CZ299151B6

CZ299151B6 - N-Substituované 2-kyanopyrrolidiny, farmaceutickýprostredek, který je obsahuje a jejich použití jako lécivo

Info

Publication number: CZ299151B6
Application number: CZ20012028A
Authority: CZ
Inventors: Bernard Villhauer@Edwin
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 1998-12-10
Filing date: 1999-12-09
Publication date: 2008-05-07
Also published as: HK1040394B; DE122008000017I1; NZ511935A; EP1137635A1; CN1329593A; LU91435I2; ES2251847T3; SK7892001A3; AR023719A1; IL143091A0; JP2002531547A; NO2008004I1; ATE307112T1; HK1040394A1; ZA200104581B; CA2350609C; RU2251544C2; MY123244A; NO2008001I1; EP1137635B1

Abstract

N-Substituované 2-kyanopyrrolidiny obecného vzorce IA nebo IB, kde symboly R' a R'' nabývají významu definovaných v patentových nárocích, a (S)-1-[[[3-[[[(cyklohexyl)amino]karbonyl]oxy]-1-adamantyl]amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin, vždy ve volné forme nebo ve forme farmaceuticky prijatelné adicní soli s kyselinou. Tyto slouceniny inhibují aktivitu dipeptidylpeptidázy-IV (DPP-IV), a jsou proto vhodné pro použití jako lécivo pro inhibici DPP-IV a pro lécení onemocnení zprostredkovaných DPP-IV, jako je non-insulin-dependentní diabetes mellitus, artritida, obezita, osteoporóza a dále stavu porušené glukózové tolerance.

Description

(57) Anotace:

N-Substituované 2-kyanopyrrolidiny obecného vzorce IA nebo IB, kde symboly R' a R nabývají významů definovaných v patentových nárocích, a (S)-l-[[[3[[[(cyklohexyl)amino]karbonyl]oxy]-ladamantyl]amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin, vždy ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou. Tyto sloučeniny inhibují aktivitu dipeptidylpeptidázy-IV (DPP-1V), a jsou proto vhodné pro použití jako léčivo pro inhibici DPP-IV a pro léčení onemocnění zprostředkovaných DPP-IV, jako je non-insulindependentní diabetes mellitus, artritida, obezita, osteoporóza a dále stavů porušené glukózové tolerance.

B6

R·

N ///

N-Substituované 2-kyanopyrrolidiny, farmaceutický prostředek, který je obsahuje a jejich použiti jako léčivo

Oblast techniky

Předkládaný vynález poskytuje nové inhibitory dipeptidylpeptidázy-IV (DPP-IV), které jsou účinné při léčení onemocnění zprostředkovaných DPP-IV. V nedávné době bylo zjištěno, že DPP-IV je zodpovědná za deaktivaci peptidu-1 podobného glukagonu (GLP-1). Proto10 že GLP-1 je hlavním stimulátorem pankreatické sekrece inzulínu a má přímý výhodný vliv na hospodaření s glukózou, ukázalo se, že inhibice DPP-IV představuje výhodný přístup k léčení onemocnění, jako je non-inzulin-dependentní diabetes mellitus (NIDDM, diabetes mellitus nezávislý na inzulínu).

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález se týká nových N-substituovaných 2-kyanopyrrolidinových sloučenin obecného vzorce IA nebo IB (dále označované jako sloučeniny obecného vzorce I):

kde R'je hydroxylová skupina, alkoxyskupina obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, alkanoyloxyskupina obsahující 1 až 8 atomů uhlíku, nebo skupina R5R4N-CO-O-, kde R4 a R₅ jsou nezávisle na sobě alkylová skupina obsahující 1 až 7 atomů uhlíku nebo fenylová skupina, která je nesubstituovaná nebo substituovaná substituentem vybraným ze skupiny, kterou tvoří alkylová skupina obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, alkoxyskupina obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, atom halogenu a trifluormethylová skupina, a kde R4 je dále atom vodíku; nebo R4 a R5 jsou společně alkylenová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku; a R je atom vodíku; nebo R a R jsou nezávisle na sobě alkylová skupina obsahující 1 až 7 atomů uhlíku; ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou existovat ve volné formě nebo ve formě adiční soli s kyselinou. Farmaceuticky přijatelné (tj. netoxické, fyziologicky přijatelné) soli jsou výhodné, i když lze využít i jiné soli, například při izolaci nebo čištění sloučenin podle předkládaného vynálezu. Ačkoliv jsou výhodnými adičními solemi s kyselinou hydrochloridy, mohou se také použít soli methansulfonové kyseliny, kyseliny sírové, kyseliny fosforečné, kyseliny citrónové, kyseliny mléčné a kyseliny octové.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou existovat ve formě opticky aktivních izomerů nebo diastereoizomerů a mohou se štěpit a izolovat obvyklými postupy, jako je chromatografie.

Dále jsou uvedeny definice různých termínů používaných v popise vynálezu. Pokud není konkrétně uvedeno v popise jinak, tyto definice platí pro termíny používané v celém popise buď samostatně nebo jako části větších skupin.

Termín „alkylová skupina“ znamená uhlovodíkovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem obsahující dle výše uvedených definic 1 až 7 atomů uhlíku, výhodněji 1 až 5 atomů uhlíku.

- 1 CZ 299151 B6

Mezi příklady alkylových skupin patří methylová skupina, ethylová skupina, propylová skupina, izopropylová skupina, n-butylová skupina, t-butylová skupina, izobutylová skupina, pentylová skupina, hexylová skupina a podobně.

Termín „alkanoylová skupina“ znamená skupinu alkyl-C(O)-.

Substituovaná fenylová skupina je s výhodou fenylová skupina substituovaná jedním nebo více, například dvěma, výše uvedenými substituenty.

Termín „alkoxyskupina“ znamená skupinu alky 1-0Termín „atom halogenu“ znamená atom fluoru, atom chloru, atom bromu nebo atom jodu.

Termín „alkylenová skupina“ znamená můstek s přímým řetězcem obsahující 3 až 6 atomů uhlí15 ku, výhodně 5 atomů uhlíku.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou připravit například způsobem, který zahrnuje kondenzaci reaktivní (2-kyanopyrrolidino)karbonylmethylenové sloučeniny s vhodným substituovaným aminemi přesněji, pro přípravu sloučenin obecného vzorce I, způsob zahrnuje reakci sloučeniny obecného vzorce II

(n), kde Y je reaktivní skupina (s výhodou atom halogenu, jako je atom bromu, atom chloru nebo 25 atom jódu) se sloučeninou obecného vzorce III nh₂-r (II ), kde R je

a izolaci získané sloučeniny obecného vzorce I ve volné formě nebo ve formě adiční soli s kyselinou.

Tento způsob se může provádět běžnými postupy. Například se sloučenina obecného vzorce II podrobí reakci s 1 až 3 ekvivalenty, s výhodou 3 ekvivalenty, primárního aminu obecného vzorce III. Reakce se obvykle provádí v přítomnosti inertního, organického rozpouštědla, jako je dichlormethan nebo cyklického etheru, jako je tetrahydrofuran. Reakční teplota se s výhodou pohybuje mezi 0 až 35 °C, s výhodou až 25 °C.

-2CZ 299151 B6

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu se mohou izolovat z reakční směsi a čistit pomocí běžných postupů, například pomocí chromatografie.

Výchozí látky se mohou také připravit běžnými postupy. Sloučeniny obecného vzorce II se 5 mohou připravit podle následujícího dvoukrokového reakčního schématu:

Krok 1

Krok 2

NH>

(IV), (v),

Krok 1 zahrnuje reakci pyrrolidinu vzorce IV s mírným molámím přebytkem halogenacetylhaloio genidu, jako je bromacetylbromid nebo chloracetylchlorid a bází, jako je uhličitan draselný nebo triethylamin. Reakce se vhodně provádí v přítomnosti inertního, organického rozpouštědla, jako je tetrahydrofuran nebo chlorovaný, alifatický uhlovodík, jako je dichlormethan, při teplotě 0 až °C, s výhodou při teplotě 0 až 15 °C.

Krok 2 zahrnuje dehydrataci sloučeniny obecného vzorce v připravené v kroku 1, jedním až dvěma ekvivalenty anhydridu kyseliny octové (TFAA). Dehydratace se s výhodou provádí v přítomnosti inertního, organického rozpouštědla, jako je tetrahydrofuran nebo chlorovaného, alifatického uhlovodíku, jako je dichlormethan, při teplotě 0 až 25 °C, s výhodou při teplotě 0 až 15 °C.

Pokud není příprava sloučenin použitých jako výchozích látek ve vynálezu popsána, jsou tyto látky známé nebo se mohou připravit ze známých sloučenin známými způsoby nebo analogicky jako způsoby popsané v příkladech.

Například primární aminové sloučeniny vzorce III jsou známé a mohou se připravit podle postu25 pů popsaných v literatuře, například v Khim. Farm. Zh. (1986), 20(7), 810-15.

Nakonec se sloučeniny podle předkládaného vynálezu získají ve volné formě nebo ve formě solí, pokud j sou přítomny skupiny schopné tvořit sůl.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu obsahující bazické skupiny se mohou převést na adiční soli s kyselinou, zejména farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou. Ty vznikají například s anorganickými kyselinami, jako jsou minerální kyseliny, například kyselina sírová, kyselina fosforečná nebo halogenovodíkové kyseliny nebo s karboxylovými kyselinami. Výhodné jsou soli získané s kyselinou chlorovodíkovou.

Vzhledem k těsnému vztahu mezi volnými sloučeninami a sloučeninami ve formě solí, kdykoli se v této souvislosti uvádí sloučenina, míní se tím také její odpovídající sůl pod podmínkou, že je to za daných okolností možné nebo vhodné.

Sloučeniny, včetně jejich solí, se mohou také získat ve formě hydrátů nebo mohou obsahovat další rozpouštědla použitá pro krystalizaci.

Předkládaný vynález také zahrnuje farmaceutické kompozice například vhodné pro inhibici DPP- IV, obsahující farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo a terapeuticky účinné množství sloučeniny obecného vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou.

-3CZ 299151 B6

Předkládaný vynález poskytuje také způsob inhibice DPP-IV zahrnující podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou savci v případě, že takovou léčbu potřebuje.

Předkládaný vynález rovněž poskytuje způsob léčení onemocnění prostřednictvím inhibice DPPIV zahrnující podávání terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou savci v případě, že takovou léčbu potřebuje.

Předmětem předkládaného vynálezu je také použití sloučeniny podle předkládaného vynálezu nebo její farmaceuticky přijatelné soli pro výrobu léčiva pro inhibici DPP-IV.

Jak je uvedeno výše, všechny sloučeniny obecného vzorce I a jejich odpovídající farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou jsou vhodné pro inhibici DPP-IV. Schopnost sloučenin obecné15 ho vzorce I a jejich odpovídajících farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyselinou inhibovat DPP-IV se může demonstrovat za použití Caco-2 DPP-IV testu, kterým se hodnotí schopnost testovaných sloučenin inhibovat aktivitu DPP-IV z extraktu buněk lidského karcinomu tlustého střeva. Buněčná linie lidského karcinomu tlustého střeva Caco-2 se získala od American Type eulture eollection (ATCC HTB 37). Diferenciace buněk za vyvolání exprimace DPP-IV se provedla podle postupu popsaného v článku Reishera, a kol. nazvaného „Increased expression of intestinal cell line Caco-2“ v Proč. Nati. Acad. Sci., Vol. 90, str. 5 757-5 761 (1993). Buněčný extrakt se připraví z buněk solubilizovaných v 10 mM Tris Hel, 0,15M NaCl, 0,04 t.i.u. aprotininu, 0,5% nonidet-P40, pH 8,0, odstředěných při 35 000 g po dobu 30 minut při teplotě 4 °C. Tento test se provádí přidáním 20 pg solubilizovaného Caco-2 proteinu, zředěného na konečný objem 125 μΐ v testovém pufru (25 mM Tris HC1 pH 7,4, 140mM NaCl, lOmM KC1, 1% bovinní sérový albumin) do jamek mikrotitrační destičky. Po 60 minutách inkubace při teplotě místnosti se reakce zahájí přidáním 25 μΐ lmM substrátu (H-Alanin-Prolin-pNA; pNA je/7-nitroanilin). Reakce se provádí při teplotě místnosti 10 minut, potom se pro ukončení reakce přidá 19 μΐ 25% ledové kyseliny octové. Testované sloučeniny se typicky přidají jako 30μ1 podíly a objem testového pufru se sníží na 95 μΙ. Standardní křivka pro volný p-nitroanilin se generuje za použití 0 až 500μΜ roztoků volného pNA v testovém pufru. generovaná křivka je lineární a použije se pro interpolaci spotřeby substrátu (katalytická aktivita v nmol substrátu štěpeného/ min). Koncový bod se určí měřením absorbance při 405 nm na zařízení pro odečítání mikrotitračních destiček od Molecular Devices UV Max.

Účinnost testovaných sloučenin jako inhibitorů DPP-IV, vyjádřená jako IC₅₀, se vypočte z osmi bodů, křivka odezvy na dávku za použití čtyřparametrové logaritmické křivky.

Získají se následující hodnoty IC₅o_:

Sloučenina	Caco-2 DPP-IV (nM)
Př. 1	3,5 ± 1,5
Př.4	8

Schopnost sloučenin obecného vzorce I a jejich odpovídajících farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí inhibovat DPP—IV, se může také demonstrovat měřením vlivu testovaných sloučenin na aktivitu DPP-IV v plazmě člověka a krysy za použití upravené verze testu popsané45 ho v Kubota, a kol. v článku nazvaném „Invol vement of dipeptidylpeptidase IV in an in vivo immune response“ v Clin. Exp. Immunol., Vol. 89, str. 192-197(1992). V krátkosti se 5 μΐ plazmy přidá do 96jamkových mikrotitračních destiček s plochým dnem (Falcon), potom se přidá 5 μ\ 80mMmgCl₂ v inkubačním pufru (25 mM HEPES, 140 mM NaCl, 1% RIA-grade BSA, pH 7,8). Po 60 minutách inkubace při teplotě místnosti se reakce zahájí přidáním 10 μΐ inkubač50 ního pufru obsahujícího 0,1 mM substrátu (H-Glycin-Prolin-AMC; AMC je 7-amino-4methylkumarin). Destičky se potom přikryjí hliníkovou fólií (nebo se udržují ve tmě) a inkubují se při teplotě místnosti 20 minut. Po 20 minutách reakce se měří fluorescence za použití fluori-4CZ 299151 B6 metru CytoFluor 2350 (excitace 380 nm, emise 460 nm; nastavení citlivosti 4). Sloučeniny se obvykle přidají jako 2μ1 podíly a objem testového pufru se sníží na 13 μΐ. Křivka závislosti fluorescence na koncentraci volného AMC se generuje za použití 0 až 50 μΜ roztoků AMC v testovém pufru. generovaná křivka je lineární a použije se pro interpolaci spotřeby substrátu (katalytická aktivita v nmol substrátu štěpeného/min). Jako při předchozím testu se účinnost testovaných sloučenin jako inhibitorů DPP-IV, vyjádřená jako IC₅₀, vypočte z osmi bodů, křivka odezvy na dávku za použití čtyřparametrové logaritmické křivky.

Získají se následující hodnoty IC₅o:

Sloučenina	Lidská plazma DPP-IV (nM)	Plazma krys DPP-IV (nM)
Př. 1	2,7 ±0,1	2,3 ±0,1
Př. 8	6	12

Vzhledem ke schopnosti sloučenin obecného vzorce I a jejich odpovídajících farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí inhibovat DPP-IV, jsou tyto sloučeniny a jejich soli vhodné pro léčení onemocnění prostřednictvím inhibice DPP-IV. Na základě výše uvedených zjištění a sku15 tečností uvedených v literatuře se očekává, že sloučeniny podle vynálezu jsou vhodné pro léčbu onemocnění, jako je diabetes mellitus nezávislý na inzulínu, artritida, obezita, alotransplantace a kalcitotoninová osteoporóza. Dále na základě úloh peptidů podobných glukagonu (jako je GLP-1 a GLP-2) a jejich spojitosti s inhibici DPP-IV se očekává, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou vhodné například pro dosažení sedativního nebo anxiolytického účinku nebo pro snížení katabolických změn po operacích a hormonální odezvy na stres nebo pro snížení úmrtnosti a chorobnosti po infarktu myokardu nebo při léčení onemocnění souvisejících s výše uvedenými účinky, které mohou být zprostředkovány hladinami GLP-1 a/nebo GLP-2.

Přesněji například sloučeniny obecného vzorce I a jejich odpovídající farmaceuticky přijatelné soli zlepšují časnou inzulínovou odezvu na orální stimulaci glukózou a proto jsou vhodné pro léčení diabetů mellitu nezávislého na inzulínu. Schopnost sloučenin obecného vzorce I a jejich odpovídajících farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí zlepšit časnou inzulínovou odezvu na orální stimulaci glukózou se může měřit u krys odolných vůči inzulínu podle následujícího postupu:

Samci krys Sprague-Dawley, kteří byli krmeni dietou bohatou na tuky (nasycený tuk = 57 % kalorií) po 2 až 3 týdny nekrmené asi 2 hodiny v den testu se rozdělí do skupin po 8 až 10 a orálně se dávkují 10 pmol/kg testované sloučeniny v CMC. 30 minut po podání testované sloučeniny se testovaným zvířatům přímo do žaludku podá orální bolus 1 g/kg glukózy. U vzorků krve získaných v různých časech z trvalého katétru krční žíly se analyzuje glukóza v plazmě a koncentrace imunoreaktivního inzulínu (IRI) a aktivita plazmy vzhledem DPP-IV. Hladina inzulínu v plazmě se testuje pomocí způsobu dvojitého protilátkového radioimunotestu (RIA) za použití specifické anti-krysí inzulínové protilátky od společnosti Lineo Research (St. Louis, MO). RIA má dolní hranici detekce 0,5 pU/ml při intra- a inter-testových odchylkách nižších, než

5 %. Hodnoty jsou vyjádřeny jako procentuální vzrůst průměru vzhledem ke kontrolním zvířatům. Při orálním podávání všechny testované sloučeniny zesílily časnou inzulínovou odezvu, což vedlo ke zlepšení tolerance glukózy u testovaných zvířat odolných vůči inzulínu. Získaly se následující výsledky:

Sloučenina	Vzrůst inzulínové odezvy při 10/zmol/kg
Př. 1	64%

Přesné dávkování sloučenin obecného vzorce I a jejich odpovídajících farmaceuticky přijatelných kyselých adičních solí, které se použije při léčení onemocnění prostřednictvím inhibice DPP-IV, závisí na několika faktorech, včetně pacienta, povahy a závažnosti léčeného onemocnění, způsobu podávání a konkrétní použité sloučeniny. Obecně se však onemocnění zprostředkovaná inhi-5CZ 299151 B6 bicí DPP-IV účinně léčí, když se sloučenina obecného vzorce I nebo odpovídající farmaceuticky přijatelná kyselá adiční sůl podává enterálně, například orálně nebo parenterálně, například nitrožilně, s výhodou orálně, při denních dávkách 0,002 až 5, s výhodou 0,02 až 2,5 mg/kg tělesné hmotnosti nebo pro většinu vyšších primátů při denních dávkách 0,1 až 250, s výhodou 1 až

100 mg. Typickou orální dávkovači jednotkou je 0,01 až 0,75 mg/kg, jednou až třikrát denně.

Obvykle se nejprve podávají malé dávky, které se postupně zvyšují, dokud se nedosáhne dávky optimální pro léčeného pacienta. Horní dávkovači mez je dána vedlejšími účinky a může se určit pomocí testu u léčeného pacienta.

ío Sloučeniny obecného vzorce I a jejich odpovídající farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli se mohou kombinovat s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči a popřípadě s jedním nebo více jinými běžnými farmaceutickými přísadami a mohou se podávat enterálně, například orálně ve formě tablet, tobolek, kapsulí, kaplet, a tak dále nebo parenterálně, například nitrožilně, ve formě sterilních injektovatelných roztoků nebo suspenzí. Enterální a parenterální kompozice se mohou připravit obvyklými způsoby.

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich odpovídající farmaceuticky přijatelné kyselé adiční soli se mohou formulovat do enterálních a parenterálních kompozic obsahujících množství aktivní látky, které je účinné pro léčení onemocnění zprostředkovaného DPP-IV, jako jsou kompozice vjed20 notkových dávkovačích formách a tyto kompozice obsahují farmaceuticky přijatelný nosič.

Sloučeniny obecného vzorce I (včetně všech jejich podskupin a všech příkladů) se mohou podávat v enantiomemě čisté formě (například ee > 98 %, s výhodou > 99 %) nebo společně s R enantiomerem, například v racemické formě. Výše uvedená dávkovači rozmezí se vztahují ke sloučeninám vzorce I (po odečtení množství R enantiomeru).

V následujících příkladech jsou uvedeny příklady sloučenin podle předkládaného vynálezu a jejich syntézy. Je však nutné poznamenat, že příklady slouží pouze pro ilustraci.

Příklady provedení vynálezu (S)-l-[(3-hydroxy-l-adamantyl)amino]acetyl-2-kyanopyrrolidin

Může se použít mírně upravený postup popsaný v Khim. Farm. Zh. (1986), 20(7), 810-15.

K. rychle míchané, čiré a bezbarvé, ledově studené směsi 210 ml koncentrované 96% kyseliny sírové (3,943 mmol) a 21,0 ml 65% kyseliny dusičné (217,0 mmol) se po částech během 30 minut přidá 21,0 g (112,0 mmol) 99% hydrochloridu 1-adamantylaminu. při přidávání hydrochloridu adamantylaminu se objeví slabé bublání a reakce je mírně exotermní. Tento bublající, žlutý roztok se míchá při teplotě ledové vody asi 2 hodiny a potom 20 hodin při teplotě místnosti. Tento čirý, světle žlutý reakční roztok se potom nalije do asi 100 g ledu a získaný roztok je jasně zelenomodrý.

Roztok se umístí do lázně ledu a vody a nechá se 30 minut míchat. Potom se během 45 minut po malých dávkách přidá asi 550 g 89% čistého hydroxidu draselného (8,74 mol). Během přidávání

-6CZ 299151 B6 je reakce exotermní; dosáhne 80 °C a uvolní se odpovídající množství hnědého, plynného oxidu dusičitého. Na konci přidávání je reakění směs hustá s bílou, pevnou látkou (produkt a soli). Získaná bílá pasta se potom nalije na buchnerovu nálevku s lůžkem z křemeliny a promyje se 1,2 1 dichlormethanu. Dichlormethanová vrstva se potom extrahuje z vodné vrstvy a suší se nad síra5 nem sodným. Roztok se potom filtruje a odpaří za vakua na rotační odparce a získá se 1-aminoadamantan-3-01 ve formě bílé, pevné látky.

B. l-Chloracetyl-2-kyanopyrrolidin ίο K mechanicky míchanému roztoku 20,0 g (180,0 mmol) chloracetylchloridu a 97 g (0,70 mmol) uhličitanu draselného ve 150 ml tetrahydrofuranu se během 45 minut přikape roztok 20,0 g (180,0 mmol) L-prolinamidu v 500 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se potom mechanicky míchá další dvě hodiny při teplotě místnosti. Potom se směs filtruje za odstranění draselných solí a filtrát se suší nad síranem sodným. Síran sodný se odfiltruje a k tomuto bezbarvému filtrátu se najednou přidá 25,0 ml (0,180 mmol) anhydridu kyseliny trifluoroctové. Reakční směs se potom magneticky míchá 1 hodinu při teplotě místnosti a získaný čirý žlutooranžový roztok se odpaří na rotační vakuové odparce. Přebytek anhydridu kyseliny trifluoroctové se odstraní přidáním ethylacetátu ke koncentrovanému oleji a směs se znovu odpaří na rotační odparce. Tato operace se provede třikrát.

Získaný olej se extrahuje mezi ethylacetát a vodu. Produkt se potom extrahuje do ethylacetátu a vodná vrstva se potom dvakrát promyje ethylacetátem. Spojené organické vrstvy se potom postupně promyjí vodou a solankou, suší se nad síranem hořečnatým filtrují se a odpaří za získání 1chloracetyl-2-kyanopyrrolidinu ve formě žluté pevné látky.

C. (S)-l-[(3-hydroxy-l-adamantyl)amino]acetyl-2-kyanopyrrolidin

K heterogennímu roztoku sloučeniny uvedené v názvu A (l-aminoadamantan-3-ol (5,80 g, 34,7 mmol)) v 68,0 ml dichlormethanu se přidá 9,6 g uhličitanu draselného. Tato heterogenní směs se potom ochladí v lázni ledu a vody a během 30 minut se přikape roztok 3,0 g (17 mmol) sloučeniny uvedené v názvu B (l-chloracetyl-2-kyanopyrrolidin) rozpuštěné v 25,0 ml dichlormethanu. Získaná směs se míchá 2 hodiny při 0 °C a 6 dní při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří za získání žluté pastovité látky, která se čistí na silikagelu za použití chromatografického systému SIMS/Biotage Flash a 7% roztoku methanolu v dichlormethanu jako eluentu za získání sloučeniny uvedené v názvu ve formě volné báze jako bílé, krystalické, pevné látky (teplota tání 138 °C - 140 °C, ^,3C-NMR (ppm) = 119,59).

Příklady 2 až 12

Analogickým způsobem, jako je popsáno v příkladu 1 (zejména v kroku C) se připraví následující sloučeniny:

(S)-1-[[(3,5-dimethyl-l-adamantyl)amino]-acetyl]-2-kyanopyrrolidin

-7CZ 299151 B6

-8CZ 299151 B6

Chirální

212-214 (HCl)

Β'°

X/^rr-A, (S)-1- ][ [3 - [ [ [(4-methoxyfenyl)amino]-karbony1]oxy]-l-adamantyl]amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin

ChirSlní (S)-1-[[[(3-[[(fenylamino)karbonyl]oxy]-l-adamantyl]amino]acetyl] -2-kyanopyrrolidin

205-207 (HCl) rrr?

‘C NMR skupina): 121,56 (ppm)] (HCl) (CN (S)-1- [ [ (5-hydroxy-2-adamantyl)amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin

-9CZ 299151 B6

Příklad latfjBÍfcítra* ~ ^J ~ fWTt :
9	Á-jl.J (S)-1- [ [(3-acetyloxy-l-adamantyl)amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin	[^iJC NMR (CN skupina): 118,54 (ppm)]
10	Chirální A A Cpy · i <S)-1- ( Π3- [ [ [(diieopropyl)amino]karbonyl]oxy]-1-adamantyl]amino)acetyl]-2-kyanopyrrolidin	148-150 (HC1)
11	__ ChirSlní Qt fS 0 /// (S)-1-[[[3-[[((cyklohexyl)amino]karbonyl]oxy]-1-adamanty1]amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin	155-157 (HC1)

(HC1) = jako hydrochlorid

-10CZ 299151 B6

Všechny hydrochloridy konečných produktů se připraví probubláváním plynného chlorovodíku 0,lmolámím roztokem volné báze v tetrahydrofuranu, dokud není roztok zřetelně kyselý, a následným odstraněním rozpouštědla (rotační odparka/vývěva).

Aminoadamantanové výchozí látky jsou známé z literatury nebo se mohou připravit následujícím postupem:

Příprava 3,5-dimethyl-l-adamantylaminu je popsaná v J. Med. Chem, 25; 1; 1982; 51-56. ío Příprava 3-ethyl-l-adamantylaminu je popsaná v J. Med. Chem, 25; 1; 1982; 51-56.

3-Methoxy-l-adamantylamin se může připravit následujícím způsobem:

K míchající se, ledově studené suspenzi 0,680 g (5,95 mmol) hydridu draselného v 15,0 ml tetra15 hydrofuranu se během 30 minut přikape směs 1,00 g (5,95 mmol) l-aminoadamantan-3-olu a 15,0 ml tetrahydrofuranu. Získaná směs se potom míchá dalších 30 minut a potom se během jedné minuty přikape 0,370 ml (5,95 mmol) methyljodidu. Vznikající bílá, neprůhledná reakční směs se potom míchá 18 hodin při teplotě místnosti. Směs se potom zředí 50 ml dichlormethanu a filtruje se za odstranění anorganických nečistot. Filtrát se potom odpaří a čistí na silikagelu za použití zařízení SIMS/Biotage a 19% methanolu a 1% hydroxidu amonného v dichlormethanu jako eluentu. získá se 3-methoxy-l-adamantylamin ve formě neprůhledného oleje.

Syntéza 3-[[(terc-butylamino)karbonyl]oxy]-l -aminoadamantanu:

Ke směsi 5,00 g (30,0 mmol) l-aminoadamantan-3-olu a 6,20 g (45 mmol) uhličitanu draselného v 150 ml tetrahydrofuranu se během 10 minut přikape k 4,70 g (33,0 mmol) benzylchloroformátu. Směs se potom míchá 2 hodiny při teplotě místnosti a potom se extrahuje mezi ethylacetát a vodu. Produkt se extrahuje do ethylacetátu a vodná vrstva se promyj e dvakrát 100 ml ethylacetátu. Spojené organické vrstvy se potom postupně promyjí 100 ml 2N vodného roztoku hyd30 roxidu sodného, vodou, solankou, suší se nad síranem sodným, filtrují se a odpaří se (rotační odparka/vývěva) a získá se l-benzylkarbamoyladamantan-3-ol ve formě bílé pevné látky ve výtěžku 85 %.

K čirému roztoku 1,00 g (3,32 mmol) l-benzylkarbamoyladamantan-3-olu a 380 μΐ (3,32 mmol) terc-butylisokyanátu v 30 ml dichlormethanu se pomocí stříkačky přidá 20,0 μΐ (0,17 mmol) trímethylsilylchloridu. Tato reakční směs se míchá při teplotě místnosti 18 hodin, odpaří se na rotační odparce a čistí se na silikagelu za použití zařízení SIMS/Biotage a 20 % ethylacetátu v hexanu jako eluentu a získá se 3-[[(terc-butylamino)karbonyl]oxy]-l-benzylkarbamoyladamantan ve formě bílé pevné látky v kvantitativním výtěžku.

Ke směsi 1,50 g (3,75 mmol) 3-[[(terc-butylamino)karbonyl]oxy]-l-benzylkarbamoyladamantanu a 400 mg 10% palladia na uhlí v 150 ml ethanolu v jednolitrové parrově hydrogenační baňce se přidá vodík (345 kPa). Neprůhledná černá směs se nechá 24 hodin třepat. Reakční směs se potom filtruje přes křemelinu, odstraní se tak palladiový katalyzátor a odpaří se (rotační odpar45 ka/pumpa) a získá se 3-[[(/erc-butylamino)karbonyl]oxy]-l-aminoadamantan ve formě čirého oleje ve výtěžku 99 %.

Postup přípravy 4-[[[(methoxyfenyl)amino]karbonyl]oxy]-l-amino-l-adamantanu je v podstatě postup pro přípravu 3-[[(terc-butyl-amino)karbonyl]oxy]-l-aminoadamantanu kromě toho, že v druhém kroku ekvivalent 4-methoxyfenylizokyanátu nahradí terc-butylizokyanát, 1,2-dichlorethan se použije jako rozpouštědlo místo dichlormethanu a reakční směs se míchá 18 hodin při 50 °C. Konečný aminový meziprodukt se získá ve formě oleje.

Postup syntézy 3-[[(fenylamino)karbonyl]oxy]-l-aminoadamantanu je v podstatě postup synté55 zy 3-[[(/<?rc-butylamino)karbonyl]oxy]-l-aminoadamantanu kromě toho, že v druhém kroku

- 11 CZ 299151 B6 ekvivalent fenylizokyanátu nahradí terc-butylizokyanát, 1,2-dichlorethan se použije jako rozpouštědlo místo dichlormethanu a reakční směs se míchá 18 hodin při 50 °C. Konečný aminový meziprodukt se získá ve formě oleje.

Postup přípravy 2-aminoadamantane-5-olu je stejný, jako je popsáno v příkladu 1 kromě toho, že výchozí látkou je 2-aminoadamantan místo 1-aminoadamantanu.

Postup přípravy nukleofilního 3-acetoxy-l-aminoadamantanu je v podstatě stejný, jako postup přípravy 3-[[(fórc-butylamino)karbonyl]oxy]- 1-aminoadamantanu kromě toho, že se pro stanío dardní acylaci l-benzylkarbamoyladamantan-3-olu použije 1,2 ekvivalentu acetylchloridu, 3,0 ekvivalentu pyridinu, 0,1 ekvivalentu 4-dimethylaminopyridinu a 1,2 dichlorethanu a všechny složky se míchají 24 hodin při teplotě místnosti. Konečný amin se získá ve formě hustého oleje.

Postup syntézy 3-[[[(diisopropyl)amino]karbonyl]oxy]-l-aminoadamantanu je v podstatě stejný, jako postup pro přípravu 3-[[(/erc-butylamino)karbonyl]oxy]-l-aminoadamantanu kromě toho, že v druhém kroku ekvivalent diizopropylkarbamoylchloridu nahradí terc-butylizokyanát, 1,2dichlorethan se použije jako rozpouštědlo místo dichlormethanu a reakční směs se míchá 18 hodin při 85 °C. Konečný aminový meziprodukt se získá ve formě šedé, pevné látky.

Postup syntézy 3-[[[(cyklohexyl)amino]karbonyl]oxy]-l-aminoadamantanu je v podstatě stejný, jako postup přípravy 3-[[(terc-butylamino)karbonyl]oxy]-l-aminoadamantanu kromě toho, že v druhém kroku nahradí ekvivalent cyklohexylizokyanátu terc-butylizokyanát, 1,2-dichlorethan se použije jako rozpouštědlo místo dichlormethanu a reakční směs se míchá 18 hodin při teplotě místnosti. Konečný aminový meziprodukt se získá ve formě hustého, čirého oleje.

Postup přípravy 3-ethoxy-l-adamantylaminu (čirý olej) je stejný, jako postup pro přípravu 3methoxy-l-adamantylaminu kromě toho, že se použije 1,3 ekvivalentu ethyljodidu místo methyljodidu.

Příklad prostředku

Tablety, které každá obsahuje 50 mg aktivní složky, například (S)-l-[(3-hydroxy-l-adamantyl)amino]acetyl-2-kyano-pyrrolidinu, se mohou připravit následujícím způsobem:

Složení (10 000 tablet)

Aktivní látka 500,0 g

Laktóza 500,0 g

Bramborový škrob 352,0 g

Želatina 8,0 g

Mastek 60,0 g

Stearát hořečnatý 10,0 g

Silika (vysoce dispergovaná) 20,0 g

Ethanol q.s.

Aktivní složka se smísí s laktózou a 292 g bramborového škrobu a směs se zvlhčí pomocí alkoholového roztoku želatiny a granuluje se pomocí síta. Po sušení se přidá zbývající bramborový škrob, mastek, stearát hořečnatý a vysoce dispergovaná silika a směs se stlačí za získání tablet o hmotnosti 145,0 mg a obsahu aktivní složky 50,0 mg. Pokud je to vhodné, mohou tablety obsahovat rozlamovací drážku, aby bylo možné dávku přesněji upravit.

- 12CZ 299151 B6

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. N-Substituovaná 2-kyanopyrrolidinová sloučenina obecného vzorce IA nebo IB:

10 kde R' je hydroxylová skupina, alkoxyskupina obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, alkanoyloxyskupina obsahující 1 až 8 atomů uhlíku, nebo skupina R5R4N-CO-O-, kde R4 a R₅ jsou nezávisle na sobě alkylová skupina obsahující 1 až 7 atomů uhlíku nebo fenylová skupina, která je nesubstituovaná nebo substituovaná substituentem vybraným ze skupiny, kterou tvoří alkylová skupina obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, alkoxyskupina obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, atom halogenu a

15 trifluormethylová skupina, a kde R4 je dále atom vodíku; nebo R4 a R₅ jsou společně alkylenová skupina obsahující 3 až 6 atomů uhlíku; a R je atom vodíku; nebo R' a R jsou nezávisle na sobě alkylová skupina obsahující 1 až 7 atomů uhlíku, ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou a (S)-l-[[[3-[[[(cyklohexyl)amino]karbonyl]oxy]-l-adamantyl]amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin,

20 ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou.

2. N-Substituovaná 2-kyanopyrrolidinová sloučenina podle nároku 1, vybraná ze skupiny, kterou tvoří:

(S)-l-[[(3,5-dimethyl-l-adamantyl)amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin;

25 (S)-l-[[(3-ethyl-l-adamantyl)amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin;

(S)-l-[[(3-methoxy-l-adamantyl)amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin;

(S)-l-[[[3-[[(t-butylamino)karbonyl]oxy]-l-adamantyl]amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin;

(S)-l-[[[3-[[[(4-methoxyfenyl)amino]karbonyl]oxy]-l-adamantyl]amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin;

30 (S)-l-[[[(3-[[(fenylamino)karbonyl]oxy]-l-adamantyl]amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin; (Sj-l-[[(5-hydroxy-2-adamantyl)amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin; (S)-l-[[(3-acetyloxy-l-adamantyl)amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin;

(S)-l-[[[3-[[[(diisopropyl)amino]karbonyl]oxy]-l-adamantyl]amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin;

(S)-l-[[[3-[[[(cyklohexyl)amino]karbonyl]oxy]-l-adamantyl]amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin;

35 a (S)-l-[[(3-ethoxy-l-adamantyl)amino]acetyl]-2-kyanopyrrolidin;

nebo, v každém případě, jejich farmaceuticky přijatelná adiční sůl s kyselinou.

40 3. N-Substituovaná 2-kyanopyrrolidinová sloučenina podle nároku 1, kterou je (S)-l—[(3—hydroxy-l-adamantyl)amino]acetyl-2-kyanopyrrolidin nebo jeho farmaceuticky přijatelná sůl.

3 nebo její farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou k výrobě léčiva pro prevenci nebo ošetřování stavů zprostředkovaných dipeptidylpeptidázou-IV, zvolených ze skupiny zahrnující non-inzulin-dependentní diabetes mellitus, artritidu, obezitu, transplantaci aloštěpu a kalcitoninovou osteoporózu, pro dosažení sedativního nebo anxiolytického účinku, pro zmírnění katabo15 lických změn po chirurgickém zákroku a hormonální odezvy na stres, nebo pro snižování mortality a morbidity po infarktu myokardu.

4. N-Substituovaná 2-kyanopyrrolidinová sloučenina podle libovolného z nároků 1 až 3 nebo její farmaceuticky přijatelná adiční sůl s kyselinou pro použití jako léčivo.

-13 CZ 299151 B6

5. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje N-substituovanou 2kyanopyrrolidinovou sloučeninu podle libovolného z nároků 1 až 3 ve volné formě nebo ve formě farmaceuticky přijatelné adiční soli a kyselinou, společně s nejméně jedním farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem.

6. Použití N-substituované 2-kyanopyrrolidinové sloučeniny podle libovolného z nároků 1 až 3 nebo její farmaceuticky přijatelné adiční soli s kyselinou pro výrobu léčiva pro inhibici dipeptidylpeptidázy-IV.

10

7. Použití N-substituované 2-kyanopyrrolidinové sloučeniny podle libovolného z nároků 1 až

8. Použití podle nároku 7, při němž je léčivo určeno pro prevenci nebo ošetřování non-inzulindependentního diabetes mellitus.

9. Použití podle nároku 7, při němž je léčivo určeno pro prevenci nebo ošetřování obezity.