PT1464639E

PT1464639E - Éster do ácido succiníco do probucol, para a inibição da expressão da vcam-1

Info

Publication number: PT1464639E
Application number: PT04075141T
Authority: PT
Inventors: Patricia K Somers
Original assignee: Atherogenics Inc
Priority date: 1997-05-14
Filing date: 1998-05-14
Publication date: 2007-06-15
Also published as: ID23877A; IL132797A0; DE69829966D1; CN1275596C; HU226611B1; EA199901026A1; US20020169215A1; NO20032254L; NO316221B1; US20020193446A1; EA200601059A1; US6121319A; EA199901027A1; KR20080066885A; SK153199A3; CN1496739A; NO20032254D0; DK1464639T3; US20080214660A1; HUP0004592A2

Description

DESCRIÇÃO

"ÉSTER DO ÁCIDO SUCCINÍCO DO PROBUCOL, PARA A INIBIÇÃO DA EXPRESSÃO DA VCAM-1"

Esta invenção situa-se na área dos métodos e composições para a inibição da expressão da VCAM-1 e, em particular, para o tratamento de doenças mediadas pela VCAM-1, incluindo doenças cardiovasculares e inflamatórias.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO A doença cardíaca coronária (CHD) permanece a principal causa de morte nos países industrializados. A causa mais importante de CHD é a aterosclerose, uma doença caracterizada pela deposição de lípidos na parede dos vasos arteriais, resultando num estreitamento das passagens dos vasos e, em última análise, no endurecimento do sistema vascular. A aterosclerose, como manifestada na sua principal complicação clínica, doença isquémica do coração, continua a ser uma das principais causas de morte nos países industrializados. Presentemente, é bem aceite que a aterosclerose se pode iniciar com danos localizados do endotélio arterial, seguidos pela proliferação de células do músculo liso arterial, da camada média até à camada íntima, juntamente com a deposição de lípidos e acumulação de células espumosas na lesão. À medida que a placa aterosclerótica se desenvolve, esta, progressivamente, bloqueia, 1 cada vez mais, o vaso sanguíneo afectado e pode, eventualmente, levar à isquemia ou enfarte. Consequentemente, é desejável proporcionar métodos de inibição da progressão da aterosclerose em doentes que necessitem desta. A doença cardiovascular foi associada a vários factores causadores, os quais incluem hipercolesterolemia, hiperlipidemia e expressão da VCAM-1 em células endoteliais vasculares.

Expressão da VCAM-1 A adesão de leucócitos ao endotélio representa um evento inicial, fundamental, numa ampla gama de estados inflamatórios, incluindo aterosclerose, distúrbios autoimunitários e infecções bacterianas e virais. 0 recrutamento de leucócitos para o endotélio é iniciado quando os receptores moleculares de adesão induzíveis, da superfície das células endoteliais, interagem com contra-receptores nas células imunitárias. As células endoteliais vasculares determinam qual o tipo de leucócitos (monócitos, linfócitos ou neutrófilos) que é recrutado, pela expressão selectiva de moléculas de adesão específicas, tais como a molécula de adesão celular vascular 1 (VCAM-1), a molécula de adesão intracelular 1 (ICAM-1) e a E-selectina. Na etapa mais inicial da lesão aterosclerótica, verifica-se uma expressão endotelial localizada da VCAM-1 e o recrutamento selectivo de leucócitos mononucleares que expressam o contra-receptor VLA-4 da integrina. Devido à expressão selectiva do VLA-4 em monócitos e linfócitos, mas não em neutrófilos, a VCAM-1 é importante na mediação da adesão selectiva de leucócitos mononucleares. A conversão subsequente de leucócitos em macrófagos espumosos, resulta na síntese de uma ampla gama de 2 citocinas inflamatórias, factores de crescimento e quimioatractores que auxiliam a propagação do recrutamento de leucócitos e de plaquetas, proliferação de células do músculo liso, a activação das células endoteliais e sintese da matriz extracelular caracteristica da placa aterosclerótica em maturação. A VCAM-1 é um mediador em distúrbios inflamatórios crónicos, tais como, asma, artrite reumatóide e diabetes autoimunitária. Por exemplo, é conhecido que a expressão da VCAM-1 e da ICAM-1 se encontra aumentada em asmáticos. Pilewski, J. M., et al. Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 12, 1-3 (1995);

Ohkawara, Y., et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 12, 4-12 (1995). Adicionalmente, o bloqueio dos receptores integrina para VCAM-1 e ICAM-1 (respectivamente, VLA-4 e LFA-1) suprimiu, tanto as respostas da fase precoce como da tardia, num modelo de rato sensibilizado à ovalbumina, de resposta alérgica das vias respiratórias. Rabb, 11. A., et al., Am. J. Respir. Care Med. 149, 1186-1191 (1994). Verifica-se, também, a expressão aumentada de moléculas de adesão endoteliais, incluindo VCAM-1, na microvasculatura do sinóvio reumatóide. Koch, A. E. et al., Lab. Invest. 64, 313-322 (1991); Morales-Ducret, J. et al.,

Immunol. 149, 1421-1431 (1992). Os anticorpos neutralizantes dirigidos contra a VCAM-1 ou o seu contra receptor, VLA-4, podem atrasar o estabelecimento da diabetes num modelo de murganho (murganhos NOD), os quais desenvolvem espontaneamente a doença. Yang, X. D. et al., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 90, 10494-10498 (1993); Burkly, L. C. et al., Diabetes 43, 523-534 (1994); Baron, J. L et al., J. Clin. Invest. 93, 1700-1708 (1994) . Os anticorpos monoclonais contra a VCAM-1 podem também ter um efeito benéfico em modelos animais da rejeição de aloenxertos, sugerindo que os inibidores da expressão da VCAM-1 3 possam ter utilidade na prevenção de rejeição de transplantes. Oroez, C.G. et al., Immunol. Lett. 32, 7-12 (1992). A VCAM-1 é expressa por células, tanto sob uma forma ligada à membrana, como sob uma forma solúvel. A forma solúvel da VCAM-1 demonstrou induzir a quimiotaxia de células endoteliais vasculares in vitro e estimular uma resposta angiogénica na córnea de rato. Koch, A. F. et al., Nature 376, 517-519 (1995). Os inibidores da expressão da VCAM-1 solúvel têm um valor terapêutico potencial, no tratamento de doenças com uma forte componente angiogénica, incluindo crescimento tumoral e metástase. Folkman, J. e Shing, Y., Biol. Chem. 10931-10934 (1992) . A VCAM-1 é expressa em células endoteliais vasculares humanas, cultivadas após activação por lipopolissacáridos (LPS) e citocinas, tais como, interleucina 1 (IL-1) e factor de necrose tumoral (TNF-α). Estes factores não são selectivos para a activação da expressão de moléculas de adesão celular. A Patente U.S. N° 5380747 de Medford, et al., mostra a utilização de ditiocarbamatos, tais como, ditiocarbamato de pirrolidina, para o tratamento de doenças cardiovasculares e outras doenças inflamatórias. A Patente U.S. N° 5750351 de Medford, et al. e o documento WO95/30415 da de Emory Univerity, descrevem a verificação de que os ácidos gordos poli-insaturados ("PUFA") e os seus hidroperóxidos ("ox-PUFA"), os quais são componentes importantes das lipoproteinas de baixa densidade (LDL) modificadas oxidativamente, induzem a expressão da VCAM-1, mas não da molécula de adesão intracelular 1 (ICAM-1) ou da E-selectina em 4 células endoteliais aórticas humanas, através um mecanismo que não é mediado por citocinas ou por outros sinais não-citocina. Isto constitui uma verificação fundamental de uma via biológica importante e anteriormente desconhecida, em respostas imunitárias mediadas pela VCAM-l.

Como exemplos não-limitantes, o ácido linoleico, o ácido linolénico, o ácido araquidónico, o hidroperóxido de linoleilo (13-HPODE) e o hidroperóxido araquidónico (15-HPETE), induzem a expressão génica à superfície celular da VCAM-l mas não da ICAM-1 ou da E-selectina. Os ácidos gordos saturados (tal como o ácido esteárico) e os ácidos gordos monoinsaturados (tal como o ácido oleico) não induzem a expressão da VCAM-l, ICAM-1 ou E-selectina. A indução da VCAM-l por PUFA e seus hidroperóxidos de ácidos gordos é suprimida por ditiocarbamatos, incluindo ditiocarbamato de pirrolidina (PDTC). Isto indica que a indução é mediada por uma molécula sinal oxidada e que a indução é evitada quando a oxidação da molécula é bloqueada (i. e., não ocorre oxidação), revertida (i. e., a molécula sinal é reduzida) ou quando o sinal redox modificado é, de qualquer outra forma, impedido de interagir com o seu alvo regulador.

As células que se encontram cronicamente expostas a níveis superiores aos normais de ácidos gordos poli-insaturados ou dos seus equivalentes oxidados, podem iniciar uma resposta imunitária que não é normal e que é desproporcionada em relação à ameaça presente, levando a um estado de doença. A sobre-sensibilização de células endoteliais vasculares a PUFA e ox-PUFA pode acelerar a formação, por exemplo, da placa aterosclerótica. 5

Com base nestas verificações, foi descrito no documento WO95/30415, um método de tratamento da aterosclerose, restenose pós-angioplastia, doenças da artéria coronária, angina, doença das artérias periféricas e outras doenças cardiovasculares, assim como as doenças inflamatórias não-cardiovasculares que são mediadas pela VCAM-1, que inclui a remoção, redução da concentração ou a prevenção da formação de ácidos gordos poli-insaturados oxidados, incluindo mas não limitados aos ácidos linoleico oxidado (Ci8A9'12) , linolénico (Οι8Δ6,9'12), araquidónico (02οΔ5'8'η'14) e eicosatrienóico (02οΔ8'η'14) .

Os exemplos não-limitantes de doenças inflamatórias não-cardiovasculares que são mediadas pela VCAM-1, incluem artrite reumatóide e osteoartrite, asma, dermatite e esclerose múltipla.

Hipercolesterolemia e hiperlipidemia A hipercolesterolemia é um factor de risco importante associado com a doença cardiovascular. As lipoproteínas do soro são os veículos para os lipidos na circulação. As lipoproteínas são classificadas de acordo com a sua densidade: quilomícrons, lipoproteínas de muito baixa densidade (VLDL), lipoproteínas de baixa densidade (LDL) e lipoproteínas de elevada densidade (HDL). As quilomícrons participam, principalmente, no transporte de triglicéridos e colesterol alimentares, do intestino para o tecido adiposo e fígado. As VLDL distribuem triglicéridos sintetizados endogenamente, do fígado para tecidos adiposos e outros tecidos. As LDL transportam o colesterol para tecidos periféricos e regulam os níveis de colesterol endógenos nesses 6 tecidos. As HDL transportam o colesterol dos tecidos periféricos para o fígado. 0 colesterol das paredes arteriais é derivado quase exclusivamente das LDL. Brown e Goldstein, Ann. Rev. Biochem. 52, 223 (1983); Miller, Ann. Rev. Med. 31, 97 (1980). 0 desenvolvimento da aterosclerose é raro, em doentes com níveis baixos de LDL.

Steinberg, et al., (N. Eng. J. Med. 1989; 320:915-924) colocaram a hipótese de que a modificação das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) em LDL modificadas oxidativamente (ox-LDL), por espécies de oxigénio reactivas, é o evento central que inicia e propaga a aterosclerose. A LDL oxidada é uma estrutura complexa consistindo em, pelo menos, vários materiais oxidados quimicamente distintos, cada um dos quais, isoladamente ou em combinação, pode modular a expressão do gene da molécula de adesão, activada por citocinas. Os hidroperóxidos R de ácidos gordos, tais como hidroperóxido de linoleílo (13-HPODE) são produzidos por lipoxigenases, a partir de ácidos gordos livres e são um componente importante das LDL oxidadas.

Foi proposto que é formada uma geração de lípidos oxidados pela acção do sistema lipoxigenase da célula e que os lípidos oxidados são, subsequentemente, transferidos para LDL. Posteriormente, ocorre uma reacção de propagação dentro da LDL no meio, catalisada por metais de transição e/ou compostos de sulfidrilo. Investigações anteriores demonstraram que a modificação dos ácidos gordos de células endoteliais cultivadas pode alterar a sua susceptibilidade aos danos oxidantes, enquanto que a suplementação com ácidos gordos poli-insaturados (PUFA) intensifica a susceptibilidade aos danos oxidantes. A suplementação de células endoteliais cultivadas com ácidos gordos saturados ou mono-insaturados reduz a sua 7 danos oxidantes, que a (PUFA) susceptibilidade aos danos oxidantes, enquanto suplementação com ácidos gordos poli-insaturados intensifica a susceptibilidade aos danos oxidantes.

Utilizando a análise de HPLC de fase reversa de extractos líquidos nativos e saponifiçados de LDL, foi demonstrado que o 13-HPODE é o ácido gordo oxidado predominante em LDL oxidadas por monócitos humanos activados. A exposição crónica a LDL oxidadas proporciona um sinal oxidativo às células endoteliais vasculares, possível através um hidroperóxido de ácidos gordos específico que aumenta selectivamente a expressão do gene da VCAM-1 induzida por citocina.

Através de um mecanismo que não está bem definido, as áreas da parede dos vasos predispostas a aterosclerose sequestram, de um modo preferido, a LDL circulante. Através de uma via pouco compreendida, as células endoteliais, do músculo liso e/ou inflamatórias convertem então, LDL em οχ-LDL. Ao contrário das LDL, as quais são incorporadas através do receptor das LDL, os monócitos incorporam intensamente as οχ-LDL através de um receptor "depurador" cuja expressão, ao contrário do receptor das LDL, não é inibida à medida que o conteúdo dos lípidos intracelulares aumenta. Deste modo, os monócitos continuam a incorporar as οχ-LDL e a tornarem-se células espumosas de macrófagos intumescidas com lípidos que formam a faixa adiposa.

Existe presentemente, um conjunto significativo de indícios demonstrando que a hipercolesterolemia é um factor de risco importante associado com a doença cardíaca. Por exemplo, em Dezembro de 1984, o National Institute of Health Consensus Development Conference Panei concluiu que fazer baixar definitivamente, os níveis elevados de colesterol no sangue (especificamente, os níveis de colesterol da lipoproteína de baixa densidade no sangue) irá reduzir o risco de ataque cardíaco devido à doença cardíaca coronária.

Tipicamente, o colesterol é transportado no sangue dos animais de sangue quente em determinados complexos lípido-proteína, tais como, quilomícrons, lipoproteína de muito baixa densidade (VLDL), lipoproteína de baixa densidade (LDL) e lipoproteína de elevada densidade (HDL). É amplamente aceite que as LDL actuam de uma forma que resulta directamente, na deposição de colesterol LDL na parede dos vasos sanguíneos e que as HDL actuam de uma forma que resulta na captura do colesterol, pelas HDL, a partir da parede dos vasos e o seu transporte para o fígado, onde este é metabolizado [Brown e Goldstein, Ann. Rev. Biochem. 52, 223 (1983); Miller, Ann. Rev. Med. 31, 97 (1980)]. Por exemplo, em vários estudos epidemiológicos, os níveis de colesterol LDL correlacionam-se significativamente com o risco de doença cardíaca coronária, enquanto que os níveis de colesterol HDL se encontram inversamente associados com a doença cardíaca coronária [Patton et al., Clin. Chem. 29, 1980 (1983)]. É, geralmente, aceite pelos especialistas na técnica que a redução de níveis de colesterol LDL anormalmente altos é uma terapia eficaz, não apenas no tratamento da hipercolesterolemia mas também no tratamento da aterosclerose.

Para além disso, existem indícios baseados em verificações em animais e em laboratório, que a peroxidação dos lípidos das LDL, tal como as porções de ácido gordo insaturado de fosfolípidos e ésteres de colesterilo de LDL, facilitam a acumulação de colesterol em monócitos/macrófagos, os quais eventualmente são transformados em células espumosas e ficam depositados no espaço sub-endotelial da parede dos vasos. A 9 acumulação de células espumosas na parede dos vasos é reconhecida como um evento inicial na formação de uma placa aterosclerótica. Deste modo, é credível que a peroxidação dos lípidos das LDL seja um pré-requisito importante para acumulação facilitada de colesterol na parede dos vasos e a formação subsequente de uma placa aterosclerótica. Foi demonstrado, por exemplo, que os monócitos/macrófagos incorporam e degradam LDL nativa em taxas relativamente baixas e sem acumulação significativa de colesterol. Pelo contrário, as LDL oxidadas são incorporadas por estes monócitos/macrófagos em taxas muito mais elevadas e com acumulação significativa de colesterol [Parthasarathy et al., J. Clin. Invest. 77, 641 (1986)]. É, consequentemente, desejável proporcionar métodos de inibição da peroxidação dos lípidos das LDL num doente que necessite destes.

Os níveis de colesterol elevados encontram-se associados com vários estados de doença, incluindo restenose, angina, aterosclerose cerebral e xantoma. É desejável proporcionar um método para reduzir o colesterol do plasma em doentes com, ou em risco de desenvolvimento de, restenose, angina, arteriosclerose cerebral, xantoma e outros estados de doença associados a níveis elevados de colesterol.

Uma vez que foi determinado que a hipercolesterolemia é devida a LDL elevadas (hiperlipidemia) , é tentada a diminuição dos níveis de LDL por terapia alimentar. Existem várias classes de fármacos que são normalmente utilizados para baixar os níveis de LDL, incluindo sequestrantes de ácido biliar, ácido nicotínico (niacina) e inibidores da redutase de 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A (HMG CoA). 0 probucol e os derivados do fibrato são por vezes utilizados como terapia adjuvante, normalmente em combinação com outras medicações. Os inibidores 10 da redutase de HMG CoA foram denominados estatinas ou vastatinas. As estatinas encontram-se entre os agentes mais eficazes para a hipercolesterolemia, actualmente no mercado e incluem pravastatina (Pravchol, Bristol Myers Squibb), atorvastatina (Warner Lambert/Pfizer), simvastatina (Zocor, Merck), lovastatina (Mevacor, Merck) e fluvastatina (Lescol) .

Os indícios sugerem que os efeitos aterogénicos das lipoproteínas de baixa densidade (LDL) possam ser parcialmente mediados através da sua modificação oxidativa. 0 probucol demonstrou possuir propriedades antioxidantes potentes e bloquear a modificação oxidativa das LDL. De um modo consistente com estas verificações, o probucol demonstrou reduzir, de facto, da progressão da aterosclerose em coelhos deficientes no receptor das LDL, como discutido em Carew et al. Proc. Natl. Acad Sei. U.S.A. 84:7725-7729 (1987). Muito provavelmente, o probucol é eficaz devido a ser altamente solúvel em lípidos e ser transportado por lipoproteínas, protegendo-as, deste modo, contra os danos oxidativos. 0 probucol está quimicamente relacionado com os aditivos alimentares amplamente utilizados 2,[3]-terc-butil-4-hidroxianisole (BHA) e 2,6-di-terc-butil-4-metilfenol (BHT) . A sua designação química completa é 4,4'-(isopropilideneditio)bis(2,6-di-terc-butilfenol). 0 probucol é utilizado, principalmente, para baixar os níveis séricos do colesterol em doentes hipercolesterolémicos. 0 probucol é normalmente administrado sob a forma de comprimidos disponíveis sob a marca comercial Lorelco™. Infelizmente, o probucol é praticamente insolúvel em água e, consequentemente, não pode ser injectado intravenosamente. De facto, o probucol é 11 difícil de absorver pelas células in vitro, devido à sua miscibilidade fraca em tampões e meios para cultura celular. 0 probucol sólido é fracamente absorvido pelo sangue e é excretado sob uma forma substancialmente inalterada. Para além disso, a forma de comprimido do probucol é absorvida em taxas significativamente diferentes e em quantidades diferentes por doentes diferentes. Num estudo (Heeg et al., Plasma Leveis of Probucol in Man After Single and Repeated Oral Doses, La Nouvelle Presse Medicale, 9:2990-2994 (1980)), foi verificado que os níveis máximos de probucol em soros diferem, até um factor de 20, entre doentes. Num outro estudo, Kazuya et al. J. Lipid Res. 32; 197-204 (1991) observaram uma incorporação de menos de cerca de 1 pg de probucol/106 células, quando células endoteliais são incubadas durante 24 h com probucol 50 μΜ. A Patente U.S. N° 5262439 de Parthasarathy divulga análogos do probucol com solubilidade em água aumentada, no qual um ou ambos os grupos hidroxilo são substituídos por grupos éster que aumentam a solubilidade em água do composto. Numa forma de realização, o derivado é seleccionado do grupo consistindo em éster mono ou di-probucólico do ácido succínico, ácido glutárico, ácido adípico, ácido sebérico, ácido sebácico, ácido azelaico ou ácido maleico. Numa outra forma de realização, o derivado do probucol é um mono ou di-éster, no qual o éster contém um grupo alquilo ou alquenilo que contém uma funcionalidade seleccionada do grupo consistindo em grupo ácido carboxílico, grupo amina, sal de um grupo amina, grupos amida, grupos amida e grupos aldeído.

Uma série de patentes Francesas divulgam que determinados derivados do probucol são agentes hipocolesterolémicos e hipolipémicos: Fr 2168137 (ésteres de bis 12 4-hidroxifeniltioalcano); Fr 2140771 (ésteres tetralinilfenoxialcanóicos do probucol); Fr 2140769 (derivados do ácido benzofuriloxialcanóico do probucol); Fr 2134810 (bis— (3— alquil-5-t-alquil-4-tiazole-5-carboxi)feniltio)alcanos; FR 2133024 (bis-(4-nicotinoiloxifeniltio)propanos; e FR 2130975 (bis(4-(fenoxialcanoiloxi)-feniltio)alcanos). A Patente U.S. N° 5155250 de Parker, et al. divulga que os 2,6-dialquil-4-sililfenóis são agentes antiateroscleróticos. Os mesmos compostos são divulgados como agentes de diminuição do colesterol sérico na publicação PCT N° WO 95/15760, publicada no dia 15 de Junho de 1995. A patente U.S. N° 5608095 de Parker, et al. divulga que os 4-silil-fenóis alquilados inibem a peroxidação das LDL, baixam o colesterol do plasma e inibem a expressão da VCAM-1 e, deste modo, são úteis no tratamento da aterosclerose.

Uma série de pedidos de patentes Europeias e de Shionogi Seiyaku Kabushiki Kaisha divulga tioéteres fenólicos para utilização no tratamento de arteriosclerose. O Pedido de Patente Europeia N° 348203 divulga tioéteres fenólicos, os quais inibem a desnaturação das LDL e a incorporação das LDL por macrófagos. Os compostos são úteis como agentes antiarteriosclerose. Os derivados do ácido hidroxâmico destes compostos são divulgados no Pedido de Patente Europeia N° 405788 e são úteis para o tratamento da arteriosclerose, úlcera, inflamação e alergia. Na Patente U.S. N° 4954514, de Kita, et al., são divulgados derivados carbamoilo e ciano dos tioéteres fenólicos. A patente U.S. N° 4752616 de Hall, et al., divulga ácidos ariltioalquilfenilcarboxílicos para o tratamento da doença trombótica. Os compostos divulgados são úteis como inibidores da 13 agregação das plaquetas, para o tratamento de tromboses coronárias ou cerebrais e para a inibição da broncoconstrição, entre outros.

Uma série de patentes de Adir et al., divulga ácidos e ésteres fenoxi-isobutiricos substituídos, úteis como agentes antioxidantes e hipolipémicos. Esta série inclui as Patentes U.S. N° 5206247 e 5627205 de Regnier, et al. (a qual corresponde ao Pedido de Patente Europeia N° 621255) e o Pedido Patente Europeia N°. 763527. 0 documento W097/15546 de Nippon Shinyaku Co. Ltd. divulga derivados ácidos carboxílicos para o tratamento da esclerose arterial, doenças cardíacas isquémicas, enfarte cerebral e restenose após PTCA. A Dow Chemical Company é titular de patentes de 2-(3,5-di-terc-butil-4-hidroxifenil)tio carboxamidas hipolipidémicas. Por exemplo, as Patentes U.S. N° 4029812, 4076841 e 4078084 de Wagner, et al., divulgam estes compostos para reduzir os lípidos do soro sanguíneo, especialmente, os níveis de triglicéridos e de colesterol.

Dado que a doença cardiovascular é actualmente a causa principal de morte nos Estados Unidos e que noventa por cento da doença cardiovascular é presentemente diagnosticada como aterosclerose, verifica-se uma grande necessidade de identificar novos métodos e agentes farmacêuticos para o seu tratamento. Para este objectivo, é importante a identificação e a manipulação dos compostos biológicos oxidados, específicos, que actuam como reguladores selectivos da expressão de mediadores do processo inflamatório e, em particular, da VCAM-1. Um objectivo 14 mais geral consiste em identificar métodos selectivos para suprimir a expressão de genes sensíveis ao redox ou activar genes sensíveis ao redox que são suprimidos.

Constitui, consequentemente, um objectivo da presente invenção, proporcionar novos compostos, composições e métodos para o tratamento de doenças cardiovasculares e inflamatórias.

Constitui, ainda, um outro objectivo da presente invenção, proporcionar novos compostos e composições, os quais sejam úteis como inibidores da peroxidação dos lípidos das LDL.

Constitui, ainda, um outro objectivo da presente invenção, proporcionar novos compostos e composições, os quais sejam úteis como agentes antiateroscleróticos.

Constitui, ainda, um outro objectivo da presente invenção proporcionar novos compostos e composições, os quais sejam úteis como agentes de diminuição dos lípidos das LDL.

Constitui, ainda, um outro objectivo da presente invenção proporcionar novos compostos, composições e métodos para inibir, selectivamente, a expressão da VCAM-1.

Constitui, ainda, um outro objectivo da presente invenção proporcionar um método para o tratamento de uma doença que é mediada pela expressão ou supressão de um gene sensível ao redox, por exemplo, MCP-1, IL-6 e receptor da trombina. 15

SUMÁRIO DA INVENÇÃO A presente invenção proporciona um composto de fórmula

HO

t-Bu t-Bu t-Bu ou um seu sal farmaceuticamente aceitável. A presente invenção proporciona, adicionalmente, uma composição farmacêutica para o tratamento de um distúrbio mediado pela expressão da VCAM-1, compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de fórmula

t-Bu t-Bu ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um veiculo farmaceuticamente aceitável. A presente invenção proporciona, adicionalmente, a utilização de um composto de fórmula t-Bu

HO

t-Bu t-Bu 16 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, opcionalmente, num veículo farmaceuticamente aceitável, na produção de um medicamento para o tratamento de um distúrbio seleccionado de um distúrbio cardiovascular ou de uma doença inflamatória. 0 termo sais ou complexos farmaceuticamente aceitáveis refere-se a sais ou complexos que conservam a actividade biológica pretendida dos compostos da presente invenção e apresentam efeitos toxicológicos não pretendidos mínimos. São exemplos não-limitantes desses sais (a) sais de adição ácida formados com ácidos inorgânicos (por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico e semelhantes) e sais formados com ácidos orgânicos, tais como, ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzóico, ácido tânico, ácido pamóico, ácido algínico, ácido poliglutâmico, ácido naftalenossulfónico, ácido naftalenodissulfónico e ácido poligalcturónico; (b) sais de adição básica formados com catiões metálicos, tais como, zinco, cálcio, bismuto, bário, magnésio, alumínio, cobre, cobalto, níquel, cádmio, sódio, potássio e semelhantes ou com um catião formado a partir de amoníaco, N,N-dibenziletilenodiamina, D-glucosamina, tetraetilamónio ou etilenodiamina; ou (c) combinações de (a) e (b) ; e. g., um sal de tanato de zinco ou semelhante. São, também, incluídos nesta definição sais quaternários farmaceuticamente aceitáveis, conhecidos dos especialistas na técnica que incluem, especificamente, o sal de amónio quaternário de fórmula -NR+A~, em que R é como definido acima e A é um contra-ião, incluindo cloreto, brometo, iodeto, -O-alquilo, toluenossulfonato, metilsulfonato, sulfonato, fosfato ou carboxilato (tais como benzoato, succinato, acetato, glicolato, maleato, malato, 17 citrato, tartrato, ascorbato, benzoato, cinamoato, mandeloato, benziloato e difenilacetato) .

As doenças mediadas pela VCAM-1 incluem, mas não são limitadas a, aterosclerose, restenose pós-angioplastia, doença da artéria coronária, angina, doença das artérias periféricas e outras doenças cardiovasculares, assim como doenças inflamatórias não-cardiovasculares, tais como, artrite reumatóide, osteoartrite, asma, dermatite, esclerose múltipla e psoriase.

Como aqui utilizado, os termos seguintes têm os significados indicados "g" refere-se a gramas; "mmol" refere-se a milimoles; "mL" refere-se a mililitros; "pe" refere-se ao ponto de ebulição; " °C" refere-se a graus Celsius; "mm Hg" refere-se a milímetros de mercúrio; "pf" refere-se ao ponto de fusão; "mg" refere-se a miligramas; "μΜ" refere-se a micromolar; "pg" refere-se a microgramas. 0 composto da presente invenção pode ser preparado utilizando processos e técnicas bem conhecidos e compreendidos por um especialista na técnica. Um esquema sintético geral, para a preparação do composto da presente invenção é estabelecido no Esquema A, em que todos os substituintes são anteriormente definidos, excepto se indicado de outra forma.

Esquema A É tratada uma quantidade de probucol, numa solução de tetra-hidrofurano 0,1 M, com 2 equivalentes de hidreto de sódio e agitada à temperatura ambiente, durante 30 minutos. São 18 adicionados 3 equivalentes de um cloreto ácido ou de um anidrido ácido à mistura de reacção e a reacção é agitada à temperatura ambiente, durante 16 horas. A reacção é terminada com HC1 aquoso 1 N e é diluída com acetato de etilo. A camada aquosa é removida e a camada de acetato de etilo é lavada com água e, seguidamente, com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio. A solução de acetato de etilo é seca sobre sulfato de magnésio,por gravidade ou filtrada sob vácuo e, seguidamente, é concentrada. 0 produto é purificado por cromatografia em gel de sílica.

Os materiais de partida para utilização nos processos sintéticos gerais delineados nos esquemas de reacção acima estão facilmente disponíveis ou podem ser facilmente preparados de acordo com técnicas e processos padrão. 0 probucol encontra-se

facilmente disponível de Sigma Chemicals. A

Os exemplos seguintes apresentam a síntese típica como descrita no Esquema A. Deverá ser entendido que estes exemplos são apenas ilustrativos e não se destinam a limitar, de qualquer forma, o âmbito da presente invenção. 19

Exemplo 1 Éster mono(4-([1-((3,5-bis(1,1-dimetiletil)-4-hidroxifenil]tio]-1-metiletil]tio]2,6-bis(1,1-dimetiletil) fenilico] do ácido butanodióico

Descrição da reacção:

Foram adicionados probucol (1,0 g, 1,93 mmol) e tetra-hidrofurano (16 mL) a um frasco de recuperação de 50 mL. Foi adicionado hidreto de sódio a 60% em óleo mineral (0,23 g, 5,75 mmol) à solução. Foi adicionado anidrido succinico (0,58 g, 5,8 mmol) em THF (12 mL) à mistura branca turva. A reacção ficou púrpura escura e foi agitada à temperatura ambiente, durante 3 h. A mistura de reacção púrpura escura foi tornada acídica com HC1 1 N (25 mL) e foi extraída duas vezes com acetato de etilo (50 mL). Os extractos orgânicos foram secos sobre MgSCh, filtrados e concentrados, originando um sólido laranja. O sólido laranja foi dissolvido em éter e foi submetido a cromatografia em gel de sílica com um gradiente de concentração de hexano/éter 70:30 a hexano/éter 0:100. As fracções apropriadas foram combinadas e concentradas, originando um sólido branco. (170 mgm 0,276 mmol, 14%) . TLC (gel de sílica, 60:40 éter/hexano + 10 gotas de HOAc, Rf = 0,35); RMN de XH (CDC13, 400 MHz): 57,61 (s, 2H) , 7,43 (s, 2H) , 5,38 (s, 1H) , 2,97 (t, J= 6,8 Hz, 2H) , 2,76 (t, J= 6,8 Hz, 2H), 1,45 (s, 8H), 1,42 (s, 16H), 1,32 (s, 18H). A presente invenção inclui, também, a utilização do composto da presente invenção na inibição da progressão da aterosclerose em doentes que necessitem desta. 20

Como aqui utilizado, o termo "doente" refere-se a animais de sangue quente ou a mamíferos e, em particular, a humanos, os quais necessitam da terapia aqui descrita.

Os exemplos seguintes ilustram a utilização do composto da presente invenção. Estes exemplos são apenas ilustrativos e não se destinam a limitar o âmbito da invenção de qualquer forma.

Exemplo 2 PESQUISA DE LÍPIDOS E PROTOCOLO DE DETERMINAÇÃO DO IC50

Preparação de HEPG2:

As células HEPG2 foram iniciadas em 10 mL de MEM, FBS 10%, Piruvato de Sódio 1 mM. As células foram incubadas numa incubadora de cultura de tecidos. As células foram repartidas por uma placa de 4 X 96-poços em MEM, FBS 10%, Piruvato de Sódio 1 mM e foi permitido o crescimento até cerca de 50% de confluência e, seguidamente, foram removidas.

Tratamento do Dia 1:

As células foram tratadas com a concentração pretendida do composto em 100 pL DMEM, RSA 1%, durante 24 horas. O composto é dissolvido em DMSO. Para a IC50, a gama de concentração é 10 uM -40 uM, sendo cada concentração realizada em triplicado.

No mesmo dia, a placa de NuncImmunoSorb com 4 X 96-poços é revestida com 100 pL do 1D1 monoclonal de murganho anti-ApoB 21 humana (1:1000 diluição em PBS 1 X, pH 7,4). 0 revestimento é realizado durante a noite. ELISA de ApoB do Dia 2: A placa revestida é lavada 3 vezes com PBS 1 X, pH 7,4, Tween 20 a 0,05%. São adicionados 100 pL dos padrões aos poços seleccionados. Os padrões de ApoB são preparados a 6,25, 3,12, 1,56, 0,78, 0,39 ng e cada concentração é realizada em triplicado.

Para as amostras: São adicionados 90 pL de PBS 1 X, pH 7,4, Tween 20 a 0,05%, a cada poço correspondente à amostra. São transferidos 10 pL de meio, das placas HEPG2 tratadas, para a placa de ELISA com ApoB. A placa é incubada à temperatura ambiente, durante 2 horas, com agitação suave.

Lavar 3 X a placa revestida com PBS 1 X, pH 7,4, Tween 20 a 0,05%. Adicionar 100 pL de policlonal de ovelha anti-ApoB humana de Boehringer Mannheim. (diluição 1:2000 em PBS 1 X, pH 7,4, Tween 20 a 0,05%) de Boehringer Mannheim. Incubar à temperatura ambiente, durante 1 hora, agitando suavemente. Lavar a placa revestida 3 X com PBS 1 X, pH 7,4, Tween 20 a 0,05%. Adicionar 100 pL de IgG de coelho anti-ovelha (1:2000 diluição em PBS 1 X, pH 7,4, Tween 20 a 0,05%). Incubar à temperatura ambiente, durante 1 hora, agitando suavemente. Lavar a placa revestida, 3 X com PBS 1 X, pH 7,4, Tween 20 a 0,05%. Adicionar 100 pL de substrato (10 mL de água destilada, 100 pL de TMB (10 mg/mL) e 22 1 pL de peróxido de hidrogénio) . Permitir o aparecimento da coloração e parar a reacção com 25 uL de ácido sulfúrico 8 N. Os poços são lidos com o Microplate Reader a 450 nM. Representar a acumulação de ApoB nos meios como uma percentagem de controlo para cada amostra e a sua concentração. A partir do gráfico é obtida uma determinação da IC50.

Exemplo 3

Ensaio da VCAM-1

Repartição das células:

Duas a quatro placas P150 confluentes são tratadas com tripsina e as células são transferidas para um tubo de centrífuga cónico de 50 mL. As células são sedimentadas, ressuspensas e contadas utilizando método de exclusão do azul tripano.

As células são ressuspensas numa concentração de 36000 células/mL e é distribuída uma alíquota de 1 mL por poço.

As células são repartidas em placas de cultura de tecidos de 24 poços. As células em cada poço devem apresentar uma confluência de, aproximadamente, 90-95% no dia seguinte. As células não devem ter mais de 8 repicagens. 23

Preparação de compostos:

Composto solúvel em água 0 composto é, inicialmente, sujeito a rastreio a 50 μΜ e 10 μΜ. É preparada uma solução de armazenamento do composto, em meio de cultura a 50 mM. A solução de armazenamento é diluida para 5 mM e 1 mM. Quando são adicionados 10 pL da solução 5 mM ao poço (1 mL meio/poço) , a concentração final será de 50 μΜ. A adição de 10 pL de uma solução 1 mM ao poço irá fornecer uma concentração final de 10 μΜ.

Compostos insolúveis em água

Os compostos que não se solubilizem no meio de cultura são ressuspensos em DMSO numa concentração de 25 mM. A solução de armazenamento é então diluída para a concentração final, no meio de cultura. O meio antigo é aspirado e é adicionado 1 mL de meio novo com o composto. Por exemplo, se a concentração final for de 50 μΜ, são adicionados 2 pL do armazenamento de 25 mM, por mL de meio de cultura. Para concentrações mais baixas, a solução 50 mM é diluída.

Adição dos compostos O composto é adicionado à placa (cada composto é realizado em duplicado) . É realizada uma placa para a expressão da VCAM e é realizada uma placa para a expressão da ICAM. 24

Imediatamente após o composto ser adicionado, é adicionado TNF a cada poço. São normalmente adicionadas 100 unidades/mL de TNF a cada poço. Uma vez que cada lote de TNF varia em termos de número de unidades, cada novo lote é titulado para determinar a concentração óptima. Consequentemente, esta concentração irá variar. Se forem utilizadas 100 unidades/mL, diluir o TNF para 10 unidades/pL e adicionar 10 pL a cada poço.

As placas são incubadas a 37 °C, com C02 a 5% de um dia para o outro (aproximadamente, 16 horas). No dia seguinte, as placas são inspeccionadas sob microscópio, para verificar se existem quaisquer sinais visuais de toxicidade. São realizados registos de qualquer morte celular, detritos ou alterações morfológicas, assim como de compostos insolúveis (particulados ou turbidez).

Exemplo 4 Ensaio de ELISA

Para avaliar a MCP-1, os meios (500 pL) são preservados e congelados a -70 °C. Lavar as células uma vez com, aproximadamente, 1 mL/poço de Solução Salina Equilibrada de Hanks (HBSS) ou PBS. Esvaziar, suavemente, a solução de lavagem e, seguidamente, escorrer a placa sobre toalhas de papel. Adicionar, quer 250 pL/poço de HBSS + FCCS a 5% ao controlo (poços sem anticorpo primário), quer 250 pL/poço de anticorpo primário diluído em HBSS + FCS a 5%. Incubar durante 30 minutos a 37 °C. Lavar os poços duas vezes com 5 mL/poço de HBSS ou PBS e escorrer suavemente as placas sobre toalhas de papel após a última lavagem. Adicionar 250 pL/poço de segundo anticorpo, conjugado com HRP diluído em HBSS + FCS a 5% a cada poço, 25 incluindo os poços de controlo (sem anticorpo primário). Incubar a 37 °C durante 30 minutos. Lavar os poços quatro vezes com 5 mL/poço de HBSS ou PBS e escorrer suavemente as placas sobre toalhas de papel após a última lavagem. Adicionar 250 pL/poço da solução de substrato. Incubar à temperatura ambiente no escuro até desenvolvimento da coloração adequada (azul). Registar duração de realização da incubação (tipicamente, 15-30 minutos). Adicionar 75 pL/poço de solução de terminação (ácido sulfúrico 8 N) e ler a A450 nm.

Anticorpos e soluções 1. A solução de substrato é preparada imediatamente antes da utilização e contém:

água 10 mL

Peróxido de hidrogénio a 30% 1 pL

TMB (3, 3',5,5'-tetrametilbenzidina) 100 pL solução de armazenamento de TMB: adicionar 1 mL de acetona a 10 mg de TMB. Armazenar a 4°C protegendo da luz.

2. Ab VCAM-1: armazenamento 1 pg/pL concentração final 0,25 pg/pL misturar 25 pL do armazenamento de VCAM-1 (Southern Biotechology) e 10 mL de HBSS + FCS a 5 %

3. Ab ICAM-1: armazenamento 1 pg/pL concentração final 0,25 pg/pL 26 misturar 25 \íL do armazenamento de ICAM-1 (Southern Biotechology) e 10 mL de HBSS + FCS a 5 % 4. Ab Secundário: IgG de cabra antimurganho conjugada com HRP diluiuda 1:500 misturar 20 \íL do armazenamento de ICAM-1 (Southern Biotechology) e 10 mL de HBSS + FCS a 5 % 0 grau de inibição do composto da presente invenção foi determinado pelos ensaios descritos nos Exemplos 2-4. Os resultados são apresentados na Tabela 1. TABELA 1

Composto IC50 de VCAM-1 ou % de inibição a [μΜ] o LO Q ApoB/HepG2 IC50 ou % de inibição [μΜ] Éster mono [4-( [1-[[3,5-bis (1,1-dimetiletil)-4-hidroxifenil]tio] -1-metiletil]tio]2,6-bis (1,1-dimetiletil)fenílico] do ácido butanodióico 5, 6 23 65% a 15

Composições Farmacêuticas

Os mamíferos e, especificamente, os humanos sofrendo de qualquer dos estados acima descritos podem ser tratados por administração tópica, sistémica ou transdérmica de uma composição compreendendo uma quantidade eficaz do composto da presente invenção ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, 27 opcionalmente, num veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável. A composição é administrada subcutaneamente, intravenosamente, intraperitonealmente, intramuscularmente, parentericamente, oralmente, submucosalmente, por inalação, transdermicamente, através de um adesivo de libertação lenta ou topicamente, numa gama de dosagem eficaz para tratar o estado alvo. Uma dose eficaz pode ser facilmente determinada pela utilização de técnicas convencionais e pela observação dos resultados obtidos sob circunstâncias análogas. Na determinação da dose eficaz são considerados vários factores, incluindo, mas não limitados a: a espécie do doente; o seu tamanho, idade e saúde geral; a doença específica envolvida; o grau de envolvimento ou a gravidade da doença; a resposta do doente individual; o composto particular administrado; o modo de administração; as características de biodisponibilidade da preparação administrada; o regime de dose seleccionado; e a utilização de medicação concomitante. As dosagens sistémicas típicas para a totalidade dos estados aqui descritos são as que variam entre 0,1 mg/kg e 500 mg/kg do peso corporal, por dia, sob a forma de uma dose diária única ou dividida em doses diárias. As dosagens preferidas para os estados descritos variam de 5-1500 mg por dia. Uma dosagem mais particularmente preferida para os estados pretendidos, varia de 25-750 mg por dia. As dosagens típicas para aplicação tópica são as que variam de 0,001 a 100% por peso do composto activo. O composto é administrado durante um período de tempo suficiente para aliviar os sintomas indesejados e os sintomas clínicos associados com o estado a ser tratado. 28 0 composto activo está incluído no veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável, numa quantidade suficiente para distibuir, in vivo, a um doente, uma quantidade terapêutica do composto, na ausência de efeitos tóxicos graves. A concentração do composto activo na composição farmacológica irá depender das taxas de absorção, inactivação e excreção do fármaco, assim como de outros factores conhecidos dos especialistas na técnica. Deve ser tido em consideração que os valores de dosagem irão, também, variar com a gravidade do estado a ser aliviado. Para além disso, deve ser entendido que, para qualquer indivíduo em particular, os regimes de dosagem específicos devem ser ajustados ao longo do tempo, de acordo com a necessidade individual e a avaliação profissional da pessoa que administra ou supervisiona a administração das composições e que as gamas de dosagem aqui estabelecidas são apenas a título de exemplo e não se destinam a limitar o âmbito ou a prática da composição reivindicada. 0 ingrediente activo pode ser administrado numa única vez ou dividido num número de doses menores, a serem administradas em intervalos de tempo variáveis.

Um modo preferido de administração do composto activo para a distribuição sistémica é oral. As composições orais irão incluir, geralmente, um diluente inerte ou um veículo comestível. Estas podem ser incluídas em cápsulas de gelatina ou prensadas em comprimidos. Para o objectivo da administração terapêutica oral, o composto activo pode ser incorporado com excipientes e utilizado sob a forma de comprimidos, trociscos ou cápsulas. Podem ser incluídos agentes ligantes e/ou materiais adjuvantes farmaceuticamente compatíveis, como parte da composição. 29

Os comprimidos, pílulas, cápsulas, trociscos e semelhantes podem conter qualquer dos sequintes ingredientes ou compostos de uma natureza semelhante: um ligante, tal como, celulose microcristalina, goma de tragacanto ou gelatina; um excipiente tal como amido ou lactose, um agente desintegrante, tal como, ácido algínico, Primogel ou amido de milho; um lubrificante, tal como, estearato de magnésio ou Sterotes; um agente deslizante, tal como, dióxido de silício coloidal; um agente edulcorante, tal como, sacarose ou sacarina; ou um agente aromatizante, tal como, hortelã-pimenta, salicilato de metilo ou aromatizante de laranja.

Quando a forma de unidade de dosagem for uma cápsula, esta pode conter, para além do material do tipo acima, um veículo líquido, tal como, um óleo gordo. Para além disso, as formas de unidade de dosagem podem conter vários outros materiais, os quais modificam a forma física da unidade de dosagem, por exemplo, revestimentos de açúcar, goma-laca ou outros agentes entéricos. 0 composto ou os seus sais podem ser administrados como um componente de um elixir, suspensão, xarope, hóstia, pastilha elástica ou semelhante. Um xarope pode conter, para além dos compostos activos, sacarose como um agente edulcorante e determinados conservantes, pigmentos e corantes e aromas. 0 composto pode também ser misturado com outros materiais activos que não prejudiquem a acção pretendida ou com materiais que complementem a acção pretendida. Os compostos activos podem ser administrados em conjunto com outras medicações utilizadas no tratamento da doença cardiovascular, incluindo agentes de diminuição de lípidos, tais como, probucol e ácido nicotínico; 30 inibidores da agregação das plaquetas, tais como a aspirina; agentes antitrombóticos, tais como coumadina; bloqueadores dos canais de cálcio, tais como, varapamil, diltiazem e nifedipina; inibidores da enzima conversora da angiotensina (ACE), tais como, captopril e enalopril e β-bloqueadores, tais como, propanalol, terbutalol e labetalol. 0 composto pode ser também administrado em combinação com anti-inflamatórios não-esteróides, tais como, ibuprofeno, indometacina, fenoprofeno, ácido mefenâmico, ácido flufenâmico, sulindac. 0 composto pode ser também administrado com corticoesteróides.

As soluções ou as suspensões utilizadas para aplicação parentérica, intradérmica, subcutânea ou tópica podem incluir os seguintes componentes: um diluente estéril, tal como água para injecção, solução salina, óleos fixos, polietilenoglicol, glicerina, propilenolicol ou outros solventes sintéticos; agentes antibacterianos, tais como, álcool benzilico ou metilparabenos; antioxidantes, tais como, ácido ascórbico ou bissulfito de sódio; agentes quelantes, tais como, ácido etilenodiaminatetracético; tampões, tais como, acetato, citrato ou fosfato e agentes para o ajustamento da tonicidade, tais como, cloreto de sódio ou dextrose. 0 pH pode ser ajustado com ácidos ou bases, tais como, ácido clorídrico ou hidróxido de sódio. A preparação parentérica pode ser contida em ampolas, seringas descartáveis ou frascos de dose múltipla de vidro ou plástico.

Se for administrado intravenosamente, os veículos preferidos são soro fisiológico, água bacteriostática, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, NJ) ou tampão fosfato salino (PBS) . 31

Numa forma de realização preferida, o composto activo é preparado com veículos que irão proteger o composto contra a eliminação rápida a partir do organismo, tal como uma formulação de libertação controlada, incluindo implantes e sistemas de distribuição microencapsulados. Podem ser utilizados polímeros biodegradáveis, biocompativeis, tais como acetato de viniletileno, polianidridos, ácido poliglicólico, colagénio, poliortoésteres e ácido poliláctico. Os métodos para a preparação dessas formulações serão evidentes para os especialistas na técnica. Os materiais podem ser também obtidos comercialmente de Alza Corporation e Nova Pharmaceuticals, Inc. São também preferidas suspensões lipossómicas (incluindo lipossomas dirigidos para células infectadas, com anticorpos monoclonais contra antigénios virais), como veículos farmaceuticamente aceitáveis. Estes podem ser preparados de acordo com métodos conhecidos dos especialistas na técnica, por exemplo, como descrito na Patente U.S. N° 4522811. As formulações de lipossomas podem ser, por exemplo, preparadas por dissolução de lípido(s) apropriado(s) (tais como estearoilfosfatidiletanolamina, estearoilfosfatidilcolina, aracadoilfosfatidilcolina e colesterol) num solvente inorgânico que é então evaporado, deixando uma película fina do lípido seco na superfície do recipiente. É então introduzida uma solução aquosa do composto no recipiente. 0 recipiente é então rodado à mão para libertar o material lipídico das paredes do recipiente e dispersar os agregados lipídicos formando, deste modo, a suspensão de lipossomas.

Os veículos ou transportadores adequados para aplicação tópica podem ser preparados por técnicas convencionais, tais como loções, suspensões, unguentos, cremes, géis, tinturas, vaporizações, pós, pastas, adesivos transdérmicos de libertação 32 lenta, supositórios para aplicação na mucosa rectal, vaginal, nasal ou oral. Para além dos outros materiais listados acima para a administração sistémica, podem ser utilizados para preparar composições tópicas agentes espessantes, emolientes e estabilizantes. Os exemplos de agentes espessantes incluem vazelina, cera de abelhas, goma de xantano ou polietileno, humectantes, tais como, sorbitol, emolientes, tais como, óleo mineral, lanolina e os seus derivados ou esqualeno.

As modificações e variações da presente invenção relacionadas com compostos que inibem a supressão da VCAM-1 e métodos para tratar doenças mediadas pela expressão da VCAM-1 serão óbvias para os especialistas na técnica, a partir da descrição detalhada anterior da invenção. É pretendido que essas modificações e variações surjam com o âmbito das reivindicações em anexo.

Lisboa, 4 de Junho de 2007 33

Claims

REIVINDICAÇÕES 1. Composto de fórmula

O ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
2. Composição farmacêutica para o tratamento de um distúrbio mediado pela expressão da VCAM-1, compreendendo uma quantidade eficaz de um composto de fórmula

-(CH2)2—C-OH O II ou um seu sal farmaceuticamente aceitável e um veículo farmaceuticamente aceitável.
3. Utilização de um composto de fórmula

1 ou um seu sal farmaceuticamente aceitável, opcionalmente, num veículo farmaceuticamente aceitável, na produção de um medicamento para o tratamento de um distúrbio seleccionado de distúrbio cardiovascular ou uma doença inflamatória.
4. Utilização da reivindicação 3, em que o distúrbio é um distúrbio cardiovascular.
5. Utilização da reivindicação 4, em que o distúrbio cardiovascular é seleccionado do qrupo consistindo em aterosclerose, restenose pós-angioplastia, doença da artéria coronária, angina e doença das artérias periféricas.
6. Utilização da reivindicação 3, em que o distúrbio é uma doença inflamatória.
7. Utilização da reivindicação 6, em que a doença inflamatória é seleccionada do grupo consistindo em artrite reumatóide, osteoartrite, asma, dermatite, esclerose múltipla e psoríase.
8. Composto de acordo com a reivindicação 1, em combinação com outro fármaco cardiovascular seleccionado do grupo consistindo em agentes de diminuição de lípidos, inibidores da agregação das plaquetas, agentes antitrombóticos, bloqueadores dos canais de cálcio, inibidores da enzima conversora da angiotensina (ACE) e beta-bloqueadores, para utilização em terapia. 2 com em
9. Composto de acordo com a reivindicação 1, em combinação outro fármaco anti-inflamatório, para utilização terapia. Lisboa, 4 de Junho de 2007 3