используемый в настоящее время, заключается в использовании иммунотерапии с применением рекомбинантного интерферона-α самостоятельно или в сочетании с нуклеозидным аналогом рибавирином. Эта терапия имеет ограниченную клиническую эффективность, и ответная реакция наблюдается лишь у 50% пациентов. Поэтому существует серьезная необходимость в более эффективных и современных средствах лечения для удовлетворения медицинских потребностей, обусловленных заболеванием НСV.

Ряд потенциальных молекулярных мишеней для разработки лекарств на основе антивирусных средств прямого действия, таких как анти-НСV терапия, в настоящее время включает, не ограничиваясь, автопротеазу N82^83, протеазу N3, геликазу N3 и полимеразу Ж5В. РНК-зависимая РНК полимераза абсолютно необходима для репликации одноцепочечного положительно-полярного РНК генома, и этот фермент вызывает значительный интерес среди медицинских химиков.

Ингибиторы №5В вируса НСV в качестве потенциальных средств лечения заболевания НСV были рассмотрены в следующих работах: Тап, 8.-Ь., е! а1., №Е.1ге Кеу. Эгид Э1ксоу., 2002, 1, 867-881; Аа1кег, М.Р. е! а1., Ехр. Орт. 1пуек!1дайопа1 Этидк, 2003, 12, 1269-1280; N1, Ζ-1. е! а1., Ситтеп! Оршюп ш Эгид Э1ксоуету апб Эеуе1ортеп!, 2004, 7, 446-459; Веаийеи, Р.Б., е! а1., Ситтеп! Оршюп ш 1пуекЕдаЕопа1 Этидк, 2004, 5, 838-850; Аи, 1., е! а1., Ситтеп! Эгид Татде!к-1пГес!юик О1котбегк, 2003, 3, 207-219; СпГГйй, К.С., е! а1., Аппиа1 Керойк ш Мебюта1 Сйет1к!гу, 2004, 39, 223-237; Сагго1, 8., е! а1., 1пГесЕоик О1когбегк-Огид Тагде!к, 2006, 6, 17-29. Возможность появления устойчивых штаммов НСV и необходимость идентификации

- 2 019341 средств широкого диапазона генотипов поддерживает потребность в продолжении попыток определения новых и более эффективных нуклеозидов в качестве ингибиторов Ν85Β вируса НСУ.

Нуклеозидные ингибиторы полимеразы Ν85Β могут действовать как неприродные субстраты, приводящие к разрыву цепи или как конкурентные ингибиторы, конкурирующие с нуклеотидом, связанным с полимеразой. Чтобы действовать в качестве прерывателя цепи, нуклеозидный аналог должен быть поглощен клеткой и преобразован ίη νίνο в триполифосфат для конкурирования за центр связывания полимеразы и нуклеотида. Это превращение в трифосфат обычно проводится клеточными киназами, которые предъявляют дополнительные структурные требования к потенциальному нуклеозидному ингибитору полимеразы. К сожалению, это ограничивает прямую оценку нуклеозидов как ингибиторов репликации НСУ в клеточном анализе фосфорилирования ίη Μΐι,ι.

В некоторых случаях биологическая активность нуклеозида затруднена его слабыми субстратными характеристиками к одной или нескольким киназам, необходимым для превращения его в активную трифосфатную форму. Образование монофосфата нуклеозидкиназой, как правило, рассматривается как лимитирующая стадия трех этапов фосфорилирирования. Чтобы избежать необходимости в первоначальной стадии фосфорилирования в метаболизме нуклеозида в активный трифосфатный аналог, описано приготовление стабильных фосфатных пролекарств. Нуклеозидные фосфорамидатные пролекарства, прописанные пациентам с клеточной вирусной инфекцией, показали себя как предшественники активных нуклеозидных трифосфатов и ингибиторы репликации вирусов (МсОшдап, С., с1 а1., 1. Меб. СЬет., 1996, 39, 1748-1753; Уа1ебе, О., е1 а1., 1. Меб. СЬет., 1996, 39, 1981-1990; Вакапш, 1., е1 а1., Ргос. №1юпа1 Асаб 8с1 И8А, 1996, 93, 7295-7299; 81бб1дш, Л.р., е1 а1., 1. Меб. СЬет., 1999, 42, 4122-4128; Е18етЬег§, Е. 1., е1 а1., Шс1ео51бе5, М.1с1еоОбе5 апб №.1с1ею Аабк, 2001, 20, 1091-1098; Ьее, А.А., е1 а1., ЛпбткгоЬ1а1 Адеп18 апб СЬетоШегару, 2005, 49, 1898); И8 2006/0241064 и АО 2007/095269.

Ограничением применимости нуклеозидов как жизнеспособных терапевтических средств иногда являются также их слабые физико-химические и фармакокинетические свойства. Эти слабые свойства могут ограничивать кишечную абсорбцию препарата и ограничивать поглощение тканью-мишенью или клеткой. Для улучшения свойств были использованы пролекарства нуклеозидов. Было показано, что препарат нуклеозидных фосфорамидатов улучшает системную абсорбцию нуклеозида и, более того, фосфорамидатная часть этих пронуклеотидов маскируется нейтральными липофильными группами, приобретая соответствующий коэффициент распределения для оптимизации поглощения и транспортировки в клетку, значительно увеличивая внутриклеточную концентрацию аналога монофосфата нуклеозида по сравнению с приемом только исходного нуклеозида. Ферменто-опосредованный гидролиз сложноэфирной части фосфата приводит к образованию монофосфата нуклеозида, исключая необходимость в лимитирующей стадии первоначального фосфорилирования.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам к’

к⁵')— нс? х

где, если Ζ представляет собой

то В¹ - это водород или фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь -это СН3; В⁴ - это водород, метил, ‘Рг или циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе, -^-СН2СН2СН2-) (азетидин-1-ил), ОВп или ОН и В⁹ - это Ν42;

- 3 019341 и где, если Ζ представляет собой

О 0 0 000

И II II II 11 и

НО-Р— , НО—Р-О-Р— НО—Р-О-Р-О-Р—

I II |Г1

ОН НО ОН НО ОН ОН или то К⁵ - это водород; К⁶ - это СН3; X - это Р; К⁸ - это ОМе, -Ν(-ΟΗ2ΟΗ₂ΟΗ₂-) (азетидин-1-ил), ОВп, или ОН и К⁹ - это ΝΗ₂.

Определения.

Выражение этот объект используется здесь по отношению к одному или более этих объектов; например, эта композиция относится к одной композиции или более или по крайней мере к одной композиции. По существу, термины один, один или более и по крайней мере один могут использоваться здесь взаимозаменяемо.

Выражение как определено выше или как определено здесь относится к первому определению, представленному в сущности изобретения.

Термины необязательный/дополнительный или по необходимости, используемые здесь, означают, что описанное далее событие или обстоятельство необязательно должно иметь место и что описание включает случаи, когда событие или обстоятельство имеет место и случаи, когда их нет. Например, дополнительная связь означает, что связь может быть или может не быть и что описание включает одинарную, двойную или тройную связи.

Термин независимо используется здесь для обозначения того, что переменная используется в любом случае, несмотря на присутствие или отсутствие переменной, имеющей то же или другое определение в том же соединении. Так, в соединении, в котором К присутствует дважды и определяется как независимо углерод или азот, оба К могут быть углеродом, оба К могут быть азотом или один К может быть углеродом, а другой - азотом.

Термин очищенный, как определено здесь, относится к чистоте данного соединения. Например, соединение является очищенным, если данное соединение является главным компонентом композиции, т.е. по крайней мере 50 вес.% чистоты. Так, к очищенным относятся соединения по крайней мере 50 вес.% чистоты, по крайней мере 60 вес.% чистоты, по крайней мере 70 вес.% чистоты, по крайней мере 80 вес.% чистоты, по крайней мере 85 вес.% чистоты, по крайней мере 90 вес.% чистоты, по крайней мере 92 вес.% чистоты, по крайней мере 94 вес.% чистоты, по крайней мере 96 вес.% чистоты, по крайней мере 97 вес.% чистоты, по крайней мере 98 вес.% чистоты и по крайней мере 99 вес.% чистоты.

Также предполагается, что соединение, представленное формулой I, включает дейтерированные аналоги. Термин дейтерированные аналоги означает соединение или его соли, описанное здесь, в котором ¹Н-изотоп, т.е. водород (Н), заменен ²Н-изотопом, т.е. дейтерием (Ό). Замена дейтерием может быть частичной или полной. Частичная замена дейтерием означает, что по крайней мере один водород замещен по крайней мере одним дейтерием. Например, в качестве соединения, представленного формулой 11, специалист среднего уровня может рассматривать, по крайней мере, следующие частично дейтерированные аналоги (где й_п обозначает п-количество атомов дейтерия, например, для изопропиловой группы п=1-7, тогда как для фениловой группы п=1-5). Хотя метиловые группы, изображенные ниже, показаны полностью дейтерированными, можно наблюдать, что возможны также частично дейтерированные варианты, такие как -ΟΌΗ₂ и -ΟΌ₂Η.

Это лишь несколько дейтерированных аналогов, доступных синтетически при помощи методик и реагентов, известных специалисту среднего уровня.

Термин метаболит, как описано здесь, относится к соединению, которое образуется ш νίνο после введения препарата пациенту.

Термин соли, как описано здесь, относится к соединению, которое образуется при протонирова

- 4 019341 нии протон-акцепторной части и/или депротонировании протон-донорной части. Следует отметить, что протонирование протон-акцепторной части приводит к образованию катионных частиц, в которых заряд сбалансирован за счет присутствия физиологического аниона, тогда как депротонирование протондонорной части приводит к образованию анионных частиц, в которых заряд сбалансирован за счет присутствия физиологического катиона.

Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения

Настоящее изобретение относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или метаболитным формам

где, если Ζ представляет собой

то В¹ - это водород или фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это водород, метил, ‘Рг или циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе, -^-СН₂СН₂СН₂-) (азетидин-1-ил), ОВп или ОН и В⁹ - это Ν^;

и где, если Ζ представляет собой

то В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе, -Н(-СН;СН_;СН_;-) (азетидин-1-ил), ОВп, или ОН и В⁹ - это ΝΗ₂.

Первый вариант настоящего изобретения относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или метаболитным формам

Ζ представляет собой

- 5 019341 где, если Ζ представляет собой

I ΐ

то В¹ - это водород или фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это водород, метил, ‘Рг или циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе и В⁹ - это Ν4₂;

и где, если Ζ представляет собой

то В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе и В⁹ - это ΝΗ2.

Первый аспект первого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

Второй аспект первого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где, если Ζ представляет собой

О

I то В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН₃; В⁴ - метил, ‘Рг или циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе и В⁹ - это ΝΗ2.

Третий аспект первого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

- 6 019341 где Ζ представляет собой

За

О

I

В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН₃; В⁴ - это метил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе и В⁹ - это ΝΗ2.

Четвертый аспект первого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой

I

В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это ‘Рг; В⁵ - это водород; В⁶ это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе и В⁹ - это Ν4₂.

Пятый аспект первого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой

За

В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН₃; В⁴ - циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе и В⁹ - это ΝΗ2.

Шестой аспект первого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

- 7 019341 где Ζ представляет собой

О

ι

В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН₃; В⁴ - это водород; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе и В⁹ - это ΝΗ2.

Седьмой аспект первого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой

В¹ - это водород; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это водород; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе и В⁹ - это Ν4₂.

Восьмой аспект первого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой

и где В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОМе и В⁹ - это ΝΗ2.

- 8 019341

Второй вариант настоящего изобретения относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где, если Ζ представляет собой о

ι то В¹ - это водород или фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это водород, метил, ‘Рг или циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это -^-СН2СН2СН2-) (азетидин-1-ил) и В⁹ - это ΝΉ2;

и где, если Ζ представляет собой

то В⁵ - это водород; В⁶ - это СН₃; X - это Р; В⁸ - это -^-СН2СН2СН2-) (азетидин-1-ил) и В⁹ - это ΝΉ2. Первый аспект второго варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где, если Ζ представляет собой

то В¹ - это водород или фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это водород, метил, ‘Рг или циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это -^-СН2СН2СН2-) (азетидин-1-ил) и В⁹ - это ΝΉ2.

- 9 019341

Второй аспект второго варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам где Ζ представляет собой

О

За

где В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это метил, ‘Рг или циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это -Ы(-СН2СН2СН2-) (азетидин-1-ил) и В⁹ - это ΝΗ2.

Третий аспект второго варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

Четвертый аспект второго варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой о За о

где В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это ‘Рг; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это -Ν(-ί.Ή2ί.Ή2ί.Ή2-) (азетидин-1-ил) и В⁹ - это ΝΗ2.

- 10 019341

Пятый аспект второго варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

Шестой аспект второго варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой

к² где В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это водород; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это -^-СН₂СН₂СН₂-) (азетидин-1-ил) и В⁹ - это Ν^.

Седьмой аспект второго варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

- 11 019341

Восьмой аспект второго варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

и где Я⁵ - это водород; Я⁶ - это СН3; X - это Р; Я⁸ - это -Х(-СН;СН_;СН_;-) (азетидин-1-ил) и Я⁹ - это ΝΗ₂.

Третий вариант настоящего изобретения относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где, если Ζ представляет собой

к² _ _ водород; Я^3Ь - это СН₃; Я⁴ - это водород, метил, ‘Рг или циклопентил; Я⁵ - это водород; Я⁶ - это СН3; X - это Р; Я⁸ - это ОВп и Я⁹ - это ΝΗ2;

то Я¹ - это водород или фенил; Я²

- это водород; Я^3а - это и где, если Ζ представляет собой о

но-ΡΟΗ о о и и НО—р-о-р—

I I но он

ООО

II II II

НО— Р-О-Р-О-Р— ΐ ΐ ΐ но он он или то Я⁵ - это водород; Я⁶ - это СН3; X - это Р; Я⁸ - это ОВп и Я⁹ - это ΝΗ2.

Первый аспект третьего варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам:

I

- 12 019341 где Ζ представляет собой

К¹ - это водород или фенил; К² - это водород; К^3а - это водород; К^3Ь - это СН3; К⁴ - это водород, метил, ‘Рг или циклопентил; К⁵ - это водород; К⁶ - это СН3; X - это Р; К⁸ - ОВп и К⁹ - это ΝΗ₂.

Второй аспект третьего варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой

За

где К¹ - это фенил; К² - это водород; К^3а - это водород; К^3Ь - это СН3; К⁴ - это метил, ‘Рг или циклопентил; К⁵ - это водород; К⁶ - это СН3; X - это Р; К⁸ - это ОВп и К⁹ - это ΝΗ₂.

Третий аспект третьего варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

Четвертый аспект третьего варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

- 13 019341

где Ζ представляет собой

В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это ‘Рг; В⁵ - это водород; В⁶ это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОВп и В⁹ - это N4-.

Пятый аспект третьего варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой

За

где В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОВп и В⁹ - это N4-.

Шестой аспект третьего варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой о

где В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это водород; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОВп и В⁹ - это ЯН₂.

Седьмой аспект третьего варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

- 14 019341 где Ζ представляет собой

где В¹ - это водород; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это водород; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОВп и В⁹ - это ΝΉ₂.

Восьмой аспект третьего варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой

и где В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОВп и В⁹ - это ΝΉ2.

Четвертый вариант настоящего изобретения относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где, если Ζ представляет собой то В¹ - это водород или фенил; В²

- это водород; В^3а - это , , ...... водород; В^3Ь - это СН₃; В⁴ - это водород, метил, ‘Рг или циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОН и В⁹ - это ΝΉ2;

и где, если Ζ представляет собой

то В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОН и В⁹ - это ΝΉ2.

- 15 019341

Первый аспект четвертого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой

где В¹ - это водород или фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это водород, метил, ‘Рг или циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОН и В⁹ - это ЯН₂.

Второй аспект четвертого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

где Ζ представляет собой о

где В¹ - это фенил; В² - это водород; В^3а - это водород; В^3Ь - это СН3; В⁴ - это метил, ‘Рг или циклопентил; В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОН и В⁹ - это ЯН₂.

Третий аспект четвертого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

- 16 019341

Четвертый аспект четвертого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

Пятый аспект четвертого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

Шестой аспект четвертого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

- 17 019341

Седьмой аспект четвертого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам

Восьмой аспект четвертого варианта относится к фосфорамидату нуклеозида, представленному формулой I, или его стереоизомерам, солям, фармацевтически пригодным солям, гидратам, сольватам, кристаллическим или их метаболитным формам к»

I где Ζ представляет собой

О и но-р-	о , НО—Р-О-	О
-Ρ-
он	но	ΟΗ

ООО . .. II II Ч

НО—Р-О-Р-О-Р—

I < I но он он или и где В⁵ - это водород; В⁶ - это СН3; X - это Р; В⁸ - это ОН и В⁹ - это Ν42.

Дозировка, введение и применение.

Пятый вариант настоящего изобретения относится к композиции для лечения любого из описанных здесь вирусных агентов, содержащей фармацевтически приемлемую среду из числа наполнителей, носителей, разбавителей или аналогичных сред и соединение, включая его возможные соли (кислотноаддитивные или основно-аддитивные соли), гидраты, сольваты и кристаллические формы, представленное формулой I.

Предполагается, что композиция по пятому варианту может содержать любое из соединений, рассматриваемых в настоящем изобретении как самостоятельно, так и в сочетании с другим соединением настоящего изобретения.

Путем смешивания соединений согласно настоящему изобретению и носителей может быть получен широкий диапазон лекарственных форм для перорального приема. Пероральный прием может осуществляться в форме таблеток, таблеток в оболочке, твердых и мягких желатиновых капсул, растворов, эмульсий, сиропов или суспензий. Соединения согласно настоящему изобретению эффективны при назначении путем введения суппозиториев среди прочих путей введения. Наиболее удобным способом введения является обычно пероральное применение с использованием удобного ежедневного режима дозирования, который можно подобрать в соответствии с серьезностью заболевания и реакцией пациента на антивирусное медикаментозное лечение.

Соединение или соединения согласно настоящему изобретению, а также их фармацевтически приемлемые соли вместе с одним или более традиционным наполнителем, носителем или разбавителем могут быть включены в композицию фармацевтических средств и единичных лекарственных форм. Фармацевтические композиции и единичные лекарственные формы могут включать стандартные компоненты в стандартных пропорциях с использованием дополнительных активных соединений или без них, а единичные лекарственные формы могут содержать любое подходящее эффективное количество активного компонента с дневной дозировкой, соответствующей применению. Фармацевтические композиции могут применяться в твердом виде, например в виде таблеток или наполненных капсул, в полутвердом или порошковом виде, в формах с замедленным высвобождением или в виде жидкостей, например суспензий,

- 18 019341 эмульсий или наполненных капсул для перорального приема; или в форме суппозиториев для ректального или вагинального введения. Стандартная композиция содержит примерно от 5 до 95% активного соединения или соединений (вес). Термин препарат или лекарственная форма подразумевает как твердые, так и жидкие композиции активного соединения, и специалист в данной области поймет, что активный компонент может присутствовать в различных препаратах в зависимости от нужной дозировки и фармакокинетических параметров.

Термин наполнитель, используемый здесь, относится к соединению, которое используется для приготовления фармацевтической композиции, и обычно является безопасным, нетоксичным и не вызывающим биологических или других проблем, и включает наполнители, пригодные для ветеринарного и фармацевтического применения. Соединения данного изобретения могут применяться самостоятельно, но, как правило, они будут вводиться в смеси с одним или более подходящих фармацевтических наполнителей, разбавителей или носителей, выбранных с учетом предполагаемого способа введения и общепринятой фармацевтической практики.

Форма фармацевтически приемлемой соли активного компонента также может изначально обеспечивать желаемые фармакокинетические свойства активного компонента, которые отсутствовали в несолевой форме, и может даже положительно влиять на фармакодинамику активного компонента по отношению к его терапевтической активности в организме. Выражение фармацевтически пригодная соль соединения, используемое здесь, означает соль, которая является пригодной для лечебных целей и которая обладает необходимой фармакологической активностью исходного соединения. К таким солям относятся (1) кислотно-аддитивные соли, образованные с неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и т.п.; или образованные с органическими кислотами, такими как гликолевая кислота, пировиноградная кислота, молочная кислота, малоновая кислота, яблочная кислота, малеиновая кислота, фумаровая кислота, винная кислота, лимонная кислота, 3-(4-гидроксибензоил)бензойная кислота, коричная кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 1,2-этандисульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, 4-хлорбензолсульфоновая кислота, 2-нафталинсульфоновая кислота, 4-толуолсульфоновая кислота, камфорсульфоновая кислота, лаурилсерная кислота, глюконовая кислота, глютаминовая кислота, салициловая кислота, муконовая кислота и т.п., или (2) основно-аддитивные соли, образованные с сопряженными основаниями любых перечисленных выше неорганических кислот, где сопряженные основания включают катионный компонент из числа Ха'. К⁺, Мд²⁴, Са²⁺, Ν1где В''' представляет собой алкил С_1-3, а д - число из ряда 0, 1, 2, 3, или 4. Следует понимать, что все упоминания фармацевтически пригодных солей включают сольвентаддитивные формы (сольваты) или кристаллические формы (полиморфы), как определено здесь, одной и той же кислотно-аддитивной соли.

Твердые формы препаратов включают, например, порошки, таблетки, пилюли, капсулы, суппозитории и диспергируемые гранулы. Твердый носитель может представлять собой одно или более соединений, которые могут также действовать как разбавители, ароматизаторы, солюбилизаторы, связующие агенты, консерванты, агенты разрушения таблеток или как материал капсулирования. В порошках носителем обычно является тонко диспергированное твердое вещество, представляющее собой смесь с тонко диспергированным активным компонентом. В таблетках активный компонент обычно смешан в соответствующей пропорции с носителем, имеющим необходимую связывающую способность, и спрессован до желаемой формы и размера. Список подходящих носителей включает, не ограничиваясь, карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактозу, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлозу, натрий-карбоксиметилцеллюлозу, низкоплавкий воск, масло какао и т.п. Препараты в твердых формах могут содержать, помимо активного компонента, красители, ароматизаторы, стабилизаторы, буферы, искусственные и природные подсластители, диспергаторы, загустители, солюбилизирующие агенты и т.п. Примеры твердых лекарственных средств представлены в следующих документах: ЕР 0524579; И8 6635278; И8 2007/0099902; И8 7060294; И8 2006/0188570; И8 2007/0077295; И8 2004/0224917; И8 7462608; И8 2006/0057196; И8 6267985; И8 6294192; И8 6569463; И8 6923988; И8 2006/0034937; И8 6383471; И8 6395300; И8 6645528; И8 6932983; И8 2002/0142050; И8 2005/0048116; И8 2005/0058710; И8 2007/0026073; И8 2007/0059360 и И8 2008/0014228, каждый из которых включен сюда путем ссылки.

Жидкие композиции также пригодны для перорального введения и включают эмульсии, сиропы, эликсиры и водные суспензии. Сюда относятся и твердые формы лекарственных средств, которые могут быть превращены в лекарства в жидкой форме непосредственно перед применением. Эмульсии могут быть приготовлены в растворах, например в водных растворах пропиленгликоля, или могут содержать эмульгирующие агенты, такие как лецитин, сорбита моноолеат или гуммиарабик. Водные суспензии могут быть приготовлены путем диспергирования тонко измельченного активного компонента в воде с вязким материалом, таким как природные или синтетические камеди, смолы, метилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза и другие широко известные суспендирующие агенты.

Соединения согласно настоящему изобретению могут входить в композиции для применения в виде суппозиториев. Низкоплавкий воск, такой как смесь глицеридов жирных кислот или масло какао, плавится первым, и активный компонент гомогенно диспергируется, например, при помешивании. Расплав

- 19 019341 ленная гомогенная смесь разливается в формы соответствующего размера, охлаждается и затвердевает.

Соединения согласно настоящему изобретению могут входить в композиции для вагинального применения. Пессарии, тампоны, кремы, гели, пасты, пены или спреи содержат, помимо активного компонента, также соответствующие носители, известные специалистам среднего уровня.

Подходящие рецептуры вместе с фармацевтическими носителями, разбавителями и наполнителями описаны в документе Кеттд1оп: Т1зе 8с1епсе апб Ргасйсе οί Рйагтасу 1995, под ред. Е.^. Магбп, Маск РнЫМапд Сотрапу, 19-е изд., Истон, Пенсильвания, включенном здесь путем ссылки. Опытный ученый по созданию рецептур может модифицировать препараты в пределах указаний описания, создавая различные композиции для конкретного способа введения без перевода композиций согласно настоящему изобретению в нестабильное состояние и без ухудшения их терапевтической активности.

Модификация этих соединений с целью улучшения их растворимости в воде или другом растворителе, например, может быть легко выполнена за счет минимальных изменений (напр., образование соли), что входит в навыки специалиста в данной области. Также знающий специалист может модифицировать способ введения и режим дозирования конкретного соединения, чтобы регулировать фармакокинетику данных соединений для максимально благотворного воздействия на пациентов.

Кроме того, очищенные соединения согласно настоящему изобретению могут входить в композиции будучи связанными с липосомами или мицеллами. Что касается липосом, предполагается, что очищенные соединения могут вводиться в композиции таким образом, как описано в патентах США Νο.Νο. 5013556; И.8. 5213804; 5225212; 5891468; 6224903; 6180134; 5192549; 5316771; 4797285; 5376380; 6060080; 6132763; 6653455; 6680068; 7060689; 7070801; 5077057; 5277914; 5549910; 5567434; 5077056; 5154930; 5736155; 5827533; 5882679; 6143321; 6200598; 6296870; 6726925 и 6214375, каждый из которых включен путем ссылки. Что касается мицелл, предполагается, что очищенные соединения могут вводиться в композиции таким образом, как описано в патентах США Νο.Νο. 5145684 и 5091188, которые включены путем ссылки.

Шестой вариант настоящего изобретения относится к использованию соединения, представленного формулой I, в производстве медикаментов для лечения любых состояний, возникших в результате инфицирования любым из ниже перечисленных вирусных агентов: вирус гепатита С, вирус Западного Нила, вирус желтой лихорадки, вирус Денге, риновирус, полиовирус, вирус гепатита А, вирус диареи скота и вирус японского энцефалита.

Термин медикамент обозначает вещество, используемое в способе лечения и/или профилактики заболевания, где вещество включает, но не ограничивает, композицию, рецептуру, лекарственную форму и т.п., представленную соединением формулы I. Предполагается, что использование соединения, представленного формулой I, в производстве медикамента для лечения любых антивирусных состояний, описанных здесь, осуществляется отдельно или совместно с другим соединением настоящего изобретения. Медикамент включает, не ограничиваясь, любую из композиций, подразумеваемых седьмым вариантом настоящего изобретения.

Седьмой вариант настоящего изобретения относится к способу лечения и/или профилактики заболевания, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения, представленного формулой I.

Первый аспект седьмого варианта относится к способу лечения и/или профилактики заболевания, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества по крайней мере двух соединений, которые могут быть описаны соединением, представленным формулой I.

Второй аспект седьмого варианта относится к способу лечения и/или профилактики заболевания, включающему альтернативное или одновременное введение пациенту терапевтически эффективного количества по крайней мере двух соединений, которые могут быть описаны соединением, представленным формулой I.

Предполагается, что у пациента наблюдается одно из состояний, возникших в результате инфицирования любым из описанных здесь вирусных агентов, включая, но не ограничиваясь, вирус гепатита С, вирус Западного Нила, вирус желтой лихорадки, вирус Денге, риновирус, полиовирус, вирус гепатита А, вирус диареи скота или вирус японского энцефалита, вирусы ПагАтбае. рейМгикек или йерасМгикек или вирусные агенты, вызывающие симптомы, эквивалентные или сравнимые с любым из вышеперечисленных вирусов.

Термин пациент обозначает млекопитающее, включая, не ограничиваясь, крупный рогатый скот, свиней, овец, кур, индеек, буйволов, лам, страусов, собак, котов и людей; предпочтительным пациентом является человек. Предполагается, что в способе лечения пациента в девятом варианте может использоваться любое из подразумеваемых здесь соединений как по отдельности, так и в сочетании с другим соединением согласно настоящему изобретению.

Термин терапевтически эффективное количество, используемый здесь, означает количество, необходимое для облегчения симптомов заболевания пациента. Дозировка регулируется по индивидуальным требованиям в каждом конкретном случае. Эта дозировка может изменяться в широких пределах в зависимости от множества факторов, таких как серьезность заболевания, которое необходимо вылечить, возраст и общее состояние здоровья пациента, другие медикаменты, которыми лечится пациент, способ и

- 20 019341 форма введения, а также предпочтения и опыт практикующего врача. Для перорального введения дневная дозировка в пределах около 0,001-10 г, включая все промежуточные значения, такие как 0,001, 0,0025, 0,005, 0,0075, 0,01, 0,025, 0,050, 0,075, 0,1, 0,125, 0,150, 0,175, 0,2, 0,25, 0,5, 0,75, 1, 1,5, 2, 2,5, 3, 3,5, 4, 4,5, 5, 5,5, 6, 6,5, 7, 7,5, 8, 8,5, 9 и 9,5 в день, является пригодной для монотерапии и/или комплексной терапии. Частная дневная дозировка находится в интервале около 0,01-1 г в день, включая все инкрементные промежуточные значения с шагом 0,01 г (т.е. 10 мг), предпочтительная дневная дозировка около 0,01-0,8 г в день, предпочтительнее около 0,01-0,6 г в день, предпочтительнее около 0,01-0,25 г в день, каждая из которых включает все инкрементные промежуточные значения с шагом 0,01 г. Как правило, лечение начинается с большой первоначальной ударной дозы для быстрого сокращения или уничтожения вируса с последующим снижением дозировки до уровня, достаточного для предотвращения возрождения инфекции. Специалист среднего уровня по лечению описанных здесь заболеваний может без лишних экспериментов, полагаясь на собственные знания, опыт и описание данного изобретения, установить терапевтически эффективное количество соединений настоящего исследования для данного заболевания и пациента.

Терапевтическая эффективность может быть установлена по пробам функций печени, включая, не ограничиваясь, уровень белков, таких как протеины сыворотки (например, альбумин, фактор свертывающей системы крови, щелочная фосфатаза, аминотрансферазы (например, аланин-трансаминаза, аспартат-трансаминаза), 5'-нуклеозидаза, γ-глютаминилтранспептидаза и т.п.), синтез билирубина, синтез холестерина и синтез желчной кислоты; метаболическую функцию печени, включая, не ограничиваясь, метаболизм углеводов, метаболизм аминокислот и аммиака. Другим способом контроля эффективности терапии является измерение РНК НСУ. Результаты этих тестов позволяют оптимизировать дозировку.

Третий аспект седьмого варианта относится к способу лечения и/или профилактики заболевания, включающему введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения, представленного формулой I и терапевтически эффективного количества другого антивирусного агента; введение может быть одновременным или альтернативным. Понятно, что время между альтернативными введениями может изменяться в пределах от 1 до 24 ч, включая любые промежуточные значения, в том числе 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23 ч. Примеры других антивирусных агентов включают следующие препараты, но не ограничиваются ими: ингибиторы протеазы N83 НСУ (см. АО 2008010921, АО 2008010921, ЕР 1881001, АО 2007015824, АО 2007014925, АО 2007014926, АО 2007014921, АО 2007014920, АО 2007014922, И8 2005267018, АО 2005095403, АО 2005037214, АО 2004094452, И8 2003187018, АО 200364456, АО 2005028502 и АО 2003006490); ингибиторы Ν85Β НСУ (см. И8 2007275947, И8 20072759300, АО 2007095269, АО 2007092000, АО 2007076034, АО 200702602, И8 200598125, АО 2006093801, И8 2006166964, АО 2006065590, АО 2006065335, И8 2006040927, И8 2006040890, АО 2006020082, АО 2006012078, АО 2005123087, И8 2005154056, И8 2004229840, АО 2004065367, АО 2004003138, АО 2004002977, АО 2004002944, АО 2004002940, АО 2004000858, АО 2003105770, АО 2003010141, АО 2002057425, АО 2002057287, АО 2005021568, АО 2004041201, И8 20060293306, И8 20060194749, И8 20060241064, И8 6784166, АО 2007088148, АО 2007039142, АО 2005103045, АО 2007039145, АО 2004096210 и АО 2003037895); ингибиторы N84 НСУ (см. АО 2007070556 и АО 2005067900); ингибиторы Ν85α НСУ (см. И8 2006276511, АО 2006120252, АО 2006120251, АО 2006100310, АО 2006035061); агонисты То11-подобных рецепторов (см. АО 2007093901) и другие ингибиторы (см. АО 2004035571, АО 2004014852, АО 2004014313, АО 2004009020, АО 2003101993, АО 2000006529); соединения, описанные в патентной заявке США № 12/053015, поданной 21 марта 2008 года (содержания которых включены путем ссылки).

Четвертый аспект седьмого варианта относится к способу лечения и/или профилактики заболевания, включающему альтернативное или одновременное введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения, представленного формулой I, и другого антивирусного агента. Понятно, что время между альтернативными введениями может изменяться в пределах от 1 до 24 ч, включая любые промежуточные значения, в том числе 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22 и 23 ч.

Предполагается, что другой антивирусный агент представляет собой интерферон-α, интерферон-β, пегилированный интерферон-α, рибавирин, левовирин, вирамидин, другие нуклеозидные ингибиторы полимеразы НСУ, ингибиторы полимеразы НСУ ненуклеозидного типа, ингибиторы протеазы НСУ, ингибиторы геликазы НСУ или ингибиторы синтеза НСУ. При введении активного соединения или его производного либо соли в сочетании с другим антивирусным агентом активность может превзойти активность исходного соединения. При использовании комплексной терапии в качестве способа лечения такое введение может быть одновременным или последовательным по отношению к нуклеозидным производным. Термин одновременное введение, используемый здесь, включает введение агентов в одно и то же или в разное время. Введение двух или более агентов в одно и то же время может быть достигнуто за счет введения одной композиции, содержащей два или более активных компонентов, или практически одновременного введения двух или более лекарственных форм с одним активным агентом.

Следует отметить, что для описанных здесь соединений при введении их пациенту могут образовы- 21 019341 ваться метаболиты. Например, для соединения, представленного формулой I, предполагается, что может возникать гидролиз сложного фосфатного эфира (-ОВ¹) или сложного эфира карбонила (-ОВ⁴); и что образующийся гидролизованный продукт сам может подвергаться гидролизу ίη νινο с образованием монофосфата, который может быть превращен в дифосфат и/или трифосфат. Предполагается, что формула изобретения, представленная ниже, включает как синтетические соединения, так и соединения, образованные ίη νινο. Метаболитные соединения веществ, представленных структурами 11-14 (см. ниже) могут быть получены при введении пациенту оговоренных соединений. Альтернативно, метаболитные соединения могут быть получены селективным гидролизом сложного эфира карбонила (-ОВ⁴) или сложного эфира фосфата (-ОВ¹) для соединений, представленных структурами 11-14 (см. ниже). Поскольку здесь подразумеваются метаболиты или соли метаболитов, то они подразумеваются также как альтернативные варианты способа лечения пациента, когда по крайней мере одно соединение, представленное формулой I, контактирует по крайней мере с одной клеткой, инфицированной вирусом гепатита С.

Следует понимать, что представленные здесь ссылки на лечение распространяются и на профилактику, и на лечение существующих состояний. Кроме того, термин лечение инфекции НСУ, используемый здесь, также включает лечение или профилактику заболеваний или состояний, связанных с НСУ, или промежуточных состояний, или клинических симптомов.

Примеры

Более глубокое понимание описанных вариантов может быть достигнуто при рассмотрении следующих примеров, которые являются лишь иллюстрациями, не ограничивая раскрытого здесь изобретения.

ΟΒζ Ρ ΟΒζ Е ΟΒζ Р

В* = Н(-СН_гСН₂СН_г-) = —N

3, X' = С1

4, X' = Вг

5, X' = I

12. И* = -Н(-СН₂СН₃СН₂-). К⁴ = Ме

13. К⁸ = -ОВп, К⁴ = сус1ореп!уI

14. К⁸ = -ОН, К⁴ = сус1ореп1у1

Использование конвергентного способа гликозилирования для приготовления 2'-дезокси-2'-фтор-2'С-метилпуриновых нуклеозидов и соответствующих им нуклеотидных фосфорамидатов основывается на разработке синтеза 3,5-ди-О-бензоил-2-дезокси-2-фтор-С-метилрибонолактона (СНнн. К.; Аанд, Р. Международная заявка на изобретение АО 2006/031725).

Предприняв несколько попыток с использованием промежуточного связывания кислоты Льюиса типа Форбрюггена и рибонолактол 1-О-ацетата 3,5-ди-О-бензоил-2-дезокси-2-фтор-2-Сметилрибонолактона, мы получили очень слабо согласующиеся результаты, при этом основным продуктом был нежелательный α-аномер. Синтез Митсунобу с рибонолактолом (2) привел к получению желаемого продукта, но без стереоселективности и с очень сложным хроматографическим разделением, в результате которого выход продукта только на этой стадии составил 6-10%, и этот способ нельзя осуществить в промышленном масштабе.

Целесообразным подходом стала реакция 8_Ν2 типа с использованием гало-сахара и соли пуринового основания. И снова, задачей этого подхода стало стереоспецифическое получение α-гало-сахара с высоким выходом для преимущественного получения инверсионной конфигурации, ожидаемой в реакциях 8-.,-2 типа. В стандартном способе используется аномерная смесь 1-О-ацетата сахара с НС1 или НВг в уксусной кислоте. Однако этот способ приводит к получению нежелательной смеси аномеров. Снижение лактона (например, с использованием ЫА1Н(трет-ВиО)₃ или Ве6-А1) первоначально дает соотношение β/α аномеров 2:1, однако после первичной очистки на силикагелевой фильтрационной колонке образующееся масло медленно аномеризуется с образованием чистого кристаллического β-аномера лактола (2). Этот процесс может быть ускорен от нескольких дней при комнатной температуре до 5-17 ч при температуре 50°С с затравкой β-кристаллов. Мы наблюдали, что лактол в растворах снова медленно аномеризуется до равновесия 2:1 в таких растворителях, как дихлорметан или хлороформ, при комнатной тем

- 22 019341 пературе. Этот процесс может быть значительно замедлен при охлаждении раствора (например, -20°С).

Хлорирование по механизму 8_Ν2 с Ν-хлорсукцинимидом (N08) приводит к стереоспецифическому получению α-хлорсахара (3) с практически количественным выходом.

Для получения α-бромсахара (4) были испытаны различные условия бромирования, включая Νбромсукцинимид (ΝΒ8) и НВг в уксусной кислоте. Из них мы выбрали общую реакцию бромирования с использованием комбинации трифенилфосфина (РРй₃) и тетрабромуглерода (СВг₄) (напр., Ноох с1 а1., Сап. 1. С11ст.. 1968, 46, 86-87). При условии использования метиленхлорида в качестве растворителя и при поддержании низкой температуры (от -10 до -20°С) мы получили наилучший результат, где желаемое соотношение изомеров α/β было больше чем 10:1 при выходе более 80%. Заявители уверены, что такой уровень стереоселективности для данного типа реакции в литературе не описан. Другим практическим наблюдением стал тот факт, что проведение бромирования при температурах ниже комнатной (например, наиболее целесообразно около -20°С) и действие силикагеля на холодный реакционный раствор как можно раньше после завершения реакции минимизирует аномеризацию бромсахара. Бромсахар может быть очищен при пропускании через силикагелевую фильтрационную колонку. После очистки силикагелем бромсахар практически стабилен даже при повышенных температурах.

Йодсахар (5) был приготовлен таким же способом и может быть связан с пурином для получения ключевого полупродукта (6).

Руководствуясь общим способом связывания с пурином, предложенным Ваи!а с1 а1. (Международная заявка на изобретение \¥О 2003/011877), мы связали α-бромсахар (4) с калиевой солью 6-хлор-2аминопурином в трет-бутаноле в ацетонитриле. Реакция заняла более недели при комнатной температуре. Реакция была оптимизирована для ее завершения в течение 24 ч при 50°С. После частичной очистки на силикагелевой фильтрационной колонке аномерная смесь была выделена с выходом 63% и соотношением β/α 14:1. β-аномер (6) может быть селективно выкристаллизован из метанольного раствора для получения чистого целевого β-аномера (6) с 55% выходом из бромсахара (4).

Располагая ключевым полупродуктом 6, была выполнена конверсия в незащищенные 2-амино-6замещенные пурины (например, 7-10). Дальнейшее превращение в производные фосфорамидатов (например, 11-14) проводилось за счет адаптации способа, предложенного БсйЧсп с1 а1., Огд. Ргос. Кек. Эсу., 2002, 6, 819-822 или как описано в патентной заявке США № 12/053015, поданной 21 марта 2008 г., с. 651-675. Поскольку фосфорамидатная группа может в меньшей степени реагировать также по вторичному 3'-гидроксилу, существует возможность присутствия 3'-монофосфорамидатных и 3',5'-бисфосфорамидатных примесей. Следует ожидать, что 3'-изомер имеет такие же физические свойства, что и целевой 5'-изомер, что затрудняет хроматографическю очистку. Это было исправлено при последующем взаимодействии неочищенной смеси продуктов с суб-стехиометрическими количествами защитных групп, которые являются селективными для первичных гидроксилов по сравнению со вторичными гидроксилами, таких как трет-бутилдиметилсилилхлорид, трет-бутилдифенилсилилхлорид или 4,4'диметокситритилхлорид в присутствии пиридина или аналогичного основания для получения 5' защищенного 3'-фосфорамидата. Полученный продукт и бис-замещенный фосфорамидат менее полярны, чем целевой 5'-фосфорамидат, и могут быть легко отделены при помощи хроматографии.

Соединение (1) может быть получено по способу, описанному на странице 5 опубликованной заявки США № 2008/0139802 (которая соответствует 2008/045419), на с. 11-13 в документе \¥О 2006/012440 и на с. 20-22 и 30-31 в документе \¥О 2006/031725, каждый из которых включен здесь путем ссылки.

Синтез ((2К,3К,4К,5К)-3-(бензоилокси)-4-фтор-5-гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2ил)метилбензоата (2).

В 5-л сухую трехгорлую круглодонную колбу с механической мешалкой, капельной воронкой и термометром поместили лактон ((2К,3К,4К)-3-(бензоилокси)-4-фтор-4-метил-5-оксотетрагидрофуран-2ил)метилбензоат (1, 379 г, 1,018 моль). Твердое вещество растворили в безводном тетрагидрофуране (ТГФ) (1,75 л) и охладили до -30°С в атмосфере азота. Раствор три-трет-бутоксиалюмогидрида лития (1,0 М в ТГФ, 1,527 л) добавляли к раствору лактона при помешивании в течение более 1 ч и поддержании температуры -30°С. После завершения добавления температуру немного повысили и после завершения реакции провели тонкослойную хроматографию (К_£ лактола 0,4, 30% ЕЮЛс в гексанах). Реакция была завершена через 1 ч 15 мин (температура составила -10°С). Реакция была подавлена добавлением этилацетата (900 мл) через капельную воронку. Насыщенный раствор Νχα (40 мл) добавили при 0°С. Мутную смесь декантировали в 10-л круглодонную колбу. Твердый осадок, оставшийся после этого, отфильтровали и промыли этилацетатом (2x200 мл). Фильтрат объединили с декантированным раствором и объединенный раствор концентрировали при пониженном давлении. Маслянистый осадок растворили в этилацетате (2 л) и промыли 3 N раствором НС1 (600 мл). Водный слой подвергли обратной экстракции с этилацетатом (3x400 мл). Объединенный органический слой промыли водой (3x800 мл), насыщенным раствором NаНСО₃ (400 мл) и насыщенным солевым раствором (400 мл). Органический раствор высушили над Мд8О₄, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении до получения светлокоричневого маслянистого осадка. Осадок очистили на колонке с упакованным слоем (2,2 кг силикагеля 40-63 мкм, упакованного в 6-л воронку из пористого стекла, длина слоя силикагеля 22 см, диаметр 15 см)

- 23 019341 с использованием отсоса и поэтапного градиента 5, 10, 20 и 30% этилацетата в гексанах - около 5 л каждого. Фракции, содержащие продукт, были объединены и концентрированы при пониженном давлении до бесцветной, очень густой жидкости (310,4 г).

Жидкость медленно твердела после добавления затравки кристаллического бета-продукта (рассыпано около 100 мг) под вакуумом (0,2 мм рт. ст.) при 50°С. Процесс отверждения закончился за 20 ч при 50°С с вакуумом или без него. Собранный, таким образом, белый твердый продукт (293,8 г, 77%) имеет температуру плавления 79-80°С и отношение β/α 20:1 по данным ЯМР.

Ή-ЯМР (ДМСО-й₆) β-изомер, δ 5,20 (дд (дублет дублетов), 1Η, ΟΗ); α-изомер, δ 5,40 (дд, 1Η, ΟΗ), (β-лактол). (ДМСО-й₆): δ 7,99 (м (мультиплет), 2Η, аром.), 7,93 (м, 2Η, аром.), 7,70 (м, 1Η, аром.), 7,61 (м, 1Η, аром.), 7,55 (м, 2Η, аром.), 7,42 (м, 2Η, аром.), 7,32 (дд, 1Η, Ό1-Η), 5,54 (дд, 1Η, С3-Н), 5,20 (дд, 1Η, ΟΗ), 4,55-4,50 (м, 1Η, С5-На), 4,46-4,40 (м, 2Η, С5-Ш> и С4-Н), 1,42 (д (дублет), 3Η, СИ₃).

Синтез ((2К,3К,4К,5К)-3-(бензоилокси)-5-хлор-4-фтор-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метилбензоата (3).

К раствору смеси соединения 2 (1,0 г, 2,67 ммоль) и РРй₃ (1,4 г, 5,34 ммоль) в СИ₂С1₂ (15 мл) частями добавили NС8 (1,07 г, 8,01 ммоль) при 0°С. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, пропустили через силикагелевую колонку и элюировали смесью ЕЮАс-гексаны (1:4) под давлением. Собранные нужные фракции были объединены, концентрированы и упарены несколько раз совместно с СИ₂С1₂ и использованы на следующих этапах (1,0 г, 95%).

Ή-ЯМР (СОС1₃): δ 8,13-8,02 (м, 4Н, ароматический), 7,78-7,50 (м, ароматический, 2Н), 7,53-7,43 (м, 4Н, ароматический), 6,01 (с (синглет), 1Н, Н-1), 5,28 (дд, 1Н, 1=3,2, 5,6 Гц, Н-3), 4,88 (м, 1Η, Н-Н-4), 4,77 (дд, 1Η, 1=3,2, 12,4 Гц, Н-5), 4,61 (дд, 1Η, 1=4,0, 12,4 Гц, Н-5'), 1,73 (д, 3Η, 1=21,6 Гц, СИ₃).

Синтез ((2К,3К,4К,5К)-3-(бензоилокси)-5-бром-4-фтор-4-метилтетрагидрофуран-2ил)метилбензоата (4).

Безводный дихлорметан (5,6 л) поместили в реактор и охладили до -22°С или ниже. К холодному растворителю добавили трифенилфосфин (205,4 г, 0,783 моль) и перемешивали суспензию до образования раствора. Твердый лактол (2, 209,4 г, 0,559 моль) добавили к холодному раствору и перемешивали в течение 15 мин. Тетрабромуглерод (278,2 г, 0,839 моль) добавляли частями при поддержании температуры раствора в интервале от -22 до -20°С под потоком азота (около 30 мин). После завершения прибавления СВг₄ температуру медленно повышали до -17°С в течение 20 мин. Тонкослойная хроматография показала, что реакция завершена более чем на 95% (К_£8 0,61 (α), 0,72 (β), лактола 0,36; 20% ЕЮАс в гексанах). Реакционный раствор немедленно переместили в емкость, содержащую 230 г силикагеля для флэшхроматографии (40-63 мкм). Перемешанную смесь немедленно пропустили через слой силикагеля (680 г) в 2,5-л воронке Бюхнера из пористого стекла. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении примерно до 800 мл, и соотношение α/β изомеров в неочищенном продукте составило 10:1, как установлено по данным Ή-ЯМР (СЭСР): δ 6,35 (8, α С1-И), 6,43 (ά, β С1-Н). Осадок очистили хроматографией на колонне с пробкой, используя 2,1 кг силикагеля в 6-л воронке Бюхнера из пористого стекла и промывая (всасыванием) при поэтапном элюировании градиента 1, 5, 8, 12% ЕЮАс в гексане (около 4 л каждого) для удаления неполярных примесей, а затем 12, 25% ЕЮАс в гексане (в целом 6 л) для элюирования продукта. Фракции, содержащие продукты, были объединены в две фракции, концентрированы при пониженном давлении, высушены под вакуумом (0,1 мм рт. ст., комнатная температура, 20 ч) до состояния бесцветного масла. Основная фракция (197 г, 89% α/β = 20:1). Альф-изомер, выкристаллизовавшийся из небольшой порции масла при стоянии при 0°С в течение нескольких недель, образовал крупные, тонкие пластинки, т.пл. 59-61°С. Чистый бета-изомер, выкристаллизовавшийся из маслянистой смеси альфа и бета продукта в предыдущем, менее селективном процессе, образовал иглы, т.пл. 77-79°С.

¹ Н-ЯМР (β-бромид) (СБС1₃): δ 8,08 (м, 2Η, аром.), 8,04 (м, 2Η, аром.), 7,62 (м, 1Η, аром.), 7,54-7,45 (м, 3Η, аром.), 7,35 (м, 2Η, аром.), 6,43 (д, 1Η, С1-Н), 6,04 (дд, 1Η, Ό3-Η), 4,78-4,73 (м, 2Η, С4-Н и С5-На), 4,63-4,58 (м, 1Η, С5-ИБ), 1,76 (д, 3Η, ϋΗ₃). α-бромид, α/β = 20:1) (СОС1₃): δ 8,13 (м, 2Η, аром.), 8,02 (м, 2Η, аром.), 7,63-7,56 (м, 2Η, аром.), 7,50-7,42 (м, 4Η, аром.), 6,34 (с, 1Η, С1-Н), 5,29 (дд, 1Η, Ό3-Η), 4,88 (м, 1Η, С4-Н), 4,78 (дд, 1Η, С5-На), 4,63 (дд, 1Η, Ό5-Ηϋ), 1,72 (д, 3Η, ϋΗ₃).

Синтез ((2К,3К,4К,5К)-3-(бензоилокси)-4-фтор-5-йод-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метилбензоата (5).

К раствору соединения 2 (1 г, 2,67 ммоль), трифенилфосфина (700 мг, 2,67 ммоль) и имидазола (180 мг, 2,67 ммоль) в безводном СИ₂С1₂ (10 мл) добавили йод (680 мг, 2,68 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин, пропустили через силикагелевую воронку и элюировали смесью ЕЮАсгексаны (1:4) до получения сиропообразного продукта (1,3 г, количественно) и использовали в следующей реакции без дальнейшего определения параметров.

Синтез (2К,3К,4К,5К)-5-(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)-2-(бензоилоксиметил)-4-фтор-4метилтетрагидрофуран-3 -илбензоата (6).

В 12-л трехгорлую круглодонную колбу поместили 6-хлор-2-аминопурин (225,4 г, 1,329 моль). Добавили безводный трет-ΒπΟΗ (4,5 л) и перемешивали раствор механической мешалкой при комнатной температуре. Добавили по частям трет-бутоксид калия (твердый, 151,6 г, 1,35 моль) под потоком азота

- 24 019341 при перемешивании. Смесь перемешивали при комнатной температуре еще в течение 30 мин. В 5-л круглодонную колбу поместили α-бромид (4, 197 г, 0,451 моль) и 3 л безводного ацетонитрила при комнатной температуре. Раствор бромида добавили к суспензии пуринового основания в течение 1 мин при комнатной температуре. 5-л колбу промыли ацетонитрилом (2x1 л) для полного перемещения бромида в реакционную смесь. Смесь постепенно нагревали до 50°С в течение 2 ч в колбонагревателе с регулятором и перемешивали в течение 20 ч. Реакция практически закончилась, как показали данные тонкослойной хроматографии бета (К._г 0,28, 30% ЕЮАс в гексанах). Реакция была подавлена добавлением насыщенного ΝΗ·|ί.Ί (200 мл) до образования суспензии. Твердое вещество в форме суспензии отделили фильтрацией через 3 см подушку целита в 2,5 л фарфоровой воронке Бюхнера. Твердое вещество промыли толуолом (3x100 мл). Объединенный фильтрат нейтрализовали добавлением 6н. раствора НС1 до рН 7 (около 220 мл). Смесь концентрировали при пониженном давлении. Когда объем смеси уменьшился до примерно одной трети объема, дополнительно осажденное количество твердого вещества отделили фильтрацией тем же путем. Затем фильтрат концентрировали до объема около 800 мл. Осадок поместили в колонку с пробкой (1,6 кг силикагеля для флэш-хроматографии в 6-л воронке Бюхнера из пористого стекла) и элюировали (отсосом) градиентом 10% этилацетата в гексанах (6 л) для удаления неполярных примесей, 30% этилацетата в гексанах для выделения небольшого количества лактола (6 л), а затем 40~45% этилацетата в гексанах (4 л) для элюирования основного количества продукта. Фракции, содержащие продукт, объединили, концентрировали при пониженном давлении и высушили под вакуумом (0,2 мм рт. ст., 24 ч, комнатная температура) до состояния твердой белой пены (150,7 г, β/α = 14:1, по данным ЯМР).

Ή-ЯМР (СБС1₃) бета: δ 1,33 (д, 22,4 Гц, 2'-С-СН₃), альфа: 1,55 (д, 22 Гц, 2'-С-СН₃).

Пену из смеси продуктов растворили в метаноле (700 мл) при комнатной температуре. При стоянии в течение более 2 ч медленно образовалось твердое вещество. Суспензию охлаждали в холодильнике до 5°С в течение 17 ч. Полученное твердое белое вещество собрали фильтрацией и промыли холодным МеОН (-5°С, 3x60 мл) и этиловым эфиром (3x100 мл). Твердое вещество высушили под вакуумом (0,2 мм рт. ст., 24 ч, комнатная температура) и получили 110,5 г β-продукта с превосходной диастереомерной чистотой (β/α 99,8:1 по данным ВЭЖХ). Фильтрат частично концентрировали (около 400 мл) и затем разбавили МеОН (400 мл) при нагревании до 60°С. Раствор охладили до комнатной температуры, ввели затравку и охладили до -5°С. Собрали вторую партию, промыли и высушили тем же способом, чтобы получить больше вещества в виде твердого белого продукта (12,26 г) с такой же диастереомерной чистотой. Маточный раствор концентрировали до сухости при пониженном давлении (около 25 г). Осадок был смесью β- и α-изомеров. Его подвергли автоматизированной хроматографии на колонке с силикагелем (Апа1ощх. картридж 240 г, 40-50% этилацетата в гексанах) для получения 14,52 г продукта в виде пены, который перекристаллизовали из МеОН, промыли и высушили таким же способом, чтобы получить дополнительно 8,46 г продукта высокой чистоты.

Было установлено, что все три твердых вещества имеют одинаковую степень чистоты, их объединили и получили 131,2 г белого кристаллического продукта 6 (55% из бромсахара, 49% из лактола). Т.пл. 160,5-162,0°С. Чистота по ВЭЖХ 99,5%, включая 0,20% альфа.

Ή-ЯМР (чистый β-аномер, СБС1₃): δ 8,03 (м, 2Н, аром.), 7,93 (м, 2Н, аром.), 7,88 (с, 1Н, С8-Н), 7,60 (м, 1Н, аром.), 7,50 (м, 1Н, аром.), 7,44 (м, 2Н, аром.), 7,33 (м, 2Н, аром.), 6,44 (дд, 1Н, С1'-Н), 6,12 (д, 1Н, С3'-Н), 5,35 (с, 2Н, ΝΉ₂), 5,00 (дд, 1Н, С5'-На), 4,76 (м, 1Н, С4'-Н), 4,59 (дд, 1Н, С5'-НЬ), 1,33 (д, 3Н, СН₃).

Ή-ЯМР (α-изомер, СБС1₃): δ 8,11-8,09 (м, 3Н, аром, и С8-Н), 8,01 (м, 2Н, аром.), 7,63 (м, 1Н, аром.), 7,55 (м, 1Н, аром.), 7,48 (м, 2Н, аром.), 7,39 (м, 2Н, аром.), 6,35 (д, 1Н, С1'-Н), 5,76 (дд, 1Н, С3'-Н), 5,18 (с, 2Н, ΝΉ₂), 4,93-4,89 (м, 1Н, С4'-Н), 4,75-4,71 (м, 1Н, С5'-На), 4,58-4,54 (м, 1Н, С5'-НЬ), 1,55 (д, 3Н, СН₃).

Синтез (2Е,3К,4К,5К)-5-(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)-2-(бензоилоксиметил)-4-фтор-4метилтетрагидрофуран-3-илбензоата (6) из соединения 3.

К раствору соединения 3 (450 мг, 2,68 ммоль) в хлорбензоле (1,5 мл) добавили калиевую соль основания (1,37 г, 8,05 ммоль) в трет-бутаноле (5 мл), а затем безводный ацетонитрил (5 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали при 80-140°С в запаянной трубке в течение 7 дней и концентрировали в вакууме после нейтрализации НС1. Осадок очистили путем хроматографии на силикагелевой колонке (гексаны:ЕЮАс = 2:1) и получили соединение 6 (90 мг, 15%) в виде белой пены.

Синтез (2Е,3К,4К,5К)-5-(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)-2-(бензоилоксиметил)-4-фтор-4метилтетрагидрофуран-3-илбензоата (6) из соединения 5.

К раствору соединения 5 (1,3 г, 2,68 ммоль) в трет-бутаноле (10 мл) добавили натриевую соль основания (1,37 г, 8,05 ммоль) в ДМФ (10 мл) при комнатной температуре. Полученную смесь перемешивали в течение 15 ч и концентрировали в вакууме. Осадок очистили методом хроматографии на силикагелевой колонке (гексаны:ЕЮАс = 2:1) и получили соединение 6 (220 мг, 16%) в виде белой пены.

- 25 019341

Синтез (2В,3В,4В,5В)-5-(2-амино-6-метокси-9Н-пурин-9-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)-4метилтетрагидрофуран-3-ола (7).

В 250-мл круглодонную сухую колбу поместили (2В,3Я,4Я,5Я)-5-(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)2-(бензоилоксиметил)-4-фтор-4-метилтетрагидрофуран-3-илбензоат (6, 7,50 г, 14,26 ммоль). Добавили безводный метанол (30 мл), образовалась белая суспензия. При 50°С сухим шприцем добавили раствор метоксида натрия в метаноле (25%, 19,7 мл, 64,17 мммоль) в атмосфере азота. Образовалась белая мутная реакционная смесь. Через 3,5 ч при 50°С реакция завершилась, при этом исходные вещества полностью прореагировали, как показала тонкослойная хроматография. Смесь охладили до комнатной температуры и нейтрализовали добавлением ледяной уксусной кислоты (3 мл). Твердое белое вещество отфильтровали и промыли метанолом (3x5 мл). Фильтрат смешали с 20 г силикагеля и концентрировали до сухого состояния. Смесь нанесли на силикагелевый картридж и разделили колоночной хроматографией, используя градиент метанола в дихлорметане 0-15% МеОН. Продукт элюировали при 12% метанола в дихлорметане. Фракции, содержащие продукт, объединили, концентрировали при пониженном давлении и высушили под вакуумом (0,2 мм рт. ст., 50°С, 24 ч) до состояния твердого белого порошка (4,45 г, выход 98%), т.пл. 199-202°С.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 8,18 (1Н, с, С8-Н), 6,61 (2Н, с, ΝΗ₂), 6,05 (1Н, д, С1'-Н), 5,68 (1Н, д, 3'-ОН), 5,26 (1Н, м, 5'-ОН), 4,23-4,13 (1Н, м, С3'-Н), 3,96 (3Н, с, ОСН₃), 3,92-3,83 (2Н, м, С4'-Н и С5'-На), 3,703,67 (1Н, м, С5'-НЬ), 1,06 (3Н, д, С2'-СН₃).

Синтез (2Б)-изопропил-2-((((2В,3В,4В,5В)-5-(2-амино-6-метокси-9Н-пурин-9-ил)-4-фтор-3гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноата (11).

В 250-мл сухую круглодонную колбу поместили фенилдихлорфосфат (2,66 г, 12,61 ммоль) и безводный дихлорметан (40 мл). Аминоэфирную соль (2,60 г, 15,53 ммоль) добавили к раствору и охладили смесь до -5°С. Затем сухим шприцем быстро добавили Ν-метилимидазол (7,7 мл, 97 ммоль) при -5°С и перемешивали раствор при -5°С в течение 1 ч. Из пробирки добавили нуклеозид (7, 3,04 г, 9,7 ммоль) одной порцией при -5°С, твердое вещество медленно растворилось за 20 мин. Температуру реакции повысили до комнатной температуры в течение 2 ч. Спустя 17 ч реакция все еще не завершилась. Были приготовлены другие реагенты, как описано выше, из фосфата (2,66 г), аминоэфира (2,60 г) и ΝΜΙ (3,8 мл, 48 ммоль) и добавлены в реакционную смесь при -5°С. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение более 2 ч. По результатам тонкослойной хроматографии реакция почти завершилась, смесь разбавили 70 мл дихлорметана. Добавили раствор НС1 (1 Ν, 70 мл). Водный слой отделили и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промыли насыщенным NаНСО₃, водой, насыщенным солевым раствором и высушили над Мд§О₄. После удаления растворителя при пониженном давлении вязкий осадок очистили методом автоматизированной колоночной хроматографии, используя 240-г картридж и градиент 0-8% 2-РгОН в дихлорметане для получения продукта в виде твердой пены (4,16 г, 7,14 ммоль, выход 73%). Чистота по ВЭЖХ 97,4%. ЯМР спектр продукта показал, что он является смесью двух диастереоизомеров с соотношением 1,2:1.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 7,98 (1Н, с, 8-Н одного изомера), 7,95 (1Н, с, 8-Н другого изомера), 7,37-7,32 (2Н, м, аром-Н), 7,22-7,15 (3Н, м, аром-Н), 6,6 (2Н, с, ΝΉ₂), 6,11 (1Н, д, С1'-Н одного изомера), 6,09 (1Н, д, С1'-Н другого изомера), 6,09-5,98 (1Н, м, амид ΝΠ), 5,88 (1Н, д, 3'-ОН одного изомера), 5,81 (1Н, д, 3'Н другого изомера), 4,85-4,75 (1Н, гепта, метановый Н изопропила), 4,46-4,27 (2Н, м, С4'-Н, α-Н аминоэфира), 4,15-4,07 (1Н, м, С3'-Н), 3,96 (3Н, с, ОСН₃), 3,82-3,72 (2Н, м, С5'-На и С5'-НЬ), 1,23-1,06 (9Н, м, СНА аминоэфира), 1,03 (3Н, д, С2'-СН₃).

³¹Р-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 4,91 (один изомер), 4,72 (другой изомер).

Альтернативный метод очистки заключается в химическом изменении 3' фосфорамидатного минорного побочного продукта для упрощения хроматографического разделения. Неочищенный фосфорамидатный продукт растворяют в безводном пиридине (5 мл/г) и обрабатывают 0,5 моль-эквивалентов трет-бутилдиметилсилилхлорида при комнатной температуре для селективного взаимодействия со свободным 5' первичным гидроксилом примеси 3'-изомера. Ход реакции можно контролировать при помощи жидкостного хромато-масс-спектрометра (ЖХ/МС). Как только 3'-изомер превратится в 5'-третБДМС-3'-фосфорамидатное производное, реакцию подавляют метанолом (3 экв.), концентрируют под пониженным давлением, разделяют между этилацетатом и 5% лимонной кислотой, а за тем концентрируют органический слой. Затем осадок подвергают хроматографии, которую теперь можно выполнить с более высокой загрузкой и более быстрым градиентом для получения более высокой чистоты.

Синтез (2В,3В,4В,5В)-5-(2-амино-6-(азетидин-1-ил)-9Н-пурин-9-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)-4метилтетрагидрофуран-3-ола (8).

В 350-мл сухую герметичную колбу (Сйетд1а88) поместили (2В,3В,4В,5В)-5-(2-амино-6-хлор-9Нпурин-9-ил)-2-(бензоилоксиметил)-4-фтор-4-метилтетрагидрофуран-3-илбензоат (6, 3,6 г, 6,85 ммоль) и 150 мл абсолютного этанола. Добавили гидрохлорид азетидина (2,56 г, 27,4 ммоль), а затем триэтиламин (4,16 г, 41,1 ммоль). Суспензию перемешивали и нагревали до 70°С в закрытой колбе в течение 5 ч. По данным тонкослойной хроматографии все реагенты были израсходованы, но бензоильные группы остались. В смесь добавили метоксид натрия (7,8 мл, 34,3 ммоль, 25% раствор в метаноле) и нагрели до 50°С.

- 26 019341

Реакция закончилась через 3,5 ч. Реакционную смесь оставили остывать до комнатной температуры и нейтрализовали добавлением ледяной уксусной кислоты (0,41 г, 6,85 ммоль). Смесь концентрировали при пониженном давлении, а затем осадок измельчили с этилацетатом. Полученное твердое вещество отделили фильтрацией и промыли ЕЮАс (2x15 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и очистили осадок методом колоночной хроматографии (Απαίο^ίχ, 120 г картридж, градиент 0-15% МеОН в ДХМ). Фракции, содержащие чистый продукт, объединили, концентрировали при пониженном давлении и высушили (50°С, 0,2 мм рт. ст., 17 ч) до твердой пены светло-розового цвета (2,15 г, 6,35 ммоль, 93%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 8,00 (с, 1Н, С8-Н), 6,03 (с, 2Н, ΝΉ>), 6,00 (д, 1Н, С1'-Н), 5,64 (д, 1Н, 3'-ОН),

5,24 (т (триплет), 1Н, 5'-ОН), 4,24-4,10 (м, 5Н, Ы-СН₂ азетидина, С3'-Н), 3,90-3,81 (м, 2Н, С4'-Н и С5'-На), 3,69-3,64 (м, 1Н, С5'-НЬ), 2,37 (пента, 2Н, центр. СН₂ азетидина), 1,05 (д, 3Н, С2'-СН₃).

Синтез (28)-метил-2-((((2В,3В,4В,5В)-5-(2-амино-6-(азетидин-1-ил)-9Н-пурин-9-ил)-4-фтор-3гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноата (12).

В 100-мл сухую круглодонную колбу поместили фенилдихлорфосфат (1,72 г, 8,15 ммоль) и безводный дихлорметан (17 мл). Добавили аминоэфир (1,42 г, 10,2 ммоль) и охладили суспензию до -5°С. Шприцем добавили Ν-метилимидазол (3,34 г, 40,7 ммоль) одной порцией и перемешивали раствор в течение 1 ч при -5°С в атмосфере азота. Затем одной порцией добавили нуклеозид (8, 1,38 г, 4,07 ммоль) (твердая пена) и оставили раствор нагреваться в течение 1 ч до комнатной температуры. Через 4 ч при комнатной температуре тонкослойная хроматография (5% МеОН в ДХМ) показала, что реакция прошла не до конца (осталось около 30% реагентов), а также увеличилось количество менее полярных примесей. Реакция была подавлена добавлением насыщенного ЫН₄С1 (20 мл), смесь разбавили дихлорметаном (20 мл). Органический слой отделили и промыли водой (5x30 мл), насыщенным солевым раствором (20 мл) и высушили над №ь8О₄. Раствор, содержащий продукт, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении до получения неочищенного маслянистого осадка, 3,26 г. Его чистили методом колоночной хроматографии (Αηαίοβίχ, 40 г картридж, градиент МеОН в ДХМ от 0 до 10%). Продукт элюировали 4% МеОН в ДХМ. Фракции, содержащие чистый продукт, объединили, концентрировали при пониженном давлении и высушили (50°С, 0,2 мм рт. ст., 17 ч) до твердой белой пены (1,322 г, 2,28 ммоль, 56%). Чистота по ВЭЖХ 99,25%. ЯМР спектр продукта показал, что он является смесью двух диастереоизомеров с соотношением 55:45.

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 7,80 (с, 1Н, 8-Н одного изомера), 7,80 (с, 1Н, 8-Н другого изомера), 7,38-7,33 (м, 2Н, аром.-Н), 7,22-7,14 (м, 3Н, аром.-Н), 6,09 (с, 2Н, ΝΉ>), 6,12-6,02 (м, 2Н, С1'-Н и ЫН), 5,83 (д, 1Н, 3'-ОН одного изомера), 5,77 (д, 1Н, 3'-ОН другого изомера), 4,46-4,05 (м, 8Н, ЫСН₂ азетидина, α-Н аминоэфира, С3'-Н, С4'-Н, С5'-На), 3,89-3,79 (м, 1Н, С5'-НЬ), 3,56 (с, 3Н, ОСН₃ аминоэфира одного изомера), 3,54 (с, 3Н, ОСН₃ аминоэфира другого изомера), 2,37 (пента, 2Н, центр. СН₂ азетидина), 1,21 (д, 3Н, αСН₃ аминоэфира в одном изомере), 1,19 (д, 3Н, а-СН₃ аминоэфира в другом изомере), 1,08 (д, 3Н, С2'СН3).

³¹Р-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 4,85 (один изомер), 4,77 (другой изомер).

Синтез (2В,3В,4В,5В)-5-(2-амино-6-(бензоилокси)-9Н-пурин-9-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)-4метилтетрагидрофуран-3-ола (9).

В 500-мл сухую круглодонную колбу поместили (2В,3В,4В,5В)-5-(2-амино-6-хлор-9Н-пурин-9-ил)2-(бензоилоксиметил)-4-фтор-4-метилтетрагидрофуран-3-илбензоат (6, 8,0 г, 15,2 ммоль) и безводный бензиловый спирт (128 мл). В другую 250-мл сухую круглодонную колбу поместили ЫаН (60% в минеральном масле, 2,44 г, 60,8 ммоль) и безводный ДМФ (40 мл). Суспензию перемешивали при 0°С на ледяной бане. Шприцем по каплям добавили бензиловый спирт (27 мл). Медленно образовался раствор, его быстро перенесли в суспензию нуклеозида в атмосфере азота при комнатной температуре. Смесь нагрели до 50°С и перемешали. Реакция закончилась через 3 ч, смесь охладили до комнатной температуры. Ее нейтрализовали добавлением 4н. НС1 примерно до рН 7 (12 мл). Раствор концентрировали при пониженном давлении (4 мбар, 90°С баня). Мутный остаток разбавили дихлорметаном (100 мл) и промыли водой (3x30 мл), насыщенным солевым раствором (30 мл) и высушили над Ыа₂8О₄. Суспензию отфильтровали, а фильтрат концентрировали при пониженном давлении до получения маслянистого осадка. Его очистили методом колоночной хроматографии (Αηαίοβίχ, градиент МеОН в ДХМ от 0 до 8%). Продукт элюировали 4% МеОН в ДХМ. Фракции, содержащие продукт, объединили, концентрировали при пониженном давлении и высушили (50°С, 0,2 мм рт. ст., 17 ч) до твердой белой пены (4,57 г, 11,7 ммоль, 77,2%).

Ή-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 8,18 (с, 1Н, 8-Н), 7,53-7,51 (м, 2Н, аром.-Н), 7,43-7,34 (м, 3Н, аром.-Н), 6,66 (с, 2Н, ЯН₂), 6,05 (д, 1Н, С1'-Н), 5,67 (д, 1Н, 3'-ОН), 5,48 (дд, 2Н, СН₂ бензила), 5,25 (т, 1Н, 5'-ОН), 4,18 (дт (дублет триплетов), 1Н, С3'-Н), 3,92-3,82 (м, 2Н, С4'-Н и С5'-На), 3,71-3,66 (м, 1Н, С5'-НЬ), 1,07 (д, 3Н, С2'-СН3).

Синтез (28)-циклопентил-2-((((2В,3В,4В,5В)-5-(2-амино-6-(бензилокси)-9Н-пурин-9-ил)-4-фтор-3гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноата (13).

В 100-мл сухую круглодонную колбу поместили фенилдихлорфосфат (3,29 г, 15,58 ммоль) и безводный дихлорметан (24 мл). Добавили тозилат аминоэфира (белый порошок) и охладили раствор до

- 27 019341

-5°С под азотом. Шприцем добавили Ν-метилимидазол (4,92 г, 59,94 ммоль) одной порцией и полученный бесцветный прозрачный раствор перемешивали при -5°С в течение 1 ч. Затем в раствор одной порцией добавили твердый нуклеозид (9) (2,334 г, 5,99 ммоль) под азотом и смесь оставили нагреваться до комнатной температуры до получения бесцветного раствора. Ход реакции контролировали тонкослойной хроматографией (5% метанола в дихлорметане). Тонкослойная хроматография показала, что реакция не завершилась через 20 ч (осталось около 30% реагентов). Реакция была подавлена добавлением дихлорметана (30 мл) и 1н. НС1 (60 мл). Органический слой отделили, а водный слой экстрагировали дихлорметаном (2x20 мл). Объединенный органический слой промыли водой (2x40 мл), насыщенным №1НСО₃, (30 мл), водой и насыщенным солевым раствором. Органический слой высушили над №ь8О₄. После удаления твердого продукта методом фильтрации фильтрат концентрировали при пониженном давлении до получения вязкого осадка (7,28 г). Осадок очистили методом колоночной хроматографии (Ληαίοβίχ, 80 г картридж, градиент МеОН в ДХМ от 0 до 10%). Продукт элюировали 2% МеОН в ДХМ. Фракции, содержащие продукт, объединили, концентрировали при пониженном давлении и высушили (50°С, 0,2 мм рт. ст., 17 ч) до твердой белой пены (2,249 г, смесь двух изомеров, 60:40). Была извлечена также часть исходного нуклеозида (0,257 г). Выход составил 62% в пересчете на израсходованный реагент.

'Н-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 7,98 (с, 1Н, 8-Н одного изомера), 7,96 (с, 1Н, 8-Н другого изомера), 7,52-7,50 (м, 2Н, аром.-Н), 7,42-7,31 (м, 5Н, аром.-Н), 7,21-7,12 (м, 3Н, аром.-Н), 6,68 (с, 2Н, ХН₂), 6,12 (д, 1Н, С1'Н одного изомера), 6,10 (д, 1Н, С1'-Н другого изомера), 6,04-5,96 (м, 1Н, ЯН), 5,87 (д, 1Н, 3'-ОН одного изомера), 5,81 (д, 1Н, 3'-ОН другого изомера), 5,48 (дд, 2Н, СН₂ бензила), 4,99-4,93 (м, 1Н, α-Н аминоэфира), 4,46-4,27 (м, 3Н, С3'-Н, С4'-Н, ОСН аминоэфира), 4,15-4,06 (м, 1Н, С5'-На), 3,81-3,71 (м, 1Н, С5'НЬ), 1,74-1,43 (м, 8Н, метилен СН₂ циклопентила), 1,18 (д, 3Н, а-СН₃ аминоэфира), 1,09 (д, 3Н, С2'-СН₃ одного изомера), 1,08 (д, 3Н, С2'-СН₃ другого изомера).

³¹Р-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 4,91 (один изомер), 4,73 (другой изомер).

Синтез (28)-циклопентил-2-((((2Я,3Я,4Я,5Я)-5-(2-амино-6-гидрокси-9Н-пурин-9-ил)-4-фтор-3гидрокси-4-метилтетрагидрофуран-2-ил)метокси)(фенокси)фосфориламино)пропаноата (14).

В 250-мл сухую круглодонную колбу с исходным веществом (13, 1,92 г, 2,8 ммоль) добавили безводный абсолютный этанол (50 мл). Добавили палладий на древесном угле (10%, 120 мг). Атмосферу в колбе заменили водородом и перемешивали смесь при давлении 1 атм газообразного водорода в течение 3,5 ч при комнатной температуре. По данным тонкослойной хроматографии реакция была завершена и Рб на древесном угле удалили фильтрацией и промыли этанолом (2x10 мл). Фильтрат концентрировали при пониженном давлении до получения твердого осадка. Твердое вещество смешали с силикагелем (10 г) и очистили методом колоночной хроматографии (Ληαίοβίχ, 40 г картридж, градиент МеОН в ДХМ от 1 до 16%). Фракции, содержащие продукт, объединили, концентрировали при пониженном давлении и высушили (50°С, 0,2 мм рт. ст., 17 ч) до белого порошка (1,43 г, 86%). Чистота по ВЭЖХ 99,55%. ЯМР спектр продукта показал, что он является смесью двух диастереоизомеров с соотношением 60:40. Т.пл.=133~150°С.

^!Н-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 10,70 (с, 1Н, ЯН имида), 7,81 (с, 1Н, 8-Н одного изомера), 7,79 (с, 1Н, 8-Н другого изомера), 7,38-7,33 (м, 2Н, аром.-Н), 7,22-7,14 (м, 3Н, аром.-Н), 6,62 (с, 2Н, ЯН₂), 6,08-5,97 (м, 2Н, С1'-Н и ЯН аминоэфира), 5,88 (Ь, 1Н, 3'-ОН одного изомера), 5,82 (Ь, 1Н, 3'-ОН другого изомера), 5,01-4,94 (м, 1Н, α-Н аминоэфира), 4,44-4,25 (м, 3Н, С3'-Н, С4'-Н, ОСН аминоэфира), 4,12-4,04 (м, 1Н, С5'-На), 3,82-3,72 (м, 1Н, С5'-НЬ), 1,77-1,46 (м, 8Н, метилен СН₂ циклопентила), 1,21-1,19 (м, 3Н, а-СН₃ аминоэфира), 1,09 (д, 3Н, С2'-СН₃ одного изомера), 1,08 (д, 3Н, С2'-СН₃ другого изомера).

³¹Р-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 4,95 (один изомер), 4,72 (другой изомер).

Синтез (2Я,3Я,4Я,5Я)-5-(2-амино-6-этокси-9Н-пурин-9-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)-4метилтетрагидрофуран-3-ола (10).

В 500-л сухую круглодонную колбу поместили (6, 11 г, 20,92 ммоль). Добавили безводный абсолютный этанол (210 мл), а затем безводный К₂СО₃ (28,91 г, 209,2 ммоль). Суспензию перемешивали и нагревали до 75°С под азотом в течение 5,5 ч. За это время были израсходованы все реагенты по данным тнокослойной хроматографии. Смесь охладили до комнатной температуры и отфильтровали твердый продукт. Фильтрат нейтрализовали добавлением ледяной уксусной кислоты (2,52 г) до рН~7 и концентрировали при пониженном давлении. Осадок растворили в метаноле и смешали с силикагелем (15 г). Высушенную смесь неочищенного продукта и силикагеля перенесли в пустой картридж и разделили методом колоночной хроматографии (Ληαίοβίχ 220 г, градиент МеОН в ДХМ от 0 до 15%) до получения продукта (5% МеОН в ДХМ) в виде твердой белой пены (3,73 г, 54,5%). Еще одно белое твердое вещество было выделено из колонки (10% МеОН в ДХМ, 1,44 г), оно представляло собой смесь двух димеров нуклеозида. Более полярное третье белое твердое вещество было собрано с колонки (15% МеОН в ДХМ, 0,47 г), оно представляло собой смесь тримеров нуклеозида. Чистота продукта по ВЭЖХ 99,94%.

^!Н-ЯМР (ДМСО-б₆): δ 8,16 (с, 1Н, 8-Н), 6,55 (с, 2Н, ЯН₂), 6,04 (д, 1Н, С1'-Н), 5,66 (д, 1Н, 3'-ОН),

5,24 (м, 1Н, 5'-ОН), 4,44 (кв (квадруплет), 2Н, 6-ОСН₂), 4,23-4,08 (м, 1Н, С3'-Н), 3,91-3,82 (м, 2Н, С4'-Н и С5'-На), 3,71-3,66 (т, 1Н, С5'-НЬ), 1,36 (т, 3Н, СН₃ этила), 1,06 (д, 3Н, С2'-СН₃).

Биологические данные.

- 28 019341

Анализ на основе репликона НСУ. Клетки НиЬ7, содержащие РНК репликона НСУ (клетки клона А; компания АраШ, ЬЬС, Сент-Луис, Миссури), поддерживали в стадии экспоненциального роста в среде Еад1е, модифицированной Эи1Ьессо (с высоким содержанием глюкозы) и содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 4 мМ Ь-глутамина и 1 мМ пирувата натрия, 1х раствор не-незаменимых аминокислот и О418 (1000 мкг/мл). Антивирусные анализы были выполнены в той же среде без О418. Клетки были высеяны в чашку с 96 лунками по 1500 клеток в каждой лунке, сразу после высевания были добавлены тестируемые вещества. Инкубационный период 4 дня. По окончании инкубационного этапа была выделена общая клеточная РНК (набор В№аку 96; компания О|;щеп). РНК-репликон и внутренний контрольный образец (контрольные реагенты Тас.|Мап рРНК; компания Арркеб Вгокуйетк) были амплифицированы в одностадийном мультиплексном протоколе ОТ-ПЦР согласно рекомендациям производителя. Праймеры НСУ и зонд были разработаны при помощи программного обеспечения Рптег Ехргекк (компания АррНеб В|о8У81ет8) и охватывали высококонсервативную последовательность 5'нетранслируемой области (ИТВ) (смысловой 5'-А6ССАТ66С6ТТА6ТА(Т)6А6Т6Т-3' и антисмысловой 5'-ТТСС6СА6АССАСТАТ66-3'; зонд 5'-РΛМ-ССТССА66АСССССССТССС-ТΛМВА-3').

Для выражения антивирусной эффективности соединения пороговый цикл ОТ-ПЦР для тестируемого вещества вычли из среднего порогового цикла ОТ-ПЦР для контрольного образца без лекарственного средства (АС!_НСУ). АС!, составляющая 3.3, равна единичному снижению на один порядок величины 1од 10 (равен 90% эффективной концентрации [ЕС₉₀]) уровней РНК репликонов. Цитотоксичность тестируемого вещества может быть также выражена через расчет значений АС1_|В\.._а Затем можно ввести параметр специфичности ДДС’1 (АС!_нсу-АС!_г№А), в котором уровни РНК НСУ нормализованы до уровней рРНК и калиброваны по контрольному образцу без лекарства.

Соединения 11, 12 и 14, представленные следующими структурами:

я⁸

11. к^! = -ОМе, В*-’Рг

12. К^! = -Μ|·< Η,<.Ή;<.Ή,.|. В⁴ = Ме

14, К^!=-ОН, В⁴ = сус1ореп!у1

К = \|.СН;СН,СН,·) = —Ν, были испытаны на их биологические свойства на основании предыдущего анализа. Результаты этих испытаний представлены в таблице.

Активность выбранных соединений

Соединение №	Клон А ЕСад (мкМ)
11	0,02
12	0,07
14	0,13

Содержание патентной заявки США № 12/053015, поданной 21 марта 2008 года (см. также АО 2008/121634), патентной заявки США № 12/479075, поданной 5 июня 2009 года, и предварительных заявок на патент США №№ 61/060683, поданной 11 июня 2008 года, 61/140441, 61/140317 и 61/140369, каждая из которых была подана 23 декабря 2008 года, включены здесь путем ссылки в полном объеме. Кроме того, патентные и непатентные ссылки, представленные здесь, включены путем отсылки. В случае, если предмет обсуждения включенного документа содержит термин, который отличается от термина, описанного в тексте настоящего изобретения, то значение термина, содержащегося в настоящем изобретении, определяется так, чтобы не был потерян общий смысл предмета обсуждения включенного документа.

Claims (20)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение, представленное формулой I, или фармацевтически приемлемые соли указанного соединения

   - 29 019341 где Ζ представляет собой

   В¹ представляет собой водород или фенил; В² представляет собой водород; В^3а представляет собой водород; В^3Ь представляет собой СН3; В⁴ представляет собой водород, ‘Рг или циклопентил; В⁵ представляет собой водород; В⁶ представляет собой СН3; X представляет собой Р; В⁸ представляет собой ОМе, ОВп или ОН и В⁹ представляет собой ΝΉ₂.
2. 2. Соединение по п.1, где В⁸ представляет собой ОМе.
3. 3. Соединение по п.1, где В⁸ представляет собой ОН.
4. 4. Соединение по п.2 или 3, где

   Ζ представляет собой
5. 5. Соединение по п.4, где В¹ представляет собой фенил.
6. 6. Соединение по п.5, где В⁴ представляет собой ‘Рг.
7. 7. Соединение по п.5, где В⁴ представляет собой цикло пентил.
8. 8. Соединение по п.5, где В⁴ представляет собой водород.
9. 9. Соединение по п.4, где В¹ и В⁴ оба представляют собой водород.
10. 10. Соединение по п.2 или 3, где

    Ζ представляет собой
11. 11. Соединение по п.1, выбранное из

    - 30 019341
12. 12. Фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемую среду и соединение по любому из пп.1-11.
13. 13. Применение соединения по любому из пп.1-11 для изготовления лекарственного средства для применения для лечения любого состояния, вызванного инфекцией вируса гепатита С, вируса Западного Нила, вируса желтой лихорадки, вируса Денге, риновируса, полиовируса, вируса гепатита А, вируса вирусной диареи скота или вируса японского энцефалита, включающее введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества указанного соединения.
14. 14. Применение по п.13, отличающееся тем, что указанный субъект является инфицированным вирусом гепатита С.
15. 15. Применение фармацевтической композиции по п.12 для изготовления лекарственного средства для применения для лечения любого состояния, вызванного инфекцией вируса гепатита С, вируса Западного Нила, вируса желтой лихорадки, вируса Денге, риновируса, полиовируса, вируса гепатита А, вируса вирусной диареи скота или вируса японского энцефалита, включающее введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества указанной фармацевтической композиции.
16. 16. Применение по п.15, отличающееся тем, что указанный субъект инфицирован вирусом гепатита С.
17. 17. Способ лечения вирусного заболевания у субъекта, инфицированного вирусом, выбранным из группы, включающей вирус гепатита С, вирус Западного Нила, вирус желтой лихорадки, вирус Денге, риновирус, полиовирус, вирус гепатита А, вирус вирусной диареи скота или вирус японского энцефалита, включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-11.
18. 18. Способ лечения по п.17, отличающийся тем, что указанный субъект инфицирован вирусом гепатита С.
19. 19. Способ лечения вирусной инфекции гепатита С у субъекта, включающий приведение в контакт по меньшей мере одной клетки, инфицированной вирусом гепатита С, по меньшей мере с одним соединением по любому из пп.1-11.
20. 20. Способ лечения вирусной инфекции гепатита С у субъекта, включающий приведение в контакт по меньшей мере одной клетки, инфицированной вирусом гепатита С, с композицией по п.12.