ES2932173T3 - Compuestos que contienen nitrilo útiles como agentes antivirales para el tratamiento de una infección por coronavirus - Google Patents

Compuestos que contienen nitrilo útiles como agentes antivirales para el tratamiento de una infección por coronavirus Download PDF

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Abstract

La invención se refiere a compuestos de fórmula (I'') en la que R, R1, R2, R3, p, q y q' son como se definen en este documento, composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos, métodos para tratar la infección por coronavirus como COVID-19 en un paciente mediante la administración de cantidades terapéuticamente eficaces de los compuestos, y métodos para inhibir o prevenir la replicación de coronavirus tales como SARS-CoV-2 con los compuestos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Compuestos que contienen nitrilo útiles como agentes antivirales para el tratamiento de una infección por coronavirus
Antecedentes de la invención
La invención se refiere a compuestos y compuestos para su uso en procedimientos de inhibición de la actividad de replicación viral que comprenden el contacto de una proteinasa similar a 3C ("3CL") relacionada con el SARS-CoV-2 con una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la proteasa similar a 3C relacionada con el SARS-CoV-2. La invención también se refiere a compuestos para su uso en procedimientos de tratamiento de la Enfermedad por Coronavirus 2019 ("COVID-19") en un paciente mediante la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la proteasa similar a 3C relacionada con el SARS-CoV-2 a un paciente que necesite la misma. La invención se refiere además a compuestos para su uso en procedimientos de tratamiento de COVID-19 en un paciente, comprendiendo el procedimiento la administración de una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz del inhibidor de la proteasa similar a 3C relacionada con el SARS-CoV-2 a un paciente que necesite la misma.
Un brote mundial de la Enfermedad por Coronavirus 2019 ("COVID-19") se ha asociado con exposiciones originadas a finales de 2019 en Wuhan, provincia de Hubei, China. A mediados de 2020, el brote de COVID-19 ha evolucionado hasta convertirse en una pandemia mundial en la que se ha confirmado la infección de millones de personas y que ha provocado cientos de miles de muertes. El agente causante del COVID-19 ha sido identificado como un nuevo coronavirus que ha sido denominado Corona Virus del Síndrome Respiratorio Agudo Severo 2 ("SARS-CoV-2"). Se ha secuenciado la secuencia del genoma del SARS-CoV-2 a partir de aislados obtenidos de nueve pacientes en Wuhan (China) y se ha descubierto que pertenece al subgénero Sarbecovirus del género Betacoronavirus. Lu, R. et al. The Lancet, 395, 10224, 565-574; en línea el 29 de enero de 2020. Se descubrió que la secuencia del SARS-CoV-2 tiene 88 % de homología con dos coronavirus similares al SARS derivados de murciélagos, el bat-SL-CoVZC45 y el bat-SL-CoVZXC21, que se recogieron en 2018 en Zhoushan, al este de China. También se descubrió que el SARS-CoV-2 comparte aproximadamente 79 % de homología con el Corona Virus del Síndrome Respiratorio Agudo Severo ("SARS-CoV"), el agente causante del brote de SARS en 2002-2003, y aproximadamente 50 % de homología con el Coronavirus del Síndrome Respiratorio de Oriente Medio ("MERS-CoV"), el agente causante de un brote viral respiratorio originado en Oriente Medio en 2012. Con base en un análisis reciente de 103 genomas secuenciados del SARS-CoV-2, se ha propuesto que el SARS-CoV-2 puede dividirse en dos tipos principales (tipos L y S), siendo el tipo S el ancestral y el tipo L el que ha evolucionado a partir del tipo S. Lu, J.; Cui, J. et al. On origin and continuing evolution of SARS-CoV-2; National Science Review, 7(6), June 2020, 1012-1023, http://doi.org/10.1093/nsr/nwaa036. Los tipos S y L pueden definirse claramente por solo dos SNP estrechamente vinculados en las posiciones 8,782 (orf1ab:T8517C, sinónimo) y 28,144 (ORF8: C251T, S84L). En los 103 genomas analizados, aproximadamente 70 % eran del tipo L y aproximadamente 30 % del tipo S. No está claro si la evolución del tipo L a partir del tipo S se produjo en los seres humanos o a través de un intermediario zoonótico, pero parece que el tipo L es más agresivo que el tipo S y la interferencia humana en el intento de contener el brote puede haber cambiado la abundancia relativa de los tipos L y S poco después del inicio del brote de SARS-CoV-2. El descubrimiento de los subtipos S y L propuestos del SARS-CoV-2 plantea la posibilidad de que un individuo pueda infectarse secuencialmente con los subtipos individuales o estar infectado con ambos subtipos al mismo tiempo. En vista de esta amenaza en evolución, existe una gran necesidad en la técnica de un tratamiento eficaz para el COVID-19 y de procedimientos para inhibir la replicación del coronavirus SARS-CoV-2.
Pruebas recientes demuestran claramente que el nuevo coronavirus SARS-CoV-2, el agente causante del COVID-19 (Centers for Disease Contro, CDC) ha adquirido la capacidad de transmisión de persona a persona, lo que lleva a la propagación del virus en la comunidad. La secuencia del dominio de unión al receptor ("RBD") de la proteína de la espiga del SARS-CoV-2, incluyendo su motivo de unión al receptor (RBM) que contacta directamente con el receptor de la enzima convertidora de angiotensina 2, ACE2, es similar al RBD y al RBM del SARS-CoV, lo que sugiere claramente que el SARS-CoV-2 utiliza ACE2 como su receptor. Wan, Y.; Shang, J.; Graham, R.; Baric, R.S.; Li, F.; Receptor recognition by the novel coronavirus from Wuhan: An analysis based on decade-long structural studies of SARS coronavirus; J. Virol. 2020; doi:10.1128/JVI.00127-20. Varios residuos críticos en el RBM del SARS-CoV-2 (particularmente Gln493) proporcionan interacciones favorables con la ACE2 humana, lo que es coherente con la capacidad del SARS-CoV-2 para la infección de células humanas. Varios otros residuos críticos en el RBM del SARS-CoV-2 (en particular el Asn501) son compatibles con la ACE2 humana, pero no son ideales para su unión, lo que sugiere que el SARS-CoV-2 utiliza la unión a la ACE2 en cierta capacidad para la transmisión de persona a persona.
La función de replicación y transcripción de los coronavirus está codificada por el gen denominado "replicasa" (Ziebuhr, J., Snijder, E.J., y Gorbalenya, A.E.; Virus-encoded proteinases and proteolytic processing in the Nidovirales. J. Gen. Virol. 2000, 81, 853-879; and Fehr, A.R.; Perlman, S.; Coronaviruses: An Overview of Their Replication and Pathogenesis, Methods Mol. Biol. 2015; 1282: 1-23. doi:10.1007/978-1-4939-2438-7_1), que consiste en dos poliproteínas superpuestas que son ampliamente procesadas por las proteasas virales. La región proximal C es procesada en once uniones interdominio conservadas por la proteasa principal del coronavirus o "similar a 3C" (Ziebuhr, Snijder, Gorbalenya, 2000 y Fehr, Perlman et al., 2015). El nombre de proteasa "similar a 3C" deriva de ciertas similitudes entre la enzima del coronavirus y las bien conocidas proteasas 3C de los picornavirus. Entre ellas se encuentran las preferencias de sustrato, el uso de la cisteína como nucleófilo del sitio activo en la catálisis y las similitudes en sus pliegues polipeptídicos generales putativos. Se ha descubierto que la secuencia de la proteasa 3CL del SARS-CoV-2 (número de acceso YP_009725301.1) comparte un 96,08 % de homología con la proteasa 3CL del SARS-CoV (número de acceso YP_009725301.1) Xu, J.; Zhao, S.; Teng, T.; Abdalla, A.E.; Zhu, W.; Xie, L.; Wang, Y.; Guo, X.; Systematic Comparison of Two Animal-to-Human Transmitted Human Coronaviruses: SARS-CoV-2 and SARS-CoV; Viruses 2020, 12, 244; doi:10.3390/v12020244. Muy recientemente, Hilgenfeld y sus colegas publicaron una estructura de rayos X de alta resolución de la proteasa principal del coronavirus SARS-CoV-2 (3CL) Zhang, L.; Lin, D.; Sun, X.; Rox, K.; Hilgenfeld, R.; X-ray Structure of Main Protease of the Novel Coronavirus sA r S-CoV-2 Enables Design of a-Ketoamide Inhibitors; bioRxiv preprint doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.17.952879. La estructura indica que hay diferencias al comparar las proteasas 3CL del SARS-CoV-2 y del SARS-CoV. En el dímero de la proteasa 3CL del SARS-CoV, pero no en el del SARS-CoV-2, existe una interacción polar entre los dos dominios III que implica un enlace de hidrógeno de 2,60-Á entre los grupos hidroxilos de la cadena lateral del residuo Thr285 de cada protómero, y que se soporta en un contacto hidrófobo entre la cadena lateral de Ile286 y Thr285 CY2. En la el 3CL del SARS-CoV-2, la treonina se sustituye por alanina y la isoleucina por leucina en comparación con los mismos residuos de la 3CL del SARS-CoV. La sustitución de Thr285Ala observada en la proteasa 3CL del SARS-CoV-2 permite que los dos dominios III se acerquen algo más (la distancia entre los átomos Ca de los residuos 285 en las moléculas A y B es de 6,77 Á en la proteasa 3CL del SARS-CoV y de 5,21 Á en la proteasa 3CL del SARS-CoV-2, y la distancia entre los centros de masa de los dos dominios III se reduce de 33,4 Á a 32,1 Á). En el sitio activo de la 3CL del SARS-CoV-2, Cys145e His41 forman una diada catalítica, que cuando se toma junto con una molécula de agua enterrada que está unida por hidrógeno a His41 puede considerarse que constituye una tríada catalítica de la proteasa 3CL del SARS-CoV-2. En vista de la actual propagación del SARS-CoV-2 que ha provocado el actual brote mundial de COVID-19, es deseable disponer de nuevos procedimientos para inhibir la replicación viral del SARS-CoV-2 y para tratar el COVID-19 en los pacientes.
Publicación de la patente internacional WO-2005/113580 describe compuestos anticoronavirales que son inhibidores de la proteasa similar a la 3C del SARS.
En el artículo "Inhibition of enterovirus 71 replication by an a-hydroxy-nitrile derivative NK-1.9k" (Antiviral Research, 141, 2017, 91-100), Wang et al describen un compuesto específico del que se dice que es un tratamiento potencial para la enfermedad de manos, pies y boca.
Sumario de la invención
La presente invención proporciona nuevos compuestos que actúan en la inhibición o prevención de la replicación viral del SARS-CoV-2 y, por lo tanto, son útiles en el tratamiento del COVID-19. La presente invención también proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos y también proporciona los compuestos para su uso en procedimientos de tratamiento de COVID-19 e inhibición de la replicación viral del SARS-CoV-2 mediante la administración de los compuestos de la invención o de composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos de la invención.
La presente invención proporciona ciertos compuestos, seleccionados de un compuesto 1 como se define a continuación, que entran en el ámbito de
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y sales farmacéuticamente aceptables de los mismos; en los que R1 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-C6 que está opcionalmente sustituido con un ciano o con uno a cinco fluoro; alquinilo C2-C6 ; y alquilo (cicloalquilo C3-C6 )-C1-Ca que está opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados entre trifluorometilo y alquilo C1-C3 o con uno a cinco fluoros; R2 es hidrógeno oR2 y R1 tomados junto con los átomos de nitrógeno y carbono a los que están unidos son un anillo de pirrolidina o piperidina que está opcionalmente sustituido con uno a cuatro R2a; R2a, en cada caso, se selecciona independientemente del grupo que consiste en fluoro, alquilo C1-C6 opcionalmente sustituido con uno a tres fluoros y alcoxi C1-C6 opcionalmente sustituido con uno a tres fluoros; o dos grupos R2a, cuando están unidos a carbonos adyacentes y tomados junto con los carbonos a los que están unidos, son un cicloalquilo C3-C6 fusionado que está opcionalmente sustituido con uno a cuatro R2b; o dos grupos R2a, cuando están unidos al mismo carbono y tomados junto con el carbono al que están unidos, son un cicloalquilo C3-C6 espiro que está opcionalmente sustituido con uno a cuatro R2b; R2b en cada ocurrencia se selecciona independientemente entre fluoro, alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno a tres fluoros, y alcoxi C1-C3 opcionalmente sustituido con uno a tres fluoros; R3 se selecciona del grupo que consiste en alquilo C1-C8, alcoxi C1-C8, alquilo(alcoxi C1-C6 )-C1-Ca, alquinilo C2-Ca, alquiniloxi C2-Ca, cicloalquilo C3-C12 opcionalmente fusionado con un heteroarilo de 5 a 6 miembros o fenilo, alquilo (cicloalquilo C3-C12 )-C1-Ca, cicloalcoxi C3-C12, alquilo (C3-C12 cicloalcoxi)-C1-Ca, heterocicloalquilo de 4 a 12 miembros opcionalmente fusionado con un heteroarilo de 5 a a miembros o fenilo y en el que dicho heterocicloalquilo comprende de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S(O)n, alquilo (heterocicloalquilo de 4 a 12 miembros)-C1-Ca en el que dicha molécula de heterocicloalquilo comprende uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S(O)n, arilo Ca-C10 opcionalmente fusionado con un cicloalquilo C4-Ca o un heterocicloalquilo de 4 a 7 miembros, alquilo (arilo Ca-C10 )-C1-Ca, heteroarilo de 5 a 10 miembros que comprende de uno a cinco heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S, que esté opcionalmente fusionado con un cicloalquilo C5-Ca; alquilo (heteroarilo de 5 a 10 miembros)-C1-Ca en el que la fracción de heteroarilo comprende de uno a cinco heteroátomos seleccionados independientemente de N, O y S; (arilo de Ca-C10)-(heteroarilo de 5 a 10 miembros)- en el que la fracción de heteroarilo comprende de uno a cinco heteroátomos seleccionados independientemente de N, O y S, alquilo (heteroarilo de 5 a 10 miembros)-C1-Ca en el que la fracción de heteroarilo comprende de uno a cinco heteroátomos seleccionados independientemente de N, O y S; (heteroarilo de 5 a a miembros)-(heteroarilo de 5 a a miembros)- en el que cada fracción de heteroarilo comprende de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S (heterocicloalquilo de 4 a 7 miembros)-(heteroarilo de 5 a a miembros)- en el que la fracción de heterocicloalquilo comprende de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S(O)n y la fracción de heteroarilo comprende de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S; (heteroarilo de 5 a a miembros)-(heterocicloalquilo de 4 a 7 miembros)-en el que la fracción de heterocicloalquilo comprende de uno a tres heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S(O) n y la fracción de heteroarilo comprende de uno a cuatro heteroátomos seleccionados independientemente entre N, O y S; en el que cada grupo R3 está opcionalmente sustituido con uno a cinco R4; R4 en cada aparición se selecciona independientemente del grupo que consiste en oxo, halo, hidroxi, ciano, fenilo, bencilo, amino, (alquilo C1-Ca )amino opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, di(alquilo C1-Ca )amino opcionalmente sustituido con uno a diez fluoros, alquilo C1-Ca opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, alcoxi C1-Ca opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, alcoxi C1-C3 -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, cicloalquilo C3-Ca opcionalmente sustituido con uno a tres fluoros o alquilo C1-C3, alquilo C1-Ca -C(O)NH- opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, alquilo C1-Ca -S(O)2NH.opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, C1-Ca alquilo-C(O)- opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, alquilo C1a-C S(O)nopcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros; y n en cada ocurrencia se selecciona independientemente entre 0, 1 y 2.
La presente invención proporciona un compuesto E11 que es un compuesto seleccionado del grupo que consiste en
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en la que R4 se selecciona del grupo que consiste en (alquilo C1-C6 )amino opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, alquilo C1-C6 -C(O)NH- opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, y alquilo C1-C6 -S(O)2NH. opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
E13 es el compuesto de E11 en el que R4 se selecciona del grupo que consiste en CF3C(O)NH-, CF3S(O)2NH-, CH3C(O)NH-, CH3CH2C(O)NH- y CF3CH2NH-; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
E14 es el compuesto de E11 o E13 en el que R4 es CF3C(O)NH- o CF3S(O)2NH-; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
E29 es un compuesto de E11 seleccionado del grupo que consiste en:
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida;
(2S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4,4-dimetil-1 -[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]piperidina-2- carboxamida;
3- metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-4-(trifluorometil)-L-prolinamida;
(25.45) -N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-1-{3-metil-N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidina-2-carboxamida;
(2S,4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]piperidina-2-carboxamida;
(2S,4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[3-metil-N-(metilsulfonil)-L-valil]piperidina-2-carboxamida;
(25.45) -N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]piperidina-2-carboxamida;
(25.45) -N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]piperidina-2-carboxamida;
(2S,4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]piperidina-2- carboxamida;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirroNdin-3-N]etN}-3-{(2S)-2-cidohexN-2-[(trifluoroacetil)amino]acetil}-6,6-dimetil-3-azabicido[3.1.0]hexano-2-carboxamida;
(1R,2S,5S)-N^(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirroMdin-3-il]etM]-6,6-dimetil-3-[N-(2,2,2-trifluoroetM)-L-valil]-3-azabiddo[3.1.0]hexano-2-carboxamida;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(3,3,3-trifluoropropanoil)-L-valil]-3- azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-(N-propanoil-L-valil)-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida;
(2S,4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[N-(2,2,2-trifluoroetil)-L-valil]piperidina-2-carboxamida;
N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-N2-(etoxicarbonil)-L-leucinamida;
N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-N2-(etoxicarbonil)-4-metil-L-leucinamida; y
(1R,2S,5S)-3-[N-(tert-butilsulfonil)-3-metil-L-valil]-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
E30 es un compuesto de E11 seleccionado del grupo que consiste en:
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida;
(25.45) -N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[N-(trifluoroacetil)-L-valil]piperidina-2-carboxamida;
(25.45) -N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-1-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]piperidina-2- carboxamida;
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-3-{(2S)-2-ciclohexil-2-[(trifluoroacetil)amino]acetil}-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida;
(25.45) -N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-1-{3-metil-N-[(trifluorometil)sulfonil]-L-valil}piperidina-2-carboxamida;
3- metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-4-(trifluorometil)-L-prolinamida; and
(2S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4,4-dimetil-1-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]piperidina-2-carboxamida;
o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.
E31 es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de cualquiera de E11, E13, E14, E29 y E30 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
E32 es la composición farmacéutica de E31, en la que la composición se presenta en forma de dosificación intravenosa, subcutánea, inhalada u oral.
E33 es la composición farmacéutica de E31 o E32, en la que la composición está en una forma de dosificación oral. E34 es la composición farmacéutica de uno cualquiera de E31 a E33 que comprende además un agente terapéutico adicional.
E35 es la composición farmacéutica de uno cualquiera de E31 a E34, en el que la composición farmacéutica comprende además una o más de las siguientes sustancias: dexametasona, azitromicina y remdesivir.
E36 es un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29 y E30 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infección por coronavirus en un paciente, comprendiendo el procedimiento la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29 y E30 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo a un paciente que necesite el mismo.
E37 es el compuesto para uso en un procedimiento de E36 en el que la infección por coronavirus es COVID-19.
E38 es una composición farmacéutica de uno cualquiera de E31 a E35 para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infección por coronavirus en un paciente, comprendiendo el procedimiento la administración de una composición farmacéutica de uno cualquiera de E31 a E35 a un paciente que necesita la misma.
E39 es la composición farmacéutica para su uso en un procedimiento de E38 en el que la infección por coronavirus es COVID-19.
E40 es un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29 y E30 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un procedimiento de inhibición o prevención de la replicación viral del SARS-CoV-2 que comprende el contacto de la proteasa 3CL del coronavirus SARS-CoV-2 con una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29 y E30.
E41 es un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29 y E30 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un procedimiento de inhibición o prevención de la replicación viral del SARS-CoV-2 en un paciente que comprende administrar al paciente que necesita inhibir o prevenir la replicación viral del SARS-CoV-2 una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29 y E30.
E49 es un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29 y E30 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infección por coronavirus en un paciente, comprendiendo el procedimiento administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29 y E30 o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, donde se administra un agente terapéutico adicional y el agente terapéutico adicional se selecciona del grupo que consiste en remdesivir galidesivir, favilavir/avifavir, molnupiravir, AT-527, AT-301, BLD-2660, favipiravir, camostat, SLV213, emtrictabina/tenofivir, clevudina, dalcetrapib, boceprevir, ABX464, dexametasona, hidrocortisona, plasma convaleciente, gelsolina (Rhup65N), regdanvimab (Regkirova), ravulizumab (Ultomiris), VIR-7831/VIR-7832, BRN-196/BRN-198, COVI-AMG/COVI DROPS (STI-2020), bamlanivimab (LY-CoV555), mavrilimab, leronlimab (PRO140), AZD7442, lenzilumab, infliximab, adalimumab, JS 016, STI-1499 (COVIGUARD), lanadelumab (Takhzyro), canakinumab (Ilaris), gimsilumab, otilimab, casirivimab/imdevimab (REGN-Cov2), MK-7110 (CD24Fc/Sa Cc OVID), heparina, apixaban, tocilizumab (Actemra), sarilumab (Kevzara), dimesilato de apilimod, DNL758, DC402234, PB1046, dapaglifozin, abivertinib, ATR-002, bemcentinib, acalabrutinib, baricitinib, tofacitinib, losmapimod, famotidina, ritonavir, niclosamida y diminazene.
E50 es el compuesto (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
E50a es el compuesto (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[ 3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida.
E51 es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida; o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
E51a es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
E52 es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3- metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infección por coronavirus en un paciente, comprendiendo el procedimiento la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo a un paciente que necesite un tratamiento del mismo.
E52a es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil -N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infección por coronavirus en un paciente, comprendiendo el procedimiento la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida a un paciente que necesita tratamiento del mismo.
E53 es el compuesto para uso en un procedimiento de E52 en el que la infección por coronavirus es COVID-19. E53a es el compuesto para uso en un procedimiento de E52a en el que la infección por coronavirus es COVID-19. E54 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E52 o E53 en el que (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se administra por vía oral.
E54a es el compuesto que se utiliza en un procedimiento de E52a o E53a en el que se administra por vía oral (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida.
E55 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E54 en el que se administran cada día de 50 mg a 1500 mg de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
E55a es el compuesto para su uso en un procedimiento de E54a en el que se administran cada día 50 mg a 1500 mg de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida.
E56 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E55, en el que se administra tres veces al día 380 mg de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
E56a es el compuesto para su uso en un procedimiento de E55a en el que se administra tres veces al día 380 mg de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
E57 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E55 en el que se administra cada día 50 mg a 1500 mg de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en forma de suspensión oral, cápsula o comprimido.
E57a es el compuesto para su uso en un procedimiento de E55a en el que se administra cada día 50 mg a 1500 mg de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo en forma de suspensión oral, cápsula o comprimido.
E58 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E57 en el que se administra un comprimido.
E58a es el compuesto para su uso en un procedimiento de E57a en el que se administra un comprimido.
E60 es el compuesto (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida; o un solvato o hidrato del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, solvato o hidrato.
E61 es el compuesto (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida que tiene la estructura
Figure imgf000009_0001
o un solvato o hidrato del mismo.
E62 es el compuesto de E61 que es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabicido[3.1.0]hexano-2-carboxamida cristalina.
E63 es el compuesto de E62 que es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabicido[3.1.0]hexano-2-carboxamida, Forma Sólida 1.
E64 es el compuesto de E62 que es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida, Forma Sólida 4.
E65 es el compuesto de E61 que es amorfo (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida.
E66 es el compuesto de E61 que es (1R,2S,5S)-N{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida, solvato de metil tert-butilo.
E67 es el compuesto de E66 que es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida, solvato de metil tert-butilo.
E68 es el compuesto de E67 que es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida cristalina, solvato de metil tert-butilo, Forma Sólida 2.
E69 es un compuesto de acuerdo con uno cualquiera de E61 a E68 para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infección por coronavirus en un paciente, comprendiendo el procedimiento la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de acuerdo con uno cualquiera de E61 a E68 a un paciente que necesita tratamiento del mismo.
E70 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E69 en el que la infección por coronavirus es COVID-19.
E71 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E70 en el que también se administra ritonavir al paciente.
E72 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E71 en el que el compuesto de uno cualquiera de E61 a E68 y el ritonavir se administran al paciente por vía oral.
E73 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E72 en el que se administran aproximadamente 10 mg a aproximadamente 1500 mg al día del compuesto de uno cualquiera de E61 a E68 y aproximadamente 10 mg a aproximadamente 1000 mg al día de ritonavir.
E74 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E73 en el que se administran al paciente aproximadamente 50 mg del compuesto de uno cualquiera de E61 a E68 y aproximadamente 100 mg de ritonavir cada uno dos veces al día.
E75 es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida; o un solvato o hidrato de la misma, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, solvato o hidrato junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
E75a es una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida; o un solvato o hidrato de la misma junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
E76 es la composición farmacéutica de E75a que comprende el compuesto de acuerdo con uno cualquiera de E62 a E68.
E77 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E69 o E70, en el que se administran por vía oral al paciente aproximadamente 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg, 500 mg, 550 mg, 600 mg, 650 mg, 700 mg o 750 mg del compuesto de acuerdo con uno cualquiera de E61 a E68, dos veces al día.
E78 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E77 en el que el ritonavir se coadministra por vía oral al paciente dos veces al día.
E79 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E78 en el que se coadministran al paciente aproximadamente 300 mg del compuesto de acuerdo con uno cualquiera de E61 a E68 y aproximadamente 100 mg de ritonavir dos veces al día.
E80 es el compuesto de E63 que se caracteriza por un pico de 19F con un desplazamiento químico a -73,3 ± 0,1 ppm y picos de 13C con desplazamientos químicos a 31,0 ± 0,1 ppm, 27,9 ± 0,1 ppm y 178,9 ± 0,2 ppm.
E81 es el compuesto de E64 que se caracteriza por uno o más picos seleccionados del grupo que consiste en un pico de 19F con desplazamiento químico a -73,6 ± 0,1 ppm y picos de 13C a 26,9 ± 0,1 ppm, 21,6 ± 0,1 ppm y 41,5 ± 0,1 ppm.
E82 es el compuesto N-(metoxicarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida que tiene la estructura
Figure imgf000011_0001
o un solvato o hidrato del mismo.
E83 es el compuesto de E82 que es N-(metoxicarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida.
E84 es un producto farmacéutico que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de N-(metoxicarbonilo)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida; o un solvato o hidrato del mismo junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
E85 es un compuesto de E82 o E83 para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infección por coronavirus en un paciente, comprendiendo el procedimiento la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de E82 o E83 a un paciente que necesita tratamiento del mismo.
E86 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E85 en el que la infección por coronavirus es COVID-19.
E87 es el compuesto para uso en un procedimiento de E85 o E86 en el que se administran de 10 mg a 1500 mg por día del compuesto de E82 o E83.
E88 es el compuesto para su uso en un procedimiento de uno cualquiera de E85 a E87 en el que el compuesto se administra por vía oral.
E89 es el compuesto para su uso en un procedimiento de E88 en el que se administran 200 mg del compuesto dos veces al día.
E91 es un compuesto inhibidor de la proteasa del SARS-CoV-2 de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83 para su uso en un procedimiento de identificación de vías celulares o víricas que interfieren en el funcionamiento de los miembros de las cuales podrían utilizarse para el tratamiento de las indicaciones causadas por las infecciones de SARS-CoV-2 mediante la administración de un compuesto inhibidor de la proteasa de SARS-CoV-2 de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83.
E92 es un procedimiento de uso de un compuesto inhibidor de la proteasa del SARS-CoV-2 de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83 como herramientas para comprender el mecanismo de acción de otros inhibidores del SARS-CoV-2.
E93 es un procedimiento de uso de un compuesto inhibidor de la proteasa similar a 3C del SARS-CoV-2 de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83 para llevar a cabo experimentos de perfilado de genes para monitorizar la regulación ascendente o descendente de genes con el fin de identificar inhibidores para el tratamiento de las indicaciones causadas por las infecciones del SARS-CoV-2, tales como COVID-19.
E94 es una composición farmacéutica para el tratamiento del COVID-19 en un mamífero que contiene una cantidad de un compuesto inhibidor de la proteasa similar a la 3C del SARS-CoV-2 de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83 que es eficaz para tratar el COVID-19 junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
E95 es un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83 para su uso en un procedimiento de tratamiento de MERS en un paciente, comprendiendo el procedimiento administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83 a un paciente que necesite el mismo.
E96 es una composición farmacéutica de uno cualquiera de E31 a E35, E51, E51a, E75, E75a, E84 y E94 para su uso en un procedimiento de tratamiento de MERS en un paciente, comprendiendo el procedimiento la administración de una composición farmacéutica de uno cualquiera de E31 a E35, E51, E51a, E75, E75a, E84 y E94 a un paciente que necesite el mismo.
E97 es un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83 para su uso en un procedimiento de inhibición o prevención de la replicación viral del MERS que comprende el contacto de la proteasa 3CL del coronavirus SARS-CoV-2 con una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83.
E98 es un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83 para su uso en un procedimiento de inhibición o prevención de la replicación viral del MERS en un paciente que comprende administrar al paciente que necesita inhibir o prevenir la replicación viral del MERS una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de uno cualquiera de E11, E13, E14, E29, E30, E50, E50a, E60 a E68 y E80 a E83.
E102 es un compuesto de una cualquiera de las realizaciones E1, E13, E14, E29 y E30, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso como medicamento.
Breve Descripción de los Dibujos
Figura 1: Patrón de difracción de rayos X de polvo de 13, solvato de metil tert- butil éter, Forma Sólida 2, de la síntesis alternativa del Ejemplo 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo; generación de la Forma Sólida 2
Figura 2: Patrón de difracción de rayos X en polvo de 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo, Forma Sólida 2, de la segunda síntesis alternativa del Ejemplo 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo; generación de la Forma Sólida 2
Figura 3: Patrón de difracción de rayos X del ejemplo 13, Forma Sólida 1, a partir de la recristalización del Ejemplo 13; generación de la Forma Sólida 1
Figura 4: Determinación estructural por rayos X del Ejemplo 13, Forma Sólida 1. Diagrama ORTEP dibujado con los parámetros de desplazamiento al 50% de probabilidad
Figura 5: Superposición del patrón de polvo obtenido para el Ejemplo 13, Forma Sólida 1, a partir de la recristalización del Ejemplo 13; generación de la Forma Sólida 1 (Figura 3) y el patrón de polvo calculado, generado a través del software Mercury, a partir de los datos de monocristal resuelto de la forma 1 (véase feterminación estructural de monocristal de rayos X del Ejemplo 13, forma sólida 1).
Figura 6: Patrón de difracción de rayos X en polvo del ejemplo 13, Forma Sólida 4, a partir de la recristalización alternativa del ejemplo 13; generación de la Forma Sólida 4
Figura 7: Determinación estructural por rayos X del Ejemplo 13, Forma Sólida 4. Diagrama ORTEP dibujado con los parámetros de desplazamiento al 50% de probabilidad
Figura 8: Superposición del patrón de polvo obtenido para el Ejemplo 13, Forma Sólida 4, a partir de la recristalización alternativa del Ejemplo 13; generación de la Forma Sólida 4 (Figura 6) y el patrón de polvo calculado, generado a través del software Mercury, a partir de los datos de monocristal resuelto de rayos X de la Forma 4 (véase determinación estructural de rayos X de monocristal del Ejemplo 13, Forma Sólida 4). Figura 9: Patrón de difracción de rayos X en polvo del Ejemplo 13, Forma Sólida 5, del Ejemplo 96.
Figura 10: Patrón de difracción de rayos X en polvo del intermedio C16, sal HCI.
Figura 11: Patrón de difracción de rayos X en polvo del intermedio C91.
Figura 12: Determinación estructural por rayos X de un monocristal del intermedio C91. Diagrama ORTEP dibujado con los parámetros de desplazamiento al 50% de probabilidad.
Figura 13: Patrón de difracción de rayos X en polvo del intermedio C92.
Figura 14: Patrón de difracción de rayos X en polvo del intermedio C42.
Figura 15: Determinación estructural por rayos X de un monocristal del intermedio C42. Diagrama ORTEP dibujado con los parámetros de desplazamiento al 50% de probabilidad.
Descripción detallada de la invención
Las referencias a los procedimientos de tratamiento en los párrafos siguientes de esta descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para su uso en un procedimiento de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para el diagnóstico). A los efectos de la presente invención, tal y como se describe y reivindica en el presente documento, los siguientes términos se definen de la siguiente manera:
Tal y como se utilizan en el presente documento, los términos "que comprende" "que incluye" se emplean en su sentido abierto y no limitativo. El término "que trata", como se usa en el presente documento, a menos que se indique lo contrario, indica revertir, aliviar, inhibir el progreso o prevenir el trastorno o condición al que se aplica dicho término, o uno o más síntomas de dicho trastorno o condición. En los procedimientos de tratamiento del COVID-19 debe entenderse que el COVID-19 es la enfermedad causada en los pacientes por la infección con el virus SARS-CoV-2. El virus del SARS-CoV-2 debe entenderse como la cepa del virus descubierta inicialmente, así como las cepas mutantes que surjan, tal como por ejemplo, pero sin limitarse a ellas, las cepas B.1.1.7 (variante del Reino Unido), B.1.351 (variante sudafricana), P.1 (variante brasileña) y B.1.427/B.1.429 (variantes de California). El término "tratamiento", tal como se usa en el presente documento, a menos que se indique lo contrario, se refiere al acto de tratar tal y como se ha definido "tratar" inmediatamente antes.
El término "paciente" se refiere a animales de sangre caliente tales como, por ejemplo, cobayas, ratones, ratas, jerbos, gatos, conejos, perros, ganado vacuno, cabras, ovejas, caballos, monos, chimpancés y humanos. Con respecto al tratamiento de COVID-19 los procedimientos de la invención son particularmente útiles para el tratamiento de un paciente humano.
El término "farmacéuticamente aceptable" indica que la sustancia o composición debe ser compatible, química y/o toxicológicamente, con los demás ingredientes que componen una formulación, y/o con el mamífero que está siendo tratado con ella.
El término "cantidad terapéuticamente eficaz" indica una cantidad de un compuesto de la presente invención que (i) trata o previene la enfermedad, afección o trastorno particular, (ii) atenúa, mejora o elimina uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular, o (iii) previene o retrasa la aparición de uno o más síntomas de la enfermedad, afección o trastorno particular descrito en el presente documento.
El término "alquilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un sustituto hidrocarbilo saturado de cadena lineal o ramificada (es decir, un sustituto obtenido de un hidrocarburo mediante la eliminación de un hidrógeno); en una realización que contiene de uno a ocho átomos de carbono, en otra de uno a seis átomos de carbono y en otra de uno a tres átomos de carbono. Ejemplos no limitantes de tales sustituyentes incluyen metilo, etilo, propilo (incluyendo n-propilo e isopropilo), butilo (incluyendo n-butilo, isobutilo, sec-butilo y ferf-butilo), pentilo, isoamilo, hexilo, heptilo, octilo y similares. En otra realización que contiene de uno a tres carbonos y que consiste en metilo, etilo, n-propilo e isopropilo.
El término "alquinilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un sustituyente hidrocarbilo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene un triple enlace carbono-carbono (es decir, un sustituyente obtenido a partir de un hidrocarburo que contiene un triple enlace mediante la eliminación de un hidrógeno); en una realización que contiene de dos a seis átomos de carbono. Ejemplos no limitantes de tales sustituyentes incluyen prop-2-in-1-il, but-3-in-1-il, pent-4-in-1-il y hex-5-in-1-il.
El término "alcoxi" se refiere a un sustituyente hidrocarbilo saturado de cadena lineal o ramificada unido a un radical de oxígeno (es decir, un sustituyente obtenido a partir de un alcohol hidrocarbonado por eliminación del hidrógeno del OH); en una realización que contiene de uno a seis átomos de carbono. Ejemplos no limitantes de tales sustituyentes incluyen metoxi, etoxi, propoxi (incluyendo n-propoxi e isopropoxi), butoxi (incluyendo n-butoxi, isobutoxi, sec-butoxi y ferf-butoxi), pentoxi, hexoxi y similares. En otra realización que tiene de uno a tres carbonos y que consiste en metoxi, etoxi, n-propoxi e isopropoxi. Un grupo alcoxi unido a un grupo alquilo se denomina alcoxialquilo. Un ejemplo de grupo alcoxialquilo es metoximetilo.
El término "alquinoxi" se refiere a un sustituto hidrocarbilo saturado de cadena lineal o ramificada que contiene un triple enlace carbono-carbono unido a un radical de oxígeno (es decir, un sustituto obtenido a partir de un alcohol hidrocarburo que contiene un triple enlace mediante la eliminación del hidrógeno del OH); en una realización que contiene de tres a seis átomos de carbono. Ejemplos no limitantes de tales sustituyentes incluyen propiniloxi, butiloxi y pentiloxi y similares.
En algunos casos, el número de átomos de carbono en un sustituyente hidrocarbilo (es decir, alquilo, cicloalquilo, etc.) se indica mediante el prefijo "Cx-Cy-" o "Cx-y", donde x es el número mínimo e y es el número máximo de átomos de carbono en el sustituyente. Así, por ejemplo, "alquilo C1-C8 " o "alquilo C1 -8 " se refiere a un sustituto alquilo que contiene de 1 a 8 átomos de carbono, "alquilo C1-C6 " o "alquilo C1-6 " se refiere a un sustituto alquilo que contiene de 1 a 6 átomos de carbono, "alquilo C1-C3 " o "alquilo C1 -3 " se refiere a un sustituto alquilo que contiene de 1 a 3 átomos de carbono. Para ilustrar aún más, cicloalquilo C3-C6 o cicloalquilo C3-6 se refiere a un grupo cicloalquilo saturado que contiene de 3 a 6 átomos de carbono en el anillo.
El término "cicloalquilo" se refiere a un sustituyente carbocíclico obtenido mediante la eliminación de un hidrógeno de una molécula carbocíclica saturada, por ejemplo una que tenga de tres a siete átomos de carbono. El término "cicloalquilo" incluye los carbociclos saturados monocíclicos. El término "cicloalquilo C3-C7" significa un radical de un sistema de anillos de tres a siete miembros que incluye los grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo y cicloheptilo. El término "cicloalquilo C3-C6" significa un radical de un sistema de anillos de tres a seis miembros que incluye los grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo. Los grupos cicloalquilos también pueden ser carbocíclos bicíclicos o espirocíclicos. Por ejemplo, el término "cicloalquilo C3-C12" incluye los carbociclos monocíclicos y las fracciones de cicloalquilo bicíclicas y espirocíclicas, tales como biciclopentilo, biciclohexilo, bicicloheptilo, biciclononilo, espiropentilo, espirohexilo, espiroheptilo, espirooctilo y espirononilo.
El término "cicloalcoxi C3-C6" se refiere a un grupo cicloalquilo de tres a seis miembros unido a un radical de oxígeno. Algunos ejemplos son ciclopropoxi, ciclobutoxi, ciclopentoxi y ciclohexoxi.
El término "arilo" se refiere a un sistema aromático carbocíclico. El término "arilo C6-C10" se refiere a los sistemas aromáticos carbocíclicos con 3 a 10 átomos e incluye fenilo y naftilo.
En algunos casos, el número de átomos de un sustituyente cíclico que contiene uno o más heteroátomos (es decir, heteroarilo o heterocicloalquilo) se indica mediante el prefijo "de x a y miembros", donde x es el número mínimo e y es el número máximo de átomos que forman la fracción cíclica del sustituyente. Así, por ejemplo, "heterocicloalquilo de 4 a 6 miembros" se refiere a un heterocicloalquilo que contiene de 4 a 6 átomos, incluyendo de uno a tres heteroátomos, en la fracción cíclica del heterocicloalquilo. Asimismo, la frase "heteroarilo de 5 a 6 miembros" se refiere a un heteroarilo que contiene de 5 a 6 átomos, y "heteroarilo de 5 a 10 miembros" se refiere a un heteroarilo que contiene de 5 a 10 átomos, incluyendo cada uno de los cuales uno o más heteroátomos, en la fracción cíclica del heteroarilo. Además, las frases "heteroarilo de 5 miembros" y "heteroarilo de 6 miembros" se refieren a un sistema de anillos heteroaromáticos de cinco miembros y a un sistema de anillos heteroaromáticos de seis miembros, respectivamente. Los heteroátomos presentes en estos sistemas de anillos se seleccionan entre N, O y S.
El término "hidroxi" o "hidroxilo" se refiere a -OH. Cuando se utiliza en combinación con otros términos, el prefijo "hidroxi" indica que el sustituyente al que se une el prefijo está sustituido con uno o más sustituyentes hidroxi. Entre los compuestos que llevan un carbono al que se le añaden uno o más sustituyentes hidroxi se encuentran, por ejemplo, alcoholes, enoles y fenol. Los términos ciano y nitrilo se refieren a un grupo -CN. El término "oxo" indica un oxígeno que está unido a un carbono por un doble enlace (es decir, cuando R4 es oxo, entonces R4 junto con el carbono al que está unido son una fracción C=O).
El término "halo" o "halógeno" se refiere al flúor (que puede representarse como -F), al cloro (que puede representarse como -CI), al bromo (que puede representarse como -Br) o al yodo (que puede representarse como -I).
El término "heterocicloalquilo" se refiere a un sustituyente obtenido mediante la eliminación de un hidrógeno de una estructura de anillo saturado o parcialmente saturado que contiene un total del número especificado de átomos, tal como por ejemplo de 4 a 6 átomos de anillo o de 4 a 12 átomos, en el que al menos uno de los átomos de anillo es un heteroátomo (es decir, oxígeno, nitrógeno o azufre), y los átomos de anillo restantes se seleccionan independientemente del grupo que consiste en carbono, oxígeno, nitrógeno y azufre. El azufre puede estar oxidado [es decir, S(O) o S(O)2] o no. En un grupo que tiene un sustituyente heterocicloalquilo, el átomo del anillo del sustituyente heterocicloalquilo que está unido al grupo puede ser un heteroátomo de nitrógeno, o puede ser un átomo de carbono del anillo. Del mismo modo, si el sustituyente heterocicloalquilo está a su vez sustituido con un grupo o sustituyente, el grupo o sustituyente puede estar unido a un heteroátomo de nitrógeno, o puede estar unido a un átomo de carbono del anillo. Debe entenderse que un grupo heterocíclico puede ser monocíclico, bicíclico, policíclico o espirocíclico.
El término "heteroarilo" se refiere a una estructura de anillo aromático que contiene el número especificado de átomos de anillo en el que al menos uno de los átomos de anillo es un heteroátomo (es decir, oxígeno, nitrógeno o azufre), y los átomos de anillo restantes se seleccionan independientemente del grupo que consiste en carbono, oxígeno, nitrógeno y azufre. Entre los ejemplos de sustituyentes heteroarilos se incluyen sustituyentes heteroarilos de 6 miembros, tales como piridilo, pirazilo, pirimidinilo y piridazinilo; y sustituyentes heteroarilo de 5 miembros tales como triazolilo, imidazolilo, furanilo, tiofenilo, pirazolilo, pirrolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, 1,2,3-, 1,2,4-, 1,2,5-, o 1,3,4-oxadiazolilo e isotiazolilo. El grupo heteroarilo también puede ser un grupo heteroaromático bicíclico tal como indolilo, benzofuranilo, benzotienilo, bencimidazolilo, benzoxazolilo, benzoisoxazolilo, oxazolopiridinilo, imidazopiridinilo, imidazopirimidinilo y similares. En un grupo que tiene un sustituyente heteroarilo, el átomo del anillo del sustituyente heteroarilo que está unido al grupo puede ser uno de los heteroátomos, o puede ser un átomo de carbono del anillo. Del mismo modo, si el sustituyente heteroarilo está a su vez sustituido con un grupo o sustituyente, el grupo o sustituyente puede estar unido a uno de los heteroátomos, o puede estar unido a un átomo de carbono del anillo. El término "heteroarilo" también incluye los N-óxidos de piridilo y los grupos que contienen un anillo de N-óxido de piridina. Además, el grupo heteroarilo puede contener un grupo oxo tal como el presente en un grupo piridona. Otros ejemplos incluyen furilo, tienilo, oxazolilo, tiazolilo, imidazolilo, pirazolilo, triazolilo, tetrazolilo, isoxazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, tiadiazolilo, piridinilo piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, piridin-2(1H)-onilo, piridazin-2(1H)-onilo, pirimidin-2(1H)-onilo, pirazin-2(1H)-onilo, imidazo[1,2-a]piridinilo y pirazolo[1,5-a]piridinilo. El heteroarilo puede estar además sustituido como se define en el presente documento.
Ejemplos de heteroarilos y heterocicloalquilos de un solo anillo incluyen furanilo, dihidrofuranilo, tetrahidrofuranilo, tiofenilo, dihidrotiofenilo, tetrahidrotiofenilo, pirrolilo, isopirrolilo, pirrolinilo, pirrolidinilo, imidazolilo, isoimidazolilo, imidazolinilo, imidazolidinilo, pirazolilo, pirazolinilo, pirazolidinilo, triazolilo, tetrazolilo, ditiolilo, oxatiolilo, oxazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, isotiazolinilo, tiazolidinilo, isotiazolidinilo, tiaoxadiazolilo, oxatiazolilo, oxadiazolilo (incluyendo oxadiazolilo, 1,2,4-oxadiazolilo, 1,2,5-oxadiazolilo, o 1,3,4-oxadiazolilo), piranilo (incluyendo 1,2-piranilo o 1,4-piranilo), dihidropiranilo, piridinilo, piperidinilo, diazinilo (incluyendo piridazinilo, pirimidinilo, piperazinilo, triazinilo (incluyendo s-triazinilo, as-triazinilo y v-triazinilo), oxazinilo (incluyendo 2H-1,2-oxazinilo, 6H-1,3-oxazinilo o 2H-1,4-oxazinilo), isoxazinilo (incluyendo o-isoxazinilo o p-isoxazinilo), oxazolidinilo, isoxazolidinilo oxatiazinilo (incluyendo 1,2,5-oxatiazinilo o 1,2,6-oxatiazinilo), oxadiazinilo (incluyendo 2H-1,2,4-oxadiazinilo o 2H-1,2,5-oxadiazinilo) y morfolinilo.
El término "heteroarilo" también puede incluir, cuando se especifica como tal, los sistemas de anillos que tienen dos anillos en los que dichos anillos pueden estar fusionados y en los que un anillo es aromático y el otro anillo no forma parte completamente del sistema aromático conjugado (es decir, el anillo heteroaromático puede estar fusionado a un anillo de cicloalquilo o heterocicloalquilo). Ejemplos no limitantes de tales sistemas de anillos incluyen 5,6,7,8-tetrahidroisoquinolinilo, 5,6,7,8-tetrahidroquinolinilo, 6,7-dihidro-5H-ciclopenta/b]piridinilo, 6,7-dihidro-5H-ciclopenta/c]piridinilo, 1,4,5,6-tetrahidrociclopenta/c]pirazolilo, 2,4,5,6-tetrahidrociclopenta[c]pirazolilo, 5,6-dihidro-4H-pirrolo[1,2-6]pirazolilo, 6,7-dihidro-5H-pirrolo[1,2-6][1,2,4]triazolilo, 5,6,7,8-tetrahidro-[1,2,4]triazolo[1,5-a]piridinilo, 4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]piridinilo, 4,5,6,7-tetrahidro-1H-indazolilo y 4,5,6,7-tetrahidro-2H-indazolilo. Debe entenderse que si una fracción carbocíclica o heterocíclica puede enlazarse o unirse de otro modo a un sustrato designado a través de diferentes átomos del anillo sin denotar un punto específico de unión, entonces se pretende todos los puntos posibles, ya sea a través de un átomo de carbono o, por ejemplo, un átomo de nitrógeno trivalente. Por ejemplo, el término "piridilo" indica 2, 3 o 4 piridilos, el término "tienilo" indica 2 o 3 tienilo, etc.
Si los sustituyentes se describen como "independientemente" con más de una variable, cada instancia de un sustituyente se selecciona independientemente de las otras de la lista de variables disponibles. Por lo tanto, cada sustituyente puede ser idéntico o diferente al otro o a los otros sustituyentes.
Si los sustituyentes se describen como "seleccionados independientemente" de un grupo, cada instancia de un sustituyente se selecciona independientemente de las otras. Por lo tanto, cada sustituyente puede ser idéntico o diferente al otro o a los otros sustituyentes.
Un compuesto de fórmula I que es un compuesto de fórmula Ih-1a, Ih-1b, Ih-1c, li-1a, Ii-1b, Ii-1c, Ij-1a, Ij-1b, Ij-1c, Ika, Ik-b o Ik-c puede denominarse en lo sucesivo "compuesto de la invención". Los compuestos de fórmula I que son compuestos de fórmula Ih-1a, Ih-1b, Ih-1c, Ii-1a, Ii-1b, Ii-1c, Ij-1a, Ij-1b, Ij-1c, Ik-a, Ik-b o Ik-c pueden denominarse en lo sucesivo "compuestos de la invención". Dichos términos también se definen para incluir todas las formas de los compuestos, incluyendo hidratos, solvatos, isómeros, formas cristalinas y no cristalinas, isomorfos, polimorfos y metabolitos de los mismos. Por ejemplo, los compuestos de la invención, o las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, pueden existir en formas disueltas y no disueltas. Cuando el solvente o el agua están fuertemente ligados, el complejo tendrá una estequiometría bien definida independiente de la humedad. Sin embargo, cuando el disolvente o el agua están débilmente unidos, como en los solvatos de canal y los compuestos higroscópicos, el contenido de agua/disolvente dependerá de la humedad y las condiciones de secado. En estos casos, la no estequiometría será la norma.
Los compuestos de la invención pueden existir como clatratos u otros complejos. Se incluyen dentro del alcance de la invención complejos tales como clatratos, complejos de inclusión de fármaco-huésped en los que el fármaco y el huésped están presentes en cantidades estequiométricas o no estequiométricas. También se incluyen complejos de los compuestos de la invención que contienen dos o más componentes orgánicos y/o inorgánicos, que pueden estar en cantidades estequiométricas o no estequiométricas. Los complejos resultantes pueden ser ionizados, parcialmente ionizados o no ionizados. Para una revisión de dichos complejos, véase J. Pharm. Sci., 64 (8), 1269-1288 por Haleblian (agosto de 1975).
Los compuestos de la invención tienen átomos de carbono asimétricos. Los enlaces carbono-carbono de los compuestos de la invención pueden representarse aquí mediante una línea sólida ( --------- ), una cuña sólida ( ) o una cuña punteada ( ..... "UN). El uso de una línea sólida para representar los enlaces a átomos de carbono asimétricos pretende indicar que se incluyen todos los posibles estereoisómeros (por ejemplo, enantiómeros específicos, mezclas racémicas, etc.) en ese átomo de carbono. El uso de una cuña sólida o punteada para representar los enlaces a átomos de carbono asimétricos pretende indicar que solo se incluye el estereoisómero mostrado. Es posible que los compuestos de Fórmula I, puedan contener más de un átomo de carbono asimétrico. En estos compuestos, el uso de una línea sólida para representar los enlaces a los átomos de carbono asimétricos pretende indicar que se pretende incluir todos los posibles estereoisómeros. Por ejemplo, a menos que se indique lo contrario, se pretende que los compuestos de Fórmula I puedan existir como enantiómeros y diastereómeros o como racematos y mezclas de los mismos. El uso de una línea sólida para representar los enlaces a uno o más átomos de carbono asimétricos en un compuesto de Fórmula I y el uso de una cuña sólida o punteada para representar los enlaces a otros átomos de carbono asimétricos en el mismo compuesto tiene por objeto indicar que está presente una mezcla de diastereómeros.
Los estereoisómeros de la Fórmula I incluyen los isómeros cis y trans, los isómeros ópticos tales como los enantiómeros R y S, los diastereómeros, los isómeros geométricos, los isómeros rotacionales, los isómeros conformacionales y los tautómeros de los compuestos de la invención, incluyendo los compuestos que presentan más de un tipo de isomería; y mezclas de los mismos (tales como los racematos y los pares diastereoméricos). También se incluyen sales de adición de ácido o de adición de base en las que el contraión es ópticamente activo, por ejemplo, D-lactato o L-lisina, o racémicas, por ejemplo, DL-tartrato o DL-arginina.
Cuando cualquier racemato se cristaliza, es posible que haya cristales de dos tipos diferentes. El primer tipo es el compuesto racémico (verdadero racemato) mencionado anteriormente, en el que se produce una forma homogénea de cristal que contiene ambos enantiómeros en cantidades equimolares. El segundo tipo es la mezcla racémica o conglomerado, en el que se producen dos formas de cristal en cantidades equimolares que comprenden cada una un único enantiómero.
Los compuestos de la invención pueden presentar el fenómeno del tautomerismo; dichos tautómeros también se consideran compuestos de la invención. Todas estas formas tautoméricas, y mezclas de los mismos, están incluidas en el ámbito de la invención. Los tautómeros existen como mezclas de un conjunto tautomérico en solución. En Forma Sólida, suele predominar un tautómero. Aunque se describa un tautómero, la presente invención incluye todos los tautómeros de los compuestos de la invención.
La frase "sales farmacéuticamente aceptables", tal como se utiliza en el presente documento, a menos que se indique lo contrario, incluye sales de grupos ácidos o básicos que pueden estar presentes en los compuestos descritos en el presente documento. Los compuestos utilizados en los procedimientos de la invención que son de naturaleza básica son capaces de formar una amplia variedad de sales con diversos ácidos inorgánicos y orgánicos. Los ácidos que pueden utilizarse para preparar sales de adición ácida farmacéuticamente aceptables de tales compuestos básicos son los que forman sales de adición ácida no tóxicas, es decir sales que contienen aniones farmacológicamente aceptables, tales como acetato, bencenosulfonato, benzoato, bicarbonato, bisulfato, bitartrato, borato, bromuro, edetato de calcio, camsilato carbonato, cloruro, clavulanato, citrato, dihidrocloruro, edetato, edisilato, estolato, esilato, etilsuccinato, fumarato, glucepato, gluconato, glutamato, hexilresorcinato, hidrabamina, hidrobromuro, clorhidrato, yoduro, isetionato, lactato, lactobionato, laurato, malato, maleato, mandelato, mesilato, metilsulfato, mucato, napsilato, nitrato, oleato, oxalato, pamoato (embonato), palmitato, pantotenato, fosfato/difosfato, poligalacturonato, salicilato, estearato, subacetato, succinato, tanato, tartrato, teoclato, tosilato, trietodo y sales de valerato.
Con respecto a los compuestos de la invención utilizados en los procedimientos de la invención, si los compuestos también existen como formas tautoméricas entonces esta invención se refiere a esos tautómeros y al uso de todos esos tautómeros y mezclas de los mismos.
La invención en cuestión también incluye compuestos y procedimientos de tratamiento de las infecciones por coronavirus tales como el COVID-19 y procedimientos de inhibición del SARS-CoV-2 con compuestos marcados isotópicamente, que son idénticos a los recitados en el presente documento, pero por el hecho de que uno o más átomos se sustituyen por un átomo que tiene una masa atómica o un número de masa diferente de la masa atómica o el número de masa que se encuentra habitualmente en la naturaleza. Los ejemplos de isótopos que pueden incorporarse a los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 18O, 17O, 31P, 32P, 35S, 18F, y 36Cl, respectivamente. Los compuestos de la presente invención, los profármacos de los mismos y las sales farmacéuticamente aceptables de dichos compuestos o de dichos profármacos que contienen los isótopos mencionados y/o isótopos de otros átomos están dentro del alcance de esta invención. Ciertos compuestos marcados isotópicamente de la presente invención, por ejemplo aquellos en los que se incorporan isótopos radiactivos tales como 3H y 14C, son útiles en ensayos de distribución de fármacos y/o sustratos en tejidos. Los isótopos tritiados, es decir, 3H, y carbono-14, es decir, 14C, son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y su detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como el deuterio, es decir, 2H, puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas que resultan de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, una mayor vida media in vivo o requisitos de dosificación reducidos y, por lo tanto, puede preferirse en algunas circunstancias. Los compuestos marcados isotópicamente utilizados en los procedimientos de esta invención y los profármacos de los mismos pueden prepararse generalmente llevando a cabo los procedimientos de preparación de los compuestos divulgados en la técnica sustituyendo un reactivo marcado isotópicamente fácilmente disponible por un reactivo no marcado isotópicamente.
La presente invención también abarca procedimientos que utilizan composiciones farmacéuticas y procedimientos de tratamiento de infecciones por coronavirus, tales como las infecciones por COVID-19, mediante la administración de profármacos de los compuestos de la invención. Los compuestos con grupos amino, amido o hidroxi libres pueden convertirse en profármacos. Los profármacos incluyen compuestos en los que un residuo de aminoácido, o una cadena polipeptídica de dos o más (por ejemplo, dos, tres o cuatro) residuos de aminoácidos se une covalentemente mediante un enlace éster a un hidroxi de los compuestos utilizados en los procedimientos de esta invención. Los residuos de aminoácidos incluyen, pero no se limitan a los 20 aminoácidos naturales comúnmente designados por símbolos de tres letras y también incluyen 4-hidroxiprolina, hidroxilisina, desmosina, isodesmosina, 3-metilhistidina, norvalina, betaalanina, ácido gamma-aminobutírico, citrulina, homocisteína, homoserina, ornitina y metionina sulfona. También se incluyen otros tipos de profármacos. Por ejemplo, los grupos hidroxi libres pueden derivarse utilizando grupos que incluyen, pero no se limitan a, hemisuccinatos, ésteres de fosfato, dimetilaminoacetatos y fosforiloximetiloxicarbonilos, tales como se indica en Advanced Drug Delivery Reviews, 1996, 19, 115. También se incluyen los profármacos de carbamato de grupos hidroxi y amino, así como los profármacos de carbonato, los ésteres de sulfonato y los ésteres de sulfato de grupos hidroxi. La derivación de los grupos hidroxi tales como éteres de (aciloxi)metilo y de (aciloxi)etilo, en los que el grupo acilo puede ser un éster de alquilo, opcionalmente sustituido con grupos que incluyen, pero no se limitan a, funcionalidades de éter, amina y ácido carboxílico, o en los que el grupo acilo es un éster de aminoácido, como se ha descrito anteriormente, también están abarcan. Los productos de este tipo se describen en J. Med. Chem., 1996, 29, 10. Las aminas libres también pueden derivarse como amidas, sulfonamidas o fosfonamidas. Todas estas moléculas de profármacos pueden incorporar grupos que incluyen, pero no se limitan a, funcionalidades de éter, amina y ácido carboxílico.
Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse en los procedimientos de la invención en combinación con otros fármacos. Por ejemplo, la dosificación de un paciente infectado por el coronavirus SARS-CoV-2 (es decir un paciente con COVID-19) con el inhibidor de la proteasa 3CL del coronavirus SARS-CoV-2 de la invención y un interferón, como el interferón alfa, o un interferón pegilado, tal como PEG-Intron o Pegasus, puede proporcionar un mayor beneficio clínico que la dosificación del interferón, del interferón pegilado o del inhibidor del coronavirus SARS-CoV-2 solo. Otros agentes adicionales que pueden utilizarse en los procedimientos de la presente invención incluyen dexametasona, azitromicina y remdesivir. Los ejemplos de mayores beneficios clínicos podrían incluir una mayor reducción de los síntomas de COVID-19, un tiempo más rápido para el alivio de los síntomas, una reducción de la patología pulmonar, una mayor reducción de la cantidad de coronavirus SARS-CoV-2 en el paciente (carga viral) y una disminución de la mortalidad.
El coronavirus SARS-CoV-2 infecta células que expresan la glicoproteína P. Algunos de los inhibidores de la proteasa 3CL del coronavirus SARS-CoV-2 de la invención son sustratos de la glicoproteína P. Los compuestos que inhiben el coronavirus SARS-CoV-2 que también son sustratos de la glicoproteína P pueden ser dosificados con un inhibidor de la glicoproteína P. Algunos ejemplos de inhibidores de la glicoproteína P son verapamilo, vinblastina, ketoconazol, nelfinavir, el ritonavir o ciclosporina. Los inhibidores de la glicoproteína P actúan inhibiendo el eflujo de los inhibidores del coronavirus SARS-CoV-2 de la invención fuera de la célula. La inhibición del eflujo con base en la glicoproteína P evitará la reducción de las concentraciones intracelulares del inhibidor del coronavirus SARS-CoV-2 debido al eflujo de la glicoproteína P. La inhibición del flujo de la glicoproteína P dará lugar a mayores concentraciones intracelulares de los inhibidores del coronavirus SARS-CoV-2. La dosificación de un paciente infectado por el coronavirus SARS-CoV-2 con los inhibidores de la proteasa 3CL del coronavirus SARS-CoV-2 de la invención y un inhibidor de la glicoproteína P puede reducir la cantidad de inhibidor de la proteasa 3CL del coronavirus SARS-CoV-2 necesaria para lograr una dosis eficaz al aumentar la concentración intracelular del inhibidor de la proteasa 3CL del coronavirus SARS-CoV-2.
Entre los agentes que pueden utilizarse para aumentar la exposición de un mamífero a un compuesto de la presente invención están los que pueden actuar como inhibidores de al menos una isoforma de las enzimas del citocromo P450 (CYP450). Las isoformas del CYP450 que pueden ser inhibidas beneficiosamente incluyen, pero no se limitan a CYP1A2, CYP2D6, CYP2C9, CYP2C19 y CYP3A4. Los compuestos utilizados en los procedimientos de la invención incluyen compuestos que pueden ser sustratos del CYP3A4 y son metabolizados por CYP3A4. La dosificación de un paciente infectado por el coronavirus SARS-CoV-2 con un inhibidor del coronavirus SARS-CoV-2 que sea un sustrato de CYP3A4, tal como el inhibidor de la proteasa 3CL del coronavirus SARS-CoV-2, y un inhibidor de CYP3A4, como ritonavir, nelfinavir o delavirdina, reducirá el metabolismo del inhibidor del coronavirus SARS-CoV-2 por CYP3A4. Esto dará lugar a una reducción del aclaramiento del inhibidor del coronavirus del SRAS-CoV-2 y a un aumento de las concentraciones plasmáticas del inhibidor del coronavirus del SRAS-CoV-2. La reducción del aclaramiento y las mayores concentraciones plasmáticas pueden dar lugar a una dosis menos eficaz del inhibidor del coronavirus del SRAS-CoV-2.
Los agentes terapéuticos adicionales que pueden utilizarse en combinación con los inhibidores del SARS-CoV-2 en los procedimientos de la presente invención incluyen los siguientes:
Inhibidores del PLpro, Apilomod, EIDD-2801, Ribavirina, Valganciclovir, ^S-Timidina, Aspartamo, Oxprenolol, Doxiciclina, Acetofenazina, lopromida, Riboflavina, Reproterol, 2,2'-Ciclocitidina, Cloranfenicol, Carbamato de clorfenesina, Levodropropizina, Cefamandole, Floxuridina, Tigeciclina, Pemetrexed, Ácido L(+)-Ascórbico, Glutatión, Hesperetina, Ademetionina, Masoprocol, Isotretinoína, Dantroleno, Sulfasalazina Antibacteriana, Silibina, Nicardipina, Sildenafil, Platycodin, Crisina, Neohesperidina, Baicalina, Sugetriol-3,9-diacetato, (-)-Epigalocatequina galato, Faitantrina D, 2-(3,4-Dihidroxifenil)-2-[[2-(3,4-dihidroxifenil)-3,4-dihidro-5,7-dihidroxi-2H-1-benzopirano-3-il]oxi]-3,4-dihidro-2H-1-benzopirano-3,4,5,7-tetrol, 2,2-di(3-indolil)-3-indolona,('S)-(1S,2R,4aS,5R,8aS)-1-Formamido-1,4adimetil-6-metileno-5-(('£)-2-(2-oxo-2,5-dihidrofurano-3-il)etenil)decahidronaftaleno-2-il-2-amino-3-fenilpropanoato, Piceatannol, ácido rosmarínico y Magnolol.
Inhibidores de 3CLpro, Limeciclina, Clorhexidina, Alfuzosina, Cilastatina, Famotidina, Almitrina, Progabide, Nepafenaco, Carvedilol, Amprenavir, Tigeciclina, Montelukast, ácido carmínico, mimosina, flavina, luteína, cefpiramida, fenicillina, candoxatril, nicardipina, valerato de estradiol, pioglitazona, conivaptán, telmisartán, Doxiciclina, Oxitetraciclina, (1S,2R,4aS,5R,8aS)-1-Formamido-1,4a-dimetil-6-metileno-5-(('£)-2-(2-oxo-2,5-dihidrofurano-3-il)etenil)decahidronaftaleno-2-il5-(('R)-1,2-ditiolan-3-il) pentanoato, Betulonal, Crisina-7-O-p-glucurónido, Andrographiside, (1S,2R,4aS,5R,8aS)-1-Formamido-1,4a-dimetil-6-metileno-5-((£)-2-(2-oxo-2,5-dihidrofurano-3-il)etenil)decahidronaftaleno-2-il 2-nitrobenzoato, ácido 2p-hidroxi-3,4-seco-friedelactona-27-oico('S)-(lS,2R,4aS,5R,8aS)-1-Formamido-1,4a-dimetil-6-metileno-5-(('£)-2-(2-oxo-2,5-dihidrofurano-3-il)etenil) decahidronaftaleno-2-il-2-amino-3-fenilpropanoato, Isodecortinol, Cerevisterol, Hesperidina, Neohesperidina, Andrograpanina, 2-((1R,5R,6R,8aS)-6-Hidroxi-5-(hidroximetil)-5,8a-dimetil-2-metilendecahidronaftaleno-1-il)benzoato de etilo, Cosmosiin, Cleistocaltone A, 2,2-Di(3-indolil)-3-indolona, Biorobin, Gnidicin, Phyllaemblinol, Theaflavin 3,3'-di-O-galato, ácido rosmarínico, Kouitchenside I, ácido oleanólico, Stigmast-5-en-3-ol, Deacetilcentapicrin, y Berchemol.
Inhibidores de RdRp, Valganciclovir, Clorhexidina, Ceftibuten, Fenoterol, Fludarabina, Itraconazol, Cefuroxima, Atovaquona, Ácido quenodesoxicólico, Cromolina, Bromuro de pancuronio, Cortisona, Tibolona, Novobiocina, Silibina, Idarubicina Bromocriptina, Difenoxilato, Bencilpenicilloil G, Dabigatrán etexilato, Betulonal, Gnidicina, 2p,30p-Dihidroxi-3,4-seco-friedelolactona-27-lactona, 14-Deoxi-11,12-didehidroandrografolido, Gniditrin, Theaflavin 3,3'-di-O-galato,(RH(1R,5aS,6R,9aS)-1,5a-Dimetil-7-metileno-3-oxo-6-((£)-2-(2-oxo-2,5-dihidrofurano-3-il)etenil)decahidro-1H-benzo/c]azepin-1-il)metil2-amino-3-fenilpropanoato, ácido 2p-Hidroxi-3,4-seco-friedelolactona-27-oico, 2-(3,4-Dihidroxifenil)-2-[[2-(3,4-dihidroxifenil)-3,4-dihidro-5,7-dihidroxi-2H-1 -benzopirano-3-il]oxi]-3,4-dihidro-2H-1-benzopirano-3,4,5,7-tetrol, Filaemblicina B, 14-hidroxiciperotundona, Andrographiside, 2-((1R,5R,6R,8aS)-6-Hidroxi-5-(hidroximetil)-5,8a-dimetil-2-metilendecahidro naftaleno-1-il)benzoato de etilo, Andrographolide, Sugetriol-3,9-diacetato, Baicalin, (1S,2R,4aS,5R,8aS)-1-Formamido-1,4a-dimetil-6-metileno-5-((E)-2-(2-oxo-2,5-dihidrofurano-3-il)etenil)decahidronaftaleno-2-il 5-((R)-1,2-ditiolan-3-il)pentanoato, 1,7-Dihidroxi-3-metoxantona, 1,2,6-Trimetoxi-8-[(6-O-p-D-xipiranosil-p-D-glucopiranosil)oxi]-9H-xanten-9-ona, y 1,8-Dihidroxi-6-metoxi-2-[(6-O-p-D-xilopiranosil-p-D-glucopiranosil)oxi]-9H-xanten-9-ona, 8-(3-D-G/ucop/ranos//ox/)-1,3,5-trihidroxi-9H-xanten-9-ona,
Los agentes terapéuticos adicionales que pueden utilizarse en los procedimientos de la invención incluyen Diosmina, Hesperidina, MK-3207, Venetoclax, Dihidroergocristina, Bolazina, R428, Ditercalinio, Etopósido, Tenipósido, UK-432097, Irinotecán, Lumacaftor, Velpatasvir, Eluxadolina, Ledipasvir, Lopinavir / Ritonavir Ribavirina, Alferón y prednisona. Otros agentes adicionales útiles en los procedimientos de la presente invención incluyen dexametasona, azitromicina y remdesivir, así como boceprevir, umifenovir y favipiravir.
Otros agentes adicionales que pueden utilizarse en los procedimientos de la presente invención incluyen compuestos de a-cetoamidas designados como 11r, 13a y 13b, mostrados a continuación, como se describe en Zhang, L.; Lin, D.; Sun, X.; Rox, K.; Hilgenfeld, R.; X-ray Structure of Main Protease of the Novel Coronavirus SARS-CoV-2 Enables Design of a-Ketoamide Inhibitors; bioRxiv preprint doi: https://doi.org/10.1101/2020.02.17.952879
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Otros agentes que pueden utilizarse en los procedimientos de la presente invención incluyen activadores de la vía RIG 1 como los descritos en la Patente de EE. Uu . No. 9,884,876.
Otros agentes terapéuticos adicionales incluyen inhibidores de la proteasa tales como los descritos en Dai W, Zhang B, Jiang X-M, et al. Structure-based design of antiviral drug candidates targeting the SARS-CoV-2 main protease. Science. 2020;368(6497):1331-1335 incluyendo compuestos como el que se muestra a continuación y un compuesto designado como DC402234
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Otra realización de la presente invención es un compuesto de la presente invención para su uso en un procedimiento de tratamiento de COVID-19 en un paciente en el que además de administrar un compuesto de la presente invención se administra un agente adicional y el agente adicional se selecciona de antivirales tales como remdesivir, galidesivir, favilavir/avifavir, molnupiravir (m K-4482/EIDD 2801), AT-527, AT-301, BLD-2660 favipiravir, camostat, SLV213 emtrictabina/tenofivir, clevudina, dalcetrapib, boceprevir y ABX464, glucocorticoides tales como dexametasona e hidrocortisona, plasma convaleciente, plasma humano recombinante tal como gelsolina (Rhu-p65N), anticuerpos monoclonales tales como regdanvimab (Regkirova), ravulizumab (Ultomiris), VIR-7831/VIR-7832, BRN-196/BRN-198, COVI-AMG/COVI DROPS (STI-2020), bamlanivimab (LY-CoV555), mavrilimab, leronlimab (PRO140), AZD7442, lenzilumab, infliximab, adalimumab, j S 016, STI-1499 (COVIGUARD), lanadelumab (Takhzyro), canakinumab (Ilaris), gimsilumab y otilimab, cócteles de anticuerpos tales como casirivimab/imdevimab (REGN-Cov2), proteínas de fusión recombinantes tales como MK-7110 (CD24Fc/SACCOVID), anticoagulantes tales como heparina y apixaban, agonistas del receptor de IL-6 tales como tocilizumab (Actemra) y sarilumab (Kevzara), Inhibidores de la PIKfyve tales como el dimesilato de apilimod, inhibidores de RIPK1 tales como DNL758, DC402234, agonistas del receptor VIP tales como PB1046, inhibidores de SGLT2 tales como el dapaglifozin, inhibidores de TYK tales como abivertinib, inhibidores de la quinasa tales como ATR-002, bemcentinib, acalabrutinib, losmapimod, baricitinib y tofacitinib, bloqueadores H2 tales como famotidina, antihelmínticos tales como niclosamida, inhibidores de la furina tales como diminazeno.
El término "agente inhibidor del SARS-CoV-2" se refiere a cualquier compuesto inhibidor de la proteasa similar al 3C del coronavirus relacionado con el SARS-CoV-2 descrito en el presente documento o a una sal, hidrato, profármaco, metabolito activo o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo o a un compuesto que inhiba la replicación del SARS-CoV-2 de cualquier manera.
El término "interferir o prevenir" la replicación viral del coronavirus relacionado con el SARS-CoV-2 ("SARS-CoV-2") en una célula significa reducir la replicación del SARS-CoV-2 o la producción de los componentes del SARS-CoV-2 necesarios para la progenie del virus en una célula tratada con un compuesto de esta invención en comparación con una célula no tratada con un compuesto de esta invención. Entre los ensayos sencillos y convenientes para determinar si se ha reducido la replicación viral del SARS-CoV-2 se incluye un ensayo ELISA para determinar la presencia, ausencia o reducción de anticuerpos anti-SARS-CoV-2 en la sangre del sujeto (Nasoff, et al., PNAS 88:5462-5466, 1991), RT-PCR (Yu, et al., en Viral Hepatitis and Liver Disease 574-577, Nishioka, Suzuki and Mishiro (Eds.); Springer-Verlag, Tokyo, 1994). Dichos procedimientos son bien conocidos por los expertos en la técnica. Como alternativa, se puede aislar el ARN total de las células "de control" transducidas e infectadas y someterlo a un análisis mediante dot blot o northern blot y sondearlo con ADN específico del SRAS-CoV-2 para determinar si se reduce la replicación del SRAS-CoV-2. Alternativamente, la reducción de la expresión de la proteína SARS-CoV-2 también puede utilizarse como indicador de la inhibición de la replicación del SARS-CoV-2. Una reducción superior al cincuenta por ciento en la replicación del SARS-CoV-2 en comparación con las células de control suele cuantificar una prevención de la replicación del SARS-CoV-2.
Si un compuesto inhibidor del SARS-CoV-2 utilizado en el procedimiento de la invención es una base, puede prepararse una sal deseada por cualquier procedimiento adecuado conocido en la técnica, incluyendo el tratamiento de la base libre con un ácido inorgánico (tal como ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico y similares), o con un ácido orgánico (tal como ácido acético, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malónico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, ácido piranosidílico (tal como ácido glucurónico o ácido galacturónico), ácido alfa-hidróxido (tal como ácido cítrico o ácido tartárico) aminoácido (tal como ácido aspártico o ácido glutámico), ácido aromático (tal como ácido benzoico o ácido cinámico), ácido sulfónico (tal como ácido p-toluenosulfónico o ácido etanosulfónico), y similares.
Si un compuesto inhibidor del SARS-CoV-2 utilizado en el procedimiento de la invención es un ácido, puede prepararse una sal deseada mediante cualquier procedimiento adecuado conocido en la técnica, incluyendo el tratamiento del ácido libre con una base inorgánica u orgánica [tal como una amina (primaria, secundaria o terciaria)], un hidróxido de metal alcalino o un hidróxido de metal alcalinotérreo. Ejemplos ilustrativos de sales adecuadas incluyen sales orgánicas derivadas de aminoácidos (tal como glicina y arginina), amoníaco, aminas primarias, aminas secundarias, aminas terciarias y aminas cíclicas (tales como piperidina, morfolina y piperazina), así como sales inorgánicas derivadas de sodio, calcio, potasio, magnesio, manganeso, hierro, cobre, zinc, aluminio y litio.
En el caso de los compuestos, profármacos, sales o solvatos del inhibidor del SARS-CoV-2 que son sólidos, los expertos en la técnica entienden que el compuesto, los profármacos, las sales y los solvatos utilizados en el procedimiento de la invención pueden existir en diferentes formas polimorfas o cristalinas, todas las cuales están previstas dentro del alcance de la presente invención y de las fórmulas especificadas. Además, el compuesto, las sales, los profármacos y los solvatos utilizados en el procedimiento de la invención pueden existir como tautómeros, todos los cuales están previstos dentro del amplio alcance de la presente invención.
Los agentes solubilizantes también pueden utilizarse con los compuestos de la invención para aumentar la solubilidad de los compuestos en agua de soluciones fisiológicamente aceptables. Estos agentes solubilizantes incluyen ciclodextrinas, propilenglicol, dietilacetamida, polietilenglicol, Tween, etanol y agentes formadores de micelas. Los agentes solubilizantes ofrecidos son las ciclodextrinas, en particular las beta-ciclodextrinas y en particular hidroxipropil beta-ciclodextrina y sulfobutil éter beta-ciclodextrina.
En algunos casos, los compuestos inhibidores del SARS-CoV-2, sales, profármacos y solvatos utilizados en el procedimiento de la invención pueden tener centros quirales. Cuando los centros quirales están presentes, el compuesto, las sales, los profármacos y los solvatos pueden existir como estereoisómeros simples, racematos, y/o mezclas de enantiómeros y/o diastereómeros. Todos estos estereoisómeros simples, racematos y mezclas de los mismos están destinados a estar dentro del amplio alcance de la presente invención.
Como generalmente entienden los expertos en la técnica, un compuesto ópticamente puro es uno que es enantioméricamente puro. Tal y como se utiliza en el presente documento, el término "ópticamente puro" se refiere a un compuesto que comprende al menos una actividad suficiente. preferentemente, una cantidad ópticamente pura de un solo enantiómero para producir un compuesto que tenga el compuesto farmacológicamente puro deseado de la invención comprende al menos 90 % de un solo isómero (80 % de exceso enantiomérico), más preferentemente al menos 95 % (90 % e.e.), aún más preferentemente al menos 97,5 % (95 % e.e.), y más preferentemente al menos 99 % (98 % e.e.).
El término "tratar", tal como se utiliza en el presente documento, a menos que se indique lo contrario, significa revertir, aliviar, inhibir el progreso o prevenir el trastorno o la condición a la que se aplica dicho término, o uno o más síntomas de dicho trastorno o condición. El término "tratamiento", tal como se usa en el presente documento, a menos que se indique lo contrario, se refiere al acto de tratar tal y como se ha definido "tratar" inmediatamente antes. En una realización preferida de la presente invención, "tratar" o "tratamiento" significa al menos la mitigación de una condición de enfermedad en un humano, que se alivia por la inhibición de la actividad de la proteasa similar a la 3C del SARS-CoV-2, que es la principal proteasa del SARS-CoV-2, el agente causante del COVID-19. Para los pacientes que padecen COVID-19, la fiebre, la fatiga y la tos seca son las principales manifestaciones de la enfermedad, mientras que la congestión nasal, la secreción nasal y otros síntomas del tracto respiratorio superior son poco frecuentes. Los Beijing Centers for Diseases Control and Prevention indicaron que el caso típico de COVID-19 tiene un procedimiento de agravamiento progresivo. El COVID-19 puede clasificarse en los tipos ligero, normal, grave y crítico en función de la gravedad de la enfermedad. National Health Commission of the People's Republic of China. Diagnosis and Treatment of Pneumonia Caused by 2019-nCoV (Trial Version 4). Disponible en línea: http://www.nhc.gov.cn/jkj/s3577/202002/573340613ab243b3a7f61df260551dd4/files/c7 91e5a7ea5149f680fdcb34dac0f54e.pdf: (1) Casos leves: los síntomas clínicos eran leves y no se encontró neumonía en la tomografía computarizada (TC) de tórax; (2) Casos normales: fiebre, síntomas respiratorios y pacientes con manifestaciones de neumonía en las imágenes; (3) Casos graves: una de las tres condiciones siguientes: Dificultad respiratoria, frecuencia respiratoria > 30 veces / min (en estado de reposo, se refiere a una saturación de oxígeno < 93%), presión arterial parcial de oxígeno (PaO2)/concentración de absorción de oxígeno (FiO2) <300 mmHg (1 mm Hg = 0,133 kPa); (4) casos críticos: una de las tres condiciones siguientes: La insuficiencia respiratoria y la necesidad de ventilación mecánica, el choque o el fallo asociado de otros órganos que requieren la unidad de cuidados intensivos. Los datos clínicos actuales muestran que la mayoría de las muertes se produjeron en los pacientes de mayor edad. Sin embargo, se han documentado casos graves en adultos jóvenes que presentan factores singulares, en particular los que padecen enfermedades crónicas, tales como la diabetes o la hepatitis B. Aquellos con un uso prolongado de hormonas o inmunosupresores, y una función inmunitaria disminuida, son propensos a infectarse gravemente.
Los procedimientos de tratamiento para la mitigación de una condición de enfermedad por coronavirus tales como COVID-19 incluyen el uso de uno o más de los compuestos de la invención en cualquier forma convencionalmente aceptable. De acuerdo con ciertas realizaciones preferidas de la invención, el compuesto o los compuestos utilizados en los procedimientos de la presente invención se administran a un mamífero, tal como un ser humano, que los necesita. Preferentemente, el mamífero que necesita el mismo está infectado con un coronavirus tal como el agente causante del COVID-19, concretamente el SARS-CoV-2.
La presente invención también incluye procedimientos profilácticos, que comprenden la administración de una cantidad eficaz de un inhibidor del SARS-CoV-2 de la invención, o de una sal, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo a un mamífero, tal como un ser humano en riesgo de infección por el SARS-CoV-2. De acuerdo con ciertas realizaciones preferidas, una cantidad eficaz de uno o más compuestos de la invención, o una sal farmacéuticamente aceptable, profármaco, metabolito farmacéuticamente activo o solvato de los mismos se administra a un ser humano con riesgo de infección por SARS-CoV-2, el agente causante de COVID-19. Los procedimientos profilácticos de la invención incluyen el uso de uno o más de los compuestos de la invención de cualquier manera convencionalmente aceptable.
Algunos de los compuestos utilizados en los procedimientos de la invención, por ejemplo la dexametasona, la azitromicina y el remdesivir, son conocidos y pueden hacerse por procedimientos conocidos en la técnica.
Pruebas recientes indican que un nuevo coronavirus SARS-CoV-2 es el agente causante del COVID-19. La secuencia de nucleótidos del coronavirus SARS-CoV-2, así como los subtipos L y S recientemente determinados, han sido recientemente determinados y puestos a disposición del público.
La actividad de los compuestos inhibidores tales como inhibidores de la actividad viral del SARS-CoV-2 puede medirse por cualquiera de los procedimientos adecuados disponibles en la técnica, incluyendo los ensayos in vivo e in vitro. La actividad de los compuestos de la presente invención como inhibidores de la actividad de la proteasa similar a 3C del coronavirus (tal como la proteasa similar a 3C del coronavirus SARS-CoV-2) puede medirse por cualquiera de los procedimientos adecuados conocidos por los expertos en la técnica, incluyendo los ensayos in vivo e in vitro. Entre los ejemplos de ensayos adecuados para medir la actividad se incluyen los ensayos de cultivo celular antiviral descritos en el presente documento, así como los ensayos de antiproteasas descritos en el presente documento, tal como los ensayos descritos en la sección Experimental.
La administración de los compuestos inhibidores del SARS-CoV-2 y sus profármacos, sales, metabolitos activos y solvatos farmacéuticamente aceptables puede realizarse de acuerdo con cualquiera de los modos de administración aceptados disponibles para los expertos en la técnica. Ejemplos ilustrativos de modos de administración adecuados incluyen oral, nasal, pulmonar, parenteral, tópico, intravenoso, inyectado, transdérmico y rectal. Se prefiere la administración oral, intravenosa, subcutánea y nasal.
Un agente inhibidor del SARS-CoV-2 puede administrarse como una composición farmacéutica en cualquier forma farmacéutica adecuada. Las formas farmacéuticas adecuadas incluyen formulaciones sólidas, semisólidas, líquidas o liofilizadas, tales como comprimidos, polvos, cápsulas, supositorios, suspensiones, liposomas y aerosoles. El agente inhibidor del SARS-CoV-2 puede prepararse como solución utilizando cualquiera de las diversas metodologías. Por ejemplo, el agente inhibidor del SARS-CoV-2 puede disolverse con ácido (por ejemplo, HCI 1 M) y diluirse con un volumen suficiente de una solución de dextrosa al 5 % en agua (D5W) para obtener la concentración final deseada del agente inhibidor del SARS-CoV-2 (por ejemplo, aproximadamente 15 mM). Alternativamente, se puede utilizar una solución de D5W que contenga aproximadamente 15 mM de HCI para proporcionar una solución del agente inhibidor del SARS-CoV-2 a la concentración adecuada. Además, el agente inhibidor del SARS-CoV-2 puede prepararse como una suspensión utilizando, por ejemplo, una solución al 1% de carboximetilcelulosa (CMC).
Los procedimientos aceptables para preparar formas farmacéuticas adecuadas de las composiciones farmacéuticas son conocidos o pueden ser determinados rutinariamente por los expertos en la técnica. Por ejemplo, las preparaciones farmacéuticas pueden prepararse siguiendo las técnicas convencionales del químico farmacéutico que implican pasos tales como mezclar, granular y comprimir cuando sea necesario para las formas de comprimidos, o mezclar, rellenar y disolver los ingredientes según corresponda, para dar los productos deseados para la administración intravenosa, oral, parenteral, tópica, intravaginal, intranasal, intrabronquial, intraocular, intraaural y/o rectal.
Típicamente, un compuesto de la invención se administra en una cantidad efectiva para tratar una condición tal como la descrita aquí. Los compuestos de la invención se administran por cualquier vía adecuada en forma de una composición farmacéutica adaptada a dicha vía, y en una dosis eficaz para el tratamiento previsto. Las dosis terapéuticas efectivas de los compuestos requeridas para tratar el progreso de la condición médica se determinan fácilmente por un experto en la técnica utilizando enfoques preclínicos y clínicos conocidos en las técnica medicinales.
Los compuestos de la invención se pueden administrar por vía oral. La administración oral puede implicar la deglución, de modo que el compuesto entre en el tracto gastrointestinal, o puede emplearse la administración bucal o sublingual, mediante la cual el compuesto entra en el torrente sanguíneo directamente desde la boca.
En otra realización, los compuestos de la invención también se pueden administrar directamente en el torrente sanguíneo, en el músculo o en un órgano interno. Los medios adecuados para la administración parenteral incluyen por vía intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intrauretral, intraesternal, intracraneal, intramuscular y subcutánea. Los dispositivos adecuados para la administración parenteral incluyen inyectores de aguja (incluyendo microaguja), inyectores sin aguja y técnicas de infusión.
En otra realización, los compuestos de la invención también se pueden administrar por vía tópica a la piel o la mucosa, es decir, por vía dérmica o transdérmica. En otra realización, los compuestos de la invención también pueden administrarse por vía intranasal o por inhalación. En otra realización, los compuestos de la invención pueden administrarse por vía rectal o vaginal. En otra realización, los compuestos de la invención también pueden administrarse directamente al ojo o al oído.
El régimen de dosificación para los compuestos y/o las composiciones que contienen los compuestos se basa en una variedad de factores, incluyendo el tipo, la edad, el peso, el sexo y la condición médica del paciente; la gravedad de la condición; la ruta de administración; y la actividad del compuesto particular empleado. Por lo tanto, el régimen de dosificación puede variar mucho. Los niveles de dosificación del orden de aproximadamente 0,01 mg a aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal por día son útiles en el tratamiento de las condiciones indicadas anteriormente. En una realización, la dosis diaria total de un compuesto de la invención (administrado en dosis únicas o divididas) es típicamente de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg/kg. En otra realización, la dosis diaria total del compuesto de la invención es de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg/kg, y en otra realización, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 30 mg/kg (es decir, mg de compuesto de la invención por kg de peso corporal). En una realización, la dosis es de 0,01 a 10 mg/kg/día. En otra realización, la dosis es de 0,1 a 1,0 mg/kg/día. Las composiciones de unidades de dosificación pueden contener dichas cantidades o submúltiplos de las mismas para constituir la dosis diaria. En muchos casos, la administración del compuesto se repetirá una pluralidad de veces en un día (típicamente no más de 4 veces). Por lo general, se pueden utilizar varias dosis al día para aumentar la dosis diaria total, si se desea.
Para la administración oral, las composiciones pueden proporcionarse en forma de comprimidos que contengan desde aproximadamente 0,01 mg hasta aproximadamente 500 mg del ingrediente activo, o en otra realización, desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 100 mg del ingrediente activo. Por vía intravenosa, las dosis pueden oscilar entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 10 mg/kg/minuto durante una infusión a tasa constante.
Los pacientes adecuados de acuerdo con la presente invención incluyen pacientes mamíferos. Los mamíferos de acuerdo con la presente invención incluyen, pero no se limitan a, caninos, felinos, bovinos, caprinos, equinos, ovinos, porcinos, roedores, lagomorfos, primates y similares, y abarcan los mamíferos en el útero. En una realización, los humanos son pacientes adecuados. Los pacientes humanos pueden ser de cualquier sexo y estar en cualquier fase de desarrollo.
En otra realización, la invención comprende el uso de uno o más compuestos de la invención para la preparación de un medicamento para el tratamiento de las condiciones mencionadas en el presente documento.
Para el tratamiento de las condiciones referidas anteriormente, el compuesto de la invención puede ser administrado como compuesto per se. Alternativamente, las sales farmacéuticamente aceptables son adecuadas para aplicaciones médicas debido a su mayor solubilidad acuosa en relación con el compuesto original.
En otra realización, la presente invención comprende composiciones farmacéuticas. Tales composiciones farmacéuticas comprenden un compuesto de la invención presentado con un portador farmacéuticamente aceptable. El portador farmacéuticamente aceptable abarca cualquier forma de dosificación adecuada que sea aceptable para la administración a un paciente. El portador puede ser un sólido, un líquido, o ambos, y puede ser formulado con el compuesto como una composición de dosis unitaria, por ejemplo, un comprimido, que puede contener del 0,05 % a l 95 % en peso de los compuestos activos. Un compuesto de la invención puede acoplarse con polímeros adecuados como portadores de fármacos dirigidos. También pueden estar presentes otras sustancias farmacológicamente activas.
Los compuestos de la presente invención pueden administrarse por cualquier vía adecuada, preferentemente en forma de una composición farmacéutica adaptada a dicha vía, y en una dosis eficaz para el tratamiento previsto. Los compuestos y composiciones activas, por ejemplo, pueden administrarse por vía oral, rectal, parenteral o tópica.
La administración oral de una forma de dosis sólida puede ser, por ejemplo, presentada en unidades discretas, tales como cápsulas duras o blandas, píldoras, cachets, pastillas o comprimidos, cado una de las cuales contiene una cantidad predeterminada de al menos un compuesto de la presente invención. En otra realización, la administración oral puede ser en forma de polvo o gránulos. En otra realización, la forma de la dosis oral es sublingual, tal como, por ejemplo, una pastilla. En dichas formas farmacéuticas sólidas, los compuestos de la invención se combinan normalmente con uno o más adyuvantes. Dichas cápsulas o comprimidos pueden contener una formulación de liberación controlada. En el caso de las cápsulas, los comprimidos y las píldoras, las formas farmacéuticas también pueden comprender agentes amortiguadores o pueden prepararse con recubrimientos entéricos.
En otra realización, la administración oral puede ser en forma de dosis líquida. Las formas de dosificación líquida para la administración oral incluyen, por ejemplo, emulsiones, soluciones, suspensiones, jarabes y elixires farmacéuticamente aceptables que contienen diluyentes inertes comúnmente utilizados en la técnica (por ejemplo, agua). Dichas composiciones también pueden comprender adyuvantes, tales como agentes humectantes, emulsionantes, suspensores, aromatizantes (por ejemplo, edulcorantes) y/o perfumantes.
En otra realización, la presente invención comprende una forma de dosis parenteral. "La administración parenteral" incluye, por ejemplo, las inyecciones subcutáneas, las inyecciones intravenosas, las inyecciones intraperitoneales, las inyecciones intramusculares, las inyecciones intraesternales y la infusión. Las preparaciones inyectables (por ejemplo, suspensiones acuosas u oleaginosas inyectables) pueden formularse de acuerdo con la técnica conocida utilizando agentes dispersantes, humectantes y/o suspensores adecuados.
En otra realización, la presente invención comprende una forma de dosis tópica. La "administración tópica" incluye, por ejemplo, la administración transdérmica, tal como a través de parches transdérmicos o dispositivos de iontoforesis, la administración intraocular o la administración intranasal o por inhalación. Las composiciones para la administración tópica también incluyen, por ejemplo, geles tópicos, aerosoles, ungüentos y cremas. Una formulación tópica puede incluir un compuesto que mejore la absorción o la penetración del ingrediente activo a través de la piel u otras zonas afectadas. Cuando los compuestos de la presente invención se administran mediante un dispositivo transdérmico, la administración se llevará a cabo utilizando un parche del tipo de depósito y membrana porosa o de una variedad de matriz sólida. Las formulaciones típicas para este fin incluyen geles, hidrogeles, lociones, soluciones, cremas, ungüentos, polvos, apósitos, espumas, películas, parches cutáneos, obleas, implantes, esponjas, fibras, vendajes y microemulsiones. También se pueden utilizar liposomas. Los portadores típicos son alcohol, agua, aceite mineral, vaselina líquida, vaselina blanca, glicerina, polietilenglicol y propilenglicol. Pueden incorporarse potenciadores de la penetración; véase, por ejemplo J. Pharm. Sci., 88 (10), 955-958, de Finnin y Morgan (octubre de 1999).
Las formulaciones adecuadas para la administración tópica al ojo incluyen, por ejemplo, gotas oculares en las que el compuesto de esta invención se disuelve o suspende en un portador adecuado. Una formulación típica adecuada para la administración ocular o auditiva puede presentarse en forma de gotas de una suspensión o solución micronizada en una solución salina estéril, isotónica y de pH ajustado. Otras formulaciones adecuadas para la administración ocular y auditiva incluyen ungüentos, implantes biodegradables (por ejemplo, esponjas de gel absorbible, colágeno) y no biodegradables (por ejemplo, silicona), obleas, lentes y sistemas de partículas o vesiculares, tales como niosomas o liposomas. Un polímero tal como ácido poliacrílico entrecruzado, alcohol polivinílico, ácido hialurónico, un polímero celulósico, por ejemplo, hidroxipropilmetilcelulosa, hidroxietilcelulosa o metilcelulosa, o un polímero de heteropolisacárido, por ejemplo, goma gelan, puede incorporarse junto con un conservante, tal como el cloruro de benzalconio. Dichas formulaciones también pueden administrarse por iontoforesis.
Para la administración intranasal o por inhalación, los compuestos activos de la invención se suministran convenientemente en forma de solución o suspensión desde un recipiente de pulverización de bomba que es exprimido o bombeado por el paciente o como una presentación en aerosol desde un recipiente presurizado o un nebulizador, con el uso de un propulsor adecuado. Las formulaciones adecuadas para la administración intranasal generalmente se administran en forma de polvo seco (ya sea solo, como una mezcla, por ejemplo, en una mezcla seca con lactosa, o como una partícula de componente mixto, por ejemplo, mezclada con fosfolípidos, tal como la fosfatidilcolina) de un inhalador de polvo seco o como un aerosol de un recipiente presurizado, bomba, rociador, atomizador (preferentemente un atomizador que use electrohidrodinámica para producir una niebla fina) o nebulizador, con o sin el uso de un propulsor adecuado, tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano o 1,1,1,2,3,3,3-heptafluoropropano. Para su uso intranasal, el polvo puede comprender un agente bioadhesivo, por ejemplo, quitosano o ciclodextrina.
En otra realización, la presente invención comprende una forma de dosis rectal. Dicha forma de dosificación rectal puede ser en forma de, por ejemplo, un supositorio. La manteca de cacao es la base tradicional de los supositorios, pero se pueden utilizar varias alternativas según convenga.
También pueden utilizarse otros materiales portadores y modos de administración conocidos en la técnica farmacéutica. Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden prepararse mediante cualquiera de las técnicas farmacéuticas conocidas, tales como los procedimientos de formulación y administración eficaces. Las consideraciones anteriores respecto a las formulaciones eficaces y los procedimientos de administración son bien conocidas en la técnica y se describen en los libros de texto estándar. La formulación de medicamentos se discute, por ejemplo, en Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania, 1975 Liberman et al., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980y Kibbe et al., Eds., Handbook of Pharmaceutical Excipients (3rd Ed.), American Pharmaceutical Association, Washington, 1999.
Los compuestos de la presente invención pueden utilizarse, solos o en combinación con otros agentes terapéuticos, en el tratamiento de diversas condiciones o estados de enfermedad. Los compuestos de la presente invención y otros agentes terapéuticos pueden administrarse simultáneamente (en la misma forma de dosificación o en formas de dosificación separadas) o secuencialmente. Pueden administrarse dos o más compuestos de forma simultánea, concurrente o secuencial. Además, la administración simultánea puede llevarse a cabo mezclando los compuestos antes de la administración o administrando los compuestos en el mismo momento pero en diferentes lugares anatómicos o utilizando diferentes vías de administración. Las frases "administración concurrente", "coadministración", "administración simultánea" y "administrado simultáneamente" indican que los compuestos se administran en combinación.
La presente invención incluye el uso de una combinación de un compuesto de la invención y uno o más agentes terapéuticos adicionales. Si se administra una combinación de agentes activos, pueden administrarse de forma secuencial o simultánea, en formas de dosificación separadas o combinadas en una única forma de dosificación. En consecuencia, la presente invención también incluye composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad de: (a) un primer agente que comprende un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto; (b) un segundo agente terapéutico; y (c) un portador farmacéuticamente aceptable. Las composiciones farmacéuticas de la invención también pueden incluir excipientes, diluyentes, vehículos y portadores adecuados, así como otros agentes farmacéuticamente activos, dependiendo del uso previsto. En las composiciones farmacéuticas pueden emplearse portadores, diluyentes, vehículos o excipientes sólidos o líquidos farmacéuticamente aceptables. Los portadores sólidos ilustrativos incluyen el almidón, la lactosa, el sulfato de calcio dihidratado, la terra alba, la sacarosa, el talco, la gelatina, la pectina, la acacia, el estearato de magnesio y el ácido esteárico. Los vehículos líquidos ilustrativos incluyen jarabe, aceite de cacahuete, aceite de oliva, solución salina y agua. El portador o diluyente puede incluir un material adecuado de liberación prolongada, tal como el monoestearato de glicerilo o el diestearato de glicerilo, solo o con una cera. Cuando se utiliza un portador líquido, la preparación puede estar en forma de jarabe, elixir, emulsión, cápsula de gelatina blanda, líquido inyectable estéril (por ejemplo, solución) o una suspensión líquida no acuosa o acuosa.
Una dosis de la composición farmacéutica puede contener al menos una cantidad terapéuticamente eficaz de un agente inhibidor del SARS-CoV-2 y, preferentemente, está formada por una o más unidades de dosificación farmacéutica. La dosis seleccionada puede administrarse a un mamífero, por ejemplo, un paciente humano, que necesite un tratamiento mediado por la inhibición de la actividad del coronavirus relacionado con el SARS-CoV-2, mediante cualquier procedimiento conocido o adecuado de administración de la dosis, incluyendo por vía tópica, por ejemplo, en forma de unguento o crema; por vía oral; por vía rectal, por ejemplo, en forma de supositorio; por vía parenteral mediante inyección; por vía intravenosa; o de forma continua mediante infusión intravaginal, intranasal, intrabronquial, intraaural o intraocular.
Las frases "cantidad terapéuticamente eficaz" y "cantidad eficaz" se refieren a la cantidad de un agente inventivo que, cuando se administra a un mamífero que necesita tratamiento, es suficiente para efectuar el tratamiento de las lesiones o enfermedades aliviadas por la inhibición de la replicación viral del SARS-CoV-2. La cantidad de un determinado agente inhibidor del SARS-CoV-2 utilizado en el procedimiento de la invención que será terapéuticamente eficaz variará en función de factores tales como el agente inhibidor del SARS-CoV-2 en particular, la condición de la enfermedad y la gravedad de la misma, la identidad y las características del mamífero que necesita el mismo, cuya cantidad puede ser determinada rutinariamente por los expertos en la técnica.
Se apreciará que las dosificaciones reales de los agentes inhibidores del SARS-CoV-2 utilizados en las composiciones farmacéuticas de esta invención se seleccionarán de acuerdo con las propiedades del agente particular que se utilice, la composición particular formulada, el modo de administración y el sitio particular, y el anfitrión y la condición que se está tratando. Los expertos en la técnica pueden determinar las dosificaciones óptimas para un conjunto determinado de condiciones mediante pruebas convencionales de determinación de la dosificación. Para la administración oral, por ejemplo, una dosis que puede emplearse es de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 1000 mg/kg de peso corporal, preferentemente de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 500 mg/kg de peso corporal, e incluso más preferentemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 500 mg/kg de peso corporal, con cursos de tratamiento repetidos a intervalos apropiados. Para la dosificación intravenosa puede emplearse una dosis de hasta 5 gramos al día. La administración intravenosa puede producirse durante periodos intermitentes a lo largo de un día o de forma continua durante un periodo de 24 horas.
Los términos "cantidad inhibidora del citocromo P450" y "cantidad inhibidora de la actividad de la enzima del citocromo P450", tal como se utilizan en el presente documento, se refieren a la cantidad de un compuesto necesaria para disminuir la actividad de las enzimas del citocromo P450 o de una isoforma particular de la enzima del citocromo P450 en presencia de dicho compuesto. El hecho de que un compuesto concreto disminuya la actividad de la enzima del citocromo P450, y la cantidad de dicho compuesto necesaria para ello, puede determinarse mediante procedimientos conocidos por los expertos en la técnica y los procedimientos descritos en el presente documento.
Las funciones proteicas necesarias para la replicación y transcripción de los coronavirus están codificadas por el gen denominado "replicasa". A partir de este gen se traducen dos poliproteínas superpuestas que son ampliamente procesadas por las proteasas virales. La región proximal C es procesada en once uniones interdominio conservadas por la proteasa principal del coronavirus o "similar a 3C-". El nombre de proteasa "similar a 3C" deriva de ciertas similitudes entre la enzima del coronavirus y las bien conocidas proteasas 3C de los picornavirus. Entre ellas se encuentran las preferencias de sustrato, el uso de la cisteína como nucleófilo del sitio activo en la catálisis y las similitudes en sus pliegues polipeptídicos generales putativos. La comparación de la secuencia de aminoácidos de la proteasa similar a 3C del coronavirus asociado al SARS-CoV-2 con la de otros coronavirus conocidos, tal como el SARS-CoV, muestra que las secuencias de aminoácidos comparten aproximadamente un 96% de homología.
Los aminoácidos del sustrato en el sitio de escisión de la proteasa se numeran desde el extremo N al C como sigue: -P3-P2-P1-P1'-P2'-P3', con una escisión entre los residuos P1 y P1' (Schechter & Berger, 1967). La especificidad del sustrato viene determinada en gran medida por las posiciones P2, P1 y P1'. Las especificidades del sitio de escisión de la proteasa principal de Coronavirus están muy conservadas, con un requisito de glutamina en P1 y un pequeño aminoácido en P1' [Journal of General Virology, 83, pp. 595-599 (2002)].
Los compuestos de la presente invención pueden prepararse de acuerdo con los procedimientos expuestos en los Esquemas de Reacción 1 a 3 a continuación.
Los esquemas proporcionados a continuación ilustran y ejemplifican aún más los compuestos de la presente invención y los procedimientos de preparación de dichos compuestos. Debe entenderse que el alcance de la presente invención no está limitado en modo alguno por el alcance de los siguientes ejemplos y preparaciones. En los siguientes ejemplos, las moléculas con un solo centro quiral pueden existir como un solo enantiómero o como una mezcla racémica. Las moléculas con dos o más centros quirales pueden existir como un solo enantiómero, como una mezcla racémica o de otro tipo de dos enantiómeros, o como diversas mezclas de diastereómeros. Dichos enantiómeros, racematos y diastereómeros pueden obtenerse y/o separarse por procedimientos conocidos por los expertos en la técnica. Un experto en la técnica apreciará que ciertas manipulaciones sintéticas pueden epimerizar o racemizar un estereocentro, y las condiciones sintéticas pueden seleccionarse para promover o desalentar dicha epimerización o racemización.
El Esquema 1 ilustra una secuencia sintética para la preparación de los compuestos de Fórmula I, como se muestra, en la que el éster metílico N-BOC de Fórmula 1 (documento WO 2005/113580) se convierte en una amida primaria de Fórmula 3 (N-BOC es N-tert-butoxicarbonilo). Esto puede realizarse directamente, por ejemplo, mediante un tratamiento con amoníaco (NH3) en un recipiente sellado en un disolvente tal como el metanol o el etanol, por ejemplo, opcionalmente en presencia de aditivos tales como el cloruro de calcio (CaCh ) o el dimetoxido de magnesio, Mg(OMe)2
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La transformación del compuesto de Fórmula 1 en el compuesto de Fórmula 3 también puede llevarse a cabo mediante la conversión previa en el ácido carboxílico de Fórmula 2 (WO 2005/113580). En este caso, el compuesto de Fórmula 2 puede convertirse en el compuesto de Fórmula 3 utilizando procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, el compuesto de Fórmula 2 puede tratarse con un reactivo tal como 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio hexafluorofosfato (HATU), cloroformato de isobutilo, clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (EDCI) e hidroxibenzotriazol (HOBt), o 1,1-carbonildiimidazol (CDI), opcionalmente en presencia de una base tal como N,N-diisopropiletilamina (DIEA), 4-metilmorfolina (NMM) o trietilamina (TEA), seguido de un tratamiento con NH3 administrado como gas o como solución en un disolvente compatible con la reacción, o con una sal de NH3 tal como acetato de amonio o cloruro de amonio en presencia de una base tal como N,N-diisopropiletilamina, 4-metilmorfolina o trietilamina. Los disolventes adecuados incluyen, entre otros, diclorometano (CH2Ch ), N,N-dimetilformamida (DMF), tetrahidrofurano (THF) o acetonitrilo (CH3CN).
El compuesto de Fórmula 3 puede desprotegerse con N para proporcionar una amina de Fórmula 4 utilizando procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica para efectuar tales desprotecciones. Con frecuencia se utilizan reactivos ácidos tales como cloruro de hidrógeno, ácido metanosulfónico o ácido trifluoroacético, normalmente en un disolvente compatible con la reacción tal como CH2Ch , 1,4-dioxano, 1,2-dicloroetano o CH3CN. Un experto en la técnica apreciará que el compuesto de Fórmula 4 se obtendrá frecuentemente como una sal de adición de ácido. El compuesto de Fórmula 4 puede entonces transformarse en un compuesto de Fórmula 6 mediante el tratamiento con un compuesto de aminoácido protegido con N de Fórmula 5 bajo condiciones apropiadas. Estos procedimientos son bien conocidos por los expertos en la técnica y, en general, pueden seleccionarse las condiciones estándar de acoplamiento de péptidos.
El compuesto de Fórmula 6 puede desprotegerse con N para proporcionar una amina de Fórmula 7 utilizando procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica para efectuar tales desprotecciones. Con frecuencia se utilizan reactivos ácidos tales como cloruro de hidrógeno, ácido metanosulfónico o ácido trifluoroacético, normalmente en un disolvente compatible con la reacción tal como CH2Ch , 1,4-dioxano, 1,2-dicloroetano o CH3CN. Un experto en la técnica apreciará que el compuesto de Fórmula 7 se obtendrá frecuentemente como una sal de adición de ácido. El compuesto de Fórmula 7 puede entonces transformarse en un compuesto de Fórmula 9 por tratamiento con un compuesto de ácido carboxílico de Fórmula 8 bajo condiciones adecuadas. Dichos procedimientos son bien conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, cuando X = un átomo de cloro, el compuesto de ácido carboxílico se conoce como cloruro ácido y la reacción se lleva a cabo en presencia de una base para consumir el haluro de hidrógeno HX producido como subproducto de la reacción. Ejemplos de bases adecuadas incluyen, pero no se limitan a, aminas terciarias tales como 4-metilmorfolina, 2,6-dimetilpiridina, o N,N-diisopropiletilamina, o bases inorgánicas tales como óxido de magnesio (MgO), carbonato de sodio (Na2CO3), o bicarbonato de potasio (KHCO3). Los disolventes adecuados incluyen, pero no se limitan a, CH2Ch , DMF, THF o CH3CN. Cuando X = OH, es habitual utilizar un reactivo o una combinación de reactivos para facilitar la reacción del compuesto de ácido carboxílico de Fórmula 8. Un experto en la técnica puede optar por utilizar, por ejemplo, un reactivo de carbodiimida tal como clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (EDCI) o N,N'-diclohexil carbodiimida (DCC), opcionalmente en presencia de un nucleófilo auxiliar tal como hidroxibenzotriazol (HOBt) o 2-hidroxipiridina-N-óxido (HOPO). Además, cuando X = OH, un experto en la técnica puede optar por utilizar reactivos adecuados para la formación de anhídridos mixtos carboxilo/carbónico, tales como CDI, cloroformato de isobutilo o de etilo, frecuentemente en presencia de una base como la descrita anteriormente. Los disolventes adecuados incluyen, pero no se limitan a, CH2Ch , THF, o CH3CN. Otro enfoque comúnmente utilizado por los expertos en la técnica cuando X = OH es tratar el compuesto de ácido carboxílico de la Fórmula 8 con un cloruro de ácido carboxílico, por ejemplo tal como Me3CCOCl, en presencia de una base tal como la descrita anteriormente para generar un anhídrido carboxílico mixto de la Fórmula R3C(O)O(O)CCMe3. Los disolventes adecuados incluyen, pero no se limitan a, CH2Ch , THF, o CH3CN. En muchos casos es posible utilizar un anhídrido simétrico del compuesto de ácido carboxílico deseado de la Fórmula 8 para efectuar la reacción, opcionalmente en presencia de una base tal como la descrita anteriormente, en cuyo caso X = O(O)CR3 y el compuesto de ácido carboxílico de la Fórmula 8 es por lo tanto R3C(O)O(O)CR3. Los disolventes adecuados incluyen, pero no se limitan a, CH2Cl2, THF, o CH3CN.
El compuesto de Fórmula 9 puede transformarse en el compuesto de Fórmula I por tratamiento bajo condiciones de deshidratación bien conocidas por los expertos en la técnica. Frecuentemente, este paso de deshidratación puede llevarse a cabo utilizando un exceso de anhídrido trifluoroacético u oxicloruro de fósforo, generalmente en presencia de una base tal como piridina, N,N-diisopropiletilamina, 4-metilmorfolina o trietilamina.
Un experto en la técnica sabrá que los aminoácidos protegidos por N-BOC de la Fórmula 5 son conocidos en la literatura química, están disponibles comercialmente, y pueden ser preparados a partir de los correspondientes aminoácidos conocidos y disponibles comercialmente por un experto en la técnica utilizando procedimientos bien establecidos para la síntesis de aminoácidos protegidos por N. Asimismo, un experto en la técnica entenderá que los compuestos de ácido carboxílico de la Fórmula 8 pueden ser conocidos en la literatura química, y/o están disponibles comercialmente, y/o pueden prepararse por procedimientos publicados o por analogía con procedimientos publicados.
Un experto en la técnica apreciará que los pasos de formación de enlaces del Esquema 1 pueden realizarse en un orden diferente con las consideraciones adecuadas, por ejemplo como se muestra en el Esquema 2.
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En el Esquema 2, el compuesto de Fórmula 3 se convierte en el compuesto de Fórmula 10 mediante un tratamiento bajo condiciones de deshidratación bien conocidas por los expertos en la técnica. Con frecuencia, este paso de deshidratación puede llevarse a cabo utilizando un exceso de anhídrido trifluoroacético u oxicloruro de fósforo, generalmente en presencia de una base tal como piridina, N,N-diisopropiletilamina, 4-metilmorfolina o trietilamina. El compuesto de Fórmula 10 se desprotege con N para proporcionar una amina de Fórmula 11 utilizando procedimientos bien conocidos por los expertos en la técnica para efectuar tales desprotecciones. Con frecuencia, se utilizan reactivos ácidos tales como cloruro de hidrógeno, ácido metanosulfónico o ácido trifluoroacético, normalmente en un disolvente compatible con la reacción, tal como CH2Ch , 1,4-dioxano, 1,2-dicloroetano o CH3CN. Un experto en la técnica apreciará que el compuesto de Fórmula 11 se obtendrá frecuentemente como una sal de adición de ácido. El compuesto de Fórmula 11 puede entonces transformarse en un compuesto de Fórmula I por tratamiento con un compuesto de Fórmula 12 bajo condiciones adecuadas. Estos procedimientos son bien conocidos por los expertos en la técnica y, en general, pueden seleccionarse las condiciones estándar de acoplamiento de péptidos. Los compuestos de Fórmula 12 son excepcionalmente bien conocidos en la literatura química, y un experto en la técnica puede optar por preparar cualquier compuesto de Fórmula 12 utilizando procedimientos análogos a los descritos en la literatura química.
Un experto en la técnica apreciará que los pasos de formación de enlaces de los Esquemas 1 y 2 pueden llevarse a cabo en órdenes aún más diferentes con las consideraciones adecuadas, por ejemplo, como se muestra en el Esquema 3.
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En el Esquema 3, el compuesto de Fórmula 4 puede transformarse entonces en un compuesto de Fórmula 9 por tratamiento con un compuesto de Fórmula 12 bajo condiciones adecuadas. Estos procedimientos son bien conocidos por los expertos en la técnica y, en general, pueden seleccionarse las condiciones estándar de acoplamiento de péptidos. Los compuestos de Fórmula 12 son excepcionalmente bien conocidos en la literatura química, y un experto en la técnica puede optar por preparar cualquier compuesto de Fórmula 12 utilizando procedimientos análogos a los descritos en la literatura química. El compuesto de Fórmula 9 se convierte entonces en el compuesto de Fórmula I mediante un tratamiento bajo condiciones de deshidratación bien conocidas por los expertos en la técnica. Con frecuencia, este paso de deshidratación puede llevarse a cabo utilizando un exceso de anhídrido trifluoroacético u oxicloruro de fósforo, generalmente en la presencia de una base tal como piridina, N,N-diisopropiletilamina, 4-metilmorfolina o trietilamina.
Un experto en la técnica reconocerá que pueden aplicarse otras permutaciones de los pasos de formación de enlaces y manipulaciones de grupos funcionales en los Esquemas 1, 2 y 3 con las consideraciones adecuadas. Tales permutaciones en la selección del orden de los pasos son bien conocidas en la literatura química y un experto en la técnica puede consultar la literatura química para obtener más orientación si lo desea. Un experto en la técnica reconocerá que pueden hacerse otras selecciones de grupos protectores y reactivos para efectuar las diversas transformaciones.
EJEMPLOS
Procedimientos experimentales
A continuación se ilustra la síntesis de diversos compuestos de la presente invención. Pueden prepararse compuestos adicionales dentro del alcance de esta invención utilizando los procedimientos ilustrados en estos Ejemplos, ya sea solos o en combinación con técnicas generalmente conocidas en la técnica. Todos los materiales de partida en estos Preparativos y Ejemplos están disponibles comercialmente o pueden prepararse por procedimientos conocidos en la técnica o como se describe en el presente documento.
Todas las reacciones se llevaron a cabo con agitación continua bajo una atmósfera de nitrógeno o gas argón, a menos que se indique lo contrario. Cuando fue apropiado, los aparatos de reacción se secaron bajo vacío dinámico utilizando una pistola de calor, y se emplearon disolventes anhidros (productos Sure-Seal™ de Aldrich Chemical Company, Milwaukee, Wisconsin o productos DriSolv™ de EMD Chemicals, Gibbstown, NJ). En algunos casos, los disolventes comerciales se hicieron pasar por columnas rellenas de tamices moleculares de 4Á, hasta alcanzar los siguientes estándares de control de calidad para el agua: a) <100 ppm para diclorometano, tolueno, N,N-dimetilformamida y tetrahidrofurano; b) <180 ppm para metanol, etanol, 1,4-dioxano y diisopropilamina. En el caso de reacciones muy sensibles, los disolventes se trataron además con sodio metálico, hidruro de calcio o tamices moleculares, y se destilaron justo antes de su uso. Se utilizaron otros disolventes y reactivos comerciales sin mayor purificación. Para procedimientos de referencia de síntesis en otros Ejemplos o Procedimientos, las condiciones de reacción (tiempo de reacción y temperatura) pueden variar. Por lo general, los productos se secaron bajo vacío antes de pasar a otras reacciones o someterse a pruebas biológicas.
Cuando se indicó, las reacciones fueron calentadas por irradiación de microondas utilizando Biotage Initiator o Personal Chemistry Emrys Optimizer. El progreso de la reacción se monitorizó mediante cromatografía en capa fina (TLC), cromatografía líquida-espectrometría de masas (LCMS), cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLc ) y/o análisis de cromatografía de gases-espectrometría de masas (GCMS). La TLC se realizó en placas de gel de sílice previamente recubiertas con un indicador de fluorescencia (longitud de onda de excitación de 254 nm) y se visualizó bajo luz UV y/o con tintes de I2, KMnO4, CoCh, ácido fosfomolíbdico y/o molibdato de amonio cérico. Los datos de LCMS se adquirieron en un instrumento de la serie Agilent 1100 con un automuestreador de Leap Technologies, columnas Gemini C18, gradientes de acetonitrilo/agua y modificadores de ácido trifluoroacético, ácido fórmico o hidróxido de amonio. El eluato de la columna se analizó con un espectrómetro de masas Waters ZQ que escaneaba en los modos de iones positivos y negativos de 100 a 1200 Da. También se utilizaron otros instrumentos similares. Los datos de HPLC se adquirieron generalmente en un instrumento de la serie Agilent 1100, utilizando las columnas indicadas, gradientes de acetonitrilo/agua y modificadores de ácido trifluoroacético o hidróxido de amonio. Los datos de GCMS se adquirieron utilizando un horno Hewlett Packard 6890 con un inyector HP 6890, columna HP-1 (12 m x 0,2 mm x 0,33 pm) y gas portador de helio. La muestra se analizó en un detector selectivo de masas HP 5973 que escanea de 50 a 550 Da mediante ionización de electrones. Las purificaciones se realizaron mediante cromatografía líquida de rendimiento medio (MPLC) utilizando instrumentos Isco CombiFlash Companion, AnaLogix IntelliFlash 280, Biotage SP1 o Biotage Isolera One y cartuchos de sílice preenvasados Isco RediSep o Biotage Snap. Las purificaciones quirales se realizaron mediante cromatografía de fluidos supercríticos (SFC) quirales, generalmente utilizando instrumentos Berger o Thar; columnas tales como ChiralPAK-AD, -AS, -IC, Chiralcel-OD o -OJ; y mezclas de CO2 con metanol, etanol, 2-propanol o acetonitrilo, solas o modificadas con ácido trifluoroacético o propan-2-amina. Se utilizó la detección UV para activar la recogida de fracciones. En el caso de las síntesis que hacen referencia a procedimientos de otros Ejemplos o Procedimientos, las purificaciones pueden variar: en general, los disolventes y las relaciones de disolvente utilizadas para los eluyentes/gradientes se eligieron para proporcionar Rfs o tiempos de retención adecuados.
Los datos de la espectrometría de masas se obtienen de los análisis de LCMS. La espectrometría de masas (EM) se realizó mediante fuentes de ionización química a presión atmosférica (APCI), ionización por electroaerosol (ESI), ionización por impacto de electrones (EI) o ionización por dispersión de electrones (ES). Los desplazamientos químicos de la espectroscopia magnética nuclear de protones(1H RMN) se indican en partes por millón a partir del tetrametilsilano y se registraron en espectrómetros Varian, Bruker o Jeol de 300, 400, 500 o 600 MHz. Los desplazamientos químicos se expresan en partes por millón (ppm, 8) referidos a los picos residuales del disolvente deuterado (cloroformo, 7,26 ppm; CD2HOD, 3,31 ppm; acetonitrilo-d2, 1,94 ppm; dimetilsulfóxido-d5, 2,50 ppm; DHO, 4,79 ppm). Las formas de los picos se describen como sigue: s, singlete; d, doblete; t, triplete; q, cuarteto; quin, quinteto; m, multiplete; br s, singlete amplio; app, aparente. Los datos analíticos de la SFC se adquirieron generalmente en un instrumento analítico Berger, como se ha descrito anteriormente. Los datos de rotación óptica se adquirieron en un polarímetro PerkinElmer modelo 343 utilizando una célula de 1 dm. Los microanálisis fueron realizados por Quantitative Technologies Inc. y estuvieron dentro del 0,4 % de los valores calculados.
A menos que se indique lo contrario, las reacciones químicas se realizaron a temperatura ambiente (aproximadamente 23 grados Celsius).
A menos que se indique lo contrario, todos los reactivos se obtuvieron comercialmente y se utilizaron sin mayor purificación, o se prepararon utilizando procedimientos conocidos en la literatura.
Los términos "concentrado", "evaporado" y "concentrado in vacuo" se refieren a la eliminación del disolvente a presión reducida en un evaporador rotatorio con una temperatura de baño inferior a 60 °C. Las abreviaturas "min" y "h" indican "minutos" y "horas", respectivamente. El término "TLC" se refiere a la cromatografía en capa fina, "temperatura ambiente" indica una temperatura entre 18 y 25 °C, "GCMS" se refiere a la cromatografía de gases-espectrometría de masas, "LCMS" se refiere a la cromatografía líquida-espectrometría de masas, "UPLC" se refiere a la cromatografía líquida de ultra rendimiento, "HPLC" se refiere a la cromatografía líquida de alto rendimiento, y "SFC" se refiere a la cromatografía de fluidos supercríticos.
La hidrogenación puede llevarse a cabo en un agitador Parr bajo gas hidrógeno presurizado, o en un aparato de hidrogenación de flujo Thales-nano H-Cube a pleno hidrógeno y con un flujo entre 1-2 ml/min a la temperatura especificada.
Los tiempos de retención de HPLC, UPLC, LCMS, GCMS y SFC se midieron utilizando los procedimientos indicados en los procedimientos.
En algunos ejemplos, se llevaron a cabo separaciones quirales para separar enantiómeros o diastereómeros de ciertos compuestos de la invención (en algunos ejemplos, los enantiómeros separados se designan como ENT-1 y ENT-2, de acuerdo con su orden de elución; de forma similar, los diastereómeros separados se designan como DIAST-1 y DIAST-2, de acuerdo con su orden de elución). En algunos ejemplos, la rotación óptica de un enantiómero se midió utilizando un polarímetro. De acuerdo con sus datos de rotación observados (o sus datos de rotación específicos), un enantiómero con una rotación en el sentido de las agujas del reloj se designó como el (+)-enantiómero y un enantiómero con una rotación en sentido contrario a las agujas del reloj se designó como el (-)-enantiómero. Los compuestos racémicos se indican bien por la ausencia de estereoquímica dibujada o descrita, bien por la presencia de (+/-) adyacente a la estructura; en este último caso, la estereoquímica indicada representa solo uno de los dos enantiómeros que componen la mezcla racémica.
Los compuestos e intermedios descritos a continuación se nombraron utilizando la convención de nomenclatura proporcionada con ACD/ChemSketch 2019.1.1, File Version C05H41, Build 110712 (Advanced Chemistry Development, Inc., Toronto, Ontario, Canadá). La convención de nomenclatura proporcionada con ACD/ChemSketch 2019.1.1 es bien conocida por los expertos en la técnica y se considera que la convención de nomenclatura proporcionada con ACD/ChemSketch 2019.1.1 se ajusta en general a las recomendaciones de la IUPAC (International Union for Pure and Applied Chemistry) sobre la Nomenclature of Organic Chemistry y las CAS Index rules.
Ejemplo 1
(1R,2S,5S)-N-((1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil)-6,6-dimetil-3-[N-(trifluoroacetil)-L-valol1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxamida (1)
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Paso 1: Síntesis de (1R.2S.5S)-3-/N-(terf-butox¡carbon¡l)-L-val¡ll-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carbox¡lato de metilo (C1).
Una soluc¡ón a 0 °C de N-(tert-butox¡carbon¡l)-L-val¡na (69.7 g. 321 mmol) en una mezcla de aceton¡tr¡lo y N,N-d¡met¡lformam¡da (10:1. 1.10 L) se trató con hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotr¡azol-1-¡l)-N,N,N',N'-tetramet¡luron¡o (HATU; 122 g. 321 mmol). segu¡do de N,N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (127 ml. 729 mmol). Tras ag¡tar la mezcla de reacc¡ón durante 5 m¡nutos. se añad¡ó (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carbox¡lato de met¡lo. sal de clorh¡drato (60.0 g. 292 mmol). y se cont¡nuó la ag¡tac¡ón a 0 °C durante 1 hora. A cont¡nuac¡ón. la mezcla de reacc¡ón se d¡luyó con una soluc¡ón acuosa de ác¡do cítr¡co (1 N; 50 ml) y agua (100 ml). se ag¡tó durante 2 m¡nutos y se concentró in vacuo hasta aprox¡madamente la m¡tad del volumen ¡n¡c¡al. La mezcla resultante se repart¡ó entre acetato de et¡lo y agua. y la capa acuosa se extrajo tres veces con acetato de et¡lo. Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron tres veces con agua y una con soluc¡ón acuosa saturada de cloruro sód¡co. se secaron sobre sulfato sód¡co. se f¡ltraron y se concentraron in vacuo. El res¡duo se ag¡tó en una cant¡dad mín¡ma de acetato de et¡lo y luego se f¡ltró; el mater¡al ¡nsoluble se lavó con acetato de et¡lo hasta que quedó blanco. Los f¡ltrados comb¡nados se concentraron bajo pres¡ón reduc¡da y se somet¡eron a cromatografía en gel de síl¡ce (Eluyente: 1:1 acetato de et¡lo / heptano). obten¡endo C1 como un ace¡te amar¡llo. Producc¡ón: 109 g. cuant¡tat¡vo. lCm S m/z 369.3 [M+Hl+. 1H RMN (400 MHz. cloroformo-d) 65.08 (d. J = 9.6 Hz. 1H). 4.45 (s. 1H). 4.11 (dd. J = 9.7. 7.8 Hz. 1H). 3.95 (d. med¡o o cuarteto AB. J = 10.1 Hz. 1H). 3.86 (dd. componente del s¡stema ABX. J = 10.2. 4.8 Hz. 1H). 3.74 (s. 3H). 2.04 - 1.93 (m. 1H). 1.50 -1.41 (m. 2H). 1.40 (s. 9H). 1.04 (s. 3H). 1.00 (d. J = 6.8 Hz. 3H). 0.95 (d. J = 6.8 Hz. 3H). 0.93 (s. 3H).
Paso 2: Síntes¡s de (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-L-val¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carbox¡lato de met¡lo. sal de clorh¡drato (C2).
Se añad¡ó una soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en 1.4-d¡oxano (4 M; 15 ml. 60 mmol) a una soluc¡ón a 0 °C de C1 (1.00 g. 2.71 mmol) en acetato de et¡lo (50 ml). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 0 °C durante 2 horas. tras lo cual se añad¡ó una soluc¡ón ad¡c¡onal de cloruro de h¡drógeno en 1.4-d¡oxano (4 M; 10 ml. 40 mmol). y se cont¡nuó ag¡tando a 0 °C durante 3 horas. y después a temperatura amb¡ente durante 1 hora. A cont¡nuac¡ón. la mezcla de reacc¡ón se trató con una soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en 1.4-d¡oxano (4 M; 10 ml. 40 mmol) y metanol (15 ml) y se dejó ag¡tar toda la noche a temperatura amb¡ente. La concentrac¡ón in vacuo proporc¡onó C2 como una goma; este mater¡al se ut¡l¡zó en la quím¡ca poster¡or s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal. y se asum¡ó que la reacc¡ón era cuant¡tat¡va. LCMS m/z 269.3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz. DMSO-d6) 68.24 (br s. 3H). 4.27 (s. 1H). 3.81 - 3.61 (m. 3H). 3.67 (s. 3H). 2.21 -2.06 (m.
1H). 1.63 - 1.55 (m. 1H). 1.49 (d. componente de cuarteto AB. J = 7.6 Hz. 1H). 1.09 -0.88 (m. 12H).
Paso 3: Síntes¡s de (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-/N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡ll-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carbox¡lato de met¡lo (C3).
Se añad¡ó tr¡et¡lam¡na (1.55 ml. 11.1 mmol) a una soluc¡ón a 0 °C de C2 (1.0 g. 3.3 mmol) en d¡clorometano (37 ml). segu¡da de la ad¡c¡ón gota a gota de anhídr¡do tr¡fluoroacét¡co (0.57 ml. 4.0 mmol) durante 30 m¡nutos. La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 0 °C durante 30 m¡nutos. tras lo cual se d¡luyó con d¡clorometano (100 ml). se lavó secuenc¡almente con una soluc¡ón acuosa de b¡sulfato de potas¡o al 10 % (50 ml) y una soluc¡ón acuosa saturada de cloruro de sod¡o (30 ml). se secó sobre sulfato de sod¡o. se f¡ltró y se concentró in vacuo para obtener C3 como un ace¡te amar¡llo claro. Producc¡ón: 1.2 g. 3.3 mmol. cuant¡tat¡vo. LCm S m/z 365.2 [M+Hl+. 1H RMN (400 MHz. cloroformo-d) 67.04 (br d. J = 8.8 Hz. 1H). 4.54 (dd. J = 8.9. 6.3 Hz. 1H). 4.46 (s. 1H). 3.91 (dd. J = 10.1. 5.0 Hz. 1H). 3.80 - 3.73 (m. 1H). 3.76 (s.
3H). 2.25 -2.13 (m. 1H). 1.55 - 1.47 (m. 2H). 1.09 - 1.03 (m. 6H). 0.94 (d. J = 6.8 Hz. 3H). 0.92 (s. 3H).
Paso 4: Síntes¡s del ác¡do (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-/N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡ll-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxíl¡co (C4).
Se añad¡ó ác¡do clorhídr¡co concentrado (0.57 ml. 6.6 mmol) a una soluc¡ón de C3 (1.25 g. 3.43 mmol) en una mezcla de ác¡do acét¡co (40.8 ml) y agua (8.2 ml). La mezcla de reacc¡ón se calentó a 55 °C durante 3 días. tras lo cual se repart¡ó entre agua (50 ml) y acetato de et¡lo (100 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de et¡lo (2 * 50 ml) y las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con soluc¡ón acuosa saturada de cloruro sód¡co (50 ml). se secaron sobre sulfato sód¡co. se f¡ltraron y se concentraron in vacuo para obtener C4 como espuma blanca. Producc¡ón: 1.00 g. 2.85 mmol. 83 %. LCMS m/z 351.2 [M+Hr. 1H RMN (400 MHz. cloroformo-d). p¡cos característ¡cos: 64.56 - 4.44 (m. 2H).
2.24 - 2.12 (m. 1H). [1.66 (d. componente de cuarteto AB. J = 7.5 Hz) y 1.59 - 1.47 (m). total 2Hl. 1.10 -1.01 (m. 6H).
0.96 -0.91 (m. 6H).
Paso 5: Síntes¡s de {(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llpropan-2-¡l}carbamato de tert-but¡lo (C5).
Se añad¡ó una soluc¡ón de amoníaco en metanol (7.0 M; 150 ml. 1.0 mol) a una soluc¡ón a 0 °C de N-(tert-butox¡carbon¡l)-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡ll-L-alan¡nato de met¡lo (5.00 g. 17.5 mmol) en metanol (25 ml). Tras ag¡tar la mezcla de reacc¡ón a temperatura amb¡ente durante 3 días. se concentró in vacuo; el res¡duo se d¡luyó y reconcentró secuenc¡almente con una mezcla de acetato de et¡lo y heptano (1:1. 4 * 50 ml). segu¡da de heptano (50 ml) para proporc¡onar C5 como un sól¡do (5.27 g. supuestamente cuant¡tat¡vo) que contenía d¡solvente res¡dual. Una porc¡ón de este mater¡al se ut¡l¡zó en el s¡gu¡ente paso. LCMS m/z 216.2 [(M - 2-met¡lprop-1-eno)+Hl+. 1HRMN(400 MHz. metanol-d4) 64.16 - 3.96 (m. 1H). 3.40 - 3.27 (m. 2H. supuesto; parc¡almente oscurec¡do por el p¡co del d¡solvente).
2,55 -2,42 (m, 1H), 2.35 (dddd, J = 12,2, 8,6, 6,8, 3,3 Hz, 1H), 2,03 (ddd, J = 14,0, 11,0, 4,4 Hz, 1H), 1,93 - 1,81 (m, 1H), 1,74 (ddd, J = 14,2, 10,1,4,3 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H).
Paso 6: Síntesis de {(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l}carbamato de tert-butilo (C6).
Se añad¡eron 2,6-d¡met¡lp¡r¡d¡na (2 ml, 17 mmol) y anhídr¡do tr¡fluoroacét¡co (0,94 ml, 6,6 mmol) a una soluc¡ón a 0 °C de C5 (del paso anter¡or; 1,0 g, <3,3 mmol) en d¡clorometano (12 ml). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 1,5 horas, tras lo cual se trató con ác¡do clorhídr¡co (1 M; 30 ml) y d¡clorometano (60 ml). La capa orgán¡ca se lavó secuenc¡almente con soluc¡ón acuosa saturada de cloruro sód¡co (30 ml) y soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato sód¡co (30 ml), se secó sobre sulfato sód¡co y se concentró in vacuo; cromatografía sobre gel de síl¡ce (Grad¡ente: 40 % a 100 % de acetato de et¡lo en heptano) perm¡t¡ó obtener C6 como sól¡do. Producc¡ón: 737 mg, 2,91 mmol, 88 % en 2 pasos. LCMS m/z 254,3 [M+Hl+.1H RMN (400 MHz, m etano l^) 84,72 (dd, J = 9,3, 6,8 Hz, 1H), 3,39 - 3,27 (m, 2H, supuesto; parc¡almente oscurec¡do por el p¡co del d¡solvente), 2,57 - 2,46 (m, 1H), 2,36 (dddd, J = 12,2, 8,6, 6,3, 3,4 Hz, 1H), 2,21 (ddd, J = 13,8, 9,3, 5,6 Hz, 1H), 1,92 - 1,79 (m, 2H), 1,47 (s, 9H).
Paso 7: Síntes¡s de (2S)-2-am¡no-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llpropanen¡tr¡lo, sal de metanosulfonato (C7).
Se añad¡ó a una soluc¡ón de C6 (317 mg, 1,25 mmol) en 1,1,1,3,3-hexafluoropropan-2-ol (3 ml), ác¡do metanosulfón¡co (81,2 pl, 1,25 mmol). Después de ag¡tar la mezcla de reacc¡ón a temperatura amb¡ente durante 45 m¡nutos, se concentró in vacuo y, a cont¡nuac¡ón, se recog¡ó repet¡damente en una mezcla de d¡solventes y se reconcentró: aceton¡tr¡lo y acetato de et¡lo (1:1,2 x 10 ml), segu¡do de acetato de et¡lo y heptano (1:1, 2 x 10 ml). El C7 resultante se obtuvo como un cr¡stal (423 mg), que estaba l¡bre del epímero n¡tr¡lo med¡ante anál¡s¡s de RMN de 1H y 13C. Una porc¡ón de este mater¡al se ut¡l¡zó en otras reacc¡ones s¡n pur¡f¡cac¡ón ad¡c¡onal. LCMS m/z 154,2 [M+Hl+.1H RMN(400 MHz, metanol-d4) 84,78 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 3,42 - 3,36 (m, 2H), 2,82 - 2,68 (m, 1H), 2,70 (s, 3H), 2,50 - 2,39 (m, 1H), 2,20 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 2,07 - 1,80 (m, 2H).
Paso 8: Síntes¡s de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l}-6,6-d¡met¡l-3-[N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡ll-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da (1).
Se enfr¡ó una mezcla de C7 (del paso anter¡or; 98,8 mg, <0,292 mmol) y C4 (100 mg, 0,285 mmol) en aceton¡tr¡lo (1,5 ml) a 0 °C. Se añad¡ó hexafluorofosfato de 0-(7-Azabenzotr¡azol-1-¡l)-N,W,W,W-tetramet¡luron¡o (HATU, 97 %; 112 mg, 0,286 mmol), segu¡do de una soluc¡ón de 4-met¡lmorfol¡na (94,0 pl, 0,855 mmol) en aceton¡tr¡lo (0,5 ml), y la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 0 °C durante aprox¡madamente 2 horas. A cont¡nuac¡ón, se añad¡ó una soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato sód¡co (30 ml) a la mezcla de reacc¡ón a 0 °C, segu¡da de d¡clorometano (50 ml), y la capa orgán¡ca se lavó con ác¡do clorhídr¡co (1 M; 30 ml). Las capas acuosas comb¡nadas se extrajeron con d¡clorometano (60 ml), tras lo cual las capas orgán¡cas comb¡nadas se secaron sobre sulfato de sod¡o, se concentraron in vacuo y se somet¡eron a cromatografía en gel de síl¡ce (Grad¡ente: 0 % a 20 % de metanol en acetato de et¡lo). Como el mater¡al resultante se cons¡deró, por RMN y LCMS, contam¡nado con un epímero del producto, se pur¡f¡có med¡ante HPLC en fase ¡nversa (Columna: Waters Sunf¡re C18, 19 x 100 mm, 5 pm; Fase móv¡l A: agua que contenía 0,05 % de ác¡do tr¡fluoroacét¡co (v/v); Fase móv¡l B: aceton¡tr¡lo que contenía 0,05 % de ác¡do tr¡fluoroacét¡co (v/v); Grad¡ente: 5 % a 95 % B durante 8,54 m¡nutos, luego 95 % B durante 1,46 m¡nutos; Caudal: 25 ml/m¡nuto) para produc¡r (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l}-6,6-d¡met¡l-3-[N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡ll-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da (1). Rend¡m¡ento: 14,6 mg, 30,1 pmol, 11 %. Lc Ms m/z 486,5 [M+H]+. T¡empo de retenc¡ón: 2,33 m¡nutos (Cond¡c¡ones analít¡cas. Columna: Waters Atlant¡s C18, 4,6 x 50 mm, 5 pm; Fase móv¡l A: agua que contenía 0,05 % de ác¡do tr¡fluoroacét¡co (v/v); Fase móv¡l B: aceton¡tr¡lo que contenía 0,05 % de ác¡do tr¡fluoroacét¡co (v/v). Grad¡ente: 5 % a 95 % B durante 4,0 m¡nutos, luego 95 % B durante 1,0 m¡nuto. Caudal: 2 ml/m¡nuto).
Síntes¡s alternat¡va de C4
Ác¡do (1R,2S,5S)-6,6-D¡met¡l-3-/A/-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡ll-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxíl¡co (C4)
Figure imgf000033_0001
Paso 1: Síntesis del ácido (1R,2S,5S)-3-[N-(tert-butoxicarbonil)-L-valil1-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxílico (C8 ).
Se añadió una solución acuosa de hidróxido de litio (2,0 M; 436 ml, 872 mmol) a una solución de C1 (107 g, 290 mmol) en tetrahidrofurano (730 ml). Tras agitar la mezcla resultante a temperatura ambiente durante aproximadamente 2 horas, se diluyó con agua y acetato de etilo, y se trató con una solución acuosa de hidróxido de sodio 1 M. La capa acuosa se lavó con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se extrajeron tres veces con una solución acuosa de hidróxido de sodio 1 M, hasta que el análisis de LCMS indicó que C8 se había eliminado completamente de la capa orgánica. La acidificación de las capas acuosas combinadas hasta el pH 2 se llevó a cabo mediante la adición de ácido clorhídrico concentrado, tras lo cual la mezcla se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron; al triturar el residuo con heptano se obtuvo C8 como un sólido blanco. Producción: 92,8 g, 262 mmol, 90 %. LCMS m/z 355,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-d4) 54,32 (s, 1H), 4,05 (d, mitad de cuarteto AB, J = 10,5 Hz, 1H), 4,01 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 3,88 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,4, 5,3 Hz, 1H), 2,03 - 1.91 (m, 1H), 1,57 (dd, componente del sistema ABX, J = 7,5, 5,2 Hz, 1H), 1,50 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,5 Hz, 1H), 1,41 (s, 9H), 1,08 (s, 3H), 0,99 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,97 - 0,94 (m, 6 H).
Paso 2: Síntesis del ácido (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-L-valil-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxílico, sal de clorhidrato (C9).
Se añadió a una solución de C8 (82,8 g, 234 mmol) en diclorometano (230 ml) una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4,0 M; 409 ml, 1,64 mol). La mezcla de reacción se agitó durante toda la noche a temperatura ambiente, tras lo cual se concentró in vacuo, proporcionando C9 como una espuma blanca. Este material se utilizó directamente en el siguiente paso. LCMS m/z 255,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-d4) 54,42 (s, 1H), 4,05 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 3,89 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,5, 5,2 Hz, 1H), 3,74 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,5 Hz, 1H), 2,36 - 2.25 (m, 1H), 1,62 (dd, componente del sistema ABX, J = 7,5, 5,1 Hz, 1H), 1,57 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,16 (d, J = 7,0 Hz, 3H), 1,10 (s, 3H), 1,04 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 1,01 (s, 3H).
Paso 3: Síntesis del ácido (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-/N-(trifluoroacetil)-L-valil1-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxílico (C4).
Se enfrió una solución de C9 (del paso anterior; <234 mmol) en metanol (230 ml) a 0 °C, se trató con trietilamina (66,7 ml, 479 mmol) y se agitó durante 5 minutos, tras lo cual se añadió lentamente trifluoroacetato de etilo (36,1 ml, 303 mmol). Tras dejar que la mezcla de reacción se agitara a temperatura ambiente durante 90 minutos, se concentró in vacuo. El residuo se diluyó con agua, solución acuosa de hidróxido de sodio 1 M y acetato de etilo, y la capa orgánica resultante se extrajo dos veces con solución acuosa de hidróxido de sodio 1 M. Las capas acuosas combinadas se acidificaron a pH 2 mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M, y luego se extrajeron tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo, obteniéndose C4 en forma de espuma blanca. Producción: 73,4 g, 210 mmol, 90 % en 2 pasos. LCMS m/z 351,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 512,65 (v brs, 1H), 9,82 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,16 (dd, J = 9,9, 7,9 Hz, 1H), 4,12 (s, 1H), 3,86 (d, mitad de cuarteto AB, J = 10,4 Hz, 1H), 3,81 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,5, 5,0 Hz, 1H), 2,18 - 2,05 (m, 1H), 1,54 (dd, componente del sistema ABX, J = 7,7, 4,6 Hz, 1H), 1,42 (d, mitad de cuarteto AB, J = 7,5 Hz, 1H), 1,02 (s, 3H), 0,95 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,6 Hz, 3H), 0,84 (s, 3H).
Síntesis Alternativa del Ejemplo 1
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1 -Ciano-2-[(3S)-2-oxopirroNdm-3-N]etN}-6,6-dimetN-3-[N-(trifluoroacetNo)-L-valN]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (1)
Figure imgf000034_0001
Paso 1: Síntesis de 3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1-L-alaninato de metilo, sal de metanosulfonato (C10).
Se añadió a una solución de N-(fe/f-butoxicarbonil)-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]-L-alaninato de metilo (10,1 g, 35,3 mmol) en 1,1,1,3,3,3-hexafluoropropan-2-ol (70 ml), ácido metanosulfónico (2,30 ml, 35,4 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 70 minutos, el análisis LCMS indicó que el material de partida se había convertido en C10: LCMS m/z 187,2 [M+H]+. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y el residuo se redisolvió dos veces, seguido de una concentración a presión reducida, en una mezcla de acetonitrilo y acetato de etilo (1 :1, 2 x 20 ml). El material resultante se recogió en una mezcla de acetonitrilo y acetato de etilo (1:1, 30 ml), se concentró, se redisolvió dos veces en acetato de etilo (2 x 40 ml) y se concentró. El residuo se trituró con acetato de etilo (60 ml) para obtener C10. Producción: 9,87 g, 35,0 mmol, 99 %. 1H RMN (400 MHz, metanol-cf4) 54,22 (dd, J = 9,7, 3,6 Hz, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,41 -3,36 (m, 2H), 2,84 -2,74 (m, 1H), 2,70 (s, 3H), 2,41 (dddd, J = 12.3, 8,6 , 5,1, 3,6 Hz, 1H), 2,25 (ddd, J = 15,1, 4,5, 3,6 Hz, 1H), 1,98 (ddd, J = 15,1, 9,6, 9,6 Hz, 1H), 1,87 (dddd, J = 12,6, 10,9, 9,2, 9,2 Hz, 1H).
Paso 2: Síntesis de N-({(1R,2S,5S)-6,6-d¡met¡l-3-[N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡ll-3-azabic¡clo[3.1.0lhexan-2-¡l}carbon¡l)-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-ill-L-alan¡nato de metilo (C11).
Se añadió a una solución a 0 °C de C10 (2,76 g, 9,78 mmol) y C4 (3,43 g, 9,79 mmol) en acetonitrilo (40 ml), clorhidrato de 1-[3-(d¡met¡lamino)prop¡l]-3-et¡lcarbod¡¡m¡da (1,88 g, 9,81 mmol), seguido de la adición gota a gota de piridina (2,37 ml, 29,3 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2,25 horas, tras lo cual se trató con ácido clorhídrico (1 M; 50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (150 ml). La capa orgánica se lavó secuencialmente con solución acuosa saturada de cloruro sódico (50 ml), solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (50 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico (50 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se recogió en metil tert-butil éter (30 ml) y se concentró bajo presión reducida, y el cristal resultante se agitó con metil tert-butil éter (50 ml) a temperatura ambiente durante la noche. Tras la filtración, la torta de filtración se lavó con metil tert-butil éter (3 x 6 ml) para obtener C11 como sólido, que por análisis de 1H RMN contenía un importante residuo de metil tert-butil éter. Una porción de este material se utilizó en el siguiente paso. Producción: 3,74 g; corregido por el metil tert-butil éter residual: 2,94 g, 5,67 mmol, 58 %. LCMS m/z 519,5 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, m etano l^) 84,55 (dd, J = 12,0, 3,8 Hz, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,29 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 3,97 (d, J = 3.1 Hz, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,37 - 3,23 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico del disolvente), 2,73 - 2,62 (m, 1H), 2.32 (dddd, J = 12,4, 8 ,8, 6,7, 2,4 Hz, 1H), 2,21 -2,10 (m, 2H), 1,86 - 1,74 (m, 2H), 1,60 (dt, componente del sistema ABX2, J = 7,7, 3,1 Hz, 1H), 1,49 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,09 (s, 3H), 1,02 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,99 - 0,95 (m, 6H).
Paso 3: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrol¡d¡n-3-¡llpropan-2-¡l}-6,6 -dimetil-3-[N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-valill-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da (C12).
Se añadió una solución de amoníaco en metanol (7,0 M; 5 ml, 40 mmol) a una solución de C11 (del paso anterior: 205 mg, 0,311 mmol) en metanol (1 ml). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas, tras lo cual se añadió de nuevo una solución de amoníaco en metanol (7,0 M; 5 ml, 40 mmol) y se continuó la agitación durante toda la noche. A continuación, la mezcla de reacción se trató por tercera vez con la misma cantidad de amoníaco en metanol; tras otras 8 horas de reacción, se concentró in vacuo. El residuo se diluyó y reconcentró secuencialmente con acetato de etilo (2 x 20 ml) y una mezcla de acetato de etilo y heptano (1:1,2 x 20 ml). El material resultante se disolvió en diclorometano (50 ml), se lavó con ácido clorhídrico (1 M; 30 ml) y con solución acuosa saturada de cloruro sódico (30 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró in vacuo para proporcionar C12 como sólido. Producción: 87 mg, 0,17 mmol, 55 %. LCMS m/z 504,5 [M+H]+. 1H RMN (400 Mh z , m etano l^) 88,68 (d, J = 7,9 Hz, <1H, intercambio incompleto con el disolvente), 4,44 (ddd, J = 11,9, 7,9, 4,0 Hz, 1H), 4.37 - 4,26 (m, 2H), 4,01 (dd, componente del sistema AbX, J = 10,3, 5,1 Hz, 1H), 3,94 (d, mitad de cuarteto AB, J = 10,2 Hz, 1H), 3,39 - 3.24 (m, 2H, supuesto; muy oscurecido por el pico del disolvente), 2,72 - 2,62 (m, 1H), 2,38 -2,28 (m, 1H), 2,21 -2,08 (m, 2H), 1,90 - 1,72 (m, 2H), 1.58 (dd, componente del sistema ABX, J = 7,5, 5 Hz, 1H), 1,54 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,7 Hz, 1H), 1,08 (s, 3H), 1,02 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,97 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,96 (s, 3H).
Paso 4: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡lletil}-6,6-d¡met¡l-3-[N-(trifluoroacet¡l)-L-valil1-3-azabic¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxamida (1).
Se añadió a una solución de C12 (85,0 mg, 0,17 mmol) en diclorometano (4,0 ml) A/-(triet¡lammon¡osulfon¡l)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 88,4 mg, 0,371 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente. Después de 3 horas, se añadió de nuevo W-(trietilammon¡osulfon¡l)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 20 mg, 84 pmol); 30 minutos después, la mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (60 ml), se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico (1 M; 30 ml), solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (30 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico (30 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se recogió en heptano y se reconcentró antes de purificarse mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 5 % de metanol en acetato de etilo). Se aisló (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxopirrol¡d¡na-3-¡llet¡l}-6,6-d¡met¡l-3-/A/-(tr¡fluoroacetil)-L-val¡ll-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da(1) como un sólido. Producción: 35 mg, 72 pmol, 42 %. LCMS m/z 486.5 [M+Hr. 1H RMN (400 MHz, metanol-^) 85,04 (dd, J = 10,7, 5,4 Hz, 1H), 4,28 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,03 - 3,94 (m, 2H), 3,35 - 3,23 (m, 2H, supuesto; muy oscurecido por el pico del disolvente), 2,72 - 2,62 (m, 1H), 2,37 - 2,26 (m, 2H), 2,19 - 2,08 (m, 1H), 1,93 - 1,75 (m, 2H), 1,64 (ddd, J = 7,6, 4,2, 2,1 Hz, 1H), 1,41 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 1,09 (s, 3H), 1,02 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 1,00 -0,95 (m, 6H).
Ejemplo 2 (solo como referencia)
N-{(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l}-4-met¡l-N2-(p¡rrol¡d¡n-1-¡lacet¡l)-L-leuc¡nam¡da, sal de trifluoroacetato (2)
Figure imgf000036_0001
Paso 1: Síntesis de 4-metil-L-leucinato de bencilo, sal de ácido p-toluenosulfónico (C13).
Una suspensión de 4-metil-L-leucina (9,5 g, 65 mmol), alcohol bencílico (28,3 g, 262 mmol) y ácido p-toluenosulfónico monohidratado (14,9 g, 78,3 mmol) en tolueno (200 ml) se calentó a reflujo durante la noche; se empleó una trampa Dean-Stark para eliminar azeotrópicamente el agua resultante. La mezcla de reacción se concentró in vacuo y el residuo se diluyó con éter dietílico (200 ml) y acetato de etilo (100 ml). La suspensión resultante se agitó durante 1,5 horas y se filtró; la torta del filtro se lavó con éter dietílico para proporcionar C13 como un sólido blanco. Producción: 24.9 g, 61,1 mmol, 94 %. LCMS m/z 236,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 58,30 (br s, 3H), 7,47 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,44 - 7,36 (m, 5H), 7,11 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 5,23 (cuarteto de AB, Jab= 12,3 Hz, Avab = 13,7 Hz, 2H), 4,02 (dd, J = 7,3, 4,5 Hz, 1H), 2,29 (s, 3H), 1,81 (dd, J = 14,5, 7,3 Hz, 1H), 1,57 (dd, J = 14,5, 4,6 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H).
Paso 2: Síntesis de 4-metil-N-(pirrolidin-1-ilacetil)-L-leucinato de bencilo (C14).
Una mezcla a 0 °C de C13 (800 mg, 1,96 mmol) y ácido pirrolidin-1-ilacético (254 mg, 1,97 mmol) en N,N-dimetilformamida (4 ml) se trató con hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',W-tetrametiluronio (HATU; 746 mg, 1,96 mmol), seguido de una solución de 4-metilmorfolina (0,496 ml, 4,51 mmol) en diclorometano (1 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 2 horas, se añadió una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (30 ml) a 0 °C; la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 * 60 ml), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice se realizó dos veces (Gradiente: 0 % a 20 % de acetato de etilo en heptano, seguido de una segunda purificación cromatográfica utilizando 0 % a 10 % de acetato de etilo en heptano), para obtener C14 como una goma (761 mg). Este material se utilizó directamente en el siguiente paso. LCMS m/z 347,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-^) 5 7,40 - 7,29 (m, 5H), 5,16 (cuarteto de AB, Jab=12,2 Hz, Avab =11,1 Hz, 2H), 4,56 (dd, J = 9,0, 3,1 Hz, 1H), 3,76 (cuarteto de AB, Jab= 15.6 Hz, Avab = 13,6 Hz, 2H), 3,17 - 3,06 (m, 4H), 2,03 - 1,93 (m, 4H), 1,81 (dd, J = 14,5, 3,1 Hz, 1H), 1,60 (dd, J = 14,5, 9,0 Hz, 1H), 0,95 (s, 9H).
Paso 3: Síntesis de 4-metil-N-(pirrolidin-1-ilacetil)-L-leucina (C15).
Se añadió a una solución de C14 (del paso anterior; 760 mg, <1,96 mmol) en metanol (5 ml), paladio sobre carbono (76,0 mg). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente bajo hidrógeno (50 psi) durante la noche, tras lo cual el análisis LCMS indicó la conversión a C15: LCMS m/z 257,4 [M+H]+. La mezcla de reacción se filtró dos veces a través de un filtro de 0,15 ^m y el filtrado se concentró in vacuo. El residuo se disolvió dos veces en una mezcla de acetato de etilo y heptano (1 :1, 2 * 20 ml), seguido de una concentración a presión reducida; esto proporcionó C15 como sólido (646 mg). Partes de este material se utilizaron en la química posterior sin más purificación. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 58,46 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,31 (ddd, J = 8,9, 8 ,6 , 3,0 Hz, 1H), 3,74 - 3,60 (m, 2H), 3,00 br (s, 4H), 1,90 - 1,79 (m, 4H), 1,70 (dd, componente del sistema ABX, J = 14,3, 3,0 Hz, 1H), 1,56 (dd, componente del sistema ABX, J = 14,3, 9,2 Hz, 1H), 0,90 (s, 9H).
Paso 4: Síntesis de N-/~(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-4-metil-N2-(pirrolidin-1-ilacetil)-L-leucinamida, sal de trifluoroacetato (2 ).
Una mezcla de C15 (del paso anterior; 30 mg, <91 pmol) y C7 (del paso 7 del ejemplo 1; 35,3 mg, <0.104 mmol) en N,N-dimetilformamida (1 ml) se enfrió a 0 °C y se trató con 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',W-tetrametiluronio hexafluorofosfato (HATU, 97%; 39,9 mg, 0,102 mmol), seguido de una solución de 4-metilmorfolina (28,0 pl, 0,255 mmol) en diclorometano (0,25 ml). Después de agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante aproximadamente 1,5 horas, se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (3 ml) a 0 °C y se extrajo con diclorometano (4 x 4 ml). Las capas orgánicas combinadas se concentraron in vacuo y se purificaron mediante Hp LC en fase inversa (Columna: Waters Sunfire C18, 19 x 100 mm, 5 pm; Fase móvil A: agua que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Gradiente: 5 % a 25 % de B durante 8.5 minutos, luego 25 % a 95 % de acetonitrilo durante 0,5 minutos, luego 95 % de B durante 1,0 minuto; Caudal: 25 ml/minuto) para obtener N-/(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-4-metil-N2-(pirrolidina-1-ilacetil)-L-leucinamida, sal de trifluoroacetato (2) como una goma. Producción: 8,1 mg, 16 pmol, 18 % en 3 pasos. LCMS m/z 392,6 [M+H]+. Tiempo de retención: 1,47 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Waters Atlantis C18, 4.6 x 50 mm, 5 pm; Fase móvil A: agua que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v). Gradiente: 5 % a 95 % B durante 4,0 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto. Caudal: 2 ml/minuto).
Ejemplo 3 (solo como referencia)
N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etill}-N2-(2,6-diclorobenzoil)-4-metil-L-leucinamida (3)
Figure imgf000037_0001
Paso 1: Síntesis de 3-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il1-L-alaninamida, sal de metanosulfonato, (C16).
A una solución de C5 (6,13 g, <19 mmol) en 1,1,1,3,3-hexafluoropropan-2-ol (40 ml) se añadió ácido metanosulfónico (1,83 g, 19 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, tras lo cual se concentró in vacuo, se resuspendió en una mezcla de tolueno y heptano y se concentró una vez más, proporcionando un cristal higroscópico (7,47 g). Una porción de este material (6,47 g) se diluyó y reconcentró secuencialmente con lo siguiente: una mezcla de diclorometano y etanol (2:3, 2 * 50 ml); acetato de etilo y etanol (2:3, 50 ml); acetato de etilo, heptano y diclorometano (4:4:1, 2 * 50 ml). El material resultante se disolvió en una mezcla de acetonitrilo y agua (1:1,22 ml) y se liofilizó durante 2 días para obtener C16 en forma de cristal. Producción: 3.23 g, 12,1 mmol, 73 % en 2 pasos. LCMS m/z 172,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, m e ta n o ^ ) 84,03 (dd, J = 9,1, 4,6 Hz, 1H), 3,43 - 3,35 (m, 2H), 2,82 -2,72 (m, 1H), 2,71 (s, 3H), 2,49 -2,38 (m, 1H), 2,12 -1,96 (m, 2H), 1,94 -1,81 (m, 1H).
Paso 2: Síntesis de N-(tert-butox¡carbon¡l)-4-met¡l-L-leuc¡l-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1-L-alaninam¡da (C17).
Una solución a 0 °C de C16 (1,34 g, 5,02 mmol) y N-(ferf-butoxicarbonil)-4-metil-L-leucina (1,28 g, 5,22 mmol) en N,N-dimetilformamida(7,0 ml) se trató con 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N,N'-tetrametiluronio hexafluorofosfato (HATU, 97%; 2,04 g, 5,20 mmol), seguido de una solución de 4-metilmorfolina (1,43 ml, 13,0 mmol) en diclorometano (3 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 2,25 horas, se apagó a 0 °C añadiendo ácido clorhídrico (1 M; 30 ml) y se diluyó con diclorometano (50 ml). La capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (30 ml), y las capas acuosas combinadas se extrajeron con diclorometano (60 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron, se concentraron in vacuo y se suspendieron / concentraron con heptano (3 * 10 ml). Purificación del residuo mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 20 % de metanol en acetato de etilo) permitió obtener C17 como sólido. Producción: 1,42 g, 3,56 mmol, 71 %. LCMS m/z 399,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-cfo) 8 6,83 (d, J = 7,4 Hz, <1H, incompletamente intercambiado con el disolvente), 4,43 (dd, J = 11,2, 4,2 Hz, 1H), 4,11 - 4,05 (m, 1H), 3,38 - 3,24 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico del disolvente), 2,52 - 2.41 (m, 1H), 2,40 - 2,30 (m, 1H), 2,13 (ddd, J = 14,0, 11,2, 4,5 Hz, 1H), 1,91 - 1,75 (m, 2H), 1,71 (dd, componente del sistema AbX, J = 14.4, 3,2 Hz, 1H), 1,51 (dd, componente del sistema ABX, J = 14,4, 9,3 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H), 0,97 (s, 9H).
Paso 3: Síntesis de 4-met¡l-L-leuc¡l-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡na-3-¡l1-L-alan¡nam¡da, sal de metanosulfonato (C18).
Se añadió ácido metanosulfónico (32,6 pL, 0,502 mmol) a una solución de C17 (200 mg, 0,502 mmol) en 1,1,1,3,3-hexafluoropropan-2-ol (1,5 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 40 minutos, tras lo cual se concentró in vacuo, se disolvió en acetato de etilo y se concentró una vez más, proporcionando C18 como sólido (238 mg). La mayor parte de este material se utilizó en el siguiente paso. LCMS m/z 299,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-d4) 8 4,53 (dd, J = 10,3, 5,0 Hz, 1H), 3,91 (dd, J = 7,6, 5,5 Hz, 1H), 3,41 - 3,27 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico del disolvente), 2,70 (s, 3h ), 2,57 -2,47 (m, 1H), 2,41 (dddd, J = 12.0, 8,6 , 7,0, 3,2 Hz, 1H), 2,15 (ddd, J = 14,0, 10,3, 5,0 Hz, 1H), 2,01 (dd, J = 14,4, 7,5 Hz, 1H), 1.96 - 1,85 (m, 1H), 1,78 (ddd, J = 14,1, 9,1, 5,0 Hz, 1H), 1,59 (dd, J = 14,3, 5,5 Hz, 1H), 1,01 (s, 9H).
Paso 4: Síntesis de N-(2.6-d¡clorobenzo¡l)-4-met¡l-L-leuc¡l-3-[(3S)-2-oxopirrol¡d¡na-3-¡l1-L-alan¡nam¡da (C19).
Se trató una suspensión a 0 °C de C18 (del paso anterior: 234 mg, <0,49 mmol) en diclorometano (2 ml) con trietilamina (170 pL, 1,2 mmol) seguido de la adición gota a gota de una solución de cloruro de 2,6-diclorobenzoilo (130 mg, 0,621 mmol) en diclorometano (0,2 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, tras lo cual se diluyó con diclorometano (60 ml) y se lavó con ácido clorhídrico (1 M; 30 ml) seguido de una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (30 ml). La capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró, se concentró in vacuo y se sometió a cromatografía sobre gel de sílice (Gradiente: 0 % a 30 % de metanol en acetato de etilo) para obtener C19. Producción: 120 mg, 0,255 mmol, 52 en 2 pasos. LCMS m/z 471,4 (patrón isotópico de dicloro observado) [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-c^) 88,45 (d, J = 7,9 Hz, <1H, incompletamente intercambiado con el disolvente), 7,45 - 7,35 (m, 3H), 4,59 (dd, J = 7,8, 4,5 Hz, 1H), 4,52 - 4,44 (m, 1H), 3,37 - 3,24 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico del disolvente), 2,65 - 2,55 (m, 1H), 2,37 (dddd, J = 12,5, 8 ,8, 6 ,6 , 2,8 Hz, 1H), 2,19 (ddd, J = 13,9, 11,3, 4,5 Hz, 1H), 1,91 - 1,72 (m, 3H), 1,66 (dd, componente del sistema ABX, J = 14,4, 7,8 Hz, 1H), 1,03 (s, 9H).
Paso 5: Síntesis de N-/’(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il1etil}-N2-(2,6-diclorobenzoil)-4-metil-L-leucinamida (3).
Una solución de C19 (90 mg, 0,19 mmol) y 1H-imidazol (33,8 mg, 0,496 mmol) en piridina (1 ml) se enfrió en un baño de acetonitrilo / hielo seco (-35 °C). A esto se añadió oxicloruro de fósforo (0,100 ml, 1,07 mmol), y la mezcla de reacción se agitó entre -30 °C a -20 °C. Después de 30 minutos, se añadió piridina (2 ml) para facilitar la agitación; después de 1 hora, se añadió diclorometano (2 ml) por el mismo motivo. A las 2 horas de reacción, se añadió de nuevo oxicloruro de fósforo (0,100 ml, 1,07 mmol) y se continuó agitando durante 30 minutos a -30 °C, tras lo cual la mezcla de reacción se calentó a 0 °C y se agitó durante 40 minutos más. A continuación se trató con ácido clorhídrico (1 M; 30 ml) y se extrajo con diclorometano (2 * 60 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, se concentraron in vacuo y se sometieron a cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 15 % de metanol en acetato de etilo) para proporcionar un sólido (67 mg). Este material se combinó con el producto (12 mg) de una reacción similar llevada a cabo con C19 (30 mg, 64 pmol) y se tomó dos veces en acetato de etilo (2 * 3 ml) seguido de una concentración a presión reducida. El residuo se agitó con una mezcla de acetato de etilo y heptano (1:3, 4 ml) a temperatura ambiente durante 40 minutos y se filtró; la torta del filtro se lavó con una mezcla de acetato de etilo y heptano (13, 5 x 2 ml), para proporcionar N-/‘(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-N2-(2,6-diclorobenzoil)-4-metil-L-leucinamida(3) como sólido. Rendimiento combinado: 70 mg, 0,15 mmol, 59 %. LCMS m/z 453,3 (patrón isotópico de dicloro observado) [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-cf4) 5 7,45 - 7,34 (m, 3H), 5,05 (dd, J = 10,7, 5,4 Hz, 1H), 4,56 (dd, J = 7,0, 5,7 Hz, 1H), 3,37 - 3,23 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico del disolvente), 2,70 - 2,59 (m, 1H), 2,42 - 2,29 (m, 2H), 1,95 - 1,77 (m, 3H), 1,67 (dd, componente del sistema ABX, J = 14,4, 7,0 Hz, 1H), 1,04 (s, 9H).
Ejemplo 4 (solo como referencia)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il]-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (4)
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Paso 1: Síntesis de L-leucil-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1-L-alaninato de metilo, sal de clorhidrato (C20).
Una solución de N-fferf-butoxicarbonil)-L-leucil-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]-L-alaninato de metilo (véase Prior, A.M., et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2013, 23, 6317-6320; 2,0 g, 5,0 mmol) en una mezcla de metanol (2 ml) y una solución de cloruro de hidrógeno en acetato de etilo (4 M; 20 ml) se agitó a 25 °C durante 1 hora. La concentración in vacuo proporcionó C20 como un sólido blanco (1,92 g, supuestamente cuantitativo). 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), picos característicos: 59,09 - 8,98 (m, 1H), 8,39 (br s, 3H), 7,69 (s, 1H), 4,44 - 4,31 (m, 1H), 3,22 - 3,07 (m, 2H), 2,5 -2.38 (m, 1H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico del disolvente), 2,24 -2,11 (m, 1H), 2,11 - 1,99 (m, 1H), 1,78 - 1,48 (m, 5H), 0,92 (d, J = 6,5 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,5 Hz, 3H).
Paso 2: Síntesis de N-(4-metoxi-1H-indol-2-carbonilo)-L-leucil-3-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il]-L-alaninato de metilo ÍC211
El hexafluorofosfato de 0-(7-Azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 494 mg, 1,30 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (388 mg, 3,00 mmol) se añadieron a una solución a 0 °C de C20 (procedente de un experimento a menor escala similar al del Paso 1; 336 mg, <0,840 mmol) y ácido 4-metoxi-1H-indol-2-carboxílico (159 mg, 0,832 mmol) en N,N-dimetilformamida (6 ml). La solución se agitó a 0 °C durante 1,5 horas, tras lo cual se vertió en agua/hielo (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 * 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Eluyente: 10:1 diclorometano / metanol) proporcionó C21 como un aceite amarillo. Producción: 380 mg, 0,804 mmol, 97 %. LCMS m/z 473,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 11,59 -11,53 (m, 1H), 8,53 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,37 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,37 -7,33 (m, 1H), 7,09 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 7,00 (d, componente del cuarteto AB, J = 8,2 Hz, 1H), 6,50 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,56 - 4,47 (m, 1H), 4,40 - 4,31 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 3,18 - 3,05 (m, 2H), 2,41 - 2,29 (m, 1H), 2,15 - 2,03 (m, 2H), 1,78 - 1,49 (m, 5H), 0,93 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,4 Hz, 3H).
Paso 3: Síntesis de N-(4-metox¡-1H-¡ndol-2-carbon¡l)-L-leuc¡l-3-[(3S)-2-oxopirrol¡d¡na-3-¡l1-L-alan¡na (C22).
Se añadió a una mezcla agitada de cloruro de calcio (0,887 g, 7,99 mmol) e hidróxido de sodio (0,168 g, 4,20 mmol) en 2-propanol (7 ml) y agua (3 ml), C21 (1,8 g, 3,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 6 horas, tras lo cual se concentró in vacuo, se diluyó con agua (4 ml), se ajustó a pH 4 añadiendo ácido clorhídrico 1 M y se extrajo con acetato de etilo (3 * 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Eluyente: 10:1 : 0,1 diclorometano / metanol / ácido acético) proporcionó C22 como un sólido amarillo. Producción: 1,76 g, 3,84 mmol, 100%. LCMS m /z 459,2 [M+H]+. 1H RMN(400 MHz, cloroformo-d), picos característicos: 86,51 -6,43 (m, 1H), 4,80 -4,66 (m, 1H), 4,60 -4,45 (m, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,36 -3,18 (m, 2H), 2,59 -2,44 (m, 1H).
Paso 3 Alternativo. Síntesis de N-(4-metox¡-1H-¡ndol-2-carbon¡l)-L-leuc¡l-3-[(3S)-2-oxopirrol¡d¡n-3-¡l1-L-alan¡na (C22).
Se trató una solución de C21 (20 mg, 42 pmol) en tetrahidrofurano (0,4 ml) con una solución acuosa que contenía hidróxido de litio (14,2 mg, 0,593 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2,5 horas, se diluyó con acetato de etilo y se lavó con una solución acuosa de bisulfato de potasio al 10 %. La capa orgánica se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró in vacuo, proporcionando C22 como un sólido blanco. Producción: 20 mg, cuantitativo. LCMS m /z 459,2 [M+H]+. 1H RMN(400 MHz, m etano l^) 87,27 (s, 1H), 7,14 (dd, componente del sistema ABX, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,02 (d, componente del cuarteto AB, J = 8,3 Hz, 1H), 6,50 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,66 (dd, J = 9,0, 5,9 Hz, 1H), 4,52 (dd, J = 11,7, 3,9 Hz, 1H), 3,92 (s, 3H), 3,30 - 3,18 (m, 2H), 2,65 - 2,52 (m, 1H), 2,38 -2,26 (m, 1H), 2,21 (ddd, J = 14,0, 11,7, 4,1 Hz, 1H), 1,90 - 1,70 (m, 5H), 1,02 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,99 (d, J = 6,3 Hz, 3H).
Paso 4: Síntesis de N-(4-metox¡-1H-¡ndol-2-carbon¡l)-L-leuc¡l-3-[(3S)-2-oxopirrol¡d¡n-3-¡l1-L-alan¡nam¡da (C23).
Se añadieron a una solución a 0 °C de C22 (1,76 g, 3,84 mmol) y cloruro de amonio (0,246 g, 4.60 mmol) en N,N-dimetilformamida(15 ml), hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 1,90 g, 5,00 mmol) y N,N-diisopropiletilamina(1,49 g, 11,5 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 1,5 horas, se utilizó N,N-diisopropiletilamina (2,3 g, 18 mmol) para ajustar el pH a 8. La mezcla de reacción se agitó durante 30 minutos más, tras lo cual se vertió en una mezcla de ácido clorhídrico (1 M; 20 ml, 20 mmol) y hielo. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (3 * 10 ml); las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con ácido clorhídrico (1 M; 10 ml) y solución acuosa saturada de cloruro de sodio (10 ml), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (Eluyente: 10:1 diclorometano / metanol), obteniendo C23 como un sólido amarillo. Producción: 1,09 g, 2,38 mmol, 62 %. LCMS m /z 458.0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 11,62 - 11,55 (m, 1H), 8,42 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 8,04 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,60 (br s, 1H), 7,38 - 7,26 (m, 2H), 7,10 (dd, componente del sistema ABX, J = 8, 8 Hz, 1H), 7,06 (br s, 1H), 7,00 (d, componente del cuarteto AB, J = 8,2 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,54 - 4,41 (m, 1H), 4,34 - 4,22 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,17 -3,01 (m, 2H), 2,31 -1,95 (m, 3H), 1,76 - 1,45 (m, 5H), 0,92 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 0,88 (d, J = 6,3 Hz, 3H).
Paso 5: Síntesis de N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2 -il1-4-metox¡-1H-indol-2-carboxamida (4).
Se añadió a una mezcla a 0 °C de C23 (500 mg, 1,09 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (565 mg, 4,37 mmol) en tetrahidrofurano (8 ml), 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfina 2,4,6-trióxido (solución al 50 % en peso en acetato de etilo; 2,78 g, 4,37 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 50 °C durante 3 horas, se concentró in vacuo, se diluyó con agua (5 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 * 5 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo; cromatografía en gel de sílice (Eluyente: 10:1 diclorometano / metanol) seguido de una purificación por HPLC en fase inversa (Columna: YMC-Actus Triart C18, 50 * 250 mm, 7 pm; Fase móvil A: agua que contenía 0,225 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 18 % a 58 % B; Caudal: 25 ml/minuto) proporcionó N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il1-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (4) como un sólido amarillo. Producción: 130 mg, 0,296 mmol, 27 %. LCMS m/z 440,2 [M+H]+. 1H RMN(400 MHz, DMSO-de) 511,58 (br s, 1H), 8,90 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,47 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,71 (br s, 1H), 7,38 - 7,35 (m, 1H), 7,09 (dd, componente del sistema ABX, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,00 (d, componente del cuarteto A b , J = 8,2 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,02 -4,93 (m, 1H), 4,49 -4,40 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,19 -3,05 (m, 2H), 2,41 -2,29 (m, 1H), 2,20 -2,06 (m, 2H), 1,85 - 1,62 (m, 4H), 1,58 - 1,47 (m, 1H), 0,94 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,3 Hz, 3H).
Síntesis Alternativa del Ejemplo 4 (solo para referencia)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il1-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (4)
Figure imgf000041_0001
Paso 1: Síntesis de N-[(4-metoxi-1H-indol-2-il)carbonil1-L-leucil-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1-L-alaninamida (C23). Se añadió una solución de amoníaco en metanol (7,0 M; 21 ml, 150 mmol) a una solución de C21 (500 mg, 1,06 mmol) en metanol (2,0 ml). Después de agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 6 horas, se añadió de nuevo una solución de amoníaco en metanol (7,0 M; 7,0 ml, 49 mmol) y se continuó agitando durante la noche. Se añadió de nuevo una solución de amoníaco en metanol (7,0 M; 7,0 ml, 49 mmol) y se continuó la agitación durante 24 horas, tras lo cual se realizó un tratamiento final con una solución de amoníaco en metanol (7,0 M; 7,0 ml, 49 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante un día más, momento en el que se concentró in vacuo. El residuo se combinó con el producto de una reacción similar (350 mg de los 512 mg aislados) realizada con C21 (500 mg, 1,06 mmol), y la mezcla se disolvió repetidamente en acetato de etilo (5 * 10 ml) y se concentró bajo presión reducida, proporcionando C23 (835 mg). Este material se utilizó directamente en el siguiente paso. LCMS m/z 458,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, m etano l^) 57,29 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,15 (dd, componente del sistema ABX, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,03 (br d, componente del cuarteto AB, J = 8,3 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,59 (dd, J = 9,7, 5,0 Hz, 1H), 4,45 (dd, J = 11,3, 4,2 Hz, 1 H), 3,93 (s, 3H), 3,34 - 3,19 (m, 2 H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico de disolvente), 2,57 - 2,47 (m, 1H), 2,31 (dddd, J = 12,6, 8,5, 6 ,8 , 2,8 Hz, 1H), 2,15 (ddd, J = 14,0, 11,4, 4,6 Hz, 1H), 1,88 - 1,67 (m, 5H), 1,02 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 0,98 (d, J = 6,1 Hz, 3H).
Paso 2: Síntesis de N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2 -il1-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (4).
Se enfrió una solución de C23 (del paso anterior; 835 mg, <1,78 mmol) y 1H-imidazol (323 mg, 4,74 mmol) en una mezcla de piridina (4 ml) y diclorometano (4 ml) a -35 °C utilizando un baño de acetonitrilo/hielo seco, tras lo cual se añadió oxicloruro de fósforo (0,956 ml, 10,2 mmol) en forma de gotas durante 5 minutos. La reacción se agitó a una temperatura entre -30 °C y -20 °C durante aproximadamente 1,5 horas, después se trató con ácido clorhídrico (1 M; 50 ml) y se agitó durante 1 hora. Tras la extracción con diclorometano (3 * 60 ml), las capas orgánicas resultantes se combinaron, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. El residuo se combinó con el 4 purificado de un lote diferente (75 mg, 0,17 mmol) y se sometió a cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 5 % de metanol en acetato de etilo) para proporcionar 4 como sólido (800 mg). Este material se combinó con el producto (80 mg) de una reacción similar realizada con C23 (161 mg, 0,352 mmol); el material resultante se agitó en éter dietílico (25 ml) durante 3 días, tras lo cual se filtró. La torta de filtración se lavó con una mezcla de éter dietílico y heptano (1:1, 4 * 2 ml) para obtener N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4-metil-1oxopentan-2-il]-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (4) como sólido. Rendimiento combinado: 519 mg, 1,18 mmol, aproximadamente el 50 % en 2 pasos. LCMS m /z 440,5 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 511,57 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 8,90 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 8,46 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,37 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,10 (dd, componente del sistema ABX, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,00 (d, componente del cuarteto AB, J = 8,2 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,03 -4,92 (m, 1H), 4,51 - 4,39 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,19 - 3,05 (m, 2H), 2,42 - 2,30 (m, 1H), 2,20 - 2,06 (m, 2H), 1,80 (ddd, J = 13,2, 9,3, 6,7 Hz, 1H), 1,75 - 1,63 (m, 3H), 1,58 - 1,47 (m, 1H), 0,94 (d, J = 6,2 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,2 Hz, 3H).
Ejemplos 5 y 6 (solo como referencia)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil)amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il1-4-metoxi-3-(trifluorometil)-1H-indol-2-carboxamida (5) y N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2 -oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il1-4-metoxi-7-(trifluorometil)-1H-indol-2-carboxamida (6 )
Figure imgf000042_0001
Se añadieron secuencialmente a un vial de liberación de presión que contenía trifluorometanosulfinato de zinc(II) (98 %, 2,44 mg, 7,21 pmol), una solución de 4 (0,79 mg, 1,8 pmol) en dimetilsulfóxido (60 pl), ácido trifluoroacético (0,56 pl, 7,3 pmol) e hidroperóxido de fe/f-butilo(70 % en agua; 1,25 ul, 9,03 pmol). El vial se tapó y se calentó a 50 °C durante la noche, tras lo cual la mezcla de reacción se enfrió y se diluyó con acetonitrilo y una solución de ácido fórmico al 1% en agua, hasta un volumen de aproximadamente 2 a 3 ml. La composición final del disolvente era tal que la mezcla resultante parecía clara, generalmente aproximadamente 20 % y aproximadamente 30 % de acetonitrilo. La mezcla completa se sometió a una HPLC en fase inversa (Columna: Phenomenex Luna C18,10 x 250 mm, 10 pm; Fase móvil A: ácido acético al 0,5 % en agua; Fase móvil B: 9:1 acetonitrilo / metanol; Gradiente: 15 % B durante 5 minutos, luego 15 % a 70 % gradiente lineal B durante 84 minutos, luego 70% a 95 % B durante 1 minuto, luego 95 % B durante 9 minutos; Caudal: 2 ml/min). El eludido se pasó por un detector UV/VIS y luego se dividió en una proporción aproximada de 15:1 entre un colector de fracciones y un espectrómetro de masas con trampa de iones. Las fracciones se recogieron cada 20 segundos y las que podían contener productos de interés se evaluaron mediante UHPLC-UV-HRMS antes de agruparlas. Los dos productos eludieron aproximadamente a los 71 y 75 minutos. El primer producto eludido fue 5 {N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il]-4-metoxi-3-(trifluorometil)-1H-indol-2-carboxamida}, y el segundo eludido fue 6 {N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4-metil -1-oxopentan-2-il]-4-metoxi-7-(trifluorometil)-1H-indol-2-carboxamida}.
5 - Rendimiento: 0,101 mg, 0,199 pmol, 11 %. MS de alta resolución m /z 508,2171 [M+H]+; calculado para C24H29F3N5O4, 508,2172. 1 H RMN (600 MHz, DMSO-CÍ 6 ) 5 12,22 (br s, 1H), 9,01 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 8,96 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,73 (s, 1H), 7,21 (dd, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,08 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,03 - 4,95 (m, 1H), 4,49 - 4,40 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,22 - 3,08 (m, 2H), 2,43 - 2,34 (m, 1H), 2,23 - 2,10 (m, 2H), 1,82 (ddd, J = 13,7, 9,3, 6 ,8 Hz, 1H), 1,78 - 1,66 (m, 2H), 1,62 (ddd, J = 14,6, 9,7, 5,2 Hz, 1H), 1,49 (ddd, J = 13,8, 8 ,8 , 5,5 Hz, 1H), 0,97 -0,88 (m, 6 H). Tiempo de retención: 8,43 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Phenomenex Kinetex XB-C18, 2,1 x 100 mm, 2,6 pm; Fase móvil A: agua que contenía 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 5 % B durante 0,5 minutos, luego 5 % a 70 % B durante 10,5 minutos, luego 70 % a 95 % B durante 2 minutos; Caudal: 0,4 ml/min).
6 - Rendimiento: 14,7 pg, 0,029 pmol, 1,6 %. MS de alta resolución m /z 508,2178 [M+H]+; calculado para C24H29F3N5O4, 508,2172. 1 H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 5 11,47 (br s, 1H), 9,00 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 8,79 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,55 (d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,35 (s, 1H), 6,72 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 5,02 - 4,94 (m, 1H), 4,56 - 4,48 (m, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,18 -3,05 (m, 2H), 2,39 -2,30 (m, 1H), 2,18 -2,08 (m, 2H), 1,86 - 1,77 (m, 1H), 1,75 - 1,64 (m, 3H), 1,61 - 1,52 (m, 1H), 0,95 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,1 Hz, 3H). Tiempo de retención: 8,92 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 5).
Síntesis Alternativa del Ejemplo 6 (solo para referencia)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil)amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il1-4-metoxi-7-(trifluorometiD-1H-indol-2-carboxamida (6)
Figure imgf000043_0001
Paso 1: Síntesis del ácido 4-metoxi-1H-indol-2-carboxílico trifluorometilado (C24).
Se trató una mezcla de ácido 4-metoxi-1H-indol-2-carboxílico (100 mg, 0,523 mmol) y trifluorometanosulfinato de zinc(N) (120 mg, 0,362 mmol) con sulfóxido de dimetilo (1,5 ml) seguido de ácido trifluoroacético (56 pl, 0,727 mmol). Después de que la mezcla de reacción se enfriara a 0 °C, se añadió hidroperóxido de fed-butilo (70 % en agua; 143 pl, 1,03 mmol), y se continuó agitando a 0 °C durante 20 minutos, y después a temperatura ambiente durante 25 minutos. A continuación, la mezcla de reacción se calentó a 52 °C durante 2 horas, tras lo cual se enfrió a temperatura ambiente y se trató, gota a gota, con una solución acuosa de bicarbonato sódico hasta que cesó el burbujeo. Tras la partición de la mezcla resultante entre una solución acuosa de bicarbonato sódico y acetato de etilo, se extrajo la capa acuosa una vez con acetato de etilo y se desecharon las capas orgánicas. A continuación, la capa acuosa se acidificó a pH 7 con ácido clorhídrico 1 M; se añadió acetato de etilo y se agitó la mezcla mientras se ajustaba el pH a 1 mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M. Tras agitar la mezcla bifásica durante 10 minutos, la capa orgánica se lavó con una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secó sobre sulfato de magnesio, se filtró y se concentró in vacuo. Por análisis de LCMS, el residuo (115 mg) contenía una mezcla de material de partida y productos monotrifluorometilados, así como una pequeña cantidad de material di-trifluorometilado. La mayor parte de esta mezcla se utilizó en el Paso 4. Producción: 115 mg, < 0,4 mmol. LCMS m/z 189,8, 257,8, 325,8 (menor) [M-H]-.1H RMN (400 MHz, metanol-d4), picos característicos de los tres componentes principales: 67,07 (br d, J = 8,4 Hz), 7,02 (br d, J = 8,4 Hz), 6,81 (d, J = 7,8 Hz), 6,66 (d, J = 7,8 Hz), 6,51 (d, J = 7,7 Hz), 4,06 (s, -OMe), 3,93 (s, -OMe), 3,92 (s, -OMe).
Paso 2: Síntesis de N-(tert-butox¡carbon¡lo)-L-leuc¡l-3-[(3S)-2-oxop¡rrolid¡n-3-¡l1-L-alan¡nam¡da (C25).
Se añadió A una solución a 0 °C de N-(tert-butoxicarbonil)-L-leucil-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]-L-alaninato de metilo (véase Prior, A.M., et al., Bioorg. Med. Chem. Lett.2013, 23, 6317-63201,5 g, 3,8 mmol) en metanol (5 ml) una solución de amoníaco en metanol (7 M; 43 ml, 300 mmol). Después de tapar el recipiente de reacción, la mezcla de reacción se agitó durante la noche a temperatura ambiente. Se añadió de nuevo una solución de amoníaco en metanol (7 M; 10,7 ml, 74,9 mmol) y se dejó que la reacción continuara a temperatura ambiente durante 3 días, tras lo cual se concentró in vacuo. El residuo se recogió dos veces en éter dietílico (40 ml) y se concentró bajo presión reducida, obteniéndose C25 como sólido blanco. Producción: 1,46 g, 3,80 mmol, cuantitativo. LCMS m/z 385,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 68,29 -8,17 (m, 1H), 7,23 (br s, 1H), 5,64 (br s, 1H), 5,32 (br s, 1H), 5,02 (d, J = 6,1 Hz, 1H), 4,50 - 4,38 (m, 1H), 4,05 (ddd, J = 10,3, 6,3, 4,5 Hz, 1H), 3,44 - 3,32 (m, 2H), 2,51 - 2,35 (m, 2H), 2,16 - 1,98 (m, 2H), 1,97 - 1,83 (m, 1H), 1,76 - 1,6 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico de agua), 1,49 - 1,39 (m, 1H), 1,45 (s, 9H), 0,94 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,94 (d, J = 6,3 Hz, 3H).
Paso 3: Síntesis de L-leuc¡l-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1-L-alan¡nam¡da, sal de metanosulfonato (C26).
Se añadió lentamente una solución de ácido metanosulfónico (0,861 ml, 13,3 mmol) en 1,1,1,3,3-hexafluoropropan-2-ol (5 ml) a una solución de C25 (5,1 g, 13 mmol) en 1,1,1,3,3-hexafluoropropan-2-ol (43 ml). Después de 30 minutos, el análisis LCMS indicó conversión a C26: LCMS m/z 285,3 [M+H]+. La mezcla de reacción se concentró in vacuo, luego se tomó en las siguientes mezclas de disolventes y se reconcentró: una mezcla de acetonitrilo y acetato de etilo (1:1, 2 * 20 ml), luego una mezcla de acetato de etilo y heptano, (1:1, 2 * 20 ml). El sólido resultante se azeotrópico dos veces con una mezcla de acetonitrilo y acetato de etilo, y luego dos veces con una mezcla de acetato de etilo y heptano, obteniéndose C26 como un sólido blanco (6,05 g) que retuvo los disolventes por análisis de 1H RMN. Rendimiento: se supone cuantitativo. 1H RMN (600 MHz, metanol-d4) 6 4,50 (dd, J = 10,7, 4,9 Hz, 1H), 3,91 (dd, J = 8 ,6 , 5,5 Hz, 1H), 3,39 - 3,28 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico de solvente), 2,70 (s, 3H), 2,53 -2,46 (m, 1H), 2,43 -2,36 (m, 1H), 2,14 (ddd, J = 14,0, 10,7, 5,0 Hz, 1H), 1,95 - 1,86 (m, 1H), 1,82 -1,71 (m, 3H), 1,70 - 1,64 (m, 1H), 1,02 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 1,01 (d, J = 6,1 Hz, 3H).
Paso 4: Síntesis de N-{r4-metox¡-7-(tr¡fluoromet¡l)-1H-¡ndol-2-¡llcarbon¡l}-L-leuc¡l-3-r(3S)-2-oxop¡rrolid¡n-3-¡ll-L-alaninamida (C27).
Se enfrió una solución de C24 (del paso 1; 101 mg, <0,35 mmol) y C26 (del paso anterior; 204 mg, <0,438 mmol) en acetonitrilo (1.7 ml) y N,N-dimetilformamida (1 ml) a 0 °C y se trató con hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 163 mg, 0,429 mmol) seguido de 4-metilmorfolina (0,129 ml, 1,17 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 40 minutos, tras lo cual se añadió lentamente una mezcla 1:1 de solución acuosa de bicarbonato sódico y hielo hasta que se formó un precipitado turbio. A continuación, se añadió acetato de etilo y se agitó la mezcla bifásica durante 5 minutos. La capa acuosa se extrajo una vez con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro de sodio, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron in vacuo. La purificación mediante cromatografía en gel de sílice se llevó a cabo dos veces (Gradiente #1: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano; Gradiente #2: 5 % a 10 % de metanol en diclorometano) para obtener C27. La regioquímica de este material se confirmó mediante experimentos de RMN 2D. Producción: 19 mg, 36 pmol, aproximadamente 10 %. LCMS m/z 526,5 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-d4) 67,53 (br d, J = 8,2 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 6,68 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,60 (dd, J = 9,5, 5,1 Hz, 1H), 4,45 (dd, J = 11,4, 4,2 Hz, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,3 - 3,21 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico de solvente), 2,60 - 2,49 (m, 1H), 2,36 - 2,26 (m, 1H), 2,15 (ddd, J = 14,1, 11,5, 4,6 Hz, 1H), 1,89 - 1,68 (m, 5H), 1,03 (d, J = 6,1 Hz, 3H), 0,99 (d, J = 6,2 Hz, 3H).
Paso 5: Síntesis de N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2 -il1-4-metoxi-7-(trifluorometil)-1H-indol-2-carboxamida (6 ).
Se añadió N-(trietilamoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 17,2 mg, 72,2 ^mol) a una solución de C27 (19 mg, 36 |jmol) en una mezcla de diclorometano (0,5 ml) y acetonitrilo (0,2 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora, se diluyó con acetato de etilo y se lavó con una mezcla 1 :1 de solución acuosa de bicarbonato sódico y hielo. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo, y las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, y se pasaron por un cartucho de extracción en fase sólida lleno de sulfato de magnesio. La concentración del filtrado in vacuo proporcionó un residuo, que se purificó mediante HPLC en fase inversa (Columna: Waters Sunfire C18, 19 x 100 mm, 5 ^m; Fase móvil A: agua que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Gradiente: 25 % a 65 % B durante 8,5 minutos, luego 65 % a 95 % B durante 0,5 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto; Caudal: 25 ml/minuto) para proporcionar N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il]-4-metoxi-7-(trifluorometil)-1H-indol-2-carboxamida (6). Rendimiento: 4,3 mg, 8,5 ^mol, 24 %. LCMS m/z 508,6 [M+H]+. Tiempo de retención: 2,83 minutos (Columna: Waters Atlantis C18, 4,6 x 50 mm, 5 ^m; Fase móvil A: agua que contenia 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenia 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Gradiente: 5 % a 95 % B durante 4,0 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto; Caudal: 2 ml/minuto).
Ejemplo 7 (solo como referencia)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2 -il1-3-metilimidazo[2,1-b1[1,31tiazol-2-carboxamida (7)
Figure imgf000045_0001
Paso 1: Síntesis de N2-(tert-butoxicarbonil)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-4-metil-L-leucinamida (C28).
Se enfrió una solución de C17 (560 mg, 1,41 mmol) y 1H-imidazol (249 mg, 3,65 mmol) en una mezcla de piridina (3 ml) y diclorometano (3 ml) a -35 °C utilizando un baño de acetonitrilo / hielo seco. Se añadió oxicloruro de fósforo (0,74 ml, 7,94 mmol) en forma de gota, durante 4 minutos, seguido de diclorometano adicional (2 ml), y se continuó agitando a -30 °C a -20 °C. Después de 1 hora, la mezcla de reacción se diluyó con diclorometano (2 ml). Después de aproximadamente 1,5 horas, se añadió ácido clorhídrico (1 M; 30 ml); la mezcla resultante se agitó durante 30 minutos y luego se extrajo con diclorometano (2 x 60 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo, obteniéndose C28 como sólido. Producción: 492 mg, 1,29 mmol, 91 %. LCMS m/z 381,4 [M+H1+. 1H RMN (400 MHz, metanol-^) 55,03 (dd, J = 10,4, 5,7 Hz, 1H), 4,09 (dd, J = 8,7, 4,2 Hz, 1H), 3,39 - 3,25 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico del disolvente), 2,64 - 2,52 (m, 1H), 2,40 - 2,27 (m, 2H), 1,97 - 1,78 (m, 2H), 1,70 (dd, componente del sistema a Bx , J = 14,3, 4,1 Hz, 1H), 1,54 (dd, componente del sistema ABX, J = 14,3, 8,7 Hz, 1H), 1,45 (s, 9H), 1,00 (s, 9H).
Paso 2: Síntesis de N-[(2S)-1-({(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}am¡no)-4.4-d¡met¡l-1-oxopentan -2-¡l1-3-met¡l¡m¡dazo[2.1-b1f1.31t¡azol-2-carboxam¡da (7).
Se añad¡ó una soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en 1,4-d¡oxano (4.0 M; 0.3 ml. 1.2 mmol) a una soluc¡ón de C28 (100 mg. 0.263 mmol) en una mezcla de aceton¡tr¡lo (1.5 ml) y metanol (1.0 ml). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos. tras lo cual se trató con 4-met¡lmorfol¡na (0.144 ml. 1.31 mmol). Tras el¡m¡nar los d¡solventes in vacuo, el res¡duo se resuspend¡ó dos veces en una mezcla de d¡clorometano y heptano (1 :1.
2 x 10 ml) y se concentró bajo pres¡ón reduc¡da. El res¡duo se comb¡nó con ác¡do 3-met¡l¡m¡dazo[2.1-b1[1.31t¡azol-2-carboxíl¡co (47.9 mg. 0.263 mmol) en N.N-d¡met¡lformam¡da (3.3 ml). se enfr¡ó a 0 °C y se trató con hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotr¡azol-1-¡l)-N,N.N'.N'-tetramet¡luron¡o (HATU; 99.9 mg. 0.263 mmol) segu¡do de una soluc¡ón de 4-met¡lmorfol¡na (72 pL. 0.655 mmol) en d¡clorometano (0.2 ml). Tras ag¡tar la mezcla de reacc¡ón a 0 °C durante aprox¡madamente 2 horas. se trató a 0 °C con ác¡do clorhídr¡co (1 M; 30 ml). y la mezcla resultante se extrajo con d¡clorometano (2 x 60 ml). A cont¡nuac¡ón. la capa acuosa se bas¡f¡có hasta pH 9 med¡ante la ad¡c¡ón de una soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato sód¡co. tras lo cual se extrajo con d¡clorometano (3 x 60 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con soluc¡ón acuosa saturada de cloruro amón¡co (50 ml). se secaron sobre sulfato sód¡co. se f¡ltraron y se concentraron in vacuo. El anál¡s¡s de 1H RMN de este mater¡al ¡nd¡có la presenc¡a de un epímero menor. que se supone que surge de la racem¡zac¡ón parc¡al en el centro que lleva el n¡tr¡lo. El producto pr¡nc¡pal se a¡sló med¡ante cromatografía en gel de síl¡ce (Grad¡ente: 0 % a 20 % de metanol en acetato de et¡lo). proporc¡onando N-[(2S)-1-({(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}am¡no)-4.4-d¡met¡l-1-oxopentan-2-¡l1-3-met¡l¡m¡dazo[2.1-b1[1.3]t¡azol-2-carboxam¡da(7) como sól¡do. Producc¡ón: 56 mg. 0.13 mmol. 49 %. LCMS m/z 445.4 [M+H]+. 1H RMN(400 MHz. m etano l^) 8 7.73 (d. J = 1.6 Hz. 1H). 7.37 (d. J = 1.6 Hz. 1H). 5.04 (dd. J = 10.3. 5.9 Hz. 1H). 4.53 (dd. J = 7.8. 5.0 Hz. 1H). 3.36 - 3.24 (m. 2H; supuesto; parc¡almente oscurec¡do por el p¡co del d¡solvente). 2.70 (s.
3H). 2.67 -2.57 (m. 1H). 2.38 -2.27 (m. 2H). 1.93 (ddd. J = 14.0. 9.4. 6.0 Hz. 1H). 1.88 - 1.78 (m. 3H). 1.03 (s. 9H).
Ejemplos 8 y 9 (solo como referencia)
N-{1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-N2-[c¡clohex¡l(metox¡)acet¡l1-4-met¡l-L-leuc¡nam¡da. DIAST-1 (8 ) y N-{1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-N2-[c¡clohex¡l(metox¡)acet¡l1-4-met¡l-L-leuc¡nam¡da. DIAST-2 (9)
Figure imgf000046_0001
Paso 1: Síntes¡s de N-{1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-4-met¡l-L-leuc¡nam¡da (C29).
Se añad¡ó a una soluc¡ón de C28 (114 mg. 0.300 mmol) en una mezcla de aceton¡tr¡lo (1 ml) y metanol (1 ml) una soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en 1.4-d¡oxano (4 M; 0.4 ml. 1.6 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 30 m¡nutos. tras lo cual se añad¡ó 4-met¡lmorfol¡na (0.165 ml. 1.50 mmol). llevando el pH a 7 a 8. Después de el¡m¡nar los d¡solventes in vacuo, el res¡duo se recog¡ó dos veces en una mezcla de acetato de et¡lo y heptano (1:1,2 x 10 ml) y se concentró bajo presión reducida para proporcionar C29 como sólido (269 mg); de acuerdo con el análisis de 1H r Mn , éste consistía en una mezcla de epímeros, presumiblemente en el centro que lleva el nitrilo, en una relación de 2-3 a 1. Una porción de este material se utilizó en el siguiente paso. LCMS m /z 281,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-cf4), picos característicos: 5 [5,11 (dd, J = 8,8, 7,3 Hz, mayor) y 5,01 (dd, J = 6,5, 6,5 Hz, menor), total 1H], [2,75 - 2,65 (m, menor) y 2.64 - 2,54 (m, mayor), total 1H], 2,48 - 2,38 (m, 1H), 2,30 - 2,20 (m, 1H), 2,06 - 1,83 (m, 3H), 1,64 (dd, J = 14,1,4,8 Hz, 1H), [1,04 (s, mayor), 1,01 (s, menor), total 9H].
Paso 2: Síntesis de N-{1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-N2-[ciclohexil(metoxi)acetil1-4-metil-L-leucinamida, DIAST-1 (8) y N-{1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-N2-[ciclohexil(metoxi)acetil1-4-metil-L-leucinamida, DIAST-2 Í9L
Se añadió a una solución a 0 °C de C29 (del paso anterior; 83,4 mg, <93 ^mol) y ácido ciclohexil(metoxi)acético (17,2 mg, 99,9 ^mol) en N,N-dimetilformamida (1 ml), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (Ha TU; 38,0 mg, 0 ,100 mmol), seguido de una solución de 4-metilmorfolina (30,8 ^L, 0,280 mmol) en diclorometano (0,2 ml). Después de agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante aproximadamente 2 horas, se diluyó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (3 ml) a 0 °C y se extrajo con diclorometano (4 x 4 ml). Las capas orgánicas combinadas se concentraron in vacuo; mediante el análisis de LCMS, el residuo estaba formado por dos componentes, que se supone que corresponden a los dos epímeros del centro que llevan el nitrilo. Estos diastereómeros se separaron mediante HPLC en fase inversa (Columna: Waters XBridge C18, 19 x 100 mm, 5 ^m; Fase móvil A: agua; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 5 % a 95 % B durante 8,54 minutos, luego 95 % B durante 1,46 minutos; Caudal: 25 ml/minuto). El diastereómero de primera liberación se designó como 8 (N-{1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-N2-[ciclohexil(metoxi)acetil]-4-metil-L-leucinamida, DIAST-1), y el diastereómero de segunda elusión como 9 fN-{1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-N2-[ciclohexil(metoxi)acetil1-4-metil-L-leucinamida, DIAST-2).
8 - Rendimiento: 12,8 mg, 29,4 ^mol, 32 % en 2 pasos. LCMS m /z 435,6 [M+H1+. Tiempo de retención: 2,63 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Waters Atlantis C18, 4,6 x 50 mm, 5 ^m; Fase móvil A: agua que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v). Gradiente: 5 % a 95 % B durante 4,0 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto. Caudal: 2 ml/minuto).
9 - Rendimiento: 10 mg, 23,0 ^mol, 25 % en 2 pasos. LCMS m /z 435,6 [M+H1+. Tiempo de retención: 2,72 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 8).
Ejemplo 10 (solo como referencia)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2-il1-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (10)
Figure imgf000047_0001
Paso 1: Síntesis de N-[(4-metoxi-1H-indol-2-il)carbonil1-4-metil-L-leucil-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1-L-alaninamida (C30).
Se añadió a una solución a 0 °C de C18 (200 mg, <0,46 mmol) y ácido 4-metoxi-1H-indol-2-carboxílico (88,2 mg, 0,460 mmol) en acetonitrilo (2 ml), O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio hexafluorofosfato (Ha TU; 175 mg, 0,460 mmol), seguido de una solución de 4-metilmorfolina (0,127 ml, 1,16 mmol) en acetonitrilo (0,2 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 2,5 horas, tras lo cual se diluyó con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (30 ml) a 0 °C, y se extrajo con diclorometano (50 ml). La capa orgánica se lavó con ácido clorhídrico (1 M; 30 ml) y las capas acuosas se extrajeron con diclorometano (60 ml). Tras secar las capas orgánicas combinadas sobre sulfato sódico, filtrar y concentrar in vacuo, el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 30% de metanol en acetato de etilo) para proporcionar C30 como sólido. Producción: 148 mg, 0,314 mmol, 68 % en 2 pasos. LCMS m/z 472,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-^) 57,25 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,15 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 7,03 (br d, componente del cuarteto AB, J = 8,3 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 4,65 (dd, J = 9,2, 3,4 Hz, 1H), 4,44 (dd, J = 11,2, 4,2 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,29 -3,15 (m, 2H), 2,54 -2,44 (m, 1H), 2,29 (dddd, J = 12,6, 8,6, 7,0, 2,7 Hz, 1H), 2,14 (ddd, J = 14.0, 11,2, 4,6 Hz, 1H), 1,89 (dd, componente del sistema ABX, J = 14,5, 3,4 Hz, 1H), 1,85 - 1,74 (m, 3H), 1,02 (s, 9H).
Paso 2: Síntesis de N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentano -2-il1-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (10).
Se enfrió una solución de C30 (143 mg, 0,303 mmol) y 1H-imidazol (53,7 mg, 0,789 mmol) en una mezcla de piridina (1 ml) y diclorometano (1 ml) en un baño de acetonitrilo / hielo seco (-35 °C). Se añadió oxicloruro de fósforo (0,159 ml, 1,71 mmol) en forma de gotas durante 5 minutos, y la mezcla de reacción se agitó entre -30 °C y -20 °C durante 2 horas, tras lo cual se trató con ácido clorhídrico (1 M; 30 ml), se agitó durante 20 minutos y se extrajo con diclorometano (2 x 60 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía sobre gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en acetato de etilo) proporcionó N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2-il]-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (l0 ) como sólido. Producción: 68 mg, 0,15 mmol, 50 %. LCMS m /z 454,5 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol-cf4) 5 7,24 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 7,14 (dd, J = 8, 8 Hz, 1H), 7,02 (br d, componente del cuarteto AB, J = 8,3 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 5,03 (dd, J = 10,1,6,0 Hz, 1H), 4,64 (dd, J = 8,6, 4,3 Hz, 1H), 3,93 (s, 3H), 3,30 -3,17 (m, 2H), 2,63 -2,52 (m, 1H), 2,37 - 2,21 (m, 2H), 1,95 - 1,74 (m, 4H), 1,03 (s, 9H).
Ejemplo 11 (solo como referencia)
N2-f(4-Bromo-1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carbonin-N-{(1S)-1-ciano-2-f(3S)-2-oxopirrolidin-3-inetil}-4-metil-L-leucinamida (11)
Figure imgf000048_0001
Se añadió a una suspensión a 0 °C de C18 (43,4 mg, <0,10 mmol) y ácido 4-bromo-1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-carboxílico (23,3 mg, 0,100 mmol) en acetonitrilo (1,0 ml),hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 38,0 mg, 0,100 mmol), seguido de una solución de 4-metilmorfolina (30 ^L, 0,27 mmol) en acetonitrilo (0,2 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante aproximadamente 80 minutos, se añadió N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 71,5 mg, 0,300 mmol), y se continuó la agitación. Después de aproximadamente 2,75 horas, se añadió de nuevo N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 71,5 mg, 0,300 mmol), y se dejó que la reacción prosiguiera durante 1,5 horas, tras lo cual se trató con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (3 ml) a 0 °C, y se extrajo con diclorometano (2 x 8 ml). Las capas orgánicas combinadas se concentraron in vacuo, luego se disolvieron en acetonitrilo (4 ml) y se concentraron de nuevo utilizando un evaporador Genevac para proporcionar el producto bruto (138 mg). Una parte de este material (80 mg) se purificó mediante HPLC en fase inversa (Columna: Waters Sunfire C18, 19 * 100 mm, 5 |jm; Fase móvil A: agua que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Gradiente: 5 % a 95 % B durante 8,54 minutos, luego 95 % B durante 1,46 minutos; Caudal: 25 ml/minuto) para proporcionar N2-[(4-bromo-1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)carbonil]-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S )-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-metil-L-leucinamida (11). Rendimiento: 24,7 mg, 49,8 jmol, 86 % en 2 pasos. LCMS m/z 495,5 (patrón isotópico de bromo observado) [M+H]+. Tiempo de retención: 2,48 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Waters Atlantis C18, 4,6 * 50 mm, 5 jm ; Fase móvil A: agua que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v). Gradiente: 5 % a 95 % B durante 4,0 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto. Caudal: 2 ml/minuto).
Ejemplo 12 (solo como referencia)
N-{(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-N2-[(3.3-d¡fluorociclobut¡l)acet¡l1-4-met¡l-L-leuc¡nam¡da (12)
Figure imgf000049_0001
Paso 1: Síntesis de 4-met¡l-L-leuc¡l-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1-L-alan¡nam¡da, sal de clorhidrato (C18, sal de HCl).
Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4 M; 1,7 ml, 6,8 mmol) a una solución de C17 (260 mg, 0,652 mmol) en acetonitrilo (3 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1,5 horas, tras lo cual se concentró in vacuo, se disolvió repetidamente en una mezcla de diclorometano y heptano (1:1, 3 * 10 ml) y se volvió a concentrar, obteniéndose C18, sal de HCl (242 mg) en forma de cristal. Una porción de este material se utilizó en el siguiente paso. LCMS m/z 299;3 [M+H]+. 1HRMN(400 MHz, m etano l^) 84,53 (dd, J = 10,3, 5,0 Hz, 1H), 3,91 (dd, J = 7,5, 5,4 Hz, 1H), 3,41 - 3,26 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico del disolvente), 2,57 - 2,47 (m, 1H), 2,41 (dddd, J = 12,0, 8,7, 7,0, 3,1 Hz, 1H), 2,15 (ddd, J = 13,9, 10,3, 4,9 Hz, 1H), 2,05 - 1,97 (m, 1H), 1,97 - 1,85 (m, 1H), 1,78 (ddd, J = 14,1, 9,1, 5,0 Hz, 1H), 1,60 (dd, J = 14,3, 5,4 Hz, 1H), 1,01 (s, 9H).
Paso 2: Síntesis de N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-N2-[(3,3 difluorociclobutil)acetil1-4-metil-L-leucinamida (12).
Se trató una pasta de C18, sal de HCl (del paso anterior; 37,2 mg, <0,100 mmol) y ácido (3,3-difluorociclobutílico)acético (15,8 mg, 0,105 mmol) en tetrahidrofurano (1,0 ml) con trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfina (solución al 50% en peso en acetato de etilo; 65,5 jl, 0,110 mmol) y 4-metilmorfolina (27,5 pl, 0,250 mmol). Después de agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante la noche, se calentó a 50 °C durante 4,5 horas, tras lo cual se añadieron de nuevo el trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfina (solución al 50 % en peso en acetato de etilo; 2,2 equivalentes) y 4-metilmorfolina (5 equivalentes). Tras agitar la mezcla de reacción a 50 °C durante 3 días más, se trató con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (3 ml) y se extrajo con diclorometano (4 x 4 ml). Las capas orgánicas combinadas se concentraron in vacuo y se purificaron mediante HPLC en fase inversa (Columna: Waters XBridge C18, 19 x 100 mm, 5 pm; Fase móvil A: agua; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 20 % a 40 % B durante 8,5 minutos, luego 40 % a 95 % B durante 0,5 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto; Caudal: 25 ml/minuto) para obtener N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-N2-[(3,3-difluorociclobutil)acetil]-4-metil-L-leucinamida(12). Producción: 10,1 mg, 24,5 pmol, 24 % en 2 pasos. Lc Ms m/z 413,5 [M+H]+. Tiempo de retención: 1,96 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Waters Atlantis C18, 4,6 x 50 mm, 5 pm; Fase móvil A: agua que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v). Gradiente: 5 % a 95 % B durante 4,0 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto. Caudal: 2 ml/minuto).
Ejemplo 13
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil1-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxamida (13)
Figure imgf000050_0001
Paso 1: Síntesis de (1R.2S.5S)-3-[N-(tert-butox¡carbon¡l)-3-met¡l-L-val¡l1-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxilato de metilo (C31).
Se añad¡ó hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotr¡azol-1-¡l)-N.N.N'.N'-tetramet¡luron¡o (HATU; 7.92 g. 20.8 mmol) a una mezcla a 0 °C de N-(tert-butox¡carbon¡l)-3-met¡l-L-val¡na (4.38 g. 18.9 mmol) y (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexano-2-carbox¡lato de met¡lo. sal de clorh¡drato (3.9 g. 19 mmol) en N.N-d¡met¡lformam¡da( 95 ml). Tras ag¡tar la mezcla de reacc¡ón durante 5 m¡nutos. se añad¡ó N.N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (8.25 ml. 47.4 mmol); se cont¡nuó ag¡tando a 0 °C durante 2 horas. tras lo cual se añad¡ó una soluc¡ón acuosa de ác¡do cítr¡co (1 N. 20 ml) y agua (40 ml). La mezcla resultante se ag¡tó durante 2 m¡nutos y luego se d¡luyó con acetato de et¡lo (250 ml). La capa orgán¡ca se lavó con agua (3 * 150 ml) y con soluc¡ón acuosa saturada de cloruro sód¡co. se secó sobre sulfato sód¡co. se f¡ltró y se concentró in vacuo. Pur¡f¡cac¡ón med¡ante cromatografía en gel de síl¡ce (Grad¡ente: 0% a 100 % de acetato de et¡lo en heptano) perm¡t¡ó obtener C31 como un ace¡te. Producc¡ón: 3.60 g. 9.41 mmol. 50 %. 1H RMN (400 MHz. metanol-d4) 86.42 (d. J = 9.7 Hz. <1H; ¡ntercamb¡o ¡ncompleto con d¡solvente). 4.35 (s. 1H). 4.21 (d. J = 9.7 Hz.
1H). 4.02 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 10.4 Hz. 1H). 3.91 (dd. componente del s¡stema A bX. J = 10.3. 5.3 Hz. 1H).
3.73 (s. 3H). 1.57 (dd. componente del s¡stema ABX. J = 7.5. 5.1 Hz. 1H). 1.47 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 7.5 Hz.
1H). 1.41 (s. 9H). 1.07 (s. 3H). 1.02 (s. 9H). 0.93 (s. 3H).
Paso 2: Síntes¡s de ác¡do (1R.2S.5S)-3-[N-(tert-butox¡carbon¡l)-3-met¡l-L-val¡l1-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxíl¡co (C32).
Se añad¡ó una soluc¡ón acuosa de h¡dróx¡do de l¡t¡o (1.0 M; 14.7 mmol. 14.7 ml) en forma de gota a una soluc¡ón a 0 °C de C31 (3.60 g. 9.41 mmol) en una mezcla de tetrah¡drofurano y metanol (1:1. 30 ml). Tras ag¡tar la mezcla de reacc¡ón a 0 °C durante 1 hora. se dejó calentar a temperatura amb¡ente y se ag¡tó durante 1 hora. tras lo cual el anál¡s¡s LCMS ¡nd¡có la convers¡ón a C32: LCMS m/z 367.3 [M-H]-. El ajuste a pH 3 se real¡zó med¡ante la ad¡c¡ón de ác¡do clorhídr¡co 1 M. tras lo cual la mezcla se d¡luyó con agua (30 ml). La capa acuosa se extrajo con acetato de et¡lo (2 * 75 ml). y las capas orgán¡cas comb¡nadas se secaron sobre sulfato de sod¡o. se f¡ltraron y se concentraron bajo pres¡ón reduc¡da para proporc¡onar C32 como un sól¡do blanquec¡no. Producc¡ón: 3.10 g. 8.41 mmol. 89 %. 1H RMN (400 MHz. metanol-d4) 86.39 (d. J = 9.7 Hz. aprox¡madamente 0.5 H; ¡ntercamb¡o ¡ncompleto con el d¡solvente). 4.33 (s. 1H). [4.21 (d. J = 9.6 Hz) y 4.21 (s). total 1H]. 4.01 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 10.5 Hz. 1H). 3.91 (dd. componente del s¡stema ABX. J = 10.4. 5.2 Hz. 1H). 1.56 (dd. componente del s¡stema ABX. J = 7.5. 5.0 Hz. 1H). 1.50 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 7.6 Hz. 1H). 1.42 (s. 9H). 1.07 (s. 3H). 1.02 (s. 9H). 0.93 (s. 3H).
Paso 3: Síntes¡s de {(2S)-1-[(1R.2S.5S)-2-({(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡lo} carbamo¡l)-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexan-3-¡l1-3.3-d¡met¡l-1-oxobutan-2-¡l}carbamato de tert-but¡lo (C33).
Se trató una mezcla a 0 °C de C7 (31.9 mg. <94 pmol) y C32 (34 mg. 92 pmol) en aceton¡tr¡lo (1 ml) se trató con hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotr¡azol-1-¡l)-N.N.N'.N'-tetramet¡luron¡o (h At U. 97 %; 36.2 mg. 92.3 pmol) segu¡do de una soluc¡ón de 4-met¡lmorfol¡na (25 pL. 0.23 mmol) en aceton¡tr¡lo (0.25 ml). Después de ag¡tar la mezcla de reacc¡ón a 0 °C durante aprox¡madamente 1 hora. se d¡luyó con una soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato sód¡co (3 ml) a 0 °C y se extrajo con d¡clorometano (4 * 4 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se concentraron in vacuo para proporc¡onar C33 como una goma (48 mg). La mayor parte de este mater¡al se ut¡l¡zó en el s¡gu¡ente paso. LCMS m/z 504.6 [M+H1+.
Paso 4: Síntes¡s de (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-6.6-d¡met¡l-3-[3- met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (13).
Se preparó una soluc¡ón madre de ác¡do metanosulfón¡co (60 pl) en 1.1.1.3.3.3-hexafluoropropan-2-ol (940 pl). A una soluc¡ón de C33 (del paso anter¡or; 47 mg. <90 pmol) en 1.1.1.3.3.3-hexafluoropropan-2-ol (1 ml) se añad¡ó una porc¡ón de la soluc¡ón madre de ác¡do metanosulfón¡co (0.1 ml; 100 pmol). Después de ag¡tar la mezcla de reacc¡ón a temperatura amb¡ente durante 1 hora. se concentró in vacuo, se recog¡ó en las s¡gu¡entes mezclas de d¡solventes y se reconcentró: una mezcla de aceton¡tr¡lo y acetato de et¡lo (1 :1.2 * 10 ml). y después una mezcla de acetato de et¡lo y heptano (1:1. 2 * 10 ml). El res¡duo se d¡solv¡ó en d¡clorometano (1 ml) y se trató con 4-met¡lmorfol¡na (30.8 pL. 0.280 mmol). segu¡do de anhídr¡do tr¡fluoroacét¡co (0.143 ml. 1.01 mmol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante 40 m¡nutos. tras lo cual se trató con 4-met¡lmorfol¡na (30.8 pl. 0.280 mmol) segu¡da de anhídr¡do tr¡fluoroacét¡co (0.143 ml. 1.01 mmol); después de 30 m¡nutos. se añad¡ó de nuevo 4-met¡lmorfol¡na (30.8 pl. 0.280 mmol). segu¡da de anhídr¡do tr¡fluoroacét¡co (0.143 ml. 1.01 mmol). Después de 15 m¡nutos ad¡c¡onales de ag¡tac¡ón. la mezcla de reacc¡ón se trató con ác¡do clorhídr¡co (1 M; 3 ml). y la mezcla resultante se extrajo con d¡clorometano (3 * 4 ml); las capas orgán¡cas comb¡nadas se concentraron in vacuo y se pur¡f¡caron med¡ante HPLC de fase ¡nversa (Waters Sunf¡re C18. 19 * 100 mm. 5 pm; fase móv¡l A: agua que cont¡ene 0.05% de ác¡do tr¡fluoroacét¡co (v/v); fase móv¡l B: aceton¡tr¡lo que contenía 0.05 % de ác¡do tr¡fluoroacét¡co (v/v). Grad¡ente: 20 % a 60 % B durante 8.5 m¡nutos. luego 60 % a 95 % B durante 0.5 m¡nutos. luego 95 % B durante 1 m¡nuto; Caudal: 25 ml/m¡nuto) para produc¡r (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-6.6-d¡met¡l-3-[3-met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (13). Rend¡m¡ento: 7.5 mg. 15 pmol. 17 % en 2 pasos. LCMS m/z 500.5 [M+H1+. T¡empo de retenc¡ón: 2.66 m¡nutos (Cond¡c¡ones analít¡cas. Columna: Waters Atlant¡s dC18. 4.6 * 50 mm. 5 pm; Fase Móv¡l A: 0.05 % de ác¡do tr¡fluoroacét¡co en agua (v/v); Fase móv¡l B: 0.05 % de ác¡do tr¡fluoroacét¡co en acetonitrilo (v/v); Gradiente: 5,0% a 95 % B durante 4,0 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto; Caudal: 2 ml/minuto).
Síntesis Alternativa del Ejemplo 13, disolvente de metil ferf-butil éter; generación de 13, disolvente de metil tert-butil éter, Forma Sólida 2
(1R,2S,5S)-N-((1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da, solvato de éter de tert-butilo de metilo (13, solvato de éter de tert-butilo de metilo), Forma Sólida 2
Figure imgf000052_0001
Figure imgf000053_0001
Paso 1: Síntesis de carbamato de {(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llpropan-2-¡l} de tert-butilo (C5). Este exper¡mento se llevó a cabo en 2 lotes paralelos. Se añad¡ó una soluc¡ón de amoníaco en metanol (7 M; 2,4 L, 17 mol) al N-(tert-butox¡carbon¡l)-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]-L-alan¡nato de met¡lo (600 g, 2,10 mol) y la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 25 °C durante 40 horas. La concentrac¡ón in vacuo y la comb¡nac¡ón de los 2 lotes proporc¡onaron C5 como un sól¡do amar¡llo. Rend¡m¡ento comb¡nado: 1,10 kg, 4,05 mol, 96 %. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 87,63 (br s, 1H), 7,29 (br s, 1H), 7,01 (br s, 1H), 6,89 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 3,96 - 3,85 (m, 1H), 3,22 - 3,06 (m, 2H, supuesto; parc¡almente oscurec¡do por el p¡co de agua), 2,28 - 2,08 (m, 2H), 1,89 (ddd, J = 14,6, 10,8, 4,0 Hz, 1H), 1,74 - 1,60 (m, 1H), 1,56 - 1,43 (m, 1H), 1,36 (s, 9H).
Paso 2: Síntes¡s de 3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡ll-L-alan¡nam¡da, sal clorh¡drato (C16, sal de HCl).
Este exper¡mento se llevó a cabo en 3 lotes paralelos. Se añad¡ó a una soluc¡ón a 0 °C de C5 (840 g, 3,10 mol) en d¡clorometano (2,0 L) una soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en 1,4-d¡oxano (4 M; 2 L, 8 mol). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 25 °C durante 2 horas, tras lo cual se concentró in vacuo; la comb¡nac¡ón de los 3 lotes proporc¡onó la sal C16, HCl como un sólido blanco. Rend¡m¡ento comb¡nado: 1,20 kg, 5,78 mol, 62 %. MS m/z 172,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 88,52 - 8,35 (br s, 3H), 8,12 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,57 (s, 1H), 3,88 - 3,76 (m, 1H), 3,24 - 3,10 (m, 2H), 2,59 - 2,5 (m, 1H, supuesto; parc¡almente oscurec¡do por el p¡co de agua), 2,35 - 2,24 (m, 1H), 2,01 (ddd, J = 14,9, 9,2, 6,1 Hz, 1H), 1,80 - 1,68 (m, 2H).
Una muestra de sal C16, HCl, se tr¡turó en 2-propanol durante 1,5 horas, tras lo cual se recog¡ó por f¡ltrac¡ón y se enjuagó con 2-propanol. El sól¡do recog¡do se secó durante una noche en alto vacío para obtener una muestra para el estudio de difracción de rayos X en polvo. El patrón de difracción de rayos X en polvo de este material se muestra en la Figura 10; los picos característicos se enumeran en la tabla Q.
Recogida de datos de difracción de rayos X en polvo
El análisis de difracción de rayos X de polvo se realizó utilizando un difractómetro Bruker AXS D4 Endeavour equipado con una fuente de radiación de Cu. La rendija de divergencia se fijó en 0,6 mm, mientras que la óptica secundaria utilizó rendijas variables. La radiación difractada fue detectada por un detector PSD-Lynx Eye. El voltaje y el amperaje del tubo de rayos X se ajustaron a 40 kV y 40 mA respectivamente. Los datos se recogieron en el goniómetro Theta-2Theta en la longitud de onda de Cu de 3,0 a 40,0 grados 2-Theta utilizando un tamaño de paso de 0,020 grados y un tiempo de paso de 0,3 segundos. Las muestras se prepararon colocándolas en un portamuestras de fondo bajo de silicona y se rotaron durante la recolección.
El análisis de difracción de rayos X de polvo se realizó usando un difractómetro Bruker AXS D8 Advance equipado con una fuente de radiación de Cu. La radiación difractada fue detectada por un detector LYNXEYE_EX con rendijas motorizadas. Tanto el primario como el secundario están equipados con rendijas de 2,5 solleres. El voltaje y el amperaje del tubo de rayos X se fijaron en 40 kV y 40 mA respectivamente. Los datos se recogieron en el goniómetro Theta-Theta en una exploración de par bloqueado en la longitud de onda Cu K-alfa (promedio) de 3,0 a 40,0 grados 2-Theta con un incremento de 0,02 grados, utilizando una velocidad de exploración de 0,5 segundos por paso. Las muestras se prepararon colocándolas en un portamuestras de silicio de bajo fondo.
Los datos se recogieron con ambos instrumentos utilizando el software Bruker DIFFRAC Plus y el análisis fue realizado por el software EVA DIFFRAC plus. El archivo de datos PXRD no se procesó antes de la búsqueda de picos. Usando el algoritmo de búsqueda de picos en el software EVA, los picos seleccionados con un valor de umbral de 1 se usaron para realizar asignaciones preliminares de picos. Para garantizar la validez, se hicieron ajustes manualmente; se comprobó visualmente la salida de las asignaciones automatizadas y se ajustaron las posiciones de los picos al máximo de los mismos. Generalmente se eligieron los picos con intensidad relativa de > 3 %. Típicamente, no se seleccionaron los picos que no se resolvieron o que eran consistentes con el ruido. Un error típico asociado con la posición del pico de PXRD indicado en USP hasta /- 0,2° 2-Theta (USP-941).
T l . Pi ifr i n r X n lv l i n r 1 l H l
Figure imgf000054_0001
Síntesis alternativa de 3-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il]-L-alaninamida, sal de clorhidrato, sal C16 HCl
Una preparación alternativa del compuesto C16, sal de HCl, se representa en el esquema de reacción siguiente
Figure imgf000055_0001
Se añadió a una solución de amoníaco en metanol (7,0 M; 100 ml, 725,4 mmol), 4-metilbencenosulfonato de (S)-2-amino-3-((S)-2-oxopirrolidin-3-il)propanoato (20 g, 55,8 mmol) y sulfato de magnesio (6,7 g, 55,8 mmol) a temperatura ambiente. Tras agitar la mezcla de reacción durante 7 horas a temperatura ambiente, se burbujeó nitrógeno en la reacción durante 1 hora para purgar el exceso de amoníaco. Después, la reacción se filtró a través de una almohadilla de Celite® y se concentró in vacuo, y (S)-2-amino-3-((S)-2-oxopirrolidin-3-il)propanamida 4-metilbencenosulfonato resultante se utilizó directamente en el paso siguiente sin más purificación. A una solución de dimetilformamida (50 ml, 647 mmol) se añadió una porción de (S)-2-amino-3-((S)-2-oxopirrolidin-3-il)propanamida 4-metilbencenosulfonato (10 g, 25,9 mmol) y una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4,0 M; 19,4 ml, 77,7 mmol). Después de agitar durante 12 horas a temperatura ambiente, la suspensión se filtró y se lavó con dimetilformamida (15 ml, 190 mmol). El sólido resultante se secó en una estufa de vacío a 40 °C durante 12 horas para obtener 3-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il]-L-alaninamida, sal de clorhidrato, sal C16 HCl (2,7 g, 12,4 mmol) como un sólido de color canela (rendimiento global del 48%).
Paso 3: Síntesis de (1R,2S,5S)-3-[N-(tert-butoxicarbonil)-3-metil-L-valil1-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxilato de metilo (C31).
Este experimento se llevó a cabo en 3 lotes paralelos. Se añadió a una solución a 0 °C de (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxilato de metilo, sal de clorhidrato (237 g, 1,15 mol) y N-(tert-butoxicarbonilo)-3-metil-L-valina (293 g, 1,27 mol) en una mezcla de N,N-dimetilformamida(400 ml) y acetonitrilo (3.6 L) hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 481 g, 1,26 mol), seguido de la adición gota a gota de N,N-diisopropiletilamina (601 ml, 3,45 mol). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta 25 °C y se agitó durante 16 horas, tras lo cual se vertió en una mezcla de agua helada (1 L) y ácido clorhídrico (0,5 M; 1 L), de pH aproximadamente 5, y se agitó durante 6 minutos. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 L), y la capa orgánica se lavó con agua (2 L), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 50 % de acetato de etilo en éter de petróleo), proporcionando, tras la combinación de los 3 lotes, C31 como un aceite incoloro. Rendimiento combinado: 1,17 kg, 3,06 mol, 89 %. LCMS m/z 383.3 [M+H]+. 1H RMN(400 MHz, cloroformo-d) 8 5,10 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,20 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 3,98 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,2 Hz, 1H), 3,89 -3,82 (m, 1H), 3,74 (s, 3H), 1,48 -1,41 (m, 2H), 1,38 (s, 9H), 1,03 (s, 3H), 1,01 (s, 9H), 0,89 (s, 3H).
Paso 4: Síntesis de ácido (1R,2S,5S)-3-[N-(tert-butoxicarbonil)-3-metil-L-valil1-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxílico (C32).
Este experimento se llevó a cabo en 3 lotes paralelos. Se añadió a una solución de C31 (668 g, 1,75 mol) en tetrahidrofurano (2,5 L),hidróxido de litio monohidratado (220 g, 5,24 mol) y agua (500 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a 25 °C durante 2 horas, se concentró in vacuo para eliminar la mayor parte del tetrahidrofurano; a continuación, el residuo se ajustó a pH 2 mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 * 500 ml), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico (500 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo para proporcionar C32 como un sólido blanco (2,0 kg) tras la combinación de los 3 lotes. Este material se utilizó directamente en el siguiente paso. LCMS m/z313,2 [(M - 2-metilprop-1-eno)+H]+. 1H RMN(400 MHz, cloroformo-d) 8 5,14 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,24 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 4,06 (d, mitad del cuarteo AB, J = 10,5 Hz, 1H), 3,82 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,5, 5,5 Hz, 1H), 1,75 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 1,49 (dd, J = 7,7, 5,4 Hz, 1H), 1,40 (s, 9H), 1,06 (s, 3H), 1,00 (s, 9H), 0,89 (s, 3H).
Paso 5: Síntesis del ácido (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-(3-met¡l-L-val¡l)-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxíl¡co. sal de clorhidrato (C41).
Este experimento se llevó a cabo en 2 lotes paralelos. Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4 M; 4,0 L, 16 mol) a una solución de C32 (del paso anterior; 1,00 kg, <2,62 mol) en diclorometano (1,0 L), y la mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 16 horas. La eliminación de los disolventes in vacuo a 50 °C proporcionó C41 como un sólido blanco (1,8 kg) tras la combinación de los 2 lotes. Este material se utilizó directamente en el siguiente paso. 1H RMN (400 MHz, metanol-d4) 84,42 (s, 1H), 4,00 (s, 1H), 3,94 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,7, 5,4 Hz, 1H), 3,80 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10.7 Hz, 1H), 1,62 (dd, componente del sistema ABX, J = 7,7, 5,2 Hz, 1H), 1,56 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,15 (s, 9H), 1,09 (s, 3H), 1,03 (s, 3H).
Paso 6 : Síntesis del ácido (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-f3-met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxílico (C42).
Este experimento se llevó a cabo en 3 lotes paralelos. Se añadió a una solución a 0 °C de C41 (del paso anterior; 600 g, <1,75 mol) en metanol (2 L), trietilamina (1,64 L, 11,8 mol), seguida de trifluoroacetato de etilo (699 g, 4,92 mol), tras lo cual la mezcla de reacción se dejó calentar hasta 25 °C, y se agitó durante 16 horas. A continuación se concentró in vacuo a 50 °C y el residuo se diluyó con acetato de etilo (3 L) y se ajustó a un pH de 3 a 4 mediante la adición de ácido clorhídrico 2 M. Tras la extracción de la capa acuosa con acetato de etilo (1 L), las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro de sodio (3 L), se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron bajo presión reducida. Los 3 lotes se combinaron en este punto, se trataron con una mezcla de éter de petróleo y acetato de etilo (5:1, 3 L) y se agitaron a 25 °C durante 2 horas. La filtración permitió obtener C42 como un sólido blanco. Rendimiento combinado: 1,90 kg, 5,21 mol, 99 % en 3 pasos. LCMS m/z 365.1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, m e ta n o ^ ) 8 8,88 (d, J = 8,8 Hz, <1H; intercambio incompleto), [4,60 (d, J = 8,9 Hz) y 4,59 (s), total 1H], 4,35 (s, 1H), 3,96 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,5, 5.1 Hz, 1H), 3,90 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,4 Hz, 1H), 1,58 (dd, componente del sistema ABX, J = 7,6, 4,9 Hz, 1H), 1,52 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,08 (s, 12H), 0,92 (s, 3H).
Paso 7: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]propan-2-il}-6,6 -dimetil-3-[3-metil-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-valil1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (C43).
Este experimento se llevó a cabo en 4 lotes paralelos. Se añadió 1-óxido de 2-hidroxipiridina (33,9 g, 305 mmol) a una solución de C42 (445 g, 1,22 mol) y C16, sal de HCl (256 g, 1,23 mol) en butan-2-ona (2,5 L), y la mezcla se enfrió a 0 °C. A continuación se añadió N,N-Diisopropiletilamina (638 ml, 3,66 mol), seguida de la adición gota a gota de clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (351 g, 1,83 mol). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 16 horas, tras lo cual se diluyó con acetato de etilo (1 L) y se trató con una mezcla de ácido clorhídrico (1 M; 1,5 L, 1,5 mol) y solución acuosa saturada de cloruro sódico (1 L). La capa orgánica se lavó con una mezcla de solución acuosa de hidróxido de sodio (1 M; 1,5 L, 1,5 mol) y solución acuosa saturada de cloruro de sodio (1 L), se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró in vacuo. La combinación de los 4 lotes proporcionó C43 como un sólido blanco (2,3 kg). Rendimiento combinado: 2,1 kg (corregido por el acetato de etilo residual), 4,1 mol, 84 %. LCMS m/z 518,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 89,41 (br d, J = 7,7 Hz, 1H), 8,30 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,32 (br s, 1H), 7,04 (br s, 1H), 4,43 (br d, J = 7,3 Hz, 1H), 4,35 -4,25 (m, 1H), 4,28 (s, 1H), 3,89 (dd, J = 10,3, 5,5 Hz, 1H), 3,67 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,17 -3,09 (m, 1H), 3,07 -2,98 (m, 1H), 2,46 -2,35 (m, 1H), 2,19 -2,10 (m, 1H), 1,99 -1,89 (m, 1H), 1,70 - 1,58 (m, 1H), 1,55 - 1,44 (m, 2H), 1,38 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,98 (s, 9H), 0,84 (s, 3H).
Paso 8 : Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-val¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da. solvato de metil tert (13, solvato de éter de tert-butilo de metilo), Forma Sólida 2.
Este experimento se llevó a cabo en 3 lotes paralelos. Se añadió a una solución de C43 (600 g, 1,16 mol) en acetato de etilo (3 L) N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 552 g, 2,32 mol). Tras agitar la mezcla de reacción a 25 °C durante 3 horas, se trató con N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo adicional, sal interna (reactivo de Burgess; 27,6 g, 116 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 1 hora. A continuación, se filtró; la torta del filtro se lavó con acetato de etilo (2 * 500 ml), y los filtrados combinados se lavaron secuencialmente con una solución acuosa de bicarbonato de sodio (1 M; 2 L), una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (2 L), ácido clorhídrico (1 M; 2 L) y una solución acuosa saturada de cloruro de sodio (2 L). Luego, la capa orgánica se secó sobre sulfato de sodio, se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se trató con una mezcla de acetato de etilo y tert-butil éter (1:10, 2,5 L) y se calentó a 50 °C; tras agitar durante 1 hora a 50 °C, se enfrió a 25 °C y se agitó durante 2 horas. El sólido se recogió por filtración, y los 3 lotes se combinaron en acetato de etilo (8 L) y se filtraron a través de gel de sílice (3,0 kg); el gel de sílice se lavó entonces con acetato de etilo (2 * 2 L). Tras concentrar los eludidos combinados in vacuo, el residuo se recogió en acetato de etilo (900 ml) y en metil tert-butil éter (9 L). Esta mezcla se calentó a 50 °C durante 1 hora, se enfrió a 25 °C y se agitó durante 2 horas. La filtración proporcionó (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]et¡l}-6,6-d¡met¡l-3-[3-metil-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida, solvato de éter de tert-butilo de metilo(13, solvato de éter de tert-butilo de metilo) como un sólido blanco. El patrón de difracción de rayos X en polvo para este material, designado como Forma Sólida 2, se muestra en la Figura 1; los picos característicos se enumeran en la Tabla A. Rendimiento combinado: 1,41 kg, 2,82 mol, 81 %. LCMS m/z 500,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 89,42 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 9,03 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 4,97 (ddd, J = 10,9, 8,5, 5,1 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,16 (s, 1H), 3,91 (dd, J = 10,4, 5,5 Hz, 1H), 3,69 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,18 - 3,10 (m, 1H), 3,08 - 2,99 (m, 1H), 2,46 - 2,34 (m, 1H), 2,20 -2,03 (m, 2H), 1,78 - 1,65 (m, 2H), 1,57 (dd, J = 7,6, 5,4 Hz, 1H), 1,32 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H), 0,98 (s, 9H), 0,85 (s, 3H).
Recogida de datos de difracción de rayos X en polvo
El análisis de difracción de rayos X de polvo se realizó usando un difractómetro Bruker AXS D8 Endeavour equipado con una fuente de radiación de Cu (promedio de K-a). La hendidura de divergencia se fijó en 15 mm de iluminación continua. La radiación difractada fue detectada por un detector PSD-Lynx Eye, con la apertura del detector PSD fijada en 2,99 grados. El voltaje y el amperaje del tubo de rayos X se ajustaron a 40 kV y 40 mA respectivamente. Los datos se recogieron en el goniómetro Theta-Theta en la longitud de onda de Cu de 3,0 a 40,0 grados 2-Theta usando un tamaño de paso de 0,00998 grados y un tiempo de paso de 1,0 segundo. La pantalla antidispersión se ajustó a una distancia fija de 1,5 mm. Las muestras se giraron a 15/minuto durante la recogida. Las muestras se prepararon colocándolas en un portamuestras de fondo bajo de silicona y se rotaron durante la recolección. Los datos se recopilaron con el software Bruker DIFFRAC Plus y el análisis se realizó con el software EVA DIFFRAC Plus. Usando el algoritmo de búsqueda de picos en el software EVA, los picos seleccionados con un valor de umbral de 1 se usaron para realizar asignaciones preliminares de picos. Para garantizar la validez, los ajustes se realizaron manualmente; la salida de las asignaciones automatizadas se comprobó visualmente y las posiciones de los picos se ajustaron al máximo de los picos. Generalmente se eligieron los picos con intensidad relativa de > 3 %. No se seleccionaron los picos que no se resolvieron o fueron consistentes con el ruido. Un error típico asociado con la posición del pico de PXRD establecido en USP es de hasta /- 0,2° 2-Theta (USP-941).
Tabla A. Picos de difracción de rayos X en polvo seleccionados para 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo, Forma Sólida 2, de la síntesis alternativa del Ejemplo 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo; generación de 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo Forma Sólida 2
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Síntesis alternativa del ácido (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxílico(C42).
Segunda síntesis alternativa del Ejemplo 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo; generación de 13, disolvente de metil tert-butil éter, Forma Sólida 2
(1R,2S,5S)-N-£(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidm-3-il]etM}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetM)-L-vam]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida, solvato de éter de tert-butilo de metilo (13, solvato de éter de tertbutilo de metilo), Forma Sólida 2
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Se añadió a una solución de C43 (415 g, 802 mmol) en acetato de etilo (2,0 L), W-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 392 g, 1,64 mol). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 3 horas, tras lo cual se añadió de nuevo N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 86,0 g, 361 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción durante 1 hora, se filtró y el filtrado se lavó secuencialmente con una solución acuosa de bicarbonato sódico (1 M; 1,5 L), una solución acuosa saturada de cloruro sódico (1,5 L), ácido clorhídrico (1 M; 1,5 L) y una solución acuosa saturada de cloruro sódico (1,5 L), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se trató con una mezcla de acetato de etilo y tert-butil éter (1:10, 2,5 L) y se calentó a 50 °C; tras agitar durante 1 hora a 50 °C, se enfrió a 25 °C y se agitó durante 2 horas. La recogida del sólido mediante filtración proporcionó (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida, (13, solvato de éter de tert-butilo de metilo) como sólido blanco cristalino. El patrón de difracción de rayos X en polvo para este material, designado como Forma Sólida 2, se muestra en la Figura 2; los picos característicos se enumeran en la Tabla B. Rendimiento: 338 g, 575 mmol, 72%. LCMS m/z 500,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 89,43 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 9,04 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 4,97 (ddd, J = 10,9, 8,5, 5,0 Hz, 1H), 4,41 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,15 (s, 1H), 3,91 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,4, 5,5 Hz, 1H), 3,69 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,4 Hz, 1H), 3,18 - 3,10 (m, 1H), 3,08 -2,98 (m, 1H), 2,46 - 2,34 (m, 1H), 2,20 - 2,02 (m, 2H), 1,77 - 1,65 (m, 2H), 1,57 (dd, J = 7,6, 5,4 Hz, 1H), 1,32 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,02 (s, 3H), 0,98 (s, 9H), 0,85 (s, 3H); picos de metil tert-butil éter: 3,07 (s, 3H), 1,10 (s, 9H).
El procedimiento de recogida de los datos de difracción de rayos X en polvo se describe en la Síntesis Alternativa del Ejemplo 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo, Paso 8.
Tabla B. Picos de difracción de rayos X en polvo seleccionados para 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo, Forma Sólida 2, de la segunda síntesis alternativa del Ejemplo 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo; generación de 13 solvato de éter de tert-butilo de metilo Forma Sólida 2
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Tercera síntesis alternativa del Ejemplo 13
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil- N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (l3 )
Figure imgf000059_0001
Paso 1: Síntesis de (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-6,6-d¡met¡l-3-[3-met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da, solvato de éter de tert-butilo de metilo (13, solvato de éter de tertbutilo de metilo)
Se trató una mezcla a 0 °C de C42 (90.5 % en masa. 5,05 g. 12,5 mmol) y C16, sal de HCl (98.9 % en masa. 3,12 g.
14.9 mmol) en aceton¡tr¡lo (50 ml) con 2.4.6-tr¡prop¡l-1.3.5.2.4.6-tr¡oxatr¡fosf¡nano 2,4,6-tr¡óx¡do (soluc¡ón al 50 % en peso en aceton¡tr¡lo; 17 ml. 24.3 mmol) durante aproximadamente 10 m¡nutos. A cont¡nuac¡ón. se añad¡ó lentamente 1-Met¡l-1H-¡m¡dazol (4.0 ml. 50,2 mmol). durante aprox¡madamente 15 m¡nutos, y se dejó que la mezcla de reacc¡ón se ag¡tara a 0 °C durante 3.5 horas. tras lo cual se calentó a 25 °C. Se añad¡ó en una porc¡ón 2.4.6-tnprop¡l-1.3.5,2.4.6-tr¡oxatr¡fosf¡nano (soluc¡ón al 50 % en peso en aceton¡tr¡lo; 17 ml. 24.3 mmol). y la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 45 °C durante 16 horas. En ese momento se enfr¡ó a 25 °C y se trató durante 10 m¡nutos con una soluc¡ón acuosa de b¡carbonato sód¡co (1,14 M; 35 ml. 40 mmol). Tras añad¡r acetato de et¡lo (25 ml) y agua suf¡c¡ente para d¡solver los sól¡dos resultantes. la capa orgán¡ca se lavó dos veces con una soluc¡ón acuosa de b¡carbonato sód¡co (1,14 M; 25 ml. 28 mmol). Después de lavar la capa orgán¡ca con soluc¡ón acuosa de cloruro sód¡co (14%. 2 * 20 ml). se secó sobre sulfato sód¡co, se f¡ltró y se concentró ¡n vacuo. El res¡duo se mezcló con acetato de et¡lo (2.1 ml) y se trató con met¡l tert-but¡l éter (19 ml); la suspens¡ón resultante se calentó con ag¡tac¡ón a 50 °C durante 1 hora. se enfr¡ó a 25 °C durante 1 hora y se mantuvo a 25 °C durante 1.5 horas. Los sól¡dos se a¡slaron por f¡ltrac¡ón. se lavaron con met¡l tertbut¡l éter (2 ml/g) y se secaron en una estufa de vacío durante una noche a 50 °C para obtener (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rroNd¡n-3-¡l]et¡l}-6,6-d¡met¡l-3-[3-metN-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l]-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexano-2-carboxam¡da, solvato de éter de tert-but¡lo de met¡lo (13, ) como sól¡do blanco cr¡stal¡no. El grueso de este mater¡al pasó al s¡gu¡ente paso. Producc¡ón: 3.71 g. 6,31 mmol. 50%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 89,40 (d. J = 8.4 Hz. 1H).
9,02 (d. J = 8.6 Hz. 1H). 7.66 (s. 1H). 4.97 (ddd, J = 10.7. 8.6.5.1 Hz. 1H). 4,41 (d. J = 8.4 Hz. 1H). 4,16 (s. 1H). 3,91 (dd. componente del s¡stema A bX, J = 10,3, 5.5 Hz. 1 H). 3,69 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 10,4 Hz. 1 H). 3,18 - 3,10 (m. 1H). 3,09 - 2,99 (m. 1H). 2,46 - 2,35 (m. 1H). 2,20 - 2,04 (m. 2H). 1,78 - 1,64 (m. 2H). 1,56 (dd. J = 7.4. 5.6 Hz.
1H). 1,32 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 7.6 Hz. 1H). 1,03 (s. 3H). 0,98 (s. 9H). 0,85 (s. 3H); p¡cos de met¡l tert-but¡l éter: 3,07 (s. 3H). 1,10 (s. 9H).
Paso 2: Síntesis de (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l)-6.6-d¡metil-3-[3-met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (13).
Se añad¡ó una mezcla de acetato de propan-2-¡lo (17 ml) y heptano (17 ml) a 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo (del paso anter¡or; 3.41 g. 5.80 mmol). y se ag¡tó durante una noche a 20 °C. A cont¡nuac¡ón, se añad¡ó heptano (17 ml) durante 2 horas. y la mezcla se ag¡tó durante toda la noche a temperatura amb¡ente. La suspens¡ón resultante se f¡ltró y los sól¡dos recog¡dos se lavaron con una mezcla de acetato de propan-2-¡lo (1.36 ml) y heptano (3.73 ml) y se secaron a 50 °C al vacío. obten¡éndose (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]et¡l}-6.6-d¡met¡l-3-[3-met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l]-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexano-2-carboxam¡da(13) como sól¡do cr¡stal¡no. Una porc¡ón de este lote se ut¡l¡zó como mater¡al de s¡embra en la recr¡stal¡zac¡ón del Ejemplo 13; generac¡ón de la Forma Sól¡da 1 a cont¡nuac¡ón. Producc¡ón: 2.73 g. 5.46 mmol. 94%.
Recristalización del Ejemplo 13; generación de la Forma Sólida 1
(1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]et¡l}-6.6-d¡met¡l-3-[3-met¡l- N-(trifluoroacet¡l)-L-val¡l]-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexano-2-carboxam¡da (13). Forma Sólida 1
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Se calentó a 60 °C una mezcla de 13. solvato de éter de tert-butilo de metilo (de la Síntes¡s Alternat¡va del Ejemplo 13. solvato de éter de tert-butilo de met¡lo; generac¡ón de 13. solvato de éter de tert-butilo de met¡lo. Forma Sólida 2; 60.1 g. 102 mmol) y acetato de propan-2-¡lo (480 ml). Se añad¡ó una muestra de 13 (mater¡al de s¡embra. de la tercera síntes¡s alternat¡va del Ejemplo 13. Paso 2; 1.2 g. 2.4 mmol); después de 10 m¡nutos. el mater¡al de s¡embra todavía estaba presente en Forma Sól¡da. Se añad¡ó lentamente heptano (360 ml) a la mezcla ag¡tada. durante 12 horas. Se ¡ntrodujo heptano ad¡c¡onal (360 ml) durante 4 horas. y la mezcla resultante se ag¡tó durante 30 m¡nutos. A cont¡nuac¡ón. se enfr¡ó a 20 °C. a una veloc¡dad de 0.1 grados/m¡nuto. tras lo cual se ag¡tó durante toda la noche. El sól¡do se recog¡ó por f¡ltrac¡ón y se lavó con una mezcla de acetato de propan-2-¡lo (72 ml) y heptano (168 ml). A cont¡nuac¡ón. se secó bajo vacío a 50 °C para proporc¡onar (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]et¡l}-6,6-d¡met¡l-3-[3-met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l]-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexano-2-carboxam¡da(13) como un sól¡do blanco y cr¡stal¡no. El patrón de d¡fracc¡ón de rayos X en polvo para este mater¡al. des¡gnado como Forma Sól¡da 1. se muestra en la F¡gura 3; los p¡cos característ¡cos se enumeran en la Tabla C. Rend¡m¡ento: 47.8 g. 95.7 mmol. 94%.
El proced¡m¡ento de recog¡da de los datos de d¡fracc¡ón de rayos X en polvo se descr¡be en la Síntes¡s Alternat¡va del Ejemplo 13. solvato de éter de tert-butilo de met¡lo. Paso 8.
T l . P fr n r X n lv l n r 1 . F rm l 1
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(continuación)
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Determinación estructural por rayos X del Ejemplo 13, Forma Sólida 1
Una muestra del Ejemplo 13 se sometió a cristalización por difusión, utilizando acetato de etilo y hexano. El recipiente de cristalización se dejó reposar a temperatura ambiente mientras se evaporaba el disolvente; al cabo de 2,5 meses, había cristales de calidad radiográfica. Uno de ellos se utilizó para la determinación estructural. En la Figura 4 se muestra un diagrama ORTEP de los datos de monocristal. Se utilizó el software Mercury para calcular el patrón de polvo a partir de la estructura cristalina resuelta; la comparación con el patrón de difracción de la recristalización del Ejemplo 13; la generación de la Forma Sólida 1 identificó que este material era la Forma Sólida 1 (véase la Figura 5). Los picos característicos de estos datos calculados se presentan en la Tabla D.
Tabla D. Datos del patrón de polvo de la Forma Sólida 1 del ejemplo 13 calculados a partir de la determinación r r l r X l E m l 1 F rm li 1
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Análisis de rayos X de un solo cristal
La recogida de datos se realizó en un difractómetro Bruker D8 Quest a temperatura ambiente. La recogida de datos consistió en exploraciones omega y phi.
La estructura fue resuelta por fase intrínseca utilizando la suite de software SHELX en el grupo espacial de clase ortorrómbica P2 -|2 -|21. Posteriormente, la estructura se refinó mediante el procedimiento de mínimos cuadrados de la matriz completa. Todos los átomos que no son de hidrógeno se encontraron y refinaron utilizando parámetros de desplazamiento anisotrópicos.
Los átomos de hidrógeno localizados en el nitrógeno fueron encontrados a partir del mapa de diferencias de Fourier y refinados con distancias restringidas. Los átomos de hidrógeno restantes se colocaron en posiciones calculadas y se les permitió montar en sus átomos portadores. El refinamiento final incluyó parámetros de desplazamiento isotrópico para todos los átomos de hidrógeno.
El análisis de la estructura absoluta mediante procedimientos de verosimilitud (Hooft, 2008) se realizó con PLATON (Spek). Los resultados indican que la estructura absoluta se ha asignado correctamente. El procedimiento calcula que la probabilidad de que la estructura se asigne correctamente es del 100 %. El parámetro de Hooft es -0,01 con una desviación estándar estimada de (3) y el parámetro de Parson es -0,01 con una desviación estándar estimada de (2).
El índice R final fue de 3,3 %. Una diferencia final de Fourier reveló que no hay densidad de electrones ausentes o mal colocados.
La información pertinente sobre el cristal, la recopilación de datos y el refinamiento se resume en la Tabla E. Las coordenadas atómicas, las longitudes de enlace, los ángulos de enlace y los parámetros de desplazamiento se enumeran en las Tablas F - H.
Programas informáticos y referencias
SHELXTL, Versión 5.1, Bruker AXS, 1997.
PLATÓN, A. L. Spek, J. Appl. Cryst. 2003, 36, 7-13.
MERCURY, C. F. Macrae, P. R. Edington, P. McCabe, E. Pidcock, G. P. Shields, R. Taylor, M. Towler, y J. van de Streek, J. Appl. Cryst. 2003, 36, 453-13.
OLEX2, O. V. Dolomanov, L. J. Bourhis, R. J. Gildea, J. A. K. Howard y H. Puschmann, J. Appl. Cryst. 2003, 36, 339-13.
R. W. W. Hooft, L. H. Straver y A. L. Spek, J. Appl. Cryst. 2003, 36, 96-13.
H. D. Flack, Acta Cryst. 1983, A39, 867-881.
Tabla E. Datos de cristal y refinamiento de la estructura para el Ejemplo 13, Forma Sólida 1.
Fórmula empírica C23H32F3N5O4
Peso de la fórmula 499,53
Temperatura 296(2) K
Longitud de onda 1,54178 A
Sistema de cristales Ortorrómbico
Grupo espacial P2 -I2 -I21
Dimensiones de la celda unitaria a = 9,6836(2) A
b = 15,0522(4) A p = 90'
c = 18,0272(5) A
Volumen 2627,64(11) A3
Z 4
Densidad (calculada) 1,263 Mg/m3
Coeficiente de absorción 0,862 mm-1
F(000) 1056
Tamaño del cristal 0,300 x 0,280 x 0,260 mm3
Intervalo de Theta para la recogida de 3,826 a 80,042°
datos
Intervalos de índices -22<=/<=23 -12<=h<=12, -18<=k<=19,
Reflexiones recogidas 79731
Reflexiones independientes 5628 [Rn = 0,0294]
Completo hasta theta = 67,679° 99,3 %
Corrección de la absorción Empírico
Procedimiento de refinamiento Mínimos cuadrados de la matriz
completa en F2
(continuación)
Datos / restricciones / parámetros 5628 / 9 / 358
Bondad de ajuste en F2 1,040
Índices R finales [/>2o(/)] R1 = 0,0326, wR2 = 0,0906
Índices R (todos los datos) R1 = 0,0346, wR2 = 0,0928
Parámetro de estructura absoluta -0,01 (3)
Coeficiente de extinción n/a
Mayor diferencia entre el pico y el agujero 0 , 112 y -0 ,121 e.Á-3
Tabla F. Coordenadas atómicas (x 104) y parámetros de desplazamiento isotrópico equivalente (Á2 x 103) para el Ejemplo 13, Forma Sólida 1. U(eq) se define como un tercio de la traza del tensor Uij ortogonalizado.
x y z U(eq)
F(1) 4585 (8 ) 3891 (5) 8183 (8 ) 174 (4)
F(2) 2984 (6 ) 4623 (4) 8601 (2 ) 135 (2)
F(3) 2988 (7) 4449 (5) 7471 (2) 133 (3)
F(1A) 2622 (7) 4494 (8 ) 8158 (16) 237 (10)
F(2A) 4140 (20) 3994 (5) 7406 (4) 167 (6 )
F(3A) 4404 (15) 3963 (8 ) 8488 (5) 127 (5)
N(1) 5507 (2) 5598 (1) 8478 (1) 54 (1)
N(2) 8733 (1) 6526 (1) 8104 (1) 49 (1)
N(3) 7304 (1) 6456 (1) 6213 (1) 44 (1)
N(4) 9229 (2) 5659 (2) 4815 (1) 99 (1)
N(5) 2159 (2) 6087 (2) 5207 (1) 76 (1)
O(1 ) 4297 (2) 5900 (1) 7426 (1) 84 (1)
O(2 ) 8176 (2) 5753 (1) 9126 (1) 70 (1)
O(3) 7711 (2) 5377 (1) 7059 (1) 70 (1)
O(4) 3393 (2) 7171 (1) 4635 (1) 86 (1 )
C(1) 3848 (3) 4543 (2) 8022 (2 ) 93 (1)
C(2) 4597 (2) 5424 (2) 7941 (1) 63 (1)
C(3) 6284 (2) 6425 (1) 8485 (1) 51 (1)
C(4) 5739 (3) 7084 (2) 9082 (1) 69 (1)
C(5) 6747 (4) 7872 (2) 9133 (2) 98 (1)
C(6 ) 5652 (4) 6670 (2) 9851 (1) 94 (1)
C(7) 4309 (3) 7402 (3) 8847 (2) 110 (1 )
C(8 ) 7812 (2) 6195 (1) 8592 (1) 50 (1)
C(9) 10204 (2) 6319 (2) 8211 (1 ) 65 (1)
C(10) 10931 (2) 6770 (2) 7575 (1) 68 (1 )
C(11) 10769 (2) 7754 (2) 7454 (1) 70 (1)
C(12) 11879 (3) 8175 (2) 6970 (2) 101 (1 )
C(13) 10220 (3) 8359 (2) 8049 (1) 85 (1)
C(14) 9842 (2) 7109 (1) 7047 (1) 58 (1)
C(15) 8435 (2) 6868 (1 ) 7361 (1) 45 (1)
C(16) 7781 (2) 6149 (1) 6870 (1) 44 (1)
C(17) 6994 (2) 5848 (1) 5610 (1) 47 (1)
C(18) 8256 (2) 5732 (2) 5157 (1) 67 (1)
C(19) 5822 (2) 6180 (1 ) 5115 (1) 47 (1)
(continuación)
x y z U(eq) C(20) 4454 (2) 6159 (1) 5519 (1) 44 (1) C(21) 3297 (2) 6544 (1) 5059 (1) 56 (1) C(22) 2355 (2) 5356 (2) 5718 (2) 82 (1) C(23) 3911 (2) 5237 (1) 5704 (1) 63 (1)
Tabla G. Longitudes de enlace [A] y ángulos [°] para el Ejemplo 13, Forma Sólida 1.
F(1)-C(1) 1,248 (7)
F(2)-C(1) 1,342 (5)
F(3)-C(1) 1,305 (4)
F(1A)-C(1) 1,215 (9)
F(2A)-C(1) 1,414 (8)
F(3A)-C(1) 1.325 (11)
N(1)-C(2) 1,335 (2)
N(1)-C(3) 1,455 (2)
N(1)-H(1X) 0,906 (18)
N(2)-C(8) 1,348 (2)
N(2)-C(15) 1,4631 (19)
N(2)-C(9) 1,471 (2)
N(3)-C(16) 1,3527 (19)
N(3)-C(17) 1,452 (2)
N(3)-H(3X) 0,944 (17)
N(4)-C(18) 1,132 (3)
N(5)-C(21) 1.326 (3)
N(5)-C(22) 1,447 (3)
N(5)-H(5X) 0,91 (2)
O(1)-C(2) 1,209 (2)
O(2)-C(8) 1,222 (2)
O(3)-C(16) 1,214 (2)
O(4)-C(21) 1,218 (2)
C(1)-C(2) 1,518 (4)
C(3)-C(8) 1,531 (2)
C(3)-C(4) 1,554 (3)
C(3)-H(3) 0,9800
C(4)-C(7) 1,525 (4)
C(4)-C(6) 1,523 (3)
C(4)-C(5) 1,540 (4)
C(5)-H(5A) 0,9600
C(5)-H(5B) 0,9600
C(5)-H(5C) 0,9600
C(6)-H(6A) 0,9600
C(6)-H(6B) 0,9600
C(6)-H(6C) 0,9600
C(7)-H(7A) 0,9600
C(7)-H(7B) 0,9600
C(7)-H(7C) 0,9600
C(9)-C(10) 1,506 (3)
(co n tin u a c ió n )
C(9)-H(9A) 0,9700 C(9)-H(9B) 0,9700 C(10)-C(11) 1,505 (3) C(10)-C(14) 1,510 (3) C(10)-H(10) 0,9800 C(11)-C(13) 1,505 (4) C(11)-C(14) 1,511 (3) C(11)-C(12) 1,522 (3) C(12)-H(12A) 0,9600 C(12)-H(12B) 0,9600 C(12)-H(12C) 0,9600 C(13)-H(13A) 0,9600 C(13)-H(13B) 0,9600 C(13)-H(13C) 0,9600 C(14)-C(15) 1,520 (2) C(14)-H(14) 0,9800 C(15)-C(16) 1,535 (2) C(15)-H(15) 0,9800 C(17)-C(18) 1,480 (2) C(17)-C(19) 1,528 (2) C(17)-H(17) 0,9800 C(19)-C(20) 1,512 (2) C(19)-H(19A) 0,9700 C(19)-H(19B) 0,9700 C(20)-C(21) 1,510 (2) C(20)-C(23) 1,521 (2) C(20)-H(20) 0,9800 C(22)-C(23) 1,518 (3) C(22)-H(22A) 0,9700 C(22)-H(22B) 0,9700 C(23)-H(23A) 0,9700 C(23)-H(23B) 0,9700 C(2)-N(1)-C(3) 121 ,10 (16) C(2)-N(1)-H(1X) 120,7 (15) C(3)-N(1)-H(1X) 117,9 (15) C(8)-N(2)-C(15) 126,62 (13) C(8)-N(2)-C(9) 118,51 (14) C(15)-N(2)-C(9) 112,66 (14) C(16)-N(3)-C(17) 120,65 (13) C(16)-N(3)-H(3X) 122,1 (13) C(17)-N(3)-H(3X) 112,1 (12 ) C(21)-N(5)-C(22) 114,42 (16) C(21)-N(5)-H(5X) 126,1 (19) C(22)-N(5)-H(5X) 119,3 (19) F(1)-C(1)-F(3) 117,2 (6 ) F(1A)-C(1)-F(3A) 103,3 (11) F(1)-C(1)-F(2) 104,3 (6 ) (co n tin u a c ió n )
F(3)-C(1)-F(2) 101,7 (4) F(1A)-C(1)-F(2A) 108,6 (10 ) F(3A)-C(1)-F(2A) 91,8 (7) F(1A)-C(1)-C(2) 122,6 (7) F(1)-C(1)-C(2) 115,8 (4) F(3)-C(1)-C(2) 109,1 (3) F(3A)-C(1)-C(2) 116,3 (6 ) F(2)-C(1)-C(2) 107,2 (3) F(2A)-C(1)-C(2) 109,8 (5) O(1)-C(2)-N(1) 126,8 (2 ) O(1)-C(2)-C(1) 118,5 (2) N(1)-C(2)-C(1) 114,65 (19) N(1)-C(3)-C(8) 107,86 (14) N(1)-C(3)-C(4) 112,12 (15) C(8)-C(3)-C(4) 112,72 (16) N(1)-C(3)-H(3) 108,0 C(8)-C(3)-H(3) 108,0 C(4)-C(3)-H(3) 108,0 C(7)-C(4)-C(6) 109,3 (2) C(7)-C(4)-C(5) 110,5 (2) C(6)-C(4)-C(5) 107,2 (2) C(7)-C(4)-C(3) 108,5 (2) C(6)-C(4)-C(3) 112,81 (19) C(5)-C(4)-C(3) 108,52 (19) C(4)-C(5)-H(5A) 109,5 C(4)-C(5)-H(5B) 109,5 H(5A)-C(5)-H(5B) 109,5 C(4)-C(5)-H(5C) 109,5 H(5A)-C(5)-H(5C) 109,5 H(5B)-C(5)-H(5C) 109,5 C(4)-C(6)-H(6A) 109,5 C(4)-C(6)-H(6B) 109,5 H(6A)-C(6 )-H(6 B) 109,5 C(4)-C(6)-H(6C) 109,5 H(6A)-C(6 )-H(6 C) 109,5
H(6 B)-C(6 )-H(6 C) 109,5 C(4)-C(7)-H(7A) 109,5 C(4)-C(7)-H(7B) 109,5 H(7A)-C(7)-H(7B) 109,5 C(4)-C(7)-H(7C) 109,5 H(7A)-C(7)-H(7C) 109,5 H(7B)-C(7)-H(7C) 109,5 O(2)-C(8)-N(2) 121,60 (16) O(2)-C(8)-C(3) 120,04 (16) N(2)-C(8)-C(3) 118,28 (13) N(2)-C(9)-C(10) 104,93 (15) N(2)-C(9)-H(9A) 110,8 (co n tin u a c ió n )
C(10)-C(9)-H(9A) 110,8 N(2)-C(9)-H(9B) 110,8 C(10)-C(9)-H(9B) 110,8 H(9A)-C(9)-H(9B) 108,8 C(11)-C(10)-C(9) 120,3 (2) C(11)-C(10)-C(14) 60,18 (13) C(9)-C(10)-C(14) 107,82 (15) C(11)-C(10)-H(10) 118,0 C(9)-C(10)-H(10) 118,0 C(14)-C(10)-H(10) 118,0 C(10)-C(11)-C(13) 121,92 (19) C(10)-C(11)-C(14) 60,07 (14) C(13)-C(11)-C(14) 121,66 (19) C(10)-C(11)-C(12) 114,8 (2) C(13)-C(11)-C(12) 113,9 (2) C(14)-C(11)-C(12) 114,14 (18) C(11)-C(12)-H(12A) 109,5 C(11)-C(12)-H(12B) 109,5 H(12A)-C(12)-H(12B) 109,5 C(11)-C(12)-H(12C) 109,5 H(12A)-C(12)-H(12C) 109,5 H(12B)-C(12)-H(12C) 109,5 C(11)-C(13)-H(13A) 109,5 C(11)-C(13)-H(13B) 109,5 H(13A)-C(13)-H(13B) 109,5 C(11)-C(13)-H(13C) 109,5 H(13A)-C(13)-H(13C) 109,5 H(13B)-C(13)-H(13C) 109,5 C(10)-C(14)-C(11) 59,75 (14) C(10)-C(14)-C(15) 108,04 (15) C(11)-C(14)-C(15) 120,32 (16) C(10)-C(14)-H(14) 118,0 C(11)-C(14)-H(14) 118,0 C(15)-C(14)-H(14) 118,0 N(2)-C(15)-C(14) 104,39 (13) N(2)-C(15)-C(16) 111,18 (13) C(14)-C(15)-C(16) 108,87 (13) N(2)-C(15)-H(15) 110,7 C(14)-C(15)-H(15) 110,7 C(16)-C(15)-H(15) 110,7 O(3)-C(16)-N(3) 123,70 (15) O(3)-C(16)-C(15) 122,40 (14) N(3)-C(16)-C(15) 113,89 (13) N(3)-C(17)-C(18) 108,50 (13) N(3)-C(17)-C(19) 112,62 (13) C(18)-C(17)-C(19) 109,24 (14) N(3)-C(17)-H(17) 108,8 (co n tin u a c ió n )
C(18)-C(17)-H(17) 108,8
C(19)-C(17)-H(17) 108,8
N (4)-C(18)-C(17) 178,6 (2)
C(20)-C(19)-C(17) 111,27 (13)
C(20)-C(19)-H(19A) 109,4
C(17)-C(19)-H(19A) 109,4
C(20)-C(19)-H(19B) 109,4
C(17)-C(19)-H(19B) 109,4
H(19A)-C(19)-H(19B) 108,0
C(21)-C(20)-C(19) 112,17 (13)
C(21)-C(20)-C(23) 102,32 (14)
C(19)-C(20)-C(23) 115,26 (15)
C(21)-C(20)-H(20) 108,9
C(19)-C(20)-H(20) 108,9
C(23)-C(20)-H(20) 108,9
O(4)-C(21)-N(5) 126,30 (18)
O(4)-C(21)-C(20) 125,79 (17)
N(5)-C(21)-C(20) 107,91 (15)
N(5)-C(22)-C(23) 102,06 (17)
N(5)-C(22)-H(22A) 111,4
C(23)-C(22)-H(22A) 111,4
N(5)-C(22)-H(22B) 111,4
C(23)-C(22)-H(22B) 111,4
H(22A)-C(22)-H(22B) 109,2
C(22)-C(23)-C(20) 103,82 (18)
C(22)-C(23)-H(23A) 111,0
C(20)-C(23)-H(23A) 111,0
C(22)-C(23)-H(23B) 111,0
C(20)-C(23)-H(23B) 111,0
H(23A)-C(23)-H(23B) 109,0
Transformaciones de simetría utilizadas para generar átomos equivalentes.
Tabla H. Parámetros de desplazamiento anisotrópico (Á2 *103) para el Ejemplo 13, Forma Sólida 1. El exponente del factor de desplazamiento anisotrópico tiene la forma -2n2[h2 a*2U11 ... 2 h k a* b* U12 ].
U11 U22 U33 U23 U13 U12
F(1) 105 (3) 87 (3) 329 (14) -12 (6 ) -36 (6 ) -6 (2 )
F(2) 113 (4) 185 (4) 107 (3) 29 (2) 25 (2) -68 (3)
F(3) 138 (4) 170 (5) 91 (2) 18 (3) -44 (2) -92 (4)
F(1A) 55 (3) 183 (9) 470 (30) 64 (16) -24 (9) -39 (4)
F(2A) 317 (18) 99 (4) 86 (4) -28 (3) -12 (6 ) -34 (7)
F(3A) 185 (11) 94 (6 ) 103 (4) 17 (3) -12 (4) -63 (6 )
N(1) 48 (1) 70 (1) 44 (1) 10 (1 ) -3 (1) -5 (1)
N(2) 42 (1) 64 (1) 42 (1) 7 (1) -7 (1) 0 (1 )
N(3) 45 (1) 45 (1) 42 (1) 2 (1 ) -6 (1 ) -4 (1)
N(4) 46 (1) 140 (2) 110 (2 ) -65 (2) 7 (1) -2 (1 )
N(5) 40 (1) 105 (1) 84 (1) 12 (1 ) -14 (1) -6 (1 )
(co n tin u a c ió n )
U11 U22 U33 U23 U13 U12
O(1 ) 75 (1 ) 118 (1 ) 59 (1) 14 (1) -21 (1 ) -4 (1)
O(2) 60 (1 ) 92 (1) 58 (1) 32 (1) -8 (1 ) 1 (1 )
O(3) 92 (1) 51 (1) 67 (1) 12 (1 ) -19 (1) -3 (1)
O(4) 76 (1 ) 79 (1) 102 (1 ) 36 (1) -15 (1) 14 (1)
C(1) 86 (2 ) 113 (2) 79 (2) 7 (2) -14 (1) -34 (2)
C(2) 51 (1) 90 (1) 48 (1) 1 (1 ) -3 (1) -4 (1)
C(3) 47 (1 ) 62 (1 ) 43 (1) 11 (1 ) 0 (1 ) 1 (1 )
C(4) 70 (1 ) 70 (1) 67 (1) -2 (1 ) 7 (1) 9 (1)
C(5) 111 (2 ) 67 (1) 117 (2) -14 (1) 17 (2) 0 (1 )
C(6 ) 117 (2) 108 (2 ) 57 (1) -11 (1 ) 18 (1 ) 2 (2 )
C(7) 81 (2 ) 138 (3) 111 (2 ) -8 (2 ) 10 (2 ) 46 (2)
C(8 ) 49 (1) 58 (1) 42 (1) 7 (1) -6 (1 ) 0 (1 )
C(9) 44 (1) 88 (1 ) 65 (1) 16 (1 ) -11 (1 ) 4 (1)
C(10) 41 (1) 99 (2) 63 (1) 5 (1) -4 (1) -3 (1)
C(11) 57 (1) 95 (1) 56 (1) 11 (1 ) -11 (1 ) -27 (1)
C(12) 74 (2) 150 (3) 80 (2 ) 23 (2) -9 (1) -55 (2)
C(13) 93 (2) 91 (2) 72 (1) -3 (1) -13 (1) -32 (1)
C(14) 47 (1) 84 (1) 44 (1) 3 (1) -2 (1 ) -14 (1)
C(15) 43 (1) 54 (1) 39 (1) 5 (1) -4 (1) -3 (1)
C(16) 41 (1) 48 (1) 44 (1) 4 (1) -3 (1) 1 (1 )
C(17) 39 (1) 52 (1) 51 (1) -5 (1) -6 (1 ) -2 (1 )
C(18) 42 (1) 85 (1) 73 (1) -33 (1) -9 (1) 0 (1 )
C(19) 41 (1) 58 (1) 41 (1) 1 (1 ) -4 (1) -5 (1)
C(20) 40 (1) 52 (1) 41 (1) 1 (1 ) -6 (1 ) -4 (1)
C(21) 46 (1) 62 (1 ) 58 (1) 4 (1) -9 (1) 6 (1 )
C(22) 58 (1 ) 103 (2) 84 (1) 14 (1) 0 (1 ) -28 (1 )
C(23) 60 (1 ) 64 (1) 66 (1 ) 19 (1) -4 (1) -12 (1 )
El análisis de RMN en estado sólido del compuesto del Ejemplo 13, Formas 1 y 4 se llevó a cabo en una sonda CPMAS colocada en un espectrómetro de RMN Bruker-BioSpin Avance III de 500 MHz(frecuencia1H). Se utilizó una velocidad de giro del ángulo mágico de 15,0 kHz. Los espectros de la Forma 1 se recogieron a temperatura ambiente (temperatura no controlada) y los de la Forma 4 se recogieron a 15°C.
Los espectros de 13C ssRMN se recogieron usando un experimento de rotación de ángulo mágico de polarización cruzada desacoplada de protones (CPMAS). Se aplicó un campo de desacoplamiento de protones modulado en fase de 80-100 kHz durante la adquisición espectral. El tiempo de contacto de polarización cruzada se fijó en 2 ms y el retraso de reciclaje en 3,5 segundos para la Forma 1 y la Forma 4. El número de barridos se ajustó para obtener una proporción señal-ruido adecuada. Se hizo referencia a la escala de desplazamiento químico de 13C mediante un experimento de CPMAS de 13C en un estándar externo de adamantano cristalino, estableciendo su resonancia de campo superior en 29,5 ppm.
Los espectros de 19F ssRMN se recogieron usando un experimento de rotación de ángulo mágico (MAS) desacoplado de protones. Se aplicó un campo de desacoplamiento de protones modulado en fase de 80-100 kHz durante la adquisición espectral. Los espectros se recogieron con un retraso de reciclaje de 6 segundos para la Forma 1 y de 5,25 segundos para la Forma 4. El número de barridos se ajustó para obtener una proporción señal-ruido adecuada. La escala de desplazamiento químico del 19F se referenció utilizando un experimento de 19F MAS en un estándar externo de ácido trifluoroacético (50 %/50 % v/v en H2O), fijando su resonancia en -76,54 ppm.
La selección automática de picos se realizó utilizando el software Bruker-BioSpin TopSpin versión 3.6. En general, se usó un valor de umbral de 4% de intensidad relativa para la selección preliminar del pico. El resultado de la selección automática de picos se verificó visualmente para garantizar la validez y los ajustes se hicieron manualmente si fuera necesario. Aunque en el presente documento se informan los valores pico de RMN de estado sólido específicos, existe un intervalo para estos valores pico debido a las diferencias en los instrumentos, las muestras y la preparación de las muestras. Esta es una práctica común en la técnica de la RMN de estado sólido debido a la variación inherente en las posiciones de los picos. Una variabilidad típica para un valor del eje x de desplazamiento químico de 13C es del orden de más o menos 0,2 ppm, a menos que se indique lo contrario, para un sólido cristalino. La variabilidad del valor del eje x del desplazamiento químico de 19F es del orden de más o menos 0,1 ppm. Las alturas de los picos de RMN de estado sólido que se indican en el presente documento son intensidades relativas. Las intensidades de RMN de estado sólido pueden variar según la configuración real de los parámetros experimentales y el historial térmico de la muestra.
Se obtuvo la RMN de estado sólido de13C del Ejemplo 13, Forma 1, como se ha descrito anteriormente y se determinó la siguiente lista de picos del Ejemplo 13, Forma 1. La variabilidad de los valores de desplazamiento químico 13C es de ± 0 ,2 ppm, a menos que se especifique lo contrario.
Figure imgf000070_0001
Se obtuvo la RMN de estado sólido de 19F del compuesto del Ejemplo 13, Forma 1, y se determinó el pico de RMN de estado sólido de 19F a un desplazamiento químico de -73,3 ± 0,1 ppm.
Los picos característicos para el compuesto del Ejemplo 13, Forma 1 son el pico 19F con un desplazamiento químico a -73,3 ± 0,1 ppm en combinación con los picos 13C con desplazamientos químicos a 31,0 ± 0,1 ppm, 27,9 ± 0,1 ppm y 178,9 ± 0,2 ppm.
Recristalización alternativa del Ejemplo 13; generación de la Forma Sólida 4
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxamida (13), Forma Sólida 4
Figure imgf000071_0001
Paso 1: Recristalización de (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etilo}-6.6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil1-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxamida (13) a partir de acetato de propan-2-ilo y heptano.
Se añadió una mezcla de acetato de propan-2-ilo (50 ml) y heptano (50 ml) a 13. solvato de éter de tert-butilo de metilo. Forma Sólida 2 (de la segunda síntesis alternativa del Ejemplo 13. solvato de éter de tert-butilo de metilo; 10.02 g. 17.0 mmol) y la mezcla se agitó a 20 °C y 3500 rpm durante la noche. A continuación. se añadió lentamente heptano (50 ml) y se continuó agitando durante 30 minutos. tras lo cual la mezcla se enfrió a 10 °C durante 30 minutos. Tras agitar durante 2 horas más. se filtró la suspensión; la torta del filtro se lavó con una mezcla de acetato de propan-2-ilo (4 ml) y heptano (16 ml) y posteriormente se secó a 55 °C al vacío para obtener (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6.6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil1-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxamida(13) como sólido cristalino. Una parte de este material se utilizó en la siguiente recristalización. Producción: 7.74 g. 15.5 mmol. 91%.
Paso 2: Recristalización de (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etilo}-6.6-dimetil-3-[3-metil-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-valill-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da (13) a partir de agua.
Se agitó una suspensión de 13 (del paso anterior; 1.0 g. 2.0 mmol) en agua (12 ml) a 5 °C durante 21 días. tras lo cual se recogió el sólido por filtración. A continuación. se secó al vacío durante 10 minutos y se secó al aire en una capa fina sobre papel durante 20 minutos. obteniéndose (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6.6-d¡met¡l-3-[3-met¡l-N-(trifluoroacet¡l)-L-val¡l]-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexano-2-carboxam¡da (13) como sólido blanco y cristalino. El patrón de difracción de rayos X en polvo para este material. designado como Forma Sólida 4. se muestra en la Figura 6 ; los picos característicos se enumeran en la Tabla J. Rendimiento: 755 mg. 1.51 mmol. 76 % El procedimiento de obtención de los datos de difracción de rayos X en polvo se describe en la Síntesis Alternativa del Ejemplo 13. solvato de éter de tert-butilo de metilo. Paso 8.
T l . Pi ifr i n r X n lv l i n r 1 . F rm li 4
Figure imgf000071_0002
continuación
Figure imgf000072_0001
Determinación estructural por rayos X del Ejemplo 13, Forma Sólida 4
Se sometió una muestra del Ejemplo 13 a cristalización por difusión a temperatura ambiente, utilizando acetato de etilo y pentano; uno de los cristales resultantes se utilizó para la determinación estructural de un solo cristal de rayos X. En la Figura 7 se muestra un diagrama ORTEP de los datos de monocristal. Se utilizó el software Mercury para calcular el patrón de polvo a partir de la estructura cristalina resuelta; la comparación con el patrón de difracción de la recristalización alternativa del Ejemplo 13; la generación de la Forma Sólida 4 identificó que este material era la Forma Sólida 4 (véase la Figura 8 ). Los picos característicos de estos datos calculados se presentan en la tabla K.
Tabla K. Datos del patrón de polvo para 13, Forma Sólida 1 calculados a partir de la determinación estructural de ra os X de un solo cristal del Eem lo 13 Forma Sólida 4.
Figure imgf000072_0002
Análisis de rayos X de un solo cristal
La recogida de datos se realizó en un difractómetro Bruker D8 Venture a -100 °C. La recogida de datos consistió en exploraciones omega y phi.
La estructura fue resuelta por fase intrínseca utilizando la suite de software SHELX en el grupo espacial de clase ortorrómbica P2 -|2 -|21. Posteriormente, la estructura se refinó mediante el procedimiento de mínimos cuadrados de la matriz completa. Todos los átomos que no son de hidrógeno se encontraron y refinaron utilizando parámetros de desplazamiento anisotrópicos.
Los átomos de hidrógeno localizados en el nitrógeno fueron encontrados a partir del mapa de diferencias de Fourier y refinados con distancias restringidas. Los átomos de hidrógeno restantes se colocaron en posiciones calculadas y se les permitió montar en sus átomos portadores. El refinamiento final incluyó parámetros de desplazamiento isotrópico para todos los átomos de hidrógeno.
El análisis de la estructura absoluta mediante procedimientos de verosimilitud (Hooft, 2008) se realizó con PLATON (Spek). La estereoquímica absoluta no se determinó, debido a los valores fuera de especificación de los parámetros Hooft / Parsons / Flack y las desviaciones estándar.
El índice R final fue de 6,3 %. Una diferencia final de Fourier reveló que no hay densidad de electrones ausentes o mal colocados.
La información pertinente sobre el cristal, la recopilación de datos y el refinamiento se resume en la Tabla L. Las coordenadas atómicas, las longitudes de enlace, los ángulos de enlace y los parámetros de desplazamiento se enumeran en las Tablas M - P.
Programas informáticos y referencias
SHELXTL, Versión 5.1, Bruker AXS, 1997.
PLATÓN, A. L. Spek, J. Appl. Cryst. 2003, 36, 7-13.
MERCURY, C. F. Macrae, P. R. Edington, P. McCabe, E. Pidcock, G. P. Shields, R. Taylor, M. Towler, y J. van de Streek, J. Appl. Cryst. 2003, 36, 453-13.
OLEX2, O. V. Dolomanov, L. J. Bourhis, R. J. Gildea, J. A. K. Howard y H. Puschmann, J. Appl. Cryst. 2003, 36, 339-13.
R. W. W. Hooft, L. H. Straver y A. L. Spek, J. Appl. Cryst. 2003, 36, 96-13.
H. D. Flack, Acta Cryst. 1983, A39, 867-881.
Tabla L. Datos del cristal y refinamiento de la estructura para el Ejemplo 13, Forma Sólida 4.
Fórmula empírica C23H32F3N5O4
Peso de la fórmula 499,53
Temperatura 173(2) K
Longitud de onda 1,54178 A
Sistema de cristales Ortorrómbico
Grupo espacial P 2221
Dimensiones de la celda unitaria a = 9,2114(9) A a = 90'
b = 15,1607(16) A P = 90' c = 18,191(2) A
Volumen 2540,5(5) A3
Z 4
Densidad (calculada) 1,306 Mg/m3
Coeficiente de absorción 0,892 mm-1
F(000) 1056
Tamaño del cristal 0,100 x 0,060 x 0,040 mm3
(co n tin u a c ió n )
Intervalo de Theta para la recogida de datos 3,795 a 54,284°
Intervalos de índices -18<=l<=18 -9<=h<=9, -15<=k<=15,
Reflexiones recogidas 15896
Reflexiones independientes 3070 [R n = 0,1260]
Completo hasta theta = 54,284° 99,1 %
Corrección de la absorción Empírico
Procedimiento de refinamiento Mínimos cuadrados de la matriz completa en F2 Datos / restricciones / parámetros 3070 / 9 / 349
Bondad de ajuste en F2 1,067
Índices R finales [l>2o(l)] R1 = 0,0625, wR2 = 0,1515
Índices R (todos los datos) R1 = 0,0696, wR2 = 0,1578
Parámetro de estructura absoluta 0,14 (14)
Coeficiente de extinción n/a
Mayor diferencia entre el pico y el agujero 0,280 y -0 ,220 e.Á-3
Tabla M. Coordenadas atómicas (x 104) y parámetros de desplazamiento isotrópico equivalente (Á2x103) para el Ejemplo 13, Forma sólida 4. U(eq) se define como un tercio de la traza del tensor Uij ortogonalizado x y z U(eq)
F(1) 4306 (16) 6041 (7) 2387 (4) 174 (5)
F(2) 2770 (10) 5589 (8 ) 1525 (8 ) 181 (5)
F(3) 4932 (11) 6015 (5) 1280 (6 ) 114 (3)
O(1 ) 4026 (8 ) 4159 (6 ) 2397 (4) 80 (2 )
C(1) 4115 (14) 5581 (8 ) 1775 (8 ) 105 (3)
C(2) 4561 (14) 4555 (7) 1871 (9) 65 (3)
F(1A) 3230 (70) 5710 (30) 2210 (20 ) 174 (5)
F(2A) 3400 (40) 5940 (30) 1470 (40) 181 (5)
F(3A) 4940 (60) 6060 (30) 1660 (30) 114 (3)
O(1A) 4410 (40) 4580 (20) 2430 (20) 80 (2 )
C(1A) 4210 (70) 5320 (30) 1790 (40) 105 (3)
C(2A) 4840 (70) 4850 (40) 1940 (40) 65 (3)
N(1) 5533 (5) 4303 (3) 1395 (2) 57 (1)
N(2) 8573 (4) 3139 (3) 1925 (2) 53 (1)
N(3) 6772 (4) 3489 (3) 3714 (2) 51 (1)
N(4) 8394 (7) 4673 (5) 5053 (4) 103 (2)
N(5) 1220 (5) 3638 (4) 4615 (3) 80 (2 )
O(2) 8305 (4) 3783 (3) 826 (2 ) 76 (1)
O(3) 7583 (4) 4429 (3) 2845 (2) 70 (1)
O(4) 2759 (5) 2668 (3) 5176 (3) 84 (1)
C(3) 6097 (5) 3407 (4) 1448 (3) 55 (1)
C(4) 5356 (6 ) 2775 (4) 886 (4) 66 (2 )
C(5) 3799 (7) 2611 (6 ) 1123 (5) 100 (2 )
C(6 ) 5336 (8 ) 3163 (5) 106 (3) 80 (2 )
C(7) 6176 (8 ) 1903 (5) 876 (5) 94 (2)
C(8 ) 7747 (6 ) 3468 (3) 1378 (3) 55 (1)
C(9) 10166 (5) 3230 (5) 1885 (3) 68 (2 )
C(10) 10729 (6 ) 2754 (5) 2548 (4) 73 (2)
C(11) 10341 (7) 1816 (5) 2669 (3) 73 (2)
(continuación)
x y z U(eq) C(12) 9762 (8 ) 1239 (5) 2060 (4) 89 (2) C(13) 11307 (8 ) 1311 (5) 3196 (4) 96 (2) C(14) 9439 (6 ) 2528 (4) 3023 (3) 62 (2 ) C(15) 8090 (5) 2884 (4) 2660 (3) 51 (1) C(16) 7471 (5) 3677 (3) 3070 (3) 49 (1) C(17) 6277 (6 ) 4180 (4) 4192 (3) 61 (2 ) C(18) 7465 (7) 4485 (4) 4670 (4) 78 (2) C(19) 5031 (6 ) 3887 (4) 4683 (3) 62 (2 ) C(20) 3625 (6 ) 3736 (4) 4274 (3) 59 (2) C(21) 2506 (6 ) 3278 (4) 4745 (3) 61 (1 ) C(22) 1247 (7) 4355 (5) 4095 (4) 80 (2 ) C(23) 2822 (6 ) 4572 (4) 4041 (4) 71 (2)
Tabla N. Longitudes de enlace [Al y ángulos [°| para el Ejemplo 13, Forma Sólida 4. F(1)-C(1) 1,326 (15)
F(2)-C(1) 1,320 (15)
F(3)-C(1) 1,345 (14)
O(1)-C(2) 1,233 (18)
C(1)-C(2) 1,618 (18)
C(2)-N(1) 1,303 (15)
F(1A)-C(1A) 1,33 (3)
F(1A)-F(2A) 1,40 (7)
F(2A)-C(1A) 1,33 (3)
F(2A)-F(3A) 1,47 (7)
F(3A)-C(1A) 1,34 (3)
F(3A)-C(2A) 1,90 (8 )
O(1A)-C(2A) 1,05 (8 )
O(1A)-C(1A) 1,62 (7)
C(1A)-C(2A) 0,95 (8 )
C(2A)-N(1) 1,45 (6 )
N(1)-C(3) 1,458 (7)
N(1)-H(1X) 0,98 (3)
N(2)-C(8) 1,348 (7)
N(2)-C(15) 1,462 (7)
N(2)-C(9) 1,476 (7)
N(3)-C(16) 1,368 (7)
N(3)-C(17) 1,436 (7)
N(3)-H(3X) 0,98 (3)
N(4)-C(18) 1,140 (9)
N(5)-C(21) 1,326 (8 )
N(5)-C(22) 1,441 (9)
N(5)-H(5X) 0,99 (3)
O(2)-C(8) 1,225 (7)
O(3)-C(16) 1,215 (6 )
O(4)-C(21) 1,236 (7)
C(3)-C(8) 1,528 (7)
(co n tin u a c ió n )
C(3)-C(4) 1,559 (8 )
C(3)-H(3) 1,0000
C(4)-C(5) 1,518 (9)
C(4)-C(7) 1,522 (9)
C(4)-C(6) 1,537 (9)
C(5)-H(5A) 0,9800
C(5)-H(5B) 0,9800
C(5)-H(5C) 0,9800
C(6 )-H(6A) 0,9800
C(6 )-H(6 B) 0,9800
C(6 )-H(6 C) 0,9800
C(7)-H(7A) 0,9800
C(7)-H(7B) 0,9800
C(7)-H(7C) 0,9800
C(9)-C(10) 1,497 (9)
C(9)-H(9A) 0,9900
C(9)-H(9B) 0,9900
C(10)-C(11) 1,483 (10) C(10)-C(14) 1,509 (8 ) C(10)-H(10) 1,0000
C(11)-C(14) 1,507 (8 ) C(11)-C(12) 1,509 (9) C(11)-C(13) 1,516 (10) C(12)-H(12A) 0,9800
C(12)-H(12B) 0,9800
C(12)-H(12C) 0,9800
C(13)-H(13A) 0,9800
C(13)-H(13B) 0,9800
C(13)-H(13C) 0,9800
C(14)-C(15) 1,506 (7) C(14)-H(14) 1,0000
C(15)-C(16) 1,525 (7) C(15)-H(15) 1,0000
C(17)-C(18) 1,472 (10) C(17)-C(19) 1,521 (8 ) C(17)-H(17) 1,0000
C(19)-C(20) 1,511 (8 ) C(19)-H(19A) 0,9900
C(19)-H(19B) 0,9900
C(20)-C(21) 1,509 (8 ) C(20)-C(23) 1,528 (8 ) C(20)-H(20) 1,0000
C(22)-C(23) 1,491 (9) C(22)-H(22A) 0,9900
C(22)-H(22B) 0,9900
C(23)-H(23A) 0,9900
C(23)-H(23B) 0,9900 (co n tin u a c ió n )
F(2)-C(1)-F(1) 114,1 (13)
F(2)-C(1)-F(3) 106,9 (11)
F(1)-C(1)-F(3) 103.3 (11)
F(2)-C(1)-C(2) 106.5 (12)
F(1)-C(1)-C(2) 112.4 (11)
F(3)-C(1)-C(2) 113.6 (11) O(1)-C(2)-N(1) 130.4 (10) O(1)-C(2)-C(1) 116,8 (11 ) N(1)-C(2)-C(1) 112.6 (11 ) C(1A)-F(1A)-F(2A) 59 (2)
C(1A)-F(2A)-F(1A) 58 (2)
C(1A)-F(2A)-F(3A) 57 (2)
F(1A)-F(2A)-F(3A) 85 (4)
C(1A)-F(3A)-F(2A) 56 (2)
C(1A)-F(3A)-C(2A) 28 (3)
F(2A)-F(3A)-C(2A) 84 (4)
C(2A)-O(1A)-C(1A) 34 (4)
C(2A)-C(1A)-F(1A) 125 (8 )
C(2A)-C(1A)-F(2A) 171 (9)
F(1A)-C(1A)-F(2A) 63 (4)
C(2A)-C(1A)-F(3A) 112 (7)
F(1A)-C(1A)-F(3A) 94 (5)
F(2A)-C(1A)-F(3A) 67 (4)
C(2A)-C(1A)-O(1A) 38 (5)
F(1A)-C(1A)-O(1A) 89 (4)
F(2A)-C(1A)-O(1A) 149 (5)
F(3A)-C(1A)-O(1A) 131 (7)
C(1A)-C(2A)-O(1A) 108 (8 )
C(1A)-C(2A)-N(1) 120 (8 )
O(1A)-C(2A)-N(1) 121 (5)
C(1A)-C(2A)-F(3A) 41 (4)
O(1A)-C(2A)-F(3A) 129 (5)
N(1)-C(2A)-F(3A) 110 (5)
C(2)-N(1)-C(3) 118.3 (7) C(2A)-N(1)-C(3) 130 (3)
C(2)-N(1)-H(1X) 120 (4)
C(2A)-N(1)-H(1X) 102 (5)
C(3)-N(1)-H(1X) 121 (4)
C(8)-N(2)-C(15) 127.0 (4)
C(8)-N(2)-C(9) 119.4 (5) C(15)-N(2)-C(9) 111,8 (4) C(16)-N(3)-C(17) 121.1 (4) C(16)-N(3)-H(3X) 113 (4)
C(17)-N(3)-H(3X) 123 (4)
C(21)-N(5)-C(22) 114,3 (5) C(21)-N(5)-H(5X) 120 (4)
C(22)-N(5)-H(5X) 125 (4) (co n tin u a c ió n )
N(1)-C(3)-C(8) 107,0 (4)
N(1)-C(3)-C(4) 111,9 (4)
C(8)-C(3)-C(4) 114.7 (5)
N(1)-C(3)-H(3) 107.7
C(8)-C(3)-H(3) 107.7
C(4)-C(3)-H(3) 107,7
C(5)-C(4)-C(7) 109,3 (6 )
C(5)-C(4)-C(6) 108,2 (5)
C(7)-C(4)-C(6) 109.1 (6 )
C(5)-C(4)-C(3) 109.2 (5)
C(7)-C(4)-C(3) 108,9 (5)
C(6)-C(4)-C(3) 112,1 (5)
C(4)-C(5)-H(5A) 109.5
C(4)-C(5)-H(5B) 109.5
H(5A)-C(5)-H(5B) 109.5
C(4)-C(5)-H(5C) 109.5
H(5A)-C(5)-H(5C) 109.5
H(5B)-C(5)-H(5C) 109.5
C(4)-C(6)-H(6A) 109.5
C(4)-C(6)-H(6B) 109.5
H(6A)-C(6 )-H(6 B) 109.5
C(4)-C(6)-H(6C) 109.5
H(6A)-C(6 )-H(6 C) 109.5
H(6 B)-C(6 )-H(6 C) 109.5
C(4)-C(7)-H(7A) 109.5
C(4)-C(7)-H(7B) 109.5
H(7A)-C(7)-H(7B) 109.5
C(4)-C(7)-H(7C) 109.5
H(7A)-C(7)-H(7C) 109.5
H(7B)-C(7)-H(7C) 109.5
O(2)-C(8)-N(2) 120,8 (5)
O(2)-C(8)-C(3) 120.6 (5)
N(2)-C(8)-C(3) 118,5 (5)
N(2)-C(9)-C(10) 105,1 (5)
N(2)-C(9)-H(9A) 110.7
C(10)-C(9)-H(9A) 110.7
N(2)-C(9)-H(9B) 110.7
C(10)-C(9)-H(9B) 110.7
H(9A)-C(9)-H(9B) 108,8
C(11)-C(10)-C(9) 119,9 (5) C(11)-C(10)-C(14) 60.5 (4)
C(9)-C(10)-C(14) 107,3 (4) C(11)-C(10)-H(10) 118,2
C(9)-C(10)-H(10) 118,2
C(14)-C(10)-H(10) 118,2
C(10)-C(11)-C(14) 60.6 (4)
C(10)-C(11)-C(12) 122,2 (6 ) (co n tin u a c ió n )
C(14)-C(11)-C(12) 122,3 (5) C(10)-C(11)-C(13) 115,9 (6 ) C(14)-C(11)-C(13) 114,6 (5) C(12)-C(11)-C(13) 112,2 (6 ) C(11)-C(12)-H(12A) 109,5
C(11)-C(12)-H(12B) 109,5
H(12A)-C(12)-H(12B) 109,5
C(11)-C(12)-H(12C) 109,5
H(12A)-C(12)-H(12C) 109,5
H(12B)-C(12)-H(12C) 109,5
C(11)-C(13)-H(13A) 109,5
C(11)-C(13)-H(13B) 109,5
H(13A)-C(13)-H(13B) 109,5
C(11)-C(13)-H(13C) 109,5
H(13A)-C(13)-H(13C) 109,5
H(13B)-C(13)-H(13C) 109,5
C(15)-C(14)-C(11) 121,6 (5) C(15)-C(14)-C(10) 108,5 (5) C(11)-C(14)-C(10) 58,9 (4)
C(15)-C(14)-H(14) 117,6
C(11)-C(14)-H(14) 117,6
C(10)-C(14)-H(14) 117,6
N(2)-C(15)-C(14) 104,2 (4)
N(2)-C(15)-C(16) 110,6 (4) C(14)-C(15)-C(16) 112,1 (4)
N(2)-C(15)-H(15) 109,9
C(14)-C(15)-H(15) 109,9
C(16)-C(15)-H(15) 109,9
O(3)-C(16)-N(3) 121,6 (5)
O(3)-C(16)-C(15) 122,9 (5)
N(3)-C(16)-C(15) 115,5 (4)
N(3)-C(17)-C(18) 110,5 (4)
N(3)-C(17)-C(19) 112,4 (5) C(18)-C(17)-C(19) 107,8 (5)
N(3)-C(17)-H(17) 108,7
C(18)-C(17)-H(17) 108,7
C(19)-C(17)-H(17) 108,7
N(4)-C(18)-C(17) 176,2 (8 ) C(20)-C(19)-C(17) 113,7 (5) C(20)-C(19)-H(19A) 108,8
C(17)-C(19)-H(19A) 108,8
C(20)-C(19)-H(19B) 108,8
C(17)-C(19)-H(19B) 108,8
H(19A)-C(19)-H(19B) 107,7
C(21)-C(20)-C(19) 112,1 (5) C(21)-C(20)-C(23) 102,0 (5) C(19)-C(20)-C(23) 115,2 (5) (co n tin u a c ió n )
C(21)-C(20)-H(20) 109,1
C(19)-C(20)-H(20) 109,1
C(23)-C(20)-H(20) 109,1
O(4)-C(21)-N(5) 126,1 (5)
O(4)-C(21)-C(20) 125,2 (5)
N(5)-C(21)-C(20) 108,6 (5)
N(5)-C(22)-C(23) 103,1 (5)
N(5)-C(22)-H(22A) 111,1
C(23)-C(22)-H(22A) 111,1
N(5)-C(22)-H(22B) 111,1
C(23)-C(22)-H(22B) 111,1
H(22A)-C(22)-H(22B) 109,1
C(22)-C(23)-C(20) 105,6 (5)
C(22)-C(23)-H(23A) 110,6
C(20)-C(23)-H(23A) 110,6
C(22)-C(23)-H(23B) 110,6
C(20)-C(23)-H(23B) 110,6
H(23A)-C(23)-H(23B) 108,7
Transformaciones de simetría utilizadas para generar átomos equivalentes.
Tabla P. Parámetros de desplazamiento anisotrópico (Á2x103) para el Ejemplo 13, Forma Sólida 4. El exponente del factor de desplazamiento anisotrópico tiene la forma -2n2[h2 a*2U11 ... 2 h k a* b* U12 ].
U11 U22 U33 U23 U13 U12
F(1) 279 (15) 138 (7) 106 (5) -56 (5) -28 (7) 100 (8 )
F(2) 69 (5) 172 (9) 302 (12) 75 (9) -10 (7) 44 (5)
F(3) 143 (5) 83 (3) 117 (7) -10 (5) -24 (6 ) 33 (3)
O(1 ) 77 (5) 91 (6 ) 74 (3) 1 (4) 29 (3) 9 (4)
C(1) 116 (7) 76 (10) 122 (8 ) 6 (9) 25 (6 ) 43 (10)
C(2) 65 (7) 68 (9) 63 (6 ) -13 (7) -5 (5) 18 (6 )
F(1A) 279 (15) 138 (7) 106 (5) -56 (5) -28 (7) 100 (8 )
F(2A) 69 (5) 172 (9) 302 (12) 75 (9) -10 (7) 44 (5)
F(3A) 143 (5) 83 (3) 117 (7) -10 (5) -24 (6 ) 33 (3)
O(1A) 77 (5) 91 (6 ) 74 (3) 1 (4) 29 (3) 9 (4)
C(1A) 116 (7) 76 (10) 122 (8 ) 6 (9) 25 (6 ) 43 (10)
C(2A) 65 (7) 68 (9) 63 (6 ) -13 (7) -5 (5) 18 (6 )
N(1) 49 (2) 70 (3) 53 (3) -1 (2 ) 3 (2) 19 (2)
N(2) 38 (2) 75 (3) 45 (3) -2 (2 ) 3 (2) 2 (2 )
N(3) 50 (2) 51 (2) 52 (3) 1 (2 ) 3 (2) 4 (2)
N(4) 60 (3) 130 (5) 119 (5) -49 (4) 0 (4) -10 (3)
N(5) 53 (3) 105 (4) 82 (4) 17 (3) 15 (3) 11 (3)
O(2) 51 (2) 114 (3) 62 (3) 25 (2) 12 (2 ) 6 (2 )
O(3) 78 (2) 55 (2) 76 (3) 4 (2) 18 (2 ) 0 (2 )
O(4) 82 (3) 83 (3) 86 (3) 30 (3) -2 (2 ) -11 (2 )
C(3) 45 (3) 70 (3) 51 (3) 9 (3) 4 (2) 9 (3)
C(4) 48 (3) 70 (4) 79 (4) -5 (3) -7 (3) 5 (3)
C(5) 56 (3) 131 (6 ) 114 (6 ) -16 (5) 4 (4) -22 (4)
(co n tin u a c ió n )
U11 U22 U33 U23 U13 U12
C(6 ) 76 (4) 107 (5) 59 (4) -15 (4) -9 (3) 12 (4)
C(7) 82 (4) 83 (5) 117 (6 ) -17 (4) -18 (4) 6 (4)
C(8 ) 44 (3) 60 (3) 60 (4) -2 (3) 6 (3) 7 (2)
C(9) 37 (3) 95 (4) 70 (4) -2 (4) 1 (3) 2 (3)
C(10) 41 (3) 105 (5) 73 (4) -24 (4) -8 (3) 5 (3)
C(11) 69 (4) 82 (4) 67 (4) -11 (4) -12 (3) 20 (3)
C(12) 85 (4) 96 (5) 87 (5) -24 (4) -17 (4) 34 (4)
C(13) 82 (4) 116 (6 ) 90 (5) -25 (4) -18 (4) 48 (4)
C(14) 55 (3) 74 (4) 57 (3) -6 (3) -6 (3) 16 (3)
C(15) 44 (2) 59 (3) 51 (3) 0 (3) -4 (2) 2 (2 )
C(16) 39 (2) 48 (3) 59 (3) 2 (3) 3 (2) -4 (2)
C(17) 49 (3) 62 (3) 73 (4) -3 (3) 2 (3) 3 (3)
C(18) 57 (4) 85 (4) 92 (5) -26 (4) 26 (4) -8 (3)
C(19) 59 (3) 65 (3) 63 (4) 0 (3) 15 (3) 8 (3)
C(20) 49 (3) 61 (3) 66 (4) 6 (3) 2 (3) 6 (2 )
C(21) 58 (3) 72 (4) 53 (3) 6 (3) 6 (3) 2 (3)
C(22) 65 (4) 92 (5) 82 (5) 13 (4) 11 (3) 16 (3)
C(23) 62 (3) 74 (4) 77 (4) 21 (3) 7 (3) 5 (3)
Lista de picos de RMN de estado sólido 13C de PF-07321332-00 Forma 4. La variabilidad de los valores de desplazamiento químico del 13C es de ±0,2 ppm, a menos que se indique lo contrario.
Figure imgf000081_0001
Se obtuvo la RMN de estado sólido del 19F del compuesto del Ejemplo 13, Forma 4, y se determinó un pico a -73,6 ± 0,1 con una intensidad relativa del 100 %.
Para el compuesto del Ejemplo 13, Forma 4, se identificaron seis picos característicos: desplazamiento químico del 19F a -73,6 ± 0,1 ppm y del 13C a 26,9 ± 0,1 ppm, 21,6 ± 0,1 ppm, 41,5 ± 0,2 ppm, 27,9 ± 0,1 ppm y 12,9 ± 0,1. El pico 19F con desplazamiento químico a -73,6 ± 0,1 ppm es característico del compuesto del Ejemplo 13, Forma 4. Los picos del 13C a 26,9 ± 0,1 ppm, 21,6 ± 0,1 ppm y 41,5 ± 0,1 ppm son cada uno de los picos característicos del compuesto del Ejemplo 13, Forma 4. Los picos del 13C a 27,9 ppm y 12,9 ppm son cada uno característicos del compuesto del Ejemplo 13, Forma 4 cuando se toman en combinación con uno o más de los picos seleccionados de entre los picos del 13C a 21,6 ppm, 26,9 ppm y 41,5 ppm y el pico del 19F a -73,6 ppm.
Cuarta síntesis alternativa del Ejemplo 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo
(1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6.6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da. solvato de éter de tert-butilo de metilo (13,solvato de éter de tert-butilo de metilo)
Figure imgf000082_0001
Se cargo a una suspensión a 0 °C de C43 (5.0 g. 9.7 mmol) en acetato de propan-2-ilo (7.6 ml/g. 38 ml).4-metilmorfolina (4.5 equivalentes; 4.8 ml. 44 mmol). A la suspensión resultante se le cargó anhídrido trifluoroacético (2.25 equivalentes; 3.1 ml. 22 mmol) a lo largo de 1 hora mediante una bomba dosificadora. Tras agitar a 0 °C durante al menos 1 hora. la mezcla de reacción se calentó hasta aproximadamente 20 °C. se apagó con agua (8 ml/g. 40 ml) y se agitó durante al menos 10 minutos. Tras la decantación. se descartó la capa de fondo (acuosa) y se añadió agua (8 ml/g. 40 ml) a la capa orgánica. Tras agitar durante al menos 10 minutos. se separaron las capas y se descartó la capa inferior (acuosa). La capa orgánica se concentró bajo presión reducida hasta aproximadamente 4 ml/g (aproximadamente 20 ml). tras lo cual se rompió el vacío con nitrógeno y la solución se calentó hasta aproximadamente 50 °C. Se añadió lentamente metil tert-butil éter (12 ml/g. 60 ml) durante al menos 4 horas a través de un embudo de adición. y la mezcla de reacción se mantuvo a 50 °C durante al menos 1 hora antes de enfriarla a 25 °C durante 1 hora. La suspensión resultante se mantuvo a 25 °C durante la noche. luego se filtró. se lavó secuencialmente con una mezcla de acetato de propan-2-ilo y metil tert-butil éter [1:3 (v/v); 2 ml/g] y con metil tert-butil éter (2 ml/g. 10 ml). y se secó en el filtro durante al menos 30 minutos. A continuación. los sólidos se transfirieron a una estufa de vacío a 50 °C y se secaron durante al menos 8 horas. obteniéndose (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etilo}-6.6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil1-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxamida. solvato de éter de tert-butilo de metilo (13, solvato de éter de tert-butilo de metilo) como un sólido blanquecino. Producción: 3.4 g. 5.8 mmol. 60 %.
Quinta Síntesis Alternativa del Ejemplo 13, solvente de metil tert-butil éter
(1R.2S.5S)-N-f(1S)-1-ciano-2-r(3S)-2-oxopirrolidin-3-illetil}-6.6-dimetil-3-r3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valill-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da. solvato de éter de tert-butilo de metilo (13, solvato de éter de tert-butilo de metilo)
Figure imgf000082_0002
Se cargó a una suspensión a temperatura ambiente de C43 (4.0 g. 7.7 mmol) en acetonitrilo (10 ml/g. 40 ml). 1-metil-1H-imidazol (4.6 equivalentes; 2.84 ml. 35.6 mmol) y la mezcla resultante se calentó hasta aproximadamente 30 °C. Se añadió una solución de 2.4.6-tripropil-1.3.5.2.4.6-trioxatrifosfina 2.4.6-trióxido (solución al 50 % en peso en acetonitrilo; 2 equivalentes; 10.8 ml) durante al menos 6 horas usando una bomba. Después de agitar la mezcla de reacción durante al menos 10 horas, se enfrió a 25 °C y se apagó cuidadosamente añadiendo una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (7 ml/g, 28 ml) (exotérmica y con desprendimiento de gases). A continuación, se destiló el acetonitrilo a presión reducida; a la mezcla resultante se añadió acetato de etilo (10 ml/g, 40 ml) y una solución acuosa adicional de bicarbonato sódico saturado (5 ml/g, 20 ml). Después de la separación de fases, la capa de fondo (acuosa) se descartó y la capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (3,5 ml/g; 14 ml). La capa acuosa se desechó de nuevo y la capa orgánica se concentró bajo presión reducida hasta aproximadamente 1 ml/g (4 ml). Se cargó metil tert-butil éter (9 ml/g; 36 ml) y la solución resultante se calentó a 50 °C, dando lugar rápidamente a una pasta. Esta pasta se mantuvo a 50 °C durante al menos 30 minutos, tras lo cual se enfrió a 25 °C durante 1 hora y se mantuvo a 25 °C durante al menos 8 horas. A continuación, se filtró la suspensión, se lavó con una mezcla de acetato de metil tert-butil éter [1:3 (v/v); 2 ml/g], y luego se lavó con metil tert-butil éter (2 ml/g; 8 ml). El sólido recogido se secó en el filtro durante al menos 30 minutos, se transfirió a una estufa de vacío a aproximadamente 50 °C y se secó durante al menos 8 horas, obteniéndose (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida, solvato de éter de tert-butilo de metilo (13, solvato de éter de tert-butilo de metilo) como un sólido blanquecino. Producción: 2,9 g, 4,9 mmol, 64%.
Ejemplos de formulación para el compuesto del Ejemplo 13
Se formula (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metill-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida o un hidrato o solvato del mismo o una sal farmacéuticamente aceptable del compuesto, hidrato o solvato para hacer un comprimido recubierto de liberación inmediata convencional para administración oral, con dosis que van de 100 a 250 mg. Como ejemplo, una formulación de liberación inmediata se describe en la Tabla de Formulación y comprende excipientes inactivos convencionales, celulosa microcristalina y lactosa monohidratada (diluyentes), crospovidona (desintegrante), dióxido de silicio coloidal (deslizante) y estearil fumarato de sodio (lubricante). Los comprimidos de liberación inmediata están recubiertos con película utilizando formulaciones de recubrimiento disponibles en el mercado, incluyendo Opadry blanco y Opadry rosa. Todos los excipientes utilizados en el comprimido recubierto son globalmente aceptables y están presentes en los niveles precedentes. La formulación proporcionada es un ejemplo de formulación de comprimidos de liberación inmediata, y como tal, un experto en la técnica podría utilizar técnicas rutinarias fácilmente disponibles utilizando excipientes de formulación alternativos para hacer comprimidos adecuados y lograr los atributos de calidad de los comprimidos deseados.
Ejemplos de Formulación: Formulaciones representativas de comprimidos recubiertos de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidm-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida
Los comprimidos de liberación inmediata de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etilo}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (denominados a continuación API) se fabrican mediante procedimientos rutinarios y estándar por lotes para comprimidos sólidos de liberación inmediata por vía oral. Algunos ejemplos de procedimientos estándar por lotes que podrían utilizarse para fabricar (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida de liberación inmediata incluyen la compresión directa, la granulación en seco y la granulación en húmedo. Como alternativa, se podría utilizar un procedimiento de fabricación de operación continua. Tras la compresión de los comprimidos, los núcleos de los mismos se recubren con una película. El recubrimiento de comprimidos puede realizarse mediante una operación de recubrimiento continuo o utilizando un procedimiento convencional de recubrimiento por lotes.
Tabla de formulación: 100 mg, 150 mg y 250 mg de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-m l- - -m l-N- rfl r l -L-v lil1- - z l .1. 1h x n -2- r x m n m rimi
Figure imgf000083_0001
(continuación)
Figure imgf000084_0001
Ejemplo 14 (solo como referencia)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l)am¡no)-5.5.5-tr¡fluoro-1-oxopentan-2-¡ll-4-metox¡-1H-¡ndol-2-carboxamida(14)
Figure imgf000085_0001
Paso 1: Síntesis del 9H-fluoren-9-ilmetil f(2S)-1-am¡no-5.5,5-tr¡fluoro-1-oxopentan-2-¡l1carbamato (C34).
Se añadió bicarbonato de sodio (4.8 g. 57 mmol) a una solución de 5,5,5-trifluoro-L-norvalinamida, sal de clorhidrato (ésta se sintetizó utilizando el procedimiento descrito para su enantiómero, en J. E. Starrett, PCT Int. Appl., 2010107997, 23 de septiembre de 2010; 4,0 g, 19 mmol) y 9H-fluoren-9-ilmetil carbonocloridato (cloruro de Fmoc; 10,2 g, 39,4 mmol) en agua (80 ml). La suspensión resultante se agitó entre 15 °C y 25 °C durante 24 horas, tras lo cual se repartió entre agua y diclorometano. La capa orgánica se lavó secuencialmente con agua y solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró in vacuo proporcionando C34 como sólido. Producción: 6,2 g, 16 mmol, 83%. LCMS m/z 393,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 7,9 (d, 2H), 7,7 (m, 2H), 7,5 (d, 1H), 7,4 (m, 5H), 7,1 (br s, 1H), 4,3 (m, 3H), 4,0 (m, 1H), 2,2 (m, 2H), 1,9 (m, 1H), 1,7 (m, 1H).
Paso 2: Síntesis de N-r^H-fluoren^-ilmetoxOcarbonill^^^-trifluoro-L-norvalina (C35).
Se añadió a una solución de C34 (6,2 g, 16 mmol) en 1,4-dioxano (60 ml) ácido clorhídrico (3 M; 10 ml, 30 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 80 °C durante 16 horas. A continuación se repartió entre agua y diclorometano, y la capa orgánica se lavó con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se trituró con éter de petróleo para obtener C35 como sólido. Producción: 5,5 g, 14 mmol, 88 %. LCMS m /z 392,1 [M-H]-.1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 12,83 (br s, 1H), 7,89 (d, J = 7,4 Hz, 2H), 7,77 -7,67 (m, 3H), 7,46 -7,38 (m, 2H), 7,36 -7,28 (m, 2H), 4,38 -4,28 (m, 2H), 4,26-4,19 (m, 1H), 4,06 (ddd, J = 9, 9, 4,9 Hz, 1H), 2,43-2,15 (m, 2H), 2,01 - 1,89 (m, 1H), 1,89 - 1,75 (m, 1H).
Paso 3: Síntesis de N-r^H-fluoren^-ilmetoxOcarbonill^^^-trifluoro-L-norvalinato de bencilo (C36).
Se agitó una mezcla de C35 (435 mg, 1,11 mmol), bromuro de bencilo (0,263 ml, 2,21 mmol) y bicarbonato de sodio (464 mg, 5,52 mmol) en N,N-dimetilformamida (20 ml) durante 15 horas a 25 °C. Después de diluir la mezcla de reacción con agua (30 ml) y extraerla con acetato de etilo (3 * 30 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con solución acuosa saturada de cloruro sódico y solución acuosa de cloruro de litio al 5%, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 100 % de acetato de etilo en éter de petróleo) proporcionó C36 como un sólido blanco. Producción: 510 mg, 1,05 mmol, 95 %. LCMS m /z 506.1 [M+Na+].
Paso 4: Síntesis del 5.5.5-tr¡fluoro-L-norval¡nato de bencilo (C37).
Se añadió dietilamina (10 ml) a una mezcla a 0 °C de C36 (510 mg, 1,05 mmol) en acetonitrilo (25 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a 20 °C durante 2 horas, se concentró bajo presión reducida; cromatografía sobre gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) y luego se obtuvo C37 como un aceite incoloro. Producción: 250 mg, 0,957 mmol, 91 %. LCMS m /z 302,9 [M CH3CN H]+. 1H RMN(400 MHz, cloroformo-d) 8 7,42-7,32 (m, 5H), 5,17 (s, 2H), 3,50 (dd, J = 8,4, 5,0 Hz, 1H), 2,32 - 2,13 (m, 2H), 2,01 (dddd, J = 13,7, 10,8, 5,2, 5,2 Hz, 1H), 1,76 (dddd, J = 13,6, 10,8, 8,4, 5,3 Hz, 1H).
Paso 5: Síntesis del 5.5.5-tr¡fluoro-N-r(4-metox¡-1H-¡ndol-2-¡l)carbon¡l1-L-norval¡nato de bencilo (C38).
Se añadió a una solución a 0 °C de C37 (250 mg, 0,957 mmol) y ácido 4-metoxi-1H-indol-2-carboxílico (220 mg, 1,15 mmol) en N,N-dimetilformamida (10 ml), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotr¡azol-1-¡l)-N,N,N',N'-tetramet¡luron¡o (HATU; 437 mg, 1,15 mmol), seguido de la adición gota a gota de 4-metilmorfolina (194 mg, 1,92 mmol). Se continuó agitando de 0 °C a 10 °C durante 1 hora, tras lo cual la mezcla de reacción se diluyó con agua (20 ml) y solución acuosa de ácido cítrico (20 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 * 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (30 ml), solución acuosa saturada de cloruro sódico y solución acuosa de cloruro de litio (5 %, 20 ml), luego se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. El residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 100 % de acetato de etilo en éter de petróleo) para proporcionar C38 como un sólido blanco. Producción: 350 mg, 0,806 mmol, 84%. LCMS m /z 435,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 8 9,09 (br s, 1H), 7,42 - 7,33 (m, 5H), 7,23 (dd, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,09 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,76 (br d, J = 7,6 Hz, 1H), 6,53 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,25 (cuarteto de AB, J ab = 12,1 Hz, Av ab = 11,4 Hz, 2H), 4,94-4,87 (m, 1H), 3,96 (s, 3H), 2,35-2,14 (m, 2H), 2,14-1,96 (m, 2H).
Paso 6 : Síntesis de 5.5.5-tr¡fluoro-N-r(4-metox¡-1H-¡ndol-2-¡l)carbon¡l1-L-norval¡na (C39).
Se hidrogenó una mezcla de C38 (350 mg, 0,806 mmol) y paladio sobre carbono (10 %, 85,7 mg, 80,5 pmol) en metanol (10 ml) durante 16 horas a 20 °C y 15 psi. La mezcla de reacción se filtró y la torta del filtro se lavó con metanol (10 ml); los filtrados combinados se concentraron in vacuo y se sometieron a cromatografía en gel de sílice (eluyente: acetato de etilo) para obtener C39 como un sólido blanco. Producción: 270 mg, 0,784 mmol, 97 %. LCMS m /z 345,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 11,62 (br s, 1H), 8,61 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,11 (dd, J = 8 , 8 Hz, 1H), 7,01 (d, mitad del cuarteto AB, J = 8,2 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 4,47 (ddd, J = 8,5, 8,5, 4,8 Hz, 1H), 3,89 (s, 3H), 2,5 - 2,27 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por pico de disolvente), 2,12-1,92 (m, 2H).
Paso 7: Síntesis de 5.5.5-tr¡fluoro-N-[(4-metox¡-1H-¡ndol-2-¡l)carbon¡lo1-L-norval¡l-3-[(3S)-2-oxop¡rrolid¡n-3-¡l1-L-alaninamida (C40).
Se trató una mezcla a 0 °C de C16 (58.2 mg, 0.218 mmol) y C39 (75.0 mg, 0.218 mmol) en N.N-dimetilformamida (4 ml) con hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-¡l)-N.N.N'.N'-tetrametiluron¡o (HATU; 99.4 mg. 0.261 mmol) y 4-metilmorfolina (44.1 mg. 0.436 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 1 hora. se diluyó con agua (20 ml) y solución acuosa de ácido cítrico (1 M; 20 ml). y se extrajo con acetato de etilo (3 * 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (20 ml) y con solución acuosa saturada de cloruro sódico (3 * 20 ml). se secaron sobre sulfato sódico. se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía sobre gel de sílice (Eluyente: 10:1 acetato de etilo / metanol) proporcionó C40 como un sólido blanco. Producción: 72 mg. 0.145 mmol. 66 %. LCMS m/z 498.2 [M+H]+. 1H RMN(400 MHz. DMSO-da) 6 11.60 (br s. 1H). 8.52 (d. J = 7.7 Hz.
1H). 8.20 (d. J = 8.3 Hz. 1H). 7.61 (s. 1H). 7.42-7.33 (m. 2H). 7.14-7.05 (m. 2H). 7.00 (d. mitad del cuarteto AB. J = 8.2 Hz. 1H). 6.51 (d. J = 7.7 Hz. 1H). 4.58 -4.46 (m. 1H). 4.32-4.22 (m. 1H). 3.89 (s. 3H). 3.18-3.02 (m. 2H). 2.45-2.21 (m.
3H). 2.18-2.07 (m. 1H). 2.06 - 1.88 (m. 3H). 1.73 - 1.59 (m. 1H). 1.59 - 1.48 (m. 1H).
Paso 8 : Síntesis de N-[(2S)-1-({(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}am¡no)-5.5.5-trifluoro-1-oxopentan-2-¡l1-4-metoxi-1H-¡ndol-2-carboxam¡da j m
Se añadió a una mezcla de C40 (52 mg. 0.10 mmol) en diclorometano (13 ml) se añadió N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo. sal interna (reactivo de Burgess; 37 mg. 0.16 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1.5 horas. tras lo cual se añadió de nuevo N-(trietilammon¡osulfon¡l)carbamato de metilo. sal interna (reactivo de Burgess; 37 mg. 0.16 mmol). y se continuó agitando durante 16 horas. Una adición final de W-(trietilammon¡osulfon¡l)carbamato de metilo. sal interna (reactivo de Burgess; 24.9 mg. 0.105 mmol) se siguió agitando durante 2 horas. tras lo cual la mezcla de reacción se diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con diclorometano (3 * 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con una solución acuosa saturada de cloruro sódico (2 * 20 ml). se secaron sobre sulfato sódico. se filtraron y se concentraron in vacuo; cromatografía de capa fina preparatoria (Eluyente: 20:1 acetato de etilo / metanol) permitió obtener -[(2S)-1-({(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡na-3-¡l1et¡l}am¡no)-5.5.5-tr¡fluoro-1-oxopentan-2-¡l]-4-metox¡-1H-¡ndol-2-carboxamida (14) como un sólido blanco. Rendimiento: 17.4 mg. 36.3 pmol. 36 %. Este material se combinó con los productos purificados de otras dos síntesis de 14 (3 mg y 4 mg) y se sometió a cromatografía de fluidos supercríticos [Columna: Chiral Technologies ChiralCel OD-H. 30 * 250 mm. 5 pm; fase móvil: 7:3 dióxido de carbono / (etanol con 0.1 % de hidróxido de amonio); Caudal: 60 ml/minuto1 para proporcionar N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}amino)-5.5.5-tr¡fluoro-1-oxopentan-2-¡l1-4-metox¡-1H-¡ndol-2-carboxam¡da (14) como sólido. Rendimiento: 11.3 mg. 23.6 pmol. 46% para la cromatografía de fluidos supercríticos. LCMS m /z 480.2 [M+H1+. 1H RMN (400 MHz. DMSO-cfe) 6 11.61 (br s. 1H). 8.96 (d. J = 8.0 Hz. 1H). 8.61 (d. J = 7.7 Hz. 1H). 7.71 (s. 1H). 7.37 (d. J = 2.2 Hz. 1H). 7.11 (dd. J = 8.8 Hz. 1H). 7.01 (d. mitad del cuarteto AB. J = 8.2 Hz. 1H). 6.51 (d. J = 7.7 Hz. 1H).
5.03-4.94 (m. 1H). 4.51-4.43 (m. 1H). 3.89 (s. 3H). 3.19-3.07 (m. 2H). 2.43 -2.28 (m. 3H). 2.20 -2.08 (m. 2H). 2.06 -1.92 (m. 2H). 1.86 - 1.76 (m. 1H). 1.76 - 1.64 (m. 1H).
Ejemplos 15, 16, 17, 18 y 19 (solo como referencia)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}am¡no)-4-met¡l-1-oxopentan-2-il1-7-fluoro-4-metox¡-1H-¡ndol-2-carboxamida(15). N-[(2S)-1-({(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}amino)-4-met¡l-1-oxopentan-2-¡l1-5-fluoro-4-metoxi-1H-¡ndol-2-carboxam¡da(16). N-[(2S)-1-({(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxopirrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}am¡no)-4-met¡l-1-oxopentan-2-il1-3-fluoro-4-metox¡-1H-¡ndol-2-carboxam¡da(17). N-[(2S)-1-({(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxopirrolid¡n-3-¡l1et¡l}am¡no)-4-met¡l-1-oxopentan-2-¡l1-5.7-d¡fluoro-4-metoxi-1H-¡ndol-2-carboxam¡da (18). y N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}am¡no)-4-met¡l-1-oxopentan-2-¡l1-3.5-d¡fluoro-4-metoxi-1H-¡ndol-2-carboxam¡da(19)
Figure imgf000088_0001
Se trató una mezcla de 4 (10,0 mg, 22,8 ^mol), decatungstato de tetra-n-butilamonio (TBADT; 3,78 mg, 1,14 ^mol) y N-fluoro-N-(fenilsulfonil)bencenosulfonamida (8.61 mg, 27,3 ^mol) con acetonitrilo (0,75 ml), agua (0,5 ml) y ácido trifluoroacético (1,74 ul, 22,6 ^mol) bajo argón. A continuación se selló el vial de reacción, se colocó en una EvoluChem™ PhotoRedOx Box equipada con un ventilador y se irradió con luz negra (PAR20-18W LG 365 nm, 100­ 240 VAC) a 25 °C durante 16 horas. A la mezcla de reacción se añadió una solución acuosa de fosfato de potasio (1 M, pH 7,45; 1 ml), seguida de alícuotas alternas de agua y acetonitrilo para mantener una solución clarificada a un volumen final de 18 ml. Se aplicaron alícuotas (3 ml) de esta mezcla a los cartuchos de extracción en fase sólida Biotage Isolute C18 que habían sido preacondicionados con metanol (3 ml) seguido de agua (3 ml). Los cartuchos se lavaron con agua (3 ml) y con acetonitrilo al 20 % en solución acuosa de acetato de amonio 20 mM (3 ml), y luego se eludieron con acetonitrilo (3 ml). Una vez evaporados los eludidos en una centrífuga de vacío, los residuos se reconstituyeron en una mezcla de ácido fórmico acuoso al 1% y acetonitrilo, y se combinaron hasta un total de 6 ml. Esta solución se dividió por la mitad y cada mitad se sometió a una HPLC de fase inversa (Columna: Phenomenex Luna C18,10 * 250 mm, 10 ^m; Fase móvil A: agua con 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 15 % B durante 5 minutos, luego 15 % a 70 % B durante 70 minutos, luego 70 % a 95 % B durante 15 minutos; Caudal: 2 ml/min). Las fracciones se recogieron cada 20 segundos, y las fracciones de interés de las dos separaciones se agruparon y concentraron. Estas fracciones se purificaron aún más mediante HPLC en fase inversa (Columna: Agilent Polaris C18, 4,6 * 250 mm, 5 ^m; Fase móvil A: agua que contenía 10 mM de acetato de amonio; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 10 % de B durante 5 minutos, luego del 10% al 35% de B durante 35 minutos, luego del 35 % al 60 % de B durante 15 minutos, luego del 60 % al 95 % de B durante 9 minutos; Caudal: 0,8 ml/min). Las fracciones se recogieron cada 20 segundos, obteniéndose N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il]-7-fluoro-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (15), N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3- il1etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il1-5-fluoro-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (16), N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il]-3-fluoro-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (17), N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4-metil-1-oxopentan-2-il]-5,7-difluoro-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (18), y N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4-metill-1-oxopentan-2-il1-3,5-difluoro-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (19).
Figure imgf000089_0001
15 - Primera separación, números de fracción 172-174; Segunda separación, números de fracción 136-137. Rendimiento: 58 |jg, 0,13 |jmol, 0,6 %. MS de alta resolución m /z 458,2201 [M+H]+; calculado para C23H29FN5O4, 458.2204. 1H RMN (600 MHz, DMSO-da) 8 12,05 (br s, 1H), 8,93 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 8,51 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,37 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,92 (dd, J = 10,8, 8 ,6 Hz, 1H), 6,42 (dd, J = 8,4, 2,5 Hz, 1H), 5,01 -4,94 (m, 1H), 4,50­ 4,43 (m, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,18-3,07 (m, 2H), 2,40-2,31 (m, 1H), 2,19-2,08 (m, 2H), 1,85 - 1,76 (m, 1H), 1,76 - 1,64 (m, 3H), 1,58 - 1,49 (m, 1H), 0,94 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,3 Hz, 3H). Tiempo de retención: 7,90 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Phenomenex Kinetex XB-C18, 2,1 * 100 mm, 2,6 jm; Fase móvil A: agua que contenía 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 5 % B durante 0,5 minutos, luego 5 % a 70 % B durante 10,5 minutos, luego 70 % a 95 % B durante 2 minutos; Caudal: 0,4 ml/min).
16 - Primera separación, números de fracción 172-174; Segunda separación, números de fracción 138-139. Rendimiento: 153 jg, 0,33 jmol, 1,4 %. MS de alta resolución m /z 458,2201 [M+H]+; calculado para C23H29FN5O4, 458.2204. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 8 11,73 (br s, 1H), 8,95 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,61 (d, J = 7,7 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,09 - 7,03 (m, 2H), 5,01 -4,94 (m, 1H), 4,51 -4,43 (m, 1H), 4,06 (s, 3H), 3,18-3,07 (m, 2H), 2,40­ 2,31 (m, 1H), 2,19 -2,08 (m, 2H), 1,80 (ddd, J = 13,6, 9,2, 7,2 Hz, 1H), 1,76 - 1,65 (m, 3H), 1,58 - 1,50 (m, 1H), 0,94 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,89 (d, J = 6,3 Hz, 3H). Tiempo de retención: 7.,94 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 15).
17 - Primera separación, números de fracción 176-177; Segunda separación, números de fracción 141-142. Rendimiento: 22 jg, 0,048 jmol, 0,21 %. MS de alta resolución m /z 458,2199 [M+H]+; calculado para C23H29FN5O4, 458.2204. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 8 11,45 (s, 1H), 8,94 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,62 (br d, J = 7,5 Hz, 1H), 7,16 (dd, J = 8 , 8 Hz, 1H), 6,95 (br d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,54 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,02 -4,94 (m, 1H), 4,54 -4,46 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,19-3,07 (m, 2H), 2,41 -2,31 (m, 1H), 2,20-2,08 (m, 2H), 1,85 - 1,77 (m, 1H), 1,76 - 1,63 (m, 3H), 1,61 -1,53 (m, 1H), 0,94 (d, J = 6,3 Hz, 3H), 0,91 (d, J = 6,3 Hz, 3H). Tiempo de retención: 8,06 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 15).
18 - Primera separación, números de fracción 180-181; Segunda separación, número de fracción 145. Rendimiento: 17 jg, 0,036 jmol, 0,16 %. MS de alta resolución m /z 476,2100 [M+H]+; calculado para C23H28F2N5O4, 476,2109. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 8 12,23 (s, 1H), 8,96 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,62 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,52-7,48 (m, 1H), 7,13 (dd, J = 11, 11 Hz, 1H), 5,02-4,94 (m, 1H), 4,53-4,44 (m, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,18 -3,07 (m, 2H), 2,38-2,30 (m, 1H), 2,19-2,08 (m, 2H), 1,81 (ddd, J = 13,6, 9,1, 7,0 Hz, 1H), 1,76 - 1,65 (m, 3H), 1,59 - 1,51 (m, 1H), 0,95 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,3 Hz, 3H). Tiempo de retención: 8,20 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 15).
19 - Primera separación, números de fracción 185-187; Segunda separación, números de fracción 150-151. Rendimiento: 35 jg, 0,074 jmol, 0,32 %. MS de alta resolución m /z 476,2107 [M+H]+; calculado para C23H28F2N5O4, 476,2109. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 8 11.64 (s, 1H), 8,94 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,80 (br d, J = 7 Hz, 1H), 7,71 (s, 1H), 7,16 (dd, componente del sistema ABX, J = 11,9, 9,1 Hz, 1H), 7,08 (br d, mitad del cuarteto AB, J = 8,5 Hz, 1H), 5.02 -4,94 (m, 1H), 4,55-4,47 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,19-3,08 (m, 2H), 2,41 -2,32 (m, 1H), 2,19-2,10 (m, 2H), 1,81 (ddd, J = 13,7, 9,0, 7,2 Hz, 1H), 1,77-1,63 (m, 3H), 1,57 (ddd, J = 12,9, 8,4, 4,8 Hz, 1H), 0,94 (d, J = 6,4 Hz, 3H), 0,91 (d, J = 6,4 Hz, 3H). Tiempo de retención: 8,44 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 15).
Ejemplos 20, 21, 22 y 23 (solo como referencia)
N-[(2S)-1-({(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}am¡no)-4.4-d¡metil-1-oxopentan-2-¡l1-7-fluoro-4-metox¡-1H-indol-2-carboxamida (20), N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2-¡l1-5-fluoro-4-metoxi-1H-¡ndol-2-carboxam¡da (21), N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4,4-d¡met¡l-1-oxopentan-2-il1-3-fluoro-4-metox¡-1H-¡ndol-2-carboxam¡da (22), y N-[(2S)-1-({(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}am¡no)-4.4-d¡met¡l-1-oxopentan-2-¡l1-5.7-d¡fluoro-4-metox¡-1H-¡ndol-2-carboxam¡da (23)
Figure imgf000090_0001
Se trató una mezcla de 10 (10,0 mg, 22,0 ^mol), decatungstato de tetra-n-butilamonio (TBADT; 3,66 mg, 1,10 ^mol) y N-fluoro-N-(fenilsulfonil)bencenosulfonamida (8.34 mg, 26,4 ^mol) con acetonitrilo (0,75 ml), agua (0,5 ml) y ácido trifluoroacético (1,69 ul, 21,9 ^mol) bajo argón. A continuación se selló el vial de reacción, se colocó en una EvoluChem™ PhotoRedOx Box equipada con un ventilador y se irradió con luz negra (PAR20-18W LG 365 nm, 100­ 240 VAC) a 25 °C durante 16 horas. A la mezcla de reacción se añadió una solución acuosa de fosfato de potasio (1 M, pH 7,45; 1 ml), seguida de alícuotas alternas de agua y acetonitrilo para mantener una solución clarificada a un volumen final de 18 ml. Se aplicaron alícuotas (3 ml) de esta mezcla a los cartuchos de extracción en fase sólida Biotage Isolute C18 que habían sido preacondicionados con metanol (3 ml) seguido de una solución acuosa de acetato de amonio (10 mM; 3 ml). Los cartuchos se lavaron con una solución acuosa de acetato de amonio (10 mM; 3 ml) y con acetonitrilo al 20 % en acetato de amonio 20 mM (3 ml), y luego se eludieron con acetonitrilo (3 ml). Una vez evaporados los eludidos en una centrífuga de vacío, los residuos se reconstituyeron en una mezcla de ácido fórmico acuoso al 1% y acetonitrilo, y se combinaron hasta un total de 6 ml. Esta solución se dividió por la mitad y cada mitad se sometió a una HPLC de fase inversa (Columna: Phenomenex Luna C18,10 * 250 mm, 10 ^m; Fase móvil A: agua con 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 15 % B durante 5 minutos, luego 15 % a 70 % B durante 70 minutos, luego 70 % a 95 % B durante 15 minutos; Caudal: 2 ml/min). Las fracciones se recogieron cada 20 segundos, y las fracciones de interés de las dos separaciones se agruparon y concentraron. Estas fracciones se purificaron aún más mediante HPLC en fase inversa (Columna: Agilent Polaris C18, 4,6 * 250 mm, 5 ^m; Fase móvil A: agua que contenía 10 mM de acetato de amonio; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 10 % B durante 5 minutos, luego un aumento inmediato al 20 % B, luego 20 % a 40 % B durante 35 minutos, luego 40 % a 60 % de B durante 15 minutos, luego 60 % a 95 % de B durante 9 minutos; Caudal: 0,8 ml/min). Las fracciones se recogieron cada 20 segundos, obteniéndose N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2-il]-7-fluoro-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (20), N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2-il]-5-fluoro-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (21), N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2-il]-3-fluoro-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (22), y N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2-il]-5,7-difluoro-4-metoxi-1H-indol-2-carboxamida (23).
Figure imgf000091_0002
20 - Primera separación, números de fracción 183-185; Segunda separación, números de fracción 150-151. Rendimiento: 24 ^g, 0,051 ^mol, 0,23 %. MS de alta resolución m /z 472,2342 [M+H]+; calculado para C24H3iFN5O4, 472.2360. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 512,05 (br s, 1H), 8,91 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,52 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,37 - 7,32 (m, 1H), 6,92 (dd, J = 10,9, 8,4 Hz, 1H), 6,41 (dd, J = 8,5, 2,7 Hz, 1H), 5,00-4,93 (m, 1H), 4,52 (ddd, J = 8,5, 8,2, 3,7 Hz, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,17 - 3,05 (m, 2H), 2,38-2,30 (m, 1H), 2,18 - 2,06 (m, 2H), 1,85-1,64 (m, 4H), 0,94 (s, 9H). Tiempo de retención: 8,32 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Phenomenex Kinetex XB-C18, 2,1 x 100 mm, 2,6 ^m; Fase móvil A: agua que contenía 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 5 % B durante 0,5 minutos, luego 5 % a 70 % B durante 10,5 minutos, luego 70 % a 95 % B durante 2 minutos; Caudal: 0,4 ml/minuto).
21 - Primera separación, números de fracción 183-185; Segunda separación, números de fracción 152-153. Rendimiento: 68 ^g, 0,14 ^mol, 0,64 %. MS de alta resolución m /z 472,2344 [M+H]+; calculado para C24H31FN5O4, 472.2360. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 511,72 (br s, 1H), 8,91 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 8,59 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,47 (d, J = 2,2 Hz, 1H), 7,09 - 7,04 (m, 2H), 5,00 - 4,93 (m, 1H), 4,52 (ddd, J = 8,5, 8,5, 3,8 Hz, 1H), 4,06 (br s, 3H), 3,17-3,05 (m, 2H), 2,39-2,31 (m, 1H), 2,18-2,06 (m, 2H), 1,84-1,77 (m, 1H), 1,78 (dd, J = 13,9, 9,0 Hz, 1H), 1,74 - 1,64 (m, 2H), 0,94 (s, 9H). Tiempo de retención: 8,34 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 20 ).
22 - Primera separación, números de fracción 187-188; Segunda separación, número de fracción 154. Rendimiento: 5 ^g, 0,011 ^mol, 0,05 %. MS de alta resolución m /z 472,2354 [M+H]+; calculado para C24H31FN5O4, 472,2360. 1H RMN (600 MHz, DMSO-CÍ6) 511,45 (s, 1H), 8,91 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,57 (dd, J = 8,2, 3,6 Hz, 1H), 7,15 (dd, J = 8,8 Hz, 1H), 6,95 (br d, J = 8,3 Hz, 1H), 6,54 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 5,00 - 4,94 (m, 1H), 4,56 -4,49 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,18-3,07 (m, 2H), 2,40-2,32 (m, 1H), 2,17-2,09 (m, 2H), 1,84 - 1,77 (m, 1H), 1,76 - 1,65 (m, 3H), 0,95 (s, 9H). Tiempo de retención: 8,51 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 20).
23 - Primera separación, números de fracción 190-192; Segunda separación, números de fracción 156-157. Rendimiento: 21 ^g, 0,043 ^mol, 0,19%. MS de alta resolución m /z 490,2258 [M+H]+; calculado para C24H30F2N5O4, 490,2266. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 5 12.24 (s, 1H), 8.95 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 8.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.49-7.47 (m, 1H), 7.13 (dd, J = 11.1, 11.1 Hz, 1H), 5.00-4.93 (m, 1H), 4.54 (ddd, J = 8 , 8 , 4,1 Hz, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,17-3,06 (m, 2H), 2,38-2,30 (m, 1H), 2,18-2,07 (m, 2H), 1,85 - 1,65 (m, 4H), 0,95 (s, 9H). Tiempo de retención: 8,65 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 20).
).
Figure imgf000091_0001
(continuación)
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(continuación)
Figure imgf000093_0001
(continuación)
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(continuación)
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(continuación)
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(continuación)
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(continuación)
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(continuación)
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(continuación)
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(continuación)
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(continuación)
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1. En este caso, C28 se desprotegió utilizando ácido metanosulfónico, en lugar de cloruro de hidrógeno.
2. Los epímeros del Ejemplo 25 y del Ejemplo 26 se separaron mediante cromatografía de fluidos supercríticos (Columna: Chiral Technologies Chiralpak IB, 21 x 250 mm, 5 ^m; Fase móvil: dióxido de carbono / metanol 9:1; Contrapresión: 120 bar, Caudal: 75 ml/minuto). El diastereómero de primera elusión se designó como Ejemplo 25, y el de segunda elusión como Ejemplo 26.
3. Condiciones para la HPLC analítica. Columna: Chiral Technologies Chiralpak IB, 4,6 x 100 mm, 5 ^m; Fase móvil: dióxido de carbono / metanol 85:15; Contrapresión: 120 bar; Caudal: 1,5 ml/minuto.
4. Condiciones para la HPLC analítica. Columna: Waters Atlantis dC18, 4,6 x 50 mm, 5 ^m; Fase móvil A: agua que contenia 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenia 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Gradiente: 5,0 % a 95 % B, lineal durante 4,0 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto; Caudal: 2 ml/minuto.
5. 1H RMN del Ejemplo 30 antes de la purificación final: 1H RMN (400 MHz, metanol-cf4) 57,48 - 7,42 (m, 2H), 7,36 -7,26 (m, 3H), 4,90 (dd, J = 10,5, 5,7 Hz, 1H), 4,37 (dd, J = 7,7, 4,9 Hz, 1H), 3,69 (s, 1H), 3,25 (ddd, J = 9,9, 8,9, 2,5 Hz, 1H), 3,18 (ddd, J = 9,6, 9,0, 7,1 Hz, 1H), 2,40 -2,29 (m, 1H), 2,20 (s, 6H), 2,2 -2,10 (m, 1H), 2,09 - 1,99 (m, 1H), 1,80 -1,61 (m, 2H), 1,73 (dd, J = 14,5, 5,0 Hz, 1H), 1,61 (dd, J = 14,4, 7,8 Hz, 1H), 0,95 (s, 9H).
6. El acoplamiento de amida con el ácido carboxílico apropiado se llevó a cabo utilizando el trióxido de 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioxatrifosfina.
7. El Ejemplo 4 (25 ^M) se incubó con el citocromo P4503A5 humano (4 nmol) en tampón de fosfato de potasio (100 mM, pH 7,4; 40 ml) que contenía cloruro de magnesio (3,3 mM), y NADPH (1,3 mM). La incubación se llevó a cabo durante 0,75 horas en un baño de agua con agitación mantenido a 37 °C. La incubación se terminó añadiendo un volumen igual de acetonitrilo, tras lo cual la mezcla se centrifugó a 1700 x g durante 5 minutos, y el sobrenadante se sometió a centrifugación al vacío durante aproximadamente 1,5 horas. A esta mezcla se le añadió ácido fórmico (0,5 ml), acetonitrilo (0,5 ml) y agua hasta un volumen final de 50 ml, y la mezcla resultante se centrifugó a 40000 x g durante 30 minutos. El sobrenadante se sometió a HPLC en fase inversa (Columna: Polaris C18, 4,6 x 250 mm; 5 ^m; Fase móvil A: agua con 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: metanol; Gradiente: 15 % B durante 5 minutos, luego 15 % a 35 % B durante 75 minutos, luego 35 % a 95% B durante 10 minutos; Caudal: 0,8 ml/minuto). Las fracciones se recogieron cada 20 segundos. El material de primera elución, el Ejemplo 33 impuro, eludió a los 54,7 minutos, y el Ejemplo 34 eludió a los 55,3 minutos. El Ejemplo 33 impuro se repurificó mediante HPLC en fase inversa (Columna: Phenomenex Kinetex XB-C18, 2,1 x 100 mm, 2,6 ^m; Fase móvil A: agua con 0,5% de ácido acético; Fase móvil B: 9:1 acetonitrilo / metanol; Gradiente: 10 % B durante 0,5 minutos, luego 10 % a35 % durante 26,5 minutos, luego 35 % a 60 % B durante 3 minutos; Caudal 0,5 ml/minuto); las fracciones se recogieron cada 15 segundos. En este sistema, el Ejemplo 33 tuvo un tiempo de retención de 12,7 minutos; el Ejemplo 34 adicional eludió a los 13,5 minutos.
8. El ácido 4-cloro-1,3-dimetil-1H-pirazol-5-carboxílico requerido puede prepararse por hidrólisis del éster etílico disponible en el mercado.
9. La mezcla de reacción se diluyó con acetonitrilo y ácido fórmico acuoso al 1%, hasta un volumen de aproximadamente 2 ml; la composición final del disolvente era tal que la mezcla parecía clara, con un contenido de acetonitrilo de aproximadamente 20 % a 30 %. Los componentes de esta mezcla se separaron mediante HPLC en fase inversa (Columna: Phenomenex Luna C18, 10 * 250 mm, 10 pm; Fase móvil A: agua que contenia 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 15 % B durante 5 minutos, luego 15 % a 70 % B durante 70 minutos, luego 70 % a 95 % B durante 15 minutos; Caudal: 2 ml/minuto); las fracciones se recogieron cada 20 segundos. Los Ejemplos 37, 38, 39, 40 y 41 eludieron a los tiempos de retención indicados a continuación.
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10. Condiciones para la HPLC analítica. Columna: Phenomenex Kinetex XB-C18, 2,1 * 100 mm, 2,6 pm; Fase móvil A: agua que contenía 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 5 % B durante 0,5 minutos, luego 5 % a 70 % B durante 10,5 minutos, luego 70 % a 95 % B durante 2 minutos; Caudal: 0,4 ml/min.
11. La regioquímica del Ejemplo 41 no se determinó rigurosamente; otras posibles estructuras para este ejemplo son N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2-il]-4-metoxi-5,6-bis(trifluorometil)-1H-indol-2-carboxamida y N-[(2S)-1-({(1 S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2-il]-4-metoxi-6,7-bis(trifluorometil)-1H-indol-2-carboxamida.
12. La mezcla de reacción se purificó utilizando las condiciones descritas en la nota 9. El Ejemplo 42 eludió a los 58,1 minutos y el Ejemplo 43 eludió a los 59,2 minutos.
13. La mezcla de reacción se diluyó con una mezcla de acetonitrilo (0,3 ml) y ácido fórmico acuoso al 1 % (0,7 ml). La mezcla resultante se centrifugó y el sobrenadante se sometió a HPLC en fase inversa (Columna: Phenomenex Luna C18, 10 * 250 mm, 10 pm; Fase móvil A: agua que contenía 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 2 % a 10 % B durante 5,0 minutos, luego 10 % a 95 % B durante 95 minutos; Caudal: 2 ml/minuto); las fracciones se recogieron cada 20 segundos. Los Ejemplos 46, 47 y 48 eludieron a los tiempos de retención indicados a continuación. El ejemplo 5 también se aisló de esta reacción, en las fracciones 189-190.
Figure imgf000103_0001
14. Condiciones para la HPLC analítica. Columna: Phenomenex Kinetex C18, 2,1 * 50 mm, 1,7 pm; Fase móvil A: agua con 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo con 0,1 % de ácido fórmico; Gradiente: 5 % B durante 0,5 minutos, luego 5 % a 50 % B durante 6,0 minutos, luego 50 % a 80 % B durante 1,5 minutos, luego 80 % a 95 % B durante 1,0 minuto; Caudal: 0,4 ml/min.
15. De esta reacción solo se observó el producto indicado.
16. Se preparó una solución madre del Ejemplo 4 (5,56 mg, 12,7 pmol) y ácido trifluoroacético (4 pl, 50 pl) en dimetilsulfóxido (420 pl). Una sexta parte de esta solución se trató con 1,1-difluoroetanosulfinato de sodio (1,3 mg, 8,5 pmol), seguido de hidroperóxido de tert-butilo (70 % en agua; 1,4 pL, 10 pmol), y se calentó a 50 °C durante la noche. La mezcla de reacción se diluyó con acetonitrilo y ácido fórmico acuoso al 1 %, hasta un volumen de aproximadamente 2-3 ml; la composición final del disolvente era tal que la mezcla parecía clara, con un contenido de acetonitrilo de aproximadamente 20 % a 30 %. Los componentes de esta mezcla se separaron mediante HPLC en fase inversa (Columna: Phenomenex Luna C18, 10 * 250 mm, 10 pm; Fase móvil A: agua que contenia 0,1 % de ácido fórmico; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 15 % B durante 5 minutos, luego 15 % a 40 % B durante 70 minutos, luego 40 % a 95 % B durante 15 minutos; Caudal: 2 ml/minuto); las fracciones se recogieron cada 20 segundos. El ejemplo 74 eludió a los 68,6 minutos.
Ejemplos 75 y 76 (solo como referencia)
(2S.4R)-4-tert-But¡l-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-1-{N-[(tr¡fluoromet¡l)sulfon¡l1-L-val¡l}p¡perid¡na-2-carboxamida y (2R.4S)-4-tert-But¡l-N-/[tS)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n3-¡l1etil?-1-{N-[(tr¡fluoromet¡l)sulfon¡l1-L-valil}p¡per¡d¡n-2-carboxam¡da [75 (DIAST-1) y 76 (DIAST-2)
Figure imgf000104_0001
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Paso 1: Síntesis del A/-[(tr¡fluoromet¡l)sulfon¡ll-L-valinato de tert-butilo (C44).
Se añadió una solución de anhídrido trifluorometanosulfónico (8,88 ml, 52,8 mmol) en diclorometano (10 ml) a una solución a -78 °C de L-valinato de tert-butilo, sal de cloruro (10,0 g, 47,7 mmol) y trietilamina (18,7 ml, 134 mmol) en diclorometano (90 ml). La mezcla de reacción se agitó a -78 °C durante 2 horas, tras lo cual se vertió en agua y se acidificó hasta un pH de aproximadamente 4 mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M. La mezcla resultante se extrajo con diclorometano, y la capa orgánica se lavó con solución acuosa de bicarbonato sódico y con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se combinó con los productos de dos reacciones similares llevadas a cabo con L-valinato de tert-butilo, sal de cloruro (1,00 g, 4,77 mmol; 1,00 g, 4,77 mmol) y se purificó mediante cromatografía sobre gel de sílice (Gradiente: 0 % a 20 % de acetato de etilo en éter de petróleo), obteniendo C44 como un sólido blanco. Rendimiento combinado: 14,0 g, 45,9 mmol, 80%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 89,92 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 3,68 (dd, J = 8,8, 6,2 Hz, 1H), 2,16 -2,02 (m, 1H), 1,43 (s, 9H), 0,92 (d, J = 6,9 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,9 Hz, 3H).
Paso 2: Síntesis de N-fítrifluorometiPsulfonill-L-valina (C45).
Se añadió ácido trifluoroacético (85 ml) a una solución de C44 (14,0 g, 45,9 mmol) en diclorometano (85 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, tras lo cual se concentró in vacuo; el residuo se lavó con éter de petróleo para proporcionar C45 como un sólido blanco. Rendimiento: 10,9 g, 43,7 mmol, 95%. MS m/z 248,0 [M-H]- 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 89,86 (br d, J = 8,3 Hz, 1H), 3,79 -3,71 (m, 1H), 2,19 -2,05 (m, 1H), 0,93 (d, J = 6,8 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
Paso 3: Síntesis de c¡s-4-tert-but¡lp¡perid¡na-2-carbox¡lato de metilo, sal de cloruro (C46).
Se añadió a una solución a 0 °C del ácido cis-4-tert-butilpiperidina-2-carboxílico, sal de clorhidrato (Véase R. T. Shuman et al., J. Org. Chem. 1990, 55, 738-741; 4,00 g, 18,0 mmol) en metanol (40 ml), cloruro de tionilo (6,44 g, 54,1 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 25 °C durante 16 horas, se concentró in vacuo para obtener C46 como un sólido blanquecino (4,50 g). Una porción de este material se utilizó en el siguiente paso. LCMS m /z 200,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 9,46 (br s, 1H), 9,09 (br s, 1H), 4,11 - 3,96 (m, 1H), 3,76 (s, 3H), 3,4 - 3,21 (m, 1H, supuesto; en gran parte oscurecido por el pico del agua), 2,93 - 2,77 (m, 1H), 2,07 (br d, J = 10,8 Hz, 1H), 1,75 (br d, J = 10,6 Hz, 1H), 1,51 - 1,32 (m, 3H), 0,84 (s, 9H).
Paso 4: Síntesis de (2S.4R)-4-tert-but¡l-1-{N-[(tr¡fluoromet¡l)sulfon¡l1-L-val¡l}p¡per¡d¡na-2-carbox¡lato de metilo y (2R,4S)-4-tert-butil-1-{N-[(trifluorometil) sulfon¡l1-L-val¡l}p¡per¡d¡na-2-carboxilato de metilo (C47).
Se añadió a una mezcla a 25 °C de C45 (300 mg, 1,20 mmol) y C46 (del paso anterior; 341 mg, <1,36 mmol) en N,N-dimetilformamida (3 ml), 4-metilmorfolina (365 mg, 3,61 mmol). Se enfrió la mezcla resultante a 0 °C y se trató con hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 549 mg, 1,44 mmol). Tras rociar la mezcla de reacción con nitrógeno durante 1 minuto, se agitó a 25 °C durante 12 horas. El análisis de LCMS en este punto indicó la presencia de C47: LCMS m /z 431,1 [M+H]+. La mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo (20 ml) y agua (20 ml), y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico (4 * 20 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 20 % de acetato de etilo en éter de petróleo) proporcionó C47 como una goma amarilla. El análisis de RMN de 1H confirmó que se trataba de una mezcla de diastereómeros. Rendimiento: 320 mg, 0,743 mmol, 62 %. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 86,12 - 5,94 (m, 1H),
[4,51 (dd, J = 11,7, 6,3 Hz) y 4,32 -4,18 (m), total 2H], [3,73 (s) y 3,71 (s), total 3H], [3,63 - 3,49 (m) y 3,48 -3,39 (m), total 2H], 2,18 - 1,93 (m, 2H), 1,91 - 1,77 (m, 1H), 1,63 - 1,37 (m, 2H), 1,37 - 1,22 (m, 1H), 1,13 - 1,04 (m, 3H), [0,94 (d, J = 6,8 Hz) y 0,91 (d, J = 6,8 Hz), total 3H], 0,87 (s, 9H).
Paso 5: Síntesis del ácido (2S,4R)-4-tert-butil-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil1-L-valil}piperidina-2-carboxílico y del ácido (2R,4S)-4-tert-butil-1-{N-[(trifluorometil)sulfonil1-L-valil}piperidina-2-carboxílico (C48).
Se trató una solución de C47 (314 mg, 0,729 mmol) en una mezcla de metanol (2 ml) y tetrahidrofurano (2 ml) con una solución de hidróxido de litio monohidratado (91,8 mg, 2,19 mmol) en agua (1,4 ml), y la mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 3 horas. Tras eliminar el disolvente in vacuo, el residuo se diluyó con agua (10 ml) y se acidificó hasta un pH de aproximadamente 1 mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M. La mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 * 20 ml), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico (15 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo, obteniéndose C48 como un cristal amarillo. El análisis de RMN de 1H confirmó que se trataba de una mezcla de diastereómeros. Rendimiento: 304 mg, cuantitativo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 [9,82 (d, J = 8,7 Hz) y 9,69 (br d, J = 8,8 Hz), total 1H], [4,28 (dd, J = 11,5, 6,4 Hz), 4,24 -4,14 (m), y 4,05 - 3,96 (m), total 2H], [3,80 - 3,69 (m) y 3,6 - 3.2 (m, supuesto; sustancialmente oscurecido por el pico de agua), total 2H], 2,06 - 1,90 (m, 2H), 1,80 - 1,65 (m, 1H), 1,41 - 1,17 (m, 3H), [0,96 (d, J = 6,8 Hz) y 0,93 (d, J = 6,5 Hz), total 3H], [0,89 (d, J = 6,9 Hz) y 0,86 - 0,80 (m), total 12H].
Paso 6: Síntesis de (2S,4R)-N-{(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]propan-2-ilM-tert-butil-1-{N-r(tr¡fluoromet¡l)sulfon¡ll-L-val¡l}p¡per¡d¡na-2-carboxam¡da y (2R,4S)-N-/’(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-¡llpropan-2-¡l}-4-tert-but¡l-1-{N-r(tr¡fluoromet¡l)sulfon¡ll-L-val¡l}p¡perid¡na-2-carboxam¡da (C49).
Se añadió a una mezcla a 25 °C de C16 (120 mg, 0,449 mmol) y C48 (144 mg, 0,346 mmol) en N,N-dimetilformamida (3 ml), 4-metilmorfolina (100 mg, 0,989 mmol), tras lo cual la mezcla se enfrió a 0 °C y se trató con hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 151 mg, 0,397 mmol). La mezcla de reacción se roció con nitrógeno durante 1 minuto y luego se agitó a 25 °C durante 12 horas. El análisis LCMS indicó la presencia de C49: LCMS m /z 570,3 [M+H]+. A continuación, la mezcla de reacción se repartió entre acetato de etilo (20 ml) y agua (20 ml), y la capa acuosa se saturó con cloruro de sodio sólido y se extrajo con acetato de etilo (5 * 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, se concentraron in vacuo y se sometieron a cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 15 % de metanol en diclorometano), proporcionando C49 como un sólido blanco. Este material contenía una mezcla de diastereómeros, por análisis de 1H r Mn . Rendimiento: 190 mg, 0,334 mmol, 96 %. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), picos característicos, las integraciones son aproximadas: 8 [9,88 (d, J = 8,6 Hz) y 9,82 - 9,68 (m), total 1H], [8,12 (d, J = 8,8 Hz) y 8,09 - 7,98 (m), total 1H], [7,63 (s) y 7,57 (s), total 1H], [7.30 (s) y 7,18 (s), total 1H], [7,06 (s) y 7,03 (s), total 1H], [4,36 (dd, J = 12,0, 6,1 Hz) y 4,32 -4.08 (m), total 2H], 2,26 - 2,05 (m, 2H), 1,81 - 1,54 (m, 2H), 1,53 - 1,30 (m, 2H), 0,98 - 0,87 (m, 6H), 0,86 - 0,76 (m, 9H).
Paso 7: Síntesis de (2S.4R)-4-tert-but¡l-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l)-1-{N-[(tr¡fluoromet¡l)sulfonill-L-val¡l}p¡perid¡na-2-carboxam¡da y (2R.4S)-4-tert-but¡l-N-/i'7S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrolid¡n-3-¡llet¡l)-HN-f(tr¡fluoromet¡l)sulfon¡ll-L-val¡l}p¡per¡d¡na-2-carboxam¡da [75 (DIAST-1) y 76 (DIAST-2)].
Se agitó una mezcla de C49 (190.0 mg. 0.334 mmol) y N-(trietilammon¡osulfon¡l)carbamato de metilo. sal interna (reactivo de Burgess; 238 mg. 1.00 mmol) en diclorometano (10 ml).a 25 °C durante 2 días. tras lo cual la mezcla de reacción se diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con diclorometano (2 * 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico (10 ml). se secaron sobre sulfato sódico. se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía sobre gel de sílice (Gradiente: 0 % a 8 % de metanol en diclorometano) proporcionó un sólido blanco. que por análisis de LCMS contenía una mezcla de productos aproximadamente 3:1: Lc Ms m /z 552.2 [M+H]+ y LCMS m /z 552.2 [M+H]+. Estos diastereómeros se separaron mediante cromatografía de fluidos supercríticos [Columna: Chiral Technologies Chiralpak IG. 30 * 250 mm. 10 pm; Fase móvil: 3:1 dióxido de carbono / (etanol con 0.1 % de hidróxido de amonio); Caudal: 70 ml/minuto]. El diastereómero de primera elución. aislado como un sólido blanco. se designó como 75, y el diastereómero de segunda elución. también un sólido blanco. se designó como 76 [(2S.4R)-4-tert-but¡l-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡na-3-¡l]et¡l}-1 -{N-[(trifluoromet¡l)sulfon¡l]-L-valil}piper¡d¡na-2-carboxam¡da y (2R.4S)-4-tert-butil-N-{(lS)-1 -ciano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]et¡l}-1 -{N-[(tr¡fluoromet¡l)sulfon¡l]-L-val¡l}p¡perid¡na-2-carboxam¡da].
75 - Rendimiento: 26.2 mg. 47.5 pmol. 14 %. 1H RMN (400 MHz. DMSO-cfe) 89.87 (d. J = 8.8 Hz. 1H). 8.87 (d. J = 8.4 Hz. 1H). 7.70 (s. 1H). 4.99 - 4.91 (m. 1H). 4.24 (dd. J = 12.3. 6.0 Hz. 1H). 4.18 (dd. J = 8.3. 8.3 Hz. 1H). 3.88 - 3.78 (m. 1H). 3.19 - 3.00 (m. 2H). 2.46 -2.35 (m. 1H). 2.17 - 2.02 (m. 2H). 1.99 - 1.85 (m. 2H). 1.79 - 1.62 (m. 3H). 1.50 -1.36 (m. 2H). 1.26 -1.12 (m. 2H). 0.97 - 0.87 (m. 6H). 0.84 (s. 9H). Tiempo de retención: 1.30 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Chiral Technologies Chiralpak IG-3. 4.6 * 50 mm. 3 pm; Fase móvil A: dióxido de carbono; Fase móvil B: etanol con 0.05 % de dietilamina; Gradiente: 5 % a 40 % B durante 2 minutos. luego 40 % B durante 1.2 minutos; Caudal: 4 ml/minuto; Contrapresión: 1500 psi).
76 - Rendimiento: 8.8 mg. 16 pmol. 5 %. LCMS m /z 552.3 [M+H]+. Según el análisis de 1H RMN 1H. esta muestra de 76 contenía impurezas. 1H RMN(400 MHz. DMSO-cfe). picos característicos. las integraciones son aproximadas: 8 9.76 (d. J = 8.8 Hz. 1H). 8.59 (d. J = 8.1 Hz. 1H). 7.72 (s. 1H). 5.02 - 4.90 (m. 1H). 0.94 - 0.86 (m. 6H). 0.82 (s. 9H). Tiempo de retención: 1.61 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 75).
Ejemplo 77 (solo como referencia)
3-met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l-(4R)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡net¡l}-4-(tr¡fluoromet¡l)-L-prolinam¡da o n
Figure imgf000108_0001
Paso 1: Síntesis de (4R)-1-(tert-butox¡carbon¡l)-4-(tr¡fluoromet¡l)-L-prol¡l-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1-L-alan¡naiT i¡da (C50).
Se añad¡ó a una mezcla a -30 °C de (4R)-1-(tert-butox¡carbon¡l)-4-(tr¡fluoromet¡l)-L-prol¡na (429 mg, 1,51 mmol) y C16, sal de HCl (346 mg, 1,67 mmol) en N,N-d¡met¡lformam¡da (7.8 ml),N,N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (0,791 ml, 4,54 mmol), segu¡do de hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotr¡azol-1-¡l)-N,N,N',N'-tetramet¡luron¡o (HATU; 633 mg, 1,66 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta 0 °C durante 1 hora, tras lo cual se diluyó con solución acuosa de bicarbonato sódico (30 ml) y se extrajo con una mezcla de 2-butanol y diclorometano (9:1, 3 * 7 ml). Las capas orgánicas combinadas se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 100 % de metanol en diclorometano), obteniendo C50 como una espuma blanquecina. Por análisis de 1H RMN, este material existía como una mezcla de rotámeros, y contenía impurezas derivadas de los reactivos empleados; una porción de esta muestra pasó al siguiente paso. Rendimiento: 613 mg, 1,40 mmol, 93 %. LCMS m /z 459,3 [M+Na+1. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), solo picos característicos del producto: 88,33 - 8,18 (m, 1H), [7,65 (br s) and 7,59 (br s), total 1H], [7,39 (br s) y 7,27 br (s), total 1H], 7,05 (br s, 1H), 4,38 - 4,28 (m, 1H), 4,28 - 4,17 (m, 1H), 3,46 - 3,36 (m, 1H), 2,02 - 1,89 (m, 1H), 1,80 - 1,45 (m, 2H), [1,39 (s) y 1,32 (s), total 9H].
Paso 2: Síntesis de N-(tert-butox¡carbon¡l)-3-met¡l-L-val¡l-(4R)-4-(tr¡fluoromet¡l)-L-prol¡l-3-[(3S)-2-oxop¡rrolid¡n-3-¡l1-L-alaninamida (C51).
Se agitó una mezcla de C50 (242 mg, 0,554 mmol) y una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4 M; 2 ml, 8 mmol) a temperatura ambiente durante 5 minutos, tras lo cual la mezcla de reacción se concentró in vacuo para eliminar el disolvente y el cloruro de hidrógeno residual. El material desprotegido resultante se combinó con N-(tertbutoxicarbonil)-3-metil-L-valina (128 mg, 0,553 mmol) y hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU: 232 mg, 0,610 mmol) en N,N-dimetilformamida (2 ml), y se enfrió a -30 °C. Se añadió N,N-diisopropiletilamina (0,290 ml, 1,66 mmol) y la mezcla de reacción se calentó a 0 °C durante 1 hora. Tras añadir una solución acuosa de bicarbonato sódico, la mezcla resultante se extrajo tres veces con acetato de etilo; las capas orgánicas combinadas se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 30 % de metanol en diclorometano), obteniendo C51 como sólido. Rendimiento: 230 mg, 0,418 mmol, 75 %. LCMS m /z 550,3 [M+H]+.
Paso 3: Síntesis de 3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1 S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-4-(trifluoromet¡l)-L-prol¡namida 177).
Se agitó una mezcla de C51 (230 mg, 0,418 mmol) y una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4 M; 2 ml, 8 mmol) a temperatura ambiente durante 5 minutos, tras lo cual la mezcla de reacción se concentró in vacuo para eliminar el disolvente y el cloruro de hidrógeno residual. El material desprotegido resultante se combinó con trifluoroacetato de etilo (595 mg, 4,19 mmol) y N,N-diisopropiletilamina (0,219 ml, 1,26 mmol) en metanol (1,0 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 minutos, se añadió de nuevo trifluoroacetato de etilo (60 mg, 0,422 mmol) y se continuó agitando durante 30 minutos. A continuación, se añadió una solución acuosa de bicarbonato sódico y la mezcla resultante se extrajo tres veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, se concentraron in vacuo y se disolvieron en diclorometano (3 ml). A esto se añadió N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de etilo, sal interna (reactivo de Burgess; 299 mg, 1,25 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 horas, tras lo cual se trató con N- (trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo adicional, sal interna (reactivo de Burgess; 100 mg, 0,420 mmol) y se dejó agitar durante otros 30 minutos. A continuación se añadió una solución acuosa de carbonato sódico y la mezcla se extrajo dos veces con acetato de etilo; las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron in vacuo. Purificación mediante cromatografía de fluidos supercríticos (Columna: Princeton dinitrofenilo, 10 * 250 mm, 5 pm; Fase móvil: dióxido de carbono / metanol 9:1; Contrapresión: 120 bar; Caudal: 80 ml/minuto) dio lugar a un material que se sumergió en heptano (2,0 ml) a 50 °C durante 2 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se recogió por filtración, proporcionando 3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida (77) como sólido. Rendimiento: 64 mg, 0,121 mmol, 29 %. LCMS m /z 528,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de) 89,46 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 9,05 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H), 4,96 (ddd, J = 11,0, 8,5, 5,0 Hz, 1H), 4,56 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,37 (dd, J = 7,5, 7,5 Hz, 1H), 3,98 (dd, componente del sistema ABX, J = 11,2, 7,5 Hz, 1H), 3,92 (dd, componente del sistema ABX, J = 11,3, 4,8 Hz, 1H), 3,46 - 3,35 (m, 1H), 3,19 - 3,10 (m, 1H), 3,09 - 3,00 (m, 1H), 2,5 - 2,38 (m, 1H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico de solvente), 2,38 - 2,28 (m, 1H), 2,21 - 2,04 (m, 3H), 1,78 - 1,65 (m, 2H), 0,99 (s, 9H).
Ejemplo 78 (solo como referencia)
(1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-6.6-dimet¡l-3-[3-met¡l-N-(met¡lcarbamo¡l)-L-val¡l1-3-azabic¡clo[3.1.01hexano-2-carboxamida (78)
Figure imgf000110_0001
Paso 1: Síntesis de (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-(3-met¡l-L-val¡l)-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carbox¡lato de metilo, sal de clorhidrato (C52).
Se añad¡ó a una soluc¡ón a 0 °C de C31 (1,00 g. 2,61 mmol) en d¡clorometano (20 ml), en forma de gotas. una soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en acetato de et¡lo (4 M; 20 ml. 80 mmol). Tras ag¡tar la mezcla de reacc¡ón a 25 °C durante la noche. se concentró in vacuo para obtener C52 como una goma blanca. Rend¡m¡ento: 700 mg, 2,20 mmol. 84 %. LCMS m/z 283,1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz. DMSO-cfe) 88.22 (br s. 3H). 4.25 (s. 1H). 3.87 - 3.77 (m. 2H). 3.72 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 10,8 Hz. 1H). 3,67 (s. 3H). 159 (dd. componente del s¡stema ABX. J = 7.7. 5.3 Hz. 1H). 1.49 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 7.7 Hz. 1H). 1,03 (s. 9H). 1,02 (s. 3H). 0.96 (s. 3H).
Paso 2: Síntes¡s de (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-[3-met¡l-N-(met¡lcarbamo¡l)-L-val¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carbox¡lato de met¡lo (C53).
Se añadieron a una solución a 0 °C de C52 (320 mg, 1,00 mmol) en diclorometano (6 ml) lentamente trietilamina (0,769 ml, 5,52 mmol) y cloruro de metilcarbamilo (188 mg, 2,01 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar hasta los 20 °C y se agitó durante 18 horas, tras lo cual se trató, gota a gota, con una solución acuosa saturada de carbonato sódico (5 ml) y se extrajo con diclorometano (2 * 5 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico (2 x 20 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) proporcionó C53 como una goma de color amarillo claro. Rendimiento: 190 mg, 0,560 mmol, 56 %. LCMS m /z 339,9 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 86,03 (d, J = 9,4 Hz, 1H), 5,89 (br q, J = 5 Hz, 1H), 4,20 - 4,14 (m, 2H), 3,91 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,3 Hz, 1H), 3,79 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,3, 5,3 Hz, 1H), 3,65 (s, 3H), 3,17 (d, J = 5,3 Hz, 3H), 1,55 - 1,49 (m, 1H), 1,40 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,4 Hz, 1H), 1,00 (s, 3H), 0,92 (s, 9H), 0,83 (s, 3H).
Paso 3: Síntesis del ácido (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(metilcarbamoil)-L-valil1-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxílico (C54).
Se añadió a una solución a 0 °C de C53 (190 mg, 0,560 mmol) en una mezcla de tetrahidrofurano (2 ml), agua (4 ml) y metanol (1 ml),hidróxido de litio monohidratado (82,0 mg, 1,95 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 20 °C durante 2 horas, se diluyó con acetato de etilo (10 ml); a continuación, la capa acuosa se enfrió hasta 0 °C a 5 °C y se acidificó a pH 2 a 3 mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M. La mezcla acuosa se extrajo con acetato de etilo (3 * 15 ml), y estas capas combinadas de acetato de etilo se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo para proporcionar C54 como un sólido blanco. Rendimiento: 120 mg, 0,369 mmol, 66 %. LCMS m /z 348,3 [M+Na+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), picos característicos: 86,04 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,89 (d, J = 4,7 Hz, 1H), 4,17 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,09 (s, 1H), 3,87 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,4 Hz, 1H), 3,77 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,3, 5,4 Hz, 1H), 1,49 (dd, componente del sistema ABX, J = 7,6, 5,1 Hz, 1H), 1,38 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,5 Hz, 1H), 1,00 (s, 3H), 0,92 (s, 9H), 0,82 (s, 3H).
Paso 4: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1propan-2-il}-6,6 -dimetil-3-[3-metil-N-(met¡lcarbamo¡l)-L-valil1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (C55).
Se añadieron a una solución de 0 °C a 5 °C de C54 (120 mg, 0,369 mmol) y C16, sal de HCl (75%, 107 mg, 0,387 mmol) en N,N-dimetilformamida (3.0 ml) hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 154 mg, 0,405 mmol) y 4-metilmorfolina (0,144 ml, 1,31 mmol). Tras dejar que la mezcla de reacción se calentara de 0 °C a 20 °C durante 1,5 horas, se dejó agitar a 20 °C durante 18 horas, tras lo cual se diluyó con agua y se trató con sulfato sódico sólido hasta la saturación. La mezcla resultante se extrajo con una mezcla de 2-propanol y cloroformo (1:4, 3 * 20 ml), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 20 % de metanol en diclorometano) proporcionó C55 (240 mg) como un cristal incoloro. Una porción de este material se utilizó en el siguiente paso. LCMS m /z 479,2 [M+H]+. Según el análisis de 1H RMN, este material estaba contaminado con un subproducto derivado del reactivo HAt U. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), solo picos característicos del producto: 88,21 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,53 (br s, 1H), 7,29 (br s, 1H), 7,03 (br s, 1H), 6,02 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 5,86 (q, J = 4,6 Hz, 1H), 4,31 -4,23 (m, 1H), 4,21 (s, 1H), 4,15 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 2,18-2,08 (m, 1H), 1,98 - 1,88 (m, 1H), 1,68 - 1,55 (m, 1H), 1,54 - 1,42 (m, 2H), 1,34 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,90 (s, 9H), 0,84 (s, 3H).
Paso 5: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(met¡lcarbamo¡l)-L-valil1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (78).
Se añadió a una solución de C55 (del paso anterior; 190 mg, <0,292 mmol) en acetonitrilo (12 ml) N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 303 mg, 1,26 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 22 horas, tras lo cual se combinó con una reacción similar realizada con C55 (del paso anterior; 50 mg, <77 pmol). La solución resultante se concentró in vacuo, se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 * 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo; la purificación se realizó mediante HPLC en fase inversa (Columna: Boston Prime C18, 30 * 150 mm, 5 pm; Fase móvil A: 0.225 % de ácido fórmico en agua; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 23 % a 46 % B; Caudal: 25 ml/minuto) proporcionó (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il1etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(metilcarbamoil)-L-valil1-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxamida (78) como un sólido blanco. Rendimiento combinado: 25 mg, 54 pmol, 15% en 2 pasos. LCMS m /z 461,2 [M+H1+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), picos característicos: 88.96 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 6,02 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 5,85 (q, J = 4,5 Hz, 1H), 4,95 (ddd, J = 10,8, 8,4, 5,1 Hz, 1H), 4,13 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,11 (s, 1H), 3,88 - 3,79 (m, 2H), 3,18 - 3,09 (m, 1H), 3,07 -2,98 (m, 1H), 2,48 -2,37 (m, 1H), 2,20 -2,02 (m, 2H), 1,77 -1,62 (m, 2H), 1,56 - 1,50 (m, 1H), 1,27 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,02 (s, 3H), 0,89 (s, 9H), 0,85 (s, 3H). 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d), picos característicos: 88,12 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 5,78 (br s, 1H), 5,04 (br d, J = 9.4 Hz, 1H), 4,99 -4,90 (m, 1H), 4,57 -4,49 (m, 1H), 4,39 (d, J = 9,7 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,01 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10.2 Hz, 1H), 3,93 (br dd, componente del sistema ABX, J = 10,6, 4,9 Hz, 1H), 3,43 - 3,25 (m, 2H), 2,71 (d, J = 4,8 Hz, 3H), 2.61 - 2,50 (m, 1H), 2,45 - 2,30 (m, 2H), 2,03 - 1,93 (m, 1H), 1,91 -1,78 (m, 1H), 1,05 (s, 3H), 0,98 (s, 9H), 0,91 (s, 3H).
Ejemplo 79 (solo como referencia)
{(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil)carbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexan-3-il1-3,3-dimetil-1-oxobutan-2-il)carbamato de metilo (79)
Figure imgf000112_0001
Paso 1: Síntesis de (1R,2S,5S)-3-/,N-(metoxicarbonil)-3-metil-L-valil1-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxilato de metilo (C56).
Se añadió a una solución a 0 °C de C52 (370 mg, 1,16 mmol) en diclorometano (6 ml), lentamente trietilamina (0,647 ml, 4,64 mmol) y cloroformiato de metilo (335 mg, 3,55 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 20 °C durante 16 horas, se diluyó gota a gota con una solución acuosa saturada de carbonato sódico (5 ml) y se extrajo con diclorometano (2 * 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico (2 * 20 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo; cromatografía sobre gel de sílice (Gradiente: 0 % a 100 % de acetato de etilo en éter de petróleo) proporcionó C56 como una goma blanca. Rendimiento: 115 mg, 0,338 mmol, 29 %. LCMS m/z 341,1 [M+H1+. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 55,29 (br d, J = 9,6 Hz, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,23 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 3,94 - 3,86 (m, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,63 (br s, 3H), 1,49 - 1,41 (m, 2H), 1,04 (s, 3H), 1,03 (s, 9H), 0,91 (s, 3H).
Paso 2: Síntesis del ácido (1R,2S,5S)-3-[N-(metoxicarbonil)-3-metil-L-valil1-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxílico (C57).
Se añadió a una solución de C56 (115 mg, 0,338 mmol) en una mezcla de metanol (2,0 ml), tetrahidrofurano (2,0 ml) y agua (2 ml),hidróxido de litio monohidratado (28,4 mg, 0,677 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente (22 °C a 25 °C) durante 16 horas, y luego se concentró in vacuo. El residuo acuoso se repartió entre agua (5 ml) y acetato de etilo (20 ml), tras lo cual se desechó la capa orgánica y se ajustó la capa acuosa a un pH de 1 a 2 mediante la adición de ácido clorhídrico concentrado. La mezcla resultante se extrajo tres veces con acetato de etilo; las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron y se concentraron in vacuo para proporcionar C57 como una goma incolora. Rendimiento: 100 mg, 0,306 mmol, 91 %. LCMS m/z 327,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 55,42 (d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,46 (s, 1H), 4,26 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 3,96 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,5 Hz, 1H), 3,87 (dd, componente del sistema AbX, J = 10.3, 5,4 Hz, 1H), 3,64 (s, 3h ), 1,68 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,7 Hz, 1H), 1,50 (dd, componente del sistema ABX, J = 7,6, 5,3 Hz, 1H), 1,06 (s, 3H), 1,01 (s, 9H), 0,91 (s, 3H).
Paso 3: Síntesis de metil {(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1 propan-2-il}carbamoil)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1,01hexan-3-il1-3,3-dimetil-1-oxobutan-2-il}carbamato (C58).
Se añadió a una solución a 0 °C de C57 (100 mg, 0,306 mmol) y C16, sal de HCl (75 %, 84,8 mg, 0,306 mmol) en N,N-dimetilformamida (3 ml), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 140 mg, 0,368 mmol), seguido de la adición gota a gota de una solución de 4-metilmorfolina (93 mg, 0,919 mmol) en N,N-dimetilformamida (1 ml). La mezcla de reacción se calentó hasta la temperatura ambiente (25 °C) y se agitó durante 16 horas, tras lo cual se añadió agua (10 ml). Después de añadir sulfato sódico sólido hasta la saturación, la mezcla resultante se extrajo con una mezcla de cloroformo y 2-propanol (4:1,3 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 30 % de metanol en diclorometano), obteniendo C58 como un sólido blanco. Rendimiento: 93 mg, 0,19 mmol, 62 %. LCMS m /z 480,0 [M+H1+. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 58,30 (br s, 1H), 7,18 (br s, 1H), 5,98 (br s, 1H), 5,64 (br s, 1H), 5,58 - 5,42 (m, 1H), 4,49 - 4,37 (m, 1H), 4,29 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 4,23 (s, 1H), 4,11 (dd, componente del sistema AbX, J = 10,3, 5,5 Hz, 1H), 3,93 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,3 Hz, 1H), 3,64 (s, 3H), 3,43 - 3,29 (m, 2H), 2,55 -2,33 (m, 2H), 2,15 - 1,81 (m, 3H), 1,54 - 1,47 (m, 1H), 1,45 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,7 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H), 1,01 (s, 9H), 0,88 (s, 3H).
Paso 4: Síntesis de metil {(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}carbamoil) -6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1,01hexan-3-il1-3,3-dimetil-1-oxobutan-2-il}carbamato (79).
Se añadió a una suspensión de C58 (93 mg, 0,19 mmol) en diclorometano (5 ml) N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 139 mg, 0,583 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 25 °C durante 2 horas. A continuación se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 10 ml); las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico (2 x 10 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 100 % de acetato de etilo en éter de petróleo, seguido de un gradiente de 0% a 20% de metanol en diclorometano) permitió obtener carbamato de metilo {(2S)-1-[(1R,2S,5S)-2-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil})-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexan-3-il1-3,3-dimetil-1-oxobutan-2-il}carbamato (79) como sólido blanco. Rendimiento: 7,0 mg, 15 ^mol, 8 %. LCMS m /z 462,2 [M+H1+. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 58,13 (br d, J = 7,0 Hz, 1H), 5,68 (br s, 1H), 5,34 (br d, J = 9,9 Hz, 1H), 4,95 - 4,85 (m, 1H), 4,26 (s, 1H), 4,23 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 3,94 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,1,4,5 Hz, 1H), 3,88 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,3 Hz, 1H), 3,63 (s, 3H), 3,45 - 3,29 (m, 2H), 2,62 - 2,50 (m, 1H), 2,46 - 2,28 (m, 2H), 2,02 - 1,93 (m, 1H), 1,92 - 1,79 (m, 1h ), 1,6 -1,49 (m, 2H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico de agua, 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 9H), 0,90 (s, 3H).
Ejemplo 80 (solo como referencia)
N-(Trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il1etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida (80)
Figure imgf000113_0001
Figure imgf000114_0001
Paso 1: Síntesis del 1-tert-butil (2S,4R)-4-(trifluorometil)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 2-bencilo (C59).
Se agitó una mezcla de (4R)-1-(tert-butoxicarbonil)-4-(trifluorometil)-L-prolina (400 mg, 1,41 mmol), bromuro de bencilo (0,335 ml, 2,82 mmol) y bicarbonato de sodio (593 mg, 7,06 mmol) en N,N-dimetilformamida (8 ml) durante 15 horas a 25 °C. Después de diluir la mezcla de reacción con agua (30 ml) y extraerla con acetato de etilo (3 * 30 ml), las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico y con solución acuosa de cloruro de litio al 5 %, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 30 % de acetato de etilo en éter de petróleo) proporcionó C59 como un aceite incoloro. Por análisis de 1H RMN, este material existía como una mezcla de rotámeros. Rendimiento: 355 mg, 0,951 mmol, 67 %. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 57,44 - 7,28 (m, 5H), 5,29 - 5,07 (m, 2H), [4,54 (br d, J = 8,6 Hz) y 4,40 (br dd, J = 8,5, 2 Hz), total 1H], 3,87 - 3,70 (m, 1H), [3,58 (dd, J = 11,2, 7,4 Hz) y 3,49 (dd, J = 11,0, 7,9 Hz), total 1H], 3,13 -2,95 (m, 1H), 2,47 - 2,27 (m, 1H), 2,25 - 2,11 (m, 1H), [1,46 (s) y 1,33 (s), total 9H].
Paso 2: Síntesis de (4R)-4-(trifluoromet¡l)-L-prolinato de bencilo, sal de cloruro (C60).
Se añadió a una solución a 0 °C de C59 (200 mg, 0,536 mmol) en acetato de etilo (3 ml) una solución de cloruro de hidrógeno en acetato de etilo (4 M; 6 ml, 24 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente (28 °C) durante 3 horas, se concentró in vacuo para obtener C60 como un sólido blanco; este material se llevó directamente al siguiente paso. LCMS m /z 274,0 [M+H]+.
Paso 3: Síntesis de N-ttert-butoxicarboniD-L-valil-^RM-ttrifluorometiD-L-prolinato de bencilo (C61).
Se añadieron hexafluorofosfato de O-(7-Azabenzotr¡azol-1-¡l)-N,N,N',N'-tetramet¡luron¡o (HATU; 277 mg, 0,728 mmol) y 4-metilmorfolina (184 mg, 1.82 mmol) a una mezcla a 0 °C de C60 (del paso anterior; <0,536 mmol) y -L-valina (158 mg, 0,727 mmol) en N,N-dimetilformamida (3 ml). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 1 hora, tras lo cual se vertió en agua helada (15 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 * 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con ácido clorhídrico 1 M, solución acuosa saturada de bicarbonato sódico y solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Purificación mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 40 % de acetato de etilo en éter de petróleo) proporcionó C61 como una goma incolora. Rendimiento: 230 mg, 0,487 mmol, 91 % en 2 pasos. LCMS m /z 495,0 [M+Na+]. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d), picos característicos: 87,40 - 7,30 (m, 5H), 5,17 (cuarteto AB, JAB= 12,3 Hz, AvAB = 12,6 Hz, 2H), 4,21 (dd, J = 9,3, 6,8 Hz, 1H), 4,00 - 3,86 (m, 2H), 3,18 - 3,04 (m, 1H), 2,36 (ddd, componente del sistema ABXY, J = 13,5, 9, 9 Hz, 1H), 2,20 (ddd, componente del sistema ABXY, J = 13,4, 7,4, 3,5 Hz, 1H), 2,05 -1,94 (m, 1H), 1,42 (s, 9H), 0,98 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 0,91 (d, J = 6,8 Hz, 3H).
Paso 4: Síntesis de L-valil-^RM-ttrifluorometiD-L-prolinato de bencilo, sal de clorhidrato (C62).
Se añadió a una solución a 0 °C de C61 (230 mg, 0,487 mmol) en acetato de etilo (2 ml) una solución de cloruro de hidrógeno en acetato de etilo (4 M; 4 ml, 16 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente (28 °C) durante 1 hora, tras lo cual el análisis LCMS indicó la conversión a C62: LCMS m /z 373.1 [M+H]+. La concentración de la mezcla de reacción in vacuo proporcionó C62 como un sólido blanco, que se llevó directamente al siguiente paso.
Paso 5: Síntesis de N-ttrifluoroacetiD-L-valil-^RM-ttrifluorometiD-L-prolinato de bencilo (C63).
Se añadió una solución de anhídrido trifluoroacético (154 mg, 0,733 mmol) en diclorometano (0,5 ml) a una suspensión a 0 °C de C62 (del paso anterior; <0,487 mmol) en diclorometano (3 ml). Después de 3 minutos, se añadió una solución de trietilamina (148 mg, 1,46 mmol) en diclorometano (0,5 ml) en forma de gota, y se continuó la agitación a 25 °C durante 3 horas. Tras diluir con diclorometano (5 ml), la mezcla de reacción se lavó con solución acuosa saturada de carbonato sódico (10 ml) y con solución acuosa saturada de cloruro sódico (15 ml), se secó, se filtró y se concentró in vacuo; cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 30 % de acetato de etilo en éter de petróleo) proporcionó C63 como un aceite incoloro. Rendimiento: 129 mg, 0,275 mmol, 56 % en 2 pasos. LCMS m /z 491,2 [M+Na+].
Paso 6: Síntesis de N-ttrifluoroacetiD-L-valil-^RM-ttrifluorometiD-L-prolina (C64).
Se añadió a una solución a 28 °C de C63 (129 mg, 0,275 mmol) en metanol (3 ml), paladio sobre carbono (10 %, 29,3 mg, 27,5 pmol), tras lo cual la mezcla se hidrogenó a 15 psi durante 16 horas. La filtración proporcionó una torta de filtración, que se lavó con metanol (10 ml); los filtrados combinados se concentraron in vacuo para obtener C64 como un sólido amarillo claro. Rendimiento: 80 mg, 0,21 mmol, 76 %. LCMS m /z 401,0 [M+Na+].
Paso 7: Síntesis de N-ttrifluoroacetiD-L-valil-^RM-ttrifluorometiD-L-prolil^-^S^-oxopirrolidin^-ill-L-alaninamida (C65).
Se añadió a una solución a 0 °C de C64 (80 mg, 0,21 mmol) y C16 (76,8 mg, 0,287 mmol) en N,N-dimetilformamida (3 ml),hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotr¡azol-1-¡l)-N,N,N',N'-tetramet¡luron¡o (HATU; 88,5 mg, 0,233 mmol) y 4-metilmorfolina (64,2 mg, 0,635 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 2 horas, se trató con agua (10 ml) y solución acuosa de ácido cítrico (1 M; 10 ml, 10 mmol), y se extrajo con acetato de etilo (3 * 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (15 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico (15 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Purificación mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) proporcionó C65 como un sólido blanco. Rendimiento: 72 mg, 0,14 mmol, 67 %. LCMS m /z 532,2 [M+H]+.
Paso 8: Síntesis de N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l-(4R)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l>-4-(tr¡fluoromet¡l)-L-prolinamida (80).
Se añadió N-^rietilammoniosulfoni^carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 96,9 mg, 0,407 mmol) a una mezcla de C65 (72 mg, 0,14 mmol) en diclorometano (5 ml), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Tras diluir con agua (15 ml), la mezcla se extrajo con diclorometano (3 * 15 ml), y las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico (2 x 20 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) permitió obtener N-(trifluoroacetil)-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida (80) como un sólido blanco. Rendimiento: 30.9 mg, 60,2 ^mol, 43 %. LCMS m/z 536,1 [M+Na+]. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), picos característicos: 59,89 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 9,06 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,69 (s, 1H), 4,96 (ddd, J = 10,6, 8,4, 5,5 Hz, 1H), 4,38 (dd, J = 7,9, 6,3 Hz, 1H), 4,28 (dd, J = 9,8, 7,8 Hz, 1H), 4,07 - 3,94 (m, 2H), 3,20 - 3,00 (m, 2H), 2,5 - 2,41 (m, 1H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico de solvente), 2,38 - 2,28 (m, 1H), 2,19 - 2,02 (m, 4H), 1,78 - 1,61 (m, 2H), 0,92 (d, J = 7 Hz, 3H), 0,90 (d, J = 6,8 Hz, 3H),
Ejemplos 81-84 (solo como referencia)
Figure imgf000116_0001
Ejemplo 81: (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3R)-5-hidroxi-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[ 3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida
Ejemplo 82: (1R,2S,5S,6R)-N-{(1S)-1 -ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6-(hidroximetil)-6-metil-3 -[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida
Ejemplo 83: (1R,2S,5S,6S)-N-{(1S)-1 -Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6-(hidroximetil)-6-metil-3 -[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida
Ejemplo 84: (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-3-[3-(hidroximetil)-N-(trifluoroacetil )-L-valil]-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida
Los compuestos de los Ejemplos 81-84 se obtuvieron por vías de biotransformación, tanto in vitro como in vivo, a partir de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (el compuesto del Ejemplo 13) como sigue. En estudios in vitro, (1r ,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3 azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida se incubó con microsomas de hígado de ratón, rata, hámster, conejo, mono o humano (véase la Tabla M1 a continuación) o con hepatocitos de rata, mono o humano (véase la Tabla M2 a continuación). Por otra parte, en estudios in vivo se administró (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida a ratas y monos. Se obtuvieron muestras de plasma, orina y bilis de rata y de plasma de mono. A continuación, los metabolitos resultantes se analizaron mediante HPLC/MS y se detectaron y obtuvieron los compuestos metabolitos oxidativos resultantes de los Ejemplos 81-84. Además de los compuestos de los Ejemplos 81-84, en los estudios in vivo se observó un metabolito adicional, el ácido (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxílico, resultante de la escisión hidrolítica.
T l M1: m ni rir mi r m h i
Figure imgf000117_0002
T l M2: m l m l 1- 4 ni rir h i
Figure imgf000117_0003
Tabla M3: Com uestos de los eem los 81-84 obtenidos in vivo en la rata o el mono
Figure imgf000117_0004
En las tablas M1, M2 y M3 se utilizan las siguientes abreviaturas: - = no detectado; = detectado por espectrometría de masas y pico UV menor; + = detectado por espectrometría de masas y pico UV moderado; ++ = detectado por espectrometría de masas y pico UV mayor; t = rastro, detectado solo por espectrometría de masas.
Ejemplos 82, 83, 84 y 81 (solo como referencia)
(1R.2S.5S.6R)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-illetil)-6-(hidroximetil)-6-metil-3 -[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-val¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxamida (82), (1R.2S.5S.6S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-illetil}-6-(hidroximetil)-6-metil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valill -3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxamida (83), (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-illetil)-3-[3-(hidroximetil)-N-(trifluoroacetil)-L-valill-6.6-dimetil-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxamida (84), y (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3R)-5-hidroxi-2-oxopirrolidin-3-illetil}-6.6-dimet¡l-3-[3 -metil-N-(trifluoroacetil)-L-valill-3-azabiciclo[3.1.0lhexano-2-carboxamida (81)
Figure imgf000117_0001
El Ejemplo 13 (25 j M) se combinó con microsomas de hígado humano (2 mg/ml) en tampón de fosfato de potasio (100 mM, pH 7,4; 40 ml) que contenía cloruro de magnesio (3,3 mM) y Na DPH (1,3 mM). La incubación se llevó a cabo durante 55 minutos en un baño de agua con agitación mantenido a 37 °C. La reacción se terminó añadiendo un volumen igual de acetonitrilo, tras lo cual la mezcla se centrifugó a 1800 x g durante 5 minutos, y el sobrenadante se sometió a centrifugación al vacío durante aproximadamente 1,5 horas. Al residuo se le añadió ácido fórmico (0,5 ml), acetonitrilo (0,5 ml) y agua hasta un volumen final de 50 ml, y la mezcla resultante se centrifugó a 40000 * g durante 30 minutos. El sobrenadante se aplicó a una columna de HPLC (Polaris C18, 4,6 * 250 mm; 5 jm) a 1 ml/min utilizando una bomba de HPLC Jasco. Tras la aplicación, la columna se trasladó a un sistema Waters Acquity HPLC-UV acoplado a un espectrómetro de masas Thermo LTQ y a un colector de fracciones CTC Analytics y se sometió a una separación por HPLC en fase inversa (fase móvil A: agua con un 0,1% de ácido fórmico (v/v); fase móvil B: acetonitrilo; gradiente: 2 % durante 5 minutos, luego se eleva al 15 % de B seguido del 15 % al 60 % de B durante 80 minutos, luego del 6 0% al 95 % de B durante 5 minutos; Caudal: 0,8 ml/min). Las fracciones se recogieron cada 20 segundos, obteniéndose (1R,2S,5S,6R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6-(hidroximetil)-6-metil-3 -[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (82), (1R,2S,5S,6S)-N-{(1S) -1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6-(hidroximetil)-6-metil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valilo] -3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (83), (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidina-3- yil1etil}-3-[3-(hidroximetil)-N-(trifluoroacetil)-L-valil1-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (84), y ( 1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3R)-5-hidroxi-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6,6-dimetil-3-[3 -metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (81).
Figure imgf000118_0001
82 - Rendimiento: 60 jg, 0,12 jmol, 12 %. MS de alta resolución m /z 516,2424 [M+H]+; calculado para C23H33F3N5O5, 516.2434. 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6), picos característicos: 69,42 (br d, J = 7,9 Hz, 1H), 9,03 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 5,01 -4,93 (m, 1H), 4,69 -4,63 (m, 1H), 4,43 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 4,15 (s, 1H), 3,94 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,2, 5,4 Hz, 1H), 3,68 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,4 Hz, 1H), 3,21 - 3,17 (m, 2H), 3,17 - 3,11 (m, 1H), 3,07 - 3,00 (m, 1H), 1,69 - 1,65 (m, 1H), 1,44 (d, J = 7,8 Hz, 1H), 0,98 (s, 9H), 0,84 (s, 3H).
83 - Rendimiento: 30 jg, 0,058 jmol, 6 %. MS de alta resolución m /z 516,2425 [M+H]+; calculado para C23H33F3N5O5, 516.2434. 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6), picos característicos: 69,37 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 9,04 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 5.00 -4,94 (m, 1H), 4,54 -4,49 (m, 1H), 4,40 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 4,28 (s, 1H), 3,93 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,2, 5,8 Hz, 1H), 3,74 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,6 Hz, 1H), 3,3 - 3,20 (m, 1H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico de agua), 3,17 - 3,11 (m, 1H), 3,07 - 3,00 (m, 1H), 1,75 - 1,63 (m, 2H), 1,38 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,3 Hz, 1H), 1,06 (s, 3H), 0,98 (s, 9H).
84 - Rendimiento: 40 jg, 0,078 jmol, 8%. MS de alta resolución m /z 516,2423 [M+H]+; calculado para C23H33F3N5O5, 516.2434. 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6), picos característicos: 69,61 -9,51 (m, 1H), 9,00 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 5,02 -4,92 (m, 1H), 4,51 -4,43 (m, 1H), 4,16 (s, 1H), 3,92 (br dd, J = 10,0, 5,6 Hz, 1H), 3,78 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 3.51 (d, J = 10,1 Hz, 1H), 3,18 -3,10 (m, 1H), 3,10 -3,03 (m, 1H), 1,73 - 1,67 (m, 2H), 1,60 - 1,54 (m, 1H), 1,31 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H), 1,01 (s, 3H), 0,88 (br s, 6H).
81 - Rendimiento: 130 jg, 0,252 jmol, 25 %. Se determinó que este material existe como una mezcla interconvergente de estereoisómeros alrededor de la fracción de carbinolamina de la pirrolidona (véanse los Ejemplos 81 y 82). MS de alta resolución m /z 516,2428 [M+H]+; calculado para C23H33F3N5O5, 516,2434. 1H RMN (600 MHz, DMSO-d6) 6 [9,40 (d, J = 8,4 Hz) y 9,38 (d, J = 8,2 Hz), total 1H], [8,99 (d, J = 8,5 Hz) y 8,92 (d, J = 7,6 Hz), total 1H], [8,37 (s) y 8,25 (s), total 1H], [583 (s) y 5,70 (s), total 1H], 5,04 - 4,92 (m, 2H), 4,44 - 4,38 (m, 1H), [4,19 (s) y 4,15 (s), total 1H], 3,91 (dd, J = 10,2, 5,5 Hz, 1H), [3,69 (d, J = 10 Hz) y 3,68 (d, J = 10.2 Hz), total 1H], [2,65 - 2,57 (m), 2,43 - 2,30 (m), y 2,21 - 2,13 (m), total 2H], [2,08 (ddd, J = 13,7, 8,4, 6,2 Hz), 2,00 - 1,90 (m), y 1,87 - 1,79 (m), total 2H], [1,78 - 1,70 (m) y 1.51 - 1,44 (m), total 1H], 1,60 - 1,53 (m, 1H), [1,32 (d, J = 7,6 Hz) y 1,29 (d, J = 7,6 Hz), total 1H], 1,03 (s, 3H), [0,99 (s) y 0,98 (s), total 9H], [0,85 (s) y 0,84 (s), total 3H].
Ejemplos 81 y 85 (solo como referencia)
(1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-C¡ano-2-[(3R)-5-h¡drox¡-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-6,6-d¡met¡l-3-[ 3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil1-3-azabic¡clo[3.1.01hexano-2-carboxamida (81) y (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-C¡ano -2-[(3R)-2,5-dioxopirrolidin-3-il1etil}-6,6-d¡met¡l-3-[3-met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-valil1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (85)
Figure imgf000119_0001
Una mezcla del Ejemplo 13 (1,0 mg, 2,0 |jmol) y decatungstato de tetra-n-butilamonio (TBADT; 0,33 mg, 0,10 |jmol) se trató con acetonitrilo (0,15 ml) y ácido clorhídrico (1,0 M; 0,05 ml, 50 jmol). Se introdujo una aguja de jeringa (calibre 18) a través del tapón de teflón del vial, y la mezcla de reacción accesible al aire se colocó en una EvoluChem™ PhotoRedOx Box equipada con un ventilador y se irradió con luz negra (PAR20-18W LG 365 nm, 100-240 VAC) a 25 °C durante 16 horas. A la mezcla de reacción se añadió una solución acuosa de fosfato de potasio (1 M, pH 7,5; 0,5 ml), luego agua (hasta un volumen de aproximadamente 6 ml), seguida de la adición de ácido fórmico acuoso (1%, 2 ml) y suficiente acetonitrilo para mantener una solución. La solución resultante se dividió por la mitad y se aplicó a dos cartuchos de extracción en fase sólida Biotage Isolute C18 de 5 g. Los cartuchos se lavaron con una solución acuosa de acetato de amonio (10 mM; 3 ml) y con acetonitrilo al 20 % en una solución acuosa de acetato de amonio 10 mM (3 ml), y luego se eludieron con acetonitrilo (3 ml). Los disolventes se eliminaron con un evaporador Genevac y los dos residuos se reconstituyeron en una mezcla de acetonitrilo y ácido fórmico acuoso al 1% y se combinaron hasta obtener un total de 2 ml de solución. Este material se sometió a una HPLC en fase inversa (Columna: Phenomenex Luna C18,10 * 250 mm, 10 jm; Fase móvil A: agua que contenía 0,1 % de ácido fórmico (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 2% a 15 % B en 5 minutos, luego 15 % a 60 % B en 80 minutos, luego 60 % a 95 % B en 5 minutos; Caudal: 2 ml/min). Se recogieron fracciones cada 20 segundos; el compuesto de primera elución fue (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3R)-5-hidroxi-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (81), y el compuesto de segunda vía fue (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3R)-2,5-dioxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (85).
Rendimiento de 81: 0.122 mg, 0,237 jmol, 12 %. Se determinó que este material existía como una mezcla interconvergente de estereoisómeros alrededor de la fracción de carbinolamina de la pirrolidona, y que eludía como un pico doble en la HPLC. MS de alta resolución m /z 516,2413 [M+H]+; calculado para C23H33F3N5O5, 516,2434. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 8 9,44 - 9,34 (m, 1H), [8,99 (d, J = 8,5 Hz) y 8,92 (d, J = 7,6 Hz), total 1H], [8,37 (s) y 8,25 (s), total 1H], [5,83 (br s) y 5,70 (br s), total 1H], 5.05 -4,91 (m, 2H), 4,44 -4,37 (m, 1H), [4,19 (s) y 4,15 (s), total 1H], 3,91 (dd, J = 10,3, 5,5 Hz, 1H), [3,69 (d, J = 10,1 Hz) y 3,68 (d, J = 10,3 Hz), total 1H], [2,65 -2,57 (m), 2.43 -2,30 (m) y 2,17 (ddd, J = 14,9, 10,7, 4,7 Hz), total 2H], [2,08 (ddd, J = 14,1, 8,5, 6,2 Hz), 2,01 -1,90 (m) y 1,83 (ddd, J = 13,7, 10,1, 5,7 Hz), total 2H], [1,78 - 1,70 (m) y 1.51 - 1,44 (m), total 1H], 1,60 - 1,53 (m, 1H), [1,32 (d, J = 7,6 Hz) y 1,29 (d, J = 7,6 Hz), total 1H], 1,03 (s, 3H), [0,99 (s) y 0,98 (s), total 9H], [0,85 (s) y 0,84 (s), total 3H]. Tiempo de retención: 7.7 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Phenomenex Kinetex XB-C18, 2.1 * 100 mm, 2.6 jm; Fase móvil A: agua con 0.1 % de ácido fórmico (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 5 % B durante 0,5 minutos, luego 5 % a 70 % B durante 10,5 minutos, luego 70 % a 95 % B durante 2 minutos; Caudal: 0,4 ml/minuto).
Rendimiento de 85: 0,104 mg, 0.203 jmol, 10 %. MS de alta resolución m /z 514,2259 [M+H]+; calculado para C23H31F3N5O5, 514.2277. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 8 11,17 (br s, 1H), 9,40 (br s, 1H), 9,08 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 5,06 -4,98 (m, 1H), 4,42 -4,36 (m, 1H), 4,13 (s, 1H), 3,91 (dd, J = 10,3, 5,6 Hz, 1H), 3,70 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,4 Hz, 1H), 3,00 - 2,93 (m, 1H), 2,60 (dd, componente del sistema ABX, J = 18,0, 5,9 Hz, 1H), 2,46 (dd, componente del sistema ABX, J = 18,1, 9,1 Hz, 1H), 2,25 -2,18 (m, 1H), 2,04 - 1,97 (m, 1H), 1,60 - 1,55 (m, 1H), 1,35 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H), 0,95 (s, 9H), 0,86 (s, 3H). Tiempo de retención: 8,3 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para 81).
Ejemplo 86 (solo como referencia)
(1R.2S.5S)-N-f(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil)-6.6-dimetil-3-[5.5.5-trifluoro-2-(2.2.2-trifluoroacetamido)pentanoil1-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxamida (86)
Figure imgf000120_0001
Figure imgf000120_0002
A una suspensión a 0 °C del ácido (1R.2S.5S)-3-(tert-butoxicarbonil)-6.6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxílico (5.25 g. 20.6 mmol). C16, sal de HCl (4.70 g. 22.6 mmol). y 1-óxido de 2-hidroxipiridina (571 mg. 5.14 mmol) en butano-2-ona (108 ml) se añadió N,N-diisopropiletilamina (7,97 g, 61,7 mmol) seguida de clorhidrato de 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etilcarbodiimida (4,73 g, 24,7 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 20 minutos, se dejó que se calentara gradualmente hasta alcanzar la temperatura ambiente y, a continuación, se agitó a temperatura ambiente durante toda la noche, tras lo cual el análisis de LCMS indicó la presencia de C66: LCMS m /z 407,1 [M-H]-. La mezcla de reacción se diluyó con acetato de etilo (100 ml), y se lavó secuencialmente con lo siguiente: una mezcla de agua (50 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico (20 ml), solución acuosa saturada de cloruro sódico (70 ml), dos veces con una mezcla de ácido clorhídrico (1 M; 50 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico (20 ml), y finalmente con solución acuosa saturada de cloruro sódico (70 ml). Cada capa acuosa se extrajo con acetato de etilo (100 ml), y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio y se filtraron. El sulfato de sodio recogido se lavó con acetato de etilo (2 * 50 ml), y los filtrados combinados se concentraron in vacuo, se diluyeron con heptano (50 ml) y se concentraron bajo presión reducida para obtener C66 como un cristal incoloro (6,69 g). Mediante el análisis de 1H RMN, algunos disolventes estaban presentes; la pureza se estimó en aproximadamente 85 % en peso. el análisis de 1H RMN también indicó que este material existe como una mezcla de rotámeros. Rendimiento, ajustado por la presencia de disolventes: 5,7 g, 14 mmol, 68%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6), picos característicos: 88,23 - 8,13 (m, 1H), [7,63 (br s) y 7,59 (br s), total 1H], [7.36 (s. br.) y 7,23 (s. br.), total 1H], 7,08 - 7,00 (m, 1H), 4,31 - 4,19 (m, 1H), [4,03 (s) y 3,99 (s), total 1H], [3,58 (dd, J = 10,8, 4,6 Hz) y 3,49 (dd, J = 10,8, 3,9 Hz), total 1H], [3,27 (d, J = 10,9 Hz) y 3,26 (d, J = 10,7 Hz), total 1H], 3,22 -3,00 (m, 2H), 2,38 - 2,09 (m, 2H), 1,79 - 1,43 (m, 2H), [1,36 (s) y 1,29 (s), total 9H], 1,00 (s, 3H), 0,89 (s, 3H).
Paso 2: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]propan-2-il}-6,6-dimetil-3-azab¡c¡clo[3.1,01hexano-2-carboxam¡da. sal de metanosulfonato (C67).
Se añadió ácido metanosulfónico (0,920 ml, 14,2 mmol) a una solución de C66 (aproximadamente 85 % en peso, del paso anterior; 6,68 g, 14 mmol) en 1,1,1,3,3-hexafluoropropan-2-ol (30 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 3 horas, tras lo cual se concentró in vacuo. El residuo se tomó secuencialmente en los siguientes sistemas de disolventes, seguidos de reconcentración: acetonitrilo / acetato de etilo (1:1,2 * 10 ml) y acetato de etilo / heptano (1:1,2 * 10 ml), para proporcionar C67 como un cristal (7,18 g). Una parte de este material se llevó al siguiente paso. LCMS m /z 309,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, metanol^) 84,51 (dd, J = 10,8, 4,7 Hz, 1H), 4,21 (br s, 1H), 3,73 (dd, J = 12,4, 6,3 Hz, 1H), 3,41 - 3,22 (m, 3H), 2,70 (s, 3H), 2,58 -2,47 (m, 1H), 2,42 -2,32 (m, 1H), 2,16 (ddd, J = 14,0, 10,8, 4,8 Hz, 1H), 1,97 (br d, J = 7,9 Hz, 1H), 1,95 - 1,84 (m, 1H), 1,84 - 1,75 (m, 2H), 1,15 (s, 6H).
Paso 3: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[5, 5,5-trifluoro-2-(2,2,2-tr¡fluoroacetam¡do)pentano¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (86).
A una solución de ácido 2-[(tert-butoxicarbonil)amino]-5,5,5-trifluoropentanoico (59,0 mg, 0,218 mmol) en una mezcla de acetonitrilo (0,60 ml) y N,N-dimetilformamida (0,40 ml) se añadió hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 82,7 mg, 0,218 mmol) seguido de 4-metilmorfolina (54,4 pL, 0,495 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción durante 20 minutos, se añadió C67 (del paso anterior; 100 mg, <0,19 mmol) como sólido. La mezcla de reacción se dejó agitar durante 1,5 horas, tras lo cual se repartió entre acetato de etilo y una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron con una corriente de nitrógeno. El residuo se disolvió en diclorometano (0,70 ml), se trató con ácido trifluoroacético (0,175 ml) y se agitó a temperatura ambiente. Después de 2 horas, se añadió de nuevo ácido trifluoroacético (0,10 ml); se continuó la agitación durante 3 horas más, tras lo cual la mezcla de reacción se concentró bajo una corriente de nitrógeno y después in vacuo. Este material se disolvió en diclorometano (0,75 ml), se enfrió en un baño de hielo y se trató con trietilamina (54,8 pL, 0,393 mmol); se añadió anhídrido trifluoroacético (41,2 pL, 0,292 mmol) en forma de gota y se dejó agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 3 horas. Los volátiles se eliminaron con un evaporador Genevac, y el residuo se disolvió en diclorometano (0,90 ml), se trató con N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 132 mg, 0,554 mmol), y se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas. A continuación, la mezcla de reacción se concentró bajo una corriente de nitrógeno, se diluyó con acetato de etilo y se lavó con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico. La capa acuosa se extrajo con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron bajo una corriente de nitrógeno. Purificación mediante HPLC en fase inversa (Columna: Waters Sunfire C18, 19 * 100 mm, 5 pm; Fase móvil A: 0,05 % de ácido trifluoroacético en agua; Fase móvil B: 0,05 % de ácido trifluoroacético en acetonitrilo; Gradiente: 5 % a 95 % B durante 8,54 minutos, seguido de 95 % B durante 1,46 minutos; Caudal: 25 ml/minuto) proporcionó (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3 -[5,5,5-trifluoro-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)pentanoil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (86). Rendimiento: 14 mg, 26 pmol, 14 % en 2 pasos. LCMS m /z 540,6 [M+H]+. Tiempo de retención: 2.60 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Waters Atlantis dC18, 4,6 * 50 mm, 5 pm; Fase móvil A: agua que contenia 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenia 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Gradiente: 5,0 % a 95 % B, lineal durante 4,0 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto; Caudal: 2 ml/minuto).
Ejemplo 87
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-3-[(2S)-2-ciclohexil-2-{[(tr¡fluoromet¡l)sulfon¡l1am¡no}acet¡l1-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (87)
Figure imgf000122_0001
Paso 1: Síntesis de metil (1R.2S.5S)-3-{(2S)-2-[(tert-butox¡carbon¡l)am¡no1-2-c¡clohex¡lacet¡l}-6.6-dimet¡l-3-azabic¡clo[3.1.01hexano- 2-carboxilatos (C68).
A una solución a 0 °C de (1R,2S,5S)-6,6-dimet¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexano-2-carboxilato de metilo. sal de clorhidrato (300 mg. 1.46 mmol) y ácido (2Sj-[(tert-butox¡carbon¡l)am¡no](c¡clohex¡l)acét¡co (394 mg. 1,53 mmol) en N.N-dimetilformamida (5 ml) se añadió hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-¡l)-N.N.N'.N'-tetrametiluron¡o (HATU; 610 mg. 1,60 mmol). seguido de la adición gota a gota de 4-metilmorfolina (443 mg. 4.38 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 0 °C durante 10 minutos y luego a temperatura ambiente (20 °C) durante 2 horas. tras lo cual se vertió en agua helada (30 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 * 40 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con agua (40 ml). ácido clorhídrico (1 M; 40 ml). solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (40 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico, después se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró in vacuo para proporcionar C68 como una espuma blanca. Rendimiento: 580 mg, 1,42 mmol, 97 %. LCMS m /z 409,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 87,03 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 4,17 (s, 1H), 4,00 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,88 (dd, J = 9, 9 Hz, 1H), 3,75 (dd, J = 10,3, 5,3 Hz, 1H), 3,64 (s, 3H), 1,83 - 1,47 (m, 8H), 1,46 - 1,28 (m, 2H), 1,33 (s, 9H), 1,18 -1,06 (m, 3H), 1,00 (s, 3H), 0,86 (s, 3H).
Paso 2: Síntesis de (1R.2S.5S)-3-[(2S)-2-am¡no-2-c¡clohex¡lacet¡l1-6.6-d¡met¡l-3-azabic¡clo[3.1.01hexano-2-carbox¡lato de metilo, sal de clorhidrato (C69).
Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4 M; 15 ml) en forma de gota a una solución a 5 °C de C68 (580 mg, 1,42 mmol) en 1,4-dioxano (3 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente (20 °C) durante 1,5 horas, se concentró in vacuo. El residuo se coevaporó con diclorometano para obtener C69 como una espuma de color amarillo claro (490 mg), cuya mayor parte se utilizó en el siguiente experimento. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 88,22 (br s, 3H), 4,26 (s, 1H), 3,99 - 3,90 (m, 1H), 3,76 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,7, 5,1 Hz, 1H), 3,71 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,6 Hz, 1H), 3,66 (s, 3H), 1,83 - 1,60 (m, 6H), 1,59 (dd, J = 7,6, 5,1 Hz, 1H), 1,49 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,27 - 1,02 (m, 5H), 1,03 (s, 3H), 0,94 (s, 3H).
Paso 3: Síntesis de (1R,2S,5S)-3-[(2S)-2-ciclohexil-2-{[(trifluorometil)sulfonil1amino}acetil1-6,6-dimetil-3-azabic¡clo[3.1.01hexano-2-carbox¡lato de metilo (C70).
A una solución a -10 °C de C69 (del paso anterior; 480 mg, <1,39 mmol) en diclorometano (10 ml) se añadió N,N-diisopropiletilamina (630 mg, 4,87 mmol), seguida de la adición gota a gota de anhídrido trifluorometanosulfónico (0,328 ml, 1,95 mmol). La mezcla de reacción se agitó a -10 °C durante 1 hora, después a temperatura ambiente (20 °C) durante 1 hora, tras lo cual se diluyó con solución acuosa saturada de cloruro sódico (50 ml) y se extrajo con diclorometano (3 * 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (Eluyente: 1:4 acetato de etilo / éter de petróleo), proporcionando C70 como un aceite amarillo claro. Rendimiento: 124 mg, 0,282 mmol, 20 % en 2 pasos. LCMS m /z 441,1 [M+H]+.
Paso 4: Síntesis del ácido (1R,2S,5S)-3-[(2S)-2-ciclohexil-2-{[(trifluorometil)sulfonil1amino}acetil1-6,6-dimetil-3-azab¡c¡clo[3.1,01hexano-2-carboxíl¡co (C71).
A una solución de C70 (120 mg, 0,272 mmol) en una mezcla de agua (2 ml), metanol (2 ml) y tetrahidrofurano (2 ml) se añadió hidróxido de litio monohidratado (28,6 mg, 0,682 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente (20 °C) durante 18 horas a temperatura ambiente, LCMS indicó que la reacción estaba completa: LCMS m /z 427,2 [m H]+. La mezcla de reacción se concentró in vacuo para eliminar los disolventes orgánicos. El residuo se diluyó con agua (5 ml) y luego se acidificó hasta un pH de 2 a 3 mediante la adición de ácido clorhídrico 1 M; la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (2 * 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo, proporcionando C71 como un sólido amarillo claro. Rendimiento: 92,0 mg, 0,216 mmol, 79 %.
Paso 5: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]propan-2-il}-3-[ (2S)-2-ciclohexil-2-{[(trifluorometil)sulfonil1amino}acetil1-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxamida (C72).
A una solución a 0 °C de C71 (92,0 mg, 0,216 mmol) y C16, sal de HCl (72%, 68,8 mg, 0238 mmol) en N,N-dimetilformamida (3 ml) se añadió hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 98,4 mg, 0,259 mmol), seguido de 4-metilmorfolina (76,4 mg, 0,755 mmol). La mezcla de reacción se agitó a 20 °C durante 2 horas, tras lo cual se vertió en agua helada (10 ml) y se extrajo con una mezcla de cloroformo y 2-propanol (4:1, 4 * 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de sodio, se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía sobre gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano), obteniendo C72 como un cristal incoloro. Rendimiento: 100 mg, 0,173 mmol, 80 %. LCMS m /z 580,2 [M+H1+.
Paso 6: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-3-[(2S)-2-ciclohexil-2-{[(trifluorometil)sulfonil1amino}acetil1-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxamida (87).
Se añadió una solución de anhídrido trifluoroacético (47,1 mg, 0,224 mmol) en diclorometano (1 ml) en forma de gota a una solución a 0 °C de C72 (100 mg, 0,173 mmol) y piridina (41,7 pL, 0,516 mmol) en diclorometano (3 ml). Tras agitar la mezcla durante 20 horas a temperatura ambiente (10 °C a 20 °C), se concentró in vacuo y se disolvió nuevamente en diclorometano (3 ml). Se añadió N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 103 mg, 0,432 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente (20 °C) durante 20 horas. A continuación, se diluyó con una solución acuosa saturada de cloruro sódico (10 ml) y se extrajo con diclorometano (3 * 20 ml); las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron, se concentraron in vacuo y se sometieron a cromatografía de fluidos supercríticos [Columna: Chiral Technologies Chiralcel OD, 30 * 250 mm, 10 pm; Fase móvil: 4:1 dióxido de carbono / (etanol con 0,1 % de hidróxido de amonio); Caudal: 60 ml/minuto]. Las fracciones que contenían 87 se concentraron in vacuo por debajo de los 40 °C para eliminar el cosolvente alcohólico.
El residuo se diluyó con acetato de etilo (50 ml) y diclorometano (5 ml) y se lavó secuencialmente con ácido clorhídrico (1 M; 20 ml), solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (20 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico. La capa orgánica resultante se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se concentró in vacuo antes de mezclarla con agua (20 ml) y acetonitrilo (5 ml); esta mezcla se liofilizó para obtener (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il]etil}-3-[(2S)-2-ciclohexil-2-{[(trifluorometil)sulfonil]amino}acetil]-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (87) como un sólido blanco. Rendimiento: 27,6 mg, 49,1 pmol, 28 %. LCMS m/z 562,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6), picos característicos: 69,93 (d, J = 8,3 Hz, 1H), 9,10 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 5,03 - 4,94 (m, 1H), 4,15 (s, 1H), 3,88 - 3,78 (m, 2H), 3,55 (d, J = 10,2 Hz, 1H), 3,20 - 3,11 (m, 1H), 3,10 - 3,00 (m, 1H), 2,19 -2,08 (m, 1H), 2,06 - 1,95 (m, 1H), 1,85 - 1,53 (m, 9H), 1,33 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,7 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H), 0,89 (s, 3H),
Ejemplos 88 y 89 (solo como referencia)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-3-[3-ciclobutil-N-(trifluoroacetilo)-L-alanil]-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida y (1R,2S,5S)-N-{(1s )-1 -Ciano-2-[(3S) -2-oxopirrolidin-3-il]etil}-3-[3-ciclobutil-N-(trifluoroacetil)-D-alanil]-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (88 y 89)
Figure imgf000124_0001
Paso 1: Síntesis de {1-[(1R.2S.5S)-2-({(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]propan- 2-il}carbamoil)-6,6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexan-3-¡l]-3-c¡clobut¡l-1-oxopropan-2-¡l}carbamato de tert-butilo (C73).
Una solución a 0 °C de C67 (150 mg, 0,371 mmol) y N-(tert-butoxicarbonilo)-3-ciclobutilalanina (99,2 mg, 0,408 mmol) en N,N-dimetilformamida (3 ml) se trató con hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 169 mg, 0,444 mmol). A continuación, se añadió 4-metilmorfolina (131 mg, 1.30 mmol) en forma de gota, tras lo cual se dejó que la mezcla de reacción se calentara a 25 °C y se agitara durante la noche. Se añadió agua helada (10 ml) y la mezcla resultante se extrajo con una mezcla de cloroformo y 2-propanol (4:1, 4 * 20 ml); las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía sobre gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) se llevó a cabo dos veces, proporcionando C73 como un sólido blanco, que comprendía una mezcla de dos diastereómeros. Rendimiento: 106 mg, 0,199 mmol, 54 %. LCMS m /z 534,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 6 [8,59 (d, J = 5,5 Hz) y 7,85 (d, J = 7,7 Hz), total 1H], 7,20 - 7,06 (m, 1H), [5,78 (br s) y 5.67 (br s), total 1H], [5,51 (br s) y 5,40 br (s), total 1H], 5,22 -5,12 (m, 1H), [4,49 -4,39 (m) y 4,38 -4,23 (m), total 3H], 4,17 -4.06 (m, 1H), [3,83 (d, J = 10,4 Hz) y 3,50 (d, J = 10,5 Hz), total 1H], 3,42 - 3,28 (m, 2H), 2,50 - 2,30 (m, 3H), 2,23 - 2,00 (m, 4H), 2.00 - 1,77 (m, 4H), 1,73 - 1,44 (m, 5H),
[1,40 (s) y 1,39 (s), total 9H], [1,07 (s) y 1,03 (s), total 3H], [0,98 (s) y 0,92 (s), total 3H].
Paso 2: Síntesis de (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]et¡l}-3-[3-c¡clobut¡l-N-(tr¡fluoroacet¡lo )-L-alan¡l1-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da y (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l>-3-f3-c¡clobut¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-D-alan¡ll-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da T88 (DIAST-1) y 89 (DIAST-2)].
Se añad¡ó una soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en 1.4-d¡oxano (4 M; 5 ml. 20 mmol) en forma de gota a una soluc¡ón a 0 °C de C73 (106 mg. 0.199 mmol) en d¡clorometano (5 ml). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 0 °C durante 15 m¡nutos y luego a 25 °C durante 2 horas. tras lo cual se concentró in vacuo para obtener el mater¡al desproteg¡do como un sól¡do blanco: LCMS m /z 434.2 [M+H]+. Se d¡solv¡ó en d¡clorometano (3 ml). se enfr¡ó en un baño de h¡elo y se trató con p¡r¡d¡na (79.9 mg. 1.01 mmol) y una soluc¡ón de anhídr¡do tr¡fluoroacét¡co (170 mg. 0.809 mmol) en d¡clorometano (1.5 ml). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 20 °C durante 20 horas; después se añad¡ó p¡r¡d¡na (40.0 mg. 0.506 mmol) y se cont¡nuó ag¡tando durante otras 12 horas a 25 °C. Tras d¡lu¡r con d¡clorometano (15 ml). la mezcla de reacc¡ón se lavó secuenc¡almente con ác¡do clorhídr¡co (1 M; 10 ml). soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato sód¡co (3 * 10 ml) y soluc¡ón acuosa saturada de cloruro sód¡co (10 ml). se secó. se f¡ltró y se concentró in vacuo. Cromatografía en gel de síl¡ce (Grad¡ente: 0 % a 20 % de metanol en d¡clorometano) fue segu¡da por cromatografía de flu¡dos supercrít¡cos [Columna: Ch¡ral Technolog¡es Ch¡ralpak IC. 30 * 250 mm. 10 pm; Fase móv¡l: 3:1 d¡óx¡do de carbono / (metanol con 0.1% de h¡dróx¡do de amon¡o); Caudal: 70 ml/m¡nuto]. obten¡éndose los d¡astereómeros separados (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]et¡l}-3-[3-c¡clobut¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-alan¡l]-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da y (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡na-3-¡l1et¡l-3-[3-c¡clobut¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-D-alan¡l]-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da. No se determ¡nó qué mater¡al contenía la conf¡gurac¡ón D-alan¡lo y cuál contenía la conf¡gurac¡ón L-alan¡lo; el d¡astereómero de pr¡mera elus¡ón se des¡gnó como 88. y el d¡astereómero de segunda elus¡ón se des¡gnó como 89. Ambos se obtuv¡eron como sól¡dos blancos.
88 - Rend¡m¡ento: 9.3 mg. 18.2 pmol. 9% en 2 pasos. LCMS m /z 512.1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz. DMSO-d6) 89.75 (br d. J = 7.0 Hz. 1H). 8.96 (d. J = 8.1 Hz. 1H). 7.71 (s. 1H). 5.00 -4.90 (m. 1H). 4.32 -4.23 (m. 1H). 4.13 (s. 1H). 3.82 (dd. componente del s¡stema ABX. J = 10.2. 5.4 Hz. 1H). 3.69 (d. m¡tad del cuarteo AB. J = 10.2 Hz. 1H). 3.20 - 3.02 (m. 2H). 2.44 - 2.28 (m. 2H). 2.16 - 2.04 (m. 2H). 2.04 - 1.91 (m. 2H). 1.87 - 1.54 (m. 9H). 1.32 (d. m¡tad del cuarteo Ab . J = 7.6 Hz. 1H). 1.03 (s. 3H). 0.88 (s. 3H). T¡empo de retenc¡ón: 2.78 m¡nutos (Cond¡c¡ones analít¡cas. Columna: Ch¡ral Technolog¡es Ch¡ralpak IC-3. 4.6 * 150 mm. 3 pm; Fase móv¡l A: d¡óx¡do de carbono; Fase móv¡l B: metanol con 0.05% de d¡et¡lam¡na (v/v); Grad¡ente: 5 % a 40 % B durante 5 m¡nutos. luego 40 % B durante 2.5 m¡nutos; Contrapres¡ón: 1500 ps¡; Caudal: 2.5 ml/m¡nuto).
89 - Rend¡m¡ento: 23 mg. 45.0 mmol. 23 % en 2 pasos. El anál¡s¡s de 1H RMN ¡nd¡có que este mater¡al ex¡ste como una mezcla de rotámeros. LCMS m /z 512.1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz. DMSO-cfe) 8 [9.92 br (s) y 9.65 (br s). total 1H]. [9.22 (d. J = 7.7 Hz) y 8.85 (d. J = 8.4 Hz). total 1H]. [7.76 (s) y 7.67 (s). total 1H]. [5.11 - 5.00 (m) y 4.98 - 4.87 (m). total 1H]. [4.51 (s) y 4.07 (s). total 1H]. [4.47 - 4.36 (m) y 4.09 - 4.00 (m). total 1H]. [3.90 (dd. J = 10.2. 5.3 Hz) y 3.60 - 3.45 (m). total 2H]. 3.21 - 3.00 (m. 2H). 2.44 - 2.33 (m. 1H). 2.28 - 1.98 (m. 3H). 1.98 - 1.52 (m. 10H). [1.49 -1.38 (m) y 1.32 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 7.6 Hz). total 2H]. [1.04 (s) y 1.02 (s). total 3H]. [0.93 (s) y 0.82 (s). total 3H]. T¡empo de retenc¡ón: 4.14 m¡nutos (cond¡c¡ones analít¡cas ¡dént¡cas a las ut¡l¡zadas para el 88).
Ejemplo 90 (solo como referencia)
(1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l}-6.6-d¡met¡l-3-[3-(p¡r¡d¡na -2-¡l)-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-alan¡l]-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da (90)
Figure imgf000126_0001
Paso 1: Síntesis de [(2S)-1-[(1R.2S.5S)-2-({(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxop¡rrolid¡na-3- il1propan-2-¡l}carbamoil)-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexan-3-¡l1-1-oxo-3-(p¡r¡d¡n-2-¡l)propan-2-ilo1carbamato de tert-butilo (C74).
A una solución a 0 °C de C67 (250 mg. 0.618 mmol) y N-(tert-butoxicarbon¡l)-3-p¡r¡d¡n-2-¡l-L-alanina (198 mg. 0.744 mmol) en N. N-dimetilformamida (2 ml) se añadió hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N.N.N'.N'-tetrametiluronio (HATU; 282 mg. 0.742 mmol). seguido de la adición gota a gota de una solución de 4-metilmorfolina (188 mg. 1.86 mmol) en N.N-dimetilformamida (1 ml). Se calentó la mezcla de reacción a 20 °C y se agitó durante 2 horas. tras lo cual se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (10 ml). Se añadió sulfato sódico sólido a la capa acuosa hasta conseguir la saturación. tras lo cual se extrajo la capa acuosa con una mezcla de diclorometano y metanol (10:1. 3 * 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano). obteniendo C74 como una goma amarilla. Rendimiento: 250 mg. 0.449 mmol. 73 %. LCMS m /z 557.0 [M+H]+. 1H Rm N(400 MHz. metanol-c^). picos característicos: 88.49 (d. J = 5.2 Hz. 1H). 7.78 -7.71 (m. 1H). 7.35 (d. J = 7.8 Hz. 1H). 7.30 -7.25 (m. 1H). 4.73 (dd. J = 8.5. 5.2 Hz. 1H). 4.40 (dd. J = 11.8. 4.2 Hz. 1H). 4.30 (s. 1H). 4.01 -3.90 (m. 1H). 3.26 (dd. J = 14.2. 5.6 Hz. 1H). 2.94 (dd. J = 14.1. 8.9 Hz. 1H). 2.65 -2.53 (m. 1H). 2.37 -2.25 (m. 1H). 2.14 -2.04 (m. 1H). 1.91 -1.78 (m. 2H). 1.61 -1.55 (m. 1H). 1.53 (d. mitad del cuarteto AB. J = 7.7 Hz. 1H). 1.34 (s. 9H). 1.08 (s. 3H). 1.00 (s. 3H).
Paso 2: Síntesis de (1R.2S.5S)-N-{(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1propan-2-¡l}-6.6 -dimetil-3-[3-(p¡r¡d¡n-2-¡l)-L-alan¡l1-3-azabic¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da. sal clorhidrato (C75).
Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en 1.4-dioxano (4 M; 6 ml) a una solución a 0 °C de C74 (250 mg.
0.449 mmol) en diclorometano (2 ml). y la mezcla de reacción se agitó durante 5 horas a 20 °C. El análisis LCMS indicó la conversión a C75: LCMS m /z 457.1 [M+H1+. La eliminación de los disolventes in vacuo proporcionó C75 como un sólido amarillo (250 mg); una parte de este material se utilizó directamente en el siguiente paso. 1H RMN (400 MHz. DMSO-cfe). picos característicos: 88.81 (br d. J = 5.4 Hz. 1H). 8.43 (d. J = 8.3 Hz. 1H). 8.39 - 8.31 (m. 1H). 7.90 (d. J = 8.0 Hz. 1H). 7.87 - 7.81 (m. 1H). 7.65 (s. 1H). 7.43 (br s. 1H). 7.06 (br s. 1H). 4.77 -4.67 (m. 1H). 4.35 (s. 1H). 4.32 -4.23 (m. 1H). 3.94 -3.86 (m. 1H). 3.80 (d. mitad del cuarteto AB. J = 10.6 Hz. 1H). 3.36 -3.25 (m. 1H). 3.20 -3.08 (m.
2H). 2.35 -2.23 (m. 1H). 2.17 -2.06 (m. 1H). 2.01 -1.90 (m. 1H). 1.55 - 1.48 (m. 1H). 1.43 (d. mitad del cuarteto AB. J = 7.6 Hz. 1H). 1.04 (s. 3H). 0.96 (s. 3H).
Paso 3: Síntesis de (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-6.6-d¡met¡l-3-[3-(p¡r¡d¡n-2-¡l)-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-alan¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (90).
A una soluc¡ón a 0 °C de C75 (del paso anter¡or; 175 mg. <0,314 mmol) en d¡clorometano (6 ml) se añad¡ó p¡r¡d¡na (197 mg. 2.49 mmol). segu¡da de una soluc¡ón de anhídr¡do tr¡fluoroacét¡co (186 mg. 0.886 mmol) en d¡clorometano (2 ml). Tras ag¡tar la mezcla de reacc¡ón a 20 °C durante 2 horas. se d¡luyó con agua y se extrajo con una mezcla de d¡clorometano y metanol (10:1.3 * 15 ml). Las capas orgán¡cas comb¡nadas se concentraron in vacuo y se somet¡eron a cromatografía en gel de síl¡ce (Grad¡ente: 0 % a 10 % de metanol en d¡clorometano). segu¡do de cromatografía de flu¡dos supercrít¡cos [Columna: Ch¡ral Technolog¡es Ch¡ralpak AS. 30 * 250 mm. 10 pm; Fase móv¡l: 3:1 d¡óx¡do de carbono / (etanol con 0.1 % de h¡dróx¡do de amon¡o); Caudal: 70 ml/m¡nuto]. para obtener (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-6.6-d¡met¡l-3-[3-(p¡r¡d¡n-2-¡l)-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-alan¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da(90) como sól¡do blanco. Rend¡m¡ento: 25 mg. 46.8 pmol. 15 % en 2 pasos. LCMS m /z 535.1 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz. DMSO-d6) 89.92 (d. J = 7.5 Hz. 1H). 8.91 (d. J = 8.0 Hz. 1H). 8.51 (br d. J = 5 Hz. 1H). 7.75 - 7.68 (m. 2H). 7.28 (d. J = 7.8 Hz. 1H). 7.25 (dd. J = 7.3. 5.1 Hz. 1H). 5.00 -4.88 (m. 2H). 4.15 (s. 1H). 3.86 (dd. componente del s¡stema ABX. J = 10.3. 5.4 Hz. 1H). 3.70 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 10.3 Hz. 1H). 3.21 - 3.04 (m. 4H). 2.42 -2.31 (m. 1H). 2.18 -2.04 (m. 2H). 1.76 (ddd. J = 13.5. 9.6. 6.6 Hz. 1H). 1.74 - 1.62 (m. 1H). 1.62 - 1.53 (m. 1H). 1.33 (d. m¡tad del cuarteto AB. J = 7.6 Hz. 1H). 1.03 (s. 3H). 0.89 (s. 3H).
Ejemplo 91 (solo como referencia)
(1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l}-3-{N-[(4-fluorofenox¡)acet¡lol-3-met¡l-L-val¡l}-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da (91)
Figure imgf000128_0001
Una solución de C32 (15,4 g, 41,8 mmol) y C16, sal de HCl (75%, 11,6 g, 41,9 mmol) en N,N-dimetilformamida (380 ml) se enfrió a -5 °C a 0 °C. A esto se añadió hexafluorofosfato de 0-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 18,3 g, 48,1 mmol) y 4-metilmorfolina (12,7 g, 126 mmol) a -5 °C a 0 °C. Después de agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 1,5 horas, se vertió en agua helada (400 ml), y la mezcla resultante se extrajo con acetato de etilo (3 x 200 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con solución acuosa de ácido cítrico (1 M; 120 ml), solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (120 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico (3 x 60 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron, se concentraron in vacuo y se combinaron con el producto bruto de una reacción similar realizada con C32 (1,08 g, 2,93 mmol). Cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) proporcionó C76 como un sólido blanco (9,80 g). Las capas acuosas combinadas se extrajeron con una mezcla de cloroformo y 2-propanol (4:1, 3 x 100 ml); la concentración de estos extractos combinados se realizó mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) para obtener C76 adicional como sólido blanco (2,3 g). Rendimiento combinado: 12,1 gm, 23,2 mmol, 52 %. LCMS m /z 522,5 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 88,28 (br d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,20 (br s, 1H), 5,71 (br s, 1H), 5,38 (br s, 1H), 5.10 (d. br, J = 10,3 Hz, 1H), 4,47 -4,38 (m, 1H), 4,28 - 4,20 (m, 2H), 4,12 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,2, 4,0 Hz, 1H), 3,99 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,2 Hz, 1H), 3,40 - 3,33 (m, 2H), 2,53 -2,35 (m, 2H), 2,17 - 2,07 (m, 1H), 2,00 -1,81 (m, 2H), 1.52 -1,4 (m, 2H, supuesto; muy oscurecido por el pico de agua y la señal de tert-butilo), 1,39 (s, 9H), 1,02 (s, 3H), 1,01 (s, 9H), 0,88 (s, 3H).
Paso 2: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]propan-2-il}-6,6 -dimetil-3-(3-metil-L-val¡l)-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da, sal clorhidrato (C77).
A una solución a 0 °C de C76 (12,1 g, 23,2 mmol) en diclorometano (50 ml) se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4 M; 250 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a 20 °C durante 2 horas, se filtró. La torta filtrada se agitó con metil tert-butil éter (250 ml) durante 18 horas; la filtración proporcionó C77 como un sólido amarillo claro / blanco (10,89 g). LCMS m /z 422,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 88,38 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 8,19 (br s, 3H), 7,57 (br s, 1H), 7,41 (br s, 1H), 7,04 (br s, 1H), 4,35 -4,27 (m, 1H), 4,34 (s, 1H), 3,85 -3,72 (m, 2H), 3,65 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,8 Hz, 1H), 3,16 - 3,09 (m, 1H), 3,05 - 2,95 (m, 1H), 2,43 - 2,31 (m, 1H), 2,17 - 2,04 (m, 1H), 2,00 - 1,89 (m, 1H), 1,71 -1,42 (m, 3H), 1,38 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,7 Hz, 1H), 1,02 (s, 3H), 1,02 (s, 9H), 0,97 (s, 3H),
Paso 3: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]propan-2-il}-3-[ N-(cloroacetil)-3-met¡l-L-val¡l1-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (C78).
Se añadió trietilamina (2,21 g, 21,8 mmol) a una solución a 0 °C de C77 (del paso anterior; 2,50 g, <5,33 mmol) en diclorometano (100 ml). Se añadió a la mezcla de reacción una solución de cloruro de cloroacetilo (1,23 g, 10,9 mmol) en diclorometano (9 ml) en forma de gotas, y se continuó la agitación a 0 °C durante 1 hora. A continuación se añadió agua (50 ml) y la mezcla resultante se extrajo con una mezcla de cloroformo y 2-propanol (4:1, 3 * 50 ml); las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico (50 ml), se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Purificación mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) permitió obtener C78 como un sólido blanco. Rendimiento: 1,21 g, 2,43 mmol, 46 % en 2 pasos. LCMS m /z 498,1 (patrón isotópico de cloro observado) [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 88,30 -8,22 (m, 2H), 7,54 (br s, 1H), 7,30 (br s, 1H), 7,03 (br s, 1H), 4,35 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 4,29 (ddd, J = 12,1, 8,7, 3,4 Hz, 1H), 4,24 (s, 1H), 4,11 (cuarteto Ab, Jab = 12,4 Hz, Avab = 14,3 Hz, 2H), 3,86 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,2, 5,4 Hz, 1H), 3,72 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,3 Hz, 1H), 3,18 -3,08 (m, 1H), 3,07 -2,97 (m, 1H), 2,48 -2,36 (m, 1H), 2,19 -2,08 (m, 1H), 1,99 - 1,88 (m, 1H), 1,69 - 1,43 (m, 3H), 1,37 (d, mitad del cuarteto, J = 7,7 Hz, 1H), 1,01 (s, 3H), 0,94 (s, 9H), 0,84 (s, 3H).
Paso 4: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]propan-2-il}-3-{N-[(4-fluorofenoxi)acetil1-3-metil-L-valil}-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxamida (C79).
Se añadió 4-Fluorofenol (49,5 mg, 0,442 mmol) a una mezcla de fluoruro de cesio (67,1 mg, 0,442 mmol) en N,N-dimetilformamida (3 ml), y la mezcla se agitó a 65 °C durante 1 hora, tras lo cual se añadió C78 (110,0 mg, 0,221 mmol), y la mezcla de reacción se agitó a 65 °C durante 8 horas. Luego se combinó con una reacción similar realizada con C78 (30 mg, 60 pmol), se vertió en agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (3 x 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con agua (20 ml), ácido clorhídrico (1 M; 10 ml), solución acuosa saturada de carbonato sódico (10 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) permitió obtener C79 como un cristal blanco. Rendimiento combinado: 100 mg, 0,174 mmol, 62 %. LCMS m /z 574,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, cloroformo-d) 88,23 (br d, J = 6 Hz, 1H), 7,19 (br s, 1H), 7,04 (br d, J = 10,2 Hz, 1H), 6,99 (dd, J = 9,2, 8,0 Hz, 2H), 6,85 (dd, componente del sistema ABX, J = 9,1, 4,2 Hz, 2H), 5,78 (br s, 1H), 5,46 (br s, 1H), 4,65 (d, J = 9,8 Hz, 1H), 4,52 - 4,38 (m, 3H), 4,22 (s, 1H), 4,14 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,3, 5,3 Hz, 1H), 3,93 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,3 Hz, 1H), 3,41 -3,32 (m, 2H), 2,55 -2,34 (m, 2H), 2,14 -2,05 (m, 1H), 2,03 - 1,80 (m, 3H), 1,03 (s, 3H), 1,00 (s, 9H), 0,86 (s, 3H).
Paso 5: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-3-{N-[(4-fluorofenoxi) acetil]-3-metil-L-valil}-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (91).
Se añadió una solución de N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 125 mg, 0,524 mmol) en diclorometano (2 ml) en forma de gota a una solución a 10 °C (temperatura ambiente) de C79 (100 mg, 0,174 mmol) en diclorometano (4 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a 10 °C durante 16 horas, se diluyó con agua (10 ml) y se extrajo con diclorometano (3 * 10 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico (2 x 10 ml) y se concentraron in vacuo; cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano), seguido de cromatografía de fluidos supercríticos [Columna: Chiral Technologies Chiralcel OD, 30 * 250 mm, 10 pm; Fase móvil: 4:1 dióxido de carbono / (etanol con 0,1 % de hidróxido de amonio); Caudal: 60 ml/minuto], se obtuvo (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-3-{N-[(4-fluorofenox¡)acet¡l]-3-met¡l-L-valil}-6,6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexano-2-carboxam¡da (91) como un sólido blanco.
Rendimiento: 55 mg, 99,0 pmol, 57 %. LCMS m /z 556,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 59,01 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,13 - 7,04 (m, 2H), 6,90 - 6,84 (m, 2H), 4,97 (ddd, J = 10.9, 8,5, 5,1 Hz, 1H), 4,61 - 4,50 (m, 2H), 4,39 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 4,12 (s, 1H), 3,87 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,4, 5,5 Hz, 1H), 3.73 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,4 Hz, 1H), 3,19 -3,09 (m, 1H), 3,09 -2,99 (m, 1H), 2,47 -2,36 (m, 1H, supuesto; parcialmente oscurecido por el pico del disolvente), 2,21 - 2,02 (m, 2H), 1,79 - 1,65 (m, 2H), 1,53 (dd, J = 7,6, 5,4 Hz, 1H), 1,29 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,00 (s, 3H), 0,93 (s, 9H), 0,75 (s, 3H).
Ejemplo 92 (solo como referencia)
3-metil-N-[(4-metilfenil)acetil1-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil)-4-(trifluorometil)-L-prolinamida (92)
Figure imgf000130_0001
Una mezcla de C51 (68,0 mg, 0,12 mmol) y una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4 M; 1 ml, 4 mmol) se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos, tras lo cual la mezcla de reacción se concentró in vacuo para eliminar el disolvente, y luego se volvió a evacuar utilizando alto vacío para eliminar el cloruro de hidrógeno residual. Se añadió ácido (4-metilfenil)acético (18,6 mg, 0,124 mmol) al residuo; la mezcla resultante se disolvió en N,N-dimetilformamida (1,0 ml) y se enfrió a -30 °C. Tras la adición de N,N-diisopropiletilamina (64,7 ^L, 0,371 mmol), seguida de hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N'-tetrametiluronio (HATU; 61,2 mg, 0,161 mmol), la mezcla de reacción se calentó a temperatura ambiente durante 1 hora y posteriormente se trató con una solución acuosa de bicarbonato sódico. La mezcla se extrajo 5 veces con acetato de etilo y las capas orgánicas combinadas se concentraron a presión reducida. A continuación, el residuo se disolvió en diclorometano (1 ml), se trató con N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 88,5 mg, 0,371 mmol), y se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora, tras lo cual la mezcla de reacción se trató con solución acuosa de carbonato sódico diluido y se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron, se concentraron in vacuo y se purificaron mediante HPLC en fase inversa (Columna: Waters XBridge C18, 19 x 100 mm, 5 ^m; Fase móvil A: agua; Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 20 % a 60 % B durante 8,5 minutos, luego 60 % a 95 % B durante 0,5 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto; Caudal: 25 ml/minuto) para obtener 3-metil-N-[(4-metilfenil)acetil]-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida (92). Rendimiento: 20,7 mg, 36,7 |jmol, 31 %. LCMS m /z 564 ,8 [M+H]+. Tiempo de retención: 2.71 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Waters Atlantis dC18, 4,6 x 50 mm, 5 ^m; Fase móvil A: agua que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Gradiente: 5,0 % a 95 % B, lineal durante 4,0 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto; Caudal: 2 ml/minuto).
Ejemplo 93 (solo como referencia)
(1R,2S,5S)-N-{(1S)-1 -Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-(1H -pirazol-1 -il)-N-(trifluoroacetil)-L-alanil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (93)
Figure imgf000131_0001
Paso 1: Síntesis de (1R.2S.5S)-N-{(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1propan-2-¡l}-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da. sal de clorhidrato (C67, sal de HCl).
A una soluc¡ón de C66 (9.97 g. 24.4 mmol) en d¡clorometano (50 ml) se añad¡ó una soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en 1.4-d¡oxano (4 M; 90 ml). La mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente (25 °C) durante 2 horas. tras lo cual el anál¡s¡s LCMS ¡nd¡có la convers¡ón a C67: LCMS m /z 309.0 [M+H]+. La concentrac¡ón in vacuo perm¡t¡ó obtener C67, sal de HCl. como un sólido blanco. Rend¡m¡ento: 8.10 g. 23.5 mmol. 96%. 1H RMN (400 MHz. DMSO-efe) 8 10.20 - 10.08 (m. 1H). 8.93 (d. J = 8.0 Hz. 1H). 8.86 - 8.71 (m. 1H). 7.68 (br s. 1H). 7.63 (br s. 1H). 7.12 (br s.
1H). 4.30 (ddd. J = 10.9. 8.1. 4.1 Hz. 1H). 4.09 - 4.02 (m. 1H). 3.63 - 3.53 (m. 1H. supuesto; parc¡almente oscurec¡do por el p¡co de agua). 3.22 - 2.99 (m. 3H). 2.34 - 2.22 (m. 1H). 2.21 - 2.11 (m. 1H). 2.01 (ddd. J = 13.6. 11.1. 3.6 Hz.
1H). 1.80 - 1.66 (m. 3H). 1.55 (ddd. J = 13.6. 11.4. 4.1 Hz. 1H). 1.08 (s. 3H). 1.05 (s. 3H).
Paso 2: Síntesis de [(2S)-1-[(1R.2S.5S)-2-({(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llpropan-2-il}carbamo¡l)-6.6-d¡met¡l-3-azabic¡clo[3.1.0lhexan-3-¡ll-1-oxo-3-(1H-p¡razol-1-¡l)propan-2 -illcarbamato de tert-butilo (C80).
Una solución a 0 °C de C67, sal de HCl (300 mg. 0.870 mmol) y N-(tert-butoxicarbon¡l)-3-(1H-p¡razol-1-¡l)-L-alanina (222 mg. 0.870 mmol) en N.N-dimetilformamida (10 ml) se trató con hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N. N.N'.N'-tetrametiluronio (HATU; 430 mg. 1.13 mmol) y 4-metilmorfolina (264 mg. 2.61 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 2 horas. se diluyó con agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (20 ml). A continuación. la capa acuosa se saturó mediante la adición de sulfato sódico sólido y se extrajo con una mezcla de diclorometano y metanol (10:1.4 * 30 ml). Las capas orgánicas combinadas se concentraron in vacuo y se sometieron a cromatografía en gel de sílice dos veces (Gradiente #1: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano; Gradiente #2: 0 % a 25 % de metanol en diclorometano). obteniendo C80 como un sólido amarillo canario. Rendimiento: 340 mg. 0.623 mmol. 72 %. LCMS m/z 546.1 [M+H]+. 1H RMN(400 MHz. DMSOcfe) 88.29 (br d. J = 8.6 Hz. 1H). 7.70 - 7.66 (m. 1H). 7.64 (s.
1H). 7.51 (br s. 1H). 7.38 (br d. J = 8.2 Hz. 1H). 7.15 - 7.06 (m. 2H). 6.23 - 6.19 (m. 1H). 4.53 - 4.43 (m. 1H). 4.34 -4.18 (m. 3H). 4.17 (s. 1H). 3.76 (d. mitad del cuarteto AB. J = 10.5 Hz. 1H). 3.65 (dd. componente del sistema ABX. J = 10.4. 5.4 Hz. 1H). 3.20 - 3.06 (m. 2H). 2.36 - 2.24 (m. 1H). 2.19 - 2.08 (m. 1H). 2.02 - 1.90 (m. 1H). 1.71 - 1.55 (m.
2H). 1.53 - 1.46 (m. 1H). 1.39 (d. mitad del cuarteto AB. J = 7.6 Hz. 1H). 1.30 (s. 9H). 1.01 (s. 3H). 0.89 (s. 3H).
Paso 3: Síntesis de (1R.2S.5S)-N-{(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrol¡d¡n-3-¡llpropan-2-¡l}-6.6 -dimetil-3-[3-(1H-p¡razol-1-¡l)-L-alan¡ll-3-azabic¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da. sal clorhidrato (C81).
Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en 1.4-dioxano (4 M; 15 ml) a una solución a 0 °C de C80 (340 mg. O. 623 mmol) en diclorometano (4 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a 20 °C durante 1 hora. se filtró y la torta del filtro se lavó con diclorometano (3 * 10 ml). Los filtrados combinados se concentraron in vacuo para proporcionar C81 como un sólido blanco. Rendimiento: 244 mg. 0.506 mmol. 81 %. LCMS m /z 446.0 [M+H]+. 1H Rm N (400 MHz. DMSO-cfe). picos característicos: 88.57 -8.48 (m. 3H). 8.42 (brd. J = 8.6 Hz. 1H). 7.81 (d. J = 2.3 Hz. 1H).
7.65 (br s. 1H). 7.58 (d. J = 1.9 Hz. 1H). 7.35 (br s. 1H). 7.09 (br s. 1H). 6.27 (dd. J = 2. 2 Hz. 1H). 4.59 (dd. componente del sistema ABX. J = 14.4. 4.7 Hz. 1H). 4.54 -4.41 (m. 2H). 4.36 -4.25 (m. 1H). 4.30 (s. 1H). 3.66 -3.60 (m. 1H). 3.42 -3.33 (m. 1H). 3.21 -3.03 (m. 2H). 2.31 -2.20 (m. 1H). 2.18 -2.06 (m. 1H). 1.97 (ddd. J = 13.5. 11.5. 3.7 Hz. 1H). 1.46 (dd. componente del sistema AbX. J = 7.7. 5.3 Hz. 1H). 1.41 (d. mitad del cuarteto AB. J = 7.7 Hz. 1H). 1.01 (s. 3H).
0.92 (s. 3H).
Paso 4: Síntesis de (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡lletil}-6.6-d¡met¡l-3-[3- (1H-pirazol-1-il)-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-alanill-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da (93).
Una solución a 0 °C de C81 (120 mg. 0.249 mmol) en diclorometano (6.0 ml) se trató con piridina (170 mg. 2.15 mmol). seguida de la adición de una solución de anhídrido trifluoroacético (158 mg. 0.752 mmol) en diclorometano (2.0 ml). La mezcla de reacción se calentó a 20 °C y se dejó agitar durante 3 horas. tras lo cual se diluyó con agua (20 ml) y se extrajo con diclorometano (3 x 20 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con ácido clorhídrico (1 M; 20 ml) y con solución acuosa saturada de cloruro sódico (2 x 20 ml). se secaron. se filtraron y se concentraron in vacuo. Cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano). seguido de cromatografía de fluidos supercríticos [Columna: Chiral Technologies Chiralpak AD. 30 * 250 mm. 10 pm; Fase móvil: 4:1 dióxido de carbono / (etanol con 0.1 % de hidróxido de amonio); Caudal: 60 ml/minutol. proporcionó (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l}-6.6-d¡met¡l-3-[3-(1H-pirazol-1-¡l)-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-alan¡ll-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxamida (93) como un sólido blanco. Rendimiento: 15.0 mg. 28.6 pmol. 11 %. LCM S m /z 524.0 [m H]+. 1H RMN (500 MHz. DMSO-cfe) 810.03 (br s. 1H). 8.92 (d. J = 8.0 Hz. 1H). 7.74 (br s. 1H). 7.69 (d. J = 2.3 Hz. 1H). 7.51 (d. J = 1.9 Hz. 1H). 6.23 (dd. J = 2. 2 Hz. 1H). 5.01 -4.93 (m. 1H). 4.91 -4.83 (m. 1H). 4.49 -4.39 (m. 2H). 4.13 (s. 1H). 3.73 (dd. componente del sistema ABX. J = 10.4. 5.4 Hz. 1H). 3.60 (d. mitad del cuarteto AB. J = 10.4 Hz. 1H). 3.21 - 3.09 (m. 2H). 2.40 -2.31 (m. 1H). 2.20 -2.10 (m. 2H). 1.79 (ddd. J = 13.7. 9.5. 6.8 Hz. 1H). 1.76 -1.66 (m. 1H). 1.56 (dd. J = 7.5. 5.4 Hz. 1H). 1.36 (d. mitad del cuarteto AB. J = 7.6 Hz. 1H). 1.02 (s. 3H). 0.85 (s. 3H).
Ejemplo 94 (solo como referencia)
(1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l}-3-[(2S)-4.4-d¡fluoro-2-(2.2.2-trifluoroacetam¡do)butano¡ll-6.6-d¡metil-3-azab¡c¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da (94)
Figure imgf000133_0001
Paso 1: Síntesis de 9H-fluoren-9-ilmetilo {(2S)-1-[(1R.2S.5S)-2-({(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-¡llpropan-2-¡l)carbamo¡l)-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clof3.1.01hexan-3-¡H-4.4-d¡fluoro-1-oxobutan-2-¡l)carbamato (C82).
A una solución a 0 °C de C67 (230 mg. 0.569 mmol) y ácido (2S)-2-{[(9H-fluoren-9-ilmetoxi)carbonil]amino}-4.4-difluorobutanoico (247 mg. 0684 mmol) en N.N-dimetilformamida (5 ml) se añadió hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N.N.N'.N'-tetrametiluronio (HATU; 281 mg. 0.739 mmol) en una porción; a continuación se añadió gota a gota 4-metilmorfolina (173 mg. 1.71 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 10 minutos. se calentó a temperatura ambiente (20 °C) y se continuó agitando durante 2 horas. tras lo cual la mezcla de reacción se vertió en agua helada (15 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 * 15 ml). Las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con ácido clorhídrico 1 M. solución acuosa saturada de bicarbonato sódico y solución acuosa saturada de cloruro sódico. se secaron sobre sulfato sódico. se filtraron. se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 10 % de metanol en diclorometano) para obtener C82 como un sólido blanco. Rendimiento: 245 mg. 0.376 mmol. 66 %. LCMS m /z 652.5 [M+H]+. 1H Rm N(400 MHz. coloroformod) 58.86 (br s. 1H). 7.74 (d. J = 7.6 Hz. 2H). 7.58 - 7.51 (m. 2H). 7.38 (dd. J = 7.4. 7.4 Hz. 2H). 7.33 - 7.25 (m. 2H. supuesto; parcialmente oscurecido por el pico de disolvente). 7.08 (br s. 1H). 6.49 - 6.32 (m. 1H). 6.17 - 5.79 (m. 3H).
4.78 -4.67 (m. 1H). 4.41 -4.24 (m. 4H). 4.22 -4.07 (m. 2H). 3.83 (d. J = 10.5 Hz. 1H). 3.45 -3.32 (m. 2H). 2.62 -2.36 (m. 3H). 2.26 - 2.10 (m. 2H). 1.99 - 1.83 (m. 2H). 1.53 (d. mitad del cuarteto AB. J = 7.6 Hz. 1H). 1.51 - 1.44 (m. 1H).
1.03 (s. 3H). 0.89 (s. 3H).
Paso 2: Síntesis de (1R.2S.5S)-3-[(2S)-2-am¡no-4.4-difluorobutano¡l1-N-{(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)- 2-oxopirrolidin-3-¡l1propan-2-¡l}-6.6-d¡metil-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (C83).
A una suspensión a 0 °C de C82 (195 mg. 0.299 mmol) en diclorometano (3 ml) se añadió una solución de dietilamina (32.8 mg. 0.448 mmol) en diclorometano (0.5 ml). La mezcla de reacción se agitó a 30 °C durante 16 horas. tras lo cual se combinó con una reacción similar realizada con C82 (50 mg. 77 |jmol) y se concentró in vacuo. Purificación mediante cromatografía en gel de sílice [Gradiente: 0% a 10% (mezcla 10:1 de metanol e hidróxido de amonio) en diclorometano] permitió obtener C83 como una goma incolora. Rendimiento combinado: 149 mg. 0.347 mmol. 92 %. LCMS m /z 452.3 [M+Na+]. 1H RMN (400 MHz. cloroformo-d) 58.73 (br d. J = 5.3 Hz. 1H). 7.11 (br s. 1H). 6.03 (tdd. J = 56.8. 6.2. 3.0 Hz. 1H). 5.64 (br s. 1H). 5.28 (br s. 1H). 4.35 -4.27 (m. 1H). 4.27 (s. 1H). 4.11 (dd. J = 10.3. 5.5 Hz. 1H).
3,72 (dd, J = 9,3, 4,1 Hz, 1H), 3,61 (d, J = 10,3 Hz, 1H), 3,41 - 3,35 (m, 2H), 2,53 -2,36 (m, 3H), 2,20 -2,11 (m, 1H), 2,00 - 1,84 (m, 3H), 1,6 -1,45 (m, 2 H, supuesto; parcialmente oscurecido por pico de agua), 1,06 (s, 3H), 0,94 (s, 3h ).
Paso 3: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-3-[(2S)-4,4- difluoro-2-(2,2,2-tr¡fluoroacetam¡do)butano¡l1-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da (94).
A una solución a 0 °C de C83 (99 mg, 0,23 mmol) en diclorometano (4 ml) se añadió piridina (146 mg, 1,85 mmol) y una solución de anhídrido trifluoroacético (194 mg, 0,924 mmol) en diclorometano (2 ml). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente (15 °C) durante 20 horas, se trató con piridina adicional (30 mg, 0,38 mmol) y se agitó a temperatura ambiente (15 °C) durante otras 16 horas. A continuación, se repartió entre diclorometano (15 ml) y ácido clorhídrico (1 M; 15 ml), y la capa orgánica se lavó con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (15 ml) y con solución acuosa saturada de cloruro sódico (10 ml), se secó, se filtró y se concentró in vacuo. El residuo se combinó con el producto de una reacción similar realizada con C83 (50 mg, 0,12 mmol) y se purificó mediante HPLC en fase inversa (Columna: Waters XBridge BEH C18, 25 * 150 mm, 5 pm; Fase móvil A: agua que contenía 0,05 % de hidróxido de amonio (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo; Gradiente: 23 % a 63 % B). (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]et¡l}-3-[(2S)-4,4-d¡fluoro-2-(2,2,2-tr¡fluoroacetamido)butano¡l]-6,6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (94) se aisló como un sólido blanco. Rendimiento combinado: 28,8 mg, 56,8 pmol, 16 %. LCMS m/z 508,0 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSOcfe) 8 10,01 (br s, 1H), 8,96 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,16 (tt, J = 55,9, 4,6 Hz, 1H), 4,99 -4,90 (m, 1H), 4,65 -4,57 (m, 1H), 4,14 (s, 1H), 3,85 (dd, componente del sistema ABX, J = 10,2, 5,4 Hz, 1H), 3,67 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,3 Hz, 1H), 3,21 - 3,04 (m, 2H), 2,42 -2,19 (m, 3H), 2,17 -2,04 (m, 2H), 1,83 - 1,64 (m, 2H), 1,60 (dd, J = 7,6, 5,3 Hz, 1H), 1,35 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H), 0,89 (s, 3H).
Ejemplo 95
N-(metox¡carbon¡l)-3-met¡l-L-val¡l-(4R)-N-{(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡net¡l}-4-(tr¡fluoromet¡l)-L-prol¡nam¡da (95)
Figure imgf000135_0001
Paso 1: Síntesis de (4R)-1-(tert-butox¡carbon¡l)-4-(tr¡fluoromet¡l)-L-prol¡l-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1-L-alan¡naiTi¡da (C50).
Se añad¡ó N,N-D¡¡soprop¡let¡lam¡na (14,8 ml, 85,0 mmol) a una mezcla a -30 °C de (4R)-1-(tert-butox¡carbon¡l)-4-(tr¡fluoromet¡l)-L-prol¡na (8,00 g, 28,2 mmol), C16, sal de HCl (6,45 g, 31,1 mmol), y hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotr¡azol-1-¡l)-N,N,N',N'-tetramet¡luron¡o (HATU; 11,8 g, 31,0 mmol) en N,N-d¡met¡lformam¡da (100 ml). La mezcla de reacc¡ón se dejó calentar a 0 °C durante 1 hora, tras lo cual el anál¡s¡s de LCMS ¡nd¡có la presenc¡a de C50: LCMS m /z 437,3 [M+H]+. Se añadió una solución acuosa de bicarbonato sódico (300 ml) y la mezcla resultante se extrajo con una mezcla de 2-propanol y diclorometano (1:4, 5 x 100 ml); las capas orgánicas combinadas se concentraron in vacuo y se purificaron mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 100 % de metanol en diclorometano), obteniendo C50 como aceite. El análisis de 1H RMN indicó que este material existe como una mezcla de rotámeros. Rendimiento: 10,9 g, 25,0 mmol, 89%. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), picos característicos: 8
[8,28 (d, J = 8,5 Hz) y 8,22 (d, J = 8,2 Hz), total 1H], [7,64 (s) y 7,59 (s), total 1H], [7,38 (br s) y 7,27 (br s), total 1H], 7,05 (br s, 1H), 4,38 -4,28 (m, 1H), 4,28 -4,17 (m, 1H), 3,45 - 3,36 (m, 1H), 3,12 - 3,00 (m, 1H), 2,42 -2,03 (m, 4H), 2,02 - 1,89 (m, 1H), 1,80 - 1,45 (m, 2H), [1,39 (s) y 1,32 (s), total 9H].
Paso 2: Síntesis de N-(tert-butox¡carbon¡l)-3-met¡l-L-val¡l-(4R)-4-(tr¡fluoromet¡l)-L-prol¡l-3-[(3S)-2-oxop¡rrolid¡n-3-¡l1-L-alaninamida (C51).
Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4 M; 80 ml) a una solución de C50 (7,00 g, 16,0 mmol) en diclorometano (15 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 5 minutos, se concentró in vacuo para eliminar el disolvente y se evacuó de nuevo mediante alto vacío para eliminar el cloruro de hidrógeno residual. El residuo se mezcló con N-(tert-butoxicarbonil)-3-metil-L-valina (4,08 g, 17,6 mmol) y hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronio (HATU; 6,71 g, 17,6 mmol) en N,N-dimetilformamida (25 ml), enfriado a -30 °C, y tratado con N,N-diisopropiletilamina (8,38 ml, 48,1 mmol). La mezcla de reacción se dejó calentar a 0 °C durante 1 hora, tras lo cual el análisis de LCMS indicó la presencia de C51: LCMS m /z 550,4 [M+H]+. A continuación, la mezcla de reacción se diluyó con una solución acuosa de bicarbonato sódico y se extrajo tres veces con una mezcla 4:1 de diclorometano y 2-propanol. Tras concentrar las capas orgánicas combinadas in vacuo, el residuo se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (Gradiente: 0 % a 30 % de metanol en diclorometano), proporcionando C51 como sólido. Rendimiento: 3,95 g, 7,19 mmol, 45 %.1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), picos característicos: 88,28 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,29 (br s, 1H), 7,03 (br s, 1H), 6,77 (br d, J = 9,1 Hz, 1H), 4,52 - 4,43 (m, 1H), 4,24 (ddd, J = 12,2, 8,7, 3,5 Hz, 1H), 4,12 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 4,02 - 3,84 (m, 2H), 3,16 - 3,08 (m, 1H), 3,08 - 2,98 (m, 1H), 2,50 - 2,37 (m, 1H), 2,31 - 2,20 (m, 1H), 2,19 - 2,05 (m, 2H), 2,00 - 1,87 (m, 1H), 1,69 - 1,55 (m, 1H), 1,55 - 1,44 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 0,93 (s, 9H).
Paso 3: Síntesis de N-(metoxicarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-4-(trifluoromet¡l)-L-prol¡namida (95).
Una mezcla de C51 (230 mg, 0,418 mmol) y una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4 M; 2 ml, 8 mmol) se agitó a temperatura ambiente durante 5 minutos, tras lo cual la mezcla de reacción se concentró in vacuo para eliminar el disolvente, y luego se volvió a evacuar utilizando alto vacío para eliminar el cloruro de hidrógeno residual. El residuo se disolvió en diclorometano (2 ml), se enfrió a 0 °C y se trató con N,N-diisopropiletilamina (0,219 ml, 1,26 mmol) seguido de cloroformato de metilo (59,3 mg, 0,628 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 10 minutos, se diluyó con una solución acuosa de bicarbonato sódico y se extrajo tres veces con una mezcla 4:1 de diclorometano y 2-propanol; las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron in vacuo. El residuo se disolvió en diclorometano (3 ml); tras la adición de N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 299 mg, 1,25 mmol), la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 1 hora. A continuación, se trató con una solución acuosa de carbonato de sodio diluida y se extrajo 3 veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se purificaron mediante cromatografía sobre gel de sílice (Gradiente: 50 % a 100 % de acetato de etilo en heptano). El material resultante se mezcló en heptano (4 ml) a 50 °C durante 2 horas, se enfrió a temperatura ambiente y se agitó a temperatura ambiente durante la noche; la recogida del sólido proporcionó N-(metoxicarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida (95) como un sólido. Rendimiento: 123 mg, 0,251 mmol, 60 %. LCMS m /z 490,4 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 89,02 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,65 (s, 1H), 7,27 (br d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,94 (ddd, J = 11,1, 8,5, 5,0 Hz, 1H), 4,36 (dd, J = 7,3, 7,2 Hz, 1H), 4,14 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,00 - 3,91 (m, 2H), 3,52 (s, 3H), 3,46 - 3,34 (m, 1H, supuesto; parcialmente oscurecido por pico de agua), 3,18 - 2,98 (m, 2H), 2,5 - 2,39 (m, 1H, supuesto; parcialmente oscurecido por pico de disolvente), 2.35 - 2,23 (m, 1H), 2,22 - 2,01 (m, 3H), 1,77 - 1,63 (m, 2H), 0,94 (s, 9H).
Ejemplo 96
(1R.2S.5S)-N-{(1R)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l}-6.6-d¡met¡l-3-[3-metil-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l1-3-azabic¡clo[3.1.01hexano-2-carboxamida (96) y (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-C¡ano-2-[ (3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6,6-dimetil-3-[3-met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-valil1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2 -carboxamida (13), Forma Sólida 5
Figure imgf000137_0001
A una solución de 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo (de la síntesis alternativa del Ejemplo 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo; 15,0 g, 25,5 mmol) en acetonitrilo (80 ml) se añadió ácido metanosulfónico (6,4 ml, 99 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 4 horas, tras lo cual se basificó añadiendo una mezcla de solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (80 ml) y solución acuosa saturada de cloruro sódico (10 ml). La mezcla resultante se extrajo con diclorometano (2 * 100 ml) y las capas orgánicas combinadas se secaron sobre sulfato sódico, se filtraron y se concentraron in vacuo. La separación de los dos epímeros se llevó a cabo mediante cromatografía de fluidos supercríticos (Columna: Chiral Technologies Chiralcel OX-H, 30 * 250 mm, 5 pm; Fase móvil: dióxido de carbono 9:1 / 2-propanol; Contrapresión: 100 bar; Caudal: 80 ml/minuto). Se recuperó el material de primera elución (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (13). Según el análisis de difracción de rayos X en polvo, este material era amorfo; se designó como Forma Sólida 5. El material de segunda elución se obtuvo como un cristal, que se disolvió en diclorometano, se trató con heptano y se concentró in vacuo para obtener (1R,2S,5S)-N-{(1R)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida (96) como sólido.
Recuperado 13 - Rendimiento: 6,00 g, 12,0 mmol, 47%. LCMS m/z 500,3 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 9,46 - 9,33 (m, 1H), 9,01 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 5,03 -4,91 (m, 1H), 4,46 -4,37 (m, 1H), 4,16 (s, 1H), 3,97­ 3,86 (m, 1H), 3,69 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,4 Hz, 1H), 3,19 -3,09 (m, 1H), 3,09 -2,98 (m, 1H), 2,46 -2,33 (m, 1H), 2,21 - 2,03 (m, 2H), 1,79 - 1,65 (m, 2H), 1,61 -1,53 (m, 1H), 1,32 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,7 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H), 0,98 (s, 9H), 0,85 (s, 3H). Tiempo de retención: 3.93 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Chiral Technologies Chiralcel OX-H, 4,6 x 250 mm, 5 pm; Fase móvil A: dióxido de carbono; Fase móvil B: 2-propanol; Gradiente: 5 % B durante 1,00 minuto, seguido de 5% a 60 % B durante 8,00 minutos; Presión trasera: 120 bar; Caudal: 3,0 ml/minuto). La Figura 9 muestra el patrón de difracción de rayos X de este material amorfo. El procedimiento de obtención de los datos de difracción de rayos X en polvo se describe en la síntesis alternativa del Ejemplo 13, solvato de éter de tert-butilo de metilo, etapa 8.
96 - Rendimiento: 2,58 g, 5,16 mmol, 20%. LCMS m /z 500,3 [M+H]+. 1H RMN(400 MHz, DMSO-d6) 89,42 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 9,06 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,79 (s, 1H), 4,96 -4,86 (m, 1H), 4,41 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 4,20 (s, 1H), 3,92 (br dd, J = 10,7, 5,4 Hz, 1H), 3,66 (d, mitad del cuarteto AB, J = 10,5 Hz, 1H), 3,22 -3,12 (m, 2H), 2,43 -2,31 (m, 1H), 2,31 -2,20 (m, 1H), 2,16 -2,04 (m, 1H), 1,84 - 1,63 (m, 2H), 1,57 - 1,49 (m, 1H), 1,32 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,7 Hz, 1H), 1,00 (br s, 12H), 0,84 (s, 3H), Tiempo de retención: 4,20 minutos (condiciones analíticas idénticas a las utilizadas para el recuperado 13 anterior).
Ejemplo 97 (solo como referencia)
(1R.2S.5S)-N-{(1S)-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1et¡l)-6.6-d¡met¡l-3-[2-(2.2.2-tr¡fluoroacetam¡do)-3-(tr¡fluoromet¡l)1pentano¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da. de C86 (DIAST-2) (97)
Figure imgf000138_0001
Figure imgf000139_0001
Paso 1: Síntesis del ácido 2-f(tert-butox¡carbon¡l)amino1-3-(tr¡fluoromet¡l)pentano¡co (C84).
Se añad¡ó una soluc¡ón acuosa de h¡dróx¡do de sod¡o (1 M; 1,48 ml, 1,48 mmol) a una suspens¡ón de ác¡do 2-am¡no-3-(tr¡fluoromet¡l)pentano¡co (Wang et al., J. Amer. Chem. Soc. 2003, 125, 6900-6906137 mg, 0,740 mmol) en 1,4-d¡oxano (3 ml) y la mezcla resultante se enfr¡ó a 0 °C. Se añad¡ó lentamente d¡carbonato de d¡-tert-but¡lo (0,204 ml, 0,888 mmol), tras lo cual la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a temperatura amb¡ente durante la noche. Después de d¡lu¡rla con acetato de et¡lo, la mezcla de reacc¡ón se enfr¡ó en un baño de h¡elo y se ac¡d¡f¡có a pH 2 med¡ante la ad¡c¡ón de una soluc¡ón acuosa 1 M de sulfato de h¡drógeno de potas¡o. La capa acuosa se extrajo dos veces con acetato de et¡lo y las capas orgán¡cas comb¡nadas se secaron sobre sulfato de magnes¡o, se f¡ltraron y se concentraron in vacuo, obten¡éndose C84 como sól¡do. Se presume que este mater¡al cons¡ste en una mezcla de 4 d¡astereómeros, que potenc¡almente tamb¡én presentan rotámeros. Rend¡m¡ento: 197 mg, 0,690 mmol, 93 %. LCMS m /z 284,3 [M-H]-. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 8 13,16 (br s, 1H), [7,29 (d, mayor, J = 9,8 Hz) y 6,95 - 6,85 (m, menor), total 1H],
[4,55 (dd, mayor, J = 9,8, 3,3 Hz), 4,46 (br d, menor, J = 9.1 Hz) y 4,40 (dd, menor, J = 9,4, 4,5 Hz), total 1H], 2,86 -2,67 (m, 1H), 1,71 -1,47 (m, 2H), 1,39 (br s, 9H), [0,98 (t, menor, J = 7,4 Hz) y 0,91 (t, mayor, J = 7,5 Hz), total 3H].
Paso 2: Síntes¡s de {1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]propan- 2-¡l}carbamo¡l)-6,6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clor3.1.0lhexan-3-¡ll-1-oxo-3-(tr¡fluoromet¡l)pentan-2-¡l)carbamato, DIAST-1 de tert-but¡lo (C85 ) y {1-[(1R,2S,5S)-2-({(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l1propan-2-¡l)carbamo¡l)-6,6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clor3.1.0lhexan-3-¡ll-1-oxo-3-(tr¡fluoromet¡l)pentan-2-¡l)carbamato, DIAST-2 de tert-but¡lo (C86).
Una soluc¡ón a 0 °C de C84 (128 mg, 0,449 mmol) en una mezcla de aceton¡tr¡lo (2,7 ml) y N,N-d¡met¡lformam¡da (1,5 ml) se trató con hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotr¡azol-1-¡l)-N,N,N',N'-tetramet¡luron¡o (HATU; 176 mg, 0,463 mmol) y 4-met¡lmorfol¡na (0,116 ml, 1,06 mmol). Tras ag¡tar la mezcla de reacc¡ón a 0 °C durante 30 m¡nutos, se añad¡ó C67 (170 mg, 0,420 mmol) como sól¡do, y se cont¡nuó ag¡tando durante 2 horas. A cont¡nuac¡ón, la mezcla de reacc¡ón se d¡luyó con acetato de et¡lo y agua, y se lavó con una soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato sód¡co. La capa acuosa se extrajo dos veces con acetato de et¡lo y las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con una soluc¡ón acuosa saturada de cloruro de sod¡o, se secaron sobre sulfato de magnes¡o, se f¡ltraron y se concentraron in vacuo.
El ace¡te resultante se azeotróp¡co dos veces con heptano y dos veces con met¡l tert-but¡l éter, y luego se somet¡ó a cromatografía en gel de síl¡ce (Grad¡ente: 0 % a 20 % de metanol en d¡clorometano). El d¡astereómero de pr¡mera elus¡ón se des¡gnó como C85, y el de segunda elus¡ón como C86.
C85 (DIAST-1) - Rend¡m¡ento: 77,3 mg, 0,134 mmol, 32 %. Este mater¡al comprendía una mezcla de ¡sómeros o rotámeros según el anál¡s¡s de 1 H RMN. LCMS m /z 576,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), p¡cos característ¡cos, las ¡ntegrac¡ones son aprox¡madas: 8 [8,35 (d, J = 7,9 Hz) y 8,16 (d, J = 8.5 Hz), total 1H], 7,62 - 7,54 (m, 1H), 7,41 - 7,18 (m, 2H), [7,02 (br s) y 6,98 (br s), total 1H], 4,59 -4,50 (m, 1H), 4,29 -4.13 (m, 2H), 3,89 (dd, J = 10,4, 5,4 Hz, 1H), 3,44 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 3,20 - 3,04 (m, 2H), 2,70 - 2,59 (m, 1H), 2,43 - 2.31 (m, 1H), 2,21 -2,08 (m, 1H), 1,99 - 1,88 (m, 1H), [1,38 (s) y 1,36 (s), total 9H], 1,01 (br s, 3H), 0,94 - 0,82 (m, 6H).
C86 (DIAST-2) - Rend¡m¡ento: 87,8 mg, 0,153 mmol, 36 %. Este mater¡al era en gran med¡da un ún¡co ¡sómero med¡ante el anál¡s¡s de 1H RMN. LCMS m /z 576,2 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), p¡cos característ¡cos: 88,27 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,31 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 7,22 (br s, 1H), 7,04 (br s, 1H), 4,55 (dd, J = 9,5, 5,9 Hz, 1H), 4,30 - 4,17 (m, 1H), 4,23 (s, 1H), 3,79 (dd, componente del s¡stema ABX, J = 10,1, 5,2 Hz, 1H), 3,71 (d, m¡tad del cuarteto AB, J = 10,1 Hz, 1H), 3,09 -2,99 (m, 1H), 2,68 -2,55 (m, 1H), 2,42 -2,30 (m, 1H), 2,17 -2,04 (m, 1H), 1,97 -1,86 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,02 (s, 3H), 0,94 - 0,83 (m, 6H).
Paso 3: Síntes¡s de (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-am¡no-1-oxo-3-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]propan-2-¡l)-6,6 -d¡met¡l-3-[2-(2,2,2-tr¡fluoroacetam¡do)-3-(tr¡fluoromet¡l)pentano¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da. de C86 (DIAST-2) (C87).
Una soluc¡ón de C86 (DIAST-2) (87,8 mg, 0,153 mmol) en d¡clorometano (1 ml) se trató con una soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en 1,4-d¡oxano (4 M; 0,381 ml, 1,52 mmol). Tras ag¡tar la mezcla de reacc¡ón a temperatura amb¡ente durante 40 m¡nutos, se añad¡ó metanol (0,5 ml) para mejorar la solub¡l¡dad. Tras otros 40 m¡nutos, se añad¡ó una soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en 1,4-d¡oxano (4 M; 0,10 ml, 0,4 mmol); 30 m¡nutos después, el anál¡s¡s de LCMS ¡nd¡có la completa el¡m¡nac¡ón del grupo protector: LCMS m /z 476,2 [M+H]+. La mezcla de reacc¡ón se concentró in vacuo y se azeotropó dos veces con heptano; el res¡duo se tr¡turó dos veces con éter d¡etíl¡co, se suspend¡ó en d¡clorometano (1,2 ml) y se enfr¡ó a 0 °C. Tras la ad¡c¡ón de tr¡et¡lam¡na (42,4 pl, 0,304 mmol), segu¡da de anhídr¡do tr¡fluoroacét¡co (47,9 pl, 0,339 mmol), la mezcla de reacc¡ón se ag¡tó a 0 °C durante 30 m¡nutos, tras lo cual se sacó del baño de h¡elo y se repart¡ó entre agua y acetato de et¡lo. La capa acuosa se extrajo con acetato de et¡lo, y las capas orgán¡cas comb¡nadas se lavaron con soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato sód¡co y con soluc¡ón acuosa saturada de cloruro sód¡co, se secaron sobre sulfato de magnes¡o, se f¡ltraron, se concentraron in vacuo y se azeotroparon dos veces con met¡l tert-but¡l éter. Por anál¡s¡s de 1H RMN y LCMS, este mater¡al contenía una mezcla de C87 y el correspondente éster metíl¡co (LCMS m/z587,4 [M+H]+). 1H RMN(400 MHz, DMSO-cfe), p¡cos característ¡cos para C87: 88,31 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,26 (s, 1H), 7,05 (s, 1H), 3,59 (d, m¡tad del cuarteto AB, J = 10,0 Hz, 1H), 1,97 - 1,87 (m, 1H), 1,40 (d, m¡tad del cuarteto AB, J = 7,6 Hz, 1H), 1,03 (s, 3H), 0,84 (s, 3H). Pur¡f¡cac¡ón med¡ante cromatografía sobre gel de síl¡ce (Grad¡ente: 0 % a 20 % de metanol en d¡clorometano), segu¡do de azeotropía del ace¡te resultante con heptano, segu¡do de azeotropía con una mezcla de éter d¡etíl¡co y heptano, perm¡t¡ó obtener C87 como un sól¡do blanco. Rend¡m¡ento: 17,9 mg, 31,3 pmol, 20 %. LCMS m /z 572.0 [M+H]+.
Paso 4: Síntesis de (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-illetil}-6.6-dimetil-3-[2-(2.2.2-trifluoroacetamido)-3-(trifluorometil)pentoill-3-azabiciclo[3.1.0lhexano-2-carboxamida. a partir de C86 (DIAST-2) (97).
A una solución de C87 (18 mg. 31 pmol) en acetato de etilo (0.8 ml) se añadió N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo. sal interna (reactivo de Burgess; 18.8 mg. 78.9 pmol). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora. se añadió de nuevo una cucharada de N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo. sal interna (reactivo de Burgess). Se continuó agitando durante 2 horas. tras lo cual se filtró la mezcla de reacción y la torta del filtro se lavó con acetato de etilo. Los filtrados combinados se lavaron con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico. y la capa acuosa se extrajo una vez con acetato de etilo; las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico. se secaron sobre sulfato de magnesio. se filtraron y se concentraron in vacuo para obtener el producto crudo. 1H RMN (600 MHz. DMSO-cfe). componente principal: 89.90 (d. J = 8.8 Hz. 1H).
8.85 (d. J = 8.1 Hz. 1H). 7.56 (br s. 1H). 4.97 -4.89 (m. 2H). 4.17 (s. 1H). 3.89 (dd. J = 10.1. 5.4 Hz. 1H). 3.62 (d. J = 10.1 Hz. 1H). 3.21 - 3.14 (m. 1H). 3.12 - 3.06 (m. 1H). 2.92 - 2.82 (m. 1H). 2.43 - 2.35 (m. 1H). 2.18 - 2.10 (m. 2H).
1.78 (ddd. J = 13.6. 9.6. 6.0 Hz. 1H). 1.75 - 1.66 (m. 2H). 1.62 - 1.55 (m. 2H). 1.35 (d. mitad del cuarteto AB. J = 7.7 Hz. 1H). 1.04 (s. 3H). 0.97 - 0.92 (t. J = 7.6 Hz. 3H). 0.85 (s. 3H). Este material se purificó mediante HPLC en fase inversa (Columna: Waters Sunfire C18. 19 x 100 mm. 5 pm; Fase Móvil A: 0.05 % de ácido trifluoroacético en agua (v/v); Fase móvil B: 0.05 % de ácido trifluoroacético en acetonitrilo (v/v); Gradiente: 5 % a 95 % B durante 8.54 minutos. seguido de 95 % B durante 1.46 minutos; Caudal: 25 ml/minuto) para obtener (1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-illetil}-6.6-dimetil-3-[2-(2.2.2-trifluoroacetamido)-3-(trifluorometil)pentoill-3-azabiciclo[3.1.0lhexano-2-carboxamida. de C86 (DIAST-2) (97). Rendimiento: 8.3 mg. 15 pmol. 48 %. LCm S m /z 554.6 [M+H]+. Tiempo de retención: 2.72 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Waters Atlantis dC18. 4.6 x 50 mm. 5 pm; Fase móvil A: agua que contenía 0.05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenía 0.05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Gradiente: 5.0 % a 95 % B. lineal durante 4.0 minutos. luego 95 % B durante 1.0 minuto; Caudal: 2 ml/minuto).
Ejemplo 98 (solo como referencia)
(1R.2S.5S)-N-{(1S)-1-C¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡llet¡l}-6.6-dimet¡l-3-[2-(2.2.2-tr¡fluoroacetam¡do)-3-(tr¡fluoromet¡l)pentano¡ll-3-azabic¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da. de C85 (DIAST-1) (98)
Figure imgf000141_0001
(tr¡fluoromet¡l)pento¡ll-6.6-d¡met¡l-3-azabic¡clo[3.1.0lhexano-2-carboxam¡da. sal de clorhidrato. a partir de C85 (DIAST-1) (C88).
Se añadió una solución de cloruro de hidrógeno en 1,4-dioxano (4 M; 0,336 ml, 1,34 mmol) a una solución de C85 (DIAST-1) (77,3 mg, 0,134 mmol) en diclorometano (1 ml). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 40 minutos, se añadió metanol (0,5 ml) para mejorar la solubilidad. Se continuó agitando durante 2 horas, tras lo cual el análisis LCMS indicó que la desprotección se había completado: LCMS m /z 476,2 [M+H]+. La mezcla de reacción se concentró in vacuo; el residuo se azeotrópico dos veces con heptano y luego se trituró dos veces con éter dietílico para proporcionar C88 como un sólido blanco. Rendimiento: 54,5 mg, 0,106 mmol, 79 %. 1H RMN (400 MHz, DMSO-ak), picos característicos principales: 88,53 (br s, 3H), 8,36 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,61 (s, 1H), 7,28 (br s, 1H), 7.06 (br s, 1H), 4,25 (ddd, J = 10,9, 8,4, 4,5 Hz, 1H), 4,17 (s, 1H), 4,08 (dd, J = 10,5, 5,6 Hz, 1H), 2,80 -2,68 (m, 1H), 2,37 - 2,26 (m, 1H), 2,23 - 2,13 (m, 1H), 2,05 - 1,96 (m, 1H), 1,73 - 1,51 (m, 5H), 1,44 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7.7 Hz, 1H), 1,04 (s, 3H), 0,90 (s, 3H).
Paso 2: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(2S)-1-amino-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1propan-2-il}-6,6 -dimetil-3-[2-(2,2,2-tr¡fluoroacetam¡do)-3-(tr¡fluoromet¡l)pentano¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da, de C85 (DIAST-1) (C89).
Una suspensión a 0 °C de C88 (54,5 mg, 0,106 mmol) en diclorometano (1 ml) se trató con trietilamina (26 pL, 0,19 mmol), seguida de anhídrido trifluoroacético (19,5 pL, 29,1 mg, 0,138 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a 0 °C durante 1 hora y 10 minutos, se añadió anhídrido trifluoroacético (1 equivalente); 30 minutos después, se añadió de nuevo anhídrido trifluoroacético (9,4 pl, 67 pmol). Se continuó agitando durante 45 minutos, tras lo cual el análisis de LCMS indicó la conversión completa a C89: LCMS m /z 572,4 [M+H]+. La mezcla de reacción se repartió entre agua y acetato de etilo, y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron secuencialmente con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico y una solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron in vacuo para obtener C89. Rendimiento: 41,2 mg, 72,1 pmol, 68 %. 1H RMN (400 MHz, DMSO-cfe), componente principal, picos característicos: 810,04 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 8,23 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,31 (br s, 1H), 7,01 (br s, 1H), 4,92 - 4,83 (m, 1H), 4,23 (s, 1H), 3,95 (dd, J = 10,2, 5,5 Hz, 1H), 2,98 -2,86 (m, 1H), 2,38 -2,27 (m, 1H), 1,90 (ddd, J = 13,5, 11,2, 4,0 Hz, 1H), 1,39 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,7 Hz, 1H), 1,02 (s, 3H), 0,90 (s, 3H).
Paso 3: Síntesis de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6,6-dimetil-3-[2-(2,2,2-tr¡fluoroacetam¡do)-3-(tr¡fluoromet¡l)pento¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxam¡da, a partir de C85 (DIAST-1) (98).
A una solución de C89 (41,0 mg, 71,7 pmol) en acetato de etilo (0,8 ml) se añadió N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess; 42,7 mg, 0,179 mmol). Tras agitar la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 1 hora, se añadió una cucharada de N-(trietilammoniosulfonil)carbamato de metilo, sal interna (reactivo de Burgess). Se continuó agitando durante 2 horas, tras lo cual se filtró la mezcla de reacción y la torta del filtro se lavó con acetato de etilo. Los filtrados combinados se lavaron con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico, y la capa acuosa se extrajo con acetato de etilo; las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron in vacuo para obtener el producto crudo. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe), componente principal, picos característicos: 810,12 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 8,99 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,70 (s, 1H), 4,94 (ddd, J = 9,4, 8,1, 6,5 Hz, 1H), 4,87 (dd, J = 9,0, 9,0 Hz, 1H), 4,11 (s, 1H), 3,96 (dd, J = 10,2, 5,6 Hz, 1H), 3,52 (d, J = 10,0 Hz, 1H), 3,18 - 3,07 (m, 2H), 2,98 -2,88 (m, 1H), 2,40 -2,33 (m, 1H), 1,79 - 1,52 (m, 4H), 1,61 (dd, J = 7,6, 5,5 Hz, 1H), 1,33 (d, mitad del cuarteto AB, J = 7,7 Hz, 1H), 1,04 (s, 3H), 0,91 -0,86 (m, 6H).
Purificación de este material mediante HPLC en fase inversa (Columna: Waters Sunfire C18, 19 x 100 mm, 5 pm; Fase Móvil A: 0,05 % de ácido trifluoroacético en agua; Fase móvil B: 0,05 % de ácido trifluoroacético en acetonitrilo; Gradiente: 5 % a 95 % B durante 8,54 minutos, seguido de 95 % B durante 1,46 minutos; Caudal: 25 ml/minuto) permitió obtener (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il1etil}-6,6-dimetil-3-[2-(2,2,2-trifluoroacetamido)-3-(trifluorometil)pentoil1-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxamida, de C85 (DIAST-1) (98). Rendimiento: 4,3 mg, 7,8 pmol, 11 %. LCMS m /z 554,6 [M+H1+. Tiempo de retención: 2.80 minutos (Condiciones analíticas. Columna: Waters Atlantis dC18, 4,6 x 50 mm, 5 pm; Fase móvil A: agua que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Fase móvil B: acetonitrilo que contenía 0,05 % de ácido trifluoroacético (v/v); Gradiente: 5,0 % a 95 % B, lineal durante 4,0 minutos, luego 95 % B durante 1,0 minuto; Caudal: 2 ml/minuto).
Preparación de 2-metil (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2.3-d¡carbox¡lato de tert-butilo (C90)
Figure imgf000143_0001
Esta preparación se llevó a cabo utilizando el procedimiento general reportado por C. Uyeda y J. Werth, Angew. Chem. Int. Ed. 2003, 36, 13902-13. Un matraz de 3 cuellos equipado con barra de agitación magnética, condensador de reflujo, termómetro y entrada de nitrógeno se cargó con bromuro de cobalto(II) (0,15 equivalentes; 0,146 g, 0,667 mmol), (1E,1,E)-1,1'-piridina-2,6-diilbis/N-(2-tert-butilfenil)etanimina](2-t-BuPDI; 0,15 equivalentes; 0,284 g, 0,667 mmol) y tetrahidrofurano (11 ml). La suspensión espesa y verde se agitó durante una noche a temperatura ambiente y se añadieron zinc (2,4 equivalentes; 0,70 g, 11 mmol) y bromuro de zinc (1,1 equivalentes; 1,1 g, 4,9 mmol). Después de agitar durante 15 minutos, la mezcla de reacción se volvió púrpura y se añadió una solución de 2-metil (2S)-2,5-dihidro-1H-pirrol-1,2-dicarboxilato de 1 -tert-butilo; 1,0 g, 4,4 mmol) en tetrahidrofurano (7,5 ml) y 2,2-dicloropropano (2,0 equivalentes; 1,0 g, 8,8 mmol). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 días, tras lo cual se filtró a través de una almohadilla de tierra de diatomeas y se enjuagó con tetrahidrofurano (10,8 ml). El filtrado se combinó con una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (3,5 ml) y acetato de etilo (9,5 ml); las capas se separaron y la fase acuosa se extrajo con acetato de etilo (8,4 ml). Los extractos orgánicos combinados se lavaron con una solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (10,5 ml), se secaron sobre sulfato de magnesio, se filtraron y se concentraron hasta sequedad, proporcionando 2-metil (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2,3-dicarboxilato de 3-tert-butilo (C90) como un aceite amarillo. Rendimiento: 0,90 g, 3,3 mmol, 75%. Por análisis de 1H RMN, este material existía como dos rotámeros de carbamato (relación ~3:2). 1H RMN(400 MHz, cloroformo-d) 54,20 & 4,09 (2 s, 1H), 3,74 & 3,75 (2 s, 3H), 3,68 - 3,60 (m, 1H), 3,44 & 3,38 (2 d, J = 10,9 Hz, 1H), 1,43 & 1,38 (2 s, 9H), 1,38 - 1,34 (m, 2H), 1,03 & 0,98 & 0,96 (3 s, 6H). ESI-MS (pos.) m/z(%) = 255,1 (12,5) [M -M e H]+, 214,1 (100) [M - t-Bu+ H]+, 170,2 (50) [M - Boc H]+.
Preparación alternativa de C42
(1R,2S,5S)-6,6-Dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil1-3-azabiciclo[3.1.01hexano-2-carboxílico (C42)
Figure imgf000144_0001
Paso 1: Síntesis de 3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valina (C91).
Se añadió una solución de metóxido de sodio en metanol (25% en peso; 28,5 ml, 124 mmol) a una solución de 3-metil-L-valina (99%, 15 g, 113 mmol) en metanol (30 ml). A continuación se añadió trifluoroacetato de etilo (130 mmol) y la mezcla de reacción se agitó a 40 °C hasta que se completó la reacción (aproximadamente 2,5 horas), tras lo cual se enfrió a 20 °C. Tras añadir ácido clorhídrico (1 M; 136 ml, 136 mmol), la mezcla se diluyó con acetato de etilo (150 ml) y se separaron las capas. La capa orgánica se lavó dos veces con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secó sobre sulfato de magnesio y se filtró. Se añadió heptano al filtrado, tras lo cual la solución se concentró a 50 °C hasta un volumen de 5 ml/g. Este procedimiento se llevó a cabo dos veces; después de la segunda destilación, se añadieron cristales de semillas de C91 (50 mg; véase más adelante). El sólido resultante se recogió por filtración, se lavó con heptano y se secó a 40 °C para proporcionar C91 como un sólido blanquecino. Rendimiento: 22,2 g, 97,7 mmol, 86%.
Los cristales semilla utilizados anteriormente se obtuvieron a partir de una reacción similar llevada a cabo con 3-metil-L-valina; después de secar la capa orgánica que contenía C91 sobre sulfato de magnesio y filtrarla, la concentración in vacuo proporcionó un sólido. Una porción de este sólido se utilizó como material de siembra.
Se obtuvieron datos fisicoquímicos de muestras de C91 obtenidas de reacciones realizadas de la misma manera. HRMS-ESI+fm/z): [M+H]+ Calculado para C8H13F3NO3, 228,0842; encontrado, 228,0842. Ion primario observado como CaHnF3NNa2O3[M+Na+]: Calculado, 272,0481; encontrado, 272,0482. 1H RMN (600 MHz, DMSO-cfe) 513,05 (s, 1H), 9,48 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 4,21 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 1,00 (s, 9H). 13C RMN (150,8 MHz, DMSO-cfe) 5170,9, 156,6 (q, 2Jcf= 36,9 Hz), 115,8 (q ,1JCF = 287,7 Hz), 61,0, 33,6, 26,5. El patrón de difracción de rayos X en polvo del C91 se muestra en la Figura 11; los picos característicos se enumeran en la Tabla R.
Figure imgf000144_0002
(continuación)
Figure imgf000145_0001
El cristal para la cristalografía de rayos X se obtuvo a través de la recristalización de acetato de etilo y hexano, utilizando cristales semilla del mismo lote anterior. En la Figura 12 se muestra un diagrama ORTEP de los datos del monocristal para C91.
Determinación estructural en monocristal de rayos X del C91
Análisis de rayos X de un solo cristal
La recogida de datos se realizó en un difractómetro Bruker D8 Quest a -100 °C. La recogida de datos consistió en escaneos omega y phi.
La estructura fue resuelta por fase intrínseca utilizando la suite de software SHELX en el grupo espacial quiral de clase tetragonal P4-|2-|2. Posteriormente, la estructura se refinó mediante el procedimiento de mínimos cuadrados de la matriz completa. Todos los átomos que no son de hidrógeno se encontraron y refinaron utilizando parámetros de desplazamiento anisotrópicos.
Los átomos de hidrógeno localizados en el nitrógeno y el oxígeno fueron encontrados a partir del mapa de diferencias de Fourier y refinados con distancias restringidas. El hidrógeno en O2(H2Z) y O3(H3Z) se compartió como carga y se refinó como 10,5 de ocupación cada uno. Los átomos de hidrógeno restantes se colocaron en posiciones calculadas y se les permitió montar en sus átomos portadores. El refinamiento final incluyó parámetros de desplazamiento isotrópico para todos los átomos de hidrógeno.
Se identificó el desorden de ocupación de la población como una relación de ~67/33 en el segmento -CF3 y se modeló en consecuencia.
El análisis de la estructura absoluta mediante procedimientos de verosimilitud (Hooft, 2008) se realizó con PLATON (Spek). Los resultados indican que la estructura absoluta se ha asignado correctamente. El procedimiento calcula que la probabilidad de que la estructura se asigne correctamente es del 100 %. El parámetro de Hooft es 0,02 con una desviación estándar estimada de (4) y el parámetro de Parson es 0,02 con una desviación estándar estimada de (4). El índice R final fue 4,1 %. Una diferencia final de Fourier reveló que no hay densidad de electrones ausentes o mal colocados.
La información pertinente sobre el cristal, la recopilación de datos y el refinamiento se resume en la Tabla S. Las coordenadas atómicas, las longitudes de enlace, los ángulos de enlace y los parámetros de desplazamiento se enumeran en las Tablas T - V.
lista de programas informáticos y referencias empleadas puede encontrarse en Determinación Estructural por rayos X de un solo cristal del ejemplo 13, Forma Sólida 1.
_____________Tabla S. Datos del cristal y refinamiento de la estructura para C91._____________ Fórmula empírica C8H12F3NO3
Peso de la fórmula 227,19
Temperatura 173(2) K
Longitud de onda 1,54178 Á
Sistema de cristales Tetragonal
Grupo espacial P4-|2-|2
Dimensiones de la celda unitaria a = 9,9168(6) Á a = 90°
b = 9,9168(6) Á p = 90°
c = 22,721 (2) Á y = 90°
Volumen 2234,5(4) Á3
Z 8
Densidad (calculada) 1,351 Mg/m3
Coeficiente de absorción 1,184 mm-1
F(000) 944
Tamaño del cristal 0,200 x 0,170 x 0,080 mm3
Intervalo de Theta para la recogida de datos 4,866 a 70,114°
Intervalos de índices -11 <=h<=10, -12<=k<=12, -27<=/<=27
Reflexiones recogidas 48160
Reflexiones independientes 2122 [Rn = 0,0392]
Completo hasta theta = 67,679° 99,8 %
Corrección de la absorción Empírico
Procedimiento de refinamiento Mínimos cuadrados de la matriz completa en F2 Datos / restricciones / parámetros 2122/9/158
Bondad de ajuste en F2 1,010
Índices R Finales [/>2o(I)] R1 = 0,0408, wR2 = 0,1012
Índices R (todos los datos) R1 = 0,0429, wR2 = 0. 0,1039 Parámetro de estructura absoluta 0,03 (4)
Coeficiente de extinción n/a
Mayor diferencia entre el pico y el agujero 0,280 y -0,215 e.Á-3
Tabla T. Coordenadas atómicas (x 104) y parámetros de desplazamiento isotrópico equivalente (Á2 x 103) ______ para C91. U(eq) se define como un tercio de la traza del tensor Uij ortogonalizado.______
x y z U(eq)
F(1) 9781 (4) 8042 (4) 5734 (2) 107 (1)
F(2) 10080 (4) 7982 (5) 6660 (2 ) 100 (2 )
F(3) 9278 (3) 6313 (2) 6193 (2) 87 (1)
F(1A) 9349 (11) 6675 (12) 6782 (5) 107 (1)
F(2A) 9431 (11) 6825 (16) 5889 (6 ) 100 (2 )
F(3A) 10149 (10) 8346 (8 ) 6346 (8 ) 87 (1)
N(1) 6809 (2) 7369 (2) 6335 (1) 32 (1)
O(1 ) 7784 (2) 9443 (2) 6392 (1) 48 (1)
0 (2 ) 5226 (2) 6038 (2) 7066 (1) 45 (1)
0 (3) 3695 (2) 7680 (2) 7101 (1) 55 (1 )
C(1) 9239 (3) 7599 (3) 6263 (2) 51 (1)
C(2) 7850 (3) 8227 (2) 6339 (1) 38 (1)
Figure imgf000147_0001
C(3) 5426 (2) 7871 (2) 6390 (1) 31 (1) C(4) 4731 (2) 7135 (2) 6890 (1) 32 (1) C(5) 4628 (3) 7777 (3) 5796 (1) 39 (1) C(6) 5489 (3) 8387 (4) 5311 (1) 55 (1) C(7) 3336 (3) 8612 (4) 5846 (1) 58 (1) C(8) 4303 (4) 6312 (3) 5650 (1) 61 (1)
Tabla U. Longitudes de enlace [A] y ángulos [°] para C91.
F(1)-C(1) 1,389 (5)
F(2)-C(1) 1,286 (4)
F(3)-C(1) 1,286 (4)
F(1A)-C(1) 1,498 (10)
F(2A)-C(1) 1,162 (10)
F(3A)-C(1) 1,183 (9)
N(1)-C(2) 1,338 (3)
N(1)-C(3) 1,464 (3)
N(1)-H(1X) 0,97 (2)
O(1)-C(2) 1,214 (3)
O(2)-C(4) 1,259 (3)
O(2)-H(2Z) 0,98 (3)
O(3)-C(4) 1,256 (3)
O(3)-H(3Z) 0,97 (3)
C(1)-C(2) 1,522 (4)
C(3)-C(4) 1,516 (3)
C(3)-C(5) 1,566 (3)
C(3)-H(3) 1,0000
C(5)-C(6) 1,520 (4)
C(5)-C(8) 1,525 (4)
C(5)-C(7) 1,530 (4)
C(6)-H(6A) 0,9800
C(6)-H(6B) 0,9800
C(6)-H(6C) 0,9800
C(7)-H(7A) 0,9800
C(7)-H(7B) 0,9800
C(7)-H(7C) 0,9800
C(8)-H(8A) 0,9800
C(8)-H(8B) 0,9800
C(8)-H(8C) 0,9800
C(2)-N(1)-C(3) 120,4 (2)
C(2)-N(1)-H(1X) 121,0 (17)
C(3)-N(1)-H(1X) 118,6 (17)
C(4)-O(2)-H(2Z) 113 (4)
C(4)-O(3)-H(3Z) 116 (4)
F(2A)-C(1)-F(3A) 114,0 (9)
F(3)-C(1)-F(2) 111,1 (4)
F(3)-C(1)-F(1) 101,2 (3)
F(2)-C(1)-F(1) 105,3 (3)
F(2A)-C(1)-F(1A) 99,3 (10)
(continuación)
F(3A)-C(1)-F(1A) 101,7 (9)
F(2A)-C(1)-C(2) 120,1 (5)
F(3A)-C(1)-C(2) 114,6 (5)
F(3)-C(1)-C(2) 116,6 (2)
F(2)-C(1)-C(2) 112,7 (3)
F(1)-C(1)-C(2) 108,6 (3)
F(1A)-C(1)-C(2) 103,1 (4)
O(1)-C(2)-N(1) 126,2 (2)
O(1)-C(2)-C(1) 117,8 (2)
N(1)-C(2)-C(1) 116,0 (2)
N(1)-C(3)-C(4) 109,07 (19)
N(1)-C(3)-C(5) 112,25 (19)
C(4)-C(3)-C(5) 112,80 (19)
N(1)-C(3)-H(3) 107,5
C(4)-C(3)-H(3) 107,5
C(5)-C(3)-H(3) 107,5
O(3)-C(4)-O(2) 124,7 (2)
O(3)-C(4)-C(3) 116,8 (2)
O(2)-C(4)-C(3) 118,4 (2)
C(6)-C(5)-C(8) 109,9 (2)
C(6)-C(5)-C(7) 108,0 (2)
C(8)-C(5)-C(7) 110,8 (3)
C(6)-C(5)-C(3) 108,5 (2)
C(8)-C(5)-C(3) 110,6 (2)
C(7)-C(5)-C(3) 109,1 (2)
C(5)-C(6)-H(6A) 109,5
C(5)-C(6)-H(6B) 109,5
H(6A)-C(6)-H(6B) 109,5
C(5)-C(6)-H(6C) 109,5
H(6A)-C(6)-H(6C) 109,5
H(6B)-C(6)-H(6C) 109,5
C(5)-C(7)-H(7A) 109,5
C(5)-C(7)-H(7B) 109,5
H(7A)-C(7)-H(7B) 109,5
C(5)-C(7)-H(7C) 109,5
H(7A)-C(7)-H(7C) 109,5
H(7B)-C(7)-H(7C) 109,5
C(5)-C(8)-H(8A) 109,5
C(5)-C(8)-H(8B) 109,5
H(8A)-C(8)-H(8B) 109,5
C(5)-C(8)-H(8C) 109,5
H(8A)-C(8)-H(8C) 109,5
H(8B)-C(8)-H(8C) 109,5
Transformaciones de simetría utilizadas para generar átomos equivalentes.
Tabla V. Parámetros de desplazamiento anisotrópico (Á2 * 103) para C91. El exponente del factor de desplazamiento anisotrópico tiene la forma -2n2[h2 a*2U11 ... 2 h k a* b* U12].
U11 U22 U33 U23 U13 U12
F(1) 84 (2) 107 (3) 129 (3) 42 (2) 67 (2) 41 (2)
F(2) 54 (2) 128 (4) 120 (3) -64 (3) -31 (2) 22 (2 )
F(3) 36 (1) 29 (1) 195 (4) -15 (2) 21 (2 ) 0 (1 )
F(1A) 84 (2) 107 (3) 129 (3) 42 (2) 67 (2) 41 (2)
F(2A) 54 (2) 128 (4) 120 (3) -64 (3) -31 (2) 22 (2 )
F(3A) 36 (1) 29 (1) 195 (4) -15 (2) 21 (2 ) 0 (1 )
N(1) 29 (1) 27 (1) 40 (1) 2 (1 ) 4 (1) -1 (1 )
O(1 ) 43 (1) 30 (1) 72 (1) -5 (1) 14 (1) -3 (1)
0 (2 ) 52 (1) 39 (1) 44 (1) 13 (1) 11 (1 ) 3 (1)
0 (3) 50 (1) 60 (1 ) 54 (1) 17 (1) 23 (1) 12 (1 )
C(1) 36 (1) 33 (1) 83 (2) -14 (1) 4 (1) -5 (1)
C(2) 38 (1) 30 (1) 44 (1) -5 (1) 7 (1) -3 (1)
C(3) 32 (1) 28 (1 ) 32 (1) 2 (1 ) 6 (1 ) 2 (1 )
C(4) 31 (1) 33 (1) 32 (1) 2 (1 ) 2 (1 ) -2 (1 )
C(5) 42 (1) 42 (1) 33 (1) 6 (1 ) -2 (1 ) 2 (1 )
C(6 ) 63 (2) 67 (2) 35 (1) 10 (1 ) 8 (1 ) 9 (2)
C(7) 43 (2) 77 (2) 55 (2) 15 (2) -2 (1 ) 14 (2)
C(8 ) 77 (2) 54 (2) 50 (2) -4 (1) -22 (2 ) -11 (2 )
Paso 2: Síntesis de (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carbox¡lato de litio (C92).
Se añadió hidróxido de litio monohidratado (29.0 g. 678 mmol) a una mezcla de (1R.2S.5S)-6.6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carbox¡lato de metilo. sal de cloruro (68.5 g. 333 mmol) en tetrahidrofurano (950 ml) y agua (48 ml). La mezcla de reacción se agitó a 25 °C hasta que se completó la hidrólisis. tras lo cual el sólido se recogió por filtración. se lavó con una solución al 5 % de agua en tetrahidrofurano (400 ml) y se secó al vacío a 70 °C para obtener C92 como un sólido de color blanco a blanquecino. Rendimiento: 47.6 g. 295 mmol. 89%. Se obtuvieron datos fisicoquímicos de muestras de C92 obtenidas de reacciones realizadas de la misma manera.
HRMS-ESI+ (m/z): [M+H]+ Calculado para C8H14NO2. 156.1019; encontrado. 156..1019. 1H RMN (600 MHz. D2O) 8 3.23 (d. J = 1.1 Hz. 1H). 3.09 (dd. J = 11.1. 5.2 Hz. 1H). 2.63 (d. J = 11.1 Hz. 1H). 1.33 - 1.24 (m. 2H). 0.86 (s. 2H).
0.83 (s. 3H). 13C RMN (150.8 MHz. D2O) 8 182.7. 62.3. 45.6. 35.5. 30.0. 25.8. 19.3. 12.7. El patrón de difracción de rayos X en polvo del C92 se muestra en la Figura 13; los picos característicos se enumeran en la Tabla W.
T l W. Pi ifr i n r X n lv l i n r 2
Figure imgf000149_0001
Figure imgf000150_0001
Paso 3: Síntesis del ácido (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-[3-met¡l-N-(trifluoroacet¡l)-L-val¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxílico (C42).
Una mezcla de C91 (1.29 g. 5.68 mmol). 4-(d¡met¡lam¡no)p¡r¡d¡na (0.60 g. 4.8 mmol). y N.N-d¡¡soprop¡let¡lam¡na (1.70 ml, 9.75 mmol) en tetrah¡drofurano (10 ml). se trató con cloruro de p-toluenosulfon¡lo (0.99 g. 5.2 mmol). Después de ag¡tar la mezcla de reacc¡ón durante 2 horas a 20 °C. se cargó C92 (75.7 % en masa. 1.00 g. 4.70 mmol) y se cont¡nuó ag¡tando durante toda la noche a 20 °C. La suspens¡ón resultante se mezcló con acetato de propan-2-¡lo (10 ml) y se lavó secuenc¡almente con soluc¡ón acuosa de ác¡do cítr¡co (10%. 10 ml) y con agua (10 ml). La capa orgán¡ca se concentró y se añad¡ó acetato de propan-2-¡lo (5 ml). segu¡do de la ad¡c¡ón gota a gota de heptano (15 ml) desde un embudo de ad¡c¡ón. Los sól¡dos se a¡slaron por f¡ltrac¡ón y se secaron al vacío para obtener el ác¡do (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-[3-met¡l-N-(tr¡fluoroacet¡l)-L-val¡l1-3-azab¡c¡clo[3.1.01hexano-2-carboxíl¡co (C42) como sól¡do blanco. Rend¡m¡ento: 1.2 g. Este compuesto muestra dos conjuntos de señales de RMN. Los conjuntos mayor y menor corresponden a los ¡sómeros Z y E de la am¡da terc¡ar¡a. respectivamente. con una relac¡ón molar de 20:1. La muestra tamb¡én cont¡ene acetato de ¡soprop¡lo con una relac¡ón molar del 37 % respecto al C42, mostrando resonanc¡as de 1 H a 4.86. 1.96 y 1.17 ppm. y resonanc¡as de 13 C a 169.7. 66.9. 21.5 y 21.0 ppm. Las señales de 1 H y 13 C se referenc¡aron ut¡l¡zando la señal de TMS. fijada en 0 ppm en ambas.
HRMS-ESI+(m/z): [M+H] + Calculado para C16H24F3N2O4.365.1683; Encontrado: 365.1684. 1 H RMN (600 MHz. DMSO-cfe) 8 mayor: 9.44 (d. J = 8.5 Hz. 1H). 4.44 (d. J = 8.5 Hz. 1H). 4.15 (s. 1H). 3.85 (dd. J = 10.5. 5.4 Hz. 1H). 3.73 (d. J = 10.5 Hz. 1H). 1.53 (dd. J = 7.6. 5.3 Hz. 1H). 1.43 (d. J = 7.6 Hz. 1H). 1.01 (s. 3H). 1.01 (s. 9H).0.83 (s. 3H); menor: 9.11 (d. J = 9.4 Hz. 1H). 4.53 (s. 1H). 4.33 (d. J = 9.4 Hz. 1H). 3.53 (dd. J = 12.5. 5.3 Hz. 1H). 3.41 (d. J = 12.5 Hz. 1H).
1.55 (d. J = 7.5 Hz. 1H). 1.41 (dd. J = 7.5. 5.3 Hz. 1H). 1.02 (s. 3H). 0.97 (s. 3H). 0.91 (s. 9H). 13 C RMN (150.8 MHz. DMSO-cfe) 8 mayor: 172.3. 167.5. 156.8(2JCF= 37.0 Hz). 115.7(1JCF= 287.7 Hz). 59.1. 58.0. 47.1. 34.6. 29.6. 26.7. 26.1.
25.6. 18.7. 12.0; menor: 172.3. 168.1. 155.9 ( 2 J c f = 36.8 Hz). 115.8 ( 1 J cf == 288.1 Hz). 59.9. 57.3. 46.4. 36.2. 32.1.
26.2. 26.0. 24.4. 19.0. 12.7. El patrón de difracción de rayos X en polvo para C42 se muestra en la Figura 14; los picos característ¡cos se enumeran en la Tabla X.
La cristalización. tanto para el trabajo de difracción de rayos X en polvo como para la determinación estructural en monocristal. se realizó de la siguiente manera. Una solución de C42 (2.96 g) en etanol (9 ml) se calentó a 40 °C con agitación (3500 rpm). tras lo cual se añadió agua (10.5 ml) durante 10 minutos. A continuación. se añadió agua (16.5 ml) durante 4 horas. y la mezcla se enfrió a 10 °C y se dejó agitar durante la noche. Tras la filtración. la torta de filtración se lavó con agua (6 ml) y se secó a 50 °C para obtener C42 cristalino (2.6 g).
T l X. Pi ifr i n r X n lv l i n r 42
Figure imgf000150_0002
En la Figura 15 se muestra un diagrama ORTEP de los datos de monocristal para C42.
Determinación estructural en monocristal de rayos X del C42
Análisis de rayos X de un solo cristal
La recogida de datos se realizó en un difractómetro Bruker D8 Venture a temperatura ambiente. La recogida de datos consistió en exploraciones omega y phi. Se aplicó una estrategia especial de datos de 0,3 grados de anchura por fotogramas para separar los dominios, eliminando así cualquier problema de TWIN y pseudosimetría.
La estructura fue resuelta por fase intrínseca utilizando la suite de software SHELX en el grupo de clase romboédrica R3. Posteriormente, la estructura se refinó mediante el procedimiento de mínimos cuadrados de la matriz completa. Todos los átomos que no son de hidrógeno se encontraron y refinaron utilizando parámetros de desplazamiento anisotrópicos.
Los átomos de hidrógeno localizados en el nitrógeno y el oxígeno fueron encontrados a partir del mapa de diferencias de Fourier y refinados con distancias restringidas. Los átomos de hidrógeno restantes se colocaron en posiciones calculadas y se les permitió montar en sus átomos portadores. El refinamiento final incluyó parámetros de desplazamiento isotrópico para todos los átomos de hidrógeno.
El análisis de la estructura absoluta mediante procedimientos de verosimilitud (Hooft, 2008) se realizó con PLATON (Spek). Los resultados indican que la estructura absoluta se ha asignado correctamente. El procedimiento calcula que la probabilidad de que la estructura se asigne correctamente es del 100 %. El parámetro de Hooft es -0,08 con una des (desviación estándar estimada) de (7) y el parámetro de Parson es -0,09 con una des de (6 ).
Se identificó el desorden del sitio poblacional en el segmento C1_F1_F2 en una relación de 78:22 y se trató en consecuencia.
El índice R final fue de 5,8%. Una diferencia final de Fourier reveló que no hay densidad de electrones ausentes o mal colocados.
La información pertinente sobre el cristal, la recopilación de datos y el refinamiento se resume en la Tabla Y. Las coordenadas atómicas, las longitudes de enlace, los ángulos de enlace y los parámetros de desplazamiento se enumeran en las Tablas Z - BB.
La lista de programas informáticos y referencias empleadas puede encontrarse en Determinación Estructural por rayos X de un solo cristal del ejemplo 13, Forma Sólida 1.
Tabla Y. Datos del cristal y refinamiento de la estructura para C42.
Fórmula empírica C16H23F3N2O4
Peso de la fórmula 364,36
Temperatura 296(2) K
Longitud de onda 1,54178 A
Sistema de cristales Trigonal
Grupo espacial R3
Dimensiones de la celda unitaria a = 14,1740(6) A a = 114,11
b = 14,1740(6) A P = 114,11 c = 14,1740(6) A Y = 114,11
Volumen 1715,9(4) A3
Z 3
Densidad (calculada) 1,058 Mg/m3
Coeficiente de absorción 0,788 mm-1
F(000) 576
Tamaño del cristal 0 ,220 x 0 ,100 x 0 ,100 mm3
Intervalo de Theta para la recogida de datos 6,445 a 80,034°
Intervalos de índices -17<=h<=16, -14<=k<=16, --14<=/<=17 Reflexiones recogidas 13310
Reflexiones independientes 4011 [R n = 0,0369]
(continuación)
Completo hasta theta = 67,679° 98,9 %
Corrección de la absorción Empírico
Procedimiento de refinamiento Mínimos cuadrados de la matriz completa en F2 Datos / restricciones / parámetros 4011 / 6 / 244
Bondad de ajuste en F2 1,056
Índices R finales [I>2a(I)] R1 = 0,582, wR2 = 0,1675
Índices R (todos los datos) R1 = 0,0611, wR2 = 0,1710
Parámetro de estructura absoluta -0,09 (6)
Coeficiente de extinción n/a
Mayor diferencia entre el pico y el agujero 0,292 y -0,174 e.A'3
Tabla Z. Coordenadas atómicas (x 104) y parámetros de desplazamiento isotrópico equivalente (A2 x 103) para C42. U(eq) se define como un tercio de la traza del tensor Uij ortogonalizado.
x y z U(eq)
C(1) 9738 (11) 9749 (11) 7504 (7) 172 (4)
F(1) 9100 (20) 9860 (20) 7899 (14) 233 (6)
F(3) 9757 (18) 8823 (16) 7411 (12) 171 (4)
F(1A) 9950 (80) 10650 (90) 8270 (60) 233 (6)
F(3A) 10320 (70) 9400 (60) 7630 (50) 171 (4)
F(2) 11182 (13) 11032 (10) 8680 (7) 296 (6)
N(1) 9252 (4) 8810 (4) 5336 (3) 75 (1)
N(2) 6546 (2) 6624 (2) 1650 (2) 49 (1)
O(1) 9065 (6) 10407 (6) 6229 (5) 130 (2)
0 (2) 7738 (3) 6229 (3) 2739 (3) 88 (1)
0 (3) 7054 (3) 5611 (3) -16 (3) 79 (1)
0 (4) 5159 (3) 3362 (2) -1315 (3) 80 (1)
C(2) 9318 (6) 9683 (6) 6263 (5) 97 (2)
C(3) 8891 (4) 8676 (4) 4135 (3) 66 (1)
C(4) 10197 (4) 9437 (4) 4311 (4) 80 (1)
C(5) 9748 (5) 9404 (6) 3121 (6) 98 (1)
C(6) 10798 (6) 8766 (7) 4324 (7) 109 (2)
C(7) 11359 (5) 10996 (5) 5744 (6) 110 (2)
C(8) 7683 (3) 7092 (3) 2793 (3) 60 (1)
C(9) 5449 (3) 5104 (3) 340 (3) 50 (1)
C(10) 5997 (3) 4749 (3) -338 (3) 56 (1)
C(11) 4191 (3) 4863 (3) -607 (3) 53 (1)
C(12) 3540 (3) 5182 (4) -65 (3) 60 (1)
C(13) 1999 (4) 4426 (5) -1228 (5) 78 (1)
C(14) 3859 (5) 5374 (5) 1178 (5) 80 (1)
C(15) 4643 (3) 6293 (3) 127 (3) 54 (1)
C(16) 6198 (3) 7435 (3) 1506 (3) 59 (1)
Tabla AA. Longitudes de enlace [A] y ángulos [°] para C42.
C(1)-F(1A) 1,09 (5)
C(1)-F(3A) 1,12 (5)
C(1)-F(1) 1,271 (14)
(continuación)
C(1)-F(3) 1,277 (13) C(1)-F(2) 1,404 (14) C(1)-C(2) 1,556 (9)
N(1)-C(2) 1,321 (6)
N(1)-C(3) 1,463 (5)
N(1)-H(1X) 0,94 (2)
N(2)-C(8) 1,333 (4)
N(2)-C(9) 1,464 (4)
N(2)-C(16) 1,477 (3)
O(1)-C(2) 1,230 (6)
O(2)-C(8) 1,231 (4)
O(3)-C(10) 1,199 (4)
O(4)-C(10) 1,311 (4)
O(4)-H(4Y) 0,98 (2)
C(3)-C(8) 1,517 (5)
C(3)-C(4) 1,556 (6)
C(3)-H(3) 0,9800
C(4)-C(5) 1,512 (8)
C(4)-C(6) 1,515 (6)
C(4)-C(7) 1,533 (6)
C(5)-H(5A) 0,9600
C(5)-H(5B) 0,9600
C(5)-H(5C) 0,9600
C(6)-H(6A) 0,9600
C(6)-H(6B) 0,9600
C(6)-H(6C) 0,9600
C(7)-H(7A) 0,9600
C(7)-H(7B) 0,9600
C(7)-H(7C) 0,9600
C(9)-C(11) 1,508 (4)
C(9)-C(10) 1,521 (4)
C(9)-H(9) 0,9800
C(11)-C(15) 1,507 (4) C(11)-C(12) 1,510 (4) C(11)-H(11) 0,9800
C(12)-C(14) 1,496 (5) C(12)-C(15) 1,512 (5) C(12)-C(13) 1,530 (5) C(13)-H(13A) 0,9600
C(13)-H(13B) 0,9600
C(13)-H(13C) 0,9600
C(14)-H(14A) 0,9600
C(14)-H(14B) 0,9600
C(14)-H(14C) 0,9600
C(15)-C(16) 1,510 (4) C(15)-H(15) 0,9800
C(16)-H(16A) 0,9700
C(16)-H(16B) 0,9700 (continuación)
F(1A)-C(1)-F(3A) 133 (4)
F(1)-C(1)-F(3) 109,3 (14) F(1A)-C(1)-C(2) 105 (2)
F(3A)-C(1)-C(2) 109,0 (19)
F(1)-C(1)-C(2) 115,0 (7)
F(3)-C(1)-C(2) 118,2 (6)
F(2)-C(1)-C(2) 104,7 (9)
C(2)-N(1)-C(3) 119,5 (3)
C(2)-N(1)-H(1X) 112 (3)
C(3)-N(1)-H(1X) 128 (3)
C(8)-N(2)-C(9) 118,3 (2)
C(8)-N(2)-C(16) 128,7 (2)
C(9)-N(2)-C(16) 113,0 (2) C(10)-O(4)-H(4Y) 103 (3)
O(1)-C(2)-N(1) 127,2 (5)
O(1)-C(2)-C(1) 118,2 (4)
N(1)-C(2)-C(1) 114,5 (4)
N(1)-C(3)-C(8) 106,8 (3)
N(1)-C(3)-C(4) 113,3 (3)
C(8)-C(3)-C(4) 113,4 (3)
N(1)-C(3)-H(3) 107,7
C(8)-C(3)-H(3) 107,7
C(4)-C(3)-H(3) 107,7
C(5)-C(4)-C(6) 111,0 (5)
C(5)-C(4)-C(7) 108,8 (4)
C(6)-C(4)-C(7) 108,5 (4)
C(5)-C(4)-C(3) 108,7 (3)
C(6)-C(4)-C(3) 112,1 (4)
C(7)-C(4)-C(3) 107,5 (4)
C(4)-C(5)-H(5A) 109,5
C(4)-C(5)-H(5B) 109,5
H(5A)-C(5)-H(5B) 109,5
C(4)-C(5)-H(5C) 109,5
H(5A)-C(5)-H(5C) 109,5
H(5B)-C(5)-H(5C) 109,5
C(4)-C(6)-H(6A) 109,5
C(4)-C(6)-H(6B) 109,5
H(6A)-C(6)-H(6B) 109,5
C(4)-C(6)-H(6C) 109,5
H(6A)-C(6)-H(6C) 109,5
H(6B)-C(6)-H(6C) 109,5
C(4)-C(7)-H(7A) 109,5
C(4)-C(7)-H(7B) 109,5
H(7A)-C(7)-H(7B) 109,5
C(4)-C(7)-H(7C) 109,5
H(7A)-C(7)-H(7C) 109,5
H(7B)-C(7)-H(7C) 109,5 (continuación)_______ O(2)-C(8)-N(2) 119.3 (3)
O(2)-C(8)-C(3) 121.0 (3)
N(2)-C(8)-C(3) 119.8 (2)
N(2)-C(9)-C(11) 105.0 (2)
N(2)-C(9)-C(10) 110.4 (2) C(11)-C(9)-C(10) 112,2 (2)
N(2)-C(9)-H(9) 109.7
C(11)-C(9)-H(9) 109.7
C(10)-C(9)-H(9) 109.7
O(3)-C(10)-O(4) 124.6 (3)
O(3)-C(10)-C(9) 125.1 (3)
O(4)-C(10)-C(9) 110.4 (3) C(15)-C(11)-C(9) 107.9 (2) C(15)-C(11)-C(12) 60.1 (2)
C(9)-C(11)-C(12) 118,0 (2) C(15)-C(11)-H(11) 118.7
C(9)-C(11)-H(11) 118.7
C(12)-C(11)-H(11) 118.7
C(14)-C(12)-C(11) 121.8 (3) C(14)-C(12)-C(15) 121,6 (3) C(11)-C(12)-C(15) 59.8 (2)
C(14)-C(12)-C(13) 113.5 (3) C(11)-C(12)-C(13) 114.8 (3) C(15)-C(12)-C(13) 115,3 (3) C(12)-C(13)-H(13A) 109.5
C(12)-C(13)-H(13B) 109.5
H(13A)-C(13)-H(13B) 109.5
C(12)-C(13)-H(13C) 109.5
H(13A)-C(13)-H(13C) 109.5
H(13B)-C(13)-H(13C) 109.5
C(12)-C(14)-H(14A) 109.5
C(12)-C(14)-H(14B) 109.5
H(14A)-C(14)-H(14B) 109.5
C(12)-C(14)-H(14C) 109.5
H(14A)-C(14)-H(14C) 109.5
H(14B)-C(14)-H(14C) 109.5
C(11)-C(15)-C(16) 108.6 (2) C(11)-C(15)-C(12) 60,04 (19) C(16)-C(15)-C(12) 120,2 (3) C(11)-C(15)-H(15) 117.9
C(16)-C(15)-H(15) 117.9
C(12)-C(15)-H(15) 117.9
N(2)-C(16)-C(15) 104.0 (2)
N(2)-C(16)-H(16A) 111.0
C(15)-C(16)-H(16A) 111,0
N(2)-C(16)-H(16B) 111,0
C(15)-C(16)-H(16B) 111,0
H(16A)-C(16)-H(16B) 109,0 Transformaciones de simetría utilizadas para generar átomos equivalentes.
Tabla BB. Parámetros de desplazamiento anisotrópico (Á2 * 103) para C42. El exponente del factor de _______ desplazamiento anisotrópico tiene la forma -2n2[h2 a*2U11 ... 2 h k a* b* U12 ]._______
U11 U22 U33 U23 U13 U12
C(1) 249 (10) 244 (10) 92 (4) 107 (6) 116 (6) 219 (9)
F(1) 349 (14) 444 (17) 236 (8) 274 (10) 264 (10) 348 (15)
F(3) 299 (12) 246 (10) 152 (5) 168 (7) 178 (7) 234 (10)
F(1A) 349 (14) 444 (17) 236 (8) 274 (10) 264 (10) 348 (15)
F(3A) 299 (12) 246 (10) 152 (5) 168 (7) 178 (7) 234 (10)
F(2) 294 (11) 235 (8) 94 (3) 84 (4) 57 (5) 147 (8)
N(1) 80 (2) 83 (2) 52 (1) 41 (1) 37 (1) 65 (2)
N(2) 52 (1) 49 (1) 44 (1) 31 (1) 30 (1) 39 (1)
O(1) 170 (4) 160 (4) 107 (3) 88 (3) 95 (3) 145 (4)
0 (2) 83 (2) 74 (2) 73 (2) 50 (1) 32 (1) 59 (1)
0 (3) 82 (2) 56 (1) 91 (2) 43 (1) 69 (2) 42 (1)
0 (4) 71 (1) 50 (1) 93 (2) 32 (1) 61 (1) 39 (1)
C(2) 109 (3) 117 (4) 73 (2) 59 (3) 57 (2) 93 (3)
C(3) 62 (2) 62 (2) 51 (2) 33 (1) 28 (1) 47 (2)
C(4) 62 (2) 64 (2) 71 (2) 36 (2) 35 (2) 42 (2)
C(5) 76 (2) 85 (3) 94 (3) 58 (2) 54 (2) 44 (2)
C(6) 97 (3) 111 (4) 134 (4) 83 (4) 80 (3) 82 (3)
C(7) 69 (2) 70 (2) 84 (3) 30 (2) 32 (2) 34 (2)
C(8) 62 (2) 59 (2) 56 (2) 40 (1) 36 (1) 46 (1)
C(9) 55 (1) 48 (1) 49 (1) 33 (1) 35 (1) 37 (1)
C(10) 56 (2) 50 (1) 57 (2) 34 (1) 39 (1) 38 (1)
C(11) 53 (1) 54 (1) 45 (1) 31 (1) 32 (1) 38 (1)
C(12) 61 (2) 69 (2) 63 (2) 46 (2) 44 (1) 50 (2)
C(13) 62 (2) 85 (2) 86 (2) 57 (2) 50 (2) 54 (2)
C(14) 91 (3) 109 (3) 89 (2) 77 (2) 72 (2) 77 (2)
C(15) 57 (2) 57 (2) 50 (1) 38 (1) 33 (1) 43 (1)
C(16) 60 (2) 51 (1) 57 (2) 35 (1) 33 (1) 42 (1)
Además de la preparación del ácido (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxílico (C42) de acuerdo con los procedimientos descritos anteriormente, el compuesto también puede prepararse como se representa en los esquemas de reacción mostrados directamente a continuación. En el paso 1, clorhidrato de (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxilato de metilo se trata primero con trietilamina en una mezcla de tetrahidrofurano y agua para neutralizar la sal de clorhidrato, seguido de la hidrólisis del éster metílico utilizando hidróxido de sodio en una mezcla de tetrahidrofurano y agua para proporcionar (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxilato de sodio.
Preparación de (1R.2S.5S)-6.6-d¡met¡l-3-azab¡ciclo[3.1.01hexano-2-carbox¡lato de sodio
Figure imgf000156_0001
A un recipiente adecuado se añadió tetrahidrofurano (30 ml0), agua (7,5 ml), trietilamina (7,62 ml, 54,7 mmol) y clorhidrato de (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0] hexano-2-carboxilato de metilo (7,59 g, 36,9 mmol). La mezcla se agitó a 25 °C durante al menos 30 minutos. Se detuvo la agitación y se separaron las capas. En un recipiente separado se añadieron hidróxido de sodio acuoso al 28 p/p (4,19 ml, 38,3 mmol) y tetrahidrofurano (71 ml) con agitación a 40 °C. 25% de la capa orgánica que contenía una solución de (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0] hexano-2-carboxilato de metilo en tetrahidrofurano de la separación y se sembró la solución con (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxilato de sodio (0,1182 g, 0,7336 mmol - preparado previamente por procedimiento análogo). La mezcla se mantuvo a 40 °C durante al menos 15 minutos y se añadió lentamente el 75 % restante de la capa orgánica. La mezcla se mantuvo con agitación a 40 °C durante 16 horas, luego se enfrió lentamente hasta 20 °C y se mantuvo durante al menos 4h. El sólido resultante, (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxilato de sodio, se aisló por filtración y se lavó con una solución de tetrahidrofurano (43 ml) y agua (2,25 ml). El material sólido se secó a 70 °C al vacío para dar 6,13 g (93,8%) de (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxilato de sodio como sólido cristalino. La PXRD se determinó de acuerdo con los procedimientos descritos anteriormente.
Picos PXRD seleccionados de (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxilato de sodio cristalino.
Figure imgf000157_0001
Picos PXRD seleccionados del ácido (S)-3,3-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)butanoico(C91)
Figure imgf000157_0002
Figure imgf000158_0001
Datos de cristal y refinamiento de la estructura del ácido(S)-3.3-dimetil-2-(2.2.2-trifluoroacetamido) butanoico (C91).
Figure imgf000158_0002
En el paso 2, (1R,2S,5S)-6,6-dimetil-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxilato de sodio resultante se acopla con ácido (S)-3,3-dimetil-2-(2,2,2-trifluoroacetamido)butanoico en presencia de cloruro de tosilo y dimetilamino piridina en tetrahidrofurano. Se retira el tetrahidrofurano y se sustituye por acetato de isopropilo, seguido de un tratamiento con HCl en salmuera y de un trabajo con agua y heptano para obtener C42.
Figure imgf000159_0001
C42 cristalino fue caracterizado por PXRD y se identificó una forma adicional obtenida por secado prolongado o a mayor temperatura.
Picos de PXRD seleccionados para C42 - Forma cristalina obtenida con un tiempo de secado prolongado o una temperatura más alta.
Figure imgf000159_0002
continuación
Figure imgf000160_0001
Actividad antiviral de la infección por el SARS-CoV-2
La capacidad de los compuestos para prevenir la muerte celular inducida por el coronavirus SARS-CoV-2 o el efecto citopático puede evaluarse a través de la viabilidad celular, utilizando un formato de ensayo que utiliza la luciferasa para medir el ATP intracelular como punto final. En resumen, las células VeroE6 enriquecidas para la expresión de hACE2 se inocularon por lotes con s Ar S-CoV-2 (USA_WA1/2020) con una multiplicidad de infección de 0,002 en un laboratorio BSL-3. A continuación, las células inoculadas con el virus se añadieron a placas de compuestos listos para el ensayo a una densidad de 4.000 células/pocillo. Tras una incubación de 3 días, tiempo en el que el efecto citopático inducido por el virus es del 95% en las condiciones de control infectadas y no tratadas, se evaluó la viabilidad celular mediante Cell Titer-Glo (Promega), según el protocolo del fabricante, que cuantifica los niveles de ATP. La citotoxicidad de los compuestos se evaluó en células paralelas no infectadas. Los compuestos de prueba se prueban solos o en presencia del inhibidor de la glicoproteína P (P-gp) CP-100356 a una concentración de 2 pM. La inclusión del CP-100356 tiene por objeto evaluar si los compuestos de ensayo son expulsados de las células VeroE6, que tienen altos niveles de expresión de la glicoproteína P. El porcentaje de efecto en cada concentración del compuesto de prueba se calculó a partir de los valores de los pocillos de control sin virus y de los pocillos de control con virus en cada placa de ensayo. La concentración requerida para un valor de respuesta del 50% (EC50) se determinó a partir de estos datos utilizando un modelo logístico de 4 parámetros. Las curvas de EC50 se ajustaron a una pendiente de Hill de 3 cuando >3 y la dosis máxima alcanzaron > 50 % de efecto. Si se detectaba una citotoxicidad superior al 30 % del efecto, los datos de la concentración correspondiente se eliminaban de la determinación de la EC50.
Para las placas de citotoxicidad, se calculó un porcentaje de efecto en cada concentración del compuesto de prueba, basándose en los valores de los pocillos de control de solo células y de los pocillos de control que contienen hiamina en cada placa de ensayo. El valor CC50 se calculó mediante un modelo logístico de 4 parámetros. A continuación se calculó un IT dividiendo el valor CC50 por el valor EC50.
Ensayo y análisis de la proteasa FRET del coronavirus 3C del SARS-CoV-2
La actividad proteolítica de la principal proteasa, 3CLpro, del SARS-CoV-2 fue monitorizada usando un ensayo de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia continua (FRET). El ensayo SARS-CoV-2 3CLpro mide la actividad de la proteasa SARS-CoV-2 3CL de longitud completa para escindir un péptido sintético de sustrato fluorogénico con la siguiente secuencia: Dabcyl-KTSAVLQ-SGFRKME-Edans modelado en un péptido consenso (V. Grum-Tokars et al. Evaluating the 3C-like protease activity of SARS-coronavirus: recommendations for standardized assays for drug discovery. Virus Research 133 (2008) 63-73). La fluorescencia del péptido Edans escindido (excitación 340 nm / emisión 490 nm) se mide utilizando un protocolo de intensidad de fluorescencia en un lector Flexstation (Molecular Devices). La señal fluorescente se reduce en presencia de PF-835231, un potente inhibidor de SARS-CoV-2 3CLpro. El tampón de reacción del ensayo contenía 20 mM de Tris-HCl (pH 7,3), 100 nM de NaCl, 1 mM de EDTA y 25 pM de sustrato peptídico. Las reacciones enzimáticas se iniciaron con la adición de 15 nM de proteasa 3CL del SARS-CoV-2 y se dejaron transcurrir 60 minutos a 23 °C. El porcentaje de inhibición o actividad se calculó sobre la base de los pocillos de control que no contenían ningún compuesto (0 % de inhibición/100 % de actividad) y un compuesto de control (100 % de inhibición/0 % de actividad). Los valores IC50 se generaron mediante un modelo de ajuste de cuatro parámetros utilizando el software ABASE (IDBS). Los valores Ki se ajustaron a la ecuación de Morrison con el parámetro de concentración de la enzima fijado en 15 nM, el parámetro Km fijado en 14 pM y el parámetro de concentración del sustrato fijado en 25 pM, utilizando el software ABASE (IDBS).
[0498] La actividad proteolítica de la proteasa 3CL del Coronavirus SARS-CoV-2 se mide utilizando un ensayo de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia continua. El ensayo FRET de SARS-CoV-23CLpro mide la escisión catalizada por la proteasa de TAMRA-SITSAVLQSGFRKMK-(DABCYL)-OH a TAMRA - SITSAVLQ y SGFRKMK(DABCYL)-OH. La fluorescencia del TAMRA escindido (ex. 558 nm / em. 581 nm) del péptido se midió utilizando un lector de placas de fluorescencia TECAN SAFIRE en el transcurso de 10 minutos. Las soluciones de reacción típicas contenían 20 mM de HEPES (pH 7,0), 1 mM de EDTA, 4,0 pM de sustrato FRET, 4 % de DMSO y 0,005 % de Tween-20. Los ensayos se iniciaron con la adición de 25 nM de SARS 3CLpr° (secuencia de nucleótidos 9985-10902 de la cepa Urbani de la secuencia completa del genoma del coronavirus del SARS (número de acceso del NCBI AY278741)). El porcentaje de inhibición se determinó por duplicado a un nivel de 0,001 mM de inhibidor. Los datos se analizaron con el programa de análisis de regresión no lineal Kalidagraph utilizando la ecuación:
F U = offset+ (Iímite)(1- e - ( kobsH )
donde el offset es igual a la señal de fluorescencia del sustrato peptídico no escindido, y el límite es igual a la fluorescencia del sustrato peptídico totalmente escindido. El kobs es la constante de velocidad de primer orden para esta reacción, y en ausencia de cualquier inhibidor representa la utilización del sustrato. En una reacción de inicio de la enzima que contiene un inhibidor irreversible, y donde el límite calculado es inferior al 20% del límite máximo teórico, el kobs calculado representa la tasa de inactivación de la proteasa 3C del coronavirus. La pendiente (kobs/ I) de un gráfico de kobs frente a [I] es una medida de la avidez del inhibidor por una enzima. En el caso de los inhibidores irreversibles muy rápidos, kobs/I se calcula a partir de las observaciones a una o dos [I] en lugar de como una pendiente.
T l 2. A ivi ^ i l i ^ n m r I PA r l E m l 1 - 4.
Figure imgf000161_0001
(continuación)
Figure imgf000162_0001
(continuación)
Figure imgf000163_0001
(continuación)
Figure imgf000164_0001
(continuación)
Figure imgf000165_0001
(continuación)
Figure imgf000166_0001
(continuación)
Figure imgf000167_0001
(continuación)
butilbutil-
Figure imgf000168_0001
(continuación)
Figure imgf000169_0001
1. No se ha determinado.
2. La regioquímica del Ejemplo 41 no se determinó rigurosamente; otras posibles estructuras para este ejemplo son A/-[(2S)-1-({(1S)-1-c¡ano-2-[(3S)-2-oxop¡rrol¡d¡n-3-¡l]et¡l}am¡no)-4,4-d¡met¡M-oxopentan-2-¡l]-4-metoxi-5,6-bis(trifluorometil)-1H-indol-2-carboxamida y N-[(2S)-1-({(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}amino)-4,4-dimetil-1-oxopentan-2-il]-4-metoxi-6,7-bis(trifluorometil)-1H-indol-2-carboxamida.
Parámetros farmacocinéticos predichos de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabicido[3.1.0]hexano-2-carboxamida (el compuesto del Ejemplo 13) en Humanos Basado en el modelado farmacocinético de base fisiológica (PBPK) de los datos in vitro que incorporan CL¡nt de las microsomas del hígado humano y CLb¡le de los hepatocitos humanos en condiciones de cultivo intercalado, CL y Vss plasmáticos humanos predichos de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida son 5,9 ml/min/kg y 0,97 L/kg, respectivamente, proporcionando una vida media efectiva, t-i/2, de 1,9 horas. Se definió Cf objetivo de 0,16 pM (concentración plasmática no ligada) a partir de los datos de inhibición antiviral obtenidos en estudios in vitro de (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-Ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-

Claims (1)

  1. REIVINDICACIONES
    1. Un compuesto de una cualquiera de las fórmulas Ih-1a, Ih-1b, Ih-1c, Ii-1a, Ii-1b, Ii-1c, Ij-1a, Ij-1b, Ij-1c, Ik-a, Ik-b e Ik-c
    Figure imgf000174_0001
    Figure imgf000175_0001
    donde R4 se selecciona del grupo que consiste en (alquilo C1-C6) amino opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, alquilo Ci -C6-C(O)NH- opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros, y alquilo C1-C6 -S(O)2NH. opcionalmente sustituido con uno a cinco fluoros; o un solvato o hidrato del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, solvato o hidrato.
    2. El compuesto de la reivindicación 1 en el que R4 se selecciona del grupo que consiste en CF3C(O)NH-, CF3S(O)2NH-, CH3C(O)NH-, CH3CH2C(O)NH- y CF3CH2NH-; o un solvato o hidrato del mismo, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto, solvato o hidrato.
    3. El compuesto de la reivindicación 2 en el que R4 es CF3C(O)NH- o CF3S(O)2NH-; o un solvato o hidrato del mismo.
    4. El compuesto de la reivindicación 1, que es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il]etilo}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida que tiene la estructura
    Figure imgf000176_0001
    o un solvato o hidrato del mismo.
    5. El compuesto de la reivindicación 4, que es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valN]-3-azabiádo[3.1.0]hexano-2-carboxamida que tiene la estructura
    Figure imgf000176_0002
    6. El compuesto de la reivindicación 4 que es cristalino (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida.
    7. El compuesto de la reivindicación 6, que es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida, Forma Sólida 1, caracterizada por un patrón de difracción de rayos X en polvo (fuente de radiación Cu, promedio K-a) que contiene picos a 7,6, 9,8, 11,4, 11.9, 12,7, 15,7, 15,8, 17,3, 17,8, 18,3, 18,9. 19,7, 19,9, 20,5, 21,0, 21,7, 22,2, 22,5, 23,1,23,6, 24,7, 25,3, 27,0, 27,2, 27.9, 28,1,29,5, 32,6, 35,7 y 37,0 °2-theta /- 0,2°.
    8. El compuesto de la reivindicación 6, que es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidina-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida, Forma Sólida 4, caracterizada por un patrón de difracción de rayos X en polvo (fuente de radiación Cu, promedio K-a) que contiene picos a 7,6, 9,8, 10,8, 11,2, 11,4, 11,4, 11,7, 12,0, 12,3, 12,7, 13,7, 14,9, 15,1, 15,9, 17,5, 18,0, 18,2, 18,5, 18,8, 20,0, 20,4, 20,7, 21,1,21,6, 21.8, 22,3, 23,1,23,4, 24,2, 24,9, 25,2, 26,1,27,0, 27,2, 28,1,28,9, 29,4, 29,5, 29,8, 30,0, 30,6, 30,8, 31,3, 31,8, 32,5, 32.8, 33,2, 34,4, 35,5, 35,6, 35,6, 36,0, 36,4, 37,1, 38,7, 39,4, 39,5 y 39,8 °2-theta /-0.2°.
    9. El compuesto de la reivindicación 4 que es amorfo (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida.
    10. El compuesto de la reivindicación 4, que es (1R,2S,5S)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-6,6-dimetil-3-[3-metil-N-(trifluoroacetil)-L-valil]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-2-carboxamida, solvato de éter de tert-butilo de metilo.
    11. El compuesto de la reivindicación 10, en el que el compuesto es cristalino.
    12. El compuesto N-(metoxicarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida que tiene la estructura
    Figure imgf000177_0001
    o un solvato o hidrato del mismo.
    13. El compuesto de la reivindicación 12 que es N-(metoxicarbonil)-3-metil-L-valil-(4R)-N-{(1S)-1-ciano-2-[(3S)-2-oxopirrolidin-3-il]etil}-4-(trifluorometil)-L-prolinamida.
    14. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 4 o un solvato o hidrato del mismo junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
    15. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la reivindicación 12 o un solvato o hidrato del mismo junto con un portador farmacéuticamente aceptable.
    16. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11 para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infección por coronavirus en un paciente.
    17. Un compuesto para su uso en un procedimiento de tratamiento, de acuerdo con la reivindicación 16, en el que la infección por coronavirus es COVID-19.
    18. Un compuesto para uso en un procedimiento de tratamiento, como se reivindica en la reivindicación 17, en el que se coadministra ritonavir al paciente.
    19. Un compuesto para su uso en un procedimiento de tratamiento, de acuerdo con la reivindicación 18, en el que el compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11 y el ritonavir se administran al paciente por vía oral. 20. Un compuesto para su uso en un procedimiento de tratamiento, como se reivindica en la reivindicación 19, en el que se administran de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 1500 mg al día del compuesto de una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11 y de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 1000 mg al día de ritonavir.
    21. Un compuesto de la reivindicación 12 o 13 para su uso en un procedimiento de tratamiento de una infección por coronavirus en un paciente.
    22. Un compuesto para su uso en un procedimiento de tratamiento, de acuerdo con la reivindicación 21, en el que la infección por coronavirus es COVID-19.
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