CN102675141A - N-(2-羟基乙基)芥酰胺及其制备与用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及N-(2-羟基乙基)芥酰胺及其制备与用途。本发明公开了N-(2-羟基乙基)芥酰胺的结构式，本发明还进一步公开了其化学合成方法及其用于降血脂的用途。试验证实，本发明的N-(2-羟基乙基)芥酰胺具有明显的降血脂，预防或治疗非酒精性脂肪肝，保肝护肝的功效，可用于多种原因引起的高血脂及非酒精性脂肪肝的预防和治疗。
Description
技术领域
本发明涉及已知药用化合物的衍生物，具体涉及PPARα激动剂油酰乙醇胺衍生物N-(2-羟基乙基)芥酰胺及其制备与用途。
背景技术
高脂血症与动脉粥样硬化、糖尿病、脂肪肝、肾病等疾病的发病关系十分密切。尤其是心血管疾病，是发病易患因子的重要因素，根据流行病学统计资料显示，患高脂血症人群发病的可能性要比同年龄别组的正常人群高，其发病率要高出4倍。在美国、澳大利亚，高血脂引起心脑血管病症而死亡的人数，在所有疾病中占第一位。而我国高脂血症实际平均发病率可能达到一成以上，全国有超过一亿的人口需要接受调脂治疗。随着人们生活水平的不断提高，血脂异常还将呈现明显的增长趋势。因此寻找疗效好副作用小的治疗高血脂的药物是我们急需解决的问题。从高脂血症的发病机制出发，寻找有效的治疗蛋白是近年来研究的热点。过氧化物酶体增殖剂激活受体(peroxisome proliferator activatived receptors,PPAR)PPARα作为在高血脂形成和发展过程重均起到重要作用的转录调节蛋白，越来越受到人们的关注。贝特类药物是激动过氧化物酶增殖物激活受体α的药理性配基。PPARα激活后调节脂质代谢，诱导与脂质代谢有关的酶，促进脂肪酸的β-氧化及ω-氧化，降低血清甘油三酯，发挥调血脂的作用。由于降血脂效果显著，PPARα的合成配体已成为治疗高脂血症的一线药物，而对于半数有效浓度更低的PPARα的天然配体OEA(oleoyleth-anolamide油酰乙醇胺)及以OEA为先导化合物而合成的OEA类似物的研究，将会使治疗高脂血症药物的开发具有深远意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种PPARα激动剂油酰乙醇胺(OEA)衍生物N-(2-羟基乙基)芥酰胺及其制备与其在降血脂方面的应用。
本发明首先提供了PPARα激动剂油酰乙醇胺(OEA)衍生物N-(2-羟基乙基)芥酰胺，其结构式为：
本发明还提供了所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺的合成方法，其合成路线如下：
具体包括下列步骤：
1）将芥酸酰氯化后获得芥酰氯；
2）将芥酰氯与三乙胺在有机溶剂中进行胺解反应制得N-(2-羟基乙基)芥酰胺。
所述步骤1）中，酰氯化所用试剂为二氯亚砜。
进一步的，步骤1）在无溶剂条件下加热回流3-20小时。
所述步骤2）中，所述有机溶剂为二氯甲烷。
步骤2）中，胺解反应时加入缚酸剂。
进一步的，所述缚酸剂为三乙胺。
步骤2）中，反应温度为常规，优选0℃。反应时间为3-20小时。
本发明的N-(2-羟基乙基)芥酰胺可用于制备具有降血脂功效的药物。
所述的降血脂可为降低血清的总胆固醇、甘油三酯或低密度脂蛋白的浓度。
进一步的，所述具有降血脂功效的药物为预防或治疗高脂血症或非酒精性脂肪肝的药物。
所述预防或治疗高脂血症或非酒精性脂肪肝可为降低肝脏损伤、肝脏脂质或减轻肝脏脂质过氧化水平。
本发明还提供了一种具有降血脂功效的药物，包括治疗有效量的N-(2-羟基乙基)芥酰胺及药用辅料。
所述药用辅料可以是一种或多种药物可接受的载体、稀释剂、填充剂、结合剂及其它赋形剂，这依赖于给药方式及所设计的剂量形式。本领域枝术人员已知的治疗惰性的无机或 有机的载体包括(但不限于)乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、植物油、蜡、脂肪、多羟基化合物例如聚乙二醇、水、蔗糖、乙醇、甘油，诸如此类，各种防腐剂、润滑剂、分散剂、矫味剂。保湿剐、抗氧化剂、甜味剂、着色剂、稳定剂、盐、缓冲液诸如此类也可加入其中，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。
配制好的药物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)口服、:肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、或局部给药。
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明融合蛋白或其抗体施用于人，其中该安全有效量通常是成人约200-300mg/d。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的
本发明的降血脂或预防非酒精性脂肪肝的药物可以单独给药，或以各种组合给药，以及与其它治疗药剂一起结合形式给药。如此配制的组合物根据需要可选择本领域技术人员已知的任何适当的方式进行给药。
本发明还提供了一种降血脂或预防或治疗非酒精性脂肪肝的方法，包括将有效剂量的本发明的药物施用于对象中。
所述对象为哺乳动物，优选为人。
较佳的施用方式为口服。
本发明通过药理实验研究发现，PPARα激动剂油酰乙醇胺衍生物N-(2-羟基乙基)芥酰胺具有明显的降血脂，预防或治疗非酒精性脂肪肝，保肝护肝的功效，可用于多种原因引起的高血脂及非酒精性脂肪肝的预防和治疗。相比油酰乙醇胺，本发明的N-(2-羟基乙基)芥酰胺具有易制备、不易水解、口服吸收好、降血脂及保肝活性高的优势。
具体实施方式
以下列举实例以进一步阐述本发明，应理解，实例并非用于限制本发明的保护范围。
实施例1
N-(2-羟基乙基)芥酰胺的制备与鉴定。
0℃下将(3mL，20mmol)二氯亚砜滴加到(3.10g，10mmol)芥酸中，室温搅拌0.5h后，无溶剂加热到90℃回流3h，冷却到室温，使用碱液洗气瓶将反应生成的盐酸气和未反应的 二氯亚砜吸收，再真空浓缩制得较纯的月桂酰氯。月桂酰氯溶解在10mL二氯甲烷中，在0℃下滴加到溶解在30mL二氯甲烷中的20mmol乙醇胺和20mmol三乙胺反应瓶中，室温搅拌反应3h。反应液用1MHCl洗涤至PH=5，用二氯甲烷（3*15mL）萃取三遍，合并有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗，用二氯甲烷（3*15mL）萃取水相三遍。合并有机相，饱和食盐水洗两次。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到粗产品。使用洗脱剂乙酸乙酯:石油醚=1:1在硅胶色谱柱上提纯，得白色固体1.9g左右，产率78%。
鉴定结果：
Mp:79.8-81.8℃.
MS(ESI,m/z):244.2(MH+),266.3(MNa+).
1H NMR(CDCl3,400MHz):δ0.85(t,J=6.8Hz,3H,CH3),1.23~1.27(m,16H,H-4-11),1.55~1.63(m,2H,H-3),2.15~2.19(t,J=7.6Hz,2H,H-2),3.35~3.39(dd,J1=5.4Hz,J2=10.0Hz,2H,NHCH2),3.66(t,J=5.2Hz,2H,CH2OH),6.42(br s,H,NH). 13CNMR(CDCl3,100MHz):δ14.18,22.76,25.87,29.42,29.47,29.60,29.60,29.70,29.71,31.99,
36.78,42.48,62.14,174.77ppm.
IR(film)νmax:3294,3094,2918,2849,1642,1561,1469,1052,721cm-1
结果证实获得产物为N-(2-羟基乙基)芥酰胺。
实施例2
本实例采用Triton WR1339诱导的小鼠急性高脂血症模型，观察N-(2-羟基乙基)芥酰胺对急性高脂血症模型小鼠的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的影响。药效学实验具体方法步骤如下：
1）实验动物和试剂
昆明种小鼠24只，雄性、均重18-22克，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司；许可证号：SCXK（沪）2007-0005。
Triton WR1339，购自SIGMA公司
菲诺贝特，购自SIGMA公司
N-(2-羟基乙基)芥酰胺，实施例1制得
2）动物处理方法
昆明种小鼠，正常光照，温度:18-25℃，湿度:40-60%,给予普通饲料，自由饮水适应性饲养7天后，随机分为4组，每组6只，分别为正常对照组、急性高脂血症模型组、非诺贝特组、N-(2-羟基乙基)芥酰胺组。除正常对照组外，实验各组分别于当日17时腹腔注射Triton WR1339（400mg/kg），并同时以灌胃的方式给予正常组和模型组生理盐水、非诺贝特组非诺贝特溶液（100mg/kg）、N-(2-羟基乙基)芥酰胺组N-(2-羟基乙基)芥酰胺（记为P58）溶液（100mg/kg）；于隔日早上9时（16小时后）全部断头取血，测定小鼠血清TC、TG。
2、结果与分析
表1N-(2-羟基乙基)芥酰胺对急性高脂血症小鼠血脂的影响
肩注###示与正常对照组相比P<0.001；***表示与高脂模型组相比P<0.001。
2）N-(2-羟基乙基)芥酰胺急性高脂血症小鼠血脂水平的影响
①从表1中可以看出，高脂模型组动物TC、TG与正常对照组相比均显著性升高，p<0.001，说明造模成功。
②非诺贝特组与高脂模型组相比，TC、TG分别下降77.06%、78.10%，均有显著性差异，说明阳性对照药非诺贝特对于急性高脂血症模型降脂效果显著。
③N-(2-羟基乙基)芥酰胺组与高脂模型组相比，TC、TG分别下降90.22%、90.82%,均有显著性差异，说明N-(2-羟基乙基)芥酰胺对于急性高脂血症模型降脂效果显著。
实验结果证明N-(2-羟基乙基)芥酰胺可以明显降低急性高脂血症小鼠血清中的TC、TG的含量，
具有一定的降血脂作用。
实施例3
本实施例采用喂饲高脂饲料的金黄地鼠高脂血症模型，观察N-(2-羟基乙基)芥酰胺对高脂血症模型金黄地鼠的血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、体重、肝重、肝脏脂质水平、肝脏MDA、肝脏SOD的影响。
本发明提供的药效学实验具体方法步骤如下：
1）实验动物和试剂
金黄地鼠（golden hamster）48只，雄性、均重100~120克，购自上海市松江区松联实验动物场；许可证号：SCXK（沪）2007-0011。
非诺贝特，购自sigma公司
N-(2-羟基乙基)芥酰胺，实施例1制得
2）动物处理方法
金黄地鼠，温度23±1℃,湿度:40-60%,自然光照，自由饮水，自由进食普通饲料1周,随机分为6组，每组8只，分别记为正常对照组、高脂血症模型组、非诺贝特组、N-(2-羟基乙基)芥酰胺低剂量组（记为P58-1）、N-(2-羟基乙基)芥酰胺中剂量组（记为P58-2）、N-(2-羟基乙基)芥酰胺高剂量组（记为P58-3）。
除正常对照组给予普通饲料外，其余组均给予高脂饲料。高脂饲料配方为：普通饲料89%，猪油10%，胆固醇1%。喂养5周。
按照下述方法给药：
正常对照组和高脂血症组：每日于下午14点给予饲料前给予生理盐水，方式：灌胃。
非诺贝特组：每日于下午14点给予饲料前给药一次，剂量40mg/kg，方式：灌胃。
P58-1组：每日于下午14点给予饲料前给药一次，剂量10mg/kg，方式：灌胃。
P58-2组：每日于下午14点给予饲料前给药一次，剂量20mg/kg，方式：灌胃。
P58-3组：每日于下午14点给予饲料前给药一次，剂量40mg/kg，方式：灌胃。
按照上述方法连续给药5周后，所有动物心脏取血，摘取肝脏组织，测定血清总胆固醇，甘油三酯，低密度脂蛋白胆固醇LDL-C，高密度脂蛋白胆固醇HDL-C，血清肝脏脂质，肝脏丙二醛MDA，肝脏超氧化物歧化酶SOD，丙氨酸氨基转移酶ALT，草酰乙酸转移酶AST。
统计学分析：数据采用Graphpad Prism 5软件(GraphPad Software Inc，USA)进行统计学分析，组间比较用单因素方差分析，当方差分析差异有显著性时，进一步用q检验作两两比较。
2、结果与分析
1）N-(2-羟基乙基)芥酰胺对饮食性高脂血症金黄地鼠血脂水平的影响
连续给药5周后，检测血脂变化(TC、TG、HDL-C/TC、LDL-C)结果如表1a和表1b所示。该结果表明：
①高脂模型组动物TC、TG、LDL-C分别比正常对照组升高883%、676%、2837%，HDL-C/TC降低77.38%，与正常组相比均有显著性差异，说明造模成功。
②非诺贝特组与高脂模型组相比，TC、TG、LDL-分别下降62.80%、87.08%、78.60%，HDL-C/TC上升205.94%，均具有显著性差异，说明阳性对照药非诺贝特对于饮食性高脂血症金黄地鼠模型降脂效果显著。
③N-(2-羟基乙基)芥酰胺各组与高脂模型组相比，TC、TG、LDL-C均有一定程度的下降，HDL-C/TC有一定程度上升，但以P58-3组的变化最为明显，且结果具有显著性差异。
表1a N-(2-羟基乙基)芥酰胺对饮食性高脂血症金黄地鼠血脂的影响
肩注###示与正常对照组相比P<0.001；***表示与高脂模型组相比P<0.001。
表1b N-(2-羟基乙基)芥酰胺对饮食性高脂血症金黄地鼠血脂的影响
肩注###示与正常对照组相比P<0.001；*表示与高脂模型组相比P<0.05，***表示P<0.001。
2）N-(2-羟基乙基)芥酰胺对饮食性高脂血症金黄地鼠肝脏生化指标的影响
连续给药5周后，检测肝脏系数、肝脏脂质含量、肝脏生化指标(ALT、AST、MDA、SOD)结果如表1c、1d、1e和1f所示。该结果表明：
①高脂模型组与正常对照组相比，肝重升高41.89%，肝指数升高57.02%，N-(2-羟基乙基)芥酰胺各组与高脂模型组相比具有下降的趋势，其中p58-2、p58-3组与高脂模型组相比均具有显著性差异。（表1c）
②高脂模型组与正常对照组相比，肝脏脂质含量、MDA、ALT、AST水平显著升高，SOD水平均显著性降低。（表1c、1d、1e、1f）
③非诺贝特组与高脂模型组相比，MDA、ALT、AST水平显著性降低，SOD水平显著性升高，表明非诺贝特具有减轻肝脏损伤以及脂质过氧化作用，但对肝脏脂质水平影响不明显。（表1d）
④N-(2-羟基乙基)芥酰胺各组中，p58-1和p58-2组对肝组织ALT、AST、MDA及SOD均有显著性影响，但对肝脏脂质水平影响不明显；p58-3组与高脂模型组相比，各指标均有程度不同的显著性差异，表明p58-3在降低ALT、AST、MDA及肝脏脂质水平和升高SOD方面显示出较好的作用。（表1d、1e）
表1c N-(2-羟基乙基)芥酰胺对饮食性高脂血症金黄地鼠肝脏的影响
肩注###示与正常对照组相比P<0.001；*表示与高脂模型组相比P<0.05,**表示P<0.01，***表示P<0.001。
表1d N-(2-羟基乙基)芥酰胺对饮食性高脂血症金黄地鼠肝脏脂质水平的影响
肩注###示与正常对照组相比P<0.001；*表示与高脂模型组相比P<0.05,**表示P<0.01。
表1e N-(2-羟基乙基)芥酰胺对饮食性高脂血症金黄地鼠肝脏的影响
表1f N-(2-羟基乙基)芥酰胺对饮食性高脂血症金黄地鼠肝脏的影响
肩注###示与正常对照组相比P<0.001；*表示与高脂模型组相比P<0.05,***表示P<0.001。
通过以上实验结果证明，N-(2-羟基乙基)芥酰胺具有显著的降低血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的作用。同时，还具有显著的降低肝脏MDA、ALT、AST水平，显著的升高肝脏SOD水平的作用，说明N-(2-羟基乙基)芥酰胺还具有降低肝脏损伤、肝脏脂质及减轻肝脏脂质过氧化水平的用途，对于高脂模型所导致的脂肪肝具有预防作用。可以开发N-(2-羟基乙基)芥酰胺作为降血脂，预防脂肪肝药物的用途。
Claims (12)
1.N-(2-羟基乙基)芥酰胺，其结构式为：
2.如权利要求1所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺的合成方法，其合成路线如下：
3.如权利要求2所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺的合成方法，具体包括下列步骤：
1）将芥酸酰氯化后获得芥酰氯；
2）将芥酰氯与三乙胺在有机溶剂中进行胺解反应制得N-(2-羟基乙基)芥酰胺。
4.如权利要求3所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺的合成方法，其特征在于，所述步骤1）中，酰氯化所用试剂为二氯亚砜。
5.如权利要求3所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺的合成方法，其特征在于，步骤1）的反应条件为：在无溶剂条件下加热回流3-20小时。
6.如权利要求3所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺的合成方法，其特征在于，所述步骤2）中，所述有机溶剂为二氯甲烷。
7.如权利要求3所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺的合成方法，其特征在于，所述步骤2）中，胺解反应时加入缚酸剂。
8.如权利要求7所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺的合成方法，其特征在于，所述缚酸剂为三乙胺。
9.如权利要求3所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺的合成方法，其特征在于，所述步骤2）中，反应温度为0℃，反应时间为3-20小时。
10.如权利要求1所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺用于制备具有降血脂功效的药物的用途。
11.如权利要求10所述N-(2-羟基乙基)芥酰胺的用途，其特征在于，所述具有降血脂功效的药物为预防或治疗高脂血症或非酒精性脂肪肝的药物。
12.一种具有降血脂功效的药物，包括治疗有效量的N-(2-羟基乙基)芥酰胺及药用辅料。
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