KR20030087657A - 체지방 감소 및 지방산 대사 조절을 위한 방법, 화합물 및조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 포유동물의 체중을 줄이고, 체지방 대사를 조절하고, 음식 섭취량을 줄이기 위한 방법, 약학 조성물 및 화합물을 제공한다. 본 발명의 화합물은 지방산 에탄올아민 화합물, 그 원형이 내인성 지방산 에탄올아미드, 올레오일에탄올아미드인 에탄올아민 화합물의 동족체 및 유사체를 포함한다.

Description

체지방 감소 및 지방산 대사 조절을 위한 방법, 화합물 및 조성물{METHODS, COMPOUNDS, AND COMPOSITIONS FOR REDUCING BODY FAT AND MODULATING FATTY ACID METABOLISM}

비만은 미국을 비롯한 선진국에서 위험적인 수준으로 발생하고 있는 범세계적인 건강상의 문제이다. 미국에서는 약 9700만명의 성인이 과체중이다. 그중 4000만명이 비만이다. 비만 및 과체중은 많은 질병의 위험성을 크게 증가시킨다. 고혈압; 2형 당뇨병; 이상지질혈증; 관상 심장 질환; 발작; 담낭 질환; 골관절염; 수면성 무호흡증 및 기타 호흡관련 문제; 및 자궁내막암, 유방암, 전립선암 및 결장암이 더 높은 체중과 관련되어 있다. 또한, 체중이 더 높은 사람은 전체적으로 사망률이 더 높다. 국립보건원에 따르면, 해마다 성인 약 280,000명의 사망 원인이 부분적으로 비만일 수 있는 것으로 밝혀졌다.

비만과 과체중인 사람에게는 감량이 좋은 방법이다. 감량은 이들 다수의 해로운 결과를 예방하는데 도움이 될 수 있으며, 당뇨병과 심혈관 질환(CVD) 환자에게는 특히 도움이 된다. 또한, 감량은 과체중의 고혈압인 개체 및 혈압이 높지 않은 개체 모두에서 혈압을 감소시키고; 혈청 트리글리세라이드 수치를 감소시키며; 이로운 고밀도 지단백질(HDL)형 콜레스테롤을 증가시킨다. 또한, 감량은 일반적으로 전체적인 혈청 콜레스테롤 및 저밀도 지단백질(LDL)-콜레스테롤 수치를 다소 감소시킨다. 또한, 감량은 과체중인 사람 및 비만인 사람에서 혈중 글루코즈 수치를 감소시킨다.

감량은 바람직한 방법이지만, 목적 달성이 어렵다. 과체중과 비만 관리 및 감량 상태의 유지를 위한 다수의 방법이 존재한다. 그러나, 상습성이 만연하고 있다. 여성의 40% 및 남성의 20%가 아무때나 의욕적으로 감량을 시도한다. 이들 감량 방법으로는 저칼로리 다이어트 및 저지방 다이어트; 강화된 육체 운동; 음식물 섭취 감소를 지향하는 행동학적 요법, 약물 요법; 수술; 및 이들을 병용하는 방법을 들 수 있다.

감량의 약전은 상대적으로 드물다. 시부트라민, 덱스펜플루라민, 올리스타트, 페닐프로판올아민, 펜테라민, 또는 펜플루라민은 장기간에 걸친 사용으로 비만인 성인의 감량을 용이하게 할 수 있다. 그러나, 일반적으로 약물 치료적 감량제의 장기 투여에 대한 안정성에 대해서는 알려진 것이 없다. 예를 들어, 최근 환자들에게서 관찰된 심장판막증에 관한 우려로 인해, 펜플라민 및 덱스펜플라민은 시장에 퇴출되었다. 비만은 더욱 만연하고 있는데 비만에 대한 약전이 거의 없는 상황에서, 감량을 촉진하고 감량된 상태를 유지시키는 신규한 약학적 방법 및 조성물이 요구되고 있다.

지방산 에탄올아미드(FAE)는 동물 및 식물 지질의 드문 성분이며, 자극되지 않은 세포에서 그들의 농도는 일반적으로 낮다[참조: Bachur 등, J. Biol. Chem. 240: 1019-1024 (1965); Schmid 등, Chem. Phys. Lipids, 80: 133-142 (1996); Chapman, K.D., Chem. Phy. Lipids, 108: 22 1-220 (2000)]. 그러나, FAE 생합성은 담배 세포에서 균주 병원체에 대한 노출[참조: Champan 등, Plant Physiol., 116: 1163-1168 (1998)], 래트 뇌 뉴런에서 신경전달 물질 수용체의 활성화[참조: Di Marzo 등, Nature, 372: 686-691 (1994); Giuffrida 등, Nat. Neurosci., 2: 358-363 (1999)] 및 마우스 상피 세포에서 대사 억제제에 대한 노출[참조: Berdyshev 등, Biochem. J., 346: 369-374 (2000)]을 포함하는 여러가지 다양한 생리학적 자극 및 병리학적 자극에 대해 신속하게 증강되었다. 포유동물 조직 내에서 자극-의존성 FAE 재생의 기초를 이루는 메카니즘은 2가지의 생화학적 협력 반응과 연루되어 있는 것으로 생각된다: 미지의 포스포리파제 D에 의해 촉진되는 막 인지질인 N-아실 포스파티딜아탄올아민(NAPE)의 절단; 및 칼슘 이온 및 cAMP-조절된 N-아실트랜스퍼라제(NAT) 활성에 의해 촉진되는 NAPE 합성[참조: Di Marzo 등, Nature, 372: 686-691 (1994); Cadas 등, J. NeuroSci., 6: 3934-3942 (1996); Cadas 등, H., J. Neurosci., 17: 1226 1242 (1997)].

식물 세포 및 동물 세포 둘 다 자극에 의존하는 방식으로 FAE를 방출한다는 사실은 이들 화합물이 세포 대 세포 소통에 중요한 역할을 수행할 수 있다는 것을 암시하는 것이다. 다중불포화 FAE인 아난드아미드(아라키도닐에탄올아미드)가 마리화나 구성적 Δ⁹-테트라히드로카난비놀(Δ⁹-THC)를 인식하는, 뉴런 및 면역 세포에서 발현된 G-단백질 커플링된 수용체인 칸나비노이드 수용체[참조: Devane 등, Science, 258: 1946-1949 (1992)]에 대한 내인성 리간드라는 발견은 상기 가설을 더 지지해 주는 자료이다[참조: Pertwee, R. G., Exp. Opin. Invest. Drug. 9: 1553-1571 (2000)].

두가지 관찰로 인해 다른 FAE는 칸나비노이드 신경전달에 참여하지 않는 것으로 생각된다. FAE 훼밀리는 대부분 포화 및 단일불포화 종, 예를 들어 팔미틸에탄올아미드 및 올레일에탄올아미드로 구성되는데, 이들은 칸나비노이드 수용체와 유의적으로 상호작용하지 않는다[참조: Devane 등, Science, 258: 1946-1949 (1992); Griffin 등, J. Pharmacol. Exp. Ther., 292: 886-894 (2000)]. 둘째로, FAE의 약리학적 특성, 특히 팔미틸에탄올아미드의 약리학적 특성은 일부 상세하게 연구되었는데, 이러한 특성은 Δ⁹-THC의 약리학적 특성과는 다르며, 공지된 칸나비노이드 수용체 아형의 활성화와는 무관한 것으로 확인되었다[참조: Calignano 등,Nature, 394: 277-281 (1998)]. 따라서, FAE의 생물학적 중요성은 이해하기 어렵다.

올레일에탄올아민(OEA)은 내인성 칸나비노이드 아난드아미드의 천연 유사체이다. 아난드아미드와 마찬가지로 OEA는 자극에 의존하는 방식으로 세포내에서 생성되며, 효소적 가수분해에 의해 신속하게 제거되는데, 이는 세포성 신호 전달에 일정 역할을 수행하고 있음을 의미하는 것이다. 그러나, 아난드아미드와는 달리 OEA는 칸나비노이드 수용체를 활성화시키지 않으며, 그의 생물학적 기능은 지금까지 거의 알려져있지 않다.

비만 및 과체중을 치료하고 감량 상태를 유지시키는 다른 방법 및 제제에 대한 요구가 존재한다. 본 발명은 올레일에탄올아민(OEA)과 다른 지방산 에탄올아민 화합물(예를 들어, 팔미틸에탄올아미드, 엘라일에탄올아미드)가 식욕을 감퇴시키고, 음식물 섭취를 감소시키고, 체중 및 체지방을 감소시키며, 지방 대사를 변경시킨다는 본 발명에 관한 신규한 방법 및 약학 조성물을 제공함으로써 상기한 바와 같은 요구에 부응한다.

관련 출원

본 출원은 미국 특허 출원 60/336.289호(2001년 10월 31일 출원) 및 미국 특허 출원 60/279,542호(2001년 3월 27일 출원)의 우선권 주장 출원이다.

연방 정부의 연구 개발 지원하에 이루어진 발명의 권리에 대한 언급

본 발명은 국립보건원에 의한 승인 번호 DA 12653으로 정부 지원하에 이루어진 것이다. 이 발명에 대한 권리는 정부에게 있다.

기술 분야

본 발명은 지방산 에탄올아미드, 그들의 상동체 및 그들의 유사체에 관한 것이며, 체지방 감소, 음식물 소비 감소 및 지질 대사 조절을 위한 약리학적 활성 성분으로서 그들의 용도에 관한 것이다.

도 1은 래트에서 단식이 순환하는 올레일에탄올아미드 수치를 증가시킴을 나태는 도면이다: (a) 혈장 올레일에탄올아미드(올레일아미드, OEA) 수치에 대한 음식물 박탈의 경시적 효과; (b) 혈장 올레일에탄올아미드 수치에 대한 물 박탈(18 시간)의 효과; (c) 뇌척수액(CSF)내 올레일에탄올아미드 수치에 대한 음식물 박탈(18 시간)의 효과; (d) 혈장 아난드아미드(아라키도닐에탄올아미드, AEA) 수치에 대한 음식물 박탈의 경시적 효과; (e) 아난드아미드 혈장 수치에 대한 물 박탈(18 시간)의 효과; (f) CSF내 아난드아미드 수치에 대한 음식물 박탈(18 시간)의 효과. 결과는 평균 ±표준편차로 나타냈으며; *은 P < 0.05; **는 P < 0.01 이며, n은 10/군이다.

도 2는 지방 조직이 순환하는 올레일에탄올아미드의 주 공급원임을 나타내는 도면이다. N-아실트랜스퍼라제(NAT) 및 지방산 아미드 하이드롤라제(FAAH)에서의 단식-유도된 변화는 여러가지 래트 조직을 활성화시킨다. (a) 지방; (b) 뇌; (c) 간; (d) 위; (e) 소장. 백색 막대는 음식물을 자유롭게 섭취한 동물이며; 흑색 막대는 18 시간 단식한 동물을 나타낸다. 활성은 pmol/mg 단백질/분으로 나타냈으며, *는 P < 0.05 이며, n은 3이다.

도 3은 지방 조직이 순환하는 올레일에탄올아미드의 주 공급원임을 나타내는 도면이다. 지방 조직 및 간 조직에서 NAPE 및 올레일에탄올아미드(올레일에탄올아미드, OEA) 함량의 단식-유도된 변화. (a) 올레일에탄올아미드 전구체 알크-1-팔미토에닐-2-아라키도닐-sn-글리세로-포스포에탄올아민-N-올레일의 구조(좌측 패널, NAPE 1) 및 알크-1-팔미틸-2-아라키도닐-sn-글리세로-포스포에탄올아민-N-올레일의 구조(우측 패널, NAPE 2); (b) 음식물을 자유롭게 섭취한 래트(상단) 및 18 시간 동안 단식시킨 래트(하단)에서 NAPE1 및 NAPE2의 선택된 이온 특성에 대한 대표적인 HPLC/MS 트레이싱(각각, 좌측 패널 m/z = 987, 양성자제거된 분자, [M-H]^-; 및 우측 패널, m/z = 1003, [M-H]^-); (c) 음식물 박탈(18 시간)은 지방에서 NAPE 종의함량을 증가시키며, 간에서 이의 함량을 감소시킨다. 확인할 수 있는 모든 NAPE 종은 정량하였으며, 여기에는 올레일에탄올아미드 전구체 NAPE1 및 NAPR2와 PEA 전구체 NAPE3이 포함된다; (d) 음식물 박탈(18 시간)은 지방 및 간에서 올레일에탄올아미드 함량을 증가시킨다. 백색 막대는 음식물을 자유롭게 섭취한 동물을 나타내며; 흑색 막대는 18시간 단식시킨 동물을 나타낸다. *는 P < 0.05, 스튜던트 t 테스트이고; n은 3이다.

도 4는 올레일에탄올아미드/프란아미드가 음식물 섭취를 선택적으로 억제함을 나타내는 도면이다: (a) 24시간 동안 음식물 박탈한 래트에서 음식물 섭취에 대한 올레일에탄올아미드(올레일에탄올아미드/OEA/프란아미드)(i.p., 사각형), 엘라이딜에탄올아미드(원), PEA(삼각형), 올레산(흑색 사각형) 및 아난드아미드(흑색 원)이 투여량 의존성 효과. 비이클 단독(염수중 70% DMSO, 1 ml/kg, i.p.)으로는 급성 음식물 섭취에 대해 유의적인 효과를 나타내지 못했다; (b) 음식물 섭취에 대한 올레일에탄올아미드(20 mg/kg, i.p.)(사각형) 또는 비이클(마름모)의 경시적인 하이포파지 효과. (c) 조건반사적인 먹이 회피 테스트(CTAA)에서 비이클(V), 염화 리튬(LiCl, 0.4 M, 7.5 ml/kg) 또는 올레일에탄올아미드(20 mg/kg)의 효과. 백색 막대, 물 섭취; 흑색 막대, 사카린 섭취. (d) 물 섭취(4시간당 ml로 표현함); (e) 체온; (f) 열판 마취 테스트에서 점프하는 잠재성; (g) 지렛대 + 미로 불안 테스트에서 앞다리를 벌린 상태로 보낸 시간(%); (h) 개방 필드 활성 테스트에서 교차하는 수; (i) 음식물에 대한 자발적인 반응의 수에 대한 비이클(V) 또는 올레일에탄올아미드(5 또는 20 mg/kg)의 효과. *는 P < 0.05이며, n은 8-12/군이다.

도 5는 음식물 섭취 및 체중에 대한 아임상적 올레일에탄올아미드 투여의 효과를 나타내는 도면이다: (a) 점증적인 음식물 섭취에 대한 올레일에탄올아미드(올레일에탄올아미드, OEA)(5 mg/kg, i.p. 1일 1회)(백색 막대) 또는 비이클(멸균 염수내 5% 트윈 80/5% 프로필렌글리콜; 흑색 막대)의 효과; (b) 체중 변화에 대한 올레일에탄올아미드(삼각형) 또는 비이클(사각형)의 경시적 효과; (c) 순 체중 변화에 대한 올레일에탄올아미드 또는 비이클의 효과; (d) 점증적인 물 섭취에 대한 올레일에탄올아미드(5 mg/kg) 또는 비이클의 효과. *는 P < 0.05이고; **는 P < 0.01이며, n은 10/군이다.

도 6은 올레일에탄올아미드-유도된 식욕부진에서 말초 감각 섬유의 역할을 나타내는 도면이다. a 대조용 래트 및 c 카프사이신 처리한 래트에서 음식물 섭취에 대한 비이클(V). 올레일에탄올아미드(올레일에탄올아미드/프란아미드/OEA)(5 mg/kg, i.p.), CCK-8(10 ㎍/kg) 및 중추 활성 5-HT_1B수용체 작용물질인 CP-93129(1 mg/kg)의 효과. *는 P < 0.05이고, n은 8-12/군이다.

도 7은 에너지 항상성 및 섭식 활동과 관련된 불연속 뇌 영역에서 c-fos mRNA 발현을 증가시키는 것을 나타내는 도면이다: (a) 방사능사진 필름의 가색 영상으로부터 확인할 수 있는 바와 같이, 올레오에탄올아미드(우측 영역)가 원위치 하이브리드화에 의해 평가되는 바와같이 스트라이킹 및 부뇌실핵(PVN) 및 시각교위(SO) 항갑상선 핵에서 c-fos mRNA 표지화에서 선택적 증가를 유발하였다. 비이클 처리된 래트의 대표적인 영역은 좌측에 나타냈다. 표지 밀도는 색으로 나타냈다: 청색 < 녹색 < 황색 < 적색. (b) 비이클, 오레오일에탄올아미드 및 올레산으로 처리한 래트의 전뇌 영역[PVN, SO, 궁형부(Arc), 층 II 이상엽피질(pir)]에서 c-fos cRNA의 표지의 정량화; (c) 방사능사진 필름으로 확인할 수 있는 바와 같이, 올레오일에탄올아미드 처리된 래트에서 고속핵(NST)에서 35S c-fos mRNA 발현이 상승하였으며; NST에서 c-fod cRNA 표지(적색으로 나타냄)는 콜린 아세틸 트랜스퍼라제(ChAT) mRNA(자주색으로 나타냄)을 발현하는, 인접한 수출관 핵(외번의 설하 및 등 운동핵)에 대한 그의 국부화에 의해 확인되었다; (d) 올레오일에탄올아미드는 NST에서 c-fos mRNA 발현을 증가시켰으나, 설하 핵(HgN) 내에서는 그리하지 아니하였다. **는 P < 0.0001이며, n은 5/군이었다.

도 8은 넙치근에서 지방산 산화에 대한 OEA, 올레산(OA), AEA, PEA 및 메틸-OEA의 효과를 나타내는 도면이다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 OEA 및 다른 지방산 알칸올아미드 화합물이 음식물 섭취, 체중 및 체지방을 감소시키고, 지방산 산화를 조절하는 작용을 한다는 놀라운 발견에 관한 것이다. 놀랍게도 포유동물에서 현재까지 생물학적 기능이 알려지지 않은 천연 지질인 올레일에탄올아미드(OEA)는 시험 동물에 투여하는 경우 강력한 체지방 감소 및 체중 감소 화합인 것으로 확인되어 왔다. 미국 특허 출원 60/279,542호(2001년 3월 27일)(동일 양수인에게 양도되고, 본원에 전적으로 참고 인용함)는 포유동물에서 체지방을 감소시키고 식욕을 감퇴시킬 수 제제로서 OEA 및 OEA-유사 화합물을 개시하고 있다.

원형 OEA의 발견시, 다른 지방산 알칸올아미드 화합물 및 상동체도 활성이 있는 것으로 확인되었다.

OEA는 비만을 치료하거나, 감량을 유도하거나, 식욕을 감토시키거나, 또는 음식물 섭취를 감소시키기 위한 다른 지방산 알칸올아미드 유사 지방 감소 화합물의 개발에서 모델로서 기능할 수 있다.

OEA 투여가 식욕을 감퇴시키고, 음식물 섭취 및 체중을 감소시키는 작용을 한다는 발견을 이용하여 감량제 및 식욕 조절제로서 다른 지방산 에탄올아미드, 상동체 및 유사체를 확인할 수 있다.

정의

본원에 사용한 약어는 화학 및 생물학 분야에서 사용하는 그들의 통상적인 의미이다.

치환기가 그들의 통상적인 화학식으로 좌에서 우로 특정되는 경우, 그들은 동일하게 우에서 좌로 표현함에 기인하는 화학적으로 동일한 치환체를 포함하는데, 예를 들어 -CH₂O-는 또한 -OCH₂-도 포함하는 의미이다.

본원에 약학 조성물의 한 부분으로서 사용한 용어 "조성물"은 활성 성분(들) 및 담체를 구성하는 불활성 성분(들) 뿐만 아니라 임이의 2개 이상의 성분들의 배합, 복합 또는 응집에 의해, 또는 하나 이상의 성분들의 해리에 의해, 또는 하나 이상의 성분들의 다른 유형의 반응 또는 상호작용에 의해 직간접적으로 생성된 임의의 생성물을 포함하는 의미이다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 본 발명의 화합물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 혼합하여 제조된 임의의 조성물을 의미한다. 본원에 사용한 용어 "약학 조성물"은 동물 또는 인간을 포함하는 개체 내에서 약학적 용도로 적합한 조성물을 의미한다. 일반적으로 약학 조성물은 유효량의 활성제 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다.

본 발명의 화합물은 하나 이상이 비대칭 중심을 보유할 수 있으며, 따라서 라세미체 및 라세미 화합물, 단일 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체 혼합물 및 개개의 부분입체 이성질체로서 나타날 수 있다. 본 발명은 본 발명의 화합물의 모든 형태의 이성질체를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

본원에 기술한 화합물의 일부는 올레핀계 이중 결합을 보유하며, 특별히 언급하지 않으면 E 및 Z 기하 이성질체 모두를 포함하는 의미이다.

본원에 기술한 화합물의 일부는 상이한 지점에 대한 수소의 부착으로 인해 호변 이성질체로 존재할 수 있다. 이러한 예로는 케톤 및 그의 에놀형을 들 수 있는데, 이는 케토-에놀 호변 이성질체로 공지되어 있다. 개개의 호변 이성질체 및 이의 혼합물은 본 발명의 화학식으로부터 도출되는 화합물에 포함된다.

본 발명의 화합물은 거울상 이성질체 쌍의 부분입체 이성질체를 포함한다. 예를 들어, 부분입체 이성질체는 적합한 용매, 예를 들어 메탄올 또는 에틸 아세테이트 또는 이의 혼합물로부터 분별 결정화에 의해 얻을 수 있다. 이와 같은 방법으로 얻은 거울상 이성질체 쌍은 통상적인 방법, 예를 들어 분해제로서 광학 활성 산을 이용하는 방법에 의해 개개의 입체 이성질체로 분리할 수 있다.

대안으로, 본 발명의 화합물의 임의의 거울상 이성질체는 광학적으로 순수한출발 물질 또는 공지된 배치의 시약을 이용하는 입체특이성 합성에 의해 얻을 수 있다.

본원에 사용한 용어 "이종원자"는 산소(O), 질소(N), 황(S) 및 규소(Si)를 포함하는 의미이다.

본원에 사용한 용어 "알칸올"은 포화 또는 불포화, 치환 또는 비치환, 분지 또는 비분지 알킬기를 의미하는데, 이는 히드록시 치환체 또는 히드록시부, 예를 들어 에테르, 에스테르로부터 유도할 수 있는 치환체를 보유한다. 또한, 알칸올은 "지방산"과 알칸올 사이에 결합(Z)(화학식 I)내에 포함된 질소-, 황-, 또는 산소-보유 치환체로 치환되는 것이 바람직하다.

본원에 사용한 용어 "지방산"은 카르복시 치환체를 보유하는 포화 또는 불포화, 치환 또는 비치환, 분지 또는 비분지 알킬기를 의미한다. 바람직한 지방산은 C₄-C₂₂산이다. 또한, 지방산은 카르복시 치환체가 -CH₂-부분으로 치환된 종을 포함한다.

본원에서 그 자체 또는 다른 치환체의 일부로서 사용한 용어 "알킬"은, 특별히 언급하지 않으면, 직쇄 또는 분지쇄, 또는 고리형 탄화수소 라디칼 또는 이의 조합을 의미하며, 완전히 포화되거나, 단일불포화 또는 다중불포화될 수 있고, 지정된 탄소원자수(즉, C₁-C₁₀은 1개∼10개의 탄소 원자를 의미함)를 보유하는 2가 및 다가 라디칼을 포함할 수 있다. 포화 탄화수소 라디칼의 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, sec-부틸, 시클로헥실, (시클로헥실)메틸, 시클로프로필메틸, 예를 들어 n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸 등의 상동체 및 이성질체를 들 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다. 불포화 알킬기의 예로는 비닐, 2-프로페닐, 크로틸, 2-이소펜테닐, 2-(부타디에닐), 2,4-펜타디에닐, 3-(1,4-펜타디에닐), 에티닐, 1-프로피닐 및 3-프로피닐, 3-부티닐, 및 더 고급의 상동체 및 이성질체를 들 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다. 본원에 사용한 용어 "알킬"은, 특별히 언급하지 않으면, 상세하게 후술하는 "헤테로알킬"과 같은, 정의된 알킬의 유도체를 포함하는 의미이다. 탄화수소기로 제한되는 알킬기는 "호모알킬"로 칭한다.

본원에서 그 자체 또는 다른 치환체의 일부분으로 사용한 용어 "알킬렌"은 -CH₂CH₂CH₂CH₂-(이로 제한되는 것은 아님)에 의해 예시되는 바와 같이 알칸으로부터 유도되는 2가 라디칼을 의미하며, "이종알킬렌"으로서 후술하는 기들을 포함한다. 전형적으로, 알킬(또는 알킬렌)기는 1개∼24개의 탄소 원자를 보유할 것이며, 본 발명에서는 10개 이하의 탄소 원자를 보유하는 기가 바람직하다. "저급 알킬" 또는 "저급 알킬렌"은 더 짧은 사슬의 알킬 또는 알킬렌 기이며, 바람직하게는 8개 또는 더 적은 수의 탄소 원자를 보유하는 기이다.

본원에 사용한 용어 "알콕시", "알킬아미노" 및 "알킬티오"(또는 티오알콕시)는 그들의 통상적인 의미로 사용되며, 각각 산소 원자, 아미노기 또는 황 원자에 의해 상기 분자의 나머지 부분에 부착된 알킬 기를 의미한다.

본원에서 그 자체 또는 다른 용어와 함께 사용한 용어 "이종알킬"은, 특별히언급하지 않으면, 안정한 직쇄 또는 분지쇄, 또는 고리형 탄화수소 라디칼, 또는 이의 조합을 의미하며, 지정된 수의 탄소 원자 및 산소, 질소 , 규소 및 황으로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 이종원자로 구성되며, 상기 질소 및 황 원자는 임의로 산화될 수 있으며, 질소 이종원자는 임의로 사량체화될 수 있다. 이종원자(들)인 산소, 질소 및 황과 규소는 헤테로알킬기의 임의의 내부 위치에 위치되거나, 알킬이 상기 분자의 나머지에 부착된 위치에 위치될 수 있다. 그 예로는 -CH₂CH₂-O-CH₃, -CH₂CH₂-NH-CH₃, -CH₂CH₂-N(CH₃)-CH₃, -CH₂-S-CH₂-CH₃, -CH₂-CH₂, -S(O)-CH₃, -CH₂CH₂-S(O)₂-CH₃, -CH=CH-O-CH₃, -Si(CH₃)₃, -CH₂CH=N-OCH₃및 -CH=CH-N(CH₃)-CH₃를 들 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다. 2개 이하의 이종원자는 구성적일 수 있는데, 예를 들어 -CH₂-NH-OCH₃및 -CH₂-O-Si(CH₃)₃일 수 있다. 유사하게, 본원에서 그 자체 또는 다른 치환체의 일부로서 사용한 용어 "이종알킬렌"은 -CH₂CH₂-S-CH₂CH₂- 및 -CH₂CH₂-S-CH₂CH₂-NH-CH₂-(이로 제한되는 것은 아님)에 의해 예시되는 바와 같이, 이종알킬로부터 유래하는 2가 라디칼을 의미한다. 이종알킬렌 기에 있어서, 이종원자는 사슬 말단(예를 들어, 알킬렌옥시, 알킬렌디옥시, 알킬렌아미노, 알킬렌디아미노 등)중 하나 또는 둘 다를 점유할 수 있다. 또한, 알킬렌 및 이종알킬렌 연결기에 있어서, 연결기의 배향은 연결기의 화학식이 기술되는 방향에 의해 함축되지는 않는데, 예를 들어 화학식 -C(O)₂R'-은 -C(O)₂R'- 및 -R'C(O)₂-를 나타낸다.

본원에서 그 자체 또는 다른 용어와 함께 사용한 "시클로알킬" 및 "이종시클로알킬"은, 특별히 언급하지 않는 한, 각각 "알킬" 및 "이종알킬"의 고리 형태를 의미한다. 또한, 이종시클로알킬에 있어서, 이종원자는 헤테로시클이 상기 분자의 나머지에 부착되는 위치를 점유할 수 있다. 시클로알킬의 예로는 시클로펜틸, 시클로헥실, 1-시클로헥세닐, 3-시클로헥세닐, 시클로헵틸 등을 들 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다. 헤테로시클로알킬의 예로는 1-(1,2,5,6-테트라히드로피리딜), 1-피페리디닐, 2-피페리디닐, 3-피페리디닐, 4-모르폴리닐, 3-모르폴리닐, 테트라히드로푸란-2-일, 테트라히드로푸란-3-일, 테트라히드로티엔-2-일, 테트라히드로티엔-3-일, 1-피페라지닐, 2-피페라지닐 등을 들 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다.

본원에서 그 자체 또는 다른 치환체의 일부로서 사용한 "할로" 또는 "할로겐"은, 특별히 언급하지 않는 한, 불소, 염소, 브롬 또는 요오드 원자를 의미한다. 또한, "할로알킬"과 같은 용어는 모노할로알킬 및 폴리할로알킬을 포함하는 의미히다. 예를 들어, 용어 "할로(C₁-C₄)알킬"은 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 4-클로로부틸, 3-브로모프로필 등을 들 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다.

본원에서 사용한 용어 "아릴"은, 특별히 언급하지 않는 한, 다중불포화 방향족 탄화수소 치환체를 의미하는데, 함께 융합되거나 공유 결합된 단일 고리 또는 다수의 고리(바람직하게는 1∼3개의 고리)일 수 있다. 용어 "이종아릴"은 질소, 산소 및 황으로부터 선택되는 1개∼4개의 이종 원자를 함유하는 아릴기(또는 고리)를 의미하는데, 상기 질소 및 황 원자는 임의로 산화되며, 질소 원자(들)는 임의로 4차화된다. 이종아릴기는 이종원자를 통해 상기 분자의 나머지에 부착될 수 있다. 아릴 및 헤테로아릴기의 비제한적인 예로는 페닐, 1-나프틸, 2-나프틸, 4-비페닐, 1-피롤, 2-피롤, 3-피롤, 3-피라졸릴, 2-이미다졸, 4-이미다졸, 피라지닐, 2-옥사졸릴, 4-옥사졸릴, 2-페닐-4-옥사졸릴, 5-옥사졸릴, 3-이속사졸릴, 4-이속사졸릴, 5-이속사졸릴, 2-티아졸릴, 4-티아졸릴, 5-티아졸릴, 2-푸릴, 3-푸릴, 2-티에닐, 3-티에닐, 2-피리딜, 3-피리딜, 4-피리딜, 2-피리미디닐, 4-피리미디닐, 5-벤조티아졸릴, 퓨리닐, 2-벤즈이미다졸릴, 5-인돌릴, 1-이소퀴놀릴, 5-이소퀴놀릴, 2-퀴녹살리닐, 5-퀴녹살리닐, 3-퀴놀릴 및 6-퀴놀릴을 들 수 있다. 상기한 아릴 및 헤테로아릴 고리 시스템 각각에 대한 치환체는 후술하는 허용가능한 치환체로 이루어진 군으로부터 선택된다.

개략적으로, 용어 "아릴"은 상기한 바와 같은 아릴 및 헤테로아릴 둘 다를 포함한다. 따라서, 용어 "아릴알킬"은 아릴기가, 탄소원자(예를 들어, 메틸렌 기)가 예를 들어 산소 원자(예를 들어, 페녹시메틸, 2-피리딜옥시메틸, 3-(1-나프틸옥시)프로필 등)에 의해 치환된 알킬기를 포함하는 알킬기(예를 들어, 벤질, 페네틸, 피리딜메틸 등)에 부착된 라디칼을 포함한다.

상기 용어(예를 들어, "알킬", "이종알킬", "아릴" 및 "이종아릴") 각각은 언급한 라디칼의 치환형 및 비치환형 둘 다를 포함하는 의미이다. 각 유형의 라디칼에 대한 바람직한 치환체는 후술한다.

알킬 및 헤테로알킬 라디칼을 위한 치환체(종종 알킬렌, 알케닐, 이종알킬렌, 이종알케닐, 알키닐, 시클로알킬, 이종시클로알킬, 시클로알케닐 및 이종시클로알케닐로 언급되는 기를 포함함)은 0∼(2m'+1) 범위내의 수의 -OR', =O, =NR', =N-OR', -NR'R'', -SR', -할로겐, -SiR'R''R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO₂R', -CONR'R'', -OC(O)NR'R'', -NR''C(O)R', -NR'-C(O)NR''R''', -NR''C(O)₂R', -NR-C(NR'R''R''')=NR'''', -NR-C(NR'R'')=NR''', -S(O)R', -S(O)₂R', -S(O)₂NR'R'', -NRSO₂R', -CN 및 -NO₂로 구성되는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 다양한 군일 수 있는데, 이때 m'은 상기 라디칼내 탄소 원자의 총 수를 의미한다. R', R'', R''' 및 R''''는 각각 개별적으로 수소, 치환 또는 비치환 이종알킬, 치환 또는 비치환 알킬, 알콕시 또는 티오알콕시기, 또는 아릴알킬기이다. 본 발명의 화합물이 하나 이상의 R 기를 포함하는 경우, 예를 들어 각각의 R 기가 각각의 R', R'', R''', R'''' 기(이들 기중 하나 이상이 존재하는 경우)로서 개별적으로 선택된다. R' 및 R''가 동일한 질소 원자에 부착되는 경우, 이들은 질소 원자와 연합하여 5원, 6원 또는 7원 고리를 형성한다. 예를 들어, -NR'R''는 1-피롤리디닐 및 4-모르폴리닐을 포함하는 의미이나, 이로 제한되는 것은 아니다. 상기한 치환체에 대한 언급으로부터, 당업자는 본원에 사용한 용어 "알킬"이 할로알킬(예를 들어, -CF₃및 -CH₂CF₃) 및 아실(예를 들어, -C(O)CH₃, -C(O)CF₃, -C(O)CH₂OCH₃등)과 같은, 수소 기 이외의 다른 기에 결합된 탄소 원자를 포함하는 의미이다.

알킬 라디칼에 대해 기술한 치환체와 유사하게, 아릴기 및 이종아릴기에 대한 치환체는 다양하며, 예를 들어 0∼방향족 고리 시스템 상의 개방 원자가의 총 수 범위의 수의 -OR', =O, =NR', =N-OR', -NR'R'', -SR', -할로겐, -SiR'R''R''', -OC(O)R', -c(O)R', -CO₂R', -CONR'R'', -OC(O)NR'R'', -NR''C(O)R', -NR'-C(O)NR''R''', -NR''C(O)₂R', -NR-C(NR'R''R''')=NR'''', -NR-C(NR'R'')-NR''', -S(O)R', -S(O)₂R', -S(O)₂NR'R'', -NRSO₂R', -CN 및 -NO₂, -R', -N₃, -CH(Ph)₂, 플루오로(C₁-C₄)알콕시, 및 플루오로(C₁-C₄)알킬로부터 구성되는 군으로부터 선택되며; 이때, R', R'', R''' 및 R''''는 수소, (C₁-C₈)알킬 및 이종알킬, 비치환 아릴 및 이종아릴, (비치환 아릴)-(C₁-C₄)알킬, 및 (비치환 아릴)옥시-(C₁-C₄)알킬로부터 개별적으로 선택되는 것이 바람직하다. 본 발명의 화합물이 하나 이상의 R 기를 포함하는 경우, 예를 들어 각각의 R 기가 각각의 R', R'', R''', R'''' 기(이들 기중 하나 이상이 존재하는 경우)로서 개별적으로 선택된다.

본원에 사용한 용어 "체지방 감소"는 체지방의 일부분을 제거함을 의미한다.

신체 질량 지수(BMI)를 구하는 식은 다음과 같다: [체중(lb) ÷ 신장(in) ÷ 신장(in)] x 703. 성인에 대한 BMI 컷포인트는 하기 지침을 이용하여 연령 또는 성별과는 무관하게 고정된 수치이다: 과체중인 성인 개체의 BMI는 25.0∼29.9이다. 비만인 인간 성인의 BMI는 30.0 이상이다. 체중미달인 성인인 BMI는 18.5 미만이다. 성인의 정상 체중 범위는 18.5∼25 사이의 BMI로 정해된다. 아동에 대한 BMI컷포인트는 16이며, 이는 백분위수에 따라 정해진다. 과체중은 ≥85th 백분위수의 연령에 대한 BMI(BMI-for-age)로 정해지며, 비만은 ≥95th 백분위수의 연령에 대한 BMI로 정해진다. 체중 미달은 < 5th 백분위수의 연령에 대한 BMI로 정해진다. 아동에 대한 정상 체중 범위는 5th 백분위수를 초과하고 85th 백분위수의 BMI로서 정해진다.

본원에 사용한 용어 "지방산 산화"는 지방산(예를 들어, 올레에이트)의 케톤체로의 전환에 관한 것이다.

본원에 사용한 용어 "간세포(hepatocyte)"는 간 조직으로부터 최초 유도된 세포를 의미한다. 간세포는 간 조직으로부터 새롭게 분리한 것이거나 확립된 세포주일 수 있다.

본원에 사용한 용어 "조절하다"는 증가 또는 감소를 포함하는 임의의 변화를 유도하는 것을 의미한다(예를 들어, 지방산 산화의 조절자는 지방 산화 속도를 증가시키거나 감소시킨다).

본원에 사용한 용어 "근육 세포"는 주로 근육 조직의 세포로부터 유래하는 세포를 의미한다. 근육 세포는 근육 조직으로부터 새롭게 분리한 것이거나 확립된 세포주일 수 있다.

본원에 사용한 용어 "비만"은 체중이 신체 질량 지수에 의해 측정되는 바와 같이 이상적인 체중에 비해 20%를 상회하는 상태를 의미한다.

올레일에탄올아미드(OEA)는 하기 화학식의 천연 지질을 의미한다:

상기 화학식에서, "Me"는 메틸기를 의미한다.

본원에 사용한 용어 "감량"은 전체 체중중 일부분의 상실을 의미한다.

본원에 사용한 용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는 임의의 표준 약학적 담체, 완충액 및 부형제, 예를 들어 인산염 완충 염수 용액, 물 및 에멀션(예를 들어, 오일/물 또는 물/오일 에멀션), 및 여러가지 유형의 습윤제 및/또는 보조제를 포함하는 의미이다. 적합한 약학 담체 및 그들의 제제화에 관한 내용은 문헌[참조: REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES(맥 출판사, 이스턴, 19판 (1995)]에 기술되어 있다. 바람직한 약학적 담체는 활성 제제의 의도된 투여 방식에 기초한다. 전형적인 투여 방식은 후술한다.

본원에 사용한 용어 "유효량"은 원하는 결과를 얻기에 충분한 투여량을 의미한다. 원하는 결과는 투여받은 개체에게서 나타나는 주관적인 개선점 및 객관적인 개선점을 포함할 수 있다. 주관적인 개선점은 감퇴된 식욕 또는 음식물에 대한 욕구의 감소일 수 있다. 객관적인 개선점은 감소된 체중, 체지방 또는 음식물, 음식물 소비의 감소 또는 감소된 식탐 활동일 수 있다.

본원에 사용한 용어 "예방적 처치"는 질병의 징후를 나타내지 않는 개체 또는 단지 질병의 초기 징후만을 나타내는 개체에게 투여하는 처치를 의미하는데, 상기 처치는 증가된 체중 또는 체지방과 관련된 병적 상태로의 전환을 감소시킬 목적으로 투여하는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물은 바람직하기 않거나 원하지 않는 체중 증가를 예방하기 위한 예방적 처치에 사용할 수 있다.

본원에 사용한 용어 "치료적 처치"는 질병의 징후를 나타내는 개체에게 투여하는 처치를 의미하는데, 상기 처치는 이들 질병의 징후를 감소 또는 제거할 목적으로 투여하는 것을 의미한다.

본원에 사용한 용어 "체중 조절을 위한"은 시간에 따른 체중 질량의 감소 또는 체중 증가의 감소를 포함하는 의미이다.

본 발명의 방법, 화합물 및 조성물은 일반적으로 포유동물에서 체지방 및 체중을 감소기키거나 조절하는 데 유용하다. 예를 들어, 본 발명의 방법, 조성물 및 화합물은 포유동물에서 식욕을 감퇴시키고 하이포파기아를 유발하는 데 유용할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법, 조성물 및 화합물은 체지방 및 체중의 상실을 촉진함으로써 과체중 또는 비만과 관련된 질병을 예방하거나 완화시키는 데 유용하다.

본 발명의 방법, 조성물 및 화합물은 지질 대사, 특히 지방 및 지방산 이화작용의 조절제를 포함한다.

본 발명의 화합물

본 발명의 특정 화합물은 비대칭 탄소 원자(광학 중심) 또는 이중 결합을 포함할 수 있으며; 라세미체, 부분입체 이성질체, 기하 이성질체 및 개개의 이성질체는 모두 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 이해해야 할 것이다.

이러한 본 발명의 화합물은 예를 들어 적합한 용매, 예를 들어 메탄올 또는에틸 아세테이트 또는 이의 혼합물로부터 분별 결정화에 의해 부분입체 이성질체 쌍의 거울상 이성질체로 분리할 수 있다. 이와 같은 방법으로 얻은 거울상 이성질체 쌍은 통상적인 방법, 예를 들어 분해제로서 광학 활성 산을 이용하는 방법에 의해 개개의 입체 이성질체로 분리할 수 있다.

대안으로, 이러한 본 발명의 화합물의 거울상 이성질체는 광학적으로 순수한 공지된 배치의 출발 물질을 이용하는 입체특이성 합성으로 얻을 수 있다.

본 발명의 화합물은 그들 원자들의 하나 이상에서 비자연적인 비의 원자 동위원소를 보유할 수 있다. 예를 들어, 상기 화합물은 동위원소, 예를 들어 트리튬 또는¹⁴C를 이용하여 방사능표지할 수 있다. 본 발명의 화합물의 모든 동위원소 변형체는 방사능을 갖고 있던 그리하지 않던 간에 본 발명의 범위에 속하는 것들이다.

본 발명의 화합물은 그들의 약학적으로 허용가능한 산 부가 염, 예를 들어 무기산 및 유기산을 이용하여 유도된 염의 형태로 분리할 수 있다. 이러한 산의 예로는 염산, 질산, 황산, 인산, 포름산, 아세트산, 트리플루오로아세트산, 프로피온산, 말레산, 숙신산, 말론산 등을 들 수 있다. 또한, 산성 기능을 갖는 특정 화합물은, 짝이온이 나트륨, 칼륨, 리튬, 칼슘, 마그네슘 등으로부터 선택되고 또한 유기 염기로부터 선택되는 그들의 무기염 형태일 수 있다. 본원에 사용한 용어 "약학적으로 허용가능한 염"은 약학적으로 허용가능한 비독성 염기 또는 산(무기 염기 또는 산 및 유기 염기 또는 산을 포함함)으로부터 제조된 염을 의미한다.

또한, 본 발명은 본 발명의 화합물의 프로드러그를 포함하는데, 프로드러그라함은 투여시 대사 과정에 의한 화학적 전환으로 인해 약리학적 활성 물질로 되는 물질을 의미한다. 일반적으로, 이러한 프로드러그는 생체 내에서 본 발명의 기능적 화합물로 용이하게 전환될 수 있는 본 발명의 화합물의 유도체일 것이다. 적합한 프로드러그 유도체를 선택하고 제제하기 위한 통상적인 방법은 예를 들어, 문헌[참조: "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985]에 기술되어 있다. 또한, 본 발명은 본 발명의 화합물의 활성 대사산물도 포함한다.

A. 지방산 알칸올아미드 화합물, 상동체 및 유사체

본 발명의 화합물은 체지방을 감소시키는 지방산 알칸올아미드 화합물(지방산 에탄올아미드 화합물을 포함함) 및 그들의 상동체 및 지방산 알칸올아미드의 특정 유사체를 포함한다. 이러한 화합물은 생체 내에서 시험 화합물에 투여시 식욕 감퇴, 음식물 섭취 및/또는 체중 또는 체지방 감소를 유발할 수 있는 능력의 관점에서 확인하고 한정할 수 있다.

따라서, 이러한 여러가지 지방산 알칸올아미드, 상동체 및 유사체도 고려한다. 본 발명의 화합물은 하기 화학식 I의 화합물을 포함한다:

화학식 I

상기 화학식에서, n은 0∼5이고, a와 b의 합은 0∼4일 수 있다. Z는 -C(O)N(R⁰)-; -(R⁰)NC(O)-; -OC(O)-; -(O)CO-; O; NR⁰및 S로부터 선택되며; R⁰및 R²는 치환 또는 비치환 알킬, 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₆알킬, 치환 또는 비치환 저급 (C_1-C₆)아실, 호모알킬, 및 아릴로 구성되는 군으로부터 개별적으로 선택된다. 또한, 상기 화합물의 지방산부 또는 알칸올아민(예를 들어, 에탄올아민) 부분 또는 상기 부분 둘 다의 4개 이하의 수소 원자는 이중결합 또는 메틸에 의해 치환될 수 있다. 또한, 탄소 c와 d 사이의 상기 분자 결합은 불포화 또는 포화 결합일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 상기 화학식 I의 지방산 에탄올아미드는 천연 화합물이다.

또한, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 Ia의 화합물을 포함한다:

몇몇 구체예에서, 상기 화학식 Ia의 화합물은 n이 0∼5이고, a와 b의 합이 0∼4이며, R¹및 R²는 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₆알킬, 저급 치환 또는 비치환 (C₁-C₆)아실, 호모알킬 및 치환 또는 비치환 아릴로 구성되는 군으로부터 개별적으로 선택된다. 또한, 이 구체예에서, 상기 화학식 Ia의 화합물의 지방산부 및 알칸올아민(예를 들어, 에탄올아민) 부분의 4개 이하의 수소 원자는 이중결합 또는 메틸기에 의해 치환될 수 있다. 또한, 탄소 c 및 d 사이의 분자 결합은 불포화되거나포화될 수 있다. 아실기를 가진 몇몇 구체예에서, 아실기는 프로피온산, 아세트산 또는 부티르산일 수 있고, R²로서 에스테르 결합 또는 R¹으로서 아미드 결합에 의해 부착된다.

다른 구체예에서, 상기 화합물은 특히 지방산부가 오레산, 엘라이드산 또는 팔미트산을 포함하는 것을 포함한다. 이러한 화합물로는 올레일에탄올아미드, 엘라이드에탄올아미드 및 팔미틸에탄올아미드를 들 수 있다.

올레일에탄올아미드

다른 구체예에서, 화학식 Ia의 화합물은 n이 1∼3이고, a와 b의 합은 1∼3이며, R¹및 R²는 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₆알킬, 치환 또는 비치환 저급 (C₁-C₆)아실로 구성되는 군으로부터 개별적으로 선택된다. 또한, 이 구체예에서, 상기 화학식 Ia의 화합물의 지방산부 및 알칸올아민(예를 들어, 에탄올아민) 부분의 4개 이하의 수소 원자는 이중결합 또는 메틸기에 의해 치환될 수 있다. 또한, 탄소 c 및 d 사이의 분자 결합은 불포화되거나 포화될 수 있다. 추가의 구체예에서, 탄소 c 및 d 사이의 분자 결합은 불포화되며, 다른 수소 원자는 치환되지 않는다. 또 다른 구체예에서, R¹및 R²는 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₃알킬, 및 치환 또는 비치환 저급 (C₁-C₃)아실로 구성되는 군으로부터 개별적으로 선택된다.

예시적인 화합물로는 화학식 Ia의 에탄올아미드를 포함하는 모노-메틸 치환 화합물을 들 수 있다. 이러한 화합물로는 다음 화합물들을 들 수 있다:

상기 화학식의 메틸 치환 화합물은 특히 R¹및 R²가 둘 다 H인 화합물이 특히바람직하다: (R)1'-메틸올레일에탄올아미드, S(1')-메틸올레일에탄올아미드, (R)2'-메틸올레일에탄올아미드, (S)2'-메틸올레일에탄올아미드, (R)1-메틸올레일에탄올아미드, 및 (S)1-메틸올레일에탄올아미드.

역 OEA-유사 화합물

또한, 본 발명의 화합물은 OEA의 각종 유사체를 포함한다. 이들 화합물로는 하기 화학식의 역 OEA 화합물을 들 수 있다:

몇몇 구체예에서, 본 발명은 상기 화학식 II의 화합물을 제공한다. 화학식 II의 예시적인 화합물은 n인 1∼5이고, a와 b의 합이 0∼4이다. 이 구체예에서, R²는 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₆알킬, 치환 또는 비치환 저급 (C₁-C₆)아실, 호모알킬 및 아릴로 구성되는 군으로부터 선택된다. 또한, 이 구체예에서, 상기 화학식 Ia의 화합물의 지방산부 및 알칸올아민(예를 들어, 에탄올아민) 부분의 4개 이하의 수소 원자는 이중결합 또는 메틸기에 의해 치환될 수 있다.

화학식 II의 예시적인 화합물로는, 알칸올아민부가 에탄올아민, R²가 H인 화합물, 및 a 및 b가 각각 1이고, n이 1인 화합물을 포함한다.

화학식 II의 화합물의 한 구체예는 다름 화합물이다.

역 OEA

다른 구체예에서, 화학식 II의 화합물은 n이 1∼5이고, a와 b의 합은 1∼3이다. 이 구체예에서, R²는 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₆알킬 및 치환 또는 비치환 저급 (C₁-C₆)아실로 구성되는 군으로부터 선택된다. 또한, 이 구체예에서, 상기 화학식 II의 화합물의 지방산부 및 알칸올아민(예를 들어, 에탄올아민) 부분의 4개 이하의 수소 원자는 이중결합 또는 메틸기에 의해 치환될 수 있다.

올레일알칸올 에스테르 화합물

또한, 본 발명의 화합물은 하기 화학식 III의 올레일알칸올 에스테르를 포함한다:

몇몇 구체예에서, 상기 화학식 III의 화합물은 n이 1∼5이고, a와 b의 합은 0∼4이다. R²는 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₆알킬, 치환 또는 비치환 저급 (C₁-C₆)아실, 호모알킬 및 아릴로 구성되는 군으로부터 선택된다. 또한, 이 구체예에서, 상기 화학식 Ia의 화합물의 지방산부 및 알칸올아민(예를 들어, 에탄올아민) 부분의 4개 이하의 수소 원자는 이중결합 또는 메틸기에 의해 치환될 수 있다.

몇몇 구체예에서, 상기 화학식 III의 화합물은 n이 1∼3이고, a와 b의 합은 1∼3이다. R²는 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₆알킬 및 치환 또는 비치환 저급 (C₁-C₆)아실로 구성되는 군으로부터 선택된다. 또한, 이 구체예에서, 상기 화학식 Ia의 화합물의 지방산부 및 알칸올(예를 들어, 에탄올) 부분의 4개 이하의 수소 원자는 이중결합 또는 메틸기에 의해 치환될 수 있다.

상기 화학식 III의 화합물은 R²가 H인 화합물, a와 b가 각각 1인 화합물 및 n이 1인 화합물을 포함한다. 상기 화학식 III에 상응하는 화합물의 예로는 하기 올레일에탄올 에스테르를 포함한다.

또한, 상기 화학식 III의 화합물은 각각 (R 또는 S)-2'-메틸올레일에탄올에스테르; (R 또는 S)-1'-메틸올레일에탄올에스테르; 및 (R 또는 S)-1'-메틸올레일에탄올에스테르와 같은 모노-메틸 치환 올레일 에탄올 에스테르를 포함한다.

올레오일 알칸올 에테르

본 발명의 화합물은 또한 하기 화학식에 의한 올레오일알칸올 에테르를 포함한다.

몇몇 구체예에서, 화학식 IV의 화합물중 n은 1∼5이며 a 및 b의 합은 0∼4일 수 있다. 상기 화학식에서 R²는 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₆알킬, 치환 또는 비치환 저급 (C₁-C₆)아실, 알킬, 및 치환 및 비치환 아릴로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 화학식의 화합물중 지방산부 및 알칸올(예컨대, 에탄올) 부분중 어느 하나 또는 둘다에 있어서 4개 이하의 수소 원자는 또한 메틸 또는 이중 결합에의하여 치환될 수도 있다.

다른 구체예에서, 화학식 IV의 화합물중 n은 1∼3이며 ; a 및 b의 합은 1∼3이다. 상기 화학식에서 R²는 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₆알킬, 및 치환 또는 비치환 저급 (C₁-C₆)아실로 이루어진 군으로부터 선택된다. 상기 화학식의 화합물중 지방산부 및 알칸올(예컨대, 에탄올) 부분중 어느 하나 또는 둘다에 있어서 4개 이하의 수소 원자는 또한 메틸 또는 이중 결합에 의하여 치환될 수도 있다.

화학식 IV의 화합물은 R²가 H인 화합물, a 및 b가 각각 1인 화합물, 및 n이 1인 화합물을 포함한다. 화학식 IV에 의한 화합물은 다음과 같은 (R 또는 S) 1'-올레오일에탄올 에테르 및 (R 또는 S)-2'-올레오일에탄올 에테르를 포함한다:

극성 헤드 변형부를 보유하는 지방산 알칸올아미드 유사체

본 발명의 화합물은 또한 OEA의 다양한 극성 헤드 유사체를 포함한다. 이러한 화합물은 하기 화학식 V의 지방산부를 보유하는 화합물을 포함한다.

몇몇 구체예에서, 화학식 V의 화합물에 있어서의 a 및 b의 합은 0∼4일 수 있다. 다른 구체예에서, a 및 b의 합은 1∼3이다. 이러한 구체예에서, 상기 화학식의 화합물중 4개 이하의 수소 원자는 또한 메틸 또는 이중 결합으로 치환될 수도 있다. 뿐만 아니라, 탄소 c 및 d 사이 분자 결합은 불포화 또는 포화될 수 있다. 특히 바람직한 구체예는 올레산 지방산부가 다음과 같은 것이다.

상기 구조식중 R³기는 다음중 어느 하나로부터 선택될 수 있다 :

HO-(CH₂)_z-NH- [상기 식중, z는 1∼5이고, 이의 알킬부는 직쇄형 메틸렌 사슬임] 예컨대,

H₂N-(CH₂)_z-NH- [상기 식중, z는 1∼5이고, 이의 알킬부는 직쇄형 메틸렌 사슬임] 예컨대,

HO-(CH₂)_x-NH- [상기 식중 x는 1∼8이고, 이의 알킬부는 분지형 또는 시클릭일 수 있음] 예컨대,

R³에 대한 추가의 극성 헤드기는 예를 들어, 푸란, 디히드로푸란 및 테트라히드로푸란 작용기를 보유하는 화합물을 포함한다 :

[상기 구조식중, z는 1∼5일 수 있음].

본 발명의 화합물은 예를 들어, 피롤, 피롤리딘, 및 피롤린 고리계인 R³극성 헤드기를 보유하는 것을 포함한다:

상기 구조식의 화합물에 있어서, z는 1∼5일 수 있다.

다른 대표적인 헤드기는 다양한 이미다졸 및 옥사졸을 포함하는데, 그 예로서는 다음과 같은 것들이 있다.

상기 구조식의 화합물에서, z는 1∼5일 수 있다.

옥사졸피리딘 극성 헤드기의 예로서는 다음과 같은 것들도 있다 :

비극성 테일 변형부를 보유하는 지방산 알칸올아미드 유사체

본 발명의 화합물은 다양한 가요성 비극성 테일을 보유하는 다양한 알칸올아미드 및 에탄올아미드 화합물을 포함한다. 이러한 화합물은 R이 에탄올아민부, 알칸올아민부 또는 이들의 안정한 유사체를 나타내는 하기 화학식을 갖는 화합물을 포함한다. 에탄올아민의 경우, 에탄올아민부는 에탄올아민 산소에 의해서라기 보다는 에탄올아민 질소에 의해서 부착되는 것이 바람직하다.

[상기 구조식중, m은 1∼9이고, p는 독립적으로 1∼5임]

대표적인 화합물로서는 다음의 것이 있다.

다른 대표적인 화합물로서는 하기 구조식을 갖는 비극성 테일을 보유하는 에탄올아민 유사체가 있다.

대표적인 화합물로서는 지방산 알칸올아미드의 유사체를 포함한다. 이러한 유사체는 미국 특허 제6,200,998호(본원에 참고문헌으로 인용됨)에 교시되어 있는 화합물들을 포함한다. 상기 참고 문헌은 하기 일반식의 화합물을 교시하고 있다.

미국 특허 제6,200,998호에 정의된 상기 화학식에서, Ar¹은 (1) 아릴렌 또는 (2) 헤테로아릴렌으로서, 여기서 아릴렌 및 헤테로아릴렌은 R^a로부터 선택된 1∼4개의 기와 임의 치환되고 ; Ar²는 (1) 오르토-치환 아릴 또는 (2) 오르토-치환 헤테로아릴로서, 여기서 상기 오르토 치환기는 R로부터 선택되며 ; 아릴 및 헤테로아릴은 R^a로부터 독립적으로 선택된 1∼4개의 기로 추가로 임의 치환되고 ; X 및 Y는 독립적으로 O, S, N-R^b, 또는 CH₂이며 ; Z 는 O 또는 S이고 ; n은 0∼3이며 ; R은 (1) 할로 및 C_3-6시클로알킬로부터 선택된 1∼4개의 기로 임의 치환된 C_3-10알킬, (2) C_3-10알케닐, 또는 (3) C_3-8시클로알킬이고 ; R^a는 (1) C_1-15알카노일, (2) C_1-15알킬, (3) C_2-15알케닐, (4) C_2-15알키닐, (5) 할로, (6) OR^b, (7) 아릴, 또는 (8) 헤테로아릴로서, 여기서 상기 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 알카노일은 R^c로부터 선택된 1∼5개의 기로 임의 치환되며, 상기 아릴 및 헤테로아릴은 R^d로부터 선택된 1∼5개의 기로 임의 치환되고 ; R^b는 (1) 수소, (2) C_1-10알킬, (3) C_2-10알케닐, (4) C_2-10알키닐, (5) 아릴, (6) 헤테로아릴, (7) 아릴C_1-15알킬, (8) 헤테로아릴 C_1-15알킬, (9) C_1-15알카노일, (10) C_3-8시클로알킬로서, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐은 R^c로부터 독립적으로 선택된 1∼4개의 치환기로 임의 치환되고, 시클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴은 R^d로부터 독립적으로 선택된 1∼4개의 치환기로 임의 치환되거나 ; 또는 R^c는 (1) 할로, (2) 아릴, (3) 헤테로아릴, (4) CN, (5) NO₂, (6) OR^f; (7) S(O)_mR^f[여기서 m=0, 1 또는 2이되, 단 m이 1 또는 2인 경우 R^f는 H가 아님] ; (8) NR^fR^f, (9) NR^fCOR^f,(10) NR^fCO₂R^f, (11) NR^fCON(R^f)₂, (12) NR^fSO₂R^f[단 R^f는 H가 아님], (13) COR^f, (14) CO₂R^f, (15) CON(R^f)₂, (16) SO₂N(R^f)₂, (17) OCON(R^f)₂, 또는 (18) C_3-8시클로알킬로서, 여기서 상기 시클로알킬, 아릴 및 헤테로아릴은 할로 또는 C_1-6알킬중 1∼3개의 기로 임의 치환되며 ; R^d는 (1) R^c로부터 선택된 기, (2) C_1-10알킬, (3) C_2-10알케닐, (4) C_2-10알키닐, (5) 아릴C_1-10알킬, 또는 (6) 헤테로아릴C_1-10알킬로서, 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴은 R^e로부터 독립적으로 선택된 기로 임의 치환되고 ; 상기 R^e는 (1) 할로겐, (2) 아미노, (3) 카르복시, (4) C_1-4알킬, (5) C^1-4알콕시, (6) 히드록시, (7) 아릴, (8) 아릴C_1-4알킬, 또는 (9) 아릴옥시이며 ; R^f는 (1) 수소, (2) C_1-10알킬, (3) C_2-10알케닐, (4) C_2-10알키닐, (5) 아릴, (6) 헤테로아릴, (7) 아릴 C_1-5알킬, (8) 헤테로아릴C_1-15알킬, (9) C_1-15알카노일, (10) C_3-8시클로알킬로서 ; 여기서 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 알카노일 및 시클로알킬은 R^e로부터 선택된 1∼4개의 기로 임의 치환된다.

미국 특허 제5,859,051호에 교시된 유사체 또한 바람직하다. 이러한 유사체는 하기 화학식을 갖는다.

미국 특허 제5,859,051호에 정의된 상기 화학식 VII에 따른 구체예에서, R¹은 H, C_1-6알킬, C_5-10아릴 및 C_5-10헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되며, 상기 알킬, 아릴 및 헤테로아릴은 1∼3개의 R^a기로 임의 치환되고, R¹은 H, C_1-15알킬, C_2-15알케닐, C_2-15알키닐 및 C_3-10시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며, 상기 알킬, 알케닐, 알키닐 및 시클로알킬은 1∼3개의 R^a기로 임의 치환되고 ; R³는 H, NHR¹, NH아실, C_1-15알킬, C_3-10시클로알킬, C_2-15알케닐, C_1-15알콕시, CO₂알킬, OH, C_2-15알키닐, C_5-10아릴, C_5-10헤테로아릴로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 알킬, 시클로알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 및 헤테로아릴은 1∼3개의 R^a기로 임의 치환되며 ; (Z--W-)는 Z-CR⁶R⁷-, Z-CH.=CH-, 또는이고 ;

R⁸은 CR⁶R⁷, O, NR⁶, 및 S(O)_p로 이루어진 군으로부터 선택되며 ; R⁶및 R⁷은H 및 C_1-6알킬로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고 ; B는 1) 0∼2개의 이중 결합과, O, S 및 N으로 이루어진 군으로부터 선택된 이종 원자를 함유하는 5원 또는 6원 복소환으로서, 상기 이종 원자는 5원 또는 6원 복소환상 임의의 위치에서 치환되고, 상기 복소환은 1∼3개의 R^a로 임의 치환 또는 비치환된 5원 또는 6원 복소환 ; 2) 0∼2개의 이중 결합을 함유하는 5원 또는 6원 탄소환으로서, 상기 탄소환은 5원 또는 6원 탄소환상의 임의의 위치에서 1∼3개의 R^a기로 임의 치환 또는 비치환된 5원 또는 6원 탄소환 ; 및 3) 0∼2개의 이중 결합, 및 O, N, 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 3개의 이종 원자를 함유하는 5원 또는 6원 복소환으로서, 상기 이종 원자는 5원 또는 6원 복소환상의 임의의 위치에서 치환되며, 상기 복소환은 1∼3개의 R^a기로 임의 치환 또는 비치환된 5원 도는 6원 복소환으로 이루어진 군으로부터 선택되며; X¹및 X²는 H, OH, C_1-15알킬, C_2-15알케닐, C_2-15알키닐, 할로, OR³, ORCF₃, C_5-10아릴, C_5-10아랄킬, C_5-10헤테로아릴 및 C_1-10아실로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택되고, 상기 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴 및 헤테로아릴은 1∼3개의 R^a기로 임의 치환되고 ; R^a기는 할로, 아실, 아릴, 헤테로아릴, CF₃, OCF₃, --O--, CN, NO₂, R³, OR³; SR³, =N(OR), S(O)R³, SO₂R³, NR³R³, NR³, COR³, NR³CO₂R³,NR³CON(R³)₂, NR³SO₂R³, COR³, CO₂R³, CON(R³)₂, SO₂N(R³)₂, OCON(R³)₂로 이루어진 군으로부터 선택되는 일원을 나타내고, 여기서 상기 아릴 및 헤테로아릴은 1∼3개의 할로 또는 C_1-6알킬 기로 임의 치환되며 ; Y는 S(O)_p, -CH₂-, -C(O)-, -C(O)NH-, -NR-, -O-, -SO₂NH-, -NHSO₂로 이루어진 군으로부터 선택되고 ; Y¹은 0 및 C로 이루어진 군으로부터 선택되며 ; Z는 CO₂R³, R³CO₂R³, CONHSO₂Me, CONHS0₂, CONH₂및 5-(1H-테트라졸)로 이루어진 군으로부터 선택되고 : t 및 v는 독립적으로 0 또는 1로서, t + v = 1이며, Q는 2∼4개의 탄소 원자를 함유하는 포화 또는 불포화 직쇄형 탄화수소 이고, p는 0∼2이되, 단 Z가 CO₂R³이고 B는 O를 포함하는 5원 복소환인 경우, R³는 메틸을 나타내지 않는다.

본 발명의 방법을 수행하는데 적당한 추가의 유사체 및 조성물은 미국 특허 제5,847,008호, 미국 특허 제6,090,836호 및 미국 특허 제6,090,839호에 교시된 화합물을 포함하며, 상기 문헌들은 각각 본원에 본 발명에 개시된 사항과 일치하는 정도로 전체로서 참고문헌으로 인용되어 있다.

추가의 다양한 유사체는 미국 특허 제6,274,608호에 교시되어 있는 것이 적당하다. 아릴 및 헤테로아릴 아세트산 및 옥시아세트산 유사체는 미국 특허 제6,160,000호에 교시되어 있으며 ; 치환된 5-아릴-2,4-티아졸리딘디온 유사체는 미국 특허 제6,200,998호에 교시되어 있고 ; 기타 가능한 유사체 예컨대, 다포화지방산 및 에이코사노이드는 공지되어 있다[예를 들어, Forman, BM, Chen, J, and Evans RM, PNAS 94: 4312-4317 참조]. 본 발명에 개시된 사항과 일치하는 정도로 본원에 전체로서 참고 문헌으로 인용된 각각의 상기 문헌에 개시된 화합물은, 이하 기술된 방법에 의하여 스크리닝되어, 예를 들어 지방의 이화 작용을 조절하고 식욕을 감소시켜, 체지방 및 체중 감소에 유용한, 본 발명의 화합물을 제공할 수 있다.

지방산 알칸올아미드의 합성

본 발명의 실시에 유용한 화합물은 당업계에 공지된 방법을 사용하여 용이하게 합성 및 정제된다. 대표적인 합성 반응식(반응식 1)에서, 카르복실산 및 아미노알코올(또는 이의 0-보호 유도체)은 적당한 용매중에서 탈수화제 예컨대, 디시클로헥실카르보디이미드의 존재하에 반응한다. 지방산 알칸올 아미드는 예컨대, 추출, 결정화, 침전, 크로마토그래피 등의 방법에 의하여 분리된다. 최종 생성물이 O-보호 부산물이면, 통상적으로 당업계에 공지된 방법에 의하여 탈보호되어 유리 히드록실기를 보유하는 지방산 부산물이 생성된다.

당업자들은 상기 제시된 반응식을 다양하게 변형시킬 수 있다는 사실을 인식할 것이다. 예를 들어, 활성화된 유도체 예를 들어, 산의 아실 할라이드, 활성 에스테르가 사용될 수 있다. 이와 유사하게, 글리콜(바람직하게는 모노 0-보호된 글리콜)은 아미노 알코올과 치환되어 상기 분자의 2개의 구성 성분 사이에 에스테르결합을 형성할 수 있다.

역 에스테르(reverse ester) 및 역 아미드(reverse amide)는 또한 당 업계에 공지된 방법에 의하여 용이하게 합성된다. 예를 들어, 히드록시카르복실산은 탈수화제의 존재하에 장쇄 알킬(즉, C₄-C₂₂)의 아민 또는 히드록시 유도체와 반응한다. 임의의 반응 경로에서, 히드록시카르복실산의 히드록실부를 보호하는 것이 바람직하다.

에테르 및 머캅탄은 당업자에게 널리 공지된 방법 예를 들어, 윌리암슨 합성법(Williamson synthesis)에 의하여 제조된다. 예를 들어, 장쇄 알킬 알코올 또는 티올은 염기 예를 들어, NaH에 의하여 탈양성자화되며, 반응성 알코올 유도체 예를 들어, 할로, 토실, 메실 알코올, 또는 이들의 보호된 유도체는 생성된 음이온과 반응하여 에스테르 또는 머캅탄을 생성한다.

전술한 방법 및 이의 변형법은 예를 들어, 문헌[RECENT DEVELOPMENTS IN THE Synthesis OF FATTY ACID DERIVATIVES, Knothe G, ed., Amer. Oil Chemists Society 1999; COMPREHENSIVE NATURAL PRODUCTS CHEMISTRY AND OTHER SECONDARY METABOLITES INCLUDING FATTY ACIDS AND THEIR DERIVATIVES, Nakanishi K, ed., Pergamon Press, 1999; ORGANIC SYNTHESIS COLLECTED VOLUMES I-V, John Wiley and Sons; COMPENDIUM OF ORGANIC SYNTHETIC METHODS, Volumes 1-6, Wiley Interscience 1984; ORGANIC FUNCTIONAL GROUP PREPARATION, Volumes I-III, Academic Press Ltd. 1983; Greene T, PROTECTING GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS,2d ed., Wiley Interscience 1991]에서 살펴볼 수 있다.

사용 방법, 약학 조성물, 및 이의 투여 방법

사용 방법

본 발명의 화합물법(예컨대, 지방산 알칸올아미드, 지방산 에탄올아미드 화합물, 유사체, 및 동족체), 조성물 및 방은 개, 고양이 및 특히 인간을 비롯한 포유 동물의 체지방 및/또는 체중을 감소시키는데 사용된다. 체중 감소는 미용 또는 치료의 목적으로 이루어질 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 식욕을 감소시키거나 또는 하이포파지아(hypophagia)를 유발시키는데 사용될 수도 있다.

본 발명의 화합물, 조성물, 및 방법은 정상 체중 범위에 속하는 개체의 체중 증가 또는 체지방 증가를 억제하는데 사용된다. 본 발명의 화합물은 당뇨병 또는 고지혈증 또는 암과 관련된 질환에 대하여 임의의 약학적 개입의 필요성이 없는 건강한 개체에서 사용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 치료될 개체는 당 또는 지방 수준, 대사 작용의 교란과 관련된 질병을 앓고있지 않거나, 또는 심혈관 질환 및 뇌혈관 질환의 위험 요인이 존재하지 않는다. 개체들은 비당뇨병성 질환을 앓을 수 있으며 혈당 수준은 정상 범위에 있을 수 있다. 개체들은 또한 혈중 지방(예를 들어, 콜레스테롤) 또는 트리글리세리드 수준이 정상 범위에 있다. 개체들은 또한 동맥경화증을 앓고 있지 않을 수 있다. 개체들은 다른 증상 예컨대, 암 또는 기타 종양, 인슐린 내성과 관련된 질환, X 증후군 및 췌장염을 앓고 있지 않을 수 있다.

다른 구체예에서, 개체들은 체지방 및/또는 체중 감소를 필요로 하는 과체중 또는 비만인 개체이다. 이러한 구체예에서, 본 발명의 방법, 화합물, 및 조성물은투여되어 체중을 감소시킬 수 있을 뿐만 아니라, 일단 체중이 개체의 성별, 나이 및 신장에 대하여 정상 범위가 되면 체중이 증가되는 것을 막을 수도 있다. 본 발명의 화합물은 당뇨병, 고지혈증 또는 암과 관련된 질환의 약학적 치료를 필요로 하지 않는 건강한 개체에서 사용될 수 있다. 개체는 또한 심혈관 질환 및 뇌혈관 질환에 대한 위험 인자가 존재하지 않는다. 몇몇 구체예에서, 치료 받은 개체는 당(예컨대, 글루코즈) 또는 지방 대사와 관련된 질환을 앓고 있지 않다. 개체는 비당뇨병성일 수 있으며, 혈당 수준은 정상의 범위내에 있을 수 있다. 개체는 또한 혈중 지방(예컨대, 콜레스테롤, HDL, LDL, 총 콜레스테롤) 또는 트리글리세리드의 수준이 정상의 범위내에 있을 수도 있다. 개체는 동맥경화증의 치료가 필요 없을 수 있다.

본 발명의 화합물, 방법, 및 조성물은 또한 투여되었을 경우 고양이, 개 및 인간을 비롯한 포유 동물의 식욕을 억제할 수도 있다. 몇몇 구체예에서, 상기 화합물은 어떠한 질병에 대해서도 약학적 개입을 필요로 하지 않는 건강한 개체에서 사용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 개체는 암, 당뇨병 또는 고지혈증을 비롯한 질환에 대하여 예방적 또는 경감적 치료를 필요로 하지 않는다. 몇몇 구체예에서, 치료받은 개체는 비정상적인 당 또는 지방의 수준과 관련된 질환을 앓고 있지 않다. 다른 구체예에서, 개체는 심혈관 질환 또는 뇌혈관 질환에 대한 위험 인자가 존재하지 않을 수 있다. 개체는 비당뇨병성이며 혈당 수준은 정상의 범위내에 있다. 개체는 또한 혈중 지방(예컨대, 콜레스테롤)또는 트리글리세리드 수준이 정상 범위내에 있다. 개체는 동맥경화증을 앓고 있지 않을 수 있다.

본 발명의 화합물, 방법 및 조성물은 또한 고양이, 개 및 인간을 비롯한 포유 동물에서 지방 대사를 조절(예컨대, 지방 이화 작용의 촉진)하도록 투여될 수도 있다. 몇몇 구체예에서, 화합물은 건강한 개체에서 식욕을 감소시키는데 사용될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 치료 받을 개체는 당 또는 지방 대사와 관련된 질환(예컨대, 당뇨병, 과콜레스테롤증, 저 HDL 수준 또는 고 LDL 수준)을 앓고 있지 않을 수도 있다. 개체는 비당뇨병성일 수 있으며, 이 경우 혈당 수준은 정상의 범위내에 있을 수 있다. 개체는 또한 혈중 지방(예컨대, 콜레스테롤) 또는 트리글리세리드 수준이 정상의 범위내에 있을 수도 있다. 개체는 동맥 경화증을 앓고 있지 않을 수도 있다.

본 발명의 화합물 및 조성물을 이용한 치료 방법은 체중 감소 정도 또는 감소량이 성취됨에 의하여 예정되는 기간 동안, 또는 개체의 BMI가 정상의 범위내에 있을때 수행될 수 있다. 본 발명의 화합물 및 조성물을 이용한 치료 방법은 소정의 체중 감소 정도 또는 체중 감소량이 일단 이루어지거나, 또는 개체의 BMI가 정상의 범위내에 있을때 줄일 수 있다.

본 발명의 화합물 및 조성물은 체지방 또는 식욕을 감소시키기 위한 목적으만 투여될 수 있다.

약학 조성물

본 발명의 다른 측면은 본 발명의 화합물 및 약학적 허용 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 약학 조성물은 활성 성분으로서 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적 허용염을 포함하고, 약학적 허용 담체를 포함할 수도 있으며, 필요에 따라서는 다른 치료 성분을 포함할 수도 있다.

상기 조성물은 경구, 직장, 국소, 비경구(피하, 근내 및 정맥내), 안(안과적), 폐(비강 또는 협측 흡입), 또는 비강 투여에 적합한 조성물을 포함하나, 임의의 주어진 경우에 있어서 가장 적당한 경로는, 부분적으로는 치료받을 증상의 성질 및 심각성과, 활성 성분의 성질에 따라서 달라질 것이다. 대표적인 투여 경로는 경구 투여이다. 상기 조성물은 편리하게는 단위 투여형으로 제공될 수 있고, 제약 업계에 널리 공지된 임의의 방법에 의하여 제조될 수 있다.

실제로, 본 발명의 화합물은 종래의 약학적 화합 기법에 따라서 약학적 담체와의 인접 혼합물에 활성 성분으로서 배합될 수 있다. 상기 담체는 투여 예컨대, 경구 투여 또는 비경구 투여(정맥내 투여 포함)에 바람직한 제제의 형태에 따라서 매우 다양한 형태를 취할 수 있다. 경구 투여형에 있어서의 조성물 제조시, 경구 액상 제제 예를 들어, 현탁액, 엘릭시르 및 용액의 경우에는 통상의 약학 배지중 임의의 것 예를 들어, 물, 글리콜, 오일, 알코올, 향미제, 보존제, 착색제 등이 사용될 수 있거나 ; 또는 경구 고상 제제 예컨대, 분말, 경질 및 연질 캡슐과 정제의 경우에는 담체 예컨대, 전분, 당, 미소결정질 셀룰로즈, 희석제, 과립화제, 윤활제, 결합제, 붕괴제 등이 사용될 수 있으며, 액상 경구 투여 제제보다는 고상 경구 투여 제제를 사용하는 것이 바람직하다.

투여의 용이성으로 인하여, 명백하게 고상 약학 담체가 사용되는 경우, 정제 및 캡슐은 가장 유리한 경구 단위 투여형을 나타낸다. 원한다면, 정제는 표준적인수성 또는 비수성 기법에 의하여 코팅될 수 있다. 이러한 조성물 및 제제는 활성 화합물을 0.1% 이상 함유할 수 있다. 이러한 조성물중 활성 화합물의 비율은 물론 다양할 수 있으며, 편리하게는 단위 투여형의 약 2∼약 60%일 수 있다. 이러한 치료학적으로 유용한 조성물에 있어서 활성 화합물의 양은 치료학적으로 효과적인 투여형이 얻어지는 정도이다. 활성 화합물은 또한 예를 들어, 액체 소적 또는 분무로서 비내 투여될 수도 있다.

정제, 알약, 캡슐 등은 또한 결합제 예컨대, 검, 트라가칸트, 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤라틴 ; 부형제 예컨대, 디칼슘 포스페이트 ; 붕괴제 예컨대, 옥수수 전분, 감자 전분, 알긴산 ; 윤활제 예컨대, 스테아르산 마그네슘 ; 및 감미제 예컨대, 수크로즈, 락토즈 또는 사카린을 함유할 수 있다. 단위 투여형이 캡슐인 경우, 전술한 유형의 재료 이외에 액상 담체 예컨대, 지방산 오일을 함유할 수 있다.

다양한 기타 재료는 코팅으로서 제공될 수 있거나 또는 단위 투여 제제의 물리적 형태를 변형시키도록 제공될 수 있다. 예를 들어, 정제는 셸락, 당 또는 이들 모두로 코팅될 수 있다. 시럽 또는 엘릭시르는 활성 성분 이외에 감미제로서 수크로즈를, 보존제로서 메틸 및 프로필파라벤을, 염료 및 향미제 예컨대, 체리 또는 오렌지 향을 함유할 수 있다. GI 관의 상부를 통하여 운반될때 파괴되는 것을 방지하기 위해서, 상기 조성물은 장용 외피 제제일 수 있다.

투여 방법

본 발명의 화합물은 또한 비경구적으로 투여될 수도 있다. 이러한 활성 화합물의 용액 또는 현탁액은 계면활성제 예컨대, 히드록시프로필셀룰로즈와 적당히 혼합된 물에서 제조될 수 있다. 분산액은 또한 글리세롤, 액상 폴리에틸렌글리콜 및 이들의 오일중 혼합물에서 제조될 수도 있다. 통상의 저장 및 사용 조건하에서, 이러한 제제는 미생물의 성장을 방지하는 보존제를 함유한다.

주입용으로 적당한 약학 제형은 멸균 주입 용액 또는 분산액의 즉시사용(extemporaneous) 제제용 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 분말을 포함한다. 모든 경우에 있어서, 상기 제형은 멸균된 것이고 용이하게 주입될 수 있는 정도의 액체이어야 한다. 제조 및 저장 조건하에서 안정해야 하며, 미생물 예컨대, 박테리아 및 진균의 오염 활동에 대하여 보존적이어야 한다. 담체는 예컨대, 물, 에탄올, 폴리올(예컨대, 글리세롤, 프로필렌글리콜 및 액상 폴리에틸렌글리콜), 이들의 적당한 혼합물 및 식물성 오일을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다.

본 발명의 화합물은 광범위한 투여량 범위에 대하여 유효할 수 있다. 예를 들어, 성인의 치료에 있어서 투여량은 약 10∼약 1000 mg, 약 100∼약 500 mg, 또는 약 1∼약 100 mg이 필요할 수 있다. 투여량은 1일에 0.05∼약 100 mg, 및 더욱 바람직하게는 약 0.1∼약 100 mg이 사용될 수 있다. 가장 바람직한 투여량은 1일에 약 0.1∼약 70 mg이다. 환자에 따른 섭생법을 선택하는데 있어서, 투여량은 종종 1일에 약 2∼약 70 mg으로 시작할 필요가 있으며, 증상이 통제 가능하게 되었을때 투여량은 1일에 약 0.1∼약 10 mg으로 감소시킬 수 있다. 예를 들어, 성인을 치료할 경우, 투여량은 1일에 약 0.05∼약 100 mg, 바람직하게는 약 0.1∼약 100 mg일 수 있다. 정확한 투여량은 투여 방식, 목적 치료법, 투여형, 치료받을 개체 및 치료받을 개체의 체중에 따라서 달라질 것이며, 치료를 책임지고 있는 내과 의사 또는 수의사의 선택 및 경험에 따라서도 달라질 것이다.

일반적으로 본 발명의 화합물은 바람직하게는 단위 투여형당 활성 성분 약 0.1∼약 100 mg과 약학적 허용 담체를 포함하는 단위 투여형으로 분배될 수 있다. 일반적으로, 경구, 비강, 폐 또는 경피 투여에 적당한 투여형은 약학적 허용 담체 또는 희석제와 함께 화합물 약 0.001∼약 100 mg, 바람직하게는 약 0.01∼약 50 mg을 포함한다. 저장 및 사용을 위해서, 이러한 제제는 미생물의 성장을 억제하는 보존제를 함유하는 것이 바람직하다.

적당량의 후보 화합물의 투여는 당 업계에 공지된 임의의 수단 예컨대, 경구 또는 직장, 비경구, 복강내, 정맥내, 피하, 진피하, 비내 또는 근내 투여에 의할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 투여는 경피 투여이다. 후보 화합물의 적당량 또는 적당 투여량은 당 업계에 공지된 실험을 통하여 결정될 수 있다. 적당한 치료학적 양은 경시적으로 동물의 체지방 또는 체중을 감소시키는데 충분한 양이다. 후보 화합물은 체지방 또는 체중을 감소시키는데 필요한 정도로 자주 예를 들어, 매시간, 6시간, 8시간, 12시간 또는 18시간 마다 투여되거나, 매일 또는 매주 투여될 수 있다.

경구 투여에 적당한 제제는 (a) 액상 용액 예컨대, 희석제 예를 들어, 물, 염수 또는 PEG 400에 현탁된 유효량의 패킹된 핵산 ; (b) 각각 소정량의 활성 성분을 액체, 고체, 과립 또는 젤라틴으로서 함유하는 캡슐, 향분(sachet) 또는 정제 ; (c) 적당한 액체중의 현탁액 ; 및 (d) 적당한 유액으로 이루어질 수 있다. 정제 제형은 락토즈, 수크로즈, 만니톨, 소르비톨, 칼슘 포스페이트, 옥수수 전분, 감자 전분, 미소결정질 셀룰로즈, 젤라틴, 콜로이드성 이산화실리콘, 활석, 스테아르산마그네슘, 스테아르산 및 기타 부형제, 착색제, 충전제, 결합제, 희석제, 완충제, 습윤제, 보존제, 향미제, 염료, 붕괴제 및 약학적 허용 담체중 1 이상을 포함할 수 있다. 로진즈 제형은 향미 성분 예컨대, 수크로즈와, 비활성 기제 예컨대, 젤라틴 및 글리세린 또는 수크로즈 및 아카시아 유액, 겔 등을 포함하는 습제 정제를 당 업계에 공지되어 있는 활성 성분, 담체와 함께 포함할 수 있다.

주입 용액 및 현탁액은 전술한 유형의 멸균 분말, 과립 및 정제로 제조될 수 있다. 예를 들어, 관절내(관절 내부), 정맥내, 근내, 피내, 복강내 및 피하 투여 경로에 의한 비경구 투여에 적당한 제제는 수성 및 비수성, 등장성 멸균 주입 용액을 포함하며, 이 용액은 산화 방지제, 완충제, 정균제와, 목적 수용체의 혈액으로 제제를 등장성으로 만드는 용질, 그리고 현탁제, 용해제, 증점제, 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 함유할 수 있다.

경피 투여 경로에 있어서, 약물의 경피 투여 방법은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th Edition, (Gennaro et al. Eds., Mack Publishing Co., 1985)]에 개시되어 있다. 진피 또는 피부 패치는 본 발명의 화합물의 경피 전달용으로서 바람직한 수단이다. 패치는 상기 화합물의 흡수를 증가시키기 위하여 흡수 촉진제 예컨대, DMSO를 제공하는 것이 바람직하다. 경피 약물 전달 방법으로서 다른 방법은 미국 특허 제5,962,012호, 동 제6,261,595호, 및 동 제 6,261,595호에 개시되어 있다. 이들은 각각 본원에 전체로서 참고 문헌으로 인용되어 있다.

바람직한 패치는 피부로의 약물 전달 속도를 조절하는 성분을 포함한다. 패치는 각각 저장 시스템 또는 일체식 시스템을 포함하는 다양한 투여 시스템을 제공할 수 있다. 상기 저장체 디자인은 예를 들어, 4개의 층 즉, 피부와 직접 접촉하는 접착층, 약물 분자의 확산을 조절하는 조절막, 약물 분자의 저장체 및 내수성 백킹(backing)을 보유할 수 있다. 이러한 디자인은 특정 기간에 걸쳐 약물을 균일한 양으로 전달하며, 이러한 전달 속도는 상이한 유형의 피부의 포화 한계(saturation limit) 미만이어야 한다.

예를 들어, 상기 일체식 디자인은 통상적으로 3개의 층 즉, 접착층, 상기 화합물을 함유하는 중합체 매트릭스 및 내수성 백킹을 보유한다. 이러한 디자인은 피부에 포화량의 약물을 전달한다. 따라서, 전달은 피부에 의하여 조절되는 것이다. 패치중 약물의 양은 포화 수준 이하로 감소되므로, 전달 속도는 느려진다.

본 발명의 화합물은 본 발명의 다른 화합물과 혼합되거나 또는 다이어트나 치료, 예방, 체지방 억제 또는 감소에 유용할 수도 있는 다른 약물과 혼합되어 사용될 수 있다. 이와같은 다른 약물들은 임의의 투여 경로 및 이러한 투여 경로에 일반적으로 사용되는 양으로, 본 발명의 화합물과 동시에 또는 연속적으로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물이 1 이상의 다른 약물과 동시에 사용되는 경우, 이러한 다른 약물 및 화합물을 함유하는 단위 투여형의 약학 조성물이 바람직하다. 1 이상의 다른 활성 성분과 함께 사용될때, 본 발명의 화합물 및 다른 활성 성분은 단독으로 사용될 경우보다 낮은 투여량으로 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 약학 조성물은 1 이상의 활성 성분과 전술한 화합물을 함유하는 성분을 포함한다.

본 발명의 화합물의 정의

예를 들어 전술한 바와 같은 후보 화합물은 당 업계에 공지된 다양한 방법에 의하여 스크리닝될 수 있다. 예를 들어, 체지방 감소 화합물은 당업자에게 공지된 동물 생물분석 기법을 사용하여 생체내에서 확인될 수 있다. 시험 화합물 및 적당한 비이클 또는 칼로리 조절제는 다수의 경로(예컨대, 경구 투여 경로, 비경구 투여 경로)중 임의의 경로에 의하여 실험 대상에 투여될 수 있으며, 이 대상물의 체중 감소는 치료 과정중에 모니터될 수 있다. 실험 대상은 인간 또는 시험 동물(예, 래트, 마우스)이다.

본 발명의 화합물이 식욕에 미치는 효과 또는 하이포파지아 유도 또는 음식 섭취량 감소에 미치는 효과는 예를 들어, 시험 대상의 음식 섭취량을 모니터함으로써(예를 들어, 음식의 무게 또는 칼로리 함량의 관점에서 개체에 의하여 섭취되었거나 또는 섭취되지 않은 양을 측정함으로써) 평가될 수 있다. 본 발명의 화합물이 식욕에 미치는 효과는 또한 인간 피검체에게 식욕 또는 음식에 대한 욕구에 대하여 질문하는 것을 비롯한 수단에 의하여 평가될 수도 있다. 본 시험 화합물이 지방 대사에 미치는 효과는 혈중 지방 및 지방산 산화를 모니터함으로써 평가될 수 있다. 이러한 평가 방법에 관하여는 당업자에게 널리 공지되어 있다. 이러한 연구 방법은 투여의 지속 기간과 관련하여 단기적, 약간 단기적(subacute), 장기적 또는 약간 장기적(subchronic)이며/이거나 투여 효과에 따른 후속적인 것일 수 있다.

체지방 감소는 예를 들어 동물의 체지방 변화를 직접 측정하거나, 또는 동물의 체중 변화를 측정함으로써 측정될 수 있다. 동물은 마우스, 래트, 기니아 피그또는 토끼로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 동물은 체중 관련 질환에 대한 ob/ob 마우스, db/db 마우스, 또는 저커(Zucker) 래트 또는 기타 동물 모델일 수 있다. 인간에 대해서 임상학적 연구가 수행될 수도 있다.

조합형 화학적 라이브러리

최근들어, 신규의 화합물을 생성시키는 것을 보조하기 위하여 조합형 화학적 라이브러리를 사용하는데 관심이 집중되고 있다. 조합형 화학적 라이브러리는 다양한 화학적 화합물의 집합체로서, 이는 다수의 화학적 "빌딩 블록(building block)" 예컨대, 시약을 배합시킴으로 인한 화학적 합성법 또는 생물학적 합성법에 의하여 제조된다. 예를 들어, 선형의 조합형 화학적 라이브러리 예컨대, 폴리펩티드 라이브러리는 아미노산이라 칭하여지는 1 세트의 화학적 빌딩 블록을, 가능한 모든 방법으로 배합하여 주어진 길이(즉, 폴리펩티드 화합물중 아미노산의 수)의 화합물로서 생성된다. 수백만개의 화학적 화합물은 이러한 화학적 빌딩 블록의 조합형 혼합 방법을 통하여 합성될 수 있다. 예를 들어, 어느 숙련가는 100개의 호환성 화학적 빌딩 블록을 체계적이고, 조합적으로 혼합하면 1억개의 4량체 화합물 또는 10억개의 5량체 화합물을 이론적으로 합성할 수 있음을 관찰하였다[Gallop et al. J. Med. Chem. 37 (9): 1233 (1994)].

이러한 조합형 화학적 라이브러리의 제조 및 스크리닝 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 이러한 조합형 화학적 라이브러리의 예로서는 p-벤조디아제핀(미국 특허 제5,288,514호), 다이버소머(diversomer) 예컨대, 히단토인, 벤조디아제핀 및 디펩티드[Hobbs et al. PNAS USA 90: 6909 (1993)], 화합물의 소라이브러리(small compound library)의 유사 유기 합성물[Chen et al., J. Amer. Chem. Soc. 116: 2661 (1994)], 올리고카르바메이트(oligocarbamate)[Cho, et al., Science 261: 1303 (1993)], 및/또는 펩티딜 포스포네이트[Campbell et al., J. Org. Chem. 59: 658 (1994)], 및 유기 소분자 라이브러리[예를 들어, 벤조디아제핀(Baum C & EN, Jan 18, page 33 (1993)), 티아졸리디논 및 메타티아자논(미국 특허 제5,549,974호), 피롤리딘(미국 특허 제 5,525,735호 및 동 제5,519,134호), 벤조디아제핀(미국 특허 제5,288,514호)등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.

조합형 라이브러리의 제조 장치는 시판중에 있다[예를 들어, 357 MPS, 390 MPS, Advanced Chem Tech, Louisville KY, Symphony, Rainin, Woburn, MA, 433A Applied Biosystems, Foster City, CA, 9050 Plus, Millipore, Bedford, MA를 참조하시오].

다수의 널리 공지된 자동화 시스템은 또한 용액상 화학물질용으로 개발되어 오고 있다. 이러한 시스템으로서는 화학자에 의하여 수행되는 수동식 합성 조작을 모의하는, 자동화 워크스테이션 예컨대, Takeda Chemical Industries, LTD. (Osaka, Japan)에 의하여 개발된 자동화 합성 장치 및 로보트 팔을 이용하는 다수의 로보트 시스템(Zymate II, Zymark Corporation, Hopkinton, Mass.; Orca, HewlettPackard, Palo Alto, CA)을 포함한다. 전술한 장치중 임의의 것은 본 발명에 사용하기 적당하다. 이러한 장치의 성질 및 이러한 장치를 변형 수행하여 본원에 기술된 바와 같이 작동시킬 수 있다는 것은 관련 업계의 숙련자들에게 명백할것이다. 또한, 다수의 조합형 라이브러리는 자체로서 시판되고 있다[예를 들어, ComGenex, Princeton, N. J., Asinex, Moscow, Ru, Tripos, Inc., St. Louis, MO, ChemStar, Ltd., Moscow, RU, 3D Pharmaceuticals, Exton, PA, Martek Biosciences, Columbia, MD, 등 참조].

화학적 라이브러리의 고처리량 분석법

본원에 기술된 화합물의 분석법은 고처리량 스크리닝에 이용할 수 있다. 그러므로 바람직한 분석법은 시험 화합물(들)에 의한 전사 작용(즉, mRNA 합성의 활성화), 시험 화합물(들)에 의한 단백질 발현의 활성화, 또는 시험 화합물(들)에 의한 유전자 생성물(예를 들어, 발현된 단백질)에의 결합 ; 또는 이하에 기술된 바와 같은 지방산 조절에 미치는 효과를 확인시킨다.

특정 단백질 생성물의 존재, 부재 또는 정량을 위한 고처리량 분석법 또는 결합 분석법은 당업자에게 널리 공지되어 있다. 따라서, 예를 들어 미국 특허 제5,559,410호는 단백질에 대한 고처리량 스크리닝 방법에 관하여 개시되어 있고, 미국 특허 제5,576,220호 및 동 제5,541,061호는 리간드/항체 결합에 대한 고처리량 스크리닝 방법에 관하여 개시되어 있다.

뿐만 아니라, 고처리량 스크리닝 시스템은 시판중에 있다.[예를 들어, Zymark Corp., Hopkinton, MA; Air Technical Industries, Mentor, OH; Beckman Instruments, Inc. Fullerton, CA; Precision Systems, Inc., Natick, MA 등 참조]. 이러한 시스템은 통상적으로 모든 샘플 및 시약 피펫팅, 액체 분배, 일정 시간 동안의 항온처리 및 본 분석법에 적합한 검출기(들)의 미세평판의 최종 판독을 비롯한 전과정이 자동화되어 있다. 이와 같은 배열 가능한 시스템은 고처리량 및 신속한 개시, 그리고 고도의 융통성과 주문제작을 제공한다. 이러한 시스템의 제작자는 다양한 고처리량의 상세한 프로토콜을 제공한다. 그러므로, 예를 들어 Zymark Corp.은 유전자 전사, 리간드 결합 등의 조절을 검출하기 위한 스크리닝 시스템을 나타내는 기술적 고시를 제공한다.

화합물이 음식 섭취, 체중, 체지방, 식욕, 음식 갈망 행동에 영향을 미치는지 여부, 또는 지방산 산화를 조절하는 지 여부에 대한 측정

본 발명의 화합물은 동물에 투여되어 화합물이 음식 섭취, 체중, 체지방, 식욕, 음식 갈망 행동에 영향을 미치는지 여부, 또는 지방산 산화 조절제를 조절하는지 여부를 측정할 수 있다.

동물은 예를 들어, 비만이거나 또는 정상인 기니아 피그, 래트, 마우스 또는 토끼일 수 있다. 적당한 래트로서는 예를 들어, 저커 래트를 포함한다. 적당한 마우스로서는 예를 들어, 정상 마우스, 식이조절 유발성 비만인 ALS/LtJ, C3.SW-H-^2b/SnJ, (NON/LtJ x NZO/H1J)F1, NZO/H1J, ALR/LtJ, NON/LtJ, KK.Cg-AALR/LtJ, NON/LtJ, KK.Cg-A^y/J, B6.HRS(BKS)-Cpe ^fat /+, B6.129P2-Gck ^tm/Efr , B6.V-Lep^ob,BKS.Cg-m+/+Lep ^rd b및 C57BL/6J를 포함한다.

적당량의 후보 화합물의 투여는 당 업계에 공지되어 있는 임의의 수단 예를 들어, 경구 또는 직장 투여, 비경구 투여 예를 들어, 복강내, 정맥내, 피하, 진피하, 비내 또는 근내 투여에 의하여 수행될 수 있다. 투여는 복강내 또는 경구 투여인 것이 바람직하다. 후보 화합물의 적당한 유효량은 당 업계에 공지되어 있는 바와 같이 실험적으로 결정될 수 있다. 적당한 유효량은 경시적으로 동물에 있어서 체지방 또는 체중을 감소시키거나 또는 음식 섭취량을 감소시키는데 충분한 양일 수 있다. 상기 후보 화합물은 체지방 또는 체중을 감소시키는데 필요한 정도로 자주 예를 들어, 매시간, 6시간, 8시간, 12시간 또는 18시간 마다 투여되거나, 매일 또는 매주 투여될 수 있다.

경구 투여에 적합한 제제는 (a) 액상 용액 예컨대, 희석제 예를 들어, 물, 염수 또는 PEG 400에 현탁된 유효량의 후보 화합물 ; (b) 각각 소정량의 활성 성분을 액체, 고체, 과립 또는 젤라틴의 형태로 포함하는 캡슐, 향분 또는 정제 ; (c) 적당한 액체중의 현탁액 ; 및 (d) 적당한 유액을 포함한다. 정제 제형은 락토즈, 수크로즈, 만니톨, 소르비톨, 칼슘 포스페이트, 옥수수 전분, 감자 전분, 미소결정질 셀룰로즈, 젤라틴, 콜로이드성 이산화실리콘, 활석, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 및 기타 부형제, 착색제, 충전제, 결합제, 희석제, 완충제, 습윤제, 보존제, 향미제, 염료, 붕괴제, 및 약학적 허용 담체중 1 이상을 포함한다. 로진즈 제형은 향미 활성 성분 예를 들어 수크로즈와, 비활성 기제 예컨대, 젤라틴 및 글리세린 또는 수크로즈 및 아카시아 유액, 젤 등을 포함하는 습제 정제를 당 업계에 공지되어 있는 활성 성분, 담체와 함께 포함할 수 있다.

주입 용액 및 현탁액은 전술한 유형의 멸균 분말, 과립 및 정제로 제조될 수 있다. 비경구 투여에 적당한 제형은 예를 들어, 수성 및 비수성, 등장성 멸균 주입 용액을 포함하며, 이 용액은 산화 방지제, 완충제, 정균제와, 목적 수용체의 혈액으로 제제를 등장성으로 만드는 용질, 그리고 현탁제, 용해제, 증점제, 안정화제 및 보존제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 함유할 수 있다.

동물에 투여된 투여량은 경시적으로 체중, 체지방, 및/또는 지방산 산화를 변화시키는데 효과적인 양이다. 이러한 투여량은 사용된 특정 후보 화합물의 효능 및 동물의 상태 뿐만 아니라, 동물의 체중 또는 표면적에 따라서 결정될 수 있다. 투여량의 크기는 또한 후보 화합물이 투여되었는지 여부, 이의 성질 및 투여에 따른 임의의 유해한 부작용 ; 후보 화합물의 LD₅₀; 및 다양한 농도의 후보 화합물의 부작용에 의하여 결정될 것이다. 일반적으로, 투여량은 체중 1㎏당 0.1∼50 mg, 바람직하게는 체중 1㎏당 1∼25 mg, 가장 바람직하게는 체중 1㎏당 1∼20 mg의 범위일 것이다. 투여량 반응 관계의 결정 방법은 당업자에게 널리 공지되어 있다.

체지방 감소

체중 감소는 통상적으로 체지방 변화 또는 체중 감소에 의하여 측정된다. 동물의 체지방 및 체중은 후보 화합물의 투여 이전, 투여와 동시에, 그리고 투여후에 측정된다. 체지방 변화는 당 업계에 공지된 임의의 방법 예컨대, 캘리퍼스를 이용하는 지방 배수 측정법(fat fold measurement), 생물전기적 임피던스, 유체정역학적 측량법, 또는 이중 X선 흡수생물측정법에 의하여 측정될 수 있다. 바람직하게, 동물들은 체지방이 2%, 5%, 8%, 또는 10% 이상 감소하였다. 체중 변화는 당 업계에 공지된 임의의 방법 예를 들어, 운반 가능한 저울, 디지털 저울, 평형 저울, 바닥용 저울 또는 테이블용 저울에 의하여 측정될 수 있다. 바람직하게, 동물은 체중이2%, 5%, 10%, 또는 15% 이상 감소하였다. 체중 감소는 후보 화합물의 투여 이전에, 그리고 치료시 및 치료후 규칙적인 간격으로 측정될 수 있다. 바람직하게, 체중은 5일에 한번씩, 더욱 바람직하게는 4일에 한번씩, 더더욱 바람직하게는 3일에 한번씩, 더더욱 바람직하게는 2일에 한번씩, 그리고 가장 바람직하게는 매일 측정된다.

지방산 대사에 있어서의 변화

지방산 대사에 있어서의 변화는 예를 들어, 주요 지방 연소 조직 예컨대, 간(Beynen, et al. Diabetes 28: 828 (1979)), 근육(Chiasson Lab. Anat. of Rat, (1980)), 심장(Flink, et al. J. Biol. Chem. 267: 9917 (1992)) 및 지방 세포(Rodbell J. Biol. Chem. 239: 375 (1964))에서 유래된 세포에서의 지방산 산화 관찰에 의하여 측정될 수 있다. 세포는 1차 세포 또는 세포주로부터 얻을 수 있다. 세포는 당 업계에 공지된 임의의 방법 예를 들어, 효소 분해 및 절개에 의하여 1차 배양액에 대해서 제조될 수 있다. 적당한 세포주는 당업자에게 공지되어 있다. 적당한 간 세포주로서는 예를 들어, Fao, MH1C1, H-4-II-E, H4TG, H4-II-E-C3, McA-RH7777, McA-RH8994, N1-S1 Fudr, N1-S1, ARL-6, Hepa 1-6, Hepa-lclc7, BpRcl, tao BpRcl, NCTC 클론 1469, PLC/PRF/5, Hep 3B2.1-7 [Hep 3B], Hep G2 [HepG2], SK-HEP-1, WCH-17이 있다. 적당한 골격근 세포주로서는 예를 들어, L6, L8, C8, NOR-10, BLO-11, BC3H1, G-7, G-8, C2C12, P19, Sol8, SJRH30 [RMS 13], QM7이 있다. 적당한 심장 세포주로서는 예를 들어, H9c2(2-1), P19, CCD-32Lu, CCD-32Sk, Girardi, FBHE가 있다. 적당한 지방 세포주로서는 예를 들어, NCTC 클론 929 [L 세포주의 유도체 ; L-929 ; L 세포], NCTC 2071, L-M, L-M(TK-)[LMTK- ; LM(tk-)], A9(L 세포주의 APRT 및 HPRT 음성 유도체), NCTC 클론 2472, NCTC 클론 2555, 3T3-L1, J26, J27-neo, J27-B7, MTKP 97-12 pMp97b[TKMp97-12], L-NGC-5HT2, Ltk-11, L-알파-lb, L-알파-2A, L-알파-2C, B82가 있다.

지방산 산화 속도는¹⁴C-올레산염의 케톤체로의 산화(Guzman and Geelen Biochem. J. 287: 487 (1982)) 및/또는¹⁴C-올레산염의 C0₂로의 산화(Fruebis PNAS 98: 2005 (2001); Blazquez et al. J. Neurochem 71: 1597 (1998))에 의하여 측정될 수 있다. 지방 분해는 표지화된 적당한 전구체 또는 분광 분석법을 사용하여 지방산 또는 글리세롤 방출에 의하여 측정될 수 있다[Serradeil-Le Gal FEBS Lett 475 : 150 (2000)].¹⁴C-올레산염의 케톤체로의 산화 분석을 위하여, 새로 분리된 세포 또는 배양된 세포주를 적당한 시간 예를 들어, 30분, 60분, 90분, 120분 또는 180분 동안¹⁴C-올레산과 함께 항온처리할 수 있다. 항온처리 배지중¹⁴C 방사능의 양은 올레산염 산화 속도를 결정하기 위해서 측정될 수 있다. 올레산염 산화는 세포 1g당 X분 동안 생성된 올레산염의 nmol로서 표현될 수 있다. 지방 분해/글리세롤 방출의 분석을 위하여, 새로이 분리한 세포 또는 배양한 세포주를 세정한후 적당한 시간 동안 항온처리할 수 있다. 상기 항온 처리 배지에 방출된 글리세롤의 양은 지방 분해에 대한 지표를 제공할 수 있다.

발명의 개요

본 발명은 포유동물에서 체지방을 감소시키고, 비만 및 과체중을 치료 또는 예방하고, 비만 및 과체중과 관련된 질병을 치료 또는 예방하기 위한 화합물, 조성물 및 방법을 제공한다. 한 관점에서, 본 발명은 체지방 또는 체중을 감소시키는 방법 및 비만 또는 과체중을 치료 또는 예방하는 방법 및 음식물 섭취를 감소시키는 방법을 제공하는데, 이들 방법은 체지방, 체중을 감소시키거나 체지방 또는 체중 증가를 예방하는데 충분한 양으로 지방산 알칸올아미드 화합물, 이의 상동체 또는 유사체를 포함하는 약학 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 다른 관점에서, 본 발명은 지방산 에탄올아미드 화합물, 이의 상동체, 유사체; 상기한 용도로 사용하기 위한 그들의 약학 조성물 및 방법에 관한 것이다.

다른 구체예에서, 지방산 알칸올아미드 또는 에탄올아미드 화합물, 이의 상동체 또는 유사체의 지방산부는 포화되거나 불포화될 수 있으며, 불포화되는 경우 단일불포화되거나 다중불포화된다.

몇몇 구체예에서, 지방산 알칸올아미드 화합물, 상동체 또는 유사체의 지방산부는 올레산, 팔미트산, 엘라이드산, 팔미톨레산, 리놀레산, 알파-리놀레산 및 감마-리놀레산으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 특정 구체예에서, 상기 지방산부는 12∼20개의 탄소 원자를 보유한다.

다른 구체예는 지방산 아미드 화합물, 상동체 또는 유사체의 히드록시알킬아미드부를 변화시킴으로써 제공된다. 이들 구체예로는 알칸올아미드 또는 에탄올아미드부의 히드록시 기상의 치환 또는 비치환 저급(C₁-C₃) 알킬기의 도입하여 상응하는 저급 알킬 에테르를 형성하는 것을 포함한다. 다른 구체예에서, 알칸올아미드 또는 에탄올아미드부의 히드록시기는 C₂∼C₆치환 또는 비치환 알킬 카르복실산의 카르복실레이트 기에 결합시켜 지방산 에탄올아미드의 상응하는 에스테르를 형성한다. 이러한 구체예는 유기 카르복실산, 예를 들어 아세트산, 프로피온산 및 부탄산에 에스테르 결합된 지방산 알칸올아미드 및 지방산 에탄올아미드를 포함한다. 한 구체예에서, 지방산 알칸올아미드는 올레일알칸올아미드이다. 추가의 구체예에서, 지방산 알칸올아미드는 올레일알칸올아미드이다.

또 다른 구체예에서, 지방산 에탄올아미드 화합물, 상동체 또는 유사체는 지방산 에탄올아미드의 질소 원자에 공유 결합된 치환 또는 비치환 저급 알킬(C₁-C₃)기를 더 포함한다.

다른 관점에서, 본 발명은 약학적으로 허용가능한 부형제와 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물을 제공한다:

상기 화학식에서, n은 0∼5이고, a와 b의 합은 0∼4이다. Z는 -C(O)N(R⁰)-; -(R^o)NC(O)-; -OC(O)-; -(O)CO-; O; NR⁰; 및 S로부터 선택되며, 이때 R⁰및 R²는 치환 또는 비치환 알킬, 수소, 치환 또는 비치환 C₁-C₆-알킬, 치환 또는 비치환 저급 (C₁-C₆)아실, 호모알킬, 및 아릴로 구성되는 군으로부터 개별적으로 선택된다. 또한, 상기 화합물의 지방산부 또는 에탄올아민부 또는 둘 다의 4개 이하의 수소 원자는 이중 결합 또는 메틸에 의해 치환될 수 있다. 또한, 탄소 c와 d 사이의 분자결합은 불포화 또는 포화 결합일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 상기 화학식 I의 지방산 에탄올아민은 천연 화합물이다.

본 발명의 다른 관점에서, 상기 방법 및 조성물은 체중 감량을 위해 지방산 에탄올아미드 및 지방산 알칸올아미드 화합물, 상동체 및 유사체를 사용하는데, 상기 화합물, 상동체 및 유사체는 시험 동물(예를 들어, 래트, 마우스, 래빗, 햄스터, 기니 피그)에게 투여되는 경우 감량을 유발한다.

또 다른 관점에서, 본 발명은 체지방과 체중을 감소시키고 식욕을 감퇴시키기 위해 아릴티아졸리딘디온 화합물 및 헤테로아릴 및 아릴 옥시아세트산형 화합물을 이용하는 방법에 관한 것이다.

또 다른 관점에서, 본 발명은 포유동물(예를 들어, 인간, 고양이 또는 개)에서 체중을 감량하거나 식욕을 감퇴시키나, 또는 음식물 섭취를 감소시키거나 하이포파기아를 유발하기 위해 본 발명의 화합물 및 조성물을 이용하는 방법 및 투여하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 경구를 포함하는 여러가지 경로를 통해 투여할 수 있다.

하기 실시예는 단지 예시를 위한 것으로 제한을 목적으로 한 것이 아니다.당업자라면 사실상 유사한 결과를 산출하도록 변화 또는 변경될 수 있는 중요치 않은 다양한 매개변수를 쉽게 알 것이다.

실시예 1: 지방산 에탄올아미드 화합물, 동족체 및 유사체의 합성

에탄올아민 및 상응하는 지방 아실로부터 지방산 에탄올아민을 제조하는 방법은 당업자가 비교적 쉽게 접할 수 있고 숙지하고 있는 것이다. 예를 들어 지방산 에탄올아미드는 지방산 또는 지방산 클로라이드와 아미노알콜을 반응시켜서 합성할 수 있으며, 이에 대해서는 Abadjj 등의 문헌[Abadji, V., Lin, S. Y., Taha, G., Griffin, G., Stevenson, L.A., Pertwee, R.G. & Makriyannis, A. J. Med. Chem. 37, 1889-1893(1994)]에 기술되어 있다. 지방산은 Serdarevich 및 Carroll[Serdarevich, B. & Carroll, K.K. J. Lipid Res. 7, 277-284(1966)]의 절차와 유사하게 제조할 수 있다. 방사능으로 표지된 지방산 에탄올아미드는 Desarnaud, F., Cadas, H. & Piomelli, D.(1995)[J. Biol. Chem. 270, 6030-6035]에 기술된 대로 아실 클로라이드(누-첵 프렙, 미네소타주 엘리시안)와 [³H] 에탄올아민(10-30 Ci/mmol; 어메리칸 바이오레이블드 케미칼스, 세인트 루이스)을 반응시켜서 제조할 수 있다. 화합물은 플래쉬 컬럼 크로마토그래피 또는 HPLC에 의해 정제할 수 있다. 화합물 본질은 NMR 및/또는 기체 크로마토그래피 질량 분광분석법 및 박막 크로마토그래피를 이용하여 규명할 수 있다.

출발 반응물 및 재료는 아반티 폴라 리피즈, 케이만 케미칼스(안 아버, 미시간주), 누-첵 프렙, 리서치 바이오케미칼스, 또는 시그마로부터 구입할 수 있다.간단히 말하면, Giuffrida, A 등의 문헌[Giuffrida, A 및 Piomelli, D. in Lipid Second Messengers(Laycock, S.G. and Rubin, R.P. Eds. pp. 113-133 CRC Press LLC, Boca Raton, Florida] 및 Deavane 등의 문헌[Devane W., Hanus, L. 등, Science 258, 1946-1949(1992)]에 교시된 방법에 따라, 상응하는 지방 아실 클로라이드와 비표지 또는 표지된 에탄올아민의 반응에 의해 비표지 또는 표지된 지방 아실 에탄올아미드를 합성할 수 있다. 지방산 클로라이드는 디클로로메탄에 용해시켜서(10 mg/ml), 에탄올아민과 0-4℃에서 15분간 반응시킬 수 있다. 정제수를 첨가하여 반응을 중단시킬 수 있다. 세게 교반하여 상들을 분리시킨다. 상부 수성상을 버린다. 유기상을 물로 2회 세척한다. 이러한 세척에 의해 미반응 에탄올아민이 제거된다. 이 방법은 지방 아실 에탄올아민의 정량적 형성을 제공한다. 에탄올아민을 질소 기체 흐름하에 농축 건조시켜서 디클로로메탄과 같은 유기 용매 중에 20 mM의 농도로 재구성할 수 있다. 형성된 지방 아실 에탄올아민 용액을 사용시까지 -20℃에 보관할 수 있다.

지방산 카르복실산기, 1차 및 2차 아민, 및 1차 알콜기의 화학 반응은 당업자라면 숙지하고 있다. 에탄올아민부에 다양한 치환기를 갖는 지방산 에탄올아민은 여러 방법으로 제조될 수 있으나, 가장 바람직한 방법은, 상응하는 치환된 에탄올 아민과 지방산부에서 출발하여 제조하는 것이다. 이러한 치환된 에탄올아민은 알킬 아미노에탄올 에테르 및 아실 아미노에탄올 에스테르뿐만 아니라 2차 알킬 에탄올 아민을 포함한다. 대안으로, 특정 지방산 에탄올아미드는 적절한 치환기를 첨가함으로써 상응하는 지방산 에탄올아미드로부터 합성할 수 있다.

실시예 2: 지방산 에탄올아미드(FAE)의 생체내 스크리닝 및 본 발명의 기타 화합물의 스크리닝 방법

동물: 수컷 위스터 래트(200-350 g)를 사용하였다. 절차는 실험 동물의 관리 및 사용에 관한 안내서에 명시된 NIH 지침 및 동물 연구를 규제하는 유럽 위원회 지령 86/609/EEC를 준수하여야 한다.

화학물질: FAE 및 [²H₄] FAE는 실험실에서 합성하였다[Giuffrida 등, "Lipid Second Messengers"(ed. Laychock, S.G. & Rubin, R.P.) 113-133(CRC Press LLC, Boca Raton, FL, 1998]. 1,2-디올레일-sn-글리세로-포스포에탄올아민-N-올레일은 아반티 폴라 리피즈(알라바스터, 알라바마주)에서 구입하였다. SR141716A는 RBI(나틱, 매사추세츠주)에 의해 NIMH의 화학적 합성 프로그램(N01MH30003)의 일부로서 제공받았다. SR144528은 Sanofi Recherche가 제공해주었다. 다른 모든 약물은 토크리스(Tocris)(볼윈, 미주리주) 또는 시그마(세인트 루이스, 미주리주)로부터 입수하였다. FAE는 디메틸설폭시드(DMSO)에 용해시켜서 멸균 염수 중의 70% DMSO(급성 처리) 또는 멸균 염수 중의 5% Tween 80/5% 프로필렌글리콜(아만성 처리)로 투여하였다(1 ml/kg, 복강 주사). 캡사이신은 10% Tween 80/10% 에탄올/80% 염수에 용해시켜 투여하였고, SR14176A, SR144528, CCK-8 및 CP-93129는 5% Tween 80/5% 프로필렌글리콜/90% 염수에 용해시켜 투여하였다(1 ml/kg, 복강 주사).

효소 분석: 모든 생화학 실험에서, 다양한 기간의 먹이 박탈 후, 1400∼1600 시간 사이에 래트를 죽이고 조직을 수집하였다. 마이크로좀 분획은 문헌[Desarnaud등, J. Biol. Chem., 270:6030-6035(1995)]에 기술된 대로 준비하였다. NAT 분석은 1,2-디[¹⁴C]팔미틸-sn-글리세로포스포콜린을 기질로서 사용하여 수행하였다(108 mCi/mmol, 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 아머샴)[Cadas 등, H. J. Neurosci., 17:1226-1242(1997)]. FAAH 분석은 문헌[Desarnaud 등, J. Biol. Chem., 270:6030-6035(1995)]에 따라 수행하되, 단 [³H]아난다마이드(아라키도닐-[1-³H]에탄올아미드; 60 Ci/mmol; 미주리주 세인트 루이스 소재의 ARC)를 기질로서 포함시켰고, 방사능은 클로로포름 추출 후에 수성상에서 측정하였다.

HPLC/MS 분석: 심장 천자에 의해 얻은 혈액으로부터 혈장을 준비하고[Giuffrida 등, Anal. Biochem., 280:87-93(2000)], 27G 1/2 바늘(Precisionglide, USA)을 사용하여 대조로부터 CSF를 수집하였다. FAE 및 NAPE를 메탄올/클로로포름을 사용하여 조직으로부터 추출하고, 컬럼 크로마토그래피에 의해 분류하였다[Giuffrida 등, "Lipid Second Messengers"(ed. Laychock, S.G. & Rubin, R.P.) 113-133(CRC Press LLC, Boca Raton, FL, 1998)]. 동위원소 희석법을 이용하여 HPLC/MS에 의해 FAE를 정량하였다[Giuffrida 등, Anal. Biochem., 280:87-93(2000)]. 개개의 NAPE종을 확인하고, 외부 표준 방법[Calignano 등, Nature, 408:96-101(2000)]을 이용하여 HPLC/MS로 정량하였다.

혈액 화학: 혈장 β-히드록시부티레이트 및 글리세롤은 상업용 키트(미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마)를 사용하여 측정하였다. 혈장 프로락틴, 코르티코스테론 및 황체 형성 호르몬은 방사능면역분석법으로 정량하였다[Navarro 등,Neuroreport, 8:491-496(1997)].

섭식 실험: 급성 실험: 24 시간 동안 먹이를 박탈한 래트에서 먹이를 제공하기 15분 전에 약물을 투여하여, 먹이 섭취량을 측정하였다[Navarro 등, J. Neurochem., 67:1982-1991(1996)]. 아만성 실험: 자유 식이 래트에는 3일간 비이클을 주사하였다. 4일째, 동물들을 두개의 동일한 군으로 나누어서, 이들에 비이클 또는 OEA(1900 시간에 5 mg/kg)를 7일 연속 매일 주사하였으며, 이 기간 동안 체중, 먹이 섭취량 및 물 섭취량을 측정하였다.

조절된 맛 회피: 래트로부터 24 시간 동안 물을 박탈한 후, 4일간 30분 테스트 시간 동안 기울여진 병으로부터 물을 섭취하는 것을 익히게 하였다. 5일째, 물을 0.1% 사카린 용액으로 바꾸고, 30분 후, 동물들에 비이클, OEA(20 mg/kg) 또는 염화리튬(0.4 M, 7.5 ml/kg)을 주사하였다. 그 후 이틀동안 30분 테스트 시간 동안 물 소비량을 기록하였다. 그 후 동물들에 물 또는 사카린을 제공하고, 마신 양을 측정하였다.

먹이에 대한 자발적 반응: 래트를 고정 비 1(FR1)의 강화 계획으로, 먹이에 대해 지렛대 누르기를 훈련시키면서, 먹이를 1일에 래트 1 마리당 20 g으로 제한하였다[Rodriguez de Fonseca 등, Acta Pharmacol. Sin., 20:1109-1114(1999)]. 안정한 반응이 얻어지면, 동물들을 FR5, 즉 중간 휴식 2분의 먹이 강화 계획을 달성하도록 훈련시키고, 먹이로의 접근을 제한한 상태로 유지시켰다. 기본값이 안정해지면, 이 동물들을 사용하여 지렛대 제시 15분 전에 투여된 비이클 또는 OEA(1, 5 또는 20 mg/kg)의 효과를 테스트하였다. 테스트 시간은 60분이었다.

기타 행동 분석: 비이클 또는 OEA(20 mg/kg, 복강 주사)를 투여한 후, 문헌[Navarro 등, Neuroreport, 8:491-496(1997)]에 기술된 대로 지렛대 + 미로 테스트를 수행하였다. 개방된 공간에서의 수직 활동[Beltramo 등, J. Neurosci., 20:3401-3407(2000)] 및 열판 테스트(55℃)에서의 통증 역치[Beltramo 등, Science, 277:1094-1097(1997)]를 비이클 또는 OEA(20 mg/kg)를 주사한지 15분 후에 측정하였다. 디지탈 온도계를 사용하여 직장 온도를 측정하였다[Martin-Calderon 등, Eur. J. Pharmacol., 344:77-86(1998)].

동일계 하이브리드화: 래트를 5일간 관리법 및 주사 절차에 적응시켰다. 6일째, 비이클 또는 약물 OEA(10 mg/kg, 복강 주사), 또는 올레산(10 mg/kg)을 투여하고, 60분 후에 래트를 마취시켜서 단두시켜 죽였다. 동일계 하이브리드화 분석은 c-fos에 대한³⁵S-표지 cRNA 프로브[Guthrie 등, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 90:3329-3333(1993)] 및 콜린 아세틸 트랜스퍼라제(ChAT)[Lauterborn 등, Brain Res. Mol. Brain Res., 17:59(1993)]를 사용하여 수행하였다. 래트 1 마리당 적어도 3개의 조직 절편으로부터 평균 하이브리드화 밀도를 측정하였다. 통계적 유의성은 일원 분산 분석법(ANOVA)을 이용한 다음, 쌍대 비교에 대한 Turkey-Kramer post-hoc 테스트를 이용하여 평가하였다.

데이터 분석: 결과는 n개의 개별 실험의 평균 ±s.e.m으로서 나타내었다. 군간의 차이의 유의성은, 다른 언급이 없다면, ANOVA를 이용하여 평가한 다음, Student-Newman-Keuls post hoc 테스트를 통해 평가하였다.

실시예 3: 래트에서 단식이 OEA 및 기타 FAE 농도에 미치는 영향

한 구체예에서, 본 발명은 체중 및/또는 체지방을 줄일 필요가 있는 개체를 단식 전 및/또는 중의 OEA 농도에 대해 테스트하는 처리 방법을 제공한다. 그 후, 특히 단식 전에 또는 단식에 반응하여 OEA 농도가 감소된 개체를 대상으로 OEA 처리를 실시한다.

래트에게서 먹이를 박탈하는 한편, 전기분무 질량 분광계(MS)와 연계된 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 심장 혈액 중의 FAE 농도를 주기적으로 측정하였다. 혈장 OEA는 단식한지 처음 12 시간 동안 기본값으로 유지되다가, 18-24 시간째 급격히 증가하여, 30 시간째에는 정상 수치로 회복되었다(도 1a). 이러한 효과는 물을 박탈한 후에나(도 1b), 구속 억류 및 리포폴리사카라이드(LPS) 투여[pmol/ml; 10.3 ±0.8; 15분 억류 후 60분, 8.4 ±1.6; LPS 주사(1 mg/kg)하고 60분 후, 7.0 ±0.7; n=6-9] 후에는 관찰되지 않았다. 혈장 PEA는 이러한 처리 중 어느 것에 의해서도 크게 영향을 받지 않았으나(데이터 도시하지 않음), 아난다마이드는 먹이를 제거하자 재빨리 감소되었고, 전 실험 기간 동안 기본값보다 낮게 유지되었다(도 1d). 아난다마이드 농도 역시 억류 후(pmol/ml; 대조군, 3.6 ±0.4; 억류, 1.1 ±0.5; n=7-8; P<0.01), LPS 처리 후(대조군, 2.0 ±0.5; LPS, 0.2 ±0.2; n=6; P<0.01), 현저하지는 않아도 물 박탈 후에 감소되었다(도 1e). 이러한 결과들은 순환 OEA 농도가 단식 중에 일시적으로 증가한다는 것을 암시한다. 이 반응은 아난다마이드 및 기타 FAE에 비해 OEA에 선택성이 있으며, 혈중 글리세롤 및 β-히드록시부티레이트의 상승과 일시적으로 동시에 일어나는데(표 1), 이것은 에너지 대사의 주연료가 탄수화물에서 지방산으로 이동한다는 신호이다[Cahill, G.F., Clin. Endocrinol. Metab., 5:397-415(1976)].

단식 래트에서의 β-히드록시부티레이트(β-HBA) 및 글리세롤의 혈장 농도
	β-HBA	글리세롤
자유 식이	1.2 ±0.4	4.6 ±0.9
2 시간 단식	1.2 ±0.2	5.3 ±0.6
4 시간 단식	0.8 ±0.1	9.1 ±1.8
8 시간 단식	1.3 ±0.2	6.3 ±0.4
12 시간 단식	4.6 ±0.8*	7.6 ±1.0
18 시간 단식	6.8 ±0.4*	8.4 ±0.4*
24 시간 단식	9.1 ±1.2*	8.4 ±0.3*
농도는 mg/dl로 나타내었다. *P<0.05, 군당 n=3

뇌척수액 중의 OEA 농도는 먹이 박탈에 의해 큰 영향을 받지 않았으며(도 1c), 이것은 혈장 OEA의 급상승이 CNS 외부에서 기인한 것일 수 있음을 암시한다. 이 가정을 테스트하기 위해, 단식이 OEA 대사에 미치는 영향을 다양한 래트 조직에서 조사하였다. 동물 세포가 OEA 및 기타 FAE를 생산하고 분해하는 생화학적 경로는 3가지 주요 효소 단계를 포함하는 것으로 알려져 있다. 칼슘 이온 자극 NAT 활성은 공여체 인지질의 sn-1 위치로부터 포스파티딜에탄올아민의 1차 아민으로 지방산기를 전달하여 NAPE2를 생산한다[Schmid 등, Chem. Phys. Lipids, 80:133-142(1996); Piomelli 등, Neurobiol. Dis., 5:462-473(1998)]. 미지의 포스포리파제 D에 의한 NAPE내 말단 포스포디에스테르 결합의 절단은 FAE를 생성하며[Schmid 등, Chem. Phys. Lipids, 80:133-142(1996); Piomelli 등, Neurobiol. Dis., 5:462-473(1998)], 이것은 결국 세포내 지방산 아미드 히드롤라제(FAAH)에 의해 지방산과 에탄올아민으로 분해된다[Schmid 등, J. Biol. Chem., 260:14145-14149(1985); Cravatt 등, Nature, 384:83-87(1996)]. 먹이 박탈를 박탈하면(18 시간) 백색 지방 조직 내의 NAT 활성은 급격히 증가하지만(도 2a), 뇌, 위 또는 신장에서는 그렇지 않다(도 2 b, d 및 데이터 도시하지 않음). 간, 장 및 골격근에서는 NAT 활성이 빨리 감소하였다(도 2 c, d 및 데이터 도시하지 않음). 이러한 효소적 변화는 NAPE 조직 함량의 상응하는 변화와 유사하였다. 래트 조직에는 NAPE의 몇가지 분자종이 존재하는데, 여기에는 OEA 전구체 alk-1-팔미토에닐-2-아라키도닐-sn-글리세로-포스포에탄올아민-N-올레일(NAPE 1; 도 3a) 및 alk-1-팔미틸-2-아라키도닐-sn-글리세로-포스포에탄올아민-N-올레일(NAPE 2; 도 3a); 및 PEA 전구체 alk-1-팔미틸-2-아라키도닐-sn-글리세로-포스포에탄올아민-N-팔미틸(도시하지 않음)이 포함된다. NAT 활성 측정과 일치하여 먹이 박탈은 지방내 NAPE 함량을 증가시켰고 간에서의 NAPE 함량은 감소시켰다(도 3 b, c).

NAPE 생합성 및 FAE 형성은 매우 밀접하게 연관된 과정이므로[Cadas 등, H., J. Neurosci., 17:1226-1242(1997)], 단식이 다른 조직에서는 아니지만 지방조직에서는 OEA 및 기타 FAE의 농도를 증가시킬 것으로 예상된다. 따라서, 단식시킨 래트로부터의 지방은 자유 식이 대조군에서 얻은 지방보다 OEA 및 PEA의 함량이 더 많은 반면(도 3d 및 데이터 도시하지 않음), 이러한 차이는 뇌, 위 및 장(데이터 도시하지 않음)에서는 관찰되지 않았다. 그러나 우리의 예상과는 달리 간의 OEA 및 PEA 함량은 자유 식이 래트에서보다 먹이 박탈 래트에서 더 높았다(도 3d 및 데이터 도시하지 않음). 이러한 불일치는 간에 의한 FAE의 축적에 기인한 것일 수 있으며, 이는 FAE 회복 및 대사에 있어서의 간의 추정되는 역할과 일치한다[Bachur 등, J. Biol. Chem., 240:1019-1024(1965); Schmid 등, J. Biol. Chem., 260:14145-14149(1985)].

FAAH에 의해 촉매되는 지방산 및 에탄올아민의 가수분해는 FAE 분해에 있어서 중요한 단계이다[Bachur 등, J. Biol. Chem., 240:1019-1024(1965); Schmid 등, J. Biol. Chem., 260:14145-14149(1985); Cravatt 등, Nature, 384:83-87(1996); Desarnaud 등, J. Biol. Chem., 270:6030-6035(1995)]. 먹이 박탈은 지방 막에서의 FAAH 활성을 크게 감소시켰으나, 뇌, 간, 위, 장, 신장 및 골격근에서의 FAAH 활성에는 영향을 주지 않았다(도 2a-e 및 데이터 도시하지 않음). 따라서 먹이 박탈은 두가지의 공동작용적 방식으로 백색 지방에서의 OEA 및 기타 FAE의 농도를 증가시킬 수 있으며, 이는 지방 분해 중에 발생하는 다른 반응과는 역학적 면에서 상이하다: NAT 활성의 자극은 NAPE 및 FAE의 생합성을 증가시킬 수 있는 반면, FAAH 활성의 억제는 새로 합성된 FAE의 수명을 연장시킬 수 있다. 몇몇 조직은 혈중 OEA의 정상 농도에 기여할 수 있으며, 지방에서 관찰되는 동적 생화학적 변화는 단식 중에 OEA를 생성하는 데 있어서 이 조직이 중요한 역할을 한다는 것을 강조한다.

실시예 4: OEA 및 기타 FAE에 의한 먹이 섭취량의 억제

전신 투여된 OEA가 래트의 먹이 섭취량에 미치는 영향을 24 시간 단식을 이용하여 평가할 수 있다. 이 시스템에서는, OEA는 용량 및 시간 의존적으로 먹이 섭취량을 억제하였다(도 4a, b). 이러한 반응의 선택성을 명백히 보여주기 위해 다양한 OEA 유사체를 그 식욕 감퇴 유발 능력에 대하여 평가하였다.

아난다마이드 및 올레산은 효과가 없었다.

팔미틸에탄올아미드는 효과가 있었으나 OEA보다는 훨씬 덜 효과적이었다.

엘라이딜에탄올아미드(비천연 OEA 유사체)는 OEA의 효능과 유사하였다(도 4a).

이러한 결과들은, OEA가 구조적으로 선택적인 방식으로 섭식을 감소시키며, 다른 지방산 에탄올아민 유사 화합물을 본 발명에 따른 사용에 대해 동정할 수 있음을 암시한다.

실시예 5: 칸나비노이드 수용체 활성인자에 대한 특이성

OEA 식욕 감퇴에 대한 분자적 필수조건은 아난다마이드와 이것의 공지된 칸나비노이드 대상의 상호작용에 관여하는 것과는 다르다[Khanolkar 등, Life Sci., 65:607-616(1999)]. 칸나비노이드 수용체 길항물질은 생체내에서 OEA 식욕 감퇴에 영향을 미치지 않았으며, OEA는 시험관내에서 래트 뇌 막에 대한 칸나비노이드의 결합을 대신하지 못했다. 따라서, 아난다마이드와의 구조적 및 생물유전학적 관련성에도 불구하고 OEA는 식욕 감퇴를 유발하기 위하여 내인성 칸나비노이드 시스템에 의존하지 않는다.

실시예 6: 지속적인 체중 감소

몇몇 구체예에서, 본 발명의 화합물은 포유동물에게 장기간 투여시 지속적인 지방 감소 또는 체중 감소를 제공한다. 이러한 효과는, 각종 약물이 급성 투여 후 섭식을 억제하지만 치료가 장기 지속되면 효과가 없다는 점을 고려할 때 유익한 것이다[Blundell, J., Trends Pharmacol. Sci., 12:147-157(1991)].

OEA는 래트에 아만성적으로 투여하였다. OEA(5 mg/kg, 복강 주사)를 7일간 매일 주사하자 누적 먹이 섭취량에 있어서 작지만 유의적인 감소가 관찰되었으며(도 5a), 이것은 두드러진 체중 증가 억제와 함께 나타났다(도 5b, c). OEA는 물 섭취량에는 영향을 주지 않았다(도 5d). 체중에 대한 OEA는 효과는, 약간의 먹이 소비량 감소에 의해 부분적으로는 설명이 되는데, 이는 에너지 소비의 자극 또는 에너지 축적의 억제와 같은 기타 요인들이 이러한 효과에 기여할 수 있음을 암시한다.

실시예 7: FAE는 말초 부위에 작용할 수 있다

본 발명은 한 양태는 말초 부위 작용성을 갖는 화합물을 제공한다. 이러한 부위는 중추신경계 부작용 발생 가능성을 줄이는 데 유익하다.

OEA는 말초 투여시 효과적이지만 뇌 공동에 직접 주사한 후에는 효과가 없었다(표 2). 이는 이 화합물의 주된 작용 부위가 CNS의 바깥에 위치할 수 있음을 제시한다. 이에 대한 추가 입증 실험으로서, 어른 래트를 신경독소인 캡사이신으로 처리함으로써 미주 신경 및 기타 말초 신경의 감각 섬유를 화학적으로 파괴하였다[Kaneko 등, Am. J. Physiol., 275:G1056-G1062(1998)]. 캡사이신을 처리한 래트는 말초 투여된 콜레시스토키닌-8(CCK-8)에는 반응하지 않았으며(도 6 a,c), 대조군보다 물을 더 많이 마셨고(도 6b,d), 각막의 화학적 감각 반사작용을 상실하였는데(데이터 도시하지 않음), 이러한 세가지 사실은 신경독소가 구심성 감각 신경을 파괴하였음을 암시하는 것이다[MacLean, D.B., Regul. Pept., 11:321-333(1985); Ritter 등, Am. J. Physiol., 248:R501-R504(1985); Curtis 등, Am. J.Physiol., 272:R704-R709(1997)]. 처리된 동물들은 또한 OEA(10 mg/kg, 복강 주사)에 반응하지 못하였지만, CNS내의 5-HT_1B수용체를 표적으로 하는 화합물 CP-93129에는 정상적으로 반응하였다(도 6a,c)[Lee 등, Psychopharmacology, 136:304-307(1998)]. 이러한 발견은 OEA가 말초 부위에 작용하여 식욕 감퇴를 유발하며, 감각 섬유가 이러한 효과에 필요하다는 가정을 지지한다.

뇌실내 프라나마이드가 먹이 섭취량에 미치는 효과
	60분	120분	240분
비이클	5.8 ±0.6	8.0 ±0.5	9.5 ±0.5
프라나마이드 0.4 ㎍	4.8 ±0.4	6.6 ±0.4	8.4 ±0.4
프라나마이드 2 ㎍	4.9 ±0.4	6.6 ±0.6	8.7 ±0.5
프라나마이드 10 ㎍	5.9 ±0.2	8.1 ±0.4	9.6 ±0.7
프라나마이드/OEA(동물 1 마리당 프라나마이드 ㎍수) 또는 비이클(DMSO, 5 ㎕)을 24 시간 동안 먹이를 박탈한 래트에게 먹이 제공 15분 전에 투여하였다. 군당 n =12

본 발명의 화합물은 식욕을 억제하기 위해 말초 감각 입력을 이용할 수 있다. 식욕 억제와 관련된 말초 감각 입력은 몇가지의 CNS 구조를 보강하는데, 이 구조에는 뇌간의 고립관의 핵(NST) 및 시상하부의 궁형 및 부실(paraventricular)(PVN) 핵을 포함한다[Schwarts 등, Nature, 404:661-671(2000)]. OEA 유도 식욕 감퇴시 이용되는 뇌 경로를 확인하기 위해, OEA, 올레산 또는 비이클의 전신 투여 후 동일계 하이브리드화에 의해, 활성이 조절된 유전자 c-fos에 대한 mRNA 수준을 맵핑하였다. 대조군과 비교하여 OEA(10 mg/kg, 복강 주사)는 PVN, 안구 상방 핵(도 7a) 및 NST(도 7c)에서 c-fos mRNA 수준을 매우 국소적으로 증가시켰다. 이러한 증가는, 다른 뇌 영역에서의 c-fos 발현이 OEA 처리에 의해 크게 영향을 받지 않는 한, 이들 부위에만 특이적이었다(도 7b,d). OEA가 NST(이는 CNS에 대한 미주신경 감각 입력을 처리한다) 및 PVN(중심적 이화 시그널의 합동작용을 위한 주요 부위)에서의 c-fos mRNA 발현을 자극한다는 발견은 식욕 감퇴의 말초 매개체로서의 상기 지질에 대한 생리적 역할과 일치한다.

OEA는 비특이적 행동 억제 상태를 유도함으로써 섭식을 감소시킬 수 있다. 이러한 경우라면, OEA는 조절된 맛 회피를 유발하여야 하며, 이는 래트에서 염화리튬(도 4c)을 비롯하여 다수의 비독성 물질에 의해 쉽게 유발될 수 있다[Green 등, Science, 173:749-751(1971)]. 그러나, OEA의 최대량(20 mg/kg, 복강 주사)은 이 분석에서 거의 영향을 주지 못하였으며(도 4c), 이는 이 화합물이 회피 대상이 아닐 수 있음을 의미한다. 몇가지 추가 관찰은 OEA의 행동 특이성을 지지한다. OEA는 물 섭취량, 체온, 통증 역치(도 4d-f), 또는 시상하부-뇌하수체-부신(HPA) 축의 활성은 변화시키지 않았다(표 3). 게다가 OEA는 운동 능력과 먹이에 대한 자발적 반응을 감소시켰지만, 불안과 같은 증상을 유발시키지 않았으며(도 4g), 이것은 식욕 감퇴를 유발하는 데 필요한 양보다 훨씬 더 많은 양에서도 그러하였다(도 4h-i). 이러한 약리학적 프로필은 암페타민 및 글루카콘 유사 펩티드 1(이것의 효과는 주로 회피, 활동항진, 불안 및 HPA 축의 활성화를 포함한다)과 같은 다른 식욕 억제제 및 내인성 칸나비노이드 아난다마이드(이것은 부분적으로 싫증을 느낀 동물에서의 먹이 섭취를 자극하고, 통증 역치를 증가시키며, 체온을 저하시키고, HPA 축을 활성화시킨다)와 OEA를 구별시킨다[Pertwee, R.G., Exp. Opin. Invest. Drugs, 9:1553-1571(2000)].

OEA가 혈장 호르몬 농도에 미치는 효과
	B	PRL	LH
비이클	212 ±24	10.8 ±2.7	5.3 ±0.9
프라나마이드 20	280 ±61	8.2 ±3.2	6.2 ±1.5
표 2에서, 혈장 코르티코스테론(B), 프로락틴(PRL) 및 항체 형성 호르몬(LH) 수준은 비이클 또는 프라나마이드(프라나마이드 mg/kg, 복강 주사)를 주사한지 60분 후에 수집된 혈장 샘플에서 방사능면역분석법에 의해 측정하여, ng/ml로 나타내었다. 군당 n=6-9

OEA는 생리학적으로 적절한 용량으로 식욕 감퇴를 유발한다. 최대 유효량의 1/2(5 mg/kg, 복강 주사)을 투여한지 1 시간 후, 순환 OEA 농도(16.1 ±2.6 pmol/ml)은 기본값보다 현저히 더 높았지만(10.1 ±1.1; P<0.05, 스튜던츠 t-테스트; n=5), 18 시간 동안 먹이를 박탈한 동물에서 측정된 값보다는 낮았다(도 1a). 따라서 단식 중에 OEA에 의해 도달된 혈중 농도는 두드러진 행동적 반응을 일으킬 수 있을 만큼 충분하다.

실시예 8: 체지방을 감소시키는 본 발명 화합물의 동정

하기 실시예는 OEA를 양성 대조군으로 사용하여 식욕 억제제를 동정하는 방법에 대해 설명한다. 구체적으로, OEA의 합성, 체지방 감소량 및 지방산 산화량의 측정에 대해 설명한다.

OEA의 합성

올레일클로라이드는 Nu-Check Prep(엘리시안, 미네소타주)으로부터 구입하거나 하기의 표준적 절차에 따라 제조한다. 올레일클로라이드를 디클로로메탄에 용해시키고(10 mg/ml), 5 당량의 에탄올아민과 0-4℃에서 15분간 반응시킨다. 정제수를첨가하여 반응을 중단시킨다. 세게 교반하여 상을 분리시킨 후, 상부의 수성상을 버리고, 유기상을 물로 2회 세척하여 미반응 에탄올아민을 제거하였다. 얻어진 OEA를 N₂스트림하에 농축 건조시킨 다음 클로로포름에 20 mM로 재구성하여 사용시까지 -20℃에 보관하였다.

후보 화합물에 의해 유도된 체지방 감소량의 측정

화합물의 체지방 감소 능력은 다수의 방법에 의해 평가할 수 있다. 예를 들어, 적절한 양의 OEA 및/또는 후보 화합물을 래트에 복강 주사한다. OEA 및 후보 화합물은 멸균 염수 중의 70% DMSO, 멸균 염수 중의 5% Tween 80/5% 프로필렌글리콜, 또는 10% Tween 80/10% 에탄올/80% 염수 중에 용해시켜 제조할 수 있다. 5 mg/kg의 OEA를 양성 대조군으로 사용할 수 있다. 투여된 후보 화합물의 양은, 예를 들어 1∼25 mg/kg이 될 수 있다. 일반적으로, 최적 용량을 결정하기 위해 여러 군의 래트에게 각 후보 화합물을 1, 2, 5, 10, 15, 및 20 mg/kg 용량으로 투여할 수 있다. 주사는 동물의 주요 식사 30분 전에 7-14일간 실시할 수 있다.

후보 화합물이 총 체지방에 미치는 효과는 피부 폴드 캘리퍼스를 사용하여 래트의 체지방을 직접 측정하여 확인할 수 있다. OEA 및/또는 후보 화합물 투여 전, OEA 및/또는 후보 화합물 투여중 매 48시간 마다, 그리고 투여 후 측정값을 얻기 위하여 래트의 등, 복부, 가슴, 앞다리 및 뒷다리의 피부를 캘리퍼스로 집을 수 있다. 집힌 부위 중 적어도 두 부위에서의 측정값의 차이는 래트의 총 체지방의 변화를 반영한다.

후보 화합물에 의해 유도된 지방산 산화의 측정

화합물은 또한 지방산 대사에 미치는 효과에 대해 평가할 수 있다. 후보 화합물이 지방산 대사에 미치는 효과는 간 세포의 1차 배양물에서의 지방산 산화율의 측정에 의해 측정될 수 있다. 간세포를 사용하여 올레이트에서 케톤 바디 및 이산화탄소로의 산화율을 측정할 수 있다. 이러한 세포는 Beynen 등의 문헌[Diabetes 28:828(1979)]에 기술된 대로 효소적 분해에 의해 어른 래트 간으로부터 분리할 수 있다. 세포는 통상, Guzman & Geelen의 문헌[Biochem. J. 287:487(1992)]에 기술된 대로 소 혈청 알부민 및 글루코스가 보충된 크렙스-헨셀라이트 중탄산염 배지에 현탁시켜서 배양한다. 배양된 세포의 단백질 농도를 측정하여 4-6 mg 단백질/ml이 반응 혼합물 중에 존재하도록 2 ml 배지에 세포를 접종할 수 있다. 세포를 [¹⁴C]-올레산(아머샴)과 함께 10 μM OEA의 존재 또는 부재하에 37℃에서 10분간 배양할 수 있으며, 반응은 2 M 과염소산 200 ㎕로 중단시키고, 산 용해성 생성물은 클로로포름/메탄올/물(5:1:1, 부피:부피:부피)을 사용하여 추출한다. 수성상을 제거하고 2회 이상 세척할 수 있다. 단백질 농도는 라우리(Lowry) 분석법을 이용하여 측정할 수 있다. 올레이트에서 케톤 바디로의 전환율은 산화된 올레이트의 nmol/시간/단백질(mg)으로서 나타낼 수 있으며, 액체 신틸레이션 계수법을 이용하여 측정할 수 있다. 따라서, OEA는 올레이트 산화를 21 ±6% 증가시킨다(n=4, 대조군 배양과 비교하여 p<0.01, 스튜던트 t 테스트).

실시예 9: OEA가 지방산 대사에 미치는 효과

올레오일에탄올아미드(OEA)는 식욕을 억제할 뿐만 아니라 가능하게는 체지방 이화작용을 증강시킴으로써 체중을 감소시킨다. 주요 체지방 연소 조직(넙치근, 간, 배양된 심근세포 및 성상세포)에서 OEA가 지방산 대사에 미치는 효과를 조사하였다. OEA는 간, 골격근(넙치근) 및 심장 세포의 1차 배양물에서 지방산 산화를 크게 촉진한 반면, 뇌에서 유래된 대교세포 배양물에는 영향을 미치지 않았다. 또한, OEA는 1차 백색 지방 조직 세포로부터 트리아실글리세롤 저장고의 현저한 동원을 유도한다. 표 4는 이들 세포에서 OEA가 지방산 산화에 미치는 방법 및 효과를 상세히 기재한다. 구조와 활성의 관계에 관한 실험은 골격근 지방산 산화에 대한 OEA의 효과가 특이적이라는 증거를 제공한다(도 8). 따라서, OEA의 효과는 가수분해 저항성 동족체 메틸-OEA에 의해, 그리고 부분적으로는 팔미틸에탄올아미드(PEA)에 의해 모방되지만, 아라키도닐에탄올아미드(AEA) 또는 올레산(OA)에 의해서는 모방되지 않는다. 요약하면, 이러한 결과들은 지질 산화 및 동원이 OEA에 의해 증강되며, OEA의 효과는 말초 부위에 국한된다는 것을 보여준다.

세포/조직	간세포	넙치근	심근세포	성상세포	지방세포
기원	어른 래트 간	어른 래트 뒷다리	신생 래트 심장	신생 래트 뇌 피질	어른 래트 부고환
분리 절차	효소적 분해(Beynen 등, 1979)	절개(Chiasson, 1980)	효소적 분해(Flink 등, 1992)	효소적 분해(McCarthy & De Vellis, 1980)	효소적 분해(Rodbell, 1964)
배양물 유형	세포 현탁액	조직 현탁액	세포 단층	세포 단층	세포 현탁액
배양 배지	크렙스-헨셀라이트 중탄산염 + BSA 및 글루코스(Guzman & Geelen, 1992)	크렙스-헨셀라이트 Hepes + BSA 및 글루코스(Fruebis 등, 2001)	고농도 글루코스 DMEM + BSA(Wu 등, 2000)	Hams F12/DMEM + 인슐린, 트렌스페린, 프로게스테론, 푸트레신 및 셀레나이트(Blazquez 등, 1998)	크렙스-헨셀라이트 Hepes + BSA 및 글루코스(Rodbell, 1965)
대사 매개변수	[14C]올레이트에서 케톤 바디로의 산화(Guzman & Geelen, 1992)	[14C]올레이트에서 CO2로의 산화(Fruebis 등, 2001)	[14C]올레이트에서 CO2로의 산화(Blazquez 등, 1998)	[14C]올레이트에서 케톤 바디로의 산화(Blazquez 등, 1998)	지질 분해(글리세롤 방출)(Serradeil-Le Gal 등, 2000)
배양 시간(분)	10	30	30	30	30
10 μM OEA의 자극 효과(%)	2 ±16(n=4)	36 ±10(n=4)	37 ±9(n=3)	2 ±6(n=3)	38 ±16(n=3)
대조군과 비교한 통계적 유의성	P < 0.01	P < 0.01	P < 0.01	유의성 없음	P < 0.01
인용 참고 문헌: Beynen AC 등, Diabetes 28:828-835(1979); Balzquez C 등, J. Neurochem 71:1597-1606(1998); Chiasson RB "Laboratory Anatomy of the White Rat" WCB, Dubuque, Iowa(1980); Funk IL 등, J. Biol. Chem. 267:9917-9924; Fruebis J 등, Proc Natl Acad Sci U USA 98:2005-2010(2001); Guzman M 등, Biochem J 287:487-492(1992); McCarthy KD 등, J. Cell Biol 85:890-902(1980); Rodbell M J Biol Chem 239:375-380(1964); Rodbell M Ann NY Acad Sci 131:302-314(1965); Serradeil-Le Gal C 등, FEBS Left 475:150-156(2000); Wu W 등, J. Biol Chem 275:40133-40119(2000)

실시예 10: 장내 내인성 OEA의 역할

장내 OEA 생합성에 섭식이 미치는 영향을 조사하였다. 고성능 액체 크로마토그래피/질량 분광계 분석에 의해, 자유 식이 래트 유래의 소장 조직은 상당량의 OEA를 포함하고 있음이 드러났다(354 ±86 pmol/g, n=3). 장내 OEA 농도는 먹이 박탈 후 급격히 감소하였지만, 먹이를 다시 제공하자 기본값으로 회복되었다. 이와는 대조적으로 위에서는 이러한 변화가 관찰되지 않았다(pmol/g; 대조군, 210 ±20; 단식, 238 ±84; 단식/재섭식, 239 ±60, n=3). 장내 OEA 농도의 변화에는, OEA 형성에 참여하지만 지방산 아미드 히드롤라제 활성에는 참여하지 않고 OEA 가수분해를 촉매하는 NAT 활성의 평행적 변화가 동반되었다. 이러한 발견은 단식과 섭식이 소장내에서 OEA의 합성을 상호적으로 조절한다는 것을 제시한다. 이는 OEA의 복내 공급원과도 일치하며, 단식 래트의 혈장 OEA 농도는 대정맥 혈액보다 문정맥 혈액에서 더 높은 것으로 확인되었다(pmol/ml; 문정맥, 14.6 ±1.8; 대정맥 10.3 ±2.8; n=5). 그밖의 복내 조직의 OEA 형성에 대한 기여는 현재 배제될 수 없다. 이러한 결과는 섭식 양상에 있어서 OEA 시스템을 이용하는 데 많은 간섭이 있음을 제시한다. 이 모델에 따르면, 먹이 섭취는 NAT 활성을 자극하여, 소장내에서, 가능하게는 다른 복부내 조직에서 OEA 생합성을 증강시킬 수 있다. 새로 생산된 OEA는 국소적 감각 섬유를 활성화시킬 수 있으며, 이는 다시 NST 및 PVN과 같은 뇌 구조를 끌어들임으로써 섭식을 억제할 수 있다.

본 발명의 결과는 섭식의 말초적 조절에 있어서의 OEA의 예기치 않은 역할을 밝혔으며, 체중 또는 체지방을 줄이기 위한 목적, 체중 증가 또는 체지방 증가를 예방하기 위한 목적, 식욕을 억제하거나 식탐, 또는 음식 섭취량을 줄이기 위한 목적, 그리고 섭식 장애, 과체중, 또는 비만을 치료하기 위한 목적으로 사용될 새로운 약물의 개발을 위한 틀을 제공한다. 이러한 약물은 OEA 유사체 및 동족체뿐만 아니라, 전술한 바와 같이 OEA 형성에 작용하여 시스템 및 효소를 가수분해시킴으로써 OEA 농도를 조절하는 제제를 포함한다.

본 명세서에서 인용된 모든 공보 및 특허 출원은 그 개개의 공보 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 참고문헌으로 포함되어 있는 것처럼 본 발명 내용과 모순되지 않는 정도로 본원에서 참고로 포함한다.

전술한 발명은 이해를 분명히 할 목적으로 설명과 실시예로서 어느 정도 상세히 설명하였으나, 당업자라면 본 발명의 교시에 비추어 청구범위의 취지 또는 범위를 벗어나지 않도록 특정 변화 및 변형이 이루어질 수 있음을 쉽게 알 것이다.

Claims (48)

1. 포유동물에게 지방산 알칸올아미드를 투여하는 것을 포함하는 포유동물의 음식 섭취량을 줄이는 방법으로서, 상기 투여는 상기 포유동물의 음식 섭취량을 줄이기에 효과적인 양으로 수행되는 것인 방법.
2. 제1항에 있어서, 지방산 알칸올아미드는 올레오일에탄올아미드인 것인 방법.
3. 제1항에 있어서, 지방산 알칸올아미드는 아미드 결합을 통해 에탄올아민부에 공유 결합된 지방산부를 포함하는 것인 방법.
4. 제3항에 있어서, 지방산부는 단일불포화 또는 다중불포화된 것인 방법.
5. 제1항에 있어서, 투여는 피부 패치를 통해 이루어지는 것인 방법.
6. 제4항에 있어서, 지방산부는 올레산인 것인 방법.
7. 제3항에 있어서, 지방산부는 12∼20개의 탄소 원자를 갖는 것인 방법.
8. 제3항에 있어서, 지방산은 엘라이드산, 팔미톨레산, 팔미트산, 리놀레산, 알파-리놀렌산 및 감마-리놀렌산으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 방법.
9. 제3항에 있어서, 에탄올아민부의 히드록시기는 저급 (C₁-C₃) 알킬기로 치환되어 상응하는 에테르를 형성하는 것인 방법.
10. 제3항에 있어서, 에탄올아민부의 히드록시기는 저급 (C₂-C₆) 알킬 카르복실산의 카르복실레이트기에 결합되어 상응하는 에스테르를 형성하는 것인 방법.
11. 제3항에 있어서, 지방산 에탄올아미드는 지방산 에탄올아미드의 질소 원자에 공유 결합된 저급 알킬 (C₁-C₃)기를 추가로 포함하는 것인 방법.
12. 제1항에 있어서, 포유동물은 인간인 것인 방법.
13. 제1항에 있어서, 지방산 알칸올아미드는 팔미토일에탄올아미드인 것인 방법.
14. 제1항에 있어서, 지방산 알칸올아미드는 칸나비노이드 CB2 또는 칸나비노이드 CB1 수용체를 활성화시키지 않는 것인 방법.
15. 제1항에 있어서, 상기 지방산 알칸올아미드는 약학적 허용 담체와 함께 경구, 직장, 국소 또는 비경구 경로를 통해 투여되는 것인 방법.
16. 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염을, 체지방 또는 체중을 줄이기에 효과적인 양으로 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물의 체지방 또는 체중을 줄이거나 조절하는 방법:

    상기 화학식에서, n은 0∼5이고, a와 b의 합은 0∼4일 수 있으며; Z는 -C(O)N(R⁰)-; -(R^o)NC(O)-; -OC(O)-; -(O)CO-; O; NR⁰; 및 S로 이루어진 군에서 선택되고, 이때 R⁰및 R²는 치환 또는 비치환 알킬, 수소, C₁-C₆-알킬, 및 저급 (C₁-C₆) 아실로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되며, 상기 화학식의 지방산부 또는 알칸올부의 4개 이하의 수소 원자는 메틸 또는 이중 결합으로 치환되고, 탄소 c와 d 사이의 결합은 불포화 또는 포화 결합일 수 있다.
17. 제16항에 있어서, 상기 화합물은 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염인 것인 방법:

    상기 화학식에서, n은 0∼4이고, a와 b의 합은 1∼3이며, R¹및 R²는 수소, C₁-C₆알킬, 및 저급 (C₁-C₆) 아실을 포함하는 군에서 독립적으로 선택되며, 상기 화학식의 지방산부 및 알칸올아민부의 4개 이하의 수소 원자는 메틸 또는 이중 결합으로 치환되고, 탄소 c와 d 사이의 결합은 불포화 또는 포화 결합일 수 있다.
18. 제17항에 있어서, R¹및 R²는 수소, C₁-C₃알킬, 및 저급 (C₁-C₃) 아실을 포함하는 군에서 독립적으로 선택되는 것인 방법.
19. 제17항에 있어서, a는 1이고, b는 1인 것인 방법.
20. 제17항에 있어서, n은 1인 것인 방법.
21. 제17항에 있어서, R¹및 R²는 각각 H인 것인 방법.
22. 제17항에 있어서, 탄소 c와 탄소 d 사이의 결합은 이중 결합인 것인 방법.
23. 제17항에 있어서, 화합물은 올레오일에탄올아미드인 것인 방법.
24. 제17항에 있어서, 화합물은 팔미토일에탄올아미드인 것인 방법.
25. 제17항에 있어서, 투여는 비경구, 경구, 경피, 직장 또는 비강내 투여인 것인 방법.
26. 제17항에 있어서, 포유동물은 인간인 것인 방법.
27. 제16항에 있어서, 화합물은 하기 화학식의 화합물 중 하나인 것인 방법:

    상기 화학식에서, n은 1∼5이고, a와 b의 합은 0∼4이며; R²는 수소, C₁-C₆알킬, 및 저급 (C₁-C₆) 아실로 이루어진 군에서 선택되고; 상기 화학식의 지방산부 및 알칸올부의 4개 이하의 수소 원자는 메틸 또는 이중 결합으로 치환될 수도 있다.
28. 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염과 약학적 허용 부형제를 포함하는 약학 조성물:

    상기 화학식에서, n은 0∼5이고, a와 b의 합은 0∼4이며; Z는 -C(O)N(R⁰)-; -(R⁰)NC(O)-; -OC(O)-; -(O)CO-; O; NR⁰; 및 S로 이루어진 군에서 선택되고, 이때 R⁰및 R²는 치환 또는 비치환 알킬, 수소, C₁-C₆알킬 및 저급 (C₁-C₆) 아실로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되며, 상기 화학식의 지방산부 또는 에탄올부의 4개 이하의 수소 원자는 메틸 또는 이중 결합으로 치환되고, 탄소 c와 d 사이의 결합은 불포화 또는 포화 결합일 수 있다.
29. 제28항에 있어서, 화합물은 하기 화학식의 화합물 또는 이의 약학적 허용 염인 것인 조성물:

    상기 화학식에서, n은 1∼3이고, a와 b의 합은 1∼3이며, R¹및 R²는 수소, C₁-C₆알킬, 및 저급 (C₁-C₆) 아실로 이루어진 군에서 독립적으로 선택되고, 상기 화학식의 지방산부 및 알칸올부의 4개 이하의 수소 원자는 메틸 또는 이중 결합으로 치환되고, 탄소 c와 d 사이의 결합은 불포화 또는 포화 결합일 수 있다.
30. 제29항에 있어서, 상기 조성물은 단위 제형으로 존재하며, 단위 용량은 체중을 감소시키거나 조절하기에 효과적인 양의 화합물을 포함하는 것인 조성물.
31. 제29항에 있어서, 상기 양은 약 10∼1,000 mg인 것인 조성물.
32. 제29항에 있어서, 상기 양은 약 1∼100 mg인 것인 조성물.
33. 제29항에 있어서, 상기 양은 약 100∼500 mg인 것인 조성물.
34. 제29항에 있어서, 화합물은 팔미토일에탄올아미드인 것인 조성물.
35. 제29항에 있어서, 조성물은 국소 조성물, 경구 조성물 또는 비경구 조성물인 것인 조성물.
36. 제29항에 있어서, R¹및 R²는 수소, C₁-C₃알킬, 및 저급 (C₁-C₃) 아실을 포함하는 군에서 독립적으로 선택되는 것인 조성물.
37. 제29항에 있어서, a는 1이고, b는 1이고, n은 1인 것인 조성물.
38. 제29항에 있어서, 화합물은 올레오일에탄올아미드인 것인 조성물.
39. 제29항에 있어서, R¹및 R²는 각각 H인 것인 조성물.
40. 제30항에 있어서, 탄소 c와 탄소 d 사이의 결합은 이중 결합인 것인 조성물.
41. 제30항에 있어서, 화합물은 팔미틸에탄올아미드인 것인 방법.
42. 하기 화학식의 화합물 및 약학적 허용 부형제를 포함하는 약학 조성물로서, 상기 화합물은 포유동물에게 투여시 음식 섭취량을 줄이기에 효과적인 양으로 존재하는 것인 약학 조성물:

    상기 화학식에서, a와 b의 합은 0∼4이고, 상기 화학식의 지방산부의 4개 이하의 수소 원자는 메틸 또는 이중 결합으로 치환될 수도 있으며; 탄소 c와 d 사이의 분자 결합은 불포화 또는 포화 결합일 수 있고, R은 직쇄 또는 분지쇄 알킬 아민, 시클릭 알킬 아민, 푸란, 테트라히드로푸란, 피롤, 피롤리딘, 및 피리딘으로 이루어진 군에서 선택되는 기를 나타낸다.
43. 포유동물에게 투여시 체중을 감소시키기에 효과적인 양의 지방산 알칸올아미드와 약학적 허용 부형제를 포함하는 약학 조성물.
44. 제46항에 있어서, 지방산부는 올레산인 것인 약학 조성물.
45. 제46항에 있어서, 지방산부는 12∼20개의 탄소 원자를 갖는 것인 약학 조성물.
46. 제46항에 있어서, 지방산은 엘라이드산, 팔미톨레산, 팔미트산, 리놀레산, 알파-리놀렌산, 및 감마-리놀렌산으로 이루어진 군에서 선택되는 것인 약학 조성물.
47. 제46항에 있어서, 알칸올아미드의 알칸올아민은 에탄올아민인 것인 약학 조성물.
48. 제46항에 있어서, 조성물은 장용피 경구 제제인 것인 조성물.