DE69837295T2

DE69837295T2 - Bernsteinsäureester von Probucol zur Hemmung der Expression von VCAM-1

Info

Publication number: DE69837295T2
Application number: DE69837295T
Authority: DE
Inventors: Patricia K. Fort Collins Somers
Original assignee: Atherogenics Inc
Current assignee: Atherogenics Inc
Priority date: 1997-05-14
Filing date: 1998-05-14
Publication date: 2007-11-15
Anticipated expiration: 2018-05-15
Also published as: CZ9904023A3; AU747801C; US20020193446A1; PL207885B1; US6147250A; US7189870B2; WO1998051289A3; US20020177717A1; HUP0004592A2; CN1200704C; EP0981343A2; IL164568A0; DE69831566D1; CN100453530C; ID29158A; PT1464639E; CN1496739A; US7375252B2; EA200500249A1; KR100953990B1

Description

Diese Erfindung liegt im Bereich von Verfahren und Zusammensetzungen zur Hemmung der Expression von VCAM-1 und insbesondere zur Behandlung von Erkrankungen, die durch VCAM-1 vermittelt werden, die kardiovaskuläre und entzündliche Erkrankungen einschließen.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Koronarherzerkrankung (engl.: coronary heart disease (CHD)) bleibt die führende Todesursache in den industrialisierten Ländern. Die Hauptursache von CHD ist Atheriosklerose, eine Erkrankung, die durch die Ablagerung von Lipiden in den arteriellen Gefäßwänden gekennzeichnet ist, was zu einem Verengen der Blutgefäßdurchgänge und letztlich zu einem Versteifen des Gefäßsystems führt.
Atheriosklerose, wie sie in ihrer hauptsächlichen klinischen Komplikation, einer ischämischen Herzerkrankung, manifestiert ist, ist nach wie vor eine Haupttodesursache in industrialisierten Ländern. Es ist nun gut akzeptiert, dass Atheriosklerose mit einer lokalen Schädigung des arteriellen Endothels gefolgt durch Wucherung arterieller glatter Muskelzellen von der medialen Schicht zur intimalen Schicht zusammen mit der Ablagerung von Lipid und Anhäufung von Schaumzellen in der Läsion beginnen kann. Indem die atheriosklerotische Ablagerung sich entwickelt, verschließt sie stufenweise das betroffene Blutgefäß und kann schließlich zu einer Ischämie oder einem Infarkt führen. Deshalb ist es erwünscht, Verfahren zum Hemmen des Fortschreitens von Atheriosklerose im Patienten bereitzustellen, die einen Bedarf daran aufweisen.
Eine kardiovaskuläre Erkrankung ist mit mehreren verursachenden Faktoren verbunden worden, die Hypercholesterinämie, Hyperlipidämie und die Expression von VCAM-1 in vaskulären Endothelzellen einschließen.
Expression von VCAM-1
Eine Adhäsion von Leukozyten an das Endothel stellt ein grundlegendes, frühes Ereignis in einer breiten Vielfalt von Entzündungsbedingungen dar, die Atheriosklerose, Autoimmunstörungen und bakterielle und virale Infektionen einschließen. Eine Leukozyten Rekrutierung zum Endothel wird begonnen, wenn induzierbare Adhäsionsmolekül Rezeptoren auf der Oberfläche von Endothelzellen mit Gegenrezeptoren auf Immunzellen interagieren. Vaskuläre Endothelzellen bestimmen durch selektive Expression spezifischer Adhäsionsmoleküle, wie vaskulärem Zelladhäsionsmolekül-1 (VCAM-1 ), intrazellulärem Adhäsionsmolekül-1 (ICAM-1) und E-Selectin, welcher Typ von Leukozyten (Monozyten, Lymphozyten oder Neutrophile) rekrutiert wird. In der frühesten Phase der atheriosklerotischen Läsion findet eine lokalisierte endotheliale Expression von VCAM-1 und eine selektive Rekrutierung von mononukleären Leukozyten statt, die den Integrin Gegenrezeptor VLA-1 exprimieren. Aufgrund der selektiven Expression von VLA-4 auf Monozyten und Lymphozyten, nicht aber Neutrophilen ist VCAM-1 im Vermitteln der selektiven Adhäsion von mononukleären Leukozyten wichtig. Eine anschließende Umwandlung von Leukozyten in Schaummakrophagen führt zur Synthese einer breiten Vielfalt von Entzündungszytokinen, Wachstumsfaktoren und chemischen Lockstoffen, die helfen, die Leukozyt und Thrombozyten Rekrutierung, die Wucherung glatter Muskelzellen, die endotheliale Zellaktivierung und die extrazelluläre Matrixsynthese Eigenschaft von sich entwickelnder atheriosklerotischer Ablagerung auszubreiten.
VCAM-1 ist ein Vermittler in chronischen entzündlichen Erkrankungen, wie Asthma, rheumatoider Arthritis und autoimmuner Zuckererkrankung. Zum Beispiel ist bekannt, dass die Expression von VCAM-1 und ICAM-1 in Asthmatikern erhöht ist.
Pilewski, J. M. et al., Am. J. Respir Cell Mol. Biol. 12, 1-3 (1995); Ohkawara, Y. et al., Am. J. Respir, Cell Mol. Biol. 12, 4-12 (1995). Zusätzlich unterdrückte ein Blockieren der Integrin Rezeptoren für VCAM-1 und ICAM-1 (VLA-4 bzw. LFA-1) sowohl Früh- als auch Spätphase Antworten in einem Ovalbumin sensibilisierten Rattenmodell allergischer Atemwegsantworten. Rabb, II. A. et al., Am. J. Respir. Care Med. 149, 1186-1191 (1994). Es gibt auch eine erhöhte Expression von endothelialen Adhäsionsmolekülen, einschließlich VCAM-1, im Mikrogefäßsystem rheumatoider Synovialmembran. Koch, A. E. et al., Lab. Invest. 64, 313-322 (1991); Morales-Ducret, J. et al., Immunol. 149, 1421-1431 (1992). Ein Neutralisieren von Antikörpern, die gegen VCAM-1 oder seinen Gegenrezeptor VLA-4 gerichtet sind, können den Ausbruch einer Zuckererkrankung in einem Mausmodell (NOD Mäuse) verzögern, das die Erkrankung spontan entwickelt. Yang, X. D. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90, 10494-10498 (1993); Burkly, L. C. et al., Diabetes 43, 523-534 (1994); Baron, J. L. et al., J. Clin. Invest. 93, 1700-1708 (1994). Monoklonale Antikörper gegen VCAM-1 können auch eine vorteilhafte Wirkung in Tiermodellen von allogener Transplantatabstoßung aufweisen, wodurch vorgeschlagen wird, dass Hemmstoffe von VCAM-1 Expression im Verhindern von Transplantatabstoßung nützlich sind. Oroez, C. G. et al., Immunol. Lett. 32, 7-12 (1992).
VCAM-1 wird von Zellen sowohl als eine Membran gebundene Form als auch als eine lösliche Form exprimiert. Für die lösliche Form von VCAM-1 ist gezeigt worden, dass sie die Chemotaxis vaskulärer Endothelzellen in vitro induziert und eine Gefäß bildende Antwort in Rattenkornea stimuliert. Koch, A. F. et al., Nature 376, 517-519 (1995). Hemmstoffe der Expression von löslichem VCAM-1 haben potenziellen therapeutischen Wert im Behandeln von Erkrankungen mit einem stark Gefäß bildenden Bestandteil, einschließlich Tumorwachstum und Metastase. Folkman, J., und Shing, Y., Biol. Chem., 10931-10934 (1992).
VCAM-1 wird in kultivierten humanen vaskulären Endothelzellen nach Aktivierung durch Lipopolysaccharid (LPS) und Zytokine, wie Interleukin 1 (IL-1) und Tumor nekrosefaktor (TNF-α) exprimiert. Diese Faktoren sind für eine Aktivierung von Zelladhäsionsmolekül Expression nicht selektiv.
Das U.S. Patent Nr. 5,380,747 an Medford et al. lehrt die Verwendung von Dithiocarbamaten, wie Pyrrolidin Dithiocarbamat, zur Behandlung von kardiovaskulären und anderen entzündlichen Erkrankungen.
Das U.S. Patent Nr. 5,750,351 an Medford et al. und die WO 95/30415 an die Emory University beschreibt die Entdeckung, dass mehrfach ungesättigte Fettsäuren (engl.: polyunsaturated fatty acids („PUFAs")) und ihre Hydroperoxide („ox-PUFAs"), die wichtige Bestandteile von oxidativ modifiziertem Lipoprotein mit geringer Dichte (engl.: low density lipoprotein (LDL)) sind, die Expression von VCAM-1, aber nicht von intrazellulärem Adhäsionsmolekül 1 (ICAM-1) oder E-Selectin in humanen Aorta Endothelzellen durch einen Mechanismus induzieren, der nicht durch Zytokine oder andere nicht-Zytokin Signale vermittelt wird. Dies ist eine grundlegende Entdeckung eines wichtigen und zuvor unbekannten biologischen Weges in VCAM-1 vermittelten Immunantworten.
Als nicht beschränkende Beispiele induzieren Linolsäure, Linolensäure, Arachidonsäure, Linoleylhydroperoxide (13-HPODE) und Arachidonhydroperoxide (15-HPETE) Zelloberflächen Genexpression von VCAM-1, aber nicht von ICAM-1 oder E-Selectin. Gesättigte Fettsäuren (wie Stearinsäure) und einfach ungesättigte Fettsäuren (wie Ölsäure) induzieren die Expression von VCAM-1, ICAM-1 oder E-Selectin nicht.
Die Induktion von VCAM-1 durch PUFAs und ihrer Fettsäure Hydroperoxide wird durch Dithiocarbamate, einschließlich Pyrrolidin Dithiocarbamat (PDTC), unterdrückt. Dies zeigt an, dass die Induktion durch ein oxidiertes Signalmolekül vermittelt wird, und dass die Induktion verhindert wird, wenn die Oxidation des Moleküls blockiert wird (d.h. die Oxidation findet nicht statt), umgekehrt wird (d.h. das Sig nalmolekül wird reduziert), oder wenn sogar verhindert wird, dass das redoxmodifizierte Signal andererseits mit seinem regulatorischen Ziel interagiert.
Zellen, die chronisch gegenüber höheren als normalen Spiegeln mehrfach ungesättigter Fettsäuren und derer oxidierten Gegenstücke ausgesetzt sind, können einen Immunantwort einleiten, die nicht normal ist und die unverhältnismäßig zur vorhandenen Gefährdung ist, was zu einem Erkrankungszustand führt. Die Übersensibilisierung vaskulärer Endothelzellen gegenüber PUFAs und ox-PUFAs kann die Bildung zum Beispiel von atheriosklerotischer Ablagerung beschleunigen.
Beruhend auf diesen Entdeckungen wurde ein Verfahren zur Behandlung von Atheriosklerose, post-angioplastischer Restenose, Koronararterienerkrankungen, Angina, der Erkrankung kleiner Arterien und anderer kardiovaskulärer Erkrankungen sowie nicht kardiovaskulärer entzündlicher Erkrankungen, die durch VCAM-1 vermittelt werden, in der WO 95/30415 beschrieben, welche die Entfernung, Abnahme in der Konzentration von, oder Verhinderung der Bildung von oxidierten mehrfach ungesättigten Fettsäuren einschließt, die einschließen, aber nicht beschränkt sind auf oxidierte Linol-(C₁₈Δ⁹ ^,2), Linolen-(C₁₈Δ⁶ ^,9,1 ²), Arachidon-(C₂₀Δ^5,8,11,14) und Eicosatrien-(C₂₀Δ^8,11,14) säuren.
Nicht beschränkende Beispiele nicht kardiovaskulärer entzündlicher Erkrankungen, die durch VCAM-1 vermittelt werden, schließen rheumatoide und Osteoarthritis, Asthma, Dermatitis und multiple Sklerose ein.
Hypercholesterinämie und Hyperlipidämie
Hypercholesterinämie ist ein wichtiger Risikofaktor, der mit kardiovaskulärer Erkrankung assoziiert ist. Serum Lipoproteine sind die Träger für die Lipide im Kreislauf. Lipoproteine werden entsprechend ihrer Dichte klassifiziert: Chylomikrone, Lipoproteine mit sehr geringer Dichte (engl.: very low-density lipoproteins (VLDL)), Lipoproteine mit geringer Dichte (LDL) und Lipoproteine mit hoher Dichte (engl.: high-density lipoproteins (HDL)). Chylomikrone sind hauptsächlich am Transportieren diätetischer Triglyceride und Cholesterin vom Darm in das Fettgewebe und die Leber beteiligt. VLDL liefern endogen synthetisierte Triglyceride von der Leber an das Fett- oder andere Gewebe. LDL transportiert Cholesterin in periphere Gewebe und reguliert endogene Cholesterinspiegel in jenen Geweben. HDL transportiert Cholesterin von peripheren Geweben zur Leber. Arterienwandcholesterin ist fast ausschließlich von LDL abgeleitet. Brown und Goldstein, Ann. Rev. Biochem. 52, 223 (1983); Miller, Ann. Rev. Med. 31, 97 (1980). In Patienten mit geringen Spiegeln von LDL ist die Entwicklung von Atheriosklerose selten.
Steinberg et al. (N. Eng. J. Med. 1989; 320: 915-924) stellt die Hypothese auf, dass eine Modifikation von Lipoprotein mit geringer Dichte (LDL) in oxidativ modifiziertes LDL (ox-LDL) durch reaktive Sauerstoffarten das zentrale Ereignis ist, das Atheriosklerose einleitet und ausbreitet. Oxidiertes LDL weist eine komplexe Struktur auf, die aus mindestens mehreren chemisch eindeutigen, oxidierten Materialien besteht, von denen jedes allein oder in Kombination Zytokin aktivierte Adhäsionsmolekül Genexpression modulieren kann. R Fettsäure Hydroperoxide, wie Linoleylhydroperoxid (13-HPODE), werden aus freien Fettsäuren durch Lipoxygenasen gebildet und sind ein wichtiger Bestandteil von oxidiertem LDL.
Es ist vorgeschlagen worden, dass eine Bildung oxidierter Lipide durch die Wirkung des Zell-Lipoxygenase Systems gebildet wird, und dass die oxidierten Lipide anschließend auf LDL übertragen werden. Es gibt danach eine Ausbreitungsreaktion innerhalb des LDL im Medium, die durch Übergangsmetalle und/oder Sulfhydrylverbindungen katalysiert wird. Vorherige Untersuchungen haben gezeigt, dass Fettsäuremodifikation kultivierter Endothelzellen ihre Anfälligkeit für oxidative Schädigung verändern kann, während eine Ergänzung mit mehrfach ungesättigten Fettsäuren (PUFA) die Anfälligkeit gegenüber oxidativer Schädigung verstärkt. Eine Ergänzung gesättigter oder einfach ungesättigter Fettsäuren zu kultivierten Endothelzellen verringert ihre Anfälligkeit gegenüber oxidativer Schädigung, wobei eine Ergänzung mit mehrfach ungesättigten Fettsäuren (PUFA) die Anfälligkeit gegenüber oxidativer Schädigung verstärkt.
Unter Verwendung reverser Phase HPLC Analyse nativer und verseifter flüssiger Extrakte von LDL ist gezeigt worden, dass 13-HPODE die vorherrschende oxidierte Fettsäure in LDL ist, die durch aktivierte humane Monozyten oxidiert wird. Die chronische Exposition gegenüber oxidiertem LDL stellt ein oxidatives Signal für vaskuläre Endothelzellen möglicherweise durch ein spezifisches Fettsäure Hydroperoxid bereit, das selektiv die Zytokin induzierte VCAM-1 Genexpression steigert.
Durch einen Mechanismus, der nicht gut definiert ist, sondern Bereiche von Blutgefäßwand, die für Atheriosklerose prädisponiert sind, vorzugsweise zirkulierendes LDL ab. Durch einen kaum verstandenen Weg wandeln Endothel-, glatte Muskel- und/oder Entzündungszellen dann LDL in ox-LDL um. Im Gegensatz zu LDL, das durch LDL Rezeptoren aufgenommen wird, nehmen Monozyten stark ox-LDL durch einen „Fress" Rezeptor auf, dessen Expression, anders als der LDL Rezeptor, nicht gehemmt wird, da der Inhalt von intrazellulärem Lipid steigt. Somit nehmen Monozyten anhaltend ox-LDL auf und werden zu Lipid angereicherten Makrophagen Schaumzellen, welche die fettige Faser bilden.
Es gibt nun eine große Menge an Hinweisen, die zeigen, dass Hypercholesterinämie ein wichtiger Risikofaktor ist, der mit Herzerkrankung assoziiert ist. Zum Beispiel schlussfolgerte im Dezember 1984 ein National Institute of Health Consensus Development Conference Gremium, dass ein Erniedrigen eindeutig erhöhter Blutcholesterinspiegel (insbesondere Blutspiegel von Lipoprotein Cholesterin mit geringer Dichte) das Risiko von Herzinfarkten aufgrund von Koronarherzerkrankung reduzieren wird.
Typischerweise wird Cholesterin im Blut von warmblütigen Tieren in bestimmten Lipid-Protein Komplexen, wie Chylomikronen, Lipoproteinen mit sehr geringer Dichte (VLDL), Lipoproteinen mit geringer Dichte (LDL) und Lipoproteinen mit ho her Dichte (HDL), transportiert. Es ist weitgehend akzeptiert, dass LDL in einer Weise wirkt, die direkt zu einer Ablagerung des LDL Cholesterins in der Blutgefäßwand führt, und dass HDL in einer Weise wirkt, die dazu führt, dass HDL Cholesterin von der Gefäßwand aufnimmt und es zur Leber transportiert, wo es metabolisiert wird [Brown und Goldstein, Ann. Rev. Biochem. 52, 223 (1983); Miller, Ann. Rev. Med. 31, 97 (1980)]. Zum Beispiel korrelieren die LDL Cholesterinspiegel in unterschiedlichen epidemiologischen Studien gut mit dem Risiko einer Koronarherzerkrankung, wobei die HDL Cholesterinspiegeln invers mit einer Koronarherzerkrankung assoziiert sind [Patton et al., Clin. Chem. 29, 1980 (1983)]. Es ist allgemein vom Fachmann akzeptiert, dass eine Verringerung abnormal hoher LDL Cholesterinspiegel nicht nur in der Behandlung von Hypercholesterinämie, sondern auch in der Behandlung von Atheriosklerose eine wirksame Therapie ist.
Darüber hinaus gibt es einen Hinweis, der auf Tier und Laborergebnissen beruht, dass die Peroxidation von LDL Lipid, wie dem ungesättigten Fettsäureanteil von LDL Cholesterinestern und Phospholipiden, die Anhäufung von Cholesterin in Monozyt/Makrophagen fördert, die schließlich in Schaumzellen umgewandelt werden und im subendothelialen Raum der Gefäßwand abgelagert werden. Die Anhäufung von Schaumzellen in der Gefäßwand wird als ein frühes Ereignis in der Bildung einer atheriosklerotischen Ablagerung verstanden. Somit wird angenommen, dass Peroxidation von LDL Lipid eine wichtige Voraussetzung für die geförderte Anhäufung von Cholesterin in der Gefäßwand und die anschließende Bildung einer atheriosklerotischen Ablagerung ist. Zum Beispiel ist gezeigt worden, dass Monozyt/Makrophagen natives LDL mit relativ geringen Geschwindigkeiten und ohne deutliche Anhäufung von Cholesterin aufnehmen und abbauen. Im Gegensatz dazu wird oxidiertes LDL durch diese Monozyt/Makrophagen mit viel höheren Geschwindigkeiten und mit deutlicher Anhäufung von Cholesterin aufgenommen [Parthasarathy et al., J. Clin. Invest. 77, 641 (1986)]. Es ist deshalb erwünscht, Verfahren zum Hemmen von LDL Lipidperoxidation in einem Patienten bereitzustellen, der einen Bedarf daran aufweist.
Erhöhte Cholesterinwerte sind mit einer Anzahl von Erkrankungszuständen assoziiert, die Restenose, Angina, zerebrale Atheriosklerose und Xanthom einschließen. Es ist erwünscht, ein Verfahren zum Reduzieren von Plasmacholesterin in Patienten mit oder mit einem Risiko der Entwicklung von Restenose, Angina, zerebraler Atheriosklerose, Xanthom und anderen Erkrankungszuständen bereitzustellen, die mit erhöhten Cholesterinspiegeln assoziiert sind.
Da es bestimmt worden ist, dass Hypercholesterinämie auf erhöhtes LDL (Hyperlipidämie) zurückzuführen ist, wird das Senken von LDL Spiegeln durch diätetische Therapie versucht. Es gibt mehrere Arzneimittelklassen, die allgemein verwendet werden, um LDL Spiegel zu senken, die Gallensäurekomplexbildner, Nikotinsäure (Niacin) und 3-Hydroxy-3-methylglutaryl Coenzym A (HMG CoA) Reduktase Hemmstoffe einschließen. Probucol und die Fibratderivate werden manchmal als Zusatztherapie, gewöhnlich in Kombination mit anderen Medikamenten, verwendet. Die HMG CoA Reduktase Hemmstoffe sind als Statine oder Vastatine bezeichnet worden. Statine sind unter den wirksamsten Mitteln, die momentan für Hypercholesterinämie auf dem Markt sind, und schließen Pravastatin (Pravchol, Bristol Meyers Squibb), Atorvastatin (Warner Lambert/Pfizer), Simvastatin (Zocor, Merck), Lovastatin (Mevacor, Merck) und Fluvastatin (Lescol) ein.
Ein Hinweis schlägt vor, dass die arthrogenen Wirkungen von Lipoprotein mit geringer Dichte (LDL) teilweise durch seine oxidative Modifikation vermittelt werden. Für Probucol ist gezeigt worden, dass es potente antioxidative Eigenschaften besitzt, und dass es die oxidative Modifikation von LDL blockiert. Im Einklang mit diesen Ergebnissen ist gezeigt worden, dass Probucol tatsächlich das Fortschreiten von Atheriosklerose in Kaninchen mit LDL Rezeptordefizienz verlangsamen, wie in Carew et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 84: 7725-7729 (1987) diskutiert. Am wahrscheinlichsten ist Probucol wirksam, weil es stark Lipid löslich ist und durch Lipoproteine transportiert wird und sie somit gegen oxidative Schädigung schützt.
Probucol hängt chemisch mit den weit verbreiteten Nahrungszusätzen 2,[3]-Tert-butyl-4-hydroxyanisol (BHA) und 2,6-Di-tert-butyl-4-methylphenol (BHT) zusammen. Sein voller chemischer Name lautet 4,4'-(Isopropylidendithio)bis(2,6-di-tertbutylphenol).
Probucol wird hauptsächlich verwendet, um Serumcholesterinspiegel in Hypercholsterinämie Patienten zu senken. Probucol wird allgemein in der Form von Tabletten verabreicht, die unter der Marke Lorelco^TM verfügbar sind. Unglücklicherweise ist Probucol in Wasser fast unlöslich und kann deshalb nicht intravenös injiziert werden. In der Tat ist es für Zellen schwierig, Probucol aufgrund seiner mangelhaften Mischbarkeit in Puffern und Medien für Zellkultur in vitro zu absorbieren. Festes Probucol wird kaum in das Blut absorbiert und wird im Wesentlichen in unveränderter Form ausgeschieden. Ferner wird die Tablettenform von Probucol mit signifikant unterschiedlichen Geschwindigkeiten und in unterschiedlichen Mengen durch unterschiedliche Patienten absorbiert. In einer Studie (Heeg et. al., Plasma Levels of Probucol in Man After Single and Repeated Oral Doses, La Nouvelle Presse Medicale, 9: 2990-2994 (1980)) wurde festgestellt, dass sich Spitzenspiegel von Probucol in Seren um bis zu einem Faktor 20 von Patient zu Patient unterscheiden. In einer anderen Studie beobachtete Kazuya et al., J. Lipid Res. 32; 197-204 (1991) eine Aufnahme von weniger als ungefähr 1 μg Probucol/10⁶ Zellen, wenn Endothelzellen für 24 Std. mit 50 μM Probucol inkubiert werden.
Das U.S. Patent Nr. 5,262,439 an Parthasarathy offenbart Analoga von Probucol mit erhöhter Wasserlöslichkeit, in denen eine oder beide der Hydroxylgruppen durch Estergruppen ersetzt werden, welche die Wasserlöslichkeit der Verbindung erhöhen. In einer Ausführungsform ist das Derivat aus der Gruppe ausgewählt, bestehend aus einem Mono- oder Di-Probucolester aus Bernsteinsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Seberinsäure, Sebacinsäure, Azelainsäure oder Maleinsäure. In einer anderen Ausführungsform ist das Probucolderivat ein Mono- oder Di-Ester, in welcher der Ester eine Alkyl- oder Alkenylgruppe enthält, die eine Funkti onalität enthält, die aus der Gruppe, bestehend aus einer Carbonsäuregruppe, Amingruppe, einem Salz einer Amingruppe, Amidgruppen, Amidgruppen und Aldehydgruppen besteht, ausgewählt ist.
Eine Reihe französischer Patente offenbart, dass bestimmte Probucolderivate hypocholesterinämische und hypolipämische Mittel sind: FR 2168137 (Bis-4-hydoxyphenylthioalkanester); FR 2140771 (Tetralinylphenoxyalkanester von Probucol); FR 2140769 (Benzofuryloxyalkansäurederviate von Probucol); FR 2134810 (Bis-(3-alkyl-5-t-alkyl-4-thiazol-5-carboxy)phenylthio)alkane); FR 2133024 (Bis-(4-nicotinoyloxyphenylthio)propane); und FR 2130975 (Bis(4-(phenoxyalkanoyloxy)phenylthio)alkane).
Das U.S. Patent Nr. 5,155,250 von Parker et al. offenbart, dass 2,6-Dialkyl-4-silylphenole antiatheriosklerotische Mittel sind. Dieselben Verbindungen werden als Serumcholesterin-senkende Mittel in der PCT-Veröffentlichung Nr. WO 95/15760 offenbart, die am 15. Juni 1995 veröffentlicht wurde. Das US Patent Nr. 5,608,095 von Parker et al. offenbart, dass alkylierte 4-Silylphenole die Peroxidation von LDL hemmen, Plasmacholesterin senken und die Expression von VCAM-1 hemmen und somit in der Behandlung von Atheriosklerose nützlich sind.
Eine Reihe europäischer Patentanmeldungen und an Shionogi Seiyaku Kabushiki Kaisha offenbaren phenolische Thioether zur Verwendung in der Behandlung von Atheriosklerose. Die europäische Patentanmeldung Nr. 348 203 offenbart phenolische Thioether, welche die Denaturierung von LDL und die Aufnahme von LDL durch Makrophagen hemmen. Die Verbindungen sind als Antiatheriosklerosemittel nützlich. Hydroxamsäurederivate dieser Verbindungen werden in der europäischen Patentanmeldung Nr. 405 788 offenbart und sind zur Behandlung von Atheriosklerose, Geschwür, Entzündung und Allergie nützlich. Carbamoyl- und Cyanoderviate der phenolischen Thioether werden im U.S. Patent Nr. 4,954,514 an Kia et al. offenbart.
Das U.S. Patent Nr. 4,752,616 an Hall et al. offenbart Arylthioalkylphenylcarbonsäuren zur Behandlung von Thromboseerkrankung. Die offenbarten Verbindungen sind unter anderem als Thrombozytenaggregationshemmstoffe zur Behandlung von Koronar- oder Zerebralthrombosen und zur Hemmung von Bronchokonstriktion nützlich.
Eine Reihe von Patenten an Adir und Kollegen offenbart substituierte Phenoxyiso-Buttersäuren und -Ester, die als Antioxidationsmittel und hypolipämische Mittel nützlich sind. Diese Reihe schließt das U.S. Patent Nr. 5,206,247 und 5,627,205 an Regnier et al. (das der europäischen Patentanmeldung Nr. 621 255 entspricht) und die europäische Patentanmeldung Nr. 763 527 ein.
Die WO 97/15546 an Nippon Shinyaku Co. Ltd. offenbart Carbonsäurederivate zur Behandlung von arterieller Sklerose, ischämischen Herzerkrankungen, zerebralem Infarkt und post-PTCA Restenose.
Die Dow Chemical Company ist der Übertragungsempfänger der Patente von hypolipidämischen 2-(3,5-Di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl)thiocarboxamiden. Zum Beispiel offenbaren die U.S. Patente Nr. 4,029,812, 4,076,841 und 4,078,084 an Wagner et al. diese Verbindungen zum Verringern von Blutserumlipiden, insbesondere Cholesterin- und Triglyceridspiegeln.
In Anbetracht, dass kardiovaskuläre Erkrankung momentan die führende Todesursache in den Vereinigten Staaten ist, und neunzig Prozent der kardiovaskulären Erkrankung derzeit als Atheriosklerose diagnostiziert werden, gibt es einen großen Bedarf, neue Verfahren und pharmazeutische Mittel zu ihrer Behandlung zu identifizieren. Für dieses Ziel ist die Identifikation und Manipulation der spezifischen oxidierten, biologischen Verbindungen wichtig, die als selektive Regulatoren der Expression von Vermittlern des entzündlichen Vorgangs wirken, insbesondere VCAM-1. Ein allgemeineres Ziel ist es, selektive Verfahren zum Unterdrücken der Expression redoxsensitiver Genen oder Aktivieren redoxsensitiver Gene, die unterdrückt sind, zu identifizieren.
Es ist deshalb ein Ziel der vorliegenden Erfindung neue Verbindungen, Zusammensetzungen und Verfahren zur Behandlung kardiovaskulärer und entzündlicher Erkrankungen bereitzustellen.
Es ist noch ein anderes Ziel der vorliegenden Erfindung neue Verbindungen und Zusammensetzungen bereitzustellen, die als Hemmstoffe von LDL Lipidperoxidation nützlich sind.
Es ist noch ein anderes Ziel der vorliegenden Erfindung neue Verbindungen und Zusammensetzungen bereitzustellen, die als antiatheriosklerotische Mittel nützlich sind.
Es ist noch ein anderes Ziel der vorliegenden Erfindung neue Verbindungen und Zusammensetzungen bereitzustellen, die als LDL Lipid-senkende Mittel nützlich sind.
Es ist noch ein anderes Ziel der vorliegenden Erfindung neue Verbindungen, Zusammensetzungen und Verfahren zum selektiven Hemmen der Expression von VCAM-1 bereitzustellen.
Es ist noch ein anderes Ziel der vorliegenden Erfindung ein Verfahren zur Behandlung einer Erkrankung, die durch die Expression oder Unterdrückung von redoxsensitiven Genen, zum Beispiel MCP-1, IL-6 und Thrombinrezeptor, vermittelt ist, bereitzustellen.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNGG
Die vorliegende Erfindung stellt eine Verbindung der Formel
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon bereit.
Die vorliegende Erfindung stellt ferner eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung einer durch die Expression von VCAM-1 vermittelten Störung bereit, umfassend eine wirksame Menge einer Verbindung der Formel
oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon, und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
Die vorliegende Erfindung stellt ferner die Verwendung einer Verbindung der Formel
oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon, gegebenenfalls in einem pharmazeutisch verträglichen Träger, in der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Störung bereit, ausgewählt aus einer kardiovaskulären Störung oder einer entzündlichen Erkrankung.
Der Begriff pharmazeutisch verträgliche Salze oder Komplexe bezeichnet Salze oder Komplexe, welche die erwünschte biologische Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen bewahren und minimale unerwünschte toxikologische Wirkungen zeigen. Nicht beschränkende Beispiele solcher Salze sind (a) Säureadditionssalze, die mit anorganischen Säuren gebildet werden (zum Beispiel Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Salpetersäure und dergleichen) und Salze, die mit organischen Säuren gebildet werden, wie Essigsäure, Oxalsäure, Weinsäure, Bernsteinsäure, Maleinsäure, Ascorbinsäure, Benzoesäure, Gerbsäure, Pamoasäure, Alginsäure, Polyglutaminsäure, Naphtalensulfonsäure, Naphtalendisulfonsäure und Polygalacturonsäure; (b) Basenadditionssalze, die mit Metallkationen, wie Zink, Kalzium, Wismuth, Barium, Magnesium, Aluminium, Kupfer, Kobalt, Nickel, Cadmium, Natrium, Kalium und dergleichen, oder mit einem Kation gebildet werden, das aus Ammoniak, N,N-Dibenzylethylendiamin, D-Glucosamin, Tetraethylammonium oder Ethylendiamin gebildet wird; oder (c) Kombinationen aus (a) und (b); z.B. ein Zinktannat Salz oder dergleichen. In diese Definition eingeschlossen sind auch pharmazeutisch verträgliche quaternäre Salze, die dem Fachmann bekannt sind, die insbesondere das quaternäre Ammoniumsalz der Formel –NR⁺A^– einschließen, wobei R wie oben definiert und A ein Gegenion ist, das Chlorid, Bromid, Iodid, -O-Alkyl, Toluolsulfonat, Methylsulfonat, Sulfonat, Phosphat oder Carboxylat (wie Benzoat, Succinat, Acetat, Glycolat, Ma leat, Malat, Citrat, Tartrat, Ascorbat, Benzoat, Cinnamoat, Mandeloat, Benzyloat und Diphenylacetat) einschließt.
Erkrankungen, die durch das VCAM-1 vermittelt werden, schließen ein, sind aber nicht beschränkt auf Atheriosklerose, post-angioplastische Restenose, Koronararterienerkrankung, Angina, die Erkrankung kleiner Arterien und andere kardiovaskuläre Erkrankungen sowie nicht kardiovaskuläre entzündliche Erkrankungen, wie rheumatoide Arthritis, Osteoarthritis, Asthma, Dermatitis, multiple Sklerose und Psoriasis.
Wie hier verwendet, haben die folgenden Begriffe die angezeigten Bedeutungen, wobei „g" Gramm bedeutet; „mmol" Millimol bedeutet; „ml" Milliliter bedeutet; „bp" Siedepunkt bedeutet (engl.: boiling point); „°C" Grad Celsius bedeutet; „mm Hg" Millimeter Quecksilber bedeutet; „mp" Schmelzpunkt bedeutet (engl.: melting point); „mg" Milligramm bedeutet; „μM" Mikromolar bedeutet; „μg" Mikrogramm bedeutet.
Die erfindungsgemäße Verbindung kann durch Verwenden von Verfahren und Techniken hergestellt werden, die dem Fachmann gut bekannt sind und von ihm begrüßt werden. Ein allgemeines Synthese-Schema zum Herstellen der erfindungsgemäßen Verbindung ist in Schema A dargestellt, worin alle Substituenten, sofern nicht anders angegeben, wie zuvor definiert sind.
Schema A
Eine Menge Probucol in einer 0,1 M Lösung Tetrahydrofuran wird mit 2 Äquivalenten Natriumhydrid behandelt und bei Raumtemperatur für 30 Minuten gerührt. Zu der Reaktionsmischung werden 3 Äquivalente eines Säurechlorids oder Säureanhydrids hinzugefügt, und die Reaktion wird bei Raumtemperatur für 16 Stunden gerührt. Die Reaktion wird mit 1 N wässriger HCl gequentscht und mit Ethylacetat verdünnt. Die wässrige Schicht wird entfernt, und die Ethylacetatschicht wird mit Wasser und anschließend mit einer wässrigen, gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen. Die Ethylacetatlösung wird über Magnesiumsulfat getrocknet, schwerkraft- oder vakuumgefiltert und dann konzentriert. Das Produkt wird durch Kieselsäuregel Chromatographie gereinigt.
Ausgangsmaterialen zur Verwendung in allgemeinen synthetischen Verfahren, die im obigen Reaktionsschema umrissen sind, sind einfach verfügbar oder können einfach entsprechend Standardtechniken und Verfahren hergestellt werden. Probucol ist einfach von Sigma Chemicals verfügbar.
Die folgenden Beispiele stellen typische Synthesen dar, wie im Schema A beschrieben. Diese Beispiele werden als nur darstellend verstanden und beabsichtigen nicht, den Schutzbereich der vorliegenden Erfindung in irgendeiner Weise zu beschränken.
Beispiel 1
Butandisäure, mono[4-[[1-[[3,5-bis(1,1-dimethylethyl)-4-hydroxyphenyl]thio]-1-methylethyl]thio]2,6-bis(1,1-dimethylethyl)phenyl]ester
Reaktionsbeschreibung:
In ein 50 ml Rückgewinnungsfläschen wurde Probucol (1,0 g, 1,93 mmol) und Tetrahydrofuran (16 ml) hinzugefügt. Zu der Lösung wurde 60% Natriumhydrid in Mineralöl (0,23 g, 5,75 mmol) hinzugefügt. Zu der wolkigen, weißen Mischung wurde Bernsteinsäureanhydrid (0,58 g, 5,8 mmol) in THF (12 ml) hinzugefügt. Die Reaktion färbte sich dunkel violett und wurde bei Raumtemperatur für 3 h gerührt. Die dunkel violette Reaktionsmischung wurde mit 1 N HCl (25 ml) sauer gemacht und zweimal mit Ethylacetat (50 ml) extrahiert. Die organischen Extrakte wurden über MgSO₄ getrocknet, filtriert und konzentriert, wodurch ein orangefarbener Feststoff geliefert wurde. Der orangefarbene Feststoff wurde in Ether gelöst und auf Kieselsäuregel mit einem Konzentrationsgradienten von 70:30 Hexan/Ether bis 0:100 Hexan/Ether chromatografiert. Die geeigneten Fraktionen wurden vereinigt und konzentriert, wodurch ein weißer Feststoff (170 mg, 0,276 mmol, 14%) geliefert wurde. TLC (Kieselsäuregel, 60:40 Ether/Hexan + 10 Tropfen HOAc, R_f = 0,35);¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz): δ 7,61 (s, 2H), 7,43 (s, 2H), 5,38 (s, 1H), 2,97 (t, J = 6,8 Hz, 2N), 2,76 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,45 (s, 8H), 1,42 (s, 16N), 1,32 (s, 18H).
Die vorliegende Erfindung schließt auch die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindung im Hemmen des Fortschreitens von Atheriosklerose in Patienten ein, die einen Bedarf daran aufweisen.
Wie hier verwendet, bedeutet der Begriff „Patient" warmblütige Tiere oder Säuger, insbesondere Menschen, welche die hier beschriebene Therapie benötigen.
Die folgenden Beispiele stellen die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindung dar. Diese Beispiele sind nur darstellend und beabsichtigen nicht, den Schutzbereich der Erfindung in irgendeiner Weise zu beschränken.
Beispiel 2
LIPID SCREEN & IC₅₀ BESTIMMUNGSPROTOKOLL
Herstellung von HEPG2:
Mit HEPG2 Zellen wurde in 10 ml MEM, 10% FBS, 1 mM Natriumpyruvat begonnen. Die Zellen wurden in einem Gewebekulturinkubator inkubiert. Die Zellen wurden in einer 4X96-Vertiefungsplatte in MEM, 10% FBS, 1 mM Natriumpyruvat gesplittet und bis ungefähr 50% Konfluenz wachsen gelassen und dann entfernt.
Tag 1 Behandlung:
Die Zellen wurden mit der erwünschten Konzentration der Verbindung in 100 μl DMEM, 1% RSA für 24 Stunden behandelt. Die Verbindung wird in DMSO gelöst. Für die IC₅₀ betrug der Konzentrationsbereich 10 μM – 40 μM, wobei jede Konzentration dreifach durchgeführt wurde.
Am selben Tag wird eine 4X96-Vertiefungsplatte NunclmmunoSorb mit 100 μl monoclonalem Maus anti-human ApoB 1D1 (1:1000 Verdünnung in 1XPBS, pH 7,4) beschichtet. Die Beschichtung wird über Nacht durchgeführt.
Tag 2 ApoB ELISA:
Die beschichtete Platte wird 3 Mal mit 1XPBS, pH 7,4, –0,05% Tween 20 gewaschen. 100 μl der Standards werden zu den ausgewählten Vertiefungen hinzugefügt. ApoB Standards werden mit 6,25, 3,12, 1,56, 0,78 und 0,39 ng hergestellt, und jede Konzentration wird dreifach durchgeführt.
Für die Proben:
90 μl von 1XPBS, pH 7,4, –0,05% Tween 20 wird zu jeder Vertiefung entsprechend der Probe hinzugefügt. 10 μl Medium werden von den behandelten HEPG2 Platten zur ApoB ELISA Platte übertragen. Die Platte wird bei Raumtemperatur für 2 Stunden mit sanftem Schütteln inkubiert.
3× Waschen der beschichteten Platte mit 1XPBS, pH 7,4, –0,05% Tween 20. Hinzufügen von 100 μl polyklonalem Schaf anti-human ApoB (1:2000 Verdünnung in 1XPBS, pH 7,4, –0,05% Tween 20) von Boehringer Mannheim. Inkubieren bei Raumtemperatur für 1 Stunde mit sanftem Schütteln.
3× Waschen der beschichteten Platte mit 1XPBS, pH 7,4, –0,05% Tween 20. Hinzufügen von 100 μl Kaninchen anti-Schaf IgG (1:2000 Verdünnung in 1XPBS, pH 7,4, –0,05% Tween 20). Inkubieren bei Raumtemperatur für 1 Stunde mit sanftem Schütteln. 3× Waschen der beschichteten Platte mit 1XPBS, pH 7,4, –0,05% Tween 20. Hinzufügen von 100 μl Substrat (10 ml destilliertes Wasser, 100 μl TMB (10 mg/ml) und 1 μl Wasserstoffperoxid). Auftreten von Farbe und Stoppen der Reaktion mit 25 μl 8N Schwefelsäure. Die Vertiefungen werden mit einem Mikroplattenlesegerät @ 450 nM ausgelesen. Graphische Anhäufung von ApoB im Medium als ein Prozentsatz der Kontrolle für jede Probe und deren Konzentration. Eine Bestimmung der IC₅₀ wird aus der Grafik erhalten.
Beispiel 3
VCAM-1 Test
Splitten der Zellen:
Zwei bis vier konfluente P150 Platten werden mit Trypsin behandelt, und die Zellen werden in ein konisches 50 ml Zentrifugenröhrchen übertragen. Die Zellen werden pelletiert, resuspendiert und unter Verwendung des Trypanblau Ausschlussverfahrens gezählt.
Die Zellen werden bei bzw. auf eine/r Konzentration von 36.000 Zellen/ml resuspendiert, und 1 ml wird pro Vertiefung aliquotiert.
Die Zellen werden in 24 Vertiefungsgewebekulturplatten aufgeteilt. Die Zellen in jeder Vertiefung sollten am folgenden Tag zu ungefähr 90–95% konfluent sein. Die Zellen sollten nicht älter als 8 Passagen sein.
Herstellung von Verbindungen:
Wasserlösliche Verbindung
Die Verbindung wird anfangs bei 50 μM und 10 μM gescreent. Eine 50 mM Stammlösung wird in Kulturmedium für die Verbindung hergestellt. Die Stammlösung wird auf 5 mM und 1 mM verdünnt. Wenn 10 μl der 5 mM Lösung zu der Vertiefung hinzugefügt werden (1 ml Medium/Vertiefung), wird die Endkonzentration 50 μM betragen. Ein Hinzufügen von 10 μl der 1 mM Lösung zu der Vertiefung wird eine Endkonzentration von 10 μM ergeben.
Wasserunlösliche Verbindung
Die Verbindung, die in Kulturmedium nicht in Lösung gehen wird, wird in DMSO auf eine Konzentration von 25 mM resuspendiert. Die Stammlösung wird anschließend in Kulturmedium auf die Endkonzentration verdünnt. Das alte Medium wird aspiriert, und 1 ml des neuen Mediums mit der Verbindung wird hinzugefügt. Wenn zum Beispiel die Endkonzentration 50 μM beträgt, werden die 2 μl der 25 mM Stammlösung pro ml Kulturmedium hinzugefügt. Die 50 mM Lösung wird für geringere Konzentrationen verdünnt.
Hinzufügen der Verbindung
Die Verbindung wird zu der Platte hinzugefügt (jede Verbindung wird zweifach durchgeführt). Eine Platte wird für eine VCAM Expression verwendet, und eine Platte wird für eine ICAM Expression verwendet.
Unmittelbar nachdem die Verbindung hinzugefügt ist, wird zu jeder Vertiefung TNF hinzugefügt. 100 Einheiten/ml TNF werden gewöhnlich zu jeder Vertiefung hinzugefügt. Da jede Charge von TNF in der Anzahl von Einheiten variiert, wird jede neue Charge titriert, um die optimale Konzentration zu bestimmen. Deshalb wird sich diese Konzentration ändern. Wenn 100 Einheiten/ml verwendet werden, wird das TNF auf 10 Einheiten/μl verdünnt, und 10 μl werden zu jeder Vertiefung hinzugefügt.
Die Platten werden bei 37°C, 5% CO₂ über Nacht inkubiert (ungefähr 16 Stunden). Am nächsten Tag werden die Platten unter dem Mikroskop kontrolliert, um zu sehen, ob irgendwelche sichtbaren Anzeichen von Toxizität vorhanden sind. Von jedem Zelltod, Ablagerungen bzw. Trümmern oder morphologischen Veränderungen sowie unlöslichen Verbindungen (partikulär oder Trübung) werden Aufnahmen erstellt.
Beispiel 4
ELISA Test
Um MCP-1 zu beurteilen, wird das Medium (500 μl) zurück behalten und bei –70°C eingefroren. Einmaliges Waschen der Zellen mit ungefähr 1 ml/Vertiefung mit Hanks Balance Salt Solution (HBSS) oder PBS. Behutsames Ausleeren der Waschlöschung und anschließendes Tippen der Platte auf Papiertücher. Hinzufügen von entweder 250 μl/Vertiefung von HBSS + 5% FCCS zu den leeren (keine primären Antikörper) Vertiefungen oder 250 μl/Vertiefung von primärem Antikörper, der in HBSS + 5% FCS verdünnt ist. Inkubieren für 30 Minuten bei 37°C. Zweimaliges Waschen der Vertiefungen mit 0,5 ml/Vertiefung HBSS oder PBS, und behutsames Tippen der Platten auf Papiertücher nach dem letzten Waschen. Hinzufügen von 250 μl/Vertiefung von HRP-konjugiertem sekundärem Antikörper, der in HBSS + 5% FCS verdünnt ist, zu jeder Vertiefung einschließlich der leeren Vertiefungen (kein primärer Antikörper). Inkubieren für 30 Minuten bei 37°C. Viermaliges Waschen der Vertiefungen mit 0,5 ml/Vertiefung von HBSS oder PBS, und behutsames Tippen der Platten auf Papiertücher nach dem letzten Waschen. Hinzufügen von 250 μl/Vertiefung von Substratlösung. Inkubieren bei Raumtemperatur in der Dunkelheit bis sich eine angemessene Farbentwicklung (blau) ergibt. Vermerken der Zeitdauer, für welche die Inkubation durchgeführt wurde (typischerweise 15–30 Minuten). Hinzufügen von 75 μl/Vertiefung einer Stopplösung (8N Schwefelsäure) und Auslesen bei A450 nm.
Antikörper und Lösungen

1. Die Substratlösung wird ummittelbar vor der Verwendung hergestellt und enthält: Wasser 10 ml 30% Wasserstoffperoxid 1 μl TMB (3,3',5,5'-Tetramethylbenzidin) 100 μl TMB Stammlösung: Zu 10 mg TMB wird 1 ml Aceton hinzugefügt. Bei 4°C Licht geschützt aufbewahren.
2. VCAM-1 Ak: Stammlösung 0,1 μg/μl Endkonzentration 0,25 μg/ml Mischen von 25 μl Stammlösung VCAM-1 (Southern Biotechnology) und 10 μl HBSS + 5% FCS.
3. ICAM-1 Ak: Stammlösung 0,1 μg/μl Endkonzentration 0,25 μg/ml Mischen von 25 μl Stammlösung ICAM-1 (Southern Biotechnology) und 10 ml HBSS + 5% FCS.
4. Sekundärer Ak: HRP-konjugiertes Ziegen anti-Maus IgG, das auf 1:500 verdünnt ist Mischen von 20 μl Stammlösung (Southern Biotechnology) und 10 μl HBSS + 5% FCS.

Der Grad der Hemmung der erfindungsgemäßen Verbindung wurde durch die in den Beispielen 2 – 4 beschriebenen Tests bestimmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 bereitgestellt.
TABELLE 1
Pharmazeutische Zusammensetzungen
Säuger, insbesondere Menschen, die an irgendeinem der oben beschriebenen Zustände leiden, können durch die topische, systemische oder transdermale Verabreichung einer Zusammensetzung behandelt werden, die eine wirksame Menge der erfindungsgemäßen Verbindung oder eines pharmazeutisch verträglichen Salz davon, gegebenenfalls in einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittels umfasst.
Die Zusammensetzung wird subkutan, intravenös, intraperitoneal, intramuskulär, parenteral, oral, submukös, durch Inhalation, transdermal über ein Pflaster, das langsam freisetzt, oder topisch in einem wirksamen Dosierungsbereich verabreicht, um den Zielzustand zu behandeln. Eine wirksame Dosis kann leicht durch die Verwendung herkömmlicher Techniken und durch Betrachten von Ergebnis sen bestimmt werden, die unter analogen Verhältnissen erhalten werden. Beim Bestimmen der wirksamen Dosis werden eine Anzahl von Faktoren in Betracht gezogen, die einschließen, aber nicht bechränkt sind auf: die Art des Patienten; seine Größe, sein Alter und seine allgemeine Gesundheit; die spezifische beteiligte Erkrankung; der Grad der Beteiligung oder die Schwere der Erkrankung; die Antwort des einzelnen Patienten; die besondere verabreichte Verbindung; die Weise der Verabreichung; die Bioverfügbarkeitseigenschaften des verabreichten Präparates; der ausgewählte Dosisbehandlungsplan; und die Verwendung von begleitender medikamentöser Behandlung. Typische systemische Dosierungen für die gesamten hier beschriebenen Zustände sind jene, die von 0,1 mg/kg bis 500 mg/kg Körpergewicht pro Tag als eine einzige tägliche Dosis oder aufgeteilte tägliche Dosen reichen. Bevorzugte Dosierungen für die beschriebenen Zustände reichen von 5–1500 mg pro Tag. Eine weiter besonders bevorzugte Dosierung für die erwünschten Zustände reicht von 25–750 mg/Tag. Typische Dosierungen für eine topische Anwendung sind jene, die von 0,001–100 Gewichts-% der aktiven Verbindung reichen.
Die Verbindung wird für einen ausreichenden Zeitraum verabreicht, um die unerwünschten Symptome und die klinischen Anzeichen zu mindern, die mit dem Zustand, der behandelt werden soll, assoziiert sind.
Die aktive Verbindung wird in einer Menge in den pharmazeutisch verträglichen Träger oder das pharmazeutisch verträgliche Verdünnungsmittel eingeschlossen, die ausreicht, um einem Patienten eine therapeutische Menge einer Verbindung in vivo in der Abwesenheit ernster toxischer Wirkungen zu verabreichen.
Die Konzentration einer aktiven Verbindung in der Arzneimittelzusammensetzung wird von Absorption, Inaktivierung und Ausscheidungsgeschwindigkeiten des Arzneimittels sowie anderen Faktoren abhängen, die dem Fachmann bekannt sind. Es sollte angemerkt werden, dass Dosierungswerte auch mit der Schwere des Zustands variieren werden, der gelindert werden soll. Es sollte ferner verstanden werden, dass für jeden besonderen Proband spezifische Dosierungsbehandlungspläne über die Zeit entsprechend dem individuellen Bedürfnis und der professionellen Beurteilung der Person eingestellt werden, die verabreicht oder die Verabreichung der Zusammensetzung überwacht, und dass die Dosierungsbereiche, die hier dargelegt sind, nur beispielhaft sind und nicht beabsichtigen, den Schutzbereich oder die Anwendung der beanspruchten Zusammensetzung zu beschränken. Der aktive Bestandteil kann auf einmal verabreicht werden oder kann in eine Anzahl kleinerer Dosen aufgeteilt werden, die in variierenden Zeitintervallen verabreicht werden sollen.
Eine bevorzugte Weise der Verabreichung der aktiven Verbindung zur systemischen Verabreichung ist oral. Orale Zusammensetzungen werden im Allgemeinen ein inertes Verdünnungsmittel oder einen essbaren Träger einschließen. Sie können in Gelatinekapseln eingeschlossen oder in Tabletten verpresst sein. Zum Zweck der oralen therapeutischen Verabreichung kann der aktive Bestandteil mit Arzneimittelträgersubstanzen aufgenommen werden und in der Form von Tabletten, Pastillen oder Kapseln verwendet werden. Pharmazeutisch verträgliche Bindemittel und/oder Zusatzmaterialien können als Teil der Zusammensetzung eingeschlossen sein.
Die Tabletten, Pillen, Kapseln, Pastillen oder dergleichen können irgendeinen der folgenden Bestandteile oder Verbindungen ähnlicher Natur enthalten: ein Bindemittel, wie mikrokristalline Zellulose, Tragantgummi oder Gelatine; eine Arzneimittelträgersubstanz, wie Stärke oder Laktose, ein sich auflösendes Mittel, wie Alginsäure, Primogel oder Maisstärke; ein Schmiermittel, wie Magnesiumstearat oder Sterote; ein Gleitmittel, wie kolloidales Kieselsäuredioxid; einen Süßstoff, wie Sucrose oder Saccharin; oder ein Geschmacksmittel, wie Pfefferminze, Methylsalicylat oder Orangengeschmacksstoff.
Wenn die Dosierungseinheitsform eine Kapsel ist, kann sie zusätzlich zu Material des obigen Typs einen flüssigen Träger enthalten, wie ein fetthaltiges Öl. Zusätz lich können Dosierungseinheitsformen verschiedene andere Materialien enthalten, welche die physikalische Form der Dosierungseinheit modifizieren, zum Beispiel Beschichtungen aus Zucker, Schellack oder anderen magensaftresistenten Mitteln.
Die Verbindung oder ihre Salze kann/können als eine Verbindung eines Elixiers, einer Suspension, eines Sirups, einer Waffel bzw. Oblate, eines Kaugummis oder dergleichen verabreicht werden. Ein Sirup kann zusätzlich zu den aktiven Verbindungen Sucrose als einen Süßstoff und bestimmte Konservierungsstoffe, Färbemittel und Farbstoffe und Geschmacksstoffe enthalten.
Die Verbindung kann auch mit anderen aktiven Materialien gemischt werden, welche die erwünschte Wirkung nicht vermindern, oder mit Materialien, welche die erwünschte Wirkung ergänzen. Die aktiven Verbindungen können zusammen mit anderen medikamentösen Behandlungen verabreicht werden, die in der Behandlung von kardiovaskulärer Erkrankung verwendet werden, die Lipid-senkende Mittel, wie Probucol und Nicotinsäure; Thrombozytenaggregationshemmstoffe, wie Aspirin; Antithrombosemittel, wie Coumadin; Kalizumkanalblocker, wie Varapamil, Diltiazem und Nifedipin; Angiotensin-Converting-Enzym (ACE)-Hemmstoffe, wie Captopril und Enalopril, und β-Blocker, wie Propanalol, Terbutalol und Labetalol, einschließen. Die Verbindung kann auch in Kombination mit nicht steroidalen Antientzündungsmitteln, wie Ibuprofen, Indomethacin, Fenoprofen, Mefenaminsäure, Flufenaminsäure, Sulindac verabreicht werden. Die Verbindung kann auch mit Corticosteroiden verabreicht werden.
Lösungen oder Suspensionen, die zur parenteralen, intradermalen, subkutanen oder topischen Anwendung verwendet werden, können die folgenden Bestandteile einschließen: ein steriles Verdünnungsmittel, wie Wasser zur Injektion, Salzlösung, fixierte Öle, Polyethylenglycole, Glycerin, Propylenglycol oder andere synthetische Lösungsmittel; antibakterielle Mittel, wie Benzylalkohol oder Methylparabene; Antioxidationsmittel, wie Ascorbinsäure oder Natriumbisulfit; Chelat bilden de Mittel, wie Ethylendiamintetraessigsäure; Puffer, wie Acetate, Citrate oder Phosphate, und Mittel zum Einstellen von Tonizität, wie Natriumchlorid oder Dextrose. Der pH-Wert kann mit Säuren oder Basen, wie Salzsäure oder Natriumhydroxid, eingestellt werden. Das parenterale Präparat kann in Ampullen, Einwegspritzen oder Mehrfachdosisfläschchen eingeschlossen sein, die aus Glas oder Plastik hergestellt sind.
Wenn intravenös verabreicht wird, sind physiologische Salzlösung, bakteriostatisches Wasser, Cremophor EL^TM (BASF, Parsippany, NJ) oder phosphatgepufferte Salzlösung (PBS) bevorzugte Träger.
In einer bevorzugten Ausführungsform wird die aktive Verbindung mit Trägern hergestellt, welche die Verbindung gegen schnelle Ausscheidung aus dem Körper schützen wird, wie eine kontrollierte Freisetzungszubereitung, die Implantate und mikroverkapselte Verabreichungssysteme einschließt. Biologisch abbaubare und biologisch verträgliche Polymere, wie Ethylenvinylacetat, Polyanhydride, Polyglycolsäure, Kollagen, Polyorthoester und Polymilchsäure, können verwendet werden. Verfahren zur Herstellung solcher Zubereitungen werden dem Fachmann offensichtlich sein. Die Materialien können auch kommerziell von Alza Corporation und Nova Pharmaceuticals, Inc. erhalten werden. Liposomale Suspensionen (einschließlich Liposome, die auf infizierte Zellen abgezielt sind, mit monoklonalen Antikörpern gegen virale Antigene) sind auch als pharmazeutisch verträgliche Träger bevorzugt. Diese können entsprechend Verfahren hergestellt werden, die dem Fachmann bekannt sind, wie zum Beispiel im U.S. Patent Nr. 4,522,811 beschrieben. Zum Beispiel können Liposomenzubereitungen durch Lösen von geeignetem/en Lipid/en (wie Stearoylphosphatidylethanolamin, Stearoylphosphatidylcholin, Arachadoylphosphatidylcholin und Cholesterin) in einem anorganischen Lösungsmittel hergestellt werden, das anschließend verdunstet, wobei ein dünnerer Film aus getrocknetem Lipid auf der Oberfläche des Gefäßes zurückbleibt. Eine wässrige Lösung der Verbindung wird anschließend in das Gefäß eingeführt. Das Gefäß wird anschließend von Hand geschüttelt, um Lipidmaterial von den Seiten des Gefäßes zu lösen und Lipidaggregate zu verteilen, wodurch sich die liposomale Suspension bildet.
Geeignete Trägermittel oder Träger für topische Anwendung können durch herkömmliche Techniken hergestellt werden, wie Lotionen, Suspensionen, Salben, Cremes, Gele, Tinkturen, Sprays, Pulver, Pasten, transdermale Pflaster, die langsam freisetzen, Zäpfchen zur Anwendung an rektaler, vaginaler, nasaler oder oraler Schleimhaut. Zusätzlich zu den anderen oben angeführten Materialien für systemische Verabreichung können Verdickungsmittel, Weichmacher und Stabilisatoren verwendet werden, um topische Zusammensetzungen herzustellen. Beispiele von Verdickungsmitteln schließen Rohvaseline, Bienenwachs, Xanthangummi oder Polyethylen, Befeuchtungsmittel, wie Sorbitol, Weichmacher, wie Mineralöl, Lanolin und seine Derivate, oder Squalen ein.
Modifikationen und Variationen der vorliegenden Erfindung die Verbindungen betreffen, welche die Unterdrückung von VCAM-1 hemmen, und Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen, die durch die Expression von VCAM-1 vermittelt werden, werden dem Fachmann aus der vorangegangenen detaillierten Beschreibung der Erfindung offensichtlich werden. Solche Modifikationen und Variationen beabsichtigen, in den Schutzbereich der angehängten Ansprüche eingeschlossen zu werden.

Claims

Verbindung der Formel:
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon.
Pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung einer durch die Expression von VCAM-1 vermittelten Störung, umfassend eine wirksame Menge einer Verbindung der Formel:
oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon, und einen pharmazeutisch verträglichen Träger.
Verwendung einer Verbindung der Formel:
oder eines pharmazeutisch verträglichen Salzes davon, gegebenenfalls in einem pharmazeutisch verträglichen Träger, in der Herstellung eines Medikaments zur Behandlung einer Störung, ausgewählt aus einer kardiovaskulären Störung oder einer entzündlichen Erkrankung.
Verwendung nach Anspruch 3, wobei die Störung eine kardiovaskuläre Störung ist.
Verwendung nach Anspruch 4, wobei die kardiovaskuläre Störung aus der Gruppe, bestehend aus Atheriosklerose, post-angioplastischer Restenose, Koronararterienerkrankung, Angina und der Erkrankung kleiner Arterien ausgewählt ist.
Verwendung nach Anspruch 3, wobei die Störung eine entzündliche Erkrankung ist.
Verwendung nach Anspruch 6, wobei die entzündliche Störung aus der Gruppe, bestehend aus rheumatoider Arthritis, Osteoarthrose, Asthma, Dermatitis, multipler Sklerose und Psoriasis ausgewählt ist.
Verbindung nach Anspruch 1 in Kombination mit einem anderen kardiovaskulären Arzneimittel, welches aus der Gruppe, bestehend aus Lipid-senkenden Mitteln, Thrombozytenaggregationshemmstoffen, Antithrombosemitteln, Kalziumkanalblockern, Angiotensin-Converting-Enzym (ACE)-Hemmstoffen und β-Blockern, ausgewählt ist, zur Verwendung in der Therapie.
Verbindung nach Anspruch 1 in Kombination mit einem weiteren antientzündlichen Arzneimittel zur Verwendung in der Therapie.