JP2023532339A - サノトランスミッションを促進するためにエンジニアリングされたウイルス及び癌の処置におけるそれらの使用 - Google Patents

サノトランスミッションを促進するためにエンジニアリングされたウイルス及び癌の処置におけるそれらの使用 Download PDF

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シュミット，ダービー，ライ
ナガラジャン，ニランジャナ，アディティ
カイザー，ウィリアム，ジョセフ
ゴフ，ピーター，ジョセフ
ダカル，サビン
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フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド
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Abstract

特定の態様では、本開示は、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むようにエンジニアリングされたウイルスに関する。サノトランスミッションは、細胞間の、応答細胞に生物学的応答を起こすようシグナル伝達する、標的細胞における細胞ターンオーバー経路の活性化の結果である、コミュニケーションである。標的細胞によるサノトランスミッションを促進するための方法、対象において免疫応答を促進するための方法、及び対象において癌を処置するための方法もまた、開示される。【選択図】なし

Description

関連出願
本出願は、それぞれの内容全体が参照によって本明細書に明確に組み込まれる、２０２０年６月２９日に出願された米国仮特許出願第６３／０４５，６１０号及び２０２１年３月３１日に出願された米国仮特許出願第６３／１６９，１６６号に対して優先権を主張する。
後生動物において、プログラム細胞死は、組織恒常性を維持し、有害な可能性のある細胞を排除する、遺伝的にプログラムされた不可欠なプロセスである。
サノトランスミッション（ｔｈａｎｏｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）は、細胞間の、例えば、標的シグナル伝達細胞と応答細胞との間の、応答細胞に生物学的応答を起こすようシグナル伝達する、標的細胞における細胞ターンオーバー経路の活性化の結果である、コミュニケーションのプロセスである。サノトランスミッションは、例えば、本明細書において記載されるエンジニアリングされたウイルスと標的細胞を接触させることを通しての細胞ターンオーバー経路遺伝子の調整によって、標的細胞において誘導されてもよい。細胞ターンオーバー経路が活性化された標的細胞は、標的細胞によって能動的に放出された因子を通して又は標的細胞のターンオーバー（例えば、細胞死）の間に応答細胞に曝露されるようになる、標的細胞の細胞内因子を通して、応答細胞にシグナル伝達してもよい。
特定の態様では、本開示は、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むようにエンジニアリングされたウイルスに関する。一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、ウイルスに対して異種のものである。一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、標的細胞に対して異種のものである。一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、サノトランスミッションポリペプチドの標的細胞における発現又は活性を増加させることによって、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する。一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、サノトランスミッションポリペプチドをコードする。一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、サノトランスミッションを抑制するポリペプチドの標的細胞における発現又は活性を低下させることによって、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する。一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、サノトランスミッションを抑制するポリペプチドの標的細胞における発現又は活性を低下させるＲＮＡ分子をコードする。一実施形態では、標的細胞におけるポリヌクレオチドの少なくとも１つの発現は、標的細胞における細胞ターンオーバー経路を変化させる。一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、野生型タンパク質をコードする。
一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、デスフォールドドメインをコードする。一実施形態では、デスフォールドドメインは、デスドメイン、パイリンドメイン、デスエフェクタードメイン（ＤＥＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）、及びその変異体からなる群から選択される。一実施形態では、デスドメインは、Ｆａｓ結合デスドメインタンパク質（ＦＡＤＤ）、Ｆａｓ、腫瘍壊死因子受容体１型関連デスドメイン（ＴＲＡＤＤ）、腫瘍壊死因子受容体１型（ＴＮＦＲ１）、及びその変異体からなる群から選択されるタンパク質に由来する。一実施形態では、パイリンドメインは、ＮＬＲファミリーパイリン領域含有３（ＮＬＲＰ３）及びアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）からなる群から選択されるタンパク質に由来する。一実施形態では、デスエフェクタードメイン（ＤＥＤ）は、Ｆａｓ結合デスドメインタンパク質（ＦＡＤＤ）、カスパーゼ－８、及びカスパーゼ－１０からなる群から選択されるタンパク質に由来する。
一実施形態では、ＣＡＲＤは、ＲＩＰ関連ＩＣＨ１／ＣＥＤ３－相同タンパク質（ＲＡＩＤＤ）、アポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、ミトコンドリア抗ウイルスシグナル伝達タンパク質（ＭＡＶＳ）、カスパーゼ－１、及びその変異体からなる群から選択されるタンパク質に由来する。一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメインをコードする。一実施形態では、ＴＩＲドメインは、ミエロイド分化一次応答タンパク質８８（ＭｙＤ８８）、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメイン含有アダプター誘導インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）、ＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質（ＴＩＲＡＰ）、及び転鎖関連膜タンパク質（ＴＲＡＭ）からなる群から選択されるタンパク質に由来する。
一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、ＴＩＲドメインを含むタンパク質をコードする。一実施形態では、ＴＩＲドメインを含むタンパク質は、ミエロイド分化一次応答タンパク質８８（ＭｙＤ８８）、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメイン含有アダプター誘導インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）、ＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質（ＴＩＲＡＰ）、及び転鎖関連膜タンパク質（ＴＲＡＭ）からなる群から選択される。
一実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドは、任意の１つ又は複数の受容体相互作用セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ３（ＲＩＰＫ３）、Ｚ－ＤＮＡ結合タンパク質１（ＺＢＰ１）、混合系統キナーゼドメイン様偽キナーゼ（ＭＬＫＬ）、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメイン含有アダプター誘導インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）、ＴＩＲドメイン及びＲＨＩＭドメインのみを含むＴＲＩＦのＮ末端切断型、インターフェロン調節因子３（ＩＲＦ３）、Ｆａｓ結合デスドメインタンパク質（ＦＡＤＤ）、切断ＦＡＤＤ、腫瘍壊死因子受容体１型関連デスドメイン（ＴＲＡＤＤ）、及び細胞性ＦＬＩＣＥ（ＦＡＤＤ様ＩＬ－１β変換酵素）抑制タンパク質（ｃ－ＦＬＩＰ）をコードする。
一実施形態では、ＺＢＰ１をコードするポリヌクレオチドは、受容体相互作用タンパク質ホモタイプ相互作用モチーフ（ＲＨＩＭ）Ｃの欠失、ＲＨＩＭ Ｄの欠失、及びＺα１ドメインのＮ末端の欠失を含む。一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、受容体相互作用セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ１（ＲＩＰＫ１）の発現又は活性を阻害する。
一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、膜融合タンパク質をコードする。一実施形態では、膜融合タンパク質は、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）由来の糖タンパク質であり、Ｒ膜貫通ペプチドが変異している又は除去されている（ＧＡＬＶ－Ｒ－）。一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、免疫刺激タンパク質をコードする。一実施形態では、免疫刺激タンパク質は、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）のアンタゴニスト、コロニー刺激因子、サイトカイン、又は免疫チェックポイントモジュレーターである。一実施形態では、コロニー刺激因子は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）である。一実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦをコードするポリヌクレオチドは、ウイルスのＩＣＰ３４．５遺伝子座に挿入される。一実施形態では、サイトカインは、インターロイキンである。一実施形態では、インターロイキンは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２４、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、及びＩＬ－３６γからなる群から選択される。一実施形態では、サイトカインは、Ｉ型インターフェロン、インターフェロンガンマ、ＩＩＩ型インターフェロン、及びＴＮＦアルファからなる群から選択される。
一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抑制性免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである。一実施形態では、抑制性免疫チェックポイントタンパク質は、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ３、Ｔｉｍ３、ＢＴＬＡ、及びＣＴＬＡ４からなる群から選択される。一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストである。一実施形態では、刺激性免疫チェックポイントタンパク質は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、及び４－１ＢＢからなる群から選択される。一実施形態では、刺激性免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストは、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＩＣＯＳリガンド、ＧＩＴＲリガンド、４－１－ＢＢリガンド、０Ｘ４０リガンド、及びそのいずれかの修飾バージョンから選択される。一実施形態では、刺激性免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストは、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、４－１－ＢＢ、及び０Ｘ４０から選択されるタンパク質の抗体アゴニストである。一実施形態では、免疫刺激タンパク質は、ｆｌｔ３リガンド又はｆｌｔ３の抗体アゴニストである。
一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、自殺遺伝子である。一実施形態では、自殺遺伝子は、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）－ＦＡＳ、ＦＫＢＰ－カスパーゼ－８、ＦＫＢＰ－カスパーゼ－９、シトシンデアミナーゼ（ＣＤａｓｅ）活性を有するポリペプチド、チミジンキナーゼ活性を有するポリペプチド、ウラシルホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＵＰＲＴａｓｅ）活性を有するポリペプチド、及びプリンヌクレオシドホスホリラーゼ活性を有するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドをコードする。一実施形態では、ＣＤａｓｅ活性を有するポリペプチドは、ＦＣＹ１、ＦＣＡ１、又はＣｏｄＡである。一実施形態では、ＵＰＲＴａｓｅ活性を有するポリペプチドは、ＦＵＲ１又はその変異体である。一実施形態では、ＦＵＲ１の変異体は、ＦＵＲ１Δ１０５である。一実施形態では、自殺遺伝子は、ＣＤａｓｅ及びＵＰＲＴａｓｅ活性を有するキメラタンパク質をコードする。一実施形態では、キメラタンパク質は、ｃｏｄＡ：：ｕｐｐ、ＦＣＹ１：：ＦＵＲ１、ＦＣＹｌ：：ＦＵＲ１Δ１０５（ＦＣＵ１）、及びＦＣＵ１－８ポリペプチドからなる群から選択される。
一実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、ガスダーミン－Ａ（ＧＳＤＭ－Ａ）、ガスダーミン－Ｂ（ＧＳＤＭ－Ｂ）、ガスダーミン－Ｃ（ＧＳＤＭ－Ｃ）、ガスダーミン－Ｄ（ＧＳＤＭ－Ｄ）、ガスダーミン－Ｅ（ＧＳＤＭ－Ｅ）、二量体化ドメインを有するアポトーシス関連スペック様タンパク質含有Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＡＳＣ－ＣＡＲＤ）、及びその突然変異体からなる群から選択されるポリペプチドをコードする。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドは、２つ以上の異なるサノトランスミッションポリペプチドをコードし、２つ以上のサノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、Ｓｈａｒｐｉｎ、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、その変異体、及びその機能的断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、少なくとも２つのサノトランスミッションポリペプチドを含むキメラタンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、２つ以上の異なるサノトランスミッションポリペプチドをコードする単一の転写物として転写される。
いくつかの実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、ＮＦ－ｋＢを活性化する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、外因性アポトーシスを促進する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、プログラム壊死を促進する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のサノトランスミッションポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、外因性アポトーシスを促進する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死を促進する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、外因性アポトーシスを促進する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のサノトランスミッションポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死を促進する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、外因性アポトーシスを促進し、１つ又は複数のサノトランスミッションポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死を促進する。いくつかの実施形態では、プログラム壊死は、ネクロトーシスを含む。いくつかの実施形態では、プログラム壊死は、ピロトーシスを含む。
いくつかの実施形態では、ＮＦ－ｋＢを活性化するサノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、Ｓｈａｒｐｉｎ、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＮＦＳＦタンパク質、及びその機能的断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化するサノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＭｙＤ８８、ＭＡＶＳ、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、及びその機能的断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、外因性アポトーシスを促進するサノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ１、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、及びその機能的断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、プログラム壊死を促進するサノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミン、及びその機能的断片からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片を含む。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含む。いくつかの実施形態では、１つ又は複数のサノトランスミッションポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片を含み、１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含む。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片を含み、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含む。
いくつかの実施形態では、１つ又は複数のポリヌクレオチドは、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをさらにコードする。いくつかの実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ＦＡＤＤドミナントネガティブ突然変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）、ｃＦＬＩＰ、ｖＩＣＡ、カスパーゼ８ドミナントネガティブ突然変異体（Ｃａｓｐ８－ＤＮ）、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、Ｔａｋ１、ＩＫＫ、及びその機能的断片からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ＦＡＤＤ－ＤＮである。いくつかの実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ｃＦＬＩＰである。いくつかの実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ｖＩＣＡである。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、少なくとも１つのガスダーミン又はその機能的断片をコードする。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片を含み、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含み、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその機能的断片を含む。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片を含み、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含み、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその機能的断片を含む。いくつかの実施形態では、ガスダーミンは、ガスダーミンＥ又はその機能的断片である。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、二量体化ドメインをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドをさらに含む。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、二量体化ドメインをさらに含む融合タンパク質内に含まれる。いくつかの実施形態では、二量体化ドメインは、サノトランスミッションポリペプチドに対して異種のものである。
特定の態様では、本開示は、本明細書において開示される１つ又は複数のウイルス及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。特定の態様では、本開示は、１つ又は複数のサノトランスミッションポリヌクレオチドを対象に送達するための方法であって、医薬組成物を対象に投与することを含む方法に関する。特定の態様では、本開示は、対象においてサノトランスミッションを促進するための方法であって、サノトランスミッションを促進するのに十分な量で及び時間、医薬組成物を対象に投与することを含む方法に関する。特定の態様では、本開示は、免疫応答の増加をそれを必要とする対象において行うための方法であって、対象において免疫応答を増加させるのに十分な量で及び時間、医薬組成物を対象に投与することを含む方法に関する。特定の態様では、本開示は、癌の処置をそれを必要とする対象において行うための方法であって、癌を処置するのに十分な量で及び時間、医薬組成物を対象に投与することを含む方法に関する。
一実施形態では、医薬組成物を対象に投与することは、対象において癌細胞の増殖を低下させる。一実施形態では、癌細胞の増殖は、対象に投与された癌の治療法に起因する癌細胞の過剰増殖である。一実施形態では、医薬組成物を対象に投与することは、対象において癌細胞の転移を低下させる。一実施形態では、医薬組成物を対象に投与することは、対象において腫瘍の血管新生を低下させる。一実施形態では、癌を処置することは、任意の１つ又は複数の腫瘍量の減少、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の阻害、処置前の進行性癌を有する対象における癌の安定化の達成、癌が進行するまでの時間の延長、及び生存期間の延長を含む。
一実施形態では、医薬組成物は、対象に静脈内投与される。一実施形態では、医薬組成物は、対象に腫瘍内投与される。一実施形態では、対象は、以前に、免疫療法により処置された。一実施形態では、癌は、免疫療法に応答しない。一実施形態では、癌は、免疫療法に応答する癌である。一実施形態では、対象への医薬組成物の投与は、免疫療法を投与するが、ウイルスを投与しない対象と比較して、免疫療法に対する癌の応答を改善する。一実施形態では、免疫療法は、免疫チェックポイント療法である。一実施形態では、免疫チェックポイント療法は、免疫チェックポイント阻害剤療法である。
一実施形態では、癌は、癌腫、肉腫、リンパ腫、黒色腫、及び白血病から選択される。一実施形態では、癌は、固形腫瘍である。一実施形態では、癌は、黒色腫、子宮頸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、尿路上皮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肉腫、結腸直腸腺癌、消化管間質腫瘍、胃食道癌、結腸直腸癌膵臓癌、腎臓癌、肝細胞がん、悪性中皮腫、白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、移行上皮癌、神経芽細胞腫、形質細胞腫瘍、ウィルムス腫瘍、及び肝細胞癌からなる群から選択される。一実施形態では、癌は、結腸癌である。
一実施形態では、方法は、抗腫瘍剤を対象に投与することをさらに含む。一実施形態では、抗腫瘍剤は、化学療法剤である。一実施形態では、抗腫瘍剤は、生物学的製剤である。一実施形態では、生物学的製剤は、抗原結合タンパク質である。一実施形態では、抗腫瘍剤は、免疫療法剤である。一実施形態では、免疫療法剤は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベースの治療法、サイトカイン、癌ワクチン、及び免疫チェックポイント分子の免疫チェックポイントモジュレーターからなる群から選択される。一実施形態では、ＴＬＲアゴニストは、コーリーの毒及びウシ型弱毒結核菌ワクチン（ＢＣＧ）から選択される。一実施形態では、細胞ベースの治療法は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）療法である。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡから選択される。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、刺激性免疫チェックポイント分子であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、抑制性免疫チェックポイント分子であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストである。一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、小分子、阻害性ＲＮＡ、アンチセンス分子、及び免疫チェックポイント分子結合タンパク質から選択される。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－１阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ－１阻害剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＳＨＲ－１２１０、ＭＥＤＩ０６８０Ｒ０１、ＢＢｇ－Ａ３１７、ＴＳＲ－０４２、ＲＥＧＮ２８１０、及びＰＦ－０６８０１５９１から選択される。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－Ｌ１であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ１阻害剤である。一実施形態では、ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＡＭＰ－２２４、及びＬＹ３３０００５４から選択される。一実施形態では、免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ－４であり、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ－４阻害剤である。一実施形態では、ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＪＭＷ－３Ｂ３、及びＡＧＥＮ１８８４から選択される。
一実施形態では、抗腫瘍剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤である。一実施形態では、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、ヒドロキサム酸、ベンズアミド、環状テトラペプチド、デプシペプチド、求電子性ケトン、又は脂肪族化合物である。一実施形態では、ヒドロキサム酸は、ボリノスタット（ＳＡＨＡ）、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、ＬＡＱ８２４、トリコスタチンＡ、又はパノビノスタット（ＬＢＨ５８９）である。一実施形態では、ベンズアミドは、エンチノスタット（ＭＳ－２７５）、０１９９４、又はモセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）である。一実施形態では、環状テトラペプチドは、トラポキシンＢである。一実施形態では、脂肪酸は、フェニル酪酸又はバルプロ酸である。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ではない。いくつかの実施形態では、ウイルスウイルスは、細胞溶解性である。いくつかの実施形態では、ウイルスは、優先的に分裂細胞に感染する。いくつかの実施形態では、ウイルスは、以前に感染した宿主に再感染することができる。いくつかの実施形態では、ウイルスは、合成多量体化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含まない。いくつかの実施形態では、ウイルスウイルスは、ワクシニアウイルスではない。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ＴＲＩＦをコードするポリヌクレオチドを含まない。
一実施形態では、免疫刺激性細胞ターンオーバー経路は、標的細胞において誘導される。一実施形態では、免疫刺激性細胞ターンオーバー経路は、プログラム壊死（例えば、ネクロトーシス又はピロトーシス）、外因性アポトーシス、フェロトーシス、及びその組み合わせからなる群から選択される。一実施形態では、標的細胞は、免疫刺激性細胞ターンオーバー経路が欠乏している。一実施形態では、標的細胞は、１つ又は複数の受容体相互作用セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ３（ＲＩＰＫ１）をコードする遺伝子、受容体相互作用セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ３（ＲＩＰＫ３）をコードする遺伝子、Ｚ－ＤＮＡ結合タンパク質１（ＺＢＰ１）をコードする遺伝子、混合系統キナーゼドメイン様偽キナーゼ（ＭＬＫＬ）をコードする遺伝子、及びＴｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメイン含有アダプター誘導インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）をコードする遺伝子において不活性化突然変異を有する。一実施形態では、標的細胞は、１つ又は複数のＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１、ＴＲＩＦ、及びＭＬＫＬの発現又は活性が低下している。一実施形態では、標的細胞は、１つ又は複数のＲＩＰＫ１をコードする遺伝子、ＲＩＰＫ３をコードする遺伝子、ＺＢＰ１をコードする遺伝子、ＴＲＩＦをコードする遺伝子、及びＭＬＫＬをコードする遺伝子のコピー数が減っている。一実施形態では、標的細胞は、癌細胞、免疫細胞、内皮細胞、及び線維芽細胞からなる群から選択される。一実施形態では、標的細胞は、癌細胞である。一実施形態では、癌は、転移癌である。
一実施形態では、ウイルスは、腫瘍溶解性ウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、ＤＮＡ複製ウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、ＤＮＡ複製腫瘍溶解性ウイルスである。一実施形態では、ウイルスは、標的細胞に優先的に感染する。一実施形態では、ウイルスは、癌細胞によるサノトランスミッションを阻害する１つ又は複数の内在性ウイルス遺伝子において不活性化突然変異を含む。一実施形態では、ウイルスは、少なくとも４ｋｂの異種ポリヌクレオチドを標的細胞の中に運搬することができる。
一実施形態では、ウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である。一実施形態では、ＨＳＶは、ＨＳＶ１である。一実施形態では、ＨＳＶ１は、Ｋｏｓ、Ｆ１、ＭａｃＩｎｔｙｒｅ、ＭｃＫｒａｅ、及び関連する株からなる群から選択される。一実施形態では、ＨＳＶは、ＩＣＰ３４．５、ＩＣＰ４７、ＵＬ２４、ＵＬ５５、ＵＬ５６からなる群から選択される１つ又は複数の遺伝子が欠損している。一実施形態では、各ＩＣＰ３４．５コード遺伝子は、最初期（ＩＥ）プロモーターに作動可能に連結されたＵＳ １１コード遺伝子を含むポリヌクレオチドカセットで置き換えられる。一実施形態では、ＨＳＶは、ワクシニアウイルスＥ３Ｌ遺伝子のΔＺα突然変異形態を含む。一実施形態では、ＨＳＶは、ＩＣＰ６の１つ又は複数の機能が欠損している。一実施形態では、ＩＣＰ６は、受容体相互作用タンパク質ホモタイプ相互作用モチーフ（ＲＨＩＭ）ドメインの突然変異を有する。一実施形態では、ＩＣＰ６は、カスパーゼ－８結合を阻害するＣ末端の１つ又は複数の突然変異を有する。一実施形態では、ＨＳＶは、最初期遺伝子としてＵＳ１１遺伝子を発現する。一実施形態では、ＩＣＰ４７遺伝子は、ＵＳ１１遺伝子がＩＣＰ４７最初期プロモーターのコントロール下となるように、欠失している。
一実施形態では、ウイルスは、ポックスウイルス科に属する。一実施形態では、ポックスウイルス科に属するウイルスは、粘液腫ウイルス、ヤバ様疾患（Ｙａｂａ－ｌｉｋｅ ｄｉｓｅａｓｅ）ウイルス、ラクーンポックスウイルス、オルフウイルス、及び牛痘ウイルスからなる群から選択される。一実施形態では、ウイルスは、ポックスウイルス科のコードポックスウイルス亜科に属する。一実施形態では、ウイルスは、コードポックスウイルス亜科のオルソポックスウイルス属に属する。一実施形態では、ウイルスは、オルソポックスウイルス属のワクシニアウイルス種に属する。一実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｄａｉｒｅｎｌ、ＩＨＤ－Ｊ、Ｌ－ＩＰＶ、ＬＣ１６Ｍ８、ＬＣ１６ＭＯ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＬＩＶＰ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＷＲ ６５－１６、Ｗｙｅｔｈ、Ａｎｋａｒａ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｔｉａｎ Ｔａｎ、及びＷＲからなる群から選択される株である。一実施形態では、ワクシニアウイルスは、チミジンキナーゼ（ＴＫ）活性を欠くようにエンジニアリングされる。一実施形態では、ワクシニアウイルスは、ＴＫ活性を低下させる又は排除するＪ２Ｒ遺伝子における不活性化突然変異又は欠失を有する。一実施形態では、ワクシニアウイルスは、リボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＲ）活性を欠くようにエンジニアリングされる。一実施形態では、ワクシニアウイルスは、ＲＲ活性を低下させる又は排除するＩ４Ｌ及びＦ４Ｌ遺伝子から選択される遺伝子における不活性化突然変異又は欠失を有する。一実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｅ３Ｌ遺伝子が欠損している。一実施形態では、Ｅ３Ｌ遺伝子は、癌細胞におけるネクロトーシスの誘導をもたらす突然変異を有する。一実施形態では、ウイルスは、アデノウイルスである。一実施形態では、アデノウイルスは、Ａｄ５／Ｆ３５である。一実施形態では、アデノウイルスは、アデノウイルス初期領域１Ａ（Ｅ１Ａ）において欠失を含む。一実施形態では、アデノウイルスは、アデノウイルス初期領域１Ｂ（Ｅ１Ｂ）において欠失を含む。一実施形態では、アデノウイルスは、ファイバー－Ｈループの中にエンジニアリングして入れられたＡｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）－モチーフを有する。
図１Ａは、組換えＨＳＶ１の概略図を示す。図１Ｂは、ＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１、ＭＬＫＬ、及びＴＲＩＦをコードする遺伝子を含む例示的なサノトランスミッションカセット（ＴＣ）を示す。 図２は、ｓｉＲＮＡ又はｇＲＮＡ／Ｃａｓ９をコードする遺伝子の、ＨＳＶ１のＩＣＰ３４．５遺伝子への挿入を含む組換えＨＳＶ１の概略図を示す。 図３は、サノトランスミッションカセット（ＴＣ）の、ＨＳＶ１のＩＣＰ３４．５遺伝子への挿入及び変異ＲＨＩＭドメインをコードする遺伝子の、ＨＳＶ１のＩＣＰ６遺伝子への挿入を含む組換えＨＳＶ１の概略図を示す。 図４Ａは、サノトランスミッションの誘導後のＣＴ－２６マウス結腸がん細胞の相対的な生存度を示す。 図４Ｂは、ＴＲＩＦを単独で又はＲＩＰＫ３及び若しくはガスダーミンＥと組み合わせて発現するＣＴ－２６マウス結腸がん細胞の相対的な生存度を示す。 図５Ａは、サノトランスミッションポリペプチド発現の誘導後にＣＴ－２６マウス結腸がん細胞から生成される細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）の、マクロファージにおけるＩＦＮ関連遺伝子活性化の刺激に対する効果を示す。図５Ａにおいて、Ｔｅｔ誘導性ＲＩＰＫ３は、「ＲＩＰＫ３」と呼ばれ、構成的ＰＧＫプロモーターを含有するＲＩＰＫ３構築物は、「ＰＧＫ＿ＲＩＰＫ３」と呼ばれる。 図５Ｂは、単独での又はＲＩＰＫ３（ｃＲ３）及び／若しくはガスダーミンＥ（ｃＧＥ）と組み合わせたＴＲＩＦの誘導後にＣＴ－２６マウス結腸がん細胞から生成される細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）の、マクロファージにおけるＩＦＮ関連遺伝子活性化の刺激に対する効果を示す。 図６は、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３、又はＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３発現の誘導後にＣＴ－２６マウス結腸がん細胞から生成される細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）の、骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）における活性化マーカーの発現の刺激に対する効果を示す。ＭＦＩは、平均蛍光強度である。 図７Ａ、７Ｂ、及び７Ｃは、サノトランスミッションポリペプチド発現の、ＣＴ－２６マウス結腸がん細胞を移植したマウスの生存に対する効果を示す。「ＣＴ２６－ＴＦ」は、ＴＲＩＦを単独で発現するＣＴ－２６細胞を表し、「ＣＴ２６－Ｐ＿Ｒ３」は、ＲＩＰＫ３を単独で発現する細胞を表す。 図７Ａ、７Ｂ、及び７Ｃは、サノトランスミッションポリペプチド発現の、ＣＴ－２６マウス結腸がん細胞を移植したマウスの生存に対する効果を示す。図７Ｂは、ＣＴ－２６マウス結腸がん細胞を移植し、抗ＰＤ１抗体で処置したマウスの生存パーセントを示す。「ＣＴ２６－ＴＦ」は、ＴＲＩＦを単独で発現するＣＴ－２６細胞を表し、「ＣＴ２６－Ｐ＿Ｒ３」は、ＲＩＰＫ３を単独で発現する細胞を表す。 図７Ａ、７Ｂ、及び７Ｃは、サノトランスミッションポリペプチド発現の、ＣＴ－２６マウス結腸がん細胞を移植したマウスの生存に対する効果を示す。「ＣＴ２６－ＴＦ」は、ＴＲＩＦを単独で発現するＣＴ－２６細胞を表し、「ＣＴ２６－Ｐ＿Ｒ３」は、ＲＩＰＫ３を単独で発現する細胞を表す。 図８Ａは、様々なサノトランスミッションペイロードを発現するＵ９３７白血病細胞由来の細胞培養物により処置し、単独で又はＲＩＰＫ３阻害剤（ＧＳＫ８７２）と組み合わせてカスパーゼ阻害剤（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ）で処置したＴＨＰ－１ Ｄｕａｌ細胞における相対的なＮＦ－ｋＢ活性を示す。図８Ａ～８Ｃにおいて、＋は、ドキシサイクリンで処置したＵ９３７細胞を示し、＋＋は、ドキシサイクリン及びＢ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒで処置したＵ９３７細胞を示す。 図８Ｂ及び８Ｃは、様々なサノトランスミッションペイロードを発現するＵ９３７白血病細胞由来の細胞培養物により処置し、単独で又はＲＩＰＫ３阻害剤（ＧＳＫ８７２）と組み合わせてカスパーゼ阻害剤（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ）で処置したＴＨＰ－１ Ｄｕａｌ細胞における相対的なＩＲＦ活性を示す。Ｕ９３７細胞はまた、単独で又は二量体化を誘導するＢ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒと組み合わせて、サノトランスミッションポリペプチド発現を誘導するためのドキシサイクリンでも処置した。図８Ａ～８Ｃにおいて、＋は、ドキシサイクリンで処置したＵ９３７細胞を示し、＋＋は、ドキシサイクリン及びＢ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒで処置したＵ９３７細胞を示す。 図８Ｂ及び８Ｃは、様々なサノトランスミッションペイロードを発現するＵ９３７白血病細胞由来の細胞培養物により処置し、単独で又はＲＩＰＫ３阻害剤（ＧＳＫ８７２）と組み合わせてカスパーゼ阻害剤（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ）で処置したＴＨＰ－１ Ｄｕａｌ細胞における相対的なＩＲＦ活性を示す。Ｕ９３７細胞はまた、単独で又は二量体化を誘導するＢ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒと組み合わせて、サノトランスミッションポリペプチド発現を誘導するためのドキシサイクリンでも処置した。図８Ａ～８Ｃにおいて、＋は、ドキシサイクリンで処置したＵ９３７細胞を示し、＋＋は、ドキシサイクリン及びＢ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒで処置したＵ９３７細胞を示す。 図９Ａは、単独で又はカスパーゼ阻害剤と組み合わせてサノトランスミッションポリペプチドを発現するＣＴ－２６マウス結腸がん細胞の相対的な生存度を示す。 図９Ｂは、単独での又はカスパーゼ阻害剤と組み合わせたサノトランスミッションポリペプチド発現の誘導後のＣＴ－２６マウス結腸がん細胞から生成される細胞ターンオーバー因子（ＣＴＦ）の、マクロファージにおけるＩＦＮ関連遺伝子活性化の刺激に対する効果を示す。図９Ｃは、単独での又はカスパーゼ阻害剤と組み合わせたＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３発現の、ＣＴ－２６マウス結腸がん細胞を移植したマウスの生存に対する効果を示す。
本開示は、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むようにエンジニアリングされたウイルスに関する。サノトランスミッションは、細胞間の、例えば、標的シグナル伝達細胞と応答細胞との間の、応答細胞に生物学的応答を起こすようシグナル伝達する、標的細胞における細胞ターンオーバー経路の活性化の結果である、コミュニケーションのプロセスである。サノトランスミッションは、例えば、本明細書において記載されるエンジニアリングされたウイルスと標的細胞を接触させることを通しての細胞ターンオーバー経路遺伝子の調整によって、標的細胞において誘導されてもよい。細胞ターンオーバー経路が活性化された標的細胞は、標的細胞によって能動的に放出された因子を通して又は標的細胞のターンオーバー（例えば、細胞死）の間に応答細胞に曝露されるようになる、標的細胞の細胞内因子を通して、応答細胞にシグナル伝達してもよい。本開示の様々な実施形態では、ウイルスが含む１つ又は複数のポリヌクレオチドは、サノトランスミッションを促進する１つ若しくは複数のポリペプチドの発現若しくは活性を増加させることによって及び／又は標的細胞におけるサノトランスミッションを抑制する１つ若しくは複数のポリペプチドの発現若しくは活性を低下させることによって、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、サノトランスミッションを促進するポリペプチドを１つだけコードするポリヌクレオチドを含むようにエンジニアリングされる。他の実施形態では、ウイルスは、サノトランスミッションを促進する２つ以上の異なるポリペプチドをコードする１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むようにエンジニアリングされる。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリペプチド（複数可）（例えば、１つだけのポリペプチド又は２つ以上の異なるポリペプチド）は、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、Ｓｈａｒｐｉｎ、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、その変異体、及びその機能的断片からなる群から選択される。
本出願人は、驚くべきことに、サノトランスミッションの調整が、癌細胞を調整する（例えば、活性、増殖、又は生存度を低下させる）ことができることを発見した。例えば、癌細胞におけるサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリペプチド（例えば、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３、単独で又は組み合わせて）の発現は、インビトロで癌細胞の生存度を低下させる。加えて、本出願人は、驚くべきことに、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリペプチド（例えば、ＴＲＩＦ単独又はＲＩＰＫ３と組み合わせたＴＲＩＦ）を発現するようにエンジニアリングされた癌細胞を持つ対象が、サノトランスミッションを促進するポリペプチドを発現するようにエンジニアリングされなかった癌細胞を持つ対象と比較して、生存率の増加を見せることを示した。特に、サノトランスミッションを促進する２つのポリペプチド（ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３）の発現の組み合わせが、いずれかのポリペプチド単独よりも生存を増加させることにおいて有効であることが見出された。カスパーゼ阻害剤（例えば、ＦＡＤＤ－ＤＮ若しくはｖＩＣＡ）又はガスダーミンＥとＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３の組み合わせは、生存をさらに増加させることが実証された。これらの結果は、癌細胞増殖が、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むようにエンジニアリングされたウイルスの投与を通して対象において低下するかもしれないことを示唆する。例えば、エンジニアリングされたウイルスは、癌細胞に形質導入し、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリペプチドの発現をもたらし、それによって、癌細胞の生存度を低下させてもよい及び／又は免疫刺激細胞ターンオーバー因子の遊離を通して癌細胞に対する宿主免疫応答を促進してもよい。
従って、本開示はまた、標的細胞（例えば、癌細胞）によるサノトランスミッションを促進するための方法であって、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むようにエンジニアリングされたウイルスと標的細胞を接触させることを含み、標的細胞は、標的細胞によるサノトランスミッションを促進するのに十分な量で及び時間、ウイルスと接触させる方法にも関する。エンジニアリングされたウイルスを含む医薬組成物もまた、開示される。本開示は、対象、例えば、癌と診断される対象においてサノトランスミッションを促進するための方法であって、サノトランスミッションを促進するのに十分な量で及び時間、医薬組成物を対象に投与することを含む方法にさらに関する。免疫応答の増加をそれを必要とする対象において行うための方法及び癌の処置をそれを必要とする対象において行うための方法もまた、開示される。
Ｉ．定義
「投与する（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒ）」、「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｉｎｇ）」、又は「投与（ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）」という用語は、医薬組成物又は薬剤を対象の系に、又は対象の内部若しくは外部の特定の領域に送達するあらゆる方法を含む。
本明細書で使用される「併用投与」、「同時投与」、若しくは「併用療法」は、別個の製剤若しくは単一の医薬製剤を使用する２つ以上の活性剤の投与、又は両方（若しくはすべて）の活性剤がそれらの生物学的活性を発揮する期間が重複するような任意の順序での連続投与として理解される。本明細書において、１つ活性剤（例えば、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むようにエンジニアリングされたウイルス）は、第２の治療薬（例えば、免疫療法剤）の活性を改善することができる、例えば、標的細胞、例えば癌細胞を第２の治療薬の活性に対して感作させることができる又は第２の治療薬と相乗効果を有することができることが企図される。「併用投与」は、薬剤が同時に、同じ頻度で、又は同じ投与経路によって投与されることを必要としない。本明細書において使用されるように、「併用投与する」、「同時投与する」、又は「併用療法」は、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むようにエンジニアリングされたウイルスの、１つ又は複数の追加の治療薬、例えば免疫療法剤（例えば、免疫チェックポイントモジュレーター）との投与を含む。免疫療法剤の例は、本明細書において提供される。
本明細書で使用される「上昇する」及び「低下する」という用語はそれぞれ、参照と比較してパラメータの量、機能、又は活性をより上昇させる又はより低下させる調節を指す。例えば、本明細書に記載の組成物の投与に続いて、パラメータ（例えば、ＩＲＦの活性化、ＮＦｋＢの活性化、マクロファージの活性化、腫瘍のサイズ又は増殖）は、投与前のパラメータ量に対して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９８％以上対象で上昇又は低下し得る。一般に、測定基準は、投与に続いて、投与の効果が現れた時点、例えば、治療計画が開始されてから少なくとも１日後、１週間後、１ヶ月後、３ヶ月後、６ヶ月後に測定される。同様に、前臨床パラメータ（インビトロでの細胞のＮＦｋＢ又はＩＲＦの活性化、及び／又は本明細書に記載の組成物による試験哺乳動物の腫瘍負荷の低下など）は、投与前のパラメータの量と比較して少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は９８％以上上昇又は低下し得る。
本明細書で使用される「抗腫瘍剤」は、癌の処置に使用される薬物を指す。抗腫瘍剤には、化学療法剤（例えば、アルキル化剤、代謝拮抗剤、抗腫瘍抗生物質、トポイソメラーゼ阻害剤、有糸分裂阻害剤、コルチコステロイド、及び酵素）、生物学的抗癌剤、及び免疫チェックポイント調節剤が含まれる。
「癌治療計画」又は「抗腫瘍療法」は、特定のスケジュールで対象への特定の量の１つ又は複数の抗腫瘍剤の投与を含む、癌の処置のための臨床的に認められた投薬プロトコルである。
ポリペプチドに関して本明細書において使用される用語「機能的断片」は、ポリペプチドの少なくとも１つの生物学的活性、例えば、サノトランスミッションを促進する能力を保持するポリペプチドの一部を指す。いくつかの実施形態では、機能的断片は、ポリペプチドのドメイン、例えば、ポリペプチドのデスフォールドドメイン、デスドメイン、パイリンドメイン、デスエフェクタードメイン（ＤＥＤ）、又はＣ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）である。いくつかの実施形態では、ポリペプチドの機能的断片は、ドメインの少なくとも１つの生物学的活性を保持するドメインの一部である。
用語「融合タンパク質」及び「キメラタンパク質」は、現実には同じタンパク質内に存在しない少なくとも２つのポリペプチドを含むタンパク質を指すために本明細書において区別なく使用される。
本明細書において使用される「膜融合タンパク質」は、ウイルスに感染した細胞の別の細胞への融合を促進することができる任意の異種タンパク質を指す。膜融合タンパク質の例は、ＶＳＶ－Ｇ、シンシチン（ｓｙｎｃｉｔｉｎ）－１（ヒト内在性レトロウイルス－Ｗ（ＨＥＲＶ－Ｗ）由来の）又はシンシチン－２（ＨＥＲＶＦＲＤＥ１由来の）、パラミクソウイルスＳＶ５－Ｆ、麻疹ウイルス－Ｈ、麻疹ウイルス－Ｆ、ＲＳＶ－Ｆ、Ｒ膜貫通ペプチドが除去された（Ｒ－バージョン）テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、マソン－ファイザーサルウイルス（ＭＰＭＶ）、及びウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）などのようなレトロウイルス又はレンチウイルス由来の糖タンパク質を含む。
本明細書において使用される用語「異種」は、組み合わせでは天然には存在しない要素の組み合わせを指す。例えば、ウイルス又は標的細胞に対して異種であるポリヌクレオチドは、ウイルス若しくは標的細胞において天然には存在しない又はポリヌクレオチドが天然に存在する位置と異なるウイルス若しくは標的細胞における位置に存在するポリヌクレオチドを指す。標的細胞に対して異種であるポリペプチドは、標的細胞において天然には存在しない又は標的細胞に対して異種であるポリヌクレオチドから発現されるポリペプチドを指す。
本明細書で使用される「免疫チェックポイント」又は「免疫チェックポイント分子」は、シグナルを調節する免疫系の分子である。免疫チェックポイント分子は、刺激性チェックポイント分子である、即ちシグナルを上昇させるか、又は抑制性チェックポイント分子である、即ちシグナルを低下させることができる。本明細書で使用される「刺激性チェックポイント分子」は、シグナルを上昇させる又は共刺激性である免疫系の分子である。本明細書で使用される「抑制性チェックポイント分子」は、シグナルを低下させる又は共抑制性である免疫系の分子である。
本明細書で使用される「免疫チェックポイントモジュレーター」は、対象における免疫チェックポイントの活性を変化させることができる薬剤である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、限定されるものではないが、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡを含む、１つ又は複数の免疫チェックポイント分子の機能を変化させる。免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイントのアゴニスト又はアンタゴニストであり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイント結合タンパク質（例えば、抗体、抗体Ｆａｂ断片、二価抗体、抗体薬物コンジュゲート、ｓｃＦｖ、融合タンパク質、二価抗体、又は四価抗体）である。他の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは小分子である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、又は抗ＣＴＬＡ－４結合タンパク質、例えば、抗体又は抗体断片、例えば、抗原結合断片である。
本明細書で使用される「免疫療法剤」は、免疫応答を誘導又は増強する、薬学的に許容される化合物、組成物、又は療法剤を指す。免疫療法剤には、限定されるものではないが、免疫チェックポイントモジュレーター、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベースの治療法、サイトカイン、及び癌ワクチンが含まれる。
本明細書で使用される「腫瘍性障害」又は「癌」又は「新生物」は、限定されるものではないが：白血病、リンパ腫、黒色腫、癌腫、及び肉腫を含む、ヒトに見られるすべての種類の癌又は新生物を指す。本明細書で使用される「腫瘍性障害」、「癌」、及び「新生物」という用語は、互換的に、そして単数形又は複数形のいずれかで使用され、宿主生物にとって細胞を異常にする悪性形質転換を受けた細胞を指す。原発性癌細胞（即ち、悪性形質転換部位の近くから得られた細胞）は、十分に確立された技術、特に組織学的検査によって非癌性細胞と容易に区別することができる。本明細書で使用される癌細胞の定義には、原発性癌細胞だけでなく、癌幹細胞、並びに、癌前駆細胞又は癌細胞の祖先に由来する任意の細胞が含まれる。これには、転移した癌細胞、並びに癌細胞に由来するインビトロ培養物及び細胞株が含まれる。
癌のステージ分類の特定の基準は、腫瘍サイズ、組織学的特徴、腫瘍マーカー、及び当業者に公知の他の基準に基づく特定の癌の種類に依存する。一般に、癌のステージは次のように説明することができる：（ｉ）ステージ０、上皮内癌；（ｉｉ）ステージＩ、ステージＩＩ、及びステージＩＩＩ（数値が大きいほど、腫瘍のサイズ、並びに／又は癌がリンパ節及び／若しくは組織の近くで最初に発生した臓器若しくは原発腫瘍の位置に隣接する臓器を超えた癌の転移を含む、より広範な疾患を示す）；並びに（ｉｉｉ）ステージＩＶ（癌が遠隔の組織又は臓器に転移している）。
「固形腫瘍」は、例えばＣＡＴスキャン、ＭＲイメージング、Ｘ線、超音波、又は触診などの方法によって腫瘍量に基づいて検出可能であり、且つ／又は患者から入手可能なサンプル中の１つ又は複数の癌特異的抗原の発現のために検出可能である腫瘍である。腫瘍は、測定可能な寸法である必要はない。
本発明の方法によって処置される「対象」は、ヒト又は非ヒト動物のいずれか、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトを意味し得る。特定の実施形態では、対象は、発明の方法を使用する処置の開始前に、検出可能な癌又は診断された癌を有する。特定の実施形態では、対象は、本発明の方法を使用する処置の開始前に、検出可能な感染症又は診断された感染症、例えば慢性感染症を有する。
本明細書において使用される「自殺遺伝子」は、薬物の無毒性の前駆体を細胞毒性化合物に変換するタンパク質（例えば、酵素）をコードする遺伝子を指す。
本明細書において使用される「細胞ターンオーバー」は、新たに指示をし直して（ｒｅｏｒｄｅｒ）、細胞内の物質をまき散らす動的プロセスを指し、最終的に細胞死をもたらすかもしれない。細胞ターンオーバーは、細胞ターンオーバー因子の産生及び細胞からの放出を含む。
本明細書において使用される「細胞ターンオーバー因子」は、最終的に細胞から放出され、他の細胞の生物学的活性に影響を与える、細胞ターンオーバーを受けている細胞によって産生される分子及び細胞断片である。細胞ターンオーバー因子は、タンパク質、ペプチド、炭水化物、脂質、核酸、小分子、並びに細胞断片（例えば、小胞及び細胞膜断片）を含むことができる。
本明細書において使用される「細胞ターンオーバー経路遺伝子」は、細胞ターンオーバー経路を促進する、誘導する、又は他の方法でそれに寄与するポリペプチドをコードする遺伝子を指す。
「サノトランスミッション」は、本明細書中で使用される場合、標的シグナル伝達細胞における細胞回転経路の活性化の結果である細胞間での情報交換であり、これは応答する細胞にシグナルを伝達して、生物学的応答を起こす。例えば、このような経路を促進する遺伝子の標的シグナル伝達細胞への、ウイルス又は他の遺伝子治療送達を通じた、前記細胞における細胞回転経路遺伝子の調整によって、サノトランスミッションが標的シグナル伝達細胞において誘導され得る。表２、３、４、５及び６は、様々な細胞回転経路を促進可能な代表的な遺伝子又はタンパク質を記載する。細胞回転経路がこのように活性化されている標的シグナル伝達細胞は、シグナル伝達細胞により能動的に放出される因子を通じて、又はシグナル伝達細胞の細胞回転（例えば細胞死）中に応答細胞に曝露されるようになるシグナル伝達細胞の細胞内因子を通じて、応答細胞にシグナルを伝達し得る。特定の実施形態では、活性化されたシグナル伝達細胞は、応答細胞（例えば免疫細胞）において免疫刺激反応（例えば炎症促進反応）を促進する。
「サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチド」及び「サノトランスミッションポリヌクレオチド」という用語は、標的細胞での発現の結果、標的細胞によるサノトランスミッションが高まるポリヌクレオチドを指すために本明細書中で交換可能に使用される。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、サノトランスミッションを促進するポリペプチドをコードし；「サノトランスミッションを促進するポリペプチド」及び「サノトランスミッションポリペプチド」という用語は、本明細書中で交換可能に使用され、標的細胞における発現が標的細胞によるサノトランスミッションを高めるポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、サノトランスミッションを抑制するポリペプチドの標的細胞における発現及び／又は活性を低下させる。例えば、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、サノトランスミッションを抑制するポリペプチドの標的細胞における発現及び／又は活性を低下させるＲＮＡ分子をコードし得る。
「治療有効量」とは、疾患を処置するために患者に投与されると、その疾患のそのような処置を有効にするのに十分な化合物の量を意味する。疾患を予防するために投与される場合、その量は、疾患の発症を回避又は遅らせるのに十分である。「治療有効量」は、化合物、疾患及びその重症度、並びに処置される患者の年齢、体重などによって異なる。治療有効量は治癒的である必要はない。治療有効量は、疾患又は状態の発生を防ぐ必要はない。代わりに治療有効量は、疾患又は状態の発症、重症度、又は進行を少なくとも遅延又は軽減する量である。
本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」、「処置（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、及びその同源語は、疾患、病的状態、又は障害を改善する、和らげる、安定化させる、予防する、又は治癒することを目的とした対象の医学的管理を指す。この用語には、積極的処置（疾患、病的状態、又は障害を改善することを目的とした処置）、原因処置（関連する疾患、病的状態、又は障害の原因を対象とした処置）、緩和処置（症状を軽減するように設計された処置）、予防的処置（関連する疾患、病的状態、又は障害の発症を最小限に抑えるか、又は部分的若しくは完全に阻害することを目的とした処置）；及び支援処置（別の療法を補完するために使用される処置）が含まれる。
「変異体」という用語は、ポリペプチドに関連して本明細書中で使用される場合、対応する野生型ポリペプチドとは少なくとも１個のアミノ酸残基が異なるポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチドは、対応する天然のポリペプチドとは異なる少なくとも１つの活性を有する。「変異体」という用語は、ポリヌクレオチドに関連して本明細書中で使用される場合、対応する野生型ポリヌクレオチドとは少なくとも１個のヌクレオチドが異なるポリヌクレオチドを指す。いくつかの実施形態では、変異体ポリペプチド又は変異体ポリヌクレオチドは、対応する野生型ポリペプチド又はポリヌクレオチドに対する少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有し、ポリペプチド又はコードされるポリペプチドは、少なくとも１個のアミノ酸残基が異なる。
ＩＩ．細胞回転経路
本明細書中で提供されるようなサノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、標的細胞において細胞回転経路を調整するために使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、標的細胞での改変ウイルスの感染は、標的細胞において免疫刺激性の細胞回転経路を誘導する。免疫刺激性の細胞回転経路は、細胞において活性化された場合、免疫細胞などの応答細胞において免疫刺激性反応を促進する細胞回転経路である。免疫刺激性の細胞回転経路としては、プログラムされた壊死（例えばピロトーシス、ネクロトーシス）、アポトーシス、例えば、外因性及び／又は内因性アポトーシス、オートファジー、フェロトーシス及びそれらの組み合わせが挙げられるが限定されない。
プログラムされた壊死
「プログラムされた壊死」は、本明細書中で使用される場合、アポトーシス中に起こる膜完全性の保持とは対照的に、細胞膨張（壊死症）、膜破裂及び細胞内容物の放出などの形態学的特性を伴う、遺伝学的に制御された細胞死を指す。いくつかの実施形態では、プログラムされた壊死はピロポトーシス（ｐｙｒｏｐｏｔｏｓｉｓ）である。いくつかの実施形態では、プログラムされた壊死はネクロトーシスである。
ピロトーシス
「ピロトーシス」は、本明細書中で使用される場合、カスパーゼ１－、カスパーゼ４－又はカスパーゼ５－依存性プログラム細胞死の本質的に炎症性の過程を指す。ピロトーシスの最も特有の生化学的特性は、カスパーゼ－１の早期の誘導性近接媒介（ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ－ｍｅｄｉａｔｅｄ）活性化である。カスパーゼ－１、４又は５のピロトーシス性の活性化は、インフラマソームとして知られる多タンパク質プラットフォームの状況で起こり得、これには、ＮＯＤ様受容体（ＮＬＲ）又は、カスパーゼ－１活性化を促進するアダプタータンパク質ＡＳＣを動員する、サイトゾルＤＮＡセンサー、アブセント・イン・メラノーマ（ａｂｓｅｎｔ ｉｎ ｍｅｌａｎｏｍａ）２（ＡＩＭ２）などの他のセンサーが含まれる。カスパーゼ－４／５は、ＬＰＳにより直接活性化され得る。両方の場合において、活性カスパーゼ－１は、発熱性のインターロイキン－１β（ＩＬ－１β）及びＩＬ－１８のタンパク質分解性の成熟及び放出を触媒する。さらに、いくつかの（しかし全てではない）例において、カスパーゼ活性化は、孔形成タンパク質ＧＳＤＭ－Ｄの切断及び活性化を誘導して、膜破裂及び細胞死を推進する。（Ｇａｌｌｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．Ｍａｒ；２５（３）：４８６－５４１を参照）。本開示の方法において、ピロトーシスは、標的細胞においてピロトーシスを誘導するポリペプチドをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスとの接触又はそれによる感染を通じて、標的細胞において誘導され得る。標的細胞におけるピロトーシスを誘導し得るポリペプチドは、ＮＬＲ、ＡＳＣ、ＧＳＤＭ－Ｄ、ＡＩＭ２及びＢＩＲＣ１を含むが限定されない。
いくつかの方法が当技術分野で公知であり、特定のマーカーの検出を通じて、ピロトーシスを起こした細胞を同定し、他のタイプの細胞解体及び／又は細胞死と区別するために使用され得る。ピロトーシスは、カスパーゼ－１、カスパーゼ－４又はカスパーゼ－５活性を必要とし、通常は、プロ－ＩＬ－１ｂ及び／又はプロ－ＩＬ－１８のプロセシング、これらの成熟サイトカインの放出及びＧＳＤＭ－Ｄのカスパーゼ－１／４／５切断断片による膜の易透化によって遂行される。
ネクロトーシス
「ネクロトーシス」という用語は、本明細書中で使用される場合、受容体相互作用タンパク質キナーゼ１及び／又は３（ＲＩＰＫ１－及び／又はＲＩＰＫ３）／混合系統キナーゼ様（ＭＬＫＬ）依存性の壊死を指す。アルキル化ＤＮＡ損傷、興奮毒及びデスレセプターの連結を含め、いくつかのトリガーがネクロトーシスを誘導し得る。例えば、カスパーゼ（及び特にカスパーゼ－８又はカスパーゼ－１０）が、遺伝子操作により（例えば遺伝子ノックアウト又はＲＮＡ干渉、ＲＮＡｉにより）阻害されるか又は薬理学的な物質（例えば化学的なカスパーゼ阻害剤）により遮断される場合、ＲＩＰＫ３は、ＭＬＫＬをリン酸化し、これが膜孔へのＭＬＫＬ集合につながり、最終的に壊死性細胞死の実行を活性化する。その全体において参照により本明細書中に組み込まれるＧａｌｌｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．Ｍａｒ；２５（３）：４８６－５４１を参照。
免疫原性アポトーシスを推進する同じ経路は、ＲＩＰＫ３を活性化し得るが、通常、カスパーゼ８（及びカスパーゼ１０の可能性もある）は、ＲＩＰＫ３活性化を抑制する。ＲＩＰＫ３は一般的に、カスパーゼ８不全の状況でのみ活性化される。ｖＩＣＡなどのウイルス性タンパク質又はＦＡＤＤドミナントネガティブ（ＤＮ）などの細胞突然変異体は、カスパーゼ８経路を標的とし、ＲＩＰＫ３が存在する場合、ＲＩＰＫ３活性の制御を解く。ＲＩＰＫ３が存在しない場合、ｖＩＣＡ又はＦＡＤＤ－ＤＮは、単純にアポトーシスを遮断する。（ａ）膜破裂及び（ｂ）炎症性転写プログラム（例えばＮＦ－ｋＢ及びＩＲＦ３）が同時に活性化されるので、ネクロトーシスは免疫原性である。
本開示の方法において、ネクロトーシスは、標的細胞においてネクロトーシスを誘導するポリペプチドをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスとの接触又はそれによる感染を通じて、標的細胞において誘導され得る。標的細胞においてネクロトーシスを誘導し得るポリペプチドとしては、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、ＴＬＲ４、ＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質（ＴＩＲＡＰ）、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）－ドメイン－含有アダプター誘導性インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）、Ｚ－ＤＮＡ－結合タンパク質１（ＺＢＰ１）、受容体－相互作用セリン／スレオニン－タンパク質キナーゼ１（ＲＩＰＫ１）、受容体－相互作用セリン／スレオニン－タンパク質キナーゼ３（ＲＩＰＫ３）、混合系統キナーゼドメイン様偽キナーゼ（ＭＬＫＬ）、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）、ＦＳ－７－関連表現抗原（ＦＡＳ）、ＴＮＦ－関連アポトーシス誘導リガンド受容体（ＴＲＡＩＬＲ）及び腫瘍壊死因子受容体１型－関連デスドメインタンパク質（ＴＲＡＤＤ）が挙げられるが限定されない。
当技術分野でいくつかの方法が知られており、特定のマーカーの検出を通じて、ネクロトーシスを起こした細胞を同定し、他のタイプの細胞解体及び／又は細胞死と区別するために使用され得る。これらのマーカーとしては、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬのリン酸化が挙げられ、これらは、一般的には細胞の免疫ブロット又は免疫染色によって、これらの翻訳後修飾を検出する抗体により検出され得る。ネクロトーシスは、カスパーゼ活性化がないこと、急速な膜の易透化、膜へのＭＬＫＬ再局在化、界面活性剤不溶性分画へのＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬの蓄積、ＲＩＰＫ３／ＭＬＫＬ複合体形成及びＭＬＫＬオリゴマー化によって、アポトーシス及びピロトーシスと区別され得る。ネクロトーシスは、ＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬの両方の必要性並びにそれらの活性化によって遺伝学的に及び薬理学的に定義され得る。
アポトーシス
アポトーシスは、本明細書中で使用される場合、細胞の縮小、核凝縮及び断片化、動的な膜ブレビング及び隣接するもの又は細胞外マトリクスへの接着の喪失を含む、死んだ細胞の特異的な形態学的及び生化学的変化を特徴とするプログラム細胞死の一タイプを指す（Ｎｉｓｈｉｄａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．，（２００８）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．１０３，３４３－３５１）。２つの基礎的なアポトーシスシグナル伝達経路：外因性経路及び内因性経路がある（Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅ Ｉ，ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｃｅｌｌ．１４３：１１９２－２）。内因性アポトーシス経路は、ＤＮＡ損傷、増殖因子欠乏及び酸化ストレスを含め、様々な細胞内刺激により活性化される。アポトーシスの外因性経路は、デスレセプターへのデスリガンドの結合により開始され、続いて、デス誘導性シグナル伝達複合体が組み立てられ、これが下流エフェクターカスパーゼを活性化して、細胞死を直接誘導するか、又はミトコンドリア介在性の内因性アポトーシス経路を活性化する（Ｖｅｒｂｒｕｇｇｅ Ｉ，ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｃｅｌｌ．１４３：１１９２－２）。
外因性アポトーシス
「外因性アポトーシス」という用語は、本明細書中で使用される場合、特異的な膜貫通受容体により感知され、伝播される、細胞外ストレスシグナルにより誘導されるアポトーシス性細胞死の例を指す。外因性アポトーシスは、リガンド、例えばＦＡＳ／ＣＤ９５リガンド（ＦＡＳＬ／ＣＤ９５Ｌ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）及びＴＮＦ（リガンド）スーパーファミリー、メンバー１０（ＴＮＦＳＦ１０、ＴＮＦ－関連アポトーシス誘導リガンド、ＴＲＡＩＬとして最もよく知られる）などの、様々なデスレセプター（即ち、それぞれ、ＦＡＳ／ＣＤ９５、ＴＮＦα受容体１（ＴＮＦＲ１）及びＴＲＡＩＬ受容体（ＴＲＡＩＬＲ）１－２）への結合により開始され得る。或いは、外因性アポトーシス促進性シグナルは、所謂、ネトリン受容体（例えばＵＮＣ５Ａ－Ｄ及び結直腸癌で欠失、ＤＣＣ）を含む、「依存受容体」により送り出され得、これは、それらの特異的なリガンドの濃度が臨界の閾値レベル未満に低下した場合のみ致死性の機能を発揮する（その全体において参照により本明細書に組み込まれる、Ｇａｌｌｕｚｚｉ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ．Ｍａｒ；２５（３）：４８６－５４１を参照）。
本開示の方法において、外因性アポトーシスは、標的細胞における外因性アポトーシスを誘導するポリペプチドをコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスとの接触又はそれによる感染を通じて、標的細胞において誘導され得る。標的細胞において外因性アポトーシスを誘導し得るポリペプチドとしては、ＴＮＦ、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＴＲＡＩＬ（及びその同族受容体）、ＴＲＡＤＤ、デスドメインを伴うＦａｓ－関連タンパク質（ＦＡＤＤ）、形質転換増殖因子ベータ－活性化キナーゼ１（Ｔａｋ１）、カスパーゼ－８、ＸＩＡＰ、ＢＩＤ、カスパーゼ－９、ＡＰＡＦ－１、ＣｙｔｏＣ、カスパーゼ－３及びカスパーゼ－７が挙げられるが限定されない。標的細胞において外因性アポトーシスを阻害し得るポリペプチドとしては、アポトーシスタンパク質１の細胞阻害剤（ｃＩＡＰ１）、ｃＩＡＰ２、Ｉｋｋａ及びＩｋｋｂが挙げられる。いくつかの方法が当技術分野で公知であり、特定のマーカーの検出を通じて、アポトーシスを起こした細胞を同定し、他のタイプの細胞解体及び／又は細胞死と区別するために使用され得る。アポトーシスは、カスパーゼ活性化を必要とし、カスパーゼ活性化の阻害剤及び／又はカスパーゼ－８又はカスパーゼ－９などのカスパーゼがないことによる死滅の阻止により抑制され得る。カスパーゼ活性化は、系統的に、ＰＡＲＰ及びＤＦＦ４５などの特異的な基質並びに６００を超えるさらなるタンパク質の切断により細胞を破壊する。アポトーシス細胞膜は最初、インタクトなままであり、ホスホチジル（ｐｈｏｓｐｈｏｔｉｄｙｌ）－セリンの外在化及び同時に起こる膜ブレビングを伴う。ミトコンドリアの外膜は、一般的には、破壊され、ＣｙｔｏＣ及びＨＴＲＡ２などのタンパク質をサイトゾルに放出する。核ＤＮＡは、当技術分野で公知のアッセイにより検出され得る別々の断片に切断される。
オートファジー
「オートファジー」という用語は、本明細書中で使用される場合、再利用が運命づけられた、オートファゴソームの形成、細胞質の巨大分子及び細胞小器官を取り囲む二重膜結合構造により始まる、進化的に保存された異化過程を指す（Ｌｉｕ ＪＪ，ｅｔ ａｌ．，（２０１１）Ｃａｎｃｅｒ Ｌｅｔｔ．３００，１０５－１１４）。オートファジーは、生理学的に、ストレス条件下での生き残りのための細胞ストラテジー及び機序である。ある特定の環境下で過剰に活性化される場合、過剰なオートファジーの結果、細胞死が起こる（Ｂｏｙａ Ｐ，ｅｔ ａｌ．，（２０１３）Ｎａｔ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１５（７）：７１３－２０）。
本開示の方法において、オートファジーは、免疫細胞においてオートファジーを誘導するポリペプチドをコードする１つ以上の異種ポリヌクレオチドの発現を通じて免疫細胞において誘導され得る。
フェロトーシス
「フェロトーシス」という用語は、本明細書中で使用される場合、鉄依存性であり、再活性酸素種の産生を含む、制御された細胞死の過程を指す。いくつかの実施形態では、フェロトーシスは、致死レベルまでの脂質ヒドロペルオキシドの鉄依存性蓄積を伴う。フェロトーシスに対する感受性は、アミノ酸、鉄及び多価不飽和脂肪酸の代謝を含む多くの生物学的な過程、並びにグルタチオン、リン脂質、ＮＡＤＰＨ及びコエンザイムＱ１０の生合成に密接に関連している。フェロトーシスは、ミトコンドリアとは無関係であるが、いくつかの細胞環境においてＮＡＤＰＨオキシダーゼに依存する、細胞質及び脂質ＲＯＳの両方の産生をもたらす代謝機能障害を伴う（例えば、その全体において参照により本明細書中に組み込まれるＤｉｘｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃｅｌｌ １４９（５）：１０６０－７２を参照）。
本開示の方法において、フェロトーシスは、標的細胞で発現される場合に、フェロトーシスを阻害する標的細胞にとって内因性であるタンパク質の発現又は活性を低下させる１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスとの接触又はそれによる感染を通じて、標的細胞において誘導され得る。フェロトーシスを阻害するタンパク質としては、ＦＳＰ１、ＧＰＸ４及びＳｙｓｔｅｍ ＸＣが挙げられるが限定されない。
いくつかの方法が当技術分野で公知であり、フェロトーシスを起こした細胞を同定し、特定のマーカーの検出を通じて他のタイプの細胞分解及び／又は細胞死と区別するために使用され得る（例えば、その全体において参照により本明細書中に組み込まれる、Ｓｔｏｃｋｗｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｃｅｌｌ １７１：２７３－２８５を参照）。例えば、フェロトーシスは、致死的な脂質過酸化から起こり得るので、脂質過酸化の測定は、鉄依存性の細胞分解を起こした細胞を特定する一方法を提供する。Ｃ１１－ＢＯＤＩＰＹ及びＬｉｐｅｒｆｌｕｏは、脂質ＲＯＳを検出するための迅速で間接的な手段を提供する親油性ＲＯＳセンサーである（Ｄｉｘｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｃｅｌｌ １４９：１０６０－１０７２）。特異的な酸化された脂質を直接検出するために、液体クロマトグラフィー（ＬＣ）／タンデム質量分析（ＭＳ）による分析も使用され得る（Ｆｒｉｅｄｍａｎｎ Ａｎｇｅｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｎａｔ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．１６：１１８０－１１９１；Ｋａｇａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１３：８１－９０）。脂質過酸化を測定するために、イソプロスタン及びマロンジアルデヒド（ＭＤＡ）も使用され得る（Ｍｉｌｎｅ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｎａｔ．Ｐｒｏｔｏｃ．２：２２１－２２６；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ６６（２）：４４９－４６５）。ＭＤＡを測定するためのキットが市販されている（Ｂｅｙｏｔｉｍｅ，Ｈａｉｍｅｎ，Ｃｈｉｎａ）。
フェロトーシスを研究するための他の有用なアッセイには、鉄の存在量及びＧＰＸ４活性を測定することが含まれる。鉄の存在量は、誘導結合プラズマ－ＭＳ又はカルセインＡＭ消光並びに他の特異的な鉄プローブを使用して測定され得（Ｈｉｒａｙａｍａ ａｎｄ Ｎａｇａｓａｗａ，２０１７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｎｕｔｒ．６０：３９－４８；Ｓｐａｎｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１６，Ｎａｔ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１２：６８０－６８５）、一方でＧＰＸ４活性は、ＬＣ－ＭＳを用いて、細胞溶解液中でホスファチジルコリンヒドロペルオキシド還元を使用して検出され得る（Ｙａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｃｅｌｌ １５６：３１７－３３１）。さらに、フェロトーシスは、グルタチオン（ＧＳＨ）含量を測定することによって評価され得る。ＧＳＨは、例えば市販のＧＳＨ－Ｇｌｏグルタチオンアッセイを使用することによって測定され得る（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）。
フェロトーシスは、１つ以上のマーカータンパク質の発現を測定することによっても評価され得る。適切なマーカータンパク質としては、グルタチオンペルオキシダーゼ４（ＧＰＸ４）、プロスタグランジン－エンドペルオキシドシンターゼ２（ＰＴＧＳ２）及びシクロオキシゲナーゼ－２（ＣＯＸ－２）が挙げられるが限定されない。マーカータンパク質又はマーカータンパク質をコードする核酸の発現レベルは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅反応、逆転写酵素ＰＣＲ分析、定量的リアルタイムＰＣＲ、一本鎖高次構造多型分析（ＳＳＣＰ）、ミスマッチ切断検出、ヘテロ二重鎖分析、ノーザンブロット分析、ウェスタンブロット分析、インサイチューハイブリッド形成、アレイ分析、デオキシリボ核酸シーケンシング、制限断片長多型分析及びそれらの組み合わせ又は部分的な組み合わせを含むが限定されない当技術分野で公知の適切な技術を使用して決定され得る。
ＩＩＩ．ウイルス
特定の態様では、本開示は、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスに関する。サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドを標的細胞に転移させる能力を有するあらゆるウイルスを使用し得る。例えば、いくつかの実施形態では、ウイルスは、少なくとも４、５、６、７、８、９又は１０ｋｂの異種ポリヌクレオチドを標的細胞に輸送可能である。いくつかの実施形態では、ウイルスは、４～１２ｋｂの異種ポリヌクレオチドを標的細胞に輸送可能である。いくつかの実施形態では、ウイルスは、細胞溶解性であり、即ち標的細胞を溶解可能である。いくつかの実施形態では、ウイルスは腫瘍溶解性であり、即ち癌細胞に優先的に感染し及び／又は溶解させるウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスは標的細胞に優先的に感染する。いくつかの実施形態では、ウイルスは急速に分裂する細胞（例えば癌細胞）に優先的に感染する。いくつかの実施形態では、ウイルスは癌細胞に優先的に感染する。
ウイルスは、ＤＮＡウイルス又はＲＮＡウイルス（例えばレトロウイルス）であり得る。いくつかの実施形態では、ウイルスはＲＮＡウイルスである。いくつかの実施形態では、ウイルスはＤＮＡウイルスである。いくつかの実施形態では、ＤＮＡウイルスは、ＤＮＡ複製ウイルス、例えばＤＮＡ複製腫瘍溶解性ウイルスである。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、このウイルスに以前感染した宿主に再感染可能である。この特徴により、対象に対するウイルスの複数回投与が可能になる。いくつかの実施形態では、ウイルスは生来、Ｚ－ＮＡ認識を惹起する。
いくつかの実施形態では、ウイルスにとって、１つ以上の内因性ウイルス遺伝子において不活性化する突然変異を含むことは有利である。いくつかの実施形態では、不活性化する突然変異は、不活性化する突然変異が病原性を低下させるような、ウイルスの病原性に寄与する内因性ウイルス遺伝子（例えばＩＣＰ３４．５）におけるものである。いくつかの実施形態では、不活性化する突然変異は、不活性化する突然変異が感染時に細胞の代謝回転を増強又は上昇させるような、感染した細胞の代謝回転を制限する内因性ウイルス遺伝子におけるものである（例えばＨＳＶにおけるＩＣＰ６；ワクシニアウイルスにおけるＥ３Ｌ）。いくつかの実施形態では、ウイルス遺伝子における不活性化する突然変異は、病原性又は細胞回転を調整するさらなるポリヌクレオチド又はポリペプチドの発現と組み合わせられ得る。例えば、ワクシニアウイルスＥ３Ｌのデルタ－Ｚα１突然変異体形態の発現をＩＣＰ３４．５の全欠失と組み合わせて、複製能を回復させ得る。
非活性化のために標的とされ得る適切なウイルス及び内因性ウイルス遺伝子の例を以下の表で提供する。
Figure 2023532339000001
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスはアデノウイルスである。いくつかの実施形態では、アデノウイルスは、アデノウイルス血清型５（Ａｄ５）である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスは、アデノウイルス血清型１９Ａ（Ａｄ１９Ａ）である。いくつかの実施形態では、アデノウイルスは、アデノウイルス血清型２６（Ａｄ２６）である。ある血清型のアデノウイルスが、異なるアデノウイルス血清型の線維タンパク質を含むように改変され得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ａｄ５は、アデノウイルス血清型３５（Ａｄ３５）からの線維タンパク質を置換するために改変される。このキメラウイルスは、Ａｄ５／Ｆ３５と呼ばれる（その全体において参照により本明細書中に組み込まれる、Ｙｏｔｎｄａ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ８：９３０－９３７を参照）。いくつかの実施形態では、Ａｄ５は、アデノウイルス血清型３（Ａｄ３）からの線維タンパク質を置換するために改変される。このキメラウイルスはＡｄ５／Ｆ３と呼ばれる。
いくつかの実施形態では、アデノウイルスは、対応する野生型アデノウイルスと比較して、１つ以上の突然変異（例えば１つ以上の置換、付加又は欠失）を含む。例えば、いくつかの実施形態では、アデノウイルス（例えばＡｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、アデノウイルス初期遺伝子領域１Ａ（Ｅ１Ａ）において欠失を含む。いくつかの実施形態では、アデノウイルス（例えばＡｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、Ｅ１Ａにおいて２４ｂｐの欠失を含む。この欠失により、ウイルス複製が、Ｒｂ経路が変化した細胞に特異的になる。いくつかの実施形態では、アデノウイルス（例えばＡｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、アデノウイルス初期遺伝子領域１Ｂ（Ｅ１Ｂ）において欠失を含む。いくつかの実施形態では、アデノウイルス（例えばＡｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、Ｅ１Ｂにおいて８２７ｂｐの欠失を含む。この欠失により、Ｐ５３の変更がある細胞においてウイルスが複製できるようになる。特定の実施形態では、アデノウイルス（例えばＡｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、Ｅ１Ａにおいて２４ｂｐの欠失を含み、Ｅ１Ｂにおいて８２７ｂｐの欠失を含む。いくつかの実施形態では、アデノウイルス（例えばＡｄ５又はＡｄ５／Ｆ３５）は、線維－Ｈループへと操作されるＡｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）－モチーフを有する。この修飾により、アデノウイルスが（癌細胞において発現される）αｖβ３及びαｖβ５インテグリンを使用して、細胞に侵入するようになる。（その全体において参照により本明細書中に組み込まれる、Ｒｅｙｎｏｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，１９９９，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ６：１３３６－１３３９を参照）。
いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のようなポリヌクレオチド（例えば、サノトランスミッションポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）は、アデノウイルスのＥ１領域に、例えばＥ１Ａ又はＥ１Ｂにおいて、挿入され得る。例えば、いくつかの実施形態では、Ｅ１領域が除去され、そのポリヌクレオチドで置き換えられる。ポリヌクレオトド（ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｄｅ）は、本明細書中に記載のようなプロモーター、例えばそのウイルスにとって異種であるプロモーター、に操作可能に連結され得る。いくつかの実施形態では、本明細書中に記載のようなポリヌクレオチド（例えば、サノトランスミッションポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）は、ポリヌクレオチドの発現を推進するために内因性ウイルスプロモーターの下流に挿入され得る。例えば、いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、強力なウイルスＬ５プロモーターのアデノウイルスの下流に挿入される。Ｌ５プロモーターは、後期ウイルス遺伝子発現と同時の発現を与える。
いくつかの特定の実施形態では、ウイルスはアデノウイルスではない。いくつかの実施形態では、ウイルスはアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ではない。いくつかの実施形態では、ウイルスは、アデノウイルス又はＡＡＶではない。さらなる特定の実施形態では、ウイルスは、合成多量体化ドメイン、即ちドメインが互いに対して近接して保持されるように十分な親和性で他のこのようなドメインと物理的に会合する非天然のドメインをコードするポリヌクレオチドを含まない。いくつかの実施形態では、ウイルスは、合成多量体化ドメイン、即ちドメインが互いに対して近接して保持されるように十分な親和性で他のこのようなドメインと物理的に会合する非天然ドメインをコードするポリヌクレオチドを含むアデノウイルス又はＡＡＶではない。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、例えばＨＳＶ１である。いくつかの実施形態では、ＨＳＶ１は、Ｋｏｓ、Ｆ１、ＭａｃＩｎｔｙｒｅ、ＭｃＫｒａｅ及び関連株から選択される。ＨＳＶは、ＩＣＰ６、ＩＣＰ３４．５、ＩＣＰ４７、ＵＬ２４、ＵＬ５５及びＵＬ５６から選択される１つ以上の遺伝子において欠損があり得る。特定の実施形態では、前初期（ＩＥ）プロモーターに操作可能に連結されるＵＳ１１をコードする遺伝子を含むポリヌクレオチドカセットによって、ＩＣＰ３４．５をコードする遺伝子が置き換えられる。さらなる特定の実施形態では、ＨＳＶは、ワクシニアウイルスＥ３Ｌ遺伝子のΔＺα突然変異体形態を含む。
一実施形態では、ＨＳＶは、１つ以上のＩＣＰ６の機能において欠損がある。例えば、ＩＣＰ６遺伝子の突然変異の結果、突然変異に依存して異なる機能喪失が起こり得る。いくつかの実施形態では、ＩＣＰ６は、受容体－相互作用タンパク質同型相互作用モチーフ（ＲＨＩＭ）ドメインの１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＰ６は、カスパーゼ－８結合を阻害するＣ末端での１つ以上の突然変異を含む。いくつかの実施形態では、ＩＣＰ６は、リボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＲ）活性を低下させるか又は排除する１つ以上の突然変異を含む。
いくつかの実施形態では、ＨＳＶは、前初期遺伝子としてＵＳ１１遺伝子を発現する。ＵＳ１１タンパク質は、ウイルス生活環の後期にタンパク質翻訳制御を必要とする。ＵＳ１１の前初期発現は、ＩＣＰ３４．５における機能喪失突然変異を代償し、ＩＣＰ３４．５が欠失している突然変異体ウイルスにおいてタンパク質合成の遮断を相殺することが可能であり、その結果、減衰が小さいウイルスが得られる。
他の実施形態では、ウイルスは、ポックスウイルス科ファミリー、例えば、粘液腫ウイルス、ヤバ様疾患ウイルス、ラクーンポックスウイルス、ｏｒｆウイルス及びウシポックスウイルスから選択されるウイルスに属する。いくつかの実施形態では、ウイルスは、ポックスウイルス科のコルドポックスウイルス亜科に属する。いくつかの実施形態では、ウイルスは、コルドポックスウイルス亜科のオルトポックスウイルス属に属する。いくつかの実施形態では、ウイルスは、オルトポックス属のワクシニアウイルス種に属する。いくつかの実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｄａｉｒｅｎｌ、ＩＨＤ－Ｊ、Ｌ－ＩＰＶ、ＬＣ１６Ｍ８、ＬＣ１６ＭＯ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＬＩＶＰ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＷＲ６５－１６、Ｗｙｅｔｈ、Ａｎｋａｒａ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｔｉａｎ Ｔａｎ及びＷＲからなる群から選択される株である。
一実施形態では、ワクシニアウイルスは、チミジンキナーゼ（ＴＫ）活性を欠くように改変される。一実施形態では、ワクシニアウイルスは、ＴＫ活性を低下させるか又は排除する、Ｊ２Ｒ遺伝子における不活性化突然変異又は欠失を有する。Ｊ２Ｒ遺伝子は、ピリミジンデオキシリボヌクレオチド合成に対するサルベージ経路の一部を形成するＴＫをコードする。いくつかの実施形態では、ワクシニアウイルスは、リボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＲ）活性を欠くように改変される。いくつかの実施形態では、ワクシニアウイルスは、ＲＲ活性を低下させるか又は排除する、Ｉ４Ｌ及びＦ４Ｌ遺伝子から選択される遺伝子における不活性化突然変異又は欠失を有する。ＴＫ活性又はＲＲ活性の低下は、形質転換された細胞（例えば癌細胞）においてウイルスの複製を増加させる。
ワクシニアウイルスは、アポトーシス、ネクロトーシス及びピロトーシスのシグナル伝達を妨害する複数のタンパク質をコードする。例えば、Ｅ３Ｌ遺伝子によりコードされるＥ３は、ワクシニア宿主の範囲にも影響を及ぼし、病原性に寄与する、重要なインターフェロンアンタゴニストである。Ｅ３は、最初、インターフェロン誘導性ｄｓＲＮＡ結合タンパク質ＰＫＲの抗ウイルス活性と拮抗し、Ｃ末端ｄｓＲＮＡ結合ドメインを保持する、２５－ｋＤａ ｄｓＲＮＡ結合タンパク質として特徴評価された。Ｅ３のＮ末端領域は、Ｚ－ＤＮＡ結合タンパク質と類似性を有する別個のドメインを形成し、両Ｎ末端及びＣ末端ドメインは、ウイルス病原性に寄与する。Ｅ３は、Ｅ３Ｌ遺伝子を欠く突然変異体ワクシニアがＨｅＬａ細胞に感染した結果、急速に細胞死が起こったときに、アポトーシス阻害剤としても記載された（Ｖｅｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｌｅｔｔｅｒｓ １８６：６８－８０を参照）。従って、いくつかの実施形態では、ワクシニアウイルスは、Ｅ３Ｌ遺伝子を欠く。いくつかの実施形態では、Ｅ３Ｌ遺伝子は、癌細胞の感染時にネクロトーシスを誘導する突然変異を有する。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、ワクシニアウイルスではない。いくつかの特定の実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、アデノウイルスではない。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ではない。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、アデノウイルス又はＡＡＶではない。さらなる特定の実施形態では、ウイルスは、合成多量体化ドメイン、即ちドメインが互いに対して近接して保持されるように十分な親和性で他のこのようなドメインと物理的に会合する非天然ドメインをコードするポリヌクレオチドを含まない。いくつかの実施形態では、ウイルスは、合成多量体化ドメイン、即ちドメインが互いに対して近接して保持されるように十分な親和性で他のこのようなドメインと物理的に会合する非天然ドメインをコードするポリヌクレオチドを含むアデノウイルス又はＡＡＶではない。
いくつかの実施形態では、ウイルス（例えばＨＳＶ）は、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲ）標的配列を含む。ｍｉＲ標的配列は、腫瘍細胞においてウイルス複製を妨害することなく、正常細胞においてウイルス病態形成を防ぐ。ｍｉＲ標的配列は、１つ以上のウイルス遺伝子の遺伝子座、例えば正常な（例えば非癌性）細胞でのウイルスの複製に必要とされる１つ以上のウイルス遺伝子に挿入され得る。ウイルスにおける封入のための代表的なｍｉｃｒｏＲＮＡ標的配列はｍｉＲ－１２４であり、これは、神経適用に対する特定の適用を有する。他のｍｉｃｒｏＲＮＡ標的配列は、或いは、他のタイプの組織を保護するために使用され得、所望の組織又は細胞タイプを保護するために適切なｍｉｃｒｏＲＮＡ標的配列を選択することは、当技術分野の通常技術の範囲内である。例えば、ｍｉＲ－１２２及びｍｉＲ－１９９は、正常な肝臓細胞で発現されるが、原発性肝臓癌では発現されず；従ってｍｉＲ－１２２及び／又はｍｉＲ－１９９ｍｉｃｒｏＲＮＡ標的配列の一方又は組み合わせが、肝臓癌の処置のためのウイルスの実施形態で使用され得る。同様に、ｍｉＲ－１２８及び／又はｍｉＲ－１３７ｍｉｃｒｏＲＮＡのための標的配列は、正常な脳の保護のためにウイルスにおいて使用され得る。代表的なｍｉｃｒｏＲＮＡ標的配列は、ｍｉｃｒｏＲＮＡの逆相補物であり得る。
いくつかの実施形態では、ｍｉｃｒｏＲＮＡ標的配列は、ｍｉｃｒｏＲＮＡの存在下でその遺伝子を抑制するために、ＨＳＶ遺伝子の３’非翻訳領域（“ＵＴＲ）に含まれる。ｍｉｃｒｏＲＮＡ標的配列の複数コピー（例えば２コピー、３コピー、４コピー、５コピー、６コピー又はそれを超える）がタンデムに挿入され得る。ｍｉｃｒｏ－ＲＮＡ標的配列の複数コピーは、４個以上のヌクレオチド（例えば８個以上のヌクレオチド）のスペーサーにより分離され得る。理論により縛られることを望むものではないが、より大きいスペーシング（例えば約８ヌクレオチドより大きい）が安定性の向上をもたらすと考えられる。
ＨＳＶ感染の溶解効果からの非癌性細胞の保護を支援するために、ｍｉｃｒｏＲＮＡ標的配列の複数コピーが非癌性細胞での複製に必須であるＨＳＶ遺伝子の３’ＵＴＲにおいて挿入され、これらは、当業者にとって公知である。この部位は、ＨＳＶゲノム内でその正常（又はネイティブ）遺伝子座における、ｍｉｃｒｏＲＮＡにより標的化される遺伝子の３’ＵＴＲであり得る。特定の実施形態では、ウイルスは、ＩＣＰ４遺伝子の両ネイティブコピーを有するウイルスにおいて、ＩＣＰ４遺伝子の３’ＵＴＲに挿入されるｍｉｃｒｏＲＮＡ標的配列の複数コピー、例えばＩＣＰ４遺伝子の一方又は両方のコピー、を含むＨＳＶである。
特定の実施形態では、ウイルスのゲノムは、ＩＣＰ４７遺伝子に対するプロモーターと一緒に、二倍体遺伝子ＩＣＰ０、ＩＣＰ３４．５、ＬＡＴ及びＩＣＰ４のそれぞれ１コピーを含む内部反復（結合部）領域の欠失を含有する。他の実施形態では、結合部を欠失させる代わりに、結合部領域、特にＩＣＰ０及び／又はＩＣＰ４７における遺伝子の発現が、これらの遺伝子の欠失又はそうでなければそれらの突然変異誘発の限定により抑制され得る。
いくつかの実施形態では、ウイルスは、標的細胞、例えば癌細胞の表面上に存在する、分子（例えば、タンパク質、脂質又は炭水化物）に特異的なリガンドを含む。リガンドは、リガンドでの所望の細胞の標的化を促進するために、ウイルス表面上に露出される糖タンパク質（例えばＨＳＶのｇＤ又はｇＣ）に組み込まれ得る。例えば、リガンドは、ｇＤの残基１と２５との間に組み込まれ得る。ＧＢＭ及び他の癌細胞を標的化するための代表的なリガンドとしては、ＥＧＦＲ及びＥＧＦＲＶＩＩＩ、ＣＤ１３３、ＣＸＣＲ４、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣｌＣ－３／アネキシン－２／ＭＭＰ－２、ヒトトランスフェリン受容体及びＥｐＣＡＭを標的とするものが挙げられる。リガンドは、このような受容体又は細胞表面分子を標的とし得、即ち、リガンドは、このような受容体又は細胞表面分子に特異的に結合可能であり得る。抗体（例えば単鎖抗体）及びＶＨＨ（単ドメイン抗体）などのＥＧＦＲ－及びＥＧＦＲＶＩＩＩ－特異的なリガンドは、文献に記載されている（Ｋｕａｎ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８８，９６２－６９（２０００）；Ｗｉｃｋｓｔｒａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，５５（１４）：３１４０－８（１９９５）；Ｏｍｉｄ ｆａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｔｕｍｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，２５：２９６－３０５（２００４）；Ｕｃｈｉｄａｅｔａｌ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，２１：５６１－９（２０１３）も参照；Ｂｒａｉｄｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｎ，１５，１５７９－９２（２００８）も参照）。
ウイルスはまた、又は或いは、必ずしも癌に関連しない他の細胞表面分子又は受容体にリガンドを組み込むことにより標的化され得る。例えば、リガンドは、天然リガンド（例えば増殖因子（ＥＧＦＲを標的化し得るＥＧＦ、ｔｒｋＡを標的化し得るＮＧＦなど））、ペプチド又は非ペプチドホルモン、標的分子（例えば、設計されるアンキリン反復タンパク質（ＤＡＲＰｉｎｓ））を結合させるために選択するペプチドなどからの結合ドメインを含み得る。ウイルスは、非カノニカル受容体を通じたベクター侵入を促進するｇＢ及び／又はｇＤの突然変異体形態も含み得る（及びＨＳＶゲノム内のこれらの遺伝子の一方又は両方においてこのような突然変異も有し得る）。
ＩＶ．ウイルスペイロード
本開示のウイルスは、感染時に標的細胞のサノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変され得る。例えば、いくつかの実施形態では、改変されたウイルスは、標的細胞においてサノトランスミッションを促進するポリペプチドをコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態では、改変されたウイルスは、それぞれ、標的細胞においてサノトランスミッションを促進するポリペプチドをコードする少なくとも２、３、４又は５つのポリヌクレオチド配列を含む。標的細胞におけるサノトランスミッションを促進する代表的なポリペプチド及びポリヌクレオチドは、以下の表２Ａ、表２Ｂ、表３、表４、表５及び表６で提供される。
いくつかの実施形態では、ウイルスにより含まれるポリヌクレオチドは、野生型タンパク質をコードする。いくつかの実施形態では、ウイルスにより含まれるポリヌクレオチドは、野生型タンパク質の生物学的に活性のある断片、例えば野生型タンパク質のＮ末端若しくはＣ末端短縮化又は野生型タンパク質の別の機能的断片若しくはドメインをコードする。いくつかの実施形態では、ウイルスにより含まれるポリヌクレオチドは、１つ以上の突然変異を含む、タンパク質若しくは機能断片又はそのドメインをコードする。いくつかの実施形態では、ウイルスにより含まれるポリヌクレオチドは、ヒトタンパク質若しくはその機能断片、例えばヒト野生型タンパク質若しくはその機能断片又はヒトタンパク質若しくはその機能断片の変異体をコードする。
Figure 2023532339000002
Figure 2023532339000003
Figure 2023532339000004
Figure 2023532339000005
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドは、表２Ａ又は２Ｂで挙げられるポリペプチド（又はそれと少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一であるポリペプチド）のいずれか１つ以上をコードするか、又は表３で挙げられるポリペプチドドメイン（又はそれと少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一であるドメイン）のいずれか１つをコードする。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドは、受容体－相互作用セリン／スレオニン－タンパク質キナーゼ３（ＲＩＰＫ３）、Ｚ－ＤＮＡ－結合タンパク質１（ＺＢＰ１）、混合系統キナーゼドメイン様偽キナーゼ（ＭＬＫＬ）、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）－ドメイン－含有アダプター誘導性インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）、ＴＩＲドメイン及びＲＨＩＭドメインのみを含むＴＲＩＦのＮ末端短縮化、インターフェロン調節因子３（ＩＲＦ３）、デスドメインを伴う短縮されたＦａｓ関連タンパク質（ＦＡＤＤ）及び細胞性ＦＬＩＣＥ（ＦＡＤＤ様ＩＬ－１β－変換酵素）－阻害タンパク質（ｃ－ＦＬＩＰ）のうちいずれか１つ以上をコードする。いくつかの実施形態では、ｃＦＬＩＰはヒトｃＦＬＩＰである。いくつかの実施形態では、ｃＦＬＩＰは、カスパーゼ－８及びＦＡＤＤ様アポトーシス制御因子（ｃＦＬＡＲ）である。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドは、ガスダーミン－Ａ（ＧＳＤＭ－Ａ）、ガスダーミン－Ｂ（ＧＳＤＭ－Ｂ）、ガスダーミン－Ｃ（ＧＳＤＭ－Ｃ）、ガスダーミン－Ｄ（ＧＳＤＭ－Ｄ）、ガスダーミン－Ｅ（ＧＳＤＭ－Ｅ）、二量体形成ドメインを伴うＣ末端カスパーゼ動員ドメインを含有するアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ－ＣＡＲＤ）及びそれらの突然変異体からなる群から選択されるポリペプチドをコードする。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドは、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＸＩＡＰ及びＮｅｍｏから選択されるポリペプチドをコードする。これらのポリペプチドは細胞死を抑制し得るものの、これらは例えばＮＦ－ｋＢ活性化を促進することによって、サノトランスミッションを促進し得る。従って、いくつかの実施形態では、標的細胞におけるｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＸＩＡＰ及び／又はＮｅｍｏの発現の上昇は、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する。他の実施形態では、標的細胞におけるｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＸＩＡＰ及び／又はＮｅｍｏの発現低下は、例えば細胞死のそれらの抑制を減弱させ、それにより細胞回転を促進することによって、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、デスフォールドドメインをコードする。デスフォールドドメインの例としては、デスドメイン、パイリンドメイン、デスエフェクタードメイン（ＤＥＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）及びそれらの変異体が挙げられるが限定されない。
いくつかの実施形態では、デスドメインは、デスドメインを伴うＦａｓ関連タンパク質のデスドメイン（ＦＡＤＤ）、Ｆａｓ受容体のデスドメイン、腫瘍壊死因子受容体１型－関連デスドメインタンパク質（ＴＲＡＤＤ）のデスドメイン、腫瘍壊死因子受容体１型（ＴＮＦＲ１）のデスドメイン及びそれらの変異体から選択される。ＦＡＤＤは、２３ｋＤａタンパク質であり、２０８個のアミノ酸から構成される。これは、２つの主要ドメイン：Ｃ末端デスドメイン（ＤＤ）及びＮ末端デスエフェクタードメイン（ＤＥＤ）を含有する。これらのドメインは、互いに構造的に類似しており、それぞれが６個のα－ヘリックスからなる。ＦＡＤＤのＤＤは、それらのＤＤを介した形質膜でのＦａｓ受容体などの受容体に結合する。ＦＡＤＤのＤＥＤは、プロカスパーゼ８など、細胞内分子のＤＥＤに結合する。いくつかの実施形態では、ＦＡＤＤ－ＤＤは、ＦＡＤＤ－ＤＤのドミナントネガティブ突然変異体又はミリストル化（ｍｙｒｉｓｔｏｌａｔｅｄ）ＦＡＤＤ－ＤＤ（ｍｙｒ－ＦＡＤＤ－ＤＤ）である。
いくつかの実施形態では、パイリンドメインは、ＮＬＲファミリーパイリンドメイン含有３（ＮＬＲＰ３）及びアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）から選択されるタンパク質由来である。
いくつかの実施形態では、デスエフェクタードメイン（ＤＥＤ）は、デスドメインを伴うＦａｓ関連タンパク質（ＦＡＤＤ）、カスパーゼ－８及びカスパーゼ－１０から選択されるタンパク質である。
いくつかの実施形態では、ＣＡＲＤは、ＲＩＰ関連ＩＣＨ１／ＣＥＤ３－相同タンパク質（ＲＡＩＤＤ）、アポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、ミトコンドリアの抗ウイルスシグナル伝達タンパク質（ＭＡＶＳ）、カスパーゼ－１及びそれらの変異体から選択されるタンパク質由来である。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、ＴＩＲドメインをコードする。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、ＴＩＲドメインを含むタンパク質をコードする。ＴＩＲドメインは、骨髄分化一次応答タンパク質８８（ＭｙＤ８８）、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）－ドメイン－含有アダプター誘導性インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）、ＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質（ＴＩＲＡＰ）及び転鎖関連膜タンパク質（ＴＲＡＭ）を含むが限定されないタンパク質由来であり得る。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、ウイルス遺伝子である。いくつかの実施形態では、ウイルス遺伝子は、カポジ肉腫関連ヘルペスウイルス（ＫＳＨＶ）からのｖＦＬＩＰ（ＯＲＦ７１／Ｋ１３）、モルスクム・コンタギオウスム（Ｍｏｌｌｕｓｃｕｍ Ｃｏｎｔａｇｉｏｕｓｕｍ）ウイルスからのＭＣ１５９Ｌ、ウマヘルペスウイルス２からのＥ８、ヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）又はマウスサイトメガロウイルス（ＭＣＭＶ）からのｖＩＣＡ、ウシポックスウイルスからのＣｒｍＡ及びオートグラファ・カリフォルニカ（Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ）マルチカプシド核多角体病ウイルス（ＡｃＭＮＰＶ）からのＰ３５から選択されるポリペプチドをコードする。
本明細書中に記載のような標的細胞によるサノトランスミッションを促進するポリペプチドのいずれかは、それらのサノトランスミッション促進能をさらに増強させるために変異させられ得る。例えば、いくつかの実施形態では、ＺＢＰ１をコードするポリヌクレオチドは、受容体－相互作用タンパク質ホモタイプ相互作用モチーフ（ＲＨＩＭ）Ｃの欠失、ＲＨＩＭ Ｄの欠失、ＲＨＩＭ Ｂの欠失及びＺα１ドメインのＮ－末端をコードする領域における欠失を含む。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するウイルスにより含まれる１つ以上のポリヌクレオチドは、受容体－相互作用セリン／スレオニン－タンパク質キナーゼ１（ＲＩＰＫ１）の発現又は活性を阻害する。
膜融合性タンパク質
一実施形態では、サノトランスミッションを促進するウイルスにより含まれる１つ以上のポリヌクレオチドは、膜融合性タンパク質をコードする。膜融合性タンパク質は、別の細胞へのウイルス感染細胞の融合を促進可能ないずれかの異種タンパク質であり得る。膜融合性タンパク質は当技術分野で公知であり、例えば国際公開第２０１７／１１８８６６号パンフレットに記載され、これはその全体において参照により本明細書に組み込まれる。膜融合性タンパク質を発現するウイルスは、膜融合性タンパク質を発現しないウイルスと比較して腫瘍細胞死滅を促進することが示されている。国際公開第２０１７／１１８８６６号パンフレットを参照。膜融合性タンパク質の例としては、ＶＳＶ－Ｇ、シンシチン－１（ヒト内在性レトロウイルス－Ｗ（ＨＥＲＶ－Ｗ）から）又はシンシチン－２（ＨＥＲＶＦＲＤＥ１から）、パラミクソウイルスＳＶ５－Ｆ、麻疹ウイルス－Ｈ、麻疹ウイルス－Ｆ、ＲＳＶ－Ｆ、レトロウイルス又はレンチウイルスからの糖タンパク質、例えばテナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）、マウス白血病ウイルス（ＭＬＶ）、マソン・ファイザー・サルウイルス（ＭＰＭＶ）及びＲ膜貫通ペプチドが除去された（Ｒ－バージョン）ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）が挙げられる。一実施形態では、膜融合性タンパク質は、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）からの糖タンパク質であり、Ｒ膜貫通ペプチドが変異しているか又は除去されている（ＧＡＬＶ－Ｒ－）。代表的な膜融合性タンパク質は以下の表２Ｂで提供する。
Figure 2023532339000006
サノトランスミッションを促進するキメラタンパク質
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、キメラタンパク質をコードし得る。キメラタンパク質は、以下の表３で列挙されるドメインのうちいずれか２つ以上、例えば表３で列挙されるドメインのうち２、３、４又は５つ、を含み得る。例えば、いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、ＴＲＩＦ ＴＩＲドメイン、ＴＲＩＦ ＲＨＩＭドメイン及びＡＳＣ－ＣＡＲＤを含むキメラタンパク質をコードする。このキメラタンパク質は、カスパーゼ－１を動員し、ピロトーシスを活性化する。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＺＢＰ１ Ｚａ２ドメイン及びＡＳＣ－ＣＡＲＤを含む。このキメラタンパク質は、ピロトーシスを活性化することが予想される。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＲＩＰＫ３ ＲＨＩＭドメイン及びカスパーゼ大サブユニット／小サブユニット（Ｌ／Ｓ）ドメインを含む。このキメラタンパク質は、カスパーゼの構成的な活性化を推進し、これは、表３で示されるような、選択されるカスパーゼＬ／Ｓドメインに依存して細胞死の異なるタイプにつながる。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ＴＲＩＦ ＴＩＲドメイン、ＴＲＩＦ ＲＨＩＭドメイン及びＦＡＤＤデスドメイン（ＦＡＤＤ－ＤＤ）を含む。このキメラタンパク質は、アポトーシスを阻止するが、ネクロトーシスを誘導すると予想される。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、阻害剤ｋＢαスーパーリプレッサー（ＩｋＢαＳＲ）及びカスパーゼ－８ＤＥＤドメインを含む。このキメラタンパク質は、ＮＦ－ｋＢを阻害し、アポトーシスを誘導すると予想される。
Figure 2023532339000007
いくつかの実施形態では、ウイルスは、サノトランスミッションを促進する唯一のポリヌクレオチドを含むように改変される。いくつかの実施形態では、このサノトランスミッションを促進する単一のポリヌクレオチドは、唯一のサノトランスミッションポリペプチド又はそのドメインをコードする。他の実施形態では、ウイルスは、２つ以上の異なるサノトランスミッションポリペプチド又はそのドメインをコードする、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変される。いくつかの実施形態では、２つ以上のサノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、Ｓｈａｒｐｉｎ、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、それらの変異体及びそれらの機能的断片からなる群から選択される。
適切なカスパーゼとしては、カスパーゼ－１、カスパーゼ－２、カスパーゼ－２、カスパーゼ－３、カスパーゼ－４、カスパーゼ－５、カスパーゼ－６、カスパーゼ－７、カスパーゼ－８、カスパーゼ－９、カスパーゼ－１０、カスパーゼ－１１及びカスパーゼ－１２が挙げられる。
代表的なＴＮＦＳＦタンパク質を以下の表４で提供する。
Figure 2023532339000008
本開示のサノトランスミッションポリペプチドをコードする代表的なポリヌクレオチド配列は、以下の表５で提供される。表５で列挙される遺伝子によりコードされるポリペプチドを含む、本明細書中で開示されるサノトランスミッションポリペプチドをコードする（又はそれと少なくとも８５％、８７％、９０％、９５％、９７％、９８％又は９９％同一であるポリペプチドをコードする）いずれかの他のポリヌクレオチド配列が本明細書中に記載の方法及び組成物において使用され得ることが理解される。
Figure 2023532339000009
Figure 2023532339000010
２つ以上のサノトランスミッションポリペプチドは、別個のポリペプチドとして発現され得るか、又はそれらは、キメラタンパク質内に含まれ得る。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドのうち少なくとも１つは、２つ以上のサノトランスミッションポリペプチドをコードする単一の転写物として転写される。
本明細書中に記載のサノトランスミッションポリペプチドは、ＮＦ－ｋＢの活性化、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７の活性化、アポトーシスの促進及びプログラムされた壊死（例えば、ネクロトーシス又はピロトーシス）の促進を含むが限定されない様々な機序を通じて、サノトランスミッションを促進し得る。２つ以上のサノトランスミッションポリペプチドの組み合わせが使用される場合、２つ以上のサノトランスミッションポリペプチドのそれぞれは、同様の機序を通じて、又は異なる機序を通じて、サノトランスミッションを促進し得る。例えば、いくつかの実施形態では、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、ＮＦ－ｋＢを活性化する。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、アポトーシスを促進する。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、プログラムされた壊死（例えばネクロトーシス又はピロトーシス）を促進する。
２つ以上のサノトランスミッションポリペプチドが異なる機序を通じてサノトランスミッションを促進する場合、機序の様々な組み合わせが使用され得る。例えば、いくつかの実施形態では、１つ以上のサノトランスミッションポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、アポトーシスを促進する。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラムされた壊死（例えばネクロトーシス又はピロトーシス）を促進する。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、アポトーシスを促進する。いくつかの実施形態では、１つ以上のサノトランスミッションポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラムされた壊死（例えばネクロトーシス又はピロトーシス）を促進する。いくつかの実施形態では、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、アポトーシスを促進し、１つ以上のサノトランスミッションポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラムされた壊死（例えばネクロトーシス又はピロトーシス）を促進する。
いくつかの実施形態では、ＮＦ－ｋＢを活性化するサノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、Ｓｈａｒｐｉｎ、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＮＦＳＦタンパク質及びそれらの機能的断片及び変異体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化するサノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＭｙＤ８８、ＭＡＶＳ、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３及びそれらの機能的断片及び変異体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、アポトーシスを促進するサノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ１、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ及びそれらの機能的断片及び変異体からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、プログラムされた壊死（例えばネクロトーシス又はピロトーシス）を促進するサノトランスミッションポリペプチドは、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミン及びそれらの機能的断片及び変異体からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの組み合わせは、ＴＲＡＤＤ及びＴＲＡＦ２、ＴＲＡＤＤ及びＴＲＡＦ６、ＴＲＡＤＤ及びｃＩＡＰ１、ＴＲＡＤＤ及びｃＩＡＰ２、ＴＲＡＤＤ及びＸＩＡＰ、ＴＲＡＤＤ及びＮＯＤ２、ＴＲＡＤＤ及びＭｙＤ８８、ＴＲＡＤＤ及びＴＲＡＭ、ＴＲＡＤＤ及びＨＯＩＬ、ＴＲＡＤＤ及びＨＯＩＰ、ＴＲＡＤＤ及びＳｈａｒｐｉｎ、ＴＲＡＤＤ及びＩＫＫｇ、ＴＲＡＤＤ及びＩＫＫａ、ＴＲＡＤＤ及びＩＫＫｂ、ＴＲＡＤＤ及びＲｅｌＡ、ＴＲＡＤＤ及びＭＡＶＳ、ＴＲＡＤＤ及びＲＩＧＩ、ＴＲＡＤＤ及びＭＤＡ５、ＴＲＡＤＤ及びＴａｋ１、ＴＲＡＤＤ及びＴＢＫ１、ＴＲＡＤＤ及びＩＫＫｅ、ＴＲＡＤＤ及びＩＲＦ３、ＴＲＡＤＤ及びＩＲＦ７、ＴＲＡＤＤ及びＩＲＦ１、ＴＲＡＤＤ及びＴＲＡＦ３、ＴＲＡＤＤ及びカスパーゼ、ＴＲＡＤＤ及びＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ及びＴＮＦＲ１、ＴＲＡＤＤ及びＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＤＤ及びＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＤＤ及びＦＡＳ、ＴＲＡＤＤ及びＢａｘ、ＴＲＡＤＤ及びＢａｋ、ＴＲＡＤＤ及びＢｉｍ、ＴＲＡＤＤ及びＢｉｄ、ＴＲＡＤＤ及びＮｏｘａ、ＴＲＡＤＤ及びＰｕｍａ、ＴＲＡＤＤ及びＴＲＩＦ、ＴＲＡＤＤ及びＺＢＰ１、ＴＲＡＤＤ及びＲＩＰＫ１、ＴＲＡＤＤ及びＲＩＰＫ３、ＴＲＡＤＤ及びＭＬＫＬ、ＴＲＡＤＤ及びガスダーミンＡ、ＴＲＡＤＤ及びガスダーミンＢ、ＴＲＡＤＤ及びガスダーミンＣ、ＴＲＡＤＤ及びガスダーミンＤ、ＴＲＡＤＤ及びガスダーミンＥ、ＴＲＡＦ２及びＴＲＡＦ６、ＴＲＡＦ２及びｃＩＡＰ１、ＴＲＡＦ２及びｃＩＡＰ２、ＴＲＡＦ２及びＸＩＡＰ、ＴＲＡＦ２及びＮＯＤ２、ＴＲＡＦ２及びＭｙＤ８８、ＴＲＡＦ２及びＴＲＡＭ、ＴＲＡＦ２及びＨＯＩＬ、ＴＲＡＦ２及びＨＯＩＰ、ＴＲＡＦ２及びＳｈａｒｐｉｎ、ＴＲＡＦ２及びＩＫＫｇ、ＴＲＡＦ２及びＩＫＫａ、ＴＲＡＦ２及びＩＫＫｂ、ＴＲＡＦ２及びＲｅｌＡ、ＴＲＡＦ２及びＭＡＶＳ、ＴＲＡＦ２及びＲＩＧＩ、ＴＲＡＦ２及びＭＤＡ５、ＴＲＡＦ２及びＴａｋ１、ＴＲＡＦ２及びＴＢＫ１、ＴＲＡＦ２及びＩＫＫｅ、ＴＲＡＦ２及びＩＲＦ３、ＴＲＡＦ２及びＩＲＦ７、ＴＲＡＦ２及びＩＲＦ１、ＴＲＡＦ２及びＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ２及びカスパーゼ、ＴＲＡＦ２及びＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ２及びＴＮＦＲ１、ＴＲＡＦ２及びＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＦ２及びＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＦ２及びＦＡＳ、ＴＲＡＦ２及びＢａｘ、ＴＲＡＦ２及びＢａｋ、ＴＲＡＦ２及びＢｉｍ、ＴＲＡＦ２及びＢｉｄ、ＴＲＡＦ２及びＮｏｘａ、ＴＲＡＦ２及びＰｕｍａ、ＴＲＡＦ２及びＴＲＩＦ、ＴＲＡＦ２及びＺＢＰ１、ＴＲＡＦ２及びＲＩＰＫ１、ＴＲＡＦ２及びＲＩＰＫ３、ＴＲＡＦ２及びＭＬＫＬ、ＴＲＡＦ２及びガスダーミンＡ、ＴＲＡＦ２及びガスダーミンＢ、ＴＲＡＦ２及びガスダーミンＣ、ＴＲＡＦ２及びガスダーミンＤ、ＴＲＡＦ２及びガスダーミンＥ、ＴＲＡＦ６及びｃＩＡＰ１、ＴＲＡＦ６及びｃＩＡＰ２、ＴＲＡＦ６及びＸＩＡＰ、ＴＲＡＦ６及びＮＯＤ２、ＴＲＡＦ６及びＭｙＤ８８、ＴＲＡＦ６及びＴＲＡＭ、ＴＲＡＦ６及びＨＯＩＬ、ＴＲＡＦ６及びＨＯＩＰ、ＴＲＡＦ６及びＳｈａｒｐｉｎ、ＴＲＡＦ６及びＩＫＫｇ、ＴＲＡＦ６及びＩＫＫａ、ＴＲＡＦ６及びＩＫＫｂ、ＴＲＡＦ６及びＲｅｌＡ、ＴＲＡＦ６及びＭＡＶＳ、ＴＲＡＦ６及びＲＩＧＩ、ＴＲＡＦ６及びＭＤＡ５、ＴＲＡＦ６及びＴａｋ１、ＴＲＡＦ６及びＴＢＫ１、ＴＲＡＦ６及びＩＫＫｅ、ＴＲＡＦ６及びＩＲＦ３、ＴＲＡＦ６及びＩＲＦ７、ＴＲＡＦ６及びＩＲＦ１、ＴＲＡＦ６及びＴＲＡＦ３、ＴＲＡＦ６及びカスパーゼ、ＴＲＡＦ６及びＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ６及びＴＮＦＲ１、ＴＲＡＦ６及びＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＦ６及びＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＦ６及びＦＡＳ、ＴＲＡＦ６及びＢａｘ、ＴＲＡＦ６及びＢａｋ、ＴＲＡＦ６及びＢｉｍ、ＴＲＡＦ６及びＢｉｄ、ＴＲＡＦ６及びＮｏｘａ、ＴＲＡＦ６及びＰｕｍａ、ＴＲＡＦ６及びＴＲＩＦ、ＴＲＡＦ６及びＺＢＰ１、ＴＲＡＦ６及びＲＩＰＫ１、ＴＲＡＦ６及びＲＩＰＫ３、ＴＲＡＦ６及びＭＬＫＬ、ＴＲＡＦ６及びガスダーミンＡ、ＴＲＡＦ６及びガスダーミンＢ、ＴＲＡＦ６及びガスダーミンＣ、ＴＲＡＦ６及びガスダーミンＤ、ＴＲＡＦ６及びガスダーミンＥ、ｃＩＡＰ１及びｃＩＡＰ２、ｃＩＡＰ１及びＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ１及びＮＯＤ２、ｃＩＡＰ１及びＭｙＤ８８、ｃＩＡＰ１及びＴＲＡＭ、ｃＩＡＰ１及びＨＯＩＬ、ｃＩＡＰ１及びＨＯＩＰ、ｃＩＡＰ１及びＳｈａｒｐｉｎ、ｃＩＡＰ１及びＩＫＫｇ、ｃＩＡＰ１及びＩＫＫａ、ｃＩＡＰ１及びＩＫＫｂ、ｃＩＡＰ１及びＲｅｌＡ、ｃＩＡＰ１及びＭＡＶＳ、ｃＩＡＰ１及びＲＩＧＩ、ｃＩＡＰ１及びＭＤＡ５、ｃＩＡＰ１及びＴａｋ１、ｃＩＡＰ１及びＴＢＫ１、ｃＩＡＰ１及びＩＫＫｅ、ｃＩＡＰ１及びＩＲＦ３、ｃＩＡＰ１及びＩＲＦ７、ｃＩＡＰ１及びＩＲＦ１、ｃＩＡＰ１及びＴＲＡＦ３、ｃＩＡＰ１及びカスパーゼ、ｃＩＡＰ１及びＦＡＤＤ、ｃＩＡＰ１及びＴＮＦＲ１、ｃＩＡＰ１及びＴＲＡＩＬＲ１、ｃＩＡＰ１及びＴＲＡＩＬＲ２、ｃＩＡＰ１及びＦＡＳ、ｃＩＡＰ１及びＢａｘ、ｃＩＡＰ１及びＢａｋ、ｃＩＡＰ１及びＢｉｍ、ｃＩＡＰ１及びＢｉｄ、ｃＩＡＰ１及びＮｏｘａ、ｃＩＡＰ１及びＰｕｍａ、ｃＩＡＰ１及びＴＲＩＦ、ｃＩＡＰ１及びＺＢＰ１、ｃＩＡＰ１及びＲＩＰＫ１、ｃＩＡＰ１及びＲＩＰＫ３、ｃＩＡＰ１及びＭＬＫＬ、ｃＩＡＰ１及びガスダーミンＡ、ｃＩＡＰ１及びガスダーミンＢ、ｃＩＡＰ１及びガスダーミンＣ、ｃＩＡＰ１及びガスダーミンＤ、ｃＩＡＰ１及びガスダーミンＥ、ｃＩＡＰ２及びＸＩＡＰ、ｃＩＡＰ２及びＮＯＤ２、ｃＩＡＰ２及びＭｙＤ８８、ｃＩＡＰ２及びＴＲＡＭ、ｃＩＡＰ２及びＨＯＩＬ、ｃＩＡＰ２及びＨＯＩＰ、ｃＩＡＰ２及びＳｈａｒｐｉｎ、ｃＩＡＰ２及びＩＫＫｇ、ｃＩＡＰ２及びＩＫＫａ、ｃＩＡＰ２及びＩＫＫｂ、ｃＩＡＰ２及びＲｅｌＡ、ｃＩＡＰ２及びＭＡＶＳ、ｃＩＡＰ２及びＲＩＧＩ、ｃＩＡＰ２及びＭＤＡ５、ｃＩＡＰ２及びＴａｋ１、ｃＩＡＰ２及びＴＢＫ１、ｃＩＡＰ２及びＩＫＫｅ、ｃＩＡＰ２及びＩＲＦ３、ｃＩＡＰ２及びＩＲＦ７、ｃＩＡＰ２及びＩＲＦ１、ｃＩＡＰ２及びＴＲＡＦ３、ｃＩＡＰ２及びカスパーゼ、ｃＩＡＰ２及びＦＡＤＤ、ｃＩＡＰ２及びＴＮＦＲ１、ｃＩＡＰ２及びＴＲＡＩＬＲ１、ｃＩＡＰ２及びＴＲＡＩＬＲ２、ｃＩＡＰ２及びＦＡＳ、ｃＩＡＰ２及びＢａｘ、ｃＩＡＰ２及びＢａｋ、ｃＩＡＰ２及びＢｉｍ、ｃＩＡＰ２及びＢｉｄ、ｃＩＡＰ２及びＮｏｘａ、ｃＩＡＰ２及びＰｕｍａ、ｃＩＡＰ２及びＴＲＩＦ、ｃＩＡＰ２及びＺＢＰ１、ｃＩＡＰ２及びＲＩＰＫ１、ｃＩＡＰ２及びＲＩＰＫ３、ｃＩＡＰ２及びＭＬＫＬ、ｃＩＡＰ２及びガスダーミンＡ、ｃＩＡＰ２及びガスダーミンＢ、ｃＩＡＰ２及びガスダーミンＣ、ｃＩＡＰ２及びガスダーミンＤ、ｃＩＡＰ２及びガスダーミンＥ、ＸＩＡＰ及びＮＯＤ２、ＸＩＡＰ及びＭｙＤ８８、ＸＩＡＰ及びＴＲＡＭ、ＸＩＡＰ及びＨＯＩＬ、ＸＩＡＰ及びＨＯＩＰ、ＸＩＡＰ及びＳｈａｒｐｉｎ、ＸＩＡＰ及びＩＫＫｇ、ＸＩＡＰ及びＩＫＫａ、ＸＩＡＰ及びＩＫＫｂ、ＸＩＡＰ及びＲｅｌＡ、ＸＩＡＰ及びＭＡＶＳ、ＸＩＡＰ及びＲＩＧＩ、ＸＩＡＰ及びＭＤＡ５、ＸＩＡＰ及びＴａｋ１、ＸＩＡＰ及びＴＢＫ１、ＸＩＡＰ及びＩＫＫｅ、ＸＩＡＰ及びＩＲＦ３、ＸＩＡＰ及びＩＲＦ７、ＸＩＡＰ及びＩＲＦ１、ＸＩＡＰ及びＴＲＡＦ３、ＸＩＡＰ及びカスパーゼ、ＸＩＡＰ及びＦＡＤＤ、ＸＩＡＰ及びＴＮＦＲ１、ＸＩＡＰ及びＴＲＡＩＬＲ１、ＸＩＡＰ及びＴＲＡＩＬＲ２、ＸＩＡＰ及びＦＡＳ、ＸＩＡＰ及びＢａｘ、ＸＩＡＰ及びＢａｋ、ＸＩＡＰ及びＢｉｍ、ＸＩＡＰ及びＢｉｄ、ＸＩＡＰ及びＮｏｘａ、ＸＩＡＰ及びＰｕｍａ、ＸＩＡＰ及びＴＲＩＦ、ＸＩＡＰ及びＺＢＰ１、ＸＩＡＰ及びＲＩＰＫ１、ＸＩＡＰ及びＲＩＰＫ３、ＸＩＡＰ及びＭＬＫＬ、ＸＩＡＰ及びガスダーミンＡ、ＸＩＡＰ及びガスダーミンＢ、ＸＩＡＰ及びガスダーミンＣ、ＸＩＡＰ及びガスダーミンＤ、ＸＩＡＰ及びガスダーミンＥ、ＮＯＤ２及びＭｙＤ８８、ＮＯＤ２及びＴＲＡＭ、ＮＯＤ２及びＨＯＩＬ、ＮＯＤ２及びＨＯＩＰ、ＮＯＤ２及びＳｈａｒｐｉｎ、ＮＯＤ２及びＩＫＫｇ、ＮＯＤ２及びＩＫＫａ、ＮＯＤ２及びＩＫＫｂ、ＮＯＤ２及びＲｅｌＡ、ＮＯＤ２及びＭＡＶＳ、ＮＯＤ２及びＲＩＧＩ、ＮＯＤ２及びＭＤＡ５、ＮＯＤ２及びＴａｋ１、ＮＯＤ２及びＴＢＫ１、ＮＯＤ２及びＩＫＫｅ、ＮＯＤ２及びＩＲＦ３、ＮＯＤ２及びＩＲＦ７、ＮＯＤ２及びＩＲＦ１、ＮＯＤ２及びＴＲＡＦ３、ＮＯＤ２及びカスパーゼ、ＮＯＤ２及びＦＡＤＤ、ＮＯＤ２及びＴＮＦＲ１、ＮＯＤ２及びＴＲＡＩＬＲ１、ＮＯＤ２及びＴＲＡＩＬＲ２、ＮＯＤ２及びＦＡＳ、ＮＯＤ２及びＢａｘ、ＮＯＤ２及びＢａｋ、ＮＯＤ２及びＢｉｍ、ＮＯＤ２及びＢｉｄ、ＮＯＤ２及びＮｏｘａ、ＮＯＤ２及びＰｕｍａ、ＮＯＤ２及びＴＲＩＦ、ＮＯＤ２及びＺＢＰ１、ＮＯＤ２及びＲＩＰＫ１、ＮＯＤ２及びＲＩＰＫ３、ＮＯＤ２及びＭＬＫＬ、ＮＯＤ２及びガスダーミンＡ、ＮＯＤ２及びガスダーミンＢ、ＮＯＤ２及びガスダーミンＣ、ＮＯＤ２及びガスダーミンＤ、ＮＯＤ２及びガスダーミンＥ、ＭｙＤ８８及びＴＲＡＭ、ＭｙＤ８８及びＨＯＩＬ、ＭｙＤ８８及びＨＯＩＰ、ＭｙＤ８８及びＳｈａｒｐｉｎ、ＭｙＤ８８及びＩＫＫｇ、ＭｙＤ８８及びＩＫＫａ、ＭｙＤ８８及びＩＫＫｂ、ＭｙＤ８８及びＲｅｌＡ、ＭｙＤ８８及びＭＡＶＳ、ＭｙＤ８８及びＲＩＧＩ、ＭｙＤ８８及びＭＤＡ５、ＭｙＤ８８及びＴａｋ１、ＭｙＤ８８及びＴＢＫ１、ＭｙＤ８８及びＩＫＫｅ、ＭｙＤ８８及びＩＲＦ３、ＭｙＤ８８及びＩＲＦ７、ＭｙＤ８８及びＩＲＦ１、ＭｙＤ８８及びＴＲＡＦ３、ＭｙＤ８８及びカスパーゼ、ＭｙＤ８８及びＦＡＤＤ、ＭｙＤ８８及びＴＮＦＲ１、ＭｙＤ８８及びＴＲＡＩＬＲ１、ＭｙＤ８８及びＴＲＡＩＬＲ２、ＭｙＤ８８及びＦＡＳ、ＭｙＤ８８及びＢａｘ、ＭｙＤ８８及びＢａｋ、ＭｙＤ８８及びＢｉｍ、ＭｙＤ８８及びＢｉｄ、ＭｙＤ８８及びＮｏｘａ、ＭｙＤ８８及びＰｕｍａ、ＭｙＤ８８及びＴＲＩＦ、ＭｙＤ８８及びＺＢＰ１、ＭｙＤ８８及びＲＩＰＫ１、ＭｙＤ８８及びＲＩＰＫ３、ＭｙＤ８８及びＭＬＫＬ、ＭｙＤ８８及びガスダーミンＡ、ＭｙＤ８８及びガスダーミンＢ、ＭｙＤ８８及びガスダーミンＣ、ＭｙＤ８８及びガスダーミンＤ、ＭｙＤ８８及びガスダーミンＥ、ＴＲＡＭ及びＨＯＩＬ、ＴＲＡＭ及びＨＯＩＰ、ＴＲＡＭ及びＳｈａｒｐｉｎ、ＴＲＡＭ及びＩＫＫｇ、ＴＲＡＭ及びＩＫＫａ、ＴＲＡＭ及びＩＫＫｂ、ＴＲＡＭ及びＲｅｌＡ、ＴＲＡＭ及びＭＡＶＳ、ＴＲＡＭ及びＲＩＧＩ、ＴＲＡＭ及びＭＤＡ５、ＴＲＡＭ及びＴａｋ１、ＴＲＡＭ及びＴＢＫ１、ＴＲＡＭ及びＩＫＫｅ、ＴＲＡＭ及びＩＲＦ３、ＴＲＡＭ及びＩＲＦ７、ＴＲＡＭ及びＩＲＦ１、ＴＲＡＭ及びＴＲＡＦ３、ＴＲＡＭ及びカスパーゼ、ＴＲＡＭ及びＦＡＤＤ、ＴＲＡＭ及びＴＮＦＲ１、ＴＲＡＭ及びＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＭ及びＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＭ及びＦＡＳ、ＴＲＡＭ及びＢａｘ、ＴＲＡＭ及びＢａｋ、ＴＲＡＭ及びＢｉｍ、ＴＲＡＭ及びＢｉｄ、ＴＲＡＭ及びＮｏｘａ、ＴＲＡＭ及びＰｕｍａ、ＴＲＡＭ及びＴＲＩＦ、ＴＲＡＭ及びＺＢＰ１、ＴＲＡＭ及びＲＩＰＫ１、ＴＲＡＭ及びＲＩＰＫ３、ＴＲＡＭ及びＭＬＫＬ、ＴＲＡＭ及びガスダーミンＡ、ＴＲＡＭ及びガスダーミンＢ、ＴＲＡＭ及びガスダーミンＣ、ＴＲＡＭ及びガスダーミンＤ、ＴＲＡＭ及びガスダーミンＥ、
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Ｋ１及びガスダーミンＣ、ＴＢＫ１及びガスダーミンＤ、ＴＢＫ１及びガスダーミンＥ、
ＩＫＫｅ及びＩＲＦ３、ＩＫＫｅ及びＩＲＦ７、ＩＫＫｅ及びＩＲＦ１、ＩＫＫｅ及びＴＲＡＦ３、ＩＫＫｅ及びカスパーゼ、ＩＫＫｅ及びＦＡＤＤ、ＩＫＫｅ及びＴＮＦＲ１、ＩＫＫｅ及びＴＲＡＩＬＲ１、ＩＫＫｅ及びＴＲＡＩＬＲ２、ＩＫＫｅ及びＦＡＳ、ＩＫＫｅ及びＢａｘ、ＩＫＫｅ及びＢａｋ、ＩＫＫｅ及びＢｉｍ、ＩＫＫｅ及びＢｉｄ、ＩＫＫｅ及びＮｏｘａ、ＩＫＫｅ及びＰｕｍａ、ＩＫＫｅ及びＴＲＩＦ、ＩＫＫｅ及びＺＢＰ１、ＩＫＫｅ及びＲＩＰＫ１、ＩＫＫｅ及びＲＩＰＫ３、ＩＫＫｅ及びＭＬＫＬ、ＩＫＫｅ及びガスダーミンＡ、ＩＫＫｅ及びガスダーミンＢ、ＩＫＫｅ及びガスダーミンＣ、ＩＫＫｅ及びガスダーミンＤ、ＩＫＫｅ及びガスダーミンＥ、
ＩＲＦ３及びＩＲＦ７、ＩＲＦ３及びＩＲＦ１、ＩＲＦ３及びＴＲＡＦ３、ＩＲＦ３及びカスパーゼ、ＩＲＦ３及びＦＡＤＤ、ＩＲＦ３及びＴＮＦＲ１、ＩＲＦ３及びＴＲＡＩＬＲ１、ＩＲＦ３及びＴＲＡＩＬＲ２、ＩＲＦ３及びＦＡＳ、ＩＲＦ３及びＢａｘ、ＩＲＦ３及びＢａｋ、ＩＲＦ３及びＢｉｍ、ＩＲＦ３及びＢｉｄ、ＩＲＦ３及びＮｏｘａ、ＩＲＦ３及びＰｕｍａ、ＩＲＦ３及びＴＲＩＦ、ＩＲＦ３及びＺＢＰ１、ＩＲＦ３及びＲＩＰＫ１、ＩＲＦ３及びＲＩＰＫ３、ＩＲＦ３及びＭＬＫＬ、ＩＲＦ３及びガスダーミンＡ、ＩＲＦ３及びガスダーミンＢ、ＩＲＦ３及びガスダーミンＣ、ＩＲＦ３及びガスダーミンＤ、ＩＲＦ３及びガスダーミンＥ、ＩＲＦ７及びＩＲＦ１、ＩＲＦ７及びＴＲＡＦ３、ＩＲＦ７及びカスパーゼ、ＩＲＦ７及びＦＡＤＤ、ＩＲＦ７及びＴＮＦＲ１、ＩＲＦ７及びＴＲＡＩＬＲ１、ＩＲＦ７及びＴＲＡＩＬＲ２、ＩＲＦ７及びＦＡＳ、ＩＲＦ７及びＢａｘ、ＩＲＦ７及びＢａｋ、ＩＲＦ７及びＢｉｍ、ＩＲＦ７及びＢｉｄ、ＩＲＦ７及びＮｏｘａ、ＩＲＦ７及びＰｕｍａ、ＩＲＦ７及びＴＲＩＦ、ＩＲＦ７及びＺＢＰ１、ＩＲＦ７及びＲＩＰＫ１、ＩＲＦ７及びＲＩＰＫ３、ＩＲＦ７及びＭＬＫＬ、ＩＲＦ７及びガスダーミンＡ、ＩＲＦ７及びガスダーミンＢ、ＩＲＦ７及びガスダーミンＣ、ＩＲＦ７及びガスダーミンＤ、ＩＲＦ７及びガスダーミンＥ、ＩＲＦ１及びＴＲＡＦ３、ＩＲＦ１及びカスパーゼ、ＩＲＦ１及びＦＡＤＤ、ＩＲＦ１及びＴＮＦＲ１、ＩＲＦ１及びＴＲＡＩＬＲ１、ＩＲＦ１及びＴＲＡＩＬＲ２、ＩＲＦ１及びＦＡＳ、ＩＲＦ１及びＢａｘ、ＩＲＦ１及びＢａｋ、ＩＲＦ１及びＢｉｍ、ＩＲＦ１及びＢｉｄ、ＩＲＦ１及びＮｏｘａ、ＩＲＦ１及びＰｕｍａ、ＩＲＦ１及びＴＲＩＦ、ＩＲＦ１及びＺＢＰ１、ＩＲＦ１及びＲＩＰＫ１、ＩＲＦ１及びＲＩＰＫ３、ＩＲＦ１及びＭＬＫＬ、ＩＲＦ１及びガスダーミンＡ、ＩＲＦ１及びガスダーミンＢ、ＩＲＦ１及びガスダーミンＣ、ＩＲＦ１及びガスダーミンＤ、ＩＲＦ１及びガスダーミンＥ、ＴＲＡＦ３及びカスパーゼ、ＴＲＡＦ３及びＦＡＤＤ、ＴＲＡＦ３及びＴＮＦＲ１、ＴＲＡＦ３及びＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＦ３及びＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＦ３及びＦＡＳ、ＴＲＡＦ３及びＢａｘ、ＴＲＡＦ３及びＢａｋ、ＴＲＡＦ３及びＢｉｍ、ＴＲＡＦ３及びＢｉｄ、ＴＲＡＦ３及びＮｏｘａ、ＴＲＡＦ３及びＰｕｍａ、ＴＲＡＦ３及びＴＲＩＦ、ＴＲＡＦ３及びＺＢＰ１、ＴＲＡＦ３及びＲＩＰＫ１、ＴＲＡＦ３及びＲＩＰＫ３、ＴＲＡＦ３及びＭＬＫＬ、ＴＲＡＦ３及びガスダーミンＡ、ＴＲＡＦ３及びガスダーミンＢ、ＴＲＡＦ３及びガスダーミンＣ、ＴＲＡＦ３及びガスダーミンＤ、ＴＲＡＦ３及びガスダーミンＥ、カスパーゼ及びＦＡＤＤ、カスパーゼ及びＴＮＦＲ１、カスパーゼ及びＴＲＡＩＬＲ１、カスパーゼ及びＴＲＡＩＬＲ２、カスパーゼ及びＦＡＳ、カスパーゼ及びＢａｘ、カスパーゼ及びＢａｋ、カスパーゼ及びＢｉｍ、カスパーゼ及びＢｉｄ、カスパーゼ及びＮｏｘａ、カスパーゼ及びＰｕｍａ、カスパーゼ及びＴＲＩＦ、カスパーゼ及びＺＢＰ１、カスパーゼ及びＲＩＰＫ１、カスパーゼ及びＲＩＰＫ３、カスパーゼ及びＭＬＫＬ、カスパーゼ及びガスダーミンＡ、カスパーゼ及びガスダーミンＢ、カスパーゼ及びガスダーミンＣ、カスパーゼ及びガスダーミンＤ、カスパーゼ及びガスダーミンＥ、ＦＡＤＤ及びＴＮＦＲ１、ＦＡＤＤ及びＴＲＡＩＬＲ１、ＦＡＤＤ及びＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＤＤ及びＦＡＳ、ＦＡＤＤ及びＢａｘ、ＦＡＤＤ及びＢａｋ、ＦＡＤＤ及びＢｉｍ、ＦＡＤＤ及びＢｉｄ、ＦＡＤＤ及びＮｏｘａ、ＦＡＤＤ及びＰｕｍａ、ＦＡＤＤ及びＴＲＩＦ、ＦＡＤＤ及びＺＢＰ１、ＦＡＤＤ及びＲＩＰＫ１、ＦＡＤＤ及びＲＩＰＫ３、ＦＡＤＤ及びＭＬＫＬ、ＦＡＤＤ及びガスダーミンＡ、ＦＡＤＤ及びガスダーミンＢ、ＦＡＤＤ及びガスダーミンＣ、ＦＡＤＤ及びガスダーミンＤ、ＦＡＤＤ及びガスダーミンＥ、ＴＮＦＲ１及びＴＲＡＩＬＲ１、ＴＮＦＲ１及びＴＲＡＩＬＲ２、ＴＮＦＲ１及びＦＡＳ、ＴＮＦＲ１及びＢａｘ、ＴＮＦＲ１及びＢａｋ、ＴＮＦＲ１及びＢｉｍ、ＴＮＦＲ１及びＢｉｄ、ＴＮＦＲ１及びＮｏｘａ、ＴＮＦＲ１及びＰｕｍａ、ＴＮＦＲ１及びＴＲＩＦ、ＴＮＦＲ１及びＺＢＰ１、ＴＮＦＲ１及びＲＩＰＫ１、ＴＮＦＲ１及びＲＩＰＫ３、ＴＮＦＲ１及びＭＬＫＬ、ＴＮＦＲ１及びガスダーミンＡ、ＴＮＦＲ１及びガスダーミンＢ、ＴＮＦＲ１及びガスダーミンＣ、ＴＮＦＲ１及びガスダーミンＤ、ＴＮＦＲ１及びガスダーミンＥ、ＴＲＡＩＬＲ１及びＴＲＡＩＬＲ２、ＴＲＡＩＬＲ１及びＦＡＳ、ＴＲＡＩＬＲ１及びＢａｘ、ＴＲＡＩＬＲ１及びＢａｋ、ＴＲＡＩＬＲ１及びＢｉｍ、ＴＲＡＩＬＲ１及びＢｉｄ、ＴＲＡＩＬＲ１及びＮｏｘａ、ＴＲＡＩＬＲ１及びＰｕｍａ、ＴＲＡＩＬＲ１及びＴＲＩＦ、ＴＲＡＩＬＲ１及びＺＢＰ１、ＴＲＡＩＬＲ１及びＲＩＰＫ１、ＴＲＡＩＬＲ１及びＲＩＰＫ３、ＴＲＡＩＬＲ１及びＭＬＫＬ、ＴＲＡＩＬＲ１及びガスダーミンＡ、ＴＲＡＩＬＲ１及びガスダーミンＢ、ＴＲＡＩＬＲ１及びガスダーミンＣ、ＴＲＡＩＬＲ１及びガスダーミンＤ、ＴＲＡＩＬＲ１及びガスダーミンＥ、ＴＲＡＩＬＲ２及びＦＡＳ、ＴＲＡＩＬＲ２及びＢａｘ、ＴＲＡＩＬＲ２及びＢａｋ、ＴＲＡＩＬＲ２及びＢｉｍ、ＴＲＡＩＬＲ２及びＢｉｄ、ＴＲＡＩＬＲ２及びＮｏｘａ、ＴＲＡＩＬＲ２及びＰｕｍａ、ＴＲＡＩＬＲ２及びＴＲＩＦ、ＴＲＡＩＬＲ２及びＺＢＰ１、ＴＲＡＩＬＲ２及びＲＩＰＫ１、ＴＲＡＩＬＲ２及びＲＩＰＫ３、ＴＲＡＩＬＲ２及びＭＬＫＬ、ＴＲＡＩＬＲ２及びガスダーミンＡ、ＴＲＡＩＬＲ２及びガスダーミンＢ、ＴＲＡＩＬＲ２及びガスダーミンＣ、ＴＲＡＩＬＲ２及びガスダーミンＤ、ＴＲＡＩＬＲ２及びガスダーミンＥ、ＦＡＳ及びＢａｘ、ＦＡＳ及びＢａｋ、ＦＡＳ及びＢｉｍ、ＦＡＳ及びＢｉｄ、ＦＡＳ及びＮｏｘａ、ＦＡＳ及びＰｕｍａ、ＦＡＳ及びＴＲＩＦ、ＦＡＳ及びＺＢＰ１、ＦＡＳ及びＲＩＰＫ１、ＦＡＳ及びＲＩＰＫ３、ＦＡＳ及びＭＬＫＬ、ＦＡＳ及びガスダーミンＡ、ＦＡＳ及びガスダーミンＢ、ＦＡＳ及びガスダーミンＣ、ＦＡＳ及びガスダーミンＤ、ＦＡＳ及びガスダーミンＥ、Ｂａｘ及びＢａｋ、Ｂａｘ及びＢｉｍ、Ｂａｘ及びＢｉｄ、Ｂａｘ及びＮｏｘａ、Ｂａｘ及びＰｕｍａ、Ｂａｘ及びＴＲＩＦ、Ｂａｘ及びＺＢＰ１、Ｂａｘ及びＲＩＰＫ１、Ｂａｘ及びＲＩＰＫ３、Ｂａｘ及びＭＬＫＬ、Ｂａｘ及びガスダーミンＡ、Ｂａｘ及びガスダーミンＢ、Ｂａｘ及びガスダーミンＣ、Ｂａｘ及びガスダーミンＤ、Ｂａｘ及びガスダーミンＥ、Ｂａｋ及びＢｉｍ、Ｂａｋ及びＢｉｄ、Ｂａｋ及びＮｏｘａ、Ｂａｋ及びＰｕｍａ、Ｂａｋ及びＴＲＩＦ、Ｂａｋ及びＺＢＰ１、Ｂａｋ及びＲＩＰＫ１、Ｂａｋ及びＲＩＰＫ３、Ｂａｋ及びＭＬＫＬ、Ｂａｋ及びガスダーミンＡ、Ｂａｋ及びガスダーミンＢ、Ｂａｋ及びガスダーミンＣ、Ｂａｋ及びガスダーミンＤ、Ｂａｋ及びガスダーミンＥ、Ｂｉｍ及びＢｉｄ、Ｂｉｍ及びＮｏｘａ、Ｂｉｍ及びＰｕｍａ、Ｂｉｍ及びＴＲＩＦ、Ｂｉｍ及びＺＢＰ１、Ｂｉｍ及びＲＩＰＫ１、Ｂｉｍ及びＲＩＰＫ３、Ｂｉｍ及びＭＬＫＬ、Ｂｉｍ及びガスダーミンＡ、Ｂｉｍ及びガスダーミンＢ、Ｂｉｍ及びガスダーミンＣ、Ｂｉｍ及びガスダーミンＤ、Ｂｉｍ及びガスダーミンＥ、Ｂｉｄ及びＮｏｘａ、Ｂｉｄ及びＰｕｍａ、Ｂｉｄ及びＴＲＩＦ、Ｂｉｄ及びＺＢＰ１、Ｂｉｄ及びＲＩＰＫ１、Ｂｉｄ及びＲＩＰＫ３、Ｂｉｄ及びＭＬＫＬ、Ｂｉｄ及びガスダーミンＡ、Ｂｉｄ及びガスダーミンＢ、Ｂｉｄ及びガスダーミンＣ、Ｂｉｄ及びガスダーミンＤ、Ｂｉｄ及びガスダーミンＥ、Ｎｏｘａ及びＰｕｍａ、Ｎｏｘａ及びＴＲＩＦ、Ｎｏｘａ及びＺＢＰ１、Ｎｏｘａ及びＲＩＰＫ１、Ｎｏｘａ及びＲＩＰＫ３、Ｎｏｘａ及びＭＬＫＬ、Ｎｏｘａ及びガスダーミンＡ、Ｎｏｘａ及びガスダーミンＢ、Ｎｏｘａ及びガスダーミンＣ、Ｎｏｘａ及びガスダーミンＤ、Ｎｏｘａ及びガスダーミンＥ、Ｐｕｍａ及びＴＲＩＦ、Ｐｕｍａ及びＺＢＰ１、Ｐｕｍａ及びＲＩＰＫ１、Ｐｕｍａ及びＲＩＰＫ３、Ｐｕｍａ及びＭＬＫＬ、Ｐｕｍａ及びガスダーミンＡ、Ｐｕｍａ及びガスダーミンＢ、Ｐｕｍａ及びガスダーミンＣ、Ｐｕｍａ及びガスダーミンＤ、Ｐｕｍａ及びガスダーミンＥ、ＴＲＩＦ及びＺＢＰ１、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ１、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦ及びＭＬＫＬ、ＴＲＩＦ及びガスダーミンＡ、ＴＲＩＦ及びガスダーミンＢ、ＴＲＩＦ及びガスダーミンＣ、ＴＲＩＦ及びガスダーミンＤ、ＴＲＩＦ及びガスダーミンＥ、ＺＢＰ１及びＲＩＰＫ１、ＺＢＰ１及びＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１及びＭＬＫＬ、ＺＢＰ１及びガスダーミンＡ、ＺＢＰ１及びガスダーミンＢ、ＺＢＰ１及びガスダーミンＣ、ＺＢＰ１及びガスダーミンＤ、ＺＢＰ１及びガスダーミンＥ、ＲＩＰＫ１及びＲＩＰＫ３、ＲＩＰＫ１及びＭＬＫＬ、ＲＩＰＫ１及びガスダーミンＡ、ＲＩＰＫ１及びガスダーミンＢ、ＲＩＰＫ１及びガスダーミンＣ、ＲＩＰＫ１及びガスダーミンＤ、ＲＩＰＫ１及びガスダーミンＥ、ＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬ、ＲＩＰＫ３及びガスダーミンＡ、ＲＩＰＫ３及びガスダーミンＢ、ＲＩＰＫ３及びガスダーミンＣ、ＲＩＰＫ３及びガスダーミンＤ、ＲＩＰＫ３及びガスダーミンＥ、ＭＬＫＬ及びガスダーミンＡ、ＭＬＫＬ及びガスダーミンＢ、ＭＬＫＬ及びガスダーミンＣ、ＭＬＫＬ及びガスダーミンＤ、ＭＬＫＬ及びガスダーミンＥ、ガスダーミンＡ及びガスダーミンＢ、ガスダーミンＡ及びガスダーミンＣ、ガスダーミンＡ及びガスダーミンＤ、ガスダーミンＡ及びガスダーミンＥ、ガスダーミンＢ及びガスダーミンＣ、ガスダーミンＢ及びガスダーミンＤ、ガスダーミンＢ及びガスダーミンＥ、ガスダーミンＣ及びガスダーミンＤ、ガスダーミンＣ及びガスダーミンＥ、ガスダーミンＤ及びガスダーミンＥ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴＲＡＦ２、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴＲＡＦ６、ＴＮＦＳＦタンパク質及びｃＩＡＰ１、ＴＮＦＳＦタンパク質及びｃＩＡＰ２、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＸＩＡＰ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＮＯＤ２、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＭｙＤ８８、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴＲＡＭ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＨＯＩＬ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＨＯＩＰ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＳｈａｒｐｉｎ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＩＫＫｇ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＩＫＫａ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＩＫＫｂ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＲｅｌＡ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＭＡＶＳ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＲＩＧＩ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＭＤＡ５、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴａｋ１、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴＢＫ１、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＩＫＫｅ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＩＲＦ３、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＩＲＦ７、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＩＲＦ１、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴＲＡＦ３、ＴＮＦＳＦタンパク質及びカスパーゼ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＦＡＤＤ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴＮＦＲ１、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴＲＡＩＬＲ１、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴＲＡＩＬＲ２、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＦＡＳ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＢａｘ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＢａｋ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＢｉｍ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＢｉｄ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＮｏｘａ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＰｕｍａ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＴＲＩＦ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＺＢＰ１、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＲＩＰＫ１、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＲＩＰＫ３、ＴＮＦＳＦタンパク質及びＭＬＫＬ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びガスダーミンＡ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びガスダーミンＢ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びガスダーミンＣ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びガスダーミンＤ、ＴＮＦＳＦタンパク質及びガスダーミンＥ及びそれらの変異体及びそれらの機能的断片から選択される。
特定の実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片及び変異体である。
特定の実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片及び変異体である。
特定の実施形態では、１つ以上のサノトランスミッションポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片を含み、１つ以上のポリヌクレオチドによりコードされるサノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含む。
特定の実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片及び変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片及び変異体である。
特定の実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片及び変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＬＫＬ又はその機能的断片及び変異体である。
いくつかの実施形態では、Ｂｉｄの機能的断片は、短縮されたＢｉｄ（ｔＢＩＤ）である。ＴＮＦＲ１／Ｆａｓ会合の結果、サイトゾルＢｉｄが切断されて短縮されたｔＢＩＤとなり、それがミトコンドリアに移動する。ｔＢＩＤポリペプチドは、膜標的化デスリガンドとして機能する。Ｂａｋ－欠失ミトコンドリア及び遮断抗体は、ｔＢＩＤがそのミトコンドリアのパートナーＢＡＫに結合してチトクロムｃを放出することを明らかにする。活性化されたｔＢＩＤにより、その結果、ＢＡＫのアロステリック活性化が起こり、その膜内オリゴマー化をチトクロムｃ排出のための提案される孔に誘導し、デスレセプターから細胞消滅への経路を統合する。Ｗｅｉ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｇｅｎｅｓ ＆ Ｄｅｖ．１４：２０６０－２０７１を参照。
特定の実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片及び変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ｔＢＩＤ又はその機能的断片及び変異体である。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、ＴＲＩＦをコードするポリヌクレオチドを含まない。
改変されたウイルスに含めようとするさらなるポリヌクレオチドを以下に記載する。
カスパーゼ阻害剤
改変されたウイルスは、標的細胞においてカスパーゼ活性を阻害する１つ以上のポリヌクレオチドをさらに含み得る。いくつかの実施形態では、標的細胞においてカスパーゼ活性を阻害するポリヌクレオチドは、標的細胞に対して内因性である１つ以上のカスパーゼの発現又は活性を低下させる。カスパーゼの発現を低下させるポリヌクレオチドとしては、アンチセンスＤＮＡ分子、アンチセンスＲＮＡ分子、２本鎖ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ又はクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）－ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）（ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ）系ガイドＲＮＡが挙げられ得るが限定されない。
いくつかの実施形態では、標的細胞においてカスパーゼ活性を阻害するポリヌクレオチドは、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをコードする。いくつかの実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ウイルスタンパク質又はその変異体若しくは機能断片である。代表的なウイルスタンパク質カスパーゼ阻害剤は、以下の表６で提供される。いくつかの実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ヒトタンパク質又はその変異体若しくは機能的断片である。いくつかの実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、カスパーゼ１、カスパーゼ２、カスパーゼ３、カスパーゼ４、カスパーゼ５、カスパーゼ６、カスパーゼ７、カスパーゼ８、カスパーゼ９及びカスパーゼ１０からなる群から選択される１つ以上のカスパーゼを阻害する。特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、カスパーゼ８を阻害する。特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、カスパーゼ１０を阻害する。特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、カスパーゼ８及びカスパーゼ１０を阻害する。
Figure 2023532339000011
いくつかの実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、Ｆａｓ関連デスドメインタンパク質（ＦＡＤＤ）ドミナントネガティブ突然変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）、カスパーゼ８活性化のウイルス阻害剤（ｖＩＣＡ）、細胞性ＦＬＩＣＥ（ＦＡＤＤ様ＩＬ－１β－変換酵素）－阻害タンパク質（ｃＦＬＩＰ）、カスパーゼ８ドミナントネガティブ突然変異体（Ｃａｓｐ８－ＤＮ）、アポトーシスタンパク質－１の細胞阻害剤（ｃＩＡＰ１）、アポトーシスタンパク質－１の細胞阻害剤（ｃＩＡＰ２）、アポトーシスのＸ連鎖阻害剤（ＸＩＡＰ）、ＴＧＦβ－活性化キナーゼ１（Ｔａｋ１）、ＩκＢキナーゼ（ＩＫＫ）及びその機能的断片からなる群から選択される。
特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドは、ＦＡＤＤ－ＤＮである。細胞死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）は、ＦＡＤＤ及びカスパーゼ８などの誘導型カスパーゼを含むアダプタータンパク質を動員する。Ｍｏｒｇａｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｃｅｌｌ Ｄｅａｔｈ ＆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｖｏｌｕｍｅ ８，ｐａｇｅｓ ６９６－７０５を参照。ＤＩＳＣにおけるカスパーゼ８の凝集は、カスパーゼカスケード及びアポトーシスの活性化につながる。ＦＡＤＤは、２つのタンパク質相互作用ドメイン：デスドメイン及びデスエフェクタードメインからなる。ＦＡＤＤはＤＩＳＣの必須の構成成分なので、デスドメインを含有するがデスエフェクタードメインを含有しないドミナントネガティブ突然変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）は、デス受容体誘導型アポトーシスの研究で広く使用されている。ＦＡＤＤ－ＤＮは、受容体に結合するがカスパーゼ８を動員し得ないので、ドミナントネガティブ阻害剤として機能する。
特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドはｖＩＣＡである。ｖＩＣＡタンパク質は、ＵＬ３６遺伝子によりコードされるヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）タンパク質である。その全体において参照により本明細書中に組み込まれるＳｋａｌｅｔｓｋａｙａ ｅｔ ａｌ．，ＰＮＡＳ Ｊｕｌｙ ３，２００１ ９８（１４）７８２９－７８３４を参照。ｖＩＣＡタンパク質は、カスパーゼ－８のプロ－ドメインへの結合及びその活性化の阻止によってＦａｓ介在性アポトーシスを阻害する。
特定の実施形態では、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドはｃＦＬＩＰである。ｃＦＬＩＰタンパク質は、主要な抗アポトーシス制御因子であり、腫瘍壊死因子－α（ＴＮＦ－α）、Ｆａｓ－Ｌ及びＴＮＦ－関連アポトーシス－誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）誘導型アポトーシスを抑制する抵抗性因子である。その全体において参照により本明細書中に組み込まれるＳａｆａ，２０１２，Ｅｘｐ Ｏｎｃｏｌ Ｏｃｔ；３４（３）：１７６－８４を参照。ｃＦＬＩＰタンパク質は、ヒト細胞において長い（ｃＦＬＩＰ（Ｌ））、短い（ｃＦＬＩＰ（Ｓ））及びｃＦＬＩＰ（Ｒ）スプライス変異体として発現される。ｃＦＬＩＰタンパク質は、リガンド依存的及び非依存性的に、ＦＡＤＤ及び／又はカスパーゼ－８又は－１０及びＴＲＡＩＬ受容体５（ＤＲ５）に結合し、アポトーシス阻害複合体（ＡＩＣ）を形成する。この相互作用は、次に、細胞死誘導シグナル伝達複合体（ＤＩＳＣ）形成及び続くカスパーゼカスケードの活性化を防ぐ。ｃ－ＦＬＩＰ（Ｌ）及びｃ－ＦＬＩＰ（Ｓ）は、様々なシグナル伝達経路において多機能的な役割を有することも知られている。特定の実施形態では、ｃＦＬＩＰは、ｃＦＬＩＰ（Ｌ）である。特定の実施形態では、ｃＦＬＩＰは、ｃＦＬＩＰ（Ｓ）である。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片及び変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＦＡＤＤ－ＤＮ又はその機能的断片若しくは変異体である。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ｖＩＣＡ又はその機能的断片若しくは変異体である。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ｃＦＬＩＰ又はその機能的断片若しくは変異体である。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＦＡＤＤ－ＤＮ又はその機能的断片若しくは変異体である。
ガスダーミン
ガスダーミンは、膜の易透化及びピロトーシスを引き起こす孔形成エフェクタータンパク質のファミリーである。ガスダーミンタンパク質は、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ及びガスダーミンＥを含む。ガスダーミンは、フレキシブルリンカーにより連結される細胞毒性Ｎ末端ドメイン及びＣ末端リプレッサードメインを含有する。これらの２つのドメイン間のタンパク質分解性切断により、細胞傷害性ドメイン上での分子内阻害が解除され、これにより、それの細胞膜への挿入が可能になり、大きなオリゴマー性の孔を形成し、これによりイオンホメオスタシスが崩壊し、細胞死を誘導する。その全体において参照により本明細書中に組み込まれるＢｒｏｚ ｅｔ ａｌ．，２０２０，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２０：１４３－１５７を参照。例えば、ガスダーミンＥ（ＧＳＤＭＥ、ＤＦＮＡ５としても知られる）は、カスパーゼ３により切断され得、それにより、ＧＳＤＭＥ－発現細胞において非炎症性アポトーシスがピロトーシスに変換される。同様に、カスパーゼ１、４及び５は、ガスダーミンＤを切断し、活性化する。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその機能的断片若しくは変異体をコードする。いくつかの実施形態では、ガスダーミンの機能的断片は、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ又はガスダーミンＥのＮ末端ドメインである。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその機能的断片若しくは変異体である。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミンＥ又はその機能的断片若しくは変異体である。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミンＤのＮ末端ドメイン又はその機能的断片若しくは変異体である。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミンＥ Ｎ末端ドメイン又はその機能的断片若しくは変異体である。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ｔＢＩＤ又はその機能的断片若しくは変異体であり、サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミンＥ又はその機能的断片若しくは変異体である。
表２、３、４、５及び６で上記で提供されるものなどのサノトランスミッションを促進するポリペプチドをコードする１つ以上のポリヌクレオチドに加えて、改変ウイルスは、以下に記載のものなど、免疫刺激タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドをさらに含み得る。
免疫刺激タンパク質
表２、３、４及び５で上記で提供されるものなどのサノトランスミッションを促進するポリペプチドをコードする１つ以上のポリヌクレオチドに加えて、本明細書中で開示される改変ウイルスは、免疫刺激タンパク質をコードする１つ以上のポリヌクレオチドをさらに含み得る。一実施形態では、免疫刺激タンパク質は、形質転換増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）のアンタゴニスト、コロニー刺激因子、サイトカイン、免疫チェックポイント調整因子、ｆｌｔ３リガンド又はｆｌｔ３の抗体アゴニストである。
コロニー刺激因子は、顆粒球－マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）であり得る。一実施形態では、ＧＭ－ＣＳＦをコードするポリヌクレオチドは、ＩＣＰ３４．５遺伝子の遺伝子座に挿入される。
サイトカインはインターロイキンであり得る。一実施形態では、インターロイキンは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２４、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β及びＩＬ－３６γからなる群から選択される。さらなる適切なサイトカインとしては、Ｉ型インターフェロン、インターフェロンガンマ、ＩＩＩ型インターフェロン及びＴＮＦαが挙げられる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント調整因子は、阻害性免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである。阻害性免疫チェックポイントタンパク質の例としては、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ３、Ｔｉｍ３、ＢＴＬＡ及びＣＴＬＡ４が挙げられるが限定されない。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイント調整因子は、刺激性免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストである。刺激性免疫チェックポイントタンパク質の例としては、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ及び４－１ＢＢが挙げられるが限定されない。いくつかの実施形態では、刺激性免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストは、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＩＣＯＳリガンド、ＧＩＴＲリガンド、４－１－ＢＢリガンド、０Ｘ４０リガンド及びそれらのいずれかの修飾バージョンから選択される。いくつかの実施形態では、刺激性免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストは、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、４－１－ＢＢ及び０Ｘ４０から選択されるタンパク質の抗体アゴニストである。
自殺遺伝子
表２Ａ、表２Ｂ．表３、表４、表５又は表６において上で提供されるものなど、サノトランスミッションを促進するポリペプチドをコードする１つ以上のポリヌクレオチドに加えて、本明細書中で開示される改変ウイルスは、自殺遺伝子をさらに含み得る。「自殺遺伝子」という用語は、薬物の無毒性前駆体を細胞傷害性化合物に変換するタンパク質（例えば酵素）をコードする遺伝子を指す。いくつかの実施形態では、自殺遺伝子は、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）－ＦＡＳ、ＦＫＢＰ－カスパーゼ－８、ＦＫＢＰ－カスパーゼ－９、シトシンデアミナーゼ（ＣＤａｓｅ）活性を有するポリペプチド、チミジンキナーゼ活性を有するポリペプチド、ウラシルホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＵＰＲＴａｓｅ）活性を有するポリペプチド及びプリンヌクレオシドホスホリラーゼ活性を有するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドをコードする。
いくつかの実施形態では、ＣＤａｓｅ活性を有するポリペプチドは、ＦＣＹ１、ＦＣＡ１又はＣｏｄＡである。
いくつかの実施形態では、ＵＰＲＴａｓｅ活性を有するポリペプチドは、ＦＵＲ１又はその変異体、例えばＦＵＲ１Δ１０５である。ＦＵＲ１Δ１０５は、最初の３５個のアミノ酸残基がＮ末端で欠失しているＵＰＲＴａｓｅの合成を可能にするコード領域の５’領域において最初の１０５個のヌクレオチドを欠く、ＦＵＲ１遺伝子である。ＦＵＲ１Δ１０５は、ネイティブタンパク質の位置３６のメチオニンで始まる。
自殺遺伝子は、キメラタンパク質、例えばＣＤａｓｅ及びＵＰＲＴａｓｅ活性を有するキメラタンパク質をコードし得る。いくつかの実施形態では、キメラタンパク質は、ｃｏｄＡ：：ｕｐｐ、ＦＣＹ１：：ＦＵＲ１、ＦＣＹｌ：：ＦＵＲ１Δ１０５（ＦＣＵ１）及びＦＣＵ１－８ポリペプチドから選択される。
サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、マトリクスメタロプロテイナーゼ、例えばマトリクスメタロプロテイナーゼ９（”ＭＭＰ９）をコードするポリヌクレオチドをさらに含み得、これは、ＩＶ型コラーゲン、細胞外マトリクス（ＥＣＭ）の主要な構成成分及び神経膠芽腫の基底膜を分解する（Ｍａｍｍａｔｏ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．，１８３（４）：１２９３－１３０５（２０１３），ｄｏｉ：１０．１０１６／ｊ．ａｊｐａｔｈ．２０１３．０６．０２６．Ｅｐｕｂ ２０１３ Ａｕｇ．５）。改変されたウイルスによるマトリクスメタロプロテイナーゼの発現は、水平伝播ゆえにウイルスによる腫瘍細胞の感染を促進し、腫瘍死滅活性を促進する。ウイルスの水平伝播を促進する他の遺伝子をコードするポリヌクレオチドも使用され得る。
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドは、サノトランスミッションを阻害する標的細胞に対して内因性のポリペプチドの標的細胞において発現又は活性を低下させるポリヌクレオチド（例えばｓｉＲＮＡをコードするポリヌクレオチド）である。サノトランスミッションを阻害し得る、標的細胞に対して内因性の代表的なポリペプチドを以下の表７で提供する。
Figure 2023532339000012
サノトランスミッションを阻害する遺伝子の発現を低下させるポリヌクレオチドとしては、アンチセンスＤＮＡ分子、アンチセンスＲＮＡ分子、２本鎖ＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ又はクラスター化して規則的な配置の短い回文配列リピート（ＣＲＩＳＰＲ）－ＣＲＩＳＰＲ関連（Ｃａｓ）（ＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓ）系ガイドＲＮＡが挙げられ得るが限定されない。
標的細胞の感染時のウイルスからのサノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチド又はポリペプチドの発現は、標的細胞において細胞回転経路を変化させ得る。例えば、標的細胞のウイルス感染時の１つ以上のポリヌクレオチド又はポリペプチドの発現は、例えばプログラムされた壊死（例えばネクロトーシス又はピロトーシス）、外因性アポトーシス又はフェロトーシスなど、サノトランスミッションを促進する細胞回転経路へと、標的細胞の正常な細胞回転経路を変化させ得る。
本明細書中に記載のウイルス遺伝子における突然変異は、サノトランスミッションを促進するタンパク質をコードするポリヌクレオチド及び／又はサノトランスミッションを阻害するポリペプチドの発現を低下させるポリヌクレオチドと組み合わせられ得る。特定の実施形態では、ウイルスは、ＩＣＰ３４．５及びＩＣＰ４７遺伝子における不活性化突然変異（例えば欠失）、ＩＣＰ６のＲＨＩＭドメインにおける不活性化突然変異及びＺＢＰ１、ＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬをコードするポリヌクレオチドを含むＨＳＶ１である。さらなる特定の実施形態では、ウイルスは、ＩＣＰ４７の不活性化突然変異（例えば欠失）、ワクシニアウイルスＥ３Ｌ遺伝子のデルタ－Ｚα１突然変異体形態でのＩＣＰ３４．５の置換及びＺＢＰ１、ＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬをコードするポリヌクレオチドを含むＨＳＶ１である。さらなる特定の実施形態では、ウイルスは、Ｅ３Ｌ遺伝子のＺα１ドメインにおける突然変異及びＺＢＰ１、ＲＩＰＫ３及びＭＬＫＬをコードするポリヌクレオチドを含むワクシニアウイルスである。さらなる特定の実施形態では、ウイルスは、Ｅ１Ａにおける２４ｂｐの欠失及びＥ１Ｂにおける８２７ｂｐの欠失を含むＡｄ５／Ｆ３５アデノウイルスである。
本明細書中に記載の改変ウイルスは、ポリヌクレオチドの発現を推進するために、本明細書中に記載のようなポリヌクレオチド（例えばサノトランスミッションポリペプチドをコードするポリヌクレオチド）に操作可能に連結される異種プロモーターをさらに含み得る。適切なプロモーターとしては、ＣＭＶプロモーター（例えばミニ－ＣＭＶプロモーター）、ＥＦ１αプロモーター（例えばミニ－ＥＦ１αプロモーター）、ＳＶ４０プロモーター、ＰＧＫ１プロモーター、ポリユビキチンＣ（ＵＢＣ）遺伝子プロモーター、ヒトベータアクチンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー／ニワトリベータ－アクチン／ウサギベータ－グロビン（ＣＡＧ）ハイブリッドプロモーターが挙げられるが限定されない。いくつかの実施形態では、プロモーターは、癌特異的なプロモーター、例えば腫瘍特異的なプロモーターである。適切な腫瘍特異的なプロモーターとしては、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素（ｈＴＥＲＴ）プロモーター及びＥ２Ｆプロモーターが挙げられるが限定されない。ｈＴＥＲＴプロモーターは、細胞（癌細胞など）において遺伝子発現を推進し、テロメラーゼの発現を上昇させる。Ｅ２Ｆプロモーターは、Ｒｂ経路が変化している細胞に特異的である遺伝子発現を推進する。
Ｖ．ウイルスに対する標的細胞
本明細書中に記載のサノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、標的細胞においてサノトランスミッションを促進するために、一連の異なる標的細胞に感染し得る。標的細胞のタイプとしては、癌細胞、免疫細胞、内皮細胞、線維芽細胞及び病原体が感染した細胞が挙げられるが限定されない。
本明細書中に記載の癌のいずれかの細胞は、改変ウイルスに対して標的細胞として適切であり得る。いくつかの実施形態では、標的細胞は転移性癌細胞である。
いくつかの実施形態では、標的細胞は、肥満細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、樹状細胞、リンパ球（例えばＢ細胞及びＴ細胞）及び本明細書中に記載の他の免疫細胞のいずれかから選択される免疫細胞である。
いくつかの実施形態では、標的細胞に病原体が感染する。代表的な病原体としては、細菌（例えばグラム陽性又はグラム陰性細菌）、真菌、寄生虫及びウイルスが挙げられる。代表的な細菌病原体としては、Ｅ．コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、シュードモナス・エルギノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）ｓｐｐ．、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）ｓｐｐ．又はバンコマイシン耐性エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）が挙げられる。真菌病原体は、例えば、カビ、酵母又はより高等真菌であり得る。寄生虫は、例えば、ジアルジア・デュオデナリス（Ｇｉａｒｄｉａ ｄｕｏｄｅｎａｌｉｓ）、クリプトスポリジウム・パルブム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ ｐａｒｖｕｍ）、シクロスポラ・カエタネシス（Ｃｙｃｌｏｓｐｏｒａ ｃａｙｅｔａｎｅｎｓｉｓ）及びトキソプラズマ・ゴンジズ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ ｇｏｎｄｉｚ）を含む、単細胞又は多細胞寄生虫、であり得る。ウイルスは、ＡＩＤＳ、トリインフルエンザ、水痘、口唇ヘルペス、感冒、胃腸炎、腺熱、インフルエンザ、麻疹、流行性耳下腺炎、咽頭炎、肺炎、風疹、ＳＡＲＳ及び下気道又は上気道感染（例えば呼吸器多核体ウイルス）に関連するウイルスであり得る。いくつかの実施形態では、ウイルスはＢ型肝炎ウイルス又はＣ型肝炎ウイルスである。
いくつかの実施形態では、標的細胞（例えば癌細胞）は、細胞回転経路が欠けている。例えば、標的細胞は、不活性化する突然変異又は細胞回転経路に寄与するタンパク質をコードする遺伝子のコピー数損失を有し得る。いくつかの実施形態では、標的細胞は、免疫刺激性の細胞回転経路、例えばプログラムされた壊死（例えばネクロトーシス又はピロトーシス）、外因性アポトーシス、フェロトーシス又はそれらの組み合わせを欠く。いくつかの実施形態では、標的細胞は、受容体－相互作用セリン／スレオニン－タンパク質キナーゼ３（ＲＩＰＫ１）をコードする遺伝子、受容体－相互作用セリン／スレオニン－タンパク質キナーゼ３（ＲＩＰＫ３）をコードする遺伝子、Ｚ－ＤＮＡ－結合タンパク質１（ＺＢＰ１）をコードする遺伝子、混合系統キナーゼドメイン様偽キナーゼ（ＭＬＫＬ）をコードする遺伝子、ガスダーミン（例えばガスダーミンＤ及び／又はガスダーミンＥ）をコードする遺伝子及びＴｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）－ドメイン－含有アダプター誘導性インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）をコードする遺伝子のうち１つ以上の不活性化する突然変異を有する。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１、ＴＲＩＦ、ガスダーミン（例えばガスダーミンＤ及び／又はガスダーミンＥ）及びＭＬＫＬのうち１つ以上の発現又は活性が低下している。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１、ＴＲＩＦ、ガスダーミン（例えばガスダーミンＤ及び／又はガスダーミンＥ）及びＭＬＫＬのうち１つ以上を発現しない。いくつかの実施形態では、標的細胞は、ＲＩＰＫ１をコードする遺伝子、ＲＩＰＫ３をコードする遺伝子、ＺＢＰ１をコードする遺伝子、ＴＲＩＦをコードする遺伝子、ガスダーミン（例えばガスダーミンＤ及び／又はガスダーミンＥ）をコードする遺伝子及びＭＬＫＬをコードする遺伝子のうち１つ以上のコピー数損失を有する。
いくつかの実施形態では、対象は、本明細書中に記載の組成物の投与前、投与中及び又は投与後に、本明細書中に記載の標的細胞基準のうちいずれか１つ以上について評価される。
ＶＩ．サノトランスミッションを促進する方法
本明細書中に記載の改変されたウイルスは、標的細胞によるサノトランスミッションを促進するために使用され得る。特定の態様では、本開示は、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する方法に関し、この方法は、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを伴う標的細胞を含有することを含み、標的細胞によるサノトランスミッションを促進するために十分である量及び時間で、ウイルスと標的細胞を接触させる。例えば、標的細胞の改変ウイルスへの感染及びサノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドの発現は、標的細胞により能動的に放出される因子を標的細胞が産生するように、又は標的細胞の代謝回転中（例えば死滅）に露出されるようになるように誘導する。これらの因子は、生物学的応答（例えば免疫活性の上昇）を受けるように応答細胞（例えば免疫細胞）にシグナルを伝達する。
いくつかの実施形態では、改変ウイルスは、対象において標的細胞によるサノトランスミッションを促進するために対象に投与される。例えば特定の態様では、本開示は、１つ以上のサノトランスミッションポリヌクレオチドを対象に送達する方法に関し、この方法は、本明細書中で記載のような改変ウイルスを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。特定の態様では、本開示は、対象においてサノトランスミッションを促進する方法に関し、この方法は、サノトランスミッションを促進するために十分である量及び時間で、本明細書中に記載のような改変ウイルスを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。
Ａ．免疫活性を高める方法
一態様では、本明細書中に記載の改変ウイルスは、対象、例えば免疫活性の上昇から利益を得る対象において、免疫活性を高めるために使用され得る。特定の態様では、本開示は、免疫反応の促進を必要とする対象において免疫反応を促進する方法に関し、この方法は、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを対象に投与することを含み、このウイルスは、サノトランスミッションを促進するために十分な量及び時間で対象に投与され、それにより、対象において免疫反応を促進する。例えば、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドの発現時に標的細胞により産生される因子は、応答細胞（例えば免疫細胞）において免疫刺激性の反応（例えば炎症促進性の反応）を誘導し得る。一実施形態では、免疫反応は抗癌反応である。
本開示の方法によれば、例えば肥満細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好塩基球、好中球、単球、マクロファージ、樹状細胞、好酸球、リンパ球（例えばＢリンパ球（Ｂ細胞））及びＴリンパ球（Ｔ細胞））のいずれか１つ以上を含め、広い範囲の免疫細胞との標的細胞の相互作用によって、免疫活性が調整され得る。
免疫細胞のタイプ
肥満細胞は、ヒスタミンと抗凝固剤であるヘパリンが豊富な顆粒を含む顆粒球の一種である。活性化されると、肥満細胞は、炎症性化合物を顆粒から局所微小環境に放出する。肥満細胞は、アレルギー、アナフィラキシー、創傷治癒、血管新生、免疫寛容、病原体に対する防御、及び血液脳関門機能において役割を果たす。
ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞は、一切の事前の刺激も免疫化もなしに特定の腫瘍及びウイルス感染細胞を溶解する細胞傷害性リンパ球である。ＮＫ細胞はまた、様々なサイトカイン、例えば、ＩＦＮ－ガンマ（ＩＦＮγ）、ＴＮＦ－アルファ（ＴＮＦα）、ＧＭ－ＣＳＦ、及びＩＬ－３の強力な産生細胞である。従って、ＮＫ細胞は、免疫系の制御性細胞としても機能し、他の細胞及び反応に影響を与えるとも考えられている。ヒトでは、ＮＫ細胞は、ＣＤ５６＋ＣＤ３－リンパ球として広く定義されている。ＮＫ細胞の細胞毒性は、細胞表面の受容体からの活性化シグナルと抑制性シグナルのバランスによって厳密に制御されている。ＮＫ細胞の活性化を阻害する主な受容体群は、抑制性キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）である。標的細胞上の自己ＭＨＣクラスＩ分子を認識すると、これらの受容体は、シグナル伝達カスケードの活性化を停止する阻害シグナルを伝達し、正常なＭＨＣクラスＩ発現を示す細胞をＮＫ細胞溶解から保護する。活性化受容体には、標的細胞表面上の様々なリガンドとの結合を介して細胞溶解作用に向けてバランスを押し上げる天然の細胞毒性受容体（ＮＣＲ）及びＮＫＧ２Ｄが含まれる。従って、標的細胞のＮＫ細胞の認識は、複数の活性化及び抑制性受容体から送達されるシグナルの統合を含むプロセスによって厳密に制御される。
単球は、組織に動員されるまで数時間／数日の間血中を循環する骨髄由来単核食細胞である。Ｗａｃｌｅｃｈｅ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｖｉｒｕｓｅｓ（１０）２：６５を参照されたい。単球の表面での様々なケモカイン受容体及び細胞接着分子の発現により、これらが、骨髄を出て血中に入り、その後、血液から組織内に動員されるのが可能となる。単球は、ウイルス感染、細菌感染、真菌感染、又は寄生虫感染に対する応答を提供する免疫系の生得的な武器（ｉｎｎａｔｅ ａｒｍ）に属する。それらの機能には、食作用による病原体の死滅、活性酸素種（ＲＯＳ）、一酸化窒素（ＮＯ）、ミエロペルオキシダーゼ、及び炎症性サイトカインの産生が含まれる。特定の条件下では、単球は、癌並びに感染症及び自己免疫疾患の際にＴ細胞応答を刺激又は阻害し得る。単球はまた、組織の修復及び血管新生に関与する。
マクロファージは、食作用と呼ばれるプロセスで、細胞残屑、異物、微生物、癌細胞などの物質を飲み込んで消化する。食作用に加えて、マクロファージは、非特異的防御（自然免疫）において重要な役割を果たし、リンパ球などの他の免疫細胞を動員することによって特定の防御機構（適応免疫）を開始するのにも役立つ。例えば、マクロファージは、Ｔ細胞への抗原プレゼンター（ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔｅｒ）として重要である。マクロファージは、炎症を増加させ、免疫系を刺激するだけでなく、重要な抗炎症の役割も果たし、サイトカインの放出を介して免疫反応を低下させ得る。炎症を促進するマクロファージは、Ｍ１マクロファージと呼ばれ、炎症を軽減して組織の修復を促進するマクロファージは、Ｍ２マクロファージと呼ばれる。
樹状細胞（ＤＣ）は、病原体に対する免疫応答を刺激し、無害な抗原に対する免疫恒常性を維持する上で重要な役割を果たす。ＤＣは、免疫応答の誘導及び調節に不可欠な、特殊な抗原感知細胞及び抗原提示細胞（ＡＰＣ）の異種群を表す。末梢血では、ヒトＤＣは、Ｔ細胞（ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８）、Ｂ細胞（ＣＤ１９、ＣＤ２０）、及び単球マーカー（ＣＤ１４、ＣＤ１６）を欠いているが、ＨＬＡ－ＤＲ及び他のＤＣ系統マーカー（例えば、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｃ）を高度に発現する細胞として特徴づけられる。Ｍｕｒｐｈｙ ｅｔ ａｌ．，Ｊａｎｅｗａｙ’ｓ Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ．８ｔｈ ｅｄ．Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ；Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ＵＳＡ：２０１２．８６８ｐを参照されたい。
「リンパ球」という用語は、体全体のリンパ組織及び正常な成人で形成される小さな白血球を指し、疾患から体を防御するのに大きな役割を果たす、循環血液中の白血球の総数の約２２～２８％を占める。個々のリンパ球は、（例えば、Ｔ細胞受容体とＢ細胞受容体を形成するために）それらの遺伝物質の組換えを介して、構造的に関連する抗原の限られたセットに応答することにコミットしているという点で特殊化されている。免疫系が所与の抗原と最初に接触する前に存在するこのコミットメントは、リンパ球の表面膜における抗原上の決定基（エピトープ）に特異的な受容体の存在によって表される。各リンパ球は、受容体のユニークな集団を有しており、そのすべてが同一の結合部位を有する。リンパ球の１つのセット又はクローンは、その受容体の結合領域の構造が別のクローンとは異なるため、認識できるエピトープが異なる。リンパ球は、それらの受容体の特異性だけでなく、それらの機能も互いに異なる（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９），ａｔ ｐ．１０２）。
リンパ球には、抗体分泌細胞の前駆細胞であるＢリンパ球（Ｂ細胞）、及びＴリンパ球（Ｔ細胞）が含まれる。
Ｂリンパ球（Ｂ細胞）
Ｂリンパ球は、骨髄の造血細胞に由来する。成熟したＢ細胞は、その細胞表面によって認識されるエピトープを発現する抗原で活性化することができる。活性化プロセスは、抗原による膜Ｉｇ分子の架橋に依存し、直接的である（架橋依存性Ｂ細胞活性化）、又は同族支援（ｃｏｇｎａｔｅ ｈｅｌｐ）と呼ばれるプロセスにおけるヘルパーＴ細胞との相互作用を介し、間接的であり得る。多くの生理学的状況では、受容体架橋刺激及び同族支援は、相乗作用を助けてより活発なＢ細胞応答を引き起こす（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
各Ｂ細胞は、同一の可変領域を有するＩｇ分子を発現するため、架橋依存性Ｂ細胞活性化には、抗原が細胞表面受容体の結合部位に相補的なエピトープの複数のコピーを発現する必要がある。このような要件は、微生物の莢膜多糖又はウイルスエンベロープタンパク質などの、反復エピトープを有する他の抗原によって満たされる。架橋依存性Ｂ細胞活性化は、これらの微生物に対して開始される主要な防御免疫応答である（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
同族支援により、Ｂ細胞は、受容体を架橋できない抗原に対する応答を開始することができ、同時に、弱い架橋事象によって刺激されたときにＢ細胞を不活化から救う共刺激シグナルを提供する。同族支援は、Ｂ細胞の膜免疫グロブリン（Ｉｇ）による抗原の結合、抗原のエンドサイトーシス、及び細胞のエンドソーム／リソソーム区画内のペプチドへのその断片化に依存する。得られたペプチドのいくつかは、クラスＩＩ主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子として知られている特殊な一連の細胞表面タンパク質の溝にロードされる。得られたクラスＩＩ／ペプチド複合体は、細胞表面で発現され、ＣＤ４＋ Ｔ細胞と呼ばれる一連のＴ細胞の抗原特異的受容体のリガンドとして機能する。ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、Ｂ細胞クラスＩＩ／ペプチド複合体に特異的な受容体をその表面に有する。Ｂ細胞活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を介したＴ細胞の結合に依存するだけでなく、この相互作用により、Ｔ細胞上の活性化リガンド（ＣＤ４０リガンド）が、Ｂ細胞活性化をシグナル伝達するＢ細胞（ＣＤ４０）上の受容体に結合することも可能になる。加えて、Ｔヘルパー細胞は、Ｂ細胞上のサイトカイン受容体に結合することによって、刺激されたＢ細胞の成長及び分化を調節するいくつかのサイトカインを分泌する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，“Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
抗体産生の同族支援の間に、ＣＤ４０リガンドは、活性化されたＣＤ４＋ Ｔヘルパー細胞で一過性に発現され、抗原特異的Ｂ細胞上のＣＤ４０に結合し、それにより第２の共刺激シグナルを変換する。後者のシグナルは、抗原に遭遇した胚中心Ｂ細胞のアポトーシスを防止することによるＢ細胞の増殖及び分化並びにメモリーＢ細胞の生成に不可欠である。Ｂ細胞及びＴ細胞の両方でのＣＤ４０リガンドの過剰発現は、ヒトＳＬＥ患者の病原性自己抗体産生に関係している（Ｄｅｓａｉ－Ｍｅｈｔａ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，“Ｈｙｐｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４０ ｌｉｇａｎｄ ｂｙ Ｂ ａｎｄ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｌｕｐｕｓ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｏｌｅ ｉｎ ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｖｏｌ．９７（９），２０６３－２０７３，（１９９６））。
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）
造血組織の前駆体に由来するＴリンパ球は、胸腺で分化し、末梢リンパ組織及びリンパ球の再循環プールに撒かれる。Ｔリンパ球又はＴ細胞は、幅広い免疫機能を仲介する。免疫機能には、Ｂ細胞が抗体産生細胞に成長するのを助ける能力、単球／マクロファージの殺菌作用を高める能力、特定のタイプの免疫応答の阻害、標的細胞の直接的な死滅、及び炎症反応の動員が含まれる。これらの効果は、特定の細胞表面分子のＴ細胞発現及びサイトカインの分泌に依存する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ”，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
Ｔ細胞は、Ｂ細胞とは抗原認識のメカニズムが異なる。Ｂ細胞の受容体である免疫グロブリンは、可溶性分子又は粒子表面の個々のエピトープに結合する。Ｂ細胞受容体は、天然分子の表面に発現するエピトープを認識する。抗体及びＢ細胞受容体は、細胞外液中の微生物に結合して防御するように進化したが、Ｔ細胞は、他の細胞の表面にある抗原を認識し、これらの抗原提示細胞（ＡＰＣ）と相互作用してその挙動を変化させることによってそれらの機能を仲介する。Ｔ細胞を活性化できる末梢リンパ器官には、主要な３種類のＡＰＣ：樹状細胞、マクロファージ、及びＢ細胞が存在する。これらの中で樹状細胞が最も強力であり、その唯一の機能は外来抗原をＴ細胞に提示することである。未熟な樹状細胞は、皮膚、腸、気道を含む体全体の組織に存在する。未熟な樹状細胞は、これらの部位で侵入微生物に遭遇すると、病原体及びその産物を取り込み、リンパを介して局所リンパ節又は腸関連リンパ器官に輸送する。病原体との遭遇により、樹状細胞が、抗原捕捉細胞からＴ細胞を活性化できるＡＰＣに成熟するように誘導される。ＡＰＣは、Ｔ細胞を活性化してエフェクター細胞にする際に役割を果たす３種類のタンパク質分子：（１）Ｔ細胞受容体に外来抗原を提示するＭＨＣタンパク質；（２）Ｔ細胞表面の相補的受容体に結合する共刺激タンパク質；及び（３）活性化するまで十分に長くＴ細胞をＡＰＣに結合することを可能にする細胞間接着分子を表面に提示する（“Ｃｈａｐｔｅｒ ２４：Ｔｈｅ ａｄａｐｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ，”Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｃｅｌｌ，Ａｌｂｅｒｔｓ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＮＹ，（２００２））。
Ｔ細胞は、それらが発現する細胞表面受容体に基づいて２つの異なるクラスに細分される。Ｔ細胞の大部分は、α鎖とβ鎖からなるＴ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現する。Ｔ細胞の小群は、γ鎖とδ鎖からなる受容体を発現する。α／β Ｔ細胞には、２つの亜系統：補助受容体分子ＣＤ４を発現するＴ細胞（ＣＤ４＋ Ｔ細胞）；及びＣＤ８を発現するＴ細胞（ＣＤ８＋ Ｔ細胞）が存在する。これらの細胞は、抗原を認識する方法と、エフェクター及び調節機能が異なる。
ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、免疫系の主要な制御性細胞である。それらの制御機能は、Ｔ細胞が活性化されると発現が誘導されるＣＤ４０リガンドなどのそれらの細胞表面分子の発現、及び活性化されると分泌する様々なサイトカインの発現の両方に依存する。
Ｔ細胞はまた、重要なエフェクター機能を媒介し、そのいくつかは、それらが分泌するサイトカインのパターンによって決定される。サイトカインは、標的細胞に対して直接的に毒性であり得、強力な炎症メカニズムを動員し得る。
加えて、Ｔ細胞、特にＣＤ８＋ Ｔ細胞は、細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）によって認識される抗原を発現する標的細胞を効率的に溶解できるＣＴＬに成長し得る（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）は、クラスＩＩ又はクラスＩ ＭＨＣタンパク質の特殊な溝に結合した抗原のタンパク質分解によって得られるペプチドからなる複合体を認識する。ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、ペプチド／クラスＩＩ複合体のみを認識し、ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、ペプチド／クラスＩ複合体を認識する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
ＴＣＲのリガンド（即ち、ペプチド／ＭＨＣタンパク質複合体）はＡＰＣ内で生成される。一般に、クラスＩＩ ＭＨＣ分子は、エンドサイトーシスプロセスを介してＡＰＣに取り込まれたタンパク質に由来するペプチドに結合する。次に、これらのペプチドがロードされたクラスＩＩ分子が細胞の表面に発現され、これらは、発現した細胞表面複合体を認識できるＴＣＲを有するＣＤ４＋ Ｔ細胞によって結合され得る。従って、ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、細胞外供給源に由来する抗原と反応するように特殊化されている（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
対照的に、クラスＩ ＭＨＣ分子には、ウイルスタンパク質などの内部合成タンパク質に由来するペプチドが主にロードされている。これらのペプチドは、プロテオソームによるタンパク質分解によって細胞質タンパク質から生成され、粗面小胞体に移動する。このようなペプチドは、一般に、９アミノ酸長から構成されており、クラスＩ ＭＨＣ分子に結合して細胞表面に運ばれ、適切な受容体を発現するＣＤ８＋ Ｔ細胞によって認識され得る。これにより、Ｔ細胞系、特にＣＤ８＋ Ｔ細胞に、生物の残りの細胞のタンパク質（例えば、ウイルス抗原）又は変異抗原（活性腫瘍遺伝子産物など）とは異なるタンパク質、又はこれらよりもはるかに大量に産生されるタンパク質を発現する細胞を、これらのタンパク質が無傷の形で細胞表面に発現も分泌もされなくても、検出する能力が付与される（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
Ｔ細胞はまた、機能に基づいてヘルパーＴ細胞；細胞性免疫の誘導に関与するＴ細胞；サプレッサーＴ細胞；及び細胞傷害性Ｔ細胞として分類することができる。
ヘルパーＴ細胞
ヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞を刺激してタンパク質及びその他のＴ細胞依存性抗原に対する抗体反応を引き起こすＴ細胞である。Ｔ細胞依存性抗原は、個々のエピトープが１回のみ又は限られた回数しか出現しないため、Ｂ細胞の膜免疫グロブリン（Ｉｇ）を架橋できないか、非効率的にしか架橋できない免疫原である。Ｂ細胞は、それらの膜Ｉｇを介して抗原に結合し、この複合体は、エンドサイトーシスを受ける。エンドソーム及びリソソーム区画内で、抗原は、タンパク質分解酵素によってペプチドに断片化され、生成されたペプチドの１つ又は複数がクラスＩＩ ＭＨＣ分子にロードされ、この小胞区画を通過する。次に、得られたペプチド／クラスＩＩ ＭＨＣ複合体は、Ｂ細胞表面膜に輸送される。ペプチド／クラスＩＩ分子複合体に特異的な受容体を有するＴ細胞は、Ｂ細胞表面でこの複合体を認識する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９））。
Ｂ細胞の活性化は、そのＴＣＲを介したＴ細胞の結合、及びＴ細胞ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）とＢ細胞上のＣＤ４０との相互作用の両方に依存する。Ｔ細胞は、ＣＤ４０Ｌを構成的に発現しない。むしろ、ＣＤ４０Ｌの発現は、Ｔ細胞のＴＣＲによって認識される同族抗原及びＣＤ８０又はＣＤ８６の両方を発現するＡＰＣとの相互作用の結果として誘導される。ＣＤ８０／ＣＤ８６は、一般に、Ｂ細胞の休止状態ではなく活性化によって発現されるため、活性化Ｂ細胞及びＴ細胞を伴うヘルパーの相互作用が、効率的な抗体産生をもたらし得る。しかしながら、多くの場合、Ｔ細胞上のＣＤ４０Ｌの最初の誘導は、樹状細胞などのＣＤ８０／８６を構成的に発現するＡＰＣの表面での抗原の認識に依存する。次に、このような活性化ヘルパーＴ細胞は、Ｂ細胞と効率的に相互作用して支援することができる。Ｂ細胞上の膜Ｉｇの架橋は、たとえ非効率的であっても、ＣＤ４０Ｌ／ＣＤ４０相互作用と相乗作用して、活発なＢ細胞の活性化をもたらし得る。増殖、Ｉｇの分泌、及び発現しているＩｇクラスのクラスの切り替えを含む、Ｂ細胞応答におけるその後の事象は、Ｔ細胞由来サイトカインの作用に依存するか、又はその作用によって増強される（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、主にサイトカインＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０を分泌する細胞（ＴＨ２細胞）、又は主にＩＬ－２、ＩＦＮ－γ、及びリンホトキシンを産生する細胞（ＴＨ１細胞）に分化する傾向がある。ＴＨ２細胞は、Ｂ細胞が抗体産生細胞に成長するのを助けるのに非常に効果的であり、ＴＨ１細胞は、単球及びマクロファージの殺菌活性の増強に関与し、結果として細胞内の小胞区画の微生物の溶解効率を向上させる、細胞免疫応答の効果的な誘導因子である。ＴＨ２細胞の表現型（即ち、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、及びＩＬ－１０）を有するＣＤ４＋ Ｔ細胞は効率的なヘルパー細胞であるが、ＴＨ１細胞はヘルパーになる能力も有する（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，“Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
細胞性免疫誘導へのＴ細胞の関与
Ｔ細胞はまた、単球及びマクロファージの能力を増強して、細胞内微生物を破壊するように作用し得る。特に、ヘルパーＴ細胞によって産生されるインターフェロン－ガンマ（ＩＦＮ－γ）は、単核食細胞が、一酸化窒素の生成及び腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）産生の誘導を含む、細胞内細菌及び寄生虫を破壊するいくつかのメカニズムを促進する。ＴＨ１細胞は、ＩＦＮ－γを産生するため、殺菌作用を高めるのに効果的である。対照的に、ＴＨ２細胞によって産生される２つの主要なサイトカインであるＩＬ－４及びＩＬ－１０は、これらの活性をブロックする（Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，“Ｃｈａｐｔｅｒ １：Ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ：ａｎ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ，”Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅｄ．Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，Ｌｉｐｐｉｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，（１９９９））。
制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞
免疫恒常性は、免疫応答の開始とダウンレギュレーションとの間の制御されたバランスによって維持される。アポトーシス及びＴ細胞アネルギーの両方のメカニズム（抗原との遭遇後にＴ細胞が本質的に機能的に不活性化される耐性メカニズム（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｈ．，“Ｔ ｃｅｌｌ ａｎｅｒｇｙ”，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．２１：３０５－３３４（２００３））は、免疫応答のダウンレギュレーションに寄与する。第３のメカニズムは、サプレッサー又は制御性ＣＤ４＋ Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞による活性化Ｔ細胞の能動的抑制によって提供される（Ｒｅｖｉｅｗｅｄ ｉｎ Ｋｒｏｎｅｎｂｅｒｇ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｍｍｕｎｉｔｙ ｂｙ ｓｅｌｆ－ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｔ ｃｅｌｌｓ”，Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．４３５：５９８－６０４（２００５））。ＩＬ－２受容体アルファ（ＩＬ－２Ｒα）鎖を構成的に発現するＣＤ４＋ Ｔｒｅｇ（ＣＤ４＋ＣＤ２５＋）は、アネルギー性及び抑制性である天然に存在するＴ細胞のサブセットである（Ｔａａｍｓ，Ｌ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，“Ｈｕｍａｎ ａｎｅｒｇｉｃ／ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ Ｔ ｃｅｌｌｓ：ａ ｈｉｇｈｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ａｎｄ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ－ｐｒｏｎｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ”，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｖｏｌ．３１：１１２２－１１３１（２００１））。ヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋ Ｔｒｅｇは、マウスの対応物と同様に胸腺で生成され、細胞間接触依存性メカニズムを介してレスポンダーＴ細胞の増殖を抑制する能力、ＩＬ－２を産生できないこと、及びインビトロでのアネルギー表現型によって特徴づけられる。ヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋ Ｔ細胞は、ＣＤ２５の発現レベルに応じて抑制性（ＣＤ２５ｈｉｇｈ）細胞及び非抑制性（ＣＤ２５ｌｏｗ）細胞に分割することができる。転写因子のフォークヘッドファミリーのメンバーであるＦＯＸＰ３は、マウス及びヒトＣＤ４＋ＣＤ２５＋ Ｔｒｅｇで発現することが示され、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ Ｔｒｅｇの発生を制御するマスター遺伝子であると考えられる（Ｂａｔｔａｇｌｉａ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，“Ｒａｐａｍｙｃｉｎ ｐｒｏｍｏｔｅｓ ｅｘｐａｎｓｉｏｎ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｏｆ ｂｏｔｈ ｈｅａｌｔｈｙ ｓｕｂｊｅｃｔｓ ａｎｄ ｔｙｐｅ １ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ”，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．１７７：８３３８－８３４７，（２００６））。従って、いくつかの実施形態では、免疫応答の上昇は、制御性Ｔ細胞の活性化又は増殖の欠如に関連し得る。
細胞傷害性Ｔリンパ球
標的細胞内で産生されたタンパク質からペプチドを認識するＣＤ８＋ Ｔ細胞は、標的細胞の溶解を引き起こすという点で細胞傷害性を有する。ＣＴＬ誘導性溶解のメカニズムには、標的細胞の膜に挿入してその細胞の溶解を促進できる分子であるパーフォリンのＣＴＬによる産生が含まれる。パーフォリンを介した溶解は、活性化されたＣＴＬによって産生される一連の酵素であるグランザイムによって促進される。多くの活性ＣＴＬはまた、それらの表面に大量のｆａｓリガンドを発現する。ＣＴＬの表面のｆａｓリガンドと標的細胞の表面のｆａｓとの相互作用は、標的細胞のアポトーシスを開始し、これらの細胞の死をもたらす。ＣＴＬを介した溶解は、ウイルスに感染した細胞を破壊するための主要なメカニズムであると考えられる。
リンパ球の活性化
「活性化」又は「リンパ球の活性化」という用語は、ＲＮＡ、タンパク質、及びＤＮＡの合成及びリンホカインの産生をもたらし；その後、様々なエフェクター細胞及びメモリー細胞の増殖及び分化が生じる、特定の抗原、非特異的マイトジェン、又は同族異系細胞によるリンパ球の刺激を指す。Ｔ細胞の活性化は、ＴＣＲ／ＣＤ３複合体と、クラスＩ又はクラスＩＩ ＭＨＣ分子の溝に結合したペプチドであるその同族リガンドとの相互作用に依存する。受容体の結合によって引き起こされる分子事象は複雑である。初期のステップでは、チロシンキナーゼの活性化が、いくつかのシグナル伝達経路を制御する一連の基質のチロシンリン酸化をもたらすと考えられる。これらには、ＴＣＲをｒａｓ経路に連結する一連のアダプタータンパク質、ホスホリパーゼＣγ１が含まれ、そのチロシンリン酸化は、その触媒活性を高め、イノシトールリン脂質代謝経路に関与し、細胞内遊離カルシウム濃度の上昇、並びにプロテインキナーゼＣと、細胞の成長及び分化を制御する他の一連の酵素の活性化をもたらす。Ｔ細胞の完全な応答性には、受容体の関与に加えて、アクセサリー細胞が提供する共刺激活性、例えば、ＡＰＣ上のＣＤ８０及び／又はＣＤ８６によるＴ細胞上のＣＤ２８の関与が必要である。
Ｔメモリー細胞
適応免疫応答による病原体の認識と根絶に続いて、Ｔ細胞の大部分（９０～９５％）が、残りの細胞と共にアポトーシスを受け、メモリーＴ細胞、指定セントラルメモリーＴ細胞（ＴＣＭ）、エフェクターメモリーＴ細胞（ＴＥＭ）、及び常在メモリーＴ細胞（ＴＲＭ）のプールが形成される（Ｃｌａｒｋ，Ｒ．Ａ．，“Ｒｅｓｉｄｅｎｔ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，７，２６９ｒｖ１，（２０１５））。
標準的なＴ細胞と比較して、これらのメモリーＴ細胞は、特定の表面マーカーの発現、様々なサイトカインプロファイルの迅速な産生、直接エフェクター細胞機能の能力、独自のホーミング分布パターンなどの異なる表現型で長寿命である。メモリーＴ細胞は、オフェンダー（ｏｆｆｅｎｄｅｒ）の再感染を排除し、それにより免疫系のバランスを迅速に回復するために、それぞれの抗原に再曝露されると迅速な応答を示す。自己免疫メモリーＴ細胞が自己免疫疾患の処置又は治癒のほとんどの試みを妨げることを実証する証拠が増えている（Ｃｌａｒｋ，Ｒ．Ａ．，“Ｒｅｓｉｄｅｎｔ ｍｅｍｏｒｙ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ ｄｉｓｅａｓｅ”，Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．，Ｖｏｌ．７，２６９ｒｖ１，（２０１５））。
免疫活性の上昇
本明細書中に記載のサノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、組織又は対象において、本明細書中に記載の免疫細胞、例えばマクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞（例えばＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋Ｔ細胞）のいずれか１つ以上のレベル又は活性を高めることによって、組織又は対象において免疫活性を高め得る。例えば、一実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、組織又は対象において、マクロファージのレベル又は活性、単球のレベル又は活性、樹状細胞のレベル又は活性、Ｔ細胞のレベル又は活性、Ｂ細胞のレベル又は活性及びＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞（例えばＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋Ｔ細胞）のレベル又は活性のうち１つ以上を高めるために十分な量で投与される。
いくつかの態様では、本開示は、組織又は対象においてマクロファージ、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及び／又は樹状細胞のレベル又は活性を高める方法に関し、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを組織又は対象に投与することを含み、ウイルスは、改変ウイルスで処置されない組織又は対象と比較して、マクロファージ、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞及び／又は樹状細胞のレベル又は活性を高めるために十分な量で投与される。
一実施形態では、対象は、マクロファージ、単球、樹状細胞、Ｂ細胞及び／又はＴ細胞のレベル又は活性の上昇を必要とする。
一実施形態では、マクロファージ、単球、Ｂ細胞、Ｔ細胞又は樹状細胞のレベル又は活性は、改変ウイルスで処置していない組織又は対象と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍若しくは１０倍に、上昇する。
いくつかの態様では、本開示は、組織又は対象においてＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性を高める方法に関し、改変ウイルスで処置されていない組織又は対象と比較してＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性を高めるために十分な量でサノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを対象に投与することを含む。
一実施形態では、対象は、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性の上昇を必要とする。
一実施形態では、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性は、改変ウイルスで処置されていない組織又は対象と比較して、少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍若しくは１０倍に、上昇する。
サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスはまた、免疫細胞により産生されるプロ免疫サイトカインのレベル又は活性を高めることによって、細胞、組織又は対象において免疫活性を高め得る。例えば、いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、細胞、組織又は対象において免疫細胞により産生されるプロ免疫サイトカインのレベル又は活性を高めるために十分な量で投与される。一実施形態では、プロ免疫サイトカインは、ＩＦＮ－α、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７及びＧＭＣＳＦから選択される。
いくつかの態様では、本開示は、例えば組織又は対象において、免疫細胞でＮＦｋＢ経路、インターフェロンＩＲＦシグナル伝達及び／又はＳＴＡＴシグナル伝達を誘導する、本明細書中に記載の免疫細胞において炎症促進性転写反応を誘導する方法に関し、免疫細胞ＮＦｋＢ経路での（ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌｓ ＮＦｋＢ ｐａｔｈｗａｙｓ）炎症促進性転写反応、インターフェロンＩＲＦシグナル伝達及び／又は免疫細胞でのＳＴＡＴシグナル伝達を誘導するために十分な量で、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを組織又は対象に投与することを含む。
サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスはまた、核酸の細胞内センサー、例えばインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、を通じたシグナル伝達の調整により、細胞、組織又は対象において免疫活性を高め得る。
いくつかの態様では、本開示は、核酸の細胞内センサー、例えばインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、を通じたシグナル伝達の調整によって、細胞、組織又は対象において免疫活性を高める方法に関し、核酸の細胞内センサー、例えばインターフェロン遺伝子の刺激因子（ＳＴＩＮＧ）、を通じたシグナル伝達の調整により細胞、組織又は対象において免疫活性を高めるために十分な量で、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを組織又は対象に投与することを含む。
サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスはまた、本明細書中に記載の免疫細胞で炎症促進性転写反応を誘導する、例えば活性化されたＢ細胞の核内因子カッパ軽鎖エンハンサー（ＮＦｋＢ）経路、インターフェロン調節因子（ＩＲＦ）シグナル伝達及び／又はＳＴＡＴシグナル伝達を誘導することによって、細胞、組織又は対象において免疫活性を高め得る。例えば、いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、ＮＦｋＢ経路、インターフェロンＩＲＦシグナル伝達及び／又は免疫細胞におけるＳＴＡＴシグナル伝達を誘導するために十分な量で投与される。
いくつかの態様では、本開示は、本明細書中に記載の免疫細胞において炎症促進性転写反応を誘導する、例えば組織又は対象において免疫細胞でのＮＦｋＢ経路、インターフェロンＩＲＦシグナル伝達及び／又はＳＴＡＴシグナル伝達を誘導する、方法に関し、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを組織又は対象に投与することを含み、このウイルスは、免疫細胞ＮＦｋＢ経路での（ｉｎ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｃｅｌｌｓ ＮＦｋＢ ｐａｔｈｗａｙｓ）炎症促進性転写反応、インターフェロンＩＲＦシグナル伝達及び／又は免疫細胞におけるＳＴＡＴシグナル伝達を誘導するために十分な量で投与される。
サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスはまた、抗体反応の誘導又は調整によって、組織又は対象において免疫活性を高め得る。例えば、いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは、組織又は対象において抗体反応を誘導又は調整するために十分な量で投与される。
いくつかの態様では、本開示は、組織又は対象における免疫細胞での抗体反応の誘導又は調整によって組織又は対象において免疫活性を高める方法に関し、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを組織又は対象に投与することを含み、このウイルスは、改変ウイルスで処置されていない組織又は対象と比較して組織又は対象において免疫活性を高めるために十分な量で投与される。
いくつかの態様では、本開示は、細胞、組織又は対象においてプロ免疫サイトカインのレベル又は活性を高める方法に関し、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを、細胞、組織又は対象に投与することを含み、このウイルスは、改変ウイルスで処置されていない細胞、組織又は対象と比較してプロ免疫サイトカインのレベル又は活性を高めるために十分な量で投与される。
一実施形態では、対象は、プロ免疫サイトカインのレベル又は活性の上昇を必要とする。
一実施形態では、プロ免疫サイトカインのレベル又は活性は、改変ウイルスで処置されていない細胞、組織又は対象と比較して少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％若しくは１００％、又は少なくとも２倍、４倍、６倍、８倍若しくは１０倍に、上昇する。
一実施形態では、プロ免疫サイトカインは、ＩＦＮ－α、ＩＬ－１、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－４、ＩＬ－６、ＴＮＦ－α、ＩＬ－１７及びＧＭＣＳＦから選択される。
いくつかの実施形態では、本明細書中で開示される方法は、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの投与の前に、マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；Ｂ細胞のレベル又は活性及びプロ免疫サイトカインのレベル又は活性のうち１つ以上について、細胞、組織又は対象を評価することをさらに含む。
一実施形態では、本発明の方法は、サノトランスミッションを促進する１つ以上のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの投与後に、ＮＦｋＢ、ＩＲＦ又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；及びプロ免疫サイトカインのレベル又は活性のうち１つ以上について細胞、組織又は対象を評価することをさらに含む。
ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧのレベル又は活性；マクロファージのレベル又は活性；単球のレベル又は活性；樹状細胞のレベル又は活性；ＣＤ４＋細胞、ＣＤ８＋細胞、又はＣＤ３＋細胞のレベル又は活性；Ｔ細胞のレベル又は活性；及び免疫促進性サイトカインのレベル又は活性を測定する方法は当技術分野で公知である。
例えば、ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧのタンパク質のレベル又は活性は、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット又はインサイチューハイブリダイゼーションを含む当技術分野で公知の適切な技術によって測定することができる。ＮＦｋＢ、ＩＲＦ、又はＳＴＩＮＧをコードする核酸（例えば、ｍＲＮＡ）のレベルは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅反応、逆転写酵素ＰＣＲ分析、定量的リアルタイムＰＣＲ、一本鎖高次構造多型分析（ＳＳＣＰ）、ミスマッチ切断検出、ヘテロ二重鎖分析、ノーザンブロット分析、インサイチューハイブリダイゼーション、アレイ分析、デオキシリボ核酸配列決定、制限断片長多型分析、及びそれらの組み合わせ又は部分的な組み合わせを含む当技術分野で公知の適切な技術を用いて測定することができる。
マクロファージのレベル及び活性を測定するための方法は、例えば、Ｃｈｉｔｕ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｃｕｒｒ Ｐｒｏｔｏｃ Ｉｍｍｕｎｏｌ １４：１－３３に記載されている。単球のレベル及び活性は、例えば、Ｈｅｎｎｉｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ ４２３：７８－８４に記載されているようにフローサイトメトリーによって測定することができる。樹状細胞のレベル及び活性は、例えば、Ｄｉｘｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．６９（７）：４３５１－４３５７に記載されているようにフローサイトメトリーによって測定することができる。これらの参考文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
Ｔ細胞のレベル又は活性は、ヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞ベースの増殖アッセイを使用して評価することができる。例えば、細胞は、蛍光色素５，６－カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）で標識されている。増殖するこれらの細胞は、フローサイトメトリーによって直接測定されるＣＦＳＥ蛍光強度の低下を示す。別法では、放射性チミジンの取り込みを使用して、Ｔ細胞の増殖速度を評価することができる。
いくつかの実施形態では、免疫応答の上昇は、制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）の活性化の低下に関連し得る。機能的活性Ｔｒｅｇは、インビトロでのＴｒｅｇ抑制アッセイを使用して評価することができる。そのようなアッセイは、Ｃｏｌｌｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｖｉｇｎａｌｉに記載されている（その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．２０１１；７０７：２１－３７）。
免疫促進性サイトカインのレベル又は活性は、例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞で定量することができる。実施形態では、免疫促進性サイトカインは、インターフェロンアルファ（ＩＦＮ－α）、インターロイキン－１（ＩＬ－１）、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－４、ＩＬ－６、腫瘍壊死因子アルファ（ＴＮＦ－α）、ＩＬ－１７、及び顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭＣＳＦ）から選択される。定量は、抗原刺激に応答して所与のサイトカイン（例えば、ＩＦＮ－α）を分泌するＴ細胞を検出するＥＬＩＳＰＯＴ（酵素結合免疫スポット）技術を使用して行うことができる。Ｔ細胞は、例えば抗ＩＦＮ－α抗体でコーティングされたウェル内で抗原提示細胞と共に培養される。分泌されたＩＦＮ－αは、コーティングされた抗体によって捕捉され、発色基質に結合した二次抗体で明らかになる。従って、局所的に分泌されたサイトカイン分子はスポットを形成し、各スポットは１つのＩＦＮ－α分泌細胞に対応する。スポットの数により、分析されたサンプル中の所与の抗原に特異的なＩＦＮ－α分泌細胞の頻度を決定することができる。ＥＬＩＳＰＯＴアッセイは、ＴＮＦ－α、インターロイキン－４（ＩＬ－４）、ＩＬ－６、ＩＬ－１２、及びＧＭＣＳＦの検出についても説明されている。
ＶＩＩ．癌を治療する方法
本明細書に提供される通り、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むウイルスによる標的細胞の感染は、免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞など）を活性化することができ、それ故、例えば、癌の治療のための免疫療法に関与する機能などの免疫細胞機能を増強することができる。従って、特定の態様では、本開示は、癌細胞によって、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを対象に投与することを含む、それを必要とする対象における癌を治療する方法に関し、ここでウイルスは、サノトランスミッションを促進するのに十分な量及び時間で対象に投与され、それにより対象における癌を処置する。
免疫系が自己と非自己を区別するのを防止する、様々な複雑で重複するメカニズムを利用する癌細胞の能力は、免疫監視を回避するための癌の基本的なメカニズムを表している。メカニズムには、抗原提示の阻害、Ｔ細胞の活性化又は阻害を制御する調節経路の破壊（免疫チェックポイント調節）、免疫抑制に寄与する細胞（Ｔｒｅｇ、ＭＤＳＣ）の動員、又は免疫活性に影響を与える因子（ＩＤＯ、ＰＧＥ２）の放出が含まれる（それぞれの内容がその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｈａｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ Ｃａｎｃｅｒ １：１２；Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ３９：１；Ｐａｒｄｏｌｌ，ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ：Ｃａｎｃｅｒ １２：２５２；ａｎｄ Ｓｈａｒｍａ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ １６１：２０５を参照）。
本明細書に記載の方法を使用する処置のための癌には、例えば、限定されるものではないが、肉腫、黒色腫、癌腫、白血病、及びリンパ腫を含む、哺乳動物に見られるあらゆる種類の癌又は新生物又は悪性腫瘍が含まれる。
「肉腫」という用語は、一般に胚性結合組織のような物質からなり、且つ一般に線維状又は均質な物質に埋め込まれた密集した細胞から構成される腫瘍を指す。本発明の方法で処置することができる肉腫の例としては、例えば、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒色肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アベメシ肉腫（Ａｂｅｍｅｔｈｙ’ｓ ｓａｒｃｏｍａ）、脂肪性肉腫、脂肪肉腫、肺巣状軟部肉腫、エナメル上皮線維肉腫、ブドウ状肉腫、緑色肉腫（ｃｈｌｏｒｏｍａ ｓａｒｃｏｍａ）、絨毛膜癌、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫、線維芽細胞肉腫、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、イエンセン肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫、悪性間葉腫、傍骨性肉腫、細網肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢肉腫（ｓｅｒｏｃｙｓｔｉｃ ｓａｒｃｏｍａ）、滑膜肉腫、子宮肉腫、粘液性脂肪肉腫、平滑筋肉腫、紡錘細胞肉腫、線維形成性肉腫（ｄｅｓｍｏｐｌａｓｔｉｃ ｓａｒｃｏｍａ）、及び毛細血管拡張性肉腫が挙げられる。
「黒色腫」という用語は、皮膚及び他の器官のメラニン細胞系から生じる腫瘍を意味すると解釈される。本発明の方法で処置することができる黒色腫には、例えば、末端黒子型黒色腫、メラニン欠乏性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング－パッセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、結節性黒色腫、爪下黒色腫、及び表在拡大型黒色腫が含まれる。
「癌腫」という用語は、周囲の組織に浸潤して転移を引き起こす傾向がある上皮細胞からなる悪性新生物を指す。本明細書に記載されるように本発明の方法で処置することができる癌腫には、例えば、腺房癌、腺房細胞癌、腺嚢胞癌、腺様嚢胞癌、腺腫様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ａｄｅｎｏｍａｔｏｓｕｍ）、副腎皮質癌、肺胞上皮癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌（ｂａｓａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、肺類基底細胞癌（ｂａｓａｌｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底扁平上皮癌（ｂａｓｏｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支肺胞上皮癌（ｂｒｏｎｃｈｉｏａｌｖｅｏｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、気管支癌、気管支原性癌、大脳様癌、胆管細胞癌、絨毛膜癌、膠様癌、結腸の結腸腺癌、面皰癌、子宮体癌（ｃｏｒｐｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、篩状癌（ｃｒｉｂｒｉｆｏｒｍ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、鎧状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｅｎ ｃｕｉｒａｓｓｅ）、皮膚癌、円柱状癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、円柱状細胞癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺管癌、硬膜癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｄｕｒｕｍ）、胎児性癌（ｅｍｂｒｙｏｎａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、脳様癌（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、類表皮癌（ｅｐｉｅｒｍｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、上皮性腺様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｅ ａｄｅｎｏｉｄｅｓ）、外向発育癌（ｅｘｏｐｈｙｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、潰瘍癌、線維性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｆｉｂｒｏｓｕｍ）、膠様癌、コロイド線癌（ｇｅｌａｔｉｎｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｇｉａｎｔ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｇｉｇａｎｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛母癌、血様癌（ｈｅｍａｔｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、肝細胞癌、ヒュルトレ細胞癌、肺硝子癌（ｈｙａｌｉｎｅ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、副腎様癌（ｈｙｐｅｍｅｐｈｒｏｉｄ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、小児胎児性癌（ｉｎｆａｎｔｉｌｅ ｅｍｂｒｙｏｎａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、上皮内癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｉｎ ｓｉｔｕ）、表皮内癌、上皮内癌（ｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クロムペッヘル癌（Ｋｒｏｍｐｅｃｈｅｒ’ｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、クルチツキー細胞癌（Ｋｕｌｃｈｉｔｚｋｙ－ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、大細胞癌、レンズ状癌（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、レンズ状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪腫性癌（ｌｉｐｏｍａｔｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄様癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌、軟性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｏｌｌｅ）、メルケル細胞癌、粘液性癌（ｍｕｃｉｎｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｕｃｉｐａｒｕｍ）、粘液細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｕｃｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、粘膜表皮癌、粘液癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｕｃｏｓｕｍ）、粘膜癌、粘液腫様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｍｙｘｏｍａｔｏｄｅｓ）、鼻咽腔癌、燕麦細胞癌、骨化性癌、類骨癌、乳頭癌、門脈周囲性癌種（ｐｅｒｉｐｏｒｔａｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、前浸潤癌、棘細胞癌、粥状癌種（ｐｕｌｔａｃｅｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腎臓の腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｓａｒｃｏｍａｔｏｄｅｓ）、シュナイダー癌、硬性癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、ソラノイド癌、球状細胞精巣癌、紡錘細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、扁平上皮癌（ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、紐様癌（ｓｔｒｉｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、毛細血管拡張性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｔｉｃｕｍ）、毛細血管拡張性癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔｏｄｅｓ）、移行上皮癌、結節癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節癌（ｔｕｂｅｒｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣贅性癌（ｖｅｒｒｕｃｏｕｓ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、子宮頸部扁平上皮癌、扁桃扁平上皮細胞癌（ｔｏｎｓｉｌ ｓｑｕａｍｏｕｓ ｃｅｌｌ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、及び絨毛癌が含まれる。特定の実施形態では、癌は腎細胞癌である。
「白血病」という用語は、「芽球」と呼ばれる未熟な白血球の異常な増加を特徴とする血液又は骨髄の癌の一種を指す。白血病は、様々な疾患を網羅する広義の用語である。次に、白血病は、血液、骨髄、及びリンパ系に影響を与えるさらに広範な疾患群の一部であり、これらはすべて血液新生物として知られている。白血病は、急性リンパ性（又はリンパ芽球性）白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性（又は骨髄性又は非リンパ性）白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、及び慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の４つの主要な区分に分類することができる。白血病のさらなる種類には、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、Ｔ細胞前リンパ球性白血病（Ｔ－ＰＬＬ）、大顆粒リンパ球性白血病、及び成人Ｔ細胞白血病が含まれる。特定の実施形態では、白血病は急性白血病を含む。特定の実施形態では、白血病は慢性白血病を含む。
「リンパ腫」という用語は、リンパ細胞に由来する血球腫瘍群を指す。リンパ腫の２つの主要な種類は、ホジキンリンパ腫（ＨＬ）と非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）である。リンパ腫には、リンパ組織のあらゆる新生物が含まれる。主なクラスは、リンパ液及び血液の両方に属し、両方に広がる白血球の一種であるリンパ球の癌である。
いくつかの実施形態では、組成物は、様々なタイプの固形腫瘍、例えば、乳癌（例えば、三重陰性乳癌）、膀胱癌、泌尿生殖器癌、結腸癌、直腸癌、子宮内膜癌、腎臓（腎細胞）癌、膵臓癌、前立腺癌、甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌）、皮膚癌、骨癌、脳腫瘍、子宮頸癌、肝臓癌、胃癌、口腔癌（ｍｏｕｔｈ ａｎｄ ｏｒａｌ ｃａｎｃｅｒ）、食道癌、腺様嚢胞癌、神経芽細胞腫、精巣癌、子宮癌、甲状腺癌、頭頸部癌、腎臓癌、肺癌（例えば、小細胞肺癌、非小細胞肺癌）、中皮腫、卵巣癌、肉腫、胃癌、子宮癌、子宮頸癌、髄芽細胞腫、及び外陰癌の処置に使用される。特定の実施形態では、皮膚癌には、黒色腫、扁平上皮癌、及び皮膚Ｔ細胞リンパ腫（ＣＴＣＬ）が含まれる。
特定の実施形態では、処置されるべき癌は、「免疫学的に冷たい」癌、例えば、いくつかの浸潤性Ｔ細胞を含む腫瘍、又は認識されずに免疫系による強力な応答を誘発しないことで、現在の免疫療法で処置することを困難にする癌であってもよい。例えば、一実施形態では、癌は、黒色腫、子宮頸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、尿路上皮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肉腫、結腸直腸腺癌、消化管間質性腫瘍、胃・食道癌、結腸直腸癌、膵臓癌、腎臓癌、悪性中皮腫、白血病、リンパ腫、骨髄形成異常症候群、多発性骨髄腫、移行上皮癌、神経芽細胞腫、形質細胞新生物、ウィルムス腫瘍、及び肝細胞癌（例えば、肝細胞癌腫）からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、処置されるべき癌は、免疫療法、例えば、免疫チェックポイント阻害剤などの免疫チェックポイント療法に対して応答性である。いくつかの実施形態では、免疫療法に対して応答性である癌は、扁平上皮細胞頭頚部癌、黒色腫、メルケル細胞癌、肝細胞癌腫、進行性腎細胞癌、転移性マイクロサテライト不安定性高（ＭＳＩ－Ｈ）若しくはミスマッチ修復欠損（ｄＭＭＲ）癌（例えば、ＭＳＩ－Ｈ又はｄＭＭＲ結腸直腸癌）、子宮頸癌、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、三重陰性乳癌、胃・食道胃接合部（ＧＥＪ）癌、ホジキンリンパ腫、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、及び尿路上皮癌（例えば、局所進行性又は転移性尿路上皮癌）からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の治療法は、すでに別の抗腫瘍療法（例えば、免疫療法）で癌の処置に失敗した対象に施すことができる。「抗腫瘍療法に失敗した対象」とは、ＲＥＣＩＳＴ １．１基準に基づく抗腫瘍療法による処置に応答しない、若しくは応答しなくなった、即ち、標的病変における完全寛解、部分寛解、若しくは安定した疾患を達成しない；又は、抗腫瘍療法の最中又は完了後のいずれかで、単独で又は外科手術及び／又は放射線療法と組み合わせて、非標的病変の完全寛解又は非ＣＲ／非ＰＤを達成しない癌対象であり、この外科手術及び／又は放射線療法は、可能であれば、多くの場合、抗腫瘍療法と組み合わせて臨床的に必要である。ＲＥＣＩＳＴ １．１基準は、例えば、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４５：２２８－２４（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されており、以下でより詳細に論じられる。失敗した抗腫瘍療法は、例えば、腫瘍の増殖、腫瘍負荷の増加、及び／又は腫瘍の転移をもたらす。本明細書で使用される失敗した抗腫瘍療法には、用量制限毒性、例えば、抗腫瘍剤による処置の継続若しくは再開を可能にするために解決できないグレードＩＩＩ又はグレードＩＶ毒性のために終了した治療計画、又は毒性を引き起こした療法が含まれる。一実施形態では、対象は、１つ又は複数の抗血管新生剤の投与を含む抗腫瘍療法による処置に失敗している。
失敗した抗腫瘍療法には、長期間、例えば、少なくとも１ヶ月、少なくとも２ヶ月、少なくとも３ヶ月、少なくとも４ヶ月、少なくとも５ヶ月、少なくとも６ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、又は臨床的に定義された治療よりも短い任意の期間にわたって、すべての標的及び非標的病変に対して少なくとも疾患の安定が得られない治療計画が含まれる。失敗した抗腫瘍療法には、抗腫瘍剤による処置中に少なくとも１つの標的病変の進行性疾患が生じる治療計画、又は治療計画の終了から２週間未満、１ヶ月未満、２ヶ月未満、３ヶ月未満、４ヶ月未満、５ヶ月未満、６ヶ月未満、１２ヶ月未満、又は１８ヶ月未満で、又は臨床的に定義された治療よりも短い任意の期間未満で進行性疾患が生じる治療計画が含まれる。
失敗した抗腫瘍療法には、癌の処置を受けた対象が臨床的に定義された治癒、例えば治療計画の終了から５年間の完全寛解を達成し、その後、対象が、例えば、治療計画の終了から５年超、６年超、７年超、８年超、９年超、１０年超、１１年超、１２年超、１３年超、１４年超、又は１５年超してから異なる癌と診断される治療計画は含まれない。
ＲＥＣＩＳＴ基準は、臨床的に認められた評価基準であり、固形腫瘍測定への標準的なアプローチを提供するため、及び臨床試験で使用するための腫瘍サイズの変化の客観的評価の定義を提供するために使用される。このような基準は、固形腫瘍の処置を受けている個人の寛解を監視するためにも使用することができる。ＲＥＣＩＳＴ １．１基準については、参照により本明細書に組み込まれる、Ｅｉｓｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，２００９，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ ４５：２２８－２４で詳細に議論されている。標的病変の寛解基準は次の通りである：
完全寛解（ＣＲ）：すべての標的病変の消失。あらゆる病理学的リンパ節（標的又は非標的）が、短軸において１０ｍｍ未満まで縮小しなければならない。
部分寛解（ＰＲ）：ベースラインの合計直径を基準として、標的病変の直径の合計が少なくとも３０％減少する。
進行性疾患（ＰＤ）：試験における最小合計を基準として、標的病変の直径の合計が少なくとも２０％増加する（これには、試験における最小の場合、ベースライン合計が含まれる）。２０％の相対的な増加に加えて、合計は少なくとも５ｍｍの絶対的な増加も示さなければならない（注：１つ又は複数の新しい病変の出現も進行と見なされる）。
安定した疾患（ＳＤ）：試験中の最小の合計直径を基準として、ＰＲを満たす十分な収縮もＰＤを満たす十分な増加もない。
ＲＥＣＩＳＴ １．１基準では、測定可能であり得るが測定する必要がなく、所望の時点でのみ定性的に評価する必要がある病変として定義される非標的病変も考慮される。非標的病変の寛解基準は次の通りである。
完全寛解（ＣＲ）：すべての非標的病変の消失と腫瘍マーカーレベルの正常化。すべてのリンパ節は、そのサイズが非病理学的でなければならない（短軸で１０ｍｍ未満）。
非ＣＲ／非ＰＤ：１つ又は複数の非標的病変の持続及び／又は正常限界を超える腫瘍マーカーレベルの維持。
進行性疾患（ＰＤ）：既存の非標的病変の明確な進行。１つ又は複数の新しい病変の出現も進行と見なされる。非標的疾患に基づく「明確な進行」を達成するには、たとえ標的疾患にＳＤ又はＰＲが存在したとしても、治療法を中止に値するのに十分に全腫瘍量が増加するように、非標的疾患の全体的なレベルが大幅に悪化する必要がある。１つ又は複数の非標的病変のサイズの適度な「増加」は、通常は明確な進行状態を満たすのに十分ではない。従って、標的疾患におけるＳＤ又はＰＲに直面した非標的疾患の変化のみに基づいた全体的な進行の決定は非常にまれである。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の医薬組成物及び併用療法は、難治性癌を有する対象に投与することができる。「難治性癌」は、外科手術が効果的でない悪性腫瘍であり、最初から化学療法又は放射線療法に反応しないか、又は時間の経過と共に化学療法又は放射線療法に反応しなくなる。
本発明は、腫瘍細胞の増殖が阻害するように、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを投与することを含む、対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法をさらに提供する。特定の実施形態では、癌の処置は、対照、例えば、改変されたウイルスで治療されていない対象と比較して生存を延長すること、又は腫瘍進行までの時間を延ばすことを含む。特定の実施形態では、対象はヒト対象である。好ましい実施形態では、対象は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの初回投与の前に癌（例えば、腫瘍）を有するとして識別されている。特定の実施形態では、対象は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの初回投与時に癌（例えば、腫瘍）を有する。
一実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの投与は、癌細胞の増殖の減少、癌細胞の転移の減少、腫瘍の新血管形成の減少、腫瘍負荷の減少、腫瘍のサイズ、重量又は体積の減少、腫瘍増殖の阻害、癌の進行までの期間増加、及び／又は腫瘍性障害を有する対象の生存期間の延長の１つ又は複数をもたらす。特定の実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの投与は、改変されたウイルスが投与されない対応する対照対象と比較して少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％、癌細胞の増殖を減少させ、癌細胞の転移を減少させ、腫瘍の新血管形成を減少させ、腫瘍負荷を減少させ、腫瘍のサイズ、重量又は体積を減少させ、進行までの時間を増加させ、腫瘍増殖を阻害し、且つ／又は対象の生存期間を延長する。特定の実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの投与は、改変されたウイルスが投与されない腫瘍性障害に罹患した対照対象の対応する集団と比較して少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％、癌細胞の増殖を減少させ、癌細胞の転移を減少させ、腫瘍の新血管形成を減少させ、腫瘍負荷を減少させ、腫瘍のサイズ、重量又は体積を減少させ、進行までの時間を増加させ、腫瘍増殖を阻害し、且つ／又は腫瘍性障害に罹患した対象の集団の生存期間を延長する。いくつかの実施形態では、癌細胞の増殖は、対象に投与される癌療法に起因する癌細胞の過剰増殖である。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの投与は、処置前に進行性腫瘍性障害を有する対象の腫瘍性障害を安定させる。
改変されたウイルス及び追加の治療剤の併用療法
「併用投与すること」、「併用療法」、「同時投与すること」又は「同時投与」という用語は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの、１つ又は複数の追加の治療剤との併用投与を指してもよい。１つ又は複数の追加の治療剤は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの投与の前に、それと同時に又は実質的に同時に、その後に、又はそれと間欠的に投与されてもよい。特定の実施形態では、１つ又は複数の追加の治療剤は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの投与前に投与される。特定の実施形態では、１つ又は複数の追加の治療剤は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスと同時に投与される。特定の実施形態では、１つ又は複数の追加の治療剤は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの投与後に投与される。
１つ又は複数の追加の治療剤とサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは相加的又は相乗的に作用し得る。一実施形態では、１つ又は複数の追加の治療剤とサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは相乗的に作用する。いくつかの実施形態では、相乗効果は、腫瘍性障害又は感染症の処置においてである。例えば、一実施形態では、１つ又は複数の追加の治療剤とサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスとの組み合わせは、癌に対する免疫応答の永続性を改善する、即ち、持続時間を延長する。いくつかの実施形態では、１つ又は複数の追加の治療剤とサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスは相加的に作用する。
１．免疫チェックポイントモジュレーター
いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスと組み合わせて投与される追加の治療剤は、免疫チェックポイント分子の免疫チェックポイントモジュレーターである。免疫チェックポイント分子の例として、ＬＡＧ－３（Ｔｒｉｅｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７１：１３９３－１４０５）、ＴＩＭ－３（Ｓａｋｕｉｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０７：２１８７－２１９４）、ＶＩＳＴＡ（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０８：５７７－５９２）、ＩＣＯＳ（Ｆａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１１：７１５－７２５）、ＯＸ４０（Ｃｕｒｔｉ ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．７３：７１８９－７１９８）、及び４－１ＢＢ（Ｍｅｌｅｒｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．３：６８２－６８５）が挙げられる。
免疫チェックポイントは、刺激性免疫チェックポイント（即ち、免疫応答を刺激する分子）又は抑制性免疫チェックポイント（即ち、免疫応答を抑制する分子）であり得る。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抑制性免疫チェックポイントのアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイントのアゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、免疫チェックポイント結合タンパク質（例えば、抗体、抗体Ｆａｂ断片、二価抗体、抗体薬物コンジュゲート、ｓｃＦｖ、融合タンパク質、二価抗体、又は四価抗体）である。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、２つ以上の免疫チェックポイントに結合するか、又はその活性を調節することができる。刺激性及び抑制性免疫チェックポイントの例、並びに本発明の方法で使用できるこれらの免疫チェックポイントを調節する分子の例が以下に示される。
ｉ．刺激性免疫チェックポイント分子
ＣＤ２７は、ナイーブＴ細胞の抗原特異的増殖を支援し、Ｔ細胞記憶の生成に不可欠である（例えば、Ｈｅｎｄｒｉｋｓ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７１（５）：４３３－４０を参照）。ＣＤ２７は、Ｂ細胞の記憶マーカーでもある（例えば、Ａｇｅｍａｔｓｕ ｅｔ ａｌ．（２０００）Ｈｉｓｔｏｌ．Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ．１５（２）：５７３－６を参照）。ＣＤ２７活性は、リンパ球及び樹状細胞上のそのリガンドであるＣＤ７０の一時的な有効性によって支配される（例えば、Ｂｏｒｓｔ ｅｔ ａｌ．（２００５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７（３）：２７５－８１を参照）。ＣＤ２７に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ２７抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２７アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２７アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターはＣＤ２７結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、バリルマブ（ｖａｒｌｉｌｕｍａｂ）（Ｃｅｌｌｄｅｘ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）である。追加のＣＤ２７結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２４８，１８３号明細書、同第９，１０２，７３７号明細書、同第９，１６９，３２５号明細書、同第９，０２３，９９９号明細書、同第８，４８１，０２９号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１８５８７０号明細書、同第２０１５／０３３７０４７号明細書、同第２０１５／０２９９３３０号明細書、同第２０１４／０１１２９４２号明細書、同第２０１３／０３３６９７６号明細書、同第２０１３／０２４３７９５号明細書、同第２０１３／０１８３３１６号明細書、同第２０１２／０２１３７７１号明細書、同第２０１２／００９３８０５号明細書、同第２０１１／０２７４６８５号明細書、同第２０１０／０１７３３２４号明細書；並びに国際公開第２０１５／０１６７１８号パンフレット、同第２０１４／１４０３７４号パンフレット、同第２０１３／１３８５８６号パンフレット、同第２０１２／００４３６７号パンフレット、同第２０１１／１３０４３４号パンフレット、同第２０１０／００１９０８号パンフレット、及び同第２００８／０５１４２４号パンフレットに開示されている。
ＣＤ２８．分化抗原群２８（ＣＤ２８）は、Ｔ細胞の活性化及び生存に必要な共刺激シグナルを提供するＴ細胞で発現するタンパク質の１つである。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）に加えてＣＤ２８を介したＴ細胞刺激は、様々なインターロイキン（特にＩＬ－６）の産生のための強力なシグナルを提供することができる。樹状細胞で発現するその２つのリガンドであるＣＤ８０及びＣＤ８６との結合は、Ｔ細胞の増殖を促進する（例えば、Ｐｒａｓａｄ ｅｔ ａｌ．（１９９４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９１（７）：２８３４－８を参照）。ＣＤ２８に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２８の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２８に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ２８抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２８アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２８アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｄ２８結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＡＢ０８（ＴｈｅｒａＭａｂ ＬＬＣ）、ルリズマブ（ｌｕｌｉｚｕｍａｂ）（ＢＭＳ－９３１６９９（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）としても知られている）、及びＦＲ１０４（ＯＳＥ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）からなる群から選択される。追加のＣＤ２８結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１１９，８４０号明細書、同第８，７０９，４１４号明細書、同第９，０８５，６２９号明細書、同第８，０３４，５８５号明細書、同第７，９３９，６３８号明細書、同第８，３８９，０１６号明細書、同第７，５８５，９６０号明細書、同第８，４５４，９５９号明細書、同第８，１６８，７５９号明細書、同第８，７８５，６０４号明細書、同第７，７２３，４８２号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００１７０３９号明細書、同第２０１５／０２９９３２１号明細書、同第２０１５／０１５０９６８号明細書、同第２０１５／００７１９１６号明細書、同第２０１５／０３７６２７８号明細書、同第２０１３／００７８２５７号明細書、同第２０１３／０２３０５４０号明細書、同第２０１３／００７８２３６号明細書、同第２０１３／０１０９８４６号明細書、同第２０１３／０２６６５７７号明細書、同第２０１２／０２０１８１４号明細書、同第２０１２／００８２６８３号明細書、同第２０１２／０２１９５５３号明細書、同第２０１１／０１８９７３５号明細書、同第２０１１／００９７３３９号明細書、同第２０１０／０２６６６０５号明細書、同第２０１０／０１６８４００号明細書、同第２００９／０２４６２０４号明細書、同第２００８／００３８２７３号明細書；並びに国際公開第２０１５１９８１４７号パンフレット、同第２０１６／０５４２１号パンフレット、同第２０１４／１２０９１６８号パンフレット、同第２０１１／１０１７９１号パンフレット、同第２０１０／００７３７６号パンフレット、同第２０１０／００９３９１号パンフレット、同第２００４／００４７６８号パンフレット、同第２００２／０３０４５９号パンフレット、同第２００２／０５１８７１号パンフレット、及び同第２００２／０４７７２１号パンフレットに開示されている。
ＣＤ４０．分化抗原群４０（ＣＤ４０、ＴＮＦＲＳＦ５としても知られている）は、抗原提示細胞を含む様々な免疫系細胞に見られる。別名ＣＤ１５４として知られているＣＤ４０Ｌは、ＣＤ４０のリガンドであり、活性化されたＣＤ４＋ Ｔ細胞の表面に一過性に発現する。ＣＤ４０シグナル伝達は、樹状細胞を「許可（ｌｉｃｅｎｓｅ）して」成熟させ、それによりＴ細胞の活性化及び分化を引き起こすことが知られている（例えば、Ｏ’Ｓｕｌｌｉｖａｎ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３（１）：８３－１０７を参照）。ＣＤ４０に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ４０の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターはＣＤ４０に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ４０抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ４０アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ４０アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ダセツズマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＣＰ－８７０、８９３（Ｐｆｉｚｅｒ）、ブレセルマブ（Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ）、ルカツムマブ（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＣＦＺ５３３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ；例えば、Ｃｏｒｄｏｂａ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１５（１１）：２８２５－３６を参照）、ＲＧ７８７６（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）、ＦＦＰ１０４（ＰａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｂ．Ｖ．）、ＡＰＸ００５（Ａｐｅｘｉｇｅｎ）、ＢＩ６５５０６４（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ）、Ｃｈｉ Ｌｏｂ ７／４（Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＵＫ；例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２１（６）：１３２１－８を参照）、ＡＤＣ－１０１３（ＢｉｏＩｎｖｅｎｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）、ＳＥＡ－ＣＤ４０（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＸｍＡｂ ５４８５（Ｘｅｎｃｏｒ）、ＰＧ１２０（ＰａｎＧｅｎｅｔｉｃｓ Ｂ．Ｖ．）、テネリキシマブ（Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ；例えば、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．（２０１１）Ａｍ．Ｊ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．１１（５）：９４７－５７を参照）、及びＡＫＨ３（Ｂｉｏｇｅｎ；例えば、国際公開第２０１６／０２８８１０号パンフレットを参照）からなる群から選択されるＣＤ４０結合タンパク質である。追加のＣＤ４０結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２３４，０４４号明細書、同第９，２６６，９５６号明細書、同第９，１０９，０１１号明細書、同第９，０９０，６９６号明細書、同第９，０２３，３６０号明細書、同第９，０２３，３６１号明細書、同第９，２２１，９１３号明細書、同第８，９４５，５６４号明細書、同第８，９２６，９７９号明細書、同第８，８２８，３９６号明細書、同第８，６３７，０３２号明細書、同第８，２７７，８１０号明細書、同第８，０８８，３８３号明細書、同第７，８２０，１７０号明細書、同第７，７９０，１６６号明細書、同第７，４４５，７８０号明細書、同第７，３６１，３４５号明細書、同第８，９６１，９９１号明細書、同第８，６６９，３５２号明細書、同第８，９５７，１９３号明細書、同第８，７７８，３４５号明細書、同第８，５９１，９００号明細書、同第８，５５１，４８５号明細書、同第８，４９２，５３１号明細書、同第８，３６２，２１０号明細書、同第８，３８８，９７１号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００４５５９７号明細書、同第２０１６／０１５２７１３号明細書、同第２０１６／００７５７９２号明細書、同第２０１５／０２９９３２９号明細書、同第２０１５／００５７４３７号明細書、同第２０１５／０３１５２８２号明細書、同第２０１５／０３０７６１６号明細書、同第２０１４／００９９３１７号明細書、同第２０１４／０１７９９０７号明細書、同第２０１４／０３４９３９５号明細書、同第２０１４／０２３４３４４号明細書、同第２０１４／０３４８８３６号明細書、同第２０１４／０１９３４０５号明細書、同第２０１４／０１２０１０３号明細書、同第２０１４／０１０５９０７号明細書、同第２０１４／０２４８２６６号明細書、同第２０１４／００９３４９７号明細書、同第２０１４／００１０８１２号明細書、同第２０１３／００２４９５６号明細書、同第２０１３／００２３０４７号明細書、同第２０１３／０３１５９００号明細書、同第２０１２／００８７９２７号明細書、同第２０１２／０２６３７３２号明細書、同第２０１２／０３０１４８８号明細書、同第２０１１／００２７２７６号明細書、同第２０１１／０１０４１８２号明細書、同第２０１０／０２３４５７８号明細書、同第２００９／０３０４６８７号明細書、同第２００９／０１８１０１５号明細書、同第２００９／０１３０７１５号明細書、同第２００９／０３１１２５４号明細書、同第２００８／０１９９４７１号明細書、同第２００８／００８５５３１号明細書、同第２０１６／０１５２７２１号明細書、同第２０１５／０１１０７８３号明細書、同第２０１５／００８６９９１号明細書、同第２０１５／００８６５５９号明細書、同第２０１４／０３４１８９８号明細書、同第２０１４／０２０５６０２号明細書、同第２０１４／０００４１３１号明細書、同第２０１３／００１１４０５号明細書、同第２０１２／０１２１５８５号明細書、同第２０１１／００３３４５６号明細書、同第２０１１／０００２９３４号明細書、同第２０１０／０１７２９１２号明細書、同第２００９／００８１２４２号明細書、同第２００９／０１３００９５号明細書、同第２００８／０２５４０２６号明細書、同第２００８／００７５７２７号明細書、同第２００９／０３０４７０６号明細書、同第２００９／０２０２５３１号明細書、同第２００９／０１１７１１１号明細書、同第２００９／００４１７７３号明細書、同第２００８／０２７４１１８号明細書、同第２００８／００５７０７０号明細書、同第２００７／００９８７１７号明細書、同第２００７／０２１８０６０号明細書、同第２００７／００９８７１８号明細書、同第２００７／０１１０７５４号明細書；並びに国際公開第２０１６／０６９９１９号パンフレット、同第２０１６／０２３９６０号パンフレット、同第２０１６／０２３８７５号パンフレット、同第２０１６／０２８８１０号パンフレット、同第２０１５／１３４９８８号パンフレット、同第２０１５／０９１８５３号パンフレット、同第２０１５／０９１６５５号パンフレット、同第２０１４／０６５４０３号パンフレット、同第２０１４／０７０９３４号パンフレット、同第２０１４／０６５４０２号パンフレット、同第２０１４／２０７０６４号パンフレット、同第２０１３／０３４９０４号パンフレット、同第２０１２／１２５５６９号パンフレット、同第２０１２／１４９３５６号パンフレット、同第２０１２／１１１７６２号パンフレット、同第２０１２／１４５６７３号パンフレット、同第２０１１／１２３４８９号パンフレット、同第２０１０／１２３０１２号パンフレット、同第２０１０／１０４７６１号パンフレット、同第２００９／０９４３９１号パンフレット、同第２００８／０９１９５４号パンフレット、同第２００７／１２９８９５号パンフレット、同第２００６／１２８１０３号パンフレット、同第２００５／０６３２８９号パンフレット、同第２００５／０６３９８１号パンフレット、同第２００３／０４０１７０号パンフレット、同第２００２／０１１７６３号パンフレット、同第２０００／０７５３４８号パンフレット、同第２０１３／１６４７８９号パンフレット、同第２０１２／０７５１１１号パンフレット、同第２０１２／０６５９５０号パンフレット、同第２００９／０６２０５４号パンフレット、同第２００７／１２４２９９号パンフレット、同第２００７／０５３６６１号パンフレット、同第２００７／０５３７６７号パンフレット、同第２００５／０４４２９４号パンフレット、同第２００５／０４４３０４号パンフレット、同第２００５／０４４３０６号パンフレット、同第２００５／０４４８５５号パンフレット、同第２００５／０４４８５４号パンフレット、同第２００５／０４４３０５号パンフレット、同第２００３／０４５９７８号パンフレット、同第２００３／０２９２９６号パンフレット、同第２００２／０２８４８１号パンフレット、同第２００２／０２８４８０号パンフレット、同第２００２／０２８９０４号パンフレット、同第２００２／０２８９０５号パンフレット、同第２００２／０８８１８６号パンフレット、及び同第２００１／０２４８２３号パンフレットに開示されている。
ＣＤ１２２．ＣＤ１２２は、インターロイキン－２受容体ベータサブユニットであり、ＣＤ８＋エフェクターＴ細胞の増殖を増加させることが知られている。例えば、Ｂｏｙｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１２）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２（３）：１８０－１９０を参照されたい。ＣＤ１２２に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ１２２の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ１２２に結合する薬剤（例えば、抗ＣＤ１２２抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ１２２アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＤ２２アゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ヒト化ＭｉＫ－ベータ－１（Ｒｏｃｈｅ；例えば、参照により組み込まれるＭｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００６）Ｐｒｏｃ Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０３（２）：４０１－６を参照されたい）。追加のＣＤ１２２結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許第９，０２８，８３０号明細書に開示されている。
ＯＸ４０．ＯＸ４０受容体（ＣＤ１３４としても知られている）は、エフェクター及びメモリーＴ細胞の増殖を促進する。ＯＸ４０はまた、Ｔ制御性細胞の分化及び活性を抑制し、サイトカインの産生を調節する（例えば、Ｃｒｏｆｔ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．２２９（１）：１７３－９１を参照）。ＯＸ４０に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＯＸ４０の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターはＯＸ４０に結合する薬剤（例えば、抗ＯＸ４０抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＯＸ４０アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＯＸ４０アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＭＥＤＩ６４６９（ＡｇｏｎＯｘ／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ポガリズマブ（ｐｏｇａｌｉｚｕｍａｂ）（ＭＯＸＲ０９１６及びＲＧ７８８８としても知られている；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．）、タボリキシズマブ（ｔａｖｏｌｉｘｉｚｕｍａｂ）（ＭＥＤＩ０５６２としても知られている；Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、及びＧＳＫ３１７４９９８（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）からなる群から選択されるＯＸ４０結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＯＸ－４０結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１６３，０８５号明細書、同第９，０４０，０４８号明細書、同第９，００６，３９６号明細書、同第８，７４８，５８５号明細書、同第８，６１４，２９５号明細書、同第８，５５１，４７７号明細書、同第８，２８３，４５０号明細書、同第７，５５０，１４０号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００６８６０４号明細書、同第２０１６／００３１９７４号明細書、同第２０１５／０３１５２８１号明細書、同第２０１５／０１３２２８８号明細書、同第２０１４／０３０８２７６号明細書、同第２０１４／０３７７２８４号明細書、同第２０１４／００４４７０３号明細書、同第２０１４／０２９４８２４号明細書、同第２０１３／０３３０３４４号明細書、同第２０１３／０２８０２７５号明細書、同第２０１３／０２４３７７２号明細書、同第２０１３／０１８３３１５号明細書、同第２０１２／０２６９８２５号明細書、同第２０１２／０２４４０７６号明細書、同第２０１１／０００８３６８号明細書、同第２０１１／０１２３５５２号明細書、同第２０１０／０２５４９７８号明細書、同第２０１０／０１９６３５９号明細書、同第２００６／０２８１０７２号明細書；並びに国際公開第２０１４／１４８８９５号パンフレット、同第２０１３／０６８５６３号パンフレット、同第２０１３／０３８１９１号パンフレット、同第２０１３／０２８２３１号パンフレット、同第２０１０／０９６４１８号パンフレット、同第２００７／０６２２４５号パンフレット、及び同第２００３／１０６４９８号パンフレットに開示されている。
ＧＩＴＲ．糖質コルチコイド誘発性ＴＮＦＲファミリー関連遺伝子（ＧＩＴＲ）は、Ｔｒｅｇ、ＣＤ４、及びＣＤ８ Ｔ細胞で構成的又は条件付きで発現する腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである。ＧＩＴＲは、ＴＣＲのライゲーション及び活性化に続いて、エフェクターＴ細胞で急速にアップレギュレートされる。ヒトＧＩＴＲリガンド（ＧＩＴＲＬ）は、二次リンパ器官及び一部の非リンパ組織のＡＰＣで構成的に発現する。ＧＩＴＲ：ＧＩＴＲＬの相互作用の下流効果は、Ｔｒｅｇ活性の減弱を誘発し、ＣＤ４＋ Ｔ細胞の活性を増強し、結果としてＴｒｅｇを介した免疫抑制が逆転し、免疫刺激が増加する。ＧＩＴＲに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＧＩＴＲの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＧＩＴＲに結合する薬剤（例えば、抗ＧＩＴＲ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＧＩＴＲアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＧＩＴＲアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＲＸ５１８（Ｌｅａｐ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）、ＭＫ－４１６６（Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．）、ＭＥＤＩ－１８７３（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ）、ＩＮＣＡＧＮ１８７６（Ａｇｅｎｕｓ／Ｉｎｃｙｔｅ）、及びＦＰＡ１５４（Ｆｉｖｅ Ｐｒｉｍｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）からなる群から選択されるＧＩＴＲ結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＧＩＴＲ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３０９，３２１号明細書、同第９，２５５，１５２号明細書、同第９，２５５，１５１号明細書、同第９，２２８，０１６号明細書、同第９，０２８，８２３号明細書、同第８，７０９，４２４号明細書、同第８，３８８，９６７号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１４５３４２号明細書、同第２０１５／０３５３６３７号明細書、同第２０１５／００６４２０４号明細書、同第２０１４／０３４８８４１号明細書、同第２０１４／００６５１５２号明細書、同第２０１４／００７２５６６号明細書、同第２０１４／００７２５６５号明細書、同第２０１３／０１８３３２１号明細書、同第２０１３／０１０８６４１号明細書、同第２０１２／０１８９６３９号明細書；並びに国際公開第２０１６／０５４６３８号パンフレット、同第２０１６／０５７８４１号パンフレット、同第２０１６／０５７８４６号パンフレット、同第２０１５／１８７８３５号パンフレット、同第２０１５／１８４０９９号パンフレット、同第２０１５／０３１６６７号パンフレット、同第２０１１／０２８６８３号パンフレット、及び同第２００４／１０７６１８号パンフレットに開示されている。
ＩＣＯＳ．誘導性Ｔ細胞共刺激因子（ＩＣＯＳ、ＣＤ２７８としても知られている）は、活性化されたＴ細胞で発現される。そのリガンドはＩＣＯＳＬであり、主にＢ細胞及び樹状細胞で発現される。ＩＣＯＳは、Ｔ細胞エフェクター機能において重要である。ＩＣＯＳの発現は、Ｔ細胞の活性化時にアップレギュレートされる（例えば、Ｆａｎ ｅｔ ａｌ．（２０１４）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２１１（４）：７１５－２５を参照）。ＩＣＯＳに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＣＯＳの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＣＯＳに結合する薬剤（例えば、抗ＩＣＯＳ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＣＯＳアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＣＯＳアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＭＥＤＩ－５７０（ＪＭａｂ－１３６としても知られている、Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＧＳＫ３３５９６０９（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ／ＩＮＳＥＲＭ）、及びＪＴＸ－２０１１（Ｊｏｕｎｃｅ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）からなる群から選択されるＩＣＯＳ結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＩＣＯＳ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３７６，４９３号明細書、同第７，９９８，４７８号明細書、同第７，４６５，４４５号明細書、同第７，４６５，４４４号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０２３９９７８号明細書、同第２０１２／００３９８７４号明細書、同第２００８／０１９９４６６号明細書、同第２００８／０２７９８５１号明細書；並びに国際公開第２００１／０８７９８１号パンフレットに開示されている。
４－１ＢＢ．４－１ＢＢ（ＣＤ１３７としても知られている）は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体スーパーファミリーのメンバーである。４－１ＢＢ（ＣＤ１３７）は、プライミングされたＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞、活性化ＮＫ細胞、ＤＣ、及び好中球で誘導的に発現されるＩＩ型膜貫通糖タンパク質であり、活性化マクロファージ、Ｂ細胞、及びＤＣに見られる４－１ＢＢリガンド（４－１ＢＢＬ）に結合するとＴ細胞共刺激分子として機能する。４－１ＢＢ受容体のライゲーションは、ＮＦ－κＢ、ｃ－Ｊｕｎ、及びｐ３８シグナル伝達経路の活性化をもたらし、特に、抗アポトーシス遺伝子ＢｃＬ－ｘ（Ｌ）及びＢｆｌ－１の発現をアップレギュレートすることによってＣＤ８＋ Ｔ細胞の生存を促進することが示されている。このように、４－１ＢＢは、最適以下の免疫応答を促進する、又は救済さえもするように機能する。４－１ＢＢに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、４－１ＢＢの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、４－１ＢＢに結合する薬剤（例えば、抗４－１ＢＢ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターは４－１ＢＢアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターは４－１ＢＢアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ウレルマブ（ＢＭＳ－６６３５１３としても知られている；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）又はウトミルマブ（ｕｔｏｍｉｌｕｍａｂ）（Ｐｆｉｚｅｒ）である４－１ＢＢ結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、４－１ＢＢ結合タンパク質（例えば、抗体）である。４－１ＢＢ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３８２，３２８号明細書、同第８，７１６，４５２号明細書、同第８，４７５，７９０号明細書、同第８，１３７，６６７号明細書、同第７，８２９，０８８号明細書、同第７，６５９，３８４号明細書；米国特許出願公開第２０１６／００８３４７４号明細書、同第２０１６／０１５２７２２号明細書、同第２０１４／０１９３４２２号明細書、同第２０１４／０１７８３６８号明細書、同第２０１３／０１４９３０１号明細書、同第２０１２／０２３７４９８号明細書、同第２０１２／０１４１４９４号明細書、同第２０１２／００７６７２２号明細書、同第２０１１／０１７７１０４号明細書、同第２０１１／０１８９１８９号明細書、同第２０１０／０１８３６２１号明細書、同第２００９／００６８１９２号明細書、同第２００９／００４１７６３号明細書、同第２００８／０３０５１１３号明細書、同第２００８／０００８７１６号明細書；及び国際公開第２０１６／０２９０７３号パンフレット、同第２０１５／１８８０４７号パンフレット、同第２０１５／１７９２３６号パンフレット、同第２０１５／１１９９２３号パンフレット、同第２０１２／０３２４３３号パンフレット、同第２０１２／１４５１８３号パンフレット、同第２０１１／０３１０６３号パンフレット、同第２０１０／１３２３８９号パンフレット、同第２０１０／０４２４３３号パンフレット、同第２００６／１２６８３５号パンフレット、同第２００５／０３５５８４号パンフレット、同第２００４／０１０９４７号パンフレット；並びにＭａｒｔｉｎｅｚ－Ｆｏｒｅｒｏ ｅｔ ａｌ．（２０１３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９０（１２）：６６９４－７０６，ａｎｄ Ｄｕｂｒｏｔ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５９（８）：１２２３－３３に開示されている。
ｉｉ．抑制性免疫チェックポイント分子
ＡＤＯＲＡ２Ａ．アデノシンＡ２Ａ受容体（Ａ２Ａ４）は、７回膜貫通型アルファヘリックスを有するＧタンパク質共役型受容体（ＧＰＣＲ）ファミリーのメンバーであり、癌の治療法における重要なチェックポイントと見なされている。Ａ２Ａ受容体は、過剰反応性免疫細胞を負に調節することができる（例えば、Ｏｈｔａ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ ４１４（６８６６）：９１６－２０を参照）。ＡＤＯＲＡ２Ａに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａに結合する薬剤（例えば、抗ＡＤＯＲＡ２Ａ抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａ結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＡＤＯＲＡ２Ａアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターは、ＡＤＯＲＡ２Ａアンタゴニストである。ＡＤＯＲＡ２Ａ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／０３２２２３６号明細書に開示されている。
Ｂ７－Ｈ３．Ｂ７－Ｈ３（ＣＤ２７６としても知られている）は、Ｔ細胞応答を共刺激又は下方調節する分子群であるＢ７スーパーファミリーに属している。Ｂ７－Ｈ３は、ヒトＴ細胞応答を強力且つ一貫して下方調節する（例えば、Ｌｅｉｔｎｅｒ ｅｔ ａｌ．（２００９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３９（７）：１７５４－６４を参照）。Ｂ７－Ｈ３に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ３の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ３に結合する薬剤（例えば、抗Ｂ７－Ｈ３抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７－Ｈ３アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７－Ｈ３アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＤＳ－５５７３（Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏ，Ｉｎｃ．）、エノブリツズマブ（ｅｎｏｂｌｉｔｕｚｕｍａｂ）（ＭａｃｒｏＧｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、及び８Ｈ９（Ｓｌｏａｎ Ｋｅｔｔｅｒｉｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ；ｓｅｅ，ｅ．ｇ．，Ａｈｍｅｄ ｅｔ ａｌ．（２０１５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２９０（５０）：３００１８－２９）からなる群から選択される抗Ｂ７－Ｈ３結合タンパク質である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ３結合タンパク質（例えば、抗体）である。Ｂ７－Ｈ３結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３７１，３９５号明細書、同第９，１５０，６５６号明細書、同第９，０６２，１１０号明細書、同第８，８０２，０９１号明細書、同第８，５０１，４７１号明細書、同第８，４１４，８９２号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０３５２２２４号明細書、同第２０１５／０２９７７４８号明細書、同第２０１５／０２５９４３４号明細書、同第２０１５／０２７４８３８号明細書、同第２０１４／０３２８７５号明細書、同第２０１４／０１６１８１４号明細書、同第２０１３／０２８７７９８号明細書、同第２０１３／００７８２３４号明細書、同第２０１３／０１４９２３６号明細書、同第２０１２／０２９４７９６０号明細書、同第２０１０／０１４３２４５号明細書、同第２００２／０１０２２６４号明細書；国際公開第２０１６／１０６００４号パンフレット、同第２０１６／０３３２２５号パンフレット、同第２０１５／１８１２６７号パンフレット、同第２０１４／０５７６８７号パンフレット、同第２０１２／１４７７１３号パンフレット、同第２０１１／１０９４００号パンフレット、同第２００８／１１６２１９号パンフレット、同第２００３／０７５８４６号パンフレット、同第２００２／０３２３７５号パンフレット；並びにＳｈｉ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｒｅｐ．１４（１）：９４３－８に開示されている。
Ｂ７－Ｈ４．Ｂ７－Ｈ４（Ｏ８Ｅ、ＯＶ０６４、及びＶセットドメインを含むＴ細胞活性化阻害剤（ＶＴＣＮ１）としても知られている）は、Ｂ７スーパーファミリーに属している。細胞周期を停止させることにより、Ｔ細胞のＢ７－Ｈ４ライゲーションは、増殖、サイトカインの分泌、及び細胞毒性の発生に対して顕著な抑制効果を有する。マウスへのＢ７－Ｈ４Ｉｇの投与は、抗原特異的Ｔ細胞応答を阻害するが、特定のモノクローナル抗体による内因性Ｂ７－Ｈ４の阻害は、Ｔ細胞応答を促進する（例えば、Ｓｉｃａ ｅｔ ａｌ．（２００３）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １８（６）：８４９－６１を参照）。Ｂ７－Ｈ４に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ４の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ４に結合する薬剤（例えば、抗Ｂ７－Ｈ４抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、Ｂ７－Ｈ４結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７－Ｈ４アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢ７－Ｈ４アンタゴニストである。Ｂ７－Ｈ４結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２９６，８２２号明細書、同第８，６０９，８１６号明細書、同第８，７５９，４９０号明細書、同第８，３２３，６４５号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１５９９１０号明細書、同第２０１６／００１７０４０号明細書、同第２０１６／０１６８２４９号明細書、同第２０１５／０３１５２７５号明細書、同第２０１４／０１３４１８０号明細書、同第２０１４／０３２２１２９号明細書、同第２０１４／０３５６３６４号明細書、同第２０１４／０３２８７５１号明細書、同第２０１４／０２９４８６１号明細書、同第２０１４／０３０８２５９号明細書、同第２０１３／００５８８６４号明細書、同第２０１１／００８５９７０号明細書、同第２００９／００７４６６０号明細書、同第２００９／０２０８４８９号明細書；並びに国際公開第２０１６／０４０７２４号パンフレット、同第２０１６／０７０００１号パンフレット、同第２０１４／１５９８３５号パンフレット、同第２０１４／１００４８３号パンフレット、同第２０１４／１００４３９号パンフレット、同第２０１３／０６７４９２号パンフレット、同第２０１３／０２５７７９号パンフレット、同第２００９／０７３５３３号パンフレット、同第２００７／０６７９９１号パンフレット、及び同第２００６／１０４６７７号パンフレットに開示されている。
ＢＴＬＡ．ＣＤ２７２としても知られているＢ及びＴリンパ球アテニュエーター（ＢＴＬＡ）は、そのリガンドとしてＨＶＥＭ（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｕｓ Ｅｎｔｒｙ Ｍｅｄｉａｔｏｒ）を有する。ＢＴＬＡの表面発現は、ヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞がナイーブ細胞からエフェクター細胞の表現型に分化する際に徐々にダウンレギュレートされるが、腫瘍特異的なヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞は高レベルのＢＴＬＡを発現する（例えば、Ｄｅｒｒｅ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１２０（１）：１５７－６７を参照）。ＢＴＬＡに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＢＴＬＡの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＢＴＬＡに結合する薬剤（例えば、抗ＢＴＬＡ抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＢＴＬＡ結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢＴＬＡアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＢＴＬＡアンタゴニストである。ＢＴＬＡ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，３４６，８８２号明細書、同第８，５８０，２５９号明細書、同第８，５６３，６９４号明細書、同第８，２４７，５３７号明細書；米国特許出願公開第２０１４／００１７２５５号明細書、同第２０１２／０２８８５００号明細書、同第２０１２／０１８３５６５号明細書、同第２０１０／０１７２９００号明細書；並びに国際公開第２０１１／０１４４３８号パンフレット及び同第２００８／０７６５６０号パンフレットに開示されている。
ＣＴＬＡ－４．細胞傷害性Ｔリンパ球抗原－４（ＣＴＬＡ－４）は、免疫調節性ＣＤ２８－Ｂ７免疫グロブリンスーパーファミリーのメンバーであり、ナイーブ及び休止Ｔリンパ球に作用して、Ｂ７依存性経路及びＢ７非依存性経路の両方を介して免疫抑制を促進する（例えば、Ｋｉｍ ｅｔ ａｌ．（２０１６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｓ．，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ４６８３６０７，１４ ｐｐ．を参照）。ＣＴＬＡ－４は、ＣＤ１５２とも呼ばれることが知られている。ＣＴＬＡ－４は、Ｔ細胞活性化の閾値を調節する。例えば、Ｇａｊｅｗｓｋｉ ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（６）：３９００－７を参照されたい。ＣＴＬＡ－４に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ－４の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ－４に結合する薬剤（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＴＬＡ－４アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＣＴＬＡ－４アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、イピリムマブ（Ｙｅｒｖｏｙ；Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、トレメリムマブ（以前はチシリムマブ；Ｐｆｉｚｅｒ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）、ＪＭＷ－３Ｂ３（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ａｂｅｒｄｅｅｎ）、及びＡＧＥＮ１８８４（Ａｇｅｎｕｓ）からなる群から選択されるＣＴＬＡ－４結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＣＴＬＡ－４結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，６９７，８４５号明細書；米国特許出願公開第２０１４／０１０５９１４号明細書、同第２０１３／０２６７６８８号明細書、同第２０１２／０１０７３２０号明細書、同第２００９／０１２３４７７号明細書；並びに国際公開第２０１４／２０７０６４号パンフレット、同第２０１２／１２０１２５号パンフレット、同第２０１６／０１５６７５号パンフレット、同第２０１０／０９７５９７号パンフレット、同第２００６／０６６５６８号パンフレット、及び同第２００１／０５４７３２号パンフレットに開示されている。
ＩＤＯ．インドールアミン２，３－ジオキシゲナーゼ（ＩＤＯ）は、免疫抑制性を有するトリプトファン異化酵素である。もう１つの重要な分子は、ＴＤＯ、トリプトファン２，３－ジオキシゲナーゼである。ＩＤＯは、Ｔ細胞及びＮＫ細胞を抑制し、Ｔｒｅｇ及び骨髄由来サプレッサー細胞を生成して活性化し、そして腫瘍の血管新生を促進することが知られている。参照により本明細書に組み込まれる、Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．６３（７）：７２１－３５。
ＩＤＯに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＤＯの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＩＤＯに結合する薬剤（例えば、抗ＩＤＯ抗体などのＩＤＯ結合タンパク質）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＤＯアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＩＤＯアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ノルハルマン、ロスマリン酸、ＣＯＸ－２阻害剤、アルファ－メチル－トリプトファン、及びエパカドスタットからなる群から選択される。一実施形態では、モジュレーターはエパカドスタットである。
ＫＩＲ．キラー免疫グロブリン様受容体（ＫＩＲ）は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞の機能を負に調節して、ＮＫを介した細胞溶解から細胞を保護するＭＨＣＩ結合分子の多様なレパートリーを含む。ＫＩＲは、一般的にはＮＫ細胞で発現されるが、腫瘍特異的ＣＴＬでも検出されている。ＫＩＲに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＫＩＲの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＫＩＲに結合する薬剤（例えば、抗ＫＩＲ抗体）である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＫＩＲ結合タンパク質（例えば、抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＫＩＲアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＫＩＲアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、リリルマブ（ＢＭＳ－９８６０１５としても知られている；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）である。追加のＫＩＲ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，９８１，０６５号明細書、同第９，０１８，３６６号明細書、同第９，０６７，９９７号明細書、同第８，７０９，４１１号明細書、同第８，６３７，２５８号明細書、同第８，６１４，３０７号明細書、同第８，５５１，４８３号明細書、同第８，３８８，９７０号明細書、同第８，１１９，７７５号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０３４４５７６号明細書、同第２０１５／０３７６２７５号明細書、同第２０１６／００４６７１２号明細書、同第２０１５／０１９１５４７号明細書、同第２０１５／０２９０３１６号明細書、同第２０１５／０２８３２３４号明細書、同第２０１５／０１９７５６９号明細書、同第２０１４／０１９３４３０号明細書、同第２０１３／０１４３２６９号明細書、同第２０１３／０２８７７７０号明細書、同第２０１２／０２０８２３７号明細書、同第２０１１／０２９３６２７号明細書、同第２００９／００８１２４０号明細書、同第２０１０／０１８９７２３号明細書；並びに国際公開第２０１６／０６９５８９号パンフレット、同第２０１５／０６９７８５号パンフレット、同第２０１４／０６６５３２号パンフレット、同第２０１４／０５５６４８号パンフレット、同第２０１２／１６０４４８号パンフレット、同第２０１２／０７１４１１号パンフレット、同第２０１０／０６５９３９号パンフレット、同第２００８／０８４１０６号パンフレット、同第２００６／０７２６２５号パンフレット、同第２００６／０７２６２６号パンフレット、及び同第２００６／００３１７９号パンフレットに開示されている。
ＬＡＧ－３．リンパ球活性化遺伝子３（ＬＡＧ－３、ＣＤ２２３としても知られている）は、ＭＨＣＩＩに競合的に結合して、Ｔ細胞活性化の共阻害チェックポイントとして機能するＣＤ４関連膜貫通タンパク質である（例えば、Ｇｏｌｄｂｅｒｇ ａｎｄ Ｄｒａｋｅ（２０１１）Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３４４：２６９－７８を参照）。ＬＡＧ－３に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＬＡＧ－３の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＬＡＧ－３に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＬＡＧ－３アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＬＡＧ－３アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ；以前はランブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１、ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＳＨＲ－１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ／Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４としても知られている；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ Ｉｎｃ．／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ Ｌｔｄ．）、ＴＳＲ－０４２（ＡＮＢ０１１としても知られている；ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．／Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、及びＰＦ－０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）からなる群から選択されるＬＡＧ－３結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＰＤ－１結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１８１，３４２号明細書、同第８，９２７，６９７号明細書、同第７，４８８，８０２号明細書、同第７，０２９，６７４号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０１５２１８０号明細書、同第２０１１／０１７１２１５号明細書、同第２０１１／０１７１２２０号明細書；並びに国際公開第２００４／０５６８７５号パンフレット、同第２０１５／０３６３９４号パンフレット、同第２０１０／０２９４３５号パンフレット、同第２０１０／０２９４３４号パンフレット、同第２０１４／１９４３０２号パンフレットに開示されている。
ＰＤ－１．プログラム細胞死タンパク質１（ＰＤ－１、ＣＤ２７９及びＰＤＣＤ１としても知られている）は、免疫系を負に調節する抑制性受容体である。主にナイーブＴ細胞に影響を与えるＣＴＬＡ－４とは対照的に、ＰＤ－１は、免疫細胞でより広く発現され、末梢組織及び腫瘍微小環境で成熟Ｔ細胞活性を調節する。ＰＤ－１は、Ｔ細胞受容体シグナル伝達を妨げることによってＴ細胞応答を阻害する。ＰＤ－１は、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２の２つのリガンドを有する。ＰＤ－１に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－１の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－１に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ－１抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－１アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－１アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ；以前はランブロリズマブ；Ｍｅｒｃｋ＆Ｃｏ．，Ｉｎｃ．）、ニボルマブ（Ｏｐｄｉｖｏ；Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ピジリズマブ（ＣＴ－０１１，ＣｕｒｅＴｅｃｈ）、ＳＨＲ－１２１０（Ｉｎｃｙｔｅ／Ｊｉａｎｇｓｕ Ｈｅｎｇｒｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｃｏ．，Ｌｔｄ．）、ＭＥＤＩ０６８０（ＡＭＰ－５１４としても知られている；Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ Ｉｎｃ．／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、ＰＤＲ００１（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、ＢＧＢ－Ａ３１７（ＢｅｉＧｅｎｅ Ｌｔｄ．）、ＴＳＲ－０４２（ＡＮＢ０１１としても知られている；ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）、ＲＥＧＮ２８１０（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．／Ｓａｎｏｆｉ－Ａｖｅｎｔｉｓ）、及びＰＦ－０６８０１５９１（Ｐｆｉｚｅｒ）からなる群から選択されるＰＤ－１結合タンパク質（例えば、抗体）である。追加のＰＤ－１結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１８１，３４２号明細書、同第８，９２７，６９７号明細書、同第７，４８８，８０２号明細書、同第７，０２９，６７４号明細書；米国特許出願公開第２０１５／０１５２１８０号明細書、同第２０１１／０１７１２１５号明細書、同第２０１１／０１７１２２０号明細書；並びに国際公開第２００４／０５６８７５号パンフレット、同第２０１５／０３６３９４号パンフレット、同第２０１０／０２９４３５号パンフレット、同第２０１０／０２９４３４号パンフレット、同第２０１４／１９４３０２号パンフレットに開示されている。
ＰＤ－Ｌ１／ＰＤ－Ｌ２．ＰＤリガンド１（ＰＤ－Ｌ１、Ｂ７－Ｈ１としても知られている）及びＰＤリガンド２（ＰＤ－Ｌ２、ＰＤＣＤ１ＬＧ２、ＣＤ２７３、及びＢ７－ＤＣとしても知られている）はＰＤ－１受容体に結合する。両方のリガンドは、ＣＤ２８及びＣＴＬＡ－４と相互作用するＢ７－１及びＢ７－２タンパク質と同じＢ７ファミリーに属している。ＰＤ－Ｌ１は、例えば、上皮細胞、内皮細胞、免疫細胞を含む多くの細胞型で発現し得る。ＰＤＬ－１のライゲーションは、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、及びＩＬ－２の産生を減少させ、Ｔ細胞の反応性及び増殖の低下並びに抗原特異的Ｔ細胞アネルギーに関連する抗炎症性サイトカインであるＩＬ１０の産生を刺激する。ＰＤＬ－２は、主に抗原提示細胞（ＡＰＣ）で発現される。ＰＤＬ２ライゲーションもまたＴ細胞の抑制をもたらすが、ＰＤＬ－１－ＰＤ－１相互作用がＧ１／Ｇ２期での細胞周期停止を介して増殖を阻害する場合、ＰＤＬ２－ＰＤ－１結合は、低い抗原濃度でＢ７：ＣＤ２８シグナルをブロックして、高い抗原濃度でサイトカインの産生を減少させることによって、ＴＣＲを介したシグナル伝達を阻害することが示されている。ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－Ｌ２に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ１の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ１に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－Ｌ１アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、デュルバルマブ（ＭＥＤＩ－４７３６としても知られている；ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ／Ｃｅｌｇｅｎｅ Ｃｏｒｐ．／Ｍｅｄｉｍｍｕｎｅ）、アテゾリズマブ（Ｔｅｃｅｎｔｒｉｑ；ＭＰＤＬ３２８０Ａ及びＲＧ７４４６としても知られている；Ｇｅｎｅｔｅｃｈ Ｉｎｃ．）、アベルマブ（ＭＳＢ００１０７１８Ｃとしても知られている；Ｍｅｒｃｋ Ｓｅｒｏｎｏ／ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）；ＭＤＸ－１１０５（Ｍｅｄａｒｅｘ／Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｅｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ）、ＡＭＰ－２２４（Ａｍｐｌｉｍｍｕｎｅ，ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、ＬＹ３３０００５４（Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ ａｎｄ Ｃｏ．）からなる群から選択されるＰＤ－Ｌ１結合タンパク質（例えば、抗体又はＦｃ融合タンパク質）である。追加のＰＤ－Ｌ１結合タンパク質は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６／００８４８３９号明細書、同第２０１５／０３５５１８４号明細書、同第２０１６／０１７５３９７号明細書、及び国際公開第２０１４／１０００７９号パンフレット、同第２０１６／０３０３５０号パンフレット、同第２０１３１８１６３４号パンフレットに開示されている。
いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ２の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ２に結合する薬剤（例えば、抗ＰＤ－Ｌ２抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－Ｌ２アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＰＤ－Ｌ２アンタゴニストである。ＰＤ－Ｌ２結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，２５５，１４７号明細書、同第８，１８８，２３８号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０１２２４３１号明細書、同第２０１３／０２４３７５２号明細書、同第２０１０／０２７８８１６号明細書、同第２０１６／０１３７７３１号明細書、同第２０１５／０１９７５７１号明細書、同第２０１３／０２９１１３６号明細書、同第２０１１／０２７１３５８号明細書；並びに国際公開第２０１４／０２２７５８号パンフレット、及び同第２０１０／０３６９５９号パンフレットに開示されている。
ＴＩＭ－３．Ｔ細胞免疫グロブリンムチン３（ＴＩＭ－３、Ａ型肝炎ウイルス細胞受容体（ＨＡＶＣＲ２）としても知られている）は、Ｓ型レクチンガレクチン－９（Ｇａｌ－９）に結合するＩ型糖タンパク質受容体である。ＴＩＭ－３は、リンパ球、肝臓、小腸、胸腺、腎臓、脾臓、肺、筋肉、網状赤血球、及び脳組織に広く発現されるリガンドである。Ｔｉｍ－３は当初、ＩＦＮ－γを分泌するＴｈ１及びＴｃ１細胞で選択的に発現されるとして同定された（Ｍｏｎｎｅｙ ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｎａｔｕｒｅ ４１５：５３６－４１）。ＴＩＭ－３受容体によるＧａｌ－９の結合は、下流のシグナル伝達を引き起こしてＴ細胞の生存及び機能を負に調節する。ＴＩＭ－３に特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＩＭ－３の活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＩＭ－３に結合する薬剤である（例えば、抗ＴＩＭ－３抗体）。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＴＩＭ－３アゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＴＩＭ－３アンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＳＲ－０２２（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）及びＭＧＢ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）からなる群から選択される抗ＴＩＭ－３抗体である。追加のＴＩＭ－３結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１０３，８３２号明細書、同第８，５５２，１５６号明細書、同第８，６４７，６２３号明細書、同第８，８４１，４１８号明細書；米国特許出願公開第２０１６／０２００８１５号明細書、同第２０１５／０２８４４６８号明細書、同第２０１４／０１３４６３９号明細書、同第２０１４／００４４７２８号明細書、同第２０１２／０１８９６１７号明細書、同第２０１５／００８６５７４号明細書、同第２０１３／００２２６２３号明細書；並びに国際公開第２０１６／０６８８０２号パンフレット、同第２０１６／０６８８０３号パンフレット、同第２０１６／０７１４４８号パンフレット、同第２０１１／１５５６０７号パンフレット、及び同第２０１３／００６４９０号パンフレットに開示されている。
ＶＩＳＴＡ．Ｔ細胞活性化のＶドメインＩｇサプレッサー（ＶＩＳＴＡ、血小板受容体Ｇｉ２４としても知られている）は、Ｔ細胞応答を負に調節するＩｇスーパーファミリーリガンドである。例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１１，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０８：５７７－９２を参照されたい。ＡＰＣで発現したＶＩＳＴＡはＣＤ４＋及びＣＤ８＋ Ｔ細胞の増殖及びサイトカインの産生を直接抑制する（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．（２０１０）Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ．２０８（３）：５７７－９２）。ＶＩＳＴＡに特異的な複数の免疫チェックポイントモジュレーターが開発されており、本明細書に開示されているように使用することができる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＶＩＳＴＡの活性及び／又は発現を調節する薬剤である。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＶＩＳＴＡに結合する薬剤（例えば、抗ＶＩＳＴＡ抗体）である。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＶＩＳＴＡアゴニストである。いくつかの実施形態では、チェックポイントモジュレーターはＶＩＳＴＡアンタゴニストである。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＴＳＲ－０２２（ＡｎａｐｔｙｓＢｉｏ／Ｔｅｓａｒｏ，Ｉｎｃ．）及びＭＧＢ４５３（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）からなる群から選択されるＶＩＳＴＡ結合タンパク質（例えば、抗体）である。ＶＩＳＴＡ結合タンパク質（例えば、抗体）は当技術分野で公知であり、例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開第２０１６／００９６８９１号明細書、同第２０１６／００９６８９１号明細書；並びに国際公開第２０１４／１９０３５６号パンフレット、同第２０１４／１９７８４９号パンフレット、同第２０１４／１９０３５６号パンフレット、及び同第２０１６／０９４８３７号パンフレットに開示されている。
少なくとも１つの免疫チェックポイントモジュレーターと組み合わせて、標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを対象に投与することによる、腫瘍性障害の処置のための方法が提供される。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、対象の免疫応答を刺激する。例えば、いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイント（例えば、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、又は４－１ＢＢ）の発現若しくは活性を刺激又は増加させる。いくつかの実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、抑制性免疫チェックポイント（例えば、Ａ２Ａ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、又はＶＩＳＴＡ）の発現若しくは活性を阻害又は減少させる。
特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、Ａ２Ａ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、Ａ２Ａ４、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡからなる群から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ－４、ＰＤ－Ｌ１、及びＰＤ－１からなる群から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。さらに特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－１から選択される免疫チェックポイント分子を標的とする。
いくつかの実施形態では、２つ以上（例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上）の免疫チェックポイントモジュレーターが対象に投与される。２つ以上の免疫チェックポイントモジュレーターが投与される場合、モジュレーターは、それぞれが刺激性免疫チェックポイント分子を標的とするか、又はそれぞれが抑制性免疫チェックポイント分子を標的とすることができる。他の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターには、刺激性免疫チェックポイントを標的とする少なくとも１つのモジュレーター、及び抑制性免疫チェックポイント分子を標的とする少なくとも１つの免疫チェックポイントモジュレーターが含まれる。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、結合タンパク質、例えば抗体である。本明細書で使用される「結合タンパク質」という用語は、標的分子、例えば免疫チェックポイント分子に特異的に結合することができるタンパク質又はポリペプチドを指す。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、抗体又はその抗原結合部分であり、標的分子は、免疫チェックポイント分子である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は、標的分子（例えば、免疫チェックポイント分子）に特異的に結合するタンパク質又はポリペプチドである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質はリガンドである。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は融合タンパク質である。いくつかの実施形態では、結合タンパク質は受容体である。本発明の方法で使用され得る結合タンパク質の例としては、限定されるものではないが、ヒト化抗体、抗体Ｆａｂ断片、二価抗体、抗体薬物コンジュゲート、ｓｃＦｖ、融合タンパク質、二価抗体、及び四価抗体が挙げられる。
本明細書で使用される「抗体」という用語は、４つのポリペプチド鎖、２つの重（Ｈ）鎖及び２つの軽（Ｌ）鎖から構成される任意の免疫グロブリン（Ｉｇ）分子、又は任意の機能的断片、突然変異体、変異体、若しくはそれらの誘導体を指す。そのような突然変異体、変異体、又は誘導体の抗体型は当技術分野で公知である。完全長抗体では、各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書ではＨＣＶＲ又はＶＨと略される）及び重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３の３つのドメインから構成されている。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書ではＬＣＶＲ又はＶＬと略される）及び軽鎖定常領域から構成されている。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、ＣＬから構成されている。ＶＨ及びＶＬ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域にさらに細分することができ、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が点在する。各ＶＨ及びＶＬは、３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順序で配置されている。免疫グロブリン分子は、任意のタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであり得る。いくつかの実施形態では、抗体は完全長抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はマウス抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗体はヒト化抗体である。他の実施形態では、抗体はキメラ抗体である。キメラ及びヒト化抗体は、ＣＤＲグラフト化アプローチ（例えば、米国特許第５，８４３，７０８号明細書；同第６，１８０，３７０号明細書；同第５，６９３，７６２号明細書；同第５，５８５，０８９号明細書；及び同第５，５３０，１０１号明細書を参照）、チェーンシャッフリング戦略（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号明細書；Ｒａｄｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９８）ＰＲＯＣ．ＮＡＴ’Ｌ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ ９５：８９１０－８９１５を参照）、及び分子モデリング戦略（米国特許第５，６３９，６４１号明細書）などを含む当業者に周知の方法によって調製することができる。
本明細書で使用される抗体の「抗原結合部分」（又は単に「抗体部分」）という用語は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ又は複数の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって果たされ得ることが示されている。そのような抗体の実施形態はまた、二重特異性（ｂｉｓｐｅｃｉｆｉｃ）、二重特異性（ｄｕａｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃ）、又は多重特異性の形態であり得；２つ以上の異なる抗原に特異的に結合する。抗体の「抗原結合部分」という用語に含まれる結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ、及びＣＨ１ドメインからなる一価断片；（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片；（ｉｉｉ）ＶＨ及びＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖ）単一可変ドメインを含むｄＡｂ断片（その内容が参照により本明細書に組み込まれる、Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８９）ＮＡＴＵＲＥ ３４１：５４４－５４６；及び国際公開第９０／０５１４４ Ａ１号パンフレット）；並びに（ｖｉ）分離した相補性決定領域（ＣＤＲ）が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメインであるＶＬとＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、ＶＬ及びＶＨ領域が対になって一価分子を形成する単一のタンパク質鎖としてこれらを作製できる合成リンカーによって、組換え法を使用して結合することができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られている；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）ＳＣＩＥＮＣＥ ２４２：４２３－４２６；ａｎｄ Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）ＰＲＯＣ．ＮＡＴ’Ｌ．ＡＣＡＤ．ＳＣＩ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照）。このような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合部分」という用語に含まれることを意図している。ダイアボディなどの他の形態の一本鎖抗体も含まれる。抗原結合部分はまた、単一ドメイン抗体、マキシボディ、ミニボディ、ナノボディ、イントラボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、ｖ－ＮＡＲ、及びｂｉｓ－ｓｃＦｖに組み込むことができる（例えば、Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ，Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２３：１１２６－１１３６，２００５を参照）。
本明細書で使用される「ＣＤＲ」という用語は、抗体可変配列内の相補性決定領域を指す。重鎖及び軽鎖の各可変領域には３つのＣＤＲがあり、これらは、可変領域ごとにＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と呼ばれる。本明細書で使用される「ＣＤＲセット」という用語は、抗原に結合することができる単一可変領域に存在する３つのＣＤＲ群を指す。これらのＣＤＲの正確な境界は、方式によって定義が異なっている。Ｋａｂａｔ（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，ＳＥＱＵＥＮＣＥＳ ＯＦ ＰＲＯＴＥＩＮＳ ＯＦ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＩＣＡＬ ＩＮＴＥＲＥＳＴ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９８７）ａｎｄ（１９９１））によって記述された方式は、抗体の任意の可変領域に適用可能な明確な残基付番方式を提供するだけではなく、３つのＣＤＲを定義する正確な残基境界も提供する。これらのＣＤＲは、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと呼ばれることもある。Ｃｈｏｔｈｉａ及び同僚らは、アミノ酸配列のレベルで大きな多様性があるにもかかわらず、Ｋａｂａｔ ＣＤＲ内の特定の小部分がほぼ同一のペプチド骨格構造を採用していることを見出した（Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８７）Ｊ．ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．１９６：９０１－９１７、及びＣｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．（１９８９）ＮＡＴＵＲＥ ３４２：８７７－８８３）。これらの小部分は、Ｌ１、Ｌ２、及びＬ３又はＨ１、Ｈ２、及びＨ３として指定され、「Ｌ」及び「Ｈ」はそれぞれ、軽鎖領域及び重鎖領域を示す。これらの領域は、Ｃｈｏｔｈｉａ ＣＤＲと呼ばれることがあり、Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複する境界を有する。Ｋａｂａｔ ＣＤＲと重複するＣＤＲを定義する他の境界は、Ｐａｄｌａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＦＡＳＥＢ Ｊ．９：１３３－１３９、及びＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．（１９９６）Ｊ．ＭＯＬ．ＢＩＯＬ．２６２（５）：７３２－４５に記載されている。さらに他のＣＤＲ境界定義は、上記の方式の１つに厳密には従わない場合もあるが、それでもＫａｂａｔ ＣＤＲと重複する。ただし、Ｋａｂａｔ ＣＤＲは、特定の残基又は残基群、又はＣＤＲ全体でさえも抗原結合に大きな影響を与えないという予測又は実験結果に照らして短縮又は延長することができる。本明細書で使用される方法は、これらの方式のいずれかに従って定義されるＣＤＲを利用できるが、好ましい実施形態は、Ｋａｂａｔ又はＣｈｏｔｈｉａ方式で定義されたＣＤＲを使用する。
本明細書で使用される「ヒト化抗体」という用語は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含むキメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、又はそれらの断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、又は他の抗体の抗原結合サブ配列など）である非ヒト（例えば、マウス）抗体を指す。ほとんどの場合、ヒト化抗体及びその抗体断片は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基が、所望の特異性、親和性、及び能力を有するマウス、ラット、又はウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲの残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体又は抗体断片）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）残基が、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体／抗体断片は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲ又はフレームワーク配列にも見られない残基を含み得る。これらの変更により、抗体又は抗体断片の性能をさらに改善して最適化することができる。一般に、ヒト化抗体又はその抗体断片は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的にすべてを含み、ＣＤＲ領域のすべて又は実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンの領域に対応し、ＦＲ領域のすべて又は大部分は、ヒト免疫グロブリン配列の領域である。ヒト化抗体又は抗体断片はまた、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのＦｃの少なくとも一部を含み得る。さらなる詳細については、それぞれその全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｊｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．（１９８６）ＮＡＴＵＲＥ ３２１：５２２－５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）ＮＡＴＵＲＥ ３３２：３２３－３２９；ａｎｄ Ｐｒｅｓｔａ（１９９２）ＣＵＲＲ．ＯＰ．ＳＴＲＵＣＴ．ＢＩＯＬ．２：５９３－５９６を参照されたい。
本明細書で使用される「免疫コンジュゲート」又は「抗体薬物コンジュゲート」という用語は、抗体又はその抗原結合断片と、化学療法剤、毒素、免疫療法剤、及びイメージングプローブなどの別の薬剤との結合を指す。結合は、共有結合、又は静電力などによる非共有相互作用であり得る。免疫コンジュゲートを形成するために、当技術分野で知られている様々なリンカーを使用することができる。加えて、免疫コンジュゲートは、免疫コンジュゲートをコードするポリヌクレオチドから発現され得る融合タンパク質の形態で提供することができる。融合遺伝子の翻訳により、元のタンパク質のそれぞれに由来する機能特性を備えた単一のタンパク質が生じる。
「二価抗体」は、２つの抗原結合部位を含む抗体又はその抗原結合断片を指す。２つの抗原結合部位は、同じ抗原に結合するか、又はそれぞれが異なる抗原に結合することができ、その場合、抗体又は抗原結合断片は、「二重特異性」として特徴づけられる。「四価抗体」は、４つの抗原結合部位を含む抗体又はその抗原結合断片を指す。特定の実施形態では、四価抗体は二重特異性である。特定の実施形態では、四価抗体は、多重特異性、即ち、３つ以上の異なる抗原に結合する。
Ｆａｂ（抗原結合断片）抗体断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域１（ＣＨ１）部分からなるポリペプチドと、軽鎖可変（ＶＬ）及び軽鎖定数（ＣＬ）部分かなるポリペプチドとから構成される抗体の一価抗原結合ドメインを含む免疫反応性ポリペプチドであり、ＣＬ及びＣＨ１部分は、好ましくはＣｙｓ残基間のジスルフィド結合によって１つに結合される。
免疫チェックポイントモジュレーター抗体には、限定されるものではないが、少なくとも４つの主要な種類：（ｉ）Ｔ細胞又はナチュラルキラー（ＮＫ）細胞における阻害経路を直接ブロックする抗体（例えば、ニボルマブ及びペンブロリズマブなどのＰＤ－１標的抗体、ＴＩＭ－３を標的とする抗体、並びにＬＡＧ－３、２Ｂ４、ＣＤ１６０、Ａ２ａＲ、ＢＴＬＡ、ＣＧＥＮ－１５０４９、及びＫＩＲを標的とする抗体）、（ｉｉ）Ｔ細胞又はＮＫ細胞における直接刺激経路を活性化する抗体（例えば、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、及び４－１ＢＢを標的とする抗体）、（ｉｉｉ）免疫細胞における抑制経路をブロックする抗体、又は抗体依存性細胞毒性に依存して免疫細胞の抑制集団を枯渇させる抗体（例えば、イピリムマブなどのＣＴＬＡ－４標的抗体、ＶＩＳＴＡを標的とする抗体、及びＰＤ－Ｌ２、Ｇｒ１、及びＬｙ６Ｇを標的とする抗体）、並びに（ｉｖ）癌細胞における抑制経路を直接ブロックする抗体、又は抗体依存性細胞毒性に依存して癌細胞に対する細胞毒性を強める抗体（例えば、リツキシマブ、ＰＤ－Ｌ１を標的とする抗体、並びにＢ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、Ｇａｌ－９、及びＭＵＣ１を標的とする抗体）が含まれる。チェックポイント阻害剤の例としては、例えば、イピリムマブ又はトレメリムマブなどのＣＴＬＡ－４の阻害剤；抗ＰＤ－１、抗ＰＤ－Ｌ１、又は抗ＰＤ－Ｌ２抗体などのＰＤ－１経路の阻害剤が挙げられる。例示的な抗ＰＤ－１抗体は、国際公開第２００６／１２１１６８号パンフレット、同第２００８／１５６７１２号パンフレット、同第２０１２／１４５４９３号パンフレット、同第２００９／０１４７０８号パンフレット、及び同第２００９／１１４３３５号パンフレットに記載されている。例示的な抗ＰＤ－Ｌ１抗体は、国際公開第２００７／００５８７４号パンフレット、同第２０１０／０７７６３４号パンフレット、及び同第２０１１／０６６３８９号パンフレットに記載されており、例示的な抗ＰＤ－Ｌ２抗体は、国際公開第２００４／００７６７９号パンフレットに記載されている。
特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、融合タンパク質、例えば、免疫チェックポイントモジュレーターの活性を調節する融合タンパク質である。
一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、治療用核酸分子、例えば、免疫チェックポイントタンパク質又はｍＲＮＡの発現を調節する核酸である。核酸治療薬は当技術分野で周知である。核酸治療薬には、細胞内の標的配列に相補的な一本鎖及び二本鎖（即ち、少なくとも１５ヌクレオチド長の相補的領域を有する核酸治療薬）核酸の両方が含まれる。特定の実施形態では、核酸治療薬は、免疫チェックポイントタンパク質をコードする核酸配列を標的とする。
アンチセンス核酸治療薬は、典型的には約１６～３０ヌクレオチド長の一本鎖核酸治療薬であり、培養物内又は生物内のいずれかの標的細胞の標的核酸配列に相補的である。
別の態様では、薬剤は、一本鎖アンチセンスＲＮＡ分子である。アンチセンスＲＮＡ分子は、標的ｍＲＮＡ内の配列に相補的である。アンチセンスＲＮＡは、ｍＲＮＡと塩基対を形成し、翻訳機構を物理的に妨害することによって化学量論的に翻訳を阻害することができる。Ｄｉａｓ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，（２００２）Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒ １：３４７－３５５を参照されたい。アンチセンスＲＮＡ分子は、標的ｍＲＮＡに相補的な約１５～３０ヌクレオチドを有し得る。アンチセンス核酸、化学修飾、及び治療用途に関する特許には、例えば：化学修飾されたＲＮＡ含有治療化合物に関する米国特許第５，８９８，０３１号明細書；これらの化合物を治療薬としての使用方法に関する米国特許第６，１０７，０９４号明細書；一本鎖の化学的に修飾されたＲＮＡ様化合物を投与することによって患者を処置する方法に関する米国特許第７，４３２，２５０号明細書；及び一本鎖の化学的に修飾されたＲＮＡ様化合物を含む医薬組成物に関する米国特許第７，４３２，２４９号明細書が含まれる。米国特許第７，６２９，３２１号明細書は、複数のＲＮＡヌクレオシド及び少なくとも１つの化学修飾を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを用いて標的ｍＲＮＡを切断する方法に関する。この段落に記載されている各特許の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の方法で使用するための核酸治療薬には、二本鎖核酸治療薬も含まれる。本明細書で互換的に使用される「ｄｓＲＮＡ剤」、「ｄｓＲＮＡ」、「ｓｉＲＮＡ」、「ｉＲＮＡ剤」とも呼ばれる「ＲＮＡｉ剤」、「二本鎖ＲＮＡｉ剤」、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）分子は、以下に定義されるように２つの逆平行の実質的に相補的な核酸鎖を含む二本鎖構造を有するリボ核酸分子の複合体を指す。本明細書で使用されるＲＮＡｉ剤はまた、ｄｓｉＲＮＡを含み得る（例えば、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２００７０１０４６８８号明細書を参照されたい）。一般に、各鎖のヌクレオチドの大部分はリボヌクレオチドであるが、本明細書に記載されるように、各鎖又は両鎖はまた、１つ又は複数の非リボヌクレオチド、例えばデオキシリボヌクレオチド及び／又は修飾ヌクレオチドを含み得る。加えて、本明細書で使用されるように、「ＲＮＡｉ剤」は、化学修飾を有するリボヌクレオチドを含み得；ＲＮＡｉ剤は、複数のヌクレオチドに実質的な修飾を含み得る。そのような修飾は、本明細書に開示される又は当技術分野で公知のあらゆるタイプの修飾を含み得る。ｓｉＲＮＡ型の分子で使用されるいずれの修飾も、本明細書及び特許請求の範囲のために「ＲＮＡｉ剤」に含まれる。本発明の方法で使用されるＲＮＡｉ剤は、例えば、それぞれその全内容が参照により本明細書に組み込まれる、国際公開第／２０１２／０３７２５４号パンフレット及び同第２００９／０７３８０９号パンフレットに開示されるような化学修飾を有する薬剤を含む。
免疫チェックポイントモジュレーターは、例えば標準投与量を使用することによって、腫瘍性障害を処置するために適切な投与量で投与することができる。当業者は、日常的な実験によって、腫瘍性障害を処置する目的で、免疫チェックポイントモジュレーターの効果的で非毒性の量がどの程度であるかを決定することができるであろう。免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量は、当業者に公知であり、例えば、免疫チェックポイントモジュレーターの製造業者によって提供される製品の説明書から得ることができる。免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量の例が以下の表８に示される。他の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターは、特定の腫瘍性障害の処置のための標準治療の下で腫瘍性障害を処置するために使用される免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量とは異なる（例えば、より低い）投与量で投与される。
Figure 2023532339000013
特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの投与量は、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量よりも５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、又は９０％低い。特定の実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの投与量は、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準投与量の９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、７０％、６５％、６０％、５５％、５０％、４５％、４０％、３５％、３０％、２５％、２０％、１５％、１０％、又は５％である。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの少なくとも１つは、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの少なくとも２つは、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターの少なくとも３つは、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。免疫チェックポイントモジュレーターの組み合わせが投与される一実施形態では、免疫チェックポイントモジュレーターのすべては、特定の腫瘍性障害に対する免疫チェックポイントモジュレーターの標準用量よりも低い用量で投与される。
標的細胞によりサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスと組み合わせて投与されてもよい追加の免疫療法剤には、限定されるものではないが、トール様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベースの治療法、サイトカイン、及び癌ワクチンが含まれる。
２．ＴＬＲアゴニスト
ＴＬＲは、微生物に由来する構造的に保存された分子を認識する単回膜貫通非触媒受容体である。ＴＬＲは、インターロイキン１受容体と共に、「インターロイキン１受容体／Ｔｏｌｌ様受容体スーパーファミリー」として知られている受容体スーパーファミリーを形成する。このファミリーのメンバーは、細胞外ロイシンリッチリピート（ＬＲＲ）ドメイン、膜近傍システイン残基の保存されたパターン、並びにＭｙＤ８８、ＴＩＲドメイン含有アダプター（ＴＲＡＰ）、及びＩＦＮβを誘導するＴＩＲドメイン含有アダプター（ＴＲＩＦ）を含むＴＩＲドメイン含有アダプターを動員することによって下流シグナル伝達のプラットフォームを形成する細胞質内シグナル伝達ドメインによって構造的に特徴づけられる（Ｏ’Ｎｅｉｌｌ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ ７，３５３）。
ＴＬＲには、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９、及びＴＬＲ１０が含まれる。ＴＬＲ２は、ペプチドグリカン、細菌性リポペプチド、リポテイコ酸、マイコバクテリアリポアラビノマンナン、及び酵母の細胞壁成分を含む多数の微生物産物に対する細胞応答を仲介する。ＴＬＲ４は、パターン認識受容体（ＰＲＲ）ファミリーに属する膜貫通タンパク質である。その活性化は、細胞内シグナル伝達経路ＮＦ－κＢ、及び自然免疫系の活性化に関与する炎症性サイトカインの産生をもたらす。ＴＬＲ５は、移動性細菌の侵入から細菌フラジェリンを認識することが知られており、炎症性腸疾患を含む多くの疾患の発症に関与していることが示されている。
ＴＬＲアゴニストは当技術分野で公知であり、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１４／００３０２９４号明細書に記載されている。例示的なＴＬＲ２アゴニストには、マイコバクテリア細胞壁糖脂質、リポアラビノマンナン（ＬＡＭ）及びマンノシル化ホスファチジルイノシトール（ＰＩＩＭ）、ＭＡＬＰ－２、及びＰａｍ３Ｃｙｓ、及びそれらの合成変異体が含まれる。例示的なＴＬＲ４アゴニストには、リポ多糖又はその合成変異体（例えば、ＭＰＬ及びＲＣ５２９）及びリピドＡ又はその合成変異体（例えば、アミノアルキルグルコサミニド４－ホスフェート）が含まれる。例えば、Ｃｌｕｆｆ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｉｔｙ，ｐ．３０４４－３０５２：７３；Ｌｅｍｂｏ ｅｔ ａｌ．，２００８，Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ１８０，７５７４－７５８１；ａｎｄ Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ２：２１９－２９を参照されたい。例示的なＴＬＲ５アゴニストには、フラジェリン又はその合成変異体（例えば、ＴＬＲ５活性化に必須ではないフラジェリンの部分を除去することによって作製された、免疫原性が低下した薬理学的に最適化されたＴＬＲ５アゴニスト（ＣＢＬＢ５０２など））が含まれる。
追加のＴＬＲアゴニストには、コーリーの毒（Ｃｏｌｅｙ’ｓ ｔｏｘｉｎ）及びカルメットゲラン桿菌（ＢＣＧ）が含まれる。コーリーの毒は、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）種及びセラチア・マルセッセンス（Ｓｅｒｒａｔｉａ ｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）種の死菌からなる混合物である。Ｔａｎｉｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２６（６Ａ）：３９９７－４００２を参照されたい。ＢＣＧは、弱毒化された生きたウシ結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｂｏｖｉｓ）の菌株から調製される。Ｖｅｎｋａｔａｓｗａｍｙ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｖａｃｃｉｎｅ．３０（６）：１０３８－１０４９を参照されたい。
３．細胞ベースの治療法
癌処置のための細胞ベースの治療法には、対象への免疫細胞（例えば、Ｔ細胞、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、ナチュラルキラー細胞、及び樹状細胞）の投与が含まれる。自家細胞ベースの治療法では、免疫細胞は、それらが投与される同じ対象に由来する。同族異系細胞ベースの治療法では、免疫細胞は、ある対象に由来し、別の対象に投与される。免疫細胞は、対象に投与する前に、例えばサイトカインでの処置によって活性化することができる。いくつかの実施形態では、免疫細胞は、例えば、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞免疫療法でのように、対象への投与の前に遺伝子組換えされている。
いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、養子細胞移植（ＡＣＴ）を含む。ＡＣＴは、典型的には３つの部分：リンパ球枯渇、細胞投与、及び高用量のＩＬ－２による治療法から構成される。ＡＣＴで投与できる細胞の種類には、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）導入Ｔ細胞、及びキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞が含まれる。
腫瘍浸潤リンパ球は、乳癌を含む多くの固形腫瘍で観察されている免疫細胞である。腫瘍浸潤リンパ球は、細胞傷害性Ｔ細胞とヘルパーＴ細胞の混合物、並びにＢ細胞、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、及び樹状細胞を含む細胞の集団である。自家ＴＩＬ治療法の一般的な手順は次の通りである：（１）切除された腫瘍を断片に消化する；（２）各断片をＩＬ－２で増殖させ、リンパ球の増殖により腫瘍を破壊する；（３）リンパ球の純粋な集団の存在の確認後、これらのリンパ球を増殖させる；及び（４）１０１１個の細胞まで増殖した後、リンパ球を患者に注入する。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３４８（６２３０）：６２－６８を参照されたい。
ＴＣＲが形質導入されたＴ細胞は、腫瘍特異的ＴＣＲの遺伝子誘導を介して作製される。これは、多くの場合、特定の抗原特異的ＴＣＲをレトロウイルス骨格にクローニングすることによって行われる。血液が患者から採取され、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）が抽出される。ＰＢＭＣは、ＩＬ－２の存在下、ＣＤ３で刺激され、次に抗原特異的ＴＣＲをコードするレトロウイルスで形質導入される。これらの形質導入ＰＢＭＣは、インビトロでさらに増殖され、患者に再び注入される。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｂｂｉｎｓ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２１（５）：１０１９－１０２７を参照されたい。
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）は、細胞外抗原認識ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞質シグナル伝達ドメイン（ＣＤ３ζ、ＣＤ２８、及び４－１ＢＢなど）を含む組換え受容体である。ＣＡＲは、抗原結合機能及びＴ細胞活性化機能の両方を備えている。従って、ＣＡＲ発現Ｔ細胞は、糖脂質、炭水化物、及びタンパク質を含む幅広い細胞表面抗原を認識し、細胞質共刺激の活性化を介してこれらの抗原を発現する悪性細胞を攻撃することができる。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｐａｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｍｏｌ Ｃａｎｃｅｒ １７：９１を参照されたい。
いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞ベースの治療法である。ＮＫ細胞は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子の発現の事前のいかなる感作も制限もすることなく、腫瘍細胞を殺す能力を有する大顆粒リンパ球である。Ｕｐｐｅｎｄａｈｌ ｅｔ ａｌ．，２０１７，Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ８：１８２５を参照されたい。高用量ＩＬ－２治療法による自家リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞の養子移入は、ヒトの臨床試験で評価されている。ＬＡＫ免疫療法と同様に、サイトカイン誘導キラー（ＣＩＫ）細胞は、抗ＣＤ３ ｍＡｂ、ＩＦＮ－γ、及びＩＬ－２の刺激による末梢血単核細胞培養から生じる。ＣＩＫ細胞は、混合Ｔ－ＮＫ表現型（ＣＤ３＋ＣＤ５６＋）を特徴とし、卵巣癌及び子宮頸癌に対してＬＡＫ細胞と比較して細胞毒性の増強を示す。一次減量手術及び補助カルボプラチン／パクリタキセル化学療法後の自家ＣＩＫ細胞の養子移入を調べるヒト臨床試験も行われている。Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ３７（２）：１１６－１２２を参照されたい。
いくつかの実施形態では、細胞ベースの治療法は、樹状細胞ベースの免疫療法である。腫瘍溶解物で処置された樹状細胞（ＤＣ）のワクチン接種は、インビトロ及びインビボの両方で治療的抗腫瘍免疫応答を高めることが示されている。Ｊｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ １１（３）：６８６－６９０を参照されたい。ＤＣは、抗原を捕捉して処理し、リンパ器官に移動し、リンパ球共刺激分子を発現し、免疫応答を開始するサイトカインを分泌する。ＤＣはまた、腫瘍関連抗原に特異的な受容体を発現する免疫エフェクター細胞（Ｔ細胞）を刺激し、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３＋制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞などの免疫抑制因子の数を減少させる。例えば、腫瘍細胞溶解物－ＤＣハイブリッドに基づく腎細胞癌（ＲＣＣ）のＤＣワクチン接種戦略は、前臨床及び臨床試験で治療可能性を示した。Ｌｉｍ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ５６：１８１７－１８２９を参照されたい。
４．サイトカイン
ＩＬ－２、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、及びＩＬ－２１を含むいくつかのサイトカインは、ＮＫ細胞及びＴ細胞などの免疫細胞の活性化のための癌の処置に使用されてきた。ＩＬ－２は、抗腫瘍免疫を誘導することを期待して、臨床的に使用された最初のサイトカインの１つであった。高用量の単剤として、ＩＬ－２は、腎細胞癌（ＲＣＣ）及び転移性黒色腫の一部の患者に寛解をもたらす。低用量のＩＬ－２も調べられ、生物学的活性を維持しながら毒性を低減するように、ＩＬ－２αβγ受容体（ＩＬ－２Ｒαβγ）を選択的に連結することを目的としている。その全体が参照により本明細書に組み込まれる、Ｒｏｍｅｅ ｅｔ ａｌ．，２０１４，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃａ，Ｖｏｌｕｍｅ ２０１４，Ａｒｔｉｃｌｅ ＩＤ ２０５７９６，１８ ｐａｇｅｓを参照されたい。
インターロイキン－１５（ＩＬ－１５）は、インターロイキン－２（ＩＬ－２）と構造的に類似したサイトカインである。ＩＬ－２と同様に、ＩＬ－１５は、ＩＬ－２／ＩＬ－１５受容体ベータ鎖（ＣＤ１２２）及び共通のガンマ鎖（ガンマ－Ｃ、ＣＤ１３２）から構成される複合体に結合し、この複合体を介してシグナルを伝達する。組換えＩＬ－１５は、固形腫瘍（例えば、黒色腫、腎細胞癌）の処置、及び癌患者の養子移入後のＮＫ細胞の支援について評価されている。上で引用したＲｏｍｅｅ ｅｔ ａｌ．を参照されたい。
ＩＬ－１２は、ｐ３５及びｐ４０サブユニット（ＩＬ－１２α及びβ鎖）から構成されるヘテロ二量体サイトカインであり、ＮＫ細胞の細胞毒性を増強する能力に基づいて、最初は「ＮＫ細胞刺激因子（ＮＫＳＦ）」として同定された。病原体に接触すると、ＩＬ－１２は、活性化樹状細胞及びマクロファージによって放出され、主に活性化Ｔ細胞及びＮＫ細胞で発現するその同族受容体に結合する。多くの前臨床試験により、ＩＬ－１２は抗腫瘍候補であることが示唆されている。上で引用したＲｏｍｅｅ ｅｔ ａｌ．を参照されたい。
ＩＬ－１８は、炎症性ＩＬ－１ファミリーのメンバーであり、ＩＬ－１２と同様に、活性化食細胞から分泌される。ＩＬ－１８は、前臨床動物モデルで有意な抗腫瘍活性を示し、ヒトの臨床試験で評価されている。Ｒｏｂｅｒｔｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １２：４２６５－４２７３を参照されたい。
ＩＬ－２１は、ＮＫ細胞及びＣＤ８＋Ｔ細胞を刺激する能力があるため、抗腫瘍免疫療法に使用されてきた。エクスビボでのＮＫ細胞の増殖では、膜結合型ＩＬ－２１がＫ５６２刺激細胞で発現され、効果的な結果が得られている。Ｄｅｎｍａｎ ｅｔ ａｌ．，２０１２，ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ７（１）ｅ３０２６４を参照されたい。組換えヒトＩＬ－２１は、可溶性ＣＤ２５を増加させ、ＣＤ８＋細胞上でのパーフォリン及びグランザイムＢの発現を誘導することも示された。ＩＬ－２１は、固形腫瘍の処置に関するいくつかの臨床試験で評価されている。上で引用したＲｏｍｅｅ ｅｔ ａｌ．を参照されたい。
５．癌ワクチン
治療用癌ワクチンは、適切なアジュバントの助けを借りて、癌に対する患者自身の免疫応答、特にＣＤ８＋Ｔ細胞媒介応答を強化することによって癌細胞を除去する。癌ワクチンの治療効果は、正常細胞に対する腫瘍細胞による腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）の差次的発現に依存している。ＴＡＡは、細胞タンパク質に由来し、免疫寛容又は自己免疫効果を回避するために、主に又は選択的に癌細胞に発現させる必要がある。Ｃｉｒｃｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｖａｃｃｉｎｅｓ ３（３）：５４４－５５５を参照されたい。癌ワクチンには、例えば、樹状細胞（ＤＣ）ベースのワクチン、ペプチド／タンパク質ワクチン、遺伝子ワクチン、及び腫瘍細胞ワクチンが含まれる。Ｙｅ ｅｔ ａｌ．，２０１８，Ｊ Ｃａｎｃｅｒ ９（２）：２６３－２６８を参照されたい。
本発明の併用療法は、腫瘍性障害の処置に利用することができる。いくつかの実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスと追加の治療剤との併用療法は、腫瘍細胞の増殖を阻害する。従って、本発明は、腫瘍細胞の増殖が阻害されるように、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルス及び少なくとも１つの追加の治療剤を対象に投与することを含む、対象における腫瘍細胞の増殖を阻害する方法をさらに提供する。特定の実施形態では、癌の処置は、対照と比較して生存を延長すること、又は腫瘍進行までの時間を延ばすことを含む。いくつかの実施形態では、対照は、追加の治療剤では処置されるが、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスでは処置されない対象である。いくつかの実施形態では、対照は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスでは処置されるが、追加の治療剤では処置されない対象である。いくつかの実施形態では、対照は、追加の治療剤でも、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスでも処置されない対象である。特定の実施形態では、対象はヒト対象である。いくつかの実施形態では、対象は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの初回投与又は追加の治療剤の初回投与の前に腫瘍を有するとして識別されている。特定の実施形態では、対象は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスの初回投与時又は追加の治療剤の初回投与時に腫瘍を有する。
特定の実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルス及び１つ又は複数の追加の治療剤を含む併用療法の少なくとも１サイクル、２サイクル、３サイクル、４サイクル、又は５サイクルが対象に施される。対象は、各サイクルの終了時に応答基準について評価される。対象はまた、治療計画が十分に許容されていることを確認するために、有害事象（例えば、凝固、貧血、肝臓及び腎臓機能など）について各サイクルのすべてで監視される。
２つ以上の追加の治療剤、例えば、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれ以上の追加の治療剤を、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスと組み合わせて投与できることに留意されたい。
一実施形態では、本明細書に記載されるサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルス及び追加の治療剤の投与は、腫瘍性障害を有する対象の腫瘍のサイズ、重量、又は体積の減少、進行までの時間の増加、腫瘍増殖の阻害、及び／又は生存期間の延長の１つ又は複数をもたらす。特定の実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルス及び追加の治療剤の投与は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスが投与されるが、追加の治療剤が投与されない対応する対照対象と比較して少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％、腫瘍のサイズ、重量、又は体積を減少させ、進行までの時間を増加させ、腫瘍増殖を阻害し、且つ／又は対象の生存期間を延長する。特定の実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルス及び追加の治療剤の投与は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスが投与されるが、追加の治療剤が投与されない腫瘍性障害に罹患した対照対象の対応する集団と比較して少なくとも１％、２％、３％、４％、５％、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、２００％、３００％、４００％、又は５００％、腫瘍のサイズ、重量、又は体積を低下させ、進行までの時間を増加させ、腫瘍増殖を阻害し、且つ／又は腫瘍性障害に罹患した対象の集団の生存期間を延長する。他の実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルス及び追加の治療剤の投与は、処置前に進行性腫瘍性障害を有する対象の腫瘍性障害を安定させる。
特定の実施形態では、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルス及び追加の治療剤（例えば、免疫療法剤）による処置は、例えば、１つ又は複数の抗腫瘍剤（例えば、化学療法剤）の標準投与量を投与することによって、処置されるべき特定の癌の処置のための標準治療などの追加の抗腫瘍剤と組み合わされる。特定の癌の種類の標準治療は、例えば、癌の種類及び重症度、対象の年齢、体重、性別、及び／若しくは病歴、並びに以前の処置の成功又は失敗に基づいて、当業者によって決定することができる。本発明の特定の実施形態では、標準治療は、外科手術、放射線、ホルモン療法、抗体療法、成長因子による治療法、サイトカイン、及び化学療法のいずれか１つ又はそれらの組み合わせを含む。一実施形態では、追加の抗腫瘍剤は、鉄依存性細胞分解を誘導する薬剤及び／又は免疫チェックポイントモジュレーターでもない。
本明細書に開示される方法での使用に適した追加の抗腫瘍剤には、限定されるものではないが、化学療法剤（例えば、アルトレタミン、ブスルファン、カルボプラチン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ロムスチン、メルファラン、オキサリプラチン、テモゾロミド、チオテパなどのアルキル化剤；５－フルオロウラシル（５－ＦＵ）、６－メルカプトプリン（６－ＭＰ）などの代謝拮抗剤；カペシタビン（Ｘｅｌｏｄａ（登録商標））、シタラビン（Ａｒａ－Ｃ（登録商標））、フロクスウリジン、フルダラビン、ゲムシタビン（Ｇｅｍｚａｒ（登録商標））、ヒドロキシ尿素、メトトレキサート、ペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））；アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン、ドキソルビシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（登録商標））、エピルビシン、イダルビシン）、アクチノマイシン－Ｄ、ブレオマイシン、マイトマイシン－Ｃ、ミトキサントロン（トポイソメラーゼＩＩ阻害剤としても機能する）などの抗腫瘍抗生物質；トポテカン、イリノテカン（ＣＰＴ－１１）、エトポシド（ＶＰ－１６）、テニポシド、ミトキサントロン（抗腫瘍抗生物質としても機能する）などのトポイソメラーゼ阻害剤；ドセタキセル、エストラムスチン、イクサベピロン、パクリタキセル、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビンなどの有糸分裂阻害剤；プレドニゾン、メチルプレドニゾロン（Ｓｏｌｕｍｅｄｒｏｌ（登録商標））、デキサメタゾン（Ｄｅｃａｄｒｏｎ（登録商標））などのコルチコステロイド；Ｌ－アスパラギナーゼ及びボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））などの酵素が含まれる。抗腫瘍剤にはまた、生物学的抗癌剤、例えば、抗ＴＮＦ抗体、例えば、アダリムマブ又はインフリキシマブ；リツキシマブなどの抗ＣＤ２０抗体、ベバシズマブなどの抗ＶＥＧＦ抗体；トラスツズマブなどの抗ＨＥＲ２抗体；パリビズマブなどの抗ＲＳＶが含まれる。
ＶＩＩＩ．医薬組成物及び投与方式
特定の態様では、本開示は、サノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むように改変されたウイルスを含む医薬組成物に関する。本明細書に記載の医薬組成物は、任意の適切な製剤で対象に投与することができる。医薬組成物には、例えば、液体、半固体、及び固体の剤形が含まれる。好ましい形態は、意図される投与方式及び治療用途によって決まる。
特定の実施形態では、医薬組成物は経口投与に適している。特定の実施形態では、医薬組成物は、局所投与、並びに静脈内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、及び皮下注射を含む非経口投与に適している。特定の実施形態では、医薬組成物は静脈内投与に適している。さらなる特定の実施形態では、医薬組成物は、腫瘍内投与に適している。
非経口投与用の医薬組成物には、水溶性形態の活性化合物の水溶液が含まれる。静脈内投与の場合、製剤は水溶液であり得る。水溶液には、ハンクス液、リンゲル液、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、生理食塩水緩衝液、又は非経口的に送達される製剤の適切なｐＨ及び浸透圧を達成する他の適切な塩又は組み合わせが含まれ得る。水溶液を使用して、投与用の製剤を所望の濃度に希釈することができる。水溶液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、又はデキストランなどの、溶液の粘度を増加させる物質を含み得る。いくつかの実施形態では、製剤は、二塩基性リン酸ナトリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、及び注射用水を含むリン酸緩衝生理食塩水を含む。
局所投与に適した製剤には、塗布剤、ローション、クリーム、軟膏、又はペーストなどの皮膚への浸透に適した液体又は半液体の製剤、及び目、耳、又は鼻への投与に適した点滴剤が含まれる。経口投与に適した製剤には、不活性希釈剤又は同化可能な食用担体を含む製剤が含まれる。経口投与用の製剤は、ハードシェル又はソフトシェルのゼラチンカプセルに封入してもよいし、又は錠剤に圧縮してもよいし、又は飲食物の食品に直接含めてもよい。単位剤形がカプセルである場合、単位剤形は、上記のタイプの材料に加えて、液体担体を含み得る。様々な他の材料が、コーティングとして又は他の方法で投与単位の物理的形態を変更するために存在し得る。本発明での使用に適した医薬組成物には、その意図された目的を達成するために活性成分が有効量で含まれている組成物が含まれる。有効量の決定は、特に本明細書で提供される詳細な開示を考慮すると、当業者の能力の十分に範囲内である。活性成分に加えて、これらの医薬組成物には、薬学的に使用できる調製物への活性化合物の処理を容易にする賦形剤及び助剤を含む適切な薬学的に許容される担体が含まれ得る。
当業者には容易に明らかであるように、投与される有用なインビボ投与量及び特定の投与方式は、年齢、体重、苦痛の重症度、及び処置される哺乳動物種、利用される特定の化合物、及びこれらの化合物が利用される特定の用途に応じて異なる。有効な投与量レベル、即ち、所望の結果を達成するために必要な投与量レベルの決定は、例えば、ヒト臨床試験、動物モデル、及びインビトロ試験などの日常的な方法を使用して当業者が行うことができる。
特定の実施形態では、医薬組成物は経口的に送達される。特定の実施形態では、組成物は非経口的に投与される。特定の実施形態では、組成物は、注射又は注入によって送達される。特定の実施形態では、組成物は、経粘膜を含めて局所的に送達される。特定の実施形態では、組成物は、吸入によって送達される。一実施形態では、本明細書で提供される組成物は、腫瘍に直接注射することによって投与することができる。いくつかの実施形態では、組成物は、静脈内注射又は静脈内注入によって投与することができる。特定の実施形態では、投与は全身性である。特定の実施形態では、投与は局所的である。
本発明は、限定するものとして解釈されるべきでない以下の実施例によってさらに例示される。すべての参考文献の内容、ＧｅｎＢａｎｋ受入及び遺伝子番号、並びに本願全体を通じて引用される公開された特許及び特許出願は、参照により本明細書に組み込まれる。当業者は、本発明が、本開示の構造、材料、組成物及び方法に対するバリエーションで実行することができ、そのようなバリエーションが本発明の範囲内とみなされることを理解するであろう。
実施例１．サノトランスミッションを促進するポリペプチド（例えば、ＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１、ＭＬＫＬ及び／又はＴＲＩＦ）をそれぞれコードする１つ又は複数の異種ポリヌクレオチドを含むウイルスの調製
サノトランスミッションカセット（ＴＣ）とウイルスゲノムへの挿入の遺伝子座の構造を図１Ａに示す。ＴＣの例は、Ｐ２Ａ切断部位によって連結されたＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１、ＭＬＫＬ、及び／又はＴＲＩＦをコードする遺伝子を含み、発現はウイルスプロモーター又は細胞プロモーター（例えば、ＩＣＰ３４．５、ＣＭＶ ＩＥ１、又はＥＦ１ａ）によって駆動される（図１Ｂ）。さらなる例として、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋カスパーゼ阻害剤（例えば、ＦＡＤＤ－ＤＮ、ｖＩＣＡ又はｃＦＬＩＰ）、又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ガスダーミン（例えば、ガスダーミンＥ）をコードするポリヌクレオチドを含むＴＣが挙げられる。ウイルスゲノムに挿入することができるＴＣの特定例を、以下の実施例９～１４に提供する。ＴＣは、ＩＣＰ３４．５遺伝子の一方若しくは両方に、又は代替的に中性遺伝子座に挿入することができる。組換えウイルスを、相同組換えによって作製し、次にベロ細胞内で増殖させる。ウイルスストックは、標的細胞を１０～０．１の種々の感染多重度（ＭＯＩ）で感染させ、感染はウイルスマーカーの発現を評価することによって確認する。イムノブロット又は蛍光タグ分析では、サノトランスミッションカセットの発現を確認する。ウイルスは、例えば、ＨＳＶ、ワクシニア、又はアデノウイルスであってもよい。
実施例２．サノトランスミッションを調節するポリペプチドの発現を減少させるポリヌクレオチド（例えば、ｓｉＲＮＡ又はｇＲＮＡ）を発現するウイルスの調製
ポリヌクレオチドを発現する組換えウイルスの構造及びウイルスゲノムへの挿入の遺伝子座の詳細を図２に示す。挿入の遺伝子座は、ウイルスの一方又は両方のＩＣＰ３４．５遺伝子に、又は代替的に中性遺伝子座に存在してもよい。組換えウイルスを、相同組換えによって作製し、次にベロ細胞内で増殖させる。ウイルスストックは、標的細胞を種々のＭＯＩで感染させ、感染はウイルスマーカーの発現を評価することによって確認する。イムノブロット又は蛍光タグ分析では、ウイルス的にコードされたポリヌクレオチドによって標的化される細胞タンパク質の発現レベルを確認する。
実施例３．細胞代謝回転経路のネクロトーシスを防止するウイルス遺伝子中の機能欠失突然変異を含むウイルスの調製
本実施例は、ＨＳＶ１のＩＣＰ６遺伝子の突然変異及びワクシニアのＥ３Ｌ遺伝子の突然変異について説明する。ＨＳＶ１－ＩＣＰ６のＲＨＩＭドメイン内及び／又はワクシニア－Ｅ３ＬのＺａドメイン内に突然変異を宿す突然変異体ウイルスの構造を図３に示す。ここで、ワクシニアの突然変異体Ｅ３Ｌ（ΔＺα）を挿入し、ＰＫＲ阻害を回復させるが、ＣＮＳ内部での複製が弱められたままである。突然変異体ウイルスを、相同組換えによって作製し、ベロ細胞内で増殖させる。ウイルスストックは、標的細胞を種々のＭＯＩで感染させ、感染は、ウイルスマーカーの発現を評価することによって確認する。イムノブロット分析では、突然変異体ＩＣＰ６及びＥ３Ｌの発現を確認する。ワクシニアの場合、ＴＣを、中性遺伝子座及び突然変異Ｅ３ＬのＺＢＰ１阻害性Ｚαドメインに挿入することになる。
実施例４．ウイルス遺伝子における突然変異及びサノトランスミッションを促進するタンパク質をコードするポリヌクレオチドを含む腫瘍溶解性ウイルスの調製
本実施例は、ＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１、ＭＬＫＬ、及びＴＲＩＦをコードするポリヌクレオチドの１つの付加を含むサノトランスミッションカセットと組み合わせた、ＨＳＶのＩＣＰ６の突然変異又はワクシニアのＥ３Ｌの突然変異について説明する。実施例１～３に記載の突然変異を組み合わせる。突然変異体ウイルスを、相同組換えによって作製し、ベロ細胞内で増殖させる。図１又は実施例１に記載されるＴＣを、図３に記載のように、ＩＣＰ６が突然変異した突然変異体ウイルス骨格にクローン化する。他の実験では、図２に記載のポリヌクレオチドカセットを、図３に記載のように、突然変異体ウイルスのバックグラウンドにクローン化する。クローニングを相同組換えによって達成し、ウイルスをベロ細胞内で増殖させる。ウイルスを、ヒト細胞株（例えば、ＨＥＫ２９３）を感染させるために使用し、ＴＣの発現をイムノブロットによって検証する。突然変異体ウイルスタンパク質の発現を、ウイルスゲノムの増幅及び配列決定によって検証する。ポリヌクレオチドが細胞遺伝子のノックダウンをもたらす場合、ｓｉＲＮＡ／ｇＲＮＡによって標的化される細胞遺伝子の発現レベルを評価する。
実施例５．サノトランスミッションを促進するタンパク質を発現する改変されたウイルスによる癌細胞の感染並びに癌細胞の細胞代謝回転及び増殖に対する効果
複数の腫瘍細胞株（例えば、Ｂ１６、ＣＴ２６）を、種々のＭＯＩの、実施例１～４からのウイルスで感染させる。増殖性感染を、ＩＥウイルス抗原を定量化することによって確認する。低いＭＯＩ（０．１）及び高いＭＯＩ（１０）での腫瘍細胞の増殖曲線を用いて、ウイルスの複製能力を評価する。感染腫瘍細胞の生存率を、標準的な細胞生存率アッセイによって測定し（例えば、細胞のＡＴＰ含量、ＬＤＨ放出、又は細胞イメージング）、腫瘍細胞のウイルス誘導細胞死に対する感受性を判定する。ＣＦＳＥなどの細胞透過性色素で標識した腫瘍細胞を、ウイルスで感染させ、細胞増殖に対する感染の効果を評価する。
実施例６．サノトランスミッションを促進するタンパク質を発現する改変されたウイルスで感染させた癌細胞の評価
複数の腫瘍細胞株（例えば、Ｂ１６、ＣＴ２６）を、実施例１～４に記載の親及び組換えウイルスによって感染させる。感染した癌細胞から放出される細胞代謝回転因子（ＣＴＦ）を、定義されたレスポンダー細胞アッセイにおいて、サノトランスミッションを促進するその能力について評価する。ＣＴＦの効果を、レポーターアッセイ（例えば、ＮＦ－ｋＢ及び／又はＩＲＦ活性）、並びにＴ細胞増殖、樹状細胞活性化又はマクロファージ分化などの免疫学的アッセイによって測定する。感染した癌細胞から放出されるＣＴＦの質量スペクトル分析により、腫瘍溶解性ウイルスで感染した細胞から放出される因子が特定される。
実施例７．サノトランスミッションを促進するタンパク質を発現する改変されたウイルスの癌マウスモデルへの投与
ＷＴ ＢＡＬＢ／ｃ又はＣ５７Ｂｌ６／Ｊマウスに、４Ｔ１、ＣＴ２６、Ｂ１６又はＭＣ３８腫瘍を皮下移植する。腫瘍細胞を、マウス１匹あたり１×１０５～１×１０６の範囲の用量で移植する。いくつかの実験では、マウスには、同所性部位、例えば乳腺脂肪パッドに移植する。腫瘍が触知可能になると、マウスを、本明細書に記載される改変されたウイルス、例えば実施例１～４に記載される改変されたウイルスの腫瘍内投与で処置する。ウイルスを、週１回、週２回又は２日ごとの範囲の異なる投与頻度で投与する。ウイルス用量は、１×１０６ｐｆｕ／マウス～１×１０８ｐｆｕ／マウスの範囲である。
腫瘍の増殖を、週３回測定する。腫瘍が約１０００ｍｍ３のサイズに達すると、腫瘍及び流出リンパ節（ＤＬＮ）を収集する。腫瘍免疫応答を、フローサイトメトリーによって、腫瘍及びＤＬＮにおける免疫細胞のレベルを定量することによって特徴づけ、腫瘍に特異的なＴ細胞応答の発生を、四量体染色によって評価する。全身性免疫応答を、ヘルパーＴ細胞に対する活性化細胞傷害性Ｔ細胞の比、及び血漿中の免疫調節性サイトカインのレベルを評価することによって測定する。いくつかの試験では、腫瘍を収集し、サノトランスミッションモジュールの成分（例えば、サノトランスミッションを促進するポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド）の発現又はｓｉＲＮＡ／ｇＲＮＡ細胞標的の発現低下を、イムノブロット、免疫蛍光、及び／又はフローサイトメトリーによって測定する。いくつかの実験では、ＨＳＶ－１＋免疫応答の発生を、ウイルス－中和抗体の出現についてＥＬＩＳＡによって監視し、抗腫瘍免疫応答の発生と比較する。
いくつかの実験では、マウスに同系の両側性皮下腫瘍を接種し、１匹のみをウイルスで処置することになる。ウイルスレベル及び腫瘍に特異的なＴ細胞応答を、処置及び非処置腫瘍の両方において監視する。これらの実験では、非処置腫瘍の腫瘍サイズを測定し、アブスコパル効果を判定する。
いくつかの実験では、腫瘍を移植したマウスを、チェックポイント阻害剤の全身投与と組み合わせた、上記のような組換えウイルスの腫瘍内投与で処置する。抗ＰＤ－１又は抗ＣＴＬＡ－４抗体を、１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲の用量で腹腔内投与する。腫瘍増殖の動力学及び免疫応答を上記のように測定する。
実施例８．癌を処置するための改変されたウイルスの有効性を調べるヒト臨床試験
膵癌、肺癌、脳癌、膀胱癌、乳癌、又は頭頚部癌又は結腸癌に罹患した患者を、本明細書で開示される組成物及び方法を用いて処置する。実施例１～４に記載のウイルスに基づく、突然変異体及び組換えＨＳＶ－１ベースのウイルス粒子を作製する。プラーク精製後、ウイルスストックをさらに精製し、緩衝液交換を行い、ベロ細胞で力価測定する。膵癌、肺癌、又は結腸癌に罹患した患者へのインビボ投与の場合、ＨＳＶ粒子を、薬学的に許容される安定化剤と共にリン酸緩衝液（ＰＢＳ）で調製する。処置の日に、薬学的に許容される担体を含む１．０ｍＬの体積中の１０７個、１０８個、１０９個又は１０１０個のベクターゲノムを、腫瘍内注入を介して投与する。患者を、その患者の特定の予後に基づき、適切な時間間隔で、標準治療手順を用いて、腫瘍退縮について監視する。
実施例９．１つ又は複数のサノトランスミッションポリペプチドを発現するＣＴ－２６マウス結腸癌細胞における細胞死の誘導
ＣＴ－２６マウス結腸癌細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ－２６３８）を、ｐＬＶＸ－Ｔｅｔ３Ｇベクター（Ｔａｋａｒａ；６３１３５８）由来のレンチウイルスで形質導入し、ヒトＰＧＫプロモーターによる安定なＴｅｔ－Ｏｎトランスアクチベーターの発現を確立した。Ｔｅｔ－Ｏｎシステムにおいて、遺伝子発現は、ドキシサイクリンによって誘導可能である。すべてのレンチウイルス形質導入を、２９３Ｔ細胞（ＡＴＣＣ；ＣＲＬ－３２１６）及びレンチウイルスパッケージングミックス（Ｂｉｏｓｅｔｔｉａ；ｐＬＶ－ＰＡＣＫ）を利用する標準の生産プロトコルを用いて行った。次に、ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ細胞を、ｐＬＶＸ－ＴＲＥ３Ｇ（Ｔａｋａｒａ；６３１１９３）におけるヒトＴＲＩＦ ＯＲＦ（受入番号：ＮＭ＿１８２９１９）を発現するレンチウイルスで形質導入した。ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ細胞を、代わりに、又は加えて、マウスＲＩＰＫ３ ＯＲＦ（受入番号：ＮＭ＿０１９９５５．２）を発現するベクターで形質導入し；ＲＩＰＫ３の発現を、ｐＬＶ－ＥＦ１ａ－ＭＣＳ－ＩＲＥＳ－Ｈｙｇ（Ｂｉｏｓｅｔｔｉａ；ｃＤＮＡ－ｐＬＶ０２）の構成的ＰＧＫプロモーター誘導体によって駆動した。両方のＯＲＦを、Ｂ－Ｂリガンド（Ｔａｋａｒａ；６３５０５９）への結合時にオリゴマー化する２つのタンデムＤｍｒＢドメインの付加によって修飾し、Ｂ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒ（１μＭ）を用いてタンパク質活性化を可能にし、オリゴマー化を促進した。初期試験後、Ｂ／Ｂを用いる二量体化は、ＴＲＩＦ構築物の活性に対する実質的効果を有しなかったが、ＲＩＰＫ３発現構築物の活性を促進した。従って、すべての後続実験では、Ｂ／Ｂ誘導性二量体化は、ＴＲＩＦを含むあらゆる構築物を活性化するのに利用しなかったが、ＲＩＰＫ３を発現する単一構築物を活性化するのに限って利用した。そのようなものとして、Ｂ／Ｂ ｄｉｍｅｒｉｚｅｒは、実験装置に含め、実験条件がすべての群を通じて同等であることを保証したが、ＴＲＩＦ誘導活性に対する効果を有しなかった。例えば、図５Ｂで示され、また実施例１０に記載されているように、ｄｉｍｅｒｉｚｅｒの付加は、上記の改変されたＣＴ－２６細胞からの細胞培養物で処置されたマクロファージにおけるＩＲＦ活性に対する効果をほとんど有しなかった。
指定のサノトランスミッションモジュールを発現するＣＴ２６マウス結腸癌細胞を播種し、続いてドキシサイクリン（１ｍｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，０２１９８９５５２５）及びＢ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒ（１μＭ）で２４時間処置し、オリゴマー化を介して発現及びタンパク質活性化を促進した。製造業者の使用説明書の通り、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ ＭＴ細胞生存率アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．Ｇ９７１２）を用いた処置の２４時間後、相対細胞生存率を決定し、相対発光単位（ＲＬＵ）によって測定された相対生存率を示すグラフを作成した。
図４Ａに示されているように、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３、又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３の誘導発現及びオリゴマー化により、ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ（Ｔｅｔ３Ｇ）親細胞株に対する細胞生存率の減少が誘導された。これらの結果は、癌細胞内での１つ又は複数のサノトランスミッションポリペプチドの発現が、癌細胞の生存率を減少させることを実証する。
別の実験では、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３、又はＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３を発現する癌細胞内でのガスダーミンＥ（ＧＳＤＭＥ）の発現の効果を試験した。ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ細胞を、ｐＬＶ－ＥＦ１ａ－ＭＣＳ－ＩＲＥＳ－Ｐｕｒｏベクター（Ｂｉｏｓｅｔｔｉａ）にクローン化したヒトＧＳＤＭＥ（ＮＭ＿００４４０３．３）で形質導入した。また、ＧＳＤＭＥを、上記のＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ－ＴＲＩＦ及びＣＴ２６－Ｔｅｔ３Ｇ－ＴＲＩＦ－ＲＩＰＫ３細胞に形質導入した。これらの細胞を播種し、続いてドキシサイクリン（１ｍｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，０２１９８９５５２５）で２４時間処置し、発現を促進した。製造業者の使用説明書の通り、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ ＭＴ細胞生存率アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．Ｇ９７１２）を用いた処置の２４時間後、相対細胞生存率を決定し、相対発光単位（ＲＬＵ）によって測定された相対生存率を示すグラフを作成した。Ｂ／Ｂ ｄｉｍｅｒｉｚｅｒは、これらの実験に使用しなかった。
図４Ｂに示されているように、ＴＲＩＦ、及びＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３の発現により、細胞生存率がＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ親細胞株と比較して減少し、図４Ａに提示される結果が確認された。加えて、ＧＳＤＭＥ発現細胞内でのＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３タンパク質発現の誘導によっても、細胞生存率がＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ親細胞と比較して減少した。まとめると、これらの結果は、癌細胞内でのＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ３及びＧＳＤＭＥを含む１つ又は複数のサノトランスミッションポリペプチドの発現が癌細胞の生存率を減少させることを実証する。
実施例１０．１つ又は複数のサノトランスミッションポリペプチドを発現するＣＴ－２６マウス結腸癌細胞からの細胞代謝回転因子（ＣＴＦ）の、マクロファージ内のインターフェロン刺激遺伝子（ＩＳＧ）レポーターに対する効果
Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ，Ｊ７７４－ＮＦＩＳ）を、９６ウェル培養プレートに１００，０００細胞／ウェルで播種した。Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞は、マウスＪ７７４．１マクロファージ様細胞株から、２つの誘導性レポーター構築物の安定な組み込みによって誘導した。これらの細胞は、ＮＦ－κＢ転写応答エレメントの５つのコピー及びｃ－Ｒｅｌ結合部位の３つのコピーに融合されたＩＦＮ－β最小プロモーターの制御下で、分泌胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を発現する。Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞は、５つのインターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）と併せて、ＩＳＧ５４最小プロモーターの制御下で、分泌ルシフェラーゼをコードするＬｕｃｉａルシフェラーゼ遺伝子も発現する。結果として、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞は、ＳＥＡＰの活性を評価することによるＮＦ－κＢ経路、及びＬｕｃｉａルシフェラーゼの活性を監視することによるインターフェロン制御因子（ＩＲＦ）経路の同時試験を可能にする。
細胞代謝回転因子（ＣＴＦ）を含有する培地を、上の実施例９に記載のように、ＣＴ－２６マウス結腸癌細胞から作製した。実施例９に記載のサノトランスミッションモジュールに加えて、完全にＴｅｔ誘導性のプロモーターを含むさらなるＲＩＰＫ３構築物も評価した。このＴｅｔ誘導性ＲＩＰＫ３を、図５Ａで「ＲＩＰＫ３」と名付け、（実施例９に記載の）ＰＧＫプロモーターを含むＲＩＰＫ３構築物を、図５Ａで「ＰＧＫ＿ＲＩＰＫ３」と名付ける。
また、対照を含めたが、それは免疫刺激サノトランスミッションなしに細胞死を誘導することが予測されるであろう。これらの対照構築物は、ｉ）ヒトＢｉｄのＣ末端カスパーゼ切断部位（ＮＭ＿１９７９６６．３）、ｉｉ）ヒトＧＳＤＭＤのＮ末端カスパーゼ切断部位（ＮＭ＿００１１６６２３７．１）、ｉｉｉ）ヒトカスパーゼ－８の合成的に二量体化可能な形態（ＤｍｒＢ－カスパーゼ－８）、又はｉｖ）ＤｍｒＢ－カスパーゼ－８及びヒトＧＳＤＭＥの両方（ＮＭ＿００４４０３．３）を発現する。次に、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞を、指定のＣＴＦで２４時間刺激した。細胞培地を収集し、ルシフェラーゼ活性を、ＱＵＡＮＴＩ－Ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；ｒｅｐ－ｑｌｃ１）アッセイを用いて測定した。インターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）プロモーターの活性化を、対照細胞株のＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇに対してグラフ化した。
図５Ａに示されているように、試験したＣＴ－２６細胞株の中で、ＴＲＩＦを発現する細胞から収集した培地のみが（単独で又はＲＩＰＫ３と組み合わせて）、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞におけるＩＳＲＥ／ＩＲＦレポーター遺伝子活性化を誘導した。
別の実験では、ガスダーミンＥ（ＧＳＤＭＥ）のＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３と組み合わせた発現の効果を試験した。ＣＴＦを含有する培地を、実施例９に記載されるＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３を発現するＣＴ－２６細胞から作製し、加えてＴＲＩＦ＋ガスダーミンＥ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ガスダーミンＥを発現するＣＴ－２６細胞から作製した。図５Ｂに示されているように、ＴＲＩＦ（ｉＴＲＩＦ）、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３（ｉＴＲＩＦ＿ｃＲ３）、ＴＲＩＦ＋ガスダーミンＥ（ｉＴＲＩＦ＿ｃＧＥ）、又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ガスダーミンＥ（ｉＴＲＩＦ＿ｃＲ３＿ｃＧＥ）を発現するＣＴ－２６細胞からの培地はそれぞれ、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞においてＩＳＲＥ／ＩＲＦレポーター遺伝子活性化を誘導した。実施例９で論じたように、ｄｉｍｅｒｉｚｅｒの付加は、ＩＳＲＥ／ＩＲＦレポーター遺伝子活性化に対する効果をほとんど有しなかった。
まとめると、これらの結果は、１つ又は複数のサノトランスミッションポリペプチドを発現する癌細胞から生成されたＣＴＦが、免疫細胞内の免疫刺激経路（即ち、ＩＲＦ経路）を活性化することを実証する。
実施例１１．１つ又は複数のサノトランスミッションポリペプチドを発現するＣＴ－２６マウス結腸癌細胞からの細胞代謝回転因子（ＣＴＦ）の骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）に対する効果
骨髄細胞を、ＧＭ－ＣＳＦが十分なＲＰＭＩ培地を用いて、樹状細胞に８日間分化させた。２ｍＬあたり４００，０００個の細胞を、６ウェルプレートに播種した。８日目、骨髄由来樹状細胞（ＢＭＤＣ）を収集し、１００，０００細胞／ウェルを９６ウェルプレートに播種した。次に、ＢＭＤＣを、実施例９に記載の改変されたＣＴ－２６細胞に由来するＣＴＦを含有する培地で刺激した。２４時間後、刺激細胞を収集し、細胞表面マーカーＣＤ８６、ＣＤ４０及びＰＤ－Ｌ１の発現を、フローサイトメトリーによって測定し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＴｅｔ３Ｇ対照と比較してグラフ化した。抗体の供給源は、次の通りであった：ＣＤ８６（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．１０５０４２）；ＣＤ４０（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．１０２９１０）；ＰＤ－Ｌ１（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．１２４３１２）。細胞表面マーカーＣＤ８６、ＣＤ４０及びＰＤ－Ｌ１の発現は、樹状細胞の成熟を示す。
図６に示されているように、試験したＣＴ－２６細胞株の中で、ＴＲＩＦを発現するように改変された細胞から収集した培地のみが（単独で又はＲＩＰＫ３と組み合わせて）、ＣＤ８６、ＣＤ４０、又はＰＤ－Ｌ１の細胞表面発現を高めた。これらの結果は、ＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３の両方を発現するように改変されたＣＴ－２６細胞からのＣＴＦが、樹状細胞の成熟を誘導したことを示す。樹状細胞におけるＣＤ８６及びＣＤ４０の上方制御は、Ｔ細胞を活性化する能力の増加を示す。従って、結果は、ＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３を発現するように改変された癌細胞からのＣＴＦが、樹状細胞の成熟を誘導し、Ｔ細胞を活性化するそれらの能力を増加させることを実証する。
実施例１２．単独での又は抗ＰＤ１抗体と組み合わせたサノトランスミッションポリペプチドの発現の、結腸癌のマウスモデルにおける腫瘍増殖及び生存に対する効果
実施例９に記載のようなＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３サノトランスミッションモジュールを宿すＣＴ－２６マウス結腸癌細胞を、トリプシン処理し、血清不含培地に１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。細胞を、ＢＡＬＢ／ｃマウスの右皮下側腹部に注射した（１００ｍＬ）。ＣＴ－２６細胞の注射後の１１日目から１８日目にかけて、通常の飲料水にドキシサイクリン（Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．Ｄ９８９１）を２ｍｇ／ｍｌで添加し、サノトランスミッションポリペプチドの発現を誘導し、１１日目から１８日目にかけて、Ｂ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒ（Ｔａｋａｒａ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．６３２６２２）を２ｍｇ／ｋｇで、毎日のＩＰ注射によって投与した。１４日目、１７日目及び２１日目、抗ＰＤ１抗体（ＢｉｏＸｃｅｌｌ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．ＢＰ０２７３）及びアイソタイプ対照を投与した。腫瘍が２０００ｍｍ３に達すると、ＩＡＣＵＣガイドラインに従い、又は実験エンドポイントで、マウスを安楽死させた。
図７Ａに示されているように、ＴＲＩＦのみの発現（ＣＴ２６－ＴＦ）により、ＣＴ－２６－Ｔｅｔ３Ｇ対照（Ｔｅｔ３Ｇ－アイソタイプ対照）及びＣＴ２６－ＲＩＰＫ３細胞（ＣＴ２６－Ｐ＿Ｒ３）と比較して、生存率が増加し、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３の組み合わせ（Ｔｒｉｆ＿ＲＩＰＫ３アイソタイプ対照）で、さらにより大きい効果が認められた。図７Ｂに示されているように、ＴＲＩＦを宿すＣＴ－２６細胞（ＣＴ２６－ＴＦ）又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３を宿すＣＴ－２６細胞（ＴＲＩＦ＿ＲＩＰＫ３）を注射したマウスの生存が、抗ＰＤ－１抗体による処置によって増強され、これら処置群の両方は、１００％の生存率を示した（株は重複している）。
別の実験では、実施例１０に記載のＴＲＩＦ＋ＧＳＤＭＥ及びＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ＧＳＤＭＥサノトランスミッションモジュールを宿すＣＴ－２６マウス結腸癌細胞を、トリプシン処理し、血清不含培地に１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。Ｂ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒは、この実験で使用しなかった。細胞を、ＢＡＬＢ／ｃマウスの右皮下側腹部に注射した（１００ｍＬ）。ＣＴ－２６細胞の注射後の１５日目から２１日目にかけて、マウスに、６２５ｍｇ／ｋｇのドキシサイクリンヒクレート（Ｅｎｖｉｇｏ ＴＤ．０１３０６）を添加したテックラドの基本食を与えた。腫瘍が２０００ｍｍ３に達すると、ＩＡＣＵＣガイドラインに従い、又は実験エンドポイントで、マウスを安楽死させた。
図７Ｃに示されているように、ＧＳＤＭＥのＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３と組み合わせた発現は、ＴＲＩＦのみ又はＴＲＩＦ－ＲＩＰＫ３のみを発現する腫瘍を移植したマウスと比較して、生存をさらに増強した。
実施例１３．サノトランスミッションポリペプチドを発現するＵ９３７ヒト骨髄性白血病細胞に対する化学的なカスパーゼ阻害剤の効果
Ｕ９３７ヒト骨髄性白血病細胞及びＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞を、それぞれＡＴＣＣ及びＩｎｖｉｖｏｇｅｎから入手した。Ｕ９３７は、骨髄性白血病細胞株である。ヒトサノトランスミッションポリペプチド（ｔＢｉｄ、カスパーゼ８、ＲＩＰＫ３又はＴＲＩＦ）を発現するＵ９３７細胞を、実施例９及び１０に記載の方法、並びに実施例９に記載のドキシサイクリン誘導発現系を用いて作製した。
ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞は、ＮＦ－ｋＢ又はＩＲＦ経路のいずれかの活性化時、レポータータンパク質を誘導するヒト単核球細胞株である。ヒト単核球細胞株は、ＮＦ－κＢコンセンサス転写応答エレメントの５つのコピー及びｃ－Ｒｅｌ結合部位の３つのコピーに融合されたＩＦＮ－β最小プロモーターによって駆動される分泌胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）レポーター遺伝子を発現する。また、ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞は、５つのＩＦＮ刺激応答エレメントと併せた、ＩＳＧ５４最小プロモーターの制御下での分泌ルシフェラーゼレポーター遺伝子であるＬｕｃｉａ遺伝子を特徴とする。結果として、ＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞は、ＳＥＡＰの活性、及びＩＲＦ経路を監視することにより、分泌ルシフェラーゼ（Ｌｕｃｉａ）の活性を評価することによって、ＮＦ－ｋＢ経路の同時試験を可能にする。
馴化培地を作製するため、５００万個のＵ９３７－ｔｅｔ３Ｇ、Ｕ９３７－ｔＢｉｄ、Ｕ９３７－カスパーゼ８、Ｕ９３７－ＲＩＰＫ３又はＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞を、１０ｃｍのディッシュ内のＲＰＭＩに播種し、続いてドキシサイクリン（１μｇ／ｍＬ）で２４時間処置し、発現を誘導した。Ｂ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒ（１００ｎＭ）を、Ｕ９３７－カスパーゼ８、Ｕ９３７－ＲＩＰＫ３及びＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞培養物に加え、発現及びタンパク質活性化をオリゴマー化を介して促進した。さらに、Ｕ９３７－ＴＲＩＦ細胞を、４μＭのＱ－ＶＤ－Ｏｐｈ（汎カスパーゼ阻害剤）、１０μＭのＧＳＫ８７２（ＲＩＰＫ３阻害剤）又は両方の組み合わせで追加的に処置した。細胞を２４時間インキュベートした後、馴化培地を収集し、濾過滅菌した。
サノトランスミッションポリペプチドのＮＦ－ｋＢ又はＩＲＦレポーター発現に対する効果を測定するため、１００，０００個のＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞／ウェルを、９６ウェル平底プレートに１００μｌの体積で播種した。サノトランスミッションモジュールを発現するＵ９３７細胞から作製した１００μｌの馴化培地を各ウェルに加えた。２４時間のインキュベーション期間後、２０μｌのＴＨＰ１－Ｄｕａｌ細胞培養上清を、平底９６ウェルの白色（不透明）アッセイプレートに移し、プレートリーダーによる発光読み取りの直前に、５０μｌのＱＵＡＮＴＩ－Ｌｕｃアッセイ溶液を各ウェルに加えた。ＮＦ－ｋＢ活性を測定するため、２０μｌのＴＨＰ１－Ｄｕａｌ培養上清を平底９６ウェル透明アッセイプレートに移し、１８０μｌの再懸濁したＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ溶液を各ウェルに加えた。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、次にＳＥＡＰレベルを、６５５ｎｍでプレートリーダーを用いて測定した。
図８Ａ及び図８Ｂに示されているように、カスパーゼ阻害剤（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ）のみ又はＲＩＰＫ３阻害剤との組み合わせ（Ｑ－ＶＤ－Ｏｐｈ＋ＧＳＫ８７２）で処置したＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞からの細胞培養物によるＴＨＰ－１ Ｄｕａｌ細胞の処置により、ＮＦ－ｋＢ活性化及びＩＲＦ活性が大幅に増加した（図８Ａ～８Ｃでは、＋はドキシサイクリンで処置したＵ９３７細胞を示し、＋＋はドキシサイクリン及びＢ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒで処置したＵ９３７細胞を示す）。ＲＩＰＫ３阻害剤のみで処置したＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞からの細胞培地は、ＴＨＰ－１ Ｄｕａｌ細胞のＮＦ－ｋＢ活性化に対する効果をほとんど有さず、ＮＦ－ｋＢ活性化の増加がカスパーゼ阻害に起因することを示した。また、図８Ｂ及び図８Ｃに示されているように、カスパーゼ阻害剤で処置されないＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞からの細胞培地によるＴＨＰ－１ Ｄｕａｌ細胞の処置により、カスパーゼ阻害剤で処置したＵ９３７－ＴＲＩＦ細胞より少ない程度であるが、ＩＲＦ活性が増強された。
まとめると、これらの結果は、ＴＲＩＦを発現するヒト癌細胞から生成されたＣＴＦが免疫細胞内の免疫刺激経路（即ち、ＮＦ－ｋＢ及びＩＲＦ経路）を活性化し、且つカスパーゼ阻害がこの効果を増強することを実証する。
実施例１４．カスパーゼ阻害剤タンパク質を含む組み合わせサノトランスミッションポリペプチドを発現することによる、ＣＴ－２６マウス結腸癌細胞におけるサノトランスミッションの調節
本実施例に記載の実験では、カスパーゼ阻害剤タンパク質の発現の、ＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３を発現する癌細胞におけるサノトランスミッションに対する効果を試験した。
実施例９に記載される、サノトランスミッションポリペプチドＴＲＩＦ及びＲＩＰＫ３を発現するＣＴ２６マウス結腸癌細胞を、（ｉ）デスドメインを含むヒトＦａｓ関連タンパク質（ＦＡＤＤ；受入番号ＮＭ＿００３８２４）のドミナントネガティブバージョン；（ｉｉ）ヒト細胞ＦＬＩＣＥ様阻害タンパク質（ｃＦＬＩＰ；受入番号ＮＭ＿００１１２７１８４．４）の短いバージョン；又は（ｉｉｉ）カスパーゼのウイルス阻害剤（ｖＩＣＡ、ＨＣＭＶ遺伝子ＵＬ３６；受入番号ＮＣ＿００６２７３．２）をコードする遺伝子で形質導入し、カスパーゼ活性を阻害することによってサノトランスミッションを調節した。ＦＡＤＤ－ＤＮ、ｃＦＬＩＰ及びｖＩＣＡを、ｐＬＶ－ＥＦ１ａ－ＭＣＳ－ＩＲＥＳ－Ｐｕｒｏベクター（Ｂｉｏｓｅｔｔｉａ）にそれぞれクローン化し、ＣＴ２６－ＴＲＩＦ－ＲＩＰＫ３発現細胞を形質導入するために使用した。
これらの細胞を播種し、続いてドキシサイクリン（１ｍｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ Ａｌｄｒｉｃｈ，０２１９８９５５２５）で２４時間処置し、発現を促進した。Ｂ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒは、この実験で使用しなかった。製造業者の使用説明書の通り、ＲｅａｌＴｉｍｅ－Ｇｌｏ ＭＴ細胞生存率アッセイキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｃａｔａｌｏｇｕｅ Ｎｏ．Ｇ９７１２）を用いた処置の２４時間後、相対細胞生存率を決定し、相対発光単位（ＲＬＵ）によって測定された相対生存率を示すグラフを作成した。
図９Ａに示されているように、ＣＴ２６－ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３細胞内でのＦＡＤＤ－ＤＮ、ｃＦＬＩＰ又はｖＩＣＡのいずれか１つの発現により、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３の発現によって誘導される癌細胞生存率の減少が弱められた。しかし、ＣＴ２６細胞内でのｃＦＬＩＰ＋ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３又はｖＩＣＡ＋ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３の発現により、癌細胞生存率が、親株のＣＴ２６－Ｔｅｔ３Ｇ細胞株と比較して、ちょうどＴＲＩＦ－ＲＩＰＫ３のみよりも少ない範囲までさらに低下した。図９Ａを参照されたい。
次に、ＣＴＦを含有する培地を、上記のようにＣＴ－２６マウス結腸癌細胞から作製した。次に、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ（商標）細胞を、指定のＣＴＦで２４時間刺激した。細胞培地を収集し、ＱＵＡＮＴＩ－Ｌｕｃ（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ；ｒｅｐ－ｑｌｃ１）アッセイを用いて、ルシフェラーゼ活性を測定した。インターフェロン刺激応答エレメント（ＩＳＲＥ）プロモーターの活性化を、対照細胞株のＴｅｔ３Ｇと比較してグラフ化した。図９Ｂに示されているように、ＴＲＩＦ又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３を発現するＣＴ２６細胞株から収集した培地は、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ細胞内でのＩＲＦレポーターの発現を誘導した。さらに、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３に加えて、ＦＡＤＤ－ＤＮ、ｃＦＬＩＰ又はｖＩＣＡを発現するＣＴ２６細胞からの培地も、Ｊ７７４－Ｄｕａｌ細胞内でＩＲＦレポーターの活性化を誘導した。
上記のＦＡＤＤ－ＤＮ、ｃＦＬＩＰ又はｖＩＣＡサノトランスミッションモジュールを宿すＣＴ－２６－ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３マウス結腸癌細胞を、トリプシン処理し、血清不含培地に１×１０６細胞／ｍＬで再懸濁した。Ｂ／Ｂ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒｉｚｅｒは、この実験で使用しなかった。細胞を、免疫コンピテントＢＡＬＢ／ｃマウスの右皮下側腹部に注射した（１００μＬ）。ＣＴ－２６細胞の注射後の１５日目から２１日目にかけて、マウスに、６２５ｍｇ／ｋｇのドキシサイクリンヒクレート（Ｅｎｖｉｇｏ ＴＤ．０１３０６）を添加したテックラドの基本食を与えた。腫瘍が２０００ｍｍ３に達すると、ＩＡＣＵＣガイドラインに従い、又は実験エンドポイントで、マウスを安楽死させた。
図９Ｃに示されているように、サノトランスミッションモジュール（即ち、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ＦＡＤＤ－ＤＮ、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ｃＦＬＩＰＳ、又はＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３＋ｖＩＣＡ）を発現するすべての腫瘍の増殖は、対照ＣＴ２６－Ｔｅｔ３Ｇ細胞に対して減少した。特に、ＦＡＤＤ－ＤＮ又はｖＩＣＡのＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３と組み合わせた発現により、腫瘍増殖が、親ＣＴ２６－ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３細胞と比較して、さらに減少した。興味深いことに、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３に加えて、ＦＡＤＤ－ＤＮ又はｖＩＣＡを含むサノトランスミッションモジュールは、インビボでの腫瘍増殖の低減に最も有効であったが、ＦＡＤＤ－ＤＮ＋ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３は、インビトロでのＣＴ２６癌細胞の生存率に対する効果を、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３細胞と比較してほとんど有しなかった一方で、ｖＩＣＡ＋ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３の同時発現は、ＴＲＩＦ＋ＲＩＰＫ３と比較して、インビトロで細胞死を増強した。これらの結果は、サノトランスミッションモジュールによる癌細胞死の規模に加えて、これらのモジュールの発現に起因した癌細胞によってもたらされる正確な細胞代謝回転因子（ＣＴＦ）の特性もまた、インビボで腫瘍細胞に対する免疫応答に寄与し得ることを示唆する。

Claims (175)

  1. 標的細胞によるサノトランスミッションを促進する１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むようにエンジニアリングされたウイルス。
  2. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、前記ウイルスに対して異種のものである、請求項１に記載のウイルス。
  3. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、前記標的細胞に対して異種のものである、請求項１又は２に記載のウイルス。
  4. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、サノトランスミッションポリペプチドの前記標的細胞における発現又は活性を増加させることによって、前記標的細胞によるサノトランスミッションを促進する、請求項１～３のいずれか一項に記載のウイルス。
  5. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、サノトランスミッションポリペプチドをコードする、請求項１～４のいずれか一項に記載のウイルス。
  6. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、サノトランスミッションを抑制するポリペプチドの前記標的細胞における発現又は活性を低下させることによって、前記標的細胞によるサノトランスミッションを促進する、請求項１～５のいずれか一項に記載のウイルス。
  7. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、サノトランスミッションを抑制するポリペプチドの前記標的細胞における発現又は活性を低下させるＲＮＡ分子をコードする、請求項１～６のいずれか一項に記載のウイルス。
  8. 前記標的細胞における前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つの発現は、前記標的細胞における細胞ターンオーバー経路を変化させる、請求項１～７のいずれか一項に記載のウイルス。
  9. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、野生型タンパク質又はその機能的断片をコードする、請求項１～８のいずれか一項に記載のウイルス。
  10. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、デスフォールドドメインをコードする、請求項１～９のいずれか一項に記載のウイルス。
  11. 前記デスフォールドドメインは、デスドメイン、パイリンドメイン、デスエフェクタードメイン（ＤＥＤ）、Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＣＡＲＤ）、及びその変異体からなる群から選択される、請求項１０に記載のウイルス。
  12. 前記デスドメインは、Ｆａｓ結合デスドメインタンパク質（ＦＡＤＤ）、Ｆａｓ、腫瘍壊死因子受容体１型関連デスドメイン（ＴＲＡＤＤ）、腫瘍壊死因子受容体１型（ＴＮＦＲ１）、及びその変異体からなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項１１に記載のウイルス。
  13. 前記パイリンドメインは、ＮＬＲファミリーパイリン領域含有３（ＮＬＲＰ３）及びアポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）からなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項１１に記載のウイルス。
  14. 前記デスエフェクタードメイン（ＤＥＤ）は、Ｆａｓ結合デスドメインタンパク質（ＦＡＤＤ）、カスパーゼ－８、及びカスパーゼ－１０からなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項１１に記載のウイルス。
  15. 前記ＣＡＲＤは、ＲＩＰ関連ＩＣＨ１／ＣＥＤ３－相同タンパク質（ＲＡＩＤＤ）、アポトーシス関連スペック様タンパク質（ＡＳＣ）、ミトコンドリア抗ウイルスシグナル伝達タンパク質（ＭＡＶＳ）、カスパーゼ－１、及びその変異体からなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項１１に記載のウイルス。
  16. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメインをコードする、請求項１～１５のいずれか一項に記載のウイルス。
  17. 前記ＴＩＲドメインは、ミエロイド分化一次応答タンパク質８８（ＭｙＤ８８）、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメイン含有アダプター誘導インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）、Ｔｏｌｌ様受容体４（ＴＬＲ４）、ＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質（ＴＩＲＡＰ）、及び転鎖関連膜タンパク質（ＴＲＡＭ）からなる群から選択されるタンパク質に由来する、請求項１６に記載のウイルス。
  18. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、任意の１つ又は複数の受容体相互作用セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ３（ＲＩＰＫ３）、Ｚ－ＤＮＡ結合タンパク質１（ＺＢＰ１）、混合系統キナーゼドメイン様偽キナーゼ（ＭＬＫＬ）、Ｔｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメイン含有アダプター誘導インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）、ＴＩＲドメイン及びＲＨＩＭドメインのみを含むＴＲＩＦのＮ末端切断型、インターフェロン調節因子３（ＩＲＦ３）、Ｆａｓ結合デスドメインタンパク質（ＦＡＤＤ）、切断ＦＡＤＤ、腫瘍壊死因子受容体１型関連デスドメイン（ＴＲＡＤＤ）、及び細胞性ＦＬＩＣＥ（ＦＡＤＤ様ＩＬ－１β変換酵素）抑制タンパク質（ｃ－ＦＬＩＰ）をコードする、請求項１～１７のいずれか一項に記載のウイルス。
  19. ＺＢＰ１をコードする前記ポリヌクレオチドは、受容体相互作用タンパク質ホモタイプ相互作用モチーフ（ＲＨＩＭ）Ｃの欠失、ＲＨＩＭ Ｄの欠失、及びＺα１ドメインのＮ末端の欠失を含む、請求項１８に記載のウイルス。
  20. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、受容体相互作用セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ１（ＲＩＰＫ１）の発現又は活性を阻害する、請求項１～１９のいずれか一項に記載のウイルス。
  21. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、膜融合タンパク質をコードする、請求項１～２０のいずれか一項に記載のウイルス。
  22. 前記膜融合タンパク質は、テナガザル白血病ウイルス（ＧＡＬＶ）由来の糖タンパク質であり、Ｒ膜貫通ペプチドが変異している又は除去されている（ＧＡＬＶ－Ｒ－）、請求項２１に記載のウイルス。
  23. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、免疫刺激タンパク質をコードする、請求項１～２２のいずれか一項に記載のウイルス。
  24. 前記免疫刺激タンパク質は、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ－β）のアンタゴニスト、コロニー刺激因子、サイトカイン、又は免疫チェックポイントモジュレーターである、請求項２３に記載のウイルス。
  25. 前記コロニー刺激因子は、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）である、請求項２４に記載のウイルス。
  26. ＧＭ－ＣＳＦをコードする前記ポリヌクレオチドは、前記ウイルスのＩＣＰ３４．５遺伝子座に挿入される、請求項２５に記載のウイルス。
  27. 前記サイトカインは、インターロイキンである、請求項２４に記載のウイルス。
  28. 前記インターロイキンは、ＩＬ－１α、ＩＬ－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－１２、ＩＬ－１５、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＩＬ－２４、ＩＬ－３３、ＩＬ－３６α、ＩＬ－３６β、及びＩＬ－３６γからなる群から選択される、請求項２７に記載のウイルス。
  29. 前記サイトカインは、Ｉ型インターフェロン、インターフェロンガンマ、ＩＩＩ型インターフェロン、及びＴＮＦアルファからなる群から選択される、請求項２４に記載のウイルス。
  30. 前記免疫チェックポイントモジュレーターは、抑制性免疫チェックポイントタンパク質のアンタゴニストである、請求項２４に記載のウイルス。
  31. 前記抑制性免疫チェックポイントタンパク質は、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＶＩＳＴＡ、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＬＡＧ３、Ｔｉｍ３、ＢＴＬＡ、及びＣＴＬＡ４からなる群から選択される、請求項３０に記載のウイルス。
  32. 前記免疫チェックポイントモジュレーターは、刺激性免疫チェックポイントタンパク質のアゴニストである、請求項２４に記載のウイルス。
  33. 前記刺激性免疫チェックポイントタンパク質は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、及び４－１ＢＢからなる群から選択される、請求項３２に記載のウイルス。
  34. 前記刺激性免疫チェックポイントタンパク質の前記アゴニストは、ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）、ＩＣＯＳリガンド、ＧＩＴＲリガンド、４－１－ＢＢリガンド、０Ｘ４０リガンド、及びそのいずれかの修飾バージョンから選択される、請求項３２に記載のウイルス。
  35. 前記刺激性免疫チェックポイントタンパク質の前記アゴニストは、ＣＤ４０、ＩＣＯＳ、ＧＩＴＲ、４－１－ＢＢ、及び０Ｘ４０から選択されるタンパク質の抗体アゴニストである、請求項３２に記載のウイルス。
  36. 前記免疫刺激タンパク質は、ｆｌｔ３リガンド又はｆｌｔ３の抗体アゴニストである、請求項２３に記載のウイルス。
  37. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、自殺遺伝子である、請求項１～３６のいずれか一項に記載のウイルス。
  38. 前記自殺遺伝子は、ＦＫ５０６結合タンパク質（ＦＫＢＰ）－ＦＡＳ、ＦＫＢＰ－カスパーゼ－８、ＦＫＢＰ－カスパーゼ－９、シトシンデアミナーゼ（ＣＤａｓｅ）活性を有するポリペプチド、チミジンキナーゼ活性を有するポリペプチド、ウラシルホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＵＰＲＴａｓｅ）活性を有するポリペプチド、及びプリンヌクレオシドホスホリラーゼ活性を有するポリペプチドからなる群から選択されるポリペプチドをコードする、請求項３７に記載のウイルス。
  39. ＣＤａｓｅ活性を有する前記ポリペプチドは、ＦＣＹ１、ＦＣＡ１、又はＣｏｄＡである、請求項３８に記載のウイルス。
  40. ＵＰＲＴａｓｅ活性を有する前記ポリペプチドは、ＦＵＲ１又はその変異体である、請求項３８に記載のウイルス。
  41. ＦＵＲ１の前記変異体は、ＦＵＲ１Δ１０５である、請求項４０に記載のウイルス。
  42. 前記自殺遺伝子は、ＣＤａｓｅ及びＵＰＲＴａｓｅ活性を有するキメラタンパク質をコードする、請求項３７に記載のウイルス。
  43. 前記キメラタンパク質は、ｃｏｄＡ：：ｕｐｐ、ＦＣＹ１：：ＦＵＲ１、ＦＣＹｌ：：ＦＵＲ１Δ１０５（ＦＣＵ１）、及びＦＣＵ１－８ポリペプチドからなる群から選択される、請求項４２に記載のウイルス。
  44. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、ガスダーミン－Ａ（ＧＳＤＭ－Ａ）、ガスダーミン－Ｂ（ＧＳＤＭ－Ｂ）、ガスダーミン－Ｃ（ＧＳＤＭ－Ｃ）、ガスダーミン－Ｄ（ＧＳＤＭ－Ｄ）、ガスダーミン－Ｅ（ＧＳＤＭ－Ｅ）、二量体化ドメインを有するアポトーシス関連スペック様タンパク質含有Ｃ末端カスパーゼ動員ドメイン（ＡＳＣ－ＣＡＲＤ）、及びその突然変異体からなる群から選択されるポリペプチドをコードする、請求項１～４３のいずれか一項に記載のウイルス。
  45. サノトランスミッションを促進する前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、２つ以上の異なるサノトランスミッションポリペプチドをコードし、前記２つ以上のサノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、Ｓｈａｒｐｉｎ、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミンＡ、ガスダーミンＢ、ガスダーミンＣ、ガスダーミンＤ、ガスダーミンＥ、腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリー（ＴＮＦＳＦ）タンパク質、その変異体、及びその機能的断片からなる群から選択される、請求項１～４４のいずれか一項に記載のウイルス。
  46. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、少なくとも２つの前記サノトランスミッションポリペプチドを含むキメラタンパク質をコードする、請求項４５に記載のウイルス。
  47. 前記ポリヌクレオチドの少なくとも１つは、前記２つ以上の異なるサノトランスミッションポリペプチドをコードする単一の転写物として転写される、請求項４５に記載のウイルス。
  48. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、ＮＦ－ｋＢを活性化する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のウイルス。
  49. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のウイルス。
  50. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、外因性アポトーシスを促進する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のウイルス。
  51. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも２つは、プログラム壊死を促進する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のウイルス。
  52. 前記１つ又は複数のサノトランスミッションポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のウイルス。
  53. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、外因性アポトーシスを促進する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のウイルス。
  54. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＮＦ－ｋＢを活性化し、前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死を促進する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のウイルス。
  55. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、外因性アポトーシスを促進する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のウイルス。
  56. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化し、前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死を促進する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のウイルス。
  57. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、外因性アポトーシスを促進し、前記１つ又は複数のサノトランスミッションポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、プログラム壊死を促進する、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のウイルス。
  58. 前記プログラム壊死は、ネクロトーシスを含む、請求項５１、５４、５６、及び５７のいずれか一項に記載のウイルス。
  59. 前記プログラム壊死は、ピロトーシスを含む、請求項５１、５４、５６、及び５７のいずれか一項に記載のウイルス。
  60. ＮＦ－ｋＢを活性化する前記サノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＴＲＡＤＤ、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、ＸＩＡＰ、ＮＯＤ２、ＭｙＤ８８、ＴＲＡＭ、ＨＯＩＬ、ＨＯＩＰ、Ｓｈａｒｐｉｎ、ＩＫＫｇ、ＩＫＫａ、ＩＫＫｂ、ＲｅｌＡ、ＭＡＶＳ、ＲＩＧＩ、ＭＤＡ５、Ｔａｋ１、ＴＮＦＳＦタンパク質、及びその機能的断片からなる群から選択される、請求項４８及び５２～５４のいずれか一項に記載のウイルス。
  61. ＩＲＦ３及び／又はＩＲＦ７を活性化する前記サノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＭｙＤ８８、ＭＡＶＳ、ＴＢＫ１、ＩＫＫｅ、ＩＲＦ３、ＩＲＦ７、ＩＲＦ１、ＴＲＡＦ３、及びその機能的断片からなる群から選択される、請求項４９、５２、５５、及び５６のいずれか一項に記載のウイルス。
  62. 外因性アポトーシスを促進する前記サノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＲＩＰＫ１、カスパーゼ、ＦＡＤＤ、ＴＲＡＤＤ、ＴＮＦＲ１、ＴＲＡＩＬＲ１、ＴＲＡＩＬＲ２、ＦＡＳ、Ｂａｘ、Ｂａｋ、Ｂｉｍ、Ｂｉｄ、Ｎｏｘａ、Ｐｕｍａ、及びその機能的断片からなる群から選択される、請求項５０、５３、５５、及び５７のいずれか一項に記載のウイルス。
  63. プログラム壊死を促進する前記サノトランスミッションポリペプチドは、ＴＲＩＦ、ＺＢＰ１、ＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＭＬＫＬ、ガスダーミン、及びその機能的断片からなる群から選択される、請求項５１、５４、５６、及び５７のいずれか一項に記載のウイルス。
  64. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片を含む、請求項１～６３のいずれか一項に記載のウイルス。
  65. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含む、請求項１～６３のいずれか一項に記載のウイルス。
  66. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片を含み、前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含む、請求項１～６３のいずれか一項に記載のウイルス。
  67. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片を含み、前記１つ又は複数のポリヌクレオチドによってコードされる前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含む、請求項１～６３のいずれか一項に記載のウイルス。
  68. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、カスパーゼ活性を阻害するポリペプチドをさらにコードする、請求項１～６７のいずれか一項に記載のウイルス。
  69. カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドは、ＦＡＤＤドミナントネガティブ突然変異体（ＦＡＤＤ－ＤＮ）、ｃＦＬＩＰ、ｖＩＣＡ、カスパーゼ８ドミナントネガティブ突然変異体（Ｃａｓｐ８－ＤＮ）、ｃＩＡＰ１、ｃＩＡＰ２、Ｔａｋ１、ＩＫＫ、及びその機能的断片からなる群から選択される、請求項６８に記載のウイルス。
  70. カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドは、ＦＡＤＤ－ＤＮである、請求項６８に記載のウイルス。
  71. カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドは、ｃＦＬＩＰである、請求項６８に記載のウイルス。
  72. カスパーゼ活性を阻害する前記ポリペプチドは、ｖＩＣＡである、請求項６８に記載のウイルス。
  73. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、少なくとも１つのガスダーミン又はその機能的断片をコードする、請求項１～７２のいずれか一項に記載のウイルス。
  74. 前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＴＲＩＦ又はその機能的断片を含み、前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含み、前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその機能的断片を含む、請求項７３に記載のウイルス。
  75. 前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＭＡＶＳ又はその機能的断片を含み、前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ＲＩＰＫ３又はその機能的断片を含み、前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、ガスダーミン又はその機能的断片を含む、請求項７３に記載のウイルス。
  76. 前記ガスダーミンは、ガスダーミンＥ又はその機能的断片である、請求項７４又は７５に記載のウイルス。
  77. 前記１つ又は複数のポリヌクレオチドは、二量体化ドメインをコードするポリヌクレオチドをさらに含む、請求項１～７６のいずれか一項に記載のウイルス。
  78. 前記サノトランスミッションポリペプチドの少なくとも１つは、二量体化ドメインをさらに含む融合タンパク質内に含まれる、請求項１～７７のいずれか一項に記載のウイルス。
  79. 前記二量体化ドメインは、前記サノトランスミッションポリペプチドに対して異種のものである、請求項７７又は７８に記載のウイルス。
  80. 請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物。
  81. １つ又は複数のサノトランスミッションポリヌクレオチドを対象に送達するための方法であって、請求項８０に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  82. 対象においてサノトランスミッションを促進するための方法であって、サノトランスミッションを促進するのに十分な量で及び時間、請求項８０に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  83. 免疫応答の増加をそれを必要とする対象において行うための方法であって、前記対象において免疫応答を増加させるのに十分な量で及び時間、請求項８０に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  84. 癌の処置をそれを必要とする対象において行うための方法であって、前記癌を処置するのに十分な量で及び時間、請求項８０に記載の医薬組成物を前記対象に投与することを含む、方法。
  85. 前記医薬組成物を前記対象に投与することは、前記対象において癌細胞の増殖を低下させる、請求項８４に記載の方法。
  86. 前記癌細胞の前記増殖は、前記対象に投与された癌の治療法に起因する前記癌細胞の過剰増殖である、請求項８５に記載の方法。
  87. 前記医薬組成物を前記対象に投与することは、前記対象において癌細胞の転移を低下させる、請求項８４～８６のいずれか一項に記載の方法。
  88. 前記医薬組成物を前記対象に投与することは、前記対象において腫瘍の血管新生を低下させる、請求項８４～８７のいずれか一項に記載の方法。
  89. 癌を処置することは、任意の１つ又は複数の腫瘍量の減少、腫瘍サイズの減少、腫瘍増殖の阻害、処置前の進行性癌を有する対象における癌の安定化の達成、前記癌が進行するまでの時間の延長、及び生存期間の延長を含む、請求項８４～８８のいずれか一項に記載の方法。
  90. 前記医薬組成物は、前記対象に静脈内投与される、請求項８１～８９のいずれか一項に記載の方法。
  91. 前記医薬組成物は、前記対象に腫瘍内投与される、請求項８１～８９のいずれか一項に記載の方法。
  92. 前記対象は、以前に、免疫療法により処置された、請求項８１～９１のいずれか一項に記載の方法。
  93. 前記癌は、免疫療法に応答しない、請求項８４～９２のいずれか一項に記載の方法。
  94. 前記癌は、免疫療法に応答する癌である、請求項８４～９２のいずれか一項に記載の方法。
  95. 前記対象への前記医薬組成物の投与は、免疫療法を投与するが、前記ウイルスを投与しない対象と比較して、前記免疫療法に対する前記癌の応答を改善する、請求項８４～９４のいずれか一項に記載の方法。
  96. 前記免疫療法は、免疫チェックポイント療法である、請求項９５に記載の方法。
  97. 前記免疫チェックポイント療法は、免疫チェックポイント阻害剤療法である、請求項９６に記載の方法。
  98. 前記癌は、癌腫、肉腫、リンパ腫、黒色腫、及び白血病から選択される、請求項８４～９７のいずれか一項に記載の方法。
  99. 前記癌は、固形腫瘍である、請求項８４～９７のいずれか一項に記載の方法。
  100. 前記癌は、黒色腫、子宮頸癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、精巣癌、尿路上皮癌、膀胱癌、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、肉腫、結腸直腸腺癌、消化管間質腫瘍、胃食道癌、結腸直腸癌膵臓癌、腎臓癌、肝細胞がん、悪性中皮腫、白血病、リンパ腫、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、移行上皮癌、神経芽細胞腫、形質細胞腫瘍、ウィルムス腫瘍、及び肝細胞癌からなる群から選択される、請求項８４～９７のいずれか一項に記載の方法。
  101. 前記癌は、結腸癌である、請求項８４～９７のいずれか一項に記載の方法。
  102. 前記方法は、抗腫瘍剤を前記対象に投与することをさらに含む、請求項８４～１０１のいずれか一項に記載の方法。
  103. 前記抗腫瘍剤は、化学療法剤である、請求項１０２に記載の方法。
  104. 前記抗腫瘍剤は、生物学的製剤である、請求項１０２に記載の方法。
  105. 前記生物学的製剤は、抗原結合タンパク質である、請求項１０４に記載の方法。
  106. 前記抗腫瘍剤は、免疫療法剤である、請求項１０２に記載の方法。
  107. 前記免疫療法剤は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）アゴニスト、細胞ベースの治療法、サイトカイン、癌ワクチン、及び免疫チェックポイント分子の免疫チェックポイントモジュレーターからなる群から選択される、請求項１０６に記載の方法。
  108. 前記ＴＬＲアゴニストは、コーリーの毒及びウシ型弱毒結核菌ワクチン（ＢＣＧ）から選択される、請求項１０７に記載の方法。
  109. 前記細胞ベースの治療法は、キメラ抗原受容体Ｔ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）療法である、請求項１０７に記載の方法。
  110. 前記免疫チェックポイント分子は、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４０、ＣＤ１２２、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、４－１ＢＢ、ＡＤＯＲＡ２Ａ、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４、ＢＴＬＡ、ＣＴＬＡ－４、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＬＡＧ－３、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－Ｌ２、ＴＩＭ－３、及びＶＩＳＴＡから選択される、請求項１０７に記載の方法。
  111. 前記免疫チェックポイント分子は、刺激性免疫チェックポイント分子であり、前記免疫チェックポイントモジュレーターは、前記刺激性免疫チェックポイント分子のアゴニストである、請求項１０７に記載の方法。
  112. 前記免疫チェックポイント分子は、抑制性免疫チェックポイント分子であり、前記免疫チェックポイントモジュレーターは、前記抑制性免疫チェックポイント分子のアンタゴニストである、請求項１０７に記載の方法。
  113. 前記免疫チェックポイントモジュレーターは、小分子、阻害性ＲＮＡ、アンチセンス分子、及び免疫チェックポイント分子結合タンパク質から選択される、請求項１０７に記載の方法。
  114. 前記免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－１であり、前記免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－１阻害剤である、請求項１０７に記載の方法。
  115. 前記ＰＤ－１阻害剤は、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、ピジリズマブ、ＳＨＲ－１２１０、ＭＥＤＩ０６８０Ｒ０１、ＢＢｇ－Ａ３１７、ＴＳＲ－０４２、ＲＥＧＮ２８１０、及びＰＦ－０６８０１５９１から選択される、請求項１１４に記載の方法。
  116. 前記免疫チェックポイント分子は、ＰＤ－Ｌ１であり、前記免疫チェックポイントモジュレーターは、ＰＤ－Ｌ１阻害剤である、請求項１０７に記載の方法。
  117. 前記ＰＤ－Ｌ１阻害剤は、デュルバルマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、ＭＤＸ－１１０５、ＡＭＰ－２２４、及びＬＹ３３０００５４から選択される、請求項１１６に記載の方法。
  118. 前記免疫チェックポイント分子は、ＣＴＬＡ－４であり、前記免疫チェックポイントモジュレーターは、ＣＴＬＡ－４阻害剤である、請求項１０７に記載の方法。
  119. 前記ＣＴＬＡ－４阻害剤は、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＪＭＷ－３Ｂ３、及びＡＧＥＮ１８８４から選択される、請求項１１８に記載の方法。
  120. 前記抗腫瘍剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤である、請求項１０２に記載の方法。
  121. 前記ヒストンデアセチラーゼ阻害剤は、ヒドロキサム酸、ベンズアミド、環状テトラペプチド、デプシペプチド、求電子性ケトン、又は脂肪族化合物である、請求項１２０に記載の方法。
  122. 前記ヒドロキサム酸は、ボリノスタット（ＳＡＨＡ）、ベリノスタット（ＰＸＤ１０１）、ＬＡＱ８２４、トリコスタチンＡ、又はパノビノスタット（ＬＢＨ５８９）である、請求項１２１に記載の方法。
  123. 前記ベンズアミドは、エンチノスタット（ＭＳ－２７５）、０１９９４、又はモセチノスタット（ＭＧＣＤ０１０３）である、請求項１２１に記載の方法。
  124. 前記環状テトラペプチドは、トラポキシンＢである、請求項１２１に記載の方法。
  125. 脂肪酸は、フェニル酪酸又はバルプロ酸である、請求項１２１に記載の方法。
  126. 前記ウイルスは、アデノウイルス又はアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ではない、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５のいずれか一項に記載の方法。
  127. 前記ウイルスは、細胞溶解性である、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５のいずれか一項に記載の方法。
  128. 前記ウイルスは、優先的に分裂細胞に感染する、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５のいずれか一項に記載の方法。
  129. 前記ウイルスは、以前に感染した宿主に再感染することができる、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５のいずれか一項に記載の方法。
  130. 前記ウイルスは、合成多量体化ドメインをコードするポリヌクレオチドを含まない、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５のいずれか一項に記載の方法。
  131. 前記ウイルスは、ワクシニアウイルスではない、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５のいずれか一項に記載の方法。
  132. 前記ウイルスは、ＴＲＩＦをコードするポリヌクレオチドを含まない、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５のいずれか一項に記載の方法。
  133. 免疫刺激性細胞ターンオーバー経路は、前記標的細胞において誘導される、請求項８１～１２５のいずれか一項に記載の方法。
  134. 前記免疫刺激性細胞ターンオーバー経路は、ネクロトーシス、外因性アポトーシス、フェロトーシス、ピロトーシス、及びその組み合わせからなる群から選択される、請求項１３３に記載の方法。
  135. 前記標的細胞は、前記免疫刺激性細胞ターンオーバー経路が欠乏している、請求項１３３又は１３４に記載の方法。
  136. 前記標的細胞は、１つ又は複数の受容体相互作用セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ３（ＲＩＰＫ１）をコードする遺伝子、受容体相互作用セリン／トレオニン－プロテインキナーゼ３（ＲＩＰＫ３）をコードする遺伝子、Ｚ－ＤＮＡ結合タンパク質１（ＺＢＰ１）をコードする遺伝子、混合系統キナーゼドメイン様偽キナーゼ（ＭＬＫＬ）をコードする遺伝子、及びＴｏｌｌ／インターロイキン－１受容体（ＴＩＲ）ドメイン含有アダプター誘導インターフェロン－β（ＴＲＩＦ）をコードする遺伝子において不活性化突然変異を有する、請求項１３５に記載の方法。
  137. 前記標的細胞は、１つ又は複数のＲＩＰＫ１、ＲＩＰＫ３、ＺＢＰ１、ＴＲＩＦ、及びＭＬＫＬの発現又は活性が低下している、請求項１３５に記載の方法。
  138. 前記標的細胞は、１つ又は複数のＲＩＰＫ１をコードする遺伝子、ＲＩＰＫ３をコードする遺伝子、ＺＢＰ１をコードする遺伝子、ＴＲＩＦをコードする遺伝子、及びＭＬＫＬをコードする遺伝子のコピー数が減っている、請求項１３５に記載の方法。
  139. 前記標的細胞は、癌細胞、免疫細胞、内皮細胞、及び線維芽細胞からなる群から選択される、請求項１３３～１３８のいずれか一項に記載の方法。
  140. 前記標的細胞は、癌細胞である、請求項１３９に記載の方法。
  141. 前記癌は、転移癌である、請求項１４０に記載の方法。
  142. 前記ウイルスは、腫瘍溶解性ウイルスである、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５及び１３３～１４１のいずれか一項に記載の方法。
  143. 前記ウイルスは、ＤＮＡ複製ウイルスである、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５及び１３３～１４１のいずれか一項に記載の方法。
  144. 前記ウイルスは、ＤＮＡ複製腫瘍溶解性ウイルスである、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５及び１３３～１４１のいずれか一項に記載の方法。
  145. 前記ウイルスは、優先的に標的細胞に感染する、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５及び１３３～１４１のいずれか一項に記載の方法。
  146. 前記ウイルスは、癌細胞によるサノトランスミッションを阻害する１つ又は複数の内在性ウイルス遺伝子において不活性化突然変異を含む、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５及び１３３～１４１のいずれか一項に記載の方法。
  147. 前記ウイルスは、少なくとも４ｋｂの異種ポリヌクレオチドを標的細胞の中に運搬することができる、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５及び１３３～１４１のいずれか一項に記載の方法。
  148. 前記ウイルスは、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）である、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５及び１３３～１４１のいずれか一項に記載の方法。
  149. 前記ＨＳＶは、ＨＳＶ１である、請求項１４８に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  150. 前記ＨＳＶ１は、Ｋｏｓ、Ｆ１、ＭａｃＩｎｔｙｒｅ、ＭｃＫｒａｅ、及び関連する株からなる群から選択される、請求項１４９に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  151. 前記ＨＳＶは、ＩＣＰ３４．５、ＩＣＰ４７、ＵＬ２４、ＵＬ５５、ＵＬ５６からなる群から選択される１つ又は複数の遺伝子が欠損している、請求項１４８～１５０のいずれか一項に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  152. 各ＩＣＰ３４．５コード遺伝子は、最初期（ＩＥ）プロモーターに作動可能に連結されたＵＳ １１コード遺伝子を含むポリヌクレオチドカセットで置き換えられる、請求項１５１に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  153. 前記ＨＳＶは、ワクシニアウイルスＥ３Ｌ遺伝子のΔＺα突然変異形態を含む、請求項１４８～１５２のいずれか一項に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  154. 前記ＨＳＶは、ＩＣＰ６の１つ又は複数の機能が欠損している、請求項１４８～１５３のいずれか一項に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  155. 前記ＩＣＰ６は、受容体相互作用タンパク質ホモタイプ相互作用モチーフ（ＲＨＩＭ）ドメインの突然変異を有する、請求項１５４に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  156. 前記ＩＣＰ６は、カスパーゼ－８結合を阻害するＣ末端の１つ又は複数の突然変異を有する、請求項１５４又は１５５に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  157. 前記ＨＳＶは、最初期遺伝子としてＵＳ１１遺伝子を発現する、請求項１５４～１５６のいずれか一項に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  158. 前記ＩＣＰ４７遺伝子は、ＵＳ１１遺伝子がＩＣＰ４７最初期プロモーターのコントロール下となるように、欠失している、請求項１５４～１５６のいずれか一項に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  159. 前記ウイルスは、ポックスウイルス科に属する、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５及び１３３～１４１のいずれか一項に記載の方法。
  160. ポックスウイルス科に属する前記ウイルスは、粘液腫ウイルス、ヤバ様疾患ウイルス、ラクーンポックスウイルス、オルフウイルス、及び牛痘ウイルスからなる群から選択される、請求項１５９に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  161. 前記ウイルスは、ポックスウイルス科のコードポックスウイルス亜科に属する、請求項１５９に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  162. 前記ウイルスは、コードポックスウイルス亜科のオルソポックスウイルス属に属する、請求項１６１に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  163. 前記ウイルスは、オルソポックスウイルス属のワクシニアウイルス種に属する、請求項１６２に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  164. 前記ワクシニアウイルスは、Ｄａｉｒｅｎｌ、ＩＨＤ－Ｊ、Ｌ－ＩＰＶ、ＬＣ１６Ｍ８、ＬＣ１６ＭＯ、Ｌｉｓｔｅｒ、ＬＩＶＰ、Ｔａｓｈｋｅｎｔ、ＷＲ ６５－１６、Ｗｙｅｔｈ、Ａｎｋａｒａ、Ｃｏｐｅｎｈａｇｅｎ、Ｔｉａｎ Ｔａｎ、及びＷＲからなる群から選択される株である、請求項１６３に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  165. 前記ワクシニアウイルスは、チミジンキナーゼ（ＴＫ）活性を欠くようにエンジニアリングされる、請求項１６３又は１６４に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  166. 前記ワクシニアウイルスは、ＴＫ活性を低下させる又は排除するＪ２Ｒ遺伝子における不活性化突然変異又は欠失を有する、請求項１６３～１６５のいずれか一項に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  167. 前記ワクシニアウイルスは、リボヌクレオチドレダクターゼ（ＲＲ）活性を欠くようにエンジニアリングされる、請求項１６３～１６６のいずれか一項に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  168. 前記ワクシニアウイルスは、ＲＲ活性を低下させる又は排除するＩ４Ｌ及びＦ４Ｌ遺伝子から選択される遺伝子における不活性化突然変異又は欠失を有する、請求項１６７に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  169. 前記ワクシニアウイルスは、Ｅ３Ｌ遺伝子が欠損している、請求項１６３～１６８のいずれか一項に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  170. 前記Ｅ３Ｌ遺伝子は、前記癌細胞におけるネクロトーシスの誘導をもたらす突然変異を有する、請求項１６９に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  171. 前記ウイルスは、アデノウイルスである、請求項１～７９のいずれか一項に記載のウイルス、請求項８０に記載の医薬組成物、又は請求項８１～１２５及び１３３～１４１のいずれか一項に記載の方法。
  172. 前記アデノウイルスは、Ａｄ５／Ｆ３５である、請求項１７１に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  173. 前記アデノウイルスは、アデノウイルス初期領域１Ａ（Ｅ１Ａ）において欠失を含む、請求項１７１又は１７２に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  174. 前記アデノウイルスは、アデノウイルス初期領域１Ｂ（Ｅ１Ｂ）において欠失を含む、請求項１７１～１７３のいずれか一項に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
  175. 前記アデノウイルスは、ファイバー－Ｈループの中にエンジニアリングして入れられたＡｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐ（ＲＧＤ）－モチーフを有する、請求項１７１～１７４のいずれか一項に記載のウイルス、医薬組成物、又は方法。
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