CN102016593A - 使用g蛋白偶联受体来鉴定肽y(pyy)促分泌素和在受pyy调控的状况的治疗中有用的化合物的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及使用GPR119受体来鉴定肽YY(PYY)促分泌素和在受PYY调控的状况(诸如受NPYY2受体(Y2R)刺激调控的状况)的治疗中有用的化合物的方法。GPR119受体的激动剂作为治疗剂用于治疗或预防受PYY调控的状况(诸如受Y2R刺激调控的状况)是有用的。受PYY调控的状况(诸如可以是受Y2R刺激调控的状况)包括骨相关状况、代谢病症、血管发生相关状况、缺血相关状况、惊厥性病症、吸收不良性病症、癌症、和炎性病症。

Description

使用G蛋白偶联受体来鉴定肽Y(PYY)促分泌素和在受PYY调控的状况的治疗中有用的化合物的方法
对相关申请的交叉引用
本申请要求2008年4月7日提交的美国临时申请No.61/123,273的优先权，通过述及在本申请中完整收录其公开内容。
发明领域
本发明涉及使用GPR119受体来鉴定肽YY(PYY)促分泌素(secretagogue)和在受PYY调控的状况(诸如受NPY Y2受体(Y2R)刺激调控的状况)的治疗中有用的化合物的方法。GPR119受体的激动剂作为治疗剂用于治疗或预防受PYY调控的状况(诸如受Y2R刺激调控的状况)是有用的。受PYY调控的状况(诸如可以是受Y2R刺激调控的状况)包括骨相关状况、代谢病症、血管发生相关状况、缺血相关状况、惊厥性病症、吸收不良性病症、癌症、和炎性病症。
发明背景
下面的讨论意图促进对本发明的理解，但是并非意图承认构成本发明的现有技术。
A.骨质疏松
骨质疏松是一种致残疾病，特征在于骨质损失和骨骼结构的微构造衰退，导致骨强度受损，这使患者倾向于脆性骨折风险升高。骨质疏松在欧洲、日本和美国影响超过7500万人，而且仅仅在欧洲和美国就引起超过230万例骨折。在美国，骨质疏松影响所有绝经后白人女性中的至少25％，而且这个比例在年龄大于80岁的女性中升高至70％。三个年龄大于50岁的女性中有一人会发生骨质疏松性骨折，对社会造成可观的社会和财政负担。这种疾病不限于女性；老年男性也会受影响。到2050，预计男性中髋骨折的全世界发病率升高至女性中的310％和240％。临床呈现的髋、前臂、和脊椎骨折的综合终生风险为40％左右，相当于心血管疾病的风险。因此，骨质疏松性骨折引起实质性的死亡率、发病率、和经济费用。鉴于老龄化的人群，骨质疏松性骨折的数目及它们的花费在接下来的50年里至少会翻倍，除非开发出有效的预防性策略。(参见例如Atik et al.，Clin Orthop Relat Res(2006)443：19-24；Raisz，J Clin Invest(2005)115：3318-3325；及World Health OrganizationTechnical Report Series 921(2003)，Prevention and Management ofOsteoporosis。)
B.肥胖症和糖尿病
由于其日益升高的流行性及相关健康风险，肥胖症是一项重大公共健康忧虑。此外，经由受限的活动性和降低的身体耐力以及经由社会、学术和职业歧视，肥胖症可影响个人的生活质量。
肥胖症和超重一般通过体重指数(BMI)来定义，体重指数与总体脂有关且充当某些疾病风险的度量。BMI通过以千克计的体重除以平方的以米计的身高来计算(kg/m2)。超重通常定义为BMI为25-29.9kg/m2，而肥胖症通常定义为BMI为30kg/m2或更高。参见例如National Heart，Lung，and BloodInstitute，Clinical Guidelines on the Identification，Evaluation，and Treatment ofOverweight and Obesity in Adults，The Evidence Report，Washington，DC：U.S.Department of Health and Human Services，NIH publication no.98-4083(1998)。
最近的研究发现肥胖症及其相关健康风险不局限于成年人，而且还以惊人的程度影响儿童和青少年。依照疾病控制中心，定义为超重的儿童和青少年的百分比自二十世纪七十年代早期已经翻倍还多，而且现在有约15％的儿童和青少年是超重的。心脏病的风险因子，诸如高胆固醇和高血压，以与体重正常、年龄相似的受试者相比升高的频率在超重的儿童和青少年中发生。还有，先前认为是成人病的2型糖尿病在儿童和青少年中显著增加。超重状况和肥胖症与2型糖尿病密切连锁。最近估算超重的青少年有70％的机会变成超重或肥胖的成人。如果至少一名双亲是超重或肥胖的，那么这个概率升高至约80％。儿童自己感受到超重最直接的后果就是社会歧视。
超重或肥胖个体的疾病风险升高，诸如高血压、血脂异常、2型(非胰岛素依赖型)糖尿病、胰岛素抵抗、葡萄糖不耐受、高胰岛素血症、冠心病、心绞痛、充血性心力衰竭、中风、胆结石、胆囊炎、胆石症、痛风、关节炎、阻塞性睡眠呼吸暂停和呼吸问题、胆囊病、某些形式的癌症(例如子宫内膜、乳腺、前列腺、和结肠的癌症)和心理障碍(诸如抑郁、进食障碍、扭歪的体像和低的自我尊重)。肥胖症的负面健康后果使之成为美国可预防的死亡的第二位原因，而且对社会造成重大经济和心理社会影响。参见例如McGinnis et al，JAMA(1993)270：2207-2212。
现在认识到肥胖症是慢性病，需要治疗来降低其相关健康风险。虽然体重减轻是一项重要的治疗后果，但是肥胖症管理的主要目标之一是改善心血管和代谢值以降低肥胖症相关发病率和死亡率。已经显示了体重减轻5-10％能实质性改善代谢值，诸如血糖、血压、和脂质浓度。因此，认为体重减轻5-10％可降低发病率和死亡率。
管理肥胖症当前可用的处方药一般通过降低饮食脂肪吸收(像奥里斯特(orlistat))或通过创造能量亏损即减少食物摄取和/或增加能量消耗(像西布曲明(sibutramine))来降低体重。当前可用的减肥药的备选方案的研究采取数条路径，其中之一聚焦于调控饱感中涉及的某些肠肽，诸如肽YY(PYY)。(Chaudhri et al，Annu Rev Physiol(2008)70：239-255。)
C.动脉粥样硬化
动脉粥样硬化是一种复杂的疾病，特征在于炎症、脂质积累、细胞死亡和纤维化。动脉粥样硬化特征在于胆固醇沉积和单核细胞浸润入内皮下间隙，导致泡沫细胞形成。动脉粥样硬化后续的血栓形成导致心肌梗死和中风。动脉粥样硬化是许多国家死亡率的首要原因，包括美国。(参见例如Ruggeri，Nat Med(2002)8：1227-1234；Arehart et al，Circ Res，2008，Mar 6 Epub ahead ofprint。)
D.炎性肠病(IBD)
炎性肠病(IBD)是在肠中引起炎症的疾病的通称，而且包括例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、溃疡性直肠炎。1990年美国炎性肠病的医疗花费估计是14至18亿美元。生产力损失估计额外增加4至8亿美元，使得炎性肠病的估计花费达到18至26亿美元。(参见例如Pearson，Nursing Times(2004)100：86-90；Hay et al，J Clin Gastroenterol(1992)14：309-317；Keighley et al，Ailment Pharmacol Ther(2003)18：66-70。)
肠炎指肠的炎症，尤其是小肠，是可具有众多不同原因之任一的普遍状况。小肠结肠炎指小肠和结肠的炎症。
克罗恩氏病(CD)是一种炎性过程，能影响消化道的任何部分，但是最常见的是在小肠最后部分，也称作(末端)回肠和盲肠中看到。总之，这个区域也称作回盲区。其它病例可影响下述一项或多项：仅结肠，仅小肠(十二指肠、空肠和/或回肠)，肛门，胃或食管。与溃疡性结肠炎(CD)不同，CD通常不影响直肠，但是频繁影响肛门。炎症深深地延伸入受影响组织的衬里。炎症能引起疼痛，而且能使得肠频繁排空，导致腹泻。克罗恩氏病还可称作小肠炎。肉芽肿性结肠炎是影响结肠的克罗恩氏病的另一个名称。回肠炎指回肠的CD，回肠是小肠的第三个部分。克罗恩氏结肠炎指影响部分或整个结肠的CD。
溃疡性结肠炎(UC)是大肠的炎性疾病，大肠普遍称为结肠。UC引起结肠和直肠内衬的炎症和溃疡。UC的炎症通常在直肠区域中最严重，严重程度向着大肠与小肠接合处的盲肠方向减轻(速率在患者间有变化)。直肠的炎症称作直肠炎。乙状结肠(刚好位于直肠之上)的炎症称作乙状结肠炎。涉及整个结肠的炎症称作全结肠炎。炎症引起结肠频繁排空，导致腹泻。随着结肠的衬里遭到破坏，溃疡形成，释放粘液、脓汁和血液。溃疡性直肠炎是只影响直肠的一种UC形式。
E.肽YY(PYY)
肽YY(PYY)是一种36个氨基酸的肽，最初是在1980自猪肠分离的(Tatemoto et al，Nature(1980)285：417-418)。PYY自大肠和小肠二者内的肠内分泌L-细胞分泌。已经显示了在大鼠和人肠中，免疫反应性PYY的浓度在十二指肠和空肠低，在回肠和结肠中高，而在直肠中最高(Lundberg et al，PNASUSA(1982)79：4471-4475；Adrian et al，Gastroenterol(1985)89：1070-1077；Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261；Ueno et al，Regul Pept(2008)145：12-16)。有报告说大鼠中的PYY表达还延伸至胰岛的α细胞和延髓中的细胞(Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261)。PYY作为PYY1-36和PYY3-36被释放入循环(Eberlein et al，Peptides(1989)10：797-803)。PYY3-36通过二肽基肽酶IV切割N端Tyr和Pro残基而自PYY1-36生成。PYY3-36是人餐后血浆中PYY的主要形式(Grandt et al，Regul Pept(1994)51：151-159)。有报告说PYY1-36和PYY3-36在NPY Y2受体(Y2R)处具有可比的激动剂活性，Y2R是一种G蛋白偶联受体(Parker et al，Br J Pharmacol(2008)153：420-431)；然而，有报告说PYY3-36是高亲和力Y2R选择性激动剂(Keire et al，Am J Physiol GastrointestLiver Physiol(2000)279：G126-G131)。随后有报告说PYY在外周施用后在大鼠中降低高脂肪食物摄取(Okada et al，Endocrinology Supplement(1993)180)，而且在外周施用后在小鼠中引起体重减轻(Morley et al，Life Sciences(1987)41：2157-2165)。
有报告说外周施用PYY3-36在大鼠中显著降低食物摄取和体重增加，在人中降低食欲和食物摄取，而且在小鼠中降低食物摄取，但是在Y2R无效(Y2R-null)小鼠中则不然，此提示食物摄取效果需要Y2R。在人体研究中，发现输注PYY3-36显著降低食欲，而且在24小时里将食物摄取减少33％。输注PYY3-36至达到该肽的正常餐后循环浓度在15分钟内导致PYY3-36的峰血清水平，接着在30分钟内快速下降至基础水平。有报告说在PYY3-36输注后的12小时时间段里食物摄取受到显著抑制，但是在12小时至24小时时间段里食物摄取没有受到本质影响。在一项大鼠研究中，重复腹膜内施用PYY3-36(每天注射两次，持续7天)降低累积食物摄取(Batterham et al，Nature(2002)418：650-654；Renshaw et al，Current Drug Targets(2005)6：171-179)。
有报告说在代谢疾病的各式各样啮齿类模型(两性)中外周施用PYY3-36降低食物摄取、体重增加和血糖指数(Pittner et al，Int J Obes Relat MetabDisord(2004)28：963-971)。有报告说用特异性拮抗剂BIIE-240阻断Y2R削弱外周施用内源和外源PYY3-36降低食物摄取的效果(Abbott et al，Brain Res(2005)1043：139-144)。有报告说在啮齿类中外周施用一种新的长效选择性Y2R聚乙二醇偶联肽激动剂降低食物摄取且改善葡萄糖代谢(葡萄糖处理、血浆胰岛素和血浆葡萄糖)(Ortiz et al，JPET(2007)323：692-700；Lamb et al，JMed Chem(2007)50：2264-2268)。有报告说PYY消除在小鼠中导致形成高胰岛素血症和肥胖症(Boey et al，Diabetologia(2006)49：1360-1370)。有报告说在小鼠中外周施用一种长效的有效且高度选择性的Y2R激动剂抑制食物摄取且促进脂肪代谢(Balasubramaniam et al，Peptides(2007)28：235-240)。
有证据表明在体内刺激PYY合成的药剂能赋予针对饮食诱导的和遗传的肥胖症的保护，而且能改善葡萄糖耐受(Boey et al，Neuropeptides(2008)42：19-30)。
有报告说Y2R激动剂诸如PYY1-36和PYY3-36能赋予针对癫痫性发作，诸如针对红藻氨酸盐发作的保护(El Bahh et al，Eur J Neurosci(2005)22：1417-1430；Woldbye et al，Neurobiology of Disease(2005)20：760-772)。
有报告说Y2R激动剂诸如PYY1-36和PYY3-36起促进吸收(或抑制分泌)激素的作用，在静脉内施用后提高肠各种部分中对水和钠二者的吸收(Bilchik etal，Gastroenterol(1993)105：1441-1448；Liu et al，J Surg Res(1995)58：6-11；Nightingale et al，Gut(1996)39：267-272；Liu et al，Am Surg(1996)62：232-236；Balasubramaniam et al，J Med Chem(2000)43：3420-3427)。有报告说Y2R激动剂诸如PYY类似物在肠上皮中抑制分泌且促进吸收和生长(Balasubramaniamet al，J Med Chem(2000)43：3420-3427)。有报告说PYY在正常大鼠中促进肠生长(Gomez et al，Am J Physiol(1995)268：G71-G81)。有报告说Y2R激动剂诸如PYY1-36和PYY3-36抑制肠运动且起预防腹泻的作用(EP1902730；还可参见Cox，Peptides(2007)28：345-351)。
有报告说Y2R激动剂诸如PYY1-36和PYY3-36能赋予针对炎性肠病诸如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病的保护(WO 03/105763)。有报告说PYY缺陷型小鼠展现骨质减少表型，即PYY能增加骨质和/或能赋予针对骨质减少的保护(例如降低骨质减少)(Wortley et al，Gastroenterol(2007)133：1534-1543)。有报告说在胰腺炎的啮齿类模型中PYY3-36能赋予保护(Vona-Davis et al，Peptides(2007)28：334-338)。
有报告说在Y2R缺陷型小鼠中血管发生受损(Lee et al，Peptides(2003)24：99-106)，即Y2R的激动剂诸如PYY1-36和PYY3-36促进血管发生。有报告说在Y2R缺陷型小鼠中伤口愈合受损(Ekstrand et al，PNAS USA(2003)100：6033-6038)，即Y2R的激动剂诸如PYY1-36和PYY3-36促进伤口愈合。有报告说在Y2R缺陷型小鼠中缺血性血管发生受损(Lee et al，J Clin Invest(2003)111：1853-1862)，即Y2R的激动剂诸如PYY1-36和PYY3-36促进缺血组织的血运重建和功能恢复。有报告说在外周动脉疾病的大鼠模型中Y2R的激动剂诸如PYY1-36和PYY3-36介导侧支依赖性血流的增加(Cruze et al，Peptides(2007)28：269-280)。
有报告说在例如胰腺癌诸如胰腺导管腺癌、乳腺癌诸如乳腺浸润性导管腺癌、结肠癌诸如结肠腺癌和Barrett氏腺癌的情况中PYY和Y2R激动剂诸如PYY3-36能遏制肿瘤生长(Liu et al，Surgery(1995)118：229-236；Liu et al，J SurgRes(1995)58：707-712；Grise et al，J Surg Res(1999)82：151-155；Tseng et al，Peptides(2002)23：389-395；McFadden et al，Am J Surg(2004)188：516-519)。
有报告说诸如PYY3-36对Y2R的刺激导致血浆脂连蛋白升高(Ortiz et al，JPET(2007)323：692-700)。脂连蛋白是一种具有有力抗炎特性的adipokine(Ouchi et al，Clin Chim Acta(2007)380：24-30；Tilg et al，Nat Rev Immunol(2006)6：772-783)。脂连蛋白发挥抗致动脉粥样硬化效果(通过靶向血管内皮细胞和巨噬细胞)和胰岛素敏化效果，主要在肌肉和肝中(Kubota et al，JBiol Chem(2002)277：25863-25866；Maeda et al，Nat Med(2002)8：731-737)。有报告说低脂连蛋白水平与血脂异常中的致动脉粥样硬化脂蛋白有关(升高的甘油三酯、低密度LDL胆固醇、低HDL胆固醇)(Marso et al，Diabetes Care(2008)Feb 5 Epub ahead of print)。高密度脂蛋白(HDL)装配中涉及脂连蛋白(Oku et al，FEBS Letters(2007)581：5029-5033)。发现在与脂连蛋白水平降低有关的肥胖症连锁代谢综合征的小鼠模型中脂连蛋白改善代谢综合征的异常，包括胰岛素抵抗、高血糖、和血脂异常(Hara et al，Diabetes Care(2006)29：1357-1362)。有报告说脂连蛋白响应组织缺血而刺激血管发生(Shibata et al，J Biol Chem (2004)279：28670-28674)。有报告说脂连蛋白经由内皮一氧化氮合酶依赖性机制而预防脑缺血损伤(Nishimura et al，Circulation(2008)117：216-223)。有报告说脂连蛋白赋予针对心肌缺血-再灌注损伤的保护(Shibata et al，Nat Med(2005)11：1096-1103；Tao et al，Circulation(2007)115：1408-1416)。有报告说脂连蛋白经AMP活化的蛋白激酶、Akt、和一氧化氮而赋予针对心肌缺血-再灌注损伤的保护(Gonon et al，Cardiovasc Res(2008)78：116-122)。有报告说脂连蛋白经由其遏制心脏肥大和间质性纤维化的能力而赋予针对心肌梗死后收缩功能障碍形成的保护，且针对肌细胞和毛细管损失提供保护(Shibata et al，J Mol Cell Cardiol(2007)42：1065-1074)。有报告说脂连蛋白赋予针对炎性肺病的保护；脂连蛋白缺陷型小鼠展现肺气肿样表型(Summer et al，Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol(March 7，2008))。有报告说脂连蛋白赋予针对变应性气道炎症和气道高反应性(诸如与哮喘有关的)的保护(Shore et al，J Allergy Clin Immunol(2006)118：389-395)。有报告说脂连蛋白因其胰岛素敏化效果而赋予针对肺动脉高血压的保护(Hansmann et al，Circulation(2007)115：1275-1284)。有报告说脂连蛋白改善肥胖症相关高血压，所述高血压改善部分与前列环素表达上调有关(Ohashi et al，Hypertension(2006)47：1108-1116)。有报告说脂连蛋白降低肿瘤坏死因子(TNF)-α介导的粘附分子VCAM-1、E-选择蛋白和ICAM-1在人主动脉内皮细胞(HAEC)中的表达(Ouchi et al，Circulation(1999)100：2473-2476)且抑制TNF-[α]在巨噬细胞中的生成(Yokota et al，Blood(2000)96：1723-1732)。有报告说脂连蛋白赋予针对血管介入后再狭窄的保护(Matsuda et al，J Biol Chem(2002)277：37487-37491)。TNF-α在炎症中的主要作用已经通过阻断TNF-α作用的药剂治疗一系列炎性状况的能力得到证明。TNF-α介导的炎性状况涵盖类风湿性关节炎、炎性肠病诸如克罗恩氏病、强直性脊柱炎、银屑病、缺血性脑损伤、心脏同种异体移植物排斥、哮喘、等等(Bradley，J Pathol(2008)214：149-160)。参见例如Yamamoto et al，Clinical Science(2002)103：137-142；Behre，Scand J Clin Lab Invest(2007)67：449-458；Guerre-Millo，Diabetes &Metabolism(2008)34：12-18；Parker et al，Br J Pharmacol(2008)153：420-431。
F.受PYY调控的状况的治疗
受PYY调控的状况的治疗的一种诱人的备选办法是开发口服有活性的组合物来提高个体中的内源PYY水平，诸如内源血浆PYY水平，诸如通过刺激肠道肠内分泌细胞中的PYY分泌。
G.GPR119
GPR119是一种G蛋白偶联受体(GPR119；例如人GPR119，登录号AAP72125及其等位基因；例如小鼠GPR119，
Figure BPA00001252734000082
登录号AY288423及其等位基因)。激动剂对GPR119的刺激导致细胞内cAMP水平升高，与GPR119偶联至Gs一致。在专利文献中，GPR119被称作RUP3(例如WO 00/31258)；GPR119还被称作葡萄糖依赖性促胰岛素受体(GDIR)。
H.G蛋白偶联受体
虽然人类中存在多类受体，但是迄今为止G蛋白偶联受体(GPCR)类代表最丰富的和治疗上重要的。估计人类基因组内有大约30,000-40,000种基因，其中大约2％估计编码GPCR。
GPCR代表药学产品开发的一个重要领域。在GPCR处有活性的药物在广谱的人类疾病中有治疗好处，多种多样，像疼痛、认知功能障碍、高血压、消化性溃疡、鼻炎、和哮喘。在大约500种临床销售的药物中，超过30％是GPCR功能的调控剂。这些药物在大约30种充分表征的GPCR处发挥它们的活性。(参见例如Wise et al，Annu Rev Pharmacol Toxicol(2004)44：43-66。)
GPCR共享一段共同结构基序，具有七段22-24个疏水性氨基酸的序列，形成七个α螺旋，每个都跨膜(每次跨越以数字鉴定，即跨膜-1(TM-1)、跨膜-2(TM-2)、等)。跨膜螺旋通过细胞膜的外部或“细胞外”侧上跨膜-2与跨膜-3、跨膜-4与跨膜-5、和跨膜-6与跨膜-7之间的氨基酸链(这些分别称作“细胞外”区1、2和3(EC-1、EC-2和EC-3))相连接。跨膜螺旋还通过细胞膜的内部或“细胞内”侧上跨膜-1与跨膜-2、跨膜-3与跨膜-4、和跨膜-5与跨膜-6之间的氨基酸链(这些分别称作“细胞内”区1、2和3(IC-1、IC-2和IC-3))相连接。受体的“羧基”(“C”)末端在细胞内的细胞内空间中，而受体的“氨基”(“N”)末端在细胞外的细胞外空间中。
一般，当配体与受体结合时(常常称作受体的“活化”)，受体的构象有变化，促进细胞内区与细胞内“G蛋白”之间的偶联。已经报告了GPCR对于G蛋白是“混杂的”，即GPCR能与超过一种G蛋白相互作用。参见Kenakin，Life Sciences(1988)43：1095-1101。虽然存在其它G蛋白，但是当前已经鉴定的G蛋白有Gq、Gs、Gi、Gz和Go。配体活化的GPCR与G蛋白偶联启动信号传导级联过程(称作“信号转导”)。在正常条件下，信号转导最终导致细胞活化或细胞抑制。虽然不希望受理论束缚，但是认为受体的IC-3环以及羧基末端与G蛋白相互作用。
也有混杂的G蛋白，它们表现出将数类GPCR偶联至磷脂酶C途径，诸如G15或G16(Offermanns&Simon，J Biol Chem(1995)270：15175-80)，或嵌合G蛋白，它们设计成将大量的不同GPCR偶联至相同途径，例如磷脂酶C(Milligan&Rees，Trends in Pharmaceutical Sciences(1999)20：118-24)。
在生理条件下，GPCR在细胞膜中在两种不同构象之间平衡存在：“无活性的”状态和“有活性的”状态。处于无活性状态的受体没有能力连接至细胞内信号转导途径以启动导致生物学应答的信号转导。受体构象变成有活性状态容许连接至转导途径(经G蛋白)及产生生物学应答。
配体或化合物(诸如药物)可稳定受体处于有活性状态。最近的发现(包括但不排他性限于对受体氨基酸序列的修饰)提供了配体或药物以外的手段来促进和稳定受体处于有活性状态构象。通过模拟配体结合受体的影响，这些手段有效稳定受体处于有活性状态。通过此类不依赖配体的手段实现的稳定称作“组成性受体活化”。
发明概述
本发明涉及申请人出乎意料的发现，即对个体施用GPR119激动剂(诸如通过口服施用)能起提高个体中血浆总PYY的作用。本发明的特征为涉及GPR119，用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、和对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法。GPR119激动剂对于提高个体中的血浆总PYY是有用的。在某些实施方案中，所述个体是人。
SEQ ID NO：1给出了编码人GPR119多肽的核苷酸序列。SEQ ID NO：2给出了所述编码的人GPR119多肽的氨基酸序列。
在第一个方面，本发明的特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)使测试化合物与包含G蛋白偶联受体的宿主细胞或与宿主细胞的膜接触，其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在
(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体：
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；并
(b)测定所述测试化合物刺激所述G蛋白偶联受体的功能性(functionality)的能力；
其中所述测试化合物刺激所述G蛋白偶联受体的功能性的能力指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的等位基因。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的哺乳动物直向同系物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是重组的。
在某些实施方案中，所述方法是一种用于鉴定PYY促分泌素的方法。
在某些实施方案中，所述方法鉴定所述受体的激动剂。
在某些实施方案中，所述方法包括鉴定所述受体的部分激动剂。
在某些实施方案中，所述方法是一种用于鉴定对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物的方法。
在某些实施方案中，所述方法是一种用于鉴定对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括这第一个方面的步骤(a)和(b)，且进一步包括：
(c)任选合成在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；
(d)在体外使在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触；并
(e)测定所述化合物是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述测试化合物自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物肠内分泌细胞是哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是L细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠获得的组织中或衍生自从小肠或大肠获得的组织。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠含L细胞的区域获得的组织中或衍生自从小肠或大肠含L细胞的区域获得的组织。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在十二指肠、空肠、回肠、结肠或直肠组织中或衍生自十二指肠、空肠、回肠、结肠或直肠组织(参见例如Lundberg et al，PNAS USA(1982)79：4471-4475；Adrian et al，Gastroenterol(1985)89：1070-1077；Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261；Ueno et al，Regul Pept(2008)145：12-16)。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是肠内分泌细胞系。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是包含在胰岛中的细胞或是衍生自胰岛(islets ofLangerhans)的细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是神经元细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是改造成能够分泌PYY的重组细胞。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括这第一方面的步骤(a)和(b)，且进一步包括：
(c)任选合成在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；
(d)对脊椎动物施用在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；并
(e)测定所述化合物是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述PYY水平是总PYY的血液或血浆浓度。在某些实施方案中，所述PYY水平是PYY3-36的血液或血浆浓度。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
在某些实施方案中，所述人是在临床试验中登记或接受治疗的个体或患者。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括这第一个方面的步骤(a)和(b)，且进一步包括：
(c)任选合成在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；并
(d)测定所述化合物是否提高样品中的PYY水平，所述样品是自先前施用了在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物的脊椎动物获得的；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括这第一个方面的步骤(a)和(b)，且进一步包括：
(c)任选合成在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；
(d)任选提供在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；
(e)在体外使在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触；并
(f)测定所述化合物是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述测试化合物自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物肠内分泌细胞是哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是L细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠获得的组织或由其衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠含L细胞的区域获得的组织或由其衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在十二指肠、空肠、回肠、结肠或直肠组织或由其衍生(参见例如Lundberg et al，PNAS USA(1982)79：4471-4475；Adrian et al，Gastroenterol(1985)89：1070-1077；Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261；Ueno et al，Regul Pept(2008)145：12-16)。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是肠内分泌细胞系。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是包含在胰岛中的细胞或由其衍生的细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是神经元细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是改造成能够分泌PYY的重组细胞。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括这第一个方面的步骤(a)和(b)，且进一步包括：
(c)任选合成在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；
(d)任选提供在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；
(e)对脊椎动物施用在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；并
(f)测定所述化合物是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述PYY水平是总PYY的血液或血浆浓度。在某些实施方案中，所述PYY水平是PYY3-36的血液或血浆浓度。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括这第一个方面的步骤(a)和(b)，且进一步包括：
(c)任选合成在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；
(d)任选提供在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；并
(e)测定所述化合物是否提高样品中的PYY水平，所述样品是自先前施用了在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物的脊椎动物获得的；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
在某些实施方案中，所鉴定的PYY促分泌素、或所鉴定的对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或所鉴定的对于调控PYY相关活性有用的化合物是所述受体的激动剂。在一些实施方案中，所鉴定的PYY促分泌素、或所鉴定的对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或所鉴定的对于调控PYY相关活性有用的化合物是所述受体的部分激动剂。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是偶联至G蛋白的。在某些实施方案中，刺激G蛋白偶联受体提高细胞内cAMP积累水平。在某些实施方案中，所述G蛋白是Gs。
在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或其等位基因。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的等位基因。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000151
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺((2-Fluoro-4-methanesulfonyl-phenyl)-{6-[4-(3-isopropyl-[1，2，4]oxadiazol-5-yl)-piperidin-1-yl]-5-nitro-pyrimidin-4-yl}-amine)的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是配体为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000161
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000162
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP积累水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，严格杂交条件包括在包含50％甲酰胺、5x SSC(1xSSC＝150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5xDenhardt氏液、10％硫酸右旋糖苷、和20μg/ml变性剪切鲑鱼精DNA的溶液中于42℃杂交，接着在包含0.1x SSC的溶液中于65℃清洗。杂交技术是本领域技术人员公知的。
在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO：2或其等位基因。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ IDNO：2的等位基因。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000163
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000164
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP积累水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述作为G蛋白偶联受体的SEQ ID NO：2变体是内源G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述作为G蛋白偶联受体的SEQ ID NO：2的变体是非内源G蛋白偶联受体。
在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或其等位基因。在某些实施方案中，所述与SEQ IDNO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000171
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000172
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，所述与SEQ IDNO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000174
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在一些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是包含G蛋白的融合蛋白的一部分。用于制备GPCR:G融合构建物的技术是技术人员公知的(参见例如国际申请WO 02/42461)。
在某些实施方案中，所述宿主细胞包含表达载体，所述表达载体包含编码所述G蛋白偶联受体的多核苷酸。一种例示性的合适的表达载体是pCMV。其它合适的表达载体对于本领域普通技术人员会是显而易见的，而且极其多种表达载体是商品化的(例如Clontech，Palo Alto，CA；Stratagene，La Jolla，CA；及Invitrogen，Carlsbad，CA)。
在一些实施方案中，所述宿主细胞是脊椎动物细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，所述哺乳动物宿主细胞选自下组：293细胞、293T细胞、CHO细胞、MCB3901细胞、和COS-7细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞是酵母细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞是载黑色素细胞。其它合适的宿主细胞对于本领域普通技术人员会是显而易见的，而且极其多种细胞系可购自美国典型培养物保藏中心(10801University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209)。
在某些实施方案中，所述测定与G蛋白偶联受体是Gs偶联受体一致。
在一些实施方案中，所述测定与G蛋白偶联受体经由混杂的G蛋白，诸如Gα15或Gα16偶联至磷脂酶C途径一致。混杂的G蛋白是技术人员公知的(参见例如Offermanns et al.，J Biol Chem(1995)270：15175-15180)。在一些实施方案中，所述测定与例如G蛋白偶联受体经由嵌合G蛋白偶联至磷脂酶C途径一致。嵌合G蛋白是技术人员公知的(参见例如Milligan et al.，Trends inPharmaceutical Sciences(1999)20：118-124；and WO 02/42461)。
在一些实施方案中，所述测定是经由测量第二信使水平而进行的。
在一些实施方案中，所述测定是经由测量选自下组的第二信使水平而进行的：环AMP(cAMP)、环GMP(cGMP)、肌醇1，4，5-三磷酸(IP3)、甘油二酯(DAG)、MAP激酶活性、MAPK/ERK激酶激酶-1(MEKK1)活性和Ca2+。在一些优选的实施方案中，所述第二信使是cAMP。在某些实施方案中，细胞内cAMP水平升高。
在某些实施方案中，所述测定是使用分离的包含G蛋白偶联受体的膜进行的。
在某些实施方案中，所述测定是经由使用载黑色素细胞测定法的。在某些实施方案中，色素分散水平升高。
在一些实施方案中，所述测定是经由报道物测定法的。在一些实施方案中，所述报道物测定法是CRE-Luc报道物测定法的。
在一些实施方案中，所述测定是经由测量由提高细胞内cAMP水平介导的活性的。
在一些实施方案中，所述测定是经由CRE-Luc报道物测定法的。在某些实施方案中，萤光素酶活性水平升高。
在一些实施方案中，所述测定是经由测量GTPγS结合包含G蛋白偶联受体的膜的。在某些实施方案中，所述GTPγS是用[35S]标记的。在某些实施方案中，所述GTPγS对包含GPCR的膜的结合增强。
在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是多肽。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是多肽或脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物是多肽。在一些实施方案中，所述测试化合物是多肽，前提是所述多肽不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述测试化合物是脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述测试化合物是抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选测定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选提供PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的名称或结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选生成或合成PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括评估PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控PYY相关活性有用的化合物的生物利用度。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物组合物。
在某些实施方案中，所述受PYY调控的状况是骨相关状况。在某些实施方案中，所述骨相关状况是特征为低骨质(Low bone mass)的状况。在某些实施方案中，所述特征为低骨质的状况选自下组：骨质减少、骨质疏松、类风湿性关节炎、骨关节炎、牙周病、牙槽骨丢失、截骨术骨丢失、儿童期特发性骨丢失、佩吉特氏病、转移癌所致骨丢失、溶骨性病变、脊柱弯曲、和身高损失。
在某些实施方案中，所述骨相关状况是骨折。在某些实施方案中，所述骨折选自下组：外伤性骨折、长期骨折、和骨质疏松性骨折。
在某些实施方案中，所述骨相关状况是骨病。在某些实施方案中，所述骨病选自下组：骨质减少、骨质疏松、类风湿性关节炎、骨关节炎、牙周病、牙槽骨丢失、截骨术骨丢失、儿童期特发性骨丢失、佩吉特氏病、转移癌所致骨丢失、溶骨性病变、脊柱弯曲、和身高损失。
在某些实施方案中，所述骨相关状况是增强的骨愈合或骨生长，其中所述增强的骨愈合或骨生长选自下组：面部重建、上颌骨重建、下颌骨重建、牙周病或拔牙后增强的骨愈合，增强的长骨延长，增强的假体向内生长，和增加的骨连结。
在某些实施方案中，所述受PYY调控的状况是代谢病症。
在某些实施方案中，所述代谢病症选自下组：超重、肥胖症、饮食过多、糖尿病(含1型糖尿病和2型糖尿病)、2型糖尿病、受损的葡萄糖耐受、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、血脂异常、高血压和代谢综合征。
在某些实施方案中，所述受PYY调控的状况是血管发生相关状况。
在某些实施方案中，所述血管发生相关状况选自下组：外周动脉病、伤口愈合和缺血。
在某些实施方案中，所述受PYY调控的状况是缺血相关状况。
在某些实施方案中，所述缺血相关状况选自下组：缺血性发作、缺血性心脏病、心肌梗死、缺血-再灌注损伤、心肌梗死后重塑、心力衰竭、和充血性心力衰竭。
在某些实施方案中，所述受PYY调控的状况是吸收不良性病症。
在某些实施方案中，所述吸收不良性病症选自下组：短肠综合征、小肠结肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、霍乱、和伴有腹泻的病症。
在某些实施方案中，所述受PYY调控的状况是惊厥性病症。
在某些实施方案中，所述惊厥性病症是癫痫。
在某些实施方案中，所述受PYY调控的状况是癌症。
在某些实施方案中，所述癌症选自下组：胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、和Barrett氏腺癌。
在某些实施方案中，所述受PYY调控的状况是炎性病症。
在某些实施方案中，所述炎性病症选自下组：动脉粥样硬化、血栓形成(atherothrombosis)、胰岛素抵抗、糖尿病(含1型糖尿病和2型糖尿病)、1型糖尿病、缺血性发作、胰腺炎、再狭窄、炎性肺病、和炎性肠病。在某些实施方案中，所述炎性肺病选自下组：哮喘、肺气肿、和肺动脉高血压。在某些实施方案中，所述炎性肠病选自下组：肠炎、小肠结肠炎、克罗恩氏病、肉芽肿性结肠炎、回肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乙状结肠炎、全结肠炎、和溃疡性直肠炎。
在某些实施方案中，所述调控PYY相关活性选自下组：
(a)提高血浆PYY；
(b)增加骨质；
(c)减少骨质损失；
(d)增加骨形成；
(e)减少食物摄取；
(f)降低体重；
(g)提高饱感；
(h)提高葡萄糖处理；
(i)降低血浆葡萄糖；
(j)提高血管发生；
(k)降低肠上皮中的分泌；
(l)提高肠上皮中的吸收；和
(m)提高血浆脂连蛋白。
本发明另一特征为一种包括实施依照这第一个方面的方法的过程。
在第二个方面，本发明的特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)在体外使通过依照第一个方面的方法鉴定的化合物与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触；并
(b)测定所述化合物是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述测试化合物自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物肠内分泌细胞是哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是L细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠获得的组织中或从该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠含L细胞的区域获得的组织中或自该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在十二指肠、空肠、回肠、结肠或直肠组织中或自该组织衍生(参见例如Lundberget al，PNAS USA(1982)79：4471-4475；Adrian et al，Gastroenterol(1985)89：1070-1077；Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261；Ueno et al，Regul Pept(2008)145：12-16)。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是肠内分泌细胞系。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是包含在胰岛中的细胞或从胰岛衍生的细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是神经元细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是改造成能够分泌PYY的重组细胞。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)对脊椎动物施用通过依照第一个方面的方法鉴定的化合物；并
(d)测定所述化合物是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述PYY水平是总PYY的血液或血浆浓度。在某些实施方案中，所述PYY水平是PYY3-36的血液或血浆浓度。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)测定所述化合物是否提高样品中的PYY水平，所述样品是自先前施用了在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物的脊椎动物获得的；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述PYY水平是总PYY的血液或血浆浓度。在某些实施方案中，所述PYY水平是PYY3-36的血液或血浆浓度。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是多肽。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是多肽或脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物是多肽。在一些实施方案中，所述测试化合物是多肽，前提是所述多肽不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述测试化合物是脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述测试化合物是抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选测定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选提供PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的名称或结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选生成或合成PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物。在一些实施方案中，所述方法进一步包括评估PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控PYY相关活性有用的化合物的生物利用度。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物组合物。
本发明另一特征为一种包括实施依照这第二个方面的方法的过程。
在第三个方面，本发明的特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)在体外使GPR119激动剂与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触；并
(b)测定所述GPR119激动剂是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述GPR119激动剂自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力指示所述GPR119激动剂是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物肠内分泌细胞是哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是L细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠获得的组织中或从该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠含L细胞的区域获得的组织中或自该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在十二指肠、空肠、回肠、结肠或直肠组织中或自该组织衍生(参见例如Lundberget al，PNAS USA(1982)79：4471-4475；Adrian et al，Gastroenterol(1985)89：1070-1077；Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261；Ueno et al，Regul Pept(2008)145：12-16)。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是肠内分泌细胞系。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是包含在胰岛中的细胞或从胰岛衍生的细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是神经元细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是改造成能够分泌PYY的重组细胞。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)对脊椎动物施用GPR119激动剂；并
(b)测定所述GPR119激动剂是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；其中所述GPR119激动剂提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力指示所述GPR119激动剂是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述PYY水平是总PYY的血液或血浆浓度。在某些实施方案中，所述PYY水平是PYY3-36的血液或血浆浓度。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)测定所述化合物是否提高样品中的PYY水平，所述样品是自先前施用了GPR119激动剂的脊椎动物获得的；对脊椎动物施用GPR119激动剂；
其中所述GPR119激动剂提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力指示所述GPR119激动剂是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述PYY水平是总PYY的血液或血浆浓度。在某些实施方案中，所述PYY水平是PYY3-36的血液或血浆浓度。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是内源GPR119的激动剂。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是人GPR119的激动剂。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是GPR119部分激动剂。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是选择性GPR119激动剂。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是小分子。在一些实施方案中，所述小分子不是多肽。在一些实施方案中，所述小分子不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述小分子不是脂质。在一些实施方案中，所述小分子不是多肽或脂质。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是口服可利用的。
在某些实施方案中，所述GPR119激动剂具有小于约10μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约75nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约15nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、或小于约1nM的EC50值。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂在具有SEQ IDNO：2的人GPR119处具有小于约10μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约75nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约15nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、或小于约1nM的EC50值。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂在腺苷酰环化酶测定法(实施例9、实施例10和实施例11中提供了例示性的腺苷酰环化酶测定法，见下文)中在具有SEQ ID NO：2的人GPR119处具有小于约10μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约75nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约15nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、或小于约1nM的EC50值。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂在载黑色素细胞测定法(实施例12中提供了例示性的载黑色素细胞测定法，见下文)中在具有SEQID NO：2的人GPR119处具有小于约10μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约75nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约15nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、或小于约1nM的EC50值。
例示性的GPR119激动剂披露于例如国际申请号PCT/US2004/001267(公布为WO 04/065380)；国际申请号PCT/US2004/005555(公布为WO04/076413)；国际申请号PCT/US2004/022327(公布为WO 05/007647)；国际申请号PCT/US2004/022417(公布为WO 05/007658)；国际申请号PCT/US2005/019318(公布为WO 2005/121121)；国际申请号PCT/GB2004/050046(公布为WO 2005/061489)；国际申请号PCT/US06/00567(公布为WO 2006/083491)；国际申请号PCT/GB2005/050264(公布为WO 2006/067531)；国际申请号PCT/GB2005/050265(公布为WO 2006/067532)；国际申请号PCT/GB2005/050266(公布为WO 2006/070208)；国际申请号PCT/JP02/09350(公布为WO 03/026661)；国际申请号PCT/JP2005/018412(公布为WO06/040966)；国际申请号PCT/JP2005/019000(公布为WO 2006/043490)；国际申请号PCT/GB2006/050176(公布为WO 2007/003960)；国际申请号PCT/GB2006/050177(公布为WO 2007/003961)；国际申请号PCT/GB2006/050178(公布为WO 2007/003962)；国际申请号PCT/GB2006/050182(公布为WO 2007/003964)；国际申请号PCT/JP02/09350(公布为WO 03/026661)；国际申请号PCT/GB2007/050183(公布为WO2007/116229)；国际申请号PCT/GB2007/050190(公布为WO 2007/116230)；国际申请号PCT/US2007/073364(公布为WO 2008/008895)；国际申请号PCT/EP2007/058991(公布为WO  2008/025798)；国际申请号PCT/EP2007/058993(公布为WO 2008/025799)；and国际申请号PCT/EP2007/058995(公布为WO 2008/025800)。
在某些实施方案中，所述方法包括提供所述GPR119激动剂。
在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是通过依照第一个方面的方法可鉴定的。
在某些实施方案中，所述方法包括进行依照第一个方面的方法来鉴定GPR119激动剂。
在某些实施方案中，所述方法包括通过依照第一个方面的方法鉴定GPR119激动剂。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选测定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选提供PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的名称或结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选生成或合成PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括评估PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控PYY相关活性有用的化合物的生物离利用度。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物组合物。
本发明另一特征为一种包括实施依照这第三个方面的方法的过程。
在第四个方面，本发明的特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)在存在或缺失测试化合物的情况中使G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体接触，其中所述受体的配体是GPR119的配体且其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体的氨基酸序列：
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；并
(b)检测所述已知配体与所述受体之间的复合物；并
(c)测定在存在所述测试化合物的情况中形成的所述复合物是否比在缺失所述测试化合物的情况中的少；
其中所述测定指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述受体包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的等位基因。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的哺乳动物直向同系物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是重组的。
在某些实施方案中，所述方法是一种用于鉴定PYY促分泌素的方法。
在某些实施方案中，所述方法是一种用于鉴定对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物的方法。
在某些实施方案中，所述方法是一种用于鉴定对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法。
在某些实施方案中，所述GPR119的配体是GPR119激动剂。在某些实施方案中，所述GPR119的配体或所述GPR119激动剂是内源脊椎动物、哺乳动物或人GPR119受体的配体或激动剂。在某些实施方案中，所述GPR119的配体或所述GPR119激动剂是内源人GPR119受体的配体或激动剂。在某些实施方案中，所述GPR119的配体或所述GPR119激动剂与例如国际申请号PCT/US2004/001267(公布为WO 04/065380)；国际申请号PCT/US2004/005555(公布为WO 04/076413)；国际申请号PCT/US2004/022327(公布为WO 05/007647)；国际申请号PCT/US2004/022417(公布为WO 05/007658)；国际申请号PCT/US2005/019318(公布为WO 2005/121121)；国际申请号PCT/GB2004/050046(公布为WO 2005/061489)；国际申请号PCT/US06/00567(公布为WO 2006/083491)；国际申请号PCT/GB2005/050264(公布为WO 2006/067531)；国际申请号PCT/GB2005/050265(公布为WO 2006/067532)；国际申请号PCT/GB2005/050266(公布为WO 2006/070208)；国际申请号PCT/JP02/09350(公布为WO 03/026661)；国际申请号PCT/JP2005/018412(公布为WO06/040966)；国际申请号PCT/JP2005/019000(公布为WO 2006/043490)；国际申请号PCT/GB2006/050176(公布为WO 2007/003960)；国际申请号PCT/GB2006/050177(公布为WO 2007/003961)；国际申请号PCT/GB2006/050178(公布为WO 2007/003962)；国际申请号PCT/GB2006/050182(公布为WO 2007/003964)；国际申请号PCT/JP02/09350(公布为WO 03/026661)；国际申请号PCT/GB2007/050183(公布为WO2007/116229)；国际申请号PCT/GB2007/050190(公布为WO 2007/116230)；国际申请号PCT/US2007/073364(公布为WO 2008/008895)；国际申请号PCT/EP2007/058991(公布为WO 2008/025798)；国际申请号PCT/EP2007/058993(公布为WO 2008/025799)；或国际申请号PCT/EP2007/058995(公布为WO 2008/025800)中披露的化合物相同。在某些实施方案中，所述GPR119的配体或所述GPR119激动剂是(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，所述GPR119的配体是内源脊椎动物、哺乳动物、或人GPR119受体的内源配体。
在某些实施方案中，所述任选标记的已知配体是标记的已知配体。在某些实施方案中，所述标记的已知配体是放射性标记的已知配体。用于放射性标记化合物，诸如用于标记本发明G蛋白偶联受体的已知配体的技术是技术人员公知的。参见例如国际申请WO 04/065380。还可见例如实施例14，见下文。
用于检测G蛋白偶联受体与已知是G蛋白偶联受体的配体的化合物之间的复合物的技术是技术人员公知的。参见例如国际申请WO 04/065380。还可参见例如实施例15，见下文。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括步骤这第四个方面的步骤(a)至(c)，且进一步包括：
(d)任选合成这样的化合物，该化合物即在该化合物存在的情况下步骤(c)中所述复合物形成较少的化合物；
(e)在体外使这样的化合物与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触，所述化合物即在步骤(c)中在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；并
(f)测定所述化合物是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述测试化合物自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物肠内分泌细胞是哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是L细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠获得的组织中或从该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠含L细胞的区域获得的组织中或自该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在十二指肠、空肠、回肠、结肠或直肠组织中或自该组织衍生(参见例如Lundberget al，PNAS USA(1982)79：4471-4475；Adrian et al，Gastroenterol(1985)89：1070-1077；Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261；Ueno et al，Regul Pept(2008)145：12-16)。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是肠内分泌细胞系。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是包含在胰岛中的细胞或从胰岛衍生的细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是神经元细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是改造成能够分泌PYY的重组细胞。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括这第四个方面的步骤(a)至(c)，且进一步包括：
(d)任选合成这样的化合物，该化合物即在该化合物存在的情况下步骤(c)中所述复合物形成较少的化合物；
(e)对脊椎动物施用这样的化合物，该化合物即在步骤(c)中在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；并
(f)测定所述化合物是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括这第四个方面的步骤(a)至(c)，且进一步包括：
(d)任选合成这样的化合物，即在该化合物存在的情况下步骤(c)中所述复合物形成较少的化合物；并
(e)测定所述化合物是否提高样品中的PYY水平，所述样品是自先前施用了这样的化合物的脊椎动物获得的，所述化合物即在步骤(c)中在该化合物存在的情况下所述复合物形成较少的化合物；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括这第四个方面的步骤(a)至(c)，且进一步包括：
(d)任选合成这样的化合物，该化合物即依照步骤(c)在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；
(e)任选提供这样的化合物，该化合物即依照步骤(c)在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；
(f)在体外使这样的化合物与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触，该化合物即依照步骤(c)在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；并
(g)测定所述化合物是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述测试化合物自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物肠内分泌细胞是哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是L细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠获得的组织中或从该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠含L细胞的区域获得的组织中或自该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在十二指肠、空肠、回肠、结肠或直肠组织中或自该组织衍生(参见例如Lundberget al，PNAS USA(1982)79：4471-4475；Adrian et al，Gastroenterol(1985)89：1070-1077；Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261；Ueno et al，Regul Pept(2008)145：12-16)。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是肠内分泌细胞系。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是包含在胰岛中的细胞或从胰岛衍生的细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是神经元细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是改造成能够分泌PYY的重组细胞。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，其包括这第四个方面的步骤(a)至(c)，且进一步包括
(d)任选合成这样的化合物，该化合物即依照步骤(c)在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；
(e)任选提供这样的化合物，该化合物即依照步骤(c)在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；
(f)对脊椎动物施用这样的化合物，该化合物即依照步骤(c)在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；并
(g)测定所述化合物是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，，其包括这第四个方面的步骤(a)至(c)，且进一步包括：
(d)任选合成这样的化合物，该化合物即依照步骤(c)在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；
(e)任选提供这样的化合物，该化合物即依照步骤(c)在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；并
(f)测定所述化合物是否提高样品中的PYY水平，所述样品是自先前施用了这样的化合物的脊椎动物获得的，该化合物即依照步骤(c)在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或其等位基因。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的等位基因。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000361
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是配体为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP积累水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，严格杂交条件包括在包含50％甲酰胺、5x SSC(1xSSC＝150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5xDenhardt氏液、10％硫酸右旋糖苷、和20μg/ml变性剪切鲑鱼精DNA的溶液中于42℃杂交，接着在包含0.1x SSC的溶液中于65℃清洗。杂交技术是本领域技术人员公知的。
在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO：2或其等位基因。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ IDNO：2的等位基因。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000364
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是配体为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000365
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000371
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述作为G蛋白偶联受体的SEQ ID NO：2变体是内源G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述作为G蛋白偶联受体的SEQ ID NO：2变体是非内源G蛋白偶联受体。
在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或其等位基因。在某些实施方案中，所述与SEQ IDNO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000372
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000373
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，所述与SEQ IDNO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000381
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000382
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在一些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是包含G蛋白的融合蛋白的一部分。用于制备GPCR:G融合构建物的技术是技术人员公知的(参见例如国际申请WO 02/42461)。
在某些实施方案中，所述测定通过使用包含G蛋白偶联受体的宿主细胞实施。在某些实施方案中，所述宿主细胞包含表达载体，所述表达载体包含编码所述G蛋白偶联受体的多核苷酸。一种例示性的合适的表达载体是pCMV。其它合适的表达载体对于本领域普通技术人员会是显而易见的，而且极其多种表达载体是商品化的(例如Clontech，Palo Alto，CA；Stratagene，LaJolla，CA；及Invitrogen，Carlsbad，CA)。
在一些实施方案中，所述宿主细胞是脊椎动物细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。在一些实施方案中，所述哺乳动物宿主细胞选自下组：293细胞、293T细胞、CHO细胞、MCB3901细胞、和COS-7细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞是酵母细胞。在一些实施方案中，所述宿主细胞是载黑色素细胞。其它合适的宿主细胞对于本领域普通技术人员会是显而易见的，而且极其多种细胞系可购自美国典型培养物保藏中心(10801University Boulevard，Manassas，VA 20110-2209)。
在某些实施方案中，所述测定使用包含所述G蛋白偶联受体的膜进行。
在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是多肽。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是多肽或脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物是多肽。在一些实施方案中，所述测试化合物是多肽，前提是所述多肽不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述测试化合物是脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述测试化合物是抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选测定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选提供PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的名称或结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选生成或合成PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选测定YY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选提供PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的名称或结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选生成或合成PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括评估PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控PYY相关活性有用的化合物的生物利用度。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物组合物。
本发明另一特征为一种包括实施依照这第四个方面的方法的过程。
在第五个方面，本发明的特征为一种筛选测试化合物以鉴定PYY促分泌素、用于治疗或预防受PYY调控的状况的化合物、或用于调控个体中的PYY相关活性的化合物的方法，其特征在于使用包含选自下组的氨基酸序列的G蛋白偶联受体：
(a)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(b)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(c)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(a)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸(one orseveral amino acids)自(a)衍生的；
(d)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(e)选自下组的SEQ ID NO：2变体：
(i)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(f)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(g)(a)至(f)任一项的生物学活性片段。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述受体包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的等位基因。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的哺乳动物直向同系物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是重组的。
在某些实施方案中，所述方法鉴定所述受体的激动剂。
在某些实施方案中，所述方法包括鉴定所述受体的部分激动剂。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括评估PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控PYY相关活性有用的化合物的生物利用度。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物组合物。
本发明另一特征为一种包括实施依照这第五个方面的方法的过程。
在第六个方面，本发明的特征为一种方法，其包括依照第一个方面、第二个方面、第三个方面、第四个方面或第五个方面鉴定PYY促分泌素、用于治疗或预防受PYY调控的状况的化合物、或用于调控个体中的PYY相关活性的化合物，将所述PYY促分泌素、所述用于治疗或预防受PYY调控的状况的化合物、或所述用于调控个体中的PYY相关活性的化合物配制成药物组合物。
在第七个方面，本发明的特征为G蛋白偶联受体用于对测试化合物筛选PYY促分泌素、用于治疗或预防受PYY调控的状况的化合物、或用于调控个体中的PYY相关活性的化合物的用途，其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(a)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(b)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(c)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(a)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸自(a)衍生的；
(d)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(e)选自下组的SEQ ID NO：2变体：
(i)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(f)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(g)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述受体包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的等位基因。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的哺乳动物直向同系物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是重组的。
在某些实施方案中，所述测试化合物是小分子。
在某些实施方案中，所述测试化合物是GPR119激动剂。
在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是内源GPR119的激动剂。
在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是人GPR119的激动剂。
在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是GPR119部分激动剂。
在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是选择性GPR119激动剂。
在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是小分子。
在某些实施方案中，所述GPR119激动剂是口服可利用的。
在某些实施方案中，所述GPR119激动剂具有小于约10μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约75nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约15nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、或小于约1nM的EC50值。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂在具有SEQ IDNO：2的人GPR119处具有小于约10μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约75nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约15nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、或小于约1nM的EC50值。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂在腺苷酰环化酶测定法(实施例9、实施例10和实施例11中提供了例示性的腺苷酰环化酶测定法，见下文)中在具有SEQ ID NO：2的人GPR119处具有小于约10μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约75nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约15nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、或小于约1nM的EC50值。在某些实施方案中，所述GPR119激动剂在载黑色素细胞测定法(实施例12中提供了例示性的载黑色素细胞测定法，见下文)中在具有SEQID NO：2的人GPR119处具有小于约10μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约75nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约15nM、小于约10nM、小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约2nM、或小于约1nM的EC50值。
例示性的GPR119激动剂披露于例如国际申请号PCT/US2004/001267(公布为WO 04/065380)；国际申请号PCT/US2004/005555(公布为WO04/076413)；国际申请号PCT/US2004/022327(公布为WO 05/007647)；国际申请号PCT/US2004/022417(公布为WO 05/007658)；国际申请号PCT/US2005/019318(公布为WO 2005/121121)；国际申请号PCT/GB2004/050046(公布为WO 2005/061489)；国际申请号PCT/US06/00567(公布为WO 2006/083491)；国际申请号PCT/GB2005/050264(公布为WO 2006/067531)；国际申请号PCT/GB2005/050265(公布为WO 2006/067532)；国际申请号PCT/GB2005/050266(公布为WO 2006/070208)；国际申请号PCT/JP02/09350(公布为WO 03/026661)；国际申请号PCT/JP2005/018412(公布为WO06/040966)；国际申请号PCT/JP2005/019000(公布为WO 2006/043490)；国际申请号PCT/GB2006/050176(公布为WO 2007/003960)；国际申请号PCT/GB2006/050177(公布为WO 2007/003961)；国际申请号PCT/GB2006/050178(公布为WO 2007/003962)；国际申请号PCT/GB2006/050182(公布为WO 2007/003964)；国际申请号PCT/JP02/09350(公布为WO 03/026661)；国际申请号PCT/GB2007/050183(公布为WO2007/116229)；国际申请号PCT/GB2007/050190(公布为WO 2007/116230)；国际申请号PCT/US2007/073364(公布为WO 2008/008895)；国际申请号PCT/EP2007/058991(公布为WO 2008/025798)；国际申请号PCT/EP2007/058993(公布为WO 2008/025799)；和国际申请号PCT/EP2007/058995(公布为WO 2008/025800)。
在第八个方面，本发明的特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)在体外使通过依照第一个方面的方法确定或鉴定的刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触，其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体：
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；并
(b)测定所述化合物是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述测试化合物自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述受体包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的等位基因。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的哺乳动物直向同系物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是重组的。
在某些实施方案中，所述脊椎动物肠内分泌细胞是哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是L细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠获得的组织中或从该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠含L细胞的区域获得的组织中或自该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在十二指肠、空肠、回肠、结肠或直肠组织中或自该组织衍生(参见例如Lundberget al，PNAS USA(1982)79：4471-4475；Adrian et al，Gastroenterol(1985)89：1070-1077；Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261；Ueno et al，Regul Pept(2008)145：12-16)。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是肠内分泌细胞系。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是包含在胰岛中的细胞或从胰岛衍生的细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是神经元细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是改造成能够分泌PYY的重组细胞。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)对脊椎动物施用通过依照第一个方面的方法确定或鉴定的刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物，其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体：
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；并
(b)测定所述化合物是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述受体包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的等位基因。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的哺乳动物直向同系物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是重组的。
在某些实施方案中，所述PYY水平是总PYY的血液或血浆浓度。在某些实施方案中，所述PYY水平是PYY3-36的血液或血浆浓度。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)测定所述化合物是否提高样品中的PYY水平，所述样品是自先前施用了通过依照第一个方面的方法确定或鉴定的刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物的脊椎动物获得的，其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体：
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述受体包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的等位基因。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的哺乳动物直向同系物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是重组的。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或其等位基因。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的等位基因。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是配体为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000482
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000483
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP积累水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，严格杂交条件包括在包含50％甲酰胺、5x SSC(1xSSC＝150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5xDenhardt氏液、10％硫酸右旋糖苷、和20μg/ml变性剪切鲑鱼精DNA的溶液中于42℃杂交，接着在包含0.1x SSC的溶液中于65℃清洗。杂交技术是本领域技术人员公知的。
在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO：2或其等位基因。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ IDNO：2的等位基因。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是配体为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000492
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000493
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述作为G蛋白偶联受体的SEQ ID NO：2变体是内源G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述作为G蛋白偶联受体的SEQ ID NO：2变体是非内源G蛋白偶联受体。
在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或其等位基因。在某些实施方案中，所述与SEQ IDNO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000494
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，所述与SEQ IDNO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在一些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是包含G蛋白的融合蛋白的一部分。用于制备GPCR:G融合构建物的技术是技术人员公知的(参见例如国际申请WO 02/42461)。
在一些实施方案中，所述刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物是小分子。在一些实施方案中，所述刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物是小分子，前提是所述小分子不是多肽。在一些实施方案中，所述刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物是小分子，前提是所述小分子不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物是小分子，前提是所述小分子不是脂质。在一些实施方案中，所述刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物是小分子，前提是所述小分子不是多肽或脂质。在一些实施方案中，所述刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物是多肽。在一些实施方案中，所述刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物是多肽，前提是所述多肽不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物是脂质。在一些实施方案中，所述刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述刺激G蛋白偶联受体的功能性的化合物是抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选测定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选提供PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的名称或结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选生成或合成PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括评估PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控PYY相关活性有用的化合物的生物利用度。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物组合物。
本发明另一特征为一种包括实施依照这第八个方面的方法的过程。
在第九个方面，本发明的特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)在体外使通过依照第四个方面的方法确定或鉴定的在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触，其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体：
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；并
(b)测定所述化合物是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述测试化合物自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述受体包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的等位基因。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是SEQ ID NO：2的哺乳动物直向同系物。
在某些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是重组的。
在某些实施方案中，所述脊椎动物肠内分泌细胞是哺乳动物肠内分泌细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是L细胞。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠获得的组织中或从该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在自小肠或大肠含L细胞的区域获得的组织中或自该组织衍生。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞包含在十二指肠、空肠、回肠、结肠或直肠组织中或自该组织衍生(参见例如Lundberget al，PNAS USA(1982)79：4471-4475；Adrian et al，Gastroenterol(1985)89：1070-1077；Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261；Ueno et al，Regul Pept(2008)145：12-16)。在某些实施方案中，所述肠内分泌细胞是肠内分泌细胞系。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是包含在胰岛中的细胞或从胰岛衍生的细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是神经元细胞。在某些实施方案中，所述能够分泌PYY的细胞是改造成能够分泌PYY的重组细胞。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)对脊椎动物施用通过依照第四个方面的方法确定或鉴定的在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物，其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体：
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；并
(b)测定所述化合物是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
本发明另一特征为一种用于鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法，包括下述步骤：
(a)测定所述化合物是否提高样品中的PYY水平，所述样品是自先前施用了通过依照第四个方面的方法确定或鉴定的在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物的脊椎动物获得的，其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体：
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；并
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人脊椎动物。在某些实施方案中，所述脊椎动物是非人哺乳动物。在某些实施方案中，所述哺乳动物是非人哺乳动物。
在某些实施方案中，所述脊椎动物或所述哺乳动物是人。在某些实施方案中，所述人是负责批准药物销售的政府机构所审查的研究的参与者。在某些实施方案中，所述研究是临床试验。在某些实施方案中，所述政府机构是美国食品和药品管理局。
在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或其等位基因。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的等位基因。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000551
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是配体为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000552
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000553
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，本发明的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP积累水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，严格杂交条件包括在包含50％甲酰胺、5x SSC(1xSSC＝150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5xDenhardt氏液、10％硫酸右旋糖苷、和20μg/ml变性剪切鲑鱼精DNA的溶液中于42℃杂交，接着在包含0.1x SSC的溶液中于65℃清洗。杂交技术是本领域技术人员公知的。
在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO.2或其等位基因。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ IDNO：2的等位基因。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000561
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是配体为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000563
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述SEQ ID NO：2变体是包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述作为G蛋白偶联受体的SEQ ID NO：2变体是内源G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，所述作为G蛋白偶联受体的SEQ ID NO：2变体是非内源G蛋白偶联受体。
在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或其等位基因。在某些实施方案中，所述与SEQ IDNO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000564
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，所述与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000571
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，所述与SEQ IDNO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000572
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体是激动剂为(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000573
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺的受体。在一些实施方案中，所述包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在一些实施方案中，所述G蛋白偶联受体是包含G蛋白的融合蛋白的一部分。用于制备GPCR:G融合构建物的技术是技术人员公知的(参见例如国际申请WO 02/42461)。
在一些实施方案中，所述在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物是小分子。在一些实施方案中，所述在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物是小分子，前提是所述小分子不是多肽。在一些实施方案中，所述在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物是小分子，前提是所述小分子不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物是小分子，前提是所述小分子不是脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物是小分子，前提是所述小分子不是多肽或脂质。在一些实施方案中，所述测试化合物是多肽。在一些实施方案中，所述在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物是多肽，前提是所述多肽不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物是脂质。在一些实施方案中，所述在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物不是抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，所述在所述化合物存在的情况中形成的G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体之间复合物比在缺失所述化合物的情况中的少的化合物是抗体或其抗原结合片段。
在某些实施方案中，所述方法是一种用于鉴定PYY促分泌素的方法。
在某些实施方案中，所述方法是一种用于鉴定对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物的方法。
在某些实施方案中，所述方法是一种用于鉴定对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法。
在某些实施方案中，所述GPR119的配体是GPR119激动剂。在某些实施方案中，所述GPR119的配体或所述GPR119激动剂是内源脊椎动物、哺乳动物或人GPR119受体的配体或激动剂。在某些实施方案中，所述GPR119的配体或所述GPR119激动剂是内源人GPR119受体的配体或激动剂。在某些实施方案中，所述GPR119的配体或所述GPR119激动剂与例如国际申请号PCT/US2004/001267(公布为WO 04/065380)；国际申请号PCT/US2004/005555(公布为WO 04/076413)；国际申请号PCT/US2004/022327(公布为WO 05/007647)；国际申请号PCT/US2004/022417(公布为WO 05/007658)；国际申请号PCT/US2005/019318(公布为WO 2005/121121)；国际申请号PCT/GB2004/050046(公布为WO 2005/061489)；国际申请号PCT/US06/00567(公布为WO 2006/083491)；国际申请号PCT/GB2005/050264(公布为WO 2006/067531)；国际申请号PCT/GB2005/050265(公布为WO 2006/067532)；国际申请号PCT/GB2005/050266(公布为WO 2006/070208)；国际申请号PCT/JP02/09350(公布为WO 03/026661)；国际申请号PCT/JP2005/018412(公布为WO06/040966)；国际申请号PCT/JP2005/019000(公布为WO 2006/043490)；国际申请号PCT/GB2006/050176(公布为WO 2007/003960)；国际申请号PCT/GB2006/050177(公布为WO 2007/003961)；国际申请号PCT/GB2006/050178(公布为WO 2007/003962)；国际申请号PCT/GB2006/050182(公布为WO 2007/003964)；国际申请号PCT/JP02/09350(公布为WO 03/026661)；国际申请号PCT/GB2007/050183(公布为WO2007/116229)；国际申请号PCT/GB2007/050190(公布为WO 2007/116230)；国际申请号PCT/US2007/073364(公布为WO 2008/008895)；国际申请号PCT/EP2007/058991(公布为WO 2008/025798)；国际申请号PCT/EP2007/058993(公布为WO 2008/025799)；或国际申请号PCT/EP2007/058995(公布为WO 2008/025800)中披露的化合物相同。在某些实施方案中，所述GPR119的配体或所述GPR119激动剂是(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000591
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，所述GPR119的配体是内源脊椎动物、哺乳动物、或人GPR119受体的内源配体。
在某些实施方案中，所述任选标记的已知配体是标记的已知配体。在某些实施方案中，所述标记的已知配体是放射性标记的已知配体。用于放射性标记化合物，诸如用于标记本发明G蛋白偶联受体的已知配体的技术是技术人员公知的。参见例如国际申请WO 04/065380。还可见例如实施例14，见下文。
用于检测G蛋白偶联受体与已知是G蛋白偶联受体的配体的化合物之间的复合物的技术是技术人员公知的。参见例如国际申请WO 04/065380。还可参见例如实施例15，见下文。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选测定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选提供PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的名称或结构。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：任选生成或合成PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括评估PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控PYY相关活性有用的化合物的生物利用度。
在一些实施方案中，所述方法进一步包括下述步骤：将PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物配制成药物组合物。
本发明另一特征为一种包括实施依照这第九个方面的方法的过程。
申请人保留自本发明任何实施方案排除任何一种或多种候选化合物的权利。申请人保留自本发明任何实施方案排除任何一种或多种调控物的权利。举例而言，并非限制，申请人保留自本发明任何实施方案排除任何一种或多种激动剂的权利。申请人保留自本发明任何实施方案排除任何多核苷酸或多肽的权利。申请人还保留自本发明任何实施方案排除任何受PYY调控的状况、任何骨相关状况、任何骨相关状况(其中所述骨相关状况是特征为骨质低的状况)、任何骨相关状况(其中所述骨相关状况为骨折)、任何骨相关状况(其中所述骨相关状况为骨病)、任何骨相关状况(其中所述骨相关状况是增强的骨愈合或骨生长)、任何代谢病症、任何血管发生相关状况、任何缺血相关状况、任何吸收不良性病症、任何惊厥性病症、任何癌症、任何炎性病症、任何炎性肺病、任何炎性肠病、和任何调控个体中的PYY相关活性的权利。还明确涵盖的是可以在实施方案中或是个别地或是以任意组合包括本发明的受PYY调控的状况、骨相关状况、骨相关状况(其中所述骨相关状况是特征为骨质低的状况)、骨相关状况(其中所述骨相关状况是骨折)、骨相关状况(其中所述骨相关状况是骨病)、骨相关状况(其中所述骨相关状况是增强的骨愈合或骨生长)、代谢病症、血管发生相关状况、缺血相关状况、吸收不良性病症、惊厥性病症、癌症、炎性病症、炎性肺病、炎性肠病、和调控个体中的PYY相关活性。
附图简述
联系附图来说明本发明，其中
图1显示GPR119受体展现提高经过转染的HEK293细胞中的cAMP积累的组成性活性。
图2显示化合物1是GPR119受体的激动剂。
图3显示施用GPR119激动剂对野生型小鼠中的血浆总PYY的影响。
发明详述
本发明至少部分基于申请人令人惊讶的发现，即对个体施用GPR119激动剂(诸如通过口服施用)能其提高个体中的血浆总PYY的作用。本发明的特征为涉及GPR119来鉴定PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的方法。GPR119激动剂对于提高个体中的血浆总PYY是有用的。在某些实施方案中，所述个体是人。GPR119激动剂作为用于治疗或预防受PYY调控的状况及用于调控个体中的PYY相关活性的药剂是有用的。
术语“配体”，如本文中所使用的，应当指与多肽诸如GPR119特异性结合的分子(例如测试化合物)。配体可以是例如多肽、脂质、小分子、抗体。化合物1是GPR119受体多肽的一种例示性配体(见表A，其列出了化合物1的化学结构和化学名称)。化合物1与国际专利申请号PCT/US2004/001267(公布为WO 2004/065380)中披露的化合物相同。(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000611
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺(见表A)是GPR119受体多肽的一种例示性配体。内源配体指如下的配体，即它是天然多肽(诸如GPR119)的内源的、天然的配体。配体可以是“拮抗剂”、“激动剂”、“部分激动剂”、或“逆激动剂(inverse agonist)”、等等。
表A
术语“激动剂”，如本文中所使用的，应当指如下的药剂(例如配体、测试化合物)，其通过结合GPCR来活化(例如刺激)GPCR以致引发由GPCR介导的细胞内应答。
术语“部分激动剂”，如本文中所使用的，应当指如下的药剂(例如配体、测试化合物)，其通过结合GPCR来活化(例如刺激)GPCR以致引发由GPCR介导的细胞内应答，只是程度比完全激动剂低。
术语“拮抗剂”应当指如下的药剂(例如配体、测试化合物)，其结合且优选在与激动剂或部分激动剂大致相同的位点处竞争性结合GPCR，但不活化由活性形式的GPCR启动的细胞内应答，而且由此能抑制激动剂或部分激动剂的细胞内应答。拮抗剂通常不降低在激动剂或部分激动剂缺失下的基线细胞内应答。
术语“逆激动剂”应当指如下的药剂(例如配体、测试化合物)，其结合GPCR且抑制由活性形式的受体启动的基线细胞内应答低于在激动剂或部分激动剂缺失下观察到的正常基础水平活性。
术语“GPR119激动剂”，如本文中所使用的，指结合GPR119受体且起激动剂作用的化合物。化合物1是一种例示性GPR119激动剂(见表A，其列出了化合物1的化学结构和名称)。化合物1与国际专利申请号PCT/US2004/001267(公布为WO 2004/065380)中披露的化合物相同。(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000622
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是一种例示性GPR119激动剂。
术语“选择性GPR119激动剂”，如本文中所使用的，指对GPR119受体具有选择性胜过一种或多种相关受体(诸如促肾上腺皮质素释放因子-1(CRF-1)受体)的GPR119激动剂。化合物1是一种例示性选择性GPR119激动剂(见表A，其列出了化合物1的化学结构和名称)。化合物1与国际专利申请号PCT/US2004/001267(公布为WO 2004/065380)中披露的化合物相同。(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000631
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是一种例示性选择性GPR119激动剂。
术语“PYY促分泌素”应当指如下的药剂(例如配体、测试化合物)，其在施用于个体(诸如脊椎动物或哺乳动物)后促进(例如刺激)细胞(例如肠内分泌细胞)中的PYY分泌，或提高总PYY水平(例如血液血浆总PYY水平)。在某些实施方案中，PYY促分泌素是适合于提高个体中的总PYY水平(例如血液或血浆总PYY水平)的化合物。
如本文中所使用的，术语“受PYY调控的状况”指受PYY1-36或其能够调控G蛋白偶联受体的片段调控的状况。在某些实施方案中，术语“受PYY调控的状况”指受PYY3-36调控的状况。在某些实施方案中，术语“受PYY调控的状况”指受NPYY2受体(Y2R)激动剂调控的状况。在某些实施方案中，术语“受PYY调控的状况”指受Y2R刺激调控的状况。在某些实施方案中，术语“受PYY3-36调控的状况”指受Y2R激动剂调控的状况。在某些实施方案中，术语“受PYY3-36调控的状况”指受Y2R刺激调控的状况。
如本文中所使用的，术语“PYY相关活性”指调控PYY水平的活性或与PYY有关的活性。在某些实施方案中，术语“PYY相关活性”指提高PYY水平的活性或与PYY有关的活性。
术语“个体”，如本文中所使用的，指脊椎动物，包括但不限于鱼类(诸如商业性饲养的鱼、宠物鱼、等)、两栖类(诸如蛙、蟾蜍、宠物两栖类、等)、爬行类(诸如蛇、蜥蜴、海龟、宠物爬行类、等)、鸟类(如鸡、火鸡、宠物鸟类、等)和哺乳动物(诸如小鼠、大鼠、仓鼠、家兔、猪、犬、猫、马、牛、绵羊、山羊、非人灵长类、非人哺乳类、宠物非人哺乳类、人、等)。在某些实施方案中，个体是鱼。在某些实施方案中，个体是两栖动物。在某些实施方案中，个体是爬行动物。在某些实施方案中，个体是鸟。在某些实施方案中，个体是火鸡。在过去25年里，让火鸡具有更大胸肌块的商业选择压力对骨骼完整性提出越来越多的要求。然而，增大的胸肌块没有伴随着补偿性骨骼变化，结果火鸡产业在腿的方面问题增多。已经报告了年轻成年雄性火鸡中的长骨骨折。(参见例如Crespo et al，Poult Sci(2000)79：602-608。)在某些实施方案中，个体是哺乳动物。在某些实施方案中，个体是小鼠、大鼠、仓鼠、家兔、猪、犬、猫、马、牛、绵羊、山羊、非人灵长类动物或人(它们可以个别地或以任意组合包括在本发明的实施方案中)。在某些实施方案中，个体是马。性能马(即涉及活动诸如赛跑、踱步和其它竞赛事件的马)易发生骨折。在某些实施方案中，个体是犬或猫。在某些实施方案中，个体是人伴侣动物(诸如犬、猫、等)、牲畜(诸如牛、绵羊、山羊、猪、鸡、等)、运动动物(诸如马、犬、等)、驮畜(诸如骡、骆驼、等)或珍稀动物(诸如在动物园中见到的动物等)，它们可以个别地或以任意组合包括在本发明的实施方案中。在某些实施方案中，个体是非人脊椎动物。在某些实施方案中，个体是非人哺乳动物。在某些实施方案中，个体是非人灵长类动物(诸如恒河猴、黑猩猩、等)。在某些实施方案中，个体是人。
术语“需要预防或治疗”，如本文中所使用的，指医护人员(例如人的情况中的内科医师、护士、开业护士；非人脊椎动物的情况中，特别是非人哺乳动物的实施方案中的兽医)做出个体需要或会受益于治疗的判断。
术语“治疗有效量”或“治疗有效剂量”，如本文中所使用的，指研究人员、兽医、医学博士或其它临床医师所寻找的，活性化合物或药剂在组织、系统、动物、个体或人中引发生物学或医学应答的量，其包括下列一项或多项：
(1)预防疾病；例如在可能倾向于疾病、状况或病症但尚未经历或展示疾病的病理或症候的个体中预防疾病、状况或病症，
(2)抑制疾病；例如在经历或展示疾病、状况或病症的病理或症候的个体中抑制疾病、状况或病症(即阻滞病理和/或症候的进一步发展)，和
(3)改善疾病；例如在经历或展示疾病、状况或病症的病理和/或症候的个体中改善疾病、状况或病症(即逆转病理和/或症候)。
术语“治疗功效”，如本文中所使用的，指研究人员、兽医、医学博士或其它临床医师所寻找的，在组织、系统、动物、个体或人中引发生物学或医学应答，其包括下列一项或多项：
(1)预防疾病；例如在可能倾向于疾病、状况或病症但尚未经历或展示疾病的病理或症候的个体中预防疾病、状况或病症，
(2)抑制疾病；例如在经历或展示疾病、状况或病症的病理或症候的个体中抑制疾病、状况或病症(即阻滞病理和/或症候的进一步发展)，和
(3)改善疾病；例如在经历或展示疾病、状况或病症的病理和/或症候的个体中改善疾病、状况或病症(即逆转病理和/或症候)。
术语“有效预防量”指药物会预防试图预防的生物学或医学事件或降低试图预防的生物学或医学事件的发生风险。在许多情况中，有效预防量与治疗有效量相同。
术语“周围施用”应当指在中枢神经系统以外的施用。周围施用不包括直接施用至脑。周围施用包括但不限于血管内、肌肉内、皮下、吸入、口服、舌下、肠、直肠、经皮、或鼻内施用。
术语“组合物”应当指包含至少一种成分的材料。
术语“活性组分”应当指在疾病的诊断、治愈、缓解、治疗、预防中提供药理学活性或任何其它直接效果的任何成分。
术语“药物组合物”应当指如下的组合物，其包含至少一种活性组分，由此所述组合物适于哺乳动物中的调查和治疗。
“药学可接受的”意味着载体、媒介、稀释剂、赋形剂、和/或盐必须与配制剂的其它组分相容，而且对其受众无害。
术语“剂量形式”应当指药物生产和分配的物理形式，诸如片剂、胶囊剂、或注射剂。
“骨”意指形成大多数脊椎动物骨骼主要部分的致密的、半刚性的、多孔的、钙化的结缔组织，其包含致密的有机基质和无机矿物成分。骨指构成脊椎动物骨骼的众多解剖学独特结构之任一。
术语“骨质(bone mass)”和“骨矿物质密度(BMD)”在本文中可互换使用。人中的BMD通常通过一种标准放射照相术技术，即双能X射线吸收术(DXA)来测量。在开发用来评估BMD的多种技术中，DXA是技术上最高度开发的，而且是生物学上最彻底验证的。DXA技术及适当改编的软件还能用于在动物研究中可靠地评估BMD。DXA用于诊断骨质疏松、预后(骨折预测)、监测病症的自然史、及评估对治疗的响应。
术语“低骨质(low bone mass)”，如本文中所使用的，指个体中骨矿物质密度(BMD)的任何降低或减少，而且包括骨质疏松和骨质减少(如世界卫生组织(WHO)的建议中所定义的)二者。WHO将正常定义为BMD值在年轻成年参照均值的一个标准偏差内(T得分≥-1)。WHO将骨质减少定义为BMD值低于年轻成年均值超过1个标准偏差，但低于此值不到2.5个标准偏差(T得分＜-1且＞-2.5)。WHO将骨质疏松表征为骨质减少的更严重形式，而且将它定义为BMD值低于年轻成年均值2.5个标准偏差或更多(T得分≤-2.5)。(参见例如World Health Organization Technical Report Series 921(2003)，Preventionand Management of Osteoporosis，通过述及将其公开内容完整收入本文。)更常见的，骨质减少定义为T得分小于-1且大于-2，而骨质疏松定义为T得分小于或等于-2。在本发明的某些实施方案中，T得分是用DXA在臀部测量的。
术语“骨质疏松”，如本文中所使用的，定义为BMD值低于年轻成年参照均值2个标准偏差或更多(T得分≤-2)或者指由医护人员(例如人的情况中的内科医师、护士、开业护士；非人脊椎动物的情况中的兽医)做出的诊断。
骨质疏松可分类为原发性的或继发性的。(参见例如World HealthOrganization Technical Report Series 921(2003)，Prevention and Management ofOsteoporosis。)如本文中所使用的，术语“骨质疏松”涵盖原发性骨质疏松和继发性骨质疏松。在某些实施方案中，骨质疏松是原发性骨质疏松。在某些实施方案中，骨质疏松是继发性骨质疏松。
“原发性骨质疏松”，如本文中所使用的，与绝经(自然的、早熟的、或手术的)、衰老、或二者有关。应当理解，在本发明中，与绝经(自然的、早熟的、或手术的)有关的原发性骨质疏松、与衰老有关的原发性骨质疏松、和与绝经和衰老有关的原发性骨质疏松可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
“继发性骨质疏松”，如本文中所使用的，指与绝经或衰老无关但与医学状况或与使用药疗或药物有关的骨质疏松。骨质疏松风险升高与宿主的医学状况有关，包括但不限于内分泌和代谢病症，和恶性疾病，而且与使用某些药疗和药物有关，它们的例子是本领域技术人员公知的。(参见例如WorldHealth Organization Technical Report Series 921(2003)，Prevention andManagement of Osteoporosis；Williams Textbook of Endocrinology，第10版；通过述及将其公开内容完整收入本文。)继发性骨质疏松也可与固定有关。医护人员(例如人的情况中的内科医师、护士、开业护士；非人脊椎动物的情况中的兽医)能做出医学状况、使用药疗或药物、和固定继发的骨质疏松的诊断。
“骨折”意指骨的完全或不完全断裂、破裂或破碎。骨折的诊断在正常情况中依赖于临床检查和放射学发现。在本发明中，骨折包括但不限于外伤性骨折、长期骨折、和病理性骨折。
“外伤性骨折”，如本文中所使用的，应当指涉及局部暴力的程度超出骨的自然弹性的阈上外伤的即时骨折。它可以伴有对软组织及(很常见的)皮肤的同时损伤。外伤性骨折可以是闭合的(邻近的软组织可以受到损伤但覆盖的软部分极大程度上保留)。外伤性骨折可以是开放的(骨的断裂端游离于广泛的软组织损伤，使得来自外部的病原体能直接进入伤口)。
“长期骨折”，如本文中所使用的，应当指慢性骨折、疲劳骨折、应力骨折或自发性骨折I型。
“病理性骨折”，如本文中所使用的，应当指自发性骨折II型。病理性骨折自发发生，没有适当的外伤来说明它。该骨可以是先前受过损伤的，或是系统性疾病(例如骨质疏松，或佩吉特氏畸形性骨炎)或是局部骨损害(例如转移、放射性骨坏死、或骨瘤)。参见Adler，Claus-Peter，BONE DISEASES，p.114(Springer-Verlag，Germany 2000)。
骨折还包括但不限于斜扭转骨折、横骨折、粉碎性骨折、压缩性骨折、肋骨骨折、蠕变骨折、和骨折的股骨颈(Adler，Claus-Peter，BONE DISEASES，Springer-Verlag，Germany(2000))。
如本文中所使用的，“骨相关状况”指自依照本发明的处理，通过提高骨质或骨生长或通过降低骨质损失获得好处的状况，而且包括但不限于特征为低骨质、骨折、骨病、和增强骨愈合或骨生长的状况。应当理解，在本发明中，能依照本发明治疗的骨相关病症可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
如本文中所使用的，术语“特征为低骨质的状况”包括但不限于骨质减少、骨质疏松、类风湿性关节炎、骨关节炎、牙周病、牙槽骨丢失、截骨术骨丢失、儿童期特发性骨丢失、脊柱弯曲和身高损失。在某些实施方案中，骨质疏松是原发性骨质疏松。在某些实施方案中，骨质疏松是继发性骨质疏松。在某些实施方案中，继发性骨质疏松与医学状况有关。在某些实施方案中，继发性骨质疏松与使用药疗或药物有关。在某些实施方案中，继发性骨质疏松与固定有关。特征为低骨质的状况还包括但不限于佩吉特氏病(paget’sdisease)、转移癌所致骨丢失、和溶骨性病变诸如那些由瘤形成疾病、放疗、或化疗引起的。特征为低骨质的状况还包括但不限于骨质疏松的长期并发症，诸如脊柱弯曲、身高损失和假体手术。应当理解，在本发明中，特征为低骨质的状况可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。(参见例如WorldHealth Organization Technical Report Series 921(2003)，Prevention andManagement of Osteoporosis；Williams Textbook of Endocrinology，第10版，Larsen et al编，(2002)，W.B.Saunders Company；及Endocrinology andMetabolism，第4版，Felig et al编，(2001)，McGraw-Hill Book Company；通过述及将每一篇的公开内容完整收入本文。)
如本文中所使用的，“骨病”指涉及骨异常的病症或状况。能依照本发明，通过提高骨质或骨生长或降低骨质损失来治疗的骨病包括但不限于骨质减少、骨质疏松、类风湿性关节炎、骨关节炎、牙周病、牙槽骨丢失、截骨术骨丢失、儿童期特发性骨丢失、脊柱弯曲、和身高损失。在某些实施方案中，骨质疏松是原发性骨质疏松。在某些实施方案中，骨质疏松是继发性骨质疏松。在某些实施方案中，继发性骨质疏松与医学状况有关。在某些实施方案中，继发性骨质疏松与使用药疗或药物有关。在某些实施方案中，继发性骨质疏松与固定化有关。能依照本发明，通过提高骨质或骨生长或降低骨质损失来治疗的骨病还包括但不限于佩吉特氏病和转移癌所致骨丢失。能依照本发明，通过提高骨质或生长来治疗的破坏性骨病症包括但不限于骨质疏松、骨关节炎、和溶骨性病变诸如那些由瘤形成疾病、放疗、或化疗引起的。应当理解，在本发明中，能依照本发明，通过提高骨质或骨生长或降低骨质损失来治疗的骨病可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。(参见例如World Health Organization Technical Report Series 921(2003)，Prevention andManagement of Osteoporosis；Williams Textbook of Endocrinology，第10版，Larsen et al编，(2002)，W.B.Saunders Company；及Endocrinology andMetabolism，第4版，Felig et al编，(2001)，McGraw-Hill Book Company；通过述及将每一篇的公开内容完整收入本文。)
本发明还涉及其它自依照本发明的处理，通过提高骨质或骨生长或降低骨质损失获得好处的状况，包括但不限于面部重建、上颌骨重建、下颌骨重建、牙周病或拔牙后增强的骨愈合，增强的长骨延长，增强的假体向内生长和增加的骨连结。
如本文中所使用的，“代谢病症”指涉及代谢异常的病症。能依照本发明治疗的代谢病症包括但不限于超重、肥胖症、饮食过多、糖尿病(含1型糖尿病和2型糖尿病)、2型糖尿病、受损的葡萄糖耐受、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、血脂异常、高血压和代谢综合征。应当理解，在本发明中，能依照本发明治疗的代谢病症可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
术语“代谢综合征”，如本文中所定义的，且依照Adult Treatment Panel III(ATP III；National Institutes of Health：Third Report of the National CholesterolEducation Program Expert Panel on Detection，Evaluation，and Treatment ofHigh Blood Cholesterol in Adults(Adult Treatment Panel III)，ExecutiveSummary；Bethesda，Md.，National Institutes of Health，National Heart，Lung andBlood Institute，2001(NIH pub.No 01-3670)，当某人达到涉及肥胖症、高甘油三酯血症、低HDL胆固醇、高血压、和高空腹葡萄糖的五项标准中的三项或更多项时发生。
术语“肥胖症”，如本文中所使用的，定义为体重指数(BMI)为30.0或更大，依照WHO体重分类[Kopelman，Nature(2000)404：635-643；通过述及将其公开内容完整收入本文]。
“受损的葡萄糖耐受”(IGT)，如本文中所使用的，意图指示与胰岛素抵抗有关的状况，其是明白的，2型糖尿病与正常葡萄糖耐受(NGT)之间的中间状态。IGT通过如下规程来诊断，其中通过餐后2小时血浆葡萄糖水平来评估，病人的餐后葡萄糖响应测定为异常。在此测试中，给予患者测量量的葡萄糖，并以规则时间间隔测量血液葡萄糖水平，通常前2个小时每半小时一次，此后每小时一次。在“正常”或非IGT个体中，葡萄糖水平在前2个小时期间上升至低于140mg/dl的水平，然后快速下降。在IGT个体中，血液葡萄糖水平更高，而且下降水平处于更慢的速率。
“胰岛素抵抗”，如本文中所使用的，意图涵盖通过多种方法之任一做出的通常的胰岛素抵抗诊断，所述方法包括但不限于：静脉内葡萄糖耐受测试或测量空腹胰岛素水平。公知在空腹胰岛素水平的高度与胰岛素抵抗的程度之间有极好的相关性。因此，为了鉴定哪些正常葡萄糖耐受(NGT)个体具有胰岛素抵抗的目的，可使用升高的空腹胰岛素水平作为胰岛素抵抗的替代标志物。胰岛素抵抗的诊断也可以使用血糖正常的葡萄糖钳夹测试(euglycemic glucose clamp test)来做出。
“血脂异常(dyslipidemia)”在本文中意图涵盖包含中升高的血浆游离脂肪酸水平、升高的血浆胆固醇水平、升高的LDL-胆固醇水平、降低的HDL-胆固醇水平、升高的总胆固醇对HDL胆固醇比、和升高的血浆甘油三酯水平任一项的病症。
如本文中所使用的，“血管发生相关状况”指自升高的血管发生获得好处的状况。能依照本发明，通过提高血管发生来治疗的血管发生相关状况包括但不限于外周动脉病、伤口愈合、和缺血。应当理解，在本发明中，能依照本发明治疗的血管发生相关状况可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
如本文中所使用的，“缺血”指组织不供氧或氧不足的状态。
如本文中所使用的，“缺血相关状况”指与缺血有关的状况。能依照本发明治疗的缺血相关状况包括但不限于脑缺血、中风、缺血性心脏病、心肌梗死、缺血-再灌注损伤、心肌梗死后重塑、心力衰竭、和充血性心力衰竭。应当理解，在本发明中，能依照本发明治疗的缺血相关状况可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
“中风”指影响向脑供血的血管的一种心血管疾病，而且在本文中意图包括脑血栓形成，即中风的最常见类型。当血块(血栓)在给部分脑带来血液的动脉中形成并阻断血流时，发生脑血栓形成。血块通常在受到动脉粥样硬化损坏的动脉中形成。
如本文中所使用的，“缺血性心脏病”指由心脏组织缺氧引起的病症，其中心脏肌肉受到影响且心脏不能正确泵血。缺血性心脏病是美国最常见的心肌病。
如本文所使用的，“心肌梗死”指心脏肌肉的一个区域由于该区域供氧不足而受损或死亡。心肌梗死常常由阻断冠状动脉(给心脏肌肉带来氧的血管)之一的血块引起。该(血)块阻止血液和氧到达该心脏区域，导致该区域中的心脏细胞死亡。
心肌组织由心肌梗死所致损失导致对心室施加持续的过度的血液动力学负担。心室肥大促成心脏补偿负载升高的主要机制之一。然而，这种适应面对血液动力学过载来维持心脏性能的能力是有限的，而且当长期维持时变得适应不良。逐渐地，随着扩大的心室日益扩大及收缩功能变弱，适应性肥大表型转变成明显的心力衰竭。心脏中对心肌梗死的适应性和适应不良性应答的自然史称作“心肌梗死后重塑”。
“充血性心力衰竭”指其中心脏丧失其有效泵血的能力的病症。随着年龄增长，充血性心力衰竭变得更加普遍。缺血性心脏病是充血性心力衰竭的最常见原因，占所有病例的60-70％。升高的静脉压大于12mmHg是充血性心力衰竭的主要Framingham标准之一，亦如等同于循环时间大于25秒的心排血量降低。
如本文中所使用的，“吸收不良性病症”指与肠上皮中的分泌和/或吸收异常有关的病症。能依照本发明治疗的吸收不良性病症包括但不限于短肠综合征、小肠结肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、霍乱和伴有腹泻的病症。如本文中所使用的，“伴有腹泻的病症”没有特别限制，只要它是伴有腹泻的疾病或症状，而且它是急性病还是慢性病没有关系。此类疾病或症状的例子包括腹泻(由寄生虫、细菌、病毒、物理刺激、消化不良、精神障碍、胃肠炎症或变态反应、等引起的)、肠易激综合征、溃疡性结肠炎等等。明确涵盖每种伴有腹泻的病症是本发明范围内的单独实施方案。应当理解，在本发明中，能依照本发明治疗的吸收不良性病症可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
如本文中所使用的，“惊厥性病症”指其中受试者患有惊厥的个体的病症，例如由癫痫发作所致惊厥。能依照本发明治疗的惊厥性病症包括癫痫和非癫痫发作，例如由对个体施用惊厥剂所致惊厥。应当理解，在本发明中，能依照本发明治疗的惊厥性病症可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
如本文中所使用的，“癌症”指恶性新生物。能依照本发明治疗的癌症包括但不限于胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、和Barrett氏腺癌。应当理解，在本发明中，能依照本发明治疗的癌症可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
如本文中所使用的，“炎性病症”指与炎症异常有关的病症。能依照本发明治疗的炎性病症包括但不限于动脉粥样硬化、血栓形成、胰岛素抵抗、胰腺炎、再狭窄、炎性肺病、和炎性肠病。应当理解，在本发明中，能依照本发明治疗的炎性病症可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
如本文中所使用的，“血栓形成”(atherothrombosis)指动脉粥样硬化血管中的血栓形成。
如本文中所使用的，“炎性肺病”指与肺中的炎症异常有关的状况。能依照本发明治疗的炎性肺病包括但不限于哮喘、肺气肿和肺动脉高血压(PAH)。PAH是一种危及生命的疾病，特征为渐进性肺血管病，导致右心室肥大；如果不治疗，那么发生右心衰竭。PAH应当理解为涵盖2003年世界卫生组织(WHO)肺动脉高血压临床分类中记载的肺动脉高血压的下述形式：特发性PAH、家族性PAH、与其它状况有关的PAH、和与显著的静脉或毛细管累及有关的PAH。应当理解，在本发明中，能依照本发明治疗的炎性肺病可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
如本文中所使用的，“炎性肠病”指与肠中的炎症异常有关的状况。能依照本发明治疗的炎性肠病包括但不限于克罗恩氏病，其可以是肠炎、小肠结肠炎、克罗恩氏病、肉芽肿性结肠炎、回肠炎或克罗恩氏结肠炎和溃疡性结肠炎，其可以是溃疡性结肠炎、乙状结肠炎、全结肠炎和溃疡性直肠炎。应当理解，在本发明中，能依照本发明治疗的炎性肠病可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。
术语“动脉粥样硬化”，如本文中所使用的，指血管病的一种形式，特征为含有胆固醇和脂质的动脉粥样斑块在大型和中型动脉壁的最内层上沉积。
“阿尔茨海默氏病”是一种渐进性神经变性性疾病，特征为超过一个认知领域的显著功能损失且常常伴有行为或人格变化。阿尔茨海默氏病是痴呆的最常见原因。认为β-淀粉状肽(Aβ)在阿尔茨海默氏病的病理中发挥重要作用。
“轻度认知受损”(MCI)是一种认知损伤状态，最常见的是只损伤记忆，严重程度不足以显著影响职业或社会机能。然而，许多具有MCI的人进展成阿尔茨海默氏病，速率为每年10-15％，在5年内高至60％。越来越多的证据显示阿尔茨海默氏病病理的开始比严重程度足以容许做出阿尔茨海默氏标准的诊断的症状的形成早得多。在2001年，美国神经病学学会(AAN)公布了MCI检测的临床实践参数，它们会提高MCI和阿尔茨海默氏病的轻度形式二者的觉察、诊断、和治疗。
如本文中所使用的，“阮病毒相关疾病”意图包括但不限于牛海绵状脑病、克罗伊茨费尔特-雅各布病，库鲁病、Gerstmann-Straussler-Scheinker综合征、和致命性家族性失眠症(Collins et al，Lancet(2004)363：51-61)。
如本文中所使用的，“兴奋毒性损伤(excitoxic injury)”指源自物质诱导的阵发性过度活动(例如谷氨酸盐诱导的阵发性活动)引起的神经元细胞损伤或神经元细胞死亡。
“帕金森氏病”是一种慢性、渐进性神经变性性病症，特征为运动症状，诸如震颤、运动徐缓、肌肉强直、步态功能障碍、和姿势不稳。研究人员已经鉴定出黑质中多巴胺能神经元变性是帕金森氏病的主要病理生理机制。
“脂连蛋白”是一种由脂肪细胞分泌的血浆蛋白质，由N端布置的胶原样区和C端球状区构成。已经将降低的脂连蛋白水平与多种代谢相关病症联系起来，包括动脉粥样硬化、冠心病、中风、胰岛素抵抗和2型糖尿病。已有报告说女性的血清脂连蛋白水平比男性的高，例如一项研究中是13.5μg/ml对7.2μg/ml(Yamamoto et al，Clin Sci(London)(2002)103：137-142)。
术语“内源”应当指个体(例如且不限于人)天然生成的材料。比较而言，“非天然”应当指个体(例如且不限于人)天然不生成的。
术语G蛋白偶联受体的“生物学活性片段”应当指具有天然存在GPCR的结构和生物化学功能的GPCR片段。在某些实施方案中，生物学活性片段偶联至G蛋白。在某些实施方案中，生物学活性片段结合GPCR的已知配体。
术语“引物”在本文中用于指与靶核苷酸序列互补且用于杂交至靶核苷酸序列的特定核苷酸序列。引物充当由DNA聚合酶、RNA聚合酶、或逆转录酶催化的核苷酸聚合的启动点。
术语“表达载体”应当指在对表达载体适宜的宿主细胞重组体中克隆的DNA转录和转录的mRNA翻译所需要的DNA序列。适当构建的表达载体应当含有用于在宿主细胞中自主复制的复制起点、选择标记、有限数目的有用限制酶位点、高拷贝数的潜力、和活性启动子。要转录的克隆的DNA可操作连接至表达载体内的组成性或条件性活性启动子。
术语“宿主细胞”应当指能够使载体掺入其中的细胞。在本语境中，载体通常会含有编码GPCR或GPCR融合蛋白的核酸，其与合适的启动子序列可操作连接以允许发生GPCR或GPCR融合蛋白的表达。在具体的实施方案，宿主细胞是真核宿主细胞。在某些实施方案中，真核宿主细胞是哺乳动物宿主细胞。在某些实施方案中，真核宿主细胞是酵母宿主细胞。在某些实施方案中，真核宿主细胞是载黑色素细胞宿主细胞。
术语“接触”应当指使至少两个模块在一起。
术语“调控”或“修饰”应当用来指特定活性、功能或分子的量、质量、或效果的升高或降低，或者当提及状况时，应当用来指所述状况的状态变化。举例而言，而非限制，G蛋白偶联受体的激动剂、部分激动剂、逆激动剂、和拮抗剂是所述受体的调控物。
术语“小分子”应当用来指具有小于约10,000克每摩尔的分子量的化合物，包括肽、肽模拟物、氨基酸、氨基酸类似物、多核苷酸、多核苷酸类似物、核苷酸、核苷酸类似物、有机化合物或无机化合物(即包括杂有机化合物或有机金属化合物)、及其盐、酯和其它药学可接受形式。在某些实施方案中，小分子是具有小于约5,000克每摩尔的分子量的有机或无机化合物。在某些实施方案中，小分子是具有小于约1,000克每摩尔的分子量的有机或无机化合物。在某些实施方案中，小分子是具有小于约800克每摩尔的分子量的有机或无机化合物。在某些实施方案中，小分子是具有小于约600克每摩尔的分子量的有机或无机化合物。在某些实施方案中，小分子是具有小于约500克每摩尔的分子量的有机或无机化合物。
表B列出了本文中所使用的氨基酸缩写：
表B
  丙氨酸   ALA   A
  精氨酸   ARG   R
  天冬酰胺   ASN   N
  天冬氨酸   ASP   D
  半胱氨酸   CYS   C
  谷氨酸   GLU   E
  谷氨酰胺   GLN   Q
  甘氨酸   GLY   G
  组氨酸   HIS   H
  异亮氨酸   ILE   I
  亮氨酸   LEU   L
  赖氨酸   LYS   K
  甲硫氨酸   MET   M
  苯丙氨酸   PHE   F
  脯氨酸   PRO   P
  丝氨酸   SER   S
  苏氨酸   THR   T
  色氨酸   TRP   W
  酪氨酸   TYR   Y
  缬氨酸   VAL   V
术语“多肽”应当指氨基酸聚合物，不管聚合物的长度。如此，肽、寡肽、和蛋白质包括在多肽的定义内。此术语也不规定或排除多肽的表达后修饰。例如，术语多肽明确涵盖包括糖基基团、乙酰基基团、磷酸根基团、脂质基团等等的共价附着的多肽。
术语“多核苷酸”应当指单链或双链体形式的，超过一个核苷酸的RNA、DNA、或RNA/DNA杂合序列。本发明的多核苷酸可通过任何已知方法来制备，包括合成、重组、离体生成、或其组合，以及利用本领域已知的任何纯化方法。
术语“抗体”在本文中意图涵盖单克隆抗体和多克隆抗体。
术语“第二信使”应当指因受体活化而产生的细胞内应答。第二信使可包括例如肌醇1，4，5-三磷酸(IP3)、甘油二酯(DAG)、环AMP(cAMP)、环GMP(cGMP)、MAP激酶活性、MAPK/ERK激酶激酶-1(MEKK1)活性和Ca2+。可测量第二信使应答作为受体活化的测定。
术语“受体功能性”应当指受体接收刺激并调控细胞中的效果的正常运转，包括但不限于调节基因转录、调节离子流入或流出、实现催化反应、和/或调控经由G蛋白的活性，诸如引发第二信使应答。
术语“刺激”在涉及术语“应答”或“受体的功能性”时应当表示与化合物缺失下相比，在化合物存在下应答或受体的功能性升高。
术语“抑制”在涉及术语“应答”或“受体的功能性”时应当表示与化合物缺失下相比，在化合物存在下应答或受体的功能性降低或被阻止。
术语“化合物功效”应当指与受体结合亲和力不同，化合物抑制或刺激受体功能性的能力的度量。
术语“测试化合物”在本文中与“候选化合物”可互换使用，应当指适应筛选技术的分子(例如且不限于化学化合物)。
术语“组成性活性”在涉及G蛋白偶联受体时应当表示G蛋白偶联受体展现不依赖激动剂的活性。
术语“直接鉴定”或“直接鉴定的”，在涉及术语“测试化合物”时，应当指在G蛋白偶联受体的已知配体(例如已知激动剂)缺失下针对G蛋白偶联受体筛选化合物。
在提供数值范围的情况中，理解为该范围的上限与下限之间相差下限十分之一(除非上下文另有清楚指明)的每一个居间值及该叙述的范围中任何其它叙述的或居间的值涵盖在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立包括在更小的范围中，而且也涵盖在本发明内，服从叙述的范围中任何具体排除的极限。在所述范围包括一个或两个极限的情况中，排除一个或两个那些包括的极限的范围也包括在本发明中。
A.导言
为了呈现的效率列出下列小节的次序，而且既非意图亦非应当解释为对公开内容或所附权利要求的限制。
B.受体表达
1.感兴趣的GPCR多肽
本发明的GPCR可包含选自下组的氨基酸序列：
(a)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(b)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(c)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(a)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸自(a)衍生的；
(d)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(e)选自下组的SEQ ID NO：2变体：
(i)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(f)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(g)(a)至(f)任一项的生物学活性片段。
在某些实施方案中，本发明的GPCR包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。在一些实施方案中，本发明的GPCR是SEQ ID NO：2的等位基因。在一些实施方案中，本发明的GPCR是SEQ ID NO：2的直向同系物。
在一些实施方案中，本发明的GPCR是重组的。在一些实施方案中，所述重组GPCR是重组人GPR119。
在某些实施方案中，可在本方法中使用的GPCR展现可检测水平的组成性活性。
在一些实施方案中，本发明的GPCR是内源的。在一些实施方案中，本发明的GPCR是哺乳动物GPR119。在一些实施方案中，本发明的内源GPCR是哺乳动物GPR119。
举例而言且并非限制，认为删除N端甲硫氨酸残基提供可在本发明中使用的生物学活性片段。在某些实施方案中，本发明的生物学活性片段是如下的片段，任选在其N端融合至包含N端甲硫氨酸残基和HA表位标签(来自血凝素流感病毒)的肽，特异性结合化合物1。在某些实施方案中，本发明的生物学活性片段是如下的片段，任选在其N端融合至包含N端甲硫氨酸残基和HA表位标签(来自血凝素流感病毒)的肽，特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，本发明的生物学活性片段是如下的片段，任选在其N端融合至包含N端甲硫氨酸残基和HA表位标签的肽，在依照下文实施例15的受体结合测定法中以小于约50μM、小于约25μM、小于约10μM、小于约5μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、或小于约50nM的IC50值特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000772
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，本发明的生物学活性片段是如下的片段，任选在其N端融合至包含N端甲硫氨酸残基和HA表位标签的肽，在依照下文实施例15的受体结合测定法中以小于约10μM、小于约5μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、或小于约50nM的IC50值特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，本发明的生物学活性片段是如下的片段，任选在其N端融合至包含N端甲硫氨酸残基和HA表位标签的肽，(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000774
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是其激动剂，在依照下文实施例10的全细胞腺苷酰环化酶测定法中或在依照下文实施例11的
Figure BPA00001252734000781
测定法中在所述任选在其N端融合至所述肽的片段处具有小于约5μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM、或小于约1nM的EC50值。在某些实施方案中，本发明的生物学活性片段是如下的片段，任选在其N端融合至包含N端甲硫氨酸残基和HA表位标签的肽，(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000782
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是其激动剂，在依照下文实施例10的全细胞腺苷酰环化酶测定法中或在依照下文实施例11的
Figure BPA00001252734000783
测定法中在所述任选在其N端融合至所述肽的片段处具有小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM、或小于约1nM的EC50值。在一些实施方案中，本发明的生物学活性片段是如下的片段，任选在其N端融合至包含N端甲硫氨酸残基和HA表位标签的肽，展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。在某些实施方案中，所述片段在其N端融合至基本上由N端甲硫氨酸残基和HA表位标签组成的肽。用于将包含N端甲硫氨酸残基和HA表位标签或基本上由N端甲硫氨酸残基和HA表位标签组成的肽融合至多肽片段N端的技术是本领域公知的，而且能能在商业上获得(例如Clontech，Mountain View，CA)。
认为SEQ ID NO：2之人GPR119的等位变体在本发明的范围内。人GPR119涵盖在本发明的范围内。
作为SEQ ID NO：2之人GPR119的脊椎动物直向同系物的变体涵盖在本发明的范围内。作为SEQ ID NO：2之人GPR119的哺乳动物直向同系物的变体涵盖在本发明的范围内。举例而言而非限制，小鼠GPR119(例如
Figure BPA00001252734000784
登录号AY288423)、大鼠GPR119(登录号AAN95195)、仓鼠GPR119、犬GPR119、和非人灵长类GPR119涵盖在本发明的范围内。
在某些实施方案中，SEQ ID NO：2的变体是GPCR。
与SEQ ID NO：2具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一性的SEQ ID NO：2变体涵盖在本发明的范围内。在某些实施方案中，与SEQ ID NO：2具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一性的SEQ ID NO：2变体是GPCR。在一些实施方案中，SEQ ID NO：2变体是内源GPCR。在一些实施方案中，SEQ ID NO：2变体是非内源GPCR。在一些实施方案中，作为内源GPCR的SEQ ID NO：2变体是哺乳动物GPCR。在某些实施方案中，SEQ ID NO：2变体特异性结合化合物1。在某些实施方案中，SEQ ID NO：2变体特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000791
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，SEQ ID NO：2变体在依照下文实施例15的受体结合测定法中以小于约50μM、小于约25μM、小于约10μM、小于约5μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、或小于约50nM的IC50值特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000792
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，SEQ ID NO：2变体在依照下文实施例15的受体结合测定法中以小于约10μM、小于约5μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、或小于约50nM的IC50值特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000793
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，SEQ ID NO：2变体是如下的受体，(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000794
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是其激动剂，在依照下文实施例10的全细胞腺苷酰环化酶测定法中或在依照下文实施例11的测定法中在所述受体处具有小于约5μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM、或小于约1nM的EC50值。在某些实施方案中，SEQ ID NO：2变体是如下的受体，(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000796
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是其激动剂，在依照下文实施例10的全细胞腺苷酰环化酶测定法中或在依照下文实施例11的测定法中在所述受体处具有小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM、或小于约1nM的EC50值。在一些实施方案中，SEQ ID NO：2变体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。百分比同一性可使用已知计算机程序方便地确定。
在某些实施方案中，可在本方法中使用的变体GPCR具有与SEQ ID NO：2具有至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、of至少约96％、至少约97％、至少约98％、或至少约99％同一性的氨基酸序列。与SEQ ID NO：2具有例如95％“同一性”的变体GPCR意味着该变体的氨基酸序列与SEQ IDNO：2的氨基酸1-335相同，只是SEQ ID NO：2的每100个氨基酸中，可以包括多至5处氨基酸改变。如此，为了获得例如与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，与SEQ ID NO：2的氨基酸1-335相比，序列中多至5％(100个中5个)的氨基酸残基可以插入、删除、或用另一种氨基酸替代。这些改变可发生于氨基或羧基末端或那些末端位置之间的任何地方，或是单独散布在序列中的残基间或是以一个或多个连续组散布在序列内。
在某些实施方案中，可在本方法中使用的变体G蛋白偶联受体是具有通过删除、替代、和/或添加一个或几个氨基酸自SEQ ID NO：2衍生的氨基酸序列的G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，可在本方法中使用的变体G蛋白偶联受体是具有通过SEQ ID NO：2的氨基酸序列中不超过10处保守氨基酸替代和/或不超过3处非保守氨基酸替代自SEQ ID NO：2衍生的氨基酸序列的G蛋白偶联受体。在某些实施方案中，精氨酸。赖氨酸和组氨酸可彼此保守替代；谷氨酸和天冬氨酸可彼此保守替代；谷氨酰胺和天冬酰胺可彼此保守替代；亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸可彼此保守替代；苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸可彼此保守替代；及甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸和甲硫氨酸可彼此保守替代。氨基酸替代、氨基酸删除、和氨基酸添加可以在任何位置(例如C端或N端，或在内部位置)。在一些实施方案中，所述变体是内源G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，所述变体是内源脊椎动物G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，所述变体是内源哺乳动物G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，所述变体是内源人G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，所述变体是非内源G蛋白偶联受体。在一些实施方案中，所述变体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。在某些实施方案中，所述具有自SEQ ID NO：2衍生的氨基酸序列的G蛋白偶联受体是如下的G蛋白偶联受体，化合物1是其配体。在某些实施方案中，所述具有自SEQ ID NO：2衍生的氨基酸序列的G蛋白偶联受体是如下的G蛋白偶联受体，(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是其配体，在依照下文实施例15的受体结合测定法中以小于约50μM、小于约25μM、小于约10μM、小于约5μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、或小于约50nM的IC50值。在某些实施方案中，所述具有自SEQ ID NO：2衍生的氨基酸序列的G蛋白偶联受体是如下的G蛋白偶联受体，化合物1是其激动剂。在某些实施方案中，所述具有自SEQ IDNO：2衍生的氨基酸序列的G蛋白偶联受体是如下的G蛋白偶联受体，(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000811
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是其激动剂，在依照下文实施例10的全细胞腺苷酰环化酶测定法中或在依照下文实施例11的测定法中具有小于约5μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM、或小于约1nM的EC50值。
作为G蛋白偶联受体，包含SEQ ID NO：2的至少20个、至少30个、至少40个、至少50个、至少75个、或至少100个连续氨基酸的SEQ ID NO：2变体涵盖在本发明的范围内。在某些实施方案中，包含SEQ ID NO：2的至少20个、至少30个、至少40个、至少50个、至少75个、或至少100个连续氨基酸的SEQID NO：2变体是GPCR。在一些实施方案中，SEQ ID NO：2变体是内源GPCR。在一些实施方案中，SEQ ID NO：2变体是非内源GPCR。在一些实施方案中，作为内源GPCR的SEQ ID NO：2变体是哺乳动物GPCR。在某些实施方案中，SEQ ID NO：2变体特异性结合化合物1。在某些实施方案中，SEQ ID NO：2变体特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000813
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，SEQ ID NO：2变体在依照下文实施例15的受体结合测定法中以小于约50μM、小于约25μM、小于约10μM、小于约5μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、或小于约50nM的IC50值特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000815
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，SEQ IDNO：2变体在依照下文实施例15的受体结合测定法中以小于约10μM、小于约5μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、或小于约50nM的IC50值特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000816
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，SEQ ID NO：2变体是如下的受体，(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是其激动剂，在依照下文实施例10的全细胞腺苷酰环化酶测定法中或在依照下文实施例11的
Figure BPA00001252734000818
测定法中在所述受体处具有小于约5μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM、或小于约1nM的EC50值。在某些实施方案中，SEQID NO：2变体是如下的受体，(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000821
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是其激动剂，在依照下文实施例10的全细胞腺苷酰环化酶测定法中或在依照下文实施例11的
Figure BPA00001252734000822
测定法中在所述受体处具有小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM、或小于约1nM的EC50值。在一些实施方案中，SEQ ID NO：2变体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO：2的至少20个、至少30个、至少40个、至少50个、至少75个、或至少100个连续氨基酸的G蛋白偶联受体展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在一些实施方案中，可在本方法中使用的变体GPCR是由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR。在一些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是内源GPCR。在一些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是非内源GPCR。在一些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码且是内源GPCR的GPCR是哺乳动物内源GPCR。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO：2或其等位基因。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO：2的等位基因。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是SEQ ID NO：2的直向同系物。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR特异性结合化合物1。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000823
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR在依照下文实施例15的受体结合测定法中以小于约50μM、小于约25μM、小于约10μM、小于约5μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、或小于约50nM的IC50值特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR在依照下文实施例15的受体结合测定法中以小于约10μM、小于约5μM、小于约1μM、小于约500nM、小于约100nM、或小于约50nM的IC50值特异性结合(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000832
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是如下的受体，(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000833
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是其激动剂，在依照下文实施例10的全细胞腺苷酰环化酶测定法中或在依照下文实施例11的
Figure BPA00001252734000834
测定法中在所述受体处具有小于约5μM、小于约1μM、小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM、或小于约1nM的EC50值。在某些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR是如下的受体，(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734000835
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺是其激动剂，在依照下文实施例10的全细胞腺苷酰环化酶测定法中或在依照下文实施例11的
Figure BPA00001252734000836
测定法中在所述受体处具有小于约100nM、小于约50nM、小于约25nM、小于约10nM、小于约5nM、或小于约1nM的EC50值。在一些实施方案中，由在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的GPCR展现可检测水平的组成性活性。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
杂交技术是本领域技术人员公知的。在一些实施方案中，严格杂交条件包括在包含50％甲酰胺、5x SSC(1xSSC＝150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5x Denhardt氏液、10％硫酸右旋糖苷、和20μg/ml变性剪切鲑鱼精DNA的溶液中于42℃温育过夜，接着在0.1x SSC中于约65℃清洗滤器。在一些实施方案中，严格杂交条件包括在包含50％甲酰胺、5x SSC(1xSSC＝150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH 7.6)、5x Denhardt氏液、10％硫酸右旋糖苷、和20μg/ml变性剪切鲑鱼精DNA的溶液中于42℃温育过夜，接着于约50℃、于约55℃、于约60℃或于约65℃在0.1x SSC/0.1％SDS(十二烷基硫酸钠)中或在0.2x SSC/0.1％SDS中清洗。在一些实施方案中，所述严格条件包括用0.1x SSC于65℃清洗。在一些实施方案中，所述严格条件包括用0.1x SSC/0.1％SDS或用0.2xSSC/0.1％SDS于约50℃、于约55℃、于约60℃、或于约65℃清洗。
在一些实施方案中，可在本方法中使用的GPCR是非内源的、组成性活化的受体，其包含SEQ ID NO：2的氨基酸序列，其中SEQ ID NO：2氨基酸第224位的亮氨酸用亮氨酸以外的氨基酸替代。在一些实施方案中，所述亮氨酸以外的氨基酸是赖氨酸。在一些实施方案中，所述亮氨酸以外的氨基酸是丙氨酸。在一些实施方案中，所述亮氨酸以外的氨基酸是精氨酸。在一些实施方案中，所述亮氨酸以外的氨基酸是组氨酸。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，本发明的GPCR包含具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性型式。在一些实施方案中，所述组成性活性型式的受体是具有SEQ ID NO：2的内源组成性活性型式。在一些实施方案中，所述组成性活性型式的受体是具有位于SEQ ID NO：2氨基酸第224位的突变的非内源组成性活性型式。在一些实施方案中，所述突变的残基被突变成亮氨酸以外的残基。在一些实施方案中，所述突变的残基被突变成赖氨酸残基。在一些实施方案中，所述突变的残基被突变成丙氨酸残基。在一些实施方案中，所述突变的残基被突变成精氨酸残基。在一些实施方案中，所述突变的残基被突变成组氨酸残基。在一些实施方案中，所述组成性活性是提高细胞内cAMP水平。在一些实施方案中，所述组成性活性是引起载黑色素细胞经历色素分散。
在某些实施方案中，本发明的GPCR形成包含G蛋白的融合蛋白的一部分。
a.序列同一性
在某些实施方案中，使用本领域公知的基本局部比对搜索工具(BasicLocal Alignment Search Tool，“BLAST”)来评估百分比同一性[参见例如Karlinand Altschul，Proc Natl Acad Sci USA(1990)87：2264-2268；Altschul et al.，JMol Biol(1990)215：403-410；Altschul et all，Nature Genetics(1993)3：266-272；及Altschul et al.，Nucleic Acids Res(1997)25：3389-3402；通过述及将每一篇的公开内容完整收入本文]。可以以缺省参数或者以用户提供的改良参数使用BLAST程序。优选的是，参数是缺省参数。
在某些实施方案中，用于测定检索序列(例如氨基酸序列SEQ ID NO：2)与要查询的序列之间的最佳整体匹配的一种优选方法(也称作整体序列比对)可使用基于Brutlag et al.(Comp App Biosci(1990)6：237-245；通过述及将其公开内容完整收入本文)算法的FASTDB计算机程序来确定。在序列比对中，检索和查询序列都是氨基酸序列。所述整体序列比对的结果是百分百同一性。FASTDB氨基酸比对中使用的优选参数是：矩阵＝PAM 0，k-tuple＝2，错配罚分＝1，连接罚分＝20，随机化组＝25，长度＝0，截留得分＝1，窗口尺寸＝序列长度，缺口罚分＝5，缺口尺寸罚分＝0.05，窗口尺寸＝247或查询氨基酸序列的长度中较短者。
如果查询序列因N端或C端删除(不是因为内部删除)而比检索序列短，那么必须人工修正以百分百同一性表示的结果，因为FASTDB程序在计算整体百分百同一性时不考虑查询序列的N端和C端截短。对于相对于检索序列在N端和C端截短的查询序列，如下修正百分百同一性，即计算检索序列中在查询序列的N端和C端，与相应查询序列残基不匹配/比对的残基数目，作为相对于检索序列总碱基的百分比。残基是否匹配/比对由FASTDB序列比对的结果来确定。然后自通过上文使用规定参数的FASTDB程序计算得到的百分比同一性减去此百分比以得到最终的百分比同一性得分。此最终的百分比同一性得分就是为本发明目的使用的那个。人工调整百分比同一性得分时，只考虑在查询序列N端和C端，与检索序列不匹配/比对的残基。也就是说，只考虑查询序列最N端和最C端残基以外的检索氨基酸残基。
例如，将90个氨基酸残基的查询序列与100个残基的检索序列比对以确定百分比同一性。删除发生在查询序列的N端，因此FASTDB比对在N端第一个残基处不匹配/比对。10个不配对的残基占序列的10％(N端和C端不匹配的残基数/检索序列中的残基总数)，所以自通过FASTDB程序计算得到的百分比同一性得分减去10％。如果剩余90个残基完全匹配，那么最终的百分比同一性会是90％。
又例如，将90个残基的查询序列与100个残基的检索序列比较。这次删除位于内部，所以查询序列N端或C端没有与检索不匹配/比对的残基检索。在这种情况中，通过FASTDB计算得到的百分比同一性不用人工修正。同样，只人工修正如FASTDB比对中展示的，受试序列N端和C端以外与检索序列不匹配/比对的残基位置。用于本发明目的不做其它修正。
b.融合蛋白
在某些实施方案中，感兴趣多肽是融合蛋白，而且可以含有例如亲和标签结构域或报告物结构域。合适的亲和标签包括可特异性结合另一模块(通常是另一种多肽，最通常的是抗体)的任何氨基酸序列。合适的亲和标签包括表位标签，例如V5标签、FLAG标签、HA标签(来自血凝素流感病毒)、myc标签、等等，正如本领域已知的。合适的亲和标签还包括结合底物已知的结构域，例如HIS、GST和MBP标签，正如本领域已知的，及来自特异性结合配偶(例如抗体，特别是单克隆抗体)可得的其它蛋白质的结构域。合适的亲和标签还包括任何蛋白质-蛋白质相互作用结构域，诸如IgG Fc区，其可以使用合适的结合配偶来特异性结合和检测，例如IgG Fc受体。本发明明确涵盖此类融合蛋白，其可含有异源N端结构域(例如表位标签)，其以符合读码框的方式与GPCR融合，该GPCR的N端甲硫氨酸残基或是删除或是用备选氨基酸替代。
合适的报告物结构域包括能报告多肽的存在的任何结构域。虽然认识到可以使用亲和标签来报告多肽的存在，其中使用例如经过标记的特异性结合该标签的抗体，但是更通常的是使用发光报告物结构域。合适的发光报告物结构域包括萤光素酶(来自例如萤火虫、Vargula、Renilla reniformis或Renillamuelleri)、或其发光变体。其它合适的报告物结构域包括荧光蛋白(来自例如水母、珊瑚和其它腔肠动物，诸如来自Aequoria、Renilla、Ptilosarcus、Stylatula物种的那些)、或其发光变体。这些报告物蛋白质的发光变体是本领域众所周知的，而且与天然报告物蛋白质相比可以更亮，是二聚体，或具有不同激发和/或发射光谱。例如，一些变体是改变了的，使得它们不再看上去是绿色的，而且可以看上去是蓝色、青色、黄色、增强的黄色、红色(分别称作BFP、CFP、YFP、eYFP和RFP)或者具有其它发射光谱，正如本领域已知的。其它合适的报告物结构域包括能经由生化或颜色变化来报告多肽的存在的结构域，诸如β-半乳糖苷酶、β-葡糖醛酸糖苷酶、氯霉素乙酰基转移酶、和分泌型胚胎碱性磷酸酶。
同样正如本领域已知的，亲和标签或报告物结构域可以存在于感兴趣多肽中的任何位置。然而，在大多数实施方案中，它们存在于感兴趣多肽的C末端或N末端。
2.编码感兴趣GPCR多肽的核酸
因为遗传密码和用于操作核酸的重组技术是已知的，而且上文描述了感兴趣GPCR多肽的氨基酸序列，所以编码感兴趣GPCR多肽的核酸的设计和生成完全在技术人员的技术范围内。在某些实施方案中，使用标准重组DNA技术(Ausubel，et al，Short Protocols in Molecular Biology，第3版，Wiley&Sons，1995；Sambrook，et al.，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版，(1989)Cold Spring Harbor，N.Y.)方法。例如，GPCR编码序列可以使用不需要在此描述的多种重组方法的任一种或组合自GPCR编码序列文库分离。后续在编码蛋白质的核酸序列中替代、删除、和/或添加核苷酸也可以使用标准重组DNA技术来进行。
例如，定点诱变和亚克隆可用于引入/删除/替代编码感兴趣多肽的多核苷酸中的核酸残基。在其它实施方案中，可使用PCR。编码感兴趣多肽的核酸还可以完全自寡核苷酸通过化学合成来制备(例如Cello et al.，Science(2002)297：1016-8)。
在一些实施方案中，为了在特定物种的细胞中表达，特别是哺乳动物(例如小鼠、大鼠、仓鼠、非人灵长类动物、或人)物种，优化编码感兴趣多肽的核酸的密码子。在一些实施方案中，为了在特定物种的细胞中表达，特别是两栖动物物种，优化编码感兴趣多肽的核酸的密码子。
a.载体
本发明进一步提供包含本发明核酸的载体(也称作“构建物”)。在本发明的许多实施方案中，本发明的核酸序列在该序列可操作连接至表达控制序列(包括例如启动子)后会在宿主中表达。本发明的核酸还通常放置在表达载体中，表达载体能在宿主细胞中复制，或是作为附加体或是作为宿主染色体DNA的整合部分。通常，表达载体会含有选择标志，例如四环素或新霉素，以容许检测那些被期望DNA序列转化的细胞(参见例如美国专利No.4,704,362，通过述及收入本文)。载体(包括单一和双重表达盒载体)是本领域公知的(Ausubel，et al，Short Protocols in Molecular Biology，第3版，Wiley&Sons，1995；Sambrook，et al.，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第2版，(1989)Cold Spring Harbor，N.Y.)。合适的载体包括病毒载体、质粒、粘粒、人工染色体(人人工染色体、细菌人工染色体、酵母人工染色体、等)、微型染色体、等等。可以使用逆转录病毒、腺病毒和腺伴随病毒载体。
本领域技术人员可利用多种表达载体在细胞中生成感兴趣多肽，而且包括商品化的表达载体(例如来自Invitrogen，Carlsbad，CA；Clontech，MountainView，CA；Stratagene，La Jolla，CA)。商品化的表达载体包括(作为非限制性例子)基于CMV启动子的载体。一种合适的表达载体是pCMV。表达载体可以是腺病毒。一种例示性的腺病毒载体可以作为AdEasyTM购自Qbiogene(Carlsbad，CA)(He TC et al，Proc Natl Acad Sci USA(1998)95：2509-2514；及美国专利No.5,922,576；通过述及将每一篇的公开内容完整收入本文)。其它合适的表达载体对于本领域普通技术人员会是显而易见的。
本发明的核酸通常包含编码本发明感兴趣多肽的单一可读框，然而，在某些实施方案中，因为用于表达感兴趣多肽的宿主细胞可以是真核细胞，例如哺乳动物细胞，诸如人细胞，所以可读框可以被内含子中断。本发明的核酸通常是转录单位的一部分，转录单位可以在本发明核酸之外含有可指导RNA稳定性、翻译效率、等的3’和5’非翻译区(UTR)。本发明的核酸还可以是表达盒的一部分，表达盒在本发明核酸之外含有指导感兴趣多肽转录和表达的启动子、和转录终止子。
真核启动子可以是在真核宿主细胞中有功能的任何启动子，包括病毒启动子和自真核基因衍生的启动子。例示性的真核启动子包括但不限于下列：小鼠金属硫蛋白I基因序列的启动子(Hamer et al.，J.Mol.Appl.Gen.1：273-288，1982)；疱疹病毒的TK启动子(McKnight，Cell 31：355-365，1982)；SV40早期启动子(Benoist et al.，Nature(London)290：304-310，1981)；酵母gall基因序列启动子(Johnston et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)79：6971-6975，1982)；Silver et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)81：5951-59SS，1984)；CMV启动子、EF-1启动子、蜕皮激素响应性启动子、四环素响应性启动子、等等。病毒启动子可能是特别感兴趣的，因为它们一般是特别强的启动子。在某些实施方案中，使用的启动子是靶病原体的启动子。选择在本发明中使用的启动子，使得它们在它们所导入的细胞类型(和/或动物)中有功能。在某些实施方案中，启动子是CMV启动子。
在某些实施方案中，本发明的载体还可提供选择标志的表达。合适的载体和选择标志是本领域公知的且讨论于Ausubel，et al，(Short Protocols inMolecular Biology，第3版，Wiley&Sons，1995)和Sambrook，et al，(MolecularCloning：A Laboratory Manual，第3版，(2001)Cold Spring Harbor，N.Y.)。已经采用多种不同基因作为选择标志，而且本发明载体中作为选择标志采用的具体基因主要是出于方便选择的。已知的选择标志基因包括：胸苷激酶基因、二氢叶酸还原酶基因、黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因、CAD、腺苷脱氨酶基因、天冬酰胺合成酶基因、抗生素抗性基因(例如tetr、ampr、Cmr或cat、kanr或neor(氨基糖苷磷酸转移酶基因))、潮霉素B磷酸转移酶基因、等等。
如上所述，感兴趣多肽可以是含有亲和结构域和/或报告物结构域的融合蛋白。用于在报告物或标签与之间GPCR生成融合物(例如在GPCR的C端或N端)的方法完全是本领域技术人员的技术范围内(例如McLean et al，Mol.Pharma.Mol Pharmacol.1999 56：1182-91；Ramsay et al.，Br.J.Pharmacology，2001，315-323)，而且不再进一步描述。明确涵盖此类融合蛋白可含有异源N端结构域(例如标签表位)，其以符合读码框的方式与GPCR融合，该GPCR的N端甲硫氨酸残基或是删除或是用备选氨基酸替代。应当领会，感兴趣多肽可以首先自天然多肽生成，然后可操作连接至合适的报告物/标签，如上所述。
本发明的核酸还可含有限制性位点、多克隆位点、引物结合位点、可连接末端、重组位点等，通常是为了便于构建编码感兴趣多肽的核酸。
b.宿主细胞
本发明进一步提供包含载体的宿主细胞，该载体包含本发明的核酸。合适的宿主细胞包括原核细胞，例如细菌细胞(例如大肠杆菌)，以及真核细胞，例如动物细胞(例如昆虫、哺乳类、鱼类、两栖类、鸟类或爬行类细胞)、植物细胞(例如玉蜀黍或拟南芥细胞)、或真菌细胞(例如酿酒酵母细胞)。在某些实施方案中，可以使用任何适合于表达感兴趣多肽编码核酸的细胞作为宿主细胞。通常，使用动物宿主细胞系，例如下列：猴肾细胞(COS细胞)、经SV40转化的猴肾CVI细胞(COS-7，ATCC CRL 165 1)；人胚肾细胞(HEK-293[“293”]，Graham et al.J.Gen Virol.36：59(1977))；HEK-293T[“293T”]细胞；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；中国仓鼠卵巢细胞(CHO，Urlaub and Chasin，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)77：4216，(1980)；叙利亚金色仓鼠细胞MCB3901(ATCC CRL-9595)；小鼠Sertoli细胞(TM4，Mather，Biol.Reprod.23：243-251(1980))；猴肾细胞(CVI ATCC CCL 70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL1442)；人肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人肝细胞(hep G2，HB 8065)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL 51)；TRI细胞(Mather et al.，Annals N.Y.Acad.Sci 383：44-68(1982))；NIH/3T3细胞(ATCC CRL-1658)；和小鼠L细胞(ATCC CCL-1)。
在某些实施方案中，使用载黑色素细胞。载黑色素细胞是见于低等脊椎动物的皮肤细胞。有关材料和方法遵循依照美国专利No.5,462,856和美国专利No.6,051,386的公开内容。通过述及将这些专利的公开内容完整收入本文。
别的细胞系对于本领域普通技术人员会变得显而易见，而且极其多种细胞系可得自美国典型培养物保藏中心(10801 University Boulevard，Manassas，Va.20110-2209)。
C.筛选候选化合物
1.一般性GPCR筛选测定法技术
当G蛋白受体变成有活性时，它结合G蛋白(例如Gq、Gs、Gi、Gz、Go)并刺激GTP结合G蛋白。然后G蛋白起GTP酶的作用并缓慢水解GTP成GDP，由此受体在正常条件下变成失活的。然而，活化的受体连续将GDP变成GTP。不可水解的GTP类似物[35S]GTPγS能用于监测增强的对表达活化的受体的膜的结合。有报告说[35S]GTPγS能用于监测在配体缺失和存在下G蛋白对膜的偶联。在本领域技术人员公知和可得的其它例子之外，Traynor和Nahorski在1995年报告了这种监测的一个例子。这种测定系统的一种优选用途是初步筛选候选化合物，因为该系统一般性适用于所有G蛋白偶联受体，不管与受体的细胞内结构域相互作用的具体G蛋白。
2.特异性GPCR筛选测定法技术
一旦使用“一般性”G蛋白偶联受体测定法(即用于选择作为激动剂或逆激动剂的化合物的测定法)鉴定了候选化合物，在一些实施方案中，优选进一步筛选来验证该化合物在受体位点处相互作用。例如，某种化合物可能被“一般性”测定法鉴定为不结合受体，但是可能改为只是自细胞内结构域“解偶联”(uncouple)G蛋白。
a.Gs，Gz，和Gi。
Gs刺激酶腺苷酰环化酶。另一方面，Gi(和Gz和Go)抑制腺苷酰环化酶。腺苷酰环化酶催化ATP转变成cAMP；如此，偶联Gs蛋白的活化的GPCR与升高的细胞cAMP水平有关。另一方面，偶联Gi(或Gz、Go)蛋白的活化的GPCR与降低的细胞cAMP水平有关。一般参见“Indirect Mechanisms ofSynaptic Transmission”，第8章，From Neuron To Brain(第3版)Nichols，J.G.etal编Sinauer Associates，Inc.(1992)。如此，检测cAMP的测定法可用来确定候选化合物是否是例如受体的逆激动剂(即此类化合物会降低cAMP水平)。可以利用本领域已知的用来测量cAMP的多种办法；在一些实施方案中，一种优选的办法依赖于以基于ELISA的形式使用抗cAMP抗体。可利用的另一种类型的测定法是全细胞第二信使报告物系统测定法。基因上的启动子驱动特定基因编码的蛋白质表达。环AMP如下驱动基因表达，即它促进cAMP响应性DNA结合蛋白或转录因子(CREB)的结合，然后它们结合至称作cAMP响应元件的特定位点处的启动子并驱动基因表达。可以如下构建报告物系统，其在报告物基因(例如B-半乳糖苷酶或萤光素酶)的前面具有含有多个cAMP响应性元件的启动子。如此，活化的Gs连接的受体引起cAMP积累，然后激活基因和报告物蛋白质表达。然后可使用标准生化测定法来检测报告物蛋白质诸如β-半乳糖苷酶或萤光素酶(Chen et al.1995)。
b.Go和Gq。
Gq和Go与酶磷酸酯酶C的活化有关，后者继而水解磷脂PIP2，释放两种细胞内信使：甘油二酯(DAG)和肌醇1，4，5-三磷酸(IP3)。升高的IP3积累与Gq和Go相关受体的活化有关。一般参见“Indirect Mechanisms of SynapticTransmission”，第8章，From Neuron To Brain(第3版)Nichols，J.G.et al编Sinauer Associates，Inc.(1992)。检测IP3积累的测定法可用来确定候选化合物是否是例如Gq或Go相关受体的逆激动剂(即此类化合物会降低IP3水平)。Gq相关受体还可使用AP1报告物测定法来检查，其中Gq依赖性磷脂酶C引起含有AP1元件的基因活化；如此，活化的Gq相关受体会显示此类基因的表达升高，由此它们的逆激动剂会显示此类表达的降低，而激动剂会显示此类表达的升高。用于此类检测的商品化测定法是可得的。
3.GPCR融合蛋白
内源的组成性活性GPCR或非内源的组成性活化GPCR用于筛选候选化合物来直接鉴定逆激动剂或激动剂的用途提供一种有趣的筛选挑战，因为根据定义，即使没有内源配体结合它，受体也是有活性的。如此，为了区分例如在候选化合物存在下的非内源受体与在该化合物缺失下的非内源受体，此类区分的目的是容许了解此类化合物可以是逆激动剂或激动剂还是对此类受体没有影响，在一些实施方案中，优选利用能增强此类区分的办法。在一些实施方案中，一种优选的办法是使用GPCR融合蛋白。
一般而言，一旦使用上文所列测定法技术(以及技术人员知道的其它技术)确定非内源GPCR已经被组成性活化，就有可能确定与内源GPCR偶联的主要G蛋白。G蛋白与GPCR的偶联提供能评估的信号传导途径。在一些实施方案中，优选使用哺乳动物或载黑色素细胞表达系统，进行筛选，因为此类系统预期其中会具有内源G蛋白。如此，根据定义，在此类系统中，非内源的组成性活化的GPCR会持续发信号。在一些实施方案中，优选增强此信号，使得在例如受体的逆激动剂存在下，更有可能的是它会能够更容易地在受体(当其与逆激动剂接触时)间区分，特别是在筛选的背景中。
GPCR融合蛋白意图增强G蛋白与GPCR偶联的效率。GPCR融合蛋白对于用内源的组成性活性GPCR或非内源的组成性活化的GPCR进行的筛选可能是优选的，因为此类办法提高了在此类筛选技术中生成的信号。这在促成显著的信噪比中是重要的；此类显著的比对于如本文所公开的筛选候选化合物是优选的。
对于表达GPCR融合蛋白有用的构建物的构建在本领域普通技术人员的范围内。商品化的表达载体和系统提供多种办法，它们能适应调查人员的具体需要。此类GPCR融合蛋白构建物的构建中的重要标准包括但不限于GPCR序列和G蛋白序列二者符合读码框(优选的是，内源GPCR的序列在G蛋白序列的上游)，而且GPCR的“终止”密码子被删除或替换，使得在GPCR表达时，G蛋白也能表达。GPCR可以直接连接至G蛋白，或者二者之间可以有间隔残基(优选的是，不超过约12个，尽管本领域普通技术人员能容易地确定这个数目)。基于方便，优选使用间隔物。在一些实施方案中，优选偶联至非内源GPCR的G蛋白在创建GPCR融合蛋白构建物之前已经过鉴定。
如上所述，偶联至Gi、Gz和Go的活化的GPCR预期抑制cAMP形成，使得基于这些GPCR类型的测定法具有挑战性(即cAMP信号在活化后降低，如此使得例如激动剂(它会进一步降低此信号)的直接鉴定具有挑战性)。正如本文中会讨论的，已经确定了对于这些受体类型，在建立可行的基于环化酶的测定法的努力中有可能创建不是基于GPCR的内源G蛋白的GPCR融合蛋白。如此，例如，可以将内源Gi偶联的受体融合至Gs蛋白-此类融合构建物在表达后“驱动”或“迫使”内源GPCR与例如Gs而非“天然”Gi蛋白偶联，使得能建立基于环化酶的测定法。如此，对于Gi、Gz和Go偶联的受体，在一些实施方案中，优选在使用GPCR融合蛋白且测定法基于腺苷酰环化酶活性检测时，融合构建物是用Gs(或刺激酶腺苷酰环化酶形成的等同G蛋白)建立的。
表C
Figure BPA00001252734000931
同等有效的是利用与Gs、Gi、Gz或Go蛋白融合的Gq蛋白的G蛋白融合构建物。在一些实施方案中，一种优选的融合构建物可用Gq蛋白来实现，其中G蛋白α亚基(“Gαq”)的前六个(6)氨基酸被删除且Gαq C末端处的最后五个(5)氨基酸用感兴趣G蛋白的Gα的相应氨基酸替换。例如，融合构建物可具有与Gi蛋白融合的Gq(6个氨基酸删除)，产生“Gq/Gi融合构建物”。这种融合构建物会迫使内源Gi偶联的受体偶联至其非内源G蛋白Gq，使得第二信使(例如肌醇三磷酸或甘油二酯)能被测量，代替cAMP生成。
4.靶Gi偶联的GPCR与信号增强剂Gs偶联的GPCR的共转染(基于cAMP的测定法)
已知Gi偶联的受体抑制腺苷酰环化酶，并因此降低cAMP生成水平，这能使得评估cAMP水平具有挑战性。在某些实施方案中，测量cAMP生成降低(作为在活化后主要偶联Gi的受体的活化的指示)的一种有效技术可以通过共转染信号增强剂例如在活化后主要偶联Gs的非内源、组成性活化的受体(例如TSHR-A623I；见下文)与Gi连接的GPCR来实现。正如显而易见的，Gs偶联的受体的活化可以基于cAMP生成升高来确定。Gi偶联的受体的活化导致cAMP生成降低。如此，共转染办法意图有利地利用这些“相反”效果。例如，非内源、组成性活化的Gs偶联的受体(“信号增强剂”)与单独的表达载体的共转染提供基线cAMP信号(即，虽然Gi偶联的受体会降低cAMP水平，这种“降低”会是相对于通过组成性活化的Gs偶联的信号增强剂建立的cAMP水平的实质性升高)。然后，将信号增强剂与“靶受体”共转染，Gi偶联的靶受体的逆激动剂会提高测量的cAMP信号，而Gi偶联的靶受体的激动剂会降低此信号。
应当独立评估使用这种办法直接鉴定的候选化合物以确保这些不靶向信号增强受体(这可以在针对共转染的受体筛选之前或之后进行)。
组合物/配制剂和治疗方法
本发明的化合物，例如GPR119激动剂、PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物可使用本领域公知技术配制成药物组合物和药物，供依照本发明使用。适当的配制剂取决于所选择的施用路径。在某些实施方案中，所述施用是对非人脊椎动物或对非人哺乳动物。
关于本发明的疗法，即涉及GPR119激动剂的疗法，依照本发明的化合物可通过任何合适的方式来施用。合适的施用路径包括口服、鼻、直肠、经粘膜、经皮、或肠施用、胃肠外投递，包括肌肉内、皮下、髓内注射，以及鞘内、直接室内、静脉内、腹膜内、鼻内、肺内(吸入)或眼内注射，使用本领域已知方法进行。其它合适的施用路径有气雾剂和储库(depot)配制剂。明确涵盖发明药物的持续释放配制剂，特别是储库。在某些优选的实施方案中，依照本发明的化合物是口服施用的。依照本发明的化合物可以以固体或液体形式包装，诸如片剂、胶囊剂、粉剂、糖浆剂、剂等等、气雾剂、无菌溶液、悬浮液或乳状液、等等。在某些实施方案中，GPR119激动剂是口服施用的。
在某些优选的实施方案中，依照本发明的化合物(例如GPR119激动剂)是口服施用的。在某些优选的实施方案中，依照本发明的化合物(例如GPR119激动剂)是以容许在肠的肠内分泌细胞中刺激PYY分泌的方式施用的。在某些优选的实施方案中，依照本发明的化合物(例如GPR119激动剂)是以容许在肠的肠内分泌细胞中刺激PYY分泌的方式口服施用的。
在某些优选的实施方案中，依照本发明的化合物，例如PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物是口服施用的。在某些优选的实施方案中，依照本发明的化合物(例如GPR119激动剂)是以容许在肠的肠内分泌细胞中刺激PYY分泌的方式施用的。在某些优选的实施方案中，依照本发明的化合物(例如GPR119激动剂)是以容许在肠的肠内分泌细胞中刺激PYY分泌的方式口服施用的。
在固体片剂和胶囊剂配制剂之外，用于口服施用的配制剂可以是水性溶液和悬浮液的形式。水性溶液和悬浮液可以自无菌粉末或颗粒制备。可以将化合物溶解于水、聚乙二醇、聚丙二醇、乙醇、玉米油、棉子油、花生油、芝麻油、苯甲醇、氯化钠、和/或各种缓冲液。其它佐剂是本领域广泛熟知的。
GPR119激动剂的药物组合物可以通过本领域公知的方法来制备，例如依靠常规混合、溶解、粒化、包衣、研磨、乳化、封装、包封、冻干工艺或喷雾干燥。
供依照本发明使用的药物组合物可以使用一种或多种能在药剂学上使用，便于将活性化合物加工成制剂的生理学可接受载体(包括赋形剂和助剂)以常规方式配制。合适的药学可接受载体是本领域技术人员可得的(参见例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，(Gennaro et al.，编)，第20版，2000，Lippincott Williams&Wilkins；及Handbook of PharmaceuticalExcipients(Rowe et al.，编)，第4版，2003，Pharmaceutical Press；通过述及将每一篇的公开内容完整收入本文)。适当的配制剂取决于所选择的施用路径。本文中的术语“载体”材料或“赋形剂”材料指如下的任何物质，自身不是治疗剂，用作载体和/或稀释剂和/或佐剂，或用于对受试者投递治疗剂或添加至药物组合物以改善其操作或贮藏特性或容许或便于一个剂量单位的组合物形成适合于口服施用的离散物体(诸如胶囊剂或片剂)的媒介。赋形剂可包括(举例而言且非限制)稀释剂、崩解剂、结合剂、粘合剂、湿润剂、聚合物、润滑剂、助流剂、为了掩盖或抵消讨厌的口味或气味而添加的物质、香料、染料、芳香剂、和为了改善组合物的外观而添加的物质。可接受的赋形剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠和钙盐、碳酸镁、滑石、明胶、阿拉伯树胶、藻酸钠、果胶、糊精、甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、淀粉、明胶、纤维质材料诸如链烷酸的纤维素酯和纤维素烃基酯、低熔点蜡可可脂或粉、聚合物诸如聚乙烯比咯烷酮、聚乙烯醇、和聚乙二醇、和其它药学可接受材料。药物组合物的成分可以装入胶囊剂或压成片剂，以方便施用。
药学可接受指关于组成、配方、稳定性、患者接受和生物利用度，从药理学/毒理学观点看患者可接受的及从物理/化学观点看制造药物化学家可接受的那些特性和/或物质。
糖锭剂核与合适的涂层一起提供。为此目的，可使用浓缩的糖溶液，其可任选含有阿拉伯胶、滑石、聚乙烯比咯烷酮、carbopol胶、聚乙二醇、和/或二氧化钛、漆溶液、和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了鉴别或表征活性化合物剂量的不同组合，可以向片剂或糖锭剂涂层添加染料或色素。
可口服使用的药物组合物包括用明胶制成的推入-配合式胶囊(push-fitcapsule)以及用明胶和增塑剂诸如甘油或山梨醇制成的密封软胶囊。推入-配合式胶囊可含有与填充剂诸如乳糖、粘合剂诸如淀粉、和/或润滑剂诸如滑石或硬脂酸镁及任选的稳定剂混合的活性组分。在软胶囊中，活性化合物可以溶解或悬浮于合适的液体，诸如脂肪油、液体石蜡、液体聚乙二醇、克列莫佛、capmul、中链或长链甘油单、双或三酯。在这些配制剂中还可以添加稳定剂。
另外，GPR119激动剂可以使用持续释放系统来投递。多种持续释放材料已经建立，而且是本领域技术人员公知的。持续释放片剂或胶囊剂是特别优选的。例如，可采用时间延迟材料诸如单硬脂酸甘油酯或双硬脂酸甘油酯。还可以通过美国专利No.4,256,108、4,166,452、和4,265,874中记载的技术包被剂量形式(剂型)以形成供受控释放用的渗透性治疗性片剂。
明确涵盖本发明的疗法(即涉及GPR119激动剂的疗法)可以单独地或与一种或多种其它药学或生理学可接受化合物组合地施用或提供。在本发明的一个方面，所述其它药学或生理学可接受化合物不是GPR119激动剂。在本发明的一个方面，所述其它药学或生理学可接受化合物是选自下组的药剂：钙、维生素D、雌激素、替勃龙(tibolone)、选择性雌激素受体调控剂(SERM；例如雷洛昔芬、他莫昔芬)、双膦酸盐/酯(例如依替膦酸盐/酯、阿伦膦酸盐/酯、利塞膦酸盐/酯)、降钙素、维生素D的1α羟基化代谢物、氟化物、噻嗪类、促蛋白合成类固醇、依普黄酮、维生素K、甲状旁腺素(PTH)、锶、抑制素(statin)、osteoprotererin、EP4受体选择性激动剂、大麻素(cannabinoid)受体2型(CB2)选择性激动剂、和p38MAP激酶抑制剂。(参见例如WorldHealth Organization Technical Report Series 921(2003)，Prevention andManagement of Osteoporosis。)
一方面，本发明的特征为包含一定量的依照本发明的GPR119激动剂或基本上由一定量的依照本发明的GPR119激动剂组成的组合物。一方面，本发明的特征为包含一定量的依照本发明的GPR119激动剂和至少一种药学可接受载体或基本上由一定量的依照本发明的GPR119激动剂和至少一种药学可接受载体组成的药物组合物。
一方面，本发明的特征为包含一定量的依照本发明的GPR119激动剂或基本上由一定量的依照本发明的GPR119激动剂组成的组合物。一方面，本发明的特征为包含一定量的依照本发明的GPR119激动剂和至少一种药学可接受载体或基本上由一定量的依照本发明的GPR119激动剂和至少一种药学可接受载体组成的药物组合物。本发明还涉及所述组合物或所述药物组合物的剂量形式(剂型)，其中GPR119激动剂、PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物的量足以提高个体中的PYY水平，诸如血浆总PYY水平或血浆PYY3-36水平。本发明还涉及所述组合物或所述药物组合物的剂量形式(剂型)，其中GPR119激动剂的量足以给出治疗或预防特征为低骨质的状况(诸如骨质疏松)和/或增加个体中的骨质的效果。
一方面，本发明的特征为包含一定量的依照本发明的GPR119激动剂或基本上由一定量的依照本发明的GPR119激动剂组成的组合物。一方面，本发明的特征为包含一定量的依照本发明的GPR119激动剂和至少一种药学可接受载体或基本上由一定量的依照本发明的GPR119激动剂和至少一种药学可接受载体组成的药物组合物。本发明还涉及所述组合物或所述药物组合物的剂量形式(剂型)，其中GPR119激动剂的量足以给出提高个体中的PYY水平的效果。本发明还涉及所述组合物或所述药物组合物的剂量形式(剂型)，其中GPR119激动剂的量足以给出提高个体中的总PYY(含PYY1-36和PYY3-36)水平的效果。本发明还涉及所述组合物或所述药物组合物的剂量形式(剂型)，其中GPR119激动剂的量足以给出提高个体中的PYY3-36水平的效果。
适合于在本发明中使用的药物组合物包括如下的组合物，其中以实现它们意图目的的量含有活性组分。在一些实施方案中，本发明的药物组合物理解为对于治疗或预防受PYY调控的状况是有用的。受PYY调控的状况依照本发明所述。在一些实施方案中，本发明的药物组合物理解为对于提高个体中的PYY水平是有用的。关于本发明，依照本发明确定GPR119激动剂足以实现意图目的的量完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其是根据本文中提供的详细公开内容。
自动物研究(包括但不限于使用小鼠、大鼠、家兔、猪、和非人灵长类动物的研究)获得的数据可用于配制供人类中使用的剂量范围。一般而言，本领域技术人员了解如何外推在动物模型系统中获得的体内数据至另一种系统，诸如人类。在一些情况中，这些外推可仅仅基于与另一种系统诸如人类相比，动物模型的重量；在其它情况中，这些外推不仅仅基于重量，而是掺入多种因素。代表性的因素包括患者的类型、年龄、重量、性别、食谱和医学状况，疾病的严重程度，施用的路径，药理学考虑诸如所采用的特定化合物的活性、功效、药动学和毒理学特性，是否利用药物投递系统，进行治疗或预防的是急性还是慢性疾病状态或在本发明的化合物之外和作为药物组合的一部分是否施用别的活性化合物。根据上文所述多种因素选择用本发明的化合物和/或组合物治疗疾病状况的剂量方案。如此，所采用的实际剂量方案可广泛变化，且因此可偏离优选的剂量方案，而且本领域技术人员会认识到这些典型范围以外的剂量和剂量方案可以进行测试，而且在适当时，可以在本发明的方法中使用。
一种例示性动物模型系统是大鼠卵巢切除术(OVX)骨丢失模型。切除了卵巢的大鼠是正确仿效雌激素消减的人骨骼的重要临床特征和对治疗剂的响应的一种卓越临床前动物模型。在这种模型中，当与卵巢切除术有关的骨丢失得到部分或完全预防时，实现治疗功效。(参见例如Bollag et al，Mol CellEndocrinol(2001)177：35-41；及Jee et al，J Musculoskel Neuron Interact(2001)1：193-207。)在某些实施方案中，当与卵巢切除术有关的骨丢失得到至少约10％预防、得到至少约20％预防、得到至少约30％预防、得到至少约40％预防、得到至少约50％预防、得到至少约60％预防、得到至少约70％预防、得到至少约75％预防、得到至少约80％预防、得到至少约85％预防、得到至少约90％预防、得到至少约95％预防、或得到100％预防时，实现治疗功效。
另一种例示性动物模型系统是小鼠中葡萄糖攻击后血液PYY水平的升高。在某些实施方案中，所述血液PYY水平是血浆PYY水平。在某些实施方案中，所述PYY水平是不依赖葡萄糖的PYY水平。在某些实施方案中，所述PYY水平是依赖葡萄糖的PYY水平。在某些实施方案中，所述PYY是总PYY，含PYY1-36和PYY3-36。在某些实施方案中，所述PYY是PYY3-36。用于测量啮齿类动物或人中的总PYY或PYY3-36的试剂盒是商品化的，诸如PhoenixPharmaceuticals，Inc.(Burlingame，CA)。还有，PYY1-36和PYY3-36可通过生化手段独立测量(Eberlein et al，Peptides(1989)10：797-803；Grandt et al，RegulPept(1994)51：151-159；Cruze et al，Peptides(2007)28：269-280)。在某些实施方案中，本发明的PYY相关活性是PYY3-36相关活性。在某些实施方案中，当血液或血浆PYY水平提高至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约100％、至少约150％、至少约200％、至少约300％、至少约400％、至少约500％、至少约600％、至少约700％、至少约800％、至少约900％、或至少约1000％时，实现治疗功效。
明确涵盖可以每日或规则地施用GPR119激动剂以实现个体中升高的PYY水平。在某些实施方案中，每日或规则地施用GPR119激动剂以实现个体中升高的PYY血液(例如血浆)水平。在某些实施方案中，每日或规则地施用GPR119激动剂以实现个体中升高的PYY血液(例如血浆)水平，其为个体中PYY正常血液(例如血浆)水平(例如正常餐前血浆PYY水平(例如血浆总PYY水平)或正常餐前和餐后血浆PYY水平之间的血浆PYY水平(例如血浆总PYY水平))或治疗前个体中PYY血液(例如血浆)水平(例如血浆总PYY)的至少约10％、至少约25％、至少约50％、至少约100％、至少约150％、至少约200％、至少约300％、至少约400％、至少约500％、至少约600％、至少约700％、至少约800％、至少约900％、或至少约1000％。注意，这些升高的PYY血液(例如血浆)水平(例如血浆总PYY)的范围是例示性范围，而非意图限制本发明。
明确涵盖可以每日或规则地施用GPR119激动剂以实现个体中升高的PYY水平。在某些实施方案中，每日或规则地施用GPR119激动剂以实现个体中升高的PYY血液(例如血浆)水平。在某些实施方案中，每日或规则地施用GPR119激动剂以实现个体中升高的PYY血液(例如血浆)水平，其在0.1ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、0.2ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、0.3ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、0.4ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、0.5ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、0.6ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、0.7ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、0.8ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、0.9ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、1ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、2ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、3ng/ml至10ng/ml或100ng/ml、或5ng/ml至10ng/ml或100ng/ml浓度范围内。注意，这些血液(例如血浆)PYY浓度(例如血浆总PYY浓度)的范围是例示性范围，而非意图限制本发明。
剂量的量和间隔可以调整以提供意图治疗效果。应当领会，依照本发明的GPR119激动剂的精确剂量会根据GPR119激动剂、其效力、施用模式、患者的年龄和体重及要治疗的状况的严重程度而变化。各内科医师能根据患者的状况来选择精确配方、施用路径和剂量。举例而言而非限制，依照本发明的GPR119激动剂的量是小于约0.001mg/kg体重、小于约0.005mg/kg体重、小于约0.01mg/kg体重、小于约0.05mg/kg体重、小于约0.1mg/kg体重、小于约0.5mg/kg body体重、小于约1mg/kg体重、小于约5mg/kg体重、小于约10mg/kg体重、小于约50mg/kg体重、或小于约100mg/kg体重的量。
每日或规则地施用本发明的化合物(例如GPR119激动剂、PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控个体中的PYY相关活性有用的化合物)能实现期望结果的量的一个优选剂量范围是0.1-100mg/kg体重。其它优选剂量范围有0.1-30mg/kg体重。其它优选剂量范围有0.1-10mg/kg体重。其它优选剂量范围有0.1-3.0mg/kg体重。例示性的优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。当然，这些每日剂量在一天的过程里以小量周期性地投递或施用。注意，这些剂量范围只是优选范围，而非意图限制本发明。注意，这些剂量只是优选剂量，而且意图限制本发明。
剂量的量和间隔可以个别地调整以提供实现意图治疗效果的依照本发明的GPR119激动剂的血浆水平。剂量间隔还可以使用选定的GPR119激动剂浓度范围的值来确定，以实现意图治疗效果。GPR119激动剂应当使用如下的方案来施用，其在10-90％的时间、优选30-99％的时间、最优选50-90％的时间里将血浆水平维持在选定的GPR119激动剂浓度范围内。在局部施用或选择性摄取的情况中，提供意图治疗效果的GPR119激动剂浓度范围可能与血浆浓度无关。
组合物的施用量当然会取决于所治疗的个体、个体的重量、疾病的严重程度、施用的方式、和主治医师的判断。
一方面，因而，本发明的特征为一种治疗或预防特征为低骨质的状况，诸如骨质疏松或提高骨质的方法，包括对有所需要的个体施用治疗有效量的组合物，其包含一定量的依照本发明的GPR119激动剂或基本上由一定量的依照本发明的GPR119激动剂组成。在某些实施方案中，所述组合物是药物组合物。
一方面，本发明涉及一种治疗或预防特征为低骨质的状况，诸如骨质疏松或提高骨质的方法，包括对有所需要的个体施用治疗有效量的组合物，其包含一定量的依照本发明的GPR119激动剂或基本上由一定量的依照本发明的GPR119激动剂组成的。在一个相关方面，本发明的特征为所述方法，其中所述GPR119激动剂是以足以给出提高个体中PYY水平的效果的量施用的。在某些实施方案中，所述组合物是药物组合物。
本发明的疗法(诸如涉及GPR119激动剂的疗法)在受PYY调控的状况的治疗或预防中是有用的。
在某些实施方案中，受PYY调控的状况是骨相关状况。
在某些实施方案中，骨相关状况是特征为低骨质的状况。在某些实施方案中，特征为低骨质的状况选自下组：骨质减少、骨质疏松、类风湿性关节炎、骨关节炎、牙周病、牙槽骨丢失、截骨术骨丢失、儿童期特发性骨丢失、佩吉特氏病、转移癌所致骨丢失、溶骨性病变、脊柱弯曲、和身高损失。
在某些实施方案中，骨相关状况是骨折。在某些实施方案中，骨折选自下组：外伤性骨折、长期骨折、和骨质疏松性骨折。
在某些实施方案中，骨相关状况是骨病。在某些实施方案中，骨病选自下组：骨质减少、骨质疏松、类风湿性关节炎、骨关节炎、牙周病、牙槽骨丢失、截骨术骨丢失、儿童期特发性骨丢失、佩吉特氏病、转移癌所致骨丢失、溶骨性病变、脊柱弯曲、和身高损失。
在某些实施方案中，骨相关状况是增强的骨愈合或骨生长，其中所述增强的骨愈合或骨生长选自下组：面部重建、上颌骨重建、下颌骨重建、牙周病或拔牙后增强的骨愈合，增强的长骨延长，增强的假体向内生长，和增加的骨连结。
在某些实施方案中，受PYY调控的状况是代谢病症。
在某些实施方案中，代谢病症选自下组：超重、肥胖症、饮食过多、糖尿病(含1型糖尿病和2型糖尿病)、1型糖尿病、2型糖尿病、受损的葡萄糖耐受、胰岛素抵抗、高胰岛素血症、血脂异常、高血压和代谢综合征。
在某些实施方案中，受PYY调控的状况是血管发生相关状况。
在某些实施方案中，血管发生相关状况选自下组：外周动脉病、伤口愈合和缺血。
在某些实施方案中，受PYY调控的状况是缺血相关状况。
在某些实施方案中，缺血相关状况选自下组：脑缺血、中风、缺血性心脏病、心肌梗死、缺血-再灌注损伤、心肌梗死后重塑、心力衰竭、和充血性心力衰竭
在某些实施方案中，受PYY调控的状况是吸收不良性病症。
在某些实施方案中，吸收不良性病症选自下组：短肠综合征、小肠结肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、肠易激综合征、霍乱、和伴有腹泻的病症。
在某些实施方案中，受PYY调控的状况是惊厥性病症。
在某些实施方案中，惊厥性病症是癫痫。
在某些实施方案中，受PYY调控的状况是癌症。
在某些实施方案中，癌症选自下组：胰腺癌、乳腺癌、结肠癌、和Barrett氏腺癌。
在某些实施方案中，受PYY调控的状况是炎性病症。
在某些实施方案中，炎性病症选自下组：动脉粥样硬化、血栓形成、银屑病、银屑病关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、胰岛素抵抗、糖尿病(含1型糖尿病和2型糖尿病)、1型糖尿病、2型糖尿病、代谢综合征、肥胖症、低于正常HDL-胆固醇、高血压、高脂血症、缺血性心脏病、心肌梗死、充血性心力衰竭、骨质疏松、高于正常破骨细胞发生、胰腺炎、间质性肾炎、急性移植物排斥、慢性肝炎、肝脂肪变性、多发性硬化、系统性红斑狼疮(SLE)、再狭窄、缺血-再灌注损伤、变应性炎症、帕金森氏病、阮病毒相关疾病、兴奋毒性损伤、阿尔茨海默氏病、轻度认知受损(MCI)、播散性血管内凝血、感染性休克、炎性肺病、和炎性肠病。在某些实施方案中，炎性肺病选自下组：哮喘、肺气肿、间质性肺病、特发性肺纤维化、梗阻性细支气管炎综合征、慢性阻塞性肺病(COPD)、和肺动脉高血压。在某些实施方案中，炎性肠病选自下组：肠炎、小肠结肠炎、克罗恩氏病、肉芽肿性结肠炎、回肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乙状结肠炎、全结肠炎、和溃疡性直肠炎。
在某些实施方案中，炎性病症选自下组：动脉粥样硬化、血栓形成、胰岛素抵抗、胰腺炎、再狭窄、炎性肺病、和炎性肠病。在某些实施方案中，炎性肺病选自下组：哮喘、肺气肿、和肺动脉高血压。在某些实施方案中，炎性肠病选自下组：肠炎、小肠结肠炎、克罗恩氏病、肉芽肿性结肠炎、回肠炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、乙状结肠炎、全结肠炎、和溃疡性直肠炎。
特征为低骨质的状况包括但不限于骨质减少、骨质疏松、类风湿性关节炎、骨关节炎、牙周病、牙槽骨丢失、截骨术骨丢失、儿童期特发性骨丢失、佩吉特氏病、转移癌所致骨丢失、溶骨性病变、脊柱弯曲、和身高损失。在某些实施方案中，特征为低骨质的状况是骨质疏松。在某些实施方案中，特征为低骨质的状况是骨质疏松。在某些实施方案中，骨质疏松是原发性骨质疏松。在某些实施方案中，骨质疏松是继发性骨质疏松。特征为低骨质的状况还包括但不限于骨质疏松的长期并发症，诸如脊柱弯曲、身高损失和假体手术。应当理解，特征为低骨质的状况可以个别地或以任意组合包括在实施方案中。在某些实施方案中，特征为低骨质的状况是原发性骨质疏松。
在某些实施方案中，需要增加骨质的个体具有低于年轻成年参照均值大于1个(T得分＜-1)、大于或等于1.5个(T得分≤-1.5)、大于或等于2个(T得分≤-2)或大于或等于2.5个(T得分≤-2.5)标准偏差的骨矿物质密度(BMD)。在某些实施方案中，需要增加骨质的个体需要治疗骨折。在某些实施方案中，需要治疗骨折的个体具有外伤性骨折、长期骨折、或骨质疏松性骨折。在某些实施方案中，个体需要治疗骨病。在某些实施方案中，需要治疗骨病的个体具有骨质减少、骨质疏松、类风湿性关节炎、骨关节炎、牙周病、牙槽骨丢失、截骨术骨丢失、儿童期特发性骨丢失、佩吉特氏病、转移癌所致骨丢失、溶骨性病变、脊柱弯曲、或身高损失。在某些实施方案中，需要治疗骨病的个体具有骨质疏松。在某些实施方案中，骨质疏松是原发性骨质疏松。在某些实施方案中，骨质疏松是继发性骨质疏松。能依照本发明治疗的破坏性骨病症包括但不限于骨质疏松、骨关节炎、和溶骨性病变诸如那些由瘤形成疾病、放疗、或化疗引起的。在某些实施方案中，骨质疏松是原发性骨质疏松。在某些实施方案中，骨质疏松是继发性骨质疏松。
本发明的疗法(诸如涉及GPR119激动剂的疗法)在个体中面部重建、上颌骨重建、下颌骨重建、牙周病或拔牙后增强骨愈合，增强长骨延长，增强假体向内生长或增加骨连结中也是有用的。
本发明的疗法(诸如涉及GPR119激动剂的疗法)在调控个体中的PYY相关活性中是有用的。在某些实施方案中，调控PYY相关活性选自下组：
(a)提高血浆PYY；
(b)增加骨质；
(c)减少骨质损失；
(d)增加骨形成；
(e)减少食物摄取；
(f)降低体重；
(g)提高饱感；
(h)提高葡萄糖处理；
(i)降低血浆葡萄糖；
(j)提高血管发生；
(k)降低肠上皮中的分泌；
(l)提高肠上皮中的吸收；和
(m)提高血浆脂连蛋白。
在某些实施方案中，个体是脊椎动物。在某些实施方案中，作为脊椎动物的个体是鱼类、两栖类、爬行类、鸟类或哺乳类。在某些实施方案中，个体或脊椎动物是哺乳动物。在某些实施方案中，作为哺乳动物的个体或脊椎动物是小鼠、大鼠、仓鼠、家兔、猪、犬、猫、马、牛、绵羊、山羊、非人哺乳类动物、非人灵长类动物或人。在某些实施方案中，个体是人。在某些实施方案中，人是绝经后女性或年龄超过50的男性。
在没有进一步详述的情况下，认为本领域技术人员能利用前面的描述来实践本发明至其最完整的程度。给出上面的详述仅仅是为了清楚理解，而且不应当自其推定出不必要的限制，因为本发明范围内的更改对于本领域技术人员可变得显而易见。
贯穿本申请，引用了多种出版物、专利和专利申请。在此通过述及将本申请中提及的这些出版物、专利和专利申请的公开内容完整收入本公开内容。在本文中申请人对出版物、专利、或专利申请的引用并非申请人承认所述出版物、专利、或专利申请为现有技术。
实施例
在没有进一步详述的情况下，认为本领域技术人员能利用前面的描述来实践本发明至其最完整的程度。下面详述的实施例要解释为仅仅是例示性的，而非无论什么以任何方式限制前面的公开内容。本领域技术人员会迅速认识到所述规程的适当变化。
实施例1：在经过转染的HEK293细胞中GPR119受体展现提高cAMP积累的组成性活性
GPR119受体显示出在cAMP测定法中展现组成性活性。cAMP测量是用Flash Plate腺苷酰环化酶试剂盒(NEN Life Science Products，Boston，MA)依照供应商的方案进行的。简言之，使用Lipofectamine(Invitrogen，Carlsbad，CA)用空载体DNA(“载体”)或人GPR119受体表达质粒DNA(“GPR119”)转染HEK293细胞。24小时后，在GIBCO(Gaithersburg，MD)细胞解离缓冲液(产品目录No.13151-014)中收获经过转染的细胞并在测定缓冲液(50％1XPBS/50％刺激缓冲液)中重悬浮。以105个细胞每孔于室温进行温育60分钟。与检测缓冲液中的示踪剂一起再温育2小时后，在Wallac(Gaithersburg，MD)MicroBeta闪烁计数器中对板计数。自每块测定板上包括的标准cAMP曲线外推每个孔的cAMP值。结果呈现于图1。根据图1所示结果，显然在经过转染的HEK293细胞中GPR119受体展现提高cAMP积累的组成性活性。
实施例2：化合物1是GPR119受体的激动剂，如例如经GPR119转染的HEK293细胞中对cAMP积累的刺激所证明的
化合物1(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734001051
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺在cAMP测定法中显示为GPR119受体的激动剂。cAMP测量是用Flash Plate腺苷酰环化酶试剂盒(NEN Life ScienceProducts，Boston，MA)依照供应商的方案进行的。简言之，使用Lipofectamine(Invitrogen，Carlsbad，CA)用空载体DNA(“载体”)或人GPR119受体表达质粒DNA(“GPR119”)转染HEK293细胞。24小时后，在GIBCO(Gaithersburg，MD)细胞解离缓冲液(产品目录No.13151-014)中收获经过转染的细胞并在测定缓冲液(50％1X PBS/50％刺激缓冲液)中重悬浮。将化合物1与105个细胞每孔一起于室温温育60分钟。与检测缓冲液中的示踪剂一起再温育2小时后，在Wallac(Gaithersburg，MD)MicroBeta闪烁计数器中对板计数。自每块测定板上包括的标准cAMP曲线外推每个孔的cAMP值。结果呈现于图2。根据图2所示结果，显然化合物1是GPR119受体的激动剂。
实施例3：在野生型小鼠中施用GPR119激动剂对血浆PYY的影响
将C57BL/6雄性小鼠(大约8周龄；得自Harlan，Indianapolis，IN)空腹18小时，并随机分入八组，每组n＝6。给小鼠口服施用媒介(80％聚乙二醇400/10％Tween 80/10％乙醇)或GPR119激动剂(化合物1；(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734001061
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺)10mg/kg，如图3所示。处理后30分钟，口服投递葡萄糖大丸药3g/kg，并在0分钟(无葡萄糖大丸药)、葡萄糖大丸药后2分钟、5分钟、和10分钟收集血液。通过使用购自Phoenix Pharmaceuticals，Inc.的PYY EIA试剂盒(肽YY(PYY)(大鼠、小鼠、猪、犬)EIA试剂盒，产品目录No.EK-059-03)依照试剂盒中提供的指令测定血浆总PYY(含PYY1-36和PYY3-36)水平。根据图3所示结果，显然在小鼠中施用GPR119激动剂(化合物1)提高血浆总PYY。根据图3所示结果，显然在小鼠中GPR119激动剂(化合物1)刺激血浆总PYY。化合物1与国际专利申请号PCT/US2004/001267(公布为WO 2004/065380)中披露的化合物相同。
实施例4：与野生型小鼠相比，在GPR119缺陷型(敲除)小鼠中施用GPR119激动剂对血浆PYY的影响
将GPR119缺陷型雄性小鼠(Chu et al，Endocrinology(2007)148：2601-2609)和野生型同窝幼仔空腹18小时。给小鼠口服施用媒介(80％聚乙二醇400/10％乙醇/10％Tween 80)或依照本发明的GPR119激动剂(化合物1；(2-氟-4-甲磺酰基-苯基)-{6-[4-(3-异丙基-[1，2，4]
Figure BPA00001252734001062
二唑-5-基)-哌啶-1-基]-5-硝基-嘧啶-4-基}-胺)20mg/kg。处理后30分钟，经眼的眶后静脉收集血液(100微升)(时间0分钟)，接着是葡萄糖大丸药3g/kg(口服)。投递葡萄糖后5分钟，再次收集血液样品(100微升)。离心后收集血浆，并通过使用购自Phoenix Pharmaceuticals，Inc.的PYY EIA试剂盒(肽YY(PYY)(大鼠、小鼠、猪、犬)EIA试剂盒，产品目录No.EK-059-03)依照试剂盒中提供的指令测定血浆总PYY水平。能进一步显示功能性GPR119受体是施用的GPR119激动剂在小鼠中提高血浆总PYY所必需的。化合物1能在野生型小鼠中显示出刺激血浆总PYY，但是在GPR119缺陷型小鼠中不然。化合物1与国际专利申请号PCT/US2004/001267(公布为WO 2004/065380)中披露的化合物相同。
实施例5：在切除了卵巢的大鼠中施用GPR119激动剂对骨质的影响
依照本发明的GPR119激动剂能显示出有效治疗或预防特征为低骨质的状况，诸如骨质疏松，和/或增加个体中的骨质，这使用下文所述切除了卵巢的(OVX)大鼠体内模型(参见例如Bollag et al，Mol Cell Endocrinol(2001)177：35-41)。
20只处女雌性OVX和20只处女非OVX Sprague-Dawley大鼠(150-175g，8周龄)购自Harlan Sprague-Dawley，Inc.(Indianapolis，IN)。用正常商品化团粒饲料Teklab啮齿类动物饲料(1.46％钙)随意喂养动物，自由获得水。将大鼠随机分入四个重量匹配的实验组，并选择来口服接受媒介或依照本发明的GPR119激动剂。每日进行处理，持续6周。
1.对照。10只非OVX大鼠口服施用媒介。
2.对照+处理。10只非OVX大鼠口服施用GPR119激动剂。
3.OVX。10只OVX大鼠口服施用媒介。
4.OVX+处理。10只OVX大鼠口服施用GPR119激动剂。
对大鼠每天称重，并在基线时测量长度，在6周时再次测量长度。在启动处理前及在6周时使用Hologic QDR 1000/W(Waltham，MA)对所有动物实施双能X射线吸收术(DXA)，并使用软件大鼠整体5.53版分析数据。测定脊柱处的骨矿物质密度(BMD)。
测定处理6周后脊椎骨密度的百分比变化。显示了施用GPR119激动剂削弱卵巢切除术对脊椎骨密度的负面影响。卵巢切除术对脊椎骨密度的负面影响的削弱指示所述处理有效治疗或预防特征为低骨质的状况，诸如骨质疏松，和/或增加个体中的骨质。
实施例6：施用GPR119激动剂对骨折愈合的影响
使用下文所述体内测定法，依照本发明的GPR119激动剂能显示出有效治疗骨折。
骨折技术
用氯胺酮麻醉3月龄Sprague-Dawley大鼠。在右胫骨或股骨的近端的前内侧上做1cm切口。下文描述胫骨手术技术。进行切口至骨，并在胫骨粗隆远端近侧4mm、前脊近中2mm处钻1mm孔。用0.8mm不锈钢管实施骨髓腔内插钉术(最大负载36.3N，最大劲度61.8N/mm，在与骨相同的条件下测试)。不铰除骨髓管。使用特别设计的可调整的钝口钳子通过三点弯曲在胫腓关节上方2mm处产生标准化闭合性骨折。为使软组织损伤最小化，小心不使骨折移位。用单丝尼龙缝合线关闭皮肤。在无菌条件下实施操作。插钉术后立即采集所有骨折的放射照片，并排除骨折在规定的骨干区域以外或钉移位的大鼠。将剩余的动物随机分入下面的组，每个时间点每个亚组10-12只动物，供测试骨折愈合用。每日给大鼠口服施用媒介或GPR119激动剂。以介于0.001mg/kg体重与100mg/kg体重之间的量使用GPR119激动剂。处理持续10、20、40和80天。
在10、20、40和80天时，用氯胺酮麻醉来自每组的10-12只大鼠，并通过驱血法处死。通过解剖取出两胫腓骨，并剥离所有软组织。将来自每组5-6只大鼠的骨保存于70％乙醇，供组织学分析用，并将来自每组另外5-6只大鼠的骨保存于缓冲的Ringcr氏溶液(+4℃，pH 7.4)，供所实施的射线照片和生物力学测试用。
组织学分析
用于骨折骨的组织学分析的方法先前已有记载(Mosekilde and Bak，Bone(1993)14：19-27)。简言之，在骨折线每侧8mm处锯下骨折部位，在甲基丙烯酸甲酯中包埋脱钙(undecalcified)，并在Reichert-Jung Polycut切片机上切出额切片，厚度8μm。Masson-Trichome染色的额中切片(包括胫骨和腓骨二者)用于显现对有和无处理的情况中骨折愈合的细胞和组织应答。Sirius红染色的切片用于展现骨痂结构的特征及区分骨折部位的编织骨与板层骨。实施下面的测量：(1)骨折缺口一作为骨折中骨皮质末端之间的最短距离测量，(2)骨痂长度和骨痂直径，(3)骨痂的总骨体积面积，(4)骨痂区域内部的单位组织面积的骨组织，(5)骨痂中的纤维组织，和(6)骨痂中的软骨面积。
生物力学分析
用于生物力学分析的方法先前已有记载(Bak and Andreassen，CalcifTissue Int(1989)45：292-297)。简言之，在生物力学测试之前采集所有骨折的射线照片。通过破坏性三点或四点弯曲规程来分析正在愈合的骨折的力学特性。测定最大负载、劲度、最大负载时的能量、最大负载时的挠度(deflection)、和最大应力。
实施例7：内源人GPR119的全长克隆
使用GPR119特异性引物5’-GTCCTGCCACTTCGAGACATGG-3’(SEQID NO：3；有义，ATG作为起始密码子)5’-GAAACTTCTCTGCCCTTACCGTC-3’(SEQ ID NO：4；反义，终止密码子的3’)和作为模板的人基因组DNA通过PCR克隆编码内源人GPR119的多核苷酸。TaqPlus PrecisionTM DNA聚合酶(Stratagene)用于通过下述循环的扩增，第2步至第4步重复35次：94℃，3分钟；94℃，1分钟；58℃，1分钟；72℃，2分钟；72℃，10分钟。分离预测大小的1.0Kb PCR片段，克隆入pCRII-TOPOTM载体(Invitrogen)，并使用T7DNA测序酶试剂盒(Amersham)完全测序。见核酸序列SEQ ID NO：1和推导氨基酸序列SEQ ID NO：2。
实施例8：受体表达
虽然本领域有多种细胞可用于表达G蛋白偶联受体，但是最优选利用真核细胞。在某些实施方案中，利用哺乳动物细胞或载黑色素细胞。下面是例示性的；相信本领域普通技术人员有能力确定对技术人员的需要优先有益的那些技术。见例如下文实施例12，其涉及载黑色素细胞。
a.瞬时转染
第1天，以6×106/10cm皿将293细胞涂板。第2天，准备2个反应管(每个管遵循的比例依照板)：A管通过在0.5ml无血清的DMEM(Gibco BRL)中混合4μg DNA(例如pCMV载体、具有受体cDNA的pCMV载体、等)来制备；B管通过在0.5ml无血清的DMEM中混合24μl lipofectamine(Gibco BRL)来制备。通过倒置(数次)来混合A和B管，接着于室温温育30-45分钟。该混合称作“转染混合物”。将涂板的293细胞用1XPBS清洗，接着添加5ml无血清的DMEM。将1ml转染混合物添加至细胞，接着于37℃/5％CO2温育4小时。通过吸取除去转染混合物，接着添加10ml DMEM/10％胎牛血清。将于37℃/5％CO2温育。温育48小时后，收获细胞并用于分析。
b.稳定的细胞系
大约12×106个293细胞在15cm组织培养板上涂板。在含有10％胎牛血清和1％丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、和抗生素的DME高葡萄糖培养基中生长。293细胞涂板后24小时(或约80％汇合时)，使用12μg DNA转染细胞(例如具有受体cDNA的pCMV-neor载体)。将12μg DNA与60μl lipofectamine和2ml无血清的DME高葡萄糖培养基组合。自板吸走培养基，并将细胞用无血清的培养基清洗一次。将DNA、lipofectamine、和培养基混合物与10ml无血清的培养基一起添加至板。于37℃温育4-5小时后，吸走培养基并添加25ml含血清的培养基。转染后24小时，再次吸走培养基，并添加新鲜的含血清的培养基。转染后48小时，吸走培养基并添加含血清的培养基，其中含有终浓度的遗传霉素(G418药物)。将大约12×106个293细胞在15cm组织培养板上涂板。在含有10％胎牛血清和1％丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、和抗生素的DME高葡萄糖培养基中生长。293细胞涂板后24小时(或约80％汇合时)，使用12μg DNA转染细胞(例如具有受体cDNA的pCMV-neor载体)。将12μg DNA与60μllipofectamine和2ml无血清的DME高葡萄糖培养基组合。自板吸走培养基，并将细胞用无血清的培养基清洗一次。将DNA、lipofectamine、和培养基混合物与10ml无血清的培养基一起添加至板。于37℃温育4-5小时后，吸走培养基并添加25ml含血清的培养基。转染后24小时，再次吸走培养基，并添加新鲜的含血清的培养基。转染后48小时，吸走培养基并添加含血清的培养基，其中含有终浓度为500μg/ml的遗传霉素(G418药物)。经过转染的细胞现在经历选择，以选出含有G418抗性基因的阳性转染细胞。在进行选择时每4-5天更换培养基。在选择期间，培养细胞以创建稳定集合，或分拆以进行稳定克隆选择。
实施例9：用于对候选化合物筛选例如GPR119激动剂的测定法
多种办法可用于对候选化合物筛选例如GPR119激动剂。下面是例示性的；相信本领域普通技术人员有能力确定对技术人员的需要优先有益的那些技术。用于对化合物筛选G蛋白偶联受体激动剂的测定法是熟练技术人员公知的(参见例如国际申请WO 02/42461)。
1.膜结合测定法：[35S]GTPγS测定法
当G蛋白偶联受体处于其活性状态时，或是作为配体结合的结果或是作为组成性活化的结果，受体偶联至G蛋白并刺激GDP释放和后续GTP结合至G蛋白。G蛋白α亚基-受体复合物起GTP酶的作用并缓慢水解GTP成GDP，在这个点时受体在正常情况中被灭活。活化的受体继续用GDP交换GTP。不可水解的GTP类似物[35S]GTPγS能用于展现[35S]GTPγS对表达活化的受体的膜的增强的结合。使用[35S]GTPγS结合来测量活化的优点在于：(a)它一般性适用于所有G蛋白偶联受体；(b)它接近膜表面，使之不太可能挑出影响细胞内级联的分子。
该测定法利用G蛋白偶联受体刺激[35S]GTPγS结合表达相关受体的膜的能力。该测定法是一般性的，而且适用于所有G蛋白偶联受体处的药物开发。
膜制备
在一些实施方案中，优选如下制备包含本发明的G蛋白偶联受体且用于在候选化合物中鉴定例如所述受体的激动剂的膜：
a.材料
“膜刮擦缓冲液”由20mM HEPES和10mM EDTA，pH 7.4构成；“膜清洗缓冲液”由20mM HEPES和0.1mM EDTA，pH 7.4构成；“结合缓冲液”由20mM HEPES、100mM NaCl、和10mM MgCl2，pH 7.4构成。
b.规程
所有材料贯穿整个规程会保持在冰上。首先，会自汇合的细胞单层吸走培养基，接着用10ml冷PBS漂洗，接着吸走。此后，会添加5ml膜刮擦缓冲液以刮擦细胞；这接着会是转移细胞提取物入50ml离心管(于4℃以20,000rpm离心17分钟)。此后，会吸走上清液，并将团粒重悬于30ml膜清洗缓冲液，接着于4℃以20,000rpm离心17分钟。然后会吸走上清液，并将团粒重悬于结合缓冲液。然后这会使用Brinkman PolytronTM匀浆器匀浆(15-20秒爆发，直至所有材料悬浮)。这在本文中称作“膜蛋白质”。
Bradford蛋白质测定法
匀浆后，会使用Bradford蛋白质测定法测定膜的蛋白质浓度(可以将蛋白质稀释至约1.5mg/ml，等分并冷冻(-80℃)，供将来使用；当冷冻时，使用的方案会是如下：在测定那天，于室温融化冷冻的膜蛋白质，接着漩涡震动，然后用Polytron以约12x1,000rpm匀浆约5-10秒；注意，对于多份制备物，在不同制备物的匀浆之间应彻底清洁匀浆器)。
a.材料
结合缓冲液(按照上文)；Bradford染料试剂；会遵循制造商的指令利用Bradford蛋白质标准品(Biorad，产品目录No.500-0006)。
b.规程
会准备两份管，一个包括膜，一个作为对照“空白”。每个含有800μl结合缓冲液。此后，会向每个管添加10μl Bradford蛋白质标准品(1mg/ml)，然后会只向一个管添加10μl膜蛋白质(不是空白)。此后，会向每个管添加200μlBradford染料试剂，接着每个漩涡震动。5分钟后，会将管再次漩涡震动，并会将其中的材料转移至比色杯。然后会使用CECIL 3041分光光度计于波长595对比色杯读数。
鉴定测定法
a.材料
GDP缓冲液由37.5ml结合缓冲液和2mg GDP(Sigma，产品目录No.G-7127)组成，接着在结合缓冲液中连续稀释以获得0.2μM GDP(每个孔中的GDP终浓度为0.1μM GDP)；包含候选化合物的每个孔具有200μl的终体积，由100μl GDP缓冲液(终浓度，0.1μM GDP)、50μl结合缓冲液中的膜蛋白质、和50μl结合缓冲液中的[35S]GTPγS(0.6nM)(每10ml结合缓冲液有2.5μl[35S]GTPγS)和组成。
b.规程
会优选使用96孔板格式来筛选候选化合物(这些可冷冻于-80℃)。会将膜蛋白质(或具有排除靶GPCR的表达载体的膜，作为对照)简短匀浆直至悬浮。然后会使用上文所列Bradford蛋白质测定法测定蛋白质浓度。然后会将膜蛋白质(和对照)在结合缓冲液中稀释至0.25mg/ml(测定终浓度，12.5μg/孔)。此后，将100μl GDP缓冲液添加至Wallac ScintistripTM(Wallac)的每个孔。然后会使用5ul针式工具(pin-tool)来转移5μl候选化合物入此类孔(即200μl测定总体积中有5μl为1∶40比例，使得候选化合物的筛选终浓度为10μM)。再次，为了避免污染，每个转移步骤后，针式工具应当在包含水(1X)、乙醇(1X)和水(2X)的三个水池中漂洗-每次漂洗后应当自工具甩掉过量的液体并用纸和kimwipe弄干。此后，会将50μl膜蛋白质添加至每个孔(还利用包含没有靶GPCR的膜的对照孔)，并于室温预温育5-10分钟。此后，会将50μl结合缓冲液中的[35S]GTPγS(0.6nM)添加至每个孔，接着于室温在摇床上温育60分钟(再次，在此实施例中，给板覆盖金属箔)。然后会通过将板于22℃以4000RPM旋转15分钟来终止测定。然后会用8道复合管吸板并用板盖密封。然后会在1450上使用设置“Prot.#37”(遵照制造商的指令)对板读数。
2.腺苷酰环化酶测定法
可改良为基于细胞的测定法设计的Flash PlateTM腺苷酰环化酶试剂盒(New England Nuclear；产品目录No.SMP004A)，供与粗制质膜一起使用。Flash Plate的孔可含有闪烁涂层，其还含有识别cAMP的特异性抗体。孔中生成的cAMP可通过对放射性cAMP示踪剂结合cAMP抗体的直接竞争来定量。下面充当测量表达受体的细胞中cAMP水平变化的简短方案。
在某些实施方案中，依照下面的方案利用改良的Flash PlateTM腺苷酰环化酶试剂盒(New England Nuclear；产品目录No.SMP004A)在候选化合物中鉴定例如GPR119激动剂。
转染后大约3天收获经本发明的G蛋白偶联受体转染的细胞。通过将悬浮的细胞在含有20mM HEPES，pH 7.4和10mM MgCl2的缓冲液中匀浆来制备膜。使用Brinkman PolytronTM在冰上实施匀浆大约10秒。将所得匀浆物于4℃以49,000Xg离心15分钟。然后将所得团粒重悬于含有20mM HEPES，pH 7.4和0.1mM EDTA的缓冲液，匀浆10秒，接着于4℃以49,000xg离心15分钟。然后将所得团粒保存于-80℃直至使用。在直接鉴定筛选那天，将膜团粒于室温缓慢融化，重悬于含有20mM HEPES，pH 7.4和10mM MgCl2的缓冲液，以产生0.60mg/ml的蛋白质终浓度(将重悬浮的膜放置在冰上直至使用)。
依照制造商的指令制备和维持cAMP标准品和检测缓冲液(在11ml检测缓冲液中包含2μCi示踪剂([125I]cAMP(100μl)))。为筛选新鲜制备测定缓冲液，含有20mM HEPES，pH 7.4、10mM MgCl2、20mM磷酸肌酸(Sigma)、0.1单位/ml肌酸磷酸激酶(Sigma)、50μM GTP(Sigma)、和0.2mM ATP(Sigma)；然后将测定缓冲液保存在冰上，直至使用。
优选的是，与40μl膜蛋白质(30μg/孔)和50μl测定缓冲液一起将候选化合物添加至例如96孔板的孔(3μl/孔；12μM测定终浓度)。然后在温和摇动中将此化合物于室温温育30分钟。
温育后，将100μl检测缓冲液添加至每个孔，接着温育2-24小时。然后在Wallac MicroBetaTM读板仪中使用“Prot.#31”(遵照制造商的指令)对板计数。
3.CRE-Luc报告物测定法
将293和293T细胞在96孔板上以2×104个细胞每孔的密度涂板，并次日使用Lipofectamine试剂(BRL)依照制造商的指令转染。如下为每个6项转染制备DNA/脂质混合物：将100μl DMEM中的260ng质粒DNA与100μl DMEM中的2μl脂质温和混合(260ng质粒DNA由200ng 8xCRE-Luc报告物质粒、50ng包含本发明的G蛋白偶联受体的pCMV或单独的pCMV、和10ng GPRS表达质粒(pcDNA3(Invitrogen)中的GPRS)组成。如下制备8XCRE-Luc报告物质粒：通过在pβgal基础载体(Clontech)中的BglV-HindIII位点处克隆大鼠促生长素抑制素启动子(-71/+51)获得载体SRIF-β-gal。通过PCR自腺病毒模板AdpCF126CCRE8[参见Suzuki et al.，Hum Gene Ther(1996)7：1883-1893；通过述及将其公开内容完整收入本文)获得8个拷贝的cAMP应答元件并在Kpn-BglV位点处克隆入SRIF-β-gal载体，产生8xCRE-β-gal报告物载体。通过在HindIII-BamHI位点处用自pGL3基础载体(Promega)获得的萤光素酶基因替换8xCRE-β-gal报告物载体中的β-半乳糖苷酶基因，生成8xCRE-Luc报告物质粒。于室温温育30分钟后，将DNA/脂质混合物用400μl DMEM稀释，并将100μl稀释的混合物添加至每个孔。在细胞培养温箱中温育4小时后，将100μl含10％FCS的DMEM添加至每个孔。次日，给经过转染的细胞更换200μl/孔含10％FCS的DMEM。8小时后，用PBS清洗一次后，给孔更换100μl/孔无酚红的DMEM。次日使用LucLiteTM报告物基因测定试剂盒(Packard)遵循制造商的指令测量萤光素酶活性，并在1450MicroBetaTM闪烁和发光计数器(Wallac)上读数。
实施例10：用于例如GPR119激动剂活性的全细胞腺苷酰环化酶测定法
用Flash PlateTM腺苷酰环化酶试剂盒(New England Nuclear)依照供应商的方案进行环AMP测量。将HEK293细胞在15-cm组织培养皿中以12×106个细胞每皿在常规生长培养基(DMEM/10％FBS)中涂板。次日，用lipofectamine(Invitrogen，Carlsbad，CA)依照制造商的方案将10μg空载体DNA或表达质粒DNA转染入细胞。培养24小时后，在GIBCO细胞解离缓冲液(产品目录#13151-014)中收获经过转染的细胞，通过以1，100rpm离心5分钟来形成团粒，并小心重悬浮入适宜体积的测定缓冲液(50％1xPBS和50％刺激缓冲液)以给出2×106个细胞/ml的最终细胞计数。在50μl测定缓冲液中以所示期望测定浓度准备测试化合物，并转移入96孔Flash Plate的孔。然后添加上文制备的细胞悬浮液(50μl每孔)。于室温温育60分钟后，然后将100μl含有示踪剂[125I]-cAMP的检测混合物添加至孔。将板再温育2小时，接着在WallacMicroBeta闪烁计数器中计数。自每块测定板上包括的标准cAMP曲线外推cAMP/孔的值。
经过GPR119转染的HEK293细胞中cAMP水平超出用空载体转染的HEK293细胞的升高指示测试化合物是刺激GPR119受体功能性的化合物。
实施例11：用于直接cAMP测量的均质时间解析荧光
Figure BPA00001252734001151
测定法
使用用于直接cAMP测量的
Figure BPA00001252734001152
测定法(Gabriel et al，ASSAY and DrugDevelopment Technologies，1：291-303，2003)和经GPR119受体稳定转染的重组CHO-K1细胞对化合物筛选刺激GPR119受体的化合物，例如GPR119受体的激动剂。使用用于直接cAMP测量的
Figure BPA00001252734001153
测定法(Gabriel et al，ASSAY andDrug Development Technologies，1：291-303，2003)和经GPR119受体稳定转染的重组CHO-K1细胞对化合物筛选GPR119受体的激动剂。CHO-K1细胞得自
Figure BPA00001252734001154
(Manassas，VA；产品目录#CCL-61)。作为提高cAMP浓度的化合物，在用于直接cAMP测量的
Figure BPA00001252734001155
测定法中检测GPR119受体的激动剂。
Figure BPA00001252734001156
测定法还用于测定GPR119受体激动剂的EC50值。
测定原理：
Figure BPA00001252734001157
测定试剂盒购自Cisbio-US，Inc.(Bedford，MA；产品目录#62AM4PEC)。由该试剂盒支持的
Figure BPA00001252734001158
测定法是由CHO-K1细胞生成的内源cAMP与用染料d2标记的示踪剂cAMP之间的竞争性免疫测定法。通过用Cryptate标记的单克隆抗cAMP抗体来显现示踪剂结合。特定信号(即荧光共振能量转移，FRET)与标准品或样品中未标记cAMP的浓度成反比。
标准曲线：依照试剂盒制造商的指令计算测定法中包括的标准品(0.17至712nM cAMP)的荧光比(665nm/620nm)并用于生成AMP标准曲线。计算样品(测试化合物或化合物缓冲液)的荧光比并用于通过参照cAMP标准曲线推导相应cAMP浓度。
测定设置：以384孔板格式(ProxiPlates；PerkinElmer，Fremont，CA；产品目录#6008280)在20μl总体积每孔中使用两步方案基本上依照试剂盒制造商的指令进行
Figure BPA00001252734001159
测定法。向每个实验孔转移3000个重组CHO-K1细胞5μl测定缓冲液(含有氯化钙和氯化镁的磷酸盐缓冲盐水(Invitrogen，Carlsbad，CA；产品目录#14040)，补充有IBMX(100μM)和咯利普兰(10μM)(磷酸二酯酶抑制剂；Sigma-Aldrich，St.Louis，MO；分别为产品目录#I5879和产品目录#R6520)和0.1％牛血清清蛋白(BSA)级分V(Sigma-Aldrich；产品目录#A3059))，接着是含有测试化合物的5μl测定缓冲液或5μl测定缓冲液。然后将板于室温温育1小时。然后依照试剂盒制造商的指令向每个孔添加5μl含有cAMP-d2偶联物的裂解缓冲液和5μl含有Cryptate偶联物的裂解缓冲液。然后将板于室温进一步温育1小时，此后对测定板读数。
测定读出：使用PHERAstar(BMG LABTECH Inc.，Durham，NC)或EnVisionTM(PerkinElmer，Fremont CA)微量板读数仪进行
Figure BPA00001252734001161
读出。
实施例12：用于例如GPR119激动剂活性的载黑色素细胞测定法
如Potenza et al[Pigment Cell Research(1992)5：372-378]报告的那样培养维持载黑色素细胞，并使用电穿孔用编码GPR119受体(GPR119；例如人GPR119，
Figure BPA00001252734001162
登录号AAP72125及其等位基因)的表达载体转染。电穿孔后，将经过转染的细胞在96孔板中涂板供测定用。然后让细胞生长48小时以自电穿孔规程恢复及达到最大受体表达水平。
测定那天，将细胞上的生长培养基更换成含有10nM褪黑激素的无血清缓冲液。褪黑激素经载黑色素细胞中的内源Gi偶联GPCR起作用来降低细胞内cAMP水平。响应降低的cAMP水平，载黑色素细胞将它们的色素转移至细胞中央。这样的净效果是于600-650nM测量的，孔中细胞单层的吸光度读数显著降低。
在褪黑激素中温育1小时后，细胞变成色素完全聚集的。在这个点时，收集基线吸光度读数。然后将测试化合物的连续稀释物添加至板，而且具有GPR119激动剂活性的化合物引起细胞内cAMP水平升高。响应这些升高的cAMP水平，载黑色素细胞将它们的色素转移回细胞边缘。1小时后，受到刺激的细胞是色素完全散布的。处于散布状态的细胞单层在600-650nm范围中吸收多得多的光。与基线读数相比测量到的吸光度升高容许对受体刺激程度定量及绘制剂量-响应曲线。
涉及载黑色素细胞测定法的材料和方法见美国专利No.5,462,856和6,051,386，通过述及将每一篇的公开内容完整收入本文。
经GPR119转染的载黑色素细胞中色素散布超出用空载体转染的载黑色素细胞的增多指示测试化合物是刺激GPR119受体功能性的化合物。
用于在化合物中鉴定GPR119激动剂的其它测定法对于熟练技术人员是显而易见的(见例如上文实施例9)。
实施例13：用于例如GPR119激动剂活性的酵母报告物测定法
基于酵母细胞的报告物测定法先前在文献中已有记载(例如see Miret etal，J Biol Chem(2002)277：6881-6887；Campbell et al，Bioorg Med Chem Lett(1999)9：2413-2418；King et al，Science(1990)250：121-123；WO 99/14344；WO00/12704；及US 6,100,042)。简言之，使用多种技术，改造酵母细胞，使得内源酵母G-α(GPA1)被删除并用所构建的G蛋白嵌合物替换。另外，内源酵母α-细胞GPCR，Ste3被删除，以容许同源表达所选择的哺乳动物GPCR。在酵母中，在真核细胞中保守的信息素信号转导途径元件(例如丝裂原活化的蛋白质激酶途径)驱动Fus1表达。通过替换在Fus1启动子(Fus1p)控制下的β-半乳糖苷酶(LacZ)，开发了一种系统，由此受体活化导致酶促读出。
通过Agatep等人记载的醋酸锂法(Agatep et al，1998，Transformation ofSaccharomyces cerevisiae by the lithium acetate/single-stranded carrierDNA/polyethylene glycol(LiAc/ss-DNA/PEG)protocol.Technical Tips Online，Trends Journals，Elsevier)的改良转化酵母细胞。简言之，将酵母细胞在酵母胰蛋白胨板(YT)上培养过夜。将载体单链DNA(10μg)、两种Fus1p-LacZ报告物质粒(一种带URA选择标志，一种带TRP)各2μg、2μg酵母表达载体(2μg复制起点)中的GPR119(例如人受体)和醋酸锂/聚乙二醇/TE缓冲液转移入Eppendorf管。含有受体的酵母表达质粒/无受体对照具有LEU标志。将酵母细胞接种入此混合物，而且反应于30℃进行60分钟。然后将酵母细胞于42℃热休克15分钟。然后将细胞清洗并在选择板上涂布。选择板是合成确定酵母培养基减LEU、URA和TRP(SD-LUT)。于30℃温育2-3天后，然后在LacZ测定法中测试在选择板上生长的菌落。
为了实施用于β-半乳糖苷酶的荧光测定酶测定法，将携带本发明GPR119受体的酵母细胞在液体SD-LUT培养基中培养过夜至不饱和浓度(即细胞仍在分裂且尚未达到稳定期)。将它们在新鲜培养基中稀释至最佳测定浓度，并将90μl酵母细胞添加至96孔黑色聚苯乙烯板(Costar)。将在DMSO中溶解并在10％DMSO溶液中稀释至10X浓度的测试化合物添加至板，并将板于30℃放置4小时。4小时后，将β-半乳糖苷酶的底物添加至每个孔。在这些实验中，使用荧光素di(β-D-吡喃半乳糖苷)(FDG)，即释放荧光素的酶的底物，容许荧光测定读出。添加20μl每孔500μM FDG/2.5％Triton X100(洗涤剂是使得细胞可渗透所必需的)。将细胞与底物一起温育60分钟后，添加20μl每孔1M碳酸钠以终止反应及增强荧光信号。然后在荧光计中于485/535nm对板读数。
经GPR119转化的酵母细胞中荧光信号超出用空载体转化的酵母细胞的升高指示测试化合物是刺激GPR119受体功能性的化合物(例如作为GPR119的激动剂或部分激动剂的化合物)。在某些实施方案中，本发明的化合物给出荧光信号超出背景信号(在单独的媒介存在下获得的信号)的升高。
实施例14：放射性标记的化合物
在某些实施方案中，放射性标记已知是本发明G蛋白偶联受体的配体的化合物。本文所述放射性标记的化合物可以在筛选测定法中用于鉴定/评估化合物。笼统的说，通过其降低放射性标记的配体与受体之间复合物形成的能力，可以对新合成的或鉴定的化合物(即测试化合物)评估其降低放射性标记的已知配体结合受体的能力。可以掺入本发明化合物的合适放射性核素包括但不限于3H(也称作T)、11C、14C、18F、125I、82Br、123I、124I、125I、131I、75Br、76Br、15O、13N、35S和77Br。掺有3H、14C、125I、131I、35S或82Br的化合物一般会是最有用的。
应当理解，“放射性标记的”化合物指掺有至少一个放射性核素的化合物。在一些实施方案中，所述放射性核素选自下组：3H、14C、125I、35S和82Br。在一些实施方案中，所述放射性核素3H或14C。此外，应当理解，已知是本发明G蛋白偶联受体的配体的化合物中呈现的所有原子可以是此类原子的最普遍存在的同位素或更稀有的放射性同位素或非放射性同位素。
用于将放射性同位素掺入有机化合物的合成方法(包括那些适用于已知是本发明G蛋白偶联受体的配体的那些化合物的)是本领域公知的，而且包括将活性水平的氚掺入靶分子包括：A.用氚气催化性还原-此规程在正常情况中产生高比活性产物且需要卤化或不饱和的前体。B.用硼氢化钠[3H]还原-此规程相当便宜且需要含有可还原的官能团的前体，诸如醛、酮、内酯、酯、等等。C.用氢化铝锂[3H]还原-此规程以几乎理论比活性提供产物。它也需要含有可还原的官能团的前体，诸如醛、酮、内酯、酯、等等。D.氚气暴露标记-此规程涉及在合适催化剂存在下将含有可交换质子的前体暴露于氚气。E.使用甲基碘[3H]的N-甲基化-通过用高比活性甲基碘(3H)处理适宜的前体，此规程通常用于制备O-甲基或N-甲基(3H)产物。这种方法一般容许高比活性，诸如约80-87Ci/mmol。
用于将活性水平的125I掺入靶分子的合成方法包括：A.Sandmeyer等等反应-此规程将芳基或杂芳基胺转变成重氮盐，诸如四氟硼酸盐，随后使用Na125I转变成125I标记的化合物。Zhu，D.-G.及其同事在J.Org.Chem.2002，67，943-948中报告了一种代表性的规程。B.酚的邻位125碘化-此此规程容许在酚的邻位掺入125I，如Collier，T.L.及其同事在J.Labelled Compd Radiopharm.1999，42，S264-S266中报告的。C.芳基和杂芳基溴化物与125I交换-此方法一般是两步工艺。第一步是使用例如Pd催化的反应(即Pd(Ph3P)4]或经由芳基或杂芳基锂在三烃基锡卤化物或六烃基二锡[例如(CH3)3SnSn(CH3)3)存在下将芳基或杂芳基溴化物转变成相应的三烃基锡中间体。Bas，M.-D.及其同事在J.Labelled Compd Radiopharm.2001，44，S280-S282中报告了一种代表性的规程。
上述技术意图是例示性的而非限制性的。用于放射性标记已知是本发明G蛋白偶联受体的配体的化合物的其它技术是熟练技术人员公知的。
实施例15：受体结合测定法
可以对测试化合物评估其降低已知是本发明G蛋白偶联受体的配体的化合物与受体之间复合物形成的能力。在某些实施方案中，已知配体是放射性标记的。放射性标记的已知配体可以在筛选测定法中用于鉴定/评估化合物。笼统的说，通过其降低放射性标记的已知配体与受体之间复合物形成的能力，可以对新合成的或鉴定的化合物(即测试化合物)评估其降低放射性标记的已知配体结合受体的能力。
在测试化合物存在下放射性标记的已知配体的特异性结合水平小于在测试化合物缺失下放射性标记的已知配体的特异性结合水平指示在测试化合物存在下形成的所述放射性标记的已知配体与所述受体之间的复合物比在测试化合物缺失下少。
用于检测已知是本发明G蛋白偶联受体的配体的化合物与受体之间的复合物的测定方案
A.受体的制备
使用60μl Lipofectamine(每15-cm皿)用10μg包含编码本发明G蛋白偶联受体的多核苷酸的表达载体瞬时转染293细胞。将经过瞬时转染的细胞在皿中培养24小时(75％汇合)，其中更换一次培养基，并用10ml/皿Hepes-EDTA缓冲液(20mM Hepes+10mM EDTA，pH 7.4)取出。然后将细胞在Beckman Coulter离心机中以17,000rpm(JA-25.50转子)离心20分钟。随后，将团粒重悬于20mM Hepes+1mM EDTA，pH 7.4，并用50-ml Dounce匀浆器匀浆并再次离心。取出上清液后，将团粒保存于-80℃，直至在结合测定法中使用。当在测定法中使用时，将膜在冰上融化20分钟，然后添加10mL温育缓冲液(20mM Hepes，1mM MgCl2，100mM NaCl，pH 7.4)。然后将膜漩涡震动以重悬浮粗制膜团粒并用Brinkmann PT-3100Polytron匀浆器以设置6匀浆15秒。使用BRL Bradford蛋白质测定法测定膜蛋白质的的浓度。
B.结合测定法
对于总的结合，将总体积50μl适当稀释的膜(在含有50mM Tris HCl(pH7.4)、10mM MgCl2、和1mM EDTA的测定缓冲液中稀释；5-50μg蛋白质)添加至96孔聚丙烯微量滴定板，接着添加100μl测定缓冲液和50μl放射性标记的已知配体。对于非特异性结合，添加50μl而非100μl测定缓冲液，而且在添加50μl所述放射性标记的已知配体之间添加另外50μl 10uM未放射性标记的所述已知配体。然后将板于室温温育60-120分钟。如下终止结合反应，即用Brandell 96孔板收集器将测定板经由Microplate Devices GF/C Unifilter过滤板过滤，接着用冷的含有0.9％NaCl的50mM Tris HCl，pH 7.4清洗。然后密封过滤板的底部，向每个孔添加50μl Optiphase Supermix，密封板的顶部，并在Trilux MicroBeta闪烁计数器中对板计数。为了确定在测试化合物存在下形成的所述放射性标记的已知配体与所述受体之间复合物是否较少，不是添加100μl测定缓冲液，而是向适宜的孔添加100μl适当稀释的所述测试化合物，接着添加50μl所述放射性标记的已知配体。
C.计算
首先在10、1和0.1μM测定测试化合物，然后是选择的浓度范围，使得中间剂量为引起放射性标记的已知配体的结合受到约50％抑制(即IC50)。在测试化合物缺失下的特异性结合(BO)总结合(BT)减去非特异性结合(NSB)的差，而且，类似的，特异性结合(在测试化合物存在下)(B)是置换结合(BD)减去非特异性结合(NSB)的差。自抑制应答曲线，即％B/BO对测试化合物浓度的logit-log图确定IC50。
通过Cheng和Prustoff换算来计算Ki：
Ki＝IC50/(1+[L]/KD)
其中[L]是测定法中使用的放射性标记的已知配体的浓度，而KD是在相同结合条件下独立测定的放射性标记的已知配体的解离常数。
实施例16：肠内分泌细胞中或自含L细胞的肠区衍生的组织的细胞中或能够分泌PYY的细胞中GPR119激动剂对PYY分泌的影响
使用本文所述体外测定法，依照本发明的GPR119激动剂能在肠内分泌细胞(例如肠内分泌细胞系)中或在自含L细胞的肠区衍生的组织(例如十二指肠、空肠、回肠、结肠或直肠组织)中的细胞诸如肠内分泌细胞中[参见例如Lundberg et al，PNAS USA(1982)79：4471-4475；Adrian et al，Gastroenterol(1985)89：1070-1077；Ekblad et al，Peptides(2002)23：251-261；Ueno et al，Regul Pept(2008)145：12-16)]或在能够分泌PYY的细胞中显示出刺激PYY分泌。在第1天在完全培养基(DMEM/10％FBS)中将肠内分泌细胞或自含L细胞的肠区衍生的组织中的细胞诸如肠内分泌细胞在24孔板中涂板。在第2天用低葡萄糖培养基(DMEM/3mM葡萄糖/10％FBS)更换上述培养基。在第3天将细胞用1xPBS清洗两次。将清洗后的细胞用媒介或用各种浓度的GPR119激动剂(例如在范围1nM至20μM中)或用作为阳性对照的福斯高林(1μM)(在含15mM葡萄糖的无血清DMEM中)在组织培养温箱中于37℃和5％CO2刺激1小时。然后收集上清液并通过以500g和4℃离心5分钟来澄清。使用购自Phoenix Pharmaceuticals，Inc.的PYY EIA试剂盒(肽YY(PYY)(大鼠、小鼠、猪、犬)EIA试剂盒，产品目录No.EK-059-03)依照试剂盒中提供的指令测定释放入上清液的总PYY。
明确涵盖能够分泌PYY的细胞包括但不限于肠内分泌细胞，正如可以是肠内分泌细胞系、自含L细胞的肠区衍生的组织中的细胞诸如可以是肠内分泌细胞、胰岛的α细胞、自胰岛衍生的细胞系诸如可以是RINm5F(Bargsten，Arch Histol Cytol(2004)67：79-94)、来自延髓的组织中的细胞诸如神经元细胞、神经元细胞系和重组细胞。
实施例17：小鼠中GPR119激动剂对动脉粥样硬化形成的体内影响
用正常饲料喂养雄性apoE-/-小鼠(Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)。载脂蛋白E缺陷型(apoE-/-)小鼠是一种已建立的动脉粥样硬化动物模型，在用饲料喂养时形成广泛的动脉粥样硬化损伤[Zhang et al，Science(1992)258：468-471]。在12周龄时，经每天一次口服施用来施用GPR119激动剂或单独的媒介。GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
施用GPR119激动剂后14天，用腹膜内注射戊巴比妥(50mg/kg)麻醉小鼠，并收获含有主动脉窦和主动脉弓的心脏。在实验开始时还自未操作的小鼠收获心脏。三个实验组每个使用10只小鼠。
在10％福尔马林中固定过夜后在Optimal Cutting Temperature(OCT；Sakura Finetechnical Co.，Ltd)化合物中包埋的主动脉窦的冷冻横切片(10μM厚)在载玻片上封固。为了分析斑大小，用油性红O对来自每只小鼠的3张切片(相距100μM)染色。用图像分析计算机软件对损伤大小和损伤中脂质微滴的直径定量，并确定均值。将施用GPR119激动剂的组的均值与施用单独的媒介的组的均值比较。
数据呈现为均值±SEM，而且通过Student氏t检验或Mann-Whitney U检验来分析，这取决于它们的分布型式。P＜0.05的值视为统计学显著的。参见例如Okamoto et al，Circulation(2002)106：2767-2770。
这些结果能证明GPR119激动剂是动脉粥样硬化形成的抑制剂。
明确涵盖在其它实施方案中，使用非侵入性体内技术[参见例如Fayad etal，Circulation(1998)98：1541-1547]，GPR119激动剂能在ApoE-/-小鼠中显示出是动脉粥样硬化形成的抑制剂。激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是腹膜内或静脉内的其它实施方案也明确涵盖在本发明中的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。处理开始时间不同于12周龄，例如早于或是晚于12周龄的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。处理持续时间少于或多于14天的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。施用频率可以不同于每天一次的实施方案明确涵盖在本发明中。
实施例18：小鼠中GPR119激动剂对慢性炎性关节炎的体内影响
使用13-14周龄的雄性和雌性MRL-lpr小鼠(Jackson Laboratory，BarHarbor，ME)。MRL-lpr小鼠自发形成慢性炎性关节炎，其具有与人类风湿性关节炎相似的特征，包括细胞浸润、翳形成、骨和软骨分解、和血清类风湿因子的存在。该疾病在正常情况中在动物寿命末期形成；然而，注射完全弗氏佐剂(CFA)启动早期发作且提高关节炎的严重程度[Rakay et al，J Immunol(1993)151：5081-5087]。
在每次实验的第0天，用补充有10mg/ml热灭活的结核分枝杆菌H37Ra(Difco，Detroit，MI)的0.05ml CFA，给所有组的小鼠皮内注射CFA入胸和腹股沟部位。立即经每天一次口服施用来施用GPR119激动剂单独的媒介。GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
处理持续30天。为了对肿胀定量，用测微计测量踝宽度。使用Student氏t检验进行踝宽度测量的成对集的统计比较。
组织病理学分析
在CFA引发后第30天，将后爪在缓冲的福尔马林中固定。在10％甲酸中脱钙48小时后，为石蜡包埋加工组织。切出厚度为5mm的跗跖关节连续切片，并用苏木精和曙红染色。由对实验方案不知情的人检查切片。最少对10张切片/关节评估和打分，以提供滑膜下炎症(0，正常；1，病灶炎性浸润物；2，细胞组织学占优势的炎性浸润物)、滑膜增生(0，正常；1，在一个关节中看到连续的，最少三层厚的滑膜衬里；2，在数个关节中检测到最少三层后的滑膜衬里)、翳形成和软骨侵蚀(0，正常；1，翳部分覆盖软骨面，没有明显的软骨损失；2，翳连接明显的软骨损失)、骨破坏(0，正常；1，检测得到的翳或破骨细胞活性对骨的破坏；2，翳或破骨细胞活性已经破坏显著部分的骨)的半定量测量，最后，总体病理学是自这些标准的值之和的总体评估[参见例如Gong et al，J Exp Med(1997)186：131-137]。组织病理学指标的统计分析是使用Student氏t检验进行的。
这些结果证明GPR119激动剂是慢性炎性关节炎的抑制剂，例如GPR119激动剂是类风湿性关节炎的抑制剂。
激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是腹膜内或静脉内的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。处理开始时间不同于13-14周龄，或是早于或是晚于13-14周龄的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。处理持续时间少于或多于30天的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。施用频率可以不同于每天一次的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。
实施例19：炎性肠病的动物模型的结肠损伤的降低
使用基本上如WO 03/105763中记载的动物模型，GPR119激动剂能显示出赋予针对炎性肠病的保护。
方法
动物准备：
以12∶12亮∶暗循环饲养范围为250-300克的10-11周龄雄性HSD大鼠，并容许随意获得标准啮齿类动物饲料(Taklad L M 485，Madison，WI)和水。在实验之前将动物空腹24小时
规程：
Morris et al(Gastroenterology(1989)96：795-803)先前记载了慢性结肠炎症的一种简单且可再现的大鼠模型。它展现相对较长的炎症和溃疡持续时间，给以具体受控的方式研究结肠炎性疾病的病理生理学及评估潜在适用于人类中炎性肠病的新治疗方法提供机会。
将大鼠用3％异氟烷麻醉，并放置在设置为37℃的调节加热垫上。将强饲法针头经直肠插入结肠7cm。以30mg/kg的剂量以0.4-0.6mL的总体积经由强饲法针头将在50％乙醇(v/v)中溶解的半抗原三硝基苯磺酸(TNBS)投递入结肠腔。对照组结肠内接受盐水溶液(NaCl 0.9％)。
诱导结肠炎后4天，自麻醉然后通过断头术处以安乐死的大鼠切出结肠。测量切出的结肠和脾的重量，并对结肠拍照，供依照如下评定量表的总体形态损伤打分用：0＝无损伤，1＝局部充血但无溃疡，2＝线性溃疡且无显著炎症，3＝线性溃疡且有一个部位的炎症，4＝2个或更多个部位的溃疡和/或炎症，5＝两个或更多个大部位的炎症和溃疡或者一个大部位的炎症和溃疡延结肠的长度延伸超过1cm，之后分成3部分。将距盲肠1cm的结肠区段在10％福尔马林中固定。将其它区段立即在干冰上冷冻。
炎症定义为充血和肠壁增厚的区域。由数名对实验处理不知情的观察员独立观察结肠。
为此测定法，如下建立5个处理组：
A组(n＝3)。结肠内盐水及盐水口服处理；
B组(n＝8)。盐水口服处理，之后通过30mg/kg TNBS来诱导结肠炎；
C组(n＝10)。实验组-GPR119激动剂(剂量为例如30mg/kg)口服处理每天两次，在通过30mg/kg TNBS诱导结肠炎之前2天、之后2天、和之前30分钟进行。
D组(n＝9)。阳性对照-在通过30mg/kg TNBS诱导结肠炎之前60分钟，肌肉内注射Depo-Medrol 600μg/kg；
E组(n＝10)。阳性对照，0.5mL盐水中200mg/kg 5-氨基水杨酸(Sigma)悬浮液的结肠内施用，在诱导结肠炎前60分钟和此后每天进行。
GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是皮下或静脉内的其它实施方案明确涵盖在本发明中。
实施例20：小鼠中GPR119激动剂对红藻氨酸盐发作的影响
使用基本上如Woldbye et al(Neurobiology of Disease(2005)20：760-772)中记载的动物模型，GPR119激动剂能在小鼠中显示出赋予针对红藻氨酸盐发作(kainite seizure)的保护。
在媒介即含有0.05％牛血清清蛋白的10mM磷酸盐缓冲盐水(PBS，0.13M NaCl，7mM Na2HPO4，3mM NaH2PO4)中，给雄性NMRI小鼠(Taconic M&B，DK；23-30g)口服施用GPR119激动剂，剂量为例如0.2、1、10、20或30mg/kg(n＝7-8)。一个对照组通过口服施用只接受媒介(n＝28)。5分钟后，所有动物接受皮下注射在等渗盐水中溶解并调节至pH 7.4的红藻氨酸盐(30mg/kg；#2020，Ocean Produce International，Canada)；依照Marsh等(PNAS USA(1999)96：13518-13523)的改良评定量表给发作严重程度打分：0＝无发作活性，1＝凝视(staring)或面部运动，2＝点头或单独的颤搐，3＝伴有前肢colonus的运动发作，4＝伴有后腿站立(rearing)的运动发作，5＝伴有姿势丢失的运动发作或癫痫持续状态(持续运动发作活动至少10分钟)，6＝死亡。由对小鼠身份不知情的观察员对每个处理组发作得分和距第一次运动发作(当得分为至少3时)和伴有姿势丢失的运动发作的潜伏期进行测定。
GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是腹膜内或静脉内的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。明确涵盖，红藻氨酸盐皮下注射也可以在施用GPR119激动剂后大于5分钟的时间进行。
实施例21：瘦小鼠中GPR119激动剂对食物摄取的影响
使用基本上如Ortiz等(JPET(2007)323：692-700)中记载的禁食-再喂食瘦小鼠，GPR119激动剂能显示出降低食物摄取。
让瘦C57BL/6小鼠(Taconic Farms，Germantown，NY)适应受控温度和湿度及12小时亮/暗循环最少一周。将小鼠在具有网格底的笼中成对饲养，食物和水(标准食物团粒饲料)持续可得。一项研究包括20只小鼠每个处理组。将小鼠禁食过夜(18小时)，其中黑暗期期间可获得水，并给它们口服施用含GPR119激动剂(剂量为例如30mg/kg)的USP盐水或仅仅媒介。服药后30分钟提供预称重的食物，并在72小时里(例如在1小时时、在2小时时、在4小时时、在24小时时、在48小时时、在72小时时)测量累积食物摄取。
GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是腹膜内或静脉内的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。
实施例22：饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠中GPR119激动剂对体重和血浆脂连蛋白的影响
使用基本上如Ortiz等(JPET(2007)323：692-700)中记载的饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠，GPR119激动剂显示出使体重降低和血浆脂连蛋白升高。
将雄性C57BL/6小鼠(Taconic Farms)用45％卡路里来自脂肪的高脂肪饲料(啮齿类动物饲料D12451；Research Diets，Inc.，New Brunswick，NJ)喂养20至22周，而且它们具有比用标准食物团粒饲料(5％卡路里来自脂肪)喂养的小鼠大超出约5个SD的平均体重。一项研究包括10只小鼠每个处理组。将小鼠保持在受控温度和湿度和12/12小时亮暗循环下的标准动物房中。水和食物是持续可得的。动物适应网格底4天，然后给它们服用媒介(USP盐水)4天，之后记录2天的基线体重和24小时食物和水消耗。基于小鼠的体重，将它们指派处理组，使得体重的初始均值和均值标准误差是相似的。黑暗期之前每天给动物口服施用含GPR119激动剂(剂量为例如30mg/kg)的USP盐水或仅仅媒介，并测量体重和食物和水消耗。每天给动物服药，持续40天。
第40天通过眶后采血收集血液，供脂连蛋白分析用；使用小鼠脂连蛋白ELISA试剂盒(产品目录No.EZMADP-60K；Millipore Corp.，Billerica，MA)依照制造商的指令测量血浆脂连蛋白。
GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是皮下或静脉内的其它实施方案明确涵盖在本发明中。
实施例23：饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠中GPR119激动剂对血浆葡萄糖、血浆胰岛素、和GLUCOSE处理的影响
基本上如Ortiz等(JPET(2007)323：692-700)中记载的，GPR119激动剂能显示出提供饮食诱导的肥胖(DIO)小鼠与2型糖尿病风险有关的代谢参数诸如葡萄糖处理(glucose disposal)(提高空腹小鼠中的葡萄糖处理，例如OGTT后的葡萄糖处理)、血浆葡萄糖水平(降低进食小鼠中的血液葡萄糖)、和血浆胰岛素水平(提高空腹小鼠中的血浆胰岛素)的有利改善。
将雄性C57BL/6小鼠(Taconic Farms)用45％卡路里来自脂肪的高脂肪饲料(啮齿类动物饲料D12451；Research Diets，Inc.，New Brunswick，NJ)喂养20-22周，而且它们具有比用标准食物团粒饲料(5％卡路里来自脂肪)喂养的小鼠大超出5个SD的平均体重。一项研究包括10只小鼠每个处理组。将小鼠保持在受控温度和湿度和12/12小时亮暗循环下的标准动物房中。水和食物是持续可得的。动物适应网格底4天，然后给它们服用媒介(USP盐水)4天，之后记录2天的基线体重和24小时食物和水消耗。基于小鼠的体重，将它们指派处理组，使得体重的初始均值和均值标准误差是相似的。
黑暗期之前每天给动物口服施用含GPR119激动剂(剂量为例如30mg/kg)的USP盐水或仅仅媒介。每天给动物服药，持续11天。处理第10天自喂养小鼠的尾部收集血液样品并用Ascensia葡萄糖计(Bayer Healthcare，Tarrytown，NY)分析。进入给料期5小时取出食物，并且动物禁食14小时，之后通过眶后采血来采集血液，供胰岛素分析用。眶后采血后2小时，口服施用2g/kg葡萄糖后实施口服葡萄糖耐受测试(OGTT)，并以30分钟间隔测量尾部血液葡萄糖，持续3小时。通过酶联免疫吸附测定法(EIA)(AlpcoDiagnostics，Windham，NH)测量胰岛素。
GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是腹膜内或静脉内的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。在眶后采血后2小时，在腹膜内施用2g/kg葡萄糖后实施腹膜内葡萄糖耐受测试(IPGTT)的其它实施方案明确涵盖在本发明中。
实施例24：外周动脉不足的大鼠模型中GPR119激动剂对依赖侧枝的血流的影响
使用基本上如Cruze等(Peptides(2007)28：269-280)中记载的常常呈现间歇性跛行症状的大血管闭塞性疾病特征性的急性发作外周动脉不足的大鼠模型，GPR119激动剂能显示出提高依赖侧枝的血流。
凭借腹股沟韧带远端股动脉双侧闭塞，在成年雄性Sprague Dawley大鼠(325-350g；Taconic Farms，Inc.)中建立外周动脉不足。在相同的手术规程中，将连接14天渗透泵
Figure BPA00001252734001281
的导管插入髂动脉，以接近侧枝膨胀部位进行输注，以系统投递血管生长因子-A(残基1-165)(VEGF165)(剂量为15μg/kg/天)；经每日口服施用来施用GPR119激动剂(剂量为例如30mg/kg)和单独的媒介(磷酸盐缓冲盐水、10％柠檬酸钠、1.6％甘油、0.008％Tween 20)。以调查人员不知情的方式供应和施用所有药剂。在第16天测量血流以消除GPR119激动剂或VEGF165对血流的任何急性影响。以不知情的方式测定肌肉血流，在踏车运行期间利用放射性标记的微球体，如Yang等(Am JPhysiolHeart Circ Phys(2000)278：H1966-H1973)中记载的。在此模型(Cruze et al，Peptides(2007)28：269-280)中所使用的VEGF165剂量(15μg/kg/天)产生依赖侧枝的血流接近最大的提高。
GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
明确涵盖在其它实施方案中，激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是剂量例如30mg/kg/天的静脉内输注。GPR119激动剂的一种优选输注剂量是0.1-100mg/kg/天。其它优选输注剂量选自下组：0.1mg/kg/天、0.3mg/kg/天、1.0mg/kg/天、3.0mg/kg/天、10mg/kg/天、30mg/kg/天和100mg/kg/天。
实施例25：体内大鼠模型中GPR119激动剂对血管活性肠肽(VIP)诱导的空肠分泌的影响
使用基本上如Balasubramaniam等(J Med Chem(2000)43：3420-3427)和Souli等(Peptides(1997)18：551-557)记载的血管活性肠肽(VIP)诱导的空肠分泌的体内大鼠模型，GPR119激动剂显示出降低肠上皮中的分泌。Balasubramaniam等(J Med Chem(2000)43：3420-3427)还记载了在此测定法中具有活性的PYY类似物。
麻醉雄性Wistar大鼠(Charles River Laboratories，Inc.，Wilmington，MA)，并给隐静脉插管以灌注药物。打开腹部，用两根结扎线限定一空肠环(长度约20cm)。在时间零点时，将2mL预温热至37℃的0.9％盐水灌输入空肠环。然后将环放回腹部并关闭。经隐静脉以2.5mL/小时的速率灌注VIP(30μg/kg/小时)30分钟，在时间零点时开始。开始VIP灌注前15分钟以大丸药剂量口服施用GPR119激动剂(剂量为例如30mg/kg)或盐水(对照)。实验结束时，处死大鼠，并切出空肠环。然后在取出灌输液之前和之后对环测量和称重。使用公式(F-E-2000)/L来计算以μL/cm/30min表述的净水通量，其中F和E是腾空剩余液体之前和之后环的重量(mg)，L是以cm计环的长度，而2000是以μL计初始灌输液体的体积。负值指示净吸收，而正值指示净分泌。每种剂量在6-8只动物中进行调查。
GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是腹膜内或静脉内的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。
实施例26：体内犬模型中GPR119激动剂对肠吸收的影响
使用基本上如Balasubramaniam等(J Med Chem(2000)43：3420-3427)记载的体内犬模型，GPR119激动剂显示出提高肠上皮中的吸收。Balasubramaniam等(J Med Chem(2000)43：3420-3427)还记载了在此测定法中具有活性的PYY类似物。
在清醒的犬中研究了基础条件下GPR119激动剂对空肠、回肠、和结肠的水和电解质吸收的体内影响，其中空肠、回肠和/或结肠Thiry-Vella环基本上如Bilchik等(Gastroenterology(1993)105：1441-1448)和Bilchik等(Am JSurg(1994)167：570-574)中更为详细记载的。每项实验包括90分钟基础期，接着是150分钟实验期。使用蠕动泵以2mL/min经由近端插管给小肠段灌注。灌注液pH 7.4维持于37℃，在5g/L聚乙二醇中含有(以nmol/L计)140Na+、5.2K+、119.8Cl-、25HCO3、1.2Ca2+、1.2Mg2+、2.4HPO2 4-、0.4H2PO4-、10葡萄糖和10μC[14C]聚乙二醇。20分钟清洗期后，每15分钟收集灌注液供测定Na+、Cl-和水含量用。
在时间零点时以例如30mg/kg剂量口服施用GPR119激动剂。
GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
明确涵盖在本发明中的其它实施方案还包括，激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是剂量例如30mg/kg/小时的腔内灌注，在时间零点时开始。GPR119激动剂的一种优选灌注剂量是0.1-100mg/kg/小时。其它优选灌注剂量选自下组：0.1mg/kg/小时、0.3mg/kg/小时、1.0mg/kg/小时、3.0mg/kg/小时、10mg/kg/小时、30mg/kg/小时和100mg/kg/小时。
实施例27：小鼠中蓖麻油诱导的通便和腹泻症状的腹泻抑制
使用基本上如EP 1902730中记载的蓖麻油诱导的通便和腹泻症状小鼠模型，GPR119激动剂显示出抑制腹泻症状。
使用C57BL/6小鼠。将小鼠在具有受控环境(温度：23℃，相对湿度：55％，光照时间：7:00至19:00)的动物房中在具有地垫的笼中个别饲养，随意获得啮齿类动物饲料(CE-2，Nippon CLEA)和饮水。
分别经口服施用、腹膜内施用、腹膜内施用、和口服施用给小鼠施用GPR119激动剂(剂量为例如30mg/kg)、常规止泻药洛哌丁胺(1mg/kg)、常规止泻药阿托品(10mg/kg)、或仅仅媒介，并在施用后15分钟时给小鼠口服施用蓖麻油(0.3ml/动物)。以依赖时间的方式(施用后1、2、和4小时)测量粪便重量和腹泻得分(正常：0，软便：1，水便：2)。同时，对只施用媒介且不施用蓖麻油的小鼠进行相同测量。
GPR119激动剂的一种优选剂量是0.1-100mg/kg。其它优选剂量选自下组：0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg。
激动剂的施用不同于口服，例如激动剂的施用是腹膜内或静脉内的其它实施方案也明确涵盖在本发明中。
实施例28：口服生物利用度
用于直接评估本发明化合物(诸如GPR119激动剂、PYY促分泌素、对于受PYY调控的状况的治疗或预防有用的化合物、或对于调控PYY相关活性有用的化合物)的口服生物利用度的物理化学分析方法是本领域普通技术人员公知的，而且是可以使用的(参见例如但不限于Wong PC等，CardiovascDrug Rev(2002)20：137-52；及Buchan P et al.，Headache(2002)Suppl2：S54-62；通过述及将每一篇的公开内容完整收入本文)。作为进一步例示而非限制，所述备选分析方法可包括液体层析-串联质谱术(Chavez-Eng CM etal.，J ChromatogrB Analyt Technol Biomed Life Sci(2002)767：117-29；Jetter Aet al.，Clin Pharmacol Ther (2002)71：21-9；Zimmerman JJ et al.，J ClinPharmacol(1999)39：1155-61；及Barrish A et al.，Rapid Commun MassSpectrom(1996)10：1033-7；通过述及将每一篇的公开内容完整收入本文)。最近，正电子发射断层摄影术(PET)已经成功用于获得口服施用药物后在哺乳动物身体中的药物分布的直接测量，包括口服生物利用度(Gulyas et al.，Eur JNucl Med Mol Imaging(2002)29：1031-8；通过述及将其公开内容完整收入本文)。
虽然凭借为例示目的提供的实施例，上述说明书教导了本发明的原理，应当理解，本发明的实践涵盖所有常规变化、适应、或改动，同样落在所附权利要求及其等同方案的范围内。
Figure ISB00000355158900021
Figure ISB00000355158900031

Claims (50)

1.在包括下述步骤的方法中，G蛋白偶联受体用于鉴定肽YY(PYY)促分泌素的用途：
(a)使测试化合物与包含所述G蛋白偶联受体的宿主细胞或与宿主细胞的膜接触，其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体的氨基酸序列：
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；并
(b)测定所述测试化合物刺激所述受体的功能性的能力；
其中所述测试化合物刺激所述受体的功能性的能力指示所述测试化合物是PYY促分泌素。
2.依照权利要求1的用途，并进一步包括：
(c)在体外使在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触；并
(d)测定所述化合物是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述测试化合物自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素。
3.依照权利要求1的用途，并进一步包括：
(c)测定所述化合物是否提高样品中的PYY水平，所述样品是自先前施用了在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物的脊椎动物获得的；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素。
4.依照权利要求1的用途，并进一步包括：
(c)对脊椎动物施用在步骤(b)中刺激所述受体的功能性的化合物；并
(d)测定所述化合物是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素。
5.依照权利要求3或4的用途，其中所述脊椎动物是非人脊椎动物。
6.依照权利要求1-5任一项的用途，其中所述受体是重组的。
7.依照权利要求1-6任一项的用途，其中所述宿主细胞包含表达载体，所述表达载体包含编码所述G蛋白偶联受体的多核苷酸。
8.依照权利要求1-7任一项的用途，其中所述测定是经由测量第二信使水平而进行的。
9.依照权利要求8的用途，其中所述第二信使选自下组：环AMP(cAMP)、环GMP(cGMP)、肌醇1，4，5-三磷酸(IP3)、甘油二酯(DAG)、MAP激酶活性、MAPK/ERK激酶激酶-1(MEKK1)活性和Ca2+。
10.依照权利要求9的用途，其中cAMP水平升高。
11.依照权利要求1-7任一项的用途，其中所述测定是经由使用载黑色素细胞测定法的，经由测量GTPγS结合包含所述GPCR的膜的，或经由报道物测定法的。
12.依照权利要求1-11任一项的用途，其中所述宿主细胞是哺乳动物宿主细胞，或其中所述宿主细胞是酵母宿主细胞，或其中所述宿主细胞是载黑色素细胞宿主细胞。
13.依照权利要求1-12任一项的用途，其中所述测试化合物是小分子。
14.依照权利要求1-13任一项的用途，其中所述受体包含与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列。
15.依照权利要求1-14任一项的用途，其中所述受体包含氨基酸序列SEQ IDNO：2。
16.一种用于鉴定肽YY(PYY)促分泌素的方法，包括下述步骤：
(a)在体外使测试化合物与包含所述G蛋白偶联受体的宿主细胞或与宿主细胞的膜接触，其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体的氨基酸序列
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；并
(b)测定所述测试化合物刺激所述受体的功能性的能力；
其中所述测试化合物刺激所述受体的功能性的能力指示所述测试化合物是PYY促分泌素。
17.一种用于鉴定PYY促分泌素的方法，包括下述步骤：
(a)测定样品中的PYY水平与先前未施用GPR119激动剂的脊椎动物参照样品相比是否提高，所述样品是自先前施用了GPR119激动剂的脊椎动物获得的；
其中所述GPR119激动剂提高所述样品中的PYY水平的能力指示所述GPR119激动剂是PYY促分泌素。
18.一种用于鉴定PYY促分泌素的方法，包括下述步骤：
(a)对脊椎动物施用GPR119激动剂；并
(b)测定所述GPR119激动剂是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；其中所述GPR119激动剂提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力指示所述GPR119激动剂是PYY促分泌素。
19.一种用于鉴定PYY促分泌素的方法，包括下述步骤：
(a)在体外使GPR119激动剂与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触；并
(b)测定所述GPR119激动剂是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述GPR119激动剂自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力指示所述GPR119激动剂是PYY促分泌素。
20.权利要求17、18、或19的方法，其中所述脊椎动物是非人脊椎动物。
21.在包括下述步骤的方法中，G蛋白偶联受体用于鉴定PYY促分泌素的用途：
(a)在存在或缺失测试化合物的情况中使G蛋白偶联受体与任选标记的、所述受体的已知配体接触，其中所述受体的配体是GPR119的配体且其中所述G蛋白偶联受体包含选自下组的氨基酸序列：
(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1-335；
(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸2-335；
(iii)包含下述多肽的氨基酸序列的氨基酸序列，所述多肽是通过在(i)中限定的氨基酸序列中替代、删除或添加一个或几个氨基酸而自(i)衍生的；
(iv)由能够在严格条件下与SEQ ID NO：1的互补物杂交的多核苷酸编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列；
(v)选自下组的SEQ ID NO：2变体的氨基酸序列：
(a’)与SEQ ID NO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列；和
(b’)包含SEQ ID NO：2的至少20个连续氨基酸的G蛋白偶联受体氨基酸序列；
(vi)具有SEQ ID NO：2的G蛋白偶联受体的组成性活性形式的氨基酸序列；和
(vii)(i)至(vi)任一项的生物学活性片段；并
(b)检测所述已知配体与所述受体之间的复合物；并
(c)测定在存在所述测试化合物的情况中形成的所述复合物是否比在缺失所述测试化合物的情况中的少；
其中所述测定指示所述测试化合物是PYY促分泌素。
22.依照权利要求21的用途，其中所述用途进一步包括：
(d)在体外使这样的化合物与脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞接触，该化合物为在步骤(c)中在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；并
(e)测定所述化合物是否自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌；
其中所述测试化合物自所述脊椎动物肠内分泌细胞或能够分泌PYY的细胞刺激PYY分泌的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素。
23.依照权利要求21的用途，其中所述方法进一步包括：
(d)测定所述化合物是否提高自脊椎动物获得的样品中的PYY水平，所述脊椎动物已经施用了这样的化合物，该化合物为在步骤(c)中在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素。
24.依照权利要求21的用途，其中所述方法进一步包括：
(d)对脊椎动物施用这样的化合物，该化合物为在步骤(c)中在存在该化合物的情况下所述复合物形成较少的化合物；并
(e)测定所述化合物是否提高所述脊椎动物中的PYY水平；
其中所述测试化合物提高所述脊椎动物中的PYY水平的能力进一步指示所述测试化合物是PYY促分泌素。
25.依照权利要求21或22的用途，其中所述脊椎动物是非人脊椎动物。
26.依照权利要求21-25任一项的用途，其中所述受体是重组的。
27.依照权利要求21-26任一项的用途，其中所述宿主细胞包含表达载体，所述表达载体包含编码所述G蛋白偶联受体的多核苷酸。
28.依照权利要求21-27任一项的用途，其中所述GPR119的配体是GPR119激动剂。
29.依照权利要求16-20任一项的方法或依照权利要求28的用途，其中所述GPR119激动剂是人GPR119的激动剂。
30.依照权利要求16＝20任一项的方法或依照权利要求28或29的用途，其中所述GPR119激动剂是选择性GPR119激动剂。
31.依照权利要求16-20、29或30任一项的方法或依照权利要求28-30任一项的用途，其中所述GPR119激动剂具有小于选自下组的值的EC50：10μM、1μM和100nM。
32.依照权利要求17-20或29-31任一项的方法或依照权利要求28-31任一项的用途，其中所述GPR119激动剂是小分子。
33.依照权利要求17-20或29-32任一项的方法或依照权利要求28-32任一项的用途，其中所述GPR119激动剂是口服生物可利用的。
34.依照权利要求21-33任一项的用途或依照权利要求16的方法，其中所述测试化合物是小分子。
35.依照权利要求21-34任一项的用途或方法，其中所述受体包含与SEQ IDNO：2具有至少约80％同一性的G蛋白偶联受体氨基酸序列。
36.依照权利要求21-35任一项的用途或方法，其中所述受体包含氨基酸序列SEQ ID NO：2。
37.GPR119激动剂在治疗或预防受肽YY(PYY)调控的状况中的用途。
38.GPR119激动剂在治疗或预防受NPY Y2受体(Y2R)刺激调控的状况中的用途。
39.一种治疗或预防受肽YY(PYY)调控的状况的方法，所述方法包括对有所需要的个体施用包含GPR119激动剂的药物组合物。
40.一种治疗受NPY Y2受体(Y2R)刺激改善的状况的方法，所述方法包括对有所需要的个体施用包含GPR119激动剂的药物组合物。
41.权利要求39或40的方法，其中以能够在所述个体的肠内分泌细胞中刺激PYY表达的方式或量施用所述GPR119激动剂。
42.依照权利要求16-20或29-33任一项的方法，进一步包括生成或合成所鉴定的PYY促分泌素。
43.依照权利要求16-20、29-33、或42任一项的方法，进一步包括作为组合物生成或合成所鉴定的PYY促分泌素。
44.依照权利要求16的方法，其中所述测试化合物是小分子。
45.依照权利要求13、16、32、34、或44任一项的方法，其中所述小分子具有小于10,000克每摩尔的重量。
46.依照权利要求13、16、32、34、或44任一项的方法，其中所述小分子具有小于5,000克每摩尔的重量。
47.一种包含GPR119激动剂的剂量形式，其中所述GPR119激动剂以足以提高受试者中的PYY水平的量存在。
48.权利要求47的剂量形式，其中所述量足以提高受试者中肠内分泌细胞中的PYY水平。
49.依照权利要求38-41的用途或方法，其中所述治疗或预防包括选自下组
的影响：
(a)提高血浆PYY；
(b)增加骨质；
(c)减少骨质损失；
(d)增加骨形成；
(e)减少食物摄取；
(f)降低体重；
(g)提高饱感；
(h)提高葡萄糖处理；
(i)降低血浆葡萄糖；
(j)提高血管发生；
(k)降低肠上皮中的分泌；
(l)提高肠上皮中的吸收；和
(m)提高血浆脂连蛋白。
50.一种GPR119激动剂，其用于治疗下述状况的方法，其中所述状况可以通过提高个体中的PYY水平来治疗。
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