JP7315703B2 - 組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子、組換えベクター及びそれを含む宿主細胞、並びに薬物組成物及びその応用 - Google Patents
組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子、組換えベクター及びそれを含む宿主細胞、並びに薬物組成物及びその応用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP7315703B2 JP7315703B2 JP2021560752A JP2021560752A JP7315703B2 JP 7315703 B2 JP7315703 B2 JP 7315703B2 JP 2021560752 A JP2021560752 A JP 2021560752A JP 2021560752 A JP2021560752 A JP 2021560752A JP 7315703 B2 JP7315703 B2 JP 7315703B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- protein
- recombinant
- vector
- cancer
- human
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
- C07K14/70532—B7 molecules, e.g. CD80, CD86
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H5/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their plant parts; Angiosperms characterised otherwise than by their botanic taxonomy
- A01H5/10—Seeds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Botany (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、ヒト2Ig-B7-H3タンパク質を開示する。前記ヒト2Ig-B7-H3タンパク質のコーディング遺伝子は、前記組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子である。
ヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子
組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子は合計2765個の塩基を含み、5’末端の1488番目のCをTに部位特異的置換する。
組換えベクター構築
pIRES2-EGFPベクターのNHeIとNotI制限酵素切断部位の間に、配列表の配列番号1で示されるヌクレオチド配列を挿入して、組換えプラスミドpIRES2-EGFP/2Ig-B7-H3を得る。
溶離液は、pH3.0、0.1MのGly-HClバッファーである。
細胞表面におけるヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子の発現
細胞表面における2IgB7-H3の発現を検出するために、実施例2で得られたベクター及びネガティブコントロールレンチウイルスでSHG44、293T細胞を感染させた。感染後に細胞を収集し、細胞表面での2IgB7-H3の発現をフローサイトメトリーで検出する。
ターゲット細胞:SHG44、293T
培地:DMEM+10%FBS+1%P/S
フローサイトメトリー試薬:2IgB7-H3フローサイトメトリー抗体(ヒト)
フローサイトメトリー器具:BD FASAriaセルソーター。
1)細胞の培養:
実施例2で得られたベクター及びネガティブコントロールレンチウイルスで感染させたSHG44及び293T細胞を5% CO2、37℃の二酸化炭素インキュベーター内で培養する。
(1)対数増殖期にあるSHG44、293T細胞をトリプシン消化させ、細胞懸濁液を作る。
i)培地を除去し、PBSで2回洗浄し、底面壁に付着された細胞をトリプシンで消化し、細胞を収集し、1000rpmで5分間遠心する。
フローサイトメトリーデータ分析
293T細胞のフローサイトメトリーデータ分析結果は、図1に示す通りである。
結果から分かるように、抗原提示細胞293T及びSHG44細胞のWT+MT群のCD276の平均蛍光強度は、いずれもWT群及びMT群よりも高く、即ち、WT群及びMT群のCD276の発現量が比較的高い。
抗癌における応用
液体窒素で凍結保存したマウス肝臓癌H22細胞を37℃のウォーターバスで素早く解凍し、細胞密度を1×107/mLに調整し、2匹のBALB/cマウスに0.2mLずつ腹腔内接種する。
ヒト肺腺癌細胞PC-9を100mL/Lウシ胎児血清を含有するDMEM培地で培養し、1×105/mLの細胞濃度で円形ガラス底培養皿(Φ=35mm)に移植し、36℃、5%CO2細胞インキュベーターで22時間培養した後、培養液を廃棄し、平均に10等分して、DMEM培地で溶解されたヒト2Ig-B7-H3タンパク質(12μM、氷浴で予冷)を加え(以下、「投薬」と略称)、氷浴及び日陰で2時間インキュベートした後、それぞれペプチド溶液を廃棄し、予冷したPBSで2回洗浄する。
実験対象は、臨床病期IVの肺腺癌患者である。前記合成ポリペプチドをpH7.4のPBS(Hyclone)溶液に溶解させ、濃度を2.5mg/mlに調整し、毎回上腕に200ug皮下注射した後、5%Aldaracream(iNova Pharmaceuticals Australia Pty Ltd.)で覆い、週に1回、12週間を1サイクルとする。それぞれELISAを用いて投薬前、投薬後3週目、7週目、及び11週目のIFN-γの分泌状況を検出し、具体的な実施例で用いられた合成ポリペプチド及び投薬前後のテスト結果を表3に示す。
Claims (10)
- 組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子であって、
前記遺伝子は、配列番号1で示されるヌクレオチド配列を有することを特徴とする組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子。 - ベクターと、前記ベクターによって携帯される標的遺伝子とを含む、組換えベクターであって、
前記標的遺伝子は、請求項1に記載の組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子であることを特徴とする組換えベクター。 - 前記ベクターは、クローニングベクター、真核発現ベクター、原核発現ベクター、及びシャトルベクターからなる群から選択されることを特徴とする請求項2に記載の組換えベクター。
- 前記ベクターは、pIRES2-EGFP、pCMVp-NEO.BAN、pEGFT-アクチン、レンチウイルスベクター、及びアデノウイルスベクターからなる群から選択されることを特徴とする請求項2に記載の組換えベクター。
- 請求項2から4のいずれか1項に記載の組換えベクターを含有する宿主細胞。
- 前記宿主細胞は、239T細胞及びSHG44細胞から選択される1つ又は複数であることを特徴とする請求項5に記載の宿主細胞。
- 薬学的に許容可能な賦形剤と、
請求項1に記載の組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子、請求項2から4のいずれか一項に記載の組換えベクター、又は請求項5から6のいずれか一項に記載の宿主細胞と、野生型ヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子とを1:1の割合で混合した混合物と
を含むことを特徴とする薬物組成物。 - 前記薬物組成物は、注射液であることを特徴とする請求項7に記載の薬物組成物。
- 癌を予防又は治療する薬物の製造における、請求項1に記載の組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子、請求項2から4のいずれか一項に記載の組換えベクター、又は請求項5から6のいずれか一項に記載の宿主細胞と、野生型ヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子とを1:1の割合で混合した混合物の使用。
- 前記癌は、肝臓癌、肺癌、前立腺癌、膵臓癌、小腸癌、結腸癌及び子宮頸癌であることを特徴とする請求項9に記載の使用。
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
PCT/CN2018/123049 WO2020132789A1 (zh) | 2018-12-24 | 2018-12-24 | 突变的人2Ig-B7-H3蛋白编码基因、重组载体、包含其的宿主细胞、药物组合物及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2022515932A JP2022515932A (ja) | 2022-02-22 |
JP7315703B2 true JP7315703B2 (ja) | 2023-07-26 |
Family
ID=71126767
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2021560752A Active JP7315703B2 (ja) | 2018-12-24 | 2018-12-24 | 組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子、組換えベクター及びそれを含む宿主細胞、並びに薬物組成物及びその応用 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220073587A1 (ja) |
EP (1) | EP3889263A4 (ja) |
JP (1) | JP7315703B2 (ja) |
CN (1) | CN113260703A (ja) |
AU (1) | AU2018455720B2 (ja) |
CA (1) | CA3124721A1 (ja) |
IL (1) | IL284294A (ja) |
SG (1) | SG11202106952UA (ja) |
WO (1) | WO2020132789A1 (ja) |
ZA (1) | ZA202104520B (ja) |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060154313A1 (en) | 2000-04-13 | 2006-07-13 | Immunex Corporation | Human B7 polypeptide B7-H3A |
JP2006523711A (ja) | 2003-04-17 | 2006-10-19 | ワイエス | 免疫調節因子としてのb7−h3の使用 |
JP2017035086A (ja) | 2010-03-04 | 2017-02-16 | マクロジェニクス,インコーポレーテッド | B7−h3と反応性のある抗体、その免疫学的に活性なフラグメントおよびその使用 |
Family Cites Families (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6891030B2 (en) * | 2000-07-27 | 2005-05-10 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | T-cell immunoregulatory molecule |
US20030134283A1 (en) * | 2000-10-03 | 2003-07-17 | Peterson David P. | Genes regulated in dendritic cell differentiation |
WO2007047796A2 (en) * | 2005-10-17 | 2007-04-26 | Institute For Systems Biology | Tissue-and serum-derived glycoproteins and methods of their use |
WO2016103269A1 (en) * | 2014-12-23 | 2016-06-30 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Populations of neural progenitor cells and methods of producing and using same |
WO2017048878A1 (en) * | 2015-09-14 | 2017-03-23 | Alpine Immune Sciences, Inc. | Tunable variant immunoglobulin superfamily domains and engineered cell therapy |
JP7114490B2 (ja) * | 2016-06-24 | 2022-08-08 | アイセル・ジーン・セラピューティクス・エルエルシー | キメラ抗体受容体(CARs)の構成およびその使用方法 |
CN116769050A (zh) * | 2016-07-20 | 2023-09-19 | 犹他大学研究基金会 | Cd229 car t细胞及其使用方法 |
CN109097366A (zh) * | 2017-06-21 | 2018-12-28 | 黄海东 | 突变的人2Ig-B7-H3蛋白编码基因、重组载体、其药物组合物及其应用 |
-
2018
- 2018-12-24 CN CN201880099908.9A patent/CN113260703A/zh active Pending
- 2018-12-24 JP JP2021560752A patent/JP7315703B2/ja active Active
- 2018-12-24 WO PCT/CN2018/123049 patent/WO2020132789A1/zh unknown
- 2018-12-24 US US17/417,991 patent/US20220073587A1/en active Pending
- 2018-12-24 AU AU2018455720A patent/AU2018455720B2/en active Active
- 2018-12-24 CA CA3124721A patent/CA3124721A1/en active Pending
- 2018-12-24 SG SG11202106952UA patent/SG11202106952UA/en unknown
- 2018-12-24 EP EP18944354.2A patent/EP3889263A4/en not_active Withdrawn
-
2021
- 2021-06-22 IL IL284294A patent/IL284294A/en unknown
- 2021-06-29 ZA ZA2021/04520A patent/ZA202104520B/en unknown
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20060154313A1 (en) | 2000-04-13 | 2006-07-13 | Immunex Corporation | Human B7 polypeptide B7-H3A |
JP2006523711A (ja) | 2003-04-17 | 2006-10-19 | ワイエス | 免疫調節因子としてのb7−h3の使用 |
JP2017035086A (ja) | 2010-03-04 | 2017-02-16 | マクロジェニクス,インコーポレーテッド | B7−h3と反応性のある抗体、その免疫学的に活性なフラグメントおよびその使用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Accession No. NM_025240.2,Database GenBank [online],2018年12月23日,https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/67188430?sat=47&satkey=3542347 |
Molecular Medicine Reports,2016年,Vol. 14,pp. 943-948 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA3124721A1 (en) | 2020-07-02 |
AU2018455720B2 (en) | 2023-06-15 |
IL284294A (en) | 2021-08-31 |
ZA202104520B (en) | 2023-01-25 |
JP2022515932A (ja) | 2022-02-22 |
EP3889263A4 (en) | 2022-08-17 |
WO2020132789A1 (zh) | 2020-07-02 |
CN113260703A (zh) | 2021-08-13 |
EP3889263A1 (en) | 2021-10-06 |
US20220073587A1 (en) | 2022-03-10 |
WO2020132789A8 (zh) | 2021-06-17 |
SG11202106952UA (en) | 2021-08-30 |
AU2018455720A1 (en) | 2021-07-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2811500T3 (es) | Dominios coestimuladores para su uso en células genéticamente modificadas | |
CN109306016B (zh) | 共表达细胞因子il-7的nkg2d-car-t细胞及其用途 | |
US20200360437A1 (en) | Chimeric antigen receptor, nkg2d car-nk cells expressing the chimeric antigen receptor, and preparation and application thereof | |
WO2018145649A1 (zh) | 一种靶向cd20抗原嵌合抗原受体的构建及其工程化t细胞的活性鉴定 | |
WO2018145648A1 (zh) | 一种靶向cd20的car的构建及其工程化t细胞的活性鉴定 | |
CN113896801B (zh) | 靶向人Claudin18.2和NKG2DL的嵌合抗原受体细胞及其制备方法和应用 | |
CN113416260B (zh) | 靶向Claudin18.2的特异性嵌合抗原受体细胞及其制备方法和应用 | |
CN111378625A (zh) | 一种cxcl13趋化型car-t细胞的制备和应用 | |
CN105218682B (zh) | 经il-12/cd62l融合蛋白改造的肿瘤治疗剂及其制法和用途 | |
CN110054698B (zh) | 抗cd19抗体的新型cd19-car载体的构建及应用 | |
WO2018137294A1 (zh) | 共表达抗msln嵌合抗原受体和无功能egfr的转基因淋巴细胞及其用途 | |
CN108728460A (zh) | 靶向gd2的嵌合抗原受体及其用途 | |
JP7315703B2 (ja) | 組み換えヒト2Ig-B7-H3タンパク質コーディング遺伝子、組換えベクター及びそれを含む宿主細胞、並びに薬物組成物及びその応用 | |
CN110845621A (zh) | 一种靶向egfr和cd19双靶点的嵌合抗原受体方法 | |
WO2022053050A1 (zh) | 能破坏细胞的氨基酸序列及相关核苷酸序列和相关的应用 | |
CN116179495A (zh) | 转基因免疫细胞及其应用 | |
CN115819614A (zh) | 一种基于il34的嵌合抗原受体免疫细胞制备及其应用 | |
CN114907485A (zh) | 一种以内源性蛋白质分子替代单结构域抗体的嵌合抗原受体 | |
CN112063640A (zh) | 靶向人源化cea的嵌合抗原受体及其用途 | |
CN105585637B (zh) | 基于il-12稳定膜表达的肿瘤治疗剂及其制法和用途 | |
CN112480266B (zh) | 一种嵌合抗原受体、嵌合抗原受体脐血有核细胞及应用 | |
CN109748974B (zh) | 一种基因修饰的树突状细胞疫苗的制备及应用 | |
WO2023246908A1 (zh) | 靶向csf1r的嵌合抗原受体免疫细胞制备及其应用 | |
CN114805612B (zh) | 一种抗gd2抗体、含其的car、car组合及其应用 | |
CN115232217B (zh) | 一种SynNotch结构及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20210623 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20210623 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20220620 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20220920 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20221219 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20230315 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20230619 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20230713 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 7315703 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |