KR20180069071A - Pd-1 및 tim-3과 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도 - Google Patents

Pd-1 및 tim-3과 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도 Download PDF

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칼라 알. 위하겐
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Abstract

본 발명은 PD-1 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체, 항체 또는 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 이들의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다.

Description

PD-1 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체 및 그의 용도
서열 목록
본 출원은 EFS-웨브를 통해 제출된 서열 목록을 포함하며, 그 전체 내용이 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 2016년 10월 28일자로 생성된 ASCII 텍스트 파일은 JBI5071WOPCT2_ST25.txt 로 명명되고 크기가 418 킬로바이트이다.
기술분야
본 발명은 PD-1 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체, 항체 또는 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 이들의 제조 및 사용 방법에 관한 것이다.
면역 시스템은 동시자극성(costimulatory) 및 동시억제성(co-inhibitory) 리간드 및 수용체의 네트워크에 의해 엄격하게 제어된다. 이러한 분자들은 T 세포 활성화를 위하여 2차 신호를 제공하고, 자신에 대한 면역력을 제한하면서 감염 및 종양에 대한 면역 반응을 최대화하도록 양성 신호 및 음성 신호의 균형 잡힌 네트워크를 제공한다(문헌[Wang et al., (Epub Mar. 7, 2011) J Exp Med 208(3):577-92]; 문헌[Lepenies et al., (2008) Endocr Metab Immune Disord Drug Targets 8:279-288]).
항종양 면역 반응을 촉진하기 위해 T 세포 내의 동시억제성 경로를 표적화하는 면역 체크포인트 요법은 암 환자의 임상 진료에 진보를 유발했다.
PD-1은 종양 미세환경(TME: tumor microenvironment)에서 CD4+ 및 CD8+ T 세포 작용을 억제하는 음성 면역 체크포인트 분자이다. 그의 리간드(PD-L1 및 PD-L2)와의 PD-1 결합(engagement)은 T 세포 수용체 신호전달의 다운스트림에 있는 다중 경로를 저해함으로써 종양에서 T 세포 무반응(anergy) 및 소진을 추진하여, 감소된 T 세포 생존, 성장 및 증식, 훼손된 이펙터 작용, 및 변경된 대사작용을 유발한다. 전임상 연구는 PD-1 경로 차단이 T 세포 소진을 역전시키고 항-종양 면역력을 자극할 수 있다는 것을 입증하였다.
그러므로 PD-1 경로는 (TME)에서 T 세포 작용의 하향조절 및 면역 파괴를 통한 종양의 회피에 기여한다. TME에서, 소진된 T 세포는 고수준의 PD-1을 발현시킴에 더하여, CTLA-4, TIM-3, LAG-3, CD244, TIGIT, 및 CD160을 포함하는 다른 저해성 수용체를 발현시킨다(예를 들어, 문헌[Pauken & Wherry; 2015, Trends in Immunology 36(4): 265-276] 참조).
TIM-3은 IFN-γ를 분비하는 Th1(T 헬퍼 1) CD4+ 세포 및 세포독성 CD8+ T 세포 상에서 발현되는 막관통 수용체이다. TIM-3은 일반적으로 미접촉 T 세포 상에서 발현되는 것이 아니라, 활성화된 이펙터 T 세포 상에서 상향조절된다. TIM-3은 생체내에서 면역력 및 관용을 조절하는 역할을 한다(문헌[Hastings et al., (2009) Eur J Immunol 39(9):2492-501] 참조).
PD-1 항체는, 예를 들어, 미국 특허 제5,897,862호 및 제7,488,802호, 및 국제 특허 출원 공개 WO2004/004771호, WO2004/056875호, WO2006/121168호, WO2008/156712호, WO2010/029435호, WO2010/036959호, WO2011/110604호, WO2012/145493호, WO2014/194302호, WO2014/206107호, WO2015/036394호, WO2015/035606호, WO2015/085847호, WO2015/112900호, 및 WO2015/112805호에 기재되어 있다.
TIM-3 항체는, 예를 들어, 문헌[Monney et al., Nature (2002) 415(6871):536-41], 및 국제 특허 출원 공개 WO2011/155607호, WO2013/006490호, 및 WO2015/117002호에 기재되어 있다.
TIM-3 항체 및 PD-L1 항체의 조합은, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO2011/159877호에 평가되어 있다.
항-PD-1/PD-L1 항체가 다수의 고형 종양을 가진 환자에서 임상 반응을 촉진하는 것으로 입증되어 있지만, 반응률은 여전히 매우 낮아서, 사전치료된 환자에서 약 15% 내지 20%이다(문헌[Swaika et al., (2015) Mol Immunol doi: 10.1016/j.molimm.2015.02.009]).
그러므로, 암 면역요법, 및 면역 반응의 향상으로부터 이익을 얻을 다른 병태, 예컨대 만성 감염의 치료에 사용하기 위한, PD-1 및 TIM-3과 같은 체크포인트 저해제의 면역억제 활성을 저해하는 새로운 치료제에 대한 필요성이 존재한다.
본 발명은, 본 명세서에 기재된 바와 같이 소정의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, LCDR3, VH, VL, 중쇄, 또는 경쇄 아미노산 서열을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인은 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인은 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인은 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인은 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 각각 서열 번호 10, 14, 16, 723, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인은 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 서열 번호 48의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 56의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 제2 도메인은 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고, 제2 도메인은 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, 제2 도메인은 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, 제2 도메인은 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고, 제2 도메인은 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 치료제 또는 조영제에 연결된 본 발명의 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 포함하는 면역접합체를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체 VH, 항체 VL, 또는 항체 VH 및 항체 VL을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체 VH, 항체 VL, 또는 항체 VH 및 VL을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
본 발명은 또한 항체가 발현되는 조건에서 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계 및 숙주 세포에 의해 생성된 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 본 발명의 항체를 생성하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 단리된 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 단리된 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 면역 반응을 향상시키기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 면역 반응을 향상시키는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체에 결합하는 항-이디오타입(anti-idiotypic) 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체를 포함하는 키트를 제공한다.
도 1a는 항-PD-1 항체로 치료한 후에 종양에서 TIM-3 표면 발현이 상승됨을 나타낸다. 확립된 CT26 결장 암종 종양을 가진 Balb/c 마우스를 항-PD-1 항체 또는 비히클로 격주로 치료하였다. 제22일에 종양을 수확하고 유세포측정을 사용하여 종양-침윤 T 세포 상에서 TIM-3 발현을 평가하였다. MFI: 평균 형광 세기. PBS: 대조군
도 1b는 항-PD-1 항체로 치료한 후에 종양 침윤 림프구(TIL: tumor infiltrated lymphocyte) 상에서 TIM-3 표면 발현이 상승됨을 나타낸다. 확립된 MC38 결장 암종 종양을 가진 Balb/c 마우스를 항-PD-1 항체 또는 비히클로 격주로 치료하였다. 비히클 치료(PBS) 또는 항-PD-1 항체 치료(PD-1) 동물에서 총 CD8 TIL 개체군 상의 TIM-3 발현의 기하 평균 형광 세기(gMFI)를 나타낸다. p=0.003 비히클 대 항-PD-1 항체 치료군.
도 1c는 비히클(PBS) 또는 항-PD-1 항체(PD-1)로 치료된 마우스로부터 수확한 MC38 종양에서 총 CD8+ TIL의 TIM-3+ CD8 세포의 상대 빈도를 나타낸다. p=0.045 비히클 대 항-PD-1 항체 치료군.
도 2a는 비히클 치료(PBS) 군에 비교할 때 항-PD-1 항체로 치료된 동물(PD-1 군)에서 MC38 결장 암종 종양 내의 TIL 상에서 CD137 표면 발현(gMFI)이 상승됨을 나타낸다. p=0.005 비히클 대 항-PD-1 항체 치료군. 각각의 지점은 1 마리의 마우스를 나타낸다. 데이터는 2회 이상의 독립적인 실험의 대표 데이터이다.
도 2b는 비히클 치료(PBS) 군에 비교할 때 항-PD-1 항체로 치료된 동물(PD-1 군)에서 MC38 결장 암종 종양에서 총 CD8+ TIL의 CD137+ CD8 세포의 상대 빈도가 상승됨을 나타낸다. p=0.0475 비히클 대 항-PD-1 항체 치료군. 각각의 지점은 1 마리의 마우스를 나타낸다. 데이터는 2회 이상의 독립적인 실험의 대표 데이터이다.
도 3a는 비히클 치료(PBS) 군에 비교할 때 항-PD-1 항체로 치료된 동물(PD-1 군)에서 MC38 결장 암종 종양 내의 TIL 상에서 OX40 표면 발현(gMFI)이 상승됨을 나타낸다. p=0.0013 비히클 대 항-PD-1 항체 치료군. 각각의 지점은 1 마리의 마우스를 나타낸다. 데이터는 2회 이상의 독립적인 실험의 대표 데이터이다.
도 3b는 비히클 치료(PBS) 군에 비교할 때 항-PD-1 항체로 치료된 동물(PD-1 군)에서 MC38 결장 암종 종양 내의 총 CD8+ TIL의 OX40+ CD8 세포의 상대 빈도가 상승됨을 나타낸다. p=0.03 비히클 대 항-PD-1 항체 치료군. 각각의 지점은 1 마리의 마우스를 나타낸다. 데이터는 2회 이상의 독립적인 실험의 대표 데이터이다.
도 4a는 비히클 치료(PBS) 군에 비교할 때 항-PD-1 항체로 치료된 동물(PD-1 군)에서 MC38 결장 암종 종양 내의 TIL 상에서 GITR 표면 발현(gMFI)이 상승됨을 나타낸다. p=0.0004 비히클 대 항-PD-1 항체 치료군. 각각의 지점은 1 마리의 마우스를 나타낸다. 데이터는 2회 이상의 독립적인 실험의 대표 데이터이다.
도 4b는 비히클 치료(PBS) 군에 비교할 때 항-PD-1 항체로 치료된 동물(PD-1 군)에서 MC38 결장 암종 종양 내의 총 CD8+ TIL의 GITR+ CD8 세포의 상대 빈도가 상승됨을 나타낸다. p=0.0015 비히클 대 항-PD-1 항체 치료군. 각각의 지점은 1 마리의 마우스를 나타낸다. 데이터는 2회 이상의 독립적인 실험의 대표 데이터이다.
도 5는 항-PD-1 항체 치료 후에 항-TIM-3 항체를 이용하는 치료는 항원-특이적 면역 반응을 추가로 유도함을 나타낸다. CMV 양성 공여자로부터의 PBMC를 사용하는 CMV 검정에서 항체를 시험하였으며, 여기에서 항원-특이적 면역 반응은 pp65 펩티드 풀(peptide pool)로 유도하였다. 세포를 5 일 동안 항-PD-1 항체 PD1B244로 처리하고, 재자극하고, 24 시간 동안 항-TIM-3 항체 TM3B105로 처리하였다. IFN-γ 분비의 증가를 측정함으로써 면역 반응을 결정하였다. IgG2s Iso: IgG2시그마(IgG2sigma) 동종형(isotype) 대조군 CMV: 항체의 부재 하에 사이토메갈로바이러스 p65 펩티드로 처리한 샘플.
도 6은 선택된 항-PD-1 항체의 HCDR1 서열 및 HCDR1 속 서열(genus sequence)을 나타낸다.
도 7은 선택된 항-PD-1 항체의 HCDR2 서열 및 HCDR2 속 서열을 나타낸다.
도 8은 선택된 항-PD-1 항체의 HCDR3 서열 및 제1 HCDR3 속 서열을 나타낸다.
도 9는 선택된 항-PD-1 항체의 HCDR3 서열 및 제2 HCDR3 속 서열을 나타낸다.
도 10은 선택된 항-PD-1 항체의 LCDR1 서열 및 LCDR1 속 서열을 나타낸다.
도 11은 선택된 항-PD-1 항체의 LCDR2 서열 및 LCDR2 속 서열을 나타낸다.
도 12는 선택된 항-PD-1 항체의 LCDR3 서열 및 LCDR3 속 서열을 나타낸다.
도 13은 선택된 항-TIM-3 항체의 HCDR1 서열 및 HCDR1 속 서열(genus sequence)을 나타낸다. MOE(몬트리올 소재의 CCG)에서 항체 모델링에 대한 기본 프로토콜을 사용하여 모든 Fv(VH/VL 쌍)에 대한 분자 모델을 생성함으로써 속 서열을 결정하였다. 상이한 길이를 갖는 CDR의 경우, 구조적으로 보존된 영역에 기초하여 이러한 구조적 모델을 정렬하였으며, 구조적으로 균등한 CDR 위치를 확인하였다.
도 14은 선택된 항-TIM-3 항체의 HCDR2 서열 및 HCDR2 속 서열을 나타낸다. HCDR2 속 서열은 도 10에 대해 기재된 바와 같이 생성되었다.
도 15는 선택된 항-TIM-3 항체의 HCDR3 서열 및 제1 HCDR3 속 서열을 나타낸다. HCDR3 속 서열은 도 10에 대해 기재된 바와 같이 생성되었다.
도 16은 선택된 항-TIM-3 항체의 LCDR1 서열 및 LCDR1 속 서열을 나타낸다. LCDR1 속 서열은 도 10에 대해 기재된 바와 같이 생성되었다.
도 17은 선택된 항-TIM-3 항체의 LCDR2 서열 및 LCDR2 속 서열을 나타낸다. LCDR2 속 서열은 도 10에 대해 기재된 바와 같이 생성되었다.
도 18는 선택된 항-TIM-3 항체의 LCDR3 서열 및 LCDR3 속 서열을 나타낸다. LCDR3 속 서열은 도 10에 대해 기재된 바와 같이 생성되었다.
도 19a는 비히클 치료(PBS) 군에 비교할 때 항-TIM-3 항체로 치료된 동물(TIM-3 군)에서 MC38 결장 암종 종양 내의 TIL 상에서 TIGIT 표면 발현(gMFI)이 상승됨을 나타낸다. p=0.0181 비히클 대 항-TIM-3 항체 치료군. 각각의 지점은 1 마리의 마우스를 나타낸다. 데이터는 2회 이상의 독립적인 실험의 대표 데이터이다.
도 19b는 비히클 치료(PBS) 군에 비교할 때 항-TIM-3 항체로 치료된 동물(TIM-3 군)에서 MC38 결장 암종 종양 내의 총 CD8+ TIL의 TIGIT+ CD8 세포의 상대 빈도가 상승됨을 나타낸다. p=0.0475 비히클 대 항-TIM-3 항체 치료군. 각각의 지점은 1 마리의 마우스를 나타낸다. 데이터는 2회 이상의 독립적인 실험의 대표 데이터이다.
도 20a는 비히클 치료(PBS) 군에 비교할 때 항-TIM-3 항체로 치료된 동물(TIM-3 군)에서 CT26 결장 암종 종양 내의 TIL 상에서 TIGIT 표면 발현(gMFI)이 상승됨을 나타낸다. p<0.001 비히클 대 항-TIM-3 항체 치료군. 각각의 지점은 1 마리의 마우스를 나타낸다. 데이터는 2회 이상의 독립적인 실험의 대표 데이터이다.
도 20b는 비히클 치료(PBS) 군에 비교할 때 항-TIM-3 항체로 치료된 동물(TIM-3 군)에서 CT26 결장 암종 종양 내의 총 CD8+ TIL의 TIGIT+ CD8 세포의 상대 빈도가 상승됨을 나타낸다. p=0.0105 비히클 대 항-TIM-3 항체 치료군. 각각의 지점은 1 마리의 마우스를 나타낸다. 데이터는 2회 이상의 독립적인 실험의 대표 데이터이다.
도 21은 항-PD-1 또는 항-TIM-3 작용 차단성 항체의 존재 또는 부재 하에 흑색종 항원 펩티드 풀(NY-ESO, gp100, MART-1)로 자극한 치료 미접촉 흑색종 환자로부터의 흑색종 환자 PBMC에서 말초 T 세포 상의 TIM-3 발현의 상향조절을 나타낸다. 제6일에 재자극된 세포 상의 유세포측정에 의해 TIM-3의 발현을 결정하였다.
도 22a는 TM3B403 처리가 IL-2 자극 인간 PBMC에서 활성화 NK 세포의 빈도를 증가시킴을 나타낸다. IgG2s: 동종형 대조군 NK 세포 활성화는 자극된 PBMC에서 CD69 발현 세포의 백분율(%)로서 평가하였다.
도 22b는 TM3B403 처리가 IL-2 자극 인간 PBMC에서 활성화 NK 세포의 빈도를 증가시킴을 나타낸다. IgG2s: 동종형 대조군 NK 세포 활성화는 자극된 PBMC에서 CD25 발현 세포의 백분율(%)로서 평가하였다.
본 명세서에 인용된, 특허 및 특허 출원을 포함하지만 이에 한정되지 않는 모든 간행물은 마치 완전히 기재된 것처럼 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 명세서에서 사용되는 용어는 단지 특정 실시 형태들을 설명하기 위한 것이며, 한정하는 것으로 의도되지 않음을 이해해야 한다. 달리 정의되지 않으면, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 숙련자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다.
본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 또는 동등한 임의의 방법 및 재료가 본 발명의 시험 실시에 사용될 수 있지만, 예시적인 방법 및 재료가 본 명세서에 기재되어 있다. 본 발명을 설명하고 청구함에 있어서, 하기 용어가 사용될 것이다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수형("a", "an" 및 "the")은 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "세포"에 대한 언급은 2개 이상의 세포의 조합 등을 포함한다.
"특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합한다" 또는 "결합한다"는 항체가 항원 또는 항원 내의 에피토프(epitope)에 대해 다른 항원들에 대한 친화성보다 더 큰 친화성으로 결합하는 것을 지칭한다. 전형적으로, 항체는 약 1x10-8 M 이하, 예를 들어 약 1x10-9 M 이하, 약 1x10-10 M 이하, 약 1x10-11 M 이하, 또는 약 1x10-12 M 이하의 평형 해리 상수(KD)로 항원 또는 항원 내의 에피토프에 결합하며, 이때 전형적으로 KD는 비특이적 항원(예를 들어, BSA, 카세인)에 결합하기 위한 그의 KD보다 적어도 100배 더 적다. 해리 상수는 표준 절차를 사용하여 측정될 수 있다. 그러나, 항원 또는 항원 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 관련 항원들에 대한, 예를 들어 다른 종, 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis)(사이노몰거스(cynomolgus), 사이노(cyno)), 판 트로글로디테스(Pan troglodytes)(침팬지, 침프(chimp)) 또는 칼리트릭스 자쿠스(Callithrix jacchus)(코먼 마모셋(common marmoset), 마모셋)로부터의 동일한 항원(상동체)에 대한 교차-반응성을 가질 수 있다. 단일특이성 항체는 하나의 항원 또는 하나의 에피토프와 특이적으로 결합하지만, 이중특이성 항체는 2개의 별개의 항원 또는 2개의 별개의 에피토프와 특이적으로 결합한다.
"항체"는 광의를 의미하며, 뮤린, 인간, 인간화, 및 키메라 단일클론 항체를 포함하는 단일클론 항체, 항원-결합 단편, 이중특이성 또는 다중특이성 항체, 이량체성, 사량체성, 또는 다량체성 항체, 단일쇄 항체, 도메인 항체를 포함하는 면역글로불린 분자, 및 필요한 특이성의 항원 결합 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 구성을 포함한다. "전장(full length) 항체"는 이황화물 결합에 의해 상호연결된 2개의 중(H)쇄 및 2개의 경(L)쇄뿐만 아니라 그의 다량체(예를 들어, IgM)로 구성된다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH) 및 중쇄 불변 영역(도메인 CH1, 힌지 CH2 및 CH3으로 구성됨)으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL) 및 경쇄 불변 영역(CL)으로 구성된다. VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 초가변성의 영역으로 추가로 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR 및 4개의 FR 세그먼트로 구성되며, 아미노-말단부터 카르복시-말단까지 하기의 순서대로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4.
"상보성 결정 영역(CDR)"은 항체 내의 "항원 결합 부위"이다. CDR은 다양한 용어를 사용하여 정의할 수 있다: (i) 상보성 결정 영역(CDR), VH 내에 3개(HCDR1, HCDR2, HCDR3) 및 VL 내에 3개(LCDR1, LCDR2, LCDR3)는 서열 가변성에 기초한다(문헌[Wu and Kabat, (1970) J Exp Med 132:211-50]; 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991]). (ii) "초가변 영역", "HVR", 또는 "HV", VH 내에 3개(H1, H2, H3) 및 VL 내에 3개(L1, L2, L3)는 초티아(Chothia) 및 레스크(Lesk)에 의해 정의된 바와 같이 구조 내에서 초가변성인 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다(문헌[Chothia and Lesk, (1987) Mol Biol 196:901-17]). International ImMunoGeneTics(IMGT) 데이터베이스(http://www_imgt_org)는 항원-결합 부위의 표준화된 번호화 및 정의를 제공한다. CDR, HV, 및 IMGT 도해 사이의 관련성은 문헌[Lefranc et al., (2003) Dev Comparat Immunol 27:55-77]에 기재되어 있다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "CDR", "HCDR1", "HCDR2", "HCDR3", "LCDR1", "LCDR2" 및 "LCDR3"은 본 명세서에 달리 명시적으로 기재되어 있지 않는 한, 상기에 기재된 방법들인 카밧, 초티아 또는 IMGT 중 임의의 것에 의해 정의된 CDR을 포함한다.
면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라, 5개의 주요 분류, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM으로 정해질 수 있다. IgA 및 IgG는 동종형 IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로 추가로 하위-분류된다. 임의의 척추동물 종의 항체 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 명확하게 별개인 2개의 유형, 즉 카파(κ) 및 람다(λ) 중 하나로 정해질 수 있다.
"항체 단편" 또는 "항원-결합 부분"은 모(parental) 전장 항체의 항원 결합 특성을 보유하는 면역글로불린 분자의 일부분을 지칭한다. 예시적인 항원-결합 부분은 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, 2, 및 3, 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, 2, 및 3, 중쇄 가변 영역(VH), 경쇄 가변 영역(VL), Fab, F(ab')2, Fd, 및 Fv 단편뿐만 아니라 하나의 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 도메인 항체(dAb)이다. VH 및 VL 도메인은 합성 링커를 통해 함께 연결되어 다양한 유형의 단일쇄 항체 설계를 형성할 수 있으며, 여기서 1가 항원 결합 부위, 예컨대 단일쇄 Fv(scFv) 또는 이중항체(diabody)를 형성하기 위해, VH/VL 도메인은 분자 간에, 또는 VH 및 VL 도메인이 별도의 단일쇄 항체 작제물에 의해 발현되는 경우에는 분자내에, 쌍을 이룰 수 있으며; 이는 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO1998/44001호, WO1988/01649호, WO1994/13804호, 및 WO1992/01047호에 기재되어 있다.
"단일클론 항체"는, 항체 중쇄로부터의 C-말단 라이신의 제거와 같은 가능한 잘 알려진 변경을 제외하고는, 각각의 중쇄 및 각각의 경쇄 내에 단일 아미노산 조성을 갖는 항체 집단을 지칭한다. 단일클론 항체는, 다중특이성 단일클론 항체가 2개 이상의 별개의 항원 또는 에피토프와 결합하는 것을 제외하고는, 전형적으로 하나의 항원 에피토프와 결합한다. 이중특이성 단일클론 항체는 2개의 별개의 항원 에피토프와 결합한다. 단일클론 항체는 항체 집단 내에 이종 당화를 가질 수 있다. 단일클론 항체는 단일특이성 또는 다중특이성, 또는 1가, 2가 또는 다가일 수 있다. 다중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 항체 또는 삼중특이성 항체는 용어 단일클론 항체 내에 포함된다.
"단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체들이 실질적으로 없는 항체 또는 항체 단편을 지칭한다(예를 들어, PD-1과 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 PD-1 이외의 항원과 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). TIM-3과 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 TIM-3 이외의 항원과 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다. 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체의 경우, 이중특이성 항체는 PD-1 및 TIM-3 둘 모두와 특이적으로 결합하고, PD-1 및 TIM-3 이외의 항원과 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다. "단리된 항체"는 더 높은 순도로 단리된 항체, 예컨대 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 순도인 항체를 포함한다.
"인간화 항체"는 하나 이상의 CDR이 비-인간 종으로부터 유래되고 가변 영역 프레임워크가 인간 면역글로불린 서열로부터 유래되는 항체를 지칭한다. 인간화 항체는 프레임워크 영역 내에 의도적으로 도입된 돌연변이를 포함할 수 있으므로, 프레임워크는 발현된 인간 면역글로불린 또는 생식세포계열(germline) 유전자 서열의 정확한 카피가 아닐 수 있다.
"인간 항체"는 프레임워크 및 모든 6개 CDR 둘 모두가 인간 기원의 서열로부터 유래되는, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 갖는 항체를 지칭한다. 이 항체가 불변 영역 또는 불변 영역의 일부분을 포함하는 경우, 불변 영역은 또한 인간 기원의 서열로부터 유래된다.
인간 항체는, 항체의 가변 영역이 인간 생식세포계열 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자를 사용하는 시스템으로부터 얻어지는 경우, 인간 기원의 서열"로부터 유래되는" 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 그러한 예시적인 시스템은, 본 명세서에 기재된 바와 같이, 파지 상에 디스플레이된 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리, 및 인간 면역글로불린 유전자좌를 담지하는 유전자도입 인간 이외의 동물, 예컨대 마우스 또는 래트를 포함한다. "인간 항체"는 인간 생식세포계열 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자와 비교할 때 아미노산 차이를 포함할 수 있는데, 이는, 예를 들어 천연 발생 체세포 돌연변이 또는 프레임워크 또는 항원 결합 부위 내로의 의도적인 치환 도입, 또는 둘 모두에 기인한다. 전형적으로, 인간 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 또는 재배열된 면역글로불린 유전자에 의해 인코딩된 아미노산 서열과 아미노산 서열이 적어도 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 동일하다. 일부 경우에, "인간 항체"는, 예를 들어 문헌[Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86]에 기재된 바와 같이 인간 프레임워크 서열 분석으로부터 유래되는 공통 프레임워크 서열을 함유하거나, 예를 들어 문헌[Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96] 및 국제 특허 출원 공개 WO2009/085462호에 기재된 바와 같이 파지 상에 디스플레이된 인간 면역글로불린 유전자 라이브러리 내로 혼입된 합성 HCDR3을 함유할 수 있다.
인간 면역글로불린 서열로부터 유래되는 인간 항체는, 합성 CDR 및/또는 합성 프레임워크를 혼입시킨 파지 디스플레이와 같은 시스템을 사용하여 생성될 수 있거나, 시험관내 돌연변이생성(in vitro mutagenesis)을 거쳐서 항체 특성을 개선하여, 생체내에서 인간 항체 생식세포계열 레퍼토리에 의해 발현되지 않는 항체를 생성할 수 있다.
"재조합"은 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 항체 및 다른 단백질을 지칭한다.
"에피토프"는 항체가 특이적으로 결합하는 항원의 부분을 지칭한다. 에피토프는 전형적으로 아미노산 또는 다당류 측쇄와 같은 모이어티(moiety)의 화학적으로 활성(예컨대, 극성, 비극성 또는 소수성)인 표면 그룹화(grouping)로 이루어지며, 특이적인 3차원 구조 특징뿐만 아니라 특이적인 전하 특징을 가질 수 있다. 에피토프는 입체구조 공간 단위(conformational spatial unit)를 형성하는 연속 및/또는 불연속 아미노산으로 구성될 수 있다. 불연속 에피토프의 경우, 항원의 선형 서열의 상이한 부분으로부터의 아미노산이 단백질 분자의 접힘을 통해 3차원 공간에서 아주 근접하게 된다. 항체 "에피토프"는 에피토프를 확인하기 위해 사용되는 방법론에 따라 달라진다.
"다중특이성"은 적어도 2개의 별개의 항원 또는 이러한 항원 내의 적어도 2개의 별개의 에피토프, 예를 들어 3개, 4개 또는 5개의 별개의 항원 또는 에피토프와 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다.
"이중특이성"은 2개의 별개의 항원 또는 동일한 항원 내의 2개의 별개의 에피토프와 특이적으로 결합하는 항체를 지칭한다. 이중특이성 항체는 다른 관련 항원들에 대한, 예를 들어 다른 종, 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시쿨라리스(사이노몰거스, 사이노), 판 트로글로디테스(침팬지, 침프) 또는 칼리트릭스 자쿠스(코먼 마모셋, 마모셋)로부터의 동일한 항원(상동체)에 대한 교차-반응성을 가질 수 있거나, 2개 이상의 별개의 항원 사이에 공유되는 에피토프와 결합할 수 있다.
"변이체"는 하나 이상의 변형(modification), 예를 들어 치환, 삽입, 또는 결실에 의해 참조 폴리펩티드 또는 참조 폴리뉴클레오티드와 상이한 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
"벡터"는 생물 시스템 내에서 복제될 수 있는 또는 그러한 시스템들 사이에서 이동할 수 있는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 전형적으로 벡터 폴리뉴클레오티드는 생물 시스템에서 이들 폴리뉴클레오티드의 복제 또는 유지를 용이하게 하는 기능을 하는 복제 기점, 폴리아데닐화 신호 또는 선택 마커와 같은 요소들을 포함한다. 그러한 생물 시스템의 예에는 벡터를 복제할 수 있는 생물 구성요소들을 이용하는 세포 시스템, 바이러스 시스템, 동물 시스템, 식물 시스템 및 재구성된 생물 시스템이 포함될 수 있다. 벡터를 포함하는 폴리뉴클레오티드는 DNA 또는 RNA 분자 또는 이들의 혼성체일 수 있다.
"발현 벡터"는 발현 벡터 내에 존재하는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩되는 폴리펩티드의 번역을 유도하기 위하여 생물 시스템 또는 재구성된 생물 시스템에서 이용될 수 있는 벡터를 지칭한다.
"폴리뉴클레오티드"는 당-포스페이트 골격 또는 다른 균등한 공유결합적 화학 특성에 의해 공유 연결된 뉴클레오티드의 쇄를 포함하는 합성 분자를 지칭한다. cDNA는 폴리뉴클레오티드의 전형적인 예이다.
"폴리펩티드" 또는 "단백질"은 폴리펩티드를 형성하도록 펩티드 결합에 의해 연결된 적어도 2개의 아미노산 잔기를 포함하는 분자를 지칭한다. 50개 미만의 아미노산의 작은 폴리펩티드는 "펩티드"로 지칭될 수 있다.
PD-1은 인간 세포 예정사 단백질 1(programmed cell death protein 1), PD-1을 지칭한다. PD-1은 CD279 또는 PDCD1로도 공지되어 있다. 성숙 인간 PD-1(신호 서열이 없음)의 아미노산 서열을 서열 번호 1에 나타낸다. 세포외 도메인은 서열 번호 1의 잔기 1 내지 150에 걸쳐 이어져 있고, 막관통 도메인은 잔기 151 내지 171에 걸쳐 이어져 있고, 세포질 도메인은 잔기 172 내지 268에 걸쳐 이어져 있다. 본 명세서 전체에 걸쳐, 인간 PD-1의 세포외 도메인 "huPD1-ECD" 는 서열 번호 1의 잔기 1 내지 149의 아미노산 서열을 갖는 단백질을 지칭하며, 이를 서열 번호2에 나타낸다. 본 명세서에서 "PD-1"은, 명백하게 반대로 언급되지 않는 한, 인간 성숙 PD-1을 지칭한다.
TIM-3은 HAVCR2라고도 불리는 인간 간염 A 바이러스 세포 수용체 2를 지칭한다. 성숙 인간 TIM-3(신호 서열이 없음)의 아미노산 서열을 서열 번호 138에 나타낸다. 세포외 도메인은 서열 번호 138의 잔기 1 내지 181에 걸쳐 이어져 있고, 막관통 도메인은 잔기 182 내지 202에 걸쳐 이어져 있고, 세포질 도메인은 잔기 203 내지 280에 걸쳐 이어져 있다. 본 명세서 전체에 걸쳐, 인간 TIM-3의 세포외 도메인 "huTIM-3-ECD"는 서열 번호 138의 잔기 1 내지 179의 아미노산 서열을 갖는 단백질을 지칭하며, 이를 서열 번호 89에 나타낸다. 본 명세서에서 "TIM-3"은, 명백하게 반대로 언급되지 않는 한, 인간 성숙 TIM-3을 지칭한다.
"와 병용하여"는 둘 이상의 치료제가 대상에게 혼합물 상태로 함께 투여되거나, 단제(single agent)로서 동시에 투여되거나, 또는 단제로서 임의의 순서로 순차적으로 투여됨을 의미한다.
"과발현하다", "과발현된", 및 "과발현"은 호환적으로 사용되며, 참조 샘플에 비교할 때 측정가능하게 더 높은 수준의 PD-1, TIM-3, PD-L1, PD-L2, 또는 TIM-3 리간드를 갖는 암 세포, 악성 세포, 또는 암 조직과 같은 샘플을 지칭한다. 과발현은 유전자 증폭에 의해, 또는 증가된 전사 또는 번역에 의해 야기될 수 있다. 샘플 내의 단백질의 발현 및 과발현은, 예를 들어 살아 있거나 용해된 세포 상에서 ELISA, 면역형광, 유세포측정, 또는 방사면역검정을 사용하는 잘 공지된 검정을 사용하여 측정할 수 있다. 샘플 내의 폴리뉴클레오티드의 발현 및 과발현은, 예를 들어 형광 동소 보합법(fluorescent in situ hybridization), 서던 블로팅, 또는 PCR 기술을 사용하여 측정할 수 있다. 샘플 내의 단백질 또는 폴리뉴클레오티드의 수준이 참조 샘플에 비교할 때 1.5-배 이상 더 높거나 통계적으로 유의한 경우, 단백질 또는 폴리뉴클레오티드는 과발현된다. 참조 샘플의 선택은 공지되어 있다.
"샘플"은 대상 내에 존재하는 유체, 세포, 또는 조직뿐만 아니라 대상으로부터 단리된 유사한 유체, 세포, 또는 조직의 집합을 지칭한다. 예시적인 샘플은 생물학적 유체, 예컨대 혈액, 혈청, 및 장막 유체, 혈장, 림프, 소변, 타액, 낭액, 눈물 방울, 배설물, 객담, 분비 조직 및 장기의 점막 분비물, 질 분비물, 복수액, 예컨대 비-고형 종양과 연계된 것들, 흉강, 심낭, 복막강, 복강, 및 다른 체강의 유체, 기관지 세척에 의해 수집된 유체, 대상 또는 생물학적 공급원과 접촉된 액체 용액, 예를 들어, 세포 또는 장기 조건화 배지를 포함하는 세포 및 장기 배양 배지, 세척액 등, 조직 생검물, 세침 흡인물, 또는 외과적으로 절제된 종양 조직이다.
"암 세포" 또는 "종양 세포"는 생체내, 생체외, 또는 조직 배양에서의 암성, 전암성, 또는 형질전환 세포를 지칭하며, 이는 자발적이거나 유도된 표현형 변화를 갖는다. 이러한 변화가 반드시 새로운 유전 물질의 흡수를 수반하지는 않는다. 형질전환은 형질전환 바이러스에 의한 감염 및 새로운 게놈 핵산의 혼입, 외인성 핵산의 흡수로부터 일어날 수 있지만, 또는 그것이 자발적으로 또는 발암물질에 대한 노출 후에 일어남으로써 내인성 유전자를 돌연변이화할 수도 있다. 형질전환/암은 시험관내, 생체내, 및 생체외에서 누드 마우스 등과 같은 적합한 동물 숙주 내의 형태학적 변화, 세포의 불멸화, 비정상 성장 제어, 병소 형성, 증식, 악성종양, 종양 특이적 표지자 수준의 변조(modulation), 침습성, 종양 성장에 의해 예시된다(문헌[Freshney, Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique (3rd ed. 1994)]).
"약"은 당업자에 의해 결정된 바와 같은 특정 값이 허용되는 오차 범위 내에 있음을 의미하며, 이는 어떻게 그 값이 측정 또는 결정되는지, 즉 측정 시스템의 제한사항에 부분적으로 좌우될 것이다. 특정 검정, 결과, 또는 실시 형태와 관련하여 본 명세서에서 실시예 또는 다른 곳에 명백하게 달리 언급되지 않는 한, "약"은 당업계의 관행에 따라 1 표준 편차, 또는 최대 5%의 범위 이내에 있음을 의미하는데, 어느 쪽이든 더 큰 것이다.
"이중특이성 PD-1/TIM-3 항체", "PD-1/TIM-3 항체", "이중특이성 항-PD-1/TIM-3 항체", 또는 "항-PD-1/TIM-3 항체"는 PD-1과 특이적으로 결합하는 하나 이상의 결합 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 하나 이상의 결합 도메인을 포함하는 분자를 지칭한다. PD-1 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 도메인은 전형적으로 VH/VL 쌍이다. 이중특이성 항-PD-1/TIM-3 항체는 PD-1 또는 TIM-3에 대한 그의 결합의 관점에서 1가일 수 있다.
"결합가(valent)"는 분자 내의 항원에 특이적인 명시된 수의 결합 부위의 존재를 지칭한다. 그렇기 때문에, 용어 "1가", "2가", "4가", 및 "6가"는 분자 내의 항원에 특이적인 각각 1개, 2개, 4개, 및 6개의 결합 부위의 존재를 지칭한다.
"항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포"는 특이적 항원, 또는 그의 면역자극성 에피토프에 의해 활성화된 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 지칭한다.
"CD137"(종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리 구성원 9, TNFRSF9, 4-1BBL이라고도 불림)은 서열 번호 281에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 인간 CD137 분자를 지칭한다.
서열 번호 281
MGNSCYNIVATLLLVLNFERTRSLQDPCSNCPAGTFCDNNRNQICSPCPPNSFSSAGGQRTCDICRQCKGVFRTRKECSSTSNAECDCTPGFHCLGAGCSMCEQDCKQGQELTKKGCKDCCFGTFNDQKRGICRPWTNCSLDGKSVLVNGTKERDVVCGPSPADLSPGASSVTPPAPAREPGHSPQIISFFLALTSTALLFLLFFLTLRFSVVKRGRKKLLYIFKQPFMRPVQTTQEEDGCSCRFPEEEEGGCEL
"TIGIT"(Ig 및 ITIM 도메인을 가진 T-세포 면역수용체라고도 불림)는 서열 번호 301에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 인간 TIGIT 분자를 지칭한다.
서열 번호 301
MMTGTIETTGNISAEKGGSIILQCHLSSTTAQVTQVNWEQQDQLLAICNADLGWHISPSFKDRVAPGPGLGLTLQSLTVNDTGEYFCIYHTYPDGTYTGRIFLEVLESSVAEHGARFQIPLLGAMAATLVVICTAVIVVVALTRKKKALRIHSVEGDLRRKSAGQEEWSPSAPSPPGSCVQAEAAPAGLCGEQRGEDCAELHDYFNVLSYRSLGNCSFFTETG
"작용제"는, 세포 단백질에 결합할 때, 단백질의 천연 리간드에 의해 유도되는 하나 이상의 반응 또는 활성을 유도하는 분자를 지칭한다. 하나 이상의 반응 또는 활성이 작용제의 부재 하에(예를 들어, 음성 대조군) 유도되는 하나 이상의 반응 또는 활성보다 약 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 이상 만큼 더 크게 유도될 경우, 또는 그 유도가 작용제의 부재 하의 유도에 비교할 때 통계적으로 유의한 경우, 그 분자는 작용제이다. 작용제는 항체, 가용성 리간드, 또는 소분자일 수 있다. 예시적인 작용제는 T 세포 활성화 분자와 특이적으로 결합하는 작용 항체(agonistic antibody)이다.
"길항제"는, 세포 단백질에 결합될 때, 단백질의 천연 리간드에 의해 유도되는 적어도 하나의 반응 또는 활성을 억제하는 분자를 지칭한다. 분자는, 적어도 하나의 반응 또는 활성이, 길항제의 부재 하에서(예를 들어, 음성 대조군) 억제되는 적어도 하나의 반응 또는 활성보다 적어도 약 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 더 많이 억제될 때, 또는 그러한 억제가 길항제의 부재 하에서의 억제에 비하여 통계학적으로 유의할 때, 길항제이다. 길항제는 항체, 가용성 리간드, 소분자, DNA 또는 RNA, 예컨대 siRNA일 수 있다. 예시적인 길항제는 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체, 또는 T 세포 저해 분자와 특이적으로 결합하는 길항 항체이다. PD-1이 그의 수용체 PD-L1 또는 PD-L2에 결합함으로써 유도되는 전형적인 반응 또는 활성은 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ 세포 증식의 감소 또는 T 세포에 의한 인터페론-γ(IFN-γ) 생성의 감소일 수 있으며, 이는, 예를 들어 종양에 대한 면역 반응의 억제를 유발한다. TIM-3이 그의 수용체, 예컨대 갈렉틴-9에 결합함으로써 유도되는 전형적인 반응 또는 활성은 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ 세포 증식의 감소, T 세포에 의한 감소된 IFN-γ 생성의 감소, 또는 CD4+ 또는 CD8+ 세포 상에서의 CD137 표면 발현의 감소일 수 있으며, 이는, 예를 들어 종양에 대한 면역 반응의 억제를 초래한다. 마찬가지로, T 세포 저해 분자에 의해 유도되는 전형적인 반응 또는 활성은 면역억제이다. 그러므로, PD-1과 특이적으로 결합하는 PD-1 길항 항체, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체, 또는 T 세포 저해 분자와 특이적으로 결합하는 길항 항체는 저해 경로를 저해함으로써 면역 반응을 유도한다.
"대상"에는 인간 또는 인간외 동물이 포함된다. "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유류 및 비포유류, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다. 표시된 경우를 제외하고는, 용어 "환자" 또는 "대상"은 호환적으로 사용된다.
달리 명백하게 언급되지 않는 한, 본 명세서 전체에 걸쳐 항체 불변 영역 내의 아미노산 잔기의 번호화는 문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)]에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다.
표 1에 나타낸 바와 같은 종래의 1-문자 및 3-문자 아미노산 코드가 본 명세서에 사용된다.
[표 1]
Figure pct00001
조성물
본 발명은 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 및 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 제공한다. 본 발명은 본 발명의 폴리펩티드 및 항체를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 그의 상보적 핵산, 벡터, 숙주 세포, 및 그의 제조 및 사용 방법을 제공한다.
PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체
PD-1은 리간드 결합시에 다중 기전을 통해 T 세포 작용을 억제한다(문헌[Pauken & Wherry (2015) Trends in Immunology 36(4): 265-276]). PD-1 결합은 TCR과의 공배치(co-localization) 및 TCR 근위 신호전달 분자(proximal signaling molecule)의 탈인산화의 후속 유도, 세포 주기 진행 및 T 세포 증식의 저해를 유발하는 Ras/MEK/ERK 경로의 저해, BATF 전사 인자의 상향조절을 유발하는 PI3K/AKT 경로의 억제를 통한 T 세포 대사작용의 리프로그래밍(reprogramming) 및 세포 성장 및 생존의 저해, 및 조절 T 세포의 발생, 유지, 및 작용의 변조를 통해 T 세포 수용체(TCR) 신호전달을 직접 저해한다. PD-1은 또한 T 세포 운동성을 증가시키고 T 세포와 표적 세포 사이의 상호작용의 지속을 제한함으로써, T 세포 활성화의 정도를 감소시키는 것으로 제시되어 있다(문헌[Honda et al., (2014)Immunity 40(2):235-47]).
종양은 종양 미세환경(TME)에서 T 세포 작용을 하향조절하고 면역 파괴를 회피하기 위해 PD-1 경로를 편입시켰다. TME에서는, 지속적 항원 및 염증의 조건 하에, T 세포가 소진되거나 작용이상이 되고 점진적으로 그의 이펙터 작용 및 증식 능력을 상실한다. 소진된 T 세포는 흔히 TIM-3 또는 LAG-3과 같은 다른 저해 수용체와 함께 고수준의 PD-1을 발현시킨다(문헌[Pauken & Wherry (2015) Trends in Immunology 36(4): 265-276]). PD-1 리간드 중의 하나인 PD-L1 또한 다양한 종양에서 상향조절된다. PD-L1 발현은 암 세포 그 자체 및/또는 종양 연계된 대식세포, 수지상 세포, 섬유모세포, 및 활성화 T 세포를 포함하는 침윤 면역 세포 상에서 일어난다(문헌[Chen et al., 2012 Clin Cancer Res 18(24):6580-7]). 이러한 설정에서, PD-1 결합은 항-종양 T 세포 반응을 제한하고 면역 회피를 유발하는 것으로 가정된다. 최근의 연구는 다수의 고형 종양에서 PD-1 발현의 더 높은 빈도 및 수준이 종양 침윤 림프구(TIL) 상에서 일어나는 것을 나타냈다. 중요하게는, 더 낮은 증식 및 이펙터 작용에 의해 입증되는 바와 같이, 이러한 PD-1+ TIL이 작용으로 손상된다(문헌[Pauken & Wherry; 2015, Trends in Immunology 36(4): 265-276]). 이러한 데이터는 PD-1이 TME에서 면역 억제를 매개한다는 가설을 지지한다.
종양에서 T 세포 소진은 PD-1 경로 차단에 의해 적어도 부분적으로 가역적이다. 다수의 전임상 종양 모델에서 항-PD-1/PD-L1 항체는 T 세포 작용을 향상시키고 개선된 항-종양 면역력을 유발하는 것으로 나타났다. PD-1/PD-L1 항체는 또한 다수의 고형 종양에서 임상 반응을 촉진하는 것으로 나타났으며, 객관적 반응률(ORR: overall response rate)은 흑색종에서 20 내지 40%, 비-소세포 폐암(NSCLC: non-small cell lung cancer)에서 10 내지 24%, 신세포 암종(RCC: renal cell carcinoma)에서 12 내지 31%, 방광암에서 24 내지 52%, 그리고 두경부암에서 20%이다(문헌[Swaika et al., (2015) Mol Immunol 67(2 Pt A):4-17]).
본 발명은 각각 서열 번호 82, 83, 및 84, 또는 각각 서열 번호 82, 83, 및 85의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 86, 87, 및 88의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 82, 83, 및 84의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 86, 87, 및 88의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 82, 83, 및 85의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 86, 87, 및 88의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
서열 번호 82, 83, 84, 85, 86, 87, 및 88은, 유사한 HCDR1, HCDR2, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 서열, 및 2개의 유사한 HCDR3 군의 서열을 갖는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 친화도-성숙 변이체의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 속 서열을 나타낸다. 속 내의 항체는 약 1x10-7 M 미만, 예컨대 약 1x10-8 M 미만, 예를 들어 약 1x10-9 M 미만, 또는 예를 들어 약 1x10-10 M 미만의 KD로 PD-1과 결합한다. 그러한 예시적인 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같이 항체 PD1B114, PD1B149, PD1B160, PD1B162, PD1B164, PD1B11, PD1B183, PD1B184, PD1B185, PD1B187, PD1B71, PD1B177, PD1B70, PD1B175, PD1B194, PD1B195, PD1B196, PD1B197, PD1B198, PD1B199, PD1B200, PD1B201, 및 PD1B244의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 아미노산 서열을 갖는 항체이다.
서열 번호 82
X1YX2IX3,
상기 식에서,
X1은 S 또는 D이고;
X2는 V 또는 A이며;
X3은 H 또는 S이다.
서열 번호 83
GIIPIX4X5TANYAQKFQG,
상기 식에서,
X4는 Y 또는 F이고;
X5는 G 또는 D이다.
서열 번호 84
PGLAAAYDTGX6LDY,
상기 식에서,
X6은 N 또는 S이다.
서열 번호 85
GX7X8X9X10TGX11LDY,
상기 식에서,
X7은 T 또는 Y이고;
X8은 L 또는 V이며;
X9는 D 또는 R이고;
X10은 R 또는 A이며;
X11은 H 또는 M이다.
서열 번호 86
RASQSVX12X13YLA,
상기 식에서,
X12는 S, R, 또는 D이고;
X13은 S 또는 N이다.
서열 번호 87
DASX14RAT,
상기 식에서,
X14는 N, D, Y, S, 또는 T이다.
서열 번호 88
QQRX15X16WPLT,
상기 식에서,
X15는 S, N, G, E, D, W, 또는 A이고;
X16은 N, Y, E, 또는 A이다.
일부 실시 형태에서, PD-1과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 하기 특성 중 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개를 갖는다:
a) 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정됨;
b) 약 100 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨;
c) 약 1 nM 미만의 KD로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨;
d) 약 100 nM 미만의 KD로 사이노몰거스 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨; 또는
e) 약 1 nM 미만의 KD로 사이노몰거스 PD-1과 결합하며,
여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨.
그러한 예시적인 항체는 본 명세서에 기재된 바와 같이 PD-1 항체 PD1B114, PD1B149, PD1B160, PD1B162, PD1B164, PD1B11, PD1B183, PD1B184, PD1B185, PD1B187, PD1B71, PD1B177, PD1B70, PD1B175, PD1B194, PD1B195, PD1B196, PD1B197, PD1B198, PD1B199, PD1B200, PD1B201, 및 PD1B244이다.
일부 실시 형태에서, PD-1과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정되고, 약 100 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, PD-1과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정되고, 약 10 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, PD-1과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정되고, 약 100 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 사이노몰거스 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, PD-1과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정되고, 약 10 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 사이노몰거스 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화는 공지된 프로토콜 및 실시예 1에 기재된 것들을 사용하여 혼합 림프구 반응(MLR: Mixed Lymphocyte Reaction) 검정에서의 증가된 T 세포 증식, MLR 검정에서의 증가된 인터페론-γ(IFN-γ) 분비, MLR 검정에서의 증가된 TNF-α 분비, 사이토메갈로바이러스 항원 검정(CMV 검정)에서의 증가된 IFN-γ 분비, 또는 CMV 검정에서의 증가된 TNF-α 분비를 측정함으로써 평가할 수 있다. 측정된 T 세포 작용성이 본 발명의 항체에 의해 용량-의존적 방식으로 증가할 경우, 본 발명의 항체는 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T의 활성화를 향상시킨다.
인간 또는 사이노몰거스 PD-1에 대한 항체의 친화도는 임의의 적합한 방법을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있다. 그러한 방법은 당업자에게 알려진 ProteOn XPR36, Biacore 3000 또는 KinExA 기기, ELISA 또는 경쟁적 결합 검정을 이용할 수 있다. 특정 항체/ PD-1 상호작용의 측정된 친화도는 상이한 조건(예를 들어, 오스몰 농도, pH) 하에서 측정된다면 달라질 수 있다. 따라서, 친화도 및 기타 결합 파라미터(예를 들어, KD, Kon, Koff)의 측정은 전형적으로 표준화된 조건, 및 표준화된 완충액, 예컨대 본 명세서에 기재된 완충액을 사용하여 행해진다. 예를 들어, 바이아코어 3000 또는 프로테온을 사용하는 친화도 측정에 대한 내부 오차(표준 편차, SD로서 측정됨)는 전형적인 검출 한계 내에서의 측정에 대해 전형적으로 5 내지 33% 이내일 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 따라서, KD와 관련하여 용어 "약"은 이 검정에서의 전형적인 표준 편차를 반영한다. 예를 들어, 1x10-9 M의 KD에 대한 전형적인 SD는 최대 ±0.33x10-9 M이다.
일부 실시 형태에서, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 또는 48의 중쇄 가변 영역(VH) 내에 함유된 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하며, 여기서 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 은 초티아, 카바트(Kabat), 또는 IMGT에 의해 정의된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 또는 62의 경쇄 가변 영역(VL) 내에 함유된 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하며, 여기서 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR은 초티아, 카바트, 또는 IMGT에 의해 정의된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
서열 번호 10, 11, 또는 12의 HCDR1;
서열 번호 13, 14, 또는 15의 HCDR2; 및
서열 번호 16, 17, 18, 또는 19의 HCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
서열 번호 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25의 LCDR1;
서열 번호 26, 27, 28, 29, 또는 30의 LCDR2; 및
서열 번호 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40의 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
서열 번호 10, 11, 또는 12의 HCDR1;
서열 번호 13, 14, 또는 15의 HCDR2;
서열 번호 16, 17, 18, 또는 19의 HCDR3;
서열 번호 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25의 LCDR1;
서열 번호 26, 27, 28, 29, 또는 30의 LCDR2; 및
서열 번호 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40의 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
각각 서열 번호 10, 13, 및 16;
각각 서열 번호 10, 14, 및 16;
각각 서열 번호 10, 13, 및 17;
각각 서열 번호 10, 13, 및 18;
각각 서열 번호 11, 15, 및 18;
각각 서열 번호 10, 13, 및 19;
각각 서열 번호 10, 14, 및 17; 또는
각각 서열 번호 12, 13, 및19의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
각각 서열 번호 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 21, 26, 및 32;
각각 서열 번호 22, 27, 및 33;
각각 서열 번호 22, 26, 및 34;
각각 서열 번호 23, 28, 및 35;
각각 서열 번호 20, 26, 및 36;
각각 서열 번호 21, 27, 및 37;
각각 서열 번호 23, 26, 및 32;
각각 서열 번호 22, 26, 및 32;
각각 서열 번호 24, 26, 및 38;
각각 서열 번호 20, 29, 및 39;
각각 서열 번호 20, 30, 및 32;
각각 서열 번호 25, 26, 및 40; 또는
각각 서열 번호 24, 26, 및32의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 약 100 nM 미만, 임의로 약 10 nM 미만, 예를 들어 약 1 nM 미만, 예컨대 약 500 pM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 약 100 nM 미만, 임의로 약 10 nM 미만, 예를 들어 약 1 nM 미만, 예컨대 약 500 pM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 사이노몰거스 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, VH 및 VL은 각각 서열 번호 196 및 197의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고, IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고, IgG4/κ 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 72의 중쇄(HC) 및 서열 번호 73의 경쇄(LC)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고, IgG2/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고, IgG2/κ 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 흑색종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 폐암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-소세포 폐암(NSCLC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 편평상피 NSCLC의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-편평상피 NSCLC의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 폐 선암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 신세포 암종(RCC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 중피종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비인두 암종(NPC: nasopharyngeal carcinoma)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 결장직장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 전립선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 거세-저항성 전립선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 위암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 난소암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 위장암(gastric cancer)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 간암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 췌장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 갑상선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 두경부의 편평상피세포 암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 식도 또는 위장관의 암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 유방암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 나팔관암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 뇌암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 요도암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 자궁내막증의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 자궁경부암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 전이 병변의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 혈액성 악성종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-호지킨 림프종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 만성 림프구성 백혈병의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 145의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, FGFR 저해제와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, 백신과 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, GITR과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 271)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, CD137과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 281)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, OX-40과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 279)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, VH 및 VL은 각각 서열 번호 198 및 199의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 63의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 약 100 nM 미만, 임의로 약 10 nM 미만, 예를 들어 약 1 nM 미만, 예컨대 약 100 pM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, IgG4/κ 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 74의 HC 및 서열 번호 75의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, IgG2/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, IgG2/κ 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 흑색종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 폐암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-소세포 폐암(NSCLC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 편평상피 NSCLC의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-편평상피 NSCLC의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 폐 선암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 신세포 암종(RCC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 중피종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비인두 암종(NPC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 결장직장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 전립선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 거세-저항성 전립선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 위암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 난소암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 위장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 간암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 췌장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 갑상선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 두경부의 편평상피세포 암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 식도 또는 위장관의 암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 유방암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 나팔관암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 뇌암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 요도암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 자궁내막증의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 자궁경부암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 전이 병변의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 혈액성 악성종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-호지킨 림프종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 만성 림프구성 백혈병의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 145의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, FGFR 저해제와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, 백신과 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, GITR과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 271)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, CD137과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 281)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, OX-40과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 279)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 12, 13, 19, 24, 26, 및 38의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 58의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 11, 15, 18, 20, 30, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 60의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, VH 및 VL은 각각 서열 번호 202 및 203의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 76의 HC 및 서열 번호 77의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 13, 16, 20, 26, 및 31의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 212의 HC 및 서열 번호 213의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 13, 16, 21, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 50의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 214의 HC 및 서열 번호 215의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 14, 16, 22, 27, 및 33의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 51의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 216의 HC 및 서열 번호 217의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 14, 16, 22, 26, 및 34의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 52의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 218의 HC 및 서열 번호 219의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 14, 16, 23, 28, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 53의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 220의 HC 및 서열 번호 221의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 13, 17, 20, 26, 및 31의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 13, 17, 20, 26, 및 36의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 54의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 222의 HC 및 서열 번호 223의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 13, 17, 21, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 50의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 224의 HC 및 서열 번호 225의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 13, 17, 21, 27, 및 37의 HCDR1, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 55의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 226의 HC 및 서열 번호 227의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 13, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 13, 17, 22, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 57의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 228의 HC 및 서열 번호 229의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 13, 18, 20, 26, 및 31의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 44의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 11, 15, 18, 20, 26, 및 31의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 13, 19, 20, 26, 및 31의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 46의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 12, 13, 19, 20, 26, 및 31의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 28, 및 35의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 53의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 14, 17, 22, 26, 및 34의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 52의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 12, 13, 19, 20, 29, 및 39의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 59의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 11, 15, 18, 25, 26, 및 40의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 11, 15, 18, 24, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 62의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
본 발명은 또한 서열 번호 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 63, 또는 64의 VH를 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 또는 65의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 63, 또는 64의 VH 및 서열 번호 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 또는 65의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 예시적인 길항 항체의 VH, VL, HCDR, 및 LCDR 서열을 표 2에 나타낸다.
실시예에 예시된 실시 형태가 중쇄로부터의 하나의 가변 영역 및 경쇄로부터의 하나의 가변 영역으로 된 가변 영역들의 쌍을 포함할지라도, 숙련자는 대안적인 실시 형태가 단일의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역들을 포함할 수 있음을 인식할 것이다. 단일의 가변 영역을 사용하여, 예를 들어 인간 PD-1에 결합할 수 있는 2-도메인 특이적 항원-결합 단편을 형성할 수 있는 가변 도메인에 대해 스크리닝할 수 있다. 스크리닝은, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO1992/01047호에 개시된 계통적 이중 조합 접근법(hierarchical dual combinatorial approach)을 사용하여 파지 디스플레이 스크리닝 방법에 의해 달성될 수 있다. 이러한 접근법에서는, VH 또는 VL 쇄 클론 중 하나를 함유하는 개별적인 콜로니를 사용하여, 다른 쇄(VL 또는 VH)를 인코딩하는 클론의 완전한 라이브러리를 감염시키고, 생성되는 2-쇄 특이적 항원-결합 도메인을 공지된 방법 및 본 명세서에 기재된 것들을 사용하여 파지 디스플레이 기술에 따라 선택한다. 따라서, 개별적인 VH 및 VL 폴리펩티드 쇄는 국제 특허 출원 공개 WO1992/01047호에 개시된 방법을 사용하여 인간 PD-1과 특이적으로 결합하는 추가적인 항체를 확인하기에 유용하다.
일부 실시 형태에서, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 다중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 이중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, PD-1과 특이적으로 결합하는 이중특이성 길항 항체는 PD-L1(서열 번호 5), PD-L2(서열 번호 8), LAG-3(서열 번호 293), TIM-3(서열 번호 138), CEACAM-1(서열 번호 296), CEACAM-5(서열 번호 307), OX-40(서열 번호 279), GITR(서열 번호 271), CD27(서열 번호 280), VISTA(서열 번호 286), CD137(서열 번호 281), TIGIT(서열 번호 301), 또는 CTLA-4(서열 번호 292)와 결합한다. 이중특이성 및 다중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 생성될 수 있다.
[표 2]
Figure pct00002
상동 항체
표 2, 표 21, 및 표 22에 나타낸 VH, VL, 또는 VH 및 VL 아미노산 서열을 포함하는, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분의 변이체는 본 발명의 범주 내에 있다. 예를 들어 변이체는, 모 항체에 비교할 때 상동 항체가 개선된 작용 특성을 유지하거나 갖는 한, VH 및/또는 VL 내의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 서열 동일성은 본 발명의 VH 또는 VL 아미노산 서열에 대해 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%일 수 있다. 임의로, 모 항체에 비교한 변이체의 임의의 변이는 변이체의 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 63, 또는 64의 VH를 포함하며, VH는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 갖는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 또는 65의 VL을 포함하며, VL은 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 갖는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한,
서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 50의 VL;
서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 51의 VL;
서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 52의 VL;
서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 53의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 54의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 50의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 55의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 56의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 57의 VL;
서열 번호 44의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 46의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 53의 VL;
서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 52의 VL;
서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 58의 VL;
서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 59의 VL;
서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 60의 VL;
서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 61의 VL;
서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 62의 VL; 또는
서열 번호 63의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 64, 또는 65의 VH와 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 또는 65의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 63, 또는 64의 VH와 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 또는 65의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호
각각 41 및 49;
각각 41 및 50;
각각 42 및 51;
각각 42 및 52;
각각 42 및 53;
각각 43 및 49;
각각 43 및 54;
각각 43 및 50;
각각 43 및 55;
각각 43 및 56;
각각 43 및 57;
각각 44 및 49;
각각 45 및 49;
각각 46 및 49;
각각 47 및 49;
각각 48 및 53;
각각 48 및 52;
각각 47 및 58;
각각 47 및 59;
각각 45 및 60;
각각 45 및 61;
각각 45 및 62; 또는
각각 63 및 65의 VH 및 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 상동 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 하기 특성 중 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개를 갖는다:
a) 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정됨;
b) 약 100 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨;
c) 약 1 nM 미만의 KD로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨;
d) 약 100 nM 미만의 KD로 서열 번호 3의 사이노몰거스 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨; 또는
e) 약 1 nM 미만의 KD로 서열 번호 3의 사이노몰거스 PD-1과 결합하며,
여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨.
일부 실시 형태에서, 항체는 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정되고, 약 100 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정되고, 약 10 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
2개의 서열들 사이의 % 동일성은 서열들에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수(즉, % 동일성 = 동일한 위치의 수/위치의 총수 × 100)이며, 이때 2개의 서열의 최적의 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭(gap)의 수, 및 각각의 갭의 길이를 고려한다.
2개의 아미노산 서열들 사이의 % 동일성은, PAM120 가중치 잔기(weight residue) 표, 12의 갭 길이 페널티, 및 4의 갭 페널티를 사용하여, ALIGN 프로그램(버전 2.0) 내에 포함된 E. 메이어스(E. Meyers) 및 W. 밀러(W. Miller)의 알고리즘(문헌[Comput Appl Biosci 4:11-17 (1988)])을 사용하여 결정될 수 있다. 추가로, 2개의 아미노산 서열들 사이의 % 동일성은, Blossum 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 및 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4의 갭 가중치 및 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 가중치를 사용하여, GCG 소프트웨어 패키지(http://_www_gcg_com에서 입수가능함) 내의 GAP 프로그램 내에 포함된 니들맨(Needleman) 및 분쉬(Wunsch)(문헌[J Mol Biol 48:444-453 (1970)]) 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.
보존적 변형을 가진 항체
본 발명은 또한, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 서열을 포함하는 VH 및 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 서열을 포함하는 VL을 포함하며, 여기서 CDR 서열 중 하나 이상은 본 명세서에 기재된 항체(예를 들어, 표 2, 표 21, 및 표 22에 나타낸 항체) 또는 그의 보존적 변형에 기초하는 명시된 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 항체는 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 모 길항 항체의 원하는 작용 특성을 유지하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
보존적 변형을 가진 항체는 하기 특성 중 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 5개를 갖는다:
a) 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정됨;
b) 약 100 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨;
c) 약 1 nM 미만의 KD로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨;
d) 약 100 nM 미만의 KD로 서열 번호 3의 사이노몰거스 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨; 또는
e) 약 1 nM 미만의 KD로 서열 번호 3의 사이노몰거스 PD-1과 결합하며,
여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정됨.
일부 실시 형태에서, 항체는 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정되고, 약 100 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 용량 의존적 방식으로 향상시키며, 여기서 활성화는 실시예 1에 기재된 바와 같이 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하여 측정되고, 약 10 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한
각각 서열 번호 10, 13, 16, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 10, 13, 16, 21, 26, 및 32;
각각 서열 번호 10, 14, 16, 22, 27, 및 33;
각각 서열 번호 10, 14, 16, 22, 26, 및 34;
각각 서열 번호 10, 14, 16, 23, 28, 및 35;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 20, 26, 및 36;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 21, 26, 및 32;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 21, 27, 및 37;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 23, 26, 및 32;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 22, 26, 및 32;
각각 서열 번호 10, 13, 18, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 11, 15, 18, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 10, 13, 19, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 12, 13, 19, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 28, 및 35;
각각 서열 번호 10, 14, 17, 22, 26, 및 34;
각각 서열 번호 12, 13, 19, 24, 26, 및 38;
각각 서열 번호 12, 13, 19, 20, 29, 및 39;
각각 서열 번호 11, 15, 18, 20, 30, 및 32;
각각 서열 번호 11, 15, 18, 25, 26, 및 40;
각각 서열 번호 11, 15, 18, 24, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
"보존적 변형"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 특성에 유의한 영향을 주지 않거나 그를 변경시키지 않는 아미노산 변형을 지칭한다. 보존적 변형은 아미노산 치환, 부가 및 결실을 포함한다. 보존적 치환은 아미노산이 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체된 것들이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기들의 패밀리는 잘 정의되어 있고, 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 염기성 측쇄(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 비극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 비하전된 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신, 트립토판), 방향족 측쇄(예를 들어, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘, 티로신), 지방족 측쇄(예를 들어, 글리신, 알라닌, 발린, 류신, 아이소류신, 세린, 트레오닌), 아미드(예를 들어, 아스파라긴, 글루타민), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 아이소류신), 및 황-함유 측쇄(시스테인, 메티오닌)를 가진 아미노산을 포함한다. 추가로, 폴리펩티드 내의 임의의 천연의 잔기는 또한 알라닌 스캐닝(scanning) 돌연변이생성(문헌[(MacLennan et al., Acta Physiol. Scand. Suppl. 643:55-67, 1998]; 문헌[Sasaki et al., Adv. Biophys. 35:1-24, 1998])에 대해 이전에 기재된 바와 같이 알라닌으로 치환될 수 있다. 본 발명의 항체에 대한 아미노산 치환은 잘 알려진 방법에 의해, 예를 들어 PCR 돌연변이생성(미국 특허 제4,683,195호)에 의해 이루어질 수 있다. 대안적으로, 변이체의 라이브러리를 알려진 방법을 사용하여 생성할 수 있는데, 예를 들어, 무작위(NNK) 또는 비무작위 코돈, 예를 들어 DVK 코돈 - 이는 11개의 아미노산(Ala, Cys, Asp, Glu, Gly, Lys, Asn, Arg, Ser, Tyr, Trp)을 인코딩함 - 을 사용하여 생성할 수 있다. 생성되는 항체 변이체들은 본 명세서에 기재된 검정을 사용하여 그들의 특성에 대해 시험될 수 있다.
TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체
T-세포 면역글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 3(TIM-3, 간염 A 바이러스 세포 수용체 2(HAVCR2)로도 공지됨)은 동시억제성 면역 체크포인트 수용체이며, 이는 적응 및 선천 면역 반응 둘 모두를 음성 조절하는 것으로 제시되어 있다. TIM-3은 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 특이적 서브세트 상에서 발현되며, T 세포 반응의 지속 및 규모를 제한하는 작용을 한다.
다수의 증거가 T 세포 반응의 조절에 있어서 TIM-3의 저해 역할을 지지한다. Tim-3-결핍 마우스는 항원-특이적 및 이식 관용 둘 모두의 유도에 있어서 결함을 나타내며, 이는 정상 면역 반응 중에 이펙터 T 세포를 저해하는 TIM-3과 일치한다(문헌[Sabatos et al., (2003) Nat Immunol 4(11):1102-1110], 문헌[Sanchez-Fueyo et al., (2003) Nat Immunol 4(11):1093-1101]). 항-TIM-3 항체는 동물 모델에서 실험적 자가면역성 뇌척수염(EAE)을 악화시킨다(문헌[Monney et al., (2002) Nature 415(6871):536-541]). TIM-3은 만성 감염 및 암에서 일어나는 작용이상 또는 소진된 T 세포 상태의 결정적 추진제인 것으로 나타났다(문헌[Sakuishi, K. and A. C.Anderson (2014). Tim-3 Regulation of Cancer Immunity. Tumor-Induced Immune Suppression. D. I. Gabrilovich and A. A. Hurwitz, Springer New York: 239-261]).
TIM-3의 차단은 이펙터 세포 내의 활성, 예컨대 사이토카인 분비 및 증식을 회복시키는 것으로 나타났다. 바이러스에 의해 소진된 세포 개체군, 예를 들어, HCV로 감염된 세포에서는, 둘 모두의 이펙터 세포 개체군, CD4+ 및 CD8+ T 세포에서 TIM-3-발현 세포(TIM-3+ 세포)가 TIM-3 음성 세포보다 더 적은 TNF-α 및 IFN-γ 사이토카인을 발현시킨다(문헌[Golden-Mason et al., (2009) J Virol 83:9122]). TIM-3의 차단은 HIV 환자로부터의 CD8+ T 세포에서, 또는 바이러스성 소진을 모방한 세포에서 증식을 회복시켰거나(문헌[Jones et al., (2008) J Exp Med 205:2763]), 전이성 환자의 PBMC로부터의 NY-ESO-1 특이적 T 세포에서 증식 및 IFN-γ 및/또는 TNF-α 분비를 회복시켰다(문헌[Fourcade et al., (2010) J Exp Med 207:2175]). TIM-3+ T 세포는 종양 내에 농축되고 면역 억제 종양 환경에 기여하는 것으로 확인되었다(문헌[Sakuishi et al., (2013) Oncoimmunology, 2:e23849]).
TIM-3의 차단(부분적으로 단독으로, 그리고 PD-1 경로 차단과 병용하여 상가적으로 또는 상승적으로)은 CT26 결장 암종(문헌[Sakuishi et al., (2010) J Exp Med 207(10):2187-94]), WT3 육종, 및 TRAMP-C1 전립선 암종(문헌[Ngiow et al., (2011) Cancer Res 71(10):3540-3551])을 포함하는 몇몇 전임상 암 모델에서 항-종양 효능을 나타냈다.
TIM-3이 T 세포 반응을 저해하는 기전은 완전히 이해되어 있지 않다. TIM-3의 세포질 테일은 다중의 티로신 잔기를 함유하지만(문헌[Ferris et al., (2014) J Immunol 193(4): 1525-1530]) PD-1 세포내 테일에서 발견되는 ITIM 또는 ITSM과 같은 저해성 신호전달 모티프가 결여되어 있다. Src 패밀리 티로신 키나제 Fyn 및 Lck는 TIM-3에 결합하는 것으로 나타났으나, 이러한 상호작용의 정확한 결과는 생체 내에서 아직 확인되지 않았다. TIM-3이 어떻게 T 세포 신호전달을 조절하는지에 대해 2개의 상반된 모델이 제시되었다. 한편으로는, TIM-3은 면역 시냅스(immunological synapse)에 포스파타제를 동원하고 Lck를 탈인산화함으로써 TCR 신호전달을 음성 조절하는 것으로 상정되었다(문헌[Clayton, et al., (2014) J Immunol 192(2):782-791]). 반면에, TIM-3은 또한 NFAT 활성 및 NFκB 신호전달의 증가된 활성화를 통해 TCR 신호전달을 향상시키고 역설적으로 T 세포를 더 소진된 상태를 향해 추진하는 것으로 제시되었다.
이펙터 T 세포 상의 발현에 더하여, TIM-3은 또한 조절 T 세포(T-reg) 상에서 발현되며 종양에서 억제성 T-reg 서브세트를 표지하는 것으로 나타났다. 1차 인간 세포 및 마우스 전임상 모델 두 모두를 사용하는 분석에서는, T 헬퍼1(Th1) 및 T 헬퍼 17(Th17) T 세포 반응의 저해에 있어서 TIM-3+ T-reg가 TIM-3- T-reg보다 더 효과적인 것으로 나타났다(문헌[Gautron et al., (2014) Eur J Immunol 44(9): 2703-2711; Sakuishi et al., (2013) Oncoimmunology, 2:e23849]). TIM-3은 고도로 억제성인 Treg 상에서 발현되므로, 그것은 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응을 직접 저해할 수 있다. 추가로, TIM-3+ Treg는 고수준의 IL-10을 발현시키며, 이는 항-종양 면역 반응 억제의 추가적인 간접 기전으로서 TME에서 이펙터 T 세포의 소진을 추진하는 것으로 제시되었다(문헌[Sakuishi et al., (2013) Oncoimmunology, 2:e23849]).
TIM-3은 단핵구/대식세포, 수지상 세포, 및 NK 세포를 포함하는 몇몇 선천 면역 세포 유형 상에서 발현된다. 기존의 데이터는 이러한 상이한 세포 유형에서의 TIM-3에 대한 억제성 역할과 일치한다.
TIM-3은 건강한 공여자에서 순환 CD14+ 단핵구에 의해 항시 발현되며, 만성 염증 및 암을 가진 환자에서는 말초 단핵구 상에서의 그의 발현이 유의적으로 증가한다(문헌[Rong et al., (2014) Tissue Antigens 83(2):76-81]). TIM-3 수준은 또한, 인접 조직으로부터의 대식세포에 비교하여 간세포 암종(HCC) 종양에 침윤하는 대식세포 상에서 상향조절되며, 대식세포를 M2 종양-촉진 표현형으로 분극화하는 것을 추진함에 있어서 역할을 하는 것으로 제시된다.
최근에, TIM-3은 마우스 종양에 침윤하는 수지상 세포 상에서 발현되는 것으로 보고되었다. 이러한 설정에서, TIM-3과 HMBG1의 상호작용은 면역자극성 핵산의 인식 및 이에 대한 반응을 방해함으로써 선천 면역력을 억제하는 것으로 제시되었다(문헌[Chiba et al., (2012) Immunol 13(9): 832-842]). TIM-3은 또한 말초 혈액 내의 NK 세포 상에서 항시 발현된다. 최근의 연구에서 진행성 흑색종 환자로부터의 NK 세포는 말초 NK 세포 상에서 고수준의 TIM-3을 발현시키는 것으로 나타났다. 중요하게는, TIM-3+ NK 세포가 작용적으로 소진되었으며 항-TIM-3 차단은 소진을 역전시키고 NK 세포 작용성을 향상시킬 수 있었다(문헌[da Silva et al., (2014) Cancer Immunol Res 2(5): 410-422]).
TIM-3은 리간드 갈렉틴-9(Gal-9), 포스파티딜세린(PtdSer), HMGB1, 및 CEACAM-1과 결합한다. S-유형 렉틴 갈렉틴-9는 뮤린 모델에서 TIM-3-연계 Th1 이펙터 작용을 저해하고 TIM-3-발현 T 세포 상의 세포자멸을 유도할 수 있다. PtdSer은 통상 원형질막의 세포내 측면 상에 체류하지만, 세포자멸 중에 세포외 측면으로 반전된다. PtdSer은 3개의 인간 TIM 패밀리 구성원(TIM-1, 3, 4) 모두에서 보존된 틈새와 결합한다. TIM-3에 대한 PtdSer 결합의 저해는 T-세포 반응을 활성화할 수 있다. 갈렉틴-9는 종양 세포에 의해 분비되며 항-종양 면역력으로부터의 회피에 기여할 수 있다. TIM-3이 그에 대한 "싱크"로서 작용할 수 있는 DNA 알라르민 HMGB1은 선천 면역력을 자극하는 HMGB1/RAGE 상호작용을 방지할 수 있다. CEACAM-1은 T 세포 상에서 이종이량체로서 시스, 및 리간드로서 트랜스, 둘 모두로 TIM-3과 상호작용할 수 있다. CEACAM-1과 TIM-3 사이의 상호작용은 면역 반응 신호전달의 차단을 매개하는 것을 보조할 수 있다. CT26 결장 암종에서 TIM-3 및 CEACAM-1의 동시-차단은 PD-L1 및 TIM-3의 동시-차단의 경우에 관찰된 것과 유사한 효능을 나타냈다.
따라서, TIM-3 작용을 저해하는 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체를 사용하는 TIM-3의 차단은 감염 및 항-종양 면역력에 대한 면역 반응을 개선할 수 있다.
본 발명은 또한 TIM-3과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공하며, 여기서 항체는 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합을 저해한다.
본 발명의 항체에 의한 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합의 저해는 경쟁 ELISA를 사용하여 평가할 수 있다. 예시적인 검정에서, 1 ㎍/ml 재조합 인간 Fc-TIM-3을 마이크로타이터 플레이트의 웰 상에 결합시키고, 웰을 세척하고 차단하고, 10 ㎍/ml의 시험 항체를 첨가한다. 세척 없이, 7.5 ㎍/ml 갈렉틴-9를 웰 내에 첨가하고 30 min 동안 인큐베이션한 후, 0.5 ㎍/ml 항-갈렉틴-9-비오틴 항체를 첨가하고 30 min 동안 인큐베이션한다. 플레이트를 세척하고 0.5 ㎍/mL 뉴트라비딘-HRP 접합체 다클론 항체를 첨가하고 30 분 동안 인큐베이션한다. 플레이트를 세척하고 발광 신호를 판독하기 직전에 POD 화학발광 기질을 첨가하였다. 본 명세서 및 실시예 1에 기재된 검정을 사용하여 갈렉틴-9의 결합이 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 이상 만큼 감소되는 경우, 본 발명의 항체는 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합을 저해한다. 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합을 저해하는 예시적인 항체는 항체 TM3B103, TM3B105, TM3B107, TM3B108, TM3B109, TM3B113, TM3B189, TM3B190, 및 TM3B196이다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시킨다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키며, 여기서 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화는 실시예 14에 기재된 방법에 따라 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상의 CD137 표면 발현의 통계적으로 유의한 향상을 측정함으로써 평가된다.
CMV 항원 자극에 반응하여 확대되는 항원 특이적 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 표지자로서 CD137을 사용하는 것은 본 발명의 TIM-3 길항 항체의 작용 효과의 검출을 가능하게 하였다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 TIM-3 잔기 32-47(WGKGACPVFECGNVVL)(서열 번호 261) 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 TIM-3 잔기 32-47(WGKGACPVFECGNVVL)(서열 번호 261) 및 잔기 50-56(DERDVNY)(서열 번호 262) 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 TIM-3 잔기 90-102(RIQIPGIMNDEKF)(서열 번호 263) 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 TIM-3 잔기 90-102(RIQIPGIMNDEKF)(서열 번호 263) 및 잔기 50-56(DERDVNY) 서열 번호 262 내에서 TIM-3과 결합한다.
"내에서"는 항체가 결합하는 에피토프 잔기의 80% 이상이 인용된 아미노산 연장부(amino acid stretch) 내에 체류하고, 항체가 결합하는 에피토프 잔기의 최대 20%가 인용된 아미노산 연장부의 외부에 체류함을 의미한다.
항체가 결합하는 Tim-3 에피토프는, 예를 들어 수소/중수소 교환(H/D 교환)을 사용하여, 또는 Tim-3과 복합체를 형성한 항체의 결정 구조를 분석함으로써 해상될 수 있다. 에피토프 잔기는 H/D 교환을 통한 중수소화 수준에서 5% 이상의 차이로 항체에 의해 보호되는 것들, 또는 항체와 TIM-3의 복합체의 결정 구조에서 항체와 결합하는 것으로 결정된 표면 노출 아미노산 잔기이다. 항체와 TIM-3의 복합체의 결정 구조에서, 에피토프 잔기는 항체 CDR 잔기들 중 임의의 것으로부터 4 ㅕ 이하의 거리 내에 체류하는 TIM-3 잔기이다.
H/D 교환 검정에서는, TIM-3 단백질을 중수소화된 물 중에서 항체의 존재 또는 부재 하에서 미리 결정된 시간 동안 인큐베이션하여, 항체에 의해 보호되지 않은 교환가능한 수소 원자에서의 중수소 혼입을 발생시킨 후, 단백질의 프로테아제 분해를 수행하고 LC-MS를 사용하여 펩티드 단편을 분석한다. 예시적인 검정에서, 5 μL의 시험 항체(10 ㎍) 또는 5 μL의 TIM-3과 시험 항체(각각 10 및 7.35 ㎍)의 복합체를 120 μL의 산화중수소 표지용 완충액(50 mM 포스페이트, 100 mM 소듐 클로라이드, pH 7.4)과 함께 0초, 60초, 300초, 1800초, 7200초, 및 14400초 동안 인큐베이션한다. 63 μL의 5 M 구아니딘 하이드로클로라이드를 첨가함으로써 중수소 교환을 켄칭(quenching)하며, 최종 pH는 2.5이다. 켄칭된 샘플에 대해 온-컬럼(on-column) 펩신/XIII형 프로테아제 분해 및 LC-MS 분석을 수행한다. 펩신/프로테아제 유형 XIII 분해를 위해, 63 μL의 5 M 구아니딘 하이드로클로라이드를 첨가하고(최종 pH는 2.5임) 혼합물을 3 min 동안 인큐베이션함으로써 125 μL 대조군 완충액(50 mM 포스페이트, 100 mM 소듐 클로라이드, pH 7.4) 중의 5 ㎍의 샘플을 변성시킨다. 이어서, 혼합물에 대해 온-컬럼 펩신/프로테아제 유형 XIII 분해를 수행하고 생성된 펩티드를 Q ExactiveTM Hybrid Quadrupole-Orbitrap Mass Spectrometer(Thermo)에 커플링된 Waters Acquity UPLC로 이루어진 UPLC-MS 시스템을 사용하여 분석한다. 원시 MS 데이터를 H/D 교환 MS 데이터 분석용 소프트웨어인 HDX WorkBench를 사용하여 처리한다. 중수소화된 펩티드와 그의 천연 형태(t0) 사이의 평균 질량 차이를 사용하여 중수소 수준을 계산한다. 펩티드 확인은 Mascot를 사용하여 TIM-3 서열에 대한 MS/MS 데이터의 검색을 통해 행해진다. 전구체 및 생성물 이온에 대한 질량 허용오차는 각각 20 ppm 및 0.05 Da이다.
X-선 결정구조해석의 경우, 표준 절차를 사용하여 TIM-3 및 시험 항체를 발현시키고 정제한다. TIM-3/시험 항체 복합체를 4®C에서 하룻밤 인큐베이션하고, 농축시키고, 크기-배제 크로마토그래피를 사용하여 복합체를 형성하지 않은 종으로부터 분리한다. 복합체는 다양한 공지된 시험 용액, 예를 들어 PEG3350, 암모늄 시트레이트, 및 2-(N-모폴리노)에탄설폰산(MES)을 함유하는 용액으로부터의 증기-확산 방법에 의해 결정화된다.
파지 디스플레이 라이브러리를 사용하여 TIM-3과 결합하는 항체를 단리하는 단계, TIM-3에 대한 결합에 대해 참조 항체 TM3B105(서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL) 또는 TM3B291(서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL)와 100% 만큼 경쟁하는 항체를 선택하는 단계, 및 항체/TIM-3 복합체의 결정 구조를 해석함으로써 생성된 항체의 에피토프를 확인하는 단계에 의해, Tim-3 잔기 32-47(WGKGACPVFECGNVVL)(서열 번호 261), 90-102(RIQIPGIMNDEKF)(서열 번호 263), 및/또는 50-56(DERDVNY)(서열 번호 262) 내의 항체 결합이 생성될 수 있다. 대안적으로, TIM-3의 잔기 32-47, 90-102, 및/또는 50-56을 포함하는 펩티드를 사용하여 마우스, 랫트, 또는 토끼가 면역화될 수 있고, 생성된 항체들을 인용된 영역 내에서의 그의 결합에 대해 평가할 수 있다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 164, 165, 및 166의 중쇄 상보성 결정 영역 1(HCDR1), HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 167, 168, 및 169의 경쇄 상보성 결정 영역 1(LCDR1), LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 164, 165, 및 166의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 167, 168, 및 169의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
서열 번호 164, 165, 166, 167, 168, 및 169는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 유래된 TIM-3 길항제의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 속 서열을 나타낸다. 속 서열은 도 13, 도 14, 도 15, 도 16, 도 17, 및 도 18에 제공된 서열 정렬을 유발한 구조 모델에 기초하여 생성되고 본 명세서에 요약되었다.
서열 번호 164
X17YX18MX19,
상기 식에서,
X17은 N, S, G, 또는 D이고;
X18은 W 또는 A이며;
X19는 S 또는 H이다.
서열 번호 165
X20IX21X22SGGSX23YYADSVKG,
상기 식에서,
X20은 A 또는 V이고;
X21은 S 또는 K이며;
X22는 G 또는 Y이고;
X23은 T 또는 K이다.
서열 번호 166
X24X25X26X27X28X29X30X31DY,
상기 식에서,
X24는 D, S, N, G, 또는 E이고;
X25는 H, P, E, T, 또는 L이며;
X26은 W, E, N이거나 결실되고;
X27은 D, P이거나 결실되며;
X28은 P, Y, D이거나 결실되고;
X29는 N, A, D, G이거나 결실되며;
X30은 F, P, R, W, 또는 V이고;
X31은 L 또는 F이다.
서열 번호 167
X32X33SQSVX34X35X36X37X38X39X40X41X42LA,
상기 식에서,
X32는 R 또는 K이고;
X33은 A 또는 S이며;
X34는 S, N, 또는 L이고;
X35는 S, A, N이거나 결실되며;
X36은 S이거나 결실되고;
X37은 S이거나 결실되며;
X38은 N이거나 결실되고;
X39는 N이거나 결실되며;
X40은 K이거나 결실되고;
X41은 S, D, 또는 N이며;
X42는 Y 또는 T이다.
서열 번호 168
X43ASX44RX45X46,
상기 식에서,
X43은 G, D, W, 또는 T이고;
X44는 S, N, 또는 T이며;
X45는 A 또는 E이고;
X46은 T 또는 S이다.
서열 번호 169
QQX47X48X49X50PX51T(서열 번호 169),
상기 식에서,
X47은 Y, G, 또는 S이고;
X48은 G 또는 Y이며;
X49는 S, H, 또는 T이고;
X50은 S, A, 또는 T이며;
X51은 L, I, 또는 W이다.
본 발명은 또한, 서열 번호 145, 146, 147, 148, 또는 149의 중쇄 가변 영역(VH) 내에 함유된 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하며, 여기서 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3은 초티아, 카바트, 또는 IMGT에 의해 정의되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한, 서열 번호 155, 156, 157, 또는 158의 경쇄 가변 영역(VL) 내에 함유된 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하며, 여기서 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3은 초티아, 카바트, 또는 IMGT에 의해 정의되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
서열 번호 90, 91, 92, 또는 93의 HCDR1;
서열 번호 99, 100, 또는 101의 HCDR2; 및
서열 번호 107, 108, 109, 110, 또는 111의 HCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
서열 번호 117, 118, 119, 또는 120의 LCDR1;
서열 번호 126, 127, 128, 또는 129의 LCDR2; 및
서열 번호 135, 136, 137, 또는 139의 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
서열 번호 90, 91, 92, 또는 93의 HCDR1;
서열 번호 99, 100, 또는 101의 HCDR2;
서열 번호 107, 108, 109, 110, 또는 111의 HCDR3;
서열 번호 117, 118, 119, 또는 120의 LCDR1;
서열 번호 126, 127, 128, 또는 129의 LCDR2; 또는
서열 번호 135, 136, 137, 또는 139의 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
각각 서열 번호 90, 99, 및 107;
각각 서열 번호 91, 99, 및 108;
각각 서열 번호 91, 99, 및 109;
각각 서열 번호 92, 100, 및 110; 또는
각각 서열 번호 93, 101, 및 111의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
각각 서열 번호 117, 126, 및 135;
각각 서열 번호 118, 127, 및 136;
각각 서열 번호 119, 128, 및 137; 또는
각각 서열 번호 120, 129, 및 139의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분은
각각 서열 번호 90, 99, 107, 117, 126, 및 135;
각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136;
각각 서열 번호 91, 99, 109, 119, 128, 및 137;
각각 서열 번호 92, 100, 110, 117, 126, 및 135; 또는
각각 서열 번호 93, 101, 111, 120, 129, 및 139의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 164, 165, 및 108의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 118, 168, 및 169의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 단리된 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 TIM-3 잔기 32-47(WGKGACPVFECGNVVL)(서열 번호 261) 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 TIM-3 잔기 32-47(WGKGACPVFECGNVVL)(서열 번호 261) 및 잔기 50-56(DERDVNY) 서열 번호 262 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합을 저해한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV3-23(서열 번호 174)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV3-11(서열 번호 171)로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, VH 및 VL은 각각 서열 번호 204 및 205의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키며, 여기서 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화는 실시예 14에 기재된 방법에 따라 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상의 CD137 표면 발현의 통계적으로 유의한 향상을 측정함으로써 평가된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하고, IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하고, IgG4/κ 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하고, IgG2/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하고, IgG2/κ 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 78의 HC 및 서열 번호 79의 LC를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 240의 HC 및 서열 번호 79의 LC를 포함한다.
서열 번호 78
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSPYAPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 79
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVNDYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGGHAPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 240
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSPYAPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 흑색종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 폐암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-소세포 폐암(NSCLC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 편평상피 NSCLC의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-편평상피 NSCLC의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 폐 선암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 신세포 암종(RCC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 중피종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비인두 암종(NPC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 결장직장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 전립선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 거세-저항성 전립선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 위암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 난소암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 위장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 간암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 췌장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 갑상선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 두경부의 편평상피세포 암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 식도 또는 위장관의 암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 유방암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 나팔관암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 뇌암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 요도암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 자궁내막증의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 자궁경부암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 전이 병변의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 58의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 60의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, TIGIT와 특이적으로 결합하는 길항 항체(서열 번호 301)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, FGFR 저해제와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, 백신과 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, GITR과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 271)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, CD137과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 281)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, OX-40과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 279)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙)).
항체는, 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙)).
항체는, 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 이용하는 치료에 대해 불응성인 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙)).
항체는, 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 이용하는 치료에 대해 불응성인 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙)).
항체는, 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 이용하는 치료 후에 재발 종양을 갖는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙).
항체는, 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 이용하는 치료 후에 재발 종양을 갖는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙)).
본 발명은 또한 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV5-51(서열 번호 179)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV1-39(서열 번호 182)으로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, VH 및 VL은 각각 서열 번호 206 및 207의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키며, 여기서 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화는 실시예 14에 기재된 방법에 따라 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상의 CD137 표면 발현의 통계적으로 유의한 향상을 측정함으로써 평가된다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 TIM-3 잔기 90-102(RIQIPGIMNDEKF)(서열 번호 263) 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 TIM-3 잔기 90-102(RIQIPGIMNDEKF)(서열 번호 263) 및 잔기 50-56(DERDVNY) 서열 번호 262 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합을 저해한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하고, IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하고, IgG4/κ 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하고, IgG2/κ 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하고, IgG2/κ 동종형이며, 이는 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 서열 번호 80의 HC 및 서열 번호 81의 LC를 포함한다.
서열 번호 80
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWMQWVRQMPGKGLEWMGAIYPGDGDIRYTQNFKGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARWEKSTTVVQRNYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 81
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASENVGTFVSWYQQKPGKAPKLLIYGASNRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSYSYPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
일부 실시 형태에서, 항체는 이중특이성 항체, 예컨대 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체이다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 흑색종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 폐암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-소세포 폐암(NSCLC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 편평상피 NSCLC의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-편평상피 NSCLC의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 폐 선암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 신세포 암종(RCC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 중피종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비인두 암종(NPC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 결장직장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 전립선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 거세-저항성 전립선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 위암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 난소암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 위장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 간암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 췌장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 갑상선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 두경부의 편평상피세포 암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 식도 또는 위장관의 암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 유방암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 나팔관암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 뇌암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 요도암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 자궁내막증의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 자궁경부암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 전이 병변의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 혈액성 악성종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 급성 림프모구성 백혈병(ALL: acute lymphoblastic leukemia)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 58의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 60의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서, 서열 번호 65의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, TIGIT와 특이적으로 결합하는 길항 항체(서열 번호 301)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, FGFR 저해제와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, 백신과 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, GITR과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 271)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, CD137과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 281)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양과 같은 암의 치료에 있어서, OX-40과 특이적으로 결합하는 작용 항체(서열 번호 279)와 병용하여 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙)).
항체는, 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙)).
항체는, 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 이용하는 치료에 대해 불응성인 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙)).
항체는, 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 이용하는 치료에 대해 불응성인 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙)).
항체는, 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 이용하는 치료 후에 재발 종양을 갖는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙).
항체는, 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 이용하는 치료 후에 재발 종양을 갖는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙)).
본 발명은 또한 각각 서열 번호 90, 99, 107, 117, 126, 및 135의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV3-23(서열 번호 174)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV3-20(서열 번호 180)으로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 145의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, VH 및 VL은 각각 서열 번호 208 및 209의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된다.
본 발명은 또한 서열 번호 91, 99, 109, 119, 128, 및 137의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV3-23(서열 번호 174)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV4-1(서열 번호 181)로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 148의 VH 및 서열 번호 157의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 92, 100, 110, 117, 126, 및 135의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV3-23(서열 번호 174)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV3-20(서열 번호 180)으로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 147의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 93, 101, 111, 120, 129, 및 139의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV3-23(서열 번호 174)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV3-20(서열 번호 180)으로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 149의 VH 및 서열 번호 158의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, VH 및 VL은 각각 서열 번호 201 및 211의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 인코딩된다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 94, 102, 112, 121, 130, 및 140의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV1-02(서열 번호 175)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV4-1(서열 번호 181)으로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 150의 VH 및 서열 번호 159의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 95, 103, 113, 122, 131, 및 141의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV4-30-4(서열 번호 176)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV1-39(서열 번호 182)으로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 151의 VH 및 서열 번호 160의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 96, 104, 114, 123, 132, 및 142의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV1-03(서열 번호 177)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV1-33(서열 번호 183)으로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 161의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV1-03(서열 번호 177)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV1-39(서열 번호 182)으로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 98, 106, 116, 125, 134, 및 144의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 IGHV2-26(서열 번호 178)으로부터 유래된 중쇄 프레임워크 및 IGKV4-1(서열 번호 181)으로부터 유래된 경쇄 프레임워크를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 서열 번호 154의 VH 및 서열 번호 163의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체 또는 그의 항원-결합 부분은 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키며, 여기서 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화는 실시예 14에 기재된 방법에 따라 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상의 CD137 표면 발현의 통계적으로 유의한 향상을 측정함으로써 평가된다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 예시적인 길항 항체의 VH, VL, HCDR, 및 LCDR 서열을 표 3에 나타낸다.
실시예에 예시된 실시 형태가 중쇄로부터의 하나의 가변 영역 및 경쇄로부터의 하나의 가변 영역으로 된 가변 영역들의 쌍을 포함할지라도, 숙련자는 대안적인 실시 형태가 단일의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역들을 포함할 수 있음을 인식할 것이다. 단일의 가변 영역을 사용하여, 예를 들어 인간 TIM-3에 결합할 수 있는 2-도메인 특이적 항원-결합 단편을 형성할 수 있는 가변 도메인에 대해 스크리닝할 수 있다. 스크리닝은 본 명세서에 기재된 바와 유사하게 파지 디스플레이 스크리닝 방법에 의해 달성될 수 있다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 다중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 이중특이성 항체이다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 또는 다중특이성 항체는 PD-1(서열 번호 1), PD-L1(서열 번호 5), PD-L2(서열 번호 8), LAG-3(서열 번호 293), CEACAM-1(서열 번호 296), CEACAM-5(서열 번호 307), NKG2D(서열 번호 282), 또는 TIGITI(서열 번호 301)와 결합한다. 이중특이성 및 다중특이성 항체는 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 생성될 수 있다.
[표 3]
Figure pct00003
상동 항체
표 3, 표 36, 및 표 37에 나타낸 VH 또는 VL 아미노산 서열을 포함하는, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 변이체는 본 발명의 범주 내에 있다. 예를 들어 변이체는, 모 항체에 비교할 때 상동 항체가 개선된 작용 특성을 유지하거나 갖는 한, VH 및/또는 VL 내의 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 서열 동일성은 본 발명의 VH 또는 VL 아미노산 서열에 대해 약 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%일 수 있다.
본 발명은 또한, 서열 번호 145의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 148의 VH 및 서열 번호 157의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 147의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 149의 VH 및 서열 번호 158의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 150의 VH 및 서열 번호 159의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 151의 VH 및 서열 번호 160의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 161의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 154의 VH 및 서열 번호 163의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하며, 여기서 VH, VL, 또는 VH 및 VL 둘 모두는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 아미노산 치환을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 또는 172의 VH와 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 또는 173의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 또는 172의 VH와 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 서열 번호 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 또는 173의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 145의 VH 및 서열 번호 155의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 148의 VH 및 서열 번호 157의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 147의 VH 및 서열 번호 155의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 149의 VH 및 서열 번호 158의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 150의 VH 및 서열 번호 159의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 151의 VH 및 서열 번호 160의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 161의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 154의 VH 및 서열 번호 163의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 발명은 또한, 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL과 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 갖는 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다. 임의로, 서열 번호의 서열로부터의 임의의 변이는 CDR 내에 있지 않다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 상동 항체는 모 TIM-3 항체에 비교할 때 실질적으로 유사한 작용성을 갖는다.
보존적 변형을 가진 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체
본 발명은 또한, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 서열을 포함하는 VH 및 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 서열을 포함하는 VL을 포함하며, 여기서 CDR 서열 중 하나 이상은 본 명세서에 기재된 항체(예를 들어, 표 3, 표 36, 또는 표 37에 나타낸 항체) 또는 그의 보존적 변형에 기초하는 명시된 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 항체는 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 모 길항 항체의 원하는 작용 특성을 유지하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 90, 99, 107, 117, 126, 및 135의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 91, 99, 109, 119, 128, 및 137의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 92, 100, 110, 117, 126, 및 135의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 93, 101, 111, 120, 129, 및 139의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 94, 102, 112, 121, 130, 및 140의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 95, 103, 113, 122, 131, 및 141의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 96, 104, 114, 123, 132, 및 142의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
본 발명은 또한 각각 서열 번호 98, 106, 116, 125, 134, 및 144의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분, 및 그의 보존적 변형을 제공한다.
"보존적 변형"은 본 명세서에 기재된 변형을 지칭한다.
특이적 프레임워크 서열을 가진, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체
본 발명은 또한 특정 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래된 VH 및 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGHV3-23(서열 번호 174), IGHV1-02(서열 번호 175), IGHV4-30-4(서열 번호 176), IGHV1-03(서열 번호 177), IGHV2-26(서열 번호 178), 또는 IGHV5-51(서열 번호 179)로부터 유래된 VH 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGKV3-20(A27)(서열 번호 180), IGKV3-11(L6)(서열 번호 171), IGKV4-1(B3)(서열 번호 181), IGKV1-39)(O12)(서열 번호 182), 또는 IGKV1-33(O18)(서열 번호 183)으로부터 유래된 VL 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGHV3-23(서열 번호 174)으로부터 유래된 VH 프레임워크 및 IGKV3-20(서열 번호 180)으로부터 유래된 VL 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGHV3-23(서열 번호 174)으로부터 유래된 VH 프레임워크 및 IGKV3-11(서열 번호 171)로부터 유래된 VL 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGHV3-23(서열 번호 174)로부터 유래된 VH 프레임워크 및 IGKV4-1(서열 번호 181)로부터 유래된 VL 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGHV1-02(서열 번호 175)로부터 유래된 VH 프레임워크 및 IGKV4-1(서열 번호 181)로부터 유래된 VL 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGHV4-30-4(서열 번호 176)로부터 유래된 VH 프레임워크 및 IGKV1-39(서열 번호 182)로부터 유래된 VL 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGHV1-03(서열 번호 177)으로부터 유래된 VH 프레임워크 및 IGKV1-33(서열 번호 183)으로부터 유래된 VL 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGHV1-03(서열 번호 177)으로부터 유래된 VH 프레임워크 및 IGKV1-39(서열 번호 182)로부터 유래된 VL 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGHV2-26(서열 번호 178)으로부터 유래된 VH 프레임워크 및 IGKV4-1(서열 번호 181)로부터 유래된 VL 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
본 발명은 또한 IGHV5-51(서열 번호 179)로부터 유래된 VH 프레임워크 및 IGKV1-39(서열 번호 182)로부터 유래된 VL 프레임워크를 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 제공한다.
특정 프레임워크 또는 생식세포계열 서열 "로부터 유래된" 중쇄 또는 경쇄 가변 영역을 포함하는 본 발명의 항체는, 본 명세서에 논의된 바와 같이 인간 생식세포계열 면역글로불린 유전자를 사용하는 시스템으로부터, 예컨대 형질전환 마우스로부터, 또는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 얻어진 항체를 지칭한다. 특정 프레임워크 또는 생식세포계열 서열 "로부터 유래된" 항체는 그것이 유래된 서열에 비교하여 아미노산 차이를 포함할 수 있는데, 이는, 예를 들어 천연 발생 체세포 돌연변이 또는 의도적인 치환에 기인한다.
소정의 VH 및 VL 프레임워크 서열을 갖는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 예시적인 길항 항체를 표 38에 나타낸다.
이중특이성 항-PD-1/TIM-3 항체
본 발명은 또한 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시킨다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키며, 여기서 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 향상된 활성화는 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상의 CD137 표면 발현의 통계적으로 유의한 증가를 측정함으로써 평가된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합을 저해한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는
약 100 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정되거나;
약 1 nM 미만의 KD로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정되거나;
약 100 nM 미만의 KD로 사이노몰거스 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정되거나; 또는
약 1 nM 미만의 KD로 사이노몰거스 PD-1과 결합하며,
여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는, 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키며, 여기서 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화는 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상의 CD137 표면 발현의 통계적으로 유의한 증가를 측정함으로써 평가되고, 약 100 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는, 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키며, 여기서 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화는 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상의 CD137 표면 발현의 통계적으로 유의한 증가를 측정함으로써 평가되고, 약 1 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는, 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키며, 여기서 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화는 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상의 CD137 표면 발현의 통계적으로 유의한 증가를 측정함으로써 평가되고, 약 100 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 사이노몰거스 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는, 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키며, 여기서 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화는 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상의 CD137 표면 발현의 통계적으로 유의한 증가를 측정함으로써 평가되고, 약 1 nM 미만의 평형 해리 상수(KD)로 사이노몰거스 PD-1과 결합하며, 여기서 KD는 +25℃에서 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 측정된다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를, 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 활성화를 향상시키는 그의 능력, 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합을 저해하는 그의 능력에 대해 평가할 수 있으며, 인간 또는 사이노몰거스 PD-1 또는 TIM-3에 대한 결합 동력학은 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 평가할 수 있다.
예를 들어, CD137을 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화에 대한 표지자로 사용할 수 있다. 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체와 같은 시험 항체의 존재 또는 부재 하에 배양된 T 세포 상에서, 항-CD137 항체 및, 예를 들어 형광 염료에 접합된 2차 항체를 사용하여 CD137 표면 발현을 측정할 수 있다. 시험 항체의 존재 또는 부재 하에 배양된 T 세포 상에서 얻어진 신호에서 통계적으로 유의한 차이를 평가한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 TIM-3 잔기 32-47(WGKGACPVFECGNVVL)(서열 번호 261) 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 TIM-3 잔기 32-47(WGKGACPVFECGNVVL)(서열 번호 261) 및 잔기 50-56(DERDVNY) 서열 번호 262 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 TIM-3 잔기 90-102(RIQIPGIMNDEKF)(서열 번호 263) 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 TIM-3 잔기 90-102(RIQIPGIMNDEKF)(서열 번호 263) 및 잔기 50-56(DERDVNY) 서열 번호 262 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 각각 서열 번호 82, 83, 및 84의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 각각 서열 번호 82, 83, 및 85의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 각각 서열 번호 86, 87, 및 88의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은, 각각 서열 번호 82, 83, 및 84의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 86, 87, 및 88의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은, 각각 서열 번호 82, 83, 및 85의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3, 및 각각 서열 번호 86, 87, 및 88의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 각각 서열 번호 164, 165, 및 166의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 각각 서열 번호 167, 168, 및 169의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은, 각각 서열 번호 164, 165, 및 166의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열 번호 167, 168 및 169의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은
각각 서열 번호 10, 13, 16, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 10, 13, 16, 21, 26, 및 32;
각각 서열 번호 10, 14, 16, 22, 27, 및 33;
각각 서열 번호 10, 14, 16, 22, 26, 및 34;
각각 서열 번호 10, 14, 16, 23, 28, 및 35;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 20, 26, 및 36;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 21, 26, 및 32;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 21, 27, 및 37;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 23, 26, 및 32;
각각 서열 번호 10, 13, 17, 22, 26, 및 32;
각각 서열 번호 10, 13, 18, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 11, 15, 18, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 10, 13, 19, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 12, 13, 19, 20, 26, 및 31;
각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 28, 및 35;
각각 서열 번호 10, 14, 17, 22, 26, 및 34;
각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32;
각각 서열 번호 12, 13, 19, 24, 26, 및 38;
각각 서열 번호 12, 13, 19, 20, 29, 및 39;
각각 서열 번호 11, 15, 18, 20, 30, 및 32;
각각 서열 번호 11, 15, 18, 25, 26, 및 40;
각각 서열 번호 11, 15, 18, 24, 26, 및 32; 또는
각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은
각각 서열 번호 90, 99, 107, 117, 126, 및 135;
각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136;
각각 서열 번호 91, 99, 109, 119, 128, 및 137;
각각 서열 번호 92, 100, 110, 117, 126, 및 135;
각각 서열 번호 93, 101, 111, 120, 129, 및 139;
각각 서열 번호 94, 102, 112, 121, 130, 및 140;
각각 서열 번호 95, 103, 113, 122, 131, 및 141;
각각 서열 번호 96, 104, 114, 123, 132, 및 142;
각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143; 또는
각각 서열 번호 98, 106, 116, 125, 134, 및 144의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 63, 또는 64의 VH를 포함하며, VH는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 또는 65의 VL을 포함하며, VL은 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 63, 또는 64의 VH 및 서열 번호 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 및 65의 VL을 포함하며, VH, VL, 또는 VH 및 VL은 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 또는 172의 VH를 포함하며, VH는 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 또는 173의 VL을 포함하며, VL은 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 또는 172의 VH 및 서열 번호 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 또는 173의 VL를 포함하며, VH 및 VL은 임의로 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 15개의 보존적 아미노산 치환을 갖는다. 임의로, 임의의 치환은 CDR 내에 있지 않다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 50의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 51의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 52의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 53의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 54의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 50의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 55의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 57의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 44의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 46의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 53의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 52의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 58의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 59의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 60의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 62의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 63의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 145의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 148의 VH 및 서열 번호 157의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 147의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 149의 VH 및 서열 번호 158의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 150의 VH 및 서열 번호 159의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 151의 VH 및 서열 번호 160의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 161의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 154의 VH 및 서열 번호 163의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 제2 도메인은 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인은 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 TIM-3 잔기 32-47(WGKGACPVFECGNVVL)(서열 번호 261) 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 TIM-3 잔기 32-47(WGKGACPVFECGNVVL)(서열 번호 261) 및 잔기 50-56(DERDVNY) 서열 번호 262 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합을 저해한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고 제2 도메인은 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 F405L 및/또는 K409R 치환을 포함하는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 F405L 및 K409R 치환을 포함하는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 중쇄 치환 S228P를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 각각 서열 번호 241, 188, 245, 또는 194의 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 각각 서열 번호 186, 188, 191, 또는 194의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 각각 서열 번호 186, 188, 248, 또는 194의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 각각 서열 번호 243, 188, 246, 또는 194의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함한다.
항체는, 예를 들어 암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 고형 종양의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 흑색종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 폐암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-소세포 폐암(NSCLC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 편평상피 NSCLC의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비-편평상피 NSCLC의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 폐 선암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 신세포 암종(RCC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 중피종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 비인두 암종(NPC)의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 결장직장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 전립선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 거세-저항성 전립선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 위암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 난소암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 위장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 간암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 췌장암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 갑상선암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 두경부의 편평상피세포 암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 식도 또는 위장관의 암종의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 유방암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 나팔관암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 뇌암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 요도암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 자궁내막증의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 자궁경부암의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 예를 들어 암의 전이 병변의 치료에 있어서 요법에 사용하기에 적합하다.
항체는, 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙)).
항체는, 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙)).
항체는, 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체를 이용하는 치료에 대해 불응성인 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙)).
항체는, 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체를 이용하는 치료에 대해 불응성인 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙)).
항체는, 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체를 이용하는 치료 후에 재발 종양을 갖는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙).
항체는, 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체를 이용하는 치료 후에 재발 종양을 갖는 대상에서 요법에 사용하기에 적합하다. (예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙)).
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인은 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 TIM-3 잔기 90-102(RIQIPGIMNDEKF)(서열 번호 263) 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체는 TIM-3 잔기 90-102(RIQIPGIMNDEKF)(서열 번호 263) 및 잔기 50-56(DERDVNY) 서열 번호 262 내에서 TIM-3과 결합한다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체는 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합을 저해한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고 제2 도메인은 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 F405L 및/또는 K409R 치환을 포함하는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 F405L 및 K409R 치환을 포함하는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 중쇄 치환 S228P를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체는 각각 서열 번호 187, 189, 190, 및 193의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인은 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고 제2 도메인은 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 F405L 및/또는 K409R 치환을 포함하는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 F405L 및 K409R 치환을 포함하는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 중쇄 치환 S228P를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 각각 서열 번호 187, 189, 191, 및 194의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체는 각각 서열 번호 242, 189, 246, 및 194의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함한다. 본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인은 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고 제2 도메인은 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 F405L 및/또는 K409R 치환을 포함하는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 F405L 및 K409R 치환을 포함하는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 중쇄 치환 S228P를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 각각 서열 번호 186, 188, 192, 및 195의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 각각 서열 번호 241, 188, 244, 및 195의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 각각 서열 번호 243, 188, 247, 및 195의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키며, 여기서 항원-특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화는 실시예 14에 기재된 방법에 따라 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포 상의 CD137 표면 발현의 통계적으로 유의한 향상을 측정함으로써 평가된다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하며, 여기서 제1 도메인은 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인은 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 제1 도메인은 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고 제2 도메인은 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 F405L 및/또는 K409R 치환을 포함하는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG2 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 임의로, 야생형 IgG4에 비교할 때 S228P 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 항체는 F405L 및 K409R 치환을 포함하는 IgG4 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 항체는 IgG4 동종형이며, 이는 야생형 IgG4에 비교할 때 중쇄 치환 S228P를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체는 각각 서열 번호 186, 188, 190, 및 193의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함한다.
소정의 VH, VL, HCDR, 및 LCDR 서열을 갖는 본 발명의 예시적인 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 표 4 및 표 5에 나타낸다.
[표 4]
Figure pct00004
[표 5]
Figure pct00005
조작되고 변형된 항체
본 발명의 항체는 모 항체와 대비하여 유사하거나 변경된 특성을 갖는 변형된 항체를 생성하도록 추가로 조작될 수 있다. VH, VL, VH 및 VL, 불변 영역, VH 프레임워크, VL 프레임워크, 또는 6개의 CDR 중 어느 하나 또는 전부가 본 발명의 항체에서 조작될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이 "본 발명의 항체"는, 본 명세서에 기재된 바와 같이 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 및 PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체(예를 들어 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체)를 지칭한다.
본 발명의 항체는 CDR 이식에 의해 조작될 수 있다. 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체의 하나 이상의 CDR 서열이 상이한 프레임워크 서열에 이식될 수 있다. CDR 이식은 공지된 방법 및 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 실행될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체는 서열 번호 10, 11, 또는 12의 HDCR1, 서열 번호 13, 14, 또는 15의 HCDR2, 서열 번호 16, 17, 18, 또는 19의 HCDR3을 포함하는 VH, 및 서열 번호 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25의 LCDR1, 서열 번호 26, 27, 28, 29, 또는 30의 LCDR2, 및/또는 서열 번호 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40의 LCDR3을 포함하는 VL을 포함하며, 여기서 VH 프레임워크는 VH1-69(서열 번호 170) 이외의 VH 프레임워크로부터 유래되고 VL 프레임워크는 IGKV3-11(서열 번호 171) 이외의 VL 프레임워크로부터 유래된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체는 서열 번호 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 또는 98의 HDCR1, 서열 번호 99, 100, 101, 102, 10, 104, 105, 또는 106의 HCDR2, 서열 번호 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 또는 116의 HCDR3, 및 서열 번호 117, 118, 119, 120, 121, 122, 123, 124, 또는 125의 LCDR1, 서열 번호 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 또는 134의 LCDR2, 및/또는 서열 번호 135, 136, 137, 139, 140, 141, 142, 143, 또는 144의 LCDR3을 포함하는 VL을 포함하며, 여기서 VH 프레임워크는 IGHV3-23(서열 번호 174), IGHV1-02(서열 번호 175), IGHV4-30-4(서열 번호 176), IGHV1-03(서열 번호 177), IGHV2-26(서열 번호 178), 또는 IGHV5-51(서열 번호 179)의 것들 이외의 인간 VH 생식세포계열 유전자 서열로부터 유래되고, VL 프레임워크는 IGKV3-20(A27)(서열 번호 180), IGKV3-11(L6)(서열 번호 171), IGKV4-1(B3)(서열 번호 181), IGKV1-39(O12)(서열 번호 182), 또는 IGKV1-33(O18)(서열 번호 183)의 것들 이외의 인간 VL 생식세포계열 유전자 서열로부터 유래된다.
사용되는 프레임워크 서열은 생식세포계열 항체 유전자 서열을 포함하는 공개 DNA 데이터베이스 또는 간행된 참조문헌으로부터 획득될 수 있다. 예를 들어, 인간 중쇄 및 경쇄 가변 영역 유전자의 생식세포계열 DNA 및 인코딩된 단백질 서열은 IMGT®, international ImMunoGeneTics information system®(http://_www-imgt_org)에서 확인할 수 있다. 본 발명의 항체 내의 기존의 프레임워크 서열을 대체하기 위해 사용될 수 있는 프레임워크 서열은 VH 또는 VL의 전체 길이에 걸쳐, 또는 FR1, FR2, FR3, 및 FR4의 길이에 걸쳐 모 프레임워크에 대한 최고 % 동일성을 나타내는 것들일 수 있다. 추가로, 적합한 프레임워크는 VH 및 VL CDR1 및 CDR2 길이 또는 동일한 LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, 및 HCDR2 정준 구조에 기초하여 추가로 선택될 수 있다. 적합한 프레임워크는 미국 특허 제8,748,356호에 기재된 인간 프레임워크 적응화(human framework adaptation) 또는 미국 특허 제7,709, 226호에 기재된 초인간화(superhumanization)와 같은 공지된 방법을 사용하여 선택될 수 있다.
예를 들어 미국 특허 제6,180,370호에 기재된 바와 같이 모 항체 및 조작된 항체의 프레임워크 서열은, 예를 들어 복귀돌연변이(backmutation)에 의해 추가로 변형되어 생성된 항체의 항원에 대한 결합을 회복시키고/시키거나 개선할 수 있다. 모 항체 또는 조작된 항체의 프레임워크 서열은 프레임워크 영역 내의, 또는 하나 이상의 CDR 영역 내의 하나 이상의 잔기를 돌연변이화하여 T-세포 에피토프를 제거하고 이에 의해 항체의 잠재적인 면역원성을 감소시킴으로써 추가로 변형될 수 있다. 이러한 접근법은 "탈면역화"라고도 지칭되며, 미국 특허 출원 공개 US20070014796호에 추가로 상세히 기재되어 있다.
PD-1, TIM-3, 또는 PD-1 및 TIM-3에 대한 항체의 친화도를 개선하기 위해 본 발명의 항체의 CDR 잔기를 돌연변이화할 수 있다.
예를 들어 번역-후 변형의 위험을 최소화하기 위해 본 발명의 항체의 CDR 잔기를 돌연변이화할 수 있다. 탈아미노화(NS), 산-촉매 가수분해(DP), 이성체화(DS), 또는 산화(W)를 위한 추정 모티프의 아미노산 잔기를 천연 발생 아미노산 중 임의의 것으로 치환하여 모티프를 돌연변이유발할 수 있으며, 생성되는 항체를 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 그의 작용성 및 안정성에 대해 시험할 수 있다.
본 발명의 항체에 Fc 치환을 실행하여 항체 이펙터 작용 및 약동학적 특성을 변조할 수 있다. 전통적인 면역 작용에서, 면역 시스템의 세포와 항체-항원 복합체의 상호작용은 이펙터 작용, 예컨대 항체-의존성 세포독성, 비만 세포 탈과립, 및 식작용에서부터 면역변조 신호, 예컨대 림프구 증식 및 항체 분비의 조절에 이르기까지 다수의 반응을 유발한다. 이러한 상호작용 모두는 조혈 세포 상의 특성화된 세포 표면 수용체에 대한 면역 복합체 또는 항체의 Fc 도메인의 결합을 통해 개시된다. 항체 및 면역 복합체에 의해 촉발되는 세포 반응의 다양성은 하기 3개의 Fc 수용체의 구조적 불균질성으로부터 유발된다: FcγRI(CD64), FcγRII(CD32), 및 FcγRIII(CD16). FcγRI(CD64), FcγRIIA(CD32A), 및 FcγRIII(CD16)은 "활성화 Fcγ 수용체"이고(즉, 면역 시스템을 향상시킴); FcγRIIB(CD32B)는 "저해 Fcγ 수용체"이다(즉, 면역 시스템을 약화시킴). FcRn 수용체에 대한 결합은 항체 반감기를 변조한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 길항 항체는 Fc 영역 내에 하나 이상의 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 길항 항체는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 또는 을 포함한다.
항체 반감기를 변조하기 위해 치환될 수 있는 Fc 위치는, 예를 들어 문헌[Dall'Acqua et al., (2006) J Biol Chem 281:23514-240], 문헌[Zalevsky et al., (2010) Nat Biotechnol 28:157-159], 문헌[Hinton et al., (2004) J Biol Chem 279(8):6213-6216], 문헌[Hinton et al., (2006) J Immunol 176:346-356], 문헌[Shields et al.(2001) J Biol Chem 276:6591-6607], 문헌[Petkova et al., (2006). Int Immunol 18:1759-1769], 문헌[Datta-Mannan et al., (2007) Drug Metab Dispos, 35:86-94, 2007], 문헌[Vaccaro et al., (2005) Nat Biotechnol 23:1283-1288], 문헌[Yeung et al., (2010) Cancer Res, 70:3269-3277], 및 문헌[Kim et al., (1999) Eur J Immunol 29: 2819]에 기재된 것들이며, 위치 250, 252, 253, 254, 256, 257, 307, 376, 380, 428, 434, 및 435를 포함한다. 단독으로 또는 조합하여 실행될 수 있는 예시적인 치환은 치환 T250Q, M252Y, I253A, S254T, T256E, P257I, T307A, D376V, E380A, M428L, H433K, N434S, N434A, N434H, N434F, H435A, 및 H435R이다. 항체의 반감기를 증가시키기 위해 실행될 수 있는 예시적인 단독 또는 조합 치환은 치환 M428L/N434S, M252Y/S254T/T256E, T250Q/M428L, N434A, 및 T307A/E380A/N434A이다. 항체의 반감기를 감소시키기 위해 실행될 수 있는 예시적인 단독 또는 조합 치환은 치환 H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 아미노산 위치 250, 252, 253, 254, 256, 257, 307, 376, 380, 428, 434, 또는 435에서 항체 Fc 내에 하나 이상의 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 T250Q, M252Y, I253A, S254T, T256E, P257I, T307A, D376V, E380A, M428L, H433K, N434S, N434A, N434H, N434F, H435A, 및 H435R로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환을 항체 Fc 내에 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 M428L/N434S, M252Y/S254T/T256E, T250Q/M428L, N434A, T307A/E380A/N434A, H435A, P257I/N434H, D376V/N434H, M252Y/S254T/T256E/H433K/N434F, T308P/N434A, 및 H435R로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환을 항체 Fc 내에 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 활성화 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 항체의 결합을 감소시키고/시키거나 Fc 이펙터 작용, 예컨대 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC) 또는 식작용(ADCP)을 감소시키는 하나 이상의 치환을 항체 Fc 내에 포함한다.
활성화 FcγR에 대한 항체의 결합을 감소시키고 이어서 이펙터 작용을 감소시키기 위해 치환될 수 있는 Fc 위치는 예를 들어 문헌[Shields et al., (2001) J Biol Chem 276:6591-6604], 국제 특허 출원 공개 WO2011/066501호, 미국 특허 제6,737,056호 및 제5,624,821호, 문헌[Xu et al., (2000) Cell Immunol, 200:16-26], 문헌[Alegre et al., (1994) Transplantation 57:1537-1543], 문헌[Bolt et al., (1993) Eur J Immunol 23:403-411], 문헌[Cole et al., (1999) Transplantation, 68:563-571], 문헌[Rother et al., (2007) Nat Biotechnol 25:1256-1264], 문헌[Ghevaert et al., (2008) J Clin Invest 118:2929-2938], 문헌[An et al., (2009) mAbs, 1:572-579]에 기재된 것들이며, 위치 214, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 265, 267, 268, 270, 295, 297, 309, 327, 328, 329, 330, 331, 및 365를 포함한다. 단독으로 또는 조합하여 실행될 수 있는 예시적인 치환은 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 내의 치환 K214T, E233P, L234V, L234A, G236의 결실, V234A, F234A, L235A, G237A, P238A, P238S, D265A, S267E, H268A, H268Q, Q268A, N297A, A327Q, P329A, D270A, Q295A, V309L, A327S, L328F, A330S, 및 P331S이다. 감소된 ADCC를 가진 항체를 생성하는 예시적인 조합 치환은 IgG1 상의 치환 L234A/L235A, IgG2 상의 V234A,/G237A/ P238S/H268A/V309L/A330S/P331S, IgG4 상의 F234A/L235A, IgG4 상의 S228P/F234A/ L235A, 모든 Ig 동종형 상의 N297A, IgG2 상의 V234A/G237A, IgG1 상의 K214T/E233P/ L234V/L235A/G236-결실/A327G/P331A/D365E/L358M, IgG2 상의 H268Q/V309L/ A330S/P331S, IgG1 상의 S267E/L328F, IgG1 상의 L234F/L235E/D265A, IgG1 상의 L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S, IgG4 상의 S228P/F234A/L235A/G237A/P238S, 및 IgG4 상의 S228P/F234A/L235A/G236-결실/G237A/P238S이다. IgG2로부터의 잔기 117-260 및 IgG4로부터의 잔기 261-447을 가진 Fc와 같은 혼성체 IgG2/4 Fc 도메인 또한 사용할 수 있다.
잘 공지된 S228P 치환을 IgG4 항체에 실행하여 IgG4 안정성을 향상시킬 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 하나 이상의 잔기 위치 214, 233, 234, 235, 236, 237, 238, 265, 267, 268, 270, 295, 297, 309, 327, 328, 329, 330, 331, 또는 365에 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 K214T, E233P, L234V, L234A, G236의 결실, V234A, F234A, L235A, G237A, P238A, P238S, D265A, S267E, H268A, H268Q, Q268A, N297A, A327Q, P329A, D270A, Q295A, V309L, A327S, L328F, A330S, 및 P331S로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 하나 이상의 잔기 위치 228, 234, 235, 237, 238, 268, 330, 또는 331에 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 S228P 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 V234A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 F234A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 G237A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 P238S 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 H268A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 Q268A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 A330S 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 P331S 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S, 및 P331S 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 F234A, L235A, G237A, P238S, 및 Q268A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 L234A, L235A, 또는 L234A 및 L235A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 F234A, L235A, 또는 F234A 및 L235A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 S228P, F234A, 및 L235A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 Fcγ 수용체(FcγR)에 대한 항체의 결합을 향상시키고/시키거나 Fc 이펙터 작용, 예컨대 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC) 또는 식작용(ADCP)을 향상시키는 하나 이상의 치환을 항체 Fc 내에 포함한다.
그의 면역변조 활성에 더하여, 본 발명의 PD-1 또는 TIM-3 항체는 항체-매개 이펙터 작용을 통해, 예를 들어 ADCC, ADCP, 또는 CDC에 의해 직접 PD-1 및/또는 TIM-3을 발현시키는 종양 세포를 살해할 수 있다.
활성화 Fcγ에 대한 항체의 결합을 증가시키고/시키거나 항체 이펙터 작용을 향상시키기 위해 치환될 수 있는 Fc 위치는, 예를 들어 미국 특허 제6,737,056호, 미국 특허 출원 공개 제2015/0259434호, 문헌[Shields et al., (2001) J Biol Chem 276:6591-6604], 문헌[Lazar et al., (2006) Proc Natal Acad Sci, 103:4005-4010], 문헌[Stavenhagen et al., (2007) Cancer Res 67:8882-8890], 문헌[Richards et al., (2008) Mol Cancer Ther 7:2517-2527], 문헌[Diebolder et al., Science; published online March 13, 2014; doi:10.1126/science.1248943]에 기재된 것들이며, 위치 236, 239, 243, 256, 290, 292, 298, 300, 305, 312, 326, 330, 332, 333, 334, 345, 360, 339, 378, 396, 또는 430을 포함한다(잔기 번호화는 EU 인덱스에 따름). 단독으로 또는 조합하여 실행될 수 있는 예시적인 치환은 G236A, S239D, F243L, T256A, K290A, R292P, S298A, Y300L, V305L, K326A, A330K, I332E, E333A, K334A, A339T, 및 P396L이다. 증가된 ADCC 또는 ADCP를 가진 항체를 생성하는 예시적인 조합 치환은 IgG1 상의 치환 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, 및 G236A/S239D/I332E이다.
항체의 CDC를 향상시키기 위해 치환될 수 있는 Fc 위치는, 예를 들어 국제 특허 출원 WO2014/108198호, 문헌[Idusogie et al., (2001) J Immunol 166:2571-2575], 및 문헌[Moore et al., (2010) Mabs, 2:181-189]에 기재된 것들이며, 위치 267, 268, 324, 326, 333, 345, 및 430을 포함한다. 단독으로 또는 조합하여 실행될 수 있는 예시적인 치환은 치환 S267E, H268F, S324T, K326A, K326W, E333A, E345K, E345Q, E345R, E345Y, E430S, E430F, 및 E430T이다. 증가된 CDC를 가진 항체를 생성하는 예시적인 조합 치환은 IgG1 상의 치환 K326A/E333A, K326W/E333A, H268F/S324T, S267E/H268F, S267E/S324T, 및 S267E/H268F/S324T이다.
"항체-의존성 세포성 세포독성", "항체-의존성 세포-매개 세포독성" 또는 "ADCC"는, 이펙터 세포 상에서 발현되는 Fc 감마 수용체(FcγR)를 통한, 항체-코팅된 표적 세포와 용해 활성을 갖는 이펙터 세포, 예컨대 자연 살해 세포, 단핵구, 대식세포 및 호중구의 상호작용에 의존하는 세포사를 유도하기 위한 기전이다. 예를 들어, NK 세포는 FcγRIIIa를 발현하며, 한편 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIIIa를 발현한다. 항체-코팅된 표적 세포, 예컨대 PD-1 또는 TIM-3 발현 세포의 죽음은 막 세공-형성 단백질 및 프로테아제의 분비를 통한 이펙터 세포 활성의 결과로서 일어난다. 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체의 ADCC 활성을 평가하기 위하여, 항체를 면역 이펙터 세포와 병용하여 TIM-3 또는 PD-1 발현 세포에 첨가할 수 있으며, 이는 항원 항체 복합체에 의해 활성화되어 표적 세포의 세포용해를 유발할 수 있다. 세포용해는 용해된 세포로부터의 표지(예를 들어, 방사성 기질, 형광 염료, 또는 천연 세포내 단백질)의 방출에 의해 검출될 수 있다. 그러한 검정을 위한 예시적인 이펙터 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 NK 세포를 포함한다. 예시적인 표적 세포는 내인성으로 또는 재조합에 의해 TIM-3 또는 PD-1을 발현시키는 세포를 포함한다. 예시적인 검정에서, 표적 세포는 1 표적 세포 대 50 이펙터 세포의 비로 사용된다. 표적 세포를 37℃에서 20 분 동안 BATDA(PerkinElmer)로 사전-표지하고, 2회 세척하고, DMEM, 10% 열-불활성화 FBS, 2 mM L-글루타민(모두 Invitrogen으로부터) 중에 재현탁한다. 표적(1x104개 세포) 및 이펙터 세포(0.5x106개 세포)를 합하고, 100 μl의 세포를 96-웰 U-바닥 플레이트의 웰에 첨가한다. 시험 항체가 있거나 없는 추가적인 100 μl를 첨가한다. 플레이트를 200 g에서 3 분 동안 원심분리하고, 37℃에서 2 시간 동안 인큐베이션한 후, 200 g에서 3 분 동안 다시 원심분리한다. 웰 당 총 20 μl의 상청액을 제거하고, 200 μl의 DELPHIA 유로퓸-기반의 시약(PerkinElmer)의 첨가에 의해 세포 용해를 측정한다. 0.67% Triton X-100(Sigma Aldrich)을 이용하는 최대 세포독성, 및 임의의 항체의 부재 하에 표적 세포로부터의 BATDA의 자발적인 방출에 의해 결정된 최소 대조군에 대해 데이터를 정규화한다. 본 발명의 항체는 ADCC를 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 만큼 유도할 수 있다.
"항체-의존성 세포 식작용"("ADCP")은 식세포, 예컨대 대식세포 또는 수지상 세포에 의한 내재화에 의한 항체-코팅된 표적 세포의 제거의 기전을 지칭한다. ADCP는, 이펙터 세포로서 단핵구-유래 대식세포를, 그리고 GFP 또는 다른 표지된 분자를 발현시키도록 조작된 표적 세포로서 다우디 세포(ATCC® CCL-213™) 또는 TIM-3 또는 PD-1을 발현시키는 B 세포 백혈병 또는 림프종 또는 종양 세포를 사용함으로써 평가될 수 있다. 이펙터:표적 세포 비는, 예를 들어 4:1일 수 있다. 본 발명의 항체의 존재 또는 부재 하에 이펙터 세포를 표적 세포와 4 시간 동안 인큐베이션할 수 있다. 인큐베이션 후에, 세포는 아큐타제를 사용하여 탈착될 수 있다. 대식세포는 형광 표지에 커플링된 항-CD11b 및 항-CD14 항체로 확인할 수 있으며, % 식작용은 표준 방법을 사용하여 CD11+CD14+ 대식세포에서의 % GFP 형광에 기초하여 결정할 수 있다. 본 발명의 항체는 ADCP를 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 만큼 유도할 수 있다.
"보체-의존성 세포독성" 또는 "CDC"는, 표적-결합된 항체의 Fc 이펙터 도메인이 보체 성분 C1q와 결합하여 이를 활성화하고, 이는 다시 보체 캐스케이드를 활성화하여 표적 세포사를 유발하는 세포사 유도 기전을 지칭한다. 보체의 활성화는 또한 표적 세포 표면 상에의 보체 성분의 침착을 가져올 수 있는데, 이는 백혈구 상의 보체 수용체(예를 들어, CR3)에 결합함으로써 ADCC를 용이하게 한다. TIM-3 또는 PD-1 발현 세포의 CDC는, 예를 들어 RPMI-B(1% BSA로 보충된 RPMI) 중에서 1x105개 세포/웰(50 μl/웰)로 다우디 세포를 플레이팅하고, 0 내지 100 ㎍/ml의 최종 농도로 웰에 50 μl의 시험 항체를 첨가하고, 실온에서 15 min 동안 반응물을 인큐베이션하고, 11 μl의 혼주된 인간 혈청을 웰에 첨가하고, 37℃에서 45분 동안 반응물을 인큐베이션함으로써 측정될 수 있다. 용해된 세포의 백분율(%)은 표준 방법을 사용하여 FACS 검정에서 % 프로피듐 요오다이드 염색된 세포로서 검출될 수 있다. 본 발명의 항체는 CDC를 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 만큼 유도할 수 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체가 ADCC를 유도하는 능력은 그의 올리고당 성분을 조작함으로써 향상될 수 있다. 인간 IgG1 또는 IgG3은 잘 알려진 바이안테나리(biantennary) G0, G0F, G1, G1F, G2 또는 G2F 형태의 글리칸의 대부분에 의해 Asn297에서 N-글리코실화된다. 비조작된 CHO 세포에 의해 생성된 항체는 전형적으로 약 85% 이상의 글리칸 푸코스 함량을 갖는다. Fc 영역에 부착된 바이안테나리 복합체-유형의(complex-type) 올리고당으로부터의 코어(core) 푸코스의 제거는, 항원 결합 또는 CDC 활성을 변경시키지 않고서, 개선된 FcγRIIIa 결합을 통해 항체의 ADCC를 향상시킨다. 그러한 mAb는 바이안테나리 복합체-유형의 Fc 올리고당을 보유하는 비교적 높은 탈푸코실화 항체의 성공적인 발현을 유발하는 것으로 보고된 상이한 방법, 예컨대 배양 삼투압의 제어(문헌[Konno et al., (2012) Cytotechnology 64:249-65]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO 세포주 Lec13의 적용(문헌[Shields et al., (2002) J Biol Chem 277:26733-26740]), 숙주 세포주로서의 변이체 CHO 세포주 EB66의 적용(문헌[Olivier et al., MAbs;2(4), 2010; Epub ahead of print; PMID:20562582]), 숙주 세포주로서의 랫트 하이브리도마 세포주 YB2/0의 적용(문헌[Shinkawa et al., (2003) J Biol Chem 278:3466-3473]), ® 1,6-푸코실트랜스페라제(FUT8) 유전자에 대해 특이적인 작은 간섭 RNA의 도입(문헌[Mori et al., (2004) Biotechnol Bioeng 88:901-908]), 또는 β-1,4-N-아세틸글루코사미닐트랜스페라제 III 및 골지 α-만노시다제 II 또는 강력한 알파-만노시다제 I 저해제, 키푸넨신의 동시발현(문헌[Ferrara et al., (2006) J Biol Chem 281:5032-5036], 문헌[Ferrara et al., (2006) Biotechnol Bioeng 93:851-861]; 문헌[Xhou et al., (2008) Biotechnol Bioeng 99:652-65])을 사용하여 달성될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 항체의 이펙터 작용을 향상시키는 하나 이상의 치환을 항체 Fc 내에 포함한다
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 아미노산 위치 236, 239, 243, 256, 267, 268, 290, 292, 298, 300, 305, 312, 324, 326, 330, 332, 333, 334, 345, 360, 339, 378, 396, 또는 430에서 항체 Fc 내에 하나 이상의 치환을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 G236A, S239D, F243L, T256A, K290A, R292P, S298A, Y300L, V305L, K326A, A330K, I332E, E333A, K334A, A339T, P396L, S267E, H268F, S324T, K326A, K326W, E333A, E345K, E345Q, E345R, E345Y, E430S, E430F, 및 E430T로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환을 항체 Fc 내에 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 S239D/I332E, S298A/E333A/K334A, F243L/R292P/Y300L, F243L/R292P/Y300L/P396L, F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L, G236A/S239D/I332E, K326A/E333A, K326W/E333A, H268F/S324T, S267E/H268F, S267E/S324T, 및 S267E/H268F/S324T로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치환을 항체 Fc 내에 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 푸코스 함량이 약 0% 내지 약 15%, 예를 들어 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0%인 바이안테나리 글리칸 구조를 갖는다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 푸코스 함량이 약 50%, 40%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11% 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 또는 0%인 바이안테나리 글리칸 구조를 갖는다.
Fc에서의 치환 및 감소된 푸코스 함량은 본 발명의 TIM-3 또는 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 ADCC 활성을 향상시킬 수 있다. ADCC, ADCP, 및/또는 CDC 활성이 향상된 TIM-3 또는 PD-1 항체는, 헴 악성종양(heme malignancy)을 포함하는 TIM-3 및/또는 PD-1 발현 종양을 가진 환자의 치료에 유용할 수 있다.
"푸코스 함량"은 Asn297에서의 당 사슬 내의 푸코스 단당의 양을 의미한다. 푸코스의 상대량은 모든 당구조(glycostructure)에 대한 푸코스-함유 구조의 백분율이다. 이들은, 예를 들어 하기와 같은 다수의 방법에 의해 특성화 및 정량화될 수 있다: 1) 국제 특허 출원 공개 WO2008/077546호에 기재된 바와 같이 N-글리코시다제 F 처리된 샘플(예를 들어, 복합, 혼성, 및 올리고- 및 고-만노스 구조)의 MALDI-TOF를 사용하는 방법; 2) Asn297 글리칸의 효소적 방출을 행하고, 후속으로, 유도체화하고, 형광 검출을 사용하는 HPLC(UPLC) 및/또는 HPLC-MS(UPLC-MS)에 의해 검출/정량화함에 의한 방법; 3) 엔도(Endo) S, 또는 제1 GlcNAc 단당과 제2 GlcNAc 단당 사이를 절단하여 푸코스가 제1 GlcNAc에 부착된 상태로 남겨 두는 다른 효소로 Asn297 글리칸을 처리하거나 처리하지 않고서, 천연 또는 환원된 mAb의 온전한 단백질을 분석하는 방법; 4) 효소적 분해(예를 들어, 트립신 또는 엔도펩티다제 Lys-C)에 의해 mAb를 구성성분 펩티드로의 분해하고, 이어서 HPLC-MS(UPLC-MS)에 의해 분리, 검출, 및 정량화하는 방법; 또는 5) Asn 297에서의 PNGase F를 이용한 특이적 효소적 탈글리코실화에 의해 mAb 단백질로부터 mAb 올리고당을 분리하는 방법. 방출된 올리고당은 형광단으로 표지되고, 실험 질량과 이론 질량의 비교에 의한 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화(MALDI: matrix-assisted laser desorption ionization) 질량 분석법에 의한 글리칸 구조의 미세 특성화, 이온 교환 HPLC(GlycoSep C)에 의한 시알릴화도(degree of sialylation)의 결정, 순상 HPLC(GlycoSep N)에 의한 친수성 기준에 따른 올리고당 형태의 분리 및 정량화, 및 고성능 모세관 전기영동-레이저 유도 형광(HPCE-LIF: high performance capillary electrophoresis-laser induced fluorescence)에 의한 올리고당의 분리 및 정량화를 가능하게 하는 다양한 상보적 기술에 의해 분리 및 확인될 수 있다.
"저 푸코스" 또는 "저 푸코스 함량"은 푸코스 함량이 약 0% 내지 15%인 항체를 지칭한다.
"정상 푸코스" 또는 "정상 푸코스 함량"은 푸코스 함량이 약 50% 초과, 전형적으로 약 60%, 70%, 80% 초과, 또는 85% 초과인 항체를 지칭한다.
본 발명의 항체는 글리코실화, 이성체화, 탈글리코실화, 또는 비-천연 발생 공유적 변형, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 모이어티의 첨가(페길화) 및 지질화와 같은 과정에 의해 번역-후 변형될 수 있다. 그러한 변형은 생체내에서 또는 시험관내에서 일어날 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체는 폴리에틸렌 글리콜에 접합되어(페길화) 그의 약동학적 프로파일을 개선할 수 있다. 접합은 당업자에게 알려진 기법에 의해 수행될 수 있다. 치료 항체와 PEG의 접합은 작용을 방해하지 않으면서 약동력학적 특성을 향상시키는 것으로 나타났다(문헌[Knigh et al., (2004) Platelets 15:409-18]; 문헌[Leong et al., (2001) Cytokine 16:106-19]; 문헌[Yang et al., (2003) Protein Eng 16:761-70]).
본 발명의 항체는 안정성, 선택성, 교차-반응성, 친화도, 면역원성 또는 다른 바람직한 생물학적 또는 생물물리학적 특성을 개선하도록 변형될 수 있으며, 이는 본 발명의 범주 내에 있다. 항체의 안정성은 (1) 개별 도메인들의 고유의 안정성에 영향을 주는 그의 코어 패킹(core packing), (2) HC 및 LC 쌍형성(pairing)에 영향을 주는 단백질/단백질 계면 상호작용, (3) 극성 및 하전된 잔기의 매몰(burial), (4) 극성 및 하전된 잔기에 대한 H-결합 네트워크; 및 (5) 다른 분자내 및 분자간 힘 중에서 표면 전하 및 극성 잔기 분포를 포함하는 다수의 인자에 의해 영향을 받는다(문헌[Worn et al., (2001) J Mol Biol 305:989-1010]). 잠재적인 구조 불안정화 잔기는 항체의 결정 구조에 기초하거나 또는 소정 경우에는 분자 모델링에 의해 확인할 수 있으며, 확인된 잔기 내에 돌연변이를 갖는 변이체를 생성하고 평가함으로써, 항체 안정성에 대한 잔기의 영향을 시험할 수 있다. 항체 안정성을 증가시키기 위한 방법 중 하나는 시차 주사 열량측정법(DSC)에 의해 측정되는 바와 같은 열 전이 중간점(Tm)을 상승시키는 것이다. 일반적으로, 단백질 Tm은 그의 안정성과는 상관관계에 있고, 용액 중의 풀림(unfolding) 및 변성, 및 단백질이 풀리는 경향에 따라 달라지는 분해 과정에 대한 그의 감수성과는 역상관관계에 있다(문헌[Remmele et al., (2000) Biopharm 13:36-46]). 다수의 연구에서 DSC에 의해 열 안정성으로서 측정된 제형의 물리적 안정성과 다른 방법에 의해 측정된 물리적 안정성의 순위 사이의 상관관계를 확인하였다(문헌[Gupta et al., (2003) AAPS PharmSci 5E8]; 문헌[Zhang et al., (2004) J Pharm Sci 93:3076-89]; 문헌[Maa et al., (1996) Int J Pharm 140:155-68]; 문헌[Bedu-Addo et al., (2004) Pharm Res 21:1353-61]; 문헌[Remmele et al., (1997) Pharm Res 15:200-8]). 제형 연구는 Fab Tm이 상응하는 mAb의 장기간 물리적 안정성에 대해 영향을 준다는 것을 제시한다.
혈류 내의 내인성 순환 카복시펩티다제에 의해 C-말단 라이신(CTL)이 주사된 항체로부터 제거될 수 있다(문헌[Cai et al., (2011) Biotechnol Bioeng 108:404-412]). 미국 특허 출원 공개 US20140273092호에 기재된 바와 같이, 제조 중에 CTL 제거는 세포외 Zn2+, EDTA, 또는 EDTA - Fe3+의 농도의 제어에 의해 최대 수준 미만으로 제어될 수 있다. 항체 내의 CTL 함량은 공지된 방법을 사용하여 측정할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체의 C-말단 라이신 함량은 약 10% 내지 약 90%, 약 20% 내지 약 80%, 약 40% 내지 약 70%, 약 55% 내지 약 70%, 또는 약 60%이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체의 C-말단 라이신 함량은 약 0%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100%이다.
상동 항체, 보존적 변형을 가진 항체, 및 조작되고 변형된 항체를 생성하는 방법
모 항체에 비교할 때 변경된 아미노산 서열을 갖는 본 발명의 항체는 표준 클로닝 및 발현 기술을 사용하여 생성할 수 있다. 예를 들어, 부위-지향적 돌연변이생성 또는 PCR-매개 돌연변이생성을 수행하여 돌연변이(들)를 도입할 수 있으며, 잘 공지된 방법 및 실시예에서 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 항체 결합 또는 다른 관심 있는 특성에 대한 효과를 평가할 수 있다.
항체 동종이형(allotype)
본 발명의 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 IgG1 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 IgG2 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 IgG3 동종형이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 IgG4 동종형이다.
치료 항체의 면역원성은 주입 반응의 증가된 위험 및 치료 반응의 감소된 지속과 연계된다(문헌[Baert et al., (2003) N Engl J Med 348:602-08]). 치료 항체가 숙주에서 면역 반응을 유도하는 정도는 항체의 동종이형에 의해 부분적으로 결정될 수 있다(문헌[Stickler et al., (2011) Genes and Immunity 12:213-21]). 항체 동종이형은 항체의 불변 영역 서열 내의 특이적 위치에서의 아미노산 서열 변이에 관련된다.
표 6은 선택된 IgG1, IgG2, 및 IgG4 동종이형을 나타낸다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 G2m(n), G2m(n-), G2m(n)/(n-), nG4m(a), G1m(17), 또는 G1m(17,1) 동종이형의 것이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 G2m(n), G2m(n-), G2m(n)/(n-), nG4m(a), G1m(17), 또는 G1m(17,1) 동종이형의 것이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체는 G2m(n), G2m(n-), G2m(n)/(n-), nG4m(a), G1m(17), 또는 G1m(17,1) 동종이형의 것이다.
[표 6]
Figure pct00006
항-이디오타입 항체
본 발명은 본 발명의 항체에 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 항-PD-1 항체에 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 50의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 51의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 52의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 53의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 54의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 50의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 55의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 57의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 44의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 46의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 53의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 52의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 58의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 59의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 60의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 62의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 63의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 145의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 148의 VH 및 서열 번호 157의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 147의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 149의 VH 및 서열 번호 158의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 150의 VH 및 서열 번호 159의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 151의 VH 및 서열 번호 160의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 161의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 154의 VH 및 서열 번호 163의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 키트는 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 키트는 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함한다.
본 발명은 또한 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하는 항체와 특이적으로 결합하는 항-이디오타입 항체를 제공한다.
일부 실시 형태에서, 항-이디오타입 항체는 샘플 내의 치료 항체(예를 들어 항-PD-1, 항-TIM-3, 또는 본 명세서에 기재된 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체)의 수준을 검출하는 데에 사용된다.
항-이디오타입(Id) 항체는 항체의 항원 결정기(예를 들어, 파라토프 또는 CDR)를 인식하는 항체이다. Id 항체는 항원-차단성 또는 비차단성일 수 있다. 항원-차단성 Id는 샘플 내의 유리 항체(예를 들어 항-PD-1, 항-TIM-3, 또는 본 명세서에 기재된 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체)를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 비차단성 Id는 샘플 내의 총 항체(유리 항체, 항원에 부분 결합된 항체, 또는 항원에 완전 결합된 항체)를 검출하는 데 사용될 수 있다. Id 항체는 항-Id가 준비되어 있는 항체로 동물을 면역화함으로써 제조될 수 있다.
항-Id 항체는 또한 면역원으로서 사용되어 또 다른 동물에서 면역 반응을 유도하여, 이른바 항-항-Id 항체를 생성할 수 있다. 항-항-Id는 항-Id를 유도한 원래의 mAb와 에피토프적으로(epitopically) 동일할 수 있다. 따라서, mAb의 이디오타입 결정기에 대한 항체를 사용함으로써, 동일한 특이성의 항체를 발현하는 다른 클론들을 확인할 수 있다. 항-Id 항체는 임의의 적합한 기술, 예컨대 PD-1 또는 TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체에 관하여 본 명세서의 다른 곳에 기재된 것들에 의해 유도체화되고/되거나 변이될 수 있다(이에 의해 항-Id 항체 변이체를 생성함).
면역접합체
"면역접합체"는 하나 이상의 이종성 분자(들)에 접합된 본 발명의 항체를 지칭한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 하나 이상의 세포독성제 또는 조영제에 접합된다.
예시적인 세포독성제는 화학치료제 또는 화학치료 약물, 성장 억제제, 독소(예를 들어, 단백질 독소, 세균, 진균, 식물, 또는 동물 기원의 효소적으로 활성인 독소, 또는 이들의 단편), 및 방사성 핵종을 포함한다.
세포독성제는 메이탄시노이드(예를 들어, 미국 특허 제5,208,020호, 제5,416,06호 참조), 아우리스타틴, 예컨대 모노메틸아우리스타틴 약물 모이어티 DE 및 DF(MMAE 및 MMAF)(예를 들어, 미국 특허 제5,635,483호 및 제5,780,588호, 및 제7,498,298호 참조), 돌라스타틴, 칼리키아미신, 또는 그의 유도체(예를 들어, 미국 특허 제5,712,374호, 제5,714,586호, 제5,739,116호, 제5,767,285호, 제5,770,701호, 제5,770,710호, 제5,773,001호, 및 제5,877,296호; 문헌[Hinman et al., (1993) Cancer Res 53:3336-3342]; 및 문헌[Lode et al.,(1998) Cancer Res 58:2925-2928] 참조); 안트라사이클린, 예컨대 다우노마이신 또는 독소루비신(예를 들어, 문헌[Kratz et al., (2006) Current Med. Chem 13:477-523]; 문헌[Jeffrey et al., (2006) Bioorganic & Med Chem Letters 16:358-362]; 문헌[Torgov et al., (2005) Bioconj Chem 16:717-721]; 문헌[Nagy et al., (2000) Proc Natl Acad Sci USA 97:829-834]; 문헌[Dubowchik et al, Bioorg. & Med. Chem. Letters 12: 1529-1532 (2002)]; 문헌[King et al., (2002) J Med Chem 45:4336-4343]; 및 미국 특허 제6,630,579호 참조), 메토트렉세이트, 빈데신, 탁산, 예컨대 도세탁셀, 파클리탁셀, 라로탁셀, 테세탁셀, 및 오르타탁셀과 같은 하나 이상의 약물일 수 있다.
세포독성제는 또한 효소적으로 활성인 독소 또는 그의 단편, 예컨대 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합성 활성 단편, 외독소 A 쇄(슈도모나스 아이루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 리신 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디이(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴, 피토라카 아메리카나(Phytolacca americana) 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(Momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오프피시날리스(Sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신, 및 트리코테센일 수 있다.
세포독성제 또는 조영제는 또한 방사성 핵종일 수 있다. 예시적인 방사성 핵종은 Ac-225, At-211, 1-131, I-125, Y-90, Re-186, Re-188, Sm-153, Bi-212, P-32, Pb-212 및 Lu의 방사성 동위원소를 포함한다. 방사성 접합체가 검출에 사용되는 경우, 그것은 섬광조영술 연구용 방사성 원자, 예를 들어 Tc-99m 또는 I-123, 또는 핵 자기 공명(NMR) 이미징(자기 공명 이미징, mri로도 알려짐)을 위한 스핀 라벨, 예컨대 I-123, I-131, In-111, F-19, C-13, N-15 또는 O-17을 포함할 수 있다.
본 발명의 항체와 이종성 분자의 접합체는 다양한 이작용성 단백질-커플링제, 예컨대 N-석신이미딜-3-(2-피리딜다이티오) 프로피오네이트(SPDP), 석신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이작용성 유도체(예컨대, 다이메틸 아디피미데이트 HQ), 활성 에스테르(예컨대, 다이석신이미딜 수베레이트), 알데하이드(예컨대, 글루타르알데하이드), 비스-아지도 화합물(예컨대, 비스(p-아지도벤조일)헥산다이아민), 비스-다이아조늄 유도체(예컨대, 비스-(p-다이아조늄벤조일)-에틸렌다이아민), 다이아이소시아네이트(예컨대, 톨루엔 2,6-다이아이소시아네이트), 및 비스-활성 불소 화합물(예컨대, 1,5-다이플루오로-2,4-다이니트로벤젠)을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소가 문헌[Vitetta et al., (1987) Science 238: 1098]에 기재된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지 1-아이소티오시아네이토벤질-3-메틸다이에틸렌 트라이아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 항체에 대한 방사성 핵종의 접합을 위한 예시적인 킬레이트제이다. 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 W094/11026호를 참조한다. 링커는 세포 내에서 세포독성 약물의 방출을 촉진시키는 "절단가능한 링커"일 수 있다. 예를 들어, 산-불안정성 링커, 펩티다제-감수성 링커, 광불안정성 링커, 다이메틸 링커 또는 이황화물-함유 링커(문헌[Chari et al., (1992) Cancer Res 52: 127-131]; 미국 특허 제5,208,020호)가 사용될 수 있다.
본 발명의 항체와 이종성 분자의 접합체는 가교결합 시약, 예컨대 BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, 설포-EMCS, 설포-GMBS, 설포-KMUS, 설포-MBS, 설포-SIAB, 설포-SMCC, 및 설포-SMPB, 및 SVSB(석신이미딜-(4-비닐설폰)벤조에이트)를 사용하여 제조될 수 있으며, 이들은 (예를 들어, 미국 일리노이주 록포드 소재의 Pierce Biotechnology, Inc.로부터) 구매가능하다.
본 발명은 또한 치료제 또는 조영제에 연결된, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함하는 면역접합체를 제공한다.
본 발명은 또한 치료제 또는 조영제에 연결된, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함하는 면역접합체를 제공한다.
본 발명은 또한 치료제 또는 조영제에 연결된 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체를 포함하는 면역접합체를 제공한다.
본 발명의 단일특이성 항체의 생성
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 인간의 것이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 인간화된다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 단일특이성 항체(예를 들어 PD-1 또는 TIM-3과 특이적으로 결합하는 항체)는 다양한 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Kohler and Milstein, Nature 256:495, 1975]의 하이브리도마 방법이 단일클론 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. 하이브리도마 방법에서는, 마우스 또는 다른 숙주 동물, 예컨대 햄스터, 랫트, 또는 원숭이를 인간 또는 사이노 PD-1 또는 TIM-3 또는 PD-1 또는 TIM-3의 단편, 예컨대 PD-1 또는 TIM-3의 세포외 도메인으로 면역화한 후, 면역화된 동물로부터의 비장 세포를 표준 방법을 사용하여 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성한다(문헌[Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp.59-103 (Academic Press, 1986)]). 단일 불멸화(immortalized) 하이브리도마 세포로부터 발생되는 콜로니를 원하는 특성, 예컨대 항원에 대한 결합의 특이성, 교차-반응성 또는 그의 결여, 및 친화성을 갖는 항체의 생성에 대해 스크리닝한다.
다양한 숙주 동물을 사용하여 본 발명의 항체를 생성할 수 있다. 예를 들어, Balb/c 마우스를 사용하여 마우스 항-인간 PD-1 또는 TIM-3 항체를 생성할 수 있다. Balb/c 마우스 및 다른 인간 이외의 동물에서 제조된 항체는 더 인간-유사한 서열을 생성하기 위하여 다양한 기술을 사용하여 인간화될 수 있다.
인간 수용자 프레임워크의 선택을 포함하는 예시적인 인간화 기술이 공지되어 있으며, CDR 이식(미국 특허 제5,225,539호), SDR 이식(미국 특허 제6,818,749호), 재표면화(Resurfacing)(문헌[Padlan, (1991) Mol Immunol 28:489-499]), 특이성 결정 잔기 재표면화(미국 특허 출원 공개 제2010/0261620호), 인간 프레임워크 적응화(미국 특허 제8,748,356호), 또는 초인간화(미국 특허 제7,709, 226호)를 포함한다. 이러한 방법에서는, 모 항체의 CDR을 인간 프레임워크 상에 전달하며, 이는 모 프레임워크에 대한 그의 전체 상동성에 기초하여, CDR 길이의 유사성, 또는 정준 구조 동일성, 또는 이들의 조합에 기초하여 선택될 수 있다.
인간화 항체는, 국제 특허 출원 공개 WO1090/007861호 및 WO1992/22653호에 기재된 것들과 같은 기술에 의해, 변경된 프레임워크 지지 잔기를 혼입시켜 결합 친화도를 보존함으로써(복귀 돌연변이), 또는 변이를 CDR들 중 임의의 것에 혼입시켜, 예를 들어 항체의 친화도를 개선함으로써, 원하는 항원에 대한 그의 선택성 또는 친화도를 개선하도록 추가로 최적화될 수 있다.
인간 면역글로불린(Ig) 유전자좌를 그의 유전체 내에 담지하는 마우스 또는 랫트와 같은 형질전환 동물을 사용하여 표적 단백질에 대한 인간 항체를 생성할 수 있으며, 이는 예를 들어 미국 특허 제6,150,584호, 국제 특허 출원 공개 WO99/45962호, 국제 특허 출원 공개 WO2002/066630호, WO2002/43478호, WO2002/043478호, 및 WO1990/04036호, 문헌[Lonberg et al (1994) Nature 368:856-9]; 문헌[Green et al (1994) Nature Genet. 7:13-21]; 문헌[Green & Jakobovits (1998) Exp. Med. 188:483-95]; 문헌[Lonberg and Huszar (1995) Int Rev Immunol 13:65-93]; 문헌[Bruggemann et al., (1991) Eur J Immunol 21:1323- 1326]; 문헌[Fishwild et al., (1996) Nat Biotechnol 14:845-851]; 문헌[Mendez et al., (1997) Nat Genet 15:146-156]; 문헌[Green (1999) J Immunol Methods 231:11-23]; 문헌[Yang et al., (1999) Cancer Res 59:1236-1243]; 문헌[Brㆌggemann and Taussig (1997) Curr Opin Biotechnol 8:455-458]에 기재되어 있다. 그러한 동물 내의 내인성 면역글로불린 유전자좌는 파괴 또는 결실될 수 있고, 상동적 또는 비상동적 재조합을 사용하거나, 도입염색체(transchromosome)를 사용하거나, 미니유전자(minigene)를 사용하여, 하나 이상의 완전하거나 부분적인 인간 면역글로불린 유전자좌를 동물의 유전체 내로 삽입할 수 있다. Regeneron(http://_www_regeneron_com), Harbour Antibodies(http://_www_harbourantibodies_com), Open Monoclonal Technology, Inc. (OMT)(http://_www_omtinc_net), KyMab(http://_www_kymab_com), Trianni(http://_www.trianni_com), 및 Ablexis(http://_www_ablexis_com)와 같은 회사들이 상기 기재된 바와 같은 기술을 사용하여 선택된 항원에 대해 지향된 인간 항체를 제공하는 데에 관여할 수 있다.
인간 항체는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택될 수 있으며, 여기서 파지는 인간 면역글로불린 또는 그의 일부, 예컨대 Fab, 단일쇄 항체(scFv), 또는 쌍을 이루지 않거나 쌍을 이루는 항체 가변 영역을 발현시키도록 조작된다(문헌[Knappik et al., (2000) J Mol Biol 296:57-86]; 문헌[Krebs et al., (2001) J Immunol Meth 254:67-84]; 문헌[Vaughan et al., (1996) Nature Biotechnology 14:309-314]; 문헌[Sheets et al., (1998) PITAS (USA) 95:6157-6162]; 문헌[Hoogenboom and Winter (1991) J Mol Biol 227:381]; 문헌[Marks et al., (1991) J Mol Biol 222:581]). 본 발명의 항체는, 문헌[Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96] 및 국제 특허 출원 공개 WO09/085462호에 기재된 바와 같이, 예를 들어 박테리오파지 pIX 외피 단백질과의 융합 단백질로서 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 발현시키는 파지 디스플레이 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 라이브러리는 인간 및/또는 사이노 PD-1 또는 TIM-3에 결합하는 파지에 대해 스크리닝될 수 있고, 얻어진 양성 클론은 추가로 특성화될 수 있으며, Fab는 클론 용해물로부터 단리되고 전장 IgG로서 발현될 수 있다. 인간 항체의 단리를 위한 그러한 파지 디스플레이 방법은, 예를 들어 미국 특허 제5,223,409호, 제5,403,484호, 제5,571,698호, 제5,427,908호, 제5, 580,717호, 제5,969,108호, 제6,172,197호, 제5,885,793호; 제6,521,404호; 제6,544,731호; 제6,555,313호; 제6,582,915호, 및 제6,593,081호에 기재되어 있다.
면역원성 항원의 제조 및 단일클론 항체 생성은 임의의 적합한 기법, 예컨대 재조합 단백질 생성을 사용하여 수행될 수 있다. 면역원성 항원은 정제된 단백질, 또는 전 세포 또는 세포 또는 조직 추출물을 포함하는 단백질 혼합물의 형태로 동물에게 투여될 수 있거나, 또는 항원은 상기 항원 또는 그의 일부분을 인코딩하는 핵산으로부터 동물의 체내에서 드 노보(de novo)로 형성될 수 있다.
본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체의 생성
.본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체(예를 들어 PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 항체)는 본 명세서에서 특성화되고 단리된 PD-1 결합 VH/VL 도메인을 TIM-3 결합 VH/VL 도메인과 조합함으로써 생성될 수 있다. 대안적으로, 공중 이용가능한 단일특이성 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체로부터의 VH/VL 도메인을 사용하고/하거나, 본 명세서에서 확인된 PD-1 또는 TIM-3 결합 VH/VL 도메인을 공중 이용가능한 PD-1 또는 TIM-3 결합 VH/VL 도메인과 혼합-일치시킴으로써 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체를 조작할 수 있다.
이중특이성 PD-1/TIM-3 분자를 조작하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 항-PD-1 항체는, 예를 들어 미국 특허 제5,897,862호 및 제7,488,802호, 및 국제 특허 출원 공개 WO2004/004771호, WO2004/056875호, WO2006/121168호, WO2008/156712호, WO2010/029435호, WO2010/036959호, WO2011/110604호, WO2012/145493호, WO2014/194302호, WO2014/206107호, WO2015/036394호, WO2015/035606호, WO2015/085847호, WO2015/112900호, 및 WO2015/112805호에 기재된 것들이다. 예를 들어, KEYTRUDA®(펨브롤리주맙) 및 OPDIVO® (니볼루맙)의 VH/VL 도메인이 사용될 수 있다. 본 명세서 및 표 3에 기재된 TIM-3 결합 VH/VL 도메인을 포함하는 이중특이성 항체 내로 이러한 PD-1 VH/VL 도메인을 혼입시킬 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 TIM-3 항체 TM3B103, TM3B105, TM3B107, TM3B108, TM3B109, TM3B113, TM3B189, TM3B190, 및 TM3B196의 VH/VL 도메인을 사용하여 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체를 생성할 수 있다.
마찬가지로, 이중특이성 PD-1/TIM-3 분자를 조작하기 위해 사용될 수 있는 예시적인 항-TIM-3 항체는, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO2011/155607호, WO2013/006490호, 및 WO2015/117002호에 기재된 것들이다. 본 명세서 및 표 2에 기재된 PD-1 결합 VH/VL 도메인을 포함하는 이중특이성 항체 내로 이러한 TIM-3 VH/VL 도메인을 혼입시킬 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 PD-1 항체 PD1B114, PD1B149, PD1B160, PD1B162, PD1B164, PD1B11, PD1B183, PD1B184, PD1B185, PD1B187, PD1B192, PD1B71, PD1B177, PD1B70, PD1B175, PD1B194, PD1B195, PD1B196, PD1B197, PD1B198, PD1B199, PD1B200, PD1B201, PD1B131, 및 PD1B132의 VH/VL 도메인을 사용하여 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체를 생성할 수 있다.
생성된 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체를 PD-1 및 TIM-3에 대한 그의 결합에 대해, 그리고 그의 원하는 작용 특징, 예컨대 항원 특이적 CD4+ 및 CD4+ T 세포의 활성화의 향상에 대해 본 명세서에 기재된 방법을 사용하여 시험할 수 있다.
본 발명의 이중특이성 항체는 전장 항체 구조를 갖는 항체를 포함한다.
동시-발현을 사용하거나 무세포 환경에서의 시험관내에서, 각각의 하프-분자(half-molecule) 내의 중쇄 CH3 계면에 돌연변이를 도입하여 별개의 특이성을 갖는 2개의 항체 하프-분자의 이종이량체 형성을 촉진함으로써, 예를 들어 2개의 단일특이성 2가 항체 사이의 Fab 아암 교환(예를 들어, 중쇄 - 경쇄 쌍 상에서 교환하는 하프 분자 교환)을 사용하여 전장 이중특이성 항체를 생성할 수 있다. Fab 아암 교환 반응은 이황화물-결합 이성질화 반응 및 CH3 도메인의 해리-회합의 결과이다. 모 단일특이성 항체의 힌지 영역 내의 중쇄 이황화물 결합은 환원된다. 모 단일특이성 항체들 중 하나의, 생성된 유리 시스테인은, 제2 모 단일특이성 항체 분자의 시스테인 잔기와 중쇄간 이황화물 결합을 형성하고, 동시에 모 항체의 CH3 도메인이 해리-회합에 의해 방출 및 재형성된다. Fab 아암의 CH3 도메인은 동종이량체화에 비하여 이종이량체화에 유리하도록 조작될 수 있다. 생성된 산물은, 각각이 별개의 에피토프와 결합하는 2개의 Fab 아암 또는 하프 분자를 갖는 이중특이성 항체이다. IgG1 항체의 경우에는 하나의 중쇄 내의 돌연변이 F405L 및 다른 중쇄 내의 K409R을 사용할 수 있다. IgG2 항체의 경우, 야생형 IgG2, 및 F405L 및 R409K 치환을 가진 IgG2 항체를 사용할 수 있다. 이중특이성 항체를 생성하기 위해, Fc 영역 내에 F405L 또는 K409R 돌연변이를 갖도록 제1 단일특이성 2가 항체 및 제2 단일특이성 2가 항체를 조작하고, 힌지 영역 내의 시스테인이 이황화물 결합 이성체화를 겪게 하기에 충분한 환원성 조건 하에 항체를 함께 인큐베이션함으로써; Fab 아암 교환에 의해 이중특이성 항체를 생성한다. 인큐베이션 조건은 비환원성 상태로 최적으로 회복될 수 있다. 사용될 수 있는 예시적인 환원제는 2-메르캅토에틸아민(2-MEA), 다이티오트레이톨(DTT), 다이티오에리트리톨(DTE), 글루타티온, 트리스(2-카르복시에틸)포스핀(TCEP), L-시스테인, 및 베타-메르캅토에탄올이다. 예를 들어, pH 5 내지 8에서, 예를 들어 pH 7.0에서 또는 pH 7.4에서 적어도 25 mM 2-MEA의 존재 하에서 또는 적어도 0.5 mM 다이티오트레이톨의 존재 하에서 20℃ 이상의 온도에서 90분 이상 동안의 인큐베이션이 사용될 수 있다.
이중특이성 항체는 또한 노브-인-홀(Knob-in-Hole)(Genentech), CrossMAb(Roche) 및 정전기적-일치(Chugai, Amgen, NovoNordisk, Oncomed), LUZ-Y(Genentech), 가닥 교환 조작된 도메인 바디(Strand Exchange Engineered Domain body)(SEEDbody)(EMD Serono), 및 Biclonic(Merus)과 같은 설계를 사용하여 생성될 수 있다.
"노브-인-홀" 전략(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 2006/028936호 참조)을 사용하여 본 발명의 전장 이중특이성 항체를 생성할 수 있다. 간략하게 말해서, 인간 IgG 내의 CH3 도메인의 계면을 형성하는 선택된 아미노산이 CH3 도메인 상호작용에 영향을 주는 위치에서 돌연변이되어 이종이량체 형성을 촉진할 수 있다. 작은 측쇄(홀)를 갖는 아미노산이 제1 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입되고, 큰 측쇄(노브)를 갖는 아미노산이 제2 항원에 특이적으로 결합하는 항체의 중쇄 내로 도입된다. 2개의 항체의 공발현 후에, "홀"을 갖는 중쇄와 "노브"를 갖는 중쇄의 우선적인 상호작용의 결과로서 이종이량체가 형성된다. 노브와 홀을 형성하는 예시적인 CH3 치환 쌍은 다음과 같다(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨): T366Y/F405A, T366W/F405W, F405W/Y407A, T394W/Y407T, T394S/Y407A, T366W/T394S, F405W/T394S 및 T366W/T366S_L368A_Y407V.
CrossMAb 기술은 본 발명의 전장 이중특이성 항체를 생성하는 데 사용될 수 있다. Fab 아암 교환을 촉진하기 위하여 "노브-인-홀" 전략을 이용하는 것에 더하여, CrossMAb는 하프 아암들 중 하나에서, CH1 및 CL 도메인이 교환되어 있어서, 생성된 이중특이성 항체의 올바른 경쇄 쌍형성을 보장한다(예를 들어, 미국 특허 제8,242,247호 참조).
한쪽 또는 양쪽 아암에서, 이중특이성 항체 내의 중쇄와 경쇄 사이에서 또는 중쇄 내에서 가변 또는 불변 도메인, 또는 두 도메인 모두를 교환함으로써 본 발명의 전장 이중특이성 항체를 생성하기 위하여 다른 크로스-오버 전략이 사용될 수 있다. 이들 교환은, 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO2009/080254호, WO2009/080251호, WO2009/018386호 및 WO2009/080252호에 기재된 바와 같이 VH-CH1을 VL-CL로, VH를 VL로, CH3을 CL로 그리고 CH3을 CH1로 교환하는 것을 포함한다.
하나의 CH3 표면에서 양성 하전된 잔기 및 제2의 CH3 표면에서 음성 하전된 잔기를 치환함으로써 정전기 상호작용을 사용하여 중쇄 이종이량체화를 촉진하는 것과 같은 다른 전략이 사용될 수 있으며, 이는 미국 특허 출원 공개 US2010/0015133호; 미국 특허 출원 공개 US2009/0182127호; 미국 특허 출원 공개 US2010/028637호, 또는 미국 특허 출원 공개 US2011/0123532호에 기재된 바와 같다. 다른 전략에서는, 미국 특허 출원 공개 US2012/0149876호 또는 미국 특허 출원 공개 US2013/0195849호에 기재된 바와 같이 하기의 치환(제1 중쇄의 제1 CH3 도메인 내의 변형된 위치/제2 중쇄의 제2 CH3 도메인 내의 변형된 위치로서 표현됨)에 의해 이종이량체화가 촉진될 수 있다: L351Y_F405A_Y407V/T394W, T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V, T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V, L351Y_Y407A/T366A_K409F, L351Y_Y407A/T366V_K409F, Y407A/T366A_K409F, 또는 T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W.
LUZ-Y 기술을 이용하여 본 발명의 이중특이성 항체를 생성할 수 있다. 이 기술에서는, 류신 지퍼가 CH3 도메인의 C 말단 내로 첨가되어 모 mAb로부터 이종이량체 조립을 유도하고, 이것을 정제 후에 제거하는데, 이는 문헌[Wranik et al., (2012) J Biol Chem 287(52): 42221-9]에 기재된 바와 같다.
SEEDbody 기술을 이용하여 본 발명의 이중특이성 항체를 생성할 수 있다. SEEDbody는, 그의 불변 도메인에서, 선택된 IgG 잔기가 IgA 잔기로 치환되어 있어서, 이종이량체화를 촉진시키는데, 이는 미국 특허 출원 공개 제20070287170호에 기재된 바와 같다.
돌연변이는 전형적으로 표준 방법을 사용하여 항체의 불변 도메인과 같은 분자에 대해 DNA 수준에서 실행된다.
본 발명의 항체는 다양한 잘 공지된 항체 체제로 조작될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 이중특이성 항체는 재조합 IgG-유사 이중 표적화 분자를 포함하며, 여기서 분자의 2개 측면은 각각 2개 이상의 상이한 항체의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 부분; 전장 IgG 항체가 추가의 Fab 단편 또는 Fab 단편의 부분에 융합된 IgG 융합 분자; 단일쇄 Fv 분자 또는 안정화된 이중항체가 중쇄 불변-도메인, Fc-영역, 또는 그의 부분에 융합된 Fc 융합 분자; 상이한 Fab-단편이 함께 융합된 Fab 융합 분자; 상이한 단일쇄 Fv 분자 또는 상이한 이중항체 또는 상이한 중쇄 항체(예를 들어 도메인 항체, 나노바디)가 서로 융합되거나 다른 단백질 또는 담체 분자에 융합된 ScFv- 및 이중항체-기반의 중쇄 항체(예를 들어, 도메인 항체, 나노바디)를 함유한다.
폴리뉴클레오티드, 벡터, 및 숙주 세포
본 발명은 또한, 소정의 VH 및 VL 서열을 가지며, 여기서 항체 VH는 제1 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩되고 항체 VL은 제2 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩되는, PD-1, TIM-3, 또는 PD-1 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 제공한다. 폴리뉴클레오티드는 상보적 데옥시핵산(cDNA)일 수 있고, 적합한 숙주에서의 발현에 대해 코돈 최적화될 수 있다. 코돈 최적화는 잘 알려진 기술이다.
본 발명은 또한 본 발명의 항체의 VH, 본 발명의 항체의 VL, 본 발명의 항체의 중쇄, 또는 본 발명의 항체의 경쇄를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 VH, VL, 또는 VH 및 VL을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 63, 또는 64의 VH를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 또는 65의 VL을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 196, 197, 198, 199, 200, 201, 202, 또는 203의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 VH, VL, 또는 VH 및 VL을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 145, 146, 147, 148, 149, 150, 151, 152, 153, 154, 또는 172의 VH를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 155, 156, 157, 158, 159, 160, 161, 162, 163, 또는 173의 VL을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 또는 211의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체의 HC1, LC1, HC2, 또는 LC2를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 186, 187, 241, 242, 또는 243의 HC1을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 188 또는 189의 LC1을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 190, 191, 192, 244, 245, 246, 247, 또는 248의 HC2를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 193, 194, 또는 195의 LC2를 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
본 발명은 또한 서열 번호 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 및 260의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 제공한다.
서열 번호 196(PD1H170)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCGGCACCTTTAGCAGCTATGCGATTAGCTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCGGCATTATTCCGATTTTTGACACCGCGAACTATGCGCAGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATTACCGCGGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGAGCAGCCTGCGCAGCGAAGATACCGCGGTGTATTATTGCGCGCGCCCTGGTCTCGCTGCGGCTTATGATACTGGTTCCTTGGACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
서열 번호 197(PD1L148)
GAAATTGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGAGCCCGGGCGAACGCGCGACCCTGAGCTGCCGCGCGAGCCAGAGCGTTCGCTCCTACCTGGCGTGGTATCAGCAGAAACCGGGCCAGGCGCCGCGCCTGCTGATCTACGACGCGAGCAATCGTGCGACCGGCATTCCGGCGCGCTTTAGCGGCTCCGGTAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCGGAAGATTTTGCGGTGTATTATTGCCAGCAACGTAATTATTGGCCGCTGACCTTTGGCCAGGGCACCAAAGTGGAAATTAAA
서열 번호 198(PD1H129)
GAAGTGCAGCTGGTGGAATCTGGCGGCGGACTGGTGCAGCCTGGCGGATCTCTGAGACTGAGCTGTGCCGCCAGCGGCTTCGCCTTCAGCAGATACGACATGAGCTGGGTGCGCCAGGCCCCTGGCAAAGGACTGGAAAGCGTGGCCTACATCTCTGGCGGAGGCGCCAACACCTACTACCTGGACAACGTGAAGGGCCGGTTCACCATCAGCCGGGACAACGCCAAGAACAGCCTGTACCTGCAGATGAACTCCCTGCGGGCCGAGGACACCGCCGTGTACTATTGCGCCTCCCCCTACCTGAGCTACTTCGACGTGTGGGGCCAGGGCACACTCGTGACCGTGTCATCT
서열 번호 199(PD1L62)
GAGATCGTGATGACCCAGAGCCCTGCCACCCTGTCCGTGTCTCCAGGCGAAAGAGCCACCCTGAGCTGCAGAGCCAGCCAGAGCCTGAGCGACTACCTGCACTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCCAGGCCCCCAGACTGCTGATCAAGTCTGCCAGCCAGTCCATCAGCGGCATCCCCGCCAGATTTTCTGGCAGCGGCTCCGGCACCGAGTTCACCCTGACAATCAGCAGCCTGCAGAGCGAGGACTTCGCCGTGTACTACTGCCAGAACGGCCACAGCTTCCCTTACACCTTCGGCCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAG
서열 번호 200(PD1H163)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCGGCACCTTCAAGTCCTATGTGATTCATTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCGGTATTATCCCAATTTTTGGCACCGCCAATTATGCGCAGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATTACCGCTGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGAGCAGCCTGCGCAGCGAAGATACCGCGGTGTATTATTGCGCGCGCGGTTATGTGCGGGCTACGGGCATGTTGGACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
서열 번호 201(PD1L185)
GAAATTGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGAGCCCGGGCGAACGCGCGACCCTGAGCTGCCGCGCGAGCCAGAGCGTTAGCAATTATCTGGCGTGGTATCAGCAGAAACCGGGCCAGGCGCCGCGCCTGCTGATCTACGACGCCAGCAATCGCGCGACCGGCATTCCGGCGCGCTTTAGCGGCTCCGGTAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCGGAAGATTTTGCGGTGTATTATTGCCAGCAACGTGCATATTGGCCGCTGACCTTTGGCCAGGGCACCAAAGTGGAAATTAAA
서열 번호 202(PD1H164)
CAGGTGCAGCTGGTGCAGAGCGGCGCGGAAGTGAAAAAACCGGGCAGCAGCGTGAAAGTGAGCTGCAAAGCGAGCGGCGGCACCTTCAGCGATTATGTGATTTCCTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGCCAGGGCCTGGAATGGATGGGCGGTATTATCCCGATTTACGGGACCGCTAACTATGCGCAGAAATTTCAGGGCCGCGTGACCATTACCGCTGATGAAAGCACCAGCACCGCGTATATGGAACTGAGCAGCCTGCGCAGCGAAGATACCGCGGTGTATTATTGCGCGCGCGGTACCCTCGACCGGACCGGGCATTTGGACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
서열 번호 203(PD1L86)
GAAATTGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGAGCCCGGGCGAACGCGCGACCCTGAGCTGCCGCGCGAGCCAGAGCGTCTCCTCCTACCTTGCGTGGTATCAGCAGAAACCGGGCCAGGCGCCGCGCCTGCTGATCCACGACGCCTCTACGCGTGCGACCGGCATTCCGGCGCGCTTTAGCGGCTCCGGTAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCGGAAGATTTTGCGGTGTATTATTGCCAGCAACGTAATTATTGGCCGCTCACCTTTGGCCAGGGCACCAAAGTGGAAATTAAA
서열 번호 204(TM3H24)
GAAGTGCAGCTGCTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCGGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCGGCAAGCGGCTTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGCAAAGGCCTGGAATGGGTGAGCGCGATTAGCGGCAGCGGCGGCAGCACCTATTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGCTTTACCATTAGCCGCGATAACAGCAAAAACACCCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCGGAAGATACCGCGGTGTATTATTGCGCGAAATCCCCGTACGCGCCCTTGGACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
서열 번호 205(TM3L33)
GAAATTGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGAGCCCGGGCGAACGCGCGACCCTTAGCTGCCGTGCAAGTCAGAGTGTGAACGACTACCTGGCGTGGTATCAGCAGAAACCGGGCCAGGCGCCGCGCCTGCTGATTTATGATGCGAGCAACCGCGCGACCGGCATTCCGGCGCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCGGAAGATTTTGCGGTGTATTATTGCCAGCAGGGTGGTCACGCGCCGATCACCTTTGGCCAGGGCACCAAAGTGGAAATTAAA
서열 번호 206(TM3H162)
GAAGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGCGCCGAAGTGAAGAAGCCTGGCGAGAGCCTGAAGATCAGCTGCAAGGGCAGCGGCTACAGCTTCACCAGCTACTGGATGCAGTGGGTGCGCCAGATGCCTGGCAAGGGCCTGGAATGGATGGGCGCCATCTATCCCGGCGACGGCGACATCAGATACACCCAGAACTTCAAGGGCCAAGTGACCATCAGCGCCGACAAGAGCATCAGCACCGCCTACCTGCAGTGGTCCAGCCTGAAGGCCAGCGACACCGCCATGTACTACTGTGCCAGATGGGAGAAGTCCACCACCGTGGTGCAGCGGAACTACTTCGACTACTGGGGCCAGGGCACCACAGTGACCGTGTCTAGT
서열 번호 207(TM3L85)
GACATCCAGATGACCCAGAGCCCCAGCAGCCTGTCTGCCAGCGTGGGCGACAGAGTGACCATCACATGCAAGGCCAGCGAGAACGTGGGCACCTTCGTGTCCTGGTATCAGCAGAAGCCCGGCAAGGCCCCCAAGCTGCTGATCTACGGCGCCAGCAACAGATACACCGGCGTGCCCAGCAGATTCAGCGGCTCTGGCAGCGGCACCGACTTCACCCTGACCATCTCTAGCCTGCAGCCCGAGGACTTCGCCACCTACTACTGCGGCCAGAGCTACAGCTACCCCACCTTTGGCCAGGGCACCAAGCTGGAAATCAAG
서열 번호 208(TM3H21)
GAAGTGCAGCTGCTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCGGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCGGCGAGCGGCTTTACCTTTAGCAACTATTGGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGCAAAGGCCTGGAATGGGTGAGCGCGATTAGCGGCAGCGGCGGCAGCACCTATTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGCTTTACCATTAGCCGCGATAACAGCAAAAACACCCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCGGAAGATACCGCGGTGTATTATTGCGCGAAAGATCATTGGGATCCCAATTTTTTGGACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
서열 번호 209(PH9L1)
GAAATTGTGCTGACCCAGAGCCCGGGCACCCTGAGCCTGAGCCCGGGCGAACGCGCGACCCTGAGCTGCCGCGCGAGCCAGAGCGTGAGCAGCAGCTATCTGGCGTGGTATCAGCAGAAACCGGGCCAGGCGCCGCGCCTGCTGATTTATGGCGCGAGCAGCCGCGCGACCGGCATTCCGGATCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCATTAGCCGCCTGGAACCGGAAGATTTTGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTATGGCAGCAGCCCGCTGACCTTTGGCCAGGGCACCAAAGTGGAAATTAAA
서열 번호 210(TM3H65)
GAAGTGCAGCTGCTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAGCCGGGCGGCAGCCTGCGCCTGAGCTGCGCGGCGAGCGGCTTTACCTTTAGCGACTATTGGATGAGCTGGGTGCGCCAGGCGCCGGGCAAAGGCCTGGAATGGGTGAGCGTGATCAAGTATAGCGGTGGCTCCAAATATTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGCTTTACCATTAGCCGCGATAACAGCAAAAACACCCTGTATCTGCAGATGAACAGCCTGCGCGCGGAAGATACCGCGGTGTATTATTGCGCGAAAGAGCTGGAGGGGGTGTTCGACTATTGGGGCCAGGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGC
서열 번호 211(TM3L12)
GAAATTGTGCTGACCCAGAGCCCGGGCACCCTGAGCCTGAGCCCGGGCGAACGCGCGACCCTGAGCTGCCGCGCGAGCCAGAGCGTTAGCAATAGCACTCTGGCGTGGTATCAGCAGAAACCGGGCCAGGCGCCGCGCCTGCTGATTTATACTGCGAGCAGCCGCGCGACCGGCATTCCGGATCGCTTTAGCGGCAGCGGCAGCGGCACCGATTTTACCCTGACCATTAGCCGCCTGGAACCGGAAGATTTTGCGGTGTATTATTGCCAGCAGTCTTACACATCTCCGTGGACTTTTGGCCAGGGCACCAAAGTGGAAATTAAA
본 발명의 항체의 VH 또는 VL 또는 그의 항원-결합 단편, 또는 본 발명의 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 의도된 숙주 세포에서 뉴클레오티드 서열의 발현을 가능하게 하는 하나 이상의 조절 요소, 예컨대 프로모터 또는 인핸서에 작동가능하게 연결될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 cDNA일 수 있다.
본 발명은 또한 본 발명의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터를 제공한다. 그러한 벡터는 플라스미드 벡터, 바이러스 벡터, 배큘로바이러스 발현용 벡터, 트랜스포손 기반 벡터, 또는 임의의 수단에 의해 주어진 유기체 또는 유전적 백그라운드 내로 본 발명의 합성 폴리뉴클레오티드를 도입시키기에 적합한 임의의 다른 벡터일 수 있다. 예를 들어, 불변 영역에 선택적으로 연결된, 본 발명의 항체의 경쇄 및/또는 중쇄 가변 영역을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 발현 벡터 내로 삽입된다. 경쇄 및/또는 중쇄는 동일하거나 상이한 발현 벡터 내에서 클로닝될 수 있다. 면역글로불린 쇄를 인코딩하는 DNA 절편은 면역글로불린 폴리펩티드의 발현을 보장하는 발현 벡터(들) 내의 제어 서열에 작동가능하게 연결될 수 있다. 그러한 제어 서열은 신호 서열, 프로모터(예를 들어, 천연 관련 프로모터 또는 이종 프로모터), 인핸서 요소, 및 전사 종결 서열을 포함하며, 항체를 발현하도록 선택된 숙주 세포에 적합하도록 선택된다. 일단 벡터가 적절한 숙주 내로 도입되었으면, 숙주는 도입된 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩된 단백질의 고수준 발현에 적합한 조건 하에서 유지된다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 196 및 197의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 198 및 199의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 200 및 201의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 202 및 203의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 204 및 205의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 206 및 207의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 208 및 209의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 210 및 211의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 253 및 254의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 255 및 256의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 257 및 258의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 벡터는 서열 번호 259 및 260의 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
적합한 발현 벡터는 전형적으로 숙주 유기체 내에서 에피솜으로서 또는 숙주 염색체 DNA의 필수 부분으로서 복제가능하다. 통상적으로, 발현 벡터는 선택 마커, 예를 들어 암피실린-저항성, 하이그로마이신-저항성, 테트라사이클린 저항성, 카나마이신 저항성 또는 네오마이신 저항성을 함유하여 원하는 DNA 서열로 형질전환된 세포의 검출을 가능하게 한다.
적합한 프로모터 및 인핸서 요소는 당업계에 알려져 있다. 진핵 세포에서의 발현을 위해, 예시적인 프로모터는 경쇄 및/또는 중쇄 면역글로불린 유전자 프로모터 및 인핸서 요소; 사이토메갈로바이러스 전초기 프로모터; 단순 포진 바이러스 티미딘 키나제 프로모터; 초기 및 후기 SV40 프로모터; 레트로바이러스로부터의 긴 말단 반복에 존재하는 프로모터; 마우스 메탈로티오네인-I 프로모터; 및 다양한 공지된 조직 특이적 프로모터를 포함한다. 적절한 벡터 및 프로모터의 선택은 충분히 당업자의 수준 내에 있다.
사용될 수 있는 예시적인 벡터는 세균 벡터: pBs, 파지스크립트, PsiX174, pBluescript SK, pBs KS, pNH8a, pNH16a, pNH18a, pNH46a(미국 캘리포니아주 라호이아 소재의 Stratagene); pTrc99A, pKK223-3, pKK233-3, pDR540, 및 pRIT5 (스웨덴 웁살라 소재의 Pharmacia). 진핵세포 벡터: pWLneo, pSV2cat, pOG44, PXR1, pSG(Stratagene) pSVK3, pBPV, pMSG 및 pSVL(Pharmacia), pEE6.4(Lonza) 및 pEE12.4(Lonza)이다.
본 발명은 또한 본 발명의 하나 이상의 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. "숙주 세포"는 벡터가 내부에 도입된 세포를 지칭한다. 용어 숙주 세포는 특정 대상 세포뿐만 아니라 그러한 세포의 자손, 그리고 또한 특정 대상 세포로부터 생성된 안정한 세포주도 지칭하고자 함이 이해된다. 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 후세대에서 특정의 변형이 일어날 수 있기 때문에, 그러한 후손은 모 세포와 동일하지 않을 수 있지만, 여전히 본 명세서에 사용되는 바와 같은 용어 "숙주 세포"의 범주 내에 포함된다. 그러한 숙주 세포는 진핵 세포, 원핵 세포, 식물 세포 또는 고세균(archeal) 세포일 수 있다. 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 간균강(bacilli), 예컨대 바실루스 수브틸리스(Bacillus subtilis), 및 다른 장내세균과(enterobacteriaceae), 예컨대 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia), 및 다양한 슈도모나스(Pseudomonas) 종이 원핵 숙주 세포의 예이다. 다른 미생물, 예컨대 효모가 또한 발현에 유용하다. 사카로미세스(Saccharomyces)(예를 들어, S. 세레비시아이(S. cerevisiae)) 및 피키아(Pichia)가 적합한 효모 숙주 세포의 예이다. 예시적인 진핵 세포는 포유류, 곤충, 조류 또는 다른 동물 기원의 것일 수 있다. 포유류 진핵 세포는 불멸화 세포주, 예컨대 하이브리도마 또는 골수종 세포주, 예컨대 SP2/0(버지니아주 머내서스 소재의 ATCC(American Type Culture Collection), CRL-1581), NS0(영국 윌트셔주 솔즈베리 소재의 ECACC(European Collection of Cell Cultures), ECACC No. 85110503), FO(ATCC CRL-1646), 및 Ag653(ATCC CRL-1580) 뮤린 세포주를 포함한다. 예시적인 인간 골수종 세포주는 U266(ATTC CRL-TIB-196)이다. 다른 유용한 세포주는 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 예컨대 CHOK1SV(메릴랜드주 워커스빌 소재의 Lonza Biologics), Potelligent® CHOK2SV(Lonza), CHO-K1(ATCC CRL-61), 또는 DG44로부터 유래된 것들을 포함한다.
본 발명은 또한 항체가 발현되는 조건에서 본 발명의 숙주 세포를 배양하는 단계 및 숙주 세포에 의해 생성된 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 본 발명의 항체를 생성하는 방법을 제공한다. 항체의 제조 방법 및 그의 정제 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 일단 (화학적으로 또는 재조합적으로) 합성되면, 전 항체, 그의 이량체, 개별 경쇄 및/또는 중쇄, 또는 다른 항체 단편, 예컨대 VH 및/또는 VL은 황산암모늄 침전, 친화성 컬럼, 컬럼 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 정제, 겔 전기영동 등을 포함한 표준 절차에 따라 정제될 수 있다(전반적으로 문헌[Scopes, Protein Purification (Springer- Verlag, N.Y., (1982))] 참조). 대상 항체는 실질적으로 순수할 수 있으며, 예를 들어 약 80% 내지 85% 이상 순수하거나, 약 85% 내지 90% 이상 순수하거나, 약 90% 내지 95% 이상 순수하거나, 약 98% 내지 99% 이상, 또는 그 이상으로 순수할 수 있으며, 예를 들어 대상 항체 이외의 세포 잔해, 거대분자 등과 같은 오염물이 없다.
본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열은 표준 분자 생물학 방법을 사용하여 벡터 내로 혼입될 수 있다. 숙주 세포 형질전환, 배양, 항체 발현 및 정제는 잘 알려진 방법을 사용하여 행해진다. 본 발명의 다른 실시 형태는,
항체의 VH를 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 및 항체의 VL을 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 발현 벡터 내로 도입시키는 단계;
숙주 세포를 발현 벡터로 형질전환시키는 단계;
VL 및 VH가 발현되고 항체를 형성하는 조건 하에서 배양 배지 중에서 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
숙주 세포 또는 배양 배지로부터 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 생성하는 방법이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 다른 실시 형태는,
항체의 VH를 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 및 항체의 VL을 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 발현 벡터 내로 도입시키는 단계;
숙주 세포를 발현 벡터로 형질전환시키는 단계;
VL 및 VH가 발현되고 항체를 형성하는 조건 하에서 배양 배지 중에서 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
숙주 세포 또는 배양 배지로부터 항체를 회수하는 단계를 포함하는, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 생성하는 방법이다.
본 명세서에, 그리고 하기 열거된 번호화된 실시 형태 각각 및 모두의 일부 실시 형태에 기재된 본 발명의 소정의 VH 또는 VL 서열을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는, 표준 분자 생물학 방법을 사용하여 벡터 내로 혼입될 수 있다. 숙주 세포 형질전환, 배양, 항체 발현 및 정제는 잘 알려진 방법을 사용하여 행해진다.
약제학적 조성물/투여
본 발명은 본 발명의 항체 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 치료적 용도를 위하여, 본 발명의 항체는 약제학적으로 허용가능한 담체 중에 활성 성분으로서 항체의 유효량을 함유하는 약제학적 조성물로서 제조될 수 있다. "담체"는 본 발명의 항체와 함께 투여되는 희석제, 애쥬번트(adjuvant), 부형제, 또는 비히클을 지칭한다. 이러한 비히클은 석유, 동물, 식물, 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 낙화생유, 대두유, 광유, 참기름 등을 포함하는, 물 및 오일과 같은 액체일 수 있다. 예를 들어, 0.4% 염수 및 0.3% 글리신이 사용될 수 있다. 이들 용액은 무균성이고 일반적으로 미립자 물질이 없다. 이들은 종래의 잘 알려진 멸균 기법(예를 들어, 여과)에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조정제 및 완충제, 안정화제, 증점제, 윤활제, 및 착색제 등과 같은 생리적 조건에 근접시키기 위하여 필요한, 약제학적으로 허용가능한 보조 물질을 함유할 수 있다. 그러한 약제학적 제형에서 본 발명의 항체의 농도는 약 0.5 중량% 미만으로부터, 통상 약 1 중량% 이상까지, 많게는 15 또는 20 중량%까지 변동될 수 있으며, 선택된 특정 투여 방식에 따라, 필요 용량, 유체 부피, 점도 등에 기초하여 주로 선택될 수 있다. 다른 인간 단백질, 예를 들어 인간 혈청 알부민을 포함하는 적합한 비히클 및 제형이, 예를 들어 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Troy, D.B. ed., Lipincott Williams and Wilkins, Philadelphia, PA 2006, Part 5, Pharmaceutical Manufacturing pp 691-1092, 특히 pp. 958-989 참조]에 기재되어 있다.
본 발명의 항체의 치료적 용도를 위한 투여 방식은, 정제, 캡슐, 용액, 분말, 겔, 입자의 형태이고; 주사기, 이식 장치, 삼투압 펌프, 카트리지, 마이크로펌프 내에 함유된 제형; 또는 당업계에 잘 공지된 바와 같이 당업자에게 인정되는 다른 수단을 사용하여, 항체를 숙주에게 전달하는 임의의 적합한 경로, 예컨대 비경구 투여, 예를 들어 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내 또는 피하, 폐, 경점막(구강, 비강내, 질내, 직장)일 수 있다. 부위 특이적 투여는, 예를 들어, 종양내, 관절내, 기관지내, 복강내, 관절낭내, 연골내, 강내, 체강내, 소뇌내, 뇌실내, 결장내, 자궁경부내, 위내, 간내, 심근내, 골내, 골반내, 심막내, 복막내, 흉막내, 전립선내, 폐내, 직장내, 신장내, 망막내, 척수내, 활막내, 흉부내, 자궁내, 혈관내, 방광내, 병변내, 질, 직장, 협측, 설하, 비강내, 또는 경피 전달에 의해 달성될 수 있다.
본 발명의 항체는 임의의 적합한 경로에 의해, 예를 들어 정맥내(i.v.) 주입 또는 볼루스 주사에 의해 비경구로, 근육내로 또는 피하로 또는 복막내로 대상에게 투여될 수 있다. i.v. 주입은, 예를 들어 15, 30, 60, 90, 120, 180, 또는 240분, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12시간에 걸쳐 제공될 수 있다.
대상에게 제공되는 용량은 치료되는 질병을 경감시키거나 적어도 부분적으로 정지시키기에 충분하고("치료적 유효량"), 때때로 0.005 mg 내지 약 100 mg/㎏, 예를 들어 약 0.05 mg 내지 약 30 mg/㎏ 또는 약 5 mg 내지 약 25 mg/㎏, 또는 약 4 mg/㎏, 약 8 mg/㎏, 약 16 mg/㎏ 또는 약 24 mg/㎏, 또는, 예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mg/㎏일 수 있지만, 더욱 더 높을 수 있으며, 예를 들어 약 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 또는 100 mg/㎏일 수 있다.
고정 단위 용량, 예를 들어 50, 100, 200, 500 또는 1000 mg이 또한 제공될 수 있거나, 또는 이러한 용량은 환자의 표면적에 기초해서, 예를 들어 500, 400, 300, 250, 200, 또는 100 mg/m2일 수 있다. 환자를 치료하기 위해 통상 1 내지 8회(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8회)의 용량이 투여될 수 있지만, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20회 이상의 용량이 제공될 수 있다.
본 발명의 항체의 투여는 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 1주, 2주, 3주, 1개월, 5주, 6주, 7주, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월 또는 그 이상 후에 반복될 수 있다. 만성 투여인 바와 같이, 반복된 치료 과정이 또한 가능하다. 반복 투여는 동일한 용량으로 또는 상이한 용량으로 행해질 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 정맥내 주입에 의해 8주 동안 매주 간격으로 8 mg/㎏으로 또는 16 mg/㎏으로 투여된 후, 추가적인 16주 동안 2주마다 8 mg/㎏으로 또는 16 mg/㎏으로 투여된 후, 4주마다 8 mg/㎏으로 또는 16 mg/㎏으로 투여될 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 항체는 일일 투여량으로서, 치료 개시 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 또는 40일 중 적어도 하나에 대해, 또는 대안적으로, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20주 중 적어도 하나에 대해, 매 24, 12, 8, 6, 4, 또는 2시간마다의 단회 또는 분할 용량, 또는 이들의 임의의 조합을 사용하여, 1일당 약 0.1 내지 100 mg/㎏, 예컨대 0.5, 0.9, 1.0, 1.1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 mg/㎏의 양으로, 또는 이들의 임의의 조합으로 제공될 수 있다.
본 발명의 항체는 또한 암 발생 위험을 감소시키고/시키거나, 암 진행에서의 사건의 발생의 개시를 지연시키고/시키거나, 암이 관해기에 있을 때 재발 위험을 감소시키기 위하여 예방적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 항체는 저장을 위해 동결건조되고, 사용 전에 적합한 담체 중에 재구성될 수 있다. 이 기법은 종래의 단백질 제제에 유효한 것으로 밝혀져 있으며, 잘 알려진 동결건조 및 재구성 기법이 사용될 수 있다.
방법 및 용도
본 발명의 항체는 시험관내 및 생체내 진단적 유용성뿐만 아니라 치료적 유용성 및 예방적 유용성을 갖는다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 암 및 감염성 장애와 같은 다양한 장애를 치료, 예방, 및/또는 진단하기 위해 대상에게 투여되거나 배양 중인 세포에, 시험관내, 또는 생체외 투여될 수 있다.
본 발명은 면역 반응을 변형시키기에 충분한 시간 동안 본 발명의 항체를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 면역 반응을 변형시키는 방법을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 면역 반응은 향상되거나, 자극되거나, 상향조절된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 대상은 인간 환자이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 대상은 면역 반응의 향상을 필요로 하는 인간 환자이다.
일부 실시 형태에서, 대상은 면역손상된다.
일부 실시 형태에서, 대상은 면역손상될 위험이 있다. 면역손상된 대상은 화학 요법 또는 방사선 요법을 받고 있거나 받은 적이 있을 수 있다.
일부 실시 형태에서, 대상은 감염의 결과로 면역손상되거나 그러한 위험이 있다.
본 발명의 항체는 T-세포 매개 면역 반응을 강화함으로써 치료될 수 있는 장애를 갖는 대상을 치료하기에 적합하다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 PD1B114, PD1B149, PD1B160, PD1B162, PD1B164, PD1B11, PD1B183, PD1B184, PD1B185, PD1B187, PD1B71, PD1B177, PD1B70, PD1B175, PD1B194, PD1B195, PD1B196, PD1B197, PD1B198, PD1B199, PD1B200, PD1B201, PD1B243, PD1B244, PD1B131, 또는 PD1B132이다. 이러한 항체의 VH 및 VL 아미노산 서열을 표 2에 나타낸다.
일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 TM3B103, TM3B105, TM3B109, TM3B108, TM3B113, TM3B189, TM3B190, TM3B193, TM3B195, TM3B196, 또는 TM3B291이다. 이러한 항체의 VH 및 VL 아미노산 서열을 표 3에 나타낸다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체는 PTBB14, PTBB15, PTBB16, PTBB17, PTBB24, PTBB30, PTBB27, PTBB28, PTBB18, PTBB20, 또는 PTBB21이다. 이러한 항체의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2 아미노산 서열을 표 41 및 표 42에 나타낸다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 50의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 51의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 52의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 53의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 54의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 50의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 55의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 57의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 44의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 46의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 49의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 53의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 52의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 58의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 59의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 60의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 61의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 62의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 145의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 148의 VH 및 서열 번호 157의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 147의 VH 및 서열 번호 155의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 149의 VH 및 서열 번호 158의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 150의 VH 및 서열 번호 159의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 151의 VH 및 서열 번호 160의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 161의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 154의 VH 및 서열 번호 163의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 사용되는, PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 제1 도메인 내의 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL, 및 제2 도메인 내의 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함한다.
암
PD-1의 차단은 대상에서 암성 세포에 대한 면역 반응을 향상시킬 수 있다. PD-1에 대한 리가드, PD-L1은 다양한 인간 암에서 풍부하게 발현된다(문헌[Dong et al., (2002) Nat Med 8:787-9]). PD-1과 PD-L1 사이의 상호작용은 종양 침윤 림프구의 감소, T-세포 수용체 매개 증식의 감소, 및/또는 암성 세포에 의한 면역 회피를 유발할 수 있다(문헌[Dong et al., (2003) J Mol Med 81:281-7]; 문헌[Blank et al., (2005) Cancer Immunol Immunother 54:307-314]; 문헌[Konishi et al., (2004) Clin Cancer Res 10:5094-100]). 면역 억제는 PD-L1에 대한 PD-1의 국소 상호작용을 저해함으로써 역전될 수 있으며; 제2 PD-1 리간드, PD-L2에 대한 PD-1의 상호작용이 또한 차단되는 경우에 그 효과는 상가적이다(문헌[Iwai et al., (2002) PorcNatl Acad Sci 99:12293-7]; 문헌[Brown et al., (2003) J Immunol 170:1257-66]). 따라서, PD-1의 저해는 면역 반응의 강화를 유발할 수 있다.
TIM-3은 IFN-γ를 분비하는 활성화된 T 헬퍼 1(Thl) CD4+ 및 세포독성 CD8+ T 세포 상에서 발현되는 공동저해 단백질(coinhibitory protein)이다. 암 및 바이러스성 소진의 전임상 모델에서 나타난 바와 같이, TIM-3은 PD-1+ 소진된 T 세포 상에서 동시-발현된다. 이러한 경로의 동시-차단은 몇몇 모델뿐 아니라 전이성 흑색종 환자 및 HIV 또는 HCV를 가진 환자로부터 유래된 인간 PBMC에서 이펙터 T 세포 작용(예를 들어, IFN-γ 분비, 증식)을 회복시킬 수 있다. TIM-3은 또한 Foxp3+ 조절 T 세포 상에 풍부하며, TIM-3, LAG3, 및 CTLA4를 동시-발현시키는 Treg는 이펙터 T 세포(Teff)의 고도로 효율적인 억제제인 것으로 나타났다(문헌[Galuton et al., (2014) Eur J Immunol 44(9):2703-11]). TIM-3 발현은 NSCLC에서 더 불량한 예후와 상관관계를 나타냈다(문헌[Zhuang et al., (2012) Am J Clin Pathol 137(6):978-85]). 난소, 결장직장, 자궁경부, 및 간세포 암종 환자의 종양 조직으로부터의 림프구는 더 높은 비율의 TIM-3+ CD4 T 세포를 나타내며, 이들 세포는 ILF-γ를 생성하는 능력이 손상된다(문헌[Yan et al., (2013) PLoS One 8(3):e58006]).
본 발명은 또한, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 종양 세포의 성장을 저해하기에 충분한 시간 동안 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 종양 세포의 성장을 저해하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 종양 세포의 성장을 저해하기에 충분한 시간 동안 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 종양 세포의 성장을 저해하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체의 치료적 유효량을 종양 세포의 성장을 저해하기에 충분한 시간 동안 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 종양 세포의 성장을 저해하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여함으로써 암을 치료하는 방법을 제공한다.
사용될 수 있는 예시적인 항체는, 본 명세서에 기재된 바와 같은 VH 및 VL 아미노산 서열 및 특징을 갖는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 및 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체 PD1B114, PD1B149, PD1B160, PD1B162, PD1B164, PD1B11, PD1B183, PD1B184, PD1B185, PD1B187, PD1B71, PD1B177, PD1B70, PD1B175, PD1B194, PD1B195, PD1B196, PD1B197, PD1B198, PD1B199, PD1B200, PD1B201, TM3B103, TM3B105, TM3B109, TM3B108, TM3B113, TM3B189, TM3B190, TM3B193, TM3B195, TM3B196, TM3B291, PTBB14, PTBB15, PTBB16, PTBB17, PTBB24, PTBB30, PTBB27, PTBB28, PTBB18, PTBB20, 및 PTBB21이다.
암은 과증식성 병태 또는 장애, 고형 종양, 혈액성 악성종양, 연조직 종양, 또는 전이 병변일 수 있다.
"암"은 조직병리학 유형 또는 침습성의 상태와 무관하게 모든 유형의 암성 성장 또는 발암 과정, 전이성 조직 또는 악성종양으로 형질전환된 세포, 조직, 또는 장기를 포함하고자 하는 것이다. 암의 예는 고형 종양, 혈액성 악성종양, 연조직 종양, 및 전이 병변을 포함한다. 예시적인 고형 종양은 다양한 장기 시스템의 악성종양, 예를 들어, 육종, 및 암종(선암종 및 편평상피세포 암종을 포함함), 예컨대 간, 폐, 유방, 림프, 위장관(예를 들어, 결장), 비뇨생식관(예를 들어, 신세포, 요로상피세포), 전립선, 및 인두에 영향을 주는 것들을 포함한다. 선암종은 악성종양, 예컨대 대부분의 결장암, 직장암, 신세포 암종, 간암, 폐의 비-소세포 암종, 소장의 암, 및 식도의 암을 포함한다. 편평상피세포 암종은, 예를 들어, 폐, 식도, 피부, 두경부 영역, 구강, 항문, 및 자궁경부 내의 악성종양을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 암은 흑색종이다.
전술한 암의 전이 병변 또한 본 명세서에 기재된 본 발명의 방법 및 항체를 사용하여 치료하거나 예방할 수 있다.
본 발명의 항체를 사용하여 그의 성장을 저해하거나 감소시킬 수 있는 예시적인 암은 면역요법에 대해 반응성일 수 있는 암을 포함한다. 그러한 예시적인 암은 흑색종, 신장암, 전립선암, 유방암, 결장암, 위장관암, 위암, 식도암, 폐암, 전이성 악성 흑색종, 투명세포 암종, 호르몬 불응성 전립선 선암종, 비-소세포 폐암, 또는 두경부의 암을 포함한다. 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체를 사용하여 불응성 또는 재발성 악성종양을 치료할 수 있다.
본 발명의 항체로 치료할 수 있는 다른 예시적인 암은 항문암, 기저세포 암종, 담도암, 방광암, 골암, 뇌 및 CNS 암, 나팔관의 암종, 질의 암종, 음문의 암종, 피부 또는 안내의 악성 흑색종, 위-식도암, 고환암, 난소암, 췌장암, 직장암, 자궁암, 원발성 CNS 림프종; 중추신경계(CNS)의 신생물, 자궁경부암, 융모막 암종, 결장암, 결합조직암, 소화기계의 암, 자궁내막암, 안암; 상피내 신생물, 콩팥암, 후두암, 간암; 소세포 폐암, 신경모세포종, 구강암(예를 들어, 입술, 혀, 입, 및 인두), 비인두암, 망막모세포종, 횡문근육종, 호흡기계의 암, 육종, 갑상선암, 비뇨기계의 암, 간암종, 항문 영역의 암, 나팔관의 암종, 질의 암종, 음문의 암종, 소장의 암, 내분비계의 암, 부갑상선의 암, 부신의 암, 연조직의 육종, 요도의 암, 음경의 암, 유년기의 고형 종양, 종양 혈관신생, 척추 종양, 뇌간 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 머켈세포암, 유표피암, 편평상피세포암, 석면에 의해 유도되는 것들을 포함하는 환경적으로 유도된 암뿐만 아니라 다른 암종 및 육종, 및 상기 암의 조합이다.
본 발명의 항체로 치료할 수 있는 예시적인 혈액성 악성종양은 백혈병, 림프종, 및 골수종, 예컨대 전구체 B-세포 림프모구성 백혈병/림프종 및 B-세포 비-호지킨 림프종, 급성 전골수구성 백혈병, 급성 림프모구성 백혈병(ALL), B-세포 만성 림프구성 백혈병(CLL)/소림프구성 림프종(SLL), B-세포 급성 림프구성 백혈병, B-세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종, 맨틀세포 림프종(MCL), 저-등급, 중간-등급, 및 고-등급 여포성 림프종(FL)을 포함하는 여포성 림프종, 피부 여포 중심 림프종, 변연부 B-세포 림프종(MALT 유형, 림프절 및 비장 유형), 털세포 백혈병, 미만성 거대 B-세포 림프종(DLBCL), 버킷 림프종(BL), 형질세포종, 다발성 골수종(MM), 형질 세포 백혈병, 이식-후 림프증식성 장애, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 형질 세포 장애, 역형성 대세포 림프종(ALCL), T-세포 급성 림프구성 백혈병, 원발성 전신 아밀로이드증(예를 들어 경쇄 아밀로이드증), 전-림프구성/골수구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 대과립 림프구성(LGL) 백혈병, NK-세포 백혈병, 및 호지킨 림프종을 포함한다.
"형질 세포 장애"는 클론성 형질 세포를 특징으로 하는 장애를 지칭하며, 다발성 골수종, 경쇄 아밀로이드증, 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증을 포함한다. 경쇄 아밀로이드증 및 발덴스트롬 거대글로불린혈증은 다발성 골수종으로부터 독립적으로 발생할 수 있다. 이들은 또한 다발성 골수종과 동시에 존재할 수 있고, 다발성 골수종의 발생 전이나 후에 발생될 수 있다.
예시적인 B-세포 비-호지킨 림프종은 림프종양 육아종증, 원발성 삼출액 림프종, 혈관내 대 B-세포 림프종, 종격 대 B-세포 림프종, 중쇄 질병(γ, μ, 및 a 질병을 포함함), 면역억제제를 이용하는 요법에 의해 유도된 림프종, 예컨대 사이클로스포린-유도 림프종, 및 메토트렉세이트-유도 림프종이다.
PD-L1을 발현시키는 전이성 암을 포함하는 암을 가진 환자를 본 발명의 항체로 치료할 수 있다. 암은 흑색종, 신세포 암종, 편평상피 비-소세포 폐암(NSCLC), 비-편평상피 NSCLC, 결장직장암, 거세-저항성 전립선암, 난소암, 위장암, 선암종(ACA), 편평상피세포 암종(SCC), 간세포 암종(HCC), 췌장 암종, 두경부의 편평상피세포 암종, 식도, 위장관, 및 유방의 암종일 수 있다.
TIM-3을 발현시키는 암을 가진 환자를 본 발명의 항체로 치료할 수 있다. TIM-3-발현 암은 자궁경부암, 폐암, NSCLC, 급성 골수성 백혈병(AML), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL), 흑색종, 신장암, 신세포 암종(RCC), 콩팥 투명세포 암종, 콩팥 유두세포 암종, 전이성 신세포 암종, 편평상피세포 암종, 식도 편평상피세포 암종, 비인두 암종, 결장직장암, 유방암(예를 들어, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 또는 Her2/neu 중 1개, 2개, 또는 전부를 발현시키지 않는 유방암, 예를 들어, 3중 음성 유방암), 중피종, 간세포 암종, 및 난소암을 포함한다. TIM-3-발현 암은 전이성 암일 수 있다.
일부 실시 형태에서, 대상은 고형 종양을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 대상은 혈액성 악성종양을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 흑색종이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 폐암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 비-소세포 폐암(NSCLC)이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 편평 비소세포 폐암(NSCLC)이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 비편평 NSCLC이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 폐 선암종이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 신세포 암종(RCC)이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 중피종이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 비인두 암종(NPC)이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 결직장암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 전립선암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 거세-저항성 전립선암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 위암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 난소암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 위장암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 간암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 췌장암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 갑상선암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 두경부의 편평 세포 암종이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 식도 또는 위장관의 암종이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 유방암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 나팔관암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 뇌암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 요도암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 비뇨생식기암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 자궁내막증이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 자궁경부암이다.
일부 실시 형태에서, 고형 종양은 상기 암의 전이성 병변이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 림프종, 골수종, 또는 백혈병이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 B 세포 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 버킷 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 호지킨 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 비-호지킨 림프종이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 골수형성이상 증후군이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 급성 골수성 백혈병(AML)이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 만성 골수성 백혈병(CML)이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 만성 골수단구성 백혈병(CMML)이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 다발성 골수종(MM)이다.
일부 실시 형태에서, 혈액성 악성종양은 형질세포종이다.
일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L1을 발현시키는 종양을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 대상은 종양 조직 내에 종양-침윤 T 림프구(TIL)를 갖는다.
일부 실시 형태에서, 대상은 종양 조직 내에 PD-1+TIM-3+ TIL을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 대상은 종양 조직 내에 증가된 수의 PD-1+TIM-3+ 종양-침윤 T 림프구(TIL)를 갖는다.
"증가된 수"는 대조군에 비교할 때 대상 내의 통계적으로 유의한 증가를 지칭한다. "증가된 수"는, 예를 들어 PD-1 항체 또는 다른 치료제를 이용한 치료-전 및 치료-후의 대상(예를 들어 환자)에서 TIL의 수의 통계적으로 유의한 증가를 지칭한다.
일부 실시 형태에서, 대상은 인터페론-감마(IFN-γ)의 증가된 발현 또는 활성을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 대상은 항-PD-1 항체로 치료된 적이 있다.
일부 실시 형태에서, 대상은 항-PD-1 항체를 이용한 치료에 대해 불응성이다.
일부 실시 형태에서, 대상은 항-PD-1 항체를 이용한 치료 후에 재발 종양을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 대상은 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체(예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙))로 치료된 적이 있다.
일부 실시 형태에서, 대상은 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체(예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙))로 치료된 적이 있다.
일부 실시 형태에서, 대상은 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체(예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙))를 이용한 치료에 대해 불응성이다.
일부 실시 형태에서, 대상은 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체(예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙))를 이용한 치료에 대해 불응성이다.
일부 실시 형태에서, 대상은 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체(예를 들어 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙))를 이용한 치료 후에 재발 종양을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 대상은 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체(예를 들어 OPDIVO®(니볼루맙))를 이용한 치료 후에 재발 종양을 갖는다.
서열 번호 230
QVQLVQSGVEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYYMYWVRQAPGQGLEWMGG
INPSNGGTNFNEKFKNRVTLTTDSSTTTAYMELKSLQFDDTAVYYCARRDYRFDMGFDYWGQGTTVTVSS
서열 번호 231
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASKGVSTSGYSYLHWYQQKPGQAPRLLIYLASYLESGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQHSRDLPLTFGGGTKVEIK
서열 번호 232
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLDCKASGITFSNSGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWYDGSKRYYADSVKGRFTISRDNSKNTLFLQMNSLRAEDTAVYYCATNDDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 233
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQSSNWPRTFGQGTKVEIK
일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L1 항체로 치료된 적이 있거나 치료 중이다.
일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L1 항체를 이용한 치료에 대해 불응성이다.
일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L1 항체를 이용한 치료 후에 재발 종양을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L1 항체 두르발루맙(MEDI-4736)을 이용한 치료 후에 불응성이거나 재발된다. 두르발루맙은 서열 번호 234의 VH 및 서열 번호 235의 VL을 포함한다.
서열 번호 234
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVAN IKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREG GWFGELAFDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 235
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY DASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFG QGTKVEIK
일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L1 항체 아테졸리주맙을 이용한 치료 후에 불응성이거나 재발된다.
아테졸리주맙은 서열 번호 236의 VH 및 서열 번호 237의 VL을 포함한다.
서열 번호 236
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 237
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIK
일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L1 항체 아벨루맙을 이용한 치료 후에 불응성이거나 재발된다.
아벨루맙은 서열 번호 238의 VH 및 서열 번호 239의 VL을 포함한다.
서열 번호 238
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSS
서열 번호 239
QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVL
일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L1 항체 MDX-1105를 이용한 치료 후에 불응성이거나 재발된다.
일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L2 항체로 치료된 적이 있거나 치료 중이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L2 항체를 이용한 치료에 대해 불응성이다.
일부 실시 형태에서, 대상은 PD-L2 항체를 이용한 치료 후에 재발 종양을 갖는다.
이 질병의 재발 또는 불응성 성질을 결정하기 위하여 다양한 정성적 및/또는 정략적 방법이 사용될 수 있다. 재발 또는 저항성과 연계될 수 있는 증상은, 예를 들어, 환자의 웰빙의 감소 또는 정체, 또는 고형 종양과 연계된 다양한 증상의 재확립 또는 악화, 및/또는 체내에서 한 위치로부터 다른 장기, 조직, 또는 세포로의 암성 세포의 확산이다.
본 명세서에서 TIM-3 발현은 항-PD-1 항체 치료 후에 종양으로부터 단리된 CD8+ T 세포에서 상승되는 것으로 확인되었다. 그러므로, 항-PD-1 항체 요법을 이미 받은 적이 있거나 받고 있는 대상, 항-PD-1 항체 치료에 대해 불응성인 대상, 또는 항-PD-1 항체 치료 중에 또는 그 후에 재발한 대상에 대한 본 명세서에 기재된 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 또는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체의 치료적 투여는 환자의 임상 결과를 개선할 수 있다.
본 발명은 또한, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상은 항-PD-1 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시 형태에서, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함한다.
본 발명은 또한, 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상은 서열 번호 230의 VH 및 서열 번호 231의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙)로 치료 중이거나 치료된 적이 있는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상은 서열 번호 232의 VH 및 서열 번호 233의 VL을 포함하는 항-PD-1 항체 OPDIVO®(니볼루맙)로 치료 중이거나 치료된 적이 있는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상은 항-PD-L1 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상은 항-PD-L2 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상은 항-PD-1 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상은 항-PD-L1 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체의 치료적 유효량을 대상에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 대상은 항-PD-L2 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하는 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 PD-1, TIM-3, 또는 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체 중 임의의 것을 본 발명의 방법에 사용할 수 있다.
"치료하다" 또는 "치료"는, 원치 않는 생리학적 변화 또는 질병, 예컨대 종양 또는 종양 세포의 발생 또는 확산을 둔화(감퇴)시키거나, 치료 동안 유익하거나 원하는 임상 결과를 제공하는 것이 목적인 치료적 처리를 지칭한다. 유익하거나 원하는 임상 결과는, 검출가능하든 검출 불가능하든 어느 것이든 간에, 증상의 경감, 질병 정도의 저하, 안정화된(즉, 악화되지 않는) 질병 상태, 질병 진행의 지연 또는 감속, 전이의 부재, 질병 상태의 개선 또는 고식, 및 관해(부분 또는 전체 어느 것이든)를 포함한다. "치료"는 또한 대상이 치료를 받지 않고 있을 경우에 예측되는 생존과 비교할 때 연장되는 생존을 의미할 수 있다. 치료를 필요로 하는 대상은 원치 않는 생리학적 변화 또는 질병을 이미 갖는 대상뿐만 아니라 생리학적 변화 또는 질병을 갖기 쉬운 대상도 포함한다.
"치료적 유효량"은 필요한 투여량에서 그리고 필요한 시간 동안 원하는 치료 결과를 달성하는 데 유효한 양을 지칭한다. 본 발명의 항체의 치료적 유효량은 개체의 질병 상태, 연령, 성별, 및 체중, 및 본 발명의 항체가 개체에서 원하는 반응을 유도하는 능력과 같은 인자들에 따라 변동될 수 있다. 유효한 치료제 또는 치료제들의 병용물의 예시적인 지표는, 예를 들어 환자의 개선된 웰빙, 종양 부하(tumor burden)의 감소, 종양의 정지성 또는 지연성 성장, 및/또는 체내의 다른 위치로의 암 세포의 전이의 부재를 포함한다.
암 치료를 위한 병용 요법
본 발명의 항체는 제2 치료제와 병용하여 투여될 수 있다.
본 발명의 항체는 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 추가적인 치료제와 병용하여 투여될 수 있다.
본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체 중 임의의 것을 제2 치료제와 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체 중 임의의 것을 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개의 추가적인 치료제와 병용하여 사용할 수 있다.
"병용하여"는 본 발명의 항체 및 하나 이상의 제2 치료제를 단일 약제로서 동시에, 또는 임의의 순서로 단일 약제로서 순차적으로 투여함을 지칭한다. 일반적으로, 각각의 작용제는 그러한 작용제에 대해 결정된 용량으로 그리고/또는 시간 스케줄에 투여될 것이다.
일부 실시 형태에서, 제2 치료제는 암-면역력 주기(cancer-immunity cycle)에 수반되는 분자, 예를 들어 암 세포 항원의 방출, 암 항원 제시, T 세포 프라이밍 및 활성화, 종양에 대한 T 세포의 수송, 종양 내로의 T 세포의 침윤, T 세포에 의한 암 세포의 인식, 및 암 세포의 살해에 작용하는 자극 또는 저해 경로에 수반되는 분자의 활성을 변조한다. 암-면역력 주기는 문헌[Chen and Mellman (2013) Immunity 39:1-10]에 기재되어 있다. 일부 실시 형태에서, 제2 치료제는 T 조절 세포(Treg), 종양 상에 발현되는 동시자극성 또는 동시억제성 리간드, 자연 살해(NK) 세포 상의 활성화 또는 저해 수용체, 또는 종양 미세환경 내의 면역억제 인자의 활성의 조절에 수반되는 분자의 활성을 변조한다. 병용 암 면역요법은 문헌[Manoney et al., (2015) Nature Reviews 14:561-584]에 기재되어 있다.
잘 공지된 바와 같이, 제2 치료제는 전형적으로 자극 분자의 활성을 향상시키고 저해 분자의 활성을 억제한다. 따라서, 약제 자체가 특이적 분자의 작용제이든 길항제이든, "변조하다"는 제2 치료제에 의한 면역 반응의 향상을 지칭한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 T 세포 저해 분자의 저해제와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 T 세포 저해 분자 PD-1, PD-L1, PD-L2, VISTA, BTNL2, B7-H3, B7-H4, HVEM, HHLA2, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, BTLA, CD160, CEACAM-1, LAIR1, TGFβ, IL-10, Siglec 패밀리 단백질, KIR, CD96, TIGIT, NKG2A, CD112, CD47, SIRPA, 또는 CD244의 저해제와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, KIR은 KIR2DL1, KIR2DL2, 또는 KIR2DL3이다.
저해 분자의 저해는 DNA, RNA, 또는 단백질 수준에서의 저해에 의해 수행될 수 있다. 일부 실시 형태에서는, 저해 핵산(예를 들어, dsRNA, siRNA, 또는 shRNA)을 사용하여 저해 분자의 발현을 저해한다.
일부 실시 형태에서, 저해 분자의 저해제는 저해 분자의 가용성 리간드이다.
일부 실시 형태에서, 저해 분자의 저해제는 저해 분자와 특이적으로 결합하는 길항 항체이다.
일부 실시 형태에서, 저해 분자의 저해제는 CTLA-4-Fc 또는 TIM-3-Fc 융합 단백질이다.
일부 실시 형태에서, 저해 분자의 저해제는 PD-1, PD-L1, PD-L2, VISTA, BTNL2, B7-H3, B7-H4, HVEM, HHLA2, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, BTLA, CD160, CEACAM-1, LAIR1, TGFβ, IL-10, Siglec 패밀리 단백질, KIR, CD96, TIGIT, NKG2A, CD112, CD47, SIRPA, 또는 CD244와 결합하는 항체 또는 항체 단편이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-PD-1 항체는 본 명세서에, 그리고 미국 특허 제5,897,862호 및 제7,488,802호에, 그리고 국제 특허 출원 공개 WO2004/004771호, WO2004/056875호, WO2006/121168호, WO2008/156712호, WO2010/029435호, WO2010/036959호, WO2011/110604호, WO2012/145493호, WO2014/194302호, WO2014/206107호, WO2015/036394호, WO2015/035606호, WO2015/085847호, WO2015/112900호, 및 WO2015/112805호에 기재된 것들이다. 예시적인 항-PD1 항체는 KEYTRUDA®(펨브롤리주맙) 및 OPDIVO®(니볼루맙)를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 가용성 PD-1 리간드와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 가용성 PD-1 리간드는 Fc에 융합된 가용성 PD-L1 또는 가용성 PD-L2이다.
일부 실시 형태에서, 가용성 PD-1 리간드는 AMP-224이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 항-PD-L1 항체, 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 PD-L1 항체는 미국 특허 제7,943,743호 및 미국 특허 출원 공개 제20120039906호에 개시된 항체 MDPL3280A(Genentech/Roche) 및 다른 인간 단일클론 항체이다. 다른 항-PD-L1 결합제는 YW243.55.S70(중쇄 및 경쇄 가변 영역은 WO2010/077634호의 서열 번호 20 및 21에 나타냄) 및 MDX-1105(BMS-936559라고도 지칭되며, 예를 들어, WO2007/005874호에 개시된 항-PD-L1 결합제임)를 포함한다. 사용될 수 있는 항-PD-L1 항체 두르발루맙, 아테졸리무맙, 및 아벨루맙의 VH 및 VL 서열은 본 명세서에 개시되어 있다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 PD-L2 항체는 미국 특허 제8,080,636호, 제8,188,238호, 미국 특허 출원 공개 제20110271358호, 및 국제 특허 출원 공개 WO2012145493호에 기재된 것들이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 B7-H4 항체는 미국 특허 제7,888,477호, 제8,609,816호, 제7,931,896호, 유럽 특허 제1817055호, 미국 특허 출원 공개 US20140037551호 및 US2014029486호, 및 국제 특허 출원 공개 WO2014/100483호 및 WO2014/159835호에 기재된 것들이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙(MDX-010, CAS No. 477202-00-9) 및 트레멜리무맙(이전에 티실리무맙으로 공지된, Pfizer로부터 입수가능한 IgG2 단일클론 항체, CP-675,206)이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-LAG-3 항체는, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO2008/132601호 및 WO2010/019570호에 기재된 것들이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-CEACAM-1 항체는 미국 특허 제8,598,322호 및 미국 특허 출원 공개 US2004/0047858호, US20140271618호, 및 US20120100158호에 기재된 것들이다. 임의의 특정 이론에 의해 구애되고자 하는 것은 아니지만, CEACAM-1은 TIM-3의 리간드 및 파트너로서 기재되어 있다(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO2014/022332호 참조). 항-TIM-3 및 항-CEACAM-1 항체의 조합의 상승적 생체내 효과가 이종이식 암 모델에서 검출되었다(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO2014/022332호 참조). 종양은 CEACAM-1을 사용하여 면역 시스템을 저해할 수 있다. 그러므로, 항- CEACAM-1 항체를 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체와 병용하여 사용할 수 있다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-LAIR1 항체는 미국 특허 제6,479,638호 및 국제 특허 출원 공개 WO2010/078580호에 기재된 것들이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-CD96 항체는 국제 특허 출원 공개 WO2015/024060호에 기재된 것들이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-TIM-3 항체는 국제 특허 출원 공개 WO2011/155607호, WO2013/006490호, 및 WO2015/117002호에 기재된 것들이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-TIGIT 항체는 미국 특허 출원 공개 US20140056890호 및 US20150216970호에 기재된 것들이다. 예시적인 항-TIGIT 항체는 RG-6058(MTIG-7192A)이다.
본 명세서에서 TIGIT 발현은 암의 동물 모델에서 항-TIM-3 항체 치료 후에 종양으로부터 단리된 CD8+ T 세포에서 상승되는 것으로 확인되었다. 그러므로, 항-TIM-3 항체 요법을 이미 받은 적이 있거나 받고 있는 대상, 항-TIM-3 항체 치료에 대해 불응성인 대상, 또는 항-TIM-3 항체 치료 중에 또는 그 후에 재발한 대상에 대한 TIGIT와 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 투여는 환자의 임상 결과를 개선할 수 있다.
본 발명은 또한, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체 및 TIGIT와 특이적으로 결합하는 길항 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시 형태에서, TIGIT와 특이적으로 결합하는 길항 항체는 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 투여 후에 투여된다.
일부 실시 형태에서, TIGIT와 특이적으로 결합하는 길항 항체 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 단일 약제로서 동시에, 또는 임의의 순서로 단일 약제로서 순차적으로 투여된다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-BTLA 항체는 미국 특허 제8,546,541호, 제7,479,544호, 제8,188,232호, 제8,247,537호, 제8,563,694호, 및 국제 특허 출원 공개 WO2014184360호에 기재된 것들이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-HVEM 항체는 미국 특허 출원 공개 US20110280866호에 기재된 것들이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 CD47 항체는 미국 특허 제8,101,719호에 기재된 것들이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 CD244 항체는 미국 특허 제5,688,690호에 기재된 것들을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-TIM-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-PD-L1 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-PD-L2 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-VISTA 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-BTNL2 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-B7-H3 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-B7-H4 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-HVEM 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-HLA2 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CTLA-4 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-LAG-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-TIM-3 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-BTLA 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD160 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CEACAM-1 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-LAIR1 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-TGFβ 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-IL-10 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-TIGIT 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-KIR 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-NKG2A 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD112 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD47 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-SIRPA 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD244 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
면역 저해 분자는 T-세포 작용을 조절하거나 상승적으로 조절하여 종양 면역 탈출(tumoral immune escape)을 촉진할 수 있다. 그러므로, 저해 분자의 2개 이상의 저해제와의 병용 요법은 단일요법 단독에 비교할 때 개선된 요법을 환자에게 제공할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 활성화 분자의 활성화제와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 활성화 분자 CD86, CD80, CD28, ICOS, ICOS 리간드, TMIGD2, CD40, GITR 리간드, 4-1BB 리간드, OX40 리간드, CD70, CD40L, TNFRSF25, LIGHT, GITR, OX-40, CD27, CD137, NKG2D, CD48, CD226, 또는 MICA의 활성화제와 병용하여 투여된다.
활성화 분자의 활성화는, 예를 들어 활성화 분자의 가용성 리간드 또는 리간드 유도체, 펩티드, 또는 작용 항체를 사용하여 수행될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 활성화 분자의 활성화제는 T 세포 활성화 분자의 가용성 리간드이다.
일부 실시 형태에서, 활성화 분자의 활성화제는 활성화 분자와 특이적으로 결합하는 작용 항체이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 항-CD40 항체는, 각각 미국 특허 제7,288,251호(항체 21.4.1) 및 미국 특허 제8,303,955호에 기재된 CP-870,893 및 인간화 S2C6, 및 국제 특허 출원 공개 WO2001/056603호, WO2001/083755호, WO2013/034904호, 및 WO2014/070934호에 기재된 항-CD40 항체를 포함한다.
예시적인 GITR 작용제는, 예를 들어, GITR 융합 단백질 및 항-GITR 항체(예를 들어, 2가 항-GITR 항체), 예컨대 미국 특허 제6,111,090호, 유럽 특허 제090505B1호, 미국 특허 제8,586,023호, 국제 특허 공개 WO2010/003118호, 및 WO2011/090754호에 기재된 GITR 융합 단백질, 또는 미국 특허 제7,025,962호, 제7,812,135호, 제8,388,967호, 제8,591,886호, 및 제7,618,632호, 유럽 특허 제1947183호 및 제1866339호, 또는 국제 특허 출원 공개 WO2011/028683호, WO2013/039954호, WO2005/007190호, WO2007/133822호, WO2005/055808호, WO1999/40196호, WO2001/03720호, WO1999/20758호, WO2006/083289호, WO2005/115451호, 및 WO2011/051726호에 기재된 항-GITR 항체를 포함한다.
본 명세서에서 GITR 발현은 암의 동물 모델에서 항-PD-1 항체 치료 후에 종양으로부터 단리된 CD8+ T 세포에서 상승되는 것으로 확인되었다. 항-PD-1 치료에 의한 TIL 상의 GITR 발현의 회복은 항-GITR 및 항-PD-l 항체를 이용한 병용 요법이 환자의 임상 결과를 개선할 수 있다는 것을 지지한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 및 GITR과 특이적으로 결합하는 작용 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시 형태에서, GITR과 특이적으로 결합하는 작용 항체는 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 투여 후에 투여된다.
일부 실시 형태에서, GITR과 특이적으로 결합하는 작용 항체 및 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 단일 약제로서 동시에, 또는 임의의 순서로 단일 약제로서 순차적으로 투여된다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 OX40 항체는 미국 특허 제8,133,983호, 제7,960,515호, 미국 특허 출원 공개 제20130280275호, 및 국제 특허 출원 공개 WO2013028231호 및 WO2014148895호에 기재된 것들을 포함한다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 OX40 항체는 서열 번호 309의 VH 및 서열 번호 310의 VL을 포함하는 항체이다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 다른 예시적인 OX40 항체는 서열 번호 311의 VH 및 서열 번호 312의 VL을 포함하는 항체이다.
본 명세서에서 OX40 발현은 암의 동물 모델에서 항-PD-1 항체 치료 후에 종양으로부터 단리된 CD8+ T 세포에서 상승되는 것으로 확인되었다. 항-PD-1 치료에 의한 TIL 상의 OX40 발현의 회복은 항-OX40 및 항-PD-l 항체를 이용한 병용 요법이 환자의 임상 결과를 개선할 수 있다는 것을 지지한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 및 OX40과 특이적으로 결합하는 작용 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시 형태에서, OX40과 특이적으로 결합하는 작용 항체는 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 투여 후에 투여된다.
일부 실시 형태에서, OX40과 특이적으로 결합하는 작용 항체 및 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 단일 약제로서 동시에, 또는 임의의 순서로 단일 약제로서 순차적으로 투여된다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 CD70 항체는 미국 특허 출원 공개 US20130336976호에 기재된 것들을 포함한다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 TNFRSF25 항체는 미국 특허 제7,708,996호에 기재된 것들을 포함한다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 CD27 항체는 미국 특허 출원 공개 US20130336976호에 기재된 것들을 포함한다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 CD137 항체는 미국 특허 제6,974,863호, 제6,303,121호, 제7,138,500호, 제7,288,638호, 제8,716,452호, 제8,821,867호, 및 미국 특허 출원 공개 US20130149301호에 기재된 것들을 포함한다.
본 명세서에서 CD137 발현은 암의 동물 모델에서 항-PD-1 항체 치료 후에 종양으로부터 단리된 CD8+ T 세포에서 상승되는 것으로 확인되었다. 항-PD-1 치료에 의한 TIL 상의 CD137 발현의 회복은 항-CD137 및 항-PD-l 항체를 이용한 병용 요법이 환자의 임상 결과를 개선할 수 있다는 것을 지지한다.
본 발명은 또한, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체 및 CD137과 특이적으로 결합하는 작용 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
일부 실시 형태에서, CD137과 특이적으로 결합하는 작용 항체는 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체의 투여 후에 투여된다.
일부 실시 형태에서, CD137과 특이적으로 결합하는 작용 항체 및 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체는 단일 약제로서 동시에, 또는 임의의 순서로 단일 약제로서 순차적으로 투여된다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 예시적인 NKG2D 항체는 미국 특허 출원 공개 US20110150870호에 기재된 것들을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD86 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD80 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD28 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-ICOS 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-ICOS 리간드 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-TMIGD2 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD40 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-GITR 리간드 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-4-1BB 리간드 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-OX40 리간드 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD70 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD40L 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-TNFRSF25 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-LIGHT 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-GITR 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-OX40 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD27 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD137 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-NKG2D 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD48 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-CD226 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 항-MICA 항체 또는 그의 항원-결합 단편과 병용하여 투여된다.
본 명세서에 인용된 항체의 조합은 별도로, 예를 들어, 별도의 항체로서, 또는 연결되어, 예를 들어, 이중특이성 또는 삼중특이성 항체 분자로서 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 조합의 효능을 당업계에 공지된 동물 모델에서 시험할 수 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체는 백신과 병용하여 투여될 수 있다.
예시적인 백신은 면역원성 약제(immunogenic agent), 예컨대 암성 세포, 정제된 종양 항원(재조합 단백질, 항원 에피토프, 펩티드, 및 탄수화물 분자를 포함함), 유전자 요법을 통해 환자에게 전달된 종양 항원, 세포, 및 면역 자극 사이토카인을 인코딩하는 유전자로 형질감염된 세포이다. 사용될 수 있는 예시적인 백신은 흑색종 항원의 펩티드, 예컨대 gp100, MAGE 항원, Trp-2, MART1, 및/또는 티로시나제의 펩티드, 또는 사이토카인 GM-CSF를 발현시키도록 형질감염된 종양 세포, DNA-기반의 백신, RNA-기반의 백신, 및 바이러스 형질도입-기반의 백신, 전립선 항원의 펩티드, 또는 폐암 항원의 펩티드를 포함한다. 암 백신은 예방적이거나 치료적일 수 있다.
종양에 대한 예방접종을 위한 다수의 실험 전략이 고안되었다(문헌[Rosenberg, S., 2000, Development of Cancer Vaccines, ASCO Educational Book Spring: 60-62]; 문헌[Logothetis, C., 2000, ASCO Educational Book Spring: 300-302]; 문헌[Khayat, D. 2000, ASCO Educational Book Spring: 414-428]; 문헌[Foon, K. 2000, ASCO Educational Book Spring: 730-738] 참조; 또한 문헌[Restifo, N. and Sznol, M., Cancer Vaccines, Ch. 61, pp. 3023-3043 in DeVita, V. et al. (eds.), 1997, Cancer: Principles and Practice of Oncology. Fifth Edition] 참조). 이러한 전략 중 하나에서, 백신은 자가유래 또는 동종유래 종양 세포를 사용하여 제조된다. 이러한 세포 백신은 종양 세포가 GM-CSF를 발현시키도록 형질도입된 경우에 가장 효과적인 것으로 나타났다. GM-CSF는 종양 예방접종을 위한 항원 제시의 강력한 활성화제인 것으로 나타났다(문헌[Dranoff et al., (1993) Proc Natl Acad Sci U.S.A. 90: 3539-43]).
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체는 종양 내에서 또는 종양 상에서 발현되는 재조합 단백질 및/또는 펩티드 중 하나 또는 집합과 병용하여 투여되어 이러한 단백질에 대한 면역 반응을 생성할 수 있다. 정상적으로 면역 시스템은 이러한 단백질을 자가-항원으로 간주하므로 그들에 대해 관용적이다. 종양 항원은 또한, 염색체의 텔로미어의 합성에 필요하며 인간 암의 85% 초과에서 발현되고 제한된 수의 체조직에서만 발현되는 단백질 텔로머라제를 포함할 수 있다(문헌[Kim et al., (1994) Science 266: 2011-2013]). 종양 항원은 또한, 단백질 서열을 변경하거나 2개의 무관한 서열 사이의 융합 단백질(예를 들어, 필라델피아 염색체(Philadelphia chromosome) 내의 bcr-abl)을 생성하는 체세포 돌연변이, 또는 B 세포 종양으로부터의 이디오타입의 결과로서 암 세포 내에 또는 암 세포 상에 발현되는"신생-항원"일 수 있다. 종양 항원은 전립선 특이적 항원(PSA), 메소텔린, 전립선-특이적 막 항원(PSMA), 활막 육종 X2(SSX2), NKX3.1, 전립선 산성 포스파타제(PAP), 또는 표피 성장 인자 수용체, 또는 종양 세포 상에서 과발현되는 잘 공지된 EGFRvIII과 같은 EGFR의 변이체에 대해 특이적인 펩티드의 항원 에피토프일 수 있다.
다른 종양 백신은 인간 암에 연루된 바이러스, 예컨대 인간 파필로마 바이러스(HPV), 간염 바이러스(HBV 및 HCV), 및 카포시 헤르페스 육종 바이러스(KHSV), 및 엡스타인-바 바이러스(EBV)로부터의 단백질을 포함할 수 있다. 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 종양 특이적 항원의 다른 형태는 종양 조직 자체로부터 단리된 정제된 열충격 단백질(HSP)이다. HSP는 종양 세포로부터의 단백질의 단편을 함유하며 종양 면역력을 유도하기 위한 항원 제시 세포로의 전달에 고도로 효율적이다(문헌[Suot and Srivastava (1995) Science 269:1585-1588]; 문헌[Tamura et al., (1997) Science 278:117-120]).
수지상 세포(DC)는 항원-특이적 반응을 프라이밍하기 위해 사용될 수 있는 강력한 항원 제시 세포이다. DC는 생체외에서 제조되고 다양한 단백질 및 펩티드 항원뿐만 아니라 종양 세포 추출물로 로딩될 수 있다(문헌[Nestle et al., (1998) Nature Medicine 4: 328-332]). DC는 또한 이러한 종양 항원을 발현시키도록 유전적 수단에 의해 형질도입될 수 있다. DC는 또한 면역화의 목적으로 종양 세포에 직접 융합되었다(문헌[Kugler et al., (2000) Nature Medicine 6:332-336]). 예방접종의 방법으로서, DC 면역화는 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체와 효과적으로 조합되어 더 강력한 항-종양 반응을 활성화할 수 있다.
일부 실시 형태에서, 백신은 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 그의 단편, 또는 폴리펩티드 또는 그의 단편을 인코딩하는 DNA 또는 RNA이다.
일부 실시 형태에서, 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 그의 단편은 PSMA이다.
일부 실시 형태에서, 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 그의 단편은 메소텔린이다.
일부 실시 형태에서, 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 그의 단편은 EGFR 또는 EGFR 변이체, 예컨대 EGFRvIII이다.
일부 실시 형태에서, 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 그의 단편은 PAP이다.
일부 실시 형태에서, 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 그의 단편은 활막 육종 X2(SSX2)이다.
일부 실시 형태에서, 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 그의 단편은 NKX3.1이다.
일부 실시 형태에서, 종양 세포는 흑색종, 폐암, 편평상피 비-소세포 폐암(NSCLC), 비-편평상피 NSCLC, 결장직장암, 전립선암, 거세-저항성 전립선암, 난소암, 위장암, 간암, 췌장암, 갑상선암, 두경부의 편평상피세포 암종, 식도 또는 위장관의 암종, 또는 유방암 세포이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 신장 암종(RCC) 백신과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 폐암 백신과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 전립선암 백신과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 폐암 백신과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 EGFR 또는 EGFRvIII의 펩티드 단편, 또는 EGFR 또는 EGFRvIII의 펩티드 단편을 인코딩하는 벡터를 포함하는 종양 백신과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 메소텔린의 펩티드 단편, 또는 메소텔린의 펩티드 단편을 인코딩하는 벡터를 포함하는 종양 백신과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체, 또는 본 발명의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체는 전립선 특이적 항원의 펩티드 단편, 또는 전립선 특이적 항원의 펩티드 단편을 인코딩하는 벡터를 포함하는 종양 백신과 병용하여 투여된다.
본 발명의 방법에 사용될 수 있는 적합한 벡터는 잘 공지되어 있으며, 렌티바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터, 최소 핵산 벡터(MNAV: minimal nucleic acid vector), 백시니아 바이러스, 플로우 폭스(flow pox) 바이러스, 알파 바이러스-유래의 VRP, 사카로미세스 세레비시아이, MVA, 단구성 리스테리아(Listeria moonocytogene), pVAX-기반의 플라스미드를 포함한다(예를 들어 문헌[Pol et al., (2014) Oncoimmunology 1(3):e28185] 참조).
본 발명의 항체는 치료 기준(standard of care) 암 치료와 병용하여 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체는 치료 기준 암 화학요법과 병용하여 투여될 수 있다. 이러한 경우, 투여되는 화학요법제의 용량을 감소시키는 것이 가능할 수 있다(문헌[Mokyr et al., (1998) Cancer Research 58: 5301-5304]).
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 다른 항체 분자, 화학요법, 다른 항암 요법(예를 들어, 표적화 항암 요법, 또는 암용해 약물), 세포독성제, 사이토카인, 수술 및/또는 방사선 절차 중 하나 이상과 병용하여 투여될 수 있다.
본 발명의 항체와 병용하여 투여될 수 있는 예시적인 세포독성제는 항미세소관제, 토포아이소머라제 저해제, 항-대사물질, 유사분열 저해제, 알킬화제, 안트라사이클린, 빈카 알칼로이드, 삽입제(intercalating agent), 신호 전달 경로를 방해할 수 있는 약제, 세포자멸을 촉진하는 약제, 프로테오좀 저해제, 및 방사선(예를 들어, 국소 또는 전신 조사)을 포함한다.
치료 기준 치료제는 아나스트로졸(Arimidex®), 비칼루타미드(Casodex®), 블레오마이신 설페이트(Blenoxane®), 부설판(Myleran®), 부설판 주사제(Busulfex®), 카페시타빈(Xeloda®), N4-펜톡시카르보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카르보플라틴(Paraplatin®), 카르무스틴(BiCNU®), 클로람부실(Leukeran®), 시스플라틴(Platinol®), 클라드리빈(Leustatin®), 사이클로포스파미드(Cytoxan® 또는 Neosar®), 사이타라빈, 사이토신 아라비노사이드(Cytosar-U®), 사이타라빈 리포좀 주사제(DepoCyt®), 다카르바진(DTIC-Dome®), 닥티노마이신(악티노마이신 D, Cosmegan), 다우노루비신 하이드로클로라이드(Cerubidine®), 다우노루비신 시트레이트 리포좀 주사제(DaunoXome®), 덱사메타손, 도세탁셀(Taxotere®), 독소루비신 하이드로클로라이드(Adriamycin®, Rubex®), 에토포사이드(Vepesid®), 플루다라빈 포스페이트(Fludara®), 5-플루오로우라실(Adrucil®, Efudex®), 플루타미드(Eulexin®), 테자시티빈, 겜시타빈(다이플루오로데옥시시티딘), 하이드록시우레아(Hydrea®), 이다루비신(Idamycin®), 이포스파미드(IFEX®), 이리노테칸(Camptosar®), L-아스파라기나제(ELSPAR®), 류코보린 칼슘, 멜팔란(Alkeran®), 6-메르캅토퓨린(Purinethol®), 메토트렉세이트(Folex®), 미톡산트론(Novantrone®), 파클리탁셀(Taxol®), 피닉스(이트륨90/MX-DTPA), 펜토스타틴, 카르무스틴 이식을 가진 폴리페프로산 20(Gliadel®), 타목시펜 시트레이트(Nolvadex®), 테니포사이드(Vumon®), 6-티오구아닌, 티오테파, 티라파자민(Tirazone®), 주사용 토포테칸 하이드로클로라이드(Hycamptin®), 빈블라스틴(Velban®), 빈크리스틴(Oncovin®), 비노렐빈(Navelbine®), 이브루티닙, 이델랄리십, 및 브렌툭시맙 베도틴을 포함한다.
예시적인 알킬화제는, 질소 머스타드, 에틸렌이민 유도체, 알킬 설포네이트, 니트로소우레아 및 트라이아젠: 우라실 머스타드(Aminouracil Mustard®, Chlorethaminacil®, Demethyldopan®, Desmethyldopan®, Haemanthamine®, Nordopan®, Uracil Nitrogen Mustard®, Uracillost®, Uracilmostaza®, Uramustin®, Uramustine®), 클로르메틴(Mustargen®), 사이클로포스파미드(Cytoxan®, Neosar®, Clafen®, Endoxan®, Procytox®, Revimmune™), 이포스파미드(Mitoxana®), 멜팔란(Alkeran®), 클로람부실(Leukeran®), 피포브로만(Amedel®, Vercyte®), 트라이에틸렌멜라민(Hemel®, Hexalen®, Hexastat®), 트라이에틸렌티오포스포라민, 테모졸로미드(Temodar®), 티오테파(Thioplex®), 부설판(Busilvex®, Myleran®), 카르무스틴(BiCNU®), 로무스틴(CeeNU®), 및 스트렙토조신(Zanosar®)을 포함한다. 추가적인 예시적인 알킬화제는, 옥살리플라틴(Eloxatin®), 테모졸로미드(Temodar® 및 Temodal®), 닥티노마이신(악티노마이신-D로도 공지됨, Cosmegen®), 알트레타민(헥사메틸멜라민(HMM)으로도 공지됨, Hexalen®), 벤다무스틴(Treanda®), 카르보플라틴(Paraplatin®), 로무스틴(CCNU로도 공지됨, CeeNU®), 시스플라틴(CDDP로도 공지됨, Platinol® 및 Platinol®-AQ), 클로람부실(Leukeran®), 프레드누무스틴, 프로카르바진(Matulane®), 및 티오테파(티오포스포아미드, TESPA, 및 TSPA로도 공지됨, Thioplex®)를 포함한다.
예시적인 안트라사이클린은, 예를 들어, 독소루비신(Adriamycin® 및 Rubex®); 블레오마이신(Lenoxane®), 다우노루비신(다우오루비신 하이드로클로라이드, 다우노마이신, 및 루비도마이신 하이드로클로라이드, Cerubidine®), 다우노루비신 리포좀(다우노루비신 시트레이트 리포좀, DaunoXome®), 미톡산트론(DHAD, Novantrone®), 에피루비신(Ellence™), 이다루비신(Idamycin®, Idamycin PFS®), 미토마이신 C(Mutamycin®), 겔다나마이신, 허비마이신, 라비도마이신, 및 데스아세틸라비도마이신을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 예시적인 빈카 알칼로이드는 비노렐빈 타르트레이트(Navelbine®), 빈크리스틴(Oncovin®), 및 빈데신(Eldisine®), 빈블라스틴(빈블라스틴 설페이트, 빈카류코블라스틴, 및 VLB로도 공지됨, Alkaban-AQ® 및 Velban®), 및 비노렐빈(Navelbine®)을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 예시적인 프로테오좀 저해제는 보르테조밉(Velcade®); 카르필조밉(Kyprolis®), 익사조밉(Ninlaro®), 마리조밉(NPI-0052), 및 델란조밉(CEP-18770)이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 티로신 키나제 저해제(예를 들어, 수용체 티로신 키나제(RTK) 저해제)와 병용하여 투여된다. 예시적인 티로신 키나제 저해제는 표피 성장 인자(EGF) 경로 저해제(예를 들어, 표피 성장 인자 수용체(EGFR) 저해제), 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 경로 저해제(예를 들어, 혈관 내피 성장 인자 수용체(VEGFR) 저해제(예를 들어, VEGFR-1 저해제, VEGFR-2 저해제, VEGFR-3 저해제), 혈소판 유래 성장 인자(PDGF) 경로 저해제(예를 들어, 혈소판 유래 성장 인자 수용체(PDGFR) 저해제(예를 들어, PDGFR-β 저해제), RAF-1 저해제, KIT 저해제, 및 RET 저해제를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제2 치료제는 악시티닙(AG013736), 보수티닙(SKI-606), 세디라닙(RECENTIN™, AZD2171), 다사티닙(SPRYCEL®, BMS-354825), 엘로티닙(TARCEVA®), 게피티닙(IRESSA®), 이마티닙(Gleevec®, CGP57148B, STI-571), 라파티닙(TYKERB®, TYVERB®), 레스타우르티닙(CEP-701), 네라티닙(HKI-272), 닐로티닙(TASIGNA®), 세막사닙(세막시닙, SU5416), 서니티닙(SUTENT®, SU11248), 토세라닙(PALLADIA®), 반데타닙(ZACTIMA®, ZD6474), 바탈라닙(PTK787, PTK/ZK), 트라스투주맙(HERCEPTIN®), 베바시주맙(AVASTIN®), 리툭시맙(RITUXAN®), 세툭시맙(ERBITUX®), 파니투무맙(VECTIBIX®), 라니비주맙(Lucentis®), 닐로티닙(TASIGNA®), 소라페닙(NEXAVAR®), 알렘투주맙(CAMPATH®), 겜투주맙 오조가미신(MYLOTARG®), ENMD-2076, PCI-32765, AC220, 도비티닙 락테이트(TKI258, CHIR-258), BIBW 2992(TOVOK™), SGX523, PF-04217903, PF-02341066, PF-299804, BMS-777607, ABT-869, MP470, BIBF 1120(VARGATEF®), AP24534, JNJ-26483327, MGCD265, DCC-2036, BMS-690154, CEP-11981, 티보자닙(AV-951), OSI-930, MM-121, XL-184, XL-647, XL228, AEE788, AG-490, AST-6, BMS-599626, CUDC-101, PD153035, 펠리티닙(EKB-569), 반데타닙(zactima), WZ3146, WZ4002, WZ8040, ABT-869(리니파닙), AEE788, AP24534(포나티닙), AV-951(티보자닙), 악시티닙, BAY 73-4506(레고라페닙), 브리바닙 알라니네이트(BMS-582664), 브리바닙(BMS-540215), 세디라닙(AZD2171), CHIR-258(도비티닙), CP 673451, CYC116, E7080, Ki8751, 마시티닙(AB1010), MGCD-265, 모테사닙 다이포스페이트(AMG-706), MP-470, OSI-930, 파조파닙 하이드로클로라이드, PD173074, 소라페닙 토실레이트(Bay 43-9006), SU 5402, TSU-68(SU6668), 바탈라닙, XL880(GSK1363089, EXEL-2880)이다. 선택된 티로신 키나제 저해제는 서니티닙, 엘로티닙, 게피티닙, 또는 소라페닙으로부터 선정된다. 일부 실시 형태에서, EGFR 저해제는 서열 번호 249, 250, 251, 및 252의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 이중특이성 EGFRc-Met 항체(EM-1 mAb)이다(US2014/0141000호).
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 베바시주맙(Avastin®), 악시티닙(Inlyta®), 브리바닙 알라니네이트(BMS-582664, (S)-((R)-1-(4-(4-플루오로-2-메틸-1H-인돌-5-일옥시)-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-6-일옥시)프로판-2-일)2-아미노프로파노에이트), 소라페닙(Nexavar®); 파조파닙(Votrient®), 서니티닙 말레이트(Sutent®), 세디라닙(AZD2171, CAS 288383-20-1), 바르가테프(BIBF1120, CAS 928326-83-4), 포레티닙(GSK1363089), 텔라티닙(BAY57-9352, CAS 332012-40-5), 아파티닙(YN968D1, CAS 811803-05-1), 이마티닙(Gleevec®), 포나티닙(AP24534, CAS 943319-70-8), 티보자닙(AV951, CAS 475108-18-0), 레고라페닙(BAY73-4506, CAS 755037-03-7), 바탈라닙 다이하이드로클로라이드(PTK787, CAS 212141-51-0), 브리바닙(BMS-540215, CAS 649735-46-6), 반데타닙(Caprelsa® 또는 AZD6474), 모테사닙 다이포스페이트(PCT 출원 공개 WO 02/066470호에 기재된, AMG706, CAS 857876-30-3, N-(2,3-다이하이드로-3,3-다이메틸-1H-인돌-6-일)-2-[(4-피리디닐메틸)아미노]-3-피리딘카르복사미드), 도비티닙 다이락트산(TKI258, CAS 852433-84-2), 린파닙(ABT869, CAS 796967-16-3); 카보잔티닙(XL184, CAS 849217-68-1), 레스타우르티닙(CAS 111358-88-4); N-[5-[[[5-(1,1-다이메틸에틸)-2-옥사졸릴]메틸]티오]-2-티아졸릴]-4-피페리딘카르복사미드(BMS38703, CAS 345627-80-7); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트라이아진-5-일)메틸)피페리딘-3-올(BMS690514); N-(3,4-다이클로로-2-플루오로페닐)-6-메톡시-7-[[(3aα,5β,6aα)-옥타하이드로-2-메틸사이클로펜타[c]피롤-5-일]메톡시]-4-퀴나졸린아민(XL647, CAS 781613-23-8); 4-메틸-3-[[1-메틸-6-(3-피리디닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-4-일]아미노]-N-[3-(트라이플루오로메틸)페닐]-벤자미드(BHG712, CAS 940310-85-0); 및 아플리베르셉트(Eylea®)를 포함하는 혈관 내피 성장 인자(VEGF) 수용체 저해제와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 PI3K 저해제와 병용하여 투여된다. 일 실시 형태에서, PI3K 저해제는 PI3K의 델타 및 감마 동형의 저해제이다. 사용될 수 있는 예시적인 PI3K 저해제는, 예를 들어, WO 2010/036380호, WO 2010/006086호, WO 09/114870호, WO 05/113556호에 기재된, GSK 2126458, GDC-0980, GDC-0941, Sanofi XL147, XL756, XL147, PF-46915032, BKM 120, CAL-101, CAL 263, SF1126, PX-886, 및 이중 PI3K 저해제(예를 들어, Novartis BEZ235)이다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 mTOR 저해제, 예를 들어, 라파마이신, 템시롤리무스(TORISEL®), AZD8055, BEZ235, BGT226, XL765, PF-4691502, GDC0980, SF1126, OSI-027, GSK1059615, KU-0063794, WYE-354, Palomid 529(P529), PF-04691502, 또는 PKI-587, 리다포롤리무스(이전에 데페롤리무스로 공지됨, (1R,2R,4S)-4-[(2R)-2 [(1R,9S,12S,15R,16E,18R,19R,21R,23S,24E,26E,28Z,30S,32S,35R)-1,18-다이하이드록시-19,30-다이메톡시-15,17,21,23,29,35-헥사메틸-2,3,10,14,20-펜타옥소-11,36-다이옥사-4-아자트라이사이클로[30.3.1.04,9] 헥사트라이아콘타-16,24,26,28-테트라엔-12-일]프로필]-2-메톡시사이클로헥실 다이메틸포스피네이트, AP23573 및 MK8669로도 공지되고 PCT 출원 공개 WO 03/064383호에 기재됨); 에베롤리무스(Afinitor® 또는 RAD001); 라파마이신(AY22989, Sirolimus®); 시마피모드(CAS 164301-51-3); 엠시롤리무스, (5-{2,4-비스[(3S)-3-메틸모폴린-4-일]피리도[2,3-d]피리미딘-7-일}-2-메톡시페닐)메탄올(AZD8055); 2-아미노-8-[트랜스-4-(2-하이드록시에톡시)사이클로헥실]-6-(6-메톡시-3-피리디닐)-4-메틸-피리도[2,3-d]피리미딘-7(8H)-온(PF04691502, CAS 1013101-36-4); 및 N2-[1,4-다이옥소-4-[[4-(4-옥소-8-페닐-4H-1-벤조피란-2-일)모폴리늄-4-일]메톡시]부틸]-L-아르기닐글리실-L-α-아스파르틸L-세린-(서열 번호 237), 내염(inner salt)(SF1126, CAS 936487-67-1), 및 XL765 중 하나 이상으로부터 선정된 하나 이상의 mTOR 저해제와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 BRAF 저해제, 예를 들어, GSK2118436, RG7204, PLX4032, GDC-0879, PLX4720, 및 소라페닙 토실레이트(Bay 43-9006)와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 MEK 저해제와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 JAK2 저해제, 예를 들어, CEP-701, INCB18424, CP-690550(타소시티닙)과 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제, 예를 들어, TAXOL®, 단백질-결합된 파클리탁셀(예를 들어, ABRAXANE®)과 병용하여 투여된다. 예시적인 파클리탁셀 약제는 나노입자 알부민-결합된 파클리탁셀(ABRAXANE, Abraxis Bioscience에 의해 시판됨), 도코사헥사에노산 결합된-파클리탁셀(DHA-파클리탁셀, 탁소프렉신, Protarga에 의해 시판됨), 폴리글루타메이트 결합된-파클리탁셀(PG-파클리탁셀, 파클리탁셀 폴리글루멕스, CT-2103, XYOTAX, Cell Therapeutic에 의해 시판됨), 종양-활성화 전구약물(TAP), ANG105(3개 분자의 파클리탁셀에 결합된 안지오펩-2, ImmunoGen에 의해 시판됨), 파클리탁셀-EC-1(erbB2-인식 펩티드 EC-1에 결합된 파클리탁셀; 문헌[Li et al., Biopolymers (2007) 87:225-230] 참조), 및 글루코스-접합된 파클리탁셀(예를 들어, 2′-파클리탁셀 메틸 2-글루코피라노실 석시네이트, 문헌[Liu et al., (2007) Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 17:617-620] 참조)을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 세포 면역요법(예를 들어, Provenge(예를 들어, 시푸류셀))과 병용하여, 그리고 임의로 사이클로포스파미드와 병용하여 투여된다.
본 발명의 항체와 병용하여 췌장암의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제, 예를 들어, 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제(예를 들어, 파클리탁셀 제형, 예컨대 TAXOL, 알부민-안정화된 나노입자 파클리탁셀 제형(예를 들어, ABRAXANE), 또는 리포좀 파클리탁셀 제형); 겜시타빈(예를 들어, 겜시타빈 단독, 또는 AXP107-11과 병용함); 다른 화학요법제, 예컨대 옥살리플라틴, 5-플루오로우라실, 카페시타빈, 루비테칸, 에피루비신 하이드로클로라이드, NC-6004, 시스플라틴, 도세탁셀(예를 들어, TAXOTERE), 미토마이신 C, 이포스파미드; 인터페론; 티로신 키나제 저해제(예를 들어, EGFR 저해제(예를 들어, 엘로티닙, 파니투무맙, 세툭시맙, 니모투주맙); HER2/neu 수용체 저해제(예를 들어, 트라스투주맙); 이중 키나제 저해제(예를 들어, 보수티닙, 사라카티닙, 라파티닙, 반데타닙); 다중 키나제 저해제(예를 들어, 소라페닙, 서니티닙, XL184, 파조파닙); VEGF 저해제(예를 들어, 베바시주맙, AV-951, 브리바닙); 방사면역요법(예를 들어, XR303); 암 백신(예를 들어, GVAX, 서르비빈 펩티드); COX-2 저해제(예를 들어, 셀레콕십); IGF-1 수용체 저해제(예를 들어, AMG 479, MK-0646); mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스, 템시롤리무스), IL-6 저해제(예를 들어, CNTO 328); 사이클린-의존성 키나제 저해제(예를 들어, P276-00, UCN-01); 변경된 에너지 대사작용-지향적(AEMD: Altered Energy Metabolism-Directed) 화합물(예를 들어, CPI-613); HDAC 저해제(예를 들어, 보리노스타트); TRAIL 수용체 2(TR-2) 작용제(예를 들어, 코나투무맙); MEK 저해제(예를 들어, AS703026, 셀루메티닙, GSK1120212); Raf/MEK 이중 키나제 저해제(예를 들어, RO5126766), 노치 신호전달 저해제(Notch signaling inhibitor)(예를 들어, MK0752), 단일클론 항체-항체 융합 단백질(예를 들어, L19IL2), 쿠르쿠민; HSP90 저해제(예를 들어, 타네스피마이신, STA-9090), rIL-2; 데니류킨 디프티톡스; 토포아이소머라제 1 저해제(예를 들어, 이리노테칸, PEP02); 스타틴(예를 들어, 심바스타틴), 인자 VIIa 저해제(예를 들어, PCI-27483), AKT 저해제(예를 들어, RX-0201), 저산소증-활성화 전구약물(예를 들어, TH-302), 메트포르민 하이드로클로라이드, 감마-세크레타제 저해제(예를 들어, R04929097), 리보뉴클레오티드 리덕타제 저해제(예를 들어, 3-AP), 면역독소(예를 들어, HuC242-DM4), PARP 저해제(예를 들어, KU-0059436, 벨리파립), CTLA-4 저해제(예를 들어, CP-675,206, 이필리무맙), AdV-tk 요법, 프로테아좀 저해제(예를 들어, 보르테조밉(Velcade), NPI-0052), 티아졸리딘다이온(예를 들어, 피오글리타존), NPC-1C; 오로라 키나제 저해제(예를 들어, R763/AS703569), CTGF 저해제(예를 들어, FG-3019), siG12D LODER 및 방사선 요법(예를 들어, 단층치료(tomotherapy), 정위 방사선, 양성자 치료(proton therapy)), 수술, 및 이들의 조합을 포함한다. 소정의 실시 형태에서는, 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제, 및 겜시타빈의 조합을 본 발명의 항체와 함께 사용할 수 있다.
본 발명의 항체와 병용하여 소세포 폐암(SCLC)의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 SCLC의 치료에 대해 승인된 약물, 예컨대 메토트렉세이트(Folex®, Mexate®), 에베롤리무스(Afinitor®), 독소루비신 하이드로클로라이드, 에토포사이드 포스페이트(Etopophos®), 토포테칸 하이드로클로라이드(Hycamtin®), 메클로레타민 하이드로클로라이드(Mustargen®), 토포테칸 하이드로클로라이드를 포함한다. 사용될 수 있는 다른 치료제는 카르보플라틴, 시스플라틴, 옥살리플라틴, 이리노테칸, 겜시타빈, 리포좀 SN-38, 벤다무스틴, 테모졸로미드, 벨로테칸, NK012, FR901228, 플라보피리돌), 티로신 키나제 저해제(예를 들어, EGFR 저해제(예를 들어, 엘로티닙, 게피티닙, 세툭시맙, 파니투무맙), 다중 키나제 저해제(예를 들어, 소라페닙, 서니티닙), VEGF 저해제(예를 들어, 베바시주맙, 반데타닙), 암 백신(예를 들어, GVAX); Bcl-2 저해제(예를 들어, 오블리메르센 소듐, ABT-263), 프로테아좀 저해제(예를 들어, 보르테조밉(Velcade), NPI-0052), 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제; 도세탁셀, IGF-1 수용체 저해제(예를 들어, AMG 479), HGF/SF 저해제(예를 들어, AMG 102, MK-0646), 클로로퀸, 오로라 키나제 저해제(예를 들어, MLN8237), 방사면역요법(예를 들어, TF2), HSP90 저해제(예를 들어, 타네스피마이신, STA-9090), mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스), Ep-CAM/CD3-이중특이성 항체(예를 들어, MT110), CK-2 저해제(예를 들어, CX-4945), HDAC 저해제(예를 들어, 벨리노스타트), SMO 길항제(예를 들어, BMS 833923), 펩티드 암 백신, 및 방사선 요법(예를 들어, 강도-변조 방사선 요법(IMRT: intensity-modulated radiation therapy), 저분할 방사선요법, 저산소증-유도 방사선요법), 수술, 및 이들의 조합이다.
본 발명의 항체와 병용하여 비-소세포 폐암의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 메토트렉세이트(Folex®, Mexate®), 파클리탁셀(Abraxane®), 아파티닙(Gilotrif®), 에베롤리무스(Afinitor®), 알렉티닙(Alecensa®), 페메트렉시드 다이소듐(Alimta®), 베바시주맙(Avastin®), 카르보플라틴, 세리티닙(Zykadia®), 크리조티닙(Xalkori®), 라무시루맙(Cyramza®), 도세탁셀, 에베롤리무스(Afinitor®),게피티닙(Iressa®), 아파티닙 다이말레에이트(Gilotrif®), 겜시타빈 하이드로클로라이드(Gmezar®), 펨브롤리주맙(Keytruda®), 메클로레타민 하이드로클로라이드(Mustargen®), 비노렐빈 타르트레이트(Navelbine®), 네시투무맙(Portrazza®), 니볼루맙(Opdivo®), 오시메르티닙, 파클리탁셀(Taxol®), 카르보플라틴, 페메트렉시드 다이소듐, 라무시루맙(Cyramza®), 오시메르티닙(Tagrisso®)을 포함하는 NSCLC의 치료에 대해 승인된 약물을 포함한다. 사용될 수 있는 다른 치료제는 비노렐빈, 시스플라틴, 도세탁셀, 페메트렉시드 다이소듐, 에토포사이드, 겜시타빈, 카르보플라틴, 리포좀 SN-38, TLK286, 테모졸로미드, 토포테칸, 페메트렉시드 다이소듐, 아자시티딘, 이리노테칸, 테가푸르-기메라실-오테라실 포타슘, 사파시타빈), 티로신 키나제 저해제(예를 들어, EGFR 저해제(예를 들어, 엘로티닙, 게피티닙, 세툭시맙, 파니투무맙, 네시투무맙, PF-00299804, 니모투주맙, RO5083945), MET 저해제(예를 들어, PF-02341066, ARQ 197), PI3K 키나제 저해제(예를 들어, XL147, GDC-0941), Raf/MEK 이중 키나제 저해제(예를 들어, RO5126766), PI3K/mTOR 이중 키나제 저해제(예를 들어, XL765), SRC 저해제(예를 들어, 다사티닙), 이중 저해제(예를 들어, BIBW 2992, GSK1363089, ZD6474, AZD0530, AG-013736, 라파티닙, MEHD7945A, 리니파닙), 다중 키나제 저해제(예를 들어, 소라페닙, 서니티닙, 파조파닙, AMG 706, XL184, MGCD265, BMS-690514, R935788), VEGF 저해제(예를 들어, 엔도스타, 엔도스타틴, 베바시주맙, 세디라닙, BIBF 1120, 악시티닙, 티보자닙, AZD2171), 암 백신(예를 들어, BLP25 리포좀 백신, GVAX, 재조합 DNA, 및 L523S 단백질을 발현시키는 아데노바이러스), Bcl-2 저해제(예를 들어, 오블리메르센 소듐), 프로테아좀 저해제(예를 들어, 보르테조밉, 카르필조밉, NPI-0052, MLN9708), 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제, 도세탁셀, IGF-1 수용체 저해제(예를 들어, 식수투무맙, MK-0646, OSI 906, CP-751,871, BIIB022), 하이드록시클로로퀸, HSP90 저해제(예를 들어, 타네스피마이신, STA-9090, AUY922, XL888), mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스, 템시롤리무스, 리다포롤리무스), Ep-CAM/CD3-이중특이성 항체(예를 들어, MT110), CK-2 저해제(예를 들어, CX-4945), HDAC 저해제(예를 들어, MS 275, LBH589, 보리노스타트, 발프로산, FR901228), DHFR 저해제(예를 들어, 프랄라트렉세이트), 레티노이드(예를 들어, 벡사로텐, 트레티노인), 항체-약물 접합체(예를 들어, SGN-15), 비스포스포네이트(예를 들어, 졸레드론산), 암 백신(예를 들어, 벨라겐푸마투셀-L), 저분자량 헤파린(LMWH)(예를 들어, 틴자파린, 에녹사파린), GSK1572932A, 멜라토닌, 탈락토페린, 디메스나, 토포아이소머라제 저해제(예를 들어, 암루비신, 에토포사이드, 카레니테신), 넬피나비르, 실렌기티드, ErbB3 저해제(예를 들어, MM-121, U3-1287), 서르비빈 저해제(예를 들어, YM155, LY2181308), 에리불린 메실레이트, COX-2 저해제(예를 들어, 셀레콕십), 페그필그라스팀, 폴로-유사 키나제 1 저해제(예를 들어, BI 6727), TRAIL 수용체 2(TR-2) 작용제(예를 들어, CS-1008), CNGRC 펩티드(서열 번호 225)-TNF 알파 접합체, 다이클로로아세테이트(DCA), HGF 저해제(예를 들어, SCH 900105), SAR240550, PPAR-감마 작용제(예를 들어, CS-7017), 감마-세크레타제 저해제(예를 들어, RO4929097), 후성유전 요법(예를 들어, 5-아자시티딘), 니트로글리세린, MEK 저해제(예를 들어, AZD6244), 사이클린-의존성 키나제 저해제(예를 들어, UCN-01), 콜레스테롤-Fus1, 항튜불린제(예를 들어, E7389), 파르네실-OH-트랜스페라제 저해제(예를 들어, 로나파르닙), 면역독소(예를 들어, BB-10901, SS1(dsFv) PE38), 폰다파리눅스, 혈관 차단제(예를 들어, AVE8062), PD-L1 저해제(예를 들어, MDX-1105, MDX-1106), 베타-글루칸, NGR-hTNF, EMD 521873, MEK 저해제(예를 들어, GSK1120212), 에포틸론 유사체(예를 들어, 익사베필론), 키네신-스핀들 저해제(예를 들어, 4SC-205), 텔로미어 표적화제(예를 들어, KML-001), P70 경로 저해제(예를 들어, LY2584702), AKT 저해제(예를 들어, MK-2206), 혈관신생 저해제(예를 들어, 레날리도미드), 노치 신호전달 저해제(예를 들어, OMP-21M18), US2014/0141000A1호에 기재된 바와 같은 EGFR/c-Met 이중특이성 항체 EM-1, 방사선 요법, 수술, 및 이들의 조합이다.
본 발명의 항체와 병용하여 난소암의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 난소암의 치료에 대해 승인된 약물, 예컨대 멜팔란(Alkeran®), 베바시주맙(Avastin®), 카르보플라틴, 사이클로포스파미드(Clafen®, Cytoxan®), 클리스플라틴, 독소루비신 하이드로클로라이드, 겜시타빈 하이드로클로라이드(Gemzar®), 토포테칸 하이드로클로라이드(Hycamtin®), 올라파립(Lynparza®), 카르보플라틴, 시스플라틴, 파클리탁셀(Taxol®), 티오테파, 및 토포테칸 하이드로클로라이드를 포함한다. 사용될 수 있는 다른 치료제는 이포스파미드, 올라파립, 옥살리플라틴, 페메트렉시드 다이소듐, SJG-136, 에토포사이드, 데시타빈; 면역요법(예를 들어, APC8024, 오레고보맙, OPT-821), 티로신 키나제 저해제(예를 들어, EGFR 저해제(예를 들어, 엘로티닙), 이중 저해제(예를 들어, E7080), 다중 키나제 저해제(예를 들어, AZD0530, JI-101, 소라페닙, 서니티닙, 파조파닙), VEGF 저해제(예를 들어, 베바시주맙, BIBF 1120, 세디라닙, AZD2171), PDGFR 저해제(예를 들어, IMC-3G3), 파클리탁셀, 토포아이소머라제 저해제(예를 들어, 카레니테신, 이리노테칸), HDAC 저해제(예를 들어, 발프로에이트, 보리노스타트), 폴레이트 수용체 저해제(예를 들어, 팔레투주맙), 안지오포이에틴 저해제(예를 들어, AMG 386), 에포틸론 유사체(예를 들어, 익사베필론), 프로테아좀 저해제(예를 들어, 카르필조밉), IGF-1 수용체 저해제(예를 들어, OSI 906, AMG 479), PARP 저해제(예를 들어, 벨리파립, AG014699, 이니파립, MK-4827), 오로라 키나제 저해제(예를 들어, MLN8237, ENMD-2076), 혈관신생 저해제(예를 들어, 레날리도미드), DHFR 저해제(예를 들어, 프랄라트렉세이트), 방사면역치료제(예를 들어, Hu3S193), 스타틴(예를 들어, 로바스타틴), 토포아이소머라제 1 저해제(예를 들어, NKTR-102), 암 백신(예를 들어, p53 합성 장 펩티드 백신(p53 synthetic long peptides vaccine), 자가유래 OC-DC 백신), mTOR 저해제(예를 들어, 템시롤리무스, 에베롤리무스), BCR/ABL 저해제(예를 들어, 이마티닙), ET-A 수용체 길항제(예를 들어, ZD4054), TRAIL 수용체 2(TR-2) 작용제(예를 들어, CS-1008), HGF/SF 저해제(예를 들어, AMG 102), EGEN-001, 폴로-유사 키나제 1 저해제(예를 들어, BI 6727), 감마-세크레타제 저해제(예를 들어, RO4929097), Wee-1 저해제(예를 들어, MK-1775), 항튜불린제(예를 들어, 비노렐빈, E7389), 면역독소(예를 들어, 데니류킨 디프티톡스), SB-485232, 혈관 차단제(예를 들어, AVE8062), 인테그린 저해제(예를 들어, EMD 525797), 키네신-스핀들 저해제(예를 들어, 4SC-205), 레블리미드, HER2 저해제(예를 들어, MGAH22), ErrB3 저해제(예를 들어, MM-121), 방사선 요법, 및 이들의 조합이다.
본 발명의 항체와 병용하여 골수종의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법 또는 다른 항암제(예를 들어, 탈리도미드 유사체, 예를 들어, 레날리도미드), HSCT(문헌[Cook, (2008) J Manag Care Pharm. 14(7 Suppl):19-25]), 항-TIM-3 항체(문헌[Hallett et al., (2011) J of American Society for Blood and Marrow Transplantation 17(8):1133-145]), 종양 항원-펄스 수지상 세포, 종양 세포와 수지상 세포의 융합(예를 들어, 전기융합), 또는 악성 형질 세포에 의해 생성된 면역글로불린 이디오타입을 이용한 예방접종(문헌[Yi (2009) Cancer J 15(6):502-10]에 개관됨) 중 하나 이상을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 신장암, 예를 들어, 신세포 암종(RCC) 또는 전이성 RCC의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 에베롤리무스(Afinitor®), 알데스류킨, 베바시주맙(Avastin®), 악시티닙(Inlyta®), 카보잔티닙-S-말레이트(Cabometyx®), 알데스류킨(Proleukin®), 렌바티닙 메실레이트(Lenvima®), 소라페닙 토실레이트(Nexavar®), 니볼루맙(Opdivo®), 파조파닙 하이드로클로라이드, 소라페닙 토실레이트, 서니티닙(Sutent®), 템시롤리무스(Torisel®), 및 파조파닙 하이드로클로라이드(Votrient®)를 포함하는 RCC의 치료에 대해 승인된 약물을 포함한다. 사용될 수 있는 다른 치료제는 표적화된 약제(예를 들어, VEGF 저해제, 예컨대 VEGF에 대한 단일클론 항체, 예를 들어, 베바시주맙, VEGF 티로신 키나제 저해제, 예컨대 소라페닙, 악시티닙, 및 파조파닙이다.
본 발명의 항체와 병용하여 만성 골수 백혈병(AML)의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제(예를 들어, 사이타라빈, 하이드록시우레아, 클로파라빈, 멜팔란, 티오테파, 플루다라빈, 부설판, 에토포사이드, 코르디세핀, 펜토스타틴, 카페시타빈, 아자시티딘, 사이클로포스파미드, 클라드리빈, 토포테칸), 티로신 키나제 저해제(예를 들어, BCR/ABL 저해제(예를 들어, 이마티닙, 닐로티닙), 이중 저해제(예를 들어, 다사티닙, 보수티닙), 다중 키나제 저해제(예를 들어, DCC-2036, 포나티닙, 소라페닙, 서니티닙, RGB-286638), 인터페론 알파, 스테로이드, 세포자멸제(apoptotic agent)(예를 들어, 오마세탁신 메페석시나트), 면역요법(예를 들어, 동종유래 CD4+ 메모리 Th1-유사 T 세포/미세입자-결합된 항-CD3/항-CD28, 자가유래 사이토카인 유도된 살해 세포(CIK), AHN-12), CD52 표적화제(예를 들어, 알렘투주맙), HSP90 저해제(예를 들어, 타네스피마이신, STA-9090, AUY922, XL888), mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스), SMO 길항제(예를 들어, BMS 833923), 리보뉴클레오티드 리덕타제 저해제(예를 들어, 3-AP), JAK-2 저해제(예를 들어, INCB018424), 하이드록시클로로퀸, 레티노이드(예를 들어, 펜레티니드), 사이클린-의존성 키나제 저해제(예를 들어, UCN-01), HDAC 저해제(예를 들어, 벨리노스타트, 보리노스타트, JNJ-26481585), PARP 저해제(예를 들어, 벨리파립), MDM2 길항제(예를 들어, RO5045337), 오로라 B 키나제 저해제(예를 들어, TAK-901), 방사면역요법(예를 들어, 악티늄-225-표지된 항-CD33 항체 HuM 195), 헤지호그 저해제(Hedgehog inhibitor)(예를 들어, PF-04449913), STAT3 저해제(예를 들어, OPB-31121), KB004, 암 백신(예를 들어, AG858), 골수 이식, 줄기 세포 이식, 방사선 요법, 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 만성 림프구성 백혈병(CLL)의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제(예를 들어, 플루다라빈, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴, 클로람부실, 벤다무스틴, 클로람부실, 부설판, 겜시타빈, 멜팔란, 펜토스타틴, 미톡산트론, 5-아자시티딘, 페메트렉시드 다이소듐), 티로신 키나제 저해제(예를 들어, EGFR 저해제(예를 들어, 엘로티닙), BTK 저해제(예를 들어, PCI-32765(이브루티닙), 다중 키나제 저해제(예를 들어, MGCD265, RGB-286638), CD-20 표적화제(예를 들어, 리툭시맙, 오파투무맙, RO5072759, LFB-R603), CD52 표적화제(예를 들어, 알렘투주맙), 프레드니솔론, 다르베포에틴 알파, 레날리도미드, Bcl-2 저해제(예를 들어, ABT-263), 면역요법(예를 들어, 동종유래 CD4+ 메모리 Th1-유사 T 세포/미세입자-결합된 항-CD3/항-CD28, 자가유래 사이토카인 유도된 살해 세포(CIK), HDAC 저해제(예를 들어, 보리노스타트, 발프로산, LBH589, JNJ-26481585, AR-42), XIAP 저해제(예를 들어, AEG35156), CD-74 표적화제(예를 들어, 밀라투주맙), mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스), AT-101, 면역독소(예를 들어, CAT-8015, 항-Tac(Fv)-PE38(LMB-2)), CD37 표적화제(예를 들어, TRU-016), 방사면역요법(예를 들어, 131-토시투모맙), 하이드록시클로로퀸, 페리포신, SRC 저해제(예를 들어, 다사티닙), 탈리도미드, PI3K 델타 저해제(예를 들어, CAL-101), 레티노이드(예를 들어, 펜레티니드), MDM2 길항제(예를 들어, RO5045337), 플레릭사포르, 오로라 키나제 저해제(예를 들어, MLN8237, TAK-901), 프로테아좀 저해제(예를 들어, 보르테조밉), CD-19 표적화제(예를 들어, MEDI-551, MOR208), MEK 저해제(예를 들어, ABT-348), JAK-2 저해제(예를 들어, INCB018424), 저산소증-활성화 전구약물(예를 들어, TH-302), 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제, HSP90 저해제, AKT 저해제(예를 들어, MK2206), HMG-CoA 저해제(예를 들어, 심바스타틴), GNKG186, 방사선 요법, 골수 이식, 줄기 세포 이식, 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 급성 림프구성 백혈병(ALL)의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제(예를 들어, 프레드니솔론, 덱사메타손, 빈크리스틴, 아스파라기나제, 다우노루비신, 사이클로포스파미드, 사이타라빈, 에토포사이드, 티오구아닌, 메르캅토퓨린, 클로파라빈, 리포좀 안나마이신, 부설판, 에토포사이드, 카페시타빈, 데시타빈, 아자시티딘, 토포테칸, 테모졸로미드), 티로신 키나제 저해제(예를 들어, BCR/ABL 저해제(예를 들어, 이마티닙, 닐로티닙), ON 01910.Na, 다중 키나제 저해제(예를 들어, 소라페닙), CD-20 표적화제(예를 들어, 리툭시맙), CD52 표적화제(예를 들어, 알렘투주맙), HSP90 저해제(예를 들어, STA-9090), mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스, 라파마이신), JAK-2 저해제(예를 들어, INCB018424), HER2/neu 수용체 저해제(예를 들어, 트라스투주맙), 프로테아좀 저해제(예를 들어, 보르테조밉), 메토트렉세이트, 아스파라기나제, CD-22 표적화제(예를 들어, 에프라투주맙, 이노투주맙), 면역요법(예를 들어, 자가유래 사이토카인 유도된 살해 세포(CIK), AHN-12), 블리나투모맙, 사이클린-의존성 키나제 저해제(예를 들어, UCN-01), CD45 표적화제(예를 들어, BC8), MDM2 길항제(예를 들어, RO5045337), 면역독소(예를 들어, CAT-8015, DT2219ARL), HDAC 저해제(예를 들어, JNJ-26481585), JVRS-100, 파클리탁셀 또는 파클리탁셀 약제, STAT3 저해제(예를 들어, OPB-31121), PARP 저해제(예를 들어, 벨리파립), EZN-2285, 방사선 요법, 스테로이드, 골수 이식, 줄기 세포 이식, 또는 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 급성 골수성 백혈병(AML)의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제(예를 들어, 사이타라빈, 다우노루비신, 이다루비신, 클로파라빈, 데시타빈, 보사록신, 아자시티딘, 클로파라빈, 리바비린, CPX-351, 트레오설판, 엘라사이타라빈, 아자시티딘), 티로신 키나제 저해제(예를 들어, BCR/ABL 저해제(예를 들어, 이마티닙, 닐로티닙), ON 01910.Na, 다중 키나제 저해제(예를 들어, 미도스타우린, SU 11248, 퀴자르티닙, 소라피닙), 면역독소(예를 들어, 겜투주맙 오조가미신), DT388IL3 융합 단백질, HDAC 저해제(예를 들어, 보리노스타트, LBH589), 플레릭사포르, mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스), SRC 저해제(예를 들어, 다사티닙), HSP90 저해제(예를 들어, STA-9090), 레티노이드(예를 들어, 벡사로텐, 오로라 키나제 저해제(예를 들어, BI 811283), JAK-2 저해제(예를 들어, INCB018424), 폴로-유사 키나제 저해제(예를 들어, BI 6727), 세네르센, CD45 표적화제(예를 들어, BC8), 사이클린-의존성 키나제 저해제(예를 들어, UCN-01), MDM2 길항제(예를 들어, RO5045337), mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스), LY573636-소듐, ZRx-101, MLN4924, 레날리도미드, 면역요법(예를 들어, AHN-12), 히스타민 다이하이드로클로라이드, 방사선 요법, 골수 이식, 줄기 세포 이식, 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 다발성 골수종(MM)의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 화학요법제(예를 들어, 멜팔란, 아미포스틴, 사이클로포스파미드, 독소루비신, 클로파라빈, 벤다무스틴, 플루다라빈, 아드리아마이신, SyB L-0501), 탈리도미드, 레날리도미드, 덱사메타손, 프레드니손, 포말리도미드, 프로테아좀 저해제(예를 들어, 보르테조밉, 카르필조밉, MLN9708), 암 백신(예를 들어, GVAX), CD-40 표적화제(예를 들어, SGN-40, CHIR-12.12), 페리포신, 졸레드론산, 면역요법(예를 들어, MAGE-A3, NY-ESO-1, HuMax-CD38), HDAC 저해제(예를 들어, 보리노스타트, LBH589, AR-42), 아플리딘, 사이클린-의존성 키나제 저해제(예를 들어, PD-0332991, 디나시클립), 삼산화비소, CB3304, HSP90 저해제(예를 들어, KW-2478), 티로신 키나제 저해제(예를 들어, EGFR 저해제(예를 들어, 세툭시맙), 다중 키나제 저해제(예를 들어, AT9283), VEGF 저해제(예를 들어, 베바시주맙), 플레릭사포르, MEK 저해제(예를 들어, AZD6244), IPH2101, 아토르바스타틴, 면역독소(예를 들어, BB-10901), NPI-0052, 방사면역치료제(예를 들어, 이트륨 Y 90 이브리투모맙 티욱세탄), STAT3 저해제(예를 들어, OPB-31121), MLN4924, 오로라 키나제 저해제(예를 들어, ENMD-2076), IMGN901, ACE-041, CK-2 저해제(예를 들어, CX-4945), 항-CD38 항체(예를 들어 DARZALEX®(다라투무맙), 방사선 요법, 골수 이식, 줄기 세포 이식, 및 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 전립선암의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 전립선암의 치료에 대해 승인된 약물, 예컨대 아비라테론 아세테이트(Zytiga®), 비칼루타미드(Casodex®), 카바지탁셀(Jevtana®), 접합된 에스트로겐(Premarin®), 스트라디올(Estrace®), 에스트라디올 발레레이트(Delestrogen®), 에스테르화 에스트로겐(Menest®), 데가렐릭스(Firmagon®), 도세탁셀(Taxotere®), 엔잘루타미드(Xtandi®), 플루타미드, 고세렐린 아세테이트(Zoladex®), 카바지탁셀(Jevtana®), 류프롤리드 아세테이트(Lupron®), 미톡산트론 하이드로클로라이드, 닐루타미드(Nilandron®) 시푸류셀-T(Provenge®), 및 라듐 223 다이클로라이드(Xofigo®)이다. 사용될 수 있는 다른 약물은 화학요법제(예를 들어, 카르보플라틴, 플루다라빈), 호르몬 요법(예를 들어, 사이프로테론 아세테이트, 케토코나졸, 아미노글루테티미드, 아바렐릭스, 데가렐릭스, 류프롤리드, 트립토렐린, 부세렐린), 티로신 키나제 저해제(예를 들어, 이중 키나제 저해제(예를 들어, 라파타닙), 다중 키나제 저해제(예를 들어, 소라페닙, 서니티닙), VEGF 저해제(예를 들어, 베바시주맙), TAK-700, 암 백신(예를 들어, BPX-101, PEP223), 레날리도미드, TOK-001, IGF-1 수용체 저해제(예를 들어, 식수투무맙), TRC105, 오로라 A 키나제 저해제(예를 들어, MLN8237), 프로테아좀 저해제(예를 들어, 보르테조밉), OGX-011, 방사면역요법(예를 들어, HuJ591-GS), HDAC 저해제(예를 들어, 발프로산, SB939, LBH589), 하이드록시클로로퀸, mTOR 저해제(예를 들어, 에베롤리무스), 도비티닙 락테이트, 다이인돌릴메탄, 에파비렌즈, OGX-427, 제니스타인, IMC-3G3, 바페티닙, CP-675,206, 방사선 요법, 수술, 또는 이들의 조합을 포함한다.
본 발명의 항체와 병용하여 두경부 편평상피세포 암종(HNSCC)의 치료에 사용될 수 있는 예시적인 치료제는 메토트렉세이트(Folex®, Mexate®), 블레오마이신(Blenoxane®), 도세탁셀(Taxotere®), 에르비툭스(Cetuximab®), 하이드록시우레아(Hydrea®), 또는 펨브롤리주맙(Keytruda®)을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 TLR 작용제와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, TLR3 작용제는 TLR4 작용제이다.
일부 실시 형태에서, TLR3 작용제는 TLR7/8 작용제이다.
예시적인 TLR 작용제는 Pa㎥Cys, TLR-1/2 작용제; CFA, TLR-2 작용제; MALP2, TLR-2 작용제; Pam2Cys, TLR-2 작용제; FSL-1, TLR-2 작용제; Hib-OMPC, TLR-2 작용제; 폴리리보신:폴리리보시티드산(polyribosinic:polyribocytidic acid)(Poly I:C), TLR-3 작용제; 폴리아데노신-폴리우리딜산(poly AU), TLR-3 작용제; 폴리-L-라이신 및 카르복시메틸셀룰로스(Hiltonol®)로 안정화된 폴리이노신-폴리시티딜산, TLR-3 작용제; 모노포스포릴 지질 A(MPL), TLR-4 작용제; LPS, TLR-4 작용제; 세균 플라젤린, TLR-5 작용제; 시알릴-Tn(STn), 다수의 인간 암 세포 상의 MUCI 뮤신 및 TLR-4 작용제와 연계된 탄수화물; 이미퀴모드, TLR-7 작용제; 레시퀴모드, TLR-7/8 작용제; 록소리빈, TLR-7/8 작용제; 및 메틸화되지 않은 CpG 다이뉴클레오티드(CpG-ODN), TLR-9 작용제이다.
예시적인 TLR4 작용제는 TLR4와 특이적으로 결합하는 작용 항체이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 CSF-1R과 결합하는 항체와 병용하여 투여된다.
CSF-1R과 결합하는 예시적인 항체는 국제 특허 출원 공개 WO2013132044호에 기재된 것들이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 LXRβ 작용제와 병용하여 투여된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 DR4 작용제와 병용하여 투여된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 DR5 작용제와 병용하여 투여된다.
적합한 DR4 및 DR5 작용제는, 예를 들어 국제 특허 출원 공개 WO2014159562호에 기재되어 있다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 항-갈렉틴 1 항체와 병용하여 투여된다.
본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 예시적인 항-갈렉틴 1 항체는 국제 특허 출원 공개 WO2015013389호에 기재된 것들이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 BTK 저해제와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, BTK 저해제는 IMBRUVICA®(이브루티닙)이다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 항-HER2 항체와 병용하여 투여된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 항-CD20 항체와 병용하여 투여된다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 OKT3 또는 CAMPATH와 같은 항체, 및/또는 사이클로포스파미드, 외부-빔 방사선 요법(XRT), 플루다라빈과 같은 화학요법제를 사용하는 T 세포 제거 요법(T cell ablative therapy), 골수 이식과 함께(예를 들어, 전에, 동시에, 또는 후에) 투여된다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 B-세포 제거 요법, 예컨대 CD20과 반응하는 약제, 예를 들어, 리툭산 후에 투여될 수 있다. 예를 들어, 일 실시 형태에서, 대상은 고용량 화학요법 후에 말초 혈액 줄기 세포 이식을 이용한 표준 치료를 받을 수 있다. 소정의 실시 형태에서, 이식 후에, 대상은 본 발명의 항체를 투여 받는다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 수술 전 또는 후에 투여된다.
본 명세서에 기재된 일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 방사선 요법과 병용하여 투여된다.
방사선 요법은 외부-빔 요법, 내부 방사선 요법, 이식 방사선(implant radiation), 정위 방사선수술(stereotactic radiosurgery), 전신 방사선 요법, 방사선요법, 및 영구적이거나 일시적인 조직내 근접치료(interstitial brachytherapy)를 포함하는 다양한 방법을 사용하여 투여될 수 있다. 외부-빔 요법은 3 차원 입체조형 방사선 요법을 수반하며, 여기서 방사선의 조사야(field of radiation)는 국소 방사선(local radiation)(예를 들어, 사전 선택된 표적 또는 장기에 지향된 방사선), 또는 집속 방사선(focused radiation)으로 설계된다. 집속 방사선은 정위 방사선수술, 분할 정위 방사선수술, 또는 강도-변조 방사선 요법으로부터 선택될 수 있다. 집속 방사선은 방사선원으로서 입자 빔(양성자), 코발트-60(광자) 선형 가속기(x-선)를 가질 수 있다(예를 들어 WO 2012/177624호 참조). "근접치료"는 종양 또는 다른 증식성 조직 질병 부위 또는 그 주위에 신체 내로 삽입된 공간적으로 격리된 방사성 물질에 의해 전달되는 방사선 요법을 지칭하며, 방사성 동위원소(예를 들어, At-211, I-131, I-125, Y-90, Re-186, Re-188, Sm-153, Bi-212, P-32, 및 Lu의 방사성 동위원소)에 대한 노출을 포함한다. 세포 컨디셔너(cell conditioner)로 사용하기에 적합한 방사선원은 고체 및 액체 둘 모두를 포함한다. 방사선원은 I-125, I-131, Yb-169, 고체 선원(solid source)으로서의 Ir-192, 고체 선원으로서의 I-125와 같은 방사성 핵종, 또는 광자, 베타 입자, 감마 방사선, 또는 다른 치료적 선을 발산하는 다른 방사성 핵종일 수 있다. 방사성 물질은 또한 임의의 방사성 핵종(들) 용액, 예를 들어, I-125 또는 I-131의 용액으로부터 제조된 유체일 수 있거나, 방사성 유체는 Au-198, Y-90과 같은 고체 방사성 핵종의 작은 입자를 함유하는 적합한 유체의 슬러리를 사용하여 생성될 수 있다. 방사성 핵종(들)은 겔 또는 방사성 미소구체에 함유될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 본 발명의 항체는 흑색종의 치료를 위한 데카르바진과 병용하여 투여된다. 임의의 특정 이론에 의해 구애됨이 없이, PD-1 및/또는 TIM-3 차단과 화학요법의 조합된 사용은 항원 제시 경로에서 종양 항원의 증가된 수준을 유발할 수 있는 대부분의 화학요법 화합물의 세포독성 작용의 결과인 세포사에 의해 촉진되는 것으로 믿어진다. 세포사를 통해 PD-1 및/또는 TIM-3 차단과의 상승효과를 유발할 수 있는 다른 병용 요법은 방사선, 수술, 및 호르몬 박탈(hormone deprivation)이다. 이러한 프로토콜 각각은 숙주 내에 종양 항원의 공급원을 생성한다. 혈관신생 저해제 또한 PD-1 및/또는 TIM-3 차단과 조합될 수 있다. 혈관신생의 저해는 종양 세포사를 유발하며, 이는 숙주 항원 제시 경로 내로 종양 항원을 공급할 수 있다.
본 발명의 단일특이성 PD-1 및/또는 TIM-3 항체는 또한 이중특이성 항체와 병용하여 사용될 수 있다. 이중특이성 항체를 사용하여 2개의 별도의 항원을 표적화할 수 있다. 예를 들어 항-Fc 수용체/항-종양 항원(예를 들어, Her-2/neu) 이중특이성 항체를 사용하여 대식세포를 종양의 부위로 표적화하였다. 이중특이성 표적화는 종양 특이적 반응을 더 효과적으로 활성화할 수 있다. 이러한 반응의 T 세포 아암은 PD-1 및/또는 TIM-3 차단의 사용에 의해 강화될 것이다. 대안적으로, 종양 항원 및 수지상 세포 특이적 세포 표면 표지자에 결합하는 이중특이성 항체의 사용에 의해 항원을 DC에 직접 전달할 수 있다.
본 발명의 항체는 제2 약제, 예를 들어, 세포독성 약물, 방사성동위원소, 또는 단백질, 예를 들어, 단백질 독소 또는 바이러스 단백질에 접합되거나 접합되지 않은 형태로 사용될 수 있다. 항체 분자를 사용하여 다양한 치료제, 예를 들어, 세포독성 모이어티, 예를 들어, 치료 약물, 방사성동위원소, 식물, 진균, 또는 세균 기원의 분자, 또는 생물학적 단백질(예를 들어, 단백질 독소) 또는 입자(예를 들어; 바이러스 외피 단백질을 통한, 예를 들어, 재조합 바이러스 입자), 또는 이들의 혼합물을 전달할 수 있다.
감염성 질병
본 발명은 또한 특정 독소 또는 병원체에 노출된 대상을 본 발명의 항체로 대상을 치료하기에 충분한 시간 동안 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 감염성 질병을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 감염성 질병을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 바이러스 감염을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 바이러스 감염을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 세균 감염을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 세균 감염을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 본 발명의 항체의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 진균 감염을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 진균 감염을 갖는 대상을 치료하는 방법을 제공한다.
감염(예를 들어, 급성 및/또는 만성)의 치료에서, 감염에 대한 천연 숙주 면역 방어를 자극함에 더하여, 또는 그 대신에, 본 발명의 항체의 투여를 종래의 치료와 조합할 수 있다. 감염에 대한 천연 숙주 면역 방어는 염증, 발열, 항체-매개 숙주 방어, T-림프구-매개 숙주 방어, 예컨대 림포카인 분비 및 세포독성 T-세포(특히 바이러스 감염 중의), 보체 매개 용해 및 옵소닌화(opsonization)(촉진된 식작용), 및 식작용을 포함한다. 본 발명의 항체가 작용이상 T-세포를 재활성화하는 능력은 만성 감염, 특히 완전한 회복을 위해 세포-매개 면역력이 중요한 것들을 치료하기에 유용할 것이다.
상기 논의된 바와 같은 종양에 대한 그의 응용과 유사하게, 병원체, 독소, 및 자가-항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 본 발명의 항체를 단독으로, 또는 애쥬번트로서, 백신과 병용하여 사용할 수 있다. 이러한 치료적 접근법이 유용할 수 있는 병원체의 예는 현재 효과적인 백신이 없는 병원체, 또는 종래의 백신이 완전히 효과적이지 못한 병원체를 포함한다. 이들은 HIV, 간염(A, B, 및 C), 인플루엔자, 헤르페스, 지아르디아, 말라리아, 리슈마니아, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 및 슈도모나스 아이루기노사를 포함한다. PD-1 및/또는 TIM-3 차단은 감염의 과정에 걸쳐 변경된 항원을 제시하는 HIV와 같은 동인에 의한 확립된 감염에 대해 유용할 수 있다. 이러한 신규 에피토프는 본 발명의 항체의 투여시에 외래인 것으로 인식되므로, PD-1 또는 TIM-3을 통한 음성 신호에 의해 약화되지 않는 강한 T 세포 반응을 유발한다.
바이러스
바이러스 원인으로부터 야기되는 감염의 경우, 본 발명의 항체는 바이러스 감염의 치료를 위한 표준 요법과 조합될 수 있다. 그러한 표준 요법은 바이러스의 유형에 따라 변동되지만, 거의 모든 경우에, 바이러스에 대해 특이적인 항체(예를 들어, IgA, IgG)를 함유하는 인간 혈청의 투여가 효과적일 수 있다.
본 발명의 항체에 의해 치료가능할 수 있는 감염을 야기하는 예시적인 병원성 바이러스는 HIV, 간염(A, B, 또는 C), 헤르페스 바이러스(예를 들어, VZV, HSV-1, HAV-6, HSV-II, 및 CMV, 엡스타인 바 바이러스), 아데노바이러스, 인플루엔자 바이러스, 플라비바이러스, 에코바이러스, 리노바이러스, 콕사키 바이러스, 코르노바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 이하선염 바이러스, 로타바이러스, 홍역 바이러스, 루벨라 바이러스, 파르보바이러스, 백시니아 바이러스, HTLV 바이러스, 뎅기 바이러스, 파필로마바이러스, 연속종 바이러스, 폴리오바이러스, 공수병 바이러스, JC 바이러스, 및 아르보바이러스 뇌염 바이러스를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 바이러스 감염은 인플루엔자 바이러스 감염이다. 인플루엔자 감염은 발열, 기침, 근육통, 두통, 및 권태를 유발할 수 있으며, 이는 흔히 계절성 유행에서 일어난다. 인플루엔자는 또한 다수의 감염후 장애, 예컨대 뇌염, 심근심막염, 굿스파처 증후군, 및 라이 증후군과 연계된다. 인플루엔자 감염은 또한 정상적인 폐 항균 방어를 억제하여, 인플루엔자로부터 회복 중인 환자는 세균성 폐렴의 발생 위험이 증가한다. 인플루엔자 바이러스 표면 단백질은 돌연변이 및 재조합으로부터 야기되는 현저한 항원 변이를 나타낸다. 따라서, 세포용해성 T 림프구는 감염 후에 바이러스의 제거를 위한 숙주의 주요 수단이다. 인플루엔자는 하기 3개의 주요 유형으로 분류된다: A, B, 및 C. 인플루엔자 A는 그것이 인간 및 다수의 다른 동물(예를 들어, 돼지, 말, 새, 및 물개) 둘 모두를 감염시키며 대유행 인플루엔자의 주원인이라는 점에서 독특하다. 세포는 2개의 상이한 인플루엔자 A 변종에 의해 감염될 수 있으며, 복제 중에 2개의 모 바이러스 유형의 세그먼트화된 RNA 유전체가 혼합되어 혼성체 복제물을 생성하여 새로운 유행 변종을 생성한다. 인플루엔자 B는 동물에서 복제하지 않으므로 유전적 변이가 더 적고 인플루엔자 C는 단일 혈청형만을 갖는다.
대부분의 종래의 요법은 감염으로부터 야기되는 증상의 일시적 처방인 반면에, 숙주의 면역 반응이 실제로 질병을 제거한다. 그러나, 소정의 변종(예를 들어, 인플루엔자 A)은 더 심각한 질환 및 사망을 야기할 수 있다. 인플루엔자 A는 사이클릭 아민 저해제 아만타딘 및 리만타딘의 투여에 의해 임상적 및 예방적 둘 모두로 치료될 수 있으며, 이는 바이러스 복제를 저해한다. 그러나, 비교적 높은 유해 반응 발생률, 그의 좁은 항-바이러스 스펙트럼(인플루엔자 A 단독), 및 바이러스가 저항성이 되는 성향으로 인해, 이러한 약물의 임상적 유용성은 제한된다. 주요 인플루엔자 표면 단백질인 헤마글루티닌 및 뉴라미니다제에 대한 혈청 IgG 항체의 투여는 폐 감염을 예방할 수 있는 반면에, 상기도 및 기관의 감염을 예방하기 위해서는 점막 IgA가 필요하다. 인플루엔자에 대한 가장 효과적인 현행 치료는 포르말린 또는 β-프로피오락톤으로 불활성화한 바이러스의 투여를 이용한 예방접종이다.
일부 실시 형태에서, 감염은 간염 감염, 예를 들어, 간염 B 또는 C 감염이다.
간염 B 바이러스(HB-V)는 가장 감염성인 공지된 혈행성 병원체이다. 그것은 급성 및 만성 간염 및 간 암종뿐만 아니라 평생 동안의 만성 감염의 주요 원인이다. 감염 후에, 바이러스가 간세포 내에서 복제하며, 이어서 이는 또한 표면 항원 HBsAg를 발산한다. 혈청 중의 HBsAg의 과도한 수준의 검출은 간염 B 감염을 진단하는 표준 방법으로 사용된다. 급성 감염은 해소될 수 있거나, 그것은 만성 지속적 감염으로 발전할 수 있다. 만성 HBV에 대한 현행 치료는 α-인터페론을 포함하며, 이는 간세포의 표면 상에서 부류 I 인간 백혈구 항원(HLA)의 발현을 증가시킴으로써, 세포독성 T 림프구에 의한 그의 인식을 촉진한다. 추가적으로, 뉴클레오시드 유사체 간시클로비르, 팜시클로비르, 및 라미부딘 또한 임상 시험에서 HBV 감염의 치료에 일부 효능을 나타냈다. HBV에 대한 추가적인 치료는 페길화 ®-인터페론, 아덴포비르, 엔테카비르, 및 텔비부딘을 포함한다. 항-HBsAg 혈청 항체의 모 투여를 통해 수동 면역력을 부여할 수 있지만, 불활성화 또는 재조합 HBsAg를 이용한 예방접종 또한 감염에 대한 저항성을 부여한다. 치료적 이점을 위해 본 발명의 항체를 간염 B 감염에 대한 종래의 치료와 조합할 수 있다.
간염 C 바이러스(HC-V) 감염은 간염의 만성 형태로 이어져 간경화를 유발할 수 있다. 간염 B로부터 야기되는 감염과 증상이 유사하지만, HB-V와는 뚜렷하게 대조적으로, 감염된 숙주는 10 내지 20 년 동안 무증상일 수 있다. 본 발명의 항체는 단독요법으로서, 또는 간염 C 감염에 대한 치료 기준과 병용하여 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 항체는 Sovaldi(소포스부비르) Olysio(시메프레비르) 중 하나 이상, 플러스 리바비린 또는 페길화 인터페론과 함께 투여될 수 있다. Incivek(텔라프레비르) 또는 Victrelis(보세프레비르) 플러스 리바비린 및 페길화 인터페론을 포함하는 치료법 또한 승인되었으나, 그들은 증가된 부작용 및 더 긴 치료 기간과 연계된다.
HC-V 감염에 대한 종래의 치료는 α-인터페론 및 리바비린의 조합의 투여를 포함한다. HC-V 감염에 대한 유망한 잠재적 요법은 프로테아제 저해제 텔라프레비르(VX-960)이다. 추가적인 치료는 바비툭시맙(B2-당단백질 I 의존성 방식으로 음이온성 인지질 포스파티딜세린과 결합하는 항체, Peregrine Pharmaceuticals), 항-HPV 바이러스 외피 단백질 E2 항체(들)(예를 들어, ATL 6865-Ab68+Ab65, XTL Pharmaceuticals), 및 Civacir®(다클론 항-HCV 인간 면역 글로불린)를 포함한다. 치료적 이점을 위해 본 발명의 항체를 간염 C 감염에 대한 이러한 치료 중 하나 이상과 조합할 수 있다. 간염 C 감염을 특이적으로 치료하기 위해 본 발명의 항체와 병용하여 사용될 수 있는 프로테아제, 폴리머라제, 및 NS5A 저해제는 US 2013/0045202호에 기재된 것들을 포함한다.
다른 실시 형태에서, 감염은 홍역 바이러스이다. 9 내지11 일의 인큐베이션 후에, 홍역 바이러스로 감염된 숙주는 발열, 기침, 코감기, 및 결막염이 발생한다. 1 내지 2 일 이내에, 홍반성, 반구진 발진이 발생하며, 이는 전신에 걸쳐 신속하게 확산된다. 감염은 또한 세포 면역력을 억제하므로, 숙주는 중이염, 폐렴, 및 감염후 자가면역성 뇌척수염을 포함하는 세균 중복감염 발생 위험이 더 커진다. 급성 감염은 특히 영양실조의 청소년에서 유의한 질병률 및 사망률과 연계된다.
홍역에 대한 치료는 혼주된 인간 IgG의 수동 투여를 포함하며, 이는 노출 후 최대 1 주에 제공된다 해도 비-면역 대상에서 감염을 예방할 수 있다. 그러나, 약독화된 생바이러스를 이용한 사전 면역화가 가장 효과적인 치료이며, 면역화된 사람들의 95% 초과에서 질병을 예방한다. 이 바이러스의 하나의 혈청형이 존재하므로, 단일 면역화 또는 감염이 전형적으로 평생 동안 후속 감염으로부터의 보호를 유발한다.
감염된 숙주의 작은 비율에서, 홍역은 SSPE로 발전할 수 있으며, 이는 중추신경계의 지속적 감염으로부터 야기되는 만성 진행성 신경 장애이다. S SPE는 비리온 조립 및 출아를 방해하는 결함을 가진 홍역 바이러스의 클론 변이체에 의해 야기된다. 이러한 환자들의 경우, 바이러스 제거를 촉진하도록 본 발명의 항체를 이용한 T-세포의 재활성화가 바람직할 것이다.
다른 실시 형태에서, 감염은 HIV이다. HIV는 T-림프구, 단핵구-대식세포, 여포성 수지상 세포, 및 랑게르한스 세포를 포함하는 CD4+ 세포를 공격하며, CD4+ 헬퍼/인듀서 세포가 고갈된다. 결과로서, 숙주는 세포-매개 면역력의 극심한 결함을 얻는다. HIV에 의한 감염은 50% 이상의 개체에서 AIDS를 유발하며, 성적 접촉, 감염된 혈액 또는 혈액 제제의 투여, 감염된 정액을 이용한 인공 수정, 혈액-함유 바늘 또는 주사기에 대한 노출, 및 분만 중의 감염된 모체로부터 유아로의 전염을 통해 전염된다.
HIV로 감염된 숙주는 무증상일 수 있거나, 단핵구증과 유사한 급성 질환-발열, 두통, 인후통, 권태, 및 발진이 발생할 수 있다. 증상은 지속적 발열, 야간 발한, 체중 감소, 원인미상의 설사, 습진, 건선, 지루성 피부염, 대상 포진, 구강 칸디다증, 및 구강 모백반증을 포함하는 진행성 면역 작용이상으로 진행할 수 있다. 그의 감염이 AIDS로 발전하는 환자에서 기생충의 숙주에 의한 기회 감염은 통상적이다.
HIV에 대한 치료는, 단독으로, 또는 디다노신 또는 잘시타빈, 다이데옥시이노신, 다이데옥시시티딘, 라미드부딘, 스타부딘과 병용하는 뉴클레오시드 유사체, 지도부딘(AST); 역전사 저해제, 예컨대 델라비르딘, 네비라핀, 로비리드, 및 프로테이나제 저해제, 예컨대 사퀴나비르, 리토나비르, 인디나비르, 및 넬피나비르를 포함하는 항바이러스 요법을 포함한다. HIV에 대한 치료는 EDURANT®(릴피비린)이다. 치료적 이점을 위해 본 발명의 항체를 HIV 감염에 대한 종래의 치료와 조합할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 감염은 사이토메갈로바이러스(CMV) 감염이다. CMV 감염은 흔히 지속적이고, 잠복성이며, 재발성인 감염과 연계된다. CMV는 단핵구 및 과립구-단핵구 전구 세포에 감염되고 잠복성으로 남는다. CMV의 임상 증상은 단핵구증-유사 증상(즉, 발열, 팽윤된 샘(swollen gland), 권태), 및 항생제에 대한 알레르기 피부 발진이 발생하는 경향을 포함한다. 바이러스는 직접 접촉에 의해 확산된다. 바이러스는 소변, 타액, 정액, 및 더 적게는 다른 체액 내에 발산된다. 전염은 또한 감염된 모체로부터 그의 태아 또는 신생아에게, 그리고 수혈 및 장기 이식에 의해 일어날 수 있다. CMV 감염은 비특이적 미토겐 및 특이적 CMV 항원에 대한 손상된 아세포화 반응 및 감소된 세포독성 능력을 특징으로 하는 세포 면역력의 일반적 손상을 유발한다.
CMV 감염의 치료는 항-바이러스 간시클로비르, 포사카르넷, 및 시도비르를 포함하지만, 이러한 약물은 전형적으로 면역손상된 환자에게만 처방된다. 치료적 이점을 위해 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체를 사이토메갈로바이러스 감염에 대한 종래의 치료와 조합할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 감염은 엡스타인-바 바이러스(EBV) 감염이다. EBV는 지속적이고 잠복성인 감염을 확립할 수 있으며, 주로 B 세포를 공격한다. EBV에 의한 감염은 감염성 단핵구증의 임상 병태를 유발하며, 이는 발열, 인후통, 흔히 삼출물과 함께, 전신성 림프절병증, 및 비장비대를 포함한다. 간염 또한 존재하며, 이는 황달로 발전할 수 있다.
EBV 감염에 대한 전형적인 치료는 증상의 일시적 처방인 반면에, EBV는 버킷 림프종 및 비인두암과 같은 소정의 암의 발생과 연계된다. 따라서, 합병증이 발생하기 전의 바이러스 감염의 제거는 크게 유익할 것이다. 치료적 이점을 위해 본 발명의 항체를 엡스타인-바 바이러스 감염에 대한 종래의 치료와 조합할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 감염은 헤르페스 심플렉스 바이러스(HSV) 감염이다. HSV는 감염된 숙주와의 직접 접촉에 의해 전염된다. 직접 감염은 무증상일 수 있지만, 전형적으로 감염성 입자를 함유하는 수포를 유발한다. 질병은 질병 활동기의 주기로서 증상발현되며, 여기에서 바이러스가 후속 발병(outbreak)을 위해 신경절을 잠복성으로 감염시킴에 따라 병변이 나타나고 사라진다. 병변은 안면, 생식기, 눈, 및/또는 손에 있을 수 있다. 일부 경우에, 감염은 또한 뇌염을 야기할 수 있다.
헤르페스 감염에 대한 치료는 증상이 있는 발병의 해소를 주로 지향하며, 전신 항바이러스 약, 예컨대 아시클로비르(예를 들어, Zovirax®), 발라시클로비르, 팜시클로비르, 펜시클로비르, 및 국부성 의약품, 예컨대 도코사놀(Abreva®), 트로만타딘, 및 질락틴을 포함한다. 헤르페스의 잠복성 감염의 제거는 임상적으로 크게 유익할 것이다. 치료적 이점을 위해 본 발명의 항체를 헤르페스 바이러스 감염에 대한 종래의 치료와 조합할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 감염은 인간 T-림프영양성 바이러스(HTLV-1, HTLV-2)이다. HTLV는 성적 접촉, 모유 수유, 또는 오염된 혈액에 대한 노출을 통해 전염된다. 바이러스는 Th1 세포를 활성화시켜, 그의 과다증식 및 Th1 관련 사이토카인(예를 들어, IFN-γ 및 TNF-α)의 과다생성을 유발한다. 이는 다시 Th2 림프구의 억제 및 Th2 사이토카인 생성(예를 들어, IL-4, IL-5, IL-10, 및 IL-13)의 감소를 유발하여, 감염된 숙주가 제거를 위해 Th2-의존성 반응을 필요로 하는 침입 유기체에 대한 적당한 면역 반응(예를 들어, 기생충 감염, 점막 및 체액 항체의 생성)을 시작하는 능력의 감소를 야기한다.
HTLV 감염은 기관지확장증, 피부염을 유발하는 기회 감염 및 다균성 패혈증으로 인한 사망을 유발하는 스타필로코커스 종 및 스트론길로이데스 종(Strongyloides spp.)에 의한 중복감염으로 이어진다. HTLV 감염은 또한 HAM/TSP로 공지된 진행성 탈수초 상위 운동 신경세포 질병(progressive demyelinating upper motor neuron disease) 및 성인 T-세포 백혈병/림프종을 직접 유발할 수 있다. HTLV 잠복성 감염의 제거는 임상적으로 크게 유익할 것이다. 치료적 이점을 위해 본 발명의 항체를 HTLV 감염에 대한 종래의 치료와 조합할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 감염은 인간 파필로마 바이러스(HPV)이다. HPV는 주로 각질형성세포에 영향을 주며, 하기 2개의 형태로 발생한다: 피부 및 생식기. 전염은 직접 접촉 및/또는 성적 활동을 통해 일어나는 것으로 믿어진다. 피부 및 생식기 HPV 감염 둘 모두는 사마귀 및 잠복성 감염 및 때때로 재발성 감염을 유발할 수 있으며, 이는 증상을 제어하고 사마귀의 출현을 차단하는 숙주 면역력에 의해 제어되지만, 숙주는 여전히 다른 숙주에게 감염을 전염시킬 수 있다.
HPV에 의한 감염은 또한 소정의 암, 예컨대 자궁경부암, 항문암, 음문암, 음경암, 및 구인두암을 유발할 수 있다. HPV 감염에 대한 공지된 치유법은 없으나, 현행 치료는 이미퀴모드의 국부 적용이며, 이는 영향을 받은 영역을 공격하도록 면역 시스템을 자극한다. HPV 잠복성 감염의 제거는 임상적으로 크게 유익할 것이다. 치료적 이점을 위해 본 발명의 항체를 HPV 감염에 대한 종래의 치료와 조합할 수 있다.
세균 감염
본 발명의 항체로 치료될 수 있는 감염을 야기하는 병원성 세균의 일부 예는 매독, 클라미디아, 리케차 세균, 항산균, 포도상구균, 연쇄상구균, 폐렴구균, 수막구균 및 코노코키(conococci), 클렙시엘라(klebsiella), 프로테우스(proteus), 세라티아, 슈도모나스, 레지오넬라(legionella), 디프테리아(diphtheria), 살모넬라, 간균강, 콜레라(cholera), 파상풍, 보툴리즘(botulism), 탄저병, 페스트(plague), 렙토스피라증(leptospirosis), 및 라임병 세균을 포함한다. 본 발명의 항체는 전술한 감염에 대한 기존의 치료 방법과 병용하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 매독에 대한 치료는 페니실린(예를 들어, 페니실린 G.), 테트라사이클린, 독시사이클린, 세프트리악손, 및 아지트로마이신을 포함한다.
보렐리아 부르그도르페리(Borrelia burgdorferi)에 의해 야기되는 라임병은 진드기 교상을 통해 인간에게 전염된다. 질병은 초기에 국소화된 발진으로서 증상발현되고, 권태, 발열, 두통, 경부 경직, 및 관절통을 포함하는 감기-유사 증상이 이어진다. 후기 증상발현은 이동성 및 다관절성 관절염, 뇌신경 마비 및 신경근증과의 신경학적 관여 및 심장 관여, 심근염, 및 부정맥을 포함할 수 있다. 라임병의 일부 경우는 지속적이 되어 3기 매독과 유사한 비가역적 손상을 유발한다. 라임병에 대한 현행 요법은 주로 항생제의 투여를 포함한다. 항생제-저항성 변종은 하이드록시클로로퀸 또는 메토트렉세이트로 치료될 수 있다. 신경병성 통증을 가진 항생제 불응성 환자는 가바펜틴으로 치료될 수 있다. 미노사이클린은 신경학적 증상발현 또는 다른 염증성 증상발현을 가진 후기/만성 라임병에 도움이 될 수 있다.
다른 형태의 보렐리아증, 예컨대 B. 레쿠렌티스(B. recurentis), B. 헤름시(B. hermsii), B. 투리카타이(B. turicatae), B. 파리케리(B. parikeri), B. 히스파니카(B. hispanica), B. 두토니(B. duttonii), 및 B. 페르시카(B. persica)로부터 야기되는 것들뿐만 아니라 렙토스피라증(예를 들어, L. 인테로간스(L. interrogans))은 전형적으로, 혈액 타이터(blood titer)가 간내성 폐쇄를 야기하는 농도에 도달하지 않는 한, 자발적으로 해소된다.
진균 및 기생충
본 발명의 항체로 치료될 수 있는 감염을 야기하는 병원성 진균의 일부 예는 칸디다(Candida)(알비칸스(albicans), 크루세이(krusei), 글라브라타(glabrata), 트로피칼리스(tropicalis), 등), 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans), 아스페르길루스(Aspergillus)(푸미가투스(fumigatus), 니게르(niger) 등), 무코랄레스(Mucorales) 속(무코르(mucor), 압시디아(absidia), 리조푸스(rhizophus)), 스포로트릭스 쉔키(Sporothrix schenkii), 블라스토마이세스 데르마티티디스(Blastomyces dermatitidis), 파라코시디오이데스 브라실리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis), 코시디오이데스 이미티스(Coccidioides immitis), 및 히스토플라스마 카프술라툼(Histoplasma capsulatum)을 포함한다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 항체로 치료가능한 감염을 야기하는 병원성 기생충의 일부 예는 엔트아메바 히스톨리티카(Entamoeba histolytica), 발란티디움 콜라이(Balantidium coli), 네글레리아파울러리(Naegleriafowleri), 아칸트아메바 종(Acanthamoeba sp.), 지아르디아 람비아(Giardia lambia), 크립토스포리디움 종(Cryptosporidium sp.), 뉴모시스티스 카리니(Pneumocystis carinii), 플라스모디움 비박스(Plasmodium vivax), 바베시아 미크로티(Babesia microti), 트리파노소마 브루세이(Trypanosoma brucei), 트리파노소마 크루지(Trypanosoma cruzi), 리슈마니아 도노바니(Leishmania donovani), 톡소플라스마 곤디(Toxoplasma gondi), 및 니포스트론길루스 브라실리엔시스(Nippostrongylus brasiliensis)를 포함한다.
진단 용도 및 키트
키트
본 발명은 또한 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명은 또한 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 포함하는 키트를 제공한다.
키트는 치료적 용도에 그리고 진단 키트로서 사용될 수 있다.
키트는 생물학적 샘플 내의 PD-1, TIM-3, 또는 PD-1 및 TIM-3의 존재를 검출하기 위해 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 키트는 본 명세서에 기재된 본 발명의 항체 및 항체를 검출하기 위한 시약을 포함한다. 키트는 하기의 것들을 포함하는 하나 이상의 다른 요소들을 포함할 수 있다: 사용 설명서; 다른 시약, 예를 들어, 표지, 치료제, 또는 킬레이트화 또는 다른 커플링에 유용한 약제, 표지 또는 치료제에 대한 항체, 또는 방사선보호 조성물; 투여용 항체를 제조하기 위한 장치 또는 다른 재료; 약제학적으로 허용가능한 담체; 대상에게 투여하기 위한 장치 또는 다른 재료.
일부 실시 형태에서, 키트는 용기 내의 본 발명의 항체 및 키트의 사용 설명서를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 키트 내의 항체는 표지되어 있다.
일부 실시 형태에서, 키트는
서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 41의 VH 및 서열 번호 50의 VL;
서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 51의 VL;
서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 52의 VL;
서열 번호 42의 VH 및 서열 번호 53의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 54의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 50의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 55의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 56의 VL;
서열 번호 43의 VH 및 서열 번호 57의 VL;
서열 번호 44의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 46의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 49의 VL;
서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 53의 VL;
서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 52의 VL;
서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL;
서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 58의 VL;
서열 번호 47의 VH 및 서열 번호 59의 VL;
서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 60의 VL;
서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 61의 VL;
서열 번호 45의 VH 및 서열 번호 62의 VL;
서열 번호 63의 VH 및 서열 번호 65의 VL; 또는
서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함한다
일부 실시 형태에서, 키트는 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 키트는 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하는, PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 키트는
서열 번호 145의 VH 및 서열 번호 155의 VL;
서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL;
서열 번호 148의 VH 및 서열 번호 157의 VL;
서열 번호 147의 VH 및 서열 번호 155의 VL;
서열 번호 149의 VH 및 서열 번호 158의 VL;
서열 번호 150의 VH 및 서열 번호 159의 VL;
서열 번호 151의 VH 및 서열 번호 160의 VL;
서열 번호 152의 VH 및 서열 번호 161의 VL;
서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL;
서열 번호 154의 VH 및 서열 번호 163의 VL; 또는
서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 키트는 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 키트는 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하는, TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 키트는
각각 서열 번호 186, 188, 190, 및 193;
각각 서열 번호 186, 188, 191, 및 194;
각각 서열 번호 187, 189, 190, 및 193;
각각 서열 번호 187, 189, 191, 194;
각각 서열 번호 186, 188, 192, 및 195;
각각 서열 번호 186, 188, 248, 및 194;
각각 서열 번호 241, 188, 244, 195;
각각 서열 번호 241, 188, 245, 194;
각각 서열 번호 242, 189, 246, 194;
각각 서열 번호 243, 188, 246, 194; 또는
각각 서열 번호 243, 188, 247, 195의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함하는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 포함한다.
PD-1, TIM-3, 또는 PD-1 및 TIM-3을 검출하는 방법
본 발명은 또한, 샘플을 얻는 단계, 샘플을 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 접촉시키는 단계, 및 샘플 내의 PD-1에 결합된 항체를 검출하는 단계를 포함하는, 샘플 내의 PD-1을 검출하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 샘플을 얻는 단계, 샘플을 본 발명의 TIM-3과 특이적으로 결합하는 길항 항체와 접촉시키는 단계, 및 샘플 내의 TIM-3에 결합된 항체를 검출하는 단계를 포함하는, 샘플 내의 TIM-3을 검출하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 샘플을 얻는 단계, 샘플을 본 발명의 PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체와 접촉시키는 단계, 및 샘플 내의 PD-1 및 TIM-3에 결합된 항체를 검출하는 단계를 포함하는, 샘플 내의 PD-1 및 TIM-3을 검출하는 방법을 제공한다.
일부 실시 형태에서, 샘플은 소변, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 복수, 순환 세포, 순환 종양 세포, 조직과 회합되지 않은 세포(즉, 유리 세포), 조직(예를 들어, 외과적으로 절제된 종양 조직, 생검 - 미세 바늘 흡인물을 포함함), 조직 프레파라트 등으로부터 유래될 수 있다.
PD-1, TIM-3, 또는 PD-1 및 TIM-3에 결합된 본 발명의 항체는 공지된 방법을 사용하여 검출될 수 있다. 예시적인 방법은 형광 또는 화학발광 표지, 또는 방사성 표지를 사용한 항체의 직접 표지화, 또는 용이하게 검출가능한 모이어티, 예컨대 비오틴, 효소 또는 에피토프 태그의 본 발명의 항체에 대한 부착을 포함한다. 예시적인 표지 및 모이어티는 루테늄, 111In-DOTA, 111In-다이에틸렌트라이아민펜타아세트산(DTPA), 고추냉이 퍼옥사이드, 알칼리성 포스파타제 및 베타-갈락토시다제, 폴리-히스티딘(HIS 태그), 아크리딘 염료, 시아닌 염료, 플로오론 염료, 옥사진 염료, 페난트리딘 염료, 로다민 염료 및 Alexafluor® 염료이다.
본 발명의 항체는 샘플 내의 PD-1, TIM-3, 또는 PD-1 및 TIM-3을 검출하기 위한 다양한 검정에 사용될 수 있다. 예시적인 검정은 웨스턴 블롯(Western blot) 분석, 방사면역검정, 표면 플라즈몬 공명, 면역침전, 평형 투석, 면역확산, 전기화학발광(ECL) 면역검정, 면역조직화학, 형광-활성화 세포 분류(FACS), 또는 ELISA 검정이다.
본 발명의 추가의 실시 형태: 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체
본 명세서의 어딘가 다른 곳에 있는 본 개시내용에 따른 본 발명의 특정의 추가 실시 형태들이 하기에 나열되어 있다. 본 명세서에 개시된 본 발명과 관련된 것으로서 기재된 상기에 나열된 본 발명의 실시 형태들로부터의 특징은 또한 이들 추가의 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나와 관련된다.
본 발명의 추가의 실시 형태: 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체
본 명세서의 어딘가 다른 곳에 있는 본 개시내용에 따른 본 발명의 특정의 추가 실시 형태들이 하기에 나열되어 있다. 본 명세서에 개시된 본 발명과 관련된 것으로서 기재된 상기에 나열된 본 발명의 실시 형태들로부터의 특징은 또한 이들 추가의 넘버링된 실시 형태들 각각 하나하나와 관련된다.
1) PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
2) 실시 형태 1에 있어서, 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시키는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
3) 실시 형태 1 또는 실시 형태 2에 있어서, ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 +25℃에서 KD를 측정할 때,
a) 약 100 nM 미만의 해리 평형 상수(KD)로 인간 PD-1과 결합하거나;
b) 약 1 nM 미만의 KD로 인간 PD-1과 결합하거나;
c) 약 100 nM 미만의 KD로 사이노몰거스 PD-1과 결합하거나;
d) 약 1 nM 미만의 KD로 사이노몰거스 PD-1과 결합하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
4) 실시 형태 1 내지 실시 형태 3 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 갈렉틴-9에 대한 TIM-3의 결합을 저해하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
5) 실시 형태 1 내지 실시 형태 4 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이
a) 각각 서열 번호 82, 83, 및 84의 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) 1(HCDR1), 2(HCDR2), 및 3(HCDR3);
b) 각각 서열 번호 82, 83, 및 85의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3;
c) 각각 서열 번호 86, 87, 및 88의 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) 1(LCDR1), 2(LCDR2), 및 3(LCDR3);
d) 각각 서열 번호 82, 83, 및 84의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열 번호 86, 87, 및 88의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 아미노산 서열; 또는
e) 각각 서열 번호 82, 83, 및 85의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열 번호 86, 87, 및 88의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
6) 실시 형태 1 내지 실시 형태 5 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제2 도메인이
a) 각각 서열 번호 164, 165, 및 166의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 아미노산 서열;
b) 각각 서열 번호 167, 168, 및 169의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 아미노산 서열; 또는
c) 각각 서열 번호 164, 165, 및 166의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3 아미노산 서열, 및 각각 서열 번호 167, 168, 및 169의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3 아미노산 서열을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
7) 실시 형태 1 내지 실시 형태 6 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이
a) 각각 서열 번호 10, 13, 및 16;
b) 각각 서열 번호 10, 14, 및 16;
c) 각각 서열 번호 10, 13, 및 17;
d) 각각 서열 번호 10, 13, 및 18;
e) 각각 서열 번호 10, 14, 및 17;
f) 각각 서열 번호 11, 15, 및 18;
g) 각각 서열 번호 10, 13, 및 19;
h) 각각 서열 번호 12, 13, 및 19; 또는
i) 각각 서열 번호 66, 67, 및 68의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
8) 실시 형태 1 내지 실시 형태 7 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이
a) 각각 서열 번호 20, 26, 및 31;
b) 각각 서열 번호 21, 26, 및 32;
c) 각각 서열 번호 22, 27, 및 33;
d) 각각 서열 번호 22, 26, 및 34;
e) 각각 서열 번호 23, 28, 및 35;
f) 각각 서열 번호 20, 26, 및 36;
g) 각각 서열 번호 21, 27, 및 37;
h) 각각 서열 번호 23, 26, 및 32;
i) 각각 서열 번호 22, 26, 및 32;
j) 각각 서열 번호 24, 26, 및 38;
k) 각각 서열 번호 20, 29, 및 39;
l) 각각 서열 번호 20, 30, 및 32;
m) 각각 서열 번호 25, 26, 및 40;
n) 각각 서열 번호 24, 26, 및 32; 또는
o) 각각 서열 번호 69, 70, 및 71의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
9) 실시 형태 1 내지 실시 형태 8 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제2 도메인이
a) 각각 서열 번호 90, 99, 및 107;
b) 각각 서열 번호 91, 99, 및 108;
c) 각각 서열 번호 91, 99, 및 109;
d) 각각 서열 번호 92, 100, 및 110;
e) 각각 서열 번호 93, 101, 및 111;
f) 각각 서열 번호 94, 102, 및 112;
g) 각각 서열 번호 95, 103, 및 113;
h) 각각 서열 번호 96, 104, 및 114;
i) 각각 서열 번호 97, 105, 및 115; 또는
j) 각각 서열 번호 98, 106, 및 116의 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
10) 실시 형태 1 내지 실시 형태 9 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제2 도메인이
a) 각각 서열 번호 117, 126, 및 135;
b) 각각 서열 번호 118, 127, 및 136;
c) 각각 서열 번호 119, 128, 및 137;
d) 각각 서열 번호 120, 129, 및 139;
e) 각각 서열 번호 121, 130, 및 140;
f) 각각 서열 번호 122, 131, 및 141;
g) 각각 서열 번호 123, 132, 및 142;
h) 각각 서열 번호 124, 133, 및 143; 또는
i) 각각 서열 번호 125, 134, 및 144의 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
11) 실시 형태 1 내지 실시 형태 10 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이
a) 각각 서열 번호 10, 13, 16, 20, 26, 및 31;
b) 각각 서열 번호 10, 13, 16, 21, 26, 및 32;
c) 각각 서열 번호 10, 14, 16, 22, 27, 및 33;
d) 각각 서열 번호 10, 14, 16, 22, 26, 및 34;
e) 각각 서열 번호 10, 14, 16, 23, 28, 및 35;
f) 각각 서열 번호 10, 13, 17, 20, 26, 및 31;
g) 각각 서열 번호 10, 13, 17, 20, 26, 및 36;
h) 각각 서열 번호 10, 13, 17, 21, 26, 및 32;
i) 각각 서열 번호 10, 13, 17, 21, 27, 및 37;
j) 각각 서열 번호 10, 13, 17, 23, 26, 및 32;
k) 각각 서열 번호 10, 13, 17, 22, 26, 및 32;
l) 각각 서열 번호 10, 13, 18, 20, 26, 및 31;
m) 각각 서열 번호 11, 15, 18, 20, 26, 및 31;
n) 각각 서열 번호 10, 13, 19, 20, 26, 및 31;
o) 각각 서열 번호 12, 13, 19, 20, 26, 및 31;
p) 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 28, 및 35;
q) 각각 서열 번호 10, 14, 17, 22, 26, 및 34;
r) 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32;
s) 각각 서열 번호 12, 13, 19, 24, 26, 및 38;
t) 각각 서열 번호 12, 13, 19, 20, 29, 및 39;
u) 각각 서열 번호 11, 15, 18, 20, 30, 및 32;
v) 각각 서열 번호 11, 15, 18, 25, 26, 및 40;
w) 각각 서열 번호 11, 15, 18, 24, 26, 및 32; 또는
x) 각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
12) 실시 형태 1 내지 실시 형태 12 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제2 도메인이
a) 각각 서열 번호 90, 99, 107, 117, 126, 및 135;
b) 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136;
c) 각각 서열 번호 91, 99, 109, 119, 128, 및 137;
d) 각각 서열 번호 92, 100, 110, 117, 126, 및 135;
e) 각각 서열 번호 93, 101, 111, 120, 129, 및 139;
f) 각각 서열 번호 94, 102, 112, 121, 130, 및 140;
g) 각각 서열 번호 95, 103, 113, 122, 131, 및 141;
h) 각각 서열 번호 96, 104, 114, 123, 132, 및 142;
i) 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143; 또는
j) 각각 서열 번호 98, 106, 116, 125, 134, 및 144의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
13) 실시 형태 1 내지 실시 형태 12 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인이 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
14) 실시 형태 1 내지 실시 형태 12 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인이 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
15) 실시 형태 1 내지 실시 형태 12 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이 각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인이 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
16) 실시 형태 1 내지 실시 형태 12 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이 각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인이 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체. 또는
17) 실시 형태 1 내지 실시 형태 12 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고, 제2 도메인이 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
18) 실시 형태 1 내지 실시 형태 17 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이 서열 번호 48의 중쇄 가변 영역(VH) 및 서열 번호 56의 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하고, 제2 도메인이 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
19) 실시 형태 1 내지 실시 형태 17 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고, 제2 도메인이 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
20) 실시 형태 1 내지 실시 형태 17 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, 제2 도메인이 서열 번호 153의 VH 및 서열 번호 162의 VL을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
21) 실시 형태 1 내지 실시 형태 17 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이 서열 번호 64의 VH 및 서열 번호 65의 VL을 포함하고, 제2 도메인이 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
22) 실시 형태 1 내지 실시 형태 17 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 도메인이 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고, 제2 도메인이 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
23) 실시 형태 1 내지 실시 형태 22 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)를 포함하며, 여기서 HC1 및 LC1은
a) 각각 서열 번호 186 및 188;
b) 각각 서열 번호 187 및 189;
c) 각각 서열 번호 241 및 188;
d) 각각 서열 번호 242 및 189; 또는
e) 각각 서열 번호 243 및 188의 아미노산 서열을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
24) 실시 형태 1 내지 실시 형태 23 중 어느 한 실시 형태에 있어서, HC2 및 LC2가
a) 각각 서열 번호 190 및 193;
b) 각각 서열 번호 191 및 194;
c) 각각 서열 번호 192 및 195;
d) 각각 서열 번호 248 및 194;
e) 각각 서열 번호 244 및 195;
f) 각각 서열 번호 245 및 194;
g) 각각 서열 번호 246 및 194; 또는
h) 각각 서열 번호 247 및 195의 아미노산 서열을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
25) 실시 형태 1 내지 실시 형태 24 중 어느 한 실시 형태에 있어서,
a) 각각 서열 번호 186, 188, 190, 및 193;
b) 각각 서열 번호 186, 188, 191, 및 194;
c) 각각 서열 번호 187, 189, 190, 및 193;
d) 각각 서열 번호 187, 189, 191, 194;
e) 각각 서열 번호 186, 188, 192, 및 195;
f) 각각 서열 번호 186, 188, 248, 및 194;
g) 각각 서열 번호 241, 188, 244, 195;
h) 각각 서열 번호 241, 188, 245, 194;
i) 각각 서열 번호 242, 189, 246, 194;
j) 각각 서열 번호 243, 188, 246, 194; 또는
k) 각각 서열 번호 243, 188, 247, 195의 HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3.
26) 실시 형태 1 내지 실시 형태 25 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 인간 항체 또는 인간화 항체인 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
27) 실시 형태 1 내지 실시 형태 26 중 어느 한 실시 형태에 있어서, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 동종형의 것인 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
28) 실시 형태 1 내지 실시 형태 27 중 어느 한 실시 형태에 있어서, IgG2 동종형의 것인 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
29) 실시 형태 1 내지 실시 형태 28 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 항체 Fc 내에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 치환을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
30) 실시 형태 1 내지 실시 형태 29 중 어느 한 실시 형태에 있어서,
a) L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S, 및 P331S 치환;
b) V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환;
c) F234A, L235A, G237A, P238S, 및 Q268A 치환;
d) L234A, L235A, 또는 L234A 및 L235A 치환;
e) F234A, L235A, 또는 F234A 및 L235A 치환;
f) V234A 치환; 또는
g) S228P, F234A, 및 L235A 치환을 포함하며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따르는, 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
31) 실시 형태 1 내지 실시 형태 30 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 항체 CH3 불변 도메인 내에 하나 이상의 치환을 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
32) 실시 형태 1 내지 실시 형태 31 중 어느 한 실시 형태에 있어서, 항체 CH3 불변 도메인 내의 치환이 K409R, F405L, 또는 F405L/R409K 치환이고, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따르는, 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
33) 실시 형태 1 내지 실시 형태 32 중 어느 한 실시 형태에 있어서,
a) HC1 내의 F405L 치환 및 HC2 내의 K409R 치환을 포함하며 IgG1 동종형이거나;
b) HC1 내의 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, P331S, 및 F405L 치환 및 HC2 내의 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, P331S, 및 K409R 치환을 포함하며 IgG2 동종형이거나;
c) HC1 내의 S228P 치환 및 HC2 내의 S228P, F405L, 및 R409K 치환을 포함하며 IgG4 동종형인 이중특이성 PD1/TIM-3 항체.
34) 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
35) 실시 형태 23 내지 실시 형태 25 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 HC1, LC1, HC2, 또는 LC2를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드.
36) 실시 형태 35의 HC1, LC1, HC2, LC2, HC1 및 LC1, 또는 HC2 및 LC2를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
37) 실시 형태 36의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
38) 항체가 발현되는 조건에서 실시 형태 37의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 숙주 세포에 의해 생성된 이중특이성 PD1/TIM-3 항체를 회수하고 정제하는 단계를 포함하는, 실시 형태 25, 실시 형태 26, 또는 실시 형태 27의 이중특이성 PD1/TIM-3 항체를 생성하는 방법.
39)
a) 2개의 동일한 HC1 및 2개의 동일한 LC1을 갖는 단일특이성 2가 PD-1 항체, 및 2개의 동일한 HC2 및 2개의 동일한 LC2를 갖는 단일특이성 2가 TIM-3 항체를 약 1:1 몰비의 혼합물로 조합하는 단계;
b) 혼합물 내로 환원제를 도입하는 단계;
c) 혼합물을 약 90 분 내지 약 6 시간 인큐베이션하는 단계;
d) 환원제를 제거하는 단계; 및
e) HC1, LC1, HC2, 및 LC2를 포함하는 이중특이성 PD1/TIM-3 항체를 정제하는 단계를 포함하는, 실시 형태 25의 이중특이성 PD1/TIM-3 항체를 생성하는 방법.
40) 실시 형태 39에 있어서, 환원제가 2-메르캅토에탄올아민(2-MEA)인 방법.
41) 실시 형태 40에 있어서,
a) 2-MEA가 약 25 mM 내지 약 75 mM의 농도로 존재하고;
b) 인큐베이션하는 단계가 약 25®C 내지 약 37®C의 온도에서 수행되는 방법.
42) 암의 치료에 사용하기 위한, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
43) 실시 형태 42에 따라 사용하기 위한, 암이 고형 종양 또는 혈액성 악성종양인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
44) 실시 형태 42 또는 실시 형태 43에 따라 사용하기 위한, 고형 종양이 흑색종, 폐암, 편평상피 비-소세포 폐암(NSCLC), 비-편평상피 NSCLC, 결장직장암, 전립선암, 거세-저항성 전립선암, 위암, 난소암, 위장암, 간암, 췌장암, 갑상선암, 두경부의 편평상피세포 암종, 식도 또는 위장관의 암종, 유방암, 나팔관암, 뇌암, 요도암, 비뇨생식기암, 자궁내막증, 자궁경부암, 또는 암의 전이 병변인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
45) 실시 형태 42 또는 실시 형태 43에 따라 사용하기 위한, 혈액성 악성종양이 림프종, 골수종, 또는 백혈병인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
46) 대상에서 면역 반응을 향상시키기 위해 사용하기 위한, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
47) 실시 형태 46에 따라 사용하기 위한, 대상이 암 또는 바이러스 감염을 갖는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
48) 실시 형태 42 내지 실시 형태 47 중 어느 한 실시 형태에 따라 제2 치료제와 병용하여 사용하기 위한, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
49) 실시 형태 42 내지 실시 형태 48 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 제2 치료제가 고형 종양 또는 혈액성 악성종양의 치료를 위한 치료 기준 약물인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
50) 실시 형태 42 내지 실시 형태 49 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 제2 치료제가 T 세포 활성화 분자의 작용제인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
51) 실시 형태 42 내지 실시 형태 50 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, T 세포 활성화 분자가 CD86, CD80, CD28, ICOS, ICOS 리간드, TMIGD2, CD40, TL1A, GITR 리간드, 4-1BB 리간드, OX40 리간드, CD70, CD40L, TNFRSF25, LIGHT, GITR, OX-40, CD27, CD137, NKG2D, CD48, CD226, 또는 MICA인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
52) 실시 형태 42 내지 실시 형태 51 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 작용제가 T 세포 활성화 분자와 특이적으로 결합하는 항체인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
53) 실시 형태 42 내지 실시 형태 52 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 제2 치료제가 T 세포 저해 분자의 저해제인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
54) 실시 형태 42 내지 실시 형태 53 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, T 세포 저해 분자가 PD-1, PD-L1, PD-L2, VISTA, BTNL2, B7-H3, B7-H4, HVEM, HHLA2, CTLA-4, LAG-3, TIM-3, BTLA, CD160, CEACAM-1, LAIR1, TGFβ, IL-10, Siglec 패밀리, KIR, CD96, TIGIT, NKG2A, CD112, CD47, SIRPA, 또는 CD244인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
55) 실시 형태 42 내지 실시 형태 54 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 저해제 또는 T 세포 저해 분자가 T 세포 저해 분자와 특이적으로 결합하는 항체인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
56) 실시 형태 42 내지 실시 형태 55 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 제2 치료제가 백신인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
57) 실시 형태 42 내지 실시 형태 56 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 백신이 종양 세포 상에서 발현되는 폴리펩티드 또는 그의 단편, 또는 폴리펩티드 또는 그의 단편을 인코딩하는 DNA 또는 RNA인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
58) 실시 형태 42 내지 실시 형태 57 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 폴리펩티드가 PSMA, 메소텔린, EGFR, 또는 EGFRvIII인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
59) 실시 형태 42 내지 실시 형태 58 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 제2 치료제가 동시에, 순차적으로, 또는 별도로 투여되는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
60) 실시 형태 42 내지 실시 형태 59 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 대상이 방사선 요법으로 치료된 적이 있거나 치료 중인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
61) 실시 형태 42 내지 실시 형태 60 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 환자가 수술을 받은 적이 있거나 받을 예정인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
62) 실시 형태 42 내지 실시 형태 61 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 대상이 PD-1 항체로 치료된 적이 있거나 치료 중인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
63) 실시 형태 42 내지 실시 형태 62 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 대상이 PD-1 항체를 이용한 치료에 대해 불응성인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
64) 실시 형태 42 내지 실시 형태 63 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 대상이 PD-1 항체를 이용한 치료에 대해 저항성인, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
65) 실시 형태 42 내지 실시 형태 64 중 어느 한 실시 형태에 따라 사용하기 위한, 이중특이성 항체의 제1 도메인이 서열 번호 48의 VL 및 서열 번호 56의 VL을 포함하고, 이중특이성 항체의 제2 도메인이 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에 따른 이중특이성 PD1/TIM-3 항체 또는 실시 형태 34에 따른 약제학적 조성물.
66) 요법에 사용하기 위한, 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에서와 같은 항체.
67) 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에서와 같은 항체에 결합하는 항-이디오타입 항체.
68) 실시 형태 1 내지 실시 형태 33 중 어느 한 실시 형태에서와 같은 항체를 포함하는 키트.
69) 실시 형태 68에 있어서, 항체를 검출하기 위한 시약 및 사용 설명서를 추가로 포함하는 키트.
이제 본 발명을 하기의 구체적인 비제한적 실시예를 참조하여 설명할 것이다.
실시예 1. 일반적인 방법
정제된 인간 혼합 림프구 반응(MLR)
CD4+ T 세포 및 수지상 세포의 공동-배양물에 시험 항체를 첨가함으로써 유도되는 사이토카인 생성의 변화를 측정하기 위해, 정제된 인간 혼합 림프구 반응(MLR 검정)을 사용하였다.
말초 혈액 단핵구(PBMC)는 피콜 구배를 사용하여 leukopak(Biological Specialty Corporation)으로부터 단리하였다. 이어서, CD4+ T 세포를 Miltenyi AutoMACS 및 CD4+ T 세포 단리 비드를 사용하여 제조사의 설명서에 따라 PBMC로부터 음성 선택에 의해 새로 단리하거나 냉동 CD4+ T 세포(Hemacare Corporation)로서 구매하였다. 하나의 수지상 세포 공여자(Hemacare Corporation)를 사용하였다. 단리 또는 해동 후에, CD4+ T 세포 및 수지상 세포를 세척하고 검정 배지(10% 우태아 혈청, 1% 페니실린/스트렙토마이신, 1X 비-필수 아미노산, 및 1X 소듐 피루베이트-Invitrogen로 보충된 RMPI1640 배지)에 재현탁하였다. 정제된 인간 CD4+ T 세포는 1x106 세포/mL로 희석하고 100,000 세포/100 μL/웰로 접종하였다. 수지상 세포는 0.1x106 세포/mL로 희석하고 5,000 세포/50 μL/웰로 U-바닥 플레이트에 접종하였다. 시험 항체 또는 대조군 항체를 검정 배지 중에 4X 농도로 제조하여, 50 μL의 항체를 150 μL의 세포에 첨가했을 경우에 1X가 되도록 하였다.
시험 항체 또는 대조군 항체의 10-지점 연속 희석액을 하기 최종 농도로 웰에 첨가하였다: 30, 10, 3.33, 1.11, 0.37, 0.12, 0.04, 0.01, 0.0046, 및 00015 nM. 기본 사이토카인 분비를 측정하기 위해, CD4+ T 세포 플러스 수지상 세포 및 수지상 세포 단독을 대조군으로서 포함하였다. 세포를 37℃, 5% CO2에서 5 일 동안 유지하였다. 제5일에, 100 μL의 조직 배양 상청액을 배양 플레이트로부터 제거하고 V-바닥 플레이트에 이전하였다. 상청액을 적어도 밤새 -80℃에서 냉동시켰다. Meso Scale Discovery(MSD) Th1/Th2 인간 사이토카인 10-플렉스 플레이트를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 조직 배양 상청액 내의 누적 사이토카인 생성을 측정하였다. 간략하게 말하면, MSD 플레이트를 1% 차단제 B로 밤새 4℃에서 차단하였다. 다음 날에, 차단제를 제거하고 Biotek 406 플레이트 세척기를 사용하여 플레이트를 세척하였다. 8-지점 표준 곡선을 제조하고 이중실험으로 플레이트에 첨가하였다. 해동된 조직 배양 상청액을 25 μL/웰로 첨가하고, 플레이트를 밀봉하고, 1.5 시간 동안 격렬하게 진탕하였다. 표준품 또는 상청액을 제거하지 않고, 25 μL의 검출 항체를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고, 1.5 시간 동안 격렬하게 진탕하였다. 플레이트를 세척하고, 판독 완충액을 첨가하고, Meso Scale Discovery의 플레이트 판독기를 사용하여 플레이트를 판독하였다.
MSD 소프트웨어에 의해 사이토카인 농도를 계산하였다. 미지 샘플 내의 사이토카인의 농도는 미지 샘플의 출력 신호를 표준 곡선 내의 공지 사이토카인 농도의 출력 신호에 비교함으로써 계산한다. 계산된 농도를 시각화를 위해 Spotfire TIBCO 소프트웨어에 업로딩하였다. 데이터의 시각 조사 후에, 로그-변환된 데이터 상에서 이상값을 확인하고 배제하기 위해, 3.5의 임계값을 가진 MAD-중앙값 이상값 절차를 사용하였다. 각각의 항체에 대해 각각의 사이토카인에 반수 영향 농도의 강건성 분석(강건성 EC50)을 실행하였다.
CMV 검정
CMV 전체 항원(PD-1 항체의 경우) 또는 65 kd 인단백질(pp65)을 통해 중첩되는 138 15-량체 펩티드의 풀(TIM-3 mAb 및 PD1/TIM-3 이중특이성 mAb의 경우)을 가진 말초 혈액 단핵구(PBMC)의 배양물에 시험 항체를 첨가함으로써 유도된 사이토카인 생성의 변화를 측정하기 위해 사이토메갈로바이러스 항원 리콜 검정(CMV 검정)을 사용하였다.
해동 후에, PBMC(Astarte Biologics 및 Hemcare Corporation)를 세척하고 검정 배지(10% 우태아 혈청, 1% 페니실린/스트렙토마이신, 1X 비-필수 아미노산, 및 1X 소듐 피루베이트-Invitrogen로 보충된 RMPI1640 배지)에 재현탁하였다. PBMC를 1.5x106 세포/mL로 희석하고 150,000 세포/100 μL/웰로 접종하였다. CMV 항원(Astarte Biologics)을 검정 배지 중에 0.4 ㎍/mL의 4X 농도로 제조하여 50 μL의 항원을 100 μL의 세포 및 50 μL의 항체에 첨가했을 경우에 0.1 ㎍/mL가 되도록 하였다. 항체를 검정 배지 중에 4X 농도로 제조하여, 50 μL의 항체를 세포 및 펩티드에 첨가했을 경우에 1X가 되도록 하였다.
시험 항체의 연속 희석액을 150 내지 0.001 nM의 최종 농도로 웰에 첨가하였다. 기본 사이토카인 분비를 측정하기 위해, 대조군으로서 세포 플러스 CMV 항원 또는 pp65 풀, 세포 단독, 및 50 또는 30 nM의 최종 농도로 제조된 동종형 대조군을 포함하였다. 세포를 37℃, 5%CO2에서 6 일 동안 유지하였다. MSD 분석을 위해, 제6일에, 100 μL의 조직 배양 상청액을 배양 플레이트로부터 제거하고 V-바닥 플레이트에 이전하였다. 상청액을 적어도 밤새 -80℃에서 냉동시켰다. Meso Scale Discovery(MSD) Th1/Th2 인간 사이토카인 10-플렉스 플레이트를 사용하여 제조사의 프로토콜에 따라 조직 배양 상청액 내의 누적 사이토카인 생성을 측정하였다. 간략하게 말하면, MSD 플레이트를 1% 차단제 B로 밤새 4℃에서 차단하였다. 다음 날에, 차단제를 제거하고 Biotek 406 플레이트 세척기를 사용하여 플레이트를 세척하였다. 8-지점 표준 곡선을 제조하고 이중실험으로 플레이트에 첨가하였다. 해동된 조직 배양 상청액을 25 μL/웰로 첨가하고, 플레이트를 밀봉하고, 1.5 시간 동안 격렬하게 진탕하였다. 표준품 또는 상청액을 제거하지 않고, 25 μL의 검출 항체를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고, 1.5 시간 동안 격렬하게 진탕하였다. 플레이트를 세척하고, 판독 완충액을 첨가하고, Meso Scale Discovery의 플레이트 판독기를 사용하여 플레이트를 판독하였다.
MSD 소프트웨어에 의해 사이토카인 농도를 계산하였다. 미지 샘플 내의 사이토카인의 농도는 미지 샘플의 출력 신호를 표준 곡선 내의 공지 사이토카인 농도의 출력 신호에 비교함으로써 계산한다. 계산된 농도를 시각화를 위해 Spotfire TIBCO 소프트웨어에 업로딩하였다. 데이터의 시각 조사 후에, 로그-변환된 데이터 상에서 이상값을 확인하고 배제하기 위해, 3.5의 임계값을 가진 MAD-중앙값 이상값 절차를 사용하였다. 각각의 항체에 대해 각각의 사이토카인에 반수 영향 농도의 강건성 분석(강건성 EC50)을 실행하였다.
TIM-3 항체 및 PD1/TIM-3 이중특이성 항체의 경우, 제6일에, MSD 분석을 위해 상청액을 수집한 후, 세포를 PBS로 1회 세척하고, 이어서 생/사 판별 및 하기 세포 표면 표지자를 위해 염색하였다: CD3, CD4, CD8, CD137, PD-1, 및 TIM-3. LSR Fortessa(BD) 상에서 유세포측정을 수행하였다. Flow Jo 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다. 생존가능 CMV-처리 CD8+ 및 CD4+ 세포에 대한 형광 마이너스 1(FMO: Fluorescence Minus One) 방법에 기초하여 CD137+ 세포를 확인하였다.
순차적 처리 실험의 경우, pp65 펩티드 풀 자극으로 6 일 동안 상기와 같이 CMV 리콜 검정을 실행하였다. 제6일에, 상청액을 제거하고 항-TIM-3 항체의 존재 하에 pp65 풀로 세포를 재자극하였다. 24 시간 후에, 상청액을 제거하고 상기 기재된 바와 같이 MSD에 의해 IFN-γ 수준을 측정하였다.
PD-1 리간드 저해 검정
리간드 저해 검정 설계는 MSD(Mescoscale Discovery)에 기초하였다. MSD 플레이트를 리간드(cynoPDL1-ECD, huPDL1-ECD, 또는 huPDL2-ECD)로 직접 코팅하고 4℃에서 밤새 인큐베이션하였다. 다음 날에, 코팅 용액을 제거하고 플레이트를 차단하였다. 고정 농도의 비오티닐화 PD-1(huPD1-ECD)을 항체와 함께, 또는 음성 대조군으로서 동종형 대조군 항체와 함께 사전 인큐베이션하였다. 시험하고자 하는 항체의 패널에 따라, 적정으로서, 또는 고정 농도에서 항체를 시험하였다. MSD 플레이트를 세척하고, 비오티닐화 PD-1/ 항체 혼합물을 리간드 코팅된 MSD 플레이트에 첨가하였다. 플레이트를 세척하고, 리간드에 결합된 비오티닐화 PD-1을 루테닐화 스트렙타비딘에 의해 검출하였다. 항체에 의한 PD-1 결합의 저해는 MSD 검정에서 감소된 신호를 유발했다. 저해제의 부재 하의 최대 비오티닐화 PD-1 결합을 결정하였으며, 때때로 데이터를 최대 비오티닐화 PD-1 신호의 백분율로 정규화하기 위해 사용하였다. 하나의 농도에서 리간드 결합의 저해에 대해 양성이었던 mAb를 또한 다양한 PD-1 리간드의 저해에 대한 용량 반응으로 시험하였다.
저캇 세포(Jurkat cell) 결합
저캇 세포를 20 ng/ml의 PHA로 밤새 자극하고, 수확하고, 세척하고, 생존율을 확인하였다. 이어서, 세포를 6 내지 10℃에서 45 내지 60 분 동안 다양한 농도의 시험 항체와 함께 인큐베이션하고, 세척하여 6 내지 10℃에서 45 내지 60 분 동안 FITC-표지된 염소 항-인간 IgG와 함께 인큐베이션하였다. 세포를 세척하여 BD Cytofix로 고정하고, 밤새 냉장하고 MACSQuant 유세포측정기 상에서 분석하였다. 각각의 항체 농도에서의 PD-1 양성 세포의 백분율을 항체 농도의 로그에 대해 플로팅하고 Prism에서 EC50 값을 생성하였다.
친화도 측정
PD-1 mAb
항-PD-1 mAb를 huPD1-ECD 및 cynoPD-1-ECD에 대한 결합 친화도에 대해 시험하였다. 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하는 친화도 측정을 ProteOn XPR36 시스템을 사용하여 수행하였다. 아민-커플링 화학에 대한 제조사의 설명서를 사용하여, 항-IgG Fc의 혼합물을 GLC 칩의 변형된 알기네이트 중합체 층 표면에 커플링함으로써 바이오센서 표면을 제조하였다. 시험 mAb를 포획하고 분석물(huPD1-ECD 또는 cynoPD1-ECD)과 그의 상호작용을 25℃에서 PBS-기반의 완충액 중에 모니터링하였다. 수집된 데이터를 처리하고 랭뮤어(Langmuir) 1:1 결합 모델에 적합시켰다. 각각의 mAb에 대한 결과는 k on(결합-속도), k off(해리-속도), 및 KD(평형 해리 상수)의 체제로 보고되었다.
TIM-3 리간드 저해 검정
96-웰 White Maxisorp 플레이트(Nunc)의 웰 당 PBS 중의 1 ㎍/ml 재조합 인간 Fc-TIM-3 키메라(R&D Systems-cat#: 2365-TM-05)를 결합시킴으로써 TIM-3/갈렉틴-9 경쟁 ELISA를 실행하였다. 플레이트를 세척하고, StartingBlock T20(Pierce)으로 차단하고, 저해제를 10 ㎍/ml 농도로 웰에 첨가하였다. 세척 없이, 7.5 ㎍/ml 갈렉틴-9를 웰에 첨가하고 30 min 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 항-갈렉틴-9-비오틴 항체 다클론 항체(R&D Systems)를 0.5 ㎍/mL로 첨가하고 30 분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고 뉴트라비딘-HRP-접합체(Pierce)를 첨가하고 플레이트를 추가적인 45 분 동안 인큐베이션하였다. 플레이트를 세척하고, POD 화학발광 기질(Roche)을 플레이트 판독 직전에 첨가하고, 광도기 상에서 발광을 판독하였다.
본 연구에 사용된 항원의 생성
표준 방법을 사용하여 항원의 클로닝, 발현 및 정제를 행하였다. 다양한 단백질 단편을 헥사히스티딘 태그 또는 Fc 융합 단백질로서 발현시켰다. 사용된 단백질의 아미노산 서열을 태그 서열 없이 서열 번호 1 내지 9, 138, 및 89에 나타낸다.
전장 인간 PD1 (huPD1); 서열 번호 1
Figure pct00007
Figure pct00008
인간 PD1의 세포외 도메인(huPD1-ECD); 서열 번호 2
PGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTL
마카카 파시쿨라리스 (사이노몰거스, 본 명세서에서는 사이노로 지칭됨) PD1 (cPD1); 서열 번호 3)
PGWFLESPDRPWNAPTFSPALLLVTEGDNATFTCSFSNASESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTRLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQALVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAAQGTIEARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPAPCVPEQTEYATIVFPSGLGTSSPARRGSADGPRSPRPLRPEDGHCSWPL
사이노 PD1의 세포외 도메인(cPD1-ECD); 서열 번호 4
PGWFLESPDRPWNAPTFSPALLLVTEGDNATFTCSFSNASESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTRLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQAL
전장 인간 PD-L1(huPD-L1); 서열 번호 5
FTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNER
인간 PD-L1의 세포외 도메인(huPDL1-ECD) 서열 번호 6
FTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLAALIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSSYRQRARLLKDQLSLGNAALQITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLFNVTSTLRINTTTNEIFYCTFRRLDPEENHTAELVIPELPLAHPPNERT
사이노몰거스 PD-L1의 세포외 도메인(cynoPDL1-ECD) 서열 번호 7
AFTVTVPKDLYVVEYGSNMTIECKFPVEKQLDLTSLIVYWEMEDKNIIQFVHGEEDLKVQHSNYRQRAQLLKDQLSLGNAALRITDVKLQDAGVYRCMISYGGADYKRITVKVNAPYNKINQRILVVDPVTSEHELTCQAEGYPKAEVIWTSSDHQVLSGKTTTTNSKREEKLLNVTSTLRINTTANEIFYCIFRRLDPEENHTAELVIPELPLALPPNERT
인간 PD-L2의 세포외 도메인(huPDL2-ECD) 서열 번호 8
LFTVTVPKELYIIEHGSNVTLECNFDTGSHVNLGAITASLQKVENDTSPHRERATLLEEQLPLGKASFHIPQVQVRDEGQYQCIIIYGVAWDYKYLTLKVKASYRKINTHILKVPETDEVELTCQATGYPLAEVSWPNVSVPANTSHSRTPEGLYQVTSVLRLKPPPGRNFSCVFWNTHVRELTLASIDLQSQMEPRTHPT
마우스 PD1의 세포외 도메인(musPD1-ECD) 서열 번호 9
LEVPNGPWRSLTFYPAWLTVSEGANATFTCSLSNWSEDLMLNWNRLSPSNQTEKQAAFCNGLSQPVQDARFQIIQLPNRHDFHMNILDTRRNDSGIYLCGAISLHPKAKIEESPGAELVVTERILETSTRYPSPSPKPEGRFQ
전장 인간 TIM-3, 서열 번호 138
SEVEYRAEVGQNAYLPCFYTPAAPGNLVPVCWGKGACPVFECGNVVLRTDERDVNYWTSRYWLNGDFRKGDVSLTIENVTLADSGIYCCRIQIPGIMNDEKFNLKLVIKPAKVTPAPTRQRDFTAAFPRMLTTRGHGPAETQTLGSLPDINLTQISTLANELRDSRLANDLRDSGATIRIGIYIGAGICAGLALALIFGALIFKWYSHSKEKIQNLSLISLANLPPSGLANAVAEGIRSEENIYTIEENVYEVEEPNEYYCYVSSRQQPSQPLGCRFAMP
인간 TIM-3의 세포외 도메인(huTIM-3-ECD) 서열 번호 89
SEVEYRAEVGQNAYLPCFYTPAAPGNLVPVCWGKGACPVFECGNVVLRTDERDVNYWTSRYWLNGDFRKGDVSLTIENVTLADSGIYCCRIQIPGIMNDEKFNLKLVIKPAKVTPAPTRQRDFTAAFPRMLTTRGHGPAETQTLGSLPDINLTQISTLANELRDSRLANDLRDSGATIR
실시예 2. 파지 디스플레이 라이브러리로부터의 인간 항-PD-1 항체의 선택
문헌[Shi et al., J Mol Biol 397:385-96, 2010], 국제 특허 출원 공개 WO2009/085462호, 및 미국 특허 출원 공개US2010/0021477호에 기재된 바와 같이 드 노보 pIX 파지 디스플레이 라이브러리로부터 PD-1 결합 Fab를 선택하였다. 간략하게 말하면, 인간 스캐폴드를 다양화함으로써 라이브러리를 생성하였으며, 여기서는 생식세포계열 VH 유전자 IGHV1-69*01, IGHV3-23*01, 및 IGHV5-51*01을 H3 루프를 통해 인간 IGHJ-4 미니유전자와 재조합하고, 인간 생식세포계열 VL 카파 유전자 O12(IGKV1-39*01), L6(IGKV3-11*01), A27(IGKV3-20*01), 및 B3(IGKV4-1*01)을 IGKJ-1 미니유전자와 재조합하여 완전한 VH 및 VL 도메인을 조립하였다. 단백질 및 펩티드 항원과 빈번하게 접촉하는 것으로 확인된 위치들에 상응하는 H1, H2, L1, L2 및 L3 루프 주위의 중쇄 및 경쇄 가변 영역 내의 위치들을 다양화를 위해 선택하였다. 선택된 위치들에서의 서열 다양성을 각각의 IGHV 또는 IGLV 유전자들의 IGHV 또는 IGLV 생식세포계열 유전자 패밀리 내의 각각의 위치에서 발생하는 잔기들로 제한하였다. 길이 7 내지 14개 아미노산의 짧은 크기 내지 중간 크기의 합성 루프를 이용함으로써 H3 루프에서의 다양성을 생성하였다. 인간 항체에서 관찰되는 아미노산의 변이를 모방하도록 H3에서의 아미노산 분포를 설계하였다. 라이브러리 설계는 문헌[Shi et al., (2010) J Mol Biol 397:385-96]에 상세히 기재되어 있다. 라이브러리를 생성하는 데 이용된 스캐폴드들은 그들의 인간 VH 및 VL 생식세포계열 유전자 기원에 따라 명명하였다. 3개의 중쇄 라이브러리를 4개의 생식세포계열 경쇄와 조합하거나 다양화된 경쇄 라이브러리와 조합하여 12개의 독특한 VH:VL 조합을 생성하였다. 이러한 라이브러리를 PD-1에 대한 패닝(panning) 실험을 위해 추가적인 라이브러리를 생성하기 위한 라이브러리 버전에 기초하여 이후에 추가로 조합하였다.
라이브러리를 huPD1-ECD, cynoPD1-ECD, musPD1-ECD, huPD1-Fc, 및/또는 musPD1-Fc에 대해 패닝하였다. 재조합 단백질을 비오티닐화(bt)하고 스트렙타비딘 자기 비드(Dynal) 상에 포획한 후, 100 nM 또는 10 nM의 최종 농도에서 드 노보 pIX Fab 라이브러리에 노출시켰다. 비-특이적 파지는 PBS-Tween 중에 세척해내고, 결합된 파지는 MC1061F' E. 콜라이 세포의 감염에 의해 회수하였다. 이러한 세포로부터 파지를 밤새 증폭하고 총 3 또는 4 라운드 동안 패닝을 반복하였다. 바이오패닝의 최종 라운드 후에, 단일클론 Fab를 huPD1-ECD, huPD1-Fc, musPD1-Fc, 및/또는 cynoPD1-Fc에 대한 결합에 대해 2개의 ELISA 체제로 스크리닝하였다. 체제 1에서는, Fab를 항-Fd 항체에 의해 ELISA 플레이트 상에 포획하고, 다양한 형태의 btPD1을 포획된 Fab에 첨가한 후, 스트렙타비딘:HRP로 Fab를 검출하였다. 체제 2에서는, 다양한 형태의 btPD1을 스트렙타비딘에 의해 ELISA 플레이트 상에 포획하고, 분비된 Fab를 포획된 항원에 첨가한 후, 염소항Fab'2HRP로 Fab를 검출하였다. 단백질에 대한 결합을 나타낸 클론을 중쇄 및 경쇄 가변 영역에서 서열분석하였다.
이어서 인간 PD-1 또는 마우스 PD-1로부터의 Fab 선택을 포유류 세포 상청액 내에 분비된 cynoPD1-Fc에 대한 교차-반응성에 대해 시험하였다. Fab를 항-Fd 항체에 의해 ELISA 플레이트 상에 포획하고, cynoPD1-Fc 상청액을 포획된 Fab에 첨가한 후, 염소항인간Fc:HRP로 Fab를 검출하였다. cynoPD1-Fc에 대한 결합 특징에 기초하여, 선택된 항체를 추가의 특성화를 위해 선정하였다.
선택된 Fab를 추가의 특성화를 위해 선정하고 IgG2시그마/κ로서 클로닝하였다. IgG2시그마는 이펙터 작용이 폐기되고 야생형 IgG2에 비교할 때 V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 갖는다. IgG2시그마는 미국 특허 제8,961,967호에 기재되어 있다. 항체를 사이노몰거스 PD-L1에 대한 인간 PD-1 결합을 차단하는 그의 능력, 인간 및 사이노몰거스 PD-1 단백질에 대한 친화도, 및 인간 PD-1을 내인성으로 발현시키는 세포(저캇 세포)에 결합하는 그의 능력에 대해 평가하였다. 이어서, 항체를 huPD1에 대한 인간 PD-L1 및 인간 PD-L2 결합을 차단하는 그들이 능력에 대해 평가하였다.
결과에 기초하여, 친화도 성숙을 위해 몇몇 항체를 선정하였다. 친화도 성숙을 위해 선정된 선택된 항체의 특징을 표 7에 나타낸다.
[표 7]
Figure pct00009
실시예 3. 인간 항-PD-1 항체의 친화도-성숙
항체 PD1B70, PD1B71, 및 PD1B114 (PD1B11에 대한 밀접한 상동체)를, 선택된 VL 위치에서, 그리고 HCDR1 및 HCDR2에서 다양성을 가진 파지 디스플레이 라이브러리를 사용하는 Fab 체제로 친화도 성숙시켰다. 각각의 Fab에 대한 친화도-성숙 라이브러리의 설계를 표 8에 나타낸다. 잔기 번호화는 표 8의 PD1B114 VH 서열 번호 41에 따른다.
[표 8]
Figure pct00010
라이브러리를 작제하고 파지를 생성하였다. 이어서, VH 및 VL 파지 라이브러리를 huPD1-ECD 및 cynoPD1-ECD 비오티닐화 재조합 단백질에 대한 파지 패닝에 사용하였다. 파지 패닝 후에, 가용성 Fab를 인간 및 사이노 PD-1 둘 모두에 대한 결합에 대해 스크리닝하였다. 선택된 Fab를 IgG2시그마 동종형으로서 클로닝하고 농도 1 ㎍/ml 및 10 ㎍/ml에서 그의 저캇 세포 결합 및 사이노몰거스 PD-L1 리간드 저해에 대해 특성화하였다.
표 9는 모 항체 및 친화도-성숙 항체의 특성화 결과를 나타낸다.
[표 9]
Figure pct00011
친화도 성숙시킨 항체를 huPD1-ECD 및 cynoPD1-ECD에 대한 결합에 대해 ProteOn SPR 분석을 사용하여 상기 기재된 바와 같이 친화도 실험에서 평가하였다. 사이노 PD-1에 대한 mAb의 결합 특징은 표 10에 나타내고 인간 PD-1에 대한 것은 표 11에 나타낸다. 인간 및 사이노 단백질에 대해 생성된 3회 이상의 반복실험에 대해 STDEV를 계산하였다. 3회 미만의 반복실험을 계산한 경우, RANGE를 표시하였다. RANGE는 시험한 반복실험에 대한 낮은 값 및 높은 값으로서 정의된다. RANGE 또는 STDEV로 표시된 값이 없는 표 10 또는 표 11 내의 샘플의 경우, 1회의 실험만 수행되었다. 최상의 친화도 성숙시킨 변이체는 그의 모 mAb에 비교하여 약 4 내지 20배의 친화도 증가 후에 인간 및 사이노 PD-1에 대한 친화도가 한 자릿수 nM 범위였다.
[표 10]
Figure pct00012
[표 11]
Figure pct00013
실시예 4. 조합 변이체(combinatorial variant) PD-1 mAb 생성
친화도 결과의 분석 후에, 조합 서열을 고려하였다.
PD1B11 및 PD1B114는 매우 유사한 서열을 갖는다. PD1B11은 PD1B114에 비교하여 인간 PD-1에 대해 대략 3-배 더 강한 친화도 및 사이노 PD-1에 대해 2-배 더 강한 친화도를 가졌으므로, 그의 다양한 CDR의 조합을 갖는 항체를 제조하였다. 부위 지향적 돌연변이생성을 사용하여 PD1B11의 HCDR3을 PD1B164 및 PD1B162(PD1B114의 친화도-성숙시킨 변이체)에 넣은 반면에, PD1B164(PD1B114의 친화도 성숙시킨 변이체)의 HCDR2을 PD1B187(PD1B11의 친화도 성숙시킨 변이체)에 넣었다. 생성되는 중쇄를 모 경쇄와 쌍을 이루게 하여 각각 새로운 항체 PD1B194, PD1B195, 및 PD1B196을 생성하였다.
PD1B175 및 PD1B177은, 친화도 성숙 중에 다양화된 VL 라이브러리를 사용하여 항체가 생성되었음에도 불구하고, 둘 모두 모 경쇄를 함유하였다. 항체 친화도를 증가시키기 위한 시도로, PD1B175 중쇄를 PD1L185 또는 PD1L187 친화도 성숙시킨 경쇄와 쌍을 이루게 하고, PD1B177 중쇄를 PD1L86, PD1L168, 또는 PD1L190 친화도 성숙시킨 경쇄와 쌍을 이루게 하여, 항체 PD1B197, PD1B198, PD1B199, PD1B200, 및 PD1B201을 생성하였다. 항체의 VH 및 VL 쌍형성을 실시예 5 내의 표 20에 나타낸다.
이러한 항체의 HCDR, LCDR, VH, 및 VL 서열을 실시예 5 내의 표 14, 15, 16, 17, 18, 19, 21, 및 22에 나타낸다. 항체는 IgG2시그마/κ mAb로서 클로닝되었고, 친화도 측정을 위해 HEK293 expi 세포에서 일시적으로 발현되었다.
생성되는 항체의 친화도를 상기 기재된 바와 같이 결정하였다. 표 12는 조합 mAb 변이체의 사이노 PD-1에 대한 측정된 친화도를 나타내고, 표 13은 인간 PD-1에 대한 친화도를 나타낸다. 인간 및 사이노 단백질에 대해 생성된 3회 이상의 반복실험에 대해 STDEV를 계산하였다. 3회 미만의 반복실험을 계산한 경우, RANGE를 표시한다. RANGE는 시험한 반복실험에 대한 낮은 값 및 높은 값으로서 정의된다. RANGE 또는 STDEV가 없는 샘플의 경우, 1회의 실험만 수행되었다.
[표 12]
Figure pct00014
[표 13]
Figure pct00015
실시예 5. 파지 디스플레이 라이브러리로부터 유래된 항-PD1 항체의 구조적 특성화
다양한 캠페인을 사용하는 항체의 생성 전체에 걸쳐 표준 기술을 사용하여 항체의 cDNA 서열 및 아미노산 번역을 얻었다. 폴리펩티드 서열 결정 후에, 가변 영역 또는 전장 항체를 인코딩하는 일부 항체 cDNA를 규모-확대 발현을 위한 표준 방법을 사용하여 코돈 최적화하였다.
표 14는 선택된 PD-1 항체의 HCDR1 서열을 나타낸다.
표 15는 선택된 PD-1 항체의 HCDR2 서열을 나타낸다.
표 16은 선택된 PD-1 항체의 HCDR3 서열을 나타낸다.
표 17은 선택된 PD-1 항체의 LCDR1 서열을 나타낸다.
표 18은 선택된 PD-1 항체의 LCDR2 서열을 나타낸다.
표 19는 선택된 PD-1 항체의 LCDR3 서열을 나타낸다.
표 20은 선택된 PD-1 항체의 VH 및 VL 쌍형성을 나타낸다.
표 21은 선택된 PD-1 항체의 VH 서열을 나타낸다.
표 22는 선택된 PD-1 항체의 VL 서열을 나타낸다.
[표 14]
Figure pct00016
[표 15]
Figure pct00017
[표 16]
Figure pct00018
[표 17]
Figure pct00019
[표 18]
Figure pct00020
[표 19]
Figure pct00021
[표 20]
Figure pct00022
[표 21]
Figure pct00023
[표 22]
Figure pct00024
모든 항-PD-1 항체는 VH1-69(서열 번호 170) 및 IGKV3-11(L6)(서열 번호 171) 프레임워크를 갖는 것으로 확인되었다.
서열 번호 170
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQG RVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
서열 번호 171
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWP
실시예 6. 마우스에서 PD-1 항체의 생성 및 특성화
BALB/c를 huPD1-ECD로 복막내 면역화하고 특이적 IgG 타이터에 대해 평가하였다. 일단 충분한 타이터가 얻어졌으면, 비장세포를 단리하고 FO 세포와 융합시켰다. 생성되는 하이브리도마를 96 웰 플레이트에 플레이팅하고 10 일 동안 배양하였다. huPD1-ECD에 대한 결합에 대한 표준 포획 ELISA에 의해 항원 특이적 클론을 확인하였다. 인간 PD-1-특이적 하이브리도마를 인간 및 사이노 PD-1에 대한 그의 친화도, 저캇 세포에 대한 결합, 및 사이노 PD-L1 저해에 대해 추가로 시험하였다. 결과에 기초하여, 프레임워크 적응화를 사용하여 인간화를 위해 클론 PD1B28을 선택하였다.
미국 특허 출원 공개 제2009/0118127호 및 문헌[Fransson et al., (2010) J Mol Biol 398:214-231]에 본질적으로 기재된 바와 같이 프레임워크 적응화 과정을 실행하였다. 간략하게 말하면, IMGT 데이터베이스에 대한 BLAST 검색(문헌[Kaas, et al., (2004) Nucl Acids Res 32, D208-D210]; 문헌[Lefranc et al., (2005) Nucl Acid Res 33, D593-D597])을 사용하여 중쇄 및 경쇄 서열을 인간 생식세포계열 서열과 비교하였다(2007년 10월 1일자의 것과 같은 "01" 대립유전자만). 이러한 세트의 인간 생식세포계열 유전자로부터, 중복 유전자(아미노산 수준에서 100% 동일함) 및 쌍을 이루지 않은 시스테인 잔기를 가진 것들을 제거하였다. 프레임워크 및 CDR 영역 둘 모두에서 나머지 가장 밀접하게 일치하는 인간 생식세포계열 유전자를 수용자 인간 프레임워크로 선정하였다. 전체 서열 상동성 및 CDR 길이뿐만 아니라 CDR 유사성에 기초하여 몇몇 VL 및 VH 생식세포계열 인간 프레임워크를 선택하였다. IGHJ/IGJK 생식세포계열 유전자의 서열 유사성에 기초하여 FR-4를 선택하였다. 이어서, VH의 HCDR1에 상응하는 영역 내를 제외하고, PD1B28의 CDR을 선택된 수용자 인간 프레임워크 내로 이전하여 HFA 변이체를 생성하였다. 이러한 영역의 경우, CDR 및 HV의 조합, 또는 더 짧은 HCDR2(카바트-7로 지칭됨, 미국 특허 출원 공개 제2009/0118127호 참조)를 비-인간 항체로부터 인간 FR 내로 이전하였는데, 이는 나머지 HCDR2 잔기가 공지된 구조의 항원-항체 복합체 내에서 접촉되는 것으로 확인되지 않았기 때문이다(문헌[Almagro, (2004) J Mol Recognit. 17:132]). 인간화 항체 내의 소정의 잔기 위치 내로 복귀돌연변이를 도입하였다. PD1B131 복귀돌연변이: VH: V37I_Q39L_W47S_R98S, VL: Y49K. PD1B132: VH W47S_R98S, VL: Y49K(잔기 번호화는 초티아에 따름). 선택된 항체는 IgG2시그마/κ로서 발현되었다. 생성되는 항체를 재조합 PD-1 및 세포(저캇 세포) 상에서 발현되는 PD-1에 대한 그의 결합, 및 그의 리간드 저해(사이노 PD-L1 및 인간 PD-L1)에 대해 특성화하였다. 선택된 인간화 항체의 특징을 표 23에 나타낸다. 생성된 항체의 VH 및 VL 서열을 각각 표 24 및 표 25에 나타낸다.
[표 23]
Figure pct00025
[표 24]
Figure pct00026
[표 25]
Figure pct00027
PD1B131 및 PD1B132의 CDR 서열을 하기에 나타낸다:
HCDR1(서열 번호 66)
RYDMS
HCDR2(서열 번호 67)
YISGGGANTYYLDNVKG
HCDR3(서열 번호 68)
PYLSYFDV
LCDR1(서열 번호 69)
RASQSLSDYLH
LCDR2(서열 번호 70)
SASQSIS
LCDR3(서열 번호 71)
QNGHSFPYT
실시예 7. 항-PD-1 항체 특성에 대한 동종형 전환(isotype switching)의 효과
항체 PD1B196 및 PD1B199(IgG2시그마/κ 동종형의)의 가변 영역을 IgG4 S228P 동종형 및 항체 PD1B132(IgG2의)로부터의 가변 영역으로서 IgG2시그마 동종형 내로 클로닝하여 작용성 및 발전성(functionality)의 가능한 차이를 평가하였다.
항체는 PD1B244(IgG4 S228P 상의 PD1B196 VH/VL) PD1B245 (IgG4 S228P 상의 PD1B199 VH/VL) 및 PD1B243(IgG2시그마 상의 PD1B132 VH/VL)으로 명명하였다.
동종형 전환은 항체 특성에 대해 일관된 효과를 갖지 않았으나, 항체 중 일부의 경우에는, CMV 검정에서 EC50 값의 일부 변화가 관찰되었다.
다양한 항체의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열이 하기 예시되어 있다. 표 26은 선택된 항체에 대한 VH, VL, 중쇄, 및 경쇄 서열 번호의 요약을 나타낸다.
[표 26]
Figure pct00028
서열 번호 72 PD1B244의 HC
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFDTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPGLAAAYDTGSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열 번호 73 PD1B244의 LC
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVRSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRNYWPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 74 PD1B243의 HC
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSRYDMSWVRQAPGKGLESVAYISGGGANTYYLDNVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPYLSYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열 번호 75 PD1B243의 LC
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSLSDYLHWYQQKPGQAPRLLIKSASQSISGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQNGHSFPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 76 PD1B245의 HC
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSDYVISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIYGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGTLDRTGHLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열 번호 77 PD1B245의 LC
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIHDASTRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRNYWPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 212 PD1B114의 HC
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPGLAAAYDTGNLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 213 PD1B114의 LC
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서열 번호 214 PD1B149의 HC
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서열 번호 215 PD1B149의 LC
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서열 번호 216 PD1B160의 HC
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서열 번호 217 PD1B160의 LC
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서열 번호 218 PD1B162의 HC
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서열 번호 219 PD1B162의 LC
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서열 번호 220 PD1B164의 HC
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서열 번호 221 PD1B164의 LC
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서열 번호 222 PD1B183의 HC
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서열 번호 223 PD1B183의 LC
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서열 번호 224 PD1B184의 HC
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPGLAAAYDTGSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 225 PD1B184의 LC
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVRNYLAWYQQKPGQAPRLLIHDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRNYWPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 226 PD1B185의 HC
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPGLAAAYDTGSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 227 PD1B185의 LC
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVRNYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASDRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRWNWPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 228 PD1B192의 HC
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPGLAAAYDTGSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 229 PD1B192의 LC
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVDSYLAWYQQKPGQAPRLLIHDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRNYWPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
실시예 8. 세포-기반 검정에서의 PD-1 항체의 특성화
선택된 항체를 실시예 1에 기재된 프로토콜을 사용하는 MLR 및 CMV 검정에서 특성화하였다. MLR 및 CMV 검정으로부터의 IFN-γ 유도에 대한 EC50 값을 표 27에 나타낸다. 대부분의 경우에, 항-PD-1 항체는 MLR 및 CMV 검정 양자 모두에서 IFN-γ 수준의 용량-의존성 증가를 나타냈다.
[표 27]
Figure pct00029
IFN-γ에 더하여, 2개의 검정에서 추가적인 사이토카인의 분비 수준 또한 PD-1 차단에 의해 영향을 받았다. CMV 자극시에는, 항-PD-1 항체가 TNF-α 및 IL-4의 용량-의존성 유도를 유발한 반면에, MLR 검정에서는 그들이 TNF-α 및 IL-2 수준을 증가시켰다.
실시예 9. 파지 디스플레이 라이브러리를 사용하는 인간 항-TIM-3 항체의 생성
실시예 2에 기재된 드 노보 pIX Fab 라이브러리를 재조합 인간 TIM-3-Fc 융합 단백질(R&D Systems, #2365-TM; 전장 TIM-3의 잔기 Ser22-Arg200)(huTIM-3-Fc)의 세포외 도메인에 대해 패닝하였다.
재조합 단백질을 비오티닐화(bt)하고 스트렙타비딘 자기 비드(Dynal) 상에 포획한 후, 100 nM의 최종 농도에서 드 노보 pIX Fab 라이브러리에 노출시켰다. 비-특이적 파지는 PBS-Tween 중에 세척해내고, 결합된 파지는 MC1061F' E. 콜라이 세포의 감염에 의해 회수하였다. 이러한 세포로부터 파지를 밤새 증폭하고 총 3 라운드 동안 패닝을 반복하였다. 바이오패닝의 최종 라운드 후에, 단일클론 Fab를 스트렙타비딘에 의해 ELISA 플레이트 상에 포획된 비오티닐화 인간 TIM-3-Fc에 대한 결합에 대해 스크리닝하고, 분비된 Fab를 포획된 항원에 첨가한 후, 염소 항 인간 카파:HRP로 Fab를 검출하였다. 선택된 항체를 하기 표시된 바와 같이 다양한 IgG 동종형 상에서 발현시키고 클로닝하고, 추가로 특성화하였다.
실시예 10. 마우스에서의 항-TIM-3 항체의 생성
Balb/c 마우스를 재조합 인간 TIM-3-Fc 융합 단백질(R&D Systems, 카탈로그 #2365-TM)로 18 일에 걸쳐 면역화하였다. 비장을 수확하고, B 세포가 풍부한 개체군을 FO 마우스 골수종 세포와 융합시켜 mAb 분비 하이브리도마를 생성하였다. ELISA에 의해 하이브리도마 상청액을 TIM-3-Fc 단백질 및 무관한 인간 IgG1 Fc에 대한 결합에 대해 스크리닝하였다. 이어서, TIM-3 특이적 상청액을 TIM-3 발현 THP-1 세포에 결합하는 능력에 대해 검정하였다.
표준 분자 생물학 기술(RT-PCR에 이어서 플라스미드 발현 벡터 내로의 PCR 단편 결찰)을 사용하여, 선택된 mAb HC 및 LC v-유전자를 TIM-3 양성 하이브리도마로부터 클로닝하였다. mAb는 재조합에 의해 발현되었으며, ELISA를 반복하여 TIM-3 특이적 결합을 확인하였다. MOE(몬트리올 소재의 CCG)를 사용하여 인간 프레임워크 적응화될 뮤린 항체 서열에 대한 분자 모델을 작제하고 시각적으로 조사하였다. 항원 결합, VL/VH 패킹에 영향을 줄 수 있는 잠재적 문제 위치, 및/또는 도메인 안정성에 영향을 줄 수 있는 코어 잔기를 확인하였다. VL 및 VH 둘 모두에 대해, 문제 위치가 확인된 경우에 마우스 프레임워크 서열로의 복귀 돌연변이가 있거나 없는 다중 인간 프레임워크가 제시되었다. 설계된 서열을 중쇄 및 경쇄 플라스미드 내로 클로닝하고 Expi293F 세포에서 발현시켰다. 배양 상청액 내의 발현된 항체를 정량화하고 재조합 인간 TIM-3으로 형질감염된 HEK293 세포에 대한 결합에 대해 평가하였다.
실시예 11. 항-TIM-3 항체의 동종형
항체 특성화 중에, 단리된 항-TIM-3 항체의 VH 및 VL을 임의로 다양한 Fc 치환을 가진 다양한 중쇄 동종형, 및 κ 경쇄를 가진 동종이형 상에 클로닝하여 항체의 작용성 또는 발전성에 대한 동종형 전환의 효과(존재하는 경우)를 평가하였다. 사용된 다양한 동종형을 표 28에 나타낸다.
[표 28]
Figure pct00030
생성된 항체에 사용된 다양한 동종이형을 표 29에 나타낸다. 항체 중 일부는 키메라 동종이형을 가졌다. 예를 들어 항체 TM3B105 및 TM3B403은 위치 189에서 불변 영역 내의 아미노산 치환 하나가 상이하다. TM3B105 중쇄 및 경쇄 서열 번호는 각각 240 및 79이고; TM3B403 중쇄 및 경쇄 서열 번호는 각각 78 및 79이다. 2개의 항체는 동일한 특징을 가질 것으로 예상된다.
[표 29]
Figure pct00031
일반적으로, CMV 검정에서 IgG2시그마 Fc를 가진 항-TIM-3 항체는 huIgG4 Fc를 가진 항-TIM-3 항체보다 더 큰 활성을 가졌다. 추가로, huIgG2 Fc를 가진 항체는 IgG2시그마와 IgG4 사이의 중간인 작용성을 나타냈다. 동종이형은 항체 활성에 대한 효과가 없었다.
실시예 12. 항-TIM-3 항체의 구조적 특성화
다양한 캠페인을 사용하는 항체의 생성 전체에 걸쳐 표준 기술을 사용하여 항체의 cDNA 서열 및 아미노산 번역을 얻었다. 폴리펩티드 서열 결정 후에, 가변 영역 또는 전장 항체를 인코딩하는 일부 항체 cDNA를 규모-확대 발현을 위한 표준 방법을 사용하여 코돈 최적화하였다. 항체 TM3B103, TM3B105, M3B108, TM3B109, 및 TM3B113은 파지 디스플레이 라이브러리로부터 단리하였다. 항체 TM3B189, TM3B190, TM3B193, TM3B195, 및 TM3B196은 마우스를 면역화함으로써 생성하였다.
표 30은 선택된 항-TIM-3 항체의 HCDR1 서열을 나타낸다.
표 31은 선택된 항-TIM-3 항체의 HCDR2 서열을 나타낸다.
표 32는 선택된 항-TIM-3 항체의 HCDR3 서열을 나타낸다.
표 33은 선택된 항-TIM-3 항체의 LCDR1 서열을 나타낸다.
표 34는 선택된 항-TIM-3 항체의 LCDR2 서열을 나타낸다.
표 35는 선택된 항-TIM-3 항체의 LCDR3 서열을 나타낸다.
표 36은 선택된 항-TIM-3 항체의 VH 서열을 나타낸다.
표 37은 선택된 항-TIM-3 항체의 VL 서열을 나타낸다.
표 38은 선택된 항-TIM-3 항체의 프레임워크를 나타낸다.
[표 30]
Figure pct00032
[표 31]
Figure pct00033
[표 32]
Figure pct00034
[표 33]
Figure pct00035
[표 34]
Figure pct00036
[표 35]
Figure pct00037
[표 36]
Figure pct00038
[표 37]
Figure pct00039
[표 38]
Figure pct00040
IGHV3-23 서열 번호 174
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKG RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAK
IGHV1-02 서열 번호 175
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTGYYMHWVRQAPGQGLEWMGRINPNSGGTNYAQKFQG RVTSTRDTSISTAYMELSRLRSDDTVVYYCAR
IGHV4-30 서열 번호 176
QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGGSISSGDYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYYSGSTYYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR
IGHV1-03 서열 번호 177
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYAMHWVRQAPGQRLEWMG WINAGNGNTKYSQKFQGRVTITRDTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR
IGHV2-26 서열 번호 178
QVTLKESGPVLVKPTETLTLTCTVSGFSLSNARMGVSWIRQPPGKALEWLA HIFSNDEKSYSTSLKSRLTISKDTSKSQVVLTMTNMDPVDTATYYCARI
IGHV5-51 서열 번호 179
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIYPGDSDTRYSPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCAR
IGKV3-20 서열 번호 180
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY GASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSP
IGKV3-11 서열 번호 171
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRSNWP
IGKV4-1서열 번호 181
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIY GASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSP
IGKV1-39 서열 번호 182
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIY AASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPI
GKV1-33 서열 번호 183
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQDISNYLNWYQQKPGKAPKLLIY DASNLETGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQYDNLP
실시예 13. 항-TIM-3 항체의 특성화
선택된 항체를 인간 또는 사이노 세포에 대한 그의 결합, 및 리간드 갈렉틴 9 결합을 차단하는 그의 능력에 대해 특성화하였다. 표 39는 이러한 검정에서 선택된 항체의 특징을 나타낸다. 세포 결합 데이터는 ㎍/ml 단위로 표현된 표시된 TIM-3 재조합 단백질로 형질감염된 세포에 대한 항체 결합의 계산된 EC50 값을 나타낸다. 갈렉틴-9 저해는 표시된 항체를 이용하여 관찰된 인간 TIM-3에 대한 갈렉틴-9 결합의 저해의 최대 수준을 나타낸다. 시험 항체는 IgG2시그마 동종형으로서 시험하였다.
MSD 플레이트 상에 재조합 huTIM-3-Fc 단백질을 코팅함으로써 에피토프 맵핑 검정을 수행하였다. 플레이트를 차단하고 세척한 후, 증가하는 농도의 표지되지 않은 항-TIM-3 mAB와 함께 인큐베이션한 MSD-태그-표지된 항-TIM-3 mAb의 혼합물을 첨가하였다. 실온에서 온화하게 진탕하면서 인큐베이션한 후에, 플레이트를 세척하고 SECTOR Imager 6000으로 분석하였다. 인간 TIM-3에 대한 결합에 대해 서로 경쟁한 항체는 유사한 에피토프에 결합하는 것으로 간주되었다. 75% 초과의 결합이 저해된 경우에는 양성 저해로 표시하였다. 부분 저해는 40 내지 75% 저해였다. 40% 미만의 저해는 음성으로 표기하였다.
[표 39]
Figure pct00041
실시예 14. 항-TIM-3 항체를 특성화하기 위한 작용성 시험관내 검정의 개발
PD-1과 같은 저해 수용체의 작용성 평가는 동종유래 수지상 세포 또는 특이적 항원, 예컨대 파상풍 변성독소 또는 CMV에 의해 자극되는 정상적 공여자로부터의 T 세포를 사용하여 실행할 수 있다. 이러한 설정에서, 항체 처리에 의한 T 세포 작용의 변화는 상청액 사이토카인 수준 또는 T 세포 활성화의 표지자를 측정함으로써 검출할 수 있다. 항-TIM-3 항체의 효과는 이러한 유형의 검정에서 매우 가변적일 수 있으며, 벌크 T 세포의 활성화 또는 작용성의 상태의 전체 변화는 거의 없다(비-항원-특이적). 반면에, 이러한 검정에서 단일 T 세포 하위-개체군/클론을 추적하기 위한 사량체 접근법을 사용하는 것은 항-TIM-3 항체의 작용 효과를 검출하기 위해 필요한 해상도를 제공하지 않는데, 이는 이러한 T 세포 클론의 낮은 빈도 및 불균질한 작용 프로파일에 기인한다. 추가로, 이러한 접근법은 각각의 공여자에서 CMV-특이적 T 세포에 의해 인식되는 에피토프의 사전 확인을 필요로 한다.
최근에 CD137은 활성화 항원-특이적 T 세포에 대한 대리 표지자로서 기재되었다(문헌[Wolf et al., (2007) Blood 110(1):201-210]; 문헌[Klinger et al., (2013) PLoS One 8(9): e74231]). 본 발명자들의 검정에서, CD137을 사용하는 것은 CMV 항원 자극에 반응하여 확대되는 항원 특이적 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 확인을 가능하게 하고 항-TIM-3 항체의 작용 효과의 검출을 가능하게 했다. CD137 발현에 더하여, 이러한 검정에서는 MSD에 의한 사이토카인 분비 또한 평가하였다
선택된 항-TIM-3 항체의 활성은 CMV pp65-자극 PBMC에서 시험하였다. 이러한 검정에서, CD8+ 및 CD4+ T 세포 둘 모두 상의 증가된 CD137 발현에 의해 입증되는 바와 같이, 항-TIM-3 항체는 T 세포 활성화를 강화하였다. 추가로, 선택된 항-TIM-3 항체는 또한 이러한 검정에서 IFN-γ 및 TNF-α의 분비를 향상시켰다.
표 40은 선택된 TIM-3 항체에 대해 CD137의 향상된 표면 발현을 CD8+ 또는 CD4+ 세포 상에서 평가한 CMV 검정의 결과를 나타낸다. 표는 양측 T-검정을 사용하여 생성된 p 값을 나타낸다(이분산(unequal variance)).
[표 40]
Figure pct00042
실시예 15. 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체의 생성
선택된 단일특이성 PD-1 및 TIM-3 항체를 IgG1/κ, IgG2/κ, 또는 IgG4/κ로서 발현시켰다. 단일특이성 항체 내의 위치 405 및 409(EU 번호화)에서 치환을 실행하여 후속의 시험관내 아암 교환 및 이중특이성 항체의 형성을 촉진하였다. 각각 F405L 및 K409R 치환을 갖도록 IgG1 및 IgG2 항-PD-1 및 항-TIM-3 항체를 조작하여 아암 교환 및 이중특이성 항체의 생성을 촉진하였다. IgG4 상에서 409 WT 위치는 R이므로, IgG4 항-PD-1 항체는 조작하지 않았고 IgG4 항-TIM-3 항체는 F405L 및 R409K 치환을 갖도록 조작하였다. 위치 405 및 409 치환에 더하여, S228P 치환을 갖도록 IgG4 mAb를 조작하였고 IgG2 항체는 IgG2시그마 치환(V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S)을 포함하도록 임의로 조작하였다.
단일특이성 항체를 발현시키고 단백질 A 컬럼(HiTrap MabSelect SuRe column)을 사용하는 표준 방법을 사용하여 정제하였다. 용출 후, 풀(pool)들을 D-PBS(pH 7.2) 내로 투석하였다.
국제 특허 출원 공개 WO2011/131746호에 기재된 바와 같이 시험관내 Fab 아암 교환에서 단일특이성 PD-1 mAb 및 단일특이성 TIM-3 mAb를 조합함으로써 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체를 생성하였다. 간략하게 말하면, PBS(pH 7 내지 7.4) 및 75 mM 2-메르캅토에탄올아민(2-MEA) 중에서 각각의 항체를 약 1 내지 20 mg/ml로 1:1 몰비로 함께 혼합하고 2 내지 6시간 동안 25 내지 37℃에서 인큐베이팅한 후, 표준 방법을 사용하여 투석, 투석여과, 접선 유동 여과 및/또는 스핀 세포 여과를 통해 2-MEA를 제거하였다.
표준 방법을 사용하여 잔류 모 PD-1 및 TIM-3 항체를 최소화하기 위해, 시험관내 Fab-아암 교환 후에 소수성 상호작용 크로마토그래피를 사용하여 이중특이성 항체를 추가로 정제하였다.
선택된 단일특이성 항-PD-1 항체 및 항-TIM-3 항체를 시험관내 Fab 아암 교환에서 매트릭스 내에 조합하여 이중특이성 항체를 생성하였다. 표 41, 표 42, 및 표 43은 생성된 이중특이성 항체 및 그의 동종형의 VH, VL, HC, 및 LC 서열을 나타낸다. G2 항체 동종이형은 G2m(n)/(n-) 또는 G2m(n-)이었다.
일부 실험에서는, PD-1 또는 TIM-3에 대해 1가이고 제2 아암은 gp120에 대해 불활성 결합(inert binding)인 대조군 항체를 사용하였다. gp120 결합 아암은 서열 번호 184의 VH 및 서열 번호 185의 VL을 가졌다. 표 44는 생성된 대조군 항체를 나타낸다.
서열 번호 184 gp120 결합 mAb의 VH
Figure pct00043
서열 번호 185 gp120 결합 mAb의 VL
Figure pct00044
[표 41]
Figure pct00045
[표 42]
Figure pct00046
[표 43]
Figure pct00047
서열 번호 186
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFDTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPGLAAAYDTGSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFLLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 187
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSRYDMSWVRQAPGKGLESVAYISGGGANTYYLDNVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPYLSYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFLLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 188
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVRSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQRNYWPLTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 189
EIVMTQSPATLSVSPGERATLSCRASQSLSDYLHWYQQKPGQAPRLLIKSASQSISGIPARFSGSGSGTEFTLTISSLQSEDFAVYYCQNGHSFPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 190
EVQLQQSGAELARPGASVKLSCKASGYTFTSYWMQWVKQRPGQGLEWIGAIYPGDGDIRYTQNFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLASEDSAVYYCARWEKSTTVVQRNYFDYWGQGTTLTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 191
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSPYAPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 192
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWMQWVRQMPGKGLEWMGAIYPGDGDIRYTQNFKGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARWEKSTTVVQRNYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVTSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 193
DVQMIQSPKSMSMSVGERVTLSCKASENVGTFVSWYQQKPDQSPKLLIYGASNRYTGVPDRFTGSGSATDFTLTISSVQAEDLADYHCGQSYSYPTFGSGTKLEMKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 194
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVNDYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQGGHAPITFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 195
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASENVGTFVSWYQQKPGKAPKLLIYGASNRYTGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSYSYPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
서열 번호 241
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFDTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPGLAAAYDTGSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFLLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 242
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFAFSRYDMSWVRQAPGKGLESVAYISGGGANTYYLDNVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCASPYLSYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열 번호 243
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFDTANYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARPGLAAAYDTGSLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열 번호 244
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTSYWMQWVRQMPGKGLEWMGAIYPGDGDIRYTQNFKGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARWEKSTTVVQRNYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 245
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSPYAPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
서열 번호 246
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSPYAPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFLLYSKLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
서열 번호 247
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서열 번호 248
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAKSPYAPLDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPAAASSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSAEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[표 44]
Figure pct00048
실시예 16. 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체의 특성화
생성된 이중특이성 길항 항체를 CMV 검정에서 항원-특이적 T 세포 반응을 향상시키는 그의 능력에 대해 시험하였다. 실시예 14에 기재된 바와 같이 CD4+ 및 CD+ T 세포 둘 모두 상의 CD137 발현을 평가함으로써, 그리고 배양 상청액 내의 IFN-γ 및 TNF-α 수준에 의해, 작용성을 측정하였다. 표 45 및 표 46은 이러한 검정에서 상이한 판독에 대해 이중특이성 PD-1/TIM-3 항체의 활성을 요약한다. 이 표에 나타낸 바와 같이, 선택된 이중특이성 분자는 CD4+ 및 CD8+ T 세포 상의 CD137 발현 및 분비된 IFN-γ 및 TNF-α의 수준의 유의한 증가를 유발했다. 종합하면, huIgG2시그마 Fc를 가진 PD-1/TIM-3 이중특이성이 가장 강건한 활성을 가졌고, 그 다음은 huIgG2를 가진 분자였으며, 그 다음은 huIgG4였다.
[표 45]
Figure pct00049
[표 46]
Figure pct00050
실시예 17. 항-PD1 항체는 종양 상의 TIM-3 발현을 상향조절한다
종양 상의 TIM-3의 발현에 있어서 항-PD-1 항체 치료의 효과를 CT26 또는 MC38 결장 암종 마우스 모델에서 평가하였다.
Balb/c 마우스에 1x106 CT26 결장 암종 종양을 피하 이식하였다. 종양 세포 이식으로부터 7 일 후에, 종양을 측정하고 종양 크기에 의해 마우스를 무작위화하였다. 종양 세포 이식 후 제7일에 PBS 또는 10 mg/㎏ 항-마우스 PD-1 항체(클론 RMP1-14, BioXCell)를 이용한 치료를 시작하였고, 연구의 잔여기간 동안 격주로 계속하였다. TIM-3의 T 세포 발현을 분석하기 위해, 제22일에 종양을 수확하고 GentleMACS(Miltenyi)를 사용하여 해리시켰다. 생/사 및 CD3, CD4, CD8, 및 TIM-3에 대한 표지자를 이용하여 유세포측정을 위한 염색을 실행하였다. LSR Fortessa(BD) 상에서 유세포측정을 수행하였다. Flow Jo 소프트웨어를 사용하여 데이터를 분석하였다.
PBS에 현탁된 5x105 MC-38 결장 암종 세포를 야생형 C57Bl/6 자성 마우스에 피하 이식하였다. 종양을 측정하고 종양 크기(50-100 ㎣)에 의해 마우스를 무작위화하였다. 무작위화 후에 PBS 또는 10 mg/㎏ 항-마우스 PD-1(클론 RMP1-14, BioXCell)을 이용한 치료를 시작하였고, 연구의 잔여기간 동안 격주로 계속하였다. 종양 침윤 T 세포를 프로파일링하기 위해, 이식으로부터 12, 15, 19, 또는 22 일 후에 종양을 수확하고 GentleMACS(Miltenyi)를 사용하여 해리시켰다.
생/사 및 CD45, Thy1, CD3, CD4, CD8, TIM-3, CD137, OX40, GITR, 및 TIGIT에 대한 표지자를 이용하여 유세포측정을 위한 염색을 실행하였다. LSR Fortessa(BD) 상에서 유세포측정 데이터를 수집하였다. FlowJo 소프트웨어(v9.9.4)를 사용하여 데이터를 분석하고 GraphPad Prism으로 시각화하였다. GraphPad Prism에 의해 통계를 생성하였다.
제22일에 CT26 종양으로부터 단리된 CD8+ T 세포 상의 TIM-3 발현의 분석에 의해, PBS 대조군에 비교하여 PD-1 치료 샘플 내의 TIM-3 발현의 증가가 밝혀졌다. 도 1a는 2개의 치료군에서 TIM-3 발현의 평균 형광 세기를 나타낸다.
TIM-3 발현은 MC-38 종양에서도 PBS 대조군에 비교할 때 항-PD-1 mAb 치료 샘플에서 증가하였다. 도 1b는 CD8+ TIL 개체군에서 TIM-3 발현의 기하 평균 형광 세기를 나타낸다. 도 1c는 총 CD8+ TIL 중 TIM-3+ CD8+ 세포의 백분율(%) 상대 빈도를 나타낸다.
이러한 데이터는 항-PD-1 치료에 반응하여 TIM-3이 상향조절됨을 나타내며, PD-1 치료 대상에서 TIM-3 표적화에 대한 근거를 지지한다.
항-마우스 PD-1 항체로 치료된 마우스로부터 단리된 MC38 종양에 침윤하는 CD8+ T 세포 상에서도 CD137, OX40, 및 GITR 발현을 분석하였다. 이러한 결과는 PD-1 차단 후에 TNF 패밀리 동시자극성 수용체 CD137, OX40, 및 GITR 발현의 빈도 및 수준(gMFI) 둘 모두가 증가했음을 나타냈다. 도 2a 및 도 2b는 각각 CD8 TIL 상의 CD137 발현의 gMFI 및 상대 빈도를 나타낸다. 도 3a 및 도 3b는 각각 CD8 TIL 상의 OX40 발현의 gMFI 및 상대 빈도를 나타내고, 도 4a 및 도 4b는 각각 CD8 TIL 상의 GITR의 gMFI 및 상대 발현을 나타낸다.
이러한 데이터는 PD-1 치료 대상에서 CD137, OX40, 및/또는 GITR 표적화에 대한 근거를 지지한다.
실시예 18. PD-1 차단 후의 항-TIM-3 항체의 활성
CMV 검정에서 항-PD-1 항체 차단 후에 항-TIM-3 항체의 활성 또한 시험하였다. 이러한 실험에서는, 하나의 정상적 공여자로부터의 PBMC(CMV-혈청 양성)를 pp65 펩티드 풀 및 항-PD-1 항체와 함께 5 일 동안 인큐베이션하였다. 제5일에, 상청액을 수확하고 항-TIM-3 또는 항-PD-1 항체의 존재 하에 pp65 펩티드 풀로 세포를 재자극하였다. 24 시간 후에 상청액 내의 IFN-γ 수준을 측정하였다. 5 일의 항-PD-1 차단 후의 항-TIM-3 항체를 이용한 처리는 IFN-γ 수준의 유의한 증가를 유발했다. 이러한 효과는 계속된 항-PD-1 처리에 비교하여 유의했다(p=0.0183). 실험에는 항-TIM-3 항체 TM3B403 및 항-PD-1 항체 PD1B244를 사용하였다. 도 5는 5 일의 항-PD-1 PD1B244를 이용한 처리 후에 PBMC를 항-TIM-3 항체 TM3B105로 처리한 CMV 검정에서 증가된 IFN-γ 수준을 나타낸다. 값들은 각각의 조건에 사용된 6회의 생물학적 반복실험의 평균을 나타낸다.
실시예 19. 항-TIM-3 항체의 에피토프 맵핑
용액 수소/중수소 교환-질량 분석법(HDX-MS: hydrogen/deuterium exchange-mass spectrometry)을 수행하여 TMB403 및 TMB291의 결합 에피토프를 확인하였다. 실험을 위해, TM3B403 및 TM3B291의 VH 및 VL을 C-말단에 헥사히스티딘 태그를 가진 IgG1 Fab로서 클로닝하였다. 현탁 진탕 플라스크(suspension shake flask) 내에서 HEK293 Expi 세포의 일시적 형질감염으로부터 Fab가 생성되었다. R&D Systems로부터의 마우스 골수종 세포주(NS0 유래)에서 생성된 TIM-3 IgG1 Fc 키메라, Ser22-Arg200(등록 # Q8TDQ0)(카탈로그 # 2365-TM)을 사용하였다.
H/D 교환을 위해, Fab 섭동을 분석하기 위해 사용된 절차는 이전에 기재된 것들과 유사하였으며(문헌[Hamuro et al., Biomolecular Techniques 14: 171-182, 2003]; 문헌[Horn et al., Biochemistry 45: 8488-8498, 2006]), 일부 변형이 있었다. 간략하게 말하면, 탈글리코실화 인간 TIM-3/Fc 융합 단백질 또는 탈글리코실화 인간 TIM-3-Fc 플러스 Fab 혼합물을 산화중수소 표지용 완충액과 함께 0oC에서 최대 2 시간의 다양한 시간 동안 인큐베이션하였다. 구아니딘 하이드로클로라이드를 첨가함으로써 중수소 교환을 켄칭하고 켄칭된 샘플에 대해 온-컬럼 펩신 분해 및 LC-MS 분석을 수행하였다. MS 전용 방식(MS only mode)으로 질량 스펙트럼을 기록하였다. 중수소 혼입의 계산을 위해, 제공된 펩티드에 대한 질량 스펙트럼을 추출된 이온 크로마토그램 피크에 걸쳐 조합하고 가중 평균 m/z를 계산하였다. 천연 펩티드의 질량(0 min)으로부터 가중 평균 질량까지의 질량 증가는 중수소 혼입의 수준에 상응한다. 약 98.4%의 단백질이 특이적 펩티드로 맵핑될 수 있었다.
확인된 펩티드에서의 중수소 수준을 LC-MS 상에서의 질량 시프트로부터 모니터링하였다. 펩티드에 대한 교환 시간에 걸쳐 중수소 수준 및/또는 경사에 유의한 차이를 나타내는, 선택된 중수소 축적 곡선을 플로팅하였다. 탈글리코실화 인간 Tim-3/Fc 융합 단백질은 서열 32WGKGACPVFECGNVVL47,(서열 번호 261)에서 TM3B403에 결합시에, 그리고 서열 90RIQIPGIMNDEKF102.(서열 번호 262)에서 TM3B291에 결합시에 중수소 흡수의 유의한 감소를 나타냈다. 따라서 Fab에 결합시에 중수소 흡수의 유의한 감소를 가진 이러한 영역을 mAb의 주된 에피토프로 간주할 수 있다.
세그먼트, 50DERDVNY56,(서열 번호 263)은 TM3B403 또는 TM3B291에 결합시에 보통 정도의 중수소 교환의 감소를 나타냈다. 이러한 영역 또한 둘 모두의 항체에 대한 잠재적 에피토프로 간주할 수 있다.
TM3B403 또는 TM3B291에 대한 주요 결합 에피토프는 상이하다. 그러나, 그들은 HDX 맵핑 결과에 기초하여 유사한 보통 정도의 보호 영역, 50DERDVNY56,(서열 번호 263)을 공유할 수 있다. 이러한 영역이 둘 모두의 Fab 분자에 대한 공통의 결합 에피토프 영역에 기여하는지 평가하는 것을 보조하기 위해, 경쟁 ELISA를 수행하였다. 재조합 인간 Tim-3/Fc 단백질을 플레이트 상에 직접 코팅한 후, 이를 차단하고 세척하였다. 상이한 농도의 표지되지 않은 TM3B105 또는 TM3B291과 함께 사전-인큐베이션한 루테늄(Ru)-표지된 TM3B291 Fab의 혼합물. 플레이트를 인큐베이션하고, 세척하고, 각각의 웰 내로 MSD Read Buffer T를 분주한 후, SECTOR Imager 6000(메릴랜드주 게이더스버그 소재의 Meso Scale Discovery)으로 판독하였다.
경쟁 분석은 TIM-3에 대한 결합에 대해 TM3B403이 TM3B291과 경쟁했음을 입증하였다. 이러한 결과는 보통 정도로 보호된 영역, DERDVNY(서열 번호 263)가 둘 모두의 항체에 대한 에피토프의 부분이라는 것, 또는 항체들이 그의 에피토프의 근접성으로 인해 서로의 결합을 입체적으로 차단할 수 있다는 것을 표시할 수 있을 것이다.
실시예 20. TIM-3 차단은 CD8 + TIL 상의 TIGIT 발현을 증가시킨다
종양 내의 TIGIT의 발현에 대한 항-TIM-3 항체 치료의 효과를 CT26 및 MC38 결장 암종 마우스 모델에서 평가하였다. 10 mg/ml 항-TIM-3 RMT3-23(Bioxcell) 항체를 사용한 점을 제외하고는, 실시예 17에 기재된 바와 같이 연구를 수행하였다.
CT26(도 19a, 도 19b) 및 MC38(도 20a, 도 20b) 종양 모델 둘 모두에서 TIM-3 차단 후에 CD8+ TIL 상의 TIGIT 발현(도 19a, 도 20a) 및 TIGIT+ TIL의 상대 빈도(도 19b, 도 20b)가 상승되었다.
실시예 21. 흑색종 환자 PBMC에서 생체외 PD-1 차단 후에 TIM-3 발현이 증가한다
치료 미접촉 흑색종 환자로부터의 PBMC를 항-PD-1 또는 항-TIM-3 작용 차단성 항체의 존재 하에 흑색종 항원 펩티드 풀(NY-ESO, gp100, MART-1)로 자극하였다. 제6일에 펩티드-재자극 세포 상에서 TIM-3의 발현을 평가하였다. 결과는 대조군 또는 TIM-3 처리 PBMC에 비교하여 항-PD-1 처리 샘플에서 TIM-3+ CD8+ T 세포의 빈도의 유의한 증가를 나타냈다(도 21).
제0일에, 치료 미접촉 흑색종 환자로부터의 냉동 PBMC를 37℃ 수조에서 신속하게 해동시켰다. 세포를 해동시키고, 세척하고, 완전 RPMI 배지(RPMI + 10% FBS + 1% 소듐 피루베이트 + 1% NEAA + 1% pen/strep) 내에서 계수하였다. 항-PD-1 또는 항-TIM-3 작용 차단성 항체(각각 PD1B244 및 TM3B403) 및 1 ㎍/mL의 흑색종 항원 펩티드 풀(NY-ESO, gp100, MART-1)의 존재 또는 부재 하에 6 일 동안 37C에서 96 웰, U-바닥 플레이트에 200,000 세포/웰로 세포를 플레이팅하였다. 제6일에 세포를 펩티드 풀로 재자극하고 PD-1 및 TIM-3의 발현뿐만 아니라 T 세포 활성화 및 증식 표지자에 대해 유세포측정에 의해 분석하였다.
실시예 22. IL-2 자극 PBMC에서 항-TIM-3 항체는 활성화 NK 세포의 빈도를 증가시킨다
인간 PBMC를 IL-2(20U)로 자극한 검정에서 활성화 NK 세포의 빈도에 대한 항-TIM-3 항체 TM3B403의 효과를 결정하였다. 소정 범위의 mAb 농도에서 처리 후 48 시간에 유세포측정에 의해 CD69 및 CD25의 빈도, NK 세포 활성화의 표지자를 평가하였다. CD69 양성 세포의 백분율(도 22a) 또는 CD25 양성 세포의 백분율(도 22b)에 의해 활성화를 평가했을 때, TM3B403은 활성화 NK 세포의 빈도를 증가시켰다.
SEQUENCE LISTING <110> DeAngelis, Nikki A Powers, Gordon Sabins, Nina Chi Santulli-Marotto, Sandra Verona, Raluca Wiehagen, Karla R <120> Antibodies specifically binding PD-1 and TIM-3 and their uses <130> JBI5071WOPC2 <140> To Be Assigned <141> 2016-11-01 <150> 62/250,095 <151> 2015-11-03 <160> 312 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 268 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr 1 5 10 15 Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe 20 25 30 Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr 35 40 45 Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu 50 55 60 Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu 65 70 75 80 Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn 85 90 95 Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala 100 105 110 Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg 115 120 125 Ala Glu Val Pro Thr Ala 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MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> Xaa is Ser or deleted <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa is Asn or deleted <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> Xaa is Asn or deleted <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..(13) <223> Xaa is Lys or deleted <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> Xaa is Ser, Asn or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa is Tyr or Thr <400> 167 Xaa Xaa Ser Gln Ser Val Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Leu 1 5 10 15 Ala <210> 168 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> TIM-3 LCDR2 genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is Gly, Asp, Trp or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Ser, Asn or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Ala or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa is Thr or Ser <400> 168 Xaa Ala Ser Xaa Arg Xaa Xaa 1 5 <210> 169 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> TIM-3 LCDR3 genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa is Tyr, Gly or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa is Gly or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa is Ser, His or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> Xaa is Ser, Ala or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa is Leu, Ile or Trp <400> 169 Gln Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Xaa Thr 1 5 <210> 170 <211> 98 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 170 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg <210> 171 <211> 95 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 171 Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 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cagcgaagat accgcggtgt attattgcgc gcgccctggt 300 ctcgctgcgg cttatgatac tggttccttg gactattggg gccagggcac cctggtgacc 360 gtgagcagc 369 <210> 197 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> DNA of PD1L148 <400> 197 gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga gcccgggcga acgcgcgacc 60 ctgagctgcc gcgcgagcca gagcgttcgc tcctacctgg cgtggtatca gcagaaaccg 120 ggccaggcgc cgcgcctgct gatctacgac gcgagcaatc gtgcgaccgg cattccggcg 180 cgctttagcg gctccggtag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctggaaccg 240 gaagattttg cggtgtatta ttgccagcaa cgtaattatt ggccgctgac ctttggccag 300 ggcaccaaag tggaaattaa a 321 <210> 198 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> DNA of PD1H129 <400> 198 gaagtgcagc tggtggaatc tggcggcgga ctggtgcagc ctggcggatc tctgagactg 60 agctgtgccg ccagcggctt cgccttcagc agatacgaca tgagctgggt gcgccaggcc 120 cctggcaaag gactggaaag cgtggcctac atctctggcg gaggcgccaa cacctactac 180 ctggacaacg tgaagggccg gttcaccatc agccgggaca acgccaagaa cagcctgtac 240 ctgcagatga actccctgcg ggccgaggac accgccgtgt actattgcgc ctccccctac 300 ctgagctact tcgacgtgtg gggccagggc acactcgtga ccgtgtcatc t 351 <210> 199 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> DNA of PD1L62 <400> 199 gagatcgtga tgacccagag ccctgccacc ctgtccgtgt ctccaggcga aagagccacc 60 ctgagctgca gagccagcca gagcctgagc gactacctgc actggtatca gcagaagccc 120 ggccaggccc ccagactgct gatcaagtct gccagccagt ccatcagcgg catccccgcc 180 agattttctg gcagcggctc cggcaccgag ttcaccctga caatcagcag cctgcagagc 240 gaggacttcg ccgtgtacta ctgccagaac ggccacagct tcccttacac cttcggccag 300 ggcaccaagc tggaaatcaa g 321 <210> 200 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> DNA of PD1H163 <400> 200 caggtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cgagcggcgg caccttcaag tcctatgtga ttcattgggt gcgccaggcg 120 ccgggccagg gcctggaatg gatgggcggt attatcccaa tttttggcac cgccaattat 180 gcgcagaaat ttcagggccg cgtgaccatt accgctgatg aaagcaccag caccgcgtat 240 atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat accgcggtgt attattgcgc gcgcggttat 300 gtgcgggcta cgggcatgtt ggactattgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 <210> 201 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> DNA of PD1L185 <400> 201 gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga gcccgggcga acgcgcgacc 60 ctgagctgcc gcgcgagcca gagcgttagc aattatctgg cgtggtatca gcagaaaccg 120 ggccaggcgc cgcgcctgct gatctacgac gccagcaatc gcgcgaccgg cattccggcg 180 cgctttagcg gctccggtag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctggaaccg 240 gaagattttg cggtgtatta ttgccagcaa cgtgcatatt ggccgctgac ctttggccag 300 ggcaccaaag tggaaattaa a 321 <210> 202 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> DNA of PD1H164 <400> 202 caggtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cgagcggcgg caccttcagc gattatgtga tttcctgggt gcgccaggcg 120 ccgggccagg gcctggaatg gatgggcggt attatcccga tttacgggac cgctaactat 180 gcgcagaaat ttcagggccg cgtgaccatt accgctgatg aaagcaccag caccgcgtat 240 atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat accgcggtgt attattgcgc gcgcggtacc 300 ctcgaccgga ccgggcattt ggactattgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 <210> 203 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> DNA of PD1L86 <400> 203 gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga gcccgggcga acgcgcgacc 60 ctgagctgcc gcgcgagcca gagcgtctcc tcctaccttg cgtggtatca gcagaaaccg 120 ggccaggcgc cgcgcctgct gatccacgac gcctctacgc gtgcgaccgg cattccggcg 180 cgctttagcg gctccggtag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctggaaccg 240 gaagattttg cggtgtatta ttgccagcaa cgtaattatt ggccgctcac ctttggccag 300 ggcaccaaag tggaaattaa a 321 <210> 204 <211> 351 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> DNA of TM3H24 <400> 204 gaagtgcagc tgctggaaag cggcggcggc ctggtgcagc cgggcggcag cctgcgcctg 60 agctgcgcgg caagcggctt tacctttagc agctatgcga tgagctgggt gcgccaggcg 120 ccgggcaaag gcctggaatg ggtgagcgcg attagcggca gcggcggcag cacctattat 180 gcggatagcg tgaaaggccg ctttaccatt agccgcgata acagcaaaaa caccctgtat 240 ctgcagatga acagcctgcg cgcggaagat accgcggtgt attattgcgc gaaatccccg 300 tacgcgccct tggactattg gggccagggc accctggtga ccgtgagcag c 351 <210> 205 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> DNA of TM3L33 <400> 205 gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga gcccgggcga acgcgcgacc 60 cttagctgcc gtgcaagtca gagtgtgaac gactacctgg cgtggtatca gcagaaaccg 120 ggccaggcgc cgcgcctgct gatttatgat gcgagcaacc gcgcgaccgg cattccggcg 180 cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctggaaccg 240 gaagattttg cggtgtatta ttgccagcag ggtggtcacg cgccgatcac ctttggccag 300 ggcaccaaag tggaaattaa a 321 <210> 206 <211> 372 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> DNA of TM3H162 <400> 206 gaagtgcagc tggtgcagtc tggcgccgaa gtgaagaagc ctggcgagag cctgaagatc 60 agctgcaagg gcagcggcta cagcttcacc agctactgga tgcagtgggt gcgccagatg 120 cctggcaagg gcctggaatg gatgggcgcc atctatcccg gcgacggcga catcagatac 180 acccagaact tcaagggcca agtgaccatc agcgccgaca agagcatcag caccgcctac 240 ctgcagtggt ccagcctgaa ggccagcgac accgccatgt actactgtgc cagatgggag 300 aagtccacca ccgtggtgca 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ccctggtctc gctgcggctt atgatactgg ttccttggac tattggggcc 600 agggcaccct ggtgaccgtg agcagcgcct ccaccaaggg cccatcggtc ttccccctgg 660 cgccctgctc caggagcacc tccgagagca cagccgccct gggctgcctg gtcaaggact 720 acttccccga accggtgacg gtgtcgtgga actcaggcgc tctgaccagc ggcgtgcaca 780 ccttcccagc tgtcctacag tcctcaggac tctactccct cagcagcgtg gtgaccgtgc 840 cctccagcaa cttcggcacc cagacctaca cctgcaacgt agatcacaag cccagcaaca 900 ccaaggtgga caagacagtt gagcgcaaat gttgtgtcga gtgcccaccg tgcccagcac 960 cacctgtggc aggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga 1020 tctcccggac ccctgaggtc acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccccgagg 1080 tccagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccacggg 1140 aggagcagtt caacagcacg ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg caccaggact 1200 ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca gcccccatcg 1260 agaaaaccat ctccaaaacc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc 1320 catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct 1380 accccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga 1440 ccacacctcc catgctggac tccgacggct ccttcctgct ctacagcaag ctcaccgtgg 1500 acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc 1560 acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatgatag ttcgaattca 1620 ttgatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca 1680 cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt 1740 gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt 1800 ttttcac 1807 <210> 254 <211> 1105 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> PTBB28 LC1 DNA <400> 254 cagctgagtt gttgtgttct gataagagtc agaggtaact cccgttgcgg tgctgttaac 60 ggtggagggc agtgtagtct gagcagtact cgttgctgcc gcgcgcgcca ccagacataa 120 tagctgacag actaacagac tgttcctttc catgggtctt ttctgcagtc accgtccttg 180 acacgaagct tgccgccacc atggagacac attctcaggt ctttgtatac atgttgctgt 240 ggttgtctgg tgtcgaggga gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga 300 gcccgggcga acgcgcgacc ctgagctgcc gcgcgagcca gagcgttcgc tcctacctgg 360 cgtggtatca gcagaaaccg ggccaggcgc cgcgcctgct gatctacgac gcgagcaatc 420 gtgcgaccgg cattccggcg cgctttagcg gctccggtag cggcaccgat tttaccctga 480 ccattagcag cctggaaccg gaagattttg cggtgtatta ttgccagcaa cgtaattatt 540 ggccgctgac ctttggccag ggcaccaaag tggaaattaa acgtacggtg gctgcaccat 600 ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt 660 gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc 720 tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca 780 gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct 840 gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt 900 gttagtgatt cgaatgatca taatcagcca taccacattt gtagaggttt tacttgcttt 960 aaaaaacctc ccacacctcc ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa ttgttgttgt 1020 taacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca caaatttcac 1080 aaataaagca tttttttcac tgcat 1105 <210> 255 <211> 1789 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> PTBB28 HC2 DNA <400> 255 cagctgagtt gttgtgttct gataagagtc agaggtaact cccgttgcgg tgctgttaac 60 ggtggagggc agtgtagtct gagcagtact cgttgctgcc gcgcgcgcca ccagacataa 120 tagctgacag actaacagac tgttcctttc catgggtctt ttctgcagtc accgtccttg 180 acacgaagct tgccgccacc atggcttggg tgtggacctt gctattcctg atggcagctg 240 cccaaagtat acaggccgaa gtgcagctgc tggaaagcgg cggcggcctg gtgcagccgg 300 gcggcagcct gcgcctgagc tgcgcggcaa gcggctttac ctttagcagc tatgcgatga 360 gctgggtgcg ccaggcgccg ggcaaaggcc tggaatgggt gagcgcgatt agcggcagcg 420 gcggcagcac ctattatgcg gatagcgtga aaggccgctt taccattagc cgcgataaca 480 gcaaaaacac cctgtatctg cagatgaaca gcctgcgcgc ggaagatacc gcggtgtatt 540 attgcgcgaa atccccgtac gcgcccttgg actattgggg ccagggcacc ctggtgaccg 600 tgagcagcgc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcgccctgc tccaggagca 660 cctccgagag cacagccgcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga 720 cggtgtcgtg gaactcaggc gctctgacca gcggcgtgca caccttccca gctgtcctac 780 agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc aacttcggca 840 cccagaccta cacctgcaac gtagatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagacag 900 ttgagcgcaa atgttgtgtc gagtgcccac cgtgcccagc accacctgtg gcaggaccgt 960 cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg 1020 tcacgtgcgt ggtggtggac gtgagccacg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg 1080 tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccacg ggaggagcag ttcaacagca 1140 cgttccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgttg tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt 1200 acaagtgcaa ggtctccaac aaaggcctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaaa 1260 ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga 1320 ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg 1380 tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacacct cccatgctgg 1440 actccgacgg ctccttcttc ctctacagcc ggctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc 1500 aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga 1560 agagcctctc cctgtctccg ggtaaatgat agttcgaatt cattgatcat aatcagccat 1620 accacatttg tagaggtttt acttgcttta aaaaacctcc cacacctccc cctgaacctg 1680 aaacataaaa tgaatgcaat tgttgttgtt aacttgttta ttgcagctta taatggttac 1740 aaataaagca atagcatcac aaatttcaca aataaagcat ttttttcac 1789 <210> 256 <211> 1105 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> PTBB28 LC2 DNA <400> 256 cagctgagtt gttgtgttct gataagagtc agaggtaact cccgttgcgg tgctgttaac 60 ggtggagggc agtgtagtct gagcagtact cgttgctgcc gcgcgcgcca ccagacataa 120 tagctgacag actaacagac tgttcctttc catgggtctt ttctgcagtc accgtccttg 180 acacgaagct tgccgccacc atggagacac attctcaggt ctttgtatac atgttgctgt 240 ggttgtctgg tgtcgaggga gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga 300 gcccgggcga acgcgcgacc cttagctgcc gtgcaagtca gagtgtgaac gactacctgg 360 cgtggtatca gcagaaaccg ggccaggcgc cgcgcctgct gatttatgat gcgagcaacc 420 gcgcgaccgg cattccggcg cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga 480 ccattagcag cctggaaccg gaagattttg cggtgtatta ttgccagcag ggtggtcacg 540 cgccgatcac ctttggccag ggcaccaaag tggaaattaa acgtacggtg gctgcaccat 600 ctgtcttcat cttcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt 660 gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca 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taacttgttt attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca caaatttcac 1080 aaataaagca tttttttcac tgcat 1105 <210> 259 <211> 1789 <212> DNA <213> Artificial sequence <220> <223> PTBB30 HC2 DNA <400> 259 cagctgagtt gttgtgttct gataagagtc agaggtaact cccgttgcgg tgctgttaac 60 ggtggagggc agtgtagtct gagcagtact cgttgctgcc gcgcgcgcca ccagacataa 120 tagctgacag actaacagac tgttcctttc catgggtctt ttctgcagtc accgtccttg 180 acacgaagct tgccgccacc atggcttggg tgtggacctt gctattcctg atggcagctg 240 cccaaagtat acaggccgaa gtgcagctgc tggaaagcgg cggcggcctg gtgcagccgg 300 gcggcagcct gcgcctgagc tgcgcggcaa gcggctttac ctttagcagc tatgcgatga 360 gctgggtgcg ccaggcgccg ggcaaaggcc tggaatgggt gagcgcgatt agcggcagcg 420 gcggcagcac ctattatgcg gatagcgtga aaggccgctt taccattagc cgcgataaca 480 gcaaaaacac cctgtatctg cagatgaaca gcctgcgcgc ggaagatacc gcggtgtatt 540 attgcgcgaa atccccgtac gcgcccttgg actattgggg ccagggcacc ctggtgaccg 600 tgagcagcgc ctccaccaag ggcccatcgg tcttccccct ggcgccctgc tccaggagca 660 cctccgagag cacagccgcc ctgggctgcc tggtcaagga ctacttcccc gaaccggtga 720 cggtgtcgtg gaactcaggc gctctgacca gcggcgtgca caccttccca gctgtcctac 780 agtcctcagg actctactcc ctcagcagcg tggtgaccgt gccctccagc aacttcggca 840 cccagaccta cacctgcaac gtagatcaca agcccagcaa caccaaggtg gacaagacag 900 ttgagcgcaa atgttgtgtc gagtgcccac cgtgcccagc accacctgcc gcagccagct 960 cagtcttcct cttcccccca aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg 1020 tcacgtgcgt ggtggtggac gtgagcgccg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg 1080 tggacggcgt ggaggtgcat aatgccaaga caaagccacg ggaggagcag ttcaacagca 1140 cgttccgtgt ggtcagcgtc ctcaccgttc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt 1200 acaagtgcaa ggtctccaac aaaggcctcc catcctccat cgagaaaacc atctccaaaa 1260 ccaaagggca gccccgagaa ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga 1320 ccaagaacca ggtcagcctg acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg 1380 tggagtggga gagcaatggg cagccggaga acaactacaa gaccacacct cccatgctgg 1440 actccgacgg ctccttcttc ctctacagcc ggctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc 1500 aggggaacgt cttctcatgc tccgtgatgc atgaggctct 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Claims (21)

  1. PD-1과 특이적으로 결합하는 제1 도메인 및 TIM-3과 특이적으로 결합하는 제2 도메인을 포함하는 단리된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체.
  2. 제2항에 있어서, 하기 특성 중 1개 또는 2개를 갖는 항체:
    a) 항원 특이적 CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 활성화를 향상시킴; 또는
    b) 갈렉틴-9(서열 번호 308)에 대한 TIM-3(서열 번호 138)의 결합을 저해함.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    a) 제1 도메인이 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32, 또는 각각 서열 번호 66, 67, 68, 69, 70, 및 71의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고;
    b) 제2 도메인이 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143; 또는 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 항체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, TIM-3 잔기 32-47(WGKGACPVFECGNVVL)(서열 번호 261) 내에서 TIM-3과 결합하고, 임의로 TIM-3 잔기 50-56(DERDVNY)(서열 번호 262) 내에서 추가로 결합하는 항체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 제1 도메인이 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하며, 제2 도메인이 각각 서열 번호 91, 99, 108, 118, 127, 및 136의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고/하거나;
    b) 제1 도메인이 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하며, 제2 도메인이 서열 번호 146의 VH 및 서열 번호 156의 VL을 포함하고/하거나;
    c) 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)가 각각 서열 번호 186, 188, 191, 및 194의 서열을 포함하고/하거나;
    d) HC1, LC1, HC2, 및 LC2가 각각 서열 번호 186, 188, 248, 및 194의 서열을 포함하고/하거나;
    e) HC1, LC1, HC2, 및 LC2가 각각 서열 번호 241, 188, 245, 및 194의 서열을 포함하고/하거나;
    f) HC1, LC1, HC2, 및 LC2가 각각 서열 번호 243, 188, 246, 및 194의 서열을 포함하는 항체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, TIM-3 잔기 90-102(RIQIPGIMNDEKF)(서열 번호 263) 내에서 TIM-3과 결합하고, 임의로 TIM-3 잔기 50-56(DERDVNY)(서열 번호 262) 내에서 추가로 결합하는 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 제1 도메인이 각각 서열 번호 10, 14, 17, 23, 26, 및 32의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하며, 제2 도메인이 각각 서열 번호 97, 105, 115, 124, 133, 및 143의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하고/하거나;
    b) 제1 도메인이 서열 번호 48의 VH 및 서열 번호 56의 VL을 포함하며, 제2 도메인이 서열 번호 172의 VH 및 서열 번호 173의 VL을 포함하고/하거나;
    c) 제1 중쇄(HC1), 제1 경쇄(LC1), 제2 중쇄(HC2), 및 제2 경쇄(LC2)가 각각 서열 번호 186, 188, 192, 및 195의 서열을 포함하고/하거나;
    d) HC1, LC1, HC2, 및 LC2가 각각 서열 번호 241, 188, 244, 및 195의 서열을 포함하고/하거나;
    e) HC1, LC1, HC2, 및 LC2가 각각 서열 번호 243, 188, 247, 및 195의 서열을 포함하는 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) Fc 영역 내에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 치환을 임의로 포함하는 IgG1 동종형;
    b) Fc 영역 내에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 치환을 임의로 포함하는 IgG2 동종형;
    c) Fc 영역 내에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 치환을 임의로 포함하는 IgG3 동종형;
    d) Fc 영역 내에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 또는 10개의 치환을 임의로 포함하는 IgG4 동종형;
    e) L234A, L235A, G237A, P238S, H268A, A330S, 및 P331S 치환을 포함하는 IgG1 동종형;
    f) V234A, G237A, P238S, H268A, V309L, A330S, 및 P331S 치환을 포함하는 IgG2 동종형;
    g) F234A, L235A, G237A, P238S, 및 Q268A 치환을 포함하는 IgG4 동종형;
    h) L234A, L235A, 또는 L234A 및 L235A 치환을 포함하는 IgG1 동종형;
    i) F234A, L235A, 또는 F234A 및 L235A 치환을 포함하는 IgG4 동종형;
    j) V234A 치환을 포함하는 IgG2 동종형;
    k) S228P 치환을 포함하는 IgG4 동종형;
    l) S228P, F234A, 및 L235A 치환을 포함하는 IgG4 동종형;
    m) F405L 및 R409K 치환을 포함하는 IgG2 동종형; 또는
    n) F405L 및 K409R 치환을 포함하는 IgG1 동종형이며, 여기서 잔기 번호화는 EU 인덱스에 따르는 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  10. a) 서열 번호 186, 187, 188, 189, 190, 191,192, 193, 194, 195, 241, 242, 243, 244, 245, 246, 또는 247의 HC1, LC1, HC2, 또는 LC2를 인코딩하거나;
    b) 서열 번호 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 또는 260의 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오티드.
  11. 제10항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터.
  12. 제11항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  13. 항체가 발현되는 조건에서 제12항의 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 숙주 세포에 의해 생성된 이중특이성 PD-1/TIM-3 길항 항체를 회수하고 정제하는 단계를 포함하는, 이중특이성 PD1/TIM-3 길항 항체를 생성하는 방법.
  14. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 단리된 항체 또는 제9항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 암을 치료하기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 암을 치료하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 암이 고형 종양 또는 혈액성 악성종양인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 고형 종양이 흑색종, 폐암, 편평상피 비-소세포 폐암(NSCLC: non-small cell lung cancer), 비-편평상피 NSCLC, 결장직장암, 전립선암, 거세-저항성 전립선암, 위암, 난소암, 위장암(gastric cancer), 간암, 췌장암, 갑상선암, 두경부의 편평상피세포 암종, 식도 또는 위장관의 암종, 유방암, 나팔관암, 뇌암, 요도암, 비뇨생식기암, 자궁내막증, 자궁경부암, 또는 암의 전이 병변인 방법.
  17. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 단리된 항체 또는 제9항의 약제학적 조성물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상에게 면역 반응을 향상시키기에 충분한 시간 동안 투여하는 단계를 포함하는, 대상에서 면역 반응을 향상시키는 방법.
  18. 제17항에 있어서, 대상이 암 또는 바이러스 감염을 갖는 방법.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 항체가 제2 치료제와 병용하여 투여되는 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 치료제가
    a) 고형 종양 또는 혈액성 악성종양의 치료를 위한 치료 기준(standard of care) 약물;
    b) 백신;
    c) 방사선 요법; 또는
    d) 수술인 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서,
    a) 대상이 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체로 치료 중이거나 치료된 적이 있거나; 또는
    b) 대상이 PD-1과 특이적으로 결합하는 길항 항체를 이용한 치료에 대해 불응성이거나 저항성인 방법.
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