JP2017035086A - Ｂ７−ｈ３と反応性のある抗体、その免疫学的に活性なフラグメントおよびその使用 - Google Patents

Ｂ７−ｈ３と反応性のある抗体、その免疫学的に活性なフラグメントおよびその使用 Download PDF

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Abstract

【課題】哺乳類、より詳しくは、ヒトＢ７−Ｈ３受容体と免疫反応性のある抗体およびそれらのフラグメント、ならびに特に癌および炎症の治療におけるそれらの使用方法の提供。【解決手段】（Ａ）Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な免疫グロブリンＶＬエピトープ結合ドメイン、及びＢ７−Ｈ３以外の分子との結合に特異的なＶＨエピトープ結合ドメインを含む、ポリペプチド鎖Ｉ、及び（Ｂ）Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な免疫グロブリンＶＨエピトープ結合ドメイン、及び前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子との結合に特異的なＶＬエピトープ結合ドメインを含む、前記ポリペプチド鎖ＩとＩＩがともに会合して、Ｂ７−Ｈ３と結合可能な機能的エピトープ結合ドメイン及び前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子と結合可能な機能的エピトープ結合ドメインを形成し、Ｆｃ領域の少なくとも一部を含む、二重親和性再標的化試薬。【選択図】図２３

Description

関連出願の相互参照：
本出願は米国特許出願第６１／３１０，６９２号（２０１０年３月４日出願；係属中）
；同第６１／３１０，６９５号（２０１０年３月４日出願；係属中）、同第６１／３１１
，０５７号（２０１０年３月５日出願；係属中）の優先権を主張するものであり、これら
の出願はそれぞれ参照によりその全内容を本明細書に組み入れる。
配列表の参照：
本出願は３７Ｃ．Ｆ．Ｒ． １．８２１に準拠した１以上の配列表（下記参照）を含み
、これらの配列表は紙面およびコンピュータ読み取り可能な媒体の双方で開示され、これ
らの紙面およびコンピュータ読み取り可能な開示は参照によりその全内容を本明細書に組
み入れる。
本発明は、哺乳類、より詳しくは、ヒトＢ７−Ｈ３受容体と免疫反応性のある抗体およ
びそれらのフラグメント、ならびに特に癌および炎症の治療におけるそれらの使用に関す
る。よって、本発明は特に、様々なヒト癌に関連する癌細胞に対する免疫系の活性化を媒
介し得る、より好ましくは増強し得る、ヒト化Ｂ７−Ｈ３反応性抗体およびそれらの免疫
反応性フラグメントに関する。
腫瘍の増殖および転移は、宿主の免疫監視を逃れ、宿主の防御に打ち勝つそれらの能力
に負うところが大きい。ほとんどの腫瘍は、様々な程度で宿主の免疫系によって認識され
得る抗原を発現するが、多くの場合、エフェクターＴ細胞の活性化が効果的でないために
惹起される免疫応答は不十分である（非特許文献１）。
ＣＤ４＋Ｔリンパ球はほとんどの哺乳類の免疫応答および自己免疫応答の必須形成体で
ある（非特許文献２）。ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞の活性化は、抗原提示細胞とナイーブＣ
Ｄ４＋Ｔリンパ球の間の共刺激性相互作用により媒介されることが判明している。２つの
相互作用が必要である（非特許文献３）。第１の相互作用では、抗原提示細胞が、その細
胞の主要組織適合性複合体に結合された関連の標的抗原を提示しなければならず、これに
より、抗原提示細胞はナイーブＣＤ４＋Ｔリンパ球のＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」：T-cell
Receptor）と結合することができる。第２の相互作用では、抗原提示細胞のリガンドが
ＣＤ４＋Ｔリンパ球のＣＤ２８受容体と結合しなければならない（非特許文献２；非特許
文献４）。両刺激シグナルを受けているＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞はその後、インターロイ
キン−２およびインターロイキン−１２などのサイトカインに応答してＴｈ１細胞へと発
達することができる。このような細胞は、標的抗原を発現する標的細胞に対する炎症性応
答を媒介するインターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）および腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α
）を産生する。また、Ｂ細胞の活性化と増殖も起こり、標的抗原に特異的な抗体が産生さ
れる（非特許文献５）。ＴＣＲの結合中に両方の共刺激シグナルが存在しなければ、Ｔ細
胞は、クローンアネルギーと呼ばれる機能的不応答状態に入る（非特許文献１）。病的状
態では、Ｔｈ１細胞は、Ｉ型糖尿病、関節リウマチおよび多発性硬化症などの種々の器官
特異的自己免疫疾患の重要な担い手となる（非特許文献２）。
Ｉ．Ｂ７スーパーファミリーとＢ７−Ｈ３
ＣＤ２８受容体のリガンドの調査から、Ｂ７スーパーファミリーとして知られる関連分
子として知られる１組の関連分子を同定するに至っている(非特許文献６；非特許文献７
；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２；非
特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５）。現在、このファミリーには現在、Ｂ
７．１（ＣＤ８０）、Ｂ７．２（ＣＤ８６）、誘導型共刺激因子リガンド（ＩＣＯＳ−Ｌ
）、プログラムされた細胞死−１リガンド（ＰＤ−Ｌ１）、プログラムされた細胞死−２
リガンド（ＰＤ−Ｌ２）、Ｂ７−Ｈ３およびＢ７−Ｈ４の７つのメンバーが知られている
（非特許文献９）。
Ｂ７ファミリーメンバーは、免疫グロブリン−Ｖ様および免疫グロブリン−Ｃ様ドメイ
ン（例えば、ＩｇＶ−ＩｇＣ）を有する免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーであ
る（非特許文献７）。Ｂ７−ファミリーメンバーのこのＩｇＶドメインおよびＩｇＣドメ
インはそれぞれ単一のエキソンによりコードされ、さらなるエキソンがリーダー配列、ト
ランスメンブランドメインおよび細胞質ドメインをコードしている。細胞質ドメインは短
く、１９〜６２アミノ酸残基の範囲の長さであり、複数のエキソンによりコードされてい
る可能性がある（非特許文献９）。Ｂ７−Ｈ３は、その主要なヒト形態が２つの細胞外タ
ンデムＩｇＶ−ＩｇＣドメイン（すなわち、ＩｇＶ−ＩｇＣ−ＩｇＶ−ＩｇＣ）を含んで
いるという点で独特である（非特許文献９）。Ｂ７ファミリーのメンバーは細胞表面で背
中合わせの非共有結合性ホモ二量体を形成していると推測され、このような二量体はＢ７
−１（ＣＤ８０）およびＢ７−２（ＣＤ８６）に関して認められている。
Ｂ７−１（ＣＤ８０）およびＢ７−２（ＣＤ８６）は、刺激性ＣＤ２８受容体と阻害性
ＣＴＬＡ−４（ＣＤ１５２）受容体に対して二重の特異性を示す（非特許文献７）。
当初は、含まれるＩｇドメインは２つだけである（ＩｇＶ−ＩｇＣ）と思われたが、免
疫グロブリン細胞外ドメイン４つの変異体（「４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３」）が確認され、この
タンパク質のより一般的なヒト型であることが分かった（非特許文献７）。天然マウス型
（２Ｉｇ）とヒト４Ｉｇ型は同様の機能を示すことから、これら２つの形態の間に機能的
な違いは見られなかった（非特許文献１８）。４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３分子は、ナチュラルキ
ラー細胞により媒介される癌細胞の溶解を阻害する（非特許文献１９）。ヒトＢ７−Ｈ３
（２Ｉｇ型）は、活性化されたＴ細胞上の推定受容体に結合することによりＴ細胞の活性
化およびＩＦＮ−γの産生を促進することが分かっている（非特許文献１６；非特許文献
２０）。Ｂ７−Ｈ４およびＢ７−Ｈ１は双方とも、腫瘍細胞上で発現した場合には免疫機
能の強力な阻害剤となる（非特許文献１２）。
Ｂ７−Ｈ３の作用様式は複雑であり、これはこのタンパク質がＴ細胞の共刺激と共阻害
の双方を媒介するからである（非特許文献１８；非特許文献２１；非特許文献２２）。Ｂ
７−Ｈ３は（ＴＲＥＭ）様転写物２（ＴＬＴ−２：(TREM)-like transcript 2）と結合し
、Ｔ細胞の活性化を共刺激するだけでなく、まだ同定されていない受容体と結合してＴ細
胞の共阻害も媒介する。さらに、Ｂ７−Ｈ３は、未知の受容体との相互作用を介して、ナ
チュラルキラー細胞および骨芽細胞の阻害剤となる（非特許文献１８）。この阻害は、Ｔ
細胞受容体（ＴＣＲ）が遺伝子転写を調節する主要なシグナル伝達経路のメンバー（例え
ば、ＮＦＴＡ、ＮＦ−κＢまたはＡＰ−１因子）との相互作用を介して機能し得る。
Ｂ７−Ｈ３はＣＤ４＋Ｔ細胞とＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖を共刺激する。Ｂ７−Ｈ３はまた
、ＩＦＮ−γの産生とＣＤ８＋溶解活性も刺激刺激する（非特許文献１６；非特許文献７
）。しかしながら、このタンパク質はまた、おそらくＮＦＡＴ（活性化Ｔ細胞の核因子）
、ＮＦ−κＢ（核因子κＢ）およびＡＰ−１（アクチベータータンパク質−１）因子を介
してＴ細胞の活性化を阻害する働きをすると思われる（非特許文献２３）。Ｂ７−Ｈ３は
また、in vivoにおいてＴｈ１、Ｔｈ２またはＴｈ１７を阻害すると考えられている（非
特許文献２４；非特許文献２５；非特許文献２３）。いくつかの独立した研究が、ヒト悪
性腫瘍細胞はＢ７−Ｈ３タンパク質の発現に著しい増強を示すこと、およびこの発現の増
強は疾患の重篤度の増大と関連していたことを示しており（非特許文献２６）、このこと
はＢ７−Ｈ３が腫瘍により免疫回避経路として利用されていることを示唆する（非特許文
献１８）。
Ｂ７分子の、Ｔ細胞受容体と結合する能力を遮断する分子（例えばＣＤ２８）は免疫系
を阻害し、自己免疫疾患の治療法として提案されている（非特許文４）。抗４Ｉｇ−Ｂ７
−Ｈ３抗体で処理された４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３発現神経芽腫細胞は、ＮＫ細胞に対する感受
性がより高かった。しかしながら、報告されている４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３に対する抗体は全
て２Ｉｇ様型のＢ７Ｈ３とも結合することから、この活性を４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３型に対す
る抗体だけに帰することができる場は核である（非特許文献２７および１９）。
Ｂ７−Ｈ３は休止中のＢもしくはＴ細胞、単球、または樹状細胞では発現されないが、
樹状細胞ではＩＦＮ−γにより、また、単球ではＧＭ−ＣＳＦにより誘導される（非特許
文献７）。Ｂ７−Ｈ３と結合する受容体は十分同定されていない。初期の研究では、この
ような受容体のあるものは活性化後にＴ細胞上で迅速かつ一時的にアップレギュレーショ
ンを受ける必要があるであろうことが示唆された（非特許文献１０）。最近、骨髄細胞で
発現される（ＴＲＥＭ）様転写物２（ＴＬＴ−２またはＴＲＥＭＬ２）受容体（非特許文
献２８；非特許文献２９；非特許文献２３）は、Ｂ７−Ｈ３と結合し得ること、およびそ
れにより特にＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化を共刺激し得ることが示されている（非特許文献３
０；非特許文献３１；非特許文献１８）。
神経芽腫細胞上での発現に加え、ヒトＢ７−Ｈ３はまた他の種々の癌細胞（例えば、胃
癌、卵巣癌および非小細胞肺癌）で発現されることが知られている。Ｂ７−Ｈ３タンパク
質発現は腫瘍細胞系統において免疫組織学的に検出されている（非特許文献１６；非特許
文献３２；非特許文献１９；非特許文献１７）。ｍＲＮＡの発現は、心臓、腎臓、精巣、
肺、肝臓、膵臓、前立腺、結腸および骨芽細胞で見られた（非特許文献９）。タンパク質
レベルでは、Ｂ７−Ｈ３はヒト肝臓、肺、膀胱、精巣、前立腺、乳房、胎盤およびリンパ
器官に見られる（非特許文献１８）。
ＩＩ．治療用抗体
診断におけるそれらの既知の使用に加え、抗体は治療薬として有用であることが示され
ている。例えば、免疫療法または治療目的での抗体の使用は、癌を治療するために近年用
いられてきた。受動免疫療法は、癌治療におけるモノクローナル抗体の使用を含む（例え
ば、非特許文献３３参照）。これらの抗体は腫瘍細胞の増殖または生存の直接的阻害と身
体の免疫系の活性を抹消するナチュラルキラー細胞を動員する能力の双方によって固有の
治療的生物活性を持ち得る。これらの薬剤は単独で投与することもできるし、あるいは放
射線または化学療法薬と併用投与することもできる。それぞれ非ホジキンリンパ腫および
乳癌の治療に認可されているリツキシマブおよびトラスツズマブは、このような治療薬の
例である。あるいは、抗体は抗体コンジュゲートを作製するために使用することもでき、
この場合、抗体は有毒薬剤と結合され、腫瘍と特異的に結合することにより、その薬剤を
腫瘍に向ける。ゲムツズマブ・オゾガマイシンは、白血病の治療に用いられる、認可され
た抗体コンジュゲートの例である。
癌細胞に結合し、診断および治療に潜在的用途を有するモノクローナル抗体が開示され
ている（例えば、とりわけ、標的タンパク質のいくつかの分子量を開示している以下の特
許出願：特許文献１（２００ｋＤ ｃ−ｅｒｂＢ−２（Ｈｅｒ２）、および他の未知の抗
原４０〜２００ＫＤの大きさ）および特許文献２（５０ｋＤおよび５５ｋＤ癌胎児性タン
パク質）参照）。臨床試験におけるおよび／または固形腫瘍の治療に認可されている抗体
の例としては、トラスツズマブ（抗原：１８０ｋＤ、ＨＥＲ２／ｎｅｕ）、エドレコロマ
ブ（抗原：４０〜５０ｋＤ、Ｅｐ−ＣＡＭ）、抗ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧｌ）（抗原 ＆
ｇｔ；２００ｋＤ、ＨＭＷ ムチン）、セツキシマブ（抗原：１５０ｋＤおよび１７０ｋ
Ｄ、ＥＧＦ受容体）、アレムツズマブ（抗原：２１〜２８ｋＤ、ＣＤ５２）、およびリツ
キシマブ（抗原：３５ｋＤ、ＣＤ２０）が挙げられる。
乳癌の治療に用いられるトラスツズマブ（Ｈｅｒ−２受容体）および数種の癌の治療に
関する臨床試験下にあるセツキシマブ（ＥＧＦ受容体）の抗原標的は、皮膚、結腸、肺、
卵巣、肝臓および膵臓をはじめとする多数の正常なヒト成人組織にある程度の検出可能な
レベルで存在する。これらの治療薬を用いる場合の安全性の限界は、おそらく抗原発現レ
ベルまたはこれらの部位における抗体の接近性もしくは活性の違いによってもたらされる
。
免疫療法のもう１つのタイプは、特定の癌上に存在する抗原または抗原の発現を命令す
るＤＮＡ構築物を用いた能動免疫療法またはワクチン接種であり、これはその後、個体に
おいて免疫応答を誘発する、すなわちその個体にその固有の癌に対する抗体を能動的に産
生させる。能動免疫は受動免疫療法または免疫毒ほど頻繁には用いられてこなかった。
疾患（癌を含む）の進行のモデルがいくつか提案されている。理論は単一の感染／形質
転換事象による原因から、段階的な「疾患様」または「癌様」組織種への進行、やがては
完全に病的または悪性能を持ったものに至るに及ぶ。例えば癌では、悪性化には１つの突
然変異事象だけで十分であるという人もいれば、それに続く変化も必要であるという人も
いる。また、細胞レベルでの連続的な突然変異選択事象を介した新生物の誘発ならびに進
行の双方には、突然変異荷重と腫瘍病期の増大が必要であるということを示唆した人もい
る。癌標的は、腫瘍組織にのみ見られるものもあれば、正常組織に存在して腫瘍組織でア
ップレギュレーションを受け、かつ／または過剰発現されるものもある。このような状況
にあって、過剰発現は悪性の獲得に関連していることを示唆した研究者もいれば、過剰発
現は単に病態進行の道筋に沿った傾向のマーカーに過ぎないことを示唆する研究者もいる
。
腫瘍で発現される、または過剰発現される癌タンパク質などの癌標的は、胚および胎児
発達中に存在し、増殖および分化のレギュレーターとして働くことが示されたケースもあ
る。胚および胎児発達中のこれらの癌タンパク質の発現は特定の組織に限定され、また、
特定の発達段階に限定されると思われることを見出した研究者もいる。これに対して、成
体でのこれらの癌タンパク質の発現は、腫瘍増殖の過剰発現および／または腫瘍抑制タン
パク質の機能不全に関連していることが示されている。
理想的な診断用および／または治療用抗体は、多数の癌には存在するが、正常組織には
存在しないか低レベルでしか存在しない抗原に特異的なものであろう。癌に特異的に関連
する抗原と結合することができる新規な抗体の発見、同定および単離が多くの方法で有用
となろう。第一に、このような抗体は癌細胞に対して生物活性を持ち、免疫系の応答を動
員して、それにより疾患を治療することができるであろう。この抗体は治療薬として単独
で、または現行療法と組み合わせて投与することができ、あるいは有毒薬剤と連結された
免疫複合体を作製するために使用することができる。同じ特異性を有するが、単独で投与
した際には生物活性が低いかまたは無い抗体も、抗体が放射性同位元素、毒素または化学
療法薬、または化学療法薬を含有するリポソームとともに免疫複合体を作製するために使
用可能であるという点で有用であり得る（なお、コンジュゲートした形態は、毒素を抗原
含有細胞に向ける抗体のために生物学的に活性である）。
上述のように、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合する抗体およびその他の分子はすでに記載さ
れている（特許文献３；特許文献４；特許文献５；特許文献６；特許文献７；特許文献８
；特許文献９；特許文献１０；特許文献１１；特許文献１２；特許文献１３；特許文献１
４；特許文献１５；特許文献１６；特許文献１７；特許文献１８；特許文献１９；特許文
献２０；特許文献２１；特許文献２２；非特許文献３４；非特許文献３５；非特許文献３
６；非特許文献２７；非特許文献２０参照）。
しかしながらやはり、理想的な診断および／または治療用抗体に望ましい一態様は、様
々な癌に関連する癌細胞（特にヒト癌細胞）に対する免疫系の活性化を媒介し得る、特に
増強し得る新規抗体の発見および同定であろう。このような組成物はまた、（例えば小分
子の）発見のため、および細胞の調節、増殖および分化のさらなる特性決定のために有用
となろう。
米国特許第６，０５４，５６１号明細書 米国特許第５，６５６，４４４号明細書 米国特許第７，５２７，９６９号明細書 米国特許第７，３６８，５５４号明細書 米国特許第７，３５８，３５４号明細書 米国特許第７，２７９，５６７号明細書 米国特許出願公開第２００９００８７４１６号明細書 米国特許出願公開第２００９００２２７４７号明細書 米国特許出願公開第２００９００１８３１５号明細書 米国特許出願公開第２００８１１６２１９号明細書 米国特許出願公開第２００８００８１３４６号明細書 米国特許出願公開第２００５０２０２５３６号明細書 米国特許出願公開第２００３０１０３９６３号明細書 米国特許出願公開第２００２０１６８７６２号明細書 国際公開第２００８／１１６２１９号 国際公開第２００６／０１６２７６号 国際公開第２００４／０９３８９４号 国際公開第２００４／００１３８１号 国際公開第２００２／３２３７５号 国際公開第２００２／１０１８７号 国際公開第２００１／０９４４１３号 欧州特許第１２９２６１９Ｂ号明細書
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従って、これまでのあらゆる進展にもかかわらず、癌細胞に結合し、癌細胞に対する免
疫応答を助長または媒介することができる改良された組成物の必要が依然としてある。こ
のような組成物はこのような癌を診断および治療するために使用可能である。本明細書に
開示されている発見に基づけば、細胞表面の二重の標的を特異的に認識し、それにより、
Ｂ７−Ｈ３の、Ｔ細胞活性化を媒介する能力を低減もしくは増強するか、またはＢ７−Ｈ
３を発現する癌細胞を認識して死に至らせるかのいずれかによって調節を行うことができ
る新規組成物のさらなる必要性が存在する。本発明の１つの目的はこのような組成物を特
定することである。もう１つの目的は、Ｂ７−Ｈ３発現のアッセイに用いるための新規化
合物を提供することである。
以下に詳細に記載されるように、本発明は、Ｔ細胞の活性化に影響を与え得る、Ｂ７−
Ｈ３ Ｔ細胞活性化のモジュレーターを含む新規な抗体（特に、二重親和性再標的化試薬
（「ＤＡＲＴ：dual affinity retargeting reagent（商標）」を含む）、ならびに癌細
胞のＢ７−Ｈ３受容体と結合し、このような細胞の細胞死を助長または媒介する新規な抗
体に関する。本発明は、このような組成物、ならびに癌などの疾患の診断および治療にお
けるそれらの使用を対象とする。
本発明は、哺乳類、より詳しくはヒト、Ｂ７−Ｈ３受容体と免疫反応性のある抗体およ
びそれらのフラグメント、ならびに特に癌および炎症の治療におけるその使用に関する。
よって、本発明は、特に、様々なヒト癌に関連する癌細胞に対する免疫系の活性化を媒介
し得る、より好ましくは増強し得るヒト化Ｂ７−Ｈ３反応性抗体およびそれらの免疫反応
性フラグメントに関する。
詳しくは、本発明は、Ｂ７−Ｈ３の細胞外ドメインと特異的に結合する可変ドメインを
含み、該Ｂ７−Ｈ３との結合に関して抗体：ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＢＲＣＡ８４ＤまたはＰＲ
ＣＡ１５７のいずれかと競合する、単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント
に関する。
本発明はさらに、（Ａ）ＢＲＣＡ６９Ｄの軽鎖のＣＤＲ1（配列番号２１）、ＣＤＲ2（
配列番号２３）およびＣＤＲ3（配列番号２５）と、ＢＲＣＡ６９Ｄの重鎖のＣＤＲ1（配
列番号２９）、ＣＤＲ2（配列番号３１）およびＣＤＲ3（配列番号３３）；（Ｂ）ＢＲＣ
Ａ８４Ｄの軽鎖のＣＤＲ1（配列番号５）、ＣＤＲ2（配列番号７）およびＣＤＲ3（配列
番号９）と、ＢＲＣＡ８４Ｄの重鎖のＣＤＲ1（配列番号１３）、ＣＤＲ2（配列番号１５
）およびＣＤＲ3（配列番号１７）；または（Ｃ）ＰＲＣＡ１５７の軽鎖のＣＤＲ1（配列
番号３７）、ＣＤＲ2（配列番号３９）およびＣＤＲ3（配列番号４１）と、ＰＲＣＡ１５
７の重鎖のＣＤＲ1（配列番号４５）、ＣＤＲ2（配列番号４７）およびＣＤＲ3（配列番
号４９）を含む可変ドメインを含む、上記の単離された抗体、またはその免疫反応性フラ
グメントに関する。
本発明はさらに、癌細胞の表面で内因的に発現されたＢ７−Ｈ３と結合する、上記の単
離された抗体、またはその免疫反応性フラグメントのいずれかに関する。
本発明はさらに、癌細胞の表面で発現されたＢ７−Ｈ３と結合した際に内部移行を受け
るＢ７−Ｈ３と結合する、上記の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメントの
いずれかに関する。
本発明はさらに、ヒト化モノクローナル抗体である、上記の単離された抗体、またはそ
の免疫反応性フラグメントのいずれかに関する。
本発明はさらに、変異型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む改変抗体であり、前記変異型ヒ
トＩｇＧ１ Ｆｃ領域が前記抗体の親のＦｃ領域に比べて少なくとも１つのアミノ酸改変
を含み、該アミノ酸改変が、ＦｃγＲとの結合に関する該変異型Ｆｃ領域の親和性または
結合力を変更するアミノ酸改変を含み、その結果、前記改変抗体が前記親抗体に比べてエ
フェクター機能の増強を示す、上記の単離された抗体、または免疫反応性フラグメントの
いずれかに関する。
本発明はさらに、前記Ｆｃ領域改変が、（Ａ）（１）Ｆ２４３Ｌ；（２）Ｄ２７０Ｅ；
（３）Ｒ２９２Ｐ；（４）Ｓ２９８Ｎ；（５）Ｙ３００Ｌ；（６）Ｖ３０５Ｉ；（７）Ａ
３３０Ｖ；および（８）Ｐ３９６Ｌからなる群から選択される少なくとも１つの置換；（
Ｂ）（１）Ｆ２４３ＬとＰ３９６Ｌ；（２）Ｆ２４３ＬとＲ２９２Ｐ；および（３）Ｒ２
９２ＰとＶ３０５Ｉからなる群から選択される少なくとも１つの、２つのアミノ酸残基の
置換；（Ｃ）（１）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００Ｌ；（２）Ｆ２４３ＬとＲ２９２
ＰとＶ３０５Ｉ；（３）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＰ３９６Ｌ；および（４）Ｒ２９２Ｐ
とＶ３０５ＩとＰ３９６Ｌからなる群から選択される少なくとも１つの、３つのアミノ酸
残基の置換；（Ｄ）（１）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００ＬとＰ３９６Ｌ；および（
２）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＶ３０５ＩとＰ３９６Ｌからなる群から選択される少なく
とも１つの、４つのアミノ酸残基の置換；または（Ｅ）少なくとも、５つのアミノ酸残基
：Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００ＬとＶ３０５ＩとＰ３９６の置換を含む、上記の単
離された抗体、または免疫反応性フラグメントのいずれかに関する。
本発明はさらに、（Ａ）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００Ｌ；（Ｂ）Ｌ２３５ＶとＦ
２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００ＬとＰ３９６Ｌ；または（Ｃ）Ｆ２４３ＬとＲ２９２Ｐ
とＹ３００ＬとＶ３０５ＩとＰ３９６Ｌの置換を含む、上記の抗体に関する。
本発明はさらに、（Ａ）ＢＲＣＡ８４Ｄの軽鎖のＣＤＲ1（配列番号５）、ＣＤＲ2（配
列番号７）およびＣＤＲ3（配列番号９）と、ＢＲＣＡ８４Ｄの重鎖のＣＤＲ1（配列番号
１３）、ＣＤＲ2（配列番号１５）およびＣＤＲ3（配列番号１７）とを含む可変ドメイン
、ならびに（Ｂ）置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９
６Ｌを含むＦｃ領域改変を含む、上記の抗体に関する。
本発明はさらに、キメラ抗体またはヒト化抗体である、上記の抗体に関する。
本発明はさらに、（Ａ）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ ＶＬのアミノ酸配列（配列番号８９）
を有する可変軽鎖と、（Ｂ）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ ＶＨのアミノ酸配列（配列番号９９
）を有する可変重鎖と、（Ｃ）置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ
およびＰ３９６Ｌを有するＦｃ領域とを含む、上記の単離された抗体、またはその免疫反
応性フラグメントに関する。
本発明はさらに、Ｂ７−Ｈ３の細胞外ドメインと特異的に結合し、Ｂ７−Ｈ３との結合
に関して抗体：ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＢＲＣＡ８４ＤまたはＰＲＣＡ１５７のいずれかと競合
するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマに関する。
本発明はさらに、上記の単離された抗体または免疫反応性フラグメントのいずれかをコ
ードする核酸分子に関する。
本発明はさらに、（Ａ）Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な免疫グロブリンＶＬエピトープ
結合ドメイン、およびＢ７−Ｈ３以外の分子との結合に特異的なＶＨエピトープ結合ドメ
インを含む、ポリペプチド鎖Ｉと、（Ｂ）Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な免疫グロブリン
ＶＨエピトープ結合ドメイン、およびＢ７−Ｈ３以外の分子との結合に特異的なＶＬエピ
トープ結合ドメインを含む、ポリペプチド鎖ＩＩとを含み、ポリペプチド鎖ＩとＩＩがと
もに会合して、Ｂ７−Ｈ３およびＢ７−Ｈ３以外の分子と結合可能な機能的エピトープ結
合ドメインを形成する、二重親和性再標的化試薬（ＤＡＲＴ（商標））に関する。
本発明はさらに、ＤＡＲＴ（商標）が結合し得るＢ７−Ｈ３以外の分子がハプテンであ
る、特に、ハプテンがフルオレセインイソチオシアネートである、上記の二重親和性再標
的化試薬（ＤＡＲＴ（商標））に関する。
本発明はさらに、ＤＡＲＴ（商標）が結合し得るＢ７−Ｈ３以外の分子がＴ細胞受容体
またはＮＫＧ２Ｄ受容体である、上記の二重親和性再標的化試薬（ＤＡＲＴ（商標））に
関する。
本発明はさらに、ＤＡＲＴ（商標）が結合し得るＢ７−Ｈ３以外の分子が腫瘍関連抗原
であり、特に、腫瘍関連抗原がＡ３３；ＡＤＡＭ−９；ＡＬＣＡＭ；ＢＡＧＥ；β−カテ
ニン；ＣＡ１２５；カルボキシペプチダーゼＭ；ＣＤ１０３；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ
２２；ＣＤ２３；ＣＤ２５；ＣＤ２７；ＣＤ２８；ＣＤ３６；ＣＤ４０／ＣＤ１５４；Ｃ
Ｄ４５；ＣＤ４６；ＣＤ５；ＣＤ５６；ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ；ＣＤＫ４；ＣＥＡ；Ｃ
ＴＬＡ４；サイトケラチン８；ＥＧＦ−Ｒ；ＥｐｈＡ２；ＥｒｂＢ１；ＥｒｂＢ３；Ｅｒ
ｂＢ４；ＧＡＧＥ−１；ＧＡＧＥ−２；ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２；ｇｐ１００；ＨＥＲ−
２／ｎｅｕ；ヒト乳頭腫ウイルス−Ｅ６；ヒト乳頭腫ウイルス−Ｅ７；インテグリンα−
Ｖ−Β−６；ＪＡＭ−３；ＫＩＤ３；ＫＩＤ３１；ＫＳＡ（１７−１Ａ）；ＬＵＣＡ−２
；ＭＡＧＥ−１；ＭＡＧＥ−３；ＭＡＲＴ；ＭＵＣ−１；ＭＵＭ−１；Ｎ−アセチルグル
コサミニルトランスフェラーゼ；オンコスタチンＭ；ｐ１５；ＰＩＰＡ；ＰＳＡ；ＰＳＭ
Ａ；ＲＯＲ１；ｓＴｎ；ＴＮＦ−β受容体；ＴＮＦ−α受容体；ＴＮＦ−γ受容体；トラ
ンスフェリン受容体；およびＶＥＧＦ受容体からなる群から選択される、上記の二重親和
性再標的化試薬（ＤＡＲＴ（商標）に関する。
本発明はさらに、上記の二重親和性再標的化試薬（ＤＡＲＴ（商標））のいずれかのポ
リペプチド鎖をコードする核酸分子に関する。
本発明はさらに、（ｉ）治療上有効な量の上記の単離された抗体または免疫反応性フラ
グメントまたは二重親和性再標的化試薬（ＤＡＲＴ（商標））のいずれかと、（ｉｉ）薬
学上許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
本発明はさらに、抗体が、（Ａ）ＢＲＣＡ８４Ｄの軽鎖のＣＤＲ1（配列番号５）、Ｃ
ＤＲ2（配列番号７）およびＣＤＲ3（配列番号９）と、ＢＲＣＡ８４Ｄの重鎖のＣＤＲ1
（配列番号１３）、ＣＤＲ2（配列番号１５）およびＣＤＲ3（配列番号１７）とを含む可
変ドメイン、ならびに（Ｂ）置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌお
よびＰ３９６Ｌを含むＦｃ領域改変を含むヒト化抗体である、上記の医薬組成物に関する
。
本発明はさらに、抗体が、（Ａ）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ ＶＬのアミノ酸配列（配列番
号８９）を有する可変軽鎖と、（Ｂ）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ ＶＨのアミノ酸配列（配列
番号９９）を有する可変重鎖と、（Ｃ）置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ
３００ＬおよびＰ３９６Ｌを有するＦｃ領域とを含むヒト化抗体である、上記の医薬組成
物に関する。
本発明はさらに、１以上の付加的抗癌薬をさらに含み、特に、付加的抗癌薬が化学療法
薬、放射線療法薬、ホルモン療法薬または免疫療法薬である、上記の医薬組成物のいずれ
かに関する。
本発明はさらに、癌の診断における上記の抗体または免疫反応性フラグメントまたは二
重親和性再標的化試薬（ＤＡＲＴ（商標））のいずれかの使用であって、該単離された抗
体、免疫反応性フラグメントまたはＤＡＲＴ（商標）が検出可能に標識されている使用に
関する。
本発明はさらに、癌が副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀
胱癌、骨癌、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉
腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織
球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液性軟骨
肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患
、生殖細胞腫瘍、頭頚部癌、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂
肪腫／良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞
腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫
、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘
腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、稀な血液疾患、転移性
腎臓癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、
胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および子宮癌の細胞からなる
群から選択される癌細胞の存在を特徴とすることを特徴とする上記の使用に関する。
本発明はさらに、患者の癌の治療または予防のための薬剤の製造における、上記の抗体
または免疫反応性フラグメントまたは二重親和性再標的化試薬（ＤＡＲＴ（商標））のい
ずれかの使用に関する。本発明はさらに、癌が副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞状軟部肉腫
、星状細胞系腫瘍、膀胱癌、骨癌、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫
瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌
、皮膚良性線維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫
瘍、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃
癌、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭頚部癌、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫
、腎臓癌、白血病、脂肪腫／良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪性腫瘍、肝臓癌、リン
パ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異
形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍
、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、
稀な血液疾患、転移性腎臓癌、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉
腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および
子宮癌の細胞からなる群から選択される癌細胞の存在を特徴とすることを特徴とするこの
ような使用に関する。
本発明はさらに、使用が化学療法、免疫療法、放射線療法、ホルモン療法および手術か
らなる群から選択される１以上の付加的癌療法の投与をさらに含むことを特徴とする上記
の使用に関する。
本件出願は、下記の［項目１］〜［項目３２］の発明を提供する。
［項目１］
Ｂ７−Ｈ３の細胞外ドメインと特異的に結合する可変ドメインを含み、該Ｂ７−Ｈ３と
の結合に関して抗体：ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＢＲＣＡ８４ＤまたはＰＲＣＡ１５７のいずれか
と競合する単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント。
［項目２］
（Ａ）ＢＲＣＡ６９Ｄの軽鎖のＣＤＲ1（配列番号２１）、ＣＤＲ2（配列番号２３）お
よびＣＤＲ3（配列番号２５）と、ＢＲＣＡ６９Ｄの重鎖のＣＤＲ1（配列番号２９）、Ｃ
ＤＲ2（配列番号３１）およびＣＤＲ3（配列番号３３）；
（Ｂ）ＢＲＣＡ８４Ｄの軽鎖のＣＤＲ1（配列番号５）、ＣＤＲ2（配列番号７）および
ＣＤＲ3（配列番号９）と、ＢＲＣＡ８４Ｄの重鎖のＣＤＲ1（配列番号１３）、ＣＤＲ2
（配列番号１５）およびＣＤＲ3（配列番号１７）；または
（Ｃ）ＰＲＣＡ１５７の軽鎖のＣＤＲ1（配列番号３７）、ＣＤＲ2（配列番号３９）お
よびＣＤＲ3（配列番号４１）と、ＰＲＣＡ１５７の重鎖のＣＤＲ1（配列番号４５）、Ｃ
ＤＲ2（配列番号４７）およびＣＤＲ3（配列番号４９）
を含む可変ドメインを含む、前記項目１に記載の単離された抗体、またはその免疫反応性
フラグメント。
［項目３］
癌細胞の表面で内因的に発現されたＢ７−Ｈ３と結合する、前記項目１又は２に記載の
単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント。
［項目４］
癌細胞の表面で発現されたＢ７−Ｈ３と結合した際に内部移行を受けるＢ７−Ｈ３と結
合する、前記項１又は２に記載の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント。
［項目５］
ヒト化モノクローナル抗体である、前記項目１ないし４のいずれか一項に記載の単離さ
れた抗体、またはその免疫反応性フラグメント。
［項目６］
変異型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む改変抗体であり、前記変異型ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ
領域が前記抗体の親のＦｃ領域に関して少なくとも１つのアミノ酸改変を含み、前記アミ
ノ酸改変が、ＦｃγＲとの結合に関する該変異型Ｆｃ領域の親和性または結合力を変更す
るアミノ酸改変を含み、その結果、前記改変抗体が前記親抗体に関してエフェクター機能
の増強を示す、項目１ないし５のいずれか一項に記載の単離された抗体。
［項目７］
前記Ｆｃ領域改変が、
（Ａ）
（１）Ｆ２４３Ｌ；
（２）Ｄ２７０Ｅ；
（３）Ｒ２９２Ｐ；
（４）Ｓ２９８Ｎ；
（５）Ｙ３００Ｌ；
（６）Ｖ３０５Ｉ；
（７）Ａ３３０Ｖ；および
（８）Ｐ３９６Ｌ
からなる群から選択される少なくとも１つの置換；
（Ｂ）
（１）Ｆ２４３ＬとＰ３９６Ｌ；
（２）Ｆ２４３ＬとＲ２９２Ｐ；および
（３）Ｒ２９２ＰとＶ３０５Ｉ
からなる群から選択される少なくとも１つの、２つのアミノ酸残基の置換；
（Ｃ）
（１）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００Ｌ；
（２）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＶ３０５Ｉ；
（３）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＰ３９６Ｌ；および
（４）Ｒ２９２ＰとＶ３０５ＩとＰ３９６Ｌ
からなる群から選択される少なくとも１つの、３つのアミノ酸残基の置換；
（Ｄ）
（１）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００ＬとＰ３９６Ｌ；および
（２）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＶ３０５ＩとＰ３９６Ｌ
からなる群から選択される少なくとも１つの、４つのアミノ酸残基の置換；または
（Ｅ）少なくとも、５つのアミノ酸残基：Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００ＬとＶ３
０５ＩとＰ３９６の置換
を含む、前記項目６に記載の抗体。
［項目８］
（Ａ）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００Ｌ；
（Ｂ）Ｌ２３５ＶとＦ２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００ＬとＰ３９６Ｌ；または
（Ｃ）Ｆ２４３ＬとＲ２９２ＰとＹ３００ＬとＶ３０５ＩとＰ３９６Ｌ
の置換を含む、前記項目７に記載の抗体。
［項目９］
（Ａ）ＢＲＣＡ８４Ｄの軽鎖のＣＤＲ1（配列番号５）、ＣＤＲ2（配列番号７）および
ＣＤＲ3（配列番号９）と、ＢＲＣＡ８４Ｄの重鎖のＣＤＲ1（配列番号１３）、ＣＤＲ2
（配列番号１５）およびＣＤＲ3（配列番号１７）とを含む可変ドメイン、ならびに
（Ｂ）置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌを含
むＦｃ領域改変
を含む、前記項目８に記載の抗体。
［項目１０］
キメラ抗体である、前記項目９に記載の抗体。
［項目１１］
ヒト化抗体である、前記項目９に記載の抗体。
［項目１２］
（Ａ）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ ＶＬの前記アミノ酸配列（配列番号８９）を有する可変
軽鎖と、
（Ｂ）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ ＶＨの前記アミノ酸配列（配列番号９９）を有する可変
重鎖と、
（Ｃ）置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌを有
するＦｃ領域
とを含む、前記項目１に記載の単離された抗体、またはその免疫反応性フラグメント。
［項目１３］
Ｂ７−Ｈ３の細胞外ドメインと特異的に結合し、前記Ｂ７−Ｈ３との結合に関して抗体
：ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＢＲＣＡ８４ＤまたはＰＲＣＡ１５７のいずれかと競合するモノクロ
ーナル抗体を分泌するハイブリドーマ。
［項目１４］
項目１ないし１２のいずれか一項に記載の前記単離された抗体、または項目１〜５のい
ずれか一項に記載の前記免疫反応性フラグメントをコードする核酸分子。
［項目１５］
（Ａ）Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な免疫グロブリンＶＬエピトープ結合ドメイン、お
よびＢ７−Ｈ３以外の分子との結合に特異的なＶＨエピトープ結合ドメインを含む、ポリ
ペプチド鎖Ｉと、
（Ｂ）Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な免疫グロブリンＶＨエピトープ結合ドメイン、お
よび前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子との結合に特異的なＶＬエピトープ結合ドメインを含む、
ポリペプチド鎖ＩＩ
とを含み、前記ポリペプチド鎖ＩとＩＩがともに会合して、Ｂ７−Ｈ３および前記Ｂ７−
Ｈ３以外の分子と結合可能な機能的エピトープ結合ドメインを形成する、二重親和性再標
的化試薬。
［項目１６］
前記二重親和性再標的化試薬が結合し得る前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子がハプテンである
、項目１５に記載の二重親和性再標的化試薬。
［項目１７］
前記ハプテンがフルオレセインイソチオシアネートである、項目１６に記載の二重親和
性再標的化試薬。
［項目１８］
前記二重親和性再標的化試薬が結合し得る前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子がＴ細胞受容体ま
たはＮＫＧ２Ｄ受容体である、項目１５に記載の二重親和性再標的化試薬。
［項目１９］
前記二重親和性再標的化試薬が結合し得る前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子が腫瘍関連抗原で
ある、項目１５に記載の二重親和性再標的化試薬。
［項目２０］
前記腫瘍関連抗原がＡ３３；ＡＤＡＭ−９；ＡＬＣＡＭ；ＢＡＧＥ；β−カテニン；Ｃ
Ａ１２５；カルボキシペプチダーゼＭ；ＣＤ１０３；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；Ｃ
Ｄ２３；ＣＤ２５；ＣＤ２７；ＣＤ２８；ＣＤ３６；ＣＤ４０／ＣＤ１５４；ＣＤ４５；
ＣＤ４６；ＣＤ５；ＣＤ５６；ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ；ＣＤＫ４；ＣＥＡ；ＣＴＬＡ４
；サイトケラチン８；ＥＧＦ−Ｒ；ＥｐｈＡ２；ＥｒｂＢ１；ＥｒｂＢ３；ＥｒｂＢ４；
ＧＡＧＥ−１；ＧＡＧＥ−２；ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２；ｇｐ１００；ＨＥＲ−２／ｎｅ
ｕ；ヒト乳頭腫ウイルス−Ｅ６；ヒト乳頭腫ウイルス−Ｅ７；インテグリンα−Ｖ−Β−
６；ＪＡＭ−３；ＫＩＤ３；ＫＩＤ３１；ＫＳＡ（１７−１Ａ）；ＬＵＣＡ−２；ＭＡＧ
Ｅ−１；ＭＡＧＥ−３；ＭＡＲＴ；ＭＵＣ−１；ＭＵＭ−１；Ｎ−アセチルグルコサミニ
ルトランスフェラーゼ；オンコスタチンＭ；ｐ１５；ＰＩＰＡ；ＰＳＡ；ＰＳＭＡ；ＲＯ
Ｒ１；ｓＴｎ；ＴＮＦ−β受容体；ＴＮＦ−α受容体；ＴＮＦ−γ受容体；トランスフェ
リン受容体；およびＶＥＧＦ受容体からなる群から選択される、項目１９に記載の二重親
和性再標的化試薬。
［項目２１］
項目１５ないし２０のいずれか一項に記載の前記二重親和性再標的化試薬のポリペプチ
ド鎖をコードする核酸分子。
［項目２２］
（ｉ）治療上有効な量の項目１〜１２のいずれか一項に記載の前記単離された抗体、ま
たは項目１〜５のいずれか一項に記載の前記免疫反応性フラグメント、または項目１５〜
２０のいずれか一項に記載の前記二重親和性再標的化試薬と、（ｉｉ）薬学上許容される
担体とを含む、医薬組成物。
［項目２３］
前記抗体が、
（Ａ）ＢＲＣＡ８４Ｄの軽鎖のＣＤＲ1（配列番号５）、ＣＤＲ2（配列番号７）および
ＣＤＲ3（配列番号９）と、ＢＲＣＡ８４Ｄの重鎖のＣＤＲ1（配列番号１３）、ＣＤＲ2
（配列番号１５）およびＣＤＲ3（配列番号１７）とを含む可変ドメイン、ならびに
（Ｂ）置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌを含
むＦｃ領域改変を含むヒト化抗体である、項目２２に記載の医薬組成物。
［項目２４］
前記抗体が、
（Ａ）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ ＶＬの前記アミノ酸配列（配列番号８９）を有する可変
軽鎖と、
（Ｂ）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ ＶＨの前記アミノ酸配列（配列番号９９）を有する可変
重鎖と、
（Ｃ）置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌを有
するＦｃ領域
とを含むヒト化抗体である、項目２２に記載の医薬組成物。
［項目２５］
１種以上の付加的抗癌薬をさらに含む、項目２２ないし２４のいずれか一項に記載の医
薬組成物。
［項目２６］
前記付加的抗癌薬が化学療法薬、放射線療法薬、ホルモン療法薬、毒素または免疫療法
薬である、項目２５に記載の医薬組成物。
［項目２７］
前記付加的抗癌薬がタキサン、メイタンシノイド、オーリスタチン、カリケアマイシン
、アントラサイクリン、ＣＣ−１０６５類似体、ドセタキセル、カテプシン、リシン、ゲ
ロニン、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素、ＲＮアーゼおよび有毒放射性同位元素
からなる群から選択される毒素である、項目２６に記載の医薬組成物。
［項目２８］
癌の診断における、項目１ないし１２のいずれか一項に記載の前記単離された抗体、項
目１〜５のいずれか一項に記載の前記免疫反応性フラグメント、項目１５〜２０のいずれ
か一項に記載の前記二重親和性再標的化試薬、又は項目２２〜２７のいずれか一項に記載
の前記医薬組成物の使用であって、前記単離された抗体、免疫反応性フラグメント、二重
親和性再標的化試薬、又は医薬組成物が検出可能に標識されている、使用。
［項目２９］
前記癌が、副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱癌、骨癌
、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫
、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維
形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維
形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞
腫瘍、頭頚部癌、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫／良性
脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫
、髄膜腫、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分
泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色
細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、稀な血液疾患、転移性腎臓癌、ラ
ブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜
肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および子宮癌の細胞からなる群から選択
される癌細胞の存在を特徴とする、項目２８に記載の使用。
［項目３０］
患者の癌治療のための薬剤の製造における、項目１ないし１２のいずれか一項に記載の
前記単離された抗体、または項目１ないし５のいずれか一項に記載の前記免疫反応性フラ
グメント、または項目１５ないし２０のいずれか一項に記載の前記二重親和性再標的化試
薬、または項目２２ないし２７のいずれか一項に記載の前記医薬組成物の使用。
［項目３１］
前記癌が、副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱癌、骨癌
、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫
、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維
形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維
形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞
腫瘍、頭頚部癌、肝細胞性癌腫、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫／
良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒
色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経
内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、
褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、稀な血液疾患、転移性腎臓癌
、ラブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、
滑膜肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および子宮癌の細胞からなる群から
選択される癌細胞の存在を特徴とする、項目２９ないし３０のいずれか一項に記載の使用
。
［項目３２］
化学療法、免疫療法、放射線療法、ホルモン療法および手術からなる群から選択される
１以上の付加的癌療法の投与をさらに含む、項目２９ないし３１のいずれか一項に記載の
使用。
正常な膵臓、肝臓、肺および結腸組織検体を用いて０．６２５μｇ／ｍｌおよび０．０７８μｇ／ｍｌのＢＲＣＡ８４Ｄで行った場合（図１Ａ）と、正常な心臓、腎臓および副腎組織を用いて０．６２５μｇ／ｍｌのＢＲＣＡ８４Ｄで行った場合（図１Ｂ）のＩＨＣ研究の結果を示す。 正常な膵臓、肝臓、肺および結腸組織検体を用いて０．６２５μｇ／ｍｌおよび０．０７８μｇ／ｍｌのＢＲＣＡ８４Ｄで行った場合（図１Ａ）と、正常な心臓、腎臓および副腎組織を用いて０．６２５μｇ／ｍｌのＢＲＣＡ８４Ｄで行った場合（図１Ｂ）のＩＨＣ研究の結果を示す。 癌の膵臓、乳房、結腸および肺組織検体を用いて０．６２５μｇ／ｍｌおよび０．０７８μｇ／ｍｌのＢＲＣＡ８４Ｄで行ったＩＨＣ研究の結果を示す。 本発明の抗体により媒介される用量依存的再指向(redirected)致死を示す。図３Ａ〜３Ｂは、Ｂ７−Ｈ３（エフェクター：標的比 ２０：１）に対して反応性のあるモノクローナル抗体によるＡ４９８腎癌腫細胞（１８時間の時点で休止ＰＢＭＣを含む（ＬＤＨ））の用量依存的再指向致死を示す（図３Ａ：ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ＧＢ８、ＴＣＲ−４４２０；図３Ｂ：ＯＶＣＡ２２、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＴＤＨ６、ＴＥＳ７、ＴＣＲ−４４２０）。 本発明の抗体により媒介される用量依存的再指向(redirected)致死を示す。図３Ａ〜３Ｂは、Ｂ７−Ｈ３（エフェクター：標的比 ２０：１）に対して反応性のあるモノクローナル抗体によるＡ４９８腎癌腫細胞（１８時間の時点で休止ＰＢＭＣを含む（ＬＤＨ））の用量依存的再指向致死を示す（図３Ａ：ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＰＲＣＡ１５７、ＧＢ８、ＴＣＲ−４４２０；図３Ｂ：ＯＶＣＡ２２、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＴＤＨ６、ＴＥＳ７、ＴＣＲ−４４２０）。 本発明の抗体により媒介される用量依存的再指向(redirected)致死を示す。図３Ｃ〜３Ｄは、Ｂ７−Ｈ３（エフェクター：標的比３０：１）に対して反応性のあるモノクローナル抗体によるＡ５４９肺癌細胞（１８時間の時点で休止ＰＢＭＣを含む（ＬＤＨ））の用量依存的再指向致死を示す（図３Ｃ：ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＯＶＣＡ２２、ＰＲＣＡ１５７、ＴＥＳ７；図３Ｄ：ＴＤＨ６、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ）。 本発明の抗体により媒介される用量依存的再指向(redirected)致死を示す。図３Ｃ〜３Ｄは、Ｂ７−Ｈ３（エフェクター：標的比３０：１）に対して反応性のあるモノクローナル抗体によるＡ５４９肺癌細胞（１８時間の時点で休止ＰＢＭＣを含む（ＬＤＨ））の用量依存的再指向致死を示す（図３Ｃ：ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＯＶＣＡ２２、ＰＲＣＡ１５７、ＴＥＳ７；図３Ｄ：ＴＤＨ６、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ）。 抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、可溶性Ｂ７Ｈ３−２Ｉｇ（図４Ａ）および可溶性Ｂ７Ｈ３−４Ｉｇ Ｂ７−Ｈ３（図４Ｂ）（抗体濃度は１００ｎＭ）と結合する能力を示す。凡例：（Ａ）ＢＬＡ８；（Ｂ）ＢＲＣＡ１６５；（Ｃ）ＢＲＣＡ６８Ｄ；（Ｄ）ＢＲＣＡ６９Ｄ；（Ｅ）ＢＲＣＡ８４Ｄ；（Ｆ）ＧＢ８；（Ｇ）ＬＵＣＡ１；（Ｈ）ＬＵＣＡ５０；（Ｉ）ＯＶＣＡ２１；（Ｊ）ＯＶＣＡ２２；（Ｋ）ＰＡ２０；（Ｌ）ＰＲＣＡ１２３；（Ｍ）ＳＧ２４；（Ｎ）ＳＧ２７；（Ｏ）ＳＴＯ９；（Ｐ）ＴＤＨ４（１８４−１９２）；（Ｑ）ＴＤＨ４；（Ｒ）ＴＤＨ５；（Ｓ）ＴＥＳ７。凡例の縦方向の位置は対応する曲線の位置と関連する。 抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、可溶性Ｂ７Ｈ３−２Ｉｇ（図４Ａ）および可溶性Ｂ７Ｈ３−４Ｉｇ Ｂ７−Ｈ３（図４Ｂ）（抗体濃度は１００ｎＭ）と結合する能力を示す。凡例：（Ａ）ＢＬＡ８；（Ｂ）ＢＲＣＡ１６５；（Ｃ）ＢＲＣＡ６８Ｄ；（Ｄ）ＢＲＣＡ６９Ｄ；（Ｅ）ＢＲＣＡ８４Ｄ；（Ｆ）ＧＢ８；（Ｇ）ＬＵＣＡ１；（Ｈ）ＬＵＣＡ５０；（Ｉ）ＯＶＣＡ２１；（Ｊ）ＯＶＣＡ２２；（Ｋ）ＰＡ２０；（Ｌ）ＰＲＣＡ１２３；（Ｍ）ＳＧ２４；（Ｎ）ＳＧ２７；（Ｏ）ＳＴＯ９；（Ｐ）ＴＤＨ４（１８４−１９２）；（Ｑ）ＴＤＨ４；（Ｒ）ＴＤＨ５；（Ｓ）ＴＥＳ７。凡例の縦方向の位置は対応する曲線の位置と関連する。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体との間の結合親和性を示す（実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ）、１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ）。 Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇ（グレーの破線）またはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇ（黒の実線）に固定化されたＢ７−Ｈ３抗体のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析の結果を示す。抗体は０．０６３μＭ〜１μＭに用量設定した。時間は秒である。 Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇ（グレーの破線）またはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇ（黒の実線）に固定化されたＢ７−Ｈ３抗体のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析の結果を示す。抗体は０．０６３μＭ〜１μＭに用量設定した。時間は秒である。 Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇ（グレーの破線）またはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇ（黒の実線）に固定化されたＢ７−Ｈ３抗体のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析の結果を示す。抗体は０．０６３μＭ〜１μＭに用量設定した。時間は秒である。 Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇ（グレーの破線）またはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇ（黒の実線）に固定化されたＢ７−Ｈ３抗体のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析の結果を示す。抗体は０．０６３μＭ〜１μＭに用量設定した。時間は秒である。 Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇ（グレーの破線）またはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇ（黒の実線）に固定化されたＢ７−Ｈ３抗体のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析の結果を示す。抗体は０．０６３μＭ〜１μＭに用量設定した。時間は秒である。 Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇ（グレーの破線）またはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇ（黒の実線）に固定化されたＢ７−Ｈ３抗体のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析の結果を示す。抗体は０．０６３μＭ〜１μＭに用量設定した。時間は秒である。 Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇ（グレーの破線）またはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇ（黒の実線）に固定化されたＢ７−Ｈ３抗体のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析の結果を示す。抗体は０．０６３μＭ〜１μＭに用量設定した。時間は秒である。 Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇ（グレーの破線）またはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇ（黒の実線）に固定化されたＢ７−Ｈ３抗体のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析の結果を示す。抗体は０．０６３μＭ〜１μＭに用量設定した。時間は秒である。 Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇ（グレーの破線）またはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇ（黒の実線）に固定化されたＢ７−Ｈ３抗体のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析の結果を示す。抗体は０．０６３μＭ〜１μＭに用量設定した。時間は秒である。 抗体ＰＲＣＡ１５７、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＢＬＡ８、ＰＡ２０、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＧＢ８およびＳＧ２７の比較ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析を示す。 抗体ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７がヒトＢ７−Ｈ３との結合に関してＢＲＣＡ８４Ｄと競合しないことを示すＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析を示す。 本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、癌細胞と結合した際に内部移行を受ける能力に関する研究の結果を示す（図９Ａ、前立腺ＣＳＣ細胞；図９Ｂ、Ｈｓ７００ｔ膵細胞）。 本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、癌細胞と結合した際に内部移行を受ける能力に関する研究の結果を示す（図９Ａ、前立腺ＣＳＣ細胞；図９Ｂ、Ｈｓ７００ｔ膵細胞）。 本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、互いに交差ブロックして、それにより重複のあるまたは別個のエピトープを露出する脳食を示す。１０倍過剰量の競合抗体を用いた。 本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、互いに交差ブロックして、それにより重複のあるまたは別個のエピトープを露出する脳食を示す。１０倍過剰量の競合抗体を用いた。 本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、互いに交差ブロックして、それにより重複のあるまたは別個のエピトープを露出する脳食を示す。１０倍過剰量の競合抗体を用いた。 本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、互いに交差ブロックして、それにより重複のあるまたは別個のエピトープを露出する脳食を示す。１０倍過剰量の競合抗体を用いた。 本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、互いに交差ブロックして、それにより重複のあるまたは別個のエピトープを露出する脳食を示す。１０倍過剰量の競合抗体を用いた。 本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、互いに交差ブロックして、それにより重複のあるまたは別個のエピトープを露出する脳食を示す。１０倍過剰量の競合抗体を用いた。 ＢＲＣＡ８４Ｄおよびそのヒト化誘導体であるｈＢＲＣＡ８４Ｄの可変軽鎖（図１１Ａ）または可変重鎖（図１１Ｂ）のアミノ酸残基のアライメントを示す。 ＢＲＣＡ８４Ｄおよびそのヒト化誘導体であるｈＢＲＣＡ８４Ｄの可変軽鎖（図１１Ａ）または可変重鎖（図１１Ｂ）のアミノ酸残基のアライメントを示す。 ヒトＢ７−Ｈ３に対するｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖誘導体ＢＲＣＡ８４Ｄ−３ＶＬ、ＢＲＣＡ８４Ｄ−４ＶＬおよびＢＲＣＡ８４Ｄ−５ＶＬの相対的結合親和性を示す。 ヒトＢ７−Ｈ３に対するｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖誘導体ＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＨ、ＢＲＣＡ８４Ｄ−３ＶＨおよびＢＲＣＡ８４Ｄ−４ＶＨの相対的結合親和性を示す。 （１）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＬおよびｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＨを含む抗体（試験１および２）、（２）キメラＢＲＣＡ８４Ｄ、（３）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−５ＶＬおよびキメラＢＲＣＡ８４Ｄ−ＨＣを含む抗体、ならびに（４）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−５ＶＬおよびｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＨを含む抗体の相対的結合親和性を示す。 マウス異種移植モデル系における、Ｆｃ改変型ヒト化抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、in vivoでＨＴ−１１９７膀胱癌胞の腫瘍増殖を阻害する能力を示す。Ｆｃ改変型ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２抗体（Ｆｃ改変Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌを含む）を癌細胞の移植の７日、１４日、２１日および２８日後にマウスに投与した（１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇまたは２０μｇ／ｋｇの用量で）。 マウス異種移植モデル系における、Ｆｃ改変型ヒト化抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、in vivoでＡ４９８腎癌細胞の腫瘍増殖を阻害する能力を示す。Ｆｃ改変型ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２抗体（Ｆｃ改変Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌを含む）を癌細胞の移植の７日、１４日、２１日および２８日後にマウスに投与した（１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇまたは２０μｇ／ｋｇの用量で）。 ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２／抗ＴＣＲ ＤＡＲＴ（商標）（「ＴＤＡＲＴ（商標）」）の、ＳＫ−ＭＥＳ−１肺癌細胞、Ａ４９８腎癌細胞、ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞およびＵＡＣＣ−６２黒色腫細胞の再指向致死を媒介する能力を示す。 ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２／抗ＴＣＲ ＤＡＲＴ（商標）（「ＴＤＡＲＴ（商標）」）の、ＳＫ−ＭＥＳ−１肺癌細胞、Ａ４９８腎癌細胞、ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞およびＵＡＣＣ−６２黒色腫細胞の再指向致死を媒介する能力を示す。 ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２／抗ＴＣＲ ＤＡＲＴ（商標）（「ＴＤＡＲＴ（商標）」）の、ＳＫ−ＭＥＳ−１肺癌細胞、Ａ４９８腎癌細胞、ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞およびＵＡＣＣ−６２黒色腫細胞の再指向致死を媒介する能力を示す。 ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２／抗ＴＣＲ ＤＡＲＴ（商標）（「ＴＤＡＲＴ（商標）」）の、ＳＫ−ＭＥＳ−１肺癌細胞、Ａ４９８腎癌細胞、ＬＮＣａＰ前立腺癌細胞およびＵＡＣＣ−６２黒色腫細胞の再指向致死を媒介する能力を示す。 腫瘍不含雄ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＿ＦＯＸＮ１マウスの血清中の抗Ｂ７−Ｈ３ Ｍａｂ１の薬物動態減衰を示す（図１８Ａ〜１８Ｂ）。 腫瘍不含雄ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＿ＦＯＸＮ１マウスの血清中の抗Ｂ７−Ｈ３ Ｍａｂ１の薬物動態減衰を示す（図１８Ａ〜１８Ｂ）。 ２−コンパートメントモデルを、５ｍｇ／ｋｇ用量からのパラメーターとともに用いて、０．１、０．５、１、５および１０ｍｇ／ｋｇで作成した推定薬物動態特性を示す。 ＨＴ−１１９７膀胱癌系統によるＨＥＲ２およびＰＲＣＡ１３５の相対的発現を示す。 ＨＴ−１１９７細胞に対する抗Ｂ７−Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ変異体の結合親和性を示す。 図２１Ａ〜２１Ｃは、ＨＴ−１１９７に関するマウス異種移植分析の結果を示す。８匹の雌マウスからなる群にビヒクルもしくは１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照、または１、５もしくは１５ｍｇ／ｋｇ用量のセツキシマブ、もしくは０．１、０．５、１、５もしくは１０ｍｇ／ｋｇ用量の抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を施した（Ｑ７Ｄ×５）。腫瘍測定を３〜４日おきに行った。図２１Ａは、マウス異種移植モデルにおける、抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１の、腫瘍発達を抑制または阻害する能力を示す。ＩｇＧ対照との比較：Ｍａｂ１（１および５ｍｇ／ｋｇ）とＩｇＧ対照の比較***は５１日目から；Ｍａｂ１（１０ｍｇ／ｋｇ）とＩｇＧ対照の比較**は４８日目から。 マウス異種移植モデルにおける、セツキシマブの、腫瘍発達を抑制または阻害する能力を示す。セツキシマブ（７ｍｇ／ｋｇ）とＩｇＧ対照の比較**は５１日目から；セツキシマブ（１５ｍｇ／ｋｇ）とＩｇＧ対照の比較***は５８日目から。 最大試験用量で得られた結果を比較したものである。 ＨＴ−１３７６膀胱癌系統によるＨＥＲ２およびＰＭＳＡの相対的発現を示す。 ＨＴ−１３７６膀胱癌系統によるＨＥＲ２およびＰＭＳＡの相対的発現を示す。 ＨＴ−１３７６に関するマウス異種移植分析の結果を示す。マウス群にビヒクルまたは１．０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を施した（Ｑ７Ｄ×４）。 ＡＧＳに関するマウス異種移植分析の結果を示す。マウス群にビヒクルまたは１０ｍｇ／ｋｇ抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を０．５、１、５または１０ｍｇ／ｋｇの用量で施した（Ｑ７Ｄ×５）。 ｈＢＲＣＡ８４Ｄ、ｃｈＢＲＣＡ８４ＤおよびｈＢＲＣＡ８４（Ｆｃ Ｖａｒ１）変異型抗Ｂ７−Ｈ３抗体とともにインキュベートした際のＡ５４９肺癌細胞のin vitro細胞傷害性アッセイの結果を示す（Ｅ：Ｔ比＝２５：１；エフェクター＝ヒトＰＢＭＣ；ＬＤＨアッセイによる読み出し）。 Ａ５４９に関するマウス異種移植分析の結果を示す。マウス群にビヒクルまたは１．０ｍｇ／ｋｇの抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を施した（Ｑ７Ｄ×４）。 ＣａＬｕ３に関するマウス異種移植分析の結果を示す。マウス群にビヒクルまたは０．５、１もしくは５ｍｇ／ｋｇ（Ｑ７Ｄ×５）の抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１またはＩｇＧ対照（１０ｍｇ／ｍｌ）を施した。 図２８Ａ〜２８Ｃは、ＬＯＸ−ＩＭＶＩ黒色腫癌細胞に関するマウス異種移植分析の結果を示す。８匹の雌マウスからなる群にビヒクルもしくは５ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照、または５、１０もしくは２０ｍｇ／ｋｇ用量のドセタキセル、または０．５、１、５もしくは１０ｍｇ／ｋｇ用量の抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を施した。図２８Ａは、マウス異種移植モデルにおける、抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１の、腫瘍発達を抑制または阻害する能力を示す。 マウス異種移植モデルにおける、ドセタキセルの、腫瘍発達を抑制または阻害する能力を示す。 最大試験用量で得られた結果を比較したものである。 ＵＡＣＣ−６２黒色腫癌細胞に関するマウス異種移植分析の結果を示す。マウス群にビヒクルもしくは５ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照、または０．５、１、５もしくは１０ｍｇ／ｋｇ用量の抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を施した。 図３０Ａ〜３０Ｃは、２ｒｖ前立腺癌細胞に関するマウス異種移植分析の結果を示す。８匹の雌マウス群からなる群にビヒクルもしくは１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照、または１、７もしくは１５ｍｇ／ｋｇ用量のトラスツズマブ、または０．５、１、５もしくは１０ｍｇ／ｋｇ用量の抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を施した。図３０Ａは、マウス異種移植モデルにおける、抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１の、腫瘍発達を抑制または阻害する能力を示す。 マウス異種移植モデルにおける、トラスツズマブの、腫瘍発達を抑制または阻害する能力を示す。 最大試験用量で得られた結果を比較したものである。 ｈＢＲＣＡ８４Ｄ、ｃｈＢＲＣＡ８４ＤおよびｈＢＲＣＡ８４（Ｆｃ Ｖａｒ１）変異型抗Ｂ７−Ｈ３抗体とインキュベートした際のＡ４９８腎癌細胞のin vitro細胞傷害性アッセイの結果を示す（Ｅ：Ｔ比＝２５：１；エフェクター＝ヒトＰＢＭＣ；ＬＤＨアッセイによる読み出し）。 Ａ４９８腎癌細胞に関するマウス異種移植分析の結果を示す。マウス群にビヒクルもしくは１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照、または０．１、０．５、１、５もしくは１０ｍｇ／ｋｇ用量の抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を施した。対照マウス群にはセツキシマブ（抗ＥＧＲＦ抗体）を１、７または１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。 セツキシマブと比較した、７８６−０腎癌細胞に関するマウス異種移植分析の結果を示す。マウス群にビヒクルもしくは１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照、または０．１、０．５、１、５もしくは１０ｍｇ／ｋｇ用量の抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を施した。対照マウス群にはセツキシマブ（抗ＥＧＲＦ抗体）を１、７または１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。 セツキシマブと比較した、７８６−０腎癌細胞に関するマウス異種移植分析の結果を示す。マウス群にビヒクルもしくは１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照、または０．１、０．５、１、５もしくは１０ｍｇ／ｋｇ用量の抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を施した。対照マウス群にはセツキシマブ（抗ＥＧＲＦ抗体）を１、７または１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。 パクリタキセルと比較した、７８６−０腎癌細胞に関するマウス異種移植分析の結果を示す。マウス群にビヒクルもしくは５ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照、または０．１、０．５、１、５もしくは１０ｍｇ／ｋｇ用量の抗Ｂ７−Ｈ３抗体Ｍａｂ１を施した。このようなマウス８匹からなる対照マウス群には、パクリタキセルを２．５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。
本発明は、哺乳類、より詳しくは、ヒトＢ７−Ｈ３受容体と免疫反応性のある抗体およ
びそれらのフラグメント、ならびに特に癌および炎症の治療におけるそれらの使用に関す
る。よって、本発明は特に、様々なヒト癌に関連する癌細胞に対する免疫系の活性化を媒
介し得る、より好ましくは増強し得る、ヒト化Ｂ７−Ｈ３反応性抗体およびそれらの免疫
反応性フラグメントに関する。
Ｉ．一般技術
本発明の実施は、特に断りのない限り、当業者の技術の範囲内である分子生物学（組換
え技術を含む）、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学の従来の技術を使用する。
このような技術はMolecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition (Sambrook
et al. Eds., 2001) Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY; Oligonucleo
tide Synthesis: Methods and Applications (Methods in Molecular Biology), Herdewi
jn, P., Ed., Humana Press, Totowa, NJ; Oligonucleotide Synthesis (Gait, M.J., Ed
., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press, Totowa, NJ; Cell Biology:
A Laboratory Notebook (Cellis, J.E., Ed., 1998) Academic Press, New York, NY; An
imal Cell Culture (Freshney, R.I., Ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue C
ulture (Mather, J.P. and Roberts, P.E., Eds., 1998) Plenum Press, New York, NY;
Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (Doyle, A. et al., Eds., 1993-8)
John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.) N
ew York, NY; Weir’s Handbook of Experimental Immunology (Herzenberg, L.A. et al
. Eds. 1997) Wiley-Blackwell Publishers, New York, NY; Gene Transfer Vectors for
Mammalian Cells (Miller, J.M. et al. Eds., 1987) Cold Spring Harbor Press, Cold
Spring Harbor, NY; Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel, F.M. et al.
, Eds., 1987) Greene Pub. Associates, New York, NY; PCR: The Polymerase Chain Re
action, (Mullis, K. et al., Eds., 1994) Birkhauser, Boston MA; Current Protocols
in Immunology (Coligan, J.E. et al., eds., 1991) John Wiley and Sons, Hoboken,
NJ; Short Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, 1999) Hoboken, NJ
; Immunobiology 7 (Janeway, C.A. et al. 2007) Garland Science, London, UK; Antib
odies (P. Finch, 1997) Stride Publications, Devoran, UK; Antibodies: A Practical
Approach (D. Catty., ed., 1989) Oxford University Press, USA, New York NY); Mon
oclonal Antibodies: A Practical Approach (Shepherd, P. et al. Eds., 2000) Oxford
University Press, USA, New York NY; Using Antibodies: A Laboratory Manual (Harl
ow, E. et al. Eds., 1998) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbo
r, NY; The Antibodies (Zanetti, M. et al. Eds. 1995) Harwood Academic Publishers
, London, UK);およびDeVita, Hellman, and Rosenberg's Cancer: Principles & Practi
ce of Oncology, Eighth Edition, DeVita, V. et al. Eds. 2008, Lippincott Williams
& Wilkins, Philadelphia, PAなどの文献に十分に記載されている。
ＩＩ．定義
本明細書において、「Ｂ７−Ｈ３」とは、ＣＤ２７６としても知られるＩｇ様ドメイン
を有するＩ型膜タンパク質である、ヒトＢ７ファミリータンパク質のメンバーを意味する
。「２Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３」とは、Ｉｇ様ドメインを２つだけ含むＢ７−Ｈ３を表し；「４
Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３」とは、４つのＩｇ様ドメインを含むＢ７−Ｈ３を表す（Sun, M. et a
l. (2002) “Characterization of Mouse and Human B7-H3 Genes,” J. Immunol. 168:6
294-6297; Steinberger et al. (2004), “Molecular Characterization Of Human 4Ig-B
7-H3, A Member Of The B7 Family With Four Ig-Like Domains,” J. Immunol. 2004, 1
72(4):2352-2359およびCastriconi et al. (2004) “Identification Of 4Ig-B7-H3 As A
Neuroblastoma-Associated Molecule That Exerts A Protective Role From An NK Cell
-Mediated Lysis,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 101(34):12640-12645参照）。抗
原「ＴＥＳ７」（国際公開第２００８／０６６６９１号）は、４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ３と共有
する特性の抗原である。よって、ＴＥＳ７と特異的に結合する抗体は、４Ｉｇ−Ｂ７−Ｈ
３と結合する。ＴＥＳ７抗原は２以上の異なるエピトープを持つ場合もあり、エピトープ
は非線形である場合もある。いくつかの抗Ｂ７−Ｈ３抗体は非線形エピトープ（４Ｉｇ−
Ｂ７−Ｈ３アイソフォームにのみ存在するいくつかのものを含む）と結合することが知ら
れている。現在のところ、ＴＥＳ７はある種の癌細胞で、それらの対応する正常な組織に
比べて過剰発現される可能性があると考えられている。
Ｂ７−Ｈ３機能のアゴニスト、アンタゴニストおよびその他のモジュレーターは、本発
明の範囲に明確に含まれる。これらのアゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーター
は、Ｂ７−Ｈ３の１以上の抗原決定基部位を含むか、このような部位のフラグメント、こ
のような部位の変異体、もしくはこのような部位のペプチドミメティクスの１以上を含む
ポリペプチドである。これらのアゴニスト、アンタゴニストおよびＢ７−Ｈ３７モジュレ
ーター化合物は直鎖または環状形態で提供され、場合により、自然界には一般に見られな
い少なくとも１つのアミノ酸残基、または少なくとも１つのアミド同配体を含む。これら
の化合物はグリコシル化されていてもよい。
より具体的には、本明細書において「Ｂ７−Ｈ３モジュレーター」とは、（１）ヒトＢ
７−Ｈ３とその天然リガンドまたは抗Ｂ７−Ｈ３抗体の間の相互作用を攪乱または遮断す
ることができる化合物；（２）ヒトＢ７−Ｈ３およびその天然リガンドまたは抗Ｂ７−Ｈ
３抗体と結合することができる化合物；（３）ヒトＢ７−Ｈ３およびその天然リガンドま
たは抗Ｂ７−Ｈ３抗体と結合することができる抗体の作製に使用可能な抗原部位を含む化
合物；（４）ヒトＢ７−Ｈ３およびその天然リガンドまたは抗Ｂ７−Ｈ３抗体と結合する
ことができる抗体のスクリーニングに使用可能な抗原部位を含む化合物；（５）ヒトＢ７
−Ｈ３とその天然リガンドまたは抗Ｂ７−Ｈ３抗体の間の相互作用を攪乱または遮断する
ことができる抗体の作製に使用可能な抗原部位を含む化合物；（６）ヒトＢ７−Ｈ３とそ
の天然リガンドまたは抗Ｂ７−Ｈ３抗体の間の相互作用を攪乱または遮断することができ
る抗体のスクリーニングに使用可能な抗原部位を含む化合物として定義される。Ｂ７−Ｈ
３モジュレーターは、それらの活性がＴ細胞の活性化を促進するか、Ｔ細胞の活性化を阻
害するかによってそれぞれ「Ｂ７−Ｈ３アゴニスト」または「Ｂ７−Ｈ３アンタゴニスト
」となり得る。
Ｂ７−Ｈ３アゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターは、Ｂ７−Ｈ３変異体、
Ｂ７−Ｈ３ペプチドアンタゴニスト、ペプチドミメティクス、および小分子、抗Ｂ７−Ｈ
３抗体および免疫グロブリン変異体、ヒトＢ７−Ｈ３のアミノ酸変異体（アミノ酸置換、
欠失および付加変異体を含む）、またはその任意の組合せ、およびキメラ免疫グロブリン
を含む。本発明のＢ７−Ｈ３アゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターは、ヒト
Ｂ７−Ｈ３の、その天然リガンドまたは抗Ｂ７−Ｈ３抗体との結合に関与するＢ７−Ｈ３
ドメインの同定に基づく。よって、本発明は、ヒトＢ７−Ｈ３の１以上の抗Ｂ７−Ｈ３結
合ドメインを２つ持つまたは模倣する分子構造を有するＢ７−Ｈ３アゴニスト、アンタゴ
ニストおよびモジュレーターを提供する。
本明細書において「Ｂ７−Ｈ３変異体」とは、アミノ酸置換、欠失および付加変異体、
またはその任意の組合せを含む、ヒトＢ７−Ｈ３のアミノ酸変異体を表す。この定義はヒ
トＢ７−Ｈ３／非ヒトキメラなどのキメラ分子および他のハイブリッド分子を包含する。
また、この定義には前記分子の変異体またはハイブリッド領域を含むＢ７−Ｈ３変異体分
子の任意のフラグメントも含まれる。
本明細書において「抗体」とは、免疫グロブリン分子の可変領域に存在する少なくとも
１つの抗原認識部位を介して、炭水化物、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの
ような標的と特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書におい
て、この用語は、完全なポリクローナルまたはモノクローナル抗体だけでなく、そのフラ
グメント（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２ Ｆｖ）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その変異
体、天然変異体、抗体部分を、必要な特異性の抗原認識部位とともに含む融合タンパク質
、ヒト化抗体、キメラ抗体、「ＢｉＴＥ（登録商標）」、「ＤＡＲＴ（商標）」分子およ
び必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の他の任意の改変構成も包含す
る。
「ＢｉＴＥ」（二重特異性Ｔ細胞エンゲージャー(bi-specific T-cell engager)）とは
、１つはＴ細胞抗原と結合し、もう１つは標的の表面に存在する抗原と結合する、２つの
抗原結合ドメインを有する単一のポリペプチド鎖分子を意味する（国際公開第０５／０６
１５４７号; Baeuerle, P et al. (2008) “BiTE（登録商標）: A New Class Of Antibod
ies That Recruit T Cells,” Drugs of the Future 33: 137-147; Bargou, et al. 2008
) “Tumor Regression in Cancer Patients by Very Low Doses of a T Cell-Engaging A
ntibody,” Science 321: 974-977）。
「ＤＡＲＴ（商標）」（二重親和性再標的化試薬）とは、（特に共有結合的相互作用を
介して）会合して同じまたは異なるエピトープを認識し得る少なくとも２つのエピトープ
結合部位を形成する、少なくとも２つのポリペプチドを含む免疫グロブリン分子を意味す
る。ＤＡＲＴ（商標）のこれらの各ポリペプチドは免疫グロブリン軽鎖可変領域と免疫グ
ロブリン重鎖可変領域を含むが、これらの領域は相互作用してエピトープ結合部位を形成
しない。そうではなく、ＤＡＲＴ（商標）ポリペプチド鎖の一方（例えば、第１）の免疫
グロブリン重鎖可変領域は、異なる（例えば、第２の）ＤＡＲＴ（商標）ポリペプチド鎖
の免疫グロブリン軽鎖可変領域と相互作用してエピトープ結合部位を形成する。同様に、
ＤＡＲＴ（商標）ポリペプチド鎖の一方（例えば、第１）の免疫グロブリン軽鎖可変領域
は、異なる（例えば、第２の）ＤＡＲＴ（商標）ポリペプチド鎖の免疫グロブリン重鎖可
変領域と相互作用してエピトープ結合部位を形成する。ＤＡＲＴ（商標）は単一特異性、
二重特異性、三重特異性などであり得、従って、１つ、２つ、３つまたはそれを越える異
なるエピトープ（同じ抗原のものであっても異なる抗原のものであってもよい）と同時に
結合することができる。ＤＡＲＴ（商標）はさらに一価、二価、三価、四価、五価、六価
などであり得、従って、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つまたはそれを越える分子と
同時に結合することができる。ＤＡＲＴ（商標）のこれらの２つの特徴（すなわち、特異
性の程度と価数を合わせて、例えば、四価の（すなわち、４組のエピトープと結合するこ
とができる）二重特異性（すなわち、２種類のエピトープと結合することができる）抗体
などを作製することができる。ＤＡＲＴ（商標）分子は国際公開第２００６／１１３６６
５号、同第２００８／１５７３７９号および同第２０１０／０８０５３８号に開示されて
いる。
「モノクローナル抗体」は均質な抗体集団を意味し、モノクローナル抗体はある抗原の
選択的結合に関与するアミノ酸（天然型および非天然型）を含む。モノクローナル抗体は
特異性が高く、単一の抗原部位に向けられる。「モノクローナル抗体」は、完全なモノク
ローナル抗体および全長モノクローナル抗体だけではなく、そのフラグメント（Ｆａｂ、
Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２ Ｆｖなど）、一本鎖（ＳｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を
含む融合タンパク質、ヒト化モノクローナル抗体、キメラモノクローナル抗体、ならびに
必要な特異性の抗原認識部位およびある抗原と結合する能力を含む免疫グロブリン分子の
他の任意の改変構成も包含する。抗体の供給源または抗体が作製される方法（例えば、ハ
イブリドーマ、ファージ選択、組換え発現、トランスジェニック動物などによる）に関し
て制限はない。この用語は、「抗体」の定義として上記された完全な免疫グロブリンなら
びにそのフラグメントなどを含む。
「ヒト化抗体」とは、一般に組換え技術を用いて作製される、非ヒト種の免疫グロブリ
ンに由来する抗原結合部位と、ヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づくそ
の分子の残りの免疫グロブリン構造を有するキメラ分子を意味する。この抗原結合部位は
、定常ドメインに融合された完全可変ドメインか、または可変ドメイン内の適当なフレー
ムワーク領域にグラフトされた相補性決定領域（ＣＤＲ）のみかのいずれかを含み得る。
抗原結合部位は野生型であっても、または１以上のアミノ酸置換により改変されていても
よい。これによりヒト個体における免疫原としての定常領域は除去されるが、外来可変領
域に対する免疫応答の可能性は残る(LoBuglio, A.F. et al. (1989) “Mouse/Human Chim
eric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response,” Proc. Natl. Aca
d. Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224)。別のアプローチでは、ヒト由来定常領域を提供するだ
けでなく、その上に可変領域を改変してヒト型にできる限り近く再成形することに焦点を
当てる。重鎖および軽鎖の可変領域は３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、これらの
相補性決定領域は所与の種において比較的保存されており、ＣＤＲの足場を提供すると思
われる４つのフレームワーク領域（ＦＲ）が隣接することが知られている。非ヒト抗体が
特定の抗原に対して作製される場合、可変領域は、非ヒト抗体由来のＣＤＲを、改変され
るヒト抗体に存在するＦＲにグラフトすることによって「再形成」または「ヒト化」する
ことができる。様々な抗体に対するこのアプローチの適用はSato, K. et al. (1993) Can
cer Res 53:851-856. Riechmann, L. et al. (1988) “Reshaping Human Antibodies for
Therapy,” Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) “Reshaping Human An
tibodies: Grafting An Antilysozyme Activity,” Science 239:1534-1536; Kettleboro
ugh, C. A. et al. (1991) “Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Gr
afting: The Importance Of Framework Residues On Loop Conformation,” Protein Eng
ineering 4:773-3783; Maeda, H. et al. (1991) “Construction Of Reshaped Human An
tibodies With HIV-Neutralizing Activity,” Human Antibodies Hybridoma 2:124-134;
Gorman, S. D. et al. (1991) “Reshaping A Therapeutic CD4 Antibody,” Proc. Nat
l. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:4181-4185; Tempest, P.R. et al. (1991) “Reshaping A H
uman Monoclonal Antibody To Inhibit Human Respiratory Syncytial Virus Infection
in vivo,” Bio/Technology 9:266-271; Co, M. S. et al. (1991) “Humanized Antibod
ies For Antiviral Therapy,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 88:2869-2873; Carte
r, P. et al. (1992) “Humanization Of An Anti-p185her2 Antibody For Human Cancer
Therapy,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 89:4285-4289;およびCo, M.S. et al. (
1992) “Chimeric And Humanized Antibodies With Specificity For The CD33 Antigen,
” J. Immunol. 148:1149-1154により報告されている。いくつかの実施形態では、ヒト化
抗体は全てのＣＤＲ配列を保持している（例えば、マウス抗体由来の６つのＣＤＲを全て
含むヒト化マウス抗体）。他の実施形態では、ヒト化抗体は、元の抗体に対して変更され
た１以上（１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ）のＣＤＲを有し、これらはまた元の抗
体の１以上のＣＤＲに「由来する」１以上のＣＤＲとも呼ばれる。
本明細書において、抗体またはポリペプチドは、別のエピトープよりもそのエピトープ
と、より高頻度に、より迅速に、より長い期間、かつ／またはより大きな親和性で反応ま
たは会合するならば、それは別の分子の領域（すなわちエピトープ）と「特異的に」結合
すると言われる。例えば、Ｂ７−Ｈ３エピトープと特異的に結合する抗体は、それが他の
Ｂ７−Ｈ３エピトープまたは非Ｂ７−Ｈ３エピトープと結合するよりも、このＢ７−Ｈ３
エピトープとより大きな親和性、結合力で、より迅速に、かつ／またはより長い期間結合
する抗体である。この定義を読めば、例えば、第１の標的と特異的に結合する抗体（また
は部分もしくはエピトープ）は第２の標的と特異的にまたは優先的に結合してもしなくて
もよいということも理解される。従って、「特異的結合」は排他的結合を（含み得るが）
必ずしも必要としない。必ずしもではないが、一般に、結合という場合には「特異的」結
合を意味する。
本明細書においてエピトープが免疫学的に活性である、または「免疫学的に活性を維持
する」という場合の「免疫学的に活性」とは、抗体（例えば、抗Ｂ７−Ｈ３抗体）の、種
々の条件下（例えば、エピトープが還元および変性条件を受けた後）でエピトープと結合
する能力を意味する。
種々の生体機能が抗Ｂ７−Ｈ３抗体と関連しており、これらの機能には、限定されるも
のではないが、Ｂ７−Ｈ３（および特に、限定されるものではないが腎臓、前立腺または
肺癌細胞を含む癌細胞の表面で発現されるＢ７−Ｈ３分子）と特異的に結合する能力；既
知の抗Ｂ７−Ｈ３抗体とＢ７−Ｈ３との優先的結合を競合的に阻害する能力（元の抗体が
優先的に結合する、同じＢ７−Ｈ３エピトープと優先的に結合する能力を含む）；in vit
roまたはin vivoにおいて生細胞の表面に露出しているＢ７−Ｈ３の部分と結合する能力
；限定されるものではないが、前立腺、肺または腎臓癌細胞などの生癌細胞の表面に露出
しているＢ７−Ｈ３の部分と結合する能力；それらの表面でＢ７−Ｈ３を発現する癌性細
胞（腎臓、前立腺または肺癌細胞）に化学療法薬を送達する能力；および／またはそれら
の表面にＢ７−Ｈ３を発現する癌細胞に治療薬または検出可能なマーカーを送達する能力
の１以上が含まれる。本明細書に述べられるように、本発明のポリペプチド（抗体を含む
）はこれらの特徴のいずれか１以上を持ち得る。
「抗Ｂ７−Ｈ３等価抗体」または「抗Ｂ７−Ｈ３等価ポリペプチド」とは、抗Ｂ７−Ｈ
３抗体と関連する１以上の生体機能（例えば、結合特異性）を有する抗体またはポリペプ
チドを意味する。
本明細書において「薬剤」とは、生物学的化合物、医薬化合物または化学化合物を意味
する。限定されない例として、単純または複雑な有機または無機分子、ペプチド、タンパ
ク質、オリゴヌクレオチド、抗体、抗体誘導体、抗体フラグメント、ビタミン誘導体、炭
水化物、毒素または化学療法化合物が含まれる。例えば、小分子およびオリゴマー（例え
ば、オリゴペプチドおよびオリゴヌクレオチド）、ならびに種々のコア構造に基づく合成
有機化合物など、種々の化合物が合成可能である。さらに、植物または動物抽出物などの
ように種々の天然源がスクリーニングのための化合物を提供することができる。
本発明の方法で使用される薬剤はランダム選択または合理的選択または設計が可能であ
る。本明細書において、薬剤は、その分子とその天然結合相手または既知の抗体との会合
に関与する特定のアミノ酸またはその他の化学部分に関して事前の考察および知見なしに
薬剤が選択される場合にランダムに選択されると言われる。ランダム選択される薬剤の一
例が、化学ライブラリーまたはペプチドコンビナトリアルライブラリーの使用およびスク
リーニングによって同定される薬剤である。
本明細書において、薬剤は、薬剤が標的部位の配列および／または薬剤の作用に関連す
るそのコンフォメーションを考慮して非ランダムに選択される場合に合理的に選択される
、または設計されると言われる。抗Ｂ７−Ｈ３薬剤に関して、現在のところ、Ｂ７−Ｈ３
上には抗体が生成され得るエピトープが少なくとも３つあり、従って、Ｂ７−Ｈ３／抗Ｂ
７−Ｈ３の相互作用を遮断する薬剤の作用部位は少なくとも３つであると考えられている
。本発明はまた、Ｂ７−Ｈ３とその天然結合相手の間の相互作用部位で作用する薬剤を包
含するが、現在既知のものであれ以後同定されるものであれ、その他のリガンドおよびそ
れらの活性Ｂ７−Ｈ３相互作用部位も本発明の範囲内に包含される。薬剤はランダムに選
択することもできるし、または受容体／リガンドおよび／またはＢ７−Ｈ３／抗Ｂ７−Ｈ
３抗体複合体の染色部位を構成するペプチド配列を用いることにより合理的に設計するこ
ともできる。例えば、合理的に選択されたペプチド薬剤は、そのアミノ酸配列がＢ７−Ｈ
３上に見られるエピトープと同一であるペプチドであってもよく、それはその天然環境で
生細胞の表面に露出しているからである。このような薬剤は、抗Ｂ７−Ｈ３抗体とＢ７−
Ｈ３との会合、または所望によりＢ７−Ｈ３とその天然リガンドとの会合を、抗Ｂ７−Ｈ
３抗体または天然リガンドと結合することによって還元または遮断する。
本明細書において、抗体に関して「標識された」とは、放射性薬剤または蛍光団（例え
ばフィコエリトリン（ＰＥ）またはフルオレセインイソチオシアネート（フルオロイソチ
オシアネートまたはＦＩＴＣとしても知られる））などの検出可能な物質と抗体とのカッ
プリング（すなわち、物理的結合）による抗体の直接標識、ならびに検出可能な物質との
反応によるプローブまたは抗体の直接標識を包含するものとする。
本明細書において、抗体に関して「会合」とは、薬剤（例えば、化学療法薬）と抗体と
の共有結合的および非共有結合的付着または結合を含む。抗体は直接的結合または共通の
プラットフォームへの付着による間接的結合によって薬剤（例えば、化学療法薬）と会合
させることができ、その結果、抗体は抗体が結合する癌性細胞へと薬剤の局在を導き、そ
こではこの抗体と薬剤は生理学的条件下では実質的に解離せず、これにより薬剤は抗体が
結合する同じ癌性細胞を標的としないか、または薬剤の効力が低下しない。
「生体サンプル」とは、個体から得られる様々なサンプル種を包含し、診断アッセイま
たはモニタリングアッセイにおいて使用可能である。この定義には、唾液、血液および生
物起源のその他の液体サンプル、固体組織サンプル、例えば、生検または組織培養物また
はそれに由来する細胞、およびその後代、例えば、癌を有する疑いのある個体から採取さ
れた組織サンプルから得られた細胞（好ましい実施形態では卵巣、肺、前立腺、膵臓、結
腸および乳房組織由来）が包含される。この定義にはまた、それらの獲得後に、例えば試
薬による処置、可溶化、またはタンパク質もしくはポリヌクレオチドなどのある特定の成
分の富化、または切片化目的での半固体または固体マトリックスへの包理といった何らか
の方法で操作されたサンプルも含まれる。「生体サンプル」には臨床サンプルが包含され
、また、培養細胞、細胞上清、細胞溶解液、血清、血漿、体液および組織サンプルも含ま
れる。
「宿主細胞」とは、ポリヌクレオチドインサートの組み込みのためのベクターのレシピ
エントであり得る、またはレシピエントであった個々の細胞または細胞培養物を含む。宿
主細胞は単一の宿主細胞の後代を含み、この後代は、自然的、偶発的または意図的突然変
異のために元の親細胞と（形態またはゲノムＤＮＡ相補物が）必ずしも完全に同一でなく
てもよい。宿主細胞には、in vivoにおいて本発明のポリヌクレオチドでトランスフェク
トされた細胞が含まれる。
本明細書において「転移の発生の遅延」とは、転移の発生を引き延ばす、妨げる、遅く
する、遅滞させる、安定化する、および／または延期することを意味する。この遅延は、
癌の履歴および／または治療される個体によって時間の長さが異なり得る。当業者には明
らかなように、十分なまたは有意な遅延は実質的に、個体が転移を発生しない予防を包含
する。
本明細書において医薬組成物の「有効量」とは、一実施形態においては、限定されるも
のではないが、腫瘍サイズの縮小（癌に関しては、例えば、乳癌または前立腺癌）、癌性
細胞増殖の遅滞、転移発生の遅延、その疾病から起こる症状の軽減、疾病罹患者の生活の
質の向上、疾病の治療に必要な他の投薬量の低減、標的化および／または内部移行を介す
るものなどの他の投薬の効果の増強、疾病進行の遅延、および／または個体の生存期間の
延長といった臨床結果を含む、有益または望まれる結果を果たすのに十分な量である。有
効量は１回以上の投与で投与することができる。本発明の目的では、有効量の薬物、化合
物または医薬組成物は直接的または間接的に癌性細胞の増殖を低減する（または癌性細胞
を破壊する）、および癌性細胞の転移の発生または増殖を低減し、かつ／または遅延させ
るのに十分な量である。いくつかの実施形態では、薬物、化合物または医薬組成物の有効
量は、別の薬物、化合物または医薬組成物と組み合わせて達成されても、そうでなくても
よい。よって、「有効量」は、１以上の化学療法薬の投与に関して考えてもよいし、１以
上の他の薬剤と組み合わせて所望の結果が達成され得るまたは達成される場合には、単一
の薬剤が有効量で与えられると考えられる。個体によって要求が異なっても、各成分の有
効量の至適範囲の決定は当業者の技術の範囲内である。典型的な用量は０．１〜１００ｍ
ｇ／ｋｇ／体重を含む。好ましい用量は１〜１００ｍｇ／ｋｇ／体重を含む。最も好まし
い用量は１０〜１００ｍｇ／ｋｇ／体重を含む。
本明細書において核酸分子、薬剤、抗体、組成物または細胞などは、その核酸分子、薬
剤、抗体、組成物または細胞などが、その元の供給源に本来存在する夾雑核酸分子、抗体
、薬剤、組成物または細胞などから実質的に分離されている場合に「単離」されていると
いう。
「個体」とは、脊椎動物、好ましくは哺乳類を意味する。哺乳類には、限定されるもの
ではないが、ヒト、農用動物、競技動物、ペット、霊長類、マウスおよびラットが含まれ
る。最も好ましい実施形態では、個体とはヒトを表す。
「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」という用
語は、本明細書では、任意の長さのアミノ酸のポリマーを意味して互換的に用いられる。
ポリマーは直鎖であっても分岐していてもよく、改変アミノ酸を含んでもよく、非アミノ
酸が挿入されていてもよい。これらの用語はまた、自然に、または介入、例えば、ジスル
フィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化もしくは他の任意の操
作、または標識成分とのコンジュゲーションなどの改変によって改変されたアミノ酸ポリ
マーを包含する。また、例えば、アミノ酸の１以上の類似体（例えば、非天然アミノ酸な
どを含む）、ならびに当技術分野で公知の他の改変を含むポリペプチドもこの定義に含ま
れる。本発明のポリペプチドは抗体に基づくことから、これらのポリペプチドは一本鎖ま
たは会合鎖として存在し得ると理解される。
また、本発明の範囲内には、本明細書に記載のＢ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタ
ゴニストおよびモジュレーターのペプチドミメティクス（抗Ｂ７−Ｈ３抗体を含む）も包
含される。このようなペプチドミメティクスには、少なくとも１つのアミノ酸残基が、そ
のアミノ酸のＤ異性体またはアミノ酸Ｎアルキル化種など、自然界には一般に見られない
アミノ酸残基で置換されているペプチドが含まれる。他の実施形態では、ペプチドミメテ
ィクスは、Ｂ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーターの少な
くとも１つのアミド結合（−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−）をアミド同配体で置換することにより
構築される。好適なアミド同配体には、−ＣＨ2−ＮＨ−、−ＣＨ2−Ｓ−、−ＣＨ2−Ｓ
（Ｏ）−、−ＣＨ2−Ｓ（Ｏ）2−、−ＣＨ2−ＣＨ2−、−ＣＨ＝ＣＨ−（ＥまたはＺ型）
、−Ｃ（＝Ｏ）−ＣＨ2−、−ＣＨ（ＣＮ）−ＮＨ−、−Ｃ（ＯＨ）−ＣＨ2−および−Ｏ
−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−が含まれる。アミド同配体での置換の好適な候補である、Ｂ７−Ｈ
３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーター中のアミド結合には、Ｂ７
−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーター処置の意図される被験
体の内因性エステラーゼまたはプロテアーゼにより加水分解され得る結合が含まれる。
本明細書において「実質的に純粋」とは、少なくとも５０％純度（すなわち、夾雑物不
含）、より好ましくは少なくとも９０％純度、より好ましくは少なくとも９５％純度、よ
り好ましくは少なくとも９８％純度、より好ましくは少なくとも９９％純度、最も好まし
くは９９％を越える純度である材料を意味する。
本明細書において「毒素」とは、細胞内で不利な応答を果たす任意の物質を意味する。
例えば、癌性細胞に向けられる毒素は、癌性細胞に対して不利な、時には有害な作用を持
つ。毒素の例としては、限定されるものではないが、タキサン、メイタンシノイド、オー
リスタチン（例えば、モノメチルオーリスタチン（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチ
ンＦ（ＭＭＡＦ）、オーリスタチンＥ（ＡＥ）など）（米国特許第５，２０８，０２０号
；同第５，４１６，０６４号；同第６，３３３，４１０号；同第６，３４０，７０１号；
同第６，３７２，７３８号；同第６，４３６，９３１号；同第６，４４１，１６３号；同
第６，５９６，７５７号；同第７，２７６，４９７号；同第７，５８５，８５７号；また
は同第７，８５１，４３２号に開示されているものなど）；カリケアマイシン、アントラ
サイクリン（例えば、ドキソルビシン）、ＣＣ−１０６５類似体、ドセタキセル；カテプ
シンＢまたはＥ；リシン、ゲロニン、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素、およびＲ
Ｎアーゼ；放射性標識抗体（例えば、チウキセタンコンジュゲートまたは有毒放射性同位
元素（例えば、90Ｙ、131Ｉ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、211Ａｔ、212Ｂｉ、213Ｂｉ
、225Ａｃなど）標識体）が挙げられる。
本明細書において「治療(“treatment”又は“treating”)」とは、好ましくは有益な
または所望の臨床結果を含む、有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチを表す。
このような有益なまたは所望の臨床結果には、限定されるものではないが、下記：癌性細
胞または他の罹患細胞の増殖の軽減（または破壊）、癌に見られる癌性細胞の転移の軽減
、腫瘍サイズの縮小、その疾病から起こる症状の軽減、疾病罹患者の生活の質の向上、疾
病の治療に必要な他の投薬量の低減、疾病進行の遅延、および／または個体の生存期間の
延長のうち１以上が含まれる。
本明細書において、癌とは、副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫
瘍、膀胱（扁平上皮癌および移行上皮癌）癌、骨癌（アダマンチノーマ、脈瘤性骨嚢胞、
骨軟骨腫、骨肉腫）、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫瘍、子宮頚癌
、軟骨肉腫、脊索腫、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線
維性組織球腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘
液性軟骨肉腫、線維形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨
毛性疾患、生殖細胞腫瘍、頭頚部癌、肝細胞癌、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌（腎
芽細胞腫、乳頭状腎細胞癌）、白血病、脂肪腫／良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫／悪性脂肪性
腫瘍、肝臓癌（肝芽細胞腫、肝細胞癌）、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒色腫、髄膜腫
、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経内分泌腫瘍、
卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、褐色細胞腫、
下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、稀な血液疾患、転移性腎臓癌、ラブドイド
腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜肉腫、精
巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および子宮癌（子宮頚癌、子宮内膜癌および平滑
筋腫）の細胞からなる群から選択される癌細胞の存在を特徴とする癌を包含するものとす
る。
ＩＩＩ．抗体およびポリペプチドの作製方法
モノクローナル抗体の作製方法は当技術分野で公知である。使用可能な１つの方法は、
Kohler, G. et al. (1975) “Continuous Cultures Of Fused Cells Secreting Antibody
Of Predefined Specificity,” Nature 256:495-497の方法またはその改変法である。典
型的には、モノクローナル抗体は、マウスなどの非ヒト種で生成される。一般に、免疫誘
導にはマウスまたはラットが用いられるが、他の動物も使用可能である。これらの抗体は
、マウスを、ヒトＢ７−Ｈ３を含む免疫原性量の細胞、細胞抽出物またはタンパク質調製
物で免疫誘導することにより生産される。免疫原は限定されるものではないが、一次細胞
、培養細胞系統、癌性細胞、核酸または組織であり得る。一実施形態では、ヒト肺癌細胞
が使用される。免疫誘導に使用される細胞、例えば、ヒト精巣または膵臓腺癌または胃細
胞は、免疫原として用いる前に一定時間（例えば、少なくとも２４時間）培養してもよい
。細胞（例えば、ヒト精巣、胃または膵臓腺癌細胞）は、それ自体で用いてもよいし、ま
たはＲｉｂｉなどの非変性アジュバントとともに用いてもよい。一般に、細胞は、免疫原
として用いる場合には無傷な状態で、好ましくは生存状態で維持するべきである。無傷な
細胞は破砕された細胞よりも免疫動物によって抗原をより良く検出させる。例えばフロイ
ントのアジュバントなどの変性性の、または作用の強いアジュバントを使用すると細胞が
破砕される場合があるので支障がある。免疫原は隔週もしくは毎週など、周期的に複数回
投与してもよいし、または動物の生存力を維持するような方法（例えば、組織組換え）で
投与してもよい。
一実施形態では、Ｂ７−Ｈ３と結合するモノクローナル抗体は、Ｂ７−Ｈ３を過剰発現
する宿主細胞を免疫原として使用することによって得られる。このような細胞には、限定
されるものではないが一例として、ヒト肺癌細胞およびヒト結腸癌細胞が含まれる。
抗体応答をモニタリングするために、少量の生体サンプル（例えば血液）を動物から得
て、免疫原に対する抗体力価を調べることができる。脾臓および／またはいくつかの大リ
ンパ節を摘出し、解離させて単細胞を得ることができる。所望により、脾細胞は（非特異
的に付着した細胞を除去した後）、抗原をコーティングしたプレートまたはウェルに細胞
懸濁液を適用することによりスクリーニングしてもよい。抗原に特異的な膜結合免疫グロ
ブリンを発現するＢ細胞は前記プレートに結合し、残りの懸濁液とともに洗い流されない
。得られたＢ細胞、または全解離脾細は、次に、骨髄腫細胞（例えば、Ｘ６３−Ａｇ８．
６５３およびＳａＩｋ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｅｌｌ Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ Ｃ
ｅｎｔｅｒ（カリフォルニア州サンディエゴ）から入手されるものと融合させることがで
きる。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を用いて脾臓またはリンパ球を骨髄腫細胞と融
合させ、ハイブリドーマを形成することができる。次に、ハイブリドーマを選択培地（例
えば、ヒポキサンチン、アミノプテリン、チミジン培地、他には「ＨＡＴ培地」として知
られるもの）で培養する。得られたハイブリドーマを、次に、制限希釈によりプレーティ
ングし、免疫原と特異的に結合する抗体の生産に関して、例えば、ＦＡＣＳ：fluorescen
ce activated cell sorting（蛍光活性化細胞選別）または免疫組織化学（ＩＨＣ：immun
ohistochemistry）スクリーニングを用いてアッセイする。選択されたモノクローナル抗
体分泌ハイブリドーマを、次に、in vitro（例えば、組織培養瓶または中空繊維反応器）
またはin vivo（例えば、マウスの腹水として）のいずれかで培養する。
この細胞融合技術の別法として、エプスタイン−バーウイルス（ＥＢＶ）不死化Ｂ細胞
を本発明のモノクローナル抗体の生産に用いてもよい。ハイブリドーマは所望により増殖
およびサブクローニングし、上清の抗免疫原活性を従来のアッセイ手法（例えば、ＦＡＣ
Ｓ、ＩＨＣ、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、蛍光イムノアッセイなど）に
よりアッセイする。
別法では、抗Ｂ７−Ｈ３モノクローナル抗体および他の任意の等価抗体の配列決定を行
い、当技術分野で公知の任意の手段（例えば、ヒト化、完全ヒト抗体を生産するためのト
ランスジェニックマウスの使用、ファージディスプレー技術など）により組換え生産する
ことができる。一実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ３モノクローナル抗体の配列決定を行い、次
に、そのポリヌクレオチド配列を発現または増殖のためのベクターにクローニングする。
目的の抗体をコードする配列は宿主細胞内のベクターに保持させることができ、次に、こ
の宿主細胞を増殖させ、その後の使用のために冷凍することができる。
抗Ｂ７−Ｈ３モノクローナル抗体のポリヌクレオチド配列および他の任意の等価抗体を
、「ヒト化」抗体を作製するため、親和性または抗体の他の特徴を改善するための遺伝子
操作に使用することができる。抗体をヒト化する一般原理は、抗体の抗原結合部分の塩基
配列を保持しつつ、抗体の残りの非ヒト部分をヒト抗体配列と入れ替えることを含む。モ
ノクローナル抗体のヒト化には４つの一般工程がある。これらは、（１）開始抗体の軽鎖
および重鎖可変ドメインのヌクレオチド配列と推定アミノ酸配列の決定、（２）ヒト化抗
体の設計、すなわち、ヒト化プロセス中にどの抗体フレームワーク領域を用いるかの決定
、（３）実際のヒト化方法論／技術、および（４）ヒト化抗体のトランスフェクションお
よび発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；同第５，８０７，７１５号
；同第５，８６６，６９２号；および同第６，３３１，４１５号参照。
齧歯類または改変型齧歯類Ｖ領域と、ヒト定常ドメインと融合されたそれらの会合相補
性決定領域（ＣＤＲ）とを有するキメラ抗体（例えば、Winter et al. (1991) “Man-mad
e Anditbodies,” Nature 349:293-299; Lobuglio et al. (1989) “Mouse/Human Chimer
ic Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response,” Proc. Natl. Acad.
Sci. (U.S.A.) 86:4220-4224 (1989), Shaw et al. (1987) “Characterization Of A M
ouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody (17-1A) To A Colon Cancer Tumor-Associat
ed Antigen,” J. Immunol. 138:4534-4538,およびBrown et al. (1987) “Tumor-Specif
ic Genetically Engineered Murine/Human Chimeric Monoclonal Antibody,” Cancer Re
s. 47:3577-3583参照）をはじめ、非ヒト免疫グロブリンに由来する抗原結合部位を含む
多くの「ヒト化」抗体分子が記載されている。他の参照文献には、適当なヒト抗体定常ド
メインと融合する前にヒト支持フレームワーク領域（ＦＲ）にグラフトされた齧歯類ＣＤ
Ｒが記載されている（例えば、Riechmann, L. et al. (1988) “Reshaping Human Antibo
dies for Therapy,” Nature 332:323-327; Verhoeyen, M. et al. (1988) “Reshaping
Human Antibodies: Grafting An Antilysozyme Activity,” Science 239:1534-1536;お
よびJones et al. (1986) “Replacing The Complementarity-Determining Regions In A
Human Antibody With Those From A Mouse,” Nature 321:522-525参照）。また別の参
照文献には、組換え的ベニア化(veneered)齧歯類フレームワーク領域により支持される齧
歯類ＣＤＲが記載されている。例えば、欧州特許公報第５１９，５９６号参照。これらの
「ヒト化」分子は、齧歯類抗ヒト抗体分子に対する望ましくない免疫応答を最小とするよ
うに設計される（この望ましくない免疫応答は、ヒトレシピエントにおけるこれらの部分
の治療適用の持続時間および有効性を限定する）。抗体をヒト化する使用可能な他の方法
はDaugherty et al. (1991) “Polymerase Chain Reaction Facilitates The Cloning, C
DR-Grafting, And Rapid Expression Of A Murine Monoclonal Antibody Directed Again
st The CD18 Component Of Leukocyte Integrins,” Nucl. Acids Res. 19:2471-2476、
ならびに米国特許第６，１８０，３７７号；同第６，０５４，２９７号；同第５，９９７
，８６７号；および同第５，８６６，６９２号に開示されている。
本発明はまた、本発明の抗体の一本鎖可変領域フラグメント（「ｓｃＦｖ」）、例えば
、ｍｕ−抗Ｂ７−Ｈ３を包含する。一本鎖可変領域フラグメントは、短い架橋ペプチドを
用いて軽鎖および／または重鎖可変領域を連結することにより作製される。Bird et al.
(1988) (“Single-Chain Antigen-Binding Proteins,” Science 242:423-426)は、一方
の可変領域のカルボキシ末端と他方の可変領域のアミノ末端の間のおよそ３．５ｎｍを架
橋する架橋ペプチドの例を記載している。他の配列のリンカーも設計および使用されてい
る(Bird et al. (1988) “Single-Chain Antigen-Binding Proteins,” Science 242:423
-426)。次に、リンカーを薬物の接着または固相支持体への接着などの付加的機能に向け
て改変することができる。一本鎖変異体は組換えまたは合成のいずれかによって生産する
ことができる。ｓｃＦｖの合成生産には、自動合成装置を使用することができる。ｓｃＦ
ｖの組換え生産では、ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチドを含む好適なプラスミドを
、酵母、植物、昆虫または哺乳類細胞などの真核生物、または大腸菌などの原核生物のい
ずれかの好適な宿主細胞に導入することができる。目的のｓｃＦｖをコードするポリヌク
レオチドは、ポリヌクレオチドのライゲーションなどの慣例の操作により作製することが
できる。得られたｓｃＦｖは、当技術分野で公知の標準的タンパク質精製技術を用いて単
離することができる。
本発明は、Ｂ７−Ｈ３ならびにそのアゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーター
と結合する抗体およびポリペプチドに対する改変（それらの特性に有意に影響を及ぼさな
い機能的に等価な抗体およびポリペプチド、ならびに活性の増強または低下を示す変異体
を含む）を含む。ポリペプチドの改変は当技術分野の常法であり、本明細書で詳細に記載
する必要はない。改変ポリペプチドの例としては、アミノ酸残基の保存的置換、機能活性
に有意に有害な変化を及ぼさないアミノ酸の１以上の欠失もしくは付加を有するポリペプ
チド、または化学類似体の使用が含まれる。互いに保存的置換が可能なアミノ酸残基とし
ては、限定されるものではないが、グリシン／アラニン；バリン／イソロイシン／ロイシ
ン；アスパラギン／グルタミン；アスパラギン酸／グルタミン酸；セリン／トレオニン；
リシン／アルギニン；およびフェニルアラニン／チロシンが含まれる。これらのポリペプ
チドにはまた、グリコシル化ポリペプチドおよび非グリコシル化ポリペプチド、ならびに
例えば、種々の糖によるグリコシル化、アセチル化およびリン酸化などの、他の翻訳後修
飾を有するポリペプチドも含まれる。好ましくは、アミノ酸置換は保存的であり、すなわ
ち、置換されたアミノ酸は元のアミノ酸と類似の化学特性を持つ。このような保存的置換
は当技術分野で公知であり、例は上記に示されている。アミノ酸改変は１以上のアミノ酸
の変更または改変から、可変領域などの領域の完全な再設計にまで及ぶ。可変領域の変更
は結合親和性および／または特異性を変化させ得る。他の改変方法としては、限定される
ものではないが、酵素的手段、酸化的置換およびキレート化を含む、当技術分野で公知の
カップリング技術が含まれる。例えば、イムノアッセイのための標識の付着、例えば、ラ
ジオイムノアッセイのための放射性部分の付着のための改変が使用可能である。改変型ポ
リペプチドは当技術分野で確立された手順を用いて作製され、当技術分野で公知の標準的
アッセイを用いてスクリーニングすることができる。
本発明はまた、本発明のポリペプチドおよび抗体由来の１以上のフラグメントまたは領
域を含む融合タンパク質を包含する。一実施形態では、可変軽鎖領域の少なくとも１０個
の連続するアミノ酸と可変重鎖領域の少なくとも１０個のアミノ酸とを含む融合ポリペプ
チドが提供される。別の実施形態では、融合ポリペプチドは異種免疫グロブリン定常領域
を含む。別の実施形態では、融合ポリペプチドは、公的に寄託されたハイブリドーマから
生産された抗体の軽鎖可変領域と重鎖可変領域を含む。本発明の目的では、抗体融合タン
パク質は、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合する１以上のポリペプチドドメインと、天然分子に
おいて、それが付着しない別のアミノ酸配列、例えば、異種配列または別の領域由来の相
同配列とを含む。
抗Ｂ７−Ｈ３ポリペプチド、および他のＢ７−Ｈ３アゴニスト、アンタゴニストおよび
モジュレーターは、当技術分野で公知の方法により、例えば、合成または組換えにより作
出することができる。Ｂ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレー
ターを生産する１つの方法は、ポリペプチドの化学の合成と、その後の天然コンフォメー
ション、すなわち、適切なジスルフィド結合を得るの適当な参加条件下での処理を含む。
これは当業者に周知の方法論を用いて達成することができる（例えば、Kelley, R. F. et
al. (1990) In: Genetic Engineering Principles and Methods, Setlow, J.K. Ed., Pl
enum Press, N.Y., vol. 12, pp 1-19; Stewart, J.M et al. (1984) Solid Phase Pepti
de Synthesis, Pierce Chemical Co., Rockford, IL参照；米国特許第４，１０５，６０
３号；同第３，９７２，８５９号；同第３，８４２，０６７号；および同第３，８６２，
９２５号参照）。
本発明のポリペプチドは好都合には固相ペプチド合成を用いて作製することができる(M
errifield, B. (1986) “Solid Phase Synthesis,” Science 232(4748):341-347; Hough
ten, R.A. (1985) “General Method For The Rapid Solid-Phase Synthesis Of Large N
umbers Of Peptides: Specificity Of Antigen-Antibody Interaction At The Level Of
Individual Amino Acids,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 82(15):5131-5135; Gane
san, A. (2006) “Solid-Phase Synthesis In The Twenty-First Century,” Mini Rev.
Med. Chem. 6(1):3-10)。
さらに別法として、特定のヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された
市販のマウスに使用によって完全ヒト抗体を得ることもできる。より望ましい（例えば、
完全ヒト抗体）またはよりロバストな免疫応答をもたらすように設計されたトランスジェ
ニック動物も、ヒト化またはヒト抗体の作製に使用可能である。このような技術の例とし
ては、Ｘｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）（Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．，カリフォルニア州フリ
ーモント）およびＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＴＣ Ｍｏｕｓｅ（商標）
（双方ともＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．，ニュージャージー州プリンストン製）がある。
あるいは、抗体は当技術分野で公知の任意の方法を用いて、組換えにより作製し、発現
させることができる。抗体は、まず、作製された抗体を宿主動物から単離し、遺伝子配列
を得、その遺伝子配列を用いて宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞）でその抗体を組換え発現
させることによって組換えにより作製することができる。使用可能な別法は、植物（例え
ば、タバコ）またはトランスジェニック乳汁中でその抗体配列を発現させることである。
抗体を植物または乳汁中で組換え発現させる好適な方法が開示されている（例えば、Peet
ers et al. (2001) “Production Of Antibodies And Antibody Fragments In Plants,”
Vaccine 19:2756; Lonberg, N. et al. (1995) “Human Antibodies From Transgenic M
ice,” Int. Rev. Immunol 13:65-93;およびPollock et al.(1999) “Transgenic Milk A
s A Method For The Production Of Recombinant Antibodies,” J. Immunol Methods 23
1:147-157参照）。抗体の誘導体、例えば、ヒト化抗体、一本鎖抗体などを作製するのに
好適な方法は当技術分野で公知である。別法として、抗体はファージディスプレー技術に
より組換えにより作製することもできる（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号；同
第５，５８０，７１７号；同第５，７３３，７４３号；同第６，２６５，１５０号；およ
びWinter, G. et al. (1994) “Making Antibodies By Phage Display Technology,” An
nu. Rev. Immunol. 12.433-455参照）。
目的の抗体またはタンパク質に、当業者に周知であるエドマン分解による配列決定を行
うことができる。質量分析またはエドマン分解から作成されたペプチド情報を用いて、目
的のタンパク質をクローニングするために使用されるプローブまたはプライマーを設計す
ることができる。
目的のタンパク質をクローニングする別法は、精製されたＢ７−Ｈ３またはその一部を
用い、目的の抗体またはタンパク質を発現する細胞に関して「パンニング(panning)」す
ることによるものである。Ｂ７−Ｈ３は「２Ｉｇ」型中、また、「４Ｉｇ」型として存在
する。ヒトＢ７−Ｈ３の「２Ｉｇ」型のアミノ酸配列は以下のとおりである（配列番号１
）：
MLRRRGSPGM GVHVGAALGA LWFCLTGALE VQVPEDPVVA LVGTDATLCC
SFSPEPGFSL AQLNLIWQLT DTKQLVHSFA EGQDQGSAYA NRTALFPDLL
AQGNASLRLQ RVRVADEGSF TCFVSIRDFG SAAVSLQVAA PYSKPSMTLE
PNKDLRPGDT VTITCSSYRG YPEAEVFWQD GQGVPLTGNV TTSQMANEQG
LFDVHSVLRV VLGANGTYSC LVRNPVLQQD AHGSVTITGQ PMTFPPEALW
VTVGLSVCLI ALLVALAFVC WRKIKQSCEE ENAGAEDQDG EGEGSKTALQ
PLKHSDSKED DGQEIA
ヒトＢ７−Ｈ３の「２Ｉｇ」型をコードするｃＤＮＡ配列は以下のとおりである（配列
番号２）：
atgctgcgtc ggcggggcag ccctggcatg ggtgtgcatg tgggtgcagc cctgggagca
ctgtggttct gcctcacagg agccctggag gtccaggtcc ctgaagaccc agtggtggca
ctggtgggca ccgatgccac cctgtgctgc tccttctccc ctgagcctgg cttcagcctg
gcacagctca acctcatctg gcagctgaca gataccaaac agctggtgca cagctttgct
gagggccagg accagggcag cgcctatgcc aaccgcacgg ccctcttccc ggacctgctg
gcacagggca acgcatccct gaggctgcag cgcgtgcgtg tggcggacga gggcagcttc
acctgcttcg tgagcatccg ggatttcggc agcgctgccg tcagcctgca ggtggccgct
ccctactcga agcccagcat gaccctggag cccaacaagg acctgcggcc aggggacacg
gtgaccatca cgtgctccag ctaccggggc taccctgagg ctgaggtgtt ctggcaggat
gggcagggtg tgcccctgac tggcaacgtg accacgtcgc agatggccaa cgagcagggc
ttgtttgatg tgcacagcgt cctgcgggtg gtgctgggtg cgaatggcac ctacagctgc
ctggtgcgca accccgtgct gcagcaggat gcgcacggct ctgtcaccat cacagggcag
cctatgacat tccccccaga ggccctgtgg gtgaccgtgg ggctgtctgt ctgtctcatt
gcactgctgg tggccctggc tttcgtgtgc tggagaaaga tcaaacagag ctgtgaggag
gagaatgcag gagctgagga ccaggatggg gagggagaag gctccaagac agccctgcag
cctctgaaac actctgacag caaagaagat gatggacaag aaatagcc
ヒトＢ７−Ｈ３の「２Ｉｇ」型のアミノ酸配列（配列番号１）（下記に太字と下線で示
される）は、ヒトＢ７−Ｈ３の「４Ｉｇ」型（配列番号７６）内に完全に包含される：
ヒトＢ７−Ｈ３の「４Ｉｇ」型をコードするｃＤＮＡ配列は以下のとおりである（配列
番号７７）。Ｂ＆−Ｈ３の「２Ｉｇ」型をコードする残基は太字と下線で示される。
「パンニング」法は、Ｂ７−Ｈ３を発現する組織または細胞からｃＤＮＡライブラリー
を得ること、第２の細胞種において前記ｃＤＮＡを過剰発現させること、および前記第２
の細胞種のトランスフェクト細胞をＢ７−Ｈ３との特異的結合に関してスクリーニングす
ることによって行うことができる。細胞表面タンパク質をコードする哺乳類遺伝子を「パ
ンニング」によりクローニングする際に用いる方法の詳細な説明は、当技術分野に見出せ
る（例えば、Aruffo, A. et al. (1987) “Molecular Cloning Of A CD28 cDNA By A Hig
h-Efficiency COS Cell Expression System,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 84:85
73-8577 and Stephan, J. et al. (1999) “Selective Cloning Of Cell Surface Protei
ns Involved In Organ Development: Epithelial Glycoprotein Is Involved In Normal
Epithelial Differentiation,” Endocrinol. 140:5841-5854参照）。
抗Ｂ７−Ｈ３抗体、ならびに他のＢ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストおよ
びモジュレーターをコードするｃＤＮＡは、当技術分野の標準法に従って特定の細胞種由
来のｍＲＮＡを逆転写することにより得ることができる。具体的には、ｍＲＮＡは、Ｓａ
ｍｂｒｏｏｋら（前掲）に示されている手順に従って、様々な溶解酵素または化学溶液を
用いて単離するか、または製造者（例えば、Ｑｉａｇｅｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｐｒ
ｏｍｅｇａ）が提供している添付の説明書に従って市販の核酸結合樹脂により抽出するこ
とができる。次に、合成されたｃＤＮＡを発現ベクターに導入し、第２の種の細胞で目的
の抗体またはタンパク質を生産する。発現ベクターはエピソームとしてか、または染色体
ＤＮＡの組み込む部分として宿主細胞内で複製可能でなければならないということが意味
される。好適な発現ベクターとしては、限定されるものではないが、プラスミド、ウイル
スベクター（アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、レトロウイルスを含む）、およびコ
スミドが挙げられる。
目的のポリヌクレオチドを含むベクターは、エレクトロポレーション、塩化カルシウム
、塩化ルビジウム、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストランまたはその他の物質を用
いたトランスフェクション；微粒子銃；リポフェクション；ならびに感染（例えば、ベク
ターがワクシニアウイルスなどの感染性因子である場合）を含むいくつかの適当な手段の
いずれかにより宿主細胞に導入することができる。ベクターを導入するかポリヌクレオチ
ドを導入するかの選択は、宿主細胞の特徴による場合が多い。
異種ＤＮＡを過剰発現し得るいずれの宿主細胞でも、目的の抗体、ポリペプチドまたは
タンパク質をコードする遺伝子を単離する目的で使用可能である。好適な哺乳類宿主細胞
の限定されない例としては、限定されるものではないが、ＣＯＳ、ＨｅＬａおよびＣＨＯ
細胞が挙げられる。好ましくは、これらの宿主細胞はｃＤＮＡを、前記宿主細胞に存在す
る場合には、目的の対応する内因性抗体またはタンパク質のレベルよりも約５倍高い、よ
り好ましくは１０倍高い、いっそうより好ましくは２０倍高いレベルで発現する。Ｂ７−
Ｈ３との特異的結合に関する宿主細胞のスクリーニングは、イムノアッセイまたはＦＡＣ
Ｓによって達成される。目的の抗体またはタンパク質を過剰発現する細胞を同定すること
ができる。
親Ｂ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーター分子に比べて
、得られたタンパク質のアミノ酸配列における付加、欠失または変異をコードする変異型
Ｂ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターを作出するために
現在利用可能な様々な技術も使用可能である。
本発明は、本発明の抗体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含む。本発明のポリペプ
チドは当技術分野で公知の手順により作製可能である。これらのポリペプチドは抗体のタ
ンパク質加水分解もしくはその他の分解によるか、上記のような組換え法（すなわち、単
一または融合ポリペプチド）によるか、または化学合成によって生産することができる。
抗体のポリペプチド、特に約５０アミノ酸までの短いポリペプチドは化学合成より好都合
に作製することができる。化学合成の方法は当技術分野で公知であり、市販されている。
例えば、抗Ｂ７−Ｈ３ポリペプチドは、固相法を用いた自動ポリペプチド合成装置により
生産可能である。
ＩＶ．ポリペプチドおよびモノクローナル抗体のスクリーニング方法
Ｂ７−Ｈ３と結合するポリペプチドおよびモノクローナル抗体をスクリーニングするに
は、いくつかの方法を使用することができる。「結合」は生物学的または免疫学的に関連
のある特異的結合を意味し、例えば、免疫グロブリンを非特異的標的に対して極めて高い
濃度で用いる場合に起こり得る非特異的結合を意味しないと理解される。一実施形態では
、モノクローナル抗体は、標準的スクリーニング技術を用いてＢ７−Ｈ３との結合に関し
てスクリーニングされる。このようにして、抗Ｂ７−Ｈ３モノクローナル抗体が得られる
。本発明の好ましいハイブリドーマは抗体ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＢＲＣＡ８４ＤまたはＰＲＣ
Ａ１５７を産生するものである。
Ｂ７−Ｈ３と結合するさらなるモノクローナル抗体も同定可能である。この目的で、モ
ノクローナル抗体を癌性組織と結合するが非癌性細胞とは結合しないそれらの示差的能力
に関してスクリーニングする。一実施形態では、Ｂ７−Ｈ３と結合し、かつ、ヒト癌性細
胞または組織と交差反応性もあるが、正常な細胞または組織とは同程度までの交差反応性
がない、モノクローナル抗体が選択される。スクリーニングに使用可能な１つの方法は、
免疫組織化学（ＩＨＣ）である。標準的免疫組織化学的技術は平均的技量を持つ当業者に
は既知である。例えば、Animal Cell Culture Methods (J.P. Mather and D. Barnes, ed
s., Academic Press, NY, Vol. 57, Ch. 18 and 19, pp. 314-350, 1998)参照。生体サン
プル（例えば、組織）は生検、剖検または屍検から得ることができる。Ｂ７−Ｈ３が癌性
細胞のみに存在するかどうかを確認するには、抗Ｂ７−Ｈ３抗体を用いて、癌を持つ個体
からの組織においてＢ７−Ｈ３の存在を検出することができ、一方、癌罹患個体からの他
の非癌性組織癌または癌を持たない個体からの組織を対照として用いる。組織は、冷凍中
の損傷を防ぐ固体または半固体物質（例えば、アガロースゲルまたはＯＣＴ）中に包埋し
た後、染色向けに切片化することができる。種々の器官および種々の病期からの癌を用い
てモノクローナル抗体をスクリーニングすることができる。スクリーニング目的に使用可
能な組織の例としては、限定されるものではないが、卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎
臓、皮膚、甲状腺、脳、心臓、肝臓、胃、神経、血管、骨、上部消化管および膵臓が挙げ
られる。スクリーニング目的に使用可能な種々の癌種の例としては、限定されるものでは
ないが、癌腫、腺癌、肉腫、腺肉腫、リンパ腫および白血病が挙げられる。
さらなる別法では、ＨＭＥＣ（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ ＣＣ−２２５１）、ＨＵＶ
ＥＣ（初代内皮細胞）、ＢＴ−４７４（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−２０）、ＭＣＦ７（ＡＴＣ
Ｃ＃ ＨＴＢ２２）、ＭＤＡ−ＭＢ−１７５−ＶＩＩ（ＡＴＣＣ＃ ＨＢ−２５）、ＭＤ
Ａ−ＭＢ−３６１（ＡＴＣＣ＃ ＨＢ−２７）、ＳＫＢＲ３（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−３０
）、Ａ５４９（ＡＴＣＣ＃ ＣＣＬ−１８５）、Ｃａｌｕ−３（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−５
５）、ＳＫＭＥＳ−Ｉ（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−５８）、ＥＳ−２（ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−
１９７８）、ＳＫＯＶ３（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−７７）、Ｐａｎｃ−１（ＡＴＣＣ＃ Ｃ
ＲＬ−１４６９）、ＡｓＰＣ−Ｉ（ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−１６８２）、ＨＰＡＦ−ＩＩ（
ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−１９９７）、Ｈｓ７００Ｔ（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−１７４）、Ｃｏ
ｌｏ２０５（ＡＴＣＣ＃ ＣＣＬ−２２２）、ＨＴ−２９（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−３８）
、ＳＷ４８０（ＡＴＣＣ＃ ＣＣＬ−２２８）、ＳＷ９４８（ＡＴＣＣ＃ ＣＣＬ−２３
７）、２９３（ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−１５７３）、７８６−Ｏ（ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−１
９３２）、Ａ４９８（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−４４）、Ｃａｋｉ−２（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ
−４７）、ＣＯＳ−７（ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−１６５１）、ＲＬ−６５（ＡＴＣＣ＃ Ｃ
ＲＬ−１０３４５）、ＳＶ−Ｔ２（ＡＴＣＣ＃ ＣＣＬ−１６３．１）、２２ＲＶ１（Ａ
ＴＣＣ＃ ＣＲＬ−２５０５）、ＤＵ１４５（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−８１）、ＬＮＣａＰ
（ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−１７４０）、ＰＣ−３（ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−１４３５）、ＨＴ
２９（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−３８）、Ｈｓ７４６Ｔ（ＡＴＣＣ＃ ＨＴＢ−１３５）、Ｎ
ＣＩ−Ｎ８７（ＡＴＣＣ＃ ＣＲＬ−５８２２）などの癌性細胞系統、およびそれらの個
々の組織からの正常細胞が、癌性組織に特異的なモノクローナル抗体のスクリーニングに
使用可能である。限定されるものではないが、腎臓、卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎
臓、皮膚、甲状腺、大動脈平滑筋および内皮細胞を含む種々の器官からの正常組織に由来
する初代または低継代の細胞培養物を陰性対照として使用することができる。癌性または
非癌性細胞はスライドガラスまたはカバーガラス上、またはプラスチック表面で増殖させ
るか、国際公開第０１／４３８６９号に記載されているようにＣｅｌｌＡｒｒａｙ（商標
）デバイスで調製し、組織に関して上記したようにＩＨＣを用いて抗体の結合に関してス
クリーニングすることができる。あるいは、非タンパク質加水分解的手段を用いて増殖面
から細胞を取り出し、回転させてペレットとし、その後、これを包埋し、上記のようにＩ
ＨＣ分析用の組織として処理することができる。細胞は免疫不全動物に摂取してもよく、
腫瘍を増殖させ、その後、この腫瘍を採取し、包埋し、ＩＨＣ分析用の組織源として使用
してもよい。別法では、単細胞を、一次抗体、蛍光分子と連結した二次的「リポーター」
抗体とともにインキュベートし、その後、蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）装置を用いて
分析することができる。
いくつかの異なる検出系のいずれかを用いて、組織切片に対する抗体の結合を検出する
ことができる。典型的には、免疫組織化学は一次抗体の組織への結合を含み、その後、そ
の一次抗体由来の種に対して反応性のある二次抗体を作製し、検出可能なマーカー（例え
ば、セイヨウワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ：horseradish peroxidase）またはジアミ
ノベンジジン（ＤＡＢ：diaminobenzedine）とコンジュゲートさせた。使用可能な１つの
別法は、ポリクローナル鏡像相補的抗体またはｐｏｌｙＭＩＣＡ（商標）(polyclonal Mi
rror Image Complementary Antibodies; The Binding Site Limited, Birmingham, UK; M
angham, D.C. et al. (1999) “A Novel Immunohistochemical Detection System Using
Mirror Image Complementary Antibodies (MICA),” Histopathology 35(2):129-33)であ
る。このＰｏｌｙＭＩＣＡ（商標）技術は、正常組織および癌性組織に対する一次抗体（
例えば、抗Ｂ７−Ｈ３抗体）の結合を試験するために使用することができる。数種のｐｏ
ｌｙＭＩＣＡ（商標）検出キットが市販されており、製品番号ＨＫ００４．Ｄはクロマゲ
ン(chromagen)を用いるｐｏｌｙＭＩＣＡ（商標）検出キットであり；製品番号ＨＫ００
４．ＡはＡＥＣクロマゲンを用いるｐｏｌｙＭＩＣＡ（商標）検出キットである。あるい
は、一次抗体は検出可能なマーカーで直接標識してもよい。
ＩＨＣスクリーニングにおける、適当な抗体を選択するための第一工程は、マウスにお
いて生成された一次抗体（例えば、抗Ｂ７−Ｈ３抗体）の、１以上の免疫原（例えば、細
胞または組織サンプル）への結合である。一実施形態では、組織サンプルは種々の器官由
来の凍結組織の切片である。細胞または組織サンプルは癌性または非癌性のいずれかであ
り得る。
凍結組織を調製し、固定を伴ってまたは伴わずに切片化し、当業者に知られたいくつか
の方法のいずれかによってＩＨＣを行うことができる（例えば、Stephan et al. (1999)
“Distribution And Function Of The Adhesion Molecule BEN During Rat Development,
” Dev. Biol. 212:264-277 and Stephan et al. (1999) “Selective Cloning Of Cell
Surface Proteins Involved In Organ Development: Epithelial Glycoprotein Is Invol
ved In Normal Epithelial Differentiation,” Endocrinology 140:5841-5854参照）。
Ｖ．抗Ｂ７−Ｈ３抗体の同定方法
いくつかの方法のいずれかを用いて抗Ｂ７−Ｈ３抗体を同定することができる。１つの
方法は、それが結合するエピトープを同定することである。エピトープマッピングは、例
えばＰｅｐｓｃａｎ Ｓｙｓｔｅｍｓ（オランダ、レリスタット）などの種々の供給者か
ら市販されている。エピトープマッピングは抗Ｂ７−Ｈ３抗体が結合する配列を決定する
ために使用することができる。エピトープは直鎖エピトープ、すなわち単一のアミノ酸ス
トレッチに含まれるエピトープであっても、または必ずしも単一のストレッチに含まれな
くともよいアミノ酸の三次元相互作用によって形成される立体配座エピトープであっても
よい。
種々の長さ（例えば、好ましくは少なくとも４〜６アミノ酸長）のペプチドが単離また
は合成（例えば、組換えによる）可能であり、抗Ｂ７−Ｈ３抗体との結合アッセイに使用
可能である。抗Ｂ７−Ｈ３抗体が結合するエピトープは、細胞外配列に由来する重複ペプ
チドを用い、抗Ｂ７−Ｈ３抗体による結合を判定することによる体系的スクリーニングで
決定することができる。
抗Ｂ７−Ｈ３抗体を同定するのに使用可能なさらに別の方法は、同じ抗原、すなわちＢ
７−Ｈ３と結合することが知られている他の抗体との競合アッセイを用いて、抗Ｂ７−Ｈ
３抗体が他の抗体と同じエピトープと結合するかどうかを判定することである。Ｂ７−Ｈ
３に対する市販の抗体例を利用することができ、本明細書で教示される結合アッセイを用
いて同定することができる。競合アッセイは当業者によく知られ、このような手法および
データ例は実施例で詳説する。抗Ｂ７−Ｈ３抗体は、それらが結合する組織、癌のタイプ
または腫瘍のタイプによってさらに特徴付けることができる。
抗Ｂ７−Ｈ３抗体を同定するもう１つの方法は、それが結合する抗原によるものである
。抗Ｂ７−Ｈ３抗体を、様々なヒト癌からの細胞溶解液とともにウエスタンブロットに用
いた。当業者に知られているように、ウエスタンブロット法は、変性または非変性ゲル上
で細胞溶解液および／または細胞画分を泳動させ、それらのタンパク質をニトロセルロー
ス紙に転写した後、そのブロットを抗体（例えば、抗Ｂ７−Ｈ３抗体）でプロービングし
、抗体がどのタンパク質に結合しているかを調べることを含み得る。Ｂ７−Ｈ３は、限定
されるものではないが、結腸、乳房、卵巣、膵臓および肺を含む種々の組織の様々なヒト
癌と関連している。
ＶＩ．抗Ｂ７−Ｈ３抗体およびＢ７−Ｈ３モジュレーターを用いた癌の診断方法
本明細書に開示される方法により作製されたＢ７−Ｈ３に対するモノクローナル抗体は
、診断目的で、限定されるものではないが、卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎臓、膵臓
、皮膚、甲状腺、脳、心臓、肝臓、胃、神経、血管、骨および上部消化管を含む様々な組
織における癌性細胞の有無を特定するために使用可能である。本明細書に開示される方法
により作製されたＢ７−Ｈ３に対するモノクローナル抗体はまた、固形腫瘍から遊離した
後に血中に循環している癌性細胞の有無、またはそのレベルを特定するためにも使用可能
である。このような循環抗原は、完全なＢ７−Ｈ３抗原、または本明細書で教示される方
法に従って検出され得る能力を保持するそのフラグメントであり得る。このような検出は
当技術分野で慣用される標準法を用いたＦＡＣＳ分析によって達成することができる。
これらの使用は、Ｂ７−Ｈ３と、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合する抗体との間の複合体の
形成を含み得る。このような抗体の例としては、限定されるものではないが、ハイブリド
ーマＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７により産生された抗Ｂ７−Ｈ
３モノクローナル抗体が挙げられる。このような複合体の形成はin vitroにおけるもので
あっても、in vivoにおけるものであってもよい。特定の理論に縛られるものではないが
、モノクローナル抗体抗Ｂ７−Ｈ３は、Ｂ７−Ｈ３の細胞外ドメインを介してＢ７−Ｈ３
と結合することができ、その後、内部移行され得る。
本発明の診断方法の好ましい実施形態では、抗体は検出可能な標識を担持する。使用可
能な標識の例としては、放射性薬剤または蛍光団、例えば、フィコエリトリンまたはフル
オレセインイソチオシアネート（フルオロイソチオシアネートまたはＦＩＴＣとしても知
られる）が挙げられる。
診断および治療目的で商業的に用いられている他の既知の抗体の場合と同様に、本発明
の標的抗原は正常組織で広く発現される。それはまた、いくつかの腫瘍ではアップレギュ
レートされている。従って、診断薬または療法薬は用いる場合の本発明の抗体の特定の用
量および送達経路は、当面の特定の腫瘍または病態、ならびに治療される特定の個体に合
わせる。
診断のために抗体を用いる１つの方法は、抗体を放射性薬剤または放射線不透過性薬剤
に連結し、その抗体を個体に投与し、Ｘ線または他の撮像機を用いて、その抗原を発現す
る癌細胞の表面における標識抗体の局在を可視化することによるin vivo腫瘍撮像法であ
る。抗体は、生理学的条件で結合を促進する濃度で投与される。
Ｂ７−Ｈ３の検出のためのin vitro技術は当技術分野においては慣例であり、酵素結合
免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、免疫蛍光、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、
ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）およびウエスタンブロット解析を含む。
本発明の態様において、腫瘍または新生物の放射線撮像法、または放射性標識抗体で処
理する方法の有効性を評価する方法は、本発明の実施に従って放射性標識された腫瘍特異
的抗体を個体に投与する工程を含む。放射性標識抗体は、好ましくはテクネチウム−９９
ｍ、インジウム−１１１、ヨウ素−１３１、レニウム−１８６、レニウム−１８８、サマ
リウム−１５３、ルテチウム−１７７、銅−６４、スカンジウム−４７、イットリウム−
９０からなる群から選択される放射性標識を含むモノクローナルまたはポリクローナル抗
体であってよい。抗体の免疫反応性を損なわず、in vivoにおいては分解されないヨウ素
−１３１、レニウム−１８８、ホルミウム−１６６、サマリウム−１５３およびスカンジ
ウム−４７などの治療用放射性核種で標識されたモノクローナル抗体が特に好ましい。当
業者ならば、他の放射性同位体も知られ、特定の適用に好適な場合があることが分かるで
あろう。この放射線撮像法は単光子放射コンピュータ断層撮影法（ＳＰＥＣＴ：Single P
hoton Emission Computer Tomography）、陽電子放射断層撮影法（ＰＥＴ）、コンピュー
タ断層撮影法（ＣＴ：Computer Tomography）または磁気共鳴画像法（ＭＲＩ：Magnetic
Resonance Imaging）を用いて行うことができる。放射免疫撮像法により位置決定された
転移の位置のより良い解剖学的定義を可能とする相関的撮像法も意図される。
他の方法では、癌性細胞を摘出し、その組織を当技術分野で周知の方法（例えば、凍結
化合物中への包理、凍結、および固定を伴ったまたは伴わない切片化；抗原賦活および対
比染色の様々な方法を伴ったまたは伴わない固定およびパラフィン包理）により免疫組織
化学向けに調製する。モノクローナル抗体はまた、種々の発達段階で癌性細胞を同定する
ために使用可能である。これらの抗体はまた、どの個体の腫瘍がそれらの表面で所定のレ
ベルで抗原を発現するか、従って、前記抗原に対する抗体を用いた免疫療法の候補となる
かを判定するために使用することもできる。これらの抗体は、Ｂ７−Ｈ３を発現する原発
癌と転移癌の双方を認識することができる。本明細書において、検出は定性的検出および
／または定量的検出を含み、癌性細胞におけるＢ７−Ｈ３の発現レベルの上昇を、正常細
胞に対して測定されたレベルと比較することを含み得る。
本発明はまた、ある個体においてＢ７−Ｈ３を発現する癌細胞を特徴とする癌の診断を
、Ｂ７−Ｈ３と結合する任意の抗体、およびＢ７−Ｈ３の発現レベルを測定するために使
用可能な他の任意の方法を用いて補助する方法を提供する。本明細書において、「診断を
補助する」方法とは、これらの方法が癌の分類または性質に関して臨床的判定を行う助け
となることを意味し、最終的な診断については決定的であってもなくてもよい。よって、
癌の診断を補助する方法は、個体由来の生体サンプルにおいてＢ７−Ｈ３レベルを測定し
、かつ／またはそのサンプルにおいてＢ７−Ｈ３発現レベルを測定する工程を含み得る。
抗原またはその一部を認識する抗体はまた、限定されるものではないが、血液、唾液、尿
、肺液または腹水を含む体液において生きているまたは死滅した癌細胞から放出または分
泌された抗原を検出するための診断イムノアッセイを創出するためにも使用することがで
きる。
対象とする特定の腫瘍中の細胞は全てがＢ７−Ｈ３を発現するわけではなく、また、他
の組織の癌性細胞もＢ７−Ｈ３を発現する可能性があるので、個体は、その個体での免疫
療法の有効性を判定するために癌性細胞におけるＢ７−Ｈ３の有無に関してスクリーニン
グすべきである。本明細書に開示されている方法によって作製された抗Ｂ７−Ｈ３抗体は
、癌を有すると診断された個体が、Ｂ７−Ｈ３に対する抗体を用いた免疫療法の候補と考
えられるかどうかを判定するために使用可能である。一実施形態では、癌性腫瘍または生
検サンプルは、Ｂ７−Ｈ３に対する抗体を用いてＢ７−Ｈ３の発現に関して試験すること
ができる。Ｂ７−Ｈ３を発現する癌細胞は、Ｂ７−Ｈ３に対する抗体を用いた免疫療法の
好適な候補である。抗Ｂ７−Ｈ３抗体による染色もまた、正常組織から癌性組織を識別す
るために使用可能である。
診断目的で抗Ｂ７−Ｈ３抗体を用いる方法は、任意の形態の抗癌治療、例えば化学療法
または放射線療法の前でも後でも、どの腫瘍が所与の処置に奏功する可能性が最も高いか
、癌を有する個体の予後、腫瘍サブタイプまたは転移性疾患の起源、および疾患の進行ま
たは処置に対する奏功を決定するのに有用である。
本発明の組成物はまた、他の罹患（非癌性）細胞を用いる適用において、一般に上記さ
れた方法を用い、癌以外の病態の診断にも好適である。本発明の方法に用いるのに好適な
病態は、限定されるものではないが、個体における炎症応答または自己免疫応答に関連す
る疾患または障害が挙げられる。上記の方法は個体における炎症応答または自己免疫応答
を調節するために使用可能である。本発明の組成物および方法を用いて診断および／また
は治療を受け得る炎症および自己免疫障害から起こる疾患および症状としては、限定され
るものではないが例を挙げれば、多発性硬化症、髄膜炎、脳炎、卒中、その他の脳外傷、
炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、重症筋無力症、狼瘡、関節リウ
マチ、喘息、急性若年発症性糖尿病、ＡＩＤＳ性痴呆、アテローム性動脈硬化症、腎炎、
網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および急性白血球媒介肺損傷が含まれる。
本発明の抗体およびその他の治療薬の診断的および／または治療的使用のためのさらに
他の適応としては、臓器または移植片拒絶のリスクがある個体への投与が含まれる。近年
、皮膚、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓および骨髄などの組織および臓器を移植するための
外科技術の有効性に著しい改善がなされた。主要な未解決の問題はおそらく、レシピエン
トにおいて移植された同種移植片または臓器に対する免疫寛容を誘導するのに満足のいく
薬剤が無いことである。宿主に同種異系細胞または臓器が移植される（すなわち、提供者
と非提供者が同じ種の異なる個体である）場合、宿主免疫系は移植片の外来抗原に対して
免疫応答を誘導し（宿主対移植片病）、移植組織の崩壊に至るおそれがある。
抗Ｂ７−Ｈ３抗体に関して本出願のいずれの箇所に記載されている使用も、本明細書に
記載されるような他のＢ７−Ｈ３アゴニスト、アンタゴニストおよびモジュレーターの使
用を包含する。このような実施形態では、記載されている工程においてＢ７−Ｈ３が抗体
Ｂ７−Ｈ３アゴニスト、アンタゴニストまたはその他の非抗体モジュレーターで置換され
、本方法を置換されたＢ７−Ｈ３調節組成物に適合させるために当業者の範囲内の変更が
なされる。
本明細書に開示されている方法によって作製されたＢ７−Ｈ３に対するモノクローナル
抗体は、様々な組織においてヒト癌幹細胞の有無を特定するために使用可能である。癌幹
細胞（ＣＳＣ：cancer stem cells）は、腫瘍増殖および転移に役割を果たすと仮定され
ている(Ghotra, V.P. et al. (2009) “The Cancer Stem Cell Microenvironment And An
ti-Cancer Therapy,” Int. J. Radiat. Biol. 85(11):955-962; Gupta, P.B. et al. (2
009) “Cancer Stem Cells: Mirage Or Reality?” Nat. Med. 15(9):1010-1012; Lawson
, J.C. et al. (2009) “Cancer Stem Cells In Breast Cancer And Metastasis,” Brea
st Cancer Res. Treat. 118(2):241-254; Hermann, P.C. et al. (2009) “Pancreatic C
ancer Stem Cells--Insights And Perspectives,” Expert Opin. Biol. Ther. 9(10):12
71-1278; Schatton, T. et al. (2009) “Identification And Targeting Of Cancer Ste
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lls: The Other Face Of Janus,” Amer. J. Med. Sci. 338(2):107-112; Alison, M.R.
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ancer Stem Cells: Tools And Models To Rely On,” BMC Cancer 9:202; Scopelliti, A
. et al. (2009) “Therapeutic Implications Of Cancer Initiating Cells,” Expert
Opin. Biol. Ther. 9(8):1005-1016;国際公開第２００８／０９１９０８号)。この仮定の
下、ＣＳＣは各腫瘍内で、無限自己複製能があり、複製能が比較的制限されるより成熟し
た腫瘍細胞へと発達し得る明確に異なる少数の細胞セットを提供する。これらの癌幹細胞
は化学療法薬、放射線またはその他の有毒条件に対して耐性が高い可能性があり、従って
、臨床治療後も存続し、後に二次的な腫瘍、転移へと成長するか、または再発の原因とな
るとの仮説が立てられている。ＣＳＣは「正常」組織幹細胞か、またはより分化した組織
始原細胞のいずれかを生じ得ることが示唆されている。
ヒト癌幹細胞はいくつかの顕著な特徴を有する。このような特徴は国際公開第２００８
／０９１９０８号に記載されており、参照により本明細書に組み入れる。癌幹細胞上の細
胞表面標的に対するモノクローナル抗体は、様々な組織中の癌幹細胞の有無を特定するた
めに使用可能である。本明細書に開示される方法により作製されたＢ７−Ｈ３に対するモ
ノクローナル抗体はまた、サンプルもしくは組織中、またはそれらが固形腫瘍から遊離し
た後に循環中の癌幹細胞の有無、または癌幹細胞のレベルを特定するためにも使用可能で
ある。このような循環抗原は完全なＢ７−Ｈ３抗原、または本明細書で教示される方法に
従って検出され得る能力を保持するそのフラグメントであり得る。このような検出は当技
術分野で慣用される標準法を用いた組織サンプルの免疫組織化学分析によって達成するこ
とができる。
これらの使用は、Ｂ７−Ｈ３と、癌幹細胞上のＢ７−Ｈ３と特異的に結合する抗体との
間の複合体の形成を含み得る。このような抗体の例としては、限定されるものではないが
、ハイブリドーマＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７により産生され
る抗Ｂ７−Ｈ３モノクローナル抗体が挙げられる。このような複合体の形成はin vitroに
おけるものであっても、in vivoにおけるものであってもよい。
抗Ｂ７−Ｈ３抗体に関してそれらの使用を列挙する本出願に記載の使用にはまた、癌幹
細胞の同定および処置の使用に関して本明細書に記載されるような他のＢ７−Ｈ３アゴニ
スト、アンタゴニストおよびモジュレーターの使用も包含される。このような実施形態で
は、抗Ｂ７−Ｈ３抗体およびその他のＢ７−Ｈ３アゴニスト、アンタゴニストおよびモジ
ュレーターは、記載されている類似の方法を用いた癌幹細胞の同定、診断または治療的処
置に用いられ、その方法を癌幹細胞の同定／診断または処置に適合させるために当業者の
範囲内にある変更もなされる。
ＶＩＩ．本発明の好ましい組成物
本発明は、抗Ｂ７−Ｈ３抗体、抗Ｂ７−Ｈ３抗体に由来するポリペプチド、抗Ｂ７−Ｈ
３抗体をコードする配列を含むポリヌクレオチド、および本明細書に記載されるようなそ
の他の薬剤を含む組成物（医薬組成物を含む）を包含する。本明細書において、組成物は
Ｂ７−Ｈ３と結合する１以上の抗体、ポリペプチドおよび／もしくはタンパク質、Ｂ７−
Ｈ３アゴニスト、アンタゴニスト、モジュレーター、ならびに／またはＢ７−Ｈ３と結合
する１以上の抗体、ポリペプチドおよびタンパク質をコードする配列を含む１以上のポリ
ヌクレオチドをさらに含む。
本発明はさらに、任意のＢ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュ
レーターと、特定のＢ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストもしくはモジュレー
ターの意図する機能（単一または複数）を助ける付加的化学構造とのコンジュゲートを提
供する。
これらのコンジュゲートとしては、本明細書で述べられる診断、スクリーニングまたは
精製手順において用いられる任意の不溶性固相支持体マトリックスなどの高分子に共有結
合されたＢ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーターが含まれ
る。好適なマトリックス材料としては、化学的に不活性な任意の物質を含み、ペプチドリ
ガンドと共有結合を形成し得る多数の官能基を有する。マトリックス材料の例およびマト
リックス−リガンドコンジュゲートの作製方法は、Dean et al. (Eds) Affinity Chromat
ography: A Practical Approach, IRL Press (1985); Lowe, “An Introduction to Affi
nity Chromatography”, in Work et al. (eds) Laboratory Techniques in Biochemistr
y and Molecular Biology, Vol. 7, Part II, North-Holland (1979); Porath et al.,
“Biospecific Affinity Chromatography”, in Neurath, H. et al. (eds), The Protei
ns, 3rd ed., Vol. 1, pp. 95-178 (1975);およびSchott, H. Affinity Chromatography,
Macel Dekker, Inc. NY (1984)に記載されている。
また、Ｂ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アンタゴニストまたはモジュレーターと、本明
細書に述べられる診断手順に用いられる任意のリポーター部分とのコンジュゲートも提供
される。抗Ｂ７−Ｈ３抗体をはじめとする本発明のＢ７−Ｈ３ペプチドアゴニスト、アン
タゴニストまたはモジュレーター薬剤、ポリペプチドおよびタンパク質は、以下の基準の
いずれか（１以上）によってさらに特定され、特徴付けられる：
（ａ）Ｂ７−Ｈ３（特に、限定されるものではないが、腎臓、前立腺または肺癌細胞を
はじめとする癌細胞の表面で発現されるＢ７−Ｈ３分子）と特異的に結合する能力；
（ｂ）既知の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、Ｂ７−Ｈ３への優先的結合を競合的に阻害する能力
（元の抗体が優先的に結合する同じＢ７−Ｈ３エピトープと優先的に結合する能力を含む
）；
（ｃ）in vitroまたはin vivoにおいて生細胞の表面で発現されるＢ７−Ｈ３の一部と
結合する能力；
（ｄ）Ｂ７−Ｈ３を発現する生癌細胞の表面で発現されるＢ７−Ｈ３の一部と結合する
能力；
（ｅ）表面にＢ７−Ｈ３を発現する癌性細胞（腎臓、前立腺または肺癌細胞など）に化
学療法薬を送達する能力；および／または
（ｆ）表面にＢ７−Ｈ３を発現する癌細胞（限定されるものではないが、前立腺癌細胞
など）に治療薬または検出可能なマーカーそ送達する能力。
本発明の好ましい抗体は、正常な非癌性組織とは異なる、腫瘍組織のＩＨＣ染色を示し
、しかも、抗体有効性の霊長類（特に、カニクイザル）モデルで試験することができる。
本発明の好ましい抗体はさらに、望ましいレベルの親和性および抗原特異性を示す。本発
明の好ましい抗体はさらに、望ましいレベルの免疫調節活性および細胞内部移行を示す。
いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、ハイブリドーマＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ
６９ＤもしくはＰＲＣＡ１５７、またはその後代により産生される抗体である。本発明は
また、これらの寄託されたハイブリドーマにより産生された抗体、および等価抗体または
ポリペプチドフラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２ Ｆｖ、Ｆｃな
ど）、キメラ抗体、一本鎖（ｓｃＦｖ）、その変異体、抗体部分を含む融合タンパク質、
ヒト化抗体、および必要とされる特異性の認識部位である抗原（Ｂ７−Ｈ３）を含むこれ
らまたは等価な抗体のいずれかの他の任意の改変構成の種々の製剤を包含する。本発明は
また、抗Ｂ７−Ｈ３ファミリーメンバーの１以上の生物学的特徴を示すヒト抗体を提供す
る。抗Ｂ７−Ｈ３ファミリーの等価抗体（ヒト化抗体およびヒト抗体を含む）、ポリペプ
チドフラグメント、およびこれらのフラグメントのいずれかを含むポリペプチドは上記の
５つの基準のいずれか（１以上の）によって特定され、特徴付けられる。抗Ｂ７−Ｈ３抗
体のマウスおよび例示的ヒト化可変ドメイン配列は国際公開第２００８／０６６６９１号
に示されている。このような配列は限定ではなく例として示されるものであり、異なる配
列ならびに示されている配列のフラグメントおよび変異体も本発明の範囲内に包含される
。
ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７は、それらのより鮮明な正常組
織ＩＨＣ特性、より強い腫瘍／正常ＩＨＣ示差、中程度から強い結合（ＢＩＡＣＯＲＥ（
商標）／ＩＨＣ）、カニクイザルのＢ７−Ｈ３との交差反応性、および他の抗体に比べて
ユニバーザルＤＡＲＴ（商標）分子（「ＵＤＡＲＴ（商標）」）に対する強力な活性のた
めに、本発明の好ましいＢ７−Ｈ３抗体である。特に好ましい実施形態では、本発明は、
これらの好ましい抗体のキメラおよびヒト化変異体、ならびに下記のように改変されたＦ
ｃ領域を有するこれらの好ましい抗体の天然およびキメラおよびヒト化変異体を包含する
。本発明はさらに、このような抗体のエピトープ結合領域、特に、Ｔ細胞受容体、ＮＫＧ
２Ｄ受容体、または腫瘍関連抗原またはハプテン、例えばフルオレセイン（例えば、フル
オレセインイソチオシアネート（フルオロイソチオシアネートまたはＦＩＴＣとしても知
られる）と結合するエピトープ結合領域と協調するエピトープ結合領域を有するＤＡＲＴ
（商標）分子を包含する。
いくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ３と結合する本発明の抗体、ポリペプチドおよびタ
ンパク質は、本明細書で明示される抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、Ｂ７−Ｈ３への優先的結合を競
合的に阻害する抗体、ポリペプチドおよびタンパク質である。いくつかの実施形態では、
これらの抗体、ポリペプチドおよびタンパク質は、Ｂ７−Ｈ３上の、抗体ｍｕ−抗Ｂ７−
Ｈ３が優先的に結合するのと同じエピトープと優先的に結合する。
よって、本発明は、下記のいずれか（または下記のいずれかを含む組成物、例えば医薬
組成物）：（ａ）上記に特定さる受託番号を有する宿主細胞またはその後代により産生さ
れる抗体；（ｂ）このような抗体のヒト化型；（ｃ）このような抗体の軽鎖および／また
は重鎖可変領域の１以上を含む抗体；（ｄ）このような抗体の重鎖および軽鎖可変領域に
相同な、または由来する可変領域と、ヒト抗体の重鎖および軽鎖定常領域に相同なまたは
由来する定常領域とを含むキメラ抗体；（ｅ）このような抗体の軽鎖および／または重鎖
ＣＤＲの１以上の（少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ）を含む抗体；
（ｆ）このような抗体の重鎖および／または軽鎖を含む抗体；（ｇ）このような抗体と等
価なヒト抗体。前記抗体のヒト化型は、元の抗体、または上記で特定される受託番号を有
する宿主細胞により産生される抗体と同一のＣＤＲを有していても有していなくてもよい
。ＣＤＲ領域の同定は十分に当技術分野の範囲内にある。いくつかの実施形態では、本発
明は、上記に特定されるハイブリドーマ寄託物の１つにより産生される抗体の少なくとも
１つのＣＤＲ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なくとも４つ、少なくとも５つのＣ
ＤＲと実質的に相同な（またはいくつかの実施形態では、これらの抗体の１つの６つ全て
のＣＤＲと実質的に相同なまたはこれらの抗体の１つに由来する）少なくとも１つのＣＤ
Ｒを含む抗体、または上記に特定される受託番号を有する宿主細胞により産生される抗体
を提供する。他の実施形態は、本明細書で特定されるように寄託されたハイブリドーマか
ら産生される、またはこのような抗体に由来する抗体の少なくとも２つ、３つ、４つ、５
つまたは６つのＣＤＲと実質的に相同な少なくとも２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの
ＣＤＲを有する抗体を含む。本発明の目的では、結合特異性および／または総体的な活性
（化学療法薬を癌性細胞にまたは癌性細胞中に送達して、癌細胞の成長および／または増
殖を軽減する、癌細胞においてアポトーシス性細胞死を誘導する、転移の発生を遅延させ
る、および／または待期的処置を行うことに関するものであり得る）は一般に保持される
が、その活性の程度は寄託されたハイブリドーマにより産生される抗体に比べて異なり得
る（高い場合も低い場合もある）と理解される。本発明はまた、これらの抗体のいずれか
の作製方法を提供する。抗体の作製方法は当技術分野で公知であり、本明細書に記載され
ている。
本発明はまた、本発明の抗体のアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。いくつか
の実施形態では、このポリペプチドは本抗体の軽鎖および／または重鎖可変領域の１以上
を含む。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは本抗体の軽鎖および／または重鎖
ＣＤＲの１以上を含む。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは本抗体の軽鎖およ
び／または重鎖の３つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態では、このポリペプチドは以
下：元の抗体の配列の少なくとも５個の連続するアミノ酸、少なくとも８個の連続するア
ミノ酸、少なくとも約１０個の連続するアミノ酸、少なくとも約１５個の連続するアミノ
酸、少なくとも約２０個の連続するアミノ酸、少なくとも約２５個の連続するアミノ酸、
少なくとも約３０個の連続するアミノ酸のうちのいずれかを有する抗体のアミノ酸配列を
含み、これらのアミノ酸の少なくとも３つが抗体の可変領域に由来する。一実施形態では
、可変領域は元の抗体の軽鎖に由来する。別の実施形態では、可変領域は抗体の重鎖に由
来する。別の実施形態では、５（またはそれを越える）連続するアミノ酸が抗体の相補性
決定領域（ＣＤＲ）に由来する。
本発明のいくつかの実施形態では、Ｂ７−Ｈ３、Ｂ７−Ｈ３の一部、抗Ｂ７−Ｈ３抗体
または本発明のその他のＢ７−Ｈ３結合ポリペプチドを発現する本発明の細胞は、in viv
oにおいてＢ７−Ｈ３生物活性を調節するために個体に直接投与される。
本発明の好ましい抗Ｂ７−Ｈ３抗体は、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣ
Ａ１５７であり、これらの抗体は全て、ヒトＢ７−Ｈ３分子に反応性のあるマウス抗体で
ある。ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７の可変軽鎖および可変重鎖
のアミノ酸配列およびコードされるポリヌクレオチド配列を、このような各差の個々のＣ
ＤＲ1、ＣＤＲ2およびＣＤＲ3ドメインとともに以下に示す。よって、当業者は、ＢＲＣ
Ａ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７により認識されるエピトープと結合し得
る、このようなＣＤＲを有する抗体、ならびにその誘導体を構築することができるであろ
う。
Ａ．ＢＲＣＡ８４Ｄの配列
（１）ＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖配列
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖のアミノ酸配列（配列番号３）：
DIAMTQSQKF MSTSVGDRVS VTCKASQNVD TNVAWYQQKP GQSPKALIYS
ASYRYSGVPD RFTGSGSGTD FTLTINNVQS EDLAEYFCQQ YNNYPFTFGS
GTKLEIK
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４）：
gacattgcga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagタグaga cagggtcagc
gtcacctgca aggccagtca gaatgtggat actaatgtag cctggtatca acagaaacca
gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat
cgcttcacag gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcaacaa tgtgcagtct
gaagacttgg cagagtattt ctgtcagcaa tataacaact atccattcac gttcggctcg
gggacaaagt tggaaataaa a
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ１（配列番号５）：KASQNVDTNVA
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ１をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６）：aa
ggccagtc agaatgtgga tactaatgta gcc
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ２（配列番号７）：SASYRYS
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ２をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号８）：tc
ggcatcct accggtacag t
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ３（配列番号９）：QQYNNYPFT
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ３をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１０）：
cagcaatata acaactatcc attcacg
（２）ＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖配列
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖のアミノ酸配列（配列番号１１）：
DVQLVESGGG LVQPGGSRKL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PEKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNPKNTLF LQMTSLRSED TAMYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTLTV SS
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１２）：
gatgtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc ccggaaactc
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctttggaa tgcactgggt tcgtcaggct
ccagagaagg ggctggagtg ggtcgcatac attagtagtg acagtagtgc catctactat
gcagacacag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca atcccaagaa caccctgttc
ctgcaaatga ccagtctaag gtctgaggac acggccatgt attactgtgg aagagggagg
gaaaacattt actacggtag タグcttgac tactggggcc aaggcaccac tctcacagtc
tcctca
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ1（配列番号１３）：FGMH
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ1をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１４）：t
ttggaatgcac
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ2（配列番号１５）：YISSDSSAIYYADTVK
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ2をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１６）：t
acattagta gtgacagtag tgccatctac tatgcagaca cagtgaag
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ3（配列番号１７）：GRENIYYGSRLDY
ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ3をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号１８）：g
ggagggaaa acatttacta cggtagtagg cttgactac
Ｂ．ＢＲＣＡ６９Ｄの配列
（１）ＢＲＣＡ６９Ｄ軽鎖配列
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖のアミノ酸配列（配列番号１９）：
DIQMTQTTSS LSASLGDRVT ISCRASQDIS NYLNWYQQKP DGTVKLLIYY
TSRLHSGVPS RFSGSGSGTD YSLTIDNLEQ EDIATYFCQQ GNTLPPTFGG
GTKLEIK
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２０）：
gatatccaga tgacacagac tacatcctcc ctgtctgcct ctctgggaga cagagtcacc
atcagttgca gggcaagtca ggacattagt aattatttaa actggtatca gcagaaacca
gatggaactg ttaaactcct gatctactac acatcacgat tacactcagg agtcccatca
aggttcagtg gcagtgggtc tggaacagat tattctctca ccattgacaa cctggagcaa
gaagatattg ccacttactt ttgccaacag ggtaatacgc ttcctccgac gttcggtgga
ggcaccaaac tggaaatcaa a
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ1（配列番号２１）：RASQDISNYLN
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ1をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２２）：a
gggcaagtc aggacattag taattattta aac
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ2（配列番号２３）：YTSRLHS
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ2をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２４）：t
acacatcac gattacactc a
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ3（配列番号２５）：QQGNTLPPT
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変軽鎖ＣＤＲ3をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２６）：c
aacagggta atacgcttcc tccgacg
（２）ＢＲＣＡ６９Ｄ重鎖配列
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖のアミノ酸配列（配列番号２７）：
QVQLQQSGAE LARPGASVKL SCKASGYTFT SYWMQWVKQR PGQGLEWIGT
IYPGDGDTRY TQKFKGKATL TADKSSSTAY MQLSSLASED SAVYYCARRG
IPRLWYFDVW GAGTTVTVSS
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号２８）：
caggttcagc tccagcagtc tggggctgag ctggcaagac ctggggcttc agtgaagttg
tcctgcaagg cttctggcta cacctttact agctactgga tgcagtgggt aaaacagagg
cctggacagg gtctggaatg gattgggact atttatcctg gagatggtga tactaggtac
actcagaagt tcaagggcaa ggccacattg actgcagata aatcctccag cacagcctac
atgcaactca gcagcttggc atctgaggac tctgcggtct attactgtgc aagaagaggg
attccacggc tttggtactt cgatgtctgg ggcgcaggga ccacggtcac cgtctcctca
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ1（配列番号２９）：SYWMQ
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ1をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号３０）：a
gctactgga tgcag
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ2（配列番号３１）：TIYPGDGDTR YTQKFKG
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ2をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号３２）：a
ctatttatc ctggagatgg tgatactagg tacactcag aagttcaagg gc
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ3（配列番号３３）：RGIPRLWYFD V
ＢＲＣＡ６９Ｄ可変重鎖ＣＤＲ3をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号３４）：a
gagggattc cacggctttg gtacttcgat gtc
Ｃ．ＰＲＣＡ１５７の配列
（１）ＰＲＣＡ１５７軽鎖配列
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖のアミノ酸配列（配列番号３５）：
DIQMTQSPAS LSVSVGETVT ITCRASESIY SYLAWYQQKQ GKSPQLLVYN
TKTLPEGVPS RFSGSGSGTQ FSLKINSLQP EDFGRYYCQH HYGTPPWTFG
GGTNLEIK
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号３６）：
gacatccaga tgactcagtc tccagcctcc ctatctgtat ctgtgggaga
aactgtcacc attacatgtc gagcaagtga gagtatttac agttatttag
catggtatca gcagaaacag ggaaaatctc ctcagctcct ggtctataat
acaaaaacct taccagaggg tgtgccatca aggttcagtg gcagtggatc
aggcacacag ttttctctga agatcaacag cctgcagcct gaagattttg
ggagatatta ctgtcaacat cattatggta ctcctccgtg gacgttcggt
ggaggcacca acctggaaat caaa
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ1（配列番号３７）：RASESIYSYLA
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ1をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号３８）：c
gagcaagtg agagtattta cagttattta gca
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ2（配列番号３９）：NTKTLPE
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ2をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４０）：a
atacaaaaa ccttaccaga g
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ3（配列番号４１）：QHHYGTPPW
ＰＲＣＡ１５７可変軽鎖ＣＤＲ3をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４２）：c
aacatcatt atggtactcc tccgtgg
（２）ＰＲＣＡ１５７重鎖配列
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖のアミノ酸配列（配列番号４３）：
EVQQVESGGD LVKPGGSLKL SCAASGFTFS SYGMSWVRQT PDKRLEWVAT
INSGGSNTYY PDSLKGRFTI SRDNAKNTLY LQMRSLKSED TAMYYCARHD
GGAMDYWGQG TSVTVSS
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４４）：
gaggtgcagc aggtggagtc ggggggagac ttagtgaagc ctggagggtc
cctgaaactc tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt tcctatggca
tgtcttgggt tcgccagact ccagacaaga ggctggagtg ggtcgcaacc
attaatagtg gtggaagtaa cacctactat ccagacagtt tgaaggggcg
attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctttac ctgcaaatgc
gcagtctgaa gtctgaggac acagccatgt attactgtgc aagacatgac
gggggagcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ1（配列番号４５）：SYGMS
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ1をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４６）：t
cctatggca tgtct
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ2（配列番号４７）：VATINSGGSN TYYPDSLKG
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ2をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号４８）：g
tcgcaacca ttaatagtgg tggaagtaac acctactatc cagacagttt gaagggg
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ3（配列番号４９）：HDGGAMDY
ＰＲＣＡ１５７可変重鎖ＣＤＲ3をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号５０）：c
atgacgggg gagctatgga ctac
Ｄ．Ｆｃ操作Ｂ７−Ｈ３抗体
従来の免疫機能において、抗体抗原複合体と免疫系細胞との相互作用は、抗体依存性細
胞傷害、肥満細胞脱顆粒および食作用などのエフェクター機能から、リンパ球増殖および
抗体分泌の調節などの免疫調節シグナルまでの広範囲の応答をもたらす。これらの相互作
用は全て、抗体または免疫複合体のＦｃドメインと、造血細胞上の特化した細胞表面受容
体との結合によって誘導される。抗体および免疫複合体により誘発される細胞応答の多様
性は、３つのＦｃ受容体：ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦ
ｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）の構造的ヘテロ性によるものである。ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）
、ＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）は活性化（すなわち
、免疫系増強）型受容体であり；ＦｃγＲＩＩＢ（ＣＤ３２Ｂ）は阻害（すなわち、免疫
系低下）型受容体である。ＩｇＧ１ Ｆｃ領域のアミノ酸配列を以下に示す（配列番号５
１、参照により本明細書に明らかに組み入れられ、以下、「Ｋａｂａｔ ＥＵ」と呼称す
る、Kabat et al., Sequence of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public
Health Service, NIH, MD (1991)に従って符番した）。
配列番号５１
PAPELLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSHE DPEVKFNWYV
230 240 250 260 270
DGVEVHNAKT KPREEQYNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKALP
280 290 300 310 320
APIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSREEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV
330 340 350 360 370
EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSK LTVDKSRWQQ GNVFSCSVMH
380 390 400 410 420
EALHNHYTQK SLSLSPGK
430 440
残基２３０〜３４１はＦｃ ＣＨ２領域である。残基３４２〜４４７はＦｃ ＣＨ３領域
である。
本発明は、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合し、１以上の部分に１以上のアミノ酸改変（例え
ば、置換、欠失、挿入）を有する変異型Ｆｃ領域を含む抗体を含み、この改変はＦｃγＲ
（活性化型および阻害型ＦｃγＲを含む）に対する変異型Ｆｃ領域の親和性および結合力
を増強する。いくつかの実施形態では、前記の１以上のアミノ酸改変は、ＦｃγＲＩＩＩ
Ａおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対する変異型Ｆｃ領域の親和性を増強する。別の実施
形態では、変異型Ｆｃ領域はさらに、対応する親抗体（すなわち、Ｆｃ領域における１以
上のアミノ酸改変以外は本発明の抗体と同じアミノ酸配列を有する抗体）のＦｃ領域の場
合よりも低い親和性でＦｃγＲＩＩＢと特異的に結合する。いくつかの実施形態では、こ
のような改変はＦｃγＲＩＩＩＡおよび／またはＦｃγＲＩＩＡに対する変異型Ｆｃ領域
の親和性を増強し、また、親抗体に比べて、ＦｃγＲＩＩＢに対する変異型Ｆｃ領域の親
和性も増強する。他の実施形態では、前記の１以上のアミノ酸改変は、ＦｃγＲＩＩＩＡ
および／またはＦｃγＲＩＩＡに対する変異型Ｆｃ領域の親和性を増強するが、親抗体の
Ｆｃ領域に比べて、ＦｃγＲＩＩＢに対する変異型Ｆｃ領域の親和性を変化させない。別
の実施形態では、前記の１以上のアミノ酸改変は、ＦｃγＲＩＩＩＡおよびＦｃγＲＩＩ
Ａに対する変異型Ｆｃ領域の親和性を増強するが、親抗体に比べて、ＦｃγＲＩＩＢに対
する親和性を低下させる。親和性および／または結合力の増強は、親分子（改変型のＦｃ
領域を持たない）の結合活性が細胞において検出できない場合に、低レベルのＦｃγＲを
発現する細胞において、ＦｃγＲに対する検出可能な結合またはＦｃγＲ関連活性をもた
らす。他の実施形態では、前記改変分子は、３０，０００〜２０，０００分子／細胞の密
度、２０，０００〜１０，０００分子／細胞の密度、１０，０００〜５，０００分子／細
胞の密度、５，０００〜１，０００分子／細胞の密度、１，０００〜２００分子／細胞の
密度または２００分子／細胞以下の密度（ただし、少なくとも１０、５０、１００または
１５０分子／細胞）で、非ＦｃγＲ受容体標的抗原を発現する細胞において検出可能な結
合を示す。
別の実施形態では、Ｆｃ領域のアミノ酸に対する前記の１以上の改変は、１以上のＦｃ
γＲ受容体に対する本抗体の親和性および結合力を低減する。特定の実施形態では、本発
明は、変異型Ｆｃ領域を含む抗体を包含し、前記変異型Ｆｃ領域は野生型Ｆｃ領域に対し
て少なくとも１つのアミノ酸改変を含み、前記変異型Ｆｃ領域は１つのＦｃγＲとのみ結
合し、ここで前記ＦｃγＲはＦｃγＲＩＩＩＡである。別の特定の実施形態では、本発明
は、変異型Ｆｃ領域を含む抗体を包含し、前記変異型Ｆｃ領域は野生型Ｆｃ領域に対して
少なくとも１つのアミノ酸改変を含み、前記変異型Ｆｃ領域は１つのＦｃγＲとのみ結合
し、ここで、前記ＦｃγＲはＦｃγＲＩＩＡである。
好ましくは、本発明の分子の結合特性は、１以上のＦｃγＲメディエーターエフェクタ
ー細胞機能を決定するためのin vitro機能アッセイにより同定される（第５．２．７節参
照）。ＦｃγＲに対する本発明の分子、例えば抗体の親和性および結合特性は、抗体−抗
原またはＦｃ−ＦｃγＲ相互作用、すなわち、それぞれ抗原と抗体の特異的、またはＦｃ
領域とＦｃγＲの特異的結合を決定するための当技術分野で公知のin vitroアッセイ（生
化学的または免疫学的アッセイ）、例えば限定されるものではないが、ＥＬＩＳＡアッセ
イ、表面プラズモン共鳴アッセイ、免疫沈降アッセイを用いて決定することができる。最
も好ましい実施形態では、本発明の分子は、in vivoモデル（例えば、本明細書に記載お
よび開示されているものなど）において、in vitroに基づくアッセイの場合と同等の結合
特性を有する。しかしながら、本発明は、in vitroに基づくアッセイでは所望の表現型を
示さないがin vivoにおいては所望の表現型を示す本発明の分子を排除しない。
いくつかの実施形態では、変異型Ｆｃ領域を含む本発明の分子は、そのＦｃ領域のＣＨ
３ドメイン（アミノ酸３４２〜４４７に及ぶと定義される）に少なくとも１つのアミノ酸
改変を含む（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９またはそれを越えるアミノ酸
改変を有する）。他の実施形態では、変異型Ｆｃ領域を含む本発明の分子は、Ｆｃ領域の
ＣＨ２ドメイン（アミノ酸２３１〜３４１に及ぶと定義される）に少なくとも１つのアミ
ノ酸改変を含む（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９またはそれを越えるアミ
ノ酸改変を有する）。いくつかの実施形態では、本発明の分子は、少なくとも２つのアミ
ノ酸改変を含み（例えば、２、３、４、５、６、７、８、９またはそれを越えるアミノ酸
改変を有する）、このような改変の少なくとも１つがＣＨ３領域にあり、このような改変
の少なくとも１つがＣＨ２領域にある。本発明はさらにヒンジ領域のアミノ酸改変も包含
する。特定の実施形態では、本発明はＦｃ領域のＣＨ１ドメイン（アミノ酸２１６〜２３
０に及ぶと定義される）のアミノ酸改変を包含する。
特に好ましい実施形態では、本発明は変異型Ｆｃ領域を含む分子を包含し、前記変異型
は、当業者に公知であり、本明細書に例示される方法を用いて測定した際にＡＤＣＣ活性
の増強および／またはＦｃγＲＩＩＡ（ＣＤ３２Ａ）に対する結合の増強を付与するまた
は示す。本発明に従って使用されるＡＤＣＣアッセイは、ＮＫ依存的であってもマクロフ
ァージ依存的であってもよい。
特に好ましい実施形態では、本発明は変異型Ｆｃ領域を含む分子を包含し、前記変異型
は、当業者に公知であり、本明細書に例示される方法を用いて測定した際にＡＤＣＣ活性
の増強および／またはＦｃγＲＩＩＩＡ（ＣＤ１６Ａ）に対する結合の増強を付与するま
たは示す。本発明に従って使用されるＡＤＣＣアッセイは、ＮＫ依存的であってもマクロ
ファージ依存的であってもよい。
本発明のＦｃ変異体は、他のＦｃ改変、例えば、米国特許第７，６３２，４９７号；同
第７，５２１，５４２号；同第７，４２５，６１９号；同第７，４１６，７２７号；同第
７，３７１，８２６号；同第７，３５５，００８号；同第７，３３５，７４２号；同第７
，３３２，５８１号；同第７，１８３，３８７号；同第７，１２２，６３７号；および同
第６，７３７，０５６号；国際公開第２００８／１０５８８６号；同第２００８／００２
９３３号；同第２００７／０２１８４１号；同第２００７／１０６７０７号；同第０６／
０８８４９４号；同第０５／１１５４５２号；同第０５／１１０４７４号；同第０４／１
０３２２６９号；および同第０４／０６３３５１号；ならびにPresta, L.G. et al. (200
2) “Engineering therapeutic antibodies for improved function,” Biochem. Soc. T
rans. 30(4):487-490; Shields, R.L. et al. (2002) “Lack of fucose on human IgG1
N-linked oligosaccharide improves binding to human Fcgamma RIII and antibody-de
pendent cellular toxicity,” J. Biol. Chem. 26;277(30):26733-26740 and Shields,
R.L. et al. (2001) “High resolution mapping of the binding site on human IgG1
for Fc gamma RI, Fc gamma RII, Fc gamma RIII,およびFcRn and design of IgG1 varia
nts with improved binding to the Fc gamma R,” J. Biol. Chem. 276(9):6591-6604に
開示されているものと組み合わせてもよい。本発明は、改変抗体に相加的、相乗的または
新規な特性を与えるための本発明のＦｃ変異体と他のＦｃ改変との組合せを包含する。好
ましくは、本発明のＦｃ変異体は、組み合わせられる改変の表現型を増強する。例えば、
本発明のＦｃ変異体を、対応する野生型Ｆｃ領域よりも高い親和性でＦｃγＲＩＩＩＡと
結合することが知られている変異体と組み合わせる場合には、本発明の変異体との組合せ
はＦｃγＲＩＩＩＡ親和性により高い倍率の増強をもたらす。
本発明は、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合し、変異型Ｆｃ領域を含む抗体であって、前記変
異型Ｆｃ領域が野生型Ｆｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸改変を含み（例えば、
１、２、３、４、５、６、７、８、９またはそれを越えるアミノ酸改変を有する）、その
結果、前記分子が野生型Ｆｃ領域を含む分子に比べてエフェクター機能の増強を示すよう
になり、ただし、前記変異型Ｆｃ領域は２４３、２５５、２５６、２５８、２６７、２６
８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８
９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０
３、３０５、３０７、３０９、３１２、３２０、３２２、３２６、３２９、３３０、３３
２、３３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３３９、３４０、３５９、３６
０、３７３、３７６、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、４３
９位のいずれか１以上に置換を持たないか、または単独で前記の置換ではない、前記抗体
を包含する。特定の実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む抗体であって、前記
変異型Ｆｃ領域が野生型Ｆｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸改変を含み（例えば
、１、２、３、４、５、６、７、８、９またはそれを越えるアミノ酸改変を有する）、そ
の結果、前記分子が野生型Ｆｃ領域を含む分子に比べて変更された親和性でＦｃγＲと結
合するようになり、ただし、前記変異型Ｆｃ領域は２４３、２５５、２５８、２６７、２
６９、２７０、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８９、２９２、２９３、２
９４、２９５、２９６、３００、３０３、３０５、３０７、３０９、３２０、３２２、３
２９、３３２、３３１、３３７、３３８、３４０、３７３、３７６、４１６、４１９、４
３４、４３５、４３７、４３８、４３９位のいずれか１以上に置換を持たないか、または
単独で前記の置換ではなく、また、２５６、２９０、２９８、３１２、３２６、３３３、
３３４、３５９、３６０または４３０位のいずれかにアラニンを；２６８位にアスパラギ
ンを；２７２位にグルタミンを；２８６位にグルタミン、セリンまたはアスパラギン酸を
；２９０位にセリンを；３０１位にメチオニンを；３２０位にメチオニン、グルタミン、
グルタミン酸またはアルギニンを；３２２位にグルタミン酸を；３２６位にアスパラギン
、セリン、グルタミン酸またはアスパラギン酸を；３３０位にリシンを；３３４位にグル
タミンを；３３４位にグルタミン酸を；３３４位にメチオニンを；３３４位にヒスチジン
を；３３４位にバリンを；３３４位にロイシンを；３３５位にグルタミンを；３３５位に
リシンを；または３３９位にトレオニンを持たない、前記抗体を包含する。
本発明はまた、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合し、変異型Ｆｃ領域を含む抗体であって、前
記変異型Ｆｃ領域が変異型Ｆｃ領域を含むかかる抗体を含み、前記変異型Ｆｃ領域は２６
８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８３、２８５、２８６、２８９、２９
２、２９３、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３２０、３３１、３３３、３３
４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、４１６、４１９、４３
０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９のいずれか１以上に置換を持たないか
、または単独で前記の置換ではなく、また、２８０位にヒスチジン、グルタミンまたはチ
ロシンを；２９０位にセリン、グリシン、トレオニンまたはチロシンを；２９４位にアス
パラギンを；２９５位にリシンを；２９６位にプロリンを；２９８位にプロリン、アスパ
ラギン、アスパラギン酸またはバリンを；または３００位にロイシンもしくはイソロイシ
ンを持たない、前記抗体を包含する。別の実施形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含
むかかる抗体であって、前記変異型Ｆｃ領域が野生型Ｆｃ領域に対して少なくとも１つの
アミノ酸改変を含み、その結果、前記分子が野生型Ｆｃ領域を含む分子に比べて低減され
た親和でＦｃγＲと結合するようになり、ただし、変異型Ｆｃ領域は２４３、２５２、２
５４、２６５、２６８、２６９、２７０、２７８、２８９、２９２、２９３、２９４、２
９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３２２、３２４、３２７、３２９、３
３３、３３５、３３８、３４０、３７３、３７６、３８２、３８８、３８９、４１４、４
１６、４１９、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９位のいずれか１以上に置換
を持たないか、または単独で前記の置換ではない、前記抗体を包含する。さらに別の実施
形態では、本発明は、変異型Ｆｃ領域を含む抗体であって、前記変異型Ｆｃ領域が野生型
Ｆｃ領域に対して少なくとも１つのアミノ酸改変を含み、その結果、前記分子が野生型Ｆ
ｃ領域を含む分子に比べて増強された親和性でＦｃγＲと結合するようになり、ただし、
前記変異型Ｆｃ領域は２８０、２８３、２８５、２８６、２９０、２９４、２９５、２９
８、３００、３０１、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３３１、３３３、３３
４、３３７、３４０、３６０、３７８、３９８または４３０のいずれか１以上に置換を持
たないか、または単独で前記の置換ではない、前記抗体を包含する。
本発明はまた、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合し、変異型Ｆｃ領域を含む抗体であって、前
記変異型Ｆｃ領域は３３０、２４３、２４７、２９８、２４１、２４０、２４４、２６３
、２６２、２３５、２６９または３２８位のいずれか１以上に置換を含まないか、または
単独で前記の置換ではなく、また、２４３位にロイシンを、２９８位にアスパラギンを、
２４１位にロイシン、および２４０位にイソロイシンまたはアラニンを、２４４位にヒス
チジンを、３３０位にバリンを、または３２８位にイソロイシンを持たない、前記抗体を
包含する。
本発明は特に、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合する抗体であって、エフェクター機能が増強
され、かつ／または活性型受容体および／または阻害型受容体に対する親和性が変更され
た変異型Ｆｃ領域を含み、前記変異型Ｆｃ領域が：（ａ）下記の置換：Ｓ２３９Ｄ、Ｓ２
９８Ａ、Ａ３３０Ｌ、Ｉ３３２Ｅ、Ｅ３３３Ａ，またはＫ３３４Ａのうちいずれか１つ、
２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ；または（ｂ）（１）Ｓ２９８ＡとＥ３３３ＡとＫ３
３４Ａ；（２）Ｓ２３９ＤとＩ３３２Ｅ；または（３）Ｓ２３９ＤとＡ３３０ＬとＩ３３
２Ｅの置換の組合せのうちのいずれかを含む、前記抗体を包含する。
本発明は特に、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合する抗体であって、エフェクター機能が増強
され、かつ／または活性型受容体および／または阻害型受容体に対する親和性が変更され
た変異型Ｆｃ領域を含み、前記変異型Ｆｃ領域が、
（１）２８８位でのアスパラギンによる置換、３３０位でのセリンによる置換、および
３９６位でのロイシンによる置換；
（２）３３４位でのグルタミン酸による置換、３５９位でのアスパラギンによる置換、
および３６６位でのセリンによる置換；
（３）３１６位でのアスパラギン酸による置換、３７８位でのバリンによる置換、およ
び３９９位でのグルタミン酸による置換；
（４）２４７位でのロイシンによる置換、および４２１位でのリシンによる置換；
（５）３９２位でのトレオニンによる置換、および３９６位でのロイシンによる置換；
（６）２２１位でのグルタミン酸による置換、２７０位でのグルタミン酸による置換、
３０８位でのアラニンによる置換、３１１位でのヒスチジンによる置換、３９６位でのロ
イシンによる置換、および４０２位でのアスパラギン酸による置換；
（７）４１９位でのヒスチジンによる置換、および３９６位でのロイシンによる置換；
（８）２４０位でのアラニンによる置換、および３９６位でのロイシンによる置換；
（９）４１０位でのヒスチジンによる置換、および３９６位でのロイシンによる置換；
（１０）２４３位でのロイシンによる置換、３０５位でのイソロイシンによる置換、３
７８位でのアスパラギン酸による置換、４０４位でのセリンによる置換、および３９６位
でのロイシンによる置換；
（１１）２５５位でのイソロイシンによる置換、および３９６位でのロイシンによる置
換；
（１２）３７０位でのグルタミン酸による置換、および３９６位でのロイシンによる置
換；
（１３）２７０位でのグルタミン酸による置換；または
（１４）前期（１）〜（１２）の置換の任意の組合せ
を含む、前記抗体を包含する。
特定の実施形態では、本発明は、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合する抗体であって、置換：
Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２ＰおよびＹ３００Ｌを含む変異型Ｆｃ領域を含む抗体を包含する。
さらなる特定の実施形態では、本発明は、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合する抗体であって、
置換：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌを含む変異型
Ｆｃ領域を含む抗体を包含する。なおさらなる特定の実施形態では、本発明は、Ｂ７−Ｈ
３と特異的に結合する抗体であって、置換：Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００Ｌ、Ｖ３
０５ＩおよびＰ３９６Ｌを含む変異型Ｆｃ領域を含む抗体を包含する。
さらなる特定の実施形態では、本発明は、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合する抗体であって
、３９６位でのロイシンによる置換、２７０位でのグルタミン酸による置換および２４３
位でのロイシンによる置換を含む変異型Ｆｃ領域を含む抗体を包含する。別の特定の実施
形態では、前記分子は本明細書に開示されているものなどの１以上のアミノ酸改変をさら
に含む。
本発明は特に、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合する抗体であって、エフェクター機能が増強
され、かつ／または活性型受容体および／または阻害型受容体に対する親和性が変更され
、下記の位置：１１９、１２５、１３２、１３３、１４１、１４２、１４７、１４９、１
６２、１６６、１８５、１９２、２０２、２０５、２１０、２１４、２１５、２１６、２
１７、２１８、２１９、２２１、２２２、２２３、２２４、２２５、２２７、２２９、２
３１、２３２、２３３、２３５、２４０、２４１、２４２、２４３、２４４、２４６、２
４７、２４８、２５０、２５１、２５２、２５３、２５４、２５５、２５６、２５８、２
６１、２６２、２６３、２６８、２６９、２７０、２７２、２７４、２７５、２７６、２
７９、２８０、２８１、２８２、２８４、２８７、２８８、２８９、２９０、２９１、２
９２、２９３、２９５、２９８、３０１、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３
０８、３０９、３１０、３１１、３１２、３１３、３１５、３１６、３１７、３１８、３
１９、３２０、３２３、３２６、３２７、３２８、３３０、３３３、３３４、３３５、３
３７、３３９、３４０、３４３、３４４、３４５、３４７、３４８、３５２、３５３、３
５４、３５５、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６５、３６６、３６７、３
６９、３７０、３７１、３７２、３７５、３７７、３７８、３７９、３８０、３８１、３
８２、３８３、３８４、３８５、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９２、３
９３、３９４、３９５、３９６、３９７、３９８、３９９、４００、４０１、４０２、４
０４、４０６、４０７、４０８、４０９、４１０、４１１、４１２、４１４、４１５、４
１６、４１７、４１９、４２０、４２１、４２２、４２３、４２４、４２７、４２８、４
３１、４３３、４３５、４３６、４３８、４４０、４４１、４４２、４４３、４４６また
は４４７の１以上にアミノ酸改変を有する変異型Ｆｃ領域を含む、前記抗体を包含する。
好ましくは、このような突然変異は、エフェクター細胞により媒介される機能が付与され
、場合により、本明細書に開示および例示され、当業者に公知の方法を用いて測定した際
にＦｃγＲに対する親和性が変更された分子をもたらす。
本発明は特に、Ｂ７−Ｈ３と特異的に結合する抗体であって、エフェクター機能が変更
され、かつ／または活性型受容体および／または阻害型受容体に対する親和性が変更され
、
（Ｉ）下記の位置：２３５、２４０、２４１、２４３、２４４、２４７、２６２、２６
３、２６９、２９８、３２８または３３０のうちの１以上でのアミノ酸改変、より好まし
くは、下記の改変：Ｖ２４０Ａ、Ｖ２４０Ｉ、Ｆ２４１Ｌ、Ｆ２４３Ｌ、Ｐ２４４Ｈ、Ｓ
２９８Ｎ、Ｌ３２８Ｉ、Ａ３３０Ｖのうちの１以上（このような抗体は、このような改変
のない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に比べて変更されたエフェクター機能を示す）；
（ＩＩ）下記の位置：２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８３、２
８５、２８６、２８９、２９２、２９３、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３
３１、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、４
１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９のうちの１以上で
のアミノ酸改変、より好ましくは、下記の改変：Ｄ２８０Ｈ、Ｄ２８０Ｑ、Ｄ２８０Ｙ、
Ｋ２９０Ｇ、Ｋ２９０Ｓ、Ｋ２９０Ｔ、Ｋ２９０Ｙ、Ｅ２９４Ｎ、Ｑ２９５Ｋ、Ｙ２９６
Ｐ、Ｓ２９８Ｄ、Ｓ２９８Ｎ、Ｓ２９８Ｐ、Ｓ２９８Ｖ、Ｙ３００Ｉ、Ｙ３００Ｌのうち
の１以上（このような抗体は、このような改変のない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に比べ
て変更されたエフェクター機能を示す）；
（ＩＩＩ）下記の位置：２５５、２５６、２５８、２６７、２６８、２６９、２７０、
２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、
２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３０５、３０７、
３０９、３１２、３２０、３２２、３２６、３２９、３３０、３３２、３３１、３３３、
３３４、３３５、３３７、３３８、３３９、３４０、３５９、３６０、３７３、３７６、
４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８、４３９のうちの１以上での
アミノ酸改変、より好ましくは、下記の改変：Ｔ２５６Ａ、Ｈ２６８Ｎ、Ｅ２７２Ｑ、Ｎ
２８６Ｄ、Ｎ２８６Ｑ、Ｎ２８６Ｓ、Ｋ２９０Ａ、Ｋ２９０Ｓ、Ｓ２９８Ａ、Ｒ３０１Ｍ
、Ｄ３１２Ａ、Ｋ３２０Ｅ、Ｋ３２０Ｍ、Ｋ３２０Ｑ、Ｋ３２０Ｒ、Ｋ３２２Ｅ、Ｋ３２
６Ａ、Ｋ３２６Ｄ、Ｋ３２６Ｅ、Ｋ３２６Ｎ、Ｋ３２６Ｓ、Ａ３３０Ｋ、Ａ３３９Ｔ、Ｅ
３３３Ａ、Ｋ３３４Ａ、Ｋ３３４Ｅ、Ｋ３３４Ｈ、Ｋ３３４Ｌ、Ｋ３３４Ｍ、Ｋ３３４Ｑ
、Ｋ３３４Ｖ、Ｔ３３５Ｋ、Ｔ３３５Ｑ、Ｔ３５９Ａ、Ｋ３６０Ａ、Ｅ４３０Ａのうちの
１以上（このような抗体は、このような改変のない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に比べて
変更されたエフェクター機能を示す）；
（ＩＶ）下記の位置：２５２、２５４、２６５、２６８、２６９、２７０、２７８、２
８９、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３００、３０１、３０３、３
２２、３２４、３２７、３２９、３３３、３３５、３３８、３４０、３７３、３７６、３
８２、３８８、３８９、４１４、４１６、４１９、４３４、４３５、４３７、４３８また
は４３９のうちの１以上でのアミノ酸改変（このような抗体は、このような改変のない野
生型Ｆｃ領域を有する抗体に比べて低減されたエフェクター機能を示す）；
（Ｖ）下記の位置：２８０、２８３、２８５、２８６、２９０、２９４、２９５、２９
８、３００、３０１、３０５、３０７、３０９、３１２、３１５、３３１、３３３、３３
４、３３７、３４０、３６０、３７８、３９８または４３０のうちの１以上でのアミノ酸
改変（このような抗体は、このような改変のない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に比べて増
強されたエフェクター機能を示す）；または
（ＶＩ）下記の位置：Ｒ２５５Ａ、Ｔ２５６Ａ、Ｅ２５８Ａ、Ｓ２６７Ａ、Ｈ２６８Ａ
、Ｈ２６８Ｎ、Ｅ２７２Ａ、Ｅ２７２Ｑ、Ｎ２７６Ａ、Ｄ２８０Ａ、Ｅ２８３Ａ、Ｈ２８
５Ａ、Ｎ２８６Ａ、Ｎ２８６Ｄ、Ｎ２８６Ｑ、Ｎ２８６Ｓ、Ｋ２９０Ａ、Ｋ２９０Ｓ、Ｒ
３０１Ｍ、Ｋ３２０Ｅ、Ｋ３２０Ｍ、Ｋ３２０Ｑ、Ｋ３２０Ｒ、Ｋ３２２Ｅ、Ｋ３２６Ａ
、Ｋ３２６Ｄ、Ｋ３２６Ｅ、Ｋ３２６Ｓ、Ａ３３０Ｋ、Ｐ３３１Ａ、Ｔ３３５Ｑ、Ｓ３３
７Ａ、Ｅ４３０Ａのうちの１以上でのアミノ酸改変（このような抗体は、このような改変
のない野生型Ｆｃ領域を有する抗体に比べて増強されたエフェクター機能を示す）
を有する変異型Ｆｃ領域を含む、前記抗体を包含する。
他の実施形態では、本発明は、Jefferis, B.J. et al. (2002) “Interaction Sites O
n Human IgG-Fc For FcgammaR: Current Models,” Immunol. Lett. 82:57-65; Presta,
L.G. et al. (2002) “Engineering Therapeutic Antibodies For Improved Function,”
Biochem. Soc. Trans. 30:487-90; Idusogie, E.E. et al. (2001) “Engineered Antib
odies With Increased Activity To Recruit Complement,” J. Immunol. 166:2571-75;
Shields, R.L. et al. (2001) “High Resolution Mapping Of The Binding Site On Hum
an IgG1 For Fc Gamma RI, Fc Gamma RII, Fc Gamma RIII, And FcRn And Design Of IgG
1 Variants With Improved Binding To The Fc gamma R,” J. Biol. Chem. 276:6591-66
04; Idusogie, E.E. et al. (2000) “Mapping Of The C1q Binding Site On Rituxan, A
Chimeric Antibody With A Human IgG Fc,” J. Immunol. 164:4178-84; Reddy, M.P. e
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fied IgG4 Monoclonal Antibody To Human CD4,” J. Immunol. 164:1925-1933; Xu, D.
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Recombinant human IgG Molecules Lacking Fcgamma Receptor I Binding And Monocyte
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iple Interactions Of IgG With Its Core Oligosaccharide Can Modulate Recognition
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ligosaccharide Chains,” J. Immunol. 157:4963-4969; Hutchins et al. (1995) “Imp
roved Biodistribution, Tumor Targeting, And Reduced Immunogenicity In Mice With
A Gamma 4 Variant Of Campath-1H,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 92:11980-84;
Jefferis, R. et al. (1995) “Recognition Sites On Human IgG For Fc Gamma Recepto
rs: The Role Of Glycosylation,” Immunol. Lett. 44:111-17; Lund, J. et al. (1995
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amma Receptors,” FASEB J. 9:115-19; Alegre, M.L. et al. (1994) “A Non-Activati
ng "Humanized" Anti-CD3 Monoclonal Antibody Retains Immunosuppressive Properties
In Vivo,” Transplantation 57:1537-1543; Lund et al. (1992) “Multiple Binding
Sites On The CH2 Domain Of IgG For Mouse Fc Gamma R11,” Mol. Immunol. 29:53-59;
Lund et al. (1991) “Human Fc Gamma RI And Fc Gamma RII Interact With Distinct
But Overlapping Sites On Human IgG,” J. Immunol. 147:2657-2662; Duncan, A.R. et
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ceptor On IgG,” Nature 332:563-564;米国特許第５，６２４，８２１号；同第５，８８
５，５７３号；同第６，１９４，５５１号；同第７，２７６，５８６号；および同第７，
３１７，０９１号；ならびに国際公開第００／４２０７２号および同第９９／５８５７２
号に開示されているものなどの当技術分野で公知の任意のＦｃ変異体の使用を包含する。
本発明は、下表１に挙げられる突然変異のいずれかからなる、またはいずれかを含む変
異型Ｆｃ領域を含む分子を包含する。
特定の実施形態では、このような抗Ｂ７−Ｈ３抗体の変異型Ｆｃ領域は、
（１）２４７位にロイシン、４２１位にリシンおよび２７０位にグルタミン酸；
（２）３９２位にトレオニン、３９６位にロイシン、２７０位にグルタミン酸、および
２４３位にロイシン；
（３）４１９位にヒスチジン、３９６位にロイシン、および２７０位にグルタミン酸；
（４）４１９位にヒスチジン、３９６位にロイシン、２７０位にグルタミン酸、および
２４３位にロイシン；
（５）２４０位にアラニン、３９６位にロイシン、および２７０位にグルタミン酸；
（６）２５５位にリシン、および３９６位にロイシン；
（７）２５５位にリシン、３９６位にロイシン、および２７０位にグルタミン酸；
（８）２５５位にリシン、３９６位にロイシン、２７０位にグルタミン酸、および３０
０位にリシン；
（９）２５５位にリシン、３９６位にロイシン、２７０位にグルタミン酸、および２９
２位にグリシン；
（１０）２５５位にリシン、３９６位にロイシン、２７０位にグルタミン酸、および２
４３位にロイシン；
（１１）３７０位にグルタミン酸、３９６位にロイシン、および２７０位にグルタミン
酸；
（１２）２７０位にグルタミン酸、３１６位にアスパラギン酸、および４１６位にグリ
シン；
（１３）２４３位にロイシン、２９２位にプロリン、３０５位にイソロイシン、および
３９６位にロイシン；
（１４）２４３位にロイシン、２７０位にグルタミン酸、３９２位にアスパラギン、お
よび３９６位にロイシン；
（１５）２４３位にロイシン、２５５位にロイシン、２７０位にグルタミン酸、および
３９位にロイシン；
（１６）２９７位にグルタミン；または
（１７）前記（１）〜（１６）の置換の任意の組合せ
を有する。
いくつかの実施形態では、本発明の分子はさらに１以上のグリコシル化部位を含み、従
って、１以上の炭水化物部分がこの分子と共有結合される。好ましくは、Ｆｃ領域に１以
上のグリコシル化部位および／または１以上の改変を有する本発明の分子は、親抗体に比
べて抗体媒介エフェクター機能の増強、例えば、ＡＤＣＣ活性の増強を付与するまたは示
す。いくつかの実施形態では、本発明はさらに、抗体の炭水化物部分と相互作用すること
が直接的または間接的に知られているアミノ酸、例えば、限定されるものではないが、２
４１、２４３、２４４、２４５、２４５、２４９、２５６、２５８、２６０、２６２、２
６４、２６５、２９６、２９９および３０１位のアミノ酸の１以上の改変を含む分子を含
む。抗体の炭水化物部分と直接的または間接的に相互作用するアミノ酸は当技術分野で公
知である（例えば、参照によりその全内容を本発明に組み入れるefferis et al., 1995 I
mmunology Letters, 44: 111-7参照）。
別の実施形態では、本発明は、１以上のグリコシル化部位をその分子の１以上の部位に
、好ましくはその分子の機能性、例えば、標的抗原またはＦｃγＲに対する結合活性を変
更することなく導入することによって改変された分子を包含する。グリコシル化部位は本
発明の分子の可変領域および／または定常領域に導入することができる。本明細書におい
て「グリコシル化部位」は、オリゴ糖（すなわち、互いに連結された２以上の単純な糖類
含む炭水化物）が特異的かつ共有結合的に結合する抗体中の任意の特定のアミノ酸配列を
含む。オリゴ糖側鎖は典型的にはＮ結合かＯ結合のいずれかを介して抗体の骨格に連結さ
れる。Ｎ結合グリコシル化は、オリゴ糖部分の、アスパラギン残基の側鎖への結合を意味
する。Ｏ結合グリコシル化は、オリゴ糖部分の、ヒドロキシアミノ酸、例えば、セリン、
トレオニンへの結合を意味する。本発明の分子は、Ｎ結合およびＯ結合グリコシル化部位
を含む１以上のグリコシル化部位を含み得る。当技術分野で公知のＮ結合またはＯ結合グ
リコシル化のためのグリコシル化部位はいずれも、本発明に従って使用可能である。本発
明の方法に従う有用なＮ結合グリコシル化部位の例はアミノ酸配列：Ａｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ
／Ｓｅｒであり、ここで、Ｘは任意のアミノ酸であってよく、Ｔｈｒ／Ｓｅｒはトレオニ
ンまたはセリンを示す。このような部位（単一または複数）は、本発明が属する当技術分
野で周知の方法を用いて本発明の分子に導入することができる（例えば、参照によりその
全内容を本発明に組み入れるIn vitro Mutagenesis, Recombinant DNA: A Short Course,
J. D. Watson, et al. W.H. Freeman and Company, New York, 1983, chapter 8, pp. 1
06-116参照）。グリコシル化部位を本発明の分子に導入するための方法の例は、所望のＡ
ｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ配列が得られるようにその分子のアミノ酸配列を改変するまた
は変異させることを含み得る。
いくつかの実施形態では、本発明は、グリコシル化部位を付加するまたは欠失させるこ
とによって本発明の分子の炭水化物含量を改変する方法を包含する。抗体の炭水化物含量
を改変する方法は当技術分野で周知であり、本発明の範囲内に包含される（例えば、米国
特許第６，２１８，１４９号；欧州特許第０３５９０９６Ｂ１号；米国特許出願公開第２
００２／００２８４８６号；国際公開第０３／０３５８３５号；米国特許出願公開第２０
０３／０１１５６１４号；米国特許第６，２１８，１４９号；同第６，４７２，５１１号
参照；これらは全て、参照によりその全内容を本明細書に組み入れる）。他の実施形態で
は、本発明は、その分子の１以上の内在炭水化物部分を欠失させることによって本発明の
分子の炭水化物含量を改変する方法を包含する。特定の実施形態では、本発明は、２９７
の隣の位置を改変することによって抗体のＦｃ領域のグリコシル化部位をシフトさせるこ
とを包含する。特定の実施形態では、本発明は、２９６位を改変して、２９６位はグリコ
シル化されるが２９７位はされないようにすることを包含する。
また、エフェクター機能も、Ｆｃ領域に１以上のシステイン残基を導入し、それにより
この領域内の鎖内ジスルフィド結合形成を可能とし、内部移行能の向上ならびに／または
補体媒介細胞死およびＡＤＣＣの増強を示し得るホモ二量体抗体の生成を得るなどの技術
によって改変可能である(Caron, P.C. et al. (1992) “Engineered Humanized Dimeric
Forms Of IgG Are More Effective Antibodies,” J. Exp. Med. 176:1191-1195; Shopes
, B. (1992) “A Genetically Engineered Human IgG Mutant With Enhanced Cytolytic
Activity,” J. Immunol. 148(9):2918-2922)。また、抗腫瘍活性が増強されたホモ二量
体抗体も、Wolff, E.A. et al. (1993) “Monoclonal Antibody Homodimers: Enhanced A
ntitumor Activity In Nude Mice,” Cancer Research 53:2560-2565に記載されているよ
うなヘテロ二官能性架橋剤を用いて作製可能である。あるいは、二重Ｆｃ領域を有し、そ
れにより増強された補体溶解能とＡＤＣＣ能を示し得る抗体を工作することができる(Ste
venson, G.T. et al. (1989) “A Chimeric Antibody With Dual Fc Regions (bisFabFc)
Prepared By Manipulations At The IgG Hinge,” Anti-Cancer Drug Design 3:219-230
)。
Ｅ．Ｂ７−Ｈ３ ＤＡＲＴ（商標）（二重親和性再標的化試薬）
上述のように、本発明はさらに、少なくとも２つのエピトープ結合部位を形成する少な
くとも２つのポリペプチド（そのうちの少なくとも１つがＢ７−Ｈ３と特異的に結合する
）を含む「ＤＡＲＴ（商標）」（二重親和性再標的化試薬）分子を包含する。
好ましい実施形態では、ＤＡＲＴ（商標）の第１のポリペプチド鎖は、
（ｉ）エピトープ（１）に特異的な第１の免疫グロブリン（ＶＬ１）の軽鎖可変ドメイ
ンの結合領域を含むドメイン（Ａ）；
（ｉｉ）エピトープ（２）に特異的な第２の免疫グロブリン（ＶＨ２）の重鎖可変ドメ
インの結合領域を含むドメイン（Ｂ）；および
（ｉｉｉ）ドメイン（Ｃ）
を含む。このようなＤＡＲＴ（商標）第２のポリペプチド鎖は、
（ｉ）エピトープ（２）に特異的な第２の免疫グロブリン（ＶＬ２）の軽鎖可変ドメイ
ンの結合領域を含むドメイン（Ｄ）；
（ｉｉ）エピトープ（１）に特異的な第１の免疫グロブリン（ＶＨ１）の重鎖可変ドメ
インの結合領域を含むドメイン（Ｅ）；および
（ｉｉｉ）ドメイン（Ｆ）
を含む。このＤＡＲＴ（商標）ドメイン（Ａ）と（Ｂ）は、互いに会合して１つのエピト
ープ結合部位を形成することはない。同様に、ＤＡＲＴ（商標）ドメイン（Ｄ）と（Ｅ）
も、互いに会合して１つのエピトープ結合部位を形成することはない。むしろ、ＤＡＲＴ
（商標）ドメイン（Ａ）と（Ｅ）は会合してエピトープ（１）と結合する結合部位を形成
し、前記ＤＡＲＴ（商標）ドメイン（Ｂ）と（Ｄ）は会合して前記エピトープ（２）と結
合する結合部位を形成する。ドメイン（Ｃ）と（Ｆ）は共有結合により会合される。
ＤＡＲＴ（商標）分子の各ポリペプチド鎖はＶＬドメインとＶＨドメインを含み、これ
らは共有結合され、その結果、これらのドメインは拘束され自己アセンブリができない。
これら２つのポリペプチド鎖の相互作用は２つのＶＬ−ＶＨ対合を作り出し、２つのエピ
トープ結合部位、すなわち二価分子を形成する。ＶＨまたはＶＬドメインはそのポリペプ
チド鎖内のいずれの位置にも拘束されず（すなわち、アミノ（Ｎ）末端またはカルボキシ
（Ｃ）末端に制限され）、しかも、互いに関連する位置に制限されるドメインでもない（
すなわち、ＶＬドメインはＶＨドメインのＮ末端にあってもよいしその逆でもよい）。唯
一の制限は、機能的ＤＡＲＴ（商標）を形成するために相補的ポリペプチド鎖が利用可能
であるということである。ＶＬドメインとＶＨドメインが同じ抗体に由来する場合、この
２つの相補的ポリペプチド鎖は同一であってもよい。例えば、結合ドメインがエピトープ
Ａに特異的な抗体に由来する場合（すなわち、結合ドメインがＶＬA−ＶＨAの相互作用か
ら形成される場合）、各ポリペプチドはＶＨAおよびＶＬAを含む。この抗体の２つのポリ
ペプチド鎖のホモ二量体形成は２つのＶＬA−ＶＨA結合部位の形成をもたらし、二価単一
特異性抗体となる。ＶＬドメインとＶＨドメインが異なる抗原に特異的な抗体に由来する
場合、機能的な二重特異性ＤＡＲＴ（商標）の形成には、２つの異なるポリペプチド鎖の
相互作用、すなわち、ヘテロ二量体の形成が必要である。例えば、二重特異性ＤＡＲＴ（
商標）の場合、１つのポリペプチド鎖がＶＬAおよびＶＬBを含み、前記の鎖のホモ二量体
形成の結果、結合が見られないか、または結合が予測できない２つのＶＬA−ＶＨB結合部
位が形成される。これに対し、例えば組換え発現系において、２つの異なるポリペプチド
鎖が相互作用を受けない場合、一方はＶＬAとＶＨBを含み、他方はＶＬBとＶＨAを含む、
２つの異なる結合部位、すなわちＶＬA−ＶＨAとＶＬB−ＶＨBが形成される。全てのＤＡ
ＲＴ（商標）ポリペプチド鎖対に関して、これらの２鎖のアライメントの誤りまたは結合
の誤りの可能性、すなわち、ＶＬ−ＶＬまたはＶＨ−ＶＨドメインの相互作用の可能性が
あるが、機能的ダイアボディーの精製は、当技術分野で公知の、または本明細書に例示さ
れる親和性に基づく任意の方法、例えばアフィニティークロマトグラフィーを用い、適切
に二量体化された結合部位の免疫特異性に基づいて容易に管理される。
ＤＡＲＴ（商標）の１以上のポリペプチド鎖は場合によりＦｃドメインまたはその一部
（例えば、ＣＨ２ドメインまたはＣＨ３ドメイン）を含む。Ｆｃドメインまたはその一部
は、限定されるものではないが、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥおよびＩｇＭを含む、
任意の免疫グロブリンアイソタイプまたはアロタイプに由来してもよい。好ましい実施形
態では、Ｆｃドメイン（またはその一部）はＩｇＧに由来する。特定の実施形態では、Ｉ
ｇＧアイソタイプはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４またはそのアロタイプ
である。一実施形態では、ダイアボディー分子はＦｃドメインを含み、Ｆｃドメインは、
任意の免疫グロブリンアイソタイプから独立に選択されるＣＨ２ドメインおよびＣＨ３ド
メインを含む（すなわち、ＦｃドメインはＩｇＧに由来するＣＨ２ドメインとＩｇＥに由
来するＣＨ３ドメイン、またはＩｇＧ１に由来するＣＨ２ドメインとＩｇＧ２に由来する
ＣＨ３ドメインなどを含む）。Ｆｃドメインは、そのポリペプチド鎖の他方のドメインま
たは一部に対していずれの位置に本発明のダイアボディー分子を含んでいてもよいポリペ
プチド鎖となるように操作することができる（例えば、Ｆｃドメインまたはその一部は前
記鎖のポリペプチドのＶＬドメインおよびＶＨドメイン双方のＣ末端にあってもよく、Ｖ
ＬドメインおよびＶＨドメイン双方のＮ末端にあってもよく、または一方のドメインのＮ
末端でもう一方のドメインのＣ末端（すなわち、前記ポリペプチド鎖の２つのドメインの
間）にあってもよい）。
ＤＡＲＴ（商標）分子のポリペプチド鎖のＦｃドメインは優先的に二量体を形成し、免
疫グロブリン様特性、例えばＦｃ−ＦｃγＲ相互作用を示すＤＡＲＴ（商標）分子の形成
をもたらす。ダイアボディーを含むＦｃは、例えばそれぞれがＶＨドメインとＶＬドメイ
ンとＦｃドメインを含む２つのポリペプチド鎖からなる二量体であり得る。前記ポリペプ
チド鎖の二量体形成の結果、非改変型の二価抗体とは異なる構造ではあるがＦｃドメイン
を含む二価ＤＡＲＴ（商標）が生じる。このようなＤＡＲＴ（商標）分子は野生型免疫グ
ロブリンに対して変更された表現型、例えば変更された血清半減期、結合特性などを示す
。他の実施形態では、Ｆｃドメインを含むＤＡＲＴ（商標）分子は四量体であり得る。こ
のような四量体は、２本の「より重い」ポリペプチド鎖、すなわち、ＶＬとＶＨとＦｃド
メインを含むポリペプチド鎖と、２本の「より軽い」ポリペプチド鎖、すなわち、ＶＬと
ＶＨを含むポリペプチド鎖とを含む。このより軽い鎖とより重い鎖は相互作用して単量体
を形成し、これらの単量体はそれらの対合していないＦｃドメインを介して相互作用して
Ｉｇ様分子を形成する。このようなＩｇ様ＤＡＲＴ（商標）は四価であり、単一特異性、
二重特異性または四重特異性であり得る。
上記のような四重特異性ダイアボディー分子の形成には、４つの異なるポリペプチド鎖
の相互作用が必要である。このような相互作用は、潜在的な鎖の誤対合の多くの変異体の
ために、単細胞組換え生産系の効率では達成が困難である。誤対合の確率の上昇に対する
１つの対策が、所望のポリペプチド鎖対に「ノブと穴(knobs-into-holes）」型突然変異
を操作により作出することである。このような突然変異はホモ二量体形成よりもヘテロ二
量体形成に有利である。例えば、Ｆｃ−Ｆｃ相互作用に関しては、アミノ酸置換（好まし
くは、嵩高の側基を含むアミノ酸、例えばトリプトファンで置換することによる「ノブ」
の形成）をＣＨ２またはＣＨ３ドメインに導入することができ、その結果、立体障害が同
様の突然変異を持つドメインとの相互作用を回避し、この突然変異ドメインに相補的また
は適合する突然変異、すなわち、「穴」（例えば、グリシンによる置換）が操作により作
出されたドメインとの対合を課す。このような突然変異セットはダイアボディー分子を含
むいずれのポリペプチド対にも操作により作出するこができ、さらに前記対のポリペプチ
ド鎖のいずれの部分にも操作により作出することができる。ホモ二量体形成よりもヘテロ
二量体形成に有利なようにするタンパク質操作法は、当技術分野で、特に免疫グロブリン
様分子の操作に関してよく知られ、本明細書に包含される(参照によりその全内容を本明
細書に組み入れるRidgway et al. (1996) “'Knobs-Into-Holes' Engineering Of Antibo
dy CH3 Domains For Heavy Chain Heterodimerization,” Protein Engr. 9:617-621, At
well et al. (1997) “Stable Heterodimers From Remodeling The Domain Interface Of
A Homodimer Using A Phage Display Library,” J. Mol. Biol. 270: 26-35,およびXie
et al. (2005) “A New Format Of Bispecific Antibody: Highly Efficient Heterodim
erization, Expression And Tumor Cell Lysis,” J. Immunol. Methods 296:95-101参照
)。
本発明はまた、変異型Ｆｃまたは変異型ヒンジ−Ｆｃドメイン（またはその一部）を含
むダイアボディー分子を包含し、この変異型Ｆｃドメインは対応する野生型Ｆｃドメイン
またはヒンジ−Ｆｃドメイン（またはその一部）に対して少なくとも１つのアミノ酸改変
（例えば、置換、挿入、欠失）を含む。変異型Ｆｃドメインまたはヒンジ−Ｆｃドメイン
（またはその一部）を含む分子（例えば抗体）は通常、野生型Ｆｃドメインｓまたはヒン
ジ−Ｆｃドメインまたはその一部を含む分子に対して変更された表現型を示す。変異型表
現型はＮＫ依存性またはマクロファージ依存性アッセイにおいてアッセイされるような血
清半減期の変更、安定性の変更、細胞酵素に対する感受性の変更またはエフェクター機能
の変更として発現され得る。エフェクター機能の変更として確認されるＦｃドメイン改変
は上記に開示されている。
本発明はまた、ヒンジドメインを含む分子を包含する。ヒンジドメインは、ＩｇＡ、Ｉ
ｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＥおよびＩｇＭを含む免疫グロブリンアイソタイプまたはアロタイプ
に由来する。好ましい実施形態では、ヒンジドメインはＩｇＧに由来し、ＩｇＧアイソタ
イプはＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３もしくはＩｇＧ４、またはそのアロタイプである。
前記ヒンジドメインは、ダイアボディー分子をＦｃドメインとともに含み、その結果、ダ
イアボディー分子がヒンジ−Ｆｃドメインを含むようになるポリペプチド鎖とするように
操作することができる。特定の実施形態では、ヒンジおよびＦｃドメインは当技術分野で
公知の、または本明細書で例示される免疫グロブリンアイソタイプから独立に選択される
。他の実施形態では、ヒンジおよびＦｃドメインは、そのポリペプチド鎖の少なくとも１
つの他のドメイン、例えばＶＬドメインによって分離されている。ヒンジドメイン、また
は場合によりヒンジ−Ｆｃドメインは、前記ポリペプチド鎖の他のドメインまたは一部に
対していずれの位置にある本発明のポリペプチドも操作により作出することができる。特
定の実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジドメインを含みヒンジドメインはポ
リペプチド鎖のＣ末端にあり、前記ポリペプチド鎖はＦｃドメインを含まない。さらに他
の実施形態では、本発明のポリペプチド鎖はヒンジ−Ｆｃドメインを含み、ヒンジ−Ｆｃ
ドメインはポリペプチド鎖のＣ末端にある。さらなる実施形態では、本発明のポリペプチ
ド鎖はヒンジ−Ｆｃドメインを含み、ヒンジ−Ｆｃドメインはポリペプチド鎖のＮ末端に
ある。
ＤＡＲＴ（商標）のポリペプチド鎖の各ドメイン、すなわち、ＶＬ、ＶＨおよびＦｃド
メインはペプチドリンカーによって分離されていてもよい。このペプチドリンカーは０、
１、２、３、４、５、６、７、８または９アミノ酸長であり得る。特定の実施形態では、
アミノ酸リンカー配列は、核酸配列ggaggcggat ccggaggcgg aggc（配列番号５３）よりコ
ードされるGGGSGGGG（配列番号５２）である。ＤＡＲＴ（商標）分子のポリペプチド鎖は
、ＤＡＲＴ（商標）の第２のポリペプチド鎖上の対応システイン残基と相互作用して鎖内
ジスルフィド結合を形成する少なくとも１つのシステイン残基を含むように操作すること
ができる。このような分子内ジスルフィド結合は、ＤＡＲＴ（商標）分子を安定化し、そ
れにより組換え系での発現および回収を改善し、安定かつ一貫した製剤を得、この単離お
よび／または精製された産物のin vivoでの安定性を改善する働きをする。システイン残
基は単一のアミノ酸として、またはより大きなアミノ酸配列部分、例えばヒンジドメイン
として、ポリペプチド鎖のいずれの部分に導入してもよい。特定の実施形態では、システ
イン残基はポリペプチド鎖のＣ末端に存在するように操作することができる。いくつかの
実施形態では、システイン残基はポリペプチド鎖のアミノ酸配列LGGC内に導入される。特
定の実施形態では、本発明のＤＡＲＴ（商標）分子を含むポリペプチド鎖のＣ末端はアミ
ノ酸配列LGGC（配列番号５４）を含む。別の実施形態では、システイン残基は、ポリペプ
チドのヒンジドメイン、例えばEPKSCDKTHTCPP（配列番号５５）またはESKYGPPCPS（配列
番号５６）を含むアミノ酸配列内に導入される。特定の実施形態では、本発明のＤＡＲＴ
（商標）分子のポリペプチド鎖のＣ末端は、ＩｇＧヒンジドメインのアミノ酸配列、例え
ば配列番号５５または配列番号５６を含む。別の実施形態では、本発明のＤＡＲＴ（商標
）分子のポリペプチド鎖のＣ末端は、アミノ酸配列VEPKSC（配列番号５７）を含み、これ
はヌクレオチド配列gttgagccca aatcttgt（配列番号５８）によりコードされ得る。他の
実施形態では、システイン残基はポリペプチド鎖のアミノ酸配列LGGCFNRGEC（配列番号５
９）内に導入され、これはヌクレオチド配列ctgggaggct gcttcaacag gggagagtgt（配列番
号６０）によりコードされ得る。特定の実施形態では、本発明のＤＡＲＴ（商標）を含む
ポリペプチド鎖のＣ末端は、アミノ酸配列LGGCFNRGEC（配列番号５９）を含む。さらに他
の実施形態では、システイン残基はポリペプチド鎖のアミノ酸配列FNRGEC（配列番号６１
）内に導入され、これはヌクレオチド配列ttcaacaggg gagagtgt（配列番号６２）のより
コードされ得る。特定の実施形態では、本発明のＤＡＲＴ（商標）を含むポリペプチド鎖
のＣ末端はアミノ酸配列FNRGEC（配列番号６１）を含む。
特定の実施形態では、ダイアボディー分子は、それぞれがアミノ酸配列LGGC（配列番号
５４）を含み、LGGC（配列番号５４）配列内のシステイン残基間でジスルフィド結合のに
より共有結合されている少なくとも２つのポリペプチド鎖を含む。別の特定の実施形態で
は、ダイアボディー分子は少なくとも２つのポリペプチド鎖を含み、その一方は配列FNRG
EC（配列番号６１）を含み、他方はヒンジドメイン（少なくとも１つのシステイン残基を
含む）を含み、前記の少なくとも２つのポリペプチド鎖は、FNRGEC（配列番号６１）のシ
ステイン残基とヒンジドメインのシステイン残基の間でジスルフィド結合で共有結合され
ている。特定の態様では、ヒンジドメインに存在するジスルフィド結合を担うシステイン
残基はＣｙｓ−１２８（Ｋａｂａｔ ＥＵに従って符番；非改変型の完全ＩｇＧ重鎖のヒ
ンジドメインに位置する）であり、配列番号２３における対応システイン残基はＣｙｓ−
２１４（Ｋａｂａｔ ＥＵに従って符番；非改変型の完全ＩｇＧ軽鎖のＣ末端に位置する
）である(Elkabetz et al. (2005) “Cysteines In CH1 Underlie Retention Of Unassem
bled Ig Heavy Chains,” J. Biol. Chem. 280:14402-14412)。さらに他の実施形態では
、少なくとも１つのシステイン残基が、アミノ酸鎖のＮ末端に存在するように操作される
。さらに他の実施形態では、少なくとも１つのシステイン残基が、ダイアボディー分子の
ポリペプチド鎖のリンカー部分に存在するように操作される。さらなる実施形態では、Ｖ
ＨまたはＶＬドメインは、親ＶＨまたはＶＬドメインに対して少なくとも１つのアミノ酸
改変を含むように操作され、その結果、前記アミノ酸改変は親アミノ酸の、システインで
の置換を含む。
この実施形態のさらに別の態様では、第１のポリペプチド鎖のドメイン（Ｃ）は、アミ
ノ酸配列VEPKSC（配列番号５７）を含み、このアミノ酸配列はヒトＩｇＧのヒンジドメイ
ンに由良し、ヌクレオチド配列gttgagccca aatcttgt（配列番号５８）によりコードされ
得る。この実施形態の別の態様では、第２のポリペプチド鎖のドメイン（Ｆ）はアミノ酸
配列VEPKSC（配列番号５７）を含む。この実施形態のある特定の態様では、第１のポリペ
プチド鎖のドメイン（Ｃ）は、ヒトκ軽鎖のＣ末端の６つのアミノ酸FNRGEC（配列番号６
１）を含み；第２のポリペプチド鎖のドメイン（Ｆ）は、アミノ酸配列VEPKSC（配列番号
５７）またはヒンジドメインを含む。この実施形態の別の態様では、第２のポリペプチド
鎖のドメイン（Ｆ）は、ヒトκ軽鎖のＣ末端の６つのアミノ酸FNRGEC（配列番号６１）を
含み；第１のポリペプチド鎖のドメイン（Ｃ）は、アミノ酸配列VEPKSC（配列番号５７）
またはヒンジドメインを含む。
以上の点から分かるように、二重特異性ＤＡＲＴ（商標）の個々のポリペプチドは、２
種類のホモ二量体と１種類のヘテロ二量体を形成し得る。本発明の一実施形態では、荷電
ポリペプチドは一方の、またはより好ましくは両方のＤＡＲＴ（商標）ポリペプチドのＣ
末端に付加することができる。二重特異性ＤＡＲＴ（商標）の個々のポリペプチドに対し
て反対の電荷を有する荷電ポリペプチドを選択することにより、このような荷電ポリペプ
チドの包摂はヘテロ二量体の形成に有利であり、ホモ二量体の形成を減らす。好ましくは
、正電荷を有するポリペプチドは実質的含量のアルギニン、グルタミン、ヒスチジンおよ
び／またはリシン（またはこのようなアミノ酸の混合物）を含み、負電荷を有するポリペ
プチドは、実質的含量のアスパラギン酸またはグルタミン酸（またはこのようなアミノ酸
の混合物）を含む。実質的含量のリシンを含む正電荷ポリペプチドおよび実質的含量のグ
ルタミン酸を含む負電荷ポリペプチドが特に好ましい。このような反対の電荷を有するポ
リペプチド間の静電引力を最大にするには、らせんコンフォメーションを自発的に採り得
るポリペプチドを使用するのが好ましい。
よって、好ましい実施形態では、正電荷を有する「Ｅ−コイル」が、二重特異性ＤＡＲ
Ｔ（商標）の形成に用いられるポリペプチドの一方に付加され、負電荷を有する「Ｋ−コ
イル」が、ＤＡＲＴ（商標）のポリペプチドのもう一方に付加される。特に好ましいＥ−
コイルは配列：(EVAALEK)4［すなわち、（配列番号６３）EVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEK
］を有する。特に好ましいＫ−コイルは配列：(KVAALKE)4［すなわち、（配列番号６４）
KVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE］を有する。
このようなＥ−コイルを有する好ましいＤＡＲＴ（商標）ポリペプチドは一般配列：［
ＶＬドメイン］-［GGGSGGGG］-［ＶＨドメイン］-［(EVAALEK)4］−GGGNSを有し、ここで
、ＶＬはＤＡＲＴ（商標）の軽鎖可変Ｉｇドメインであり、GGGSGGGGは配列番号５２であ
り、ＶＨはＤＡＲＴ（商標）の重鎖可変Ｉｇドメインであり、(EVAALEK)4は配列番号６３
であり、GGGNSは配列番号６５である。このようなＫ−コイルを有する好ましいＤＡＲＴ
（商標）ポリペプチドは、一般配列：［ＶＬドメイン］-［GGGSGGGG］-［ＶＨドメイン］
-［(KVAALKE)4］−GGGNSを有し、ここで、ＶＬはＤＡＲＴ（商標）の軽鎖可変Ｉｇドメイ
ンであり、GGGSGGGGは配列番号５２であり、ＶＨはＤＡＲＴ（商標）の重鎖可変Ｉｇドメ
インであり、(KVAALKE)4は配列番号６４であり、GGGNSは配列番号６５である。
さらなる実施形態では、Ｆｃ領域はＥ−コイルまたはＫ−コイルＤＡＲＴ（商標）のＥ
コイルおよび／またはＫコイルと連結することができる。さらに、Ｆｃ含有ＤＡＲＴ（商
標）のＦｃ領域とＤＡＲＴ（商標）ＶＨドメインの間の分離は、このようなドメインの分
離配置が不十分であるとこのようなドメインとそれらの結合リガンドの間の相互作用が減
少するか、あるいはそうでなければＤＡＲＴ（商標）のアセンブリが妨害される場合に望
ましい。いずれのアミノ酸配列のセパレーターも使用可能であるが、Ｆｃドメインを可変
ドメインから遠ざけて最大限延ばし、突き出るようにαヘリックスコイルを形成するセパ
レーターを使用するのが好ましい。反対の電荷を有する上記コイルポリペプチドはさらに
ヘテロ二量体形成を促進する働きをするので、このような分子は特に好ましいセパレータ
ーである。このようなコイル含有Ｆｃ−ＤＡＲＴ（商標）分子は、血清半減期の改善およ
びエフェクター機能の動員を含む、Ｆｃ−ＤＡＲＴ（商標）と同様の利益をもたらす。上
記Ｅ−コイルおよびＫ−コイルポリペプチドはこの目的に特に好ましい。よって、好まし
い実施形態では、Ｅ−コイルＦｃ含有ＤＡＲＴ（商標）は一般配列：Ｄ２３４（Ｋａｂａ
ｔナンバリング）で始まる［ＶＬドメイン］-［GGGSGGGG］-［ＶＨドメイン］-［(EVAALE
K)4］−GGG−Ｆｃドメインを有し、ここで、ＶＬはＤＡＲＴ（商標）の軽鎖可変Ｉｇドメ
インであり、GGGSGGGGは配列番号５２であり、ＶＨはＤＡＲＴ（商標）の重鎖可変Ｉｇド
メインであり、(EVAALEK)4は配列番号６３である。同様に、好ましい実施形態では、Ｋ−
コイルＦｃ含有ＤＡＲＴ（商標）は一般配列：Ｄ２３４（Ｋａｂａｔナンバリング）で始
まる［ＶＬドメイン］-［GGGSGGGG］-［ＶＨドメイン］-［(KVAALKE)4］−GGG−Ｆｃドメ
インを有し、ここで、ＶＬはＤＡＲＴ（商標）の軽鎖可変Ｉｇドメインであり、GGGSGGGG
は配列番号５１であり、ＶＨはＤＡＲＴ（商標）の重鎖可変Ｉｇドメインであり、(KVAAL
KE)4は配列番号６４である。
上記で示したように、コイル含有ＤＡＲＴ（商標）分子またはコイル含有Ｆｃ含有ＤＡ
ＲＴ（商標）分子はこのようなコイルセパレーターを１個だけ分でもよいし、または２以
上のこのようなセパレーターを含んでもよく、例えば、好ましくは反対の電荷を有する２
個のセパレーターであって、そのうち１つはＤＡＲＴ（商標）のポリペプチドの各ＶＨド
メインと連結されている。Ｆｃ領域をこのようなセパレーター分子を連結することにより
、鎖交換によるＦｃ−ＤＡＲＴ（商標）分子の二価型、四価型などを作出する能力が増強
される。従って、ＦｃドメインがＤＡＲＴ（商標）ＶＨドメインの一方に連結されるか両
方に連結されるかによって単量体または二量体を形成するＦｃ−ＤＡＲＴ（商標）分子が
生産できる。
１．Ｂ７−Ｈ３ ＤＡＲＴ（商標）分子の多用途性
本発明の二重特異性ＤＡＲＴ（商標）は２つの別個の、異なるエピトープを同時に結合
させることができる。特定の実施形態では、これらのエピトープは同じ抗原に由来する。
他の実施形態では、これらのエピトープは異なる抗原に由来する。好ましい実施形態では
、少なくとも１つのエピトープ結合部位が、免疫エフェクター細胞上で発現される決定基
（例えば、Ｔリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞またはその他の単核細胞上で発現
されるＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ３２、ＣＤ６４、Ｔ細胞受容体など）に特異的である。一
実施形態では、ＤＡＲＴ（商標）分子は前記エフェクター細胞決定基と結合し、また、前
記エフェクター細胞を活性化する。これに関して、本発明のＤＡＲＴ（商標）分子は、そ
れらがＦｃドメインをさらに含むかどうかに関わらず、Ｉｇ様機能を示し得る（例えば、
当技術分野で公知の、または本明細書で例示される任意のエフェクター機能アッセイ（例
えば、ＡＤＣＣアッセイ）でアッセイされる）。特定の実施形態では、本発明の二重特異
性ＤＡＲＴ（商標）は腫瘍細胞上の癌抗原とエフェクター細胞決定基の双方に結合すると
ともに該細胞を活性化する。別の実施形態では、本発明の二重特異性ＤＡＲＴ（商標）ま
たはＤＡＲＴ（商標）分子は、上記のように、同じ細胞上の活性化型受容体と阻害型受容
体と同時に結合し（例えば、ＣＤ３２ＡとＣＤ３２Ｂ、ＢＣＲとＣＤ３２Ｂ、またはＩｇ
ＥＲＩとＣＤ３２Ｂの双方に結合し）、従って連結することによって標的細胞、例えばエ
フェクター細胞の活性化を阻害し得る（背景の節を参照）。この実施形態のさらなる態様
において、二重特異性ＤＡＲＴ（商標）は、ウイルス（例えば、ＲＳＶエピトープ；Ｅ１
６およびＥ５３などのＷＮＶエピトープ）上の２つの中和型エピトープに同時に結合する
ことにより、抗ウイルス特性を示し得る。
２．万能Ｂ７−Ｈ３ ＤＡＲＴ（商標）分子
一実施形態では、本発明の二重特異性ＤＡＲＴ（商標）分子は、Ｂ７−Ｈ３と特異的に
結合する１つのエピトープ結合ドメインと、ハプテン、例えばフルオレセインイソチオシ
アネート（フルオロイソチオシアネートまたはＦＩＴＣとしても知られる）と特異的に結
合する第２のエピトープ結合ドメインとを含むように構築することができる。このような
ＤＡＲＴ（商標）は、Ｂ７−Ｈ３と、フルオレセインと結合した結合相手と相互作用する
分子との同時ライゲーションを行うことができるユニバーサルアダプター（「ＵＤＡＲＴ
（商標）」）として機能する。例えば、ＤＡＲＴ（商標）のＦＩＴＣ反応性アームを用い
て、細胞間クラスタリング、細胞間動員、細胞不含動員、多重標的などに関与する非Ｂ７
−Ｈ３標的に結合されるＦＩＴＣ標識抗体と結合させることができる。抗フルオレセイン
ＭＡｂのキメラマウスＦｖ／ヒトＦｃ型である４４２０をＦＩＴＣ特異的ＣＤＲドメイン
の供給源として用いることができる(Gruber, M. et al. (1994) “Efficient Tumor Cell
Lysis Mediated By A Bispecific Single Chain Antibody Expressed In Escherichia c
oli,” J. Immunol. 152(11): 5368-5374)。
３．細胞標的特異的Ｂ７−Ｈ３ＤＡＲＴ（商標）分子
本発明の二重特異性ＤＡＲＴ（商標）分子は標的特異的細胞種に独特な機会を与える。
例えば、二重特異性ＤＡＲＴ（商標）またはＤＡＲＴ（商標）分子は、標的細胞または組
織種に独特な抗原セットを認識するエピトープ結合部位の組合せを含むように操作するこ
とができる。さらに、各抗原のいずれかまたは双方が他の組織および／または細胞種にお
いてそれぞれかなり一般的である場合には、低親和性結合ドメインを用いてＤＡＲＴ（商
標）またはＤＡＲＴ（商標）分子を構築することができる。このような低親和性結合ドメ
インは、各エピトープまたは抗原と、治療目的に十分な結合力では結合することができな
い。しかしながら、双方のエピトープまたは抗原が単一の標的細胞または組織に存在する
場合には、該細胞または組織に対するＤＡＲＴ（商標）またはＤＡＲＴ（商標）分子の結
合力は、該抗原のうち１つだけを発現する細胞または組織よりも増大し、その結果、前記
細胞または組織は本発明によって効果的に標的化され得る。このような二重特異性分子は
、前記抗原の双方を発現する細胞上では、単一特異性ＤＡＲＴ（商標）またはその抗原の
１つだけに特異性を有する抗体に比べて、その標的抗原の一方または双方との結合の増強
を示し得る。
例えば、本発明のＢ７−Ｈ３特異的ＤＡＲＴ（商標）は、ナチュラルキラーグループ２
Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）受容体の結合リガンドであるドメインを含むように構築することができ
る。ＮＫＧ２Ｄ受容体は全てのヒト（および他の哺乳類）ナチュラルキラー細胞(Bauer,
S. et al. (1999) “Activation Of NK Cells And T Cells By NKG2D, A Receptor For S
tress-Inducible MICA,” Science 285(5428):727-729; Jamieson, A.M. et al. (2002)
“The Role Of The NKG2D Immunoreceptor In Immune Cell Activation And Natural Kil
ling,” Immunity 17(1):19-29)ならびに全てのＣＤ８＋ Ｔ細胞(Groh, V. et al. (200
1) “Costimulation Of CD8αβ T Cells By NKG2D Via Engagement By MIC Induced On
Virus-Infected Cells,” Nat. Immunol. 2(3):255-260; Jamieson, A.M. et al. (2002)
“The Role Of The NKG2D Immunoreceptor In Immune Cell Activation And Natural Ki
lling,” Immunity 17(1):19-29)で発現される。このような結合リガンド、特に、正常な
細胞上では発現されないものとしては、組織結合性６０（Ｈ６０）分子、レチノイン酸初
期誘導性遺伝子(retinoic acid early inducible gene)−１（ＲＡＥ−１）の産物、およ
びマウスＵＬ１６−結合タンパク質様転写物(murine UL16-binding proteinlike transcr
ipt)１（ＭＵＬＴ１）(Raulet D.H. (2003) “Roles Of The NKG2D Immunoreceptor And
Its Ligands,” Nature Rev. Immunol. 3:781-790; Coudert, J.D. et al. (2005) “Alt
ered NKG2D Function In NK Cells Induced By Chronic Exposure To Altered NKG2D Lig
and-Expressing Tumor Cells,” Blood 106:1711-1717)が含まれる。ヒトＮＫＧ２Ｄと反
応性のあるさらなるリガンドとしては、多型ＭＨＣクラスＩ鎖関連分子ＭＩＣＡおよびＭ
ＩＣＢが含まれる(Diefenbach, A. et al. (1999) “Natural Killer Cells: Stress Out
, Turn On, Tune In,” Curr. Biol. 9(22):R851-R8533; Bauer, S. et al. (1999) “Ac
tivation Of NK Cells And T Cells By NKG2D, A Receptor For Stress-Inducible MICA,
” Science 285(5428):727-729; Stephens, H.A. (2001) “MICA And MICB Genes: Can T
he Enigma Of Their Polymorphism Be Resolved?” Trends Immunol. 22:378-385)。ＭＩ
ＣＡの配列は配列番号６６である。
MGLGPVFLLL AGIFPFAPPG AAAEPHSLRY NLTVLSWDGS VQSGFLTEVH
LDGQPFLRCD RQKCRAKPQG QWAEDVLGNK TWDRETRDLT GNGKDLRMTL
AHIKDQKEGL HSLQEIRVCE IHEDNSTRSS QHFYYDGELF LSQNLETKEW
TMPQSSRAQT LAMNVRNFLK EDAMKTKTHY HAMHADCLQE LRRYLKSGVV
LRRTVPPMVN VTRSEASEGN ITVTCRASGF YPWNITLSWR QDGVSLSHDT
QQWGDVLPDG NGTYQTWVAT RICQGEEQRF TCYMEHSGNH STHPVPSGKV
LVLQSHWQTF HVSAVAAAAI FVIIIFYVRC CKKKTSAAEG PELVSLQVLD
QHPVGTSDHR DATQLGFQPL MSDLGSTGST EGA
ＭＩＣＢの配列は配列番号６７である。
PHSLRYNLMV LSQDGSVQSG FLAEGHLDGQ PFLRYDRQKR RAKPQGQWAE
DVLGAKTWDT ETEDLTENGQ DLRRTLTHIK DQKGGLHSLQ EIRVCEIHED
SSTRGSRHFY YDGELFLSQN LETQESTVPQ SSRAQTLAMN VTNFWKEDAM
KTKTHYRAMQ ADCLQKLQLP PMVNVICSEV SEGNITVTCR ASSFYPRNIT
LTWRQDGVSL SHNTQQWGDV LPDGNGTYQT WVATRIRQGE EQRFTCYMEH
SGNHGTHPVP SGKALVLQSQ RTDFPYVSAA MPCFVIIIIL CVPCCKKKTS
AAEGP
あるいは、本発明のＤＡＲＴ（商標）分子は、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）またはＣＤ
３（Ｔ細胞共受容体）の結合リガンドであるドメインを含むように構築することができる
。ＴＣＲはＣＤ４＋またはＣＤ８＋ Ｔ細胞により本来発現され、このような細胞に、抗
原提示細胞のクラスＩまたはクラスＩＩ ＭＨＣタンパク質により結合され、提示される
抗原ペプチドを認識させる。ＴＣＲによるｐＭＨＣ（ペプチド−ＭＨＣ）複合体の認識は
、サイトカインの産生および抗原提示細胞の溶解をもたらす細胞性免疫応答の伝達を誘導
する（例えば、Armstrong, K.M. et al. (2008) “Conformational Changes And Flexibi
lity In T-Cell Receptor Recognition Of Peptide-MHC Complexes,” Biochem. J. 415(
Pt 2):183-196; Willemsen, R. (2008) “Selection Of Human Antibody Fragments Dire
cted Against Tumor T-Cell Epitopes For Adoptive T-Cell Therapy,” Cytometry A. 7
3(11):1093-1099; Beier, K.C. et al. (2007) “Master Switches Of T-Cell Activatio
n And Differentiation,” Eur. Respir. J. 29:804-812; Mallone, R. et al. (2005)
“Targeting T Lymphocytes For Immune Monitoring And Intervention In Autoimmune D
iabetes,” Am. J. Ther. 12(6):534-550参照）。ＣＤ３はＴＣＲと結合する受容体であ
る(Thomas, S. et al. (2010) “Molecular Immunology Lessons From Therapeutic T-Ce
ll Receptor Gene Transfer,” Immunology 129(2):170-177; Guy, C.S. et al. (2009)
“Organization Of Proximal Signal Initiation At The TCR:CD3 Complex,” Immunol.
Rev. 232(1):7-21; St. Clair, E.W. (Epub 2009 Oct 12) “Novel Targeted Therapies
For Autoimmunity,” Curr. Opin. Immunol. 21(6):648-657; Baeuerle, P.A. et al. (E
pub 2009 Jun 9) “Bispecific T-Cell Engaging Antibodies For Cancer Therapy,” Ca
ncer Res. 69(12):4941-4944; Smith-Garvin, J.E. et al. (2009) “T Cell Activation
,” Annu. Rev. Immunol. 27:591-619; Renders, L. et al. (2003) “Engineered CD3 A
ntibodies For Immunosuppression,” Clin. Exp. Immunol. 133(3):307-309)。
例えば標的細胞の表面に存在する受容体と結合し得る少なくとも１つのエピトープ結合
ドメインをさらに含むようにこのようなＤＡＲＴ（商標）分子を構築することにより、こ
のようなＤＡＲＴ（商標）分子は、標的細胞と結合し、それにより、標的細胞にナチュラ
ルキラーグループ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）受容体またはＴＣＲの結合リガンド（どちらも標的
細胞が結合したＤＡＲＴ（商標）上に存在する）を提示させることができるＤＡＲＴ（商
標）分子となる（例えば、Germain, C. et al. (2008) “Redirecting NK Cells Mediate
d Tumor Cell Lysis By A New Recombinant Bifunctional Protein,” Prot. Engineer.
Design Selection 21(11):665-672参照）。このようなＤＡＲＴ（商標）はいかなる所望
の標的細胞をも、ＮＫ細胞により媒介される細胞溶解またはＴ細胞媒介性細胞傷害性の標
的である細胞へ再指向するために使用することができる。一実施形態では、標的細胞の表
面に存在する受容体に結合することができるＤＡＲＴ（商標）のエピトープ結合ドメイン
は、腫瘍関連抗原と結合して、このような癌細胞からＮＫ細胞により媒介される細胞溶解
またはＴ細胞媒介性細胞傷害性の基質へ再指向するエピトープである。乳癌抗原、卵巣癌
抗原、前立腺癌抗原、子宮頚癌抗原、膵臓癌抗原、肺癌抗原、膀胱癌抗原、結腸癌抗原、
精巣癌抗原、膠芽腫癌抗原、Ｂ細胞悪性腫瘍関連抗原、多発性骨髄腫関連抗原、非ホジキ
ンリンパ腫関連抗原または慢性リンパ性白血病関連抗原である腫瘍関連抗原が特に注目さ
れる。
このような使用に好適な腫瘍関連抗原としては、Ａ３３（結腸直腸癌抗原；Almqvist,
Y. 2006, Nucl Med Biol. Nov;33(8):991-998）；Ｂ１(Egloff, A.M. et al. 2006, Canc
er Res. 66(1):6-9)； ＢＡＧＥ(Bodey, B. 2002 Expert Opin Biol Ther. 2(6):577-84
)；β−カテニン(Prange W. et al. 2003 J Pathol. 201(2):250-9)；ＣＡ１２５(Bast,
R.C. Jr. et al. 2005 Int J Gynecol Cancer 15 Suppl 3:274-81)；ＣＤ５(Calin, G.A.
et al. 2006 Semin Oncol. 33(2):167-73；ＣＤ１９(Troussard, X. et al. 1998 Hemat
ol Cell Ther. 40(4):139-48)；ＣＤ２０(Thomas, D.A. et al. 2006 Hematol Oncol Cli
n North Am. 20(5):1125-36)；ＣＤ２２(Kreitman, R.J. 2006 AAPS J. 18;8(3):E532-51
)；ＣＤ２３(Rosati, S. et al. 2005 Curr Top Microbiol Immunol. 5;294:91-107)；Ｃ
Ｄ２５(Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4):139-48)；ＣＤ２７(Bata
ille, R. 2006 Haematologica 91(9):1234-40)；ＣＤ２８(Bataille, R. 2006 Haematolo
gica 91(9):1234-40)；ＣＤ３６(Ge, Y. 2005 Lab Hematol. 11(1):31-7)；ＣＤ４０／Ｃ
Ｄ１５４(Messmer, D. et al. 2005 Ann N Y Acad Sci. 1062:51-60)；ＣＤ４５(Jurcic,
J.G. 2005 Curr Oncol Rep. 7(5):339-46)；ＣＤ５６(Bataille, R. 2006 Haematologic
a 91(9):1234-40)；ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ(Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell
Ther. 40(4):139-48; Chu, P.G. et al. 2001 Appl Immunohistochem Mol Morphol. 9(2)
:97-106)；ＣＤ１０３(Troussard, X. et al. 1998 Hematol Cell Ther. 40(4):139-48)
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；Mathelin, C. 2006 Gynecol Obstet Fertil. 34(7-8):638-46; Tellez-Avila, F.I. et
al. 2005 Rev Invest Clin. 57(6):814-9）；ＣＴＬＡ４(Peggs, K.S. et al. 2006 Cur
r Opin Immunol. 18(2):206-13)；ＥＧＦ−Ｒ（上皮細胞増殖因子受容体；Adenis, A. et
al. 2003 Bull Cancer. 90 Spec No:S228-32）；Ｅｒｂ（ＥｒｂＢ１；ＥｒｂＢ３；Ｅ
ｒｂＢ４；Zhou, H. et al. 2002 Oncogene 21(57):8732-40; Rimon, E. et al. 2004 In
t J Oncol. 24(5):1325-38）；ＧＡＧＥ（ＧＡＧＥ−１；ＧＡＧＥ−２；Akcakanat, A.
et al. 2006 Int J Cancer. 118(1):123-8）；ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２(Livingston, P.O
. et al. 2005 Cancer Immunol Immunother. 54(10):1018-25)；ｇｐ１００(Lotem, M. e
t al. 2006 J Immunother. 29(6):616-27)；ＨＥＲ−２／ｎｅｕ(Kumar, Pal S et al. 2
006 Semin Oncol. 33(4):386-91)；ヒト乳頭腫ウイルス−Ｅ６／ヒト乳頭腫ウイルス−Ｅ
７(DiMaio, D. et al. 2006 Adv Virus Res. 66:125-59)；ＫＳＡ（１７−１Ａ）(Ragupa
thi, G. 2005 Cancer Treat Res. 123:157-80)；ＭＡＧＥ（ＭＡＧＥ−１；ＭＡＧＥ−３
；(Bodey, B. 2002 Expert Opin Biol Ther. 2(6):577-84)；ＭＡＲＴ(Kounalakis, N. e
t al. 2005 Curr Oncol Rep. 7(5):377-82)；ＭＵＣ−１（Mathelin, C. 2006 Gynecol O
bstet Fertil. 34(7-8):638-46Ｃ)；ＭＵＭ−１(Castelli, C. et al. 2000 J Cell Phys
iol. 182(3):323-31)；Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼ(Dennis, J.W. 1
999 Biochim Biophys Acta. 6;1473(1):21-34)；ｐ１５(Gil, J. et al. 2006 Nat Rev M
ol Cell Biol. 7(9):667-77)；ＰＳＡ（前立腺特異的抗原；Cracco, C.M. et al. 2005 M
inerva Urol Nefrol. 57(4):301-11）；ＰＳＭＡ(Ragupathi, G. 2005 Cancer Treat Res
. 123:157-80)；ｓＴｎ(Holmberg, L.A. 2001 Expert Opin Biol Ther. 1(5):881-91)；
ＴＮＦ受容体（ＴＮＦ−α受容体、ＴＮＦ−β受容体；またはＴＮＦ−γ受容体；van Ho
rssen, R. et al. 2006 Oncologist. 11(4):397-408; Gardnerova, M. et al. 2000 Curr
Drug Targets. 1(4):327-64；またはＶＥＧＦ受容体(O’Dwyer. P.J. 2006 Oncologist.
11(9):992-8)が含まれる。
このような使用のためのさらなる腫瘍関連抗原（およびこのような抗原に対する反応性
抗体を具体的に開示している刊行物）としては、ＡＤＡＭ−９（米国特許出願公開第２０
０６／０１７２３５０号；国際公開第０６／０８４０７５号）；ＡＬＣＡＭ（国際公開第
０３／０９３４４３号）；カルボキシペプチダーゼＭ（米国特許出願公開第２００６／０
１６６２９１号）；ＣＤ４６（米国特許第７，１４８，０３８号；国際公開第０３／０３
２８１４号）；サイトケラチン８（国際公開第０３／０２４１９１号）；エフリン受容体
（特に、ＥｐｈＡ２（米国特許第７，５６９，６７２号；国際公開第０６／０８４２２６
号）；インテグリンα−Ｖ−Β−６（国際公開第０３／０８７３４０号）；ＪＡＭ−３（
国際公開第０６／０８４０７８号）；ＫＩＤ３（国際公開第０５／０２８４９８号）；Ｋ
ＩＤ３１（国際公開第０６／０７６５８４号）；ＬＵＣＡ−２（米国特許出願公開第２０
０６／０１７２３４９号；国際公開第０６／０８３８５２号）；オンコスタチンＭ（オン
コスタチン受容体Β）（米国特許第７，５７２，８９６号；国際公開第０６／０８４０９
２号）；ＰＩＰＡ（米国特許第７，４０５，０６１号；国際公開第０４／０４３２３９号
）；ＲＯＲ１（米国特許第５，８４３，７４９号）；およびトランスフェリン受容体（米
国特許第号７，５７２，８９５号；国際公開第０５／１２１１７９号）が含まれる。
また、特定の病原体、例えば、限定されるものではないが、ヒト免疫不全ウイルス（Ｈ
ＩＶ）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、インフルエンザ、ヒトパピローマウイルス（ＨＰ
Ｖ）、手足口病ウイルス（コクサッキーウイルス）、狂犬病ウイルス、単純ヘルペスウイ
ルス（ＨＳＶ）、および胃腸炎の病原体（ロタウイルス、アデノウイルス、カリシウイル
ス、アストロウイルスおよびノーウォークウイルスを含む）をはじめとするウイルス薬；
限定されるものではないが、大腸菌、ネズミチフス菌(Salmonella thyphimurium)、緑膿
菌(Pseudomonas aeruginosa)、コレラ菌(Vibrio cholerae)、淋菌(Neisseria gonorrhoea
e)、ピロリ菌(Helicobacter pylori)、インフルエンザ菌(Hemophilus influenzae)、志賀
赤痢菌(Shigella dysenteriae)、黄色ブドウ球菌(Staphylococcus aureus)、結核菌(Myco
bacterium tuberculosis)および肺炎球菌(Streptococcus pneumoniae)をはじめとする細
菌薬、真菌薬ならびにジアルジア属などの寄生虫に特異的な抗原も注目される。
いくつかの実施形態では、本発明の分子は、鋳型分子の対応する部分に対して変更され
たグリコシル化パターンまたは変更されたグリコフォームを含むように操作される。操作
グリコフォームは、限定されるものではないがエフェクター機能の増強をはじめとする様
々な目的に有用であり得る。操作グリコフォームは当業者に公知のいずれの方法によって
作製してもよいが、例えば、操作されたもしくは変異型発現株の使用によるか、例えばＤ
Ｉ Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩ１１）などの１以
上の酵素との同時発現によるか、種々の生物もしくは種々の生物由来の細胞系統での本発
明のＤＡＲＴ（商標）の発現によるか、またはＤＡＲＴ（商標）が発現および精製された
後に糖鎖を改変することによる。操作グリコフォームを作製する方法は、当技術分野で公
知であり、限定されるものではないが、Umana et al. (1999) “Engineered Glycoforms
Of An Antineuroblastoma IgG1 With Optimized Antibody-Dependent Cellular Cytotoxi
c Activity,” Nat. Biotechnol 17:176-180; Davies et al. (2001) “Expression Of G
nTIII In A Recombinant Anti-CD20 CHO Production Cell Line: Expression Of Antibo
dies With Altered Glycoforms Leads To An Increase In Adcc Through Higher Affinit
y For Fc Gamma RIII,” Biotechnol Bioeng 74:288-294; Shields et al. (2002) “Lac
k Of Fucose On Human IgG1 N-Linked Oligosaccharide Improves Binding To Human Fcg
amma RIII And Antibody-Dependent Cellular Toxicity,” J Biol Chem 277:26733-2674
0; Shinkawa et al. (2003) “The Absence Of Fucose But Not The Presence Of Galact
ose Or Bisecting N-Acetylglucosamine Of Human IgG1 Complex-Type Oligosaccharides
Shows The Critical Role Of Enhancing Antibody-Dependent Cellular Cytotoxicity,
” J Biol Chem 278:3466-3473)；米国特許第６，６０２，６８４号; ＵＳＳＮ１０／２
７７，３７０；ＵＳＳＮ１０／１１３，９２９；国際公開第００／６１７３９Ａ１号；国
際公開第０１／２９２２４６Ａ１号；国際公開０２／３１１１４０Ａ１号；国際公開第０
２／３０９５４Ａ１号；Ｐｏｔｉｌｌｅｇｅｎｔ（商標）技術（Biowa, Inc.ニュージャ
ージー州プリンストン）；ＧｌｙｃｏＭＡｂ（商標）グリコシル化操作技術（GLYCART bi
otechnology AG,スイス, チューリッヒ）（それぞれ参照によりその全内容を本明細書に
組み入れる）に記載されているものが挙げられる。
本発明はさらに、非天然アミノ酸の組み込みによる本発明のＤＡＲＴ（商標）の作製を
包含する。このような方法は当業者に公知であり、例えば、タンパク質への非天然アミノ
酸の組み込みを可能とする天然の生合成機構を用いるものがある（例えば、参照によりそ
の全内容を本明細書に組み入れるWang et al. (2002) “Expanding The Genetic Code,”
Chem. Comm. 1: 1-11; Wang et al. (2001) “Expanding The Genetic Code Of Escheri
chia coli,” Science, 292: 498-500; van Hest et al. (2001) “Protein-Based Mater
ials, Toward A New Level Of Structural Control," Chem. Comm. 19: 1897-1904参照）
。別法としては、アミノアシル−ｔＲＮＡの生合成を担う酵素の着目するものがある（例
えば、それぞれ参照によりその全内容を本明細書に組み入れるTang et al. (2001) “Bio
synthesis Of A Highly Stable Coiled-Coil Protein Containing Hexafluoroleucine In
An Engineered Bacterial Host,” J. Am. Chem. Soc. 123(44): 11089-11090; Kiick e
t al. (2001) “Identification Of An Expanded Set Of Translationally Active Methi
onine Analogues In Escherichia coli,” FEBS Lett. 502(1-2):25-30参照）。いくつか
の実施形態では、本発明は、グリコシル化部位の付加または欠失により本発明の分子のＶ
Ｌ、ＶＨまたはＦｃドメインを改変する方法を包含する。タンパク質の糖鎖を改変する方
法は当技術分野で周知であり、本発明の範囲内に包含される（例えば、参照によりその全
内容を本明細書に組み入れる米国特許第６，２１８，１４９号；欧州特許第０３５９０９
６ Ｂ１号；米国特許出願公開第２００２／００２８４８６号；国際公開第０３／０３５
８３５号；米国特許出願公開第２００３／０１１５６１４号；米国特許第６，２１８，１
４９号；米国特許第６，４７２，５１１号参照；これらは全て参照によりその全内容を本
明細書に組み入れる）。
ＶＩＩＩ．治療目的でＢ７−Ｈ３モジュレーターおよび抗Ｂ７−Ｈ３抗体を使用する方法
Ｂ７−Ｈ３に対するモノクローナル抗体は癌または他の疾患を有する個体に治療目的で
使用することができる。抗Ｂ７−Ｈ３抗による治療は、上記のようにin vitroおよびin v
ivoの双方における複合体の形成を含み得る。一実施形態では、モノクローナル抗体の抗
Ｂ７−Ｈ３は癌性細胞と結合してその増殖を低下させることができる。抗体は生理的（例
えばin vivo）条件で結合を促進する濃度で投与されると理解される。別の実施形態では
、Ｂ７−Ｈ３に対するモノクローナル抗体は、結腸、肺、乳房、前立腺、卵巣、膵臓、腎
臓などの種々の組織の癌性細胞、および肉腫などの他の種類の癌に向けた免疫療法に使用
可能である。別の実施形態では、モノクローナル抗体の抗Ｂ７−Ｈ３は単独で癌細胞に結
合して、癌細胞の細胞分裂を低下させることができる。別の実施形態では、モノクローナ
ル抗体の抗Ｂ７−Ｈ３は、癌性細胞と結合し、転移の発生を遅延させることができる。さ
らに別の実施形態では、癌を有する個体に抗Ｂ７−Ｈ３抗体による待期療法が施される。
癌個体の待期療法には、疾患の有害な症状、または癌の進行に直接影響を及ぼさずにその
疾患に施された他の処置に起因する医原性症状を治療することもしくは軽減することが含
まれる。これには、疼痛、栄養補助、性的問題、精神的苦痛、鬱病、疲労、精神障害、悪
心、嘔吐などの緩和のための処置が含まれる。
このような状況において、抗Ｂ７−Ｈ３抗体は、個体固有の免疫応答を増強または指令
する薬剤、例えばＡＤＣＣを強化する薬剤とともに投与することができる。
さらに別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ３抗体は、放射性分子、毒素（例えば、カリケア
マイシン）、化学療法薬分子、化学療法化合物を含有するリポソームまたはその他の小胞
とコンジュゲートまたは会合され、このような処置を必要とする個体に、これらの化合物
を、前記抗体により認識される抗原を含む癌細胞に標的化し、癌性細胞または罹患細胞を
除去するために投与される。特定の理論に縛られるものではないが、抗Ｂ７−Ｈ３抗体は
その表面にＢ７−Ｈ３を有する細胞によって内部移行され、そのコンジュゲートされた部
分を細胞に送達して治療効果を誘導する。さらに別の実施形態では、前記抗体は、前記抗
原を発現する癌の外科的除去の際に転移の発生を遅延させるためにアジュバント療法とし
て使用することもできる。前記抗体はまた、抗原を発現する腫瘍を有する個体において、
腫瘍のサイズを小さくし、手術を可能にするまたは簡単にするため、手術の際に組織を温
存するため、および／または結果として起こる美観的問題を軽減するために手術前に投与
することもできる（ネオアジュバント療法）。
本発明の実施においては細胞周期投与が意図される。このような実施形態では、化学療
法薬は腫瘍または他の標的罹患細胞の細胞周期を所定の段階に同調させるために用いられ
る。その後、本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の投与（単独で、または付加的治療用成分ととも
に）を行う。別の実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ３抗体は、２回目の処置を施す前に細胞周期
を同調させ、細胞分裂を低下させるために用いられ、２回目に抗Ｂ７−Ｈ３抗体および／
または付加的治療用成分の投与を行うことができる。
化学療法薬としては、放射性分子、毒素（細胞毒素または細胞傷害性薬剤とも呼ばれる
）が含まれ、癌性細胞、病原体の生存に有害な薬剤、ならびに化学療法化合物を含有する
リポソームまたはその他の小胞が含まれる。好適な化学療法薬の例としては、限定される
ものではないが、１−デヒドロテストステロン、５−フルオロウラシルデカルバジン、６
−メルカプトプリン、６−チオグアニン、アクチノマイシンＤ、アドリアマイシン、アル
デスロイキン、アルキル化剤、アロプリノールナトリウム、アルトレタミン、アミフォス
チン、アナストロゾール、アントラマイシン（ＡＭＣ））、抗有糸分裂薬、シス−ジクロ
ロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、ジアミノジクロロ白金、アントラサ
イクリン、抗生物質、代謝拮抗物質、アスパラギナーゼ、生ＢＣＧ（小胞内）、ベタメタ
ゾンリン酸ナトリウムおよび酢酸ベタメタゾン、ビカルタミド、硫酸ブレオマイシン、ブ
スルファン、ロイコボリンカルシウム、カリケアマイシン、カペシタビン、カルボプラチ
ン、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、クロラムブシル、シスプラチ
ン、クラドリビン、コルヒチン、結合型エストロゲン、シクロホスファミド、シクロトス
ファミド(Cyclothosphamide)、シタラビン、シタラビン、サイトカラシンＢ、サイトキサ
ン、ダカルバジン、ダクチノマイシン、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、
ダウノルビシンＨＣＬ、クエン酸ダウノルビシン、デニロイキンジフチトックス、デクス
ラゾキサン、ジブロモマンニトール、ジヒドロキシアントラシンジオン、ドセタキセル、
ドラセトロンメシレート、ドキソルビシンＨＣＬ、ドロナビノール、大腸菌Ｌ−アスパラ
ギナーゼ、エメチン、エポエチンアルファ、エルウィニアＬ−アスパラギナーゼ、エステ
ル化エストロゲン、エストラジオール、エストラムスチンリン酸ナトリウム、臭化エチジ
ウム、エチニルエストラジオール、エチドロン酸、エトポシドシトロボラム因子、リン酸
エトポシド、フィルグラスチム、フロクスウリジン、フルコナゾール、リン酸フルダラビ
ン、フルオロウラシル、フルタミド、フォリン酸、ゲムシタビンＨＣＬ、グルココルチコ
イド、酢酸ゴセレリン、グラミシジンＤ、グラニセトロンＨＣＬ、ヒドロキシ尿素、イダ
ルビシンＨＣＬ、イフォスファミド、インターフェロンα−２ｂ、イリノテカンＨＣＬ、
レトロゾール、ロイコボリンカルシウム、酢酸ロイプロリド、レバミゾールＨＣＬ、リド
カイン、ロムスチン、メイタンシノイド、メクロレタミンＨＣＬ、酢酸メドロキシプロゲ
ステロン、酢酸メゲストロール、メルファランＨＣＬ、メルカプトプリン、メスナ、メト
トレキサート、メチルテストステロン、ミトラマイシン、マイトマイシンＣ、ミトタン、
ミトキサントロン、ニルタミド、酢酸オクトレオチド、オンダンセトロンＨＣＬ、パクリ
タキセル、パミドロン酸二ナトリウム、ペントスタチン、ピロカルピンＨＣＬ、プリマイ
シン、ポリフェプロサン２０（カルムスチンインプラントを伴う）、ポルフィマーナトリ
ウム、プロカイン、プロカルバジンＨＣＬ、プロプラノロール、リツキシマブ、サルグラ
モスチン、ストレプトゾトシン、タモキシフェン、タキソール、テニポシド、テノポシド
、テストラクトン、テトラカイン、チオエパクロラムブシル、チオグアニン、チオテパ、
トポテカンＨＣＬ、クエン酸トレミフェン、トラスツズマブ、トレチノイン、バルルビシ
ン、硫酸ビンブラスチン、硫酸ビンクリスチンおよび酒石酸ビノレルビンが挙げられる。
好ましい実施形態では、細胞毒素は特に分裂中、または急速に分裂している細胞に有効
であり、そのため、非分裂細胞はその有毒作用を比較的逃れる。
本発明の抗体は、それらが結合する罹患細胞または癌腫細胞に内部移行され得るので、
それらの有毒な活性のために内部移行させる必要のある毒素を細胞に送達するなどの治療
適用に特に有用である。このような毒素の例としては、限定されるものではないが、サポ
リン、カリケアマイシン、オーリスタチンおよびメイタンシノイドが挙げられる。
本発明の抗体またはポリペプチドは放射性分子、毒素または他の治療薬、または治療薬
を含有するリポソームもしくは他の小胞に、共有結合的にまたは非共有結合的に、直接的
にまたは間接的に会合（コンジュゲートまたは連結を含む）させることができる。この抗
体は、抗体がその標的Ｂ７−Ｈ３と結合できる限り、抗体のいずれの位置で放射性分子、
毒素または化学療法薬分子と連結してもよい。
毒素または化学療法薬は好適なモノクローナル抗体とともに（投与前、投与後または投
与中に）投与するか、あるいは好適なモノクローナル抗体と直接的または間接的（例えば
、リンカー基により、あるいはまた適当な付着部位を有する連結分子、例えば、米国特許
第５，５５２，３９１号に記載されているようなプラットフォーム分子により）のいずれ
かでカップリングさせることができる。本発明の毒素および化学療法薬は当技術分野で公
知の方法を用いて、特定の標的化タンパク質に直接カップリングさせることもできる。例
えば、薬剤と抗体がそれぞれ互いに反応することができる置換基を有する場合には、薬剤
と抗体の間の直接的反応が可能である。例えば、一方の求核基（アミノ基またはスルフヒ
ドリル基など）を、他方のカルボニル含有基（無水基または酸ハロゲン化物基）と、また
は良好な脱離基（例えば、ハロゲン化物基）を含有するアルキル基と反応させることがで
きる。
該抗体またはポリペプチドはまた化学療法薬にマイクロ担体により連結させることもで
きる。「マイクロ担体」とは、水に不溶であり、約１５０μｍ、１２０μｍまたは１００
μｍ未満の大きさ、より一般的には約５０〜６０μｍ未満、好ましくは約１０μｍ、５、
２．５、２または１．５μｍ未満の大きさを有する生分解性または非生分解性粒子を意味
する。マイクロ担体としては「ナノ担体」が挙げられ、これは、約１μｍ未満、好ましく
は約５００ｎｍ未満の大きさを有するマイクロ担体である。このような粒子は、当技術分
野で公知である。固相マイクロ担体は、生体適合性の天然ポリマー、合成ポリマーまたは
合成コポリマーから形成される粒子であり得、これには、アガロースまたは架橋アガロー
スならびに当技術分野で公知の他の生分解性材料から形成されるマイクロ担体を含んでも
含まなくてもよい。生分解性固相マイクロ担体は、哺乳類の生理学的条件下で分解性であ
るポリマー（例えば、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）およびそのコポリマー）か、
または腐食性であるポリマー（例えば、ポリ（オルトエステル、例えば、３，９−ジエチ
リデン−２，４，８，１０−テトラオキサスピロ［５．５］ウンデカン（ＤＥＴＯＳＵ）
など、もしくはポリ（無水物）、例えばセバシン酸のポリ（無水物）など）から形成され
得る。マイクロ担体はまた、リポソーム、ｉｓｃｏｍ（免疫刺激性複合体(immune-stimul
ating comples)などの液相（例えば、油もしくは脂質系）であってよく、これは、抗原を
含まないコレステロールとリン脂質、アジュバント活性サポニンとの安定な複合体である
か、または水中油型もしくは油中水型エマルションに見られる液滴もしくはミセルである
（ただし、液相マイクロ担体は生分解性である）。生分解性液相マイクロ担体には、典型
的には、生分解性油（例えば、スクアレンおよび植物油など、そのいくつかが当技術分野
で公知である）が配合される。マイクロ担体は、典型的には、球形であるが、球状から外
れたマイクロ担体もまた許容され得る（例えば、楕円、棒状など）。（水に対しての）そ
の不溶性のために、マイクロ担体は、水および水系（水性）溶液から濾過可能である。
本発明の抗体またはポリペプチドコンジュゲートとしては、有毒薬剤または化学療法薬
にカップリングすることができる基と、抗体にカップリングすることできる基の両方を含
有する二官能性リンカーを含み得る。リンカーは、結合能力の障害を回避するために抗体
を薬剤から離隔するスペーサーとしての機能を果たし得る。リンカーは、切断可能であっ
ても切断不能であってもよい。リンカーはまた、薬剤または抗体上の置換基の化学的反応
性を増大させ、従って、カップリング効率を増大させる機能を果たし得る。また、化学的
反応性の増大は、そうでなければ可能とはならない薬剤または薬剤上の官能基の使用を容
易にすることができる。二官能性リンカーは抗体に、当技術分野で公知の手段によってカ
ップリングさせることができる。例えば、活性なエステル部分（例えば、Ｎ−ヒドロキシ
スクシンイミドエステルなど）を含有するリンカーが、アミド結合による抗体内のリシン
残基へのカップリングに使用され得る。別の例において、求核性アミンまたはヒドラジン
残基を含有するリンカーを、抗体糖鎖残基の解糖酸化によって生成されるアルデヒド基に
カップリングさせることができる。これらの直接的カップリング法に加え、リンカーは抗
体に、アミノデキストランなどの中間担体によって間接的にカップリングさせることもで
きる。これらの実施形態において、連結の修飾はリシン、糖鎖または中間担体のいずれか
によるものである。一実施形態において、リンカーは、タンパク質内の遊離チオール残基
に部位選択的にカップリングさせる。タンパク質上のチオール基への選択的カップリング
に適した部分は、当技術分野でよく知られている。例としては、ジスルフィド化合物、α
−ハロカルボニルおよびα−ハロカルボキシル化合物ならびにマレイミドが挙げられる。
求核性アミン官能基が＆＃９４５；−ハロカルボニルまたはカルボキシル基と同じ分子内
に存在する場合、アミンの分子内アルキル化により環化が起こる可能性がある。この問題
を防ぐ方法は当業者によく知られており、例えば、アミンと＆＃９４５；−ハロカルボニ
ル官能基が、アリール基またはトランス−アルケンなどの非柔軟性基によって分離され、
所望でない環化を立体化学的に不利にした分子の作製による。例えば、ジスルフィド部分
によるメイタンシノイドと抗体のコンジュゲートの作製については、米国特許第６，４４
１，１６３号参照。
抗体−薬物コンジュゲートの作製に使用され得る切断可能なリンカーの１つは、シス−
アコニット酸に基づく酸不安定性リンカーであり、これはレセプターにより媒介されるエ
ンドサイトーシスの際に見られるエンドソームおよびリソソームなど、種々の細胞内コン
パートメントの酸性環境を利用するものである。例えば、ダウノルビシンと高分子担体と
のコンジュゲートの作製については、Shen, W.C. et al. (1981) (“cis-Aconityl Space
r Between Daunomycin And Macromolecular Carriers: A Model Of pH-Sensitive Linkag
e Releasing Drug From A Lysosomotropic Conjugate,” Biochem. Biophys. Res. Comtn
un. 102:1048-1054 (1981))；ダウノルビシンと抗黒色腫抗体とのコンジュゲートの作製
については、Yang et al. (1988) (“Pharmacokinetics And Mechanism Of Action Of A
Doxorubicin-Monoclonal Antibody 9.2.27 Conjugate Directed To A Human Melanoma Pr
oteoglycan,” J. Natl. Canc. Inst. 80:1154-1159)；ダウノルビシンと抗Ｔ細胞抗体と
のコンジュゲートを作製するための同様の酸不安定性リンカーの使用については、Dillma
n et al. (1988) (“Superiority Of An Acid-Labile Daunorubicin-Monoclonal Antibod
y Immunoconjugate Compared To Free Drug,” Cancer Res. 48:6097-6102)；およびペプ
チドスペーサーアームによる抗体へのダウノルビシンの連結については、Trouet et al.
(1982) “A Covalent Linkage Between Daunorubicin And Proteins That Is Stable In
Serum And Reversible By Lysosomal Hydrolases, As Required For A Lysosomotropic D
rug-Carrier Conjugate: In Vitro And In Vivo Studies,” Proc. Natl. Acad. Sci. (U
.S.A.) 79:626-629)参照。
本発明の抗体（またはポリペプチド）は当技術分野で公知の任意の方法によって放射性
分子にコンジュゲート（連結）させることができる。抗体の放射能標識法に関する考察と
しては、Cancer Therapy with Monoclonal Antibodies, D.M. Goldenberg (Ed.) CRC Pre
ss, Boca Raton, 1995を参照。好適な毒素としては、タキサン、メイタンシノイド、オー
リスタチン（例えば、モノメチルオーリスタチン（ＭＭＡＥ）、モノメチルオーリスタチ
ンＦ（ＭＭＡＦ）、オーリスタチンＥ（ＡＥ）など）が挙げられる（例えば、米国特許第
５，２０８，０２０号；同第５，４１６，０６４号；同第６，３３３，４１０号；同第６
，３４０，７０１号；同第６，３７２，７３８号；同第６，４３６，９３１号；同第６，
４４１，１６３号；同第６，５９６，７５７号；同第７，２７６，４９７号；同第７，５
８５，８５７号；または同第７，８５１，４３２号に開示されているものなど）、カリケ
アマイシン、アントラサイクリン（例えば、ドキソルビシン）、ＣＣ−１０６５類似体、
ドセタキセル；カテプシンＢまたはＥ；リシン、ゲロニン、シュードモナス外毒素、ジフ
テリア毒素、およびＲＮアーゼ；チウキセタンまたは有毒放射性同位元素（例えば、90Ｙ
；131Ｉ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、188Ｒｅ、211Ａｔ、212Ｂｉ、213Ｂｉ、225Ａｃなど）。
あるいは、抗体を第２の抗体にコンジュゲートさせて米国特許第４，６７６，９８０号
に記載されているような抗体ヘテロコンジュゲートを形成させることもできる。架橋抗体
の形成により、免疫系を、特定の細胞種、例えば、Ｂ７−Ｈ３を発現する癌または罹患細
胞に標的化することができる。
本発明はまた、抗Ｂ７−Ｈ３抗体またはＢ７−Ｈ３と結合する他の実施形態を化学療法
薬と組み合わせて、または化学療法薬と連結させて用いて、癌（限定されるものではない
が、前立腺癌、肺癌または腎臓癌を含む）を有する個体において転移の発生を遅延させる
方法も提供する。いくつかの実施形態では、抗体は非ヒト抗Ｂ７−Ｈ３抗体のヒト化また
はキメラ型である。
さらに別の実施形態では、抗体は、その抗原を発現する癌の外科的除去の際に転移の発
生を遅延させるためにアジュバント療法として使用することができる。抗体または化学療
法薬と会合された抗体はまた、抗原を発現する腫瘍を有する個体において、腫瘍のサイズ
を小さくし、手術を可能にするまたは簡単にするため、手術の際に組織を温存するため、
および／または結果として起こる美観的問題を軽減するために手術前に投与することもで
きる（ネオアジュバント療法）。
さらに別の実施形態では、本明細書に記載のＢ７−Ｈ３結合組成物のいずれかはＢ７−
Ｈ３発現癌性細胞と結合して、Ｂ７−Ｈ３を発現する癌性細胞に対して能動免疫応答を誘
導することができる。場合によっては、能動免疫応答は癌性細胞の死をもたらし得る（例
えば、癌細胞に結合する抗体結合はアポトーシス細胞死を誘導する）か、または癌性細胞
の増殖を阻害し得る（例えば、細胞周期の進行を遮断する）。他の場合では、本明細書に
記載の新規な抗体のいずれかは癌性細胞と結合し、抗体依存性細胞傷害性（ＡＤＣＣ）が
抗Ｂ７−Ｈ３が結合する癌性細胞を排除することができる。よって、本発明は、本明細書
に記載の組成物のいずれかを投与することを含む、免疫応答の刺激方法を提供する。
BAAによっては、抗体の結合はまた細胞性免疫応答と体液性免疫応答の双方を活性化し
、より多くのナチュラルキラー細胞を動員するか、または癌性細胞を破壊するために個体
の免疫系をさらに活性化させるサイトカイン（例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１
２、ＴＮＦ−α、ＴＮＦ−βなど）の産生を増大させることができる。さらに別の実施形
態では、抗Ｂ７−Ｈ３抗体は癌性細胞と結合することができ、マクロファージまたは他の
食細胞が癌性細胞にオプソニンを作用させることができる。
抗Ｂ７−Ｈ３抗体またはそのフラグメントの種々の製剤を投与に使用することができる
。いくつかの実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ３抗体またはそのフラグメントはそのまま投与す
ることができる。本発明の組成物は、薬理学的に活性な薬剤の他、当技術分野で周知であ
って、薬理学的に有効な物質の投与を助ける、またはその作用部位に送達するための薬学
的に使用可能な製剤へと活性化合物を加工する助けをする比較的不活性な物質である賦形
剤および補助剤を含む好適な薬学上許容される担体を含み得る。例えば、賦形剤は形態も
しくは粘稠度を与え得るか、または希釈剤として働くことができる。好適な賦形剤として
は、限定されるものではないが、分解防止剤、湿潤剤および乳化剤、浸透圧を変更するた
めの塩、封入剤、バッファー、および皮膚浸透増強剤が挙げられる。
非経口投与に好適な製剤としては、水溶性形態、例えば、水溶性塩の該活性化合物の水
溶液が挙げられる。また、適当であれば、油性注射懸濁液用の該活性化合物の懸濁液を投
与することができる。好適な親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油、例えば、ゴマ
油、または合成脂肪酸エステル、例えば、オレイン酸エチルもしくはトリグリセリドが挙
げられる。水性注射懸濁液は、懸濁液の粘度を増大させる物質を含有してもよく、例えば
、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールおよび／またはデキストランが
挙げられる。任意選択で、該懸濁液は安定化剤も含み得る。また、リポソームも細胞送達
のために該薬剤をカプセル化するために使用可能である。
本発明による全身投与のための医薬製剤は、経腸的、非経口または局所投与用に製剤化
することができる。実際には、３種類の製剤は全て、該活性成分の全身投与を達成するた
めに同時に使用してもよい。非経口および経口薬物送達のための賦形剤ならびに製剤は、
Remington: The Science And Practice Of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Willia
ms & Wilkins Publishing (2005)に示されている。経口投与に好適な製剤としては、硬質
もしくは軟質ゼラチンカプセル剤、丸剤、錠剤（被覆錠を含む）、エリキシル剤、懸濁剤
、シロップ剤または吸入剤およびその徐放性形態が挙げられる。一般的に、これらの薬剤
は、注射（例えば、腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）による投与のために製剤化され
るが、他の投与形態（例えば、経口、経粘膜など）もまた使用可能である。従って、抗Ｂ
７−Ｈ３抗体は、好ましくは、薬学的に許容されるビヒクル、例えば、生理食塩水、リン
ゲル溶液、デキストロース溶液などと組み合わされる。
特定の投薬レジメン、すなわち、用量、タイミングおよび反復は、特定の個体およびそ
の個体の病歴に依存する。一般に、少なくとも約１００μｇ／ｋｇ体重、より好ましくは
少なくとも約２５０μｇ／ｋｇ体重、さらにより好ましくは少なくとも約７５０μｇ／ｋ
ｇ体重、さらにより好ましくは少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、さらにより好ましくは少
なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、さらにより好ましくは少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重の
用量が投与される。
半減期などの経験的考慮事項は、一般的に、用量の決定に寄与する。ヒト化抗体または
完全なヒト抗体などのヒト免疫系に適合する抗体は、抗体の半減期延長するため、および
該抗体が宿主の免疫系に攻撃されるのを防ぐために使用することができる。投与の頻度は
、治療過程で決定および調整することができ、癌性細胞の数の減少、癌性細胞の減少の維
持、癌性細胞の増殖の低減、または転移の発生の遅延に基づく。あるいは、抗Ｂ７−Ｈ３
抗体の徐放性持続的放出製剤が適切であり得る。徐放を達成するための種々の製剤および
デバイスは、当技術分野で公知である。
一実施形態では、抗Ｂ７−Ｈ３抗体の用量は１回以上の投与を受けている個体において
経験的に決定され得る。個体には、漸増的用量の抗Ｂ７−Ｈ３抗体が投与される。抗ＯＢ
７−Ｈ３抗体の有効性を評価するためには、特異的癌病態のマーカーを追跡することがで
きる。これらとしては、触診もしくは視覚的検査による腫瘍サイズの直接的測定、ｘ線も
しくは撮像法による腫瘍サイズの間接的測定；腫瘍サンプルの直接腫瘍生検および顕微鏡
検査によって評価される改善；間接的腫瘍マーカー（例えば、前立腺癌ではＰＳＡ）の測
定、痛みもしくは麻痺の減少；腫瘍に関連する発話、視力、呼吸もしくは他の障害の改善
；食欲の増進；または認められた試験もしくは生存の延長によって測定される生活の質の
向上が挙げられる。当業者には、用量が、個体、癌の種類、癌の病期、個体において癌が
他の位置に転移し始めているかどうか、および使用された過去および併用処理によって異
なることは明白である。
他の製剤としては、限定されるものではないが、リポソームなどの担体をはじめとする
当技術分野で公知の好適な送達形態が含まれる。例えば、Mahato et al. (1997) “Catio
nic Lipid-Based Gene Delivery Systems: Pharmaceutical Perspectives,” Pharm. Res
. 14:853-859参照。リポソーム製剤としては、限定されるものではないが、サイトフェク
チン、多重ラメラ小胞および単層小胞が挙げられる。
いくつかの実施形態では、２以上の抗体が存在し得る。該抗体は、モノクローナルであ
ってもポリクローナルであってもよい。このような組成物は、癌腫、腺癌、肉腫または腺
肉腫に対して反応性のある少なくとも１種類、少なくとも２種類、少なくとも３種類、少
なくとも４種類、少なくとも５種類の異なる抗体を含有し得る。抗Ｂ７−Ｈ３抗体は、限
定されるものではないが、卵巣、乳房、肺、前立腺、結腸、腎臓、皮膚、甲状腺、骨、上
部消化管および膵臓をはじめとする器官などの癌腫、腺癌、肉腫または腺肉腫に対して反
応性のある１以上の抗体と混合してもよい。一実施形態では、種々の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の
混合物が使用される。抗体の混合物は、多くの場合、当技術分野において表されていると
おり、より広範な個体集団の処置に特に有用であり得る。
以上、本発明を全般的に記載してきたが、本発明は以下の実施例を参照すればより容易
に理解される。なお、これらの実施例は例として示され、明示されない限り、本発明を限
定することを意図するものではない。
免疫組織適合性の検討
腫瘍細胞／胎児始原細胞免疫誘導から４９ｍＡｂのパネルを作製した。抗体の、正常な
非癌性組織に対する腫瘍組織の示差的ＩＨＣ染色を示す能力、抗体有効性の霊長類（特に
カニクイザル）モデルにおける使用可能性、親和性および抗原特異性のレベル、ならびに
免疫調節活性および細胞内部移行のレベルを評価した。これらのｍＡｂのうち２１をまず
、ＭＳ分析および／またはＢ７−Ｈ３−ＣＨＯ細胞に対する結合により同定した。残りの
２８のｍＡｂを、Ｂ７−Ｈ３タンパク質を用いたＥＬＩＳＡによるライブラリーの再スク
リーニングによって同定した。このパネルの４９のメンバーのうち４６の特徴を表２に示
す。
ＩＨＣ染色により、このパネルが、同定された抗体の多くにおいて強い腫瘍／正常組織
結合差を惹起し、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析により一定範囲の結合特性を示し、一定範
囲の重複エピトープおよび非重複エピトープに対して反応性を示し、４Ｉｇと２Ｉｇ Ｂ
７−Ｈ３に対して一定範囲の特異性を示した抗体からなったことが確認された。９つの最
良の候補の特徴を表３および表４に示す。
表５はこれらの抗体の活性特性の概要を示す。
表６に示される抗体の活性を分析したところ、それらの個々の特性が異なること、およ
び各抗体は互いに対して有利と不利の双方に関連していたことが明らかになった（表６）
。
ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７は、より明ら
かな正常組織ＩＨＣ特性、より強い腫瘍／正常ＩＨＣ差、中程度から強い結合（ＢＩＡＣ
ＯＲＥ（商標）／ＩＨＣ）、カニクイザルのＢ７−Ｈ３に対する交差反応性、および強力
なＵＤＡＲＴ（商標）活性を示したことから、これらの抗体種をさらなる開発のために選
択した。これらの抗体は、低い親和性を示し（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）アッセイ）、カニ
クイザルのＢ７−Ｈ３に対する交差反応性を全く示さなかったＴＥＳ７およびＯＶＣＡ２
とは異なっていた。これらの抗体は、低い親和（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）アッセイ）、不
十分なＩＨＣ性能（弱い結合）および低いＵＤＡＲＴ（商標）活性を示したＳＧ２７とは
異なっていた。これらの抗体は、低い親和性（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）アッセイ）、不十
分な腫瘍／正常ＩＨＣ差、および低ＵＤＡＲＴ（商標）活性を示したＧＢ８とは異なって
いた。
Ｃａｋｉ−２およびＨｓ７００Ｔ陽性対照細胞を用い、ＩＨＣ検討を行ったところ、各
抗体は種々の至適濃度と互いに対して種々の示差的濃度を示すことが明らかになった（表
７）。
表７に示されている至適濃度および示差的濃度を用い、ヒト組織におけるＢ７−Ｈ３抗
体のＩＨＣ応答を決定した。副腎、肝臓、膵臓、腎臓、肺および結腸に関するこれらの分
析の結果を表８Ａ〜８Ｂおよび表９Ａ〜９Ｂに示す（全ての抗体が心臓組織に対しては陰
性のＩＨＣ応答を示した）。
癌検体を用いて行ったＩＨＣ検討では、本発明のＢ７−Ｈ３抗体が複数の組織源におい
て癌の同定および診断に使用可能であることが示された（表１０）。表１０において、数
字は＋のサインの数を示す（１＝＋、２＝＋＋、３＝＋＋＋）；各数字は異なる供試サン
プルを指す。
Ｂ７−Ｈ３抗体ＢＲＣＡ８４Ｄで処理した前立腺、乳房、結腸および肺癌細胞に関して
は、腫瘍細胞および間質細胞（腫瘍血管系を含む）腫瘍サンプル染色が存在した。いくつ
かの腫瘍サンプルでは、腫瘍細胞よりも間質の染色がはるかに強かった。ＢＲＣＡ８４Ｄ
ｍＡｂをより低濃度に用量設定した際、腫瘍細胞の染色の低下が示された場合があるが
、やはり強い間質染色を維持していた。０．６２５μｇ／ｍｌのＢＲＣＡ８４Ｄで染色し
た際には、前立腺癌細胞は３／３＋のＩＨＣを示し、乳癌細胞は４／４＋のＩＨＣを示し
、結腸癌細胞は４／４＋のＩＨＣを示し、肺癌細胞は４／４＋のＩＨＣを示した。０．０
７８μｇ／ｍｌのＢＲＣＡ８４Ｄで染色した際には、前立腺癌細胞は３／４＋のＩＨＣを
示し、乳癌細胞は５／５＋のＩＨＣを示し、結腸癌細胞は４／４＋のＩＨＣを示し、肺癌
細胞は３／４＋のＩＨＣを示した。
正常な肝臓をＢ７−Ｈ３抗体ＢＲＣＡ６８Ｄで処理したところ、肝細胞および類洞壁細
胞に染色が見られた。Ｂ７−Ｈ３抗体ＢＲＣＡ６８Ｄで染色された正常な膵臓は、コラー
ゲン線維と上皮に多局染色を示した。Ｂ７−Ｈ３抗体ＢＲＣＡ６８Ｄで処理した正常な副
腎細胞は、皮質に染色を示した。０．１５６μｇ／ｍｌのＢＲＣＡ６８Ｄで染色した際、
胃癌、腎臓癌および卵巣癌の細胞は全て５／５＋のＩＨＣを示した。
胃癌、腎臓癌および卵巣癌組織のサンプルでさらなるＩＨＣ染色を行った。このような
分析の結果を表１２に示す。表１１では、数字は＋のサインの数を示す（１＝＋、２＝＋
＋、３＝＋＋＋）；各数字は異なる供試サンプルを指す。
まとめると、試験したｍＡｂは全て、正常な肝臓、膵臓、結腸および肺において様々な
染色強度を示した。図１Ａは、０．６２５μｇ／ｍｌおよび０．０７８μｇ／ｍｌのＢＲ
ＣＡ８４Ｄとともに正常な膵臓、肝臓、肺および結腸組織検体を用いて行ったＩＨＣ検討
の結果を示す。ＢＲＣＡ８４ＤおよびＴＥＳ７を用いた場合、肝臓染色は比較的類洞壁細
胞（繊維芽細胞およびクップファー細胞）に限定された。ＯＶＣＡ２２は、至適濃度で類
洞壁細胞の他、膜肝細胞染色を示した。しかしながら、この肝細胞の染色は示差的濃度で
は消失した。他のｍＡｂは全て、至適濃度と示差的濃度の双方で膜または細胞質染色のい
ずれかを含む肝細胞の染色を示した。膵臓染色は主としてコラーゲン線維で見られ、また
、割合は小さいが上皮（腺房細胞または／および介在部細胞）でも見られた。上皮の染色
は示差的濃度では減少または消失した。結腸染色は陰窩上皮の頂端膜および粘膜の繊維芽
細胞に比較的限定された。結腸のリンパ節には結合は見られなかった。肺はＢＲＣＡ８４
Ｄ、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＧＢ８で上皮に極めて弱い、パッチ状の染色
を示した。しかしながら、この染色は示差的濃度では消失した。肺では、ＴＥＳ７、ＯＶ
ＣＡ２２およびＰＲＣＡ１５７の場合、どちらの濃度でも染色は見られなかった。副腎皮
質染色はＢＲＣＡ８４Ｄを除くほとんど全てのｍＡｂの至適濃度で見られた。この副腎の
染色は示差的濃度のＴＥＳ７およびＯＶＣＡ２２では明らかに消失した。心臓および腎臓
は全てのｍＡｂで明らかな染色を示さなかった（図１Ｂ）。これらの特性によれば、ＢＲ
ＣＡ８４Ｄが最良のｍＡｂであると考えられ、次いで、（２）ＴＥＳ７、（３）ＯＶＣＡ
２２、（４）ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７の群、そして最後に
（５）ＧＢ８の順であった。
本試験に含まれた全てのｍＡｂは、至適濃度で４種類の癌に陽性染色を示した。示差的
濃度では、ＢＲＣＡ８４Ｄが、前立腺癌、乳癌および結腸癌においてなお良好な染色を維
持した。ＴＥＳ７は４種類の供試癌で良好な染色を維持した。残りのｍＡｂは、種々の腫
瘍種で様々な染色強度を示した。腫瘍サンプル染色は腫瘍細胞および間質細胞（血管系を
含む）で見られた。いくつかの腫瘍サンプル、すなわち、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６９
Ｄ、ＴＥＳ７およびＰＲＣＡ１５７は、血管系にのみ陽性染色を示した。いくつかの腫瘍
は腫瘍細胞染色よりも強い間質染色を示した。これらのサンプルでｍＡｂをより低濃度に
用量設定した場合、いくつかの場合では腫瘍細胞の染色の低下または非染色を示したが、
間質染色はなお維持されていた。一般に、ヒト正常組織における発現および正常組織と腫
瘍組織との差次的発現に関して、ｍＡｂの順序は、最良のＩＨＣ性能から最低の性能まで
次の通りである：（１）ＢＲＣＡ８４Ｄ、（２）ＴＥＳ７、（３）ＯＶＣＡ２２、（４）
ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７の群、そして最後に（５）ＧＢ８
。表１２および図２は抗体ＢＲＣＡ８４Ｄに関する結果を示す。
カニクイザルＢ７−Ｈ３の交差反応性
カニクイザルＢ７−Ｈ３の配列はそのヒト対応物とおよそ９０％の相同性を有し、カニ
クイザルがヒトＢ７−Ｈ３相互作用に関する優れたモデルであることを示唆する。Ｂ７Ｈ
３候補としてのＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＴＥＳ７、ＯＶＣＡ
２２およびＰＲＣＡ１５７の、カニクイザルの副腎、肝臓、腎臓、膵臓および肺、ならび
に満期胎盤１例との交差反応性を評価するための検討を行い、ヒト組織で見られた染色強
度および染色パターンとの交差反応性を比較した。
各試験Ｍａｂの染色濃度は、Ｃａｋｉ−２およびＨｓ７００Ｔ陽性対照細胞で決定され
た至適濃度とする（表８参照）。市販のヤギ抗ヒトＢ７−Ｈ３（カニクイザルと交差反応
する）を、カニクイザル胎盤組織を染色するための陽性対照抗体として選択した。各実験
ごとに対応するアイソタイプ対照を適用した。これらの検討の結果を表１３に示す。
カニクイザル胎盤におけるＢＲＣＡ８４Ｄ（０．６２５μｇ／ｍｌ）のＩＨＣ染色を検
討したところ、脱落膜細胞の染色は見られたが、絨毛の染色は見られなかった。カニクイ
ザルの肝臓および膵臓には染色は見られなかったが、ヒト肝臓では類洞壁細胞の染色が見
られ、ヒト膵臓組織では線維および上皮染色の局在が見られた。
カニクイザル胎盤におけるＢＲＣＡ６８Ｄ（０．１５６μｇ／ｍｌ）のＩＨＣ染色を検
討したところ、脱落膜細胞、間葉細胞（内皮および繊維芽細胞）ならびに絨毛の染色が見
られた。染色は、肝細胞の膜および肝繊維芽細胞の細胞質、ならびに膵臓線維および膵臓
上皮の細胞質に存在した。よって、ヒトおよびカニクイザル肝臓および膵臓組織はＢＲＣ
Ａ６８Ｄにより類似の染色パターンを示す。
まとめると、ＢＲＣＡ８４Ｄ、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７
は全て、カニクイザル組織において交差反応性を示した。ＢＲＣＡ８４Ｄはサルの肝臓お
よび膵臓では染色を示さず、ヒト肝臓および膵臓組織ではその染色が見られた。ＢＲＣＡ
６８ＤおよびＢＲＣＡ６９Ｄは、サル組織でも類似の染色強度および染色パターンを示し
た。ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＰＲＣＡ１５７はヒト組織に対応する染色パ
ターンを示したが、至適濃度での染色強度はヒト組織と同じではなかった。ＴＥＳ７およ
びＯＶＣＡ２２は至適濃度で、サル組織において染色を示さなかった。
カニクイザル組織およびヒト組織におけるＩＨＣ染色の比較結果の概要を表１４に示す
。
Ｂ７−Ｈ３ ｍＡｂは複数のＡＴＣＣ癌細胞系統に結合する
本発明の抗体は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション(American Type Cul
ture Collection)のコレクションに含まれる複数の癌細胞系統と結合し得ることが分かっ
た。表１５および表１６に結合結果をまとめる。
Ｂ７−Ｈ３ ｍＡｂは致死を再指向する
本発明の抗体は、癌細胞の表面に存在するＢ７−Ｈ３と結合する。従来の方法を用い、
このような抗体を上記のようにフルオレセインで標識することができる。このような標識
分子を、Ｔ細胞受容体と結合するエピトープ結合ドメインとフルオレセインと結合するエ
ピトープ結合ドメインを備えたＵＤＡＲＴ（商標）分子（「ＴＣＲ−ＵＤＡＲＴ（商標）
」）の存在下でインキュベートすると、それらはＤＡＲＴ（商標）分子と結合し、それに
より、それらを、Ｂ７−Ｈ３を発現する細胞の表面に局在させ、再指向致死に至らせるこ
とができる。
Ａ．Ａ４９８腎癌細胞の再指向致死
このような再指向致死を実証するために、フルオレセイン標識Ｂ７−Ｈ３抗体を前記Ｔ
ＣＲ−ＵＤＡＲＴ（商標）分子とともにインキュベートし、これらの分子の、Ａ４９８腎
癌細胞の細胞傷害性を媒介する能力を評価した（表１７）。得られた結果に基づき、上位
候補をＲＥＣＡ１３、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＴＤＨ６と結論付けた。
抗体により媒介される用量依存的な再指向致死を調べるために、Ａ４９８腎癌細胞をＢ
７−Ｈ３に対して反応性のある種々の濃度のモノクローナル抗体とともにインキュベート
した。これらの実験結果（図３Ａ〜３Ｂ）は、再指向致死が用量依存的であることを示し
た。
Ｂ．Ａ５４９肺癌細胞の再指向致死
このような再指向致死をさらに実証するために、フルオレセイン標識Ｂ７−Ｈ３抗体を
、上記のＴＣＲ−ＵＤＡＲＴ（商標）分子またはＣＤ１６と結合するエピトープ結合ドメ
インとフルオレセインと結合するエピトープ結合ドメインを備えたＵＤＡＲＴ（商標）分
子（「ＣＤ１６−ＵＤＡＲＴ（商標）」）とともにインキュベートし、これらの分子の、
Ａ５４９肺癌細胞の細胞傷害性を媒介する能力を評価した（表１８）。これらの実験の結
果（図３Ｃ〜３Ｄ）は、再指向致死が用量依存的であったことを示す。得られた結果に基
づき、上位候補をＢＬＡ８、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＢＲＣＡ８４Ｄと結
論付けた。
Ｃ．ＬＮｃａｐ前立腺癌細胞の再指向致死
このような再指向致死をさらに実証するために、フルオレセイン標識Ｂ７−Ｈ３抗体を
、上記のＴＣＲ−ＵＤＡＲＴ（商標）分子またはＣＤ１６と結合するエピトープ結合ドメ
インとフルオレセインと結合するエピトープ結合ドメインを備えたＵＤＡＲＴ（商標）分
子（「ＣＤ１６−ＵＤＡＲＴ（商標）」）とともにインキュベートし、これらの分子の、
ＬＮｃａｐ前立腺癌細胞の細胞傷害性を媒介する能力を評価した（表１９）。得られた結
果に基づき、上位候補をＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＢＲＣＡ８４ＤおよびＰＲＣ
Ａ１５７と結論付けた。
Ｂ７−Ｈ３ ｍＡｂの、可溶性Ｂ７Ｈ３−２Ｉｇおよび可溶性Ｂ７Ｈ３−４Ｉｇと結合す
る能力
上述のように、Ｂ７−Ｈ３は４つのＩｇドメイン含有型（Ｂ７Ｈ３−４Ｉｇ）と２つの
Ｉｇドメイン含有型（Ｂ７Ｈ３−２Ｉｇ）の双方で存在する。本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体
の、可溶性Ｂ７Ｈ３−２Ｉｇ（図４Ａ）および可溶性Ｂ７Ｈ３−４Ｉｇ Ｂ７−Ｈ３（図
４Ｂ）と結合する能力を調べた。これらの抗体は広範な結合特徴を示すことが分かった。
抗体ＰＲＣＡ１２３、ＴＤＨ５、ＢＬＡ８、ＢＲＣＡ６８ＤおよびＳＧ２４は可溶性Ｂ７
Ｈ３−２Ｉｇと最も強い結合を示すことが分かり、抗体ＴＥＳ７、ＬＵＣＡ５０、ＢＲＣ
Ａ１６５、ＯＶＣＡ２２、ＳＴＯ９およびＰＡ２０は可溶性Ｂ７Ｈ３−２Ｉｇと最も弱い
結合を示すことが分かった。抗体ＰＲＣＡ１２３、ＢＲＣＡ６９Ａ、ＢＬＡ８およびＢＲ
ＣＡ６８Ｄは可溶性Ｂ７Ｈ３−４Ｉｇと最も強い結合し示すことが分かり、抗体ＴＥＳ７
、ＯＶＣＡ２１、ＢＲＣＡ１６５およびＳＴＯ９は可溶性Ｂ７Ｈ３−４Ｉｇと最も弱い結
合を示すことが分かった。
捕捉されたモノクローナル抗体に対する溶液中の抗原の親和性結合
溶液中の抗原と捕捉されたモノクローナル抗体の間の結合親和性を実証するために、抗
体を固定化ＩｇＧ Ｆｃ特異的Ｆａｂ２フラグメントに１００〜２００ＲＵのレベルで捕
捉した。抗原Ｂ７−Ｈ３およびＢ７−Ｈ３（４Ｉｇ）をこの捕捉抗体に１００ｎＭの濃度
で注入し（流速２０μｌ／分で１２０秒間）、結合を測定した。結合応答を同レベルの捕
捉ｍＡｂに対してノーマライズし、ｍ２Ｂ６抗体（ｍＩｇＧ１）対照に対する結合応答を
ブランクとして差し引いた。この分析の結果（図５Ａ〜５Ｓ；実線；Ｂ７−Ｈ３（４Ｉｇ
）１００ｎＭ；破線；Ｂ７−Ｈ３、１００ｎＭ））は、本発明の抗体がＢ７−Ｈ３（４Ｉ
ｇ）に対して強い結合を示すことを実証する。
ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析：固定化Ｂ７−Ｈ３に対するＢ７−Ｈ３ ｍＡｂの滴定
本発明の抗体に対するＢ７−Ｈ３−２ＩｇおよびＢ７−Ｈ３−４Ｉｇの相対的結合親和
性を実証するために、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析を行った。本発明のＢ７−Ｈ３抗体は
固定化Ｂ７−Ｈ３−２ＩｇまたはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇとの結合を可能とし、結合の滴定を
経時的に評価した（図６Ａ〜６Ｉ）。ＴＤＨ５、ＰＲＣＡ１２３、ＢＬＡ８、ＢＲＣＡ６
９はＢ７−Ｈ３−２ＩｇおよびＢ７−Ｈ３−４Ｉｇの双方に対して高い親和性を有するこ
とが分かった。しかしながら、それらのエピトープはＢ７−Ｈ３−４Ｉｇ分子中にほとん
ど閉じ込められており、少量だけが利用可能であることが分かった。ＯＶＣＡ２２はＢ７
−Ｈ３−２ＩｇおよびＢ７−Ｈ３−４Ｉｇの双方に対して極めて低い親和性を有するが、
両分子ともそのエピトープは同等に利用可能であることが分かった。しかしながら、Ｂ７
−Ｈ３−４Ｉｇだけが抗体二価結合にとって十分な近接性を与え（低解離速度）と思われ
、一方、Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇは一価でのみ結合し得る。ＴＤＨ６はこの形式ではほとんど
親和性を持たないことが分かり、２Ｉｇに対する結合は非特異的であると思われる。ＴＥ
Ｓ７およびＰＡ２０は低親和性のＢ７−Ｈ４−４Ｉｇ特異的抗体であることが分かった。
ＴＥＳ７はおそらく低い結合速度と、ＰＡ２０よりも高い解離速度を有すると思われる。
ＢＲＣＡ８４Ｄは、Ｂ７−Ｈ３−２ＩｇとＢ７−Ｈ３−４Ｉｇの双方に複数の結合部位を
持つ可能性のある中間的親和性の抗体であることが分かった。ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分
析に基づき、ＢＲＣＡ８４Ｄはその特異な結合部位のために好ましい抗体であると考えら
れた。ＴＥＳ７およびＰＡ２０は高密度抗原表面に対する特異的結合の候補、および高親
和性−低特異性抗体（例えば、ＢＲＣＡ６９Ｄ他）の１つであると考えられた。
図７は、抗体ＰＲＣＡ１５７、ＢＲＣＡ６９Ｄ、ＢＬＡ８、ＰＡ２０、ＢＲＣＡ８４Ｄ
、ＧＢ８およびＳＧ２７の比較ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析を示し、本発明の抗Ｂ７−Ｈ
３抗体が一定の範囲の結合特性を示し得ること示している。
図８は、本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体のいくつかの非競合的特異性を示す。この実験では
、ヒトＢ７−Ｈ３分子を抗体ＢＲＣＡ８４Ｄの存在下でインキュベートし、ＢＩＡＣＯＲ
Ｅ（商標）分析を行った。およそ３分後にこの反応物に第２の抗Ｂ７−Ｈ３抗体を加えた
。この第２の抗体がＢＲＣＡ８４Ｄと競合するならば、Ｂ７−Ｈ３部位が占有され、結合
不能であることが見て取れる。これらの結果は、抗体ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９Ｄお
よびＰＲＣＡ１５７はヒトＢ７−Ｈ３との結合に関してＢＲＣＡ８４Ｄと競合しないこと
を示す。
ＣＳＣおよびＡＴＣＣ細胞系統での抗Ｂ７−Ｈ３ ｍＡｂの内部移行
本発明の抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、癌細胞との結合時の内部移行能を検討した。前立腺ＣＳ
Ｃ細胞およびＨｓ７００ｔ膵臓細胞を抗Ｂ７−Ｈ３抗体とともにインキュベートした。一
次抗体と結合して内部移行された際に細胞に有毒となるサポリンコンジュゲート抗マウス
二次抗体の存在下でインキュベートした後の細胞の生存率を測定した。前立腺ＣＳＣ細胞
（図９Ａ）およびＨｓ７００ｔ膵臓細胞（図９Ｂ）に関するこの検討の結果は、本発明の
抗体の、細胞への内部移行能を実証する。
ＥＬＩＳＡによるＢ７−Ｈ３ ｍＡｂの結合および交差遮断分析
本発明の抗体の交差反応性とこのような抗体により認識されるエピトープを探るため、
競合的Ｂ７−Ｈ３抗体の存在下で生じる結合の程度を測定した。この分析の結果を図１０
Ａ〜１０Ｆに示し、その結果はＢＲＣＡ６８ＤがＢＲＣＡ６９Ｄと競合することを示す。
ＴＥＳ７およびＯＶＣＡ２２もまた互いに競合することが分かったが、ＴＥＳ７はＢＲＣ
Ａ６８ＤおよびＢＲＣＡ６９Ｄとも競合するが、ＯＶＣＡ２２はＢＲＣＡ６８ＤおよびＢ
ＲＣＡ６９Ｄと競合しないことが分かった。ＧＢ８はＢ７−Ｈ３−２Ｉｇとの結合に関し
てＳＧ２７と競合するが、Ｂ７−Ｈ３−４Ｉｇとの結合に関しては競合しないことが分か
った。これらのデータを表２０にまとめたが、Ｂ７−Ｈ３−４Ｉｇに関しては少なくとも
４つの異なるエピトープ（すなわち、ＳＧ２７により認識されるエピトープ、ＧＢ８によ
り認識されるエピトープ、ＯＶＣＡ２２およびＴＥＳ７により認識されるエピトープ、な
らびにＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６９ＤおよびＴＥＳ７により認識されるエピトープ）と
Ｂ７−Ｈ３−２Ｉｇに関しては少なくとも２つのエピトープ（すなわち、ＳＧ２７および
ＧＢ８により認識されるエピトープ、ならびにＢＲＣＡ６８ＤおよびＢＲＣＡ６９Ｄによ
り認識されるエピトープ）が示される。
本発明の重要な抗Ｂ７−Ｈ３抗体の属性を表２１に示す。示されたそれらの正常組織お
よび癌組織の示差的染色、それらのＢ７−Ｈ３−４ＩｇならびにＢ７−Ｈ３−２Ｉｇとの
結合能、上記のＢＩＡＣＯＲＥ（商標）分析により測定されるそれらの結合親和性、およ
びそれらのカニクイザルＢ７Ｈ３抗体との結合能に基づき、ＢＲＣＡ６８Ｄ、ＢＲＣＡ６
９Ｄ、ＢＲＣＡ８４ＤおよびＰＲＣＡ１５７が最も好ましい抗体であると判断された。
ヒト化抗Ｂ７−Ｈ３抗体
モノクローナル抗体ＢＲＣＡ８４Ｄは、ヒトにおける治療能を改善する抗体を作製する
ためにヒト化した（本明細書では一般に「ｈＢＲＣＡ８４Ｄ」と呼ぶ）。得られたヒト化
抗体（本明細書では「ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−１」と呼ぶ）の可変軽鎖および可変重鎖の配列
、ならびにそれらの個々のアミノ酸配列およびポリヌクレオチド配列を以下に示す。
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変軽鎖（配列番号６８）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKLLIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変軽鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号６９
）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgacc atcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccacctacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変軽鎖ＣＤＲ1（配列番号７０）：KASQNVDTNVA
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変軽鎖ＣＤＲ1をコードするポリヌクレオチド配列（配列
番号７１）：aaggccagtc agaatgtgga tactaatgta gcc
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変軽鎖ＣＤＲ2（配列番号７２）：SASYRYS
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変軽鎖ＣＤＲ2をコードするポリヌクレオチド配列（配列
番号７３）：tcggcatcct accggtacag t
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変軽鎖ＣＤＲ3（配列番号７４）：QQYNNYPFT
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変軽鎖ＣＤＲ3をコードするポリヌクレオチド配列（配列
番号７５）：cagcaatata acaactatcc attcacg
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変重鎖のアミノ酸配列（配列番号８０）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRDED TAVYYCARGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SS
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変重鎖をコードするポリヌクレオチド配列（配列番号８１
）：
gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggagga ctggtgcagc ctggcggctc
cctgagactg tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agcttcggca
tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg gactggaatg ggtggcctac
atctcctccg actcctccgc catctactac gccgacaccg tgaagggcag
gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac ctgcagatga
actccctgcg ggacgaggac accgccgtgt actactgcgc cagaggccgg
gagaatatct actacggctc ccggctggat tattggggcc agggcaccac
cgtgaccgtg tcctct
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変重鎖ＣＤＲ1（配列番号８２）：FGMH
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変重鎖ＣＤＲ1をコードするポリヌクレオチド配列（配列
番号８３）：tttggaatgcac
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ可変重鎖ＣＤＲ2（配列番号８４）：YISSDSSAIYYADTVK
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変重鎖ＣＤＲ2をコードするポリヌクレオチド配列（配列
番号８５）：tacattagta gtgacagtag tgccatctac tatgcagaca cagtgaag
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変重鎖ＣＤＲ3（配列番号８６）：GRENIYYGSRLDY
ヒト化ＢＲＣＡ８４Ｄ−１可変重鎖ＣＤＲ3をコードするポリヌクレオチド配列（配列
番号８７）：gggagggaaa acatttacta cggtagtagg cttgactac
図１１Ａ〜１１ＢはＢＲＣＡ８４Ｄおよびそのヒト化誘導体ｈＢＲＣＡ８４Ｄの可変軽
鎖（図１１Ａ）または可変重鎖（図１１Ｂ）のアミノ酸残基のアライメントを示す。
ヒトＢ７−Ｈ３に対する親和性の改善を示すｈＢＲＣＡ８４Ｄ種を得るために、ｈＢＲ
ＣＡ８４Ｄ−１の軽鎖または重鎖（すなわち、それぞれｈＢＲＣＡ８４Ｄ−１ＶＬまたは
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−１ＶＨ）をコードするポリヌクレオチドに突然変異誘発を施し、変異
したｈＢＲＣＡ８４Ｄ−１軽鎖誘導体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−３
ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−４ＶＬ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−５ＶＬおよびｈＢＲＣＡ８４Ｄ−
６ＶＬと、変異したｈＢＲＣＡ８４Ｄ−１重鎖誘導体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＨ、ｈＢＲ
ＣＡ８４Ｄ−３ＶＨおよびｈＢＲＣＡ８４Ｄ−４ＶＨを単離し、同定した。これらの抗体
の可変軽鎖および重鎖のアミノ酸配列およびポリヌクレオチド配列を以下に示す。
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＬ（配列番号８９）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKALIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＬをコードするポリヌクレオチド（配列番号９０）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgacc atcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggcaaggccc ctaaggcgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccacctacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−３ＶＬ（配列番号９１）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVS VTCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKLLIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−３ＶＬをコードするポリヌクレオチド（配列番号９２）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgtcc gtcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccacctacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−４ＶＬ（配列番号９３）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GQAPKLLIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−４ＶＬをコードするポリヌクレオチド（配列番号９４）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgacc atcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggccaggccc ctaagctgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccacctacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−５ＶＬ（配列番号９５）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GQAPKALIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFATYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−５ＶＬをコードするポリヌクレオチド（配列番号９６）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgacc atcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggccaggccc ctaaggcgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccacctacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−６ＶＬ（配列番号９７）：
DIQLTQSPSF LSASVGDRVT ITCKASQNVD TNVAWYQQKP GKAPKLLIYS
ASYRYSGVPS RFSGSGSGTD FTLTISSLQP EDFAEYYCQQ YNNYPFTFGQ
GTKLEIK
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−６ＶＬをコードするポリヌクレオチド（配列番号９８）：
gacatccagc tgacccagtc cccctccttc ctgtctgcct ccgtgggcga
cagagtgacc atcacatgca aggcctccca gaacgtggac accaacgtgg
cctggtatca gcagaagcct ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc
gcctcctacc ggtactccgg cgtgccttcc aggttctccg gctccggctc
tggcaccgac ttcaccctga ccatctccag cctgcagcct gaggacttcg
ccgagtacta ctgccagcag tacaacaact accctttcac cttcggccag
ggcaccaagc tggaaatcaa g
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＨ（配列番号９９）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRDED TAVYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SS
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＨをコードするポリヌクレオチド（配列番号１００）：
gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggagga ctggtgcagc ctggcggctc
cctgagactg tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agcttcggca
tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg gactggaatg ggtggcctac
atctcctccg actcctccgc catctactac gccgacaccg tgaagggcag
gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac ctgcagatga
actccctgcg ggacgaggac accgccgtgt actactgcgg cagaggccgg
gagaatatct actacggctc ccggctggat tattggggcc agggcaccac
cgtgaccgtg tcctct
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−３ＶＨ（配列番号１０１）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRDED TAMYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SS
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−３ＶＨをコードするポリヌクレオチド（配列番号１０２）：
gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggagga ctggtgcagc ctggcggctc
cctgagactg tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agcttcggca
tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg gactggaatg ggtggcctac
atctcctccg actcctccgc catctactac gccgacaccg tgaagggcag
gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac ctgcagatga
actccctgcg ggacgaggac accgccatgt actactgcgg cagaggccgg
gagaatatct actacggctc ccggctggat tattggggcc agggcaccac
cgtgaccgtg tcctct
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−４ＶＨ（配列番号１０３）：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PGKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNAKNSLY LQMNSLRSED TAVYYCARGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTVTV SS
ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−４ＶＨをコードするポリヌクレオチド（配列番号１０４）：
gaggtgcagc tggtcgagtc tggcggagga ctggtgcagc ctggcggctc
cctgagactg tcttgcgccg cctccggctt caccttctcc agcttcggca
tgcactgggt ccgccaggct ccaggcaagg gactggaatg ggtggcctac
atctcctccg actcctccgc catctactac gccgacaccg tgaagggcag
gttcaccatc tcccgggaca acgccaagaa ctccctgtac ctgcagatga
actccctgcg gagcgaggac accgccgtgt actactgcgc cagaggccgg
gagaatatct actacggctc ccggctggat tattggggcc agggcaccac
cgtgaccgtg tcctct
表２２に供試したｈＢＲＣＡ８４Ｄ可変軽鎖および可変重鎖突然変異を列挙する。数字
は図１１Ａおよび１１Ｂで用いたＫａｂａｔナンバリングシステムに相当する。
ヒトＢ７−Ｈ３に対するｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖誘導体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−３ＶＬ、ｈＢ
ＲＣＡ８４Ｄ−４ＶＬおよびｈＢＲＣＡ８４Ｄ−５ＶＬの相対的結合親和性を、これらの
軽鎖可変領域とキメラＢＲＣＡ８４Ｄ−１ＶＨ重鎖を含む抗体を形成することにより調べ
た（図１２）。ＢＲＣＡ８４Ｄ−５ＶＬ（Ｋ４２Ｑ、Ｌ４６Ａ）は、試験したｈＢＲＣＡ
８４Ｄ−ＶＬのうち最高の結合親和性を有することが分かった。従って、ＢＲＣＡ８４Ｄ
−５ＶＬを軽鎖として用いて、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−１ＶＨ、ｈＢＲ
ＣＡ８４Ｄ−２ＶＨ、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−３ＶＨおよびｈＢＲＣＡ８４Ｄ−４ＶＨのヒト
Ｂ７−Ｈ３に対する相対的結合親和性を検討した（図１３）。ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＨ
（Ａ９３Ｇ）は、試験したｈＢＲＣＡ８４Ｄ−ＶＨのうち最高の結合親和性を有すること
が分かった。
キメラＢＲＣＡ８４Ｄ−１のアミノ酸配列およびコードポリヌクレオチド配列は次の通り
である。
ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖（配列番号１０５）：
DIAMTQSQKF MSTSVGDRVS VTCKASQNVD TNVAWYQQKP GQSPKALIYS
ASYRYSGVPD RFTGSGSGTD FTLTINNVQS EDLAEYFCQQ YNNYPFTFGS
GTKLEIKRTV AAPSVFIFPP SDEQLKSGTA SVVCLLNNFY PREAKVQWKV
DNALQSGNSQ ESVTEQDSKD STYSLSSTLT LSKADYEKHK VYACEVTHQG
LSSPVTKSFN RGEC
ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ軽鎖をコードするポリヌクレオチド（配列番号１０６）：
gacattgcga tgacccagtc tcaaaaattc atgtccacat cagtaggaga
cagggtcagc gtcacctgca aggccagtca gaatgtggat actaatgtag
cctggtatca acagaaacca gggcaatctc ctaaagcact gatttactcg
gcatcctacc ggtacagtgg agtccctgat cgcttcacag gcagtggatc
tgggacagat ttcactctca ccatcaacaa tgtgcagtct gaagacttgg
cagagtattt ctgtcagcaa tataacaact atccattcac gttcggctcg
gggacaaagt tggaaataaa acgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat
cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt
gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg
gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga
cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag
cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttag
ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖（配列番号１０７）：
DVQLVESGGG LVQPGGSRKL SCAASGFTFS SFGMHWVRQA PEKGLEWVAY
ISSDSSAIYY ADTVKGRFTI SRDNPKNTLF LQMTSLRSED TAMYYCGRGR
ENIYYGSRLD YWGQGTTLTV SSASTKGPSV FPLAPSSKST SGGTAALGCL
VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT
QTYICNVNHK PSNTKVDKRV EPKSCDKTHT CPPCPAPELL GGPSVFLFPP
KPKDTLMISR TPEVTCVVVD VSHEDPEVKF NWYVDGVEVH NAKTKPREEQ
YNSTYRVVSV LTVLHQDWLN GKEYKCKVSN KALPAPIEKT ISKAKGQPRE
PQVYTLPPSR DELTKNQVSL TCLVKGFYPS DIAVEWESNG QPENNYKTTP
PVLDSDGSFF LYSKLTVDKS RWQQGNVFSC SVMHEALHNH YTQKSLSLSP
GK
ｃｈＢＲＣＡ８４Ｄ重鎖をコードするポリヌクレオチド（配列番号１０８）：
gatgtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttagtgcagc ctggagggtc
ccggaaactc tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt agctttggaa
tgcactgggt tcgtcaggct ccagagaagg ggctggagtg ggtcgcatac
attagtagtg acagtagtgc catctactat gcagacacag tgaagggccg
attcaccatc tccagagaca atcccaagaa caccctgttc ctgcaaatga
ccagtctaag gtctgaggac acggccatgt attactgtgg aagagggagg
gaaaacattt actacggtag taggcttgac tactggggcc aaggcaccac
tctcacagtc tcctcagcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg
caccctcctc caagagcacc tctgggggca cagcggccct gggctgcctg
gtcaaggact acttccccga accggtgacg gtgtcgtgga actcaggcgc
cctgaccagc ggcgtgcaca ccttcccggc tgtcctacag tcctcaggac
tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc cctccagcag cttgggcacc
cagacctaca tctgcaacgt gaatcacaag cccagcaaca ccaaggtgga
caagagagtt gagcccaaat cttgtgacaa aactcacaca tgcccaccgt
gcccagcacc tgaactcctg gggggaccgt cagtcttcct cttcccccca
aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt
ggtggtggac gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc aactggtacg
tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag
tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgtcc tgcaccagga
ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac aaagccctcc
cagcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gatgagctga ccaagaacca
ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg
tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacgcct
cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc ctctacagca agctcaccgt
ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc
atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg
ggtaaatga
（１）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＬとｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＨを含む抗体（二試験）、
（２）キメラＢＲＣＡ８４Ｄ、（３）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−５ＶＬとキメラＢＲＣＡ８４Ｄ
−ＨＣを含む抗体、および（４）ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−５ＶＬとｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ＶＨ
を含む抗体の相対的結合親和性を比較した。結果を図１４に示す。
ヒト化抗Ｂ７−Ｈ３抗体は異種移植片において腫瘍増殖を阻害する
ヒト化抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、in vivo腫瘍増殖を阻害する能力を実証するために、マウ
ス異種移植片においてＨＴ−１１９７膀胱癌細胞およびＡ４９８腎癌細胞の腫瘍増殖を調
べた。ヒト化抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２（ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２ ＶＬ鎖／ｈＢＲＣＡ８
４Ｄ−２ ＶＬ鎖）を、置換Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ
３９６Ｌを有するＦｃ領域を含むように改変した。このＦｃ改変型ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２
抗体を癌細胞移植から７日、１４日、２１日および２８日後にマウスに投与した（用量１
μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇまたは２０μｇ／ｋｇ）。これらの結果は、全ての用量で投
与したＦｃ改変型ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２抗体がＨＴ−１１９７膀胱癌細胞（図１５）およ
びＡ４９８腎癌細胞（図１６）の腫瘍増殖を阻害することができたことを示す。
Ｂ７−Ｈ３およびＴ細胞受容体に特異的な二重親和性再標的化試薬（ＤＡＲＴ（商標））
はＴ細胞致死の有効な再指向を媒介する
Ｂ７−Ｈ３と、Ｔ細胞受容体（「ＴＣＲ」）、またナチュラルキラーグループ２Ｄ（Ｎ
ＫＧ２Ｄ）受容体に特異的な二重親和性再標的化試薬（ＤＡＲＴ（商標））を作製した。
このようなＤＡＲＴ（商標）は、癌細胞の位置に（このような癌細胞がＤＡＲＴ（商標）
のＢ７−Ｈ３結合部分に結合することによる）、Ｔ細胞を局在させる能力（このようなＴ
細胞がＴＣＲ結合ＤＡＲＴ（商標）のＴＣＲ結合部分に結合することによる）またはＮＫ
細胞を局在させる能力（このようなＮＫ細胞がＮＫＧ２Ｄ結合ＤＡＲＴ（商標）のＮＫＧ
２Ｄ結合部分に結合することによる）を有する。次に、前記の局在したＴ細胞またはＮＫ
細胞は、本明細書で「再指向」致死と呼ばれるプロセスにおいて癌細胞の致死を媒介する
。
Ｂ７−Ｈ３およびＴ細胞受容体（「ＴＣＲ」）に特異的な二重親和性再標的化試薬（Ｄ
ＡＲＴ（商標））は、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２の抗Ｂ７−Ｈ３可変ドメインと抗ＴＣＲ可変
ドメインを有するように構築した。
ＴＣＲ ＶＬ×ｈＢＲＣＡ８４Ｄ ＶＨ−２−ＥコイルＤＡＲＴ（商標）鎖（配列番号
１０９）：
ＴＣＲ ＶＬ×ｈＢＲＣＡ８４Ｄ ＶＨ−２−ＥコイルＤＡＲＴ（商標）鎖をコードす
るポリヌクレオチド配列番号１１０）：
ｈＢＲＣＡ８４ＤＶＬ−２×ＴＣＲ ＶＨ−Ｋコイル鎖（配列番号１１１）：
ｈＢＲＣＡ８４ＤＶＬ−２×ＴＣＲ ＶＨ−Ｋコイル鎖をコードするポリヌクレオチド
（配列番号１１２）：
Ｂ７−Ｈ３およびナチュラルキラーグループ２Ｄ（ＮＫＧ２Ｄ）受容体に特異的な二重
親和性再標的化試薬（ＤＡＲＴ（商標））は、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２の抗Ｂ７−Ｈ３可変
ドメインと抗ＴＣＲ可変ドメインを有するように構築した。
ＮＫＧ２Ｄ ＶＬ×ｈＢＲＣＡ８４Ｄ ＶＨ−２−ＥコイルＤＡＲＴ（商標）鎖（配列
番号１１３）：
ＮＫＧ２Ｄ ＶＬ×ｈＢＲＣＡ８４Ｄ ＶＨ−２−ＥコイルＤＡＲＴ（商標）鎖をコー
ドするポリヌクレオチド（配列番号１１４）：
ｈＢＲＣＡ８４ＤＶＬ−２×ＮＫＧ２Ｄ ＶＨ−Ｋコイル鎖（配列番号１１５）：
ｈＢＲＣＡ８４ＤＶＬ−２×ＮＫＧ２Ｄ ＶＨ−Ｋコイル鎖をコードするポリヌクレオ
チド（配列番号１１６）：
ＤＡＲＴ（商標）の、このような癌細胞の再指向致死を媒介する能力を実証するために
、上記のｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２／抗ＴＣＲ ＤＡＲＴ（商標）（「ＴＤＡＲＴ（商標）」
）、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２、ｈＢＲＣＡ８４Ｄ−２（Ｆｃ改変：Ｌ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ
、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌ）、およびＴＣＲ−ＤＡＲＴ（商標）対照を
種々の濃度で標的癌細胞（ＳＫ−ＭＥＳ−１肺癌細胞、Ａ４９８腎癌細胞、ＬＮＣａＰ前
立腺癌細胞またはＵＡＣＣ−６２黒色腫細胞）およびエフェクターとしての休止期ＰＢＭ
Ｃ（Ｅ：Ｔ比＝３０：１）とともにインキュベートし、細胞傷害性を測定した（ＬＤＨア
ッセイ）。これらの検討の結果を図１７Ａ〜１７Ｄに示すが、これらの結果は、ｈＢＲＣ
Ａ８４Ｄ−２／抗ＴＣＲ ＤＡＲＴ（商標）（「ＴＤＡＲＴ（商標）」）の、癌細胞の再
指向致死を媒介する能力を実証する。
腫瘍不含マウスにおける薬物動態特性
抗Ｂ７−Ｈ３抗体（Ｍａｂ１）を雄ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＿ＦＯＸＮ１マウ
スに注射し（５ｍｇ／ｋｇ；ＩＶ）、注射の２、１５、３０分後、および１、２、４、６
時間後、および１、２、３、６、８、１４、２１、２８日後に血清をアッセイいた（投与
前も）。この抗体のＴ１／２は１０．５４日であり、Ｃmaxは４３．４９３μｇ／ｍｌで
あることが分かった。抗体の経時的濃度は二成分モデルに当てはまる二相系であることが
分かった（図１８Ａ〜１８Ｂ）。２−コンパートメントモデルを５ｍｇ／ｋｇ用量から得
られたパラメーターとともに用いて作成した推定薬物動態特性を図１８Ｃに示す。
マウス異種移植モデルにおける抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、ＨＴ−１１９７膀胱癌細胞と結合し
、腫瘍発達を抑制または阻害する能力
上記の抗Ｂ７−Ｈ３抗体（Ｍａｂ１）の、ヒトＢ７−Ｈ３発現膀胱癌細胞系統であるＨ
Ｔ−１１９７と結合する能力を評価した。図１９に示されるように、このような細胞はＨ
ＥＲ２よりもＰＲＣＡ１３５の高い発現を示し、従って、ＨＴ−１１９７腫瘍の改善にお
ける本発明の抗体の治療能を評価するのに特に好適である。この結論によれば、抗Ｂ７−
Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ変異体はＨＴ−１１９７細胞と結合し得ることが分かった。図
２０はＨＴ−１１９７細胞に対するＭａｂ１抗体の結合親和性を示す。
マウス（ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）の側腹部に８×１０6のＨ
Ｔ−１１９７細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル（商標）で１：１希
釈したハムのＦ１２培地２００μｌとして移植した。Ｍａｂ１による処置は、移植７日以
内に、０．１、０．５、１、５または１０ｍｇ／ｋｇの用量を用い（各用量につき雌マウ
ス８匹）、ｉｖ Ｑ７Ｄ×５で開始した。対照マウス群にはセツキシマブ（抗ＥＧＲＦ抗
体）を１、５または１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した（各用量につき雌マウス８匹）。ま
た、８匹の雌マウスの全てにビヒクルかまたは１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対照を注射した。
腫瘍測定は３〜４日おきに行った。この試験の結果（図２１Ａ）は、Ｍａｂ１がマウス異
種移植モデルにおいて膀胱腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。図２
１Ｂは、セツキシマブ(centimab)を用いて得られた結果を示す。図２１Ａと２１Ｂを比較
すると、本発明の抗体はマウス異種移植モデルにおける膀胱腫瘍発達の抑制または阻害に
おいてセツキシマブ(centimab)よりも効果的であることが示される。図２１Ｃは試験した
最大試験用量で得られた結果を比較したものである。
マウス異種移植モデルにおける、抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、ＨＴ−１３７６膀胱癌細胞と結合
し、腫瘍発達を抑制または阻害する能力
上記の抗Ｂ７−Ｈ３抗体（Ｍａｂ１）の、ヒトＢ７−Ｈ３発現膀胱癌細胞系統であるＨ
Ｔ−１３７６と結合する能力を評価した。図２２Ａ〜２２Ｂに示されるように、このよう
な細胞はＨＥＲ２またはＰＭＳＡよりもＰＲＣＡ１３５の高い発現を示し、従って、ＨＴ
−１３７６腫瘍の改善における本発明の抗体の治療能を評価するのに特に好適である。こ
の結論によれば、抗Ｂ７−Ｈ３抗体ｈＢＲＣＡ８４Ｄ変異体はＨＴ−１３７６細胞と結合
し得ることが分かった。図２２Ａ〜２２ＢはＨＴ−１３７６細胞に対するＭａｂ１抗体の
結合親和性を示す。
マウス（ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）の側腹部に５×１０6のＨ
Ｔ−１３７６細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル（商標）で１：１希
釈したハムのＦ１２培地２００μｌとして移植した。Ｍａｂ１による処置は、移植７日以
内に１ｍｇ／ｋｇの用量にてｉｖ Ｑ７Ｄ×４で開始した。この試験の結果（図２３）は
、Ｍａｂ１がマウス異種移植モデルにおいて膀胱腫瘍発達を抑制または阻害することがで
きたことを示す。
抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、癌細胞と結合する能力
抗Ｂ７−Ｈ３抗体ＢＲＣＡ８４Ｄの、ＳＷ４８０およびＳＷ６２０結腸直腸癌細胞；Ａ
ＧＳ胃癌細胞；Ｍ−１４およびＬＯＸ ＩＭＶＩ黒色腫細胞；２２ｒｖ前立腺癌細胞；Ａ
ｓＰＣ−１およびＢｘＰｃ−３膵臓癌細胞；Ａ４９８および７８６−０腎癌細胞と結合す
る能力をＦＡＣＳ分析により評価した。該抗体はこのような細胞の全てと結合し得ること
が分かった。
マウス異種移植モデルにおける抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、胃腫瘍発達を抑制または阻害する能
力
マウス（ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）の側腹部に５×１０6のＡ
ＧＳ細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル（商標）で１：１希釈したハ
ムのＦ１２培地２００μｌとして移植した。Ｍａｂ１による処置は、移植７日以内に、０
．５、１、５または１０ｍｇ／ｋｇの用量を用いてｉｖ Ｑ７Ｄ×５で開始した。この試
験の結果（図２４）は、Ｍａｂ１がマウス異種移植モデルにおいて胃腫瘍発達を抑制また
は阻害することができたことを示す。
マウス異種移植モデルにおける抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、肺癌細胞と結合し、腫瘍発達を抑制
または阻害する能力
Ａ５４９肺癌細胞をｈＢＲＣＡ８４Ｄ、ｃｈＢＲＣＡ８４ＤおよびｈＢＲＣＡ８４（０
２６４ Ｆｃ）変異体の存在下でインキュベートし、これらの抗体の細胞傷害作用を測定
した。この試験の結果を図２５に示すが、それらの結果はこの３種類の抗体が全てＡ５４
９細胞に対して細胞傷害性であったことを示す。
マウス（ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）の側腹部に８×１０6のＡ
５４９細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル（商標）で１：１希釈した
ハムのＦ１２培地２００μｌとして移植した。Ｍａｂ１による処置は、移植７日以内に、
１ｍｇ／ｋｇの用量を用いてｉｖ Ｑ７Ｄ×４で開始した。この試験の結果（図２６）は
、Ｍａｂ１がマウス異種移植モデルにおいて肺癌腫瘍発達を抑制または阻害することがで
きたことを示す。
ＣａＬｕ３肺癌細胞において、このような細胞が抗Ｂ７−Ｈ３抗体と結合するかどうか
を判定するためにＦＡＣＳ分析を行った。この試験から、このような細胞がＢ７−Ｈ３を
発現し、本発明の抗体と結合することが確認された。本発明の抗体が肺癌腫瘍発達の抑制
または阻害に効果的であるかどうかを判定するために、マウス（ｍＣＤ１６−／−、ｈＣ
Ｄ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）の側腹部に５×１０6のＣａＬｕ３細胞を皮下移植した。これ
らの腫瘍細胞は、マトリゲル（商標）で１：１希釈したハムのＦ１２培地２００μｌとし
て移植した。Ｍａｂ１による処置は、移植７日以内に、０．５、１または５ｍｇ／ｋｇの
用量を用いてｉｖ Ｑ７Ｄ×４で開始した。この試験の結果（図２７）は、Ｍａｂ１がマ
ウス異種移植モデルにおいて肺癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す
。
マウス異種移植モデルにおける抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、ＬＯＸ黒色腫腫瘍発達を抑制または
阻害する能力
マウス（８匹の雌ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）の側腹部にＬＯＸ
−ＩＭＶＩ黒色腫癌細胞を皮下移植した後、ＰＢＳ対照、ＩｇＧ対照（５／ｍｇ／ｋｇ）
、Ｍａｂ１（０．５、１、５または１０ｍｇ／ｋｇ）またはｉｐ／ＢＩＷｘ２をドキセタ
キセル（５、１０または２０ｍｇ／ｋｇ）とともに、ｉｖ／Ｑ７Ｄ×３にて接種した。こ
れらの腫瘍細胞は、マトリゲル（商標）で１：１希釈したハムのＦ１２培地２００μｌと
して移植した。Ｍａｂ１による処置は移植７日以内に開始した。この試験の結果（図２８
Ａ〜２８Ｃ）は、Ｍａｂ１がマウス異種移植モデルにおいて黒色腫腫瘍発達を抑制または
阻害することができたことを示す。
マウス異種移植モデルにおける抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、ＵＡＣＣ−６２黒色腫腫瘍発達を抑
制または阻害する能力
マウス（８匹の雌ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）の側腹部にＵＡＣ
Ｃ−６２黒色腫癌細胞を皮下移植した後、ＰＢＳ対照、ＩｇＧ対照（５／ｍｇ／ｋｇ）ま
たはＭａｂ１（０．５、１、５または１０ｍｇ／ｋｇ）をｉｖ／Ｑ７Ｄ×５で接種した。
これらの腫瘍細胞は、マトリゲル（商標）で１：１希釈したハムのＦ１２培地２００μｌ
として移植した。Ｍａｂ１による処置は移植７日以内に開始した。この試験の結果（図２
９）は、Ｍａｂ１がマウス異種移植モデルにおいて黒色腫腫瘍発達を抑制または阻害する
ことができたことを示す。
マウス異種移植モデルにおける抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、２２ｒｖ前立腺腫瘍発達を抑制また
は阻害する能力
マウス（ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）の側腹部に６×１０6の２
２ｒｖ前立腺癌細胞を皮下移植した後、ＰＢＳ対照、ＩｇＧ（１０ｍｇ／ｋｇ）、Ｍａｂ
１（０．５、１、５または１０ｍｇ／ｋｇ；Ｑ７Ｄ×５）またはトラスツズマブ（１．７
または１５ｍｇ／ｋｇ）をｉｖ／Ｑ７Ｄ×４で接種した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲ
ル（商標）で１：１希釈したハムのＦ１２培地２００μｌとして移植した。Ｍａｂ１によ
る処置は移植７日以内に開始した。この試験の結果（図３０Ａ〜３０Ｃ）は、Ｍａｂ１が
マウス異種移植モデルにおいて前立腺癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたこと
を示す。
マウス異種移植モデルにおける抗Ｂ７−Ｈ３抗体の、腎癌細胞と結合し、腫瘍発達を抑制
または阻害する能力
Ａ４９８腎癌細胞をｈＢＲＣＡ８４Ｄ、ｃｈＢＲＣＡ８４ＤおよびｈＢＲＣＡ８４（０
２６４ Ｆｃ）変異体の存在下でインキュベートし、これらの抗体の細胞傷害作用を測定
した。この試験の結果を図３１に示すが、それらの結果はこの３種類の抗体が全てＡ４９
８細胞に対して細胞傷害性であったことを示す。
Ａ４９８異種移植腫瘍組織のＩＨＣ分析を、ビオチン化ＢＲＣＡ８４Ｄ抗体（２０μｇ
／ｍｌ）、ＢＲＣＡ６９Ｄ（５μｇ／ｍｌ）および抗Ｈｅｒ２抗体（２０μｇ／ｍｌ）を
用いて行った。ＢＲＣＡ８４Ｄ抗体は腫瘍組織の２０〜４０％と結合することが分かり（
弱〜中程度：＋または＋＋）；ＢＲＣＡ６９Ｄは腫瘍組織の８０〜１００％と結合するこ
とが分かった（中程度〜強：＋＋または＋＋＋）。ＢＲＣＡ８４Ｄ抗体はＵＭＵＣ−３腫
瘍組織の４０％と弱い結合を示すことが分かり（＋）；ＢＲＣＡ６９Ｄは該腫瘍組織の７
０％と中程度〜強い結合を示すことが分かり（＋＋または＋＋＋）；抗Ｈｅｒ２抗体は該
腫瘍組織の２０％と変動のある結合を示すことが分かった（＋〜＋＋＋）。対照としての
抗Ｈｅｒ２抗体はＳＫＢＲ−３細胞と結合することが分かり（＋＋＋）、ＢＲＣＡ８４Ｄ
およびＢＲＣＡ６９ＤはＨｓ ７００Ｔ細胞と結合可能であることが分かった（＋＋＋）
。
マウス（ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）の側腹部に５×１０6のＡ
４９８腎癌細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル（商標）で１：１希釈
したハムのＦ１２培地２００μｌとして移植した。Ｍａｂ１による処置は、移植７日以内
に、０．１、０．５、１、５または１０ｍｇ／ｋｇの用量を用いてｉｖ Ｑ７Ｄ×５で開
始した。対照マウス群にはセツキシマブ（抗ＥＧＲＦ抗体）を１、７または１５ｍｇ／ｋ
ｇの用量で投与した。さらなる対照マウスにはビヒクルまたは１０ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ対
照を注射した。この試験の結果（図３２）は、Ｍａｂ１がマウス異種移植モデルにおいて
腎癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。
あるいは、マウス（ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）の側腹部に５×
１０6の７８６−０腎癌細胞を皮下移植した。これらの腫瘍細胞は、マトリゲル（商標）
で１：１希釈したハムのＦ１２培地２００μｌとして移植した。Ｍａｂ１による処置は、
移植７日以内に、０．１、０．５、１、５または１０ｍｇ／ｋｇの用量を用いてｉｖ Ｑ
７Ｄ×５で開始した。対照マウス群にはセツキシマブ（抗ＥＧＲＦ抗体）を１、７または
１５ｍｇ／ｋｇの用量で投与した。さらなる対照マウスにはビヒクルまたは１０ｍｇ／ｋ
ｇのＩｇＧ対照を注射した。この試験の結果（図３３Ａ〜３３Ｂ）は、Ｍａｂ１がマウス
異種移植モデルにおいて腎癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。
Ｍａｂ１の活性は、癌の化学療法に用いられている有糸分裂阻害剤であるパクリタキセ
ルに匹敵していた。８匹の雌マウス（ｍＣＤ１６−／−、ｈＣＤ１６Ａ＋＿ＦｏｘＮ１）
群の側腹部に７８６−０腎癌細胞を皮下移植した後、０．１、０．５、１、５または１０
ｍｇ／ｋｇの用量にてＭａｂ１をｉｖ Ｑ７Ｄで与えた。このようなマウス８匹の対照群
にはパクリタキセルを２．５ｍｇ／ｋｇの用量で、試験２１日目、２８日目および３５日
目に投与した。さらなる対照マウス（各群につき雌７匹）にビヒクルまたは５ｍｇ／ｋｇ
のＩｇＧ対照を注射した。この試験の結果（図３４）は、Ｍａｂ１がマウス異種移植モデ
ルにおいて腎癌腫瘍発達を抑制または阻害することができたことを示す。
カニクイザル毒性試験
Ｍａｂ１の単回用量後の急性毒性特性を評価するため、Ｍａｂ１の薬物動態特性を求め
るため、エフェクター細胞の活性化に関連するサイトカイン誘導の時間と用量の関係を確
定するため、および循環白血球（例えば、ＮＫ細胞およびＴ細胞）のレベルに対する薬物
処置の効果を評価するために、カニクイザル毒性試験を行う。
このような試験は６匹（雄３匹と雌３匹）からなる４群を含み、最初の処置から最終の
剖検まで７週間にわたるように設計することができる。群１は１週目と２週目にビヒクル
のみを施す対照群である。群１のうち４匹（雄２匹と雌２匹）は３週目に犠牲にする。群
１の残りのメンバーは３週目にさらなるビヒクルを施し、７週目に犠牲にして剖検にかけ
る。群２〜４は、１週目にビヒクル、２週目にＢ７−Ｈ３抗体（それぞれ１、３０または
１００ｍｇ／ｋｇ）を施す試験群である。各群のうち４匹（雄２匹と雌２匹）は３週目に
犠牲にする。各群の残りのメンバーは３週目にさらなるビヒクルを施し、７週目に犠牲に
して剖検にかける。
注入は全て十分な耐用性があり、死亡はなく、または体重、臨床徴候もしくは血清検査
値に有意な変化は見られない。循環ＮＫ細胞には用量依存的な減少が見られるが、循環Ｂ
細胞およびＴ細胞には用量依存的な減少は見られない。
この試験により、カニクイザルが適切な毒物学的種であるという確証が得られる。正常
なヒト組織と接触させた場合、抗体ＢＲＣＡ８４Ｄは肝臓、膵臓、結腸、肺および副腎皮
質において様々な程度の染色強度を示した。肝臓染色は比較的類洞壁細胞（繊維芽細胞お
よびクップファー細胞）に限定されていた。膵臓染色は主としてコラーゲン線維で見られ
、また、割合は小さいが上皮（腺房細胞および／または介在部細胞）でも見られた。結腸
染色は陰窩上皮の頂端膜および粘膜の繊維芽細胞に比較的限定された。肺は、上皮に極め
て弱い、パッチ状の染色を示した。ＢＲＣＡ８４Ｄは、肝臓および膵臓の染色の欠如とカ
ニクイザル下垂体細胞におけるＢ７−Ｈ３発現の可能性を除き、ヒト組織特性と比較して
カニクイザル組織において良好な交差反応性を示した。
本明細書に記載される全ての刊行物および特許は、個々の各刊行物または特許出願が参
照によりその全内容が本明細書に組み入れられることが具体的かつ個々に示される場合と
同程度に、参照により本明細書に組み入れられる。本発明をその具体的実施形態に関して
記載したが、さらなる改変が可能であると理解され、本出願は、一般に本発明の原理に従
い、本発明が属する技術分野で公知のまたは慣例的な実施の範囲内に入るような、また、
以上に示される本質的特徴に当てはまり得るような、本開示からの逸脱を含む、本発明の
いずれの変形、使用または適合も包含するものとする。

Claims (24)

  1. 二重親和性再標的化試薬において、前記試薬は、
    （Ａ）Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な免疫グロブリンＶＬエピトープ結合ドメイン、及び
    Ｂ７−Ｈ３以外の分子との結合に特異的なＶＨエピトープ結合ドメインを含む、ポリペプ
    チド鎖Ｉ、及び
    （Ｂ）Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な免疫グロブリンＶＨエピトープ結合ドメイン、及び
    前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子との結合に特異的なＶＬエピトープ結合ドメインを含む、ポリ
    ペプチド鎖ＩＩ
    を含み、
    前記ポリペプチド鎖ＩとＩＩがともに会合して、Ｂ７−Ｈ３と結合可能な機能的エピト
    ープ結合ドメイン及び前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子と結合可能な機能的エピトープ結合ドメ
    インを形成し、
    （１）前記ポリペプチド鎖Ｉが、ＣＤＲ１（配列番号２１）、ＣＤＲ２（配列番号２３）
    及びＣＤＲ３（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むか、若しくは前記ポリペプチド鎖Ｉ
    Ｉが、ＣＤＲ１（配列番号２９）、ＣＤＲ２（配列番号３１）及びＣＤＲ３（配列番号３
    ３）のアミノ酸配列を含み、
    （２）前記ポリペプチド鎖Ｉが、ＣＤＲ１（配列番号５）、ＣＤＲ２（配列番号７）及び
    ＣＤＲ３（配列番号９）のアミノ酸配列を含むか、若しくは前記ポリペプチド鎖ＩＩが、
    ＣＤＲ１（配列番号１３）、ＣＤＲ２（配列番号１５）及びＣＤＲ３（配列番号１７）の
    アミノ酸配列を含み、又は
    （３）前記ポリペプチド鎖Ｉが、ＣＤＲ１（配列番号３７）、ＣＤＲ２（配列番号３９）
    、及びＣＤＲ３（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むか、若しくは前記ポリペプチド鎖
    ＩＩが、ＣＤＲ１（配列番号４５）、ＣＤＲ２（配列番号４７）及びＣＤＲ３（配列番号
    ４９）のアミノ酸配列を含み、
    前記試薬がＦｃ領域の少なくとも一部を含む、二重親和性再標的化試薬。
  2. Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＬエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ１（配列番
    号２１）、ＣＤＲ２（配列番号２３）及びＣＤＲ３（配列番号２５）のアミノ酸配列を含
    むとともに、Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＨエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ
    １（配列番号２９）、ＣＤＲ２（配列番号３１）及びＣＤＲ３（配列番号３３）のアミノ
    酸配列を含む、請求項１に記載の二重親和性再標的化試薬。
  3. Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＬエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ１（配列番
    号５）、ＣＤＲ２（配列番号７）及びＣＤＲ３（配列番号９）のアミノ酸配列を含むとと
    もに、Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＨエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ１（配
    列番号１３）、ＣＤＲ２（配列番号１５）及びＣＤＲ３（配列番号１７）のアミノ酸配列
    を含む、請求項１に記載の二重親和性再標的化試薬。
  4. Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＬエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ１（配列番
    号３７）、ＣＤＲ２（配列番号３９）、及びＣＤＲ３（配列番号４１）のアミノ酸配列を
    含むとともに、Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＨエピトープ結合ドメインが、ＣＤ
    Ｒ１（配列番号４５）、ＣＤＲ２（配列番号４７）及びＣＤＲ３（配列番号４９）のアミ
    ノ酸配列を含む、請求項１に記載の二重親和性再標的化試薬。
  5. （Ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン、及び
    （Ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン
    を含む、請求項１に記載の二重親和性再標的化試薬。
  6. （Ａ）前記ポリペプチド鎖ＩがさらにＥ−コイルドメインを含むとともに、前記ポリペプ
    チド鎖ＩＩがさらにＫ−コイルドメインを含み、又は
    （Ｂ）前記ポリペプチド鎖ＩがさらにＫ−コイルドメインを含むとともに、前記ポリペプ
    チド鎖ＩＩがさらにＥ−コイルドメインを含む、
    請求項１〜５のいずれか１項に記載の二重親和性再標的化試薬。
  7. 二重親和性再標的化試薬において、前記試薬は、
    （Ａ）Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な免疫グロブリンＶＬエピトープ結合ドメイン、及び
    Ｂ７−Ｈ３以外の分子との結合に特異的なＶＨエピトープ結合ドメインを含む、ポリペプ
    チド鎖Ｉ、及び
    （Ｂ）Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な免疫グロブリンＶＨエピトープ結合ドメイン、及び
    前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子との結合に特異的なＶＬエピトープ結合ドメインを含む、ポリ
    ペプチド鎖ＩＩ
    を含み、
    前記ポリペプチド鎖ＩとＩＩがともに会合して、Ｂ７−Ｈ３と結合可能な機能的エピト
    ープ結合ドメイン及び前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子と結合可能な機能的エピトープ結合ドメ
    インを形成し、
    （１）前記ポリペプチド鎖Ｉが、ＣＤＲ１（配列番号２１）、ＣＤＲ２（配列番号２３）
    及びＣＤＲ３（配列番号２５）のアミノ酸配列を含むか、若しくは前記ポリペプチド鎖Ｉ
    Ｉが、ＣＤＲ１（配列番号２９）、ＣＤＲ２（配列番号３１）及びＣＤＲ３（配列番号３
    ３）のアミノ酸配列を含み、
    （２）前記ポリペプチド鎖Ｉが、ＣＤＲ１（配列番号５）、ＣＤＲ２（配列番号７）及び
    ＣＤＲ３（配列番号９）のアミノ酸配列を含むか、若しくは前記ポリペプチド鎖ＩＩが、
    ＣＤＲ１（配列番号１３）、ＣＤＲ２（配列番号１５）及びＣＤＲ３（配列番号１７）の
    アミノ酸配列を含み、又は
    （３）前記ポリペプチド鎖Ｉが、ＣＤＲ１（配列番号３７）、ＣＤＲ２（配列番号３９）
    、及びＣＤＲ３（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むか、若しくは前記ポリペプチド鎖
    ＩＩが、ＣＤＲ１（配列番号４５）、ＣＤＲ２（配列番号４７）及びＣＤＲ３（配列番号
    ４９）のアミノ酸配列を含み、
    （１）前記ポリペプチド鎖ＩがさらにＥ−コイルドメインを含むとともに、前記ポリペプ
    チド鎖ＩＩがさらにＫ−コイルドメインを含み、又は
    （２）前記ポリペプチド鎖ＩがさらにＫ−コイルドメインを含むとともに、前記ポリペプ
    チド鎖ＩＩがさらにＥ−コイルドメインを含む、
    二重親和性再標的化試薬。
  8. Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＬエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ１（配列番
    号２１）、ＣＤＲ２（配列番号２３）及びＣＤＲ３（配列番号２５）のアミノ酸配列を含
    むとともに、Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＨエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ
    １（配列番号２９）、ＣＤＲ２（配列番号３１）及びＣＤＲ３（配列番号３３）のアミノ
    酸配列を含む、請求項７に記載の二重親和性再標的化試薬。
  9. Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＬエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ１（配列番
    号５）、ＣＤＲ２（配列番号７）及びＣＤＲ３（配列番号９）のアミノ酸配列を含むとと
    もに、Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＨエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ１（配
    列番号１３）、ＣＤＲ２（配列番号１５）及びＣＤＲ３（配列番号１７）のアミノ酸配列
    を含む、請求項７に記載の二重親和性再標的化試薬。
  10. Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＬエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ１（配列番
    号３７）、ＣＤＲ２（配列番号３９）及びＣＤＲ３（配列番号４１）のアミノ酸配列を含
    むとともに、Ｂ７−Ｈ３との結合に特異的な前記ＶＨエピトープ結合ドメインが、ＣＤＲ
    １（配列番号４５）、ＣＤＲ２（配列番号４７）及びＣＤＲ３（配列番号４９）のアミノ
    酸配列を含む、請求項７に記載の二重親和性再標的化試薬。
  11. （Ａ）配列番号８９のアミノ酸配列を有する軽鎖可変ドメイン、及び
    （Ｂ）配列番号９９のアミノ酸配列を有する重鎖可変ドメイン
    を含む、請求項７に記載の二重親和性再標的化試薬。
  12. 前記試薬が、Ｆｃ領域の少なくとも一部を含む、請求項７〜１１のいずれか１項に記載
    の二重親和性再標的化試薬。
  13. 前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子が、ハプテンである、請求項１〜１２のいずれか１項に記載
    の二重親和性再標的化試薬。
  14. 前記ハプテンが、フルオレセインイソチオシアネートである、請求項１３に記載の二重
    親和性再標的化試薬。
  15. 前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子が、Ｔ細胞受容体、ＣＤ３
    Ｔ細胞共受容体、又はＮＫＧ２Ｄ受容体である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の
    二重親和性再標的化試薬。
  16. 前記Ｂ７−Ｈ３以外の分子が、腫瘍関連抗原である、請求項１〜１２のいずれか１項に
    記載の二重親和性再標的化試薬。
  17. 前記腫瘍関連抗原がＡ３３；ＡＤＡＭ−９；ＡＬＣＡＭ；ＢＡＧＥ；β−カテニン；Ｃ
    Ａ１２５；カルボキシペプチダーゼＭ；ＣＤ１０３；ＣＤ１９；ＣＤ２０；ＣＤ２２；Ｃ
    Ｄ２３；ＣＤ２５；ＣＤ２７；ＣＤ２８；ＣＤ３６；ＣＤ４０；ＣＤ１５４；ＣＤ４５；
    ＣＤ４６；ＣＤ５；ＣＤ５６；ＣＤ７９ａ；ＣＤ７９ｂ；ＣＤＫ４；ＣＥＡ；ＣＴＬＡ４
    ；サイトケラチン８；ＥＧＦ−Ｒ；ＥｐｈＡ２；ＥｒｂＢ１；ＥｒｂＢ３；ＥｒｂＢ４；
    ＧＡＧＥ−１；ＧＡＧＥ−２；ＧＤ２；ＧＤ３；ＧＭ２；ｇｐ１００；ＨＥＲ−２（ｎｅ
    ｕ）；ヒト乳頭腫ウイルス−Ｅ６；ヒト乳頭腫ウイルス−Ｅ７；インテグリンα−Ｖ−β
    −６；ＪＡＭ−３；ＫＩＤ３；ＫＩＤ３１；ＫＳＡ（１７−１Ａ）；ＬＵＣＡ−２；ＭＡ
    ＧＥ−１；ＭＡＧＥ−３；ＭＡＲＴ；ＭＵＣ−１；ＭＵＭ−１；Ｎ−アセチルグルコサミ
    ニルトランスフェラーゼ；オンコスタチンＭ；ｐ１５；ＰＩＰＡ；ＰＳＡ；ＰＳＭＡ；Ｒ
    ＯＲ１；ｓＴｎ；ＴＮＦ−β受容体；ＴＮＦ−α受容体；ＴＮＦ−γ受容体；トランスフ
    ェリン受容体；及びＶＥＧＦ受容体からなる群から選択される、請求項１６に記載の二重
    親和性再標的化試薬。
  18. 請求項１〜１７のいずれか１項に記載の二重親和性再標的化試薬のポリペプチド鎖をコ
    ードする核酸分子。
  19. （ｉ）治療上有効な量の請求項１〜１７のいずれか１項に記載の二重親和性再標的化試薬
    と、（ｉｉ）薬学上許容される担体とを含む、医薬組成物。
  20. １種以上の付加的抗癌薬をさらに含む、請求項１９に記載の医薬組成物。
  21. 前記付加的抗癌薬が、化学療法薬、放射線療法薬、ホルモン療法薬、毒素または免疫療
    法薬である、請求項２０に記載の医薬組成物。
  22. 前記付加的抗癌薬がタキサン、メイタンシノイド、オーリスタチン、カリケアマイシン
    、アントラサイクリン、ＣＣ−１０６５類似体、ドセタキセル、カテプシン、リシン、ゲ
    ロニン、シュードモナス外毒素、ジフテリア毒素、ＲＮアーゼ、及び有毒放射性同位元素
    からなる群から選択される毒素である、請求項２１に記載の医薬組成物。
  23. 患者の癌治療のための薬剤の製造における、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の二
    重親和性再標的化試薬又は請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
  24. 前記癌が、副腎腫瘍、ＡＩＤＳ関連癌、胞状軟部肉腫、星状細胞系腫瘍、膀胱癌、骨癌
    、脳および脊髄癌、転移性脳腫瘍、乳癌、頚動脈小体腫瘍、子宮頚癌、軟骨肉腫、脊索腫
    、嫌色素性腎細胞癌、明細胞癌腫、結腸癌、結腸直腸癌、皮膚良性線維性組織球腫、線維
    形成性小円形細胞腫瘍、脳室上衣細胞腫、ユーイング腫瘍、骨外性粘液性軟骨肉腫、線維
    形成不全骨、線維性骨形成異常、胆嚢または胆管癌、胃癌、妊娠性絨毛性疾患、生殖細胞
    腫瘍、頭頚部癌、肝細胞性癌腫、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、白血病、脂肪腫、
    良性脂肪性腫瘍、脂肪肉腫、悪性脂肪性腫瘍、肝臓癌、リンパ腫、肺癌、髄芽細胞腫、黒
    色腫、髄膜腫、多発性内分泌腺腫症、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、神経芽腫、神経
    内分泌腫瘍、卵巣癌、膵臓癌、甲状腺乳頭癌、副甲状腺腫瘍、小児癌、末梢神経鞘腫瘍、
    褐色細胞腫、下垂体腫瘍、前立腺癌、後部ブドウ膜黒色腫、血液疾患、転移性腎臓癌、ラ
    ブドイド腫瘍、横紋筋肉腫、肉腫、皮膚癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、胃癌、滑膜
    肉腫、精巣癌、胸腺癌、胸腺腫、転移性甲状腺癌および子宮癌の細胞からなる群から選択
    される癌細胞の存在を特徴とする、請求項２３に記載の使用。
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