EA030226B1 - Антитела, реактивные к b7-h3, их иммунологически активные фрагменты и их применения - Google Patents

Антитела, реактивные к b7-h3, их иммунологически активные фрагменты и их применения Download PDF

Info

Publication number
EA030226B1
EA030226B1 EA201270734A EA201270734A EA030226B1 EA 030226 B1 EA030226 B1 EA 030226B1 EA 201270734 A EA201270734 A EA 201270734A EA 201270734 A EA201270734 A EA 201270734A EA 030226 B1 EA030226 B1 EA 030226B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
cancer
molecule
binding
amino acid
antibody
Prior art date
Application number
EA201270734A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201270734A1 (ru
Inventor
Дерик Т. Лу
Лин Хуан
Пол А. Мур
Франсин Чжифэнь Чэнь
Лесли С. Джонсон
Original Assignee
Макродженикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Макродженикс, Инк. filed Critical Макродженикс, Инк.
Publication of EA201270734A1 publication Critical patent/EA201270734A1/ru
Publication of EA030226B1 publication Critical patent/EA030226B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3076—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties
    • C07K16/3092—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells against structure-related tumour-associated moieties against tumour-associated mucins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Epoxy Compounds (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к антителам и их фрагментам, которые являются иммунореактивными к рецептору B7-H3 млекопитающего и, конкретнее, человека, и к их применению, в частности, при лечении рака и воспаления. Настоящее изобретение, таким образом, в частности, касается гуманизированных, реактивных к B7-H3 антител и их иммунореактивных фрагментов, которые способны опосредовать и предпочтительнее усиливать активацию иммунной системы против раковых клеток, которые ассоциированы с рядом видов рака человека.

Description

изобретение относится к антителам и их фрагментам, которые являются иммунореактивными к рецептору В7-Н3 млекопитающего и, конкретнее, человека, и к их применению, в частности, при лечении рака и воспаления. Настоящее изобретение, таким образом, в частности, касается гуманизированных, реактивных к В7-Н3 антител и их иммунореактивных фрагментов, которые способны опосредовать и предпочтительнее усиливать активацию иммунной системы против раковых клеток, которые ассоциированы с рядом видов рака человека.
030226 Β1
030226
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Данная заявка заявляет приоритет на заявки на патенты США с серийными №№ 61/310692 (подана 4 марта 2010; на стадии рассмотрения); 61/310695 (подана 4 марта 2010; на стадии рассмотрения), 61/311057 (подана 5 марта 2010; на стадии рассмотрения), каждая из которых включена в данный документ посредством ссылки во всей ее полноте.
Ссылка на перечень последовательностей
Данная заявка включает один или несколько перечней последовательностей в соответствии с 37 С.Р.К. 1.821 и т.д., которые раскрываются как на бумажных, так и на машиночитаемых носителях, и раскрытия которых на бумажных и на машиночитаемых носителях включены в данный документ посредством ссылки во всей ее полноте.
Предпосылки изобретения Область изобретения
Настоящее изобретение относится к антителам и их фрагментам, которые являются иммунореактивными к рецептору В7-Н3 млекопитающих, а конкретнее человека, и к их применениям, в частности, при лечении рака и воспаления. Таким образом, настоящее изобретение, в частности, касается гуманизированных В7-Н3-реактивных антител и их иммунореактивных фрагментов, которые способны опосредовать и более предпочтительно повышать активацию иммунной системы против раковых клеток, которые связаны с множеством видов рака человека.
Описание известного уровня техники
Рост и метастазирование опухолей в значительной степени зависит от их способности избегать иммунного надзора хозяина и преодолевать иммунные защиты организма. Большинство опухолей экспрессируют антигены, которые могут быть распознаны в различной степени иммунной системой хозяина, но во многих случаях вызывается неадекватный иммунный ответ из-за неэффективной активации эффекторных Т-клеток (КйаМц Ь.А. е! а1. (2008) "Су!окте, Сйетокше, аиЛ Со-8!1ти1а!огу Рикюи Рго1е1и8 1ог !йе 1ттиио!йегару о1 8оПЛ Титогк" Ехрег. Рйагтасок 181:291-328).
СН4+ Т-лимфоциты являются основными организаторами большинства иммунных и аутоиммунных ответов млекопитающих. (Эопд. С. е! а1. (2003) 'Тттиие Кеди1аЛои Ьу Ыоуе1 Сокйти1а!огу Мо1еси1ек," 1ттиио1од. Кек. 28(1):39-48). Активация СИ4+ хелперных Т-клеток, как было установлено, опосредована через костимулирующие взаимодействия между антигенпрезентирующими клетками и наивными СИ4+ Т-лимфоцитами. Требуются два взаимодействия (НдПеЛа, V. е! а1. (2007) "МоЛи1аПид Со-8Пти1а1юи" №игоТЬегареи!1ск 4:666-675; Когтаи, А.1. е! а1. (2007) "Сйескрош! В1оскаЛе ίη Саисег 1ттиио1йегару" АЛу. 1ттиио1. 90:297-339). При первом взаимодействии антигенпрезентирующая клетка должна представить соответствующий целевой антиген, который связан с молекулами главного комплекса гистосовместимости клетки так, чтобы он мог связаться с Т-клеточным рецептором ("ТСК") наивных СИ4+ Т-лимфоцитов. При втором взаимодействии лиганд антигенпрезентирующей клетки должен связаться с СН28 рецептором СИ4+ Т-лимфоцита (Эоид, С. е! а1. (2003) "1ттиие Кеди1а!юи Ьу Ыоуе1 Сок!1ти1а!огу Мо1еси1ек" 1ттиио1од. Кек. 28(1):39-48; ЬшЛ1еу, Р.8. е! а1. (2009) "Тйе СПтса1 ИШПу 01 IηЫЬ^!^ид СН28-МеЛ1а!еЛ СокПти1а!юи" 1ттиио1. Кеу. 229:307-321). СЭ4+ хелперные Т-клетки, испытывающие действие обоих стимулирующих сигналов, затем способны реагировать на цитокины (такие как интерлейкин-2 и интерлейкин-12, с превращением в клетки ТЫ. Такие клетки продуцируют гаммаинтерферон (ΙΡΝ-γ) и фактор некроза опухоли альфа (ΕΝΡ-α), которые опосредуют воспалительные реакции в отношении клеток-мишеней, экспрессирующих целевой антиген. Также происходит активация и пролиферация В-клеток, что приводит к продуцированию антитела, специфичного к целевому антигену (ВегиагЛ, А. е! а1. (2005) "Т аиЛ В Се11 СоорегаЛои: А Иаисе о1 Ы1е аиЛ Иеа!Ь", Тгаикр1айа1юи 79:88-811). В случае отсутствия обоих костимулирующих сигналов во время вовлечения ТСК, Т-клетки входят в функционально неуправляемое состояние, называемое клональной толерантностью (КйазуП, Ь.А. е! а1. (2008) "Су!окше, Сйетокше, аиЛ Со-8Пти1а!огу Рикюи Рго!етк 1ог Пзе 1ттиио1йегару о1 8ойЛ Титогк", Ехрег. Рйагтасок 181:291-328). При патологических состояниях Тй1 клетки играют ключевую роль в различных органоспецифических аутоиммунных заболеваниях, таких как диабет типа Ι, ревматоидный артрит и рассеянный склероз (Иоид, С. е! а1. (2003) "1ттиие Кеди1а1юи Ьу №уе1 Сок!1ти1а!огу Мо1еси1ек", 1ттиио1од. Кек. 28(1):39-48).
Ι. Суперсемейство В7 и В7-Н3.
Исследования в отношении лигандов рецептора СИ28 привели к определению характерных признаков набора родственных молекул, известных как суперсемейство В7 (Соу1е, А.1. е! а1. (2001) "Тйе ЕхраиЛшд В7 8ирег1атПу: 1исгеакшд Сотр1ехПу 1и СокПти1а!огу 81диа1к Кеди1а!тд Т Се11 РиисЛои", №!иге 1ттиио1. 2(3):203-209; 8йагре, А.Н. е! а1. (2002) "Тйе В7-СИ28 8ирег1атЛу"; №Циге Кеу. 1ттиио1. 2:116-126; Огеен№а1Л, К.1. е! а1. (2005) "Тйе В7 Ратйу КеуЕйеЛ" Аии. Кеу. 1ттиио1. 23:515-548; СоШик, М. е! а1. (2005) "Тйе В7 РатПу 01 1ттиие-Кеди1а!огу НдаиЛк", Оеиоте Вю1. 6:223.1-223.7; Ьоке, Р. е! а1. (2004) "Етегдшд Месйатктк 01 1ттиие Кеди1а!юи: Тйе Ех!еиЛеЛ В7 РатПу аиЛ Кеди1а!огу Т Се11к" АгПтйк Кек. Тйег. 6:208-214; Когтаи, А.1. е! а1. (2007) "Сйескрот! В1оскаЛе т Саисег 1ттиио1Пегару", АЛу. 1ттиио1. 90:297-339; РПек, И.В. е! а1. (2007) "Тйе №\ν В7к: Р1аушд а Р1уо1а1 Ко1е т Титог 1ттит1у", 1. 1ттиио!йег. 30(3):251-260; Адатоа1., А. е! а1. (2008) "Тйе Ко1е 01 РокПтуе Сок!1ти1а!огу Мо1еси1ек 1и Тгаик- 1 030226
ρΐαηίαΐίοη апй То1егапсе", Сшт. Θρίη. Огдап Тгапкр1ап!. 13:366-372; ЬепксНоте, Ό.Ι. е! а1. (1996) "СЭ28/В7 8ук!ет оГ Т Се11 Сокйти1айоп" Апп. Кеу. 1ттипо1. 14:233-258; \Уапд. 8. е! а1. (2004) "Со-81дпа1тд Мо1еси1ек ОГ ТНе В7-СЭ28 Ратйу 1п РокШуе апй ЫедаНуе Кеди1айоп ОГ Т ЬутрНосу!е Кекропкек", МкгоЪек 1п£ес1. 6:759-766). В настоящее время известно семь членов семейства: В7.1 (СЭ80). В7.2 (СЭ86). индуцибельный костимуляторный лиганд (1СО8-Ь), лиганд запрограммированной смерти-1 (РИ-Ы) лиганд запрограммированной смерти-2 (РИ-Е2), В7-Н3 и В7-Н4 (СоШпк, М. е! а1. (2005) "ТНе В7 Ратйу ОГ 1ттипе-Кеди1а!огу Ыдапйк", Сепоте Вю1. 6:223.1-223.7).
Члены семейства В7 представляют собой члены суперсемейства иммуноглобулинов с иммуноглобулиновым У-подобным и иммуноглобулиновым С-подобным доменом (например, 1дУ-1дС) (8йатре, А.Н. е! а1. (2002) "ТНе В7-СИ28 8иретГатйу" Ыа1иге Кеу. 1ттипо1. 2:116-126). Каждый из 1дУ и 1дС доменов членов семейства В7 кодируются отдельными экзонами, при этом дополнительные экзоны кодируют лидерные последовательности, трансмембранные и цитоплазматические домены. Цитоплазматические домены являются короткими, варьирующими по длине от 19 до 62 аминокислотных остатков и могут кодироваться несколькими экзонами (СоШпк, М. е! а1. (2005) "ТНе В7 Ратйу ОГ 1ттипе-Кеди1а1огу Ыдапйк", Сепоте Вю1. 6:223.1-223.7). В7-Н3 уникален тем, что основная человеческая форма содержит два внеклеточных тандемных домена 1дУ-1дС (т.е. 1дУ-1дС-1дУ-1дС) (СоШпк, М. е! а1. (2005) "ТНе В7 Ратйу ОГ 1ттипе-Кеди1а!огу Ыдапйк", Сепоте Вю1. 6:223.1-223.7). Предполагают, что члены семейства В7 образуют располагаемые вплотную друг к другу, нековалентные гомодимеры на поверхности клетки, и такие димеры были обнаружены в отношении В7-1 (ί'.Ό80) и В7-2 (СЭ86).
В7-1 (ί'.Ό80) и В7-2 (СЭ86) проявляют двойную специфичность по отношению к стимулирующему ί'.Ό28 рецептору и ингибирующему СТЬА-4 (СЭ152) рецептору (8Нагре, А.Н. е! а1. (2002) "ТНе В7-СЭ28 8иретГатйу" Ыа!иге Кеу. 1ттипо1. 2:116-126).
Хотя первоначально считалось, что они включают только 2 1д домена (1дУ-1дС) (СНароуаТ, А. е! а1. (2001) "В7-Н3: А Сокйти1а!оту Мо1еси1е Рог Т Се11 Асйуайоп апй ΙΡΝ-γ Ртойисйоп" Ха!ите 1ттипо1. 2:269-274; 8ип, М. е! а1. (2002) "СНагасЮп/аОоп оГ Мойке апй Нитап В7-Н3 Сепек" 1. 1ттипо1. 168:62946297), были идентифицированы четыре варианта иммуноглобулиновых внеклеточных доменов ("41д-В7Н3") и была обнаружена более общая форма белка у человека. (8Нагре, А.Н. е! а1. (2002) "ТНе В7-СИ28 8иретГатйу" №т.1ге Кеу. 1ттипо1. 2:116-126). Не наблюдалось функциональное различие между этими двумя формами, так как природная форма (21д) мыши и форма 41д человека проявляют похожую функцию (НоГтеуег, К. е! а1. (2008) "ТНе Сойтакйпд Ко1е ОГ В7-Н3" Ргос. Ν!1. Асай. 8с1. (И.8.А.) 105(30): 10277-10278). Молекула 41д-В7-Н3 ингибирует лизис раковых клеток, опосредуемый натуральными киллерами (Сакйтсош, К. е! а1. "Иепййсайоп ОГ 41д-В7-Н3 Ак А №игоЪ1ак!ота-Аккос1а!ей Мо1еси1е ТНа! Ехейк А Рто!есйуе Ко1е Ргот Ап ΝΚ Се11-Мей1а!ей Ьукй" Ргос. №Ш. Асай. 8сй (И.8.А.) 101(34): 1264012645). В7-Н3 человека (форма 21д), как было обнаружено, способствует Т-клеточной активации и продукции ΙΕΝ-γ путем связывания с предполагаемым рецептором на активированных Т-клетках (СНароуа1., А. е! а1. (2001) "В7-Н3: А Сокйти1а!оту Мо1еси1е Рог Т Се11 Асйуайоп апй ΙΡΝ-γ Ртойисйоп" №Лиге 1ттипо1. 2:269-274; Хи, Н. е! а1. (2009) "МюгоКЫА т1К-29 Мойи1а!ек Ехргеккюп оГ 1ттипо1пН1Ъйогу Мо1еси1е В7-Н3: Ро!епйа1 1трйсайопк Гог 1ттипе Вакей ТНегару оГ Нитап 8ойй Титогк" Сапсег Кек. 69(15):52756281). Как В7-Н4, так и В7-Н1 являются сильными ингибиторами иммунной функции при экспрессии на опухолевых клетках (Рйек, Э.В. е! а1. (2007) "ТНе №ν В7к: Р1аут§ а Р|уо1а1 Ко1е т Титог 1ттипйу" 1. 1ттипо1йег. 30(3):251-260).
Механизм действия В7-Н3 является сложным, поскольку белок опосредует как Т-клеточную костимуляцию, так и коингибирование (НоГтеуег, К. е! а1. (2008) "ТНе Сойгакйпд Ко1е ОГ В7-Н3" Ргос. №Ш. Асай. 8сй (И.8.А.) 105(30): 10277-10278; МаПт-Ого/со, Ν. е! а1. (2007) ’ГпЫЪйогу Сокйти1айоп апй АпйТитог 1ттипйу", 8етт. Сапсег Вю1. 17(4):288-298; 8иЪийЫ, 8.К. е! а1. (2005) "ТНе Ва1апсе ОГ 1ттипе Кекропкек: СокйтШайоп Уегке Со1пНШйюп", 1. Мо1. Мей. 83:193-202). В7-Н3 связывается с (ТКЕМ)подобным транскриптом 2 (ТЬТ-2) и костимулирует активацию Т-клеток, но также связывается с пока еще неизвестным рецептором(ами) и в результате опосредует коингибирование Т-клеток. В дополнение к этому В7-Н3 через взаимодействие с неизвестным рецептором(ами) является ингибитором для натуральных киллеров и остеобластов (НоГтеуег, К. е! а1. (2008) "ТНе Сопйакйпд Ко1е ОГ В7-Н3", Ргос. №!1. Асай. 8сй (И.8.А.) 105(30): 10277-10278). Ингибирование может оказывать влияние через взаимодействия с членами главных сигнальных путей, через которые Т-клеточный рецептор (ТСК) регулирует генную транскрипцию (например, факторы №”ГА, ΝΕ-кВ или АР-1).
В7-Н3 костимулирует пролиферацию СИ4+ и СИ8+ Т-клеток. В7-Н3 также стимулирует продукцию ΙΕΝ-γ и литическую активность СИ8+ (СНароуа1., А. е! а1. (2001) "В7-Н3: А Сокйти1а!оту Мо1еси1е Рог Т Се11 Асйуайоп апй ΙΕΝ-γ Ртойисйоп", №Лиге 1ттипо1. 2:269-274; 8Нагре, А.Н. е! а1. (2002) "ТНе В7СИ28 8ирегГатйу", №т.1ге Кеу. Iттиηο1. 2:116-126). Однако белок возможно также действует через факторы ИРАТ (ядерный фактор для активированных Т-клеток), NΡ-кВ (ядерный фактор каппа В) и АР-1 (Асйуа!от Рто!ет-1), чтобы ингибировать активацию Т-клеток (Υί. К.Н. е! а1. (2009) "Рте Титпд ТНе Ιιηтипе Кекропке ТНгоидН В7-Н3 апй В7-Н4", ^типоГ Кеу. 229:145-151). Считается, что В7-Н3 также ингибирует ТН1, ТН2 или ТН17 ш У1уо (Ргакай, И.У. е! а1. (2004) "Мийпе В7-Н3 И А №дайуе Кеди1а!ог ОГ Т
- 2 030226
Се11", 1. 1ттипо1. 173:2500-2506; РикикНша, А. с! а1. (2007) "В7-Н3 Ксди1а!ск ТНс Осус1ортсп1 ОГ Ехрептсп1а1 А11сг§1с СопцшсНуЮк 1п Мкс", 1ттипо1. Ьс!!. 113:52-57; Υί. К.Н. с! а1. (2009) "Рте Титпд ТНс 1ттипс Кекропке ТНгоидН В7-Н3 апД В7-Н4", 1ттипо1. Ксу. 229:145-151). Несколько независимых исследований показали, что клетки злокачественной опухоли человека проявляют значительное повышение экспрессии белка В7-Н3, и что эта повышенная экспрессия была связана с повышением тяжести заболевания (Ζηπβ. X. с! а1. (2007) "ТНс В7 Рашйу АпД Сапссг ТНсгару: СокНти1аНоп АпД СотЫЬНюп". СНп. Сапссг Кек. 13:5271-5279), что указывает на то. что В7-Н3 используются опухолями как путь ускользания от иммунологического надзора (НоГтсусг. К. с! а1. (2008) "ТНс Соп!гакПпд Ко1с ОГ В7-Н3", Ргос. Ν;·ιΐ1. АсаД. 8οΐ. (И.8.А.) 105(30): 10277-10278).
Молекулы, которые блокируют способность молекулы В7 соединяться с Т-клеточным рецептором (например, СЭ28), ингибируют иммунную систему и были предложены в качестве курсов лечения аутоиммунных заболеваний (Ьтк1су, Р.8. с! а1. (2009) "ТНс СНтса1 иШйу ОГ 1пНЪНтд СЭ28-МсД|а1сД Со8ί^ши1а!^оп", 1ттипо1од. Ксу. 229:307-321). Клетки нейробластомы, экспрессирующие 41д-В7-Н3, обработанные антителами к 41д-В7-Н3, были более чувствительными к ΝΚ-клеткам. Однако не ясно, можно ли отнести эту активность только к антителам против формы 41д-В7-Н3, так как все описанные в литературе антитела, индуцированные против 41д-В7-Н3, также связывали две 1д-подобные формы В7-Н3 (8!стЪсгдсг, Р. с! а1. (2004) "Мо1сси1аг СНа^ас!с^^ζа!^оη оГ Нитап 41д-В7-Н3, а МстНег оГ !Нс В7 Рашйу \\ПН Роиг 1д-Ыкс Поташк", 1. 1шшипо1. 172(4): 2352-2359 и СакНтсот с! а1. (2004) "ИспййсаНоп ОГ 41дВ7-Н3 Ак №игоЫакЮ1па-Лккос1а1сД Мо1сси1с ТНа! Ехейк А Рго!ссПус Ко1с Ргот Ап ΝΚ Сс11-МсД1а!сД Ьу818”, Ргос. Νίώ. АсаД. 8с1. (И.8.А.) 101(34): 12640-12645).
В7-Н3 не экспрессируется на покоящихся В- и Т-клетках, моноцитах или дендритных клетках, но индуцируется на дендритных клетках посредством ΙΡΝ-γ и на моноцитах посредством ОМ-С8Р (8Нагрс, А.Н. с! а1. (2002) "ТНс В7-СЭ28 8ирс^Гаш^1у", №1игс Ксу. Iтшиио1. 2:116-126). Рецептор(ы), который связывает В7-Н3, не был полностью охарактеризован. В ранних работах сделано предположение, что один такой рецептор был бы необходим для быстрой и временной апрегуляции на Т-клетках после активации (Ьокс, Р. с! а1. (2004) "Етсгдшд МссНашктк ОГ Iтшиис Ксди1аНоп: ТНс Ех!спДсД В7 РатПу апД Ксди1а!огу Т Сс11к. ", АйНййк Кек. ТНсг. 6:208-214). Недавно было показано, что рецептор (ТКЕМ)-подобного транскрипта-2 (ТЬТ-2 или ТКЕМЬ2) (Кшд, К.О. с! а1. (2006) "Тгст-Ыкс Тгапксйр! 2 1к ЕхргскксД Оп Сс11к ОГ ТНс МусЫД/ОгатПок АпД В ЬутрНок Ыпсадс АпД 1к ир-Ксди1а!сД 1п Кекропке То МаттаНой', 1. 1ттипок 176:6012-6021; К1скпсу-ТаН, 1. с! а1. (2006) "ТНс ТКЕМ Кссср!ог РатПу АпД 81дпа1 1п!сдга!юп", Ν!. 1шшипо1. 7:1266-1273; Υί. К.Н. с! а1. (2009) "Рте Титпд ТНс Iтшипс Кекропке ТНгоидН В7-Н3 АпД В7-Н4", 1шшипо1. Ксу. 229:145-151), который экспрессируется на миелоидных клетках, способен к связыванию с В7-Н3 и, таким образом, к костимуляции активации СЭ8+ Т-клеток, в частности ^апд, X. с! а1. (2003) "В7х: А ^1Дс1у ЕхргскксД В7 РатПу МсшЪсг ТНа! IиН^Ъ^!к Т Сс11 АсПуаНоп", Ргос. №·ιΠ. АсаД. 8с1. (И.8.А.) 100:10388-10392; НакЫдисНц М. с! а1. (2008) "Тйддсйпд Кссср!ог ЕхргскксД Оп Мус1оМ Сс11Ыкс Тгапксйр! 2 (ТЬТ-2) 1к А Соип!сг-Кссср!ог Рог В7-Н3 апД ЕпНапсск Т Сс11 Кекропкек", Ргос. №!1. АсаД. 8с1. (И.8.А.) 105(30): 10495-10500; НоГтсусг, К. с! а1. (2008) "ТНс СойгакПпд Ко1с ОГ В7-Н3," Ргос. №П. АсаД. 8с1. (И.8.А.) 105(30): 10277-10278).
В дополнение к его экспрессии на нейробластомных клетках известно, что В7-Н3 человека экспрессируется на ряде других раковых клеток (например, рак желудка, рак яичника и немелкоклеточный рак легкого). Экспрессия белка В7-Н3 была обнаружена иммунопатологическими методами в линиях опухолевых клеток (СНароуа1., А. с! а1. (2001) "В7-Н3: А Сок!1ти1а!огу Мо1сси1с Рог Т Сс11 АсНуаПоп апД ΙΕΝ-γ РгоДисНоп", №!игс 1шшипо1. 2:269-274; 8ааί^аи, В. с! а1. (2004) "Ехргеккюп ОГ Оспек Рог В7-Н3 апД О!Нсг Т Сс11 ЫдапДк Ву №ка1 ЕрПНсНа1 Сс11к Этюд ПИТсгепПайоп апД АсПуаНоп", Атег. 1. РНукю1. Ьипд Сс11. Мо1. РНукю1. 287:Е217-Ь225; Сакйтсот с! а1. (2004) "ИспПйсаПоп ОГ 41д-В7-Н3 Ак А Nси^оЪ1ак!ошаАккос1а!сД Мо1сси1с ТНа! Ехейк А Рго!ссПус Ко1с Ргот Ап ΝΙ< Сс11-МсД1а!сД Ьукк", Ргос. №и1. АсаД. 8сг (И.8.А.) 101(34): 12640-12645); 8ип, М. с! а1. (2002) "СНагас1сп/аПоп оГ Мойке апД Нитап В7-Н3 Оспек", 1. 1шшипо1. 168:6294-6297). Экспрессия мРНК была обнаружена в сердце, почке, яичках, легком, печени, поджелудочной железе, простате, толстой кишке и остеобластах (СоШпк, М. с! а1. (2005) "ТНс В7 РатПу ОГ Нтпипс-РсдикПогу ЫдапДк", Оспотс Вю1. 6:223.1-223.7). На белковом уровне В7-Н3 обнаружен в печени, легком, мочевом пузыре, яичке, простате, молочной железе, плаценте и лимфоидных органах человека (НоГтсусг, К. с! а1. (2008) "ТНс Соп!гак!шд Ко1с ОГ В7-Н3", Ргос. №!1. АсаД. 8сг (И.8.А.) 105(30): 10277-10278).
ΙΙ. Терапевтические антитела.
Было показано, что в дополнение к их известным примениям в диагностике антитела являются пригодными в качестве терапевтических средств. К примеру, иммунотерапия, или применение антител для терапевтических целей, в последние годы применялась для лечения рака. Пассивная иммунотерапия включает применение моноклональных антител в курсах лечениях рака (см., например, ЭЕУ1ТА, НЕЬЬМА^ ЛN^ КО8ЕХВЕКО'8 Сапссг: Ргтар1ск & РгасПсе оГ Опсо1оду, Е1дЫН ЕДйюп (2008), ЭсУПа, V. с! а1. ЕДк., Ырршсо!! ^ПНатк & ХУПктк, РНПаДс1рЫа, РА, рр. 537-547, 2979-2990). Эти антитела могут обладать собственной терапевтической биологической активностью как путем прямого ингибирования рос- 3 030226
та или выживаемости опухолевых клеток, так и путем их способности стимулировать активность натуральных киллеров иммунной системы организма. Эти средства можно вводить отдельно или в сочетании с радиационными или химиотерапевтическими средствами. Ритуксимаб и трастузумаб, утвержденные для лечения неходжинской лимфомы и рака груди соответственно, являются примером таких терапевтических средств. Альтернативно можно применять антитела для создания конъюгатов антител, в которых антитело соединяется с токсическим средством и направляет такое средство к опухоли путем специфичного связывания с опухолью. Гемтузумаб озогамицин является примером утвержденного конъюгата антител, применяемого для лечения лейкемии.
Были раскрыты моноклональные антитела, которые связываются с раковыми клетками и обладают потенциальными применениями для диагностики и терапии (см., например, следующие патентные заявки, которые расскрывают, 1п1сг аПа, некоторые молекулярные массы целевых белков: патент США № 6054561 (200 кДа с-егЬВ-2 (Нег2) и другие неизвестные антигены размером 40-200 кДа) и патент США № 5656444 (50 и 55 кДа онкофетальный белок)). Примеры антител в клинических испытаниях и/или утвержденные для лечения солидных опухолей, включают трастузумаб (антиген: 180 кДа, НЕК2/пеи), эдреколомаб (антиген: 40-50 кДа, Ер-САМ), антитела к жировым глобулам молока человека (НМРО1) (антиген &§1; 200 кДа, НМ\У Мисше), центуксимаб (антигены: 150 и 170 кДа, рецептор ЕОР), алемтузумаб (антиген: 21-28 кДа, СЛ52) и ритуксимаб (антиген: 35 кДа, СЛ20).
Антигенные мишени трастузумаба (рецептор Нег-2), который применяют для лечения рака молочной железы, и цетуксимаба (рецептор ЕОР), который находится на стадии клинических испытаний для лечения нескольких видов рака, присутствуют на некотором детектируемом уровне на большом количестве нормальных тканей взрослого человека, включая кожу, толстую кишку, легкое, яичник, печень и поджелудочную железу. Широта терапевтического диапазона при применении этих терапевтических средств, возможно, обеспечивается разницей уровней экспрессии антигена, или доступа, или активности антитела на этих участках.
Другой тип иммунотерапии представляет собой активную иммунотерапию, или вакцинацию, антигеном, присутствующем на конкретном виде(видах) раковой опухоли, или ДНК-конструктом, который управляет экспрессией антигена, которая затем вызывает иммунный ответ у индивидуума, т. е. чтобы индуцировать индивидуума к активной выработке антител против его собственного рака. Активную иммунизацию не применяют так часто, как пассивную иммунотерапию или иммунотоксины.
Было предложено несколько моделей развития заболевания (включая рак). Теории варьируют от обусловленности одиночным инфекционным/трансформирующим событием до постепенного развития в возрастающей степени типа ткани "пораженной заболеванием" или "пораженной раком", приводящего в конечном итоге к таковому с полностью патогенными или злокачественными характеристиками. Некоторые утверждают, что в случае, например, рака одиночное мутационное событие является достаточным для того, чтобы вызвать злокачественное развитие, в то время как другие утверждают, что также необходимы последующие изменения. Некоторые другие авторы предположили, что увеличивающаяся мутационная нагрузка и степень злокачественности опухоли являются необходимыми как для инициации, так и для развития неоплазии через непрерывное множество событий мутация-отбор на клеточном уровне. Некоторые раковые мишени обнаружены только в опухолевых тканях, в то время как другие присутствуют в нормальных тканях и подвергаются апрегуляции и/или сверэкспресируются в опухолевых тканях. В таких ситуациях, некоторые исследователи предположили, что сверхэкспрессия связана с приобретением злокачественности, в то время как другие полагают, что сверхэкспрессия является лишь маркером тенденции по направлению к пути развития стадии заболевания.
Было показано, что в некоторых случаях раковые мишени, такие как онкобелки, экспрессируемые или сверхэкспрессируемые в опухолях, присутствуют в ходе эмбрионального развития и фетального развития и служат регуляторами роста и дифференцировки. Некоторые исследователи обнаружили, что экспрессия этих онкобелков в ходе эмбрионального и фетального развития, по всей видимости, ограничивается конкретными тканями, а также ограничивается конкретными стадиями развития. Напротив, экспрессия этих онкобелков у взрослых, как было показано, связана со сверхэкспрессией при опухолевом росте и/или дисфункции белков-супрессоров опухолевого роста.
Идеальное диагностическое и/или терапевтическое антитело будет специфичным в отношении антигена, присутствующего на большом количестве злокачественных опухолей, но отсутствующего или присутствующего только на низких уровнях на любой нормальной ткани. Открытие, характеристика и выделение нового антитела, способного связываться с антигеном, который специфически ассоциируется со злокачественными опухолями, будет полезно во многих отношениях. Во-первых, антитело будет обладать биологической активностью против таких раковых клеток и будет способно стимулировать ответ иммунной системы, чтобы таким образом лечить эти заболевания. Антитело может быть введено как отдельное терапевтическое средство или в комбинации с нынешними лечебными препаратами, или может применяться для получения иммуноконъюгатов, соединенных с токсическими средствами. Антитело с такой же специфичностью, но с низкой или с отсутствующей биологической активностью, при введении отдельно может также быть полезно в том отношении, что антитело можно применять для получения иммуноконъюгата с радиоизотопом, токсином или химиотерапевтическим средством или липосо- 4 030226
мой, содержащей химиотерапевтическое средство, при этом конъюгированная форма является биологически активной посредством антитела, направляющего токсин к антигенсодержащей клетке.
Как обсуждалось выше, были описаны антитела и другие молекулы, которые специфично связываются с В7-Н3 (см., патент США №№ 7527969; 7368554; 7358354 и 7279567; публикации патентных заявок США №№ И8 20090087416; И8 20090022747; И8 20090018315; И8 2008116219; И8 20080081346; И8 20050202536; И8 20030103963; И8 20020168762; РСТ публикации №№ ΥΘ 2008/116219; ΥΘ 2006/016276; ΥΘ 2004/093894; \\А) 04/001381; \\А) 2002/32375; ΥΘ 2002/10187 и ΥΘ 2001/094413; ЕР 1292619В; Мойак, 8. е! а1. (Магск 1999) "Οίδίαίοβαηβΐίοδίάο ΟΌ2 Апй Апкдепе 8Н9: Ро!епка1 Тагде!к Рот АпНЬойу-Вакей 1тшипо1кетару Адашк! Пектор1акОс 8та11 Коипй Се11 Титог (Э8РСТ) Апй КкаЬйотуокагсота (КМ8)", Ртосеейшдк Θί Тке Атепсап АккоааОоп Рог Сапсег Кекеагск Аппиа1 Меекпд, Уо1. 40:474 (90!к Аппиа1 Меекпд Οί Тке Атепсап Аккоаакоп Рог Сапсег Кекеагск; Р1и1айе1р1иа. Реппкуката, И8; Аргй 10-14, 1999; Мойак, 8. е! а1. (Магск 2000) "Кайю1ттипо1атдекпд То Нитап КкаЬйотуокагсота Икшд Мопос1опа1 АпкЬойу 8Н9", Ргос. Ат. Аккос. Сапсег Кек.41:724; Мойак, 8. е! а1. (2001) "Мопос1опа1 АпкЬойу 8Н9 Тагде!к А Ыоуе1 Се11 8игГасе Апкдеп Ехргеккей Ву А \С1йе 8рес!гит Οί Нитап 8окй Титогк", Сапсег Кек. 61(10):4048-4054; 8!ешЬетдет, Р. е! а1. (2004) "Мо1еси1аг Скагас1еп/аОоп оГ Нитап 41д-В7-Н3, а МетЬег оГ !ке В7 РатПу \\кк Роиг 1д-Ь1ке Поташк", 1. 1ттипо1. 172(4):2352-2359; Хи, Н. е! а1. (2009) "МюгоККА т1К-29 Мойи1а!ек Ехртеккюп оГ 1ттипошкЬкоту Мо1еси1е В7-Н3: Ро!епка1 1трксакопк Гог 1ттипе Вакей Ткегару оГ Нитап 8окй Титогк", Сапсег Кек. 69(15):5275-6281).
Тем не менее, одним аспектом, желательным для идеального диагностического и/или терапевтического антитела, может стать открытие и характеристика новых антител, способных опосредовать и, в частности, усиливать активацию иммунной системы против раковых клеток (особенно раковых клеток человека), которые являются ассоциированными с рядом злокачественных опухолей. Такие композиции также будут полезны для открытия новых лекарственных средств (например, малые молекулы) и для дополнительной характеристики клеточной регуляции, роста и дифференцировки.
Таким образом, несмотря на все предыдущие достижения, остается необходимость в усовершенствованных композициях, способных связываться с раковыми клетками и способствовать или опосредовать иммунный ответ против раковых клеток. Такие композиции могут применяться для диагностики и лечения таких злокачественных опухолей. Существует дополнительная необходимость на основе открытий, раскрываемых в данном документе, в новых композициях, которые специфично распознают двойные цели на поверхности клетки, и которые могут тем самым модулировать либо путем ослабления, либо путем усиления, функциональные возможности В7-Н3 опосредовать активацию Т-клеток, либо путем распознания и уничтожения раковых клеток, которые экспрессируют В7-Н3. Целью настоящего изобретения является идентификация таких композиций. Другой целью является обеспечение новых соединений для применения в анализе экспрессии В7-Н3.
Как подробно описано ниже, настоящее изобретение относится к новым антителам, включая, в частности, переориентирующие реагенты с двойной аффинностью ("ПАКТ™"), которые включают модуляторы активации В7-Н3 Т-клеток, которые способны влиять на активацию Т-клеток, а также новые антитела, которые связываются с рецепторами В7-Н3 раковых клеток и способствуют или опосредуют смерть таких клеток. Настоящее изобретение направлено на такие композиции и на их применения в диагностике и в лечении таких заболеваний, как рак.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к антителам и их фрагментам, которые являются иммунореактивными в отношении рецептора В7-Н3 млекопитающих, а еще конкретнее человека, и к их применениям, в частности при лечении рака и воспаления. Таким образом, настоящее изобретение, в частности, касается гуманизированных, реактивных к В7-Н3 антител и их иммунореактивных фрагментов, которые способны опосредовать и более предпочтительно повышать активацию иммунной системы против раковых клеток, которые ассоциированы с рядом злокачественных опухолей человека.
Подробным образом настоящее изобретение касается выделенного антитела или его иммунореактивного фрагмента, где выделенное антитело или фрагмент содержит вариабельный домен, который специфично связывает внеклеточный домен В7-Н3, при этом антитело конкурирует за связывание с В7-Н3 с любым из антител: ВКСА69Ц, ВКСА84Ц или РКСА157.
Настоящее изобретение дополнительно относится к вышеописанному выделенному антителу или его иммунореактивному фрагменту, где антитело или фрагмент содержит вариабельный домен, который включает:
(A) СОИ- (81 А) ГО ΝΟ: 21), СПК2 (81 А) ГО ΝΟ: 23) и СПК3 (81 А) ГО ΝΟ: 25) легкой цепи ВИСЛ691) и СПК! (81 А) ГО ΝΟ: 29), СИК2 (81 А) ГО ΝΟ: 31) и СПК3 (81 А) ГО ΝΟ: 33) тяжелой цепи ВВСА691);
(B) СПК! (81 А) ГО ΝΟ: 5), СОН; (81(0 II) ΝΟ: 7) и СПК3 (81 А) ГО ΝΟ: 9) легкой цепи ВВСА841) и СПК! (81 А) ГО ΝΟ: 13), СПК2 (81(0 ГО ΝΟ: 15) и СПК3 (81(0 ГО ΝΟ: 17) тяжелой цепи ВВСА841); или
(C) СОИ- (81(0 ГО ΝΟ: 37), СПК2 (81(0 ГО ΝΟ: 39) и СПК3 (81(0 ГО ΝΟ: 41) легкой цепи РКСА157 и СОИ- (81 А) ГО ΝΟ: 45), СПК2 (81(0 ГО ΝΟ: 47) и СПК3 (81(0 ГО ΝΟ: 49) тяжелой цепи РКСА157.
Настоящее изобретение дополнительно касается любого из вышеописанных выделенных антител или их иммунореактивных фрагментов, где антитело связывается с В7-Н3, который эндогенно экспрес- 5 030226
сируется на поверхности раковой клетки.
Настоящее изобретение дополнительно касается любого из вышеописанных выделенных антител или их иммунореактивных фрагментов, где антитело связывается с В7-Н3, которое интернализируется после связывания с В7-Н3, экспрессируемым на поверхности раковой клетки.
Настоящее изобретение дополнительно касается любого из вышеописанных выделенных антител или их иммунореактивных фрагментов, которое представляет собой гуманизированное моноклональное антитело.
Настоящее изобретение дополнительно касается любого из вышеописанных выделенных антител или их иммунореактивных фрагментов, где антитело является модифицированным антителом, которое содержит вариантную Ре-область 1дС1 человека, где вариантная Ре-область 1дС1 человека содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию по отношению к Рс-области исходного антитела, при этом аминокислотная модификация(и) включает аминокислотную модификацию(и), которая изменяет аффинность или авидность вариантного Рс-участка для связывания с РсуК, так что модифицированное антитело проявляет усиленную эффекторную функцию по сравнению с исходным антителом.
Настоящее изобретение дополнительно касается любого из вышеописанных выделенных антител или их иммунореактивных фрагментов, где модификация Рс-участка включает:
(А) по меньшей мере одну замену, выбранную из группы, состоящей из УЗООЬ;
(1)
(2)
(3)
(4)
Р243Ь;
Ώ270Ε;
К292Р;
8298Ν:
(5)
(6) (Ό (8)
У3051;
АЗЗОУ;
Р396Ь;
(В) по меньшей мере одну замену двух аминокислотных остатков, при этом замены выбраны из группы, состоящей из
(1)
(2)
(3)
Р243Ь и Р396Ь; Р243Ь и К292Р;
К292Р и У3051;
(С) по меньшей мере одну замену трех аминокислотных остатков, при этом замены выбраны из группы, состоящей из
(1)
(2)
(3)
(4)
Р243Ь, К292Р и УЗООЬ; Р243Ь, К292Р и У3051; Р243Ь, К292Р и Р396Ь;
К292Р, УЗ 051 и Р396Ь;
(Ώ) по меньшей мере одну замену четырех аминокислотных остатков, при этом замены выбраны из группы, состоящей из
(1) Р243Ь, К292Р, УЗООЬ и Р396Ь;
(2) Р243Ь, К292Р, У3051 и Р396Ь;
или
(Е) замену по меньшей мере пяти аминокислотных остатков Р243Ь, К292Р,
УЗООЬ, У3051 и Р396.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанного антитела, где антитело включает замены
(А) Р243Ь, К292Р и УЗООЬ;
(В) Ь235У, Р243Ь, К292Р, УЗООЬ и Р396Ь
или
(С) Р243Ь, К292Р, УЗООЬ, У3051 и Р396Ь.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанного антитела, где антитело включает:
(A) вариабельный домен, который включает СЬК1 (δΕΡ ΙΌ N0: 5), С1Ж2 (δΕΡ ГО N0: 7) и С1Ж3 (8Ер ГО N0: 9) легкой цепи ВКСЛ84Ь и СЭКц (8Ьр ГО N0: 13), СОК2 (8Ьр ГО N0: 15) и СОК3 (8Ьр ГО N0: 17) тяжелой цепи ВКСЛ84Ь; и
(B) модификацию Рс-участка, которая включает замены
Ь235У, Р243Ь,
К292Р, УЗООЬ и Р396Ь.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанного антитела, где антитело является химерным антителом или гуманизированным антителом.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанных выделенных антител или их им- 6 030226
мунореактивных фрагментов, где антитело включает:
(A) вариабельную легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность ЬВКСА84Э-2 УЪ (8ЕЦ ГО N0: 89);
(B) вариабельную тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность ЬВКСА84Э-2 УН (8ЕЦ ГО N0: 99); и
(C) Рс-область, имеющую замены Ь235У, Р243Ь, К292Р, У300Ь и Р396Ь.
Настоящее изобретение дополнительно касается гибридомы, которая секретирует моноклональное антитело, которое специфично связывает внеклеточный домен В7-Н3, где антитело конкурирует за связывание с В7-Н3 с любыми из антител ВКСА69Э, ВКСА84Э или РКСА157.
Настоящее изобретение дополнительно касается молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует любое из вышеописанных выделенных антител или иммунореактивных фрагментов.
Настоящее изобретение дополнительно касается переориентирующего реагента с двойной аффинностью (ЭАК.Т™), при этом реагент включает:
(A) полипептидную цепь I, которая содержит эпитоп-связывающий домен УЪ иммуноглобулина, специфичный к связыванию В7-Н3, и эпитоп-связывающий домен УН, специфичный к связыванию молекулы, отличной от В7-Н3; и
(B) полипептидную цепь II, которая содержит эпитоп-связывающий домен УН иммуноглобулина, специфичный к связыванию В7-Н3, и эпитоп-связывающий домен УЪ, специфичный к связыванию молекулы, отличной от В7-Н3;
где полипептидные цепи I и II связаны вместе так, чтобы образовывать функциональные эпитопсвязывающие домены, способные связываться с В7-Н3 и молекулой, отличной от В7-Н3.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанного переориентирующего реагента с двойной аффинностью (ЭАКТ™), где отличная от В7-Н3 молекула, которую может связать ЭЛИТ™. представляет собой гаптен и, в частности, где гаптен является флуоресцеинизотиоцианатом.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанного переориентирующего реагента с двойной аффинностью (ЭАКТ™), где указанная молекула, отличная от В7-Н3, которая может быть связана указанным ПАКТ™, представляет собой Т-клеточный рецептор или рецептор ΝΚΟ2Ό.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанного переориентирующего реагента с двойной аффинностью (ЭАКТ™), где указанная молекула, отличная от В7-Н3, которая может быть связана указанным ЭАКТ™, представляет собой опухолеассоциированный антиген, и, в частности, где опухолеассоциированный антиген выбирают из группы, состоящей из А33; АЭАМ^; АЬСАМ; ВАСЕ; βкатенина; СА125; карбоксипептидазы М; СЭ103; СЭ19; СЭ20; СЭ22; СЭ23; СЭ25; СЭ27; СЭ28; СЭ36; СЭ40/СЭ154; СЭ45; СЭ46; СЭ5; СЭ56; СЭ79а/СЭ79Ь; СГОК4; СЕА; СТЬА4; цитокератина 8; ЕСР-К; ЕрЬА2; ЕгЬВ1; ЕгЬВ3; ЕгЬВ4; САСЕ-1; САСЕ-2; СЭ2/СЭ3/СМ2; др100; НЕК-2/пеи; Е6 папилломавируса человека; Е7 папилломавируса человека; интегрина а-У-β-ό; 1АМ-3; КГО3; КГО31; К8А (17-1А); ЬИСА2; МАСЕ-1; МАСЕ-3; МАКТ; МИС-1; МИМ-1; Ν-ацетилглюкозаминилтрансферазы; онкостатина М; р15; РГОА; Р8А; Р8МА; К0К1; §Тп; рецептора Т№ф; рецептора ТОТ-а; рецептора ТОТ-у; трансферринового рецептора и рецептора УЕСР.
Настоящее изобретение дополнительно касается молекулы нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептидную цепь любого из вышеописанных переориентирующих реагентов с двойной аффинностью (ЭАКТ™).
Настоящее изобретение дополнительно касается фармацевтической композиции, содержащей: (ί) терапевтически эффективное количество любого из вышеописанных выделенных антител, или иммунореактивных фрагментов, или переориентирующих реагентов с двойной аффинностью (ЭАКТ™), и (ίί) фармацевтически приемлемый носитель.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанной фармацевтической композиции, где антитело представляет собой гуманизированное антитело, которое содержит:
(A) вариабельный домен, который включает СГОК, (8ЕЦ ГО N0: 5), СЭК2 (8ЕЦ ГО N0: 7) и СЭК3 (8ЕЦ ГО N0: 9) легкой цепи ВКСА84Э и СОИ- (8ЕЦ ГО N0: 13), СЭК2 (8ЕЦ ГО N0: 15) и СЭК3 (8ЕЦ ГО N0: 17) тяжелой цепи ВКСА84Э; и
(B) модификацию Рс-области, которая включает замены Ь235У, Р243Ь, К292Р, У300Ь и Р396Ь.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанной фармацевтической композиции,
где антитело является гуманизированным антителом, которое содержит:
(A) вариабельную легкую цепь, имеющую аминокислотную последовательность ЬВКСА84Э-2 УЪ (8ЕЦ ГО N0: 89);
(B) вариабельную тяжелую цепь, имеющую аминокислотную последовательность ЬВКСА84Э-2 УН (8ЕЦ ГО N0: 99); и
(C) Рс-область, имеющую замещения Ь235У, Р243Ь, К292Р, У300Ь и Р396Ь.
Настоящее изобретение дополнительно касается любой из вышеописанных фармацевтических композиций, которые дополнительно включают одно или несколько дополнительных противораковых средств, и, в частности, где дополнительное противораковое средство является химиотерапевтическим
- 7 030226
средством, радиационным терапевтическим средством, гормональным терапевтическим средством или иммунотерапевтическим средством.
Настоящее изобретение дополнительно касается применения любого из вышеописанных антител, или иммунореактивных фрагментов, или переориентирующих реагентов с двойной аффинностью (ΩΑΚ.Τ™) в диагностике рака, где выделенное антитело, иммунореактивный фрагмент или ΩΑΡΤ™ мечены детектируемой меткой.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанного применения, отличающегося тем, что рак характеризуется присутствием раковой клетки, выбранной из группы, состоящей из клетки опухоли надпочечника, СПИД-ассоциированного рака, альвеолярной саркомы мягких тканей, астроцитарной опухоли, рака мочевого пузыря, рака кости, рака головного и спинного мозга, метастатической опухоли головного мозга, рака молочной железы, опухолей каротидных телец, рака шейки матки, хондросаркомы, хордомы, хромофобной почечно-клеточной карциномы, светлоклеточного рака, рака толстой кишки, колоректального рака, кожной доброкачественной фиброзной гистиоцитомы, десмопластической мелкокруглоклеточной опухоли, эпендимомы, опухоли Юинга, внескелетной миксоидной хондросаркомы, несовершенного фиброгенеза кости, фиброзной дисплазии кости, рака желчного пузыря или желчных протоков, рака ЖКТ, гестационной трофобластической болезни, эмбрионально-клеточной опухоли, рака головы и шеи, гепатоклеточной карциномы, инсулиномы, саркомы Капоши, рака почки, лейкоза, липомы/доброкачественной липоматозной опухоли, липосаркомы/злокачественной липоматозной опухоли, рака печени, лимфомы, рака легкого, медуллобластомы, меланомы, менингиомы, множественных эндокринных неоплазий, множественной миеломы, миелодиспластического синдрома, нейробластомы, нейроэндокринных опухолей, рака яичника, рака поджелудочной железы, папиллярной карциномы щитовидной железы, опухоли паращитовидной железы, детского рака, опухоли оболочки периферического нерва, феохромоцитомы, рака гипофиза, рака простаты, задней увеальной меланомы, редкого гематологического нарушения, метастатического рака почки, рабдоидной опухоли, рабдомиосаркомы, саркомы, рака кожи, саркомы мягких тканей, плоскоклеточного рака, рака желудка, синовиальной саркомы, рака яичка, карциномы тимуса, тимомы, метастатического рака щитовидной железы и рака матки.
Настоящее изобретение дополнительно касается применения любого из вышеописанных антител или иммунореактивных фрагментов, или переориентирующих реагентов с двойной аффинностью (ΩΑΚ.Τ™) при получении лекарственого препарата для лечения или предотвращения рака у пациента. Настоящее изобретение дополнительно касается таких применений, которые отличаются тем, что рак характеризуется присутствием раковой клетки, выбранной из группы, состоящей из клетки опухоли надпочечника, СПИД-ассоциированного рака, альвеолярной саркомы мягких тканей, астроцитарной опухоли, рака мочевого пузыря, рака кости, рака головного и спинного мозга, метастатической опухоли головного мозга, рака молочной железы, опухолей каротидных телец, рака шейки матки, хондросаркомы, хордомы, хромофобной почечно-клеточной карциномы, светлоклеточного рака, рака толстой кишки, колоректального рака, кожной доброкачественной фиброзной гистиоцитомы, десмопластической мелкокруглоклеточной опухоли, эпендимомы, опухоли Юинга, внескелетной миксоидной хондросаркомы, несовершенного фиброгенеза кости, фиброзной дисплазии кости, рака желчного пузыря или желчных протоков, рака ЖКТ, гестационной трофобластической болезни, эмбрионально-клеточной опухоли, рака головы и шеи, гепатоклеточной карциномы, инсулиномы, саркомы Капоши, рака почки, лейкоза, липомы/доброкачественной липоматозной опухоли, липосаркомы/злокачественной липоматозной опухоли, рака печени, лимфомы, рака легкого, медуллобластомы, меланомы, менингиомы, множественных эндокринных неоплазий, множественной миеломы, миелодиспластического синдрома, нейробластомы, нейроэндокринных опухолей, рака яичника, рака поджелудочной железы, папиллярной карциномы щитовидной железы, опухоли паращитовидной железы, детского рака, опухоли оболочки периферического нерва, феохромоцитомы, рака гипофиза, рака простаты, задней увеальной меланомы, редкого гематологического нарушения, метастатического рака почки, рабдоидной опухоли, рабдомиосаркомы, саркомы, рака кожи, саркомы мягких тканей, плоскоклеточного рака, рака желудка, синовиальной саркомы, рака яичка, карциномы тимуса, тимомы, метастатического рака щитовидной железы и рака матки.
Настоящее изобретение дополнительно касается вышеописанных применений, отличающихся тем, что применение дополнительно включает назначение одной или нескольких дополнительных противораковых терапий, выбранных из группы, состоящей из химиотерапии, иммунотерапии, радиационной терапии, гормональной терапии и хирургии.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1А-1В показаны результаты 1НС исследований, проведенных с применением образцов нормальных тканей поджелудочной железы, печени, легкого и толстой кишки с ΒΚΟΑ84Ω при 0,625 мкг/мл и 0,078 мкг/мл (фиг. 1А) и нормальных тканей сердца, почки и надпочечника с ΒΡί'.Ά84Ω при 0,625 мкг/мл (фиг. 1В).
На фиг. 2 показаны результаты 1НС исследований, проведенных с применением образцов раковых тканей поджелудочной железы, молочной железы, толстой кишки и легкого с ΒΡί'.Ά84Ω при 0,625 мкг/мл и 0,078 мкг/мл.
- 8 030226
На фиг. 3Ά-3Ό показан дозозависимый перенаправленный киллинг, опосредованный антителами настоящего изобретения. На фиг. 3А-3В показан дозозависимый перенаправленный киллинг клеток А498 карциномы почки (с покоящимися РВМС через 18 ч (БЭН)) при помощи моноклональных антител, реактивных по отношению к В7-Н3 (соотношение эффектор:цель 20:1) (фиг. 3А: ВКСА68О. ВКСА69О. РКСА157. ОВ8. ТСК-4420; фиг. 3В: ОУСА22. ВКСА84В. ТШ16. ΊΈ87, ТСК-4420). На фиг. 3С-3П показан дозозависимый перенаправленный киллинг клеток рака легкого А549 (с покоящимися РВМС через 18 ч (БЭН)) при помощи моноклональных антител. реактивных по отношению к В7-Н3 (соотношение эффектор:цель 30:1) (фиг. 3С: ВКСА841У ОУСА22. РКСА157. ТЕ87; фиг. 3Ό: ТОН6. ВКСА681). ВКСА69О).
На фиг. 4А-4В показаны способности антител к В7-Н3 связываться с растворимым В7Н3-21§ (фиг. 4А) и растворимым В7Н3-41§ В7-Н3 (фиг. 4В) (концентрация антитела составляет 100 нМ). Условные обозначения: (А) ВЬА8; (В) ВКСА165; (С) ВКСА681); (Ό) ВКСА691); (Е) ВКСА84В; (Р) ОВ8; (О) БИСА1; (Н) БИСА50; (I) ОУСА21; (1) ОУСА22; (К) РА20; (Б) РКСА123; (М) 8О24; (Ν) 8О27; (О) 8ТО9; (Р) ТОН4 (184-192); (О) ТОН4; (К) ТОН5; (8) ТЕ87. Вертикальное положение условных обозначений коррелирует с положением соответствующей кривой.
На фиг. 5А-58 продемонстрирована связывающая аффинность между антигенами в растворе и захваченными моноклональными антителами (сплошные линии; В7-Н3(41§) 100 нМ; пунктирные линии; В7-Н3. 100 нМ).
На фиг. 6А-61 показаны результаты В1АСОКЕ™ анализов антител к В7-Н3. иммобилизированных на В7-Н3-21д (пунктирные серые линии) или В7-Н3-41д (сплошные черные линии). Антитела титровали от 0.063 до 1 мкМ. Время приведено в секундах.
На фиг. 7 предоставлен сравнительный анализ В1АСОКЕ™ антител РКСА157. ВКСА69О. ВЬА8. РА20. ВКСА841). ОВ8 и 8О27.
На фиг. 8 предоставлен анализ В1АСОКЕ™. демонстрирующий. что антитела ВКСА68О. ВКСА69О и РКСА157 не конкурируют с ВКСА84О за связывание с В7-Н3 человека.
На фиг. 9А-9В показаны результаты исследований по способности антител к В7-Н3 настоящего изобретения интернализоваться при связывании с клетками рака (фиг. 9А клетки простаты С8С; фиг. 9В клетки поджелудочной железы Н§7001).
На фиг. 10А-10Р показана способность антител к В7-Н3 настоящего изобретения к перекрестной конкуренции друг с другом. тем самым выявляя перекрывающиеся или отдельные эпитопы. Был использован десятикратный избыток конкурентного антитела.
На фиг. 11А-11В показано выравнивание аминокислотных остатков вариабельных легких цепей (фиг. 11А) или вариабельных тяжелых цепей (фиг. 11В) ВКСА84О и его гуманизированного производного НВКСА84О.
На фиг. 12 показаны относительные связывающие аффинности производных ВКСА84О-3УБ. ВКСА84О-4УБ и ВКСА84О-5УБ легкой цепи НВКСА84О с В7-Н3 человека.
На фиг. 13 показаны относительные связывающие аффинности производных ВКСА84О-2УН. ВКСА84О-3УН и ВКСА84О-4УН тяжелой цепи НВКСА84О с В7-Н3 человека.
На фиг. 14 показаны относительные связывающие аффинности (1) антител. содержащих ЬВКСА84О-2УБ и НВКСА84О-2УН (опыты 1 и 2). (2) химерных ВКСА84О. (3) антитела. содержащего ЬВКСА84О-5УБ и химерную ВКСА84О-НС. и (4) антитела. содержащего НВКСА84О-5УБ и НВКСА84О2УН.
На фиг. 15 показана способность Рс-модифицированных. гуманизированных антител к В7-Н3 ингибировать опухолевый рост клеток карциномы мочевого пузыря НТ-1197 ίη νίνο в модельной системе с использованием мышиных ксенотрансплантатов. Рс-модифицированное антитело НВКСА84О-2 (включающее Рс-модификации Ь235У. Р243Б. К292Р. У300Б и Р396Б) вводили мышам (в дозе 1 мкг/кг. 10 мкг/кг или 20 мкг/кг) через 7 дней. 14 дней. 21 день и 28 дней после имплантации раковых клеток.
На фиг. 16 показана способность Рс-модифицированных. гуманизированных антител к В7-Н3 ингибировать опухолевый рост клеток карциномы почки А498 ίη νίνο в модельной системе с использованием мышиных ксенотрансплантатов. Рс-модифицированное антитело НВКСА84О-2 (включающее Рсмодификации Ь235У. Р243Б. К292Р. У300Б и Р396Б) вводили мышам (в дозе 1 мкг/кг. 10 мкг/кг или 20 мкг/кг) через 7 дней. 14 дней. 21 день и 28 дней после имплантации раковых клеток.
На фиг. 17А-17О демонстрируется способность НВРСА84О-2/ОАРТ™ к ТСК ("Т-ЭАКТ™") опосредовать перенаправленный киллинг клеток рака легкого 8К-МЕ8-1. клеток карциномы почки А498. клеток рака простаты БЖ'.'аР и клеток меланомы ИАСС-62.
На фиг. 18А-18С показан фармакокинетический распад МаЫ к В7-Н3 в сыворотках крови самцов мышей без опухоли ιηί'.Ό16-/-. ЬСИ16А_РОХШ (фиг. 18А-18В). На фиг. 18С показаны прогнозируемые фармакокинетические профили. составленные при помощи 2-камерной модели с параметрами от дозы 5 мг/кг при 0.1. 0.5. 1. 5 и 10 мг/кг.
На фиг. 19 показана относительная экспрессия НЕК2 и РКСА135 в линии НТ-1197 рака мочевого пузыря.
- 9 030226
На фиг. 20 показана связывающая аффинность вариантов антитела 1ιΒΚί'.Ά84Ό к В7-Н3 к клеткам НТ-1197.
На фиг. 21А-21С показаны результаты анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для НТ-1197. Группы из 8 самок мышей получили растворитель или 10 мг/кг 1§С-контроля, или центуксимаб в дозе 1, 5 или 15 мг/кг, или антитело МаЫ к В7-Н3 в дозе 0,1, 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг (Ο7Ό х5). Измерения опухоли выполняли каждые 3-4 дня. На фиг. 21А показана способность антитела МаЫ к В7-Н3 предотвращать или ингибировать развитие опухоли в модели с использованием мышиных ксенотрансплантатов. Сравнения относительно 1дС-контроля: МаЫ (1 и 5 мг/кг) относительно 1дС-контроля *** от дня 51; МаЫ (10 мг/кг) относительно 1дС-контроля ** от дня 48. На фиг. 21В показана способность центуксимаба предотвращать или ингибировать развитие опухоли в модели с использованием мышиных ксенотрансплантатов. Цетуксимаб (7 мг/кг) относительно 1дС-контроля ** от дня 51; цетуксимаб (15 мг/кг) относительно 1дС-контроля х от дня 58. На фиг. 21С сравниваются полученные результаты при максимальных протестированных дозах.
На фиг. 22А-22В показана относительная экспрессия НЕК.2 и РМ8А в линии НТ-1376 рака мочевого пузыря.
На фиг. 23 показаны результаты анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для НТ1376. Группы мышей получали растворитель или 1,0 мг/кг антитела МаЫ к В7-Н3 (Ο7Ό х4).
На фиг. 24 показаны результаты анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для АО8. Группы мышей получали растворитель или 10 мг/кг антитела МаЫ к В7-Н3 в дозе 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг (Ο7Ό х5).
На фиг. 25 показаны результаты ίη νίΐτο анализа цитотоксичности для клеток рака легкого А549 после инкубации с ЬВКСА84И, сЬВКСА84И и НВРСА84 (Рс Уат1) вариантными антителами к В7-Н3 (соотношение Е:Т = 25:1; эффектор = РВМС человека; представление данных по ЬИН-анализу).
На фиг. 26 показаны результаты анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для А549. Группы мышей получали растворитель или 1,0 мг/кг антитела МаЫ к В7-Н3 (Ο7Ό х4).
На фиг. 27 показаны результаты анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для СаЬи3. Группы мышей получали растворитель или 0,5, 1 или 5 мг/кг (Ο7Ό х5) антитела МаЫ к В7-Н3 или 1§С-контроль (10 мг/мл).
На фиг. 28А-28С показаны результаты анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для раковых клеток меланомы ЬОХ-1МУ1. Группы из 8 самок мышей получали растворитель, или 5 мг/кг 1дС-контроля, или доцетаксел в дозе 5, 10 или 20 мг/кг, или антитело МаЫ к В7-Н3 в дозе 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг. На фиг. 28А показана способность антитела МаЫ к В7-Н3 предотвращать или ингибировать развитие опухоли в модели с использованием мышиных ксенотрансплантатов. На фиг. 28В показана способность доцетаксела предотвращать или ингибировать развитие опухоли в модели с использованием мышиных ксенотрансплантатов. На фиг. 28С сравниваются полученные результаты при максимальных протестированных дозах.
На фиг. 29 показан результат анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для раковых клеток меланомы ИАСС-62. Группы мышей получали растворитель или 5 мг/кг 1§С-контроля или антитела МаЫ к В7-Н3 в дозе 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг.
На фиг. 30А-30С показаны результаты анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для клеток рака простаты 2τν. Группы из 8 самок мышей получали растворитель или 10 мг/кг 1§Сконтроля, или трастузумаб в дозе 1, 7 или 15 мг/кг, или антитело МаЫ к В7-Н3 в дозе 0,5, 1, 5, или 10 мг/кг. На фиг. 30А показана способность антитела МаЫ к В7-Н3 предотвращать или ингибировать развитие опухоли в модели с использованием мышиных ксенотрансплантатов. На фиг. 30В показана способность трастузумаба предотвращать или ингибировать развитие опухоли в модели с использованием мышиных ксенотрансплантатов. На фиг. 30С сравниваются полученные результаты при максимальных протестированных дозировках.
На фиг. 31 показаны результаты анализа цитотоксичности ίη νίίτο клеток рака почки А498 после инкубации с ЬВКСА84И, сЬВКСА84И и НВРСА84 (Рс Уат1) вариантными антителами к В7-Н3 (соотношение Е:Т = 25:1; эффектор = РВМС человека; представление данных по ЬИН-анализу).
На фиг. 32 показан результат анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для клеток рака почки А498. Группы мышей получали растворитель или 10 мг/кг 1§С-контроля, или антитела МаЫ к В7-Н3 в дозе 0,1, 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг. Центуксимаб (антитело к ЕСРР) вводили контрольной группе мышей в дозах 1, 7 или 15 мг/кг.
На фиг. 33А-33В показан результат анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для клеток рака почки 786-0 в сравнении с центуксимабом. Группы мышей получали растворитель или 10 мг/кг 1§С-контроля или антитела МаЫ к В7-Н3 в дозе 0,1, 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг. Центуксимаб (антитело к ЕОКЕ) вводили контрольной группе мышей в дозах 1, 7 или 15 мг/кг.
На фиг. 34 показан результат анализа с использованием мышиных ксенотрансплантатов для клеток рака почки 786-0 в сравнении с паклитакселем. Группы мышей получали растворитель или 5 мг/кг 1§Сконтроля или антитело МаЫ к В7-Н3 в дозе 0,1, 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг. Паклитаксель вводили контроль- 10 030226
ной группе из восьми таких мышей в дозе 2,5 мг/кг.
Детальное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к антителам и их фрагментам, которые являются иммунореактивными в отношении рецептора В7-Н3 млекопитающих, и еще конкретнее, человека, и их применениям, в частности, при лечении рака и воспаления. Таким образом, настоящее изобретение, в частности, касается гуманизированных, реактивных к В7-Н3 антител и их иммунореактивных фрагментов, которые способны опосредовать и более предпочтительно повышать активацию иммунной системы против раковых клеток, которые ассоциированы с рядом злокачественных опухолей.
I. Общие методы.
В осуществлении на практике настоящего изобретения будут использоваться, если не указано иное, традиционные методы молекулярной биологии (включая рекомбинантные методы), микробиологии, клеточной биологии, биохимии и иммунологии, которые имеются в пределах уровня техники. Такие методы в полной мере изложены в литературе, такой как МОЬЕСиЬАК СЬОЫ1ЫО: А ЬАВОКАТОКУ МАЫиАЬ, ТЫгй Еййюп (8атЬгоок е! а1. Ейк., 2001) Со1й 8ргшд НагЬог Ргекк, Со1й 8ргтд НагЬог, ΝΥ; ОЬЮОЫиСЬЕОТГОЕ 8уп1Нек1к: Ме!йойк апй АррПсаОопк (Ме!йойк ίη Мо1еси1аг Вю1о§у), Негйемуп, Р., Ей., Нитапа Ргекк, То!ома, N1; ОиООБТиСЬЕОТГОЕ 8ΥΝΊΉΕ8Ι8 (Оай, М.Е, Ей., 1984); МЕТНОО8 ΙΝ МОЬЕСиЬАК ВIО^ООΥ, Нитапа Ргекк, То!ома, N1; Се11 Вю1о§у: А ЬаЬога!огу №1еЬоок (СеШк, ЕЕ., Ей., 1998) Асайетк Ргекк, Аем Уогк, ΝΥ; АММАЬ СЕЬЬ СиЬТИКЕ (РгекНпеу, Κ.Ι., Ей., 1987); 1\ТНОШ;СТ1О\ ю Се11 апй Тйкие СиНиге (Ма!йег, ЕР. апй КоЬейк, Р.Е., Ейк., 1998) Р1епит Ргекк, №\ν Уогк, ΝΥ; Се11 АN^ Т188ИЕ СиЬТИКЕ: ^АВОКАТОКΥ РКОСЕЕЕ'КЕ8 (Ооу1е, А. е! а1., Ейк., 1993-8) 1оЬп \УПе\ апй 8опк, НоЬокеп, Νί; МЕТНОО8 ΙΝ ΕNΖΥМО^ООΥ (Асайетю Ргекк, 1пс.) Νβν Υο^к, ΝΥ; \ΥΕΙΡ'8 НАУЕВООК ОР Е\рептеп!а1 1ттипо1о§у (Нег/епЬегщ Ь.А. е! а1. Ейк. 1997) \Уйеу-В1аск\уе11 РиЬПккегк, Νον Υο^к, ΝΥ; Οενε ТРАЖРЕР УЕСТОК8 РОК \1А\1\1АЕЕ\\ СЕЬЬ8 (МШег, ЕМ. е! а1. Ейк., 1987) Со1й 8ргш§ НагЬог Ргекк, Со1й 8ргшд НагЬог, ΝΥ; Сиггеп! Рго!осо1к ш Мо1еси1аг Вю1о§у (АикиЬе1, Р.М. е! а1., Ейк., 1987) Огеепе РиЬ. Аккоша!ек, кем Υο^к, ΝΥ; РСК: Тйе РО^УМΕКА8Ε Скат КРАСЛО^ (МиШк, К. е! а1., Ейк., 1994) Вйкйаикег, Вок!оп МА; СиККЕЭТ РРОТОСОЕ8 ΙΝ IММυNО^ООΥ (Сой§ап, ЕЕ. е! а1., ейк., 1991) 1окп \УПеу апй 8опк, НоЬокеп, Ν1; 81юг1 Рго!осо1к ш Мо1еси1аг Вю1о§у Нокп \УПеу апй 8опк, 1999) НоЬокеп, Ν1; IММυNОВIО^ООΥ 7 (1апемау, С.А. е! а1. 2007) Оаг1апй 8аепсе, Ьопйоп, ИК; АпОЬоШек (Р. Ршсй, 1997) 8!пйе РиЬйсайопк, Еехогаи, ИК; А\Т1ВО1)1Е8: А РКАСТ1САЕ АРРКОАСН (Ό. Сайу., ей., 1989) О\Еогй ищуегкйу Ргекк, И8А, кем Υο^к ΝΥ); Мопос1опа1 АпйЬоФек: А Ргас!юа1 Арргоасй (8йерйегй, Р. е! а1. Ейк., 2000) О\Еогй Итуегейу Ргекк, И8А, Уем когк ΝΥ; υ8ΙΝΟ АNТIВО^IΕ8: А ^АВОКАТОКΥ МАNυА^ (Наг1ом, Е. е! а1. Ейк., 1998) Со1й 8ргшд НагЬог ЬаЬога!огу Ргекк, Со1й 8ргшд НагЬог, ΝΥ; ТНЕ АNТIВО^IΕ8 /апеШ, М. е! а1. Ейк. 1995) Нагмоой Асайетю РнЬИкНегк, Ьопйоп, иК); апй ОеУйа, Не11тап, ААЕ КО8ЕМВЕКО'8 СА^ЕК: РКINСIР^Ε8 & РКАСПСЕ ОР О^ОБОО^ ЕЮНТН Е^ОШОЮ ОеУйа, V. е! а1. Ейк. 2008, Ырршсо!! ХУПНатк & ХУПктк, Рййайе1рЫа, РА.
ΙΙ. Определения.
Выражение "В7-Н3", используемое в данном документе, относится к члену семейства белков В7 человека, мембранному белку Ι типа с ^-подобными доменами, также известному как СЭ276. Выражение ^£^7-4311 означает форму В7-Н3, которая включает только два ^-подобных домена; выражение "4Ι§В7-Н3" означает форму В7-Н3, которая включает четыре Ιβ-подобных домена (см., 8ип, М. е! а1. (2002) "СНагас1еп/аЦоп о! Мойке апй Нитап В7-Н3 Оепек", 1. Iттиηο1. 168:6294-6297; 8!ешЬег§ег е! а1. (2004), "Мо1еси1аг СНагасГеп/аПоп О! Нитап 4^^7-43, А МетЬег О! ТНе В7 Ратйу \νί11ι Роиг ^-Нке Ноташк", 1. Iттиηο1. 2004, 172(4):2352-2359 и СаАпсот е! а1. (2004) "Иепййсайоп О! 4^^7^3 Ак А №игоЬ1ак!ота-Аккос1а!ей Мо1еси1е ТНа! Е\ег1к А Рго!есйуе Ко1е Ргот Ап ΝΙ< Се11-Мей1а!ей Ьукй", Ргос. №И. Асай. 8с1. (и.8.А.) 101(34): 12640-12645). Антиген "ТЕ87" (АО 2008/066691) представляет собой антиген, имеющий общие характеристики с 4^^7-43. Соответственно, антитела, которые специфично связываются с ТЕ87, связываются с 4^^7-43. Антиген ТЕ87 может иметь несколько различных эпитопов, и эпитопы могут быть нелинейными. Некоторые антитела к В7-Н3, как известно, связывают нелинейные эпитопы, включая некоторые, присутствующие только на изоформе 4^^7-43. В настоящее время считается, что ТЕ87 может сверхэкспрессироваться в определенных раковых клетках по сравнению с их аналогами в нормальных тканях.
Агонисты, антагонисты и другие модуляторы функции В7-Н3 прямо включены в объем данного изобретения. Эти агонисты, антагонисты и модуляторы являются полипептидами, которые включают один или несколько участков антигенных детерминант В7-Н3 или включают один или несколько фрагментов таких участков, варианты таких участков или пептидомиметики таких участков. Эти агонистические, антагонистические и В7-Н37-модулирующие соединения предоставляются в линейной или циклической форме и необязательно включают по меньшей мере один аминокислотный остаток, который обычно не обнаруживается в природе, или по меньшей мере один изостер амида. Эти соединения могут быть гликолизированными.
Более конкретно, выражения "модулятор В7-Н3", используемые в данном документе, определяют как любое соединение, которое (1) способно нарушать или блокировать взаимодействие между В7-Н3 человека и его нативными лигандами или антителом к В7-Н3; (2) способно связываться с В7-Н3 человека
- 11 030226
и его нативными лигандами или антителом к В7-Н3; (3) содержит антигенный участок, который может быть применен в индукции антител, способных к связыванию с В7-Н3 человека и его нативными лигандами или антителом к В7-Н3; (4) содержит антигенный участок, который может быть применен в скрининге антител, способных к связыванию с В7-Н3 человека и его нативными лигандами или антителом к В7-Н3; (5) содержит антигенный участок, который может быть применен в индукции антител, способных нарушать или блокировать взаимодействие между В7-Н3 человека и его нативными лигандами или антителом к В7-Н3; (6) содержит антигенный участок, который может быть применен в скрининге антител, способных нарушать или блокировать взаимодействие между В7-Н3 человека и его нативными лигандами или антителом к В7-Н3. Модуляторы В7-Н3 могут быть "агонистами В7-Н3" или "антагонистами В7Н3," в зависимости от того, повышает ли их активность активацию Т-клеток или ингибирует активацию Т-клеток соответственно.
Агонисты, антагонисты и модуляторы В7-Н3 включают варианты В7-Н3, пептидные антагонисты В7-Н3, пептидомиметики и малые молекулы, антитела к В7-Н3 и иммуноглобулиновые варианты, аминокислотные варианты В7-Н3 человека, включая варианты с аминокислотной заменой, делецией и добавлением или любые их комбинации, и химерные иммуноглобулины. Агонисты, антагонисты и модуляторы В7-Н3 настоящего изобретения основываются на идентификации доменов В7-Н3, вовлеченных в связывание В7-Н3 человека с его нативными лигандами или антителами к В7-Н3. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает агонисты, антагонисты и модуляторы В7-Н3 с молекулярными структурами, которые дублируют или имитируют один или несколько В7-Н3-связывающих доменов В7-Н3 человека.
Выражение "вариант В7-Н3", используемое в данном документе, означает любой аминокислотный вариант В7-Н3 человека, включая варианты с аминокислотной заменой, делецией и добавлением или любую их комбинацию. Определение охватывает химерные молекулы, такие как химеры В7-Н3 человека/не относящиеся к человеку и другие гибридные молекулы. Также в определение включается любой фрагмент вариантной молекулы В7-Н3, который содержит вариантую или гибридную область(и) молекулы.
"Антитело", используемое в данном документе, является молекулой иммуноглобулина, способной специфично связываться с целью, такой как углевод, полинуклеотид, липид, полипептид и т.д., с помощью по меньшей мере одного антигенраспознающего участка, локализованного в вариабельной области молекулы иммуноглобулина. Используемое в данном документе выражение охватывает не только интактные поликлональные или моноклональные антитела, но также их фрагменты (такие как РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2, Ρν), одиночную цепь (8еРу), их мутанты, встречающиеся в природе варианты, слитые белки, включающие часть антитела с антигенраспознающим участком необходимой специфичности, гуманизированные антитела, химерные антитела, молекулы "ΒίΤΕδ®," "ΌΑΚΤ™" и любую другую модифицированную конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая включает антигенраспознающий участок необходимой специфичности.
Выражение "ΒίΤΕδ" (биспецифические активаторы Т-клеток) относится к молекуле с одиночной полипептидной цепью, которая при этом имеет два антигенсвязывающих домена, один из которых связывается с Т-клеточным антигеном, а второй из которых связывается с антигеном, присутствующим на поверхности цели (\УО 05/061547; Ваеиег1е, Р. е! а1. (2008) "ΒίΤΕ®: Α №ν С1а55 Οί АиНЬобу Тйа! Ресгий Т Се11в", Итад8 οί 1йе Ри1ите 33: 137-147; Вагдои, е! а1. 2008) "Титог Редгеххюп ίη Сапсег РаИеи18 Ьу Уету Ьо\у Ио8е8 οί а Т СеП-Епдадшд АпНЬобу", 8с1епсе 321: 974-977).
Выражение "ΌΑΚΤ™" (переориентирующий реагент с двойной аффинностью) относится к молекуле иммуноглобулина, которая включает по меньшей мере две полипептидные цепи, которые соединяются (главным образом посредством ковалентного взаимодействия) с образованием по меньшей мере двух эпитопсвязывающих участков, которые могут распознавать одинаковые или различные эпитопы. Каждая из полипептидных цепей ΩΑΡΤ™ включает вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина и вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина, но эти области не взаимодействуют с образованием эпитопсвязывающего участка. Точнее, вариабельная область тяжелой цепи иммуноглобулина одной (например, первой) из полипептидных цепей ΌΑΚΤ™ взаимодействует с вариабельной областью легкой цепи иммуноглобулина другой (например, второй) полипептидной цепи ΌΑΚΤ™ с образованием эпитопсвязывающего участка. Аналогично, вариабельная область легкой цепи иммуноглобулина одной (например, первой) из полипептидных цепей ΌΑΚΤ™ взаимодействует с вариабельной областью тяжелой цепи иммуноглобулина другой (например, второй) полипептидной цепи ΌΑΚΤ™ с образованием эпитопсвязывающего участка. ΩΑΡΤ™ могут быть моноспецифичными, биспецифичными, триспецифичными и т.д., таким образом будучи способными к одновременному связыванию одного, двух, трех или более различных эпитопов (которые могут принадлежать одному или различным антигенам). ΌΑΚΊ™ могут дополнительно быть одновалентными, бивалентными, тривалентными, тетравалентными, пентавалентными, гексавалентными и т.д., таким образом будучи способными одновременно связывать одну, две, три, четыре, пять, шесть или более молекул. Эти два свойства ΌΑΚΤ™ (т.е. степень специфичности и валентность можно объединить, например, для получения биспецифичных антител (т.е. способных связывать
- 12 030226
два эпитопа), которые являются тетравалентными (т.е. способны связывать четыре группы эпитопов) и т.д. Молекулы О АКТ™ раскрыты в РСТ публикациях XV О 2006/113665, XV О 2008/157379 и XV О 2010/080538.
Выражение "моноклональное антитело" относится к однородной популяции антител, где моноклональное антитело состоит из аминокислот (встречающиеся в природе и не встречающиеся в природе), которые вовлекаются в избирательное связывание антигена. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными, при этом направлены против отдельного антигенного участка. Выражение "моноклональное антитело" охватывает не только интактные моноклональные антитела и моноклональные антитела полной длины, но также их фрагменты (такие как РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2, Ρν), одиночную цепь (δοΡν), их мутанты, слитые белки, содержащие участок антитела, гуманизированные моноклональные антитела, химерные моноклональные антитела и любую другую модифицированною конфигурацию молекулы иммуноглобулина, которая содержит антигенраспознающий участок с необходимой специфичностью и способностью связываться с антигеном. Он не предназначен для ограничения в отношении источника антитела или способа, которым его получают (например, гибридома, фаговый отбор, рекомбинантная экспрессия, трансгенные животные и т. д.). Термин включает цельные иммуноглобулины, а также фрагменты и т.д., описанные выше под определением "антитело".
Термин "гуманизированное антитело" относится к химерной молекуле, в основном получаемой с применением рекомбинантных методов, имеющей антигенсвязывающий участок, полученный из иммуноглобулина вида, не относящегося к человеку, и оставшейся иммуноглобулинновой структуры молекулы на основе структуры и/или последовательности иммуноглобулина человека. Антигенсвязывающий участок может включать либо полные вариабельные домены, слитые с константными доменами, либо только гипервариабельные участки (СОК), привитые на соответствующие каркасные области в вариабельных доменах. Антигенсвязывающие участки могут быть дикого типа или модифицированными одним или несколькими аминокислотными заменами. Это исключает константную область в качестве иммуногена у человеческих индивидуумов, но остается возможность иммунного ответа на чужеродную вариабельную область (ЬоВидйо, А.Р. е! а1. (1989) "Моике/Нитап Сййтепс Мопос1опа1 АпйЬойу Ιη Мап: Кшейск апй 1ттиие Кекропке", Ргос. Ν;·ιΟ. Асай. δα. (И.8.А.) 86:4220-4224). Другой подход сосредотачивается не только на обеспечении константных областей человеческого происхождения, но и на модификации вариабельных областей так, чтобы реконструировать их как можно ближе к человеческой форме. Известно, что вариабельные области как тяжелых, так и легких цепей содержат три гипервариабельных участка (СОК), которые различаются по ответу на рассматриваемые антигены и определяют связывающую способность, и они фланкированы четырьмя каркасными областям (РК), которые являются сравнительно консервативными у данного вида и которые предположительно обеспечивают каркас для СОК. При получении не относящихся к человеку антител в отношении конкретного антигена, вариабельные области можно "реконструировать," или "гуманизировать" прививанием СОК, полученных из не относящихся к человеку антител, на РК, присутствующих в антителе человека, которое необходимо модифицировать. Применение данного подхода к различным антителам сообщалось §а!о, К. е! а1. (1993) Сапсег Кек 53:851-856. К1есЬшапп, Ь. е! а1. (1988) "Кекйаршд Нитап АпйЬойу Гог Тйегару", №йиге 332:323-327; Уегйоеуеп, М. е! а1. (1988) "Кекйаршд Нитап АпйЬойу: ОгаГйпд Ап Апй1уко/уте Ас!ййу", 8с1епсе 239:1534-1536; Ке!ЙеЬогоидй, С. А. е! а1. (1991) "Ниташ/айоп ОГ А Мойке Мопос1опа1 АпйЬойу Ву СЭКОгаГйпд: Тйе 1тройапсе Οί Ргате^огк Кеййиек Оп Ьоор СопРогтайоп", Рго!еш Епдшеейпд 4:773-3783; Маейа, Н. е! а1. (1991) "Сопкйисйоп ОГ Кекйарей Нитап АпйЬойу Χνίΐΐι Н1У-№и!гаИ/тд Асйуйу", Нитап АпйЬойу НуЬййота 2:124-134; Оогтап, δ. Ό. е! а1. (1991) "Кекйаршд А Тйегареийс СЭ4 АпйЬойу", Ргос. Ν!1. Асай. δα. (И.8.А.) 88:4181-4185; Тетрек!, Р.К. е! а1. (1991) "Кекйаршд А Нитап Мопос1опа1 АпйЬойу То йййЬй Нитап Кекрйа!огу 8упсуйа1 Уник 1пГесйоп ш \Ао". Вю/ТесЬпо1оду 9:266-271; Со, МД. е! а1. (1991) "Нитат/ей АпйЬоФек Рог Апй\йа1 Тйегару", Ргос. №й1. Асай. δα. (И.8.А.) 88:2869-2873; Сайег, Р. е! а1. (1992) "Ниташ/айоп ОГ Ап Апй-р185йег2 АпйЬойу Рог Нитап Сапсег Тйегару", Ргос. Ν!1. Асай. δα. (И.8.А.) 89:4285-4289; и Со, МД. е! а1. (1992) "СЫтепс Апй Нитат/ей АпйЬоЫек XV йй δрес^Г^сйу Рог Тйе ί.Ό33 Апйдеп", 1. 1ттипо1. 148:1149-1154. В некоторых вариантах осуществления гуманизированные антитела сохраняют все СОК-последовательности (например, гуманизированное антитело мыши, которое содержит все шесть СОК из антител мыши). В других вариантах осуществления гуманизированные антитела имеют один или несколько СОК (один, два, три, четыре, пять, шесть), которые изменены в отношении первоначального антитела, которые также называют один или несколько СОК "полученные из" одного или нескольких СОК из исходного антитела.
Как используется в данном документе, считается, что антитело или полипептид "специфично" связывает область другой молекулы (т.е. эпитоп), если оно реагирует или связывается чаще, быстрее, с большей продолжительностью и/или с большей аффинностью с таким эпитопом по сравнению с альтернативными эпитопами. Например, антитело, которое специфично связывается с эпитопом В7-Н3, является антителом, которое связывает данный эпитоп В7-Н3 с большей аффинностью, авидностью, легче и/или с большей продолжительностью, чем оно связывается с другими эпитопами В7-Н3 или не с эпитопами В7-Н3. При чтении данного определения становиться ясно, что, например, антитело (или часть, или эпитоп), которое специфично связывается с первой целью, может или не может специфично или пре- 13 030226
имущественно связываться со второй целью. По существу, "специфичное связывание" не обязательно требует (хотя может включать) исключительного связывания. Главным образом, но не обязательно, упоминание связывания подразумевает "специфичное" связывание.
Выражение "иммунологически активный", используемое в данном документе по отношению к эпитопу, находящемуся или "остающемуся иммунологически активным", относится к способности антитела (например, антитела к В7-Н3) связываться с эпитопом в различных условиях, например, после того как эпитоп был подвергнут воздействию условий восстановления и денатурации.
Различные биологические функции ассоциированы с антителами к В7-Н3, включая, но без ограничений, одну или несколько из: способности к специфичному связыванию с В7-Н3 (и, в частности, с молекулами В7-Н3, которые экспрессируются на поверхностях раковых клеток, включая, но без ограничений, раковые клетки почки, простаты или легкого); способности к конкурентному ингибированию преимущественного связывания известного антитела к В7-Н3 с В7-Н3, включая способность к преимущественному связыванию с тем же эпитопом В7-Н3, с которым преимущественно связывается первоначальное антитело; способности к связыванию с частью В7-Н3, которая экспонирована на поверхности живой клетки ίη νίίτο или ίη νίνο; способности к связыванию с частью В7-Н3, которая экспонирована на поверхности живых раковых клеток, таких как, но без ограничений, раковые клетки простаты, легкого или почки; способности доставлять химиотерапевтическое средство к раковым клеткам (такие как раковые клетки почки, простаты или легкого), экспрессирующим В7-Н3 на своей поверхности; и/или способности доставлять терапевтическое средство или детектируемый маркер в раковые клетки, экспрессирующие В7-Н3 на своей поверхности. Как обсуждается в данном документе, полипептиды (включая антитела) настоящего изобретения могут иметь любую одну или несколько из этих характеристик.
"Эквивалентное антитело к В7-Н3" или "эквивалентный полипептид к В7-Н3" относится к антителу или полипептиду, имеющему одну или несколько биологических функций, ассоциированных с антителом к В7-Н3, такие как, например, специфичность связывания.
Выражение "средство", используемое в данном документе, относится к биологическому, фармацевтическому или химическому соединению. Неограничивающие примеры включают простую или сложную органическую или неорганическую молекулу, пептид, белок, олигонуклеотид, антитело, производное антитела, фрагмент антитела, производное витамина, углевод, токсин или химиотерапевтическое соединение. Различные соединения можно синтезировать, например, малые молекулы и олигомеры (например, олигопептиды и олигонуклеотиды) и синтетические органические соединения на основе различных стержневых структур. К тому же, различные природные источники могут обеспечивать соединения для скрининга, такие как растительные или животные экстракты и т. п.
Средства, которые используются в способах настоящего изобретения, можно выбрать случайным образом или выбрать рационально или сконструировать. Как используется в данном документе, считается, что средство выбрано случайным образом, если средство выбирают без предварительного рассмотрения или знания о конкретной аминокислоте или других химических частей, вовлекаемых в ассоциацию молекулы с ее природным связывающим партнером(партнерами) или известными антителами. Примером выбранного случайным образом средства является средство, которое идентифицируют посредством применения и скрининга химической библиотеки или комбинаторной пептидной библиотеки.
Как используется в данном документе, считается, что средство выбрано рационально или сконструировано, если средство выбирают на неслучайной основе, что принимает во внимание последовательность целевого участка и/или его конформацию в сочетании с действием средства. По отношению к средствам к В7-Н3 в настоящее время считается, что существует по меньшей мере три эпитопа на В7-Н3, против которых можно индуцировать антитела, и, следовательно, по меньшей мере три участка действия для средств, которые блокируют взаимодействие В7-Н3/антитело к В7-Н3. Настоящее изобретение также охватывает средства, которые действуют на участках взаимодействия между В7-Н3 и его природным партнером по связыванию, хотя другие лиганды и их активные В7-Н3-взаимодействующие участки также охвачены в пределах объема настоящего изобретения, известные ли в настоящее время или которые будут идентифицированы позже. Средства можно рационально выбрать или рационально сконструировать с использованием пептидных последовательностей, которые составляют участки контактирования рецептора/лиганда и/или комплекса В7-Н3/антитело к В7-Н3. Например, рационально выбранным пептидным средством может быть пептид, чья аминокислотная последовательность идентична эпитопу, появляющемуся на В7-Н3 по мере его экспонирования на поверхности живой клетки в ее природном окружении. Такое средство будет подавлять или блокировать ассоциацию антитела к В7-Н3 с В7-Н3 или ассоциацию В7-Н3 с его природным лигандом, по необходимости, путем связывания с антителом к В7-Н3 или с природным лигандом.
Выражение "меченный", используемое в данном документе по отношению к антителу, предназначено для охватывания прямого мечения антитела присоединением (т.е. физическим связыванием) детектируемого вещества, такого как радиоактивное средство или флюорофор (например, фикоэритрин (РЕ) или флюоресцеинизотиоцианат (также известный как флюороизотиоцианат или Р1ТС)), к антителу, а также непрямого мечения пробы или антитела посредством реакционной способности с детектируемым веществом.
- 14 030226
Выражение "ассоциация," используемое в данном документе по отношению к антителу, включает ковалентное и нековалентное присоединение или связывание средства (например, химиотерапевтическое средство) с антителом. Антитело может быть ассоциированным со средством (например, химиотерапевтическим средством) при помощи прямого связывания или непрямого связывания через присоединение к общей платформе так, чтобы антитело управляло локализацией средства на раковой клетке, с которой антитело связывается, и где антитело и средство, по сути, не диссоциируют при физиологических условиях так, чтобы средство не нацеливалось на ту же раковую клетку, с которой связывается антитело, или так чтобы не снижалась сила средства.
Выражение "биологический образец," охватывает ряд типов образцов, получаемых от индивидуумов, и его можно применять в диагностическом или контрольном анализе. Определение охватывает слюну, кровь и другие образцы жидкостей биологического происхождения, образцы твердых тканей, такие как биопсийный материал, или культуры ткани, или клетки, полученные из них, и их потомство, например клетки, полученные из образца ткани, собранного от индивидуума, потенциально имеющего рак, в предпочтительном варианте осуществления из ткани яичника, легкого, простаты, поджелудочной железы, толстого кишечника и молочной железы. Определение также включает образцы, на которые воздействовали тем или иным образом после их получения, таким как обработка реагентами, солюбилизация или обогащение в отношении отдельных компонентов, таких как белки или полинуклеотиды, или заливка в полутвердой или твердой матрице с целью изготовления срезов. Выражение "биологический образец," охватывает клинический образец, а также включает клетки в культуре, клеточные супернатанты, клеточные лизаты, сыворотку, плазму, биологическую жидкость и тканевые образцы.
Выражение "клетка-хозяин" включает отдельную клетку или клеточную культуру, которая может быть или была реципиентом для вектора(ов) для встраивания полинуклеотидных вставок. Клеткихозяева включают потомство одиночной клетки-хозяина, и потомство может необязательно быть полностью идентичным (по морфологии или комплементарности геномной ДНК) первоначальной родительской клетке вследствие естественной, случайной или запланированной мутации. Клетка-хозяин включает клетки, трансфицированные ίη νίνο полинуклеотидом(ами) настоящего изобретения.
Выражение "задержание развития метастазирования", используемое в данном документе, означает отсрочку, препятствование, замедление, торможение, стабилизирование и /или откладывание развития метастазирования. Эта задержка может быть с различными продолжительностями по времени в зависимости от истории рака и/или подвергаемого лечению индивидуума. Как очевидно специалисту в данной области, достаточная или значительная задержка может фактически охватывать предотвращение в том смысле, что у индивидуума не развивается метастазирование.
Используемое в данном документе "эффективное количество" фармацевтической композиции в одном варианте осуществления является количеством, достаточным для обеспечения благотворных или желаемых результатов, включая, без ограничения, клинические результаты, такие как уменьшение размера опухоли (в контексте рака, например, рака молочной железы или простаты), замедление роста раковых клеток, задержание развития метастазирования, облегчение симптомов, являющихся следствием заболевания, улучшение качества жизни страдающих от заболевания, уменьшение дозы других медицинских средств, требующихся для лечения данного заболевания, усиление эффекта другого медицинского средства, например посредством нацеливания и/или интернализации, задержка прогрессирования заболевания и/или пролонгирование выживаемости индивидуумов. Эффективное количество можно вводить за одно или несколько введений. Для целей настоящего изобретения эффективное количество лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции является количеством, достаточным для подавления пролиферации (или разрушения) раковых клеток и для подавления и/или задержки развития или роста метастазов раковых клеток, либо непосредственно, либо опосредованно. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество лекарственного средства, соединения или фармацевтической композиции может или не может быть достигнуто совместно с другим лекарственным средством, соединением или фармацевтической композицией. Таким образом, "эффективное количество" можно рассматривать в контексте введения одного или нескольких химиотерапевтических средств и можно рассматривать, что отдельное средство предоставляется в эффективном количестве, если совместно с одним или несколькими другими средствами можно достигнуть или достигается желаемый результат. В то время как индивидуальные потребности варьируют, определение оптимальных диапазонов эффективных количеств каждого компонента находится в пределах данной области техники. Типичные дозировки включают 0,1-100 мг/кг/массы тела. Предпочтительные дозировки включают от 1 до 100 мг/кг/массы тела. Наиболее предпочтительные дозировки включают от 10 до 100 мг/кг/массы тела.
Как используется в данном документе, молекула нуклеиновой кислоты или средство, антитело, композиция или клетка и т.д. считается "выделенной", если такая молекула нуклеиновой кислоты, средство, антитело, композиция или клетка и т.д. является, по сути, отделенной от посторонних молекул нуклеиновых кислот, антител, средств, композиций или клеток и т.д., которые естественным образом присутствуют в их первоначальном источнике.
Выражение "индивидуум" относится к позвоночному животному, предпочтительно млекопитающему. Млекопитающие включают, но без ограничений, людей, сельскохозяйственных животных, спор- 15 030226
тивных животных, домашних питомцев, приматов, мышей и крыс. В наиболее предпочтительном варианте осуществления выражение индивидуум обозначает человека.
Выражения "полипептид", "олигопептид", "пептид" и "белок" применяют в данном документе на равных основаниях для ссылки на полимеры аминокислот любой длины. Полимер может быть линейным или разветвленным, он может включать модифицированные аминокислоты и он может прерываться не аминокислотами. Выражения также охватывают аминокислотный полимер, который был модифицирован естественным образом или путем вмешательства; например образованием дисульфидной связи, гликолизированием, липидизацией, ацетилированием, фосфорилированием или любым другим воздействием или модификацией, такой как конъюгация с компонентами для мечения. Также в определение включены, например, полипептиды, содержащие один или несколько аналогов аминокислоты (включая, например, не встречающиеся в природе аминокислоты и т.д.), а также другие модификации, известные в данной области техники. Понятно что, поскольку полипептиды настоящего изобретения основаны на антителе, полипептиды могут встречаться в качестве отдельных цепей или в качестве ассоциированных цепей.
Также в объеме данного изобретения охвачены пептидомиметики пептидных агонистов, антагонистов и модуляторов В7-Н3 (включая антитела к В7-Н3), описываемых в данном документе. Такие пептидомиметики включают пептиды, где по меньшей мере один аминокислотный остаток заменен на аминокислотный остаток, который обычно не встречается в природе, такой как Ό-изомер аминокислоты или Νалкилированная разновидность аминокислоты. В других вариантах осуществления пептидомиметики конструируют путем замещения по меньшей мере одной амидной связи (-Ο(=Θ)-ΝΗ-) в пептидном агонисте, антагонисте или модуляторах В7-Н3 на амидный изостер. Подходящие амидные изостеры включают -ΟΗ2-ΝΗ-, -СЩ-8-, -СЩ-З(О)-, -СН2-8(О)2-, -СН2-СН2-, -СН=СН- (Е- или Ζ-форма), -С(=О)-СН2-, -ΟΗ(ΟΝ)-ΝΗ-, -С(ОН)-СН2- и -О-С(=О)-ТО-. Амидные связи в пептидном агонисте, антагонисте или модуляторе В7-Н3, которые являются подходящими кандидатами для замещения амидными изостерами, включают связи, которые поддаются гидролизу эндогенными эстеразами или протеазами предполагаемого субъекта лечения пептидным агонистом, антагонистом или модулятором В7-Н3.
Выражение "по сути чистый", используемое в данном документе, относится к материалу, который является по меньшей мере на 50% чистым (т.е. не содержит примесей), более предпочтительно по меньшей мере на 90% чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 95% чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 98% чистым, более предпочтительно по меньшей мере на 99% чистым и наиболее предпочтительно более чем на 99% чистым.
Выражение "токсин", используемое в данном документе, относится к любому веществу, которое вызывает ответную неблагоприятную реакцию в клетке. Например, токсин, направленный на раковую клетку, будет оказывать неблагоприятное, иногда вредное воздействие на раковую клетку. Примеры токсинов включают, но без ограничений, таксан, майтансиноид, ауристатин (например, монометилауристатин (ММАЕ), монометилауристатин Ρ (ММАР), ауристатин Е (АЕ) и т.д.) (такие как раскрываемые в патентах США №№ 5208020; 5416064; 6333410; 6340701; 6372738; 6436931; 6441163; 6596757; 7276497; 7585857 или 7851432), калихеамицин, антрациклин (например, доксорубицин), аналог СС-1065, доцетаксел; катепсин В или Е; рицин, гелонин, экзотоксин Ркеиботоиак, дифтерийный токсин и РНКазы; меченные радиоактивным изотопом антитела (например, конъюгированные с теуксетаном или меченные токсичным радиоизотопом (например, 90Υ; 1311, 177Ьи, 186Ке, 188Ке, 211А1, 212Βί, 213Βί, 225Ас и т.д.).
Выражения "лечение" или "проведение лечения", используемые в данном документе, означают подход для получения благотворного или желаемого результата включительно и предпочтительно благотворного или желаемого клинического результата. Такие благотворные или желаемые клинические результаты включают, но без ограничений, одно или несколько из следующего: подавление пролиферации (или разрушение) раковых или других поврежденных клеток, подавление метастазирования раковых клеток, обнаруживаемых в злокачественных опухолях, уменьшение размеров опухоли, облегчение симптомов, являющихся следствием заболевания, повышение качества жизни страдающих от заболевания, уменьшение дозы других медицинских средств, требующихся для лечения данного заболевания, задержка прогрессирования заболевания и/или пролонгирование выживаемости индивидуумов.
Выражение "рак", используемое в данном документе, предназначено для охвата злокачественных опухолей, отличающихся наличием раковой клетки, выбранной из группы, состоящей из клетки опухоли надпочечника, СПИД-ассоциированного рака, альвеолярной саркомы мягких тканей, астроцитарной опухоли, рака мочевого пузыря, рака кости, рака головного и спинного мозга, метастатической опухоли головного мозга, рака молочной железы, опухолей каротидных телец, рака шейки матки, хондросаркомы, хордомы, хромофобной почечно-клеточной карциномы, светлоклеточного рака, рака толстой кишки, колоректального рака, кожной доброкачественной фиброзной гистиоцитомы, десмопластической мелкокруглоклеточной опухоли, эпендимомы, опухоли Юинга, внескелетной миксоидной хондросаркомы, несовершенного фиброгенеза кости, фиброзной дисплазии кости, рака желчного пузыря или желчных протоков, рака ЖКТ, гестационной трофобластической болезни, эмбрионально-клеточной опухоли, рака головы и шеи, гепатоклеточной карциномы, инсулиномы, саркомы Капоши, рака почки, лейкоза, липомы/доброкачественной липоматозной опухоли, липосаркомы/злокачественной липоматозной опухоли,
- 16 030226
рака печени, лимфомы, рака легкого, медуллобластомы, меланомы, менингиомы, множественных эндокринных неоплазий, множественной миеломы, миелодиспластического синдрома, нейробластомы, нейроэндокринных опухолей, рака яичника, рака поджелудочной железы, папиллярной карциномы щитовидной железы, опухоли паращитовидной железы, детского рака, опухоли оболочки периферического нерва, феохромоцитомы, рака гипофиза, рака простаты, задней увеальной меланомы, редкого гематологического нарушения, метастатического рака почки, рабдоидной опухоли, рабдомиосаркомы, саркомы, рака кожи, саркомы мягких тканей, плоскоклеточного рака, рака желудка, синовиальной саркомы, рака яичка, карциномы тимуса, тимомы, метастатического рака щитовидной железы и рака матки (карцинома шейки матки, карцинома эндометрия и лейомиома).
III. Способы получения антител и полипептидов.
Способы производства моноклональных антител известны в уровне техники. Одним способом, который может быть задействован, является способ КоЫег, С. с1 а1. (1975) "СопПпиоик СиЙигек ОГ Рикей Се11к 8есгейпд АпПЬойу ОГ Ргейейпей 8рес1йу", Ыа1иге 256:495-497 или его модификация. Как правило, моноклональные антитела разрабатываются на видах, не относящихся к человеку, таких как мыши. В большинстве случаев для иммунизации применяют мышь или крысу, но также можно применять других животных. Антитела продуцируются посредством иммунизации мышей иммуногенным количеством клеток, клеточных экстрактов или белковых препаратов, которые содержат В7-Н3 человека. Иммуногеном могут быть, но без ограничений, первичные клетки, культивируемые клеточные линии, раковые клетки, нуклеиновые кислоты или ткань. В одном варианте осуществления применяют клетки карциномы легкого человека. Клетки, применяемые для иммунизации, например клетки яичек или аденокарциномы поджелудочной железы или желудка человека, можно культивировать в течение некоторого периода времени (например, по меньшей мере 24 ч) перед их применением в качестве иммуногена. Клетки (например, клетки яичек, желудка или аденокарциномы поджелудочной железы человека) можно применять в качестве иммуногенов сами по себе или в комбинации с неденатурирующим адъювантом, таким как К1Ы. В большинстве случаев клетки должны оставаться интактными и предпочтительно жизнеспособными при применении в качестве иммуногенов.
Интактные клетки могут давать возможность антигенам лучше обнаруживаться иммунизированным животным, чем разрушенные клетки. Применение денатурирующего или агрессивного адъюванта, например адъюванта Фрейнда, может разрушать клетки и, следовательно, не советуется. Иммуноген можно вводить многократно с периодическими интервалами, такими как дважды в неделю или еженедельно, или можно вводить таким способом, чтобы поддерживать жизнеспособность в животном (например, в тканевом рекомбинанте).
В одном варианте осуществления моноклональные антитела, которые связываются с В7-Н3, получают путем применения в качестве иммуногена клеток хозяина, которые сверхэкспрессируют В7-Н3. Такие клетки включают, в виде примера и не ограничения, клетки карциномы легкого человека и клетки рака толстой кишки человека.
Для мониторинга образования антител небольшой биологический образец (например, кровь) можно получать от животного и тестировать на титр антитела к иммуногену. Можно удалить селезенку и/или несколько крупных лимфоузлов и разделить на одиночные клетки. При желании клетки селезенки могут быть подвержены скринингу (после удаления неспецифично прилипающих клеток) путем нанесения клеточной суспензии на планшет или лунку, покрытую антигеном. В-клетки, экспрессирующие мембраносвязаный иммуноглобулин, специфичный к антигену, будут связываться с планшетом, и не смываются с остальной частью суспензии. Полученные в результате В-клетки или все разделенные клетки селезенки можно затем слить с клетками миеломы (например, Х63- Ад8.653 и клетки из 8а1к 1пк1йи1е, Се11 ЭШпЬийоп Сеп1ег, Сан Диего, Калифорния). Для слияния клеток селезенки или лимфоцитов с клетками миеломы для образования гибридомы можно применять полиэтиленгликоль (РЕС). Гибридому затем культивируют в селективной среде (например, гипоксантин-аминоптерин-тимидиновая среда, иначе известная как "НАТ среда"). Полученные в результате гибридомы затем высевают предельным разведением и анализируют на продукцию антител, которые специфично связываются с иммуногеном с применением, например, РАС8 (сортировка флуоресцентно-активированных клеток) или иммуногистохимического (1НС) скрининга. Отобранные гибридомы, секретирующие моноклональные антитела, затем культивируют либо ш уйго (например, в сосудах для культивирования тканей или реакторах с полыми волокнами), либо щ у1уо (например, как асциты у мышей).
В качестве другой альтернативы методу слияния клеток для продуцирования моноклональных антител рассматриваемого изобретения можно применять В-клетки, иммортализированные вирусом Эпштейна-Барра (ЕВУ). Гибридомы размножают и субклонируют, при необходимости, а супернатанты анализируют на активность к иммуногену с помощью традиционных аналитических процедур (например, РАС8, 1НС, радиоиммунологический анализ, иммуноферментный анализ, иммуннофлуоресцентный анализ и т.д.).
Альтернативно, моноклональное антитело к В7-Н3 и любые другие эквивалентные антитела можно секвенировать и продуцировать рекомбинантно с помощью любых средств, известных в уровне техники (например, гуманизация, применение трансгенных мышей для получения полностью человеческих анти- 17 030226
тел, технология фагового дисплея и т.д.). В одном варианте осуществления моноклональное антитело к В7-Н3 секвенируют и полинуклеотидную последовательность затем клонируют в вектор для экспрессии или воспроизводства. Последовательность, кодирующую представляющее интерес антитело, можно поддерживать в векторе в клетке-хозяине, а клетку-хозяина можно затем размножить и заморозить для дальнейшего применения.
Полинуклеотидную последовательность моноклонального антитела к В7-Н3 и любых других эквивалентных антител можно применять для генетической манипуляции для создания "гуманизированого" антитела, чтобы улучшить аффинность или другие характеристики антитела. Общий принцип гуманизации антитела включает сохранение основной последовательности антигенсвязывающей части антитела и в то же время замену остатка антитела, на принадлежащего человеку, последовательностями антитела человека. Существует четыре общих этапа гуманизации моноклонального антитела. Они представляют собой: (1) определение нуклеотидной и предсказанной аминокислотной последовательности вариабельных доменов легких и тяжелых цепей начального антитела, (2) проектирование гуманизированного антитела, т.е. решение, какую каркасную область антитела применять в ходе процесса гуманизации, (3) актуальные методики/методы гуманизации, (4) трансфекцию и экспрессию гуманизированного антитела. См., например, патенты США №№ 4816567; 5807715; 5866692 и 6331415.
Был описан ряд "гуманизированных" молекул антитела, содержащих антигенсвязывающие участки, полученные из иммуноглобулина человека, не принадлежащего человеку, в том числе химерные антитела с У-областями грызунов или модифицированными У-областями грызунов и их гипервариабельными участками (СОК), слитыми с константными доменами человека (см., например, \Уш!ег е! а1. (1991) "Маптайе АпйЪоФек", №йиге 349:293-299; ЬоЪидйо е! а1. (1989) "Моике/Нитап Сйппепс Мопос1опа1 АпйЪойу 1п Мап: Кшейск апй 1ттипс Кекропке", Ргос. ЫаЙ. Асай. 8с1. (И.8.А.) 86:4220-4224 (1989), δίκην с! а1. (1987) "Сйагас!еп/а!юп О£ А Моике/Нитап СЫтейс Мопос1опа1 АпйЪойу (17-1А) То Со1оп Сапсег Титог-Аккос1ае1ей Апйдеп", 1. 1ттипо1. 138:4534-4538 и Вго\уп е! а1. (1987) "Титог-8ресйтс Сепейса11у Епдтеегей Мийпе/Нитап Сйппепс Мопос1опа1 АпйЪойу", Сапсег Кек. 47:3577-3583). Другие ссылки описывают СОК грызунов, привитые к поддерживающей каркасной области (РК) человека перед слиянием с соответствующим константным доменом антитела человека (см., например, Шесйтапи, Ь. е! а1. (1988) "Кекйаршд Нитап АпйЪоФек £от Тйетару", №йиге 332:323-327; Уегйоеуеп, М. е! а1. (1988) "Кекйаршд Нитап АпОЬоШек: Отайшд Ап АпШуко/уте Асйуйу", 8с1епсе 239:1534-1536 и 1опек е! а1. (1986) "Кер1асшд Тйе Сотр1етеп!ап!у-Ое!егтти1д Кедюпк 1п А Нитап АпйЪойу ΥίίΡ Тйоке Ргот А Мойке", №йиге 321:522-525). Другая ссылка описывает СОК грызунов, поддерживаемые рекомбинантно обшитыми каркасными областями грызунов. См., например, европейскую патентную публикацию № 519596. Эти "гуманизированные" молекулы проектируют для минимизации нежелаемого иммунологического ответа относительно молекул антитела грызуна к человеку, который ограничивает продолжительность и эффективность терапевтических применений таких фрагментов у реципиентов-людей. Другие способы гуманизации антител, которые можно также использовать, раскрываются Оапдйег!у е! а1. (1991) "Ройтетаке Сйаш Кеасйоп Расййа!ек Тйе С1отпд, СОК-Отайшд, Апй КарМ Ехртеккюп О£ А Мийпе Мопос1опа1 АпйЪойу ОиеЩей Адатк! Тйе СЭ18 Сотропеп! О£ йеикосуЮ 1Щедйпк", Ыис1. Аайк Кек. 19:2471-2476 и в патентах США №№ 6180377; 6054297; 5997867 и 5866692.
Настоящее изобретение также охватывает одноцепочечные фрагменты вариабельной области ("ксРу") антител данного изобретения, таких как мышиные антитела к В7-Н3. Одноцепочечные фрагменты вариабельной области создают соединением вариабельных областей легкой цепи и/или тяжелой цепи с помощью короткого соединяющего пептида. Вйй е! а1. (1988) ("8шд1е-Сйаш Апйдеп-Вшйшд Рго1ешк", 8с1епсе 242:423-426) описывает пример соединяющих пептидов, которые образуют мостик приблизительно 3,5 нм между карбоксильным концом одной вариабельной области и аминным концом другой вариабельной области. Были разработаны и применялись линкеры с другими последовательностями (Вий е! а1. (1988) "8шд1е-Сйаш Апйдеп-Вшйшд Рго1ешк", 8с1епсе 242:423-426). Линкеры, в свою очередь, можно модифицировать для дополнительных функций, таких как прикрепление лекарственных средств или прикрепление к твердым подложкам. Одноцепочечные варианты можно продуцировать либо рекомбинантно, либо синтетически. Для синтетического продуцирования ксРу можно применять автоматические синтезаторы. Для рекомбинантной продукции ксРу подходящую плазмиду, содержащую полинуклеотид, который кодирует ксРу, можно ввести в подходящую клетку-хозяин, либо эукариотическую, такую как клетки дрожжей, растений, насекомых или млекопитающих, либо прокариотическую, такую как Е. сой. Полинуклеотиды, кодирующие представляющие интерес ксРу, можно получать при помощи традиционных манипуляций, таких как лигирование полинуклеотидов. Полученный в результате ксРу можно выделить с помощью стандартных методов очистки белка, известных в уровне техники.
Настоящее изобретение включает модификации в антителах и полипептидах, которые связываются с В7-Н3 и его агонистах, антагонистах и модуляторах, включая функционально эквивалентные антитела и полипептиды, которые в значительной степени не влияют на их свойства, и варианты, которые имеют усиленную или сниженную активность. Модификация полипептидов является традиционной практикой в уровне техники и не требует подробного описания в данном документе. Примеры модифицированных полипептидов включают полипептиды с консервативными заменами аминокислотных остатков, одной
- 18 030226
или несколькими делениями или добавлениями аминокислот, которые не изменяют в значительной степени вредным образом функциональную активность, или применение химических аналогов. Аминокислотные остатки, которые можно консервативно замещать друг на друга, включают, но без ограничений: глицин/аланин; валин/изолейцин/лейцин; аспарагин/глутамин; аспаргиновую кислоту/глутаминовую кислоту; серин/треонин; лизин/аргинин и фенилаланин/треозин. Эти полипептиды также включают гликозилированные и негликозилированные полипептиды, а также полипептиды с другими посттрансляционными модификациями, такими как, например, гликолизирование различными сахарами, ацетилирование и фосфорилирование. Предпочтительно аминокислотные замещения были консервативными, т.е. замещенная аминокислота обладала похожими химическими свойствами таковым изначальной аминокислоты. Такие консервативные замены известны в уровне техники, и примеры приведены выше. Аминокислотные модификации могут варьировать от изменения или модифицирования одной или нескольких аминокислот до полной перестройки области, такой как вариабельная область. Изменения в вариабельной области могут видоизменять аффинность и/или специфичность связывания. Другие способы модификации включают применение методик пришивки, известных в уровне техники, включая, но без ограничений, ферментативные способы, окислительное замещение и хелатообразование. Модификации можно применять, например, для прикрепления меток для иммуноанализа, такое как прикрепление радиоактивных фрагментов для радиоиммуноанализа. Модифицированные полипептиды получают с помощью общепринятых процедур в данной области и их можно подвергнуть скринингу с применением стандартных анализов, известных в уровне техники.
Настоящее изобретение также охватывает слитые белки, содержащие один или несколько фрагментов или областей из полипептидов и антител настоящего изобретения. В одном варианте осуществления обеспечивается слитый полипептид, который содержит по меньшей мере 10 смежных аминокислот вариабельной области легкой цепи и по меньшей мере 10 аминокислот вариабельной области тяжелой цепи. В других вариантах осуществления слитый полипептид содержит константную область гетерологичную иммуноглобулину. В другом варианте осуществления слитый полипептид содержит вариабельную область легкой цепи и вариабельную область тяжелой цепи антитела, полученного от депонированной для открытого доступа гибридомы. Для целей данного изобретения слитый белок антитела содержит один или несколько полипептидных доменов, которые специфично связываются с В7-Н3, и другую аминокислотную последовательность, к которой он не прикреплен в нативной молекуле, например гетерологичную последовательность или гомологичную последовательность из другой области.
Полипептид к В7-Н3 и другие агонисты, антагонисты и модуляторы В7-Н3 можно создать при помощи способов, известных в уровне техники, например, синтетически или рекомбинантно. Один способ продуцирования пептидных агонистов, антагонистов и модуляторов В7-Н3 включает химический синтез полипептида, за которым следует обработка при окисляющих условиях, подходящих для получения нативной конформации, то есть правильных связей дисульфидными мостиками. Этого можно достигать, применяя методики, хорошо известные специалистам в данной области (см., например, Ке11еу, Р.Р. е1 а1. (1990) в: ΟΕΝΕΤΙΡ’ ΕΝΟΙΝΕΕΡΙΝΟ РР1\С1РЕР5 ΑΝΏ ΜΕΤΉΘΌδ, 8с11о№, !К. Εά., Р1епит Рге88, Ν.Υ., νοί. 12, рр. 1-19; Р1еиаг1. ΙΜ. е1 а1. (1984) δΟΜΌ ΡΗΑδΕ РЕРТГО δΥΝΤΉΕδΙδ, Р1егсе СЬетка1 Со., РоскίοΓά, 1Ь; см. также патенты США №№ 4105603; 3972859; 3842067 и 3862925).
Полипептиды данного изобретения можно удобно получать с помощью твердофазного синтеза пептидов (МетйеЫ, В. (1986) "δο1ίά Р1а8е 8уп1Ъе818", 8с1епсе 232(4748):341-347; НоидЫеи, Ρ.Α. (1985) "Оепега1 Ме11ю0 Рог Τίκ Ραρίά ЗоПЬ-РНазе 8уп1Ъе818 Οί Ьагде ШтЬегз Οί Рерййез: 8ресШсйу Οί ЛпЦдепЛпПЬойу ЕЧегасПоп Αί Τ1κ Ре\'е1 Οί 1п0Ра0иа1 Лт^иο Ααά8", Ргос. №и1. Αсаά. δα. (υ.δ.Α.) 82(15):51315135; Оапе8ап, Α. (2006) "8оМ-РЬа8е 8упШе818 1п Τ1κ Τ\\Όπργ-ΡίΓ8ΐ Сейшу", Μίπί Ρеν. Мей. С1ет. 6(1):310).
В еще одном варианте полностью человеческие антитела можно получить посредством применения коммерчески доступных мышей, которые были разработаны для экспрессирования специфичных белковиммуноглобулинов человека. Трансгенных животных, которых конструируют для выработки более желательного (например, полностью человеческого антитела) или более стойкого иммунного ответа, также можно применять для создания гуманизированных или человеческих антител. Примерами такой технологии являются ΧΕΝΟΜΟυδΕ™ (Αϋ^ηίχ, 1пс., Фремонт, Калифорния) и ΗυΜΑΒ-ΜΟυδΕ® И ТС ΜΟυδΕ™ (обе от Μеάа^еx, 1пс., Принстон, Нью Джерси).
Альтернативно, антитела можно производить рекомбинантно и экспрессировать путем применения любого способа, известного в уровне техники. Антитела можно производить рекомбинантно путем, вопервых, выделения антител, производимых животными-хозяевами, получения генной последовательности и применения генной последовательности для рекомбинантной экспрессии антитела в клеткаххозяевах (например, клетки СНО). Другой способ, который может быть задействован представляет собой экспрессию последовательности антитела в растениях (например, табаке) или трансгенном молоке. Были раскрыты подходящие способы рекомбинантной экспрессии антител в растениях или молоке (см., например, Рее1ег8 е1 а1. (2001) "Ргойисйои Οί Лй^Ьοά^е8 Απά Лп1^Ьοάγ Ргадтеий 1п Р1ай8", Уассше 19:2756; ЬоиЬегд, Ν. е1 а1. (1995) "Нитап Ли1^Ьοά^е8 Ргот ^аш^етс Μ^", Ιη1. Ρеν. 1ттипо1 13:65-93 и Ро11оск е1
- 19 030226
а1.(1999) "Тгапздешс Мйк Аз А МекЬой Рог ТЬе Ргойисйоп 0£ КесотЬтапк АпйЬоЛез", I. 1ттипо1 МекЬоЗз 231:147-157). Подходящие способы производства производных антител, например, гуманизированных, одноцепочечных и т.д., известны в данной области. В другом варианте антитела можно производить рекомбинантно с помощью технологии фагового дисплея (см., например, патенты США №№. 5565332; 5580717; 5733743; 6265150 и АпЧег, О. ек а1. (1994) "Мактд АпйЬоЛез Ву РЬаде О1зр1ау ТесЬпо1оду", Аппи. Кеу. 1ттипо1. 12.433-455).
Антитела или представляющий интерес белок можно подвергнуть секвенированию с расщеплением по Эдману, которое хорошо известно специалистам в данной области. Информацию о пептиде, сгенерированную в результате масспектрометрии или расщепления по Эдману, можно применять для построения зондов или праймеров, которые применяются для клонирования интересующего белка.
Альтернативный способ клонирования представляющего интерес белка, осуществляют путем "пэннинга" с помощью очищенного В7-Н3 или его частей в отношении клеток, экспрессирующих представляющих интерес антитела или белка. В7-Н3 существует в форме "21д" и как форма "41д". Аминокислотная последовательность формы "21д" В7-Н3 человека представляет собой (8ЕР ГО N0: 1)
МЪККЕСЗРСМ СУНУСААЬСА ьирсьтсаье уоуреррууа ЬУСТРАТЪСС ЗЕЗРЕРСЕЗЪ АОЬЫЫИОЬТ ОТКОЬУНЗЕА ЕС<2Р<2<ЗЗАУА ЫКТАЬЕРОЬЬ АфСЫАЗЬКЬф КУКУАОЕСЗЕ ТСЕУ31КРЕС ЗААУЗЬфУАА РУЗКРЗМТЬЕ РЫКРЬЕРСРТ УИТСЗЗУКС ΥΡΕΑΕνΕΝφϋ СОСУРЬТСИУ ΤΤ3ζ)ΜΑΝΕζ)0 ЬЕОУНЗУЬКУ УЪСАРГСТУЗС ЬУКЫРУЬООР АНСЗУПТСф РМТЕРРЕАЬИ УТУСЬЗУСЫ АЪЬУАЬАЕУС ИЕК1К03СЕЕ ΕΝΑΟΑΕϋΟϋΟ ЕСЕСЗКТАЫ2 РЪКНЗРЗКЕР РС<2Е1А
Последовательностью кДНК, кодирующая форму "21д" В7-Н3 человека, представляет собой (8ЕР ГО N0: 2)
аЕдсЕдсдЕс ддсддддсад сссЕддсаЕд ддЕдЕдсаЕд ЕдддЕдсадс ссЕдддадса сЕдЕддЕЕсЕ дссЕсасадд адсссЕддад дЕссаддЕсс сЕдаадассс адЕддЕддса сЕддЕдддса ссдаЕдссас ссЕдЕдсЕдс ЕссЕЕсЕссс сЕдадссЕдд сЕЕсадссЕд дсасадсЕса ассЕсаЕсЕд дсадсЕдаса даЕассааас адсЕддЕдса садсЕЕЕдсЕ дадддссадд ассадддсад сдссЕаЕдсс аассдсасдд сссЕсЕЕссс ддассЕдсЕд дсасадддса асдсаЕсссЕ даддсЕдсад сдсдЕдсдЕд Еддсддасда дддсадсЕЕс ассЕдсЕЕсд ЕдадсаЕссд ддаЕЕЕсддс адсдсЕдссд ЕсадссЕдса ддЕддссдсЕ сссЕасЕсда адсссадсаЕ дасссЕддад сссаасаадд ассЕдсддсс аддддасасд дЕдассаЕса сдЕдсЕссад сЕассддддс ЕасссЕдадд сЕдаддЕдЕЕ сЕддсаддаЕ дддсадддЕд ЕдссссЕдас ЕддсаасдЕд ассасдЕсдс адаЕддссаа сдадсадддс ЕЕдЕЕЕдаЕд ЕдсасадсдЕ ссЕдсдддЕд дЕдсЕдддЕд сдааЕддсас сЕасадсЕдс сЕддЕдсдса ассссдЕдсЕ дсадсаддаЕ дсдсасддсЕ сЕдЕсассаЕ сасадддсад ссЕаЕдасаЕ Ессссссада ддсссЕдЕдд дЕдассдЕдд ддсЕдЕсЕдЕ сЕдЕсЕсаЕЕ дсасЕдсЕдд ЕддсссЕддс ЕЕЕсдЕдЕдс Еддадааада Есааасадад сЕдЕдаддад дадааЕдсад дадсЕдадда ссаддаЕддд дадддадаад дсЕссаадас адсссЕдсад ссЕсЕдааас асЕсЕдасад сааадаадаЕ даЕддасаад аааЕадсс
Аминокислотная последовательность формы "21д" В7-Н3 человека (8ЕР ГО N0: 1) (показана жирным шрифтом и подчеркнута снизу) полностью включена в форму "41д" В7-Н3 человека (8ЕР ГО N0: 76)
мьвввезрем еунуедльел ьнгсьтеАЪЕ уоуреорууа ьустратьсс ЗЕЗРЕРСЕЗЬ А<2ЫЯЫИ<2ЬТ ОТК<2ЬУНЗЕА ΕΟ2ϋ<2<33ΑΥΑ ЫКТАЬЕРОЬЬ Αζ)(3ΝΑ3ΕιΚΕιζ) КУКУАОЕСЗЕ ТСЕУ31К0ЕС ЗААУЗЫ2УАА ΡΥ3ΚΡ3ΜΤΈΕ РЫКОЬКРСОТ νΤΙΤΟ33Υ<2<3 ΥΡΕΑΕνΕΝζ/ϋ С<2<ЕУРЬТСЫУ ΤΤ3ζ)ΜΑΝΕζ)(Ε ЬЕ0УН31ЬКУ УЬСАКГСТУЗС ЬУКЫРУЬ<2<20 АНЗЗУТ1ТР<2 КЗРТСАУЕУО УРЕРРУУАЪУ СТРАТЬКСЗГ ЗРЕРСГЗЪАО ЪЫЫ№ЪТРТ КОЪУНЗГТЕС
ΚΡζ)63ΑΥΑΝΚ ТАЪГРРЪЪАО еыАзькы2РУ КУАРЕ63ЕТС ГУ31ЕРЕ63А
АУЗЬОУААРУ ЗКРЗМТЪЕРЫ КРЪЕРбРТУТ 1ТСЗЗУЕ6УР ЕАЕУЕТлГОРеО
еурьтеыутт 30ΜΑΝΕ0ΘΏΕ РУНЗУЪРУУЪ САЫбТУЗСЪУ ЕЫРУЪООРАН
СЗУИТбОРМ ТРРРЕАЫГУТ УбЪЗУСЫАЪ ЪУАЪАБУСТлГЕ КТКОЗСЕЕЕЫ
ΑΘΑΕΡΟΡΘΕΘ ЕбЗКТАЬОРЬ ΚΗ3Ρ3ΚΕΡΡΘ ΩΕΙΑ
Последовательность кДНК, кодирующая форму "41д" В7-Н3 человека, представляет собой (8ЕР ГО N0: 77); остатки, кодирующие форму "21д" В7-Н3, показаны жирным шрифтом и подчеркнуты
- 20 030226
аБдоБдсдБс ддсддддсад ссс'Ьддса'Ьд ддЬдЬдсаЬд ЪдддЬдсадс ссЬдддадса
сЬдЬддЬЬсЬдссЬсасаддадсссЬддад
сЬддЬдддса
дсасадсЬса
дадддссадд
дсасадддса
ассЬдсЬЬсд
сссЬасЬсда
дЬдассаЬса
дддсадддЬд
ссдаЬдссас
ассЬсаЬсЬд
ассадддсад
асдсаЬсссЬ
ЬдадсаЬссд
адсссадсаЬ
сдЬдсЬссад
ЬдссссЬдас
ссЬдЬдсЬдс
дсадсЬдаса
сдссЬаЬдсс
даддсЬдсад
ддаЬЬЬсддс
дасссЬддад
сЬассадддс
ЬддсаасдЬд
дЬссаддЬсс
ЬссЬЬсЬссс
даЬассааас
аассдсасдд
сдсдЬдсдЬд
адсдсЬдссд
сссаасаадд
ЬасссЬдадд
ассасдЬсдс
сЬдаадассс
сЬдадссЬдд
адсЬддЬдса
сссЬсЬЬссс
Ьддсддасда
ЬсадссЬдса
ассЬдсддсс
сЬдаддЬдЬЬ
адаЬддссаа
адЬддЬддса
сЬЬсадссЬд
садсЬЬЬдсЬ
ддассЬдсЬд
дддсадсЬЬс
ддЬддссдсЬ
аддддасасд
сЬддсаддаЬ
сдадсадддс
х- „у „ „ „у
сЬддЬдсдса
адаадсссса
ассссдЬдсЬ
саддадссдЬ
-4 4 ^ 4 4, 4, 4, 4 4,
дсадсаддаЬ
ддаддЬссад
4, 4 4, 4 44, 4, 4, 44,
дсдсасадсЬ
дЬсссЬдадд
сЬдЬсассаЬ
асссддЬддЬ
сасассссад
ддсссЬадЬд
ддсассдаЬд ссасссЬдсд сЬдсЬссЬЬс Ьсссссдадс сЬддсЬЬсад ссЬддсасад
сЬсаассЬса ЬсЬддсадсЬ дасадасасс ааасадсЬдд •ЬдсасадЬЬЬ сассдааддс
сдддассадд дсадсдссЬа Ьдссаассдс асддсссЬсЬ •ЬсссддассЬ дсЬддсасаа
ддсааЪдсаЬ сссЬдаддсЬ дсадсдсдЬд сдЬдЬддсдд асдадддсад сЬЬсассЬдс
•ЬЬсдЬдадса ЬссдддаЬЬЬ сддсадсдсЬ дссдЬсадсс ЬдсаддЬддс сдсЬсссЬас
•Ьсдаадссса дсаЬдасссЬ ддадсссаас ааддассЬдс ддссадддда сасддЬдасс
аЬсасдЬдсЬ ссадсЬассд дддсЬасссЬ даддсЬдадд •ЬдЬЬсЬддса ддаЬдддсад
ддЬдЬдсссс ЬдасЬддсаа сдЬдассасд ЬсдсадаЬдд ссаасдадса дддсЬЬдЬЬЪ
даЬдЬдсаса дсдЬссЬдсд ддЬддЬдсЬд ддЬдсдааЬд дсассЬасад сЬдссЬддЬд
сдсаассссд ЬдсЬдсадса ддаЬдсдсас ддсЬсЬдЬса ссаЬсасадд дсадссЬаЬд
асаЬЬссссс сададдсссЬ дЬдддЬдасс дЬддддсЬдЬ сЬдЬсЬдЬсЬ саЬЬдсасЬд
сЬддЬддссс ЬддсЬЬЬсдЬ дЬдсЬддада аадаЬсааас ададсЬдЬда ддаддадааЬ
дсаддадсЬд аддассадда Ьддддаддда дааддсЬсса адасадсссЬ дсадссЬсЬд
ааасасЬсЬд асадсааада адаЬдаЬдда саадаааЬад сс
Процедуру "пэннинга" можно проводить путем получения библиотеки кДНК из тканей или клеток, которые экспрессируют В7-Н3, сверхэкспрессии кДНК у второго типа клеток и скрининга трансфицированных клеток второго типа на специфичное связывание с В7-Н3. Подробные описания способов, применяемых при клонировании генов млекопитающих, кодирующих белки клеточной поверхности с помощью "пэннинга", можно найти в известном уровне техники (см., например, АгиПо, А. е£ а1. (1987) "Мо1еси1аг С1ошпд Ой А С^28 сО\А Ву А ИдЬ-Е£йшепсу СО8 Се11 Ехргеззюп 8уз£ет", Ргос. Ναΐ1. Асай. 8οί. (И.8.А.) 84:8573-8577 и 8£еркап, I. е£ а1. (1999) "8е1есДуе С1ошпд Ой Се11 8иг£асе Рго£етз 1пуо1уей Ιη Огдап ^еνе1ортеηΐ: ЕрйНеНа1 О1усорго£ет 1з 1пуо1уеб Ιη Хогта1 ЕрйНеНа1 ОйегепЦаЦоп", Епйосгто1. 140:58415854).
кДНК, кодирующие антитела к В7-Н3 и другие пептидные агонисты, антагонисты и модуляторы В7-Н3, можно получать путем обратного транскрибирования мРНК из конкретного типа клеток в соответствии со стандартными способами в данной области. В частности, мРНК можно выделить с помощью различных лизирующих ферментов или химических растворов согласно процедурам, изложенным в 8ашЬгоок е£ а1. выше, или экстрагировать коммерчески доступными смолами, связывающими нуклеиновые кислоты, следуя сопроводительным инструкциям, предоставляемым производителями (например, ^^адеη, ШуЦгодеп, Рготеда). Синтезированные кДНК затем вводят в вектор экспрессии для продукции представляющего интерес антитела или белка в клетках второго типа. Подразумевается, что вектор экспрессии должен быть реплицируемым в клетках-хозяевах либо в качестве эписомы, либо в качестве интегральной части хромосомной ДНК. Подходящие векторы экспрессии включают, но без ограничений,
плазмиды, вирусные векторы, в том числе аденовирусы, аденоассоциированные вирусы, ретровирусы и
космиды.
Векторы, содержащие представляющие интерес полинуклеотиды, можно вводить в клетку-хозяина любым из ряда подходящих способов, включая электропорацию, трансфекцию с использованием хлорида кальция, хлорида рубидия, фосфата кальция, ^ЕАЕ-декстрана или других веществ; бомбардировку микрочастицами; липофекцию и инфекцию (например, если вектор является инфекционным средством, таким как вирус коровьей оспы). Выбор вводящихся векторов или полинуклеотидов будет зачастую зависеть от особенностей клетки-хозяина.
Любые клетки-хозяева, способные к сверхэкспрессии гетерологичных ДНК, можно применять с целью выделения генов, кодирующих представляющие интерес антитело, полипептид или белок. Неограничивающие примеры подходящих клеток-хозяев млекопитающих включают, но без ограничений, клетки СО8, НеЕа и СНО. Предпочтительно, клетки-хозяева экспрессируют кДНК на уровне приблизительно в 5 раз выше, более предпочтительно в 10 раз выше, еще более предпочтительно в 20 раз выше уровня соответствующего представляющего интерес эндогенного антитела или белка, если они присутствуют, в клетках-хозяевах. Скрининг клеток-хозяев на специфичное связывание с В7-Н3 осуществляют с помощью иммуноанализа или ЕАС8. Можно идентифицировать клетку, сверхэкспрессирующую представляющее интерес антитело или белок.
Также доступны различные методы, которые теперь можно задействовать для продуцирования мутантных пептидных агонистов, антагонистов и модуляторов В7-Н3, которые кодируют добавления, делеции или изменения в аминокислотной последовательности белка, получающегося в результате по срав- 21 030226
нению с исходной молекулой пептидного агониста, антагониста или модулятора В7-Н3.
Настоящее изобретение включает полипептиды, содержащие аминокислотную последовательность антител настоящего изобретения. Полипептиды настоящего изобретения можно получить с помощью процедур, известных в уровне техники. Полипептиды можно продуцировать путем протеолитической или другой деградации антител с помощью рекомбинантных способов (т. е. одиночные или слитые полипептиды), описываемых выше, или путем химического синтеза. Полипептиды антител, особенно более короткие полипептиды до приблизительно 50 аминокислот традиционно получают путем химического синтеза. Способы химического синтеза известны в уровне техники и коммерчески доступны. Например, полипептид к В7-Н3 можно получить с помощью автоматического синтезатора полипептидов, задействующего твердофазный способ.
IV. Способы скрининга полипептидов и моноклональных антител.
Для скрининга полипептидов и моноклональных антител, которые связываются с В7-Н3, можно применять несколько способов. При этом "связывание" относится к биологически или иммунологически соответствующему специфичному связыванию и не относится к неспецифичному связыванию, которое может происходить, например, если иммуноглобулин применяют в очень высокой концентрации против неспецифичной мишени. В одном варианте осуществления моноклональные антитела подвергают скринингу на связывание с В7-Н3 с применением стандартных методов скрининга. Таким образом, получили моноклональное антитело к В7-Н3. Предпочтительные гибридомы настоящего изобретения представляют собой гибридомы, которые продуцируют антитела ВКСА69О, ВКСА84О или РКСА157.
Можно идентифицировать дополнительные моноклональные антитела, которые связываются с В7Н3. Для этой цели моноклональные антитела подвергают скринингу на их избирательную способность связываться с раковыми тканями, но не с нераковыми клетками. В одном варианте осуществления отбирают моноклональные антитела, которые связываются с В7-Н3 и которые также кроссреактивны к раковым клеткам или тканям человека, но не к нормальным клеткам или тканям в той же степени. Одним способом, который можно задействовать для скрининга, является иммуногистохимия (1НС). Стандартные иммуногистохимические методики известны средним специалистам в данной области. См., например, А№МАЬ СЕЬЬ СиЬТиКЕ МЕТНОЭ8 (1Р. МаШег апб Ό. Ватек, сП.. Асабепис Ргекк, ΝΥ, νοί. 57, СИ. 18 апб 19, рр. 314-350, 1998). Биологические образцы (например, ткани) можно получить путем биопсий, аутопсий или некропсий. Для выяснения того, присутствует ли В7-Н3 только на раковых клетках, можно применять антитела к В7-Н3 для обнаружения присутствия В7-Н3 на тканях от индивидуумов с раком, при этом другие нераковые ткани от индивидуума, страдающего от рака, или ткани от индивидуумов без рака применяют в качестве контроля. Ткань можно заключить в твердое или эластичное вещество, которое препятствует повреждению в ходе заморозки (например, агарозный гель или ОСТ), и затем получить срезы для окрашивания. Злокачественные опухоли из различных органов и на различных стадиях можно применять для скрининга моноклональных антител. Примеры тканей, которые можно применять с целью скрининга, включают, но без ограничений, яичник, молочную железу, легкое, простату, толстую кишку, почку, кожу, щитовидную железу, головной мозг, сердце, печень, желудок, нерв, кровеносные сосуды, кость, верхний отдел пищеварительного тракта и поджелудочную железу. Примеры различных типов рака, которые могут применяться с целью скрининга, включают, но без ограничений, карциномы, аденокарциномы, саркомы, аденосаркомы, лимфомы и лейкемии.
В еще одном варианте линии раковых клеток, такие как НМЕС (Вю\Ыйакег СС- 2251), НυVЕС (первичные эндотелиальные клетки), ВТ-474 (АТСС № НТВ-20), МСР7 (АТСС № НТВ22), ΜΌΑ-ΜΒ175-νΐΙ (АТСС № НВ-25), ΜΌΑ-ΜΒ-361 (АТСС № НВ-27), 8КВК3 (АТСС № НТВ-30), А549 (АТСС № ССЬ-185), Са1и-3 (АТСС № НТВ-55), 8КМЕ84 (АТСС № НТВ-58), Е8-2 (АТСС № СКЬ-1978), 8Κ0ν3 (АТСС № НТВ-77), Рапс-1 (АТСС № СКЬ-1469), АкРС-Ι (АТСС № СКЬ-1682), НРАЬ-ΙΙ (АТСС № СКЬ1997), Нк700Т (АТСС № НТВ-174), Со1о205 (АТСС № ССЬ-222), НТ-29 (АТСС № НТВ-38), 8\480 (АТСС № ССЬ-228), 8\948 (АТСС № ССЬ-237), 293 (АТСС № СКЬ-1573), 786-0 (АТСС № СКЬ-1932), А498 (АТСС № НТВ-44), СаИ-2 (АТСС № НТВ-47), СО8-7 (АТСС № СКЬ-1651), КЬ-65 (АТСС № СКЬ10345), 8ν-Τ2 (АТСС № ССЬ-163.1), 22Κν1 (АТСС № СКЬ-2505), Όυ145 (АТСС № НТВ-81), Ь^аР (АТСС № СКЬ-1740), РС-3 (АТСС № СКЬ-1435), НТ29 (АТСС № НТВ-38), Нк746Т (АТСС № НТВ-135), ΝΟΙ-Ν87 (АТСС № СКЬ-5822), а также нормальные клетки из их соответствующих тканей можно применять для скрининга в отношении моноклональных антител, которые специфичны к раковой ткани. Первичные, или малого пассажа, клеточные культуры, полученные из нормальных тканей из различных органов, включая, но без ограничений, почку, яичник, молочную железу, легкое, простату, толстую кишку, почку, кожу, щитовидную железу, гладкую мышцу аорты и клетки эндотелия можно применять в качестве отрицательных контролей. Раковые или нераковые клетки можно выращивать на предметных или покровных стеклах или на пластиковых поверхностях, или можно подготавливать в устройстве Се11Аггау™, как описано в \О 01/43869, и подвергать скринингу на связывание антитела с помощью ГНС, как описано выше для тканей. Альтернативно, клетки можно удалять с ростовой поверхности с помощью непротеолитических средств и центрифугировать до осадка, который затем заключают и обрабатывают как ткани для ИС-анализа, как описывалось выше. Клетки можно инокулировать в иммунодефицитных животных, опухоли позволяют вырасти, а затем эту опухоль можно собрать, заключить и применять как
- 22 030226
источник ткани для 1НС-анализа. В другом варианте отдельные клетки можно подвергнуть скринингу путем инкубации с первичным антителом, вторичным "репортерным" антителом, соединенным с флуоресцентной молекулой, и затем проанализировать с помощью устройства для сортировки флуоресцентно-активной клетки (РАС8).
Любую из нескольких различных систем обнаружения можно использовать для обнаружения связывания антител со срезом ткани. Как правило, иммуногистохимия включает связывание первичного антитела с тканью и затем с вторичным антителом, реактивным к виду, от которого было получено первичное антитело, и конъюгированным с детектируемым маркером (например, пероксидаза хрена, НИР, или диаминобензидин, ΌΑΒ). Одним альтернативным способом, который можно применять, являются поликлональные зеркально комплементарные антитела или ро1уМ1СА™ (ро1ус1опа1 Мигог 1таде Сотр1етеп!агу АпйЬоЛек Т1е Βίηάίη§ 8йе Ытйеб, В1гтт§Ьат, ИК; МапдЬат, Э.С. е1 а1. (1999) "А Nονе1 1ттипоЫ84осЬет1са1 Эе1ес11оп 8у81ет И8шд Мигог 1таде Сотр1етеп!агу АпПЬоДе8 (М1СА) ", НйЮра11ю1оду 35(2): 129-33). Методику Ро1уМ1СА™ можно применять для тестирования связывания первичных антител (например, антитела к В7-Н3) с нормальной и раковой тканью. Несколько видов наборов определения ро1уМ1СА™ коммерчески доступны: продукт № НК004.Э представляет собой набор определения ро1уМ1СА™, в котором применяется хромоген ЭАВ; продукт № НК004.А представляет собой набором определения ро1уМ1СА™, в котором применяется хромоген АЕС. Альтернативно, первичное антитело может быть непосредственно помечено детектируемым маркером.
Первым этапом в 1НС-скрининге для отбора соответствующего антитела является связывание первичных антител, индуцированных у мышей (например, антител к В7-Н3), с одним или несколькими иммуногенами (например, образцы клеток или тканей). В одном варианте осуществления образцом ткани являются срезы замороженной ткани из различных органов. Образцы клеток или тканей могут быть либо раковыми, либо нераковыми.
Замороженные ткани можно приготовить, сделать срезы с или без фиксации, и выполнить 1НС при помощи любого из ряда способов, известных осведомленному в данной области (см., например, 81ерйап е1 а1. (1999) "О181пЬиРоп Апб Рипсйоп ОГ Т1е Абйе8юп Мо1еси1е ΒΕΝ Эиппд Ра1 Оеуе1ортеп1". Эеу. Вю1. 212:264-277 и 81ерйап е1 а1. (1999) "Зе1ес!ке С1отпд ОГ Се11 ЗигГасе Рго1еш8 1пуокеб 1п Огдап Эеуе1ортеп1: ЕрЦНеПа1 О1усорго!еш 18 1^океб 1п №гта1 ЕрЦНеПа1 ОГГегепИайоп", Епбосгто1оду 140:5841-5854).
V. Способы характеристики антител к В7-Н3.
Для характеристики антител к В7-Н3 можно применять любой из нескольких способов. Один способ заключается в идентификации эпитопа, с которым оно связывается. Система картирования эпитопов коммерчески доступна из различных источников, например Рер8сап 8у81ет8 (Лелистад, Нидерланды). Систему картирования эпитопов можно применять для определения последовательности, с которой связывается антитело к В7-Н3. Эпитоп может представлять собой линейный эпитоп, т.е. входить в состав единого отрезка аминокислот, или конформационный эпитоп, образованный в результате трехмерного взаимодействия аминокислот, который не обязательно может входить в состав единого отрезка.
Пептиды с различными длинами (например, предпочтительно длиной по меньшей мере 4-6 аминокислот) можно выделять или синтезировать (например, рекомбинантно) и применять для анализов связывания с антителом к В7-Н3. Эпитоп, с которым связывается антитело к В7-Н3, можно определять при систематическом скрининге с применением перекрывающихся пептидов, полученных из внеклеточной последовательности, и определении связывания антителом к В7-Н3.
Еще одним способом, который можно применять для характеристики антитела к В7-Н3, является применение конкурентных анализов с другими антителами, которые, как известно, связываются с тем же антигеном, т.е. В7-Н3, для определения того, связываются ли антитела к В7-Н3 с тем же эпитопом, что и другие антитела. Примеры коммерчески доступных антител к В7-Н3 могут быть доступны и их можно идентифицировать с помощью анализов связывания, изложенных в данном документе. Конкурентные анализы хорошо известны специалистам в данной области, и такие процедуры и иллюстративные данные дополнительно подробно рассматриваются в примерах. Антитела к В7-Н3 можно дополнительно характеризовать по тканям, типу рака или типу опухоли, с которой они связываются.
Другой способ характеризования антител к В7-Н3 - по антигену, с которым оно связывается. Антитела к В7-Н3 применяли в вестерн-блоттинге с клеточными лизатами из различных форм рака человека. Как известно специалисту в данной области, вестерн-блоттинг может включать проведение электрофореза клеточных лизатов и/или клеточных фракций на денатурирующем или неденатурирующем геле, перенос белков на нитроцеллюлозную бумагу и затем зондирование блота антителом (например, антителом к В7-Н3), чтобы увидеть какие белки связались антителом. В7-Н3 ассоциирован с различными формами рака человека различных тканей, включая, но без ограничений, толстую кишку, молочную железу, яичник, поджелудочную железу и легкое.
VI. Способы диагностирования рака с применением антител к В7-Н3 и модуляторов В7-Н3.
Моноклональные антитела к В7-Н3, произведенные с помощью раскрываемых в данном документе
способов, можно применять для идентификации наличия или отсутствия раковых клеток в ряде тканей, включая, но без ограничений, яичник, молочную железу, легкое, простату, толстую кишку, почку, под- 23 030226
желудочную железу, кожу, щитовидную железу, головной мозг, сердце, печень, желудок, нерв, кровеносные сосуды, кость и верхний отдел пищеварительного тракта, с целью диагностики. Моноклональные антитела к В7-Н3, произведенные с помощью раскрываемых в данном документе способов, можно также применять для идентификации наличия или отсутствия раковых клеток или их уровня, циркулирующих в крови после их высвобождения из солидной опухоли. Такой циркулирующий антиген может представлять собой интактный антиген В7-Н3 или его фрагмент, который сохраняет способность определяться согласно способам, излагаемым в данном документе. Такое определение можно осуществить с помощью ΡΑСЗ-анализа с применением стандартных способов, традиционно применяемых в области техники.
Данные применения могут включать образование комплекса между В7-Н3 и антителом, которое специфично связывается с В7-Н3. Примеры таких антител включают, но без ограничений, моноклональные антитела к В7-Н3, продуцируемые гибридомами Β^Α84Ό, ΒΚί'.Ά69Ο и ΡΚί'.Ά157. Образование такого комплекса может происходить ш νίΙΐΌ или ш νί\Ό. Не ограничиваясь теорией, моноклональное антитело к В7-Н3 может связыватся с В7-Н3 через внеклеточный домен В7-Н3 и затем может интернализироваться.
В предпочтительном варианте осуществления диагностических способов настоящего изобретения антитело несет детектируемую метку. Примеры меток, которые можно применять, включают радиоактивное средство или флюорофор, такой как фикоэритрин или флюоресцеинизотиоцианат (также известный как флюороизотиоцианат или РИС).
Как и в случае с другими известными антителами, применяемыми коммерчески для диагностических и терапевтических целей, целевой антиген настоящего изобретения широко экспрессируется в нормальной ткани. Он также подвержен апрегуляции в некоторых опухолях. Следовательно, конкретные дозировки и пути доставки антител настоящего изобретения, применяемые для диагностических или терапевтических средств, будут адаптироваться для конкретной рассматриваемой опухоли или стадии заболевания, а также для конкретного индивидуума, подвергаемого лечению.
Один способ применения антител для диагностики заключается в получении изображений опухоли 1п νί\Ό путем соединения антитела с радиоактивным или рентгеноконтрастным средством, введения антитела индивидууму и применения рентгеновской установки или другого устройства получения изображения для визуализации местоположения меченого антитела на поверхности раковых клеток, экспрессирующих антиген. Антитело вводят в концентрации, которая вызывает связывание в физиологических условиях.
1п νίΙΐΌ методики обнаружения В7-Н3 являются общепринятыми в области техники и включают твердофазные иммуноферментные анализы (ΕΟ3Α), иммунопреципитации, иммунофлуорсценцию, иммуноферментный анализ (ΕΙΑ), радиоиммунологический анализ (ΚΙΑ) и вестерн-блоттинг.
В аспектах настоящего изобретения способы сцинтиграфии опухолей или новообразований или измерения эффективности способа лечения антителом с радиоактивной меткой включают этап введения опухоль-специфичного антитела с радиоактивной меткой индивидууму, следуя практическому осуществлению настоящего изобретения. Антитело с радиоактивной меткой может представлять собой моноклональное или поликлональное антитело, содержащее радиоактивную метку, предпочтительно выбранную из группы, состоящей из технеция-99т, индия-111, йода-131, рения-186, рения-188, самария-153, лютеция-177, меди-64, скандия-47, иттрия-90. Особенно предпочтительны моноклональные антитела, меченные терапевтическими радионуклидами, такими как йод-131, рений-188, гольмий-166, самарий-153 и скандий-47, которые не компрометируют иммунореактивность антител и не разрушаются ш νί\Ό. Специалист в данной области примет во внимание, что известны другие радиоактивные изотопы, и они могут быть пригодны для конкретных применений. Сцинтиграфию можно проводить с помощью однофотонной эмиссионной компьютерной томографии (ЗРЕСТ), позитронно-эмиссионной томографии (ΡΕΤ), компьютерной томографии (СТ) или магнитнорезонансной томографии (ΜΚΙ). Также предполагается корреляционная визуализация, которая позволяет получить лучшее анатомическое определение местоположение метастазов, выявленных с помощью иммуносцинтиграфии.
В других способах раковые клетки извлекают и ткань готовят к иммуногистохимии способами, хорошо известными в области техники (например, заключение в соединение для замораживания, замораживание и приготовление срезов с или без фиксации; фиксация и парафиновая заливка с или без различных способов поиска и контрастного окрашивания антигена). Моноклональные антитела также можно применять для идентификации раковых клеток на различных стадиях развития. Антитела также можно применять для определения того, какие опухоли индивидуумов экспрессируют антиген на своих поверхностях на предопределенном уровне и, таким образом, являются кандидатами на иммунотерапию с помощью антител, направленных против указанного антигена. Антитела могут распознавать как первичные, так и метастазирующие формы рака, которые экспрессируют В7-Н3. Применяемое в данном документе определение может включать качественное и/или количественное определение и может включать сравнение уровня, измеряемого у нормальной клетки с повышенным уровнем экспрессии В7-Н3 у раковых клеток.
Изобретение также обеспечивает способы вспомогательной диагностики рака, характеризующегося раковыми клетками, которые экспрессируют В7-Н3 у индивидуума, с помощью любого антитела, кото- 24 030226
рое связывается с В7-Н3, и любые другие способы, которые можно применять для определения уровня экспрессии В7-Н3. Применяемое в данном документе выражение способы "вспомогательной диагностики," означает, что все эти способы содействуют в осуществлении клинического определения, касающегося классификации, или природы рака, и могут быть или могут не быть решающими в отношении заключительного диагноза. Соответственно, способ вспомогательной диагностики рака может включать этап определения уровня В7-Н3 в биологическом образце от индивидуума и/или определения уровня экспресиии В7-Н3 в образце. Антитела, распознающие антиген или его часть, также можно применять для создания диагностических иммунопроб для определения антигена, высвобождаемого или секретируемого из живой или умирающей раковой клетки, в жидкостях организма, включая, но без ограничений, кровь, слюну, мочу, легочную жидкость или асцитную жидкость.
Не все клетки в конкретной представляющей интерес опухоли будут экспрессировать В7-Н3, но и раковые клетки в других тканях могут экспрессировать В7-Н3, таким образом индивидуума нужно подвергнуть скринингу на присутствие или отсутствие В7-Н3 на раковых клетках для определения полезности иммунотерапии для индивидуума. Антитела к В7-Н3, произведенные с помощью раскрываемых в данном документе способов, можно применять для определения того, можно ли индивидуума с диагнозом рак считать кандидатом на иммунотерапию с помощью антител, направленных против В7-Н3. В одном варианте осуществления раковую опухоль или образец биопсии можно протестировать на экспрессию В7-Н3 с помощью антител, направленных против В7-Н3. Индивидуумы с раковыми клетками, которые экспрессируют В7-Н3, являются подходящими кандидатами на иммунотерапию с помощью антител, направленных против В7-Н3. Также можно применять окрашивание с помощью антитела к В7-Н3 для проведения различий между раковыми тканями и нормальными тканями.
Способы применения антител к В7-Н3 для диагностических целей пригодны как до, так и после какой-либо формы противоракового лечения, например химиотерапии или радиационной терапии, для определения того, какие опухоли наиболее вероятно будут давать ответ на данное лечение, прогноза для индивидуума с раком, подтипа опухоли или происхождения метастазирования и прогрессировать заболевания или реакции на лечение.
Композиции настоящего изобретения также пригодны для диагностики болезненных состояний, отличных от рака, с помощью способов, в целом описываемых выше в заявке в отношении других пораженных (нераковых) клеток. Болезненные состояния, подходящие для применения способов настоящего изобретения, включают, но без ограничений, заболевания или расстройства, ассоциированные с воспалительными или аутоиммунными реакциями у индивидуумов. Описываемые выше способы можно применять для модуляции воспалительных или аутоиммунных реакций у индивидуумов. Заболевания и состояния, являющиеся результатом воспалительных и аутоиммунных расстройств, которые можно подвергнуть диагностике и/или лечению с помощью композиций и способов настоящего изобретения, включают в качестве иллюстрации, а не ограничения рассеянный склероз, менингит, энцефалит, инсульт, другие черепно-мозговые травмы, воспалительные заболевания кишечника, включая язвенный колит и болезнь Крона, тяжелую миастению, волчанку, ревматоидный артрит, астму, острый юношеский диабет, СПИД-деменцию, атеросклероз, нефрит, ретинит, атопический дерматит, псориаз, ишемию миокарда и острое опосредованное лейкоцитами повреждение легкого.
Дополнительные показания для диагностического и/или терапевтического применения антител и других терапевтических средств настоящего изобретения включают введение индивидуумам с риском отторжения органа или трансплантата. В последние годы имело место значительно улучшение эффективности хирургических методов трансплантации тканей и органов, таких как кожа, почка, печень, сердце, легкое, поджелудочная железа и костный мозг. Возможно, основной неразрешенной проблемой является недостаток приемлемых средств для индуцирования иммунотолерантности реципиента к трансплантируемому аллогенному трансплантату или органу. Когда аллогенные клетки или органы трансплантируют хозяину (т.е. донор и реципиент являются различными индивидуумами одного вида), то иммунная система хозяина, скорее всего, повышает иммунный ответ на чужеродные антигены в трансплантате (заболевание хозяин-против-трансплантата), что приведет к разрушению трансплантированной ткани.
Применения, описываемые где-либо в данной заявке в отношении антител к В7-Н3, также охватывают применение других агонистов, антагонистов и модуляторов В7-Н3, как описано в данном документе. В таких вариантах осуществления антитело к В7-Н3 замещают агонистом, антагонистом или другим модулятором В7-Н3, не являющимся антителом, на описанных этапах и выполняют изменения в пределах объема знаний рядового специалиста-практика в данной области для адаптации данного способа к замещенной В7-Н3 модуляторной композиции.
Моноклональные антитела к В7-Н3, произведенные с помощью раскрываемых в данном документе способов, можно применять для идентификации наличия или отсутствия раковых стволовых клеток человека в ряде тканей. Была выдвинута гипотеза, что раковые стволовые клетки (С8С) играют важную роль в росте и метастазировании опухоли (СБоКа, У.Р. е1 а1. (2009) "ТНе Сапсег 81ет Се11 Мюгоепупоптеп1 Апб Апб-Сапсег ТНегару", ШУ ί. КаШа1. Вю1. 85(11):955-962; Сир1а, Р.В. е1 а1. (2009) "Сапсег 81ет Се11в: МНаде 0г Кеа1йу?" №-Ц. Меб. 15(9): 1010-1012; Ьа^коп, !С. е1 а1. (2009) "Сапсег 81ет Се11в Ш Вгеак! Сапсег Апб Ме1а51а515", Вгеак! Сапсег Кек. Тгеа1. 118(2):241-254; Негтапп, Р.С. е1 а1. (2009) "Рапсгеабс
- 25 030226
Сапсег 8!ет Се118-1п81дЫ8 Апй Регкрескуек", Ехрей Ορίη. ΒίοΙ. Ткег. 9(10): 1271-1278; 8ска!!оп, Т. е! а1. (2009) 'кйепкксакоп Апй Тагдекпд Ой Сапсег 8!ет Се11к", Вюеккаук 31(10): 1038-1049; Мкйа1, 8. е! а1. (2009) "Сапсег 8!ет Се11к: Тке О1кег Расе Ой йапик", Атег. 1. Мей. 8ск 338(2): 107-112; АИкоп, М.К. е! а1. (2009) "81ет Се11к Апй Ьипд Сапсег: Ри!иге Ткегареийс Тагде!к?" Ехрей Орт. Вю1. Ткег. 9(9): 1127-1141; Скагайе-йаиййге!, Е. е! а1. (2009) "Вгеак! Сапсег 81ет Се11к: Тоо1к Апй Мойе1к То Ке1у Оп", ВМС Рак 9:202; 8сореШй, А. е! а1. (2009) "Ткегареийс кпрксакопк Ой Сапсег кикакпд Се11к", Ехрей Орт. Вю1. Ткег. 9(8): 1005-1016; публикация РСТ АО 2008/091908). Согласно данной гипотезе С8С обеспечивают небольшую отдельную субпопуляцию клеток в пределах каждой опухоли, которые способны к бесконечному самообновлению и развитию в более зрелую опухолевую клетку(и), которая относительно ограничена в способности к репликации. Была выдвинута гипотеза, что эти раковые стволовые клетки могут быть более устойчивыми к химиотерапевтическим средствам, радиации или другим токсическим условиям и, таким образом, выживают после клинических терапий и позже вырастают во вторичные опухоли, метастазы или ответственны за рецидив. Было высказано предположение, что С8С могут возникать либо из "нормальных" стволовых клеток ткани, либо из более дифференцированных клеток-предшественников ткани.
Раковые стволовые клетки человека имеют несколько определяющих характеристик. Такие характеристики описаны в публикации РСТ АО 2008/091908 и, таким образом, включены ссылкой. Моноклональные антитела к целям клеточной поверхности на раковых стволовых клетках можно применять для идентификации наличия или отсутствия раковых стволовых клеток в ряде тканей. Моноклональные антитела к В7-Н3, произведенные с помощью раскрываемых в данном документе способов, также можно применять для идентификации наличия или отсутствия раковых стволовых клеток или уровня раковых стволовых клеток в образце или в ткани, или в кровотоке после их высвобождения из солидной опухоли. Такой циркулирующий антиген может представлять собой интактный антиген В7-Н3 или его фрагмент, который сохраняет способность к обнаружению согласно изложенным в данном документе способам. Такое обнаружение можно осуществить с помощью РАС8-анализа с применением стандартных способов, традиционно применяемых в данной области. В другом варианте осуществления такое обнаружение можно осуществить с помощью иммуногистохимического анализа образцов ткани с применением стандартных способов, традиционно применяемых в данной области.
Данные применения могут включать образование комплекса между В7-Н3 и антителом, которое специфично связывается с В7-Н3 на раковых стволовых клетках. Примеры таких антител включают, но без ограничений, такие моноклональное антитела к В7-Н3, продуцируемые гибридомами ВКСА84Э, ВКСА69Э и РКСА157. Образование такого комплекса может происходить ш уйго или ш У1уо.
Применения, описываемые в данной заявке, излагающие их применение в отношении антител к В7Н3, также охватывают применение других агонистов, антагонистов и модуляторов В7-Н3, как описано в данном документе, для применения идентификации и лечения раковых стволовых клеток. В таких вариантах осуществления антитела к В7-Н3 и другие агонисты, антагонисты и модуляторы В7-Н3 применяют для идентификации, диагностики или терапевтического лечения раковых стволовых клеток с помощью подобных описанных способов, и выполняют изменения в пределах объема знаний рядового специалиста-практика в данной области для адаптации данного способа к идентификации/диагностике или лечению раковых стволовых клеток.
VII. Предпочтительные композиции настоящего изобретения.
Настоящее изобретение охватывает композиции, в том числе фармацевтические композиции, содержащие антитела к В7-Н3, полипептиды, полученные от антител к В7-Н3, полинуклеотиды, содержащие последовательности, кодирующие антитела к В7-Н3, и другие средства, описываемые в данном документе. Применяемые в данном документе композиции дополнительно содержат одно или несколько антител, полипептидов и/или белков, которые связываются с В7-Н3, агонисты, антагонисты, модуляторы В7-Н3 и/или один или несколько полинуклеотидов, содержащих последовательности, кодирующие одно или несколько антител, полипептидов и белков, которые связываются с В7-Н3.
Настоящее изобретение дополнительно обеспечивает конъюгаты из любого пептидного агониста, антагониста или модулятора В7-Н3 и дополнительных химических структур, которые поддерживают заданную функцию или функции конкретного пептидного агониста, антагониста или модулятора В7-Н3.
Эти конъюгаты включают пептидный агонист, антагонист или модулятор В7-Н3, ковалентно связанный с макромолекулой, такой как любая нерастворимая твердая матрица-подложка, применяемая в диагностических, скрининговых процедурах или процедурах очистки, обсуждаемых в данном документе. Подходящие материалы матрицы включают любое вещество, которое является химически инертным, имеет высокую пористость и большие количества функциональных групп, способных образовывать ковалентные связи с пептидными лигандами. Примеры материалов матрицы и процедур получения конъюгатов матрица-лиганд описываются в Эеап е! а1. (Ейк) АΡΡINIТΥ Скгота!одгарку: А Ргасйса1 Арргоаск, 1КЬ Ргекк (1985); Боте, "Ап 1п!гойисйоп !о Аййпйу Скгота!одгарку", в Аогк е! а1. (ейк) ^АΒΟКАТΟКΥ Тескшдиек ш Вюскетюйу Апй Мо1еси1аг Вю1оду, ^1. 7, Рай II, №г1к-Но11апй (1979); Рога!к е! а1., "Вюкресйю Аййпйу Скгота!одгарку", в №ига!к, Н. е! а1. (ейк), Тке Рго!ешк, 3гй ей., Vο1. 1, рр. 95-178 (1975); и 8ской, Н. Аййпйу Скгота!одгарку, Масе1 Эеккег Шс. ΝΥ (1984).
Также в данном документе обеспечиваются конъюгаты из пептидного агониста, антагониста или
- 26 030226
модулятора В7-Н3 и любого репортерного фрагмента, применяемого в диагностических процедурах, обсуждаемых в данном документе. Средства пептидного агониста, антагониста или модулятора В7-Н3, полипептиды и белки настоящего изобретения, включая антитела к В7-Н3, дополнительно идентифицируются и характеризуются любым (одним или несколькими) из следующих критериев:
(a) способность специфично связываться с В7-Н3 (и, в частности, молекулами В7-Н3, которые экспрессируются на поверхностях раковых клеток, включая, но без ограничений, клетки рака почки, простаты или легкого);
(b) способность конкурентно ингибировать преимущественное связывание известного антитела к В7-Н3 с В7-Н3, в том числе способностью преимущественно связываться с тем же эпитопом В7-Н3, с которым преимущественно связывается первоначальное антитело;
(c) способность связываться с частью В7-Н3, которая выставлена на поверхности живой клетки ίη νίΐτο или ίη νΐνο;
(й) способность связываться с частью В7-Н3, которая выставлена на поверхности живой раковой клетки, которая экспрессирует В7-Н3;
(е) способность доставлять химиотерапевтическое средство к раковым клеткам (таким как клетки рака почки, простаты или легкого), экспрессирующим В7-Н3 на своей поверхности; и/или
(£) способность доставлять терапевтическое средство или детектируемый маркер в раковые клетки (такие как, но без ограничений, клетки рака простаты), экспрессирующие В7-Н3 на своей поверхности.
Предпочтительное антитело настоящего изобретения будет проявлять различное 1НС-окрашивание опухолевой ткани по сравнению с нормальной нераковой тканью и, помимо этого, будет допускать тестирование в моделях на приматах (и, в частности, яванском макаке) эффективности антитела. Предпочтительные антитела настоящего изобретения будут дополнительно проявлять необходимые уровни аффинности и антигенной специфичности. Предпочтительные антитела настоящего изобретения будут дополнительно проявлять необходимые уровни иммуномодуляторной активности и клеточной интернализации.
В некоторых вариантах осуществления антитело настоящего изобретения является антителом, которое продуцируется гибридомой ВРСА84О. ВКСА69О или РКСА157 или их потомством. Настоящее изобретение также охватывает различные составы антител, продуцируемых данными депонированными гибридомами, а также эквивалентных антител или полипептидных фрагментов (например, РаЬ, РаЬ', Р(аЬ')2, Ρν, Рс и т.д.), химерных антител, одиноцепочечных ОсРу), их мутантов, слитых белков, содержащих часть антитела, гуманизированных антител, и любую другую модифицированную конфигурацию любых данных или эквивалентных антител, которые содержат участок распознания антигена (В7-Н3) с требуемой специфичностью. Настоящее изобретение также обеспечивает антитела человека, проявляющие одну или несколько из биологических характеристик члена семейства антител к В7-Н3. Эквивалентные антитела из семейства антител к В7-Н3 (включая гуманизированные антитела и антитела человека), полипептидные фрагменты и полипептиды, содержащие любой из данных фрагментов, идентифицируются и характеризуются любым (одним или несколькими) из пяти вышеописанных критериев. Последовательности мышиного и иллюстративного гуманизированного вариабельного домена антитела к В7-Н3 обеспечиваются в публикации РСТ \УО 2008/066691. Такие последовательности обеспечиваются в качестве иллюстрации, а не ограничения, и различные последовательности, а также фрагменты и варианты обеспеченных последовательностей охватываются объемом настоящего изобретения.
ВКСА84О, ВКСА69О и РКСА157 являются предпочтительными антителами к В7-Н3 настоящего изобретения вследствие их более чистых 1НС-профилей в нормальных тканях, более сильной 1НСразницы опухолевой/нормальной ткани, среднего-сильного связывания (В1АСОКЕ™)/1НС), перекрестной реактивности с В7-Н3 яванских макак и сильной активности в отношении универсальных молекул ПАКТ™ ("ИВАРТ™") по сравнению с другими антителами. В особенно предпочтительных вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает химерные и гуманизированные варианты этих предпочтительных антител, а также нативные, химерные и гуманизированные варианты этих предпочтительных антител, которые обладают модифицированными Рс-областями, как описано ниже. Настоящее изобретение дополнительно охватывает молекулы ПАКТ™, которые обладают эпитопсвязывающими областями таких антител, особенно вместе с эпитопсвязывающей областью(ями), которая связывается с Тклеточным рецептором, рецептором ΝΚΟ2Ό или с опухоль-ассоциированным антигеном или с гаптеном, таким как флюоресцеин (например, флюоресцеинизотиоцианатом, также известным как флюороизотиоцианат или Р1ТС).
В некоторых вариантах осуществления антитела, полипептиды и белки настоящего изобретения, которые связываются с В7-Н3, являются антителами, полипептидами и белками, которые конкурентно ингибируют преимущественное связывание с В7-Н3 описываемого в данном документе антитела к В7Н3. В некоторых вариантах осуществления антитела, полипептиды и белки преимущественно связываются с тем же эпитопом на В7-Н3, с которым преимущественно связывается мышиное антитело к В7-Н3.
Соответственно, настоящее изобретение обеспечивает любое из следующего (или композиции, в том числе фармацевтические композиции, содержащие любое из следующего): (а) антитело, продуци- 27 030226
руемое клеткой-хозяином с номером депонирования, приведенным выше, или ее потомством; (Ь) гуманизированную форму такого антитела; (с) антитело, содержащее одну или несколько из вариабельных областей легкой цепи и/или тяжелой цепи такого антитела; (ά) химерное антитело, содержащее вариабельные области, гомологичные или полученные от вариабельных областей тяжелой цепи и легкой цепи такого антитела, и константные области, гомологичные или полученные от константных областей тяжелой цепи и легкой цепи антитела человека; (е) антитело, содержащее один или несколько из СЭК легкой цепи и/или тяжелой цепи (по меньшей мере один, два, три, четыре, пять или шесть) такого антитела; (£) антитело, содержащее тяжелую и/или легкую цепь такого антитела; (д) антитело человека, которое эквивалентно такому антителу.
Гуманизированная форма антитела может иметь или может не иметь СЭК, идентичные таковым первоначального антитела или антитела, продуцируемого клеткой-хозяином с номером депонирования, указанным выше. Определение СЭК-областей хорошо известно специалисту в данной области. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение обеспечивает антитело, которое содержит по меньшей мере один СЭК, который по сути гомологичен по меньшей мере одному СЭК, по меньшей мере двум, по меньшей мере трем, по меньшей мере четырем, по меньшей мере 5 СЭК антитела, продуцируемого одной из вышеуказанных депонированных гибридом (или в некоторых вариантах осуществления по сути гомологичен всем 6 СЭК одного из данных антител или получен из одного из данных антител), или антитела, продуцируемого клеткой-хозяином с номером депонирования, указанным выше. Другие варианты осуществления включают антитела, которые имеют по меньшей мере два, три, четыре, пять или шесть СЭК, которые по сути гомологичны по меньшей мере двум, трем, четырем, пяти или шести СГОК антитела, продуцируемого гибридомой, депонированной, как указано в данном документе, или полученных от такого антитела. Понятно, что для целей настоящего изобретения специфичность связывания и/или общая активность (которые могут использоваться, через доставку химиотерапевтического средства к или в раковые клетки, для уменьшения роста и/или пролиферации раковых клеток, для индукции апоптической клеточной гибели в раковой клетке, для задержки развития метастазирования и/или лечении паллиативно) в целом сохраняется, хотя степень активности может изменяться по сравнению с антителом, продуцируемым депонированной гибридомой (может быть большей или меньшей). Настоящее изобретение также обеспечивает способы производства любого из этих антител. Способы производства антител известны в области техники и описываются в данном документе.
Настоящее изобретение так же обеспечивает полипептиды, включающие аминокислотную последовательность антител настоящего изобретения. В некоторых вариантах осуществления полипептид включает одну или несколько из вариабельных областей легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления полипептид включает один или несколько из СГОК легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления полипептид включает три СЭК легкой цепи и/или тяжелой цепи антитела. В некоторых вариантах осуществления полипептид включает аминокислотную последовательность антитела, которая имеет любое из следующего: по меньшей мере 5 смежных аминокислот последовательности первоначального антитела, по меньшей мере 8 смежных аминокислот, по меньшей мере приблизительно 10 смежных аминокислот, по меньшей мере приблизительно 15 смежных аминокислот, по меньшей мере приблизительно 20 смежных аминокислот, по меньшей мере приблизительно 25 смежных аминокислот, по меньшей мере приблизительно 30 смежных аминокислот, где по меньшей мере 3 аминокислоты происходят из вариабельной области антитела. В одном варианте осуществления вариабельная область происходит из легкой цепи первоначального антитела. В другом варианте осуществления вариабельная область происходит из тяжелой цепи антитела. В другом варианте осуществления 5 (или более) смежных аминокислот происходят из гипервариабельного участка (СОК) антитела.
В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения клетки настоящего изобретения, которые экспрессируют В7-Н3, часть В7-Н3, антитела к В7-Н3 или другие В7-Н3-связывающие полипептиды настоящего изобретения непосредственно вводят индивидууму для модуляции биологической активности В7-Н3 ίπ νίνο.
Предпочтительными антителами к В7-Н3 настоящего изобретения являются ВКСА84Э, ВКСА69Э и РКСА157, причем все из них являются мышиными антителами, реактивными к молекуле В7-Н3 человека. Аминокислотные и кодирующие полинуклеотидные последовательности вариабельной легкой цепи и вариабельной тяжелой цепи ВКСА84Э, ВКСА69Э и РКСА157 показаны ниже наряду с соответствующими СЭК1-, СГОК2- и СОК3-доменами каждой такой цепи. Таким образом, специалисты в данной области смогут сконструировать антитела с такими СОК, а также их производные, способные связываться с эпитопами, распознаваемые ВКСА84Э, ВКСА69Э и РКСА157.
А. Последовательности ВКСА84Э.
(1) Последовательности легкой цепи ВКСА84Э.
Аминокислотная последовательность вариабельной легкой цепи ВКСА84Э (8ЬЦ ГО N0: 3)
ϋΙΑΜΤ<25<2ΚΡ МЗТЗУСОКУЗ νΤΟΚΑ5<2Ννϋ ΤΝνΑΝΥ<2<2ΚΡ ®25РКАЫУ5 Α5ΥΚΥ50νΡϋ КЕТС5С5СТР ΕΤΣΤΙΝΝν<25 ЕРЬАЕУЕС<2<2 ΥΝΝΥΡΕΤΕΟ5 ΟΤΚΕιΕΙΚ
- 28 030226
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную легкую цепь ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 4)
дасаРРдсда РдасссадРс РсаааааРРс аРдРссасаР садРаддада садддРсадс дРсассРдса аддссадРса дааРдРддаР асРааРдРад ссРддРаРса асадааасса дддсааРсРс сРааадсасР даРРРасРсд дсаРссРасс ддРасадРдд адРсссРдаР сдсРРсасад дсадРддаРс РдддасадаР РРсасРсРса ссаРсаасаа РдРдсадРсР даадасРРдд сададРаРРР сРдРсадсаа РаРаасаасР аРссаРРсас дРРсддсРсд дддасааадр РддаааРааа а
СЭК1 вариабельной легкой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 5)
ΚΑ5<2ΝνϋΤΝνΑ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЭК1 вариабельной легкой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 6)
ааддссадРс адааРдРдда РасРааРдРа дсс
США вариабельной легкой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 7)
3Α3ΥΚΥ3
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая США вариабельной легкой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 8)
РсддсаРссР ассддРасад-у
США вариабельной легкой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0:9):
ΟΟΥΝΝΥΡΓΤ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая США вариабельной легкой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 10)
садсааРаРа асаасРаРссаРРсасд
(2) Последовательности тяжелой цепи ВКСА84О.
Аминокислотная последовательность вариабельной тяжелой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 11) ОУОЬУЕЗССС ЬУОРССЗЕКЬ ЗСАА8СЕТЕЗ ЗГСМНГОУЕ<2А РЕКСЬЕИУАУ Ι33Ρ33ΑΙΥΥ ΑΌΤνΚΟΕΕΤΙ ЗЕОИРКЫТЬЕ Ь<2МТЗЬЕЗЕР ТАМУУССЕСЕ ЕШУУСЗЕЬР Υ№3ζ)<3ΤΊΈΤν 33
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную тяжелую цепь ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 12)
даРдРдсадс РддРддадРс Рдддддаддс РРадРдсадс сРддадддРс ссддааасРс РссРдРдсад ссРсРддаРР сасРРРсадР адсРРРддаа РдсасРдддР РсдРсаддсР ссададаадд ддсРддадРд ддРсдсаРас аРРадРадРд асадРадРдс саРсРасРаР дсадасасад Рдаадддссд аРРсассаРс Рссададаса аРсссаадаа сасссРдРРс сРдсаааРда ссадРсРаад дРсРдаддас асддссаРдР аРРасРдРдд аададддадд даааасаРРР асРасддРад РаддсРРдас РасРддддсс ааддсассас РсРсасадРс РссРса
СЭК1 вариабельной тяжелой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 13)
гсмн
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЭК1 вариабельной тяжелой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 14):
РРРддааРдсас
США вариабельной тяжелой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 15)
ΥΙ33ϋ33ΑΙΥΥΑΌΤνΚ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая США вариабельной тяжелой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 16)
РасаРРадРа дРдасадРад РдссаРсРас РаРдсадаса садрдаад
США вариабельной тяжелой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 17)
ΟΚΕΝΙΥΥΟΒΚΣϋΥ
Полинуклеотидная последовательность кодирующая США вариабельной тяжелой цепи ВКСА84О (8ЕР ГО N0: 18)
дддадддааа асаРРРасРа сддРадРадд сРРдасРас
В. Последовательности ВКСА69О.
(1) Последовательности легкой цепи ВКСА69О.
Аминокислотная последовательность вариабельной легкой цепи ВКСА69О (8ЕР ГО N0: 19): ϋΙ<2ΜΤζ)ΤΤ53 ЬЗАЗЪСЕЕУТ 13СКА30013 ΝΥΣΝΝΥΟΟΚΡ РСТУКЬЫУУ ТЗКЬНЗСУРЗ КЕЗСЗСЗСТР УЗЬТЮЫЬЕО ΕϋΙΑΤΥΕΟΟΟ ΟΝΤΣΕΡΤΕΟΟ СТКБЕ1К
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную легкую цепь ВКСА69О (8ЕР ГО N0: 20)
- 29 030226
даБаБссада Бдасасадас БасаБссБсс сБдБсБдссБ сБсБдддада сададБсасс аБсадББдса дддсаадБса ддасаББадБ 3355355533 асБддБабса дсадааасса даБддаасбд ББааасБссБ дабсБасбас асаБсасдаБ БасасБсадд адБсссаБса аддББсадБд дсадБдддБс БддаасадаБ БаББсБсБса ссаББдасаа ссБддадсаа даадаБаББд ссасББасББ ББдссаасад ддБааБасдс ББссБссдас дББсддБдда ддсассааас БддаааБсаа а
СЭК1 вариабельной легкой цепи ВКСА69О (8ЕЦ ГО ΝΟ: 21)
ΚΑ3<2ΌΙ3ΝΥΕΝ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЭК1 вариабельной легкой цепи ВКСА69Э (8ЕЦ ГО ΝΟ: 22)
адддсаадБс аддасаББад БааББаБББа аас
СЭК2 вариабельной легкой цепи ВКСА69О (8ЕЦ ГО ΝΟ: 23)
УТЗКЬНЗ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЭК2 вариабельной легкой цепи ВКСА69Э (8ЕЦ ГО ΝΟ: 24)
БасасаБсас даББасасБса
СЭК3 вариабельной легкой цепи ВКСА69В (8ЕЦ ГО ΝΟ: 25)
(2<2СЫТЬРРТ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЭК3 вариабельной легкой цепи ВКСА69В (8ЕЦ ГО ΝΟ: 26)
саасадддБа аБасдсББсс Бссдасд
(2) Последовательности тяжелой цепи ВКСА69В.
Аминокислотная последовательность вариабельной тяжелой цепи ВКСА69В (8ЕЦ ГО ΝΟ: 27)
<2У<2Ъ<2<25еАЕ ЬАКРСАЗУКЬ ЗСКАЗОУТЕТ ЗУИМфИУКфК РСфОЬЕШСТ ΙΥΡσϋΟΌΤΚΥ ТфКЕКСКАТЬ ΤΑΌΚ333ΤΑΥ МфЬЗЗЬАЗЕО ЗАУУУСАККЗ 1РКЬИУРОУИ САСТТУТУЗЗ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную тяжелую цепь ВКСА69Э (8ЕЦ ГО ΝΟ: 28)
саддББсадс БссадсадБс БддддсБдад сБддсаадас сБддддсББс адБдаадББд БссБдсаадд сББсБддсБа сассБББасБ адсБасБдда БдсадБдддБ аааасададд ссБддасадд дБсБддааБд даББдддасБ аБББаБссБд дадаБддБда БасБаддБас асБсадаадБ Бсаадддсаа ддссасаББд асБдсадаБа ааБссБссад сасадссБас аБдсаасБса дсадсББддс аБсБдаддас БсБдсддБсБ аББасБдБдс аадаададдд аББссасддс БББддБасББ сдаБдБсБдд ддсдсаддда ссасддБсас сдБсБссБса
СЭК1 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69В (8ЕЦ ГО ΝΟ: 29)
ЗУВДМф
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЭК1 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69В (8ЕЦ ГО ΝΟ: 30)
адсБасБдда Бдсад
СЭК2 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69В (8ЕЦ ГО ΝΟ: 31)
τιγροϋσϋτκ утфкркс
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЭК2 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69В (8ЕЦ ГО ΝΟ: 32)
асБаБББаБс сБддадаБдд БдаБасБадд БасасБсад аадББсаадд дс
СЭК3 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69В (8ЕЦ ГО ΝΟ: 33)
ΚΟΙΡΚΣΝΥΕΌ V
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЭК31 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69Э (8ЕЦ ГО ΝΟ: 34)
ададддаББс сасддсБББд дБасББсдаБ дБс
С. Последовательности РКСА157.
(1) Последовательности легкой цепи РКСА157.
Аминокислотная последовательность вариабельной легкой цепи РКСА157 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 35) ϋΙζ)ΜΤζ)3ΡΑ3 ЬЗУЗУСЕТУТ ΙΤΟΚΑ3Ε3ΙΥ ЗУЬАИУООКО СКЗРфЬЬУУИ ТКТЬРЕСУРЗ КЕЗСЗСЗСТф ЕЗЬК1ЫЗЬфР ЕОЕСКУУСфН НУСТРРИТЕС ССТИЬЕ1К
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную легкую цепь РКСА157 (8ЕЦ ГО ΝΟ: 36)
- 30 030226
дасаЕссада ЕдасЕсадЕс ЕссадссЕсс сЕаЕсЕдЕаЕ сЕдЕдддада аасЕдЕсасс аЕЕасаЕдЕс дадсаадЕда дадйаШас адЕЕаЕЕЕад саЕддЕаЕса дсадааасад ддааааЕсЕс сЕсадсЕссЕ ддЕсЕаЕааЕ асааааассЕ Еассададдд ЕдЕдссаЕса аддЕЕсадЕд дсадЕддаЕс аддсасасад ЕЕЕЕсЕсЕда адаЕсаасад ссЕдсадссЕ даадаННд ддадаЕаЕЕа сЕдЕсаасаЕ саЕЕаЕддЕа сЕссЕссдЕд дасдЕЕсддЕ ддаддсасса ассЕддаааЕ сааа
СЭК] вариабельной легкой цепи РКСА157 (8Е0 ГО N0: 37)
ΚΑ5Ε5ΙΥ5ΥΣΑ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СГОК] вариабельной легкой цепи РКСА157 (81 А) ГО N0: 38)
сдадсаадЕд ададЕаЕЕЕа садЕЕаЕЕЕа дса
СГОК2 вариабельной легкой цепи РКСА157 (8Е0 ГО N0: 39):
ΝΤΚΤΙιΡΕ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СГОК2 вариабельной легкой цепи РКСА157 (81 А) ГО N0: 40)
ааЕасааааа ссЕЕассадад
СГОК3, вариабельной легкой цепи РКСА157 (8Е0 ГО N0: 41)
ОННУСТРРИ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СГОК3, вариабельной легкой цепи РКСА157 (81 А) ГО N0: 42)
саасаЕсаЕЕ аЕддЕасЕсс ЕссдЕдд
(2) Последовательности тяжелой цепи РКСА157.
Аминокислотная последовательность вариабельной тяжелой цепи РКСА157 (8Е0 ГО N0: 43)
ЕУ<2<2УЕ5ССР ЬУКРССЗЬКЬ 5САА5СЕТЕ5 5УСМ5ИУК<2Т РРККЬЕИУАТ ΙΝ5005ΝΤΥΥ РР5ЬКСКЕТ1 ΕΚϋΝΑΚΝΤΈΥ Ь<2МК5ЬК5ЕР ΤΑΜΥΥΟΑΚΗϋ ΟΟΑΜΡΥΝΟΟΟ ТЗУТУЗЗ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную тяжелую цепь РКСА157 (8Е0 ГО N0: 44)
даддЕдсадс аддЕддадЕс ддддддадас ЕЕадЕдаадс сЕддадддЕс ссЕдааасЕс ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ сасЕЕЕсадЕ ЕссЕаЕддса ЕдЕсЕЕдддЕ ЕсдссадасЕ ссадасаада ддсЕддадЕд ддЕсдсаасс аЕЕааЕадЕд дЕддаадЕаа сассЕасЕаЕ ссадасадЕЕ Едааддддсд аЕЕсассаЕс Ессададаса аЕдссаадаа сасссЕЕЕас сЕдсаааЕдс дсадЕсЕдаа дЕсЕдаддас асадссаЕдЕ аЕЕасЕдЕдс аадасаЕдас дддддадсЕа ЕддасЕасЕд дддЕсаадда ассЕсадЕса ссдЕсЕссЕс а
СОК! вариабельной тяжелой цепи РКСА157 (8Е0 ГО N0: 45)
3Υ0Μ3
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СОШ вариабельной тяжелой цепи РКСА157 (81 А) ГО N0: 46)
ЕссЕаЕддса ЕдЕсЕ
СГОК2 вариабельной тяжелой цепи РКСА157 (8Е0 ГО N0: 47)
νΑΤΙΝ5005Ν ΤΥΥΡϋ3ΤιΚ(3
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СГОК2 вариабельной тяжелой цепи РКСА157 (81 А) ГО N0: 48)
дЕсдсаасса ЕЕааЕадЕдд ЕддаадЕаас ассЕасЕаЕс садасадЕЕЕ даадддд
СГОК3, вариабельной тяжелой цепи РКСА157 (8Е0 ГО N0: 49)
ΗϋΟΟΑΜϋΥ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СГОК3, вариабельной тяжелой цепи РКСА157 (81 А) ГО N0: 50)
саЕдасдддд дадсЕаЕдда сЕас
Ό. Антитела В7-Н3 с перестроенными Рс-доменами.
В традиционной иммунной функции взаимодействие комплексов антитело-антиген с клетками иммунной системы приводит к широкому спектру реакций, варьирующих от эффекторный функций, таких как антителозависимая цитотоксичность, дегрануляция тучных клеток и фагоцитоз, до иммуномодуляторных сигналов, таких как регуляция пролиферации лимфоцитов и секреции антител. Все эти взаимодействия инициируются посредством связывания Рс-домена антител или иммунных комплексов со специализированными рецепторами клеточной поверхности на гематопоэтических клетках. Многообразие клеточных реакций, запускаемых антителами и иммунными комплексами, является результатом структурной гетерогенности трех Рс-рецепторов: РсγКI (СЭ64), РсγКII (СГО32) и РсγКIII (СГО16). РсγКI (СЭ64),
- 31 030226
РсуКПА (СЭ32А) и РсуКШ (СЭ16) являются активирующими (т.е. усиливающими иммунную систему) рецепторами; РсуКПВ (СЭ32В) является ингибирующим (т.е. ослабляющим иммунную систему) рецептором. Аминокислотная последовательность Рс-области 1дО1 показана ниже (как 8Ер ГО NО: 51. пронумеровано согласно КаЬа! е! а1.. 8ециепсе оР Рго1еш5 οΓ 1ттипо1о§1са1 ИИегеП. 51Ь Е4. РиЪНс Неа№ 8егуюе. ΝΗ. МЭ (1991). нарочно включенная в данный документ ссылкой и называемая далее "КаЬа! Еи"):
8ЕО ГО ^: 51
РАРЕЬЬООРЗ 230 νΕΣΕΡΡΚΡΚϋ 240 ТЬМ15КТРЕУ 250 Τθνννϋν5ΗΕ 260 ϋΡΕνΚΕΝΪίΥν 270
ΏΟνΕνΗΝΑΚΤ 280 ΚΡΚΕΕ0ΥΝ5Τ 290 УКУУЗУЬТУЬ 300 ΗΟϋΐΛΓΕΝΟΚΕΥ 310 КСКУЗЫКАЬР 320
ΑΡΙΕΚΤΙ5ΚΑ 330 ΚΟΟΡΚΕΡςνΥ 340 ТЬРРЗКЕЕМТ 350 КЫОУЗЬТСЬУ 360 ΚΟΕΥΡ5ϋΙΑν 370
ΕΐϊΕ5ΝΟζ)ΡΕΝ 380 ΝΥΚΤΤΡΡνΣϋ 390 5ΟΟ5ΕΕΣΥ5Κ 400 ЬТУОК5К№212 410 оыуезсзумн 420
ΕΑΣΗΝΗΥΤζ)Κ 430 440 ЗЬЗЬЗРОК
Остатки 230-341 представляют собой СН2 область Рс. Остатки 342-447 представляют собой СН3 область Рс.
Настоящее изобретение включает антитела. которые специфично связываются с В7-Н3. которые включают вариантную Рс-область с одной или несколькими аминокислотными модификациями (например. заменами. делениями. вставками) в одной или нескольких частях. при этом модификации повышают аффинность и авидность вариантной Рс-области к РсуК (включая активирующие и ингибирующие РсуК). В некоторых вариантах осуществления указанные одна или несколько аминокислотных модификаций повышают аффинность вариантной Рс-области к РсуКША и/или РсуКПА. В другом варианте осуществления вариантная Рс-область дополнительно специфично связывает РсуКПВ с более низкой аффинностью. чем это делает Рс-область сравнимого исходного антитела (т.е. антитела с такой же аминокислотной последовательностью. как и антитело настоящего изобретения. за исключением одной или нескольких аминокислотных модификаций в Рс-области). В некоторых вариантах осуществления такие модификации повышают аффинность вариантного Рс-области к РсуКША и/или РсуКПА и также усиливают аффинность вариантной Рс-области к РсуКПВ по сравнению с исходным антителом. В других вариантах осуществления указанная одна или несколько аминокислотных модификаций повышают аффинность вариантной Рс-области к РсуКША и/или РсуКПА. но не изменяет аффинность вариантных Рс-областей к РсуКПВ по сравнению с Рс-областью исходного антитела. В другом варианте осуществления указанная одна или несколько аминокислотных модификаций усиливают аффинность вариантной Рс-области к РсуКША и РсуКПА. но уменьшают аффинность к РсуКПВ по сравнению с исходным антителом. Повышенная аффинность и/или авидность приводит в результате к детектируемому связыванию с РсуК или РсуК-связанной активности в клетках. которые экспрессируют низкие уровни РсуК. в то время как активность связывания исходной молекулы (без модифицированной Рс-области) не может детектироваться в клетках. В других вариантах осуществления модифицированная молекула проявляет детектируемое связывание в клетках. которые экспрессируют целевые антигены. не относящиеся к рецептору РсуК. с плотностью 30000-20000 молекул/клетку. с плотностью 20000-10000 молекул/клетку. с плотностью 10000-5000 молекул/клетку. с плотностью 5000-1000 молекул/клетку. с плотностью 1000-200 молекул/клетку или с плотностью 200 молекул/клетку или менее (но по меньшей мере 10. 50. 100 или 150 молекул/клетку).
В другом варианте осуществления указанная одна или несколько модификаций в отношении аминокислот Рс-области уменьшают аффинность и авидность антитела к одному или нескольких РсуК рецепторам. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает антитела. содержащие вариантную Рс-область. где указанная вариантная Рс-область содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию по сравнению с Рс-областью дикого типа. при этом вариантная Рсобласть связывает только один РсуК. где указанный РсуК представляет собой РсуКША. В другом конкретном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает антитела. содержащие вариантную Рс-область. где указанная вариантная Рс-область содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию по сравнению с Рс-областью дикого типа. при этом вариантная Рс-область связывает только один РсуК. где указанный РсуК представляет собой РсуКПА.
Предпочтительно связывающие свойства молекул настоящего изобретения характеризуют с помощью функциональных ίη νότο анализов для определения одной или нескольких функций эффекторных клеток. опосредованных РсуК (см. раздел 5.2.7). Аффинности и связывающие свойства молекул. например антител. настоящего изобретения к РсуК можно определить с помощью ίη νίΐτο анализов (биохимических или иммунологических анализов). известных в области техники для определения антителоантиген или Рс-РсуК взаимодействий. т.е. специфичного связывания антигена с антителом или специ- 32 030226
фичного связывания Рс-области с РсуК соответственно, включая, но без ограничений, ИФА анализ, анализ на основе поверхностного плазмонного резонанса, иммунопреципитационные анализы. В наиболее предпочтительных вариантах осуществления молекулы настоящего изобретения имеют связывающие свойства в моделях ш νί\Ό (таких как, например, описываемые и раскрываемые в данном документе), подобные таковым в анализах ш νίΐΐΌ. Тем не менее, настоящее изобретение не исключает молекулы настоящего изобретения, которые не проявляют требуемый фенотип в анализах ш уНго, но проявляют требуемый фенотип 1п νί\Ό.
В некоторых вариантах осуществления молекулы настоящего изобретения, содержащие вариантную Рс-область, включают по меньшей мере одну аминокислотную модификацию (например, обладающие 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более аминокислотными модификациями) в СН3-домене Рс-области, который определяется исходя из аминокислот 342-447. В других вариантах осуществления молекулы настоящего изобретения, содержащие вариантную Рс-область, включают по меньшей мере одну аминокислотную модификацию (например, обладающие 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более аминокислотными модификациями) в СН2-домене Рс-области, который определяется исходя из аминокислот 231-341. В некоторых вариантах осуществления молекулы настоящего изобретения включают по меньшей мере две аминокислотные модификации (например, обладающие 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более аминокислотными модификациями), где по меньшей мере одна такая модификация находится в СН3-области и по меньшей мере другая такая модификация находится в СН2-области. Настоящее изобретение дополнительно охватывает аминокислотную модификацию в шарнирной области. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает аминокислотную модификацию в СН1-домене Рс-области, который определяется исходя из аминокислот 216-230.
В конкретных предпочтительных вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает молекулы, содержащие вариантную Рс-область, где указанный вариант придает или имеет повышенную активность ΑΩί'.'ί'.' и/или повышенное связывание с Рс/ΡΙΙΑ (ί'.'Ω32ΑΕ измеряемые с помощью способов, известных специалисту в данной области, и приведенные в данном документе в качестве примера. Анализы ΑΩ", применяемые в соответствии со способами настоящего изобретения, могут быть ΝΚзависимыми или макрофагзависимыми.
В конкретных предпочтительных вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает молекулы, содержащие вариантную Рс-область, где указанный вариант придает или имеет повышенную активность ΑΩ" и/или повышенное связывание с Рсу^Л^ (ί'.'Ω16ΑΕ измеряемые с помощью способов, известных специалисту в данной области, и приведенные в данном документе в качестве примера. Анализы ΑΩ", применяемые в соответствии со способами настоящего изобретения, могут быть ΝΚзависимыми или макрофагзависимыми.
Рс-варианты настоящего изобретения можно совмещать с другими Рс-модификациями, такими как раскрытые в патентах США №№ 7632497; 7521542; 7425619; 7416727; 7371826; 7355008; 7335742; 7332581; 7183387; 7122637 и 6737056; в РСТ публикациях №№ АО 2008/105886; АО 2008/002933; АО 2007/021841; АО 2007/106707; АО 06/088494; АО 05/115452; АО 05/110474; АО 04/1032269 и в АО 04/063351; и в Рге§1а, Ь.О. е! а1. (2002) "Епдшеегшд Τке^ареиί^с апНЬоФек Рог йпргоуеб Гипскоп", ΒΟΗ^ιη. Зос. Τππίδ. 30(4):487-490; ЗЫеМк, Κ.Ω. е! а1. (2002) "Ьаск оГГисохе оп китап 1дО1 Ν-кпкек окдохасскапке ипргоуех Ьшкшд !о китап Рсдатта ΚΙΙΙ апк апкЬоку-керепкеп! се11и1аг !охюку", 1. ΒΟΕ Скет. 26; 277(30):26733-26740 и ЗЫе1Й8, Κ.Ω. е! а1. (2001) "Шдк ге8о1икоп тарршд оГ !ке Ьшкшд 8ке оп китап ЦО1 Гог Рс датта ΚΙ, Рс датта ΚΙΙ, Рс датта ΚΙΙΙ, апк РсРп апк кеыдп оГ ЦО1 уапаШх \\Цк птргоуек Ьшкшд !о !ке Рс датта Κ", 1. ΒΟΕ Скет. 276(9):6591-6604). Настоящее изобретение охватывает совмещение Рсварианта настоящего изобретения с другими Рс-модификациями для обеспечения модифицированного антитела аддитивными, синергичными или новыми свойствами. Предпочтительно Рс-варианты настоящего изобретения усиливают фенотип модификации, с которой они совмещаются. Например, если Рсвариант настоящего изобретения совмещают с мутантом, известным как связывающий Рсу^Л^ с более высокой аффинностью, чем сравнимая Рс-область дикого типа; то совмещение с мутантом настоящего изобретения в результате дает более кратное усиление ΡсγΚШΑ-аффинности.
Настоящее изобретение охватывает антитела, специфично связывающиеся с В7-Н3, которые включают вариантную Рс-область, где вариантная Рс-область содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию (например, обладающие 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более аминокислотными модификациями) по сравнению с Рс-областью дикого типа, так что молекула имеет усиленную эффекторную функцию по сравнению с молекулой, включающей Рс-область дикого типа, при условии, что вариантная Рс-область не имеет, или она не является единственной, замену в любом одном или нескольких из положений 243, 255, 256, 258, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 320, 322, 326, 329, 330, 332, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 339, 340, 359, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438, 439. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает такие антитела, содержащие вариантную Рс-область, где вариантная Рсобласть содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию (например, обладающие 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более аминокислотными модификациями) по сравнению с Рс-областью дикого типа,
- 33 030226
так что молекула связывает РсуК с измененной аффинностью по сравнению с молекулой, содержащей Рс-область дикого типа, при условии, что вариантная Рс-область не имеет, или она не является единственной, замену в любом одном или нескольких из положений 243, 255, 258, 267, 269, 270, 276, 278, 280, 283, 285, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 300, 303, 305, 307, 309, 320, 322, 329, 332, 331, 337, 338, 340, 373, 376, 416, 419, 434, 435, 437, 438, 439, а также не имеет аланин в любом из положений 256, 290, 298, 312, 326, 333, 334, 359, 360 или 430; аспарагин в положении 268; глутамин в положении 272; глутамин, серин или аспарагиновую кислоту в положении 286; серин в положении 290; метионин в положении 301; метионин, глутамин, глутаминовую кислоту или аргинин в положении 320; глутаминовую кислоту в положении 322; аспарагин, серин, глутаминовую кислоту или аспарагиновую кислоту в положении 326; лизин в положении 330; глутамин в положении 334; глутаминовую кислоту в положении 334; метионин в положении 334; гистидин в положении 334; валин в положении 334; лейцин в положении 334; глутамин в положении 335; лизин в положении 335 или треонин в положении 339.
Настоящее изобретение также охватывает антитела, специфично связывающиеся с В7-Н3, которые включают вариантную Рс-область, причем вариантная Рс-область, включающаяся в такие антитела, включают вариантную Рс-область, где вариантная Рс-область не имеет, или она не является единственной, замену в любом одном или нескольких из положений 268, 269, 270, 272, 276, 278, 283, 285, 286, 289, 292, 293, 301, 303, 305, 307, 309, 320, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 или 439, а также не имеет гистидин, глутамин или тирозин в положении 280; серин, глицин, треонин или тирозин в положении 290, аспарагин в положении 294, лизин в положении 295; пролин в положении 296; пролин, аспарагин, аспарагиновую кислоту или валин в положении 298 или лейцин или изолейцин в положении 300. В другом варианте осуществления настоящее изобретение охватывает такие антитела, содержащие вариантную Рс-область, где вариантная Рс-область содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию по сравнению с Рс-областью дикого типа, так что молекула связывает РсуК со сниженной аффинностью по сравнению с молекулой, содержащей Рс-область дикого типа, при условии, что вариантная Рс-область не имеет, или она не является единственной, замену в любом одном или нескольких из положений 243, 252, 254, 265, 268, 269, 270, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 или 439. В еще одном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает такие антитела, содержащие вариантную Рс-область, где вариантная Рс-область содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию по сравнению с Рс-областью дикого типа, так что молекула связывает РсуК с усиленной аффинностью по сравнению с молекулой, содержащей Рс-область дикого типа, при условии, что вариантная Рс-область не имеет, или она не является единственной, замену в любом одном или нескольких из положений 280, 283, 285, 286, 290, 294, 295, 298, 300, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 331, 333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 или 430.
Настоящее изобретение также охватывает антитела, специфично связывающиеся с В7-Н3, которые включают вариантную Рс-область, где вариантная Рс-область не включает, или не она является единственной, замену в любом одном или нескольких из положений 330, 243, 247, 298, 241, 240, 244, 263, 262, 235, 269 или 328, а также не имеет лейцин в положении 243, аспарагин в положении 298, лейцин в положении 241 и изолейцин или аланин в положении 240, гистидин в положении 244, валин в положении 330 или изолейцин в положении 328.
Настоящее изобретение, в частности, охватывает антитела, специфично связывающиеся с В7-Н3, которые включают вариантную Рс-область с усиленной эффекторной функцией и/или измененными аффиностями в отношении активирующих и/или ингибирующих рецепторов, где вариантная Рс-область включает: (а) любые 1, 2, 3, 4, 5 или 6 из следующих замен: 8239Ό, 8298А, А330Ь, 1332Е, Е333А или К334А; или (Ь) любую из комбинаций замен: (1) 8298А, Е333А и К334А; (2) 8239Ό и 1332Е; или (3) 8239Ό, А330Ь и 1332Е.
Настоящее изобретение, в частности, охватывает антитела, специфично связывающиеся с В7-Н3, которые включают вариантную Рс-область с усиленной эффекторной функцией и/или измененными аффинностями к активирующим и/или ингибирующим рецепторам, где вариантная Рс-область содержит замену:
(1) в положении 288 аспарагином, в положении 330 серином и в положении 396 лейцином;
(2) в положении 334 глутаминовой кислотой, в положении 359 аспарагином и в положении 366 серином;
(3) в положении 316 аспарагиновой кислотой, в положении 378 валином и в положении 399 глутаминовой кислотой;
(4) в положении 247 лейцином и замену в положении 421 лизином;
(5) в положении 392 треонином и в положении 396 лейцином;
(6) в положении 221 глутаминовой кислотой, в положении 270 глутаминовой кислотой, в положении 308 аланином, в положении 311 гистидином, в положении 396 лейцином и в положении 402 аспарагиновой кислотой;
(7) в положении 419 гистидином и замену в положении 396 лейцином;
- 34 030226
(8) в положении 240 аланином и в положении 396 лейцином;
(9) в положении 410 гистидином и в положении 396 лейцином;
(10) в положении 243 лейцином, в положении 305 изолейцином, в положении 378 аспарагиновой кислотой, в положении 404 серином и в положении 396 лейцином;
(11) в положении 255 изолейцином и в положении 396 лейцином;
(12) в положении 370 глутаминовой кислотой и в положении 396 лейцином;
(13) в положении 270 глутаминовой кислотой; или
(14) любую комбинацию из вышеперечисленных (1)-(12) замен.
В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает антитело, специфично связывающее В7-Н3, которое содержит вариантную Рс-область, включающую замену Р243Ь, К292Р и У300Ь. В дополнительном конкретном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает антитело, специфично связывающее В7-Н3, которое содержит вариантную Рс-область, включающую замену Ь235У, Р243Ь, К292Р, У300Ь и Р396Ь. В еще одном дополнительном конкретном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает антитело, специфично связывающее В7-Н3, которое содержит вариантную Рс-область, включающую замену Р243Ь, К292Р, У300Ь, У305I и Р396Ь.
В дополнительном конкретном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает антитело, специфично связывающее В7-Н3, которое содержит вариантную Рс-область, включающую замену в положении 396 лейцином, в положении 270 глутаминовой кислотой и в положении 243 лейцином. В другом конкретном варианте осуществления молекула дополнительно содержит одну или несколько аминокислотных модификаций, таких как раскрываемые в данном документе.
Настоящее изобретение, в частности, охватывает антитела, специфично связывающиеся с В7-Н3, которые содержат вариантную Рс-область с усиленной эффекторной функцией и/или измененными аффинностями к активирующим или ингибирующим рецепторам, которые имеют аминокислотную модификацию в одном или нескольких из следующих положений: 119, 125, 132, 133, 141, 142, 147, 149, 162, 166, 185, 192, 202, 205, 210, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 221, 222, 223, 224, 225, 227, 229, 231, 232, 233,
235, 240, 241, 242, 243, 244, 246, 247, 248, 250, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 258, 261, 262, 263, 268, 269,
270, 272, 274, 275, 276, 279, 280, 281, 282, 284, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 295, 298, 301, 303, 304,
305, 306, 307, 308, 309, 310, 311, 312, 313, 315, 316, 317, 318, 319, 320, 323, 326, 327, 328, 330, 333, 334,
335, 337, 339, 340, 343, 344, 345, 347, 348, 352, 353, 354, 355, 358, 359, 360, 361, 362, 365, 366, 367, 369,
370, 371, 372, 375, 377, 378, 379, 380, 381, 382, 383, 384, 385, 386, 387, 388, 389, 390, 392, 393, 394, 395,
396, 397, 398, 399, 400, 401, 402, 404, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 414, 415, 416, 417, 419, 420, 421,
422, 423, 424, 427, 428, 431, 433, 435, 436, 438, 440, 441, 442, 443, 446 или 447. Предпочтительно такие мутации дают в результате молекулы, которые были наделены опосредуемой эффекторной клеткой функцией и, необязательно, имеют измененную аффинность к РсуК, определяемую с помощью способов, раскрытых и приведенных в качестве примера в данном документе и известных специалисту в данной области.
Настоящее изобретение, в частности, охватывает антитела, специфично связывающиеся с В7-Н3, которые включают вариантную Рс-область с измененной эффекторной функцией и/или измененными аффинностями к активирующим или ингибирующим рецепторам, которая имеет:
(I) аминокислотную модификацию в одном или нескольких из следующих положений: 235, 240, 241, 243, 244, 247, 262, 263, 269, 298, 328 или 330 и более предпочтительно одну или несколько из следующих модификаций: У240А, У240Е Р241Ь, Р243Ь, Р244Н, §298^ 0328!, А330У; где такие антитела проявляют измененную эффекторную функцию по сравнению с антителами с Рс-областью дикого типа, в которой нет такой модификации;
(II) аминокислотную модификацию в одном или нескольких из следующих положений: 268, 269, 270, 272, 276, 278, 283, 285, 286, 289, 292, 293, 301, 303, 305, 307, 309, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 или 439 и более предпочтительно одну или несколько из следующих модификаций: Э280Н, Э280Ц, Ό280Υ, К290С, К2908, К290Т, Κ290Υ, Е294Н Ц295К, У296Р, 8298Э, §298^ 8298Р, 8298У, Υ300φ Υ300Ε; где такие антитела проявляют измененную эффекторную функцию по сравнению с антителами с Рс-областью дикого типа, в которой нет такой модификации;
(III) аминокислотную модификацию в одном или нескольких из следующих положений: 255, 256, 258, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 320, 322, 326, 329, 330, 332, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 339, 340, 359, 360, 373, 376, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438, 439 и, более предпочтительно одну или несколько из следующих модификаций: Т256А, Н268Н Е272Ц, N2860, N2869, N2868, К290А, К290§, §298А, К301М, Э312А, К320Е, К320М, К3209, К320К, К322Е, К326А, К326Э, К326Е, К326Н К3268, А330К, А339Т, Е333А, К334А, К334Е, К334Н, К334Ь, К334М, К3349, К334У, Т335К, Т3359, Т359А, К360А, Е430А; где такие антитела проявляют измененную эффекторную функцию по сравнению с антителами с Рс-областью дикого типа, в которой нет такой модификации;
аминокислотную модификацию в одном или нескольких из следующих положений: 252, 254, 265, 268, 269, 270, 278, 289, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 300, 301, 303, 322, 324, 327, 329, 333, 335, 338, 340, 373, 376, 382, 388, 389, 414, 416, 419, 434, 435, 437, 438 или 439; где такие антитела проявляют сни- 35 030226
женную эффекторную функцию по сравнению с антителами с Рс-областью дикого типа, в которой нет такой модификации;
(ν) аминокислотную модификацию в одном или нескольких из следующих положений: 280, 283, 285, 286, 290, 294, 295, 298, 300, 301, 305, 307, 309, 312, 315, 331, 333, 334, 337, 340, 360, 378, 398 или 430; где такие антитела проявляют усиленную эффекторную функцию по сравнению с антителами с Рсобластью дикого типа, в которой нет такой модификации; или
(νΙ) аминокислотную модификацию в одном или нескольких из следующих положений: К255А, Т256А, Е258А, 8267А, Н268А, Μ68Ν, Е272А, НЗЖР Ю76А, П280А, Е283А, Н285А, Ю86А, Ν286Ό, Ν286Ρ, Ν2868, К290А, К2908, К301М, К320Е, К320М, К320Р, К320К, К322Е, К326А, Κ326Ό, К326Е, К3268, А330К, Р331А, Т335О, 8337А, Е430А; где такие антитела проявляют усиленную эффекторную функцию по сравнению с антителами с Рс-областью дикого типа, в которой нет такой модификации.
В других вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает применение любого Рсварианта, известного в уровне техники, такого как раскрытые в .ГеЛЛепк, Β.Ρ е! а1. (2002) "йИегасбоп 8йек Оп Нитап ЩС-Рс Рог РсдаттаК: СиггеШ Мойе1к", Iттиηο1. Ьей. 82:57-65; Ргек!а, Ь.С. е! а1. (2002) "ЕпдЕ пеегшд ТИегареийс АпйЬой1ек Рог Iтр^ονей Рипсйоп," БюсИет. 8ос. Тгапк. 30:487-90; Микодхе, Е.Е. е! а1. (2001) "Епдтеегей АпйЬоФек \ЙИ Шсгеакей Асйуйу То Кесгий Сотр1етеп!", Р ^типоР 166:2571-75; 8Ые1йк, К.Ь. е! а1. (2001) "ШдИ Кеко1ийоп Марртд ОЛ ТИе Етйтд 8йе Оп Нитап !дС1 Рог Рс Сатта ΚΙ, Рс Сатта КП, Рс Сатта ΚΙΙΙ, Апй РсКп Апй Оейдп ОЛ !дС1 Vа^^аη!к \йй Iтр^ονей Етйтд То ТИе Рс датта К", Р Βω! СИет. 276:6591-6604; Ии8од1е, Е.Е. е! а1. (2000) "Марртд ОЛ ТИе С1ц ΒίΜί^ 8йе Оп Кйихап, А СЫтепс АпйЬойу \йй А Нитап ЩС Рс", Р Iттиηο1. 164:4178-84; Кеййу, М.Р. е! а1. (2000),"ЕНттайоп ОЛ Рс Кесер!ог-Оерепйеп! ЕГГес1ог Рипсйопк ОЛ А Мой|йей ^С4 Мопос1опа1 АпйЬойу То Нитап СЭ4", Р Iттиηο1. 164:1925-1933; Хи, Ό. е! а1. (2000) Лп Мйо СИагаШеп/абоп оЛ Ргуе Нитапί/ей ОКТ3 ЕЛЛес!ог Рипсйоп Vа^^аη! АпйЬоФек", Се11. Iттиηο1. 200:16-26; Агтоиг, К.Ь. е! а1. (1999) "КесотЬшап! Иитап ЩС Мо1еси1ек Ьаскшд Рсдатта КесерЮг Ι ЕтШпд Апй Мопосу!е Тпддеппд АсЙуШек", Еиг. Р ^типок 29:2613-24; .ГеЛЛейк, К. е! а1. (1996) "Мойи1айоп ОЛ Рс(Сатта)К Апй Нитап Сотр1етеШ Асйуайоп Βу !дС3-Соге ОПдокассИапйе ИетсРот", Iттиηο1. Ьей. 54:101-04; Ьипй, к е! а1. (1996) "Ми1йр1е бйегасбопк ОЛ ЩС \ИИ Ι!κ Соге ОПдокассИапйе Сап Мойи1а!е Кесодпйюп Βу Сотр1етеШ Апй Нитап Рс Сатта РесерЮг Ι Апй ШЛепсе ТИе 8уп1Иек1К ОЛ Ι!κ ОПдокассИапйе СИатк", Р Iттиηο1. 157:49634969; Ни!сЫпк е! а1. (1995) "Iтр^ονей Β^οй^κί^^Ьийοη, Титог Тагдейпд, Апй Рейпсей ЕптиподешсПу П Мюе \ИИ А Сатта 4 Vа^^аη! оЛ Сатра!И-1Н", Ргос. №й1. Асай. 8ск (и.8.А.) 92:11980-84; .ГеЛЛейк, К. е! а1. (1995) "Кесодпйюп 8йек Оп Нитап ЩС Рог Рс Сатта РесерЮгк: ТИе Ко1е ОЛ С1усоку1айоп," Iттиηο1. Ьей. 44:111-17; Ьипй, Р е! а1. (1995) "ОПдокассИапйе-РгоГет Пйегасбопк П ЩС Сап Мойи1а!е Кесодпйюп Βу Рс Сатта Кесер!огк", РΑ8ЕΒ Р 9:115-19; А1едге, М.Ь. е! а1. (1994) "А №п-АсЙуайпд "Нитат/ей", Ап11-СЭ3 Мопос1опа1 АпйЬойу Ке!атк бппшпокирргеккйе Ргорегйек Ш V^νο," Тгапкр1апГайоп 57:15371543; Ьипй е! а1. (1992) "Ми1йр1е Етйтд 8йек Оп ТИе СН2 Поташ ОЛ ЩС Рог Мойке Рс Сатта КП", Мо1. ^типок 29:53-59; Ьипй е! а1. (1991) "Нитап Рс Сатта ΡΙ Апй Рс Сатта КП !п1егас1 \ЙИ ΌίκΠικΙ ΒιιΙ Оνе^1арр^ηд 8йек Оп Нитап IдС", Р Iттиηο1. 147:2657-2662; Эппсат А.К. е! а1. (1988) "косаП/абоп ОЛ ТИе Етйтд 8йе Рог ТИе Нитап Н1дИ-АЛйпйу Рс Кесер!ог Оп IдС", №йиге 332:563-564; патентах США №№ 5624821; 5885573; 6194551; 7276586 и 7317091; а также РСТ публикациях \О 00/42072 и \О 99/58572.
Настоящее изобретение охватывает молекулы, содержащие вариантные Рс-области, состоящие из или содержащие любую из мутаций, перечисленных ниже в табл. 1.
- 36 030226
Таблица 1
Иллюстративные модификации Рс-области
Замены одного участка
81321 Е24ПУ ϋ265Ν ϋ280Ο Υ296Τ ϋ312Α Б3281 К334Е
А162У Γ241Υ ϋ265φ ϋ280Υ Ν297ϋ ХУ313Е Б328К К334Н
3219Υ Γ241Υ ϋ265Τ 028 Ю Ν297Ε N3151 Б328М Κ334Ι
Κ222Ν Γ243ϋ О265У 0281Κ N2971 Ε318Κ Ε328Ν К334Б
Н224Б Г243Н ϋ265Υ 0281Ρ N2978 Κ320Ε Б328Р К334М
Т2253 Г243Б У266А 0281Υ 3298Α Κ320Μ Б328О Κ334Ν
Р228Е Г243Б У2661 У282М 3298ϋ Κ3200 Б328К К334О
Р228О Г243Ц У266М Ε283Α 3298Ν Κ320Κ Б3283 К334У
Р228К Г243К У266Т У284Е 3298Ν Κ322Ε Б328Т Т335К
Ρ228Υ Г243\У 3267Α У284Б 3298Ν У3231 Б328У Т335О
Р230А Γ243Υ Η268Α ν284Ν 3298Ρ Ν325Α Б328\У Ι336Ε
Р230Е Р244Н Η268Ν У284Т 3298У Ν325ϋ Ε328Υ Ι336Κ
Р230О Р245А ϋ270Ε У284У Τ299Α Ν325Ε АЗ 301 Ι336Υ
Ρ230Υ Р247О Ρ271Α Η285Α Τ299ϋ Ν325Ε АЗЗОК 3337А
А231Е Р247Б Р27Ю Ν286Α Τ299Ε N3250 АЗ ЗОБ А339Т
А231О Р247У Ρ271Ε Ν286ϋ Τ299Ε Ν325Η АЗЗОЗ М352Б
А231К К248М Ρ271Ε N2868 Τ299Ο N3251 АЗЗОУ Т359А
А231Р К255А Ρ271Ο Κ288Ν Τ299Η Ν325Κ АЗЗОУ Τ359Ν
Α231Υ Т256А Ρ271Η Κ290Α Τ299Ι Ν325Ε Р331А К360А
Р232Е Е258А Ρ271Ι Κ290Ο Τ299Κ Ν325Μ Ι332Α Τ366Ν
Р232О У262А Ρ271Κ Κ2903 Т299Б Ν325Ρ Ι332ϋ Т3663
Р232К У262Е Р271Б Κ290Τ Τ299Μ Ν325Κ Ι332Ε Ε372Υ
Ρ232Υ У262Е Ρ271Μ Κ290Υ Τ299Ν N3258 Ι332Ε Ε372Υ
Ε233ϋ У2621 Ρ271Ν Р29Ю Τ299Ρ Ν325Τ 13320 Ι377Ε
Е233О У262Т Р271Ц Ρ291Ε Τ2990 Ν325ν Ι332Η Ι377Ν
Б2341 У263А Ρ271Κ Ρ291Ο Τ299Κ Ν325\ν Ι332Κ У379Б
Б235О У2631 Ρ2713 Ρ291Η Τ2993 Ν325Υ 1332Б У379М
3239ϋ У263М Ρ271Τ Ρ291Ι Т299У Κ326Α Ι332Μ К392К
3239Е У263Т Р271У Ρ2910 Т299ХУ Κ326ϋ Ι332Ν Р396Н
823 9Ν У264А Р27ПУ Ρ291Τ Τ299Υ Κ326Ε Ι332Ρ Р396Б
82390 У264Е Ρ271Υ Κ292Ο Υ300Ι Κ326Ε 13320 Б398У
У240А У264Е Ε272Α К292Б УЗООБ Κ326Ν Ι332Κ 3400Р
У2401 У2641 Е272Ц Ε294Ν Κ301Μ Κ3263 13328 ϋ40ΐν
У240М У264К У2731 0295Κ Κ301Μ Κ326Τ Ι332Τ 84071
У240Т У264Т Е275Б Υ296ϋ УЗ 021 Б328А 1332У Κ414Ν
Е241Е У264\У Е275ХУ Υ296Ε 3304ϋ Б328О 1332\У Е430А
У2411 ϋ265Ε Ε275Υ Υ296Η 3304Η Б328Е Ι332Υ
Е241Б ϋ265Η Ν276Α Υ296Ν 8304Б Б328Е ЕЗЗЗА
Е241К ϋ265Ι ϋ280Α Υ296Ρ 3304Ν Б328О К334А
Е2413 О265Б ϋ280Η Υ2960 3304Τ Б328Н К334Е
Замены двух участков
Ι332Ε АЗ ЗОЕ $?39Ν / 13320 У279Е Ρ3958 Р396Е Р2178
Ι332Ε, Б328О 32390/Ι332ϋ У284А, Е372Б Р396Б, Р2273
Ι332Ε, Б328Е 8239Ц/1332Е Κ288Ν, Κ326Ν Р396Б, У3231
Ι332Ε, Б328Н 32390/Ι332Ν Κ288Ν, АЗЗОЗ Р396Б, У240А
Ι332Ε, Б3281 32390/13320 Κ290Ε, Б142Р Р396Б, Б242Е
Ι332Ε, Б328М У2401, У281М Κ290Ε, Ρ2278 Р396Б, Р244Н
Ι332Ε, Ε328Ν Е241Б, Ε258Ο Κ290Τ, 037Ю Р396Б, Т250А
Ι332Ε, Б328О Е241Е/У2621 Ρ2913, Ρ353Ο Р396Б, К255Б
Ι332Ε, Б328Т Е243Б, Ε318Κ Κ292Ρ, Υ305Ι Р396Б, Ε258ϋ
- 37 030226
Ι332Ε, Ь328У Ε243Ι, У379Б 3298Α/Ι332Ε Р396Б, Η268ϋ
Ι332Ε, N2970 Р243Б / У2641 3298Ν, А381К Р396Б, Η268Ν
Ι332Ε, Ν297Ε К246Т, Υ319Ε 3298Ν, 3407К Р396Б, У3031
Ι332Ε, N2978 К246Т, Р396Н Κ317Ν, Е423-ОЕЕ Р396Б, Κ326Ι
3166Ν, К409К Р247Н, О285Е К326Е, К320Е Р396Б, У305Б
Р2328, 83040 Р247Б, Ι377Ε К326Е, АЗЗОТ Р396Б, Б358Р
8239Ο/Ι332Ο Р247Б, Е389О К326Е, О385Е Р396Б, К370Е
8239ϋ/Ι332Ε Р2473, Р396Е АЗЗОУ, 0419Н Р396Б, 3375С
ΓΉίΊΤΛ / ΤΟΟΊΧΤ охзуи / 133Ζ1Ν ПЭ ЛТ Т ЭПО/Л ΓΖ4- /1^, ТЛ О О 3 Г Г Ί э Э тл гудэчп. ехээе/ ПЭП/ГТ ΙΖΑΠΛ1Μ· УЗ/У1У1
8239Ο/Ι3320 Р247Б, Е406Е Κ334Ν, Κ246Ι Р396Б, Ν384Κ
3239Ε / ϋ265Ν Р247Б, N421К К334Е, К288М Р396Б, К392Т
3239Ε /02650 Б251Р, Е372Е К334Е, К292Б Р396Б, 3400Е
3239Е/ 13320 Б251Р, 84151 К334Е, Ε308ϋ Р396Б, Е410Н
3239Ε/Ι332Ε К255Б, Е318К К334Е, Ε380ϋ Р396Б, (}419Н
3239Ε/Ι332Ν К2550, К326Е Κ334Ν, Р396Б Р396Б, (3419Б
3239Е/ 13320 Е258О, Ν384Κ А339У, 0347Н Р396Б, У427А
3239Ν /13320 У2630, Ε272Ω Κ370Ν, 3440Ν О399Е, 04020
3239Ν / Ι332Ε У2641 / Ι332Ε Т394М, У397М О399Е, М428Б
3239Ν / Ι332Ν Н268О, Ε318ϋ Р396Б, К210М
Замены трех участков
У185М, К292Ц ϋ399Ε Р2173, А378У, 3408К К218К, О28Ю, О385К
3192Τ, М252Ц К301С Р247Б, Ι253Ν, Κ334Ν Р247Б, АЗЗОТ, 84400
У125Б, У2151, 84081 О312Е, Κ327Ν, 13788 Τ355Ν, Р3873, Н435О
К292Б, Τ359Ν, Р396Б Е216О, Е345К, 83751 Р247Б, А431У, 3442Е
Ε275Ι, Κ334Ν, У348М Κ288Ν, АЗЗОЗ, Р396Е А378У, N3901, У4221
ттэ/ют опсст εγώ ι οτζ Г/ЛДЬ, 1\2,ЛЦ ЬЛО1\ ΛΤΏ1/СТЛ ЛОДОЛ/ ΤΛΏΩΩΈ7 VIЫ НОГУ, ТАЫ /ОУ, ЛЛЭОЭТ? ΛΖΏ/ίΩΤ т V 2-02.0', Ь-ΐνυΐ
Κ334Ε, Τ359Ν, Τ3663 N3151, У379М, Т394М У397М, Т411А, 3415Ν
Κ288Ν, АЗЗОЗ, Р396Б Р247Е,А313К,Е388О Τ223Ι, Т2563, Е406Е
Ρ243Ι, У379Б, О420У К301Н, Κ340Ε,ϋ399Ε Κ246Ν, Р396Б, 0419К
А231У, Ο386Η, У412М Κ326Ι, Р396Е, 3408Ν Р217А, Т359А, Р396Б
Ε216Ο,Κ334Κ,3375Ι К210М, Κ261Ν, Р396Е У2151, К290У, Р396Б
Τ335Ν, Ρ3873, Η435Ο АЗЗОУ, О427М, К438К У2630, Е272О, 0419Н
Κ246Ι, 0362Η, Κ370Ε К222Е, У2630, 3298Ν Ν276Υ, Τ393Ν, А417К
Κ334Ε, Ε380Ο, О446У Е233О, Р2473, БЗОбР О270Е, 03160, К4160
У3031, У369Е, М428Б 3219Т, Т225К, О270Е О270Е, К392Т, Р396Б
Κ246Ε, У284М, У308А К292Р, Е243Ц У3051 К255Б, О270Е, Р396Б
Е293У, 0295Ε, Α327Τ У284М, К292Ц Κ370Ν У240А, О270Е, Р396Б
Υ319Ε, Р352Б ,Ρ396Ε О270Е, К370Е, Р396Б 270Е, Р396Ц 0419ЕГО
Κ290Τ, N3901, Р396Б Р247Б, О270Е, N421К 82390, АЗЗОБ, Ι332Ε
N2970, Α330Υ, Ι332Ε Υ296Ο, N2970,1332Ε 82390, Α330Υ, Ι332Ε
N2970, Т299Ц Ι332Ε Υ296Ε, N2970,1332 Е 82390,1332Ε, Α330Ι
N2970, Τ299Ι, Ι332Ε Υ296Η, N2970,1332Ε 82390, N2970,1332Ε
ΛΤΟΩ^ΤΛ ΤΟΩΩΤ Т229С пду/ъ». ± уА-/, илдъ νθΩ£ΛΤ ΧΤΩΩ^ΤΛ Т229С ιζ,^υιι, гу^у / ивдп €Ο^ΩΤΛ €ΩΩΟΛ Т229С
N2970, Т299У, Ι332Ε Υ2960, N2971,1332Ε 82390, У26411,1332Ε
Р243Б, У2621, У264А Υ296Τ, N2970,1332Ε 3239Ε, N2970,1332Ε
Ο265Ε, Ν297Ε, Ι332Ε Р230А, Е233О, Ι332Ε 3239Ε, У2641,1332 Ε
Ω265Υ, Ν297ϋ, Ι332Ε Р244Н, Р245А, Р247У 5239Ν, А330Б, Ι332Ε
У264Е, N2970,1332Ε У2641, Α330Υ, Ι332Ε 3239Ν, Α330Υ, Ι332Ε
У2641, АЗЗОБ, Ι332Ε У2641, 3298А, Ι332Ε 3239(3, У2641,1332Ε
Замены четырех участков
А141У, Н268Е, К288Е, Р2913 | Т2563, У3051, К334Е, N3908
- 38 030226
Ε258ϋ, Т289А, Η310Υ, У407У ϋ280Ε, 8354Ρ, А43Ю, Ε441Ι
К334Е, Τ359Ν, Т3668, О386К Ρ3433, Р353Б, 33751, 8383Ν
К3260, К334Е, Τ359Ν, Т3668 Ε269Κ ,Κ290Ν, 0311Κ, Η433Υ
К288К, Т307А, К344Е, Р396Б Κ290Ε, У369А, Τ393Α, Р396Б
У2731, К326Е, Б3281, Р396Б Κ210Ν, Κ222Ι, Κ320Μ, Р396Б
Р275Б, 0362Н, Ν384Κ, Р396Б 8219Τ, Τ225Κ, ϋ270Ε, Κ360Κ
У282Б, АЗЗОУ, Η433Υ, Т436К Р243Б, 8254Τ, А330У, N36Ю
К255Б, ϋ270Ε,Υ300Ε, Р396Б, Р243Б, ϋ270Ε, Κ392Ν, Р396Б
К255Б, ϋ270Ε, К292О, Р396Б Р243Б, К255Б, ϋ270Ε, Р396Б
У284М, 8298Ν, К334Е, Κ355Υ 8239ϋ, ϋ265Ρ, Ν297ϋ, Ι332Ε
ϋ265Υ, Ν297ϋ, Т299Б, Ι332Ε 8239ϋ, ϋ265Η, Ν297ϋ, Ι332Ε
Ρ241Ε, Ε2430, У262Т, У264Е 8239ϋ, ϋ265Ι, Ν297ϋ, Ι332Ε
Ρ241Ε, Ρ243Κ, У262Е, У264К 8239ϋ, 0265Б, Ν297ϋ, Ι332Ε
Ρ241Ε, Ρ243Υ, У262Т, У264К 8239ϋ, ϋ265Τ, Ν297ϋ, Ι332Ε
Р241Б, Р243Б, У2621, У2641 8239ϋ, О265У, Ν297ϋ, Ι332Ε
Ρ241Κ, Ε2430, У262Т, У264К 8239ϋ, ϋ265Υ, Ν297ϋ, Ι332Ε
Ε241Υ, Ε243Υ, У262А, У264А 8239ϋ, Ν297ϋ, Ι332Ε, Α330Υ
Ρ241Υ, Ρ243Υ, У262Т, У264Т 8239ϋ, Ν297ϋ, Ι332Ε, Κ326Ε
Ν297ϋ, Ι332Ε, 8239ϋ, А330Б 8239ϋ, Ν297ϋ, Ι332Ε, Ε235ϋ
Ν297ϋ, 8298Α, Α330Υ, I 332Ε 8239ϋ, У2641, А330Б, Ι332Ε
8239ϋ, Α330Υ, Ι332Ε, Κ326Ε 8239ϋ, У2641, 8298Α, Ι332Ε
8239ϋ, Α330Υ, Ι332Ε, Κ326Τ 8239Ε, У2641, Α330Υ, 1332 Ε
8239ϋ, Α330Υ, Ι332Ε, Б2341 8239ϋ, Α330Υ, Ι332Ε, У264Т
8239ϋ, Α330Υ, Ι332Ε, Б235О 8239ϋ, Α330Υ, Ι332Ε, Υ266Ι
8239ϋ, Α330Υ, Ι332Ε, Υ240Ι
Замены пяти участков
У284М, 8298Ν, Κ334Ε, К355ХУ. Κ416Τ Κ147Τ, Υ202Μ, Γ275Ι, Κ334Ν, У348М
Ρ2178, У3051,1309Б, Ν390Η, Р396Б Τ335Ν, Κ370Ε, А378У, Τ394Μ, 8424Б
Р243Б, У3051, Α378ϋ, Р396Б, Ε4048 Ρ244Η, Б358М, У379М, Ν384Κ, У397М
Κ222Ν, Τ335Ν, Κ370Ε, А378У, Τ394Μ Ρ244Α, Κ326Ι, С367К, 83751, Κ447Τ
Б235Р, 83040, У3051, У3231, У382М С229У, Α287Τ, У379М, Р396Б, Б443У
Ρ241Ε, Ρ2430, У262Т, У264Е, Ι332Ε Γ241Κ, Γ2430, У262Т, У264К, Ι332Ε
Ρ241Ε, Ρ243Κ, У262Е, У264К, Ι332Ε 8239Ε, Υ264Ι, 8298Α, Α330Υ, Ι332Ε
Ρ741Ε Ε743Υ У767Т λ/764Ρ. Τ337Ε
Замены более пяти участков
ϋ221Ε, ϋ270Ε, У308А, 0311Η, Р396Б, Ο402ϋ
Τ215Ρ, Κ274Ν, Α287Ο, Κ334Ν, Е365У, Р396Б
Ρ241Υ, Ρ243Υ, У262Т, У264Т, Ν297ϋ, Ι332Ε
Ν297ϋ, Τ299Ρ, Ι332Ε, Ν297ϋ, Τ299Η, Ι332Ε
ϋ221Υ, Μ252Ι, АЗЗОО, Α339Τ, Τ359Ν, У4221, Н433Б
8239ϋ, Ν297ϋ, Ι332Ε, Α330Υ, Ε2413, Ε243Η, У262Т, У264Т
Κ133Μ, Ρ149Υ, Κ205Ε, Κ214Ι, Κ218Ε, 3383Ν, Ν384Κ, Τ256Ν, У262Ь
В конкретных вариантах осуществления вариантная Рс-область таких антител к В7-Н3 имеет:
(1) лейцин в положении 247, лизин в положении 421 и глутаминовую кислоту в положении 270;
(2) треонин в положении 392, лейцин в положении 396, глутаминовую кислоту в положении 270 и лейцин в положении 243;
(3) гистидин в положении 419, лейцин в положении 396 и глутаминовую кислоту в положении 270;
(4) гистидин в положении 419, лейцин в положении 396, глутаминовую кислоту в положении 270 и лейцин в положении 243;
(5) аланин в положении 240, лейцин в положении 396 и глутаминовую кислоту в положении 270;
(6) лизин в положении 255 и лейцин в положении 396;
(7) лизин в положении 255, лейцин в положении 396 и глутаминовую кислоту в положении 270;
(8) лизин в положении 255, лейцин в положении 396, глутаминовую кислоту в положении 270 и лизин в положении 300;
(9) лизин в положении 255, лейцин в положении 396, глутаминовую кислоту в положении 270 и глицин в положении 292;
(10) лизин в положении 255, лейцин в положении 396, глутаминовую кислоту в положении 270 и лейцин в положении 243;
(11) глутаминовую кислоту в положении 370, лейцин в положении 396 и глутаминовую кислоту в положении 270;
(12) глутаминовую кислоту в положении 270, аспарагиновую кислоту в положении 316 и глицин в положении 416;
(13) лейцин в положении 243, пролин в положении 292, изолейцин в положении 305 и лейцин в положении 396;
(14) лейцин в положении 243, глутаминовую кислоту в положении 270, аспарагин в положении 392
- 39 030226
и лейцин в положении 396;
(15) лейцин в положении 243, лейцин в положении 255, глутаминовую кислоту в положении 270 и лейцин в положении 396;
(16) глутамин в положении 297 или
(17) любую комбинацию из вышеприведенных (1)-(16) замен.
В некоторых вариантах осуществления молекулы настоящего изобретения дополнительно включают один или несколько участков гликозилирования, таким образом, что один или несколько углеводных фрагментов ковалентно присоединяются к молекуле. Предпочтительно молекулы настоящего изобретения с одним или несколькими участками гликозилирования и/или одной или несколькими модификациями в Рс-области придают или обладают усиленной эффекторной функцией, опосредуемой антителом, например усиленной активностью АОСС по сравнению с исходным антителом. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение дополнительно включает молекулы, включающие одну или несколько модификаций аминокислот, которые, как известно, прямо или опосредованно взаимодействуют с углеводным фрагментом антитела, включая, но без ограничений, аминокислоты в положениях 241, 243, 244, 245, 245, 249, 256, 258, 260, 262, 264, 265, 296, 299 и 301. Аминокислоты, которые прямо или опосредованно взаимодействуют с углеводным фрагментом антитела, известны из уровня техники, см., например,, 1еГГеп5 е! а1., 1995 1штипо1о§у Ьейетк, 44: 111-7, включенный в данный документ ссылкой в полном объеме.
В другом варианте осуществления настоящее изобретение охватывает молекулы, которые были модифицированы введением одного или нескольких участков гликозилирования в один или несколько участков молекул, предпочтительно без изменения функциональности молекул, например связывающей активности с целевым антигеном или РсуК. Участки гликозилирования можно ввести в вариабельную и/или константую область молекул настоящего изобретения. Применяемые в данном документе "участки гликозилирования" включают любую специфичную аминокислотную последовательность в антителе, к которой будет специфично и ковалентно присоединяться олигосахарид (т.е. углеводы, содержащие два или более простых сахаров, соединенных вместе). Олигосахаридные боковые цепи как правило присоединены к скелету антитела посредством либо либо О-связей. ^связанное гликозилирование относится к прикреплению олигосахаридного фрагмента к боковой цепи аспарагинового остатка. О-связанное гликозилирование относится к прикреплению олигосахаридного фрагмента к гидроксиаминокислоте, например серину, треонину. Молекулы настоящего изобретения могут включать один или несколько участков гликозилирования, в том числе участки ^связанного и О-связанного гликозилирования. В соответствии с данным изобретением можно применять любой участок гликозилирования для N связанного и О-связанного гликозилирования, известный в области техники. Иллюстративный N связанный участок гликозилирования, пригодный в соответствии со способами настоящего изобретения, представляет собой аминокислотную последовательность Акп-Х-ТЬт/Зет, где X может быть любой аминокислотой, а ТЬг/Зег означает треонин или серин. Такой участок или участки можно ввести в молекулу настоящего изобретения с помощью способов, хорошо известных в области техники, к которой принадлежит данное изобретение (см., например, Ш У1ТК0 МиТАСЬХЬЗ1З, КЬС0МВ1ИАет ЭХА: А ЗН0КТ С0ИКЗЬ, Ι.Ό. Аа1коп, е! а1. А.Н. Ргеетап апб Сотрапу, №ν Уогк, 1983, сЬар!ег 8, рр. 106-116, включенный в данный документ ссылкой в полном объеме. Иллюстративный способ введения участка гликозилирования в молекулу настоящего изобретения может включать модифицирование или мутирование аминокислотной последовательности молекулы таким образом, чтобы получить требуемую последовательность Акп-Х-Тйт/Зет.
В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает способы модификации углеводной части молекулы настоящего изобретения путем добавления или удаления участка гликозилирования. Способы модификации углеводной части антител хорошо известны в уровне техники и охватываются объемом настоящего изобретения, см., например, патент США № 6218149; ЕР 0359096 В1; публикацию заявки США № 2002/0028486; XV 0 03/035835; публикацию заявки США № 2003/0115614; патент США № 6218149; патент США № 6472511; все из которых включены в данный документ ссылкой в их полном объеме. В других вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает способы модификации углеводной части молекулы настоящего изобретения путем удаления одного или нескольких эндогенных углеводных фрагментов молекулы. В конкретном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает сдвиг участка гликозилирования Рс-области антитела путем модификации положений смежных с 297. В конкретном варианте осуществления изобретение охватывает модификацию положения 296 так, чтобы гликозилировать положение 296, а не положение 297.
Эффекторную функцию также можно модифицировать такими методами, как введение одного или нескольких цистеиновых остатков в Рс-область, таким образом давая возможность образованию дисульфидной связи между цепями в данной области, приводящему к образованию гомодимерного антитела, которое может обладать улучшенной способностью к интернализации и/или повышенным комплементопосредованным клеточным киллингом и ЛЭСС (Сагоп, Р.С. е! а1. (1992) "Ьпдшеетей Ниташ/еб Эипепс Роттк 0£ 1дС Аге Моге ЬйесШе АпйЬоФек", 1. Ьхр. Меб. 176:1191-1195; ЗЬорек, В. (1992) "А СепеРсаПу Ьпдтеегеб Нитап 1дС Ми!ап1 Χνίΐΐι ЬпЬапсеб Су1о1уйс АсШйу", 1. 1ттипо1. 148(9):2918-2922. Гомоди- 40 030226
мерные антитела с усиленной противоопухолевой активностью также можно получить с помощью гетеробифункциональных кросс-линкеров, как описывается в АоТТ, Е.А. е! а1. (1993) "Мопос1опа1 АпйЪойу Нотойшегк: Епкапсей Ап!йитог Асйуйу Ш Шйе Мюе", Сапсег Кекеагск 53:2560-2565. Альтернативно, антитело может разрабатываться, чтобы иметь двойные Рс-области, и, таким образом, может обладать усиленными способностями к комплементопосредованному лизису и ЛЭСС (8!еуепкоп, С.Т. е! а1. (1989) "А Скйпепс АпйЪойу Айк Эиа1 Рс Кедюпк (ЫкРаЪРс) Ргерагей Ву Машри1айопк А! Тке ЦС Ншде", АпйСапсег Цгад Эейдп 3:219-230).
Е. В7-Н3 ПАКТ™ (переориентирующие реагенты с двойной аффинностью).
Как обсуждалось выше, настоящее изобретение дополнительно охватывает молекулы "ПАКТ™" (переориентирующий реагент с двойной аффинностью), которые включают по меньшей мере две полипептидные цепи, которые образуют по меньшей мере два эпитопсвязывающих участка, по меньшей мере один из которых специфично связывается с В7-Н3.
В предпочтительных вариантах осуществления первая полипептидная цепь ПАКТ™ включает:
(ί) домен (А), содержащий связывающую область вариабельного домена легкой цепи первого иммуноглобулина ("Ы), специфичную к эпитопу (1);
(ίί) домен (В), содержащий связывающую область вариабельного домена тяжелой цепи второго иммуноглобулина ("Н2), специфичную к эпитопу (2); и
(ίίί) домен (С).
Вторая полипептидная цепь такого ПАКТ™ включает:
(ί) домен (Ό), содержащий связывающую область вариабельного домена легкой цепи второго иммуноглобулина ("Ь2), специфичную к эпитопу (2);
(ίί) домен (Е), содержащий связывающую область вариабельного домена тяжелой цепи первого иммуноглобулина АН1), специфичную к эпитопу (1); и
(ίίί) домен (Р).
Домены (А) и (В) ПАКТ™ не ассоциируются друг с другом для образования эпитопсвязывающего участка. Аналогично, домены (Ό) и (Е) ПАКТ™ не ассоциируются друг с другом для образования эпитопсвязывающего участка. Вместо этого домены (А) и (Е) ПАКТ™ ассоциируются для образования связывающего участка, который связывает эпитоп (1); а указанные домены (В) и (Ό) ПАКТ™ ассоциируются для образования связывающего участка, который связывает указанный эпитоп (2). Домены (С) и (Р) ковалентно ассоциированы вместе.
Каждая полипептидная цепь молекулы ПАКТ™ содержит νΤ-домен и VΗ-домен, которые соединяют ковалентно таким образом, чтобы сдерживать домены от самосборки. Взаимодействие двух полипептидных цепей будет давать две "Ь-"Н пары, образующие два эпитопсвязывающих участка, т.е. бивалентную молекулу. Как "Н- или "ТО-домены не сдерживаются каким-либо положением в полипептидной цепи, т.е. не ограничиваются амино (Ν) или карбокси (С) концом, так эти домены не ограничиваются их относительными положениями друг к другу, т.е. νΤ-домен может быть Ν-концевым относительно "Ндомена и наоборот. Единственным ограничением является то, чтобы дополнительная полипептидная цепь была доступна для образования функциональных ПАКТ™. Если "Ь- и "Н-домены получены от одного антитела, две дополнительные полипептидные цепи могут быть идентичными. Например, если связывающие домены получены от антитела, специфичного к эпитопу А (т. е. связывающий домен образуется в результате взаимодействия "^-"НД, то каждый полипептид будет включать "НА и "Щ. Гомодимеризация двух полипептидных цепей антитела будет приводить к образованию двух "ЕАН·,связывающих участков, приводя в результате к бивалентному моноспецифичному антителу. Если "Ь- и "Н-домены получены из антител, специфичных к различным антигенам, то для образования функционального биспецифичного ПАКТ™ необходимо взаимодействие двух различных полипептидных цепей, т.е. формирование гетеродимера. Например, для биспецифичного ПАКТ™ одна полипептидная цепь будет включать "ЬА и "ЬВ; гомодимеризация указанной цепи будет приводить к формированию двух "Щ"НВ-связывающих участков либо с отсутствующим связыванием, либо с непредсказуемым связыванием. Напротив, если две различные полипептидные цепи имеют возможность взаимодействовать, например, в рекомбинантной системе экспрессии, при этом одна содержит "ЬА и "НВ и другая содержит "ЬВ и "НА, то будут образовываться два различных связывающих участка "ЩАЩ и "ЬВ-"НВ. Для все пар полипептидных цепей ПАКТ™ возможна некоторая вероятность несовмещения или ошибочного связывания двух цепей, т.е. взаимодействия "Ь-"Ь- или "Н-"Н-доменов; однако очисткой функциональных диател легко управлять, исходя из иммуноспецифичности правильно димеризованного связывающего участка с помощью любого способа на основе аффинности, известного в уровне техники или проиллюстрированного в данном документе, например, аффинной хроматографии.
Одна или несколько из полипептидных цепей ПАКТ™ могут необязательно включать Рс-домен или его часть (например, СН2-домен или СН3-домен). Рс-домен или его часть можно получать из любого изотипа или аллотипа иммуноглобулина, включая, но без ограничений, ЦА, !дО, ЦС, ЦЕ и ЦМ. В предпочтительных вариантах осуществления Рс-домен (или его часть) получают из ЦС. В конкретных вариантах осуществления изотипом ЦС является ЦС1, ЦС2, ЦС3 или ЦС4 или их аллотип. В одном вариан- 41 030226
те осуществления молекула диатела содержит Рс-домен, при этом Рс-домен включает СН2-домен и СН3домен, независимо выбранные из любого изотипа иммуноглобулина (т.е. Рс-домен, включающий СН2 домен, полученный из ΙβΗ и СН3 домен, полученный из Ι^Ε, или СН2 домен, полученный из ^СЕ и СН3 домен, полученный из ^С2 и т.д.). Рс-домен можно встраивать в полипептидной цепи, содержащей молекулу диатела настоящего изобретения, в любом положении относительно других доменов или частей указанной полипептидной цепи (например, Рс-домен или его часть может быть с-концевым относительно как УЬ-, так и УН-домена указанной полипептидной цепи; может быть п-концевым относительно как УЬ-, так и УН-домена; или может быть Ν-концевыми относительно одного домена и с-концевыми относительно другого (т.е. между двумя доменами полипептидной цепи)).
Рс-домены в полипептидных цепях молекул ЭЛИТ™ преимущественно димеризуются, приводя к образованию молекулы ПАКТ™, которая проявляет иммуноглобулиноподобные свойства, например взаимодействия Рс-РсуК. Диатела, содержащие Рс, могут быть димерами, например, включающими две полипептидные цепи, при этом каждая включает УН-домен, УЬ-домен и Рс-домен. Димеризация указанных полипептидных цепей дает в результате бивалентный ПАКТ™, содержащий Рс-домен, хотя и со структурой, отличающейся от таковой немодифицированного бивалентного антитела. Такие молекулы НАКТ™ будут проявлять измененные фенотипы по сравнению с иммуноглобулином дикого типа, например измененные период полувыведения из сыворотки, свойства связывания и т.д. В других вариантах осуществления молекулы ПАКТ™, содержащие Рс-домены, могут быть тетрамерами. Такие тетрамеры включают две "более тяжелые" полипептидные цепи, т.е. полипептидную цепь, содержащую УЬ, УН и Рс-домен, и две "более легкие" полипептидные цепи, т.е. полипептидную цепь, содержащую УЬ и УН. Более легкая и более тяжелая цепи взамодействуют, образуя мономер, а указанные мономеры взамодействуют через их неспаренные Рс-домены, образуя ^-подобную молекулу. Такой ^-подобный ОАКТ™ является тетравалентным и может быть моноспецифичным, биспецифичным или тетраспецифичным.
Образование тетраспецифичной молекулы диатела, описываемой выше, требует взаимодействия четырех различных полипептидных цепей. Такие взаимодействия тяжелы для эффективного достижения в пределах рекомбинантной продуцирующей системы одной клетки из-за многочисленных вариантов возможных ошибочных спариваний цепей. Одним решением снижения возможности ошибочного спаривания является встраивание мутаций по типу "выступы-во-впадины" в необходимых парах полипептидных цепей. Такие мутации благоприятствуют гетеродимеризации над гомодимеризапией. Например, касательно Рс-Рс-взаимодействий аминокислотную замену (предпочтительно замену на аминокислоту, содержащую объемную боковую группу, образующую "выступ", например триптофан) можно ввести в СН2- или СН3-домен так, что стерическое взаимное влияние будет препятствовать взаимодействию с подобным образом мутированным доменом и будет заставлять мутированный домен спариваться с доменом, в котором была создана комплементарная или вмещающая мутация, т.е. "впадина" (например, замена на глицин). Такие наборы мутаций можно создать в любой паре полипептидов, включающихся в молекулу диатела, и, кроме того, создать в любой части полипептидных цепей указанной пары. Способы белковой инженерии для благоприятствования гетеродимеризации над гомодимеризацией хорошо известны в уровне техники, в частности, в отношении инженерии иммуноглобулиноподобных молекул, и охватываются в данном документе (см., например, Шйдгау е! а1. (1996) "КпоЪк-Шо-Нокк" Епщпееппд ОГ АпйЪойу СН3 Иотатк Рог Неауу СНат НекгоФтеп/айоп", Рго!ет Епдг. 9:617-621, АЩе11 е! а1. (1997) "81аЬ1е Не!егой1тегк Ргот КетойеНпд ТНе Иотат БИегГасе ОГ А НотоФтег Иктд А РНаде Э|кр1ау ЫЪгагу", 1. Мо1. Вю1. 270: 26-35 и Х1е е! а1. (2005) "А №ν Рогта! ОГ ВйресШс АпйЪойу: Ш§Ь1у ЕГйтеп! Не!егой1тег17айоп, Ехргеккюп Апй Титог Се11 Ьуык", 1. Тттипо1. МеФойк 296:95-101; каждая из которых тем самым включается в данный документ ссылкой в полном объеме.
Настоящее изобретение также охватывает молекулы диател, содержащие вариантный Рс- или вариантный шарнирный-Рс-домен (или его часть), при этом вариантный Рс-домен содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию (например, замену, вставку, делецию) относительно сравнимого Рсдомена или шарнирного-Рс-домена дикого типа (или его части). Молекулы, содержащие вариантные Рсдомены или шарнирные-Рс-домены (или их части) (например, антитела), обычно имеют измененные фенотипы относительно молекул, содержащих Рс-домены или шарнирные-Рс-домены дикого типа или их части. Вариантный фенотип может выражаться в виде измененного периода полувыведения из сыворотки, измененной стабильности, измененной чувствительности к клеточным ферментам или измененной эффекторной функции, анализируемых в МК-зависимом или макрофагзависимом анализе. Модификации Рс-доменов, идентифицируемые как изменение эффекторной функции, раскрываются выше.
Настоящее изобретение также охватывает молекулы, содержащие шарнирный домен. Шарнирный домен можно получить из любого изотипа или аллотипа иммуноглобулина, в том числе ^А, Ι§ϋ, Ι§Η ^Е и ^М. В предпочтительных вариантах осуществления шарнирный домен получают из Ι§Η где Ιβ6изотипом является Ι§01, Ι^ΟΣ, Ι§03 или ΙβΟ4 или их аллотип. Указанный шарнирный домен можно встроить в полипептидную цепь, включающую молекулу диатела вместе с Рс-доменом, таким образом, что молекула диатела содержит шарнирный-Рс-домен. В определенных вариантах осуществления шарнирный и Рс-домен независимо выбраны из любого изотипа иммуноглобулина, известного в уровне тех- 42 030226
ники или приведенного в качестве примера в данном документе. В других вариантах осуществления шарнирный и Рс-домен разделяют по меньшей мере одним другим доменом полипептидной цепи, например νΡ-доменом. Шарнирный домен или необязательно шарнирный-Рс-домен можно встроить в полипептид настоящего изобретения в любое положение относительно других доменов или частей указанной полипептидной цепи. В определенных вариантах осуществления полипептидная цепь настоящего изобретения включает шарнирный домен, при этом шарнирный домен находится на С-конце полипептидной цепи, где указанная полипептидная цепь не включает Рс-домен. В еще одних вариантах осуществления полипептидная цепь настоящего изобретения включает шарнирный-Рс домен, при этом шарнирный-Рс-домен находится на С-конце полипептидной цепи. В дополнительных вариантах осуществления полипептидная цепь настоящего изобретения включает шарнирный-Рс-домен, при этом шарнирный-Рсдомен находится на Ν-конце полипептидной цепи.
Каждый домен полипептидной цепи ПАКТ™, т.е. νΕ-, ν4- и Рс-домен, может быть отделен пептидным линкером. Пептидный линкер может быть длиной 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9 аминокислот. В определенных вариантах осуществления аминокислотная линкерная последовательность представляет собой ОСС5СССС (8ЕЦ Ш N0: 52), кодируемую последовательностью нуклеиновой кислоты
ддаддсддаЕ ссддаддсдд аддс (§Ер ш Ν0· 53)
Полипептидные цепи молекулы ЭАКТ™ могут быть разработаны, чтобы включать по меньшей мере однин цистеиновый остаток, который будет взамодействовать с соответствующим цистеиновым остатком на второй полипептидной цепи ЭАКТ™ с образованием дисульфидной связи между цепями. Такие дисульфидные связи между цепями служат для стабилизации молекулы ПАКТ™, повышая, таким образом, экспрессию и выделение в рекомбинантных системах, что дает в результате стабильный и одинаковый состав и улучшает стабильность выделенного и/или очищенного продукта ίη νί\Ό. Цистеиновый остаток может быть введен в качестве отдельной аминокислоты или как часть большей аминокислотной последовательности, например шарнирного домена, в любую часть полипептидной цепи. В конкретном варианте осуществления цистеиновый остаток можно встроить так, чтобы он оказался на С-конце полипептидной цепи. В некоторых вариантах осуществления цистеиновый остаток вводят в полипептидную цепь в рамках аминокислотной последовательности ШОС. В конкретном варианте осуществления Сконец полипептидных цепей, включающихся в молекулу ЭАКТ™ настоящего изобретения, включает аминокислотную последовательность ШОС (8ЕЦ ГО N0: 54). В другом варианте осуществления цистеиновый остаток вводят в полипептид в рамках аминокислотной последовательности, включающей шарнирный домен, например ЕРК5С0КТНТСРР (8ЕЦ ГО N0: 55) или ЕЗКУСРРСРЗ (8ЕЦ ГО N0: 56). В конкретном варианте осуществления С-конец полипептидной цепи молекулы ЭАКТ™ настоящего изобретения включает аминокислотную последовательность шарнирного домена 1дО, например 8ЕЦ ГО N0:5 или 8ЕЦ ГО N0:6. В другом варианте осуществления С-конец полипептидной цепи молекулы ϋΑΚΤ™ настоящего изобретения включает аминокислотную последовательность УЕРКЗС (8ЕЦ ГО N0: 57), которая может кодироваться нуклеотидной последовательностью д’Ь'Ьдадссса ааЕсЕЕдЕ (8ЕЦ ГО N0: 58). В других вариантах осуществления цистеиновый остаток вводят в полипептидную цепь
в рамках аминокислотной последовательности
ЪСССЕРГКСЕС
(8ЕЦ ГО N0: 59), которая может кодироваться нуклеотидной последовательностью сЬдддаддсЕ дсЕЕсаасад дддададСд’Ь (§ЕЦ ГО N0: 60). В конкретном варианте осуществления С-конец полипептидной цепи, включающейся в ЭАКТ™ настоящего изобретения, включает аминокислотную последовательность ЬСбСГНКСЕС (§ЕЦ ГО N0: 59). В еще одних вариантах осуществления цистеиновый остаток вводят в полипептидную цепь в аминокислотной последовательности
ЕЫЕСЕС
(8ЕЦ ГО N0: 61), которая может кодироваться нуклеотидной
последовательностью ’ЬЕсаасаддд дададСдС (§ЕЦ ГО N0: 62). В конкретном варианте осуществления С-конец полипептидной цепи, включающейся в ЭАКТ™ настоящего изобретения, включает аминокислотную последовательность
ЕРГКСЕС
(ЗЕЦ ГО N0: 61).
В определенных вариантах осуществления молекула диатела содержит по меньшей мере две полипептидные цепи, каждая из которых включает аминокислотную последовательность ШОС (8ЕЦ ГО N0: 54), и они ковалентно соединены дисульфидной связью между цистеиновыми остатками в последовательностях ЕООС (8ЕЦ ГО N0: 54). В другом конкретном варианте осуществления молекула диатела содержит по меньшей мере две полипептидные цепи, одна из которых содержит последовательность ЕЫЕСЕС (8ЕЦ ГО N0: 61), в то время как другая содержит шарнирный домен (содержащий по меньшей мере один цистеиновый остаток), где указанные по меньшей мере две полипептидные цепи ковалентно соединены дисульфидной связью между цистеиновым остатком в ЕРГКСЕС (8ЕЦ ГО N0: 61) и цистеиновым остатком в шарнирном домене. В конкретных аспектах цистеиновый остаток, ответственный за дисульфидную связь, который расположен в шарнирном домене, представляет собой Су8-128 (пронумеровано согласно КаЬа! ЕЦ; расположен в шарнирном домене немодифицированной интактной тяжелой цепи 1дО), а соответствующий цистеиновый остаток в 8ЕЦ ГО N0: 23 представляет собой Су8-214 (пронумеровано согласно КаЬа! ЕЦ; расположен на С-конце немодифицированной интактной легкой цепи 1дО) (Е1каЬе1/ е! а1. (2005) "(’у81ете8 Ιη СН1 Цпбегйе Ке1епйоп 0Г ипа88етЬ1еб 1д Неаνу СНаш8", I. Вю1. ('Нет.
- 43 030226
280:14402-14412). В еще одних вариантах осуществления по меньшей мере один цистеиновый остаток встраивают так, чтобы он оказался на Ν-конце аминокислотной цепи. В еще одних вариантах осуществления по меньшей мере один цистеиновый остаток встраивают так, чтобы он оказался в линкерной части полипептидной цепи молекулы диатела. В дополнительных вариантах осуществления УН- или УЬ-домен разработан таким образом, что он включает по меньшей мере одну аминокислотную модификацию по сравнению с исходным УН- или УЬ-доменом, так что указанная аминокислотная модификация включает замену исходной аминокислоты цистеином.
В еще одном аспекте данного варианта осуществления домен (С) первой полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность УЕРК5С ($Е(/ ГО N0: 57), полученную из шарнирного домена ΚΟ человека, и которая может кодироваться нуклеотидной последовательностью дТЕдадссса ааЕсЕЕдТ (8Е(^ ГО ΝΟ: 58). В другом аспекте данного варианта осуществления домен (Р) второй полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность УЕРК5С ($Е(/ ГО ΝΟ: 57). В определенных аспектах данного варианта осуществления домен (С) первой полипептидной цепи содержит 6 С-концевых аминокислот легкой к-цепи человека еыксес (8Е(^ ГО ΝΟ: 61); а домен (Р) второй полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность УЕРК8С ($Е(/ ГО N0: 57) или шарнирный домен. В других аспектах данного варианта осуществления домен (Р) второй полипептидной цепи содержит 6 С-концевых аминокислот легкой к-цепи человека еетксес (8ЕР ГО ΝΟ: 61); а домен (С) первой полипептидной цепи содержит аминокислотную последовательность УЕРКЗС ($Е(/ ГО ΝΟ: 57) или шарнирный домен.
Принимая во внимание вышесказанное, отдельные полипептиды биспецифичного РАКТ™ могут образовывать два вида гомодимеров и один вид гетеродимера. В одном варианте осуществления настоящего изобретения к С-концу одного или предпочтительнее двух полипептидов РАКТ™ можно добавлять заряженный полипептид. При выборе заряженных полипептидов с противоположным зарядом для отдельных полипептидов биспецифичного РАКТ™ включение таких заряженных полипептидов благоприятствует образованию гетеродимеров и уменьшает образование гомодимеров. Предпочтительно положительно заряженный полипептид будет содержать значительное содержание аргинина, глутамина, гистидина и/или лизина (или смеси таких аминокислот), а отрицательно заряженный полипептид будет содержать значительное количество аспартата или глутамата (или смеси таких аминокислот). Особенно предпочтительны положительно заряженные полипептиды, содержащие значительное содержание лизина, и отрицательно заряженные полипептиды, содержащие значительное содержание глутамата. Для того чтобы максимизировать электростатическое притяжение между такими противоположно заряженными полипептидами, предпочтительно задействовать полипептиды, способные самопроизвольно принимать спиральную конформацию.
Таким образом, в предпочтительном варианте осуществления положительно заряженная "Еспираль" будет добавляться к одному из полипептидов, используемых для образования биспецифичного РАКТ™, а отрицательно заряженная "К-спираль" будет добавляться ко второму из полипептидов РАКТ™. Особенно предпочтительная Е-спираль будет иметь последовательность (Е¥ААЕЕК)4 [т е ($Е(/ ΙΡ N0· 63) ЕУААЬЕКЕУААЬЕКЕУААЬЕКЕУААЬЕК].
Особенно предпочтительная К-спираль будет иметь последовательность (κνΑΑΕΚΕ)4 [т е ($Е(/ ГО N0· 64) КУААЬКЕКУААЬКЕКУААЬКЕКУААЬКЕ].
Предпочтительный полипептид РАКТ™, обладающий такой Е-спиралью, будет иметь общую последовательность [УЕ-домен] [ΘΘΘ3ΘΘΘΘ] [УН-домен] [(еуааьек^] сссыз, где уЬ является вариабельным доменом легкой цепи 1д РАКТ™, ООО8ОООО представляет собой 8ЕР ГО ΝΟ: 52, УН является вариабельным доменом тяжелой цепи 1д РАКТ™, (ЕУААЬЕКД представляет собой $Е(/ ΙΡ N0: 63 и ΟΟΟΝ8 представляет собой 8ЕР ГО ΝΟ: 65.
Предпочтительный полипептид РАКТ™, обладающий такой К-спиралью, будет иметь общую последовательность [νΕ-домен] [ΘΘΘ3ΘΘΘΘ] [УН-домен] [(куаатке)4] сссыз, где уЬ является вариабельным доменом легкой цепи 1д РАКТ™, ΟΟΟ8ΟΟΟΟ представляет собой 8ЕР ГО ΝΟ: 52, УН является вариабельным доменом тяжелой цепи 1д РАКТ™, (куааьке)4 представляет собой $Е(/ ΙΡ N0: 64 и ΟΟΟΝ8 представляет собой 8ЕР ГО ΝΟ: 65.
В дополнительном варианте осуществления Рс-области могут быть соединены с Е- и/или Кспиралями РАКТ™ с Е-спиралью или К-спиралью. Продолжение разделения между Рс-областями и УНдоменом РАКТ™ Рс-содержащих РАКТ™ желательно в случаях, при которых менее разделенное расположение таких доменов приводит в результате к ослабленному взаимодействию между такими доменами и их связывающими лигандами или же препятствует сборке РАКТ™. Хотя можно задействовать разделители с любой аминокислотной последовательностью, предпочтительно задействовать разделители, которые образуют α-спирали, с тем, чтобы максимально удлинить и перенести Рс-домен далеко от вариабельных доменов. Поскольку описанные ранее спиральные полипептиды с противоположным зарядом дополнительно функционируют для содействия образованию гетеродимера, такие молекулы являют- 44 030226
ся особенно предпочтительными разделителями. Такие спираль-содержащие молекулы Рс-ПАКТ™ обеспечивают преимущества подобные таковым молекул Рс-ПАКТ™, в том числе улучшенный период полувыведения из сыворотки и рекрутинг эффекторной функции. Описанные ранее полипептиды с Еспиралью и К-спиралью являются особенно предпочтительными для данной цели. Таким образом, в предпочтительном варианте осуществления Рс-содержащие ПАКТ™ с Е-спиралью будет иметь общую последовательность
[УЪ- домен]-[бббЗбббб]-[УН-ДОМен]-[(еУААЬЕК)4]-666—Рс-домен,
начинающийся с Ώ234 (нумерация по КаЪа1), где УЬ является вариабельным доменом легкой цепи 1д ПАКТ™, 66636666 представляет собой §Е(Д ΙΠ N0: 52, УН является вариабельным доменом тяжелой цепи Ι§ ПАКТ™ и (еуааъек)4 представляет собой §Е(Д Ш N0: 63.
Аналогично, в предпочтильном варианте осуществления Рс-содержащий ПАКТ™ с К-спиралью будет иметь общую последовательность
[УЪ- домен]—[есезбесб]—[УН-домен]—[(куааъке)4]—есс—Рс-домен, начинающийся с ϋ234 (нумерация по КаЪа1), где УЬ является вариабельным доменом легкой цепи 1д ПАКТ™, ООО8ОООО представляет собой 8Е0 ГО NΟ: 51, УН является вариабельным доменом тяжелой цепи 1§ ПАКТ™ и (кальке)4 представляет собой 8Е0 ГО NΟ: 64.
Как указано выше, спираль-содержащая молекула ПАКТ™ или спираль-содержащая Рссодержащая молекула ПАКТ™ может содержать только один такой спиральный разделитель, или она может содержать более одного такого разделителя (например, два разделителя, предпочтительно с противоположным зарядом, из которых один присоединен к каждому из УН-доменов полипептидов ПАКТ™). При присоединении Рс-участка к такой молекуле(ам)-разделителю(ям) повышается возможность производить бивалентную, тетравалентную и т.д. версии Рс-ПАКТ™ молекул путем смены цепей. Таким образом, можно получать Рс-ПАКТ™ молекулы, которые образуют мономеры или димеры, в зависимости от того, присоединен ли Рс-домен к одному или к обоим УН-доменам ПАКТ™.
1. Многофункциональность молекул В7-Н3 ПАКТ™.
Биспецифичные ПАКТ™ настоящего изобретения могут одновременно связывать два раздельных и отличных эпитопа. В определенных вариантах осуществления эпитопы принадлежат одному антигену. В других вариантах осуществления эпитопы принадлежат различным антигенам. В предпочтительных вариантах осуществления по меньшей мере один эпитопсвязывающий участок специфичен к детерминанте, экспрессируемой на иммунной эффекторной клетке (например, СП3, СП16, СП32, СП64 Т-клеточный рецептор и т.д.), которые экспрессируются на Т-лимфоцитах, натуральных киллерах (ΝΙ<) или других мононуклеарных клетках. В одном варианте осуществления молекула ПАКТ™ связывается с детерминантой эффекторной клетки и также активирует указанную эффекторную клетку. В связи с этим молекулы ПАКТ™ настоящего изобретения могут проявлять 1д-подобную функциональность независимо от того, включают ли они дополнительно Рс-домен (например, проверяемую в любом анализе эффекторной функции, известном в уровне техники или приведенном в качестве примера в данном документе (например, анализе АПСС). В определенных вариантах осуществления биспецифичный ПАКТ™ настоящего изобретения связывает как раковый антиген на опухолевой клетке, так и детерминанту эффекторной клетки, при этом активируя указанную клетку. В альтернативных вариантах осуществления биспецифичный ПАКТ™ или молекула ПАКТ™ настоящего изобретения могут ингибировать активацию целевой, например эффекторной, клетки путем одновременного связывания и, таким образом соединения активирующего и ингибирующего рецептора на одной клетке (например, связывать как СП32А, так и СП32В, ВСК и СП32В или 1дЕК1 и СП32В), как описано выше (см. раздел "Предпосылки к созданию изобретения"). В дополнительном апекте данного варианта осуществления биспецифичный ПАКТ™ может проявлять противовирусные свойства путем одновременного связывания двух нейтрализующих эпитопов на вирусе (например, эпитопы К8У; эпитопы ^КУ, такие как Е16 и Е53).
2. Универсальные молекулы В7-Н3 ПАКТ™.
В одном варианте осуществления биспепифичные молекулы ПАКТ™ настоящего изобретения можно сконструировать, чтобы они включали один эпитопсвязывающий домен, который специфично связывается с В7-Н3, и второй эпитопсвязывающий домен, который специфично связывает гаптен, например флюоресцеинизотиоцианат (также известный как флюороизотиоцианат или Р1ТС). Такой ПАКТ™ служит в качестве универсального адаптера ("иЛАКТ™"), способного сшивать В7-Н3 с молекулами, которые взамодействуют с флюоресцеин-конъюгированными связывающими партнерами. Например, реактивное к Р1ТС плечо ПАКТ™ можно применять для связывания с Р1ТС-меченным антителом, которое связано с мишенью, не являющейся В7-Н3, вовлеченным в межклеточную агрегацию, межклеточный рекрутинг, бесклеточный рекрутинг, множественное нацеливание и т.д. Химерную версию с Ру мыши/Рс человека МАЪ к флюоресцеину 4420 можно использовать в качестве источника специфичных к Р1ТС СПК-доменов (ОгиЪсг, М. с! а1. (1994) "ЕГйсюп! Титог Сс11 Ьуык МсД|а1сД Ву А ЫзреНйс 8т§1с СНат АпйЪоДу ЕхргскксД 1п ЕксНспсЫа сой", Т 1ттипо1. 152(11): 5368-5374).
- 45 030226
3. Молекулы В7-Н3 ПАКТ™, специфичные к клетке-мишени.
Биспецифичные молекулы ПАКТ™ настоящего изобретения предлагают уникальные возможности нацеливания на конкретные типы клеток. Например, биспецифичный ПАКТ™ или молекулу ПАКТ™ можно сконструировать с включением комбинации эпитопсвязывающих участков, которые распознают набор антигенов, уникальных для клетки-мишени или типа ткани. Дополнительно там, где один из или оба отдельных антигена является/являются довольно распространенными по отдельности, в другой ткани и/или типах клеток можно применять связывающие домены с низкой аффинностью для построения ПАКТ™ или молекулы ПАКТ™. Такие связывающие домены с низкой аффинностью будут неспособны связываться с отдельным эпитопом или антигеном с достаточной авидностью для терапевтических целей. Однако там, где эпитопы или антигены присутствуют на отдельной клетке-мишени или ткани, авидность ПАКТ™ или молекулы ПАКТ™ к клетке или ткани относительно клетки или ткани, экспрессирующей только один из антигенов, будет увеличиваться так, что указанная клетка или ткань можно будет эффективно нацелить с помощью настоящего изобретения. Такие биспецифичные молекулы могут проявлять усиленное связывание с одним или обоими их целевыми антигенами на клетках, экспрессирующих оба указанных антигены, относительно моноспецифичного ПАКТ™ или антитела со специфичностью только к одному из антигенов.
Например, ПАКТ™ настоящего изобретения, специфичные к В7-Н3, можно построить с включением домена, который представляет собой связывающий лиганд для рецептора натуральных киллеров группы 2Ώ (М<С2О). Рецептор М<С2О экспрессируется на всех натуральных киллерах человека (и других млекопитающих) (Ваиег, 8. е! а1. (1999) "Асйуайоп 0£ NΚ Се11з Апб Т Се11з Ву УхСЗО, А Кесер!ог Рог ЗПезз-ХпбиыЫе МХСА", §щепсе 285(5428):727-729; 1ат1езоп, А.М. е! а1. (2002) "ТНе Ко1е 0£ ТНе М<С2И ЕптипогесерЮг Ш Хттипе Се11 Асйуайоп Апб №1ига1 КШтд", ХттипДу 17(1): 19-29), а также на всех СЭ8+ Т-клетках (СгоН, У. е! а1. (2001) "Созйти1а!юп 0£ С^8αβ Т Се11з Ву М<С2И У1а Епдадетеп! Ву МХС Хпбисеб 0п Уп'из-1пГес1ес1 Се11з", №!. Хттипо1. 2(3):255-260; 1ат1езоп, А.М. е! а1. (2002) "ТНе Ко1е 0£ ТНе М<С2И Хттипо^есер!о^ Хп Хттипе Се11 АсЕуайоп Апб №1ига1 КППпд", ЕптипЩ 17(1): 19-29). Такие связывающиеся лиганды и, в особенности те, которые не экспрессируются на нормальных клетках, включают молекулу гистосовместимости 60 (Н60), продукт гена 1, индуцируемого ретиноевой кислотой (КАЕ-1), и мышиный иЕ16-связывающий протеиноподобный транскрипт 1 (МиЬТ1) (Каи1е! Э.Н. (2003) "Ко1ез 0£ ТНе NN020 ЕптипогесерЮг Апб Х!з Пдапбз", Уинге Кеу. Хттипо1. 3:781-790; Соибег!, ΕΏ. е! а1. (2005) "А1!егеб М<С2О РипсЕоп Хп NΚ Се11з Хпбисеб Ву СНгошс Ехрозиге То А1!егеб М<С2О ЫдапбЕхргеззтд Титог Се11з", В1ооб 106:1711-1717). Дополнительные лиганды, реактивные к М<С2И человека, включают полиморфные молекулы, родственные цепи МНС класса I, МХСА и МХСВ (Э1е£епЬасН, А. е! а1. (1999) "№!ига1 КШег Се11з: 8!гезз 0и!, Тит 0п, Типе Сигг. Вю1. 9(22):К851-К8533; Ваиег, 8. е! а1. (1999) "АсЕуаЕоп 0£ NΚ Се11з Апб Т Се11з Ву УхСАО, А Кесер!ог Рог 8!^езз-Хпбис^Ые МХСА", 8с1епсе 285(5428):727-729; 8!ерНепз, Н.А. (2001) "МХСА Апб МХСВ Сепез: Сап ТНе Ешдта 0£ ТНеЕ Ро1утогрЫзт Ве КезоКеб?" Тгепбз Хттипо1. 22:378-385. Последовательностью МХСА является 8Е0 Ю N0: 66
МСЪСРУЕЬЬЬ АС1ЕРЕАРРС ΑΑΑΕΡΗ3ΣΚΥ ЫЬТУЬЗГОСЗ У<25СРЬТЕУН ЬРСОРРЬКСО К<2КСКАКР<2<3 СЖАЕОУЫЗЫК ТТОКЕТКРЬТ СЫСКРЬКМТЬ АН1КР<2КЕСЬ Н5Ь<2Е1КУСЕ ΙΗΕΡΝ3ΤΚ33 ОНЕУУРСЕЬЕ ЬЗОЫЬЕТКЕИ ΤΜΡζ)33ΚΑζ)Τ ЬАМЫУКЫЕЬК ΕϋΑΜΚΤΚΤΗΥ НАМНАРСЫ2Е ЬККУЬКЗСУУ ΕιΚΚΤνΡΡΜνΝ νΤΚ5ΕΑ5ΕΟΝ 1ТУТСКАЗСЕ ΥΡΝΝΙΤΣ3ΝΚ <2ОСУЗЬЗНРТ <2<2ВДСОУЬРОС ΝΟΤΥ<2ΤΝνΑΤ К1С<2<ЗЕЕ<2КЕ ΤΟΥΜΕΗ3<3ΝΗ ЗТНРУРЗСКУ ЬУЪ<25Н№2ТЕ НУЗАУАААА1 ΕνίΙΙΕΥνΚΟ СКККТЗААЕС РЕЬУЗЬ<2УЬР <2ΗΡν<3Τ5ϋΗΚ РАТ<2ЬСЕ<2РЬ МЗРЫЗЗТСЗТ ЕСА
Последовательностью МХСВ является 8Е0 Ю N0: 67
РНЗЬКУЫЪМУ ЬЗ<2ОСЗУ<23С ЕЬАЕСНЬР©2 ΡΕΣΚΥϋΚΟΚΚ КАКР<2&2ВДАЕ РУЬСАКТТОТ ΕΤΕϋΣΤΕΝΟΟ РЬККТЪТН1К Р<2КССЬНЗЪ<2 ΕΙΚνΟΕΙΗΕϋ 33ΤΚΟ3ΚΗΕΥ ЕООЕЬЕЪЗ<2Ы ЬЕТ<2Е5ТУР<2 35Β.Α<2ΤΈΑΜΝ νΤΝΕΝΚΕϋΑΜ ΚΤΚΤΗΥΚΑΜζ) АРСЫ2КЪ<2ЬР РМУЫУЮЗЕУ 3ΕΟΝΙΤνΤΟΚ Α33ΕΥΡΚΝΙΤ ЬТИКфОСУЗЬ 3ΗΝΤ<2<2№<Ξϋν ΣΡΟΟΝΟΤΥΟΤ ВДУАТК1К<2СЕ ΕφΚΕΤΟΥΜΕΗ 3<3ΝΗ<ΞΤΗΡνΡ ЗСКАЬУЪ<23<2 ΚΤϋΕΡΥν3ΑΑ МРСГУППЬ СУРССКККТЗ ААЕСР
В качестве альтернативы молекулы ПАКТ™ настоящего изобретения можно построить с включением домена, который представляет собой связывающийся лиганд к Т-клеточному рецептору ("ТСК") или к СЭ3 (Т-клеточный корецептор). ТСК исходно экспрессируется СЭ4+ или СЭ8+ Т-клетками и позволяет таким клеткам распознавать антигенные пептиды, которые связываются и презентируются белками МНС класса I или класса II антиген-презентирующих клеток. Распознавание комплекса рМНС (пептид-МНС) ТСК инициирует развитие клеточного иммунного ответа, что приводит к продукции цитокинов и лизису антиген-презентирующей клетки, см., например, Агтз!гопд, К.М. е! а1. (2008) "Соп£огтаЕопа1 СНапдез Апб Р1ехЛШ1у Хп Т-Се11 Кесер!ог КесодшЕоп 0£ РерЕбе-МНС Сотр1ехез", ВюсНет. 1.
- 46 030226
415(Р! 2): 183-196; АШеткеп, Κ. (2008) "Зе1ескоп ОГ Нитап ΑикЬοку Ргадтепк Э|гес1ек Αда^и8! ^тог Τ-Сек Еркорек Рог Α^ρύνο Τ-Сек ΤΕοη-ιι}}·", Су!оте!гу Α. 73(11): 1093-1099; Βοιογ, К.С. е! а1. (2007) "Мак!ег Зукскек ОГ Τ-Сек Αскνакοи Αΐ'ΐά ИкГегепкакоп", Еиг. Яекрк. I. 29:804-812; Ма11опе, Κ е! а1. (2005) 'Иагдекпд Τ Ьутркосу!е8 Рог Iттиие Мопкокпд Αΐ'ΐά киеггепкоп Ш Αи!ο^ттиие И1аЬе!е8", Αт. I. ΤΙιογ. 12(6):534-550). СЭ3 представляет собой рецептор, который связывается с Τί,’Κ ^котак, З. е! а1. (2010) "Мо1еси1аг Iттииο1οду Ьеккопк Ргот Τке^аρеикс Τ-Сек Ресер1ог Оепе ^типоЛду
129(2): 170-177; Сиу, С.З. е! а1. (2009) "Огдаш/акоп ОГ Ргох1та1 З1дпа1 кикакоп Α! Τке Τί'.’Κ:ί'.Ό3 Сотр1ех", Iттииο1. Κν. 232(1):7-21; З!. С1а1г, Е.А. (ЕриЬ 2009 Ос! 12) "Nονе1 Τа^де!ек Τке^аρ^е8 Рог Αи!ο^ттипку", Сигг. Орш. Iттииο1. 21(6):648-657; Βаеие^1е, РА е! а1. (ЕриЬ 2009 кт 9) 'Щбресгйс Τ-Сек Епдадтд ΑикЬοк^е8 Рог Сапсег ΤΕοη-ιι}}·", Сапсег Рек. 69(12):4941-4944; Зт11к-Саг^'1п, 1Е. е! а1. (2009) "Τ Се11 Αскνакοи", Αиии. Κν. Iттииο1. 27:591-619; Иепкегк, Ь. е! а1. (2003) "Епдшеегек СЭ3 ΑикЬοк^е8 Рог Ιιπтипокирргеккюп", Скп. Ехр. Iттииο1. 133(3):307-309).
Путем построения таких молекул ΌΑΚΤ™ с дополнительным включением по меньшей мере одного эпитопсвязывающего домена, способного связываться, например, с рецептором, присутствующим на поверхности клетки-мишени, такие молекулы ΩΑΚΤ™ будут молекулами ΩΑΚΤ™ и, таким образом, будут способны связываться с клетками-мишенями и тем самым заставлять клетки-мишени демонстрировать связывающийся лиганд к рецептору натуральных киллеров группы 2Ω (ΝΚΟ2Ω) или к ΤΟΚ (любой, который присутствует на ΩΑΚΤ™, связавшимся с клеткой-мишенью) (см., например, Оегташ, С. е! а1. (2008) "Яеккескпд ΝΚ Се11к Мек1а!ек Τитο^ Се11 Ьу818 Βу Α №\у ЯесотЫпаШ Β^ίиискοиа1 Рго!еш", Рго!. Епдтеег. Ие81дп Зе1ескоп 21(11):665-672). Такие ΩΑΚΤ™ можно применять для переназначения любой желаемой клетки-мишени в клетку, которая является мишенью опосредованного ΝΚ-клетками клеточного лизиса или опосредованной Т-клетками цитотоксичности. В одном варианте осуществления эпитопсвязывающий домен ΩΑΚΤ™, способный связываться с рецептором, присутствующем на поверхности клетки-мишени, представляет собой эпитоп, который связывается с опухолеассоциированным антигеном с тем, чтобы переназначить такие раковые клетки в субстраты для опосредованного ΝΚ-клетками клеточного лизиса или опосредованной Т-клетками цитотоксичности. Особый интерес представляют опухолеассоциированные антигены, а именно антиген рака молочной железы, антиген рака яичника, антиген рака простаты, антиген рака шейки матки, антиген карциномы поджелудочной железы, антиген рака легкого, антиген рака мочевого пузыря, антиген рака толстой кишки, антиген рака яичка, антиген глиобластомы, антиген, ассоциированный с В-клеточным злокачественным новообразованием, антиген, ассоциированный с множественной миеломой, антиген, ассоциированный с неходжкинской лимфомой, или антиген, ассоциированный с хроническим лимфоцитарным лейкозом.
Подходящие опухолеассоциированные антигены для такого применения включают Α33 (антиген колоректальной карциномы; Α1т^ν^8!, Υ. 2006, Шс1 Мек ΒΟΕ Μν; 33(8):991-998); Β1 (Ед1оГГ, ΑΛΙ. е! а1. 2006, Сапсег Иек. 66(1):6-9); ΒΑΟΕ Щокеу, Β. 2002 Ехрег! Орш Β^ ΤΕογ. 2(6):577-84); бета-катенин (Ргапде А. е! а1. 2003 1 Ра!ко1. 201(2):250-9); СΑ125 Щак!, КС. 1г. е! а1. 2005 Щ 1 Супесо1 Сапсег 15 Зирр1 3:274-81); СИ5 (Сакп, Ο.Α. е! а1. 2006 Зетш Опсо1. 33(2): 167-73; СИ19 (Τ^οи55а^к, X. е! а1. 1998 Нета!о1 Сек ΤΙιογ. 40(4): 139-48); СИ20 ^котак, Ό.Α. е! а1. 2006 Нета!о1 Опсо1 Скп ХопЕ Αω. 20(5): 1125-36); СИ22 (Кгектап, К! 2006 ΑΑΡЗ 1. 18;8(3):Е532-51); СИ23 (Яовак, З. е! а1. 2005 Сигг ^р МмяоЪю1 ]ттипо1. 5;294:91-107); СИ25 (Τ^οи55а^к, X. е! а1. 1998 Нета!о1 Сек ΤΙιογ. 40(4): 139-48); СИ27 ЩаЩИе, Κ. 2006 Наета!о1одюа 91(9): 1234-40); СИ28 файШе, Κ. 2006 Наета!о1одюа 91(9): 1234-40); СИ36 (Се, Υ. 2005 ЬаЬ Нета!о1. 11(1):31-7); СИ40/СИ154 (Мекктег, И. е! а1. 2005 Αии Ν Υ Αсак ЗсЕ 1062:51-60); СИ45 (.Гигсю, !С. 2005 Сигг Опсо1 ^р. 7(5):339-46); СИ56 ЩаЩке, Κ. 2006 Наета!о1одюа 91(9): 1234-40); СИ79а/СИ79Ь (Ггоиввагк, X. е! а1. 1998 Нета!о1 Сек ΤΙιογ. 40(4): 139-48; Ски, Р.С. е! а1. 2001 Αρρ1 китипок18!оскет Мо1 Могрко1. 9(2):97-106); СИ103 (Τ^οи88а^к, X. е! а1. 1998 Нета!о1 Се11 ΤΕογ. 40(4): 139-48); ί'.ΌΚ4 (Ьее, У.М. е! а1. 2006 Се11 Сус1е 5(18):2110-4); СΕΑ (карциноэмбриональный антиген; Ма!кекп, С. 2006 Супесо1 ОЬк!е! Регк1. 34(7-8):638-46; Τекеζ-Ανка, Р.Г е! а1. 2005 Κν ^ек! Скп. 57(6):814-9); СΤ^Α4 (Реддк, К.З. е! а1. 2006 Сигг Орш Гттипо1. 18(2):206-13); ЕСР-Κ (рецептор эпидермального фактора роста; Αкеи^8, Α. е! а1. 2003 Βυ11 Сапсег. 90 Зрес №:З228-32); ЕгЬ (Β±Β1; ΡιΕΒ3; ΡιΕΒ4; 2кои, Н. е! а1. 2002 Опсодепе 21(57):8732-40; Нинон, Е. е! а1. 2004 Ш 1 Опсо1. 24(5): 1325-38); СΑСΕ ^СЕД; СΑСΕ2; Αксакаиа!, Α. е! а1. 2006 Щ 1 Сапсег. 118(1): 123-8); СИ2/СИ3/СМ2 (ЬггапдЛоп, Р.О. е! а1. 2005 Сапсег Iттииο1 ^типоГкег. 54(10): 1018-25); др100 (Ьо!ет, М. е! а1. 2006 1. Iттииο!ке^. 29(6):616-27); НЕН2/пеи (Китаг, Ра1 З. е! а1. 2006 Зетт Опсо1. 33(4):386-91); Е6 вируса папилломы человека/Е7 вируса папилломы человека (И1Маю, И. е! а1. 2006 Αάν Уиик Нек. 66:125-59; Ι^Α (17-1Α) (^дира^, С. 2005 Сапсег П-еа! Нек. 123:157-80); ΜΑСΕ (ΜΑСΕ-1; ΜΑСΕ-3; Щокеу, Β. 2002 Ехрег! Орш ΒΜ ΤΙιογ. 2(6):577-84); ΜΑΚΤ (Коипа1ак15, Ν. е! а1. 2005 Сигг Опсо1 ^р. 7(5):377-82; МИС-1 (МаГкекп, С 2006 Супесо1 ОЬк!е! Регк1. 34(7-8):638-46); МИМ-1 (СОйеШ, С. е! а1. 2000 1 Се11 Ркузю1. 182(3):323-31); Νацетилглюкозаминилтрансферазу (Иепшк, кА. 1999 Β^Εμ Β^ορку8 Α^;ι. 6; 1473(1):21-34); р.15 (Ск, 1. е! а1. 2006 №·ιΙ Κν Мо1 Се11 Β^Ε 7(9):667-77); ΡЗΑ (простатоспецифический антиген; Сгассо, С.М. е! а1. 2005 Мше1Уа Иго1 ИеЕго1. 57(4):301-11); ΡЗΜΑ (Надираки, С. 2005 Сапсег ^еа! Нек. 123:157-80); к1п (Но1тЬегд, ЬА. 2001 Ехрег! Орш Β^ ΤΙιογ. 1(5):881-91); ΤΝΕ-рецептор (рецептор ΤΝΕ-α, рецептор ΤΝΕ- 47 030226
β; или рецептор ТУ-γ; уап Ногккеп, К. е! а1. 2006 Опсо1одй!. 11(4):397-408; Оагйпегоуа, М. е! а1. 2000 Сигг Игид Тагде!к. 1(4):327-64); или νΕΟΡ-рецептор (О'Лмуег. Р.1. 2006 Опсо1од1к!. 11(9):992-8).
Дополнительные опухолеассоциированные антигены для такого применения (и публикации, раскрывающие специфично реактивные антитела к таким антигенам) включают АЛАМ-9 (публикация патента США № 2006/0172350; РСТ публикация № АО 06/084075); АЬСАМ (РСТ публикация № АО 03/093443); карбоксипептидазу М (публикация патента США 2006/0166291); СЛ46 (патент США № 7148038; РСТ публикация № АО 03/032814); цитокератин 8 (РСТ публикация № АО 03/024191); рецепторы эфрина (и в особенности ЕрНА2 (патент США № 7569672; РСТ публикация № АО 06/084226); интегрин α-ν-β-6 (РСТ публикация № АО 03/087340); 1АМ-3 (РСТ публикация № АО 06/084078); КПП (РСТ публикация № АО 05/028498); КГО31 (РСТ публикация № АО 06/076584); ЬиСА-2 (публикация патента США № 2006/0172349; РСТ публикация № АО 06/083852); онкостатин М (β-рецептор онкостатина) (патент США № 7572896; РСТ публикация № АО 06/084092); ИРА (патент США № 7405061; РСТ публикация № АО 04/043239); КОК1 (патент США № 5843749) и рецептор трансферрина (патент США № 7572895; РСТ публикация № АО 05/121179).
Также представляют интерес антигены, специфичные для конкретных инфекционных возбудителей, например вирусных возбудителей, включая, без ограничения, вирус иммунодефицита человека (НЮ), вирус гепатита В (НВ’У), грипп, вирус папилломы человека (НРV), ящур (вирусы Коксаки), вирус бешенства, вирус простого герпеса (Ж’У), и возбудителей, вызывающих гастроэнтерит, включая ротавирусы, аденовирусы, калицивирусы, астровирусы и норовирус; бактериальные возбудители, включая, без ограничения, Е. сой, 8а1топе11а ШурЫтигшт, Ркеийотопак аегидшока, 4Ьйо сНо1егае, №йкепа допоггНоеае, НейсоЬас!ег ру1оп, НеторНйик тЛиеп/ае, 8Ыде11а йукеп!епае, 8!арНу1ососсик аигеик, МусоЬас!егтт !иЬегси1ок1К и 8!гер!ососсик рпеитотае, грибковые возбудители и паразиты, такие как лямблии.
В некоторых вариантах осуществления молекулы настоящего изобретения сконструированы так, чтобы включать измененный паттерн гликозилирования или измененную гликоформу по сравнению с сопоставимой частью эталонной молекулы. Сконструированные гликоформы могут быть полезными для разнообразных целей, включая, без ограничения, усиление эффекторной функции. Сконструированные гликоформы можно создать любым способом, известным специалисту настоящей области, например, с помощью сконструированных или вариантных штаммов экспрессии, путем коэкспрессии с одним или несколькими ферментами, например ΌΙ Ν-ацетилглюкозаминилтрансферазой ΙΙΙ (ОпТШ), путем экспрессии ПАКТ™ настоящего изобретения в различных организмах или клеточных линиях из различных организмов, или путем модифицирования углевода(ов) после экспрессии и очистки ПАКТ™. Способы создания сконструированных гликоформ известны в настоящем уровне техники и включают, но без ограничений, описанные в итапа е! а1. (1999) "Епдшеегей О1усо!огтк О! Ап Ап!теигоЬ1ак!ота Ι§Ο1 АЙН Орйιηί/ей АпйЬойу-Лерепйеп! Се11и1аг Су!о!о\ю Асйуйу", №И. Вю!есНпо1 17:176-180; Пау1ек е! а1. (2001) "Е\ргеккюп О! ОпТШ Ш А КесотЬтап! Апй-СП20 СНО Ргойисйоп Се11 Ьте: Ехргеккюп О! АпНЬоШек Айй А1!егей О1усо!огтк Ьеайк То Ап йюгеаке Ш Айсс Тйгоидй Шдйег АРйпйу Рог Рс Оатта КШ", Вю!есНпо1 Вюепд 74:288-294; 8Ые1йк е! а1. (2002) "Ьаск О! Рисоке Оп Нитап Ι§Ο1 Ν-Ыпкей ОПдокассНапйе йпргоуек Вшйтд То Нитап Рсдатта КШ Апй АпйЬойу-Лерепйеп! Се11и1аг Томску", 1 Вю1 СНет 277:26733-26740; 8Ншкама е! а1. (2003) "ТНе АЬкепсе О! Рисоке Ви! №1 ТНе Ргекепсе О! Оа1ас!оке Ог Вйесйпд ΝАсе1у1д1исокатЙ1е О! Нитап ΙβΟ1 Сотр1е\-Туре ОйдокассНапйек 8Номк ТНе Сгйюа1 Ко1е О! Епйапстд АпйЬойу-Лерепйеп! Се11и1аг Су!о!о\юйу", 1. Бю1 СНет 278:3466-3473) и8 6602684; ^8Ν 10/277370; ^8Ν 10/113,929; РСТ АО 00/61739А1; РСТ АО 01/292246А1; РСТ АО 02/311140А1; РСТ АО 02/30954А1; технологию Роййедеп!™ (Вюма, йю. Принстон, Нью Джерси); инженерную технологию гликозилирования О1усоМАЬ™ (О^ΥСАКТ Ью!есНпо1оду АО, Цюрих, Швейцария); каждая из которых включается в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. См, например, АО 00061739; ЕА 01229125; и8 20030115614; Ока2ак е! а1. (2004) "Рисоке Лер1ейоп Ргот Нитап Ι§Ο1 ОйдокассНапйе ЕпНапсек Вшйтд Еп1йа1ру Апй Аккотайоп Ка!е Ве!мееп Ι§Ο1 Апй РсОаттаКШ", 1МВ, 336: 1239-49, каждая из которых включается в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте.
Настоящее изобретение дополнительно охватывает включение не встречающихся в природе аминокислот для создания ЛАКТ™ настоящего изобретения. Такие способы известны специалистам настоящей области техники, как, например, задействующий естестенный биосинтетический аппарат, чтобы обеспечить включение не встречающихся в природе аминокислот в белки, см., например, Аапд е! а1. (2002) "Ехрапйшд ТНе Оепейс Сойе", СНет. Сотт. 1: 1-11; Аапд е! а1. (2001) "Ехрапйшд ТНе Оепейс Сойе О! ЕксНейсНга сой", 8тепсе, 292: 498-500; уап Нек! е! а1. (2001) "Рго!еш-Вакей Ма!епа1к, Томагй А кем Ьеуе1 О! 8!гис!ига1 Соп!го1", СНет. Сотт. 19: 1897-1904, каждая из которых включается в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. Альтернативные стратегии сосредотачиваются на ферментах, отвечающих за биосинтез аминоацил-тРНК, см., например, Тапд е! а1. (2001) "Вюкуййекй О! А ШдН1у 8!аЬ1е Сойей-Сой Рго!еш СоШайипд Не\айиого1еисте Ш Ап Епдшеегей Вас!епа1 Нок!", 1. Ат. СНет. 8ос. 123(44): 11089-11090; Кйск е! а1. (2001) Пйепййсайоп О! Ап Ехрапйей 8е! О! Тгапк1а!юпа11у Асйуе Ме!Нютпе Апа1одиек Ш ЕксНейсНга сой", РЕВ8 Ье!!. 502(1-2):25-30; каждая из которых включается в на- 48 030226
стоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте. В некоторых вариантах осуществления настоящее изобретение охватывает способы модифицирования АЪ-, АН- или Рс-домена молекулы настоящего изобретения путем добавления или удаления участка гликозилирования. Способы модифицирования углеводов или белков хорошо известны в настоящем уровне техники и охватываются настоящим изобретением, см., например, патент США № 6218149; ЕР 0359096В1; публикацию США № И8 2002/0028486; \\'0 03/035835; публикацию США № 2003/0115614; патент США № 6218149; патент США № 6472511; все из которых включаются в настоящий документ посредством ссылки во всей своей полноте.
VIII. Способы применения модуляторов В7-Н3 и антител к В7-Н3 с терапевтическими целями.
Моноклональные антитела к В7-Н3 можно применять с терапевтическими целями для индивидуумов с раковыми или другими заболеваниями. Терапия антителами к В7-Н3 может включать образование комплексов как ш уНго, так и ш У1уо, как описано выше. В одном варианте осуществления моноклональное антитело к В7-Н3 может связываться с и снижать пролиферацию раковых клеток. Понятно, что антитело вводят в концентрации, которая способствует связыванию при физиологических (например, ш У1уо) условиях. В другом варианте осуществления моноклональные антитела к В7-Н3 можно применять для иммунотерапии, направленной на раковые клетки разных тканей, таких как толстой кишки, легкого, молочной железы, простаты, яичника, поджелудочной железы, почки и других типов рака, таких как саркома. В другом варианте осуществления моноклональное антитело к В7-Н3 само по себе может связываться с и снижать клеточное деление раковой клетки. В другом варианте осуществления моноклональное антитело к В7-Н3 может связываться с раковыми клетками и задерживать развитие метастаза. В еще одном варианте осуществления индивидууму с раком назначается паллиативное лечение антителом к В7Н3. Паллиативное лечение индивидуума с раком включает лечение или облегчение неблагоприятных симптомов заболевания или ятрогенных симптомов, возникающих в результате других видов лечения, которые назначают в отношении заболевания, без непосредственного воздействия на прогрессирование рака. Это включает виды лечения в отношении ослабления боли, дополнительного питания, сексуальных проблем, психологического расстройства, депрессии, утомляемости, психического расстройства, тошноты, рвоты и т. д.
В таких ситуациях антитело к В7-Н3 можно вводить со средством, которое усиливает или направляет собственный иммунный ответ индивидуума, таким как средство, которое усиливает ЛЭСС.
В еще одном варианте осуществления антитело к В7-Н3 конъюгируют с или ассоциируют с радиоактивной молекулой, токсином (например, калихемицином), химиотерапевтической молекулой, липосомами или другими везикулами, содержащими химиотерапевтические соединения, и вводят индивидууму, нуждающемуся в таком лечении, чтобы нацелить данные соединения на раковую клетку, содержащую антиген, распознаваемый антителом, и таким образом устранить раковые или повреждённые клетки. Не ограничиваясь любой отдельной теорией, антитело к В7-Н3 интернализуется клеткой, несущей В7-Н3 на ее поверхности, таким образом, доставляя конъюгированный фрагмент в клетку для индукции терапевтического эффекта. В еще одном варианте осуществления антитело можно использовать в качестве адъювантной терапии во время хирургического удаления раковой опухоли, экспрессирующей антиген, для того, чтобы задержать развитие метастаза. Антитело можно также вводить перед хирургией (неоадъювантная терапия) индивидууму с опухолью, экспрессирующей антиген, для того, чтобы уменьшить размер опухоли и, таким образом, облегчить или упростить хирургию, сберечь ткань во время хирургии и/или уменьшить возникающий в результате физический недостаток.
Дозировка с привязкой к клеточному циклу предполагается в осуществлении на практике настоящего изобретения. В таких вариантах осуществления применяют химиотерапевтическое средство для синхронизации клеточного цикла опухоли или других пораженных заболеванием клеток-мишеней на предопределённой стадии. Впоследствии осуществляют введение антитела к В7-Н3 настоящего изобретения (само по себе или с дополнительным терапевтическим фрагментом). В альтернативных вариантах осуществления антитело к В7-Н3 применяют для синхронизации клеточного цикла и снижения клеточного деления перед введением второго раунда лечения; вторым раундом может быть введение антитела к В7-Н3 и/или дополнительного терапевтического фрагмента.
Химиотерапевтические средства включают радиоактивные молекулы, токсины, которые также называют цитотоксинами или цитотоксическими средствами, что включает любое средство, пагубное для жизнеспособности раковых клеток, средства и липосомы или другие везикулы, содержащие химиотерапевтические соединения. Примеры подходящих химиотерапевтических средств включают, без ограничений, 1-дегидротестостерон, 5-фторурацилдекарбазин, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, актиномицин Ό, адриамицин, альдеслейкин, алкилирующие средства, аллопуринол натрия, алтретамин, амифостин, анастрозол, антрамицин (АМС)), антимитотические средства, цис-дихлородиаминоплатина(П) (ЭЭР) цисплантин), диаминдихлорплатина, антрациклины, антибиотики, антиметаболиты, аспарагиназа, ВСО Пуе (внутрипузырный), бетаметазон натрий фосфат и бетаметазона ацетат, бикалутамид, сульфат блеомицина, бусульфан, лейковорин кальция, калихемицин, капецитабин, карбоплатин, ломустин (ССИи), кармустин (В8^), хлорамбуцил, цисплатин, кладрибин, колхицин, конъюгированные эстрогены, циклофосфамид, циклотосфамид, цитарабин, цитарабин, цитохалазин В, цитоксан, дакарбазин, дактиномицин,
- 49 030226
дактиномицин (ранее актиномицин), даунорубицин НС1, цитрат даунорубицина, денилейкин дифтитокс, дексразоксан, дибромманнитол, дигидроксиантрациндион, доцетаксел, доласетронмезилат, доксорубицин НС1, дронабинол, Ь-аспарагиназа Е. сок, эметин, эпоэтин-α, Ь-аспарагиназа ЕгШша, этерифицированные эстрогены, эстрадиол, эстрамустин натрия фосфат, этидия бромид, этинилэстрадиол, этидронат, этопозид цитроворум-фактор, этопозида фосфат, филграстим, флоксуридин, флуконазол, флударабина фосфат, фторурацил, флутамид, фолиновую кислоту, гемцитабин НС1, глюкокортикоиды, гозерелина ацетат, грамицидин Ό, гранисетрон НС1, гидроксимочевину, идарубицин НС1, ифосфамид, интерферон а-2Ъ, иринотекан НС1, летрозол, кальция лейковорин, лейпролида ацетат, левамизол НС1, лидокаин, ломустин, майтансиноид, мехлорэтамин НС1, медроксипрогестерона ацетат, мегестрола ацетат, мелфалан НС1, меркаптипурин, месна, метотрексат, метилтестостерон, митрамицин, митомицин С, митотан, митоксантрон, нилутамид, октреотид ацетат, ондансетрон НС1, паклитаксел, памидронат динатрия, пентостатин, пилокарпин НС1, плимицин, полифепросан 20 (с имплантатом кармустина), порфимер натрия, прокаин, прокарбазин НС1, пропранолол, ритуксимаб, сарграмостим, стрептозотоцин, тамоксифен, таксол, тенипозид, тенопозид, тестолактон, тетракаин, тиоэпа хлорамбуцил, тиогуанин, тиотепа, топотекан НС1, торемифен цитрат, трастузумаб, третиноин, валрубицин, винбластин сульфат, винкристин сульфат и винорелбин тартрат.
В предпочтительном варианте осуществления цитотоксин является особенно эффективным в делящихся или быстро делящихся клетках, так что неделящиеся клетки относительно избавлены от токсических эффектов.
Антитела настоящего изобретения могут интернализоваться внутрь пораженных заболеванием клеток или клеток карциномы, с которой они связываются и, следовательно, являются особенно пригодными для терапевтических применений, например, для доставки внутрь клетки токсинов, которые необходимо интернализовать для проявления их неблагоприятной активности. Примеры таких токсинов включают, без ограничений, сапорин, калихеамицин, ауристатин и майтансиноид.
Антитела или полипептиды настоящего изобретения можно ковалентно или нековалентно, непосредственно или опосредованно ассоциировать (включая конъюгирововать или соединять) с радиоактивной молекулой, токсином или другими терапевтическими средствами, или липосомами, или другими везикулами, содержащими терапевтические средства. Антитело можно соединить с радиоактивной молекулой, токсином или химиотерапевтической молекулой в любом местоположении по антителу, при условии, что антитело будет способно связывать свой целевой В7-Н3.
Токсин или химиотерапевтическое средство можно вводить одновременно с (перед, после или во время введения) или соединять (например, ковалентно связывать) с подходящим моноклональным антителом либо непосредственно, либо опосредованно (например, через линкерную группу или в качестве альтернативы через соединяющую молекулу с соответствующими участками прикрепления, такую как молекула-платформа, как описано в патенте США № 5552391). Токсин и химиотерапевтическое средство настоящего изобретения можно непосредственно присоединить непосредственно к специфическим нацеливающим белкам с использованием способов, известных в настоящем уровне техники. Например, прямая реакция между средством и антителом возможна, когда каждый обладает заместителем, способным вступать в реакцию с другим. Например, нуклеофильная группа, такая как амино- или сульфгидрильная группа, на одном может быть способной вступать в реакцию с карбонил-содержащей группой, такой как ангидридная или галоидангидридная, или с алкильной группой, содержащей хорошую замещаемую группу (например, галогенид) на другой.
Антитела или полипептиды можно также соединять с химиотерапевтическим средством через микроноситель. Выражение "микроноситель" относится к биологически разлагаемой или биологически не разлагаемой частице, которая не растворима в воде и которая имеет размер менее чем приблизительно 150, 120 или 100 мкм, чаще менее чем приблизительно 50-60 мкм, предпочтительно менее чем приблизительно 10, 5, 2,5, 2 или 1,5 мкм. Микроносители включают "наноносители", которые представляют собой микроносители с размером менее чем приблизительно 1 мкм, предпочтительно менее чем приблизительно 500 нм. Такие частицы известны в настоящем уровне техники. Твердофазные микроносители могут представлять собой частицы, образованные из биосовместимых встречающихся в природе полимеров, синтетических полимеров или синтетических сополимеров, которые могут включать или исключать микроносители, образованные из агарозы или сшитой агарозы, а также другие биоразлагаемые материалы, известные в настоящем уровне техники. Биоразлагаемые твердофазные микроносители могут быть образованы из полимеров, которые являются разлагаемыми (например, поли(молочная кислота), поли(гликолевая кислота) и их сополимеры) или поддающимися эрозии (например, сложные(полиортоэфиры), такие как 3,9-диэтилиден-2,4,8,10-тетраоксаспиро[5,5]ундекан (ПЕТО8И), или поли(ангидриды), такие как поли(ангидриды) себациновой кислоты), при физиологических условиях, характерных для млекопитающих. Микроносители могут также быть жидкофазными (например, на основе масел или липидов), такие как липосомы, искомы (иммуностимулирующие комплексы, которые представляют собой стабильные комплексы из холестерина и фосфолипида, адъювант-активного сапонина) без антигена, или капли или мицеллы, обнаруживаемые в эмульсиях типа "масло-в-воде" или "вода-в- 50 030226
масле", при условии, что жидкофазные микроносители являются биоразлагаемыми. Биоразлагаемые жидкофазные микроносители как правило включают биоразлагаемое масло, множество видов которого известны в настоящем уровне техники, включая сквален и растительные масла. Микроносители как правило являются сферическими по форме, но микроносители, которые отклоняются от сферической формы также приемлемы (например, эллипсоидные, палочкообразный и т.д.). Из-за их нерастворимой природы (по отношению к воде) микроносители поддаются фильтрованию из воды и растворов (водных) на водной основе.
Конъюгаты антител или полипептидов настоящего изобретения могут включать двухфункциональный линкер, который содержит как группу способную соединяться с токсическим средством или химиотерапевтическим средством, так и группу, способную соединяться с антителом. Линкер может функционировать в качестве спейсера, чтобы помещать антитело на расстоянии от средства во избежание нарушения способностей связывания. Линкер может быть расщепляемым или нерасщепляемым. Линкер может также способствовать увеличению химической реакционной способности заместителя на средстве или антителе, и, таким образом, увеличению эффективности присоединения. Увеличение химической реакционной способности может также содействовать применению средств или функциональных групп на средствах, которое иным образом не было бы возможным. Двухфункциональный линкер можно соединять с антителом с помощью средств, которые известны в настоящем уровне техники. Например, линкер, содержащий активный сложноэфирный фрагмент, такой как N-гидроксисукцинимидный сложный эфир, можно применять для соединения с остатками лизина на антителе посредством амидной связи. В другом примере линкер, содержащий нуклеофильный остаток амина или гидразина, можно соединять с альдегидными группами, полученными путем гликолитического окисления углеводных остатков антитела. В дополнение к данным прямым способам соединения линкер можно опосредованно соединять с антителом посредством промежуточного носителя, такого как аминодекстран. В данных вариантах осуществления модифицированное связывание происходит либо посредством лизина, углевода, либо промежуточного носителя. В одном варианте осуществления линкер соединяют избирательно, по отношению к участку, со свободными тиольными остатками в белке. Фрагменты, которые подходят для избирательного соединения с тиольными группами на белках, хорошо известны в настоящем уровне техники. Примеры включают дисульфидные соединения, α-галогенкарбонильные и α-галогенкарбоксильные соединения и малеимиды. Когда нуклеофильная аминная функциональная группа присутствует в той же молекуле, что и &#945; галогенкарбонильная или карбоксильная группа, существует возможность, чтобы произошла реакция образования цикла посредством внутримолекулярного алкилирования амина. Способы предотвращения данной проблемы хорошо известны специалисту настоящей области, например, путем получения молекул, у которых аминная и &#945;-галоген функциональные группы отделяются негибкими группами, такими как арильные группы или транс-алкены, что делает нежелательное замыкание кольца стереохимически невыгодным. Смотри, например, патент США № 6441163 для получения конъюгатов майтансиноидов и антитела посредством дисульфидного фрагмента.
Одним из расщепляемых линкеров, которые можно применять для получения конъюгатов антителолекарственное средство, является кислото-неустойчивый линкер на основе цис-аконитовой кислоты, которые пользутся преимуществом кислотной окружающей среды разных внутриклеточных компартментов, таких как эндосомы, встречающиеся во время опосредованного рецепторами эндоцитоза, и лизосомы. См., например, ЗЬеп, А.С. е! а1. (1981) ("ак-Асопйу1 Зрасег Вейгееп Оаипотусш Апй Масгото1еси1аг Сатегк: А Мойе1 0£ рН-ЗепкйКе Ыпкаде Ке1еакшд Эгид Ргот А Букокотойорю Соп)ида1е", ВюсЬет. ВюрЬук. Кек. Сот1пип. 102:1048-1054 (1981)) для получения конъюгатов даунорубицина с макромолекулярными носителями; Уапд е! а1. (1988) ("РЬагтасокшейск Апй Месйаткт 0£ Асйоп 0£ А ПохогиЫсшМопос1опа1 АпйЬойу 9.2.27 СопщдаЮ ЭнеЛей То А Нитап Ме1апота Рго!еод1усап", 1. №й1. Сапс. 1пк1. 80:1154-1159 для получения конъюгатов даунорубицина с антителом к меланоме; ЭШтап е! а1. (1988) ("Зирегюгйу 0£ Ап Аай-ЬаЬйе ПаипогиЬют-Мопос1опа1 АпйЬойу 1ттипосопщда1е Сотрагей То Ргее Огид", Сапсег Кек. 48:6097-6102) для применения кислото-неустойчивого линкера аналогичным образом для получения конъюгатов даунорубицина с антителом к Т-клеткам; и Тгоие! е! а1. (1982) "А Сονа1еηΐ Ыпкаде Вейгееп ПаипогиЫсш Апй Рго!ешк ТЬа! 1к З!аЬ1е 1п Зегит Апй Кеνе^к^Ь1е Ву Ьукокота1 Нуйго1акек, Ак Ресцигей Рог А Ьукокотойорю Огид-Сатег СопщдаЮ: 1п Уйго Апй 1п УУо ЗшФек", Ргос. №И. Асай. Зс1. (И.З.А.) 79:626-629) для соединения даунорубицина с антителом через пептидную спейсерную "ножку".
Антитело (или полипептид) настоящего изобретения можно конъюгировать (соединять) с радиоактивной молекулой или токсином любым способом, известным в настоящем уровне техники. Для рассмотрения способов радиоактивного мечения антител (см. САNСЬК ТНЬКАРУ ΑΙΊΉ МΟNΟС^ΟNΛ^ АЭТ1В0П1ЬЗ, И.М. Со1йепЬегд (Ьй.) СКС Ргекк, Воса Ка!оп, 1995). Подходящие токсины включают таксаны, майтансиноиды, ауристатины (например, монометил ауристатин (ММАЕ), монометилауристатин Р (ММАР), ауристатин Е (АЕ) и т.д.) (такие как раскрываемые в патентах США №№5208020; 5,416064; 6333410; 6340701; 6372738; 6436931; 6441163; 6596757; 7276497; 7585857 или 7851432), калихемицин, антрациклины (например, доксорубицин), аналог СС-1065, доцетаксел, катепсин В или Е; рицин, гелонин, экзотоксин Ркеийотопак, дифтерийный токсин и РНКазу; тиуксетан или токсический радиоизотоп
- 51 030226
(такой как 90Υ; 131Ι, 177Ьи, 186Ке, 188Ке, 211А!, 212В1, 213В1, 225Ас и т.д.).
В качестве альтернативы антитело можно конъюгировать со вторым антителом для образования гетероконъюгата антител, как описано в патенте США № 4676980. Образование сшитых антител может нацеливать иммунную систему на специфические типы клеток, например, раковые или пораженные заболеванием клетки, экспрессирующие В7-Н3.
Настоящее изобретение также предоставляет способы задержки развития метастаза у индивидуумов с раком (включая, без ограничения, рак простаты, легкого или почки) с применением антитела к В7-Н3 или других вариантов осуществления, которые связываются с В7-Н3 в комбинации с химиотерапевтическим средством, или присоединенных к химиотерапевтическому средству. В некоторых вариантах осуществления антитело представляет собой гуманизированную или химерную форму антитела к В7-Н3, за исключением человеческого.
В еще одном варианте осуществления антитело можно применять для адъювантной терапии во время хирургического удаление раковой опухоли, экспрессирующей антиген, для того, чтобы задержать развитие метастаза. Данное антитело или антитело, ассоциированное с химиотерапевтическим средством, можно также вводить перед хирургией (неоадъювантная терапия) индивидуума с опухолью, экспрессирующей антиген, для того, чтобы уменьшить размер опухоли и таким образом облегчить или упростить хирургию, сберечь ткань во время хирургии и/или уменьшить возникающий в результате физический недостаток.
В еще одном варианте осуществления любая из композиций, связывающих В7-Н3, описанная в настоящем документе, может связываться с раковыми клетками, экспрессирущими В7-Н3, и индуцировать активный иммунный ответ против раковых клеток, экспрессирущих В7-Н3. В некоторых случаях активный иммунный ответ может вызывать гибель раковых клеток (например, связывание антитела с раковыми клетками, индуцирующее апоптическую гибель клеток) или ингибировать рост (например, блокировать продвижение по клеточному циклу) раковых клеток. В других случаях любое из новых антител, описанных в настоящем документе, может связываться с раковыми клетками, а антителозависимая клеточноопосредованная цитотоксичность (АЭСС) может уничтожить раковые клетки, с которыми связывается антитело к В7-Н3. Соответственно, настоящее изобретение предоставляет способы стимулирования иммунного ответа, включающие введение любой из композиций, описанных в настоящем документе.
В некоторых случаях связывание антитела может также активировать как клеточный, так и гуморальный иммунные ответы и рекрутировать больше натуральных киллеров или повышенную продукцию цитокинов (например, ГЬ-2, ΙΕΝ-γ, ГЬ-12, ТОТ'-а, ΈΝΗ-β и т.д.), что дополнительно активирует иммунную систему индивидуума для разрушения раковых клеток. В еще одном варианте осуществления антитела к В7-Н3 могут связываться с раковыми клетками, а макрофаги или другие фагоцитарные клетки могут опсонизировать раковые клетки.
Для введения можно применять различные составы из антител к В7-Н3 или их фрагменты. В некоторых вариантах осуществления можно вводить антитела к В7-Н3 или их фрагменты без примесей. В дополнение к фармакологически активному средству композиции настоящего изобретения могут содержать подходящие фармацевтически приемлемые носители, включающие наполнители и вспомогательные средства, которые хорошо известны в настоящем уровне техники и представляют собой относительно инертные вещества, которые облегчают введение фармакологически эффективного вещества или которые облегчают переработку активных соединений в препараты, которые можно фармацевтически применять для доставки к месту приложения действия. Например, наполнитель может придавать форму или консистенцию или действовать в качестве разбавителя. Подходящие наполнители включают, но без ограничений, стабилизирующие средства, увлажняющие и эмульгирующие средства, соли для изменения осмолярности, инкапсулирующие средства, буферы и усилители проникновения через кожу.
Подходящие составы для парентерального введения включают водные растворы активных соединений в водорастворимой форме, например водорастворимые соли. К тому же можно вводить суспензии активных соединений, которые подходят для инъекционных суспензий на масляной основе. Подходящие липофильные растворители или носители включают жирные масла, например кунжутное масло, или синтетические сложные эфиры жирных кислот, например этилолеат или триглицериды. Водные инъекционные суспензии могут содержать вещества, которые увеличивают вязкость суспензии и включают, например, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, сорбит и/или декстран. Необязательно, суспензия может также содержать стабилизаторы. Можно также применять липосомы для инкапсуляции средства для доставки в клетку.
Фармацевтический состав для системного введения согласно настоящему изобретению можно составлять для энтерального, парентерального или местного введения. Действительно, все три типа состава можно применять одновременно для достижения системного введения активного ингредиента. Наполнители, а также составы для парентеральной и непарентеральной доставки лекарственного средства излагаются в Кешт§!оп: ТНе 8с1епсе Апй Ргасйсе ОГ ΡНЛКМАСΥ, 21к! Еййюп, Ырршсо!! ХУППатк & ХУШйпк РиЪИкЫпд (2005). Подходящие составы для орального введения включают твердые или мягкие желатиновые капсулы, пилюли, таблетки, включая таблетки, покрытые оболочкой, эликсиры, суспензии, сиропы или средства для ингаляции и их формы с контролируемым высвобождением. В основном данные
- 52 030226
средства составляют для введения путем инъекции (например, внутрибрюшинно, внутривенно, подкожно, внутримышечно и т.д.), хотя также можно применять другие формы введения (например, оральная, мукозальная и т.д.).
Соответственно, антитела к В7-Н3 предпочтительно объединяют с фармацевтически приемлемыми средами, такими как солевой раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы и т.п.
Конкретный режим дозирования, т.е. доза, выбор времени и повторение, будут зависеть от конкретного индивидуума и истории болезни индивидуума. В основном вводят дозу по меньшей мере приблизительно 100 мкг/кг веса тела, более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 250 мкг/кг веса тела, еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 750 мкг/кг веса тела, еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 3 мг/кг веса тела, еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 5 мг/кг веса тела, еще более предпочтительно по меньшей мере приблизительно 10 мг/кг веса тела.
Эмпирические факторы, которые необходимо учитывать, такие как время полужизни, в целом будут вносить вклад в определение дозировки. Антитела, которые совместимы с иммунной системой человека, такие как гуманизированные антитела или полностью человеческие, можно применять для пролонгирования времени полужизни антитела и для предотвращения атаки антитела иммунной системой хозяина. В ходе терапии можно определять и корректировать частоту введения, и она базируется на снижении количества раковых клеток, поддержании снижения количества раковых клеток, снижении пролиферации раковых клеток или задержании развития метастаза. В качестве альтернативы могут подойти составы антител к В7-Н3 с замедленным непрерывным высвобождением. Различные составы и устройства для достижения замедленного высвобождения известны в настоящем уровне техники.
В одном варианте осуществления дозировки для антител к В7-Н3 можно определить эмпирически на индивидуумах, кому назначали одно введение или несколько введений. Индивидуумам назначают возрастающие дозировки антитела к В7-Н3. Для оценки эффективности антител к В7-Н3 можно отслеживать маркер конкретной стадии ракового заболевания. Они включают непосредственные измерения размера опухоли путем пальпации или визуального наблюдения, опосредственное измерение размера опухоли путем рентгеновского анализа или других методов визуализации; положительную динамику, которую оценивают путем непосредственной биопсии опухоли и микроскопического исследования образца опухоли; измерение опосредованного опухолевого маркера (например, РδА для рака простаты), уменьшение боли или паралича; нормализованную речь, зрение, дыхание или другое нарушение функции, связанное с опухолью; повышенный аппетит; или повышение качества жизни, что измеряют путем общепринятых тестов, или пролонгирование срока существования. Специалисту настоящей области будет очевидно, что дозировка будет варьировать в зависимости от индивидуума, типа рака, стадии рака, начал ли рак метастазировать к другому местоположению у индивидуума и применяемых прошедших и сопутствующих видов лечения.
Другие составы включают подходящие формы для доставки, известные в настоящем уровне техники, включая, но без ограничения, носители, такие как липосомы. См., например, Майа!о е! а1. (1997) "Са!ютс ЫрМ-Вакей Оепе ОеЫегу δук!етк: Рйагтасеийса1 Регкресйуек", Рйагт. Кек. 14:853-859. Липосомальные препараты включают, но без ограничения, цитофектины, многослойные везикулы и однослойные везикулы.
В некоторых вариантах осуществления может присутствовать более одного антитела. Антитела могут быть моноклональными или поликлональными. Такие композиции могут содержать по меньшей мере одно, по меньшей мере два, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять разных антител, реактивных в отношении карцином, аденокарцином, сарком или аденосарком. Антитело к В7-Н3 можно примешать к одному или нескольким антителам, реактивным в отношении карцином, аденокарцином, сарком или аденосарком в органах, включая, но без ограничения, яичник, молочную железу, легкое, простату, толстую кишку, почку, кожу, щитовидную железу, кость, верхний отдел пищеварительного тракта и поджелудочную железу. В одном варианте осуществления применяют смесь разных антител к В7-Н3. Смесь антител, как их часто обозначают в настоящем уровне техники, могут быть особенно полезными в лечении более широкого спектра популяции индивидуумов.
После описания в общих чертах настоящего изобретения то же самое будет более легко понятным посредством отсылки к следующим примерам, которые предоставляются с целью иллюстрации и не предназначены для ограничения настоящего изобретения, если не оговаривается иное.
Пример 1. Исследования иммуногистосовместимости.
В результате иммунизации опухолевой клеткой/фетальной клеткой-предшественником создали панель из 49 тАЬ. Антитела оценивали в отношении их способности проявлять дифференциальное 1НСокрашивание опухолевой ткани по отношению к нормальной, нераковой ткани, возможности применения в моделях на приматах (и, в частности, на яванском макаке) эффективности антитела, уровней аффинности и специфичности к антигену, и уровней иммуномодуляторной активности, и клеточной интернализации. 21 тАЬ первоначально идентифицировали путем Мδ анализа и/или связывания с клетками В7-Н3-СНО. Оставшиеся 28 тАЬ идентифицировали путем повторного скрининга библиотеки посредством Εί-ΙδΆ с белком В7-Н3. Характеристики 46 из 49 членов панели представлены в табл. 2.
- 53 030226
Таблица 2
Назва ние Изотип 1НС АТСС анали 3 Интернализация иОАКТ™ Анализ В1АСОКЕ™ Связывание Супо В7-НЗ
ВКСА8 4ϋ 1§О1/к 2а 2 + + + ++
ΤϋΗ6 1§01/к 2а 1 + + +/- +
ТЕ37 1§01/к 2а 1 + + + -
ВКСА6 8ϋ 1§01/к 2Ь 3 + + ++ ++
ВКСА6 9ϋ 1§01/к 2Ь 3 + + ++ ++
ΟΒ8 1§01/к 2Ь 3 + + + ++
8027 1§02Ь/к 2Ь 1 + + +
ОУСА 22 1§01/к 2с 3 + + +/- +
РКСА1 57 1§01/к 2с 2 + + ++
ΒΡΑ8 1§01/к 2с +/- + ++ ++
КГО35 1§01/к 2с 2 ++
ЬиСА5 0 1§02а/к 2с 1 + ++
ОУСА 21 1§01/к 2с 1 + + +
РКСА1 35 1§01/к 2с 3 + ++
8024 1§02а/к 2с 3 ++ ++
ТОН5 1§01/к 2с 3 + ++ ++
ВССА6 6 1§01/к 2с 2 +
КЕСА1 3 1§01/к 2с 3 +
КЕСА9 1§01/к 2с 3 + -
РКСА1 23 1§01/к 2с/3 3 + ++
ВКСА1 26 1§01/к 3/Р
ВКСА1 92 1§01/к 3/Р
ВКСАЗ 4 1§01/к 3/Р
КГО1 1§01/к 3/Р Νϋ + + +
КГО13 1§02а/к 3/Р 3 ++
Ш14 1§02Ь/к 3/Р -
ьисА1 1§01/к 3/Р 1 + + ++ ++
МСРУ 42 1§02а/к 3/Р ++
МСРУ 46 1§01/к 3/Р ++
ОУСА 40 1§01/к 3/Р ++
РА20 1§01/к 3/Р + ++ -
РА40 1§02Ь/к 3/Р 3 -
РА41 1§01/к 3/Р 3
РК06 1§01/к 3/Р 2 -
КЕСА2 2 1§О1/к 3/Р 3 - +
8АРЗ 1§О2а/к 3/Р +++ ++
3020 1§О1/к 3/Р +
8029 1§О1/к 3/Р ++
8ΚΙΝ2 1§О1/к 3/Р 3 +++ ++
3ΊΌ5 1§О2Ь/к 3/Р 3 ++ +
ТОН36 1§О1/к 3/Р 2 ++
ТОН37 1§О1/к 3/Р 3 +
ТОГО 1§О1/к 3/Р +++ ++ ++
ТОН40 1§О2Ь/к 3/Р 3 ++
ТОН44 1§О2Ь/к 3/Р ++
ОУСА 25 1§О1/к 3/Р 3 +
1НС-окрашивание подтвердило, что антитела, включенные в панель, которые выявляли сильное различие в связывании с опухолевой по отношению к обычной ткани у многих идентифицированных антител, проявляли ряд свойств связывания, определенных путем анализа В1АС0КЕ™, проявляли реактивность к ряду перекрывающихся и неперекрывающихся эпитопов и проявляли спектр специфичности к 41д по сравнению с 21д В7-Н3. Характеристики девяти наилучших кандидатов показаны в табл. 3 и 4.
Таблица 3
- 54 030226
Названи е Нормальная ткань Рак толсто й кишки Рак легких Рак простаты Рак молочной железы
ВКСА84 ϋ Толстая кишка 1+ Легкое 1+ Печень 1+ 1231 * ИЗО 112 1111
ΤϋΗ6 Толстая кишка 1+ Поджелудочная железа 1+ Почка 1+ Легкое 1+ Печень 1+ 1110 * 1010 111 1011
ТЕ87 1,5 1,75 3 3
ВКСА68 ϋ Поджелудочная железа 1+ Почка 1+ Легкое 1+ Печень 2+ 2321 * 3332 333 3333
ВКСА69 ϋ Толстая кишка 1+ Поджелудочная железа 1+ Почка 1+ Печень 1+ 2231 * 3231 333 3333
СВ8
8С27 Толстая кишка 1+ Поджелудочная железа 1+ Почка 1+ Печень 1+ 1221 * 1120 222 1122
ОУСА22 Толстая кишка 2+ Поджелудочная железа 2+ Печень 2+ 1122 3131 ** 222 3233
РКСА15 7 Толстая кишка 2+ Печень 2+ Кожа 2+ 2231 * 3231 333 2333
* +также стр.; ** стр. 3+
Таблица 4
Названи е Специфичност ь 21й/41ц Группа эпитопа
ВКСА84 ϋ 41§/21§ 1
ΤϋΗ6 41§/21§ 2
ТЕ87 41§ 3
ВКСА68 ϋ 41§/21§ 4
ВКСА69 ϋ 41§/21ё 4
СВ8 41§/21ё 5
8С27 41§/21ё 6
ОУСА22 41§ 7
РКСА15 7 41§/21ё 8
Табл. 5 представляет краткое описание профилей активности даных антител.
- 55 030226
Таблица 5
Назв ание Окрашивай ие нормальной ткани Различие опухолейа я/нормаль ная Опухолевая ткань положительна я Перекрестна я реактивност ь с яван. 1НС Связывани е В1АСОКЕ тм Активность 1ЮАКТ™
ВКС А84 ϋ 1 1 Строма опухоли Ьу Положительн ая (не 1:1) 78 ++ ++
ТЕ8 7 1 1 Опухоль Строма Ьу Негативная 1250 - ++
ВКС А68 ϋ 3 3 Опухоль Положительн ая (1:1) 20 +++ ++
ВКС А69 ϋ 3 3 Строма опухоли Положительн ая (1:1) 20 +++ ++
СВ8 2/3 (Надпочечни κΝϋ) 3/4 Строма опухоли ΝΏ, + рекомб. 625 + +
8С2 7 2/3 Νϋ Νϋ ΝΏ, + рекомб. 20000 + +
ОУС А22 1 1 Строма опухоли Негативная + рекомб. 2500 + ++
РКС А157 2 3 Строма опухоли Ьу Положительн ая (1:1) 20 н.о. ++
* Оптимальная концентрация в нг/мл; Νϋ, не определяли
Анализ активностей антител, показанный в табл. 6, выявил, что их соответствующие профили отличались, и что каждое антитело ассоциировалось как с преимуществами, так и недостатками по отношению друг к другу (табл. 6).
Таблица 6
Антител о Преимущества Недостатки
ВКСА84 # 1 окрашивание нормальной ткани перекрестная реактивность с
Антител о Преимущества Недостатки
ϋ # 1 различие опухолевая/нормальная окрашивание опухоли, стромы, ВУ средняя аффинность, уникальный участок связывания (титруемое связывание) яван. не 1:1
ВКСА68 ϋ #3 окрашивание нормальной ткани #3 различие опухолевая/нормальная перекрестная реактивность с яван. 1:1 высокая аффинность сильная активность 1ЛЭАКТ™ Окрашивание только опухоли
ВКСА69 ϋ #3 окрашивание нормальной ткани #3 различие опухолевая/нормальная перекрестная реактивность с яван. 1:1 окрашивание опухоли, стромы высокая аффинность сильная активность 1ЮАКТ™
РКСА15 7 #2 окрашивание нормальной ткани #3 различие опухолевая/нормальная перекрестная реактивность с яван. 1:1 окрашивание опухоли, стромы, ВУ Сильная активность СГОАКТ™ В1АСОКЕ™
ТЕ87 #1/2 окрашивание нормальной ткани #1/2 различие опухолевая/нормальная окрашивание опухоли, стромы, ВУ специфичный к 41§ Сильная активность СГОАКТ™ нет перекрестной реактивности с яван. низкая аффинность
ОУСА22 #1/2 окрашивание нормальной ткани #1/2 различие опухолевая/нормальная низкая аффинность окрашивание опухоли, стромы специфичный к 41§ Сильная активность Щ)АК.Т™ нет перекрестной реактивности с яван. низкая аффинность низкая аффинность
СВ8 #2/3 окрашивание нормальной ткани (надпочечник не определяли) #3/4 различие опухолевая/нормальная окрашивание опухоли, стромы Умеренная активность СЮ АКТ™ перекрестную реактивность с яван. не определяли низкую аффинность
ЗС27 #2/3 нормальный ткань окрашивание 2 различие опухолевая/нормальная не определяли Умеренная активность ЦЛАКТ™ перекрестную реактивность с яван. не определяли низкая аффинность
- 56 030226
Поскольку ВКСА84В, ВКСА68В, ВКСА69В и РКСА157 проявляли более чистые 1НС-профили нормальной ткани, более сильное различие 1НС опухоль/нормальная ткань, умеренное-сильное связывание (В1АС0КЕ™/1НС), перекрестную реактивность с В7-Н3 яванских макак и сильную активность иОАКТ™, данные разновидности антител выбрали для дополнительного усовершенствования. Данные антитела отличались от ТЕ87 и 0VСА2, которые проявляли низкую аффинность (в анализе В1АС0КЕ™) и не проявляли перекрестную реактивность с В7-Н3 яванского макака. Данные антитела отличались от 8О27, которые проявляли низкую аффинность (в анализе В1АС0КЕ™), низкую 1НС-эффективность (слабое связывание) и более низкую активность иЭАКТ™. Данные антитела отличались от ОВ8, которые проявляли низкую аффинность (в В1АС0КЕ™ анализе), низкое различие 1НС опухоль/нормальная ткань и более низкую активность иЭАКТ™.
С применением клеток положительного контроля Сак 1-2 и Н§700Т в 1НС-исследованиях выявили, что каждое из антител проявляло разную оптимальную концентрацию и разную дифференциальную концентрацию по отношению друг к другу (табл. 7).
Таблица 7
Антитело Оптимальная 1НСконцентрация Дифференциальная 1НСконцентрация
ВКСА84О 0,625 мкг/мл 0,078 мкг/мл
ВКСА68О 0,156 мкг/мл 0,0195 мкг/мл
ВКСА69О 0,156 мкг/мл 0,0195 мкг/мл
РВСА157 0,078 мкг/мл 0,0195 мкг/мл
ТЕ87 5 мкг/мл 1,25 мкг/мл
ОУСА22 10 мкг/мл 2,5 мкг/мл *
СВ8 1,25 мкг/мл 0,625 мкг/мл
8С27 20 мкг/мл не определяли **
ΤϋΗ6 20 мкг/мл не определяли ***
* ОУСА22 только демонстрировало связывание с клетками саН2, не
демонстрировало связывание с клетками Нз700Т. Решение по оптимицазии основывалось на связывании клеток сак12.
** Поскольку 8027 не демонстрировало соответствующих результатов в
титровальном анализе между двумя операторами, низкую аффинность и дифференциальную концентрацию не определяли.
* * * Исследование ТЭН6 не осуществляли из-за слишком низкой аффинности
к клеткам положительного контроля
С помощью оптимальных и дифференциальных концентраций, указанных в табл. 7, определяли 1НС-ответы антител В7-Н3 в тканях человека. Результаты этих анализов для надпочечника, печени, поджелудочной железы, почки, легкого и толстой кишки показаны в табл. 8А-8В и 9А-9В (все антитела проявляли отрицательные 1НС-ответы в отношении ткани сердца).
Таблица 8А
1НС тАЬ В7Н3 при оптимальной концентрации в тканях человека
тАЬ Надпочечник Печень Поджелудочная железа
ВКСА84О 0,625 мкг/мл Отрицательно Клетки, выстилающие синусоиды ++ Гепатоциты +, 5-10% Эпителий + 5% Волокно ++
ВКСА68О 0,156 мкг/мл Корковое вещество +++ Клетки, выстилающие синусоиды ++ Гепатоциты ++ (т) Эпителий + Волокно ++
ВКСА69О 0,156 мкг/мл Корковое вещество +++ Гепатоциты ++ (т) Эпителий + Волокно ++
ТЕ87 5 мкг/мл Корковое вещество + Клетки, выстилающие синусоиды + Эпителий + 5% Волокно ++
ОУСА22 10 мкг/мл Корковое вещество + Клетки, выстилающие синусоиды ++ Гепатоциты + (т) Эпителий + 5% Волокно ++
РКСА157 0,078 мкг/мл Корковое вещество ++ Клетки, выстилающие синусоиды ++ Гепатоциты + (т) Эпителий + 5% Волокно ++
ОВ8 1,25 мкг/мл не определяли Клетки, выстилающие синусоиды ++ Гепатоциты + (т) Эпителий + Волокно ++
- 57 030226
1НС тАЬ В7Н3 при опти мальной концентрации в тканях человека
тАЬ Почка Легкое Толстая кишка
ВКСА84Ц 0,625 мкг/мл Отрицательно Эпителий + (5-10%) Эпителий +
ВКСА68Ц 0,156 мкг/мл Фибробласт +, редко Эпителий + Слизистая оболочка ++
ВКСА69Ц 0,156 мкг/мл Фибробласт +, редко Эпителий + Слизистая оболочка +
ТЕ87 5 мкг/мл Отрицательно Отрицательно Эпителий +
ОУСА22 10 мкг/мл Фибробласт + Отрицательно Эпителий +
РКСА157 0,078 мкг/мл Отрицательно Отрицательно Слизистая оболочка +
ОВ8 1,25 мкг/мл Отрицательно Эпителий + Слизистая оболочка +
Таблица 8В
Таблица 9 А
1НС тАЬ В7Н3 при дифференциальной концентрации в тканях человека
тАЬ Надпочечник Печень Поджелудочная железа
ВКСА84Ц 0,078 мкг/мл Отрицательно Клетки, выстилающие синусоиды + Волокно + (редко)
ВКСА68Ц 0,0195 мкг/мл Корковое вещество ++ Гепатоциты + (т) Волокно +
ВКСА69Ц 0,0195 мкг/мл Корковое вещество ++ Гепатоциты + (т) Волокно +
ТЕ37 1,25 мкг/мл Фибробласт + Клетки, выстилающие синусоиды + Эпителий +, 5% Волокно ++
ОУСА22 2,5 мкг/мл Фибробласт + Клетки, выстилающие синусоиды + Волокно +
РКСА157 0,0195 мкг/мл Не определяли Клетки, выстилающие синусоиды + Гепатоциты + (т) Волокно +
ОВ8 0,625 мкг/мл Не определяли Клетки, выстилающие синусоиды ++ Гепатоциты + (т) Волокно +
Таблица 9В
1НС тАЬ В7Н3 при дифференциальной концентрации в тканях человека
тАЬ Почка Легкое Толстая кишка
ВКСА84О 0,078 мкг/мл Отрицательно Отрицательно Эпителий +
ВКСА68О 0,0195 мкг/мл Отрицательно Фибрин + (редко) Слизистая оболочка +
ВКСА69О 0,0195 мкг/мл Отрицательно Отрицательно Слизистая оболочка +
ТЕ37 1,25 мкг/мл Отрицательно Отрицательно Эпителий +
ОУСА22 2,5 мкг/мл Отрицательно Отрицательно Эпителий +
РКСА157 0,0195 мкг/мл Отрицательно Отрицательно Слизистая оболочка +
ОВ8 0,625 мкг/мл Отрицательно Отрицательно Слизистая оболочка +
1НС-исследования, проводимые с использованием образцов рака, показали, что антитела В7-Н3 настоящего изобретения можно применять для идентификации и диагностики рака в многочисленных источниках ткани (табл. 10). В табл. 10 числа указывают число знаков плюс (1 = +, 2 = ++, 3 = +++); причем каждое число относится к разному тестируемому образцу.
- 58 030226
Таблица 10
тАЬ мкг/мл Рак простаты Рак молочной железы Рак легкого Рак толстой кишки
ВКСА84Л 0,625 мкг/мл 2, 2, 1 3, 3, 3, 3 2, 3, 2(строма) , 1(кр. с.) 2(строма) , з, 3, 3 (строма)
0,078 мкг/мл 0, 2, 3, 2 1 (строма), 1 (строма), 1 (строма), 2, 3 1, 1, о, 1 2, 2(строма) 1 (строма) 2(строма)
ВКСА68Л 0,156 мкг/мл 2, 3, 3, 3 2, 3, 3, 3, 3 3, 3, 2, 2 3, 3, 3, 3
0,0195 мкг/мл о, 1, 1, 1 о, 0, 2, 2, 1 о, 1, 1, 0 1, 1, 1, 1
ВКСА69О 0,156 мкг/мл 3, 3, 3 3, 3, 3, 3, 3 3, з, 2, 2(строма) 3, 3, 3, 3
о, 1, 2, 1 1, 2, 1, 1 1, 1, о, 1 1(кр. с.), 2(строма) , ί, 1
ОВ8 1,25 мкг/мл 2, 3, 1 2, 2, 1, 2 3, 3, 0, 0 2(строма) , 2, 2, 2
0,625 мкг/мл о, 1, 1 0, 0, 0, 0, 1 1, 0, 0, 0 1 (строма) 1 (строма) , о, о
ТЕ87 5 мкг/мл 2, 3, 2, 3 1 (строма), 3, 3, 3, 2 3, 2, 1 (строма) , 1(кр. с.) 3, 3, 2, 2
1,25 мкг/мл 1, 2, 2, 3 1 (строма), 2, 3, 3, 2 3, 1, 1 (строма) , 1(кр. с.) 3, 2(строма) 2(строма) , 2
ОУСА22 10 мкг/мл 3, 2, 2, 1 1 (строма), 2, 2, 3, 3 3, 2, 1 (строма) , о 1 (строма) , 1, 1, 2(строма)
2,5 мкг/мл 1, 1, 3, 1 1 (строма), 1 (строма), 1 (строма), 3, 2, 2 2, 1, 0, 0 1, о, 2(строма) , о
РКСА157 0,078 мкг/мл 2, 2, 2, 3 1, 2, 2, 3, 3 2, 2, 1 (строма) , 1(кр. с.) з, з, 2(строма) 2(строма)
0,0195 мкг/мл о, 1, 2, 1 1 (строма), 0, 2, 1 (строма) 0, 1, 0, 0 1, 1, 1 (строма) 1 (строма)
В отношении раковых клеток простаты, молочной железы, толстой кишки и легкого, обработанных антителом В7-Н3 ВКСА84Э, окрашивание образцов опухоли присутствовало в опухолевых клетках и стромальных клетках, включая сосудистую сеть опухоли. В некоторых образцах опухоли окрашивание стромы было намного сильнее, чем опухолевых клеток. Когда тАЬ ВКСА84Э титровали до более низкой концентрации, некоторые случаи демонстрировали сниженное окрашивание у опухолевых клеток, но все еще сохранялось интенсивное окрашивание стромы. После окрашивания с помощью ВКСА84Э из расчета 0,625 мкг/мл раковые клетки простаты проявляли 1НС 3/3+; раковые клетки молочной железы проявляли 1НС 4/4+; раковые клетки толстой кишки проявляли 1НС 4/4+ и раковые клетки легкого проявляли 1НС 4/4+. После окрашивания с помощью ВКСА84Э из расчета 0,078 мкг/мл раковые клетки простаты проявляли 1НС 3/4+; раковые клетки молочной железы проявляли 1НС 5/5+; раковые клетки толстой кишки проявляли 1НС 4/4+ и раковые клетки легкого проявляли 1НС 3/4+.
Нормальную печень обрабатывали антителом В7-Н3 ВКСА68Э, и окрашивание наблюдалось в гепатоцитах и клетках, выстилающих синусоиды. Нормальная поджелудочная железа, окрашенная антителом В7-Н3 ВКСА68Э, проявляла мультифокальное окрашивание коллагенового волокна и эпителия. Нормальные клетки надпочечника, обработанные антителом В7-Н3 ВКСА68Э, проявляли окрашивание в корковом веществе. После окрашивания с помощью ВКСА68Э из расчета 0,156 мкг/мл раковые клетки желудка, почки и яичника все проявляли 1НС 5/5+.
- 59 030226
Дополнительные анализы 1НС-окрашивания проводили на образцах раковых тканей желудка, почки и яичника. Результаты таких анализов показаны в табл. 12. В табл. 11 числа обозначают число знаков плюс (1= +, 2= ++, 3 = +++); причем каждое число относится к разному тестируемому образцу.
Таблица 11
тАЬ мкг/мл рак желудка рак почки рак яичников
ВКСА84О 0,625 мкг/мл 2,1,2,2,2 1,2,1,1,1 0,3,1,2,2
0,078 мкг/мл 1,0,0,1,0 ο,ι,ο,ι,ο,ι 0,2,0,1,1
ВКСА68О 0,156 мкг/мл 3,2,3,3,3 3,3,2,3,3,3 2,3,3,2,2
0,0195 мкг/мл 2,1,2,1,1 2,2,2,2,2,2 1,2,2,1,1
ОУСА22 10 мкг/мл 3,1,3,1,1 3,1,2,3,0,2 2,3,2,1,1
2,5 мкг/мл 2,0,2,1,0 2,1,1,2,0,1 1,2,1,0,1
ТЕ87 5 мкг/мл 2,1,3,2,1 2,3,1,2,2,1 1,3,1,2,2
1,25 мкг/мл 2,0,2,1,1 2,2,1,1,1,1 1,3,1,2,2
Вкратце, все тестируемые тАЪ показали различные степени интенсивности окрашивания в нормальной печени, поджелудочной железе, толстой кишке и легком. На фиг. 1А показаны результаты 1НСисследований, проведенных с использованием тканевых препаратов нормальной поджелудочной железы, печени, легкого и толстой кишки с ВКСА84О из расчета 0,625 и 0,078 мкг/мл. Окрашивание печени было относительно ограниченным в клетках, выстилающих синусоиды (фибробласты и купферовские клетки печени), с ВКСА84О и ТЕ87. ОУСА22 показали мембранное окрашивание мембраны гепатоцитов помимо клеток, выстилающих синусоиды, при оптимальной концентрации. Однако окрашивание в гепатоцитах исчезало при дифференциальной концентрации. Все другие тАЪ демонстрировали окрашивание в гепатоцитов, включая или окрашивание мембраны, или цитоплазмы, как при оптимальной, так и при дифференциальной концентрации. Окрашивание поджелудочной железы наблюдали главным образом у коллагенового волокна и небольшого процента эпителия (ацинарные клетки или/и клетки вставочного протока). Окрашивание в эпителии ослаблялось или исчезало при дифференциальной концентрации. Окрашивание толстой кишки относительно ограничивалось в апикальной мембране эпителия крипты и фибробласта слизистой. Связывание в лимфоузлах толстой кишки не наблюдали. Легкое показало очень слабое и неоднородное окрашивание в эпителии с помощью ВКСА84П, ВКСА68П, ВКСА69О и ОВ8. Однако окрашивание исчезало при дифференциальной концентрации. Не наблюдали окрашивания посредством ТЕ87, ОУСА22 и РКСА157 в легком при обеих концентрациях. Наблюдали окрашивание коры надпочечника почти со всеми тАЪ при оптимальной концентрации, за исключением ВКСА84О. Окрашивание с помощью ТЕ87 и ОУСА22 в надпочечнике явно ослаблялось при дифференциальной концентрации. В сердце и почке не было показано явное окрашивание всеми тАЪ (фиг. 1В). Учитывая эти свойства, ВКСА84О рассматривали как наилучшее из тАЪ, за которым следовали по порядку (2) ТЕ87, (3) ОУСА22, (4) группа ВКСА68П, ВКСА69О и РКСА157 и на последнем месте (5) ОВ8.
Все тАЪ, включенные в исследование, показали положительное окрашивание в 4 типах рака при оптимальной концентрации. При дифференциальной концентрации ВКСА84О еще сохраняло хорошее окрашивание в раке простаты, раке молочной железы и раке толстой кишки. ТЕ87 сохраняло хорошее окрашивание в 4 исследуемых типах рака. Остальные тАЪ показали различные интенсивности окрашивания в разных типах опухолей. Окрашивание образца опухоли наблюдали в опухолевых клетках и стромальных клетках, включая сосудистую сеть. Некоторые образцы опухоли показали положительное окрашивание только в сосудистой сети, т.е. ВКСА84П, ВКСА69П, ТЕ87 и РКСА157. Некоторые опухоли показали более интенсивное окрашивание стромы, чем окрашивание опухолевых клеток. Когда тАЪ титровали до более низкой концентрации на данных образцах, в некоторых случаях было показано ослабленное или не было показано окрашивание в опухолевых клетках, но все еще сохранялось интенсивное окрашивание стромы. В основном, что касается экспрессии в нормальных тканях человека и дифференциальной экспрессии в нормальных по сравнению с опухолевыми тканями, порядок тАЪ от наилучших 1НС-показателей до наихудших показателей является следующим: (1) ВКСА84П, (2) ТЕ87, (3) ОУСА22, (4) группа ВКСА68П, ВКСА69О и РКСА157 и на последнем месте (5) ОВ8. В табл. 12 и на фиг. 2 показаны результаты для антитела ВКСА84О.
- 60 030226
Таблица 12
Тип раковой ткани ВКСА84О 0,625 мкг/мл ВКСА84О 0,078 мкг/мл
Простата 3/3+ 3/4+
Молочная железа 4/4+ 5/5+
Толстая кишка 4/4+ 4/4+
Легкое 4/4+ 3/4+
Пример 2. Перекрестная реактивность В7-Н3 яванского макака.
Последовательность В7-Н3 яванского макака имеет общую приблизительно 90% гомологию со своим аналогом у человека, что позволяет сделать предположение, что яванский макак представляет собой превосходную модель для взаимодействий с В7-Н3 человека. Проводили исследования для оценки перекрестной реактивности В7Н3-кандидатов ВКСА84Э, ВКСА68Э, ВКСА69Э, ТЕЗ7, ОVСΑ22 и РКСА157 с надпочечником, печенью, почкой, поджелудочной железой и легким, а также в одном случае с плацентой доношенного плода яванского макака, для того чтобы сравнить любую перекрестную реактивность с интенсивностью окрашивания и паттернами окрашивания, которые наблюдали для тканей человека.
Концентрация для окрашивания для каждого тестируемого МаЬ является оптимальной концентрацией, которую определяли в клетках положительного контроля Сак1-2 и Н8700Т (см. табл. 8). Коммерческое антитело козы к В7-Н3 человека (перекрестно-реагировавшее с яван.) выбрали в качестве антитела положительного контроля для окрашивания плацентарной ткани яванского макака. Соответствующие изотипические контроли применяли в каждом цикле экспериментов. Результаты этих исследований показаны в табл. 13.
Таблица 13
тАЬ Надпочечн ик(2) Печень(2) Поджелудо чная железа(2) Почка(2) Легкое(2) Плацента(1 )
ВКСА84 ϋ 0,625 мкг/мл Отрицатель но Отрицател ьно Отрицатель но Отрицател ьно 1/2 Эпителий 1+ Децидуальн ые клетки 2+ Мезенхимал ьные клетки Отрицатель но
ВКСА68 ϋ 0,156 мкг/мл Корковое вещество 3+ 2/2 Гепатоцит ы 1+ (т) Клетки, выстилаю щие синусоиды 1+ ' 1/2 Волокно 2+ Эпителий 1+ Фиброблас т 1+ Отрицател ьно Децидуальн ые клетки, ворсинки, Мезенхимал ьные клетки 3+
ВКСА69 ϋ 0,156 мкг/мл Корковое вещество 2+ 1/2 Гепатоцит ы 1+ (т) 1/2 Эпителий 1+ Фиброблас т 1+ редко Отрицател ьно Децидуальн ые клетки 2+, ворсинки, Мезенхимал ьные клетки 2+
ТЕ87 5 мкг/мл Отрицатель но Отрицател ьно Отрицатель но Отрицател ьно Отрицател ьно Отрицатель но
ОУСА22 10 мкг/мл Отрицатель но Отрицател ьно Отрицатель но Отрицател ьно Отрицател ьно Отрицатель но
РКСА15 7 0,078 мкг/мл Корковое вещество 1+ 1/2 Гепатоцит ы 1+ (т) Отрицатель но Отрицател ьно Отрицател ьно Децидуальн ые клетки 2+, ворсинки, Мезенхимал ьные клетки 1+
Примечание: ВКСА84О показали отрицательное окрашивание в печени и поджелудочной железе из расчета до 5 мкг/мл. Хотя ОУСА22 не связывалось с тканью яван. в 1НС, наблюдали умеренное связывание с рекомбинантным В7НЗ яван. на клетках СНО. 1НС-оценка в нормальных тканях представляет собой систему оценки отрицательно, 1+, 2+ и 3+ 4; т=мембрана; 2/2= 2 из 2 случаев, Уг= 1 из 2 случаев
В исследовании ВКСА84Э (0,625 мкг/мл) 1НС-окрашивание в плаценте яванского макака проявляло окрашивание в децидуальных клетках, но не ворсинках. Не наблюдали окрашивание в печени и поджелудочной железе яван., однако наблюдали окрашивание клеток, выстилающих синусоиды, в печени человека и наблюдали локальное окрашивание волокна и эпителия в ткани поджелудочной железы человека.
- 61 030226
В исследовании ВКСА68Э (0,156 мкг/мл) 1НС-окрашивание в плаценте яванского макака проявляло окрашивание в децидуальных клетках, мезенхимальных клетках (эндотелий и фибробласты) и ворсинках. Окрашивание присутствовало в мембране гепатоцитов и цитоплазме фибробластов печени, а также в волокнах поджелудочной железы и в цитоплазме эпителия поджелудочной железы. Таким образом, ткань печени и поджелудочной железы человека и яван. проявляли похожие паттерны окрашивание с помощью ВКСА68Э.
Кратко, все ВКСА84П, ВКСА68П, ВКСА69Э и РКСА157 показали перекрестную реактивность в тканях яван. ВКСА84Э не показало окрашивание в печени и поджелудочной железе обезьяны; такое окрашивание наблюдали в тканях печени и поджелудочной железы человека. ВКСА68Э и ВКСА69Э показали похожую интенсивность окрашивания и паттерны окрашивания в тканях обезьяны. Хотя ВКСА68П, ВКСА69Э и РКСА157 показали сравнимый с тканями человека паттерн окрашивания, интенсивность окрашивания не идентична в отношении тканей человека при оптимальных условиях. ТЕ87 и ОУСА22 не показали какого-либо окрашивания в тканях обезьяны при оптимальных условиях.
Краткое описание сравнительных результатов 1НС-окрашивания в тканях яванского макака и тканях человека представлены в табл. 14.
Таблица 14
тАЬ Надпочеч ник Печень Поджелудо чная железа Почка Легкое Плацента
ВКСА84 Децидуальн
ϋ 0,625 ые клетки
Отрицател Отрицател Отрицатель Отрицател 1/2 Эпителий 2+ Мезенхимал
мкг/мл ьно ьно но ьно
Яванский 1+ ьные клетки
макак отрицательн о
ВКСА84 ϋ Отрицател 2/2 Клетки, Эпителий 1+, Отрицател Эпителий 1+, Децидуальн ые клетки
0,625 ьно выстилаю 5%, ьно 5-10% 1+,
мкг/мл щие волокно 2+ ворсинки,
Человек синусоиды Мезенхимал
2+, ьные клетки
Гепатоцит ы 1+ 5-10% 2/2 1+
ВКСА68 Гепатоцит Децидуальн
ϋ Корковое ы 1+ (т) 1/2 ые клетки,
0,156 Клетки, Волокно 2+ Фиброблас Отрицател ворсинки,
мкг/мл 3+ выстилаю Эпителий т 1+ ьно Мезенхимал
Яванский щие 1+ ьные клетки
макак синусоиды 1+ 3+
Клетки, Децидуальн
ВКСА68 выстилаю ые клетки
ϋ Корковое щие Эпителий Фиброблас з+,
0,156 вещество синусоиды 1+ т 1+ 1+ ворсинки,
мкг/мл 3+ 2+, Волокно 2+ редко Мезенхимал
Человек Гепатоцит ьные клетки
ы 2+ (т) 3+
ВКСА69 Децидуальн
ϋ 0,156 мкг/мл Яванский ые клетки
Корковое вещество 1/2 Гепатоцит 1/2 Эпителий Фиброблас т 1+ Отрицател ьно 2+, ворсинки,
2+ ы 1+ (т) 1+ редко Мезенхимал
ьные клетки
макак 2+ Децидуальн
ВКСА69 ые клетки
ϋ Корковое Гепатоцит Эпителий Фиброблас Эпителий з+,
0,156 мкг/мл вещество 3+ ы 2+ (т) 1+ Волокно 2+ т 1+ редко 1+ ворсинки, Мезенхимал
Человек ьные клетки
3+ Децидуальн
РКСА157 ые клетки
0,078 мкг/мл Корковое вещество 1/2 Г епатоцит Отрицатель Отрицател Отрицател ьно 2+, ворсинки,
Яванский 1+ ы 1+ (т) ьно Мезенхимал
макак ьные клетки
1+
Клетки,
РКСА157 0,078 мкг/мл Человек Корковое вещество 2+ выстилаю щие синусоиды 2+, Гепатоцит ы 1+ (т) Эпителий 1+ 5% Волокно 2+ Отрицател ьно Отрицател ьно не определяли
- 62 030226
Пример 3. тАЬ В7-Н3 связываются со множеством линий раковых клеток АТСС.
Было обнаружено, что антитела настоящего изобретения способны связываться со множеством линий раковых клеток, содержащихся в коллекциях американской коллекции типовых культур. В табл. 15 и 16 суммируются результаты связывания.
_Таблица 15
Антитело
Клеточные линии ВБА08 ВКСА68Ц ВКСА69Ц ВКСА84Ц РКСА157
Нормальные линии человека
НМЕС ++/+++ +++ +++ ++
НиУЕС Νϋ ++ +/++ +/- +/++
Линии рака молочной железы человека
ВТ474 +++ ++ ++/+++ +/++ ++/+++
МСР7 +++ ++ ++/+++ + ++
МЦА175 Νϋ
МЦА361 Νϋ ++ +/+/- ++
8КВКЗ +++ ++
Линии рака легкого человека
А549 +++ +/+/- +/- +/-
Са1иЗ +++ +/++ + +/++
δΚΜΕδΙ +++ ++ ++/+++ +/++ ++
Линии рака яичника человека
Εδ-2 +++ +/-
δΚΟΥ3 +++ ++ +/++ +/+/- ++
Линии рака поджелудочной железы человека
Рапс-1 ++/+++ +/++ +/++ +/+/- +/++
АзРС-1 +++
НРАРП +++
Нз700Т +++ ++/+++ +++ +++
Линии рака толстой кишки человека
Со1о205 Νϋ
НТ-29 +++ + + +
δΥ480 +++ +/- +/-
δΥ948 Νϋ + +
Линии рака почки человека
293 +++ ++ ++ + ++/+++
786-0 +++ ++ ++ + ++/+++
А498 +++ ++ ++ ++ ++/+++
Сакз2 +++ +++ +++ ++ ++/+++
Клеточные линии, не относящиеся к человеку
Соз7 +++ + +/++ +/- +/++
КЬ65 -
δΥΤ2 Νϋ
Линии рака простаты человека
22Κν1 +++
ШЛ45 +++ + + + +/+/-
БКСаР +++ ++ ++ +/++ ++/+++
РСЗ +++ +/+/- +/- +/- +/-
ΤϋΗ Νϋ +/+/- +/+/- +
Линии рака желудка человека
Ηδ746Τ Νϋ +/++ +/++ + ++
N87 Νϋ +/++ +/++ +/- +/++
- 63 030226
Таблица 16
Антитело
Клеточные линии ΤϋΗ06 ОУСА22 СВ8 8С27 ТЕ87
Нормальные линии человека
НМЕС
ниУЕС +/+/- +/- +/-
Линии рака молочной железы человека
ВТ474 +/++ + ++ +/++ +/++
МСГ7 + + ++ +/+/- +
ХГОА175 ++
ΜϋΑ361 +/+/- +
ЗКВКЗ ++
Линии рака легкого человека
А549
Са1иЗ +
5КМЕ51 +/++ +/- +/++ + +
Линии рака яичника человека
ЕЗ-2
ЗКОУЗ + +/+/-
Линии рака поджелудочной железы человека
Рапс-1 +/+/- + +/- +/+/-
АзРС-1
НРАЕП +
Нз700Т + +++ +++ + +++
Линии рака толстой кишки человека
Со1о205 +
НТ-29 + +/+/- +/+/-
8ХУ480 +/- +++
8ХУ948 +/- +
Линии рака почки человека
293 +/+/- + +/+/- +
786-0 + +* +/- +
А498 + +/++ +/++
СаИ2 ++ + +++ +/++ ++
Клеточные линии, не относящиеся к человеку
Соз7 + +/+/- * +/-
КБ65
8УТ2
Линии рака простаты человека
22Κν1 +
ШЛ45 +/- +
ЕИСаР +/+/- + +* +/+/- +
РСЗ
ΤϋΗ +++ +/- +/-
Линии рака желудка человека
Н3746Т + | +/+/- | +/- | +/-
N87 | +/+/- 1 +/-
Пример 4. Переназначенный киллинг шАЪ В7-Н3.
Антитела настоящего изобретения связываются с В7-Н3, присутствующим на поверхности раковых клеток. С помощью общепринятых способов такие антитела можно метить флюоресцеином, как описано выше. Когда такие меченые молекулы инкубируют в присутствии молекул ББАКТ™ с эпитопсвязывающим доменом, который связыватся с Т-клеточным рецептором, и эпитоп-связывающим доменом, который связыватся с флюоресцеином (ТСК-ЦБАКТ™), они могут связываться с молекулами БАКТ™ и, таким образом, локализовать их на поверхности клетки, которая экспрессирует В7-Н3, и вызвать переназначенный киллинг.
А. Переназначенный киллинг клеток карциномы почки А498.
Чтобы продемонстрировать такой переназначенный киллинг, меченные флюоресцеином антитела В7-Н3 инкубировали с такими молекулами ТСК-ЦБАКТ™ и оценивали способность молекул опосредовать цитотоксичность клеток карциномы почки А498 (табл. 17). На основании полученных результатов был сделан вывод, что лучшими кандидатами являются: КЕСА13, ВКСА68Б, ВКСА69Б и ТБН6.
- 64 030226
Таблица 17
Переназначенный киллинг клеток карциномы почки А498
тАЬ КОЛ-ВО υϋΑΚΤ™ с тск-иоАкт™ ГАС8
Среднее значение Среднее значение МИ
ВССА66 -1,04 46,39 43,30
ВЬА8 1,35 49,19 50
ВКСА165 0 5,11 5,46
ВКСА52 0 55,53 41,7
ВКСА68О 0 36,89 83,7
ВКСА69О 0 54,71 84,1
Таблица 17
Переназначенный киллинг клеток карциномы почки А498
тАЬ КОЛ-ВО υϋΑΚΤ™ с тск-υϋΑκτ™ ГАС8
Среднее значение Среднее значение МИ
ВКСА84О 0 72,40 30,6
СВ8 4,00 42,00 17,9
КЮ1 0,38 52,08 18,5
КЮ13 26,39 58,20
КЮ35 -1,68 7,62
ьисА1 9,85 52,73 52,9
ОУСА21 -0,85 47,59 6,04
ОУСА22 0,36 38,66 53,9
ОУСА25 -2,86 16,70
РА40 -0,46 40,54
РКСА123 0 56 130
РКСА135 0 55 127
РКСА157 0 39,14 58,8
КЕСА13 0 38,62 39,8
КЕСА22 -0,24 51,74 99,90
КЕСА9 0 62 50,1
8АЬЗ 4,94 52,23 60,5
8С24 -2,25 42,00
8С27 -3,98 0,21
8ΚΙΝ2 з,п 56,44 45,8
8ТО5 2,91 37,84 36,7
ΤϋΗ36 -1,03 53,52 155,00
ΤϋΗ37 0,05 65,21 47,50
ΤϋΗ4 5,09 50,63 45,9
ΤϋΗ40 -0,65 44,55
ΤϋΗ5 2,92 49,60 28,8
ΤϋΗ6 0 70,10 19,5
ΤΕ87 6,23 52,89 17,5
Клетки карциномы почки А498 инкубировали с разными концентрациями моноклональных антител, реактивных к В7-Н3, для того чтобы определить дозозависимый переназначенный киллинг, опосредованый антителами. Результаты экспериментов (фиг. 3Α-3Β) показывают, что переназначенный киллинг был дозозависимым.
В. Переназначенный киллинг клеток рака легкого А549.
Чтобы дополнительно продемонстрировать такой переназначенный киллинг, меченные флюоресцеином антитела В7-Н3 инкубировали с вышеописанными молекулами ТСК-иЭАКТ™ или с молекулами иЭАКТ™ с эпитоп-связывающим доменом, который связывается с СО16, и эпитоп-связывающим доменом, который связывается с флюоресцеином (СШ 6-иЭАКТ™), и оценивали способность молекул опосредовать цитотоксичность клеток рака легкого А549 (табл. 18). Результаты эксперимента (фиг. 3С3Ώ) показывают, что переназначенный киллинг был дозозависимым. На основании полученных результатов был сделан вывод, что лучшими кандидатами являются Β1 ,А8, ККСА68О, 13КС.А691) и ККСА84О.
- 65 030226
Таблица 18
Переназначенный киллинг клеток А549 рака , легкого
тАЬ КОЛ-ВО ПАКТ™ СТСКυϋΑκτ™ С СШ6υϋΑκτ™ ГАС8
Среднее Среднее Среднее ΜΓΙ
ВССА66 1,89 25,17 8,22 36,1
ВЬА8 -7,70 10,97 3,68 34,7
ВКСА52 0 27,63 37
ВКСА68О -4,42 13,45 15,95 58,3
ВКСА69О 0 24,25 60,5
ВКСА84О 0 15,33 25
СВ8 -8,68 2,44 -4,65 17
ΚΙΟ1 0 22,93 41
ьисА1 0 14,65 53
ОУСА21 -2,43 18,90 7,22 31,5
ОУСА22 0 32,90 61
РКСА123 7,68 29,88 17,31 79,4
РКСА135 -6,58 22,72 8,14 75,6
РКСА157 0,02 18,63 18,24 44,3
Р8МА -0,70 5,58 9,94
КЕСА13 0,86 17,39 11,90 34,4
КЕСА22 3,71 20,49 19,35 74,3
КЕСА9 7,01 26,89 31,80 44,3
8АЬЗ 0 31,80 67,4
КОЖА2 -0,08 8,65 9,33 41,9
8ТО5 -10,36 9,28 1,71 54,7
ΤϋΗ36 6,79 24,12 24,08 107
ΤϋΗ37 6,93 22,57 23,37 42,3
ΤϋΗ4 -6,26 10,07 2,21 32,4
ΤϋΗ40 4,87 22,01 24,90 53,3
ΤϋΗ5 -5,08 9,35 -2,85 27,1
ΤϋΗ6 0 19,09 21,3
ΤΕ87 0 19,35 15,7
С. Переназначенный киллинг раковых клеток ЕЖар простаты.
Чтобы дополнительно продемонстрировать такой переназначенный киллинг, меченные флюоресцеином антитела В7-Н3 инкубировали с вышеописанными молекулами ТСК-ЦБАКТ™ или с молекулами иБАКТ™ с эпитоп-связывающим доменом, который связывается с СБ16, и эпитоп-связывающим доменом, который связывается с флюоресцеином (СОШ-иСАКТ™), и оценивали способность молекул опосредовать цитотоксичность раковых клеток ЕЖар простаты (табл. 19). На основании полученных результатов был сделан вывод, что лучшими кандидатами являются ВКСА68Б, ВКСА69Б, ВКСА84Б и РКСА157.
- 66 030226
Таблица 19
Переназначенный киллинг раковых клеток В\сар простаты
тАЬ кол-во ПАКТ™ СТСКυϋΑκτ™ С СШ6υϋΑκτ™ ГАС8
Среднее Среднее Среднее ΜΓΙ
ВССА4 -2,96 13,29 2,47 5,1
ВССА66 -2,13 13,42 16,40 41
ВЬА8 4,32 14,97 24,00 48,4
ВКСА165 3,59 57,26 12,02 7,6
ВКСА183О -4,65 43,09 35,30 7,6
ВКСА52 32,34 71,23 48,28 42,5
ВКСА68О -1,40 23,00 21,91 86,9
ВКСА69О 40,08 78,02 60,55 92,4
ВКСА84О 20,11 78,70 41,27 16,4
СВ8 -6,25 14,04 10,76 22
КГО1 54,65 91,87 67,86 44,8
КГО13 15,86 69,21 47,85
КГО133 27,51 45,65 47,12 120
КГО24 -4,26 34,13 41,17 14,5
КГО35 14,17 64,01 33,05
КГО47 11,34 39,49 15,02 10,8
КГО8 16,98 58,80 34,77 5,5
ьисА1 47,40 89,31 67,15 73
ЬиСА17 23,18 26,90 35,87 11,1
ьисАТ1 8,25 22,36 21,49 6,9
ЬиСАТ7 26,50 38,29 44,77 8,7
МСЫ2 26,62 35,59 46,38 17,6
МЕЬ2 6,57 29,90 31,40 19
ОУСА21 12,07 26,81 31,30 41
ОУСА22 45,09 96,50 77,30 113
ОУСА25 16,14 63,26 32,39
РА22 1,73 57,70 9,89 8,9
РАЗЗ 8,99 34,49 48,14 9,4
РА40 38,42 73,07 63,65
РКСА123 9,96 14,39 18,38 125
РКСА135 -3,75 8,89 13,64 123
РКСА157 1,05 17,07 15,43 16,4
Р8МА 11,52 31,38 34,79
Р5МА 52,82 71,19 66,04
КЕСА13 5,86 22,55 15,40 37
КЕСА22 7,33 24,65 23,54 22,5
КЕСА9 27,67 52,54 45,14 5,3
тАЬ кол-во ПАКТ™ СТСКυϋΑκτ™ С СШ6υϋΑκτ™ ГАС8
Среднее Среднее Среднее ΜΓΙ
8АЬ1 2,76 17,87 44,52 6,5
8АЬ2 8,71 30,68 29,17 14,5
8АЬЗ 43,79 92,60 76,46 105
8С24 12,64 66,82 44,99
8С27 1,37 55,30 16,96
КОЖА2 -2,04 14,81 24,23 73,8
8РЬ16 9,97 29,90 23,74 5,2
8ТО5 -1,48 21,11 24,97 61,3
ΤϋΗ28 -4,23 18,55 15,04 13,3
ΤϋΗ36 3,58 19,61 19,79 199
ΤϋΗ37 7,90 18,78 25,22 57,3
ΤϋΗ4 14,48 37,96 54,64 45,2
ΤϋΗ40 8,51 44,55 43,87 79,3
ΤϋΗ5 7,35 48,71 38,15 29,1
ΤϋΗ6 4,50 54,59 19,73 41,7
ΤΕ87 50,15 94,47 73,40 22,4
Пример 5. Способность тАЪ В7-Н3 связываться с растворимым В7Н3-21д и растворимым В7Н341д.
Как обсуждалось выше, В7-Н3 существует как в форме, содержащей домен 41д (В7Н3-41д), так и в форме, содержащей домен 21д (В7Н3-21д). Антитела к В7-Н3 настоящего изобретения тестировали на их способности к связыванию с растворимым В7Н3-21д (фиг. 4А) и растворимым В7Н3-41д В7-Н3 (фиг. 4В). Было обнаружено, что антитела проявляли широкий диапазон характеристик связывания. Было обнаружено, что антитела РКСА123, Т1)115, ВТА8, ВКСА681) и 8Θ24 проявляли наиболее сильное связывание с
- 67 030226
растворимым В7Н3-21д и было обнаружено, что антитела ТЬЗ7, ЬиСА50, ВКСА165, 0УСА22, ЗТ09 и РА20 проявляли наиболее слабое связывание с растворимым В7Н3-21д. Было обнаружено, что антитела РКСА123, ВКСА69А, ВЬА8 и ВКСА68О проявляли наиболее сильное связывание с растворимым В7Н341д и было обнаружено, что антитела ТЬЗ7, 0УСА21, ВКСА165 и ЗТ09 проявляли наиболее слабое связывание с растворимым В7Н3-41д.
Пример 6. Аффинное связывание антигенов в растворе с захваченными моноклональными антителами.
Для того чтобы демонстрировать связывающую аффинность между антигенами в растворе и захваченными моноклональными антителами, антитела захватывались на иммобилизированные РаЬ2фрагменты, специфичные к Рс 1дС, на уровне 100-200 КИ. Антигены В7-Н3 и В7-Н3(41д) ввели поверх захваченных антител при концентрации 100 нМ (скорость потока 20 мкл/мин) за 120 с и измерили связывание. Реакции связывания нормализовали до такого же уровня захваченных тАЬ и реакцию связывания с контрольным антителом т2В6 (т1дС1) вычитали как холостую пробу. Результаты данного анализа (фиг. 5А-5З; сплошные линии; В7-Н3(41д) 100 нМ; пунктирные линии; В7-Н3, 100 нМ)) демонстрируют, что антитела настоящего изобретения проявляют сильное связывание с В7-Н3(41д).
Пример 7. Анализ В1АС0КЬ™: титрование тАЬ В7-Н3 к иммобилизированным В7-Н3.
Для того чтобы продемонстрировать относительные связывающие аффинности В7-Н3-21д и В7-Н341д для антител настоящего изобретения, осуществляли анализ В1АС0КЬ™. Антителам В7-Н3 настоящего изобретения давали возможность связываться с иммобилизированными В7-Н3-21д или с В7-Н3-41д и со временем оценивали титрование связывания (фиг. 6А-61). Было обнаружено, что ТЭН5, РКСА123, ВЬА8, ВКСА69 обладают высокой аффинностью как к В7-Н3-21д, так и к В7-Н3-41д. Однако было обнаружено, что их эпитоп(ы) в основном были закрыты в молекуле В7-Н3-41д, причем было доступно всего лишь несколько. Было обнаружено, что 0УСА22 обладает очень низкой аффинностью как к В7-Н3-21д, так и к В7-Н3-41д, причем его эпитоп был в равной степени доступным на обеих молекулах. Однако возможно, что только форма В7-Н3-41д обеспечивает достаточную близость для бивалентного связывания антитела (низкую скорость диссоциации), тогда как В7-Н3-21д может быть связано только моновалентно. Было обнаружено, что ТЭН6 едва ли обладает какой-либо аффинностью в данном формате, причем связывание с 21д вероятно неспецифичное. Было обнаружено, что ТЬЗ7 и РА20 представляют собой специфичные к В7-Н4-41д антитела с низкой аффинностью. ТЬЗ7 вероятно обладает низкой скоростью ассоциации и более высокой скоростью диссоциации, чем РА20. Было обнаружено, что ВКСА84О представляет собой антитело с промежуточной аффинностью с вероятно множественными участками связывания как на В7-Н3-21д, так и на В7-Н3-41д. На основе анализа В1АС0КЬ™ ВКСА84О рассматривали как предпочтительное антитело из-за его необычного участка связывания. ТЬЗ7 и РА20 рассматривали в качестве кандидатов для специфичного связывания с поверхностями антигенов с высокой плотностью и одним из антител с высокой аффинностью-низкой специфичностью (например, ВКСА69О или другое).
На фиг. 7 представлен сравнительным анализ В1АС0КЬ™ антител РКСА157, ВКСА69П, ВЬА8, РА20, ВКСА84П, СВ8 и ЗС27, иллюстрирующий, что антитела к В7-Н3 настоящего изобретения могут проявлять ряд свойств связывания.
На фиг. 8 демонстрируется неконкурентная специфичность нескольких антител к В7-Н3 настоящего изобретения. В данном эксперименте молекулы В7-Н3 человека инкубировали в присутствии антитела ВКСА84О и подвергали анализу В1АС0КЬ™. Приблизительно через 3 мин в реакционную смесь добавляли второе антитело к В7-Н3. Если второе антитело конкурировало с ВКСА84П, обнаруживалось, что участки В7-Н3 окклюдированны и не доступны для связывания. Результаты указывают на то, что антитела ВКСА68П, ВКСА69О и РКСА157 не конкурируют с ВКСА84О за связывание с В7-Н3 человека.
Пример 8. тАЬ к В7-Н3 интернализуются в клеточных линиях СЗС и АТСС.
Исследовали способность антител к В7-Н3 настоящего изобретения интернализоваться после связывания с раковыми клетками. Клетки СЗС простаты и клетки поджелудочной железы Нк700! инкубировали с антителом к В7-Н3. Определяли жизнеспособность клеток после инкубации в присутствии конъюгированного с сапорином вторичного антитела к антителам мыши, которое будет токсичным для клеток при связывании с первичным антителом и интернализации. Результаты данного исследования для клеток СЗС простаты (фиг. 9А) и для клеток поджелудочной железы Нк700! (фиг. 9В) демонстрируют способность антител настоящего изобретения интернализоваться в клетки.
Пример 9. Анализ связывания тАЬ В7-Н3 и эпитоп-перекрёстный конкурентный анализ посредством ЬЬ1ЗА.
Для изучения перекрестной реактивности антител настоящего изобретения и эпитопов, распознаваемых такими антителами, измеряли степень связывания, возникающего в присутствии конкурентного антитела к В7-Н3. Результаты данного анализа показаны на фиг. 10А-10Р, и они показывают, что ВКСА68О конкурирует с ВКСА69О. Обнаружили также, что ТЬЗ7 и 0УСА22 конкурируют друг с другом, но обнаружили также, что ТЬЗ7, а не 0УСА22 конкурирует как с ВКСА68П, так и с ВКСА69О. Обнаружили, что СВ8 конкурирует с ЗС27 за связывание с В7-Н3-21д, но не с В7-Н3-41д. Данные суммированы в табл. 20 и показывают по меньшей мере четыре различных эпитопа для В7-Н3-41д (т.е. эпитоп,
- 68 030226
распознаваемый 8О27, эпитоп, распознаваемый ОВ8, эпитоп, распознаваемый 0VСА22 и ТЕ87, и эпитоп, распознаваемый ВКСА68И, ВКСА69И и ТЕ87) и по меньшей мере два эпитопа для В7-Н3-21д (т.е. эпитоп, распознаваемый 8О27 и ОВ8, и эпитоп, распознаваемый ВКСА68И и ВКСА69И).
Таблица 20
Краткое описание эпитоп-перекрестного конкурентного анализа тАЬ В7-Н3 посредством ЕЫ8А
Конкуренты ое антитело Антитело (Процент связывания по сравнению с М1§С)
В7-НЗ 41§ В7-НЗ-21§
СВ8 ВКСА 69ϋ ВКСА 68ϋ ТЕ57 ОУСА 22 СВ8 ВКСА 69ϋ ВКСА 68ϋ
СВ8 50,211 119,105 108,948 87,480 98,142 26,618 84,408 94,710
ТЕ87 111,234 109,390 108,425 1,605 16,268 100,645 90,734 99,515
ОУСА22 121,783 112,322 100,813 3,371 2,048 100,423 87,991 102,766
ΤϋΗ6 105,591 105,065 100,494 99,839 96,701 100,089 66,086 100,728
8027 101,266 103,021 97,763 78,331 87,789 64,421 89,927 94,225
ВКСА68О 105,934 40,284 43,144 4,815 102,655 98,888 7,635 7,425
ВКСА69О 102,558 66,291 71,441 4,334 96,928 94,952 17,346 17,059
М1цС 100,000 100,000 100,00 100,000 100,000 100,000 100,000 100,000
Отличительные черты ключевых антител к В7-Н3 настоящего изобретения показаны в табл. 21. Пришли к выводу, что антитела ВКСА68И, ВКСА69И, ВКСА84И и РКСА157 являются наиболее предпочтительными антителами на основе проявленного ними дифференциального окрашивания нормальных и раковых тканей, их способности связывать В7-Н3-41д, а также В7-Н3-21д, их связывающих аффинностей, измеряемых с помощью вышеописанного анализа В1АС0КЕ™, и их способности связываться с В7Н3 яванского макака.
Таблица 21
МАЬ ВКСА 84ϋ ΤϋΗ 6 ТЕ8 7 ВКСА 68ϋ ВКСА 69ϋ СВ8 8С 27 ОУСА 22 РКСА 157
Изотип О1/к О1/к О1/к О1/к О1/к 01/ к 2Ь/к О1/к О1/к
1НС 2а 2а 2а 2Ь 2Ь 2Ь 2Ь 2с 2с
Анализ АТСС 2 1 1 3 3 3 1 3 2
Нормальная ткань
Толстая кишка 1+ 1+ 1+ 1+ 2+ 2+
Легкое 1+ 1+ 1+
Печень 1+ 1+ 2+ 2+ 1+ 2+ 2+
Почка 1+ 1+ 1+ 1+
Поджелудочная железа 1+ 1+ 1+ 2+
Кожа 2+
Раковая Ткань
Толстая кишка 1231* 1110 * 1,5 2321* 2231* 1221 * 1122 2231*
Легкое ИЗО 1010 1,75 3332 3231 1120 3131** 3231
Простата 112 111 3 333 333 222 222 333
МАЬ ВКСА 84ϋ ΤϋΗ 6 ТЕ8 7 ВКСА 68ϋ ВКСА 69ϋ СВ8 80 27 ОУСА 22 РКСА 157
Молочная железа 1111 1011 3 3333 3333 1122 3233 2333
Интернализация + + + + + + + + +
υ-ϋΑΚΤ™ + + + + + + + + +
Специфичность 41§ 21§ 41§ 21§ 41§ 41§ 21§ 41§ 21§ 41§ 21§ 41§ 21§ 41§ 41§ 21§
Группа эпитопа А В С ϋ ϋ Е Р О Н
В1АСОКЕ™ + +/- + ++ ++ + + + +/-
Связывание с В7-НЗ яванского макака ++ + - ++ ++ ++ + + ++
Примечания: * обозначает окрашивание стромы ** окрашивание стромы 3+
Пример 10. Гуманизированные антитела к В7-Н3.
Моноклональное антитело ВКСА84И гуманизировали для того, чтобы получить антитела (в общем обозначенные в данном документе как "ИВКСА84П"), обладающие улучшенным терапевтическим потенциалом для человека. Последовательности вариабельной легкой цепи и вариабельной тяжелой цепи и их соответствующие аминокислотные и полинуклеотидные последовательности полученного в результате гуманизированного антитела (обозначенного в данном документе как "ИВКСА84П-1") представлены ниже.
Вариабельная легкая цепь гуманизированного ВКСА84И-1 (8ГО ΙΌ №: 68)
- 69 030226
ϋΙζ)ΕιΤζ)3Ρ3Ε ЬЗАЗУСОКУТ ΙΤΟΚΑ3<2Ννϋ ΤΝνΑΝΥ<2<2ΚΡ СКАРКЬЫУЗ Α3ΥΚΥ33νΡ3 КЕЗСЗСЗСТР ЕТЬТ133Ь<2Р ΕϋΕΑΤΥΥΟ<2<2 ΥΝΝΥΡΕΤΕΟ2 ΟΤΚΡιΕΙΚ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную легкую цепь гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Ер ГО №: 69)
дасаЕссадс ЕдасссадЕс сссс£сс1£с сЕдЕсЕдссЕ ссдЕдддсда сададЕдасс аЕсасаЕдса аддссЕссса даасдЕддас ассаасдЕдд ссЕддЕаЕса дсадаадссЕ ддсааддссс сЕаадсЕдсЕ даЕсЕасЕсс дссЕссЕасс ддЕасЕссдд сдЕдссЕЕсс аддЕЕсЕссд дсЕссддсЕс Еддсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсЕссад ссЕдсадссЕ даддасЕЕсд ссассЕасЕа сЕдссадсад ЕасаасаасЕ асссЫЬсас сЕЕсддссад ддсассаадс ЕддаааЕсаа д
СЭК1 вариабельной легкой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Еф ГО №: 70)
ΚΑ5<2ΝνϋΤΝνΑ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СГОК] вариабельной легкой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Ер ГО №: 71)
ааддссадЕс адааЕдЕдда ЕасЕааЕдЕа дсс СГОК вариабельной легкой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Еф ГО №: 72)
3Α3ΥΚΥ3
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СГОК2 вариабельной легкой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Ер ГО №: 73)
ЕсддсаЕссЕ ассддЕасад Е
СГОК3 вариабельной легкой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Еф ГО №: 74)
£>£>ΥΝΝΥΡΕΤ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СГОК вариабельной легкой цепи гуманизированного МВКСА84Э-1 (8Ер ГО №: 75)
садсааЕаЕа асаасЕаЕсс аЕЕсасд
Аминокислотная последовательность вариабельной тяжелой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Ер ГО №: 80)
ЕУОЬУЕЗССС ЬУОРССЗЬНЬ ЗСААЗСЕТЕЗ ЗЕСМНИУК<2А РСКСЬЕИУАУ Ι33Ρ33ΑΙΥΥ ΑϋΤνΚΟΚΕΤΙ 3ΚϋΝΑΚΝ3ΣΥ ЬОМИЗЬКРЕР ΤΑνΥΥΟΑΚΟΚ ΕΝΙΥΥ<33ΒΑϋ Υ№3<2<3ΤΤντν 33
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную тяжелую цепь гуманизированного ВКСА84О-1 (8Ε() ГО №: 81)
даддЕдсадс ЕддЕсдадЕс Еддсддадда сЕддЕдсадс сЕддсддсЕс ссЕдадасЕд ЕсЕЕдсдссд ссЕссддсЕЕ сассЕЕсЕсс адсЕЕсддса ЕдсасЕдддЕ ссдссаддсЕ ссаддсаадд дасЕддааЕд ддЕддссЕас аЕсЕссЕссд асЕссЕссдс саЕсЕасЕас дссдасассд Едаадддсад дЕЕсассаЕс Есссдддаса асдссаадаа сЕсссЕдЕас сЕдсадаЕда асЕсссЕдсд ддасдаддас ассдссдЕдЕ асЕасЕдсдс сададдссдд дадааЕаЕсЕ асЕасддсЕс ссддсЕддаЕ ЕаЕЕддддсс адддсассас сдЕдассдЕд ЕссЕсЕ
СЭК1 вариабельной тяжелой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Еф ГО №: 82)
ЕСМН
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЭК1 вариабельной тяжелой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Ер ГО №: 83)
ЕЕЕддааЕдсас
СЭК2 вариабельной тяжелой цепи гуманизированного ВКСА84Э (8Еф ГО №: 84)
ΥΙ33Ό33ΑΙΥΥΑϋΤνΚ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЭК2 вариабельной тяжелой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Ер ГО №: 85)
ЕасаЕЕадЕа дЕдасадЕад ЕдссаЕсЕас ЕаЕдсадаса садЕдаад
СГОК3 вариабельной тяжелой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Еф ГО №: 86)
ΟΚΕΝΙΥΥΟΒΕΣΌΥ
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СГОК вариабельной тяжелой цепи гуманизированного ВКСА84Э-1 (8Ер ГО №: 87)
дддадддааа асаЕЕЕасЕа сддЕадЕадд сЕЕдасЕас На фиг. 11А-11В показано выравнивание аминокислотных остатков вариабельных легких цепей
(фиг. 11 А) или вариабельных тяжелых цепей (фиг. 11В) ВКСА84Э и его гуманизированного производного НВКСА84Э.
Для получения разновидностей НВКСА84Э, которые проявляют повышенную аффинность к В7-Н3 человека, подвергали мутагенезу полинуклеотиды, кодирующие легкие или тяжелые цепи НВКСА84Э-1
- 70 030226
(т.е. ЬВКСА84П-1УЬ или кВКСА84Э-1УН соответственно), и выделяли и характеризовали мутантные производные легкой цепи ЬВКСА84П-2УЬ, ЬВКСА84П-3УЬ, ЬВКСА84П-4УЬ, НВКСА84П-5УЬ и ЬВЕСА84П-6УЬ из кВКСА84Э-1, и мутантные производные тяжелой цепи кВКСА84Э-2УН, кВКСА84Э3УН и кВКСА84Э-4УН из ЬВКСА84Э-1. Аминокислотные и полинуклеотидные последовательности вариабельных легких и тяжелых цепей даных антител представлены ниже.
НВКСА84О-2УЕ (8Е() ГО №: 89)
01<2ЬТ<25Р5Р ЬЗАЗУСОКУТ ΙΤΟΚΑ5<2Ννϋ ΤΝνΑΝΥ<2<2ΚΡ СКАРКАЫУЗ АЗУКУЗСУРЗ КЕЗСЗСЗСТО ЕТЬТ155Ь<2Р ΕϋΡΑΤΥΥΟ<2<2 ΥΝΝΥΡΡΤΡΟζ)
СТКЬЕТК
Полинуклеотид, кодирующий ЬВКСА84П-2УЬ (8Е0 ГО №: 90)
дасаЕссадс ЕдасссадЕс ссссЕссЕЕс сЕдЕсЕдссЕ сададЕдасс аЕсасаЕдса аддссЕссса даасдЕддас ссЕддЕаЕса дсадаадссЕ ддсааддссс сЕааддсдсЕ дссЕссЕасс ддЕасЕссдд сдЕдссЕЕсс аддЕЕсЕссд Еддсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсЕссад ссЕдсадссЕ ссассЕасЕа сЕдссадсад ЕасаасаасЕ асссЕЕЕсас ддсассаадс ЕддаааЕсаа д
кВКСА84П-3УЬ (8Е() ГО №: 91)
01<2ЬТ£>5РЗЕ ЬЗАЗУСОКУЗ νΤΟΚΑ5<2Ννϋ ΤΝνΑΝΥΟφΚΡ АЗУКУЗСУРЗ КЕЗСЗСЗСТО ЕТЬТ155Ь<2Р ΕϋΕΑΤΥΥΟφΟ СТКЬЕ1К
Полинуклеотид, кодирующий ЬВКСА84П-3УЬ (8Е0 ГО №: 92)
дасаЕссадс ЕдасссадЕс ссссЕссЕЕс сЕдЕсЕдссЕ сададЕдЕсс дЕсасаЕдса аддссЕссса даасдЕддас ссЕддЕаЕса дсадаадссЕ ддсааддссс сЕаадсЕдсЕ дссЕссЕасс ддЕасЕссдд сдЕдссЕЕсс аддЕЕсЕссд Еддсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсЕссад ссЕдсадссЕ ссассЕасЕа сЕдссадсад ЕасаасаасЕ асссЕЕЕсас ддсассаадс ЕддаааЕсаа д
НВКСА84О-4УЕ (8Е() ГО №: 93)
ϋΙζ)ΕιΤζ)3Ρ3Ε ЬЗАЗУСОКУТ ΙΤΟΚΑ3<2Ννϋ ΤΝνΑ«Υ<2<2ΚΡ АЗУКУЗСУРЗ КЕЗСЗСЗСТО ЕТЬТ133Ь<2Р ΕΌΕΑΤΥΥΟ<2<2 СТКЬЕ1К
Полинуклеотид, кодирующий ЬВКСА84П-4УЬ (8Е0 ГО №: 94)
дасаЕссадс ЕдасссадЕс ссссЕссЕЕс сЕдЕсЕдссЕ сададЕдасс аЕсасаЕдса аддссЕссса даасдЕддас ссЕддЕаЕса дсадаадссЕ ддссаддссс сЕаадсЕдсЕ дссЕссЕасс ддЕасЕссдд сдЕдссЕЕсс аддЕЕсЕссд Еддсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсЕссад ссЕдсадссЕ ссассЕасЕа сЕдссадсад ЕасаасаасЕ асссЕЕЕсас ддсассаадс ЕддаааЕсаа д
кВКСА84П-5УЬ (8Е() ГО №: 95)
ϋΙζ)ΕιΤζ)3Ρ3Ε ЪЗАЗУСОНУТ ΙΤΟΚΑ3<2Ννϋ ТЖ/АВДУООКР АЗУКУЗСУРЗ КЕЗСЗСЗСТО ЕТЬТ133Ь<2Р ΕϋΕΑΤΥΥΟΟΟ СТΚΑΕΙК
Полинуклеотид, кодирующий ЬВКСА84П-5УЬ (8Е0 ГО №: 96)
дасаЕссадс ЕдасссадЕс ссссЕссЕЕс сЕдЕсЕдссЕ сададЕдасс аЕсасаЕдса аддссЕссса даасдЕддас ссЕддЕаЕса дсадаадссЕ ддссаддссс сЕааддсдсЕ дссЕссЕасс ддЕасЕссдд сдЕдссЕЕсс аддЕЕсЕссд Еддсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсЕссад ссЕдсадссЕ ссассЕасЕа сЕдссадсад ЕасаасаасЕ асссЕЕЕсас ддсассаадс ЕддаааЕсаа д
кВКСА84П-6УЬ (8Е() ГО №: 97)
01<2ЬТ<23РЗЕ ЬЗАЗУСОКУТ ΙΤΩΚΑ3<2Ννθ ΤΝνΑ№Υζ)ζ)ΚΡ АЗУКУЗСУРЗ КЕЗСЗСЗСТО ЕТЬТ133Ь0Р ЕОЕАЕУУС<2<2 СТКЬЕТК
ссдЕдддсда
ассаасдЕдд
даЕсЕасЕсс
дсЕссддсЕс
даддасЕЕсд
сЕЕсддссад
СКАРКЬЫУЗ
ΥΝΝΥΡΕΤΕσΟ
ссдЕдддсда
ассаасдЕдд
даЕсЕасЕсс
дсЕссддсЕс
даддасЕЕсд
сЕЕсддссад
СфАРКЬЫУЗ
ΥΝΝΥΡΕΤΕΰ<2
ссдЕдддсда
ассаасдЕдд
даЕсЕасЕсс
дсЕссддсЕс
даддасЕЕсд
сЕЕсддссад
СОАРКАЫУЗ
ΥΝΝΥΡΕΤΕΟζ)
ссдЕдддсда
ассаасдЕдд
даЕсЕасЕсс
дсЕссддсЕс
даддасЕЕсд
сЕЕсддссад
СКАРКЬЫУЗ
ΥΝΝΥΡΕΤΕΟΟ
Полинуклеотид, кодирующий ЬВКСА84П-6УЬ (8Е0 ГО №: 98)
- 71 030226
дасаЕссадс ЕдасссадЕс ссссЕссЕЕс сЕдЕсЕдссЕ сададЕдасс аЕсасаЕдса аддссЕссса даасдЕддас ссЕддЕаЕса дсадаадссЕ ддсааддссс сЕаадсЕдсЕ дссЕссЕасс ддЕасЕссдд сдЕдссЕЕсс аддЕЕсЕссд Еддсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсЕссад ссЕдсадссЕ ссдадЕасЕа сЕдссадсад ЕасаасаасЕ асссЕЕЕсас ддсассаадс ЕддаааЕсаа д
ЬВКСА84П-2УН (8ЕЦ ГО №: 99)
ЕУ(2ЬУЕ5ССС ЬУдРССЗЬКЬ ЗСААЗСЕТЕЗ 5ЕСМНИУК(2А Ι83Ρ33ΑΙΥΥ ΑΌΤνΚΟΚΕΤΙ 3ΚΌΝΑΚΝ3ΣΥ ЬОМИЗЬКОЕО ΕΝΙΥΥΟ3ΚΕιΟ ΥΤΛΓΟΟΟΤΤντν 33
Полинуклеотид. кодирующий ЙВКСА84П-2УН (8ЕЦ ГО №: 100)
даддЕдсадс ЕддЕсдадЕс Еддсддадда сЕддЕдсадс ссЕдадасЕд ЕсЕЕдсдссд ссЕссддсЕЕ сассЕЕсЕсс ЕдсасЕдддЕ ссдссаддсЕ ссаддсаадд дасЕддааЕд аЕсЕссЕссд асЕссЕссдс саЕсЕасЕас дссдасассд дЕЕсассаЕс Есссдддаса асдссаадаа сЕсссЕдЕас асЕсссЕдсд ддасдаддас ассдссдЕдЕ асЕасЕдсдд дадааЕаЕсЕ асЕасддсЕс ссддсЕддаЕ ЕаЕЕддддсс сдЕдассдЕд ЕссЕсЕ
ЙВКСА84П-3УН (8ЕЦ ГО №: 101)
ЕУОЬУЕЗССС ЕЛЛЭРССЗЪКЪ ЗСААЗСЕТЕЗ ЗГСМНМУКОА Ι33Ώ33ΑΙΥΥ ΑϋΤνΚΟΚΕΤΙ 3ΚΟΝΑΚΝ3ΙΑ ЬОМЫЗЬКОЕО ενιυυο3κεό ΥΝΟοοττντν 33
Полинуклеотид. кодирующий ЙВКСА84П-3УН (8ЕЦ ГО №: 102)
даддЕдсадс ЕддЕсдадЕс Еддсддадда сЕддЕдсадс ссЕдадасЕд ЕсЕЕдсдссд ссЕссддсЕЕ сассЕЕсЕсс ЕдсасЕдддЕ ссдссаддсЕ ссаддсаадд дасЕддааЕд аЕсЕссЕссд асЕссЕссдс саЕсЕасЕас дссдасассд дЕЕсассаЕс Есссдддаса асдссаадаа сЕсссЕдЕас асЕсссЕдсд ддасдаддас ассдссаЕдЕ асЕасЕдсдд дадааЕаЕсЕ асЕасддсЕс ссддсЕддаЕ ЕаЕЕддддсс сдЕдассдЕд ЕссЕсЕ
ЬВКСА84П-4УН (8ЕЦ ГО №: 103)
ЕУСЬУЕЗССС ЬУаРССЗЕКЬ ЗСААЗСЕТЕЗ 8ЕСМНЖ7К<2А Ι33Ό33ΑΙΥΥ ΑΌΤνΚΟΚΕΤΙ 3ΚϋΝΑΚΝ3ΕΥ ЫЭМЫЗЬКЗЕО ΕΝΙΥΥΟεΕΣΌ УИС<2СТТУТУ 33
Полинуклеотид. кодирующий НВКСА84О-4УН (8ЕО ГО №: 104)
даддЕдсадс ЕддЕсдадЕс Еддсддадда сЕддЕдсадс ссЕдадасЕд ЕсЕЕдсдссд ссЕссддсЕЕ сассЕЕсЕсс ЕдсасЕдддЕ ссдссаддсЕ ссаддсаадд дасЕддааЕд аЕсЕссЕссд асЕссЕссдс саЕсЕасЕас дссдасассд дЕЕсассаЕс Есссдддаса асдссаадаа сЕсссЕдЕас асЕсссЕдсд дадсдаддас ассдссдЕдЕ асЕасЕдсдс дадааЕаЕсЕ асЕасддсЕс ссддсЕддаЕ ЕаЕЕддддсс сдЕдассдЕд ЕссЕсЕ
ссдЕдддсда
ассаасдЕдд
даЕсЕасЕсс
дсЕссддсЕс
даддасЕЕсд
сЕЕсддссад
РСКСЬЕТлГУАУ
ТАУУУССКСК
сЕддсддсЕс
адсЕЕсддса
ддЕддссЕас
Едаадддсад
сЕдсадаЕда
сададдссдд
адддсассас
РСКСЬЕИУАУ
ТАМУУССКСК
РСЕЬЕИУАУ
ТАУУУСАКСЕ
сЕддсддсЕс
адсЕЕсддса
ддЕддссЕас
Едаадддсад
сЕдсадаЕда
сададдссдд
адддсассас
сЕддсддсЕс
адсЕЕсддса
ддЕддссЕас
Едаадддсад
сЕдсадаЕда
сададдссдд
адддсассас
В табл. 22 перечислены изученные мутации в вариабельной легкой цепи и вариабельной тяжелой цепи НВКСА841); числа относятся к системе нумерации КаЬа!. которую используют на фиг. 11А и 11В.
_ Таблица 22
Вариабельная легкая цепь Вариабельная тяжелая цепь
Положение по КаЬа1 20 21 42 46 85 Положение по КаЬа! 84 89 93
ВКСА84О 8 V О А Е ВКСА84О 8 Μ С
ЬВКСА84О-1УЬ Т I к Ь Т ЬВКСА84О-1УН ϋ V Α
ЬВКСА84О-2УЬ Т I к А Т ЬВКСА84О-2УН ϋ V С
ЬВКСА84О-ЗУЬ 8 V к Ь т ЬВКСА84О-ЗУН ϋ Μ С
ЬВКСА84О-4УЬ Т I О Ь т ЬВКСА84О-4УН δ V А
ЬВКСА84О-5УЬ Т I О А т
ЬВКСА84О-6УЬ т I к Ь Е
Определяли относительные связывающие аффинности производных легкой цепи 11ВКСА84[)-3\'Е. ЬВКСА84П-4УЬ и ЬВКСА84П-5УЬ из ЬВКСА84О в отношении В7-Н3 человека путем образования антител. содержащих данные вариабельные области легкой цепи и химерную тяжелую цепь ВКСА841)1УН (фиг. 12). Было обнаружено. что ВКСА841)-5\4. (К42С). Б46А) обладает наиболее высокой связывающей аффинностью связывания из протестированных ЬВКСА84П-УЬ. Поэтому ВКСА84П-5УБ при- 72 030226
меняли в качестве легкой цепи для исследования относительной связывающей аффинности тяжелых цепей кВКСА84В-1"Н, кВКСА84В-2"Н, кВКСА84О-3"Н и кВКСА84О-4"Н из кВКСА84О к В7-Н3 человека (фиг. 13). Было обнаружено, что кВКСА84Э-2"Н (А93С) обладает наиболее высокой аффинностью связывания из протестированных кВКСА84Э-"Н.
Аминокислотная и кодирующая полинуклеотидные последовательности химерного ВКСА84Э-1 выглядят следующим образом.
Легкая цепь скВКСА84Э (8Е0 ГО №: 105)
ϋΙΑΜΤζ)3ζ)ΚΕ МЗТЗУСРКУЗ УТСКАЗ<2ЫУР ΤΝνΑϊίΥΟΟΚΡ С<25РКАЫУЗ АЗУКУЗСУРР КЕТСЗСЗСТР ΡΤΣΤΙΝΝν03 ЕРЬАЕУЕС<2<2 ΥΝΝΥΡΕΤΕΟ3 ΟΤΚΣΕΙΚΚΤν ААРЗУПЕРР ЗРЕОЬКЗСТА ЗУУСЪЬЫЫЕУ РКЕАКУОИКУ РЫАЬОЗСЫЗО Ε3νΤΕ<2ϋ3Κϋ ЗТУЗЬЗЗТЪТ ЬЗКАРУЕКНК УУАСЕУТНОС ЬЗЗРУТКЗЕИ КСЕС
Полинуклеотид, кодирующий легкую цепь скВКСА84Э (8ЕЦ ГО №: 106)
дасаРРдсда РдасссадРс РсаааааРРс аРдРссасаР садРаддада садддРсадс дРсассРдса аддссадРса дааРдРддаР асРааРдРад ссРддРаРса асадааасса дддсааРсРс сРааадсасР даРРРасРсд дсаРссРасс ддРасадРдд адРсссРдаР сдсРРсасад дсадРддаРс РдддасадаР РРсасРсРса ссаРсаасаа РдРдсадРсР даадасРРдд сададРаРРР сРдРсадсаа РаРаасаасР аРссаРРсас дРРсддсРсд дддасааадр РддаааРааа асдРасддРд дсРдсассаР сРдРсРРсаР сРРсссдсса РсРдаРдадс адРРдаааРс РддаасРдсс РсРдРРдРдР дссРдсРдаа РаасРРсРаР сссадададд ссааадРаса дрддааддрд даРаасдссс РссааРсддд РаасРсссад дададРдРса сададсадда садсааддас адсассРаса дссРсадсад сасссРдасд сРдадсааад садасРасда дааасасааа дРсРасдссР дсдаадРсас ссаРсадддс сРдадсРсдс ссдРсасааа дадсРРсаас аддддададр дРРад
Тяжелая цепь скВКСА84Э (8ЕР ГО №:
РУОЬУЕЗССС ЬУОРССЗККЪ Ι33Ό33ΑΙΥΥ АРТУКСКЕТ1 ΕΝΙΥΥσ3ΚΣϋ У№С<2СТТЬТУ νΚϋΥΕΡΕΡνΤ УЗИЫЗСАЬТЗ ΟΤΥΙΟΝνΝΗΚ РЗЫТКУОККУ кркртьшзк τΡΕντονννϋ ΥΝ3ΤΥΚνν3ν ЬТУЬНОРИЬЫ Ρ£>νΥΤΡιΡΡ5Κ ϋΕΕΤΚΝφν3Ε РУЬРЗРСЗЕЕ ЬУЗКЬТУРКЗ СК
Полинуклеотид, кодирующий тяжелую
даРдРдсадс РддРддадРс ссддааасРс РссРдРдсад РдсасРдддР РсдРсаддсР аРРадРадРд асадРадРдс аРРсассаРс Рссададаса ссадРсРаад дРсРдаддас даааасаРРР асРасддРад РсРсасадРс РссРсадссР сасссРссРс саададсасс дРсааддасР асРРссссда ссРдассадс ддсдрдсаса РсРасРсссР садсадсдрд садассРаса РсРдсаасдР саадададРР дадсссаааР дсссадсасс РдаасРссРд ааасссаадд асасссРсаР ддрддрддас дрдадссасд РддасддсдР ддаддРдсаР Расаасадса сдРассдРдР
107)
ЗСААЗСЕТЕЗ
ΒΚϋΝΡΚΝΤΈΕ
ЗЗАЗТКСРЗУ
СУНТЕРАУЬО
ЕРКЗСРКТНТ
УЗНЕРРЕУКЕ
СКЕУКСКУЗИ
ТСЬУКСЕУРЗ
ΚΝ<2<2<3ΝνΕ3Ο
ЗЕСМНМУК<2А
ЬОМТЗЬКЗЕР
ЕРЪАРЗЗКЗТ
ЗЗСЪУЗЪЗЗУ
СРРСРАРЕЪЪ
ШУУРСУЕУН
ΚΑΕΡΑΡΙΕΚΤ
Р1АУЕ№ЕЗЫС
ЗУМНЕАЪНЫН
цепь скВКСА84Э (8Е0 ГО №:
Рдддддаддс РРадРдсадс ссРсРддаРР сасРРРсадР ссададаадд ддсРддадРд саРсРасРаР дсадасасад аРсссаадаа сасссРдРРс асддссаРдР аРРасРдРдд РаддсРРдас РасРддддсс ссассааддд сссаРсддРс РсРдддддса садсддсссР ассддрдасд дРдРсдРдда ссРРсссддс РдРссРасад дрдассдрдс ссРссадсад дааРсасаад сссадсааса сРРдРдасаа аасРсасаса дддддассдр садРсРРссР даРсРсссдд ассссРдадд аадасссРда ддРсаадРРс ааРдссаада сааадссдсд ддРсадсдРс сРсассдРсс
РЕКСЪЕИУАУ
ТАМУУССКСК
ЗССТААЪССЪ
УТУРЗЗЗЪСТ
ССРЗУЕЪЕРР
ΝΑΚΤΚΡΚΕΕζ)
13КАКС0РКЕ
ΟΡΕΝΝΥΚΤΤΡ
ΥΤζ)Κ3Ρι3Ρι3Ρ
108)
сРддадддРс
адсРРРддаа
ддРсдсаРас
Рдаадддссд
сРдсаааРда
аададддадд
ааддсассас
РРсссссРдд
дддсРдссРд
асРсаддсдс
РссРсаддас
сРРдддсасс
ссааддрдда
РдсссассдР
сРРсссссса
РсасаРдсдР
аасРддРасд
ддаддадсад
Рдсассадда
- 73 030226
сЕддсЕдааЕ ддсааддадЕ асаадЕдсаа ддЕсЕссаас ааадсссЕсс
садсссссаЕ сдадаааасс аЕсЕссааад ссааадддса дссссдадаа
ссасаддЕдЕ асасссЕдсс сссаЕсссдд даЕдадсЕда ссаадаасса
ддЕсадссЕд ассЕдссЕдд ЕсаааддсЕЕ сЕаЕсссадс дасаЕсдссд
ЕддадЕддда дадсааЕддд садссддада асаасЕасаа дассасдссЕ
сссдЕдсЕдд асЕссдасдд сЕссЕЕсЕЕс сЕсЕасадса адсЕсассдЕ
ддасаададс аддЕддсадс аддддаасдЕ сЕЕсЕсаЕдс ЕссдЕдаЕдс
аЕдаддсЕсЕ дсасаассас Еасасдсада ададссЕсЕс ссЕдЕсЕссд
ддЕаааЕда
Сравнивали относительные связывающие аффинности антител, содержащих: (1) НВКСА84П-2УЬ и НВКСА84Э-2УН (два испытания), (2) химерное ВКСА84Э, (3) антитело, содержащее НВКСА84П-5УЬ и химерную ВКСА84П-НС, и (4) антитело, содержащее НВКсА84П-5УЬ и НВКСА84П-2УН. Результаты показаны на фиг. 14.
Пример 11. Гуманизированные антитела к В7-Н3 ингибируют рост опухоли в ксенотрансплантатах.
Для демонстрации способности гуманизированных антител к В7-Н3 ингибировать опухолевый рост т у1уо исследовали опухолевый рост клеток карциномы мочевого пузыря НТ-1197 и клеток карциномы почки А498 на мышином ксенотрансплантате. Гуманизированное антитело НВКСА84П-2 (цепь НВКСА84Э-2 УЬ/цепь НВКСА84Э-2 УЬ) модифицировали для включения Рс-области с заменами Ь235У, Р243Ь, К292Р, Υ300Σ и Р396Ь. Антитело НВКСА84П-2 с модифицированным Рс-фрагментом вводили мышам (в дозе 1 мкг/кг, 10 мкг/кг или 20 мкг/кг) через 7 дней, 14 дней, 21 день и 28 дней после имплантации раковых клеток. Результаты показывают, что при всех дозах введенное антитело НВКСА84Э-2 с модифицированным Рс-фрагментом было способно ингибировать опухолевый рост клеток карциномы мочевого пузыря НТ-1197 (фиг. 15) и клеток карциномы почки А498 (фиг. 16).
Пример 12. Переориентирующие реагенты с двойной аффинностью (ЛАКТ™), специфичные к В7Н3 и Т-клеточному рецептору, опосредуют сильный переназначенный Т-клеточный киллинг.
Получали переориентирующие реагенты с двойной аффинностью (ЛАКТ™), специфичные к В7-Н3, и Т-клеточному рецептору (ТСК) и к рецептору натуральных киллеров группы 2Л (ХКС2П). Такие ПАКТ™ обладают способностью к локализации Т-клетки (путем связывания такой Т-клетки с ТСКсвязывающей частью ТСК-связывающего ПАКТ™) или локализации ЫК-клеток (путем связывания такой НК-клетки с NКС2^-связывающей частью NКС2^-связывающего ПАКТ™) с локализацией раковой клетки (путем связывания такой раковой клетки с В7-Н3-связывающей частью ПАКТ™). Локализованная Т-клетка или NК-клетка может затем опосредовать киллинг раковой клетки в процессе, называемом в данном документе "переназначенный" киллинг.
Сконструировали переориентирующий реагент с двойной аффинностью (ПАКТ™), специфичный к В7-Н3 и Т-клеточному рецептору (ТСК), с вариабельными доменами к В7-Н3 НВКСА84П-2 и вариабельными доменами к ТСК.
Цепь ПАКТ™ с Е-спиралью и НВКСА84Л УН-2 х ТСК УЛ (8Ер ГО №: 109)
Е1УЪТ<23РАТ ЪЗЬЗРСЕРАТ ЪЗСЗАТЗЗУЗ ΥΜΗ«Υ<2<2ΚΡΟ ΚΑΡΚΕΝΙΥΏΤ ЗКЬАЗСУРЗН ЕЗСЗСЗСТЕЕ ТЬТ133Ь<2РЕ ΟΕΑΤΥΥΟ<2<2№ ЗЗЫРЬТЕСОС ТКЪЕ1КС663 О666ЕУ<2ЪУЕ ЗСССЪУ<2Рбе ЗЪКЬЗСААЗС ЕТЕЗЗЕСМН1ЛГ УЕ<2АРСКСЬЕ Ж/ΑΥΙ33Ώ33 ΑΙΥΥΑΌΤνΚΟ ΚΕΊΊ3ΒΌΝΑΚ Ν3ΕΥΏΩΜΝ3Ε ΕϋΕΌΤΑνΥΥΟ 0Ε3ΕΕΝΙΥΥ3 ЗЕЬОУ№С<2СТ ТУТУ55С6СС 55ЕУААЕЕКЕ УААЪЕКЕУАА ЪЕКЕУААЪЕК
Полинуклеотид, кодирующий цепь ПАКТ™ с Е-спиралью и НВКСА84П УН-2 х ТСК УЪ (8Е0 ГО №: 110)
даааЕЕдЕдЕ ЕдасасадЕс Ессадссасс сЕдЕсЕЕЕдЕ сЕссадддда аададссасс сЕсЕссЕдса дЕдссассЕс аадЕдЕаадЕ ЕасаЕдсасЕ ддЕаЕсадса дааассаддд ааадссссЕа адсдсЕддаЕ сЕаЕдасаса ЕссааасЕдд сЕЕсЕддддЕ сссаЕсаадд ЕЕсадсддса дЕддаЕсЕдд дасадааЕЕЕ асЕсЕсасаа ЕсадсадссЕ дсадссЕдаа даЕЕЕЕдсаа сЕЕаЕЕасЕд ЕсадсадЕдд адЕадЕаасс сдсЕсасдЕЕ Еддссадддд ассаадсЕЕд адаЕсааадд аддсддаЕсс ддсддсддад дсдаддЕдса дсЕддЕсдад ЕсЕддсддад дасЕддЕдса дссЕддсддс ЕсссЕдадас ЕдЕсЕЕдсдс сдссЕссддс ЕЕсассЕЕсЕ ссадсЕЕсдд саЕдсасЕдд дЕссдссадд сЕссаддсаа дддасЕддаа ЕдддЕддссЕ асаЕсЕссЕс сдасЕссЕсс дссаЕсЕасЕ асдссдасас сдЕдаадддс аддЕЕсасса ЕсЕсссддда саасдссаад аасЕсссЕдЕ ассЕдсадаЕ даасЕсссЕд сдддасдадд асассдссдЕ дЕасЕасЕдс ддсададдсс дддадааЕаЕ сЕасЕасддс ЕсссддсЕдд аЕЕаЕЕдддд ссадддсасс ассдЕдассд ЕдЕссЕссдд аддаЕдЕддс ддЕддадаад ЕддссдсасЕ ддадааадад дЕЕдсЕдсЕЕ Еддадаадда ддЕсдсЕдса сЕЕдаааадд аддЕсдсадс ссЕааааааа
- 74 030226
Цепь с К-спиралью и ТСК УН X НВКСА84ЦУЬ-2 (8Е() ГО №: 111)
Р1<2ЪТ<25Р5Е ЪЗАЗУСРЕУТ ΙΤΟΚΑ3<2ΝνΡ ТЫУАИУООКР СКАРКАЫУЗ АЗУЕУЗСУРЗ ЕЕЗСЗСЗСТР РТЬТ133Ъ<2Р ЕРЕАТУУС<2<2 ΥΝΝΥΡΕΤΕΟ2 сткъЕтксее зебееоуоъу озсаеуккрс азукузсказ сукетзуумн ИУЕ<2АРС<2СЪ ΕΝΙΟΥΙΝΡΥΝ ΡνΤΚΥΝΕΚΕΚ СЕУТ1ТАРКЗ ТЗТАУЪ<2МЫЗ ъезертауну саесзуурур сеууисфстъ утуззеесее скуалькеку ААЬКЕКУААЪ КЕКУААЪКЕ
Полинуклеотид, кодирующий цепь с К-спиралью и ТСК УН X НВКСА84ЦУЕ-2 (8ЕР ГО №: 112)
дасаРссадс РдасссадРс ссссРссРРс сРдРсРдссР ссдрдддсда сададрдасс аРсасаРдса аддссРссса даасдрддас ассаасдрдд ссРддРаРса дсадаадссР ддсааддссс сРааддсдсР даРсРасРсс дссРссРасс ддРасРссдд сдРдссРРсс аддРРсРссд дсРссддсРс Рддсассдас РРсасссРда ссаРсРссад ссРдсадссР даддасРРсд ссассРасРа сРдссадсад РасаасаасР асссРРРсас сРРсддссад ддсассаадс РддаааРсаа дддаддсдда Ъссддсддсд даддссаддр РсадсРддРд садРсРддад сРдаддРдаа даадссРддд дссРсадРда здэ"Ьс"Ьсс"Ьс[ сзздо’ссздс эс["Ь"Ьэ.сэ.э.с["Ь "Ь"Ьэ.ссэ.дс"Ьэ. сэ"Ьс[с1"Ьс[сэ.с РдддРдсдас аддссссРдд асаадддсРР дадРддаРсд даРаРаРРаа РссРРасааР даРдРРасРа адРасааРда даадРРсааа ддсададРса сдаРРассдс ддасаааРсс асдадсасад ссРассРдса даРдаасадс сРдадаРссд аддасасддс сдРдсасРас РдРдсдадад ддадсРасРа РдаРРасдас дддРРРдРРР асРддддсса адддасРсРд дРсасРдРда дсРссддадд аРдРддсддР ддаааадрдд ссдсасРдаа ддадааадРР дсРдсРРРда аададааддр сдссдсасРР ааддаааадд РсдсадсссР дааадад
Сконструировали переориентирующий реагент с двойной аффинностью (ПАКТ™), специфичный к В7-Н3 и рецептору натуральных киллеров группы 2Ώ (М<С2О), с вариабельными доменами к В7-Н3 НВКСА84Ц-2 и вариабельными доменами к ТСК.
Цепь ЦАКТ™ с Е-спиралью и НВКСА84Ц УН-2-Е X N<620 УЬ (8Ер ГО №: 113)
ОЗАЬТОРАЗУ ЗСЗР&231Т1 ЗСЗСЗЗЗШС ΝΝΑνΝΝΥ<2<2Ρ РСКАРКЪЫУ УРРЪЪРЗСУЗ РЕЕЗСЗКЗСТ ЗАЕЪА13СЪ0 3ΕΡΕΑΡΥΥΟΑ АВДРРЗЬЫСРУ ЕСССТКЪТУЪ 66656С66ЕУ ОЬУЕЗСССЪУ ОРССЗЬЕЪЗС АА5СЕТЕ35Е СМНИУЕфАРС КСЪЕИУАУ13 3Ρ33ΑΙΥΥΑΡ ТУКСЕЕТ13Е ΡΝΑΚΝ3ΡΥΡ0 МИЗЪЕРЕРТА УУУССЕСЕЕЫ 1УУСЗЕЪРУИ СфСТТУТУЗЗ беСбебЕУАА ЬЕКЕУААРЕКЕ УААЬЕКЕУА АЪЕК
Полинуклеотид, кодирующий цепь ЦАКТ™ с Е-спиралью и НВКСА84Ц УН-2-Е X М<С2О УЬ (8Е0 ГО №: 114)
садРсРдссс РдасРсадсс РдссРссдРд РсРдддРсРс сРддасадРс ааРсассаРс РссРдРРсРд даадсадсРс саасаРсдда ааРааРдсРд РРаасРддРа ссадсадсРс ссаддааадд сРсссааасР ссРсаРсРаР РаРдаРдасс РасРдсссРс аддддРсРсР дассдаРРсР сРддсРссаа дРсРддсасс РсадссРРсс РддссаРсад РдддсРссад РсРдаддаРд аддсРдаРРа РРасРдРдса дсаРдддаРд асадссРдаа РддРссадРд РРсддсддад ддассаадсР дассдРссРа ддаддсддаР ссддсддсдд аддсдаддрд садсРддРсд адРсРддсдд аддасРддРд садссРддсд
ддсаРдсасР дддРссдсса ддсРссаддс аадддасРдд ааРдддРддс сРасаРсРсс РссдасРссР ссдссаРсРа сРасдссдас ассдрдаадд дсаддРРсас саРсРсссдд дасаасдсса адаасРсссР дРассРдсад аРдаасРссс Рдсдддасда ддасассдсс дРдРасРасР дсддсададд ссдддадааР аРсРасРасд дсРсссддсР ддаРРаРРдд ддссадддса ссассдрдас сдРдРссРсс ддаддаЪдЪд дсддЪддада адрддссдса
сРддадааад аддРРдсРдс РРРддадаад даддРсдсРд сасРРдаааа ддаддРсдса дсссРддада аа
Цепь с К-спиралью и N<620 УН X НВКСА84ЦУЕ-2 (8Ер ГО №: 115)
Р1<2ЪТ<23РЗЕ ЪЗАЗУСРЕУТ ΙΤΟΚΑ3ζ)ΝνΡ ΤΝνΑΝΥζ)ζ)ΚΡ СКАРКАЫУЗ АЗУЕУЗСУРЗ ЕЕЗОЗСЗСТР ЕТЬТ133Ь<2Р ЕРЕАТУУС<2£> ΥΝΝΥΡΕΤΕΟζ) СТКЬЕ1КС66 36С66(2У(2ЪУ ЕЗСССЬУКРС СЗЪЕЪЗСААЗ СЕТЕЗЗУСМН ИУЕОАРСКСЪ ЕИУАЕ1ЕУРС 3ΝΚΥΥΑΡ3νΚ СЕЕЫЗЕРШ ΚΝΤΡΥΡ<2ΜΝ3 ЬЕАЕРТАУУУ САКРЕСЬСРС ТУЕРУИС<2СТ ТУТУЗЗОбСС ООКУААЪКЕК УААЪКЕКУАА ЪКЕКУААЪКЕ
Полинуклеотид, кодирующий цепь с К-спиралью и М<С2О УН X НВКСА84ЦУЕ-2 (8ЕР ГО №: 116)
дасаРссадс РдасссадРс ссссРссРРс сРдРсРдссР ссдрдддсда сададрдасс аРсасаРдса аддссРссса даасдрддас ассаасдрдд
- 75 030226
ссБддБаБса дсадаадссБ ддсааддссс сБааддсдсБ даБсБасБсс
дссБссБасс ддБасБссдд сдБдссББсс аддББсБссд дсБссддсБс
Бддсассдас ББсасссБда ссаБсБссад ссБдсадссБ даддасББсд
ссассБасБа сБдссадсад БасаасаасБ асссБББсас сББсддссад
ддсассаадс БддаааБсаа дддаддсдда Бссддсддсд даддссаддБ
асадсБддБд дадБсБдддд даддссБддБ саадссБдда дддБсссБда
дасБсБссБд БдсадсдБсБ ддаББсассБ БсадБадсБа БддсаБдсас
БдддБссдсс аддсБссадд сааддддсБд дадБдддБдд саБББаБасд
дБаБдаБдда адБааБаааБ асБаБдсада сБссдБдаад ддссдаББса
ссаБсБссад адасааББсс аадаасасдс БдБаБсБдса ааБдаасадс
сБдададсБд аддасасддс БдБдБаББас БдБдсдааад аБсдаддБББ
дддддаБдда ассБасБББд асБасБдддд ссаадддасс асддБсассд
БсБссБссдд аддаБдБддс ддБддаааад БддссдсасБ дааддадааа
дББдсБдсББ Бдааададаа ддБсдссдса сББааддааа аддБсдсадс
ссБдааадад
Для демонстрации способности ЭАКТ™ опосредовать такой переназначенный киллинг раковых клеток вышеописанное йВКСА84В-2/ОАКТ™ (Т-ЭАКТ™) к ТСК, ЙВКСА84О-2, ЙВКСА84О-2 (модифицированный Рс-участок Б235У, Р243Б, К292Р, У300Б и Р396Б) и контроль ТСК-ОАКТ™ инкубировали при различных концентрациях с раковыми клетками-мишенями (клетки рака легкого δК-МΕδ-1, клетки карциномы почки А498, раковые клетки простаты Б-Ж'.'аР или клетки меланомы иАСС-62) и эффекторными покоящимися РВМС (Е:Т соотношение = 30:1) и определяли цитотоксичность (БЭН-анализ). Результаты этих исследований показаны на фиг. 17А-17Э и демонстрируют способность ЙВКСА84Э-2/ ЭАКТ™ к ТСК (Т-ЭАКТ™) опосредовать переназначенный киллинг раковых клеток.
Пример 13. Фармакокинетический профиль у безопухолевых мышей.
Антитело к В7-Н3 (МаЬ1) ввели инъекцией самцам тСЭ16-/-, йСО16А_РОХМ мышей (5 мг/кг; IV) и анализировали сыворотку (до введения дозы и) через 2, 15, 30 мин, и 1, 2, 4, 6 ч, и 1, 2, 3, 6, 8, 14, 21 и 28 дней после инъекции. Было обнаружено, что антитело имело Т 1/2 10,54 дней и Стах 43,493 мкг/мл. Было обнаружено, что концентрация антитела со временем становилась двухфазной, соответствующей двухкомпонентной модели (фиг. 18А-18В). Предсказанные фармакокинетические профили, созданные с использованием 2-камерной модели с параметрами от дозы 5 мг/кг, показаны на фиг. 18С.
Пример 14. Способность антитела к В7-Н3 связывать раковые клетки НТ-1197 мочевого пузыря и предупреждать или ингибировать развитие опухоли в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Вышеописанное антитело к В7-Н3 (МаЬ1) оценивали в отношении способности связывать НТ-1197, клеточная линия карциномы мочевого пузыря человека, экспрессирующая В7-Н3. Как показано на фиг. 19, такие клетки проявляют более значительную экспрессию РКСА135, чем НЕК2, и, таким образом, особенно подходят для оценки терапевтического потенциала антител настоящего изобретения в излечении опухолей НТ-1197. В соответствии с данным выводом было обнаружено, что варианты антитела к В7-Н3 ЙВКСА84Э были способными связываться с клетками НТ-1197. На фиг. 20 показана связывающая аффинность антител МаЬ1 с клетками НТ-1197.
Мышам (шСЭ16-/-, йСЭ16А+_Рох№) имплантировали подкожно по бокам 8х106 клеток НТ-1197. Опухолевые клетки имплантировали в 200 мкл среды Р12 Хэма, разбавленной 1:1 МАТКЮЕБ™. Лечение с помощью МаЬ1 инициировали в срок не позднее 7 дней от имплантации посредством внутривенных введений один раз в семь дней х5 с использованием доз 0,1, 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг (восемь самок мышей на дозу). Центуксимаб (антитело к ЕОКР) вводили контрольной группе мышей в дозах 1, 5 или 15 мг/кг (восемь самок мышей на дозу). Восьми самкам мышей также ввели инъекцией растворитель или 10 мг/кг контроля 1§О. Измерения опухоли осуществляли каждые 3-4 дня. Результаты эксперимента (фиг. 21А) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие опухоли мочевого пузыря в модели с мышиным ксенотрансплантатом. На фиг. 21 В показаны результаты, полученные с использованием центимаба. Сравнение фиг. 21А и 21В демонстрирует, что антитела настоящего изобретения являются более эффективными, чем центимаб в предупреждении или ингибировании развития опухоли мочевого пузыря в модели с мышиным ксенотрансплантатом. На фиг. 21 С сравниваются результаты, полученные при максимальных тестируемых дозах.
Пример 15. Способность антитела к В7-Н3 связывать раковые клетки НТ-1376 мочевого пузыря и предупреждать или ингибировать развитие опухоли в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Вышеописанное антитело к В7-Н3 (МаЬ1) оценивали в отношении его способности связывать НТ1376, клеточная линия карциномы мочевого пузыря человека, экспрессирующая В7-Н3. Как показано на фиг. 22А-22В, такие клетки проявляют более значительную экспрессию РКСА135, чем НЕК2 или РМδА, и, таким образом, особенно подходят для оценки терапевтического потенциала антител настоящего изобретения в излечении опухолей НТ-1376. В соответствии с данным выводом было обнаружено, что варианты антитела к В7-Н3 ЙВКСА84Э были способными связываться с клетками НТ-1197. На фиг. 22А-22В показана связывающая аффинность антител МаЬ1 с клетками НТ-1197.
Мышам (шСЭ16-/-, йСЭ16А+_Рох№) имплантировали подкожно по бокам 5х106 клеток НТ-1376.
- 76 030226
Опухолевые клетки имплантировали в 200 мкл среды Р12 Хэма, разбавленной 1:1 МАТКЮЕЬ™. Лечение с помощью МаЬ1 инициировали в срок не позднее 7 дней от имплантации посредством внутривенных введений один раз в семь дней х4 в дозе 1 мг/кг. Результаты эксперимента (фиг. 23) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие опухоли мочевого пузыря в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Пример 16. Способность антитела к В7-Н3 связывать раковые клетки.
Антитело ВКСА84Э к В7-Н3 оценивали посредством РАС8-анализа в отношении его способности связывать клетки колоректального рака 8Υ480 и 8Υ620; клетки рака желудка АΟ8; клетки меланомы М-14 и ΕΟΧ 1МУ1; клетки рака простаты 22гу; клетки рака поджелудочной железы АкРС-1 и ВхРс-3; клетки рака почки А498 и 786-0. Было обнаружено, что антитело способно связываться со всеми такими клетками.
Пример 17. Способность антитела к В7-Н3 предупреждать или ингибировать развитие опухоли желудка в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Мышам (ιηί'.Ό16-/-. кСО16А+_РохХ1) имплантировали подкожно по бокам 5х106 клеток АΟ8. Опухолевые клетки имплантировали в 200 мкл среды Р12 Хэма, разбавленной 1:1 МАТКЮЕЬ™. Лечение с помощью МаЬ1 инициировали в срок не позднее 7 дней от имплантации посредством внутривенных введений один раз в семь дней х5 с использованием доз 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг. Результаты эксперимента (фиг. 24) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие опухоли желудка в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Пример 18. Способность антитела к В7-Н3 связывать клетки рака легкого и предупреждать или ингибировать развитие опухоли в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Клетки рака легкого А549 инкубировали в присутствии варианта кВКСА84П, скВКСА84Ь и кВКСА84 (0264 Рс) и определяли цитотоксический эффект даных антител. Результаты данного эксперимента показаны на фиг. 25 и указывают на то, что все три антитела были цитотоксическими по отношению к клеткам А549.
Мышам (тСО16-/-, кСО16А+_РохШ) имплантировали подкожно по бокам 8х106 клеток А549. Опухолевые клетки имплантировали в 200 мкл среды Р12 Хэма, разбавленной 1:1 МАТКЮЕЬ™. Лечение с помощью МаЬ1 инициировали в срок не позднее 7 дней от имплантации посредством внутривенных введений один раз в семь дней х4 с использованием дозы 1 мг/кг. Результаты эксперимента (фиг. 26) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие раковой опухоли легкого в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
РАС8-анализ проводили на клетках рака легкого СаЬи3 для того, чтобы определить связывают ли такие клетки антитела к В7-Н3. Эксперимент подтвердил, что такие клетки экспрессируют В7-Н3 и связываются с антителами настоящего изобретения. Для того чтобы определить были ли антитела настоящего изобретения эффективными для предупреждения или ингибирования развития опухоли рака легкого, мышам (тСО16-/-, кСО16А+_РохШ) имплантировали подкожно по бокам 5х106 клеток СаЬи3. Опухолевые клетки имплантировали в 200 мкл среды Р12 Хэма, разбавленной 1:1 МАТКЮЕЬ™. Лечение с помощью МаЬ1 инициировали в срок не позднее 7 дней от имплантации посредством внутривенных введений один раз в семь дней х4 с использованием дозы 0,5, 1 или 5 мг/кг. Результаты эксперимента (фиг. 27) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие раковой опухоли легкого в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Пример 19. Способность антитела к В7-Н3 предупреждать или ингибировать развитие опухоли ΕΟΧ меланомы в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Мышам (восемь самок тС(Э16-/-, кС^16А+_РоxN1) имплантировали подкожно по бокам раковые клетки ^ΟΧ-IМУI меланомы и затем инокулировали внутривенно/раз в 7 дней х3 РВ8-контролем, 1дСконтролем (5/мг/кг), МаЬ1 (0,5, 1, 5 или 10 мг/кг) или внутрибрюшинно/раз в две недели х2 доксетакселем (5, 10 или 20 мг/кг). Опухолевые клетки имплантировали в 200 мкл среды Нат'к Р12, разведённой 1:1 МАТКЮЕЬ™. Лечение с помощью МаЬ1 инициировали в срок не позднее 7 дней от имплантации. Результаты эксперимента (фиг. 28А-28С) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие раковой опухоли меланомы в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Пример 20. Способность антитела к В7-Н3 предупреждать или ингибировать развитие опухоли ИАСС-62 меланомы в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Мышам (восемь самок тСИ16-/-, кСО16А+_РохШ) имплантировали подкожно по бокам раковые клетки ИАСС-62 меланомы и затем инокулировали внутривенно/раз в 7 дней х5 РВ8-контролем, 1дСконтролем (5/мг/кг) или МаЬ1 (0,5, 1, 5 или 10 мг/кг). Опухолевые клетки имплантировали в 200 мкл среды Нат'к Р12, разведённой 1:1 МАТКЮЕЬ™. Лечение с помощью МаЬ1 инициировали в срок не позднее 7 дней от имплантации. Результаты эксперимента (фиг. 29) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие раковой опухоли меланомы в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Пример 21. Способность антитела к В7-Н3 предупреждать или ингибировать развитие опухоли 22гу простаты в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
- 77 030226
Мышам (ιηί'.Ό16-/-, ЬСО16А+_РохШ) имплантировали подкожно по бокам 6х106 раковых клеток 22Γν простаты и затем инокулировали внутривенно/раз в 7 дней х4 РВЗ-контролем, 1дС (10 мг/кг), МаЬ1 (0,5, 1, 5 или 10 мг/кг; внутривенно/раз в 7 дней х5) или трастузумабом (1, 7 или 15 мг/кг). Опухолевые клетки имплантировали в 200 мкл среды Нат'к Р12, разведённой 1:1 МАТКЮЬЬ™. Лечение с помощью МаЬ1 инициировали в срок не позднее 7 дней от имплантации. Результаты эксперимента (фиг. 30А-30С) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие раковой опухоли простаты в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Пример 22. Способность антитела к В7-Н3 связываться с раковыми клетками почки и предупреждать или ингибировать развитие опухоли в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Раковые клетки почки А498 инкубировали в присутствии ЬВКСА84П, сЬВКСА84П и варианта ЬВКСА84 (0264 Рс) и определяли цитотоксический эффект даных антител. Результаты данного эксперимента показаны на фиг. 31 и указывают на то, что все три антитела были цитотоксическими по отношению к А498 клеткам.
Раковые клетки почки А498 инкубировали в присутствии ЬВКСА84П, сЬВКСА84П и варианта ЬВКСА84 (0264 Рс), и определяли цитотоксический эффект даных антител. Результаты данного эксперимента показаны на фиг. 31 и указывают на то, что все три антитела были цитотоксическими по отношению к А498 клеткам.
1НС анализ опухолевой ткани А498 ксенотрансплантата проводили с использованием биотинилированного антитела ВКСА84О (20 мкг/мл), ВКСА69О (5 мкг/мл) и антитела к Нег2 (20 мкг/мл). Было обнаружено, что антитело ВКСА84П, связывало 20-40% опухолевой ткани (от слабо до умеренно: + или ++); было обнаружено, что ВКСА69О связывало 80-100% опухолевой ткани (от умеренно до сильно: ++ или +++). Было обнаружено, что антитело ВКСА84О слабо связывало 40% опухолевой ткани иМИС-3 (+); было обнаружено, что ВКСА69И умеренно или сильно связывало 70% такой опухолевой ткани (++ или +++); было обнаружено, что антитело к Нег2 переменно связывало 20% такой опухолевой ткани (+ +++). Было обнаружено, что в качестве контролей антитело к Нег2 связывало клетки ЗКВК-3 (+++), и было обнаружено, что ВКСА84И и ВКСА69И были способными связывать клетки Нк 700Т (+++).
Мышам (шСИ16-/-, ЬСИ16А+_РохЮ) имплантировали подкожно по бокам 5х106 раковых клеток почки А498. Опухолевые клетки имплантировали в 200 мкл среды Нат'к Р12, разведённой 1:1 МАТКЮЬЬ™. Лечение с помощью МаЬ1 инициировали в срок не позднее 7 дней от имплантации посредством внутривенных введений один раз в семь дней х5 с использованием доз 0,1, 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг. Цетуксимаб (антитело к ЬСКР) вводили контрольной группе мышей в дозах 1, 7 или 15 мг/кг. Дополнительным контрольным мышам инъецировали растворитель или 10 мг/кг 1дС-контроля. Результаты эксперимента (фиг. 32) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие раковой опухоли почки в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Мышам (тСЭ16-/-, ЬС^16А+_РοxN1) в качестве альтернативы имплантировали подкожно по бокам 5х106 раковых клеток 786-0 почки. Опухолевые клетки имплантировали в 200 мкл среды Нат'к Р12, разведённой 1:1 МАТКЮЬЬ™. Лечение с помощью МаЬ1 инициировали в срок не позднее 7 дней от имплантации посредством внутривенных введений один раз в семь дней х5 с использованием с использованием доз 0,1, 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг. Цетуксимаб (антитело к ЬСКР) вводили контрольной группе мышей в дозах 1, 7 или 15 мг/кг. Дополнительным контрольным мышам инъецировали растворитель или 10 мг/кг 1дС-контроля. Результаты эксперимента (фиг. 33А-33В) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие раковой опухоли почки в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Активность МаЬ1 сравнивали с активностью паклитакселя, ингибитора митоза, применяемого в химиотерапии рака. Группе из восьми самок мышей (тСЭ16-/-, ЬСИ16А+_РохН1) имплантировали подкожно по бокам раковые клетки 786-0 почки и затем обеспечивали МаЬ1 посредством внутривенных введений один раз в семь дней в дозах 0,1, 0,5, 1, 5 или 10 мг/кг. Паклитаксель вводили контрольной группе из восьми таких мышей в дозе 2,5 мг/кг на 21, 28 и 35 день исследования. Дополнительным контрольным мышам (семь самок на группу) инъецировали растворитель или 5 мг/кг 1дС-контроля. Результаты эксперимента (фиг. 34) показывают, что МаЬ1 было способно предупреждать или ингибировать развитие раковой опухоли почки в модели с мышиным ксенотрансплантатом.
Пример 23. Токсикологическое исследование на яванском макаке.
Токсикологическое исследование на яванском макаке проводят для того, чтобы оценить острый токсикологический профиль после одноразовой дозы МаЬ1, определить фармакокинетический профиль МаЬ1, установить время по отношению к связи с дозой для индукции цитокинов, связанной с активацией эффекторных клеток, и оценить действие лечения лекарственными средствами на уровень циркулирующих лейкоцитов (например, ХК- и Т-клетки).
Такое исследование можно спланировать для включения четырех групп из 6 обезьян (3 самца и 3 самки) и для продления 7 недель от первоначального лечения до конечного вскрытия. Группа 1 будет включать контрольную группу, которая будет получать только растворитель в течение недель 1 и 2. Четырех членов группы 1 (два самца и две самки) умертвят в неделю 3. Остающиеся члены группы 1 будут
- 78 030226
получать дополнительный растворитель в неделю 3 и их умертвят для вскрытия в неделю 7. Группы 2-4 представляют собой экспериментальные группы, которые будут получать растворитель в неделю 1 и антитело к В7-Н3 (1, 30 или 100 мг/кг соответственно) в неделю 2. Четырех членов каждой группы (два самца и две самки) умертвят в неделю 3. Остающиеся члены каждой группы будут получать дополнительный растворитель в неделю 3 и их умертвят для вскрытия в неделю 7.
Все инфузии хорошо переносятся и смертность или значительные изменения веса тела, клинических признаков или биохимического анализа крови не наблюдаются. Наблюдается дозозависимое уменьшение количества циркулирующих НК-клеток, но не циркулирующих В- и Т-клеток.
В исследовании обеспечивается проверка яванского макака в качестве соответствующего вида для токсикологии. При контакте с нормальной тканью человека антитело ВКСА84Э показало различные степени интенсивности окрашивания в печени, поджелудочной железе, толстой кишке, легком и коре надпочечника. Окрашивание печени относительно ограничивалось клетками, выстилающими синусоиды (фибробласты и купферовские клетки). Окрашивание поджелудочной железы наблюдали главным образом у коллагенового волокна и небольшого процента эпителия (ацинарные клетки или/и клетки вставочного протока). Окрашивание толстой кишки относительно ограничивалось апикальной мембраной крипты эпителия и фибробласта в слизистой оболочке. В эпителии легкого было показано очень слабое и неоднородное окрашивание. ВКСА84Э показали хорошую перекрестную реактивность в тканях яванского макака по сравнению с профилем ткани человека, за исключением недостаточного окрашивания в печени и поджелудочной железе и возможной экспрессии В7-Н3 в гипофизарных клетках яванского макака.
Все публикации и патенты, упомянутые в данном описании, включены в данный документ посредством ссылки в той же степени, как если бы была указана каждая отдельная публикация или заявка на патент, которую следует особым образом или отдельно включить в настоящую заявку посредством ссылки во всей ее полноте. Тогда как настоящее изобретение было описано в связи со специфическими вариантами его осуществлений, следует понимать, что оно поддается дополнительным модификациям, и данная заявка предназначена для охвата любых изменений, применений или адаптации настоящего изобретения, следуя в основном принципам настоящего изобретения и включая такие отклонения от настоящего раскрытия, которые подпадают под известную или общепринятую практику в пределах настоящего уровня техники, к которому настоящее изобретение относится, и которые можно применить к существенным признакам, изложенным выше в данном документе.
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> МакроДженикс, Инк.
Лу, Дерик Хуан, Лин
<120> Антитела, реактивные к В7-Н3, их иммунологически фрагменты и их применения
<150> ИЗ 61/311,057
<151> 2010-03-05
<150> из 61/310,695
<151> 2010-03-04
<150> из 61/310,692
<151> 2010-03-04
<160> 116
<170> Версия РаЬепЫп 3.5
<210> 1
<211> 316
<212> БЕЛОК
<213> Ното зарФепз
<400> 1
МеЬ Ьеи Агд Агд Агд О1у Зег Рго О1у МеЬ О1у Уа1 НФз Уа1
1 5 10
активные
О1у А1а 15
- 79 030226
А1а Ьеи О1у А1а 20 Ьеи Тгр РЬе Суз Ьеи 25 ТЬг О1у А1а Ьеи О1и 30 Уа1 О1п
ναι Рго О1и Азр Рго Уа1 Уа1 А1а Ьеи Уа1 О1у ТЬг Азр А1а ТЬг Ьеи
35 40 45
Суз Суз Зег РЬе Зег Рго О1и Рго О1у РЬе Зег Ьеи А1а О1п Ьеи Азп
50 55 60
Ьеи 11е Тгр О1п Ьеи ТЬг Азр ТЬг Ьуз О1п Ьеи Уа1 Ηΐ3 Зег РЬе А1а
65 70 75 80
О1и О1у О1п Азр О1п О1у Зег А1а Туг А1а Азп Агд ТЬг А1а Ьеи РЬе
85 90 95
Рго Азр Ьеи Ьеи А1а О1п О1у Азп А1а Зег Ьеи Агд Ьеи О1п Агд Уа1
100 105 110
Агд Уа1 А1а Азр О1и О1у Зег РЬе ТЬг Суз РЬе Уа1 Зег 11е Агд Азр
115 120 125
РЬе О1у Зег А1а А1а Уа1 Зег Ьеи О1п Уа1 А1а А1а Рго Туг Зег Ьуз
130 135 140
Рго Зег МеЕ ТЬг Ьеи О1и Рго Азп Ьуз Азр Ьеи Агд Рго О1у Азр ТЬг
145 150 155 160
ναι ТЬг 11е ТЬг Суз Зег Зег Туг Агд О1у Туг Рго О1и А1а О1и Уа1
165 170 175
РЬе Тгр О1п Азр О1у О1п О1у Уа1 Рго Ьеи ТЬг О1у Азп Уа1 ТЬг ТЬг
180 185 190
Зег О1п МеЕ А1а Азп О1и О1п О1у Ьеи РЬе Азр Уа1 Ηΐ3 Зег Уа1 Ьеи
195 200 205
Агд Уа1 Уа1 Ьеи О1у А1а Азп О1у ТЬг Туг Зег Суз Ьеи Уа1 Агд Азп
210 215 220
Рго Уа1 Ьеи О1п О1п Азр А1а Ηΐ3 О1у Зег Уа1 ТЬг 11е ТЬг О1у О1п
225 230 235 240
Рго МеЕ ТЬг РЬе Рго Рго О1и А1а Ьеи Тгр Уа1 ТЬг Уа1 О1у Ьеи Зег
245 250 255
ναι Суз Ьеи 11е А1а Ьеи Ьеи Уа1 А1а Ьеи А1а РЬе Уа1 Суз Тгр Агд
260 265 270
- 80 030226
Буз 11е Буз 275 О1п Бег Суз О1и О1и 280
Азр О1у О1и О1у О1и О1у Бег Буз
290 295
Бег Азр Бег Буз О1и Азр Азр О1у
305 310
О1и Азп А1а О1у А1а 285 О1и Азр О1п
ТБг А1а Беи О1п 300 Рго Беи Буз Нгз
О1п О1и 11е 315 А1а
<210> 2
<211> 948
<212> ДНК
<213> Ното заргепз
<400> 2
абдсбдсдбс ддсддддсад сссбддсабд ддбдбдсабд бдддбдсадс ссбдддадса 60
сбдбддббсб дссбсасадд адсссбддад дбссаддбсс сбдаадассс адбддбддса 120
сбддбдддса ссдабдссас ссбдбдсбдс бссббсбссс сбдадссбдд сббсадссбд 180
дсасадсбса ассбсабсбд дсадсбдаса дабассааас адсбддбдса садсбббдсб 240
дадддссадд ассадддсад сдссбабдсс аассдсасдд сссбсббссс ддассбдсбд 300
дсасадддса асдсабсссб даддсбдсад сдсдбдсдбд бддсддасда дддсадсббс 360
ассбдсббсд бдадсабссд ддабббсддс адсдсбдссд бсадссбдса ддбддссдсб 420
сссбасбсда адсссадсаб дасссбддад сссаасаадд ассбдсддсс аддддасасд 480
дбдассабса сдбдсбссад сбассддддс басссбдадд сбдаддбдбб сбддсаддаб 540
дддсадддбд бдссссбдас бддсаасдбд ассасдбсдс адабддссаа сдадсадддс 600
ббдбббдабд бдсасадсдб ссбдсдддбд дбдсбдддбд сдаабддсас сбасадсбдс 660
сбддбдсдса ассссдбдсб дсадсаддаб дсдсасддсб сбдбсассаб сасадддсад 720
ссбабдасаб бссссссада ддсссбдбдд дбдассдбдд ддсбдбсбдб сбдбсбсабб 780
дсасбдсбдд бддсссбддс бббсдбдбдс бддадааада бсааасадад сбдбдаддад 840
дадаабдсад дадсбдадда ссаддабддд дадддадаад дсбссаадас адсссбдсад 900
ссбсбдааас асбсбдасад сааадаадаб дабддасаад ааабадсс 948
<210> 3
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность вариабельной легкой цепи БКСА84Б
<400> 3
- 81 030226
Азр 1 11е А1а Меб Тйг 5 О1п Бег О1п Ьуз Рйе 10 Меб Бег Тйг Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 Бег Уа1 Тйг Суз Ьуз А1а Бег О1п Азп Уа1 Азр Тйг Азп
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п Бег Рго Ьуз А1а Ьей 11е
35 40 45
Туг Бег А1а Бег Туг Агд Туг Бег О1у Уа1 Рго Азр Агд Рйе Тйг О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у Тйг Азр Рйе Тйг Ьей Тйг 11е Азп Азп Уа1 О1п Бег
65 70 75 80
О1и Азр Ьей А1а О1и Туг Рйе Суз О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго Рйе
85 90 95
Тйг Рйе О1у Бег О1у Тйг Ьуз Ьей О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 4
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную легкую цепь ВКСА84Б
<400> 4 дасаббдсда бдасссадбс бсаааааббс абдбссасаб садбаддада садддбсадс 60
дбсассбдса аддссадбса даабдбддаб асбаабдбад ссбддбабса асадааасса 120
дддсаабсбс сбааадсасб дабббасбсд дсабссбасс ддбасадбдд адбсссбдаб 180
сдсббсасад дсадбддабс бдддасадаб ббсасбсбса ссабсаасаа бдбдсадбсб 240
даадасббдд сададбаббб сбдбсадсаа бабаасаасб абссаббсас дббсддсбсд 300
дддасааадб бддааабааа а 321
<210> 5
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК1 вариабельной легкой цепи ВКСА84Б
<400> 5
Ьуз А1а Бег О1п Азп Уа1 Азр ТЪг Азп Уа1 А1а
- 82 030226
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 6 33 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБК1 вариабельной легкой цепи ΒΚΟΑ84Ό
<400> 6
ааддссадкс адаабдбдда басбаабдба дсс 33
<210> <211> <212> <213> 7 7 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> СБК2 вариабельной легкой цепи ΒΚΟΑ84Ό
<400> 7
Зег А1а Зег Туг Агд Туг Зег
1 5
<210> <211> <212> <213> 8 21 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБК2 вариабельной легкой цепи ΒΚΟΑ84Ό
<400> 8
бсддсабссб ассддкасад к 21
<210> <211> <212> <213> 9 9 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> СБК3 вариабельной легкой цепи ΒΚΟΑ84Ό
<400> 9
О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго РНе ТЪг
1 5
<210> <211> <212> <213> 10 27 ДНК Искусственная последовательность
- 83 030226
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБК3 вариабельной легкой цепи ВКСА84Б
<400> 10
садсаабаба асаасбабсс аббсасд
<210> 11
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность вариабельной тяжелой цепи ΒΚΟΛ84Ό
<400> 11
Азр Уа1 1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Бег О1у О1у О1у Ьеи 10 Уа1 О1п Рго О1у 15 О1у
Бег Агд Ьуз Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у Рйе ТЬг Рйе Бег Бег Рйе
20 25 30
О1у Меб Ηΐ3 Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1и Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Туг 11е Бег Бег Азр Бег Бег А1а 11е Туг Туг А1а Азр ТЬг Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд Рйе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп Рго Ьуз Азп ТЬг Ьеи Рйе
65 70 75 80
Ьеи О1п Меб ТЬг Бег Ьеи Агд Бег О1и Азр ТЬг А1а Меб Туг Туг Суз
85 90 95
О1у Агд О1у Агд О1и Азп 11е Туг Туг О1у Бег Агд Ьеи Азр Туг Тгр
100 105 110
О1у О1п О1у ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 12
<211> 366
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную тяжелую цепь ΒΚΟΛ84Ό
<400> 12
дабдбдсадс бддбддадбс бдддддаддс ббадбдсадс сбддадддбс ссддааасбс
27
60
- 84 030226
бссбдбдсад ссбсбддабб сасбббсадб адсбббддаа бдсасбдддб бсдбсаддсб 120
ссададаадд ддсбддадбд ддбсдсабас аббадбадбд асадбадбдс сабсбасбаб 180
дсадасасад бдаадддссд аббсассабс бссададаса абсссаадаа сасссбдббс 240
сбдсааабда ссадбсбаад дбсбдаддас асддссабдб аббасбдбдд аададддадд 300
даааасаббб асбасддбад баддсббдас басбддддсс ааддсассас бсбсасадбс 360
бссбса 366
<210> 13
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК1 вариабельной тяжелой цепи БКСА84Б
<400> 13
РНе О1у Меб Идз
1
<210> 14
<211> 12
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБК1 вариабельной тяжелой цепи БКСА84Б
<400> 14
бббддаабдс ас 12
<210> 15
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК2 вариабельной тяжелой цепи БКСА84Б
<400> 15
Туг 11е Бег Бег Азр Бег Бег А1а 11е Туг Туг А1а Азр Тйг Уа1 Буз 1 5 10 15
<210> 16
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБК2 вариабельной тяжелой цепи БКСА84Б
- 85 030226
<400> 16
ЕасаЕЕадЕа дЕдасадЕад ЕдссаЕсЕас ЕаЕдсадаса садЕдаад 48
<210> 17
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СВЕ3 вариабельной тяжелой цепи ВКСА84Б
<400> 17
О1у Агд О1и Азп 11е Туг Туг О1у Зег Агд Ьеи Азр Туг
1 5 10
<210> 18
<211> 39
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЕЖ3 вариабельной тяжелой цепи ВКСА84Б
<400> 18
дддадддааа асаЕЕЕасЕа сддЕадЕадд сЕЕдасЕас 39
<210> 19
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность вариабельной легкой цепи ВКСА69Б
<400> 19
Азр 1 11е О1п МеЕ Тйг 5 О1п ТЬг ТЬг Зег Зег 10 Ьеи Зег А1а Зег Ьеи 15 О1у
Азр Агд Уа1 Тйг 11е Зег Суз Агд А1а Зег О1п Азр 11е Зег Азп Туг
20 25 30
Ьеи Азп Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго Азр О1у ТЬг Уа1 Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Туг Тйг Зег Агд Ьеи НФз Зег О1у Уа1 Рго Зег Агд Рйе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у Тйг Азр Туг Зег Ьеи ТЬг 11е Азр Азп Ьеи О1и О1п
65 70 75 80
- 86 030226
О1и Азр 11е А1а ТИг 85 Туг РИе Суз О1п О1п О1у Азп ТИг Ьеи Рго Рго
90 95
ТИг РИе О1у О1у О1у ТИг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 20
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную легкую цепь ВКСА69Б
<400> 20 дабабссада бдасасадас басабссбсс сбдбсбдссб сбсбдддада сададбсасс 60
абсадббдса дддсаадбса ддасаббадб ааббабббаа асбддбабса дсадааасса 120
дабддаасбд ббааасбссб дабсбасбас асабсасдаб басасбсадд адбсссабса 180
аддббсадбд дсадбдддбс бддаасадаб баббсбсбса ссаббдасаа ссбддадсаа 240
даадабаббд ссасббасбб ббдссаасад ддбаабасдс ббссбссдас дббсддбдда 300
ддсассааас бддааабсаа а 321
<210> 21
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК1 вариабельной легкой цепи ВКСА69Б
<400> 21
Агд А1а Зег О1п Азр 11е Зег Азп Туг Ьеи Азп
1 5 10
<210> 22
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность,
СБК1 вариабельной легкой цепи ВКСА69Б
<400> 22
адддсаадбс аддасаббад бааббаббба аас
<210> 23
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
33
- 87 030226
<220>
<223> СБК2 вариабельной легкой цепи ΒΚΟΑ69Ό
<400> 23
Туг ТЪг Бег Агд Ьеи Ηΐ3 Бег
1 5
<210> 24
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность,
СБК2 вариабельной легкой цепи ΒΚΟΑ69Ό
<400> 24
басасабсас < даббасасбс а
<210> 25
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК3 вариабельной легкой цепи ΒΚΟΑ69Ό
<400> 25
Ο1η Ο1η О1у Азп ТЪг Ьеи Рго Рго ТЬг
1 5
<210> 26
<211> 27
<212> ДНК
<213>
<220>
<223>
21
Искусственная последовательность
Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБК3 вариабельной легкой цепи ΒΚΟΑ69Ό
<400> 26
саасадддба абасдсббсс бссдасд
27
<210> 27
<211> 120
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223>
Аминокислотная последовательность вариабельной тяжелой цепи ΒΚΟΑ69Ό
<400> 27
Ο1η Уа1 Ο1η Ьеи Ο1η Ο1η Бег О1у А1а О1и Ьеи А1а Агд Рго О1у А1а 1 5 10 15
- 88 030226
Бег Уа1 Ьуз Ьеи 20 Бег Суз Ьуз А1а Бег 25 О1у Туг ТЬг Рйе ТЬг 30 Бег Туг
Тгр Меб О1п Тгр Уа1 Ьуз О1п Агд Рго О1у О1п О1у Ьеи О1и Тгр 11е
35 40 45
О1у Тйг 11е Туг Рго О1у Азр О1у Азр ТЬг Агд Туг ТЬг О1п Ьуз Рйе
50 55 60
Ьуз О1у Ьуз А1а ТЬг Ьеи ТЬг А1а Азр Ьуз Бег Бег Бег ТЬг А1а Туг
65 70 75 80
Меб О1п Ьеи Бег Бег Ьеи А1а Бег О1и Азр Бег А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд Агд О1у 11е Рго Агд Ьеи Тгр Туг Рйе Азр Уа1 Тгр О1у А1а
100 105 110
О1у Тйг Тйг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 28
<211> 360
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную тяжелую цепь ВКСА69Б
<400> 28 саддббсадс бссадсадбс бддддсбдад сбддсаадас сбддддсббс адбдаадббд 60
бссбдсаадд сббсбддсба сассбббасб адсбасбдда бдсадбдддб аааасададд 120
ссбддасадд дбсбддаабд даббдддасб абббабссбд дадабддбда басбаддбас 180
асбсадаадб бсаадддсаа ддссасаббд асбдсадаба аабссбссад сасадссбас 240
абдсаасбса дсадсббддс абсбдаддас бсбдсддбсб аббасбдбдс аадаададдд 300
аббссасддс бббддбасбб сдабдбсбдд ддсдсаддда ссасддбсас сдбсбссбса 360
<210> 29
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК1 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69Б
<400> 29
Бег Туг Тгр Меб О1п
- 89 030226
1 5
<210> 30
<211> 15
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБК1 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69Б
<400> 30
адсЕасЕдда Едсад
15
<210> 31
<211> 17
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК2 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69Б
<400> 31
ТЕг 11е Туг Рго О1у Азр О1у Азр ТЕг Агд Туг ТЕг О1п Ьуз РЕе Ьуз
1 5 10 15
О1у
<210> 32
<211> 51
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, вариабельной тяжелой цепи ВКСА69Б кодирующая СБК2
<400> 32
асЕаЕЕЕаЕс сЕддадаЕдд ЕдаЕасЕадд ЕасасЕсада адЕЕсааддд с
51
<210> 33
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК3 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69Б
<400> 33
Агд О1у 11е Рго Агд Ьеи Тгр Туг РЕе Азр Уа1
1 5 10
<210> 34
- 90 030226
33
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБК3 вариабельной тяжелой цепи ВКСА69Б
<400> 34
ададддаББс сасддсБББд дБасББсдаБ дБс
<210> 35
<211> 108
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность вариабельной легкой
цепи РКСА157
<400> 35
Азр 1 11е О1п МеБ ТБг 5 О1п Бег Рго
О1и ТБг Уа1 ТБг 20 11е ТБг Суз Агд
Ьеи А1а Тгр 35 Туг О1п О1п Ьуз О1п 40
Туг Азп 50 ТБг Ьуз ТБг Ьеи Рго 55 О1и
Бег 65 О1у Бег О1у ТБг О1п 70 РБе Бег
О1и Азр РБе О1у Агд 85 Туг Туг Суз
Тгр ТБг РБе О1у 100 О1у О1у ТБг Азп
А1а Бег 10 Ьеи Бег Уа1 Бег Уа1 15 О1у
А1а 25 Бег О1и Бег 11е Туг 30 Бег Туг
О1у Ьуз Бег Рго О1п 45 Ьеи Ьеи Уа1
О1у Уа1 Рго Бег 60 Агд РБе Бег О1у
Ьеи Ьуз 11е 75 Азп Бег Ьеи О1п Рго 80
О1п НБз 90 НБз Туг О1у ТБг Рго 95 Рго
Ьеи О1и 11е Ьуз
105
<210> 36
<211> 324
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную легкую цепь РКСА157
<400> 36
дасаБссада БдасБсадБс БссадссБсс сБаБсБдБаБ сБдБдддада аасБдБсасс
60
- 91 030226
аЬЬасакдЬс дадсаадкда дадкаЬЬЬас адЬЬаЬЬЬад сакддЬаЬса дсадааасад 120
ддаааакскс сксадсксск ддксЬаЬааЬ асааааасск кассададдд ЬдЬдссаЬса 180
аддЬЬсадкд дсадкддакс аддсасасад ЬЬЬЬсЬсЬда адаксаасад сскдсадсск 240
даадаЬЬЬЬд ддадакакка скдксаасак саккакддка сксскссдкд дасдкксддк 300
ддаддсасса асскддааак сааа 324
<210> 37
<211> 11
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СВЕ1 вариабельной легкой цепи РКСА157
<400> 37
Агд А1а Зег О1и Зег 11е Туг Зег Туг Ьеи А1а 1 5 10
<210> 38
<211> 33
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельной легкой цепи РКСА157 СБЕ1
<400> 38
сдадсаадкд ададкаккка садккаккка дса 33
<210> 39
<211> 7
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220> <223> СВЕ2 вариабельной легкой цепи РЕСА157
<400> 39
Азп ТЪг Ьуз ТЪг Ьеи Рго О1и
1 5
<210> 40
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220> <223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБЕ2
вариабельной легкой цепи РКСА157
<400> 40
- 92 030226
аабасааааа ссббассада д 21
<210> 41
<211> 9
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СВЕ3 вариабельной легкой цепи РКСА157
<400> 41
Ο1η Ηΐ3 Ηΐ3 Туг О1у ТЪг Рго Рго Тгр
1 5
<210> 42
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СВЕ3 вариабельной легкой цепи РЕСА157
<400> 42
саасабсабб абддбасбсс бссдбдд 27
<210> 43
<211> 117
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность вариабельной тяжелой
цепи РЕСА157
<400> 43
О1и 1 Уа1 Θ1η Θ1η Уа1 5 О1и Бег О1у
Бег Ьеи Ьуз Ьеи 20 Бег Суз А1а А1а
О1у Меб Бег 35 Тгр Уа1 Агд Θ1η ТЬг 40
А1а ТЬг 50 11е Азп Бег О1у О1у 55 Бег
Ьуз 65 О1у Агд РЬе ТЬг 11е 70 Бег Агд
Ьеи Θ1η Меб Агд Бег 85 Ьеи Ьуз Бег
О1у Азр 10 Ьеи Уа1 Ьуз Рго О1у 15 О1у
Бег 25 О1у РЬе ТЬг РЬе Бег 30 Бег Туг
Рго Азр Ьуз Агд Ьеи 45 О1и Тгр Уа1
Азп ТЬг Туг Туг 60 Рго Азр Бег Ьеи
Азр Азп А1а 75 Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 80
О1и Азр 90 ТЬг А1а Меб Туг Туг 95 Суз
- 93 030226
А1а Агд Ηΐ3 Азр О1у О1у А1а МеЕ Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЪг Зег 100 105 110
Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег 115
<210> 44
<211> 351
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную тяжелую цепь РКСА157
<400> 44
даддЕдсадс аддЕддадЕс ддддддадас ЕЕадЕдаадс сЕддадддЕс ссЕдааасЕс 60
ЕссЕдЕдсад ссЕсЕддаЕЕ сасЕЕЕсадЕ ЕссЕаЕддса ЕдЕсЕЕдддЕ ЕсдссадасЕ 120
ссадасаада ддсЕддадЕд ддЕсдсаасс аЕЕааЕадЕд дЕддаадЕаа сассЕасЕаЕ 180
ссадасадЕЕ Едааддддсд аЕЕсассаЕс Ессададаса аЕдссаадаа сасссЕЕЕас 240
сЕдсаааЕдс дсадЕсЕдаа дЕсЕдаддас асадссаЕдЕ аЕЕасЕдЕдс аадасаЕдас 300
дддддадсЕа ЕддасЕасЕд дддЕсаадда ассЕсадЕса ссдЕсЕссЕс а 351
<210> <211> <212> <213> 45 5 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> СВК1 вариабельной тяжелой цепи РКСА157
<400> 45
Зег Туг О1у МеЕ Зег
1 5
<210> 46
<211> 15
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СЕЖ1 вариабельной тяжелой цепи РКСА157
<400> 46
ЕссЕаЕддса ЕдЕсЕ 15
<210> 47
<211> 19
<212> БЕЛОК
- 94 030226
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СВЕ2 вариабельной тяжелой цепи РКСА157
<400> 47
Уа1 А1а ТЪг 11е Азп Зег О1у О1у Зег Азп ТЪг Туг Туг Рго Азр Зег
1 5 10 15
Ьеи Ьуз О1у
<210> <211> <212> <213> 48 57 ДНК Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая
вариабельной тяжелой цепи РКСА157
<400> 48
дбсдсаасса ббаабадбдд бддаадбаас ассбасбабс садасадббб
<210> 49
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СВК.3 вариабельной тяжелой цепи РКСА157
<400> 49
Ηΐ3 Азр О1у О1у А1а Меб Азр Туг
1 5
СБК2
даадддд
57
<210> 50
<211> 24
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельной тяжелой цепи РКСА157
<400> 50
сабдасдддд дадсбабдда сбас
СБК3
<210> 51
<211> 218
<212> БЕЛОК
<213> Ното заряепз
<400> 51
Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи О1у О1у Рго Зег Уа1 РНе Ьеи РНе Рго Рго
24
- 95 030226
1 5 10 15
Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи Меб 11е Бег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз
20 25 30
Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Бег Н1з О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр
35 40 45
Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и
50 55 60
О1и Ο1η Туг Азп Бег ТЬг Туг Агд Уа1 Уа1 Бег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи
65 70 75 80
Ηΐ3 Ο1η Азр Тгр Ьеи Азп О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Бег Азп
85 90 95
Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго 11е О1и Ьуз ТЬг 11е Бег Ьуз А1а Ьуз О1у
100 105 110
Ο1η Рго Агд О1и Рго Ο1η Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Бег Агд О1и О1и
115 120 125
Меб ТЬг Ьуз Азп Ο1η Уа1 Бег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг
130 135 140
Рго Бег Азр 11е А1а Уа1 О1и Тгр О1и Бег Азп О1у Ο1η Рго О1и Азп
145 150 155 160
Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго Уа1 Ьеи Азр Бег Азр О1у Бег РЬе РЬе
165 170 175
Ьеи Туг Бег Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Бег Агд Тгр Ο1η Ο1η О1у Азп
180 185 190
Уа1 РЬе Бег Суз Бег Уа1 Меб Н1з О1и А1а Ьеи Нгз Азп Нгз Туг ТЬг
195 200 205
Ο1η Ьуз Бег Ьеи Бег Ьеи Бег Рго О1у Ьуз
210 215
<210> 52
<211> 8
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная линкерная последовательность
- 96 030226
<400> 52
О1у О1у О1у Зег О1у О1у О1у О1у
1 5
<210> <211> <212> <213> 53 24 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Полинуклеотид, кодирующий аминокислотную линкерную последовательность
<400> 53
ддаддсддаЬ ссддаддсдд аддс 24
<210> <211> <212> <213> 54 4 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> С-концевая аминокислотная последовательность ПАКТ'
<400> 54
Ьеи О1у О1у Суз 1
<210> <211> <212> <213> <220> <223> 55 13 БЕЛОК Искусственная последовательность Шарнирный домен
<400> 55
О1и Рго Ьуз Зег Суз Азр Ьуз ТЪг Нтз ТЪг Суз Рго Рго
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 56 10 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> Шарнирный домен
<400> 56
О1и Зег Ьуз Туг О1у Рго Рго Суз Рго Зег
1 5 10
<210> <211> <212> 57 6 БЕЛОК
- 97 030226
<213> Искусственная последовательность
<220> <223> С-концевая аминокислотная последовательность БАЕТ
<400> 57
Уа1 О1и Рго Ьуз Зег Суз
1 5
<210> <211> <212> <213> 58 18 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Полинуклеотид, кодирующий с-концевую последовательность БАЕТ
<400> 58
дббдадссса аабсббдб 18
<210> <211> <212> <213> 59 10 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> Цистеин-содержащая последовательность БАЕТ
<400> 59
Ьеи О1у О1у Суз РИе Азп Агд О1у О1и Суз 1 5 10
<210> <211> <212> <213> 60 30 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Полинуклеотид, кодирующий с-концевую цистеин-содержащую последовательность БАЕТ
<400> 60
сбдддаддсб дсббсаасад дддададбдб 30
<210> <211> <212> <213> 61 6 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> Цистеин-содержащая последовательность БАЕТ
<400> 61
РИе Азп Агд О1у О1и Суз 1 5
- 98 030226
<210> 62
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий цистеин-содержащую последовательность БАКТ
<400> 62
ЕЕсаасаддд дададЕдЕ
18
<210> <211> <212> <213> 63 28 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> Е-спиральная аминокислотная последовательность БАКТ
<400> 63
О1и Уа1 . А1а А1а Ьеи О1и Ьуз О1и Уа1 А1а А1а Ьеи О1и Ьуз О1и Уа1
1 5 10 15
А1а А1а Ьеи О1и Ьуз О1и Уа1 А1а А1а Ьеи О1и Ьуз 20 25
<210> <211> <212> <213> 64 28 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220>
<223> К-спиральная аминокислотная последовательность БАКТ
<400> 64
Ьуз Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и Ьуз Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и Ьуз Уа1
1 5 10 15
А1а А1а Ьеи Ьуз О1и Ьуз Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и 20 25
<210> 65
<211> 5
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Линкер
<400> 65
О1у О1у О1у Азп Зег
1 5
- 99 030226
<210> 66
<211> 383
<212> БЕЛОК <213> Ното зар1епз
<400> 66
МеЕ 1 О1у Беи О1у Рго 5 Уа1 РЕе Беи Беи Беи 10 А1а О1у 11е РЕе Рго 15 РЕе
А1а Рго Рго О1у А1а А1а А1а О1и Рго Н1з Бег Беи Агд Туг Азп Беи
20 25 30
ТЕг Уа1 Беи Бег Тгр Азр О1у Бег Уа1 О1п Бег О1у РЕе Беи ТЕг О1и
35 40 45
Уа1 Н1з Беи Азр О1у О1п Рго РЕе Беи Агд Суз Азр Агд О1п Буз Суз
50 55 60
Агд А1а Буз Рго О1п О1у О1п Тгр А1а О1и Азр Уа1 Беи О1у Азп Буз
65 70 75 80
ТЕг Тгр Азр Агд О1и ТЕг Агд Азр Беи ТЕг О1у Азп О1у Буз Азр Беи
85 90 95
Агд МеЕ ТЕг Беи А1а Н1з 11е Буз Азр О1п Буз О1и О1у Беи Н1з Бег
100 105 110
Беи О1п О1и 11е Агд Уа1 Суз О1и 11е Н1з О1и Азр Азп Бег ТЕг Агд
115 120 125
Бег Бег О1п Н1з РЕе Туг Туг Азр С1у О1и Беи РЕе Беи Бег О1п Азп
130 135 140
Беи О1и ТЕг Буз О1и Тгр ТЕг МеЕ Рго О1п Бег Бег Агд А1а О1п ТЕг
145 150 155 160
Беи А1а МеЕ Азп Уа1 Агд Азп РЕе Беи Буз О1и Азр А1а МеЕ Буз ТЕг
165 170 175
Буз ТЕг Н1з Туг Н1з А1а МеЕ Н1з А1а Азр Суз Беи О1п О1и Беи Агд
180 185 190
Агд Туг Беи Буз Бег О1у Уа1 Уа1 Беи Агд Агд ТЕг Уа1 Рго Рго МеЕ
195 200 205
Уа1 Азп Уа1 ТЕг Агд Бег О1и А1а Бег О1и О1у Азп 11е ТЕг Уа1 ТЕг
210 215 220
- 100
030226
Суз 225 Агд А1а Бег О1у Рйе 230 Туг Рго Тгр Азп 11е 235 Тйг Ьей Бег Тгр Агд 240
О1п Азр О1у Уа1 Бег Ьей Бег Н1з Азр Тйг О1п О1п Тгр О1у Азр Уа1
245 250 255
Ьей Рго Азр О1у Азп О1у Тйг Туг О1п Тйг Тгр Уа1 А1а Тйг Агд 11е
260 265 270
Суз О1п О1у О1и О1и О1п Агд Рйе Тйг Суз Туг Меб О1и Н1з Бег О1у
275 280 285
Азп Н1з Бег Тйг Н1з Рго Уа1 Рго Бег О1у Ьуз Уа1 Ьей Уа1 Ьей О1п
290 295 300
Бег Н1з Тгр О1п Тйг Рйе Н1з Уа1 Бег А1а Уа1 А1а А1а А1а А1а 11е
305 310 315 320
Рйе Уа1 11е 11е 11е Рйе Туг Уа1 Агд Суз Суз Ьуз Ьуз Ьуз Тйг Бег
325 330 335
А1а А1а О1и О1у Рго О1и Ьей Уа1 Бег Ьей О1п Уа1 Ьей Азр О1п Н1з
340 345 350
Рго Уа1 О1у Тйг Бег Азр Н1з Агд Азр А1а Тйг О1п Ьей О1у Рйе О1п
355 360 365
Рго Ьей Меб Бег Азр Ьей О1у Бег Тйг О1у Бег Тйг О1и О1у А1а
370 375 380
<210> 67
<211> 305
<212> БЕЛОК
<213> Ното зар1епз
<400> 67
Рго Н1з Бег Ьей Агд Туг Азп Ьей Меб Уа1 Ьей Бег О1п Азр О1у Бег
1 5 10 15
Уа1 О1п Бег О1у Рйе Ьей А1а О1и О1у Н1з Ьей Азр О1у О1п Рго Рйе
20 25 30
Ьей Агд Туг Азр Агд О1п Ьуз Агд Агд А1а Ьуз Рго О1п О1у О1п Тгр
35 40 45
А1а О1и Азр Уа1 Ьей О1у А1а Ьуз Тйг Тгр Азр Тйг О1и Тйг О1и Азр
50 55 60
- 101
030226
Ьеи 65 ТЬг О1и Азп О1у О1п 70 Азр Беи Агд Агд ТБг 75 Беи ТЬг Н1з 11е Ьуз 80
Азр О1п Ьуз О1у О1у Ьеи Н1з Бег Ьеи О1п О1и 11е Агд Уа1 Суз О1и
85 90 95
11е Н1з О1и Азр Бег Бег ТЬг Агд О1у Бег Агд Н1з РЬе Туг Туг Азр
100 105 110
О1у О1и Ьеи РЬе Ьеи Бег О1п Азп Ьеи О1и ТБг О1п О1и Бег ТБг Уа1
115 120 125
Рго О1п Бег Бег Агд А1а О1п ТЬг Беи А1а МеБ Азп Уа1 ТБг Азп РБе
130 135 140
Тгр Буз О1и Азр А1а МеБ Буз ТЬг Буз ТБг Н1з Туг Агд А1а МеБ О1п
145 150 155 160
А1а Азр Суз Ьеи О1п Ьуз Ьеи О1п Ьеи Рго Рго МеБ Уа1 Азп Уа1 11е
165 170 175
Суз Бег О1и Уа1 Бег О1и О1у Азп 11е ТБг Уа1 ТЬг Суз Агд А1а Бег
180 185 190
Бег Рйе Туг Рго Агд Азп 11е ТЬг Ьеи ТБг Тгр Агд О1п Азр О1у Уа1
195 200 205
Бег Ьеи Бег Н1з Азп ТЬг О1п О1п Тгр О1у Азр Уа1 Беи Рго Азр О1у
210 215 220
Азп О1у ТЬг Туг О1п ТЬг Тгр Уа1 А1а ТБг Агд 11е Агд О1п О1у О1и
225 230 235 240
О1и О1п Агд РЬе ТЬг Суз Туг МеБ О1и Н1з Бег О1у Азп Н1з О1у ТБг
245 250 255
Н1з Рго Уа1 Рго Бег О1у Ьуз А1а Беи Уа1 Ьеи О1п Бег О1п Агд ТБг
260 265 270
Азр РЬе Рго Туг Уа1 Бег А1а А1а МеБ Рго Суз РЬе Уа1 11е 11е 11е
275 280 285
11е Ьеи Суз Уа1 Рго Суз Суз Буз Буз Ьуз ТЬг Бег А1а А1а О1и О1у
290 295 300
Рго
305
- 102
030226
<210> 68
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Вариабельная легкая цепь гуманизированного БКСА84Б-1
<400> 68
Азр 1 11е О1п Беи ТБг 5 О1п Бег Рго Бег РБе 10 Беи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТБг 11е ТБг Суз Буз А1а Бег О1п Азп Уа1 Азр ТБг Азп
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг О1п О1п Буз Рго О1у Буз А1а Рго Буз Беи Беи 11е
35 40 45
Туг Бег А1а Бег Туг Агд Туг Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РБе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТБг Азр РБе ТБг Беи ТБг 11е Бег Бег Беи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РБе А1а ТБг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго РБе
85 90 95
ТБг РБе О1у О1п О1у ТБг Буз Беи О1и 11е Буз
100 105
<210> 69
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая вариабельную легкую цепь гуманизированного БКСА84Б-1
<400> 69
дасаРссадс РдасссадРс ссссРссРРс сРдРсРдссР ссдРдддсда сададРдасс 60
аРсасаРдса аддссРссса даасдРддас ассаасдРдд ссРддРаРса дсадаадссР 120
ддсааддссс сРаадсРдсР даРсРасРсс дссРссРасс ддРасРссдд сдРдссРРсс 180
аддРРсРссд дсРссддсРс Рддсассдас РРсасссРда ссаРсРссад ссРдсадссР 240
даддасРРсд ссассРасРа сРдссадсад РасаасаасР асссРРРсас сРРсддссад 300
ддсассаадс РддаааРсаа д 321
- 103 030226
<210> <211> <212> <213> 70 11 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> СВЕ1 вариабельной легкой цепи гуманизированного ΒΕСΑ84^-1
<400> 70
Ьуз А1а Зег О1п Азп Уа1 Азр ТЪг Азп Уа1 А1а
1 5 10
<210> <211> <212> <213> 71 33 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБЕ1 вариабельной легкой цепи гуманизированного ΒΕСΑ84^-1
<400> 71
ааддссадкс адаакдкдда ЬаскаакдЬа дсс 33
<210> <211> <212> <213> 72 7 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> СБЕ2 вариабельной легкой цепи гуманизированного ΒΕСΑ84^-1
<400> 72
Зег А1а Зег Туг Агд Туг Зег
1 5
<210> <211> <212> <213> 73 21 ДНК Искусственная последовательность
<220> <223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБЕ2 вариабельной легкой цепи гуманизированного ΒΕСΑ84^-1
<400> 73
ксддсаксск ассддкасад к 21
<210> <211> <212> <213> 74 9 БЕЛОК Искусственная последовательность
<220> <223> СБЕ3 вариабельной легкой цепи гуманизированного ΒΕСΑ84^-1
<400> 74
- 104 030226
О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго РИе ТИг 1 5
<210> 75
<211> 27
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СВЕ3 вариабельной легкой цепи гуманизированного ВЕСА84Б-1
<400> 75
садсаабаба асаасбабсс аббсасд
27
<210> 76
<400> 76
000
<210> 77
<400> 77
000
<210> 78
<400> 78
000
<210> 79
<400> 79
000
<210> 80
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Аминокислотная последовательность вариабельной тяжелой цепи гуманизированного ВЕСА84Б-1
<400> 80
О1и 1 Уа1 О1п Ьеи Уа1 5 О1и Зег О1у О1у О1у 10 Ьеи Уа1 О1п Рго О1у 15 О1у
Зег Ьеи Агд Ьеи 20 Зег Суз А1а А1а Зег 25 О1у РИе ТИг РИе Зег 30 Зег РИе
О1у Меб Н1з 35 Тгр Уа1 Агд О1п А1а 40 Рго О1у Ьуз О1у Ьеи 45 О1и Тгр Уа1
А1а Туг 11е Зег Зег Азр Зег Зег А1а 11е Туг Туг А1а Азр ТИг Уа1
50 55 60
- 105
030226
Ьуз О1у Агд Рйе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Буз Азп Зег Ьеи Туг
65 70 75 80
Беи О1п Меб Азп Зег Беи Агд Азр О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1у Агд О1и Азп 11е Туг Туг О1у Зег Агд Беи Азр Туг Тгр
100 105 110
О1у О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 81
<211> 366
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая
вариабельную тяжелую цепь гуманизированного БКСА84Б-1
<400> 81 даддбдсадс бддбсдадбс бддсддадда сбддбдсадс сбддсддсбс ссбдадасбд 60
бсббдсдссд ссбссддсбб сассббсбсс адсббсддса бдсасбдддб ссдссаддсб 120
ссаддсаадд дасбддаабд ддбддссбас абсбссбссд асбссбссдс сабсбасбас 180
дссдасассд бдаадддсад дббсассабс бсссдддаса асдссаадаа сбсссбдбас 240
сбдсадабда асбсссбдсд ддасдаддас ассдссдбдб асбасбдсдс сададдссдд 300
дадаабабсб асбасддсбс ссддсбддаб баббддддсс адддсассас сдбдассдбд 360
бссбсб 366
<210> 82
<211> 4
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК1 вариабельной тяжелой цепи гуманизированного БКСА84Б-1
<400> 82
РНе О1у Меб Н1з
1
<210> 83
<211> 12
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
- 106 030226
12
<223> Полинуклеотидная последовательность, вариабельной тяжелой цепи гуманизиро кодирующая СБК1 занного БКСА84Б-1
<400> 83
ЕЕЕддааЕдс ас
<210> 84
<211> 16
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК2 вариабельной тяжелой цепи гуманизированного БКСА84Б
<400> 84
Туг 11е Зег Зег Азр Зег Зег А1а 11е Туг Туг А1а Азр ТЪг Уа1 Буз
1 5 10 15
<210> 85
<211> 48
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБК2
вариабельной тяжелой цепи гуманизированного БКСА84Б-1
<400> 85
ЕасаЕЕадЕа дЕдасадЕад ЕдссаЕсЕас ЕаЕдсадаса садЕдаад
48
<210> 86
<211> 13
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> СБК3 вариабельной тяжелой цепи гуманизированного БКСА84Б-1
<400> 86
О1у Агд О1и Азп 11е Туг Туг О1у Зег Агд Беи Азр Туг
1 5 10
<210> 87
<211> 39
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотидная последовательность, кодирующая СБК3 вариабельной тяжелой цепи гуманизированного БКСА84Б-1
<400> 87
дддадддааа асаЕЕЕасЕа сддЕадЕадд сЕЕдасЕас 39
<210> 88
- 107 030226
<400> 88
000
<210> 89
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ЬВКСА84Ь-2УЬ
<400> 89
Азр 1 11е О1п Ьеи ТЬг 5 О1п Зег Рго Зег РЬе 10 Ьеи Зег А1а Зег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Зег О1п Азп Уа1 Азр ТЬг Азп
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз А1а Ьеи 11е
35 40 45
Туг Зег А1а Зег Туг Агд Туг Зег О1у Уа1 Рго Зег Агд РЬе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго РЬе
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 90
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ЬВКСА84Ь-2УЬ
<400> 90
дасаЕссадс ЕдасссадЕс ссссЕссЕЕс сЕдЕсЕдссЕ ссдЕдддсда сададЕдасс 60
аЕсасаЕдса аддссЕссса даасдЕддас ассаасдЕдд ссЕддЕаЕса дсадаадссЕ 120
ддсааддссс сЕааддсдсЕ даЕсЕасЕсс дссЕссЕасс ддЕасЕссдд сдЕдссЕЕсс 180
аддЕЕсЕссд дсЕссддсЕс Еддсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсЕссад ссЕдсадссЕ 240
даддасЕЕсд ссассЕасЕа сЕдссадсад ЕасаасаасЕ асссЕЕЕсас сЕЕсддссад 300
ддсассаадс ЕддаааЕсаа д 321
- 108 030226
<210> 91
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ЬВКСА84Ь-3УЬ
<400> 91
Азр 1 11е О1п Ьеи ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег РЬе 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 Бег Уа1 ТЬг Суз Ьуз А1а Бег О1п Азп Уа1 Азр ТЬг Азп
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Бег А1а Бег Туг Агд Туг Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а ТЬг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго РЬе
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 92
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ЬВКСА84Ь-3УЬ
<400> 92
дасабссадс бдасссадбс ссссбссббс сбдбсбдссб ссдбдддсда сададбдбсс 60
дбсасабдса аддссбссса даасдбддас ассаасдбдд ссбддбабса дсадаадссб 120
ддсааддссс сбаадсбдсб дабсбасбсс дссбссбасс ддбасбссдд сдбдссббсс 180
аддббсбссд дсбссддсбс бддсассдас ббсасссбда ссабсбссад ссбдсадссб 240
даддасббсд ссассбасба сбдссадсад басаасаасб асссбббсас сббсддссад 300
ддсассаадс бддааабсаа д 321
<210> 93 <211> 107 <212> БЕЛОК
- 109 030226
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ЕВКСА84Б-4УЬ
<400> 93
Азр 1 11е О1п Ьеи ТЕг 5 О1п Зег Рго Зег РЕе 10 Ьеи Зег А1а Зег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЕг 11е ТЕг Суз Ьуз А1а Зег О1п Азп Уа1 Азр ТЕг Азп
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Зег А1а Зег Туг Агд Туг Зег О1у Уа1 Рго Зег Агд РЕе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТЕг Азр РЕе ТЕг Ьеи ТЕг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЕе А1а ТЕг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго РЕе
85 90 95
ТЕг РЕе О1у О1п О1у ТЕг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 94
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ЕВКСА84Б-4УЬ
<400> 94
дасаЕссадс ЕдасссадЕс ссссЕссЕЕс сЕдЕсЕдссЕ ссдЕдддсда сададЕдасс 60
аЕсасаЕдса аддссЕссса даасдЕддас ассаасдЕдд ссЕддЕаЕса дсадаадссЕ 120
ддссаддссс сЕаадсЕдсЕ даЕсЕасЕсс дссЕссЕасс ддЕасЕссдд сдЕдссЕЕсс 180
аддЕЕсЕссд дсЕссддсЕс Еддсассдас ЕЕсасссЕда ссаЕсЕссад ссЕдсадссЕ 240
даддасЕЕсд ссассЕасЕа сЕдссадсад ЕасаасаасЕ асссЕЕЕсас сЕЕсддссад 300
ддсассаадс ЕддаааЕсаа д 321
<210> 95 <211> 107 <212> БЕЛОК <213> Искусственная последовательность
<220>
- 110 030226
<223> ББКСА84Б-5УЬ
<400> 95
Азр 1 11е О1п Беи ТБг 5 О1п Зег Рго Зег РБе 10 Беи Зег А1а Зег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТБг 11е ТБг Суз Ьуз А1а Зег О1п Азп Уа1 Азр ТБг Азп
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п А1а Рго Ьуз А1а Беи 11е
35 40 45
Туг Зег А1а Зег Туг Агд Туг Зег О1у Уа1 Рго Зег Агд РБе Зег О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТБг Азр РБе ТБг Беи ТБг 11е Зег Зег Беи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РБе А1а ТБг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго РБе
85 90 95
ТБг РБе О1у О1п О1у ТБг Ьуз Беи О1и 11е Буз
100 105
<210> 96
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ББКСА84Б-5УЬ
<400> 96
дасабссадс бдасссадбс ссссбссббс сбдбсбдссб ссдбдддсда сададбдасс 60
абсасабдса аддссбссса даасдбддас ассаасдбдд ссбддбабса дсадаадссб 120
ддссаддссс сбааддсдсб дабсбасбсс дссбссбасс ддбасбссдд сдбдссббсс 180
аддббсбссд дсбссддсбс бддсассдас ббсасссбда ссабсбссад ссбдсадссб 240
даддасббсд ссассбасба сбдссадсад басаасаасб асссбббсас сббсддссад 300
ддсассаадс бддааабсаа д 321
<210> 97
<211> 107
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ББКСА84Б-6УЬ
<400> 97
- 111 030226
Азр 1 11е О1п Ьеи ТЬг 5 О1п Бег Рго Бег РЬе 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 11е ТЬг Суз Ьуз А1а Бег О1п Азп Уа1 Азр ТЬг Азп
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи 11е
35 40 45
Туг Бег А1а Бег Туг Агд Туг Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РЬе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РЬе А1а О1и Туг Туг Суз О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго РЬе
85 90 95
ТЬг РЬе О1у О1п О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз
100 105
<210> 98
<211> 321
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ЬВКСА84Ь-6УЬ
<400> 98
дасабссадс бдасссадбс ссссбссббс сбдбсбдссб ссдбдддсда сададбдасс 60
абсасабдса аддссбссса даасдбддас ассаасдбдд ссбддбабса дсадаадссб 120
ддсааддссс сбаадсбдсб дабсбасбсс дссбссбасс ддбасбссдд сдбдссббсс 180
аддббсбссд дсбссддсбс бддсассдас ббсасссбда ссабсбссад ссбдсадссб 240
даддасббсд ссдадбасба сбдссадсад басаасаасб асссбббсас сббсддссад 300
ддсассаадс бддааабсаа д 321
<210> 99
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ЬВКСА84Ь-2УН
<400> 99
О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Бег О1у О1у О1у Ьеи Уа1 О1п Рго О1у О1у
1 5 10 15
- 112 030226
Бег Ьеи Агд Ьеи 20 Бег Суз А1а А1а Бег 25 О1у РЬе ТЬг РЬе Бег 30 Бег РЬе
О1у МеБ Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Туг 11е Бег Бег Азр Бег Бег А1а 11е Туг Туг А1а Азр ТЬг Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Бег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи О1п МеБ Азп Бег Ьеи Агд Азр О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
О1у Агд О1у Агд О1и Азп 11е Туг Туг О1у Бег Агд Ьеи Азр Туг Тгр
100 105 110
О1у О1п О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 100
<211> 366
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ЬВКСА84Ь-2УН
<400> 100
даддБдсадс БддБсдадБс Бддсддадда сБддБдсадс сБддсддсБс ссБдадасБд 60
БсББдсдссд ссБссддсББ сассББсБсс адсББсддса БдсасБдддБ ссдссаддсБ 120
ссаддсаадд дасБддааБд ддБддссБас аБсБссБссд асБссБссдс саБсБасБас 180
дссдасассд Бдаадддсад дББсассаБс Бсссдддаса асдссаадаа сБсссБдБас 240
сБдсадаБда асБсссБдсд ддасдаддас ассдссдБдБ асБасБдсдд сададдссдд 300
дадааБаБсБ асБасддсБс ссддсБддаБ БаББддддсс адддсассас сдБдассдБд 360
БссБсБ 366
<210> 101
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ЬВКСА84Ь-3УН
<400> 101
- 113 030226
О1и Уа1 1 Θ1η Ьеи Уа1 5 О1и Бег О1у О1у О1у Ьеи 10 Уа1 Θ1η Рго О1у 15 О1у
Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у РЬе ТЬг РЬе Бег Бег РЬе
20 25 30
О1у Меб Н1з Тгр Уа1 Агд Θ1η А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Туг 11е Бег Бег Азр Бег Бег А1а 11е Туг Туг А1а Азр ТЬг Уа1
50 55 60
Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Бег Ьеи Туг
65 70 75 80
Ьеи Θ1η Меб Азп Бег Ьеи Агд Азр О1и Азр ТЬг А1а Меб Туг Туг Суз
85 90 95
О1у Агд О1у Агд О1и Азп 11е Туг Туг О1у Бег Агд Ьеи Азр Туг Тгр
100 105 110
О1у Θ1η О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег
115 120
<210> 102
<211> 366
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ЬВКСА84Е>-3УН
<400> 102
даддбдсадс бддбсдадбс бддсддадда сбддбдсадс сбддсддсбс ссбдадасбд 60
бсббдсдссд ссбссддсбб сассббсбсс адсббсддса бдсасбдддб ссдссаддсб 120
ссаддсаадд дасбддаабд ддбддссбас абсбссбссд асбссбссдс сабсбасбас 180
дссдасассд бдаадддсад дббсассабс бсссдддаса асдссаадаа сбсссбдбас 240
сбдсадабда асбсссбдсд ддасдаддас ассдссабдб асбасбдсдд сададдссдд 300
дадаабабсб асбасддсбс ссддсбддаб баббддддсс адддсассас сдбдассдбд 360
бссбсб 366
<210> 103
<211> 122
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
- 114 030226
<223> ЪБКСА84Б-4УН
<400> 103
О1и Уа1 1 О1п Беи Уа1 5 О1и Зег О1у О1у О1у Беи 10 Уа1 О1п Рго О1у 15 О1у
Зег Беи Агд Беи Зег Суз А1а А1а Зег О1у РЪе ТЪг РЪе Зег Зег РЪе
20 25 30
О1у МеЕ ΗΪ8 Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Буз О1у Беи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Туг 11е Зег Зег Азр Зег Зег А1а 11е Туг Туг А1а Азр ТЪг Уа1
50 55 60
Буз О1у Агд РЪе ТЪг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Буз Азп Зег Беи Туг
65 70 75 80
Беи О1п МеЕ Азп Зег Беи Агд Зег О1и Азр ТЪг А1а Уа1 Туг Туг Суз
85 90 95
А1а Агд О1у Агд О1и Азп 11е Туг Туг О1у Зег Агд Беи Азр Туг Тгр
100 105 110
О1у О1п О1у ТЪг ТЪг Уа1 ТЪг Уа1 Зег Зег
115 120
<210> 104
<211> 366
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ЪБКСА84Б-4УН
<400> 104
даддЕдсадс ЕддЕсдадЕс Еддсддадда сЕддЕдсадс сЕддсддсЕс ссЕдадасЕд 60
ЕсЕЕдсдссд ссЕссддсЕЕ сассЕЕсЕсс адсЕЕсддса ЕдсасЕдддЕ ссдссаддсЕ 120
ссаддсаадд дасЕддааЕд ддЕддссЕас аЕсЕссЕссд асЕссЕссдс саЕсЕасЕас 180
дссдасассд Едаадддсад дЕЕсассаЕс Есссдддаса асдссаадаа сЕсссЕдЕас 240
сЕдсадаЕда асЕсссЕдсд дадсдаддас ассдссдЕдЕ асЕасЕдсдс сададдссдд 300
дадааЕаЕсЕ асЕасддсЕс ссддсЕддаЕ ЕаЕЕддддсс адддсассас сдЕдассдЕд 360
ЕссЕсЕ 366
<210> 105 <211> 214 <212> БЕЛОК
- 115 030226
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Легкая цепь сККЕСА^В
<400> 105
Азр 1 11е А1а Мек ТЪг О1п 5 Зег О1п Ьуз РЪе 10 Мек Зег ТЪг Зег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 Зег Уа1 ТЪг Суз Ьуз А1а Зег О1п Азп Уа1 Азр ТЪг Азп
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у О1п Зег Рго Ьуз А1а Ьеи 11е
35 40 45
Туг Зег А1а Зег Туг Агд Туг Зег О1у Уа1 Рго Азр Агд РЪе ТЪг О1у
50 55 60
Зег О1у Зег О1у ТЪг Азр РЪе ТЪг Ьеи ТЪг 11е Азп Азп Уа1 О1п Зег
65 70 75 80
О1и Азр Ьеи А1а О1и Туг РЪе Суз О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго РЪе
85 90 95
ТЪг РЪе О1у Зег О1у ТЪг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз Агд ТЪг Уа1 А1а А1а
100 105 110
Рго Зег Уа1 РЪе 11е РЪе Рго Рго Зег Азр О1и О1п Ьеи Ьуз Зег О1у
115 120 125
ТЪг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЪе Туг Рго Агд О1и А1а
130 135 140
Ьуз Уа1 О1п Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи О1п Зег О1у Азп Зег О1п
145 150 155 160
О1и Зег Уа1 ТЪг О1и О1п Азр Зег Ьуз Азр Зег ТЪг Туг Зег Ьеи Зег
165 170 175
Зег ТЪг Ьеи ТЪг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг О1и Ьуз Н1з Ьуз Уа1 Туг
180 185 190
А1а Суз О1и Уа1 ТЪг Н1з О1п О1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЪг Ьуз Зег
195 200 205
РЪе Азп Агд О1у О1и Суз
210
- 116
030226
<210> 106
<211> 645
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий легкую цепь сИВКСА84Б
<400> 106
дасаЕЕдсда ЕдасссадЕс ЕсаааааЕЕс аЕдЕссасаЕ садЕаддада садддЕсадс 60
дЕсассЕдса аддссадЕса дааЕдЕддаЕ асЕааЕдЕад ссЕддЕаЕса асадааасса 120
дддсааЕсЕс сЕааадсасЕ даЕЕЕасЕсд дсаЕссЕасс ддЕасадЕдд адЕсссЕдаЕ 180
сдсЕЕсасад дсадЕддаЕс ЕдддасадаЕ ЕЕсасЕсЕса ссаЕсаасаа ЕдЕдсадЕсЕ 240
даадасЕЕдд сададЕаЕЕЕ сЕдЕсадсаа ЕаЕаасаасЕ аЕссаЕЕсас дЕЕсддсЕсд 300
дддасааадЕ ЕддаааЕааа асдЕасддЕд дсЕдсассаЕ сЕдЕсЕЕсаЕ сЕЕсссдсса 360
ЕсЕдаЕдадс адЕЕдаааЕс ЕддаасЕдсс ЕсЕдЕЕдЕдЕ дссЕдсЕдаа ЕаасЕЕсЕаЕ 420
сссадададд ссааадЕаса дЕддааддЕд даЕаасдссс ЕссааЕсддд ЕаасЕсссад 480
дададЕдЕса сададсадда садсааддас адсассЕаса дссЕсадсад сасссЕдасд 540
сЕдадсааад садасЕасда дааасасааа дЕсЕасдссЕ дсдаадЕсас ссаЕсадддс 600
сЕдадсЕсдс ссдЕсасааа дадсЕЕсаас аддддададЕ дЕЕад 645
<210> 107
<211> 452
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Тяжелая цепь сИВКСА84Б
<400> 107
Азр Уа1 1 О1п Беи Уа1 5 О1и Бег О1у О1у О1у Беи 10 Уа1 О1п Рго О1у 15 О1у
Бег Агд Буз Беи Бег Суз А1а А1а Бег О1у РИе ТИг РИе Бег Бег РИе
20 25 30
О1у МеЕ Ηΐ3 Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1и Буз О1у Беи О1и Тгр Уа1
35 40 45
А1а Туг 11е Бег Бег Азр Бег Бег А1а 11е Туг Туг А1а Азр ТИг Уа1
50 55 60
Буз О1у Агд РИе ТИг 11е Бег Агд Азр Азп Рго Буз Азп ТИг Беи РИе
65 70 75 80
Беи О1п МеЕ ТИг Бег Беи Агд Бег О1и Азр ТИг А1а МеЕ Туг Туг Суз
- 117 030226
85 90 95
О1у Агд О1у Агд 100 О1и Азп 11е Туг Туг 105 О1у Зег Агд Ьеи Азр 110 Туг Тгр
О1у О1п О1у ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз О1у Рго
115 120 125
Зег Уа1 РЬе Рго Ьеи А1а Рго Зег Зег Ьуз Зег ТЬг Зег О1у О1у ТЬг
130 135 140
А1а А1а Ьеи О1у Суз Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг РЬе Рго О1и Рго Уа1 ТЬг
145 150 155 160
Уа1 Зег Тгр Азп Зег О1у А1а Ьеи ТЬг Зег О1у Уа1 Н1з ТЬг РЬе Рго
165 170 175
А1а Уа1 Ьеи О1п Зег Зег О1у Ьеи Туг Зег Ьеи Зег Зег Уа1 Уа1 ТЬг
180 185 190
Уа1 Рго Зег Зег Зег Ьеи О1у ТЬг О1п ТЬг Туг 11е Суз Азп Уа1 Азп
195 200 205
Η18 Ьуз Рго Зег Азп ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Агд Уа1 О1и Рго Ьуз Зег
210 215 220
Суз Азр Ьуз ТЬг Н1з ТЬг Суз Рго Рго Суз Рго А1а Рго О1и Ьеи Ьеи
225 230 235 240
О1у О1у Рго Зег Уа1 РЬе Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи
245 250 255
МеЕ 11е Зег Агд ТЬг Рго О1и Уа1 ТЬг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр Уа1 Зег
260 265 270
Н1з О1и Азр Рго О1и Уа1 Ьуз РЬе Азп Тгр Туг Уа1 Азр О1у Уа1 О1и
275 280 285
Уа1 Н1з Азп А1а Ьуз ТЬг Ьуз Рго Агд О1и О1и О1п Туг Азп Зег ТЬг
290 295 300
Туг Агд Уа1 Уа1 Зег Уа1 Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи Н1з О1п Азр Тгр Ьеи Азп
305 310 315 320
О1у Ьуз О1и Туг Ьуз Суз Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз А1а Ьеи Рго А1а Рго
325 330 335
- 118
030226
11е О1и Ьуз ТЬг 340 11е Зег Ьуз А1а Ьуз 345 О1у О1п Рго Агд О1и 350 Рго О1п
Уа1 Туг ТЬг Ьеи Рго Рго Зег Агд Азр О1и Ьеи ТЬг Ьуз Азп О1п Уа1
355 360 365
Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи Уа1 Ьуз О1у РЬе Туг Рго Зег Азр 11е А1а Уа1
370 375 380
О1и Тгр О1и Зег Азп О1у О1п Рго О1и Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго
385 390 395 400
Рго Уа1 Ьеи Азр Зег Азр О1у Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи ТЬг
405 410 415
Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр О1п О1п О1у Азп Уа1 РЬе Зег Суз Зег Уа1
420 425 430
Мер Нтз О1и А1а Ьеи Нтз Азп Н1з Туг ТЬг О1п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи
435 440 445
Зег Рго О1у Ьуз 450
<210> 108
<211> 1359
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь сЬБКСА84Ь
<400> 108
дардрдсадс рддрддадрс Рдддддаддс РРадРдсадс сРддадддРс ссддааасРс 60
РссРдРдсад ссРсРддаРР сасРРРсадР адсРРРддаа РдсасРдддР РсдРсаддсР 120
ссададаадд ддсрддадрд ддРсдсаРас аРРадРадРд асадРадРдс саРсРасРаР 180
дсадасасад Рдаадддссд аРРсассаРс Рссададаса аРсссаадаа сасссРдРРс 240
сРдсаааРда ссадРсРаад дРсРдаддас асддссаРдР аРРасРдРдд аададддадд 300
даааасаРРР асрасддрад РаддсРРдас РасРддддсс ааддсассас РсРсасадРс 360
РссРсадссР ссассааддд сссаРсддРс РРсссссРдд сасссРссРс саададсасс 420
РсРдддддса садсддсссР дддсРдссРд дРсааддасР асРРссссда ассддРдасд 480
дрдрсдрдда асРсаддсдс ссРдассадс ддсдРдсаса ссРРсссддс РдРссРасад 540
РссРсаддас РсРасРсссР садсадсдРд дрдассдрдс ссРссадсад сРРдддсасс 600
садассРаса РсРдсаасдР дааРсасаад сссадсааса ссааддРдда саадададРР 660
- 119 030226
дадсссаааб сббдбдасаа аасбсасаса бдсссассдб дсссадсасс бдаасбссбд 720
дддддассдб садбсббссб сббсссссса ааасссаадд асасссбсаб дабсбсссдд 780
ассссбдадд бсасабдсдб ддбддбддас дбдадссасд аадасссбда ддбсаадббс 840
аасбддбасд бддасддсдб ддаддбдсаб аабдссаада сааадссдсд ддаддадсад 900
басаасадса сдбассдбдб ддбсадсдбс сбсассдбсс бдсассадда сбддсбдааб 960
ддсааддадб асаадбдсаа ддбсбссаас ааадсссбсс садсссссаб сдадаааасс 1020
абсбссааад ссааадддса дссссдадаа ссасаддбдб асасссбдсс сссабсссдд 1080
дабдадсбда ссаадаасса ддбсадссбд ассбдссбдд бсаааддсбб сбабсссадс 1140
дасабсдссд бддадбддда дадсаабддд садссддада асаасбасаа дассасдссб 1200
сссдбдсбдд асбссдасдд сбссббсббс сбсбасадса адсбсассдб ддасаададс 1260
аддбддсадс аддддаасдб сббсбсабдс бссдбдабдс абдаддсбсб дсасаассас 1320
басасдсада ададссбсбс ссбдбсбссд ддбааабда 1359
<210> 109
<211> 270
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ТСЕ УЬ х ИВЕСА84Б УН-2-Е спиральная цепь БАЕТ
<400> 109
О1и 1 11е Уа1 Беи ТИг 5 О1п Зег Рго А1а ТИг 10 Ьеи Зег Ьеи Зег Рго 15 О1у
О1и Агд А1а ТИг Ьеи Зег Суз Зег А1а ТИг Зег Зег Уа1 Зег Туг Меб
20 25 30
Н1з Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Агд Тгр 11е Туг
35 40 45
Азр ТИг Зег Ьуз Ьеи А1а Зег О1у Уа1 Рго Зег Агд РИе Зег О1у Зег
50 55 60
О1у Зег О1у ТИг О1и РИе ТИг Ьеи ТИг 11е Зег Зег Ьеи О1п Рго О1и
65 70 75 80
Азр РИе А1а ТИг Туг Туг Суз О1п О1п Тгр Зег Зег Азп Рго Ьеи ТИг
85 90 95
РИе О1у О1п О1у ТИг Ьуз Ьеи О1и 11е Ьуз О1у О1у О1у Зег О1у О1у
100 105 110
- 120 030226
О1у О1у О1и 115 Уа1 Ο1η Ьеи Уа1 О1и 120 Бег О1у О1у О1у Ьеи 125 Уа1 Ο1η Рго
О1у О1у Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у РЬе ТЬг РЬе Бег
130 135 140
Бег РЬе О1у Меб Н1з Тгр Уа1 Агд Ο1η А1а Рго О1у Ьуз О1у Ьеи О1и
145 150 155 160
Тгр Уа1 А1а Туг 11е Бег Бег Азр Бег Бег А1а 11е Туг Туг А1а Азр
165 170 175
ТЬг Уа1 Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Бег
180 185 190
Ьеи Туг Ьеи Ο1η Меб Азп Бег Ьеи Агд Азр О1и Азр ТЬг А1а Уа1 Туг
195 200 205
Туг Суз О1у Агд О1у Агд О1и Азп 11е Туг Туг О1у Бег Агд Ьеи Азр
210 215 220
Туг Тгр О1у Ο1η О1у ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Бег Бег О1у О1у Суз О1у
225 230 235 240
О1у О1у О1и Уа1 А1а А1а Ьеи О1и Ьуз О1и Уа1 А1а А1а Ьеи О1и Ьуз
245 250 255
О1и Уа1 А1а А1а Ьеи О1и Ьуз О1и Уа1 А1а А1а Ьеи О1и Ьуз
260 265 270
<210> 110
<211> 810
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ТСК УЬ х ЬΒКСА84^ УН-2-Е спиральную цепь БАЕТ
<400> 110 даааббдбдб бдасасадбс бссадссасс сбдбсбббдб сбссадддда аададссасс 60
сбсбссбдса дбдссассбс аадбдбаадб басабдсасб ддбабсадса дааассаддд 120
ааадссссба адсдсбддаб сбабдасаса бссааасбдд сббсбддддб сссабсаадд 180
ббсадсддса дбддабсбдд дасадааббб асбсбсасаа бсадсадссб дсадссбдаа 240
даббббдсаа сббаббасбд бсадсадбдд адбадбаасс сдсбсасдбб бддссадддд 300
ассаадсббд адабсааадд аддсддабсс ддсддсддад дсдаддбдса дсбддбсдад 360
бсбддсддад дасбддбдса дссбддсддс бсссбдадас бдбсббдсдс сдссбссддс 420
- 121 030226
ббсассббсб ссадсббсдд сабдсасбдд дбссдссадд сбссаддсаа дддасбддаа 480
бдддбддссб асабсбссбс сдасбссбсс дссабсбасб асдссдасас сдбдаадддс 540
аддббсасса бсбсссддда саасдссаад аасбсссбдб ассбдсадаб даасбсссбд 600
сдддасдадд асассдссдб дбасбасбдс ддсададдсс дддадаабаб сбасбасддс 660
бсссддсбдд аббаббдддд ссадддсасс ассдбдассд бдбссбссдд аддабдбддс 720
ддбддадаад бддссдсасб ддадааадад дббдсбдсбб бддадаадда ддбсдсбдса 780
сббдаааадд аддбсдсадс ссбддадааа 810
<210> 111
<211> 269
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> НВКСА84В\/Ь-2 х ТСК УН - К спиральная цепь
<400> 111
Азр 1 11е О1п Ьеи ТЬг 5 О1п Зег Рго Зег РЬе 10 Ьеи Зег А1а Зег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТЬг 20 11е ТЬг Суз Ьуз А1а 25 Зег О1п Азп Уа1 Азр 30 ТЬг Азп
Уа1 А1а Тгр 35 Туг О1п О1п Ьуз Рго 40 О1у Ьуз А1а Рго Ьуз 45 А1а Ьеи 11е
Туг Зег 50 А1а Зег Туг Агд Туг 55 Зег О1у Уа1 Рго Зег 60 Агд РЬе Зег О1у
Зег 65 О1у Зег О1у ТЬг Азр 70 РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е 75 Зег Зег Ьеи О1п Рго 80
О1и Азр Рйе А1а ТЬг 85 Туг Туг Суз О1п О1п 90 Туг Азп Азп Туг Рго 95 РЬе
ТЬг Рйе О1у О1п 100 О1у ТЬг Ьуз Ьеи О1и 105 11е Ьуз О1у О1у О1у 110 Зег О1у
О1у О1у О1у 115 О1п Уа1 О1п Ьеи Уа1 120 О1п Зег О1у А1а О1и 125 Уа1 Ьуз Ьуз
Рго О1у 130 А1а Зег Уа1 Ьуз Уа1 135 Зег Суз Ьуз А1а Зег 140 О1у Туг Ьуз РЬе
ТЬг Зег Туг Уа1 Меб Нгз Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у О1п О1у Ьеи
- 122
030226
145 150 155 160
О1и Тгр 11е О1у Туг 11е Азп Рго Туг Азп Азр Уа1 ТБг Ьуз Туг Азп
165 170 175
О1и Ьуз РБе Ьуз О1у Агд Уа1 ТБг 11е ТБг А1а Азр Ьуз Бег ТБг Бег
180 185 190
ТБг А1а Туг Ьеи О1п МеР Азп Бег Ьеи Агд Бег О1и Азр ТБг А1а Уа1
195 200 205
Н1з Туг Суз А1а Агд О1у Бег Туг Туг Азр Туг Азр О1у РБе Уа1 Туг
210 215 220
Тгр О1у О1п О1у ТБг Ьеи Уа1 ТБг Уа1 Бег Бег О1у О1у Суз О1у О1у
225 230 235 240
О1у Ьуз Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и Ьуз Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и Ьуз
245 250 255
Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и Ьуз Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и
260 265
<210> 112
<211> 807
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ББКСА84БУЬ-2 х ТСК. УН - К спиральную цепь
<400> 112
дасаРссадс РдасссадРс ссссРссРРс сРдРсРдссР ссдРдддсда сададРдасс 60
аРсасаРдса аддссРссса даасдРддас ассаасдРдд ссРддРаРса дсадаадссР 120
ддсааддссс сРааддсдсР даРсРасРсс дссРссРасс ддРасРссдд сдРдссРРсс 180
аддРРсРссд дсРссддсРс Рддсассдас РРсасссРда ссаРсРссад ссРдсадссР 240
даддасРРсд ссассРасРа сРдссадсад РасаасаасР асссРРРсас сРРсддссад 300
ддсассаадс РддаааРсаа дддаддсдда Рссддсддсд даддссаддР РсадсРддРд 360
садРсРддад сРдаддРдаа даадссРддд дссРсадРда аддРсРссРд сааддссадс 420
ддРРасаадР РРассадсРа сдРдаРдсас РдддРдсдас аддссссРдд асаадддсРР 480
дадРддаРсд даРаРаРРаа РссРРасааР даРдРРасРа адРасааРда даадРРсааа 540
ддсададРса сдаРРассдс ддасаааРсс асдадсасад ссРассРдса даРдаасадс 600
сРдадаРссд аддасасддс сдРдсасРас РдРдсдадад ддадсРасРа РдаРРасдас 660
- 123 030226
дддбббдббб асбддддсса адддасбсбд дбсасбдбда дсбссддадд абдбддсддб 720
ддаааадбдд ссдсасбдаа ддадааадбб дсбдсбббда аададааддб сдссдсасбб 780
ааддаааадд бсдсадсссб дааадад 807
<210> 113
<211> 274
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ΝΚΟ2Ό УЬ х ЦВКСА84Б νΗ-2-Ε спиральная цепь БАНТ
<400> 113
О1п Бег 1 А1а Ьеи ТЬг 5 О1п Рго А1а Бег Уа1 10 Бег О1у Бег Рго О1у 15 О1п
Бег 11е ТЬг 11е Бег Суз Бег О1у Бег Бег Бег Азп 11е О1у Азп Азп
20 25 30
А1а Уа1 Азп Тгр Туг О1п О1п Ьеи Рго О1у Ьуз А1а Рго Ьуз Ьеи Ьеи
35 40 45
11е Туг Туг Азр Азр Ьеи Ьеи Рго Бег О1у Уа1 Бег Азр Агд РЬе Бег
50 55 60
О1у Бег Ьуз Бег О1у ТЬг Бег А1а РЬе Ьеи А1а 11е Бег О1у Ьеи О1п
65 70 75 80
Бег О1и Азр О1и А1а Азр Туг Туг Суз А1а А1а Тгр Азр Азр Бег Ьеи
85 90 95
Азп О1у Рго Уа1 РЬе О1у О1у О1у ТЬг Ьуз Ьеи ТЬг Уа1 Ьеи О1у О1у
100 105 110
О1у Бег О1у О1у О1у О1у О1и Уа1 О1п Ьеи Уа1 О1и Бег О1у О1у О1у
115 120 125
Ьеи Уа1 О1п Рго О1у О1у Бег Ьеи Агд Ьеи Бег Суз А1а А1а Бег О1у
130 135 140
РЬе ТЬг РЬе Бег Бег РЬе О1у Меб Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у
145 150 155 160
Ьуз О1у Ьеи О1и Тгр Уа1 А1а Туг 11е Бег Бег Азр Бег Бег А1а 11е
165 170 175
Туг Туг А1а Азр ТЬг Уа1 Ьуз О1у Агд РЬе ТЬг 11е Бег Агд Азр Азп
180 185 190
- 124
030226
А1а Ьуз Азп Зег 195 Ьеи Туг Ьеи О1п МеЕ Азп Зег Ьеи Агд Азр О1и Азр
200 205
ТЕг А1а Уа1 Туг Туг Суз О1у Агд О1у Агд О1и Азп 11е Туг Туг О1у
210 215 220
Зег Агд Ьеи Азр Туг Тгр О1у О1п О1у ТЕг ТЕг Уа1 ТЕг Уа1 Зег Зег
225 230 235 240
О1у О1у Суз О1у О1у О1у О1и Уа1 А1а А1а Ьеи О1и Ьуз О1и Уа1 А1а
245 250 255
А1а Ьеи О1и Ьуз О1и Уа1 А1а А1а Ьеи О1и Ьуз О1и Уа1 А1а А1а Ьеи
260 265 270
О1и Ьуз
<210> 114
<211> 822
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ΝΚΟ2Ό УЬ х ЕВКСА84Б УН-2-Е спиральную цепь БАКТ
<400> 114 садЕсЕдссс ЕдасЕсадсс ЕдссЕссдЕд ЕсЕдддЕсЕс сЕддасадЕс ааЕсассаЕс 60
ЕссЕдЕЕсЕд даадсадсЕс саасаЕсдда ааЕааЕдсЕд ЕЕаасЕддЕа ссадсадсЕс 120
ссаддааадд сЕсссааасЕ ссЕсаЕсЕаЕ ЕаЕдаЕдасс ЕасЕдсссЕс аддддЕсЕсЕ 180
дассдаЕЕсЕ сЕддсЕссаа дЕсЕддсасс ЕсадссЕЕсс ЕддссаЕсад ЕдддсЕссад 240
ЕсЕдаддаЕд аддсЕдаЕЕа ЕЕасЕдЕдса дсаЕдддаЕд асадссЕдаа ЕддЕссадЕд 300
ЕЕсддсддад ддассаадсЕ дассдЕссЕа ддаддсддаЕ ссддсддсдд аддсдаддЕд 360
садсЕддЕсд адЕсЕддсдд аддасЕддЕд садссЕддсд дсЕсссЕдад асЕдЕсЕЕдс 420
дссдссЕссд дсЕЕсассЕЕ сЕссадсЕЕс ддсаЕдсасЕ дддЕссдсса ддсЕссаддс 480
аадддасЕдд ааЕдддЕддс сЕасаЕсЕсс ЕссдасЕссЕ ссдссаЕсЕа сЕасдссдас 540
ассдЕдаадд дсаддЕЕсас саЕсЕсссдд дасаасдсса адаасЕсссЕ дЕассЕдсад 600
аЕдаасЕссс Едсдддасда ддасассдсс дЕдЕасЕасЕ дсддсададд ссдддадааЕ 660
аЕсЕасЕасд дсЕсссддсЕ ддаЕЕаЕЕдд ддссадддса ссассдЕдас сдЕдЕссЕсс 720
ддаддаЕдЕд дсддЕддада адЕддссдса сЕддадааад аддЕЕдсЕдс ЕЕЕддадаад 780
даддЕсдсЕд сасЕЕдаааа ддаддЕсдса дсссЕддада аа 822
- 125 030226
<210> 115
<211> 270
<212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> ББКСА84БУЬ-2 х ΝΚΟ2Ό УН - К спиральная цепь
<400> 115
Азр 1 11е О1п Ьеи ТБг О1п Бег 5 Рго Бег РБе 10 Ьеи Бег А1а Бег Уа1 15 О1у
Азр Агд Уа1 ТБг 11е ТБг Суз Ьуз А1а Бег О1п Азп Уа1 Азр ТБг Азп
20 25 30
Уа1 А1а Тгр Туг О1п О1п Ьуз Рго О1у Ьуз А1а Рго Буз А1а Ьеи 11е
35 40 45
Туг Бег А1а Бег Туг Агд Туг Бег О1у Уа1 Рго Бег Агд РБе Бег О1у
50 55 60
Бег О1у Бег О1у ТБг Азр РБе ТБг Беи ТБг 11е Бег Бег Ьеи О1п Рго
65 70 75 80
О1и Азр РБе А1а ТБг Туг Туг Суз О1п О1п Туг Азп Азп Туг Рго РБе
85 90 95
ТБг РБе О1у О1п О1у ТБг Ьуз Ьеи О1и 11е Буз О1у О1у О1у Бег О1у
100 105 110
О1у О1у О1у О1п Уа1 О1п Беи Уа1 О1и Бег О1у О1у О1у Беи Уа1 Буз
115 120 125
Рго О1у О1у Бег Беи Агд Беи Бег Суз А1а А1а Бег О1у РБе ТБг РБе
130 135 140
Бег Бег Туг О1у МеБ Н1з Тгр Уа1 Агд О1п А1а Рго О1у Буз О1у Беи
145 150 155 160
О1и Тгр Уа1 А1а РБе 11е Агд Туг Азр О1у Бег Азп Ьуз Туг Туг А1а
165 170 175
Азр Бег Уа1 Ьуз О1у Агд РБе ТБг 11е Бег Агд Азр Азп Бег Ьуз Азп
180 185 190
ТБг Беи Туг Беи О1п МеБ Азп Бег Беи Агд А1а О1и Азр ТБг А1а Уа1
195 200 205
- 126
030226
Туг Туг 210 Суз А1а Ьуз Азр Агд О1у Ьеи О1у Азр О1у ТЕг Туг РЕе Азр
215 220
Туг Тгр О1у О1п О1у ТЕг ТЕг Уа1 ТЕг Уа1 Бег Бег О1у О1у Суз О1у
225 230 235 240
О1у О1у Ьуз Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и Ьуз Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и
245 250 255
Ьуз Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и Ьуз Уа1 А1а А1а Ьеи Ьуз О1и
260 265 270
<210> 116
<211> 810
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Полинуклеотид, кодирующий ЕВКСА84ЬУЬ-2 х ΝΚΟ2Ό УН - К спиральную цепь
<400> 116
дасаБссадс БдасссадБс ссссБссББс сБдБсБдссБ ссдБдддсда сададБдасс 60
аБсасаБдса аддссБссса даасдБддас ассаасдБдд ссБддБаБса дсадаадссБ 120
ддсааддссс сБааддсдсБ даБсБасБсс дссБссБасс ддБасБссдд сдБдссББсс 180
аддББсБссд дсБссддсБс Бддсассдас ББсасссБда ссаБсБссад ссБдсадссБ 240
даддасББсд ссассБасБа сБдссадсад БасаасаасБ асссБББсас сББсддссад 300
ддсассаадс БддаааБсаа дддаддсдда Бссддсддсд даддссаддБ асадсБддБд 360
дадБсБдддд даддссБддБ саадссБдда дддБсссБда дасБсБссБд БдсадсдБсБ 420
ддаББсассБ БсадБадсБа БддсаБдсас БдддБссдсс аддсБссадд сааддддсБд 480
дадБдддБдд саБББаБасд дБаБдаБдда адБааБаааБ асБаБдсада сБссдБдаад 540
ддссдаББса ссаБсБссад адасааББсс аадаасасдс БдБаБсБдса ааБдаасадс 600
сБдададсБд аддасасддс БдБдБаББас БдБдсдааад аБсдаддБББ дддддаБдда 660
ассБасБББд асБасБдддд ссаадддасс асддБсассд БсБссБссдд аддаБдБддс 720
ддБддаааад БддссдсасБ дааддадааа дББдсБдсББ Бдааададаа ддБсдссдса 780
сББааддааа аддБсдсадс ссБдааадад 810

Claims (33)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Молекула, связывающая В7-Н3, где указанная молекула представляет собой антитело, антигенсвязывающий фрагмент указанного антитела или диатело, которое(ый) содержит вариабельный домен, который специфично связывает внеклеточный домен В7-Н3, где указанная молекула связывается с В7Н3, который эндогенно экспрессируется на поверхности раковой клетки; а указанный вариабельный до- 127 030226
    мен включает вариабельный домен легкой цепи, содержащий СЛЮ имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 21, СЛК2, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 23, и СЛК3, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 25, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий СГОК], имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 29, СЛК2, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 31, и СЛК3, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 33.
  2. 2. Молекула, связывающая В7-Н3, где указанная молекула представляет собой антитело, антигенсвязывающий фрагмент указанного антитела или диатело, которое(ый) содержит вариабельный домен, который специфично связывает внеклеточный домен В7-Н3, где указанная молекула связывается с В7Н3, который эндогенно экспрессируется на поверхности раковой клетки; а указанный вариабельный домен включает вариабельный домен легкой цепи, содержащий СГОК], имеющую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО NО: 5, СЛК2, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 7, и СЛК3, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 9, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий СГОК], имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 13, СЛК2, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 15, и СЛК3, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 17.
  3. 3. Молекула, связывающая В7-Н3, где указанная молекула представляет собой антитело, антигенсвязывающий фрагмент указанного антитела или диатело, которое(ый) содержит вариабельный домен, который специфично связывает внеклеточный домен В7-Н3, где указанная молекула связывается с В7Н3, который эндогенно экспрессируется на поверхности раковой клетки; а указанный вариабельный домен включает вариабельный домен легкой цепи, содержащий СГОК], имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 37, СЛК2, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 39, и СЛК3, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 41, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий СГОК], имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 45, СЛК2, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 47, и СЛК3, имеющую аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО NО: 49.
  4. 4. Молекула, связывающая В7-Н3, по любому из пп.1-3, где указанная молекула, связывающая В7Н3, представляет собой антитело или антигенсвязывающий фрагмент указанного антитела, которое(ый) интернализуется при связывании с В7-Н3, экспрессируемым на поверхности раковой клетки.
  5. 5. Молекула, связывающая В7-Н3, по любому из пп.1-4, которая представляет собой гуманизированное моноклональное антитело.
  6. 6. Молекула, связывающая В7-Н3, по любому из пп.1-5, где указанная молекула содержит модифицированную Рс-область ΙβΟ1 человека, где указанная модифицированная Рс-область ΙβΟ1 человека содержит по меньшей мере одну аминокислотную модификацию относительно Рс-области дикого типа, при этом указанная аминокислотная модификация(и) включает аминокислотную модификацию(и), которая изменяет аффинность или авидность указанной модифицированной Рс-области связывания с РсуК, так что указанная молекула, связывающая В7-Н3, проявляет усиленную эффекторную функцию по отношению к указанной Рс-области дикого типа.
  7. 7. Молекула, связывающая В7-Н3, по п.6, где указанная модификация Рс-области включает:
    (A) по меньшей мере одну замену, выбранную из группы, состоящей из
    (1) Р243Л;
    (2) Ό270Ε;
    (3) К292Р;
    (4) 8298Ν;
    (5) Υ300Ε;
    (6) ν305Ι;
    (7) А330V и
    (8) Р396Л;
    (B) по меньшей мере одну замену двух аминокислотных остатков, при этом указанные замены выбраны из группы, состоящей из
    (1) Р243Л и Р396Л;
    (2) Р243Л и К292Р и
    (3) К292Р и ν305Ι;
    (C) по меньшей мере одну замену трех аминокислотных остатков, при этом указанные замены выбраны из группы, состоящей из
    (1) Р243Л, К292Р и Υ300Ε;
    (2) Р243Л, К292Р и ν305Ι;
    (3) Р243Л, К292Р и Р396Ь и
    (4) К292Р, ν305Ι и Р396Ь;
    (Л) по меньшей мере одну замену четырех аминокислотных остатков, при этом указанные замены выбраны из группы, состоящей из
    (1) Р243Л, К292Р, Υ300Ε и Р396Л и
    - 128 030226
    (2) Р243Ь, К292Р, У3051 и Р396Ь; или
    (Е) замену по меньшей мере пяти аминокислотных остатков Р243Ь, К292Р, У300Ь, У3051 и Р396Ь; где указанная нумерация соответствует схеме нумерации КаЪа!.
  8. 8. Молекула, связывающая В7-Н3, по п.6, где указанная модификация Рс-области содержит замены:
    (A) Р243Ь, К292Р и У300Ь;
    (B) Ь235У, Р243Ь, К292Р, У300Ь и Р396Ь или
    (C) Р243Ь, К292Р, У300Ь, У3051 и Р396Ь;
    где указанная нумерация соответствует схеме нумерации КаЪа!.
  9. 9. Молекула, связывающая В7-Н3, по п.8, где указанная молекула содержит:
    (A) вариабельный домен легкой цепи, содержащий СГОК], имеющую аминокислотную последовательность 8Еф ГО ЫО: 5, СОК2, имеющую аминокислотную последовательность 8Еф ГО ЫО: 7, и СОК3, имеющую аминокислотную последовательность 8Еф ГО ЫО: 9, и вариабельный домен тяжелой цепи, содержащий СОК!, имеющую аминокислотную последовательность 8Еф ГО ЫО: 13, СОК2, имеющую аминокислотную последовательность 8Еф ГО ЫО: 15, и СОК3, имеющую аминокислотную последовательность 8Еф ГО ЫО: 17; и
    (B) модификацию Рс-области, которая включает замены Ь235У, Р243Ь, К292Р, У300Ь и Р396Ь; где указанная нумерация соответствует схеме нумерации КаЪа!.
  10. 10. Молекула, связывающая В7-Н3, по п.9, где указанная молекула представляет собой химерное антитело.
  11. 11. Молекула, связывающая В7-Н3, по п.9, где указанная молекула представляет собой гуманизированное антитело.
  12. 12. Молекула, связывающая В7-Н3, по п.2, где указанная молекула содержит:
    (A) вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность 8Еф ГО ЫО: 89;
    (B) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность 8Еф ГО ЫО: 99; и
    (C) Рс-область, имеющую замены Ь235У, Р243Ь, К292Р, У300Ь и Р396Ь; где указанная нумерация соответствует схеме нумерации КаЪа!.
  13. 13. Молекула, связывающая В7-Н3, где указанная молекула представляет собой диатело, содержащее:
    (A) полипептидную цепь I, которая содержит эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина, специфичный к связыванию В7-Н3, и эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи, специфичный к связыванию молекулы, отличной от В7-Н3; и
    (B) полипептидную цепь II, которая содержит эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина, специфичный к связыванию В7-Н3, и эпитопсвязывающий домен легкой цепи, специфичный к связыванию указанной молекулы, отличной от В7-Н3;
    где указанные полипептидные цепи I и II связаны вместе так, что указанный эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи I и указанный эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи II образуют функциональный эпитопсвязывающий домен, способный связываться с В7-Н3, а указанный эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи I и указанный эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи II образуют функциональный эпитопсвязывающий домен, способный связываться с указанной молекулой, отличной от В7-Н3;
    где указанный эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи I, специфичный к связыванию В7-Н3, содержит аминокислотные последовательности 8Еф ГО ЫО: 21, 8Еф ГО ЫО: 23, 8Еф ГО ЫО: 25, а указанный эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи II, специфичный к связыванию В7-Н3, содержит аминокислотные последовательности 8Еф ГО ЫО: 29, 8Еф ГО ыО: 31 и 8Еф ГО ЫО: 33; и
    где указанная молекула, отличная от В7-Н3, представляет собой гаптен, Т-клеточный рецептор, Тклеточный корецептор, рецептор ЫКС2О, опухолеассоциированный антиген или инфекционный агент.
  14. 14. Молекула, связывающая В7-Н3, где указанная молекула представляет собой диатело, содержащее:
    (A) полипептидную цепь I, которая содержит эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина, специфичный к связыванию В7-Н3, и эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи, специфичный к связыванию молекулы, отличной от В7-Н3; и
    (B) полипептидную цепь II, которая содержит эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина, специфичный к связыванию В7-Н3 и эпитопсвязывающий домен легкой цепи, специфичный к связыванию указанной молекулы, отличной от В7-Н3;
    где указанные полипептидные цепи I и II связаны вместе так, что указанный эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи I и указанный эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи II образуют функциональный эпитопсвязывающий домен, способный связываться с В7-Н3, а указанный эпитопсвязывающий домен
    - 129 030226
    тяжелой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи I и указанный эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи II образуют функциональный эпитопсвязывающий домен, способный связываться с указанной молекулой, отличной от В7-Н3;
    где указанный эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи I, специфичный к связыванию В7-Н3, содержит аминокислотные последовательности ЗЬО ГО N0: 5, ЗЬО ГО N0: 7, ЗЬО ГО N0: 9, а указанный эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи II, специфичный к связыванию В7-Н3, содержит аминокислотные последовательности ЗЬО ГО N0: 13, ЗЬО ГО N0: 15 и ЗЬО ГО N0: 17; и
    где указанная молекула, отличная от В7-Н3, представляет собой гаптен, Т-клеточный рецептор, Тклеточный корецептор, рецептор МКС2П, опухолеассоциированный антиген или инфекционный агент.
  15. 15. Молекула, связывающая В7-Н3, где указанная молекула представляет собой диатело, содержащее:
    (A) полипептидную цепь I, которая содержит эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина, специфичный к связыванию В7-Н3, и эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи, специфичный к связыванию молекулы, отличной от В7-Н3; и
    (B) полипептидную цепь II, которая содержит эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина, специфичный к связыванию В7-Н3, и эпитопсвязывающий домен легкой цепи, специфичный к связыванию указанной молекулы, отличной от В7-Н3;
    где указанные полипептидные цепи I и II связаны вместе так, что указанный эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи I и указанный эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи II образуют функциональный эпитопсвязывающий домен, способный связываться с В7-Н3, а указанный эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи I и указанный эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи II образуют функциональный эпитопсвязывающий домен, способный связываться с указанной молекулой, отличной от В7-Н3;
    где указанный эпитопсвязывающий домен легкой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи I, специфичный к связыванию В7-Н3, содержит аминокислотные последовательности ЗЬО ГО N0: 37, ЗЬО ГО N0: 39, ЗЬО ГО N0: 41, а указанный эпитопсвязывающий домен тяжелой цепи иммуноглобулина указанной полипептидной цепи II, специфичный к связыванию В7-Н3, содержит аминокислотные последовательности ЗЬО ГО N0: 45, ЗЬО ГО N0: 47 и ЗЬО ГО N0: 49; и
    где указанная молекула, отличная от В7-Н3, представляет собой гаптен, Т-клеточный рецептор, Тклеточный корецептор, рецептор МКС2П, опухолеассоциированный антиген или инфекционный агент.
  16. 16. Молекула, связывающая В7-Н3, по п.14, где указанное диатело содержит:
    (A) вариабельный домен легкой цепи, имеющий аминокислотную последовательность ЗЬО ГО N0:
    89; и
    (B) вариабельный домен тяжелой цепи, имеющий аминокислотную последовательность ЗЬО ГО N0: 99.
  17. 17. Молекула, связывающая В7-Н3, по любому из пп.13-16, где указанное диатело содержит по меньшей мере часть Рс-области.
  18. 18. Молекула, связывающая В7-Н3, по любому из пп.13-17, где
    (A) указанная полипептидная цепь I дополнительно содержит Е-спиральный домен, а указанная полипептидная цепь II дополнительно содержит К-спиральный домен; или
    (B) указанная полипептидная цепь I дополнительно содержит К-спиральный домен, а указанная полипептидная цепь II дополнительно содержит Е-спиральный домен.
  19. 19. Молекула, связывающая В7-Н3, по любому из пп.13-18, где указанная молекула, отличная от В7-Н3, представляет собой гаптен.
  20. 20. Молекула, связывающая В7-Н3, по п.19, где указанный гаптен представляет собой флюоресцеинизотиоцианат.
  21. 21. Молекула, связывающая В7-Н3, по любому из пп.13-18, где указанная молекула, отличная от В7-Н3, представляет собой Т-клеточный рецептор, Т-клеточный корецептор или рецептор М<С2Э.
  22. 22. Молекула, связывающая В7-Н3, по любому из пп.13-18, где указанная молекула, отличная от В7-Н3, представляет собой опухолеассоциированный антиген.
  23. 23. Молекула, связывающая В7-Н3, по п.22, где указанный опухолеассоциированный антиген выбран из группы, состоящей из А33; АОАМ-® АБСАМ; ВАСЬ; β-катенина; СА125; карбоксипептидазы М; СИ103; СИ19; СИ20; СИ22; СИ23; СИ25; СИ27; СИ28; СИ36; СИ40/СИ154; СИ45; СИ46; СИ5; СИ56; СГО79а/СГО79Ь; СИК4; СЕА; СТЬА4; цитокератина 8; ЬСР-К; ЬрЬА2; ЬгЬВ1; ЬГЬВ3; ЬгЬВ4; САСЬ-1; САСЬ-2; СЭ2/СО3/СМ2; др100; НЬК-2/пеи; Ь6 папилломавируса человека; Е7 папилломавируса человека; интегрин а-У-β-ό; 1АМ-3; КГО3; КГО31; КЗА (17-1А); ЬиСА-2; МАСЬ-1; МАСЬ-3; МАКТ; МИС-1; МИМ-1; N-ацетилглюкозаминилтрансферазы; онкостатина М; р15; РГОА; РЗА; РЗМА; К0К1; кТп; рецептора рецептора ЮТ-а; рецептора ТИР-у; рецептора трансферрина и рецептора УЬСР.
  24. 24. Молекула нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептидную цепь молекулы, связываю- 130 030226
    щей В7-Н3, по любому одному из пп.1-23.
  25. 25. Фармацевтическая композиция для лечения рака, которая содержит: (ί) терапевтически эффективное количество молекулы, связывающей В7-Н3, по любому одному из пп.1-23 и (ίί) фармацевтически приемлемый носитель.
  26. 26. Фармацевтическая композиция по п.25, которая дополнительно содержит одно или несколько противораковых средств.
  27. 27. Фармацевтическая композиция по п.26, где указанное противораковое средство представляет собой химиотерапевтическое средство, гормональное терапевтическое средство, токсин или иммунотерапевтическое средство.
  28. 28. Фармацевтическая композиция по п.27, где указанное противораковое средство представляет собой токсин, выбранный из группы, состоящей из таксана, майтансиноида, ауристатина, калихеамицина, антрациклина, аналога СС-1065, доцетаксела, катепсина, рицина, гелонина, экзотоксина Р8еиботопа8, дифтерийного токсина, РНазы и токсического радиоизотопа.
  29. 29. Применение молекулы, связывающей В7-Н3, по любому из пп.1-23 в диагностике рака, где указанная молекула, связывающая В7-Н3, мечена детектируемой меткой.
  30. 30. Применение по п.29, отличающееся тем, что указанный рак характеризуется присутствием раковой клетки, выбранной из группы, состоящей из клетки опухоли надпочечника, СПИДассоциированного рака, альвеолярной саркомы мягких тканей, астроцитарной опухоли, рака мочевого пузыря, рака кости, рака головного и спинного мозга, метастатической опухоли головного мозга, рака молочной железы, опухолей каротидных телец, рака шейки матки, хондросаркомы, хордомы, хромофобной почечно-клеточной карциномы, светлоклеточного рака, рака толстой кишки, колоректального рака, десмопластической мелкокруглоклеточной опухоли, эпендимомы, опухоли Юинга, внескелетной миксоидной хондросаркомы, рака желчного пузыря или желчных протоков, рака ЖКТ, гестационной трофобластической болезни, эмбрионально-клеточной опухоли, рака головы и шеи, гепатоклеточной карциномы, инсулиномы, саркомы Капоши, рака почки, лейкоза, липосаркомы/злокачественной липоматозной опухоли, рака печени, лимфомы, рака легкого, медуллобластомы, меланомы, менингиомы, множественных эндокринных неоплазий, множественной миеломы, миелодиспластического синдрома, нейробластомы, нейроэндокринных опухолей, рака яичника, рака поджелудочной железы, папиллярной карциномы щитовидной железы, опухоли паращитовидной железы, опухоли оболочки периферического нерва, феохромоцитомы, рака гипофиза, рака простаты, задней увеальной меланомы, метастатического рака почки, рабдоидной опухоли, рабдомиосаркомы, саркомы, рака кожи, саркомы мягких тканей, плоскоклеточного рака, рака желудка, синовиальной саркомы, рака яичка, карциномы тимуса, тимомы, метастатического рака щитовидной железы и рака матки.
  31. 31. Применение молекулы, связывающей В7-Н3, по любому из пп.1-23 при получении лекарственного препарата для лечения рака у пациента.
  32. 32. Применение фармацевтической композиции по любому из пп.25-28 при получении лекарственного препарата для лечения рака у пациента.
  33. 33. Применение по п.31 или 32, отличающееся тем, что указанный рак характеризуется присутствием раковой клетки, выбранной из группы, состоящей из клетки опухоли надпочечника, СПИДассоциированного рака, альвеолярной саркомы мягких тканей, астроцитарной опухоли, рака мочевого пузыря, рака кости, рака головного и спинного мозга, метастатической опухоли головного мозга, рака молочной железы, опухолей каротидных телец, рака шейки матки, хондросаркомы, хордомы, хромофобной почечно-клеточной карциномы, светлоклеточного рака, рака толстой кишки, колоректального рака, десмопластической мелкокруглоклеточной опухоли, эпендимомы, опухоли Юинга, внескелетной миксоидной хондросаркомы, рак желчного пузыря или желчных протоков, рак ЖКТ, гестационной трофобластической болезни, эмбрионально-клеточной опухоли, рака головы и шеи, гепатоклеточной карциномы, инсулиномы, саркомы Капоши, рака почки, лейкоза, липосаркомы/злокачественной липоматозной опухоли, рака печени, лимфомы, рака легкого, медуллобластомы, меланомы, менингиомы, множественных эндокринных неоплазий, множественной миеломы, миелодиспластического синдрома, нейробластомы, нейроэндокринных опухолей, рака яичника, рака поджелудочной железы, папиллярной карциномы щитовидной железы, опухоли паращитовидной железы, опухоли оболочки периферического нерва, феохромопитомы, рака гипофиза, рака простаты, задней увеальной меланомы, метастатического рака почки, рабдоидной опухоли, рабдомиосаркомы, саркомы, рака кожи, саркомы мягких тканей, плоскоклеточного рака, рака желудка, синовиальной саркомы, рака яичка, карциномы тимуса, тимомы, метастатического рака щитовидной железы и рака матки.
    - 131 030226
EA201270734A 2010-03-04 2011-03-01 Антитела, реактивные к b7-h3, их иммунологически активные фрагменты и их применения EA030226B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US31069510P 2010-03-04 2010-03-04
US31069210P 2010-03-04 2010-03-04
US31105710P 2010-03-05 2010-03-05
PCT/US2011/026689 WO2011109400A2 (en) 2010-03-04 2011-03-01 Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201270734A1 EA201270734A1 (ru) 2013-04-30
EA030226B1 true EA030226B1 (ru) 2018-07-31

Family

ID=44542802

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201270734A EA030226B1 (ru) 2010-03-04 2011-03-01 Антитела, реактивные к b7-h3, их иммунологически активные фрагменты и их применения

Country Status (41)

Country Link
US (5) US9150656B2 (ru)
EP (2) EP2542256B1 (ru)
JP (2) JP5998060B2 (ru)
KR (1) KR101828570B1 (ru)
CN (2) CN106279416B (ru)
AU (1) AU2011223782B2 (ru)
BR (2) BR112012022210B1 (ru)
CA (1) CA2791658C (ru)
CL (4) CL2012002433A1 (ru)
CO (1) CO6630123A2 (ru)
CR (1) CR20120450A (ru)
CY (1) CY1121913T1 (ru)
DK (1) DK2542256T3 (ru)
EA (1) EA030226B1 (ru)
EC (1) ECSP12012139A (ru)
ES (2) ES2742351T3 (ru)
GE (2) GEP201706660B (ru)
HK (1) HK1221154A1 (ru)
HN (1) HN2012001846A (ru)
HR (1) HRP20191483T1 (ru)
HU (1) HUE045487T2 (ru)
IL (1) IL221767B (ru)
JO (1) JO3538B1 (ru)
LT (1) LT2542256T (ru)
MA (1) MA34062B1 (ru)
ME (1) ME03447B (ru)
MX (1) MX345232B (ru)
MY (1) MY156358A (ru)
NZ (3) NZ705128A (ru)
PE (2) PE20170779A1 (ru)
PH (1) PH12018501083A1 (ru)
PL (1) PL2542256T3 (ru)
PT (1) PT2542256T (ru)
RS (1) RS59269B1 (ru)
SA (1) SA114350709B1 (ru)
SG (2) SG183847A1 (ru)
SI (1) SI2542256T1 (ru)
TN (1) TN2012000437A1 (ru)
TW (6) TWI551611B (ru)
WO (1) WO2011109400A2 (ru)
ZA (1) ZA201206556B (ru)

Families Citing this family (275)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2707152T3 (es) * 2005-04-15 2019-04-02 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y usos de los mismos
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
KR101614494B1 (ko) 2008-04-02 2016-04-22 마크로제닉스, 인크. Ｂｃｒ-복합체-특이적 항체 및 그것의 사용 방법
US8802091B2 (en) 2010-03-04 2014-08-12 Macrogenics, Inc. Antibodies reactive with B7-H3 and uses thereof
LT2542256T (lt) * 2010-03-04 2019-10-25 Macrogenics Inc Su b7-h3 reaguojantys antikūnai, jų imunologiškai aktyvūs fragmentai ir jų naudojimas
SG187682A1 (en) * 2010-08-02 2013-03-28 Macrogenics Inc Covalent diabodies and uses thereof
KR102125672B1 (ko) * 2011-04-25 2020-06-23 다이이찌 산쿄 가부시키가이샤 항 ｂ７-ｈ３항체
CA2843595C (en) 2011-08-01 2022-10-18 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and mek inhibitors
UY34317A (es) 2011-09-12 2013-02-28 Genzyme Corp Anticuerpo antireceptor de célula T (alfa)/ß
CN104470536A (zh) 2012-03-03 2015-03-25 免疫基因公司 工程化的抗体-干扰素突变体融合分子
US9790268B2 (en) 2012-09-12 2017-10-17 Genzyme Corporation Fc containing polypeptides with altered glycosylation and reduced effector function
DK2956482T3 (en) 2013-02-14 2017-10-16 Innate Pharma TREATMENT OF PERFECT T cell lymphoma
EP3521312B1 (en) 2013-02-20 2021-04-07 Innate Pharma A compound that specifically binds to kir3dl2 for use in the treatment of peripheral t cell lymphoma
US9487587B2 (en) 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
IL275376B2 (en) 2013-03-11 2024-01-01 Genzyme Corp Polypeptides with hyperglycosidic bonds
WO2014160627A1 (en) 2013-03-25 2014-10-02 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Anti-cd276 polypeptides, proteins, and chimeric antigen receptors
BR112015025347A2 (pt) 2013-04-09 2017-07-18 Boston Biomedical Inc 2-acetil-nafto [2-3-b] furan-4,9-diona para uso no tratamento do câncer
US20160184399A1 (en) 2013-08-08 2016-06-30 Cytune Pharma Combined pharmaceutical composition
EP2840091A1 (en) 2013-08-23 2015-02-25 MacroGenics, Inc. Bi-specific diabodies that are capable of binding gpA33 and CD3 and uses thereof
NZ756750A (en) 2013-09-13 2022-05-27 Genentech Inc Methods and compositions comprising purified recombinant polypeptides
PL3044323T3 (pl) 2013-09-13 2022-06-27 F.Hoffmann-La Roche Ag Sposoby wykrywania i ilościowego oznaczania białka komórki gospodarza w liniach komórkowych
CA2925421C (en) 2013-09-24 2023-08-29 Medicenna Therapeutics, Inc. Interleukin-2 fusion proteins and uses thereof
AU2014342182B2 (en) 2013-10-30 2020-05-14 Eberhard Karls Universitat Tubingen Methods for enhancing immunosuppressive therapy by multiple administration of alpha beta TCR -binding polypeptide
SG11201605097SA (en) 2013-12-24 2016-07-28 Bristol Myers Squibb Co Tricyclic compounds as anticancer agents
CN106604740A (zh) * 2014-02-14 2017-04-26 宏观基因有限公司 用于治疗血管化癌症的改进的方法
US11039621B2 (en) 2014-02-19 2021-06-22 Corning Incorporated Antimicrobial glass compositions, glasses and polymeric articles incorporating the same
US11039620B2 (en) 2014-02-19 2021-06-22 Corning Incorporated Antimicrobial glass compositions, glasses and polymeric articles incorporating the same
US9622483B2 (en) 2014-02-19 2017-04-18 Corning Incorporated Antimicrobial glass compositions, glasses and polymeric articles incorporating the same
EP2915569A1 (en) 2014-03-03 2015-09-09 Cytune Pharma IL-15/IL-15Ralpha based conjugates purification method
KR102345173B1 (ko) 2014-03-14 2021-12-29 이나뜨 파르마 에스.에이. 증가된 안정성을 가진 인간화 항체
CN116333148A (zh) 2014-03-19 2023-06-27 建新公司 靶向模块的位点特异性糖工程化
JP6592505B2 (ja) 2014-04-24 2019-10-16 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー インターロイキン−２のスーパーアンタゴニスト、パーシャルアゴニスト及びアンタゴニスト
EP3149040A1 (en) * 2014-05-29 2017-04-05 Spring Bioscience Corporation Anti-b7-h3 antibodies and diagnostic uses thereof
AP2016009586A0 (en) 2014-05-29 2016-11-30 Macrogenics Inc Tri-specific binding molecules and methods of use thereof
ES2755395T3 (es) 2014-06-06 2020-04-22 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos contra el receptor del factor de necrosis tumoral inducido por glucocorticoides (GITR) y usos de los mismos
MX2016015610A (es) 2014-06-06 2017-07-13 Flexus Biosciences Inc Agentes inmunorreguladores.
JP6822849B2 (ja) 2014-06-27 2021-01-27 イナート・ファルマ・ソシエテ・アノニムＩｎｎａｔｅ Ｐｈａｒｍａ Ｐｈａｒｍａ Ｓ．Ａ． 多重特異的ＮＫｐ４６結合タンパク質
EP3160994A2 (en) 2014-06-27 2017-05-03 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
SG11201700074YA (en) 2014-07-15 2017-02-27 Genentech Inc Compositions for treating cancer using pd-1 axis binding antagonists and mek inhibitors
US20170216403A1 (en) 2014-08-12 2017-08-03 Massachusetts Institute Of Technology Synergistic tumor treatment with il-2, a therapeutic antibody, and an immune checkpoint blocker
DK3180018T3 (da) 2014-08-12 2019-10-28 Massachusetts Inst Technology Synergistisk tumorbehandling med IL-2 og integrinbindende Fc-fusionsprotein
EP3186277B1 (en) * 2014-08-27 2020-10-07 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Antibodies, compositions, and uses
WO2016030488A1 (en) 2014-08-27 2016-03-03 Innate Pharma Treatment of celiac disease
JP6613304B2 (ja) * 2014-09-17 2019-12-04 ザ ユナイテッド ステイツ オブ アメリカ， アズ リプレゼンテッド バイ ザ セクレタリー， デパートメント オブ ヘルス アンド ヒューマン サービシーズ 抗ｃｄ２７６抗体（ｂ７ｈ３）
CA2964123C (en) 2014-10-09 2023-09-05 Genzyme Corporation Glycoengineered antibody drug conjugates
CA2959841A1 (en) 2014-10-23 2016-04-28 Innate Pharma Treatment of cancers using anti-nkg2a agents
UY36391A (es) 2014-11-05 2016-06-01 Flexus Biosciences Inc Compuestos moduladores de la enzima indolamina 2,3-dioxigenasa (ido1), sus métodos de síntesis y composiciones farmacèuticas que las contienen
UY36390A (es) 2014-11-05 2016-06-01 Flexus Biosciences Inc Compuestos moduladores de la enzima indolamina 2,3-dioxigenasa (ido), sus métodos de síntesis y composiciones farmacéuticas que los contienen
EP3215141A4 (en) 2014-11-05 2018-06-06 Flexus Biosciences, Inc. Immunoregulatory agents
US10100129B2 (en) 2014-11-21 2018-10-16 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies against CD73 and uses thereof
TW201630907A (zh) 2014-12-22 2016-09-01 必治妥美雅史谷比公司 ＴＧＦβＲ拮抗劑
AU2015369683B2 (en) 2014-12-23 2020-12-10 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies to TIGIT
US9884868B2 (en) 2015-03-02 2018-02-06 Rigel Pharmaceuticals, Inc. TGF-beta inhibitors
BR112017020999A2 (pt) 2015-04-03 2018-07-03 Bristol-Myers Squibb Company inibidores de indolamina-2,3-dioxigenase para o tratamento de câncer
TW201642897A (zh) 2015-04-08 2016-12-16 Ｆ 星生物科技有限公司 Ｈｅｒ２結合劑治療
LT3283527T (lt) 2015-04-13 2021-03-25 Five Prime Therapeutics, Inc. Kompleksinė terapija vėžio gydymui
WO2016183114A1 (en) 2015-05-11 2016-11-17 Bristol-Myers Squibb Company Tricyclic compounds as anticancer agents
US9725449B2 (en) 2015-05-12 2017-08-08 Bristol-Myers Squibb Company Tricyclic compounds as anticancer agents
SG10202008304TA (en) 2015-05-29 2020-10-29 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against ox40 and uses thereof
TW201717935A (zh) 2015-06-03 2017-06-01 波士頓生醫公司 用於治療癌症的組成物和方法
CA2990511A1 (en) 2015-06-23 2016-12-29 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
EP3313881A1 (en) 2015-06-23 2018-05-02 Innate Pharma Multispecific nk engager proteins
MX2017016863A (es) * 2015-06-25 2018-09-06 Advanced Accelerator Applications Metodo de tratamiento de tumores neuroendocrinos que sobreexpresan receptores de somatostatatina.
JP2018526977A (ja) 2015-06-29 2018-09-20 ザ ロックフェラー ユニヴァーシティ アゴニスト活性が増強されたｃｄ４０に対する抗体
KR20180034548A (ko) 2015-07-28 2018-04-04 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Tgf 베타 수용체 길항제
CN108025051B (zh) * 2015-07-29 2021-12-24 诺华股份有限公司 包含抗pd-1抗体分子的联合疗法
MX2018001227A (es) * 2015-07-30 2018-03-26 Macrogenics Inc Moleculas de union a pd-1 y metodos de uso de las mismas.
CN107921130A (zh) * 2015-08-17 2018-04-17 宏观基因有限公司 能够结合b7‑h3和cd3的双特异性单价双抗体及其用途
WO2017035118A1 (en) 2015-08-25 2017-03-02 Bristol-Myers Squibb Company Tgf beta receptor antagonists
EP3347375B1 (en) * 2015-09-10 2020-12-23 The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Anti-cd276 chimeric antigen receptors
AU2016329057A1 (en) 2015-09-30 2018-04-12 Janssen Biotech, Inc. Antagonistic antibodies specifically binding human CD40 and methods of use
WO2017062619A2 (en) * 2015-10-08 2017-04-13 Macrogenics, Inc. Combination therapy for the treatment of cancer
PE20181300A1 (es) 2015-11-02 2018-08-09 Five Prime Therapeutics Inc Polipeptidos del dominio extracelular de cd80 y su uso en el tratamiento del cancer
US10894830B2 (en) 2015-11-03 2021-01-19 Janssen Biotech, Inc. Antibodies specifically binding PD-1, TIM-3 or PD-1 and TIM-3 and their uses
WO2017083354A1 (en) * 2015-11-10 2017-05-18 Yale University Compositions and methods for treating autoimmune diseases and cancers
SG11201803817PA (en) 2015-11-19 2018-06-28 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor (gitr) and uses thereof
CA3004794A1 (en) 2015-11-23 2017-06-01 Five Prime Therapeutics, Inc. Fgfr2 inhibitors alone or in combination with immune stimulating agents in cancer treatment
US20200254118A1 (en) * 2015-12-02 2020-08-13 Sunitha Bachawal Breast cancer detection using b7-h3-targeted molecular imaging
WO2017106061A1 (en) 2015-12-14 2017-06-22 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules having immunoreactivity with pd-1 and ctla-4, and methods of use thereof
EP3390406A1 (en) 2015-12-15 2018-10-24 Bristol-Myers Squibb Company Cxcr4 receptor antagonists
US20190000989A1 (en) * 2016-01-11 2019-01-03 STC Biologics Inc. Bispecific targeting agents and methods for their preparation
BR112018067368A2 (pt) 2016-03-04 2019-01-15 Bristol-Myers Squibb Company terapia de combinação com anticorpos anti-cd73
SG10201601719RA (en) 2016-03-04 2017-10-30 Agency Science Tech & Res Anti-LAG-3 Antibodies
CA3016765A1 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Innate Pharma Anti-mica antibodies
MX2018012433A (es) * 2016-04-15 2019-03-01 Macrogenics Inc Moleculas de union b7-h3 novedosas, conjugados anticuerpo-farmaco de los mismos y metodos de uso de los mismos.
WO2017184619A2 (en) 2016-04-18 2017-10-26 Celldex Therapeutics, Inc. Agonistic antibodies that bind human cd40 and uses thereof
JP2019516687A (ja) 2016-05-04 2019-06-20 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤およびその使用方法
JP2019516682A (ja) 2016-05-04 2019-06-20 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ インドールアミン２，３−ジオキシゲナーゼ阻害剤およびその使用方法
SG10201603721TA (en) 2016-05-10 2017-12-28 Agency Science Tech & Res Anti-CTLA-4 Antibodies
WO2017214322A1 (en) * 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
WO2017214339A1 (en) * 2016-06-08 2017-12-14 Abbvie Inc. Anti-b7-h3 antibodies and antibody drug conjugates
CN116284404A (zh) 2016-06-08 2023-06-23 艾伯维公司 抗b7-h3抗体和抗体药物偶联物
MY200602A (en) 2016-07-14 2024-01-04 Bristol Myers Squibb Co Antibodies against tim3 and uses thereof
US20190292179A1 (en) 2016-07-21 2019-09-26 Bristol-Myers Squibb Company TGF Beta RECEPTOR ANTAGONISTS
NL2017267B1 (en) * 2016-07-29 2018-02-01 Aduro Biotech Holdings Europe B V Anti-pd-1 antibodies
MA45941A (fr) 2016-08-12 2019-06-19 Janssen Biotech Inc Anticorps de membres de la superfamille anti-tnfr modifiés par fc ayant une activité agoniste améliorée et leurs procédés d'utilisation
US10669344B2 (en) 2016-08-12 2020-06-02 Janssen Biotech, Inc. Engineered antibodies and other Fc-domain containing molecules with enhanced agonism and effector functions
KR20230173745A (ko) 2016-10-21 2023-12-27 이나뜨 파르마 에스.에이. 항-kir3dl2 작용제에 의한 치료
US10660909B2 (en) 2016-11-17 2020-05-26 Syntrix Biosystems Inc. Method for treating cancer using chemokine antagonists
JP7106563B2 (ja) 2016-11-29 2022-07-26 スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド ナフトフラン誘導体、その調製、および使用方法
CN110167591B (zh) 2016-12-23 2023-09-26 宏观基因有限公司 Adam9结合分子及使用其的方法
LT3558391T (lt) 2016-12-23 2022-07-11 Immunogen, Inc. Imunokonjugatai, kurių taikinys yra adam9, ir jų naudojimo būdai
EP3559032A1 (en) 2016-12-23 2019-10-30 Innate Pharma Heterodimeric antigen binding proteins
US11046764B2 (en) 2017-01-03 2021-06-29 Trellis Bioscience, Llc Native human antibodies for immune checkpoint modulation targets TIM-3 and B7-H3
WO2018132279A1 (en) 2017-01-05 2018-07-19 Bristol-Myers Squibb Company Tgf beta receptor antagonists
US10350266B2 (en) 2017-01-10 2019-07-16 Nodus Therapeutics, Inc. Method of treating cancer with a multiple integrin binding Fc fusion protein
WO2018132516A1 (en) 2017-01-10 2018-07-19 Nodus Therapeutics Combination tumor treatment with an integrin-binding-fc fusion protein and immune modulator
PL3570844T3 (pl) 2017-01-20 2024-02-26 Arcus Biosciences, Inc. Azolopirymidyna do leczenia zaburzeń związanych z nowotworami
AU2018219887A1 (en) 2017-02-08 2019-08-22 Dragonfly Therapeutics, Inc. Multi-specific binding proteins for activation of natural killer cells and therapeutic uses thereof to treat cancer
CA3053222A1 (en) * 2017-02-10 2018-08-16 Genmab B.V. Polypeptide variants and uses thereof
ES2955074T3 (es) 2017-02-20 2023-11-28 Dragonfly Therapeutics Inc Proteínas que se unen a HER2, NKG2D Y CD16
KR102585848B1 (ko) 2017-02-24 2023-10-11 마크로제닉스, 인크. Cd137 및 종양 항원에 결합할 수 있는 이중특이적 결합 분자, 및 그것의 용도
CN109843927B (zh) * 2017-03-06 2022-06-21 江苏恒瑞医药股份有限公司 抗b7-h3抗体、其抗原结合片段及其医药用途
FR3064007A1 (fr) * 2017-03-20 2018-09-21 Laboratoire Francais Du Fractionnement Et Des Biotechnologies Anticorps pour le traitement de cancers
US20200031944A1 (en) 2017-03-31 2020-01-30 Five Prime Therapeutics, Inc. Combination therapy for cancer using anti-gitr antibodies
JP7158403B2 (ja) 2017-03-31 2022-10-21 ジエンス ヘンルイ メデイシンカンパニー リミテッド Ｂ７－ｈ３抗体、その抗原結合フラグメント、及びそれらの医学的使用
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
CA3059939A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Kyn Therapeutics Indole ahr inhibitors and uses thereof
AU2018258661A1 (en) 2017-04-28 2019-10-17 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treatment with CD80 extracellular domain polypeptides
US11066392B2 (en) 2017-05-12 2021-07-20 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
WO2018213424A1 (en) 2017-05-17 2018-11-22 Boston Biomedical, Inc. Methods for treating cancer
WO2018213377A1 (en) 2017-05-17 2018-11-22 Arcus Biosciences, Inc. Quinazoline-pyrazole derivatives for the treatment of cancer-related disorders
EP3641814A4 (en) 2017-06-19 2021-06-23 Medicenna Therapeutics Inc. USES AND METHODS FOR IL-2 SUPERAGONISTS, AGONISTS, AND FUSIONS THEREOF
CN109097366A (zh) * 2017-06-21 2018-12-28 黄海东 突变的人2Ig-B7-H3蛋白编码基因、重组载体、其药物组合物及其应用
BR112019027259A2 (pt) 2017-06-30 2020-07-14 Bristol-Myers Squibb Company formas amorfas e cristalinas de inibidores da ido
CN110997691B (zh) 2017-07-28 2023-11-07 百时美施贵宝公司 作为抗癌剂的环二核苷酸
JP7269917B2 (ja) 2017-08-17 2023-05-09 イケナ オンコロジー， インコーポレイテッド Ａｈｒ阻害剤およびその使用
JP7209697B2 (ja) 2017-08-31 2023-01-20 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 抗癌剤としての環状ジヌクレオチド
ES2904317T3 (es) 2017-08-31 2022-04-04 Bristol Myers Squibb Co Dinucleótidos cíclicos como agentes anticancerosos
CN111032672A (zh) 2017-08-31 2020-04-17 百时美施贵宝公司 作为抗癌剂的环二核苷酸
KR101912587B1 (ko) * 2017-09-14 2018-10-30 펌텍코리아(주) 스포이드형 이종 내용물 혼합 용기
EP3684366A4 (en) 2017-09-22 2021-09-08 Kymera Therapeutics, Inc. CRBN LIGANDS AND USES OF THE LATEST
IL307995A (en) 2017-09-22 2023-12-01 Kymera Therapeutics Inc Protein compounds and their uses
US11203592B2 (en) 2017-10-09 2021-12-21 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
WO2019074822A1 (en) 2017-10-09 2019-04-18 Bristol-Myers Squibb Company INDOLEAMINE 2,3-DIOXYGENASE INHIBITORS AND METHODS OF USE
CN111344297B (zh) 2017-10-10 2023-10-20 百时美施贵宝公司 作为抗癌剂的环二核苷酸
EP3694552A1 (en) 2017-10-10 2020-08-19 Tilos Therapeutics, Inc. Anti-lap antibodies and uses thereof
WO2019079261A1 (en) 2017-10-16 2019-04-25 Bristol-Myers Squibb Company CYCLIC DINUCLEOTIDES AS ANTICANCER AGENTS
EP3704159A1 (en) 2017-11-01 2020-09-09 Bristol-Myers Squibb Company Immunostimulatory agonistic antibodies for use in treating cancer
US11166959B2 (en) 2017-11-06 2021-11-09 Bristol-Myers Squibb Company Isofuranone compounds useful as HPK1 inhibitors
US20200325232A1 (en) 2017-11-21 2020-10-15 Innate Pharma Multispecific antigen binding proteins
SG11202005557TA (en) 2017-12-12 2020-07-29 Macrogenics Inc Bispecific cd 16-binding molecules and their use in the treatment of disease
IL304055A (en) 2017-12-26 2023-08-01 Kymera Therapeutics Inc IRAK joints and used in them
KR20200103761A (ko) 2017-12-27 2020-09-02 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-cd40 항체 및 그의 용도
US11447449B2 (en) 2018-01-05 2022-09-20 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
CN111886255A (zh) 2018-01-12 2020-11-03 百时美施贵宝公司 抗tim3抗体及其用途
WO2019140387A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Kymera Therapeutics, Inc. Crbn ligands and uses thereof
WO2019140380A1 (en) 2018-01-12 2019-07-18 Kymera Therapeutics, Inc. Protein degraders and uses thereof
CN111867581B (zh) 2018-01-29 2023-12-26 默克专利股份有限公司 Gcn2抑制剂及其用途
CN118005640A (zh) 2018-01-29 2024-05-10 默克专利股份有限公司 Gcn2抑制剂及其用途
BR112020016190A2 (pt) 2018-02-08 2020-12-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. Domínios variáveis de anticorpos direcionando o receptor nkg2d
US10519187B2 (en) 2018-02-13 2019-12-31 Bristol-Myers Squibb Company Cyclic dinucleotides as anticancer agents
US11685781B2 (en) 2018-02-15 2023-06-27 Macrogenics, Inc. Variant CD3-binding domains and their use in combination therapies for the treatment of disease
WO2019165315A1 (en) 2018-02-23 2019-08-29 Syntrix Biosystems Inc. Method for treating cancer using chemokine antagonists alone or in combination
CN111971304A (zh) 2018-03-21 2020-11-20 戊瑞治疗有限公司 在酸性pH结合至VISTA的抗体
KR20200142542A (ko) 2018-04-12 2020-12-22 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 Cd73 길항제 항체 및 pd-1/pd-l1 축 길항제 항체에 의한 항암 조합 요법
AU2019255196A1 (en) 2018-04-16 2020-11-12 Arrys Therapeutics, Inc. EP4 inhibitors and use thereof
WO2019225787A1 (ko) * 2018-05-24 2019-11-28 에이비엘바이오 주식회사 항-b7-h3 항체 및 그 용도
US20220403001A1 (en) 2018-06-12 2022-12-22 Obsidian Therapeutics, Inc. Pde5 derived regulatory constructs and methods of use in immunotherapy
CA3103629A1 (en) 2018-06-15 2019-12-19 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Increasing immune activity through modulation of postcellular signaling factors
US11180531B2 (en) 2018-06-22 2021-11-23 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for Nectin-4
BR112020025346A2 (pt) 2018-06-26 2021-05-25 Immunogen, Inc. imunoconjugados que alvejam adam9 e métodos de uso dos mesmos
WO2020006018A1 (en) 2018-06-27 2020-01-02 Bristol-Myers Squibb Company Substituted naphthyridinone compounds useful as t cell activators
SG11202012973RA (en) 2018-06-27 2021-01-28 Bristol Myers Squibb Co Naphthyridinone compounds useful as t cell activators
WO2020010177A1 (en) 2018-07-06 2020-01-09 Kymera Therapeutics, Inc. Tricyclic crbn ligands and uses thereof
MX2021000009A (es) 2018-07-09 2021-03-09 Five Prime Therapeutics Inc Anticuerpos de union a transcripcion tipo inmunoglobulina 4 (ilt4).
PE20210687A1 (es) 2018-07-11 2021-04-08 Bristol Myers Squibb Co Anticuerpos de union a vista a ph acido
WO2020018964A1 (en) 2018-07-20 2020-01-23 Fred Hutchinson Cancer Research Center Compositions and methods for controlled expression of antigen-specific receptors
US20210355113A1 (en) 2018-07-23 2021-11-18 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
WO2020023355A1 (en) 2018-07-23 2020-01-30 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of indoleamine 2,3-dioxygenase and methods of their use
CA3107079A1 (en) 2018-07-27 2020-01-30 Arcus Biosciences, Inc. Pyridone a2r antagonists
CN112789291A (zh) * 2018-08-08 2021-05-11 蜻蜓疗法股份有限公司 结合nkg2d、cd16和肿瘤相关抗原的蛋白质
WO2020047257A1 (en) * 2018-08-31 2020-03-05 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Methods and compositions comprising b7h3 chimeric antigen receptors
CN110950953B (zh) * 2018-09-26 2022-05-13 福州拓新天成生物科技有限公司 抗b7-h3的单克隆抗体及其在细胞治疗中的应用
BR112021004383A2 (pt) 2018-09-28 2021-08-03 Massachusetts Institute Of Technology proteína de fusão imunomoduladora, composição farmacêutica, ácido nucleico, vetor de expressão, célula transformada, método para a produção de uma proteína de fusão imunomoduladora, método para ativar, aumentar ou promover uma resposta por uma célula imune em um sujeito, método para inibir, reduzir ou suprimir uma resposta por uma célula imune em um sujeito, método para reduzir ou inibir o crescimento do tumor, método para tratar câncer em um sujeito, kit, uso de uma proteína de fusão imunomoduladora e método para reduzir ou inibir o crescimento do tumor ou tratar o câncer em um sujeito
EP3863722A2 (en) 2018-10-10 2021-08-18 Tilos Theapeutics, Inc. Anti-lap antibody variants and uses thereof
CN110305213B (zh) * 2018-11-09 2023-03-10 泰州复旦张江药业有限公司 一种抗b7-h3抗体及其制备方法、其偶联物和应用
WO2020094120A1 (zh) * 2018-11-09 2020-05-14 上海复旦张江生物医药股份有限公司 一种抗b7-h3抗体及其制备方法、其偶联物和应用
TW202033555A (zh) 2018-11-16 2020-09-16 美商必治妥美雅史谷比公司 抗nkg2a抗體及其用途
US20220119529A1 (en) * 2018-11-22 2022-04-21 Suzhou Kanova Biopharmaceutical Co., Ltd. An anti-b7-h3 antibody
JP2022516401A (ja) 2018-11-30 2022-02-28 カイメラ セラピューティクス， インコーポレイテッド Ｉｒａｋ分解剤およびそれらの使用
EP3670659A1 (en) 2018-12-20 2020-06-24 Abivax Biomarkers, and uses in treatment of viral infections, inflammations, or cancer
CN113260703A (zh) * 2018-12-24 2021-08-13 黄海东 突变的人2Ig-B7-H3蛋白编码基因、重组载体、包含其的宿主细胞、药物组合物及其应用
CN109851673B (zh) * 2019-01-22 2023-07-25 苏州旭光科星抗体生物科技有限公司 一种抗人b7-h3单克隆抗体的制备方法及其免疫组化检测方法及其应用及其试剂盒
AU2020210710A1 (en) 2019-01-22 2021-07-29 Innate Pharma Treatment of T cell lymphoma
US11235032B2 (en) 2019-01-23 2022-02-01 Massachusetts Institute Of Technology Combination immunotherapy dosing regimen for immune checkpoint blockade
WO2020187998A1 (en) 2019-03-19 2020-09-24 Fundació Privada Institut D'investigació Oncològica De Vall Hebron Combination therapy with omomyc and an antibody binding pd-1 or ctla-4 for the treatment of cancer
JP2022528887A (ja) 2019-04-02 2022-06-16 バイスクルテクス・リミテッド バイシクルトキシンコンジュゲートおよびその使用
US11485750B1 (en) 2019-04-05 2022-11-01 Kymera Therapeutics, Inc. STAT degraders and uses thereof
WO2020227159A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Methods of modulating immune activity
WO2020231766A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
WO2020231713A1 (en) 2019-05-13 2020-11-19 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
TW202108559A (zh) 2019-05-31 2021-03-01 美商醫肯納腫瘤學公司 Tead抑制劑及其用途
US11642409B2 (en) 2019-06-26 2023-05-09 Massachusetts Insttute of Technology Immunomodulatory fusion protein-metal hydroxide complexes and methods thereof
AU2020299305A1 (en) * 2019-07-03 2022-01-06 Crystal Bioscience Inc. Anti-B7-H3 antibody and methods of use thereof
KR20210006637A (ko) * 2019-07-09 2021-01-19 주식회사 와이바이오로직스 B7-h3(cd276)에 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
US20220306630A1 (en) 2019-08-06 2022-09-29 Bristol-Myers Squibb Company AGONISTS OF ROR GAMMAt
CN111454357B (zh) * 2019-08-14 2022-03-15 康诺亚生物医药科技（成都）有限公司 一种含有抗体的肿瘤治疗剂的开发和应用
AR119821A1 (es) 2019-08-28 2022-01-12 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de piridopirimidinonilo sustituidos útiles como activadores de células t
WO2021050964A1 (en) 2019-09-13 2021-03-18 Nimbus Saturn, Inc. Hpk1 antagonists and uses thereof
WO2021052307A1 (zh) * 2019-09-16 2021-03-25 南京圣和药业股份有限公司 一种抗b7-h3抗体及其应用
JP2022548292A (ja) 2019-09-19 2022-11-17 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー 酸性ｐＨでＶＩＳＴＡと結合する抗体
MX2022005839A (es) 2019-11-19 2022-06-09 Bristol Myers Squibb Co Compuestos utiles como inhibidores de la proteina helios.
WO2021101349A1 (ko) * 2019-11-21 2021-05-27 에이비엘바이오 주식회사 Ror1 및 b7-h3에 결합하는 항체, 이를 포함하는 항체-약물 접합체 및 그 용도
WO2021097800A1 (en) * 2019-11-22 2021-05-27 Abl Bio Inc. Anti-pd-l1/anti-b7-h3 multispecific antibodies and uses thereof
CN111000978B (zh) * 2019-11-22 2023-03-10 中山大学附属第五医院 Tlt-2在制备治疗结核病药物中的应用
IL293357A (en) 2019-11-26 2022-07-01 Bristol Myers Squibb Co Salts/crystals of (r)-n-(4-chlorophenyl)-2-((1s,4s)-4-(6-fluoroquinolin-4-yl)cyclohexyl)propanamide
JP2023502531A (ja) 2019-11-26 2023-01-24 イケナ オンコロジー， インコーポレイテッド 多形カルバゾール誘導体およびその使用
WO2021127217A1 (en) 2019-12-17 2021-06-24 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Combination anti-cancer therapies with inducers of iron-dependent cellular disassembly
MX2022007576A (es) 2019-12-17 2022-09-23 Kymera Therapeutics Inc Degradadores de cinasas asociadas al receptor de interleucina-1 (irak) y usos de los mismos.
EP4076524A4 (en) 2019-12-17 2023-11-29 Kymera Therapeutics, Inc. IRAQ DEGRADERS AND USES THEREOF
CN115297931A (zh) 2019-12-23 2022-11-04 凯麦拉医疗公司 Smarca降解剂和其用途
CN114846015A (zh) 2019-12-23 2022-08-02 百时美施贵宝公司 用作t细胞激活剂的经取代的杂芳基化合物
US20230094758A1 (en) 2019-12-23 2023-03-30 Bristol-Myers Squibb Company Substituted quinazolinyl compounds useful as t cell activators
IL294269A (en) 2019-12-23 2022-08-01 Bristol Myers Squibb Co Substitute quinolinyl piperazine compounds are useful as t-cell activators
AR120823A1 (es) 2019-12-23 2022-03-23 Bristol Myers Squibb Co Compuestos bicíclicos sustituidos útiles como activadores de células t
CA3162979A1 (en) 2019-12-23 2021-07-01 Upender Velaparthi Substituted piperazine derivatives useful as t cell activators
EP4121456A1 (en) 2020-03-18 2023-01-25 Genmab A/S Antibodies binding to b7h4
TW202200543A (zh) 2020-03-19 2022-01-01 美商凱麥拉醫療公司 Mdm2降解劑及其用途
BR112022018600A2 (pt) 2020-03-19 2022-11-08 Arcus Biosciences Inc Compostos, composição farmacêutica, método de tratamento de uma doença e combinação
TW202140441A (zh) 2020-03-23 2021-11-01 美商必治妥美雅史谷比公司 經取代之側氧基異吲哚啉化合物
US20230272056A1 (en) 2020-04-09 2023-08-31 Merck Sharp & Dohme Llc Affinity matured anti-lap antibodies and uses thereof
CN113527487A (zh) * 2020-04-22 2021-10-22 复星凯特生物科技有限公司 抗人b7-h3的单克隆抗体及其应用
CA3176246A1 (en) 2020-06-02 2021-12-09 Arcus Biosciences, Inc. Antibodies to tigit
TW202210483A (zh) 2020-06-03 2022-03-16 美商凱麥拉醫療公司 Irak降解劑之結晶型
AU2021284808A1 (en) * 2020-06-04 2022-12-15 Y-Mabs Therapeutics, Inc. Anti-B7H3 antibodies for the treatment of cancer
CN116249717A (zh) * 2020-06-24 2023-06-09 普罗塞纳生物科学有限公司 识别分拣蛋白的抗体
JP2023532339A (ja) 2020-06-29 2023-07-27 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド サノトランスミッションを促進するためにエンジニアリングされたウイルス及び癌の処置におけるそれらの使用
CN112851812B (zh) * 2020-06-30 2021-09-14 广州百暨基因科技有限公司 抗b7h3抗体及其应用
CA3187255A1 (en) 2020-07-30 2022-02-03 Duncan Walker Methods of treating mutant lymphomas
CN111944050B (zh) * 2020-08-19 2022-05-13 苏州普乐康医药科技有限公司 一种抗b7-h3抗体及其应用
CN116063550A (zh) * 2020-09-02 2023-05-05 南京北恒生物科技有限公司 靶向nk激活性受体的嵌合抗原受体
US20230416382A1 (en) 2020-10-14 2023-12-28 Five Prime Therapeutics, Inc. Anti-c-c chemokine receptor 8 (ccr8) antibodies and methods of use thereof
AU2021390121A1 (en) * 2020-12-02 2023-06-29 Mabwell (shanghai) Bioscience Co., Ltd. Anti-human b7-h3 antibody and application thereof
EP4269435A1 (en) * 2020-12-23 2023-11-01 Innovent Biologics (Singapore) Pte. Ltd. Anti-b7-h3 antibody and uses thereof
AR124681A1 (es) 2021-01-20 2023-04-26 Abbvie Inc Conjugados anticuerpo-fármaco anti-egfr
US20240109899A1 (en) 2021-02-04 2024-04-04 Bristol-Myers Squibb Company Benzofuran compounds as sting agonists
KR20230145038A (ko) 2021-02-09 2023-10-17 메디링크 테라퓨틱스 (쑤저우) 컴퍼니, 리미티드 생물활성 물질 접합체, 이의 제조방법 및 이의 용도
AU2022221124A1 (en) 2021-02-12 2023-08-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydroazepine derivatives for the treatment of cancer
WO2022174269A1 (en) 2021-02-15 2022-08-18 Kymera Therapeutics, Inc. Irak4 degraders and uses thereof
EP4301756A1 (en) 2021-03-05 2024-01-10 Nimbus Saturn, Inc. Hpk1 antagonists and uses thereof
US20240165256A1 (en) 2021-03-08 2024-05-23 Immunogen, Inc. Methods for increasing efficacy of immunoconjugates targeting adam9 for the treatment of cancer
KR20220134462A (ko) 2021-03-26 2022-10-05 세라노틱스(주) B7-h3 항체 또는 이의 항원 결합 단편 및 이의 용도
CA3207652A1 (en) 2021-03-26 2022-09-29 Stephanie Cornen Cytokine anchors for nkp46-binding nk cell engager proteins
EP4313109A1 (en) 2021-03-31 2024-02-07 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Thanotransmission polypeptides and their use in treating cancer
AU2022253450A1 (en) 2021-04-05 2023-11-16 Bristol-Myers Squibb Company Pyridinyl substituted oxoisoindoline compounds for the treatment of cancer
WO2022216644A1 (en) 2021-04-06 2022-10-13 Bristol-Myers Squibb Company Pyridinyl substituted oxoisoindoline compounds
CN117751145A (zh) * 2021-04-28 2024-03-22 礼进生物医药科技（上海）有限公司 包括抗b7h3结合分子的双特异性抗体
CA3214582A1 (en) 2021-05-07 2022-11-10 Martin SAHLIN Pharmaceutical compositions comprising bispecific antibodies binding to b7h4 and cd3
WO2022246177A1 (en) 2021-05-21 2022-11-24 Arcus Biosciences, Inc. Axl compounds
TW202313603A (zh) 2021-05-21 2023-04-01 美商阿克思生物科學有限公司 Axl抑制劑化合物
KR20240019786A (ko) 2021-06-09 2024-02-14 이나뜨 파르마 에스.에이. Cd20, nkp46, cd16에 결합하고 il-2에 접합된 다중특이적 항체
WO2022258678A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkp30, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
WO2022258662A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkp46, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
WO2022258691A1 (en) 2021-06-09 2022-12-15 Innate Pharma Multispecific proteins binding to nkg2d, a cytokine receptor, a tumour antigen and cd16a
CA3224374A1 (en) 2021-06-29 2023-01-05 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof
CN113527493B (zh) * 2021-07-20 2023-10-27 广州爱思迈生物医药科技有限公司 一种b7-h3抗体及其应用
CN113683697B (zh) * 2021-08-27 2022-06-17 上海祥耀生物科技有限责任公司 抗b7-h3抗体、其制备方法及用途
KR20230035508A (ko) 2021-08-27 2023-03-14 세라노틱스(주) B7-H3 및 TGFβ에 특이적으로 결합하는 이중 특이적 분자 및 이의 용도
TW202325279A (zh) 2021-10-29 2023-07-01 美商阿克思生物科學有限公司 HIF-2α抑制劑及其使用方法
WO2023150186A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Arvinas Operations, Inc. Dgk targeting compounds and uses thereof
CN116589586B (zh) * 2022-02-25 2024-02-02 南京蓬勃生物科技有限公司 针对人b7-h3的抗体及其变体
WO2024015251A1 (en) 2022-07-15 2024-01-18 Arcus Biosciences, Inc. Inhibitors of hpk1 and methods of use thereof
WO2024020034A1 (en) 2022-07-20 2024-01-25 Arcus Biosciences, Inc. Cbl-b inhibitors and methods of use thereof
WO2024036101A1 (en) 2022-08-09 2024-02-15 Bristol-Myers Squibb Company Tertiary amine substituted bicyclic compounds useful as t cell activators
WO2024033388A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033457A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033458A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydroazepine derivatives
WO2024033389A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
CN116396388A (zh) * 2022-08-26 2023-07-07 四川大学 一种抗b7-h3抗体及其应用
WO2024077191A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer
WO2024081385A1 (en) 2022-10-14 2024-04-18 Arcus Biosciences, Inc. Hpk1 inhibitors and methods of use thereof
WO2024086718A1 (en) 2022-10-20 2024-04-25 Arcus Biosciences, Inc. Lyophilized formulations of cd73 compounds
WO2024092073A1 (en) * 2022-10-26 2024-05-02 Abbratech Inc. Chimeric antibodies and methods of making and using same
CN116199779B (zh) * 2022-12-08 2023-08-11 北京东方百泰生物科技股份有限公司 一种抗lilrb4单克隆抗体、其抗原结合片段及其应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020127227A1 (en) * 1998-11-19 2002-09-12 Smithkline Beecham Corporation RHAMM antagonist antibodies
US20030103976A1 (en) * 1997-04-01 2003-06-05 Sankyo Company, Limited Anti-fas antibodies
US20030185827A1 (en) * 1994-04-29 2003-10-02 Mayo Foundation Human IgM antibodies, and diagnostic and therapeutic uses thereof particularly in the central nervous system
US20080177045A1 (en) * 2006-12-08 2008-07-24 E-Chiang Lee Monoclonal antibodies against ANGPTL3
US20090087416A1 (en) * 2000-07-27 2009-04-02 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h3 and b7-h4, novel immunoregulatory molecules
US20090252732A1 (en) * 2005-05-06 2009-10-08 Siadak Anthony W Variable region sequences of il-31 monoclonal antibodies and methods of use

Family Cites Families (239)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3862925A (en) 1973-07-05 1975-01-28 American Home Prod Preparation of somatotropin release inhibiting factor and intermediates therefor
US4179337A (en) 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US3842067A (en) 1973-07-27 1974-10-15 American Home Prod Synthesis of(des-asn5)-srif and intermediates
JPS5726506B2 (ru) 1974-03-08 1982-06-04
US4105603A (en) 1977-03-28 1978-08-08 The Salk Institute For Biological Studies Peptides which effect release of hormones
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4752601A (en) 1983-08-12 1988-06-21 Immunetech Pharmaceuticals Method of blocking immune complex binding to immunoglobulin FC receptors
US6054561A (en) 1984-02-08 2000-04-25 Chiron Corporation Antigen-binding sites of antibody molecules specific for cancer antigens
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5185432A (en) 1986-02-26 1993-02-09 Oncogen Monoclonal antibodies and antigen for human non-small cell lung carcinoma and other certain human carcinomas
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5985599A (en) 1986-05-29 1999-11-16 The Austin Research Institute FC receptor for immunoglobulin
US4954617A (en) 1986-07-07 1990-09-04 Trustees Of Dartmouth College Monoclonal antibodies to FC receptors for immunoglobulin G on human mononuclear phagocytes
US5185462A (en) 1987-01-08 1993-02-09 Bp Chemicals Limited Production of carboxylic acids and esters thereof
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
WO1989007142A1 (en) 1988-02-05 1989-08-10 Morrison Sherie L Domain-modified constant region antibodies
FR2626882B1 (fr) 1988-02-08 1991-11-08 Ire Celltarg Sa Conjugues de derives de vinca comportant une chaine detergente en position c-3
US4861579A (en) 1988-03-17 1989-08-29 American Cyanamid Company Suppression of B-lymphocytes in mammals by administration of anti-B-lymphocyte antibodies
KR0149012B1 (ko) 1988-05-27 1998-08-17 쇼트보르그 레기날드 데 사람 f크롬 수용체 iii
US5169933A (en) 1988-08-15 1992-12-08 Neorx Corporation Covalently-linked complexes and methods for enhanced cytotoxicity and imaging
US5576184A (en) 1988-09-06 1996-11-19 Xoma Corporation Production of chimeric mouse-human antibodies with specificity to human tumor antigens
DE68928427T2 (de) 1988-09-15 1998-06-04 Univ Columbia Antikörper mit modifiziertem Kohlenhydratgehalt und Verfahren zur Herstellung und Verwendung
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
GB8916400D0 (en) 1989-07-18 1989-09-06 Dynal As Modified igg3
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5552391A (en) 1990-01-16 1996-09-03 La Jolla Pharmaceutical Company Chemically-defined non-polymeric valency platform molecules and conjugates thereof
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
US5364930A (en) 1990-10-16 1994-11-15 Northwestern University Synthetic C1q peptide fragments
GB9105245D0 (en) 1991-03-12 1991-04-24 Lynxvale Ltd Binding molecules
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
US6800738B1 (en) 1991-06-14 2004-10-05 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
US5223408A (en) 1991-07-11 1993-06-29 Genentech, Inc. Method for making variant secreted proteins with altered properties
GB9115364D0 (en) 1991-07-16 1991-08-28 Wellcome Found Antibody
US5843749A (en) 1991-07-26 1998-12-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Ehk and Ror tyrosine kinases
CA2078539C (en) 1991-09-18 2005-08-02 Kenya Shitara Process for producing humanized chimera antibody
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
AU2605592A (en) 1991-10-15 1993-04-22 Atrix Laboratories, Inc. Polymeric compositions useful as controlled release implants
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
EP0640094A1 (en) 1992-04-24 1995-03-01 The Board Of Regents, The University Of Texas System Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5736137A (en) 1992-11-13 1998-04-07 Idec Pharmaceuticals Corporation Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human B lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of B cell lymphoma
GB9225453D0 (en) 1992-12-04 1993-01-27 Medical Res Council Binding proteins
EP0682710B1 (en) 1993-02-10 2003-10-29 Unilever Plc Isolation process using immobilized proteins with specific binding capacities
US5877396A (en) 1993-04-23 1999-03-02 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Mice mutant for functional Fc receptors and method of treating autoimmune diseases
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
US6180377B1 (en) 1993-06-16 2001-01-30 Celltech Therapeutics Limited Humanized antibodies
AU7516694A (en) 1993-07-30 1995-02-28 Affymax Technologies N.V. Biotinylation of proteins
GB9316989D0 (en) 1993-08-16 1993-09-29 Lynxvale Ltd Binding molecules
NZ276943A (en) 1993-11-10 1998-02-26 Schering Corp Substituted For Alpha-interferon conjugated to a non-antigenic polymer (preferably a polyalkylene oxide) and its preparation
US5532159A (en) 1994-04-01 1996-07-02 The Ohio State University Monoclonal antibody to canine placental oncofetal protein for detecting cancer
US6132764A (en) 1994-08-05 2000-10-17 Targesome, Inc. Targeted polymerized liposome diagnostic and treatment agents
AU722247B2 (en) 1994-08-12 2000-07-27 Edward E. Timm Spinal support system for seating
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
US6265150B1 (en) 1995-06-07 2001-07-24 Becton Dickinson & Company Phage antibodies
US6113898A (en) 1995-06-07 2000-09-05 Idec Pharmaceuticals Corporation Human B7.1-specific primatized antibodies and transfectomas expressing said antibodies
US6410690B1 (en) 1995-06-07 2002-06-25 Medarex, Inc. Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies
US5736152A (en) 1995-10-27 1998-04-07 Atrix Laboratories, Inc. Non-polymeric sustained release delivery system
US6750334B1 (en) 1996-02-02 2004-06-15 Repligen Corporation CTLA4-immunoglobulin fusion proteins having modified effector functions and uses therefor
DE69731289D1 (de) 1996-03-18 2004-11-25 Univ Texas Immunglobulinähnliche domäne mit erhöhten halbwertszeiten
US5834597A (en) 1996-05-20 1998-11-10 Protein Design Labs, Inc. Mutated nonactivating IgG2 domains and anti CD3 antibodies incorporating the same
US6699658B1 (en) 1996-05-31 2004-03-02 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Yeast cell surface display of proteins and uses thereof
US6300065B1 (en) 1996-05-31 2001-10-09 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Yeast cell surface display of proteins and uses thereof
JP2001506967A (ja) 1996-08-02 2001-05-29 ブリストル―マイヤーズ・スクイブ・カンパニー 治療およびインビボ診断における免疫グロブリンの使用の結果としての免疫グロブリン誘発毒性の抑制方法
US6025485A (en) 1997-02-14 2000-02-15 Arcaris, Inc. Methods and compositions for peptide libraries displayed on light-emitting scaffolds
US6339069B1 (en) 1996-10-15 2002-01-15 Elan Pharmaceuticalstechnologies, Inc. Peptide-lipid conjugates, liposomes and lipsomal drug delivery
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
US6090381A (en) 1997-02-11 2000-07-18 Immunomedics, Inc. Stimulation of an immune response with antibodies labeled with the . .alpha-galactosyl epitope
US5942602A (en) * 1997-02-13 1999-08-24 Schering Aktiengessellschaft Growth factor receptor antibodies
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US20030207346A1 (en) 1997-05-02 2003-11-06 William R. Arathoon Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
DE19721700C1 (de) 1997-05-23 1998-11-19 Deutsches Krebsforsch Mutierter OKT3-Antikörper
WO1999019362A1 (en) 1997-10-15 1999-04-22 Medarex, Inc. BISPECIFIC MOLECULES DIRECTED TO TUMOR ASSOCIATED GLYCOPROTEIN-72 AND Fc RECEPTOR
CA2248971A1 (en) 1997-10-31 1999-04-30 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. .beta.1, 3-n-acetylglucosaminyltransferase, dna encoding it and its use
IL137919A0 (en) 1998-02-17 2001-10-31 Medarex Inc Treating and diagnosing macrophage-mediated diseases using fc receptor ligands
EP1060194A1 (en) 1998-02-25 2000-12-20 Lexigen Pharmaceuticals Corp. Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
NZ507435A (en) 1998-03-10 2003-12-19 Genentech Inc Novel polypeptides and nucleic acids with homology to cornichon
US6455263B2 (en) 1998-03-24 2002-09-24 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Small molecule library screening using FACS
US6242195B1 (en) 1998-04-02 2001-06-05 Genentech, Inc. Methods for determining binding of an analyte to a receptor
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
PT1068241E (pt) 1998-04-02 2007-11-19 Genentech Inc Variantes de anticorpos e respectivos fragmentos
DK2180007T4 (da) 1998-04-20 2017-11-27 Roche Glycart Ag Glycosyleringsteknik for antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellecytotoxicitet
EP0953639A1 (en) 1998-04-30 1999-11-03 Boehringer Ingelheim International GmbH FAPalpha-specific antibody with improved producibility
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
US6696550B2 (en) 1998-07-23 2004-02-24 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-CCR2 antibodies and methods of use therefor
CA2341029A1 (en) 1998-08-17 2000-02-24 Abgenix, Inc. Generation of modified molecules with increased serum half-lives
US7315786B2 (en) 1998-10-16 2008-01-01 Xencor Protein design automation for protein libraries
EP1006183A1 (en) 1998-12-03 2000-06-07 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V. Recombinant soluble Fc receptors
US20030190669A1 (en) 1998-12-30 2003-10-09 Genentech, Inc. Secreted and transmembrane polypeptides and nucleic acids encoding the same
US7183387B1 (en) 1999-01-15 2007-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
MXPA01007170A (es) 1999-01-15 2002-07-30 Genentech Inc Variantes de polipeptidos con funcion efectora alterada.
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
PL350909A1 (en) 1999-02-12 2003-02-10 Genetics Inst Humanized immunoglobulin reactive with b7 molecules and methods of treatment therewith
EP2275540B1 (en) 1999-04-09 2016-03-23 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Method for controlling the activity of immunologically functional molecule
US7527787B2 (en) 2005-10-19 2009-05-05 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Multivalent immunoglobulin-based bioactive assemblies
WO2000068266A1 (en) 1999-05-11 2000-11-16 Eli Lilly And Company Amyloid precursor protein protease and related nucleic acid compounds
EP1514933A1 (en) 1999-07-08 2005-03-16 Research Association for Biotechnology Secretory protein or membrane protein
CA2389916A1 (en) 1999-09-03 2001-03-15 Human Genome Sciences, Inc. B7-like polynucleotides, polypeptides, and antibodies
US6429303B1 (en) 1999-09-03 2002-08-06 Curagen Corporation Nucleic acids encoding members of the human B lymphocyte activation antigen B7 family and methods of using the same
JP4668498B2 (ja) 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 ポリペプチドの製造方法
DE60032633T2 (de) 1999-11-24 2007-10-04 Immunogen Inc., Cambridge Zytotoxische mittel, die taxane enthalten und ihre therapeutische anwendung
US6406840B1 (en) 1999-12-17 2002-06-18 Biomosaic Systems, Inc. Cell arrays and the uses thereof
US6541225B1 (en) 2000-01-26 2003-04-01 Raven Biotechnologies, Inc. Methods and compositions for generating human monoclonal antibodies
CZ20023203A3 (cs) 2000-03-24 2003-08-13 Micromet Ag Multifunkční polypeptidy obsahující vazebné místo k epitopu receptorového komplexu NKG2D
US20060154313A1 (en) 2000-04-13 2006-07-13 Immunex Corporation Human B7 polypeptide B7-H3A
JP2003531149A (ja) 2000-04-13 2003-10-21 ザ・ロツクフエラー・ユニバーシテイ 抗体由来の免疫応答の増強
CA2412377A1 (en) 2000-06-06 2001-12-13 Bristol-Myers Squibb Company B7-related nucleic acids and polypeptides and their uses for immunomodulation
US20030031675A1 (en) 2000-06-06 2003-02-13 Mikesell Glen E. B7-related nucleic acids and polypeptides useful for immunomodulation
EP1892251A3 (en) 2000-06-06 2008-12-31 Brystol-Myers Squibb Company B7-related nucleic acids and polypeptides and their uses for immunomodulation
EP1294904A1 (en) 2000-06-30 2003-03-26 Vlaams Interuniversitair Instituut voor Biotechnologie vzw. Heterodimeric fusion proteins
US6333410B1 (en) 2000-08-18 2001-12-25 Immunogen, Inc. Process for the preparation and purification of thiol-containing maytansinoids
EP1327638A4 (en) 2000-09-12 2004-09-29 Kirin Brewery NEW WALL MEMBRANE OF DENDRITIC CELLS AND THEIR USE
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
CA2424977C (en) 2000-10-06 2008-03-18 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
MXPA03002974A (es) 2000-10-06 2004-05-05 Kyowa Hakko Kogyo Kk Celulas que producen composiciones de anticuerpo.
US7737258B2 (en) 2000-10-18 2010-06-15 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Uses of monoclonal antibody 8H9
CA2423843A1 (en) 2000-10-18 2002-04-25 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Uses of monoclonal antibody 8h9
EP2357187A1 (en) 2000-12-12 2011-08-17 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
JP4229704B2 (ja) 2001-04-18 2009-02-25 ダイアックス、コープ Ｆｃ領域ポリペプチドの結合分子
DE60230736D1 (de) 2001-04-30 2009-02-26 Lilly Co Eli HUMANISIERTE ANTIKÖRPER DIE DAS BETA-AMYLOID PEPTID ERKENNEN& x9;
US6972324B2 (en) 2001-05-18 2005-12-06 Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals, Inc. Antibodies specific for CD44v6
US6441163B1 (en) 2001-05-31 2002-08-27 Immunogen, Inc. Methods for preparation of cytotoxic conjugates of maytansinoids and cell binding agents
US6833441B2 (en) 2001-08-01 2004-12-21 Abmaxis, Inc. Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers
WO2003024191A2 (en) 2001-09-21 2003-03-27 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies that bind to cancer-associated antigen cytokeratin 8 and methods of use thereof
EP1439857B1 (en) 2001-10-12 2009-02-25 Schering Corporation USE OF BISPECIFIC ANTIBODIES BINDING TO THE ACTIVATING RECEPTOR FcEpsilonRI AND TO THE INHIBITING RECEPTOR OX2Ra (CD200Ra) TO REGULATE IMMUNE RESPONSES
US7148038B2 (en) 2001-10-16 2006-12-12 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies that bind to cancer-associated antigen CD46 and methods of use thereof
CN1250920C (zh) * 2001-10-17 2006-04-12 罗伯特·福尔克 推拉门装置
BR0213761A (pt) 2001-10-25 2005-04-12 Genentech Inc Composições, preparação farmacêutica, artigo industrializado, método de tratamento de mamìferos, célula hospedeira, método para a produção de uma glicoproteìna e uso da composição
AU2002359851A1 (en) 2001-12-21 2003-07-30 Idexx Laboratories, Inc. Canine immunoglobulin variable domains, caninized antibodies, and methods for making and using them
AU2003206264A1 (en) 2002-02-07 2003-09-02 Vereniging Voor Christelijk Wetenschappelijk Onderwijs MODULATING TOLERANCE BY MODULATING FcGammaRIIB RECEPTOR SIGNALLING
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US8188231B2 (en) 2002-09-27 2012-05-29 Xencor, Inc. Optimized FC variants
WO2003074679A2 (en) 2002-03-01 2003-09-12 Xencor Antibody optimization
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
JP2006506323A (ja) 2002-04-12 2006-02-23 レイヴェン バイオテクノロジーズ， インコーポレイテッド インテグリンα−ｖ−β−６に結合する抗体およびその使用方法
EP1354600A1 (en) 2002-04-19 2003-10-22 Affimed Therapeutics AG Antibody combination useful for tumor therapy
WO2003093443A2 (en) 2002-05-03 2003-11-13 Raven Biotechnologies, Inc. Alcam and alcam modulators
EP1519956B1 (en) 2002-05-10 2011-09-21 Medimmune, Inc. Epha2 monoclonal antibodies and methods of use thereof
US6596757B1 (en) 2002-05-14 2003-07-22 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising polyethylene glycol-containing taxanes and their therapeutic use
US7351803B2 (en) 2002-05-30 2008-04-01 Macrogenics, Inc. CD16A binding proteins and use for the treatment of immune disorders
EP1565489B1 (en) * 2002-06-19 2010-11-17 Raven Biotechnologies, Inc. Internalizing antibodies specific for the RAAG10 cell surface target
KR101115797B1 (ko) 2002-08-01 2012-07-27 이뮤노메딕스, 인코오포레이티드 알파 태아 단백질 Ｉｍｍｕ31 항체 및 융합단백질, 및이들의 이용 방법
US8946387B2 (en) 2002-08-14 2015-02-03 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8530627B2 (en) 2002-08-14 2013-09-10 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8187593B2 (en) 2002-08-14 2012-05-29 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US20090017023A1 (en) 2002-08-14 2009-01-15 Macrogenics, Inc. FcGammaRIIB Specific Antibodies and Methods of Use Thereof
US8044180B2 (en) 2002-08-14 2011-10-25 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8968730B2 (en) 2002-08-14 2015-03-03 Macrogenics Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
US8193318B2 (en) 2002-08-14 2012-06-05 Macrogenics, Inc. FcγRIIB specific antibodies and methods of use thereof
ATE536188T1 (de) 2002-08-14 2011-12-15 Macrogenics Inc Fcgammariib-spezifische antikörper und verfahren zur verwendung davon
WO2004029207A2 (en) 2002-09-27 2004-04-08 Xencor Inc. Optimized fc variants and methods for their generation
JP2004126818A (ja) 2002-09-30 2004-04-22 Toshiba Corp 電子機器システム、電池ユニットおよび電池ユニットの動作制御方法
US20050058661A1 (en) 2002-10-18 2005-03-17 Sykes Kathryn F. Methods and compositions for vaccination comprising nucleic acid and/or polypeptide sequences of the genus Borrelia
EP1581096A4 (en) 2002-11-13 2006-06-21 Raven Biotechnologies Inc ANTIGEN PIPA AND BINDING ANTIBODIES THEREOF
US7960512B2 (en) 2003-01-09 2011-06-14 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
US7355008B2 (en) 2003-01-09 2008-04-08 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
EP2052713A3 (en) 2003-01-13 2009-05-20 Macrogenics, Inc. Soluble FcgammaR fusion proteins and methods of use thereof
DE10303664A1 (de) 2003-01-23 2004-08-12 Nemod Immuntherapie Ag Erkennungsmoleküle zur Behandlung und Detektion von Tumoren
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
US20050002935A1 (en) 2003-04-17 2005-01-06 Vincent Ling Use of B7-H3 as an immunoregulatory agent
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
AR044388A1 (es) 2003-05-20 2005-09-07 Applied Molecular Evolution Moleculas de union a cd20
WO2005018669A1 (en) 2003-08-18 2005-03-03 Macrogenics, Inc. Fcϝriib-specific antibodies and methods of use thereof
KR20060079236A (ko) 2003-09-18 2006-07-05 레이븐 바이오테크놀로지스, 인코퍼레이티드 Ｋｉｄ3 및 그것과 결합하는 ｋｉｄ3 항체
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
KR101149242B1 (ko) 2004-01-12 2012-05-25 어플라이드 몰리큘라 에볼류션, 인코포레이티드 Ｆｃ 영역 변이체
MXPA06011425A (es) 2004-03-31 2007-03-12 Johnson & Johnson Memiticuerpos de peptido-1 similar a glucagon de humano, composiciones, metodos y usos.
WO2005115452A2 (en) 2004-04-16 2005-12-08 Macrogenics, Inc. Fcϝriib-specific antibodies and methods of use thereof
EP1761563A4 (en) 2004-05-10 2008-05-14 Macrogenics Inc HUMANIZED gamma RIIB SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE
CA2569692C (en) 2004-06-07 2015-07-21 Raven Biotechnologies, Inc. Transferrin receptor antibodies
BRPI0512235A (pt) 2004-06-18 2008-02-19 Ambrx Inc polipeptìdeos ligadores de antìgenos e seus usos
KR20180091967A (ko) 2004-07-22 2018-08-16 제넨테크, 인크. Ｈｅｒ２ 항체 조성물
ES2534288T3 (es) * 2004-08-03 2015-04-21 Innate Pharma Composiciones terapéuticas contra el cáncer que seleccionan como objetivo 4Ig-B7-H3
EP1776384B1 (en) 2004-08-04 2013-06-05 Mentrik Biotech, LLC Variant fc regions
ZA200701783B (en) 2004-09-02 2009-10-28 Genentech Inc Anti-Fc-gamma RIIB receptor antibody and uses therefor
US7655229B2 (en) 2004-09-02 2010-02-02 Chan Andrew C Anti-FC-gamma RIIB receptor antibody and uses therefor
US7662926B2 (en) 2004-09-02 2010-02-16 Genentech, Inc. Anti-Fc-gamma receptor antibodies, bispecific variants and uses therefor
CA2587766A1 (en) 2004-11-10 2007-03-01 Macrogenics, Inc. Engineering fc antibody regions to confer effector function
EP2845865A1 (en) 2004-11-12 2015-03-11 Xencor Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
WO2006066078A2 (en) 2004-12-15 2006-06-22 Magrogenics, Inc. Fcϝriib-specific antibodies and methods of use thereof
WO2006076584A2 (en) 2005-01-12 2006-07-20 Raven Biotechnologies, Inc. Kid31 and antibodies that bind thereto
CA2596115A1 (en) 2005-01-31 2006-08-10 Raven Biotechnologies, Inc. Luca2 and antibodies that bind thereto
US20060171952A1 (en) 2005-02-02 2006-08-03 Mather Jennie P JAM-3 and antibodies that bind thereto
NZ556561A (en) 2005-02-02 2011-08-26 Macrogenics West Inc Adam-9 modulators
US7572896B2 (en) 2005-02-03 2009-08-11 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies to oncostatin M receptor
CA2597198C (en) 2005-02-04 2016-06-21 Raven Biotechnologies, Inc. Antibodies that bind to epha2 and methods of use thereof
US20060193849A1 (en) 2005-02-25 2006-08-31 Antisoma Plc Biological materials and uses thereof
WO2006110593A2 (en) 2005-04-07 2006-10-19 Macrogenics, Inc. Biological targets for the diagnosis, treatment and prevention of cancer
US9284375B2 (en) 2005-04-15 2016-03-15 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
ES2707152T3 (es) 2005-04-15 2019-04-02 Macrogenics Inc Diacuerpos covalentes y usos de los mismos
US9963510B2 (en) 2005-04-15 2018-05-08 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
JP2006345852A (ja) * 2005-06-16 2006-12-28 Virxsys Corp 抗体複合体
SG163615A1 (en) 2005-07-11 2010-08-30 Macrogenics Inc Methods for the treatment of autoimmune disorders using immunosuppressive monoclonal antibodies with reduced toxicity
BRPI0612814A2 (pt) 2005-07-11 2017-06-20 Macrogenics Inc anticorpo, métodos para redução e para tratamento de uma resposta imune prejudicial em um mamífero, proteína de ligação ao cd16a, e, método para redução dos efeitos colaterais de primeira dose em um paciente
EP2573114B1 (en) * 2005-08-10 2016-03-30 MacroGenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
AU2006312148B2 (en) 2005-11-07 2012-04-12 The Rockefeller University Reagents, methods and systems for selecting a cytotoxic antibody or variant thereof
FR2894982A1 (fr) 2005-12-16 2007-06-22 Lab Francais Du Fractionnement Procede de preparation d'anticorps selectifs des recepteurs fc activateurs
JP2009529331A (ja) 2006-03-10 2009-08-20 マクロジェニクス，インコーポレーテッド 変異型重鎖を有する抗体の同定および工学的改変ならびにその使用方法
WO2007117600A2 (en) 2006-04-07 2007-10-18 Macrogenics, Inc. Combination therapy for treating autoimmune diseases
WO2008105886A2 (en) 2006-05-26 2008-09-04 Macrogenics, Inc. HUMANIZED FCγRIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
MX2008015524A (es) * 2006-06-12 2009-01-13 Trubion Pharmaceuticals Inc Proteinas de union multivalentes monocatenarias con funcion efectora.
MX2008015771A (es) 2006-06-14 2009-01-27 Macrogenics Inc Metodos para el tratamiento de padecimientos autoinmunes usando anticuerpos monoclonales con toxicidad reducida.
CA2656224C (en) 2006-06-26 2018-01-09 Macrogenics, Inc. Combination of fc.gamma.riib antibodies and cd20-specific antibodies and methods of use thereof
WO2008019199A2 (en) 2006-06-26 2008-02-14 Macrogenics, Inc. FCγRIIB-SPECIFIC ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF
BRPI0712953B8 (pt) 2006-06-30 2021-05-25 Novo Nordisk As anticorpos anti-nkg2a, seu uso, e composição farmacêutica
US20080112961A1 (en) 2006-10-09 2008-05-15 Macrogenics, Inc. Identification and Engineering of Antibodies with Variant Fc Regions and Methods of Using Same
US7718774B2 (en) 2006-11-08 2010-05-18 Macrogenics, Inc. TES7 and antibodies that bind thereto
US7992748B2 (en) 2006-11-17 2011-08-09 North Safety Products, Inc. Earplug dispenser
US8652466B2 (en) 2006-12-08 2014-02-18 Macrogenics, Inc. Methods for the treatment of disease using immunoglobulins having Fc regions with altered affinities for FcγRactivating and FcγRinhibiting
EP2094302A4 (en) 2006-12-21 2010-12-08 Macrogenics Inc METHODS FOR THE TREATMENT OF LADA-LIKE DIABETES AND OTHER AUTOIMMUNE DIABETES OF THE ADULT USING IMMUNOSUPPRESSANT MONOCLONAL ANTIBODIES HAVING REDUCED TOXICITY
EP2109668A4 (en) 2007-01-22 2011-10-05 Macrogenics West Inc HUMAN CANCER STEM CELLS
WO2008116219A2 (en) 2007-03-22 2008-09-25 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Uses of monoclonal antibody 8h9
FR2916763B1 (fr) 2007-05-31 2013-11-15 Biomerieux Sa Nouveaux substrats de peptidase
EP2158221B1 (en) * 2007-06-21 2018-08-29 MacroGenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
EP2178914A2 (en) 2007-08-15 2010-04-28 Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft Monospecific and multispecific antibodies and method of use
BRPI0818963A2 (pt) 2007-11-30 2015-05-05 Bristol Myers Squibb Co Conjugado anticorpo-molécula parceira e método para tratar câncer em um indivíduo
EP2234641B1 (en) 2008-01-03 2015-08-19 Genmab A/S Monoclonal antibodies against cd32b
EP2247304B1 (en) 2008-04-02 2016-05-25 MacroGenics, Inc. Her2/neu-specific antibodies and methods of using same
KR101614494B1 (ko) 2008-04-02 2016-04-22 마크로제닉스, 인크. Ｂｃｒ-복합체-특이적 항체 및 그것의 사용 방법
US20090262732A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 Barry Wood Data Communications Network
EP2282770B1 (en) 2008-06-04 2018-03-07 MacroGenics, Inc. Antibodies with altered binding to fcrn and methods of using same
JP2012501178A (ja) 2008-08-26 2012-01-19 マクロジェニクス，インコーポレーテッド Ｔ細胞受容体抗体およびその使用方法
HUE043084T2 (hu) * 2008-12-19 2019-08-28 Macrogenics Inc Kovalens diatestek és alkalmazásaik
EP2399130A4 (en) * 2009-02-20 2012-06-06 Wayne John Cancer Inst ASSAY OF B7-H3 ANTIBODY-COUPLED BEADS FOR THE ISOLATION AND DETECTION OF CIRCULATING TUMOR CELLS IN THE BODILY FLUIDS OF MELANOMA AND BREAST CANCER PATIENTS
ES2672121T3 (es) 2009-10-07 2018-06-12 Macrogenics, Inc. Polipéptidos que contienen región Fc que presentan una función efectora mejorada debido a alteraciones del grado de fucosilación, y métodos para su uso
LT2542256T (lt) * 2010-03-04 2019-10-25 Macrogenics Inc Su b7-h3 reaguojantys antikūnai, jų imunologiškai aktyvūs fragmentai ir jų naudojimas
US8802091B2 (en) * 2010-03-04 2014-08-12 Macrogenics, Inc. Antibodies reactive with B7-H3 and uses thereof
SG187682A1 (en) 2010-08-02 2013-03-28 Macrogenics Inc Covalent diabodies and uses thereof
US9487587B2 (en) * 2013-03-05 2016-11-08 Macrogenics, Inc. Bispecific molecules that are immunoreactive with immune effector cells of a companion animal that express an activating receptor and cells that express B7-H3 and uses thereof
KR102060540B1 (ko) * 2013-04-03 2019-12-31 삼성전자주식회사 항 c-Met 항체 및 항 Ang2 항체를 포함하는 병용 투여용 약학 조성물
CN106604740A (zh) * 2014-02-14 2017-04-26 宏观基因有限公司 用于治疗血管化癌症的改进的方法
US11392902B2 (en) 2017-06-06 2022-07-19 United Parcel Service Of America, Inc. Systems, methods, apparatuses and computer program products for providing notification of items for pickup and delivery

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030185827A1 (en) * 1994-04-29 2003-10-02 Mayo Foundation Human IgM antibodies, and diagnostic and therapeutic uses thereof particularly in the central nervous system
US20030103976A1 (en) * 1997-04-01 2003-06-05 Sankyo Company, Limited Anti-fas antibodies
US20020127227A1 (en) * 1998-11-19 2002-09-12 Smithkline Beecham Corporation RHAMM antagonist antibodies
US20090087416A1 (en) * 2000-07-27 2009-04-02 Mayo Foundation For Medical Education And Research B7-h3 and b7-h4, novel immunoregulatory molecules
US20090252732A1 (en) * 2005-05-06 2009-10-08 Siadak Anthony W Variable region sequences of il-31 monoclonal antibodies and methods of use
US20080177045A1 (en) * 2006-12-08 2008-07-24 E-Chiang Lee Monoclonal antibodies against ANGPTL3

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHEN et al. Cloning and Characterization of Porcine 4lg-B7-H3: A Potent Inhibitor of Porcine T-Cell Activation. PLoS One. Epub 27 June 2011, 6(6):e21341; pg 3, Fig 1B and its legend *
SUN et al. B7-H3 and B7-H4 expression in non-small-cell lung cancer. Lung cancer 2006, 53(2):143-51; pg 149, left col, para 1 *
ZHANG et al. B7-H3: Another Molecule Marker for Mo-DCs? Cellular & Molecular Immunology 2005, 2(4):307-311 *

Also Published As

Publication number Publication date
US9150656B2 (en) 2015-10-06
NZ602161A (en) 2014-12-24
LT2542256T (lt) 2019-10-25
TW201410255A (zh) 2014-03-16
MA34062B1 (fr) 2013-03-05
US20130149236A1 (en) 2013-06-13
EA201270734A1 (ru) 2013-04-30
RS59269B1 (sr) 2019-10-31
JP5998060B2 (ja) 2016-09-28
HUE045487T2 (hu) 2019-12-30
AU2011223782A1 (en) 2012-09-20
TWI551296B (zh) 2016-10-01
TWI646110B (zh) 2019-01-01
CO6630123A2 (es) 2013-03-01
GEP201706660B (en) 2017-04-25
CR20120450A (es) 2012-12-27
TWI551611B (zh) 2016-10-01
US10683364B2 (en) 2020-06-16
GEP20166442B (en) 2016-03-10
JO3538B1 (ar) 2020-07-05
ES2742351T3 (es) 2020-02-14
BR122016002916B8 (pt) 2021-05-25
SA114350709B1 (ar) 2015-08-31
SG10201604336VA (en) 2016-07-28
US20170362333A1 (en) 2017-12-21
BR112012022210B1 (pt) 2021-08-17
CL2012002433A1 (es) 2013-03-22
TW201708258A (zh) 2017-03-01
CL2016000284A1 (es) 2016-09-02
TW201130514A (en) 2011-09-16
NZ701539A (en) 2015-04-24
PH12018501083A1 (en) 2019-02-18
US20150259434A1 (en) 2015-09-17
BR122016002916B1 (pt) 2021-05-11
CN106279416A (zh) 2017-01-04
BR122016002916A2 (pt) 2019-05-28
WO2011109400A2 (en) 2011-09-09
CN106279416B (zh) 2019-08-30
CA2791658A1 (en) 2011-09-09
NZ705128A (en) 2015-04-24
CL2018002383A1 (es) 2018-12-07
TW201439120A (zh) 2014-10-16
CL2018002380A1 (es) 2018-12-07
EP2542256A4 (en) 2014-02-12
KR20130010117A (ko) 2013-01-25
CN102892426A (zh) 2013-01-23
ZA201206556B (en) 2013-05-29
ES2895480T3 (es) 2022-02-21
AU2011223782B2 (en) 2014-09-18
ECSP12012139A (es) 2012-12-28
HK1221154A1 (zh) 2017-05-26
EP2542256B1 (en) 2019-05-22
JP2017035086A (ja) 2017-02-16
US9714295B2 (en) 2017-07-25
EP2982380B1 (en) 2021-09-01
HRP20191483T1 (hr) 2019-11-15
US9714296B2 (en) 2017-07-25
JP2013520994A (ja) 2013-06-10
EP2542256A2 (en) 2013-01-09
TWI645858B (zh) 2019-01-01
JP6294414B2 (ja) 2018-03-14
DK2542256T3 (da) 2019-08-26
US20200377612A1 (en) 2020-12-03
TWI639441B (zh) 2018-11-01
EP2982380A1 (en) 2016-02-10
TW201617096A (zh) 2016-05-16
BR112012022210A2 (pt) 2017-09-05
CA2791658C (en) 2019-10-01
WO2011109400A3 (en) 2011-11-24
MY156358A (en) 2016-02-15
TN2012000437A1 (en) 2014-01-30
TW201707724A (zh) 2017-03-01
SI2542256T1 (sl) 2019-11-29
ME03447B (me) 2020-01-20
IL221767B (en) 2018-12-31
SG183847A1 (en) 2012-10-30
MX345232B (es) 2017-01-20
PL2542256T3 (pl) 2020-01-31
CN102892426B (zh) 2016-08-31
CY1121913T1 (el) 2020-10-14
HN2012001846A (es) 2015-05-04
TWI645857B (zh) 2019-01-01
PT2542256T (pt) 2019-09-05
PE20170779A1 (es) 2017-07-04
PE20130479A1 (es) 2013-05-12
US20150274838A1 (en) 2015-10-01
MX2012010201A (es) 2013-04-03
KR101828570B1 (ko) 2018-02-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA030226B1 (ru) Антитела, реактивные к b7-h3, их иммунологически активные фрагменты и их применения
CA2884704C (en) Vista modulators for diagnosis and treatment of cancer
EP3193933B1 (en) Anti-cd276 antibodies (b7h3)
CN101854946B (zh) 结肠癌和胰腺癌的重组单克隆抗体和相应抗原
JP5328155B2 (ja) Ａｄａｍ−９モジュレータ
JP2019110906A (ja) Ｒｏｒ１癌の治療および転移の阻害に使用するための抗体およびワクチン
KR101854443B1 (ko) 항-her2 항체 및 이의 접합체
KR20190008171A (ko) 항-bcma 폴리펩티드 및 단백질
US20040048319A1 (en) ALCAM and ALCAM modulators
JP4621674B2 (ja) Ｋｉｄ３およびｋｉｄ３に結合するｋｉｄ３抗体
CA2669731A1 (en) Anti-human dlk-1 antibody showing anti-tumor activity in vivo
JP2009528257A (ja) 抗ｃｄｈ３抗体のエフェクター機能を用いて細胞を障害する方法
EA030182B1 (ru) Антитела, специфические для кадгерина-17
US20230330253A1 (en) Antibody-drug conjugates targeting claudin 18.2
US20220073638A1 (en) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancers resistant to immune checkpoint therapy
JP6159010B2 (ja) テトラスパニン８に対するハイブリドーマクローンおよびモノクローナル抗体
US20190060480A1 (en) Anti-tmem-180 antibody, anticancer drug and cancer testing method
CN110300761B (zh) 抗pcna单克隆抗体及其用途
WO2021234006A1 (en) Compositions and methods for treating cancer expressing cd90 and cd326
KR20230009459A (ko) 인간 ceacam1/3/5에 특이적으로 결합하는 신규 항체 및 그의 용도
CN115322257B (zh) Bcma靶向抗体、嵌合抗原受体及其应用