KR20220142483A - 항바이러스 화합물 - Google Patents

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KR20220142483A
KR20220142483A KR1020227031782A KR20227031782A KR20220142483A KR 20220142483 A KR20220142483 A KR 20220142483A KR 1020227031782 A KR1020227031782 A KR 1020227031782A KR 20227031782 A KR20227031782 A KR 20227031782A KR 20220142483 A KR20220142483 A KR 20220142483A
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그레고리 에프. 친
천병권
마이클 오. 클라크
빈두 고얄
혼 씨. 후이
페트르 얀사
리처드 엘. 맥맨
더스틴 에스. 시겔
하이 양
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길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 다양한 질병, 예컨대 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), HRV, hMPV, 에볼라(Ebola), 지카(Zika), 웨스트 나일(West Nile), 뎅기(Dengue), 및 HCV를 치료하기 위한 화합물을 제공한다.

Description

항바이러스 화합물
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 발명의 명칭이 "ANTIVIRAL COMPOUNDS"인, 2020년 2월 18일자로 출원된 미국 가특허 출원 제62/977,881호에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 이의 전체 내용이 본 명세서에 참고로 포함된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 서식으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이는 본 명세서에 전체적으로 참고로 포함된다. 2021년 2월 17일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 파일명이 1223-WO-PCT_SL.txt이며, 크기가 800 바이트이다.
뉴모바이러스과(Pneumoviridae) 바이러스는 만연하고 있는 많은 인간 및 동물 질병의 원인이 되는 음성-센스, 단일-가닥 RNA 바이러스이다. 뉴모바이러스과 바이러스는 인간 호흡기 세포융합 바이러스(HRSV) 및 인간 메타뉴모바이러스(metapneumovirus)를 포함한다. 거의 모든 어린이는 이들의 두 번째 생일까지 HRSV 감염증을 가졌을 것이다. HRSV는 영아 및 소아에서 하기도 감염증의 주요 원인이며, 감염자의 0.5% 내지 2%는 입원을 필요로 한다.
HRSV 감염증을 예방할 백신은 현재 이용가능하지 않다. 단일클론 항체 팔리비주맙이 면역예방을 위해 이용가능하지만, 이의 사용은 고위험 상태에 있는 영아, 예를 들어 조산아 또는 선천성 심장 또는 폐 질병을 갖는 영아로 제한되며, 일반적인 사용에 대한 비용이 종종 너무 고가이다. 게다가, 뉴클레오시드 유사체 리바비린이 HRSV 감염증을 치료하기 위한 유일한 항바이러스제로서 승인되어 있지만 제한된 효능을 갖는다. 따라서, 항-뉴모바이러스과 치료제에 대한 필요성이 있다.
바이러스성 감염증을 치료하는 데 유용한 피롤로[2,3-d]피리미딘 화합물의 예가 미국 특허 출원 공개 제2012/0009147 A1호(Cho et al.), 미국 특허 출원 공개 제2012/0020921 A1호(Cho et al.), 국제 특허 출원 공개 WO 2008/089105 A2호(Babu et al.), WO 2008/141079 A1호(Babu et al.), WO 2009/132135 A1호(Butler et al.), WO 2010/002877 A2호(Francom), WO 2011/035231 A1호(Cho et al.), WO 2011/035250 A1호(Butler et al.), WO 2011/150288 A1호(Cho et al.), WO 2012/012465호(Cho et al.), WO 2012/012776 A1호(Mackman et al.), WO 2012/037038호(Clarke et al.), WO 2012/087596 A1호(Delaney et al.), 및 WO 2012/142075 A1호(Girijavallabhan et al.)에 기재되어 있다.
따라서, 효과적이고 허용가능한 독성 프로파일을 갖는, 뉴모바이러스과 바이러스성 감염증, 예컨대 HRSV 감염증, 플라비바이러스과(Flaviviridae) 감염증 - 뎅기(dengue)를 포함함 -, 및 EBOV 감염증을 치료하기 위한 조성물 및 방법에 대한 필요성이 있다. 본 발명은 이들 및 다른 요구에 대처한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
[화학식 (II)]
Figure pct00001
(상기 식에서,
염기는 하기와 같으며:
Figure pct00002
,
Figure pct00003
또는
Figure pct00004
;
R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 하기와 같으며:
(A) 1 내지 3개의 R1B로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬,
(B) N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴 - 여기서, 상기 3원 내지 6원 헤테로사이클릴은 1 내지 3개의 R1C로 선택적으로 치환됨 -, 또는
(C) 페닐
(여기서, 각각의 R1B는 독립적으로 할로겐, -OH, -NH2, C1-6 알콕시, 메톡시에톡시, C3-8 사이클로알킬, 또는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴이고, 각각의 R1C는 독립적으로 C1-3 알킬임);
R3은 -N(H)R3A 또는 -N=C(R3B)(R3C)이고; R3A는 H, -CH2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이며, 여기서 R3D는 1개의 메톡시로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이거나, 또는 C1-3 알킬로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴이고; R3B는 H 또는 C1-3 알킬이고; R3C는 -N(R3C1)(R3C2)이고; R3C1 및 R3C2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이거나; 또는 R3C1과 R3C2는 그들이 부착되어 있는 원자와 함께, C1-6 알킬로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴을 형성하고;
R4A는 O 또는 S이고;
R4B 및 R4C는 각각 독립적으로 하기와 같으며:
(A) -OH;
(B) -OR4B1
(여기서, R4B1은 1 내지 3개의 R4B2 기로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이거나, 또는 C6-12 아릴이며, 여기서 각각의 R4B2 기는 독립적으로 C1-6 알콕시, -S-R4B3, 또는 -S(O)2-R4B3이고, 각각의 R4B3 기는 독립적으로 C1-6 알킬임);
(C)
Figure pct00005
(여기서, m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고; 각각의 R4D는 독립적으로, 1 내지 3개의 R4D1 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알킬, 1 내지 3개의 R4D2 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알콕시, 또는 - C(O)N(R4D3)2이며, 여기서 각각의 R4D1 기는 독립적으로 -NH2 또는 -C(O)OR4D3이고, 각각의 R4D2는 독립적으로 C1-3 알콕시이고, 각각의 R4D3은 독립적으로 C1-3 알킬임);
(D)
Figure pct00006
(여기서, R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이고, R4F1 및 R4F2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이거나, 또는 R4F1과 R4F2는 함께 결합하여 옥소이고, R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, 1 내지 3개의 R4G2로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬, 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 8원 헤테로사이클릴, 또는 -C(O)R4G4이고, 각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알킬, C1-3 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, -N(R4G8)2, -OP(O)(OH)2, 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬, 1 내지 3개의 R4G10으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴, 또는 페닐이고, 각각의 R4G2는 독립적으로 C1-6 알킬, C1-3 할로알킬, -OH 또는 -NH2이고, 각각의 R4G3은 독립적으로 할로겐 또는 C1-3 알킬이고, 각각의 R4G4는 독립적으로 C1-12 알킬이고, 각각의 R4G8은 독립적으로 C1-6 알킬이고, 각각의 R4G9는 독립적으로 C1-3 할로알킬, -OH 또는 -NH2이고, 각각의 R4G10은 독립적으로 C1-3 할로알킬임); 또는
(E) -(OP(O)(OH))1-2-OH;
R5A 및 R5B는 각각, -OP(O)(OH)2로 치환된 C1-6 알킬임).
다른 실시 형태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 약제학적 유효량과, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 피코르나바이러스과(Picornaviridae) 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 플라비바이러스과(Flaviviridae) 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 필로바이러스과(Filoviridae) 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서의 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서의 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서의 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서의 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악(exacerbation)의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방을 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병이다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 하며, 상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병이다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공하며, 상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병이다.
다른 실시 형태에서, 본 발명은 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공하며, 상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병이다.
I. 총론
본 발명은 바이러스성 감염증, 예컨대 에볼라(Ebola), 지카(Zika), 웨스트 나일(West Nile), 황열(Yellow Fever), 뎅기, HCV, RSV, 및 기타의 치료를 위한 2',3'-다이에스테르-4'-시아노 뉴클레오시드 화합물을 제공한다.
II. 정의
"알킬"은 선형 또는 분지형 포화 1가 탄화수소이다. 예를 들어, 알킬 기는 1 내지 18개의 탄소 원자(즉, C1-18 알킬) 또는 1 내지 8개의 탄소 원자(즉, C1-8 알킬) 또는 1 내지 6개의 탄소 원자(즉, C1-6 알킬) 또는 1 내지 4개의 탄소 원자(즉, C1-4 알킬)를 가질 수 있다. 알킬 기의 예에는 메틸(Me, -CH3), 에틸(Et, -CH2CH3), 1-프로필(n-Pr, n-프로필, -CH2CH2CH3), 2-프로필(i-Pr, i-프로필, -CH(CH3)2), 1-부틸(n-Bu, n-부틸, -CH2CH2CH2CH3), 2-메틸-1-프로필(i-Bu, i-부틸, -CH2CH(CH3)2), 2-부틸(s-Bu, s-부틸, -CH(CH3)CH2CH3), 2-메틸-2-프로필(t-Bu, t-부틸, -C(CH3)3), 1-펜틸(n-펜틸, -CH2CH2CH2CH2CH3), 2-펜틸(-CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-펜틸(-CH(CH2CH3)2), 2-메틸-2-부틸(-C(CH3)2CH2CH3), 3-메틸-2-부틸(-CH(CH3)CH(CH3)2), 3-메틸-1-부틸(-CH2CH2CH(CH3)2), 2-메틸-1-부틸(-CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-헥실(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-헥실(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-헥실(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-메틸-2-펜틸(-C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-메틸-2-펜틸(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-메틸-2-펜틸(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-메틸-3-펜틸(-C(CH3)(CH2CH3)2), 2-메틸-3-펜틸(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-다이메틸-2-부틸(-C(CH3)2CH(CH3)2), 및 3,3-다이메틸-2-부틸(-CH(CH3)C(CH3)3)이 포함되지만 이로 한정되지 않는다. 다른 알킬 기는 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실, 운데실, 도데실, 펜타데실, 헥사데실, 헵타데실 및 옥타데실을 포함한다.
"알콕시"는 알킬 기를 부착점에 연결하는 산소 원자를 갖는 알킬 기를 지칭한다: 알킬-O-. 알킬 기와 마찬가지로, 알콕시 기도 임의의 적합한 탄소 원자수, 예컨대 C1-6을 가질 수 있다. 알콕시 기는, 예를 들어 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 아이소-프로폭시, 부톡시, 2-부톡시, 아이소-부톡시, sec-부톡시, tert-부톡시, 펜톡시, 헥속시 등을 포함한다. 알콕시 기는 본 명세서에 기재된 다양한 치환체로 추가로 치환될 수 있다. 알콕시 기는 치환 또는 비치환될 수 있다.
"알콕시-알콕시"는 알콕시 기가, 화합물의 나머지 부분에 연결된 또 하나의 알콕시 기에 연결된 것을 지칭한다. 알콕시는 상기에 정의된 바와 같으며, 메톡시-메톡시(CH3OCH2O-), 메톡시-에톡시(CH3OCH2CH2O-) 및 기타를 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다.
"하이드록시"는 -OH를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "할로" 또는 "할로겐"은 플루오로(-F), 클로로(-Cl), 브로모(-Br) 및 요오도(-I)를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "할로알킬"은 본 명세서에 정의된 바와 같은 알킬에서, 알킬의 하나 이상의 수소 원자가 독립적으로, 동일하거나 상이할 수 있는 할로 치환체로 대체된 것을 지칭한다. 예를 들어, C1-4할로알킬은 C1-4 알킬에서, C1-4알킬의 수소 원자들 중 하나 이상이 할로 치환체로 대체된 것이다. 할로알킬 기의 예에는 플루오로메틸, 플루오로클로로메틸, 다이플루오로메틸, 다이플루오로클로로메틸, 트라이플루오로메틸, 1,1,1-트라이플루오로에틸 및 펜타플루오로에틸이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
"사이클로알킬"은 3 내지 20개의 환상 탄소 원자를 갖는 단일 포화 또는 부분 불포화 전-탄소(all carbon) 고리(즉, C3-20 사이클로알킬), 예를 들어 3 내지 12개의 환상 원자, 예를 들어 3 내지 10개의 환상 원자, 또는 3 내지 8개의 환상 원자, 또는 3 내지 6개의 환상 원자, 또는 3 내지 5개의 환상 원자, 또는 3개 또는 4개의 환상 원자를 갖는 것들을 지칭한다. 용어 "사이클로알킬"은 또한 다수의 축합된, 포화 및 부분 불포화 전-탄소 고리 시스템(예를 들어, 2, 3 또는 4개의 카르보사이클릭 고리를 포함하는 고리 시스템)을 포함한다. 따라서, 사이클로알킬은 멀티사이클릭 카르보사이클, 예컨대 바이사이클릭 카르보사이클(예를 들어, 약 6 내지 12개의 환상 탄소 원자를 갖는 바이사이클릭 카르보사이클, 예컨대 바이사이클로[3.1.0]헥산 및 바이사이클로[2.1.1]헥산), 및 폴리사이클릭 카르보사이클(예를 들어, 최대 약 20개의 환상 탄소 원자를 갖는 트라이사이클릭 및 테트라사이클릭 카르보사이클)을 포함한다. 다중 축합 고리 시스템의 고리들은, 원자가 요건에 의해 허용될 때, 융합, 스피로 및 가교 결합을 통해 서로 연결될 수 있다. 모노사이클릭 사이클로알킬의 비제한적인 예에는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 1-사이클로펜트-1-에닐, 1-사이클로펜트-2-에닐, 1-사이클로펜트-3-에닐, 사이클로헥실, 1-사이클로헥스-1-에닐, 1-사이클로헥스-2-에닐 및 1-사이클로헥스-3-에닐이 포함된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "헤테로사이클릴" 또는 "헤테로사이클" 또는 "헤테로사이클로알킬"은 고리 내에 적어도 하나의 헤테로원자(즉, 산소, 질소, 및 황으로부터 선택되는 적어도 하나의 환상 헤테로원자)를 갖는 단일 포화 또는 부분 불포화 비방향족 고리 또는 비방향족 다중 고리 시스템을 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한, 헤테로사이클릴 기는 3 내지 약 20개의 환상 원자, 예를 들어 3 내지 12개의 환상 원자, 예를 들어 3 내지 10개의 환상 원자, 또는 3 내지 8개의 환상 원자, 또는 3 내지 6개의 환상 원자, 또는 3 내지 5개의 환상 원자, 또는 4 내지 6개의 환상 원자, 또는 4개 또는 5개의 환상 원자를 갖는다. 따라서, 이 용어는 고리 내에 약 1 내지 6개의 환상 탄소 원자, 및 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택되는 약 1 내지 3개의 환상 헤테로원자를 갖는 단일 포화 또는 부분 불포화 고리(예를 들어, 3원, 4원, 5원, 6원 또는 7원 고리)를 포함한다. 다중 축합 고리(예를 들어, 바이사이클릭 헤테로사이클릴) 시스템의 고리들은, 원자가 요건에 의해 허용될 때, 융합, 스피로 및 가교 결합을 통해 서로 연결될 수 있다. 헤테로사이클은 아제티딘, 아지리딘, 이미다졸리딘, 모르폴린, 옥시란(에폭사이드), 옥세탄, 티에탄, 피페라진, 피페리딘, 피라졸리딘, 피페리딘, 피롤리딘, 피롤리디논, 테트라하이드로푸란, 테트라하이드로티오펜, 다이하이드로피리딘, 테트라하이드로피리딘, 퀴누클리딘, 2-옥사-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일, 6-옥사-1-아자스피로[3.3]헵탄-1-일, 2-티아-6-아자스피로[3.3]헵탄-6-일, 2,6-다이아자스피로[3.3]헵탄-2-일, 2-아자바이사이클로[3.1.0]헥산-2-일, 3-아자바이사이클로[3.1.0]헥사닐, 2-아자바이사이클로[2.1.1]헥사닐, 2-아자바이사이클로[2.2.1]헵탄-2-일, 4-아자스피로[2.4]헵타닐, 5-아자스피로[2.4]헵타닐 등을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "아릴"은 단일 전-탄소 방향족 고리, 또는 고리들 중 적어도 하나가 방향족인 다중 축합 전-탄소 고리 시스템을 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 아릴 기는 6 내지 20개의 탄소 원자, 6 내지 14개의 탄소 원자, 또는 6 내지 12개의 탄소 원자를 갖는다. 아릴은 페닐 라디칼을 포함한다. 아릴은 또한, 적어도 하나의 고리가 방향족이고 나머지 다른 고리들이 방향족일 수 있거나 방향족이 아닐 수 있는(즉, 카르보사이클), 약 9 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 다중 축합 고리 시스템(예를 들어, 2, 3 또는 4개의 고리를 포함하는 고리 시스템)을 포함한다. 그러한 다중 축합 고리 시스템은 다중 축합 고리 시스템의 임의의 카르보사이클 부분 상에서 하나 이상(예를 들어, 1, 2 또는 3개)의 옥소 기로 선택적으로 치환된다. 다중 축합 고리 시스템의 고리들은, 원자가 요건에 의해 허용될 때, 융합, 스피로 및 가교 결합을 통해 서로 연결될 수 있다. 또한, 소정 원자-범위 구성원 아릴(예를 들어, 6원 내지 10원 아릴)이 언급될 때, 원자 범위는 아릴의 총 고리 원자들에 대한 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 6원 아릴은 페닐을 포함할 것이며, 10원 아릴은 나프틸 및 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸을 포함할 것이다. 아릴 기의 비제한적인 예에는 페닐, 인데닐, 나프틸, 1,2,3,4-테트라하이드로나프틸, 안트라세닐 등이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "헤테로아릴"은 고리 내에 탄소 이외의 적어도 하나의 원자를 갖는 단일 방향족 고리를 지칭하며, 여기서 원자는 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택되고; "헤테로아릴"은 또한 적어도 하나의 그러한 방향족 고리를 갖는 다중 축합 고리 시스템을 포함하며, 이러한 다중 축합 고리 시스템은 이하에서 추가로 설명된다. 따라서, "헤테로아릴"은 약 1 내지 6개의 탄소 원자, 및 산소, 질소 및 황으로 이루어진 군으로부터 선택되는 약 1 내지 4개의 헤테로원자의 단일 방향족 고리를 포함한다. 황 및 질소 원자는 또한, 고리가 방향족이면, 산화 형태로 존재할 수 있다. 예시적인 헤테로아릴 고리 시스템은 피리딜, 피리미디닐, 옥사졸릴 또는 푸릴을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. "헤테로아릴"은 또한 다중 축합 고리 시스템(예를 들어, 2, 3 또는 4개의 고리를 포함하는 고리 시스템)을 포함하며, 여기서 상기에 정의된 바와 같은 헤테로아릴 기는 헤테로아릴(예를 들어, 1,8-나프티리디닐을 형성함), 헤테로사이클(예를 들어, 1,2,3,4-테트라하이드로-1,8-나프티리디닐을 형성함), 카르보사이클(예를 들어, 5,6,7,8-테트라하이드로퀴놀릴을 형성함) 및 아릴(예를 들어, 인다졸릴을 형성함)로부터 선택되는 하나 이상의 고리와 축합되어 다중 축합 고리 시스템을 형성한다. 따라서, 헤테로아릴(단일 방향족 고리 또는 다중 축합 고리 시스템)은 헤테로아릴 고리 내에 약 1 내지 20개의 탄소 원자 및 약 1 내지 6개의 헤테로원자를 갖는다. 그러한 다중 축합 고리 시스템은 축합 고리의 카르보사이클 또는 헤테로사이클 부분 상에서 하나 이상(예를 들어, 1, 2, 3 또는 4개)의 옥소 기로 선택적으로 치환될 수 있다. 다중 축합 고리 시스템의 고리들은, 원자가 요건에 의해 허용될 때, 융합, 스피로 및 가교 결합을 통해 서로 연결될 수 있다. 다중 축합 고리 시스템의 개별 고리들은 서로에 대해 임의의 순서로 연결될 수 있음이 이해되어야 한다. 헤테로아릴 또는 헤테로아릴 다중 축합 고리 시스템에 대한 부착점은 탄소 원자 및 헤테로원자(예를 들어, 질소)를 포함하는 헤테로아릴 또는 헤테로아릴 다중 축합 고리 시스템의 임의의 적합한 원자에 있을 수 있음이 이해되어야 한다. 또한, 소정 원자-범위 구성원 헤테로아릴(예를 들어, 5원 내지 10원 헤테로아릴)이 언급될 때, 원자 범위는 헤테로아릴의 총 고리 원자에 대한 것이며, 탄소 원자 및 헤테로원자를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 5원 헤테로아릴은 티아졸릴을 포함할 것이고, 10원 헤테로아릴은 퀴놀리닐을 포함할 것이다. 예시적인 헤테로아릴은 피리딜, 피롤릴, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 피라졸릴, 티에닐, 인돌릴, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 아이속사졸릴, 티아졸릴, 푸릴, 옥사다이아졸릴, 티아다이아졸릴, 퀴놀릴, 아이소퀴놀릴, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 인다졸릴, 퀴녹살릴, 퀴나졸릴, 5,6,7,8-테트라하이드로아이소퀴놀리닐 벤조푸라닐, 벤즈이미다졸릴, 티아나프테닐, 피롤로[2,3-b]피리디닐, 퀴나졸리닐-4(3H)-온, 및 트라이아졸릴을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
"본 발명의 화합물"은 본 명세서에 개시된 화합물을 포함하며, 예를 들어 본 발명의 화합물은 실시예의 화합물을 포함하여 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 및 (IIn)의 화합물을 포함한다.
"약제학적 유효량"은 원하는 치료적 또는 약제학적 결과를 제공하는, 본 발명의 화합물의 제형 또는 병용물 내의 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다.
"약제학적으로 허용되는 부형제"는, 제한 없이, 인간 또는 가축에서의 사용이 허용되는 것으로 미국 식품의약국(United States Food and Drug Administration)에 의해 승인된 임의의 애쥬번트(adjuvant), 담체, 부형제, 활택제, 감미제, 희석제, 방부제, 염료/착색제, 향미 증진제, 계면활성제, 습윤제, 분산제, 현탁화제, 안정제, 등장제, 용매, 또는 유화제를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "치료" 또는 "치료하다" 또는 "치료하는"은 유익하거나 원하는 결과를 얻기 위한 접근을 지칭한다. 본 발명의 목적상, 유익하거나 원하는 결과는 질병 또는 질환과 관련된 증상의 경감 및/또는 증상의 정도의 감소 및/또는 증상 악화의 예방을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 일 실시 형태에서, "치료" 또는 "치료하는"은 하기 중 하나 이상을 포함한다: (a) 질병 또는 질환을 억제하는 것(예를 들어, 질병 또는 질환으로 인한 하나 이상의 증상을 감소시키고/감소시키거나, 질병 또는 질환의 정도를 저하시키는 것); (b) 질병 또는 질환과 관련된 하나 이상의 증상의 발생을 둔화 또는 정지시키는 것(예를 들어, 질병 또는 질환을 안정화시키거나, 질병 또는 질환의 악화 또는 진행을 지연시키는 것); 및 (c) 질병 또는 질환을 완화시키는 것, 예를 들어 임상 증상의 퇴행을 야기하고/하거나, 질병 상태를 개선하고/하거나, 질병의 진행을 지연시키고/시키거나, 삶의 질을 증가시키고/시키거나, 생존을 연장시키는 것.
"예방"은 바이러스성 감염증을 앓고 있는 환자에서 임상 질환의 진행을 예방하거나 지연시키는 것을 의미한다.
"호흡기 질환"은 바이러스성 감염증에 의해 야기되는 호흡기 감염증, 알레르기성 비염, 코막힘, 콧물, 다년성 비염, 비강 염증, 모든 유형의 천식, 만성 폐색성 폐 질병(COPD), 만성 또는 급성 기관지수축, 만성 기관지염, 소기도 폐색, 폐기종, 만성 호산구성 폐렴, 성인성 호흡곤란 증후군, 다른 약물 요법에 의한 결과로 생기는 기도 과반응성의 증악, 폐 혈관 질병(폐 동맥성 고혈압을 포함함), 급성 폐 손상, 기관지확장증, 부비동염, 알레르기성 결막염, 특발성 폐 섬유증 또는 아토피성 피부염, 특히 천식 또는 알레르기성 비염 또는 아토피성 피부염 또는 알레르기성 결막염에 의해 야기되는 질병 또는 질환을 지칭한다.
"호흡기 질환의 증악"은 바이러스성 감염증에 의해 유도되는 증악을 지칭한다. 대표적인 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 리노바이러스 및 메타뉴모바이러스를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "치료적 유효량" 또는 "유효량"은 원하는 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 데 효과적인 양을 지칭하며, 이에는, 질병을 치료하기 위해 대상체에게 투여될 때, 질병에 대한 그러한 치료를 달성하기에 충분한 화합물의 양이 포함된다. 유효량은 화합물, 질병, 및 이의 중증도, 및 치료하려는 대상체의 연령, 체중 등에 따라 달라질 것이다. 유효량은 다양한 양을 포함할 수 있다. 당업계에 이해되는 바와 같이, 유효량은 1회 이상의 용량으로 가능할 수 있으며, 즉 단회 용량 또는 다회 용량이 원하는 치료 종점을 달성하는 데 필요할 수 있다. 유효량은 하나 이상의 치료제를 투여하는 것과 관련하여 고려될 수 있으며, 단제(single agent)는 하나 이상의 다른 작용제와 함께 바람직하거나 유익한 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우, 유효량으로 제공되는 것으로 간주될 수 있다. 임의의 공동투여되는 화합물들의 적합한 용량은 이들 화합물의 조합된 작용(예를 들어, 상가적 또는 상승적 효과)으로 인해 선택적으로 낮출 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "공동투여"는 하나 이상의 추가의 치료제의 단위 투여량의 투여 전이나 투여 후에 본 명세서에 개시된 화합물의 단위 투여량을 투여하는 것, 예를 들어 하나 이상의 추가의 치료제를 투여한지 수초, 수분, 또는 수시간 이내에 본 명세서에 개시된 화합물을 투여하는 것을 지칭한다. 예를 들어, 일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물의 단위 용량이 먼저 투여된 후, 수초 또는 수분 이내에 하나 이상의 추가의 치료제의 단위 용량이 투여된다. 대안적으로, 다른 실시 형태에서, 하나 이상의 추가의 치료제의 단위 용량이 먼저 투여된 후, 수초 또는 수분 이내에 본 발명의 화합물의 단위 용량이 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물의 단위 용량이 먼저 투여된 후, 일정 기간(예를 들어, 1 내지 12시간) 후에 하나 이상의 추가의 치료제의 단위 용량이 투여된다. 다른 실시 형태에서, 하나 이상의 추가의 치료제의 단위 용량이 먼저 투여된 후, 일정 기간(예를 들어, 1 내지 12시간) 후에 본 발명의 화합물의 단위 용량이 투여된다. 본 명세서에 개시된 화합물과 하나 이상의 추가의 치료제의 공동투여는 일반적으로, 치료적 유효량의 각각의 작용제가 환자의 체내에 존재하도록 하는, 본 명세서에 개시된 화합물과 하나 이상의 추가의 치료제의 동시적 또는 순차적 투여를 지칭한다.
본 명세서에 기재된 화합물의 약제학적으로 허용되는 염, 수화물, 용매화물, 호변이성질체 형태, 다형체, 및 전구약물이 또한 제공된다. "약제학적으로 허용되는" 또는 "생리학적으로 허용되는"은 수의학적 또는 인간 약제학적 용도에 적합한 약제학적 조성물을 제조하기에 유용한 화합물, 염, 조성물, 투여 형태 및 다른 물질을 지칭한다.
본 명세서에 기재된 화합물은 약제학적으로 허용되는 염으로서 또는 적절한 경우 유리 염기로서 제조되고/되거나 제형화될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염은 유리 염기의 원하는 약리학적 활성을 갖는 화합물의 유리 염기 형태의 비독성 염이다. 이들 염은 무기 또는 유기 산 또는 염기로부터 유도될 수 있다. 예를 들어, 염기성 질소를 함유하는 화합물을 무기산 또는 유기산과 접촉시킴으로써 상기 화합물이 약제학적으로 허용되는 염으로서 제조될 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염의 비제한적인 예에는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 포스페이트, 모노하이드로겐-포스페이트, 다이하이드로겐-포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 클로라이드, 브로마이드, 요오다이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포르메이트, 아이소부티레이트, 카프로에이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말레에이트, 부틴-1,4-다이오에이트, 헥신-1,6-다이오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 다이니트로벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 설포네이트, 메틸설포네이트, 프로필설포네이트, 베실레이트, 자일렌설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, γ-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 타르트레이트, 및 만델레이트가 포함된다. 다른 적합한 약제학적으로 허용되는 염의 목록은 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Wiliams and Wilkins, Philadelphia, Pa., 2006]에 나타나 있다.
본 명세서에 개시된 화합물의 "약제학적으로 허용되는 염"의 예에는 또한 적절한 염기, 예컨대 알칼리 금속(예를 들어, 나트륨, 칼륨), 알칼리 토금속(예를 들어, 마그네슘), 암모늄, 및 NX4 +(여기서, X는 C1-C4 알킬임)로부터 유도되는 염이 포함된다. 또한, 염기 부가 염, 예컨대 나트륨 또는 칼륨 염이 포함된다.
탄소 원자에 부착된 1 내지 n개의 수소 원자가 중수소 원자 또는 D로 대체될 수 있는 본 명세서에 기재된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 이성질체, 또는 혼합물이 또한 제공되며, 여기서 n은 분자 내의 수소 원자의 수이다. 당업계에 알려진 바와 같이, 중수소 원자는 수소 원자의 비방사성 동위원소이다. 그러한 화합물은 대사 저항성을 증가시킬 수 있으며, 이에 따라 포유동물에게 투여될 때 본 명세서에 기재된 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 이성질체, 또는 혼합물의 반감기를 증가시키는 데 유용할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Foster, "Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism," Trends Pharmacol. Sci., 5(12):524-527 (1984)]을 참조한다. 그러한 화합물은 당업계에 잘 알려진 수단에 의해, 예를 들어 하나 이상의 수소 원자가 중수소에 의해 대체된 출발 물질을 사용함으로써 합성된다.
개시된 화합물 내로 도입될 수 있는 동위원소의 예에는 또한 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소, 염소, 및 요오드의 동위원소, 예컨대 각각 2H, 3H, 11C, 13C, 14C, 13N, 15N, 15O, 17O, 18O, 31P, 32P, 35S, 18F, 36Cl, 123I 및 125I가 포함된다. 양전자 방출 동위원소, 예컨대 11C, 18F, 15O 및 13N으로의 치환이 기질 수용체 점유를 조사하기 위한 양전자 방출 단층촬영(PET) 연구에 유용할 수 있다. 화학식 (I)의 동위원소 표지 화합물은 일반적으로 당업자에게 알려진 통상의 기법에 의해 또는 이전에 사용된 비표지 시약 대신에 적절한 동위원소 표지 시약을 사용하여 이하에 제시된 바와 같은 실시예에 기재된 것들과 유사한 공정에 의해 제조될 수 있다.
본 명세서에 개시된 실시 형태의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 하나 이상의 비대칭 중심을 함유할 수 있으며, 따라서 절대 입체화학의 관점에서 (R)- 또는 (S)-로서, 또는 아미노산에 대해서는 (D)- 또는 (L)-로서 정의될 수 있는 거울상 이성질체, 부분입체 이성질체, 및 다른 입체이성질체 형태를 발생시킬 수 있다. 본 발명은 모든 그러한 가능한 이성질체뿐만 아니라, 그들의 라세미 형태 및 광학적으로 순수한 형태를 포함하는 것으로 의미된다. 광학 활성 (+) 및 (-), (R)- 및 (S)-, 또는 (D)- 및 (L)- 이성질체는 키랄 신톤 또는 키랄 시약을 사용하여 제조되거나, 통상적인 기법, 예를 들어 크로마토그래피 및 분별 결정화를 사용하여 분할될 수 있다. 개별 거울상 이성질체의 제조/단리를 위한 통상적인 기법은 적합한 광학적으로 순수한 전구체로부터의 키랄 합성 또는 예를 들어 키랄 고압 액체 크로마토그래피(HPLC)를 사용한 라세미체(또는 염 또는 유도체의 라세미체)의 분할을 포함한다. 본 명세서에 기재된 화합물이 올레핀 이중 결합 또는 기하 비대칭의 다른 중심을 함유할 때, 그리고 달리 명시되지 않는 한, 그러한 화합물은 E 기하 이성질체 및 Z 기하 이성질체 둘 모두를 포함하도록 의도된다. 마찬가지로, 모든 호변이성질체 형태가 또한 포함되는 것으로 의도된다. 화합물이 이들의 키랄 형태로 표현되어 있는 경우, 실시 형태는 특정한 부분입체 이성질체적으로 또는 거울상 이성질체적으로 풍부한 형태를 포함하지만 이로 한정되지 않음이 이해된다. 키랄성이 명시되어 있지 않지만 존재하는 경우, 실시 형태는 특정한 부분입체 이성질체적으로 또는 거울상 이성질체적으로 풍부한 형태; 또는 그러한 화합물(들)의 라세미 또는 스칼레미 혼합물에 관한 것임이 이해된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "스칼레미 혼합물"은 1:1 이외의 비의 입체이성질체들의 혼합물이다.
"라세미체"는 거울상 이성질체들의 혼합물을 지칭한다. 이러한 혼합물은 동일하거나 동일하지 않은 양의 각각의 거울상 이성질체를 포함할 수 있다.
"입체이성질체" 및 "입체이성질체들"은 하나 이상의 입체중심의 키랄성이 상이한 화합물들을 지칭한다. 입체이성질체는 거울상 이성질체 및 부분입체 이성질체를 포함한다. 이러한 화합물은, 이들이 하나 이상의 비대칭 중심을 갖거나 비대칭 치환을 갖는 이중 결합을 갖는다면 입체이성질체 형태로 존재할 수 있으며, 이에 따라 개별 입체이성질체로서 또는 혼합물로서 생성될 수 있다. 달리 지시되지 않는 한, 상기 설명은 개별 입체이성질체뿐만 아니라 혼합물도 포함하는 것으로 의도된다. 입체화학의 결정 및 입체이성질체들의 분리를 위한 방법은 당업계에 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Chapter 4 of Advanced Organic Chemistry, 4th ed., J. March, John Wiley and Sons, New York, 1992] 참조).
"호변이성질체"는 양성자의 위치만이 상이한 화합물의 교번하는 형태, 예컨대 엔올-케토 및 이민-엔아민 호변이성질체, 또는 고리 -NH- 및 고리 =N- 둘 모두에 부착된 고리 원자를 함유하는 헤테로아릴 기의 호변이성질체 형태, 예컨대 피라졸, 이미다졸, 벤즈이미다졸, 트라이아졸, 및 테트라졸을 지칭한다.
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 화학기의 앞쪽 또는 끝쪽의 대시는 편의적이며; 화학기는 그의 통상의 의미를 잃지 않으면서 1개 이상의 대시와 함께 또는 대시 없이 나타낼 수 있다. 구조에서 선을 통과하여 그려진 물결선은 기의 부착점을 나타낸다. 파선은 선택적 결합을 나타낸다. 화학적으로 또는 구조적으로 요구되지 않는 한, 어떠한 방향성도 화학기가 기재된 순서 또는 그것이 분자의 나머지 부분에 부착되어 있는 지점으로 지시되거나 암시되지 않는다. 예를 들어, 기 "-SO2CH2-"는 "-CH2SO2-"와 동등하고, 둘 모두는 어느 방향으로도 연결될 수 있다. 유사하게, 예를 들어 "아릴알킬"기는 이 기의 아릴 또는 알킬 부분 중 어느 하나에서 분자의 나머지 부분에 부착될 수 있다. "Cu-v" 또는 (Cu-Cv)와 같은 접두사는 뒤따르는 기가 u 내지 v개의 탄소 원자를 갖는다는 것을 나타낸다. 예를 들어, "C1-6 알킬" 및 "C1-C6 알킬" 둘 모두는 알킬 기가 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는다는 것을 나타낸다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "용매화물"은 용매와 화합물의 상호작용의 결과를 지칭한다. 본 명세서에 기재된 화합물의 염의 용매화물이 또한 제공된다. 본 명세서에 기재된 화합물의 수화물이 또한 제공된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "전구약물"은 인체에 대한 투여 시에 어떠한 화학적 또는 효소적 경로에 따라 모 약물(parent drug)로 전환되는 약물의 유도체를 지칭한다.
III. 화합물
본 발명은 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 및 (IIn)의 화합물을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다:
[화학식 (II)]
Figure pct00007
(상기 식에서,
염기는 하기와 같으며:
Figure pct00008
,
Figure pct00009
또는
Figure pct00010
;
R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 하기와 같으며:
(A) 1 내지 3개의 R1B로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬,
(B) N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴 - 여기서, 상기 3원 내지 6원 헤테로사이클릴은 1 내지 3개의 R1C로 선택적으로 치환됨 -, 또는
(C) 페닐
(여기서, 각각의 R1B는 독립적으로 할로겐, -OH, -NH2, C1-6 알콕시, 메톡시에톡시, C3-8 사이클로알킬, 또는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴이고, 각각의 R1C는 독립적으로 C1-3 알킬임);
R3은 -N(H)R3A 또는 -N=C(R3B)(R3C)이고; R3A는 H, -CH2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이며, 여기서 R3D는 1개의 메톡시로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이거나, 또는 C1-3 알킬로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴이고; R3B는 H 또는 C1-3 알킬이고; R3C는 -N(R3C1)(R3C2)이고; R3C1 및 R3C2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이거나; 또는 R3C1과 R3C2는 그들이 부착되어 있는 원자와 함께, C1-6 알킬로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴을 형성하고;
R4A는 O 또는 S이고;
R4B 및 R4C는 각각 독립적으로 하기와 같으며:
(A) -OH;
(B) -OR4B1
(여기서, R4B1은 1 내지 3개의 R4B2 기로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이거나, 또는 C6-12 아릴이며, 여기서 각각의 R4B2 기는 독립적으로 C1-6 알콕시, -S-R4B3, 또는 -S(O)2-R4B3이고, 각각의 R4B3 기는 독립적으로 C1-6 알킬임);
(C)
Figure pct00011
(여기서, m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고; 각각의 R4D는 독립적으로, 1 내지 3개의 R4D1 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알킬, 1 내지 3개의 R4D2 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알콕시, 또는 - C(O)N(R4D3)2이며, 여기서 각각의 R4D1 기는 독립적으로 -NH2 또는 -C(O)OR4D3이고, 각각의 R4D2는 독립적으로 C1-3 알콕시이고, 각각의 R4D3은 독립적으로 C1-3 알킬임);
(D)
Figure pct00012
(여기서, R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이고, R4F1 및 R4F2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이거나, 또는 R4F1과 R4F2는 함께 결합하여 옥소이고, R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, 1 내지 3개의 R4G2로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬, 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 8원 헤테로사이클릴, 또는 -C(O)R4G4이고, 각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알킬, C1-3 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, -N(R4G8)2, -OP(O)(OH)2, 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬, 1 내지 3개의 R4G10으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴, 또는 페닐이고, 각각의 R4G2는 독립적으로 C1-6 알킬, C1-3 할로알킬, -OH 또는 -NH2이고, 각각의 R4G3은 독립적으로 할로겐 또는 C1-3 알킬이고, 각각의 R4G4는 독립적으로 C1-12 알킬이고, 각각의 R4G8은 독립적으로 C1-6 알킬이고, 각각의 R4G9는 독립적으로 C1-3 할로알킬, -OH 또는 -NH2이고, 각각의 R4G10은 독립적으로 C1-3 할로알킬임); 또는
(E) -(OP(O)(OH))1-2-OH;
R5A 및 R5B는 각각, -OP(O)(OH)2로 치환된 C1-6 알킬임).
일부 실시 형태에서, 화합물은, 염기는 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00013
,
Figure pct00014
또는
Figure pct00015
.
일부 실시 형태에서, 화합물은, 염기는 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00016
.
일부 실시 형태에서, 화합물은, 염기는 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00017
.
일부 실시 형태에서, 화합물은, 염기는 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00018
.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다: (A) 1 내지 3개의 R1B로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, (B) N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴 - 여기서, 상기 3원 내지 6원 헤테로사이클릴은 1 내지 3개의 R1C로 선택적으로 치환됨 -, 또는 (C) 페닐(여기서, 각각의 R1B는 독립적으로, -OH, -NH2, C1-6 알콕시, 메톡시에톡시, C3-8 사이클로알킬, 또는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴이고, 각각의 R1C는 독립적으로 C1-3 알킬임).
일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 1 내지 3개의 R1B로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각, 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, 아이소부틸, tert-부틸, 및 아이소펜틸로 이루어진 군으로부터 선택되며, 각각은 1 내지 3개의 R1B로 선택적으로 치환되는, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R1B는 독립적으로 메톡시, 메톡시에톡시, 모르폴리닐, -OH, 또는 -NH2일 수 있는, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로, 메톡시, 메톡시에톡시, 또는 모르폴리닐로 선택적으로 치환된 메틸, 메톡시로 선택적으로 치환된 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, -OH 또는 -NH2로 선택적으로 치환된 아이소부틸, tert-부틸, 또는 아이소펜틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, 아이소부틸, tert-부틸, 또는 아이소펜틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 메틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 에틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 아이소프로필인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴이며, 여기서 3원 내지 6원 헤테로사이클릴은 1 내지 3개의 R1C로 선택적으로 치환되며, 여기서 각각의 R1C는 독립적으로 C1-3 알킬, 하이드록시, 또는 할로겐인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각, N 및 O로부터 선택되는 1개의 헤테로원자를 갖는 4원 내지 6원 헤테로사이클릴이며, 여기서 4원 내지 6원 헤테로사이클릴은 1개의 R1C로 선택적으로 치환되며, 여기서 각각의 R1C는 독립적으로 C1-3 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 옥세타닐, 테트라하이드로피라닐 또는 피페리디닐이며, 각각은 1개의 R1C로 선택적으로 치환되며, 여기서 각각의 R1C는 독립적으로 C1-3 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R1C는 메틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 옥세타닐, 테트라하이드로피라닐, 또는 메틸로 선택적으로 치환된 피페리디닐인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 페닐인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R3은 -N(H)R3A 또는 -N=C(R3B) (R3C)이고, R3A는 H, -CH2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이며, 여기서 R3D는 1개의 메톡시로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이거나, 또는 C1-3 알킬로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴이고, R3B는 H 또는 C1-3 알킬이고, R3C는 -N(R3C1)(R3C2)이고, R3C1 및 R3C2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이거나, 또는 R3C1과 R3C2는 그들이 부착되어 있는 원자와 함께, C1-6 알킬로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴을 형성하는, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R3은 -N(H)R3A이고, R3A는 H, -CH2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이며, 여기서 R3D는 1개의 메톡시로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이거나, 또는 C1-3 알킬로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R3은 -N(H)R3A이고, R3A는 H, -CH2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이며, 여기서 R3D는 1개의 메톡시로 선택적으로 치환된 C1-3 알킬이거나, 또는 메틸로 선택적으로 치환된 피페리딘인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R3A는 H인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R3은 -NH2인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R3은 -N=C(R3B)(R3C)이며, 여기서 R3B는 H 또는 메틸이고, R3C는 -N(R3C1)(R3C2)이며, R3C1 및 R3C2는 각각 독립적으로 H 또는 메틸이거나, 또는 R3C1과 R3C2는 그들이 부착되어 있는 원자와 함께, 메틸로 선택적으로 치환된 피페라진을 형성하는, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4A는 O 또는 S인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4A는 O인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4A는 S인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B 및 R4C 중 하나는 -OH인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B 및 R4C 중 하나는 -OR4B1이며, 여기서 R4B1은 1 내지 3개의 R4B2 기로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이거나, 또는 C6-12 아릴이며, 여기서 각각의 R4B2 기는 독립적으로 C1-6 알콕시, -S-R4B3, 또는 -S(O)2-R4B3이고, 각각의 R4B3 기는 독립적으로 C1-6 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B1은 1 내지 3개의 R4B2 기로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R4B2 기는 독립적으로 C1-6 알콕시, -S-R4B3, 또는 -S(O)2-R4B3이고, 각각의 R4B3 기는 독립적으로 C1-6 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B1은 1 내지 3개의 R4B2 기로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이며, 여기서 각각의 R4B2 기는 독립적으로 C1-6 알콕시, -S-R4B3, 또는 -S(O)2-R4B3이고, 각각의 R4B3 기는 메틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B 및 R4C 중 하나는 메톡시, 메틸티오 또는 메틸설포닐로 선택적으로 치환된 -O-C1-6 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B 및 R4C 중 하나는 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00019
(상기 식에서, m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고; 각각의 R4D는 독립적으로, 1 내지 3개의 R4D1 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알킬, 1 내지 3개의 R4D2 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알콕시, 또는 - C(O)N(R4D3)2이며, 여기서 각각의 R4D1 기는 독립적으로 -NH2 또는 -C(O)OR4D3이고, 각각의 R4D2는 독립적으로 C1-3 알콕시이고, 각각의 R4D3은 독립적으로 C1-3 알킬임).
일부 실시 형태에서, 화합물은, m은 0, 1 또는 2이고; 각각의 R4D는 독립적으로, 1개의 R4D1 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알킬, 메톡시로 선택적으로 치환된 C1-3 알콕시, 또는 -C(O)N(R4D3)2이며, 여기서 각각의 R4D1 기는 독립적으로 -NH2 또는 -C(O)OR4D3이고, 각각의 R4D3은 독립적으로 C1-3 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, m은 0 또는 1인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, m은 0인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B 및 R4C 중 하나는 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00020
(상기 식에서, R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이고, R4F1 및 R4F2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이거나, 또는 R4F1과 R4F2는 함께 결합하여 옥소이고, R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, 1 내지 3개의 R4G2로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬, 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 8원 헤테로사이클릴, 또는 -C(O)R4G4이고, 각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알킬, C1-3 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, -N(R4G8)2, -OP(O)(OH)2, 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬, 1 내지 3개의 R4G10으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴, 또는 페닐이고, 각각의 R4G2는 독립적으로 C1-6 알킬, C1-3 할로알킬, -OH 또는 -NH2이고, 각각의 R4G3은 독립적으로 할로겐 또는 C1-3 알킬이고, 각각의 R4G4는 독립적으로 C1-12 알킬이고, 각각의 R4G8은 독립적으로 C1-6 알킬이고, 각각의 R4G9는 독립적으로 C1-3 할로알킬 또는 -NH2이고, 각각의 R4G10은 독립적으로 C1-3 할로알킬임).
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B 및 R4C 중 하나는 하기와 같으며:
Figure pct00021
;
R4B 및 R4C 중 다른 하나는 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00022
.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 메틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4F1 및 R4F2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이거나, 또는 R4F1과 R4F2는 함께 결합하여 옥소인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4F1 및 R4F2는 각각 독립적으로 H 또는 메틸이거나, 또는 R4F1과 R4F2는 함께 결합하여 옥소인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4F1과 R4F2는 함께 결합하여 옥소인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B 및 R4C 중 하나는 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00023
.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B 및 R4C 중 하나는 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다:
Figure pct00024
.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, 아이소부틸, t-부틸 또는 2-에틸-부틸이며, 각각은 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환된, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알킬, C1-3 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, -N(R4G8)2, -OP(O)(OH)2, 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬, 1 내지 3개의 R4G10으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴, 또는 페닐이며, 여기서 각각의 R4G8은 독립적으로 C1-6 알킬이고, 각각의 R4G9는 독립적으로 C1-3 할로알킬, 또는 -NH2이고, 각각의 R4G10은 독립적으로 C1-3 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알킬, C1-3 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, -N(R4G8)2, -OP(O)(OH)2, 1 내지 4개의 R4G9로 선택적으로 치환된 C3-6 사이클로알킬, 1 내지 4개의 R4G10으로 선택적으로 치환된, N 및 O로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 2개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴, 또는 페닐이며, 여기서 각각의 R4G8은 독립적으로 C1-6 알킬이고, 각각의 R4G9는 독립적으로 C1-3 할로알킬, 또는 -NH2이고, 각각의 R4G10은 독립적으로 C1-3 할로알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, 메틸, OMe, -(CH2OCH2)2-CH3, -N(iPr)2, -OP(O)(OH)2, 사이클로프로필, 사이클로부틸, -NH2 또는 CF3로 선택적으로 치환된 사이클로헥실, 옥세타닐, CF3 또는 CH2CF3로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 모르폴리닐, 또는 페닐인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 R4G1로 선택적으로 치환된 메틸, 모르폴리닐 또는 -N(R4G8)2로 선택적으로 치환된 에틸, 메톡시 또는 모르폴리닐로 선택적으로 치환된 n-프로필, 아이소프로필, C1-3 알킬로 선택적으로 치환된 n-부틸, -OH 또는 -OP(O)(OH)2로 선택적으로 치환된 아이소부틸이며, 여기서 R4G1은 사이클로프로필, 사이클로부틸, R4G9로 선택적으로 치환된 사이클로헥실, 옥세타닐, R4G10으로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 또는 페닐인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G8은 C1-3 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G8은 아이소프로필인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G9는 C1-3 할로알킬 또는 -NH2인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G9는 -CF3 또는 -NH2인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G10은 C1-3 할로알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G10은 -CF3 또는 2,2,2-트라이플루오로에틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 R4G1로 선택적으로 치환된 메틸, 모르폴리닐 또는 -N(C1-3 알킬)2로 선택적으로 치환된 에틸, 메톡시 또는 모르폴리닐로 선택적으로 치환된 n-프로필, 아이소프로필, C1-3 알킬로 선택적으로 치환된 n-부틸, -OH 또는 -OP(O)(OH)2로 선택적으로 치환된 아이소부틸이며, 여기서 R4G1은 사이클로프로필, 사이클로부틸, -NH2 또는 C1-3 할로알킬로 선택적으로 치환된 사이클로헥실, 옥세타닐, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 또는 페닐인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 1 내지 3개의 R4G2로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실이며, 각각은 1 내지 3개의 R4G2로 선택적으로 치환되는, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R4G2는 독립적으로 C1-6 알킬, C1-3 할로알킬 또는 -NH2인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R4G2는 tert-부틸, -CF3 또는 -NH2인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 8원 헤테로사이클릴인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환된, N 및 O로부터 선택되는 1개 또는 2개의 헤테로원자를 갖는 4원 내지 6원 헤테로사이클릴인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 옥세타닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 또는 테트라하이드로피라닐이며, 각각은 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환되는, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R4G3은 독립적으로 할로겐 또는 C1-3 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R4G3은 독립적으로 F, 메틸 또는 에틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 -C(O)R4G4인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, 각각의 R4G4는 독립적으로 C1-12 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 -C(O)C1-6 알킬인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 -C(O)-tert-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B 및 R4C 중 하나는 -(OP(O)(OH))1-2-OH인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4B 및 R4C 중 하나는 -(OP(O)(OH))1-2-OH이고, R4B 및 R4C 중 하나는 -OH인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R5A 및 R5B는 각각 -CH2OP(O)(OH)2인, 화학식 (II), (IIa) 또는 (IIb)로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R5A는 -CH2OP(O)(OH)2인, 화학식 (II) 또는 (IIa)로 나타낼 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R5B는 -CH2OP(O)(OH)2인, 화학식 (II) 또는 (IIb)로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIa)로 나타낸다:
[화학식 (IIa)]
Figure pct00025
(상기 식에서, R5A는 -CH2OP(O)(OH)2임).
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIb)로 나타낸다:
[화학식 (IIb)]
Figure pct00026
(상기 식에서, R5B는 -CH2OP(O)(OH)2임).
일부 실시 형태에서, 화합물은,
R1A 및 R2A는 각각 독립적으로, 메톡시, 메톡시에톡시, 또는 모르폴리닐로 선택적으로 치환된 메틸, 메톡시로 선택적으로 치환된 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, -OH 또는 -NH2로 선택적으로 치환된 아이소부틸, tert-부틸, 아이소펜틸, 옥세타닐, 테트라하이드로피라닐, 메틸로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 또는 페닐이고;
R3은 -N(H)R3A 또는 -N=C(R3B) (R3C)이고; R3A는 H, -C(H)2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이고; R3D는 메틸, 메톡시로 선택적으로 치환된 에틸, 아이소프로필, 또는 메틸로 선택적으로 치환된 피페리디닐이고; R3B는 H 또는 메틸이고; R3C는 -N(R3C1)(R3C2)이고; R3C1 및 R3C2는 독립적으로 H 또는 메틸이거나; 또는 R3C1과 R3C2는 그들이 부착되어 있는 원자와 함께, 메틸로 선택적으로 치환된 피페라지닐을 형성하고;
R4A는 O 또는 S이고;
R4B 및 R4C는 각각 독립적으로 하기와 같은, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다:
(A) -OH;
(B) 메톡시, 메틸티오 또는 메틸설포닐로 선택적으로 치환된 -O-C1-6 알킬;
(C)
Figure pct00027
(여기서, m은 0, 1 또는 2이고; 각각의 R4D는 독립적으로, 1개의 R4D1 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알킬, 메톡시로 선택적으로 치환된 C1-3 알콕시, 또는 -C(O)N(R4D3)2이며, 여기서 각각의 R4D1 기는 독립적으로 -NH2 또는 -C(O)OR4D3이고, 각각의 R4D3은 독립적으로 C1-3 알킬임); 또는
(D)
Figure pct00028
(여기서, R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 메틸이고, R4F1 및 R4F2는 각각 독립적으로 H 또는 메틸이거나, 또는 R4F1과 R4F2는 함께 결합하여 옥소이고, R4G는 R4G1로 선택적으로 치환된 메틸, 모르폴리닐 또는 -N(C1-3 알킬)2로 선택적으로 치환된 에틸, 메톡시 또는 모르폴리닐로 선택적으로 치환된 n-프로필, 아이소프로필, C1-3 알킬로 선택적으로 치환된 n-부틸, -OH 또는 -OP(O)(OH)2로 선택적으로 치환된 아이소부틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, -NH2, C1-6 알킬, 또는 C1-3 할로알킬로부터 각각 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 기로 선택적으로 치환된 사이클로헥실, 옥세타닐, 1 내지 3개의 메틸로 선택적으로 치환된 피롤리디닐, 할로겐 또는 C1-3 알킬로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 또는 -C(O)C1-6 알킬이고, R4G1은 사이클로프로필, 사이클로부틸, -NH2 또는 C1-3 할로알킬로 선택적으로 치환된 사이클로헥실, 옥세타닐, C1-3 할로알킬로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 또는 페닐임).
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIc)로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IIc)]
Figure pct00029
.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IId)로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IId)]
Figure pct00030
.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IId)로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IIe)]
Figure pct00031
.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIf)로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IIf)]
Figure pct00032
.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIg)로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IIg)]
Figure pct00033
(상기 식에서, m은 0 또는 1임).
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIh)로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IIh)]
Figure pct00034
.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIi)로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IIi)]
Figure pct00035
.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIj)로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IIj)]
Figure pct00036
.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIk)로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IIk)]
Figure pct00037
.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIm)으로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IIm)]
Figure pct00038
.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 화학식 (IIn)으로 나타낼 수 있다:
[화학식 (IIn)]
Figure pct00039
.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, 아이소부틸, tert-부틸, 또는 아이소펜틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 에틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 아이소프로필인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, t-부틸 또는 2-에틸-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 메틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 에틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 n-프로필인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G은 아이소프로필인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 n-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 t-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R4G는 2-에틸-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, 아이소부틸, tert-부틸, 또는 아이소펜틸이고, R4G는 R4G1로 선택적으로 치환된 메틸, 모르폴리닐 또는 -N(C1-3 알킬)2로 선택적으로 치환된 에틸, 메톡시 또는 모르폴리닐로 선택적으로 치환된 n-프로필, 아이소프로필, C1-3 알킬로 선택적으로 치환된 n-부틸, -OH 또는 -OP(O)(OH)2로 선택적으로 치환된 아이소부틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, -NH2, C1-6 알킬, 또는 C1-3 할로알킬로부터 각각 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 기로 선택적으로 치환된 사이클로헥실, 옥세타닐, 1 내지 3개의 메틸로 선택적으로 치환된 피롤리디닐, 할로겐 또는 C1-3 알킬로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 또는 -C(O)C1-6 알킬이고, R4G1은 사이클로프로필, 사이클로부틸, -NH2 또는 C1-3 할로알킬로 선택적으로 치환된 사이클로헥실, 옥세타닐, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 또는 페닐인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필이고, R4G는 R4G1로 선택적으로 치환된 메틸, 모르폴리닐 또는 -N(C1-3 알킬)2로 선택적으로 치환된 에틸, 메톡시 또는 모르폴리닐로 선택적으로 치환된 n-프로필, 아이소프로필, C1-3 알킬로 선택적으로 치환된 n-부틸, -OH 또는 -OP(O)(OH)2로 선택적으로 치환된 아이소부틸, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, -NH2, C1-6 알킬, 또는 C1-3 할로알킬로부터 각각 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 기로 선택적으로 치환된 사이클로헥실, 옥세타닐, 1 내지 3개의 메틸로 선택적으로 치환된 피롤리디닐, 할로겐 또는 C1-3 알킬로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 테트라하이드로피라닐, 또는 -C(O)C1-6 알킬이고, R4G1은 사이클로프로필, 사이클로부틸, -NH2 또는 C1-3 할로알킬로 선택적으로 치환된 사이클로헥실, 옥세타닐, C1-3 알킬 또는 C1-3 할로알킬로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 테트라하이드로피라닐, 또는 페닐인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, 아이소부틸, tert-부틸, 또는 아이소펜틸이고, R4G는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, t-부틸 또는 2-에틸-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필이고, R4G는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, t-부틸 또는 2-에틸-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 메틸이고, R4G는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, t-부틸 또는 2-에틸-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 에틸이고, R4G는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, t-부틸 또는 2-에틸-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 아이소프로필이고, R4G는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, t-부틸 또는 2-에틸-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필이고, R4G는 메틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필이고, R4G는 에틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필이고, R4G는 n-프로필인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필이고, R4G는 아이소프로필인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필이고, R4G는 n-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필이고, R4G는 t-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은, R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필이고, R4G는 2-에틸-부틸인, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있다.
본 발명의 화합물은 표 1A, 표 1B, 표 1C, 표 1D, 표 1E, 표 1F, 표 1G, 표 1H, 및 표 1I의 화합물을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 화합물은 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)으로 나타낼 수 있는 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염일 수 있으며, 여기서 화합물은 표 1A, 표 1B, 표 1C, 표 1D, 표 1E, 표 1F, 표 1G, 표 1H, 및 표 1I의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택된다:
[표 1A]
화합물
Figure pct00040
Figure pct00041
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
Figure pct00052
Figure pct00053
Figure pct00054
Figure pct00055
Figure pct00056
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
Figure pct00061
Figure pct00062
Figure pct00063
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
Figure pct00067
Figure pct00068
Figure pct00069
Figure pct00070
Figure pct00071
[표 1B]
화합물
Figure pct00072
Figure pct00073
Figure pct00074
Figure pct00075
Figure pct00076
Figure pct00077
Figure pct00078
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
Figure pct00082
Figure pct00083
Figure pct00084
Figure pct00085
Figure pct00086
Figure pct00087
Figure pct00088
Figure pct00089
Figure pct00090
Figure pct00091
Figure pct00092
Figure pct00093
Figure pct00094
Figure pct00095
Figure pct00096
Figure pct00097
Figure pct00098
Figure pct00099
Figure pct00100
Figure pct00101
Figure pct00102
Figure pct00103
Figure pct00104
Figure pct00105
Figure pct00106
Figure pct00107
Figure pct00108
Figure pct00109
Figure pct00110
Figure pct00111
Figure pct00112
Figure pct00113
[표 1C]
화합물
Figure pct00114
Figure pct00115
[표 1D]
화합물
Figure pct00116
Figure pct00117
Figure pct00118
Figure pct00119
Figure pct00120
Figure pct00121
Figure pct00122
Figure pct00123
Figure pct00124
Figure pct00125
Figure pct00126
Figure pct00127
Figure pct00128
Figure pct00129
Figure pct00130
Figure pct00131
Figure pct00132
Figure pct00133
Figure pct00134
Figure pct00135
Figure pct00136
Figure pct00137
Figure pct00138
Figure pct00139
Figure pct00140
Figure pct00141
Figure pct00142
Figure pct00143
Figure pct00144
Figure pct00145
Figure pct00146
Figure pct00147
Figure pct00148
Figure pct00149
Figure pct00150
Figure pct00151
Figure pct00152
Figure pct00153
[표 1E]
화합물
Figure pct00154
Figure pct00155
Figure pct00156
Figure pct00157
Figure pct00158
Figure pct00159
Figure pct00160
Figure pct00161
Figure pct00162
Figure pct00163
Figure pct00164
Figure pct00165
Figure pct00166
Figure pct00167
Figure pct00168
Figure pct00169
Figure pct00170
Figure pct00171
Figure pct00172
Figure pct00173
Figure pct00174
Figure pct00175
Figure pct00176
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
Figure pct00180
Figure pct00181
Figure pct00182
Figure pct00183
Figure pct00184
Figure pct00185
Figure pct00186
Figure pct00187
Figure pct00188
Figure pct00189
Figure pct00190
Figure pct00191
Figure pct00192
[표 1F]
화합물
Figure pct00193
Figure pct00194
Figure pct00195
Figure pct00196
Figure pct00197
Figure pct00198
[표 1G]
화합물
Figure pct00199
Figure pct00200
Figure pct00201
Figure pct00202
Figure pct00203
Figure pct00204
Figure pct00205
Figure pct00206
Figure pct00207
Figure pct00208
Figure pct00209
[표 1H]
화합물
Figure pct00210
Figure pct00211
Figure pct00212
Figure pct00213
[표 1I]
화합물
Figure pct00214
Figure pct00215
Figure pct00216
Figure pct00217
Figure pct00218
Figure pct00219
Figure pct00220
Figure pct00221
Figure pct00222
Figure pct00223
Figure pct00224
Figure pct00225
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00226
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일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00227
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일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에서, 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00228
Figure pct00229
Figure pct00230
또는
Figure pct00231
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일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에서, 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00232
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일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에서, 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00233
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일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에서, 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00234
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일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에서, 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00235
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일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에서, 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00236
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일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에서, 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00237
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일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에서, 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00238
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일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염에서, 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00239
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본 명세서에 기재된 화합물의 생체내 대사 산물이 종래 기술에 비해 신규하고 자명하지 않는 한, 그러한 산물이 또한 본 발명의 범주 내에 포함된다. 그러한 산물은, 예를 들어 투여된 화합물의, 주로 효소 과정으로 인한 산화, 환원, 가수분해, 아미드화, 에스테르화 등으로부터 발생될 수 있다. 따라서, 화합물을 이의 대사 산물을 생성하기에 충분한 기간 동안 포유동물과 접촉시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 생성되는 신규하고 자명하지 않은 화합물이 포함된다. 그러한 산물은 전형적으로 방사성 표지(예를 들어, 14C 또는 3H) 화합물을 제조하고, 그것을 검출가능한 용량(예를 들어, 약 0.5 mg/㎏ 초과)으로 래트, 마우스, 기니피그, 원숭이와 같은 동물, 또는 사람에게 비경구적으로 투여하여, 대사가 일어나기에 충분한 시간(전형적으로 약 30초 내지 30시간)을 주고, 소변, 혈액 또는 다른 생물학적 샘플로부터 이의 변환 산물을 단리함으로써 확인된다. 이들 산물은 표지되어 있기 때문에 용이하게 단리된다(다른 것들은 대사물에서 생존하는 에피토프에 결합할 수 있는 항체를 사용하여 단리된다). 대사물 구조는 통상적인 방식으로, 예를 들어 MS 또는 NMR 분석에 의해 결정된다. 일반적으로, 대사물의 분석은 당업자에게 잘 알려진 통상적인 약물 대사 연구와 동일한 방법으로 행해진다. 변환 산물은, 생체내에서 달리 발견되지 않는 한, 그 자체에 HSV 항바이러스 활성이 없더라도 화합물의 치료적 투여를 위한 진단 검정에 유용하다.
대용 위장 분비물(surrogate gastrointestinal secretion)에서 화합물의 안정성을 결정하기 위한 레시피 및 방법이 알려져 있다. 화합물은, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션 시에, 보호된 기의 약 50 몰% 미만이 대용 장액 또는 위액에서 탈보호되는 위장관에서 안정한 것으로 본 명세서에 정의되어 있다. 단순히, 화합물이 위장관에 대해 안정하기 때문에, 이들이 생체내에서 가수분해될 수 없음을 의미하지는 않는다. 전구약물은 전형적으로 소화기계에서 안정하겠지만, 소화관 내강, 간, 폐 또는 다른 대사 기관에서, 또는 일반적으로 세포 내에서 모 약물로 실질적으로 가수분해될 수 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 전구약물은 경구 전달에 대한 생물학적 장벽을 극복한 후에 모 약물을 효율적으로 유리시키도록 화학적으로 설계된 화합물인 것으로 이해된다.
IV. 약제학적 제형
일부 실시 형태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 약제학적 유효량과, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다. 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 및 (IIn)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 및/또는 에스테르의 약제학적 유효량과, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 제형이 본 명세서에 또한 제공된다.
본 발명의 화합물은 통상적인 관행에 따라 선택될 통상적인 담체 및 부형제를 사용하여 제형화된다. 정제는 부형제, 활택제(glidant), 충전제, 결합제 등을 함유할 것이다. 수성 제형은 멸균 형태로 제조되고, 경구 투여 이외의 것에 의해 전달되도록 의도된 경우 일반적으로 등장성일 것이다. 모든 제형은 선택적으로 문헌["Handbook of Pharmaceutical Excipients" (1986)]에 제시된 것들과 같은 부형제를 함유할 것이다. 부형제는 아스코르브산 및 다른 산화방지제, 킬레이트제, 예컨대 EDTA, 탄수화물, 예컨대 덱스트란, 하이드록시알킬셀룰로스, 하이드록시알킬메틸셀룰로스, 스테아르산 등을 포함한다. 제형의 pH는 약 3 내지 약 11의 범위이지만, 통상적으로 약 7 내지 10이다.
활성 성분이 단독으로 투여되는 것이 가능하지만, 그것을 약제학적 제형으로서 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 수의학적 사용 및 인간 사용 둘 모두를 위한 제형은 상기에 정의된 바와 같은 적어도 하나의 활성 성분을, 하나 이상의 허용되는 담체 및 선택적으로 다른 치료용 성분, 특히 본 명세서에 논의된 바와 같은 추가의 치료용 성분과 함께 포함한다. 담체(들)는, 제형의 나머지 다른 성분들과 상용성이고 이의 수용자에게 생리학적으로 무해하다는 의미에서 "허용되어야" 한다.
제형은 전술한 투여 경로에 적합한 것들을 포함한다. 제형은 편의상 단위 투여 형태(unit dosage form)로 제공될 수 있으며, 제약 분야에서 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다. 기법 및 제형은 전반적으로 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences (Mack Publishing Co., Easton, PA)]에서 확인된다. 그러한 방법은 활성 성분을 하나 이상의 보조 성분을 구성하는 담체와 회합되게 하는 단계를 포함한다. 일반적으로, 제형은, 활성 성분을 액체 담체 또는 미분된 고체 담체 또는 둘 모두와 균일하게 그리고 친밀하게 회합되게 하고, 이어서 필요하다면, 생성물을 형상화함으로써 제조된다.
경구 투여에 적합한 제형은 분리된 단위, 예컨대 캡슐, 카세이(cachet) 또는 정제 - 각각은 미리 결정된 양의 활성 성분을 함유함 - 로서; 분말 또는 과립으로서; 수성 또는 비수성 액체 중 용액 또는 현탁액으로서; 또는 수중유 액체 에멀젼 또는 유중수 액체 에멀젼으로서 제공될 수 있다. 활성 성분은 또한 볼루스(bolus), 연약(electuary) 또는 페이스트로서 투여될 수 있다.
정제는, 선택적으로 하나 이상의 보조 성분과 함께, 압축 또는 성형에 의해 제조된다. 압축 정제는, 선택적으로 결합제, 윤활제, 불활성 희석제, 방부제, 표면 활성제 또는 분산제와 혼합된, 분말 또는 과립과 같은 자유-유동 형태의 활성 성분을 적합한 기계에서 압축함으로써 제조될 수 있다. 성형 정제는 불활성 액체 희석제로 촉촉하게 된 분말형 활성 성분의 혼합물을 적합한 기계에서 성형함으로써 제조될 수 있다. 정제는 선택적으로 코팅되거나 스코어링될 수 있고, 선택적으로 그로부터의 활성 성분의 느린 또는 제어 방출을 제공하도록 제형화된다.
눈 또는 다른 외부 조직, 예를 들어 입 및 피부의 감염증의 경우, 제형은 바람직하게는, 예를 들어 0.075 내지 20% w/w(0.1% w/w, 예컨대 0.6% w/w, 0.7% w/w 등의 증분으로 0.1% 내지 20% 범위로 활성 성분(들)을 포함함), 바람직하게는 0.2 내지 15% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 0.5 내지 10% w/w의 양으로 활성 성분(들)을 함유하는 국소 연고 또는 크림으로서 적용된다. 연고 형태로 제형화되는 경우, 활성 성분은 파라핀계 또는 수혼화성 연고 베이스와 함께 사용될 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 수중유 크림 베이스를 사용하여 크림 형태로 제형화될 수 있다.
필요하다면, 크림 베이스의 수성 상은, 예를 들어 적어도 30% w/w의 다가 알코올, 즉, 2개 이상의 하이드록실 기를 갖는 알코올, 예컨대 프로필렌 글리콜, 부탄 1,3-다이올, 만니톨, 소르비톨, 글리세롤 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG 400을 포함함) 및 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 국소 제형은 바람직하게는 피부 또는 다른 이환된 영역을 통한 활성 성분의 흡수 또는 침투를 향상시키는 화합물을 포함할 수 있다. 그러한 진피 침투 향상제의 예에는 다이메틸 설폭사이드 및 관련 유사체가 포함된다.
에멀젼의 유성 상은 알려진 방식으로 알려진 성분으로부터 구성될 수 있다. 상기 상은 단지 유화제(달리 에멀젼트(emulgent)로 알려짐)만을 포함할 수 있지만, 이는 바람직하게는 적어도 하나의 유화제와 지방 또는 오일의, 또는 지방 및 오일 둘 모두의 혼합물을 포함한다. 바람직하게는, 친수성 유화제가, 안정제로서 작용하는 친유성 유화제와 함께 포함된다. 오일 및 지방 둘 모두를 포함하는 것이 또한 바람직하다. 종합하면, 안정제(들)와 함께 또는 이것 없이 유화제(들)는 이른바 유화 왁스를 구성하고, 오일 및 지방과 함께 왁스는, 크림 제형의 유성 분산상을 형성하는 이른바 유화 연고를 구성한다.
제형에 사용하기에 적합한 에멀젼트 및 유화 안정제는 Tween® 60, Span® 80, 세토스테아릴 알코올, 벤질 알코올, 미리스틸 알코올, 글리세릴 모노-스테아레이트 및 소듐 라우릴 설페이트를 포함한다.
제형에 적합한 오일 또는 지방의 선택은 원하는 미용 특성의 달성에 기초한다. 크림은 바람직하게는 튜브 또는 다른 용기로부터의 누출을 피하기에 적합한 주도(consistency)를 갖는 비-그리스성(non-greasy)이고, 비오염성(non-staining)이고, 세척가능한 생성물이어야 한다. 직쇄 또는 분지쇄, 일염기성 또는 이염기성 알킬 에스테르, 예컨대 다이-아이소아디페이트, 아이소세틸 스테아레이트, 코코넛 지방산의 프로필렌 글리콜 다이에스테르, 아이소프로필 미리스테이트, 데실 올레에이트, 아이소프로필 팔미테이트, 부틸 스테아레이트, 2-에틸헥실 팔미테이트, 또는 Crodamol CAP로 알려진 분지쇄 에스테르들의 블렌드가 사용될 수 있으며, 마지막 3개가 바람직한 에스테르이다. 이들은 필요한 특성에 따라 단독으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 대안적으로, 고융점 지질, 예컨대 백색 연질 파라핀 및/또는 액체 파라핀 또는 다른 광유가 사용된다.
본 발명의 약제학적 제형은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제 및 선택적으로 다른 치료제와 함께 형성되는 병용물을 포함한다. 활성 성분을 함유하는 약제학적 제형은 의도된 투여 방법에 적합한 임의의 형태일 수 있다. 경구용으로 사용되는 경우, 예를 들어 정제, 트로키(troche), 로젠지(lozenge), 수성 또는 오일 현탁액, 분산성 분말 또는 과립, 에멀젼, 경질 또는 연질 캡슐, 용액, 시럽 또는 엘릭서(elixir)가 제조될 수 있다. 경구 사용으로 의도된 조성물은 약제학적 조성물의 제조를 위한 당업계에 알려진 임의의 방법에 따라 제조될 수 있으며, 그러한 조성물은 맛좋은 제제를 제공하기 위하여 감미제, 향미제, 착색제 및 방부제를 포함한 하나 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 정제의 제조에 적합한 무독성의 약제학적으로 허용되는 부형제와 혼합된 활성 성분을 함유하는 정제가 허용된다. 이들 부형제는, 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘 또는 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예컨대 옥수수 전분, 또는 알긴산; 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 윤활제, 예컨대 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 또는 활석일 수 있다. 정제는 코팅되지 않을 수 있거나, 위장관에서의 붕해 및 흡착을 지연시킴으로써 더 오랜 기간에 걸쳐 지속된 작용을 제공하기 위한, 미세캡슐화를 포함한 알려진 기법에 의해 코팅될 수 있다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 다이스테아레이트가 단독으로 또는 왁스와 함께 사용될 수 있다.
경구 사용을 위한 제형은 또한, 활성 성분이 불활성 고체 희석제, 예를 들어 인산칼슘 또는 카올린과 혼합된 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 활성 성분이 물 또는 오일 매질, 예컨대 땅콩유, 액체 파라핀 또는 올리브유와 혼합된 연질 젤라틴 캡슐로서 제공될 수 있다.
수성 현탁액은 수성 현탁액의 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성 물질을 함유한다. 그러한 부형제는 현탁화제, 예컨대 소듐 카르복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스, 소듐 알기네이트, 폴리비닐피롤리돈, 검 트래거캔스 및 검 아카시아, 및 분산제 또는 습윤제, 예컨대 천연 발생 포스파티드(예를 들어, 레시틴), 알킬렌 옥사이드와 지방산의 축합 생성물(예를 들어, 폴리옥시알킬렌 스테아레이트), 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방족 알코올의 축합 생성물(예를 들어, 헵타데카에틸렌옥시세탄올), 에틸렌 옥사이드와, 지방산과 헥시톨 무수물로부터 유도되는 부분 에스테르의 축합 생성물(예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트)을 포함한다. 수성 현탁액은 또한 하나 이상의 방부제, 예컨대 에틸 또는 n-프로필 p-하이드록시-벤조에이트, 하나 이상의 착색제, 하나 이상의 향미제, 및 하나 이상의 감미제, 예를 들어 수크로스 또는 사카린을 함유할 수 있다.
유성 현탁액은 식물성 오일, 예를 들어 땅콩유, 올리브유, 참깨유 또는 코코넛유 중에, 또는 광유, 예컨대 액체 파라핀 중에 활성 성분을 현탁시킴으로써 제형화될 수 있다. 유성 현탁액은 증점제, 예컨대 밀랍, 경질 파라핀 또는 세틸 알코올을 함유할 수 있다. 감미제, 예컨대 상기에 기재된 것들, 및 향미제가 첨가되어 맛좋은 경구 제제를 제공할 수 있다. 이들 조성물은 산화방지제, 예컨대 아스코르브산의 첨가에 의해 보존될 수 있다.
물의 첨가에 의한 수성 현탁액의 제조에 적합한 분산성 분말 및 과립은 분산제 또는 습윤제, 현탁화제, 및 하나 이상의 방부제와 혼합된 활성 성분을 제공한다. 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제는 상기에 개시된 것들에 의해 예시된다. 추가의 부형제, 예를 들어 감미제, 향미제 및 착색제가 또한 존재할 수 있다.
약제학적 조성물은 또한 수중유 에멀젼의 형태일 수 있다. 유성 상은 식물성 오일, 예컨대 올리브유 또는 땅콩유, 또는 광유, 예컨대 액체 파라핀, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 유화제는 천연 발생 검, 예컨대 아카시아 검 및 트래거캔스 검, 천연 발생 포스파티드, 예컨대 대두 레시틴, 및 지방산과 헥시톨 무수물로부터 유도되는 에스테르 또는 부분 에스테르, 예컨대 소르비탄 모노올레에이트, 및 이들 부분 에스테르와 에틸렌 옥사이드의 축합 생성물, 예컨대 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트를 포함한다. 에멀젼은 또한 감미제 및 향미제를 함유할 수 있다. 시럽 및 엘릭서는 감미제, 예컨대 글리세롤, 소르비톨 또는 수크로스를 사용하여 제형화될 수 있다. 그러한 제형은 또한 점활제(demulcent), 방부제, 향미제 또는 착색제를 함유할 수 있다.
약제학적 조성물은 멸균 주사용 또는 정맥내 제제, 예컨대 멸균 주사용 수성 또는 유지성(oleaginous) 현탁액의 형태일 수 있다. 이러한 현탁액은 상기에 언급된 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 알려진 기술에 따라 제형화될 수 있다. 멸균 주사용 또는 정맥내 제제는 또한 무독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중 멸균 주사용 용액 또는 현탁액, 예컨대, 1,3-부탄-다이올 중 용액일 수 있거나, 동결건조된 분말로서 제조될 수 있다. 사용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매 중에는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이 있다. 게다가, 멸균 고정유가 용매 또는 현탁 매질로서 통상적으로 사용될 수 있다. 이러한 목적으로, 합성 모노- 또는 다이글리세라이드를 포함하는 임의의 무자극성(bland) 고정유가 사용될 수 있다. 게다가, 마찬가지로 지방산, 예컨대 올레산이 주사제의 제조에 사용될 수 있다.
단회 투여 형태를 생성하기 위해 담체 물질과 배합될 수 있는 활성 성분의 양은 치료되는 숙주 및 특정 투여 방식에 따라 변동될 것이다. 예를 들어, 인간에 대한 경구 투여를 위해 의도된 시한-방출 제형은 총 조성물의 약 5 내지 약 95% (중량:중량)로 변동될 수 있는 적절하고 편리한 양의 담체 물질과 배합된 대략 1 내지 1000 mg의 활성 물질을 함유할 수 있다. 약제학적 조성물은 투여를 위해 용이하게 측정가능한 양을 제공하도록 제조될 수 있다. 예를 들어, 정맥내 주입을 위해 의도된 수용액은 약 30 mL/hr의 속도로 적합한 부피의 주입이 일어날 수 있도록 하기 위하여, 용액 1 밀리리터당 약 3 내지 500 ㎍의 활성 성분을 함유할 수 있다.
눈에 대한 국소 투여에 적합한 제형은 또한 점안제를 포함하는데, 여기서는 활성 성분이 적합한 담체, 특히 활성 성분을 위한 수성 용매 중에 용해되거나 현탁된다. 활성 성분은 바람직하게는 0.5 내지 20%, 유리하게는 0.5 내지 10%, 그리고 특히 약 1.5% w/w의 농도로 그러한 제형에 존재한다.
입에 대한 국소 투여에 적합한 제형은 향미부여된 베이스, 통상 수크로스 및 아카시아 또는 트래거캔스 중에 활성 성분을 포함하는 로젠지; 불활성 베이스, 예컨대 젤라틴 및 글리세린, 또는 수크로스 및 아카시아 중에 활성 성분을 포함하는 향정(pastille); 및 적합한 액체 담체 중에 활성 성분을 포함하는 구강세척제를 포함한다.
직장 투여용 제형은, 예를 들어 코코아 버터 또는 살리실레이트를 포함하는 적합한 베이스를 함유하는 좌제로서 제공될 수 있다.
폐내 또는 비강 투여에 적합한 제형은, 예를 들어 0.1 내지 500 마이크로미터 범위, 예컨대 0.5, 1, 30, 35 마이크로미터 등의 입자 크기를 가지며, 이는 폐포낭(alveolar sac)에 도달하도록 비도(nasal passage)를 통한 신속한 흡입에 의해 또는 입을 통한 흡입에 의해 투여된다. 적합한 제형은 활성 성분의 수용액 또는 유성 용액을 포함한다. 에어로졸 또는 건조 분말 투여에 적합한 제형은 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있으며, 다른 치료제, 예컨대 지금까지 하기에 기재된 바와 같은 뉴모바이러스과 감염증의 치료 또는 예방에 사용된 화합물과 함께 전달될 수 있다.
다른 실시 형태는 신규한, 효능이 있는, 안전한, 비자극성이고, 생리학적으로 상용성인 흡입가능한 조성물을 제공하며, 상기 조성물은 뉴모바이러스과 감염증 및 잠재적으로 관련된 세기관지염을 치료하는 데 적합한 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함한다. 바람직한 약제학적으로 허용되는 염은 하이드로클로라이드, 하이드로브로마이드, 설페이트 또는 포스페이트 염을 포함한 무기산 염인데, 그 이유는, 이들은 더 적은 폐 자극을 야기할 수 있기 때문이다. 바람직하게는, 흡입가능한 제형은 질량 중위 공기역학적 직경(mass median aerodynamic diameter, MMAD)이 약 1 내지 약 5 μm인 입자를 포함하는 에어로졸 형태로 기관지내 공간에 전달된다. 바람직하게는, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물은 네뷸라이저, 가압형 정량식 흡입기(pMDI), 또는 건조 분말 흡입기(DPI)를 사용한 에어로졸 전달을 위해 제형화된다.
네뷸라이저의 비제한적인 예에는 무화(atomizing) 네뷸라이저, 제트 네뷸라이저, 초음파 네뷸라이저, 가압형 네뷸라이저, 진동 다공성 플레이트 네뷸라이저, 또는 적응 에어로졸 전달 기술을 이용하는 네뷸라이저를 포함한 등가의 네뷸라이저가 포함된다(문헌[Denyer, J. Aerosol medicine Pulmonary Drug Delivery 2010, 23 Supp 1, S1-S10]). 제트 네뷸라이저는 공기 압력을 이용하여 액체 용액을 에어로졸 액적으로 파단시킨다. 초음파 네뷸라이저는 액체를 작은 에어로졸 액적으로 전단하는 압전 결정에 의해 작동한다. 가압형 네뷸라이제이션 시스템은 작은 기공을 통해 압력 하에서 용액을 강제로 밀어내어 에어로졸 액적을 생성한다. 진동 다공성 플레이트 장치는 급속 진동을 이용하여 액체 스트림을 적절한 액적 크기로 전단한다.
바람직한 실시 형태에서, 네뷸라이제이션을 위한 제형은 네뷸라이저를 사용하여 MMAD가 주로 약 1 μm 내지 약 5 μm인 입자를 포함하는 에어로졸 형태로 기관지내 공간으로 전달되며, 이때 네뷸라이저는 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물의 제형을 필요 MMAD의 입자로 에어로졸화할 수 있는 것을 사용한다. 최적으로 치료적으로 유효하게 하기 위하여, 그리고 상기도 및 전신 부작용을 피하기 위하여, 에어로졸화된 입자의 대부분은 MMAD가 약 5 μm를 초과하지 않아야 한다. 에어로졸이 MMAD가 5 μm를 초과하는 다수의 입자를 함유하는 경우, 입자는 상기도에 침착되어, 하기도 내의 염증 및 기관지수축의 부위에 전달되는 약물의 양을 감소시킨다. 에어로졸의 MMAD가 약 1 μm 미만인 경우, 입자는 흡입된 공기 중에 부유된 상태로 유지하는 경향을 가지며, 후속으로 숨을 내쉬는 동안 호기된다.
본 발명의 방법에 따라 제형화되고 전달될 때, 네뷸라이제이션을 위한 에어로졸 제형은 뉴모바이러스과 감염증을 치료하기에 충분한 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물의 치료적 효능 용량을 뉴모바이러스과 감염증의 부위에 전달한다. 투여되는 약물의 양은 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물의 치료적 효능 용량의 전달의 효율을 반영하도록 조정되어야 한다. 바람직한 실시 형태에서, 수성 에어로졸 제형과 무화 네뷸라이저, 제트 네뷸라이저, 가압형 네뷸라이저, 진동 다공성 플레이트, 또는 초음파 네뷸라이저의 조합은, 네뷸라이저에 따라, 기도 내로의 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물의 투여된 용량의 약, 적어도, 20, 내지 약 90%, 전형적으로 약 70% 전달을 가능하게 한다. 바람직한 실시 형태에서, 활성 화합물의 적어도 약 30 내지 약 50%가 전달된다. 더 바람직하게는, 활성 화합물의 적어도 약 70 내지 약 90%가 전달된다.
다른 실시 형태에서, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 흡입가능한 건조 분말로서 전달된다. 이들 화합물은 건조 분말 흡입기 또는 정량식 흡입기를 사용하여 화합물의 미세한 입자를 기관지내 공간 내로 전달하기에 효능이 있도록 건조 분말 제형으로서 기관지내 투여된다. DPI에 의한 전달을 위하여, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물은 밀링 분무 건조, 임계 유체 가공, 또는 용액으로부터의 침전에 의해, 주로 MMAD가 약 1 μm 내지 약 5 μm인 입자로 가공된다. MMAD가 약 1 μm 내지 약 5 μm인 입자 크기를 생성할 수 있는 매체 밀링, 제트 밀링 및 분무-건조 장치 및 절차가 당업계에 잘 알려져 있다. 일 실시 형태에서, 필요 크기의 입자로 가공하기 전에 부형제가 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물에 첨가된다. 다른 실시 형태에서, 필요 크기의 입자와 함께 부형제가 블렌딩되어 약물 입자의 분산을 도우며, 이는, 예를 들어 부형제로서 락토스를 사용함으로써 수행된다.
입자 크기 결정은 당업계에 잘 알려진 장치를 사용하여 행해진다. 예를 들어, 다단 앤더슨 캐스케이드 충격기(multi-stage Anderson cascade impactor) 또는 다른 적합한 방법, 예컨대 정량식 흡입기 및 건조 분말 흡입기 내의 에어로졸을 위한 장치를 특성화하는 것으로서 미국 약전 제601장(US Pharmacopoeia Chapter 601)에 구체적으로 언급된 것들이 있다.
다른 바람직한 실시 형태에서, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물은 장치, 예컨대 건조 분말 흡입기 또는 다른 건조 분말 분산 장치를 사용하여 건조 분말로서 전달된다. 건조 분말 흡입기 및 장치의 비제한적인 예에는 미국 특허 제5,458,135호; 미국 특허 제5,740,794호; 미국 특허 제5775320호; 미국 특허 제5,785,049호; 미국 특허 제3,906,950호; 미국 특허 제4,013,075호; 미국 특허 제4,069,819호; 미국 특허 제4,995,385호; 미국 특허 제5,522,385호; 미국 특허 제4,668,218호; 미국 특허 제4,667,668호; 미국 특허 제4,805,811호 및 미국 특허 제5,388,572호에 개시된 것들이 포함된다. 건조 분말 흡입기의 2가지 주요 디자인이 있다. 하나의 디자인은 약물을 위한 저장소가 장치 내에 배치되고 환자가 흡입 챔버 내로 약물의 용량을 첨가하는 계랑 장치이다. 두 번째 디자인은 각각의 개별 용량이 별개의 용기 내에 제조된 공장-계량 장치이다. 두 시스템 모두는 약물의 제형이 MMAD가 1 μm 내지 약 5 μm인 작은 입자로 되는 것에 의존하고, 종종 더 큰 부형제 입자, 예컨대 제한 없이, 락토스와의 공동제형을 포함한다. 약물 분말이 (장치 계량에 의해 또는 공장-계량 투여량의 파단에 의해) 흡입 챔버 내에 배치되고, 환자의 흡기 유동은 분말을 장치로부터 구강 내로 들어가는 것을 가속시킨다. 분말 경로의 비-층류(non-laminar flow) 특성은 부형제-약물 응집체가 분해되게 하고, 큰 부형제 입자의 덩어리는 목의 뒤에서 그들의 고착을 야기하는 반면, 더 작은 약물 입자는 폐 내에 깊숙이 침착된다. 바람직한 실시 형태에서, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 본 명세서에 기재된 바와 같은 건조 분말 흡입기의 어느 유형이든 이를 사용하여 건조 분말로서 전달되는데, 여기서 임의의 부형제를 제외한 건조 분말의 MMAD는 주로 1 μm 내지 약 5 μm의 범위이다.
다른 실시 형태에서, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물은 정량식 흡입기를 사용하여 건조 분말로서 전달된다. 정량식 흡입기 및 장치의 비제한적인 예에는 미국 특허 제5,261,538호; 미국 특허 제5,544,647호; 미국 특허 제5,622,163호; 미국 특허 제4,955,371호; 미국 특허 제3,565,070호; 미국 특허 제3,361306호 및 미국 특허 제6,116,234호에 개시된 것들이 포함된다. 바람직한 실시 형태에서, 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 정량식 흡입기를 사용하여 건조 분말로서 전달되는데, 여기서 임의의 부형제를 제외한 건조 분말의 MMAD는 주로 약 1 내지 5 μm의 범위이다.
질 투여에 적합한 제형은, 활성 성분에 더하여, 당업계에서 적절한 것으로 알려진 바와 같은 담체를 함유하는 페서리, 탐폰, 크림, 겔, 페이스트, 폼(foam) 또는 스프레이 제형으로서 제공될 수 있다.
비경구 투여에 적합한 제형은, 산화방지제, 완충제, 정세균제(bacteriostat), 및 제형을 의도된 수용자의 혈액과 등장성이 되게 하는 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 주사 용액; 및 현탁화제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현탁액을 포함한다.
제형은 단위-용량 또는 다회-용량 용기, 예를 들어 밀봉 앰풀 및 바이알로 제공되며, 냉동-건조된(동결건조된) 상태로 저장되어, 사용 직전에 단지 멸균 액체 담체, 예를 들어 주사용수의 첨가만을 필요로 할 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 앞서 기재된 종류의 멸균 분말, 과립, 및 정제로부터 제조된다. 바람직한 단위 투여 제형은, 본 명세서에서 상기에 언급된 바와 같은, 활성 성분의 일일 용량 또는 단위 일일 하위용량, 또는 이의 적절한 분율을 함유하는 것들이다.
상기에 특별히 언급된 성분들에 더하여, 제형은 대상이 되는 제형의 유형과 관련하여 당업계에서 통상적인 다른 작용제를 포함할 수 있으며, 예를 들어 경구 투여에 적합한 것들은 향미제를 포함할 수 있음이 이해되어야 한다.
상기 정의된 바와 같은 적어도 하나의 활성 성분을 이를 위한 수의학적 담체와 함께 포함하는 수의학적 조성물이 추가로 제공된다.
수의학적 담체는 조성물을 투여하기 위한 목적에 유용한 물질이며, 수의과 기술분야에서 달리 불활성이거나 허용되는 고체, 액체 또는 가스상 물질일 수 있으며, 활성 성분과 상용성이다. 이들 수의학적 조성물은 경구 투여되거나, 비경구 투여되거나, 또는 임의의 다른 원하는 경로에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물은 활성 성분으로서 하나 이상의 이들 화합물을 함유하는 제어 방출 약제학적 제형("제어 방출 제형")을 제공하는 데 사용되며, 여기서는 활성 성분의 방출이, 더 적은 빈도의 투여가 가능하도록 또는 주어진 활성 성분의 약동학적 또는 독성 프로파일을 개선하도록 제어되고 조절된다.
활성 성분의 유효 용량은 치료되는 질환의 성질, 독성, 화합물이 예방적으로(더 낮은 용량) 또는 활동성 바이러스성 감염증에 대해 사용되고 있는지의 여부, 전달 방법, 및 약제학적 제형에 적어도 의존하며, 통상적인 용량 점증 연구를 사용하여 임상의에 의해 결정될 것이다. 이는 약 0.0001 내지 약 100 mg/㎏ 체중/일; 전형적으로, 약 0.01 내지 약 10 mg/㎏ 체중/일; 더 전형적으로는, 약 0.01 내지 약 5 mg/㎏ 체중/일; 가장 전형적으로는, 약 0.05 내지 약 0.5 mg/㎏ 체중/일일 것으로 예상될 수 있다. 예를 들어, 대략 70 ㎏ 체중의 성인에 대한 일일 후보 용량은 1 mg 내지 1000 mg, 바람직하게는 5 mg 내지 500 mg의 범위일 것이고, 단회 또는 다회 용량의 형태를 취할 수 있다.
V. 투여 경로
화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물(본 명세서에서는 활성 성분으로 지칭됨)들 중 하나 이상이 치료하려는 질환에 적절한 임의의 경로에 의해 투여된다. 적합한 경로는 경구, 직장, 비강, 폐, 국소(협측 및 설하를 포함함), 질내 및 비경구(피하, 근육내, 정맥내, 진피내, 수강내 및 경막외를 포함함) 등을 포함한다. 바람직한 경로는, 예를 들어, 수용자의 상태에 따라 달라질 수 있음이 이해될 것이다. 본 발명의 화합물의 이점은 이들이 경구로 생체이용가능하고 경구 투여될 수 있다는 점이다.
본 발명의 화합물(본 명세서에서 활성 성분으로도 지칭됨)은 치료하려는 질환에 적절한 임의의 경로에 의해 투여될 수 있다. 적합한 경로는 경구, 직장, 비강, 국소(협측 및 설하를 포함함), 경피, 질내 및 비경구(피하, 근육내, 정맥내, 진피내, 수강내 및 경막외를 포함함) 등을 포함한다. 바람직한 경로는, 예를 들어, 수용자의 상태에 따라 달라질 수 있음이 이해될 것이다. 본 명세서에 개시된 소정 화합물의 이점은 이들이 경구로 생체이용가능하고 경구 투여될 수 있다는 점이다.
본 발명의 화합물은 원하는 기간 또는 지속기간 동안, 예컨대 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 6개월, 또는 적어도 약 12개월 또는 그 이상 동안 효과적인 투여 계획에 따라 개체에게 투여될 수 있다. 일 변형 형태에서, 화합물은 개체의 수명의 지속기간 동안 매일 또는 간헐적 일정으로 투여된다.
본 발명의 화합물의 투여량 또는 투여 빈도는 투여하는 의사의 판단에 기초하여 치료 과정에 걸쳐 조정될 수 있다.
화합물은 유효량으로 개체(예를 들어, 인간)에게 투여될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 화합물은 매일 1회 투여된다.
화합물은 임의의 유용한 경로 및 수단에 의해, 예컨대 경구 또는 비경구(예를 들어, 정맥내) 투여에 의해 투여될 수 있다. 화합물의 치료적 유효량은 약 0.00001 mg/㎏ 체중/일 내지 약 10 mg/㎏ 체중/일, 예컨대 약 0.0001 mg/㎏ 체중/일 내지 약 10 mg/㎏ 체중/일, 또는 예컨대 약 0.001 mg/㎏ 체중/일 내지 약 1 mg/㎏ 체중/일, 또는 예컨대 약 0.01 mg/㎏ 체중/일 내지 약 1 mg/㎏ 체중/일, 또는 예컨대 약 0.05 mg/㎏ 체중/일 내지 약 0.5 mg/㎏ 체중/일, 또는 예컨대 약 0.3 mg 내지 약 30 mg/일, 또는 예컨대 약 30 mg 내지 약 300 mg/일을 포함할 수 있다.
본 발명의 화합물은 본 발명의 화합물의 임의의 투여량(예를 들어, 1 mg 내지 1000 mg의 화합물)으로 하나 이상의 추가의 치료제와 병용될 수 있다. 치료적 유효량은 용량당 약 1 mg 내지 용량당 약 1000 mg, 예컨대 용량당 약 50 mg 내지 용량당 약 500 mg, 또는 예컨대 용량당 약 100 mg 내지 용량당 약 400 mg, 또는 예컨대 용량당 약 150 mg 내지 용량당 약 350 mg, 또는 예컨대 용량당 약 200 mg 내지 용량당 약 300 mg을 포함할 수 있다. 본 발명의 화합물의 다른 치료적 유효량은 용량당 약 100, 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 325, 350, 375, 400, 425, 450, 475 또는 약 500 mg이다. 본 발명의 화합물의 다른 치료적 유효량은 용량당 약 100 mg, 또는 용량당 약 125, 150, 175, 200, 225, 250, 275, 300, 350, 400, 450 또는 약 500 mg이다. 단회 용량이 매시간, 매일, 또는 매주 투여될 수 있다. 예를 들어, 단회 용량이 매 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 6시간, 8시간, 12시간, 16시간마다 1회, 또는 매 24시간마다 1회 투여될 수 있다. 단회 용량이 또한 매 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일마다 1회, 또는 매 7일마다 1 회 투여될 수 있다. 단회 용량이 또한 매 1주, 2주, 3주마다 1회, 또는 매 4주마다 1회 투여될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 단회 용량이 매 1주마다 1회 투여될 수 있다. 단회 용량이 또한 매 1개월마다 1회 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물의 다른 치료적 유효량은 용량당 약 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 또는 약 100 mg이다.
본 발명의 화합물의 투여 빈도는 개별 환자의 필요에 의해 결정될 것이며, 예를 들어 하루당 1회 또는 하루당 2회 또는 그 이상의 횟수일 수 있다. 화합물의 투여는 바이러스성 감염증을 치료하는 데 필요한 기간 동안 계속된다. 예를 들어, 화합물은 바이러스로 감염된 사람에게 20일 내지 180일의 기간 동안, 또는 예를 들어 20일 내지 90일의 기간 동안, 또는 예를 들어 30일 내지 60일의 기간 동안 투여될 수 있다.
투여는 간헐적일 수 있는데, 환자가 본 발명의 화합물의 일일 용량을 제공받는 수일 이상의 기간 후에, 환자가 화합물의 일일 용량을 제공받지 않는 수일 이상의 기간을 갖는다. 예를 들어, 환자는 격일마다, 또는 주당 3회 화합물의 용량을 제공받을 수 있다. 다시 예로서, 환자는 화합물의 용량을 1 내지 14일의 기간 동안 매일 제공받은 후, 환자는 화합물의 용량을 7 내지 21일의 기간 동안 제공받지 않은 후, 환자는 화합물의 일일 용량을 후속 기간(1 내지 14일) 동안 다시 제공받을 수 있다. 화합물의 투여에 이은 화합물의 비-투여의 교대 기간은 환자를 치료하기 위해 임상적으로 필요한 바와 같이 반복될 수 있다.
일 실시 형태에서, 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 1개 또는 2개, 1개 내지 3개, 또는 1개 내지 4개)의 추가의 치료제, 및 약제학적으로 허용되는 부형제와 배합되어, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
일 실시 형태에서, 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 1개 또는 2개, 1개 내지 3개, 또는 1개 내지 4개)의 추가의 치료제와 배합되어, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 포함하는 키트가 제공된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 1개, 2개, 3개, 4개 또는 그 이상의 추가의 치료제와 병용된다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 2개의 추가의 치료제와 병용된다. 다른 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 3개의 추가의 치료제와 병용된다. 추가의 실시 형태에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염은 4개의 추가의 치료제와 병용된다. 1개, 2개, 3개, 4개 또는 그 이상의 추가의 치료제는 동일한 치료제 부류로부터 선택되는 상이한 치료제일 수 있고/있거나, 이들은 상이한 치료제 부류로부터 선택될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물이 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 추가의 치료제와 병용될 때, 조성물의 성분들은 동시적 또는 순차적 계획으로서 투여된다. 순차적으로 투여될 때, 병용은 2회 이상의 투여로 투여될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 환자에 대한 동시적 투여를 위한 단일 투여 형태(unitary dosage form)로, 예를 들어 경구 투여용 고체 투여 형태로서 하나 이상의 추가의 치료제와 병용된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 추가의 치료제와 공동투여된다.
본 발명의 화합물의 효과를 연장시키기 위하여, 피하 또는 근육내 주사로부터의 화합물의 흡수를 감속시키는 것이 종종 바람직하다. 이는 난수용성을 갖는 결정질 또는 비정질 물질의 액체 현탁액의 사용으로 달성될 수 있다. 이때, 화합물의 흡수 속도는 이의 용해 속도에 좌우되며, 이는 다시, 결정 크기 및 결정질 형태에 좌우될 수 있다. 대안적으로, 비경구 투여 화합물 형태의 지연된 흡수는 화합물을 오일 비히클 중에 용해시키거나 현탁시킴으로써 달성된다. 주사가능한 데포(depot) 형태는 폴리락티드-폴리글리콜라이드와 같은 생분해성 중합체에서 화합물의 마이크로캡슐 매트릭스를 형성함으로써 제조된다. 화합물 대 중합체의 비 및 사용되는 특정 중합체의 성질에 따라, 화합물의 방출 속도가 제어될 수 있다. 다른 생분해성 중합체의 예에는 폴리(오르토에스테르) 및 폴리(무수물)이 포함된다. 또한, 주사가능한 데포 제형은 신체 조직에 적합한 리포좀 또는 마이크로에멀젼 내에 화합물을 봉입하여 제조된다.
VI. 병용 요법
본 명세서에 제공된 화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물 및 조성물은 또한 바이러스 감염증, 예컨대 뉴모바이러스과, 피코르나바이러스과, 플라비바이러스과, 또는 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 다른 활성 치료제와 병용하여 사용된다.
뉴모바이러스과의 치료를 위한 병용 요법
본 명세서에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 다른 활성 치료제와 병용하여 사용된다. 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위하여, 바람직하게는, 다른 활성 치료제는 뉴모바이러스과 바이러스 감염증, 특히 호흡기 세포융합 바이러스 감염증 및/또는 메타뉴모바이러스 감염증에 대해 활성이다. RSV에 대해 활성인 이들 다른 활성 치료제의 비제한적인 예는 리바비린, 팔리비주맙, 모타비주맙, RSV-IGIV(RespiGam®), MEDI-557, A-60444(RSV604로도 알려짐), MDT-637, BMS-433771, ALN-RSV0, ALX-0171 및 이들의 혼합물이다. 호흡기 세포융합 바이러스 감염증에 대해 활성인 다른 활성 치료제의 다른 비제한적인 예에는 하기가 포함된다: 호흡기 세포융합 바이러스 단백질 F 억제제, 예컨대 AK-0529; RV-521, ALX-0171, JNJ-53718678, BTA-585, 및 프레사토비르; RNA 폴리머라제 억제제, 예컨대 루미시타빈 및 ALS-8112; 항-RSV G 단백질 항체, 예컨대 항-G-단백질 mAb; 바이러스 복제 억제제, 예컨대 니타족사니드.
일부 실시 형태에서, 다른 활성 치료제는 RSV의 치료 또는 예방을 위한 백신일 수 있으며, 이에는 MVA-BN RSV, RSV-F, MEDI-8897, JNJ-64400141, DPX-RSV, SynGEM, GSK-3389245A, GSK-300389-1A, RSV-MEDI 델타M2-2 백신, VRC-RSVRGP084-00VP, Ad35-RSV-FA2, Ad26-RSV-FA2, 및 RSV 융합 당단백질 하위단위 백신이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
메타뉴모바이러스 감염증에 대해 활성인 다른 활성 치료제의 비제한적인 예에는 하기가 포함된다: 시알리다제 조절제, 예컨대 DAS-181; RNA 폴리머라제 억제제, 예컨대 ALS-8112; 및 메타뉴모바이러스 감염증의 치료를 위한 항체, 예컨대 EV-046113.
일부 실시 형태에서, 다른 활성 치료제는 메타뉴모바이러스 감염증의 치료 또는 예방을 위한 백신일 수 있으며, 이에는 mRNA-1653 및 rHMPV-Pa 백신이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
피코르나바이러스과의 치료를 위한 병용 요법
본 명세서에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 다른 활성 치료제와 병용하여 사용된다. 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위하여, 바람직하게는, 다른 활성 치료제는 피코르나바이러스과 바이러스 감염증, 특히 엔테로바이러스 감염증에 대해 활성이다. 이들 다른 활성 치료제의 비제한적인 예는 하기와 같다: 캡시드 결합 억제제, 예컨대 플레코나릴, BTA-798(바펜다비르) 및 Wu, et al.(미국 특허 제7,078,403호) 및 Watson(미국 특허 제7,166,604호)에 의해 개시된 다른 화합물; 융합 시알리다제 단백질, 예컨대 DAS-181; 캡시드 단백질 VP1 억제제, 예컨대 VVX-003 및 AZN-001; 바이러스 프로테아제 억제제, 예컨대 CW-33; 포스파티딜이노시톨 4 키나제 베타 억제제, 예컨대 GSK-480 및 GSK-533; 항-EV71 항체.
일부 실시 형태에서, 다른 활성 치료제는 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료 또는 예방을 위한 백신일 수 있으며, 이에는 EV71 백신, TAK-021, 및 EV-D68 아데노벡터-기반 백신이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
호흡기 감염증을 위한 병용 요법
뉴모바이러스과 및 피코르나바이러스과 바이러스의 감염증의 다수는 호흡기 감염증이다. 따라서, 호흡기 증상 및 감염증의 후유증을 치료하는 데 사용되는 추가의 활성 치료제가 본 명세서에 제공된 화합물과 병용하여 사용될 수 있다. 추가의 작용제는 바람직하게는 경구 또는 직접 흡입에 의해 투여된다. 예를 들어, 바이러스성 호흡기 감염증의 치료를 위하여 본 명세서에 제공된 화합물과 병용되는 다른 바람직한 추가의 치료제는 기관지확장제 및 코르티코스테로이드를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
글루코코르티코이드
1950년에 천식 요법으로서 최초로 소개된(문헌[Carryer, Journal of Allergy, 21, 282-287, 1950]) 글루코코르티코이드는 이 질병에 대한 가장 강력하고 일관되게 효과적인 요법을 유지하지만, 그들의 작용 기전은 아직까지 완전히 이해되어 있지 않다(문헌[Morris, J. Allergy Clin. Immunol., 75 (1 Pt) 1-13, 1985]). 불행하게도, 경구 글루코코르티코이드 요법은 중심성 비만(truncal obesity), 고혈압, 녹내장, 당불내성, 백내장 형성의 가속화, 골 미네랄 손실, 및 심리학적 영향과 같은 바람직하지 않은 심각한 부작용과 관련되어 있으며, 이들 모두는 장기간 치료제로서의 그들의 사용을 제한한다(문헌[Goodman and Gilman, 10th edition, 2001]). 전신 부작용에 대한 해결책은 스테로이드 약물을 염증 부위에 직접 전달하는 것이다. 흡입 코르티코스테로이드(ICS)는 경구 스테로이드의 심각한 유해 효과를 완화시키도록 개발되어 왔다. 본 명세서에 제공된 화합물과 병용하여 사용될 수 있는 코르티코스테로이드의 비제한적인 예는 덱사메타손, 덱사메타손 소듐 포스페이트, 플루오로메톨론, 플루오로메톨론 아세테이트, 로테프레드놀, 로테프레드놀 에바보네이트, 하이드로코르티손, 프레드니솔론, 플루드로코르티손, 트리암시놀론, 트리암시놀론 아세토니드, 베타메타손, 베클로메타손 디프로프리오네이트, 메틸프레드니솔론, 플루오시놀론, 플로오시놀론 아세토니드, 플루니솔리드, 플루오코르틴-21-부틸레이트, 플루메타손, 플루메타손 피발레이트, 부데소니드, 할로베타솔 프로피오네이트, 모메타손 푸로에이트, 플루티카손, AZD-7594, 시클레소니드; 또는 이들의 약제학적으로 허용되는 염이다.
항염증제
항염증성 캐스케이드 기전을 통해 작용하는 다른 항염증제가 또한 바이러스성 호흡기 감염증의 치료를 위해 본 명세서에 제공된 화합물과 병용되는 추가의 치료제로서 유용하다. 포스포다이에스테라제 억제제(예를 들어, PDE-4, PDE-5, 또는 PDE-7 특이적), 전사 인자 억제제(예를 들어, IKK 억제를 통한 NFκB의 차단), 또는 키나제 억제제(예를 들어, P38 MAP, JNK, PI3K, EGFR 또는 Syk의 차단)와 같은, "항염증성 신호 전달 조절제"(본 명세서에서 AISTM으로 지칭됨)를 적용하는 것은 염증을 스위치 오프하기 위한 논리적인 접근인데, 그 이유는, 이들 소분자는 제한된 수의 공통 세포내 경로 - 항염증 치료적 개입을 위한 중요한 지점인 신호 전달 경로 - 를 표적화하기 때문이다(문헌[P.J. Barnes, 2006]에 의한 검토 참조). 이들 비제한적인 추가의 치료제는 하기를 포함한다: 5-(2,4-다이플루오로-페녹시)-1-아이소부틸-1H-인다졸-6-카르복실산(2-다이메틸아미노-에틸)-아미드 (P38 Map 키나제 억제제 ARRY-797); 3-사이클로프로필메톡시-N-(3,5-다이클로로-피리딘-4-일)-4-다이플루오로메톡시-벤즈아미드 (PDE-4 억제제 로플루밀라스트); 4-[2-(3-사이클로펜틸옥시-4-메톡시페닐)-2-페닐-에틸]-피리딘 (PDE-4 억제제 CDP-840); N-(3,5-다이클로로-4-피리디닐)-4-(다이플루오로메톡시)-8-[(메틸설포닐)아미노]-1-다이벤조푸란카르복스아미드 (PDE-4 억제제 오글레밀라스트); N-(3,5-다이클로로-피리딘-4-일)-2-[1-(4-플루오로벤질)-5-하이드록시-1H-인돌-3-일]-2-옥소-아세트아미드 (PDE-4 억제제 AWD 12-281); 8-메톡시-2-트라이플루오로메틸-퀴놀린-5-카르복실산(3,5-다이클로로-1-옥시-피리딘-4-일)-아미드 (PDE-4 억제제 Sch 351591); 4-[5-(4-플루오로페닐)-2-(4-메탄설피닐-페닐)-1H-이미다졸-4-일]-피리딘 (P38 억제제 SB-203850); 4-[4-(4-플루오로-페닐)-1-(3-페닐-프로필)-5-피리딘-4-일-1H-이미다졸-2-일]-부트-3-인-1-올 (P38 억제제 RWJ-67657); 4-시아노-4-(3-사이클로펜틸옥시-4-메톡시-페닐)-사이클로헥산카르복실산 2-다이에틸아미노-에틸 에스테르 (실로밀라스트의 2-다이에틸-에틸 에스테르 전구약물, PDE-4 억제제); (3-클로로-4-플루오로페닐)-[7-메톡시-6-(3-모르폴린-4-일-프로폭시)-퀴나졸린-4-일]-아민 (게피티닙, EGFR 억제제); 및 4-(4-메틸-피페라진-1-일메틸)-N-[4-메틸-3-(4-피리딘-3-일-피리미딘-2-일아미노)-페닐]-벤즈아미드 (이마티닙, EGFR 억제제).
β2-아드레날린 수용체 효능제(agonist) 기관지확장제
본 명세서에 제공된 화합물과 함께 흡입 β2-아드레날린 수용체 효능제 기관지확장제, 예컨대 포르모테롤, 알부테롤 또는 살메테롤을 포함하는 병용물이 또한 호흡기 바이러스성 감염증의 치료에 유용한 병용물에 적합하지만, 이로 한정되지 않는다.
흡입 β2-아드레날린 수용체 효능제 기관지확장제, 예컨대 포르모테롤 또는 살메테롤과 ICS의 병용물이 또한 기관지수축 및 염증 둘 모두를 치료하는 데 사용된다(각각 Symbicort® 및 Advair®). 본 명세서에 제공된 화합물과 함께 이들 ICS 및 β2-아드레날린 수용체 효능제 병용물을 포함하는 병용물이 또한 호흡기 바이러스성 감염증의 치료에 유용한 병용물에 적합하지만, 이로 한정되지 않는다.
베타 2 아드레날린 수용체 효능제의 다른 예는 베도라드린, 빌란테롤, 인다카테콜, 올로다테롤, 툴로부테롤, 포르모테롤, 아베디테롤, 살부타몰, 아르포르모테롤, 레바부테롤, 페노테롤, 및 TD-5471이다.
항콜린제
폐 기관지-수축의 치료 및 예방을 위하여, 항콜린제가 잠재적인 사용을 가지며, 이에 따라, 바이러스성 호흡기 감염증의 치료를 위하여 본 명세서에 제공된 화합물과 병용되는 추가의 치료제로서 유용하다. 이들 항콜린제는 하기를 포함하지만 이로 한정되지 않는다: COPD에서 콜린성 톤(cholinergic tone)의 제어에 있어서 인간에서 치료적 효능을 보여준 무스카린 수용체(특히, M3 아형의 것)의 길항제(문헌[Witek, 1999]); 1-{4-하이드록시-1-[3,3,3-트리스-(4-플루오로-페닐)-프로피오닐]-피롤리딘-2-카르보닐}-피롤리딘-2-카르복실산 (1-메틸-피페리딘-4-일메틸)-아미드; 3-[3-(2-다이에틸아미노-아세톡시)-2-페닐-프로피오닐옥시]-8-아이소프로필-8-메틸-8-아조니아-바이사이클로[3.2.1]옥탄 (이프라트로퓸-N,N-다이에틸글리시네이트); 1-사이클로헥실-3,4-다이하이드로-1H-아이소퀴놀린-2-카르복실산 1-아자-바이사이클로[2.2.2]옥트-3-일 에스테르 (솔리페나신); 2-하이드록시메틸-4-메탄설피닐-2-페닐-부티르산 1-아자-바이사이클로[2.2.2]옥트-3-일 에스테르 (레바트로페이트); 2-{1-[2-(2,3-다이하이드로-벤조푸란-5-일)-에틸]-피롤리딘-3-일}-2,2-다이페닐-아세트아미드 (다리페나신); 4-아제판-1-일-2,2-다이페닐-부티르아미드 (부제피드); 7-[3-(2-다이에틸아미노-아세톡시)-2-페닐-프로피오닐옥시]-9-에틸-9-메틸-3-옥사-9-아조니아-트라이사이클로[3.3.1.02,4]노난 (옥시트로퓸-N,N-다이에틸글리시네이트); 7-[2-(2-다이에틸아미노-아세톡시)-2,2-다이-티오펜-2-일-아세톡시]-9,9-다이메틸-3-옥사-9-아조니아-트라이사이클로[3.3.1.02,4]노난 (티오트로퓸-N,N-다이에틸글리시네이트); 다이메틸아미노-아세트산 2-(3-다이아이소프로필아미노-1-페닐-프로필)-4-메틸-페닐 에스테르 (톨테로딘-N,N-다이메틸글리시네이트); 3-[4,4-비스-(4-플루오로-페닐)-2-옥소-이미다졸리딘-1-일]-1-메틸-1-(2-옥소-2-피리딘-2-일-에틸)-피롤리디늄; 1-[1-(3-플루오로-벤질)-피페리딘-4-일]-4,4-비스-(4-플루오로-페닐)-이미다졸리딘-2-온; 1-사이클로옥틸-3-(3-메톡시-1-아자-바이사이클로[2.2.2]옥트-3-일)-1-페닐-프로프-2-인-1-올; 3-[2-(2-다이에틸아미노-아세톡시)-2,2-다이-티오펜-2-일-아세톡시]-1-(3-페녹시-프로필)-1-아조니아-바이사이클로[2.2.2]옥탄 (아클리디늄-N,N-다이에틸글리시네이트); 또는 (2-다이에틸아미노-아세톡시)-다이-티오펜-2-일-아세트산 1-메틸-1-(2-페녹시-에틸)-피페리딘-4-일 에스테르; 레베페나신, 글리코피로늄 브로마이드, 우메클리디늄 브로마이드, 티오트로퓸 브로마이드, 아클리디늄 브로마이드, 벤사이클로퀴듐 브로마이드.
점액용해제
본 명세서에 제공된 화합물 및 본 명세서에 제공된 조성물은 또한, 호흡기 감염증의 감염 및 증상 둘 모두를 치료하기 위해 점액용해제와 병용될 수 있다. 점액용해제의 비제한적인 예는 암브록솔이다. 유사하게, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물은 호흡기 감염증의 감염 및 증상 둘 모두를 치료하기 위해 거담제와 병용될 수 있다. 거담제의 비제한적인 예는 구아이페네신이다.
네뷸라이징된 고장성 식염수가 폐 질병을 갖는 환자에서 소기도(small airway)의 즉각적이고 장기간의 클리어런스를 개선하는 데 사용된다(문헌[Kuzik, J. Pediatrics 2007, 266]). 따라서, 본 명세서에 제공된 화합물은 또한, 특히 뉴모바이러스과 바이러스 감염증이 세기관지염으로 인해 악화될 때, 네뷸라이징된 고장성 식염수와 병용될 수 있다. 화학식 (I) 또는 화학식 (II)의 화합물과 고장성 식염수의 병용물은 또한 상기에 논의된 임의의 추가적 작용제를 포함할 수 있다. 일 실시 형태에서, 네뷸라이징된 약 3% 고장성 식염수가 사용된다.
COPD의 치료를 위한 병용 요법
본 명세서에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 다른 활성 치료제와 병용하여 사용된다. COPD의 호흡기 증악의 치료를 위해, 다른 활성 치료제는 COPD에 대해 활성인 다른 것을 포함한다. 이들 다른 활성 치료제의 비제한적인 예에는 하기가 포함된다: 항-IL5 항체, 예컨대 벤랄리주맙, 메폴리주맙; 다이펩티딜 펩티다제 I(DPP1) 억제제, 예컨대 AZD-7986 (INS-1007); DNA 기라제(gyrase) 억제제/토포이소머라제 IV 억제제, 예컨대 시프로플록사신 하이드로클로라이드; MDR 관련 단백질 4/포스포다이에스테라제(PDE) 3 및 4 억제제, 예컨대 RPL-554; CFTR 자극제, 예컨대 이바카프토르, QBW-251; MMP-9/MMP-12 억제제, 예컨대 RBx-10017609; 아데노신 A1 수용체 길항제, 예컨대 PBF-680; GATA 3 전사 인자 억제제, 예컨대 SB-010; 무스카린성 수용체 조절제/니코틴성 아세틸콜린 수용체 효능제, 예컨대 ASM-024; MARCKS 단백질 억제제, 예컨대 BIO-11006; 키트 티로신 키나제/PDGF 억제제, 예컨대 마시티닙; 포스포다이에스테라제(PDE) 4 억제제, 예컨대 로플루밀라스트, CHF-6001; 포스포이노시티드-3 키나제 델타 억제제, 예컨대 네미랄리십; 5-리폭시게나제 억제제, 예컨대 TA-270; 무스카린성 수용체 길항제/베타 2 아드레날린 수용체 효능제, 예컨대 바테펜테롤 석시네이트, AZD-887, 이프라트로퓸 브로마이드; TRN-157; 엘라스타제 억제제, 예컨대 에르도스테인; 메탈로프로테아제-12 억제제, 예컨대 FP-025; 인터류킨 18 리간드 억제제, 예컨대 타데키니그 알파; 골격근 트로포닌 활성화제, 예컨대 CK-2127107; p38 MAP 키나제 억제제, 예컨대 아쿠마피모드; IL-17 수용체 조절제, 예컨대 CNTO-6785; CXCR2 케모카인 길항제, 예컨대 다니릭신; 백혈구 엘라스타제 억제제, 예컨대 POL-6014; 에폭사이드 하이드롤라제 억제제, 예컨대 GSK-2256294; HNE 억제제, 예컨대 CHF-6333; VIP 효능제, 예컨대 아비프타딜; 포스포이노시티드-3 키나제 델타/감마 억제제, 예컨대 RV-1729; 보체 C3 억제제, 예컨대 APL-1; 및 G-단백질 결합 수용체-44 길항제, 예컨대 AM-211.
활성 치료제의 다른 비제한적인 예에는 또한 부데소니드, 아디포셀, 산화질소, PUR-1800, YLP-001, LT-4001, 아지트로마이신, 가무넥스, QBKPN, 소듐 피루베이트, MUL-1867, 만니톨, MV-130, MEDI-3506, BI-443651, VR-096, OPK-0018, TEV-48107, 독소필린, TEV-46017, 올리고G-COPD-5/20, Stempeucel®, ZP-051, 라이신 아세틸살리실레이트가 포함된다.
일부 실시 형태에서, 다른 활성 치료제는 COPD에 대해 활성인 백신일 수 있으며, 이에는 MV-130 및 GSK-2838497A가 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
뎅기의 치료를 위한 병용 요법
본 명세서에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 다른 활성 치료제와 병용하여 사용된다. 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위하여, 바람직하게는, 다른 활성 치료제는 플라비바이러스과 바이러스 감염증, 특히 뎅기 감염증에 대해 활성이다. 이들 다른 활성 치료제의 비제한적인 예는 하기와 같다: 숙주 세포 인자 조절제, 예컨대 GBV-006; 펜레티니드 ABX-220, BRM-211; 알파-글루코시다제 1 억제제, 예컨대 셀고시비르; 혈소판 활성화 인자 수용체(PAFR) 길항제, 예컨대 모디파판트; 카드헤린-5/인자 Ia 조절제, 예컨대 FX-06; NS4B 억제제, 예컨대 JNJ-8359; 바이러스 RNA 스플라이싱 조절제, 예컨대 ABX-202; NS5 폴리머라제 억제제; NS3 프로테아제 억제제; 및 TLR 조절제.
일부 실시 형태에서, 다른 활성 치료제는 뎅기의 치료 또는 예방을 위한 백신일 수 있으며, 이에는 TetraVax-DV, Dengvaxia®, DPIV-001, TAK-003, 약독화 뎅기 생백신, 4가 뎅기열 백신, 4가 DNA 백신, rDEN2델타30-7169; 및 DENV-1 PIV가 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
에볼라 치료를 위한 병용 요법
본 명세서에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 다른 활성 치료제와 병용하여 사용된다. 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위하여, 바람직하게는, 다른 활성 치료제는 필로바이러스과 바이러스 감염증, 특히 마르부르크(Marburg) 바이러스, 에볼라 바이러스 및 쿠에바(Cueva) 바이러스 감염증에 대해 활성이다. 이들 다른 활성 치료제의 비제한적인 예는 다음과 같다: 리바비린, 팔리비주맙, 모타비주맙, RSV-IGIV (RespiGam®), MEDI-557, A-60444, MDT-637, BMS-433771, 아미오다론, 드로네다론, 베라파밀, 에볼라 회복기 혈장(ECP), TKM-100201, BCX4430((2S,3S,4R,5R)-2-(4-아미노-5H-피롤로[3,2-d]피리미딘-7-일)-5-(하이드록시메틸)피롤리딘-3,4-다이올), TKM-에볼라, T-705 모노포스페이트, T-705 다이포스페이트, T-705 트라이포스페이트, FGI-106 (1-N,7-N-비스[3-(다이메틸아미노)프로필]-3,9-다이메틸퀴놀리노[8,7-h]퀴놀론-1,7-다이아민), rNAPc2, OS-2966, 브린시도포비르, 렘데시비르; RNA 폴리머라제 억제제, 예컨대 갈리데시비르, 파비피라비르(T-705 또는 Avigan으로도 알려짐), JK-05; 숙주 세포 인자 조절제, 예컨대 GMV-006; 카드헤린-5/인자 Ia 조절제, 예컨대 FX-06; 및 에볼라 치료를 위한 항체, 예컨대 REGN-3470-3471-3479 및 ZMapp.
에볼라에 대해 활성인 다른 비제한적인 활성 치료제는 알파-글루코시다제 1 억제제, 카텝신 B 억제제, CD29 길항제, 수지상 ICAM-3 그래빙 논인테그린 1 억제제, 에스트로겐 수용체 길항제, 인자 VII 길항제 HLA 클래스 II 항원 조절제, 숙주 세포 인자 조절제, 인터페론 알파 리간드, 중성 알파 글루코시다제 AB 억제제, 니만-픽(Niemann-Pick) C1 단백질 억제제, 핵단백질 억제제, 폴리머라제 보조인자 VP35 억제제, 세린 프로테아제 억제제, 조직 인자 억제제, TLR-3 효능제, 바이러스 외피 당단백질 억제제, 및 에볼라 바이러스 침입 억제제(NPC1 억제제)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 다른 활성 치료제는 에볼라의 치료 또는 예방을 위한 백신일 수 있으며, 이에는 VRC-EBOADC076-00-VP, 아데노바이러스-기반 에볼라 백신, rVSV-EBOV, rVSVN4CT1-EBOVGP, MVA-BN Filo + Ad26-ZEBOV 계획, INO-4212, VRC-EBODNA023-00-VP, VRC-EBOADC069-00-VP, GamEvac-혼합 백신, SRC VB 벡터, HPIV3/EboGP 백신, MVA-EBOZ, 에볼라 재조합 당단백질 백신, Vaxart 아데노바이러스 벡터 5-기반 에볼라 백신, FiloVax 백신, GOVX-E301, 및 GOVX-E302가 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 제공된 화합물 및 조성물은 또한, 포스포르아미데이트 모르폴리노 올리고머(PMO)와 병용하여 사용될 수 있는데, 이는 특이적 RNA 서열과의 염기쌍 이중체를 형성함으로써 번역 과정을 방해하도록 설계된 합성 안티센스 올리고뉴클레오티드 유사체이다. PMO의 예에는 AVI-7287, AVI-7288, AVI-7537, AVI-7539, AVI-6002, 및 AVI-6003이 포함되지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 제공된 화합물 및 조성물은 또한 필로바이러스과 바이러스성 감염증을 갖는 환자에게 제공되는 일반적 케어와 함께 사용하도록 의도된 것으로, 이러한 일반적 케어에는 비경구 유체(덱스트로스 식염수 및 링거의 락테이트를 포함함) 및 영양제, 항생제(메트로니다졸 및 세팔로스포린 항생제, 예컨대 세프트리악손 및 세푸록심을 포함함) 및/또는 항진균 예방제, 열 및 통증 투약제, 항구토제(예컨대, 메토클로프라미드) 및/또는 항설사제, 비타민 및 미네랄 보충제(비타민 K 및 황산아연을 포함함), 항염증제(예컨대, 이부프로펜) 통증 투약제, 및 환자 집단에서의 다른 일반적인 질병을 위한 투약제, 예컨대 항말라리아제(아르테메테르 및 아르테수네이트-루메판트린 병용 요법을 포함함), 티포이드(퀴놀론 항생제, 예컨대 시프로플록사신, 마크로라이드 항생제, 예컨대 아지트로마이신, 세팔로스포린 항생제, 예컨대 세프트리악손, 또는 아미노페니실린, 예컨대 암피실린을 포함함) 또는 시겔라증 항생제가 포함된다.
VII. 바이러스성 감염증의 치료 방법
본 발명은 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In)의 화합물을 사용하여 호흡기 세포융합 바이러스(RSV), 에볼라, 지카, 웨스트 나일, 뎅기, 및 HCV와 같은 다양한 질병을 치료하기 위한 방법을 제공한다.
파라믹소바이러스과(Paramyxoviridae)
일부 실시 형태에서, 본 발명은 파라믹소바이러스과 감염증의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 파라믹소바이러스과 바이러스로 감염된 개체(예를 들어, 인간)에게 투여하는 단계를 포함한다. 파라믹소바이러스과 바이러스는 니파(Nipah) 바이러스 및 파라인플루엔자 바이러스를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
뉴모바이러스과
일부 실시 형태에서, 본 발명은 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다. 뉴모바이러스과 바이러스는 호흡기 세포융합 바이러스 및 인간 메타뉴모바이러스를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 인간 메타뉴모바이러스 감염증이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서의 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다. 일부 실시 형태에서, 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 인간 메타뉴모바이러스 감염증이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 인간 메타뉴모바이러스 감염증이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 RSV 감염증의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 호흡기 세포융합 바이러스로 감염된 개체(예를 들어, 인간)에게 투여하는 단계를 포함한다. 전형적으로, 개체는 만성 호흡기 세포융합 바이러스성 감염증을 앓고 있지만, RSV로 급성 감염된 사람을 치료하는 것은 본 발명의 범주 내에 있다.
일부 실시 형태에서, RSV 복제를 억제하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 개체(예를 들어, 인간)에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 RSV 감염증과 관련된 바이러스 부하를 감소시키기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 RSV로 감염된 개체(예를 들어, 인간)에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 치료적 유효량은 상기 개체에서 상기 RSV 바이러스 로드를 감소시키기에 충분하다.
본 명세서에 더 충분히 기재된 바와 같이, 본 발명의 화합물은 RSV로 감염된 개체(예를 들어, 인간)에게 하나 이상의 추가의 치료제(들)와 함께 투여될 수 있다. 추가의 치료제(들)는 본 발명의 화합물과 동시에, 또는 본 발명의 화합물의 투여 전이나 후에 감염된 개체(예를 들어, 인간)에게 투여될 수 있다.
일부 실시 형태에서, RSV 감염증을 치료 또는 예방하는 데 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다. 일부 실시 형태에서, RSV 감염증을 치료 또는 예방하기 위한 약제의 제조를 위한 본 발명의 화합물(예를 들어, 화학식 (I), (Ia), (Ib), (Ic), (Id), (Ie), (If), (Ig), (Ih), (Ij), (Ik), (Im) 또는 (In))의 화합물) 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 제공된다.
본 명세서에 더 충분히 기재된 바와 같이, 본 발명의 화합물은 RSV로 감염된 개체(예를 들어, 인간)에게 하나 이상의 추가의 치료제(들)와 함께 투여될 수 있다. 추가로, 일부 실시 형태에서, RSV를 치료 또는 예방하는 데 사용될 때, 본 발명의 화합물은 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개 또는 그 이상)의 추가의 치료제(들)와 함께 투여될 수 있다: RSV 병용 약물, RSV 백신, RSV DNA 폴리머라제 억제제, 면역조절제, 톨-유사 수용체(TLR) 조절제, 인터페론 알파 수용체 리간드, 하이알루로니다제 억제제, 호흡기 세포융합 표면 항원 억제제, 세포독성 T-림프구-관련 단백질 4(ipi4) 억제제, 사이클로필린 억제제, RSV 바이러스 침입 억제제, 바이러스 mRNA를 표적화하는 안티센스 올리고뉴클레오티드, 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 ddRNAi 엔도뉴클레아제 조절제, 리보뉴클레오티드 리덕타제 억제제, RSV E 항원 억제제, 공유적으로 폐쇄된 환상 DNA(cccDNA) 억제제, 파르네소이드 X 수용체 효능제, RSV 항체, CCR2 케모카인 길항제, 티모신 효능제, 사이토카인, 핵단백질 조절제, 레틴산-유도성 유전자 1 자극제, NOD2 자극제, 포스파티딜이노시톨 3-키나제(PI3K) 억제제, 인돌아민-2,3-다이옥시게나제(IDO) 경로 억제제, PD-1 억제제, PD-L1 억제제, 재조합 티모신 알파-1, 브루톤 티로신 키나제(BTK) 억제제, KDM 억제제, RSV 복제 억제제, 아르기나제 억제제, 및 다른 RSV 약물.
피코르나바이러스과
일부 실시 형태에서, 본 발명은 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다. 피코르나바이러스과 바이러스는 포진성 구협염, 무??성 척수성 소아마비-유사 증후군, 유행성 흉막통(일반적으로 유행병으로 발생하는 급성, 열성, 감염성 질병), 손-발-입 증후군, 소아 및 성인 췌장염 및 심각한 심근염을 포함한 감염증들의 이질군(heterogeneous group)을 야기하는 엔테로바이러스이다. 일부 실시 형태에서, 피코르나바이러스과 바이러스 감염증은 인간 리노바이러스 감염증이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서의 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다. 일부 실시 형태에서, 피코르나바이러스과 바이러스 감염증은 인간 리노바이러스 감염증이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 피코르나바이러스과 바이러스 감염증은 인간 리노바이러스 감염증이다.
플라비바이러스과
일부 실시 형태에서, 본 발명은 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다. 대표적인 플라비바이러스과 바이러스는 뎅기, 황열, 웨스트 나일, 지카, 일본 뇌염 바이러스, 및 C형 간염(HCV)을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 뎅기 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 황열 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 웨스트 나일 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 지카 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 일본 뇌염 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 C형 간염 바이러스 감염증이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서의 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 뎅기 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 황열 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 웨스트 나일 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 지카 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 C형 간염 바이러스 감염증이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 뎅기 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 황열 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 웨스트 나일 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 지카 바이러스 감염증이다. 일부 실시 형태에서, 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 C형 간염 바이러스 감염증이다.
필로바이러스과
일부 실시 형태에서, 본 발명은 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함한다. 대표적인 필로바이러스과 바이러스는 에볼라 및 마르부르크를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 일부 실시 형태에서, 필로바이러스과 바이러스 감염증은 에볼라 바이러스 감염증이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 한다. 일부 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서의 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공한다. 일부 실시 형태에서, 필로바이러스과 바이러스 감염증은 에볼라 바이러스 감염증이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공한다. 일부 실시 형태에서, 필로바이러스과 바이러스 감염증은 에볼라 바이러스 감염증이다.
VIII. 바이러스 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방 방법
화학식 (II), (IIa), (IIb), (IIc), (IId), (IIe), (IIf), (IIg), (IIh), (IIi), (IIj), (IIk), (IIm) 또는 (IIn)의 화합물은 또한 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방에 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방을 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병이다. 일부 실시 형태에서, 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방을 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 호흡기 질환은 천식이다. 일부 실시 형태에서, 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스, 엔테로바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 하며, 상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병이다. 일부 실시 형태에서, 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조 방법을 제공하며, 상기 방법은 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 하며, 상기 호흡기 질환은 천식이다. 일부 실시 형태에서, 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스, 엔테로바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공하며, 상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병이다. 일부 실시 형태에서, 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 인간에서 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 있어서의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도를 제공하며, 상기 호흡기 질환은 천식이다. 일부 실시 형태에서, 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스, 엔테로바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공하며, 상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병이다. 일부 실시 형태에서, 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명은 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방에 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염을 제공하며, 상기 호흡기 질환은 천식이다. 일부 실시 형태에서, 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스, 엔테로바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기된다.
IX. 실시예
약어. 실험 세부사항을 설명하는 데 소정 약어 및 두문자어가 사용된다. 이들 중 대부분은 당업자에 의해 이해되겠지만, 표 2는 이들 약어 및 두문자어 중 다수의 목록을 수록한다.
[표 2]
Figure pct00240
Figure pct00241
화합물은 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å AXIA 250 x 21.2 mm 컬럼, 30 내지 70% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA를 사용함))를 거칠 수 있다. 일부 화합물은 이러한 분취용 HPLC 공정 후에 TFA 염으로서 얻어진다.
"Pa" 또는 "Pb" 표기를 사용하는 화합물 구조는 (R)- 또는 (S)-이성질체를 지칭하는데, 여기서는 그 위치에서의 특정 입체화학이 할당되어 있지 않다.
A. 중간체
중간체 1. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-3,4-다이하이드록시-2-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-2-카르보니트릴
Figure pct00242
이 생성물은 국제 특허 출원 공개 WO2015/069939호에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO2015/069939호의 페이지 43 내지 54는 WO2015/069939호에서 화합물 1로서 확인되는 상기 화합물을 제조하기 위한 공정을 제공한다.
중간체 2. tert-부틸 (7-((3aS,4S,6R,6aS)-6-시아노-6-(하이드록시메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-4-일)카르바메이트
Figure pct00243
THF(400 mL) 중 WO2015/069939호로부터의 화합물 14j(21.79 g, 39.93 mmol)를 빙조(ice bath) 내에서 냉각시켰다. THF 중 1.0 M TBAF(50.0 mL, 50.0 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 혼합물을 주위 온도에 이르게 하고, 약 30분 동안 교반하였다. 반응은 LCMS에 의해 완료된 것으로 결정되었다. 반응 혼합물을 물로 켄칭(quenching)하고, 유기물을 감압 하에서 제거하였다. 조 물질(crude)을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 세척하였다. 유기물을 합하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 고체를 여과 제거하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 물질을 실리카 겔 크로마토그래피(330 g 컬럼, 헥산 중 30 내지 100% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. MS m/z = 431.74 [M+1]. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 10.53 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.03 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.77 (t, J = 6.1 ㎐, 1H), 5.59 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 5.27 (dd, J = 6.7, 4.1 ㎐, 1H), 4.94 (d, J = 6.7 ㎐, 1H), 3.66 (dd, J = 6.1, 2.4 ㎐, 2H), 1.62 (s, 3H), 1.50 (s, 9H), 1.33 (s, 3H).
중간체 3. (3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-4-(((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-카르보니트릴
Figure pct00244
이 생성물은 국제 특허 출원 공개 WO2015/069939호에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO2015/069939호의 페이지 127 내지 138은 WO2015/069939호에서 화합물 14k로서 확인되는 상기 화합물을 제조하기 위한 공정을 제공한다.
중간체 4. (3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-4-(하이드록시메틸)-2,2-다이메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-카르보니트릴
Figure pct00245
THF(100 mL) 중에 중간체 3(8.41 g, 18.87 mmol)을 흡수시켰다. 주위 온도에서 THF 중 1.0 M TBAF(28.31 mL, 28.31 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 주위 온도에서 10분 동안 교반되게 하였다. 반응은 LCMS에 의해 완료된 것으로 결정되었다. 반응 혼합물을 물로 켄칭하고, 유기물을 감압 하에서 제거하였다. 조 물질을 EtOAc와 물 사이에 분배하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 세척하였다. 유기물을 합하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 고체를 여과 제거하고, 용매를 감압 하에서 제거하였다. 조 물질을 실리카 겔 크로마토그래피(120 g 컬럼, CH2Cl2 중 0 내지 10% CH3OH)로 정제하여 생성물을 얻었다. LC/MS: tR = 0.76분, MS m/z = 332.14 [M+1]; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC. MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.00 mm. 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물. 구배: 0분 내지 2.4분: 2 내지 100% ACN, 2.4분 내지 2.80분: 100% ACN, 2.8분 내지 2.85분: 100% 내지 2% ACN, 2.85분 내지 3.0분: 2% ACN(유량: 1.8 mL/분). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.87-7.80 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.82 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.74 (t, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.52 (d, J = 4.2 ㎐, 1H), 5.24 (dd, J = 6.8, 4.2 ㎐, 1H), 4.92 (d, J = 6.8 ㎐, 1H), 3.65 (dd, J = 6.1, 1.7 ㎐, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.33 (s, 3H).
중간체 5. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-(((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-카르보니트릴
Figure pct00246
50 mL의 DMF 중에 중간체 1(2 g, 6.18 mmol)을 용해시키고, 이 용액에 tert-부틸클로로다이메틸실란(1 g, 7 mmol) 및 이미다졸(1.26 g, 19 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 반응물을 EtOAc로 희석시키고, NH4Cl 용액으로 세척하고, 유기 용매를 증발시키고, 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 406.36 [M+1], tR = 1.45분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.25분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
중간체 6. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-(((tert-부틸다이메틸실릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00247
15 mL의 THF 중에 중간체 5(1.8 g, 4.44 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 아이소부티르산 무수물(1.54 g, 9.8 mmol) 및 DMAP(179 mg, 1.45 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고, 반응물을 MeOH로 켄칭하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 유기 용매를 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 546.16 [M+1], tR = 1.92분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.88분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
중간체 7. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-(하이드록시메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00248
100 mL 플라스틱 병 내에서 25 mL의 THF 중에 중간체 6(3.2 g, 5.86 mmol)을 용해시키고, 이 용액에 HF-피리딘(10 g, 0.35 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 반응물을 NaHCO3로 켄칭하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 유기 용매를 Na2SO4로 건조시키고, 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% EtOAc로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 6.83 - 6.74 (m, 2H), 6.33 (s, 2H), 5.84 - 5.74 (m, 2H), 5.62 (d, J = 5.4 ㎐, 1H), 4.31 (dd, J = 8.4, 5.2 ㎐, 1H), 3.94 (dd, J = 12.2, 5.0 ㎐, 1H), 3.87 (dd, J = 12.2, 8.4 ㎐, 1H), 2.70 (hept, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.56 (hept, J = 7.0 ㎐, 1H), 1.28 - 1.17 (m, 6H), 1.12 (dd, J = 15.1, 7.0 ㎐, 6H). LCMS: MS m/z = 432.24 [M+1], tR = 1.47분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.74분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
중간체 8. 사이클로펜틸 L-알라니네이트 HCl 염
Figure pct00249
아세토니트릴(100 mL) 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(3.95 g, 20.9 mmol), 사이클로펜탄올(1.5 g, 17.4 mmol) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드 HCl 염(EDCI)(3.5 g, 22.6 mmol)의 혼합물에 4-(다이메틸아미노)피리딘(DMAP, 3.2 g, 26.1 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 유기 용매를 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 중간체를 얻었으며, 이것을 10 mL의 DCM 중에 용해시키고, 이 용액에 다이옥산 중 4 N HCl(3 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시키고, 잔류물을 고진공으로 건조시켜 조 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.75 - 8.42 (m, 2H), 5.20 (tt, J = 5.6, 2.5 ㎐, 1H), 4.22 - 4.07 (m, 1H), 1.87 - 1.58 (m, 8H), 1.54 (dd, J = 12.6, 7.2 ㎐, 3H).
중간체 9. 사이클로프로필 L-알라니네이트 HCl 염
Figure pct00250
아세토니트릴(100 mL) 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(5.86 g, 31 mmol), 사이클로프로판올(1.5 g, 25.8 mmol) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드 HCl 염(EDCI)(5.2 g, 33.6 mmol)의 혼합물에 4-(다이메틸아미노)피리딘(DMAP, 4.7 g, 38.7 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 유기 용매를 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 중간체를 얻었으며, 이것을 10 mL의 DCM 중에 용해시키고, 이 용액에 다이옥산 중 4 N HCl(3 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시키고, 잔류물을 고진공으로 건조시켜 조 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.68 (s, 2H), 4.22 (tt, J = 6.3, 3.2 ㎐, 1H), 1.68 (d, J = 7.3 ㎐, 3H), 1.42 (s, 1H), 0.86 - 0.69 (m, 2H), 0.70 (dd, J = 7.1, 3.6 ㎐, 2H).
중간체 10. 포름아세탈 1 및 2: 1,1-다이메톡시- N , N -다이메틸메탄아민 및 1-(다이메톡시메틸)-4-메틸피페라진
Figure pct00251
N-메틸피페라진(1.5 mL, 15.93 mmol) 및 DMF-다이메틸아세탈(1 mL, 7.50 mmol)의 혼합물을 100℃에서 3일 동안 밀봉 튜브 내에서 가열하고, 60℃에서 고진공 하에서 농축시켜 과량의 N-메틸 피페라진을 제거하고, 이어서 다음 반응에 사용하였다. 다음 반응의 생성물 조성에 기초하여, 이 생성물은 약 1:2 비의 포름아세탈 1과 포름아세탈 2의 혼합물이었다.
중간체 11. (S)-사이클로헥실 2-아미노프로파노에이트 하이드로클로라이드
Figure pct00252
L-알라닌(5 g, 56.12 mmol) 및 사이클로헥산올(56 g, 561 mmol)의 혼합물에 TMSCl(20 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 약 70℃에서 약 15시간 동안 교반하고, 약 80℃에서 진공 중에서 농축시키고, 톨루엔과 동시증발시키고, 헥산 중에 용해시키고, 대략 실온에서 교반하였으며, 이 동안 고체가 침전되었다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 여과 케이크를 헥산 중 5% EtOAc로 수회 세척하고, 약 15시간 동안 고진공 하에서 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.76 (s, 3H), 4.85 (tt, J = 8.7, 3.8 ㎐, 1H), 4.17 (p, J = 6.5 ㎐, 1H), 1.84 (dd, J = 9.9, 5.5 ㎐, 2H), 1.70 (d, J = 7.3 ㎐, 5H), 1.57 - 1.42 (m, 3H), 1.32 (ddddd, J = 20.3, 12.8, 9.9, 6.4, 3.1 ㎐, 3H).
중간체 12. (S)-2-에틸부틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-4-메틸펜타노에이트
Figure pct00253
아세토니트릴(10 mL) 중에 (S)-2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-4-메틸펜탄산(1.09 g, 4.71 mmol)을 흡수시키고, 2-에틸-1-부탄올(2.88 mL, 23.56 mmol)을 첨가한 후, EDCI(878 mg, 5.66 mmol) 및 DMAP(863 mg, 7.07 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 실온에서 하룻밤 교반되게 하였다. 농축시키고, CH2Cl2로 희석시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피(0 내지 40% EtOAc/Hex)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 7.19 (d, J = 8.7 ㎐, 1H), 4.00-3.84 (m, 3H), 1.67-1.22 (m, 17H), 0.91-0.80 (m, 12H).
중간체 13. (S)-2-에틸부틸 2-아미노-4-메틸펜타노에이트 하이드로클로라이드
Figure pct00254
CH2Cl2(10 mL) 및 다이옥산 중 4 N HCl(10 mL, 40 mmol) 중에 (S)-2-에틸부틸 2-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-4-메틸펜타노에이트를 흡수시켰다. 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 감압 하에서 농축시키고, 헥산과 동시증발시켰다. 고진공 하에 1시간 동안 두었으며, 생성물을 다음 단계에 정제 없이 그대로 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.43 (s, 3H), 4.08 (d, J = 5.6 ㎐, 2H), 3.92 (m, 1H), 1.69 (m, 1H), 1.61 (m, 2H), 1.47 (m, 1H), 1.34 (m, 4H), 0.83 (m, 12H).
중간체 14. 2-(벤질옥시)-2-메틸프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00255
아세토니트릴(20 mL) 중 Boc-L-알라닌(1.26 g, 6.66 mmol), 2-벤질옥시-2-메틸프로판올(1.0 g, 5.55 mmol), 및 EDCI(1.12 g, 7.21 mmol)의 혼합물에 DMAP(2.04 g, 8.32 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 EtOAc 0 내지 60%)로 정제하여 Boc-L-알라닌 프로필 에스테르를 얻었으며, 이것을 DCM(10 mL) 중에 용해시키고, 다이옥산 중 4 N HCl(5.5 mL, 22.19 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 진공 중에서 농축시키고, ACN(10 mL) 중에 재용해시키고, 하룻밤 동결건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.82 (s, 3H), 7.42 - 7.07 (m, 5H), 4.44 (s, 2H), 4.24 (m, 2H), 4.08 (d, J = 11.2 ㎐, 1H), 1.70 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.28 (d, J = 2.4 ㎐, 6H). LCMS m/z = 251.97 (유리 염기 M +H), tR = 0.85분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00256
2-(벤질옥시)-2-메틸프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. DCM(20 mL) 중 2-(벤질옥시)-2-메틸프로필 L-알라니네이트 HCl 염(832 mg, 2.89 mmol)의 용액에 -78℃에서 페닐 포스포로다이클로리데이트(0.43 mL, 2.89 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(0.80 mL, 5.76 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, -78℃로 냉각시키고, p-니트로페놀(402 mg, 2.89 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(0.40 mL, 2.89 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 50분 동안 교반하고, 이어서 DCM으로 희석시키고, 염수로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 60% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.23 - 8.13 (m, 2H), 7.41 - 7.27 (m, 3H), 7.28 - 7.14 (m, 4H), 4.45 (m, 2H), 4.27 - 4.15 (m, 2H), 4.07 (m, 1H), 3.89 (m, 1H), 1.41 (m, 3H), 1.27 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.10, -3.18. LCMS m/z = 528.78 (M+H), tR = 1.70분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
중간체 15. 사이클로부틸메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00257
L-알라닌 사이클로부틸메틸 에스테르-HCl(1.2 g, 7.16 mmol)을 메틸렌 클로라이드(10 mL) 중에 현탁시키고, -78℃로 냉각시키고, 페닐 다이클로로포스페이트(1.07 mL, 7.16 mmol)를 신속하게 첨가하였다. 트라이에틸아민(2.0 mL, 14.32 mmol)을 -78℃에서 60분에 걸쳐 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 4-니트로페놀(996 mg, 7.16 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 이어서, 트라이에틸아민(1.0 mL, 7.16 mmol)을 60분에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, 여과하고, 여과액을 1/3 부피로 농축시키고, 다시 여과하였다. 여과액을 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 35% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.28 - 8.16 (m, 2H), 7.45 - 7.32 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 4.23 - 4.01 (m, 3H), 3.95 - 3.83 (m, 1H), 2.59 (m, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.98 - 1.80 (m, 2H), 1.73 (m, 2H), 1.42 (d, J = 3.2 ㎐, 1.5H), 1.40 (d, J = 3.3 ㎐, 1.5H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.06, -3.11.
중간체 16. 2-에틸부틸 ((벤질옥시)(4-니트로페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00258
4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(2.00 g, 7.81 mmol)와 트라이에틸아민(2.18 mL, 15.6 mmol)을 아르곤 분위기 하에서 0℃에서 다이클로로메탄(23 mL) 중 2-에틸부틸 L-알라니네이트 하이드로클로라이드(1.091 g, 18.9 mmol)의 현탁액에 순차적으로 첨가하였다. 1시간 후에, 이어서 벤질 알코올(0.810 mL, 7.81 mmol)과 트라이에틸아민(1.09 mL, 7.81 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ 8.30 - 8.07 (m, 2H), 7.42 - 7.28 (m, 7H), 5.18 - 5.09 (m, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 3.68 (q, J = 9.4 ㎐, 1H), 1.55 - 1.18 (m, 8H), 0.87 (t, J = 7.4 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ 2.32 (s), 2.28 (s). LCMS: MS m/z = 463.00 [M-1], tR = 1.56분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분).
중간체 17. 2-에틸부틸 ((S)-(4-니트로페녹시)(페녹시)(포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00259
국제 특허 출원 공개 WO 2016/069825호에 기재된 바와 같이 제조하였다.
중간체 18. 아이소프로필 ((S)-(4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00260
문헌[Cho et al., J. Med. Chem. 2014, 57, 1812-1825]에 기재된 바와 같이 제조하였다.
중간체 19. 에틸 ((S)-(4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00261
미국 특허 출원 공개 제20120009147A1호에 기재된 바와 같이 제조하였다.
중간체 20. 사이클로프로필메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00262
L-알라닌 사이클로프로필메틸 에스테르-HCl(1.0 g, 5.57 mmol)을 메틸렌 클로라이드(10 mL) 중에 현탁시키고, -78℃로 냉각시키고, 페닐 다이클로로포스페이트(0.83 mL, 5.57 mmol)를 신속하게 첨가하였다. DCM(1.5 mL) 중 트라이에틸아민(1.54 mL, 11.13 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하고, 30분간 교반하였다. 4-니트로페놀(774 mg, 5.57 mmol)을 -78℃에서 한꺼번에 첨가하였다. 이어서, DCM(2 mL) 중 트라이에틸아민(0.77 mL, 7.16 mmol)을 30분에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반하고, 물, 포화 Na2CO3 용액, 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 20% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.58 - 7.29 (m, 4H), 7.32 - 7.14 (m, 3H), 4.25 - 4.07 (m, 1H), 4.07 - 3.80 (m, 3H), 1.44 (d, J = 2.9 ㎐, 1.5H), 1.42 (d, J = 2.9 ㎐, 1.5H), 1.26 - 1.01 (m, 1H), 0.66 - 0.49 (m, 2H), 0.42 - 0.15 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.07, -3.11. MS m/z = 420.97.
중간체 21. 2-(((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)에틸 피발레이트
Figure pct00263
2-아미노에틸 피발레이트 하이드로클로라이드. 피발로일 클로라이드(3.82 mL, 31.0 mmol)를 실온에서 다이클로로메탄(150 mL) 중 tert-부틸 (2-하이드록시에틸)카르바메이트(4.8 mL, 31.0 mmol) 및 다이아이소프로필에틸아민(5.4 mL, 31.0 mmoL)의 용액에 첨가하였다. 4시간 후에, 생성된 혼합물을 포화 중탄산나트륨 수용액(150 mL) 및 염수(150 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 무색 오일을 다이옥산 중 염산의 용액(4 M, 50 mL) 중에 흡수시키고, 실온에서 교반하고, 백색 고체가 용액으로부터 서서히 침전되었다. 3시간 후에, 고체를 진공 여과에 의해 수집하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ 4.32 - 4.25 (m, 2H), 3.26 (t, J = 5.4 ㎐, 2H), 1.23 (s, 9H).
Figure pct00264
2-(((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)에틸 피발레이트. 다이클로로메탄(23 mL) 중 2-아미노에틸 피발레이트 하이드로클로라이드(0.861 g, 4.74 mmol) 및 페닐 다이클로로포스페이트(0.705 mL, 4.74 mmol)의 용액에 아르곤 분위기 하에서 0℃에서 트라이에틸아민(1.2 mL, 9.4 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 1.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 4-니트로페놀(660 mg, 4.74 mmol) 및 트라이에틸아민(0.66 mL, 4.7 mmol)을 첨가하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 중탄산나트륨 수용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(40 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ 8.23 (d, J = 9.2 ㎐, 2H), 7.47 - 7.31 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 4.18 - 4.06 (m, 2H), 3.45 - 3.31 (m, 2H), 1.17 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d6) δ -1.48 (s). MS m/z = 422.95 [M+1].
중간체 22. (2S)-테트라하이드로-2H-피란-4-일 2-(((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트
Figure pct00265
(S)-테트라하이드로-2H-피란-4-일 2-아미노프로파노에이트 하이드로클로라이드. L-알라닌(500 mg, 5.61 mmol) 및 테트라하이드로-2H-피란-4-올(5 g, 49.0 mmol)의 혼합물에 TMSCl(2 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃에서 15시간 동안 교반하고, 진공 중에서 농축시키고, 생성된 고체를 헥산 중 5% EtOAc로 분쇄(tritulate)하고, 여과하고, 헥산 중 5% EtOAc로 수회 세척하고, 고진공 하에서 15시간 동안 건조시켜 생성물을 얻었으며, 이것을 어떠한 특성화 없이 다음 반응에 사용하였다.
Figure pct00266
(2S)-테트라하이드로-2H-피란-4-일 2-(((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트. (S)-테트라하이드로-2H-피란-4-일 2-아미노프로파노에이트 하이드로클로라이드(1.33 g, 6.34 mmol)를 메틸렌 클로라이드(15 mL) 중에 용해시키고, -78℃로 냉각시키고, 페닐 다이클로로포스페이트(1.137 mL, 7.61 mmol)를 신속하게 첨가하였다. 트라이에틸아민(2.2 mL, 15.2 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 4-니트로페놀(882 mg, 6.34 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(1.1 mL, 7.61 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하고, 물로 2회 그리고 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 70% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.06 (m, 7H), 4.95 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.07 - 3.80 (m, 3H), 3.52 (m, 2H), 1.95 - 1.81 (m, 2H), 1.64 m, 2H), 1.42 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.09, -3.13. MS m/z = 451 (M+H)+.
중간체 23. (S)-1-메틸피롤리딘-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00267
(S)-1-메틸피롤리딘-3-일 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트. Boc-L-알라닌(2.1 g, 11 mmol) 및 (R)-3-하이드록시-1-메틸피롤리딘(1.1 mL, 10 mmol)을 무수 THF(20 mL) 중에 용해시켰다. 트라이페닐포스핀(3.4 g, 13 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 다이아이소프로필 아조다이카르복실레이트(2.4 mL, 12 mmol)를 적가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 추가의 다이아이소프로필 아조다이카르복실레이트(240 uL, 1.2 mmol)를 적가하고, 반응물을 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(10 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL)으로 세척하였다. 이어서, 유기물을 5% 시트르산 수용액(30 mL)으로 추출하였다. 시트르산 추출물을 EtOAc(2 x 5 mL)로 세척하였다. 시트르산 부분을 1 N NaOH 수용액으로 염기성화하여 pH 9를 얻고 EtOAc(2 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 5.24 (m, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.27 (m, 1H), 2.88 - 2.69 (m, 2H), 2.64 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.29 (m, 1H), 1.96 - 1.80 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.37 (d, J = 7.2 ㎐, 3H).
Figure pct00268
(S)-1-메틸피롤리딘-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. (S)-1-메틸피롤리딘-3-일 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트(545 mg, 2 mmol)를 다이옥산 중 4 N HCl 10 mL와 혼합하고, 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에서 농축시켜 포말을 얻었으며, 이어서 이것을 20 mL의 무수 DCM과 혼합하고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. 페닐 다이클로로포스페이트(298 uL, 2 mmol)를 반응물에 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(837 uL, 6 mmol)을 반응물에 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(279 μL, 2 mmol)을 반응물에 적가하고, 이어서 30분 동안 교반하였다. p-니트로페놀(250 mg, 1.8 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM(20 mL)으로 희석시키고, 물(5 x 20 mL)로 세척하였다. 유기물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 10% 메탄올/DCM)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.28 - 8.15 (m, 2H), 7.46 - 7.28 (m, 4H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 5.17 (m, 1H), 4.21 - 4.04 (m, 1H), 4.01 - 3.85 (m, 1H), 2.81 (m, 1H), 2.70 - 2.55 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.33 - 2.21 (m, 2H), 1.84 - 1.70 (m, 1H), 1.39 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.16, -3.21. LCMS: MS m/z = 450.3 [M+1]; 448.1 [M-1], tR = 1.15분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.61분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분).
중간체 24. (R)-1-메틸피롤리딘-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00269
(R)-1-메틸피롤리딘-3-일 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트. Boc-L-알라닌(5.2 g, 27.5 mmol) 및 (R)-3-하이드록시-1-메틸피롤리딘(2.74 mL, 25 mmol)을 무수 THF(25 mL) 중에 용해시켰다. N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(4.67 mL, 30 mmol)를 적가하였다. 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 추가의 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(467 uL, 3 mmol)를 적가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 추가의 N,N'-다이아이소프로필 카르보다이이미드(467 uL, 3 mmol)를 적가하고, 반응물을 16시간 동안 교반하였다.
반응물을 EtOAc(25 mL)로 희석시키고, 10분 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 소량의 EtOAc로 세척하였다. 여과액을 포화 중탄산나트륨 수용액(3 x 10 mL)으로 세척하였다. 이어서, 유기물을 5% 시트르산 수용액(50 mL)으로 추출하였다. 시트르산 추출물을 EtOAc(5 mL)로 세척하였다. 시트르산 부분을 1 N NaOH 수용액으로 염기성화하여 pH 9를 얻고, 이어서 EtOAc(3 x 15 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 5.28 - 5.18 (m, 1H), 5.02 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 2.84 - 2.75 (m, 1H), 2.69 (d, J = 4.2 ㎐, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.34 - 2.22 (m, 2H), 1.87 - 1.76 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.37 (d, J = 7.2 ㎐, 3H).
Figure pct00270
(R)-1-메틸피롤리딘-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. (R)-1-메틸피롤리딘-3-일 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트(3.9 g, 14.3 mmol)를 다이옥산 중 4 N HCl 30 mL와 혼합하고, 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에서 농축시켜 포말을 얻었으며, 이어서 이것을 30 mL의 무수 DCM과 혼합하고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. 페닐 다이클로로포스페이트(2.34 mL, 15.75 mmol)를 반응물에 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 15분 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(4.4 mL, 31.5 mmol)을 무수 DCM(5 mL)과 혼합하고, 반응물에 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(2.2 mL, 15.75 mmol)을 무수 DCM(3 mL)과 혼합하고, 반응물에 적가하였다. 반응물을 15분 동안 교반하였다. p-니트로페놀(1.8 g, 12.87 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다.
반응물을 DCM(20 mL)으로 희석시키고, 중탄산나트륨 수용액(3 x 20 mL)으로 세척하였다. 유기물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(40 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 10% 메탄올/DCM)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.29 - 8.15 (m, 2H), 7.48 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.13 (m, 3H), 5.20 (m, 1H), 4.21 - 4.07 (m, 1H), 3.99 (m, 1H), 2.86 (m, 1H), 2.70 (m, 1H), 2.63 (m, 1H), 2.37 (m, 3H), 2.35 - 2.21 (m, 2H), 1.86 - 1.73 (m, 1H), 1.40 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.12, -3.14. LCMS: MS m/z = 450.3 [M+1]; 448.1 [M-1], tR = 1.24분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.63분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분).
중간체 25. (2S)-사이클로헥실 2-(((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트
Figure pct00271
중간체 11(3.4 g, 16.37 mmol)을 메틸렌 클로라이드(45 mL) 중에 용해시키고, -78℃로 냉각시키고, 페닐 다이클로로포스페이트(2.45 mL, 16.37 mmol)를 신속하게 첨가하였다. 트라이에틸아민(4.54 mL, 32.74 mmol)을 -78℃에서 60분에 걸쳐 첨가하고, 이어서 4-니트로페놀(2277 mg, 16.37 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 트라이에틸아민(2.27 mL, 16.37 mmol)을 -78℃에서 60분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하고, 메틸렌 클로라이드(100 mL)로 희석시키고, 물로 2회 그리고 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 20% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.46 - 7.30 (m, 4H), 7.29 - 7.09 (m, 3H), 4.76 (m, 1H), 4.20 - 4.02 (m, 1H), 3.92 (m, 1H), 1.87 - 1.64 (m, 4H), 1.54 (m, 2H), 1.46 - 1.18 (m, 7H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -2.94, -3.00. MS m/z = 449 (M+H)+.
중간체 26. tert-부틸 4-(((2S)-2-(((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노일)옥시)피페리딘-1-카르복실레이트
Figure pct00272
tert -부틸 4-((L-알라닐)옥시)피페리딘-1-카르복실레이트. 아세토니트릴(15 mL) 중 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라닌(1.26 g, 5.65 mmol), tert-부틸 4-하이드록시피페리딘-1-카르복실레이트(5.68 g, 28.22 mmol), 및 EDCI(1.05 g, 6.77 mmol)의 혼합물에 DMAP(1.03 g, 8.47 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 100% EtOAc)로 정제하여 Cbz-L-알라닌 피페리딜 에스테르를 얻었으며, 이것을 THF(10 mL) 중에 용해시키고, 탄소 상의 20% 수산화팔라듐(400 mg)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 가스 하에서 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 여과액을 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 고진공 하에서 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 4.95 (tt, J = 7.9, 3.8 ㎐, 1H), 3.79 - 3.62 (m, 2H), 3.56 (q, J = 7.0 ㎐, 1H), 3.25 (ddd, J = 13.6, 8.5, 3.7 ㎐, 2H), 1.85 (ddd, J = 13.4, 6.4, 3.4 ㎐, 2H), 1.73 (s, 2H), 1.62 (ddq, J = 12.7, 8.7, 4.3, 3.9 ㎐, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.34 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). MS m/z = 273 [M+H].
Figure pct00273
tert-부틸 4-(((2S)-2-(((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노일)옥시)피페리딘-1-카르복실레이트.
tert-부틸 4-((L-알라닐)옥시)피페리딘-1-카르복실레이트(0.9 g, 3.31 mmol)를 메틸렌 클로라이드(10 mL) 중에 용해시키고, -78℃로 냉각시키고, 페닐 다이클로로포스페이트(0.49 mL, 3.31 mmol)를 신속하게 첨가하였다. 트라이에틸아민(0.46 mL, 3.31 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하고, 4-니트로페놀(460 mg, 3.31 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 이어서, 트라이에틸아민(0.49 mL, 3.31 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -78℃에서 2시간 동안 교반하고, 메틸렌 클로라이드로 희석시키고, 물로 2회 그리고 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 70% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.23 (m, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 4H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 4.93 (m, 1H), 4.26 - 4.03 (m, 1H), 3.85 (m, 1H), 3.75 - 3.56 (m, 2H), 3.21 (m, 2H), 1.91 - 1.75 (m, 2H), 1.66 - 1.48 (m, 2H), 1.46 (s, 9H), 1.44 - 1.38 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.07, -3.13. MS m/z = 550 (M+H)+.
중간체 27. 트랜스-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00274
트랜스-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실 L-알라니네이트. 중간체 26에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 Cbz-l-알라닌(900 mg, 4.03 mmol) 및 트랜스-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥산-1-올(1.02 g, 6.05 mmol)로부터 상기 생성물을 제조하였다. MS m/z = 240 [M+H].
Figure pct00275
트랜스-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 25에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 트랜스-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실 L-알라니네이트(974 mg, 4.07 mmol)로부터 이성질체 혼합물로서 상기 생성물(840 mg)을 제조하였다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.27 - 8.19 (m, 2H), 7.43 - 7.31 (m, 4H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 4.68 (m, 1H), 4.11 (m, 1H), 3.84 (m, 1H), 2.02 (m, 4H), 1.50 - 1.27 (m, 8H). 19F NMR (377 ㎒, 클로로포름-d) δ -73.91 (d, J = 7.7 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.08, -3.12. MS m/z = 517 [M+H].
상기 생성물을 Chiralpak SFC(Chiralpak IF 20X250 mm 컬럼, 30% 아이소프로판올)에 의해 분리하여 중간체 28 및 중간체 29를 얻었다:
Figure pct00276
Figure pct00277
중간체 28. 트랜스-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실 ((R)-(4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 27의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.22 (d, J = 9.1 ㎐, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 4H), 7.29 - 7.16 (m, 3H), 4.69 (tt, J = 10.7, 4.2 ㎐, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 1H), 3.90 (dd, J = 11.9, 9.5 ㎐, 1H), 2.12 - 1.97 (m, 5H), 1.52 - 1.21 (m, 7H). 19F NMR (376 ㎒, 클로로포름-d) δ -73.90 (d, J = 7.7 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.07.
중간체 29. 트랜스 4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실 ((S)-(4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 27의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.21 (d, J = 9.08 ㎐, 2H), 7.42 - 7.31 (m, 4H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 4.67 (tt, J = 10.8, 4.2 ㎐, 1H), 4.11 (ddt, J = 15.8, 8.9, 7.1 ㎐, 1H), 3.97 (dd, J = 12.0, 9.4 ㎐, 1H), 2.07 - 1.91 (m, 5H), 1.51 - 1.19 (m, 7H). 19F NMR (376 ㎒, 클로로포름-d) δ -73.90 (d, J = 7.9 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.08.
중간체 30. 1-메틸피페리딘-4-일((4-니트로페녹시) (페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00278
1-메틸피페리딘-4-일 L-알라니네이트. 아세토니트릴(20 mL) 중 N-Cbz-L-알라닌(1.047 g, 4.688 mmol), 4-하이드록시-N-메틸피페리딘(450 mg, 3.907 mmol), 및 EDCI(788 mg, 5.079 mmol)의 혼합물에 DMAP(716 mg, 5.861 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 10% MeOH)로 정제하여 Cbz-L-알라닌 4-피페리딜 에스테르를 얻었으며, 이것을 THF(10 mL) 중에 용해시키고, 20% Pd(OH)2(300 mg, 0.427 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 가스 하에서 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 진공 중에서 농축시키고, DCM과 수회 동시증발시키고, 고진공 하에서 하룻밤 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 4.81 (td, J = 8.3, 7.7, 3.8 ㎐, 1H), 3.52 (q, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.63 (s, 2H), 2.29 (s, 5H), 2.14 - 1.86 (m, 4H), 1.73 (ddt, J = 12.9, 8.8, 4.5 ㎐, 2H), 1.32 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). LCMS: MS m/z = 187.09 [M+1]; tR = 0.12분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00279
1-메틸피페리딘-4-일((4-니트로페녹시) (페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. DCM(10 mL) 중 1-메틸피페리딘-4-일 L-알라니네이트(360 mg, 1.706 mmol)의 용액에 -78℃에서 페닐 포스포로다이클로리데이트(0.255 mL, 1.706 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, 이어서 DCM(2.76 mL) 중 트라이에틸아민(0.24 mL, 1.706 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, 이어서 -78℃로 재냉각시켰다. p-니트로페놀(0.237 g, 1.706 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(0.237 mL, 1.706 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 10% MeOH)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.28 - 8.15 (m, 2H), 7.36 (m, 4H), 7.25 - 7.17 (m, 3H), 4.80 (s, 1H), 4.19 - 4.04 (m, 1H), 3.93 (m, 1H), 2.64 (s, 2H), 2.31 (m, 5H), 1.90 (m, 2H), 1.78 - 1.67 (m, 2H), 1.47 - 1.33 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.04, -3.07. LCMS: MS m/z = 464.32 [M+1]; tR = 0.74분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
중간체 31. (테트라하이드로-2H-피란-4-일)메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00280
(테트라하이드로-2H-피란-4-일)메틸 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트. Cbz-L-Ala(446 mg, 2 mmol)를 무수 MeCN(10 mL) 중에 용해시켰다. EDCI(422 mg, 2.2 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, 반응물을 15분 동안 교반하였다. 테트라하이드로피란-4-메탄올(279 uL, 2.4 mmol)을 첨가하였다. 이어서, DMAP(269 mg, 2.2 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 16시간 동안 교반하였다.
반응물을 EtOAc(30 mL)로 희석시키고, 5% 시트르산 수용액(10 mL), 이어서 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL), 그리고 마지막으로 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 80% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.28 (d, J = 7.9 ㎐, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.39 (t, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.07 - 3.84 (m, 4H), 3.38 (t, J = 11.7 ㎐, 2H), 1.92 (s, 1H), 1.68 - 1.50 (m, 3H), 1.39 (m, 4H).
Figure pct00281
(테트라하이드로-2H-피란-4-일)메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. (테트라하이드로-2H-피란-4-일)메틸 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트(530 mg, 1.65 mmol)를 무수 THF(12 mL) 중에 용해시켰다. Degussa 타입 10% Pd/C를 첨가하고, 반응 혼합물을 수소 분위기 하에서 2시간 동안 교반하였다. 촉매를 여과하고, 여과액을 정제 없이 사용하였다.
페닐 다이클로로포스페이트(294 uL, 1.98 mmol)를 무수 DCM(10 mL) 중에 용해시키고, 질소 분위기 하에서 빙조 내에서 교반하였다. 상기 THF 용액을 반응물에 적가하고, 이어서 10분 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(300 uL, 2.15 mmol)을 적가하고, 이어서 30분 동안 교반하였다. p-니트로페놀(207 mg, 1.49 mmol) 및 트라이에틸아민(300 uL, 2.15 mmol)을 첨가하였다. 빙조를 제거하고, 반응 혼합물을 실온에서 14시간 동안 교반하였다.
반응물을 EtOAc(30 mL)로 희석시키고, 0.2 M 탄산나트륨 용액(2 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 50% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.23 (d, J = 9.0 ㎐, 2H), 7.45 - 7.30 (m, 4H), 7.30 - 7.16 (m, 3H), 4.23 - 4.07 (m, 2H), 3.97 (m, 4H), 3.85 (t, J = 10.5 ㎐, 1H), 3.35 (t, J = 11.8 ㎐, 2H), 1.99 - 1.79 (m, 1H), 1.56 (d, J = 8.4 ㎐, 3H), 1.48 - 1.29 (m, 4H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.13(s), -3.16 (s). MS m/z = 464.9 [M+1]; 463.1 [M-1].
중간체 32. 트랜스-4-(tert-부틸)사이클로헥실 ((S)-(4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00282
트랜스-4-( tert- 부틸)사이클로헥실 L-알라니네이트. 중간체 26에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 Cbz-l-알라닌(960 mg, 4.03 mmol) 및 트랜스-4-(tert-부틸)사이클로헥산올(1.0 g, 6.45 mmol)로부터 상기 생성물(845 mg)을 제조하였다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 4.65 (tt, J = 11.2, 4.5 ㎐, 1H), 3.51 (q, J = 7.1 ㎐, 1H), 2.07 - 1.93 (m, 2H), 1.87 - 1.73 (m, 4H), 1.40 - 1.23 (m, 4H), 1.19 - 0.94 (m, 4H), 0.85 (d, J = 2.6 ㎐, 9H). MS m/z = 228 [M+H].
Figure pct00283
트랜스-4-( tert -부틸)사이클로헥실 ((4-니트로페녹시)(페녹시) 포스포릴)-L-알라니네이트. 중간체 25에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 트랜스-4-(tert-부틸)사이클로헥실 L-알라니네이트(420 mg, 1.85 mmol)로부터 이성질체 혼합물로서 상기 생성물(520 mg)을 제조하였다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.27 - 8.19 (m, 2H), 7.37 (m, 4H), 7.28 - 7.16 (m, 3H), 4.62 (m, 1H), 4.17 - 4.00 (m, 1H), 3.88 (m, 1H), 1.95 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.39 (m, 3H), 1.35 - 1.22 (m, 2H), 1.15 - 0.92 (m, 3H), 0.85 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -2.98, -3.04. MS m/z = 505 [M+H].
중간체 33. ((1r, 4S)-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실)메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트
Figure pct00284
((1s, 4s)-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실)메탄올. 무수 테트라하이드로푸란(40 mL) 중 (1s,4s)-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥산 카르복실산(3 g, 15.29 mmol)의 빙랭 용액에 수소화알루미늄리튬(0.871 g, 22.94 mmol)을 30분만에 일부씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 0℃로 냉각시키고, 물(0.8 mL), 5 N 수산화나트륨 수용액(0.8 mL), 이어서 물(2.4 mL)로 켄칭하였다. 분리된 고체를 여과하고, 여과액을 에틸 아세테이트 및 포화 중탄산나트륨 수용액으로 희석시켰다. 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 에틸 아세테이트를 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 얻어진 잔류물을 1시간 동안 고진공에서 건조시켰으며, 후속 반응에서 그대로 사용한다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 3.47 (dd, J = 6.3, 1.9 ㎐, 2H), 2.08 - 1.77 (m, 5H), 1.62 - 1.18 (m, 4H), 0.99 (qd, J = 13.0, 3.2 ㎐, 2H). 19F NMR (376 ㎒, 클로로포름-d) δ -74.33 (d, J = 8.2 ㎐).
Figure pct00285
((1r, 4S)-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실)메틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 중간체 12에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 상기 생성물(1.48 g)을 제조하였다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 5.00 (s, 1H), 4.30 (s, 1H), 4.04 - 3.89 (m, 2H), 2.08 - 1.79 (m, 5H), 1.74 - 1.57 (m, 1H), 1.44 (s, 9H), 1.38 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.30 (m, 2H), 1.12 - 0.93 (m, 2H). 19F NMR (376 ㎒, 클로로포름-d) δ -74.38 (d, J = 7.8 ㎐).
Figure pct00286
(S)-1-옥소-1-(((1r, 4S)-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실)메톡시)프로판-2-아미늄 클로라이드. 중간체 13에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 상기 생성물(1.184 g)을 제조하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 8.55 (s, 3H), 4.17 - 3.88 (m, 3H), 2.21 (dtd, J = 12.2, 8.8, 3.3 ㎐, 1H), 1.83 (ddd, J = 29.5, 13.4, 3.4 ㎐, 4H), 1.63 (tdd, J = 11.9, 6.0, 3.3 ㎐, 1H), 1.41 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.32 - 0.93 (m, 4H). 19F NMR (377 ㎒, DMSO-d6) δ -72.84 (d, J = 8.8 ㎐).
Figure pct00287
((1r, 4S)-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실)메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트. 중간체 35에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 상기 생성물(1.4 g)을 제조하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d6) δ 8.37 - 8.22 (m, 2H), 7.56 - 7.31 (m, 4H), 7.30 - 7.14 (m, 2H), 6.72 (ddd, J = 13.7, 10.1, 8.6 ㎐, 1H), 4.10 - 3.91 (m, 1H), 3.88 - 3.75 (m, 2H), 2.20 - 1.99 (m, 1H), 1.86 - 1.63 (m, 4H), 1.54 - 1.41 (m, 1H), 1.29 - 1.06 (m, 5H), 0.98 (td, J = 12.7, 3.2 ㎐, 2H). MS m/z = 531.02 [M+1].
중간체 34. 에틸 ((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00288
DCM(15 mL) 중 L-알라닌 에틸 에스테르-HCl(631 mg, 2.465 mmol)의 용액에 -78℃에서 페닐 포스포로다이클로리데이트(0.368 mL, 2.465 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(0.68 mL, 4.93 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, 이어서 -78℃로 냉각시켰다. 펜타플루오로페놀(454 mg, 2.465 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(0.34 mL, 2.465 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 1시간 동안 교반하고, 이어서 DCM으로 희석시키고, 염수로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 60% EtOAc)로 정제하여 부분입체 이성질체 혼합물을 얻었으며, 이것에 다이아이소프로필 에테르(4 mL)를 첨가하였다. 현탁액을 초음파 처리하고, 여과하였다. 여과 케이크의 1H NMR은 그것이 3:1 비의 혼합물임을 보여주었다. 다이아이소프로필 에테르(5 mL)를 여과 케이크에 첨가하고, 현탁액을 70℃에서 가열하여 투명한 용액이 되게 하였다. 가열조의 제거 시에, 침상 결정이 형성되기 시작하였으며, 10분 후에, 혼합물을 여과하고, 여과 케이크를 고진공 하에서 30분 동안 건조시켜 Sp 이성질체를 얻었다.
부분입체 이성질체 혼합물: 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.43 - 7.30 (m, 2H), 7.32 - 7.17 (m, 3H), 4.29 - 4.11 (m, 3H), 3.94 (m, 1H), 1.52 - 1.42 (m, 3H), 1.28 (q, J = 7.0 ㎐, 3H).
S p 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.50 - 7.36 (m, 2H), 7.32 - 7.21 (m, 3H), 4.75 (t, J = 11.5 ㎐, 1H), 4.17 - 3.98 (m, 3H), 1.37 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H), 1.22 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ -0.51. 19F NMR (376 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ -155.48 - -155.76 (m), -162.73 (td, J = 21.3, 3.7 ㎐), -165.02 - -165.84 (m). LCMS m/z = 440.5 (M-에틸+H), tR = 1.57분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
중간체 35. (2S)-2-에틸부틸 2-사이클로헥실-2-(((4-니트로페녹시) (페녹시)포스포릴)아미노)아세테이트
Figure pct00289
(S)-2-에틸부틸 2-아미노-2-사이클로헥실아세테이트 하이드로클로라이드. 2-에틸-1-부탄올(20 mL) 중에 L-사이클로헥실글리신(0.90 g, 5.75 mmol)을 흡수시키고, 클로로트라이메틸실란(1.31 mL, 10.30 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 예열된 60℃ 유조(oil bath) 내에 16시간 동안 넣어두었다. 농축시키고, 60℃ 회전 증발기 조 내에서 톨루엔과 5회 동시증발시켰다. 고진공 하에 하룻밤 두어서 생성물을 얻었다. 이 물질을 다음 단계에 그대로 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.38 (s, 3H), 4.17 - 3.96 (m, 2H), 3.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 1.90 - 1.40 (m, 5H), 1.41 - 0.88 (m, 11H), 0.83 (t, J = 7.3 ㎐, 6H).
Figure pct00290
(2S)-2-에틸부틸 2-사이클로헥실-2-(((4-니트로페녹시) (페녹시)포스포릴)아미노)아세테이트. 다이클로로메탄(50 mL) 중 (S)-2-에틸부틸 2-아미노-2-사이클로헥실아세테이트 하이드로클로라이드(1.50 g, 5.39 mmol) 및 페닐 다이클로로포스페이트(0.803 mL, 5.39 mmol)의 용액에 아르곤 분위기 하에서 0℃에서 트라이에틸아민(1.56 mL, 11.16 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 4-니트로페놀(713 mg, 5.13 mmol) 및 트라이에틸아민(0.81 mL, 5.63 mmol)을 첨가하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 Et2O(100 mL)로 희석시키고, 고체를 여과하였다. 조 물질을 감압 하에서 농축시키고, 실리카 겔 크로마토그래피(120 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 50% 에틸 아세테이트/헥산)로 정제한 후, 변형제(modifier)를 사용하지 않는 역상 HPLC(물 중 20 내지 100% ACN)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.28 (br d, J = 9.3 ㎐, 2H), 7.55 - 7.28 (m, 4H), 7.28 - 7.01 (m, 3H), 6.61 - 6.52 (m, 1H), 3.85 (d, J = 4.0 ㎐, 2H) 3.75 - 3.53 (m, 1H), 1.67 - 1.31 (m, 7H), 1.25 (m, 6H), 1.16 - 0.67 (m, 9H). LC/MS: tR = 1.48분, MS m/z = 519.03 [M+1]; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC. MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.00 mm. 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물. 구배: 0분 내지 2.4분: 2 내지 100% ACN, 2.4분 내지 2.80분: 100% ACN, 2.8분 내지 2.85분: 100% 내지 2% ACN, 2.85분 내지 3.0분: 2% ACN(유량: 1.8 mL/분).
중간체 36. (1-(2,2,2-트라이플루오로에틸)피페리딘-4-일)메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)알라니네이트
Figure pct00291
(1-(2,2,2-트라이플루오로에틸)피페리딘-4-일)메틸 ( tert -부톡시카르보닐)알라니네이트. 중간체 12에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 상기 생성물(3.8 g)을 제조하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 7.25 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.08 - 3.72 (m, 3H), 3.10 (q, J = 10.3 ㎐, 2H), 2.88 (d, J = 11.0 ㎐, 2H), 2.37 - 2.18 (m, 2H), 1.66 - 1.47 (m, 3H), 1.36 (s, 9H), 1.21 (d, J = 7.5 ㎐, 5H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6 ) δ -68.52 (t, J = 10.3 ㎐).
Figure pct00292
(1-(2,2,2-트라이플루오로에틸)피페리딘-4-일)메틸 알라니네이트 다이하이드로클로라이드. 중간체 13에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 상기 생성물(3.52 g)을 제조하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 8.67 (s, 3H), 4.44 - 3.75 (m, 5H), 3.49 - 2.81 (m, 4H), 2.00 - 1.61 (m, 5H), 1.43 (d, J = 7.2 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6 ) δ -63.30 (d, J = 443.2 ㎐).
Figure pct00293
(1-(2,2,2-트라이플루오로에틸)피페리딘-4-일)메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)알라니네이트. 중간체 35에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 상기 생성물(4.25 g)을 제조하였다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6 ) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.53 - 7.40 (m, 2H), 7.39 (ddd, J = 8.1, 6.8, 3.1 ㎐, 2H), 7.24 (ddd, J = 17.4, 6.5, 1.6 ㎐, 3H), 6.69 (ddd, J = 13.7, 10.0, 8.4 ㎐, 1H), 4.07 - 3.92 (m, 1H), 3.88 - 3.77 (m, 2H), 3.08 (qd, J = 10.3, 1.6 ㎐, 2H), 2.87 - 2.79 (m, 2H), 2.25 - 2.14 (m, 2H), 1.56 - 1.39 (m, 3H), 1.26 - 1.08 (m, 5H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6 ) δ -1.26, -1.49. 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6 ) δ -68.45 (td, J = 10.2, 2.4 ㎐). LCMS: MS m/z = 546.27 [M+1]; ]; tR = 1.12분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
중간체 37. (1-에틸-3,3-다이플루오로피페리딘-4-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00294
tert- 부틸 4-((((벤질옥시)카르보닐)-L-알라닐)옥시)-3,3-다이플루오로피페리딘-1-카르복실레이트. 아세토니트릴(20 mL) 중 N-Cbz-L-알라닌(2.0 g, 8.96 mmol), tert-부틸 3,3-다이플루오로-4-하이드록시피페리딘-1-카르복실레이트(2.12 g, 8.96 mmol), 및 EDCI(1.67 g, 10.75 mmol)의 혼합물에 DMAP(1.64 g, 13.44 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 50 내지 100% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 19F NMR (377 ㎒, 클로로포름-d) δ -114.32 (m), -117.73 - -121.11 (m). LCMS: MS m/z = 343.14 [M+1-Boc], 386.82 (M+1-t-Bu); tR = 1.23분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00295
3,3-다이플루오로피페리딘-4-일 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트. DCM(5 mL) 중 tert-부틸 4-((((벤질옥시)카르보닐)-L-알라닐)옥시)-3,3-다이플루오로피페리딘-1-카르복실레이트(330 mg, 0.746 mmol)의 혼합물에 다이옥산 중 4 M HCl(0.9 mL)을 실온에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 진공 중에서 농축시키고, DCM과 수회 동시증발시키고, 고진공 하에서 15시간 동안 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.33 (m, 5H), 5.59 (m, 1H), 5.27 - 5.01 (m, 3H), 4.53 - 4.25 (m, 1H), 3.12 (m, 1H), 3.03 - 2.76 (m, 2H), 2.73 (s, 1H), 1.94 (s, 1H), 1.80 (s, 1H), 1.41 (d, J = 7.2 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 클로로포름-d) δ -114.66 (dd, J = 245.9, 61.8 ㎐), -119.63.
Figure pct00296
1-에틸-3,3-다이플루오로피페리딘-4-일 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트. DCM(9 mL) 중 3,3-다이플루오로피페리딘-4-일 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트(450 mg, 1.190 mmol), 아세트알데하이드(0.194 mL, 2.629 mmol), 및 아세트산(0.15 mL, 2.629 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, 시아노붕수소화나트륨(330 mg, 5.258 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini 10u C18 110Å 250 x 21.2 mm 컬럼, 20 내지 80% 아세토니트릴(0.1% TFA)/물(0.1% TFA) 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 10.18 (bs, 2H), 7.38 (m, 5H), 6.19 (m, 1H), 5.47 - 5.26 (m, 1H), 4.33 (m, 1H), 3.82 - 2.98 (m, 6H), 2.30 (s, 1H), 2.16 (s, 1H), 1.42 (m, 3H), 1.31 (td, J = 7.3, 1.5 ㎐, 3H). LCMS: MS m/z = 371.27 [M+1]; tR = 0.66분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00297
1-에틸-3,3-다이플루오로피페리딘-4-일 L-알라니네이트. THF(10 mL) 중 1-에틸-3,3-다이플루오로피페리딘-4-일 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트(450 mg, 0.929 mmol) 및 20% Pd(OH)2/C의 혼합물을 H2 가스 하에서 실온에서 1시간 동안 교반하고, 여과하고, 진공 중에서 농축시키고, DCM과 수회 동시증발시키고, 고진공 하에서 1시간 동안 건조시켜 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 237.09 [M+1]; tR = 0.15분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00298
(1-에틸-3,3-다이플루오로피페리딘-4-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 메틸렌 클로라이드(10 mL)를 1-에틸-3,3-다이플루오로피페리딘-4-일 L-알라니네이트(480 mg, 1.37 mmol)의 시럽에 첨가하고, TEA(0.190 mL, 0.370 mmol)를 첨가하여 용액을 달성하고, 이것을 -78℃로 냉각시키고, 페닐 다이클로로포스페이트(0.205 mL, 1.370 mmol)를 신속하게 첨가하였다. 트라이에틸아민(0.190 mL, 1.37 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 동일한 온도에서 30분 동안 교반하고, 4-니트로페놀(191 mg, 1.370 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 이어서, 트라이에틸아민(0.190 mL, 1.370 mmol)을 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 이어서, 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 100% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.29 - 8.15 (m, 2H), 7.44 - 7.28 (m, 4H), 7.27 - 7.11 (m, 3H), 5.03 (m, 1H), 4.34 - 4.14 (m, 1H), 3.94 - 3.75 (m, 1H), 2.88 (s, 1H), 2.63-2.49 (m, 4H), 2.39 (m, 1H), 2.03 - 1.93 (m, 1H), 1.93 - 1.77 (m, 1H), 1.44 (m, 3H), 1.09 (td, J = 7.2, 1.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.21, -3.26, -3.32, -3.46. 19F NMR (377 ㎒, 클로로포름-d) δ -110.50 (d, J = 244.0 ㎐), -116.76 (m). LCMS: MS m/z = 514.29 [M+1]; tR = 0.80분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
중간체 38. 4-니트로페닐-N,N'-에틸 L-알라니네이트포스포로다이아미데이트
Figure pct00299
DCM(20 mL) 중 에틸 L-알라니네이트 HCl 염(1.8 g, 11.72 mmol)의 용액에 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(1.5 g, 5.86 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 트라이에틸아민(2.37 g, 23.44 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, 하룻밤 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 417.93 [M+1], tR = 1.23분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.02분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
중간체 39. 벤질 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00300
페닐 다이클로로포스페이트(1.49 mL, 10 mmol)를 20 mL의 무수 다이클로로메탄 중에 용해시키고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. L-알라닌 벤질 에스테르 HCl(2.2 g, 10 mmol)을 반응 용액에 한꺼번에 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(3 mL, 22 mmol)을 5 mL의 무수 다이클로로메탄 중에 용해시키고, 반응물에 적가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. p-니트로페놀(1.25 g, 9 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 트라이에틸아민(1.5 mL, 11 mmol)을 3 mL의 무수 다이클로로메탄 중에 용해시키고, 반응물에 적가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 다이클로로메탄(10 mL)으로 희석시키고, 물(3 x 10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 30% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.24 - 8.10 (m, 2H), 7.40 - 7.10 (m, 12H), 5.14 (m, 2H), 4.19 (m, 1H), 3.87 (m, 1H), 1.47 - 1.36 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.15, -3.29. LCMS: MS m/z = 457.1 [M+1]; 455.1 [M-1], tR = 1.45분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.03분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분).
중간체 40. 4-니트로페닐-N,N'-메틸 L-알라니네이트포스포로다이아미데이트
Figure pct00301
트라이에틸아민(3.68 mL, 26.4 mmol)을 아르곤 분위기 하에서 0℃에서 다이클로로메탄(23 mL) 중 메틸 L-알라니네이트 하이드로클로라이드(1.63 g, 12.0 mmol) 및 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(1.5 g, 5.9 mmol)의 용액에 첨가하였다. 3시간 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d 1 ) 8.25 - 8.16 (m, 2H), 7.38 (dd, J = 9.3, 1.0 ㎐, 2H), 4.17 - 3.95 (m, 2H), 3.73 (br s, 6H), 3.61 (br t, J = 10.0 ㎐, 2H), 1.42 (s, 3H), 1.40 (s, 1H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ 7.82 (s). LCMS: MS m/z = 389.98 [M+1], tR = 1.11분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.81분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분).
중간체 41. 메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00302
페닐 다이클로로포스페이트(2.81 mL, 18.9 mmol)와 트라이에틸아민(5.38 mL, 37.9 mmol)을 0℃에서 다이클로로메탄(100 mL) 중 메틸 L-알라니네이트 하이드로클로라이드(2.64 g, 18.9 mmol)의 현탁액에 순차적으로 첨가하였다. 1시간 후에, 이어서 4-니트로페놀(2.64 g, 18.9 mmol)과 트라이에틸아민(2.64 mL, 18.9 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 2.5시간 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(100 mL)으로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ 8.25 - 8.18 (m, 2H), 7.43 - 7.29 (m, 4H), 7.29 - 7.15 (m, 3H), 4.24 - 4.07 (m, 1H), 3.97 (br q, J = 9.8 ㎐, 1H), 3.70 (s, 3H), 1.45 - 1.35 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ -3.12 (s), -3.17 (s). LCMS: MS m/z = 380.98 [M+1], tR = 1.59분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.49분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분).
중간체 42. 메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00303
4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(2.00 g, 7.81 mmol)와 트라이에틸아민(2.18 mL, 15.6 mmol)을 아르곤 분위기 하에서 0℃에서 다이클로로메탄(23 mL) 중 메틸 L-알라니네이트 하이드로클로라이드(1.091 g, 18.9 mmol)의 현탁액에 순차적으로 첨가하였다. 1시간 후에, 이어서 벤질 알코올(0.810 mL, 7.81 mmol)과 트라이에틸아민(1.09 mL, 7.81 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ 8.32 - 8.09 (m, 2H), 8.32 - 8.09 (m, 7H), 5.15 (app t, J = 8.4 ㎐, 2H), 4.70 (s, 1H), 4.07 - 3.93 (m, 1H), 3.73 - 3.65 (m, 3H), 1.42 - 1.31 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ 2.23 (s), 2.15 (s). LCMS: MS m/z = 394.9[M+1], tR = 1.34분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분).
중간체 43. 아이소프로필 ((4-(다이메틸카르바모일)페녹시)(4-니트로페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00304
DCM-THF(10:3 mL) 중 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(620 mg, 2.422 mmol) 및 아이소프로필 L-알라닌-HCl(406 mg, 2.422 mmol)의 용액에 -78℃에서 30분에 걸쳐 DCM(3.32 mL) 중 TEA(0.68 mL, 4.844 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, -78℃로 냉각시키고, N,N-다이메틸-4-하이드록시벤즈아미드(400 mg, 2.422 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, DCM(3.66 mL) 중 TEA(0.34 mL, 2.422 mmol)를 -78℃에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 1시간 동안 교반하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 100% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.26 - 8.18 (m, 2H), 7.45 - 7.35 (m, 3H), 7.27 (m, 2H), 6.76 (m, 1H), 5.01 (m, 1H), 4.17 - 3.94 (m, 2H), 3.19 - 2.84 (m, 6H), 1.39 (m, 3H), 1.27 - 1.16 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.13, -3.21. MS m/z = 480 (M+H). LCMS: MS m/z = 480.26 [M+1]; tR = 1.00분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
중간체 44. 옥세탄-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00305
옥세탄-3-일 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트. 아세토니트릴(100 mL) 중 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라닌(1.8 g, 8.1 mmol), 3-하이드록시옥세탄(0.5 g, 6.75 mmol) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드 HCl 염(EDCI)(1.68 g, 8.77 mmol)의 혼합물에 4-(다이메틸아미노)피리딘(DMAP, 1.24 g, 10.12 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 유기 용매를 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.47 (p, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.30 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.88 (t, J = 7.1 ㎐, 2H), 4.62 (ddd, J = 17.5, 7.7, 5.3 ㎐, 2H), 4.41 (p, J = 7.3 ㎐, 1H), 1.44 (d, J = 7.3 ㎐, 3H). LCMS: MS m/z = 280.04 [M+1], tR = 1.11분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.82분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
Figure pct00306
옥세탄-3-일 L-알라니네이트. DCM(5 mL) 중에 옥세탄-3-일 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트(0.1 g, 0.36 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 15 mg의 Pd-C(10%, 습윤)를 첨가하고, 반응 플라스크를 탈기하고, 이어서 H2 벌룬을 장입하고, 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 반응 혼합물을 여과하고, 용매를 진공 하에서 증발시키고, 잔류물을 고진공 상에서 5분 동안 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 5.42 (p, J = 5.7 ㎐, 1H), 4.87 (t, J = 6.9 ㎐, 2H), 4.65 - 4.54 (m, 2H), 3.58 (qd, J = 7.0, 2.1 ㎐, 1H), 1.49 (d, J = 7.1 ㎐, 2H), 1.34 (dd, J = 7.2, 2.1 ㎐, 3H).
Figure pct00307
옥세탄-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. DCM(10 mL) 중 옥세탄-3-일 L-알라니네이트(120 mg, 0.83 mmol)의 용액에 페닐 포스포로다이클로리데이트(175 mg, 0.83 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 트라이에틸아민(252 mg, 2.49 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, 0℃로 냉각시키고, 파라-니트로페놀(115 mg, 0.83 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(252 mg, 2.49 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 423.06 [M+1], tR = 1.25분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.15분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
중간체 45. 프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00308
프로필 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트. N-(3-다이메틸아미노프로필)-N′-에틸카르보다이이미드 하이드로클로라이드(6.08 g, 31.71 mmol)를 실온에서 아세토니트릴(125 mL) 중 Boc-Ala-OH(5 g, 26.43 mmol) 및 n-프로필 알코올(6.02 mL, 80.6 mmol)의 용액에 첨가하였다. 15분 후에, 4-(다이메틸아미노)피리딘(3.23 g, 26.43 mmol)을 첨가하였다. 16시간 후에, 반응 혼합물을 절반의 부피로 농축시키고, 혼합물을 에틸 아세테이트(250 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(2 x 200 mL) 및 염수(200 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 20% EtOAc로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 5.57 (s, 1H), 4.19 - 3.92 (m, 3H), 1.63 (h, J = 7.1 ㎐, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.30 (d, J = 7.3 ㎐, 3H), 0.93 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). LCMS: MS m/z = 231.60 [M+1], tR = 1.10분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00309
프로필 L-알라니네이트 하이드로클로라이드. 다이옥산 중 4 M 염산 용액(16.91 mL)을 실온에서 다이클로로메탄(10 mL) 중 프로필 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트(3.91 g, 16.91 mmol)에 첨가하였다. 16시간 후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 8.45 (s, 3H), 4.22 - 4.11 (m, 2H), 4.11 - 3.99 (m, 1H), 1.68 (dtd, J = 14.0, 7.4, 6.6 ㎐, 2H), 1.60 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 0.95 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). LCMS: MS m/z = 131.94 [M+1], tR = 0.32분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00310
프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 다이클로로메탄(12 mL) 중 페닐 다이클로로포스페이트(0.89 mL, 5.97 mmol)를 0℃에서 다이클로로메탄(12 mL) 중 프로필 L-알라니네이트 하이드로클로라이드(1.0 g, 5.97 mmol)의 용액에 15분에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료된 후에, 다이클로로메탄(2.5 mL) 중 트라이에틸아민(2.0 mL, 14.32 mmol)을 5분에 걸쳐 첨가하였다. 3.5시간 후에, 이어서 4-니트로페놀(0.83 g, 5.97 mmol)과 트라이에틸아민(1.0 mL, 7.16 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 물(2 x 100 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 8.28 - 8.20 (m, 2H), 7.49 - 7.35 (m, 4H), 7.31 - 7.19 (m, 3H), 4.72 - 4.56 (m, 1H), 4.14 - 4.02 (m, 1H), 3.99 (td, J = 6.6, 2.5 ㎐, 2H), 1.58 (dtdd, J = 13.9, 7.4, 6.5, 0.9 ㎐, 2H), 1.31 (ddd, J = 7.1, 4.2, 1.1 ㎐, 3H), 0.88 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ -2.12, -2.22. LCMS: MS m/z = 409.12 [M+1], tR = 1.15분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.73분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
중간체 46. 옥세탄-3-일메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00311
옥세탄-3-일메틸 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트. 아세토니트릴(100 mL) 중 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라닌(6.08 g, 27.24 mmol), 옥세탄-3-일메탄올(2 g, 22.7 mmol) 및 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필)카르보다이이미드 HCl 염(EDCI)(5.66 g, 29.51 mmol)의 혼합물에 4-(다이메틸아미노)피리딘(DMAP, 4.16 g, 34.05 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 유기 용매를 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 280.04 [M+1], tR = 1.11분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.88분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
Figure pct00312
옥세탄-3-일메틸 L-알라니네이트. DCM(25 mL) 중에 옥세탄-3-일메틸 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트(2.2 g, 8 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 500 mg의 Pd-C(10%, 습윤)를 첨가하고, 반응 플라스크를 탈기하고, 이어서 H2 벌룬을 장입하고, 실온에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 반응 혼합물을 여과하고, 용매를 진공 하에서 증발시키고, 잔류물을 고진공 상에서 5분 동안 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 4.77 (dd, J = 7.9, 6.3 ㎐, 2H), 4.44 (td, J = 6.1, 2.5 ㎐, 2H), 4.38 - 4.23 (m, 2H), 3.55 (q, J = 7.0 ㎐, 1H), 3.34 - 3.19 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.0 ㎐, 3H).
Figure pct00313
옥세탄-3-일메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. DCM(20 mL) 중 옥세탄-3-일메틸 L-알라니네이트(1.19 g, 7.11 mmol)의 용액에 페닐 포스포로다이클로리데이트(1.5 g, 7.11 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 트라이에틸아민(1.44 g, 14.22 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, 0℃로 냉각시키고, 파라-니트로페놀(0.99 g, 7.1 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(1.44 g, 14.22 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 437.14 [M+1], tR = 1.25분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.36분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
중간체 47. 사이클로부틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00314
빙조 내에서 질소 분위기 하에서 DCM(10 mL) 중 L-알라닌, 사이클로부틸 에스테르(1.8 g, 10 mmol)의 용액에 페닐 포스포로다이클로리데이트(2.1 g, 10 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 이어서, 트라이에틸아민(1.11 g, 11 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 2시간 동안 교반하고, 0℃로 냉각시키고, 파라-니트로페놀(2.5 g, 18 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(1.11 g, 11 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 2시간 동안 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 5% 시트르산 수용액으로 2회 세척한 후, 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. MS m/z = 422.0 (M+H)+.
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IA, 150 x 4.6 mm, 헵탄 70%, IPA 30%)를 통해 정제하여 중간체 48 및 중간체 49를 형성하였다:
Figure pct00315
Figure pct00316
중간체 48. 중간체 47의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 8.33-8.23 (m, 2H), 7.52 -7.33 (m, 4H), 7.33-7.17 (m, 3H), 4.96-4.85 (m, 1H), 4.07-3.96 (m, 1H), 2.27 (m, 2H), 2.07-1.91 (m, 2H), 1.83-1.70 (m, 1H), 1.70-1.55 (m, 1H), 1.32 (ddd, J = 7.2, 5.3, 1.2 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 1.36. LCMS: MS m/z = 421.05 [M+1], tR = 1.42분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 8.07분; HPLC 시스템: Chiralpak IC, 150 x 4.6 mm, 5 마이크로미터, CN=IC00CD-QC005, 1 CV=2.49 mL, CV#1, Col 밸브: 위치 3, 1 mL/분으로 15 mL/15분. Pmax=300 bar; 용매 밸브: D: 헵탄 70%, #6: IPA.
중간체 49. 중간체 47의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 8.33-8.23 (m, 2H), 7.52 -7.33 (m, 4H), 7.33-7.17 (m, 3H), 4.96-4.85 (m, 1H), 4.07-3.96 (m, 1H), 2.27 (m, 2H), 2.07-1.91 (m, 2H), 1.83-1.70 (m, 1H), 1.70-1.55 (m, 1H), 1.32 (ddd, J = 7.2, 5.3, 1.2 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 1.59. LCMS: MS m/z = 420.90 [M+1], tR = 1.42분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 11.50분; HPLC 시스템: Chiralpak IC, 150 x 4.6 mm, 5 마이크로미터, CN=IC00CD-QC005, 1 CV=2.49 mL, CV#1, Col 밸브: 위치 3, 1 mL/분으로 15 mL/15분. Pmax=300 bar; 용매 밸브: D: 헵탄 70%, #6: IPA 30%.
중간체 50. 메틸 ((S)-(퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00317
L-알라닌 메틸 에스테르 하이드로클로라이드(14 g, 100 mmol)를 50 mL의 무수 DCM과 혼합하고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. 페닐 다이클로로포스페이트(16.4 mL, 110 mmol)를 반응물에 적가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(29.4 mL, 210 mmol)을 20 mL의 무수 DCM과 혼합하고, 반응물에 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 펜타플루오로페놀(18.4 g, 100 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 트라이에틸아민(14.7 mL, 105 mmol)을 30 mL의 무수 DCM과 혼합하고, 반응물에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다.
반응물을 DCM(50 mL)으로 희석시키고, 물(5 x 10 mL)로 세척하였다. 유기물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 감압 하에서 농축시켜 고체를 얻었다. 아이소프로필 에테르(130 mL)를 고체에 첨가하였다. 큰 고체 조각을 분해하고, 이어서 20분 동안 초음파 처리하고, 이후에, 이어서 혼합물을 24시간 동안 교반하였다.
고체를 수집하고, 소량의 아이소프로필 에테르(30 mL)로 세척하였다. 고체를 고진공 하에서 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.40 - 7.32 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 3H), 4.20 (m, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 1.47 (d, J = 7.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -1.62. 19F NMR (376 ㎒, 클로로포름-d) δ -153.82 (dd, J = 18.5, 2.7 ㎐), -159.99 (td, J = 21.8, 3.8 ㎐), -162.65 (dd, J = 22.2, 17.6 ㎐). LCMS: MS m/z = 425.9 [M+1], 423.9 [M-1], tR = 1.68분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.76분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분).
중간체 51. 아이소프로필 ((4-(2-메톡시에톡시)페녹시)(4-니트로페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00318
다이클로로메탄(20 mL) 중 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(503 mg, 1.97 mmol)를 0℃에서 다이클로로메탄(20 mL) 중 L-알라닌 아이소프로필 에스테르 하이드로클로라이드(329 mg, 1.97 mmol)의 용액에 10분에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료된 후에, 트라이에틸아민(0.55 mL, 3.93 mmol)을 적가하였다. 90분 후에, 4-(2-메톡시-에톡시)페놀(331 mg, 1.97 mmol)과 트라이에틸아민(0.28 mL, 1.97 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 물(2 x 50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.51 - 7.39 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 2H), 6.97 - 6.90 (m, 2H), 4.94 (heptd, J = 6.2, 3.2 ㎐, 1H), 4.12 - 4.07 (m, 2H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.76 - 3.68 (m, 2H), 3.41 (d, J = 0.5 ㎐, 3H), 1.32 (td, J = 7.1, 1.2 ㎐, 3H), 1.19 (dt, J = 6.3, 2.0 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ -0.86, -1.06. LCMS: MS m/z = 483.06 [M+1], tR = 1.39분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.58분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
중간체 52. 부틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00319
다이클로로메탄(12 mL) 중 페닐 다이클로로포스페이트(0.89 mL, 5.97 mmol)를 0℃에서 다이클로로메탄(12 mL) 중 부틸 L-알라니네이트 하이드로클로라이드(CAS# 81305-85-3, 1.0 g, 5.97 mmol)의 용액에 15분에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료된 후에, 다이클로로메탄(2.5 mL) 중 트라이에틸아민(2.0 mL, 14.32 mmol)을 5분에 걸쳐 첨가하였다. 3.5시간 후에, 이어서 4-니트로페놀(0.83 g, 5.97 mmol)과 트라이에틸아민(1.0 mL, 7.16 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 물(2 x 100 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.31 - 8.23 (m, 1H), 7.52 - 7.34 (m, 2H), 7.32 - 7.18 (m, 2H), 4.04 (td, J = 6.6, 2.7 ㎐, 2H), 1.60 - 1.48 (m, 1H), 1.40 - 1.26 (m, 3H), 0.89 (t, J = 7.4 ㎐, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ -1.36, -1.59. LCMS: MS m/z = 423.13 [M+1], tR = 1.22분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
중간체 53. 3-메톡시프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00320
3-메톡시프로필 L-알라니네이트. 아세토니트릴(40 mL) 중 Cbz-L-알라닌(2.80 g, 12.54 mmol), 3-메톡시프로판올(1.00 mL, 10.45 mmol), 및 EDCI(2.11 g, 13.59 mmol)의 혼합물에 DMAP(1.92 g, 15.68 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 50% EtOAc, 35분 전개)로 정제하여 Cbz-L-알라닌 에스테르(2.78 g)를 얻었으며, 이것을 THF(20 mL) 중에 용해시키고, 20% Pd(OH)2(800 mg, 1.14 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 수소 가스 분위기 하에서 실온에서 4시간 동안 교반하고, 여과하고, 진공 중에서 농축시키고, 고진공 하에서 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 4.28 - 4.14 (m, 2H), 3.55 (q, J = 7.0 ㎐, 1H), 3.43 (t, J = 6.2 ㎐, 2H), 3.32 (s, 3H), 1.98 - 1.85 (m, 4H), 1.33 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). LCMS m/z = 161.98 (M+H), tR = 0.12분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00321
3-메톡시프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. DCM(20 mL) 중 3-메톡시프로필 L-알라니네이트(1.32 g, 8.20 mmol)의 용액에 -78℃에서 페닐 포스포로다이클로리데이트(1.23 mL, 8.20 mmol)를 한꺼번에 신속히 첨가하였다. 이어서, 트라이에틸아민(1.14 mL, 8.20 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, -78℃로 냉각시켰다. p-니트로페놀(1.14 g, 8.20 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(1.14 mL, 8.20 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 2시간 동안 교반하였다. DCM으로 희석시킨 후에, 혼합물을 염수로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 100% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.26 - 8.19 (m, 2H), 7.36 (m, 4H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 4.20 (m, 2H), 4.17 - 4.06 (m, 1H), 3.91 (m, 1H), 3.40 (m, 2H), 3.30 (m, 3H), 1.87 (m, 2H), 1.40 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.07, -3.10. LCMS: m/z = 439.11 (M+H). tR = 1.36분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분)
중간체 54. 메틸 (2S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(((((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(4-니트로페녹시)포스포릴)옥시)페닐)프로파노에이트
Figure pct00322
다이클로로메탄(20 mL) 중 L-알라닌 메틸 에스테르 하이드로클로라이드(275 mg, 1.97 mmol)를 0℃에서 다이클로로메탄(20 mL) 중 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(504 mg, 1.97 mmol)의 용액에 10분에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료된 후에, 트라이에틸아민(0.55 mL, 3.93 mmol)을 적가하였다. 60분 후에, N-카르보벤질옥시-L-티로신 메틸 에스테르(649 mg, 1.97 mmol)와 트라이에틸아민(0.28 mL, 1.97 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 3시간 후에, 반응 혼합물을 물(2 x 50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.34 - 8.17 (m, 2H), 7.53 - 7.37 (m, 2H), 7.37 - 7.09 (m, 9H), 5.02 (s, 2H), 4.43 (dd, J = 9.4, 5.2 ㎐, 1H), 4.19 - 3.97 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.62 (d, J = 4.4 ㎐, 3H), 3.16 (dd, J = 14.0, 5.4 ㎐, 1H), 2.93 (dd, J = 14.1, 9.8 ㎐, 1H), 1.32 (td, J = 7.3, 1.2 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ -1.30, -1.51. LCMS: MS m/z = 616.03 [M+1], tR = 1.63분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.81분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
중간체 55. (S)-테트라하이드로푸란-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)
Figure pct00323
(S)-테트라하이드로푸란-3-일-L-알라니네이트. 아세토니트릴(20 mL) 중 N-Cbz-L-알라닌(3.31, 14.83 mmol), (S)-THF-3-올(1.0 mL, 12.34 mmol), 및 EDCI(2.49 g, 16.04 mmol)의 혼합물에 DMAP(2.26 g, 18.51 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 80% EtOAc)로 정제하여 Cbz-L-알라닌 4-THF 에스테르를 얻었으며, 이것을 THF(20 mL) 중에 용해시키고, 20% 수산화팔라듐(433 mg, 0.617 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 가스 하에서 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 진공 중에서 농축시키고, DCM과 다수회 동시증발시키고, 고진공 하에서 15시간 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 5.37 - 5.29 (m, 1H), 3.97 - 3.77 (m, 4H), 3.61 - 3.52 (m, 1H), 2.27 - 2.12 (m, 1H), 2.02 (dt, J = 12.8, 5.6 ㎐, 1H), 1.76 (s, 2H), 1.34 (dd, J = 7.1, 1.5 ㎐, 3H). LCMS m/z = 159.94 (M+H), tR = 0.12분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00324
(S)-테트라하이드로푸란-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. DCM(20 mL) 중 (S)-테트라하이드로푸란-3-일-L-알라니네이트(1.45 g, 9.10 mmol)의 용액에 -78℃에서 페닐 포스포로다이클로리데이트(1.37 mL, 9.10 mmol)를 한꺼번에 신속히 첨가하였다. 이어서, 트라이에틸아민(1.27 mL, 9.10 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, -78℃로 냉각시켰다. p-니트로페놀(1.27 g, 9.10 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(1.27 mL, 9.10 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 2시간 동안 교반하였다. DCM으로 희석시킨 후에, 혼합물을 염수로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 100% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.31 (m, 4H), 7.30 - 7.12 (m, 3H), 5.29 (m, 1H), 4.14 (m, 1H), 4.00 - 3.79 (m, 4H), 3.82 - 3.60 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.95 (m, 1H), 1.40 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.18, -3.20. LCMS: m/z = 437.05 (M+H), tR = 1.41분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
중간체 56. 3-모르폴리노프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00325
다이클로로메탄(20 mL) 중 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(503 mg, 1.97 mmol)를 0℃에서 다이클로로메탄(20 mL) 중 3-모르폴리노프로필 L-알라니네이트 하이드로클로라이드(496 mg, 1.97 mmol)의 용액에 10분에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료된 후에, 트라이에틸아민(0.55 mL, 3.93 mmol)을 적가하였다. 90분 후에, 페놀(185 mg, 1.97 mmol)과 트라이에틸아민(0.28 mL, 1.97 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 물(2 x 50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.51 - 7.39 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 2H), 6.97 - 6.90 (m, 2H), 4.94 (m, 1H), 4.12 - 4.07 (m, 2H), 4.05 - 3.93 (m, 1H), 3.76 - 3.68 (m, 2H), 3.41 (d, J = 0.5 ㎐, 3H), 1.32 (td, J = 7.1, 1.2 ㎐, 3H), 1.19 (dt, J = 6.3, 2.0 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ -2.12, -2.22. LCMS: MS m/z = 494.35 [M+1], tR = 1.03분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
중간체 57. (R)-테트라하이드로푸란-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)
Figure pct00326
(R)-테트라하이드로푸란-3-일-L-알라니네이트. 아세토니트릴(20 mL) 중 N-Cbz-L-알라닌(3.31 g, 14.83 mmol), (R)-THF-3-올(1.0 mL, 12.34 mmol), 및 EDCI(2.49 g, 16.04 mmol)의 혼합물에 DMAP(2.26 g, 18.51 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 50% EtOAc, 35분 전개)로 정제하여 Cbz-L-알라닌 에스테르(2.78 g)를 얻었으며, 이것을 THF(20 mL) 중에 용해시키고, 20% Pd(OH)2(433 mg, 0.617 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 수소 분위기 하에서 실온에서 4.5시간 동안 교반하고, 여과하고, 진공 중에서 농축시키고, 고진공 하에서 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 5.32 (ddt, J = 6.5, 4.3, 1.9 ㎐, 1H), 3.98 - 3.78 (m, 4H), 3.56 (q, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.19 (dtd, J = 13.7, 8.4, 6.4 ㎐, 1H), 2.05 - 1.92 (m, 1H), 1.79 (s, 2H), 1.34 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). LCMS: m/z = 159.92 (M+H), tR = 0.21분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00327
(R)-테트라하이드로푸란-3-일 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. DCM(40 mL) 중 (R)-테트라하이드로푸란-3-일-L-알라니네이트(1.66 g, 10.44 mmol)의 용액에 -78℃에서 페닐 포스포로다이클로리데이트(1.56 mL, 10.44 mmol)를 한꺼번에 신속히 첨가하였다. 이어서, 트라이에틸아민(1.45 mL, 10.44 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, -78℃로 냉각시켰다. p-니트로페놀(1.45 g, 10.44 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(1.45 mL, 10.44 mmol)을 -78℃에서 5분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 2시간 동안 교반하였다. DCM으로 희석시킨 후에, 혼합물을 염수로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 100% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.22 (m, 2H), 7.43 - 7.31 (m, 4H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 5.29 (m, 1H), 4.21 - 4.10 (m, 1H), 3.93 - 3.79 (m, 4H), 3.79 - 3.71 (m, 1H), 2.17 (m, 1H), 1.97 - 1.85 (m, 1H), 1.44 - 1.37 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.24, -3.26. LCMS: m/z = 437.02 (M+H), tR = 1.42분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
중간체 58. 메틸 (클로로(페녹시)포스포로티오일)-L-알라니네이트
Figure pct00328
티오포스포릴 클로라이드(5.08 mL, 50.0 mmol)와 트라이에틸아민(6.97 mL, 50.0 mmol)을 아르곤 분위기 하에서 -78℃에서 TBME(72 mL) 중 페놀(4.70 mg, 50.0 mmol)의 용액에 순차적으로 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 하였다. 1시간 후에, 생성된 혼합물을 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 다이클로로메탄(72 mL) 중에 용해시키고, L-알라닌 메틸 에스테르 하이드로클로라이드(6.97 mg, 50.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 -78℃로 냉각시키고, 트라이에틸아민(13.9 mL, 100 mmol)을 적가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 하였다. 16시간 후에, 반응 혼합물을 was 감압 하에서 농축시키고, TBME(100 mL)를 잔류물에 첨가하였다. 생성된 백색 고체를 진공 여과에 의해 제거하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었으며, 이것을 다음 단계에 직접 사용하였다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ 7.45 - 7.12 (m, 5H), 4.67 - 4.44 (m, 1H), 4.44 - 4.24 (m, 1H), 3.81 (s, 1.5H), 3.78 (s, 1.5H), 1.53 (app t, J = 6.8 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ 64.78 (s), 64.63 (s).
중간체 59. 사이클로헥실 ((((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(4-니트로페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트 및 사이클로헥실 ((((S)-1-사이클로헥실옥시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(4-니트로페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00329
THF(10 mL) 중 (S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-아미늄 클로라이드 중간체 11(680 mg, 3.27 mmol)의 용액에 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(838 mg, 3.27 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙조 내에서 냉각시키고, THF(2 mL) 중 트라이에틸아민(1.0 mL, 6.54 mmol)을 30분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 빙조 하에서 교반하고, (S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-아미늄 클로라이드(687 mg, 3.27 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, THF(2 mL) 중 트라이에틸아민(1.0 mL, 6.54 mmol)을 빙조 하에서 30분에 걸쳐 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1.5시간 동안 빙조 하에서 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.20 (m, 2H), 7.38 (m, 2H), 4.77 (m, 1H), 4.15 - 3.91 (m, 4H), 3.60 (m, 2H), 1.91 - 1.77 (m, 2H), 1.75 - 1.67 (m, 2H), 1.51 (m, 2H), 1.45 - 1.23 (m, 15H), 0.88 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.04. LCMS: MS m/z = 528.10 [M+1].
중간체 60. 4-니트로페닐-N,N'-사이클로헥실 L-알라니네이트포스포로다이아미데이트
Figure pct00330
(S)-사이클로헥실 2-아미노프로파노에이트 하이드로클로라이드. L-알라닌(891 mg, 10 mmol)을 사이클로헥산올(10 mL)과 혼합하였다. 트라이메틸실릴 클로라이드(12.7 mL, 100 mmol)를 적가하고, 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 60℃로 가열하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에서 농축시키고, 톨루엔(5x)과 공비증류하여 오일을 얻었다. 헥산(100 mL)을 첨가하고, 15시간 동안 교반하여 고체를 얻었으며, 이것을 수집하고, 헥산(100 mL)으로 세척하고, 고진공 하에서 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.45 (s, 3H), 4.77 (tt, J = 8.4, 3.7 ㎐, 1H), 4.02 (q, J = 7.2 ㎐, 1H), 1.71 (m, 4H), 1.53 - 1.17 (m, 9H).
Figure pct00331
4-니트로페닐-N,N'-사이클로헥실 L-알라니네이트포스포로다이아미데이트. 4-니트로페닐 다이클로로포스페이트(256 mg, 1 mmol)를 무수 다이클로로메탄(10 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. (S)-사이클로헥실 2-아미노프로파노에이트 하이드로클로라이드(415 mg, 2 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 트라이에틸아민(698 μL, 5 mmol)을 적가하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 다이클로로메탄(15 mL)으로 희석시키고, 2% 시트르산 수용액(20 mL)으로 세척하였다. 유기물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 물질을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 50% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.30 - 8.13 (m, 2H), 7.49 - 7.27 (m, 2H), 5.50 (m, 2H), 4.62 (m, 2H), 3.85 (m, 2H), 1.67 (m, 8H), 1.51 - 1.18 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 9.50. MS m/z = 526.0 [M+1], 524.1 [M-1].
중간체 61. 4-니트로페닐-N,N'-아이소프로필 L-알라니네이트포스포로다이아미데이트
Figure pct00332
DCM(20 mL) 중 아이소프로필 L-알라니네이트 HCl 염(1.97 g, 11.72 mmol)의 용액에 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(1.5 g, 5.86 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 약 0℃로 냉각시키고, 트라이에틸아민(2.37 g, 23.44 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 약 30분 동안 교반하고, 하룻밤 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 445.96 [M+1].
중간체 62. 4-니트로페닐-N,N'-사이클로부틸메틸 L-알라니네이트포스포로다이아미데이트
Figure pct00333
DCM(20 mL) 중 사이클로부틸메틸 L-알라니네이트 HCl 염(1.51 g, 7.8 mmol)의 용액에 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(1 g, 3.9 mmol)를 한꺼번에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 트라이에틸아민(1.58 g, 15.6 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 30분 동안 교반하고, 하룻밤 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 497.98 [M+1].
중간체 63. (1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00334
(1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트. 4-다이메틸아미노피리딘(2.84 g, 23 mmol)을 실온에서 아세토니트릴(100 mL) 중 tert-부틸 ((1r,4r)-4-하이드록시사이클로헥실)카르바메이트(4.00 g, 19.0 mmol) 및 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라닌(4.98 g, 22.0 mmol), 및 EDCI(3.13 g, 20.0 mmol)의 용액에 첨가하였다. 4시간 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(200 mL)으로 희석시키고, 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 50% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ 7.40 - 7.28 (m, 5H), 5.29 (br d, J = 7.7 ㎐, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.78 - 4.60 (m, 1H), 4.47 - 4.19 (m, 2H), 3.45 (s, 1H), 2.08 - 1.89 (m, 4H), 1.54 - 1.34 (m, 14H), 1.28 - 1.16 (m, 2H). LCMS: MS m/z = 420.99 [M+1].
Figure pct00335
(1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 아르곤 분위기 하에서 실온에서 테트라하이드로푸란(50 mL) 중 (1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트(1.96 g, 4.66 mmol) 및 탄소 상의 팔라듐(10 중량%, 2.0 g)의 용액이 담긴 플라스크에 수소 벌룬을 부착하였다. 베셀(vessel)을 소기하고, 수소 분위기(3x)로 재충전하고, 반응 혼합물을 격렬하게 교반하였다. 1.5시간 후에, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 조 Cbz-탈보호된 물질을 얻었다. 조 잔류물을 다이클로로메탄(23 mL) 중에 흡수시키고, 생성된 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 페닐 다이클로로포스페이트(0.70 mL, 4.7 mmol)와 트라이에틸아민(0.66 mL, 4.7 mmol)을 순차적으로 첨가하였다. 1시간 후에, 이어서 4-니트로페놀(660 mg, 4.74 mmol) 및 트라이에틸아민(0.66 mL, 4.7 mmol)을 첨가하였다. 1.5시간 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ 8.26 - 8.18 (m, 2H), 7.43 - 7.30 (m, 4H), 7.25 - 7.17 (m, 3H), 4.77 - 4.58 (m, 1H), 4.40 (br s, 1H), 4.18 - 3.99 (m, 1H), 3.93 - 3.80 (m, 1H), 3.44 (br s, 1H), 2.07 - 1.87 (m, 4H), 1.52 - 1.36 (m, 14H), 1.30 - 1.16 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ -3.15 (s). LCMS: MS m/z = 563.88 [M+1].
중간체 64. ((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
방법 1.
Figure pct00336
((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 ((벤질옥시) 카르보닐)-L-알라니네이트. Cbz-L-알라닌(223 mg, 1.00 mmol)을 무수 MeCN(10 mL) 중에 용해시켰다. 트랜스-1-(Boc-아미노)-4-(하이드록시메틸)사이클로헥산(229 mg, 1.00 mmol) 및 EDCI(230 mg, 1.2 mmol)를 반응물에 첨가하고, 이어서 이것을 25분 동안 교반하였다. DMAP(122 mg, 1 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, 반응물을 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 5% 시트르산 수용액(2 x 5 mL), 이어서 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 40% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.41 - 7.27 (m, 5H), 5.29 (d, J = 7.6 ㎐, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.47 - 4.24 (m, 2H), 3.96 (d, J = 6.6 ㎐, 2H), 3.37 (bs, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.58 (m, 2H), 1.44 (m, 12H), 1.10 (m, 4H).
Figure pct00337
((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. ((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 ((벤질옥시) 카르보닐)-L-알라니네이트(348 mg, 0.800 mmol)를 12 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시켰다. Degussa 타입 탄소 상의 10% 팔라듐(25 mg)을 반응물에 첨가하고, 이어서 수소 분위기 하에서 3시간 동안 교반하였다. 탄소 상의 팔라듐을 여과하고, 여과액을 추가의 정제 없이 다음 반응에 사용하였다. 페닐 다이클로로포스페이트(119 μL, 0.800 mmol)를 15 mL의 무수 다이클로로메탄 중에 용해시키고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. 이어서, 상기로부터의 여과액을 반응 용액에 적가하고, 이어서 30분 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(120 μL, 0.88 mmol)을 적가하고, 1시간 동안 교반하였다. p-니트로페놀(100 mg, 0.72 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 트라이에틸아민(123 μL, 0.88 mol)을 적가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(10 mL)으로 희석시키고, 물(3 x 10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 40% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.44 - 7.30 (m, 4H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 4.35 (s, 1H), 4.22 - 4.06 (m, 1H), 3.99 - 3.88 (m, 2H), 3.85 (t, J = 10.6 ㎐, 1H), 3.36 (s, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.57 (m, 2H), 1.48 - 1.36 (m, 12H), 1.15 - 0.98 (m, 4H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 3.12, 3.13. LCMS: MS m/z = 478.2 [M+1].
방법 2.
Figure pct00338
((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트. 트랜스-1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-4-(하이드록시메틸)사이클로헥산(510 mg, 2.18 mmol), 이어서 N-(3-다이메틸아미노프로필)-N′-에틸카르보다이이미드 하이드로클로라이드(509 g, 2.62 mmol)를 실온에서 아세토니트릴(22 mL) 중 Z-Ala-OH(489 g, 2.18 mmol)의 용액에 첨가하였다. 30분 후에, 4-(다이메틸아미노)피리딘(267 mg, 2.18 mmol)을 첨가하였다. 18시간 후에, 반응물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 10% 시트르산 수용액(2 x 100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트 중 0 내지 50% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.41 - 7.29 (m, 5H), 5.28 (s, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.46 - 4.27 (m, 2H), 3.96 (d, J = 6.6 ㎐, 2H), 3.37 (s, 1H), 2.03 (s, 2H), 1.78 (s, 2H), 1.56 (s, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.42 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.08 (t, J = 9.7 ㎐, 4H). LCMS: MS m/z = 434.87 [M+1], tR = 1.21분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.96분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
Figure pct00339
((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 L-알라니네이트. 탄소 상의 팔라듐(198 mg, 10 중량%)을 아르곤으로 퍼지된 테트라하이드로푸란(24 mL) 중 ((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트(719 g, 1.65 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 수소로 퍼지하고, 실온에서 교반하였다. 1시간 후에, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터를 테트라하이드로푸란으로 헹구고, 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 4.38 (s, 1H), 4.02 - 3.85 (m, 2H), 3.55 (q, J = 7.0 ㎐, 1H), 3.38 (s, 1H), 2.04 (d, J = 7.1 ㎐, 2H), 1.83 - 1.73 (m, 2H), 1.63 (s, 2H), 1.44 (s, 10H), 1.34 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.09 (t, J = 10.0 ㎐, 4H). LCMS: MS m/z = 300.93 [M+1], tR = 0.65분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00340
((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 0℃에서 테트라하이드로푸란(24 mL) 중 ((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 L-알라니네이트(553 mg, 1.65 mmol)에 15분에 걸쳐 다이클로로메탄(30 mL) 중 페닐 다이클로로포스페이트(247 μL, 1.65 mmol)의 용액을 서서히 첨가하였다. 첨가가 완료된 후에, 트라이에틸아민(0.26 mL, 1.82 mmol)을 적가하였다. 1시간 후에, 이어서 4-니트로페놀(240 mg, 1.65 mmol)과 트라이에틸아민(0.26 mL, 1.82 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄(50 mL)으로 희석시키고, 물(3 x 75 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.23 (ddd, J = 9.3, 1.3, 0.6 ㎐, 2H), 7.44 - 7.31 (m, 4H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 4.36 (s, 1H), 4.22 - 4.06 (m, 1H), 3.96 - 3.90 (m, 2H), 3.84 (t, J = 10.6 ㎐, 1H), 3.36 (s, 1H), 2.02 (s, 2H), 1.83 - 1.68 (m, 2H), 1.57 (s, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.41 (dd, J = 7.1, 3.2 ㎐, 3H), 1.06 (t, J = 9.6 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -3.13 (d, J = 2.9 ㎐). LCMS: MS m/z = 577.8 [M+1], tR = 1.28분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.35분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
중간체 65. 4-니트로페닐-N,N'-부틸 L-알라니네이트포스포로다이아미데이트
Figure pct00341
부틸 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트. Boc-L-알라닌(380 mg, 2.0 mmol)을 무수 MeCN(10 mL) 중에 용해시켰다. 1-부탄올(920 μL, 10.0 mmol) 및 EDCI(460 mg, 2.4 mmol)를 반응물에 첨가하고, 이어서 이것을 15분 동안 교반하였다. DMAP(240 mg, 2.0 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, 반응물을 14시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 10 mL), 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 20% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 5.04 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.18 - 4.07 (m, 2H), 1.67 - 1.59 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.38 (m, 5H), 0.93 (t, J = 7.4 ㎐, 3H).
Figure pct00342
4-니트로페닐-N,N'-부틸 L-알라니네이트포스포로다이아미데이트. 부틸 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트(291 mg, 1.18 mmol)를 다이옥산 중 4 M HCl 7 mL 중에 용해시키고, 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켜 오일을 얻었으며, 이어서 이것을 무수 다이클로로메탄(10 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(152 mg, 0.59 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, 반응물을 10분 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(270 μL, 1.95 mmol)을 1 mL의 무수 다이클로로메탄 중에 용해시키고, 반응 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(270 μL, 1.95 mmol)을 700 μL의 무수 다이클로로메탄으로 용해시키고, 반응물에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 다이클로로메탄(15 mL)으로 희석시키고, 물(3 x 20 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 50% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.27 - 8.15 (m, 2H), 7.43 - 7.34 (m, 2H), 4.19 - 3.98 (m, 5H), 3.80 - 3.61 (m, 1H), 3.58 (m, 2H), 1.67 - 1.59 (m, 4H), 1.45 - 1.30 (m, 10H), 0.93 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.93. LCMS: MS m/z = 474.0 [M+1].
중간체 66. 메틸 (2S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(((((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(4-니트로페녹시)포스포릴)옥시)페닐)프로파노에이트
Figure pct00343
다이클로로메탄(20 mL) 중 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(504 mg, 1.97 mmol)를 0℃에서 다이클로로메탄(20 mL) 중 L-알라닌 아이소프로필 에스테르 하이드로클로라이드(330 mg, 1.97 mmol)의 용액에 10분에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료된 후에, 트라이에틸아민(0.55 mL, 3.93 mmol)을 적가하였다. 60분 후에, N-카르보벤질옥시-L-티로신 메틸 에스테르(649 mg, 1.97 mmol)와 트라이에틸아민(0.28 mL, 1.97 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 물(2 x 50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.32 - 8.22 (m, 2H), 7.49 - 7.37 (m, 2H), 7.35 - 7.13 (m, 9H), 5.02 (s, 2H), 4.93 (pd, J = 6.3, 1.1 ㎐, 1H), 4.43 (dd, J = 9.4, 5.2 ㎐, 1H), 4.00 (dtd, J = 10.1, 7.7, 6.5 ㎐, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.15 (dd, J = 14.0, 5.4 ㎐, 1H), 2.93 (dd, J = 13.9, 9.6 ㎐, 1H), 1.32 (td, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 1.20 - 1.16 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ -1.26, -1.49. LCMS: MS m/z = 644.11 [M+1], tR = 1.56분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.21분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
중간체 67. 2-모르폴리노에틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00344
다이클로로메탄(20 mL) 중 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(505 mg, 1.97 mmol)를 0℃에서 다이클로로메탄(20 mL) 중 2-모르폴리노에틸 L-알라니네이트 하이드로클로라이드(496 mg, 1.97 mmol)의 용액에 10분에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료된 후에, 트라이에틸아민(0.55 mL, 3.93 mmol)을 적가하였다. 90분 후에, 페놀(185 mg, 1.97 mmol)과 트라이에틸아민(0.28 mL, 1.97 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 물(2 x 50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CDCl3) δ 8.28 - 8.14 (m, 2H), 7.41 - 7.29 (m, 4H), 7.24 - 7.16 (m, 4H), 6.87 - 6.81 (m, 1H), 4.14-4.04 (bs, 2H), 2.61-2.57 (bs, 4H), 2.45 - 3.40 (bs, 4H), 1.42 (dt, J = 6.3, 2.0 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, CDCl3) δ -2.70. LCMS: MS m/z = 480.27 [M+1], tR = 0.96분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.23분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Kinetx 2.6u 100A C18, 100mm x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 8.5분: 2 내지 98% ACN, 8.5분 내지 10.0분: 98% ACN(유량: 1.5 mL/분).
중간체 68. 2-(다이아이소프로필아미노)에틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00345
2-(다이아이소프로필아미노)에틸 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트. N-(3-다이메틸아미노프로필)-N′-에틸카르보다이이미드 하이드로클로라이드(2.06 g, 10.8 mmol)를 실온에서 아세토니트릴(125 mL) 중 Z-Ala-OH(2.00 g, 8.96 mmol) 및 2-(다이아이소프로필아미노)에탄올(3.2 mL, 17.9 mmol)의 용액에 첨가하였다. 10분 후에, 4-(다이메틸아미노)피리딘(1.09 g, 8.96 mmol)을 첨가하였다. 2일 후에, 반응 혼합물을 절반의 부피로 농축시키고, 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트 중 0 내지 20% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.48 - 7.23 (m, 5H), 5.96 (s, 1H), 5.07 (s, 2H), 4.30 - 4.00 (m, 3H), 2.28 (t, J = 7.1 ㎐, 2H), 2.14 (s, 6H), 1.73 (p, J = 6.9 ㎐, 2H), 1.34 (d, J = 7.3 ㎐, 3H). LCMS: MS m/z = 351.26 [M+1], tR = 1.05분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.10분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
Figure pct00346
2-(다이아이소프로필아미노)에틸 L-알라니네이트. 탄소 상의 팔라듐(587 mg, 10 중량%)을 아르곤으로 퍼지된 에탄올(50 mL) 중 2-(다이아이소프로필아미노)에틸 ((벤질옥시)카르보닐)-L-알라니네이트(1.93 g, 5.52 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 수소로 퍼지하고, 실온에서 교반하였다. 18시간 후에, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터를 에틸 아세테이트로 헹구고, 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 4.06 - 3.90 (m, 2H), 3.43 (q, J = 7.0 ㎐, 1H), 3.01 (hept, J = 6.5 ㎐, 2H), 2.65 (t, J = 6.9 ㎐, 2H), 1.22 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 0.99 (d, J = 6.6 ㎐, 12H). LCMS: MS m/z = 217.01 [M+1], tR = 0.17분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00347
2-(다이아이소프로필아미노)에틸 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 테트라하이드로푸란(7 mL) 중 2-(다이아이소프로필아미노)에틸 L-알라니네이트(511 mg, 2.43 mmol)를 0℃에서 테트라하이드로푸란(25 mL) 중 페닐 다이클로로포스페이트(0.36 mL, 2.43 mmol)의 용액에 15분에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완료된 후에, 트라이에틸아민(0.36 mL, 2.43 mmol)을 적가하였다. 90분 후에, 이어서 4-니트로페놀(337 mg, 2.43 mmol)과 트라이에틸아민(1.0 mL, 7.16 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 17시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 물(2 x 100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 8.29 - 8.18 (m, 2H), 7.49 - 7.35 (m, 4H), 7.30 - 7.21 (m, 3H), 4.71 - 4.52 (m, 1H), 4.12 - 3.99 (m, 2H), 4.00 - 3.83 (m, 3H), 3.06 - 2.86 (m, 2H), 2.56 (td, J = 7.0, 3.8 ㎐, 2H), 1.31 (ddd, J = 7.1, 4.7, 1.1 ㎐, 4H), 0.94 (d, J = 6.5 ㎐, 13H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ -2.15, -2.30. LCMS: MS m/z = 494.25 [M+1], tR = 1.27분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.97분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
중간체 69. 아이소프로필 (2S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(((((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(4-니트로페녹시)포스포릴)옥시)페닐)프로파노에이트
Figure pct00348
아이소프로필 ((벤질옥시)카르보닐)-L-티로시네이트. 벤질 클로로포르메이트(0.94 mL, 6.58 mmol)를 아세톤(4.5 mL) 및 7 중량% 탄산나트륨 수용액(4.5 mL) 중 L-티로신 아이소프로필 에스테르(1.0 g, 4.48 mmol)의 혼합물에 적가하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.39 - 7.20 (m, 5H), 7.06 - 6.97 (m, 2H), 6.74 - 6.62 (m, 2H), 5.05 (d, J = 2.6 ㎐, 2H), 4.94 (p, J = 6.3 ㎐, 1H), 4.31 (dd, J = 8.6, 6.1 ㎐, 1H), 2.99 (dd, J = 13.9, 6.1 ㎐, 1H), 2.84 (dd, J = 13.9, 8.6 ㎐, 1H), 1.22 (d, J = 6.3 ㎐, 3H), 1.14 (d, J = 6.3 ㎐, 3H). LCMS: MS m/z = 357.87 [M+1], tR = 1.36분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.19분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
Figure pct00349
아이소프로필 (2S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-(4-(((((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(4-니트로페녹시)포스포릴)옥시)페닐)프로파노에이트. 다이클로로메탄(8.0 mL) 중 L-알라닌 아이소프로필 에스테르 하이드로클로라이드(97.2 mg, 0.70 mmol)를 0℃에서 다이클로로메탄(7.5 mL) 중 4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(179.7 mg, 0.70 mmol)의 용액에 첨가하였다. 첨가가 완료된 후에, 트라이에틸아민(0.22 mL, 1.57 mmol)을 적가하였다. 60분 후에, 다이클로로메탄(8.0 mL) 중 아이소프로필 ((벤질옥시)카르보닐)-L-티로시네이트(250.9 mg, 0.70 mmol)와 트라이에틸아민(0.11 mL, 0.78 mmol)을 0℃에서 순차적으로 첨가하고, 이어서, 생성된 혼합물이 실온으로 가온되게 하였다. 20분 후에, 반응 혼합물을 물(2 x 20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.32 - 8.24 (m, 2H), 7.43 (ddd, J = 16.0, 9.2, 1.1 ㎐, 2H), 7.36 - 7.09 (m, 9H), 5.03 (s, 2H), 4.97 (p, J = 6.2 ㎐, 1H), 4.35 (d, J = 8.2 ㎐, 1H), 4.14 - 3.95 (m, 1H), 3.62 (d, J = 4.5 ㎐, 3H), 3.12 (dt, J = 12.6, 5.9 ㎐, 1H), 2.92 (t, J = 11.6 ㎐, 1H), 1.35 - 1.30 (m, 3H), 1.22 (d, J = 6.2 ㎐, 3H), 1.16 (d, J = 6.2 ㎐, 4H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ -1.31, -1.52. LCMS: MS m/z = 644.07 [M+1], tR = 1.56분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.17분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
중간체 70. 아이소프로필 ((2-(메틸티오)에톡시)(4-니트로페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00350
4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(512 mg, 2 mmol)를 10 mL의 무수 다이클로로메탄과 혼합하고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. L-알라닌 아이소프로필 에스테르 하이드로겐 클로라이드(335 mg, 2 mmol)를 무수 다이클로로메탄(3 mL) 중에 용해시키고, 반응물에 적가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(927 μL, 6.6 mmol)을 무수 다이클로로메탄(1 mL) 중에 용해시키고, 반응물에 적가하고, 반응물을 60분 동안 교반하였다. 2-(메틸티오)에탄올(74 μL, 2 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 다이클로로메탄(15 mL)으로 희석시키고, 물(3 x 20 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 50% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.27 - 8.18 (m, 2H), 7.44 - 7.33 (m, 2H), 5.02 (m, 1H), 4.33 - 4.21 (m, 2H), 4.07 - 3.94 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 2.84 - 2.73 (m, 2H), 2.14 (m, 3H), 1.40 (m, 3H), 1.29 - 1.19 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.08, 2.20. LCMS: MS m/z = 834.5 [2M+Na]; 405.1 [M-1], tR = 1.33분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.60분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분).
중간체 71. 아이소프로필 ((2-메톡시에톡시)(4-니트로페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00351
4-니트로페닐 포스포로다이클로리데이트(512 mg, 2 mmol)를 10 mL의 무수 다이클로로메탄과 혼합하고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. L-알라닌 아이소프로필 에스테르 하이드로겐 클로라이드(335 mg, 2 mmol)를 무수 다이클로로메탄(3 mL) 중에 용해시키고, 반응물에 적가하였다. 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(927 μL, 6.6 mmol)을 무수 다이클로로메탄(1 mL) 중에 용해시키고, 반응 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 60분 동안 교반하였다. 2-메톡시에탄올(158 μL, 2 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 다이클로로메탄(15 mL)으로 희석시키고, 물(3 x 10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 50% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.25 - 8.15 (m, 2H), 7.43 - 7.32 (m, 2H), 5.00 (m, 1H), 4.36 - 4.17 (m, 2H), 4.06 - 3.82 (m, 2H), 3.65 - 3.55 (m, 2H), 3.37 (m, 3H), 1.41 - 1.34 (m, 3H), 1.27 - 1.18 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.52, 2.69. LCMS: MS m/z = 391.0 [M+1]; 389.1 [M-1], tR = 1.24분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.29분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분).
중간체 72. 아이소프로필 ((2-(메틸설포닐)에톡시)(4-니트로페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00352
옥시염화인(280 μL, 3 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(10 mL) 중에 용해시키고, 질소 분위기 하에서 빙조 내에서 교반하였다. 2-(메틸설포닐)에탄올(280 μL, 3 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(2 mL) 중에 용해시키고, 반응물에 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였다. L-알라닌 아이소프로필 에스테르 하이드로클로라이드(503 mg, 3 mmol)를 한꺼번에 첨가하고, 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 트라이에틸아민(1.38 mL, 9.9 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(2 mL) 중에 용해시키고, 반응물에 적가하였다. 반응물을 90분 동안 교반하였다. p-니트로페놀(417 mg, 3 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 트라이에틸아민(460 μL, 3.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다.
이어서, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 물(5 x 15 mL), 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 80% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.28 - 8.16 (m, 2H), 7.44 - 7.32 (m, 2H), 5.00 (m, 1H), 4.71 - 4.51 (m, 2H), 4.06 - 3.85 (m, 2H), 3.51 - 3.33 (m, 2H), 2.96 (m, 3H), 1.40 - 1.35 (m, 3H), 1.27 - 1.20 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.06, 2.29. LCMS: MS m/z = 439.0 [M+1]; tR = 1.18분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.08분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분).
중간체 73. 2-(2-에톡시에톡시)에틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트 단일 이성질체
Figure pct00353
2-(2-에톡시에톡시)에틸 ( tert -부톡시카르보닐)- L -알라니네이트. 건성 다이클로로메탄(100 mL) 중 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라닌(12.41 g, 66 mmol) 및 2-(2-에톡시에톡시)에탄-1-올(8.00 g, 60 mmol)의 교반된 용액에 아르곤 분위기 하에서 0℃에서 N-메틸모르폴린(19.67 mL, 179 mmol), 4-(다이메틸아미노)피리딘(0.15 g, 1.2 mmol) 및 트라이-프로필포스폰산 사이클릭 무수물(42.6 mL, 72 mmol, 에틸 아세테이트 중 50%)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(50 mL)로, 10% 시트르산 용액(2 x 40 mL)으로 2회, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 40 mL)으로 2회, 그리고 염수(50 mL)로 1회 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 3 cm 실리카 겔 층을 통해 여과하고, 실리카 겔 층을 추가의 다이클로로메탄으로 세척하였다. 합한 유기물을 감압 하에서 농축시키고, 다이클로로메탄과 동시증류시키고, 고진공 하에서 하룻밤 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.27 (d, J = 7.4 ㎐, 1H), 4.23 - 4.14 (m, 1H), 4.14 - 4.06 (m, 1H), 4.05 - 3.94 (m, 1H), 3.64 - 3.56 (m, 2H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.49 - 3.39 (m, 4H), 1.38 (s, 9H), 1.23 (d, J = 7.4 ㎐, 3H), 1.09 (t, J = 7.0 ㎐, 3H).
Figure pct00354
2-(2-에톡시에톡시)에틸 ((퍼플루오로페녹시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트 단일 이성질체. 중간체 2-(2-에톡시에톡시)에틸 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트(18.3 g, 59.93 mmol)를 1,4-다이옥산 중 4 M HCl 50 mL 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에서 농축시키고, 톨루엔과 동시증류시켜 고체를 얻었으며, 이것을 고진공 하에서 1시간 동안 건조시켰다. 고체를 다이클로로메탄(100 mL) 중에 현탁시키고, 페닐 다이클로로포스페이트(9.81 mL, 65.92 mmol)와 트라이에틸아민(18.28 mL, 131.84 mmol)을 -78℃에서 순차적으로 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 이어서 펜타플루오로페놀(11.03 g, 59.93 mmol)과 트라이에틸아민(10.80 mL, 78.05 mmol)을 순차적으로 첨가하고, 이어서 생성된 혼합물을 실온으로 가온되게 하였다. 3시간 후에, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 고체를 여과하고, 여과액을 포화 염화암모늄 수용액(100 mL), 물(100 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기물을 황산나트륨으로 건조시키고, 3 cm 실리카 겔 층을 통해 여과하고, 실리카 겔 층을 1:1 에틸 아세테이트 및 다이클로로메탄 혼합물(100 mL)로 세척하였다. 합한 유기물을 감압 하에서 농축시켜 (NMR에 기초하여 인에서의 두 이성질체 모두의 혼합물로서) 21.7 g의 조 생성물을 얻었다. 고체를 최소량의 비등하는 다이아이소프로필 에테르 중에 용해시키고, 혼합물을 실온에서 하룻밤 격렬하게 교반하였다. 고체 생성물을 여과하고, 차가운 다이아이소프로필 에테르(2 x 20 mL) 및 헥산(3 x 40 mL)으로 세척하여 생성물(NMR에 기초하여 인에서의 단일 이성질체)을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.47 - 7.36 (m, 2H), 7.30 - 7.20 (m, 3H), 6.92 (dd, J = 14.2, 9.9 ㎐, 1H), 4.21 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.92 (m, 1H), 3.62 - 3.56 (m, 2H), 3.53 - 3.47 (m, 2H), 3.45 - 3.36 (m, 4H), 1.29 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.07 (t, J = 7.0 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, DMSO-d 6) δ -154.24 (d, J = 21.5 ㎐, 2F), -160.86 (t, J = 23.1 ㎐, 1F), -163.68 (t, J = 21.7 ㎐, 2F). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 0.40. LCMS: MS m/z = 528.06 [M+1], tR = 1.64분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 0.2분: 2% 아세토니트릴, 0.2분 내지 1.5분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.5분 내지 2.2분: 100% 아세토니트릴, 2.2분 내지 2.4분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 2.4분 내지 2.5분: 2% 아세토니트릴(유량: 2 μL/분).
중간체 74. 사이클로헥실 ((S)-(4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00355
중간체 25(1.3 g, 2.90 mmol)를 다이아이소프로필 에테르(3 mL) 중에 현탁시키고, 파라-니트로페놀(14 mg, 0.1 mmol) 및 DBU(0.05 mL, 0.335 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 4시간 동안 교반하고, 1 N 염산 수용액 및 에틸 아세테이트를 첨가하였다. 유기 층을 분할하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 다이아이소프로필 에테르(2 mL) 중에 흡수시키고, 초음파 처리하여 고체를 분산시켰다. 고체를 진공 여과에 의해 수집하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.27 (d, J = 9.1 ㎐, 2H), 7.51 - 7.44 (m, 2H), 7.38 (dd, J = 8.6, 7.2 ㎐, 2H), 7.28 - 7.17 (m, 3H), 4.68 (dt, J = 8.9, 4.6 ㎐, 1H), 4.02 (dq, J = 9.9, 7.2 ㎐, 1H), 1.80 - 1.64 (m, 5H), 1.52 (s, 1H), 1.57 - 1.46 (m, 1H), 1.44 - 1.22 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ -1.32. MS m/z = 449 (M+H)+.
B. 화합물 전구체
실시예 1. (S)-아이소프로필 2-(((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트
Figure pct00356
중간체 1(50 mg, 0.172 mmol) 및 중간체 18(84 mg, 0.206 mmol)을 무수 N,N-다이메틸포름아미드(2 mL) 중에서 혼합하였다. 염화마그네슘(36 mg, 0.378 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃에서 가열하였다. N,N-다이아이소프로필에틸아민(75 μL, 0.43 mmol)을 첨가하고, 반응물을 50℃에서 4.5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 에틸 아세테이트(30 mL)로 희석시키고, 5% 시트르산 수용액(10 mL), 그리고 이어서 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 2 내지 5% 메탄올/다이클로로메탄)를 통해 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.79 (s, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.49 (d, J = 5.1 ㎐, 1H), 4.91 - 4.84 (m, 1H), 4.62 (dd, J = 5.6, 5.0 ㎐, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 2H), 3.85 (dq, J = 10.0, 7.1 ㎐, 1H), 1.25 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.15 (t, J = 6.4 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.31. MS m/z = 561.0 [M+1], 559.0 [M-1].
실시예 2. (2S)-사이클로부틸메틸 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트
Figure pct00357
중간체 2(50 mg, 0.116 mmol) 및 중간체 15(60 mg, 0.139 mmol)를 무수 테트라하이드로푸란(3 mL) 중에 용해시켰다. 염화마그네슘(17 mg, 0.174 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 60℃로 가온하고, 20분 동안 교반하였다. N,N-다이아이소프로필에틸아민(50 μL, 0.29 mmol)을 첨가하고, 반응물을 60℃에서 17시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(30 mL)로 희석시키고, 5% 탄산나트륨 수용액(3 x 20 mL), 그리고 이어서 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴(2 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 12 M 염산(330 μL)을 적가하고, 20시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(30 mL)로 희석시키고, 빙조 내에서 냉각시켰다. 1 N 수산화나트륨 용액을 적가하여 pH 10을 얻었다. 유기 층을 수집하고, 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL), 그리고 이어서 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 3 내지 8% 메탄올/다이클로로메탄)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 갖는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.79 (m, 1H), 7.37 - 7.10 (m, 5H), 6.84 (dd, J = 4.5, 2.3 ㎐, 1H), 6.73 (dd, J = 4.5, 2.4 ㎐, 1H), 5.53 - 5.45 (m, 1H), 4.62 (q, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.54 - 4.28 (m, 3H), 4.10 - 3.80 (m, 3H), 2.65 - 2.45 (m, 1H), 2.08 - 1.62 (m, 6H), 1.26 (d, J = 7.2 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.25, 3.24. MS m/z = 587.2 [M+1], 585.2 [M-1].
실시예 3. (2S)-에틸 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)-3-페닐프로파노에이트
Figure pct00358
중간체 4(52.0 mg, 0.121 mmol), 중간체 19(68.0 mg, 0.145 mmol), 및 염화마그네슘(17.2 mg, 0.181 mmol)의 혼합물에 실온에서 THF(1.0 mL)를 첨가하였다. 생성된 현탁액을 50℃로 가온하고, 10분 동안 교반되게 하였다. 이어서, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.052 mL, 0.301 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 50℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 진한 염산 수용액(12 M, 0.200 mL, 2.4 mmol)을 첨가하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 빙조 내에서 냉각시키고, pH = 7이 될 때까지 포화 탄산나트륨 수용액으로 켄칭하였다. 조 혼합물을 분취용 HPLC(Phenominex Gemini NX 10u C18 250 x 30 mm 컬럼, 40 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. LC/MS: tR = 1.27분, MS m/z = 623.00 [M+1]; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC. MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.00 mm. 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물. 구배: 0분 내지 2.4분: 2 내지 100% ACN, 2.4분 내지 2.80분: 100% ACN, 2.8분 내지 2.85분: 100% 내지 2% ACN, 2.85분 내지 3.0분: 2% ACN(유량: 1.8 mL/분). 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.88 (m, 3H), 7.37 - 6.84 (m, 12H), 6.71 (t, J = 4.2 ㎐, 2H), 6.22 (ddd, J = 23.7, 12.9, 10.5 ㎐, 1H), 5.36 (dd, J = 9.2, 6.1 ㎐, 1H), 4.39 (s, 1H), 4.16 (dd, J = 16.2, 5.3 ㎐, 1H), 4.09 - 3.83 (m, 5H), 2.93 (dt, J = 14.3, 7.3 ㎐, 1H), 2.78 (td, J = 13.2, 12.2, 8.6 ㎐, 1H), 1.01 (t, 7.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.85 (s), 2.86 (s).
실시예 4. (2S)-사이클로헥실 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트
Figure pct00359
DMF(4 mL) 중 중간체 4(99 mg, 0.30 mmol), 중간체 25(201 mg, 0.45 mmol), 및 MgCl2(43 mg, 0.45 mmol)의 혼합물에 실온에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.13 mL, 0.75 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 x 30 mm 컬럼, 10 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 중간체를 얻었으며, 이것을 ACN(3 mL) 중에 용해시키고, c-HCl(0.1 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 분취용 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 x 30 mm 컬럼, 10 내지 80% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 0.5H), 7.78 (s, 0.5H), 7.42 - 7.05 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.64 (m, 2H), 4.57 - 4.25 (m, 3H), 3.86 (m, 1H), 1.91 - 1.61 (m, 4H), 1.61 - 1.09 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.3. MS m/z = 601 (M+H)+.
부분입체 이성질체들의 분리. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IA, 150 x 4.6 mm, 헵탄 70%, 에탄올 30%)를 통해 정제하였다.
실시예 5. 사이클로헥실 ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00360
실시예 4의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.78 (s, 1H), 7.34 - 7.23 (m, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.51 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.69 (td, J = 8.8, 4.2 ㎐, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.53 - 4.44 (m, 2H), 4.36 (dd, J = 10.9, 5.2 ㎐, 1H), 3.86 (dq, J = 9.4, 7.1 ㎐, 1H), 1.85 - 1.62 (m, 4H), 1.58 - 1.20 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.31.
실시예 6. 사이클로헥실 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00361
실시예 4의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.49 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.71 - 4.56 (m, 2H), 4.46 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 2H), 3.87 (dq, J = 10.0, 7.1 ㎐, 1H), 1.80 - 1.61 (m, 4H), 1.55 - 1.21 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.31.
실시예 7.
Figure pct00362
중간체 2(60 mg, 0.139 mmol)를 무수 테트라하이드로푸란(2 mL) 중에 용해시켰다. 옥시염화인(25 μL, 0.278 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 추가의 옥시염화인(100 μL)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. (S)-2-에틸부틸 2-아미노프로파노에이트 하이드로클로라이드(87 mg, 0.417 mmol) 및 트라이에틸아민(116 μL, 0.834 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 추가의 (S)-2-에틸부틸 2-아미노프로파노에이트 하이드로클로라이드(500 mg)를 첨가하였다. 트라이에틸아민을 첨가하여 pH 9를 얻었다. 반응물을 16시간 동안 교반하고, 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 20 mL), 5% 시트르산 수용액(20 mL), 이어서 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴(2 mL) 중에 용해시키고, 12 M 염산(400 uL)을 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(30 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 10 mL), 이어서 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 3 내지 8% 메탄올/다이클로로메탄)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 갖는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.82 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.64 - 4.57 (m, 1H), 4.49 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 4.31 (dd, J = 11.1, 7.1 ㎐, 1H), 4.21 (dd, J = 11.1, 5.8 ㎐, 1H), 4.11 - 3.94 (m, 4H), 3.94 - 3.84 (m, 2H), 1.58 - 1.29 (m, 10H), 0.98 - 0.82 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 13.61. MS m/z = 682.1 [M+1], 680.1 [M-1].
실시예 8. (2S)-사이클로프로필메틸 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)프로파노에이트
Figure pct00363
THF(3 mL) 중 중간체 4(70 mg, 0.211 mmol), 중간체 20(133 mg, 0.32 mmol), 및 MgCl2(30 mg, 0.32 mmol)의 혼합물에 실온에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.092 mL, 0.53 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 60℃에서 15시간 동안 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 ACN(3 mL) 중에 용해시키고, c-HCl(0.3 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 x 30 mm 컬럼, 10 내지 70% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.39 - 7.10 (m, 5H), 6.85 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.58 - 4.24 (m, 3H), 4.00 - 3.69 (m, 3H), 1.27 (m, 3H), 1.17 - 0.95 (m, 1H), 0.49 (m, 2H), 0.29 - 0.15 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.29, 3.22. MS m/z 573 (M+H)+.
(S) 부분입체 이성질체와 (R) 부분입체 이성질체의 분리. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IA, 150 x 4.6 mm, 헵탄 80%, 에탄올 20%)에 의해 분리하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00364
Figure pct00365
실시예 9. 실시예 8의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (dd, J = 8.7, 7.1 ㎐, 2H), 7.22 - 7.06 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.55 - 4.44 (m, 2H), 4.36 (dd, J = 10.9, 5.1 ㎐, 1H), 3.97 - 3.77 (m, 3H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 1.15 - 1.04 (m, 1H), 0.58 - 0.45 (m, 2H), 0.32 - 0.18 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.30.
실시예 10. 실시예 8의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.29 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.49 (d, J = 5.1 ㎐, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 10.9, 6.3 ㎐, 1H), 4.34 (dd, J = 10.9, 5.4 ㎐, 1H), 3.98 - 3.82 (m, 2H), 3.78 (dd, J = 11.4, 7.3 ㎐, 1H), 1.27 (dd, J = 7.2, 1.1 ㎐, 3H), 1.11 - 0.98 (m, 1H), 0.52 - 0.45 (m, 2H), 0.25 - 0.14 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.23.
실시예 11. 2-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)아미노)에틸 피발레이트
Figure pct00366
중간체 4(22.0 mg, 0.066 mmol), 중간체 21(28.1 mg, 0.066 mmol), 및 염화마그네슘(6.3 mg, 0.166 mmol)의 혼합물에 실온에서 아세토니트릴(0.50 mL)을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 50℃로 가온하고, 5분 동안 교반되게 하였다. 이어서, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.03 mL, 0.066 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 진한 염산 수용액(12 M, 0.077 mL, 0.93 mmol)을 첨가하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기 층을 염수(20 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 x 30 mm 컬럼, 40 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. MS m/z = 575.00 [M+H].
(S) 부분입체 이성질체와 (R) 부분입체 이성질체의 분리. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IC, 150 x 4.6 mm, 헵탄 80%, 에탄올 20%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00367
Figure pct00368
실시예 12. 실시예 11의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.45 - 4.29 (m, 2H), 3.96 (t, J = 5.7 ㎐, 2H), 3.14 (dt, J = 11.8, 5.7 ㎐, 2H), 1.12 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, CD3OD) δ 5.24 (s). MS m/z = 575.00 [M+H].
실시예 13. 실시예 11의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, CD3OD) δ 7.77 (s, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 2H), 7.19 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.72 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.62 (t, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.49 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 10.9, 6.1 ㎐, 1H), 4.33 (dd, J = 10.9, 5.5 ㎐, 1H), 3.99 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 3.19 - 3.10 (m, 2H), 1.15 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, CD3OD) δ 5.05 (br s). MS m/z = 575.00 [M+H].
실시예 14.
Figure pct00369
중간체 4(50 mg, 0.15 mmol) 및 중간체 60(95 mg, 0.18 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(3 mL) 중에 용해시켰다. 염화마그네슘(21 mg, 0.225 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 반응물을 50℃로 가온하고, 30분 동안 교반하였다. N,N-다이아이소프로필에틸아민(65 μL, 0.375 mmol)을 첨가하고, 반응물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(30 mL)로 희석시키고, 5% 탄산나트륨 수용액(3 x 20 mL), 그리고 이어서 염수(20 mL)로 세척하였다. 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴(2 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 12 M 염산(300 μL)을 적가하고, 빙조 내에서 60분 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(30 mL)로 희석시키고, 빙조 내에서 냉각시켰다. 포화 중탄산나트륨 수용액을 적가하여 pH 16을 얻었다. 유기 층을 수집하고, 염수(10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 생성물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 3 내지 8% 메탄올/다이클로로메탄)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 갖는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 아세토니트릴 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.82 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.51 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.70 (m, 2H), 4.61 (dd, J = 5.7, 4.9 ㎐, 1H), 4.49 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 4.36 - 4.17 (m, 2H), 3.86 (m, 2H), 1.88 - 1.63 (m, 8H), 1.58 - 1.25 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 13.64. MS m/z = 678.1 [M+1], 676.2 [M-1].
실시예 15. (S)-1-메틸피롤리딘-3-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00370
중간체 4(99 mg, 0.3 mmol)와 중간체 23(162 mg, 0.36 mmol)을 2 mL의 무수 THF 중에서 혼합하고 용해시켰다. 염화마그네슘(86 mg, 0.9 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. DIPEA(131 uL, 0.75 mmol)를 첨가하고, 반응물을 50℃에서 5시간 동안 교반하였다.
반응물을 EtOAc(15 mL)로 희석시키고, 물(4 x 15 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 5 내지 10 내지 20% 메탄올/DCM)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 갖는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN(7 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 진한 염산 수용액(500 uL)을 적가하였다. 반응물을 빙조 내에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(30 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(30 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 유기 추출물을 수집하고, 수성 부분을 EtOAc(2 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (m, 1H), 7.39 - 7.26 (m, 2H), 7.26 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.18 - 4.98 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.55 - 4.28 (m, 3H), 3.89 (m, 1H), 2.78 (m, 1H), 2.69 - 2.54 (m, 2H), 2.32 (m, 4H), 2.23 - 2.08 (m, 1H), 1.78 (m, 1H), 1.27 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.28, 3.14. LCMS: MS m/z = 602.2 [M+1], 600.2 [M-1], tR = 0.99분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 1.84분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.868분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 16. 트랜스-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00371
실시예 3에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 중간체 27(129 mg, 0.25 mmol) 및 중간체 4(55 mg, 0.25 mmol)로부터 상기 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.78 (m, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (dd, J = 5.1, 1.9 ㎐, 1H), 4.69 - 4.49 (m, 2H), 4.49 - 4.32 (m, 3H), 3.93 - 3.75 (m, 1H), 2.23 - 1.71 (m, 5H), 1.44 - 1.20 (m, 7H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.28, 3.22. 19F NMR (377 ㎒, 메탄올-d4) δ -75.31 -75.40 (m). MS m/z = 669 [M+H].
상기 생성물을 30% 에탄올을 사용하는 SFC(AD-H4.6X100m 컬럼)에 의해 분리하였다.
실시예 17. 트랜스-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실 ((R)- (((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트.
Figure pct00372
실시예 16의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.21 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.62 (q, J = 5.2 ㎐, 2H), 4.52 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.47 (dd, J = 10.9, 6.0 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.1 ㎐, 1H), 3.83 (dq, J = 9.1, 7.1 ㎐, 1H), 2.10 (m, 1H), 1.96 (m, 4H), 1.38 (m, 4H), 1.23 (dd, J = 7.1, 1.2 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.29. 19F NMR (377 ㎒, 메탄올-d4) δ -75.41 (d, J = 8.6 ㎐).
실시예 18. 트랜스-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00373
실시예 16의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.79 (s, 1H), 7.39 - 7.27 (m, 2H), 7.29 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.58 (m, 2H), 4.43 (m, 2H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.5 ㎐, 1H), 3.86 (dq, J = 9.9, 7.4 ㎐, 1H), 2.14 - 1.81 (m, 5H), 1.32 (m, 4H), 1.24 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.22. 19F NMR (377 ㎒, 메탄올-d4) δ -75.33 (d, J = 8.5 ㎐).
실시예 3에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 중간체 29(701 mg, 1.36 mmol) 및 중간체 4(300 mg, 0.91 mmol)로부터 상기 생성물을 또한 얻었다.
실시예 19. 1-메틸피페리딘-4-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00374
THF(3 mL) 중 중간체 4(70 mg, 0.211 mmol), 중간체 30(293 mg, 0.317 mmol), 및 MgCl2(30 mg, 0.317 mmol)의 혼합물에 실온에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.09 mL, 0.528 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 아세토니드 중간체를 얻었으며, 이것을 아세토니트릴(3 mL) 중에 용해시키고, c-HCl(0.5 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 진공 중에서 농축시키고, 동결건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.85 (m, 1H), 7.41 - 7.12 (m, 5H), 6.97 (m, 1H), 6.79 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 5.04 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.53 - 4.31 (m, 3H), 3.98 (m, 1H), 3.66(m, 5H), 2.82 (m, 2H), 2.10 (m, 4H), 1.30 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.32, 3.10. LCMS: MS m/z = 616.24 [M+1-HCl]; tR = 0.54분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
실시예 20. (테트라하이드로-2H-피란-4-일)메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시) 포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00375
중간체 4(50 mg, 0.15 mmol)와 중간체 31(84 mg, 0.18 mmol)을 무수 THF(5 mL) 중에서 혼합하고 용해시켰다. 염화마그네슘(86 mg, 0.906 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 반응물을 50℃에서 10분 동안 교반하였다. DIPEA(158 uL, 0.906 mmol)를 첨가하고, 반응물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 추가의 염화마그네슘(50 mg)을 첨가하고, 50℃에서 16시간 동안 교반하였다.
반응물을 EtOAc(20 mL)로 희석시키고, 물(5 x 20 mL), 그리고 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰으며, 이어서 이것을 MeCN(5 mL) 중에 용해시켰다. 12 M HCl(aq)(300 uL)을 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(25 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL), 그리고 이어서 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 10% 메탄올/DCM)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일을 얻었으며, 이어서 이것을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.41 - 7.07 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.57 - 5.40 (m, 1H), 4.62 (m, 1H), 4.56 - 4.28 (m, 3H), 3.87 (m, 5H), 3.31 (m, 2H), 1.94 - 1.72 (m, 1H), 1.63 - 1.46 (m, 2H), 1.34 - 1.16 (m, 5H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.23 (s), 3.19 (s). MS m/z = 617.1 [M+1]; 615.0 [M-1].
실시예 21. 트랜스-4-( tert -부틸)사이클로헥실 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00376
실시예 3에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 중간체 32(116 mg, 0.23 mmol) 및 중간체 4(51 mg, 0.15 mmol)로부터 상기 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.79 (m, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.18 (m, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.76 - 6.69 (m, 1H), 5.51 (m, 1H), 4.65 - 4.57 (m, 1H), 4.51 (m, 1H), 4.47 - 4.39 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 3.93 - 3.76 (m, 1H), 1.93 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.24 (m, 5H), 1.13 - 0.89 (m, 3H), 0.84 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.35, 3.28. MS m/z = 657 [M+H].
혼합물을 Chiralpak SFC(Chiralpak ID 21 x 250 mm 컬럼, 30% 메탄올)에 의해 분리하였다.
실시예 22. 트랜스-4-(tert-부틸)사이클로헥실 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00377
실시예 21의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.51 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.59 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.51 (tt, J = 11.3, 4.5 ㎐, 1H), 4.46 - 4.39 (m, 2H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.6 ㎐, 1H), 3.89 - 3.81 (m, 1H), 1.99 - 1.86 (m, 2H), 1.75 (t, J = 12.0 ㎐, 2H), 1.31 - 1.18 (m, 5H), 1.12 - 0.89 (m, 3H), 0.83 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.25.
실시예 23. 트랜스-4-(tert-부틸)사이클로헥실 ((R)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00378
실시예 21의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.18 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.51 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.59 - 4.43 (m, 3H), 4.36 (dd, J = 10.9, 5.2 ㎐, 1H), 3.82 (q, J = 7.9 ㎐, 1H), 1.94 (m, 2H), 1.79 (m, 2H), 1.36 - 1.20 (m, 5H), 1.13 - 0.94 (m, 3H), 0.85 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.32.
실시예 24. 2-에틸부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(벤질옥시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00379
아세토니트릴(2.5 mL)을 실온에서 중간체 4(200 mg, 0.604 mmol), 중간체 16(280 mg, 0.604 mmol), 및 염화마그네슘(57 mg, 0.60 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 50℃로 가열하고, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.263 mL, 0.604 mmol)을 첨가하였다. 22시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 진한 염산 수용액(0.5 mL)을 적가하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (s, 0.6H), 7.75 (s, 0.4H), 7.40 - 7.26 (m, 5H), 6.85 - 6.80 (m, 1H), 6.75 - 6.69 (m, 1H), 5.54 - 5.48 (m, 2H), 5.06 (d, J = 7.5 ㎐, 1.2H), 4.99 (d, J = 7.3 ㎐, 0.8H), 4.64 - 4.58 (m, 1H), 4.52 - 4.46 (m, 1H), 4.41 - 4.20 (m, 2H), 4.07 - 3.77 (m, 2H), 1.54 - 1.21 (m, 8H), 0.95 - 0.77 (m, 6H) 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.90 (s), 7.82 (s). LCMS: MS m/z = 617.14 [M+1], tR = 1.26분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.057분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 25. 2-에틸부틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)알라니네이트
Figure pct00380
중간체 4(700 mg, 2.113 mmol), 중간체 17(998 mg, 2.218 mmol), 및 염화마그네슘(302 mg, 3.169 mmol)의 혼합물에 실온에서 테트라하이드로푸란(8.5 mL)을 첨가한 후, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.92 mL, 5.282 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 얻어진 잔류물을 포화 염화나트륨 용액 및 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(80 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 용리제로서 100% 다이클로로메탄 내지 다이클로로메탄 중 14% 메탄올)를 통해 정제하였다. 얻어진 순수한 물질을 무수 아세토니트릴(10 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 냉각시킨 후, 진한 염산(4 mL, 48 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 빙조 내에서 냉각시키고, 물로 희석시켰다. 이 용액을 3 N 수산화나트륨을 사용하여 중화시키고, 다이클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 얻어진 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(40 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 100% 다이클로로메탄 내지 다이클로로메탄 중 20% 메탄올)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.27 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.49 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.61 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.49 - 4.29 (m, 3H), 4.04 - 3.82 (m, 3H), 1.43 (dq, J = 12.5, 6.1 ㎐, 1H), 1.37 - 1.23 (m, 7H), 0.84 (td, J = 7.5, 1.1 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.73. MS m/z = 603 [M+1].
실시예 26. ((1r, 4S)-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실)메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)알라니네이트
Figure pct00381
중간체 4(0.06 g, 0.181 mmol), 중간체 33(0.115 g, 0.217 mmol), 및 염화마그네슘(0.028 g, 0.29 mmol)의 혼합물에 실온에서 테트라하이드로푸란(1.5 mL)을 첨가한 후, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.079 mL, 0.453 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 얻어진 잔류물을 포화 염화나트륨 용액 및 다이클로로메탄으로 희석시켰다. 층을 분할하고, 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(40 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 용리제로서 100% 다이클로로메탄 내지 다이클로로메탄 중 14% 메탄올)를 통해 정제하였다. 얻어진 순수한 물질을 무수 아세토니트릴(2 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 냉각시킨 후, 진한 염산(0.1 mL, 1.2 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 빙조 내에서 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨 용액(1 mL)으로 희석시켰다. 생성된 혼합물을 분취용 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 15% 내지 85% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.82 (d, J = 3.1 ㎐, 1H), 7.40 - 7.10 (m, 5H), 6.81 - 6.67 (m, 2H), 6.54 (s, 2H), 5.50 (t, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.72 - 4.26 (m, 6H), 4.05 - 3.69 (m, 3H), 2.17 - 1.93 (m, 1H), 1.88 (dt, J = 13.3, 3.6 ㎐, 2H), 1.82 - 1.69 (m, 2H), 1.55 (dtq, J = 12.0, 5.8, 3.0 ㎐, 1H), 1.33 - 1.14 (m, 5H), 1.10 - 0.86 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.77, - 2.68. 19F NMR (376 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ -74.72 (d, J = 8.7 ㎐). MS m/z = 683.20 [M+1].
(S) 부분입체 이성질체와 (R) 부분입체 이성질체의 분리. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(AD-H 5 um 21 x 250 mm, 헵탄 70%, 에탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00382
Figure pct00383
실시예 27. 실시예 26의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.88 (s, 1H), 7.35 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 6.79 - 6.71 (m, 2H), 6.23 (s, 2H), 5.48 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.66 - 4.55 (m, 1H), 4.50 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.43 (dd, J = 11.1, 6.5 ㎐, 1H), 4.37 - 4.17 (m, 3H), 4.07 - 3.83 (m, 4H), 1.93 (d, J = 13.5 ㎐, 2H), 1.81 (d, J = 13.5 ㎐, 2H), 1.62 (d, J = 6.2 ㎐, 1H), 1.40 - 1.20 (m, 6H), 1.03 (q, J = 12.9 ㎐, 2H). 19F NMR (376 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ -74.83 (d, J = 8.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.59. MS m/z = 683.20 [M+1].
실시예 28. 실시예 26의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.37 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.31 - 7.14 (m, 3H), 6.75 (s, 2H), 6.24 (s, 2H), 5.47 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.58 (q, J = 5.1 ㎐, 1H), 4.48 (t, J = 6.0 ㎐, 1H), 4.43 - 4.20 (m, 4H), 4.05 - 3.73 (m, 4H), 1.91 (d, J = 13.2 ㎐, 2H), 1.78 (d, J = 13.0 ㎐, 2H), 1.65 - 1.47 (m, 1H), 1.39 - 1.19 (m, 6H), 1.01 (t, J = 13.0 ㎐, 2H). 19F NMR (376 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ -74.83 (d, J = 8.8 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.67. MS m/z = 683.20 [M+1].
실시예 29. 에틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00384
THF(6 mL) 중 중간체 4(150 mg, 0.45 mmol), 중간체 34(298 mg, 0.68 mmol), 및 MgCl2(65 mg, 0.68 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.20 mL, 1.13 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, EtOAc(150 mL)로 희석시키고, 염수(50 mL x 2)로 세척하고, 건조시키고, 진공 중에서 농축시키고, 아세토니트릴(6 mL) 중에 재용해시키고, c-HCl(0.3 mL)을 빙조 내에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙조 내에서 1시간 동안 그리고 실온에서 1시간 동안 교반하고, 포화 NaHCO3(2 mL)로 처리하고, HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 5 내지 70% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.31 (d, J = 7.7 ㎐, 2H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.49 (d, J = 5.1 ㎐, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.46 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.40 (dd, J = 10.9, 6.2 ㎐, 1H), 4.33 (dd, J = 10.9, 5.4 ㎐, 1H), 4.11 - 3.98 (m, 2H), 3.87 (dd, J = 9.9, 7.1 ㎐, 1H), 1.25 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.16 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.26. LCMS: MS m/z = 547.12 [M+1]; tR = 0.76분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.03분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 30. 사이클로헥실 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4] 트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00385
THF(2 mL) 중 중간체 4(65 mg, 0.196 mmol), 중간체 59(124 mg, 0.235 mmol), 및 MgCl2(40 mg, 0.42 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.085 mL, 0.490 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 약 50℃에서 약 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 아세토니드 중간체를 얻었으며, 이것을 아세토니트릴(2 mL) 중에 용해시키고, c-HCl(0.1 mL)을 빙조 하에서 첨가하였다. 이어서, 생성된 혼합물을 약 2시간 동안 빙조 하에서 교반하고, 포화 NaHCO3(2 mL)를 서서히 첨가하였다. 이어서, 생성된 혼합물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 80% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.86 (s, 1H), 6.81 - 6.67 (m, 2H), 6.48 (s, 2H), 5.53 - 5.44 (m, 2H), 4.71 (m, 1H), 4.58 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.29 (m, 1H), 4.18 (m, 1H), 4.13 - 3.69 (m, 7H), 1.72 (m, 4H), 1.58 - 1.19 (m, 17H), 0.88 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 12.68, 12.66. LCMS: MS m/z = 680.31 [M+1].
실시예 31. (1-(2,2,2-트라이플루오로에틸)피페리딘-4-일)메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)알라니네이트
Figure pct00386
중간체 4(0.5 g, 1.509 mmol), 중간체 36(0.905 g, 1.66 mmol), 및 염화마그네슘(0.206 g, 2.264 mmol)의 혼합물에 테트라하이드로푸란(7 mL)을 첨가한 후, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.657 mL, 3.773 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 50℃에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 얻어진 잔류물을 아세토니트릴(11 mL)로 희석시키고, 0℃로 냉각시켰다. 진한 염산(1 mL, 12 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 빙조 내에서 냉각시키고, 5 N 수산화나트륨 수용액을 사용하여 중화시켰다. 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(80 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 100% 다이클로로메탄 내지 다이클로로메탄 중 20% 메탄올)를 통해 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (d, J = 8.8 ㎐, 1H), 7.38 - 7.12 (m, 5H), 6.85 (dd, J = 4.5, 1.8 ㎐, 1H), 6.74 (dd, J = 4.5, 3.2 ㎐, 1H), 5.49 (t, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.63 (q, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.55 - 4.30 (m, 3H), 3.98 - 3.86 (m, 3H), 3.91 - 3.76 (m, 2H), 3.07 - 2.86 (m, 4H), 2.32 - 2.17 (m, 2H), 1.61 (t, J = 12.5 ㎐, 4H), 1.26 (ddd, J = 7.1, 3.5, 1.1 ㎐, 4H). 19F NMR (377 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -71.22 (td, J = 9.8, 4.6 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.23, 3.18. LCMS: MS m/z = 349.86 [M+1]; tR = 0.70분 (부 이성질체) - 0.72분 (주 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.525분 (부 이성질체), 3.56분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 32. 1-에틸-3,3-다이플루오로피페리딘-4-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00387
THF(2 mL) 중 중간체 4(50 mg, 0.151 mmol), 중간체 37(116 mg, 0.226 mmol), 및 MgCl2(22 mg, 0.226 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.1 mL, 0.574 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 아세토니드 중간체를 얻었으며, 이것을 ACN(2 mL) 중에 용해시키고, c-HCl(0.1 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 5 N NaOH를 사용하여 중화시키고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini 10u C18 110Å 250 x 21.2 mm 컬럼, 20 내지 65% 아세토니트릴(0.1% TFA)/물(0.1% TFA) 구배)로 정제하였다. 농축 시에, 잔류물을 EtOAc 중에 용해시키고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, DCM 중에 재용해시키고, 한 방울의 c-HCl을 첨가하였으며, 그 결과 백색 침전이 발생하였다. 농축 후에, 잔류물을 물-아세토니트릴 중에 용해시키고, 동결건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.91 (m, 1H), 7.40 - 7.10 (m, 6H), 6.86 (m, 1H), 5.55 - 5.47 (m, 1H), 5.30 (m, 1H), 4.57 (m, 1H), 4.49 - 4.30 (m, 3H), 4.06 (m, 1H), 3.68 (m, 2H), 3.32 - 3.09 (m, 2H), 2.19 (s, 2H), 1.40 - 1.23 (m, 8H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.19, 3.01, 2.97, 2.96. 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -77.5. LCMS: MS m/z = 666.23 [M+1] (중성 형태로서); tR = 0.68분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.35, 3.37, 3.38, 3.41분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 33. (1r,4S)-4-아미노사이클로헥실 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00388
(1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실 ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-4-시아노-2,2-다이메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 아세토니트릴(4.5 mL)을 실온에서 중간체 4(300 mg, 0.91 mmol), 중간체 63(510 mg, 0.91 mmol), 및 염화마그네슘(86 mg, 0.91 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 20분 동안 50℃로 가열하고, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.39 mL, 2.26 mmol)을 첨가하였다. 3.5시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(200 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(200 mL) 및 염수(200 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 다이클로로메탄 중 0 내지 10% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ 7.92 (s, 0.25H), 7.91 (s, 0.75H), 7.35 - 7.08 (m, 5H), 6.71 - 6.68 (m, 1H), 6.66 - 6.62 (m, 1H), 5.92 (br s, 2H), 5.65 - 5.60 (m, 1H), 5.27 - 5.22 (m, 1H), 5.10 (d, J = 6.7 ㎐, 0.25H), 5.00 (d, J = 6.6 ㎐, 0.75H), 4.69 - 4.57 (m, 1H), 4.51 - 4.27 (m, 3H), 4.06 - 3.92 (m, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 1H), 3.41 (br s, 1H), 2.03 - 1.84 (m, 4H), 1.76 (br s, 3H), 1.44 (br s, 9H), 1.41 - 1.29 (m, 8H), 1.24 - 1.12 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d 1 ) δ -3.15 (s). LCMS: MS m/z = 756.11 [M+1].
(1r,4S)-4-아미노사이클로헥실 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 진한 염산 용액(12 M, 0.47 mL)을 실온에서 아세토니트릴(4.7 mL) 중 (1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실 ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-4-시아노-2,2-다이메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(470 mg, 0.62 mmol)의 용액에 첨가하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 포화 탄산나트륨 수용액을 사용하여 pH = 7로 중화시켰다. 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 메탄올(4 mL)을 잔류물에 첨가하였다. 이어서, 에틸 아세테이트(2 mL)를 첨가하고, 생성된 고체를 여과에 의해 제거하였다. 여과액을 감압 하에서 농축시키고, 조 잔류물을 분취용 HPLC(Gemini 5u C18 100Å 100 x 30 mm 컬럼, 10 내지 100% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA))로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.03 (s, 0.75H), 7.99 (s, 0.25H), 7.42 - 7.12 (m, 6H), 6.96 - 6.92 (m, 1H), 5.57 - 5.51 (m, 1H), 4.74 - 4.60 (m, 1H), 4.56 - 4.49 (m, 1H), 4.49 - 4.34 (m, 3H), 3.96 - 3.84 (m, 1H), 3.18 - 3.04 (m, 1H), 2.12 - 1.99 (m, 4H), 1.57 - 1.42 (m, 4H), 1.33 - 1.28 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.36 (s), 3.24 (s). LCMS: MS m/z = 616.07 [M+1].
실시예 34.
Figure pct00389
THF(2 mL) 중 중간체 61(161 mg, 0.36 mmol), 중간체 4(100 mg, 0.3 mmol), 및 MgCl2(43 mg, 0.45 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(98 mg, 0.76 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 약 50℃에서 약 2시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 하에서 증발시키고, 이어서 잔류물을 아세토니트릴(2 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 냉각시키고, 진한 HCl을 적가하였다. 생성된 혼합물을 대략 실온에서 약 2시간 동안 교반하고, 빙조 내에서 냉각시키고, 2 N NaOH 및 NaHCO3 용액의 적가에 의해 중화시키고, EtOAc(150 mL)로 희석시키고, 물(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc(50 mL x 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 하에서 건조시키고, 진공 중에서 농축시키고, 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.83 (s, 1H), 6.87 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 5.00 - 4.92 (m, 1H), 4.91 - 4.85 (m, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.50 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 4.35 - 4.12 (m, 2H), 3.91 - 3.72 (m, 2H), 1.34 - 1.13 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.61. LCMS: MS m/z = 598.05 [M+1].
실시예 35. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-에틸 L-알라니네이트 포스페이트
Figure pct00390
THF(2 mL) 중 중간체 38(100 mg, 0.3 mmol), 중간체 4(151 mg, 0.36 mmol), 및 MgCl2(43 mg, 0.45 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(98 mg, 0.76 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 하에서 증발시키고, 이어서 잔류물을 아세토니트릴(2 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 냉각시키고, 진한 HCl을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 빙조 내에서 냉각시키고, 2 N NaOH 및 NaHCO3 용액의 적가에 의해 중화시키고, EtOAc(150 mL)로 희석시키고, 물(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc(50 mL x 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 하에서 건조시키고, 진공 중에서 농축시키고, 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.50 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 4.30 (dd, J = 11.1, 7.0 ㎐, 1H), 4.23 - 3.99 (m, 5H), 3.86 (ddq, J = 19.6, 9.4, 7.1 ㎐, 2H), 1.35 - 1.13 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.61. LCMS: MS m/z = 570.10 [M+1], tR = 0.99분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.19분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 36. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-사이클로부틸메틸 L-알라니네이트 포스페이트
Figure pct00391
THF(2 mL) 중 중간체 62(132 mg, 0.27 mmol), 중간체 4(80 mg, 0.24 mmol), 및 MgCl2(34 mg, 0.36 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(78 mg, 0.6 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 하에서 증발시키고, 이어서 잔류물을 아세토니트릴(2 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 냉각시키고, 진한 HCl을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 빙조 내에서 냉각시키고, 2 N NaOH 및 NaHCO3 용액의 적가에 의해 중화시키고, EtOAc(150 mL)로 희석시키고, 물(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc(50 mL x 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 하에서 건조시키고, 진공 중에서 농축시키고, 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (s, 1H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.61 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.49 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 4.30 (dd, J = 11.1, 7.1 ㎐, 1H), 4.20 (dd, J = 11.1, 5.7 ㎐, 1H), 4.14 - 3.98 (m, 3H), 3.98 - 3.80 (m, 3H), 2.60 (dp, J = 22.0, 7.4 ㎐, 2H), 2.10 - 1.95 (m, 4H), 1.94 - 1.64 (m, 8H), 1.39 - 1.17 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.54. LCMS: MS m/z = 650.12 [M+1].
실시예 37. 벤질 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시) (페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00392
중간체 4(83 mg, 0.25 mmol)를 중간체 39(126 mg, 0.275 mmol)와 혼합하고, 2 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시켰다. 염화마그네슘(71 mg, 0.75 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. 이어서, DIPEA(87 μL, 0.5 mmol)를 첨가하고, 반응물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다.
추가의 중간체 39(30 mg) 및 DIPEA(52 μL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 6시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 물(5 x 10 mL), 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 물질을 5 mL의 MeCN 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 진한 HCl(aq)(300 μL)을 적가하고, 반응물을 빙조 내에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액, 그리고 이어서 염수로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 다이클로로메탄 중 0 내지 10% 메탄올)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일로서 얻었으며, 이어서 이것을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.77 (m, 1H), 7.35 - 7.08 (m, 10H), 6.83 (m, 1H), 6.71 (m, 1H), 5.52 - 5.48 (m, 1H), 5.14 - 4.93 (m, 2H), 4.61 (m, 1H), 4.53 - 4.27 (m, 3H), 4.01 - 3.87 (m, 1H), 1.26 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.22, 3.19. LCMS: MS m/z = 609.1 [M+1]; 607.4 [M-1], tR = 1.19분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.78분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.626분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 38.
Figure pct00393
아세토니트릴(1 mL)을 실온에서 중간체 4(150 mg, 0.453 mmol), 중간체 40(176 mg, 0.453 mmol), 및 염화마그네슘(43 mg, 0.453 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 50℃로 가열하고, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.197 mL, 1.13 mmol)을 첨가하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 진한 염산 수용액(0.25 mL)을 적가하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.64 (dd, J = 5.6, 5.0 ㎐, 1H), 4.51 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 4.30 (dd, J = 11.1, 6.9 ㎐, 1H), 4.19 (dd, J = 11.1, 5.6 ㎐, 1H), 3.86 (ddd, J = 14.7, 9.4, 7.2 ㎐, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 1.30 (dd, J = 7.2, 1.0 ㎐, 3H), 1.25 (dd, J = 7.2, 0.8 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 13.58 (s). LCMS: MS m/z = 542.08 [M+1], tR = 0.88분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 1.87분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.052분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 39. 메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00394
아세토니트릴(5 mL)을 실온에서 중간체 4(348 mg, 1.05 mmol), 중간체 41(399 mg, 1.05 mmol), 및 염화마그네슘(100 mg, 1.05 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 50℃로 가열하고, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.475 mL, 2.63 mmol)을 첨가하였다. 2.5시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 진한 염산 수용액(0.5 mL)을 적가하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(100 mL) 및 염수(100 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (s, 0.65H), 7.78 (s, 0.35H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.87 - 6.82 (m, 1H), 6.75 - 6.71 (m, 1H), 5.52 - 5.47 (m, 1H), 4.66 - 4.60 (m, 1H), 4.55 - 4.29 (m, 3H), 3.95 - 3.80 (m, 1H), 3.64 (s, 1H), 3.60 (s, 2H), 1.27 - 1.22 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.24 (s). LCMS: MS m/z = 533.13 [M+1], tR = 1.02분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.28분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.712분 (부 이성질체), 3.775분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 40. 아이소프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(2-(메틸티오) 에톡시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00395
중간체 4(50 mg, 0.15 mmol)와 중간체 70(67 mg, 0.165 mmol)을 1.5 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에서 혼합하고 용해시켰다. 염화마그네슘(43 mg, 0.45 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. DIPEA(65 μL, 0.75 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 36시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 물(5 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 3% 메탄올/다이클로로메탄)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN(5 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 진한 염산 수용액(300 μL)을 적가하였다. 반응 혼합물을 빙조 내에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 유기 추출물을 수집하고, 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 5% 메탄올/다이클로로메탄)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.81 (m, 1H), 6.85 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.92 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.40 - 4.21 (m, 2H), 4.17 (m, 1H), 4.09 (m, 1H), 3.85 - 3.72 (m, 1H), 2.72 (m, 2H), 2.09 (m, 3H), 1.29 (m, 3H), 1.25 - 1.21 (m, 3H), 1.17 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.74, 7.82. LCMS: MS m/z = 559.0 [M+1]; 557.2 [M-1], tR = 1.04분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.36분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.976, 4.022분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 41. 아이소프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(2-메톡시 에톡시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00396
중간체 4(50 mg, 0.15 mmol)와 중간체 71(64 mg, 0.165 mmol)을 1.5 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에서 혼합하고 용해시켰다. 염화마그네슘(43 mg, 0.45 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. DIPEA(65 μL, 0.375 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다.
반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 물(5 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 3% 메탄올/다이클로로메탄)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 물질을 MeCN(5 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 진한 염산 수용액(300 μL)을 적가하였다. 반응 혼합물을 빙조 내에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 유기 추출물을 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 5% 메탄올/다이클로로메탄)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 6.89 - 6.83 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.01 - 4.84 (m, 1H), 4.63 (m, 1H), 4.50 (m, 1H), 4.35 (m, 1H), 4.30 - 4.19 (m, 1H), 4.19 - 4.13 (m, 2H), 3.77 (m, 1H), 3.63 - 3.51 (m, 2H), 3.35 (m, 3H), 1.28 (m, 3H), 1.17 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.98, 8.04. LCMS: MS m/z = 543.1 [M+1]; 541.2 [M-1], tR = 0.96분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.18분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.599, 3.619분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 42. 아이소프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(2-(메틸설포닐)에톡시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00397
중간체 4(66 mg, 0.2 mmol)와 중간체 72(100 mg, 0.22 mmol)를 2 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에서 혼합하고 용해시켰다. 염화마그네슘(57 mg, 0.6 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. DIPEA(87 μL, 0.5 mmol)를 첨가하고, 반응물을 35℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 물(5 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% B/헥산(B = 에틸 아세테이트 중 3% MeOH))를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다.
생성된 물질을 MeCN(5 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 진한 염산 수용액(250 μL)을 적가하였다. 반응물을 빙조 내에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 유기 추출물을 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 10% 메탄올/다이클로로메탄)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 6.77 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.03 - 4.85 (m, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.54 - 4.44 (m, 2H), 4.43 - 4.21 (m, 2H), 3.80 (m, 1H), 3.57 - 3.36 (m, 2H), 2.97 (m, 3H), 1.30 (m, 3H), 1.26 - 1.14 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79, 7.92. LCMS: MS m/z = 591.1 [M+1], tR = 0.92분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.07분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.435분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 43. 아이소프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(4-(다이메틸카르바모일)페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00398
THF(3 mL) 중 중간체 4(70 mg, 0.211 mmol), 중간체 43(160 mg, 0.317 mmol), 및 MgCl2(30 mg, 0.317 mmol)의 혼합물에 실온에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.1 mL, 0.528 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 아세토니드 중간체를 얻었으며, 이것을 아세토니트릴(2 mL) 중에 용해시키고, c-HCl(0.2 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 교반하고, NaHCO3 수용액(2 mL)을 빙조 하에서 첨가하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (m, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 2H), 7.23 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 5.00 - 4.81 (m, 1H), 4.61 (m, 1H), 4.54 - 4.38 (m, 2H), 4.35 (m, 1H), 3.92 - 3.79 (m, 1H), 3.07 (d, J = 3.4 ㎐, 3H), 2.95 (m, 3H), 1.28 (m, 3H), 1.22 - 1.12 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.18. LCMS: MS m/z = 632.32 [M+1]; tR = 0.67분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.84분 (18%), 3.85분 (81%); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 44. 옥세탄-3-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00399
옥세탄-3-일 ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-4-시아노-2,2-다이메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. THF(5 mL) 중 중간체 44(133 mg, 0.31 mmol), 중간체 4(130 mg, 0.39 mmol), 및 MgCl2(45 mg, 0.47 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(127 mg, 0.98 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 하에서 증발시키고, 잔류물을 DCM 중 0 내지 100% MeOH로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 615.18 [M+1], tR = 1.18분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.40분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
Figure pct00400
옥세탄-3-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. 10 mL의 ACN 중에 옥세탄-3-일 ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-4-시아노-2,2-다이메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(500 mg, 0.81 mmol)를 용해시키고, 20 mL의 TFA를 10 mL의 물과 혼합하고, 이어서 TFA 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하고, NaHCO3 수용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하고, 유기 용매를 증발시키고, 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.79 (d, J = 9.7 ㎐, 1H), 7.38 - 7.11 (m, 5H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (dd, J = 5.6, 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (t, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.32 (dtt, J = 23.9, 6.3, 5.1 ㎐, 1H), 4.82 - 4.73 (m, 2H), 4.63 (td, J = 5.3, 4.1 ㎐, 1H), 4.60 - 4.44 (m, 4H), 4.44 - 4.26 (m, 2H), 4.01 - 3.85 (m, 1H), 1.29 (dt, J = 7.2, 1.3 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.3, 3.29. LCMS: MS m/z = 575.11 [M+1], tR = 0.98분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.63 및 3.70분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 45. 프로필 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00401
N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.33 mL, 1.89 mmol) 및 염화마그네슘(107.8 mg, 1.13 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(7.5 mL) 중 중간체 4(250.0 mg, 0.76 mmol) 및 중간체 45(462.16 mg, 1.13 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 55℃로 가열하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(30 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(5 x 20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.53 mL)을 0℃에서 아세토니트릴(7.5 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(75 mL) 및 염수(75 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 다이클로로메탄 중 0 내지 20% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd, J = 4.5, 2.9 ㎐, 1H), 6.74 (dd, J = 4.6, 2.1 ㎐, 1H), 5.50 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.63 (q, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.54 - 4.31 (m, 3H), 4.07 - 3.82 (m, 3H), 1.68 - 1.49 (m, 2H), 1.31 - 1.26 (m, 3H), 0.90 (dt, J = 9.9, 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.27. LCMS: MS m/z = 561.20 [M+1], tR = 0.78분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.70분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 SFC(Chiralpak AD-H, 5 um, 21 x 250 mm, 아이소프로필 알코올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00402
Figure pct00403
실시예 46. 실시예 45의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.79 (s, 1H), 7.33 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.51 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.53 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.48 (dd, J = 10.9, 6.0 ㎐, 1H), 4.36 (dd, J = 10.9, 5.1 ㎐, 1H), 4.06 - 3.95 (m, 2H), 3.88 (dq, J = 9.4, 7.1 ㎐, 1H), 1.62 (h, J = 7.3 ㎐, 2H), 1.26 (dd, J = 7.1, 1.3 ㎐, 3H), 0.91 (t, J = 7.5 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.26. LCMS: MS m/z = 561.21 [M+1], tR = 0.76분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.63분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 47. 실시예 45의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.62 (dd, J = 5.6, 5.1 ㎐, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 10.9, 6.3 ㎐, 1H), 4.34 (dd, J = 10.9, 5.5 ㎐, 1H), 4.02 - 3.85 (m, 3H), 1.58 (dtd, J = 14.0, 7.4, 6.6 ㎐, 2H), 1.27 (dd, J = 7.2, 1.1 ㎐, 3H), 0.88 (t, J = 7.5 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.27. LCMS: MS m/z = 561.26 [M+1], tR = 0.77분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.74분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 48. 옥세탄-3-일메틸 ((((3aS,4R,6S,6aS)-6-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-4-시아노-2,2-다이메틸테트라하이드로푸로[3,4-d][1,3]다이옥솔-4-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00404
THF(10 mL) 중 중간체 46(350 mg, 1.06 mmol), 중간체 4(507 mg, 1.16 mmol), 및 MgCl2(130 mg, 1.37 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(341 mg, 2.64 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 하에서 증발시키고, 잔류물을 DCM 중 0 내지 100% MeOH로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS: MS m/z = 629.10 [M+1], tR = 1.21분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.51분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 49. 옥세탄-3-일메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00405
12 mL의 ACN 중에 실시예 48(385 mg, 0.61 mmol)을 용해시키고, 17 mL의 TFA를 12 mL의 물과 혼합하고, 이어서 TFA 용액을 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하고, NaHCO3 수용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하고, 유기 용매를 증발시키고, 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (d, J = 8.5 ㎐, 1H), 7.31 (dt, J = 16.0, 7.8 ㎐, 2H), 7.25 - 7.10 (m, 3H), 6.86 (dd, J = 4.6, 2.8 ㎐, 1H), 6.74 (t, J = 4.3 ㎐, 1H), 5.49 (t, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.72 (dddd, J = 11.0, 7.9, 6.3, 3.6 ㎐, 2H), 4.67 - 4.57 (m, 1H), 4.55 - 4.29 (m, 5H), 4.29 - 4.23 (m, 1H), 4.24 - 4.09 (m, 1H), 3.91 (td, J = 9.4, 8.9, 6.9 ㎐, 1H), 3.28 - 3.10 (m, 1H), 1.27 (ddd, J = 7.2, 2.7, 1.2 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.22, 3.15. LCMS: MS m/z = 589.15 [M+1], tR = 1.01분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.66 및 3.72분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 50. 사이클로부틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00406
또는
Figure pct00407
THF(10 mL) 중 중간체 48(330 mg, 0.79 mmol), 중간체 4(260 mg, 0.79 mmol), 및 MgCl2(97 mg, 1.02 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(254 mg, 1.96 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 하에서 증발시키고, 잔류물을 DCM 중 0 내지 100% MeOH로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 아세토니드 중간체를 얻었으며, 이어서 이것을 아세토니트릴(10 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 냉각시키고, 진한 HCl을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 빙조 내에서 냉각시키고, 2 N NaOH 및 NaHCO3 용액의 적가에 의해 중화시키고, EtOAc(150 mL)로 희석시키고, 물(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc(50 mL x 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 하에서 건조시키고, 진공 중에서 농축시키고, 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, DCM 중 0 내지 100% MeOH로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.7, 7.1 ㎐, 2H), 7.22 (dt, J = 8.6, 1.3 ㎐, 2H), 7.20 - 7.08 (m, 1H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.72 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.51 (dt, J = 5.0, 1.4 ㎐, 1H), 4.82-4.80 (m, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.53 - 4.38 (m, 2H), 4.35 (ddd, J = 10.3, 5.0, 1.4 ㎐, 1H), 3.86 (dq, J = 9.7, 7.1 ㎐, 1H), 2.32 - 2.09 (m, 2H), 2.04 - 1.89 (m, 2H), 1.79 - 1.64 (m, 1H), 1.64 - 1.46 (m, 1H), 1.29 - 1.18 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.25. LCMS: MS m/z = 573.11 [M+1], tR = 1.12분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 4.395분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 51. 사이클로부틸 (((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00408
또는
Figure pct00409
THF(10 mL) 중 중간체 49(355 mg, 0.85 mmol), 중간체 4(280 mg, 0.85 mmol), 및 MgCl2(105 mg, 1.1 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(273 mg, 2.1 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 하에서 증발시키고, 잔류물을 DCM 중 0 내지 100% MeOH로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 아세토니드 중간체를 얻었으며, 이어서 이것을 아세토니트릴(10 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 냉각시키고, 진한 HCl을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 빙조 내에서 냉각시키고, 2 N NaOH 및 NaHCO3 용액의 적가에 의해 중화시키고, EtOAc(150 mL)로 희석시키고, 물(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc(50 mL x 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 하에서 건조시키고, 진공 중에서 농축시키고, 잔류물을 DCM 중에 용해시키고, DCM 중 0 내지 100% MeOH로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (dd, J = 8.8, 7.0 ㎐, 2H), 7.20 - 7.08 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.51 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.97 - 4.86 (m, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.52 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.47 (dd, J = 10.9, 5.9 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.1 ㎐, 1H), 3.84 (dq, J = 9.2, 7.1 ㎐, 1H), 2.34 - 2.19 (m, 2H), 2.13 - 1.91 (m, 2H), 1.84 - 1.69 (m, 1H), 1.69 - 1.52 (m, 1H), 1.25 (dd, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.21. LCMS: MS m/z = 573.10 [M+1], tR = 1.15분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 4.364분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 52. 메틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00410
방법 1. N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.12 mL, 0.68 mmol) 및 염화마그네슘(38.8 mg, 0.41 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(3 mL) 중 중간체 4(100.0 mg, 0.30 mmol) 및 중간체 50(141.2 mg, 0.33 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 50℃로 가열하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(5 x 10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.2 mL)을 0℃에서 아세토니트릴(3 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하였다. 3시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 다이클로로메탄 중 0 내지 20% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.87 (s, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.27 - 7.14 (m, 3H), 6.73 (s, 2H), 6.20 (s, 2H), 5.46 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.63 - 4.51 (m, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 1H), 4.35 (dd, J = 11.1, 6.6 ㎐, 2H), 4.28 (dd, J = 11.1, 6.4 ㎐, 2H), 4.00 - 3.83 (m, 2H), 3.59 (s, 3H), 1.26 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 2.64. LCMS: MS m/z = 533.15 [M+1], tR = 0.65분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.03분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
방법 2. 중간체 4(150 mg, 0.5 mmol)와 중간체 50(234 mg, 0.55 mmol)을 4 mL의 무수 THF 중에서 혼합하고 용해시켰다. 염화마그네슘(143 mg, 1.5 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. DIPEA(218 uL, 1.25 mmol)를 첨가하고, 반응물을 50℃에서 4시간 동안 교반하였다.
반응물을 EtOAc(20 mL)로 희석시키고, 물(5 x 15 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN(10 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 진한 염산 수용액(500 uL)을 적가하였다. 반응물을 빙조 내에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(30 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(30 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 유기 추출물을 수집하고, 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(12 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 10% 메탄올/DCM)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 갖는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.22 (m, 2H), 7.16 (m, 1H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.51 (d, J = 5.1 ㎐, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.48 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.45 - 4.30 (m, 2H), 3.90 (m, 1H), 3.59 (s, 3H), 1.25 (d, J = 7.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.24. LCMS: MS m/z = 533.0 [M+1], 531.0 [M-1], tR = 1.31분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.29분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.791분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 53. 아이소프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00411
N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.06 mL, 0.33 mmol) 및 염화마그네슘(12.0 mg, 0.13 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(1.5 mL) 중 중간체 4(41.8 mg, 0.13 mmol) 및 중간체 51(60.9 mg, 0.13 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 55℃로 가열하였다. 5시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(5 x 15 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.06 mL)을 0℃에서 아세토니트릴(1.5 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 다이클로로메탄 중 0 내지 20% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (d, J = 3.7 ㎐, 1H), 7.14 (dd, J = 9.0, 1.4 ㎐, 1H), 7.09 - 7.03 (m, 1H), 6.90 - 6.80 (m, 3H), 6.73 (dd, J = 4.8, 1.0 ㎐, 1H), 5.50 (dd, J = 7.8, 5.0 ㎐, 1H), 4.99 - 4.86 (m, 1H), 4.62 (q, J = 5.1 ㎐, 1H), 4.53 - 4.29 (m, 3H), 4.10 - 4.01 (m, 2H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.77 - 3.68 (m, 2H), 3.41 (d, J = 2.1 ㎐, 3H), 1.26 (ddd, J = 7.1, 3.7, 1.1 ㎐, 3H), 1.23 - 1.13 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.71. LCMS: MS m/z = 635.19 [M+1], tR = 0.95분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.68분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 54. 부틸 ((S)-(((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00412
N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.13 mL, 0.76 mmol) 및 염화마그네슘(43 mg, 0.45 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(7.5 mL) 중 중간체 4(100.0 mg, 0.30 mmol) 및 중간체 52(191 mg, 0.45 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 55℃로 가열하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(30 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(5 x 20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.53 mL)을 0℃에서 아세토니트릴(7.5 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(75 mL) 및 염수(75 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 다이클로로메탄 중 0 내지 20% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.79 (d, J = 7.2 ㎐, 1H), 7.37 - 7.10 (m, 4H), 6.84 (dd, J = 4.5, 2.8 ㎐, 1H), 6.73 (dd, J = 4.5, 2.0 ㎐, 1H), 5.49 (t, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.62 (q, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.55 - 4.28 (m, 3H), 4.15 - 3.80 (m, 3H), 1.68 - 1.46 (m, 2H), 1.46 - 1.22 (m, 5H), 0.99 - 0.83 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.25. LCMS: MS m/z = 575.14 [M+1], tR = 0.83분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.50분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 19.0분: 2 내지 95% ACN, 19.0분 내지 20.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 55. 테트라하이드로-2H-피란-4-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00413
아세토니트릴(40 mL) 중 중간체 22(1.7 g, 3.77 mmol), 중간체 4(1 g, 3 mmol), 및 MgCl2(359 mg, 3.77 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.98 g, 8 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 냉각시키고, EtOAc로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 하에서 증발시키고, 이어서 잔류물을 아세토니트릴 중에 용해시키고, 빙조 내에서 냉각시키고, 진한 HCl을 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 빙조 내에서 냉각시키고, 2 N NaOH 및 NaHCO3 용액의 적가에 의해 중화시키고, EtOAc(150 mL)로 희석시키고, 물(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 수성 상을 EtOAc(50 mL x 2)로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨 하에서 건조시키고, 진공 중에서 농축시키고, 잔류물을 DCM 중 0 내지 100% MeOH로 용리하는 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.54 - 4.42 (m, 2H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.2 ㎐, 1H), 3.97 - 3.80 (m, 3H), 3.56 - 3.44 (m, 2H), 1.89 - 1.81 (m, 2H), 1.60 (dtd, J = 12.9, 8.6, 3.9 ㎐, 2H), 1.27 (dd, J = 7.2, 1.3 ㎐, 4H), 1.14 (d, J = 6.1 ㎐, 5H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.23. LCMS: MS m/z = 603.14 [M+1], tR = 1.20분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.87분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 56. 테트라하이드로-2H-피란-4-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00414
또는
Figure pct00415
실시예 55의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.29 (dd, J = 8.7, 7.0 ㎐, 2H), 7.16 (ddd, J = 7.1, 2.1, 1.1 ㎐, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.88 (dq, J = 9.4, 5.1, 4.7 ㎐, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.55 - 4.44 (m, 2H), 4.36 (dd, J = 10.9, 5.2 ㎐, 1H), 3.86 (m, 3H), 3.50 (dtd, J = 11.3, 5.4, 2.7 ㎐, 2H), 1.94 - 1.76 (m, 2H), 1.60 (dtd, J = 12.9, 8.4, 3.9 ㎐, 2H), 1.27 (dd, J = 7.1, 1.3 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.23. MS m/z = 603 (M+H)+.
실시예 57. 테트라하이드로-2H-피란-4-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00416
또는
Figure pct00417
실시예 55의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 8.6, 7.2 ㎐, 2H), 7.27 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.49 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.80 (m, 1H), 4.61 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.50 - 4.38 (m, 2H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.5 ㎐, 1H), 3.90 (dq, J = 9.9, 7.1 ㎐, 1H), 3.85 - 3.75 (m, 2H), 3.46 (dddd, J = 11.8, 8.9, 6.0, 3.2 ㎐, 2H), 1.81 (tdd, J = 9.6, 4.6, 2.5 ㎐, 2H), 1.57 (dtd, J = 12.7, 8.4, 3.9 ㎐, 2H), 1.27 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.23. MS m/z = 603 (M+H)+.
실시예 58. 3-3-메톡시프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00418
THF(5 mL) 중 중간체 4(127 mg, 0.38 mmol), 중간체 53(252 mg, 0.58 mmol), 및 MgCl2(55 mg, 0.58 mmol)의 혼합물에 실온에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.17 mL, 0.97 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 물 중 10 내지 100% ACN)로 정제하였다. 얻어진 잔류물을 ACN(8 mL) 중에 용해시키고, c-HCl(0.2 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 빙조 하에서 냉각시키고, NaHCO3 수용액(4 mL)을 서서히 첨가하였다. 혼합물을 절반의 부피로 농축시키고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 물 중 10 내지 100% ACN)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 0.64H), 7.78 (s, 0.36H), 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.50 (m, 1H), 4.62 (m,1H), 4.53 - 4.38 (m, 2H), 4.34 (m, 1H), 4.17 - 4.00 (m, 2H), 3.93 - 3.83 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 3.27 (m, 3H), 1.81 (m, 2H), 1.26 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.24. LCMS: m/z = 591.18 (M+H), t R = 0.96분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.96분 (35%) 및 4.02분 (64%); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 IA SFC(5 um, 21 x 250 mm, 30% 2-프로판올)에 의해 분리하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00419
Figure pct00420
실시예 59. 실시예 58의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.33 - 7.25 (m, 2H), 7.19 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.72 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.51 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.52 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.47 (dd, J = 10.9, 6.0 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.1 ㎐, 1H), 4.12 (td, J = 6.5, 2.1 ㎐, 2H), 3.89 (ddd, J = 14.4, 10.8, 6.6 ㎐, 1H), 3.39 (t, J = 6.2 ㎐, 2H), 3.26 (s, 3H), 1.83 (m, 2H), 1.25 (dd, J = 7.1, 1.2 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.24. HPLC: tR = 3.96분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 60. 실시예 58의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.79 (s, 1H), 7.32 (dd, J = 8.6, 7.2 ㎐, 2H), 7.22 (dt, J = 8.6, 1.3 ㎐, 2H), 7.20 - 7.13 (m, 1H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.47 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.41 (dd, J = 10.9, 6.3 ㎐, 1H), 4.34 (dd, J = 10.9, 5.5 ㎐, 1H), 4.07 (qt, J = 10.9, 6.4 ㎐, 2H), 3.90 (dq, J = 10.0, 7.1 ㎐, 1H), 3.37 (t, J = 6.2 ㎐, 2H), 3.25 (s, 3H), 1.79 (m, 2H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.24. HPLC: tR = 4.02분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 61. (R)-1-메틸피롤리딘-3-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00421
중간체 4(50 mg, 0.15 mmol)와 중간체 24(81 mg, 0.18 mmol)를 1.5 mL의 무수 THF 중에서 혼합하고 용해시켰다. 염화마그네슘(43 mg, 0.45 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. DIPEA(65 uL, 0.375 mmol)를 첨가하고, 반응물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다.
반응물을 EtOAc(15 mL)로 희석시키고, 물(6 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 5 내지 10 내지 20% 메탄올/DCM)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN(5 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 진한 염산 수용액(300 uL)을 적가하였다. 반응물을 빙조 내에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(20 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(30 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 유기 추출물을 수집하고, 수성 부분을 EtOAc(2 x 10 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (m, 1H), 7.41 - 7.09 (m, 5H), 6.85 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.33 - 5.15 (m, 1H), 4.70 - 4.58 (m, 1H), 4.56 - 4.28 (m, 3H), 4.00 - 3.86 (m, 1H), 3.28 - 3.07 (m, 3H), 3.03 - 2.83 (m, 1H), 2.69 (m, 3H), 2.35 (m, 1H), 2.00 (m, 1H), 1.28 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.39, 3.05. LCMS: MS m/z = 602.2 [M+1], 599.9 [M-1], tR = 1.00분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 1.85분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.142, 3.190분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 62. 메틸 (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)페닐)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로파노에이트
Figure pct00422
메틸 (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)페닐)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로파노에이트. N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.11 mL, 0.604 mmol) 및 염화마그네슘(23 mg, 0.24 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(3.8 mL) 중 중간체 4(80 mg, 0.24 mmol) 및 중간체 54(178 mg, 0.29 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 55℃로 가열하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(50 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(5 x 50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.11 mL)을 0℃에서 아세토니트릴(3.8 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하였다. 3.5시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(50 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(2 x 50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 다이클로로메탄 중 0 내지 25% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.78 (d, J = 9.1 ㎐, 1H), 7.38 - 7.25 (m, 5H), 7.19 - 7.09 (m, 3H), 7.06 (dd, J = 8.7, 1.2 ㎐, 1H), 6.84 (dd, J = 4.5, 1.3 ㎐, 1H), 6.72 (dd, J = 7.2, 4.5 ㎐, 1H), 5.56 - 5.46 (m, 1H), 5.03 (d, J = 2.9 ㎐, 2H), 4.63 (td, J = 5.3, 4.4 ㎐, 1H), 4.54 - 4.29 (m, 4H), 3.87 (ddq, J = 16.7, 9.4, 7.1 ㎐, 1H), 3.69 (d, J = 3.0 ㎐, 3H), 3.61 (d, J = 15.9 ㎐, 4H), 3.20 - 3.06 (m, 1H), 2.91 (dt, J = 14.0, 8.4 ㎐, 1H), 1.24 (td, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.27 (d, J = 2.1 ㎐). LCMS: MS m/z = 768.49 [M+1], tR = 1.12분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.95분, 4.02분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
Figure pct00423
Figure pct00424
메틸 (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)페닐)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로파노에이트. 탄소 상의 팔라듐(10.3 mg, 10 중량%)을 아르곤으로 퍼지된 에탄올(5 mL) 중 메틸 (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)페닐)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로파노에이트(30.6 mg, 0.04 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 수소로 퍼지하고, 실온에서 교반하였다. 18시간 후에, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터를 에탄올로 헹구고, 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하였다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Synergi 4 um Polar-RP 80Å 150 x 21.2 mm 컬럼, 10 내지 60% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA를 사용함))를 거쳐서, TFA 염으로서 생성물을 얻었다.
실시예 62. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.95 (s, 1H), 7.29 - 7.16 (m, 5H), 6.93 (s, 1H), 5.53 (d, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.59 (t, J = 5.4 ㎐, 1H), 4.52 - 4.43 (m, 2H), 4.37 (dd, J = 10.9, 5.2 ㎐, 1H), 4.30 (dd, J = 7.6, 6.1 ㎐, 1H), 4.03 - 3.87 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.25 (dd, J = 14.5, 6.1 ㎐, 1H), 3.13 (dd, J = 14.6, 7.4 ㎐, 1H), 1.34 (dd, J = 7.4, 1.2 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -77.68. 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.54. LCMS: MS m/z = 634.18 [M+1], tR = 0.77분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 2.30분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 63. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.94 (s, 1H), 7.32 - 7.22 (m, 4H), 7.14 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 5.52 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.58 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.40 (dd, J = 12.5, 5.8 ㎐, 2H), 4.37 - 4.28 (m, 2H), 3.92 (dd, J = 10.0, 7.3 ㎐, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.27 - 3.08 (m, 2H), 1.31 (d, J = 7.1 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -77.65. 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.48. LCMS: MS m/z = 634.24 [M+1], tR = 0.80분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 2.43분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 64. (S)-테트라하이드로푸란-3-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00425
THF(5 mL) 중 중간체 4(132 mg, 0.40 mmol), 중간체 55(234 mg, 0.54 mmol), 및 MgCl2(46 mg, 0.48 mmol)의 혼합물에 실온에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.10 mL, 0.60 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 물 중 10 내지 100% ACN)로 정제하였다. 얻어진 잔류물을 ACN(4 mL) 중에 용해시키고, c-HCl(0.2 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 빙조 하에서 냉각시키고, 5 N NaOH를 사용하여 중화시키고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 물 중 10 내지 100% ACN)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (s, 0.67H), 7.78 (s, 0.33H), 7.37 - 7.13 (m, 5H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.25 - 5.20 (m, 0.33H), 5.18 - 5.10 (m, 0.67H), 4.62 (m, 1H), 4.53 - 4.30 (m, 3H), 3.93 - 3.63 (m, 5H), 2.20 - 1.99 (m, 1H), 1.98 - 1.87 (m, 1H), 1.25 (m, 3H). LCMS: m/z = 589.02 (M+H), tR = 1.06분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.75분 (29%), 3.81분 (68%); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 혼합물을 Chiralpak AD-H(150 x 4.6 mm, 5 um, 100% EtOH)에 의해 분리하였다.
실시예 65. (S)-테트라하이드로푸란-3-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00426
또는
Figure pct00427
실시예 64의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.28 (m, 2H), 7.16 (dt, J = 8.1, 1.3 ㎐, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 5.23 (t, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.63 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.51 (d, J = 5.5 ㎐, 1H), 4.47 (dd, J = 10.9, 5.9 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.2 ㎐, 1H), 3.92 - 3.68 (m, 5H), 2.23 - 2.06 (m, 1H), 2.01 - 1.91 (m, 1H), 1.25 (dd, J = 7.1, 1.3 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.22. LCMS: m/z = 589.02 (M+H), tR = 1.06분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.75분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 66. (S)-테트라하이드로푸란-3-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00428
또는
Figure pct00429
실시예 64의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 8.6, 7.2 ㎐, 2H), 7.25 - 7.21 (m, 2H), 7.20 - 7.15 (m, 1H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.48 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 5.14 (dd, J = 6.0, 4.1 ㎐, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.46 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 4.41 (dd, J = 10.9, 6.4 ㎐, 1H), 4.33 (dd, J = 10.9, 5.4 ㎐, 1H), 3.95 - 3.65 (m, 5H), 2.11 - 1.98 (m, 1H), 1.96 - 1.82 (m, 1H), 1.25 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.19. LCMS: m/z = 589.02 (M+H), tR = 1.07분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.82분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 67. 3-모르폴리노프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00430
N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.11 mL, 0.62 mmol) 및 염화마그네슘(23.8 mg, 0.25 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(2.5 mL) 중 중간체 4(82.7 mg, 0.25 mmol) 및 중간체 56(133 mg, 0.27 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 55℃로 가열하였다. 4.5시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(2 x 15 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.12 mL)을 아세토니트릴(5 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 4.5시간 후에, 반응 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 20 mg의 생성된 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å AXIA 250 x 21.2 mm 컬럼, 30 내지 70% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA를 사용함)), 이어서 다이클로로메탄 중 0 내지 25% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.94 (s, 1H), 7.43 - 7.19 (m, 6H),5.51 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.55 - 4.43 (m, 3H), 4.43 - 4.33 (m, 2H), 4.09 (dt, J = 9.4, 4.9 ㎐, 2H), 3.95 (d, J = 13.1 ㎐, 3H), 3.77 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 3.13 (q, J = 8.7, 7.9 ㎐, 2H), 2.08 - 1.99 (m, 2H), 1.30 (t, J = 8.6 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 2.70, 2.40. LCMS: MS m/z = 646.35 [M+1], tR = 1.05분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.23분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Kinetx 2.6u 100A C18, 100mm x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 8.5분: 2 내지 98% ACN, 8.5분 내지 10.0분: 98% ACN(유량: 1.5 mL/분).
실시예 68. (R)-테트라하이드로푸란-3-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00431
THF(5 mL) 중 중간체 4(130 mg, 0.40 mmol), 중간체 57(256 mg, 0.59 mmol), 및 MgCl2(46 mg, 0.48 mmol)의 혼합물에 실온에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.10 mL, 0.60 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 물 중 10 내지 100% ACN)로 정제하였다. 얻어진 잔류물을 ACN(4 mL) 중에 용해시키고, c-HCl(0.2 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 빙조 하에서 냉각시키고, 5 N NaOH를 사용하여 중화시키고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 물 중 10 내지 100% ACN)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 0.71H), 7.78 (s, 0.29H), 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.73 (m, 1H), 5.49 (m, 1H), 5.23 (s, 0.29H), 5.20 - 5.14 (m, 0.71H), 4.66 - 4.59 (m, 1H), 4.53 - 4.30 (m, 3H), 3.95 - 3.69 (m, 5H), 2.22 - 2.05 (m, 1H), 1.99 - 1.85 (m, 1H), 1.25 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.22, 3.17. LCMS: m/z = 589.03 (M+H), tR = 1.07분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.77분 (25%), 3.82분 (75%); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 혼합물을 Chiralpak IA(150 x 4.6 mm, 5 마이크로미터, 100% EtOH)에 의해 분리하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00432
Figure pct00433
실시예 69. 실시예 68의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.78 (s, 1H), 7.32 - 7.26 (m, 2H), 7.19 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.50 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 5.26 - 5.20 (m, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.50 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.47 (dd, J = 11.0, 6.0 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 10.9, 5.2 ㎐, 1H), 3.94 - 3.69 (m, 5H), 2.15 (td, J = 14.5, 8.3 ㎐, 1H), 1.99 - 1.86 (m, 1H), 1.25 (dd, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.22. LCMS: m/z = 589.09 (M+H), tR = 0.95분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.76분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 70. 실시예 68의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.40 - 7.25 (m, 3H), 7.28 - 7.12 (m, 2H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.49 (d, J = 5.1 ㎐, 1H), 5.17 (td, J = 4.1, 2.1 ㎐, 1H), 4.62 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 4.46 (d, J = 5.6 ㎐, 1H), 4.41 (dd, J = 10.9, 6.4 ㎐, 1H), 4.34 (dd, J = 10.9, 5.4 ㎐, 1H), 3.98 - 3.68 (m, 5H), 2.18 - 2.03 (m, 1H), 1.96 - 1.83 (m, 1H), 1.25 (dd, J = 7.2, 1.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.17. LCMS: m/z = 589.10 (M+H), tR = 0.96분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.81분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 71. 메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포로티오일)-L-알라니네이트
Figure pct00434
트라이에틸아민(170 μl, 1.2 mmol)을 실온에서 아세토니트릴(6 mL) 중 중간체 4(0.40 g, 1.2 mmol) 및 중간체 58(0.35 g, 1.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃로 가온하였다. 3시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 진한 염산 수용액(300 μL)을 첨가하였다. 1시간 후에, 포화 중탄산나트륨 수용액(5 mL)을 서서히 첨가하고, 생성된 혼합물을 다이클로로메탄(3 x 5 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.95 (br s, 1H), 7.40 - 7.02 (m, 5H), 6.90 - 6.72 (m, 2H), 5.52 - 5.45 (m, 1H), 4.58 - 4.49 (m, 1H), 4.43 - 4.30 (m, 2H), 3.90 - 3.77 (m, 2H), 3.71 - 3.54 (m, 3H), 1.38 - 1.29 (m, 3H). LCMS: MS m/z = 549.27 [M+1], tR = 1.23분 (부 이성질체), 1.25 (주 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.21분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.124분 (부 이성질체), 5.221분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 72. 메틸 (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)페닐)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로파노에이트
Figure pct00435
N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.06 mL, 0.33 mmol) 및 염화마그네슘(12.3 mg, 0.13 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(1.5 mL) 중 중간체 4(42.7 mg, 0.13 mmol) 및 중간체 66(82.9 mg, 0.13 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 55℃로 가열하였다. 4시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(5 x 15 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.06 mL)을 0℃에서 아세토니트릴(1.5 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 다이클로로메탄 중 0 내지 20% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.79 (d, J = 8.0 ㎐, 1H), 7.31 (ddd, J = 11.2, 6.2, 3.3 ㎐, 5H), 7.20 - 7.10 (m, 3H), 7.06 (d, J = 8.3 ㎐, 1H), 6.87 - 6.80 (m, 1H), 6.72 (dd, J = 5.5, 4.7 ㎐, 1H), 5.56 - 5.44 (m, 1H), 5.03 (d, J = 3.6 ㎐, 2H), 4.91 (ddd, J = 24.9, 12.6, 6.3 ㎐, 1H), 4.62 (t, J = 5.4 ㎐, 1H), 4.48 (dd, J = 11.8, 5.5 ㎐, 1H), 4.45 - 4.28 (m, 3H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.69 (d, J = 3.5 ㎐, 3H), 3.16 - 3.05 (m, 1H), 2.91 (dt, J = 14.0, 8.8 ㎐, 1H), 1.25 (dt, J = 7.2, 1.4 ㎐, 3H), 1.20 (d, J = 6.3 ㎐, 3H), 1.16 (t, J = 6.3 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.36, 3.33. LCMS: MS m/z = 796.45 [M+1], tR = 1.17분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.44분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 73. 아이소프로필 (2S)-3-(4-(((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)페닐)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)프로파노에이트
Figure pct00436
N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.11 mL, 0.62 mmol) 및 염화마그네슘(23.8 mg, 0.25 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(2.5 mL) 중 중간체 4(82.7 mg, 0.25 mmol) 및 중간체 69(176.6 mg, 0.27 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 55℃로 가열하였다. 4.5시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(2 x 15 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.12 mL)을 아세토니트릴(5 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 4.5시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(2 x 20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 다이클로로메탄 중 0 내지 25% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.79 (d, J = 9.3 ㎐, 1H), 7.36 - 7.21 (m, 5H), 7.20 - 7.10 (m, 3H), 7.09 - 7.03 (m, 1H), 6.84 (dd, J = 4.5, 1.0 ㎐, 1H), 6.73 (dd, J = 7.4, 4.5 ㎐, 1H), 5.51 (t, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.04 (d, J = 2.2 ㎐, 2H), 5.01 - 4.89 (m, 1H), 4.66 - 4.60 (m, 1H), 4.55 - 4.28 (m, 4H), 3.87 (ddd, J = 16.3, 9.6, 7.1 ㎐, 1H), 3.61 (d, J = 16.9 ㎐, 3H), 3.09 (dt, J = 14.2, 5.8 ㎐, 1H), 2.91 (dt, J = 15.3, 8.2 ㎐, 1H), 1.24 (dtd, J = 9.4, 4.9, 4.3, 1.6 ㎐, 6H), 1.16 (dd, J = 6.3, 3.8 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.27. LCMS: MS m/z = 796.51 [M+1], tR = 1.25분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.331분, 4.395분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 74. 2-(다이아이소프로필아미노)에틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트
Figure pct00437
N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.20 mL, 1.17 mmol) 및 염화마그네슘(44.7 mg, 0.47 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(5.47 mL) 중 중간체 4(155.6 mg, 0.47 mmol) 및 중간체 68(231.8 mg, 0.47 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 55℃로 가열하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(50 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(2 x 50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.40 mL)을 0℃에서 아세토니트릴(5 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하였다. 20시간 후에, 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하였다. 수성 층을 동결건조시켜 생성물을 얻었으며, 이것을 추가의 정제 없이 사용하였다. LCMS: MS m/z = 635.19 [M+1], tR = 0.95분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
실시예 75. 2-(2-에톡시에톡시)에틸 ((((2 R ,3 S ,4 R ,5 S )-5-(4-아미노피롤로[2,1- f ][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)- L -알라니네이트 단일 이성질체
Figure pct00438
테트라하이드로푸란(1.4 mL)을 실온에서 중간체 4(202 mg, 0.610 mmol), 중간체 73(418 mg, 0.793 mmol), 및 염화마그네슘(87 mg, 0.914 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 40℃로 가열하고, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.265 mL, 1.524 mmol)을 첨가하였다. 40℃에서 2시간 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트(40 mL) 중에 용해시키고, 생성된 혼합물을 물(30 mL) 및 염수(30 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 아세토니트릴(10 mL) 중에 용해시키고, 진한 염산 수용액(0.508 mL)을 0℃에서 적가하였다. 0℃에서 4시간 후에, 반응 혼합물을 0℃에서 에틸 아세테이트(50 mL) 및 물(30 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 중탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 물 중 10 내지 100% 아세토니트릴 구배를 사용하는 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110Å 100 x 30 mm 컬럼)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 7.86 (s, 1H), 7.77 (bs, 2H), 7.41 - 7.32 (m, 2H), 7.27 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.25 - 6.07 (m, 2H), 5.50 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.38 (d, J = 6.2 ㎐, 1H), 4.54 - 4.42 (m, 1H), 4.35 - 4.21 (m, 2H), 4.22 - 4.08 (m, 2H), 4.07 - 3.95 (m, 1H), 3.92 - 3.77 (m, 1H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.49 - 3.44 (m, 2H), 3.43 - 3.36 (m, 4H), 1.20 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.07 (t, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.24. LCMS: MS m/z = 635.07 [M+1], tR = 1.17분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 0.2분: 2% 아세토니트릴, 0.2분 내지 1.5분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.5분 내지 2.2분: 100% 아세토니트릴, 2.2분 내지 2.4분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 2.4분 내지 2.5분: 2% 아세토니트릴(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.45분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.09분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 76. 메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(벤질옥시)포스포릴)-L-알라니네이트.
Figure pct00439
아세토니트릴(2.5 mL)을 실온에서 중간체 4(150 mg, 0.453 mmol), 중간체 42(179 mg, 0.453 mmol), 및 염화마그네슘(43 mg, 0.453 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 50℃로 가열하고, N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.197 mL, 0.453 mmol)을 첨가하였다. 22시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 진한 염산 수용액(0.5 mL)을 적가하였다. 1시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(50 mL) 및 염수(50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.78 (s, 0.7H), 7.73 (s, 0.3H), 7.41 - 7.22 (m, 5H), 6.88 - 6.79 (m, 1H), 6.76 - 6.67 (m, 1H), 5.56 - 5.43 (m, 1H), 5.09 - 4.93 (m, 2H), 4.69 - 4.18 (m, 4H), 3.92 - 3.72 (m, 1H), 3.61 (s, 0.9H), 3.60 (s, 2.1H), 1.31 - 1.22 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.88 (s), 7.81 (s). LCMS: MS m/z = 547.06 [M+1], tR = 1.04분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.381분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분).
C. 화합물
실시예 77. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00440
실시예 6(10 mg, 0.0167 mmol)을 무수 DMF(1 mL) 중에 용해시켰다. 아이소부티르산(6.2 uL, 0.0667 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(10.4 uL, 0.0667 mmol)를 반응물에 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. DMAP(2 mg, 0.0167 mmol)를 첨가하고, 반응물을 16시간 동안 교반하였다. 추가의 아이소부티르산(7 uL, 0.067 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(11 uL, 0.067 mmol)를 반응물에 첨가하고, 이어서 이것을 6시간 동안 교반하였다. 추가의 아이소부티르산(4 uL, 0.034 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(6 uL, 0.034 mmol)를 반응물에 첨가하고, 이것을 18시간 동안 교반하였다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일로서 얻었으며, 이어서 이것을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.91 (s, 1H), 7.35 - 7.22 (m, 2H), 7.22 - 7.08 (m, 3H), 6.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.58 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.98 - 5.71 (m, 3H), 5.67 (d, J = 3.7 ㎐, 1H), 4.73 (dq, J = 8.7, 4.2 ㎐, 1H), 4.40 (d, J = 6.3 ㎐, 2H), 4.07 - 3.83 (m, 2H), 2.64 (dq, J = 13.8, 6.9 ㎐, 2H), 1.98 - 1.59 (m, 7H), 1.57 - 1.08 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.42 (s). MS m/z = 741.1 [M+1]; 739.2 [M-1].
실시예 78. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(4-메틸펜타노에이트)
Figure pct00441
실시예 6(10 mg, 0.016 mmol)을 무수 DMF(1 mL) 중에 용해시켰다. 4-메틸발레르산(10.4 uL, 0.083 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(13 uL, 0.083 mmol)를 반응물에 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. DMAP(2 mg, 0.0167 mmol)를 첨가하고, 반응물을 16시간 동안 교반하였다.
추가의 4-메틸발레르산(10.4 uL, 0.083 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(13 uL, 0.083 mmol)를 반응물에 첨가하고, 이어서 이것을 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(20 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL), 그리고 이어서 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 분획을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 70% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일로서 얻었으며, 이어서 이것을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (s, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.89 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.79 (t, J = 5.4 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.68 (dt, J = 8.8, 4.5 ㎐, 1H), 4.51 - 4.36 (m, 2H), 3.95 - 3.79 (m, 1H), 2.54 - 2.26 (m, 4H), 1.83 - 1.45 (m, 10H), 1.45 - 1.26 (m, 10H), 0.97 - 0.82 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.07 (s). MS m/z = 797.1 [M+1]; 795.4 [M-1].
실시예 79. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-옥소-1-((트랜스-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실)옥시)프로판-2-일)아미노) (페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00442
DMF(5 mL) 중 실시예 18(355 mg, 0.50 mmol), 아이소부티르산(0.23 mL, 2.51 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.40 mL, 2.51 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(61.2 mg, 0.50 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 진공 중에서 농축시켰다. 생성된 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 70% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.6, 7.3 ㎐, 2H), 7.23 - 7.14 (m, 3H), 6.75 (m, 2H), 6.37 (s, 2H), 5.86 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.60 (tt, J = 10.6, 4.2 ㎐, 1H), 4.52 - 4.27 (m, 3H), 3.87 (tq, J = 9.6, 7.1 ㎐, 1H), 2.64 (m, 2H), 2.18 - 2.05 (m, 1H), 2.02 - 1.86 (m, 4H), 1.49 - 1.12 (m, 19H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.46. 19F NMR (376 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ -74.35 (d, J = 8.7 ㎐). LCMS: MS m/z = 809.32 [M+1]; tR = 1.41분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.56분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 80. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((S)-(((S)-1-(((1r,4S)-4-(tert-부틸)사이클로헥실)옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴) 옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00443
DMF(1 mL) 중 실시예 22의 (S)-이성질체(40 mg, 0.061 mmol), 아이소부티르산(0.023 mL, 0.244 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.038 mL, 0.244 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(8 mg, 0.065 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 추가의 아이소부티르산(0.023 mL, 0.244 mmol), 및 DIC(0.038 mL, 0.244 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 70% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.89 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.77 (dd, J = 5.8, 4.8 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.55 (tt, J = 11.2, 4.4 ㎐, 1H), 4.45 (dd, J = 5.8, 1.2 ㎐, 2H), 3.86 (dq, J = 10.0, 7.1 ㎐, 1H), 2.64 (dhept, J = 17.2, 7.0 ㎐, 2H), 1.94 (d, J = 10.6 ㎐, 2H), 1.82 - 1.71 (m, 2H), 1.31 - 1.13 (m, 17H), 1.12 - 0.91 (m, 3H), 0.84 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.03. LCMS: MS m/z = 797.37 [M+1]; tR = 1.45분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 7.33분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 81. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00444
실시예 6(25 mg, 0.0416 mmol)을 무수 THF(1 mL) 중에 용해시켰다. 아세트산(12 uL, 0.208 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(32 uL, 0.208 mmol)를 반응물에 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. DMAP(5 mg, 0.0416 mmol)를 첨가하고, 반응물을 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일로서 얻었으며, 이어서 이것을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.88 (s, 1H), 7.32 - 7.23 (m, 2H), 7.23 - 7.09 (m, 3H), 6.63 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.52 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.93 (bs, 2H), 5.85 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 5.79 (dd, J = 5.7, 4.1 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.1 ㎐, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.42 (d, J = 6.4 ㎐, 2H), 4.20 - 4.01 (m, 2H), 2.13 (s, 6H), 1.82 - 1.61 (m, 4H), 1.50 (m, 1H), 1.45 - 1.28 (m, 8H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.49 (s). MS m/z = 685.3 [M+1]; 683.3 [M-1].
실시예 82. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00445
실시예 6(25 mg, 0.0416 mmol)을 무수 THF(1 mL) 중에 용해시켰다. 프로피온산(16 uL, 0.208 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(32 uL, 0.208 mmol)를 반응물에 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. DMAP(5 mg, 0.0416 mmol)를 첨가하고, 반응물을 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일로서 얻었으며, 이어서 이것을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.89 (s, 1H), 7.35 - 7.22 (m, 2H), 7.22 - 7.09 (m, 3H), 6.65 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.54 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.95 (bs, 2H), 5.87 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.81 (dd, J = 5.7, 3.9 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 3.9 ㎐, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.41 (d, J = 6.3 ㎐, 2H), 4.08 - 3.92 (m, 2H), 2.49 - 2.34 (m, 4H), 1.83 - 1.61 (m, 4H), 1.56 - 1.45 (m, 1H), 1.45 - 1.21 (m, 8H), 1.17 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.46 (s). MS m/z = 713.1 [M+1]; 711.2 [M-1].
실시예 83. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이벤조에이트
Figure pct00446
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL) 중 실시예 6(50 mg, 0.083 mmol)의 용액에 벤조산(31 mg, 0.25 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.039 mL, 0.25 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(10 mg, 0.083 mmol)을 첨가하였다. 4시간 동안 교반을 계속한 후, 아세토니트릴(1 mL)로 희석시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 8.00 (dt, J = 8.4, 1.1 ㎐, 4H), 7.95 (s, 1H), 7.63 (td, J = 7.4, 5.7 ㎐, 2H), 7.45 (t, J = 7.7 ㎐, 4H), 7.30 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.16 (d, J = 7.9 ㎐, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.79 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.38 - 6.15 (m, 4H), 5.95 (d, J = 3.9 ㎐, 1H), 4.74 - 4.44 (m, 3H), 4.23 (t, J = 11.0 ㎐, 1H), 3.98 - 3.80 (m, 1H), 1.82 - 1.58 (m, 5H), 1.50 (s, 1H), 1.42 - 1.21 (m, 7H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 2.49. LCMS: MS m/z = 809.32 [M+1]; tR = 1.28분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.539분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 84. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00447
실시예 1(10 mg, 0.0178 mmol)을 무수 THF(1 mL) 중에 용해시켰다. 아이소부티르산(6.6 uL, 0.0714 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(11 uL, 0.0714 mmol)를 반응물에 첨가하고, 15분 동안 교반하였다. DMAP(2 mg, 0.0178 mmol)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 추가의 아이소부티르산(7 uL, 0.0714 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(11 uL, 0.0714 mmol)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 메탄올(500 uL)을 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(15 mL)로 희석시키고, 염수(2 x 10 mL)로 세척하였다. 유기물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일로서 얻었으며, 이어서 이것을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.91 (s, 1H), 7.33 - 7.23 (m, 2H), 7.22 - 7.09 (m, 3H), 6.66 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.54 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.88 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.85 - 5.70 (m, 2H), 5.66 (d, J = 3.7 ㎐, 1H), 4.95 (p, J = 6.3 ㎐, 1H), 4.40 (d, J = 6.3 ㎐, 2H), 4.03 - 3.89 (m, 2H), 2.64 (m, 2H), 1.36 - 1.28 (m, 3H), 1.25 - 1.17 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.41 (s). MS m/z = 701.3 [M+1]; 699.4 [M-1].
실시예 85. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((벤질옥시)(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00448
아이소부티르산 무수물(0.073 mL, 0.44 mmol)과 4-다이메틸아미노피리딘(4 mg, 0.03 mmol)을 실온에서 2-메틸-테트라하이드로푸란(2.0 mL) 중 실시예 24(135 mg, 0.219 mmol)의 용액에 순차적으로 첨가하였다. 3.5시간 후에, 반응 혼합물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 직접 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (s, 0.6H), 7.78 (s, 0.4H), 7.38 - 7.26 (m, 5H), 6.84 - 6.82 (m, 1H), 6.78 - 6.74 (m, 1H), 5.95 (d, J = 5.8 ㎐, 0.4H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 0.6H), 5.86 - 5.79 (m, 1H), 5.71 - 5.66 (m, 1H), 5.06 - 4.98 (m, 2H), 4.45 - 4.28 (m, 2H), 4.05 - 3.75 (m, 3H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 1.49 - 1.13 (m, 20H), 0.87 - 0.81 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.73 (s), 7.64 (s). LCMS: MS m/z = 757.04 [M+1], tR = 1.57분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.787분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 86. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00449
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(0.4 mL) 중 실시예 25(15 mg, 0.025 mmol)의 용액에 아이소부티르산(22 mg, 0.25 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.039 mL, 0.25 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(3 mg, 0.025 mmol)을 첨가하였다. 4시간 동안 교반을 계속한 후, 아세토니트릴(1 mL)로 희석시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 7.91 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.20 (dd, J = 8.3, 6.8 ㎐, 3H), 6.78 (s, 2H), 6.49 (s, 2H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.67 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.49 - 4.33 (m, 2H), 4.31 - 4.16 (m, 1H), 4.04 - 3.84 (m, 3H), 2.64 (dp, J = 28.2, 7.0 ㎐, 2H), 1.46 (dt, J = 12.6, 6.3 ㎐, 1H), 1.38 - 1.21 (m, 8H), 1.24 - 1.11 (m, 11H), 0.86 (td, J = 7.5, 1.1 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 2.45. LCMS: MS m/z = 743.79 [M+1]; tR = 1.5분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.547분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 87. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소-1-((((1r,4S)-4-(트라이플루오로메틸)사이클로헥실)메톡시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸 프로파노에이트)
Figure pct00450
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL) 중 실시예 26(72 mg, 0.105 mmol)의 용액에 아이소부티르산(93 mg, 1.055 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.164 mL, 1.055 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(13 mg, 0.105 mmol)을 첨가하였다. 4시간 동안 교반을 계속한 후, 아세토니트릴(1 mL)로 희석시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 7.90 (d, J = 6.5 ㎐, 1H), 7.35 (s, 2H), 7.18 (dd, J = 12.9, 8.1 ㎐, 3H), 6.81 - 6.73 (m, 2H), 6.33 (s, 2H), 5.93 - 5.75 (m, 2H), 5.68 (dd, J = 6.8, 4.5 ㎐, 1H), 4.53 - 4.33 (m, 2H), 4.26 (m, 1H), 3.95 - 3.73 (m, 2H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.91 (d, J = 13.2 ㎐, 3H), 1.79 (s, 2H), 1.35 - 1.11 (m, 15H), 1.05 - 0.95 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 2.40, 2.35. 19F NMR (376 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ -74.83 (d, J = 8.6 ㎐). LCMS: MS m/z = 823.59 [M+1]; tR = 1.27분 (부 이성질체), 1.28분 (주 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.599분 (부 이성질체), 6.658분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 88. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00451
실시예 25(15 mg, 0.025 mmol)를 1 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시켰다. 아세트산(7 μL, 0.12 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(19 μL, 0.12 mmol)를 반응물에 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. DMAP(3 mg, 0.025 mmol)를 첨가하고, 반응물을 14시간 동안 교반하였다. 메탄올(1 mL)을 반응물에 첨가하고, 5분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 염수(3 x 5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일로서 얻었으며, 이어서 이것을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.90 (s, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 7.22 - 7.10 (m, 3H), 6.65 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.53 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.85 (m, 3H), 5.79 (dd, J = 5.7, 4.1 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 4.42 (d, J = 6.3 ㎐, 2H), 4.11 - 4.00 (m, 3H), 3.95 (m, 1H), 2.14 (s, 6H), 1.53 - 1.43 (m, 1H), 1.38 - 1.26 (m, 7H), 0.85 (t, J = 7.5 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.41 (s). LCMS: MS m/z = 701.3 [M+1]; 699.4 [M-1], tR = 1.32분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.39분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.738분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 89. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00452
THF(1 mL) 중 실시예 1(70 mg, 0.125 mmol), 아세트산(0.04 mL, 0.624 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.06 mL, 0.400 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(17 mg, 0.139 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 2H), 7.23 - 7.15 (m, 3H), 6.76 (q, J = 4.6 ㎐, 2H), 6.38 (s, 2H), 5.86 - 5.75 (m, 2H), 5.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.87 (p, J = 6.3 ㎐, 1H), 4.47 (dd, J = 11.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.42 - 4.30 (m, 2H), 3.86 (tq, J = 9.6, 7.1 ㎐, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.26 (dd, J = 7.1, 0.9 ㎐, 3H), 1.16 (d, J = 6.4 ㎐, 3H), 1.15 (d, J = 6.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.54. LCMS: MS m/z = 645.24 [M+1]; tR = 1.00분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.03분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 90. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00453
THF(1 mL) 중 실시예 1(70 mg, 0.125 mmol), 프로피온산(0.047 mL, 0.624 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.06 mL, 0.400 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(17 mg, 0.139 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 건조시키고, 진공 중에서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 40 내지 100% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (m, 2H), 7.24 - 7.16 (m, 3H), 6.80 - 6.72 (m, 2H), 6.45 (s, 2H), 5.90 - 5.80 (m, 2H), 5.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.87 (p, J = 6.3 ㎐, 1H), 4.53 - 4.44 (m, 2H), 4.40 (dt, J = 11.2, 5.6 ㎐, 1H), 3.87 (tq, J = 9.6, 7.1 ㎐, 1H), 2.51 - 2.36 (m, 4H), 1.26 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.19 - 1.07 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.57. LCMS: MS m/z = 673.29 [M+1]; tR = 1.10분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.45분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 91. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(사이클로부틸메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00454
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL) 중 실시예 2(60 mg, 0.102 mmol)의 용액에 프로피온산(38 mg, 0.511 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.08 mL, 0.511 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(12 mg, 0.102 mmol)을 첨가하였다. 1시간 동안 교반을 계속한 후, N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL)로 희석시켰다. 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 7.90 (d, J = 6.4 ㎐, 1H), 7.34 (td, J = 8.0, 3.2 ㎐, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.83 - 6.73 (m, 2H), 6.30 (s, 2H), 5.91 - 5.77 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 6.8, 4.6 ㎐, 1H), 4.54 - 4.32 (m, 2H), 4.24 (q, J = 12.3, 11.9 ㎐, 1H), 4.10 - 3.80 (m, 3H), 2.62 - 2.44 (m, 1H), 2.48 - 2.33 (m, 4H), 2.15 (s, 3H), 1.95 - 1.79 (m, 1H), 1.74 (q, J = 8.3 ㎐, 2H), 1.25 (ddd, J = 17.0, 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.13 (dtd, J = 17.3, 7.5, 2.6 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 2.42, 2.36 LCMS: MS m/z = 699.26 [M+1]; tR = 1.13 분 (부 이성질체), 1.28 분 (주 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.763분 (부 이성질체), 5.8분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(SFC AD-H, 5 um 21 x 250 mm, 헵탄 70%, 에탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00455
Figure pct00456
실시예 92. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.16 (ddd, J = 8.1, 2.2, 1.1 ㎐, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.51 (dd, J = 11.1, 5.8 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.1 ㎐, 1H), 4.10 - 3.94 (m, 2H), 3.91 - 3.78 (m, 1H), 2.58 (p, J = 7.5 ㎐, 1H), 2.53 - 2.35 (m, 4H), 2.06 - 1.67 (m, 6H), 1.31 - 1.09 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.05 LCMS: MS m/z = 699.30 [M+1], tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.736분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 93. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.43 (dd, J = 5.8, 4.3 ㎐, 2H), 4.01 (dd, J = 10.9, 6.8 ㎐, 1H), 3.96 - 3.85 (m, 2H), 2.62 - 2.43 (m, 2H), 2.47 - 2.34 (m, 3H), 1.99 (ddd, J = 10.6, 8.2, 4.8 ㎐, 2H), 1.96 - 1.77 (m, 2H), 1.80 - 1.66 (m, 2H), 1.28 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H), 1.15 (dt, J = 13.8, 7.5 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.01 LCMS: MS m/z = 699.29 [M+1], tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.793분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 94. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(사이클로부틸메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00457
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL) 중 실시예 2(60 mg, 0.102 mmol)의 용액에 아세트산(31 mg, 0.511 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.08 mL, 0.511 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(12 mg, 0.102 mmol)을 첨가하였다. 1시간 동안 교반을 계속한 후, N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL)로 희석시켰다. 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3 )δ 7.90 (d, J = 6.7 ㎐, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.83 - 6.73 (m, 2H), 6.30 (s, 2H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 6.5, 4.6 ㎐, 1H), 4.47 (ddd, J = 17.5, 11.2, 6.5 ㎐, 1H), 4.38 (ddd, J = 11.2, 8.8, 5.6 ㎐, 1H), 4.24 (q, J = 12.5, 12.0 ㎐, 1H), 4.10 - 3.83 (m, 3H), 2.56 (tt, J = 14.7, 7.3 ㎐, 1H), 2.15 (d, J = 3.3 ㎐, 6H), 1.95 - 1.79 (m, 1H), 1.80 - 1.68 (m, 2H), 1.25 (ddd, J = 17.2, 7.1, 1.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 2.42, 2.36 LCMS: MS m/z = 671.25 [M+1]; tR = 1.49분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.346분 (부 이성질체), 5.38분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(SFC AD-H, 5 um 21 x 250 mm, 헵탄 70%, 에탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00458
Figure pct00459
실시예 95. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.20 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.93 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.83 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.51 (dd, J = 11.1, 5.8 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.1 ㎐, 1H), 4.10 - 3.94 (m, 2H), 3.91 - 3.73 (m, 1H), 2.57 (dq, J = 14.6, 7.3 ㎐, 1H), 2.13 (d, J = 19.4 ㎐, 6H), 2.06 - 1.67 (m, 6H), 1.23 (dd, J = 7.1, 1.3 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.04. LCMS: MS m/z = 671.43 [M+1], tR = 1.03분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.343분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 96. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 8.6, 7.2 ㎐, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.87 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.79 (dd, J = 5.9, 4.9 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.43 (t, J = 5.6 ㎐, 2H), 4.01 (dd, J = 10.9, 6.7 ㎐, 1H), 3.90 (ddd, J = 10.1, 8.7, 6.8 ㎐, 2H), 2.55 (hept, J = 7.4 ㎐, 1H), 2.12 (d, J = 19.7 ㎐, 6H), 2.06 - 1.66 (m, 6H), 1.27 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.02. LCMS: MS m/z = 671.30 [M+1], tR = 1.03분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.376분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 97. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-(((페녹시((2-(피발로일옥시)에틸)아미노)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00460
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.14 mL, 0.87 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(21.0 mg, 0.174 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(1.0 mL) 중 실시예 11(100 mg, 0.174 mmol) 및 아이소부티르산(0.081 mL, 0.87 mmol)의 용액에 첨가하였다. 2시간 후에, 메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 0.55H), 7.80 (s, 0.45H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.21 - 7.12 (m, 3H), 6.88 - 6.82 (m, 1H), 6.78 - 6.73 (m, 1H), 5.94 (t, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.85 - 5.77 (m, 1H), 5.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.49 - 4.36 (m, 2H), 4.01 - 3.93 (m, 2H), 3.20 - 3.07 (m, 2H), 1.25 - 1.12 (m, 27H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 5.02 (s), 4.86 (s). LCMS: MS m/z = 715.47 [M+1], tR = 1.38분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.53분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.96분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 98. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(사이클로프로필메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00461
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL) 중 실시예 8(65 mg, 0.112 mmol)의 용액에 프로피온산(38 mg, 0.511 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.042 mL, 0.568 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(14 mg, 0.114 mmol)을 첨가하였다. 1시간 동안 교반을 계속한 후, N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL)로 희석시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 7.90 (d, J = 6.3 ㎐, 1H), 7.34 (td, J = 8.0, 3.4 ㎐, 2H), 7.20 (s, 1H), 7.25 - 7.14 (m, 2H), 6.83 - 6.72 (m, 2H), 6.28 (s, 2H), 5.92 - 5.77 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 7.2, 4.5 ㎐, 1H), 4.55 - 4.33 (m, 2H), 4.23 (d, J = 13.3 ㎐, 1H), 3.97 - 3.74 (m, 3H), 2.54 - 2.33 (m, 4H), 1.26 (ddd, J = 17.5, 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.13 (dtd, J = 17.6, 7.5, 2.6 ㎐, 7H), 0.51 (ddt, J = 8.4, 5.9, 4.4 ㎐, 2H), 0.24 (dq, J = 6.2, 4.5 ㎐, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 2.41, 2.37. LCMS: MS m/z = 685.26 [M+1]; tR = 1.07분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.476분 (부 이성질체), 5.515분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(SFC AD-H, 5 um 21 x 250 mm, 헵탄 70%, 에탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00462
Figure pct00463
실시예 99. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.71 (s, 1H), 7.25 - 7.17 (m, 2H), 7.08 (d, J = 7.5 ㎐, 3H), 6.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.88 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.76 (dd, J = 5.8, 4.5 ㎐, 1H), 5.60 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.43 (dd, J = 11.1, 5.8 ㎐, 1H), 4.34 (dd, J = 11.0, 5.0 ㎐, 1H), 3.86 - 3.68 (m, 3H), 2.46 - 2.26 (m, 4H), 1.14 (dd, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 1.06 (dt, J = 13.0, 7.5 ㎐, 7H), 0.45 - 0.36 (m, 2H), 0.19 - 0.12 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.1. LCMS: MS m/z = 685.26 [M+1], tR = 1.06분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.464분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 100. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 8.5, 7.4 ㎐, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.81 (dd, J = 5.9, 4.8 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.44 (dd, J = 5.8, 2.9 ㎐, 2H), 3.96 - 3.74 (m, 3H), 2.55 - 2.35 (m, 4H), 1.29 (dd, J = 7.2, 1.1 ㎐, 3H), 1.16-1.08 (dd, J = 13.9, 7.5 ㎐, 7H), 0.54 - 0.45 (m, 2H), 0.26 - 0.19 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.01. LCMS: MS m/z = 685.22 [M+1], tR = 1.06분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.506분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 101. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(사이클로프로필메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00464
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL) 중 실시예 8(65 mg, 0.114 mmol)의 용액에 아세트산(34 mg, 0.568 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.088 mL, 0.568 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(14 mg, 0.114 mmol)을 첨가하였다. 1시간 동안 교반을 계속한 후, N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL)로 희석시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 7.90 (d, J = 6.5 ㎐, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.83 - 6.72 (m, 2H), 6.29 (s, 2H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 6.9, 4.5 ㎐, 1H), 4.55 - 4.33 (m, 2H), 4.23 (d, J = 11.8 ㎐, 1H), 3.99 - 3.74 (m, 3H), 2.12 (m, 6H), 1.26 (ddd, J = 17.7, 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.13 - 0.97 (m, 1H), 0.51 (ddd, J = 8.2, 4.5, 1.6 ㎐, 2H), 0.25 (ddt, J = 9.2, 6.0, 4.4 ㎐, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3 ) δ 2.42, 2.36. LCMS: MS m/z = 657.20 [M+1]; tR = 0.98분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.051분 (부 이성질체), 5.088분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(SFC AD-H, 5 um 21 x 250 mm, 헵탄 70%, 에탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00465
Figure pct00466
실시예 102. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.58 (s, 1H), 7.08 (dd, J = 8.7, 7.1 ㎐, 2H), 6.98 - 6.89 (m, 3H), 6.63 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.55 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.72 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.62 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.47 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.30 (dd, J = 11.1, 5.8 ㎐, 1H), 4.21 (dd, J = 11.1, 5.0 ㎐, 1H), 3.73 - 3.55 (m, 3H), 1.91 (d, J = 19.4 ㎐, 6H), 1.01 (dd, J = 7.1, 1.3 ㎐, 3H), 0.86 (dddd, J = 15.2, 12.3, 7.8, 4.8 ㎐, 1H), 0.32 - 0.23 (m, 2H), 0.05 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.09. LCMS: MS m/z = 657.23 [M+1], tR = 0.96분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.040분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 103. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.61 (s, 1H), 7.13 - 7.04 (m, 2H), 7.02 - 6.90 (m, 3H), 6.62 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.52 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.66 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.57 (dd, J = 5.9, 4.9 ㎐, 1H), 5.46 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.29 - 4.14 (m, 2H), 3.74 - 3.58 (m, 2H), 3.57 (dd, J = 11.4, 7.3 ㎐, 1H), 1.90 (d, J = 20.1 ㎐, 6H), 1.07 (dd, J = 7.2, 1.0 ㎐, 3H), 0.91 - 0.76 (m, 1H), 0.32 - 0.21 (m, 2H), 0.05 (m, 2H); 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.04. LCMS: MS m/z = 657.28 [M+1], tR = 0.97분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.080분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 104. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-에톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00467
THF(1 mL) 중 실시예 29(70 mg, 0.128 mmol), 아세트산(0.04 mL, 0.64 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.06 mL, 0.39 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(16 mg, 0.128 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.39 - 7.29 (m, 2H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 6.76 (d, J = 3.8 ㎐, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.86 - 5.76 (m, 2H), 5.69 (d, J = 4.3 ㎐, 1H), 4.47 (dd, J = 11.2, 6.6 ㎐, 1H), 4.38 (dd, J = 11.2, 5.7 ㎐, 1H), 4.10 - 3.96 (m, 2H), 3.90 (tq, J = 9.6, 7.1 ㎐, 1H), 2.15 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.26 (dd, J = 7.1, 0.9 ㎐, 3H), 1.16 (t, J = 7.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.48. LCMS: MS m/z = 631.18 [M+1]; tR = 0.94분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.80분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 105. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-에톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00468
THF(1 mL) 중 실시예 29(70 mg, 0.128 mmol), 프로피온산(0.05 mL, 0.64 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.06 mL, 0.39 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(16 mg, 0.128 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.20 (ddd, J = 8.1, 2.4, 1.2 ㎐, 3H), 6.81 - 6.69 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.87 - 5.76 (m, 2H), 5.68 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 21.1, 6.0 ㎐, 2H), 4.12 - 3.96 (m, 2H), 3.89 (td, J = 9.6, 7.0 ㎐, 1H), 2.45 (qd, J = 7.5, 3.4 ㎐, 2H), 2.38 (q, J = 7.6 ㎐, 2H), 1.29 - 1.24 (m, 3H), 1.15 (td, J = 7.4, 4.3 ㎐, 6H), 1.10 (t, J = 7.6 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.49. LCMS: MS m/z = 659.30 [M+1]; tR = 1.04분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.25분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 106. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00469
실시예 1(40 mg, 0.071 mmol)을 3 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시켰다. 아이소부티르산(26 μL, 0.27 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(44 μL, 0.29 mmol)를 반응물에 첨가하고, 이것을 15분 동안 교반하였다. DMAP(8.7 mg, 0.71 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 추가의 아이소부티르산(26 μL, 0.29 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(44 μL, 0.286 mmol)를 첨가하고, 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 염수(4 x 5 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 80% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일로서 얻었으며, 이어서 이것을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.12 (s, 1H), 7.32 - 7.20 (m, 3H), 7.20 - 7.09 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.81 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.77 (dd, J = 5.8, 3.8 ㎐, 1H), 5.71 (d, J = 3.7 ㎐, 1H), 4.95 (m, 1H), 4.41 (d, J = 6.1 ㎐, 2H), 4.05 - 3.91 (m, 2H), 3.02 (m, 1H), 2.63 (m, 2H), 1.32 (d, J = 6.4 ㎐, 3H), 1.30 - 1.25 (m, 6H), 1.21 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.41. LCMS: MS m/z = 771.3 [M+1]; 769.5 [M-1], tR = 1.46분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 6.686분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 107. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)메톡시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴) 옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00470
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL) 중 실시예 20(75 mg, 0.122 mmol)의 용액에 프로피온산(45 mg, 0.608 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.095 mL, 0.608 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(15 mg, 0.122 mmol)을 첨가하였다. 1시간 동안 교반을 계속한 후, N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL)로 희석시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (d, J = 8.8 ㎐, 1H), 7.31 (s, 2H), 7.18 (dd, J = 15.0, 7.9 ㎐, 3H), 6.88 - 6.72 (m, 2H), 5.93 - 5.76 (m, 2H), 5.69 (t, J = 4.2 ㎐, 1H), 4.54 - 4.37 (m, 2H), 3.95 - 3.79 (m, 5H), 3.3 (m, 2H), 2.50 - 2.35 (m, 4H), 1.85 (s, 1H), 1.55 (d, J = 13.0 ㎐, 2H), 1.31 - 1.08 (m, 11H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 2.99, 3.04. LCMS: MS m/z = 729.25 [M+1]; ]; tR = 1.00분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.159분 (부 이성질체), 5.216분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(SFC AD-H, 5 um 21 x 250 mm, 헵탄 70%, 에탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00471
Figure pct00472
실시예 108. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.86 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.46 (ddd, J = 36.1, 11.1, 5.5 ㎐, 2H), 3.94 - 3.79 (m, 5H), 3.3 (m, 2H), 2.54 - 2.36 (m, 4H), 1.86 (dp, J = 10.6, 3.8 ㎐, 1H), 1.64 - 1.46 (m, 2H), 1.35 - 1.09 (m, 11H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.03. LCMS: MS m/z = 729.30 [M+1], tR = 1.00분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.151분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 109. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.89 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.8 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.50 - 4.37 (m, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 5H), 3.34 (m, 2H), 2.53 - 2.35 (m, 4H), 1.95 - 1.68 (m, 1H), 1.55 (d, J = 13.3 ㎐, 2H), 1.34 - 1.22 (m, 5H), 1.15 (dt, J = 14.3, 7.5 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 2.98. LCMS: MS m/z = 729.27 [M+1], tR = 1.01분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.214분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 110. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)메톡시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴) 옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00473
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL) 중 실시예 20(75 mg, 0.122 mmol)의 용액에 아세트산(37 mg, 0.608 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.095 mL, 0.608 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(15 mg, 0.122 mmol)을 첨가하였다. 1시간 동안 교반을 계속한 후, N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL)로 희석시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (d, J = 9.3 ㎐, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.88 - 6.71 (m, 2H), 5.90 - 5.75 (m, 2H), 5.69 (dd, J = 4.8, 3.7 ㎐, 1H), 4.56 - 4.37 (m, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 3H), 2.13 (dd, J = 20.6, 4.2 ㎐, 6H), 1.84 (s, 1H), 1.55 (d, J = 13.1 ㎐, 2H), 1.34 - 1.20 (m, 5H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 2.99, 3.03. LCMS: MS m/z = 701.27 [M+1]; ]; tR = 0.90 내지 0.91분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.726분 (부 이성질체), 4.786분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(SFC AD-H, 5 um 21 x 250 mm, 헵탄 70%, 에탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00474
Figure pct00475
실시예 111. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.94 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 5.9, 4.8 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.51 (dd, J = 11.1, 5.9 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.1 ㎐, 1H), 3.94 - 3.80 (m, 5H), 3.34 (d, J = 11.6 ㎐, 2H), 2.13 (d, J = 20.4 ㎐, 6H), 1.86 (s, 1H), 1.56 (d, J = 13.6 ㎐, 2H), 1.35 - 1.20 (m, 5H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.02. LCMS: MS m/z = 701.28 [M+1], tR = 0.89분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.721분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 112. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.7, 7.2 ㎐, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.87 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.78 (dd, J = 5.9, 4.9 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.44 (t, J = 5.5 ㎐, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 5H), 3.35 (dt, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.83 (ddd, J = 11.6, 7.8, 5.0 ㎐, 1H), 1.55 (d, J = 11.8 ㎐, 2H), 1.34 - 1.18 (m, 5H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 2.99. LCMS: MS m/z = 701.28 [M+1], tR = 0.90분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.779분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 113. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00476
THF(3 mL) 중 실시예 30(47 mg, 0.069 mmol), 아세트산(0.05 mL, 0.874 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.05 mL, 0.319 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(16 mg, 0.131 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.91 (s, 1H), 6.82 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.48 (s, 2H), 5.80 (d, J = 2.4 ㎐, 2H), 5.71 - 5.64 (m, 1H), 4.70 (qd, J = 8.5, 3.8 ㎐, 1H), 4.33 (dd, J = 11.3, 7.1 ㎐, 1H), 4.22 (ddd, J = 11.3, 5.8, 2.3 ㎐, 1H), 4.05 (td, J = 11.0, 5.7 ㎐, 1H), 3.94 (ddd, J = 20.8, 10.9, 5.6 ㎐, 1H), 3.88 - 3.72 (m, 4H), 2.16 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.78 (m, 2H), 1.73 - 1.65 (m, 2H), 1.51 (m, 2H), 1.35 (m, 9H), 1.26 (m, 6H), 0.88 (m, 6H). LCMS: MS m/z = 764.54 [M+1]; tR = 1.19분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.05분 (37%), 6.07분 (60%); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 114. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(((2S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00477
THF(3 mL) 중 실시예 7(60 mg, 0.088 mmol), 아세트산(0.05 mL, 0.874 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.05 mL, 0.319 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(16 mg, 0.131 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.91 (s, 1H), 6.82 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.46 (s, 2H), 5.84 - 5.76 (m, 2H), 5.72 - 5.63 (m, 1H), δ 4.33 (dd, J = 11.3, 7.1 ㎐, 1H), 4.22 (dd, J = 11.3, 5.8 ㎐, 1H), 4.10 - 3.89 (m, 4H), 3.88 - 3.73 (m, 4H), 2.16 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.57 - 1.43 (m, 2H), 1.34 (hd, J = 7.3, 2.0 ㎐, 8H), 1.29 - 1.23 (m, 6H), 0.88 (td, J = 7.5, 4.6 ㎐, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 12.10. LCMS: MS m/z = 766.51 [M+1]; tR = 1.22분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.25분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 115. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((1-(2,2,2-트라이플루오로에틸)피페리딘-4-일)메톡시)프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00478
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL) 중 실시예 31(100 mg, 0.143 mmol)의 용액에 프로피온산(53 mg, 0.717 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.112 mL, 0.717 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(18 mg, 0.143 mmol)을 첨가하였다. 1시간 동안 교반을 계속한 후, N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL)로 희석시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (d, J = 8.9 ㎐, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 3H), 6.88 - 6.71 (m, 2H), 5.92 - 5.76 (m, 2H), 5.69 (t, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 2H), 3.95 - 3.78 (m, 3H), 3.09 - 2.88 (m, 4H), 2.49 - 2.35 (m, 4H), 2.26 (t, J = 11.8 ㎐, 2H), 1.61 (d, J = 12.3 ㎐, 3H), 1.35 - 1.08 (m, 11H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 2.99, 3.05. LCMS: MS m/z = 405.90 [M+1]; ]; tR = 1.01 내지 1.02분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.633분 (부 이성질체), 4.677분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(SFC AD-H, 5 um 21 x 250 mm, 헵탄 70%, 에탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00479
Figure pct00480
실시예 116. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.56 - 4.37 (m, 2H), 3.94 - 3.78 (m, 3H), 3.04 - 2.87 (m, 4H), 2.53 - 2.35 (m, 4H), 2.26 (t, J = 12.0 ㎐, 2H), 1.61 (s, 3H), 1.35 - 1.20 (m, 5H), 1.15 (dt, J = 13.2, 7.5 ㎐, 6H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -71.22 (t, J = 10.0 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.05. LCMS: MS m/z = 405.89 [M+1], tR = 1.03분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.628분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 117. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.6, 7.1 ㎐, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.89 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.8 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.50 - 4.37 (m, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 3H), 3.04 - 2.88 (m, 4H), 2.53 - 2.35 (m, 4H), 2.26 (t, J = 11.7 ㎐, 2H), 1.65 - 1.51 (m, 3H), 1.34 - 1.08 (m, 11H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -71.22 (t, J = 9.9 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 2.99. LCMS: MS m/z = 405.88 [M+1], tR = 1.04분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.673분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 118. (2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((1-(2,2,2-트라이플루오로에틸)피페리딘-4-일)메톡시)프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00481
무수 N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL) 중 실시예 31(100 mg, 0.143 mmol)의 용액에 아세트산(43 mg, 0.717 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.112 mL, 0.717 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반한 후, 4-다이메틸아미노 피리딘(18 mg, 0.143 mmol)을 첨가하였다. 1시간 동안 교반을 계속한 후, N,N'-다이메틸포름아미드(1 mL)로 희석시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 30분 전개에서 25% 내지 95% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (d, J = 10.0 ㎐, 1H), 7.31 (ddd, J = 10.2, 7.4, 2.9 ㎐, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.89 - 6.72 (m, 2H), 5.90 - 5.75 (m, 2H), 5.69 (t, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.56 - 4.38 (m, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 3H), 3.05 - 2.83 (m, 4H), 2.26 (t, J = 11.8 ㎐, 2H), 2.13 (dd, J = 20.1, 4.5 ㎐, 6H), 1.65 - 1.51 (m, 3H), 1.26 (ddd, J = 20.1, 7.2, 1.2 ㎐, 5H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.02, 3.06. 19F NMR (377 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -71.22 (t, J = 9.9 ㎐) LCMS: MS m/z = 391.90 [M+1]; ]; tR = 0.89분 (부 이성질체) - 0.91분 (주 이성질체); LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.217분 (부 이성질체), 4.258분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(SFC AD-H, 5 um 21 x 250 mm, 헵탄 70%, 에탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00482
Figure pct00483
실시예 119. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.94 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 5.9, 4.8 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.51 (dd, J = 11.1, 5.9 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.1 ㎐, 1H), 3.94 - 3.78 (m, 3H), 2.95 (dd, J = 28.2, 10.6 ㎐, 4H), 2.26 (t, J = 11.9 ㎐, 2H), 2.13 (d, J = 19.8 ㎐, 6H), 1.60 (s, 3H), 1.34 - 1.20 (m, 5H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -71.21 (t, J = 10.0 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.04. LCMS: MS m/z = 391.83 [M+1], tR = 0.91분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.212분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 120. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.87 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.79 (dd, J = 5.9, 5.0 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.44 (t, J = 5.5 ㎐, 2H), 3.97 - 3.78 (m, 3H), 3.04 - 2.88 (m, 4H), 2.26 (t, J = 11.8 ㎐, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.60 (d, J = 12.8 ㎐, 3H), 1.35 - 1.20 (m, 5H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ -71.22 (t, J = 9.9 ㎐). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.00. LCMS: MS m/z = 391.87 [M+1], tR = 0.92분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.256분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 121. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(((S)-1-사이클로헥실옥시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00484
THF(3 mL) 중 실시예 14(52 mg, 0.077 mmol), 아세트산(0.0544 mL, 0.762 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.044 mL, 0.278 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(15 mg, 0.124 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.92 (s, 1H), 6.82 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.45 (s, 2H), 5.80 (m, 2H), 5.68 (t, J = 2.3 ㎐, 1H), 4.69 (qd, J = 8.7, 3.8 ㎐, 2H), 4.33 (dd, J = 11.3, 7.2 ㎐, 1H), 4.22 (dd, J = 11.3, 5.8 ㎐, 1H), 3.88 - 3.67 (m, 4H), 2.16 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.86 - 1.59 (m, 8H), 1.51 (m, 2H), 1.38 (m, 10H), 1.25 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 12.16. LCMS: MS m/z = 762.53 [M+1]; tR = 1.14분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.86분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 122. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴) 옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 (2S,2'S)-비스(2-아미노-3-메틸부타노에이트)
Figure pct00485
실시예 6(50 mg, 0.083 mmol)을 1 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시켰다. Boc-L-발린(72 mg, 0.33 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(52 μL, 0.33 mmol)를 반응물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 20분 동안 교반하였다. DMAP(10 mg, 0.083 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 메탄올(0.5 mL)을 반응물에 첨가하고, 25분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 2% 시트르산 수용액(10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN(5 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. 진한 HCl(aq)(300 μL)을 적가하고, 반응 혼합물을 4시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 분취용 HPLC 컬럼 상에 직접 로딩하고, 산 변형제를 사용하지 않고서 5 내지 100% MeCN의 선형 구배로 용리하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 냉동 건조시켰다. 생성된 물질을, 변형제로서 TFA를 사용하는 분취용 HPLC(5 내지 100% MeCN/물)로 재정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.03 (s, 1H), 7.37 - 7.29 (m, 2H), 7.27 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 7.24 - 7.15 (m, 3H), 6.99 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 6.32 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 6.04 (dd, J = 5.8, 3.2 ㎐, 1H), 5.87 (d, J = 3.2 ㎐, 1H), 4.59 (m, 1H), 4.50 (qd, J = 11.5, 6.4 ㎐, 2H), 4.14 (dd, J = 9.7, 4.1 ㎐, 2H), 3.79 (dq, J = 10.1, 7.1 ㎐, 1H), 2.51 (m, 2H), 1.79 - 1.60 (m, 4H), 1.57 - 1.44 (m, 1H), 1.44 - 1.20 (m, 8H), 1.20 - 1.06 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.15 (s). LCMS: MS m/z = 799.3 [M+1]; 797.6 [M-1], tR = 1.00분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.65분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.472분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 123. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이프로피오네이트테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-아이소프로필 L-알라니네이트 포스페이트
Figure pct00486
3 mL의 THF 중에 실시예 34(20 mg, 0.033 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 프로피온산(20 mg, 0.27 mmol) 및 DIC(17 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(8.2 mg, 0.07 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.91 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.82 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.00 - 4.90 (m, 1H), 4.90 - 4.83 (m, 1H), 4.35 (dd, J = 11.2, 6.8 ㎐, 1H), 4.27 (dd, J = 11.2, 5.2 ㎐, 1H), 3.82 (dp, J = 9.2, 7.1 ㎐, 2H), 2.56 - 2.34 (m, 4H), 1.35 - 1.07 (m, 24H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.51. LCMS: MS m/z = 710.29 [M+1], tR = 1.34분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.14분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 124. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이프로피오네이트테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-에틸 L-알라니네이트 포스페이트
Figure pct00487
3 mL의 THF 중에 실시예 35(21 mg, 0.037 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 프로피온산(22 mg, 0.30 mmol) 및 DIC(19 mg, 0.15 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(9 mg, 0.07 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.93 (s, 1H), 7.00 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.89 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.88 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.36 (dd, J = 11.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.27 (dd, J = 11.2, 5.1 ㎐, 1H), 4.11 (dp, J = 18.8, 7.1 ㎐, 4H), 3.89 - 3.75 (m, 2H), 2.58 - 2.32 (m, 4H), 1.37 - 1.04 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.49. LCMS: MS m/z = 682.14 [M+1], tR = 1.25분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.92분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 125. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이프로피오네이트테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-사이클로부틸메틸 L-알라니네이트 포스페이트
Figure pct00488
3 mL의 THF 중에 실시예 36(17 mg, 0.026 mmol)을 용해시키고, 이 용액에 프로피온산(15.5 mg, 0.21 mmol) 및 DIC(13 mg, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(6 mg, 0.05 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.86 (s, 1H), 6.87 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.82 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.83 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 11.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.26 (dd, J = 11.2, 5.1 ㎐, 1H), 4.15 - 3.81 (m, 6H), 2.65 - 2.34 (m, 6H), 2.02 (dq, J = 13.7, 7.0 ㎐, 4H), 1.96 - 1.65 (m, 8H), 1.29 (d, J = 7.1 ㎐, 6H), 1.16 (dt, J = 21.0, 7.5 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.44. LCMS: MS m/z = 762.36 [M+1], tR = 1.47분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.51분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 126. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-(벤질옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00489
실시예 37(25 mg, 0.041 mmol)을 1.5 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시켰다. 아세트산(12 μL, 0.205 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(32 μL, 0.205 mmol)를 반응물에 첨가하고, 이것을 30분 동안 교반하였다. DMAP(5 mg, 0.041 mmol)를 첨가하고, 반응물을 14시간 동안 교반하였다. 추가의 아세트산(5 μL) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(12 μL)를 첨가하고, 반응물을 45분 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(2 x 5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일로서 얻었으며, 이어서 이것을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 7.86 (m, 1H), 7.36 - 7.21 (m, 7H), 7.21 - 7.07 (m, 3H), 6.63 (m, 1H), 6.50 (m, 1H), 6.02 (bs, 2H), 5.95 - 5.75 (m, 2H), 5.68 (m, 1H), 5.16 - 4.98 (m, 2H), 4.58 - 4.19 (m, 3H), 4.11 - 3.97 (m, 1H), 2.14 (m, 6H), 1.31 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ 2.32, 2.33. LCMS: MS m/z = 693.2 [M+1]; 691.4 [M-1], tR = 1.32분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.16분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.287, 5.309분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 127.
Figure pct00490
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.086 mL, 0.55 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(14.0 mg, 0.11 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(1.0 mL) 중 실시예 38(60 mg, 0.110 mmol) 및 아세트산(0.032 mL, 0.55 mmol)의 용액에 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물 및 트라이아세테이트 화합물 실시예 128의 혼합물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.87 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.86 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.93 - 5.80 (m, 2H), 5.69 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 11.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.26 (dd, J = 11.2, 5.1 ㎐, 1H), 3.91 - 3.76 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.31 - 1.22 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 13.49 (s). LCMS: MS m/z = 626.32 [M+1], tR = 1.07분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.38분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.93분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 128.
Figure pct00491
실시예 127의 방법에 의해 제조된 트라이아세테이트. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.25 (s, 1H), 7.21 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 7.05 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.89 - 5.82 (m, 2H), 5.78 (d, J = 3.9 ㎐, 1H), 4.36 (dd, J = 11.2, 6.6 ㎐, 1H), 4.28 (dd, J = 11.2, 5.1 ㎐, 1H), 3.92 - 3.77 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.32 - 1.23 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 13.48 (s). LCMS: MS m/z = 668.08 [M+1], tR = 1.11분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.66분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.28분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 129. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00492
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.307 mL, 1.97 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(48.0 mg, 0.394 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(2.0 mL) 중 실시예 39(210 mg, 0.394 mmol) 및 아세트산(0.113 mL, 1.97 mmol)의 용액에 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (s, 0.66H), 7.80 (s, 0.33H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.22 - 7.12 (m, 3H), 6.86 - 6.81 (m, 1H), 6.78 - 6.71 (m, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 ㎐, 0.33H), 5.89 (d, J = 5.9 ㎐, 0.66H), 5.87 - 5.78 (m, 1H), 5.71 - 5.68 (m, 1H), 4.54 - 4.35 (m, 2H), 3.95 - 3.75 (m, 1H), 3.62 (s, 1H), 3.60 (s, 2H), 2.16 (s, 1H), 2.15 (s, 2H), 2.11 (s, 1H), 2.10 (s, 2H), 1.27 (dd, J = 7.2, 1.1 ㎐, 2H), 1.21 (dd, J = 7.2, 1.3 ㎐, 1H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.02 (s), 3.00 (s). LCMS: MS m/z = 617.16 [M+1], tR = 1.18분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.74분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.513분 (부 이성질체), 4.570분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 SFC(Chiralpak ADH, 30% 에탄올)를 통해 정제하였다.
실시예 130. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((R)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00493
실시예 129의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.34 - 7.24 (m, 2H), 7.19 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.95 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.70 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.52 (dd, J = 11.1, 5.9 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 4.9 ㎐, 1H), 3.80 (dq, J = 9.4, 7.1 ㎐, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.21 (dd, J = 7.2, 1.3 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.00 (s). LCMS: MS m/z = 617.16 [M+1], tR = 1.18분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLCtR = 4.51분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 131. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00494
실시예 129의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.82 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.89 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.81 (dd, J = 5.9, 4.9 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.49 - 4.37 (m, 2H), 3.96 - 3.83 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.27 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.02 (s). LCMS: MS m/z = 617.16 [M+1], tR = 1.18분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLCtR = 4.57분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 132. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아세트아미도피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00495
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.307 mL, 1.97 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(48.0 mg, 0.394 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(2.0 mL) 중 실시예 39(210 mg, 0.394 mmol) 및 아세트산(0.113 mL, 1.97 mmol)의 용액에 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.20 (s, 0.6H), 8.18 (s, 0.4H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.99 (d, J = 4.8 ㎐, 0.4H), 6.95 (d, J = 4.7 ㎐, 0.6H), 5.93 - 5.76 (m, 2H), 4.57 - 4.37 (m, 2H), 3.95 - 3.75 (m, 1H), 3.63 (s, 1.2H), 3.61 (s, 1.8H), 2.38 (d, J = 1.7 ㎐, 3H), 2.17 (s, 1.2H), 2.16 (s, 1.8H), 2.11 (s, 1.2H), 2.10 (s, 1.8H), 1.28 (dd, J = 7.2, 1.1 ㎐, 1.8H), 1.23 (dd, J = 7.2, 1.3 ㎐, 1.2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.04 (s), 3.02 (s). LCMS: MS m/z = 659.24 [M+1], tR = 1.22분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.38분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.92분 (부 이성질체), 4.95분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 133. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이아세테이트테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-아이소프로필 L-알라니네이트 포스페이트
Figure pct00496
((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-아이소프로필 L-알라니네이트 포스페이트 실시예 34(40 mg, 0.067 mmol)를 3 mL의 THF 중에 용해시키고, 이 용액에 아세트산(32 mg, 0.54 mmol) 및 DIC(34 mg, 0.27 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(16 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.86 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.81 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.88 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.82 (dd, J = 6.0, 4.8 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.92 (dp, J = 27.0, 6.3 ㎐, 2H), 4.36 (dd, J = 11.2, 6.8 ㎐, 1H), 4.27 (dd, J = 11.2, 5.2 ㎐, 1H), 3.82 (dt, J = 9.1, 7.2 ㎐, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.34 - 1.09 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.52. LCMS: MS m/z = 682.40 [M+1], tR = 1.25분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.02분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 134. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이아세테이트테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-에틸 L-알라니네이트 포스페이트
Figure pct00497
3 mL의 THF 중에 실시예 35(30 mg, 0.053 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 아세트산(25 mg, 0.42 mmol) 및 DIC(27 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(13 mg, 0.11 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.86 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.82 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.88 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.83 (dd, J = 6.0, 4.8 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 11.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.26 (dd, J = 11.2, 5.1 ㎐, 1H), 4.19 - 3.99 (m, 4H), 3.84 (dq, J = 9.2, 7.1 ㎐, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.27 (dt, J = 7.1, 1.1 ㎐, 6H), 1.22 (dt, J = 14.1, 7.1 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.50. LCMS: MS m/z = 654.35 [M+1], tR = 1.17분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.58분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 135. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((2S)-1-((1-에틸-3,3-다이플루오로피페리딘-4-일)옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00498
1-에틸-3,3-다이플루오로피페리딘-4-일 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시) 포스포릴)-L-알라니네이트. THF(2 mL) 중 중간체 4(70 mg, 0.211 mmol), 중간체 37(130 mg, 0.254 mmol), 및 MgCl2(30 mg, 0.317 mmol)의 혼합물에 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.14 mL, 0.574 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하고, 냉각시키고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 5% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 아세토니드 중간체를 얻었으며, 이것을 ACN(3 mL) 중에 용해시키고, c-HCl(0.1 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, EtOAc로 희석시키고, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, 메틸렌 클로라이드로 수회 동시증발시키고, 다음 반응에 사용하였다.
Figure pct00499
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((2S)-1-((1-에틸-3,3-다이플루오로피페리딘-4-일)옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트. THF(2 mL) 중 ((((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라닐)옥시)-1-에틸피페리딘 (44 mg, 0.066 mmol, 조 물질), 프로피온산(0.026 mL, 0.331 mmol), 및 N,N-다이아이소부틸카르보다이이미드(0.03 mL, 0.193 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(8.08 mg, 0.066 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (m, 1H), 7.34 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.82 - 6.71 (m, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.93 - 5.76 (m, 2H), 5.73 - 5.66 (m, 1H), 5.08 - 4.89 (m, 1H), 4.53 - 4.32 (m, 3H), 4.00 (m, 1H), 2.82 (m, 1H), 2.70 - 2.51 (m, 1H), 2.50 - 2.28 (m, 8H), 1.95 - 1.82 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.33 - 1.24 (m, 3H), 1.13 (m, 6H), 1.06 - 0.99 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.34, 2.31, 2.25. 19F NMR (376 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ -110.35 (d, J = 51.7 ㎐), -110.99 (d, J = 54.2 ㎐), 166.55. LCMS: MS m/z = 778.27 [M+1]; tR = 1.01분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.38, 4.41, 4.44분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 136. (2R,3S,4S,5S)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-아미노사이클로헥실) 옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00500
실시예 33(142 mg, 0.195 mmol)을 5 mL의 다이옥산 및 5 mL의 물 중에 용해시키고, 실온에서 교반하였다. 0.1 M 탄산나트륨 용액을 첨가하여 pH 9 내지 10을 얻었다. Boc 무수물(47 mg, 0.214 mmol)을 1 mL의 다이옥산 중에 용해시키고, 반응 혼합물에 첨가하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 염수(2 x 10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 다이클로로메탄 중 0 내지 5% 메탄올)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 모노 Boc 보호된 물질을 얻었다. 모노 Boc 보호된 물질(57 mg, 0.08 mmol)을 2 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시켰다. 아이소부티르산(30 μL, 0.32 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(50 μL, 0.32 mmol)를 반응물에 첨가하고, 25분 동안 교반하였다. DMAP(10 mg, 0.08 mmol)를 첨가하고, 16시간 동안 교반하였다. 추가의 아이소부티르산(30 μL) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(50 μL)를 반응물에 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 염수(4 x 5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 물질을 다이클로로메탄(2 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. TFA(200 μL)를 적가하고, 혼합물을 1.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 트라이에틸아민을 적가하여 pH 3 내지 4를 얻었다. 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 조 잔류물을 MeOH 중에 용해시키고, 중성 조건 하에서 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.84 (m, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.91 (m, 1H), 6.77 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.82 (m, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.67 (m, 1H), 4.57 - 4.37 (m, 2H), 3.96 - 3.78 (m, 1H), 3.08 (m, 1H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 2.13 - 1.94 (m, 4H), 1.57 - 1.37 (m, 4H), 1.34 - 1.06 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.00, 3.07. LCMS: MS m/z = 756.4[M+1]; 754.5 [M-1], tR = 1.19분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.80분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.671, 4.727분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 137. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이아이소부틸레이트테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-에틸 L-알라니네이트 포스페이트.
Figure pct00501
3 mL의 THF 중에 실시예 35(36 mg, 0.063 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 아이소부티르산(45 mg, 0.51 mmol) 및 DIC(32 mg, 0.04 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(15 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.34 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 7.05 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.71 (d, J = 4.1 ㎐, 1H), 4.37 (dd, J = 11.3, 6.6 ㎐, 1H), 4.29 (dd, J = 11.3, 5.2 ㎐, 1H), 4.21 - 4.02 (m, 4H), 3.90 - 3.75 (m, 2H), 2.78 - 2.66 (m, 1H), 2.66 - 2.55 (m, 1H), 1.31 (ddd, J = 6.9, 5.7, 0.9 ㎐, 6H), 1.27 - 1.09 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.47. LCMS: MS m/z = 710.36 [M+1], tR = 1.34분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.12분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 138. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00502
실시예 39(54 mg, 0.1 mmol)를 2 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시켰다. 아이소부티르산(37 μL, 0.4 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(62 μL, 0.4 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. DMAP(12 mg, 0.1 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 산 변형제를 사용하지 않는 분취용 HPLC(5 내지 100% MeCN/물)로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 에틸 아세테이트(15 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 염수(2 x 10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 물질을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.81 (m, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (m, 1H), 6.75 (m, 1H), 5.95 (m, 1H), 5.83 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 4.58 - 4.34 (m, 2H), 3.98 - 3.74 (m, 1H), 3.61 (m, 3H), 2.74 - 2.52 (m, 2H), 1.33 - 1.09 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.04. LCMS: MS m/z = 673.2 [M+1]; 671.3 [M-1], tR = 1.37분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.24분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.415, 5.469분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak AD-H, 150 x 4.6 mm, SFC 35% 아이소프로필 알코올 등용매 용리)를 통해 정제하였다.
실시예 139. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((R)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00503
실시예 138의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.16 (m, 3H), 6.88 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.8, 4.3 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.3 ㎐, 1H), 4.57 - 4.36 (m, 2H), 3.80 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.27 - 1.06 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.02 (s). MS m/z = 673.2 [M+1]. HPLC: tR = 5.406분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 140. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00504
실시예 138의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.84 (s, 1H), 7.36 - 7.23 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.52 - 4.37 (m, 2H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.73 - 2.55 (m, 2H), 1.35 - 1.07 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.03 (s). MS m/z = 673.2 [M+1] HPLC: tR = 5.463분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 141. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00505
실시예 39(54 mg, 0.1 mmol)를 2 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시켰다. 프로피온산(30 μL, 0.4 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(62 μL, 0.4 mmol)를 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. DMAP(12 mg, 0.1 mmol)를 첨가하고, 16시간 동안 교반하였다. 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. 조 물질을 산 변형제를 사용하지 않는 분취용 HPLC(5 내지 100% MeCN/물)로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 에틸 아세테이트(15 mL)로 추출하였다. 유기 추출물을 염수(2 x 10 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 물질을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.86 (m, 1H), 7.36 - 7.24 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.97 (m, 1H), 6.81 (m, 1H), 5.99 - 5.75 (m, 2H), 5.71 (m, 1H), 4.57 - 4.38 (m, 2H), 3.96 - 3.71 (m, 1H), 3.62 (m, 3H), 2.55 - 2.34 (m, 4H), 1.34 - 1.03 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.03. LCMS: MS m/z = 645.2 [M+1]; 643.3 [M-1], tR = 1.24분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.00분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.986, 5.041분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IF, 150 x 4.6 mm, SFC 30% 에탄올 등용매 용리)를 통해 정제하였다.
실시예 142. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((R)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00506
실시예 141의 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.80 (s, 1H), 7.35 - 7.23 (m, 2H), 7.21 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.98 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.87 (dd, J = 5.8, 4.4 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.56 - 4.37 (m, 2H), 3.80 (m, 1H), 3.63 (s, 3H), 2.55 - 2.36 (m, 4H), 1.24 - 1.10 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.01 (s). HPLC: tR = 4.982분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 143. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00507
실시예 141의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.82 (dd, J = 5.9, 4.8 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.51 - 4.36 (m, 2H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.54 - 2.35 (m, 4H), 1.27 (d, J = 7.1, 3H), 1.20 - 1.09 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.02 (s). HPLC: tR = 5.043분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 144. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-에톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00508
다이올 실시예 29(54 mg, 0.099 mmol) 및 아이소부티르산(70 mg, 0.8 mmol)을 THF(3 mL) 중에 용해시키고, N,N'-다이사이클로헥실카르보다이이미드(82 mg, 0.4 mmol)를 아르곤 하에서 실온에서 첨가하였다. 이 용액을 5분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(24 mg, 0.19 mmol)를 첨가하였다. 50분 동안 교반한 후에, 반응물을 MeOH(0.5 mL)로 켄칭하고, 휘발성 물질을 제거하고, 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 8.5, 7.3 ㎐, 2H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.66 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.43 (dd, J = 5.7, 2.6 ㎐, 2H), 4.11 - 3.97 (m, 2H), 2.64 (dp, J = 17.4, 7.0 ㎐, 2H), 1.32 - 1.06 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.05. LCMS: MS m/z = 687.42 [M+1], tR = 1.41분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.353분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 145. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아이소부티르아미도피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이아이소부틸레이트테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-에틸 L-알라니네이트 포스페이트
Figure pct00509
3 mL의 THF 중에 실시예 35(36 mg, 0.063 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 아이소부티르산(45 mg, 0.51 mmol) 및 DIC(32 mg, 0.04 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(15 mg, 0.13 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.22 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 7.06 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.91 - 5.80 (m, 2H), 5.76 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.43 - 4.30 (m, 1H), 4.32 - 4.20 (m, 1H), 4.18 - 3.98 (m, 4H), 3.84 (p, J = 7.6 ㎐, 2H), 2.66 (dp, J = 29.7, 7.0 ㎐, 2H), 1.35 - 1.07 (m, 30H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.49. LCMS: MS m/z = 780.15 [M+1], tR = 1.44분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.26분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 146. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴) 옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00510
THF(2 mL) 중 실시예 55(27 mg, 0.066 mmol), 아이소부티르산(0.020 mL, 0.224 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.022 mL, 0.143 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(5.47 mg, 0.045 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.90 (m, 1H), 7.34 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 6.81 - 6.71 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.92 - 5.77 (m, 2H), 5.68 (m, 1H), 4.84 (m, 1H), 4.54 - 4.32 (m, 3H), 3.98 - 3.84 (m, 1H), 3.79 (m, 2H), 3.46 (m, 2H), 2.75 - 2.55 (m, 2H), 1.88 - 1.74 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 1.30-1.14 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 2.50, 2.41. LCMS: MS m/z = 743.42 [M+1]; tR = 1.18분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 SFC(IF, 5u, 21 x 250 mm, 20% MeOH)에 의해 분리하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00511
Figure pct00512
실시예 147. 실시예 146의 첫 번째로 용리하는 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.81 - 6.75 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 5.89 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.83 (dd, J = 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.87 (tt, J = 8.4, 4.1 ㎐, 1H), 4.49 (dd, J = 11.2, 6.1 ㎐, 1H), 4.40 (dd, J = 11.2, 5.3 ㎐, 1H), 4.29 (d, J = 11.0 ㎐, 1H), 3.92 - 3.73 (m, 3H), 3.52 - 3.42 (m, 2H), 2.64 (dh, J = 28.0, 7.0 ㎐, 2H), 1.82 (d, J = 8.9 ㎐, 2H), 1.56 (dtd, J = 12.9, 8.6, 3.9 ㎐, 2H), 1.25 - 1.20 (m, 9H), 1.18 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.15 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.39. HPLC: tR = 5.43분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 148. 실시예 146의 두 번째로 용리하는 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.24 - 7.16 (m, 3H), 6.76 (d, J = 1.2 ㎐, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.86 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.80 (dd, J = 6.0, 4.6 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.84 (tt, J = 8.3, 4.0 ㎐, 1H), 4.49 - 4.30 (m, 3H), 3.91 (ddt, J = 16.8, 9.6, 7.1 ㎐, 1H), 3.78 (dt, J = 10.7, 4.9 ㎐, 2H), 3.45 (ddt, J = 12.0, 8.0, 3.7 ㎐, 2H), 2.64 (dp, J = 29.4, 7.0 ㎐, 2H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.53 (dtd, J = 12.7, 8.4, 4.0 ㎐, 2H), 1.28 (dd, J = 7.1, 0.9 ㎐, 3H), 1.21 (t, J = 7.0 ㎐, 6H), 1.17 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.14 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.48. HPLC: tR = 5.50분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 149. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이아이소부틸레이트테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-메틸 L-알라니네이트 포스페이트
Figure pct00513
3 mL의 THF 중에 실시예 38(58 mg, 0.11 mmol)을 용해시키고, 이 용액에 아이소부티르산(76 mg, 0.86 mmol) 및 DIC(54 mg, 0.43 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(26 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.86 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.81 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.92 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 11.2, 6.6 ㎐, 1H), 4.25 (dd, J = 11.2, 5.0 ㎐, 1H), 3.92 - 3.75 (m, 2H), 3.65 (d, J = 10.8 ㎐, 6H), 2.65 (dp, J = 26.5, 7.0 ㎐, 2H), 1.32 - 1.09 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.48. LCMS: MS m/z = 682.32 [M+1], tR = 1.27분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.92분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 150. ((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아이소부티르아미도피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이아이소부틸레이트테트라하이드로푸란-2-일)메틸 비스-메틸 L-알라니네이트 포스페이트
Figure pct00514
3 mL의 THF 중에 실시예 38(58 mg, 0.11 mmol)을 용해시키고, 이 용액에 아이소부티르산(76 mg, 0.86 mmol) 및 DIC(54 mg, 0.43 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(26 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 8.24 (s, 1H), 7.22 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 7.06 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.90 - 5.81 (m, 2H), 5.76 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.36 (dd, J = 11.2, 6.5 ㎐, 1H), 4.27 (dd, J = 11.2, 5.0 ㎐, 1H), 3.84 (dt, J = 9.3, 7.0 ㎐, 2H), 3.65 (d, J = 8.9 ㎐, 6H), 2.96 (h, J = 6.8 ㎐, 1H), 2.66 (dp, J = 30.4, 7.0 ㎐, 2H), 1.34 - 1.10 (m, 24H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 13.48. LCMS: MS m/z = 752.24 [M+1], tR = 1.37분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.51분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 151. (2 R ,3 S ,4 S ,5 S )-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-(((( S )-((( S )-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메톡시아세테이트)
Figure pct00515
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.04 mL, 0.27 mmol)를 실온에서 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 실시예 1(40.0 mg, 0.07 mmol) 및 2-메톡시아세트산(52 mg, 0.57 mmol)의 용액에 첨가하였다. 5분 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(18.0 mg, 0.15 mmol)을 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 x 30.0 mm 컬럼, 5 내지 75% 아세토니트릴/물 구배)를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.36 - 7.27 (m, 2H), 7.24 - 7.13 (m, 2H), 6.85 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.04 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.94 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.72 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.47 (t, J = 5.9 ㎐, 2H), 4.26 - 4.03 (m, 2H), 3.91 - 3.78 (m, 1H), 3.43 (d, J = 16.4 ㎐, 6H), 1.27 (dd, J = 7.2, 1.1 ㎐, 3H), 1.16 (dd, J = 6.2, 5.4 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.14. LCMS: MS m/z = 705.45 [M+H], tR = 0.94분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.96; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6μ C18 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 8.5분: 2 내지 98% ACN, 8.5분 내지 10.0분: 98% ACN(유량: 1.5 mL/분).
실시예 152. (2 R ,3 S ,4 S ,5 S )-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-(((( S )-((( S )-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(3-하이드록시-3-메틸부타노에이트)
Figure pct00516
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.04 mL, 0.27 mmol)를 실온에서 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 실시예 1(40 mg, 0.07 mmol) 및 3-하이드록시-3-메틸부탄산(67 mg, 0.57 mmol)의 용액에 첨가하였다. 5분 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(15.0 mg, 0.11 mmol)을 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 x 30.0 mm 컬럼, 5 내지 75% 아세토니트릴/물 구배)를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.82 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.92 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 6.0, 5.0 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 5.0 ㎐, 1H), 4.87 (q, J = 6.2 ㎐, 1H), 4.52 - 4.38 (m, 2H), 3.91 - 3.78 (m, 1H), 2.67 - 2.50 (m, 4H), 1.35 (d, J = 1.7 ㎐, 6H), 1.33 - 1.20 (m, 9H), 1.15 (t, J = 5.9 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.14. LCMS: MS m/z = 761.65 [M+H], tR = 0.91분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.54분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 153. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-(사이클로헥실옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴) 옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 (2R,2'R)-비스(2-아미노-3-메틸부타노에이트)
Figure pct00517
실시예 6(10 mg, 0.0166 mmol)을 1.5 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시켰다. Boc-D-발린(14 mg, 0.067 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(10 μL, 0.067 mmol)를 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. DMAP(2 mg, 0.017 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 추가의 Boc-D-발린(14 mg) 및 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(10 μL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 메탄올(200 μL)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 10 mL) 및 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 80% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시키고, 다이클로로메탄(2 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. TFA(200 μL)를 적가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 추가의 TFA(200 μL)를 첨가하고, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 트라이에틸아민을 다이클로로메탄 중에 용해시키고 적가하여 pH 3 내지 4를 얻었다. 생성된 혼합물을 감압 하에서 농축시키고, 산 변형제를 사용하지 않는 분취용 HPLC(5 내지 100% MeCN/물)로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.95 (s, 1H), 7.42 - 7.28 (m, 2H), 7.28 - 7.12 (m, 3H), 7.06 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.90 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.20 - 6.00 (m, 2H), 5.79 - 5.66 (m, 1H), 4.68 - 4.45 (m, 3H), 4.06 (m, 2H), 3.85 (m, 1H), 2.51 - 2.34 (m, 2H), 1.84 - 1.59 (m, 4H), 1.59 - 1.23 (m, 11H), 1.18 (dd, J = 9.4, 6.9 ㎐, 6H), 1.00 (dd, J = 17.8, 7.0 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.45. LCMS: MS m/z = 799.3 [M+1]; 797.6 [M-1], tR = 1.06분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.66분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.478분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 154. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 (2R,2'R)-비스(2-메톡시프로파노에이트)
Figure pct00518
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.04 mL, 0.29 mmol)를 실온에서 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 실시예 1(43 mg, 0.07 mmol) 및 (R)-(+)-2-메톡시프로피온산(68.3 mg, 0.66 mmol)의 용액에 첨가하였다. 5분 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(18.3 mg, 0.14 mmol)을 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 x 30.0 mm 컬럼, 5 내지 75% 아세토니트릴/물 구배)를 거쳐서 생성물 및 실시예 155의 2-메톡시프로판아미도 화합물을 얻었다.
생성물: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.32 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.23 (d, J = 8.1 ㎐, 2H), 7.18 (t, J = 7.4 ㎐, 1H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.97 - 5.89 (m, 2H), 5.67 (t, J = 2.6 ㎐, 1H), 4.93 - 4.88 (m, 1H), 4.50 (qd, J = 11.2, 6.1 ㎐, 2H), 4.08 (q, J = 6.8 ㎐, 1H), 3.92 (q, J = 6.8 ㎐, 1H), 3.87 (dd, J = 9.9, 7.2 ㎐, 1H), 3.43 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 1.46 (d, J = 6.9 ㎐, 3H), 1.33 (d, J = 6.9 ㎐, 3H), 1.28 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H), 1.18 (d, J = 4.6 ㎐, 3H), 1.16 (d, J = 4.6 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.17. LCMS: MS m/z = 733.46 [M+1], tR = 1.00분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.65분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 155. (2R,3S,4S,5S)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-((R)-2-메톡시프로판아미도)피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 (2R,2'R)-비스(2-메톡시프로파노에이트)
Figure pct00519
실시예 154의 첫 번째로 용리하는 예: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 8.26 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 7.27 - 7.20 (m, 3H), 7.20 - 7.14 (m, 1H), 7.02 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.93 (d, J = 5.4 ㎐, 2H), 5.79 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.92 - 4.88 (m, 1H), 4.55 - 4.46 (m, 2H), 4.15 (q, J = 6.5 ㎐, 1H), 4.09 (q, J = 6.9 ㎐, 1H), 3.93 (q, J = 6.8 ㎐, 1H), 3.87 (dd, J = 10.1, 7.3 ㎐, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 1.48 (d, J = 2.5 ㎐, 3H), 1.47 (d, J = 2.7 ㎐, 3H), 1.34 (d, J = 6.9 ㎐, 3H), 1.29 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.18 (d, J = 3.7 ㎐, 3H), 1.16 (d, J = 3.8 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.20. LCMS: MS m/z = 819.43 [M+1], tR = 1.15분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.84분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 156. (2 R ,3 S ,4 S ,5 S )-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-(((( S )-((( S )-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(테트라하이드로-2H-피란-4-카르복실레이트)
Figure pct00520
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.04 mL, 0.29 mmol)를 실온에서 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 실시예 1(40 mg, 0.071 mmol) 및 테트라하이드로-2H-피란-4-카르복실산(74 mg, 0.57 mmol)의 용액에 첨가하였다. 5분 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(15.0 mg, 0.11 mmol)을 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 x 30.0 mm 컬럼, 5 내지 75% 아세토니트릴/물 구배)를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.18 (dd, J = 16.1, 7.9 ㎐, 2H), 6.84 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.87 - 5.79 (m, 1H), 5.68 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.47 - 4.41 (m, 2H), 3.95 - 3.78 (m, 4H), 3.52 - 3.46 (m, 2H), 3.45 (s, 1H), 2.70 (dt, J = 10.9, 4.2 ㎐, 2H), 1.88 (q, J = 15.7, 14.5 ㎐, 4H), 1.82 - 1.66 (m, 4H), 1.26 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.16 (t, J = 5.8 ㎐, 5H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.12. LCMS: MS m/z = [M+1], tR = 0.94분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.68분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 157. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 (2S,2'S)-비스(2-아미노-3-메틸부타노에이트)
Figure pct00521
Boc-L-발린(87 mg, 0.4 mmol)과 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(62 μL, 0.4 mmol)를 1 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에서 혼합하고 용해시켰다. 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 실시예 1(55 mg, 0.1 mmol)을 1 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시키고, 상기 혼합물에 첨가하였다. DMAP(12 mg, 0.1 mmol)를 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다.
메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 50 내지 80% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켜 오일로서 얻었으며, 이것을 다이클로로메탄(4 mL) 중에 물질을 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. TFA(300 μL)를 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 추가의 TFA(200 μL)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 무수 다이옥산 중에 용해시키고, 감압 하에서 수회 농축시켜 포말을 얻었다. 물질을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.08 (s, 1H), 7.43 - 7.26 (m, 3H), 7.26 - 7.10 (m, 3H), 7.03 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 6.27 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 6.04 (dd, J = 5.8, 3.3 ㎐, 1H), 5.89 (d, J = 3.3 ㎐, 1H), 4.83 (m, 1H), 4.50 (m, 2H), 4.16 (m, 2H), 3.88 - 3.73 (m, 1H), 3.69 (m, 1H), 2.50 (m, 1H), 1.34 - 1.22 (m, 3H), 1.22 - 1.05 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.18. LCMS: MS m/z = 759.3 [M+1]; 757.5 [M-1], tR = 0.99분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.42분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.068분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 158. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 (2S,2'S)-비스(2-메톡시프로파노에이트)
Figure pct00522
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.03 mL, 0.21 mmol)를 실온에서 테트라하이드로푸란(4.5 mL) 중 실시예 1(30.0 mg, 0.05 mmol) 및 (S)-(-)-2-메톡시프로피온산(46.6 mL, 0.43 mmol)의 용액에 첨가하였다. 5분 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(14.3 mg, 0.11 mmol)을 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å AXIA 250 x 21.2 mm 컬럼, 40 내지 80% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA를 사용함))를 거치고, 생성된 물질을 EtOAc(25 mL) 중에 용해시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.86 (s, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.79 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.13 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.92 (dd, J = 5.9, 4.1 ㎐, 1H), 5.75 (d, J = 4.1 ㎐, 1H), 4.87 - 4.82 (m, 1H), 4.45 (d, J = 5.7 ㎐, 2H), 4.01 (dq, J = 17.4, 6.9 ㎐, 2H), 3.85 (dq, J = 9.5, 6.9 ㎐, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.35 (s, 3H), 1.45 (dd, J = 9.6, 6.9 ㎐, 6H), 1.27 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.16 (dd, J = 6.2, 5.1 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.10. LCMS: MS m/z = 733.49 [M+1], tR = 0.99분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.51분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 159. (2R,3S,4S,5S)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-아미노사이클로헥실) 메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-아미노 피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00523
중간체 4(71 mg, 0.214 mmol)와 중간체 64(124 mg, 0.214 mmol)를 3 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에서 혼합하고 용해시켰다. 염화마그네슘(61 mg, 0.642 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. DIPEA(187 μL, 1.07 mmol)를 첨가하고, 반응물을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다.
반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 물(5 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 물질을 5 mL의 MeCN 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 진한 HCl(aq)(300 μL)을 적가하고, 이어서 빙조 내에서 2시간 동안 교반하였다. 추가의 진한 HCl(aq)(200 μL)을 적가하고, 이어서 빙조 내에서 2시간 동안 교반하였다. 1 M 탄산나트륨 수용액을 반응물에 첨가하여 pH 9 내지 10을 얻었다. Boc 무수물(47 mg, 0.14 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다.
반응물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 다이옥산(5 mL) 및 물(3 mL) 중에 용해시키고, 120℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 냉각시키고, 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 염수(3 x 5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 무수 테트라하이드로푸란(4 mL) 중에 용해시켰다. 프로피온산(37 μL, 0.493 mmol)을 무수 테트라하이드로푸란(1 mL) 중에 용해시켰다. N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(77 μL, 0.493 mmol)를 프로피온산 용액에 한꺼번에 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 한꺼번에 반응물에 첨가하였다. DMAP(15 mg, 0.123 mmol)를 첨가하고, 반응물을 16시간 동안 교반하였다.
반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 염수(3 x 10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 물질을 무수 다이클로로메탄(5 mL) 중에 용해시키고, 질소 분위기 하에서 빙조 내에서 교반하였다. TFA(500 μL)를 적가하고, 반응물을 0℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 무수 MeCN으로 희석시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 무수 다이옥산(3x)과 동시증발시켰다. 잔류물을 무수 MeCN(3x)과 동시증발시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.04 (m, 1H), 7.43 - 7.25 (m, 3H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.97 (m, 1H), 5.88 - 5.69 (m, 1H), 4.59 - 4.40 (m, 2H), 4.01 - 3.84 (m, 3H), 3.73 - 3.49 (m, 2H), 3.01 (m, 1H), 2.54 - 2.37 (m, 4H), 2.02 (m, 2H), 1.92 - 1.79 (m, 2H), 1.64 (m, 1H), 1.44 - 1.27 (m, 5H), 1.22 - 1.05 (m, 8H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.00, 3.10. LCMS: MS m/z = 742.3 [M+1]; 740.5 [M-1], tR = 1.06분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.59분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.389, 4.429분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 160. (2 R ,3 S ,4 S ,5 S )-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-(((( S )-((( S )-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(옥세탄-3-카르복실레이트)
Figure pct00524
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.04 mL, 0.29 mmol)를 실온에서 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 실시예 1(40 mg, 0.071 mmol) 및 옥세탄-3-카르복실산(58 mg mL, 0.57 mmol)의 용액에 첨가하였다. 5분 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(15.0 mg, 0.11 mmol)을 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 x 30.0 mm 컬럼, 5 내지 75% 아세토니트릴/물 구배)를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.10 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.94 (dd, J = 5.8, 4.2 ㎐, 1H), 5.72 (d, J = 4.2 ㎐, 1H), 4.95 - 4.72 (m, 7H), 4.54 - 4.40 (m, 2H), 4.09 - 3.77 (m, 2H), 3.60 (q, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.02 (s, 2H), 1.26 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H), 1.27 - 1.07 (m, 8H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.31. LCMS: MS m/z = 729.50 [M+H], tR = 0.89분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.11분, HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 161. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-(2-메톡시에톡시)아세테이트)
Figure pct00525
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.04 mL, 0.27 mmol)를 실온에서 테트라하이드로푸란(4.5 mL) 중 실시예 1(31.0 mg, 0.05 mmol) 및 2-(2-메톡시에톡시)아세트산(0.05 mL, 0.43 mmol)의 용액에 첨가하였다. 5분 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(15.0 mg, 0.11 mmol)을 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 x 30.0 mm 컬럼, 5 내지 75% 아세토니트릴/물 구배)를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.90 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 7.22 - 7.14 (m, 3H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.28 (s, 2H), 5.92 (d, J = 6.2 ㎐, 1H), 5.88 (dd, J = 6.1, 4.6 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.84 (p, J = 6.3 ㎐, 1H), 4.46 (dd, J = 11.2, 6.8 ㎐, 1H), 4.37 (dd, J = 11.2, 5.8 ㎐, 1H), 4.29 - 4.17 (m, 4H), 4.15 (d, J = 0.8 ㎐, 1H), 3.90 - 3.77 (m, 1H), 3.69 - 3.64 (m, 2H), 3.64 - 3.58 (m, 2H), 3.52 - 3.48 (m, 2H), 3.48 - 3.43 (m, 2H), 3.30 (s, 3H), 3.26 (s, 3H), 1.23 (dd, J = 7.1, 0.9 ㎐, 3H), 1.13 (dd, J = 7.0, 6.2 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 2.56. LCMS: MS m/z = 739.63 [M+1], tR = 0.94분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.29분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 162. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-((1-메틸피페리딘-4-일)옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴) 옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00526
DMF(2 mL) 중 실시예 19(50 mg, 0.069 mmol), 아이소부티르산(0.031 mL, 0.343 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.053 mL, 0.343 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(25.12 mg, 0.206 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 추가의 N,N-다이아이소부틸카르보다이이미드(0.053 mL, 0.343 mmol)를 첨가하였다. 2시간 교반 후에, 반응물을 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini 10u C18 110Å 250 x 21.2 mm 컬럼, 30분 전개에서 20 내지 65% 아세토니트릴(0.1% TFA)/물(0.1% TFA) 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.95 (m, 1H), 7.32 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 4H), 6.88 (m, 1H), 5.90 - 5.73 (m, 2H), 5.70 (m, 1H), 5.04 (m, 0.7H), 4.09 (m, 0.3H), 4.50 (m, 2H), 3.97 (s, 1H), 3.54 (m, 0.7H), 3.34 (m, 1.3H), 3.14 (m, 2H), 2.91 - 2.76 (m, 3H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 2.20 (m, 1H), 2.03 (m, 2H), 1.83 (m, 1H), 1.41 - 1.27 (m, 3H), 1.26 - 1.08 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.44. LCMS: MS m/z = 756.32 [M+1-TFA]; tR = 0.84분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.66분 (29%), 4.70분 (69%); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 163. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴) 옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00527
THF(2 mL) 중 실시예 55(53 mg, 0.083 mmol), 아세트산(0.023 mL, 0.415 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.15 mL, 0.963 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(20.27 mg, 0.166 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.90 (m, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.81 - 6.73 (m, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.88 - 5.75 (m, 2H), 5.69 (m, 1H), 4.84 (m, 1H), 4.56 - 4.29 (m, 3H), 3.98 - 3.84 (m, 1H), 3.83 - 3.72 (m, 2H), 3.45 (m, 2H), 2.16 (s, 1H), 2.15 (s, 2H), 2.08 (s, 1H), 2.07 (s, 2H), 1.87 - 1.73 (m, 2H), 1.62 - 1.47 (m, 2H), 1.28 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 2H), 1.24 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 1H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 2.51, 2.39. LCMS: MS m/z = 687.39 [M+1]; tR = 0.84, 0.86분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 SFC(IF, 5u, 21 x 250 mm, 20% MeOH)에 의해 분리하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00528
Figure pct00529
실시예 164. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.82 - 6.74 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 5.88 - 5.78 (m, 2H), 5.70 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.87 (tt, J = 8.6, 4.2 ㎐, 1H), 4.50 (dd, J = 11.2, 6.3 ㎐, 1H), 4.40 (dd, J = 11.2, 5.4 ㎐, 1H), 4.27 (t, J = 11.1 ㎐, 1H), 3.93 - 3.75 (m, 3H), 3.52 - 3.42 (m, 2H), 2.16 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.82 (q, J = 6.4, 5.2 ㎐, 2H), 1.56 (dtd, J = 12.8, 8.7, 3.9 ㎐, 2H), 1.23 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.37. LCMS: MS m/z = 687.35 [M+1]; tR = 0.85분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.62분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 165. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.91 (s, 1H), 7.35 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.21 (ddd, J = 8.3, 2.6, 1.4 ㎐, 3H), 6.77 (q, J = 4.6 ㎐, 2H), 6.35 (s, 2H), 5.83 - 5.74 (m, 2H), 5.68 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.84 (tt, J = 8.2, 4.0 ㎐, 1H), 4.46 (dd, J = 11.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.42 - 4.26 (m, 2H), 4.00 - 3.83 (m, 1H), 3.78 (dt, J = 10.6, 4.8 ㎐, 2H), 3.51 - 3.39 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.80 (q, J = 10.4, 7.4 ㎐, 2H), 1.53 (dtd, J = 12.7, 8.4, 3.9 ㎐, 2H), 1.28 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.49. LCMS: MS m/z = 687.37 [M+1]; tR = 0.86분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.69분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 166. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 (2R,2'R)-비스(2-메톡시프로파노에이트)
Figure pct00530
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.05 mL, 0.31 mmol)를 실온에서 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 실시예 52(40.0 mg, 0.08 mmol) 및 (R)-(+)-2-메톡시프로피온산(62.6 mg, 0.60 mmol)의 용액에 첨가하였다. 5분 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(18.4 mg, 0.14 mmol)을 첨가하였다. 2시간 후에, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å AXIA 250 x 21.2 mm 컬럼, 30 내지 60% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA를 사용함))를 거쳐서, TFA 염으로서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.93 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.23 - 7.16 (m, 4H), 6.93 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.82 - 5.76 (m, 2H), 5.69 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.50 (dd, J = 11.4, 6.8 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 11.3, 6.1 ㎐, 1H), 4.34 - 4.24 (m, 1H), 4.05 (q, J = 6.9 ㎐, 1H), 3.97 - 3.86 (m, 2H), 3.60 (s, 3H), 3.38 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 1.42 (d, J = 6.9 ㎐, 3H), 1.32 (d, J = 6.8 ㎐, 3H), 1.29 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H). 19F NMR (376 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ -77.14. 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 2.47. LCMS: MS m/z = 705.43 [M+1], tR = 0.89분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.12분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 167. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00531
DMF(2 mL) 중 실시예 55(54 mg, 0.085 mmol), 프로피온산(0.032 mL, 0.423 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.132 mL, 0.423 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(20.65 mg, 0.169 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물 및 실시예 170의 프로피온아미드를 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.90 (dd, J = 4.7, 1.6 ㎐, 1H), 7.44 - 7.27 (m, 2H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 6.77 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.95 - 5.76 (m, 2H), 5.68 (m, 1H), 4.84 (m, 1H), 4.56 - 4.33 (m, 3H), 4.03 - 3.69 (m, 3H), 3.52 - 3.38 (m, 2H), 2.57 - 2.29 (m, 4H), 1.88 - 1.75 (m, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.26 (m, 3H), 1.13 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 2.50, 2.40. LCMS: MS m/z = 715.33 [M+1]; tR = 0.95분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 SFC(IF, 5u, 21 x 250 mm, 30% EtOH)에 의해 분리하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00532
Figure pct00533
실시예 168. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.22 - 7.14 (m, 3H), 6.79 (q, J = 4.6 ㎐, 2H), 6.35 (s, 2H), 5.88 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.83 (dd, J = 6.1, 4.7 ㎐, 1H), 5.70 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.87 (tt, J = 8.3, 4.1 ㎐, 1H), 4.50 (dd, J = 11.2, 6.3 ㎐, 1H), 4.40 (dd, J = 11.2, 5.4 ㎐, 1H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 3.83 (ddt, J = 21.2, 10.5, 5.9 ㎐, 3H), 3.55 - 3.38 (m, 2H), 2.46 (qd, J = 7.6, 3.3 ㎐, 2H), 2.39 (q, J = 7.5 ㎐, 2H), 1.81 (s, 2H), 1.56 (dtd, J = 12.7, 8.6, 3.9 ㎐, 2H), 1.23 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H), 1.15 (t, J = 7.5 ㎐, 3H), 1.11 (t, J = 7.6 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.37. LCMS: MS m/z = 715.46 [M+1]; tR = 0.95분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.07분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 169. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.91 (s, 1H), 7.35 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 6.81 - 6.72 (m, 2H), 6.38 (s, 2H), 5.87 - 5.77 (m, 2H), 5.68 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.84 (tt, J = 8.4, 4.1 ㎐, 1H), 4.46 (dd, J = 11.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.41 - 4.26 (m, 2H), 3.91 (ddt, J = 16.9, 9.8, 7.1 ㎐, 1H), 3.78 (dt, J = 10.6, 4.9 ㎐, 2H), 3.46 (ddd, J = 9.5, 8.1, 4.1 ㎐, 2H), 2.45 (qd, J = 7.5, 3.3 ㎐, 2H), 2.38 (q, J = 7.5 ㎐, 2H), 1.86 - 1.75 (m, 2H), 1.53 (dtd, J = 12.7, 8.4, 3.9 ㎐, 2H), 1.28 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.15 (t, J = 7.5 ㎐, 3H), 1.10 (t, J = 7.6 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.48. LCMS: MS m/z = 715.48 [M+1]; tR = 0.96분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.14분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 170. (2R,3S,4S,5S)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-프로피온아미도피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00534
실시예 167을 통해 제조된 프로판아미드. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 8.90 (s, 1H), 8.27 - 8.09 (m, 1H), 7.34 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 4H), 6.96 (m, 1H), 5.90 - 5.74 (m, 3H), 4.96 - 4.69 (m, 1H), 4.59 - 4.27 (m, 3H), 4.05 - 3.69 (m, 3H), 3.55 - 3.34 (m, 2H), 2.72 (m, 2H), 2.55 - 2.34 (m, 4H), 1.81 (s, 2H), 1.66 - 1.49 (m, 2H), 1.39 - 0.93 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 2.49, 2.35. LCMS: MS m/z = 771.52 [M+1]; tR = 1.10분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.77분 (22%), 5.79분 (71%); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 171. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2,2-다이메틸프로파노에이트)
Figure pct00535
DMF(2 mL) 중 실시예 55(54 mg, 0.066 mmol), 피발산(0.049 mL, 0.423 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.132 mL, 0.845 mmol)의 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반하고, DMAP(21 mg, 0.172 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 80분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.89 (m, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.76 (m, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.91 (m, 1H), 5.80 (m, 1H), 5.65 (m, 1H), 4.84 (m, 1H), 4.52 - 4.31 (m, 3H), 3.98 - 3.84 (m, 1H), 3.79 (m, 2H), 3.45 (m, 2H), 1.89 - 1.74 (m, 2H), 1.55 (m, 2H), 1.28 (m, 12H), 1.22 (m, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 2.48, 2.42. LCMS: MS m/z = 771.52 [M+1]; tR = 1.10분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 SFC(IF, 5u, 21 x 250 mm, 30% 2-프로판올)에 의해 분리하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00536
Figure pct00537
실시예 172. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.38 - 7.28 (m, 2H), 7.25 - 7.14 (m, 3H), 6.77 (s, 2H), 6.33 (s, 2H), 5.93 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.86 - 5.77 (m, 1H), 5.66 (d, J = 4.0 ㎐, 1H), 4.87 (tt, J = 8.4, 4.1 ㎐, 1H), 4.48 (dd, J = 11.2, 6.1 ㎐, 1H), 4.40 (dd, J = 11.2, 5.4 ㎐, 1H), 4.31 - 4.18 (m, 1H), 3.91 - 3.75 (m, 3H), 3.47 (ddt, J = 11.7, 8.8, 3.0 ㎐, 2H), 1.89 - 1.76 (m, 2H), 1.56 (dtd, J = 12.8, 8.7, 4.0 ㎐, 2H), 1.28 (s, 9H), 1.23 (s, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.41. LCMS: MS m/z = 771.47 [M+1]; tR = 1.14분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.90분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 173. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.38 - 7.30 (m, 2H), 7.23 - 7.16 (m, 3H), 6.76 (s, 2H), 6.35 (s, 2H), 5.89 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.79 (dd, J = 5.8, 4.1 ㎐, 1H), 5.64 (d, J = 4.2 ㎐, 1H), 4.84 (tt, J = 8.3, 4.1 ㎐, 1H), 4.49 - 4.36 (m, 2H), 4.33 (dd, J = 12.0, 9.9 ㎐, 1H), 3.97 - 3.86 (m, 1H), 3.78 (dt, J = 10.6, 4.8 ㎐, 2H), 3.51 - 3.40 (m, 2H), 1.88 - 1.72 (m, 2H), 1.54 (dtd, J = 12.7, 8.5, 3.9 ㎐, 2H), 1.28 (s, 12H), 1.22 (s, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.47. LCMS: MS m/z = 771.51 [M+1]; tR = 1.14분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.97분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 174. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(옥세탄-3-일옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00538
3 mL의 THF 중에 실시예 44(20 mg, 0.035 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 프로피온산(10 mg, 0.14 mmol) 및 DIC(22 mg, 0.17 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(8.5 mg, 0.07 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (d, J = 12.0 ㎐, 1H), 7.38 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (t, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.76 (dd, J = 8.5, 4.6 ㎐, 1H), 5.94 (dd, J = 24.6, 5.9 ㎐, 1H), 5.84 (ddd, J = 18.2, 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.69 (dd, J = 4.7, 2.7 ㎐, 2H), 5.32 (dtt, J = 16.5, 6.3, 5.1 ㎐, 1H), 4.81 - 4.71 (m, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 4H), 3.92 (ddq, J = 23.9, 9.5, 7.1 ㎐, 1H), 2.54 - 2.33 (m, 4H), 1.28 (ddd, J = 16.2, 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 1.15 (dtd, J = 15.1, 7.6, 2.8 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.95, 2.89. LCMS: MS m/z = 687.18 [M+1], tR = 1.24분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 4.88 및 4.95분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IC, 150 x 4.6 mm, 헵탄 80%, 에탄올 20%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00539
Figure pct00540
실시예 175. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.82 (dd, J = 5.9, 4.8 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.30 (tt, J = 6.3, 5.1 ㎐, 1H), 4.78 (tdd, J = 7.5, 6.4, 1.0 ㎐, 2H), 4.57 - 4.47 (m, 2H), 4.43 (dt, J = 11.1, 5.9 ㎐, 2H), 4.02 - 3.84 (m, 1H), 2.50 - 2.33 (m, 4H), 1.30 (dd, J = 7.2, 1.1 ㎐, 3H), 1.20 - 1.07 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.95. LCMS: MS m/z = 687.15 [M+1], tR = 1.26분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 4.94분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 176. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 8.8, 7.0 ㎐, 2H), 7.21 - 7.09 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.86 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.34 (tt, J = 6.3, 5.1 ㎐, 1H), 4.82 - 4.75 (m, 2H), 4.56 - 4.48 (m, 3H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.0 ㎐, 1H), 3.97 - 3.80 (m, 1H), 2.54 - 2.32 (m, 4H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.3 ㎐, 3H), 1.21 - 1.05 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.89. LCMS: MS m/z = 687.14 [M+1], tR = 1.25분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 4.88분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 177. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((4-(다이메틸카르바모일)페녹시)(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00541
THF(4 mL) 중 실시예 43(48 mg, 0.076 mmol) 및 아이소부티르산 무수물(0.028 mL, 0.167 mmol)의 혼합물에 DMAP(3 mg, 0.323 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고, 메탄올(1 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 80% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.89 (m, 1H), 7.36 (m, 2H), 7.20 (m, 2H), 6.76 (m, 2H), 6.47 (s, 2H), 5.89 (m, 1H), 5.82 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 4.89 (m, 1H), 4.56 - 4.36 (m, 3H), 3.97 - 3.74 (m, 1H), 2.96 (m, 6H), 2.76 - 2.50 (m, 2H), 1.28 - 1.10 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 2.43, 2.34. LCMS: MS m/z = 772.48 [M+1]; tR = 1.02분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.39분 (18%), 3.85분 (81%); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 SFC(AD-H, 5u, 21 x 250 mm, 30% 2-프로판올)에 의해 분리하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00542
Figure pct00543
실시예 178. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.35 (d, J = 8.5 ㎐, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 2H), 6.77 (t, J = 3.4 ㎐, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.89 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.83 (dd, J = 5.9, 4.4 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.3 ㎐, 1H), 4.91 (p, J = 6.3 ㎐, 1H), 4.50 (dd, J = 11.2, 6.1 ㎐, 1H), 4.43 (dd, J = 11.2, 5.6 ㎐, 1H), 4.36 (dd, J = 12.3, 10.0 ㎐, 1H), 3.80 (ddt, J = 16.5, 9.5, 7.1 ㎐, 1H), 3.01 (s, 3H), 2.91 (s, 3H), 2.66 (m, 2H), 1.35 - 1.08 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.31. LCMS: MS m/z = 772.48 [M+1]; tR = 1.03분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.39분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 179. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.40 - 7.33 (m, 2H), 7.22 (dd, J = 8.7, 1.2 ㎐, 2H), 6.79 - 6.70 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.87 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.81 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.87 (hept, J = 6.3 ㎐, 1H), 4.47 (dd, J = 11.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.39 (ddd, J = 12.0, 8.2, 2.5 ㎐, 2H), 3.87 (tq, J = 9.5, 7.0 ㎐, 1H), 3.02 (s, 3H), 2.91 (s, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.30 - 1.06 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.40. LCMS: MS m/z = 772.42 [M+1]; tR = 1.02분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.39분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 180. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00544
프로피온산 무수물(13 μL, 0.10 mmol)을 실온에서 2-메틸테트라하이드로푸란(1.0 mL) 중 실시예 25(30 mg, 0.050 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 4-다이메틸아미노피리딘(1 mg, 0.007 mmol)을 첨가하였다. 40분 후에, 반응 혼합물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.49 - 4.38 (m, 2H), 4.01 (dd, J = 10.9, 5.7 ㎐, 1H), 3.95 - 3.85 (m, 2H), 2.53 - 2.34 (m, 5H), 1.51 - 1.39 (m, 1H), 1.37 - 1.25 (m, 9H), 1.15 (dt, J = 13.8, 7.5 ㎐, 7H), 0.86 (td, J = 7.5, 1.1 ㎐, 7H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.04 (s). LCMS: MS m/z = 715.44 [M+1], tR = 1.50분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.61분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 6.22분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 181. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)메톡시)프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00545
아이소부티르산 무수물(32 μL, 0.19 mmol)을 실온에서 2-메틸테트라하이드로푸란(1.0 mL) 중 실시예 20(60 mg, 0.10 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 4-다이메틸아미노피리딘(2 mg, 0.02 mmol)을 첨가하였다. 40분 후에, 반응 혼합물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.84 (s, 0.55H), 7.81 (s, 0.45H), 7.35 - 7.27 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.88 - 6.82 (m, 1H), 6.79 - 6.72 (m, 1H), 5.97 (d, J = 5.9 ㎐, 0.45H), 5.90 (d, J = 5.9 ㎐, 0.55H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.5 ㎐, 0.45H), 5.79 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 0.55H), 5.69 - 5.65 (m, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 2H), 3.98 - 3.79 (m, 5H), 3.38 - 3.30 (m, 2H), 2.73 - 2.54 (m, 2H), 1.91 - 1.78 (m, 1H), 1.62 - 1.50 (m, 2H), 1.33 - 1.11 (m, 17H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.06 (s), 2.97 (s). LCMS: MS m/z = 757.45 [M+1], tR = 1.40분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.33분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.60분 (부 이성질체), 5.66분 (주 이성질체); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 SFC(Chiralpak ADH, 20% 아이소프로필 알코올)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00546
Figure pct00547
실시예 182. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.78 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.4 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.51 (dd, J = 11.0, 5.7 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.0 ㎐, 1H), 3.95 - 3.79 (m, 5H), 3.38 - 3.29 (m, 2H), 2.75 - 2.55 (m, 2H), 1.94 - 1.78 (m, 1H), 1.62 - 1.50 (m, 2H), 1.35 - 1.11 (m, 17H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.05 (s). LCMS: MS m/z = 757.30 [M+1], tR = 1.43분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.33분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.59분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 183. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.36 - 7.27 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.79 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.49 - 4.39 (m, 2H), 3.96 - 3.79 (m, 5H), 3.37 - 3.27 (m, 2H), 2.73 - 2.54 (m, 2H), 1.91 - 1.77 (m, 1H), 1.58 - 1.52 (m, 2H), 1.33 - 1.11 (m, 17H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 2.97 (s). LCMS: MS m/z = 757.50 [M+1], tR = 1.45분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.34분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.65분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 184. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(옥세탄-3-일옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00548
10 mL의 THF 중에 실시예 44(99 mg, 0.17 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 아이소부티르산(38 mg, 0.43 mmol) 및 DIC(65 mg, 0.52 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(42 mg, 0.34 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (d, J = 12.8 ㎐, 1H), 7.31 (ddd, J = 8.2, 6.7, 4.1 ㎐, 2H), 7.25 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (t, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.76 (dd, J = 8.2, 4.6 ㎐, 1H), 5.94 (dd, J = 23.8, 5.9 ㎐, 1H), 5.82 (ddd, J = 19.6, 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.67 (dd, J = 4.6, 2.2 ㎐, 1H), 5.32 (dtt, J = 16.6, 6.4, 5.1 ㎐, 1H), 4.82 - 4.71 (m, 2H), 4.52 (dddd, J = 12.6, 7.4, 5.0, 1.2 ㎐, 2H), 4.42 (ddd, J = 11.2, 5.9, 4.4 ㎐, 2H), 3.99-3.84 (m, 1H), 2.72 - 2.56 (m, 2H), 1.34 - 1.09 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.94, 2.90. LCMS: MS m/z = 715.22 [M+1], tR = 1.34분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.31 및 5.38분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IC, 150 x 4.6 mm, 헵탄 80%, 에탄올 20%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00549
Figure pct00550
실시예 185. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.7, 7.1 ㎐, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.30 (tt, J = 6.4, 5.1 ㎐, 1H), 4.82 - 4.72 (m, 2H), 4.52 (dddd, J = 12.9, 7.6, 5.1, 1.0 ㎐, 2H), 4.46 - 4.38 (m, 2H), 3.95 (dq, J = 10.3, 7.2 ㎐, 1H), 2.64 (dp, J = 17.3, 7.0 ㎐, 2H), 1.35 - 1.26 (m, 3H), 1.24 - 1.08 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.94. LCMS: MS m/z = 715.21 [M+1], tR = 1.35분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.38분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 186. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.33 - 7.24 (m, 2H), 7.19 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.4 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.37-5.31 (m, 1H), 4.83 - 4.78 (m, 2H), 4.57 - 4.47 (m, 3H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.0 ㎐, 1H), 3.96 - 3.81 (m, 1H), 2.64 (dq, J = 15.2, 7.0 ㎐, 2H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.3 ㎐, 3H), 1.25 - 1.13 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.90. LCMS: MS m/z = 715.28 [M+1], tR = 1.34분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.30분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 187. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00551
프로피온산 무수물(23.5 μL, 0.18 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(1.8 mL) 중 실시예 45(51.2 mg, 0.09 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(1.8 mg, 0.1 mmol)의 용액에 첨가하였다. 20분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.82 (d, J = 9.0 ㎐, 1H), 7.38 - 7.26 (m, 2H), 7.25 - 7.09 (m, 3H), 6.85 (dd, J = 7.1, 4.6 ㎐, 1H), 6.76 (dd, J = 11.7, 4.6 ㎐, 1H), 6.02 - 5.87 (m, 1H), 5.88 - 5.79 (m, 1H), 5.69 (t, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.57 - 4.37 (m, 2H), 4.07 - 3.76 (m, 3H), 2.55 - 2.26 (m, 4H), 1.59 (dtd, J = 14.0, 7.4, 6.6 ㎐, 2H), 1.26 (ddd, J = 18.1, 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 1.16 (dtd, J = 14.0, 7.6, 2.9 ㎐, 6H), 0.90 (td, J = 7.4, 2.9 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.05. LCMS: MS m/z = 673.40 [M+1], tR = 1.03분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.83분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 SFC(Chiralpak AD-H, 5 um, 21 x 250 mm, 아이소프로필 알코올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00552
Figure pct00553
실시예 188. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.86 (dd, J = 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.70 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.52 (dd, J = 11.1, 5.8 ㎐, 1H), 4.43 (dd, J = 11.1, 5.0 ㎐, 1H), 4.08 - 3.94 (m, 2H), 3.84 (dq, J = 9.4, 7.2 ㎐, 1H), 2.55 - 2.35 (m, 4H), 1.61 (dtd, J = 14.1, 7.4, 6.6 ㎐, 2H), 1.24 (dd, J = 7.1, 1.3 ㎐, 3H), 1.16 (dt, J = 13.4, 7.5 ㎐, 6H), 0.90 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.05. LCMS: MS m/z = 673.41 [M+1], tR = 1.03분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.82분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 189. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.83 (s, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.82 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.51 - 4.37 (m, 2H), 4.06 - 3.83 (m, 3H), 2.54 - 2.35 (m, 4H), 1.59 (dtd, J = 14.0, 7.4, 6.6 ㎐, 2H), 1.29 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H), 1.15 (dt, J = 14.0, 7.6 ㎐, 6H), 0.89 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.05. LCMS: MS m/z = 673.34 [M+1], tR = 1.04분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.87분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 190. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00554
아이소부티르산 무수물(30.3 μL, 0.18 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(1.8 mL) 중 실시예 45(51.2 mg, 0.09 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(1.8 mg, 0.1 mmol)의 용액에 첨가하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (d, J = 9.5 ㎐, 1H), 7.30 (tt, J = 6.9, 1.9 ㎐, 2H), 7.25 - 7.06 (m, 3H), 6.85 (dd, J = 7.3, 4.5 ㎐, 1H), 6.76 (dd, J = 11.6, 4.6 ㎐, 1H), 5.94 (dd, J = 23.8, 5.9 ㎐, 1H), 5.83 (ddd, J = 20.0, 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.68 (t, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.60 - 4.35 (m, 2H), 4.08 - 3.75 (m, 3H), 2.75 - 2.52 (m, 2H), 1.59 (dtd, J = 14.0, 7.5, 6.6 ㎐, 2H), 1.33 - 1.14 (m, 15H), 0.89 (td, J = 7.4, 2.7 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.06, 3.04. LCMS: MS m/z = 701.47 [M+1], tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.23분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 SFC(Chiralpak AD-H, 5 um, 21 x 250 mm, 아이소프로필 알코올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00555
Figure pct00556
실시예 191. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.11 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.4 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.52 (dd, J = 11.1, 5.7 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 11.0, 4.9 ㎐, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 2H), 3.84 (dq, J = 9.4, 7.2 ㎐, 1H), 2.65 (dhept, J = 14.0, 7.0 ㎐, 2H), 1.61 (dtd, J = 14.0, 7.4, 6.6 ㎐, 2H), 1.26 - 1.16 (m, 15H), 0.90 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.07. LCMS: MS m/z = 701.48 [M+1], tR = 1.14분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.21분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 192. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.14 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.80 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.49 - 4.38 (m, 2H), 4.05 - 3.84 (m, 3H), 2.64 (dhept, J = 17.1, 7.0 ㎐, 2H), 1.59 (dtd, J = 13.9, 7.4, 6.6 ㎐, 2H), 1.29 (dd, J = 7.1, 1.1 ㎐, 3H), 1.26 - 1.14 (m, 12H), 0.89 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.04. LCMS: MS m/z = 701.47 [M+1], tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.24분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 193.
Figure pct00557
중간체 4(50 mg, 0.15 mmol)와 중간체 65(85 mg, 0.18 mmol)를 1.5 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에서 혼합하고 용해시켰다. 염화마그네슘(43 mg, 0.45 mmol)을 한꺼번에 첨가하였다. DIPEA(65 μL, 0.375 mmol)를 첨가하고, 반응물을 35℃에서 48시간 동안 교반하였다.
반응물을 에틸 아세테이트(10 mL)로 희석시키고, 물(5 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 5 mL의 MeCN 중에 용해시키고, 빙조 내에서 교반하였다. 진한 HCl(aq)(250 μL)을 적가하고, 이어서 빙조 내에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 10% 메탄올/다이클로로메탄)를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다.
잔류물을 무수 테트라하이드로푸란(5 mL) 중에 용해시켰다. 프로피온산 무수물(26 μL, 0.2 mmol)을 첨가하였다. DMAP(1.8 mg, 0.014 mmol)를 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 반응물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% B/헥산(B = 에틸 아세테이트 중 3% MeOH))를 통해 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.86 (s, 1H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.82 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 6.0, 4.7 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.41 - 4.23 (m, 2H), 4.08 - 3.95 (m, 3H), 3.92 - 3.80 (m, 2H), 2.58 - 2.34 (m, 4H), 1.66 - 1.51 (m, 4H), 1.36 (m, 4H), 1.29 (m, 6H), 1.16 (m, 6H), 0.91 (m, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 13.47. LCMS: MS m/z = 738.5 [M+1], 736.5 [M-1], tR = 1.43분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.41분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.862분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 194. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-(((비스(((S)-1-에톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이펜타노에이트
Figure pct00558
THF(4 mL) 중 실시예 35(64 mg, 0.112 mmol), 발레르산(0.05 mL, 0.455 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.040 mL, 0.255 mmol)의 혼합물에 DMAP(14 mg, 0.115 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 추가의 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.04 mL, 0.255 mmol)를 첨가하였다. 2시간 교반 후에, 추가의 발레르산(0.05 mL, 0.455 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 30분 동안 교반하고, 메탄올(1 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.91 (s, 1H), 6.81 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.78 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.55 (s, 2H), 5.86 - 5.80 (m, 2H), 5.67 (dd, J = 2.8, 1.8 ㎐, 1H), 4.33 (dd, J = 11.3, 7.0 ㎐, 1H), 4.22 (dd, J = 11.3, 5.5 ㎐, 1H), 4.18 - 3.98 (m, 4H), 3.95 - 3.73 (m, 4H), 2.46 (td, J = 7.4, 4.7 ㎐, 2H), 2.36 (t, J = 7.4 ㎐, 2H), 1.70 - 1.50 (m, 4H), 1.36 (m, 4H), 1.27 - 1.17 (m, 12H), 0.94 (t, J = 7.4 ㎐, 3H), 0.89 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 12.18. LCMS: MS m/z = 738.49 [M+1]; tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.86분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 195. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-사이클로부톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00559
또는
Figure pct00560
3 mL의 THF 중에 실시예 50(50 mg, 0.087 mmol)을 용해시키고, 이 용액에 프로피온산(16 mg, 0.218 mmol) 및 DIC(33 mg, 0.262 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(21 mg, 0.175 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.81 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.81 (ddd, J = 7.9, 7.1, 1.0 ㎐, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 3.85 (dq, J = 10.0, 7.1 ㎐, 1H), 2.54 - 2.35 (m, 4H), 2.31 - 2.13 (m, 2H), 2.09 - 1.90 (m, 2H), 1.74 (tddt, J = 11.6, 9.0, 2.8, 1.4 ㎐, 1H), 1.67 - 1.49 (m, 1H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.1 ㎐, 3H), 1.14 (dt, J = 13.5, 7.5 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.07. LCMS: MS m/z = 685.27 [M+1], tR = 1.40분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.59분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 196. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((R)-(((S)-1-사이클로부톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00561
또는
Figure pct00562
3 mL의 THF 중에 실시예 51(40 mg, 0.07 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 프로피온산(13 mg, 0.18 mmol) 및 DIC(26 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(17 mg, 0.14 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.80 (s, 1H), 7.29 (dd, J = 8.7, 7.0 ㎐, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.95 - 4.86 (m, 1H), 4.52 (dd, J = 11.0, 5.8 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 5.1 ㎐, 1H), 3.80 (dq, J = 9.2, 7.1 ㎐, 1H), 2.48 - 2.36 (m, 4H), 2.27 (ddt, J = 10.8, 7.0, 2.1 ㎐, 2H), 2.09 - 1.92 (m, 2H), 1.76 (dtdt, J = 11.6, 8.9, 2.7, 1.4 ㎐, 1H), 1.67 - 1.54 (m, 1H), 1.23 (dd, J = 7.2, 1.3 ㎐, 3H), 1.15 (dt, J = 13.7, 7.6 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.04. LCMS: MS m/z = 685.33 [M+1], tR = 1.40분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.55분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 197. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-사이클로부톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00563
3 mL의 THF 중에 실시예 50(50 mg, 0.087 mmol)을 용해시키고, 이 용액에 아이소부티르산(31 mg, 0.35 mmol) 및 DIC(55 mg, 0.44 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(21 mg, 0.18 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.22 - 7.10 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.79 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.66 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.83-4.79 (m, 1H), 4.43 (dd, J = 5.8, 4.3 ㎐, 2H), 3.85 (dq, J = 9.9, 7.1 ㎐, 1H), 2.64 (dp, J = 16.1, 7.0 ㎐, 2H), 2.31 - 2.14 (m, 2H), 1.99 (dtdd, J = 11.1, 9.9, 8.9, 7.8 ㎐, 2H), 1.82 - 1.65 (m, 1H), 1.67 - 1.49 (m, 1H), 1.30 - 1.11 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.05. LCMS: MS m/z = 713.37 [M+1], tR = 1.48분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 6.02분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 198. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-사이클로부톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이아세테이트
Figure pct00564
3 mL의 THF 중에 실시예 50(50 mg, 0.087 mmol)을 용해시키고, 이 용액에 아세트산(21 mg, 0.35 mmol) 및 DIC(55 mg, 0.44 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(21 mg, 0.18 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (s, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.88 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.83 - 5.75 (m, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.81 (dd, J = 7.5, 6.6 ㎐, 1H), 4.51 - 4.35 (m, 2H), 3.85 (dq, J = 10.0, 7.1 ㎐, 1H), 2.30 - 2.17 (m, 2H), 2.15 (d, J = 3.8 ㎐, 4H), 2.10 (d, J = 1.2 ㎐, 4H), 2.06 - 1.91 (m, 2H), 1.80 - 1.67 (m, 1H), 1.59 (dddd, J = 18.2, 11.0, 10.2, 8.1 ㎐, 1H), 1.30 - 1.19 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.07. LCMS: MS m/z = 657.23 [M+1], tR = 1.31분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.15분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 199.
Figure pct00565
프로피온산 무수물(19 μL, 0.19 mmol)을 실온에서 2-메틸테트라하이드로푸란(1.0 mL) 중 실시예 38(40 mg, 0.07 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 4-다이메틸아미노피리딘(1 mg, 0.07 mmol)을 첨가하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 다이클로로메탄 중 0 내지 20% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.87 (s, 1H), 6.87 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.83 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.92 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.86 (dd, J = 6.0, 4.7 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.35 (dd, J = 11.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.26 (dd, J = 11.2, 5.0 ㎐, 1H), 3.92 - 3.76 (m, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 2.58 - 2.34 (m, 4H), 1.31 - 1.23 (m, 6H), 1.19 (t, J = 7.5 ㎐, 3H), 1.13 (t, J = 7.6 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 13.49 (s). LCMS: MS m/z = 654.28 [M+1], tR = 1.22분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.70분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.46분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 200. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(옥세탄-3-일메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00566
5 mL의 THF 중에 실시예 49(60 mg, 0.1 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 아이소부티르산(50 mg, 0.6 mmol) 및 DIC(80 mg, 0.6 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(50 mg, 0.6 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (d, J = 10.1 ㎐, 1H), 7.36 - 7.24 (m, 2H), 7.17 (dddd, J = 13.7, 7.3, 3.5, 2.3 ㎐, 3H), 6.84 (dd, J = 7.2, 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (dd, J = 11.2, 4.5 ㎐, 1H), 5.93 (dd, J = 24.5, 5.8 ㎐, 1H), 5.82 (ddd, J = 23.2, 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.67 (dd, J = 4.5, 3.6 ㎐, 1H), 4.72 (ddd, J = 8.0, 6.2, 4.2 ㎐, 2H), 4.42 (dh, J = 7.2, 3.4, 2.4 ㎐, 4H), 4.31 - 4.11 (m, 2H), 3.89 (ddq, J = 26.9, 9.2, 7.1 ㎐, 1H), 3.23 (dtt, J = 12.5, 8.0, 6.2 ㎐, 1H), 2.72 - 2.54 (m, 2H), 1.31 - 1.10 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.01, 2.94. LCMS: MS m/z = 729.27 [M+1], tR = 1.37분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.30 및 5.36분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IC, 150 x 4.6 mm, 헵탄 80%, 에탄올 20%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00567
Figure pct00568
실시예 201. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (t, J = 7.7 ㎐, 2H), 7.18 (dd, J = 15.0, 7.7 ㎐, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.79 (t, J = 5.3 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.71 (ddd, J = 8.0, 6.2, 1.9 ㎐, 2H), 4.51 - 4.35 (m, 4H), 4.20 (qd, J = 11.3, 6.3 ㎐, 2H), 3.93 (dq, J = 9.6, 7.2 ㎐, 1H), 3.22 (tt, J = 7.6, 5.9 ㎐, 1H), 2.63 (dp, J = 17.6, 7.0 ㎐, 2H), 1.29 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.26 - 1.06 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.94. LCMS: MS m/z = 729.22 [M+1], tR = 1.35분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.36분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 202. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.81 (s, 1H), 7.30 (dd, J = 8.7, 7.0 ㎐, 2H), 7.16 (ddd, J = 8.1, 2.4, 1.2 ㎐, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.96 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.72 (ddd, J = 7.9, 6.3, 4.2 ㎐, 2H), 4.51 (dd, J = 11.0, 5.7 ㎐, 1H), 4.46 - 4.36 (m, 3H), 4.33 - 4.19 (m, 2H), 3.86 (dq, J = 9.2, 7.1 ㎐, 1H), 3.27 - 3.19 (m, 1H), 2.64 (dp, J = 15.4, 7.0 ㎐, 2H), 1.26 - 1.10 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.01. LCMS: MS m/z = 729.21 [M+1], tR = 1.34분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.30분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 203. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(옥세탄-3-일메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00569
5 mL의 THF 중에 실시예 49(92 mg, 0.16 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 프로피온산(46 mg, 0.63 mmol) 및 DIC(99 mg, 0.78 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(95 mg, 0.78 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (d, J = 9.3 ㎐, 1H), 7.37 - 7.23 (m, 2H), 7.24 - 7.08 (m, 3H), 6.83 (dd, J = 7.2, 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (dd, J = 11.1, 4.5 ㎐, 1H), 5.94 (dd, J = 25.1, 5.9 ㎐, 1H), 5.84 (ddd, J = 21.2, 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.69 (t, J = 4.3 ㎐, 1H), 4.71 (ddd, J = 7.9, 6.1, 4.0 ㎐, 2H), 4.55 - 4.35 (m, 4H), 4.31 - 4.10 (m, 2H), 3.99 - 3.79 (m, 1H), 3.22 (dddd, J = 12.8, 7.9, 6.3, 1.8 ㎐, 1H), 2.52 - 2.32 (m, 4H), 1.34 - 1.21 (m, 3H), 1.14 (dtd, J = 13.8, 7.5, 3.1 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.99, 2.95. LCMS: MS m/z = 701.28 [M+1], tR = 1.27분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 4.87 및 4.94분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IC, 150 x 4.6 mm, 헵탄 80%, 에탄올 20%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00570
Figure pct00571
실시예 204. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.37 - 7.27 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.81 (dd, J = 5.9, 4.8 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.72 (ddd, J = 8.1, 6.3, 1.9 ㎐, 2H), 4.48 - 4.35 (m, 4H), 4.20 (qd, J = 11.3, 6.3 ㎐, 2H), 3.99 - 3.86 (m, 1H), 3.22 (tt, J = 8.0, 6.1 ㎐, 1H), 2.53 - 2.33 (m, 4H), 1.29 (dd, J = 7.1, 1.2 ㎐, 3H), 1.15 (dt, J = 14.9, 7.5 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.95. LCMS: MS m/z = 701.12 [M+1], tR = 1.31분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 4.94분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 205. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.81 (s, 1H), 7.34 - 7.22 (m, 2H), 7.20 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.86 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.72 (ddd, J = 7.9, 6.2, 4.1 ㎐, 2H), 4.51 (dd, J = 11.0, 5.8 ㎐, 1H), 4.42 (tdd, J = 6.0, 4.7, 2.0 ㎐, 3H), 4.33 - 4.19 (m, 2H), 3.93 - 3.79 (m, 1H), 3.29 - 3.20 (m, 1H), 2.56 - 2.33 (m, 4H), 1.24 (dd, J = 7.1, 1.3 ㎐, 3H), 1.15 (dt, J = 14.2, 7.6 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.99. LCMS: MS m/z = 701.20 [M+1], tR = 1.30분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 4.87분; Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 206. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(옥세탄-3-일옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2,2-다이메틸프로파노에이트)
Figure pct00572
5 mL의 THF 중에 실시예 44(67 mg, 0.12 mmol)를 용해시키고, 이 용액에 피발산(96 mg, 0.94 mmol) 및 DIC(148 mg, 1.16 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DMAP(142 mg, 1.16 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 75℃에서 하룻밤 교반하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (d, J = 13.5 ㎐, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (t, J = 4.4 ㎐, 1H), 6.75 (dd, J = 6.5, 4.5 ㎐, 1H), 5.95 (dd, J = 21.5, 5.8 ㎐, 1H), 5.79 (ddd, J = 19.6, 5.7, 4.2 ㎐, 1H), 5.68 - 5.59 (m, 1H), 5.32 (dtt, J = 16.6, 6.3, 5.1 ㎐, 1H), 4.82 - 4.74 (m, 2H), 4.52 (dddd, J = 13.9, 7.8, 3.7, 1.0 ㎐, 3H), 4.45 - 4.34 (m, 1H), 3.91 (ddq, J = 32.6, 9.2, 7.1 ㎐, 1H), 1.28 (d, J = 0.8 ㎐, 12H), 1.22 (d, J = 4.0 ㎐, 9H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 2.93, 2.91. LCMS: MS m/z = 743.22 [M+1], tR = 1.43분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.71 및 5.78분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 207. (2R,3S,4S,5S)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-아미노사이클로헥실)메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00573
((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.19 mL, 1.06 mmol) 및 염화마그네슘(61.5 mg, 0.63 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(3.0 mL) 중 중간체 4(68.8 mg, 0.21 mmol) 및 중간체 64(130.9 mg, 0.21 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 55℃로 가열하였다. 90분 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(2 x 20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.20 mL)을 0℃에서 아세토니트릴(5 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하였다. 1시간 후에, 혼합물을 냉동기 안에 넣었다. 16시간 후에, 반응물을 포화 중탄산나트륨 용액(6 mL)으로 염기성화하고, 실온으로 가온하였다. 이 혼합물에 다이-tert-부틸 다이카르보네이트(49.8 mg, 0.21 mmol)를 첨가하였다. 6시간 후에, 추가의 다이-tert-부틸 다이카르보네이트(31.4 mg, 0.14 mmol)를 첨가하였다. 16시간 후에, 혼합물을 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석시키고, 상을 분리하였다. 유기 층을 포화 중탄산나트륨 용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트, 이어서 에틸 아세테이트 중 0 내지 10% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (d, J = 8.8 ㎐, 1H), 7.37 - 7.26 (m, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.86 (dd, J = 4.5, 1.4 ㎐, 1H), 6.74 (dd, J = 4.6, 2.8 ㎐, 1H), 5.53 - 5.45 (m, 1H), 4.66 - 4.58 (m, 1H), 4.55 - 4.38 (m, 2H), 4.38 - 4.30 (m, 1H), 3.96 - 3.70 (m, 3H), 3.23 (s, 1H), 1.93 - 1.84 (m, 2H), 1.78 - 1.67 (m, 2H), 1.43 (d, J = 1.3 ㎐, 9H), 1.28 - 1.25 (m, 3H), 1.18 - 0.95 (m, 4H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.22. LCMS: MS m/z = 730.18 [M+1], tR = 0.92분, 0.93분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.47분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
Figure pct00574
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). 아이소부티르산 무수물(46.2 μL, 0.28 mmol)을 실온에서 2-메틸테트라하이드로푸란(3.0 mL) 중 ((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메틸 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(101.7 mg, 0.14 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(3.3 mg, 0.03 mmol)의 용액에 첨가하였다. 10분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(10 mL) 및 염수(10 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.83 (d, J = 10.3 ㎐, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.86 (dd, J = 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (dd, J = 12.0, 4.6 ㎐, 1H), 5.94 (dd, J = 27.9, 5.9 ㎐, 1H), 5.82 (ddd, J = 24.4, 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.68 (t, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 2H), 3.98 - 3.72 (m, 3H), 3.23 (s, 1H), 2.74 - 2.51 (m, 2H), 1.89 (d, J = 13.7 ㎐, 2H), 1.73 (d, J = 12.5 ㎐, 3H), 1.62 - 1.48 (m, 2H), 1.43 (d, J = 1.1 ㎐, 9H), 1.30 - 1.15 (m, 15H), 1.13 - 0.94 (m, 5H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.00. LCMS: MS m/z = 870.36 [M+1], tR = 1.24분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.66분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
Figure pct00575
(2R,3S,4S,5S)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-아미노사이클로헥실)메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). 트라이플루오로아세트산(0.5 mL)을 0℃에서 다이클로로메탄(5.0 mL) 중 (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-(((1r,4S)-4-((tert-부톡시카르보닐)아미노)사이클로헥실)메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)(92.4 mg, 0.11 mmol)의 용액에 첨가하였다. 4.5시간 후에, 반응 혼합물을 아세토니트릴(15 mL)로 희석시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 이 물질을 2,4-다이옥산(2 x 10 mL) 및 아세토니트릴(10 mL)과 동시증발시켜, TFA 염으로서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.92 (d, J = 9.4 ㎐, 1H), 7.38 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.14 (m, 3H), 7.08 (s, 1H), 6.92 - 6.81 (m, 1H), 5.93 - 5.73 (m, 2H), 5.70 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.58 - 4.38 (m, 2H), 4.01 - 3.83 (m, 3H), 3.07 - 2.94 (m, 1H), 2.77 - 2.57 (m, 2H), 2.03 (d, J = 12.4 ㎐, 2H), 1.86 (d, J = 13.1 ㎐, 2H), 1.63 (s, 1H), 1.46 - 1.27 (m, 5H), 1.27 - 1.15 (m, 12H), 1.12 (d, J = 13.3 ㎐, 2H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -77.65. 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.08. LCMS: MS m/z = 770.27 [M+1], tR = 0.91분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.11분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 SFC(Chiralpak IA, 5 um, 4.6 x 150 mm, 메탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00576
Figure pct00577
실시예 208. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.88 (s, 1H), 7.35 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.14 (m, 3H), 7.00 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.84 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.93 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 6.0, 4.5 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.53 (dd, J = 11.1, 5.5 ㎐, 1H), 4.44 (dd, J = 11.0, 5.1 ㎐, 1H), 3.99 - 3.84 (m, 3H), 3.07 - 2.93 (m, 1H), 2.73 - 2.58 (m, 2H), 2.01 (d, J = 12.7 ㎐, 2H), 1.85 (d, J = 13.4 ㎐, 2H), 1.63 (s, 1H), 1.34 (d, J = 12.3 ㎐, 2H), 1.28 (dd, J = 7.2, 1.2 ㎐, 3H), 1.26 - 1.16 (m, 12H), 1.12 (d, J = 11.8 ㎐, 2H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -77.59. 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.05. LCMS: MS m/z = 770.29 [M+1], tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.02분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 209. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.97 (s, 1H), 7.36 - 7.29 (m, 2H), 7.24 - 7.18 (m, 3H), 7.14 (s, 1H), 6.87 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.85 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 5.79 - 5.74 (m, 1H), 5.71 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.51 - 4.40 (m, 2H), 4.00 - 3.85 (m, 3H), 3.06 - 2.94 (m, 1H), 2.65 (dp, J = 19.3, 7.0 ㎐, 2H), 2.03 (d, J = 12.4 ㎐, 2H), 1.86 (d, J = 13.3 ㎐, 2H), 1.64 (s, 1H), 1.41 - 1.30 (m, 5H), 1.26 - 1.15 (m, 12H), 1.13 (d, J = 13.7 ㎐, 2H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -77.67. 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.09. LCMS: MS m/z = 770.35 [M+1], tR = 1.14분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.08분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 210. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(2-(메틸설포닐)에톡시) 포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00578
아이소부티르산(4 μL, 0.0446 mmol)과 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(6.6 μL, 0.0426 mmol)를 1 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에서 혼합하고 용해시키고, 30분 동안 교반하였다. 실시예 42(5 mg, 0.0085 mmol)를 첨가하였다. DMAP(1 mg, 0.0085 mmol)를 첨가하고, 4시간 동안 교반하였다.
메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. 조 잔류물을 중성 조건(5 내지 100% MeCN/물) 하에서 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.87 (m, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.82 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.84 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 5.01 - 4.85 (m, 1H), 4.50 - 4.30 (m, 4H), 3.85 - 3.71 (m, 1H), 3.52 - 3.38 (m, 2H), 2.97 (m, 3H), 2.78 - 2.53 (m, 2H), 1.35 - 1.12 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.64, 7.78. LCMS: MS m/z = 731.3 [M+1], tR = 1.60분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.05분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.139, 5.199분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 211. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-(((비스(((S)-1-에톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이펜타노에이트
Figure pct00579
THF(4 mL) 중 실시예 35(64 mg, 0.112 mmol), 발레르산(0.05 mL, 0.455 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.040 mL, 0.255 mmol)의 혼합물에 DMAP(14 mg, 0.115 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 추가의 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.04 mL, 0.255 mmol)를 첨가하였다. 2시간 교반 후에, 추가의 발레르산(0.05 mL, 0.455 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 30분 동안 교반하고, 메탄올(1 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.91 (s, 1H), 6.81 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.78 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.55 (s, 2H), 5.86 - 5.80 (m, 2H), 5.67 (dd, J = 2.8, 1.8 ㎐, 1H), 4.33 (dd, J = 11.3, 7.0 ㎐, 1H), 4.22 (dd, J = 11.3, 5.5 ㎐, 1H), 4.18 - 3.98 (m, 4H), 3.95 - 3.73 (m, 4H), 2.46 (td, J = 7.4, 4.7 ㎐, 2H), 2.36 (t, J = 7.4 ㎐, 2H), 1.70 - 1.50 (m, 4H), 1.36 (m, 4H), 1.27 - 1.17 (m, 12H), 0.94 (t, J = 7.4 ㎐, 3H), 0.89 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 12.18. LCMS: MS m/z = 738.49 [M+1]; tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.86분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 212. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-(((비스(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이부티레이트
Figure pct00580
THF(3 mL) 중 실시예 38(46 mg, 0.085 mmol), 부티르산(0.109 mL, 1.189 mmol), 및 N,N-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.033 mL, 0.212 mmol)의 혼합물에 DMAP(11 mg, 0.090 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 메탄올(1 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini-NX 10μ C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 25분 전개에서 0% 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.91 (s, 1H), 6.81 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.50 (s, 2H), 5.87 - 5.83 (m, 2H), 5.67 (dd, J = 3.2, 1.3 ㎐, 1H), 4.33 (dd, J = 11.3, 7.0 ㎐, 1H), 4.22 (dd, J = 11.3, 5.6 ㎐, 1H), 3.83 (m, 4H), 3.65 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 2.51 - 2.37 (m, 2H), 2.34 (t, J = 7.3 ㎐, 2H), 1.65 (dq, J = 25.7, 7.4 ㎐, 4H), 1.30 - 1.19 (m, 6H), 0.98 (t, J = 7.4 ㎐, 3H), 0.92 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 12.04. LCMS: MS m/z = 682.40 [M+1]; tR = 0.94분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.97분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 213. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(2-(메틸티오)에톡시) 포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00581
아이소부티르산(5 μL, 0.0525 mmol)과 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(8 μL, 0.05 mmol)를 1 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시키고, 30분 동안 교반하였다. 실시예 40(5.6 mg, 0.01 mmol) 및 DMAP(1.2 mg, 0.01 mmol)를 첨가하고, 4시간 동안 교반하였다.
메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. 조 잔류물을 중성 조건(5 내지 100% MeCN/물) 하에서 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.86 (m, 1H), 6.87 (m, 1H), 6.81 (m, 1H), 5.93 (m, 1H), 5.84 (m, 1H), 5.67 (m, 1H), 5.02 - 4.84 (m, 1H), 4.45 - 4.27 (m, 2H), 4.20 - 4.04 (m, 2H), 3.84 - 3.68 (m, 1H), 2.79 - 2.55 (m, 4H), 2.09 (m, 3H), 1.33 - 1.12 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.57, 7.67. LCMS: MS m/z = 699.3 [M+1], 697.4 [M-1], tR = 1.70분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.33분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.662, 5.687분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 214. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(2-메톡시에톡시)포스포릴) 옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00582
아이소부티르산(4 μL, 0.045 mmol)과 N,N'-다이아이소프로필카르보다이이미드(7 μL, 0.045 mmol)를 1 mL의 무수 테트라하이드로푸란 중에 용해시키고, 30분 동안 교반하였다. 실시예 41(5.1 mg, 0.009 mmol) 및 DMAP(1 mg, 0.009 mmol)를 첨가하고, 4시간 동안 교반하였다.
메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 20분 동안 교반하였다. 조 잔류물을 중성 조건(물 중 5 내지 100% MeCN) 하에서 분취용 HPLC로 정제하였다. 원하는 생성물을 함유하는 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.86 (m, 1H), 6.90 - 6.84 (m, 1H), 6.81 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.83 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 4.91 (m, 1H), 4.44 - 4.27 (m, 2H), 4.19 - 4.06 (m, 2H), 3.77 (m, 1H), 3.56 (m, 2H), 3.35 (m, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.32 - 1.12 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.79, 7.88. LCMS: MS m/z = 683.2 [M+1], 681.3 [M-1], tR = 1.65분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.18분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.362분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 215. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(4-(2-메톡시에톡시)페녹시)포스포릴) 옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00583
프로피온산 무수물(16.2 μL, 0.13 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(1.5 mL) 중 실시예 53(45.0 mg, 0.07 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(1.3 mg, 0.01 mmol)의 용액에 첨가하였다. 10분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트, 이어서 에틸 아세테이트 중 0 내지 25% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.83 (d, J = 3.6 ㎐, 1H), 7.09 (ddd, J = 13.9, 9.2, 1.4 ㎐, 2H), 6.89 - 6.81 (m, 3H), 6.75 (dd, J = 18.1, 4.5 ㎐, 1H), 5.92 (dd, J = 13.2, 5.9 ㎐, 1H), 5.82 (ddd, J = 21.0, 5.8, 4.7 ㎐, 1H), 5.69 (dd, J = 7.0, 4.7 ㎐, 1H), 4.98 - 4.85 (m, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 2H), 4.07 (ddd, J = 6.2, 3.0, 1.5 ㎐, 2H), 3.90 - 3.75 (m, 1H), 3.72 (ddt, J = 4.5, 3.1, 1.4 ㎐, 2H), 3.41 (d, J = 1.0 ㎐, 3H), 2.54 - 2.34 (m, 4H), 1.26 (ddd, J = 20.2, 7.2, 1.1 ㎐, 3H), 1.22 - 1.11 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.49. LCMS: MS m/z = 747.45 [M+1], tR = 1.31분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.66분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 216. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-모르폴리노아세테이트)
Figure pct00584
N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.04 mL, 0.29 mmol)를 실온에서 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 실시예 1(40 mg, 0.071 mmol) 및 2-모르폴리노아세트산 하이드로클로라이드(107 mg, 0.57 mmol)의 용액에 첨가하였다. 5분 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(15.0 mg, 0.11 mmol)을 첨가하였다. 1.5시간 후에, 메탄올(0.2 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å 250 x 30.0 mm 컬럼, 5 내지 75% 아세토니트릴/물 구배)를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.83 (s, 1H), 7.31 (dd, J = 8.7, 7.2 ㎐, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.00 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.90 (dd, J = 5.9, 4.9 ㎐, 1H), 5.72 (d, J = 4.9 ㎐, 1H), 4.88 (q, J = 6.3 ㎐, 4H), 4.54 - 4.40 (m, 2H), 3.91 - 3.82 (m, 1H), 3.82 - 3.63 (m, 6H), 3.45 - 3.32 (m, 4H), 2.69 - 2.53 (m, 7H), 1.98 (d, J = 17.7 ㎐, 1H), 1.30 - 1.17 (m, 5H), 1.17 - 1.09 (m, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.17. LCMS: MS m/z = 815.35 [M+H], tR = 1.00분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.11분, HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 217. (2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2-아미노-3-메톡시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트
Figure pct00585
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((4-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트. 프로피온산 무수물(20.5 μL, 0.16 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(1.5 mL) 중 실시예 72(63.4 mg, 0.08 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(1.5 mg, 0.01 mmol)의 용액에 첨가하였다. 15분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트, 이어서 에틸 아세테이트 중 0 내지 25% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.81 (d, J = 12.8 ㎐, 1H), 7.36 - 7.20 (m, 5H), 7.17 - 7.04 (m, 4H), 6.83 (t, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.74 (dd, J = 4.5, 1.0 ㎐, 1H), 5.93 (dd, J = 11.1, 5.9 ㎐, 1H), 5.83 (ddd, J = 10.5, 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.69 (t, J = 4.9 ㎐, 1H), 5.02 (d, J = 5.3 ㎐, 2H), 4.97 - 4.85 (m, 1H), 4.57 - 4.36 (m, 3H), 3.81 (ddq, J = 21.0, 9.1, 7.0 ㎐, 1H), 3.69 (d, J = 1.2 ㎐, 3H), 3.12 (dd, J = 13.9, 5.3 ㎐, 1H), 2.92 (ddd, J = 14.0, 9.1, 2.2 ㎐, 1H), 2.54 - 2.35 (m, 4H), 1.28 - 1.09 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.13 (d, J = 4.0 ㎐). LCMS: MS m/z = 908.59 [M+1], tR = 1.44분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.21분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
Figure pct00586
(2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2-아미노-3-메톡시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트. 탄소 상의 팔라듐(17.7 mg, 10 중량%)을 아르곤으로 퍼지된 에탄올(5 mL) 중 (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((4-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-아이소프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 다이프로피오네이트(62.5 mg, 0.07 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 수소로 퍼지하고, 실온에서 교반하였다. 17시간 후에, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터를 에탄올로 헹구고, 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하였다. 잔류물을 동결건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.82 (d, J = 8.5 ㎐, 1H), 7.17 - 7.07 (m, 4H), 6.85 (dd, J = 6.9, 4.6 ㎐, 1H), 6.76 (t, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.92 (dd, J = 9.5, 5.9 ㎐, 1H), 5.88 - 5.78 (m, 1H), 5.69 (dd, J = 8.6, 4.6 ㎐, 1H), 4.98 - 4.85 (m, 1H), 4.55 - 4.37 (m, 2H), 3.82 (ddd, J = 17.7, 9.4, 7.0 ㎐, 1H), 3.70 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 3.67 (d, J = 3.2 ㎐, 3H), 2.99 (ddd, J = 13.5, 6.1, 4.1 ㎐, 1H), 2.89 (dd, J = 13.6, 7.0 ㎐, 1H), 2.54 - 2.36 (m, 4H), 1.26 (ddd, J = 15.1, 7.1, 1.2 ㎐, 3H), 1.22 - 1.11 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.14. LCMS: MS m/z = 774.20 [M+1], tR = 1.08분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.70분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 218. (2R,3S,4S,5S)-2-시아노-5-(4-(((E)-(다이메틸아미노)메틸렌)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00587
또는
Figure pct00588
실시예 148(50 mg, 0.067 mmol)의 용액에 N,N-다이메틸포름아미드 다이메틸 아세탈(16 mg, 0.14 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 하룻밤 교반하고, 이어서 반응 혼합물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 8.90 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.4, 7.4 ㎐, 2H), 7.20 (dddd, J = 8.2, 4.4, 1.8, 0.9 ㎐, 3H), 6.87 - 6.78 (m, 2H), 5.91 - 5.79 (m, 2H), 5.70 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.83 (tt, J = 8.3, 4.1 ㎐, 1H), 4.43 (qd, J = 11.2, 6.3 ㎐, 2H), 4.26 (dd, J = 12.0, 9.9 ㎐, 1H), 3.98 - 3.83 (m, 1H), 3.78 (dt, J = 11.3, 5.5 ㎐, 1H), 3.45 (ddt, J = 11.6, 8.5, 3.0 ㎐, 2H), 3.25 - 3.19 (m, 6H), 2.64 (ddq, J = 31.2, 13.9, 7.0 ㎐, 2H), 2.16 (s, 4H), 1.79 (ddp, J = 8.0, 5.9, 4.0 ㎐, 1H), 1.60 - 1.46 (m, 1H), 1.53 (s, 1H), 1.32 - 1.10 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.54. LCMS: MS m/z = 798.61 [M+1], tR = 1.72분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.77분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 219. (2R,3S,4S,5S)-2-시아노-5-(4-(((E)-1-(다이메틸아미노)에틸리덴)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00589
또는
Figure pct00590
DMF 중 실시예 147(65 mg, 0.088 mmol)의 용액에 N,N-다이메틸아세트아미드 다이메틸 아세탈(26 mg, 0.19 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 하룻밤 교반하고, 이어서 반응 혼합물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 8.06 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.7, 7.1 ㎐, 2H), 7.24 - 7.16 (m, 3H), 6.77 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 6.67 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.92 - 5.79 (m, 2H), 5.69 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.84 (tt, J = 8.3, 4.1 ㎐, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 4.30 - 4.20 (m, 1H), 3.78 (dt, J = 10.6, 4.9 ㎐, 2H), 3.45 (ddt, J = 11.8, 8.4, 3.3 ㎐, 2H), 3.20 (t, J = 9.9 ㎐, 6H), 2.65 (dp, J = 30.7, 7.0 ㎐, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.53 (dtd, J = 12.6, 8.9, 8.4, 3.7 ㎐, 2H), 1.31 - 1.11 (m, 16H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.52. LCMS: MS m/z = 812.48 [M+1], tR = 1.47분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.52분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 220. (2R,3S,4S,5S)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-(1-메틸피페리딘-4-카르복스아미도)피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(1-메틸 피페리딘-4-카르복실레이트)
Figure pct00591
실시예 52(22 mg, 0.04 mmol)를 2 mL의 무수 THF 중에 용해시켰다. 1-메틸피페리딘-4-카르복실산 하이드로클로라이드(29 mg, 0.16 mmol) 및 EDAC(31 mg, 0.16 mmol)를 반응물에 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 중탄산나트륨(200 mg) 및 DMAP(5 mg, 0.04 mmol)를 반응물에 첨가하고, 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 추가의 1-메틸피페리딘-4-카르복실산 하이드로클로라이드(29 mg, 0.16 mmol) 및 EDAC(31 mg, 0.16 mmol)를 반응물에 첨가하였다. 중탄산나트륨(200 mg) 및 DMAP(10 mg)를 반응물에 첨가하고, 이어서 이것을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(15 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(3 x 10 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 감압 하에서 농축시켰다. 조 물질을 DCM(10 mL) 중에 용해시켰다. 1-메틸피페리딘-4-카르복실산 하이드로클로라이드(29 mg, 0.16 mmol), EDAC(31 mg, 0.16 mmol) 및 DMAP(50 mg)를 첨가하였다. 반응물을 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM(10 mL)으로 희석시키고, 중탄산나트륨 용액(2 x 5 mL)으로 세척하였다. 유기물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 10 내지 20% 메탄올/DCM(1% 트라이에틸아민을 사용함))를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.19 (s, 1H), 7.34 - 7.26 (m, 2H), 7.23 - 7.11 (m, 4H), 6.96 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 5.83 (dd, J = 5.7, 4.6 ㎐, 1H), 5.78 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.54 - 4.36 (m, 2H), 3.90 (dq, J = 10.2, 7.1 ㎐, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.98 (m, 2H), 2.93 - 2.72 (m, 5H), 2.47 (m, 2H), 2.36 - 2.23 (m, 9H), 2.23 - 2.07 (m, 6H), 2.07 - 1.64 (m, 13H), 1.28 (d, J = 7.2, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.08. LCMS: MS m/z = 908.3 [M+1], 906.7 [M-1], tR = 0.94분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.08분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.473분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 221. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-((테트라하이드로-2H-피란-4-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 (2S,2'S)-비스(2-아미노-3-메틸부타노에이트)의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00592
THF 중 실시예 57(30 mg, 0.05 mmol)의 용액에 Boc-Val(43 mg, 0.2 mmol) 및 N,N'-다이아이소프로필 카르보다이이미드(25 mg, 0.2 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 후, DMAP(6 mg, 0.05 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 하룻밤 교반하였다. 이어서, 반응물을 MeOH로 켄칭하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, 2% 시트르산 수용액, 그리고 이어서 염수로 세척하였다. 유기 상을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 컬럼(헥산 중 0 내지 100% EtOAc)으로 정제하였다. 이어서, 정제된 중간체를 MeCN(5 mL) 중에 용해시키고, 빙조 내에서 질소 분위기 하에서 교반하였다. 진한 HCl(aq)(300 uL)을 적가하였다. 반응물을 4시간 동안 교반하였다. 조 반응 혼합물을 분취용 HPLC 컬럼 상에 로딩하고, TFA 변형제를 사용하는 5 내지 100% MeCN의 선형 구배로 용리하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.87 (s, 1H), 7.33 (dd, J = 8.6, 7.2 ㎐, 2H), 7.25 - 7.10 (m, 3H), 6.90 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.86 - 6.75 (m, 1H), 6.44 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 6.04 (dd, J = 5.9, 3.1 ㎐, 1H), 5.80 (d, J = 3.1 ㎐, 1H), 4.77 (tt, J = 8.2, 4.0 ㎐, 1H), 4.49 (dd, J = 6.1, 2.4 ㎐, 2H), 4.11 (dd, J = 12.2, 4.1 ㎐, 2H), 3.90 - 3.72 (m, 3H), 3.44 (dtd, J = 11.9, 8.8, 3.3 ㎐, 2H), 2.49 (dtt, J = 14.1, 7.0, 4.0 ㎐, 2H), 1.85 - 1.69 (m, 2H), 1.54 (dddd, J = 13.5, 8.7, 6.8, 4.1 ㎐, 2H), 1.34 - 1.21 (m, 3H), 1.19 - 1.02 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.65. LCMS: MS m/z = 801.14 [M+1], tR = 1.07분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 2.48분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 222. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(3-메톡시프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00593
THF(3 mL) 중 실시예 60(30 mg, 0.051 mmol) 및 아이소부티르산 무수물(0.019 mL, 0.164 mmol)의 혼합물에 DMAP(2 mg, 0.016 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 x 30 mm 컬럼, 10 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.4, 7.4 ㎐, 2H), 7.25 - 7.13 (m, 3H), 6.76 (d, J = 0.8 ㎐, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.87 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.81 (dd, J = 6.0, 4.5 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.50 - 4.34 (m, 3H), 4.13 - 3.98 (m, 2H), 3.91 (m, 1H), 3.36 (t, J = 6.2 ㎐, 2H), 3.25 (s, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.27 (dd, J = 7.1, 0.9 ㎐, 3H), 1.22 (t, J = 6.9 ㎐, 6H), 1.18 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.15 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.48. LCMS m/z = 731.36 (M+H), tR = 1.37분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.66분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 223. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(2-모르폴리노에톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00594
N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.13 mL, 0.76 mmol) 및 염화마그네슘(43 mg, 0.45 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(7.5 mL) 중 중간체 4(100.0 mg, 0.30 mmol) 및 중간체 67(216 mg, 0.45 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 55℃로 가열하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되게 하고, 에틸 아세테이트(30 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(5 x 20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 진한 염산 수용액(0.53 mL)을 0℃에서 아세토니트릴(7.5 mL) 중 조 잔류물에 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하였다. 2시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(100 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(75 mL) 및 염수(75 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 생성된 조 잔류물(80 mg)을 실온에서 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.13 mL, 0.76 mmol), N,N′-다이아이소프로필카르보다이이미드(0.113 g, 1.0 mmol), 4-다이메틸아미노피리딘(33 mg, 0.27 mmol) 및 아이소부티르산(89 mg, 1.01 mmol)에 노출시켰다. 실온에서 20시간 후에, 메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 물(15 mL) 및 염수(15 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å AXIA 250 x 21.2 mm 컬럼, 30 내지 70% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA를 사용함))를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.99 (d, J = 11.7 ㎐, 1H), 7.34 (dt, J = 15.6, 8.1 ㎐, 2H), 7.28 - 7.13 (m, 2H), 6.99 - 6.83 (m, 2H), 5.87 (dd, J = 8.6, 5.9 ㎐, 1H), 5.83 - 5.75 (m, 1H), 5.73 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 4.80 - 4.14 (m, 6H), 3.85 (s, 6H), 3.56 - 3.31 (m, 7H), 2.79 - 2.50 (m, 3H), 1.56 - 0.74 (m, 13H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.36, 3.42. LCMS: MS m/z = 772.47 [M+1], tR = 1.10분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.66분, HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 224. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(2-(다이아이소프로필아미노)에톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00595
아이소부티르산 무수물(36 μL, 0.39 mmol)을 실온에서 테트라하이드로푸란(3 mL) 및 아세토니트릴(1 mL) 중 조 실시예 74(50 mg, 약 0.08 mmol)의 용액에 첨가하였다. 10분 후에, 4-다이메틸아미노피리딘(1.8 mg, 0.1 mmol)을 첨가하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 물(3.5 mL)로 희석시켰다. 조 용액을 분취용 HPLC(Phenomenex Synergi 4 um Polar-RP 80Å 150 x 21.2 mm 컬럼, 35 내지 55% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA를 사용함))를 거쳐서, TFA 염으로서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 8.89 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.33 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.26 - 7.10 (m, 4H), 6.89 (dd, J = 8.6, 4.7 ㎐, 1H), 5.76 (dq, J = 9.9, 5.9 ㎐, 2H), 5.69 (dd, J = 5.9, 4.0 ㎐, 1H), 4.65 (ddd, J = 49.2, 12.4, 9.2 ㎐, 1H), 4.54 - 4.26 (m, 4H), 3.91 (h, J = 8.5, 7.9 ㎐, 1H), 3.63 (s, 2H), 3.28 (s, 2H), 2.73 - 2.52 (m, 3H), 1.33 - 1.25 (m, 15H), 1.22 - 1.13 (m, 12H). 19F NMR (376 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ -76.83. 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 2.31. LCMS: MS m/z = 786.22 [M+1], tR = 1.31분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.00분, 4.06분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 225. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-부톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00596
아이소부티르산 무수물(30 μL, 0.14 mmol)을 실온에서 2-메틸 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 실시예 54(40 mg, 0.07 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(5.5 mg, 0.05 mmol)의 용액에 첨가하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, CD3CN) δ 7.82 (d, J = 9.9 ㎐, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd, J = 7.5, 4.5 ㎐, 1H), 6.76 (dd, J = 11.1, 4.6 ㎐, 1H), 5.95 (dd, J = 23.4, 5.9 ㎐, 1H), 5.83 (ddd, J = 19.6, 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.68 (t, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 2H), 4.16 - 3.96 (m, 2H), 3.94 - 3.76 (m, 1H), 2.77 - 2.55 (m, 2H), 1.31 - 1.14 (m, 20H). 31P NMR (162 ㎒, CD3CN) δ 2.49, 2.37. LCMS: MS m/z = 715.05 [M+1], tR = 1.21분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.34분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 실시예 225를 키랄 SFC(Chiralpak IF, 5 um, 4.6 x 150 mm, 메탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00597
Figure pct00598
실시예 226. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 5.9, 4.4 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.51 (dd, J = 11.0, 5.7 ㎐, 1H), 4.41 (dd, J = 11.1, 4.9 ㎐, 1H), 4.05 (td, J = 6.6, 5.6 ㎐, 1H), 3.94 - 3.74 (m, 1H), 2.64 (dp, J = 14.0, 7.0 ㎐, 2H), 1.64 - 1.50 (m, 3H), 1.43 1.13 (m, 16H), 0.89 (t, J = 7.4 ㎐, 4H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.07. LCMS: MS m/z = 715.14 [M+1], tR = 1.21분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.183분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 227. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.85 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.9 ㎐, 2H), 7.23 - 7.10 (m, 3H), 6.94 - 6.84 (m, 1H), 6.75 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.89 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.78 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.43 (dd, J = 5.8, 2.4 ㎐, 2H), 4.09 - 3.83 (m, 1H), 2.64 (dp, J = 16.7, 7.0 ㎐, 2H), 1.60 - 1.48 (m, 2H), 1.43 - 1.29 (m, 4H), 1.29 - 1.25 (m, 3H), 1.25 - 1.12 (m, 12H), 0.89 (t, J = 7.4 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.03. LCMS: MS m/z = 715.14 [M+1], tR = 1.21분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 6.185분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Kinetx 2.6u C18, 100 mm x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 228. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(((S)-1-메틸피롤리딘-3-일)옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00599
실시예 15(15 mg, 0.025 mmol)를 2 mL의 무수 THF 중에 용해시키고, 실온에서 교반하였다. 아이소부티르산 무수물(8.3 uL, 0.05 mmol) 및 DMAP(0.3 mg, 0.0025 mmol)를 첨가하고, 반응물을 60분 동안 교반하였다. 추가의 아이소부티르산 무수물(3 uL)을 첨가하고, 반응물을 45분 동안 교반하였다.
메탄올(500 uL)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc(10 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 5 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 10 내지 20% 메탄올/DCM)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 중에 용해시키고, 물로 희석시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (m, 1H), 7.36 - 7.24 (m, 2H), 7.23 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.82 (m, 1H), 5.67 (m,1H), 5.16 - 4.99 (m, 1H), 4.57 - 4.37 (m, 2H), 3.88 (m, 1H), 2.76 (m, 1H), 2.72 - 2.53 (m, 4H), 2.32 (m, 4H), 2.25 - 2.06 (m, 1H), 1.86 - 1.70 (m, 1H), 1.37- 1.06 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.04, 2.99. LCMS: MS m/z = 742.3 [M+1], 740.3 [M-1], tR = 1.34분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.75분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.669, 4.701분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IA, 150 x 4.6 mm, SFC 30% 에탄올 등용매 용리)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00600
Figure pct00601
실시예 229. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.35 - 7.25 (m, 2H), 7.21 - 7.11 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.94 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 5.8, 4.6 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.13 (m, 1H), 4.59 - 4.36 (m, 2H), 3.86 (dq, J = 9.3, 7.1 ㎐, 1H), 2.83 (m, 1H), 2.78 - 2.55 (m, 4H), 2.42 (m, 1H), 2.36 (s, 3H), 2.23 (m, 1H), 1.82 (m, 1H), 1.35 - 1.10 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.04 (s). HPLC: tR = 4.655분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 230. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.84 (s, 1H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.83 - 5.75 (m, 1H), 5.67 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.04 (m, 1H), 4.52 - 4.35 (m, 2H), 3.89 (dq, J = 9.8, 7.1 ㎐, 1H), 2.76 (m, 1H), 2.71 - 2.54 (m, 4H), 2.30 (m, 4H), 2.22 - 2.06 (m, 1H), 1.77 (m, 1H), 1.36 - 1.07 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 2.99 (s). HPLC: tR = 4.703분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 231. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(3-메톡시프로파노에이트)
Figure pct00602
실시예 52(20 mg, 0.038 mmol)를 1.5 mL의 무수 THF 중에 용해시켰다. 3-메톡시 프로피온산(14 uL, 0.15 mmol)을 첨가하였다. N,N'-다이아이소프로필 카르보다이이미드(23 uL, 0.15 mmol)를 첨가하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다. 이어서, DMAP(5 mg, 0.038 mmol)를 첨가하고, 반응물을 2시간 동안 교반하였다.
메탄올(0.5 mL)을 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 EtOAc(10 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 5 mL), 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 5% 메탄올/DCM)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 및 물 중에 용해시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 7.36 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.10 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 6.0, 4.4 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.50 - 4.36 (m, 2H), 3.89 (dq, J = 10.0, 7.1 ㎐, 1H), 3.73 - 3.63 (m, 4H), 3.59 (s, 3H), 3.33 (s, 3H), 3.29 (s, 3H), 2.71 (t, J = 6.1 ㎐, 2H), 2.65 (td, J = 6.0, 1.7 ㎐, 2H), 1.26 (dd, J = 7.2, 1.1 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.01. LCMS: MS m/z = 705.3 [M+1], 703.2 [M-1], tR = 1.43분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.83분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.748분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 232. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(((R)-1-메틸피롤리딘-3-일)옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00603
실시예 61(23 mg, 0.038 mmol)을 4 mL의 무수 THF 중에 용해시키고, 실온에서 교반하였다. 아이소부티르산 무수물(12 uL, 0.076 mmol) 및 DMAP(0.5 mg, 0.0038 mmol)를 첨가하고, 반응물을 60분 동안 교반하였다. 추가의 아이소부티르산 무수물(3 uL)을 첨가하고, 반응물을 45분 동안 교반하였다.
메탄올(500 uL)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc(10 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 5 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 10 내지 20% 메탄올/DCM)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 중에 용해시키고, 물로 희석시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (m, 1H), 7.37 - 7.25 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.85 (m, 1H), 6.76 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.81 (m, 1H), 5.68 (m, 1H), 5.16 - 5.00 (m, 1H), 4.56 - 4.36 (m, 2H), 3.87 (m, 1H), 2.79 (m, 1H), 2.73 - 2.49 (m, 4H), 2.31 (m, 4H), 2.26 - 2.12 (m, 1H), 1.85 - 1.67 (m, 1H), 1.33 - 1.10 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.03, 3.01. LCMS: MS m/z = 742.5 [M+1], 740.4 [M-1], tR = 1.29분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 2.74분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 4.687, 4.706분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 분취용 HPLC(Chiralpak IF, 150 x 4.6 mm, SFC 30% 에탄올 등용매 용리)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00604
Figure pct00605
실시예 233. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.81 (s, 1H), 7.36 - 7.22 (m, 2H), 7.22 - 7.10 (m, 3H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.95 (d, J = 5.8 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 5.8, 4.5 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.11 (m, 1H), 4.57 - 4.37 (m, 2H), 3.85 (dq, J = 9.2, 7.1 ㎐, 1H), 2.77 (m, 1H), 2.71 - 2.56 (m, 4H), 2.39 - 2.32 (m, 1H), 2.30 (s, 3H), 2.22 (m, 1H), 1.76 (m, 1H), 1.30 - 1.13 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.03 (s). HPLC: tR = 4.681분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 234. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.84 (s, 1H), 7.37 - 7.26 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.84 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.79 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.06 (ddt, J = 8.1, 5.4, 2.5 ㎐, 1H), 4.51 - 4.37 (m, 2H), 3.89 (dq, J = 9.9, 7.1 ㎐, 1H), 2.80 (m, 1H), 2.74 - 2.50 (m, 4H), 2.32 (m, 4H), 2.20 (m, 1H), 1.75 (m, 1H), 1.28 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.26 - 1.12 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.01 (s). HPLC: tR = 4.706분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 235. (2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2-아미노-3-메톡시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00606
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((4-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). 아이소부티르산 무수물(20.0 μL, 0.12 mmol)을 실온에서 2-메틸 테트라하이드로푸란(1.5 mL) 중 실시예 62(53.3 mg, 0.07 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(1.3 mg, 0.01 mmol)의 용액에 첨가하였다. 5분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(25 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 에틸 아세테이트 중 0 내지 25% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (d, J = 16.5 ㎐, 1H), 7.36 - 7.22 (m, 5H), 7.17 - 7.04 (m, 4H), 6.84 (t, J = 4.8 ㎐, 1H), 6.74 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.94 (dd, J = 20.9, 5.8 ㎐, 1H), 5.83 (ddd, J = 15.4, 5.8, 4.5 ㎐, 1H), 5.68 (dd, J = 4.5, 1.6 ㎐, 1H), 5.02 (d, J = 3.9 ㎐, 2H), 4.58 - 4.34 (m, 3H), 3.96 - 3.72 (m, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.61 (d, J = 8.9 ㎐, 3H), 3.12 (dd, J = 14.0, 5.3 ㎐, 1H), 2.91 (dd, J = 14.0, 9.2 ㎐, 1H), 2.75 - 2.54 (m, 2H), 1.29 - 1.14 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.07, 3.02. LCMS: MS m/z = 908.56 [M+1], tR = 1.47분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.424분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
Figure pct00607
(2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2-아미노-3-메톡시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). 탄소 상의 팔라듐(10.6 mg, 10 중량%)을 아르곤으로 퍼지된 에탄올(5 mL) 중 (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((4-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-메톡시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)(37.3 mg, 0.04 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 수소로 퍼지하고, 실온에서 교반하였다. 17시간 후에, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터를 에탄올로 헹구고, 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하였다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Synergi 4 um Polar-RP 80Å 150 x 21.2 mm 컬럼, 20 내지 70% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA를 사용함))를 거쳐서, TFA 염으로서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.94 (dd, J = 21.1, 1.3 ㎐, 1H), 7.27 - 7.18 (m, 4H), 7.17 - 7.09 (m, 1H), 6.93 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.96 - 5.79 (m, 2H), 5.71 (dd, J = 4.6, 2.2 ㎐, 1H), 4.62 - 4.39 (m, 2H), 4.37 - 4.24 (m, 1H), 3.88 (ddd, J = 19.6, 9.8, 7.1 ㎐, 1H), 3.81 (d, J = 3.0 ㎐, 3H), 3.65 (d, J = 17.3 ㎐, 3H), 3.25 (ddd, J = 14.4, 6.2, 4.4 ㎐, 1H), 3.14 (dd, J = 14.6, 7.5 ㎐, 1H), 2.66 (dpd, J = 21.1, 7.2, 4.7 ㎐, 2H), 1.34 - 1.27 (m, 3H), 1.27 - 1.15 (m, 12H). 19F NMR (376 ㎒, 메탄올-d 4) δ -77.65. 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.34 (d, J = 2.3 ㎐). LCMS: MS m/z = 774.25 [M+1], tR = 1.10분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.82분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 236. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-(벤질옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00608
실시예 37(15 mg, 0.024 mmol)을 1.5 mL의 무수 THF 중에 용해시키고, 실온에서 교반하였다. 아이소부티르산 무수물(8 uL, 0.048 mmol) 및 DMAP(0.3 mg, 0.0024 mmol)를 첨가하고, 반응물을 30분 동안 교반하였다.
메탄올(500 uL)을 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc(10 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(2 x 5 mL), 그리고 이어서 염수(5 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 이어서 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 SiO2 컬럼 크로마토그래피(4 g SiO2 Combiflash HP Gold 컬럼, 0 내지 100% 에틸 아세테이트/헥산)를 통해 정제하였다. 분획을 합하고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 MeCN 중에 용해시키고, 물로 희석시키고, 냉동 건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.81 (m, 1H), 7.36 - 7.22 (m, 7H), 7.21 - 7.08 (m, 3H), 6.83 (m, 1H), 6.74 (m, 1H), 5.93 (m, 1H), 5.82 (m, 1H), 5.67 (m, 1H), 5.11 - 4.94 (m, 2H), 4.53 - 4.34 (m, 2H), 4.01 - 3.81 (m, 1H), 2.72 - 2.54 (m, 2H), 1.33 - 1.10 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.03, 2.97. LCMS: MS m/z = 749.5 [M+1], 747.1 [M-1], tR = 1.75분; LC 시스템: Thermo Dionex Ultimate 3000 UHPLC; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ C18 100A, 50 x 3 mm; 용매: A: 0.1% 아세트산을 함유하는 물, B: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴; 구배: 0분 내지 0.3분: 5% B, 0.3분 내지 1.5분: 5 내지 100% B, 1.5분 내지 2분: 100% B, 2분 내지 2.2분: 100 내지 5% B(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 3.57분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Phenomenex Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B(5분, 유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 6.128, 6.162분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 237. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(3-모르폴리노프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00609
아이소부티르산 무수물(29.0 μL, 0.17 mmol)을 실온에서 2-메틸 테트라하이드로푸란(2.0 mL) 중 실시예 67(78.4 mg, 0.10 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(1.8 mg, 0.02 mmol)의 용액에 첨가하였다. 10분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(2 x 15 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 100 mg의 생성된 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 10u C18 110Å AXIA 250 x 21.2 mm 컬럼, 30 내지 70% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA를 사용함)), 이어서 다이클로로메탄 중 0 내지 25% 메탄올로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서, 트라이플루오로아세테이트 염으로서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.96 (d, J = 2.6 ㎐, 1H), 7.41 - 7.27 (m, 3H), 7.27 - 7.15 (m, 3H), 6.95 (dd, J = 6.1, 4.7 ㎐, 2H), 5.75 (m, 4H), 4.57 - 4.38 (m, 4H), 4.16 - 3.98 (m, 3H), 3.94 (d, J = 12.9 ㎐, 2H), 3.79 (s, 1H), 3.38 (d, J = 12.1 ㎐, 2H), 3.10 (q, J = 7.2 ㎐, 2H), 2.94 (s, 1H), 2.75 - 2.57 (m, 2H), 2.00 (d, J = 13.8 ㎐, 3H), 1.38 - 1.13 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, CD3CN) δ -1.45, -1.59. LCMS: MS m/z = 786.41 [M+1], tR = 1.24분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.72분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Kinetx 2.6u 100A C18, 100mm x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 238. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(사이클로프로필메톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00610
3 mL의 THF 중에 실시예 10(84 mg, 0.15 mmol)을 용해시키고, 이 용액에 아이소부티르산 무수물(51 mg, 0.32 mmol) 및 DMAP(6 mg, 0.05 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, 반응물을 MeOH로 켄칭하고, 이어서 용매를 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.83 (s, 1H), 7.34 - 7.25 (m, 2H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 6.83 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.73 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.90 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.79 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.66 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.44 (dd, J = 5.7, 1.3 ㎐, 2H), 3.96 - 3.74 (m, 3H), 2.63 (dp, J = 17.0, 7.0 ㎐, 2H), 1.34 - 1.12 (m, 15H), 1.05 (dqd, J = 12.5, 7.6, 3.8 ㎐, 1H), 0.54 - 0.44 (m, 2H), 0.26 - 0.19 (m, 2H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.00. LCMS: MS m/z = 713.12 [M+1], tR = 1.72분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.44분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 239. ((2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-비스(아이소부티릴옥시)테트라하이드로푸란-2-일)메틸 ((S)-1-(2-에틸부톡시)-1-옥소프로판-2-일)포스포르아미데이트
Figure pct00611
중탄산나트륨(50 mg) 및 Pd/C(10 중량%, 40 mg)를 실온에서 메탄올(2.0 mL) 중 실시예 85(38 mg, 0.050 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 베셀을 소기하고, 수소 가스(3x)로 재충전하였다. 10분 후에, 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 물 중 10 내지 100% 아세토니트릴로 용리하는 분취용 HPLC(Gemini 5u C18 100Å 100 x 30 mm 컬럼)를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 6.87 (app q, J = 4.6 ㎐, 2H), 5.81 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 5.76 (t, J = 5.4 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.19 - 4.10 (m, 2H), 4.02 (dd, J = 10.9, 5.7 ㎐, 1H), 3.91 - 3.81 (m, 2H), 2.68 (h, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.58 (h, J = 7.0 ㎐, 1H), 1.51 - 1.20 (m, 14H), 1.16 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.13 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 0.86 (td, J = 7.5, 1.1 ㎐, 6H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 5.04 (s). LCMS: MS m/z = 667.05 [M+1], tR = 1.55분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.955분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 240. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프로판-2-일)아미노) (페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00612
또는
Figure pct00613
THF(2 mL) 중 실시예 66(28 mg, 0.048 mmol) 및 아이소부티르산 무수물(0.034 mL, 0.38 mmol)의 혼합물에 DMAP(5.8 mg, 0.048 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 x 30 mm 컬럼, 10 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.40 - 7.30 (m, 2H), 7.24 - 7.15 (m, 3H), 6.82 - 6.69 (m, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.86 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.81 (dd, J = 6.0, 4.5 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.14 (ddt, J = 6.3, 4.5, 1.8 ㎐, 1H), 4.50 - 4.35 (m, 2H), 3.90 (m, 1H), 3.81 - 3.62 (m, 5H), 2.64 (m, 2H), 2.05 (m, 1H), 1.91 - 1.81 (m, 1H), 1.25 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.21 (m, 6H), 1.18 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.15 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.47. LCMS: m/z = 729.17 (M+H), tR = 1.37분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.47분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 241. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-(((S)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프로판-2-일)아미노) (페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00614
또는
Figure pct00615
THF(2 mL) 중 실시예 65(37 mg, 0.063 mmol) 및 아이소부티르산 무수물(0.031 mL, 0.190 mmol)의 혼합물에 DMAP(4 mg, 0.033 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 x 30 mm 컬럼, 10 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 2H), 7.22 - 7.15 (m, 3H), 6.77 (q, J = 4.6 ㎐, 2H), 6.40 (s, 2H), 5.90 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 6.0, 4.4 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.20 (m, 1H), 4.49 (dd, J = 11.2, 6.1 ㎐, 1H), 4.44 - 4.34 (m, 2H), 3.92 - 3.62 (m, 5H), 2.65 (m, 2H), 2.12 (m, 1H), 1.92 - 1.83 (m, 1H), 1.22 (m, 9H), 1.18 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.15 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.37. LCMS: m/z = 729.16 (M+H), tR = 1.36분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.41분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 242. ((2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-비스(아이소부티릴옥시)테트라하이드로푸란-2-일)메틸 ((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)포스포르아미데이트
Figure pct00616
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((벤질옥시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). 아이소부티르산 무수물(0.055 mL, 0.33 mmol)과 4-다이메틸아미노피리딘(3 mg, 0.03 mmol)을 실온에서 2-메틸-테트라하이드로푸란(2.0 mL) 중 실시예 76(91 mg, 0.167 mmol)의 용액에 순차적으로 첨가하였다. 3.5시간 후에, 반응 혼합물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 직접 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.82 (s, 0.7H), 7.75 (s, 0.3H), 7.38 - 7.23 (m, 5H), 6.85 - 6.81 (m, 1H), 6.78 - 6.74 (m, 1H), 5.98 (d, J = 5.8 ㎐, 0.3H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 0.7H), 5.88 - 5.81 (m, 1H), 5.70 - 5.66 (m, 1H), 5.06 - 4.97 (m, 2H), 4.44 - 4.27 (m, 2H), 3.86 - 3.64 (m, 1H), 3.61 (s, 2.1H), 3.60 (s, 0.9H), 2.71 - 2.53 (m, 2H), 1.31 - 1.11 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.72 (s), 7.60 (s). LCMS: MS m/z = 687.22 [M+1], tR = 1.38분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.27분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분).
Figure pct00617
((2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-비스(아이소부티릴옥시)테트라하이드로푸란-2-일)메틸 ((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)포스포르아미데이트. 중탄산나트륨(50 mg) 및 Pd/C(10 중량%, 50 mg)를 실온에서 메탄올(2.0 mL) 중 (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((벤질옥시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)(70 mg, 0.102 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 베셀을 소기하고, 수소 가스(3x)로 재충전하였다. 10분 후에, 생성된 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 물 중 10 내지 100% 아세토니트릴로 용리하는 분취용 HPLC(Gemini 5u C18 100Å 100 x 30 mm 컬럼)를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 7.83 (s, 1H), 6.88 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 6.86 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.82 (d, J = 5.7 ㎐, 1H), 5.77 (t, J = 5.4 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 5.2 ㎐, 1H), 4.14 (qd, J = 10.8, 4.4 ㎐, 2H), 3.87 - 3.75 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.68 (h, J = 7.0 ㎐, 1H), 2.58 (p, J = 7.0 ㎐, 1H), 1.27 - 1.21 (m, 9H), 1.16 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.13 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 5.02 (s). LCMS: MS m/z = 597.17 [M+1], tR = 1.19분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 5.013분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 243. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-(((R)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00618
또는
Figure pct00619
THF(2 mL) 중 실시예 70(32 mg, 0.054 mmol) 및 아이소부티르산 무수물(0.027 mL, 0.163 mmol)의 혼합물에 DMAP(6.6 mg, 0.048 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 x 30 mm 컬럼, 10 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.91 (s, 1H), 7.40 - 7.29 (m, 2H), 7.26 - 7.15 (m, 3H), 6.78 - 6.74 (m, 2H), 6.39 (s, 2H), 5.86 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.81 (dd, J = 6.0, 4.5 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.16 (ddt, J = 6.2, 4.1, 1.8 ㎐, 1H), 4.51 - 4.34 (m, 3H), 3.91 (ddt, J = 16.8, 9.8, 7.1 ㎐, 1H), 3.83 - 3.63 (m, 4H), 2.65 (m, 2H), 2.10 (dtd, J = 14.5, 8.3, 6.4 ㎐, 1H), 1.90 - 1.77 (m, 1H), 1.26 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.22 (t, J = 6.9 ㎐, 6H), 1.18 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.15 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.44. LCMS: m/z = 729.16 (M+H), tR = 1.37분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.47분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 244. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-옥소-1-(((R)-테트라하이드로푸란-3-일)옥시)프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)의 단일 부분입체 이성질체
Figure pct00620
또는
Figure pct00621
THF(2 mL) 중 실시예 69(19 mg, 0.032 mmol) 및 아이소부티르산 무수물(0.016 mL, 0.097 mmol)의 혼합물에 DMAP(4 mg, 0.033 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하고, 메탄올(0.5 mL)을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenominex Synergi 4u Hydro-RR 80Å 150 x 30 mm 컬럼, 10 내지 100% 아세토니트릴/물 구배)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.89 (s, 1H), 7.41 - 7.27 (m, 2H), 7.26 - 7.16 (m, 3H), 6.86 - 6.71 (m, 2H), 6.37 (s, 2H), 5.89 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 6.0, 4.4 ㎐, 1H), 5.69 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 5.21 (ddt, J = 6.3, 4.6, 1.7 ㎐, 1H), 4.49 (dd, J = 11.2, 6.1 ㎐, 1H), 4.43 - 4.27 (m, 2H), 3.92 - 3.64 (m, 5H), 2.65 (m, 2H), 2.19 - 2.07 (m, 1H), 1.93 - 1.82 (m, 1H), 1.22 (m, 9H), 1.19 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.15 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.38. LCMS: m/z = 729.20 (M+H), tR = 1.36분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.41분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 245. 실시예 162의 S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할
실시예 162의 혼합물을 SFC IA(12 x 250 mm, 5 μm, 15% MeOH)에 의해 분리하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00622
Figure pct00623
실시예 246. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.40 - 7.31 (m, 2H), 7.26 - 7.12 (m, 3H), 6.83 - 6.65 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 5.90 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.83 (dd, J = 6.0, 4.5 ㎐, 1H). 5.69 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.67 (dq, J = 8.5, 4.2 ㎐, 1H), 4.49 (dd, J = 11.2, 6.1 ㎐, 1H), 4.40 (dd, J = 11.2, 5.4 ㎐, 1H), 4.31 - 4.23 (m, 1H), 3.84 (ddd, J = 10.0, 9.0, 7.1 ㎐, 1H), 2.65 (dp, J = 26.9, 7.0 ㎐, 2H), 2.58 - 2.39 (m, 2H), 2.25 - 2.14 (m, 5H), 1.79 (d, J = 6.8 ㎐, 2H), 1.61 (dtd, J = 12.6, 8.6, 3.8 ㎐, 2H), 1.22 (m, 9H), 1.19 (d, J = 7.0 ㎐, 3H), 1.15 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) 2.41. LCMS: m/z = 756.17, tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.68분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 247. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.91 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.9, 6.9 ㎐, 2H), 7.25 - 7.15 (m, 3H), 6.76 (s, 2H), 6.36 (s, 2H), 5.86 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.82 - 5.77 (m, 1H), 5.67 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.65 (dt, J = 8.0, 3.9 ㎐, 1H), 4.45 (dd, J = 11.2, 6.7 ㎐, 1H), 4.39 (dd, J = 11.3, 5.8 ㎐, 1H), 4.33 (dd, J = 12.1, 10.0 ㎐, 1H), 3.97 - 3.81 (m, 1H), 2.78 - 2.36 (m, 4H), 2.20 (s, 5H), 1.87 - 1.73 (m, 2H), 1.59 (dp, J = 12.7, 4.3 ㎐, 2H), 1.27 (dd, J = 7.1, 0.9 ㎐, 3H), 1.22 m, 6H), 1.18 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.15 (d, J = 7.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.48. LCMS: m/z = 756.18, tR = 1.13분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.71분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 248. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-에톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00624
아이소부티르산 무수물(85.2 μL, 0.51 mmol)을 실온에서 2-메틸 테트라하이드로푸란(6 mL) 중 국제 특허 출원 공개 WO2015/069939호의 실시예 35(165.2 mg, 0.30 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(5.5 mg, 0.05 mmol)의 용액에 첨가하였다. 30분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(15 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(20 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 20 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.82 (d, J = 9.9 ㎐, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.85 (dd, J = 7.5, 4.5 ㎐, 1H), 6.76 (dd, J = 11.1, 4.6 ㎐, 1H), 5.95 (dd, J = 23.4, 5.9 ㎐, 1H), 5.83 (ddd, J = 19.6, 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.68 (t, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.58 - 4.37 (m, 2H), 4.16 - 3.96 (m, 2H), 3.94 - 3.76 (m, 1H), 2.77 - 2.55 (m, 2H), 1.31 - 1.14 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.06 LCMS: MS m/z = 687.13 [M+1], tR = 1.43분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.94분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 SFC(Chiralpak IF, 5 um, 4.6 x 150 mm, 메탄올 30%)를 통해 정제하였다.
실시예 249. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((R)-(((S)-1-에톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00625
첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체 of 실시예 248: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.81 (s, 1H), 7.36 - 7.26 (m, 2H), 7.20 - 7.12 (m, 3H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.78 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.97 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.8, 4.4 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.52 (dd, J = 11.1, 5.8 ㎐, 1H), 4.42 (dd, J = 11.1, 4.9 ㎐, 1H), 4.10 (qd, J = 7.2, 2.5 ㎐, 2H), 3.81 (dq, J = 9.5, 7.3 ㎐, 1H), 2.65 (dp, J = 13.9, 7.0 ㎐, 2H), 1.26 - 1.16 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.07. LCMS: MS m/z = 687.14 [M+1], tR = 1.43분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.89분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 248의 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체는 실시예 144이다.
실시예 250. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포로티오일)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00626
아이소부티르산 무수물(11 μL, 0.066 mmol)을 실온에서 2-메틸테트라하이드로푸란(1.0 mL) 중 실시예 71(18 mg, 0.33 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 4-다이메틸아미노피리딘(1 mg, 0.006 mmol)을 첨가하였다. 3시간 후에, 반응 혼합물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피를 거쳐서 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.21 - 7.78 (m, 1H), 7.38 - 6.98 (m, 5H), 7.00 - 6.65 (m, 2H), 5.99 - 5.42 (m, 3H), 4.66 - 4.20 (m, 3H), 3.75 - 3.41 (m, 3H), 2.75 - 2.53 (m, 2H), 1.47 - 1.02 (m, 15H). LCMS: MS m/z = 688.98 [M+1], tR = 1.50분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 4.195분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 251. (2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2-아미노-3-아이소프로폭시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00627
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((4-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-아이소프로폭시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). 아이소부티르산 무수물(29.0 μL, 0.17 mmol)을 실온에서 2-메틸 테트라하이드로푸란(2.0 mL) 중 실시예 73(78.4 mg, 0.10 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(1.8 mg, 0.02 mmol)의 용액에 첨가하였다. 10분 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 생성된 혼합물을 포화 탄산나트륨 수용액(2 x 15 mL) 및 염수(20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 헥산 중 0 내지 100% 에틸 아세테이트로 용리하는 실리카 겔 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.81 (d, J = 17.1 ㎐, 1H), 7.36 - 7.23 (m, 5H), 7.19 - 7.13 (m, 2H), 7.13 - 7.04 (m, 2H), 6.84 (t, J = 4.4 ㎐, 1H), 6.75 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.94 (dd, J = 21.4, 5.9 ㎐, 1H), 5.83 (ddd, J = 15.4, 5.7, 4.6 ㎐, 1H), 5.68 (dd, J = 4.5, 1.4 ㎐, 1H), 5.03 (d, J = 4.1 ㎐, 2H), 4.97 (p, J = 12.2, 6.1 ㎐, 1H), 4.57 - 4.28 (m, 3H), 3.97 - 3.73 (m, 1H), 3.62 (d, J = 9.7 ㎐, 3H), 3.10 (dd, J = 14.1, 6.0 ㎐, 1H), 2.91 (dd, J = 14.0, 8.9 ㎐, 1H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 1.31 - 1.13 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.04 (d, J = 7.6 ㎐). LCMS: MS m/z = 936.26 [M+1], tR = 1.57분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.55분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
Figure pct00628
(2R,3S,4S,5S)-2-((((4-((S)-2-아미노-3-아이소프로폭시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). 탄소 상의 팔라듐(18.6 mg, 10 중량%)을 아르곤으로 퍼지된 테트라하이드로푸란(5 mL) 중 (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((4-((S)-2-(((벤질옥시)카르보닐)아미노)-3-아이소프로폭시-3-옥소프로필)페녹시)(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)(67.6 mg, 0.07 mmol)의 용액에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 수소로 퍼지하고, 실온에서 교반하였다. 23시간 후에, 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 필터를 테트라하이드로푸란으로 헹구고, 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하였다. 조 잔류물을 분취용 HPLC(Phenomenex Synergi 4 um Polar-RP 80Å 150 x 21.2 mm 컬럼, 20 내지 70% 아세토니트릴/물 구배(0.1% TFA를 사용함))를 거쳤다. 관련된 생성물 함유 분획을 합하고, 휘발성 물질을 감압 하에서 제거하였다. 중탄산나트륨(3 g)을 이 수용액에 첨가하고, 생성된 혼합물을 에틸 아세테이트(2 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 잔류물을 동결건조시켜 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.82 (d, J = 11.6 ㎐, 1H), 7.20 - 7.06 (m, 4H), 6.86 (dd, J = 7.2, 4.6 ㎐, 1H), 6.77 (t, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.94 (dd, J = 21.4, 5.9 ㎐, 1H), 5.83 (ddd, J = 18.0, 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.68 (t, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.01 - 4.89 (m, 1H), 4.60 - 4.34 (m, 2H), 3.96 - 3.74 (m, 1H), 3.71 - 3.59 (m, 4H), 3.06 - 2.84 (m, 2H), 2.75 - 2.54 (m, 2H), 1.31 - 1.14 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.07. LCMS: MS m/z = 802.13 [M+1], tR = 1.16분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 3.97분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물을 키랄 SFC(Chiralpak IF, 5 um, 4.6 x 150 mm, 에탄올 30%)를 통해 정제하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00629
Figure pct00630
실시예 252. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.80 (s, 1H), 7.20 - 7.13 (m, 2H), 7.13 - 7.07 (m, 2H), 6.86 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.77 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 5.96 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.85 (dd, J = 5.8, 4.4 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.4 ㎐, 1H), 4.94 (p, J = 6.2 ㎐, 1H), 4.51 (dd, J = 11.1, 5.8 ㎐, 1H), 4.39 (dd, J = 11.1, 4.8 ㎐, 1H), 3.86 - 3.74 (m, 1H), 3.69 - 3.58 (m, 4H), 2.93 (qd, J = 13.6, 6.6 ㎐, 2H), 2.65 (dp, J = 16.1, 7.0 ㎐, 2H), 1.26 - 1.13 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.07. LCMS: MS m/z = 802.14 [M+1], tR = 1.19분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.04분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 253. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4) δ 7.84 (s, 1H), 7.20 - 7.08 (m, 4H), 6.85 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.76 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 5.91 (d, J = 5.9 ㎐, 1H), 5.81 (dd, J = 5.9, 4.7 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 4.94 (p, J = 6.2 ㎐, 1H), 4.48 - 4.36 (m, 2H), 3.90 (dq, J = 9.9, 7.4 ㎐, 1H), 3.67 - 3.58 (m, 4H), 3.02 - 2.84 (m, 2H), 2.65 (dp, J = 20.9, 7.0 ㎐, 2H), 1.28 (dd, J = 7.1, 1.0 ㎐, 3H), 1.26 - 1.14 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4) δ 3.06 LCMS: MS m/z = 802.17 [M+1], tR = 1.18분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 4.01분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 9.0분: 2 내지 95% ACN, 9.0분 내지 10.0분: 95% ACN(유량: 2 mL/분).
실시예 254. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(사이클로펜틸옥시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00631
중간체 8(75 mg, 0.27 mmol) 및 페닐 포스포로다이클로리데이트(57 mg, 0.27 mmol)를 5 mL의 DCM 중에 용해시키고, 이 용액에 0℃에서 TEA(110 mg, 1 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 30분 동안 교반하였다. 반응물을 다시 0℃로 냉각시키고, 중간체 7(45 mg, 0.1 mmol)을 첨가한 후, tert-부틸 마그네슘 브로마이드(0.27 mL, 1 M THF 용액)를 첨가하였다. 빙조의 제거 후에 반응물을 10분 동안 교반하였다. 반응물을 NH4Cl로 켄칭하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, NaHCO3 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (d, J = 8.2 ㎐, 1H), 7.41 - 7.24 (m, 4H), 7.24 - 7.05 (m, 6H), 6.75 (dd, J = 11.8, 4.6 ㎐, 1H), 5.93 (dd, J = 18.2, 5.9 ㎐, 1H), 5.81 (ddd, J = 18.9, 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.67 (dd, J = 6.1, 4.6 ㎐, 1H), 5.20 - 4.98 (m, 3H), 4.56 - 4.32 (m, 2H), 3.87 (dddd, J = 38.4, 16.3, 9.3, 7.1 ㎐, 3H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 1.93 - 1.75 (m, 6H), 1.75 - 1.49 (m, 17H), 1.38 - 1.28 (m, 5H), 1.28 - 1.11 (m, 17H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 9.85, 3.09. LCMS: MS m/z = 727.27 [M+1], tR = 1.77분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.56분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 255. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-사이클로프로폭시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00632
중간체 9(90 mg, 0.55 mmol) 및 페닐 포스포로다이클로리데이트(115 mg, 0.55 mmol)를 5 mL의 DCM 중에 용해시키고, 이 용액에 0℃에서 TEA(165 mg, 2 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙조의 제거 후에 30분 동안 교반하였다. 반응물을 다시 0℃로 냉각시키고, 중간체 7(24 mg, 0.05 mmol)을 첨가한 후, tert-부틸 마그네슘 브로마이드(0.06 mL, 1 M THF 용액)를 첨가하였다. 빙조의 제거 후에 반응물을 10분 동안 교반하였다. 반응물을 NH4Cl로 켄칭하고, 이어서 EtOAc로 희석시키고, NaHCO3 및 염수로 세척하고, 유기 용매를 진공 하에서 증발시켰다. 잔류물을 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 7.82 (d, J = 8.7 ㎐, 1H), 7.34 - 7.24 (m, 2H), 7.17 (dddd, J = 15.3, 6.7, 2.5, 1.2 ㎐, 3H), 6.86 (dd, J = 7.9, 4.5 ㎐, 1H), 6.76 (dd, J = 9.7, 4.6 ㎐, 1H), 5.93 (dd, J = 19.6, 5.9 ㎐, 1H), 5.82 (ddd, J = 17.6, 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.67 (dd, J = 4.5, 2.6 ㎐, 1H), 4.54 - 4.34 (m, 2H), 3.88 - 3.70 (m, 1H), 2.75 - 2.53 (m, 2H), 1.28 - 1.09 (m, 15H), 0.70 - 0.51 (m, 4H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.02, 3.00. LCMS: MS m/z = 699.09 [M+1], tR = 1.69분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 2.0분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 2.0분 내지 3.05분: 100% 아세토니트릴, 3.05분 내지 3.2분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 3.2분 내지 3.5분: 2% ACN(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.36분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 256. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(2-하이드록시-2-메틸프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00633
2-(벤질옥시)-2-메틸프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시) (페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트. DMF(5 mL) 중 중간체 1(50 mg, 0.172 mmol), 중간체 14(143 mg, 0.223 mmol), 및 MgCl2(20 mg, 2.54 mmol)의 혼합물에 실온에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민(0.045 mL, 0.257 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 15시간 동안 교반하고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 물 중 10 내지 100% ACN)로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS m/z = 681.07 (M+H), tR = 1.22분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00634
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-(2-(벤질옥시)-2-메틸프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) -2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). THF(3 mL) 중 2-(벤질옥시)-2-메틸프로필 ((((2R,3S,4R,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-3,4-다이하이드록시테트라하이드로푸란-2-일)메톡시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(60 mg, 0.060 mmol)의 용액에 실온에서 아이소부티르산 무수물(30 μL, 0.181 mmol), 그리고 이어서 DMAP(4 mg, 0.033 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 LCMS로 모니터링하면서 10분 동안 교반하고, 메탄올을 첨가함으로써 켄칭하고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 물 중 10 내지 100% ACN)로 정제하여 생성물을 얻었다. LCMS m/z = 821.18 (M+H), tR = 1.63분: LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00635
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(2-하이드록시-2-메틸프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). THF(1 mL) 중 (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-(2-(벤질옥시)-2-메틸프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)(30 mg, 0.037 mmol)의 용액에 10% Pd/C(19 mg, 0.018 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 가스 하에서 실온에서 15시간 동안 교반하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 여과 케이크를 메탄올로 수회 세척하고, 여과액을 진공 중에서 농축시키고, ACN 중에 용해시키고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 물 중 10 내지 100% ACN)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.91 (s, 0.4H), 7.90 (s, 0.6H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.24 - 7.15 (m, 3H), 6.77 (m, 2H), 6.40 (m, 2H), 5.91 (m, 0.6H), 5.88 - 5.77 (m, 1.4H), 5.68 (m, 1H), 4.56 - 4.34 (m, 3H), 4.03 - 3.78 (m, 3H), 2.74 - 2.55 (m, 2H), 1.33 - 1.11 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.55, 2.48. MS m/z = 731.14, tR = 1.35분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.30분 (53%) 및 5.34분 (44%); HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
S p 부분입체 이성질체와 R p 부분입체 이성질체의 분할. 상기 생성물(20 mg)을 IE SFC(5 um, 21 x 250 mm, 30% 에탄올)에 의해 분리하여 부분입체 이성질체들을 얻었다:
Figure pct00636
Figure pct00637
실시예 257. 첫 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.90 (s, 1H), 7.33 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.25 - 7.12 (m, 3H), 6.82 - 6.71 (m, 2H), 6.35 (s, 2H), 5.90 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.84 (dd, J = 5.9, 4.4 ㎐, 1H), 5.68 (d, J = 4.3 ㎐, 1H), 4.50 (dd, J = 11.2, 6.1 ㎐, 1H), 4.40 (dd, J = 11.2, 5.3 ㎐, 1H), 4.35 - 4.23 (m, 1H), 3.90 (m, 3H), 2.64 (m, 2H), 1.30 - 1.08 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.45. LCMS m/z = 731.14 (M+H), tR = 1.36분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.32분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 258. 두 번째로 용리하는 부분입체 이성질체: 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d 3) δ 7.90 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.6, 7.1 ㎐, 2H), 7.23 - 7.13 (m, 3H), 6.80 - 6.73 (m, 2H), 6.34 (s, 2H), 5.86 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.81 (dd, J = 5.9, 4.5 ㎐, 1H), 5.67 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 4.52 - 4.31 (m, 3H), 4.03 - 3.87 (m, 2H), 3.82 (d, J = 10.8 ㎐, 1H), 2.64 (m, 2H), 1.30 (dd, J = 7.2, 1.0 ㎐, 3H), 1.26 - 1.09 (m, 21H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.52. LCMS m/z = 731.14 (M+H), tR = 1.36분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.36분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 259. (2R,3S,4S,5S)-2-시아노-5-(4-이미노-3-((포스포노옥시)메틸)-3,4-다이하이드로피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00638
(상기 식에서, R5A 및 R5B는 각각 독립적으로 H 또는 -CH2OP(O)(O-벤질)2이며,
여기서 R5A 및 R5B 중 적어도 하나는 -CH2OP(O)(O-벤질)2임).
(2R,3S,4S,5S)-5-(3-(((비스(벤질옥시)포스포릴)옥시)메틸)-4-이미노-3,4-다이하이드로피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). HMPA(3 mL) 중 실시예 140(115 mg, 0.171 mmol), 클로로메틸 다이벤질포스페이트(67 mg, 0.205 mmol), 및 요오드화나트륨(77 mg, 0.514 mmol)의 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하고, DCM으로 희석시키고, 포화 염화암모늄 수용액으로 세척하고, 수층을 DCM으로 역추출하였다. 합한 유기 층을 진공 중에서 농축시키고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini-NX 10u C18 110Å 250 x 30 mm 컬럼, 물 중 10 내지 100% ACN)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 7.96 (s, 1H), 7.56 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 7.37 - 7.12 (m, 11H), 6.77 (d, J = 4.7 ㎐, 1H), 5.76 - 5.67 (m, 3H), 5.67 - 5.63 (m, 1H), 5.60 (d, J = 4.3 ㎐, 1H), 4.92 (d, J = 7.7 ㎐, 2H), 4.80 (t, J = 11.2 ㎐, 1H), 4.45 (qd, J = 11.4, 6.1 ㎐, 2H), 4.04 - 3.84 (m, 1H), 2.63 (m, 2H), 3.58 (s, 3H), 1.30 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.23 - 1.13 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.68, -0.49. LCMS m/z = 873.17 (M+H), tR = 1.38분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
Figure pct00639
(상기 식에서, R5A 및 R5B는 각각 독립적으로 H 또는 -CH2OP(O)(OH)2이며,
여기서 R5A 및 R5B 중 적어도 하나는 -CH2OP(O)(OH)2임):
Figure pct00640
또는
Figure pct00641
(2R,3S,4S,5S)-2-시아노-5-(4-이미노-3-((포스포노옥시)메틸)-3,4-다이하이드로피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). (2R,3S,4S,5S)-5-(3-(((비스(벤질옥시)포스포릴)옥시)메틸)-4-이미노-3,4-다이하이드로피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)(69 mg, 0.079 mmol)를 THF(5 mL) 중에 용해시키고, 10% Pd/C(40 mg, 0.038 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H2 가스 하에서 실온에서 2시간 동안 교반하고, 여과하고, 여과 케이크를 MeOH로 수회 세척하였다. 합한 여과액을 진공 중에서 농축시키고, 분취용 HPLC(Phenominex Gemini 10u C18 110Å 250 x 21.2 mm 컬럼, 30분 전개에서 30 내지 85% 아세토니트릴(0.1% TFA)/물(0.1% TFA) 구배)로 재정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d4) δ 8.28 (s, 1H), 7.43 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 7.33 (t, J = 7.8 ㎐, 2H), 7.19 (dd, J = 14.4, 7.6 ㎐, 3H), 6.96 (d, J = 4.8 ㎐, 1H), 5.90 - 5.54 (m, 5H), 4.46 (dt, J = 8.8, 4.7 ㎐, 2H), 3.92 (dq, J = 10.3, 7.1 ㎐, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.32 (d, J = 7.1 ㎐, 3H), 1.28 - 1.06 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d4) δ 3.07, 0.66 (broad). LCMS m/z = 783.12 (M+H), tR = 1.27분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분). HPLC: tR = 5.81분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
실시예 260. (2R,3S,4S,5S)-2-시아노-5-(4-(((E)-(다이메틸아미노)메틸렌)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸) 테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00642
실시예 140(80 mg, 0.119 mmol) 및 중간체 10(62 mg, 0.357 mmol)의 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 진공 중에서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 15% MeOH, 50분 전개)로 정제하여 첫 번째로 용리하는 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 8.89 (s, 1H), 8.05 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.8, 7.0 ㎐, 2H), 7.25 - 7.16 (m, 3H), 6.83 (q, J = 4.5 ㎐, 2H), 5.88 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.83 (dd, J = 5.9, 4.6 ㎐, 1H), 5.71 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.50 - 4.33 (m, 2H), 4.30 - 4.21 (m, 1H), 3.99 - 3.82 (m, 1H), 3.58 (s, 3H), 3.22 (s, 3H), 3.22 (d, J = 0.7 ㎐, 3H), 2.65 (m, 2H), 1.36 - 1.02 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.39. LCMS m/z = 728.25 (M+H), tR = 1.44분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
실시예 261. (2R,3S,4S,5S)-2-시아노-2-((((S)-(((S)-1-메톡시-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-5-(4-(((E)-(4-메틸피페라진-1-일) 메틸렌)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00643
실시예 140(80 mg, 0.119 mmol) 및 중간체 10(62 mg, 0.357 mmol)의 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 진공 중에서 농축시키고, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(DCM 중 0 내지 15% MeOH, 50분 전개)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 8.92 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.34 (dd, J = 8.8, 7.0 ㎐, 2H), 7.27 - 7.17 (m, 3H), 6.82 (s, 2H), 5.88 (d, J = 6.0 ㎐, 1H), 5.86 - 5.82 (m, 1H), 5.71 (d, J = 4.6 ㎐, 1H), 4.49 - 4.35 (m, 2H), 4.32 - 4.23 (m, 1H), 3.99 - 3.78 (m, 3H), 3.62 (dd, J = 5.9, 4.3 ㎐, 2H), 3.58 (s, 3H), 2.65 (m, 2H), 2.47 (dt, J = 12.1, 5.1 ㎐, 4H), 2.29 (s, 3H), 1.34 - 1.10 (m, 15H). 31P NMR (162 ㎒, 아세토니트릴-d3) δ 2.39. LCMS m/z = 783.27 (M+H), tR = 1.30분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Phenomenex Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 3.0 mm; 용매: 0.1% 포름산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 포름산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 1.8분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.8분 내지 1.85분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 1.85분 내지 2.00분: 2% ACN(유량: 1800 μL/분).
실시예 262. (2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-((((((S)-1-(2-메틸-2-(포스포노옥시)프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시) 포스포릴)옥시)메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)
Figure pct00644
2-하이드록시-2-메틸프로필 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트. 아세토니트릴(40 mL) 중 Boc-L-알라닌(2.53 g, 13.38 mmol), 2-하이드록시-2-메틸프로판올(1.0 mL, 11.15 mmol), 및 EDCI(2.25 g, 14.50 mmol)의 혼합물에 DMAP(2.04 g, 16.73 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 15시간 동안 교반하고, 이어서 농축시키고, EtOAc로 희석시키고, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피(헥산 중 0 내지 80% 에틸아세테이트)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 5.00 (s, 1H), 4.45 - 4.24 (m, 1H), 4.15 - 3.91 (m, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.41 (d, J = 7.2 ㎐, 3H), 1.25 (d, J = 2.4 ㎐, 6H). MS m/z = 283.99 (M+Na).
Figure pct00645
2-((비스(벤질옥시)포스포릴)옥시)-2-메틸프로필 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트. DCM(20 mL) 중 2-하이드록시-2-메틸프로필 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트(1500 mg, 5.74 mmol), 다이벤질-N,N-다이아이소프로필 포스포르아미다이트(3.64 mL, 11.48 mmol), 및 1H-테트라졸(1.21 g, 17.22 mmol)의 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 빙수조 하에서 냉각시키고, t-BuOOH(2.3 mL, 11.48 mmol, 데칸 중 5 내지 6 M)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 1시간 동안 교반하고, DCM으로 희석시키고, NH4Cl 용액, 그리고 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 중에서 농축시키고, 0.1% TFA 변형된 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. MS m/z = 521.80 (M+H).
Figure pct00646
2-((비스(벤질옥시)포스포릴)옥시)-2-메틸프로필 (S)-2-(클로로-l5-아자닐)프로파노에이트. 2-((비스(벤질옥시)포스포릴)옥시)-2-메틸프로필 (tert-부톡시카르보닐)-L-알라니네이트(460 mg, 60% 순도, 0.529 mmol)를 다이클로로메탄(10 mL) 중에 용해시키고, 빙수조 하에서 냉각시켰다. 다이옥산 중 4 M-HCl(2.65 mL, 10.58 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 빙수조 하에서 3시간 동안 교반하고, DCM으로 희석시키고, 물로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 생성물을 얻었다. MS m/z 422.01 (M+H).
Figure pct00647
2-((비스(벤질옥시)포스포릴)옥시)-2-메틸프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시) 포스포릴)-L-알라니네이트. 다이클로로메탄(10 mL) 중 2-((비스(벤질옥시)포스포릴)옥시)-2-메틸프로필 (S)-2-(클로로-l5-아자닐)프로파노에이트(434 mg, 0.948 mmol)의 용액에 -78℃에서 페닐 포스포로다이클로리데이트(0.142 mL, 0.948 mmol) 및 트라이에틸아민(0.26 mL, 1.90 mmol)을 첨가하였다. 드라이 아이스 조를 제거하고, 생성된 혼합물을 40분 동안 교반하였다. 혼합물을 -78℃로 냉각시키고, p-니트로페놀(132 mg, 0.948 mmol)을 한꺼번에 첨가하고, 트라이에틸아민(0.13 mL, 0.948 mmol)을 -78℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 드라이 아이스 조의 제거 후에 60분 동안 교반하고, 이어서 에틸 아세테이트로 희석시키고, 물 및 염수로 세척하고, 진공 중에서 농축시키고, 생성된 잔류물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피(헥산 중 내지 90% EtOAc)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 클로로포름-d) δ 8.18 (dd, J = 9.2, 3.4 ㎐, 2H), 7.43 - 7.13 (m, 19H), 4.98 (ddd, J = 8.0, 6.2, 2.7 ㎐, 4H), 4.61 (dd, J = 12.0, 9.6 ㎐, 1H), 4.25 - 4.03 (m, 3H), 1.47 - 1.40 (m, 6H), 1.37 (dd, J = 7.1, 5.0 ㎐, 3H). 31P NMR (162 ㎒, 클로로포름-d) δ -2.66, -2.74, -5.44, -5.46. MS m/z 698.87 (M+H).
Figure pct00648
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-(2-((비스(벤질옥시)포스포릴)옥시)-2-메틸프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트). THF(5 mL) 중 중간체 7(73 mg, 0.169 mmol), 2-((비스(벤질옥시)포스포릴)옥시)-2-메틸프로필 ((4-니트로페녹시)(페녹시)포스포릴)-L-알라니네이트(165 mg, 0.237 mmol), 및 MgCl2(21 mg, 0.220 mmol)의 혼합물에 실온에서 다이아이소프로필에틸아민(0.047 mL, 0.271 mmol)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 분취용 HPLC(물 중 10 내지 90% MeCN(0.1% TFA 변형제를 사용함))로 정제하여 중간체를 얻었다. MS m/z = 991.04 (M+H).
Figure pct00649
(2R,3S,4S,5S)-5-(4-아미노피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-((((((S)-1-(2-((비스(벤질옥시)포스포릴)옥시)-2-메틸프로폭시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시)메틸)-2-시아노테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트)를 THF(10 mL) 중에 용해시키고, 10% Pd/C(140 mg, 0.131 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 수소 가스 분위기 하에서 실온에서 30분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물을 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 물 중 10 내지 90% 아세토니트릴 구배(0.1% TFA 변형제를 사용함)를 사용하여 분취용 HPLC로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 8.04 (s, 0.5H), 8.03 (s, 0.5H), 7.38 - 7.26 (m, 3H), 7.23 - 7.11 (m, 3H), 6.97 (m, 1H), 5.88 - 5.69 (m, 3H), 4.56 (dd, J = 11.2, 5.6 ㎐, 0.5H), 4.51 - 4.41 (m, 1.5H), 4.21 - 4.08 (m, 1.5H), 4.03 (dd, J = 11.2, 1.1 ㎐, 0.5H), 3.92 (ddt, J = 16.2, 9.0, 7.1 ㎐, 1H), 2.81 - 2.48 (m, 2H), 1.51 - 1.42 (m, 6H), 1.35 (dd, J = 7.2, 1.0 ㎐, 0.5H), 1.31 (dd, J = 7.2, 1.3 ㎐, 0.5H)., 1.27 - 1.09 (m, 12H). 31P NMR (162 ㎒, 메탄올-d 4 ) δ 3.07, -3.72. MS m/z = 811.06 (M+H).
실시예 263. (2 R ,3 S ,4 S ,5 S )-5-(4-아미노피롤로[2,1- f ][1,2,4]트라이아진-7-일)-2-시아노-2-(((((( S )-1-(2-(2-에톡시에톡시)에톡시)-1-옥소프로판-2-일)아미노)(페녹시)포스포릴)옥시) 메틸)테트라하이드로푸란-3,4-다이일 비스(2-메틸프로파노에이트) 단일 이성질체
Figure pct00650
실시예 75(232 mg, 0.366 mmol)를 아르곤 하에서 무수 테트라하이드로푸란(10.0 mL) 중에 용해시켰다. 아이소부티르산 무수물(121 mg, 0.768 mmol) 및 4-다이메틸아미노피리딘(4 mg, 0.04 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 교반하였다. 4시간 후에, 반응 혼합물을 에틸 아세테이트(20 mL)로 희석시키고, 포화 중탄산나트륨 수용액(10 mL)으로 2회, 그리고 염수(10 mL)로 1회 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켰다. 조 잔류물을 물 중 10 내지 100% 아세토니트릴 구배를 사용하는 분취용 HPLC(Phenomenex Gemini 5 μm C18 110Å 100 x 30 mm 컬럼)로 정제하여 생성물을 얻었다. 1H NMR (400 ㎒, DMSO-d 6) δ 8.02 - 7.78 (m, 3H), 7.42 - 7.28 (m, 2H), 7.25 - 7.11 (m, 3H), 6.87 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.81 (d, J = 4.5 ㎐, 1H), 6.22 (dd, J = 13.5, 10.0 ㎐, 1H), 5.81 - 5.70 (m, 2H), 5.67 - 5.62 (m, 1H), 4.48 - 4.41 (m, 1H), 4.39 - 4.29 (m, 1H), 4.16 - 4.08 (m, 1H), 4.03 - 3.94 (m, 1H), 3.92 - 3.76 (m, 1H), 3.55 - 3.49 (m, 2H), 3.49 - 3.44 (m, 2H), 3.43 - 3.37 (m, 4H), 2.71 - 2.52 (m, 2H), 1.26 - 0.98 (m, 18H). 31P NMR (162 ㎒, DMSO-d 6) δ 3.08. LCMS: MS m/z = 775.09 [M+1], tR = 1.54분; LC 시스템: Thermo Accela 1250 UHPLC; MS 시스템: Thermo LCQ Fleet; 컬럼: Kinetex 2.6μ XB-C18 100A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% 아세트산을 함유하는 아세토니트릴, 0.1% 아세트산을 함유하는 물; 구배: 0분 내지 0.2분: 2% 아세토니트릴, 0.2분 내지 1.5분: 2 내지 100% 아세토니트릴, 1.5분 내지 2.2분: 100% 아세토니트릴, 2.2분 내지 2.4분: 100% 내지 2% 아세토니트릴, 2.4분 내지 2.5분: 2% 아세토니트릴(유량: 2 μL/분). HPLC: tR = 3.31분; HPLC 시스템: Agilent 1100 시리즈; 컬럼: Gemini 5μ C18 110A, 50 x 4.6 mm; 용매: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴, 0.1% TFA를 함유하는 물; 구배: 0분 내지 5.0분: 2 내지 98% ACN, 5.0분 내지 6.0분: 98% ACN(유량: 2 mL/분). HPLC: tR = 5.67분; HPLC 시스템: Agilent 1290 II; 컬럼: Phenomenex Kinetex C18, 2.6u 110A, 100 x 4.6 mm; 용매: A: 0.1% TFA를 함유하는 물, B: 0.1% TFA를 함유하는 아세토니트릴; 구배: 2 내지 98% B 구배(8.5분, 유량: 1.5 mL/분).
D. 생물학적 실시예
실시예 264. DENV Pol IC50
서열 5'-(UCAG)20(UCCAAG)14(UCAG)20-3'(서열 번호 1)을 갖는 244-뉴클레오티드 2차 무구조 헤테로중합체 RNA(sshRNA)가 DENV2-NS5 폴리머라제 검정에서 5'-CUG-3' 프라이머를 갖는 주형으로서 사용된다. 200 nM로부터 시작하는 화합물의 6개의 2배 희석물 및 무억제제 대조군을 96웰 플레이트 내에서 플레이팅한다. 100 nM DENV2 NS5를 40 mM Tris-HCl(pH 7.5), 10 mM NaCl, 3 mM DTT, 0.2 단위/μL RNasin Plus RNase 억제제, 200 ng/μL sshRNA, 20 μM CUG 및 2 mM MgCl2를 함유하는 반응 혼합물에서 실온에서 5분 동안 사전-인큐베이션한다. 효소 믹스를 화합물 희석물에 첨가하고, 20 μM의 3개의 천연 NTP + 2 μM의 유사체:염기 매칭된 경쟁 천연 NTP 함유 1:100 α-33P-NTP를 함유하는 혼합물의 첨가에 의해 반응을 개시한다. 30℃에서 90분 후에, 5 μL의 반응 혼합물을 DE81 음이온 교환지 상에 스폿팅한다. 여과지를 5분 동안 Na2HPO4(125 mM, pH 9)로 3회 세척하고, 물 및 에탄올로 헹구고, 이어서 공기-건조시키고 포르포르이미저(phosphorimager)에 노출시킨다. 합성된 RNA를 Typhoon Trio 이미저 및 Image Quant TL 소프트웨어를 사용하여 정량화하고, 반응 속도를 GraphPad Prism 5.0을 사용하여 선형 회귀에 의해 계산한다. 다음과 같은 용량-반응(가변 기울기) 방정식(4-파라미터 로지스틱 방정식)을 사용하여 비선형 회귀 분석에 의해 Prism에서 IC50 값을 계산한다: Y = 하단 + (상단 - 하단)/(1 + 10^((LogIC50 - X) * 힐 기울기(HillSlope))).
실시예 265. RSV RNP 제조
문헌[Mason et al (1)]으부터 변형된 방법으로부터 RSV 리보핵단백질(RNP) 복합체를 제조하였다. HEp-2 세포를 MEM + 10% 소태아 혈청(FBS) 중에 7.1 x 104개의 세포/㎠의 밀도로 플레이팅하고, 37℃(5% CO2)에서 하룻밤 부착되게 하였다. 부착 후에, 세포를 35 mL MEM + 2% FBS 중에서 RSV A2(MOI = 5)로 감염시켰다. 감염 후 20시간째에, 배지를 MEM + 2 ㎍/mL 악티노마이신 D가 보충된 2% FBS로 대체하고, 1시간 동안 37℃로 복귀시켰다. 이어서, 세포를 PBS로 1회 세척하고, 35 mL의 PBS + 250 ㎍/mL 리소-레시틴(lyso-lecithin)으로 1분 동안 처리하고, 이후에 모든 액체를 흡인하였다. 1.2 mL의 완충액 A[50 mM TRIS 아세테이트(pH 8.0), 100 mM 포타슘 아세테이트, 1 mM DTT 및 2 ㎍/mL 악티노마이신 D] 중으로 세포를 긁어냄으로써 세포를 수합하고, 18 게이지 니들을 통한 반복된 계대(10회)에 의해 용해시켰다. 세포 용해물을 10분 동안 얼음 속에 넣어두고, 이어서 4℃에서 10분 동안 2400 g로 원심분리하였다. 상층액(S1)을 제거하고, 펠릿(P1)을 18 게이지 니들을 통한 반복된 계대(10회)에 의해 1% Triton X-100이 보충된 완충액 B[10 mM TRIS 아세테이트(pH 8.0), 10 mM 포타슘 아세테이트 및 1.5 mM MgCl2] 600 μL 중에서 파괴하였다. 재현탁된 펠릿을 10분 동안 얼음 속에 넣어두고, 이어서 4℃에서 10분 동안 2400 g로 원심분리하였다. 상층액(S2)을 제거하고, 펠릿(P2)을 0.5% 데옥시콜레이트 및 0.1% Tween 40이 보충된 완충액 B 600 μL 중에서 파괴하였다. 재현탁된 펠릿을 10분 동안 얼음 속에 넣어두고, 이어서 4℃에서 10분 동안 2400 g로 원심분리하였다. 풍부화된 RSV RNP 복합체를 함유하는 상층액(S3) 분획을 수집하고, 280 nm에서의 UV 흡광도에 의해 단백질 농도를 결정하였다. 분취된 RSV RNP S3 분획을 -80℃에서 저장하였다.
실시예 266. RSV RNP 검정
전사 반응물은 30 μL의 반응 완충액[50 mM TRIS-아세테이트(pH 8.0), 120 mM 포타슘 아세테이트, 5% 글리세롤, 4.5 mM MgCl2, 3 mM DTT, 2 mM 에틸렌글리콜-비스(2-아미노에틸에테르)-테트라아세트산(EGTA), 50 ㎍/mL BSA, 2.5 U RNasin(Promega), ATP, GTP, UTP, CTP 및 1.5 uCi [α-32P] NTP(3000 Ci/mmol)] 중에 25 ㎍의 조 RSV RNP 복합체를 함유하였다. 전사 검정에서 사용된 방사성 표지 뉴클레오티드를 RSV RNP 전사의 억제에 대해 평가된 뉴클레오티드 유사체와 매칭하도록 선택하였다. 저온의 경쟁적 NTP를 그의 Km(ATP = 20 μM, GTP = 12.5 μM, UTP = 6 μM 및 CTP = 2 μM)의 절반의 최종 농도로 첨가하였다. 3개의 나머지 뉴클레오티드를 100 μM의 최종 농도로 첨가하였다.
뉴클레오티드 유사체가 RSV RNP 전사를 억제하였는지의 여부를 결정하기 위하여, 5배 증분으로 6-단계 연속 희석물을 사용하여 화합물을 첨가하였다. 30℃에서 90분간 인큐베이션한 후에, RNP 반응을 350 μL의 Qiagen RLT 용해 완충액을 사용하여 정지시키고, Qiagen RNeasy 96 키트를 사용하여 RNA를 정제하였다. 정제된 RNA를 65℃에서 10분 동안 RNA 샘플 로딩 완충액(Sigma) 중에서 변성시키고, 2 M 포름알데하이드를 함유하는 1.2% 아가로스/MOPS 겔 상에서 전개시켰다. 아가로스 겔을 건조시키고, Storm 포스포르이미저 스크린에 노출시키고, Storm 포스포르이미저(GE Healthcare)를 사용하여 현상하였다. 총 방사성 표지 전사체를 50%만큼 감소시킨 화합물의 농도(IC50)를 2개의 반복시험물의 비선형 회귀 분석에 의해 계산하였다.
실시예 267. DENV moDC EC50
인간 단핵구-유래 수지상 세포(moDC)를 GM-CSF 및 IL-4를 함유하는 인간 Mo-DC 분화 배지(Miltenyi Biotec) 중에서 배양된 CD14+ 단핵구(AllCell)로부터 유도하였다. 일수 7에서, 기계적 파괴에 의해 moDC를 수합하고, 무혈청 RPMI 중에서 세척하고 현탁시켰다. moDC를 37℃에서 온화하게 교반하면서 무혈청 RPMI 중에서 2시간 동안 Vero-유래 뎅기 2, 뉴 기니 바이러스주(New Guinea strain, NGC)로 감염시켰다. 세포를 10% 혈청-함유 RPMI(Gibco, 소듐 피루베이트, NEAA, 페니실린-스트렙토마이신이 보충됨) 중에서 세척하고 재현탁시켰다. 105개의 세포를 화합물이 등급화된 용량으로 분배된(Hewlett-Packard D300 디지털 디스펜서) 96웰 플레이트 내에서 3회 반복하여 플레이팅하였다. 모든 웰을 0.25% DMSO에 대해 정규화하였다. 48시간째에, 세포를 1 x PBS로 세척하고, 모든 상층액을 제거하였다. RNEasy 96 플레이트(Qiagen)를 사용하여 총 RNA를 추출하고, 이를 사용하여, XLT cDNA 5x Supermix(QuantaBio)를 사용하여 제1 가닥 cDNA를 생성하였다. DENV2 바이러스 및 GAPDH 유전자 발현에 특이적인 Taqman qPCR 이중 반응에서 주형으로서 cDNA를 사용하였다. 양성 대조군 웰 및 무화합물 음성 대조군 웰에 대한 정규화와 함께, Prism Graphpad 소프트웨어를 사용하여 EC50 값을 결정하였다.
실시예 268. moDC CC50
인간 단핵구-유래 수지상 세포(moDC)를 GM-CSF 및 IL-4를 함유하는 인간 Mo-DC 분화 배지(Miltenyi Biotec) 중에서 배양된 CD14+ 단핵구(AllCell)로부터 유도하였다. 일수 7에서, 기계적 파괴에 의해 moDC를 수합하고, 세척하고, 화합물이 등급화된 용량으로 분배된(Hewlett-Packard D300 디지털 디스펜서) 96웰 플레이트 내에서 1 x 105 내지 5 x 104개의 세포/웰로 3회 반복하여 배양하였다. 모든 웰을 0.25% DMSO에 대해 정규화하였다. 48시간 후에, CellTiter Glo(Promega)를 첨가하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 후, 발광광도계 상에서 판독하였다. 무화합물 대조군 웰 및 무세포 대조군 웰에 대해 % 생존력 곡선을 계산하였다. Prism Graphpad 소프트웨어를 사용하여 CC50 값을 결정하였다.
실시예 269. DENV-2 Huh-7 EC50
Huh7(인간 간암종 7) 세포를 10% FCS-함유 DMEM 완전 배지 중에 유지하였다. 검정 당일에, 세포를 트립신 처리하고(0.1% 트립신-EDTA), 세척하고, 37℃에서 온화하게 교반하면서 MOI = 0.1의 뎅기 혈청형 2 뉴 기니 C(NGC) 바이러스주를 함유하는 무혈청 DMEM 중에서 2시간 동안 감염시켰다. 2시간 후에, 세포를 무혈청 배지로 세척하고, 10% FCS-함유 DMEM(Gibco, 소듐 피루베이트, NEAA, 페니실린-스트렙토마이신이 보충됨) 중에 현탁시켰다. 105개의 세포를 화합물이 등급화된 용량으로 분배된(Hewlett-Packard D300 디지털 디스펜서) 96웰 플레이트 내에서 3회 반복하여 플레이팅하였다. 모든 웰을 0.25% DMSO에 대해 정규화하였다. 48시간째에, 세포를 1 x PBS로 세척하고, 모든 상층액을 제거하였다. RNEasy 96 플레이트(Qiagen)를 사용하여 총 RNA를 추출하고, 이를 사용하여, XLT cDNA 5x Supermix(QuantaBio)를 사용하여 제1 가닥 cDNA를 생성하였다. DENV2 바이러스 및 GAPDH 유전자 발현에 특이적인 Taqman qPCR 이중 반응에서 주형으로서 cDNA를 사용하였다. 양성 대조군 웰 및 무화합물 음성 대조군 웰에 대한 정규화와 함께, Prism Graphpad 소프트웨어를 사용하여 EC50 값을 결정하였다.
실시예 270. Huh-7 CC50
인간 간암종 7(Huh7) 세포를 10% FCS-함유 완전 DMEM 중에 유지하였다. 검정 당일에, 세포를 0.1% 트립신-EDTA로 트립신 처리하고, 세척하고, 화합물이 등급화된 용량으로 분배된(Hewlett-Packard D300 디지털 디스펜서) 96웰 플레이트 내에서 1 내지 2 x 104개의 세포/웰로 3회 반복하여 배양하였다. 모든 웰을 0.25% DMSO에 대해 정규화하였다. 48시간 후에, CellTiter Glo(Promega)를 첨가하고, 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 후, 발광광도계 상에서 판독하였다. 무화합물 대조군 웰 및 무세포 대조군 웰에 대해 % 생존력 곡선을 계산하였다. Prism Graphpad 소프트웨어를 사용하여 CC50 값을 결정하였다.
실시예 271. RSV HEp-2 EC50
HEp-2 세포에서 감염성 세포변성 세포 보호 검정을 사용하여 RSV에 대한 항바이러스 활성을 결정한다. 이 검정에서는, 바이러스성 감염 및/또는 복제를 억제하는 화합물이, 세포 생존력 시약을 사용하여 정량화될 수 있는 바이러스-유도 세포 사멸에 대한 세포보호 효과를 생성한다. 여기서 사용된 기법은 공개된 문헌에 기재된 방법들의 신규한 개조이다(문헌[Chapman et al., Antimicrob Agents Chemother. 2007, 51(9):3346-53]).
ATCC(미국 버지니아주 머내서스 소재)로부터 HEp-2 세포를 입수하고, 10% 소태아 혈청 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 MEM 배지 중에 유지한다. 세포를 주 2회 계대배양하고, 서브컨플루언트(subconfluent) 단계로 유지한다. RSV 바이러스주 A2(Advanced Biotechnologies, 미국 매사추세츠주 콜럼비아 소재)의 시판 스톡을 적정한 후, HEp-2 세포에서 바람직한 세포변성 효과를 생성하는 바이러스 스톡의 적절한 희석을 결정하기 위한 화합물 시험을 수행하였다.
항바이러스 시험을 위하여, HEp-2 세포를 대형 세포 배양 플라스크 내에서 컨플루언시에 근접하지만 완전히 그렇게 되지는 않도록 성장시킨다. 시험하려는 화합물을 8 또는 40-샘플/플레이트 표준화된 용량 반응 포맷으로 384웰 화합물 희석 플레이트 내에서 DMSO 중에 사전희석시킨다. 각각의 시험 화합물의 3배 증분 연속 희석물을 플레이트 내에서 제조하고, 시험 샘플을 세포 배양 검정 384웰 플레이트 내로 100 nL/웰로 음향 전달 장치(Echo, Labcyte)를 통해 옮긴다. 각각의 화합물 희석물을 건조된 검정 플레이트 내로 단일 샘플 또는 4개의 반복 샘플로 옮기고, 검정이 수행될 준비가 될 때까지 이것을 저장한다. 양성 대조군과 음성 대조군은 수직 블록들(1열)에서 서로 반대편에 있는 플레이트의 말단들에 배치한다.
후속으로, 감염성 혼합물을 50,000개/mL의 밀도로 세포를 사용하여 적정에 의해 미리 결정된 바이러스 스톡의 적절한 희석을 사용하여 제조하고, 20 μL/웰을 자동화(uFlow, Biotek)를 통해 화합물이 담긴 시험 플레이트에 첨가한다. 각각의 플레이트는, 각각에 대해 0% 및 100% 바이러스 억제 표준을 생성할 음성 대조군 및 양성 대조군(각각 16개의 반복시험물)을 포함한다. RSV로 감염시킨 후에, 시험 플레이트를 37℃ 세포 배양 인큐베이터 내에서 4일 동안 인큐베이션한다. 인큐베이션 후에, 세포 생존력 시약, Cell TiterGlo(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)를 검정 플레이트에 첨가하고, 이것을 짧게 인큐베이션하고, 모든 검정 플레이트에서 발광 판독치(Envision, Perkin Elmer)를 측정한다. RSV-유도 세포변성 효과, 즉, % 억제는 잔존 세포 생존력의 수준으로부터 결정된다. 이들 수치는 각각의 시험된 농도에 대해 0% 및 100% 억제 대조군에 대비하여 계산되고, 각각의 화합물에 대한 EC50 값은 RSV-유도 세포변성 효과를 50%만큼 억제하는 농도로서 비선형 회귀에 의해 결정된다. 다양한 강력한 항-RSV 툴 화합물이 항바이러스 활성을 위한 양성 대조군으로서 사용된다.
실시예 272. HEp-2 CC50
시험된 화합물의 세포독성이 다른 세포 유형에 대해 이전에 기재된 것과 유사한 방식으로, 세포 생존력 시약을 사용하는 항바이러스 활성과 병행하여, 비감염된 HEp-2 세포에서 결정된다(문헌[Cihlar et al., Antimicrob Agents Chemother. 2008,52(2):655-65]). 항바이러스 활성의 결정에 대한 것과 동일한 프로토콜이, 세포가 RSV로 감염되지 않는다는 것을 제외하고, 화합물 세포독성의 측정에 사용된다. 대신에, 동일한 밀도의 비감염된 세포 혼합물을, 또한 100 nL/샘플로, 사전희석된 화합물이 담긴 플레이트에 20 ul/웰로 첨가한다. 이어서, 검정 플레이트를 4일 동안 인큐베이션한 후, 동일한 CellTiter Glo 시약 첨가 및 발광 판독치의 측정을 사용하여 세포 생존력 시험을 수행한다. 비처리된 세포 및 2 μM 퓨로마이신(Sigma, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)으로 처리된 세포는 각각 100% 및 0% 세포 생존력 대조군으로서의 역할을 한다. % 세포 생존력은 각각의 시험된 화합물 농도에 대해 0% 및 100% 대조군과 대비하여 계산되고, CC50 값은 세포 생존력을 50%만큼 감소시키는 화합물 농도로서 비선형 회귀에 의해 결정된다.
실시예 273. RSV NHBE EC50
정상 인간 기관지 상피(NHBE) 세포를 Lonza(미국 매사추세츠주 워커스빌 소재, Cat # CC-2540)로부터 구매하고, 기관지 상피 성장 배지(BEGM)(Lonza, 미국 매사추세츠주 워커스빌 소재, Cat # CC-3170) 중에서 배양하였다. 세포를 주당 1회 또는 2회 계대배양하여 80% 미만의 컨플루언시를 유지하였다. NHBE 세포를 배양 상태에서 6회 계대 후에 폐기하였다.
RSV A2 항바이러스 검정을 수행하기 위하여, NHBE 세포를 BEGM 중에서 웰당 7,500개의 세포의 밀도로 96웰 플레이트 내에서 플레이팅하고, 37℃에서 하룻밤 부착되게 하였다. 부착 후에, 100 μL의 세포 배양 배지를 제거하고, 3배 연속 희석된 화합물을 Hewlett-Packard D300 디지털 디스펜서를 사용하여 첨가하였다. DMSO의 최종 농도를 0.05%에 대해 정규화하였다. 화합물 첨가 후에, NHBE 세포를 BEGM 중에 1 x 104.5 조직 배양 감염 용량/mL의 역가로 100 μL의 RSV A2의 첨가에 의해 감염시키고, 이어서 37℃에서 4일 동안 인큐베이션하였다. 이어서, NHBE 세포를 25℃로 평형화되게 하고, 100 μL의 배양 배지를 제거하고 100 μL의 Cell-Titer Glo 생존력 시약을 첨가함으로써 세포 생존력을 결정하였다. 혼합물을 25℃에서 10분 동안 인큐베이션하고, 발광 신호를 Envision 발광 플레이트 판독기 상에서 정량화하였다.
실시예 274. hMPV(A1, A2, B1, B2) EC50
LLC-MK2 세포를 MEM + 10% FBS 중에서 90% 컨플루언스(confluence)로 24웰 플레이트에 시딩하였다. 플레이트를 PBS로 세척하고, 40 PFU/mL를 함유하는 500 μL의 hMPV(바이러스주 CAN99-81(gr. A1), CAN97-83(gr. A2), CAN97-82(B1) 또는 CAN98-75(gr. B2))를 첨가하고, 이와 함께, 4개의 화합물의 상이한 희석물을 37℃, 5% CO2에서 1시간 30분 동안 세포 상에 첨가하였다. 흡착 기간 후에, 배지를 제거하고, 세포를 PBS로 세척하였다. 흡착 기간에서와 동일한 농도의 화합물을 함유하는 Opti-MEM 2x + 메틸셀룰로스 1.6%(1:1)의 오버레이를 웰에 첨가하였다. 리바비린으로 이루어진 양성 대조군을 또한 1 μM 내지 100 μM 범위의 농도로 시험하였다. 플레이트를 37℃, 5% CO2에서 3 내지 5일 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 기간 후에, 세포를 실온에서 1시간 동안 7% 포르말린으로 고정시켰다. 1/10 000으로 희석된 F 단백질에 특이적인 Mab(클론 hMPV24, ABD Serotec, Inc.) 및 1/2500으로 희석된 제2 항-마우스 IgG HRP 항체(GeneScriptCorp)를 사용하여 hMPV 역가를 결정하였다. 마지막으로, KPL True Blue를 사용하여 감염된 세포를 밝혀내었다.
실시예 275. HRV16 HeLa EC 50
10% 열 불활성화된 FBS 및 1% 페니실린/스트렙토마이신을 함유하는 완전 DMEM 배지 중에서 배양된 H1-HeLa 세포를, 화합물 투여 및 감염 전 1일째에, 96웰 플레이트 내에 3000개의 세포/웰로 시딩하였다. 각각의 화합물의 항바이러스 활성을 3회 반복하여 측정하였다. 화합물을 감염 직전에 HP300 디지털 디스펜서(Hewlett Packard, 미국 캘리포니아주 팔로 알토 소재)를 사용하여 3배 연속 희석물로 세포 배양물에 직접 첨가하였다. 플레이트를 BSL-2 격납용기(containment)에 옮기고, 적정에 의해 미리 결정되고 세포 배양 배지 중에 제조된 바이러스 스톡의 적절한 희석물을 세포 및 연속 희석된 화합물이 담긴 시험 플레이트에 첨가하였다. 각각의 플레이트는, 각각에 대해 0% 및 100% 바이러스 억제 대조군으로서의 역할을 하는, 감염되고 비처리된 세포의 6개의 웰 및 비감염된 세포의 6개의 웰을 포함하였다. 감염 후, 시험 플레이트를 33℃/5% CO2로 설정된 조직 배양 인큐베이터 내에서 96시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, H1-HeLa 세포를 인큐베이션으로부터 꺼내고, 25℃로 평형화되게 하였다. 100 μL의 배양 배지를 제거하고 100 μL의 Cell-Titer Glo 생존력 시약을 첨가함으로써 세포 생존력을 결정하였다. 혼합물을 25℃에서 10분 동안 진탕기 상에서 인큐베이션하고, 발광 신호를 Envision 발광 플레이트 판독기 상에서 정량화하였다. 바이러스 감염의 % 억제를 각각의 시험된 농도에 대해 0% 및 100% 억제 대조군에 대비하여 계산하고, 각각의 화합물에 대한 EC50 값을 세포변성 효과를 50%만큼 억제한 화합물의 유효 농도로서 4-파라미터 비선형 회귀에 의해 결정하였다.
실시예 276. DENV-2 Huh-7 Rep EC 50
384웰 플레이트(Greiner, Cat # 781091)에서, 화합물을 8-화합물 용량 반응 포맷(4개의 반복시험물) 또는 40-화합물 용량 반응 포맷(3개의 반복시험물)으로 웰당 200 nl로 음향 전달하였다. 시험된 모든 플레이트에 대해, 0% 억제인 DMSO-단독 음성 대조군 웰과 함께, GS-5734 및 NITD008을 양성 억제 대조군으로서 포함시켰다. 화합물 첨가 후에, DENV2 레플리콘 작제물을 함유하는 Huh-7 세포를 표준 세포 배양 절차에 따라 수합하고, 게네티신 없이 cDMEM으로 구성된 세포 배양 배지 중에서 1.25E5개의 세포/mL의 농도로 조정하였다. 이어서, 40 μL의 세포 스톡을 5,000개의 세포/웰의 최종 세포 밀도를 위하여 각각의 웰에 첨가하였다. 세포 및 화합물 혼합물을 37℃/5% CO2에서 48시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 수합하기 전에, 3.4 mg을 100 uL의 DMSO 중에 현탁시켜 60 mM 스톡 용액을 생성함으로써 EnduRen 살아있는 세포 기질(Live Cell Substrate)(Promega, Cat # E6481)을 제조하였다. 이어서, 스톡 용액을 예비가온된 cDMEM 중에 1:200으로 희석시키고, 이 희석된 용액 10 uL를 384웰 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 이어서, 플레이트를 500 rpm으로 짧게 원심분리하고, 2분 동안 플레이트 진탕기 상에 두었다. 혼합한 후에, 플레이트를 7℃/5% CO2에서 1.5시간 동안 인큐베이션한 후, Envision 발광광도계 상에서 발광을 측정하였다. 레플리콘 신호의 % 억제를 각각의 시험된 농도에 대해 0% 및 100% 억제 대조군에 대비하여 계산하고, 각각의 화합물에 대한 EC50 값을 레플리콘 신호를 50%만큼 억제한 화합물의 유효 농도로서 4-파라미터 비선형 회귀에 의해 결정하였다.
실시예 277. HCV Rep 1B 및 2A EC 50
화합물을 384웰 플레이트 내에서 10개 단계의 1:3 희석물로 연속 희석시켰다. 모든 연속 희석을 동일한 384웰 플레이트 내에서 화합물당 4개의 반복시험물로 수행하였다. 100 μM의 HCV 프로테아제 억제제 ITMN-191을 HCV 반복의100% 억제의 대조군으로서 첨가한 반면, 10 mM의 퓨로마이신을 100% 세포독성의 대조군으로서 포함시켰다. 흑색 폴리스티렌 384웰 플레이트(Greiner Bio-one, 미국 노스 캐롤라이나주 먼로 소재)의 각각의 웰에 대해, 2000개의 현탁된 HCV 레플리콘 세포를 함유하는 90 μL의 세포 배양 배지(게네티신이 없음)를 Biotek μFlow 워크스테이션을 사용하여 첨가하였다. 세포 배양 플레이트 내로의 화합물 전달을 위하여, 화합물 연속 희석 플레이트로부터의 0.4 μL의 화합물 용액을 Biomek FX 워크스테이션 상에서 세포 배양 플레이트에 옮겼다. 최종 검정 웰에서의 DMSO 농도는 0.44%였다. 플레이트를 5% CO2 및 85% 습도 하에서 37℃에서 3일 동안 인큐베이션하였다. HCV 레플리콘 검정은 동일한 웰로부터 세포독성 및 항레플리콘 활성 둘 모두를 평가할 수 있는 멀티플렉스 검정이었다. CC50 검정을 먼저 수행하였다. 384웰 세포 배양 플레이트 내의 배지를 흡인하고, 웰을 Biotek ELX405 플레이트 워셔를 사용하여 매회마다 100 μL의 PBS로 4회 세척하였다. 1 x PBS 중 400 nM 칼세인 AM(Anaspec, 미국 캘리포니아주 프리몬트 소재)을 함유하는 용액의 50 μL 부피를 Biotek μFlow 워크스테이션을 사용하여 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 30분 동안 인큐베이션한 후, 형광 신호(여기 490 nm, 방출 520 nm)를 Perkin-Elmer Envision 플레이트 판독기를 사용하여 측정하였다. EC50 검정을 CC50 검정과 동일한 웰 내에서 수행하였다. 384웰 세포 배양 플레이트 내의 칼세인-PBS 용액을 Biotek ELX405 플레이트 워셔를 사용하여 흡인하였다. 20 μL 부피의 Dual-Glo 루시퍼라제 완충액(Promega, 미국 위스콘신주 매시슨 소재)을 Biotek μFlow 워크스테이션을 사용하여 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션하였다. Dual-Glo Stop & Glo 기질(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재) 및 Dual-Glo Stop & Glo 완충액(Promega, 미국 위스콘신주 매디슨 소재)의 1:100 혼합물을 함유하는 용액의 20 μL 부피를 Biotek μFlow 워크스테이션을 사용하여 플레이트의 각각의 웰에 첨가하였다. 이어서, 플레이트를 실온에서 10분 동안 인큐베이션한 후, Perkin-Elmer Envision 플레이트 판독기를 사용하여 발광 신호를 측정하였다.
실시예 278. 인간 미토콘드리아 RNA 폴리머라제(POLRMT)의 억제
모든 반응 혼합물은 50 mM Tris-HCl 완충액(pH 8.0), 0.2 mg/ml의 BSA, 2 mM DTT, 0.05 mg/ml의 활성화된 어류 정자 DNA, 10 mM MgCl2, 1.3 μCi [®-33P]dTTP(3,000 Ci/mmol), 및 각각 2 μM의 dATP, dGTP, 및 TTP를 함유하였다. 효소 농도([E]) vs. 활성의 선형 범위에 있도록 최적의 효소 농도를 선택하고, 기질의 10%가 소비되는 것을 보장하도록 반응 시간을 선택하였다. 모든 반응은 37℃에서 실시하였다. 미토콘드리아 RNA 폴리머라제(POLRMT)의 억제를, 10 mM HEPES(pH 7.5), 20 mMNaCl, 10 mM DTT, 0.1 mg/ml BSA, 및 10 mM MgCl2를 함유하는 완충액 중에서 POLRMT 가벼운 가닥(light-strand) 프로모터 영역 및 미토콘드리아 전사 인자 A(mtTFA)(100 nM) 및 mt-TFB2(20 nM)를 함유하는 20 nM 주형 플라스미드(pUC18-LSP)와 사전-인큐베이션된 20 nM POLRMT를 사용하여 평가하였다. 반응물을 32℃로 가열하고, 각각 2.5 μM의 4개의 천연 NTP 및 1.5 μCi의 [33P]GTP를 첨가함으로써 개시하였다. 32℃에서 30분 동안 인큐베이션 후에, 반응물을 DE81 종이 상에 스폿팅한 후, 정량화를 위해 처리하였다.
실시예 279. 인간 미토콘드리아 RNA 폴리머라제(POLRMT)에 의한 단일 뉴클레오티드의 도입
MTCN 완충액(50 mM MES, 25 mM Tris-HCl, 25 mM CAPS, 및 50 mM NaCl, pH 7.5), 200 nM 5′-32P-R12/D18, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 및 376 nM POLRMT의 혼합물을 30℃에서 1분 동안 사전-인큐베이션하였다. 500 μM(최종) 천연 NTP 또는 NTP 유사체를 첨가함으로써 반응을 시작하였다. 선택된 시점에서, 반응 혼합물을 취출하고, 100 mM EDTA, 80% 포름아미드, 및 브로모페놀 블루를 함유하는 겔 로딩 완충액으로 켄칭하고, 65℃에서 5분 동안 가열하였다. 샘플을 20% 폴리아크릴아미드 겔(8 M 우레아) 상에서 전개하고, 생성물 제형을 Typhoon Trio 이미저 및 Image Quant TL 소프트웨어(GE Healthcare, 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재)를 사용하여 정량화하였다. mt RNA 폴리머라제에 의한 단일 뉴클레오티드 도입의 속도를 하기의 단일 지수 방정식을 사용하여 생성물 형성을 적합화함으로써 계산하였다: [R13] = A(1 - e -kt ) (여기서, [R13]은 형성된 신장된 생성물의 양(단위: nM)을 나타내고, t는 반응 시간을 나타내고, k는 관찰된 속도를 나타내고, A는 지수의 진폭을 나타냄).
[표 3]
Figure pct00651
Figure pct00652
Figure pct00653
Figure pct00654
Figure pct00655
Figure pct00656
[표 4]
Figure pct00657
[표 5]
Figure pct00658
[표 6]
Figure pct00659
[표 7]
Figure pct00660
전술한 발명은 명확한 이해를 위해 예시 및 실시예로서 어느 정도 상세히 기술되었지만, 당업자는 소정의 변경 및 수정이 첨부된 청구범위의 범주 내에서 실시될 수 있음을 이해할 것이다. 또한, 본 명세서에 제공된 각각의 참고문헌은, 마치 각각의 참고문헌이 개별적으로 참고로 포함되는 것처럼 그와 동일한 정도로 전체적으로 참고로 포함된다. 본 출원과 본 명세서에 제공된 참고문헌 사이에 불일치가 존재하는 경우, 본 출원이 우선할 것이다.
SEQUENCE LISTING <110> GILEAD SCIENCES, INC. <120> ANTIVIRAL COMPOUNDS <130> 1223-WO-PCT <140> <141> <150> 62/977,881 <151> 2020-02-18 <160> 1 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 244 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide" <400> 1 ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag 60 ucagucaguc agucagucag uccaagucca aguccaaguc caaguccaag uccaagucca 120 aguccaaguc caaguccaag uccaagucca aguccaaguc caagucaguc agucagucag 180 ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag ucagucaguc agucagucag 240 ucag 244

Claims (103)

  1. 화학식 (II)의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (II)]
    Figure pct00661

    (상기 식에서,
    염기는 하기와 같으며:
    Figure pct00662
    ,
    Figure pct00663
    또는
    Figure pct00664
    ;
    R1A 및 R2A는 각각 독립적으로 하기와 같으며:
    (A) 1 내지 3개의 R1B로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬,
    (B) N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴 - 여기서, 상기 3원 내지 6원 헤테로사이클릴은 1 내지 3개의 R1C로 선택적으로 치환됨 -, 또는
    (C) 페닐
    (여기서
    각각의 R1B는 독립적으로 -OH, -NH2, C1-6 알콕시, 메톡시에톡시, 또는 N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴이고,
    각각의 R1C는 독립적으로 C1-3 알킬임);
    R3은 -N(H)R3A 또는 -N=C(R3B)(R3C)이고;
    R3A는 H, -CH2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이며, 여기서
    R3D는 1개의 메톡시로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이거나, 또는 C1-3 알킬로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴이고;
    R3B는 H 또는 C1-3 알킬이고;
    R3C는 -N(R3C1)(R3C2)이고;
    R3C1 및 R3C2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이거나; 또는
    R3C1과 R3C2는 그들이 부착되어 있는 원자와 함께, C1-6 알킬로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴을 형성하고;
    R4A는 O 또는 S이고;
    R4B 및 R4C는 각각 독립적으로 하기와 같으며:
    (A) -OH;
    (B) -OR4B1
    (여기서,
    R4B1은 1 내지 3개의 R4B2 기로 선택적으로 치환된 C1-6 알킬이거나, 또는 C6-12 아릴이며, 여기서
    각각의 R4B2 기는 독립적으로 C1-6 알콕시, -S-R4B3, 또는 -S(O)2-R4B3이고,
    각각의 R4B3 기는 독립적으로 C1-6 알킬임);
    (C)
    Figure pct00665

    (여기서,
    m은 0, 1, 2, 3, 4, 또는 5이고;
    각각의 R4D는 독립적으로, 1 내지 3개의 R4D1 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알킬, 1 내지 3개의 R4D2 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알콕시, 또는 - C(O)N(R4D3)2이며, 여기서
    각각의 R4D1 기는 독립적으로 -NH2 또는 -C(O)OR4D3이고,
    각각의 R4D2는 독립적으로 C1-3 알콕시이고,
    각각의 R4D3은 독립적으로 C1-3 알킬임);
    (D)
    Figure pct00666

    (여기서,
    R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이고,
    R4F1 및 R4F2는 각각 독립적으로 H 또는 C1-6 알킬이거나, 또는 R4F1과 R4F2는 함께 결합하여 옥소이고,
    R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬, 1 내지 3개의 R4G2로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬, 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 8원 헤테로사이클릴, 또는 -C(O)R4G4이고,
    각각의 R4G1은 독립적으로 -OH, C1-6 알킬, C1-3 알콕시, -(CH2OCH2)1-5-CH3, -N(R4G8)2, -OP(O)(OH)2, 1 내지 3개의 R4G9로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬, 1 내지 3개의 R4G10으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴, 또는 페닐이고,
    각각의 R4G2는 독립적으로 C1-6 알킬, C1-3 할로알킬, 또는 -NH2이고,
    각각의 R4G3은 독립적으로 할로겐 또는 C1-3 알킬이고,
    각각의 R4G4는 독립적으로 C1-12 알킬이고,
    각각의 R4G8은 독립적으로 C1-6 알킬이고,
    각각의 R4G9는 독립적으로 C1-3 할로알킬, 또는 -NH2이고,
    각각의 R4G10은 독립적으로 C1-3 할로알킬임); 또는
    (E) -(OP(O)(OH))1-2-OH; 그리고
    R5A 및 R5B는 각각, -OP(O)(OH)2로 치환된 C1-6 알킬임).
  2. 제1항에 있어서, R1A 및 R2A는 1 내지 3개의 R1B로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  3. 제2항에 있어서, R1A 및 R2A는 각각, 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, 아이소부틸, tert-부틸, 및 아이소펜틸로 이루어진 군으로부터 선택되며, 각각은 1 내지 3개의 R1B로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R4B 및 R4C 중 하나는 하기와 같으며:
    Figure pct00667
    ; 그리고
    R4B 및 R4C 중 다른 하나는 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00668
    .
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R4F1과 R4F2는 함께 결합하여 옥소인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R4G는 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환된 C1-12 알킬인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  7. 제6항에 있어서, R4G는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, 아이소부틸, t-부틸 또는 2-에틸-부틸이며, 각각은 1 내지 3개의 R4G1로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  8. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R4G는 1 내지 3개의 R4G2로 선택적으로 치환된 C3-7 사이클로알킬인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  9. 제8항에 있어서, R4G는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 또는 사이클로헥실이며, 각각은 1 내지 3개의 R4G2로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  10. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R4G는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환된, N, O 및 S로부터 선택되는 1 내지 3개의 헤테로원자를 갖는 3원 내지 6원 헤테로사이클릴인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  11. 제10항에 있어서, R4G는 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환된, N 및 O로부터 선택되는 1개 또는 2개의 헤테로원자를 갖는 4원 내지 6원 헤테로사이클릴인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  12. 제10항에 있어서, R4G는 옥세타닐, 피롤리디닐, 피페리디닐, 테트라하이드로푸라닐, 또는 테트라하이드로피라닐이며, 각각은 1 내지 3개의 R4G3으로 선택적으로 치환되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, R5A 및 R5B는 각각 -CH2OP(O)(OH)2인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIa)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIa)]
    Figure pct00669

    (상기 식에서, R5A는 -CH2OP(O)(OH)2임).
  15. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIb)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIb)]
    Figure pct00670

    (상기 식에서, R5B는 -CH2OP(O)(OH)2임).
  16. 제1항에 있어서,
    R1A 및 R2A는 각각 독립적으로,
    메톡시, 메톡시에톡시, 또는 모르폴리닐로 선택적으로 치환된 메틸,
    메톡시로 선택적으로 치환된 에틸,
    n-프로필,
    아이소프로필,
    n-부틸,
    -OH 또는 -NH2로 선택적으로 치환된 아이소부틸,
    tert-부틸,
    아이소펜틸,
    옥세타닐,
    테트라하이드로피라닐,
    메틸로 선택적으로 치환된 피페리디닐, 또는
    페닐이고;
    R3은 -N(H)R3A 또는 -N=C(R3B) (R3C)이고;
    R3A는 H, -C(H)2OP(O)(OH)2, 또는 -C(O)R3D이고;
    R3D는
    메틸,
    메톡시로 선택적으로 치환된 에틸,
    아이소프로필, 또는
    메틸로 선택적으로 치환된 피페리디닐이고,
    R3B는 H 또는 메틸이고;
    R3C는 -N(R3C1)(R3C2)이고;
    R3C1 및 R3C2는 독립적으로 H 또는 메틸이거나; 또는
    R3C1과 R3C2는 그들이 부착되어 있는 원자와 함께, 메틸로 선택적으로 치환된 피페라지닐을 형성하고;
    R4A는 O 또는 S이고;
    R4B 및 R4C는 각각 독립적으로 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    (A) -OH;
    (B) 메톡시, 메틸티오 또는 메틸설포닐로 선택적으로 치환된 -O-C1-6 알킬;
    (C)
    Figure pct00671

    (여기서,
    m은 0, 1 또는 2이고;
    각각의 R4D는 독립적으로, 1개의 R4D1 기로 선택적으로 치환된 C1-3 알킬, 메톡시로 선택적으로 치환된 C1-3 알콕시, 또는 -C(O)N(R4D3)2이며, 여기서
    각각의 R4D1 기는 독립적으로 -NH2 또는 -C(O)OR4D3이고,
    각각의 R4D3은 독립적으로 C1-3 알킬임); 또는
    (D)
    Figure pct00672

    (여기서,
    R4E1 및 R4E2는 각각 독립적으로 H 또는 메틸이고;
    R4F1 및 R4F2는 각각 독립적으로 H 또는 메틸이거나, 또는 R4F1과 R4F2는 함께 결합하여 옥소이고;
    R4G는
    R4G1로 선택적으로 치환된 메틸,
    모르폴리닐 또는 -N(C1-3 알킬)2로 선택적으로 치환된 에틸,
    메톡시 또는 모르폴리닐로 선택적으로 치환된 n-프로필,
    아이소프로필,
    C1-3 알킬로 선택적으로 치환된 n-부틸,
    -OH 또는 -OP(O)(OH)2로 선택적으로 치환된 아이소부틸,
    사이클로프로필,
    사이클로부틸,
    사이클로펜틸,
    -NH2, C1-6 알킬, 또는 C1-3 할로알킬로부터 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 기로 선택적으로 치환된 사이클로헥실,
    옥세타닐,
    1 내지 3개의 메틸로 선택적으로 치환된 피롤리디닐,
    할로겐 또는 C1-3 알킬로 선택적으로 치환된 피페리디닐,
    테트라하이드로푸라닐,
    테트라하이드로피라닐, 또는
    -C(O)C1-6 알킬이고;
    R4G1은
    사이클로프로필,
    사이클로부틸,
    -NH2 또는 C1-3 할로알킬로 선택적으로 치환된 사이클로헥실,
    옥세타닐,
    C1-3 할로알킬로 선택적으로 치환된 피페리디닐,
    테트라하이드로피라닐, 또는
    페닐임).
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIc)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIc)]
    Figure pct00673
    .
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IId)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IId)]
    Figure pct00674
    .
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIe)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIe)]
    Figure pct00675
    .
  20. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIf)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIf)]
    Figure pct00676
    .
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIg)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIg)]
    Figure pct00677

    (상기 식에서, m은 0 또는 1임).
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIh)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIh)]
    Figure pct00678
    .
  23. 제1항 내지 제16항 및 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIi)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIi)]
    Figure pct00679
    .
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIj)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIj)]
    Figure pct00680
    .
  25. 제1항 내지 제16항 및 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIk)로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIk)]
    Figure pct00681
    .
  26. 제1항 내지 제22항 및 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIm)으로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIm)]
    Figure pct00682
    .
  27. 제1항 내지 제22항, 제25항 및 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식 (IIn)으로 나타낸, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    [화학식 (IIn)]
    Figure pct00683
    .
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, R1A 및 R2A는 각각 메틸, 에틸, 또는 아이소프로필인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, R1A 및 R2A는 각각 아이소프로필인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, R4G는 메틸, 에틸, n-프로필, 아이소프로필, n-부틸, t-부틸 또는 2-에틸-부틸인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, R4G는 메틸인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  32. 제1항에 있어서, 표 1A, 표 1B, 표 1C, 표 1D, 표 1E, 표 1F, 표 1G, 표 1H, 및 표 1I의 화합물로 이루어진 군으로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  33. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00684
    ,
    Figure pct00685
    ,
    Figure pct00686
    ,
    Figure pct00687
    ,
    Figure pct00688
    ,
    Figure pct00689
    ,
    Figure pct00690
    ,
    Figure pct00691
    ,
    Figure pct00692
    ,
    Figure pct00693
    ,
    Figure pct00694
    ,
    Figure pct00695
    ,
    Figure pct00696
    ,
    Figure pct00697
    ,
    Figure pct00698
    ,
    Figure pct00699
    ,
    Figure pct00700
    ,
    Figure pct00701
    ,
    Figure pct00702
    ,
    Figure pct00703
    , 또는
    Figure pct00704
    .
  34. 제33항에 있어서, 상기 화합물은 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00705
    .
  35. 제33항에 있어서, 상기 화합물은 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00706
    .
  36. 제33항에 있어서, 상기 화합물은 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00707
    .
  37. 제33항에 있어서, 상기 화합물은 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00708
    .
  38. 제33항에 있어서, 상기 화합물은 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00709
    .
  39. 제33항에 있어서, 상기 화합물은 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00710
    .
  40. 제33항에 있어서, 상기 화합물은 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00711
    .
  41. 제33항에 있어서, 상기 화합물은 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00712
    .
  42. 제33항에 있어서, 상기 화합물은 하기와 같은, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염:
    Figure pct00713
    .
  43. 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 약제학적 유효량과, 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 제형.
  44. 뉴모바이러스과(Pneumoviridae) 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법으로서,
    제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  45. 제44항에 있어서, 상기 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스 감염증인, 방법.
  46. 제44항에 있어서, 상기 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 인간 메타뉴모바이러스(metapneumovirus) 감염증인, 방법.
  47. 피코르나바이러스과(Picornaviridae) 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법으로서,
    제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  48. 제47항에 있어서, 상기 피코르나바이러스과 바이러스 감염증은 인간 리노바이러스(rhinovirus) 감염증인, 방법.
  49. 플라비바이러스과(Flaviviridae) 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법으로서,
    제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  50. 제49항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 뎅기(dengue) 바이러스 감염증인, 방법.
  51. 제49항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 황열(Yellow fever) 바이러스 감염증인, 방법.
  52. 제49항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 웨스트 나일(West Nile) 바이러스 감염증인, 방법.
  53. 제49항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 지카(Zika) 바이러스 감염증인, 방법.
  54. 제49항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 HCV 감염증인, 방법.
  55. 필로바이러스과(Filoviridae) 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하는 방법으로서,
    제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 필로바이러스과 바이러스 감염증은 에볼라(Ebola) 바이러스 감염증인, 방법.
  57. 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법으로서,
    제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 하는, 방법.
  58. 제57항에 있어서, 상기 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스 감염증인, 방법.
  59. 제57항에 있어서, 상기 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 인간 메타뉴모바이러스 감염증인, 방법.
  60. 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법으로서,
    제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 하는, 방법.
  61. 제60항에 있어서, 상기 피코르나바이러스과 바이러스 감염증은 인간 리노바이러스 감염증인, 방법.
  62. 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법으로서,
    제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 하는, 방법.
  63. 제62항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 뎅기 바이러스 감염증인, 방법.
  64. 제62항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 황열 바이러스 감염증인, 방법.
  65. 제62항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 웨스트 나일 바이러스 감염증인, 방법.
  66. 제62항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 지카 바이러스 감염증인, 방법.
  67. 제62항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 HCV 감염증인, 방법.
  68. 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증을 치료하기 위한 약제의 제조 방법으로서,
    제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 하는, 방법
  69. 제68항에 있어서, 상기 필로바이러스과 바이러스 감염증은 에볼라 바이러스 감염증인, 방법.
  70. 인간에서의 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.
  71. 제70항에 있어서, 상기 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스 감염증인, 용도.
  72. 제70항에 있어서, 상기 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 인간 메타뉴모바이러스 감염증인, 용도.
  73. 인간에서의 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.
  74. 제73항에 있어서, 상기 피코르나바이러스과 바이러스 감염증은 인간 리노바이러스 감염증인, 용도.
  75. 인간에서의 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.
  76. 제75항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 뎅기 바이러스 감염증인, 용도.
  77. 제75항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 황열 바이러스 감염증인, 용도.
  78. 제75항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 웨스트 나일 바이러스 감염증인, 용도.
  79. 제75항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 지카 바이러스 감염증인, 용도.
  80. 제75항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 HCV 감염증인, 용도.
  81. 인간에서의 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서의 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도.
  82. 제81항에 있어서, 상기 필로바이러스과 바이러스 감염증은 에볼라 바이러스 감염증인, 용도.
  83. 뉴모바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  84. 제83항에 있어서, 상기 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스 감염증인, 화합물.
  85. 제83항에 있어서, 상기 뉴모바이러스과 바이러스 감염증은 인간 메타뉴모바이러스 감염증인, 화합물.
  86. 피코르나바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  87. 제86항에 있어서, 상기 피코르나바이러스과 바이러스 감염증은 인간 리노바이러스 감염증인, 화합물.
  88. 플라비바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  89. 제88항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 뎅기 바이러스 감염증인, 화합물.
  90. 제88항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 황열 바이러스 감염증인, 화합물.
  91. 제88항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 웨스트 나일 바이러스 감염증인, 화합물.
  92. 제88항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 지카 바이러스 감염증인, 화합물.
  93. 제88항에 있어서, 상기 플라비바이러스과 바이러스 감염증은 HCV 감염증인, 화합물.
  94. 필로바이러스과 바이러스 감염증의 치료를 필요로 하는 인간에서 상기 바이러스 감염증의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  95. 제94항에 있어서, 상기 필로바이러스과 바이러스 감염증은 에볼라 바이러스 감염증인, 화합물.
  96. 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악(exacerbation)의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방을 위한 방법으로서,
    제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 치료적 유효량을 상기 인간에게 투여하는 단계를 포함하며, 상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병인, 방법.
  97. 제96항에 있어서, 상기 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기되는, 방법.
  98. 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조 방법으로서,
    제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염이 사용되는 것을 특징으로 하며, 상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병인, 방법.
  99. 제98항에 있어서, 상기 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기되는, 방법.
  100. 인간에서 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 위한 약제의 제조에 있어서의 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염의 용도로서,
    상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병인, 용도.
  101. 제100항에 있어서, 상기 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기되는, 용도.
  102. 바이러스성 감염증에 의한 호흡기 질환의 증악의 치료 또는 예방을 필요로 하는 인간에서 상기 치료 또는 예방에 사용하기 위한 제1항 내지 제42항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염으로서,
    상기 호흡기 질환은 만성 폐색성 폐 질병인, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염.
  103. 제102항에 있어서, 상기 바이러스성 감염증은 호흡기 세포융합 바이러스, 리노바이러스 또는 메타뉴모바이러스에 의해 야기되는, 화합물.
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