KR20140064765A - Hcv 조합 치료 - Google Patents

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마이클 호지스
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Abstract

본 발명은 miR-122 저해제 및 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제를 이용한 조합 치료에 의한 C형 간염(HCV) 감염의 치료에 관한 것이다.

Description

HCV 조합 치료{HCV COMBINATION THERAPY}
본 발명은 miR-122 저해제와 HCV NS5B RNA-의존성 RNA 폴리머라제의 저해제와의 조합 및 임의로 리바비린을 이용한 C형 간염 (HCV) 감염의 치료 방법에 관한 것이다.
전세계 인구의 대략 3%가 C형 간염 바이러스 (HCV)에 감염되어 있으며 이는 종종 간경화 및 간세포 암종의 원인이 된다. 페길화 인터페론과 리바비린을 이용한 표준 치료법은 심각한 부작용을 일으키며 많아야 환자의 50% 에서만 바이러스가 근절될 뿐이다. 리바비린과 인터페론을 비롯한 HCV의 조합 치료법은 HCV의 승인된 치료법이다. 불행히도, 이러한 조합 치료법 역시 부작용을 나타내며 종종 잘 관용되지 못하여, 유의적인 비율의 환자들에 있어서 주요 임상 변화를 일으킨다. HCV의 치료를 위해, 수많은 직접 작용하는 물질들(DAA: direct acting agents)이 개발되어 왔거나 개발 중에 있고, 이러한 물질의 예로는 텔라프레비어 및 보세프레비어(두 가지 모두 2011년도에 인터페론 및 리바비린 기반 치료법과 사용하도록 MA 승인됨)를 들 수 있다. 그러나 직접 작용 물질은 치료의 독성 증가, 내성 출현과 연관이 있어서 오늘날까지 인터페론이 없는 표준 치료법이 제공되고 있지 못하다. 직접 작용 물질들의 조합 역시 약물-약물 상호반응을 야기한다. 오늘날까지, 인터페론을 사용하지 않는 HCV 치료법은 어떠한 것도 승인된 바 없다. 따라서, 부작용이 갑소되고, 인터페론을 사용하지 않으며, 내성 출현율도 감소되고, 치료 기간이 단축되고 및/또는 치유율은 향상된 새로운 조합 치료법이 요구되고 있다.
관련 출원
본 출원은 2011년 6월 30일 출원된 미국 가특허출원 61/502885호 및 2011년 12월 2일 출원된 미국 가특허출원 61/566028호에 기초한 우선권 주장 출원이며 상기 기초출원들의 내용 전부가 본 발명에 참조 병합된다.
발명의 개요
본 발명은 미라버센(미라버센)과 같은 마이크로RNA-122 저해제를 NS5B 폴리머라제 저해제 및/또는 리바비린과 같은 적어도 1종의 추가의 항바이러스 화합물과 조합 사용하는, 마이크로RNA-122 저해제의 치료 용도에 관한 것이다. 이러한 조합 치료법은 몇몇 구체예에서 인터페론을 사용하지 않는다.
본 발명은 HCV에 감염된 대상자에 있어서 C형 간염 (HCV) 감염을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 HCV에 감염된 대상자에게 miR-122 저해제 (본 명세서에서 miR-122 길항제라고도 칭함) 및 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제를 투여하는 단계를 포함하여 이루어진다.
이 치료법은 필요에 따라 대상자에게 리바비린 또는 그의 바이러스 활성 유도체를 투여하는 단계를 더 포함한다. 이 치료법은 몇몇 구체예에서 인터페론을 사용하지 않는다.
본 발명은 세포에서 HCV 감염 수준을 감소시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 HCV에 감염된 세포를 miR-122 저해제 및 적어도 1종의 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제와 접촉시키는 것을 포함하여 이루어진다. 이 방법은 필요에 따라, 리바비린 또는 그의 바이러스 활성 유도체를 세포에 투여하는 단곌ㄹ 더 포함한다.
본 발명은 miR-122 저해제의 C형 간염의 치료용 약물의 제조를 위한 용도를 제공하며, 여기서 상기 의약은 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제와 조합 사용된다.
본 발명은 C형 간염 치료를 위하여, HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제와 조합적으로 사용되는miR-122 저해제를 제공한다.
임의로, 이러한 사용은 리바비린, 또는 그의 바이러스 활성 유도체와 조합될 수도 있다. 몇몇 구체예에서, 그 사용은 인터페론 없이 이루어질 수 있다.
miR-122 저해제는 몇몇 구체예에서, 미라버센(SPC3649)와 같은, 올리고머 (안티센스 올리고머)의 has-miR-122 마이크로RNA 서열에 상보적인 올리고머일 수 있다:
Figure pct00001
HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제는 몇몇 구체예에서, 비제한적인 예로서 miR-122 저해제가 예컨대 SPC3649와 같은 안티센스 올리고머인 경우, 뉴클레오사이드 폴리머라제 저해제(NI) 예컨대 GS-6620, IDX184, PSI-7977, PSI-938, RG7128 (메르시타빈), 및 TMC649128로 이루어진 군으로부터 선택된 NI이거나 또는 비뉴클레오사이드 폴리머라제 저해제(NNI), 예컨대: ABT-072, ABT-333, ANA598, BI 207127, BMS-791325, GS-9190(테고부비어), IDX375, MK-3281, 필리부비어(Filibuvir), VX-222, 및 VX-916으로 이루어진 군으로부터 선택된 NNI이다.
HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제는 몇몇 구체예에서, 비제한적인 예로서 miR-122 저해제가 예컨대 SPC3649와 같은 안티센스 올리고머인 경우, ALS-2158(Alios), ALS-2200(Alios), ABT-072(Abbott); ABT-333(Abbott), MK-3281(Merck), TMC649128(메디비어/Tibotec), BI 207127(Boehringer Ingelheim Pharma), RG7128 (Genetech: 메르시타빈), GS-9190(테고부비어) (Gilead), GS-7977(Gilead - 이전 명칭 PSI-7977); GS-938(Gilead), RG7128 (Gliead/Genetech), VX-222(Vertex), VX-759(Vertex), ANA598(Anadys/Genetech), IDX184(Idenix), 및 INX-189 (Inhibitex/BMS)로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
몇몇 구체예에서 2종 이상의 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제를 조합 치료 기간 동안 투여할 수 있으며 에컨대 2종 이상의 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제, 예컨대 적어도 1종의 NI 및 적어도 1종의 NNI의 조합을 투여할 수 있다. NNI와 NI와의 이러한 조합의 예로는 예컨대 2'-C-메틸시티딘 및 VX-222를 들 수 있다.
적절하게는, miR-122 저해제는 유효량으로 투여될 수 있다. 적절하게는, HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제를 유효량으로 투여할 수 있다. 적절하게는, 리바비린, 그의 바이러스 활성 유도체는 사용될 경우 유효량으로 사용될 수 있다.
발명의 상세한 설명
조합 치료법
화합물 1: miR-122 저해제, 예컨대 안티센스 올리고머.
화합물 2: 1종 이상의 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제.
화합물 3: 리바비린, 또는 그의 바이러스 활성 유도체.
화합물 4: 인터페론.
화합물 5: 추가의 직접 작용 물질.
본 발명은 적어도 화합물 1 및 2를 HCV에 감염된 대상자에게 투여하는 것을 포함하는 조합 치료법에 관한 것이다.
적절하게는, 이러한 조합 치료법은 HCV에 감염된 대상자에게 적어도 화합물 1과 2, 및 임의로 화합물 3을 HCV에 감염된 대상자에게 투여하는 것을 포함하되, 여기서 몇몇 구체예에서, 조합 치료법은 인터페론을 사용하지 않는다 (interferon free), 즉, 조합 치료법 기간 동안, 화합물 4는 대상자에게 투여되지 않는다.
몇몇 구체예에서, 화합물 1, 2 및 3을 HCV에 감염된 대상자에게 투여하는 조합 치료법에 관한 것이다.
몇몇 구체예에서, 조합 치료법은 HCV에 감염된 대상자에게 화합물 1, 2 및 3을 투여한다.
몇몇 구체예에서, 조합 치료법은 HCV에 감염된 대상자에게 화합물 1, 2, 3 및 4를 투여한다.
몇몇 구체예에서, 조합 치료법은 HCV에 감염된 대상자에게 화합물 1과 2를 투여하되, 이 조합 치료 기간 동안 대상자에게 화합물 3을 투여하지 않는다.
몇몇 구체예에서, 조합 치료법은 HCV에 감염된 대상자에게 화합물 1과 2를 투여하되, 이 조합 치료 기간 동안 대상자에게 화합물 4를 투여하지 않는다.
몇몇 구체예에서, 조합 치료법은 HCV에 감염된 대상자에게 화합물 1과 2를 투여하되, 여기서 화합물 3 및 화합물 4는 조합 치료 기간 동안 대상자에게 투여되지 않는다.
전술한 구체예에서, 임의로 화합물 5 역시도 투여될 수 있다. 임상 시험 결과는 계획된 대로 또는, 일반적으로 화합물 3과 조합되는, 화합물 1 및 화합물 5의 조합 사용을 위해 실시된다. 화합물 5는 예컨대 HCV NS3/4A 프로테아제 저해제, 및/또는 HCV NS5A 단백질 저해제일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 화합물 5는 치료 기간 동안 투여되지 않는다.
리토나비어; 1,3-티아졸-5-일메틸 N-[(2S,3S,5S)-3-히드록시-5-[(2S)-3-메틸-2-{[메틸({[2-(프로판-2-일)-1,3-티아졸-4-일]메틸})카르바모일]아미노}부탄아미도]-1,6-디페닐헥산-2-일]카르바메이트는 직접 작용 물질과 조합적으로 종종 사용되는 CYP3A4 저해제이며, 조합 치료 기간 동안, 본 발명의 조합 요법에서 사용될 수 있다. 리토나비어는 시토크롬 P450, 특히 몇몇 DAA의 CYP3A 매개된 대사를 억제하여, 혈액 내의 약물의 양을 향상시키고 후속적으로 DAA의 효능을 증가시키는 것으로 여겨진다. 몇몇 구체예에서, 시토크롬 P450의 저해제를 조합 치료 기간 중에 투여한다.
2종 이상의 조합된 화합물들을 함께 또는 순차적으로, 즉, 본 발명의 방법에서 하나의 화합물을, 본 발명의 방법에서 언급되는 다른 1종 이상의 다른 치료제의 사용 전에, 사용 중에 또는 사용 후에 사용할 수 있다 (조합 치료). 두가지 약물 모두 (또는 그 이상)의 조합 사용은 적절히 중복되어 한가지 물질의 치료 효능(즉 환자에 대하여 측정가능한 장점이 관찰되는 사용후 기간)이 적어도 어떤 시점에서, 두번째 물질의 치료 효능 기간과 동시에 일어난다. 몇몇 구체예에서, 화합물 1과 2 및 임의로 화합물 3의 조합 사용을 동시에 수행하고, 이러한 동시 조합 사용에 이어서 임의로 화합물 3 및/또는 4를 이용하여 치료할 수 있다. 예를 들어, 몇몇 구체예에서, 화합물 4의 투여는 조합 치료 기간에 이어서 수행될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 화합물 4의 투여는 화합물 1 및/또는 2의 최종 투여에 이어서 실시될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 화합물 4의 후속 투여는 화합물 3과 조합적으로 이용될 수 있다.
몇몇 구체예에서, 화합물 1 및 화합물 2는 함께 또는 순차 사용된다. 몇몇 구체예에서, 화합물 1의 적어도 1회 투여 및 화합물 2의 적어도 1회 투여는 안티센스 올리고머의 투여와 같은 날 이루어지거나 또는 같은 주일 내에 또는 동일한 2주일 이내 또는 3주일 또는 4주일 이내에 이루어진다. 몇몇 구체예에서, 화합물 3은화합물 1 및 화합물 2와 함께 또는 순차적으로, 예컨대 화합물 1 및/또는 2의 투여와 동일한 날, 또는 동일한 주일 또는 동일한 2주일 이내, 또는 3주일 또는 4주일 이내에 사용될 수 있다.
몇몇 구체예에서, 이러한 이중(화합물 1 및 2) 또는 삼중 (화합물 1, 2 및 3) (화합물 1, 2, 및 5) (화합물 1, 2, 3 및 5)의 조합 치료법은 치료 기간 동안 화합물 4 (인터페론, 예컨대 페길화 인터페론 알파-2a)의 투여를 포함하지 않는다.
조합 치료 기간은 첫번째 조합 치료가 투여된 시기, 즉 대상자가 적어도 화합물 1과 2 두가지 모두를 투여받은 때로부터 적어도 4주일, 예컨대 적어도 8주일, 예컨대 적어도 12 주일, 예컨대 적어도 16 주일, 예컨대 적어도 24 주일 동안일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 조합 치료 기간은 최대 6개월이다. 일반적으로 조합 치료 기간 동안 화합물 1, 화합물 2 및 임의로 화합물 3 및/또는 화합물 5 각각을 복수 투여한다. 몇몇 다른 구체예에서, 화합물 4 역시도 조합 치료 기간 동안 투여될 수 있으나, 인터페론을 사용하지 않는 치료가 바람직한 것으로 인식된다.
별법으로 또는 이에 더해, 조합 치료 기간 후에, 예컨대 적어도 약 8 주일 동안, 예컨대 적어도 약 8 주일 동안, 예컨대 적어도 약 12 주일 동안 예컨대 적어도 약 16 주일 동안, 예컨대 적어도 약 24주일 동안, 예컨대 최대 약 24 주일 동안 또는 최대 약 48 주일 동안 화합물 4를 투여할 수 있다. 일반적으로 만일 화합물 4가 투여되는 경우 이것은 화합물 3과 함께 투여된다.
본 발명은 또한 HCV에 감염된 대상자에 있어서 C형 간염 (HCV) 감염을 치료하기 위한 방법을 제공하는데, 상기 방법은 대상자에게 화합물 1 (본 명세서에서 miR-122 길항제, 예컨대 미라버센이라 칭한다) 및 화합물 3, 예컨대 리바비린, 또는 그의 바이러스 활성 유도체를 투여하는 것을 포함하여 이루어진다. 이 치료법은 몇몇 구체예에서 인터페론을 사용하지 않는다. 몇몇 구체예에서 상기 방법은 화합물 2의 투여를 포함할 수도 또는 포함하지 않을 수도 있다. 이와 관련하여, 본 발명에 제공된 결과들 및 2상 임상 시험에서 미라버센 단일요법으로부터 얻은 결과들에 의하면, 미라버센과 같은 화합물 1의, 본 명세서에 기재된 바와 같은 리바비린과의 조합 사용은, 심지어 다른 항바이러스 치료제 예컨대 화합물 4 또는 화합물 2 예컨대 HCV NS3/4A 단백질 저해제, 및/또는 HCV NS5A 단백질 저해제의 부재시에조차, HCV 감염을 효과적으로 치료 또는 치유하는데 충분한 것으로 나타났다. 미라버센과 리바비린과의 조합 사용은 본 명세서에서 DAA/미라버센과 연관되어 설명된 바와 같다. 본 발명은 C형 간염 치료에 있어서, 화합물 3, 예컨대 리바비린과 조합적으로 사용되기 위한 miR-122 저해제, 예컨대 미라버센을 제공한다. 본 발명은 C형 간염 치료용 의약의 제조를 위한 miR-122 저해제의 용도를 제공하며, 여기서 상기 의약은 예컨대 리바비린과 같은 화합물 3과 조합 사용되기 위한 것이다.
몇몇 구체예에서 조합 치료 기간은 약 4 주일 또는 약 8 주일, 또는 약 12 주일이다. 몇몇 구체예에서, 조합 치료 기간은 최소한 약 4 주일, 또는 최소한 약 8 주일, 또는 최소한 약 12 주일이다. 몇몇 구체예에서, 조합 치료의 최대 기간은 약 24 주일, 약 36 주일 또는 약 48 주일이다. 몇몇 구체예에서, 조합 치료 기간은 약 4 - 약 8 주일, 약 4 - 약 12 주일, 약 4 - 약 24 주일, 약 4 - 약 36 주일, 약 4 - 약 48 주일, 약 8 - 약 12 주일, 약 8 - 약 24 주일, 약 8 - 약 36 주일, 약 8 - 약 48 주일, 약 12 - 약 24 주일, 약 12 - 약 36 주일, 약 12 - 약 48 주일, 약 24 - 약 36 주일, 약 24 - 약 48 주일이다.
조합 치료 기간 동안 적어도 화합물 1의 1회 투여량 및 화합물 2의 1회 투여량이 대상자(환자)에게 투여된다.
몇몇 구체예에서, 화합물 2를 조합 치료 기간 개시에 앞서서 (즉 예비 치료 / 선도 치료), 예컨대 조합 치료 기간 개시로부터 약 2 - 약 12 주일, 예컨대 약 4 주일 전에 투여할 수 있다.
직접 작용 물질에 대한 바이러스 내성의 출현은 인터페론을 사용하지 않는 치료법을 비롯한 HCV 치료제의 성공적인 개발과 적용에 있어서 주요한 제약 사항이 되고 있다. HCV는 정확도(fidelity)가 낮고 프루프 리딩 능력이 결여된 HCV-RNA-의존성 RNA-폴리머라제 NS5B를 이용함으로써 복제된다. 따라서, HCV는 HCV 게놈을 복제하는데 있어서 오차(에러) 빈도가 높다. 뿐만 아니라, HCV는 턴오버 비율이 높고, 따라서, 만성 HCV 감염 (CHC)을 앓는 환자들은 복수개의 HCV "준(quasi)" 종(species)에 의해 감염되게 된다. 이들 종들 중 내성 관련 변이체(RAVs: Resistant Associate Variants)라 불리는 것들은 직접 작용 항바이러스 물질(DAAs)에 대해 보다 낮은 감수성 및/또는 내성을 갖는다. DAAs가 CHC 환자에게 투여될 경우 DAA에 대한 감수성이 높은 준 종들(quasi species)이 감소될 것이다. 그리 되면 RAV가 HCV 준 종들의 풀(pool)을 우점하게 되어 감염되지 않은 간세포들을 감염시킬 수 있게 된다. 소위 말하는 이러한 "복제 스페이스로의 확장(expansion in to the replication space)"은 바이러스학적 실패의 원인이 되며, 이것은 CHC를 DAA 단일 요법을 치료하는 경우, 급속히 발생한다 (DAA 단일요법 개시로부터 수일 이내에 바이러스적 브레이크쓰루). 바이러스학적 실패(virologicfailure: 혈액으로부터 HCV RNA의 초기 소거 후 관찰되는 바이러스적 브레이크쓰루 또는 재발)는 DAA를 peg-IFN 및 리바비린과 함께 사용하거나 사용하지 않는 경우에도 일어날 수 있다. 미라버센은 간에서의 HCV 축적에 필수적인 마이크로 RNA인 miR-122를 격리시킨다. 미라버센은 간 전반에 분포하여 miR-122를 격리시키고, 이에 따라 HCV가 miR-122를 이용하는 것을 방지한다. 그 결과, MIR 치료가 DAA보다 먼저 및/또는 DAA와 함께 실시될 경우, RAV 팽창으로부터 복제 스페이스가 보호되어 바이러스적 실패를 방지할 수 있다.
몇몇 구체예에서, 화합물 1은 화합물 2의 투여보다 먼저, 예컨대 화합물 2의 투여 보다 적어도 약 1 주일 또는 적어도 약 2 주일 전에, 예컨대 적어도 약 3주일 전, 예컨대 적어도 약 4 주일 전에 대상자에게 투여된다. 이것은 [화합물 1] 예비-치료 기간이라 칭할 수 있으며 이 예비-치료 기간 동안, 화합물 1은 단독으로 또는 화합물 3과 조합적으로 투여될 수 있다. 이 예비-치료 기간은 예컨대 약 12 주일의 기간 동안 이어질 수 있고 - 예컨대 조합 치료 기간 개시 약 2주일 - 약 12 주일 전에 개시될 수 있다. 일반적으로, 예비-치료 기간 동안 화합물 1은 화합물 2의 투여 전에 대상자 체내에서 효과적으로 바이러스 로드를 감소시킬 수 있다. 이것은 화합물 2에 대한 내성 생성을 감소 또는 예방하는데 유용하다. 몇몇 구체예에서 예비-치료 기간은 화합물 1 (예컨대) 미라버센을 1회 또는 2회 투여하는 것을 포함한다. 화합물 1의 각각의 (예비) 투여량을 예컨대 약 5mgs/kg의 양으로,약 5mgs/kg의 양으로, 또는 약 6mgs/kg의 양으로, 또는 약 7mgs/kg의 양으로, 또는 약 8mgs/kg의 양으로, 또는 약 9mgs/kg의 양으로, 또는 약 10mgs/kg의 양으로, 또는 약 11mgs/kg의 양으로 또는 약 12mgs/kg의 양으로 투여할 수 있다. 몇몇 구체예에서 화합물 1 (예컨대 미라버센)의 1회 (예컨대 단일) 예비-투여량을, 화합물 2의 최초 투여 또는 조합 치료 기간 개시로부터 예컨대 약 또는 적어도 1 1주일 또는 적어도 약 2주일 전 또는 약 또는 적어도 3 주일 전 또는 약 또는 적어도 4 주일 전에 투여할 수 있다. 적절하게는 화합물 1 (예컨대 미라버센)의 (예비 투여량)(들)을 화합물 2의 최초 투여 또는 조합 치료 기간으로부터 약 12주일 전 이내, 또는 예컨대 화합물 2의 최초 투여 또는 조합 치료 기간으로부터 약 10주 전 이내 또는 약 8주 전 이내에 투여한다. 몇몇 구체예에서 예비-치료 기간 동안 리바비린과 같은 화합물 3을 대상자에게 더 투여할 수 있다.
따라서, 또 다른 일 구체예에서, 화합물 1, 예컨대 미라버센을 조합 치료 기간 개시 전에 (즉, 화합물 1 예비 치료/선도 치료), 예컨대 조합 치료 기간의 개시 약 2 내지 약 24 주일 전, 예컨대 약 4 주일 전, 또는 약 8 주일 또는 약 12 주일 전에 투여할 수 있다. 몇몇 구체예에서 화합물 1의 예비-치료 기간 동안, 대사자 체내(예컨대 대상자의 간 내)에 화합물 1을 치료적 유효 농도 수준으로 빌드-업시킬 목적으로, 예비-치료 기간에 걸쳐 화합물 1을 연속 투여한다. 따라서, 몇몇 구체예에서, 예비-치료 기간 동안 화합물 1의 매회 투여 간의 시간 간격은 예컨대 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 및 매주로부터 선택될 수 있다. 몇몇 구체예에서, 예비 치료 기간의 각각의 투여량은 예컨대 약 0.1mgs/kg 내지 약 10mgs/kg 또는 0.1 최대 약 12mgs/kg, 예컨대 약 0.2 mgs/kg, 예컨대 약 0.3mgs/kg, 예컨대 약 0.4mgs/kg, 예컨대 약 0.5mgs/kg, 예컨대 약 0.6mgs/kg, 예컨대 약 0.7mgs/kg, 예컨대 약 0.8mgs/kg, 예컨대 약 0.9mgs/kg, 예컨대 약 1mg/kg, 예컨대 약 2mgs/kg, 예컨대 약 3mgs/kg, 예컨대 약 4mgs/kg, 예컨대 약 5mgs/kg, 예컨대 약 6mgs/kg, 예컨대 약 7mgs/kg, 예컨대 약 8mgs/kg, 예컨대 약 9mgs/kg, 예컨대 약 10mgs/kg, 예컨대 약 11mgs/kg, 예컨대 약 12mgs/kg일 수 있다.
빌드-업 단계 후, 화합물 1의 투여는 전술한 바와 같이 예컨대 매주, 2주에 한번 또는 매달 실시할 수 있다. 빌드 업 단계 후, 일정 기간 동안 유지 투여량을 투여할 수 있으며 (유지 투여의 목적은 표적 조직 내에서 화합물의 활성 또는 농도를 비교적 높게 유지시키는 한편, 예컨대 바이러스 역가를 감소시키거나 다른 질병 변수를 향상시키는 것임), 그 후, 요구되는 유효 투여량을 최소한으로 이용하여 새로운 낮은 수준으로 질병을 유지시키고 이와 동시에 부작용을 최소화하고 투여간격을 증가시킴으로써 환자의 불편함을 최소화하기 위해, 투여 간격을 증가시키거나 또는 매 투여시 제공되는 투여량을 감소시키거나 또는 두 가지 모두를 실시할 수 있다.
몇몇 구체예에서, 빌드 업 단계 후, 중요한 질병 변수에 대한 바람직한 효과를 수득하기 위해 그 목적이 표적 조직 내의 유효 농도를 유지시키는 것인 유지 투여량을 투여하며, 여기서, 각각의 투여 간의 간격은 환자의 복약 불편을 피할 수 있을 정도로 길며 투여량은 부작용을 최소화하되 선택된 질병 변수에 대한 효과는 유지하는 수준으로 한다.
몇몇 구체예서, 빌드 업 단계는 예비-투여 단계 동안 일어나며 유지 투여량은 조합 치료 기간(화합물 1 일부)로서 투여된다.
C형 간염 ( HCV )
몇몇 구체예에서, 대상자는 만성 C형 간염 (CHC)에 걸린 대상자이다. 몇몇 구체예에서, 대상자는 보상성 경화증(compensated cirrhosis)를 앓는 대상자이다. 몇몇 구체예에서 대상자는 인터페론 (화합물 4) 치료를 관용하지 못하는 대상자이다. 예컨대 이 대상자는 인터페론에 금기를 나타내는 대상자이다. 몇몇 구체예에서 대상자는 간이식 환자이다. 몇몇 구체예에서, 대상자는 HIV 및 HCV 두가지 모두에 감염된 대상자이다. 몇몇 구체예에서 대상자는 인터페론 비반응자(non-responder)이다. 몇몇 구체예에서 대상자는 보상성 간질환을 앓는 대상자이다. 몇몇 구체예에서 대상자는 인터페론 및/또는 리바비린을 이용한 치료에 실패한 전력이 있는 대상자이다.
DAA의 개발 결과, DAA 치료에 대한 반응이 저조한 대상자 또는 DAA 치료에 대한 비반응자(DAA 실패자)가 동정되었다. 몇몇 구체예에서, 대상자는 DAA 실패자 예컨대 DAA 치료에 대해 반응하지 않거나 저조하게 반응한 대상자 또는 DAA 치료 기간 동안 또는 치료 기간 후 재발한 대상자이다. 이와 관련하여, 몇몇 구체예에서, DAA 실패와 연관된 DAA 물질은 화합물 2가 아니다. 몇몇 구체예에서 DAA 실패와 연관된 DAA 물질은 HCV NS5A 단백질 저해제 및/또는 HCV NS3/4A 프로테아제 저해제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 구체예에서, DAA 실패는 본 발명의 조합 치료에 사용된 것과는 다른 NS5B 폴리머라제 저해제와 연관된다. 이와 관련하여, 만일 NS5B 폴리머라제의 비뉴클레오사이드와 관련하여 실패가 관찰되는 경우, 화합물 2는 NS5B 폴리머라제의 뉴클레오사이드 저해제일 수 있으며, 또는 만일 실패가 NS5B 폴리머라제의 뉴클레오사이드와 관련하여 관찰되는 경우, 화합물 2는 NS5B 폴리머라제의 비뉴클레오사이드 저해제일 수 있다.
C형 간염 바이러스 (HCV)에 걸린 환자들 중 유의적인 비율이 인터페론을 이용한 표준 치료법에 저조하게 반응하였다. 예를 들어, 미국내 C형 간염 바이러스 (HCV) 감염 환자들 중 대다수가 비반응자이거나 재발자이다. 본 발명의 목적 상, "비반응자"라는 용어에는 비제한적인 구체예로서, 인터페론 치료 결과 유의적인 바이러스 반응을 나타내지 않고, 치료 기간 중 어떤 시점에서도 바이러스 음성이 되지 않는 HCV-감염된 대상자, 예컨대, HCV-감염된 영장류, 예컨대, HCV-감염된 인간이 포함된다. "이전 치료(prior treatment)"의 예로는; 표준 인터페론 (IFN) 단일요법, 리바비린 (RBV)과의 표준 IFN 조합 치료, 페길화 IFN 알파-2a 단일요법, 페길화 IFN 알파-2b 단일요법, RBV와의 페길화 IFN 알파-2a 조합 요법, RBV와의 페길화 IFN 알파-2b 조합 요법과 같은 C형 간염 항바이러스 치료법을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. "느린 반응자(slow responder)"라는 용어는 인터페론 치료 개시로부터 약 24주일이 경과하기 전까지 바이러스 반응을 일으키지 않는 HCV-감염된 대상자, 예컨대, HCV-감염된 영장류, 예컨대 HCV-감염된 인간을 칭할 수 있다. "부분 반응자(partial responder)"라는 용어는 인터페론 치료 개시로부터 약 24주일이 경과하기 전까지 바이러스 반응을 일으키지 않으나, 치료 말기에 바이러스 반응이 유지되지 않는, HCV-감염된 대상자, 예컨대, HCV-감염된 영장류, 예컨대, HCV-감염된 인간을 포함한다. "부분 반응자"라는 용어는 제12주 째에 HCV RNA가 2 log10 이상 감소되지만 Peg 인터페론/RBV를 이용한 치료 말기에 검출불가능한 HCV RNA를 달성하지 못하는 환자를 일컫는다. "재발자(relapser)"라는 용어는 HCV RNA 음성인 바이러스 반응을 나타내고 치료 말기까지 이 바이러스 반응을 유지하지만, 치료 후 6개월 이전에 재발을 일으키는 HCV-감염된 대상자, 예컨대, HCV-감염된 영장류, 예컨대, HCV-감염된 인간을 가리킨다. "비반응자", "느린 반응자", "부분 반응자" 및 "재발자"라는 용어들이 반드시 상호 배제적일 필요는 없다. 몇몇 구체예에서, 이 용어들은 하기와 같이 정의될 수 있다.
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혈장 HCV 수준은 예컨대 Roche Diagnostics Taqman assay 또는 RealTime HCV Assay (Abbott)를 이용하여 탐지할 수 있다.
대상자는 1a, 1b, 2, 3, 4, 5 또는 6으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전형의 HCV로 감염될 수 있다. 몇몇 구체예에서 HCV의 유전형은 1a이다. 몇몇 구체예에서 HCV의 유전형은 1b이다. 몇몇 구체예에서 대상자는 치료를 받은 적이 없는(treatment naive) 대사상자이다.
몇몇 구체예에서, 만일 약 2주, 또는 약 4주, 또는 약 8주의 조합 치료 기간 째의 바이러스 로드가 효과적으로 0(RNA-ve)이면, 치료 기간, 예컨대 조합 치료 기간은 약 8 - 약 24 주일, 예컨대 약 12 주일이다.
몇몇 구체예에서, 본 발명의 조합 치료는 HCV 감염(역가:titre) 수준을 적어도 2배, 예컨대 적어도 3배, 예컨대 적어도 4배 감소시킬 수 있다. 몇몇 구체예에서 조합 치료는 대상자에 있어서 지속적인 바이러스 반응(SVR: sustained viral response)을 제공한다. 몇몇 구체예에서 조합 치료에 의해 완치(cure)될 수도 있다.
HCV 활성 저해제의 활성은 당업자에게 공지인 적절한 방법으로 측정 가능하며, 여기에는 생체내(in vivo) 및 시험관내(in vitro) 분석법이 포함된다. 예컨대, 화학식 I의 화합물의 HCV NS5B 저해제 활성은 Behrens 등, EMBOJ. 1996 15:12-22, Lohmann 등, Virology 1998 249:108-118 및 Ranjith-Kumar 등, J. Virology 2001 75:8615-8623에 설명된 표준 분석 공정을 이용하여 측정할 수 있다.
본 명세서에서 "치료적 유효량(therapeutically effective amount)"이라 함은 개체에 있어서 질병의 증상을 감소시키는데 필요한 양을 의미한다. 투여량은 각각의 특정 경우에 있어서 개별적인 요구사항에 따라 조정된다. 투여량은 치료하고자 하는 질병의 위중도, 환자의 연령 및 일반적인 건강 상태, 환자가 투약받고 있는 다른 약제, 투여 경로 및 투여 제형 그리고 관련 의료진의 선호도 및 경험과 같은 많은 인자들에 따라 크게 달라질 수 있다. 경구 투여의 경우, 1일 약 0.01 내지 약 1000 mg/kg 체중의 1일 투여량이 단일요법 및/또는 조합요법에서 적절하다. 예를 들어, 1일/1주/1개월 투여량은 1일 약 0.1 내지 약 500 mg/kg 체중, 예컨대 0.1 내지 약 100 mg/kg 체중 예컨대 0.1 내지 1mg/kg 체중의 범위 또는 1일 1.0 내지 약 10 mg/kg 체중의 범위일 수 있다. 따라서, 체중 70 kg 개체에게 투여할 경우, 몇몇 구체예에서, 투여량 범위는 1일 약 7 mg 내지 0.7 g이다. 1일 투여량은 한번에 또는 수차례, 일반적으로 하루 1 내지 5회 나누어 투여할 수 있다. 일반적으로, 몇몇 구체예에서, 치료는 화합물의 최적 투여량보다 적은 투여량으로 시작한다. 따라서, 투여량은 당해 환자 개인에 있어서 최적 효과에 도달할 때까지 소량씩 증량시키면서 늘릴 수 있다. 본 명세서에 설명된 질환 치료 분야의 당업자라면, 과도한 실험을 행하지 않고도 자신의 지식과 경험 그리고 본 명세서의 개시 내용을 참조로 주어진 질병 및 환자에 대한 본 발명 화합물의 치료적 유효량을 결정할 수 있을 것이다.
본 발명의 화합물 및 임의로 1종 이상의 부가적인 항바이러스제들의 치료적 유효량은 바이러스 로드를 감소시키는데 유효한 양 또는 치료에 대한 지속적인 바이러스 반응을 달성할 수 있게 하는 양이다. 바이러스 로드에 더해, 지속 반응의 유용한 표지자의 예로 간 섬유화(liver fibrosis), 혈청 트랜스아미나제 수준의 상승 및 간에 있어서의 괴사 염증 활성을 들 수 있다. 한가지 흔한 마커의 예로서 표준 임상 분석법에 의해 측정되는 혈청 알라닌 트랜스아미나제(ALT)를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 몇몇 구체예에서 효과적인 치료법 중 하나는 ALT 수준을 약 45 IU/mL 혈청 미만으로 감소시키는 것이다.
본 명세서에서 "지속적 바이러스 반응(sustained viral response)" [SVR; "지속 반응(sustained response)" 또는 "내구 반응(durable response)"이라고도 함]이라는 용어는 혈청 HCV 역가 측면에서, HCV 감염을 위한 치료법에 대한 개체의 반응을 가리킨다. 예를 들어, "지속적 바이러스 반응"은 치료 중단으로부터 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월 및/또는 적어도 약 6개월의 기간 동안 환자의 혈청에서 HCV RNA가 검출되지 않는 상태 (예컨대, 혈청 1 밀리리터 당 게놈 카피 약 500개 미만, 약 200개 미만, 또는 약 100개 미만)를 가리킨다. 예컨대 Abbot HCV 검출 키트를 사용하는 경우, SVR은 <12IU/ml인 것으로 간주된다. 일반적으로 SVR24 또는 SVR48이 이용된다. SVR24은 치료 중단으로부터 24주일째 HCV RNA가 검출되지 않음을 의미한다. SVR48은 치료 중단으로부터 48주일째 HCV RNA가 검출되지 않음을 가리킨다. SVR 비율은 특정 치료법을 받는 대상자들 중 SVR을 나타내는 대상자의 비율을 가리킨다. SVR24는 치료 중단으로부터 24주일째 검출가능한 HCV RNA가 없음을 가리킨다. 유전형 1 및 4는 SVR 달성을 위해, 대개 보다 긴 치료 기간을 필요로 하며 일반적으로 유전형 1 HCV에 감염된 환자들의 40 내지 50% 만이 peg-인터페론/RBV 치료에 대하여 SVR을 나타낸다. 흑인 그리고 HIV 감염 환자들의 SVR은 대개 20-30%에 불과하다. 본 발명의 조합 치료는 SVR 달성에 필요한 기간을 감소시킬 수 있다. 본 발명의 조합 치료는 SVR 비율을 증가시킬 수 있다.
화합물 2에 대한 내성. NNI와 같은 NS5B 폴리머라제 저해제와 같은 직접 작용 물질에 대한 내성 발달은 이들 화합물의 임상 사용에 있어 주요한 걱정거리가 되고 있다. 따라서 직접 작용 물질에 대한 내성 발달을 회피 또는 감소시키는 HCV 치료방법이 요구되고 있다. 본 발명의 한가지 목적은 NS5B 폴리머라제 저해제, 예컨대 NNI와 같은 직접 작용 물질과 miR-122의 저해제의 조합 사용에 의해 이를 달성하는 것이다.
임상 프로토콜의 비제한적 예
약물/약물 상호반응 연구: 이 연구는 미라버센 및 화합물 2를 예컨대 건강한 대상자에게 공동 투여한 경우 미라버센과 화합물 2의 안전성, 관용성 및 약동학(pharmacokinetics)을 평가하기 위한 오픈-라벨 약물 상호반응 연구이다: 대략 5명의 대상자에게 제1일에 화합물 2의 단일 투여량을 투여하고 24시간 연속 혈액 채취하여 NS5B 폴리머라제의 비뉴클레오사이드 저해제 예컨대 VX-222 또는 NS5B 폴리머라제의 뉴클레오사이드 저해제 예컨대 GI-7977 또는 2'-C-메틸시티딘의 단일 투여량 약동학 프로파일을 평가하였다. 대상자에게 화합물 2의 TID 투여량을 5일간(제2-6일) 투여한다. 제7일에, 대상자에게 화합물 2를 다시 단일 투여량으로 투여하고 24시간 연속 약동학 혈액 샘플을 채취한다. 대상자에게 미라버센 단일 투여량(7 mg/kg)을 제 8, 15, 22, 29 및 36일에 투여한다. 제15일에, 대상자로부터 24시간 연속 혈액 및 뇨 채취하여 미라버센의 단일 투여량 약동학 프로파일을 평가한다. 단일 약동학 혈액 샘플을 미라버센의 3차 및 4차 투여 직전인 제22일과 제29일에 수집한다 (최저 농도(trough concentraration) 측정을 위함). 제30일에, 화합물 2의 단일 투여량을 투여하고 대상자로부터 24시간 연속 약동학 혈액 샘플을 채혈한다. 대상자들에게 화합물 2의 TID 투여량을 5일간 (제31-35일) 투여한다. 제36일에, 대상자에게 화합물 2의 단일 투여량 및 미라버센 단일 투여량을 투여하고 24시간 연속 혈액 채혈하여 화합물 2와 미라버센 양자 모두의 약동학 프로파일을 평가한다. 이에 더해, 24시간 동안 뇨를 수집하여 미라버센의 약동학 프로파일을 평가한다. 대상자로 하여금 12주일(스크리닝 제외) 간의 총 연구 기간에 있어서 제43, 50, 57, 64 및 71일 및 연구 마지막 날인 제78일에, 후속 연구를 위하여 매주 방문하도록 하였다. 유해사례, 신체 검사, 바이털 사인, 일상적인 임상 안전성 실험실 평가 및 심전도 평가에 의해 안전성과 관용성을 평가한다.
복수의 상이한 DAA 간의 임상 시도에 있어서, 약물-약물 상호반응은 유해사례를 일으킬 수 있다. 미라버센은 단일요법 임상 연구에서 HCV의 현저한 넉다운(knock down)을 나타내었다 (예컨대 실시예 6 참조). 뿐만 아니라 미라버센은 시토크롬 450 메카니즘에 의해 대사되지 않으며, 설명된 바와 같은 HCV 조합 치료에 사용하기에 특히 적합한 비직접 작용 물질(non direct acting agent)인 것으로 여겨진다. 이와 관련하여, 이 치료 프로파일은 화합물 2, 및/또는 화합물 3과 조합되는 인터페론 기반 치료법의 이상적인 대안인 것으로 나타났다. 실제로, 본 발명자들의 실험 결과 미라버센은 인터페론 알파-2b보다 적어도 한 차수(an order) 강도가 더 큰 치료지수를 가지면서 탁월한 독성 프로파일을 갖는다. 안전성 및 관용성 평가를 위한 4주일간의 임상 연구 결과 미라버센을 이용한 치료는 HCV 역가를 검출 하한 미만으로 감소시키는데 효과적이었다. 미라버센은 또한 모든 HCV 유전형에 대해 시험관내 효과적인 것으로 입증되었다. 몇몇 구체예에서, 이 조합 치료법은 시토크롬 P450 저해제, 예컨대 리토나비어의 부재 하에 실시된다.
화합물 1 (미라버센) 및 화합물 2 (예컨대 VX-222 또는, GI-7977 또는 2'-C-메틸시티딘)은 임의로 리바비린과 함께 조합 치료(MIR + DAA) 최초 12 주일 내에 바이러스 브레이쓰루를 예방할 수 있고 조합 치료의 최후 투여일로부터 12, 24 및 48주 후에 SVR을 제공한다. 미라버센은 단일요법으로서 4주일간 투여되며 (예컨대 29일 동안 4회 또는 5회 투여), 이어서 부가 기간, 예컨대 12주일 동안 리바비린 존재하에 (코호트 1) 및 리바비린 부재하에 (코호트 2) 화합물 2와 조합되어 계속 투여된다. 20명의 만성 HCV, 유전형 1 치료 경험이 없는 대상자들(치료전 혈장 HCV RNA > 75,000 IU/mL HCV 바이러스 로드)을 제8주RVR), 28주(SVR12) 및 40주(SVR24) 및 48주(SVR48)에 검사하였다. 내성 분석 및 바이러스 브레이크쓰루/재발 분석을 위해 샘플들을 채취한다. 화합물 1(예컨대 미라버센)의 예비 치료 투여량은 예컨대 7mgs/kg x 4 weekly doses (적절하게는 제11, 8, 15, 22일)이다. 다른 예비치료 투여량에 대해서도 본 명세서에 설명되어 있다 (예컨대 1 또는 2(예비) 투여량, 예컨대 최대 12mgs/kg). 조합 기간 투여량은 예컨대 최초 투여량 7mg/kg 이어서 후속 투여량 5mgs/ kg (제5주/제29일에 개시) 이어서 제16주(112일)까지 2주일마다 5mg/kg이다. 리바비린은 100mg/일 <75kgs 또는 1200mg/일 >75kgs으로 투여될 수 있다. 화합물 2 (예컨대 GI-7977 또는 2'-C-메틸시티딘)는 임의로 리토나비어와 조합 사용되어, 예컨대 조합 치료 기간 동안 매일 400 mg 투여될 수 있다. 임의로 화합물 2가 리토나비어와 함께 조합 사용될 수 있다.
조합 치료가 수반되는 계속 또는 계획된 임상연구 예시
TVR (PI) + VX-222(NNI) +/- RBV (예컨대 GT1 치료 이력 없음)
GS-9256 (PI) + 테고부비어 (NNI) +/- RBV (예컨대 GT1 치료 이력 없음)
GS-9256 (PI) + 테고부비어 (NNI) + GS-5885 (NS5A) + RBV (예컨대 GT1 치료 이력 없음)
다노프레비어 (PI) + 메르시타빈 (NUC) +/- RBV (예컨대 GT1 치료 이력 없음)
ABT-450/r (PI) + ABT-072 (NNI) + RBV (예컨대 GT1 치료 이력 없음)
ABT-450/r (PI) + ABT-333 (NNI) -RBV (예컨대 GT1 치료 이력 없음)
TMC435 (PI) + PSI-7977 (NUC) +/- RBV (예컨대 GT1 치료 이력 없음)
ABT-450/r + ABT-333 (NNI) + RBV (예컨대 GT1 치료 이력 있음)
PSI-7977 + RBV (GT1 치료 이력 없음), (예컨대. GT2/3 치료 이력 없음) (예컨대 GT1 치료 이력 있음) (예컨대 GT2/3 치료 이력 있음)
BMS79052 (NS5A) + PSI-7977 (NUC) +/- RBV (예컨대 GT1 치료 이력 없음)
전술한 조합은 본 발명에서 화합물 2 및 화합물 5 (또는 복수개의 화합물 5) 및 임의로 화합물 3을 나타낼 수 있다.
몇몇 구체예에서, 화합물 5는 NS5A 단백질 저해제, 예컨대 다음으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다:
Figure pct00003
몇몇 구체예에서, 화합물 5는 다클라타스비어(Bristol-Myers Squibb사)라고도 알려진 BMS-790052이다. BMS 790052는 EBP 883, 또는 카르밤산, N,N'-[[1,1'-바이페닐]-4,4'-디일비스[1H-이미다졸-5,2-디일-(2S)-2,1-피롤리딘디일[(1S)-1-(1-메틸에틸)-2-옥소-2,1-에탄디일]]]비스-, C,C'-디메틸 에스테르라고도 알려져 있다. BMS-790052는 또한 ApisChemical사로부터 구입할 수도 있고, 디메틸 (2S, 2'S)-1, 1'-((2S, 2'S)-2, 2'-(4, 4'-(바이페닐-4, 4'-디일)비스(1H-이미다졸-4, 2-디일))비스(피롤리딘-2,1-디일))비스(3-메틸-1-옥소부탄-2,1-디일)디카르바메이트라고도 칭해지며 CAS Reg No: 1009119-64-5이다.
몇몇 구체예에서, 화합물 5는 NS3/4A 프로테아제 저해제, 예컨대 다음으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다:
Figure pct00004
텔라프레비어( Telaprevir )
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Telaprevir.svg에 의하면, 텔라프레비어는 다음의 구조를 갖는다:
Figure pct00005
시스템에 따른 IUPAC 명칭: (1S,3aR,6aS)-2-[(2S)-2-[[(2S)-2-시클로헥실-2-(피라진-2-카르보닐아미노)아세틸]아미노]-3,3-디메틸부타노일]-N-[(3S)-1-(시클로프로필아미노)-1,2-디옥소헥산-3-일]-3,3a,4,5,6,6a-헥사히드로-1H-시클로펜타[c]피롤-1-카르복사미드
텔라프레비어는 예컨대 약 250 내지 약 1000mg, 예컨대 약 750mg/kg의 단위 투여량으로 투여될 수 있다. 일반적으로 예비-치료 기간 및/또는 조합 치료 기간 동안 하루 1회, 2회, 3회 또는 4회, 예컨대 3회 투여된다.
보세프레비어( Boceprevir )
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Beceprevir.svg에 의하면, 보세프레비어는 다음의 구조를 갖는다:
Figure pct00006
시스템에 따른 IUPAC 명칭: (1R,2S,5S)-N-[(2E)-4-아미노-1-시클로부틸-3,4-디옥소부탄-2-일)]-3-{(2S)-2-[(3차-부틸카르바모일)아미노]-3,3-디메틸부타노일}- 6,6-디메틸-3-아자비시클로[3.1.0]헥산-2-카르복사미드
보세프레비어는 예컨대 약 250 및 약 1000mg, 예컨대 약 800mg/kg의 단위 투여량으로 투여될 수 있다. 일반적으로 예비-치료 기간 및/또는 조합 치료 기간 동안 하루 1회, 2회, 3회 또는 4회, 예컨대 3회 투여된다.
화합물 1: miR -122 저해제
Young 등의 문헌 [JACS 2010, 132, 7976-7981](본 명세서에 참고 통합됨)에 보고된 바와 같이, miR122의 소분자 저해제를 분석하는 것이 가능하고 miR-122의 소분자 저해제로는 다음에 예시된 것들을 들 수 있다:
Figure pct00007
위에서 숫자들은 miR-122 디프레프레션(deprepression)에 기인한 루시페라제 발현을 가리키며, 숫자가 1보다 크면 miR-122 저해를 나타낸다.
화합물 1: 안티센스 올리고머
miR-122 저해제는 안티센스 올리고머일 수 있다.
몇몇 구체예에서, 항miR-122 화합물은 마이크로RNA-122를 표적화하는 안티센스 올리고머이다. miR-122의 서열은 상이한 포유류 종들 간에 잘 보존되어 있다(mirbase, Sanger Center, UK).
>hsa-mir-122 precursor 서열 (miRBase) MI0000442:
CCUUAGCAGAGCUGUGGAGUGUGACAAUGGUGUUUGUGUCUAAACUAUCAAACGCCAUUAUCACACUAAAUAGCUACUGCUAGGC (SEQ ID NO 4)
성숙한 hsa-miR-122 서열 (miRBase) MIMAT0000421:
UGGAGUGUGACAAUGGUGUUUG (SEQ ID NO 1)
본 발명의 마이크로RNA-122 길항제들은 miR-122를 표적화하는 안티센스 올리고머들이다 (예컨대 SEQ ID NO 1 또는 SEQ ID NO 4). 이 안티센스 올리고머는 성숙한 hsa-miR-122 서열과 같이, miR-122 서열의 일부에 상보적인 적어도 6개의 연속적인 핵염기들을 포함할 수 있다.
몇몇 구체예에서, 항miR-122 올리고뉴클레오타이드는 기본적으로 RNAseH를 리크루트할 수 없는 믹스머(mixmer)로서 설계된다. 기본적으로 RNAseH를 리크루트할 수 없는 올리고뉴클레오타이드들은 예컨대 WO2007/112754, WO2007/112753, 또는 WO2009/043353 등의 문헌을 통해 잘 알려져 있다. 믹스머들은 비제한적인 예로서, 2'-O-알킬-RNA 모노머, 2'-아미노-DNA 모노머, 2'-플루오로-DNA 모노머, LNA 모노머, 아라비노 핵산 (ANA) 모노머, 2'-플루오로-ANA 모노머, HNA 모노머, 3 플루오로 헥시톨 모노머 (3F HNA), INA 모노머, 2'-MOE-RNA (2'-O-메톡시에틸-RNA), 2'플루오로-DNA, 및 LNA와 같은 친화성 향상 뉴클레오타이드 유사체들의 혼합물을 포함하도록 설계될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 올리고뉴클레오타이드는 DNA 또는 RNA 뉴클레오타이드들을 포함하지 않고, 오로지 친화성 향상 뉴클레오타이드 유사체만으로 이루어지는데 이러한 분자는 토탈머(totalmer)라 칭하기도 한다. 몇몇 구체예에서, 믹스머는 DNA 및/또는 RNA와 함께 오직 1종류의 친화성 향상 뉴클레오타이드 유사체만을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 올리고뉴클레오타이드는 오직 1종 이상의 뉴클레오타이드 유사체만으로, 예를 들어 비제한적인 예로서, 2'-O-알킬-RNA 모노머, 2'-아미노-DNA 모노머, 2'-플루오로-DNA 모노머, LNA 모노머, 아라비노 핵산 (ANA) 모노머, 2'-플루오로-ANA 모노머, HNA 모노머, INA 모노머, 2'-MOE-RNA (2'-O-메톡시에틸-RNA), 2'플루오로-DNA, 및 LNA만으로 구성된다.
길이
몇몇 구체예에서 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 7 - 25개 (연속: contiguous) 뉴클레오타이드, 예컨대 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24개 (연속)의 뉴클레오타이드 길이를 갖는다. 몇몇 구체예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 길이가 7 - 10 (연속) 뉴클레오타이드이거나 또는 몇몇 경우 7 - 16 뉴클레오타이드이다. 몇몇 구체예에서, 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 길이가 적어도 8개 (연속) 뉴클레오타이드, 10-17개 또는 10 -16개 또는 10-15개 (연속) 뉴클레오타이드, 예컨대 12 - 15개 (연속) 뉴클레오타이드이다.
기본적으로 RNAseH 를 리크루트할 수 없는 올리고머들
EP 1 222 309는 RNaseH 활성을 측정하기 위한 시험관내 방법을 제공하는데 이 방법을 이용하여 RNaseH의 리크루트 능력을 탐지할 수 있다. 어떤 올리고머가 상보적인 RNA 표적과 함께 제공될 때, EP 1 222 309의 실시예 91-95에 제공된 방법론에 의하여 pmol/l/분 단위로서 측정된 초기 비율이 동등한 DNA만으로 된 올리고뉴클레오타이드의 적어도 1 %, 예컨대 적어도 5%, 예컨대 적어도 10% 또는 20% 미만이고 2' 치환되지 않고, 상기 올리고뉴클레오타이드 중의 모든 뉴클레오타이드들 간에 포스포로티오에이트 결합기가 있을 경우, 상기 올리고머는 RNaseH를 리크루트할 수 있는 것으로 간주된다.
몇몇 구체예에서, 어떤 올리고머가 상보적인 RNA 표적 및 RNAseH와 함께 제공될 때, EP 1 222 309의 실시예 91-95에 제공된 방법론에 의하여 pmol/l/분 단위로서 측정될 경우의 RNaseH 초기 비율이 동등한 DNA 만으로 된 올리고뉴클레오타이드의 1% 미만 예컨대, 5%, 미만, 예컨대 10% 미만 또는 20% 미만이고, 2' 치환되지 않고, 상기 올리고뉴클레오타이드 중의 모든 뉴클레오타이드들 간에 포스포로티오에이트 결합기가 있을 경우, 상기 올리고머는 기본적으로 RNaseH를 리크루트할 수 없는 것으로 간주된다.
믹스머 또는 토탈머인 올리고뉴클레오타이드들은 대체로 기본적으로 RNAseH를 리크루트하지 못하는 것으로 인식되며, 본 발명의 몇몇 구체예에서 기본적으로 RNaseH를 리크루트하지 못한다는 표현을 사용할 경우, 이는 심지어 그러한 올리고머가 실제로 RNaseH를 리크루트할 수 있는 유의적인 능력을 갖는 경우라 할지라도, 그 표현은, 예컨대 DNA 믹스머를 알파-L-옥시-LNA와 함RP 사용하는 경우처럼, 본 명세서에서 정의된 믹스머 또는 토탈머로 대체될 수 있다.
본 발명에 유용한 마이크로 RNA -122의 모듈레이터의 예시
본 발명에서 사용하기에 특히 바람직한 화합물들은 마이크로RNA-122를 표적화하는 것들- 예컨대 세포, 예컨대 HCV에 감염된 대상자에서 마이크로RNA-122를 저해할 수 있는 올리고머들이다. miR-122의 서열은 마이크로RNA 데이터베이스 "mirbase" (http://microrna.sanger.ac.uk/서열s/)에서 찾아볼 수 있다. 마이크로RNA-122의 저해제들은 수많은 특허 및 논문을 통해 설명된 바 있으며 당업자들에게 잘 알려져 있다. 몇몇 구체예에서, 유용한 마이크로RNA-122 모듈레이터를 설명하는 이러한 문헌의 예로 WO2007/112754, WO2007/112753, 또는 WO2009/043353를 들 수 있으며 이들 문헌 모두는 본 발명에 참조 병합되었다. 몇몇 구체예에서, 이러한 마이크로RNA-122 모듈레이터들은 WO2009/20771, WO2008/91703, WO2008/046911, WO2008/074328, WO2007/90073, WO2007/27775, WO2007/27894, WO2007/21896, WO2006/93526, WO2006/112872, WO2005/23986, 또는 WO2005/13901에 설명되어 있고, 이들 문헌 모두 본 발명에 참조 병합되었다.
몇몇 구체예에서 마이크로-RNA-122 길항제는 miR-122에 상보적인 올리고머이거나 또는 그의 (대응하는) 연속 핵염기 서열이다. miR-122에 상보적인 올리고머들은 인간 miR-122 서열의 일부 또는 전장에 상보적인 적어도 7개의 연속(contiguous) 뉴클레오타이드들로 된 서열을 포함하거나 또는 이러한 서열로 이루어진다. 이와 관련하여, 상기 서열의 일부라 함은 예컨대 성숙한 has-miR-122 서열과 같이, 마이크로-RNA 122 서열에서 발견되는 어떤 서열과 100% 상보적인 연속하는, 적어도 6개, 예컨대 적어도 7개 또는 예컨대 적어도 8개의 뉴클레오타이드들을 말한다. 특정 구체예에서, miR-122에 상보적인 올리고머들은 has-miR-122 시드 서열(seed 서열)에 상보적인 연속 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 또는 이러한 서열로 구성되는데, 다시 말해서, 즉 본 명세서에서 "시드 맷치 영역(seed match region)"이라 칭해지는 연속 뉴클레오타이드 서열 5'-CACTCC -3'을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어진다.
몇몇 구체예에서, 상기한 서열 5'-CACTCC -3'은 3' 말단으로부터 세어서, 올리고머의 1 - 6 위치, 2 - 7 위치 또는 3 - 8 위치에 위치한다. 몇몇 구체예에서, 서열 5'-CACTCC -3'은 3' 말단으로부터 세어서, 올리고머의 1 - 7 위치 또는 2 - 8 위치에 위치한다. 연속 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 어떤 올리고머는 또한, 예컨대 5' 또는 3' 비뉴클레오타이드 컨쥬게이션 기와 같은, 비뉴클레오타이드 성분들을 더 포함할 수도 있다. 몇몇 구체예에서, 이 올리고머는 예컨대 컨쥬게이션 기 없이, 연속 뉴클레오타이드 서열만을 포함하거나 상기 서열만으로 이루어질 수 있다. miR-122에 상보적인 올리고머들은, has-miR-122 서열의 일부 또는 전체에 상보적인, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 또는 22개의 뉴클레오타이드들의 연속 서열을 포함하거나 또는 상기 서열로 이루어질 수 있다. has-miR-122 서열의 일부에만 상보적인 올리고머들은 길이가 22개 뉴클레오타이드 미만일 수 있고, miR-has-miR122 서열의 일부의 상보체로 이루어진 연속 뉴클레오타이드 서열을 포함하거나 이러한 서열로 이루어질 수도 있다 (즉, has-miR-122의 상응하는 일부 영역(sub-region)에 대하여 상보적인 연속 뉴클레오타이드 서열).
몇몇 구체예에서 올리고머는 예컨대 2'MOE, 2'OMe 및/또는 2'플루오로와 같은 2' 치환된 뉴클레오사이드들을 포함하거나 상기 뉴클레오사이드들로 이루어지는 것일 수 있다. 예를 들어, Davis 등 [NAR 2008 Vol 37, No 1]은, 생체내 효능이 극적으로 향상된 2'-플루오로/2'-메톡시에틸 (2'MOE) 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드 (ASO) 모티프를 개시하고 있다. 이 2'MOE/2'플루오로 올리고 (예컨대 믹스머)는, 몇몇 구체예에서 그 길이가 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 21 또는 22 뉴클레오타이드일 수 있다. 2'MOE/2'플루오로 올리고 설계에 관한 추가 설명은 2011년 12월 2일 출원된 미국 가특허출원 61/566027에서 찾아볼 수 있으며 (24 페이지, 4행 ~ 26 페이지 13행) 상기 내용은, 본문에 참조 병합되었다.
방법에 사용될 수 있는 올리고머 제공을 위해 특별히 참조 병합되었으며 miRbase에 공개된 바와 같이 마이크로RNA를 표적화하는 항miRs를 개시하고 있다. 마이크로RNA의 5' 말단 뉴클레오타이드 (즉, -1 위치)로부터 세어서 성숙한 마이크로RNA-122의 -2 내지 -8/-9 또는 -10 위치 (7, 8 또는 9mers)를 맷칭시킴으로써 동등한 항miRs를 설계할 수 있다.
Figure pct00008
마이크로RNA-122를 표적화하는 추가의 LNA 화합물들. PCT/DK2008/000344에 개시된 바와 같은 다음의 특정 화합물들을 본 발명의 방법에 이용할 수 있다.
Figure pct00009
miR-122를 표적화하는 추가적인 특정 화합물로서 본 발명에 사용될 수 있는 화합물들이 WO2007/112754 및 WO2007/112753의 표 1에 개시되어 있으며 이들 모두 본 발명에 참조 병합되었다. miR-122를 표적화할 수 있는 또 다른 사용가능한 특정 화합물들이, 2011년 12월 2일 출원된 미국 가특허출원 61/566027의 표 4에 수록되어 있으며 이들 역시 본 발명에 참조 병합된다.
미라버센 ( SPC3649 )
바람직한 구체예에서 안티센스 올리고머는 다음 구조식을 갖는 미라버센 (SPC3649)이다:
Figure pct00010
식 중; 소문자는 DNA 단위를, 대문자는 LNA 단위를 나타내고, m C는 5-메틸시토신 LNA를 나타내며, 아래첨자 s는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 결합을 나타내고, 여기서 LNA 단위는 LNA 잔기 다음에 나오는 윗첨자 o에 의해 나타내지는 바와 같이 베타-D-옥시이다.
화합물 2:
현재 임상 시험 중에 있는 HCV NS5B 폴리머라제 저해제들이 많이 있으며 이들의 예로는 ALS-2158(Alios), ALS-2200(Alios), ABT-072(Abbott); ABT-333(Abbott), MK-3281(Merck), TMC649128 (Medivir/Tibotec), BI 207127 (Boehringer Ingelheim Pharma), RG7128 (Genetech: Mercitabine), GS-9190 (tegobuvir) (Gilead), GS-7977(Gilead - 이전 명칭 PSI-7977); GS-938(Gilead), RG7128 (Gliead/Genetech), VX-222 (Vertex), VX-759 (Vertex), ANA598 (Anadys/Genetech), IDX184 (Idenix), 및 INX-189 (Inhibitex/BMS), 또는 다음 표에 기재된 것들을 들 수 있다.
Figure pct00011
VX-222는 다음의 구조를 갖는다.
Figure pct00012
PSI-7977, also known as GI-7977 after the acquisition of Pharmasset사가 Gilead에 합병된 후로 GI-7977로 개명된 PSI-7977은 활성 항바이러스제인 2'-데옥시-2'-α-플루오로-β-C-메틸우리딘-5'-모노포스페이트로 대사되는 전구약물이다.
Figure pct00013
전형적인 투여량은 예컨대 400 mgs이다.
NI와 NII의 조합이 화합물 2로서 사용될 경우, 사용되는 NS5B 물질은 같은 회사 또는 다른 회사로부터 유래하는 것일 수 있다.
Figure pct00014
몇몇 구체예에서 화합물 2는 다음과 같다:
Figure pct00015
미국특허 7,524,825 B2에 개시된 바와 같음.
몇몇 구체예에서, 화합물 2는 2'-C-메틸시티딘(발로피시타빈(NM283)) (Idenix사)이다. 몇몇 구체예에서, 화합물 2는 VX-222(Vertex사)이다.
화합물 3 및 4: 표준 관리( Standard of Care ) - 2011년 2월 이전에는, HCV 감염의 표준 관리법은 화합물 4 (인터페론)와 화합물 3 (리바비린)과의 조합에 이한 것이었다. 2012년 6월의 시점에도, SOC는 여전히 NS3/4A 프로테아제 저해제, 텔라프레비어 또는 보세프레비어와 연계하여 사용되는 IFN/RBV 조합에 의존하고 있다.
전형적인 표준 관리법은 peg인터페론 알파-2b (1.5 마이크로그램/kg 1주일에 1회) 플러스 리바비린 (환자 체중에 기초하여 1일 800 내지 1400　mg)을 48 주일 동안 투여하는 것이다.
인터페론의 비제한적인 예로는 페길화 rIFN-알파 2b, 페길화 rIFN-알파 2a, rIFN-알파 2b, rIFN-알파 2a, 컨센서스 IFN 알파 (인퍼겐), 페론, 레아페론, 인터맥스 알파, r-IFN-베타, 인퍼겐, 및 악티뮨, DUROS와 조합된 IFN-오메가, 알부페론, 록테론, 알부페론, 레비프, 경구용 인터페론 알파, IFNaIp ha-2b XL, AVI-005, PEG-Infergen, 및 페길화 IFN-베타를 들 수 있다.
리바비린 유사체 및 리바비린 전구약물 비라미딘 (타리바비린)은 HCV 제어를 위해 인터페론과 함께 투약되어 왔다. 몇몇 구체예에서, 화합물 3은 따라서 항바이러스 리바비린 유사체 및 항바이러스 리바비린 유도체 뿐만 아니라, 리바비린 전구약물도 포함할 수 있다.
C형 간염 (HCV)의 예시적인 치료 옵션에는 인터페론, 예컨대, 인터페론 알파-2b, 인터페론 알파-2a, 및 인터페론 알파콘-1이 포함된다. 페길화 인터페론 (폴리에틸렌 글리콜 부분에 결합된 인터페론으로서 그의 약동학적 프로파일이 유의적으로 향상됨)을 이용하면 인터페론의 투약 횟수를 줄일 수 있다. 인터페론 알파-2b [페길화(pegylated) 및 비페길화(unpegylated)]와 리바비린과의 조합 치료법 역시 몇몇 환자 집단에서 효과적인 것으로 나타난 바 있다. 몇몇 구체예에서, 인터페론은 페길화 인터페론-알파이다.
몇몇 구체예에서, 인터페론은 페길화 인터페론 알파-2a이다. 적절한 페길화 인터페론 알파-2a로서 제약회사 F. Hoffmann-La Roche가 발견한 항바이러스 약물인 Pegasys (분지형 40 kDa PEG 사슬에 의해 페길화됨)를 들 수 있다; 이 약물은 항바이러스성인 한편 면역계에도 작용하는 이중 작용 모드를 갖는다. 페길화로 알려진 공정을 통해 인터페론에 폴리에틸렌 글리콜을 부가하면 인터페론 본래 형태에 비해 인터페론의 반감기가 향상된다. 이 약물은 전세계적으로 만성 C형 간염 (HIV 공동-감염, 경화증, ALT의 '정상' 수준을 앓는 환자들을 포함한다) 치료에 승인되었다. Peg인터페론 알파-2a는 장기간 작용하는 인터페론이다.
몇몇 구체예에서, HCV 감염된 대상자들을 유효량의 리바비린 또는 그의 항바이러스 유도체로 더 치료한다.
화합물 3 - 리바비린( Ribavirin )
http://en.wikipedia.org/wiki/File:Ribavirin.svg에 의하면, 리바비린의 구조는 다음과 같으며:
Figure pct00016
시스템에 따른 IUPAC 명칭은 1-[(2R,3R,4S,5R)-3,4-디히드록시-5-(히드록시메틸)옥솔란-2-일]-1H-1,2,4-트리아졸-3-카르복사미드이다.
유럽과 미국에서는 페길화 인터페론 약물과 조합적으로, 경구 (캡슐 또는 정제) 형태의 리바비린이 C형 간염 치료에 사용되고 있다.[1]
리바비린 (브랜드 명칭: Copegus, Rebetol, Ribasphere, Vilona 및 Virazole)은 심각한 RSV 감염 (개별적으로), C형 간염 감염 (peg인터페론 알파-2b 또는 peg인터페론 알파-2a와 연계적으로 이용됨) 및 기타의 바이러스성 감염을 치료하는데 사용되는 항바이러스 약물이다. 리바비린은 대사될 경우 순수한 RNA 뉴클레오타이드과 유사해지는 일종의 전구약물이다. 이 형태로 이 약물은 바이러스 복제에 요구되는 RNA 대사를 방해한다. 이것이 바이러스 복제에 어떻게 영향을 미치는지에 관한 정확한 정보는 알려져 있지 않다; 이와 관련하여 수많은 메카니즘 가설이 제안된 바 있으나 (후술되는 작용 메카니즘 설명란 참조), 어떠한 가설도 오늘날까지 입증되지는 않았다. 어쩌면 다중 메카니즘이 이 약물의 작용에 관여하는 것일 수도 있다.
관찰된 것 중 가장 심각한 리바비린의 부작용은 용혈성 빈혈인데 이로 인해 기존의 심장 질환이 더 악화될 수도 있다. 이 부작용의 메카니즘은 적혈구 내에 리바비린이 쌓이기 때문이다. 적혈구 세포막에 대한 산화 손상은 대개 글루타치온에 의해 억제되지만; 그러나, 리바비린에 의해 일어나는 ATP 수준 감소로 인하여, 글루타치온 수준이 손실되어, 산화성 적혈구 세포의 용해가 생기게 된다. 적혈구의 이러한 점진적인 손실로 인해 빈혈이 발생하게 된다. 빈혈은 투여량-의존적이므로 종종 투여량을 감소시킴으로써 완화될 수 있다. 리바비린은 또한 어떤 동물 종에서는 기형원이기도 하기 때문에 인간의 경우 이론적으로 생식과 관련한 위험성이 제기되고 있고, 이 약물의 사용 기간이 종료된 후 길게는 6개월까지도 이 약물의 유해성이 잔존한다.
몇몇 구체예에서, 항바이러스성 리바비린 유도체를 리바비린 대신 이용할 수 있다: 리바비린은 가능하게는, 불완전한 퓨린 6원환을 갖는 리보실 퓨린 유사체로서 가장 좋게 고찰될 수 있다. 이 구조 유사성으로 인해, 두번째 고리를 부분적으로 "채우기 위한(fill out)" 목적으로서, 역사적으로 트리아졸의 2' 질소를 탄소로 치환(이렇게 되면 이미다졸의 5' 탄소가 됨)하려는 시도가 촉발되어 왔으나 - 그 효과는 크지 않았다. 이러한 5' 이미다졸 리보사이드 유도체는 5' 수소 또는 할라이드와 함께 항바이러스 활성을 나타내지만, 치환기의 크기가 클수록 활성은 더 작고, 이들 모두 리바비린보다 활성이 낮은 것으로 입증되었다.[13] 이 이미다졸 리보사이드 구조를 갖는 2개의 천연 산물이 이미 알려져 있다: 5' 탄소가 OH로 치환되어 피라조마이신/피라조퓨린이 생성되는데 이것은 항바이러스 특성은 있지만 허용불가능할 정도로 독성이 있는 항생제이며, 아미노기로 치환될 경우, 천연 퓨린 합성 전구체 5-아미노이미다졸-4-카르복사미드-1-β-D-리보퓨라노사이드 (AICAR)가 생성되는데, 이것은 항바이러스 활성이 미미하다. 트리아졸 5' 탄소의 유도화, 또는 이것을 질소로 치환할 경우 (즉, 1,2,4,5 테트라졸 3-카르복사미드)에도, 3' 카르복사미드 질소의 알킬 유도화와 마찬가지로, 실질적인 활성 손상이 일어난다. 리바비린의 2' 데옥시리보스 버젼 (DNA 뉴클레오사이드 유사체)은 항바이러스제로서의 활성은 없는데, 이는 리바비린이 그의 항바이러스 활성을 갖기 위해 RNA-의존 효소를 필요로 함을 강력히 시사하는 것이다. 항바이러스 활성은 트리포스페이트 및 3',5' 시클릭 포스페이트를 비롯하여, 리보스 가수분해의 아세테이트 및 포스페이트 유도화에도 유지되지만, 이들 화합물들은 모분자 보다 더 활성적이지는 않으며, 이는 체내의 에스테르제 및 키나제 활성의 높은 효능을 반영하는 것이다. 타리바비린 (비라미딘)은 오늘날까지 가장 성공적인 리바비린 유도체로서 모분자인 3-카르복사미드의 3-카르복사미딘 유도체인데 현재는 타리바비린 (이전 명칭: 비라미딘 및 리바미딘)으로 칭해지고 있다. 이 약물은 리바비린과 유사한 항바이러스 활성 스펙트럼을 나타내며, 이 약물이 이제 리바비린의 전구약물로 알려진 것에 비추어 볼 때 놀라운 일도 아니다. 그러나, 비라미딘은 리바비린에 비해 적혈구-트래핑이 덜하고 간 표적화능력이 더 우수하다는 점에서 유용한 특성을 갖는다. 상기 첫번째 특성은 RBCs로의 약물 유입을 억제하는 비라미딘의 염기성 아미딘 기에 의한 것이고, 두번째 특성은 아마도 간 조직에서 아미딘을 아미드로 변환시키는 효소의 농도 증가에 기인하는 듯하다. 비라미딘은 인체를 대상으로 한 III상 임상 시험 중에 있고 적어도 특정 종류의 바이러스성 간염에 대하여는 언젠가 리바비린을 대체할 수도 있을 것이다. 비라미딘의 약간이나마 더 우수한 독성학적 특성에 따라 언젠가는 리바비린을 모든 목적에서 대체하는 날이 올 수도 있을 것이다.
안티센스 올리고머의 투약
이 올리고머는 예컨대 비경구 투여될 수 있다. 비경구, 피하, 피내 또는 구소 투여를 위해서 포뮬레이션에 멸균 희석제, 완충제, 등장성 조절제 및 항균제를 포함시킬 수 있다. 활성 화합물은 제어된 방출 특성을 갖는 임플란트 또는 마이크로캡슐을 비롯하여, 체내로부터 즉각 제거되거나 분해되지 않도록 해주는 캐리어를 포함하여 조제될 수 있다. 정맥 투여용으로 바람직한 담체는 생리 식염수 또는 포스페이트 완충 식염수일 수 있다. 다른 투여 방법으로 예컨대 경구, 경비, 직장 투여를 이용할 수 있다.
치료를 필요로 하는 대상자에게 화합물 2을 적어도 2회 연속 투여하는 것이 일반적이다. 몇몇 구체예에서, 적어도 2회의 연속 투여 간의 투여 간격은 적어도 2주일이며 임의로 20 주일을 넘지 않는다. 몇몇 구체예에서, 조성물은 단위 투여 제형일 수 있으며, 각각의 단위 투여가 대상자에게 투여되는 단일 투여의 전부 또는 일부를 형성하는 것일 수 있다. 투여 횟수는 2회 초과, 예컨대 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16회 또는 그 이상일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 화합물 1의 각각의 투여 사이의 시간 간격은 적어도 14일, 예컨대 적어도 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 105, 110, 115, 120, 또는 적어도 125일일 수 있다.
몇몇 구체예에서, 화합물 1, 예컨대 미라버센의 각 투여 간의 시간 간격은 1일 이상, 예컨대 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 1주일일 수 있고 또는 8, 9, 10, 11, 12, 13일 또는 2주일일 수도 있다. 화합물 1의 각각의 투여는 환자에게 치료적 유효량이 확실히 투여될 수 있도록 본 명세서에 설명된 바와 같이 최적화될 수 있다. 몇몇 구체예에서 각각의 투여량은 약 0.1mgs/kg 내지 약 10mgs/kg 또는 약 12mgs/kg, 예컨대 약 0.2 mgs/kg, 예컨대 약 0.3mgs/kg, 예컨대 약 0.4mgs/kg, 예컨대 약 0.5mgs/kg, 예컨대 약 0.6mgs/kg, 예컨대 약 0.7mgs/kg, 예컨대 약 0.8mgs/kg, 예컨대 약 0.9mgs/kg, 예컨대 약 1mg/kg, 예컨대 약 2mgs/kg, 예컨대 약 3mgs/kg, 예컨대 약 4mgs/kg, 예컨대 약 5mgs/kg, 예컨대 약 6mgs/kg, 예컨대 약 7mgs/kg, 예컨대 약 8mgs/kg, 예컨대 약 9mgs/kg, 예컨대 약 10mgs/kg 예컨대 약 11mgs/kg, 예컨대 약 12mgs/kg일 수 있다.
*투여량의 효과는 바이러스 게놈(역가)의 양으로 측정할 수 있다. 몇몇 구체예에서, 빌드업 단계 경과 후, 표적 조직 내에서 화합물의 농도를 비교적 고활성으류 유지시키는 한편, 바이러스 역가를 감소시키거나 다른 질병 변수들을 향상시키는 것을 목적으로, 유지 투여량을 일정 기간 동안 투여할 수 있으며, 그 후, 유효 투여량에 필요한 최소량을 이용하여 새로운 낮은 수준으로 당해 질병을 유지하면서 이와 동시에 부작용을 최소화하고 투약 간격을 증가시킴으로써 환자들의 불편함을 최소화하기 위해, 각 투약시기 사이의 시간 간격을 증가시키거나 또는 각 투약시 제공되는 투여량을 감소시키거나 또는 두가지 모두를 실시할 수 있다.
몇몇 구체예에서, 빌드업 단계 경과 후, 중요한 질병 변수들에 대하여 바람직한 효과를 얻을 수 있도록, 표적 조직 내에서 유효 농도를 유지할 목적으로 유지 투여량을 투여하되, 각 투여 사이의 시간 간격을 환자의 불편함을 회피하기 위해 연장시키고, 선택된 질병 변수에 미치는 효과는 유지하는 한편 부작용은 최소화하기 위해 투여량은 최소한도로 유지시킬 수 있다.
몇몇 구체예에서, 화합물 1의 적어도 2회 투여, 예컨대 유지 투여와 같은 투여간의 시간 간격은 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14일, 또는 예컨대 적어도 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124 또는 적어도 125일 중 어느 하나일 수 있다. 몇몇 구체예에서, 상기 적어도 2회 투여 간의 시간 간격, 예컨대 유지 투여 간의 시간 간격은 적어도 약 1주일, 예컨대 적어도 약 2 주일, 예컨대 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 적어도 약 18 주일 중에서 선택된다. 몇몇 구체예에서, 상기 적어도 2회 투여 간의 시간 간격, 예컨대 유지 투여 간의 시간 간격은, 예컨대 적어도 ½개월, 예컨대 적어도 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4 또는 적어도 4½개월일 수 있다.
몇몇 구체예에서, 환자가 질병의 활성적인 증상을 나타내는 한, 예컨대 검출가능한 HCV 역가를 나타내는 한 화합물 1을 계속 투여한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 치료는 일정 기간 중단했다가 화합물의 유효 조직 농도를 다시 구축하기 위해 다시 초기 투여를 고투여량으로 하거나 또는 빈번한 투여를 실시한 다음 이어서, 설명에 따라 유지 투여를 실시할 수도 있다.
몇몇 구체예에서, 화합물 1의 적어도 2회 투여 간의 시간 간격, 예컨대 유지 투여 간의 시간 간격은 적어도 약 1주일 또는 예컨대 적어도 약 14일이다. 몇몇 구체예에서, 투약 간격은 적어도 약 21일이다. 몇몇 구체예에서, 투약 간격은 적어도 4 주일, 또는 적어도 1 개월이다. 몇몇 구체예에서, 투약 간격은 적어도 5 주일이다. 몇몇 구체예에서, 투약 간격은 적어도 6 주일이다. 몇몇 구체예에서, 투약 간격은 적어도 7 주일이다. 몇몇 구체예에서, 투약 간격은 적어도 8 주일이다. 이러한 투여는 유지 투여일 수 있다.
몇몇 구체예에서 화합물 1, 예컨대 안티센스 올리고머 예컨대 미라버센의 대상자 체내에서의 순환 농도, 예컨대 혈장 농도는 0.04 내지 25nM, 예컨대 0.8 내지 20nM의 범위로 유지된다.
몇몇 구체예에서, 각 투여시, 예컨대 단위 투여되는 화합물 1의 투여량은 0.01 mg/kg -25 mg/kg 범위이다. 몇몇 구체예에서, 각 투여시 투여되는 화합물 1의 예컨대 단위 투여량과 같은 투여량은 0.05 mg/kg -20 mg/kg의 범위이다. 몇몇 구체예에서, 각 투여시 투여되는 화합물의 투여량(예컨대 단위 투여량)은 0.1 mg/kg -15 mg/kg의 범위이다. 몇몇 구체예에서, 각 투여시 투여되는 화합물의 투여량 (예컨대 단위 투여량)은 1 mg/kg -15 mg/kg의 범위이다. 몇몇 구체예에서, 각 투여시 투여되는 화합물의 투여량은 1 mg/kg -10 mg/kg의 범위이다. 몇몇 구체예에서, 각 투여시 투여되는 화합물의 투여량 (예컨대 단위 투여량)은 0.01 mg/kg -25 mg/kg의 범위, 예컨대 약 0.01, 0.05, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.25, 1.5, 1.75, 2, 2.25, 2.5, 2.75, 3, 3.25, 3.5, 3.75, 4, 4.25, 4.5, 4.75, 5, 5.25, 5.5, 5.75, 6, 6.25, 6.5, 6.75, 7, 7.25, 7.5, 7.75, 8, 8.25, 8.5, 8.75, 9, 9.25, 9.5, 9.75, 10, 10.25, 10.5, 10.75, 11, 11.25, 11.5, 11.75, 12, 12.25, 12.5, 12.75, 13, 13.25, 13.5, 13.75, 14, 14.25, 14.5, 14.75, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 예컨대 약 25 mg/kg이며, 이들 각각이 개별적인 구체예를 구성한다.
몇몇 구체예에서, 화합물 1, 예컨대 올리고머, 예컨대 미라버센은 0.1 내지 100mg/kg, 예컨대 1 내지 10mg/kg 또는 약 1 내지 약 12mgs/kg의 범위로 투여될 수 있다. 투약 간격은 예컨대 1일 1회 내지 2개월에 1회, 예컨대 1주일에 1회 또는 2주일마다 1회 내지 1개월에 1회 또는 2개월에 1회일 수 있다.
몇몇 구체예에서, 화합물 1의 조성물 (예컨대 단위 투여량)은 비경구 투여 방법, 예컨대 비제한적인 예로서 정맥내, 피하, 복강내, 뇌혈관내, 비내 투여되도록 만들어질 수 있다. 몇몇 구체예에서, 투여는 경구 경로를 통한다.
적절하게는, 이러한 조성물은 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 아쥬반트를 포함한다. PCT/DK2006/000512는 적절하고 바람직한 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체 및 아쥬반트를 설명하는데 이들 모두 본 발명에 참조 병합되었다. 적절한 투여량, 포뮬레이션, 투여 경로, 조성, 투여 제형, 다른 치료제와의 조합, 전구약물 포뮬레이션 역시 PCT/DK2006/000512에 개시되어 있으며 이들 모두 본 발명에 참조 병합되었다. 몇몇 구체예에서, 화합물 1은 비경구 투여 경로, 예컨대 정맥내 또는 피하 경로로 투여된다. 몇몇 구체예에서, 투여 경로는 경구 투여 경로이다 (본 발명에 참조 병합된 WO2011/048125를 참조할 것).
본 발명에 사용된 바와 같은 화합물 1은 몇몇 구체예에서, 이 화합물로 치료된 환자에서 심각한 부작용을 일으킴이 없이 환자에게 치료적 유효량을 전달하는데 충분한 양으로, 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제 중에 단위 포뮬레이션(즉, 단위 투여)로서 제공될 수 있다.
의약 조성물의 투여는 치료하고자 하는 질병의 상태에 대한 반응성 및 이러한 상태의 위중도, 며칠 내지 수개월까지 지속되는 치료 경과 또는 완치되기까지 또는 질병 상태의 호전이 달성되기까지 등에 따라 달라진다. 최적 투약 스케쥴은 환자 체내의 약물 축적량을 측정함으로써 계산할 수 있다. 최적 투여량은 개별적인 올리고뉴클레오타이드의 상대적인 효능에 따라 달라질 수 있다. 일반적으로 이것은 시험관내 및 생체내 동물 모델에서 유효한 것으로 밝혀지는 EC50 값에 기초하여 평가할 수 있다. 일반적으로, 투여량은 체중 1 kg 당 0.01 ㎍ 내지 1 g일 수 있고, 1일 1회 이상, 1주에 1회 이상 또는 1개월에 1회 이상 투여될 수 있다. 투여 반복률은 체액이나 조직 중에 측정된 약물 체류 시간 및 약물 농도에 기초하여 평가할 수 있다.
감소된 표준 관리( Reduced Standard of Care )
본 발명에 따른 조합 치료에 의해, 몇몇 구체예에서, 인터페론 및 리바비린의 감소된 치료가 가능하거나 또는 몇몇 구체예에서, 인터페론 및/또는 리바비린을 이용하지 않고 치료할 수 있다.
몇몇 구체예에서 인터페론 및/또는 리바비린 치료 기간은 48주 미만, 예컨대 36주 미만, 예컨대 24주 미만 또는 12주 미만으로 단축된다.
몇몇 구체예에서 인터페론 및/또는 리바비린의 이러한 감소된 치료는 1일 투여량의 감소 또는 단위 투여량 감소 형태일 수 있다.
Figure pct00017
몇몇 구체예에서 화합물 4 (예컨대 PEGASYSTM)의 투여량은, 본 발명에 따른 조합 치료에 사용될 경우 또는 예비 치료의 일부로서 및/또는 조합 치료기간 후에 사용될 경우, 180meg 미만, 예컨대 150meg 미만, 예컨대 120meg 미만, 예컨대 100meg 미만이다.
몇몇 구체예에서 화합물 3 (예컨대 COPEGUSTM)의 투여량은, 본 발명에 따른 조합 치료에 사용될 경우 또는 예비 치료의 일부로서 및/또는 조합 치료기간 후에 사용될 경우, 800mg 미만, 예컨대 700mg 미만, 예컨대 600mg 미만, 예컨대 500mg 미만, 또는 16mg/kg 미만, 예컨대 14mg/kg 미만, 예컨대 13mg/kg 미만, 예컨대 12mg/kg 미만, 예컨대 10mg/kg 미만, 예컨대 8mg/kg 미만이다.
용어
본 발명의 문맥상 "올리고머"라는 용어는 2개 이상의 뉴클레오타이드 의 공유 결합에 의해 형성되는 분자를 가리킨다(즉 올리고뉴클레오타이드). 본 명세서에서, 단일 뉴클레오타이드(unit)는 또한 모노머 또는 유닛(unit)을 칭하는 것일 수 있다. 몇몇 구체예에서, "뉴클레오사이드", "뉴클레오타이드", "유닛" 및 "모노머"라는 용어는 상호 호환적으로 사용된다. 모노머 또는 뉴클레오타이드의 서열을 칭할때 여기서 서열은 염기 서열, 예컨대 A, T, G, C 또는 U를 가리키는 것이다.
올리고머는 일반적으로 7 -25 유닛의 연속 뉴클레오타이드 서열로 구성되거나 이러한 서열을 포함한다.
다양한 구체예에서, 본 발명의 화합물은 RNA (유닛)을 포함하지 않는다. 본 발명에 다른 화합물은 선형 분자이거나 또는 선형 분자로서 합성되는 것이 바람직하다. 올리고머는 단일가닥 분자이며, 좋기로는 동일 올리고머 내의 동등한 영역에 대해 상보적인 예컨대 적어도 3, 4 또는 5개 연속 뉴클레오타이드들로 된 짧은 영역을 포함하지 않는 것이 바람직하다 (즉 듀플렉스) - 이와 관련하여, 올리고머는 (기본적으로) 이중가닥이 아니다. 몇몇 구체예에서, 올리고머는 기본적으로 이중 가닥이 아니며 예컨대 siRNA가 아니다. 다양한 구체예에서, 본 발명의 올리고머는 그 전체가 연속 뉴클레오타이드 영역(contiguous nucleotide region)만으로 이루어질 수 있다. 따라서, 올리고머는 실제로 자기 상보성이 아니다.
"대응하는 뉴클레오타이드 유사체(corresponding nucleotide analogue)" 및 "대응하는 뉴클레오타이드"라는 용어는 뉴클레오타이드 유사체 중의 뉴클레오타이드와 자연발생적인 뉴클레오타이드가 동일함을 나타내기 위한 것이다. 예컨대, 뉴클레오타이드의 2-데옥시리보스 유닛이 아데닌에 링크된 경우, "대응하는 뉴클레오타이드 유사체"는 아데닌에 링크된 오탄당 유닛(2-데옥시리보스와는 다르다)을 함유한다.
본 명세서에서 "역상보(reverse complement)", "역상보적(reverse complementary)"라는 용어는 "상보", "상보적" 및 "상보성"이라는 용어와 호환적으로 사용된다.
뉴클레오사이드 및 뉴클레오사이드 유사체
몇몇 구체예에서, "뉴클레오사이드 유사체" 및 "뉴클레오타이드 유사체"라는 용어는 호환적으로 사용된다.
본 명세서에서 "뉴클레오타이드"라는 용어는 당 부분, 염기 부분 및 공유 결합된 기(결합기:linkage group), 예컨대 포스페이트 또는 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드간 결합기를 포함하는 글리코사이드를 가리키는 것으로서, 이 용어는 DNA 또는 RNA와 같은 자연발생적인 뉴클레오타이드와, 변형된 당 및/또는 염기 부분을 포함하는 비자연발생적인 뉴클레오타이드(본 명세서에서 "뉴클레오타이드 유사체"라고도 칭함) 양자 모두를 포괄한다. 본 명세서에서, 단일 뉴클레오타이드 (유닛)은 또한 모노머 또는 핵산 유닛으로 칭해지기도 한다.
생화학 분야에서, "뉴클레오사이드"라는 용어는 흔히 당 부분과 염기 부분을 포함하는 글리코사이드를 가리키는 것으로 이해되며, 따라서 해당 올리고머의 뉴클레오타이드들 간의 뉴클레오타이드간 결합에 의해 공유 결합되는 뉴클레오타이드 유닛들을 칭할 때 이 용어가 사용될 수 있다. 생화학 분야에서, "뉴클레오타이드"라는 용어는 핵산 모노머 또는 유닛을 가리키며, 올리고뉴클레오타이드는 문맥상 염기 - 예컨대 "뉴클레오타이드 서열"을 가리키며, 일반적으로 핵염기 서열 (즉 당 골격과 뉴클레오사이드간 결합의 존재가 암시됨)을 가리킨다. 마찬가지로, 특히 하나 이상의 핵염기간 결합기가 변형된 올리고뉴클레오타이드의 경우, "뉴클레오타이드"라는 용어는, "뉴클레오사이드"를 가리킬 수 있는데 예컨대 그 "뉴클레오타이드"가 뉴클레오사이드들 간의 결합의 존재 또는 특성을 특정하는 경우에조차, "뉴레오사이드"를 가리키는 것일 수 있다.
당업자에게 인식되는 바와 같이, 올리고뉴클레오타이드의 5' 말단 뉴클레오타이드는 5' 말단기를 포함하거나 포함하지 않는 경우에도, 5' 뉴클레오타이드간(internucleotide) 결합기를 포함하지 않는다.
비자연발생적 뉴클레오타이드는 바이시클릭 뉴클레오타이드 또는 2' 변형된 뉴클레오타이드 예컨대 2' 치환된 뉴클레오타이드와 같은, 변형된 당 부분을 갖는 뉴클레오타이드를 포함한다.
"뉴클레오타이드 유사체"는 천연 뉴클레오타이드 예컨대 DNA 또는 RNA 뉴클레오타이드의 당 및/또는 염기 부분이 변형된 변이체이다. 유사체들은 이론적으로 올리고뉴클레오타이드 관점에서 천연 뉴클레오타이드들에 대해 단지 "침묵(silent)"하거나 또는 "균등(equivalent)"할 수 있다. 즉, 그 올리고뉴클레오타이드가 표적 유전자 발현을 억제하는 작용에 대해 아무런 기능적 효과를 나타내지 않는다. 이러한 "균등한" 유사체는 그럼에도 불구하고, 예를 들어 이들이 제조하기가 더 용이하거나 더 저렴한 경우 또는 저장하기에 더 안정하거나 또는 제조 조건에 더 안정하거나 또는 태그 또는 라벨을 나타낼 경우 유용할 수 있다. 그러나, 좋기로는 유사체는, 예컨대 표적에 대해 증가된 결합 친화성 및/또는 세포내 뉴클리아제에 대해 증가된 내성 및/또는 세포내로의 증가된 전달 용이성을 제공함으로써 그 올리고머가 발현을 억제하도록 작용하는 방식에 기능적 효과를 미치는 것이 바람직하다. 뉴클레오사이드 유사체의 특별한 예가 문헌, [예컨대 Freier & Altmann; Nucl. Acid Res ., 1997, 25, 4429-4443 및 Uhlmann; Curr . Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213], 및 Scheme 1에 개시되어 있다: 따라서 올리고머는 예컨대 2'-데옥시뉴클레오타이드 (본 명세서에서 일반적으로 "DNA")와 같은 자연발생 뉴클레오타이드의 간단한 서열로 이루어지거나 이 서열을 포함할 수 있을 뿐만 아니라, 가능하게는 리보뉴클레오타이드 (본 발명에서 "RNA") 또는 이러한 자연 발생적인 뉴클레오타이드들의 조합 및 1종 이상의 비자연발생적 뉴클레오타이드, 즉 뉴클레오xrefer타이드 유사체를 포함하거나 이들로 이루어질 수 있다. 이러한 뉴클레오타이드 유사체는 표적 서열에 대한 올리고머의 친화성을 적절히 향상시킬 수 있을 것이다.
적절한 뉴클레오타이드 유사체의 예로는 WO2007/031091 또는 본 명세서에 인용된 것들을 들 수 있다.
친화성-향상 뉴클레오타이드 유사체들을 올리고머, 예컨대 LNA 또는 2'-치환된 당에 병합시킴으로써, 특이적으로 결합하는 올리고머의 크기를 감소시킬 수 있을 뿐만 아니라, 그 상한을 비특이적이거나 비정상적인 결합이 일어나기 전의 올리고머 크기로 한정시킬 수도 있다.
Figure pct00018
Scheme 1
몇몇 구체예에서, 올리고머는 적어도 1개의 뉴클레오사이드 유사체를 포함한다. 몇몇 구체예에서 올리고머는 적어도 2개의 뉴클레오타이드 유사체를 포함한다. 몇몇 구체예에서 올리고머는 적어도 2개의 뉴클레오타이드 유사체들을 포함한다. 몇몇 구체예에서, 올리고머는 3-8개의 뉴클레오타이드 유사체들, 예컨대 6 또는 7개의 뉴클레오타이드 유사체들을 포함한다. 이제까지의 구체예들 중 가장 바람직한 구체예에서는, 상기한 뉴클레오타이드 유사체들 중 적어도 1개는 잠금 핵산 (LNA:locked nucleic acid)이며; 예컨대 뉴클레오타이드 유사체들 중 적어도 3 또는 적어도 4, 또는 적어도 5, 또는 적어도 6, 또는 적어도 7, 또는 8개가 LNA일 수 있다. 몇몇 구체예에서는 모든 뉴클레오타이드 유사체들이 LNA일 수 있다.
뉴클레오타이드만으로 구성된 바람직한 뉴클레오타이드 서열 모티프 또는 뉴클레오타이드 서열이라 할 때, 그 서열에 의해 규정된 본 발명의 올리고머들은 상기 서열 내에 존재하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 대신 대응하는 뉴클레오타이드 유사체 예컨대 LNA 유닛 또는 기타 뉴클레오타이드 유사체를 포함하여, 올리고머/표적 듀플렉스의 듀플렉스 안정성/Tm (즉, 친화성 향상 뉴클레오타이드 유사체)을 일으킨다.
몇몇 구체예에서, 올리고머와 표적 서열의 뉴클레오타이드 서열 간에 미스맷치가 발생할 경우 이러한 미스맷치는 친화성 향상 뉴클레오타이드 유사체 외부 영역, 예컨대 본 명세서에서 영역 B 및/또는 본 명세서에서 영역 D, 및/또는 올리고뉴클레오타이드의 DNA 뉴클레오타이드와 같은 비변형 부위, 및/또는 연속 뉴클레오타이드 서열에 대한 5' 또는 3' 영역에서 발견되는 것이 바람직하다.
뉴클레오타이드의 이러한 변형의 예로는 당 부분을 변형시켜 2'-치환기를 제공하거나 또는 결합 친화성을 향상시키는 브릿지(잠금 핵산) 구조를 생성하는 것 및 증가된 뉴클리아제 내성을 제공하는 것 등을 들 수 있다.
바람직한 뉴클레오타이드 유사체는 LNA, 예컨대 옥시-LNA (예컨대 베타-D-옥시-LNA, 및 알파-L-옥시-LNA), 및/또는 아미노-LNA (예컨대 베타-D-아미노-LNA 및 알파-L-아미노-LNA) 및/또는 티오-LNA (예컨대 베타-D-티오-LNA 및 알파-L-티오-LNA) 및/또는 ENA (예컨대 베타-D-ENA 및 알파-L-ENA)이다. 베타-D-옥시-LNA가 가장 바람직하다.
몇몇 구체예에서, 본 발명의 올리고머 내에 존재하는 뉴클레오타이드 유사체들 (예컨대 본 명세서에서 영역 A 및 C 내)은 독립적으로 예컨대: 2'-O-알킬-RNA 유닛, 2'-아미노-DNA 유닛, 2'-플루오로-DNA 유닛, LNA 유닛, 아라비노 핵산 (ANA) 유닛, 2'-플루오로-ANA 유닛, HNA 유닛, INA (인터컬레이팅 핵산: intercalating nucleic acid -Christensen, 2002. Nucl. Acids. Res. 2002 30: 4918-4925, 본 발명에 참조 병합됨) 유닛 및 2'MOE 유닛으로부터 선택된다. 몇몇 구체예에서 본 발명의 올리고머에는 상기한 뉴클레오타이드 유사체 또는 그의 연속 뉴클레오타이드 서열들 중 오직 하나만이 존재한다.
몇몇 구체예에서 뉴클레오타이드 유사체는 2'-O-메톡시에틸-RNA (2'MOE), 2'-플루오로-DNA 모노머 또는 LNA 뉴클레오타이드 유사체들이며, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 이들 3가지 유형의 유사체로부터 독립적으로 선택된 뉴클레오타이드 유사체들을 포함하거나 또는 3가지 유형으로부터 선택된 유사체중 오직 하나의 종류만 포함할 수 있다. 몇몇 구체예에서 상기 뉴클레오타이드 유사체들 중 적어도 하나는 2'-MOE-RNA, 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 2'-MOE-RNA 뉴클레오타이드 유닛이다. 몇몇 구체예에서 상기 뉴클레오타이드 유사체들 중 적어도 하나는 2'-플루오로 DNA로서, 예컨대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 2'-플루오로-DNA 뉴클레오타이드 유닛이다.
몇몇 구체예에서, 본 발명에 따른 올리고머는 적어도 1개의 잠금 핵산(LNA) 유닛, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8 LNA 유닛, 예컨대 3 -7 또는 4 내지 8 LNA 유닛, 또는 3, 4, 5, 6 또는 7 LNA 유닛이다. 몇몇 구체예에서, 모든 뉴클레오타이드 유사체들은 LNA이다. 몇몇 구체예에서, 올리고머는 베타-D-옥시-LNA 다음의 LNA 유닛들 중 하나 이상의 양자 모두를 포함할 수 있다: 티오-LNA, 아미노-LNA, 옥시-LNA, 및/또는 ENA 베타-D 또는 알파-L 배열 중 하나 또는 이들의 조합. 몇몇 구체예에서 모든 LNA 시토신 유닛은 5'메틸-시토신이다. 본 발명의 몇몇 구체예에서, 올리고머는 LNA 및 DNA 유닛 양자 모두를 포함할 수 있다. 좋기로는, LNA 유닛과 DNA 유닛의 총합은 10-25, 예컨대 10 -24, 예컨대 10-20, 예컨대 10 -18, 예컨대 12-16개인 것이 바람직하다. 본 발명의 몇몇 구체예에서, 올리고머의 뉴클레오타이드 서열, 예컨대 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 적어도 1개의 LNA이고 나머지 뉴클레오타이드 유닛은 DNA 유닛이다. 몇몇 구체예에서 올리고머는오로지 LNA 뉴클레오타이드 유사체 및 자연 발생적인 뉴클레오타이드 (예컨대 RNA 또는 DNA, 예컨대 DNA 뉴클레오타이드)로 이루어지며 임의로 포스포로티오에이트와 같은 변형된 뉴클레오타이드간 결합이 포함될 수 있다.
"핵염기(nucleobase)"라는 용어는 뉴클레오타이드의 염기 부분을 가리키되, 자연발생적인 것 뿐 아니라 비자연발생적인 변이체도 모두 포괄한다. 따라서, "핵염기"는 공지의 퓨린 및 피리미딘 헤테로사이클 뿐만 아니라 헤테로사이클 유사체 및 그의 호변이성체도 포괄한다.
핵염기의 비제한적인 예로는 아데닌, 구아닌, 시토신, 티미딘, 우라실, 잔틴, 하이포잔틴, 5-메틸시토신, 이소시토신, 슈도이소시토신, 5-브로모우라실, 5-프로피닐우라실, 6-아미노퓨린, 2-아미노퓨린, 이노신, 디아미노퓨린, 및 2-클로로-6-아미노퓨린을 들 수 있다.
몇몇 구체예에서, 올리고머 내에 존재하는 핵염기들 중 적어도 하나는 5-메틸시토신, 이소시토신, 슈도이소시토신, 5-브로모우라실, 5-프로피닐우라실, 6-아미노퓨린, 2-아미노퓨린, 이노신, 디아미노퓨린, 및 2-클로로-6-아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 변형된 핵염기이다.
LNA
"LNA"라는 용어는 "잠금 핵산(Locked Nucleic Acid)",로 알려진 바이시클릭 뉴클레오사이드 유사체를 가리키는 것이다. 이 용어는 LNA 모노머를 가리키는 것일 수 있고 또는 "LNA 올리고뉴클레오타이드"의 문맥으로 사용될 경우, LNA는 1개 이상의 그러한 바이시클릭 뉴클레오타이드 유사체들을 함유하는 올리고뉴클레오타이드를 가리킨다. LNA 뉴클레오타이드는 리보스 당 환의 C2'와 C4' 사이에 링커기 (예컨대 브릿지)가 존재한다는 특징을 갖는다 - 예를 들어 후술하는 바이래디칼 R4 * - R2 *로서 표시되는 바와 같음.
본 발명의 올리고뉴클레오타이드 화합물들에 사용되는 LNA는 하기 화학식 I의 구조를 갖는 것이거나 및 그의 염기성 염 및 산부가염인 것이 바람직하다:
Figure pct00019
식 중 모든 키랄 중심, 비대칭 기들은 R 또는 S 배향일 수 있다;
식 중 X는 -O-, -S-, -N(RN *)-, -C(R6R6 *)-, 예컨대, 몇몇 구체예에서 -O-;
B는 수소, 임의 치환된 C1 -4-알콕시, 임의 치환된 C1 -4-알킬, 임의 치환된 C1 -4-아실옥시, 자연발생적인 핵염기 및 핵염기 유사체를 비롯한 핵염기, DNA 인터컬레이터, 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이팅기, 리포토기 및 리간드이며; 좋기로는 B는 핵염기 또는 핵염기 유사체이다;
P는 인접한 모노머에 대한 뉴클레오타이드간(internucleotide) 결합을 나타내거나 또는 5'-말단기를 나타내고 이러한 뉴클레오타이드간 결합 또는 5'-말단기는 임의로 치환기 R5 또는 동등하게 적용가능한 치환기 R5 *를 포함한다;
P*는 인접한 모노머, 또는 3'-말단기에 대한 뉴클레오타이드간 결합을 나타낸다;
R4 * 및 R2 *는 함께 -C(RaRb)-, -C(Ra)=C(Rb)-, -C(Ra)=N-, -O-, -Si(Ra)2-, -S-, -SO2-, -N(Ra)-, 및 >C=Z로부터 선택된 1 - 4개의 기(groups)/원자(atoms)로 이루어진 2가의 링커기를 나타내고, 여기서, Z는 -O-, -S-, 및 -N(Ra)-로부터 선택되고, Ra 및 Rb 각각은 독립적으로 수소, 임의 치환된 C1 -12-알킬, 임의 치환된 C2 -12-알케닐, 임의 치환된 C2 -12-알키닐, 히드록시, 임의 치환된 C1 -12-알콕시, C2 -12-알콕시알킬, C2 -12-알케닐옥시, 카르복시, C1 -12-알콕시카르보닐, C1 -12-알킬카르보닐, 포르밀, 아릴, 아릴-옥시-카르보닐, 아릴옥시, 아릴카르보닐, 헤테로아릴, 헤테로-아릴옥시-카르보닐, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카르보닐, 아미노, 모노- 및 디(C1-6-알킬)아미노, 카르바모일, 모노- 및 디(C1 -6-알킬)-아미노-카르보닐, 아미노-C1 -6-알킬-아미노카르보닐, 모노- 및 디(C1-6-알킬)아미노-C1 -6-알킬-아미노카르보닐, C1 -6-알킬-카르보닐아미노, 카르바미도, C1 -6-알카노일옥시, 설포노, C1 -6-알킬설포닐옥시, 니트로, 아지도, 설파닐, C1 -6-알킬티오, 할로겐, DNA 인터컬레이터, 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이팅기, 리포터기, 및 리간드로부터 선택되며, 여기서 아릴 및 헤테로아릴은 임의 치환될 수 있고 여기서 2개의 제미날(geminal) 치환기 Ra 및 Rb는 함께 임의 치환된 메틸렌 (=CH2)을 나타내되, 여기서 모든 키랄 중심, 비대칭 기들은 R 또는 S 배향으로 존재할 수 있고;
존재하는 치환기 R1 *, R2, R3, R5, R5 *, R6 및 R6 * 각각은 독립적으로 수소, 임의 치환된 C1 -12-알킬, 임의 치환된 C2 -12-알케닐, 임의 치환된 C2 -12-알키닐, 히드록시, C1 -12-알콕시, C2 -12-알콕시알킬, C2 -12-알케닐옥시, 카르복시, C1 -12-알콕시카르보닐, C1 -12-알킬카르보닐, 포르밀, 아릴, 아릴-옥시-카르보닐, 아릴옥시, 아릴카르보닐, 헤테로아릴, 헤테로-아릴옥시-카르보닐, 헤테로아릴-옥시, 헤테로아릴카르보닐, 아미노, 모노- 및 디(C1-6-알킬)아미노, 카르바모일, 모노- 및 디(C1 -6-알킬)-아미노-카르보닐, 아미노-C1 -6-알킬-아미노카르보닐, 모노- 및 디(C1-6-알킬)아미노-C1 -6-알킬-아미노카르보닐, C1 -6-알킬-카르보닐아미노, 카르바미도, C1 -6-알카노일옥시, 설포노, C1 -6-알킬설포닐옥시, 니트로, 아지도, 설파닐, C1 -6-알킬티오, 할로겐, DNA 인터컬레이터, 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이팅기, 리포터기, 및 리간드로부터 선택되며, 여기서 아릴 및 헤테로아릴은 임의 치환될 수 있고, 여기서 2개의 제미날 치환기들은 함께 옥소, 티옥소, 이미노 또는 임의 치환된 메틸렌을 나타내고; 여기서 RN은 수소 및 C1 -4-알킬로부터 선택되고, 여기서 2개의 인접(비제미날 (non-geminal)) 치환기들은 이중 결합을 결과시키는 부가적인 결합을 나타내는 것일 수 있으며; RN *은 존재할 경우 그리고 바이래디칼에 관여하지 않을 경우, 수소 및 C1 -4-알킬로부터 선택된다. 모든 키랄 중심에 있어서, 비대칭 기들은 R 또는 S 배향으로 발견될 수 있다.
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 *는 함께 C(RaRb)-C(RaRb)-, C(RaRb)-O-, C(RaRb)-NRa-, C(RaRb)-S-, 및 C(RaRb)-C(RaRb)-O-로 이루어진 군으로부터 선택된 바이래디칼을 나타낼 수 있고, 여기서 각각의 Ra 및 Rb는 임의로 독립적으로 선택될 수 있다. 몇몇 구체예에서, Ra 및 Rb는 수소 및 C1 - 6알킬, 예컨대 메틸, 예컨대 수소로 이루어진 군으로부터, 임의로 독립적으로 선택될 수 있다.
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 *은 함께 바이래디칼 -O-CH(CH2OCH3)- (2'O-메톡시에틸 바이시클릭 핵산 - Seth at al., 2010, J. Org. Chem)을 나타내며 이것은 R- 또는 S- 배열일 수 있다.
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 *는 함께 바이래디칼 -O-CH(CH2CH3)- (2'O-에틸 바이시클릭 핵산 - Seth at al., 2010, J. Org. Chem)을 나타내며-이것은 R- 또는 S- 배열일 수 있다.
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 *은 함께 바이래디칼 -O-CH(CH3)-을 나타내며 이것은 R- 또는 S- 배열일 수 있다. 몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 *은 함께 바이래디칼 -O-CH2-O-CH2- 을 나타낸다　- (Seth at al., 2010, J. Org. Chem).
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 * 은 함께 바이래디칼 -O-NR-CH3- 　- (Seth at al., 2010, J. Org. Chem)을 나타낸다.
몇몇 구체예에서, LNA 유닛은 군으로부터 선택되는 구조를 갖는다:
Figure pct00020
몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3, R5, R5 *은 독립적으로 수소, 할로겐, C1 -6 알킬, 치환된 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐 또는 치환된 C2 -6 알키닐, C1 -6 알콕실, 치환된 C1 -6 알콕실, 아실, 치환된 아실, C1 -6 아미노알킬 또는 치환된 C1 -6 아미노알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 모든 키랄 중심에 있어서, 비대칭 기들은 R 또는 S 배향으로 존재할 수 있다.
몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3, R5, R5 *은 수소이다.
몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3은 독립적으로 수소, 할로겐, C1 -6 알킬, 치환된 C1-6 알킬, C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐 또는 치환된 C2 -6 알키닐, C1 -6 알콕실, 치환된 C1 -6 알콕실, 아실, 치환된 아실, C1 -6 아미노알킬 또는 치환된 C1 -6 아미노알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.모든 키랄 중심에 있어서, 비대칭 기들은 R 또는 S 배향으로 존재할 수 있다.
몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3은 수소이다.
몇몇 구체예에서, R5 및 R5 *은 각각 독립적으로 H, -CH3, -CH2-CH3,- CH2-O-CH3, 및 -CH=CH2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 적절한 몇몇 구체예에서, R5 또는 R5* 은 수소이며, 여기서 다른 기(각각 R5 또는 R5 *)는 C1 -5 알킬, C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐, 치환된 C1 -6 알킬, 치환된 C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알키닐 또는 치환된 아실 (-C(=O)-)이고; 여기서 각각의 치환된 기는 할로겐, C1 -6 알킬, 치환된 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐, 치환된 C2 -6 알키닐, OJ1, SJ1, NJ1J2, N3, COOJ1, CN, O-C(=O)NJ1J2, N(H)C(=NH)NJ,J2 또는 N(H)C(=X)N(H)J2 로부터 독립적으로 선택된 치환기에 의해 일치환 또는 다치환된 것이고 여기서 X는 O 또는 S이고; 각각의 J1 및 J2는 독립적으로, H, C1 -6 알킬, 치환된 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐, 치환된 C2 -6 알키닐, C1 -6 아미노알킬, 치환된 C1 -6 아미노알킬 또는 보호기이다. 몇몇 구체예에서 R5 또는 R5 *은 치환된 C1 -6 알킬이다. 몇몇 구체예에서 R5 또는 R5 *은 치환된 메틸렌이며 여기서 바람직한 치환기는 F, NJ1J2, N3, CN, OJ1, SJ1, O-C(=O)NJ1J2, N(H)C(=NH)NJ, J2 또는 N(H)C(O)N(H)J2. 로부터 선택된 1 이상의 기를 포함한다. 몇몇 구체예에서 각각의 J1 및 J2는 독립적으로 H 또는 C1 -6 알킬이다. 몇몇 구체예에서 R5 또는 R5 *은 메틸, 에틸 또는 메톡시메틸이다. 몇몇 구체예에서 either R5 또는 R5 *은 메틸이다. 또 다른 구체예에서 R5 또는 R5 *은 에틸레닐이다. 몇몇 구체예에서 R5 또는 R5 *은 치환된 아실이다. 몇몇 구체예에서 R5 또는 R5 *은 C(=O)NJ1J2이다. 모든 키랄 중심에 있어서, 비대칭 기들은 R 또는 S 배향으로 존재한다. 이러한 5' 변형된 바이시클릭 뉴클레오타이드는 WO 2007/134181에 설명되어 있으며 이 문헌은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 통합되었다.
몇몇 구체예에서 B는 핵염기이며, 핵염기 유사체 및 자연발생적인 핵염기, 예컨대 퓨린 또는 피리미딘, 또는 치환된 퓨린 또는 치환된 피리미딘, 예컨대 본 명세서에 언급된 핵염기, 예컨대 아데닌, 시토신, 티민, 아데닌, 우라실 및/또는 변형되거나 치환된 핵염기, 예컨대 5-티아졸로-우라실, 2-티오-우라실, 5-프로피닐-우라실, 2'티오-티민, 5-메틸 시토신, 5-티아졸로-시토신, 5-프로피닐-시토신, 및 2,6-디아미노퓨린으로 이루어진 군으로부터 선택된 핵염기를 포함한다.
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 *은 함께 -C(RaRb)-O-, -C(RaRb)-C(RcRd)-O-, -C(RaRb)-C(RcRd)-C(ReRf)-O-, -C(RaRb)-O-C(RcRd)-, -C(RaRb)-O-C(RcRd)-O-, -C(RaRb)-C(RcRd)-, -C(RaRb)-C(RcRd)-C(ReRf)-, -C(Ra)=C(Rb)-C(RcRd)-, -C(RaRb)-N(Rc)-, -C(RaRb)-C(RcRd)- N(Re)-, -C(RaRb)-N(Rc)-O-, 및 -C(RaRb)-S-, -C(RaRb)-C(RcRd)-S-로부터 선택된 바이래디칼을 나타내며, 여기서 Ra, Rb, Rc, Rd, Re, 및 Rf 각각은 독립적으로 수소, 임의 치환된 C1 -12-알킬, 임의 치환된 C2 -12-알케닐, 임의 치환된 C2 -12-알키닐, 히드록시, C1 -12-알콕시, C2 -12-알콕시알킬, C2 -12-알케닐옥시, 카르복시, C1 -12-알콕시카르보닐, C1 -12-알킬카르보닐, 포르밀, 아릴, 아릴-옥시-카르보닐, 아릴옥시, 아릴카르보닐, 헤테로아릴, 헤테로-아릴옥시-카르보닐, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카르보닐, 아미노, 모노- 및 디(C1-6-알킬)아미노, 카르바모일, 모노- 및 디(C1 -6-알킬)-아미노-카르보닐, 아미노-C1 -6-알킬-아미노카르보닐, 모노- 및 디(C1 -6-알킬)아미노-C1 -6-알킬-아미노카르보닐, C1 -6-알킬-카르보닐아미노, 카르바미도, C1 -6-알카노일옥시, 설포노, C1 -6-알킬설포닐옥시, 니트로, 아지도, 설파닐, C1 -6-알킬티오, 할로겐, DNA 인터컬레이터, 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이팅기, 리포터기, 및 리간드로부터 선택되고, 여기서 아릴 및 헤테로아릴은 임의 치환될 수 있으며 2개의 제미날 치환기 Ra 및 Rb 가 함께 임의 치환된 메틸렌 (=CH2)을 나타낼 수 있다. 모든 키랄 중심에 있어서, 비대칭 기는 R 또는 S 배열로 발견될 수 있다.
또 다른 구체예에서, R4 * 및 R2 *은 함께 -CH2-O-, -CH2-S-, -CH2-NH-, -CH2-N(CH3)-, -CH2-CH2-O-, -CH2-CH(CH3)-, -CH2-CH2-S-, -CH2-CH2-NH-, -CH2-CH2-CH2-, -CH2-CH2-CH2-O-, -CH2-CH2-CH(CH3)-, -CH=CH-CH2-, -CH2-O-CH2-O-, -CH2-NH-O-, -CH2-N(CH3)-O-, -CH2-O-CH2-, -CH(CH3)-O-, 및 -CH(CH2-O-CH3)-O-, 및/또는, -CH2-CH2-, 및 -CH=CH-로 이루어진 군으로부터 선택된 바이래디칼(2가기)를 나타낸다. 모든 키랄 중심에 있어서, 비대칭 기는 R 또는 S 배열로 발견될 수 있다.
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 *는 함께 바이래디칼 C(RaRb)-N(Rc)-O-를 나타내고, 여기서 Ra 및 Rb는 독립적으로 수소, 할로겐, C1 -6 알킬, 치환된 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐 또는 치환된 C2 -6 알키닐, C1 -6 알콕실, 치환된 C1 -6 알콕실, 아실, 치환된 아실, C1 -6 아미노알킬 또는 치환된 C1 -6 아미노알킬, 예컨대 수소를 나타내고; 여기서 Rc는 수소, 할로겐, C1 -6 알킬, 치환된 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐 또는 치환된 C2 -6 알키닐, C1 -6 알콕실, 치환된 C1-6 알콕실, 아실, 치환된 아실, C1 -6 아미노알킬 또는 치환된 C1 -6 아미노알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며, 예컨대 수소이다.
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 *는 함께 바이래디칼 C(RaRb)-O-C(RcRd) -O-를 나타내고, 여기서 Ra, Rb, Rc, 및 Rd는 독립적으로 수소, 할로겐, C1 -6 알킬, 치환된 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐 또는 치환된 C2 -6 알키닐, C1 -6 알콕실, 치환된 C1 -6 알콕실, 아실, 치환된 아실, C1 -6 아미노알킬 또는 치환된 C1 -6 아미노알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며, 예컨대 수소를 나타낸다.
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 * 는 바이래디칼 -CH(Z)-O-를 형성하되, 여기서 Z는 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐, 치환된 C1 -6 알킬, 치환된 C2 -6 알케닐, 치환된 C2-6 알키닐, 아실, 치환된 아실, 치환된 아미드, 티올 또는 치환된 티오로 이루어진 군으로부터 선택되며; 및 여기서 각각의 치환기는 독립적으로, 할로겐, 옥소, 히드록실, OJ1, NJ1J2, SJ1, N3, OC(=X)J1, OC(=X)NJ1J2, NJ3C(=X)NJ1J2 및 CN으로부터 독립적으로 선택된 임의 보호된 치환기에 의해 일치환 또는 다치환된 것이고, 여기서 각각의 J1, J2 및 J3는, 독립적으로, H 또는 C1 -6 알킬이고, X는 O, S 또는 NJ1이다. 몇몇 구체예에서 Z는 C1 -6 알킬 또는 치환된 C1 -6 알킬이다. 몇몇 구체예에서 Z는 메틸이다. 몇몇 구체예에서 Z는 치환된 C1 -6 알킬이다. 몇몇 구체예에서 상기 치환기는 C1-6 알콕시이다. 몇몇 구체예에서 Z는 CH3OCH2-이다. 모든 키랄 중심에서, 비대칭 기느는 R 또는 S 배향으로 존재할 수 있다. 이러한 바이시클릭 뉴클레오타이드들은 US 7,399,845에 개시되어 있으며 이 문헌은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 병합되었다. 몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3, R5, R5 * 는 수소이다. 몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3 *는 수소이고, R5, R5 * 중 하나 또는 양자 모두는 상기 및 WO 2007/134181와 같이 수소가 아니다.
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 *는 함께 브릿지 내에 치환된 아미노기를 포함하는 바이래디칼을 나타내며 예컨대 바이래디칼 -CH2-N( Rc)-으로 구성되거나 이를 포함하되, 여기서 Rc는 C1 -12 알킬옥시이다. 몇몇 구체예에서 R4 * 및 R2 *는 함께 바이래디칼 -Cq3q4-NOR -을 나타내며, 여기서 q3 및 q4는 독립적으로 수소, 할로겐, C1 -6 알킬, 치환된 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐 또는 치환된 C2 -6 알키닐, C1-6 알콕실, 치환된 C1 -6 알콕실, 아실, 치환된 아실, C1 -6 아미노알킬 또는 치환된 C1 -6 아미노알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며; 여기서 각각의 치환기는 독립적으로 할로겐, OJ1, SJ1, NJ1J2, COOJ1, CN, O-C(=O)NJ1J2, N(H)C(=NH)N J1J2 또는 N(H)C(=X=N(H)J2 로부터 독립적으로 선택된 치환기에 의해 일치환 또는 다치환된 것이며, 여기서 X는 O 또는 S이고; J1 및 J2 각각은, 독립적으로 H, C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐, C1 -6 아미노알킬 또는 보호기이다. 모든 키랄 중심에 있어서, 비대칭 기들은 R 또는 S 배향으로 존재할 수 있다. 이러한 바이시클릭 뉴클레오타이드는 WO2008/150729에 개시되어 있으며, 이 문헌은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 병합되었다. 몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3, R5, R5 *는 독립적으로 수소, 할로겐, C1 -6 알킬, 치환된 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐 또는 치환된 C2 -6 알키닐, C1 -6 알콕실, 치환된 C1 -6 알콕실, 아실, 치환된 아실, C1 -6 아미노알킬 또는 치환된 C1 -6 아미노알킬로 이루어진 군으롤부터 선택된다. 몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3, R5, R5 *은 수소이다. 몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3은 수소이고 R5, R5 * 중 일방 또는 양방 모두는 상기 및 WO 2007/134181에 기재된 바와 같이 수소가 아니다. 몇몇 구체예에서 R4 * 및 R2 * 는 함께 바이래디칼 (2가기) C(RaRb)-O-를 나타내며, 여기서 Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 할로겐, C1-C12 알킬, 치환된 C1-C12 알킬, C2-C12 알케닐, 치환된 C2-C12 알케닐, C2-C12 알키닐, 치환된 C2-C12 알키닐, C1-C12 알콕시, 치환된 C1-C12 알콕시, OJ1 SJ1, SOJ1, SO2J1, NJ1J2, N3, CN, C(=O)OJ1, C(=O)NJ1J2, C(=O)J1, O-C(=O)NJ1J2, N(H)C(=NH)NJ1J2, N(H)C(=O)NJ1J2 또는 N(H)C(=S)NJ1J2를 나타내거나 ; 또는 Ra 및 Rb는 함께 =C(q3)(q4); q3 및 q4는 각각 독립적으로, H, 할로겐, C1-C12알킬 또는 치환된 C1-C12 알킬을 나타내고; 각각의 치환기는 독립적으로 할로겐, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2- C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C2-C6 알키닐, OJ1, SJ1, NJ1J2, N3, CN, C(=O)OJ1, C(=O)NJ1J2, C(=O)J1, O-C(=O)NJ1J2, N(H)C(=O)NJ1J2 또는 N(H)C(=S)NJ1J2 . 로부터 독립적으로 선택된 치환기에 의해 일치환 또는 다치환된 것이며; 각각의 J1 및 J2는 독립적으로, H, C1-C6 알킬, 치환된 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, 치환된 C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 치환된 C2-C6 알키닐, C1-C6 아미노알킬, 치환된 C1-C6 아미노알킬 또는 보호기를 나타낸다. 이러한 화합물들은 본 발명에 그 내용 전체가 참고 병합된 WO2009006478A에 개시되어 있다.
몇몇 구체예에서, R4 * 및 R2 *는 바이래디칼 - Q -을 형성하는데, 여기서 Q는 C(q1)(q2)C(q3)(q4), C(q1)=C(q3), C[=C(q1)(q2)]-C(q3)(q4) 또는 C(q1)(q2)-C[=C(q3)(q4)]이고; q1, q2, q3, q4는 각각 독립적으로 H, 할로겐, C1 -12 알킬, 치환된 C1-12 알킬, C2 -12 알케닐, 치환된 C1 -12 알콕시, OJ1, SJ1, SOJ1, SO2J1, NJ1J2, N3, CN, C(=O)OJ1, C(=O)-NJ1J2, C(=O) J1, -C(=O)NJ1J2, N(H)C(=NH)NJ1J2, N(H)C(=O)NJ1J2 또는 N(H)C(=S)NJ1J2를 나타내며; 각각의 J1 및 J2는 독립적으로, H, C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐, C1 -6 아미노알킬 또는 보호기를 나타내고; 필요에 따라 Q가 C(q1)(q2)(q3)(q4)이고 q3 또는 q4 중 하나가 CH3 이면, q3 또는 q4 중 적어도 다른 하나 또는 q1 및 q2 중 하나는 H가 아니다.몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3, R5, R5 *는 수소이다. 모든 키랄 중심에서, 비대칭 기들은 R 또는 S 배향으로 존재할 수 있다. 이러한 바이시클릭 뉴클레오타이드는 본 발명에 그 내용 전체가 참고 병합된 WO2008/154401에 개시되어 있다. 몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3, R5, R5 *는 독립적으로 수소, 할로겐, C1 -6 알킬, 치환된 C1 -6 알킬, C2 -6 알케닐, 치환된 C2 -6 알케닐, C2 -6 알키닐 또는 치환된 C2 -6 알키닐, C1 -6 알콕실, 치환된 C1 -6 알콕실, 아실, 치환된 아실, C1 -6 아미노알킬 또는 치환된 C1 -6 아미노알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3, R5, R5 *는 수소이다. 몇몇 구체예에서, R1 *, R2, R3는 수소이고 R5, R5 * 중 일방 또는 양방 모두는 상기 및 WO 2007/134181 또는 WO2009/067647에 개시된 바와 같이 수소 이외의 것일 수 있다 (알파-L-바이시클릭 핵산 유사체).
몇몇 구체예에서 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 화합물들에 사용된 LNA는 다음 일반 화학식 II의 구조를 갖는다:
Figure pct00021
식 중 Y는 -O-, -CH2O-, -S-, -NH-, N(Re) 및/또는 -CH2-로 이루어진 군으로부터 선택되고; Z 및 Z*는 독립적으로 뉴클레오타이드간 결합, RH, 말단기 또는 보호기로부터 선택되며; B는 천연 또는 비천연 뉴클레오타이드 염기 부분 (핵염기)를 구성하고, RH는 수소 및 C1 -4-알킬로부터 선택되며; Ra, Rb Rc, Rd 및 Re는 임의로 독립적으로, 수소, 임의 치환된 C1 -12-알킬, 임의 치환된 C2 -12-알케닐, 임의 치환된 C2 -12-알키닐, 히드록시, C1 -12-알콕시, C2 -12-알콕시알킬, C2 -12-알케닐옥시, 카르복시, C1 -12-알콕시카르보닐, C1 -12-알킬카르보닐, 포르밀, 아릴, 아릴-옥시-카르보닐, 아릴옥시, 아릴카르보닐, 헤테로아릴, 헤테로-아릴옥시-카르보닐, 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴카르보닐, 아미노, 모노- 및 디(C1-6-알킬)아미노, 카르바모일, 모노- 및 디(C1 -6-알킬)-아미노-카르보닐, 아미노-C1 -6-알킬-아미노카르보닐, 모노- 및 디(C1 -6-알킬)아미노-C1 -6-알킬-아미노카르보닐, C1 -6-알킬-카르보닐아미노, 카르바미도, C1 -6-알카노일옥시, 설포노, C1 -6-알킬설포닐옥시, 니트로, 아지도, 설파닐, C1 -6-알킬티오, 할로겐, DNA 인터컬레이터, 광화학적 활성기, 열화학적 활성기, 킬레이팅기, 리포터기, 및 리간드로 이루어진 군으로부터 선택되는데, 여기서 아릴 및 헤테로아릴은 임의 치환될 수 있고 여기서 2개의 제미날 치환기 Ra 및 Rb는 함께 임의 치환된 메틸렌 (=CH2)을 나타내며; 및 RH는 수소 및 C1 -4-알킬로부터 선택된다. 몇몇 구체예에서 Ra, Rb Rc, Rd 및 Re는 임의로 독립적으로, 수소 및 C1 -6 알킬로부터 선택되며, 예컨대 메틸이다. 모든 키랄 중심에서, 비대칭 기들은 R 또는 S 배향으로 존재할 수 있으며, 예컨대, 2개의 예시적인 입체화학 이성체로서 다음과 같이 도시될 수 있는 베타-D 및 알파-L 이소형을 들 수 있다:
Figure pct00022
LNA 유닛의 특별한 구체예로 다음을 들 수 있다:
Figure pct00023
"티오-LNA"라는 용어는 상기 일반 화학식 중의 Y가 S 또는 -CH2-S-로부터 선택되는 것인 잠금 뉴클레오타이드를 포함한다. 티오-LNA는 베타-D 및 알파-L- 배열의 두가지 모두로 존재할 수 있다.
"아미노-LNA"라는 용어는 상기 일반 화학식 중의 Y가 -N(H)-, N(R)-, CH2-N(H)-, 및 -CH2-N(R)-로부터 선택되는 것이고 여기서 R은 수소 및 C1 -4-알킬로부터 선택되는 것인 잠금 뉴클레오타이드를 포함하는 것이다. 아미노-LNA는 베타-D 및 알파-L- 배열의 두가지 모두로 존재할 수 있다.
"옥시-LNA"라는 용어는 상기 일반 화학식 중의 Y가 -O-를 나타내는 것인 잠금 뉴클레오타이드를 포함한다. 옥시-LNA는 베타-D 및 알파-L- 배열의 두가지 모두로 존재할 수 있다.
"ENA"라는 용어는 상기 일반 화학식 중의 Y가 -CH2-O- (여기서 -CH2-O-의 산소 원자는 염기 B에 상대적으로 2'-위치에 결합되어 있음)인 잠금 뉴클레오타이드를 포함한다. Re는 수소 또는 메틸이다.
몇몇 예시적인 구체예에서 LNA는 베타-D-옥시-LNA, 알파-L-옥시-LNA, 베타-D-아미노-LNA 및 베타-D-티오-LNA로부터 선택되며, 특히 베타-D-옥시-LNA이다.
뉴클레오타이드간 결합 ( Internucleotide Linkages )
본 명세서에 설명되니 올리고머들의 모노머들은 결합기(linkage groups)를 통해 함께 커플링된다. 적절하게는, 각각의 모노머는 결합기를 경유하여 3' 인접 모노머에 결합된다.
당업자라면 본 발명의 문맥 상, 올리고머의 한쪽 말단의 5' 모노머가 5' 말단기를 포함하건 포함하지 않건 간에, 5' 결합기를 포함하지 않는다는 것을 이해할 것이다.
"결합기(linkage group)" 또는 "뉴클레오타이드간 결합"이라는 용어는 2개의 뉴클레오타이드들을 함께 공유적으로 커플링시킬 수 있는 기를 의미한다. 이것의 특별하고도 바람직한 예로는 포스페이트기 및 포스포티오에이트기를 들 수 있다.
본 발명의 올리고머의 뉴클레오타이드 또는 그의 연속적인 뉴클레오타이드 서열은 결합기를 통해 함께 커플링된다. 적절하게는 각각의 뉴클레오타이드는 결합기를 경유하여 3' 인접 뉴클레오타이드에 결합된다.
적절한 뉴클레오타이드간 결합들로는 WO2007/031091에 설명된 것들, 예컨대 WO2007/031091의 34 페이지의 첫번째 문단에 수록된 것들을 들 수 있다 (본 발명에 참조 병합됨).
몇몇 구체예에서, 뉴클레오타이드간 결합을 그의 정상적인 포스포디에스테르로부터 뉴클리아제 공격에 보다 내성이 있는 것들, 예컨대 포스포로티오에이트 또는 보라노포스페이트로 변형시키는 것이 바람직하다.
본 명세서에 개시된 바와 같은 적절한 함황(S) 뉴클레오타이드간 결합이 바람직할 수 있다. 포스포로티오에이트 뉴클레오타이드간 결합 역시도 바람직하다.
예컨대 상기 언급된 구체예들과 같은 몇몇 구체예에서, 적절하고 특별히 언급되지 않은 경우, 나머지 모든 결합기들은 포스포디에스테르 또는 포스포로티오에이트, 또는 이들의 혼합물을 나타낸다.
몇몇 구체예에서 모든 뉴클레오타이드간 결합기들은 포스포로티오에이트이다.
컨쥬게이트( Conjugates )
본 명세서에서 "컨쥬게이트"라는 용어는 1 이상의 비뉴클레오타이드 또는 비폴리뉴클레오타이드 부분에 대한, 본 명세서에 설명된 바와 같은 올리고머의 공유 결합("컨쥬게이션")에 의해 형성되는 이종 분자(heterogenous molecule)를 가리키는 것이다. 비뉴클레오타이드 또는 비폴리뉴클레오타이드 부분의 예로는 단백질, 지방산 사슬, 당 잔기, 당단백질, 폴리머 또는 이들의 조합을 비롯한 거대분자 물질을 들 수 있다. 일반적으로 단백질은 표적 단백질에 대한 항체일 수 있다. 일반적인 폴리머는 폴리에틸렌 글리콜일 수 있다.
따라서, 다양한 구체예에서, 본 발명의 올리고머는 일반적으로 뉴클레오타이드의 연속 서열로 이루어진 폴리뉴클레오타이드 영역과, 추가적으로 비뉴클레오타이드 영역 두가지 모두를 포함할 수 있다. 연속 뉴클레오타이드 서열로 이루어진 본 발명의 올리고머와 관련한 설명에서, 이 화합물은 컨쥬게이트 성분과 같은 비뉴클레오타이드 성분을 포함할 수도 있다.
본 발명의 다양한 구체예에서, 올리고머 화합물은 리간드/컨쥬게이트에 결합되고 이들은 예컨대 올리고머 화합물의 세포 흡수를 증가시키는데 이용될 수 있다. WO2007/031091에는 적절한 리간드와 컨쥬게이트가 개시되어 있으며 이 문헌의 내용 전체는 본 발명에 참조 병합되었다.
본 발명은 또한 본 명세서에 설명된 바와 같은 화합물, 및 상기 화합물에 공유결합된 적어도 1종의 비뉴클레오타이드 또는 비폴리뉴클레오타이드 부분을 포함하는 컨쥬게이트를 제공한다. 따라서, 본 발명의 화합물이 본 명세서에 개시된 바와 같은 특정 핵산 또는 뉴클레오타이드 서열로 구성된 다양한 구체예에서, 이 화합물은 상기 화합물에 공유 결합된 적어도 1종의 비뉴클레오타이드 또는 비폴리뉴클레오타이드 부분 (예컨대 1 이상의 뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유사체를 포함하지 않음)을 포함할 수도 있다.
컨쥬게이션(컨쥬게이트 부분에 대한 컨쥬게이션)은 본 발명의 올리고머의 활성, 세포 분포 및 세포 흡수를 향상시킬 수 있다. 이러한 부분의 비제한적인 예로는 항체, 폴리펩타이드, 지질 부분 예컨대 콜레스테롤 부분, 콜산, 티오에테르, 예컨대 헥실-s-트리틸티올, 티오콜레스테롤, 지방족 사슬, 예컨대 도데칸디올 또는 운데실 잔기, 인지질, 예컨대 디-헥사데실-rac-글리세롤 또는 트리에틸암모늄 1,2-디-o-헥사데실-rac-글리세로-3-h-포스포네이트, 폴리아민 또는 폴리에틸렌 글리콜 사슬, 아다만탄 아세트산, 팔미틸 부분, 옥타데실아민 또는 헥실아미노-카르보닐-옥시콜레스테롤 부분을 들 수 있다.
본 발명의 올리고머들은 또한 활성 물질, 예컨대, 아스피린, 이부프로펜, 설파제, 항당뇨병제, 항균제 또는 항생제에 컨쥬게이트될 수도 있다.
특정 구체예에서 컨쥬게이트된 부분은 스테롤, 예컨대 콜레스테롤이다.
다양한 구체예에서, 컨쥬게이트된 부분은 양하전된 폴리머, 예컨대 길이가 1-50, 예컨대 2-20 예컨대 3-10 아미노산 잔기인 양하전된 펩타이드, 및/또는 폴리알킬렌 옥사이드 예컨대 폴리에틸렌글리콜(PEG) 또는 폴리프로필렌 글리콜(WO 2008/034123 참조, 본 발명에 참조병합됨)을 포함하거나 이들로 구성된 것일 수 있다. 양하전된 적절한 폴리머, 예컨대 폴리알킬렌 옥사이드는 링커 예컨대 WO 2008/034123에 설명된 방출가능한 링커와 같은 링커를 경유하여 본 발명의 올리고머에 결합될 수 있다.
일례로서, 다음의 컨쥬게이트 부분을 본 발명의 컨쥬게이트에 이용할 수 있다:
Figure pct00024
활성화된 올리고머
본 명세서에서 "활성화된 올리고머(activated oligomer)"라는 용어는 1 이상의 컨쥬게이트된 부분, 즉 그 자체로 핵산 또는 모노머가 아니면서 본 명세서에 설명된 컨쥬게이트를 형성하는 부분에 대한 올리고머의 공유결합을 허용하는 적어도 1개의 관능성 부분에 공유경합된(즉 관능화된) 올리고머를 가리킨다. 일반적으로, 관능성 부분은 예컨대 아데닌 염기의 엑소시클릭 NH2기 또는 3'-히드록시기, 좋기로는 친수성인 스페이서 및 컨쥬게이트된 부분에 결합할 수 있는 말단기 (예컨대 아미노, 설프히드릴 또는 히드록실기)를 경유하여 올리고머에 공유결합할 수 있는 화학기를 포함한다. 몇몇 구체예에서, 이 말단기는 보호된 것이 아니며, 예컨대 NH2 기이다. 또 다른 구체예에서, 말단기는 보호된 것이며 예컨대 "Protective Groups in Organic Synthesis", Theodora W Greene 및 Peter G M Wuts, 3rd edition (John Wiley & Sons, 1999)에 설명된 적절한 보호기이면 어느 것이든 무방하다. 적절한 히드록실 보호기의 예로는 에스테르 예컨대 아세테이트 에스테르, 아르알킬기 예컨대 벤질, 디페밀메틸 또는 트리페닐메틸 및 테트라히드로피라닐을 들 수 있다. 적절한 아미노 보호기의 예로는 벤질, 알파-메틸벤질, 디페닐메틸, 트리페닐메틸, 벤질옥시카르보닐, 3차-부톡시카르보닐, 및 아실기, 예컨대 트리클로로아세틸 또는 트리플루오로아세틸을 들 수 있다. 몇몇 구체예에서, 관능성 부분은 자체 분해성이다. 또 다른 구체예에서, 관능성 부분은 생물분해성이다. 예컨대, 본 발명에 그 내용 전부가 참조 병합된 미국특허 No. 7,087,229 참조.
몇몇 구체예에서, 본 발명의 올리고머들은 그 올리고머의 5' 말단에 대한 컨쥬게이트된 부분의 공유결합을 허용하기 위해 5' 말단이 관능화된다. 다른 구체예에서, 본 발명의 올리고머들은 3' 말단이 관능화될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 올리고머는 백본을 따라 또는 헤테로시클릭 염기 부분에서 관능화될 수 있다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 올리고머는 5' 말단, 3' 말단, 백본 및 염기로부터 독립적으로 선택된 하나 보다 많은 위치에서 관능화될 수 있다.
몇몇 구체예에서, 본 발명의 활성화된 올리고머는 합성 중에 관능성 부분에 공유결합되는 1 이상의 모노머를 병합시킴으로써 합성된다. 다른 구체예에서, 본 발명의 활성화 올리고머는 관능화된 적이 없는 모노머와 함께 합성되며 올리고머는 합성 완료시 관능화된다. 몇몇 구체예에서, 올리고머는 아미노알킬 링커를 함유하는 힌더드 에스테르에 의해 관능화되며 여기서 알킬 부분은 화학식 (CH2)w을 갖는 것으로서 여기서 w는 1 내지 10의 정수, 좋기로는 약 6이고 알킬아미노기의 알킬 부분은 직쇄 또는 분지쇄이며 관능기는 에스테르기(-O-C(O)-(CH2)wNH)를 통해 올리고머에 결합된다.
또 다른 구체예에서, 올리고머는 에스테르 (CH2)w-설프히드릴 (SH) 링커를 함유하는 힌더드 에스테르에 의해 관능화되며, 여기서 w는 1 내지 10의 정수, 좋기로는 약 6이고 알칼아미노기의 알킬 부분은 직쇄 또는 분지쇄이며 올리고머에 결합된 관능기는 에스테르기 (-O-C(O)-(CH2)wSH)를 통해 올리고머에 결합된다.
몇몇 구체예에서, 설프히드릴-활성화된 올리고뉴클레오타이드들은 폴리머 부분 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 또는 펩타이드과 컨쥬게이션된다(디설파이드 결합 형성에 의함).
전술한 바와 같은 힌더드 에스테르를 함유하는 활성화 올리고머는 여하한 공지기술에 의해 합성될 수 있으며, 특히, PCT 공개번호 WO 2008/034122에 설명된 방법 및 그 실시예란에 설명된 방법에 의해 합성될 수 있다. 상기 문헌은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 병합되었다.
또 다른 구체예에서, 본 발명의 올리고머는 미국특허 Nos. 4,962,029 및 4,914,210에 실제로 설명된 바와 같은 관능화 시약을 이용하여, 즉 친수성 스페이서 사슬을 통해 반대쪽 말단에 결합된 포스포라미다이트를 한쪽 말단에 갖는 실질적으로 선형인 시약으로서 보호되거나 보호되지 않은 설프히드릴, 아미노 또는 히드록실기를 갖는 시약에 의해 설프히드릴, 아미노 또는 히드록실기를 도입시킴으로써 관능화된다. 이러한 시약은 주로 올리고머의 히드록실기와 반응한다. 몇몇 구체예에서, 이러한 활성화된 올리고머들은 그 올리고머의 5'- 히드록실기에 커플링된 관능화 시약을 갖는다. 다른 구체예에서, 활성화된 올리고머들은 3'-히드록실기에 커플링된 관능화 시약을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 활성화된 올리고머들은 올리고머의 백본 상의 히드록실기에 커플링된 관능화 시약을 갖는다. 또 다른 구체예에서, 본 발명의 올리고머는 미국특허 Nos. 4,962,029 및 4,914,210에 설명된 바와 같은 두개 이상의 관능화 시약에 의해 관능화되며 상기 문헌들은 그 내용 전체가 본 발명에 참조 병합된다. 이러한 관능화 시약의 합성법 및 이들을 모노머 또는 올리고머에 병합시키는 방법은 미국특허 Nos. 4,962,029 및 4,914,210에 설명되어 있다.
몇몇 구체예에서, 고체상에 결합된 올리고머의 5'-말단을 디에닐 포스포라미다이트 유도체로 관능화시킨 다음, 탈보호된 올리고머를, 딜스-알더 시클로 부가반응을 통해, 예컨대 아미노산이나 펩타이드와 컨쥬게이션시킨다.
다양한 구체예에서, 2'-카르바메이트 치환된 당 또는 2'-(O-펜틸-N-프탈이미도)-데옥시리보스 당과 같은 2'-당 변형된 모노머를 올리고머에 병합시킴으로 써, 컨쥬게이트된 부분을 올리고머의 당에 공유결합시키는 것이 쉬워진다. 또 다른 구체예에서, 예컨대, 5'-디메톡시트리틸-2'-O-(e-프탈이미딜아미노펜틸)-2'-데옥시아데노신-3'-- N,N-디이소프로필-시아노에톡시 포스포라미다이트와 같은 시약을 이용하여 1 이상의 모노머의 2'-위치에서 아미노-함유 링커를 갖는 올리고머를 제조한다. 예컨대, Manoharan, 등, Tetrahedron Letters, 1991, 34, 7171.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 본 발명의 올리고머는 N6 퓨린 아미노기 상에, 구아닌의 엑소시클릭 N2 상에 또는, 시토신의 N4 또는 5 위치 상 등과 같이, 핵염기 상에 아민-함유 관능성 부분을 가질 수 있다. 다양한 구체예에서, 이러한 관능화는 올리고머 합성시 이미 관능화된 시판 시약을 이용하여 달성할 수도 있다.
몇몇 관능성 부분은 시판되고 있으며 예를 들어, 헤테로이관능성 결합 부분(linking moieties) 및 호모이관능성 결합 부분은 Pierce Co. (Rockford, Ill.)가 판매하고 있다. 기타 시판되는 결합기로는 5'-아미노-Modifier C6 및 3'-아미노-Modifier 시약을 들 수 있고 이들 두가지 모두 Glen Research Corporation (Sterling, Va.)로부터 구입할 수 있다. 5'-아미노-Modifier C6은 또한 ABI (Applied Biosystems Inc., Foster City, Calif.)가 아미노링크-2로서 시판하고 있고, 3'-아미노-Modifier 역시 Clontech Laboratories Inc. (Palo Alto, Calif.)로부터 구입가능하다.
조성물
본 발명의 올리고머는 의약 포뮬레이션 및 의약 조성물에 이용될 수도 있다. 적절하게는, 이러한 조성물은 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체, 염 또는 아쥬반트를 포함한다. PCT/DK2006/000512는 적절하고도 바람직한 약학적으로 허용가능한 희석제, 담체 및 아쥬반트를 개시하고 있으며 - 이들 모두 본 발명에 참조 병합되었다. 적절한 투여량, 포뮬레이션, 투여경로, 조성물, 투여 제형, 다른 치료제와의 조합, 전구약물 포뮬레이션 역시 본 발명에 참조 병합된 PCT/DK2006/000512에 개시되어 있다.
추가적인 구체예
1. HCV에 감염된 대상자에 있어서 C형 간염 (HCV) 감염을 치료하는 방법으로서 HCV에 감염된 상기 대상자에게 유효량의 miR-122 저해제 및 유효량의 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제를 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
2. 구체예 1에 있어서, 상기 miR-122 저해제는 miR-122의 소분자 저해제 및 안티센스 올리고머로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
3. 구체예 1 또는 2에 있어서, miR-122 저해제는 hsa-miR-122 서열 (SEQ ID NO 1) across the entire length of the 올리고뉴클레오타이드 전장에 걸치 성숙한 hsa-miR-122 서열 (SEQ ID NO 1)에 완전히 상보적인 안티센스 올리고머인 것인 방법.
4. 구체예 3에 있어서, 안티센스 올리고머는 믹스머 또는 토탈머인 것인 방법.
5. 구체예 2-4 중 어느 하나에 있어서, 올리고머는 7-18 연속 뉴클레오타이드의 길이를 갖는 것인 방법.
6. 구체예 2-5 중 어느 하나에 있어서, 올리고머는 비자연발생적 뉴클레오타이드 또는 DNA 또는 RNA 이외의 뉴클레오타이드를 포함하는 것인 방법.
7. 구체예 2-6 중 어느 하나에 있어서, 올리고머는 뉴클레오타이드 유사체들을 포함하는 것인 방법.
8. 구체예 7에 있어서, 뉴클레오타이드 유사체들은 당 변형된 뉴클레오타이드, 예컨대 임의로, 독립적으로, : 잠금 핵산 (LNA) 유닛; 2'-O-알킬-RNA 유닛, 2'-OMe-RNA 유닛, 2'-아미노-DNA 유닛, 임의 치환된 헥시톨 핵산 유닛, 및 2'-플루오로-DNA 유닛으로 이루어진 군으로부터 선택된 당 변형된 뉴클레오타이드인 것인 방법.
9. 구체예 8에 있어서, 뉴클레오타이드 유사체는 LNA인 것인 방법.
10. 구체예 1-9 중 어느 하나에 있어서, 기본적으로 RNaseH를 리크루트할 수 없는 것인 방법..
11. 구체예 1-9 중 어느 하나에 있어서, 믹스머 또는 토탈머인 방법.
12. 구체예 1-11 중 어느 하나에 있어서, 길이가 7, 8, 9 또는 10 핵염기인 것인 방법.
13. 구체예 1-11 중 어느 하나에 있어서, 길이가 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16 핵염기인 것인 방법.
14. 구체예 1-13 중 어느 하나에 있어서, DNA 및 뉴클레오타이드 유사체 핵염기를 포함하거나, 또는 뉴클레오타이드 유사체 핵염기만을 포함하는 것인 방법.
15. 구체예 1-14 중 어느 하나에 있어서, 4보다 많은 또는 3 보다 많은 또는 2 보다 많은 연속 DNA 뉴클레오타이드로 된 영역을 포함하지 않는 것인 방법..
16. 구체예 1-15 중 어느 하나에 있어서, 올리고머의 모든 뉴클레오타이드는 뉴클레오타이드 유사체인 것인 방법.
17. 구체예 1-16 중 어느 하나에 있어서, 올리고머의 모든 뉴클레오타이드는 LNA 뉴클레오타이드인 것인 방법.
18. 구체예 1-17 중 어느 하나에 있어서, 뉴클레오사이드간 결합은 임의, 독립적으로, 포스포로티오에이트 및 포스포디에스테르로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
19. 구체예 1-18 중 어느 하나에 있어서, 올리고머는 적어도 하나의 포스포로티오에티트 결합을 포함하거나 또는 모든 뉴클레오사이드간 결합이 포스포로티오에이트 결합인 것인 방법.
20. 구체예 1-19 중 어느 하나에 있어서, 올리고머의 연속 뉴클레오타이드 서열은 본 명세서에 수록된 서열들로부터 선택되는 것인 방법.
21. 구체예 1-19 중 어느 하나에 있어서, 올리고머는 다음 식으로 구성되거나 다음 식을 포함하는 것인 방법:
Figure pct00025
식 중; 소문자는 DNA 유닛을 나타내고, 대문자는 LNA 유닛을 나타내며, m C 는 5-메틸시토신 LNA, 아래첨자 s는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 결합을 나타내고, 여기서 LNA 유닛은 LNA 잔기 뒤에 윗첨자 o 가 붙는 것으로 표시되는 바와 같이, 베타-D-옥시인 것인 방법.
22. 구체예 1-21 중 어느 하나에 있어서, HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제는 예컨대 GS-6620, IDX184, PSI-7977, PSI-938, RG7128, 및 TMC649128로 이루어진 군으로부터 선택된 NI와 같은 뉴클리아제 저해제(NI) 및 ABT-072, ABT-333, ANA598, BI 207127, BMS-791325, GS-9190 (테고부비어), IDX375, MK-328, VX-222, VX-916, 및 필리부비어로 이루어진 군으로부터 선택되는 NNI와 같은 비뉴클리아제 저해제(NNI) 또는 NI와 NNI 두가지 모두의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
23. 구체예 1-21 중 어느 하나에 있어서, HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제는 2'-C-메틸시티딘 및/또는 VX-222인 것인 방법.
24. 구체예 1-23 중 어느 하나에 있어서, 치료는 인터페론을 이용하지 않는 것 (interferon free)인 방법.
25. 구체예 1-23 중 어느 하나에 있어서, 치료는 인터페론 및 임의로 리바비린 치료와 조합 실시되는 것인 방법.
26. 구체예 1-25 중 어느 하나에 있어서, miR-122 저해제의 복수 투여량(multiple doses) 및 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제의 복수 투여량, 및 임의로 리바비린이 1년 미만의 치료 기간 동안 투여되는 것인 방법.
27. 구체예 26에 있어서, 치료 기간은 48 주일 미만, 예컨대 24주일 미만 또는 13주일 미만인 것인 방법.
28. 구체예 1-27 중 어느 하나에 있어서, 대상자는 인터페론-비반응자인 방법.
29. 구체예 1-28 중 어느 하나에 있어서, HCV는 유전형 1, 2, 3, 4, 5, 및 6으로부터 선택되며, 예컨대 유전형 1a 및/또는 유전형 1b인 것인 방법.
30. 구체예 1-29 중 어느 하나에 있어서, 대상자는 만성 C형 간염(CHC)에 걸린 것인 방법.
31. 구체예 1-30 중 어느 하나에 있어서, 대상자는 HIV와 HCV 두 가지 모두에 공동 감염된 것인 방법.
32. 구체예 1-31 중 어느 하나에 있어서, 대상자는 인터페론 비반응자, 부분 반응자 (partial responder), 재발 반응자(relapse responder) 또는 무효 반응자(null responder)인 것인 방법.
33. 구체예 1-32 중 어느 하나에 있어서, miR-122 저해제는 대상자에게 약 0.1mg/kg 및 10mg/kg의 투여량으로 투여되는 것인 방법.
34. 구체예 1-33 중 어느 하나에 있어서, miR-122 저해제는 2 이상의 별도 투여량으로 투여되고 miR-122 저해제의 연속적인 투여 사이의 시간 간격은 1일, 1주일 또는 1개월이거나 또는 1일과 1개월 사이의 시간 간격인 것인 방법.
35. 세포에 있어서 HCV 감염 수준을 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 HCV에 감염된 세포를 miR-122 저해제 및 적어도 1종의 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제와 접촉시키는 것을 포함하는 것인 방법.
36. C형 간염 치료용 약제 제조를 위한 miR-122 저해제의 용도로서, 상기 약제는 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제와 조합적으로 사용되기 위한 것인 miR-122 저해제의 용도.
37. C형 간염의 치료시 HCV NS5B RNA 의존성 RNA 폴리머라제 저해제와 조합적으로 사용되기 위한 miR-122 저해제.
도 1: 임의로 화합물 3 및 임의로 4의 존재 하에 또는 화합물 4의 부재 하에, 화합물 1 또는 화합물 2를 이용한 임의의 예비 치료 기간 동안의 몇몇 조합 치료법의 개략도. 조합 예비 치료 기간이라 함은 화합물 1이 화합물 2와 조합 사용되고, 임의로 추가 약물, 화합물 3 및 임의로 화합물 4와 조합 사용되는 경우의 기간을 말한다. 화합물 3 및 임의로 화합물 4와의 임의의 치료후 기간이 있다.
도 2: 배양된 세포들을 G418 존재하에 배양하고 표시 농도의 SPC4729, SPC3649, 또는 텔라프레비어 또는 세포 배양 배지 단독과 G418과 함께 28일 동안 크리스탈 바이올렛으로 염색하였다.
실시예
실시예 1
물질:
NI: 2'-C-메틸시티딘 (발로피시타빈(NM283)) (Idenix 제품)
NNI: VX-222 (Vertex 제품)
미라버센 (SPC3649) 단독에 대한 EC50 (효능) 및 CC50 (세포 독성) 값을 검사하였다. 미라버센의 EC50 및 CC50 값을 하기 표에 나타내었다.
Figure pct00026
승인된 그리고 실험적인 항HCV 치료제 (예컨대 NM283, 2'-C-메틸시타빈, 및/또는 VX-222) (또는 기타 NS5B 폴리머라제 저해제)와 조합 사용시의 비형질감염된 항mirR 올리고뉴클레오타이드의 항바이러스 효능 및 세포독성을 리포터 세포주 Huh-luc/neo-ET을 이용하여 탐지하였다. 이 세포주는 반딧불이의 루시페라제 유전자-유비퀴틴-네오마이신 포스포트랜스페라제 융합 단백질 및 ET 조직 배양 순응형 돌연변이(E1202G, T1208I, 및 K1846T)를 함유하는 EMCV IRES 구동NS3-5B HCV 코딩 서열을 함유하는 지속 복제형 I389lucubi-neo/NS3-3'/ET 레플리콘을 생성한다. 비형질감염된 항miR 올리고뉴클레오타이드 (계산된 EC50을 브라켓팅)의 8가지 희석물을 각 대조군 화합물(계산된 EC50을 브라켓팅) 각각의 5가지 희석물과 함께 3개 플레이트로 된 이중 세트에 대해 3회씩 평가하였다. 플레이트 1 세트는 세포 독성 측정에 사용하고 또 다른 플레이트 세트는 항바이러스 효능 측정에 이용한다. 효능과 독성 결과를 반딧불이 루시페라제 활성 및 XTT 염료 감소 각각을 이용하여 정량하고 분석 결과를 Prichard 및 Shipman MacSynergy II 소프트웨어 프로그램에 도입한다. MacSynery II 분석은 2개 (또는 그 이상) 화합물을 단독으로 사용한 경우의 투여량 반응을 계산한 다음 이 화합물들을 개별적인 투여량 반응 곡선에 기초하여 함께 사용한 경우의 항바이러스 억제 또는 독성의 예상된 부가 수준을 계산하는 것을 포함한다. 각각의 농도 데이터 포인트에서의 활성의 예상 수준을 검사에서 실험적으로 측정된 항바이러스 활성과 비교한다. 예상 활성을 실현 활성으로부터 빼서 음성, 제로 또는 양성 값을 구한다. 이들 값들을 3차원 데이터로 표시하여 플롯하고 그 결과를 2인자 값, 즉 예상 활성 수준을 넘어서는(상승 볼륨) 및 예상 활성 수준을 밑도는(길항 볼륨)의 조합 평균값으로서 나타낸다. 시험 화합물과 대조군 물질 각 쌍에 대해 2회 이상 조합 분석을 실시하였다. 2'-C-메틸시타빈 및 VX-222의 이 실험 결과를 이하의 표에 나타내었다:
Figure pct00027
실시예 2: HCV 유전형 l b 레플리콘 세포에서 인터페론- a2b , 리바비린, 2'-메틸시티딘, VX-222, BMS-790052, 및 텔라프레비어와 조합된 비형질감염 SPC3649 항miR 올리고뉴클레오타이드의 항 HCV 평가.
이 실시예는 항HCV 약물 및 실험 화합물과 조합된 SPC3649 (미라버센)의 시험관내 평가에 기초하였다. SPC3649를 다양한 항바이러스 활성을 나타내는 6종의 약물/화합물, 즉 인터페론, 리바비린, NS3/4A 프로테아제 저해제 텔라프레비어, 뉴클레오사이드 NS5B 저해제 2'-메틸시티딘, 비뉴클레오사이드 NS5B 저해제 VX-222, 및 NS5A 저해제 BMS-790052와 조합하여 평가하였다. 이 조합 항바이러스 분석을, 비시스트론 HCV 유전형 Ib 레플리콘을 함유하는 리포터 세포주 Huh-Iuc/neo-ET를 이용하여 실시하였다. 95% 신뢰 구간에서 MacSynergy II 소프트웨어를 이용하여 조합 데이터를 분석하였다. 시험관내 조합 분석을 설계하여 2종의 화합물들의 항바이러스 상호반응을 규정하고 이들의 상호반응이 상승적인지 아니면 길항적인지를 탐지한다.
인터페론-a2b (lFN-a2b)를 R&D Systems (Minneapolis, MN)으로 구입하였다. 리바비린 (RBV)은 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO)로부터 구입하였다. 텔라프레비어, VX-222, 및 BMS-790052는 Selleck Chemicals (Houston, TX)로부터 구입하였다. 2'메틸- 시티딘 (2-MeC)은 Toronto Research Chemicals (North York, Ontario, Canada)로부터 구입하였다.
세포 준비: 리포터 세포주 Huh-Iuc/neo-ET를 랄프 바텐슐라거 박사(Dr. Ralf BartenschlagerL: Department of Molecular Virology, Hygiene Institute, University of Heidelberg, Germany] by ImQuest BioSciences로부터 입수하였다. 이 세포주는 반딧불이의 루시페라제 유전자-유비퀴틴-네오마이신 포스포트랜스페라제 융합 단백질 및 ET 조직 배양 순응형 돌연변이(E1202G, T1208I, 및 K1846T)를 함유하는 EMCV IRES 구동NS3-5B HCV 코딩 서열을 함유하는 지속 복제형 1389Iuc-ubi-neo/NS3-3'lET 레플리콘을 생성한다. Huh-luc/neo-ET의 보존 배양체(stock culture)를, 10% FBS, 2mM 글루타민, 페니실린 (100 lU/mL)/스트렙토마이신(100 f.lg/mL) 및 IX 비필수 아미노산 플러스 I mg/ml G418이 보강된 DMEM에서 배양시킴으로써 확장시켰다. 도말하기 전에, 세포들을 1:4 스플릿시키고 동일한 배지 플러스 250 f.lg/mL G418에서 2 세대 계대배양시켰다. 세포들을 트립신으로 처리하고 트리판 블루로 염색하여 계수한 다음 웰 당 85 f.IL의 체적으로 웰 당 5.0 x 103 세포의 세포 배양 밀도로 96-웰 조직 배양 플레이트에 접종한 다음 5% CO2의 환경에서 24 시간 동안 3ic로 인큐베이션시켰다. 화합물 조합 각각에 대해 6개 플레이트를 이용하여 조합 효능(EC50) 및 세포독성(TC50)을 이용하여 분석하였다 (3개 플레이트 각각에 대하여 효능과 독성 측정). 24 시간 인큐베이션한 후, G418 없이 세포 배양 배지에서 SPC3649의 2배 연속 희석액 8종을 준비하여 (웰 중의 최종 최고 시험 농도는 1.20μM 내지 2.40μM) 세포에 첨가한 다음 G418 없는 세포 배양 배지 중의 대조군 화합물의 2배 또는 5배 연속 희석액 5종을 준비하여 세포에 첨가하였다. 대조군 화합물 각각에 대한 웰의 최종 고시험농도, 희석 계획 및 농도 범위를 표 A에 나타내었다. 각 플레이트 당 6개 웰에 미처리 대조군으로서 배지 단독을 1 밀리리터 당 10.0, 2.00, 0.400, 0.0800, 0.0160, 및 0.0032 유닛의 최종농도 (U/ml)로 3중 웰에 첨가하여, 항바이러스 효능을 n이한 양성 단일 화합물 대조군으로서 하였다. 세포들을 5% CO2 분위기 하 37℃에서 48 시간 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후, TXX 염색을 이용하여 루시페라제 리포터 활성 및 세포 독성을 측정함으로써, 플레이트들을 항HCV 활성에 대해 평가하였다.
Figure pct00028
표 A: 항HCV 조합 분석에 사용된 시험 화합물들의 농도.
바이러스 복제의 측정: 제조업체 지침(Perkin Elmer, Shelton, CT)에 따라 브라이트라이트 플러스 발광 리포터 유전자 키트를 이용하여 루시페라제 활성에 의해 레플리콘 분석 시스템으로부터 HCV 복제를 측정하였다. 간단히 설명하면, 브라이트라이트 플러스 동결건조된 기질의 바이알 1개를 10 mL의 브라이트라이트 재조성 완충액에 용해시키고 거꾸로 흔들면서 가볍게 혼합하였다. 실온에서 5분간 인큐베이션한 후, 브라이트라이트 플러스 시약을 웰 당 100 μl의 농도로 96 웰 플레이트에 첨가하였다. 웰 내용물을 화이트 96-웰 플레이트로 옮기고 발광량을 Wallac 1450 Microbeta Trilux 액체 섬광 계수기를 이용하여 15분 내에 측정하였다. 조합 분석 데이터를 Prichard and Shipman (Antiviral Research 14:181-206 [1990]) MacSynergy II 소프트웨어 템플릿에 도입하여 후술하는 바와 같이 분석하였다. 단일 화합물 IFN-a2b 항바이러스 대조군에 대한 데이터를 맞춤형 Microsoft Excel 워크북에 도입하여 50% 바이러스 저해 농도(EC50)를 구하였다.
세포독성: 처리된 세포들로부터 얻은 세포 배양 단층(monolayer)을 테트라졸륨 염료 XTT로 염색하여 화합물들 존재 하에 인큐베이션된 Huh-Iuc/neo-ET 리포터 세포주의 세포 생존성(cellular viability)을 평가하였다. XTT-테트라졸륨은 대사 활성 세포의 미토콘드리아 효소에 의해 대사되어 가용성 포르마잔 생성물로 변하므로, 시험 물질에 의한 세포 사멸의 신속한 정량 분석이 가능하다. XTT 용액을 PBS 중 1 mg/ml의 스톡으로서 새로 제조하였다. 페나진 메토설페이트(PMS) 용액을 PBS 중 0.15 mg/ml로 제조하고 사용전까지 -20℃에서 보관하였다. 1 ml의 XTT 용액 당 40 ilL의 PMS를 첨가함으로써 사용 직전에 XTT/PMS 용액을 만들었다. 플레이트의 각 웰에 50 마이크로리터의 XTT/PMS를 첨가하고, 접착 플레이트 씰러를 이용하여 플레이트를 밀봉한 다음 플레이트들을 5% CO2 분위기 하 37℃에서 4 시간 인큐베이션시켰다. 밀봉된 플레이트들을 수차례 뒤집어서 가용성 포르마잔 샌성물을 혼합한 다음 Molecular Devices Spectramax 384 플러스 플레이트 판독기를 이용하여 450 nm에서 분광학적으로 측정하였다. 분석을 위해, 얻어진 데이터를 SoftMax Pro 5.4.2 소프트웨어로 가공하고 Prichard and Shipman MacSynergy II 소프트웨어 템플레이트에 도입하였다. 단일 화합물 IFNa2b 항바이러스 대조군에 대한 데이터를 맞춤형 Microsoft Excel 워크북에 도입하여 50% 세포독성 농도 (TCso)를 구하였다. 모든 세포독성 값들을 미처리 세포 대조군의 포르마잔 양에 대하여 정규화시키고 배경 비색 대조군으로부터 제하여 정규화시켰다.
데이터 분석: 미가공 데이터를 Wallac 1450 Microbeta Trilux 액체 섬광 계수기로부터 수집하여 Softmax Pro 5.4.2 소프트웨어를 Prichard and Shipman MacSynergy II 소프트웨어 템플릿 (Antiviral Research 14: 181-206 [1990])에 도입하였다. 2종의 화합물들을 단독 시험하였을 때의 활성에 기초하여 약물 조합 효능을 계산한다. 예상된 부가적인 항바이러스 보호값을 각 조합 농도에서 실험적으로 구한 항바이러스 활성으로부터 빼서 양성값(상승 또는 강화), 음성값(길항) 또는 제로(부가)을 얻는다. 조합 분석 결과를 각 조합 농도에서 3차원적으로 제공하여, 부가(additivity) 평면의 위(상승) 또는 아래(길항)의 활성 표면을 생성시킨다. 표면 볼륨을 계산하여 95% 신뢰 구간에서 계산된 상승 볼륨(μM2%)으로서 표현한다. 결과를 중앙값(median value)(± 표준편차) (3회 실험) 또는 개별값(1 또는 2회 실험)으로서 나타내었다.
조합 치료 평가: Huh-Iuc/neoET 세포에서의 HCV 유전형 Ib 레플리콘의 억제에 대하여 SPC3649를 6종의 공지 항HCV 약물들과 조합하여 평가하였다. 실험 설계는 화합물 각각의 2배 또는 5배 연속 희석물의 체크보드 희석 매트릭스를 이용하였다. 화합물들이 개별적으로 사용된 웰 또는 화합물이 첨가되지 않은 웰에 대하여도 분석하였다. 모든 조합에 대한 분석을 대조군 화합물에 대해 1:5 희석 계획을 이용하여 초기에 수행하되, 대조군 화합물의 계산된 EC50값의 2배의 고시험 농도를 이용하였다. 각 화합물 단독에 대한 2 이상의 농도가 투여량 반응 곡선에 부합하고 단일 화합물 곡선이 항바이러스 활성에서 투여량-의존성 반응을 나타낸 것으로 입증된 경우에만, 상기 분석 결과들이 타당한 것으로 판정하였다. 대조군 화합물의 계산된 EC50값의 2배의 고시험 농도를 이용하여 대조군 화합물에 대해 1:2 희석 계획을 이용하여 복제 분석을 실시하였다. 약물-약물 상호반응의 예상 효과의 Bliss Independence 수학적 정의에 기초하여 약물의 이론적인 부가적 상호반응을 계산하는 MacSynergy II 프로그램을 이용하여, 2개 화합물들의 이론적인 부가적 상호반응을 개별 화합물의 투여량-반응 곡선으로부터 구하였다. SPC 3649 및 각각의 항바이러스 화합물들의 조합에 대한 항HCV 효능 및 세포독승 상승 볼륨을 95% 신뢰구간으로 계산하였다. 허용 기준을 만족하는 분석에 대하여, 결과를 중앙값(median: ± 표준편차) (>3회 실험) 또는 개별값 (1 또는 2회 실험)으로서 나타태고 아래의 표 B에 요약하였다.
SPC 3649과 리바비린의 4가지 독립 복제물 중 3가지의 상승 볼륨과 길항 볼륨은 각각 4.2 내지 25.9 μM2% 및 -3.1 내지 -31.8 μM2%의 범위였는데, 이는 부가적 상호반응을 시사하는 것이다. 리바비린과 조합 사용된 SPC 3649는 4회차 실험에서 매우 길항적인 상호반응을 나타내었고 이 때의 길항 볼륨은 -292.6 μM2%이었다. 리바비린과의 SPC 3649과의 전체적인 상호반응은 4가지 복제물에 대하여 각각 4.20 μM2 %and -24.2 μM2%의 중앙 상승 볼륨 및 길항 볼륨을 나타내었다.
Figure pct00029
NS5B 폴리머라제 비뉴클레오사이드 VX-222과 조합된 SPC3649는 4.8 및 0.8μM2%의 상승 볼륨과 -34.4 및 -4.27 μM2%의 길항 볼륨을 나타내었다. NS5A 저해제 BMS790052와 SPC 3649와의 조합에 대한 2회의 복제 분석에 대한 상승 볼륨은 0 및 18.5 μM2% 였고 길항 볼륨은 -25.5 및 -0.1 μM2%였다.
NS3 프로테아제 저해제 텔라프레비어와 SPC 3649-09와의 조합 역시 각각 0.00 μM2% 및 -3.22 μM2%의 중앙 평균 상승 볼륨과 길항 볼륨의 3가지 복제 분석에 대한 양성 상호반응을 나타내었다.
NS5B 폴리머라제 뉴클레오사이드 저해제 2-메틸 시티딘과 조합된 SPC3649는 복제 분석 중 두가지에 대해 양성 상호반응을 나타내었고 3번째 복제에 대해서는 약간 길항적인 상호반응을 나타내었다. SPC 3649 및 2-메틸 시티딘의 조합에 있어서 중앙 상승 볼륨과 길항 볼륨은 각각 0.0 μM2% 및 -27.6 μM2%이었으며 3가지 검증된 분석 복제물의 평균으로부터 양성 상호반응을 나타내었다.
시험관내 세포독성에 대한 약물 조합의 영향 평가 결과 각 약물 단독이나 또는 배합의 경우 세포독성은 거의 또는 전혀 나타나지 않았다.
실시예 3: 야생형 및 약물-내성 HCV 유전형 1b 레플리콘에 대한 미라버센 (SPC3649)의 시험관내 항바이러스 활성.
이 연구의 목적은 Huh 7 세포를 이용하는 일시적 형질감염 분석에 있어서 야생형 HCV 유전형 1b 레플리콘 및 NS3, NS5A 및 NS5B 약물-내성 유전형 1b 레플리콘에 대한 미라버센 (SPC3649)의 시험관내 항바이러스 활성을 평가하는 것이었다.
방법: 미라버센의 시험관내 항바이러스 활성을, Huh 7 세포를 이용하는 일시적 형질감염 분석에서 NS3 프로테아제 (A156T, R155K), NS5B 폴리머라제 (S282T, M423I) 및 NS5A 단백질 (Y93H)의 핵심 아미노산 치환을 포함하도록 구축된 야생형 HCV 유전형 1b 레플리콘 및 HCV 유전형 1b 레플리콘에 대하여 평가하였다. 약물 내성 대조군으로서 5종의 레퍼런스 화합물 (BMS-790052 (NS5A), VX-222 (NS5B), 텔라프레비어 (NS3), BILN-2061(NS3) 및 2'Me-C (NS5B))을 포함시켰다. Huh 7 세포들을 전기영동에 의해 야생형 또는 돌연변이 RNA 구축물로 형질감염시켰다. 화합물 처리 72시간 후 루시페라제 활성을 측정하고 투여량-반응 곡선으로부터 EC50 값을 측정하였다. 돌연변이 HCV 레플리콘의 EC50 대 야생형 HCV 레플리콘의 EC50의 비율로서 폴드 내성을 표현하였다.
결과: 돌연변이를 포함하도록 구축된 HCV 레플리콘들은 시험된 각 약물 군에 뚜렷한 내성을 나타내었다 (표 C) 구체적으로, NS3에서 A156T 및 R155K 아미노산 치환된 HCV 레플리콘들은 프로테아제 저해제 텔라프레비어에 대해 각각 36.1 및 4.6배-내성을 나타내었고; NS5B가 S282T로 치환된 레플리콘은 NS5B 뉴클레오사이드 저해제 2'Me-C에 대해 42.8배-내성을 나타내었으며; NS5B가 M423I로 치환된 레플리콘은 NS5B 비뉴클레오사이드 저해제 VX-222에 대해 4.4배-내성을 나타냈고; NS5A가 Y93H로 치환된 레플리콘은 NS5A 저해제 BMS 790052에 대해 29.9배-내성을 나타내었다. 이와 대조적으로, 미라버센은 시험된 모든 약물-내성 HCV 변이체에 대해 광범위한 활성을 나타내면서 내성 변화는 2배 미만인 것으로 입증되었다.
미라버센의 시험관내 항바이러스 활성을, 일시적 형질감염 분석에서, NS3 프로테아제 (A156T, R155K), NS5B 폴리머라제 (S282T, M423I) 및 NS5A 단백질 (Y93H)의 핵심 아미노산 치환을 포함하도록 구축된 야생형 HCV 유전형 1b 레플리콘 및 HCV 레플리콘을 이용하여 평가하였다. 5종의 레퍼런스 화합물 (BMS-790052 (NS5A), VX-222(NS5B), 텔라프레비어 (NS3), BILN-2061(NS3) 및 2'Me-C (NS5B))를 약물-내성 대조군으로서 포함시켰다. Huh 7 세포들을 전기영동에 의해 야생형 또는 돌연변이 RNA 구축물로 형질감염시켰다. 화합물 처리 72시간 후 루시페라제 활성을 측정하고 투여량-반응 곡선으로부터 EC50 값을 측정하였다. 돌연변이 HCV 레플리콘의 EC50 대 야생형 HCV 레플리콘의 EC50의 비율로서 폴드 내성을 표현하였다. 2회의 개별 실험의 평균값으로서 결과를 나타내었다. 초기 실험 세트에서, 전기영동 24시간 후 화합물을 첨가함으로써 표준 프로토콜을 변경하였다. 표준 프로토콜을 이용하여 실험을 반복하여 다양한 수준의 HCV 복제 적합성을 부여하는 RNA 구축물로 형질감염된 세포에 대한 노출을 최대화시키는 한편 관찰된 실험간 가변성은 감소시켰다. 3차 실험에서 세포들을 야생형 RNA 구축물과 함께 전기영동시키기 전 24시간 동안 미라버센으로 전처리시켜 예비인큐베이션이 미라버센의 항바이러스 활성 증가를 초래하였는지를 탐지하였다.
돌연변이가 포함되도록 구축된 HCV 레플리콘들은 시험된 각각의 약물 클래스에 특이적인 내성을 나타내었다. 구체적으로, NS3에서 A156T 및 R155K 아미노산 치환된 HCV 레플리콘들은 프로테아제 저해제 텔라프레비어에 대해 각각 36.1 및 4.6배-내성을 나타내었고; NS5B가 S282T로 치환된 레플리콘은 NS5B 뉴클레오사이드 저해제 2'Me-C에 대해 42.8배-내성을 나타내었으며; NS5B가 M423I로 치환된 레플리콘은 NS5B 비뉴클레오사이드 저해제 VX-222에 대해 4.4배-내성을 나타냈고; NS5A가 Y93H로 치환된 레플리콘은 NS5A 저해제 BMS 790052에 대해 29.9배-내성을 나타내었다. 이와 대조적으로, 미라버센은 시험된 모든 약물-내성 HCV 변이체에 대해 광범위한 활성을 나타내면서 내성 변화는 2배 미만인 것으로 입증되었다.
Figure pct00030
2회의 실험(개별 값들)으로부터의 감수성에서의 평균 폴드 변화로 결과를 나타내었다; NT = 시험하지 않음;. 이들 연구 수행 중, 일시적 형질감염 분석에 있어서 야생형 HCV에 대한 미라버센의 항바이러스 활성(평균 EC50 36.7 μM;)은 안정한 HCV 세포주에 대해 앞서 보고된 항바이러스 활성(평균 EC50 0.671 μM)과 비교할 때 감소된 것으로 관찰되었다. 미라버센 첨가 시기가 상대적인 항바이러스 활성을 증가시키는지를 알아보기 위해, Huh 7 세포들을 야생형 RNA 구축물과 함께 전기영동하기 24 시간 전에 미라버센과 함께 인큐베이션시켰다. 그러나 세포들을 미라버센과 함께 예비 인큐베이션시켰어도 항바이러스 활성에는 아무 영향이 없었다 (EC50 25.6 μM).
결론: NS3 프로테아제 (A156T, R155K), NS5B 폴리머라제 (S282T, M423I) 및 NS5A 단백질 (Y93H)에 핵심 아미노산 치환을 포함하도록 구축된 HCV 레플리콘들은 시험된 각각의 약물 부류에 대하여 뚜렷한 내성을 갖는 것으로 입증되었다. 이와 대조적으로, 미라버센은 NS3, NS5A 및 NS5B 저해제에 대해 내성을 갖는 HCV 레플리콘에 대해 광범한 항바이러스 활성을 갖는 것으로 입증되었다.
실시예 4: SPC3649 -내성 HCV -1 b 레플리콘 세포들의 선택
이 실시예는 SPC3649 내성 HCV 레플리콘 세포들의 시험관내 선택 결과를 요약한 것이다. G418 및 4가지 독립적인 고정 농도의 SPC3649 또는 NS3 프로테아제 저해제 텔라프레비어의 존재 하, 선택적 압력 하에 리포터 세포주 Huh-luc/ neo-ET를 배양하였다. 대조군 배양체들에는 화합물 부재하 또는 스크램블된 올리고뉴클레오타이드 대조군 SPC4729의 존재 하에 G418 선택 압력 하에 배양된 레플리콘 세포들이 포함되었다. SPC3649의 존재 하의 선택은 세포 팽창률의 감소를 결과시켰지만, 뚜렷한 개별적인 내성 클론 집단을 생성하는데는 실패하였다. 텔라프레비어 존재 하의 선택은 세포 팽창률을 감소시켰으며, 뚜렷한 개별적인 클론 집단이 생성되었다. 화합물 부재하 또는 SPC4729 존재 하의 선택은 세포 팽창률을 감소시키지 않았다.
Figure pct00031
세포 배양 및 분석 설계: 전술한 바와 같이 리포터 세포주 Huh-Iuc/neo-ET를 구입하여 준비하였다. 250 ㎍/ml G418을 함유하는 배양 배지에서 플레이트 당 3 x 105 세포 밀도로 세포들을 10 cm 조직 배양 디쉬에 도말하고, 37℃, 5% C02 분위기에서 24 시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션한지 24시간 후, SPC3649, SPC4729, 또는 텔라프레비어의 희석물들을 750 ㎍/ml G418와 함께 세포 배양 배지(상기)에서 제조하였다. 각 희석물들을 플레이트에 이중 첨가하고 플레이트를 37℃, 5% CO2 분위기에서 인큐베이션하였다. 2개의 부가적인 플레이트에 미처리 대조군으로서, 750 ㎍/ml G418과 함께 세포 배양 배지를 첨가하였다. 최종 SPC3649 농도는 1.00 μM, 2.50 μM, 5.00 μM, 및 10.0 μM (the EC50 농도의 각각 2X, 5X, 10X, 및 20X)였다. 최종 텔라프레비어 농도는 0.600 μM, 1.50 μM, 3.00 μM, 및 6.00 μM (EC50 농도의 각각 2X, 5X, 10X, 및 20X)였다. SPC4729의 최종 농도는 10.0 μM이었다. 28일 동안 또는 배양 디쉬 중 세포 점도(confluence)로 측정시 세포성장률에 관찰가능한 감소가 있을 때까지, 2주일마다 세포들을 1:4 내지 1:3으로 스플릿시켰다. 28일간 계대 후, 디쉬 1 세트를 크리스탈 바이올렛으로 염색시키고 다른 플레이트 세트는 내성 세포 배양체 스톡의 팽창 및 확립에 이용하였다.
결과: Huh-Iuc/neo-ET HCY 유전형 Ib 레플리콘 세포들을 SPC3649 항miR 올리고뉴클레오타이드, 또는 텔라프레비어의 4가지 독립적 고정 농도 존재 또는 부재 하에, 또는 스크램블된 올리고뉴클레오타이드 SPC4729의 1가지 농도의 존재 또는 부재 하에, 조직 배양 플레이트에서 28일 동안 750 ㎍/mL G4I8의 존재하 선택적 압력 하에 배양하였다. 이중 조직 배양 디쉬를 설정하여 각각의 배양 조건으로 유지시켰다. 28일간의 배양 기간 동안 2주에 한번 배지를 갈아주고 세포들을 배지를 갈아주는 때 스플릿시켜 컨플루언트 세포 배양 단층을 유지하였다. 배양 4주일 후, 세포들을 메탄올로 고정하고 크리스탈 바이올렛으로 염색하거나 또는 후속적인 표현형 및 유전형 특징화를 위해 팽창시켰다. 750 ㎍/ml G418 단독의 존재하에 또는 750 ㎍/ml G418과 10.0 μM의 스크램블된 올리고뉴클레오타이드 SPC4729의 존재 하에 배양된 세포들은 신선한 배지에서 1:3 또는 1:4의 비율로 2주마다 스플릿시킬 필요가 있었다 (표 D). 750 ㎍/ml G418 및 SPC3649의 존재 하에 배양된 세포들은 배지 교환 및 계대 동안 세포의 요구되는 희석의 투여량-의존 감소에 의해 나타난 바와 같이 세포팽창률이 감소되었다 (표 E); 그러나, SPC3649 선택의 결과로 뚜렷한 개별적인 내성 클론 집단이 생성되지는 않았다 (도 2). 텔라프레비어 존재 하의 선택은 세포팽창률의 투여량-의존 감소를 일으켰으며 뚜렷한 개별적인 내성 클론 집단을 생성시켰다 (표 F 및 도 2).
Figure pct00032
표 D: G418 단독 또는 G418 플러스 대조군 올리고 SPC4729 존재 하의 세포 계대: 세포 스플릿 비율.
Figure pct00033
표 E: G418 단독 또는 G418 플러스 표시 농도의 SPC3649 존재 하의 세포 계대: 세포 스플릿 비율.
Figure pct00034
N.S. = not split. 이들 날짜에서 배지를 갈아주었지만 세포들은 스플릿되지 않았다.
표 F: G418 단독 또는 G418 플러스 표시 농도의 NS3 프로테아제 저해제인 텔라프레비어의 존재 하의 세포 계대: 세포 스플릿 비율.
실시예 5: HCV 유전형- lb 레플리콘 세포에 있어서 텔라프레비어 또는 스크램블된 올리고뉴클레오타이드 SPC 4729와 조합된 리바비린의 항HCV 평가.
이 실시예는 NS3/4A 프로테아제 저해제 텔라프레비어, 또는 스크램블된 올리고뉴클레오타이드와 조합 사용된 리바비린의 시험관내 평가 결과를 요약한 것이다. 비시스트론 HCV 유전형 Ib 레플리콘을 함유하는 리포터 세포주 Huhluc/ neo-ET를 이용하여 조합 항바이러스 분석을 실시하였다. 95% 신뢰 구간에서 MacSynergy II 소프트웨어를 이용하여 조합 데이터를 분석하였다. 시험관내 조합 분석을 설계하여 2종의 화합물들의 항바이러스 상호반응을 규정하고 이들의 상호반응이 상승정인지 길항적인지를 판단하였다.
리포터 세포주 Huh-Iuc/neo-ET는 앞서 설명된 것처럼 구입 및 준비하였다. 세포들을 트립신으로 처리하고 트리판 블루로 염색하여 계수한 다음, 웰 당 85 ㎕의 부피로 웰 당 5.0 x 103의 세포 배양 밀도로 96-웰 조직 배양 플레이트에 접종한 다음 37℃, 5% CO2 분위기에서 24 시간 동안 인큐베이션시켰다. 각 화합물 조합에 대해 6개의 플레이트들을 조합 효능(EC50) 및 세포독성 (TC50) 측정에 이용하였다 (효능 및 독성 각각에 대해 3개 플레이트씩). 24 시간 인큐베이션 후, 화합물 각각의 2배 연속 희석물을 G418 없이 세포 배양 배지에서 준비하고 체크보드 패턴으로 웰에 첨가하였다. 리바비린 플러스 텔라프레비어 조합 분석의 경우, 리바비린의 8개의 2배 연속 희석물 (농도 범위 148 μM 내지 1.16 μM) 및 텔라프레비어의 5개의 2배 희석물 (농도 범위 1.00 μM 내지 62.5 nM)을 세포에 첨가하였다. SPC 4729 플러스 리바비린 조합 분석의 경우, SPC 4729의 8개의 2배 연속 희석물 (농도 범위 2.4 μM 내지 18.8 nM) 및 리바비린의 5개의 2배 희석물 (농도 범위 148 μM 내지 9.25 nM)를 세포에 첨가하였다. 각각의 플레이트 당 6개의 웰에 배지 단독을 미처리 대조군으로서 첨가하였다. 항바이러스 효능의 양성 단일 화합물 대조군으로서, IFN-a2b가 1 밀리리터 당 10.0,2.00,0.400,0.0800,0.0160, 및 0.0032 유닛 (U/mL)의 최종 농도로 삼중 웰에 첨가된 별도의 이중 플레이트를 준비하였다. 세포들을 37℃, 5% CO2의 분위기에서 48 시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 플레이트들을, XTT 염색에 의해 세포독성 및 루시페라제 리포터 활성을 평가함으로써 항HCV 활성에 대해 평가하였다.
바이러스 복제 측정, 세포독성 및 데이터 분석 : 실시예 2에 준함
조합 요법 평가: Huh-luc/neo-ET 세포에 있어서 HCY 유전형 Ib 레플리콘의 억제에 대하여 리바비린을 텔라프레비어 및 스크램블된 올리고뉴클레오타이드 SPC 4729-03과 조합 평가하였다. 실험 설계는 각각의 화합물의 2배 연속 희석물의 체크보드 희석 매트릭스를 이용하였다. 화합물이 개별적으로 사용되거나 화합물이 첨가되지 않은 웰도 분석에 포함시켰다. 3가지 독립적인 실험을 각각의 조합에 대하여 수행하였다. 약물-약물 상호반응의 예상 효과의 Bliss Independence 수학적 정의에 기초하여 약물의 이론적인 부가적 상호반응을 계산하는 MacSynergy II 프로그램을 이용하여, 2개 화합물들의 이론적인 부가적 상호반응을 개별 화합물의 투여량-반응 곡선으로부터 구하였다. 약물 조합의 항HCV 효능 및 세포독성 상승 볼륨을 95% 신뢰 구간에서 계산하였다. 리바비린 플러스 텔라프레비어 조합의 분석 결과는, 각 화합물 단독의 2가지 이상의 농도가 투여량-반응 곡선에 부합하고 단일 화합물 곡선이 항바이러스 활성 또는 세포독성에서 투여량-의존성 반응을 입증하는 경우에만 타당한 것으로 판정하였다. 리바비린 플러스 SPC 4729 조합의 분석 결과는 리바비린의 2가지 이상의 농도가 투여량-반응 곡선에 부합하고, 리바비린 단일 화합물 곡선이 항바이러스 활성의 투여량-의존 반응을 나타내는 것으로 입증되며, 항바이러스 활성이 SPC 4729에 대해서는 관찰되지 않은 경우에만 타당한 것으로 판정하였다. 이들 결과를 리바비린 플러스 텔라프레비어 조합의 경우 2개의 독립 실험으로 그리고 리바비린 플러스 SPC 4729 조합의 경우 단일 값으로서 표 F에 요약하였다.
Figure pct00035
표 F: 텔라프레비어 또는 SPC 4729와 사용된 리바비린의 조합 분석 결과
리바비린 및 텔라프레비어의 전체적인 상호반응은 결정적이지 않았다. 리바비린과 스프램블된 대조군 SPC 4729의 상호반응은 SPC3649 (실시예 2)에 대한 데이터와 대조적으로 길항적이었는데, 이는 SPC3649과 리바비린 간에 명백한 상승효과가 있음을 시사하는 것이다. 시험관내 세포독성에 대한 약물 조합의 영향 평가 결과 리바비린 플러스 텔라프레비어는 길항적 상호반응으로 밝혀졌고 (전체적인 세포독성 감소) 리바비린 플러스 SPC 4729의 상호반응은 세포독성이 약간 더 높은 것으로 나타났다.
실시예 6: 2a상 임상시험- 미라버센 단일요법
배경: C형 간염 바이러스 (HCV) 복제는 숙주의 마이크로RNA-122 (miR-122)와 HCV 게놈 간의 기능적 상호반응에 의존한다. 미라버센은 β-D-옥시-잠금 핵산 (LNA)-변형된 포스포로티오에이트 안티센스 올리고뉴클레오타이드로서 간에 특이적인 miR-122를 표적화한다. 미라버센은 시험관내에서 내성을 발현함이 없이, 시험관내에서 모든 HCV 유전형에 대해 활성을 나타내었고 장기-지속 HCV RNA 억제 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 다회 투여량 증가기인 IIa상 임상 연구에서 만성 HCV 감염 환자에 있어서의 미라버센의 안전성과 효능이 평가되었다.
방법: 만성 HCV 유전형 1에 감염된, 과거 치료 경력이 없는(treatment-naive) 36명의 환자들을 3 연속 투여 코호트에 등록하여 5주일 동안 미라버센 3, 5, 또는 7 mg/kg (n=27) 또는 위약 (n=9)을 29일 동안 피하 투여한 다음 18주까지 팔로우업 하였다.
결과: 미라버센은 HCV RNA를 투여량-의존적으로 감소시켰으며 이것은 활성 요법 말기가 지난 후에도 잘 지속되었다. 베이스라인으로부터의 최대 HCV RNA 하락(decline)의 평균값은, 3, 5, 및 7 mg/kg 미라버센 치료된 코호트에 있어서 각각 1.2 (p=0.011), 2.9 (p=0.003) 및 3.0 (p=0.002) log10IU/mL이었다. 이 하락은 위약 코호트의 경우 0.4 log10IU/mL였다. 5 mg/kg가 투여된 환자 1명과 7 mg/kg가 투여된 4명의 환자들은 검출불가능한 HCV RNA를 달성하였다. 투여량-한정적인 유해사례는 없었으며, HCV 게놈 miR-122 결합 부위에서 어떠한 이스케이프 돌연변이도 관찰되지 않았다.
결론: 미라버센은 환자에게 투여되는 최초의 마이크로RNA-표적화 치료제이다. 만성 HCV 유전형 1 감염 환자에 있어서, 미라버센은 안전하고, 잘 관용되었으며, HCV RNA 수준을 장기간 지속적으로 투여량-의존적으로 감소시켰다. 미라버센에 대한 바이러스 내성 출현은 관찰되지 않았다. (ClinicalTrials.gov number NCT01200420).
SEQUENCE LISTING <110> Santaris Pharma A/S <120> HCV COMBINATION THERAPY <130> 1130 WO <150> US 61/502885 <151> 2011-06-30 <150> US 61/566028 <151> 2011-12-02 <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 22 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 1 uggaguguga caaugguguu ug 22 <210> 2 <211> 15 <212> DNA <213> artificial <220> <223> Miravirsen nucleobase sequence <400> 2 ccattgtcac actcc 15 <210> 3 <211> 15 <212> DNA <213> artificial <220> <223> Scambled control oligo nucleobase sequence <400> 3 tcatactata tgaca 15 <210> 4 <211> 85 <212> RNA <213> homo sapiens <400> 4 ccuuagcaga gcuguggagu gugacaaugg uguuuguguc uaaacuauca aacgccauua 60 ucacacuaaa uagcuacugc uaggc 85

Claims (22)

  1. C형 간염(HCV) 치료를 위하여, HCV NS5B 폴리머라제 저해제, 및 임의로 리바비린(또는 그의 바이러스 활성 유도체)과 조합 사용되는 miR-122 저해제.
  2. 제1항 또는 제2항에 있어서, miR-122 저해제는 다음 식으로 이루어지거나 다음 식을 포함하는 올리고머인 것인 miR-122 저해제.
    Figure pct00036

    식 중: 소문자는 DNA 유닛을 나타내고, 대문자는 LNA 유닛을 나타내며, m C는 5-메틸시토신 LNA를 나타내고, 아래첨자 s는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 결합을 나타내고, 여기서 LNA 유닛은 LNA 잔기 뒤에 윗첨자 o 가 붙는 것으로 표시되는 바와 같이, 베타-D-옥시이다.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, HCV NS5B 폴리머라제 저해제는 예컨대 GS-6620, IDX184, PSI-7977, PSI-938, RG7128 (메르시타빈) 및 TMC649128로 이루어진 군으로부터 선택된 NI와 같은 뉴클레오사이드 폴리머라제 저해제(NI) 또는 예컨대 ABT-072, ABT-333, ANA598, BI 207127, BMS-791325, GS-9190 (테고부비어), IDX375, MK-3281, 필리부비어, VX-222, 및 VX-916로 이루어진 군으로부터 선택된 NNI와 같은 비뉴클레오사이드 폴리머라제 저해제(NNI)이거나; 또는 HCV NS5B 폴리머라제 저해제는 ALS-2158(Alios), ALS-2200(Alios), ABT-072(Abbott); ABT-333(Abbott), MK-3281(Merck), TMC649128 (Medivir/Tibotec), BI 207127 (Boehringer Ingelheim Pharma), RG7128 (Genetech: 메르시타빈), GS-9190 (테고부비어) (Gilead), GS-7977(Gilead - 이전 명칭 PSI-7977); GS-938(Gilead), RG7128 (Gliead/Genetech), VX-222 (Vertex), VX-759 (Vertex), ANA598 (Anadys/Genetech), IDX184 (Idenix), 및 INX-189 (Inhibitex/BMS)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 miR-122 저해제.
  4. 제1항 내지 제2항 중 어느 하나의 항에 있어서, HCV NS5B 폴리머라제 저해제는 2'-C-메틸시티딘, GI-7977 및/또는 VX-222인 것인 miR-122 저해제.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 치료는 무인터페론(interferon free) 치료인 것인 miR-122 저해제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, 치료는 NS5A 단백질 저해제, 및 HCV NS3/4A 프로테아제 저해제로 이루어진 군으로부터 선택된 직접 작용 물질의 사용을 더 포함하는 것인 miR-122 저해제.
  7. 제1항 내지 제5항 중 어느 하나의 항에 있어서, miR-122 저해제 및 HCV NS5B 폴리머라제 저해제의 조합 치료는 1년, 예컨대 4-48 주일의 조합 치료 기간 동안 수행되는 것인 miR-122 저해제.
  8. 제7항에 있어서, 조합 치료 기간은 48 주일 미만, 예컨대 24주일 미만 또는 13 주일 미만인 것인 miR-122 저해제.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 조합 치료 기간에 앞서서 리바비린 또는 그의 바이러스 활성 유도체와 조합 사용될 수 있는 miR-122 저해제를 이용하지만 HCV NS5B 폴리머라제 저해제는 이용되지 않는 예비 치료 기간이 선행되는 것인 miR-122 저해제.
  10. 제9항에 있어서, 예비 치료 기간은 1 - 12 주일인 것인 miR-122 저해제.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상자는 비반응자, 부분 반응자, 재발 반응자 또는 무효 반응자이거나 또는 인터페론이나 직접 작용 물질 예컨대 HCV NS5A 단백질의 저해제, 또는 HCV NS3/4 프로테아제의 저해제에 대한 비반응자인 것인 miR-122 저해제.
  12. C형 간염 치료용 약제의 제조를 위한 miR-122 저해제의 용도로서, 상기 약제는 HCV NS5B 폴리머라제 저해제와 조합적으로 사용되는 것인 miR-122 저해제의 용도.
  13. HCV에 감염된 대상자에 있어서 C형 간염(HCV) 감염을 치료하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 유효량의 miR-122 저해제 및 유효량의 HCV NS5B 폴리머라제 저해제를 HCV에 감염된 대상자에게 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 상기 방법은 리바비린 또는 그의 바이러스 활성 유도체의 유효량을 대상자에게 투여하는 것윽 더 포함하는 것인 방법.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 올리고머는 다음 식으로 이루어지거나 다음 식을 포함하는 것인 방법:
    Figure pct00037

    식 중: 소문자는 DNA 유닛을 나타내고, 대문자는 LNA 유닛을 나타내며, m C는 5-메틸시토신 LNA를 나타내고, 아래첨자 s는 포스포로티오에이트 뉴클레오사이드간 결합을 나타내고, 여기서 LNA 유닛은 LNA 잔기 뒤에 윗첨자 o 가 붙는 것으로 표시되는 바와 같이, 베타-D-옥시이다.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 하나의 항에 있어서, HCV NS5B 폴리머라제 저해제는 제3항에 기재된 것인 방법.
  17. 제13항 내지 제15항 중 어느 하나의 항에 있어서, HCV NS5B 폴리머라제 저해제는 2'-C-메틸시티딘, GI-7977 및/또는 VX-222인 것인 방법.
  18. 제13항 내지 제17항 중 어느 하나의 항에 있어서, 치료는 무인터페론 치료인 방법.
  19. 제13항 내지 제18항 중 어느 하나의 항에 있어서, 복수 투여량의 miR-122 저해제 및 복수 투여량의 HCV NS5B 폴리머라제 저해제 및 임의로 리바비린 (또는 그의 바이러스 활성 유도체)이 1년 미만의 치료 기간 예컨대 4-48주일 동안 투여되는 것인 방법.
  20. 제19항에 있어서, 치료 기간은 48 주일 미만, 예컨대 24주일 미만, 또는 13 주일 미만인 것인 방법.
  21. 제19항 또는 제20항에 있어서, 조합 치료 기간에 앞서서 리바비린 (또는 그의 바이러스 활성 유도체)와 조합 사용될 수 있는 miR-122 저해제가 투여되는 예비 치료 기간이 선행되는 것인 방법.
  22. 제13항 내지 제21항 중 어느 하나의 항에 있어서, 대상자는 비반응자, 부분 반응자, 재발 반응자, 또는 부효 반응자이거나 또는 인터페론이나 직접 작용 물질 예컨대 HCV NS5A 단백질의 저해제, 또는 HCV NS3/4 프로테아제의 저해제에 대한 비반응자인 것인 방법.
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG11201400664WA (en) 2011-09-16 2014-04-28 Gilead Pharmassett Llc Methods for treating hcv
DE112012003510T5 (de) 2011-10-21 2015-03-19 Abbvie Inc. Verfahren zur Behandlung von HCV umfassend mindestens zwei direkt wirkende antivirale Wirkstoffe, Ribavirin aber nicht Interferon
US8492386B2 (en) 2011-10-21 2013-07-23 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
DE202012013117U1 (de) 2011-10-21 2015-01-16 Abbvie Inc. Kombinationsbehandlung (z.B. mit ABT-072 oder ABT-333 von DAAs zur Verwendung in der Behandlung von HCV)
US8466159B2 (en) 2011-10-21 2013-06-18 Abbvie Inc. Methods for treating HCV
WO2014118272A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 Santaris Pharma A/S Antimir-122 oligonucleotide carbohydrate conjugates
PT2950786T (pt) 2013-01-31 2020-03-03 Gilead Pharmasset Llc Formulação de combinação de dois compostos antivirais
JP2016515378A (ja) * 2013-03-15 2016-05-30 ラボラトリー コーポレイション オブ アメリカ ホールディングス ウイルス阻害剤に対するウイルス感受性を決定するための方法
BR112015025716A2 (pt) 2013-04-12 2017-07-18 Achillion Pharmaceuticals Inc pró-fármacos de nucleosídeo submetidos a deutério úteis para o tratamento de hcv
JP2016518842A (ja) 2013-05-01 2016-06-30 レグルス セラピューティクス インコーポレイテッド マイクロＲＮＡ化合物およびｍｉＲ−１２２をモジュレートする方法
US20140343008A1 (en) * 2013-05-16 2014-11-20 Gilead Pharmasset Llc Hepatitis c treatment
EP3218486A1 (en) * 2014-11-10 2017-09-20 Glaxosmithkline Intellectual Property (No. 2) Limited Combination long acting compositions and methods for hepatitis c
CN109689063A (zh) 2016-04-28 2019-04-26 埃默里大学 含有炔烃的核苷酸和核苷治疗组合物及其相关用途
WO2017197046A1 (en) 2016-05-10 2017-11-16 C4 Therapeutics, Inc. C3-carbon linked glutarimide degronimers for target protein degradation
CN109562113A (zh) 2016-05-10 2019-04-02 C4医药公司 用于靶蛋白降解的螺环降解决定子体
CN109562107A (zh) 2016-05-10 2019-04-02 C4医药公司 用于靶蛋白降解的杂环降解决定子体
TW202322824A (zh) 2020-02-18 2023-06-16 美商基利科學股份有限公司 抗病毒化合物
AU2022256476A1 (en) 2021-04-16 2023-10-12 Gilead Sciences, Inc. Methods of preparing carbanucleosides using amides

Family Cites Families (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4914210A (en) 1987-10-02 1990-04-03 Cetus Corporation Oligonucleotide functionalizing reagents
US4962029A (en) 1987-10-02 1990-10-09 Cetus Corporation Covalent oligonucleotide-horseradish peroxidase conjugate
US6617442B1 (en) 1999-09-30 2003-09-09 Isis Pharmaceuticals, Inc. Human Rnase H1 and oligonucleotide compositions thereof
US7087229B2 (en) 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
US7683036B2 (en) 2003-07-31 2010-03-23 Regulus Therapeutics Inc. Oligomeric compounds and compositions for use in modulation of small non-coding RNAs
US20050142581A1 (en) 2003-09-04 2005-06-30 Griffey Richard H. Microrna as ligands and target molecules
US20080213891A1 (en) 2004-07-21 2008-09-04 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. RNAi Agents Comprising Universal Nucleobases
CA2574088C (en) 2004-07-21 2013-09-17 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a modified or non-natural nucleobase
WO2006112872A2 (en) 2004-08-04 2006-10-26 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Oligonucleotides comprising a ligand tethered to a modified or non-natural nucleobase
EA200701849A1 (ru) 2005-02-28 2008-02-28 Дженелабс Текнолоджис, Инк. Пролекарственные соединения трициклических нуклеозидов, фармацевтическая композиция на их основе и способ лечения и/или ингибирования вирусной инфекции у млекопитающего
WO2007021896A2 (en) 2005-08-10 2007-02-22 Alnylam Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified oligonucleotides for use in modulating micro rna and uses thereof
US20070213292A1 (en) 2005-08-10 2007-09-13 The Rockefeller University Chemically modified oligonucleotides for use in modulating micro RNA and uses thereof
EP2338992A3 (en) 2005-08-29 2011-10-12 Regulus Therapeutics, Inc Antisense compounds having enhanced anti-microRNA activity
EP2338991B1 (en) 2005-08-29 2017-01-18 Regulus Therapeutics Inc. Methods for use in modulating MIR-122a
WO2007031091A2 (en) 2005-09-15 2007-03-22 Santaris Pharma A/S Rna antagonist compounds for the modulation of p21 ras expression
EP1984381B1 (en) 2006-01-27 2010-09-29 Isis Pharmaceuticals, Inc. 6-modified bicyclic nucleic acid analogs
EP1984499B1 (en) 2006-01-27 2015-05-27 Isis Pharmaceuticals, Inc. Oligomeric compounds and compositions for the use in modulation of micrornas
CA2649045C (en) 2006-04-03 2019-06-11 Santaris Pharma A/S Pharmaceutical composition comprising anti-mirna antisense oligonucleotides
ES2389737T3 (es) 2006-05-11 2012-10-31 Isis Pharmaceuticals, Inc. Análogos de ácidos nucleicos bicíclicos modificados en 5'
WO2008034123A2 (en) 2006-09-15 2008-03-20 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric conjugates containing positively-charged moieties
AU2007296054B2 (en) 2006-09-15 2013-03-28 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Hindered ester-based biodegradable linkers for oligonucleotide delivery
EP2090665A2 (en) 2006-10-20 2009-08-19 Exiqon A/S Novel human microRNAs associated with cancer
US20090137504A1 (en) 2006-12-21 2009-05-28 Soren Morgenthaler Echwald Microrna target site blocking oligos and uses thereof
WO2008124384A2 (en) * 2007-04-03 2008-10-16 Aegerion Pharmaceuticals, Inc. Combinations of mtp inhibitors with cholesterol absorption inhibitors or interferon for treating hepatitis c
CA2688321A1 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Isis Pharmaceuticals, Inc. N-substituted-aminomethylene bridged bicyclic nucleic acid analogs
WO2008154401A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic bicyclic nucleic acid analogs
ATE538127T1 (de) 2007-07-05 2012-01-15 Isis Pharmaceuticals Inc 6-disubstituierte bicyclische nukleinsäureanaloga
WO2009043353A2 (en) * 2007-10-04 2009-04-09 Santaris Pharma A/S Micromirs
WO2009067647A1 (en) 2007-11-21 2009-05-28 Isis Pharmaceuticals, Inc. Carbocyclic alpha-l-bicyclic nucleic acid analogs
US9364495B2 (en) 2009-10-20 2016-06-14 Roche Innovation Center Copenhagen A/S Oral delivery of therapeutically effective LNA oligonucleotides

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Publication number Publication date
EP2726610A1 (en) 2014-05-07
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