CN103796680A - 用于增强针对赘生物的基于免疫的治疗的聚焦放射 - Google Patents

Abstract

公开了一种将基于免疫的治疗与聚焦放射，包括立体定位放射，联合以治疗癌症的方法。聚焦放射的使用以与疫苗类似的方式引发免疫系统以增强基于免疫的治疗并能对抗肿瘤的抑制作用。聚焦放射和基于免疫的治疗的联合，包括施用至少一种免疫治疗剂，与每种治疗单用相比提高存活率，并且能在某些情况下导致持久的治愈。因此，聚焦放射可以是用于治疗癌症的基于免疫的治疗的辅药。

Description

用于增强针对赘生物的基于免疫的治疗的聚焦放射

相关申请的引用

本申请要求2011年6月21日提交的美国临时专利申请号61/499,237和2011年10月21日提交的美国临时专利申请号61/549,975的权益，两者均为了所有目的通过引用并入此文，如同在本文中完全描述。

发明背景

治疗赘生物的现有治疗策略的主要限制因素是肿瘤异质性和肿瘤的侵袭性本质。因此，有效的治疗需要特异性靶向多样和动态的细胞群体，以及攻击已迁徙出肿瘤块边缘的肿瘤细胞。

几十年以来，免疫治疗已经作为癌症治疗被研究。成功地驾驭免疫应答可在细胞水平引起特异性的和适应性的抗肿瘤活性。免疫治疗允许靶向不同区室中的多个细胞类型。而且，完全参与的免疫系统，例如通过接种，可提供长期的抗肿瘤监控和保护。因此，如果免疫系统以它针对感染被激活的方式针对癌症被完全激活，机体可为它自己提供持久和靶向的方式以抵御癌症。

然而，尽管研究密集，目前的免疫治疗方法产生了令人失望的结果。最近的工作表明，机体可产生抗肿瘤免疫应答，然而仅仅观察到存活率的微小改进。令人失望的结果的一个原因是肿瘤免疫微环境。肿瘤细胞设计了一套复杂的机制来逃避免疫应答。癌症可通过几个机制来减弱免疫应答，这些机制包括，但不限于：下调主要组织相容性复合体（MHC）的表达，增加调节性T细胞（T_reg）的激活和表达免疫抑制性的细胞因子谱。例如，来源于培养在bFGF和EGF中的成胶质细胞瘤的肿瘤干细胞比血清培养的细胞系更密切地反映原发性肿瘤的表型和基因型。例如，图1显示了针对多形性成胶质细胞瘤的积极免疫治疗的目前方法。然而，肿瘤细胞也可表达免疫关卡分子或抑制剂（immune checkpoint molecules orinhibitors），例如Programmed Death1（PD-1）、CTLA-4、B7H1、B7H4、OX-40、CD137、CD40和LAG3，这些分子或抑制剂直接抑制免疫细胞和抑制宿主的免疫应答。

放射治疗长期以来被认为是直接细胞毒性的癌症治疗，并已知是降低肿瘤体积的有效方法。然而，较新的证据也表明放射能够对抗免疫抑制的肿瘤微环境以通过以下机制产生免疫应答：例如增加MHC I类表达，呈递通常受抑制的癌-相关抗原，增加促炎性细胞因子的表达，以及Fas配体的下调。

因此，放射在用癌症抗原引发免疫系统的方面是有效的。然而，目前的放射策略具有限制。例如，目前的放射范例放射显著边缘以包括浸润细胞。该范例要求将患者放射数周，因此，患者已经历放射相关的毒性，包括白细胞（WBC）计数的下降，这种下降对于免疫治疗是产生相反效果的。相反，聚焦辐射，例如立体定向放射外科手术（stereotactic radiosurgery，SRS），允许放射的治疗剂量，同时将放射相关的毒性最小化。而且，高剂量的放射可通过SRS在一天内递送。

因此，对于要求组合治疗方法的新癌症免疫治疗存在需要，该方法同时使用放射治疗激活免疫系统，并绕开肿瘤介导的免疫抑制。

发明概述

根据一个实施方案，本发明提供用以在受试者中针对癌症激活和/或维持免疫系统以促进抗肿瘤应答的方法，所述方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射以针对癌症激活和/或维持免疫系统以在受试者中促进抗肿瘤应答。

根据一个实施方案，本发明提供用于抑制、降低或对抗受试者中肿瘤的免疫抑制作用的方法，该方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射以抑制或降低肿瘤的免疫抑制作用。

根据一个实施方案，本发明提供用于在受试者的肿瘤微环境中起始或增加癌症抗原的存在的方法，该方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射以在受试者的肿瘤微环境中起始或增加癌症抗原的存在。

根据一个实施方案，本发明提供用以在需要肿瘤治疗的受试者中治疗肿瘤的方法，该方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射以与至少一种免疫治疗剂联合来治疗肿瘤。

根据另一个实施方案，本发明提供用以在需要肿瘤治疗的受试者中治疗肿瘤的方法，该方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射以与至少一种包含免疫关卡抑制剂（immune checkpoint inhibitor）的免疫治疗剂联合来治疗肿瘤。

根据另一个实施方案，本发明提供用以在需要肿瘤治疗的受试者中治疗肿瘤的方法，该方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射以与选自由以下组成的组的至少一种免疫治疗剂联合来治疗肿瘤：基于细胞因子的治疗，基于被动免疫的策略，包括抗体治疗和过继性治疗，和基于疫苗的治疗。

根据进一步实施方案，本发明提供包含至少一种免疫治疗剂的药物组合物，其中组合物包括药学上和生理上可接受的载体，以有效的量用于药剂并最优选作为药剂使用，在当以有效量施用于接受或将接受聚焦放射治疗的受试者中时，在该受试者中诱导免疫应答、或治疗癌症、或抑制肿瘤或赘生物的生长。

根据又另一个实施方案，本发明提供至少一种免疫治疗剂在制备用于在接受或将接受聚焦放射治疗的个体中治疗临床病症的药物组合物中的用途。

根据一个实施方案，本发明提供用于在需要癌症治疗的受试者中治疗癌症的新辅助治疗（neoadjuvant therapy）的方法，所述方法包含：（a）联合治疗有效的第一剂量的至少一种免疫治疗剂，向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射；（b）对受试者进行手术以移除与癌症相关的至少部分肿瘤；以及（c）联合治疗有效的第二剂量的至少一种免疫治疗剂，向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射；其中步骤（a）、（b）和（c）可按照治疗受试者中癌症的需要系列或单独重复（repeated in series or individually）。在又进一步方面，方法还包含向受试者施用另外的化学治疗和或放射治疗，例如传统的化学/放射治疗，在一些方面化学/放射治疗也可包括辅助治疗。

根据另一个实施方案，本发明提供用于在需要癌症治疗的受试者中治疗癌症的新辅助治疗的方法，所述方法包含：（a）联合治疗有效的第一剂量的至少一种免疫治疗剂，向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射，免疫治疗剂选自由以下组成的组：基于细胞因子的治疗，基于被动免疫的策略，包括抗体治疗和过继性治疗，和基于疫苗的治疗；（b）对受试者进行手术以移除与癌症相关的至少部分肿瘤；以及（c）联合治疗有效的第二剂量的至少一种免疫治疗剂，向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射；其中步骤（a）、（b）和（c）可按照治疗受试者中癌症的需要系列或单独重复。在又进一步方面，方法还包含向受试者施用另外的化学治疗和/或放射治疗，例如传统的化学/放射治疗，在一些方面化学/放射治疗也可包括辅助治疗。

本公开的主题的一些方面已经在上文中陈述，这些方面的整体或一部分由本公开的主题提到，其它方面将在与下文中最佳描述的伴随的实施例和附图一起随着描述的进行变得明显。

附图简述

已经概括地如此描述了本公开的主题，现在将参照附图，附图不必按比例绘出，其中：

图1提供了在肿瘤微环境中免疫逃避的机制（现有技术，来自Bower等人）；

图2A-2D显示在植入后第10天的颅内植入（2A和2B）和组织学（2C和2D）；

图3A-3C显示（3A）小动物研究辐射体平台（SARRP）和来自植入的基于钻孔的肿瘤周围中心的立体定位放射束（3B和3C）；

图4A-4C显示（4A）在不同治疗臂中小鼠的Kaplan-Meier存活曲线；（4B）确认GL161细胞系中PD-L1表达的蛋白质印迹数据；以及（4C）小鼠在不同治疗臂中治疗前和治疗后的生物发光图像；

图5A-5C显示在植入后第21天的脑免疫状态：（5A）细胞毒性T细胞；（5B）调节性T细胞；以及（5C）细胞毒性T细胞与调节性T细胞的比率。无肿瘤臂中N=3只小鼠，所有其他臂具有每臂6-9只小鼠。星号代表所示的治疗臂和所有其它治疗臂之间的统计性显著差异；

图6描述与“幼稚（naive）”小鼠相比，脑肿瘤的“治愈”小鼠的胁腹（flank）再攻击。在6A中一张图显示了幼稚小鼠与治疗小鼠相比在肿瘤体积上的增加。6B显示了在第21天时幼稚小鼠与治疗小鼠相比的生物发光成像。

图7是利用本公开的方法的代表性新辅助治疗策略的示意图。

图8显示在植入后第7天，小鼠使用生物发光成像被分层为四个治疗组：（1）同种型对照（2）立体定向放射（3）抗4-1BB和抗CTLA-4抗体（4）立体定向放射和抗4-1BB和抗CTLA-4抗体。

图9描述了Kaplan-Meier曲线，该曲线显示，用立体定向放射手术合并抗4-1BB和抗CTLA-4抗体治疗的小鼠导致了比对照和用IgG同种型的放射显著（P<0.05，时序检验）更高的中位存活。

图10A和10B是描述产生IFN-y的CD4+和CD8+细胞的数目的图。在治疗组之间TIL的绝对计数没有差别。然而，从放射加抗4-1BB和抗CTLA-4组收获的脑具有更小的肿瘤。

图11是显示保护性记忆响应的图。图示了在肿瘤再攻击后的肿瘤尺寸。胁腹肿瘤生长被监测了另外50天。所有幼稚动物到第17天都有可触知的肿瘤，然而长期存活者到第50天时都没有肿瘤生长的迹象。

图12是描绘记忆响应的特异性的图。对治愈和幼稚的小鼠在左胁腹皮下注射10⁶GL261-LUC细胞，在右胁腹皮下注射10⁵B16-LUC细胞。幼稚动物在两胁腹均具有可触知的肿瘤；GL261和B16肿瘤的生长。然而，治愈动物仅在右胁腹生长肿瘤，左胁腹没有肿瘤；仅生长B16肿瘤。

发明详述

本公开的主题现在将在以下参考附图更详尽的描述，一些但不是所有本公开的主题的实施方案显示在这些图中。本公开的主题可以以许多不同形式实施，不应被解释为限制于本文列出的实施方案；而是，提供这些实施方案使得本公开内容将满足适用的法律要求。事实上，由于具有前述描述和相关图中呈现的教导的益处，本公开的主题所属领域的技术人员将想到本文列出的本公开的主题的许多修改和其它实施方案。因此，将被理解的是本公开的主题不限于公开的特定实施方案，修改和其它实施方案旨在被包括在所附权利要求的范围内。

根据本发明的实施方案，公开的主题提供一种方法，通过这种方法免疫系统被激活并然后维持以在受试者中促进有效的抗肿瘤响应。

在一个或多个实施方案中，本发明提供使用聚焦放射作为受试者中针对肿瘤的免疫治疗的启动物（initiator）的方法。

根据一个或多个实施方案，本发明提供治疗肿瘤的方法：对受试者使用聚焦放射以在受试者中启动免疫应答，接着施用免疫治疗剂，例如PD-1抗体，以绕过免疫关卡并维持受试者中的免疫应答。

因此，根据一个实施方案，本发明提供在需要肿瘤治疗的受试者中治疗肿瘤的方法，所述方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射联合包含免疫关卡抑制剂的至少一种免疫治疗剂来治疗肿瘤。

如本文中使用，术语“免疫治疗剂”可包括能在受试者中刺激宿主免疫系统产生对肿瘤或癌症的免疫应答的任何分子、肽、抗体或其它剂。不同的免疫治疗剂可用在本文描述的组合物和方法中。

本领域普通技术人员将理解的是，术语“免疫关卡”是指CD4和CD8T细胞的细胞表面上的一组分子。这些分子有效地充当“闸”来下调或抑制抗肿瘤免疫应答。免疫关卡分子包括，但不限于，Programmed Death1（PD-1）、细胞毒性T淋巴细胞抗原4（CTLA-4）、B7H1、B7H4、OX-40、CD137、CD40和LAG3，这些分子直接抑制免疫细胞。能充当本发明的方法中有用的免疫关卡抑制剂的免疫治疗剂包括，但不限于，抗B7-H4；抗PD1或抗B7-H1；抗CTLA-4（伊匹单抗（ipilimumab））和抗LAG3。

更具体地，如也在本文以下更详细描述的，伊匹单抗（抗CTLA-4）是结合至CTLA-4的完全人类拮抗性的单克隆抗体。CTLA-4是在某些CD4和CD8T细胞上表达的细胞表面蛋白；当与APC上它的配体（B7-1和B7-2）接合时，T细胞激活和效应子功能被抑制。当施用抗CTLA-4抗体时，CTLA-4受体不再结合至这些配体，T细胞响应不被限制。伊匹单抗在黑素瘤、肾细胞癌以及更近地在前列腺癌的许多临床试验中已被评价。

根据本发明的另一个实施方案，另一个能有潜力被开发用来治疗某些癌症的免疫关卡是被称为programmed death1（PD-1或CD29）的抑制性共受体。在浸润患癌症男性的前列腺的CD8T细胞中，达87%表达PD-1。PD-1的主要配体B7-H1的肿瘤-特异性表达与肾癌以及人类中的其它癌症的不良预后相关。相反地，在多个系统中阻断PD-1：B7-H1相互作用引起肿瘤退化。MDX-1106是对人PD-1特异的遗传改造的、完全人免疫球蛋白G4（IgG4）单克隆抗体，其最近在1期、剂量递增试验中被评价。

根据本发明的替代实施方案，免疫治疗剂可包括蛋白和/或蛋白抗体和生物分子，包括例如B和T淋巴细胞弱化子蛋白（B-and T-lymphocyteattenuator protein，BTLA）、Tim3、CD160、KIR拮抗剂抗体、4-1BB、OX40、CD27和CD4。

不希望被任何一个特定理论所束缚，认为聚焦放射有效地破坏肿瘤微环境并引起肿瘤抗原的呈递以有效地作为疫苗样响应。目前的癌症疫苗被缺少肿瘤特异性抗原所限制。与疫苗相比，聚焦放射的一个优势是聚焦放射精确地单独靶向肿瘤，以引起将对肿瘤特异的多个抗原的溢出（spillage）。

根据一个实施方案，本发明提供用于针对癌症激活和/或维持受试者的免疫系统以在受试者中产生抗肿瘤响应的方法，所述方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射以针对癌症激活和/或维持免疫系统以在受试者中促进抗肿瘤响应。

根据另一个实施方案，本发明提供用于抑制、降低或对抗受试者中肿瘤的免疫抑制作用的方法，该方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射以抑制或降低肿瘤的免疫抑制作用。

根据一个进一步的实施方案，本发明提供用于在受试者的肿瘤微环境中起始或增加癌症抗原的存在的方法，该方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射以在受试者的肿瘤微环境中起始或增加癌症抗原的存在。

如本文所使用，术语“肿瘤微环境”包括围绕和饲养肿瘤细胞的细胞，包括正常细胞、分子和血管。肿瘤可改变它的微环境，微环境可影响肿瘤的生长和扩散方式。更具体地，肿瘤微环境是许多细胞的复杂系统，这些细胞全部能参与肿瘤进展，包括内皮细胞以及其前体、周细胞、平滑肌细胞、各种表型的成纤维细胞、肌成纤维细胞、嗜中性粒细胞和其它的粒细胞（嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）、肥大细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤淋巴细胞、和抗原呈递细胞，例如巨噬细胞和树突细胞。微环境的成分通常可被分组为四类：癌细胞、非癌细胞、分泌的可溶性因子和非细胞固体物质，包括细胞外基质。

根据一个实施方案，本发明提供在需要肿瘤治疗的受试者中治疗肿瘤的方法，所述方法包含向受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射联合至少一种免疫治疗剂来治疗肿瘤。

如本文以下所更详细地描述的，聚焦放射可选自由以下组成的组：立体定位放射手术、分级立体定位放射手术和调强放射治疗（intensity-modulated radiation therapy）。聚焦放射可具有选自由以下组成的组的放射源：粒子束（质子）、钴60（光子）和线性加速器（X射线）。

根据一个或多个实施方案，本发明提供施用治疗有效量的至少一种免疫治疗剂联合治疗有效剂量的聚焦放射的方法。在具体实施方案中，免疫治疗剂选自由以下组成的组：单克隆抗体、免疫效应细胞、疫苗包括树突细胞疫苗、和细胞因子。

如本文以下更详细描述的，本发明组合物和方法中使用的单克隆抗体可选自由以下组成的组：抗PD-1抗体、阿仑单抗、贝伐单抗、brentuximabvedotin、西妥昔单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、替伊莫单抗（ibritumomabtiuxetan）、伊匹单抗（抗CTLA-4）、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、抗B7-H4、抗B7-H1、抗LAG3、BTLA、抗Tim3、抗B7-DC、抗CD160、KIR拮抗剂抗体、抗4-1BB、抗OX40、抗CD27和CD40激动剂抗体。

根据一个实施方案，本发明提供治疗方法，其中聚焦放射被用于补充阻断PD-1受体和允许持续免疫应答的基于免疫的治疗。如实施例中更详细地提供的，本公开的数据表明在小鼠GBM模型中，将SRS与PD-1阻滞相结合是协同性的，比单独的每种治疗更有效。

根据进一步实施方案，本发明提供包含至少一种免疫治疗剂的药物组合物，其中组合物包括药学和生理学上可接受的载体，以有效的量用于药剂并最优选作为药剂使用，在当以有效量施用于接受或将接受聚焦放射治疗的受试者中时，在该受试者中诱导免疫应答、或治疗癌症、或抑制肿瘤或赘生物的生长的药物。

根据又另一个实施方案，本发明提供至少一种免疫治疗剂例如免疫关卡抑制剂在制备用于在接受或将接受聚焦放射治疗的个体中治疗临床病症的药物组合物中的用途。

根据又另一种实施方案，本发明提供用于治疗癌症的新辅助策略或治疗方案。本领域普通技术人员将理解，术语“新辅助治疗”包括在传统化疗/放射治疗和辅助治疗前，或连同传统化疗/放射治疗和辅助治疗，联合聚焦放射施用一种或多种治疗或免疫治疗剂。新辅助治疗旨在在使用彻底治疗干预前，降低癌症的大小或程度，因此使得方案更容易和更可能成功，并在如果肿瘤没有在大小或程度上降低时，降低将要求的更广泛的治疗技术的后果。

如本文所用，术语“治疗剂”包含药物和其它活性剂，例如化疗剂、免疫治疗剂，例如免疫关卡抑制剂。

图7描绘了标准现有技术肿瘤治疗方案（左）和本发明的代表性新辅助治疗方案（右）的比较。在该代表性、非限制性策略中，患者在收到活组织检查的结果后数天，被施用聚焦放射联合第一剂量的抗体。在一段时间后，例如一周后，患者可经历手术。在手术后，例如，手术后两周，患者被施用聚焦放射联合第二剂量的抗体。在另一段时间后，例如两周后，患者被施用聚焦放射联合第三剂量的抗体。本领域普通技术人员在回顾本公开的主题后将认识到图7中呈现的治疗方案可被调整或修改以满足个体患者的治疗需要。例如，图7中公开的任何步骤均可系列重复，或单独进行，以满足这种需要。

根据另一个实施方案，本发明的方法还包含向受试者施用另外的化疗、免疫治疗和或放射治疗。在其它实施方案中，方法还包含向受试者施用辅助治疗。

根据另一个实施方案，本发明方法还包含向受试者施用至少一种辅药（adjuvant）联合至少一种免疫治疗剂和/或免疫关卡抑制剂。在特定实施方案中，辅药选自由下列组成的组：细胞因子、白介素、干扰素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、卡介苗（BCG）、匙孔戚血蓝蛋白（keyhole limpet memocyanin，KLH）、不完全弗氏佐剂（IFA）、QS-21、DETOX和二硝基苯基（dinitrophenyl）。

将被理解的是，本发明的方法可被用于治疗许多肿瘤，包括良性和恶性的。在一种或多种实施方案中，本发明提供治疗癌症的方法和组合物，所述癌症包括，例如，受试者中作为实体瘤存在的癌症。本领域普通技术人员在回顾本公开的主题后，将理解其它肿瘤，包括实体瘤、病变和病症可被本公开的方法治疗，包括但不限于：涉及脑的癌症；涉及脊椎的癌症；肺癌；胰腺癌；前列腺癌；肝癌、肾癌；乳腺癌、黑素瘤、转移性眼眶肿瘤、眼眶淋巴瘤和眼眶炎症；良性脑肿瘤，例如听神经瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤、颅咽管瘤成血管细胞瘤、神经鞘瘤；脑中血管的畸形，例如动静脉血管畸形（AVM）和三叉神经痛。

根据本发明的一个实施方案，被治疗的肿瘤是脑瘤。在更具体的实施方案中，脑瘤选自由以下组成的组：成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤和转移性脑瘤。

如本文所使用，术语“治疗”可包括逆转、减轻、抑制这种术语适用的疾病、疾患或病症的进程，阻止或降低这种术语适用的疾病、疾患或病症的可能性或这种疾病、疾患或病症的一种或多种症状或表现。阻止指的是使得疾病、疾患或病症或其症状或表现不发生，或其严重程度的恶化不发生。因此，本公开的治疗方案可被预防性施用以阻止或降低疾病、疾患或病症的发生或复发。

在它们的许多实施方案中被本公开的方法治疗的“受试者”理想中是人类受试者，然而将被理解的是本文中描述的方法对于所有脊椎动物物种是有效的，脊椎动物意图被包括在术语“受试者”中。因此，“受试者”可包括医学目的上的人类受试者，例如用于治疗现存病症或疾病或为了阻止病症或疾病的发生的预防性治疗，或者用于医学、兽医目的或开发目的的动物受试者。适合的动物受试者包括哺乳动物，包括但不限于，灵长类动物，例如，人类、猴、猿等等；牛科动物，例如，牛（cattle）、公牛（ox）等等；绵羊类的动物，例如，绵羊等等；山羊类动物，例如，山羊等等；猪类动物，例如，猪（pig）、肉猪（hog）等等；马科动物，例如，马、驴、斑马等等；猫科动物，包括野生和家养的猫；犬科动物，包括犬；兔类动物，包括家兔、野兔等等；以及啮齿类动物，包括小鼠、大鼠等等。动物可以是转基因动物。在一些实施方案中，受试者是人类，包括但不限于，胎儿、新生儿、婴儿、青少年和成年受试者。而且，“受试者”可包括罹患或疑似罹患病症或疾病的患者。因此，术语“受试者”和“患者”在本文是可互换使用的。术语“受试者”也指来自受试者的有机体、组织、细胞或细胞的集合。

总的来说，剂的“有效量”，例如，放射和/或免疫治疗剂的剂量，指的是引起期望的生物响应的必要的量。如本领域普通技术人员所将理解的，剂的有效量可依赖于例如以下的因素而不同：预期的生物学终点、将递送的剂、剂的组成、靶组织等等。

术语“联合”以其最广泛的意义使用，是指受试者被施用至少两种剂，例如，放射剂量和至少一种免疫治疗剂，例如，单克隆抗体、免疫效应细胞、疫苗包括树突细胞疫苗、和细胞因子，如本文所描述或本领域另外所知。

根据本发明的方法的一种或多种实施方案，只要达到这些剂的组合的有益效果，放射剂量和至少一种免疫治疗剂的施用的时间安排可以变化。因此，短语“联合“指的是同时地、顺序地（sequentially）施用放射剂量和至少一种免疫治疗剂或其组合。因此，施用放射剂量和至少一种免疫治疗剂的组合的受试者可在同一时间（即，同时）或在不同时间（即，顺序地，以任一顺序，在同一天或不同天）接受放射剂量和至少一种免疫治疗剂，只要在受试者中达到了两个剂的组合的效果。

将被普通技术人员理解的是，当顺序施用时，免疫治疗剂可在互相的1、5、10、30、60、120、180、240分钟或更长时间内施用。在其它实施方案中，顺序施用的剂，可在互相的1、5、10、15、20或更多天内施用。当施用多于一种治疗剂联合放射剂量，并且这些剂被顺序地或同时地施用时，它们能作为分别的药物组合物向受试者施用，各自包含一种治疗剂和至少一种免疫治疗剂，或者它们可作为包含两种剂的单个药物组合物向受试者施用。

当联合施用时，引起特定生物学响应的每种剂的有效浓度可少于当单独施用时的每种剂的有效浓度，因此允许相对于如果剂被作为单独剂施用时所需要的剂量在一种或多种剂的剂量上的降低。多种剂的效果可以但不必是累加的或协同的。这些剂可以多次施用。

如本文所使用，术语“协同”“协同的”“协同地”和其派生词，例如在“协同效应”或“协同组合”或“协同组合物”中指的是其中放射剂量和至少一种另外治疗剂的组合的生物学活性比相应剂单独施用时的生物学活性的总和更大的情况。

因此，“协同组合”具有比基于单个成分单独使用时观察到的活性所期望的更高的活性。而且，成分的“协同有效量”指的是例如引起组合物中存在的另一种治疗剂的协同效应所必需的成分的量。

总之，本公开的方法为破坏肿瘤微环境提供了新的治疗方案。而且，本公开的方法具有脑癌以外的影响，因为目前存在向在身体的其它部位的癌症递送立体定位放射所必要的技术。因此，本公开的主题可提高对于免疫细胞被肿瘤细胞抑制的复杂机制的理解和引进治疗GBM的新范例。

而且，在动物接受初始治疗后接着以肿瘤细胞再攻击时，本发明的方法可促进持续的抗肿瘤响应。根据一个实施方案，本发明提供在受试者中有效产生免疫应答并克服受试者中肿瘤的免疫抑制效应的方法。将被本领域普通技术人员理解的是，如本发明所提供的，聚焦放射与至少一种免疫治疗剂例如抗体的组合，与每种治疗单独相比，提高存活率并导致持久性治愈。

适合与本公开的方法使用的聚焦放射方法包括，但不限于，立体定位放射手术、分级立体定位放射手术和调强放射治疗（IMRT）。

将被本领域普通技术人员理解的是，立体定位放射治疗包括向肿瘤组织例如脑瘤精确递送放射，同时避开周围的非肿瘤、正常组织。因为立体定位放射手术如此精确，它允许给予比使用传统放射治疗技术所能达到的更高剂量的放射和对正常组织避免更多伤害。为达到这种精确度，使用了用于确认肿瘤组织的位置的特定程序。例如，来自磁共振成像（MRI）和/或计算机断层扫描（CT）的信息可被直接传输到治疗-计划计算机系统以产生肿瘤和周围正常组织的三维（3-D）模型。3-D图像允许确认和靶向将被治疗的异常的位置。使用了复杂的放射递送计划系统以在肿瘤处靶向高剂量的放射，同时很大地限制对附近正常组织的剂量。使用了特殊设备以保持受试者不动，使得放射将以很大精确度瞄准靶向的肿瘤。

在本发明的方法中使用的不同类型的放射手术可被用于治疗许多不同的肿瘤，例如，良性和恶性的脑瘤。放射手术最经常治疗的恶性肿瘤包括，但不限于，脑部转移或扩散到脑部的肿瘤。在复发时使用放射手术治疗了恶性神经胶质瘤。而且，许多良性肿瘤可使用放射手术治疗。这样的良性肿瘤包括，但不限于，前庭神经鞘瘤（听神经瘤）、脑膜瘤和垂体腺瘤。

因为无创性固定设备，立体定位放射不必在单个治疗中递送。治疗计划可被可靠地逐日重复，因此允许递送多个分级剂量的放射。当被用来随时间治疗肿瘤时，放射手术被称为“分级立体定位放射手术”或FSR。相反，立体定位放射手术称为一次性治疗。

在一个实施方案中，使用立体定位放射手术施加的放射的剂量可变化。在一些实施方案中，剂量可从1Gy变化到大约30Gy，并可包含中间范围，包括例如，从1到5、10、15、20、25直到30Gy的剂量。

分级的主要优势是，因为周围的正常组织对这些更小分级剂量的增加的耐受，它允许更高的剂量被递送到肿瘤组织。因此，当单剂量的立体定位放射利用给予放射的模式时，分级立体定位放射不仅利用放射的模式，还利用正常和周围的肿瘤组织的不同放射敏感性。分级立体定位放射的另一个优势是所谓的“反复”治疗，其中治疗计划的形状（shape）和强度可在治疗过程中被修改。

分级立体定位放射治疗可导致高的治疗比，即，杀死肿瘤细胞的高比率和对正常组织的低影响。肿瘤和正常组织对于高的单次剂量放射与多次更小剂量放射有不同响应。单次大剂量放射比几次较小剂量放射可杀死更多的正常组织。因此，多次较小剂量的放射可杀死更多肿瘤细胞同时避免伤害正常组织。

在一个实施方案中，使用分级立体定位放射施加的放射的剂量可变化。在一些实施方案中，剂量可从1Gy变化到大约50Gy，并可包含中间范围，包括例如，从1到5、10、15、20、25、30、40直到50Gy的小分级剂量。

对于前庭神经鞘瘤，分级立体定位放射手术（FSR）通常可避免伤害面部运动神经和感觉神经。对于治疗因为接近颅底或海绵窦的位置而通过传统手术可能难以去除的脑膜瘤，或对于手术和常规放射后复发的脑膜瘤，FSR是特别有用的。例如，对于垂体腺瘤，FSR可避免伤害视神经和交叉神经，以及下丘脑，因此避免伤害驱动正常垂体的释放激素。从FSR获益的其它肿瘤包括，但不限于，成血管细胞瘤、脊索瘤、低级（纤维状细胞型）星形细胞瘤、血管外皮细胞瘤以及其它。

立体定位放射治疗的另一个进展是肿瘤和周围组织的三维图像的开发。高级的软件可从CT或MRI扫描提取小的，例如2-mm切片，并将它们转化为三维图像。三维治疗计划向肿瘤递送高精度剂量，同时避免伤害正常组织，并且可达到比使用二维计划所能达到的更有效的结果。因此，使用MRI和CT图像的融合的FSR治疗可获得靶区勾画的高敏感性和精确性。

将被本领域普通技术人员理解的是，立体定位放射手术可被使用的放射源表征，包括粒子束（质子）、钴-60（光子-Gamma）和线性加速器（X射线）。线性加速器产生高能量X射线放射，并能够递送精确的和准确的放射手术要求的放射剂量。使用线性加速器的放射手术通常以多次、较小剂量治疗来进行，使得健康的周围组织不被太高的放射剂量损伤。使用线性加速器技术的放射手术也能够靶向较大的大脑和身体癌症，对健康组织的损伤较小。线性加速器立体定位放射手术的最通常的用途是对于转移性癌症、一些良性肿瘤和一些动静脉血管畸形的治疗。基于线性加速器的机器不是专用于仅仅脑内的治疗，而是可被用于整个身体，以及头部和颈部。

如本文提供的本发明方法和组合物使用的，“伽马刀”使用多个，例如，192或201个，高聚焦的X射线束来组成切割患病组织的“刀”。伽马刀使用汇聚到一点的精确靶向的放射束以无痛地“切割”脑肿瘤、血管畸形和其它脑部异常。伽马刀使得到达脑的最深凹处并校正使用传统手术无法治疗的疾患成为可能。

根据本发明方法和组合物，使用质子束放射提供了优于立体定位放射手术的其它形式（例如，Gamma

和线性加速器）的一定理论优势，因为它使用质子的量子波特性以降低对靶组织外的周围组织的放射剂量。实际上，质子束放射对于治疗不规则形状的脑瘤和动静脉血管畸形提供优势。由质子束源递送的均一剂量的放射也使得分级治疗成为可能。质子束放射手术也具有治疗颅腔以外的肿瘤的能力。这些特性使得质子束放射手术对于脊椎和颅底的许多脊索瘤和某些软骨肉瘤的切除后治疗是有效的，也成为对于许多其它类型的肿瘤的治疗模式。

根据本发明方法和组合物的另一种实施方案，可使用调强放射治疗（IMRT）。IMRT是高精度三维适形放射治疗（3DCRT）的一种高级模式，它使用计算机控制的线性加速器以向恶性肿瘤或肿瘤内的特定区域递送精确的放射剂量。在3DCRT中，使用多叶准直器（MLC），每种放射束的轮廓被成形为适合来自线束视观（BEV）的靶的轮廓，因此产生许多线束。更具体地，IMRT通过以多个小的量来调节放射线束的强度，允许放射剂量更精确地符合肿瘤的三维（3-D）形状。因此，IMRT允许更高的放射剂量集中在肿瘤内的区域，同时将对周围的正常关键结构的剂量最小化。IMRT提高使治疗量与凹面的肿瘤形状一致的能力，例如，当肿瘤被包裹在脆弱结构，例如脊髓或主要器官或血管时。

通过使用患者的3-D计算机断层扫描（CT）或磁共振（MRI）图像连同计算机化的剂量计算以确定将最佳符合肿瘤形状的剂量强度模式，计划IMRT治疗。通常，来自不同线束方向的多个强度-调节域的组合产生了将肿瘤剂量最大化同时也将对邻近正常组织的剂量最小化的定制放射剂量。因为使用IMRT方法时正常组织剂量与肿瘤剂量的比率被降低到最小，与传统放射治疗技术相比，更高和更有效的放射剂量可被安全地递送到肿瘤中而伴随更少的副作用。IMRT通常被用于治疗前列腺癌、头颈癌和中枢神经系统癌症。IMRT也已被用于治疗乳腺、甲状腺、肺、以及胃肠道、妇产科恶性肿瘤和某些类型的肉瘤。

根据一个或多个实施方案，本发明提供包括免疫治疗的组合物和治疗方法。如本文所使用，术语“免疫治疗”包括通过在受试者中诱导、增强或抑制免疫应答来治疗疾病或病症。本领域普通技术人员所理解的是，设计为引起或扩大免疫应答的免疫治疗被分类为激活免疫治疗，而降低或抑制免疫应答的免疫疗法被分类为抑制免疫治疗。免疫治疗中的活性剂被称作免疫治疗剂。本发明的方法中有用的代表性剂包括，但不限于，白介素，例如IL-2、IL-7和IL-12；细胞因子，例如干扰素、G-CSF和咪喹莫特；趋化因子；和其它剂，例如胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸（cytosinephosphate-guanosine）、寡聚脱氧核苷酸和葡聚糖。适合用于本公开的方法的代表性免疫治疗包括，但不限于，基于细胞因子的治疗，基于被动免疫的策略，包括抗体治疗和过继性治疗，和主动治疗，包括疫苗，例如基于树突细胞的疫苗。

根据一个实施方案，用于本发明的组合物和方法的免疫治疗包括免疫关卡抑制剂的使用。

如本发明方法和组合物中所使用，免疫治疗通常被理解为以两种方式起作用：主动免疫治疗刺激一个人的自身免疫系统以对抗疾病，而被动免疫治疗使用实验室中制造的免疫系统组分（例如抗体）。或者，一些免疫治疗通过靶向一定类型的细胞起作用。大部分免疫治疗靶向一种细胞或抗原（特异性免疫治疗），但有一些总体上刺激免疫系统的免疫治疗（非特异性免疫治疗）。在某些情况下，非特异性免疫治疗和其它治疗（作为辅药）一起使用以增加对癌症的攻击。

更具体地，本发明的组合物和方法中使用的免疫治疗是使用受试者的免疫系统来排斥和破坏癌性肿瘤。癌症免疫治疗的主要前提是刺激受试者的免疫系统以攻击恶性肿瘤细胞。癌症免疫治疗可如下进行：通过免疫受试者，例如，通过施用癌症疫苗，例如用于前列腺癌的sipuleucel-T，其中受试者的免疫系统识别将被破坏的肿瘤细胞，或者通过施用治疗抗体，其中受试者的免疫系统被治疗抗体募集以破坏肿瘤细胞。

本领域普通技术人员所理解的是，在某些情况下，基于细胞的免疫治疗被证明对于一些癌症是有效的。例如，免疫效应细胞，例如淋巴细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、淋巴因子激活的杀伤细胞、细胞毒性T淋巴细胞等等，可以通过靶向因突变表达于肿瘤表面的异常抗原而抵御癌症。这样的细胞或者通过施用某些细胞因子例如白介素而被体内激活，或者它们被分离、富集并输注给受试者。注射的免疫细胞对癌症细胞是高度细胞毒性的。

适合用于本发明方法的另一种类型的癌症免疫治疗包括单克隆抗体。在识别外来抗原和刺激对于外来抗原例如在癌细胞表面的抗原的免疫应答时，抗体起到主要作用。单克隆抗体技术的发展使得针对特定抗原产生抗体成为可能，所述抗原包括呈递在肿瘤表面的抗原。许多治疗性单克隆抗体已经被批准用于人类，并可在本发明中使用，包括但不限于，阿仑单抗、贝伐单抗、brentuximab vedotin、西妥昔单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、替伊莫单抗、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗和曲妥珠单抗。

两种类型的单克隆抗体通常用于癌症治疗和本发明方法中：其上未附着任何药物或放射性物质的裸露单克隆抗体；和轭合的单克隆抗体，其结合在化学治疗药物、放射活性颗粒或毒素（毒害细胞的物质）上。裸露的MAb是现在对于癌症治疗最常使用的MAb。虽然它们通过将自己附着于特异性抗原起作用，裸露MAb可以不同方式有帮助，包括作为破坏的标志物，其中它们附着于癌细胞以充当使机体的免疫系统破坏它们的标志物。该组的抗体包括：利妥昔单抗、奥法木单抗、阿仑单抗。

一些裸露的MAb实际上并不与受试者自身的免疫系统相互作用。它们的作用来自于其附着于癌症细胞或帮助癌症细胞生长的其它细胞的特异性抗原，并阻止其起作用的能力，即，作为激活阻滞剂。这些MAb也被称为靶向治疗。美国FDA批准的并且也可被包括在本发明的方法中的这种类型的MAb的例子包括：曲妥珠单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗和贝伐单抗。

而且，轭合MAb是附着于药物、毒素或放射活性物质的单克隆抗体。这样的MAb被用作将这些物质直接带往癌细胞的导归设备（homingdevice）。MAb在机体内循环直到它能发现并附着于靶抗原，然后在那里它将毒性物质递送至最需要的地点。该特性减轻对于身体的其它部位的正常细胞的损伤。取决于轭合抗体所连接的物质，它们可被分为下列各组：放射活性颗粒附着的MAb被称为放射标记的，使用这种类型的抗体的治疗被称为放射免疫治疗（RIT）；化学治疗药物附着的MAb经常被称为化学标记的；附着于毒素的MAb被称为免疫毒素。

目前，有两种放射标记的抗体目前被批准治疗癌症。替伊莫单抗直接向癌性B淋巴细胞递送放射活性，并被用于治疗未对标准治疗响应的B细胞非霍奇金淋巴瘤。托西莫单抗被用于治疗某些类型的不再响应利妥昔单抗或标准化疗的非霍奇金淋巴瘤。

目前批准用于治疗癌症的仅有的化学标记的抗体是brentuximabvedotin，该抗体由附着于称为单甲基auristatin E的化学治疗剂的靶向CD30抗原的抗体组成。Brentuximab vedotin被用于治疗霍奇金淋巴瘤和不再响应其它治疗的间变性大细胞淋巴瘤。

免疫毒素可通过将MAb附着于细菌毒素例如白喉毒素（DT）或假单胞菌外毒素（PE40），或者附着于植物毒素例如蓖麻毒素A或皂草素而制备。目前没有免疫毒素被批准用于治疗癌症。吉妥珠单抗奥唑米星曾在一段时间内被批准用于治疗罹患急性骨髓性白血病的一些受试者。它含有称为卡里奇霉素（calicheamicin）的毒素，该毒素附着于抗CD33抗原的抗体，CD33抗原呈递在大部分白血病细胞上。对该药物进一步的研究没有显示它帮助患者存活更久，批准被撤回。其不再可用于临床试验之外的用途。

另一种免疫毒素，BL22，在针对一些形式的慢性白血病的早期研究中，甚至在不再对化学治疗响应的患者中显示了有希望的结果。在早期临床试验中，3名患者中有约2名对治疗有持续达2年的完全响应（没有癌症的证据）。这种免疫毒素的更新的改进的版本，称为HA22(CAT-8015)，现在正在被研究。其它免疫毒素的临床试验目前也正在患有某些白血病、淋巴瘤、脑癌和其它癌症的人中进行。

本文以下紧接着提供特定的单克隆抗体和它们在治疗癌症的特定形式中的用途：

阿仑单抗是指出用于治疗慢性淋巴细胞性白血病（CLL）的抗CD52人源化IgG1单克隆抗体。CD52的功能是未知的，但被发现存在于>95%的外周血淋巴细胞和单核细胞上。在与CD52结合后，阿仑单抗通过补体结合和抗体依赖性细胞介导的细胞毒性机制启动其细胞毒性作用。阿仑单抗治疗也被指出用于T-前淋巴细胞白血病（TPPL）。

贝伐单抗是人源化IgG1单克隆抗体，其结合并在空间上干扰血管内皮生长因子-A（VEGF-A），因此阻止受体激活。VEGF蛋白通常由肿瘤细胞制造以吸引新的血管来饲养它们的生长。VEGF表达的显著增加被认为在肿瘤血管生成中起作用。贝伐单抗被指出用于结肠直肠癌；但已经被应用于许多其它癌症，包括非小细胞肺癌、乳腺癌、成胶质细胞瘤、肾癌和肾细胞癌。

Brentuximab vedotin被批准用于治疗霍奇金淋巴瘤和间变性大细胞淋巴瘤（非霍奇金淋巴瘤的一个类型）。

西妥昔单抗是靶向表皮生长因子受体（EGFR）的细胞外域的嵌合IgG1单克隆抗体。它通过竞争性抑制配体结合，因此阻止EGFR激活而起作用。西妥昔单抗被指出用于治疗结肠直肠癌和头颈癌。也在许多其它恶性肿瘤中进行了研究，包括非小细胞肺癌。其它开发中的抗EGFR单克隆抗体包括ABX-EGF、hR3和EMD72000。

德尼单抗（Denosumab）结合至称为Rank配体的蛋白。该蛋白由癌症细胞当其攻击骨头的时候制造。因此，德尼单抗帮助阻止已经扩散的癌细胞破坏骨组织。德尼单抗被批准用于治疗已经扩散至骨头的癌症。

吉妥珠单抗奥唑米星是化学连接至细胞毒性剂卡里奇霉素的抗CD33抗体的“免疫轭合物”。吉妥珠单抗奥唑米星被指出用于治疗急性髓细胞样白血病（AML），虽然此时仅仅被批准用于临床试验。最有可能获益于吉妥珠单抗的患者组是年轻成年人，试验已经报告了当与强化化疗联合使用时的高的完全响应（例如，85%）。

替伊莫单抗是抗CD20抗体，可被作为放射免疫治疗使用，与钇-90或铟-111联用以治疗一些形式的B细胞非霍奇金淋巴瘤，例如滤泡性淋巴瘤。更具体地，替伊莫单抗是化学连接至结合钇-90或铟-111的螯合剂的鼠抗体。

伊匹单抗不结合癌细胞。反而它结合至CTLA-4，CTLA-4是在调节性T细胞（Treg细胞）和细胞毒性T细胞上发现的抗原。伊匹单抗以两种方式工作。它降低Treg细胞的数目，这本质上释放了免疫系统，允许它对抗癌症。它也结合至细胞毒性T细胞，允许它们起作用以杀死癌细胞。伊匹单抗被批准用于治疗黑素瘤。

托西莫单抗/碘是另一种形式的放射免疫治疗。托西莫单抗是鼠IgG2a抗CD20抗体，其能共价结合至碘（¹³¹I）。临床试验已经建立了在复发滤泡性淋巴瘤患者中顺序应用托西莫单抗和碘（¹³¹I）托西莫单抗的疗效。

奥法木单抗是另一种抗CD20抗原的抗体。它被主要用于当其它治疗不再有效时治疗慢性淋巴细胞性白血病。

帕尼单抗是特异于表皮生长因子受体（也称为EGF受体、EGFR、ErbB-1和在人类中称为HER1）的完全人类单克隆抗体。帕尼单抗被美国FDA批准用于治疗尽管既往治疗仍有疾病进展的表达EGFR的转移性结肠直肠癌。

利妥昔单抗是特异于CD20的嵌合单克隆抗体，CD20被广泛表达于B细胞上。虽然CD20的功能相对未知，已表明CD20可在穿过质膜的钙流入、维持细胞内钙浓度和允许B细胞的激活中起作用。利妥昔单抗的确切作用模式也是不清楚的，但已发现它对细胞周期和免疫受体表达具有总的调节作用，被认为标记细胞使得免疫系统可攻击这些细胞。涉及灵长类的实验显示抗CD20治疗降低外周B细胞达98%，降低外周淋巴结和骨髓B细胞达95%。利妥昔单抗被批准用于B细胞非霍奇金淋巴瘤和慢性淋巴细胞性白血病（CLL）。

曲妥珠单抗是特异于表皮生长因子受体2蛋白（HER2）的单克隆IgG1人源化抗体。它于1998年得到FDA批准，临床用于治疗乳腺癌。曲妥珠单抗的使用一般限制于其中肿瘤过表达HER2的患者。曲妥珠单抗也被批准用于具有大量HER2/新蛋白的胃癌。

根据一个实施方案，本发明提供治疗肿瘤的方法，其中治疗包含使用过继细胞转移联合放射治疗。过继细胞转移使用基于T细胞的细胞毒性响应以攻击癌症细胞。根据本发明的方法，体外产生对受试者的癌症具有天然或遗传改造的反应性的T细胞，然后转移回至受试者。通过取得与受试者的特定肿瘤相关的T细胞、将该T细胞训练为攻击癌性细胞，可完成该过程。这样的T细胞被称为肿瘤浸润淋巴细胞（TIL），被鼓励在体外使用高浓度IL-2、抗CD3和同种反应性饲养细胞来繁殖。T细胞可被转移回受试者，连同外源施用IL-2以进一步增强它们的抗癌活性。

癌症疫苗已经被研究了几十年，但是该领域的进展比免疫治疗的其它形式更慢，现在仍然是大部分实验性的治疗。疫苗，一般而言，使用弱化的或杀死的病毒、细菌或其它病菌以在体内触发免疫应答以抵御外来抗原。癌症疫苗被设计为以相同方式工作。例如，抗人类乳头瘤病毒（HPV）的新疫苗帮助预防子宫颈、阴道、外阴和肛门癌症。抗乙型肝炎病毒（HBV）的疫苗可降低一些受试者得肝癌的风险。但是这些疫苗不靶向癌细胞；它们靶向能引起癌症的病毒。

真正的癌症疫苗与抗病毒的疫苗是不同的。代替预防疾病，它们意味着促进免疫系统以攻击癌症本身。真正的癌症疫苗具有癌细胞、细胞的部分或纯抗原。疫苗增加对于已经在体内的癌症细胞的免疫应答，并可与称为辅药、帮助增强免疫应答的其它物质或细胞合并使用。

癌症疫苗被表征为主动免疫治疗，因为它们意味着触发受试者的自身免疫系统进行响应。而且，癌症疫苗是特异性的，因为它们应仅影响癌症细胞。这样的疫苗不仅仅在总体上增强免疫系统；它们引起免疫系统攻击具有一种或多种特定抗原的癌症细胞。现在，仅仅一种真正的癌症疫苗已经被FDA批准。Sipuleucel-T（

）被用于治疗晚期前列腺癌。在该疫苗中，白细胞（免疫系统的细胞）被从患者血液中取出，并暴露于来自前列腺癌细胞的称为前列腺酸性磷酸酶（PAP）的蛋白。然后这些暴露的细胞被通过静脉输注（IV）给回患者。在体内后，这些细胞使得其他的免疫系统细胞攻击患者的前列腺癌。

目前被研究的其他类型的癌症疫苗包括，但不限于，肿瘤细胞疫苗，包括自体的和异体的肿瘤细胞疫苗；抗原疫苗，其通过使用仅仅一种或几种抗原例如蛋白质或肽来增强免疫系统；树突细胞疫苗，其包括特别的抗原呈递细胞（APC），所述特别的抗原呈递细胞通过将癌细胞分解为更小片段（包括抗原）帮助免疫系统识别癌症细胞，然后将这些抗原呈递给T细胞，使得免疫系统细胞更容易识别和攻击它们；抗个体基因型疫苗，其显示作为B细胞淋巴瘤的希望；DNA疫苗，和基于载体的疫苗，其使用特别的递送系统（称为载体）以使得它们更有效，可包括，例如，基于载体的抗原疫苗和基于载体的DNA疫苗。

肿瘤细胞疫苗正在被研究的癌症的类型包括，但不限于，黑素瘤、肾癌、卵巢癌、乳腺癌、结肠直肠癌、肺癌、前列腺癌、非霍奇金淋巴瘤和白血病。正在研究抗原疫苗以针对这些癌症以及其他癌症使用：乳腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、黑素瘤、肾癌、胰腺癌和多发性骨髓瘤。正在研究树突细胞疫苗方法以用于患有这些和其它癌症的受试者：前列腺癌、黑素瘤、肾癌、结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌、白血病和非霍奇金淋巴瘤。被批准用于治疗晚期前列腺癌的Sipuleucel-T(Provenge)，是树突细胞疫苗的例子。现在正在临床试验中研究DNA疫苗，以针对下列癌症以及其他癌症使用：黑素瘤、白血病、前列腺癌和头颈癌。

虽然疫苗被设计为使得机体的免疫系统对特异性抗原反应，其它主动的、特异性免疫治疗增强免疫系统的特定部分。这样的免疫治疗包括，但不限于，淋巴因子激活的杀伤细胞治疗；肿瘤浸润淋巴细胞疫苗和白介素-2；和抑制性调节性T细胞。

非特异性免疫治疗不靶向某一细胞或抗原。反而，它们以非常广泛的方式刺激免疫系统，这能导致对癌细胞的更大活性。一些非特异性免疫治疗可作为治疗给予，然而其它的可用作辅药（连同主要治疗）以增强免疫系统功能以提高另一个治疗的有效性。一些免疫治疗对于一些癌症可独立使用，对于另一些作为辅药使用。这样的非特异性免疫治疗包括，但不限于，细胞因子、白介素、干扰素和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）。

细胞因子是免疫系统细胞制造的化学物质，在调节其它免疫系统细胞和血细胞的生长和活性中有关键作用。一些细胞因子可被用于减轻其它治疗方案例如化学治疗的副作用。人造的细胞因子可帮助骨髓制造更多白细胞、红细胞或血小板。虽然这种功能在癌症治疗中是重要的，它不是真正的免疫治疗。人造的细胞因子也能与例如作为辅药的肿瘤疫苗联合施用，或单独给予，以增强免疫系统。

白介素是一组在白细胞之间充当化学信号的细胞因子。白介素-2（IL-2）被批准治疗晚期肾癌，也已经被批准治疗患有转移性黑素瘤的受试者。IL-2可被用作这些癌症的单药治疗，或者它可与其它形式的免疫治疗例如疫苗组合。IL-2帮助免疫系统细胞更快生长并分裂。

与化学治疗或与一种或多种其它细胞因子例如α-干扰素联合施用IL-2，可使得这些治疗对于一些癌症更有效，但是合并治疗的副作用也可增加。其它白介素，例如IL-7、IL-12和IL-21也被研究用于作为辅药和作为独立剂治疗癌症。

干扰素是帮助机体抵抗病毒感染和癌症的细胞因子家族，包括α-IFN、β-IFN和γ-IFN。α-IFN被用于治疗癌症，并认为通过以下机制中的一种或多种起作用：直接减缓癌细胞的生长；减缓血管生成；引起癌症细胞产生更多抗原，使它们更易被免疫系统识别和破坏；在抗体帮助下增强自然杀伤（NK）细胞和攻击癌症的其它免疫系统细胞的癌症细胞杀伤能力。α-IFN被批准治疗下列癌症：毛细胞白血病、慢性髓细胞性白血病、滤泡性非霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、肾癌、黑素瘤和卡波西肉瘤。

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）是引起骨髓制造更多的某些类型的免疫系统细胞和血细胞包括单核细胞、巨噬细胞和树突细胞的细胞因子/生长因子。GM-CSF也促进其它血细胞的产生。人造形式的GM-CSF（也称为沙格司亭或

）经常被用于促进化疗后的白细胞计数。GM-CSF也正作为非特异性免疫治疗和作为与其它类型的免疫治疗一起给予的辅药被针对癌症进行评价。

除了细胞因子以外的辅药也已知增强免疫系统的活性并作为可能的辅药被评价，尤其和疫苗治疗一起使用。这样的辅药包括，但不限于，卡介苗（BCG），与引起肺结核的细菌相关的细菌，并被批准作为常规治疗用于早期膀胱癌。BCG也正作为辅药被评价，以在经历化疗、放射治疗或其它类型的免疫治疗的受试者中增强免疫系统。

钥孔戚血蓝蛋白（KLH）是用于增强癌症疫苗治疗的有效性的辅药。不完全弗氏佐剂（IFA）刺激对抗原的T细胞免疫应答，也与一些实验性治疗联合被施用以帮助刺激免疫系统和增加对癌症疫苗的免疫应答。QS-21是由植物提取物制得的增加对某些癌症疫苗的免疫应答的免疫刺激物。DETOX是由细菌的细胞壁的部分和也来自细菌的一种脂肪制得的辅药。自从它首次制造，其它类型，例如DETOX-B和DETOX-PC，已经通过使用其它方法被创造并能与不同免疫治疗一起被使用以增强免疫系统。二硝基苯基（DNP）是能附着于肿瘤抗原并增强免疫应答的小分子。它被用于在某些癌症疫苗中修饰肿瘤细胞。

虽然本文应用了特定术语，它们仅以一般和描述性意义被使用，不是出于限制目的。除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有和目前描述的主题所属领域的普通技术人员通常理解的同样的意义。

遵循存在已久的专利法传统，当在本申请包括权利要求书中使用时，术语“一（a）”、“一（an）”和“该（the）”指的是“一个或多个”。因此，例如，对“一个受试者”的提及包括多个受试者，除非上下文清楚地相反指出（例如，多个受试者），如此等等。

在整个本说明书和权利要求书中，术语“包含（comprise）”、“包含（comprises）”和“包含（comprising）”以非排他意义被使用，除了上下文另外要求时。同样，术语“包括（include）”和其语法变体旨在为非限制性的，使得列表中项目的列举不排除可替代或被加至列表项目的其它相似项目。

为了此说明书和所附权利要求书的目的，除非另有说明，所有表示量、大小、尺寸、比例、形状、配方、参数、百分比、参数、数量、特征的数字，和说明书和权利要求书中使用的其它数值，将被理解为在所有情况下被术语“大约”修饰，即使术语“大约”可能未与值、量或范围一起明确出现。因此，除非有相反说明，在以下说明书和所附权利要求书中列出的数值参数不是并且不需要是确切的，而如需要可以是大约和/或大于或小于，反映了允许误差、换算因数、四舍五入、测量误差等等，和本领域技术人员所知的其它因素，其依赖于由本公开的主题所追求获得的期望特性。例如，当提及值时，术语“大约”可以意指包含以下变量：在一些实施方案中，指的是距离指定量的±100%，在一些实施方案中为距离指定量的±50%，在一些实施方案中为距离指定量的±20%，在一些实施方案中为距离指定量的±10%，在一些实施方案中为距离指定量的±5%，在一些实施方案中为距离指定量的±1%，在一些实施方案中为距离指定量的±0.5%，在一些实施方案中为距离指定量的±0.1%，如此这样的变量适合于实施公开的方法或应用公开的组合物。

而且，当与一个或多个数字或数字范围相连使用时，术语“大约”应被理解为指的是所有这样的数字，包括范围中所有的数字，并通过延伸边界在列出的数值以上和以下来修改范围。通过端点对数字范围的列举包括所有的数，例如，该范围所包括的所有整数，包括其分数（例如，1到5的列举包括1、2、3、4和5，以及其分数，例如，1.5、2.25、3.75、4.1等等）和该范围内的任何范围。

实施例

包括了下列实施例以向本领域普通技术人员提供实施本公开的主题的代表性实施方案的指导。根据本公开内容和本领域技术的一般水平，技术人员可理解下列实施例旨在仅仅是示例性的，可利用数的改变、修改和改动而不偏离本公开的主题的范围。随后的合成描述和具体实施例仅仅旨在为了示例目的，将不被解释为以任何方式限制通过其它方法制造本公开内容的化合物。

实施例1

肿瘤模型.130,000个转染有萤光素酶的GL261细胞的颅内肿瘤植入在C57/BL6小鼠中进行（图2A和2B）。到植入后第10天，组织学显示在H&E染色上可见的肿瘤，测量直径为大约1-2mm（图2C和2D）。

实施例2

联合免疫治疗剂抗PD-1抗体和放射.在植入后第7天，对小鼠进行生物发光成像以评估肿瘤生长，并相等地分层为四个治疗臂之一：对照、放射、抗PD-1抗体和放射加抗PD-1抗体。在植入后第10、12和14天给予抗PD-1抗体，剂量为200μg/小鼠。使用独特的小动物研究辐射器平台（SARRP）给予放射治疗，这种仪器由Johns Hopkins Medicine的物理学家开发，是目前在临床用于治疗患者的小规模型号的线性加速器。SARRP有辐射器内置的CT-扫描仪，其能够进行CT扫描以确认解剖结构，然后当小鼠在同样位置时递送放射。使用SARRP，可确认来自颅内植入的钻孔，立体定位3mm放射线束可靶向以肿瘤为中心的10Gy(图3A-3C)。

在小鼠基于它们分配的臂接受适当的治疗后，观察了小鼠的存活。显示结果的Kaplan-Meier存活曲线显示于图4A。联合使用抗PD-1治疗加上放射与任何单独的疗法相比表明了改善的存活：对照臂中的中位存活是25天，抗PD-1抗体臂中的中位存活是27天，放射臂中的中位存活是28天，放射加上抗PD-1治疗臂中的中位存活是53天（P<0.05，对数-秩Mantle-Cox）。仅在联合治疗臂中观察到了长期存活，在治疗后第+180天有部分（20-40%）的动物存活。相反，对照臂中所有小鼠在第28天前死亡。一式三份重复了存活实验，每次得到相似结果。

生物发光成像结果与存活结果相关（图4C）。小鼠在植入后第7天（接受任何治疗前）进行了生物发光成像，并在植入后第21天（在完成所有治疗后）再次进行生物发光成像。在第7天，所有治疗组中的小鼠具有大致等同的生物发光信号。在对照小鼠中，到第21天，所有小鼠具有比第7天更强的信号，显示了肿瘤进展。在用单独放射或抗PD-1抗体治疗的小鼠中，观察到异质性的响应，一些小鼠显示了增加的生物发光信号，一些显示了稳定信号，一些显示轻微的肿瘤退化。然而，在接受放射和抗PD-1的小鼠中，大部分小鼠显示肿瘤退化，几只小鼠显示稳定疾病。还通过蛋白质印迹分析确认了GL261细胞系中PD-L1的表达（图4B）。

实施例3

免疫学研究.为了评价与不同治疗臂中观察到的不同存活结果相关的脑中免疫学状态，小鼠在植入后第21天被处死。收获了脑/肿瘤、颈淋巴结和脾并通过流式细胞术评估了它们的免疫学参数。与来自其它组的小鼠相比，使用放射和免疫治疗剂抗PD-1抗体治疗的小鼠在脑中具有最高数目的细胞毒性T细胞（CD8+/IFNγ+/TNFα+细胞），特别是当以肿瘤大小标准化时（图5A）。在接受放射加抗PD-1抗体的小鼠中观察到更少的调节性T细胞（CD4+/FOXP3+细胞）（图5B）。在接受放射加抗体的小鼠中细胞毒性T细胞与调节性T细胞的比率是最高的（图5C）。

为了检测免疫记忆，脑瘤被“治愈”的小鼠（植入后至少90天存活，这仅仅发生在放射+抗PD-1抗体臂），使用150万个GL-261-萤光素酶细胞的胁腹植入进行再攻击。将这些“治愈”小鼠与从未被植入肿瘤也未接受任何治疗的“幼稚”小鼠相比较。图6显示了再攻击实验的结果。到第21天，在“幼稚”小鼠中的肿瘤已经达到了至少1000mm³大小，而“治愈”小鼠未生长任何可见胁腹肿瘤。胁腹植入后第10天胁腹肿瘤的生物发光成像确认了肿瘤大小测量的结果。

实施例4

将免疫治疗剂抗CTLA-4和抗4-1BB激动剂抗体与聚焦放射治疗联合。如实施例2中，为了建立原位肿瘤，130,000个转染有萤光素酶的GL261神经胶质瘤细胞被颅内植入到6-8周龄C57/BL6小鼠的尾状壳核复合体。在植入后第7天，使用生物发光成像将小鼠分层为四个治疗组：（1）同种型对照（2）立体定位放射（3）抗4-1BB和抗CTLA-4抗体（4）立体定位放射和抗4-1BB和抗CTLA-4抗体（图8）。在植入后第10天在CT指导下在小动物辐射器上使用设置为10Gy的3mm线束递送了立体定位放射。在第11、14和17天施用了0.2mg抗4-1BB IP，在第11、17和23天施用了0.8mg抗CTLA-4IP。还检测了两组的IgG对照。从杂交瘤上清液产生了单克隆抗体。

实施例5

存活率分析.使用立体定位放射手术联合抗4-1BB和抗CTLA-4抗体治疗的小鼠导致了比对照和放射联用IgG同种型显著（P<0.05，对数秩检验）更高的中位存活（图9）。

实施例6

TIL分析.为了监控免疫应答，在第18天收获每个治疗组中来自三只小鼠的脑以确定产生IFN-y的CD4+（图10A）和CD8+细胞（图10B）的数目。各治疗组之间TIL的绝对计数没有差异。然而，从放射加抗4-1BB和抗CTLA-4组收获的脑具有更小的肿瘤。当考虑肿瘤体积时，在放射加抗4-1BB和抗CTLA-4组有相对更高的数目的CD8+IFN-y+细胞。

实施例7

保护性记忆响应.被认为从其脑肿瘤“治愈”的长期存活者和幼稚动物被皮下注射10⁶个GL261-LUC细胞以评估保护性抗肿瘤记忆响应。在肿瘤再攻击后，胁腹肿瘤生长被监测了另外50天。到第17天时，所有幼稚动物均有可触知的肿瘤，而到第50天长期存活者没有肿瘤生长的迹象（图11）。

实施例8

记忆响应的特异性.为了确定系统抗肿瘤记忆响应是否是仅GL261特异性的，将GL261与B16黑素瘤胁腹肿瘤相比较。治愈的和幼稚的小鼠在左胁腹被皮下注射10⁶个GL261-LUC细胞，在右胁腹被皮下注射10⁵B16-LUC细胞。幼稚动物在两胁腹均具有可触知的肿瘤；GL261和B16肿瘤的生长。然而，治愈的动物仅在右胁腹生长肿瘤，在左胁腹没有肿瘤；只生长B16肿瘤（图12）。研究显示使用抗4-1BB激动剂和抗CTLA-4阻滞的双免疫治疗联合立体定位放射手术导致具有保护性记忆响应发展的长期存活。

本文引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请和专利，通过引用并入本文，程度如同每个参考文献被单独和特别指明被通过引用并入并全文在此列出。

在描述本发明的上下文中（特别是以下权利要求书的上下文中）术语“一（a）”和“一（an）”和“该（the）”和类似指示物的使用将被解释为涵盖单数和复数，除非本文另有说明或与上下文明确抵触。术语“包含（comprising）”、“具有（having）”、“包括（including）”和“包含（containing）”将被解释为开放式的术语（即，是指“包括但不限于”）除非另有说明。本文数值的范围的列举仅仅旨在充当单独提到落在该范围内的每个分别数值的快速方法，除非本文另有说明，并且每个分别的数值被并入说明书，如同该数值被本文单独列举。本文描述的所有方法可被以任何适当顺序进行，除非本文另有说明，或与上下文明确抵触。本文提供的任何和所有实施例或示例性语言（例如，“例如”）的使用，仅仅旨在更好地说明本发明，而不对本发明的范围加以限制，除非另外要求。说明书中的语言不应被解释为表明任何非要求保护的要素对于本发明的实施是必要的。

本发明的优选实施方案在本文中被描述，包括发明人已知的用于实施发明的最佳模式。在阅读前述描述后，那些优选实施方案的变化形式对于本领域普通技术人员可变得明显。发明人预料了技术人员适当地利用这样的变化形式，且发明人预期了本发明以本文特别描述以外的方式被实施。因此，如适用的法律所允许，本发明包括所附的权利要求书中列举的主题的所有修改和等同物。而且，本发明包含以上描述的要素以所有可能变化形式的任何组合，除非本文另有说明或与上下文明确抵触。

Claims (34)

1.一种药物组合物，所述药物组合物包含至少一种免疫治疗剂，其中所述组合物包括药学和生理学上可接受的载体，以有效的量用于药剂并最优选作为药剂使用，在当以有效量施用于接受或将接受聚焦放射治疗的受试者中时，在所述受试者中诱导免疫应答、或治疗癌症、或抑制肿瘤或赘生物的生长。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中所述聚焦放射治疗选自由以下组成的组：立体定位放射手术、分级立体定位放射手术和调强放射治疗。

3.根据权利要求1或2的任一项所述的药物组合物，其中用于所述聚焦放射治疗的放射源选自由以下组成的组：粒子束（质子）、钴60（光子）和线性加速器（X射线）。

4.根据权利要求1至3的任一项所述的药物组合物，其中所述至少一种免疫治疗剂选自由以下组成的组：单克隆抗体、免疫效应细胞、过继性细胞转移、免疫毒素、疫苗或细胞因子。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中所述单克隆抗体选自由以下组成的组：抗PD-1抗体、阿仑单抗、贝伐单抗、brentuximab vedotin、西妥昔单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、替伊莫单抗、伊匹单抗（抗CTLA-4）、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、抗B7-H4、抗B7-H1、抗LAG3、BTLA、抗Tim3、抗B7-DC、抗CD160、KIR拮抗剂抗体、抗4-1BB、抗OX40、抗CD27和CD40激动剂抗体。

6.根据权利要求1至5的任一项所述的药物组合物，所述药物组合物还包含与所述至少一种免疫治疗剂联合施用至少一种辅药。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述辅药选自由以下组成的组：细胞因子、白介素、干扰素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、卡介苗（BCG）、匙孔戚血蓝蛋白（KLH）、不完全弗氏佐剂（IFA）、QS-21、DETOX和二硝基苯基。

8.根据权利要求1至7的任一项所述的药物组合物，其中所述肿瘤是与选自由以下组成的组的癌症相关的肿瘤：涉及脊椎的癌症、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、黑素瘤、转移性眼眶瘤、眼眶淋巴瘤、脑瘤和其组合。

9.根据权利要求8所述的药物组合物，其中肿瘤是脑瘤。

10.根据权利要求8或9的任一项所述的药物组合物，其中所述脑瘤选自由以下组成的组：成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤和转移性脑瘤。

11.根据权利要求1至10的任一项所述的药物组合物，所述药物组合物还包含向所述受试者施用至少一种另外的治疗剂。

12.免疫治疗剂在制备用于在接受或将接受聚焦放射治疗的个体中治疗临床病症的药物组合物中的用途。

13.根据权利要求12所述的用途，其中所述聚焦放射治疗选自由以下组成的组：立体定位放射手术、分级立体定位放射手术和调强放射治疗。

14.根据权利要求12或13的任一项所述的用途，其中用于所述聚焦放射治疗的放射源选自由以下组成的组：粒子束（质子）、钴60（光子）和线性加速器（X射线）。

15.根据权利要求1至3的任一项所述的用途，其中所述至少一种免疫治疗剂选自由以下组成的组：单克隆抗体、免疫效应细胞、过继性细胞转移、免疫毒素、疫苗或细胞因子。

16.根据权利要求15所述的用途，其中所述单克隆抗体选自由以下组成的组：抗PD-1抗体、阿仑单抗、贝伐单抗、brentuximab vedotin、西妥昔单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、替伊莫单抗、伊匹单抗（抗CTLA-4）、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、抗B7-H4、抗B7-H1、抗LAG3、BTLA、抗Tim3、抗B7-DC、抗CD160、KIR拮抗剂抗体、抗4-1BB、抗OX40、抗CD27和CD40激动剂抗体。

17.根据权利要求12至16的任一项所述的用途，所述用途还包含与所述免疫关卡抑制剂联合施用至少一种辅药。

18.根据权利要求17所述的用途，其中所述至少一种辅药选自由以下组成的组：细胞因子、白介素、干扰素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、卡介苗（BCG）、匙孔戚血蓝蛋白（KLH）、不完全弗氏佐剂（IFA）、QS-21、DETOX和二硝基苯基。

19.根据权利要求12至18的任一项所述的用途，其中所述肿瘤是与选自由以下组成的组的癌症相关的肿瘤：涉及脊椎的癌症、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、黑素瘤、转移性眼眶瘤、眼眶淋巴瘤、脑瘤和其组合。

20.根据权利要求12至18的任一项所述的用途，所述用途还包含向所述受试者施用至少一种另外的治疗剂。

21.一种用于在需要肿瘤治疗的受试者中治疗肿瘤的方法，所述方法包含与至少一种免疫治疗剂联合向所述受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射以治疗肿瘤。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述至少一种免疫治疗剂是免疫关卡抑制剂。

23.根据权利要求21至22的任一项所述的方法，其中所述聚焦放射选自由以下组成的组：立体定位放射手术、分级立体定位放射手术和调强放射治疗。

24.根据权利要求21至23的任一项所述的方法，其中所述聚焦放射具有选自由以下组成的组的放射源：粒子束（质子）、钴60（光子）和线性加速器（X射线）。

25.根据权利要求21至24的任一项所述的方法，其中所述至少一种免疫治疗剂选自由以下组成的组：单克隆抗体、免疫效应细胞、疫苗和细胞因子。

26.根据权利要求25所述的方法，其中所述单克隆抗体选自由以下组成的组：抗PD-1抗体、阿仑单抗、贝伐单抗、brentuximab vedotin、西妥昔单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、替伊莫单抗、伊匹单抗（抗CTLA-4）、奥法木单抗、帕尼单抗、利妥昔单抗、托西莫单抗、曲妥珠单抗、抗B7-H4、抗B7-H1、抗LAG3、BTLA、抗Tim3、抗B7-DC、抗CD160、KIR拮抗剂抗体、抗4-1BB、抗OX40、抗CD27和CD40激动剂抗体。

27.根据权利要求21至26的任一项所述的方法，所述方法还包含与所述至少一种免疫治疗剂联合施用至少一种辅药。

28.根据权利要求27所述的方法，其中所述至少一种辅药选自由以下组成的组：细胞因子、白介素、干扰素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）、卡介苗（BCG）、匙孔戚血蓝蛋白（KLH）、不完全弗氏佐剂（IFA）、QS-21、DETOX和二硝基苯基。

29.根据权利要求21至28的任一项所述的方法，其中所述肿瘤是与选自由以下组成的组的癌症相关的肿瘤：涉及脊椎的癌症、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、肝癌、肾癌、乳腺癌、黑素瘤、转移性眼眶瘤、眼眶淋巴瘤、良性脑瘤和其组合。

30.根据权利要求21至29的任一项所述的方法，所述方法还包含向所述受试者施用至少一种另外的治疗剂。

31.一种用于在需要癌症治疗的受试者中治疗癌症的新辅助治疗的方法，所述方法包含：

（a）联合治疗有效的第一剂量的至少一种免疫治疗剂，向所述受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射；

（b）对所述受试者进行手术以移除与所述癌症相关的至少部分肿瘤；以及

（c）联合治疗有效的第二剂量的至少一种免疫治疗剂，向所述受试者施用治疗有效剂量的聚焦放射；

其中步骤（a）、（b）和（c）可按照治疗所述受试者中所述癌症的需要系列或单独重复。

32.根据权利要求31所述的方法，所述方法还包含向所述受试者施用另外的化疗和或放射治疗。

33.根据权利要求31或32的任一项所述的方法，所述方法还包含向所述受试者施用辅助治疗。

34.根据权利要求31至33的任一项所述的方法，所述方法还包含向所述受试者施用至少一种另外的免疫治疗剂。

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