CN114846015A - 用作t细胞激活剂的经取代的杂芳基化合物 - Google Patents

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Abstract

公开了式(I)的化合物：(I)或其盐，其中：X是CR6或N；Y是CR3或N；R1、R2、R3、R4、R5、R6和m是本文定义的。还公开了使用此类化合物抑制二酰甘油激酶α(DGKα)和二酰甘油激酶ζ(DGKζ)中之一或两者的活性的方法以及包含此类化合物的药物组合物。这些化合物可用于治疗病毒感染和增殖性障碍，诸如癌症。

Description

用作T细胞激活剂的经取代的杂芳基化合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年12月23日提交的印度临时申请号201911053558的权益，将其以其整体并入本文。
说明书
本发明总体上涉及激活T细胞、促进T细胞增殖和/或展现出抗肿瘤活性的经取代的杂芳基化合物。本文提供了经取代的杂芳基化合物、包含此类化合物的组合物、及其使用方法。本发明进一步涉及包含根据本发明的至少一种化合物的药物组合物，其可用于治疗增殖性障碍(诸如癌症)和病毒感染。
背景技术
人癌症具有许多的遗传和表观遗传改变，产生了潜在地可被免疫系统识别的新抗原(Sjoblom等人,(2006)Science 314:268-74)。由T淋巴细胞和B淋巴细胞构成的适应性免疫系统具有强大的抗癌潜力，具有广泛的能力和精确的特异性以响应多样的肿瘤抗原。此外，免疫系统展现了相当大的可塑性和记忆组分。成功地利用适应性免疫系统的所有这些属性将使得免疫疗法在所有癌症治疗方式中是独特的。然而，尽管在临床前模型和患者中观察到对癌症的内源性免疫应答，但是这种应答是无效的，并且已确立的癌症被认为是“自身”的并且被免疫系统所耐受。通过促成这种耐受状态，肿瘤可能利用若干种不同的机制来主动破坏抗肿瘤免疫力。这些机制包括功能异常的T细胞信号传导(Mizoguchi等人,(1992)Science 258:1795-98)、抑制性调节细胞(Facciabene等人,(2012)Cancer Res.72:2162-71)以及肿瘤对内源“免疫检查点”的共同选择(co-opting)以逃避免疫破坏，所述免疫检查点用于下调适应性免疫应答的强度并且保护正常组织免受的附带损害(Topalian等人,(2012)Curr.Opin.Immunol.24:1-6；Mellman等人(2011)Nature 480:480-489)。
二酰甘油激酶(DGK)是介导二酰甘油向磷脂酸转化从而终止通过TCR信号传导通路传播的T细胞功能的脂质激酶。因此，DGK用作细胞内检查点，并且对DGK的抑制预期增强T细胞信号传导通路和T细胞激活。支持性证据包括显示出高反应性T细胞表型和改善的抗肿瘤免疫活性的DGKα或DGKζ的敲除小鼠模型(Riese M.J.等人,Journal of BiologicalChemistry,(2011)7:5254-5265；Zha Y等人,Nature Immunology,(2006)12:1343；Olenchock B.A.等人,(2006)11:1174-81)。此外，观察到从人肾细胞癌患者分离的肿瘤浸润淋巴细胞过表达DGKα，从而导致受抑制的T细胞功能(Prinz,P.U.等人,J Immunology(2012)12:5990-6000)。因此，DGKα和DGKζ被视为癌症免疫疗法的靶标(Riese M.J.等人,Front Cell Dev Biol.(2016)4:108；Chen,S.S.等人,Front Cell Dev Biol.(2016)4:130；Avila-Flores,A.等人,Immunology and Cell Biology(2017)95:549-563；Noessner,E.,Front Cell Dev Biol.(2017)5:16；Krishna,S.,等人,Front Immunology(2013)4:178；Jing,W.等人,Cancer Research(2017)77:5676-5686)。
仍然需要可用作DGKα和DGKζ中之一或两者的抑制剂的化合物。另外，仍然需要可用作DGKα和DGKζ中之一或两者的抑制剂的化合物，所述化合物具有相对于其他二酰甘油激酶、蛋白激酶和/或其他脂质激酶的选择性。
因此，安全且在恢复T细胞激活、降低抗原阈值、增强抗肿瘤功能和/或克服一种或多种内源性免疫检查点(诸如PD-1、LAG-3和TGFβ)的抑制作用方面有效的药剂对于治疗患有增殖性障碍(诸如癌症)以及病毒感染的患者而言将是重要的补充。
发明内容
申请人已经发现了具有作为DGKα和DGKζ中之一或两者的抑制剂的活性的化合物。此外，申请人已经发现了具有作为DGKα和DGKζ中之一或两者的抑制剂的活性并且具有相对于其他二酰甘油激酶、蛋白激酶和/或其他脂质激酶的选择性的化合物。提供的这些化合物可用作药物，所述药物具有希望的稳定性、生物利用度、治疗指数和对其成药性重要的毒性值。
本发明提供了可用作DGKα、DGKζ或DGKα和DGKζ两者的抑制剂的式(I)的经取代的杂芳基化合物，包括其盐或前药。
本发明还提供了药物组合物，其包含式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐；和药学上可接受的载体。
本发明还提供了一种治疗与DGKα、DGKζ、或DGKα和DGKζ两者的活性相关的疾病或障碍的方法，所述方法包括向哺乳动物患者施用式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐。
本发明还提供了用于制备所述式(I)的化合物和/或其盐的方法和中间体。
本发明还提供了一种式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐，其用于疗法。
本发明还提供了式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐用于制造治疗增殖性障碍(诸如癌症)和病毒感染的药剂的用途。
式(I)的化合物和包含式(I)的化合物的组合物可以用于治疗、预防或治愈病毒感染和各种增殖性障碍，诸如癌症。包含这些化合物的药物组合物可用于治疗、预防多种治疗领域中的疾病或障碍(诸如病毒感染和癌症)或减缓其进展。
随着本公开文本的继续，将以扩展的形式阐述本发明的这些和其他特征。
具体实施方式
本发明第一方面提供了至少一种式(I)的化合物：
Figure BDA0003708460770000021
或其盐，其中：
X是CR6或N；
Y是CR3或N；
R1是H、F、Cl、Br、-CN、被零至4个R1a取代的C1-3烷基、被零至4个R1a取代的C3-4环烷基、被零至4个R1a取代的C1-3烷氧基、-C(O)NRaRa、-NRaRa、-S(O)nRe或-P(O)ReRe；
每个R1a独立地是F、Cl、-CN、-OH、-OCH3或-NRaRa；
每个Ra独立地是H或C1-3烷基；
每个Re独立地是被零至4个R1a取代的C3-4环烷基或C1-3烷基；
R2是H、被零至4个R2a取代的C1-3烷基、被零至4个R2a取代的C2-3烯基、或被零至4个R2a取代的C3-4环烷基；
每个R2a独立地是F、Cl、-CN、-OH、-O(C1-2烷基)、C3-4环烷基、C3-4烯基或C3-4炔基；
R3是H、F、Cl、Br、-CN、C1-3烷基、C1-2氟烷基、C3-4环烷基、C3-4氟环烷基、-NO2或被零至2个R3a取代的吡啶基；
每个R3a是卤基、-CN、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
R4是C6-10芳基或5至14元杂芳基，各自被零至4个R4a取代；
每个R4a独立地是卤基-CN、-OH、C1-6烷基-(CH2)1-2O(C1-3烷基)、C1-4烷氧基、-O(CH)1-3O(C1-3烷基)、-O(CH)1-3NRcRc、-OCH2CH＝CH2、-OCH2C≡CH、-C(O)(C1-4烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-4烷基)、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-4烷基)、-C(O)N(C1-4烷基)2、-NRcRc、-NRaS(O)2(C1-3烷基)、-NRaC(O)(C1-3烷基)、-NRaC(O)O(C1-4烷基)、-P(O)(C1-3烷基)2、-S(O)2(C1-3烷基)、-(CH2)0-3R4b、-O(CH2)0-3R4b、-NRaR4b或-C(O)R4b，其中所述烷基和烷氧基中的每一个被零至6个R4c取代；
R4b是C3-7环烷基、4至7元杂环基、苯基或5元或6元杂芳基，各自被零至4个R4d取代；
每个R4c独立地是卤基、-CN、-OH、C1-3烷氧基、-O(C1-2氟烷基)或-NRaRa；
每个R4d独立地是卤基、-CN、-OH、C1-3烷基、C1-2氟烷基、C1-3烷氧基或-NRaRa；
每个Rc独立地是H或C1-2烷基；
每个R5独立地是F、Cl、-CN、-OH、被零至4个Rg取代的C1-6烷基、被零至4个Rg取代的C1-3烷氧基、被零至4个Rg取代的C2-4烯基、被零至4个Rg取代的C2-4炔基、被零至4个Rg取代的C3-4环烷基、被零至4个Rg取代的苯基、被零至3个Rg取代的噁二唑基、被零至4个Rg取代的吡啶基、-(CH2)1-2(被零至4个Rg取代的杂环基)、-(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4烷基)、-(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4烷基)、-(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4烷基)、-C(O)(C1-4烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-4烷基)、-C(O)O(C3-4环烷基)、-C(O)NRaRa或-C(O)NRa(C3-4环烷基)，或者附接至同一碳原子的两个R5形成＝O；
每个Rg独立地是F、Cl、-CN、-OH、C1-3烷氧基、C1-3氟烷氧基、-O(CH2)1-2O(C1-2烷基)、C3-5环烷基或-NRcRc；
每个R6是H、F、Cl、-CN、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3或-OCH3；
m是零、1、2或3；并且
n是零、1或2。
在一个实施方案中，提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6；并且Y是CR3或N。此实施方案的化合物具有式(II)的结构：
Figure BDA0003708460770000031
在一个实施方案中，提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；并且Y是CR3。此实施方案的化合物具有式(III)的结构：
Figure BDA0003708460770000032
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案的化合物具有式(IV)的结构：
Figure BDA0003708460770000041
此实施方案包括这样的化合物，其中X是CH。此实施方案还包括这样的化合物，其中每个R6是H。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是N并且Y是CR3。此实施方案的化合物具有式(V)的结构：
Figure BDA0003708460770000042
此实施方案包括这样的化合物，其中每个R6是H。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6并且Y是N。此实施方案的化合物具有式(VI)的结构：
Figure BDA0003708460770000043
此实施方案包括这样的化合物，其中X是CH。此实施方案还包括这样的化合物，其中每个R6是H。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是N并且Y是N。此实施方案的化合物具有式(VII)的结构：
Figure BDA0003708460770000044
此实施方案包括这样的化合物，其中每个R6是H。
一个实施方案提供了式(I)的化合物或其盐，其中：
R1是H、F、Cl、Br、-CN、被零至4个R1a取代的C1-3烷基、被零至3个R1a取代的环丙基、被零至3个R1a取代的C1-3烷氧基、-C(O)NRaRa、-NRaRa、-S(O)nCH3或-P(O)(CH3)2；
每个R1a独立地是F、Cl或-CN；
每个Ra独立地是H或C1-3烷基；
R2是H、被零至2个R2a取代的C1-2烷基或被零至2个R2a取代的C2-3烯基；
每个R2a独立地是F、Cl、-CN、-OH、-O(C1-2烷基)、环丙基、C3-4烯基或C3-4炔基；
R3是H、F、Cl、Br、-CN、C1-2烷基、C1-2氟烷基、C3-4环烷基、-NO2或被零至2个R3a取代的吡啶基；
R4是苯基、吡咯基、噻唑基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基、吲唑基、萘基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、苯并[d]噁唑基、苯并噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基或噻吩并[3,2-b]吡啶基，各自被零至3个R4a取代；
每个R4a独立地是F、Cl、Br、-CN、-OH、C1-4烷基-(CH2)1-2O(C1-3烷基)、C1-3烷氧基、-O(CH)1-2NRcRc、-C(O)(C1-3烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-3烷基)、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)、-C(O)N(C1-3烷基)2、-NRcRc、-NRaS(O)2(C1-2烷基)、-NRaC(O)(C1-2烷基)、-NRaC(O)O(C1-3烷基)、-S(O)2(C1-2烷基)、-(CH2)0-3R4b、-O(CH2)0-3R4b、-NRaR4b或-C(O)R4b，其中所述烷基和烷氧基中的每一个被零至6个R4c取代；
R4b是C3-6环烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、苯基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、三唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基，各自被零至3个R4d取代；
每个R4c独立地是卤基、-CN、-OH、-O(C1-2烷基)、-O(C1-2氟烷基)或-NRaRa；
每个R4d独立地是F、Cl、Br、-CN、-OH、C1-2烷基、C1-2氟烷基、C1-2烷氧基或-NRaRa；
每个R5独立地是F、-CN、-OH、被零至4个Rg取代的C1-5烷基、被零至3个Rg取代的C1-2烷氧基、被零至4个Rg取代的C2-3烯基、被零至4个Rg取代的C2-3炔基、被零至4个Rg取代的C3-4环烷基、被零至3个Rg取代的苯基、被零至3个Rg取代的噁二唑基、被零至3个Rg取代的吡啶基、-(CH2)1-2(被零至4个Rg取代的杂环基)、-(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4烷基)、-(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4烷基)、-(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4烷基)、-C(O)(C1-4烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-4烷基)、-C(O)O(C3-4环烷基)、-C(O)NRaRa或-C(O)NRa(C3-4环烷基)，或者附接至同一碳原子的两个R5形成＝O；
每个R6是H、F或-CH3；并且
m是零、1、2或3。
一个实施方案提供了式(I)的化合物或其盐，其中：
X是N并且Y是CR3；或
X是N并且Y是N；
R1是-CN；
R2是-CH3；
R3是H；
R4是苯基、噻唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并[d]噁唑基、苯并[d]噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基或噻吩并[3,2-b]吡啶基，各自被零至2个R4a取代；
每个R4a独立地是F、Br、-OH、-CN、-CH3、-CF3、-OCH3、-OCF3或氟苯基；
每个R5独立地是氢、-CH3或-CH2CH3；并且
每个R6是H。
在一个实施方案中，提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中R1是H、F、Cl、Br、-CN、被零至4个R1a取代的C1-3烷基、被零至3个R1a取代的环丙基、被零至3个R1a取代的C1-3烷氧基、-C(O)NRaRa、-NRaRa、-S(O)nCH3或-P(O)(CH3)2。此实施方案包括这样的化合物，其中R1是H、F、Cl、Br、-CN、-CH3、-CHF2、-CF3、环丙基或-OCH3。此实施方案还包括这样的化合物，其中R1是H、F、-CN或-OCH3。此外，此实施方案包括这样的化合物，其中R1是-CN。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中每个R1a独立地是F、Cl、-CN、-OH或-OCH3。此实施方案包括这样的化合物，其中每个R1a独立地是F、Cl、-CN或-OCH3。此实施方案还包括这样的化合物，其中每个R1a独立地是F、Cl或-CN。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中每个Ra独立地是H或C1-2烷基。此实施方案包括这样的化合物，其中每个Ra独立地是H或-CH3。
在一个实施方案中，提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中R2是H、被零至2个R2a取代的C1-2烷基或被零至2个R2a取代的C2-3烯基。此实施方案包括这样的化合物，其中R2是H、-CH3、-CH2CN、-CH2CH2F或-CH2CH＝CH2。此实施方案还包括这样的化合物，其中R2是H、-CH3、-CH2CN或-CH2CH2F。此外，此实施方案包括这样的化合物，其中R2是-CH3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中每个R2a独立地是F、Cl、-CN、-OH、-O(C1-2烷基)、环丙基、C3-4烯基或C3-4炔基。此实施方案包括这样的化合物，其中每个R2a独立地是F、Cl、-CN、-OH、-OCH3或环丙基。
在一个实施方案中，提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中R3是H、F、Cl、Br、-CN、C1-2烷基、C1-2氟烷基、C3-4环烷基、-NO2或被零至2个R3a取代的吡啶基。此实施方案包括这样的化合物，其中R3是H、-CN、-CH2OH、-C(O)OCH2CH3、-NO2或吡啶基。此实施方案还包括这样的化合物，其中R3是H、-CN、-CH2OH或-NO2。此外，此实施方案包括这样的化合物，其中R3是H。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是Cl；并且R3是-CN。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是Br；并且R3是-CN。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是-CN；并且R3是H。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是F；并且R3是-NO2。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是-OCH3；并且R3是-CN。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是-CN；并且R3是-CN。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是-CN；并且R3是-NO2。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是-C(O)NH2；并且R3是H。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是-CN；并且R3是-CH3。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是-CN；并且R3是F。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是-CN；并且R3是Cl。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是-CN；并且R3是Br。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中X是CR6或N；Y是CR3；R1是Cl；并且R3是H。此实施方案包括这样的化合物，其中X是CR6并且Y是CR3。此实施方案还包括这样的化合物，其中X是N并且Y是CR3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中R4是苯基、吡咯基、噻唑基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基、吲唑基、萘基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、苯并[d]噁唑基、苯并噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基或噻吩并[3,2-b]吡啶基，各自被零至3个R4a取代。此实施方案包括这样的化合物，其中R4是苯基、噻唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并[d]噁唑基、苯并[d]噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基或噻吩并[3,2-b]吡啶基，各自被零至2个R4a取代。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中R4是苯基、吡咯基、噻唑基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基、吲唑基、萘基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、苯并[d]噁唑基、苯并噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基或噻吩并[3,2-b]吡啶基，各自被零至3个R4a取代；每个R4a独立地是F、Cl、Br、-CN、-OH、C1-4烷基-(CH2)1-2O(C1-3烷基)、C1-3烷氧基、-O(CH)1-2NRcRc、-C(O)(C1-3烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-3烷基)、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)、-C(O)N(C1-3烷基)2、-NRcRc、-NRaS(O)2(C1-2烷基)、-NRaC(O)(C1-2烷基)、-NRaC(O)O(C1-3烷基)、-S(O)2(C1-2烷基)、-(CH2)0-3R4b、-O(CH2)0-3R4b、-NRaR4b或-C(O)R4b，其中所述烷基和烷氧基中的每一个被零至6个R4c取代；R4b是C3-6环烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、苯基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、三唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基，各自被零至3个R4d取代；每个R4c独立地是卤基、-CN、-OH、-O(C1-2烷基)、-O(C1-2氟烷基)或-NRaRa；每个R4d独立地是F、Cl、Br、-CN、-OH、C1-2烷基、C1-2氟烷基、C1-2烷氧基或-NRaRa；并且每个Ra独立地是H或C1-3烷基。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中R4是苯基、噻唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并[d]噁唑基、苯并[d]噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基或噻吩并[3,2-b]吡啶基，各自被零至2个R4a取代；并且每个R4a独立地是F、Br、-OH、-CN、-CH3、-CF3、-OCH3、-OCF3或氟苯基。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中R4是被零至4个R4a取代的C6-10芳基。此实施方案包括这样的化合物，其中R4是被零至3个R4a取代的苯基。此实施方案还包括这样的化合物，其中R4是被零至2个R4a取代的苯基。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中R4是被零至4个R4a取代的5至14元杂芳基。此实施方案包括这样的化合物，其中R4是被零至4个R4a取代的5至6元杂芳基。此实施方案还包括这样的化合物，其中R4是9至10元杂芳基。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中R4a是每个R4a独立地是F、Cl、Br、-CN、-OH、C1-4烷基-(CH2)1-2O(C1-3烷基)、C1-3烷氧基、-O(CH)1-2NRcRc、-C(O)(C1-3烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-3烷基)、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)、-C(O)N(C1-3烷基)2、-NRcRc、-NRaS(O)2(C1-2烷基)、-NRaC(O)(C1-2烷基)、-NRaC(O)O(C1-3烷基)、-S(O)2(C1-2烷基)、-(CH2)0-3R4b、-O(CH2)0-3R4b、-NRaR4b或-C(O)R4b，其中所述烷基和烷氧基中的每一个被零至6个R4c取代；R4b是C3-6环烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、苯基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、三唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基，各自被零至3个R4d取代；每个R4c独立地是卤基、-CN、-OH、-O(C1-2烷基)、-O(C1-2氟烷基)或-NRaRa；每个R4d独立地是F、Cl、Br、-CN、-OH、C1-2烷基、C1-2氟烷基、C1-2烷氧基或-NRaRa；并且每个Ra独立地是H或C1-2烷基。此实施方案包括这样的化合物，其中每个R4a独立地是F、Br、-OH、-CN、-CH3、-CF3、-OCH3、-OCF3或氟苯基。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中m是1、2或3。此实施方案包括这样的化合物，其中m是零、1或2。此实施方案还包括这样的化合物，其中m是1或2。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中m是1、2或3；并且每个R5独立地是F、-CN、-OH、被零至4个Rg取代的C1-5烷基、被零至3个Rg取代的C1-2烷氧基、被零至4个Rg取代的C2-3烯基、被零至4个Rg取代的C2-3炔基、被零至4个Rg取代的C3-4环烷基、被零至3个Rg取代的苯基、被零至3个Rg取代的噁二唑基、被零至3个Rg取代的吡啶基、-(CH2)1-2(被零至4个Rg取代的杂环基)、-(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4烷基)、-(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4烷基)、-(CH2)1- 2NRcS(O)2(C1-4烷基)、-C(O)(C1-4烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-4烷基)、-C(O)O(C3-4环烷基)、-C(O)NRaRa或-C(O)NRa(C3-4环烷基)。此实施方案包括这样的化合物，其中每个R5独立地是氢、F、-CN、-OH、被零至4个Rg取代的C1-2烷基或C1-2烷氧基。此实施方案还包括这样的化合物，其中每个R5独立地是氢、F、-OH、C1-2烷基或C1-2烷氧基。此外，此实施方案包括这样的化合物，其中每个R5独立地是氢、-CH3或-CH2CH3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中m是1或2；并且每个R5独立地是氢、-CH3或-CH2CH3。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中m是1；并且R5是氢、F、-OH、C1-2烷基或C1-2烷氧基。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其具有选自以下的结构：
Figure BDA0003708460770000081
一个实施方案提供了一种式(I) 的化合物或其盐，其具有选自以下的结构：
Figure BDA0003708460770000082
Figure BDA0003708460770000091
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中每个R6是H、F或-CH3。此实施方案包括这样的化合物，其中R6是H。
一个实施方案提供了一种式(I)的化合物或其盐，其中所述化合物是：
4-((2S,5R)-2,5-二乙基-4-(4-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(1)；
4-((2S,5R)-2,5-二乙基-4-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(2)；
4-((2S,5R)-5-乙基-4-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(3)；
4-((2S,5R)-5-乙基-2-甲基-4-(4-(三氟甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(4)；
(S)-5-甲基-8-(2-甲基-4-(喹啉-8-基)哌嗪-1-基)-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(5)；
8-((2S,5R)-4-(6-氟喹啉-8-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(6)；
8-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(噻吩并[3,2-b]吡啶-3-基)哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(7)；
8-((2S,5R)-4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(8)；
(S)-5-甲基-8-(2-甲基-4-(喹啉-8-基)哌嗪-1-基)-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(9)；
8-((2S,5R)-4-(8-溴-6-甲基喹啉-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(10)；
8-((2S,5R)-4-(异喹啉-1-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(11)；
8-((2S,5R)-4-(4-溴异喹啉-1-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(12)；
8-((2S,5R)-4-(5-氟喹啉-8-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(13)；
8-((2S,5R)-4-(3-溴吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(14)；
8-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(15)；
8-((2S,5R)-4-(5,7-二氟喹啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(16)；
8-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(喹啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(17)；
8-((2S,5R)-4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(18)；
8-((2S,5R)-4-(异喹啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(19)；
8-((2S,5R)-4-(苯并[d]噁唑-7-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(20)；
8-((2S,5R)-4-(3-羟基-6-(三氟甲氧基)喹啉-8-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(21)；
8-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(2-甲基喹啉-8-基)哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(22)；
8-((2S,5R)-4-(6-氟喹啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(23)；
8-((2S,5R)-4-(3-甲氧基-6-甲基喹啉-8-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(24)；
8-((2S,5R)-4-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(25)；
8-((2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(26)；或
8-((2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(27)。
本发明可以在不脱离其精神或基本属性的情况下以其他特定形式实施。本发明涵盖本文所述的本发明的方面和/或实施方案的所有组合。应当理解，本发明的任何和所有实施方案可以与任何一个或多个其他实施方案结合来描述另外的实施方案。还应理解，所述实施方案中的每个单独要素意在与来自任何实施方案中的任何和所有其他要素组合来描述另外的实施方案。
定义
本领域技术人员在阅读以下详细描述后可更容易地理解本发明特征和优点。应该理解的是，出于清楚原因而在前后不同实施方案中描述的本发明某些特征也可组合成一个实施方案。相反地，出于简要原因而在一个实施方案中描述的本发明各个特征也可组合形成其亚组合。在此标识为示例性或优选的实施例旨在是说明性的而不是限制性的。
除非本文另有具体说明，当提及单数时，也可包括复数指代。例如，“一个/一种(a)”和“一个/一种(an)”可以是指一个/一种，或者一个或多个/一种或多种。
如本文所用的短语“化合物和/或其盐”是指至少一种化合物、所述化合物的至少一种盐或其组合。例如，式(I)的化合物和/或其盐包括：式(I)的化合物；两种式(I)的化合物；式(I)的化合物的盐；式(I)的化合物和式(I)的化合物的一种或多种盐；和式(I)的化合物的两种或更多种盐。
除非另有指明，否则假定具有不饱和化合价的任何原子具有足以满足所述化合价的氢原子。
本文阐述的定义优先于通过引用并入本文的任何专利、专利申请和/或专利申请公开中阐述的定义。
以下列出了用于描述本发明的多个术语的定义。这些定义适用于在说明书通篇中单独使用或作为更大基团的一部分而使用的术语(除非它们在具体情况下另有限制)。
在说明书通篇中，本领域技术人员可选择基团和其取代基以提供稳定的部分和化合物。
根据本领域使用的惯例，在本文的结构式中使用
Figure BDA0003708460770000101
来描绘作为部分或取代基与核心或骨架结构的附接点的键。
如本文所用的术语“卤基”和“卤素”是指F、Cl、Br和I。
术语“氰基”是指基团-CN。
术语“氨基”是指基团-NH2。
术语“氧代基”是指基团＝O。
如本文所用的术语“烷基”是指含有例如从1至12个碳原子、从1至6个碳原子和从1至4个碳原子的支链和直链饱和脂族烃基团两者。烷基的例子包括但不限于甲基(Me)、乙基(Et)、丙基(例如，正丙基和异丙基)、丁基(例如，正丁基、异丁基、仲丁基、和叔丁基)、和戊基(例如，正戊基、异戊基、新戊基)、正己基、2-甲基戊基、2-乙基丁基、3-甲基戊基、和4-甲基戊基。当数字出现在符号“C”之后的下标中时，下标更具体地定义了特定基团可能含有的碳原子的数量。例如，“C1-4烷基”表示具有一至四个碳原子的直链和支链烷基。
如本文所用的术语“氟烷基”旨在包括被一个或多个氟原子取代的支链和直链饱和脂族烃基两者。例如，“C1-4氟烷基”旨在包括被一个或多个氟原子取代的C1、C2、C3和C4烷基。氟烷基的代表性例子包括但不限于-CF3和-CH2CF3。
术语“羟烷基”包括被一个或多个羟基取代的支链和直链饱和烷基两者。例如，“羟烷基”包括-CH2OH、-CH2CH2OH和C1-4羟烷基。
术语“烯基”是指含有从2至12个碳原子和至少一个碳-碳双键的直链或支链烃自由基。示例性的此类基团包括乙烯基或烯丙基。例如，“C2-6烯基”表示具有二至六个碳原子的直链和支链烯基。
术语“炔基”是指含有从2至12个碳原子和至少一个碳至碳三键的直链或支链烃自由基。示例性的此类基团包括乙炔基。例如，“C2-6炔基”表示具有二至六个碳原子的直链和支链炔基。
如本文所用的术语“环烷基”是指通过从饱和环碳原子上去除一个氢原子而衍生自非芳族单环或多环烃分子的基团。环烷基的代表性实例包括但不限于环丙基、环戊基和环己基。当数字出现在符号“C”后的下标位置时，所述下标更具体地定义了特定的环烷基可含有的碳原子数量。例如，“C3-6环烷基”表示具有三至六个碳原子的环烷基。
如本文所用的术语“氟环烷基”旨在包括被一个或多个氟原子取代的环烷基。
如本文所用的术语“烷氧基”是指通过氧原子附接到母体分子部分的烷基，例如甲氧基(-OCH3)。例如，“C1-3烷氧基”表示具有一至三个碳原子的烷氧基。
术语“氟烷氧基”和“-O(氟烷基)”表示通过氧连接(-O-)附接的如上定义的氟烷基。例如，“C1-4氟烷氧基”旨在包括C1、C2、C3和C4氟烷氧基。
术语“碳环基(carbocyclo)”、“碳环状”或“碳环基(carbocyclyl)”可以互换使用，并且是指具有至少一个其中所有环的所有原子都是碳的饱和或部分饱和的非芳族环的环状基团。碳环可以是未经取代的或者在化合价允许的情况下可以含有一个或多个取代基。因此，所述术语包括非芳族环，诸如环烷基、环烯基和环炔基环。示例性双环碳环基包括茚满基、茚基、二氢萘基、四氢萘基、六氢萘基、八氢萘基、十氢萘基、二环庚基、二环辛基和二环壬基。
如本文所用的术语“芳基”是指通过去除与一个或多个芳族环键合的一个氢而由含所述一个或多个芳族环的分子衍生的一组原子。芳基的代表性例子包括但不限于苯基和萘基。芳基环可以是未取代的或者在化合价允许的情况下可以含有一个或多个取代基。
如本文所用的“苄基”是指其中一个氢原子被苯基替代的甲基。苯环可以是未经取代的，或者在化合价允许的情况下可以含有一个或多个取代基。
术语“杂原子”是指氧(O)、硫(S)和氮(N)。
术语“杂环基(heterocyclo)”、“杂环状”或“杂环基(heterocyclyl)”可以互换使用，并且是指具有至少一个饱和或部分饱和的非芳族环的环状基团，并且其中一个或多个所述环具有至少一个杂原子(O、S或N)，所述含有杂原子的环优选地具有1至3个独立地选自O、S和/或N的杂原子。这样的含有杂原子的基团的环可以含有一个或两个氧或硫原子和/或一个至四个氮原子，条件是每个环中的杂原子总数是四或更小，并且另一个条件是所述环含有至少一个碳原子。氮和硫原子可以任选地被氧化，并且氮原子可以任选被季铵化。杂环基团可以被附接在任何可用的氮或碳原子上。杂环可以是未经取代的或者在化合价允许的情况下可以含有一个或多个取代基。
示例性的单环杂环基包括吡咯烷基、咪唑啉基、噁唑烷基、异噁唑啉基、噻唑烷基、异噻唑烷基、四氢呋喃基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧代氮杂卓基、氮杂卓基、4-哌啶酮基、四氢吡喃基、吗啉基、硫杂吗啉基、硫杂吗啉基亚砜、硫杂吗啉基砜、1,3-二氧戊环、四氢-1,1-二氧代噻吩基、二氢异吲哚基和四氢喹啉基。
术语“杂芳基”是指未经取代的和经取代的芳族基团，其在至少一个环中具有至少一个杂原子(O、S或N)，所述含有杂原子的环优选具有1、2或3个独立地选自O、S和/或N的杂原子。含有杂原子的杂芳基的每个环可以含有一个或两个氧或硫原子和/或一个至四个氮原子，条件是每个环中的杂原子总数是四或更少，并且每个环具有至少一个碳原子。5至14元杂芳基包括5-或6-元单环杂芳基、9-或10-双环杂芳基和11至14元三环杂芳基。构成双环和三环杂芳基的稠合环是芳族的并且可以仅含有碳原子。氮和硫原子可以任选地被氧化，并且氮原子可以任选被季铵化。双环和三环杂芳基必须仅包括芳族环。杂芳基可以被附接在任何环的任何可用氮或碳原子上。杂芳基环系统可以是未取代的或者可以含有一个或多个取代基。
示例性的单环杂芳基包括吡咯基、吡唑基、吡唑啉基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、噻二唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、噁二唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基和三嗪基。
示例性的二环杂芳基包括吲哚基、苯并噻唑基、苯并二氧杂环戊烯基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢异喹啉基、异喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、吲嗪基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、苯并吡喃基、噌啉基、喹喔啉基、吲唑基和吡咯并吡啶基。
示例性三环杂芳基包括吖啶基、苯并喹啉基、苯并异喹啉基和苯并萘啶基。
短语“药学上可接受的”在本文中用于指在合理的医学判断的范围内，适用于与人和动物的组织接触而没有过度的毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的效益/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
式(I)的化合物可以形成盐，其也在本发明的范围内。除非另有指示，否则提及本发明化合物应理解为包括提及其一种或多种盐。术语“盐”表示与无机和/或有机酸和碱形成的酸式和/或碱式盐。此外，术语“一种或多种盐”可以包括两性离子(内盐)，例如，当式(I)的化合物含有碱性部分如胺或吡啶或咪唑环以及酸性部分如羧酸时。药学上可接受的(即无毒的，生理上可接受的)盐是优选的，如例如其中阳离子对盐的毒性或生物活性没有显著贡献的可接受的金属盐和胺盐。然而，其他盐可以例如用于可在制备期间采用的分离或纯化步骤中，并且因此涵盖在本发明的范围内。式(I)的化合物的盐可以例如通过以下方式来形成：使式(I)的化合物与一定量(诸如等效量)的酸或碱在介质(诸如其中盐沉淀的介质)中或在水性介质中反应，之后冻干。
示例性酸加成盐包括乙酸盐(诸如与乙酸或三卤乙酸(例如三氟乙酸)形成的那些)、己二酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、盐酸盐(与盐酸形成)、氢溴酸盐(与溴化氢形成)、氢碘化物、马来酸盐(与马来酸形成)、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐(与甲磺酸形成)、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐(诸如与硫酸形成的那些)、磺酸盐(诸如本文中提到的那些)、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonate)(诸如甲苯磺酸盐(tosylate))、十一烷酸盐等。
示例性的碱式盐包括铵盐；碱金属盐，诸如钠盐、锂盐和钾盐；碱土金属盐，诸如钙盐和镁盐；钡盐、锌盐和铝盐；与有机碱(例如，有机胺)的盐，所述有机碱诸如三烷基胺(诸如三乙胺)、普鲁卡因、二苄胺、N-苄基-β-苯乙胺、1-二苯羟甲胺(ephenamine)、N,N'-二苄乙烯-二胺、脱氢枞胺、N-乙基哌啶、苄胺、二环己胺或类似的药学上可接受的胺；以及与氨基酸的盐，所述氨基酸诸如精氨酸、赖氨酸等。碱性含氮基团可以用以下试剂季铵化：诸如低级烷基卤化物(例如，甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物)、二烷基硫酸盐(例如，二甲基、二乙基、二丁基和二戊基的硫酸盐)、长链卤化物(例如，癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂酰基的氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如，苄基和苯乙基的溴化物)以及其他试剂。优选的盐包括单盐酸盐、硫酸氢盐、甲磺酸盐、磷酸盐或硝酸盐。
式(I)的化合物可以作为无定形固体或结晶固体来提供。可以使用冻干来提供呈固体的式(I)的化合物。
还应当理解，式(I)的化合物的溶剂化物(例如，水合物)也在本发明的范围内。术语“溶剂化物”意指式(I)的化合物与一个或多个溶剂分子(无论是有机的还是无机的)的物理缔合。此物理缔合包括氢键。在某些情况下，溶剂化物将能够分离，例如，当一个或多个溶剂分子掺入结晶固体的晶格中时。“溶剂化物”涵盖溶液相和可分离的溶剂化物。示例性溶剂化物包括水合物、乙醇合物、甲醇合物、异丙醇合物、乙腈溶剂化物和乙酸乙酯溶剂化物。溶剂化方法是本领域已知的。
各种形式的前药是本领域熟知的，并且描述于Rautio,J.等人,Nature ReviewDrug Discovery,17,559-587(2018)中。
此外，可以分离并且纯化式(I)的化合物(在其制备之后)，以获得含有按重量计等于或大于99％的量的式(I)的化合物(“基本上纯的”)的组合物，然后如本文所描述使用或配制所述组合物。此类“基本上纯的”式(I)的化合物在本文中也被考虑作为是本发明的一部分。
“稳定的化合物”和“稳定的结构”意在表示化合物是足够稳健的，从而经受得住由反应混合物分离至有用的纯度和配制成有效的治疗剂。本发明旨在包括稳定的化合物。
“治疗有效量”旨在包括单独的本发明化合物的量或所要求保护的多种化合物的组合的量或本发明化合物与有效充当DGKα和/或DGKζ抑制剂、或有效治疗或预防病毒感染和增殖性障碍(诸如癌症)的其他活性成分的组合的量。
如本文所用的“治疗(treating或treatment)”涵盖哺乳动物(特别是人)的疾病状态的治疗，并且包括：(a)防止所述疾病状态在哺乳动物中发生，特别是当这种哺乳动物易患所述疾病状态，但尚未被诊断为患有所述疾病状态时；(b)抑制所述疾病状态，即阻止其发展；和/或(c)缓解所述疾病状态，即引起所述疾病状态的消退。
本发明化合物旨在包括在本发明化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括原子数相同但质量数不同的那些原子。通过一般举例且没有限制，氢的同位素包括氘(D)和氚(T)。碳的同位素包括13C和14C。本发明的同位素标记的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过与本文所述那些类似的方法，使用适当的同位素标记的试剂代替原本采用的未经标记的试剂来制备。
根据式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐可以通过适合于待治疗病症的任何方式施用，这可以取决于对部位特异性治疗的需要或待递送的式(I)化合物的量。
本发明还包括一类药物组合物，所述药物组合物包含式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐；以及一种或多种无毒的药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或佐剂(在本文中统称为“载体”材料)和(如果需要的话)其他活性成分。式(I)的化合物可以通过任何合适的途径、优选以适于此类途径的药物组合物的形式，并且以对于预期治疗有效的剂量施用。例如，本发明化合物和组合物可按含有常规药学上可接受的载体、佐剂和媒介物的剂量单位制剂形式来口服、粘膜或肠胃外(包括血管内、静脉内、腹膜内、皮下、肌内和胸骨内)施用。例如，所述药物载体可含有甘露醇或乳糖和微晶纤维素的混合物。所述混合物可含有额外组分诸如润滑剂(例如硬脂酸镁)和崩解剂(诸如交聚维酮)。可将所述载体混合物填充到明胶胶囊中或压制成片剂。药物组合物可例如以口服剂型或输注形式施用。
对于口服施用，所述药物组合物可例如呈以下形式：片剂、胶囊剂、液体胶囊剂、混悬剂或液体。优选将所述药物组合物制备成含有特定量的活性成分的剂量单位形式。例如，所述药物组合物可以以片剂或胶囊剂提供，所述片剂或胶囊剂包含在从约0.1至1000mg、优选从约0.25至250mg、更优选从约0.5至100mg范围内的量的活性成分。根据患者的状况和其他因素，对于人或其他哺乳动物的合适的日剂量可能有很大差异，但是可以使用常规方法确定。
本文中考虑的任何药物组合物可以例如经由任何可接受且合适的口服制剂口服递送。示例性的口服制剂包括但不限于例如片剂、锭剂、糖锭剂、水性和油性混悬剂、可分散散剂或颗粒剂、乳剂、硬和软胶囊剂、液体胶囊剂、糖浆和酏剂。旨在用于口服施用的药物组合物可以根据本领域已知的用于制造旨在用于口服施用的药物组合物的任何方法制备。为了提供药学上可口的制剂，根据本发明的药物组合物可以含有至少一种选自甜味剂、调味剂、着色剂、缓和剂、抗氧化剂、和防腐剂的试剂。
片剂可以例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐与适合于制造片剂的至少一种无毒的药学上可接受的赋形剂混合来制备。示例性的赋形剂包括但不限于例如惰性稀释剂，如例如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙和磷酸钠；制粒剂和崩解剂，如例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉和海藻酸；粘合剂，如例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯胶；以及润滑剂，如例如硬脂酸镁、硬脂酸和滑石。另外，片剂可以是未包衣的，或通过已知技术包衣，以掩蔽尝起来令人不快的药物的不良味道，或延迟胃肠道中活性成分的崩解和吸收，从而维持活性成分的作用持续更长时间。示例性水溶性遮味材料包括但不限于羟丙基甲基纤维素和羟丙基纤维素。示例性延时材料包括但不限于乙基纤维素和乙酸丁酸纤维素。
硬明胶胶囊可以例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或其至少一种盐与至少一种惰性固体稀释剂(如例如碳酸钙、磷酸钙和高岭土)混合来制备。
软明胶胶囊可以例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐与至少一种水溶性载体(如例如聚乙二醇)和至少一种油介质(如例如花生油、液体石蜡和橄榄油)混合来制备。
水性混悬剂可以例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐与适合于生产水性混悬剂的至少一种赋形剂混合来制备。适合于生产水性混悬剂的示例性的赋形剂包括但不限于例如混悬剂，如例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、海藻酸、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散剂或润湿剂，如例如天然存在的磷脂，例如卵磷脂；环氧烷与脂肪酸的缩合产物，如例如聚氧乙烯硬脂酸酯；环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，如例如十七烷乙烯-氧基鲸蜡醇；环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物，如例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯；以及环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物，如例如聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。水性混悬剂还可以含有至少一种防腐剂，如例如对羟基苯甲酸乙酯和对羟基苯甲酸正丙酯；至少一种着色剂；至少一种调味剂；和/或至少一种甜味剂，包括但不限于例如蔗糖、糖精和阿斯巴甜。
油性混悬剂可以例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐悬浮在植物油(如例如花生油、橄榄油、芝麻油和椰子油)或者悬浮在矿物油(如例如液体石蜡)中来制备。油性混悬剂还可以含有至少一种增稠剂，如例如蜂蜡、硬石蜡和十六醇。为了提供适口的油性混悬剂，可以将至少一种上文已经描述的甜味剂和/或至少一种调味剂添加至油性混悬剂中。油性混悬剂可以进一步含有至少一种防腐剂，包括但不限于例如抗氧化剂，如例如丁基化羟基茴香醚和α-生育酚。
可分散粉末和颗粒可以例如通过将至少一种式(I)的化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐与至少一种分散剂和/或润湿剂、至少一种混悬剂和/或至少一种防腐剂混合来制备。合适的分散剂、润湿剂和助悬剂如上已经所述。示例性防腐剂包括但不限于例如抗氧化剂，例如，抗坏血酸。此外，可分散粉末和颗粒还可以含有至少一种赋形剂，包括但不限于例如甜味剂、调味剂和着色剂。
至少一种式(I)的化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐的乳剂可以例如制备为水包油乳剂。包含式(I)的化合物的乳剂的油相可以已知方式由已知成分构成。油相可以通过但不限于例如植物油(如例如橄榄油和花生油)、矿物油(如例如液体石蜡)及其混合物来提供。虽然所述相可以仅包含乳化剂，但是它可以包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。合适的乳化剂包括但不限于例如天然磷脂，例如大豆卵磷脂；衍生自脂肪酸和己糖醇酐的酯或偏酯，如例如脱水山梨糖醇单油酸酯；以及偏酯与环氧乙烷的缩合产物，如例如聚氧乙烯去水山梨醇单油酸酯。优选地，亲水性乳化剂与用作稳定剂的亲脂性乳化剂一起被包括。包括油和脂肪两者也是优选的。一种或多种乳化剂在有或没有一种或多种稳定剂的情况下一起形成所谓的乳化蜡，并且所述蜡与油和脂肪一起形成所谓的乳化软膏基质，其形成乳霜制剂的油性分散相。乳剂还可以含有甜味剂、调味剂、防腐剂和/或抗氧化剂。适用于本发明配制品的乳化剂和乳剂稳定剂包括吐温60、司盘80、十六十八醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯、十二烷基硫酸钠、单独或与蜡一起的二硬脂酸甘油酯、或本领域熟知的其他材料。
式(I)的化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐还可以例如通过任何药学上可接受的且合适的可注射形式静脉内、皮下和/或肌内递送。示例性的可注射形式包括但不限于例如无菌水溶液，其包含可接受的媒介物和溶剂，如例如水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液；无菌水包油微乳剂；以及水性或油性混悬剂。
用于肠胃外施用的制剂可以呈水性或非水性等渗无菌注射溶液或混悬液形式。这些溶液和混悬液可由无菌粉末或颗粒使用在用于口服施用的制剂中提及的载体或稀释剂中的一种或多种或通过使用其他合适的分散剂或润湿剂和助悬剂制备。可将化合物溶解于水、聚乙二醇、丙二醇、乙醇、玉米油、棉籽油、花生油、芝麻油、苄醇、氯化钠、黄蓍胶和/或各种缓冲液中。其他佐剂和施用模式在制药领域中是众所周知的。活性成分也可以通过注射作为与合适的载体(包括盐水、右旋糖或水)或与环糊精(即Captisol)、共溶剂增溶(即丙二醇)或胶束增溶(即Tween 80)的组合物来施用。
无菌可注射制剂也可为在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或混悬剂，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受的媒介物和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌不挥发油通常用作溶剂或混悬介质。就此目的而言，可使用任何温和的不挥发油，包括合成的单甘油酯或二甘油酯。另外，脂肪酸诸如油酸可用于制备可注射剂。
无菌可注射水包油型微乳剂可例如通过以下方式来制备：1)将至少一种式(I)的化合物溶解于油相(如例如，大豆油与卵磷脂的混合物)中；2)将含有式(I)的油相与水和甘油的混合物组合；和3)处理所述组合以形成微乳剂。
可根据本领域已知的方法来制备无菌水性或油性混悬剂。例如，可利用无毒性的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(如例如1,3-丁二醇)制备无菌水溶液或混悬液；且可利用无菌无毒性的可接受的溶剂或混悬介质(如例如无菌不挥发油(例如合成的单甘油酯或二甘油酯)和脂肪酸(如例如油酸))制备无菌油性混悬剂。
可用于本发明的药物组合物的药学上可接受的载体、佐剂和媒介物包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、自乳化药物递送系统(SEDDS)(如d-α-生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、用于药物剂型的表面活性剂(如吐温类、聚乙氧基化蓖麻油(如CREMOPHOR表面活性剂(BASF)))、或其他类似的聚合物递送基质、血清蛋白(如人血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物)、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐)、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。也可有利地使用环糊精诸如α-环糊精、β-环糊精和γ-环糊精或化学改性衍生物诸如羟基烷基环糊精(包括2-羟丙基环糊精和3-羟丙基环糊精)或其他溶解的衍生物，以有助于递送本文所述式的化合物。
本发明药学活性化合物可根据常规药学方法来加工以产生用于施用于患者(包括人和其他哺乳动物)的药物。可以使药物组合物经历常规制药操作如灭菌，和/或可以含有常规佐剂，如防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、缓冲液等。片剂和丸剂可以另外用肠溶包衣来制备。此类组合物还可以包含佐剂，诸如润湿剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。
所施用的化合物的量和用于用本发明的化合物和/或组合物治疗病状的剂量方案取决于多种因素，包括受试者的年龄、体重、性别、医学状况、疾病类型、疾病的严重程度、施用的途径和频率以及所使用的具体化合物。因此，剂量方案可以广泛变化，但是可以使用标准方法常规确定。约0.001至100mg/kg体重、优选约0.0025与约50mg/kg体重之间、并且最优选约0.005至10mg/kg体重之间的日剂量可能是适当的。日剂量可以按每天一至四剂来施用。其他给药时间安排包括每周一剂和每两天周期一剂。
出于治疗目的，通常将本发明活性化合物与一种或多种适于所指示的施用途径的佐剂组合。若口服施用，则可将所述化合物与乳糖、蔗糖、淀粉粉末、烷酸纤维素酯、纤维素烷基酯、滑石、硬脂酸、硬脂酸镁、氧化镁、磷酸和硫酸的钠盐和钙盐、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮和/或聚乙烯醇混合，然后压片或包囊以方便施用。这样的胶囊剂或片剂可以含有控释配制品，如可以以活性化合物在羟丙基甲基纤维素中的分散体来提供。
本发明的药物组合物包含至少一种式(I)的化合物和/或其至少一种药学上可接受的盐和任选地选自任何药学上可接受的载体、佐剂和媒介物的另外的药剂。本发明的替代组合物包含本文所述的式(I)的化合物或其前药以及药学上可接受的载体、佐剂或媒介物。
实用性
式(I)的化合物可用于治疗癌症。
在另一个实施方案中，本发明提供了一种式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐、其立体异构体或其互变异构体以及一种或多种另外的治疗剂的组合制剂，其用于在与T细胞中的DGK靶标抑制相关的多种疾病或障碍的治疗和/或预防中同时、分开或顺序地使用。
在另一方面，本发明提供了一种治疗患有或易患与T细胞中的DGK靶标抑制相关的医学病症的患者的方法。可以治疗多种医学病症。所述方法包括向患者施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含式(I)的化合物和/或其药学上可接受的盐、其立体异构体或其互变异构体。例如，本文所述的化合物可以用于治疗或预防病毒感染和增殖性疾病，诸如癌症。
式(I)的化合物和包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物可用于治疗或预防与T细胞中的DGK靶标抑制相关的任何疾病或病症。这些疾病或病症包括病毒感染和其他感染(例如，皮肤感染、GI感染、尿路感染、生殖泌尿系统感染、全身感染)和增殖性疾病(例如，癌症)。可以将式(I)的化合物和包含至少一种式(I)的化合物的药物组合物施用于动物，优选哺乳动物(例如家养动物、猫、狗、小鼠、大鼠)，并且更优选人。可以使用任何施用方法将化合物或药物组合物递送至患者。在某些实施方案中，口服施用式(I)的化合物或包含至少式(I)的化合物的药物组合物。在其他实施方案中，肠胃外施用式(I)或包含至少式(I)的化合物的药物组合物。
式(I)的化合物可以抑制二酰甘油激酶α和ζ(DGKα/ζ)的活性。例如，式(I)的化合物可以用于通过施用抑制量的式(I)的化合物或其盐来抑制需要调节DGKα和DGKζ的细胞中或个体中DGKα和DGKζ的活性。
本发明进一步提供了通过向需要这种治疗的个体施用治疗有效量或剂量的式(I)的化合物或其药物组合物来治疗个体(例如患者)的与DGKα和DGKζ的活性或表达(包括异常活性和/或过表达)相关的疾病的方法。疾病的例子可以包括与DGKα和DGKζ酶的表达或活性(诸如过表达或异常活性)直接或间接关联的任何疾病、障碍或病症。DGKα和DGKζ相关疾病还可以包括可以通过调节DGKα和DGKζ酶活性来预防、改善或治愈的任何疾病、障碍或病症。DGKα和DGKζ相关疾病的例子包括癌症和病毒感染，诸如HIV感染、乙型肝炎和丙型肝炎。
在一方面，在施用免疫肿瘤学药剂之前顺序地施用一种或多种式(I)的化合物。在另一方面，与免疫肿瘤学药剂同时施用一种或多种式(I)的化合物。在又另一方面，在施用免疫肿瘤学药剂之后顺序地施用一种或多种式(I)的化合物。
在另一方面，可以将式(I)的化合物与免疫肿瘤学药剂共配制。
免疫肿瘤学药剂包括例如小分子药物、抗体、或其他生物学分子或小分子。生物学免疫肿瘤学药剂的例子包括但不限于癌症疫苗、抗体、和细胞因子。在一方面，抗体是单克隆抗体。在另一方面，单克隆抗体是人源化的或人的。
在一方面，免疫肿瘤学药剂是(i)刺激(包括共刺激)受体的激动剂，或(ii)T细胞上的抑制(包括共抑制)信号的拮抗剂，两者均导致放大抗原特异性T细胞应答(通常称为免疫检查点调节剂)。
某些刺激分子和抑制分子是免疫球蛋白超家族(IgSF)的成员。与共刺激受体或共抑制受体结合的膜结合配体的一个重要家族是B7家族，其包括B7-1、B7-2、B7-H1(PD-L1)、B7-DC(PD-L2)、B7-H2(ICOS-L)、B7-H3、B7-H4、B7-H5(VISTA)、和B7-H6。与共刺激受体或共抑制受体结合的膜结合配体的另一个家族是与同源TNF受体家族成员结合的分子的TNF家族，其包括CD40和CD40L、OX-40、OX-40L、CD70、CD27L、CD30、CD30L、4-1BBL、CD137(4-1BB)、TRAIL/Apo2-L、TRAILR1/DR4、TRAILR2/DR5、TRAILR3、TRAILR4、OPG、RANK、RANKL、TWEAKR/Fn14、TWEAK、BAFFR、EDAR、XEDAR、TACI、APRIL、BCMA、LTβR、LIGHT、DcR3、HVEM、VEGI/TL1A、TRAMP/DR3、EDAR、EDA1、XEDAR、EDA2、TNFR1、淋巴毒素α/TNFβ、TNFR2、TNFα、LTβR、淋巴毒素α1β2、FAS、FASL、RELT、DR6、TROY、NGFR。
在一方面，可以通过式(I)的化合物和以下中的一种或多种的组合刺激T细胞应答：(i)抑制T细胞激活的蛋白质(例如免疫检查点抑制剂)(诸如CTLA-4、PD-1、PD-L1、PD-L2、LAG-3、TIM-3、半乳糖凝集素9、CEACAM-1、BTLA、CD69、半乳糖凝集素-1、TIGIT、CD113、GPR56、VISTA、2B4、CD48、GARP、PD1H、LAIR1、TIM-1和TIM-4)的拮抗剂，和(ii)刺激T细胞激活的蛋白质(诸如B7-1、B7-2、CD28、4-1BB(CD137)、4-1BBL、ICOS、ICOS-L、OX40、OX40L、GITR、GITRL、CD70、CD27、CD40、DR3和CD28H)的激动剂。
可以与式(I)的化合物组合用于治疗癌症的其他药剂包括NK细胞上抑制受体的拮抗剂或NK细胞上激活受体的激动剂。例如，可以将式(I)的化合物与KIR的拮抗剂(诸如利瑞鲁单抗(lirilumab))组合。
用于组合疗法的又其他药剂包括抑制或耗尽巨噬细胞或单核细胞的药剂，其包括但不限于CSF-1R拮抗剂，诸如CSF-1R拮抗剂抗体，包括RG7155(WO11/70024、WO11/107553、WO11/131407、WO13/87699、WO13/119716、WO13/132044)或FPA-008(WO11/140249；WO13169264；WO14/036357)。
在另一方面，式(I)的化合物可以与以下中的一种或多种一起使用：连接阳性共刺激受体的激动剂、减弱经由抑制性受体的信号传导的阻断剂、拮抗剂、以及一种或多种全身性地增加抗肿瘤T细胞的频率的药剂，克服肿瘤微环境中的不同免疫抑制通路(例如，阻断抑制性受体接合(例如，PD-L1/PD-1相互作用)、耗尽或抑制Treg(例如，使用抗CD25单克隆抗体(例如达克珠单抗(daclizumab))或通过离体抗CD25珠耗尽)、抑制代谢酶(诸如IDO)、或逆转/预防T细胞无能或衰竭)的药剂以及在肿瘤部位触发先天性免疫激活和/或炎症的药剂。
在一方面，免疫肿瘤学药剂是CTLA-4拮抗剂，诸如拮抗性CTLA-4抗体。合适的CTLA-4抗体包括例如YERVOY(伊匹木单抗)或曲美木单抗。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是PD-1拮抗剂，诸如拮抗性PD-1抗体。合适的PD-1抗体包括例如OPDIVO(纳武单抗)、KEYTRUDA(派姆单抗)、或MEDI-0680(AMP-514；WO2012/145493)。免疫肿瘤学药剂也可以包括匹地利珠单抗(CT-011)，尽管其对PD-1结合的特异性存有疑问。靶向PD-1受体的另一种方法是由与IgG1的Fc部分融合的PD-L2(B7-DC)的细胞外结构域构成的重组蛋白，称为AMP-224。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是PD-L1拮抗剂，诸如拮抗性PD-L1抗体。合适的PD-L1抗体包括例如MPDL3280A(RG7446；WO2010/077634)、度伐单抗(durvalumab)(MEDI4736)、BMS-936559(WO2007/005874)、和MSB0010718C(WO2013/79174)。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是LAG-3拮抗剂，诸如拮抗性LAG-3抗体。合适的LAG3抗体包括例如BMS-986016(WO10/19570、WO14/08218)、或IMP-731或IMP-321(WO08/132601、WO09/44273)。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是CD137(4-1BB)激动剂，诸如激动性CD137抗体。合适的CD137抗体包括例如乌瑞鲁单抗和PF-05082566(WO12/32433)。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是GITR激动剂，诸如激动性GITR抗体。合适的GITR抗体包括例如BMS-986153、BMS-986156、TRX-518(WO06/105021、WO09/009116)和MK-4166(WO11/028683)。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是IDO拮抗剂。合适的IDO拮抗剂包括例如INCB-024360(WO2006/122150、WO07/75598、WO08/36653、WO08/36642)、吲哚莫德(indoximod)、BMS-986205、或NLG-919(WO09/73620、WO09/1156652、WO11/56652、WO12/142237)。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是OX40激动剂，诸如激动性OX40抗体。合适的OX40抗体包括例如MEDI-6383或MEDI-6469。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是OX40L拮抗剂，诸如拮抗性OX40抗体。合适的OX40L拮抗剂包括例如RG-7888(WO06/029879)。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是CD40激动剂，诸如激动性CD40抗体。在又另一个实施方案中，免疫肿瘤学药剂是CD40拮抗剂，诸如拮抗性CD40抗体。合适的CD40抗体包括例如鲁卡妥木单抗或达西珠单抗。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是CD27激动剂，诸如激动性CD27抗体。合适的CD27抗体包括例如伐立鲁单抗。
在另一方面，免疫肿瘤学药剂是MGA271(针对B7H3)(WO11/109400)。
组合疗法旨在包括以顺序方式施用这些治疗剂(即，其中在不同时间施用每种治疗剂)以及以基本上同时的方式施用这些治疗剂或这些治疗剂中的至少两种。基本上同时施用可以例如通过向受试者施用具有固定比率的每种治疗剂的单一剂型或施用多个单一剂型(用于每种治疗剂)来实现。顺序施用或基本上同时施用每种治疗剂可以通过任何适当途径来实现，所述适当途径包括但不限于口服途径、静脉内途径、肌内途径、以及通过粘膜组织直接吸收。治疗剂可以通过相同途径或通过不同途径施用。例如，所选组合的第一治疗剂可以通过静脉内注射施用，而所述组合的其他治疗剂可以口服施用。可替代地，例如，可以口服施用所有治疗剂或者可以通过静脉内注射施用所有治疗剂。组合疗法还可以包括将如上所述的治疗剂进一步与其他生物活性成分和非药物疗法(例如，外科手术或放射治疗)组合施用。在组合疗法进一步包括非-药物治疗的情况下，所述-非药物治疗可以在任何合适的时间进行，只要从治疗剂与非药物治疗的组合的共同作用实现有益效果即可。例如，在适当的情况下，当从治疗剂的施用暂时(也许是数天或甚至数周)去除非-药物治疗时，仍然实现所述有益效果。
如本文所用的术语“细胞”意在是指体外、离体或体内的细胞。在一些实施方案中，离体细胞可以是从生物体(诸如哺乳动物)切离的组织样品的一部分。在一些实施方案中，体外细胞可以是在细胞培养物中的细胞。在一些实施方案中，体内细胞是生活在生物体(诸如哺乳动物)中的细胞。
如本文所用的术语“接触”是指使体外系统或体内系统中的指示部分在一起。例如，使DGKα和DGKζ酶与式(I)的化合物“接触”包括向具有DGKα和DGKζ的个体或患者(诸如人)施用本发明的化合物，以及例如将式(I)的化合物引入含有细胞或纯化制剂的样品中，所述细胞或纯化制剂含有DGKα和DGKζ酶。
术语“DGKα和DGKζ抑制剂”是指能够抑制T细胞中的二酰甘油激酶α和/或二酰甘油激酶ζ(DGKα和DGKζ)的活性从而导致T细胞刺激的药剂。DGKα和DGKζ抑制剂可以是可逆或不可逆DGKα和DGKζ抑制剂。“可逆DGKα和DGKζ抑制剂”是在催化部位或非催化部位可逆地抑制DGKα和DGKζ酶活性的化合物，并且“不可逆DGKα和DGKζ抑制剂”是通过与酶形成共价键而不可逆地破坏DGKα和DGKζ酶活性的化合物。
可以用式(I)的化合物治疗的癌症的类型包括但不限于脑癌、皮肤癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、血液癌、肺癌和骨癌。此类癌症类型的例子包括神经母细胞瘤、肠癌(诸如直肠癌、结肠癌、熟悉的腺瘤性息肉癌和遗传性非息肉病性结直肠癌)、食道癌、唇癌、喉癌、下咽癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲状腺髓样癌、乳头状甲状腺癌、肾癌、肾实质癌、卵巢癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、胰腺癌、前列腺癌、睾丸癌、乳腺癌、泌尿系癌、黑色素瘤、脑肿瘤(诸如成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、成神经管细胞瘤和周围神经外胚层肿瘤)、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、伯基利淋巴瘤、急性淋巴白血病(ALL)、慢性淋巴白血病(CLL)、急性髓样白血病(AML)、慢性髓样白血病(CML)、成人T细胞白血病淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、肝细胞癌、胆囊癌、支气管癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、多发性骨髓瘤、基底细胞癌、畸胎瘤、视网膜母细胞瘤、脉络膜黑色素瘤、精原细胞瘤、横纹肌肉瘤、颅咽管瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、尤因肉瘤和浆细胞瘤。
一种或多种另外的药剂或治疗方法(如例如抗病毒剂、化疗剂或其他抗癌剂、免疫增强剂、免疫抑制剂、放射、抗肿瘤和抗病毒疫苗、细胞因子疗法(例如IL2和GM-CSF)、和/或酪氨酸激酶抑制剂)可以任选地与式(I)的化合物组合用于治疗DGKα和DGKζ相关的疾病、障碍或病症。可以将药剂与本发明化合物组合在单一剂型中，或可以将药剂作为单独的剂型同时或顺序地施用。
合适的化疗剂或其他抗癌剂包括例如烷基化剂(包括但不限于氮芥(nitrogenmustard)、亚乙基亚胺衍生物、磺酸烷基酯、亚硝基脲和三氮烯)，诸如尿嘧啶氮芥、氮芥(chlormethine)、环磷酰胺
Figure BDA0003708460770000191
异环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、哌泊溴烷、三亚乙基-三聚氰胺、三亚乙基硫代磷酰胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链脲霉素、达卡巴嗪和替莫唑胺。
在黑色素瘤的治疗中，与式(I)的化合物组合使用的合适的药剂包括：达卡巴嗪(DTIC)，任选地，连同其他化疗药物诸如卡莫司汀(BCNU)和顺铂；“达特茅斯方案”，由DTIC、BCNU、顺铂和他莫昔芬组成；顺铂、长春碱和DTIC、替莫唑胺或YERVOYTM的组合。在黑色素瘤的治疗中，也可以将式(I)的化合物与免疫疗法药物组合，所述免疫疗法药物包括细胞因子，诸如干扰素α、白介素2和肿瘤坏死因子(TNF)。
也可以将式(I)的化合物与疫苗疗法组合用于治疗黑色素瘤。抗黑色素瘤疫苗在某些方面类似于用于预防由病毒引起的疾病(脊髓灰质炎、麻疹和腮腺炎)的抗病毒疫苗。可以将称为抗原的减弱的黑色素瘤细胞或黑色素瘤细胞的部分注射到患者体内，以刺激身体的免疫系统以破坏黑色素瘤细胞。
也可以使用高温隔离肢体灌注技术用包括一种或多种式(I)的化合物的药剂的组合治疗限于手臂或腿的黑色素瘤。这种治疗方案暂时将受累肢体的循环与身体的其余部分分开，并且将高剂量的化学疗法注射到向肢体供血的动脉中，从而向肿瘤区域提供高剂量，而不使内脏暴露于原本会引起严重副作用的这些剂量。通常，将体液加热至38.9℃至40℃。美法仑是这种化学疗法中最常用的药物。这可以与称为肿瘤坏死因子(TNF)的另一种药剂一起给予。
合适的化疗剂或其他抗癌剂包括例如抗代谢物(包括但不限于叶酸拮抗剂、嘧啶类似物、嘌呤类似物和腺苷脱氨酶抑制剂)，诸如甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达拉滨、喷司他丁(pentostatine)以及吉西他滨。
合适的化疗剂或其他抗癌剂进一步包括例如某些天然产物及其衍生物(例如，长春花生物碱、抗肿瘤抗生素、酶、淋巴因子和表鬼臼毒素)，诸如长春碱、长春新碱、长春地辛、博莱霉素、更生霉素、柔红霉素、多柔比星、表柔比星、伊达比星、ara-C、紫杉醇(Taxol)、光辉霉素、脱氧柯福霉素(deoxyco-formycin)、丝裂霉素-C、L-天冬酰胺酶、干扰素(尤其是IFN-a)、依托泊苷以及替尼泊苷。
其他细胞毒性剂包括长春瑞滨(navelbene)、CPT-11、阿那曲唑、来曲唑、卡培他滨和德洛昔芬(droloxafine)。
同样合适的是细胞毒性剂，诸如表鬼臼毒素(epidophyllotoxin)；抗肿瘤酶；拓扑异构酶抑制剂；丙卡巴肼；米托蒽醌；铂配位复合物，诸如顺铂和卡铂；生物反应调节剂；生长抑制剂；抗激素治疗剂；亚叶酸；替加氟；和造血生长因子。
一种或多种其他抗癌剂包括抗体治疗剂，诸如曲妥珠单抗
Figure BDA0003708460770000201
针对共刺激分子(诸如CTLA-4、4-1BB和PD-1)的抗体、或针对细胞因子(IL-1O或TGF-β)的抗体。
其他抗癌剂还包括阻断免疫细胞迁移的那些，诸如趋化因子受体(包括CCR2和CCR4)的拮抗剂。
其他抗癌剂还包括增强免疫系统(诸如辅助性或过继性T细胞转移)的那些。
抗癌疫苗包括树突细胞、合成肽、DNA疫苗和重组病毒。
本发明的药物组合物可以任选地包含至少一种信号转导抑制剂(STI)。“信号转导抑制剂”是这样的药剂，所述药剂选择性地抑制癌细胞的正常功能中的信号传导通路中的一个或多个重要步骤，从而导致细胞凋亡。合适的STI包括但不限于：(i)bcr/abl激酶抑制剂，如例如STI 571
Figure BDA0003708460770000202
(ii)表皮生长因子(EGF)受体抑制剂，如例如激酶抑制剂(
Figure BDA0003708460770000203
SSI-774)和抗体(Imclone：C225[Goldstein等人,Clin.Cancer Res.,1:1311-1318(1995)]、和Abgenix：ABX-EGF)；(iii)her-2/neu受体抑制剂，诸如法尼基转移酶抑制剂(FTI)，如例如L-744,832(Kohl等人,Nat.Med.,1(8):792-797(1995))；(iv)Akt家族激酶或Akt途径的抑制剂，如例如雷帕霉素(参见例如，Sekulic等人,Cancer Res.,60:3504-3513(2000))；(v)细胞周期激酶抑制剂，如例如，夫拉平度(flavopiridol)和UCN-O1(参见例如，Sausville,Curr.Med.Chem.Anti-Canc.Agents,3:47-56(2003))；以及(vi)磷脂酰肌醇激酶抑制剂，如例如LY294002(参见例如，Vlahos等人,J.Biol.Chem.,269:5241-5248(1994))。可替代地，至少一种STI和至少一种式(I)的化合物可以在单独的药物组合物中。在本发明的具体实施方案中，可以将至少一种式(I)的化合物和至少一种STI同时或顺序地施用于患者。换句话说，可以首先施用至少一种式(I)的化合物，可以首先施用至少一种STI，或者可以同时施用至少一种式(I)的化合物和至少一种STI。另外，当使用多于一种式(I)的化合物和/或STI时，所述化合物可以以任何顺序施用。
本发明进一步提供了一种用于治疗患者的慢性病毒感染的药物组合物，其包含在药学上可接受的载体中的至少一种式(I)的化合物、任选地至少一种化疗药物、和任选地至少一种抗病毒剂。
还提供了一种通过施用有效量的以上药物组合物来治疗患者的慢性病毒感染的方法。
在本发明的具体实施方案中，可以将至少一种式(I)的化合物和至少一种化疗剂同时或顺序地施用于患者。换句话说，可以首先施用至少一种式(I)的化合物，可以首先施用至少一种化疗剂，或者可以同时施用至少一种式(I)的化合物和至少一种STI。另外，当使用多于一种式(I)的化合物和/或化疗剂时，所述化合物可以以任何顺序施用。类似地，也可以在与式(I)的化合物的施用相比的任何点施用任何抗病毒剂或STI。
可以使用本发明组合治疗来治疗的慢性病毒感染包括但不限于由以下引起的疾病：丙型肝炎病毒(HCV)、人乳头瘤病毒(HPV)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV)、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、水痘带状疱疹病毒、柯萨奇病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)。值得注意地，寄生生物感染(例如疟疾)也可以通过以上方法来治疗，其中任选地添加已知治疗寄生生物病症的化合物代替抗病毒剂。
考虑与式(I)的化合物组合使用的合适的抗病毒剂可以包括核苷和核苷酸逆转录酶抑制剂(NRTI)、非核苷逆转录酶抑制剂(NNRTI)、蛋白酶抑制剂和其他抗病毒药物。
合适的NRTI的例子包括齐多夫定(AZT)；地达诺新(ddl)；扎西他滨(ddC)；司他夫定(d4T)；拉米夫定(3TC)；阿巴卡韦(1592U89)；阿德福韦酯[双(POM)-PMEA]；洛布卡韦；BCH-I0652；恩曲他滨(emitricitabine)[(-)-FTC]；β-L-FD4(也称为β-L-D4C并且命名为β-L-2',3'-二去氧-5-氟-胞苷(cytidene))；DAPD((-)-β-D-2,6,-二氨基-嘌呤二氧戊环)；和洛德腺苷(lodenosine)(FddA)。典型的合适的NNRTI包括奈韦拉平(BI-RG-587)；地拉韦定(delaviradine)(BHAP，U-90152)；依法韦仑(DMP-266)；PNU-142721；AG-1549；MKC-442(1-(乙氧基-甲基)-5-(1-甲基乙基)-6-(苯基甲基)-(2,4(1H,3H)-嘧啶二酮)；和(+)-胡桐内酯A(NSC-675451)和B。典型的合适的蛋白酶抑制剂包括沙奎那韦(Ro 31-8959)；利托那韦(ABT-538)；茚地那韦(MK-639)；奈非那韦(AG-1343)；安普那韦(141W94)；拉司那韦；DMP-450；BMS-2322623；ABT-378；和AG-1549。其他抗病毒剂包括羟基脲、利巴韦林、IL-2、IL-12、喷他夫西(pentafuside)和Yissum项目编号11607。
本发明还包括可用于例如治疗或预防DGKα和DGKζ相关疾病或障碍以及本文提及的其他疾病的药物试剂盒，其包括一个或多个含有药物组合物的容器，所述药物组合物包含治疗有效量的式(I)的化合物。如果希望，此类试剂盒可以进一步包括以下中的一种或多种：各种常规药物试剂盒部件，如例如具有一种或多种药学上可接受的载体的容器、另外的容器，这对于本领域技术人员而言将是容易清楚的。试剂盒中还可以包括作为插页或作为标签的说明书，指示待施用的组分的量、施用指导、和/或混合组分的指导。
组合疗法旨在包括以顺序方式施用这些治疗剂(即，其中在不同时间施用每种治疗剂)以及以基本上同时的方式施用这些治疗剂或这些治疗剂中的至少两种。基本上同时施用可以例如通过向受试者施用具有固定比率的每种治疗剂的单一剂型或施用多个单一剂型(用于每种治疗剂)来实现。顺序施用或基本上同时施用每种治疗剂可以通过任何适当途径来实现，所述适当途径包括但不限于口服途径、静脉内途径、肌内途径、以及通过粘膜组织直接吸收。治疗剂可以通过相同途径或通过不同途径施用。例如，所选组合的第一治疗剂可以通过静脉内注射施用，而所述组合的其他治疗剂可以口服施用。可替代地，例如，可以口服施用所有治疗剂或者可以通过静脉内注射施用所有治疗剂。组合疗法还可以包括将如上所述的治疗剂进一步与其他生物活性成分和非药物疗法(例如，手术或放射治疗)组合施用。在组合疗法还包括非药物治疗的情况下，所述非药物治疗可以在任何合适的时间进行，只要从治疗剂与非药物治疗的组合的共同作用实现有益效果即可。例如，在适当的情况下，当从治疗剂的施用中暂时(也许是数天或甚至数周)去除非药物治疗时，仍然实现所述有益效果。
本发明还提供了药学上可接受的组合物，所述药物组合物包含与一种或多种药学上可接受的载体(添加剂)和/或稀释剂一起配制的治疗有效量的一种或多种式(I)的化合物，以及任选地如上所述的一种或多种另外治疗剂。
可以通过以下任何合适的方式施用本发明的化合物用于任何本文所述的用途：例如口服，诸如片剂、胶囊剂(其中的每一种包括持续释放或定时释放配制品)、丸剂、散剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、混悬剂(包括纳米混悬剂、微混悬剂、喷雾干燥分散剂)、糖浆剂和乳剂；舌下地；经颊地；肠胃外地，诸如通过皮下、静脉内、肌内或胸骨内注射或输注技术(例如，作为无菌可注射水性或非水性溶液或混悬剂)；经鼻地，包括施用至鼻膜，诸如通过吸入喷雾；局部地，诸如以乳膏或软膏的形式；或经直肠地，诸如以栓剂的形式。它们可以单独施用，但是通常将与基于所选择的施用途径和标准药学实践而选择的药物载体一起施用。
如本文所用的短语“药学上可接受的载体”意指药学上可接受的材料、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(例如润滑剂、滑石镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌、或硬脂酸)、或溶剂包封材料，其参与将主题化合物从一个器官或身体部分携带或运输到另一个器官或身体部分。每种载体都必须是在以下意义上“可接受的”：与配制品的其他成分相容，所述其他成分包括：即，佐剂、赋形剂或媒介物，诸如稀释剂、防腐剂、填充剂、流动调节剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、混悬剂、甜味剂、调味剂、加香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分配剂，取决于施用方式和剂型的性质；并且对患者无害。
术语“药物组合物”意指包含本发明的化合物与至少一种另外的药学上可接受的载体的组合的组合物。
药学上可接受的载体根据本领域普通技术人员认知范围内的许多因素来配制。这些因素包括但不限于：所配制的活性剂的类型和性质；含有药剂的组合物待施用的受试者；组合物的预期施用途径；以及所靶向的治疗适应症。药学上可接受的载体包括水性和非水性液体介质两者，以及多种固体和半固体剂型。此类载体除活性剂之外还可以包括许多不同的成分和添加剂，此类另外的成分出于本领域普通技术人员熟知的多种原因(例如，活性剂的稳定、粘合剂等)被包括在配制品中。合适的药学上可接受的载体的描述及其选择涉及的因素发现于各种可容易获得的来源，如例如Allen,L.V.Jr.等人Remington:The Scienceand Practice of Pharmacy(2卷),第22版(2012),Pharmaceutical Press。
当然，本发明的化合物的给药方案将根据已知因素而变化，所述因素诸如特定药剂的药效学特征及其施用方式和途径；接受者的物种、年龄、性别、健康、医疗状况和体重；症状的性质和程度；同时治疗的种类；治疗频率；施用途径、患者的肾功能和肝功能，以及所希望的效果。
作为通用指导，当用于所指示的效果时，每种活性成分的每日口服剂量范围将在约0.001至约5000mg/天之间、优选在约0.01至约1000mg/天之间、并且最优选在0.1至约250mg/天之间。静脉内施用时，在恒定速率输注期间，最优选的剂量的范围将是约0.01至约10mg/kg/分钟。可以将本发明的化合物以单一日剂量施用，或者可以将每日总剂量以每日两次、三次或四次的分剂量施用。
所述化合物典型地与合适的药物稀释剂、赋形剂或载体(在本文中统称为药物载体)混合施用，所述药物稀释剂、赋形剂或载体关于施用的预期形式(例如，口服片剂、胶囊、酏剂和糖浆)适当选择，并且与常规制药实践一致。
适用于施用的剂型(药物组合物)可以含有从约1毫克至约2000毫克活性成分/剂量单位。在这些药物组合物中，所述活性成分通常将以基于组合物总重量按重量计约0.1％-95％的量存在。
用于口服施用的典型胶囊含有至少一种本发明化合物(250mg)、乳糖(75mg)和硬脂酸镁(15mg)。将混合物通过60目筛并且包装到L号明胶胶囊中。
通过将至少一种本发明的化合物(250mg)无菌放入小瓶中、无菌冷冻干燥和密封来产生典型的可注射制剂。为了使用，将小瓶的内容物与2mL生理盐水混合以产生可注射制剂。
本发明在其范围内包括包含治疗有效量的至少一种本发明的化合物(单独的或与药物载体组合)作为活性成分的药物组合物。任选地，本发明化合物可以单独使用，与本发明的其他化合物组合使用，或者与一种或多种其他治疗剂(例如抗癌剂或其他药物活性材料)组合使用。
无论选择何种施用途径，可以通过本领域技术人员已知的常规方法将本发明的化合物(其可以以合适的水合形式使用)和/或本发明的药物组合物配制成药学上可接受的剂型。
可以改变本发明的药物组合物中的活性成分的实际剂量水平，以便获得有效实现对于特定患者、组合物和施用方式而言的治疗反应的量的活性成分，而不会对患者造成毒性。
所选剂量水平将取决于多种因素，包括所采用的本发明的特定化合物或其酯、盐或酰胺的活性、施用途径、施用时间、所采用的特定化合物的排泄或代谢速率、吸收速率和程度、治疗的持续时间、与所采用的特定化合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料、所治疗的患者的年龄、性别、体重、状况、总体健康状况和先前病史，以及医学领域中熟知的类似因素。
具有本领域普通技术的医师或兽医可以容易地确定和开出所需药物组合物的有效量。例如，医师或兽医可以以低于实现治疗效果所需的水平开始药物组合物中采用的本发明化合物的剂量，并且逐渐增加剂量直到达到效果。
通常，本发明化合物的合适日剂量将是所述化合物有效产生治疗效果的最低剂量的量。通常这个有效剂量将取决于上述因素。通常，对于患者而言本发明化合物的口服、静脉内、脑室内和皮下剂量的范围将是约0.01mg至约50mg/千克体重/天。
如果希望，活性化合物的有效日剂量可以作为两个、三个、四个、五个、六个或更多个子剂量在全天以适当的间隔分开施用，任选地呈单位剂型。在本发明的某些方面，给药是每天施用一次。
虽然有可能单独施用本发明的化合物，但优选的是将所述化合物作为药物配制品(组合物)来施用。
当与本发明的化合物组合使用时，以上其他治疗剂可以例如以在Physicians'Desk Reference(PDR)中指示的那些量来使用，或者如由本领域普通技术人员以其他方式确定的那些量来使用。在本发明的方法中，一种或多种此类其他治疗剂可以在施用本发明的化合物之前、同时或之后施用。
制备方法
本发明的化合物可以通过有机化学领域的技术人员可用的多种方法合成。用于制备本发明的化合物的通用合成方案描述于下文中。这些方案是说明性的，并且不意在限制本领域技术人员可以用于制备本文所公开化合物的可能技术。制备本发明的化合物的不同方法对于本领域技术人员而言是清楚的。通过通用方案中所述的方法制备的本发明化合物的例子在下文所述的实施例部分中给出。同手性例子的制备可以通过本领域技术人员已知的技术进行。例如，可以通过经由手性相制备型HPLC分离外消旋产物或非对映异构体来制备同手性化合物。可替代地，可以通过已知会得到对映异构体或非对映异构体富集产物的方法制备来制备示例性化合物。
本章节所述的反应和技术在适合于所用试剂和材料的溶剂中进行，并且适用于所进行的转化。此外，在下文给出的合成方法的描述中，应理解，所有提出的反应条件(包括溶剂的选择、反应气氛、反应温度、实验的持续时间和处理程序)都是针对该反应的标准条件来选择的，本领域技术人员应当容易地认识到这一点。有机合成领域技术人员应该理解的是，存在于分子中各个部分上的官能团必须与所提出的试剂和反应相容。对与反应条件相容的取代基的此类限制对于本领域技术人员而言应是容易地清楚的，且在存在不相容的取代基时需要替代方案。这有时将需要判断以修改合成步骤的顺序或选择一种特定的方法方案而不是另一种，以便获得本发明的化合物。还应认识到，在此领域中计划任何合成途径时另一个重要的考虑因素是明智地选择用于保护本发明所述的化合物中存在的反应性官能团的保护基团。为受过培训的从业者描述许多替代方案的权威解释是Wuts和Greene,Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis,第四版,Wiley and Sons(2007)。
实施例
以下实施例阐明了本发明的特定和优选的实施方案，并且不限制本发明的范围。除非另有说明，否则化学缩写和符号以及科学缩写和符号具有其通常和惯常的含义。以上定义了实施例和本申请中其他地方使用的其他缩写。常见的中间体通常可用于制备多于一个的实施例，并且按顺序标识(例如中间体1、中间体2等)，并且缩写为Int.1或I1、Int.2或I2等。实施例的化合物由制备它们的实施例和步骤来标识(例如，“1-A”表示实施例1，步骤A)，或者在化合物是实施例的标题化合物的情况下仅由实施例来标识(例如，“1”表示实施例1的标题化合物)。在一些情况下，描述了中间体或实施例的替代性制备。通常，合成领域的熟练化学家可以设计基于一种或多种考虑因素可能合意的替代性制备，所述一种或多种考虑因素诸如较短的反应时间、较低廉的起始材料、易于操作或分离、提高的产率、适合于催化、避免毒性试剂、专用仪器的可得性以及减少的线性步骤的数量等。描述替代性制备的目的是进一步使得能够制备本发明的实施例。在一些情况下，在所概述的实施例和权利要求中的一些官能团可以通过本领域已知的熟知的生物电子等排置换来置换，例如，用四唑或磷酸酯部分置换羧酸基团。在氘代二甲基亚砜中收集的1H NMR数据在数据处理时使用水峰压制。所报告的光谱未针对水峰压制作用进行校正。与3.35ppm的水峰压制频率相邻的质子展现出降低的信号强度。
缩写
Ac 乙酰基
anhyd. 无水的
aq. 水性的
BOP 苯并三唑-1-基氧基三-(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐
Bu 丁基
DCM 二氯甲烷
DEA 二乙胺
DIEA或DIPEA 二异丙基乙基胺
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
dppf 1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁
Et 乙基
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
h、hour或hr 小时
HCl 盐酸
HPLC 高效压液相色谱法
LC 液相色谱法
LCMS 液相色谱-质谱法
M 摩尔
mM 毫摩尔
Me 甲基
MeOH 甲醇
Mesyl-Cl 甲磺酰氯
MHz 兆赫
mins 分钟
M+1 (M+H)+
MS 质谱法
n或N 正常
NH4OAc 乙酸铵
nM 纳摩尔
NMP N-甲基吡咯烷酮
Pd2(dba)3 三(二亚苄基丙酮)二钯
pet ether 石油醚
Ph 苯基
POCl3 三氯氧磷
rt或Ret时间 保留时间
sat. 饱和的
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
可用于合成可用于制备本发明实施例的中间体的方法示于以下方案中。
可以将所示类型的苯并噁嗪-2,4(1H)-二酮用强碱和甲基化试剂(诸如碘甲烷)处理以提供1-甲基-2H-苯并[d][1,3]噁嗪-2,4(1H)-二酮。可以将这些用例如硝基乙酸酯处理以产生1-甲基-3-硝基喹啉-2,4(1H,3H)-二酮。此类化合物可以进而转化为相关的4-氯衍生物，所述衍生物可以与多种官能化哌啶反应以提供本发明的实施例。
在其他方法中，可以将吡啶甲酸在标准条件下酯化，然后用例如乙酸酐处理，以得到3-乙酰胺基吡啶甲酸乙酯。可以将这些在标准条件下烷基化，随后用过氧化氢和三氟乙酸酐的混合物处理以获得相关的N-氧化物，例如，2-(乙氧基羰基)-3-(N-甲基乙酰胺基)吡啶1-氧化物。在本领域已知的条件下，这些中间体可以转化为6-氰基-3-(N-甲基乙酰胺基)吡啶甲酸酯，其在用碱处理时可以环化以得到1,5-萘啶-2,4(1H,3H)-二酮。这种类型的化合物可以以多种方式衍生以获得许多有用的中间体。例如，在标准硝化条件下处理可以产生相关的1-甲基-3-硝基-1,5-萘啶-2,4(1H,3H)-二酮，其可以在标准条件下转化为4-氯或4-三氟甲磺酸酯中间体，所述中间体可以与多种官能化哌啶反应以提供本发明的另外的实施例。可替代地，在溴化条件(例如，在DMF中的N-溴代琥珀酰亚胺)下处理可以得到相关的3-溴衍生物，所述衍生物在如上所述衍生时既允许在杂环的4位引入多个哌啶，也允许在萘啶的3位进一步衍生化。例如，可以通过本领域已知的偶联化学在此载体处引入芳族和杂芳族部分。
在另外的方法中，可以将由相关的3-氨基-吡啶甲酸乙酯产生的3-氨基-6-溴吡啶甲酸乙酯如上所述进行处理以得到6-溴-1-甲基-1,5-萘啶-2,4(1H,3H)-二酮，其允许在萘啶杂环的6位引入多种部分，一个例子是在此位置引入氰基官能团，如方案1所示。
方案1
Figure BDA0003708460770000261
可用于合成本发明的中间体的另外的方法示于以下方案中。
可以使用2-氰基乙酰氯处理的3-氨基-6-溴吡啶甲酸乙酯环化以产生6-溴-2,4-二氧代-1,2,3,4-四氢-1,5-萘啶-3-甲腈。可以将这些在标准条件下在N1处烷基化并且随后转化为相关的6-溴-3-氰基-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢-1,5-萘啶-4-基三氟甲烷磺酸酯，其可用于制备其他实施例。可替代地，用POCl3和二噁烷中的HCl进行连续处理得到4,6-二氯-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢-1,5-萘啶-3-甲腈，其也是有用的中间体。
方案2
Figure BDA0003708460770000262
Figure BDA0003708460770000271
可用于在本发明实施例的6位引入氰基基序的其他合成方法可以涉及在钯催化的条件下将6-溴-3-(2-氰基乙酰胺基)吡啶甲酸乙酯中间体用锌和氰化锌处理以产生3-(2-氰基乙酰胺基)-6-氰基吡啶甲酸乙酯。可以将这些使用如先前所述的方法衍生以得到4-氯-6-异氰基-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢-1,5-萘啶-3-甲腈，其可以与不同官能化的哌啶反应以产生本发明的多个实施例。
如以下方案所指示的，可以通过使适当官能化的萘啶酮和喹诺酮杂环与各种官能化的哌啶缩合来制备另外有用的中间体。可以通过使用例如与适当官能化的芳族或杂芳族偶联配偶体的光延(Mitzunobu)反应或SNAr反应的进一步精细处理，将此类中间体转化为本发明的实施例。
实施例
以下实施例阐明了本发明的特定和优选的实施方案，并且不限制本发明的范围。除非另有说明，否则化学缩写和符号以及科学缩写和符号具有其通常和惯常的含义。以上定义了实施例和本申请中其他地方使用的其他缩写。常见的中间体通常可用于制备多于一个的实施例，并且按顺序标识(例如中间体1、中间体2等)，并且缩写为Int.1或I1、Int.2或I2等。实施例的化合物由制备它们的实施例和步骤来标识(例如，“1-A”表示实施例1，步骤A)，或者在化合物是实施例的标题化合物的情况下仅由实施例来标识(例如，“1”表示实施例1的标题化合物)。在一些情况下，描述了中间体或实施例的替代性制备。通常，合成领域的熟练化学家可以设计基于一种或多种考虑因素可能合意的替代性制备，所述一种或多种考虑因素诸如较短的反应时间、较低廉的起始材料、易于操作或分离、提高的产率、适合于催化、避免毒性试剂、专用仪器的可得性以及减少的线性步骤的数量等。描述替代性制备的目的是进一步使得能够制备本发明的实施例。在一些情况下，在所概述的实施例和权利要求中的一些官能团可以通过本领域已知的熟知的生物电子等排置换来置换，例如，用四唑或磷酸酯部分置换羧酸基团。在氘代二甲基亚砜中收集的1H NMR数据在数据处理时使用水峰压制。所报告的光谱未针对水峰压制作用进行校正。与3.35ppm的水峰压制频率相邻的质子展现出降低的信号强度。
缩写
Ac 乙酰基
anhyd. 无水的
aq. 水性的
BINAP 2,2'-双(二苯基膦基)-1,1'-联萘
Boc 叔丁氧基羰基
BOP 苯并三唑-1-基氧基三-(二甲基氨基)-鏻六氟磷酸盐
Bu 丁基
DCM 二氯甲烷
DEA 二乙胺
DIEA或DIPEA 二异丙基乙基胺
DMF 二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
dppf 1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁
Et 乙基
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
h、hour或hr 小时
HCl 盐酸
HPLC 高效压液相色谱法
LC 液相色谱法
LCMS 液相色谱-质谱法
M 摩尔
mM 毫摩尔
Me 甲基
MeOH 甲醇
Mesyl-Cl 甲磺酰氯
MHz 兆赫
mins 分钟
M+1 (M+H)+
MS 质谱法
n或N 正常
NH4OAc 乙酸铵
nM 纳摩尔
NMP N-甲基吡咯烷酮
Pd2(dba)3 三(二亚苄基丙酮)二钯
pet ether 石油醚
Ph 苯基
POCl3 三氯氧磷
rt或Ret时间 保留时间
sat. 饱和的
TEA 三乙胺
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
可用于合成可用于制备本发明实施例的中间体的方法示于以下方案中。
LCMS条件：
方法A：柱：XBridge BEH XP C18(50x2.1mm)，2.5μm；流动相A：95％水:5％乙腈；10mM乙酸铵；流动相B：5％水:95％乙腈；10mM乙酸铵；流速：1.1mL/min；温度：50℃；时间(min)0-3；％B：0-100％)。
方法B：柱：Kinetex XB-C18(3x75mm)2.6μm；流动相A：10mM甲酸铵:乙腈(98:2)，流动相B：10mM甲酸铵:乙腈(2:98)，梯度＝经4分钟20％-100％B，然后在100％B下保持0.6分钟；温度：27℃；流速：1.0mL/min；检测：在220nm下的UV。
方法C：柱：Waters XBridge C18，2.1mm x 50mm，1.7μm颗粒；流动相A：5:95乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；流动相B：95:5乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；温度：50℃；梯度：经3min 0％B至100％B，然后在100％B下保持0.50min；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)。
方案1
Figure BDA0003708460770000291
实施例1
4-((2S,5R)-2,5-二乙基-4-(4-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈
Figure BDA0003708460770000292
在室温下向4-((2S,5R)-2,5-二乙基哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈盐酸盐(50mg，0.14mmol)在1,4-二噁烷(3mL)中的搅拌溶液中顺序添加1-溴-4-(三氟甲基)苯(78mg，0.34mmol)、碳酸铯(135mg，0.41mmol)和和rac-BINAP(17.2mg，0.028mmol)。将反应混合物用氩气吹扫并且在氩气下添加Pd2(dba)3(12.6mg，0.01mmol)。将反应小瓶密封并且在100℃下加热14h。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc(2X30mL)萃取，用水、盐水洗涤，经硫酸钠干燥并且在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过制备型HPLC[方法：Waters XBridge C18，19x150mm，5μm颗粒；流动相A：10mM乙酸铵；流动相B：乙腈；梯度：经20分钟15％-75％B，然后在100％B下保持5分钟；流速：15mL/min]纯化以得到4-((2S,5R)-2,5-二乙基-4-(4-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(4.5mg，7％产率)。LCMS：m/z，471.2(M+H)；保留时间2.20min；(LCMS方法：柱：XBridge BEH XP C18(50x2.1)mm，2.5μm；流动相A：95％水:5％乙腈；10mM乙酸铵；流动相B：5％水:95％乙腈；10mM乙酸铵；流速：1.1mL/min；温度：50℃；时间(min)0-3；％B:0-100％)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.28(dd,J＝4.2,8.8Hz,1H),8.03(br dd,J＝6.2,8.7Hz,1H),7.49(d,J＝8.8Hz,2H),7.06(br d,J＝8.1Hz,2H),6.02-5.65(m,1H),5.24-4.90(m,1H),4.16-3.97(m,1H),3.78(br d,J＝12.5Hz,1H),3.46(s,3H),3.42-3.35(m,1H),3.30(br s,1H),1.96-1.72(m,2H),1.61(br d,J＝7.6Hz,1H),1.45-1.28(m,1H),1.01-0.73(m,6H)。
表1中的实施例2是根据实施例1中公开的通用程序从合适的哌啶制备的。
表1
Figure BDA0003708460770000301
实施例3
4-((2S,5R)-5-乙基-4-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈
Figure BDA0003708460770000302
在室温下向4-((2S,5R)-5-乙基-2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(30mg，0.10mmol)在1,4-二噁烷(2mL)中的搅拌溶液中添加4-溴-2-氟-1-(三氟甲基)苯(28.0mg，0.11mmol)、Cs2CO3(94mg，0.29mmol)和X-Phos Pd-G2(1310584-14-5)(8mg，9.60μmol)。将反应混合物用氩气脱气5min。将小瓶密封并且在110℃下加热14h。将反应混合物冷却至室温，通过注射器过滤器过滤，用过量EtOAc洗涤并且将滤液在减压下浓缩以得到粗残余物，将其通过制备型HPLC[方法：Waters XBridge C18，19x150mm，5μm颗粒；流动相A：10mM乙酸铵；流动相B：乙腈；梯度：经20分钟15％-75％B，然后在100％B下保持5分钟；流速：15mL/min]纯化以提供4-((2S,5R)-5-乙基-4-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(19mg，40％产率)。LCMS：m/z，475.2(M+H)；保留时间2.12min；(LCMS方法：柱：XBridge BEHXP C18(50x2.1)mm，2.5μm；流动相A：95％水:5％乙腈；10mM乙酸铵；流动相B：5％水:95％乙腈；10mM乙酸铵；流速：1.1mL/min；温度：50℃；时间(min)0-3；％B：0-100％)；1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.27(d,J＝8.8Hz,1H),8.03(d,J＝9.0Hz,1H),7.47(t,J＝9.0Hz,1H),6.95(br d,J＝15.4Hz,1H),6.85(dd,J＝0.9,8.4Hz,1H),5.93-5.79(m,1H),5.21-4.89(m,1H),4.20-4.02(m,1H),3.87-3.69(m,2H),3.47(s,3H),3.42-3.35(m,1H),1.76-1.57(m,1H),1.53-1.18(m,4H),0.91(t,J＝7.5Hz,3H)。
表2中的实施例4是根据实施例3中公开的通用程序从合适的哌啶制备的。
表2
Figure BDA0003708460770000303
Figure BDA0003708460770000311
中间体1
(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(喹啉-8-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003708460770000312
向(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.155g，0.721mmol)在DMSO(4mL)中的溶液中添加8-溴喹啉(0.1g，0.481mmol)、[(2,6-二甲基苯基)氨基甲酰基]甲酸(0.019g，0.096mmol)、碘化铜(I)(9.15mg，0.048mmol)和磷酸三钾(0.204g，0.961mmol)。将反应混合物用氩气鼓泡1min。将反应容器加盖并且在100℃下加热过夜。通过LC-MS(Acquity UPLCBEH C18 2.1X50mm 1.7μm柱；0-100％B；2分钟梯度，3分钟运行时间0.8mL/min流速(溶剂A：90％水，10％甲醇，0.1％TFA：溶剂B：10％水，90％甲醇，0.1％TFA)监测反应。观察到产物形成并且观察到一些起始材料。添加另外的[(2,6-二甲基苯基)氨基甲酰基]甲酸(0.019g，0.096mmol)、碘化铜(I)(9.15mg，0.048mmol)和磷酸三钾(0.204g，0.961mmol)并且将反应混合物在100℃下加热过夜。LC-MS未检测到任何起始材料。将反应混合物过滤并且通过使用30x100mm Xterra柱和5％-100％B，12分钟梯度，14分钟运行(溶剂A：90％水，10％乙腈，0.1％TFA：溶剂B：10％水，90％乙腈，0.1％TFA)的反相制备型HPLC纯化。将所需级分浓缩以提供(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(喹啉-8-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.068g，0.199mmol，41.4％产率)。LC-MS：Rt＝1.76min，(M+H)＝342.35。
中间体2
8-((2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)喹啉
Figure BDA0003708460770000313
在室温下向(2S,5R)-2,5-二甲基-4-(喹啉-8-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(0.068g，0.199mmol)在二氯甲烷(4mL)中的溶液中添加HCl(0.149mL，0.597mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜。通过LC-MS(Acquity UPLC BEH C18 2.1X50mm 1.7μm柱；0-100％B；2分钟梯度，3分钟运行时间0.8mL/min流速(溶剂A：90％水，10％甲醇，0.1％TFA：溶剂B：10％水，90％甲醇，0.1％TFA)监测反应。观察到具有正确质量的产物峰。将反应混合物浓缩以获得作为粗产物的8-((2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)喹啉(0.048g，0.199mmol，100％产率)。LC-MS：Rt＝1.36min，(M+H)＝242.30。
实施例5
(S)-5-甲基-8-(2-甲基-4-(喹啉-8-基)哌嗪-1-基)-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈
Figure BDA0003708460770000321
在室温下在氮气下向6-氰基-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢-1,5-萘啶-4-基三氟甲烷磺酸酯(0.030g，0.090mmol)在DMF(15mL)中的溶液中添加8-((2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)喹啉(0.024g，0.099mmol)和DIEA(0.039mL，0.225mmol)。将反应容器加盖并且在80℃下加热过夜。通过LC-MS(Acquity UPLC BEH C18 2.1X50mm 1.7μm柱；0-100％B；2分钟梯度，3分钟运行时间0.8mL/min流速(溶剂A：90％水，10％甲醇，0.1％TFA：溶剂B：10％水，90％甲醇，0.1％TFA)监测反应。观察到产物形成。将反应混合物浓缩并且将重新溶解于甲醇中的残余物过滤并且经由具有以下条件的制备型LC/MS纯化：柱：XBridge C18，200mm x 19mm，5μm颗粒；流动相A：5:95乙腈:水(含10mM乙酸铵)；流动相B：95:5乙腈:水(含10mM乙酸铵)；梯度：在29％B下保持0分钟，经25分钟29％-69％B，然后在100％B下保持5分钟；流速：20mL/min；将所需级分合并并且浓缩以获得(S)-5-甲基-8-(2-甲基-4-(喹啉-8-基)哌嗪-1-基)-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(0.0057g，0.013mmol，15％产率)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.94(br d,J＝3.1Hz,1H),8.41(br d,J＝7.6Hz,1H),8.23-8.08(m,2H),7.57-7.50(m,1H),7.24(s,2H),7.13(s,1H),7.03(s,1H),6.16(s,1H),5.04-4.93(m,1H),4.91-4.81(m,1H),3.99-3.82(m,2H),3.57(s,2H),3.13(br d,J＝11.3Hz,1H),2.55(s,1H),1.33(d,J＝6.7Hz,3H),1.03(d,J＝6.7Hz,3H)。LC-MS:Rt＝1.21min,(M+H)＝425.26。
QC方法1：柱：Waters XBridge C18，2.1mm x 50mm，1.7μm颗粒；流动相A：5:95乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；流动相B：95:5乙腈:水(含0.1％三氟乙酸)；温度：50℃；梯度：经3min 0％B至100％B，然后在100％B下保持0.50min；流速：1mL/min；检测：MS和UV(220nm)
表3中的化合物是使用上文实施例5提及的相同的化学从6-氰基-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢-1,5-萘啶-4-基三氟甲烷磺酸酯制备的。
表3
Figure BDA0003708460770000322
Figure BDA0003708460770000331
Figure BDA0003708460770000341
Figure BDA0003708460770000351
Figure BDA0003708460770000361
Figure BDA0003708460770000371
实施例25
Figure BDA0003708460770000372
向8-((2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(50mg，0.17mmol)在DMSO(4mL)中的搅拌溶液中添加2-氯-6-氟苯并[d]噻唑(38mg，0.20mmol)和K2CO3(70mg，0.50mmol)。将反应混合物在90℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温，用EtOAc(3X30mL)萃取，用水、盐水洗涤并且经硫酸钠干燥。在减压下去除溶剂以得到粗残余物，将其通过制备型HPLC(柱：Waters XBridge C18，19x150mm，5μm颗粒；流动相A：10mM乙酸铵；流动相B：乙腈；梯度：经20分钟15％-50％B，然后在100％B下保持5分钟；流速：15mL/min)纯化以提供8-((2S,5R)-4-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(10mg，13％产率)。LCMS：m/z，449.2(M+H)；RT1.98min；(LCMS方法：柱：XBridge BEH XP C18(50x2.1)mm，2.5μm；流动相A：95％水:5％乙腈；10mM乙酸铵；流动相B：5％水:95％乙腈；10mM乙酸铵；流速：1.1mL/min；温度：50℃；时间(min)：0-3；％B：0-100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.26-8.18(m,1H),8.16-8.06(m,1H),7.74(dd,J＝2.7,8.8Hz,1H),7.46(dd,J＝4.6,8.8Hz,1H),7.13(dt,J＝2.7,9.0Hz,1H),6.14(s,1H),4.74-4.62(m,1H),4.43(br d,J＝2.4Hz,1H),3.93-3.70(m,3H),3.64(dd,J＝3.7,13.2Hz,1H),3.56(s,3H),1.40(d,J＝6.6Hz,3H),1.20(d,J＝6.6Hz,3H)。
中间体3
(2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003708460770000381
向(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，1.40mmol)在甲苯(4mL)中的溶液中添加2-溴-4-(4-氟苯基)噻唑(400mg，1.54mmol)、叔丁醇钠(404mg，4.20mmol)、Xantphos(81mg，0.14mmol)。将反应混合物用氩气脱气5min。接下来，在室温下添加Pd2(dba)3(128mg，0.14mmol)，然后在110℃下加热14h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释并且用EtOAc(3X50mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将粗产物通过快速柱色谱法(柱：12g二氧化硅；溶剂运行：在石油醚中的25％-40％EtOAc)纯化以得到5(2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，55％产率)。LCMS：m/z，392.3(M+H)；rt 2.34min；柱：Waters Acquity UPLC BEHC18(2.1x50mm)1.7μm，流动相A：10mM乙酸铵:乙腈(95:5)；流动相B：10mM乙酸铵:乙腈(5:95)，梯度＝经1.1分钟20％-90％B，然后在90％B下保持0.6分钟；温度：50℃；流速：0.7mL/min；检测：在220nm下的UV。
中间体4
2-((2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-4-(4-氟苯基)噻唑，HCl
Figure BDA0003708460770000382
在0℃下向(2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(250mg，0.64mmol)在DCM(5mL)中的溶液中添加在二噁烷中的4N HCl(0.8mL，3.19mmol)。允许反应混合物达到室温并且搅拌2h。在减压下去除溶剂并且干燥以提供2-((2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-4-(4-氟苯基)噻唑，HCl(150mg，81％产率)。LCMS：m/z，292.3(M+H)；rt 1.36min；柱：Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1x50mm)1.7μm，流动相A：10mM乙酸铵:乙腈(95:5)；流动相B：10mM乙酸铵:乙腈(5:95)，梯度＝经1.1分钟20％-90％B，然后在90％B下保持0.6分钟；温度：50℃；流速：0.7mL/min；检测：在220nm下的UV。
实施例26
8-((2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈
Figure BDA0003708460770000391
在室温下向2-((2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-4-(4-氟苯基)噻唑，HCl(54mg，0.16mmol)在乙腈(5mL)中的溶液中添加碳酸氢钠(125mg，1.50mmol)和6-氰基-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢-1,5-萘啶-4-基三氟甲烷磺酸酯(50mg，0.15mmol)。将所得的混合物在80℃下加热14h。将反应混合物冷却至室温并且在减压下去除溶剂以得到粗残余物。将粗残余物通过制备型HPLC(柱：Waters XBridge C18，150mm x 19mm，5μm颗粒；流动相A：5:95乙腈:水(含10mM乙酸铵)；流动相B：95:5乙腈:水(含10mM乙酸铵)；梯度：在15％B下保持0分钟，经25分钟15-55％B，然后在100％B下保持5分钟；流速：15mL/min，柱温：25℃)纯化以提供8-((2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(4.3mg，6％产率)。LCMS：m/z，475.1(M+H)；RT 2.08min；(LCMS方法：柱：XBridge BEH XP C18(50x2.1)mm，2.5μm；流动相A：95％水:5％乙腈；10mM乙酸铵；流动相B：5％水:95％乙腈；10mM乙酸铵；流速：1.1mL/min；温度：50℃；时间(min)0-3；％B：0-100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.26-8.17(m,1H),8.15-8.07(m,1H),7.92(dd,J＝5.6,8.6Hz,2H),7.30-7.14(m,3H),6.14(s,1H),4.76-4.63(m,1H),4.37(br s,1H),3.87(br d,J＝12.5Hz,1H),3.76-3.61(m,3H),3.56(s,3H),1.37(d,J＝6.6Hz,3H),1.22(d,J＝6.6Hz,3H)。
中间体5
5-溴-4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑
Figure BDA0003708460770000392
在室温下向4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑(800mg，4.14mmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加Br2(0.25mL，4.55mmol)，然后在45℃下加热4h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释并且用EtOAc(3X50mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将粗产物通过快速柱色谱法(柱：12g二氧化硅；溶剂运行：在石油醚中的25％-40％EtOAc)纯化以得到5-溴-4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑(900mg，80％产率)。1H NMR(400MHz,氯仿-d)δppm 7.82-7.96(m,2H),7.08-7.16(m,2H),2.70(s,3H)。
中间体6
(2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003708460770000401
向(2S,5R)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，1.40mmol)在甲苯(4mL)中的溶液中添加5-溴-4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑(420mg，1.54mmol)、叔丁醇钠(410mg，4.20mmol)和Xantphos(81mg，0.14mmol)。将反应混合物用氩气脱气5min。接下来，在室温下添加Pd2(dba)3(130mg，0.14mmol)，然后在110℃下加热14h。将反应混合物冷却至室温，用水稀释并且用EtOAc(3X50mL)萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并在减压下浓缩。将粗产物通过快速柱色谱法(柱：12g二氧化硅；溶剂运行：在石油醚中的25％-40％EtOAc)纯化以得到(2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(350mg，62％产率)。LCMS：m/z，406.4(M+H)；rt2.32min；柱：Waters Acquity UPLCBEH C18(2.1x50mm)1.7μm，流动相A：10mM乙酸铵:乙腈(95:5)；流动相B：10mM乙酸铵:乙腈(5:95)，梯度＝经1.1分钟20％-90％B，然后在90％B下保持0.6分钟；温度：50℃；流速：0.7mL/min；检测：在220nm下的UV。
中间体7
5-((2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑盐酸盐
Figure BDA0003708460770000402
在0℃下向(2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(300mg，0.74mmol)在DCM(8mL)中的溶液中添加在二噁烷中的4N HCl(0.8mL，3.70mmol)。允许反应混合物达到室温并且搅拌2h。在减压下去除溶剂并且干燥以提供5-((2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑，HCl(180mg，71％产率)。LCMS：m/z，306.3(M+H)；rt 1.11min；柱：Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1x50mm)1.7μm，流动相A：10mM乙酸铵:乙腈(95:5)；流动相B：10mM乙酸铵:乙腈(5:95)，梯度＝经1.1分钟20％-90％B，然后在90％B下保持0.6分钟；温度：50℃；流速：0.7mL/min；检测：在220nm下的UV。
实施例27
8-((2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈
Figure BDA0003708460770000411
在室温下向5-((2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑，HCl(50mg，0.15mmol)在乙腈(5mL)中的溶液中添加碳酸氢钠(62mg，0.73mmol)和6-氰基-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢-1,5-萘啶-4-基三氟甲烷磺酸酯(59mg，0.18mmol)。将反应混合物在80℃下加热14h。将反应混合物冷却至室温并且在减压下去除溶剂以得到粗残余物。将粗残余物通过制备型HPLC(柱：Waters XBridge C18，150mm x 19mm，5μm颗粒；流动相A：5:95乙腈:水(含10mM乙酸铵)；流动相B：95:5乙腈:水(含10mM乙酸铵)；梯度：在15％B下保持0分钟，经25分钟15％-65％B，然后在100％B下保持5分钟；流速：15mL/min，柱温：25℃)纯化以提供8-((2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(7.8mg，10％产率)。LCMS：m/z，489.2(M+H)；rt1.44min；(LCMS方法：柱：XBridge BEH XP C18(50x2.1)mm，2.5μm；流动相A：95％水:5％乙腈；0.1％TFA；流动相B：5％水:95％乙腈；0.1％TFA；流速：1.1mL/min；温度：50℃；时间(min)0-3；％B：0-100％)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm 8.15-8.23(m,1H),7.95-8.12(m,4H),7.28(t,J＝8.8Hz,2H),6.10(s,1H),4.42-4.53(m,1H),4.02-4.13(m,1H),3.95(d,J＝15.9Hz,1H),3.58-3.61(m,1H),3.55(s,3H),3.23-3.30(m,1H),3.09-3.16(m,1H),1.27(d,J＝6.6Hz,3H),1.21(d,J＝6.4Hz,3H),(3H可能被溶剂峰遮挡)。
生物测定
本发明化合物的药理学特性可通过许多生物测定证实。已经用本发明的化合物进行以下示例的生物测定。
测定1：体外DGK抑制测定-方法A
使用挤出脂质体进行DGKα和DGKζ反应(DGKα和DGKζLIPGLO测定)。在50mM MOPS pH7.5、100mM NaCl、10mM MgCl2、1μM CaCl2和1mM DTT(测定缓冲液)中进行反应。对于挤出脂质体反应，脂质底物浓度为2mM PS、0.25mM DAG和2.75mM PC。在150μM ATP中进行反应。DGKα和DGKζ的酶浓度为5nM。
如下进行化合物抑制研究：将溶解于DMSO中的每种测试化合物的50nL液滴(对于每种化合物，最高浓度10mM，11点3倍稀释系列)转移至白色1536孔板(Corning 3725)的孔中。通过将2.5mL 4x酶溶液(在测定缓冲液中的20nM DGKα或DGKζ(如下所述制备))和2.5mL的4x脂质体溶液(组成在以下所述)合并来制备2x最终反应浓度的5mL酶/底物溶液，并且将其在室温下孵育10分钟。接下来，将1μL 2x酶/底物溶液添加到含有测试化合物的孔中并且通过添加1μL 300uM ATP开始反应。允许反应进行1h，此后添加2μL Glo试剂(PromegaV9101)并且孵育40分钟。接下来，添加4μL激酶检测试剂并且孵育30分钟。使用EnVision酶标仪记录发光。从通过无酶对照反应(100％抑制)和仅媒介物反应(0％抑制)产生的ATP转化来计算抑制百分比。以11种浓度评价化合物以确定IC50。
4x脂质体制备
对于4x脂质体溶液，脂质组成是5mol％DAG(Avanti 800811O)、40mol％PS(Avanti840035P)和55mol％PC(Avanti 850457)，总脂质浓度为15.2mg/mL。将PC、DAG和PS溶解在氯仿中，合并，并且在真空中干燥成薄膜。将脂质在50mM MOPS pH 7.5、100mM NaCl、5mM MgCl2中水合至20mM，并且冻融五次。将脂质悬浮液通过100nm聚碳酸酯过滤器挤出十一次。进行动态光散射以确认脂质体的尺寸(半径为50-60nm)。将脂质体制剂储存在4℃下长达四周。
人DGKα和DGKζ的杆状病毒表达
根据制造商的方案使用Bac至Bac杆状病毒表达系统(Invitrogen)产生人DGK-α-TVMV-His-pFBgate和人DGK-ζ-转录变体-2-TVMV-His-pFBgate杆状病毒样品。用于表达DGK-α和DGK-ζ的DNA分别具有SEQ ID NO:1和3。以1:1500的病毒/细胞比使用受感染的Sf9细胞实现杆状病毒扩增，并且在转染后在27℃下生长65小时。
在来自GE Healthcare Bioscience的Cellbag 50L WAVE-生物反应器系统20/50中进行每种蛋白质的表达放大。将12L在ESF921昆虫培养基(Expression System)中生长的2×106个细胞/mL的Sf9细胞(Expression System，戴维斯，加利福尼亚州)用病毒原液以1:200的病毒/细胞比感染，并且在感染后在27℃下生长66-68小时。通过在
Figure BDA0003708460770000421
RC12BP离心机中在4℃下以2000rpm离心20min来收获受感染的细胞培养物。将细胞沉淀储存在-70℃直到纯化。
人DGK-α和DGK-ζ的纯化
从受Sf9杆状病毒感染的昆虫细胞糊纯化全长人DGKα和DGKζ，其各自表达含有TVMV可切割C末端六His标签序列(分别为SEQ ID NO:2和4)并且如上所述产生。通过氮气空化方法用氮弹(Parr Instruments)裂解细胞，并且通过离心使裂解物澄清。在
Figure BDA0003708460770000422
Purifier Plus系统上使用三个连续的柱色谱步骤将澄清的裂解物纯化至约90％同质性。这三步柱色谱法包括镍亲和树脂捕获(即HisTrap FF粗品，GE Healthcare)，然后是尺寸排阻色谱法(即对于DGK-α为HiLoad 26/600 Superdex 200制备级，GE Healthcare，并且对于DGK-ζ为HiPrep 26/600 Sephacryl S 300_HR，GE Healthcare)。第三步是离子交换色谱法，并且对于两种亚型有所不同。使用Q-Sepharose阴离子交换色谱法(GE Healthcare)精制DGKα。使用SP Sepharose阳离子交换色谱法(GE Healthcare)精制DGKζ。蛋白质以≥2mg/mL的浓度递送。两种蛋白质的配制缓冲液相同：50mM Hepes，pH 7.2，500mM NaCl、10％v/v甘油、1mM TCEP和0.5mM EDTA。
测定2：体外DGK抑制测定-方法B
使用任一种挤出脂质体进行DGKα和DGKζ反应(DGKα和DGKζLIPGLO测定)。在50mMMOPS pH 7.5、100mM NaCl、10mM MgCl2、1μM CaCl2和1mM DTT(测定缓冲液)中进行反应。对于挤出脂质体反应(5mM总脂质)，脂质底物浓度为2mM PS、0.25mM DAG和2.75mM PC。在150μM ATP中进行反应。DGKα和DGKζ的酶浓度为5nM。
如下进行化合物抑制研究：将溶解于DMSO中的每种测试化合物的25nL液滴(对于每种化合物，最高浓度10mM，11点3倍稀释系列)转移至白色1536孔板(Corning 3725)的孔中。通过将2.5mL 4x酶溶液(在测定缓冲液中的20nM DGKα或DGKζ(如下所述制备))和2.5mL的4x洗涤剂/脂质胶束溶液(组成在以下所述)合并来制备2x最终反应浓度的5mL酶/脂质底物溶液，并且将其在室温下孵育10分钟。接下来，将1μL 2x酶/脂质底物溶液添加到含有测试化合物的孔中并且通过添加1μL 300uM ATP开始反应。允许反应进行2h，此后添加2μLGlo试剂(Promega V9101)并且孵育40分钟。接下来，添加4μL激酶检测试剂并且孵育30分钟。使用EnVision酶标仪记录发光。从通过无酶对照反应(100％抑制)和仅媒介物反应(0％抑制)产生的ATP转化来计算抑制百分比。以11种浓度评价化合物以确定IC50。
2x脂质体制备
对于脂质体溶液，脂质组成是5mol％DAG(Avanti 800811O)、40mol％PS(Avanti840035P)和55mol％PC(Avanti 850457)，总脂质浓度为7-8mg/mL。将PC、DAG和PS溶解在氯仿中，合并，并且在真空中干燥成薄膜。将脂质在50mM MOPS pH 7.5、100mM NaCl、5mMMgCl2中水合至20mM，并且冻融五次。将脂质悬浮液通过100nm聚碳酸酯过滤器挤出10-12次。进行动态光散射以确认脂质体的尺寸(半径为50-60nm)。将脂质体制剂储存在4℃下长达四周。
近全长人DGKα和全长DGKζ的杆状病毒表达
根据制造商的方案，使用Bac至Bac杆状病毒表达系统(Invitrogen)产生人MA-hDGKα-(S9-S727)-Ct-TVMV-His-pFBgate和全长人DGK-ζ-转录变体-2-TVMV-His-pFBgate杆状病毒样品(注意：DGKα试剂名称中的MA-指示在Ser-9之前添加了两个额外氨基酸)。用于表达DGK-α(9-727)和DGK-ζ的DNA分别具有SEQ ID NO:5和3。以1:1500的病毒/细胞比使用受感染的Sf9细胞实现杆状病毒扩增，并且在转染后在27℃下生长65小时。
在2L烧瓶中进行近全长DGK-α(9-727)蛋白的表达放大，并且使用来自GEHealthcare Bioscience的Cellbag 50L WAVE-生物反应器系统20/50进行全长DGKζ蛋白的表达放大。将蛋白质使用相似的条件以不同体积表达。对于DGKα(9-727)的表达，使用2x2L烧瓶(每个含有0.8L最终体积的培养基)，并且使DGKζ在50L Cellbag中以12L的规模生长。对于每一种，将初始密度为2×106个细胞/mL的Sf9细胞(Expression System，戴维斯，加利福尼亚州)接种在ESF921昆虫培养基(Expression System)中，用病毒原液以1:200的病毒/细胞比感染，并且在感染后在27℃下生长66-68小时。通过在
Figure BDA0003708460770000432
RC12BP离心机中在4℃下以2000rpm离心20min来收获受感染的细胞培养物。将细胞沉淀储存在-80℃直到纯化。
人DGK-α和DGK-ζ的纯化
从受Sf9杆状病毒感染的昆虫细胞糊纯化人DGKα(9-727)和全长DGKζ，其各自表达含有TVMV可切割C末端六His标签序列(分别为SEQ ID NO:2和4)并且如上所述产生。将细胞糊解冻并且悬浮在缓冲液(50mM HEPES，pH 7.2，300mM NaCl，10％v/v甘油，1mM TCEP，含有benzonase和蛋白酶抑制剂)中，达到1:10v/v的原始培养体积。使用氮气空化方法用氮弹(Parr Instruments)实现裂解，并且通过高速离心使裂解物澄清。在
Figure BDA0003708460770000431
Purifier Plus系统上分别使用两个或三个连续的柱色谱步骤将澄清的裂解物纯化至约90％同质性。两种亚型均通过以下方式来纯化：使用咪唑梯度洗脱的镍亲和纯化(即HisTrap FF，GEHealthcare)，然后进行尺寸排阻色谱法(即对于DGKα(9-727)，HiLoad 26/600Superdex200制备级，GE Healthcare；以及对于DGKζ，HiPrep 26/600 Sephacryl S 300HR，GEHealthcare)。这两个步骤产出>90％纯度的DGKα(9-727)。实现全长DGKζ的类似纯度需要第三步，其采用阳离子交换色谱法(SP Sepharose FF，GE Healthcare)，并且用NaCl梯度洗脱。两种蛋白质的最终配制缓冲液相似，其中DGKα(9-727)在50mM Hepes、pH 7.3、300mMNaCl、10％v/v甘油和1mM TCEP中制备，并且全长DGKζ在50mM Hepes、pH 7.3、500mM NaCl、5％v/v甘油和1mM TCEP中制备。将蛋白质浓缩至1-2mg/mL，快速冷冻，并且保持在-80℃下用于长期储存。
测定3：Raji CD4 T细胞IL2测定
使用预激活的CD4 T细胞和Raji细胞在4μL体积中进行1536孔IL-2测定。在测定之前，通过用分别为1.5μg/mL、1μg/mL和10μg/mL的α-CD3、α-CD28和PHA处理将CD4 T细胞预激活。将Raji细胞用10,000ng/mL的葡萄球菌肠毒素B(SEB)处理。首先将连续稀释的化合物转移至1536孔测定板(Corning，#3727)，然后添加2μL预激活的CD4 T细胞(最终密度为6000个细胞/孔)和2μL经SEB处理的Raji细胞(2000个细胞/孔)。在37℃/5％CO2孵育器中孵育24小时后，将4μl IL-2检测试剂添加到测定板(Cisbio，#64IL2PEC)。在Envision读板器上读取测定板。为了评估化合物的细胞毒性，将Raji或CD4 T细胞与连续稀释的化合物一起孵育。孵育24小时后，添加4μL Cell Titer Glo(Promega，#G7572)，并且在Envision读板器上读取板。使用四参数逻辑斯谛公式y＝A+((B-A)/(1+((C/x)^D)))计算50％有效浓度(IC50)，其中A和B分别表示最小和最大激活或抑制％，C是IC50，D是希尔斜率(hill slope)并且x表示化合物浓度。
测定4：CellTiter-Glo CD8 T细胞增殖测定
将冷冻的幼稚人CD8 T细胞在RPMI+10％FBS中解冻，在37℃下孵育2h，并且计数。将384孔组织培养板在4℃下用20μl在普通RPMI中的0.1μg/mL的抗人CD3涂布过夜，将其从板上去除，然后将20k/40μL CD8 T细胞和0.5μg/ml可溶性抗人CD28添加到每个孔中。在细胞铺板后立即将化合物用echo仪器添加(echoed)到细胞板。在37℃的孵育器中孵育72h后，将10μL CellTiter-glo试剂(Promega目录号G7570)添加到每个孔中。将板剧烈振荡5min，在室温下再孵育15min，并且在Envision上读取CD8 T细胞增殖。在分析中，0.1μg/mL抗CD3和0.5μg/mL抗CD28刺激的CD8 T细胞信号为背景。使用3μM参考化合物8-(4-(双(4-氟苯基)甲基)哌嗪-1-基)-5-甲基-7-硝基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈设置100％范围，并且EC50为绝对50％以归一化数据。
测定5：DGK AP1-报告物测定
使用来自SABiosciences的Cignal Lenti AP1报告物(luc)试剂盒(CLS-011L)产生Jurkat AP1-荧光素酶报告物。
使用Echo550仪器将化合物从Echo LDV板转移至384孔板(白色，实心底部，不透明的PE CulturPlate 6007768)的单独的孔。样品量为30nL/孔；并且每个源板一个目标板。通过将40mL细胞(2x20mL)转移至干净的50mL锥形管中来制备细胞悬液。通过离心(1200rpm；5min；环境温度)浓缩细胞。去除上清液，并且将所有细胞悬浮在RPMI(Gibco 11875)+10％FBS中，以使浓度为1.35x106个细胞/ml。使用多通道移液器手动将细胞(30μL/孔的细胞悬浮液)添加到含有化合物的384孔TC板中，4.0x104个细胞/孔。将细胞板在37℃和5％CO2下孵育20分钟。
在孵育过程中，通过将3μL aCD3(1.3mg/mL)与10mL培养基混合[最终浓度＝0.4μg/mL]来制备抗CD3抗体(αCD3)溶液。接下来，将1.5μl aCD3(1.3mg/mL)与0.5mL培养基混合[最终浓度＝4μg/ml]。20分钟后，将10μL培养基添加到第1列的所有孔(孔A至M)中，并且向第1列(行N至P)中添加每孔10μLαCD3(4ug/mL)用于参考。然后使用多通道移液器添加每孔10μLαCD3(0.4ug/mL)。将αCD3刺激的+/-化合物处理的细胞在37℃ 5％CO2下孵育6小时。
在此孵育阶段期间，将Steady-Glo(Promega E2520)试剂缓慢解冻至环境温度。接下来，使用多滴式Combi-分配器添加20μL Steady-Glo试剂/孔。通过离心(2000rpm，环境温度，10秒)去除气泡。将细胞在室温下孵育5分钟。通过使用Envision读板仪根据发光方案测量相对光单位(RLU)来表征样品。使用参考化合物8-(4-(双(4-氟苯基)甲基)哌嗪-1-基)-5-甲基-7-硝基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈分析数据以归一化100％抑制。
测定6：鼠细胞毒性T淋巴细胞测定
开发了抗原特异性细胞裂解T细胞(CTL)测定，以在功能上评价DGKα和DGKζ抑制剂增强效应T细胞介导的肿瘤细胞杀伤活性的能力。从OT-1转基因小鼠分离的CD8+T细胞识别抗原呈递细胞MC38，其呈递卵清蛋白来源的肽SIINFEKL。同源抗原的识别启动了OT-1抗原特异性CD8+T细胞的细胞裂解活性。
如下产生功能性CTL细胞：从8-12周龄小鼠分离OT-1脾细胞，并且在1μg/mL的SIINFEKL肽和10U/mL的mIL2的存在下扩增。三天后，添加具有mIL2 U/ml的新鲜培养基。在扩增的第5天，分离CD8+T细胞并且准备好使用。激活的CTL细胞可以冷冻储存6个月。单独地，将一百万个MC38肿瘤细胞用1μg/mL的SIINFEKL-OVA肽在37℃下脉冲处理3小时。将细胞用新鲜培养基洗涤(3X)以去除过量肽。最后，将在96孔U底板中用DGK抑制剂预处理1小时的CTL细胞与加载抗原的MC38肿瘤细胞以1:10的比率合并。然后将细胞在700rpm下旋转5min，并且放置在37℃的孵育器中过夜。24小时后，收集上清液以通过购自Perkin Elmer的AlphaLisa分析IFN-γ细胞因子水平。
测定7：PHA增殖测定
将来自冷冻原液的植物血凝素(PHA)刺激的胚细胞在补充有10％胎牛血清(SigmaAldrich，圣路易斯，密苏里州)的RPMI培养基(Gibco，ThermoFisher Scientific，沃尔瑟姆，马萨诸塞州)中孵育一小时，然后添加到384孔板的单独孔(10,000个细胞/孔)中。将化合物转移至384孔板的单独孔中，并且将经处理的细胞在含有人IL2(20ng/mL)的培养基中在37℃ 5％CO2下保持72h，然后根据制造商的说明(Promega，麦迪逊，威斯康星州)使用MTS试剂[3-(4,5-二甲基-2-基)-5-(3-羧甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓]测量生长。通过比较IL2刺激(0％抑制)与未刺激对照(100％抑制)之间的值来计算抑制百分比。基于对IL2刺激与未刺激处理之间的倍数诱导的50％抑制来计算抑制浓度(IC50)的确定。
测定8：人CD8 T细胞IFN-γ测定
将冷冻的幼稚人CD8 T细胞在AIM-V培养基中解冻，在37℃下孵育2h，并且计数。将384孔组织培养板在4℃下用20μL在PBS中0.05μg/mL的抗人CD3涂布过夜，将其从板上去除，然后将40,000个细胞/40微升CD8 T细胞和0.1μg/mL可溶性抗人CD28添加到每个孔中。细胞铺板后，立即使用Echo液体处理器将化合物转移到细胞板上。在37℃孵育器中孵育20h后，将3微升/孔的上清液转移到新的384孔白色测定板中，以进行细胞因子测量。
使用AlphLISA试剂盒(目录号AL217)如制造商手册(Perkin Elmer)所述定量干扰素-γ(IFN-γ)。将来自每个孔的计数转换为IFN-γ浓度(pg/mL)。通过将0.05μg/mL抗CD3加0.1μg/mL抗CD28设置为基线并且将3μM的参考化合物8-(4-(双(4-氟苯基)甲基)哌嗪-1-基)-5-甲基-7-硝基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈与抗CD3加抗CD28的共刺激设置为100％激活来确定化合物EC50值。
测定9：人CD8 T细胞pERK测定
将冷冻的幼稚人CD8 T细胞在AIM-V培养基中解冻，在37℃下孵育2h，并且计数。将CD8阳性T细胞以在AIM-V培养基中20,000个细胞/孔添加到384孔组织培养板中。将一种化合物添加到每个孔中，然后以0.3μg/mL的最终浓度添加珠结合的抗人CD3和抗CD28mAb。将细胞在37℃下孵育10分钟。通过添加来自AlphaLISA Surefire试剂盒的裂解缓冲液终止反应。(Perkin Elmer，目录号ALSU-PERK-A)。将裂解物(5μL/孔)转移到新的384孔白色测定板中进行pERK激活测量。
通过将抗CD3加抗CD28设置为基线并且将3μM的8-(4-(双(4-氟苯基)甲基)哌嗪-1-基)-5-甲基-7-硝基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈与抗CD3加抗CD28的共刺激设置为100％激活来确定化合物EC50值。
测定10：人全血IFN-γ测定
将从健康供体获得的人静脉全血(22.5μL/孔)在加湿的95％空气/5％CO2孵育器中在37℃下用化合物预处理一小时。将血液用2.5μL抗人CD3和抗CD28 mAb各自以1μg/mL的最终浓度在37℃下刺激24小时。使用AlphLISA试剂盒(目录号AL217)测量上清液中的IFN-γ。
通过将抗CD3加抗CD28设置为基线并且将3μM的参考化合物，8-(4-(双(4-氟苯基)甲基)哌嗪-1-基)-5-甲基-7-硝基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈与抗CD3加抗CD28的共刺激设置为100％激活来确定化合物EC50值。
测定11：DGK人全血pERK测定
用获自健康供体的人静脉全血(用肝素作为抗凝剂抽取)进行人全血ERK磷酸化测定。使用ECHO 550声学分配器(Labcyte)将在DMSO中连续稀释的化合物(11点，3倍)以20nL/孔添加到384孔板中，以在测定中达到20μM的最终起始浓度。将肝素化的人全血以9μL/孔添加到化合物板中，并且在加湿的95％，空气/5％CO2孵育器中在37℃下孵育一小时。化合物孵育一小时后，将1μL人抗CD3抗体(内部)在存在交联抗体山羊抗小鼠IgG(4μg/mL)的情况下以1μg/mL最终浓度添加到孔中用于刺激途径，并且在37℃下另外孵育15分钟。通过添加90μL固定/裂解缓冲液(BD 558049)停止刺激。将细胞洗涤并且在室温下用抗CD8 PE(BD555635)抗体染色60分钟，再次洗涤，并且使用Perm III缓冲液(BD 558050)在冰上渗透化处理30分钟。然后将细胞用Alexa
Figure BDA0003708460770000463
647抗ERK1/2Phospho(Thr202/Tyr204)抗体(Bioleged 675504)以1:50的稀释度染色60分钟。将样品洗涤并且重新悬浮在含有1％BSA的dPBS(dPBS，Gibco 14190136；BSA，Sigma-Aldrich A9205)中。使用
Figure BDA0003708460770000461
iQueScreener PLUS分析样品。通过CD8阳性群体中pERK阳性群体的百分比来定量pERK激活。化合物效力的计算基于20μM浓度的内部化合物作为100％激活，以及抗CD3对照作为0％激活。
编码hDGKα-(M1-S735)-Ct-TVMV-His的核苷酸序列：
Figure BDA0003708460770000462
Figure BDA0003708460770000471
(SEQ ID NO:1)
hDGKα-(M1-S735)-Ct-TVMV-His的氨基酸序列：
Figure BDA0003708460770000472
(SEQ ID NO:2)
编码hDGKζ-(M1-A928)-转录变体-2Ct-TVMV-His的核苷酸序列：
Figure BDA0003708460770000473
Figure BDA0003708460770000481
(SEQ ID NO:3)
hDGKζ-(M1-A928)-转录变体-2Ct-TVMV-His的氨基酸序列：
Figure BDA0003708460770000482
(SEQ ID NO:4)
编码MA-hDGKα-(S9-S727)-Ct-TVMV-His的核苷酸序列：
Figure BDA0003708460770000483
Figure BDA0003708460770000491
(SEQ ID NO:5)
MA-hDGKα-(S9-S727)-Ct-TVMV-His的氨基酸序列：
Figure BDA0003708460770000492
(SEQ ID NO:6)
序列表
<110> 百时美施贵宝公司
<120> 用作T细胞激活剂的经取代的杂芳基化合物
<130> 13370-WO-PCT
<150> IN 201911053558
<151> 2019-12-23
<160> 6
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 2256
<212> DNA
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 1
atggccaagg agaggggcct aataagcccc agtgattttg cccagctgca aaaatacatg 60
gaatactcca ccaaaaaggt cagtgatgtc ctaaagctct tcgaggatgg cgagatggct 120
aaatatgtcc aaggagatgc cattgggtac gagggattcc agcaattcct gaaaatctat 180
ctcgaagtgg ataatgttcc cagacaccta agcctggcac tgtttcaatc ctttgagact 240
ggtcactgct taaatgagac aaatgtgaca aaagatgtgg tgtgtctcaa tgatgtttcc 300
tgctactttt cccttctgga gggtggtcgg ccagaagaca agttagaatt caccttcaag 360
ctgtacgaca cggacagaaa tgggatcctg gacagctcag aagtggacaa aattatccta 420
cagatgatgc gagtggctga atacctggat tgggatgtgt ctgagctgag gccgattctt 480
caggagatga tgaaagagat tgactatgat ggcagtggct ctgtctctca agctgagtgg 540
gtccgggctg gggccaccac cgtgccactg ctagtgctgc tgggtctgga gatgactctg 600
aaggacgacg gacagcacat gtggaggccc aagaggttcc ccagaccagt ctactgcaat 660
ctgtgcgagt caagcattgg tcttggcaaa cagggactga gctgtaacct ctgtaagtac 720
actgttcacg accagtgtgc catgaaagcc ctgccttgtg aagtcagcac ctatgccaag 780
tctcggaagg acattggtgt ccaatcacat gtgtgggtgc gaggaggctg tgagtccggg 840
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tgtgggctgc tccgggatca catcctgcct ccatcttcca tctatcccag tgtcctggcc 1020
tctggaccgg atcgtaaaaa tagcaaaaca agccagaaga ccatggatga tttaaatttg 1080
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gtcaatccta agagtggcgg gaagcagggg cagagggtgc tctggaagtt ccagtatata 1200
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ttcaaggatg ttcctgatag ccggattttg gtgtgtggtg gagacggcac agtaggctgg 1320
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tctgtggagg tgatacctca acaaactgaa gaaaaaagtg acccagtccc ctttcaaatc 1560
atcaataact acttctctat tggcgtggat gcctctattg ctcatcgatt ccacatcatg 1620
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gagatctgtg ggaaaccgct ggatctgagc aacctgtccc tagaaggcat cgcagtgcta 1800
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aagtgctctg agatcacctt ccacaccaca aaaacccttc ccatgcaaat tgacggagaa 2100
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atgggcccac ccccccgctc caccaatttc tttggcttct tgagcggatc ctcggagaca 2220
gtgcggtttc agggacacca ccaccatcac cactga 2256
<210> 2
<211> 737
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 2
Met Ala Ser Pro Ser Asp Phe Ala Gln Leu Gln Lys Tyr Met Glu Tyr
1 5 10 15
Ser Thr Lys Lys Val Ser Asp Val Leu Lys Leu Phe Glu Asp Gly Glu
20 25 30
Met Ala Lys Tyr Val Gln Gly Asp Ala Ile Gly Tyr Glu Gly Phe Gln
35 40 45
Gln Phe Leu Lys Ile Tyr Leu Glu Val Asp Asn Val Pro Arg His Leu
50 55 60
Ser Leu Ala Leu Phe Gln Ser Phe Glu Thr Gly His Cys Leu Asn Glu
65 70 75 80
Thr Asn Val Thr Lys Asp Val Val Cys Leu Asn Asp Val Ser Cys Tyr
85 90 95
Phe Ser Leu Leu Glu Gly Gly Arg Pro Glu Asp Lys Leu Glu Phe Thr
100 105 110
Phe Lys Leu Tyr Asp Thr Asp Arg Asn Gly Ile Leu Asp Ser Ser Glu
115 120 125
Val Asp Lys Ile Ile Leu Gln Met Met Arg Val Ala Glu Tyr Leu Asp
130 135 140
Trp Asp Val Ser Glu Leu Arg Pro Ile Leu Gln Glu Met Met Lys Glu
145 150 155 160
Ile Asp Tyr Asp Gly Ser Gly Ser Val Ser Gln Ala Glu Trp Val Arg
165 170 175
Ala Gly Ala Thr Thr Val Pro Leu Leu Val Leu Leu Gly Leu Glu Met
180 185 190
Thr Leu Lys Asp Asp Gly Gln His Met Trp Arg Pro Lys Arg Phe Pro
195 200 205
Arg Pro Val Tyr Cys Asn Leu Cys Glu Ser Ser Ile Gly Leu Gly Lys
210 215 220
Gln Gly Leu Ser Cys Asn Leu Cys Lys Tyr Thr Val His Asp Gln Cys
225 230 235 240
Ala Met Lys Ala Leu Pro Cys Glu Val Ser Thr Tyr Ala Lys Ser Arg
245 250 255
Lys Asp Ile Gly Val Gln Ser His Val Trp Val Arg Gly Gly Cys Glu
260 265 270
Ser Gly Arg Cys Asp Arg Cys Gln Lys Lys Ile Arg Ile Tyr His Ser
275 280 285
Leu Thr Gly Leu His Cys Val Trp Cys His Leu Glu Ile His Asp Asp
290 295 300
Cys Leu Gln Ala Val Gly His Glu Cys Asp Cys Gly Leu Leu Arg Asp
305 310 315 320
His Ile Leu Pro Pro Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Val Leu Ala Ser Gly
325 330 335
Pro Asp Arg Lys Asn Ser Lys Thr Ser Gln Lys Thr Met Asp Asp Leu
340 345 350
Asn Leu Ser Thr Ser Glu Ala Leu Arg Ile Asp Pro Val Pro Asn Thr
355 360 365
His Pro Leu Leu Val Phe Val Asn Pro Lys Ser Gly Gly Lys Gln Gly
370 375 380
Gln Arg Val Leu Trp Lys Phe Gln Tyr Ile Leu Asn Pro Arg Gln Val
385 390 395 400
Phe Asn Leu Leu Lys Asp Gly Pro Glu Ile Gly Leu Arg Leu Phe Lys
405 410 415
Asp Val Pro Asp Ser Arg Ile Leu Val Cys Gly Gly Asp Gly Thr Val
420 425 430
Gly Trp Ile Leu Glu Thr Ile Asp Lys Ala Asn Leu Pro Val Leu Pro
435 440 445
Pro Val Ala Val Leu Pro Leu Gly Thr Gly Asn Asp Leu Ala Arg Cys
450 455 460
Leu Arg Trp Gly Gly Gly Tyr Glu Gly Gln Asn Leu Ala Lys Ile Leu
465 470 475 480
Lys Asp Leu Glu Met Ser Lys Val Val His Met Asp Arg Trp Ser Val
485 490 495
Glu Val Ile Pro Gln Gln Thr Glu Glu Lys Ser Asp Pro Val Pro Phe
500 505 510
Gln Ile Ile Asn Asn Tyr Phe Ser Ile Gly Val Asp Ala Ser Ile Ala
515 520 525
His Arg Phe His Ile Met Arg Glu Lys Tyr Pro Glu Lys Phe Asn Ser
530 535 540
Arg Met Lys Asn Lys Leu Trp Tyr Phe Glu Phe Ala Thr Ser Glu Ser
545 550 555 560
Ile Phe Ser Thr Cys Lys Lys Leu Glu Glu Ser Leu Thr Val Glu Ile
565 570 575
Cys Gly Lys Pro Leu Asp Leu Ser Asn Leu Ser Leu Glu Gly Ile Ala
580 585 590
Val Leu Asn Ile Pro Ser Met His Gly Gly Ser Asn Leu Trp Gly Asp
595 600 605
Thr Arg Arg Pro His Gly Asp Ile Tyr Gly Ile Asn Gln Ala Leu Gly
610 615 620
Ala Thr Ala Lys Val Ile Thr Asp Pro Asp Ile Leu Lys Thr Cys Val
625 630 635 640
Pro Asp Leu Ser Asp Lys Arg Leu Glu Val Val Gly Leu Glu Gly Ala
645 650 655
Ile Glu Met Gly Gln Ile Tyr Thr Lys Leu Lys Asn Ala Gly Arg Arg
660 665 670
Leu Ala Lys Cys Ser Glu Ile Thr Phe His Thr Thr Lys Thr Leu Pro
675 680 685
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Ser Gly Ser Ser Glu Thr Val Arg Phe Gln Gly His His His His His
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His
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<211> 2838
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
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Gly Thr Ala Gly Cys Cys Cys Cys Gly Ala Gly Gly Cys Cys Cys Gly
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Gly Ala Gly Cys Ala Gly Cys Gly Ala Cys Thr Cys Cys Gly Ala Gly
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Cys Cys Gly Gly Ala Cys Ala Ala Gly Gly Cys Gly Cys Cys Gly Cys
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Gly Gly Cys Gly Ala Cys Thr Cys Ala Ala Cys Ala Ala Gly Cys Gly
115 120 125
Gly Cys Gly Cys Thr Thr Cys Cys Cys Gly Gly Gly Gly Cys Thr Gly
130 135 140
Cys Gly Gly Cys Thr Cys Thr Thr Cys Gly Gly Gly Cys Ala Cys Ala
145 150 155 160
Gly Gly Ala Ala Ala Gly Cys Cys Ala Thr Cys Ala Cys Gly Ala Ala
165 170 175
Gly Thr Cys Gly Gly Gly Cys Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Ala Cys
180 185 190
Cys Thr Gly Gly Cys Cys Cys Cys Cys Cys Cys Thr Cys Cys Gly Cys
195 200 205
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Gly Thr Gly Cys Ala Gly Cys Gly Ala Gly Thr Cys Ala Gly Ala Gly
225 230 235 240
Cys Gly Gly Cys Ala Gly Ala Thr Cys Cys Gly Gly Ala Gly Thr Ala
245 250 255
Cys Ala Gly Thr Gly Gly Ala Cys Thr Gly Gly Ala Gly Cys Gly Ala
260 265 270
Gly Thr Cys Ala Gly Cys Gly Ala Cys Ala Thr Ala Thr Gly Gly Gly
275 280 285
Gly Ala Gly Cys Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly Gly Thr Thr Cys Gly
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Ala Gly Ala Cys Cys Ala Ala Cys Gly Thr Gly Thr Cys Cys Gly Gly
305 310 315 320
Gly Gly Ala Cys Thr Thr Cys Thr Gly Cys Thr Ala Cys Gly Thr Thr
325 330 335
Gly Gly Gly Gly Ala Gly Cys Ala Gly Thr Ala Cys Thr Gly Thr Gly
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Thr Ala Gly Cys Cys Ala Gly Gly Ala Thr Gly Cys Thr Gly Cys Ala
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Gly Ala Ala Gly Thr Cys Ala Gly Thr Gly Thr Cys Thr Cys Gly Ala
370 375 380
Ala Gly Ala Ala Ala Gly Thr Gly Cys Gly Cys Ala Gly Cys Cys Thr
385 390 395 400
Gly Cys Ala Ala Gly Ala Thr Thr Gly Thr Gly Gly Thr Gly Cys Ala
405 410 415
Cys Ala Cys Gly Cys Cys Cys Thr Gly Cys Ala Thr Cys Gly Ala Gly
420 425 430
Cys Ala Gly Cys Thr Gly Gly Ala Gly Ala Ala Gly Ala Thr Ala Ala
435 440 445
Ala Thr Thr Thr Cys Cys Gly Cys Thr Gly Thr Ala Ala Gly Cys Cys
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Gly Thr Cys Cys Thr Thr Cys Cys Gly Thr Gly Ala Ala Thr Cys Ala
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Gly Gly Cys Thr Cys Cys Ala Gly Gly Ala Ala Thr Gly Thr Cys Cys
485 490 495
Gly Cys Gly Ala Gly Cys Cys Ala Ala Cys Cys Thr Thr Thr Gly Thr
500 505 510
Ala Cys Gly Gly Cys Ala Cys Cys Ala Cys Thr Gly Gly Gly Thr Ala
515 520 525
Cys Ala Cys Ala Gly Ala Cys Gly Ala Cys Gly Cys Cys Ala Gly Gly
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Thr Gly Cys Cys Ala Cys Thr Gly Cys Thr Gly Gly Thr Cys Cys Thr
545 550 555 560
Gly Cys Thr Gly Gly Gly Ala Cys Thr Gly Gly Ala Ala Ala Thr Gly
565 570 575
Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Ala Gly Gly Ala Cys Gly Ala Cys Gly
580 585 590
Gly Thr Cys Ala Gly Cys Ala Cys Ala Thr Gly Thr Gly Gly Cys Gly
595 600 605
Cys Cys Cys Ala Ala Ala Gly Cys Gly Thr Thr Thr Cys Cys Cys Cys
610 615 620
Ala Gly Gly Cys Cys Ala Gly Thr Cys Thr Ala Cys Thr Gly Cys Ala
625 630 635 640
Ala Cys Cys Thr Gly Thr Gly Cys Gly Ala Gly Thr Cys Thr Thr Cys
645 650 655
Ala Ala Thr Cys Gly Gly Thr Cys Thr Gly Gly Gly Cys Ala Ala Gly
660 665 670
Cys Ala Gly Gly Gly Cys Cys Thr Gly Thr Cys Ala Thr Gly Cys Ala
675 680 685
Ala Cys Cys Thr Gly Thr Gly Cys Ala Ala Gly Thr Ala Cys Ala Cys
690 695 700
Cys Gly Thr Gly Cys Ala Cys Gly Ala Cys Cys Ala Gly Thr Gly Cys
705 710 715 720
Gly Cys Thr Ala Thr Gly Ala Ala Gly Gly Cys Cys Cys Thr Gly Cys
725 730 735
Cys Cys Thr Gly Cys Gly Ala Gly Gly Thr Cys Thr Cys Ala Ala Cys
740 745 750
Thr Thr Ala Cys Gly Cys Thr Ala Ala Gly Thr Cys Cys Cys Gly Thr
755 760 765
Ala Ala Gly Gly Ala Cys Ala Thr Cys Gly Gly Ala Gly Thr Gly Cys
770 775 780
Ala Gly Thr Cys Ala Cys Ala Cys Gly Thr Gly Thr Gly Gly Gly Thr
785 790 795 800
Cys Ala Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Thr Thr Gly Cys Gly Ala Ala
805 810 815
Thr Cys Cys Gly Gly Thr Ala Gly Ala Thr Gly Cys Gly Ala Cys Cys
820 825 830
Gly Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly Ala Ala Gly Ala Ala Gly Ala Thr
835 840 845
Cys Cys Gly Thr Ala Thr Cys Thr Ala Cys Cys Ala Cys Thr Cys Cys
850 855 860
Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly Gly Ala Cys Thr Gly Cys Ala Cys Thr
865 870 875 880
Gly Cys Gly Thr Cys Thr Gly Gly Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr
885 890 895
Gly Gly Ala Gly Ala Thr Cys Cys Ala Cys Gly Ala Cys Gly Ala Cys
900 905 910
Thr Gly Cys Cys Thr Gly Cys Ala Gly Gly Cys Cys Gly Thr Gly Gly
915 920 925
Gly Ala Cys Ala Cys Gly Ala Ala Thr Gly Cys Gly Ala Cys Thr Gly
930 935 940
Cys Gly Gly Thr Cys Thr Gly Cys Thr Gly Cys Gly Thr Gly Ala Cys
945 950 955 960
Cys Ala Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly Cys Cys Thr Cys Cys Cys Thr
965 970 975
Cys Cys Ala Gly Cys Ala Thr Cys Thr Ala Cys Cys Cys Thr Thr Cys
980 985 990
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995 1000 1005
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1010 1015 1020
Ala Gly Cys Ala Ala Gly Ala Cys Cys Thr Cys Thr Cys Ala Gly
1025 1030 1035
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1040 1045 1050
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Thr Cys Thr Gly Ala Gly Gly Cys Cys Cys Thr Gly Cys Gly Cys
1070 1075 1080
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1085 1090 1095
Ala Ala Cys Ala Cys Thr Cys Ala Cys Cys Cys Ala Cys Thr Gly
1100 1105 1110
Cys Thr Gly Gly Thr Gly Thr Thr Cys Gly Thr Cys Ala Ala Cys
1115 1120 1125
Cys Cys Thr Ala Ala Gly Ala Gly Cys Gly Gly Cys Gly Gly Ala
1130 1135 1140
Ala Ala Gly Cys Ala Gly Gly Gly Thr Cys Ala Gly Ala Gly Ala
1145 1150 1155
Gly Thr Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Ala Gly Thr Thr Cys
1160 1165 1170
Cys Ala Gly Thr Ala Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly Ala Ala Cys
1175 1180 1185
Cys Cys Ala Cys Gly Cys Cys Ala Gly Gly Thr Gly Thr Thr Cys
1190 1195 1200
Ala Ala Cys Cys Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Gly Gly Ala Cys
1205 1210 1215
Gly Gly Cys Cys Cys Thr Gly Ala Gly Ala Thr Cys Gly Gly Ala
1220 1225 1230
Cys Thr Gly Ala Gly Ala Cys Thr Gly Thr Thr Cys Ala Ala Gly
1235 1240 1245
Gly Ala Cys Gly Thr Gly Cys Cys Cys Gly Ala Cys Thr Cys Thr
1250 1255 1260
Cys Gly Cys Ala Thr Cys Cys Thr Cys Gly Thr Cys Thr Gly Cys
1265 1270 1275
Gly Gly Thr Gly Gly Cys Gly Ala Cys Gly Gly Thr Ala Cys Thr
1280 1285 1290
Gly Thr Gly Gly Gly Ala Thr Gly Gly Ala Thr Cys Cys Thr Gly
1295 1300 1305
Gly Ala Ala Ala Cys Thr Ala Thr Cys Gly Ala Cys Ala Ala Gly
1310 1315 1320
Gly Cys Thr Ala Ala Cys Cys Thr Gly Cys Cys Ala Gly Thr Gly
1325 1330 1335
Cys Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr Gly Thr Gly Gly Cys Thr
1340 1345 1350
Gly Thr Cys Cys Thr Gly Cys Cys Ala Cys Thr Gly Gly Gly Ala
1355 1360 1365
Ala Cys Cys Gly Gly Thr Ala Ala Cys Gly Ala Cys Cys Thr Gly
1370 1375 1380
Gly Cys Thr Cys Gly Thr Thr Gly Cys Cys Thr Gly Cys Gly Thr
1385 1390 1395
Thr Gly Gly Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly Gly Cys Thr Ala Cys
1400 1405 1410
Gly Ala Gly Gly Gly Ala Cys Ala Gly Ala Ala Cys Cys Thr Gly
1415 1420 1425
Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Cys Thr Gly Ala Ala Gly
1430 1435 1440
Gly Ala Cys Cys Thr Gly Gly Ala Ala Ala Thr Gly Ala Gly Cys
1445 1450 1455
Ala Ala Gly Gly Thr Gly Gly Thr Cys Cys Ala Cys Ala Thr Gly
1460 1465 1470
Gly Ala Cys Ala Gly Ala Thr Gly Gly Thr Cys Thr Gly Thr Gly
1475 1480 1485
Gly Ala Gly Gly Thr Cys Ala Thr Cys Cys Cys Ala Cys Ala Gly
1490 1495 1500
Cys Ala Gly Ala Cys Thr Gly Ala Gly Gly Ala Ala Ala Ala Gly
1505 1510 1515
Thr Cys Ala Gly Ala Cys Cys Cys Ala Gly Thr Cys Cys Cys Thr
1520 1525 1530
Thr Thr Cys Cys Ala Gly Ala Thr Cys Ala Thr Cys Ala Ala Cys
1535 1540 1545
Ala Ala Cys Thr Ala Cys Thr Thr Cys Ala Gly Cys Ala Thr Cys
1550 1555 1560
Gly Gly Thr Gly Thr Gly Gly Ala Cys Gly Cys Thr Thr Cys Thr
1565 1570 1575
Ala Thr Cys Gly Cys Cys Cys Ala Cys Ala Gly Ala Thr Thr Cys
1580 1585 1590
Cys Ala Cys Ala Thr Cys Ala Thr Gly Cys Gly Cys Gly Ala Gly
1595 1600 1605
Ala Ala Gly Thr Ala Cys Cys Cys Thr Gly Ala Ala Ala Ala Gly
1610 1615 1620
Thr Thr Cys Ala Ala Cys Thr Cys Cys Cys Gly Cys Ala Thr Gly
1625 1630 1635
Ala Ala Gly Ala Ala Cys Ala Ala Gly Cys Thr Gly Thr Gly Gly
1640 1645 1650
Thr Ala Cys Thr Thr Cys Gly Ala Gly Thr Thr Cys Gly Cys Thr
1655 1660 1665
Ala Cys Cys Thr Cys Ala Gly Ala Ala Thr Cys Cys Ala Thr Cys
1670 1675 1680
Thr Thr Cys Thr Cys Ala Ala Cys Thr Thr Gly Cys Ala Ala Gly
1685 1690 1695
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1700 1705 1710
Cys Thr Gly Ala Cys Cys Gly Thr Cys Gly Ala Gly Ala Thr Cys
1715 1720 1725
Thr Gly Cys Gly Gly Cys Ala Ala Gly Cys Cys Thr Cys Thr Gly
1730 1735 1740
Gly Ala Cys Cys Thr Gly Thr Cys Ala Ala Ala Cys Cys Thr Gly
1745 1750 1755
Thr Cys Cys Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly Cys Ala Thr Cys
1760 1765 1770
Gly Cys Thr Gly Thr Gly Cys Thr Gly Ala Ala Cys Ala Thr Cys
1775 1780 1785
Cys Cys Ala Ala Gly Cys Ala Thr Gly Cys Ala Cys Gly Gly Ala
1790 1795 1800
Gly Gly Thr Thr Cys Thr Ala Ala Cys Cys Thr Cys Thr Gly Gly
1805 1810 1815
Gly Gly Cys Gly Ala Cys Ala Cys Thr Ala Gly Gly Ala Gly Gly
1820 1825 1830
Cys Cys Thr Cys Ala Cys Gly Gly Thr Gly Ala Cys Ala Thr Cys
1835 1840 1845
Thr Ala Cys Gly Gly Cys Ala Thr Cys Ala Ala Cys Cys Ala Gly
1850 1855 1860
Gly Cys Cys Cys Thr Gly Gly Gly Ala Gly Cys Thr Ala Cys Cys
1865 1870 1875
Gly Cys Cys Ala Ala Gly Gly Thr Cys Ala Thr Cys Ala Cys Thr
1880 1885 1890
Gly Ala Cys Cys Cys Cys Gly Ala Cys Ala Thr Cys Cys Thr Gly
1895 1900 1905
Ala Ala Gly Ala Cys Cys Thr Gly Cys Gly Thr Gly Cys Cys Ala
1910 1915 1920
Gly Ala Cys Cys Thr Gly Ala Gly Cys Gly Ala Cys Ala Ala Gly
1925 1930 1935
Cys Gly Thr Cys Thr Gly Gly Ala Gly Gly Thr Gly Gly Thr Cys
1940 1945 1950
Gly Gly Ala Cys Thr Gly Gly Ala Gly Gly Gly Thr Gly Cys Cys
1955 1960 1965
Ala Thr Cys Gly Ala Ala Ala Thr Gly Gly Gly Cys Cys Ala Gly
1970 1975 1980
Ala Thr Cys Thr Ala Cys Ala Cys Thr Ala Ala Gly Cys Thr Gly
1985 1990 1995
Ala Ala Gly Ala Ala Cys Gly Cys Thr Gly Gly Ala Ala Gly Gly
2000 2005 2010
Ala Gly Ala Cys Thr Gly Gly Cys Cys Ala Ala Gly Thr Gly Cys
2015 2020 2025
Thr Cys Thr Gly Ala Gly Ala Thr Cys Ala Cys Cys Thr Thr Cys
2030 2035 2040
Cys Ala Cys Ala Cys Cys Ala Cys Thr Ala Ala Gly Ala Cys Thr
2045 2050 2055
Cys Thr Gly Cys Cys Thr Ala Thr Gly Cys Ala Gly Ala Thr Cys
2060 2065 2070
Gly Ala Cys Gly Gly Thr Gly Ala Ala Cys Cys Cys Thr Gly Gly
2075 2080 2085
Ala Thr Gly Cys Ala Gly Ala Cys Cys Cys Cys Ala Thr Gly Cys
2090 2095 2100
Ala Cys Thr Ala Thr Cys Ala Ala Gly Ala Thr Cys Ala Cys Cys
2105 2110 2115
Cys Ala Cys Ala Ala Gly Ala Ala Cys Cys Ala Gly Ala Thr Gly
2120 2125 2130
Cys Cys Cys Ala Thr Gly Cys Thr Gly Ala Thr Gly Gly Gly Thr
2135 2140 2145
Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Gly Cys Thr Cys Thr
2150 2155 2160
Gly Gly Ala Thr Cys Thr Thr Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Thr
2165 2170 2175
Gly Thr Gly Ala Gly Gly Thr Thr Cys Cys Ala Gly Gly Gly Cys
2180 2185 2190
Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys Ala Cys Cys Ala Cys
2195 2200 2205
Cys Ala Cys Thr Gly Ala
2210
<210> 6
<211> 737
<212> PRT
<213> 智人 (Homo sapiens)
<400> 6
Met Ala Ser Pro Ser Asp Phe Ala Gln Leu Gln Lys Tyr Met Glu Tyr
1 5 10 15
Ser Thr Lys Lys Val Ser Asp Val Leu Lys Leu Phe Glu Asp Gly Glu
20 25 30
Met Ala Lys Tyr Val Gln Gly Asp Ala Ile Gly Tyr Glu Gly Phe Gln
35 40 45
Gln Phe Leu Lys Ile Tyr Leu Glu Val Asp Asn Val Pro Arg His Leu
50 55 60
Ser Leu Ala Leu Phe Gln Ser Phe Glu Thr Gly His Cys Leu Asn Glu
65 70 75 80
Thr Asn Val Thr Lys Asp Val Val Cys Leu Asn Asp Val Ser Cys Tyr
85 90 95
Phe Ser Leu Leu Glu Gly Gly Arg Pro Glu Asp Lys Leu Glu Phe Thr
100 105 110
Phe Lys Leu Tyr Asp Thr Asp Arg Asn Gly Ile Leu Asp Ser Ser Glu
115 120 125
Val Asp Lys Ile Ile Leu Gln Met Met Arg Val Ala Glu Tyr Leu Asp
130 135 140
Trp Asp Val Ser Glu Leu Arg Pro Ile Leu Gln Glu Met Met Lys Glu
145 150 155 160
Ile Asp Tyr Asp Gly Ser Gly Ser Val Ser Gln Ala Glu Trp Val Arg
165 170 175
Ala Gly Ala Thr Thr Val Pro Leu Leu Val Leu Leu Gly Leu Glu Met
180 185 190
Thr Leu Lys Asp Asp Gly Gln His Met Trp Arg Pro Lys Arg Phe Pro
195 200 205
Arg Pro Val Tyr Cys Asn Leu Cys Glu Ser Ser Ile Gly Leu Gly Lys
210 215 220
Gln Gly Leu Ser Cys Asn Leu Cys Lys Tyr Thr Val His Asp Gln Cys
225 230 235 240
Ala Met Lys Ala Leu Pro Cys Glu Val Ser Thr Tyr Ala Lys Ser Arg
245 250 255
Lys Asp Ile Gly Val Gln Ser His Val Trp Val Arg Gly Gly Cys Glu
260 265 270
Ser Gly Arg Cys Asp Arg Cys Gln Lys Lys Ile Arg Ile Tyr His Ser
275 280 285
Leu Thr Gly Leu His Cys Val Trp Cys His Leu Glu Ile His Asp Asp
290 295 300
Cys Leu Gln Ala Val Gly His Glu Cys Asp Cys Gly Leu Leu Arg Asp
305 310 315 320
His Ile Leu Pro Pro Ser Ser Ile Tyr Pro Ser Val Leu Ala Ser Gly
325 330 335
Pro Asp Arg Lys Asn Ser Lys Thr Ser Gln Lys Thr Met Asp Asp Leu
340 345 350
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355 360 365
His Pro Leu Leu Val Phe Val Asn Pro Lys Ser Gly Gly Lys Gln Gly
370 375 380
Gln Arg Val Leu Trp Lys Phe Gln Tyr Ile Leu Asn Pro Arg Gln Val
385 390 395 400
Phe Asn Leu Leu Lys Asp Gly Pro Glu Ile Gly Leu Arg Leu Phe Lys
405 410 415
Asp Val Pro Asp Ser Arg Ile Leu Val Cys Gly Gly Asp Gly Thr Val
420 425 430
Gly Trp Ile Leu Glu Thr Ile Asp Lys Ala Asn Leu Pro Val Leu Pro
435 440 445
Pro Val Ala Val Leu Pro Leu Gly Thr Gly Asn Asp Leu Ala Arg Cys
450 455 460
Leu Arg Trp Gly Gly Gly Tyr Glu Gly Gln Asn Leu Ala Lys Ile Leu
465 470 475 480
Lys Asp Leu Glu Met Ser Lys Val Val His Met Asp Arg Trp Ser Val
485 490 495
Glu Val Ile Pro Gln Gln Thr Glu Glu Lys Ser Asp Pro Val Pro Phe
500 505 510
Gln Ile Ile Asn Asn Tyr Phe Ser Ile Gly Val Asp Ala Ser Ile Ala
515 520 525
His Arg Phe His Ile Met Arg Glu Lys Tyr Pro Glu Lys Phe Asn Ser
530 535 540
Arg Met Lys Asn Lys Leu Trp Tyr Phe Glu Phe Ala Thr Ser Glu Ser
545 550 555 560
Ile Phe Ser Thr Cys Lys Lys Leu Glu Glu Ser Leu Thr Val Glu Ile
565 570 575
Cys Gly Lys Pro Leu Asp Leu Ser Asn Leu Ser Leu Glu Gly Ile Ala
580 585 590
Val Leu Asn Ile Pro Ser Met His Gly Gly Ser Asn Leu Trp Gly Asp
595 600 605
Thr Arg Arg Pro His Gly Asp Ile Tyr Gly Ile Asn Gln Ala Leu Gly
610 615 620
Ala Thr Ala Lys Val Ile Thr Asp Pro Asp Ile Leu Lys Thr Cys Val
625 630 635 640
Pro Asp Leu Ser Asp Lys Arg Leu Glu Val Val Gly Leu Glu Gly Ala
645 650 655
Ile Glu Met Gly Gln Ile Tyr Thr Lys Leu Lys Asn Ala Gly Arg Arg
660 665 670
Leu Ala Lys Cys Ser Glu Ile Thr Phe His Thr Thr Lys Thr Leu Pro
675 680 685
Met Gln Ile Asp Gly Glu Pro Trp Met Gln Thr Pro Cys Thr Ile Lys
690 695 700
Ile Thr His Lys Asn Gln Met Pro Met Leu Met Gly Pro Pro Pro Arg
705 710 715 720
Ser Gly Ser Ser Glu Thr Val Arg Phe Gln Gly His His His His His
725 730 735
His

Claims (13)

1.一种式(I)的化合物：
Figure FDA0003708460760000011
或其盐，其中：
X是CR6或N；
Y是CR3或N；
R1是H、F、Cl、Br、-CN、被零至4个R1a取代的C1-3烷基、被零至4个R1a取代的C3-4环烷基、被零至4个R1a取代的C1-3烷氧基、-C(O)NRaRa、-NRaRa、-S(O)nRe或-P(O)ReRe；
每个R1a独立地是F、Cl、-CN、-OH、-OCH3或-NRaRa；
每个Ra独立地是H或C1-3烷基；
每个Re独立地是被零至4个R1a取代的C3-4环烷基或C1-3烷基；
R2是H、被零至4个R2a取代的C1-3烷基、被零至4个R2a取代的C2-3烯基、或被零至4个R2a取代的C3-4环烷基；
每个R2a独立地是F、Cl、-CN、-OH、-O(C1-2烷基)、C3-4环烷基、C3-4烯基或C3-4炔基；
R3是H、F、Cl、Br、-CN、C1-3烷基、C1-2氟烷基、C3-4环烷基、C3-4氟环烷基、-NO2或被零至2个R3a取代的吡啶基；
每个R3a是卤基、-CN、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
R4是C6-10芳基或5至14元杂芳基，各自被零至4个R4a取代；
每个R4a独立地是卤基-CN、-OH、C1-6烷基-(CH2)1-2O(C1-3烷基)、C1-4烷氧基、-O(CH)1-3O(C1-3烷基)、-O(CH)1-3NRcRc、-OCH2CH＝CH2、-OCH2C≡CH、-C(O)(C1-4烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-4烷基)、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-4烷基)、-C(O)N(C1-4烷基)2、-NRcRc、-NRaS(O)2(C1-3烷基)、-NRaC(O)(C1-3烷基)、-NRaC(O)O(C1-4烷基)、-P(O)(C1-3烷基)2、-S(O)2(C1-3烷基)、-(CH2)0-3R4b、-O(CH2)0-3R4b、-NRaR4b或-C(O)R4b，其中所述烷基和烷氧基中的每一个被零至6个R4c取代；
R4b是C3-7环烷基、4至7元杂环基、苯基或5元或6元杂芳基，各自被零至4个R4d取代；
每个R4c独立地是卤基、-CN、-OH、C1-3烷氧基、-O(C1-2氟烷基)或-NRaRa；
每个R4d独立地是卤基、-CN、-OH、C1-3烷基、C1-2氟烷基、C1-3烷氧基或-NRaRa；
每个Rc独立地是H或C1-2烷基；
每个R5独立地是F、Cl、-CN、-OH、被零至4个Rg取代的C1-6烷基、被零至4个Rg取代的C1-3烷氧基、被零至4个Rg取代的C2-4烯基、被零至4个Rg取代的C2-4炔基、被零至4个Rg取代的C3-4环烷基、被零至4个Rg取代的苯基、被零至3个Rg取代的噁二唑基、被零至4个Rg取代的吡啶基、-(CH2)1-2(被零至4个Rg取代的杂环基)、-(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4烷基)、-(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4烷基)、-(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4烷基)、-C(O)(C1-4烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-4烷基)、-C(O)O(C3-4环烷基)、-C(O)NRaRa或-C(O)NRa(C3-4环烷基)，或者附接至同一碳原子的两个R5形成＝O；
每个Rg独立地是F、Cl、-CN、-OH、C1-3烷氧基、C1-3氟烷氧基、-O(CH2)1-2O(C1-2烷基)、C3-5环烷基或-NRcRc；
每个R6是H、F、Cl、-CN、-CH3、-CH2F、-CHF2、-CF3或-OCH3；
m是零、1、2或3；并且
n是零、1或2。
2.根据权利要求1所述的化合物或其盐，其中：
R1是H、F、Cl、Br、-CN、被零至4个R1a取代的C1-3烷基、被零至3个R1a取代的环丙基、被零至3个R1a取代的C1-3烷氧基、-C(O)NRaRa、-NRaRa、-S(O)nCH3或-P(O)(CH3)2；
每个R1a独立地是F、Cl或-CN；
每个Ra独立地是H或C1-3烷基；
R2是H、被零至2个R2a取代的C1-2烷基或被零至2个R2a取代的C2-3烯基；
每个R2a独立地是F、Cl、-CN、-OH、-O(C1-2烷基)、环丙基、C3-4烯基或C3-4炔基；
R3是H、F、Cl、Br、-CN、C1-2烷基、C1-2氟烷基、C3-4环烷基、-NO2或被零至2个R3a取代的吡啶基；
R4是苯基、吡咯基、噻唑基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、吲哚基、吲唑基、萘基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、苯并[d]噁唑基、苯并噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基或噻吩并[3,2-b]吡啶基，各自被零至3个R4a取代；
每个R4a独立地是F、Cl、Br、-CN、-OH、C1-4烷基-(CH2)1-2O(C1-3烷基)、C1-3烷氧基、-O(CH)1-2NRcRc、-C(O)(C1-3烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-3烷基)、-C(O)NH2、-C(O)NH(C1-3烷基)、-C(O)N(C1-3烷基)2、-NRcRc、-NRaS(O)2(C1-2烷基)、-NRaC(O)(C1-2烷基)、-NRaC(O)O(C1-3烷基)、-S(O)2(C1-2烷基)、-(CH2)0-3R4b、-O(CH2)0-3R4b、-NRaR4b或-C(O)R4b，其中所述烷基和烷氧基中的每一个被零至6个R4c取代；
R4b是C3-6环烷基、氧杂环丁烷基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、苯基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、异噁唑基、噁唑基、噁二唑基、三唑基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基或三嗪基，各自被零至3个R4d取代；
每个R4c独立地是卤基、-CN、-OH、-O(C1-2烷基)、-O(C1-2氟烷基)或-NRaRa；
每个R4d独立地是F、Cl、Br、-CN、-OH、C1-2烷基、C1-2氟烷基、C1-2烷氧基或-NRaRa；
每个R5独立地是F、-CN、-OH、被零至4个Rg取代的C1-5烷基、被零至3个Rg取代的C1-2烷氧基、被零至4个Rg取代的C2-3烯基、被零至4个Rg取代的C2-3炔基、被零至4个Rg取代的C3-4环烷基、被零至3个Rg取代的苯基、被零至3个Rg取代的噁二唑基、被零至3个Rg取代的吡啶基、-(CH2)1-2(被零至4个Rg取代的杂环基)、-(CH2)1-2NRcC(O)(C1-4烷基)、-(CH2)1-2NRcC(O)O(C1-4烷基)、-(CH2)1-2NRcS(O)2(C1-4烷基)、-C(O)(C1-4烷基)、-C(O)OH、-C(O)O(C1-4烷基)、-C(O)O(C3-4环烷基)、-C(O)NRaRa或-C(O)NRa(C3-4环烷基)，或者附接至同一碳原子的两个R5形成＝O；
每个R6是H、F或-CH3；并且
m是零、1、2或3。
3.根据权利要求1-2中任一项所述的化合物或其盐，其中：
X是N并且Y是CR3；或
X是N并且Y是N；
R1是-CN；
R2是-CH3；
R3是H；
R4是苯基、噻唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并[d]噁唑基、苯并[d]噻唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]嘧啶基或噻吩并[3,2-b]吡啶基，各自被零至2个R4a取代；
每个R4a独立地是F、Br、-OH、-CN、-CH3、-CF3、-OCH3、-OCF3或氟苯基；
每个R5独立地是氢、-CH3或-CH2CH3；并且
每个R6是H。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中：
X是N；并且
Y是CR3。
5.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中：
X是N；并且
Y是N。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的化合物或其盐，其中m是1或2。
7.根据权利要求1-3和6中任一项所述的化合物或其盐，其具有选自以下的结构：
Figure FDA0003708460760000031
8.根据权利要求1-3或6中任一项所述的化合物或其盐，其具有选自以下的结构：
Figure FDA0003708460760000032
9.根据权利要求1-3中任一项所述的化合物或其盐，其中所述化合物是：
4-((2S,5R)-2,5-二乙基-4-(4-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(1)；
4-((2S,5R)-2,5-二乙基-4-(3-(三氟甲基)苯基)哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(2)；
4-((2S,5R)-5-乙基-4-(3-氟-4-(三氟甲基)苯基)-2-甲基哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(3)；
4-((2S,5R)-5-乙基-2-甲基-4-(4-(三氟甲氧基)苯基)哌嗪-1-基)-1-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶并[3,2-d]嘧啶-6-甲腈(4)；
(S)-5-甲基-8-(2-甲基-4-(喹啉-8-基)哌嗪-1-基)-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(5)；
8-((2S,5R)-4-(6-氟喹啉-8-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(6)；
8-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(噻吩并[3,2-b]吡啶-3-基)哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(7)；
8-((2S,5R)-4-(咪唑并[1,2-b]哒嗪-3-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(8)；
(S)-5-甲基-8-(2-甲基-4-(喹啉-8-基)哌嗪-1-基)-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(9)；
8-((2S,5R)-4-(8-溴-6-甲基喹啉-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(10)；
8-((2S,5R)-4-(异喹啉-1-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(11)；
8-((2S,5R)-4-(4-溴异喹啉-1-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(12)；
8-((2S,5R)-4-(5-氟喹啉-8-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(13)；
8-((2S,5R)-4-(3-溴吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(14)；
8-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(7-(三氟甲基)喹啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(15)；
8-((2S,5R)-4-(5,7-二氟喹啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(16)；
8-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(喹啉-4-基)哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(17)；
8-((2S,5R)-4-(咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(18)；
8-((2S,5R)-4-(异喹啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(19)；
8-((2S,5R)-4-(苯并[d]噁唑-7-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(20)；
8-((2S,5R)-4-(3-羟基-6-(三氟甲氧基)喹啉-8-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(21)；
8-((2S,5R)-2,5-二甲基-4-(2-甲基喹啉-8-基)哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(22)；
8-((2S,5R)-4-(6-氟喹啉-4-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(23)；
8-((2S,5R)-4-(3-甲氧基-6-甲基喹啉-8-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(24)；
8-((2S,5R)-4-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(25)；
8-((2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(26)；或
8-((2S,5R)-4-(4-(4-氟苯基)-2-甲基噻唑-5-基)-2,5-二甲基哌嗪-1-基)-5-甲基-6-氧代-5,6-二氢-1,5-萘啶-2-甲腈(27)。
10.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐；以及药学上可接受的载体。
11.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于治疗癌症或病毒感染的用途。
12.根据权利要求11所述的用途，其中所述癌症选自结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、肾癌、头颈癌、淋巴瘤、白血病和黑色素瘤。
13.根据权利要求1-9中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐用于抑制选自二酰甘油激酶α(DGKα)和二酰甘油激酶ζ(DGKζ)的至少一种二酰甘油激酶的活性的用途。
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