KR20230037664A - 항-ctla-4 항체 및 이의 사용 방법 - Google Patents

항-ctla-4 항체 및 이의 사용 방법 Download PDF

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다이크 마크 반
코르넬리아 앤 문트
게르드 리터
데이비드 쉬아
제드 데이비드 월초크
타하 멀고브
니콜라스 스튜어트 윌슨
데이비드 아담 사비츠키
마크 아서 핀데이스
데니스 존 언더우드
진-마리 퀼러렛
이고르 프로우스커심
올가 쉐바노바
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Abstract

본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고 CTLA-4 기능을 길항하는 항체를 제공한다. 또한 이들 항체, 이들 항체를 암호화하는 핵산, 이들 항체를 제조하기 위한 발현 벡터 및 숙주 세포를 포함하는 약제학적 조성물, 및 이들 항체를 이용하여 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.

Description

항-CTLA-4 항체 및 이의 사용 방법{ANTI-CTLA-4 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF}
1. 관련 출원
본 출원은 2016년 12월 7일자로 출원된 미국 가출원 특허 제62/431,272호의 유익을 주장하며, 이 기초출원은 본 명세서에 그의 전문이 참고로 편입된다.
2. 기술분야
본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 및 이를 사용하는 방법에 관한 것이다.
T-림프구는 항원에 대한 적응 면역 반응에 대한 중심이다. 미경험 T 세포의 완전한 활성화를 위해 적어도 2가지의 신호가 필요하다(Bretscher 1999, Proc Natl Acad Sci USA 96:185-90). 첫째로, 항원-특이적 신호는 항원-제시 세포(항원-presenting cell: APC) 상에서 T-세포 수용체(T-cell receptor: TCR)와 MHC/펩타이드 복합체의 상호작용에 의해 제공된다. 둘째로, 공-자극 신호는 T-세포 상의 수용체와 항원 제시 세포(APC) 상의 그들의 리간드 사이의 상호작용에 의해 제공된다. TCR/MHC 둘 다의 맞물림과 공자극 상호작용은 칼슘-칼시뉴린 및 RAS 미토겐-활성화된 단백질 키나제, 및 사이토카인, 예컨대 IL-2를 비롯한 다수의 효과기 화합물에 대한 전사 인자의 후속적 활성화를 포함하는 다수의 세포내 경로를 통해 T-세포 활성화를 야기한다. 이들 사건은 T-세포 증식, CD4+ 헬퍼 T-세포(TH) 풀의 생성, 및 활성화된 CD8+ 세포독성 T-세포의 확장을 야기한다. 공자극은 완전한 T-세포 할성화에 중요할 뿐만 아니라, TCR/MHC 맞물림 동안 그의 부재는 무반응(anergy) 및/또는 세포자멸사를 초래한다.
다중 양성 및 음성 공자극 경로는 T-세포 조절에 연루되지만; 그러나, T-세포 상의 CD28와 APC 상의 B7-1(CD80) 및 B7-2(CD86) 사이가 가장 중요하다. CD28은 TH1 표현형 세포로의 T-세포 분화를 촉진하며, B 세포에 의한 항체 생산 및 T-세포의 활성화를 향상시킨다. APC, 예컨대 수지상 세포(dendritic cell: DC) 및 B 세포 상에서 발현되는 B7-1 및 B7-2는 중복되지만 별개인 기능을 가진다. B7-2는 구성적으로 발현되며, TCR/MHC 맞물림과 동시에 APC 상에서 빠르게 상향조절된다(신호 1). B7-1 발현은 휴지 세포 상에서 매우 낮지만, 전형적으로 연장된 T-세포 자극 후에 유도된다. 이들 차이는 B7-2가 T-세포 활성화의 개시에서 중요할 수 있지만, B7-1이 면역 반응을 영구화함에 있어서 더 큰 역할을 할 수 있다는 것을 시사한다.
T-세포 활성화 후에, 음성 조절 수용체 세포독성 T-림프구 항원 4(CTLA-4)는 T-세포 상에서 상향조절된다(Alegre et al., 2001, Nat Rev Immunol 1:220-8). CTLA-4는 CD28에 대해 구조적으로 상동성이지만, B7-1과 B7-2 리간드 둘 다에 대해 더 단단하게 결합한다. CTLA-4는 몇몇 방법에서 면역 반응을 저해한다: 이는 B7 리간드에 대해 CD28과 경쟁하고, 따라서 공자극을 차단하며; T-세포 활성화를 저해하기 위해 음성으로 신호를 전달하고; 그리고 트랜스-엔도사이토시스에 의해 반대편 세포로부터 CD80 및 CD86을 포획하여 CD28을 통한 손상된 공자극을 초래할 수 있다(Krummel and Allison, 1995, J Exp Med 182:459-465; Walunas et al., 1994, Immunity 1:405-413; Qureshi et al., 2011, Science 332:600-603).
면역 반응을 촉진하고 유지함에 있어서 B7 공자극 경로의 중요한 역할을 고려하면, 이 경로를 길항하도록 설계된 치료제는 자가면역 질환 및 장애의 치료에 유망하다.
본 개시내용은 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하고 CTLA-4 기능, 예를 들어, CTLA-4-매개 면역 억제를 길항하는 항체를 제공한다. 또한 이들 항체, 이들 항체를 암호화하는 핵산, 이들 항체를 제조하기 위한 발현 벡터 및 숙주 세포를 포함하는 약제학적 조성물, 및 이들 항체를 이용하여 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 본 명세서에 기재된 항체는 항원(예를 들어, 종양 항원 또는 전염성 질환 항원)에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키고/시키거나 Treg-매개 면역 억제를 감소시키는 데 특히 유용하며, 따라서, 대상체에서 암을 치료하거나 또는 대상체에서 전염성 질환을 치료 또는 예방하는 데 유용하다.
따라서, 일 양상에서, 본 개시내용은 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 단리된 항체를 제공하되,
(a) CDRH1은 SYSMN의 아미노산 서열(서열번호 10)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SISSSSSYIYYAXSVKG의 아미노산 서열(서열번호 18)을 포함하되, X는 E 또는 D이며;
(c) CDRH3은 VGLXGPFDI의 아미노산 서열(서열번호 19)이되, X는 F 또는 M이고;
(d) CDRL1은 RASQSVSRYLG의 아미노산 서열(서열번호 15)을 포함하며;
(e) CDRL2는 GASTRAT의 아미노산 서열(서열번호 16)을 포함하고; 그리고
(f) CDRL3은 QQYGSSPWT의 아미노산 서열(서열번호 17)을 포함하며,
항체의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 서열은 각각 서열번호 10, 11 및 13이 아니다.
소정의 실시형태에서, CDRH2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH2는 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH3은 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH3은 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 10, 11 및 14; 10, 12 및 13; 또는 10, 12 및 14에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 10, 12 및 14에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 10, 11, 14, 15, 16 및 17; 10, 12, 13, 15, 16 및 17; 또는 10, 12, 14, 15, 16 및 17에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 10, 12, 14, 15, 16 및 17에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합되는 단리된 항체를 제공하되:
(a) CDRH1은 SYSMN의 아미노산 서열(서열번호 10)을 포함하고;
(b) CDRH2는 SISSSSSYIYYAXSVKG의 아미노산 서열(서열번호 18)을 포함하되, X는 E 또는 D이며;
(c) CDRH3은 VGLXGPFDI의 아미노산 서열(서열번호 19)이되, X는 F 또는 M이고;
(d) CDRL1은 RASQSVSRYLG의 아미노산 서열(서열번호 15)을 포함하며;
(e) CDRL2는 GASTRAT의 아미노산 서열(서열번호 16)을 포함하고; 그리고
(f) CDRL3은 QQYGSSPWT의 아미노산 서열(서열번호 17)을 포함하며,
항체의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 서열은 각각 서열번호 10, 11 및 13이 아니다.
소정의 실시형태에서, CDRH2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH2는 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH3은 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH3은 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 10, 11 및 14; 10, 12 및 13; 또는 10, 12 및 14에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3은 각각 서열번호 10, 12 및 14에 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 10, 11, 14, 15, 16 및 17; 10, 12, 13, 15, 16 및 17; 또는 10, 12, 14, 15, 16 및 17에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 10, 12, 14, 15, 16 및 17에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하되, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3은 각각 서열번호 10, 12, 14, 15, 16 및 17에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 2 및 4 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 2 및 4 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 중쇄 가변 영역은 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 인간 IGHV3-21 생식계열 서열(예를 들어, IGHV3-21*01, 예를 들어, 서열번호 21의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 9의 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 인간 IGKV3-20 생식계열 서열(예를 들어, IGKV3-20*01, 예를 들어, 서열번호 22의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 인간 IGHV3-21 생식계열 서열(예를 들어, IGHV3-21*01, 예를 들어, 서열번호 21의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하되, 중쇄 가변 영역은 서열번호 14에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 인간 IGKV3-20 생식계열 서열(예를 들어, IGKV3-20*01, 예를 들어, 서열번호 22의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 서열번호 2 내지 8로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 23 내지 26으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하되, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역은 각각 서열번호 2 및 9; 3 및 9; 4 및 9; 5 및 9; 6 및 9; 7 및 9; 또는 8 및 9에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 IGHV3-21*01 생식계열 서열(예를 들어, IGHV3-21*01, 예를 들어, 서열번호 21의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역; 및 인간 IGKV3-20*01 생식계열 서열(예를 들어, IGKV3-20*01, 예를 들어, 서열번호 22의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다.
소정의 실시형태에서, 항체는 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 이루어진 군으로부터 선택된 중쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 중쇄 불변 영역은 IgG1이다. 소정의 실시형태에서, 중쇄 불변 영역은 IgG2이다. 소정의 실시형태에서, 항체는 인간 Igκ 및 Igλ로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 항체는 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 28의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, IgG1 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S239D/I332E 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, IgG1 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S239D/A330L/I332E 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, IgG1 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L 돌연변이를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, IgG1 중쇄 불변 영역은 비푸코실화된 IgG1이다.
소정의 실시형태에서, 항체는 야생형 인간 IgG 중쇄 불변 영역의 변이체인 인간 IgG 중쇄 불변 영역을 포함하되, 변이체 인간 IgG 중쇄 불변 영역은 야생형 인간 IgG 중쇄 불변 영역이 FcγRIIIA에 결합하는 것보다 더 큰 친화도로 FcγRIIIA에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 변이체 인간 IgG 중쇄 불변 영역은 변이체 인간 IgG1 중쇄 불변 영역이다.
소정의 실시형태에서, 항체는 인간 Igκ 및 Igλ로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 Igκ 경쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 CTLA-4에 대한 결합에 대해 본 명세서에 기재된 항체와 상호 경쟁하는 단리된 항체를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 CTLA-4에 대한 결합에 대해 서열번호 8 및 9에 각각 제시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 상호 경쟁하는 단리된 항체를 제공한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 항체와 동일한 인간 CTLA-4 상의 에피토프에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 서열번호 8 및 9에 각각 제시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 동일한 인간 CTLA-4 상의 에피토프에 결합하는 단리된 항체를 제공한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 CTLA-4의 에피토프에 결합하는, 예를 들어, 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 34 내지 39로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 37의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 36의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 35의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 34의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 38의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 39의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 발명의 임의의 항체와 동일한 인간 CTLA-4의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 34 내지 39로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 37의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 36의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 35의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 34의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 38의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 39의 아미노산 서열로 이루어진 인간 CTLA-4의 영역 내에 위치된 에피토프에 결합한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된, 항체를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된, 항체를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된, 항체를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은, 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된, 항체를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된, 항체를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된, 항체를 제공한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 발명의 임의의 항체와 동일한 인간 CTLA-4의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체 또는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 항체는, 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 34에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된다. 소정의 실시형태에서, 항체는, 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 35에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된다. 소정의 실시형태에서, 항체는, 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 36에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된다. 소정의 실시형태에서, 항체는, 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 37에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된다. 소정의 실시형태에서, 항체는, 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 38에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된다. 소정의 실시형태에서, 항체는, 인간 CTLA-4 단백질 또는 이의 단편에 결합되었을 때, 예를 들어, 서열번호 33의 잔기 37 내지 162의 아미노산 서열을 포함하여, 수소/중수소 분석에 의해 결정하여, 항체의 부재 하에 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환에 비해 서열번호 39에 제시된 아미노산 서열로 이루어진 영역에서의 수소/중수소 교환이 감소된다.
소정의 실시형태에서, 항체는 인간 항체이다. 소정의 실시형태에서, 항체는 이중특이성 항체이다.
소정의 실시형태에서, 항체는 인간 CTLA-4에 대해 길항적이다. 소정의 실시형태에서, 항체는 인간 CTLA-4의 활성을 비활성화시키거나, 감소시키거나, 또는 저해한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 인간 CD80 또는 인간 CD86에 대한 인간 CTLA-4의 결합을 저해한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 스타필로코커스 엔테로톡신 A(staphylococcal enterotoxin A: SEA)로 자극된 말초혈액단핵세포(peripheral blood mononuclear cell: PBMC)에 의해 IL-2 생산을 유도한다.
소정의 실시형태에서, 항체는 세포독성제, 세포정지제(cytostatic agent), 독소, 방사성핵종, 또는 검출 가능한 표지에 접합된다.
소정의 실시형태에서, 항체의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역의 N-말단의 아미노산 잔기는 파이로글루타메이트로 전환되었다.
일 실시형태에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 항체에 관한 것이다.
일 실시형태에서, 본 발명은 면역요법을 위한 약제학적 조성물 또는 의약을 제조하기 위한 본 발명의 항체의 용도에 관한 것이다. 소정의 실시형태에서, 면역요법은, 선택적으로 암을 치료하거나, 또는 전염성 질환을 치료하거나 또는 예방하기 위해 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키기 위한 것이다.
일 실시형태에서, 본 발명은 진단제로서 사용하기 위한 본 발명의 항체에 관한 것이다.
일 실시형태에서, 본 발명은 생물학적 샘플 중의 인간 CTLA-4의 시험관내 검출을 위한 본 발명의 항체의 용도에 관한 것이다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 및/또는 경쇄를 암호화하는 단리된 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 폴리뉴클레오타이드 또는 벡터를 포함하는 재조합 숙주 세포를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 CTLA-4에 결합하는 항체를 생성하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 폴리뉴클레오타이드가 발현되고 항체가 생산되도록 숙주 세포를 배양시키는 단계를 포함한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 본 명세서에 기재된 유효량의 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 대상체는 암을 가진다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 전이성 또는 국소로 진행된 종양(예를 들어, 고형 종양)을 가진다. 소정의 실시형태에서, 암은 전이성 또는 국소로 진행된 종양의 진단 후에 (예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된다. 소정의 실시형태에서, 암은 상이한 암 요법에 의한 종양의 사전 치료에도 불구하고 발생된 종양 진행의 진단 후에(예를 들어, 종양 진행의 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 방법은 투여되는 제2 암 요법으로서 제공된다. 소정의 실시형태에서, 암은 상이한 암 요법의 독성의 진단 후에(예를 들어, 상이한 암 요법의 독성의 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 방법은 투여되는 제2 암 요법으로서 제공된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 표준 요법을 이용 가능하지 않은 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양)이다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 표준 요법이 실패한 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양)이다(즉, 암은 표준 요법 후에 진행되었다). 소정의 실시형태에서, 암이 요법에 대해 불응성이라면 요법은 실패한다. 소정의 실시형태에서, 암이 요법에 대해 완전히 또는 부분적으로 반응한 후에 재발한다면, 요법은 실패한다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양)은 조직학적으로 또는 세포학적으로 확인되었다.
소정의 실시형태에서, 암은 PD-L1을 발현시킨다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 암 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%(예를 들어, 적어도 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%)이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 암 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 암 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 5%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 암 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 25%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 암 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 50%이다.
소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 종양은 PD-L1을 발현시킨다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 종양의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%(예를 들어, 적어도 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%)이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 종양의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 종양의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 5%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 종양의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 25%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 종양의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 50%이다.
소정의 실시형태에서, 암은 자궁경부암이다. 소정의 실시형태에서, 암은 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양)이다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양)은 자궁경부의 전이성 또는 국소로 진행된, 절제 가능하지 않은 편평세포암종, 선평편암종 또는 선암종이다. 소정의 실시형태에서, 표준 요법은 암(예를 들어, 자궁경부암) 또는 전이성 또는 국소로 진행된 종양(예를 들어, 고형 종양)에 대해 이용 가능하지 않다. 소정의 실시형태에서, 암(예를 들어, 자궁경부암) 또는 전이성 또는 국소로 진행된 종양 (예를 들어, 고형 종양)은 표준 요법에 대해 불응성이다. 소정의 실시형태에서, 암(예를 들어, 자궁경부암) 또는 전이성 또는 국소로 진행된 종양(예를 들어, 고형 종양)은 표준 요법 후에 재발되었다. 소정의 실시형태에서, 표준 요법은 백금-함유 화학요법을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 표준 요법은 백금-함유 더블릿(platinum-containing doublet)이다. 소정의 실시형태에서, 암(예를 들어, 자궁경부암)은 진행된(재발성, 절제 가능하지 않은, 또는 전이성) 질환의 치료를 위해 투여된 백금-함유 더블릿 후에 재발된 자궁경부의 전이성 또는 국소로 진행된, 절제 가능하지 않은 편평세포암종, 선평편암종 또는 선암종이다. 소정의 실시형태에서, 암(예를 들어, 자궁경부암) 또는 전이성 또는 국소로 진행된 종양은 HPV 양성이다. 소정의 실시형태에서, 암 또는 전이성 또는 국소로 진행된 고형 종양은 두경부암, 흑색종, 신세포암종, 요로상피세포암종 또는 자궁내막 암종이다. 소정의 실시형태에서, 암(예를 들어, 자궁경부암) 또는 전이성 또는 국소로 진행된 고형 종양은 미소부수체 불안정성과 관련된다.
소정의 실시형태에서, 대상체는 자궁경부암(예를 들어, 자궁경부의 전이성 또는 국소로 진행된, 절제 가능하지 않은 편평세포암종, 선평편암종, 또는 선암종)을 가지며, 상기 방법은 자궁경부암의 진단 후에(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 대상체에게 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 유효량의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 4주마다 0.3㎎/㎏, 4주마다 1㎎/㎏, 4주마다 3㎎/㎏, 6주마다 0.3㎎/㎏, 6주마다 1㎎/㎏, 6주마다 3㎎/㎏, 12주마다 0.3㎎/㎏, 12주마다 1㎎/㎏ 및 12주마다 3㎎/㎏으로 이루어진 군으로부터 선택된 투약량 및 빈도로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 자궁경부암(예를 들어, 자궁경부의 전이성 또는 국소로 진행된, 절제 가능하지 않은 편평세포암종, 선평편암종 또는 선암종)을 가지며, 상기 방법은 자궁경부암의 진단 후에(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 대상체에게 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 펨브롤리주맙을 포함하는 유효량의 치료적 조합물을 투여하는 단계를 포함하되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 4주마다 0.3㎎/㎏, 4주마다 1㎎/㎏, 4주마다 3㎎/㎏, 6주마다 0.3㎎/㎏, 6주마다 1㎎/㎏, 6주마다 3㎎/㎏, 12주마다 0.3㎎/㎏, 12주마다 1㎎/㎏ 및 12주마다 3㎎/㎏으로 이루어진 군으로부터 선택된 투약량 및 빈도로 투여되고, 펨브롤리주맙은 3주마다 200㎎으로 투여된다.
소정의 실시형태에서, 암은 비소세포 폐암(NSCLC)이다. 소정의 실시형태에서, NSCLC는 IV기 NSCLC이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%(예를 들어, 적어도 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%)이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 5%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 25%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 50%이다. 소정의 실시형태에서, NSCLC는 EGFR 또는 ALK 게놈 종양 이상이 없다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC는 EGFR 민감화 돌연변이(예를 들어, 에를로티닙, 게피티닙 또는 아파타닙을 포함하는 타이로신 키나제 저해제에 의한 치료를 받을 수 있는 돌연변이) 또는 ALK 전좌가 없다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 NSCLC에 대한 사전 전신 화학요법 치료를 받지 않았다.
소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 고형 종양은 전이성 또는 국소로 진행된 비소세포 폐암(NSCLC)이다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 고형 종양은 전이성 비소세포 폐암(NSCLC)이다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 고형 종양은 IV기, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC이다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 고형 종양은 IV기, 전이성 NSCLC이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%(예를 들어, 적어도 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%)이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 5%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 25%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 50%이다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC는 EGFR 또는 ALK 게놈 종양 이상이 없다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC에 대한 사전 전신 화학요법 치료를 받지 않았다.
소정의 실시형태에서, 대상체는 NSCLC(예를 들어, IV기, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC)를 갖되, 선택적으로 PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 막 발현, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%이고, 상기 방법은 자궁경부암의 진단 후에(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 대상체에게 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 유효량의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 4주마다 0.3㎎/㎏, 4주마다 1㎎/㎏, 4주마다 3㎎/㎏, 6주마다 0.3㎎/㎏, 6주마다 1㎎/㎏, 6주마다 3㎎/㎏, 12주마다 0.3㎎/㎏, 12주마다 1㎎/㎏ 및 12주마다 3㎎/㎏으로 이루어진 군으로부터 선택된 투약량 및 빈도로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 NSCLC(예를 들어, IV기, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC)를 갖되, 선택적으로 PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 막 발현, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%이고, 상기 방법은 자궁경부암의 진단 후에(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 대상체에게 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 펨브롤리주맙을 포함하는 치료적 조합물을 투여하는 단계를 포함하고, 선택적으로 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 4주마다 0.3㎎/㎏, 4주마다 1㎎/㎏, 4주마다 3㎎/㎏, 6주마다 0.3㎎/㎏, 6주마다 1㎎/㎏, 6주마다 3㎎/㎏, 12주마다 0.3㎎/㎏, 12주마다 1㎎/㎏ 및 12주마다 3㎎/㎏으로 이루어진 군으로부터 선택된 투약량 및 빈도로 투여되고, 및 펨브롤리주맙은 3주마다 200㎎으로 투여된다.
소정의 실시형태에서, 암은 피부의 편평세포 암종(cutaneous squamous-cell carcinoma: cSCC)이다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 고형 종양은 IV기 피부의 편평세포 암종(cSCC)이다. 소정의 실시형태에서, cSCC는 미국암연합위원회 병기분류 8판에 따라 조직학적으로 또는 세포학적으로 진단된다. 소정의 실시형태에서, cSCC는 방사선 요법으로 치유 가능하지 않다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 cSCC(예를 들어, IV기 cSCC)를 가지며, 상기 방법은 대상체에게 제1 암 요법으로서 cSCC의 진단 후에(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 유효량의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 4주마다 0.3㎎/㎏, 4주마다 1㎎/㎏, 4주마다 3㎎/㎏, 6주마다 0.3㎎/㎏, 6주마다 1㎎/㎏, 6주마다 3㎎/㎏, 12주마다 0.3㎎/㎏, 12주마다 1㎎/㎏ 및 12주마다 3㎎/㎏으로 이루어진 군으로부터 선택된 투약량 및 빈도로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 cSCC(예를 들어, IV기 cSCC)를 가지며, 상기 방법은 cSCC의 진단 후에 (예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 대상체에게 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 및 펨브롤리주맙을 포함하는 유효량의 치료적 조합물을 투여하는 단계를 포함하되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 4주마다 0.3㎎/㎏, 4주마다 1㎎/㎏, 4주마다 3㎎/㎏, 6주마다 0.3㎎/㎏, 6주마다 1㎎/㎏, 6주마다 3㎎/㎏, 12주마다 0.3㎎/㎏, 12주마다 1㎎/㎏, 및 12주마다 3㎎/㎏로 이루어진 군으로부터 선택된 투약량 및 빈도로 투여되고, 펨브롤리주맙은 3주마다 200㎎으로 투여된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 정맥내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 선택적으로 2주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 6㎎/㎏ 또는 10㎎/㎏으로 정맥내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 선택적으로 3주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 6㎎/㎏ 또는 10㎎/㎏으로 정맥내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 선택적으로 4주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 6㎎/㎏ 또는 10㎎/㎏으로 정맥내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 6주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 6㎎/㎏ 또는 10㎎/㎏으로 정맥내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 선택적으로 12주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 6㎎/㎏ 또는 10㎎/㎏으로 정맥내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 선택적으로 3주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏으로 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 선택적으로 3주마다 1회의 간격으로 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏ 또는 0.3㎎/㎏으로 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 전신 투여에 의해 주어진 용량보다 5배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 100배 또는 200배까지 더 낮은 용량으로 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 전신 투여에 의해 주어진 용량보다 10배까지 더 낮은 용량으로 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 전신 투여에 의해 주어진 용량보다 100배까지 더 낮은 용량으로 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 단일요법으로서 (예를 들어, 종양내로 또는 전신으로) 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내로 투여되고, 상기 방법은 대상체에게 추가적인 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, 추가적인 치료제는 전신으로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 고형 종양을 갖고, 추가적인 치료제는 항-PD-1 항체이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙이다. 소정의 실시형태에서, 펨브롤리주맙은 3주마다 200㎎의 용량으로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 두경부 편평세포암종을 갖고, 추가적인 치료제는 항-EGFR 항체이다. 소정의 실시형태에서, 항-EGFR 항체는 세툭시맙이다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 HER2+ 유방암을 갖고, 추가적인 치료제는 항-HER2 항체이다. 소정의 실시형태에서, 항-HER2 항체는 트라스투주맙이다. 소정의 실시형태에서, 이들 방법은 대상체에게 화학치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, 화학치료제는 전신으로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 화학치료제는 겜시타빈이다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내로 투여되고, 상기 대상체는 진행된 또는 전이성 고형 종양을 가진다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내로 투여되고, 상기 대상체는 두경부 암(예를 들어, 재발/불응성 두경부 편평세포암종)을 가진다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내로 투여되고, 상기 대상체는 유방암(예를 들어, 재발/불응성 HER2+ 유방암)을 가진다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양 배수 림프절에 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 국소화된 투여(예를 들어, 피하 투여)를 통해 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏으로 국소화된 투여(예를 들어, 피하 투여)를 통해 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 전신 투여에 의해 주어진 용량보다 5배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배, 100배 또는 200배까지 더 낮은 용량으로 국소화된 투여(예를 들어, 피하 투여)를 통해 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 전신 투여에 의해 주어진 용량보다 10배까지 더 낮은 용량으로 국소화된 투여(예를 들어, 피하 투여)를 통해 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 전신 투여에 의해 주어진 용량보다 100배까지 더 낮은 용량으로 국소화된 투여(예를 들어, 피하 투여)를 통해 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 국소화된 투여(예를 들어, 피하 투여)를 통해 전달되고, 상기 방법은 대상체에게 추가적인 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, 추가적인 치료제는 백신이다. 소정의 실시형태에서, 백신은 항원 펩타이드와 복합체화된 열 충격 단백질을 포함하는 열 충격 단백질 펩타이드 복합체(HSPPC)를 포함한다. 일 실시형태에서, 열 충격 단백질은 gp96 단백질이고, 종양-관련 항원 펩타이드와 복합체화되되, HSPPC는 대상체로부터 얻은 종양으로부터 유래된다. 소정의 실시형태에서, 열 충격 단백질은 hsc70, hsp70, hsp90, hsp110, grp170, gp96, 칼레티쿨린, 이들의 돌연변이체, 및 이들의 둘 이상의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 열 충격 단백질은 hsc70이다. 소정의 실시형태에서, 열 충격 단백질은 hsp70이다. 소정의 실시형태에서, 항원 펩타이드는 합성이다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 암을 가진다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 전염성 질환을 가진다. 소정의 실시형태에서, 이들 방법은 대상체에게 추가적인 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, 추가적인 치료제는 화학치료제 또는 관문 표적화제이다. 소정의 실시형태에서, 관문 표적화제는 길항제 항-PD-1 항체, 길항제 항-PD-L1 항체, 길항제 항-PD-L2 항체, 길항제 항-CTLA-4 항체, 길항제 항-TIM-3 항체, 길항제 항-LAG-3 항체, 길항제 항-CEACAM1 항체, 작용제 항-GITR 항체, 작용제 항-OX40 항체, 및 작용제 항-CD137 항체, 작용제 항-DR3 항체, 작용제 항-TNFSF14 항체 및 작용제 항-CD27 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 추가적인 치료제는 방사선요법이다. 소정의 실시형태에서, 추가적인 치료제는 인돌아민-2,3-다이옥시게나제(IDO)의 저해제이다. 적합한 IDO 저해제는 에파카도스탯, F001287, 인독시모드 및 NLG919를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 소정의 실시형태에서, 추가적인 치료제는 백신이다. 소정의 실시형태에서, 백신은 항원 펩타이드와 복합체화된 열 충격 단백질을 포함하는 열 충격 단백질 펩타이드 복합체(HSPPC)를 포함한다. 일 실시형태에서, 열 충격 단백질은 gp96 단백질이고, 종양-관련 항원 펩타이드와 복합체화되되, HSPPC는 대상체로부터 얻어진 종양으로부터 유래된다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 대상체에서 전염성 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 대상체에서 전염성 질환을 예방하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일 실시형태에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 항체, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드, 본 발명의 벡터, 및/또는 본 발명의 재조합 숙주 세포에 관한 것이다.
일 실시형태에서, 본 발명은 진단제로서 사용하기 위한 본 발명의 항체, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드, 본 발명의 벡터, 및/또는 본 발명의 재조합 숙주 세포에 관한 것이다.
일 실시형태에서, 본 발명은 생물학적 샘플에서 인간 CTLA-4의 시험관내 검출을 위한 본 발명의 항체, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드, 본 발명의 벡터, 및/또는 본 발명의 재조합 숙주 세포의 용도에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 명세서에서 의약으로서 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
일 양상에서, 본 명세서에서 진단제로서 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
일 양상에서, 본 명세서에서 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 본 발명의 폴리뉴클레오타이드, 본 발명의 벡터, 및/또는 본 발명의 재조합 숙주 세포, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 일 양상에서, 약제학적 조성물은 의약 및/또는 진단제로서 사용하기 위한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키기 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포, 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키기 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포, 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 대상체에게 유효량의 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키기 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 대상체에서 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 대상체에게 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 추가적인 치료제, 바람직하게는 항-PD-1 항체에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 추가적인 치료제, 바람직하게는 항-PD-1 항체에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 암은 고형 종양이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물은 대상체에 대해 종양내로 투여되고, 바람직하게는 선택적으로 3주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏으로 대상체에 대해 종양내로 투여된다.
일 양상에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 추가적인 치료제, 바람직하게는 항-PD-1 항체를 포함하는, 약제학적 조성물, 키트 또는 키트의 부품에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 항-EGFR 항체, 및 선택적으로 (c) 화학치료제에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 항-EGFR 항체, 및 선택적으로 (c) 화학치료제에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 암은 두경부 편평세포암종이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물은 대상체에게 종양내로 투여되고, 바람직하게는 대상체에게 선택적으로 3주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏으로 종양내로 투여된다.
일 양상에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 항-EGFR 항체, 및 선택적으로 (c) 화학치료제를 포함하는, 약제학적 조성물, 키트 또는 키트의 부품에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 항-HER2 항체, 및 선택적으로 (c) 화학치료제에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 HER2+ 유방암의 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 항-HER2 항체, 및 선택적으로 (c) 화학치료제에 관한 것이다. 다른 바람직한 실시형태에서, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물은 대상체에 대해 종양내로 투여되고, 바람직하게는 선택적으로 3주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏으로 대상체에 대해 종양내로 투여된다.
일 양상에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 항-HER2 항체, 및 선택적으로 (c) 화학치료제를 포함하는, 약제학적 조성물, 키트 또는 키트의 부품에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이되, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물은 대상체에 대해 종양내로 투여되고, 바람직하게는 선택적으로 3주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏ 또는 3㎎/㎏으로 대상체에 대해 종양내로 투여된다.
일 양상에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이되, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물은 대상체에 대해 피하로 또는 정맥내로 투여되고, 바람직하게는 선택적으로 3주마다 1회의 간격으로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 6㎎/㎏ 또는 10㎎/㎏으로 대상체에 대해 정맥내로 투여된다.
일 양상에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 추가적인 치료제에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 추가적인 치료제는 화학치료제 또는 관문 표적화제 또는 인돌아민-2,3-다이옥시게나제(IDO)의 저해제 또는 백신이다.
일 양상에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한, (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 추가적인 치료제에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 추가적인 치료제 화학치료제 또는 관문 표적화제 또는 인돌아민-2,3-다이옥시게나제(IDO)의 저해제 또는 백신이다.
일 양상에서, 본 발명은 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 추가적인 치료제를 포함하는 약제학적 조성물, 키트, 키트의 부품에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 추가적인 치료제는 화학치료제 또는 관문 표적화제 또는 인돌아민-2,3-다이옥시게나제(IDO)의 저해제 또는 백신이다.
일 양상에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 그리고/또는 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키기 위한 방버벵서 사용하기 위한 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이되, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물은 종양 배수 림프절에 전달된다.
일 양상에서, 본 발명은 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키기 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이되, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물은 종양 배수 림프절에 전달된다.
일 양상에서, 본 발명은 면역요법을 위한, 예를 들어, 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키기거나, 암을 치료하거나 또는 전염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 의약을 제조하기 위한 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 면역요법을 위한, 예를 들어, 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키기거나, 암을 치료하거나 또는 전염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 의약을 제조하기 위한 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이되, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물은 종양 배수 림프절에 전달된다.
일 양상에서, 본 발명은 면역요법을 위한, 예를 들어, 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키기거나, 암을 치료하거나 또는 전염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 의약을 제조하기 위한 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 항-HER2 항체, 및 선택적으로 (c) 화학치료제의 용도에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 면역요법을 위한, 예를 들어, 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키기거나, 암을 치료하거나 또는 전염성 질환을 치료 또는 예방하기 위한 의약을 제조하기 위한 (a) 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 항-HER2 항체, 및 선택적으로 (c) 화학치료제의 용도에 관한 것이되, 본 발명의 항체, 폴리뉴클레오타이드, 벡터, 재조합 숙주 세포 및/또는 약제학적 조성물은 종양 배수 림프절에 전달된다.
도 1A, 도 1B, 도 1C, 도 1D, 도 1E, 도 1F 도 1G는 세포 표면 상에서 인간 CTLA-4를 발현시키도록 조작된 Jurkat 세포에 대한 항-CTLA-4 항체 또는 IgG1 아이소타입 대조군 항체의 결합을 나타내는 유세포분석 히스토그램을 도시한 도면. 시험한 항-CTLA-4 항체는 AGEN1884.H1.1(IgG1), AGEN1884.H1.2(IgG1), AGEN1884.H1.3(IgG1), AGEN1884.H2.1(IgG1), AGEN1884.H2.2(IgG1), AGEN1884.H2.3(IgG1) 및 AGEN1884.H3(IgG1)이다.
도 2는 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1) 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG1)의 부재 또는 존재 하에 스타필로코커스 엔테로톡신 A(SEA) 초항원에 의한 차선의 자극 하에 인큐베이션 후 1차 인간 PBMC의 IL-2 생산을 나타내는 그래프를 도시한 도면. 각각의 그룹에 대해 8개의 복제를 수행하였고, 8개의 복제물의 평균 값은 검정색 막대로 나타낸다.
도 3은 CTLA-4의 차단이 T 세포 활성화를 야기한다는 것을 입증하는 IL-2-루시퍼라제 리포터 분석으로부터의 결과를 나타내는 그래프를 도시한 도면. IL-2 유전자 활성화에 대한 대리 마커인 루시퍼라제 발현의 반응 배수는 AGEN1884.H3(IgG1) 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG1)에 대한 항체 농도 범위에 대해 플롯팅된다.
도 4는 표적 세포(CTLA-4 결합을 통해) 및 효과기 세포(FcγRIIIA 결합을 통해)에 패한 AGEN1884.H3(IgG1)의 동시 맞물림이 효과기 세포주에 의한 루시퍼라제의 발현을 촉발시키는 경우의 리포터 분석으로부터의 결과를 나타내는 그래프를 도시한 도면. 루시퍼라제 활성은 FcγRIIIA 신호전달을 위한 대리 마커이다. RLU 값의 반응 배수는 AGEN1884.H3(IgG1) 및 아이소타입 대조군 항체(IgG1)에 대한 다양한 항체 농도에 대해 플롯팅한다.
도 5A, 도 5B, 도 5C도 5D는 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1), AGEN1884.H3(IgG1 S239D/I332E), AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 AGEN1884.H3(IgG1 L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L) 또는 아이소타입 대조군 항체와 함께 인큐베이션시킨 CTLA-4-발현 Jurkat 세포를 나타내는 유세포 분석 히스토그램을 도시한 도면. 형광색소-접합된 2차 항체를 이용하여 항체 결합을 검출하였다.
도 6A 도 6B는 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E)에 의한 인간 CTLA-4와 그의 리간드, CD80 및 CD86 사이의 결합 차단을 각각 나타내는 그래프를 도시한 도면. 인간 CTLA-4를 구성적으로 발현시키도록 조작된 Jurkat 세포를 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1-S239D/A330E/I332E), 기준 항-CTLA-4 항체, 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG1)와 함께 인큐베이션시키고, 이어서, 표시된 형광 표지된 리간드로 염색하였다. 이어서, 리간드 결합을 유세포 분석에 의해 평가하였다.
도 7a, 도 7b 도 7c는 아이소타입 대조군 항체(IgG1) 또는 항-CTLA-4 항체의 부재 또는 존재 하에서 SEA 초항원에 의한 차선의 자극 하에 배양시킨 1차 인간 PBMC의 IL-2 생산을 나타내는 그래프를 도시한 도면. 도 7a 및 도 7b는 아이소타입 대조군 항체(IgG1) 또는 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1), AGEN1884.H3(IgG1 S239D/I332E), AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 및 AGEN1884.H3(IgG1 L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L)의 단일 용량 또는 용량 적정에 의해 자극된 IL-2 생산을 나타내는 그래프를 도시한 도면. 도 7b에 나타낸 연구에서, 아이소타입 대조군 항체(IgG1) 또는 항-CTLA-4 항체에 추가로, 각각의 샘플 내 세포를 또한 IgG4 S228P 아이소타입 대조군 항체와 함께 인큐베이션시켰다. 도 7c는 아이소타입 대조군 항체(IgG1) 또는 항-CTLA-4 항체 AGEN1884(IgG1), AGEN1884(IgG1 S239D/I332E), AGEN1884(IgG1 S239D/A330L/I332E), 및 비푸코실화된 AGEN1884(IgG1)의 용량 적정에 의해 자극된 IL-2 생산을 나타내는 그래프를 도시한 도면.
8A는 50 ng/㎖의 SEA 초항원 및 10㎍/㎖의 아이소타입 대조군 항체(IgG1) 또는 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1), AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 또는 AGEN1884.H3(IgG1 N297A)에 의한 자극 후 인간 PBMC에서 인산화된 ZAP70 (Y493)에 대한 면역블롯 분석을 도시한 도면. 도 8B는 도 8A에 나타낸 데이터의 정규화된 농도 계측을 나타내는 차트를 도시한 도면.
9a, 9b, 9C 9D는 뮤린 항-CTLA-4 항체 9D9의 Fc 변이체에 의해 유도된 항종양 효능 및 종양 내 조절 T 세포(Treg) 고갈을 나타내는 그래프를 도시한 도면. 도 9a 뮤린 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a), 항-CTLA-4 항체 9D9의 Fc-침묵 변이체(mIgG2a-N297A), 항-CTLA-4 항체 9D9의 Fc 변이체(mIgG2a-S239D/A330L/I332E), 또는 아이소타입 대조군 항체(mIgG2a)에 의한 단일 용량 치료 후 CT26 마우스에서의 종양 성장을 도시한 도면. 상부 패널은 각각의 처리군에 대한 시간에 따른 중앙값 종양 용적을 나타낸다. 남아있는 패널은 각각의 처리군에서 개개 동물에 대한 시간에 따른 종양 용적을 나타낸다. 도 9b는 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a), 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a-N297A), 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a-S239D/A330L/I332E) 또는 아이소타입 대조군 항체(mIgG2a)의 단일 용량으로 처리된 마우스로부터 수집된 종양 침윤물로부터의 T 세포 집단에 대한 항-CTLA-4 항체 처리의 효과를 나타낸다. 종양 침윤물을 채취하고 나서, 항체로 주사 후 나타낸 시점에 유세포분석에 의해 분석하였다. 분석한 세포 집단은: FoxP3+ Treg(상부 좌측 패널), CD45+ 백혈구(상부 우측 패널), 및 CD4+ 비-Treg(하부 좌측 패널)를 포함한다. 하부 우측 패널은 종양 침윤물 중에서 관찰된 CD8+ T 세포 대 Treg의 비를 나타낸다. 도 9C는 도 9b에 대해 기재한 바와 같이 처리된 마우스로부터 채취한 종양-배수 림프절 내 FoxP3+ Treg 집단을 나타낸다. 도 9D는 도 9b에 대해 기재한 바와 같은 치료 후 72시간에 비장 FoxP3+ Treg의 변화 배수를 나타낸다.
도 10은 HPV+ 종양으로부터 유래된 종양 백신(바이러스 항원 E6/E7)과 조합할 때 뮤린 항-CTLA-4 항체의 항종양 효능을 도시한 일련의 그래프를 도시한 도면. 처리 없음, 아이소타입 대조군 항체(mIgG2a), 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a), 또는 항-CTLA-4 항체 9D9의 Fc 변이체(mIgG2a-S239D/A330L/I332E)를 받은 개개 마우스에 대한 시간에 따른 종양 용적을 나타낸다. 상부 행의 그래프는 표시된 항체 처리 단독을 투여받은 동물에 대한 결과를 나타낸다. 하부 행의 그래프는 종양 백신과 조합한 표시된 항체 처리가 투여된 동물에 대한 결과를 나타낸다.
도 11a 도 11b는 인간 T 세포 집단의 유전자 발현 및 CpG 메틸화를 나타내는 그래프를 도시한 도면. CD4+ CD25+/- FOXP3- 비-조절 T 세포(Teff) 및 CD4+ CD25+ FOXP3+ 조절 T 세포(Treg)를 건강한 공여자의 말초 혈액으로부터 단리시키고, 확장시키고 나서, 활성화시켰다. 도 11a는 유세포분석에 의해 결정하여 각각의 활성화된 T 세포 집단 내 FOXP3, 세포내 CTLA-4 및 막 CTLA-4 수준을 나타낸다. 도 11b는 미경험 T 세포, 활성화된 T 세포, 및 활성화된 조절 T 세포(각각 동일한 공여자로부터 유래됨) 내 FOXP3(상부 패널) 및 CTLA4(하부 패널) 좌위 내의 CpG 영역 내 CpG 메틸화 수준을 나타낸다.
도 12A 도 12B는 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1) 또는 이의 Fc 변이체와 함께 인큐베이션 후에 인간 CTLA-4+ 표적 세포의 항체 의존적 세포의 세포독성(ADCC)의 시간 과정을 나타내는 그래프를 도시한 도면. NK-92 세포(FcγRIIIA V158-발현)를 항-CTLA-4 항체 또는 IgG1 아이소타입 대조군의 상이한 Fc 변이체(10㎍/㎖)와 함RP 인큐베이션시킨 CTLA-4+ 표적 세포와 함께 공동배양시켰다. 이어서 카스파제 3/7 활성화의 고함량 현미경 관찰법을 사용하여 ADCC 활성을 정량화시켰다. 도 12A는 AGEN1884.H3(IgG1), AGEN1884.H3(IgG1 N297A), AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), AGEN1884.H3(IgG1 S267E/L328F), 비푸코실화된 AGEN1884.H3(IgG1), 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG1)와 함께 인큐베이션시켰을 때 세포 표면 상에서 CTLA-4를 발현시키도록 조작된 Jurkat 세포 내 ADCC 활성을 나타낸다. 도 12B는 이들 항체와 함께 인큐베이션시켰을 때 1차 인간 활성화된 효과기 T 세포(좌측 패널) 또는 조절 T 세포(우측 패널) 내 ADCC 활성을 나타낸다.
도 13A, 도 13B, 도 13C 도 13D는 단독으로 또는 항-PD-1 항체와 조합하여 투여될 때 T 세포 기능에 대한 항-CTLA-4 항체 변이체의 효과를 나타내는 그래프를 도시한 도면. 인간 PBMC는 두 명의 공여자로부터 단리시키고 나서, 표시한 바와 같이 기준 항-PD-1 항체 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG4)와 조합한 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1), Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG1)와 함께 동시 배양 조건 하에 인큐베이션시켰다. 열거한 각각의 처리 조건에 대해, 처음 열거된 항체에 대해 투약량 적정을 사용하였고, 두 번째 열거된 항체에 대해 고정된 농도(5㎍/㎖)를 사용하였다. 이 실험을 공여자마다 총 2개의 복제물에 대해 2회 수행하였다. 첫 번째 공여자로부터 수집한 PBMC 상에서 각각의 항체 조합물에 의해 유도된 IL-2 생산 수준을 도 13A(복제물 1) 및 도 13B(복제물 2)에 나타낸다. 두 번째 공여자로부터 수집된 PBMC 상에서 각각의 항체 조합물에 의해 유도된 IL-2 생산 수준을 도 13C(복제물 1) 및 도 13D(복제물 2)에 나타낸다.
도 14a, 도 14b 도 14c는 일련의 서열 정렬을 도시한 도면. 도 14a는 인간 CTLA-4(서열번호 33), 사이노몰거스 원숭이 CTLA-4(서열번호 40), 마우스 CTLA-4(서열번호 41), 및 래트 CTLA-4(서열번호 42)에 대한 서열 정렬이다. 점은 대응하는 인간 잔기와 동일한 잔기를 나타낸다. "*"(별표)는 단일의, 완전히 보존된 잔기를 갖는 위치를 나타낸다. ":"(콜론)은 강하게 유사한 특성의 그룹 사이의 보존을 나타낸다. "."(마침표)는 약하게 유사한 특성의 그룹 사이의 보존을 나타낸다. 도 14b 및 도 14c는 인간 CTLA-4(각각 서열번호 33의 잔기 1 내지 144 및 잔기 145 내지 223), 사이노몰거스 원숭이 CTLA-4 (각각 서열번호 40의 잔기 1 내지 144 및 잔기 145 내지 223), 인간 CD28(각각 서열번호 43의 잔기 1 내지 127 및 잔기 128 내지 220), 인간 ICOS(각각 서열번호 44의 잔기 1 내지 124 및 잔기 125 내지 199), 인간 BTLA(각각 서열번호 45의 잔기 1 내지 125 및 잔기 126 내지 289) 및 인간 PD-1(각각 서열번호 46의 잔기 1 내지 143 및 잔기 144 내지 288)에 대한 서열 정렬이다. 인간 CTLA-4가 AGEN1884-Fab에 결합되었을 때 중수소 흡수의 강한 감소를 나타내는 2개의 영역은 도 14a 내지 도 14c에서 밑줄 표시한다: 서열번호 33에 따라 넘버링된 잔기 80 내지 82(QVT, 서열번호 39) 및 잔기 135 내지 149(YPPPYYLGIGNGTQI, 서열번호 37).
본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고, CTLA-4 기능, 예를 들어, CTLA-4-매개 면역 억제를 길항하는 항체를 제공한다. 또한 이들 항체를 포함하는 약제학적 조성물, 이들 항체를 암호화하는 핵산, 이들 항체를 제조하기 위한 발현 벡터 및 숙주 세포, 및 이들 항체를 이용하여 대상체를 치료하는 방법이 제공된다. 본 명세서에 기재된 항체는 항원(예를 들어, 종양 항원 또는 전염성 질환 항원)에 반응하여 T 세포 활성화를 증가시키는 데, 그리고 따라서 대상체에서 암을 치료하거나 또는 대상체에서 전염성 질환을 치료하거나 또는 예방하는 데 특히 유용하다. 본 명세서에 기재된 "단리된 항체"의 모든 예는 추가적으로 단리될 수도 있지만, 단리될 필요가 없는 항체로서 상정된다. 본 명세서에 기재된 "단리된 폴리뉴클레오타이드"의 모든 예는 추가적으로 단리될 수도 있지만, 단리될 필요가 없는 폴리뉴클레오타이드로서 상정된다. 본 명세서에 기재된 "항체"의 모든 예는 추가적으로 단리될 수도 있지만, 단리될 필요가 없는 항체로서 상정된다. 본 명세서에 기재된 "폴리뉴클레오타이드"의 모든 예는 추가적으로 단리될 수도 있지만, 단리될 필요가 없는 폴리뉴클레오타이드로서 상정된다.
당업자는 본 명세서에 기재된 항체(예를 들어, 항-CTLA4 항체) 중 임의의 하나의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역의 N-말단에서 글루타메이트(E) 또는 글루타민(Q) 아미노산 잔기가 특정 조건 하에서 유리 아미노기의 번역후 고리화에 의해 파이로글루타메이트로 자발적으로 전환되어 락탐을 형성할 수 있다는 것을 인식할 것이다. 따라서, 본 명세서에 기재된 방법, 용도, 약제학적 조성물 또는 키트의 각각의 그리고 모든 것의 특정 실시형태에서, 상기 항체의 하나 이상의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역의 N-말단의 아미노산 잔기는 (예를 들어, N-말단의 E 또는 Q 잔지의 유리 아미노기의 번역후 고리화의 결과로서) 파이로글루타메이트로 전환되었다.
6.1 정의
본 명세서에서 사용되는 용어 "약" 및 "대략"은 수치적 값 또는 수치적 범위를 변형하기 위해 사용될 때, 값 또는 범위의 5% 내지 10% 초과(예를 들어, 5% 내지 10%까지 초과) 및 5% 내지 10% 미만(예를 들어, 5% 내지 10%까지 미만)의 편차가 인용된 값 또는 범위의 의도된 의미 내에 남아있다는 것을 나타낸다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "CTLA-4"는 세포독성 T-림프구-연관 단백질 4를 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "인간 CTLA-4"는 야생형 인간 CTLA-4 유전자, 예를 들어, GenBank(상표명) 수탁 번호 NM_005214.4 또는 NM_001037631.2에 의해 암호화된 인간 CTLA-4 단백질을 지칭한다. 인간 CTLA-4의 예시적인 미성숙 아미노산 서열은 서열번호 33으로서 제공된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항체" 및 "항체들"은 전장 항체, 전장 항체의 항원-결합 단편, 및 항체 CDR, VH 영역 또는 VL 영역을 포함하는 분자를 포함한다. 항체의 예는 단클론성 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 단일특이성 항체, 다중특이성 항체(이중특이성 항체를 포함), 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 면역글로불린, 면역글로불린, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄- 항체 중쇄쌍, 인트라바디, 이형접합체 항체, 항체-약물 접합체, 단일 도메인 항체, 1가 항체, 단일쇄 항체 또는 단일쇄 Fv(scFv), 낙타 항체, 애피바디, Fab 단편, F(ab')2 단편, 이황화-연결된 Fv(sdFv), 항-유전자형(항-Id) 항체(예를 들어, 항-항-Id 항체를 포함), 및 상기 중 어떤 것의 항원-결합 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 다클론성 항체 집단을 지칭한다. 항체는 면역글로불린 분자의 임의의 유형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY), 임의의 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 또는 IgA2), 또는 임의의 하위부류(예를 들어, IgG2a 또는 IgG2b)를 가질 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 IgG 항체, 또는 이의 부류(예를 들어, 인간 IgG1 또는 IgG4) 또는 하위부류이다. 구체적 실시형태에서, 항체는 인간화된 단클론성 항체이다. 다른 구체적 실시형태에서, 항체는 인간 단클론성 항체이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "VH 영역" 및 "VL 영역"은 FR(프레임워크 영역) 1, 2, 3 및 4 및 CDR(상보성 결정 영역) 1, 2 및 3을 각각 포함하는 단일 항체 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 지칭한다(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Kabat et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest(NIH Publication No. 91-3242, Bethesda)] 참조).
본 명세서에서 사용되는 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"은 중쇄와 경쇄 폴리펩타이드 둘 다의 가변 영역 내에서 발견된 비인접 항원 결합 부위를 의미한다. 이들 특정 영역은 문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) 및 Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991)]에 의해, 문헌[Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)], 그리고 문헌[MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996)]에 의해 기재되었으며, 이들 모두는 그들의 전문이 본 명세서에 참고로 편입되며, 정의는 서로에 비교할 때 아미노산 잔기의 중복 또는 서브세트를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 용어 "CDR"은 문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) 및 Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest. (1991)]에 의해 정의되는 CDR이다. 소정의 실시형태에서, 용어 "CDR"은 문헌[Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]에 의해 정의되는 CDR이다. 소정의 실시형태에서, 용어 "CDR"은 문헌[MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996) 및 Martin A. "Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains," in Antibody Engineering, Kontermann and
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, eds., Chapter 31, pp. 422-439, Springer-Verlag, Berlin (2001)]에 의해 정의되는 CDR이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "프레임워크(framework: FR) 아미노산 잔기"는 면역글로불린 쇄의 프레임워크 영역 내 해당 아미노산을 지칭한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "프레임워크 영역" 또는 "FR 영역"은 가변 영역의 부분이지만, CDR의 부분이 아닌 아미노산 잔기를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "가변 영역" 및 "가변 도메인"은 상호 호환적으로 사용되고, 당업계에서 통상적이다. 가변 영역은 전형적으로 항체 중에서 서열이 광범위하게 상이하고 그의 특정 항원에 대한 특정 항체의 결합 및 특이성에서 사용되는 항체의 일부, 일반적으로, 경쇄 또는 중쇄의 일부, 전형적으로 성숙 중쇄 내 약 아미노-말단의 110 내지 125개의 아미노산 및 성숙 경쇄 내 약 90 내지 115개의 아미노산을 지칭한다. 서열의 가변성은 상보성 결정 영역(CDR)으로 불리는 해당 영역에 집중되지만, 가변 도메인에서 더 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역(FR)으로 불린다. 임의의 특정 메커니즘 또는 이론에 의해 구속되는 일 없이, 경쇄 및 중쇄의 CDR은 항원과 항원의 상호작용 및 특이성을 주로 초래하는 것으로 여겨진다. 소정의 실시형태에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 소정의 실시형태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 인간 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 특정 실시형태에서, 가변 영역은 영장류(예를 들어, 비-인간 영장류) 가변 영역이다. 소정의 실시형태에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR 및 영장류(예를 들어, 비-인가나 영장류) 프레임워크 영역(FR)을 포함한다.
용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 항체의 경쇄 가변 영역을 지칭하기 위해 상호 호환적으로 사용된다.
용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 항체의 중쇄 가변 영역을 지칭하기 위해 상호 호환적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "불변 영역" 및 "불변 도메인"은 상호 호환적으로 사용 가능하고, 당업계에서 통상적이다. 불변 영역은 항체 부분, 예를 들어, 항원에 대한 항체의 결합에 직접적으로 연루되지 않지만, 다양한 효과기 기능, 예컨대 Fc 수용체(예를 들어, Fc 감마 수용체)와의 상호작용을 나타낼 수 있는 경쇄 및/또는 중쇄의 카복실 말단 부분이다. 면역글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 면역글로불린 가변 도메인에 비해 더 보존된 아미노산 서열을 가진다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "중쇄"는 항체에 대해 사용될 때 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반하여, 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 부류가 각각 생기게 하는(IgG의 하위부류, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4)를 포함하는 임의의 별개의 유형, 예를 들어, 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마 (γ), 및 뮤(μ)를 지칭할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "경쇄"는 항체와 관련하여 사용될 때, 불변 도메인의 아미노산에 기반하여 임의의 별개의 유형, 예를 들어, 카파(κ) 또는 람다(λ)를 지칭할 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 잘 공지되어 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "EU 넘버링 시스템"은 각각 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969) 및 Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health and Human Services, 5th edition, 1991]에 기재된 바와 같은 항체의 불변 영역에 대한 EU 넘버링 관례를 지칭한다.
"결합 친화도"는 일반적으로 분자의 단일 결합 부위(예를 들어, 항체)와 그의 결합 상대(예를 들어, 항원) 사이의 비공유 상호작용의 총 합의 강도를 지칭한다. 달리 표시되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는, "결합 친화도"는 결합쌍의 구성원(예를 들어, 항체 및 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 본래의 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 그의 상대 Y에 대한 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타날 수 있다. 친화도는 평형 해리 상수(KD), 및 평형 결합 상수(KA)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 당업계에 공지된 다수의 방법으로 측정되고/되거나 발현될 수 있다. KD는 koff/kon의 몫으로부터 계산된 반면, KA는 kon/koff의 몫으로부터 계산된다. kon은, 예를 들어, 항원에 대한 항체의 결합 속도 상수를 지칭하고, 그리고 koff는, 예를 들어, 항원에 대한 항체의 해리 속도 상수를 지칭한다. kon 및 koff는 당업자에게 공지된 기법, 예컨대 BIAcore(등록상표) 또는 KinExA에 의해 결정될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는, "더 낮은 친화도"는 더 큰 KD를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "특이적으로 결합한다", "특이적으로 인식한다", "면역특이적으로 결합한다" 및 "면역특이적으로 인식한다"는 항체와 관련하여 유사한 용어이며, 항원(예를 들어, 에피토프 또는 면역 복합체)에 결합하는(이러한 결합은 당업자에 의해 이해되는 바와 같음) 분자를 지칭한다. 예를 들어, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 일반적으로, 예를 들어, 면역분석, BIAcore(등록상표), KinExA 3000 기기(아이다호주 보이시에 소재한 사피다인 인스트루먼츠(Sapidyne Instruments)) 또는 당업계에 공지된 다른 분석에 의해 결정된 바와 같은 더 낮은 친화도를 갖는 다른 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 결합할 수 있다. 구체적 실시형태에서, 분자가 다른 항원에 비특이적으로 결합할 때 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 KA보다 적어도 2 log(즉, 10배), 2.5 log, 3 log, 4 log 이상인 KA를 갖는 항원에 결합한다.
다른 구체적 실시형태에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 유사한 결합 조건 하에 다른 단백질과 교차 반응하지 않는다. 다른 구체적 실시형태에서, CTLA-4에 특이적으로 결합하는 분자는 다른 비-CTLA-4 단백질과 교차 반응하지 않는다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에서 다른 관련 없는 항원에 대해서 보다 더 고친화도로 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 결합하는 항체가 제공된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에서, 예를 들어, 방사면역측정법, 표면 플라즈몬 공명, 또는 역학 제외 분석에 의해 측정된 바와 같은 다른, 관련없는 항원에 대해서보다 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상 더 높은 친화도로 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 결합하는 항원이 제공된다. 구체적 실시형태에서, 관련 없는, 비-CTLA-4 단백질에 대한 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체의 결합 정도는, 예를 들어, 방사면역측정법에 의해 측정하여 CTLA-4 단백질에 대한 항체 결합의 10%, 15% 또는 20% 미만이다.
Fc와 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "비푸코실화" 또는 "비푸코실화된"은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 인간 IgG1 Fc 영역의 잔기 297 또는 비-IgG1 또는 비-인간 IgG1 면역글로불린 내 대응하는 잔기에 직접적으로 또는 간접적으로 공유 부착된 푸코스의 실질적인 결여를 지칭한다. 따라서, 복수의 비푸코실화된 항체를 포함하는 조성물 중에서, 항체의 적어도 70%는 항체의 Fc 영역의 잔기 297에서 직접적으로 또는 간접적으로 (예를 들어, 개재 당을 통해) 푸코실화되지 않을 것이며, 일부 실시형태에서 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 99%는 Fc 영역의 잔기 297에서 직접적으로 또는 간접적으로 푸코실화되지 않을 것이다.
본 명세서에서 사용되는, "에피토프"는 당업계의 용어이며, 항체가 특이적으로 결합될 수 있는 항원의 국소화된 영역을 지칭한다. 에피토프는, 예를 들어, 폴리펩타이드의 인접한 아미노산(선형 또는 인접한 에피토프)일 수 있거나 또는 에피토프는, 예를 들어, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 2 이상의 비인접 영역(입체배좌, 비선형, 불연속 또는 비인접 에피토프)으로부터 함께 유래될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 항체가 결합하는 에피토프는, 예를 들어, NMR 분광학, X-선 회절 결정학 연구, ELISA 분석, 질량분석법과 결합된 수소/중수소 교환(예를 들어, 액체 크로마토그래피 전기분무 질량분석법), 어레이 기반 올리고-펩타이드 주사 분석(예를 들어, 불연속적 또는 입체배좌적 에피토프를 맵핑하기 위해 CLIPS(스캐폴드 상의 펩타이드의 화학적 결합)을 이용하여 펩타이드를 제한함), 및/또는 돌연변이유발 맵핑(예를 들어, 부위-지정 돌연변이유발 맵핑)에 의해 결정될 수 있다. X-선 결정학에 대해, 결정학은 당업계에서 임의의 공지된 방법을 이용하여 달성될 수 있다(예를 들어, 문헌[
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R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303] 참조, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입됨). 항체:항원 결정은 잘 공지된 X-선 회절 기법을 이용하여 연구될 수 있고, 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 X-PLOR(Yale University, 1992, 몰레큘러 시뮬레이션 인코포레이티드(Molecular Simulations, Inc.)에 의해 배포됨; 예를 들어, 문헌[Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.,] 참조; 미국 특허 제2004/0014194호 참조), 및 BUSTER(Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323)를 이용하여 정제될 수 있으며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된다. 돌연변이유발 맵핑 연구는 당업자에게 공지된 임의의 방법을 이용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Champe M et al., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 및 Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085]을 참고하며, 이들 각각은 알라닌 주사 돌연변이유발 기법을 비롯한 돌연변이유발 기법의 설명을 위해, 그의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다. CLIPS(스캐폴드에 대한 펩타이드의 화학적 결합(Chemical Linkage of Peptides onto Scaffolds))는 복잡한 단백질 도메인의 기능성 모방체로서 거동하도록 구조적으로 제한된 입체배치에서 하나 이상의 펩타이드를 제공하는 기법이다. 예를 들어, 미국 특허 공개 제2008/0139407 A1호 및 미국 특허 제2007/099240 A1호 및 미국 특허 제7,972,993호를 참조하며, 이들 각각은 그의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다. 구체적 실시형태에서, 항체의 에피토프는 알라닌 주사 돌연변이유발 연구를 이용하여 결정된다. 구체적 실시형태에서, 항체의 에피토프는 질량분석법과 결합된 수소/중수소 교환을 이용하여 결정된다. 구체적 실시형태에서, 항체의 에피토프는 펩스칸 쎄라퓨틱스사(Pepscan Therapeutics)로부터의 CLIPS 에피토프 맵핑 기법을 이용하여 결정된다.
특정 아미노산 또는 한 세트의 아미노산 잔기로 이루어진 "인간 CTLA-4 영역 내에 위치된 에피토프"라는 본 명세서에서 사용되는 용어는 구체화된 영역의 아미노산 잔기 중 하나 이상을 포함하는 에피토프를 지칭하되, 구체화된 영역은 처음 구체화된 아미노산 잔기 및 인간 CTLA-4 영역의 마지막 구체화된 아미노산 잔기를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 에피토프는 구체화된 영역 내에 위치된 아미노산 잔기의 각각의 하나를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 구체화된 영역 밖의 인간 CTLA-4의 하나 이상의 추가적인 아미노산 잔기는 구체화된 영역 내에 위치된 에피토프와 함께 항체에 결합한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "T 세포 수용체" 및 "TCR"은 상호 호환적으로 사용되며, 전장 이형이량체 αβ 또는 γδ TCR, 전장 TCR의 항원-결합 단편, 및 TCR CDR 또는 가변 영역을 포함하는 분자를 지칭한다. TCR의 예는 전장 TCR, 전장 TCR의 항원-결합 단편, 막관통 및 세포질 영역이 결여된 가용성 TCR, 가용성 링커에 의해 부착된 TCR의 가변 영역을 함유하는 단일쇄 TCR, 조작된 이황화 결합에 의해 연결된 TCR 쇄, 단일특이성 TCR, 다중 특이성 TCR(이중 특이성 TCR을 포함), TCR 융합, 인간 TCR, 인간화된 TCR, 키메라 TCR, 재조합적으로 생성된 TCR 및 합성 TCR을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 상기 용어는 야생형 TCR 및 유전자 조작된 TCR(예를 들어, 제1 종의 TCR로부터의 제1 부분 및 제2 종으로부터의 TCR로부터의 제2 부분을 포함하는 키메라 TCR을 포함하는 키메라 TCR)을 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "주조직 적합성 복합체" 및 "MHC"는 상호 호환적으로 사용되고, MHC 클래스 I 분자 및/또는 MHC 클래스 II 분자를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "펩타이드-MHC 복합체"는 MHC의 당업계에 인식된 펩타이드 결합 포켓에 결합된 펩타이드를 갖는 MHC 분자(MHC 클래스 I 또는 MHC 클래스 II)를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 본 명세서에 기재된 치료적 또는 예방적 측정을 지칭한다. "치료" 방법은 질환 또는 장애 또는 질환 또는 장애의 재발의 중증도를 예방하거나, 치유하거나, 지연시키거나, 감소시키거나 또는 이의 하나 이상의 증상을 개선시키기 위해, 또는 이러한 치료의 부재 하에서 예상된 것 이상으로 대상체의 생존을 연장시키기 위해 질환 또는 장애를 갖거나 또는 이러한 질환 장애를 갖는 경향이 있는 대상체에게 항체의 투여를 사용한다.
대상체에 대한 요법의 투여와 관련하여 본 명세서에서 사용되는 용어 "유효량"은 요망되는 예방적 또는 치료적 효과를 달성하는 요법의 양을 지칭한다.
요법에 대한 암의 반응에 대해 본 명세서에서 사용되는 용어 "불응성" 및 "내성"은 그들의 당업계에 인식된 의미를 가지며, 상호 호환적으로 사용된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "대상체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 일 실시형태에서, 대상체는 인간 또는 비인간 포유류이다. 일 실시형태에서, 대상체는 인간이다.
두 서열(예를 들어, 아미노산 서열 또는 핵산 서열) 사이의 "동일성 백분율"의 결정은 수학적 알고리즘을 이용하여 달성될 수 있다. 두 서열의 비교를 위해 이용되는 수학적 알고리즘의 특정, 비제한적 예는 문헌[Karlin S & Altschul SF (1993) PNAS 90: 5873-5877]에서와 같이 변형된 문헌[Karlin S & Altschul SF (1990) PNAS 87: 2264-2268]의 알고리즘이며, 이들 각각은 그의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다. 이러한 알고리즘은 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Altschul SF et al., (1990) J Mol Biol 215: 403]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 편입된다. BLAST 뉴클레오타이드 검색은 본 명세서에 기재된 핵산 분자에 상동성인 뉴클레오타이드 서열을 얻기 위해, 예를 들어, 스코어=100, 단어 길이=12에 대해, NBLAST 뉴클레오타이드 프로그램 매개변수 세트로 수행될 수 있다. BLAST 단백질 검색은 본 명세서에 기재된 단백질 분자에 상동성인 아미노산 서열을 얻기 위해, 예를 들어, 스코어 50, 단어 길이=3에 대해 XBLAST 프로그램 매개변수로 수행될 수 있다. 비교 목적을 위해 갭핑된 정렬을 얻기 위해, 갭핑된 BLAST는 전문이 본 명세서에 참고로 편입된 문헌[Altschul SF et al., (1997) Nuc Acids Res 25: 3389-3402]에 기재된 바와 같이 이용될 수 있다. 대안적으로, PSI BLAST는 분자 사이의 원거리 관계를 검출하는 반복된 검색을 수행하기 위해 사용될 수 있다(이하 참조). BLAST를 이용할 때, 갭화된 BLAST, 및 PSI Blast 프로그램, 각각의 프로그램의(예를 들어, XBLAST 및 NBLAST의) 디폴트 매개변수가 사용될 수 있다(예를 들어, 월드와이드웹, ncbi.nlm.nih.gov 상에서 생물정보센터(National Center for Biotechnology Information: NCBI)). 서열의 비교를 위해 이용되는 수학적 알고리즘의 다른 특이적, 비제한적 예는 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Myers and Miller, 1988, CABIOS 4:11-17]의 알고리즘이다. 이러한 알고리즘은 GCG 서열 정렬 소프트웨어 패키지의 부분인 ALIGN 프로그램(버전 2.0)에 편입된다. 아미노산 서열을 비교하기 위해 ALIGN 프로그램을 이용할 때, PAM120 가중치 잔기 표, 갭 길이 페널티 12, 및 갭 페널티 4가 사용될 수 있다.
두 서열 사이의 동일성 백분율은 허용되는 갭과 함께 또는 갭 없이 상기 기재한 것과 유사한 기법을 이용하여 결정될 수 있다. 동일성 백분율을 계산함에 있어서, 전형적으로 정확한 매칭만이 계수된다.
6.2 항-CTLA-4 항체
일 양상에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고, CTLA-4 기능을 길항하는 항체를 제공한다. 예시적인 항체의 아미노산 서열을 본 명세서의 표 1 내지 4에서 제시한다.
[표 1]
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[표 2]
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[표 3]
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[표 4]
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[표 5]
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[표 6]
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소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 본 명세서의 표 1에 제시된 VH 도메인의 CDR 중 1, 2 또는 3개 모두를 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 표 1에 제시된 VH 도메인 중 하나의 CDRH1을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 표 1에 제시된 VH 도메인 중 하나의 CDRH2를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 표 1에 제시된 VH 도메인 중 하나의 CDRH3을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 항체는 본 명세서의 표 1에 개시된 VL 도메인의 CDR 중 1, 2 또는 3개 모두를 포함하는 VL 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 표 1에 제시된 VL 도메인 중 하나의 CDRL1을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 표 1에 제시된 VL 도메인 중 하나의 CDRL2을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 표 1에 제시된 VL 도메인 중 하나의 CDRL3을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 항체의 CDR은 문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) 및 Kabat et al., Sequences of protein of immunological interest (1991)]에 따라 결정될 수 있으며, 이들 각각은 그의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다.
소정의 실시형태에서, 항체의 CDR은 면역글로불린 구조적 루프의 위치를 지칭하는 코티아 넘버링 계획에 따라 결정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Chothia C & Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B et al., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C et al., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A et al., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82]; 및 미국 특허 제7,709,226호, 이들 모두는 그의 전문이 본 명세서에 참고로 편입됨). 전형적으로, 카바트 넘버링 관례를 이용할 때, 코티아 CDRH1 루프는 중쇄 아미노산 26 내지 32, 33 또는 34에 존재하고, 코티아 CDRH2 루프는 중쇄 아미노산 52 내지 56에 존재하며, 코티아 CDRH3 루프는 중쇄 아미노산 95 내지 102에 존재하는 반면, 코티아 CDRL1 루프는 경쇄 아미노산 24 내지 34에 존재하고, 코티아 CDRL2 루프는 경쇄 아미노산 50 내지 56에 존재하고, 코티아 CDRL3 루프는 경쇄 아미노산 89 내지 97에 존재한다. 카바트 넘버링 관례를 이용하여 넘버링할 때 코티아 CDRH1 루프의 말단은 루프의 길이에 따라서 H32와 H34 사이에서 변한다(이는 카바트 넘버링 계획이 H35A 및 H35B에서 일어나기 때문이며; 35A도 35B도 존재하지 않는다면, 루프는 32에서 종결되고; 35A만이 존재한다면, 루프는 33에서 종결되고; 35A와 35B가 둘 다 존재한다면, 루프는 34에서 종결된다).
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 본 명세서의 표 1에 개시된 VH의 코티아 VH CDR을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 본 명세서의 표 1에 개시된 VL의 코티아 VL CDR을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 본 명세서의 표 1에 개시된 항체의 코티아 VH CDR 및 코티아 VL CDR을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체는 하나 이상의 CDR을 포함하되, 이때 코티아 및 카바트 CDR은 동일한 아미노산 서열을 가진다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고 카바트 CDR 및 코티아 CDR의 조합을 포함하는 단리된 항체를 제공한다.
소정의 실시형태에서, 항체의 CDR은 문헌[Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136 및 Lefranc M-P et al., (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212]에 기재된 바와 같은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 결정될 수 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 그의 전문이 참고로 편입된다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고, IMGT 넘버링 시스템에 의해 결정되는 바와 같은, 예를 들어, 문헌[Lefranc M-P (1999) 상기 참조 및 Lefranc M-P et al., (1999) 상기 참조]에 기재된 바와 같은, 본 명세서의 표 1에 개시된 항체의 CDR을 포함하는 항체를 제공한다.
소정의 실시형태에서, 항체의 CDR은 카바트 CDR과 코티아 구조적 루프 사이의 절충을 나타내고 본 명세서에 참고로 편입된 옥스퍼드 몰레큘러사(Oxford Molecular)의 AbM 항체 모델링 소프트웨어(옥스퍼드 몰레큘러 그룹, 인코포레이티드(Oxford Molecular Group, Inc.))에 의해 사용되는, AbM 초가변 영역을 지칭하는 AbM 넘버링 계획에 따라 결정될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고, AbM 넘버링 계획에 의해 결정되는 바와 같은 표 1에 개시된 항체의 CDR을 포함하는 항체를 제공한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하되, 상기 항체는 서열번호 2, 4, 5, 6, 7 또는 8에 제시된 VH 도메인의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 9에 제시된 VL 도메인의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, 각각의 CDR은 MacCallum 정의, Kabat 정의, 코티아 정의, Kabat 정의 및 코티아 정의의 조합, IMGT 넘버링 시스템, 또는 CDR의 AbM 정의에 따라 정의된다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 하기 (a) 내지 (f)를 포함하고:
(a) CDRH1은 SYSMN의 아미노산 서열(서열번호 10)을 포함하고; 그리고/또는
(b) CDRH2는 SISSSSSYIYYAXSVKG의 아미노산 서열(서열번호 18)을 포함하되, X는 E 또는 D이며; 그리고/또는
(c) CDRH3은 VGLXGPFDI의 아미노산 서열(서열번호 19)이되, X는 F 또는 M이고; 그리고/또는
(d) CDRL1은 RASQSVSRYLG의 아미노산 서열(서열번호 15)을 포함하며; 그리고/또는
(e) CDRL2는 GASTRAT의 아미노산 서열(서열번호 16)을 포함하고; 그리고/또는
(f) CDRL3은 QQYGSSPWT의 아미노산 서열(서열번호 17)을 포함하며,
그리고 항체의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 서열은 각각 서열번호 10, 11 및 13이 아니다.
소정의 실시형태에서, CDRH2는 서열번호 11의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH2는 서열번호 12의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH3은 서열번호 13의 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, CDRH3은 서열번호 14의 아미노산 서열을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하되, 상기 항체는 서열번호 10, 11 및 14; 10, 12 및 13; 또는 10, 12 및 14에 각각 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하되, 상기 항체는 서열번호 10, 12 및 14에 각각 제시된 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 아미노산 서열을 포함하는 VH 도메인을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하되, 상기 항체는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하고, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 10, 11, 14, 15, 16 및 17; 10, 12, 13, 15, 16 및 17; 또는 10, 12, 14, 15, 16 및 17에 제시된 아미노산 서열을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하되, 상기 항체는 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 영역은 각각 서열번호 10, 12, 14, 15, 16 및 17에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 2, 4, 5, 6, 7 또는 8에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%)인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 2, 4, 5, 6, 7 또는 8에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 5에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 6에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 7에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 8에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 9에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 2, 4, 5, 6, 7 또는 8에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% (예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 9에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% (예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열번호 3에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 서열번호 9에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100%(예를 들어, 적어도 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 2 및 9; 4 및 9; 5 및 9; 6 및 9; 7 및 9; 또는 8 및 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 2 및 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 3 및 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 4 및 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 5 및 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 6 및 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 7 및 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 각각 서열번호 8 및 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IGHV3-21 생식계열 서열(예를 들어, IGHV3-21*01, 예를 들어, 서열번호 21의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 프레임워크 1, 프레임워크 2, 프레임워크 3, CDRH1 및 CDRH2로부터 선택된 하나 이상의 영역(예를 들어, 이들 영역 중 2, 3, 4 또는 5개)은 인간 IGHV3-21 생식계열 서열(예를 들어, IGHV3-21*01, 예를 들어, 서열번호 21의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래될 수 있다. 일 실시형태에서, 프레임워크 1, 프레임워크 2, 프레임워크 3, CDRH1 및 CDRH2는 모두 인간 IGHV3-21 생식계열 서열(예를 들어, IGHV3-21*01, 예를 들어, 서열번호 21의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 IGKV3-20으로 이루어진 군으로부터 선택된 인간 생식계열 서열(예를 들어, IGKV3-20*01, 예를 들어, 서열번호 22의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 프레임워크 1, 프레임워크 2, 프레임워크 3, CDRL1 및 CDRL2로부터 선택된 하나 이상의 영역(예를 들어, 이들 영역 중 2, 3, 4 또는 5)은 IGKV3-20으로 이루어진 군으로부터 선택된 인간 생식계열 서열(예를 들어, IGKV3-20*01, 예를 들어, 서열번호 22의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래될 수 있다. 일 실시형태에서, 프레임워크 1, 프레임워크 2, 프레임워크 3, CDRL1 및 CDRL2는 모두 IGKV3-20으로 이루어진 군으로부터 선택된 인간 생식계열 서열(예를 들어, IGKV3-20*01, 예를 들어, 서열번호 22의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 인간 IGHV3-21 생식계열 서열(예를 들어, IGHV3-21*01, 예를 들어, 서열번호 21의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 IGKV3-20으로 이루어진 군으로부터 선택된 인간 생식계열 서열(예를 들어, IGKV3-20*01, 예를 들어, 서열번호 22의 아미노산 서열을 가짐)로부터 유래된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 대한 결합에 대해 각각 서열번호 2 및 9; 4 및 9; 5 및 9; 6 및 9; 7 및 9; 또는 8 및 9에 제시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 교차 경쟁하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 대한 결합에 대해 각각 서열번호 3 및 9에 제시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 교차-경쟁하는 단리된 항체를 제공한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 항체, 예를 들어, 각각 서열번호 2 및 9; 4 및 9; 5 및 9; 6 및 9; 7 및 9; 또는 8 및 9에 제시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체와 동일하거나 또는 중복되는 CTLA-4의 에피토프(예를 들어, 인간 CTLA-4의 에피토프)에 결합하는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 항체와 동일 또는 중복되는 CTLA-4의 에피토프(예를 들어, 인간 CTLA-4의 에피토프)에 결합하는 단리된 항체, 예를 들어, 각각 서열번호 3 및 9에 제시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함하는 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 항체의 에피토프는, 예를 들어, NMR 분광학, 표면 플라즈몬 공명(비아코어(BIAcore)(등록상표)), X-선 회절 결정학 연구, ELISA 분석, 질량분석법과 결합된 수소/중수소 교환(예를 들어, 액체 크로마토그래피 전기분무 질량분석법), 어레이-기반 올리고-펩타이드 스캐닝 분석, 및/또는 돌연변이유발 맵핑(예를 들어, 부위-지정 돌연변이유발 맵핑)에 의해 결정될 수 있다. X-선 결정학에 대해, 결정화는 임의의 당업계에 공지된 방법을 이용하여 수행될 수 있다(예를 들어, 문헌[
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R et al., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303], 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입됨). 항체:항원 결정은 잘 공지된 X-선 회절 기법을 이용하여 연구될 수 있고, 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 X-PLOR(몰레큘러 시뮬레이션 인코포레이티드(Molecular Simulations, Inc.)에 의해 배포된 Yale University, 1992; 예를 들어, 문헌[Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff HW et al.; U.S. Patent Application No. 2004/0014194] 참조), 및 BUSTER(Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol 276A: 361-423, ed Carter CW; Roversi P et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10): 1316-1323, 이들 모두는 본 명세서에서 그들의 전문이 참고로 편입됨)를 이용하여 개선될 수 있다. 돌연변이유발 맵핑 연구는 당업자에게 공지된 임의의 방법을 이용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 기법을 포함하는 돌연변이유발 기법의 설명에 대해 문헌[Champe M et al., (1995) 상기 참조], 및 문헌[Cunningham BC & Wells JA (1989) 상기 참조]을 참조한다. 구체적 실시형태에서, 항체의 에피토프는 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 연구를 이용하여 결정된다. 추가로, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)의 동일 또는 중복 에피토프를 인식하고 이에 결합하는 항체는 일상적 기법, 예를 들어, 표적 항원에 대한 다른 항체의 결합을 차단하는 하나의 항체의 능력을 나타내는 것에 의한 면역분석, 즉, 경쟁적 결합 분석을 이용하여 동정될 수 있다. 경쟁 결합 분석은 또한 2개의 항체가 에피토프에 대해 유사한 결합 특이성을 갖는지의 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 경쟁적 결합은 시험 하의 면역글로불린이 공통 항원, 예컨대 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 대한 기준 항체의 특이적 결합을 저해하는 분석에서 결정될 수 있다. 경쟁적 결합 분석의 수많은 유형은, 예를 들어: 고체상 직접 또는 간접 방사면역측정법(RIA), 고체상 직접 또는 간접 효소 면역분석(EIA), 샌드위치 경쟁 분석(문헌[Stahli C et al., (1983) Methods Enzymol 9: 242-253] 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(문헌[Kirkland TN et al., (1986) J Immunol 137: 3614-9] 참조); 고체상 직접 표지 분석, 고체상 직접 표지 샌드위치 분석(문헌[Harlow E & Lane D, (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press] 참조); I-125 표지를 이용하는 고체상 직접 표지 RIA(문헌[Morel GA et al., (1988) Mol Immunol 25(1): 7-15] 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(문헌[Cheung RC et al., (1990) Virology 176: 546-52]); 및 직접 표지된 RIA(문헌[Moldenhauer G et al., (1990) Scand J Immunol 32: 77-82] 참조)가 공지되어 있고, 이들 모두는 그들의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다. 전형적으로, 이러한 분석은 이들, 비표지 시험 면역글로불린 및 표지된 기준 면역글로불린 중 하나를 보유하는 고체 표면 또는 세포에 결합된 정제된 항원(예를 들어, CTLA-4, 예컨대 인간 CTLA-4)의 사용을 수반한다. 경쟁적 저해는 시험 면역글로불린의 존재 하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정될 수 있다. 보통 시험 면역글로불린은 과량으로 존재한다. 보통, 경쟁 항체가 과량으로 존재할 때, 적어도 50 내지 55%, 55 내지 60%, 60 내지 65%, 65 내지 70%, 70 내지 75% 이상만큼 공통 항원에 대한 기준 항체의 특이적 결합을 저해할 것이다. 경쟁 결합 분석은 표지된 항원 또는 표지된 항체 중 하나를 이용하여 다수의 상이한 형식으로 배치될 수 있다. 이 분석의 공통 형식에서, 항원은 96-웰 플레이트 상에서 고정된다. 이어서, 항원에 대한 표지 항체의 결합을 차단하는 비표지 항체의 능력은 방사성 또는 효소 표지를 이용하여 측정된다. 추가적인 상세한 설명에 대해, 예를 들어, 문헌[Wagener C et al., (1983) J Immunol 130: 2308-2315; Wagener C et al., (1984) J Immunol Methods 68: 269-274; Kuroki M et al., (1990) Cancer Res 50: 4872-4879; Kuroki M et al., (1992) Immunol Invest 21: 523-538; Kuroki M et al., (1992) Hybridoma 11: 391-407 및 Antibodies: A Laboratory Manual, Ed Harlow E & Lane D editors 상기 참조, pp. 386-389]을 참조하며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 서열번호 23, 24, 25 또는 26에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 23에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 24에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 25에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 26에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 서열번호 27에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
임의의 Ig 불변 영역은 본 명세서에 기재된 항체에서 사용될 수 있다. 소정의 실시형태에서, Ig 영역은 인간 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 임의의 부류(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2), 또는 면역글로불린 분자의 임의의 하위 부류(예를 들어, IgG2a 및 IgG2b)이다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 서열번호 28, 29, 30 또는 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S239D, I332E 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S239D 및 I332E 돌연변이를 포함하는 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S239D, A330L, I332E, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S239D, A330L 및 I332E 돌연변이를 포함하는 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 30의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 단리된 항체를 제공하며, 상기 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 L235V, F243L, R292P, Y300L, P396L 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 L235V, F243L, R292P, Y300L 및 P396L 돌연변이를 포함하는 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 31의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 IgG 영역은, 예를 들어, 야생형 Fc 영역, 예를 들어, IgG1 Fc을 갖는 항체에 비해 FcγRIIIA에 대해 증가된 친화도를 가진다. FcγRIIIA에 대해 증가된 친화도를 초래하는 서열 변경은 당업계에, 예를 들어, 문헌[Kellner et al., Methods 65: 105-113 (2014), Lazar et al., Proc Natl Acad Sci 103: 4005-4010 (2006), Shields et al., J Biol Chem. 276(9):6591-6604 (2001)]에 공지되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 그의 전문이 참고로 편입된다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 G236A, S239D, F243L, T256A, K290A, R292P, S298A, Y300L, V305I, A330L, I332E, E333A, K334A, A339T 및 P396L, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이를 포함하는 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S239D를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 T256A를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 K290A를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S298A를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 I332E를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 E333A를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 K334A를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 A339T를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S239D 및 I332E를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 239D, A330L 및 I332E를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S298A, E333A 및 K334A를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 G236A, S239D 및 I332E를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 F243L, R292P, Y300L, V305I 및 P396L를 포함하는, 중쇄 불변 영역, 예를 들어, IgG1 불변 영역, 또는 이의 단편을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 항체-의존적 세포의 세포독성(ADCC) 활성을 나타낸다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 자연 살해 세포 매개 세포 고갈을 개시한다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 자연 살해 세포와 함께 침윤된 종양을 치료하기 위해 사용된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 항체-의존적 세포의 식세포작용(ADCP) 활성을 나타낸다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 대식세포 매개된 세포 고갈을 개시한다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 대식세포와 함께 침윤된 종양을 치료하기 위해 사용된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 종양내 조절 T 세포를 선택적으로 고갈시킨다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 활성화된 상태에서 인간 CTLA-4 단백질에 결합하는 활성화 가능한 항체이다.  소정의 실시형태에서, 활성화 가능한 항체는 인간 CTLA-4 단백질에 대해 절단되지 않은 상태로 항체의 결합을 저해하는 마스킹 모이어티(masking moiety), 및 항체에 결합된 적어도 하나의 절단 가능한 모이어티를 포함하되, 예를 들어, 절단 가능한 모이어티는 종양 미세환경에서 농축된 프로테아제에 대한 기질로서 작용하는 폴리펩타이드이다. 예시적인 활성화 가능한 항체는, 예를 들어, 본 명세서에 참고로 편입된 미국 특허 제8,513,390호 및 제8,518,404호, 및 미국 특허 출원 공개 제2014/0255313호, 제2014/0010810호, 제2014/0023664호에 기재된다.  소정의 실시형태에서, 활성화 가능한 항체는 야생형 인간 IgG 중쇄 불변 영역의 변이체인 인간 IgG 중쇄 불변 영역을 포함하되, 변이체 인간 IgG 중쇄 불변 영역은 야생형 인간 IgG 중쇄 불변 영역이 인간 FcγRIIIA에 결합되는 것보다 더 큰 친화도로 인간 FcγRIIIA에 결합한다.
소정의 실시형태에서, 1, 2개 이상의 돌연변이(예를 들어, 아미노산 치환)는 항체의 하나 이상의 기능성 특성, 예컨대 혈청 반감기, 상보체 고정, Fc 수용체 결합 및/또는 항원-의존적 세포의 세포독성을 변경시키기 위해 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 본 명세서에 기재된 항체의 Fc 영역(예를 들어, CH2 도메인(인간 IgG1의 잔기 231 내지 340) 및/또는 CH3 도메인(인간 IgG1의 잔기 341 내지 447) 및/또는 힌지 영역 내로 도입된다.
소정의 실시형태에서, 힌지 영역 내 시스테인 잔기의 수가, 예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 미국 특허 제5,677,425호에 기재된 바와 같이 변경(예를 들어, 증가 또는 감소)되도록 1, 2개 이상의 돌연변이(예를 들어, 아미노산 치환)가 Fc 영역(CH1 도메인)의 힌지 영역 내로 도입된다. CH1 도메인의 힌지 영역 내 시스테인 잔기의 수는, 예를 들어, 경쇄 및 중쇄의 조립을 용이하게 하기 위해, 또는 항체의 안정성을 변경(예를 들어, 증가 또는 감소)시키기 위해, 변경될 수 있다.
구체적 실시형태에서, 1, 2개 이상의 아미노산 돌연변이(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실)는 생체내 항체의 반감기를 변경(예를 들어, 감소 또는 증가)하기 위해 IgG 불변 도메인, 또는 이의 FcRn-결합 단편(바람직하게는 Fc 또는 힌지-Fc 도메인 단편) 내로 도입된다. 예를 들어, 생체내 항체의 반감기를 변경(예를 들어, 감소 또는 증가)하는 돌연변이에 대해, 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 02/060919; WO 98/23289; 및 WO 97/34631; 및 미국 특허 제5,869,046호, 제6,121,022호, 제6,277,375호 및 제6,165,745호을 참조하며, 이들 모두는 그들의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다. 일부 실시형태에서, 1, 2개 이상의 아미노산 돌연변이(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실)는 생체내 항체의 반감기를 감소시키기 위해 IgG 불변 도메인, 또는 이의 FcRn-결합 단편(바람직하게는 Fc 또는 힌지-Fc 도메인 단편) 내로 도입된다. 다른 실시형태에서, 1, 2개 이상의 아미노산 돌연변이(예를 들어, 치환, 삽입 또는 결실)은 생체내 항체의 반감기를 증가시키기 위해 IgG 불변 도메인, 또는 이의 FcRn-결합 단편(바람직하게는 Fc 또는 힌지-Fc 도메인 단편) 내로 도입된다. 구체적 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 제2 불변(CH2) 도메인(인간 IgG1의 잔기 231 내지 340) 및/또는 제3 불변(CH3) 도메인(인간 IgG1의 잔기 341 내지 447)에서 하나 이상의 아미노산 돌연변이(예를 들어, 치환)를 가질 수 있다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 IgG1의 불변 영역은 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 위치 252에서 메티오닌(M)의 타이로신(Y)으로의 치환, 위치 254에서 세린(S)의 트레오닌(T)으로의 치환 및 위치 256에서 트레오닌(T)의 글루탐산(E)으로의 치환을 포함한다. 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 미국 특허 제7,658,921호 참조. "YTE 돌연변이체"로서 지칭되는 이 유형의 돌연변이체 IgG는 동일한 항체의 야생형 형태에 비해 4배 증가된 반감기를 나타내는 것으로 나타났다(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Dall'Acqua WF et al., (2006) J Biol Chem 281: 23514-24] 참조). 소정의 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 위치 251 내지 257, 285 내지 290, 308 내지 314, 385 내지 389 및 428 내지 436에서 아미노산 잔기의 1, 2, 3개 이상의 아미노산 치환을 포함하는 IgG 불변 도메인을 포함한다.
일부 실시형태에서, 1, 2개 이상의 돌연변이(예를 들어, 아미노산 치환)는 효과기 세포의 표면 상에서 Fc 수용체(예를 들어, 활성화된 Fc 수용체)에 대한 항체의 친화도를 증가 또는 감소시키기 위해 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 본 명세서에 기재된 항체의 Fc 영역(예를 들어, CH2 도메인(인간 IgG1의 잔기 231 내지 340) 및/또는 CH3 도메인(인간 IgG1의 잔기 341 내지 447) 및/또는 힌지 영역 내로 도입된다. Fc 수용체에 대한 항체의 친화도를 감소 또는 증가시키는 항체의 Fc 영역 내 돌연변이 및 Fc 수용체 또는 이의 단편 내로 이러한 돌연변이를 도입하기 위한 기법은 당업자에게 공지되어 있다. Fc 수용체에 대한 항체의 친화도를 변경시키기 위해 이루어질 수 있는 항체의 Fc 수용체 내 돌연변이의 예는, 예를 들어, 문헌[Smith P et al., (2012) PNAS 109: 6181-6186], 미국 특허 제6,737,056호 및 국제 특허 출원 공개 WO 02/060919; WO 98/23289; 및 WO 97/34631에 기재되어 있고, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된다.
추가적인 실시형태에서, 항체의 효과기 기능(들)을 변경시키기 위해 1, 2개 이상의 아미노산 치환이 IgG 불변 도메인 Fc 영역 내로 도입된다. 예를 들어, EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 아미노산 잔기 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 및 322로부터 선택된 1개 이상의 아미노산은 항체가 효과기 리간드에 대한 변경된 친화도를 갖지만 모 항체의 항원-결합 능력을 보유하도록, 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 친화도가 변경된 효과기 리간드는, 예를 들어, Fc 수용체 또는 상보체의 C1 성분일 수 있다. 이 접근은 미국 특허 제5,624,821호 및 제5,648,260호에서 추가로 상세하게 기재되며, 이들 각각은 그의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다. 일부 실시형태에서, (점 돌연변이 또는 다른 수단을 통한) 불변 영역 도메인의 결실 또는 비활성화는 순환 항체의 Fc 수용체 결합을 감소시킴으로써 종양 국소화를 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 불변 도메인을 결실 또는 비활성화시킴으로써 종양 국소화를 증가시키는 돌연변이의 설명에 대해 각각 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 미국 특허 제5,585,097호 및 제8,591,886호를 참고한다. 소정의 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 치환은 Fc 수용체 결합을 감소시킬 수 있는 Fc 영역 상에서 잠재적 글리코실화 부위를 제거하기 위해 본 명세서에 기재된 항체의 Fc 영역 내로 도입될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Shields RL et al., (2001) J Biol Chem 276: 6591-604] 참조). 다양한 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 불변 영역 내 다음의 돌연변이 중 하나 이상이 이루어질 수 있다: EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된, N297A 치환; N297Q 치환; L235A 치환 및 L237A 치환; L234A 치환 및 L235A 치환; E233P 치환; L234V 치환; L235A 치환; C236 결실; P238A 치환; D265A 치환; A327Q 치환; 또는 P329A 치환. 소정의 실시형태에서, EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 D265A, P329A 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이는 본 명세서에 기재된 항체의 불변 영역에서 만들어질 수 있다.
구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 N297Q 또는 N297A 아미노산 치환을 갖는 IgG1의 불변 도메인을 포함한다. 일 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 D265A, P329A 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이를 갖는 IgG1의 불변 도메인을 포함한다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 L234A, L235A 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 돌연변이를 갖는 IgG1의 불변 도메인을 포함한다. 소정의 실시형태에서, EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 인간 IgG1 중쇄 내 위치 L234, L235 및 D265에 대응하는 위치에서 본 명세서에 기재된 항체의 불변 영역 내 아미노산 잔기는 각각 L, L 및 D가 아니다. 이 접근은 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 국제 특허 출원 공개 WO 14/108483에서 상세하게 기재된다. 특정 실시형태에서, 인간 IgG1 중쇄에서 위치 L234, L235 및 D265에 대응하는 아미노산은 각각 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 F, E 및 A; 또는 A, A 및 A이다.
소정의 실시형태에서, EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 본 명세서에 기재된 항체의 불변 영역 내 아미노산 잔기 329, 331 및 322로부터 선택된 하나 이상의 아미노산은, 항체가 변경된 C1q 결합 및/또는 감소된 또는 제거된 상보체 의존적 세포독성(CDC)을 변경하도록 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 이 접근은 전문이 본 명세서에 참고로 편입된 미국 특허 제6,194,551호(Idusogie et al.)에서 추가로 상세하게 기재된다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 CH2 도메인의 N-말단 영역 내 아미노산 위치 231 내지 238 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 변경됨으로써, EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 상보체를 고정시키는 항체의 능력을 변경시킨다. 이 접근은 본 명세서에 그의 전문이 참고로 편입된 국제 특허 출원 공개 WO 94/29351에서 추가로 기재된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 Fc 영역은 항체 의존적 세포의 세포독성(ADCC)을 매개하고/하거나 다음의 위치에서 하나 이상의 아미노산을 돌연변이시킴으로써(예를 들어, 아미노산 치환을 도입함으로써) Fcg 수용체에 대한 항체의 친화도를 증가시키는 항체의 친화도를 증가시키도록 변형된다: EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 238, 239, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 328, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 또는 439. 이 접근은 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 국제 특허 출원 공개 WO 00/42072에서 추가로 기재된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 IgG4 항체의 불변 영역을 포함하며, EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 중쇄의 아미노산 잔기 228에서 세린은 프롤린으로 치환된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 불변 영역 돌연변이 또는 변형은 2개의 중쇄 불변 영역을 갖는 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 불변 영역 중 1개 또는 둘 다에 도입될 수 있다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고 길항제로서 작용하는 단리된 항체를 제공한다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체가 없는 또는 관련없는 항체(예를 들어, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하지 않는 항체)가 있는 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 비해, 본 명세서에 기재되고/되거나 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가하여 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%만큼 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 활성을 감소시키는 단리된 항체를 제공한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고 임의의 항체가 없는 또는 관련없는 항체(예를 들어, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하지 않는 항체)가 있는 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 활성에 비해, 본 명세서에 기재된 그리고/또는 당업계에 공지된 방법에 의해 평가하여 적어도 약 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배만큼 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 활성을 감소시키는 단리된 항체를 제공한다. CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 활성의 비제한적 예는 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 신호전달, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 리간드(예를 들어, CD80 또는 CD86)에 대한 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 결합, 및 사이토카인 생산(예를 들어, IL-2, IFN-γ 또는 TNF-α)의 저해를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 활성을 비활성화하거나, 감소시키거나 또는 저해하는 단리된 항체를 제공한다. 구체적 실시형태에서, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 활성의 감소는 실시예(이하 참조)에 기재된 바와 같이 평가된다.
구체적 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체가 없는 또는 관련없는 항체(예를 들어, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하지 않은 항체)가 있는 리간드(예를 들어, CD80 또는 CD86)에 대한 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 결합에 비해, 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가되는 바와 같이, 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99%만큼 리간드(예를 들어, CD80 또는 CD86)에 대한 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 결합을 감소시키는 단리된 항체를 제공한다. 구체적 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체가 없는 또는 관련없는 항체(예를 들어, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하지 않은 항체)가 있는 리간드(예를 들어, CD80 또는 CD86)에 대한 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 결합에 비해, 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가되는 바와 같이, 적어도 약 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배만큼 리간드(예를 들어, CD80 또는 CD86)에 대한 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 결합을 감소시키는 단리된 항체를 제공한다.
구체적 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체가 없는 또는 관련없는 항체(예를 들어, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하지 않은 항체)가 있는 사이토카인 생산에 비해, 본 명세서에 기재된(이하의 실시예 참조) 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가하여 사이토카인 생산(예를 들어, IL-2, IFN-γ 또는 TNF-α)을 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%만큼 증가시키는 단리된 항체를 제공한다. 구체적 실시형태에서, 본 개시내용은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고, 임의의 항체가 없는 또는 관련없는 항체(예를 들어, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하지 않은 항체)가 있는 사이토카인 생산에 비해, 본 명세서에 기재된(이하의 실시예 참조) 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가하여 적어도 약 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배만큼 사이토카인 생산(예를 들어, IL-2, IFN-γ 또는 TNF-α)을 증가시키는 단리된 항체를 제공한다.
소정의 실시형태에서, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체의 존재 하에 스타필로코커스 엔테로톡신 A(SEA)로 자극된 인간 말초혈액단핵세포(PBMC)는 본 명세서에 기재된(이하의 실시예 참조) 또는 당업자에게 공지된 방법에 의해 평가하여 임의의 항체가 없는 또는 관련없는 항체(예를 들어, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하지 않은 항체)가 있는 적어도 약 1.2배, 1.3배, 1.4배, 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배, 5배, 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배만큼 IL-2 생산을 증가시켰다.
6.3 약제학적 조성물
본 명세서에서 생리적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정제에서 목적으로 하는 순도를 갖는 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체를 포함하는 조성물이 제공된다(Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정제는 사용되는 투약량 및 농도로 수용자에 대해 비독성이고, 완충제, 예컨대 인산염, 시트르산염 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대 옥타데실다이메틸벤질 염화암모늄; 염화헥사메토늄; 염화벤즈알코늄, 염화벤즈에토늄; 페놀, 뷰틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자량(약 10개 미만의 잔기) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 알기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대, 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 솔비톨; 염-형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 금속 복합체(예를 들어, Zn-단백질 복합체); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 트윈(TWEEN((상표명), 플루로닉스(PLURONICS)(상표명) 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
구체적 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체 중에서 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 및 선택적으로 하나 이상의 추가적인 예방적 또는 치료적 제제를 포함한다. 구체적 실시형태에서, 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체 중에서 유효량의 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 선택적으로 1종 이상의 추가적인 예방적 또는 치료적 제제를 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체는 약제학적 조성물 중에 포함된 유일한 활성 성분이다. 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물은 CTLA-4 활성을 저해하고, 암 또는 전염성 질환과 같은 병태를 치료하는 데 유용할 수 있다.
일 양상에서, 본 명세서에서 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
일 양상에서, 본 명세서에서 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
모 제제에서 사용되는 약제학적으로 허용 가능한 담체는 수성 비히클, 비수성 비히클, 항미생물제, 등장제, 완충제, 항산화제, 국소 마취제, 현탁제 및 분산제, 유화제, 봉쇄제 또는 킬레이트제 및 다른 약제학적으로 허용 가능한 물질을 포함한다. 수성 비히클의 예는 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 등장성 덱스트로스 주사액, 멸균수 주사액, 덱스트로스 및 젖산 링거 주사액을 포함한다. 비수성 비경구 비히클은 식물성 유래의 고정유, 면실유, 옥수수유, 참깨유 및 땅콩유를 포함한다. 정균 또는 정진균 농도의 항미생물제가 페놀 또는 크레졸, 수은, 벤질 알코올, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-하이드록시벤조산 에스터, 티메로살, 염화벤즈알코늄 및 염화벤즈에토늄을 포함하는 다회 용량 용기로 패키징된 비경구 제제에 첨가될 수 있다. 등장성 제제는 염화나트륨 및 덱스트로스를 포함한다. 완충제는 인산염 및 시트르산염을 포함한다. 항산화제는 황산수소나트륨을 포함한다. 국소 마취제는 염산프로카인을 포함한다. 현탁제 및 분산제는 카복시메틸셀룰로스나트륨, 하이드록시프로필 메틸셀룰로스 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 폴리솔베이트 80(트윈(등록상표) 80)을 포함한다. 금속 이온의 봉쇄제 또는 킬레이트제는 EDTA를 포함한다. 약제학저거 담체는 또한 수 혼화성 비히클에 대해 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜; 및 pH 조절을 위해 수산화나트륨, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함한다.
약제학적 조성물은 대상체에 대한 임의의 투여 경로에 대해 제형화될 수 있다. 투여 경로의 구체적 예는 비경구, 경구, 폐, 경피, 진피내 및 비경구를 포함한다. 피하, 근육내 또는 정맥내 주사를 특징으로 하는 비경구 투여는 또한 본 명세서에 상정된다. 주사액은 액체 용액 또는 현탁액으로서, 주사 전 액체 중의 용액 또는 현탁액에 적합한 고체 형태, 또는 에멀션으로서 통상적인 형태로 제조될 수 있다. 주사 가능한, 용액 및 에멀션은 또한 1종 이상의 부형제를 함유한다. 적합한 부형제는, 예를 들어, 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤 또는 에탄올이다. 추가로, 요망된다면, 투여될 약제학적 조성물은 또한 소량의 비독성 보조 물질, 예컨대 습윤 또는 유화제, pH 완충제, 안정제, 용해도 향상제, 및 기타 제제, 예를 들어, 아세트산나트륨, 솔비탄 모노라우레이트, 트라이에탄올아민 올레이트 및 사이클로덱스트린을 함유할 수 있다.
항체의 비경구 투여를 위한 제조는 바로 주사할 수 있는 멸균 용액, 피하 정제를 비롯하여 사용 직전에 용매와 바로 조합되어 사용되는 멸균 건조 가용성 제품, 예컨대 동결건조된 분말, 바로 주사할 수 있는 멸균 현탁액, 사용 직전에 비히클과 바로 조합되는 멸균 건조 불용성 제품 및 멸균 에멀션을 포함한다. 용액은 수성 또는 비수성일 수 있다.
정맥내로 투여된다면, 적합한 담체는 생리 식염수 또는 인산염 완충 식염수(PBS) 및 농조화제 및 가용화제를 함유하는 용액, 예컨대 글루코스, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물을 포함한다.
항체를 포함하는 국소 혼합물은 국소 및 전신 투여에 대해 기재된 바와 같이 제조된다. 얻어진 혼합물은 용액, 현탁액, 에멀션 등일 수 있고, 크림, 겔, 연고, 에멀션, 용액, 엘릭시르, 로션, 현탁액, 팅크제, 페이스트, 폼(foam), 에어로졸, 관류, 스프레이, 좌약, 붕대, 진피 패치 또는 국소 투여에 적합한 임의의 다른 제형으로서 제형화될 수 있다.
본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체는 국소 적용을 위한, 예컨대 흡입에 의한 에어로졸로서 제형화될 수 있다(예를 들어, 염증성 질환, 특히 천식의 치료에 유용한 스테로이드의 전달을 위한 에어로졸을 기재하고, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 미국 특허 제4,044,126호, 제4,414,209호 및 제4,364,923호 참조). 호흡관에 투여를 위한 이들 제형은 단독으로 또는 락토스와 같은 비활성 담체와 조합하여 네뷸라이저용 에어로졸 또는 용액의 형태로 또는 흡입제용 마이크로핀 분말로서의 형태일 수 있다. 이러한 경우에, 제형의 입자는 일 실시형태에서 50 마이크론 미만, 일 실시형태에서 10 마이크론 미만의 직경을 가질 것이다.
본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체는 국소 또는 국부 적용을 위해, 피부 및 점막, 예컨대 눈에 대한 국부 적용을 위해, 겔, 크림 및 로션의 형태로, 눈에 대한 적용을 위해 또는 낭내 또는 척추내 적용을 위해 제형화될 수 있다. 국소 투여는 경피 전달을 위해 그리고 또한 눈 또는 점막에 대한 투여를 위해, 또는 흡입 요법에 대해 상정된다. 단독으로 또는 다른 약제학적으로 허용 가능한 부형제와 조합한 항체의 비강 용액이 또한 투여될 수 있다.
이온영동 및 전기영동 장치를 포함하는 경피 패치는 당업자에게 잘 공지되어 있으며, 항체를 투여하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 패치는 미국 특허 제6,267,983호, 제6,261,595호, 제6,256,533호, 제6,167,301호, 제6,024,975호, 제6,010715호, 제5,985,317호, 제5,983,134호, 제5,948,433호 및 제5,860,957호에 개시되어 있으며, 이들 모두는 그의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 용액, 에멀션 및 다른 혼합물로서 투여를 위해 재구성될 수 있는 동결건조 분말이다. 이는 또한 재구성될 수 있고, 고체 또는 겔로서 제형화될 수 있다. 동결건조 분말은 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 유도체를 적합한 용매 중에 용해시킴으로써 제조된다. 일부 실시형태에서, 동결건조 분말은 멸균이다. 용매는 안정성을 개선시키는 부형제 또는 분말 또는 분말로부터 제조되는 재구성 용액의 다른 약학적 성분을 함유할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는 덱스트로스, 솔비톨, 프럭토스, 옥수수 시럽, 자일리톨, 글리세린, 글루코스, 수크로스 또는 다른 적합한 제제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 용매는 또한 완충제, 예컨대 시트르산염, 인산나트륨 또는 인산칼륨 또는 일 실시형태에서 중성 pH에서 당업자에게 공지된 다른 완충제를 함유할 수 있다. 용매의 후속적 멸균 여과 다음에 당업자에게 공지된 표준 조건 하의 동결건조는 목적으로 하는 제형을 제공한다. 일 실시형태에서, 얻어진 용액은 동결건조를 위해 바이알 내로 배분될 것이다. 각각의 바이알은 화합물의 단일 투약량 또는 다회 투약량을 함유할 것이다. 동결건조된 분말은 적절한 조건 하에, 예컨대 약 4℃ 내지 실온에서 저장될 수 있다. 주사용수에 의한 이 동결건조 분말의 재구성은 비경구 투여에서 사용하기 위한 제형을 제공한다. 재구성을 위해, 동결건조 분말은 멸균수 또는 다른 적합한 담체에 첨가된다. 정확한 양은 선택된 화합물에 의존한다. 이러한 양은 경험적으로 결정될 수 있다.
항-CTLA-4 본 명세서에 기재된 항체 및 본 명세서에 제공된 다른 조성물은 또한 치료될 대상체 신체의 특정 조직, 수용체 또는 다른 면적에 대해 표적화되도록 제형화될 수 있다. 다수의 이러한 표적화 방법은 당업자에게 잘 공지되어 있다. 모든 이러한 표적화 방법은 본 조성물에서 사용하기 위해 본 명세서에서 상정된다. 표적화 방법의 비제한적 예에 대해, 예를 들어, 미국 특허 제6,316,652호, 제6,274,552호, 제6,271,359호, 제6,253,872호, 제6,139,865호, 제6,131,570호, 제6,120,751호, 제6,071,495호, 제6,060,082호, 제6,048,736호, 제6,039,975호, 제6,004,534호, 제5,985,307호, 제5,972,366호, 제5,900,252호, 제5,840,674호, 제5,759,542호 및 제5,709,874호를 참조하며, 이들 모두는 그들의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 종양에 대해 표적화된다.
생체내 투여를 위해 사용되는 조성물은 멸균일 수 있다. 이는, 예를 들어, 멸균 여과막을 통해 여과에 의해 용이하게 달성된다.
6.4 사용 방법 및 용도
다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체를 이용하여 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. CTLA-4 기능의 저해가 유리한 대상체에서 임의의 질환 또는 장애는 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체를 이용하여 치료될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체는 종양에 대한 면역계 내약성을 저해하는 데 특히 유용하며, 따라서, 암을 갖는 대상체에 대한 면역요법으로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 기재된 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 기재된 항체, 치료적 조합물 또는 약제학적 조성물로 치료될 수 있는 암은 고형암(예를 들어, 재발 또는 불응성 고형암, 및 진행된 또는 전이성 고형암), 암종, 육종, 흑색종(예를 들어, III기 또는 IV기 흑색종), 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 방광암, 난소암, 전립선암(예를 들어, 전이성 호르몬-불응성 전립선암 및 진행성 전이성 전립선암), 췌장암, 유방암(예를 들어, HER2+ 유방암(예를 들어, 재발/불응성 HER2+ 유방암)), 두경부 암(예를 들어, 재발/불응성 두경부 편평세포암종(HNSCC)), 신경교종, 악성 신경교종, 다형성 신경교아종, 뇌 전이, 메켈암(merkel cancer), 위암, 위식도암, 신세포암종, 포도막 흑색종, 결장암, 자궁경부암, 림프종(예를 들어, 재발 또는 불응성 림프종), 비-호지킨 림프종, 호지킨 림프종, 백혈병, 및 다발성 골수종을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 소정의 실시형태에서, 암은 본 명세서에 기재된 항체, 치료적 조합 또는 약제학적 조성물의 종양내 투여로 치료된다. 본 명세서에 기재된 항체, 치료적 조합 또는 약제학적 조성물의 종양내 투여로 치료될 수 있는 암은 고형 종양(예를 들어, 진행된 또는 전이성 고형 종양), 두경부암(예를 들어, 재발/불응성 두경부 편평세포암종(HNSCC)) 및 유방암(예를 들어, HER2+ 유방암(예를 들어, 재발/불응성 HER2+ 유방암))을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 고형 종양이다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 전이성 또는 국소로 진행된 고형 종양)이다. 소정의 실시형태에서, 암은 전이성 또는 국소로 진행된 종양의 진단 후에(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된다. 소정의 실시형태에서, 암은 상이한 암 요법을 이용하는 종양의 사전 치료에도 불구하고 발생된 종양 진행의 진단 후에(예를 들어, 종양 진행의 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 방법은 투여되는 제2 암 요법으로서 제공된다. 소정의 실시형태에서, 암은 상이한 암 요법의 독성의 진단 후(예를 들어, 상이한 암 요법의 독성의 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 방법은 투여되는 제2 암 요법으로서 제공된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 표준 요법이 이용 가능하지 않은 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양)이다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 표준 요법을 실패한(즉, 표준 요법 후에 암이 진행된) 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양)이다. 소정의 실시형태에서, 암이 요법에 대해 불응성이라면, 요법은 실패한다. 소정의 실시형태에서, 요법에 대해 완전히 또는 부분적으로 반응한 후에 암이 재발된다면, 요법은 실패한다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양)은 조직학적으로 또는 세포학적으로 확인되었다.
소정의 실시형태에서, 암은 고형 종양이다. 소정의 실시형태에서, 암은(예를 들어, 고형 종양) PD-L1을 발현시킨다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 암(예를 들어, 고형 종양)의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%(예를 들어, 적어도 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%)이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 암(예를 들어, 고형 종양)의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%(예를 들어, 적어도 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%)이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 암(예를 들어, 고형 종양) 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 암(예를 들어, 고형 종양) 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 5%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 암(예를 들어, 고형 종양) 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 25%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 암(예를 들어, 고형 종양) 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 50%이다.
소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양) PD-L1을 발현시킨다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양) 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%(예를 들어, 적어도 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%)이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양) 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%(예를 들어, 적어도 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%)이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양) 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양) 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 5%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양) 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 25%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 암(예를 들어, 고형 종양) 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 50%이다.
샘플 내 세포의 특정 백분율이 PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 막 발현, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 것이 필요한 본 명세서에 기재된 방법의 각각의 그리고 모든 것에 대해, PD-L1의 발현은 면역조직화학을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 당업계에 잘 공지된 임의의 방법에 의해 검출될 수 있다. 종양 세포 내 PD-L1 발현을 측정하기 위한 예시적인 면역조직화학 분석은 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Hirsch et al. (2017, J. Thoracic Oncol. 12(2): 208-222), Rimm et al. (2017, JAMA Oncol. 3(8): 1051-1058), 및 Diggs and Hsueh (2017, Biomarker Res. 5:12)]에서 제공된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된 암은 전이성 또는 국소로 진행된 비소세포 폐암(NSCLC)이다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된 암은 전이성 비소세포 폐암(NSCLC)이다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 IV기, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC이다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된 암은 IV기, 전이성 NSCLC이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 5%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 25%이다. 소정의 실시형태에서, PD-L1의 검출 가능한 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 발현)을 나타내는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 50%이다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC는 EGFR 또는 ALK 게놈 종양 이상이 없다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC는 EGFR 민감화 돌연변이(예를 들어, 에를로티닙, 게피티닙 또는 아파타닙을 포함하는 타이로신 키나제 저해제로 치료 될 수 있는 돌연변이) 또는 ALK 전좌가 없다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC를 갖는 대상체는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC에 대한 사전 전신 화학요법 치료를 받지 않았다. 소정의 실시형태에서, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC는 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC의 진단 후(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된다. 소정의 실시형태에서, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 이용하여 NSCLC(예를 들어, IV기, 전이성 또는 국소로 진행된 NSCLC)를 갖는 대상체를 치료하는 단계를 포함하되, PD-L1의 검출 가능한 막 발현(예를 들어, 부분적 또는 완전한 막 발현)을 나타내는 NSCLC의 샘플 내 종양 세포의 백분율은 적어도 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%이고, 상기 방법은 자궁경부암의 진단 후에(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 제공된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 자궁경부암이다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 자궁경부의 전이성 또는 국소로 진행된, 절제 가능하지 않은 편평세포암종, 선평편암종 또는 선암종이다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 절제 가능하지 않은 또는 전이성 자궁경부암이다. 소정의 실시형태에서, 자궁경부암은 표준 요법 후에 진행되었다(예를 들어, 표준 요법 후에 재발되었거나, 또는 표준 요법에 대해 불응성이다). 소정의 실시형태에서, 표준 요법은 백금-함유 화학요법을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 백금-함유 화학요법은 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 데다플라틴, 사트라플라틴, 피코플라틴, 트리플라틴, 페난트리플라틴, 이프로플라틴, 로바파틴, 헵타플라틴, 리포플라틴 및 이들의 조합물로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 표준 요법은 제2 화학요법을 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, 제2 화학요법은 뉴클레오타이드 유사체(예를 들어, 겜시타빈), 엽산 대사길항물질(예를 들어, 페메트렉시드) 및 탁산(예를 들어, 파클리탁셀)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 표준 요법은 당업계에 공지된 임의의 백금기반 더블릿 화학요법(PT-DC)(또한 백금-함유 더블릿으로서 알려짐)이다. 소정의 실시형태에서, PT-DC는 시스플라틴 및 겜시타빈, 시스플라틴 및 페메트렉시드, 시스플라틴 및 파클리탁셀, 카보플라틴 및 파클리탁셀, 또는 시스플라틴 및 토포테칸을 포함한다. 표준 요법(예를 들어, PT-DC를 포함하는 것)은 선택적으로 하나 이상의 추가적인 요법, 예컨대 베바시주맙을 추가로 포함할 수 있다. 소정의 실시형태에서, 표준 요법은 파클리탁셀 및 토포테칸을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 자궁경부암은 HPV 양성이다. 소정의 실시형태에서, 자궁경부암은 미소부수체 불안정성과 관련된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 진행된(재발성, 절제 가능하지 않은 또는 전이성) 질환의 치료를 위해 투여된 백금-함유 더블릿 후에 재발된 자궁경부의 전이성 또는 국소로 진행된, 절제 가능하지 않은 편평세포암종, 선평편암종 또는 선암종이다. 소정의 실시형태에서, 자궁경부의 암은 자궁경부암의 진단 후에(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된다. 소정의 실시형태에서, 자궁경부의 암은 상이한 암 요법을 이용한 자궁경부암의 이전의 치료에도 불구하고 발생된 종양 진행의 진단 후에(예를 들어, 종양 진행의 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 방법은 투여된 제2 암 요법으로서 제공된다. 소정의 실시형태에서, 자궁경부암은 상이한 암 요법의 독성의 진단 후(예를 들어, 상이한 암 요법의 독성의 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 방법은 투여되는 제2 암 요법으로서 제공된다. 소정의 실시형태에서, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 이용하여 자궁경부암(예를 들어, 자궁경부의 전이성 또는 국소로 진행된, 절제 가능하지 않은 편평세포암종, 선평편암종 또는 선암종)을 갖는 대상체를 치료하는 단계를 포함하되, 상기 방법은 자궁경부암의 진단 후에(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 제공된다. 소정의 실시형태에서, 상기 방법은 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체, 예를 들어, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 이러한 항-CTLA-4 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 이용하여 자궁경부암(예를 들어, 자궁경부의 전이성 또는 국소로 진행된, 절제 가능하지 않은 편평세포암종, 선평편암종 또는 선암종)을 갖는 대상체를 치료하는 단계를 포함하되, 상기 방법은 상이한 암 요법을 이용한 자궁경부암의 이전의 치료에도 불구하고 발생된 종양 진행(예를 들어, 종양 진행의 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에)의 진단 후에 제공되거나, 또는 상이한 암 요법 독성의 진단 후에(예를 들어, 상이한 암 요법 독성의 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제공되며, 본 명세서에 기재된 방법은 투여되는 제2 암 요법으로서 제공된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 피부의 편평세포 암종(cSCC)이다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 IV기 피부의 편평세포 암종(cSCC)이다. 소정의 실시형태에서, cSCC(예를 들어, IV기 cSCC)는 방사선 요법으로 치유 가능하지 않다. 소정의 실시형태에서, IV기 cSCC는 미국암연합위원회 병기분류 8판(AJCC-8)에 따라 조직학적으로 또는 세포학적으로 진단된다. 소정의 실시형태에서, cSCC(예를 들어, IV기 cSCC)는 cSCC의 진단 후에(예를 들어, IV기 cSCC)(예를 들어, 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료된다. 소정의 실시형태에서, cSCC(예를 들어, IV기 cSCC)는 상이한 암 요법에 의한 cSCC(예를 들어, IV기 cSCC)의 이전의 치료에도 불구하고 발생된 종양 진행의 진단 후(예를 들어, 종양 진행의 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 방법은 투여되는 제2 암 요법으로서 제공된다. 소정의 실시형태에서, cSCC(예를 들어, IV기 cSCC)는 상이한 암 요법의 독성의 진단 후(예를 들어, 상이한 암 요법 독성의 진단 후 1, 2, 3, 4, 5 또는 6일; 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12주; 또는, 1, 2, 3, 4, 6, 8 또는 12개월 내에) 제1 암 요법으로서 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되되, 선택적으로 본 명세서에 기재된 방법은 투여되는 제2 암 요법으로서 제공된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 B 세포 림프종(예를 들어, B 세포 만성 림프구성 백혈병, B 세포 비-호지킨 림프종, 피부 B 세포 림프종, 미만성 거대 B 세포 림프종), 기저 세포 암종, 방광암, 아세포종, 뇌 전이, 유방암, 버킷 림프종, 암종(예를 들어, 선암종(예를 들어, 위식도 접합부의)), 자궁경부암, 결장암, 결장직장암(결장암 및 직장암), 자궁내막 암종, 식도암, 유잉 육종, 여포성 림프종, 위암, 위식도 접합부 암종, 위장암, 교아세포종(예를 들어, 다형성 신경교아종, 예를 들어, 새로 진단 또는 재발), 신경교종, 두경부 암(예를 들어, 두경부 편평세포암종), 간 전이, 호지킨 및 비-호지킨 림프종, 신장암(예를 들어, 신세포암종 및 윌름 종양), 후두암, 백혈병(예를 들어, 만성 골수성 백혈병, 모발 세포 백혈병), 간암(예를 들어, 간암종 및 간세포암), 폐암(예를 들어, 비소세포 폐암 및 소세포 폐암), 림프아구성 림프종, 림프종, 맨틀 세포 림프종, 전이성 뇌 종양, 전이성 암, 골수종(예를 들어, 다발성 골수종), 신경아세포종, 안구 흑색종, 구인두암, 골육종, 난소암, 췌장암(예를 들어, 췌관 선암종), 전립선암(예를 들어, 호르몬 불응성(예를 들어, 거세 저항성), 전이성, 전이성 호르몬 불응성(예를 들어, 거세 저항성, 안드로겐 독립적)), 신세포암종(예를 들어, 전이성), 침샘 암종, 육종(예를 들어, 횡문근육종), 피부암(예를 들어, 흑색종(예를 들어, 전이성 흑색종)), 연조직 육종, 고형 종양, 편평세포암종, 활액 육종, 고환암, 갑상선암, 이행세포암(요로상피세포암), 포도막 흑색종(예를 들어, 전이성), 사마귀모양 암종, 외음부암 및 발덴스트롬 마크로글로불린혈증이다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 인간 육종 또는 암종, 예를 들어, 섬유육종, 점액육종, 지방육종, 연골육종, 골원성 육종, 척색종, 혈관육종, 내피육종, 림프혈관육종, 림프관내피육종, 활막종, 악성중피종, 유잉 종양, 평활근육종, 횡문근육종, 결장 암종, 췌장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 편평세포암종, 기저 세포 암종, 선암종, 땀샘 암종, 피지선 암종, 유두상 암종, 유두상 선암종, 낭선암종, 수질암종, 기관지성 암종, 신세포암종(예를 들어, 전이성), 간세포암, 담관 암종, 융모막암종, 정상피종, 배아 암종, 윌름 종양, 자궁경부암, 고환 종양, 폐암종, 소세포 폐암종, 방광 암종, 상피 암종, 신경교종, 다형성 신경교아종, 성상세포종, 수모세포종, 두개인두종, 상의세포종, 송과체종, 혈관아세포종, 청신경종, 핍돌기신경교종, 뇌수막종, 흑색종, 신경아세포종 또는 망막모세포종이다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 혈관육종이다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 급성 림프구성 백혈병 또는 급성 골수구성 백혈병(예를 들어, 골수아구성, 전골수구, 골수단핵구, 단핵구 및 적백혈병); 만성 백혈병(만성 골수성 (과립구) 백혈병 또는 만성 림프구성 백혈병); 호지킨병; 비-호지킨병; 급성 골수성 백혈병; B-세포 림프종; T-세포 림프종; 역형성 대세포 림프종; 안구내 림프종; 여포성 림프종; 소장 림프종; 또는 비장 변연부 림프종이다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 다발성 골수종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 중쇄병, 위장관기질종양, 두경부암(예를 들어, 후두인두의 편평세포암종, 후두의 편평세포암종, 구강인두의 세포암종, 또는 후두의 사마귀모양 암종), 자궁내막간질 육종, 비만세포 육종, 성인 연조직 육종, 자궁 육종, 메켈 세포 암종, 요로상피세포암종, 뇌 전이가 있는 흑색종, 포도막 흑색종, 간 전이가 있는 포도막 흑색종, 비소세포 폐암, 직장암 또는 골수이형성증후군이다. 일부 실시형태에서, 상기 방법에 따라 치료되는 암은 전이성이다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 전립선암, 유방암, 폐암, 결장직장암, 흑색종, 기관지암, 방광암, 뇌 또는 중추 신경계암, 말초 신경계암, 자궁 또는 자궁내막암, 구강 또는 인두의 암, 비-호지킨 림프종, 갑상선암, 신장암, 담도암, 소장 또는 맹장암, 침샘암, 갑상선암, 부신암, 편평세포암, 악성중피종, 골암, 흉선종/흉선 암종, 교아세포종, 골수이형성증후군, 연조직 육종, DIPG, 선암종, 골육종, 연골육종, 백혈병 또는 췌장암이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 암종(예를 들어, 선암종), 림프종, 아세포종, 흑색종, 육종 또는 백혈병을 포함한다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 편평세포암, 소세포 폐암, 비소세포 폐암, 위장암, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 췌장암, 교아세포종, 신경교종, 자궁경부암, 난소암, 간암(예를 들어, 간암종 및 간세포암), 방광암, 유방암, 염증성 유방암, 메켈 세포 암종, 결장암, 결장직장암, 위암, 방광암, 자궁내막 암종, 골수종(예를 들어, 다발성 골수종), 침샘, 암종, 신장암(예를 들어, 신세포암종 및 윌름 종양), 기저 세포 암종, 흑색종, 전립선암, 외음부암, 갑상선암, 고환암, 식도암, 장액성 선암종 또는 다양한 유형의 두경부암이다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 섬유조직형성 흑색종, 염증성 유방암, 흉선종, 직장암, 항문암 또는 수술로 치료 가능한 또는 비수술적으로 치료 가능한 뇌 줄기 신경교종을 포함한다. 구체적 실시형태에서, 암은 고형 종양이다. 다른 구체적 실시형태에서, 암은 다형성 신경교아종이다. 일부 실시형태에서, 다형성 신경교아종은 재발성이다. 일부 실시형태에서, 다형성 신경교아종은 새로 진단된다. 일부 실시형태에서, 다형성 신경교아종은 비-메틸화된 MGMT 프로모터를 갖는 대상체에 있다. 일부 실시형태에서, 다형성 신경교아종은 베바시주맙 요법에 대해 불응성이다. 일부 실시형태에서, 다형성 신경교아종은 베바시주맙 요법을 받지 않은 대상체에 있다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 전이성 흑색종(예를 들어, 내성 전이성 흑색종), 전이성 난소암 또는 전이성 신세포암종이다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 이필리무맙에 대해 내성인 흑색종이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에 대해 내성인 흑색종이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 이필리무맙 및 니볼루맙 또는 펨브롤리주맙에 대해 내성인 흑색종이다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 유방암(예를 들어, 허셉틴 내성 유방암 및 트라스투주맙-DM1(T-DM1) 내성 유방암), 전립선암, 다형성 신경교아종, 결장직장암, 육종, 방광암, 자궁경부암, HPV-연관암, 질암, 외음부암, 음경암, 항문암, 직장암, 구강인두암, 다발성 골수종, 신세포암종, 난소암, 간세포암, 자궁내막암, 췌장암, 림프종 및 백혈병(예를 들어, 노인성 백혈병, 급성 골수성 백혈병(AML) 및 노인성 AML)이다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에 따라 치료되는 암은 전이성 악성 흑색종(예를 들어, 피부 또는 안구내 악성 흑색종), 신세포암(예를 들어, 투명세포 암종), 전립선암(예를 들어, 호르몬 불응성 전립선 선암종), 유방암, 결장암, 폐암(예를 들어, 비소세포 폐암), 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부암, 위암, 고환암, 자궁암, 나팔관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 식도암, 소장암, 내분비계의 암, 갑상선의 암, 부갑상선의 암, 부신암, 연조직의 육종, 요도암, 음경암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병을 비롯한 만성 또는 급성 백혈병, 아동의 고형 종양, 림프구성 림프종, 방광암, 신장 또는 요관의 암, 신우의 암종, 중추 신경계(CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 종양혈관형성인자, 척추종양, 뇌 줄기 신경교종, 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 표피모양암, 편평세포암, T-세포 림프종, 석면에 의해 유도된 것을 포함하는 환경적으로 유도된 암, 식도암, 간암, 불응성 또는 재발 악성종양, 전이성암, PD-L1을 발현시키는 암, 및 상기 암들의 조합이다.
소정의 실시형태에서, 대상체는 이전에 면역요법을 받았다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 이전에 임의의 면역요법을 받지 않았다. 소정의 실시형태에서, 암은 진행된 또는 전이성 암이다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 대상체에서 전염성 질환을 예방하거나 또는 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 유효량의 본 명세서에 기재된 바와 같은 항-CTLA-4 항체 또는 이의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 본 명세서에서 감염(예를 들어, 바이러스 감염, 박테리아 감염, 진균 감염, 원생동물 감염 또는 기생충 감염)을 예방하고/하거나 치료하기 위한 방법이 제공된다. 상기 방법에 따라 예방되고/되거나 치료되는 감염은 본 명세서에서 확인된 감염제에 의해 야기될 수 있다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이들의 조성물은 대상체에게 투여되는 유일한 활성제이다. 일부 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 조성물은 전염성 질환의 치료를 위해 항-감염적 개입(예를 들어, 항바이러스, 항박테리아, 항진균 또는 항-기생충제)과 조합하여 사용된다.
본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물에 의해 치료되고/되거나 예방될 수 있는 전염성 질환은 박테리아, 기생충, 진균, 원생동물 및 바이러스를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 전염성 제제에 의해 야기된다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물에 의해 치료되고/되거나 예방되는 전염성 질환은 바이러스에 의해 야기된다. 본 명세서에 기재된 방법에 따라 예방되고/되거나 치료될 수 있는 바이러스 질환 또는 바이러스 감염은 A형 간염, B형 간염, C형 간염, 인플루엔자(예를 들어, 인플루엔자 A 또는 인플루엔자 B), 수두, 아데노바이러스, I형 단순 포진(HSV-I), II형 단순 포진(HSV-II), 우역, 리노바이러스, 에코바이러스, 로타바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 유두종 바이러스, 파포바바이러스, 거대세포바이러스, 에키노바이러스, 아르보바이러스, 한타바이러스, 콕사키 바이러스, 멈프스 바이러스, 홍역 바이러스, 풍진 바이러스, 폴리오 바이러스, 두창, 엡스타인 바 바이러스, I형 인간 면역결핍 바이러스(HIV-I), II형 인간 면역결핍 바이러스(HIV-II), 및 바이러스 질환의 제제, 예컨대 바이러스 뇌수막염, 뇌염, 뎅기열 또는 두창에 의해 야기되는 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
예방되고/되거나 치료될 수 있는 박테리아 감염은 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 클렙시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 엔테로코커스 파에칼리스(Enterococcus faecalis), 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris), 스타필로코커스 비리단스(Staphylococcus viridans) 및 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa)에 의해 야기된 감염을 포함한다. 본 명세서에 기재된 방법에 따라 예방되고/되거나 치료될 수 있는 박테리아(예를 들어, 에스케리키아 콜라이, 클렙시엘라 뉴모니애, 스타필로코커스 아우레우스, 엔테로코커스 파에칼리스, 프로테우스 불가리스, 스타필로코커스 비리단스 및 슈도모나스 아에루기노사)에 의해 야기되는 박테리아 질환은 마이코박테리아 리케차(Mycobacteria rickettsia), 마이코플라즈마(Mycoplasma), 네이세리아(Neisseria), 슈도모나스 뉴모니아(S. pneumonia), 보렐리아 부르그도페리(Borrelia burgdorferi)(라임병), 바실러스 안트라시스(탄저균), 파상풍, 스트렙토코커스, 스타필로코커스, 마이코박테륨, 백일해, 콜레라, 흑사병, 디프테리아, 클라미디아, 스타필로코커스 아우레우스(S. aureus) 및 레지오넬라를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에 기재된 방법에 따라 예방되고/되거나 치료될 수 있는 원생동물에 의해 야기되는 원생동물 질환 또는 원생동물 감염은 리슈마니아, 콕시디아증, 트리파노소마 주혈흡충 또는 말라리아를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 명세서에 기재된 방법에 따라 예방되고/되거나 치료될 수 있는 기생충에 의야 야기된 기생충 질환 또는 기생충 감염은 클라미디아 및 리케차를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에 기재된 방법에 따라 예방되고/되거나 치료될 수 있는 진균 질환 또는 진균 감염은 칸디다(Candida) 감염, 접합진균증, 칸디다 유선염, 잠복성 트리코스포론에 의한 진행성의 파종성 트리코스포로니증, 파종성 칸디다증, 폐 파라콕시디오이데스진균증, 폐 아스페르질루스증, 폐포자충폐렴, 크립토코커스 뇌수막염, 콕시디오이데스성 수막뇌염 및 뇌척수 혈관염, 아스퍼질러스 니거(Aspergillus niger) 감염, 푸사리움 케라티티스(Fusarium keratitis), 부비강 진균증, 아스페르길루스 푸미가투스(Aspergillus fumigatus) 심내막염, 경골연골부전증, 칸디다 글라브라타(Candida glabrata) 질염, 구강인두 칸디다증, X-연관 만성 육아종병, 발 백선, 피부 칸디다증, 진균성 태반염, 파종성 트리코스포론증, 알레르기성 기관지폐 아스페르질루스증, 진균각막염, 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans) 감염, 진균 복막염, 쿠르부랄리아 게니쿨라타(Curvularia geniculata) 감염, 스타필로코커스 엔도프탈미티스(staphylococcal endophthalmitis), 스포로트릭스증 및 피부사상균증에 의해 야기되는 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
소정의 실시형태에서, 전염성 질환은 급성이다. 소정의 실시형태에서, 전염성 질환은 만성이다. 소정의 실시형태에서, 전염성 질환은 플라비바이러스, 예를 들어, 웨스트 나일 바이러스, 세인트 루이스 뇌염 바이러스, 파와산 바이러스, 진드기 매개 뇌염 바이러스, 뎅기열 바이러스, 지카 바이러스, 카야사나 삼림병 바이러스, 황열 바이러스 및 치쿤구니야 바이러스에 의해 야기된다. 소정의 실시형태에서, 전염성 질환은 에볼라 바이러스에 의해 야기된다. 소정의 실시형태에서, 전염성 질환은 인플루엔자 바이러스에 의해 야기된다. 소정의 실시형태에서, 전염성 질환은 인간 면역결핍 바이러스(HIV), B형 간염 바이러스(HBV) 또는 C형 간염 바이러스(HCV)에 의해 야기된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항-CTLA-4 항체 또는 이의 약제학적 조성물은 바이러스 제어를 촉진시킨다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 항-CTLA-4 항체 또는 이의 약제학적 조성물 바이러스 저장소를 제거한다.
본 발명은 일 양상에서 의약으로서 사용하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 일 양상에서, 면역요법(예를 들어, 대상체에서 항원에 반응하여 T-세포 활성화를 증가시키거나, 암을 치료하거나, 또는 전염성 질환을 치료하거나 또는 예방하기 위한 면역요법)을 위한 약제학적 조성물 또는 의약을 제조하기 위한 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 조합한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 이의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 일 양상에서 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 일 양상에서 종양에 대한 면역계 내약성을 저해하기 위한 그리고/또는 암을 갖는 대상체에 대한 면역요법을 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 일 양상에서 전염성 질환의 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 본 발명의 약제학적 조성물에 관한 것이다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 단일요법으로서 투여된다.
소정의 실시형태에서, 이들 방법은 대상체에 추가적인 치료제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 소정의 실시형태에서, 추가적인 치료제는 화학치료제 또는 관문 표적화제이다. 소정의 실시형태에서, 관문 표적화제는 길항제 항-PD-1 항체, 길항제 항-PD-L1 항체, 길항제 항-PD-L2 항체, 길항제 항-CTLA-4 항체, 길항제 항-TIM-3 항체, 길항제 항-LAG-3 항체, 길항제 항-CEACAM1 항체, 작용제 항-GITR 항체, 작용제 항-OX40 항체, 작용제 항-CD137 항체, 작용제 항-DR3 항체, 작용제 항-TNFSF14 항체, 및 작용제 항-CD27 항체로 이루어진 군으로부터 선택된다. 소정의 실시형태에서, 관문 표적화제는 길항제 항-PD-1 항체이다. 소정의 실시형태에서, 관문 표적화제는 길항제 항-PD-L1 항체이다. 소정의 실시형태에서, 관문 표적화제는 길항제 항-LAG-3 항체이다. 소정의 실시형태에서, 추가적인 치료제는 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 또는 종양 괴사 인자 슈퍼패밀리 구성원에 대한 작용제이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물 및 (b) 추가적인 치료제에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 추가적인 치료제는 화학치료제 또는 관문 표적화제이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물 및 (b) 추가적인 치료제에 관한 것이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 전염성 질환의 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물 및 (b) 추가적인 치료제에 관한 것이다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체는 대상체에게 면역조절 효소(들), 예컨대 IDO(인돌아민-(2,3)-다이옥시게나제) 및/또는 TDO(트립토판 2,3-다이옥시게나제)를 표적화하는 화합물과 조합하여 투여된다. 소정의 실시형태에서, 이러한 화합물은 에파카도스탯(인사이트 코포레이션(Incyte Corp); 예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 WO 2010/005958 참조), F001287(플렉서스 바이오사이언시즈(Flexus Biosciences)), 인독시모드(뉴링크 제네틱스(NewLink Genetics)) 및 NLG919(뉴링크 제네틱스)로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일 실시형태에서, 화합물은 에파카도스탯이다. 다른 실시형태에서, 화합물은 F001287이다. 다른 실시형태에서, 화합물은 인독시모드이다. 다른 실시형태에서, 화합물은 NLG919이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물 및 (b) 면역조절 효소를 표적화하는 화합물에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 화합물은 IDO 및/또는 TDO를 표적화한다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물 및 (b) 면역조절 효소를 표적화하는 화합물에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 화합물은 IDO 및/또는 TDO를 표적화한다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체은 대상체에게 백신과 조합하여 투여된다. 소정의 실시형태에서, 백신은 열 충격 단백질 기반 종양 백신 또는 열 충격 단백질 기반 병원체 백신이다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체는 대상체에게 열 충격 단백질 기반 종양-백신과 조합하여 투여된다. 열 충격 단백질(HSP)은 모든 종에 걸쳐 편재하여 발견되는 고도로 보존된 단백질의 패밀리이다. 그들의 발현은 열 충격, 또는 독소, 산화적 스트레스 또는 글루코스 결핍을 포함하는 다른 형태의 스트레스의 결과로서 훨씬 더 고수준으로 강력하게 유도될 수 있다. 분자량에 따라 5가지 패밀리로 분류되었다: HSP-110, -90, -70, -60 및 -28. HSP는 항원 제시 세포(APC), 예컨대 대식세포 및 수지상 세포(DC)에서 교차-제시 경로를 통해 면역원성 펩타이드를 전달하여, T 세포 활성화를 야기한다. HSP는 종양 특이적 면역을 유도할 수 있는 복합체를 형성하는 종양-관련 항원 펩타이드의 샤페론 담체로서 작용한다. 사멸 종양 세포로부터의 방출 시, HSP-항원 복합체는 항원-제시 세포(APC)에 의해 취해지되, 항원은 MHC 클래스 I 및 클래스 II 분자에 결합하는 펩타이드로 가공되어 항-종양 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 활성화를 야기한다. 종양 제제로부터 유래된 HSP 복합체에 의해 유발된 면역은 구체적으로는 각각의 대상체의 암에 의해 발현된 독특한 항원 펩타이드 레퍼토리로 지향된다.
열 충격 단백질 펩타이드 복합체(HSPPC)는 항원 펩타이드와 비공유적으로 복합체화된 열 충격 단백질로 이루어진 단백질 펩타이드 복합체이다. HSPPC는 선천성과 적응 면역 반응을 둘 다 유발한다. 구체적 실시형태에서, 항원 펩타이드(들)는 치료될 암에 대한 항원성을 나타낸다. HSPPC는 막 수용체(주로 CD91)를 통해 또는 Toll-유사 수용체에 대한 결합에 의해 APC에 의해 효율적으로 점유된다. HSPPC 내재화는 자연 살해 세포(NK), 단핵구 및 Th1 및 Th-2-매개 면역 반응의 활성화를 야기하는 케모카인 및 사이토카인 생산에 의해 APC의 기능적 성숙을 초래한다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 방법에서 사용된 HSPPC는 항원 펩타이드와 복합체화된 스트레스 단백질의 hsp60, hsp70 또는 hsp90 패밀리로부터의 하나 이상의 열 충격 단백질을 포함한다. 소정의 실시형태에서, HSPPC는 hsc70, hsp70, hsp90, hsp110, grp170, gp96, 칼레티쿨린 또는 이들의 둘 이상의 조합을 포함한다.
구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체는 암을 치료하기 위해 열 충격 단백질 펩타이드 복합체(HSPPC), 예를 들어, 열 충격 단백질 펩타이드 복합체-96(HSPPC-96)과 조합하여 대상체에게 투여된다. HSPPC-96는 항원 펩타이드와 복합체화되는 96kDa 열 충격 단백질(Hsp)인 gp96를 포함한다. HSPPC-96은 대상체의 종양으로부터 제조된 암 면역요법이고, 암의 항원성 "지문(fingerprint)"을 함유한다. 소정의 실시형태에서, 이 지문은 특정 대상체의 특정 암세포 및 백신의 주사가 단지 특정 암 지문을 갖는 임의의 세포를 인식하고 공격하는 대상체의 면역계를 자극하도록 의도된다는 점에서 존재하는 독특한 항원을 함유한다.
소정의 실시형태에서, HSPPC, 예를 들어, HSPPC-96는 대상체의 종양 조직으로부터 생산된다. 구체적 실시형태에서, HSPPC(예를 들어, HSPPC-96)는 치료 중인 암 또는 이의 전이의 유형의 종양으로부터 생산된다. 다른 구체적 실시형태에서, HSPPC(예를 들어, HSPPC-96)는 치료 중인 대상체에 대해 자가(autologous)이다. 소정의 실시형태에서, 종양 조직은 비-괴사성 종양 조직이다. 소정의 실시형태에서, 비-괴사성 종양 조직의 적어도 1그램(예를 들어, 적어도 1, 적어도 2, 적어도 3, 적어도 4, 적어도 5, 적어도 6, 적어도 7, 적어도 8, 적어도 9 또는 적어도 10그램)은 백신 요법을 생산하기 위해 사용된다. 소정의 실시형태에서, 수술적 절제 후에, 비-괴사성 종양 조직은 백신 제제에서 사용 전에 냉동된다. 일부 실시형태에서, HSPPC, 예를 들어, HSPPC-96은 정제 기법에 의해 종양 조직으로부터 단리되고, 여과 후, 주사 가능한 백신용으로 제조된다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 HSPPC, 예를 들어, HSPCC-96의 6 내지 12 용량으로 투여된다. 이러한 실시형태에서, HSPPC, 예를 들어, HSPPC-96 용량은 처음 4회 용량에 대해 매주 투여될 수 있고, 이어서, 2 내지 8회의 추가적인 용량에 대해 2주마다 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 방법에 따라 사용될 수 있는 HSPPC의 추가적인 예는 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 다음의 특허 및 특허 출원, 미국 특허 제6,391,306호, 제6,383,492호, 제6,403,095호, 제6,410,026호, 제6,436,404호, 제6,447,780호, 제6,447,781호 및 제6,610,659호에서 개시되며, 이들 모두는 그들의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 본 발명의 약제학적 조성물 및 (b) 백신에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 백신은 충격 단백질 기반 종양 백신 또는 열 충격 단백질 기반 병원체 백신이다. 바람직한 실시형태에서, 백신은 열 충격 단백질 기반 바이러스 백신이다.
소정의 실시형태에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 (a) 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 본 발명의 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물 및 (b) 백신에 관한 것이다. 바람직한 실시형태에서, 백신은 열 충격 단백질 기반 종양 백신이다.
항-CTLA-4 항체 및 추가적인 치료제(예를 들어, 화학치료제, 관문 표적화제, IDO 저해제 및/또는 백신)는 별개의 투약 형태로서 별개로, 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 일 실시형태에서, 항-CTLA-4 항체는 비경구로 투여되고, IDO 저해제는 경구로 투여된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체는 대상체에게 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체는 대상체에게 추가적인 치료제와 조합하여 종양내로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 추가적인 치료제는 전신으로 투여된다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 고형 종양을 가진다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 두경부 편평세포암종(HNSCC)을 가진다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 HER2+ 유방암을 가진다. 소정의 실시형태에서, 전신으로 투여된 추가적인 치료제는 항-PD-1 항체(예를 들어, 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙)이다. 소정의 실시형태에서, 전신으로 투여되는 추가적인 치료제는 항-EGFR 항체(예를 들어, 세툭시맙)이다. 소정의 실시형태에서, 전신으로 투여되는 추가적인 치료제는 항-HER2 항체(예를 들어, 트라스투주맙)이다. 소정의 실시형태에서, 전신으로 투여되는 추가적인 치료제는 화학치료제(예를 들어, 겜시타빈)이다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 고형 종양을 가지며, 전신으로 투여되는 추가적인 치료제는 항-PD-1 항체(예를 들어, 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙)이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 3주마다 200㎎으로 투여되는 펨브롤리주맙이다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 두경부 편평세포암종(HNSCC)을 가지며, 전신으로 투여되는 추가적인 치료제는 항-EGFR 항체(예를 들어, 세툭시맙)이다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 HER2+ 유방암을 가지며, 전신으로 투여되는 추가적인 치료제는 항-HER2 항체(예를 들어, 트라스투주맙)이다. 소정의 실시형태에서, 대상체는 추가로 화학치료제(예를 들어, 겜시타빈)를 받는다. 일 양상에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한, 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물, 및 선택적으로 추가적인 치료제에 관한 것이되, 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물은 대상체에 대해 종양내로 투여된다. 하나의 바람직한 실시형태에서, 추가적인 치료제는 대상체에게 투여되며, 더 바람직하게는, 추가적인 치료제는 대상체에게 전신으로 투여된다.
소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 본 명세서에 기재된 방법에서 사용된다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 브리스톨-마이어스 스큅(Bristol-Myers Squibb)에 의해 개발된 BMS-936558 또는 MDX1106으로서도 알려진 니볼루맙이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 머크 앤드 컴퍼니(Merck & Co)에 의해 개발된 람브롤리주맙 또는 MK-3475로서도 알려진 펨브롤리주맙이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 큐어테크(CureTech)에 의해 개발된 CT-011로서도 알려진 피딜리주맙이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 메디뮨(Medimmune)에 의해 개발된 AMP-514로서도 알려진 MEDI0680이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 노바티스 파마슈티컬스(Novartis Pharmaceuticals)에 의해 개발된 PDR001이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 리제네론 파마슈티컬스(Regeneron Pharmaceuticals)에 의해 개발된 REGN2810이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 화이자(Pfizer)에 의해 개발된 PF-06801591이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 베이젠(BeiGene)에 의해 개발된 BGB-A317이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 아납티스바이오(AnaptysBio) 및 테사로(Tesaro)에 의해 개발된 TSR-042이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-1 항체는 헨루이(Hengrui)에 의해 개발된 SHR-1210이다.
본 명세서에 기재된 치료 방법에서 사용될 수 있는 항-PD-1 항체의 추가적인 비제한적 예는 본 명세서에 모든 목적을 위하여 전문이 참고로 편입된 다음의 특허 및 특허 출원에 개시되어 있다: 미국 특허 제6,808,710호; 미국 특허 제7,332,582호; 미국 특허 제7,488,802호; 미국 특허 제8,008,449호; 미국 특허 제8,114,845호; 미국 특허 제8,168,757호; 미국 특허 제8,354,509호; 미국 특허 제8,686,119호; 미국 특허 제8,735,553호; 미국 특허 제8,747,847호; 미국 특허 제8,779,105호; 미국 특허 제8,927,697; 미국 특허 제8,993,731호; 미국 특허 제9,102,727호; 미국 특허 제9,205,148호; 미국 특허 공개 제2013/0202623 A1호; 미국 특허 공개 제2013/0291136 A1호; 미국 특허 공개 제2014/0044738 A1호; 미국 특허 공개 제2014/0356363 A1호; 미국 특허 공개 제2016/0075783 A1호; 및 국제 특허 출원 공개 WO 2013/033091 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2015/036394 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2014/179664 A2; 국제 특허 출원 공개 WO 2014/209804 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2014/206107 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2015/058573 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2015/085847 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2015/200119 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2016/015685 A1; 및 국제 특허 출원 공개 WO 2016/020856 A1.
소정의 실시형태에서, 항-PD-L1 항체는 본 명세서에 기재된 방법에서 사용된다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-L1 항체는 제네테크(Genentech)에 의해 개발된 아테졸리주맙이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-L1 항체는 아스트라제네카(AstraZeneca), 셀진(Celgene) 및 메디뮨(Medimmune)에 의해 개발된 두루발루맙이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-L1 항체는 머크 세로노(Merck Serono) 및 화이자(Pfizer)에 의해 개발된 MSB0010718C로서도 알려진 아벨루맙이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-L1 항체는 브리스톨-마이어스 스큅에 의해 개발된 MDX-1105이다. 소정의 실시형태에서, 항-PD-L1 항체는 앰플리뮨(Amplimmune) 및 GSK에 의해 개발된 AMP-224이다.
본 명세서에 기재된 치료 방법에서 사용될 수 있는 항-PD-L1 항체의 비제한적 예는 모든 목적을 위해 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 다음의 특허 및 특허 출원에서 개시된다: 미국 특허 제7,943,743호; 미국 특허 제8,168,179호; 미국 특허 제8,217,149호; 미국 특허 제8,552,154호; 미국 특허 제8,779,108호; 미국 특허 제8,981,063호; 미국 특허 제9,175,082호; 미국 특허 공개 제2010/0203056 A1호; 미국 특허 공개 제2003/0232323 A1호; 미국 특허 공개 제2013/0323249 A1호; 미국 특허 공개 제2014/0341917 A1호; 미국 특허 공개 제2014/0044738 A1호; 미국 특허 공개 제2015/0203580 A1호; 미국 특허 공개 제2015/0225483 A1호; 미국 특허 공개 제2015/0346208 A1호; 미국 특허 공개 제2015/0355184 A1호; 및 국제 특허 출원 공개 WO 2014/100079 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2014/022758 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2014/055897 A2; 국제 특허 출원 공개 WO 2015/061668 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2015/109124 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2015/195163 A1; 국제 특허 출원 공개 WO 2016/000619 A1; 및 국제 특허 출원 공개 WO 2016/030350 A1.
소정의 실시형태에서, 항-LAG-3 항체는 본 명세서에 기재된 방법에서 사용된다. 소정의 실시형태에서, 항-LAG-3 항체는 브리스톨-마이어스 스큅에 의해 개발된 BMS-986016이다. 소정의 실시형태에서, 항-LAG-3 항체는 노바티스에 의해 개발된 LAG525이다. 소정의 실시형태에서, 항-LAG-3 항체는 GSK에 의해 개발된 GSK2831781이다.
본 발명에 기재된 치료 방법에서 사용될 수 있는 항-LAG-3 항체의 비제한적 예는 모든 목적을 위해 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 다음의 특허 및 특허 출원에서 개시된다: 미국 특허 제9,244,059호; 미국 특허 공개 제2011/0150892 A1호; 미국 특허 공개 제2014/0093511 A1호; 미국 특허 공개 제2014/0286935 A1호; 미국 특허 공개 제2015/0259420 A1호; 및 국제 특허 출원 공개 WO 2015/042246 A1호; 국제 특허 출원 공개 WO 2015/116539 A1호; 국제 특허 출원 공개 WO 2015/200119 A1호; 및 국제 특허 출원 공개 WO 2016/028672 A1호.
소정의 실시형태에서, 항-EGFR 항체는 본 명세서에 기재된 방법에서 사용된다. 소정의 실시형태에서, 항-EGFR 항체는 브리스톨-마이어스 스큅 및 임클론(ImClone)에 의해 개발된 세툭시맙, 압지닉스(Abgenix) 및 암젠(Amgen)에 의해 개발된 파니투무맙, CMI 쿠바(CMI Cuba) 및 YM 바이오사이언시즈(YM BioSciences)에 의해 개발된 니모투주맙, 임클론에 의해 개발된 네시투무맙, 겐맙(Genmab)에 의해 개발된 잘루투무맙, 타케다(Takeda)에 의해 개발된 마투주맙, 머크 세로노(Merck Serono) 및 심포겐(Symphogen)에 의해 개발된 Sym004, 글리카트(Glycart) 및 로슈(Roche)에 의해 개발된 이마투주맙, 제넨테크(Genentech) 및 로슈에 의해 개발된 둘리고투맙, 애보트(Abbott)에 의해 개발된 데파툭시주맙, 애브비(Abbvie)에 의해 개발된 데파툭시주맙 마포도틴, 아디맙(Adimab) 및 메리맥(Merrimack)에 의해 개발된 MM-151, 그린 크로스(Green Cross)에 의해 개발된 GC1118, 암젠 및 이뮤노겐에 의해 개발된 AMG 595, 글리코토프(Glycotope)에 의해 개발된 CetuGEX, 이뮤노겐에 의해 개발된 라프리툭시맙 엠탄신, 겐맙(Genmab) 및 잔센 바이오테크(Janssen Biotech)에 의해 개발된 JNJ-61186372, 시노셀테크(Sinocelltech)에 의해 개발된 SCT200, 릴리(Lilly)에 의해 개발된 LY3164530, 상하이 헨리우스(Henlius)에 의해 개발된 HLX07 또는 시너모어(Synermore)에 의해 개발된 SYN004.
소정의 실시형태에서, 항-HER2 항체는 본 명세서에 기재된 방법에서 사용된다. 소정의 실시형태에서, 항-HER2 항체는 제넨테크 및 로슈에 의해 개발된 트라스투주맙, 제넨테크 및 로슈에 의해 개발된 트라스투주맙 엠탄신, 제넨테크에 의해 개발된 퍼투주맙, 프레세니우스에 의해 개발된 에르투막소맙, 마크로게닉스(MacroGenics)에 의해 개발된 마르게툭시맙, 메리맥(Merrimack)에 의해 개발된 MM-111, 셀트리온(Celltrion)에 의해 개발된 CT-P06, 화이자에 의해 개발된 PF-05280014, 메리맥에 의해 개발된 MM-302, 머크 앤드 컴퍼니에 의해 개발된 SB3, 상하이 CP 구오지안(Shanghai CP Guojian)에 의해 개발된 CMAB302, 글리코토프(Glycotope)에 의해 개발된 TrasGEX, 암브렉스(Ambrx) 및 저장 메디신(Zhejiang Medicine)에 의해 개발된 ARX788, 신톤(Synthon)에 의해 개발된 SYD985, 브리스톨-마이어스 스큅 및 f-스타(f-star)에 의해 개발된 FS102, 바이오캐드(Biocad)에 의해 개발된 BCD-022, 암젠에 의해 개발된 ABP 980, 다이이치 산쿄(Daiichi Sankyo)에 의해 개발된 DS-8201a, 상하이 헨리우스(Shanghai Henlius)에 의해 개발된 HLX02 또는 바이오콘(Biocon) 및 마일란(Mylan)에 의해 개발된 CANMAb이다.
본 명세서에 기재된 항체 또는 약제학적 조성물은 다양한 경로에 의해 대상체에게 전달될 수 있다. 이들은 비경구, 비강내, 기관내, 경구, 진피내, 국소, 근육내, 복강내, 경피, 정맥내, 종양내, 결막 및 피하 경로를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 예를 들어, 흡입기 또는 네뷸라이저의 사용 및 스프레이로서 사용하기 위한 에어로졸화제를 이용하는 제형에 의한 폐 투여가 또한 사용될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 약제학적 조성물은 피하로 또는 정맥내로 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내로 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양 배수 림프절에 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 약제학적 조성물은 국소화된 투여(예를 들어, 피하 투여)를 통해 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 전신으로 전달된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 국소로 전달된다.
일 양상에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물, 및 선택적으로 추가적인 치료제에 관한 것이되, 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물은 대상체에게 종양내로 전달되고, 대상체의 종양 배수 림프절에 전달되거나, 또는 대상체에게 국소화된 투여(예를 들어, 피하 투여)를 통해 전달된다.
병태의 치료 및/또는 예방에서 유효한 항체 또는 조성물의 양은 질환의 특성에 의존할 것이며, 표준 임상 기법에 의해 결정될 수 있다.
조성물 중에서 사용될 정확한 용량은 또한 투여 경로, 감염의 중증도 또는 그에 의해 야기되는 질환에 의존할 것이며, 실행자의 판단 및 각각의 대상체의 환경에 따라 결정되어야 한다. 예를 들어, 유효 용량은 또한 투여 수단, 표적 부위, 환자의 생리적 상태(연령, 체중 및 건강 상태를 포함), 환자가 인간인지 또는 동물인지의 여무, 투여되는 다른 의약 또는 치료가 예방적인지 또는 치료적인지의 여부에 따라 다를 수 있다. 보통, 환자는 인간이지만, 유전자이식 포유류를 포함하는 비인간 포유류가 또한 치료될 수 있다. 치료 투약량은 안전성 및 효능을 최적화하도록 최적으로 적정된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 6㎎/㎏, 10㎎/㎏, 약 0.1㎎/㎏, 약 0.3㎎/㎏, 약 1㎎/㎏, 약 3㎎/㎏, 약 6㎎/㎏ 또는 약 10㎎/㎏으로 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 매주, 2주마다, 3주마다, 4주마다, 6주마다, 8주마다, 12주마다, 매달, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다, 5개월마다, 6개월마다, 8개월마다 및 매년, 예를 들어, 상기 기재된 용량으로 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 3주마다 상기 기재된 용량으로 대상체에게 투여된다.
일 양상에서, 본 발명은 암 치료를 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물, 및 선택적으로 추가적인 치료제에 관한 것이되, 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물은 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 6㎎/㎏, 10㎎/㎏, 약 0.1㎎/㎏, 약 0.3㎎/㎏, 약 1㎎/㎏, 약 3㎎/㎏, 약 6㎎/㎏ 또는 약 10㎎/㎏, 더 바람직하게는 2주마다, 3주마다, 4주마다, 6주마다 또는 12주마다 대상체에게 투여된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 0.1㎎/㎏으로 2주마다, 3주마다, 4주마다, 6주마다 또는 12주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 0.3㎎/㎏으로 2주마다, 3주마다, 4주마다, 6주마다 또는 12주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 1㎎/㎏으로 2주마다, 3주마다, 4주마다, 6주마다 또는 12주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 3㎎/㎏으로 2주마다, 3주마다, 4주마다, 6주마다 또는 12주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 6㎎/㎏으로 2주마다, 3주마다, 4주마다, 6주마다 또는 12주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 10㎎/㎏으로 2주마다, 3주마다, 4주마다, 6주마다 또는 12주마다 대상체에게 투여된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 0.1㎎/㎏ 또는 약 0.1㎎/㎏으로 3주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 0.3㎎/㎏ 또는 약 0.3㎎/㎏으로 3주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 1㎎/㎏ 또는 약 1㎎/㎏으로 3주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 3㎎/㎏ 또는 약 3㎎/㎏으로 3주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 6㎎/㎏ 또는 약 6㎎/㎏으로 3주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 (예를 들어, 정맥내 주사를 통해) 10㎎/㎏ 또는 약 10㎎/㎏으로 3주마다 대상체에게 투여된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내 주사를 통해 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 약 0.01㎎/㎏, 약 0.03㎎/㎏, 약 0.1㎎/㎏, 약 0.3㎎/㎏, 약 1㎎/㎏ 또는 약 3㎎/㎏으로 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내 주사를 통해 매주, 2주마다, 3주마다, 4주마다, 6주마다, 8주마다, 12주마다, 매달, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다, 5개월마다, 6개월마다, 8개월마다 및 매년, 예를 들어, 상기 기재된 용량으로 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 종양내 주사를 통해 3주마다 상기 기재된 용량으로 투여된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내 주사를 통해 0.01㎎/㎏ 또는 약 0.01㎎/㎏으로 3주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내 주사를 통해 0.03㎎/㎏ 또는 약 0.03㎎/㎏으로 3주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내 주사를 통해 0.1㎎/㎏ 또는 약 0.1㎎/㎏으로 대상체에게 3주마다 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내 주사를 통해 0.3㎎/㎏ 또는 약 0.3㎎/㎏으로 3주마다 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내 주사를 통해 1㎎/㎏ 또는 약 1㎎/㎏으로 3주마다 대상체에 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 종양내 주사를 통해 3㎎/㎏ 또는 약 3㎎/㎏으로 대상체에게 3주마다 투여된다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 국소화된 투여를 통해 (예를 들어, 피하 투여) 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 약 0.01㎎/㎏, 약 0.03㎎/㎏, 약 0.1㎎/㎏, 약 0.3㎎/㎏, 약 1㎎/㎏ 또는 약 3㎎/㎏으로 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물은 국소화된 투여를 통해 (예를 들어, 피하 투여) 매주, 2주마다, 3주마다, 4주마다, 6주마다, 8주마다, 12주마다, 매달, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다, 5개월마다, 6개월마다, 8개월마다 및 매년, 예를 들어, 상기 기재된 용량으로 대상체에게 투여된다.
소정의 실시형태에서, 치료적 조합물은 적어도 3, 6, 9, 12, 18 또는 24개월 동안 대상체에게 투여된다. 소정의 실시형태에서, 치료적 조합물은 3, 6, 9, 12, 18 또는 24개월까지 동안 대상체에게 투여된다.
소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 혈관육종을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 (예를 들어, 정맥내로, 종양내로 또는 피하로) 유효량의 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 혈관육종을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 정맥내로 0.01㎎/㎏, 0.03㎎/㎏, 0.1㎎/㎏, 0.3㎎/㎏, 1㎎/㎏, 3㎎/㎏, 약 0.01㎎/㎏, 약 0.03㎎/㎏, 약 0.1㎎/㎏, 약 0.3㎎/㎏, 약 1㎎/㎏ 또는 약 3㎎/㎏으로, 선택적으로 1, 2 또는 3주마다 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 본 개시내용은 혈관육종을 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 대상체에게 정맥내로 0.1㎎/㎏으로 3주마다 1회 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 23의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 25의 아미노산을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 소정의 실시형태에서, 항체는 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체는 또한 면역분석, 예컨대 효소 결합 면역흡착 분석(ELISA), 면역침전법 또는 웨스턴 블롯팅을 포함하는 당업자에게 공지된 고전적 면역조직학적 방법을 이용하여 생물학적 샘플 중의 CTLA-4 단백질 수준을 분석하기 위해 사용될 수 있다. 적합한 항체 분석 표지는 당업계에 공지되어 있고, 효소 표지, 예컨대, 글루코스 옥시다제; 방사성 동위 원소, 예컨대 아이오딘(125I, 121I), 탄소(14C), 황(35S), 삼중수소(3H), 인듐(121In) 및 테크네튬(99Tc); 발광 표지, 예컨대 루미놀; 및 형광 표지, 예컨대 플루오레세인 및 로다민 및 바이오틴을 포함한다. 이러한 표지는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 표지하기 위해 사용될 수 있다. 대안적으로, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인식하는 제2 항체가 표지될 수 있고, CTLA-4 단백질 수준을 검출하기 위해 항-CTLA-4 항체 또는 항원-결합 단편과 조합하여 사용될 수 있다. 일 실시형태에서, 본 발명은 시험관내 생물학적 샘플 내 CTLA-4 단백질 수준을 분석하고/하거나 검출하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체의 용도에 관한 것이다.
CTLA-4 단백질의 발현 수준에 대해 분석하는 것은 직접적으로(예를 들어, 절대 단백질 수준을 결정하거나 또는 추정함으로써) 또는 상대적으로(예를 들어, 제2 생물학적 샘플 중의 질환 연관 단백질 수준에 비교함으로써) 제1 생물학적 샘플 중의 CTLA-4 단백질을 정성적으로 또는 정성적으로 측정하거나 또는 추정하는 것을 포함하도록 의도된다. 제1 생물학적 샘플 중의 CTLA-4 폴리펩타이드 발현 수준은 측정 또는 추정되고, 표준 CTLA-4 단백질 수준에 비교될 수 있으며, 표준은 장애를 갖지 않는 개체로부터 얻은 제2 생물학적 샘플로부터 취하거나 또는 장애를 갖지 않는 개체의 집단으로부터의 수준을 평균냄으로써 결정된다. 당업자에 의해 인식될 바와 같이, 일단 "표준" CTLA-4 펩타이드 수준이 알려진다면, 이는 비교를 위한 표준으로서 반복적으로 사용될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "생물학적 샘플"은 대상체, 세포주, 조직 또는 CTLA-4를 잠재적으로 발현시키는 세포의 다른 공급원으로부터 얻은 임의의 생물학적 샘플을 지칭한다. 동물(예를 들어, 인간)로부터 조직 생검 및 체액을 얻기 위한 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 생물학적 샘플은 말초 단핵구 혈액 세포를 포함한다.
본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당업자에게 잘 공지되고 표준이며 본 설명에 기반한 시험관내 및 생체내 적용을 포함하는, 예후적, 진단적, 모니터링 및 선별을 위해 사용될 수 있다. 면역계 상태 및/또는 면역 반응의 시험관내 평가 및 사정을 위한 예후적, 진단적, 모니터링 및 선별 분석 및 키트는 면역계 장애를 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 것으로 알려진 환자를 포함하는 환자 샘플을 평가하기 위해 또는 또는 예상되거나 또는 요망되는 면역계 반응, 항원 반응 또는 백신 반응에 관해 예측, 진단 및 모니터링하는 데 이용될 수 있다. 면역계 상태 및/또는 면역 반응의 평가 및 사정은 또한 약물의 임상 시험을 위해 또는 상이한 제제 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 대해, 특정 화학치료제 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편(이들의 조합을 포함)의 투여를 위해 환자의 적합성을 결정하는 데 유용하다. 이 유형의 예후적 및 진단적 모니터링 및 평가는 이미 사실상 유방암(허셉테스트(HercepTest)(상표명), 다코(Dako))에서 HER2 단백질에 대해 항체를 이용 중이며, 상기 분석은 허셉틴(Herceptin)(등록상표)을 이용하여 항체 요법에 대해 환자를 평가하는 데 사용된다. 생체내 적용은 지시된 세포 요법 및 면역계 조절 및 면역 반응의 방사선 영상화를 포함한다.
일 양상에서, 본 발명은 진단제로서 사용하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일 양상에서, 본 발명은 면역계-기능장애 및/또는 암의 예측, 진단 및/또는 모니터링을 위한 방법에서 사용하기 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체 및/또는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
일 실시형태에서, 본 발명은 시험관내 대상체의 생물학적 샘플에서 CTLA-4 단백질 수준을 분석 및/또는 검출함으로써 대상체에서 면역계-기능장애 및/또는 암의 예측, 진단 및/또는 모니터링을 위한 본 발명의 항-CTLA-4 항체의 용도에 관한 것이다.
일 실시형태에서, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 생검 샘플의 면역조직화학에서 사용될 수 있다. 다른 실시형태에서, 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CTLA-4의 수준, 또는 막 표면 상에 CTLA-4를 함유하는 세포의 수준을 검출하기 위해 사용될 수 있으며, 이의 수준은 이어서, 특정 질환 증상과 관련될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 검출 가능한 또는 기능성 표지를 운반할 수 있다. 형광 표지가 사용될 때, 현재 이용 가능한 현미경 및 형광-활성화 세포 분류 분석(FACS) 또는 당업계에 공지된 방법 절차 둘 다의 조합이 특정 결합 구성원을 동정하기 위해 그리고 정량화하기 의해 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 형광 표지를 운반할 수 있다. 예시적인 형광 표지는, 예를 들어, 반응성 및 접합된 프로브, 예를 들어, 아미노쿠마린, 플루오레세인 및 텍사스 레드(Texas red), 알렉사 플루오르 염료, Cy 염료 및 DyLight 염료를 포함한다. 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 방사성 표지, 예컨대 동위원소 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 67Cu, 90Y, 99Tc, 111In, 117Lu, 121I, 124I, 125I, 131I, 198Au, 211At, 213Bi, 225Ac 및 186Re를 운반할 수 있다. 방사성 표지가 사용될 때, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 대한 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 특이적 결합을 동정하고 정량화하기 위해 당업계에 공지된 현재 이용 가능한 계수 절차가 이용될 수 있다. 표지가 효소인 예에서, 검출은 당업계에 공지된 바와 같은 임의의 현재 이용되는 표색, 분광광도적, 형광분광광도적, 전류측정 또는 가스분석 기법에 의해 달성될 수 있다. 이는 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 CTLA-4 사이의 복합체의 형성을 허용하는 조건 하에서 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 샘플 또는 대조군 샘플을 접촉시킴으로써 달성될 수 있다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 CTLA-4 사이에 형성된 임의의 복합체는 검출되며, 샘플 및 대조군에서 비교된다. CTLA-4에 대한 본 명세서에 기재된 항체의 특이적 결합에 비추어, 세포 표면 상에서 CTLA-4 발현을 특이적으로 검출하기 위해 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 사용될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 또한 면역친화도 정제를 통해 CTLA-4를 정제하는 데 사용될 수 있다. 또한, 예를 들어, CTLA-4 또는 CTLA-4/CTLA-4 리간드 복합체의 존재 정도의 정량적 분석을 위해 검사 키트의 형태로 제조될 수 있는 분석 시스템이 본 명세서에 포함된다. 시스템 또는 검사 키트는 표지된 성분, 예를 들어, 표지된 항체 및 1종 이상의 추가적인 면역화학적 시약을 포함할 수 있다.
일 실시형태에서, 본 발명은 (1) 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 CTLA-4 사이의 복합체 형성을 허용하는 조건 하에서 본 발명의 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 샘플 및 선택적으로 대조군 샘플을 접촉시키는 단계, 및 (2) 샘플 및 선택적으로 대조군으로부터 형성된 복합체를 검출하고 비교하는 단계를 포함하는, 생물학적 샘플 내 CTLA-4 단백질 수준을 분석하고/하거나 검출하기 위한 시험관내 방법에 관한 것이다.
6.5 항-CTLA-4 항체를 생산하는 폴리뉴클레오타이드, 벡터 및 방법
다른 양상에서, 본 명세서에서 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4) 항원 및 벡터, 예를 들어, 숙주 세포(예를 들어, 이콜라이(E. coli) 및 포유류 세포)에서 재조합 발현을 위해 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 단편(예를 들어, 경쇄 가변 영역 및/또는 중쇄 가변 영역)을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 본 명세서에서 본 명세서에 제공된 임의의 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드뿐만 아니라 이러한 폴리뉴클레오타이드 서열을 포함하는 벡터, 예를 들어 숙주 세포, 예를 들어, 포유류 세포에서 그들의 효율적인 발현을 위한 발현 벡터를 포함하는 벡터가 제공된다.
본 명세서에서 사용되는, "단리된" 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산 분자는 핵산 분자의 천연 공급원에(예를 들어, 마우스 또는 인간에) 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리된 것이다. 게다가, "단리된" 핵산 분자, 예컨대 cDNA 분자는 재조합 기법에 의해 생산될 때 다른 세포 물질 또는 배양물 배지가 실질적으로 없거나, 또는 화학적으로 합성될 때 화학물질 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없을 수 있다. 예를 들어, 언어 "실질적으로 없는"은 약 15%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1%의 (특히 약 10% 미만) 다른 물질, 예를 들어, 세포 물질, 배양 배지, 다른 핵산 분자, 화학물질 전구체 및/또는 다른 화학물질을 갖는 폴리뉴클레오타이드 또는 핵산 분자의 제제를 포함한다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체를 암호화하는 핵산 분자(들)는 단리되거나 또는 정제된다.
특정 양상에서, 본 명세서에서, CTLA-4 폴리펩타이드(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하고 본 명세서에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 암호화하는 뉴클레오타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드뿐만 아니라 CTLA-4 폴리펩타이드에 결합을 위해 (예를 들어, 용량-의존적 방식으로) 이러한 항체와 경쟁하거나, 또는 이러한 항체와 동일한 에피트프에 결합하는 항체가 제공된다.
소정의 양상에서, 본 명세서에 기재된 항체의 경쇄 또는 중쇄를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 폴리뉴클레오타이드는 본 명세서에 기재된 항체의 VL FR 및 CDR을 포함하는 경쇄를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다(예를 들어, 표 1 참조).
또한 본 명세서에서, 예를 들어, 코돈/RNA 최적화, 이종성 신호 서열로 대체 및 mRNA 불안정 요소의 제거에 의해 최적화되는 항-CTLA-4 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 코돈 변화를 도입하고/하거나 mRNA 내 저해 영역을 제거함으로써 재조합 발현을 위해 항-CTLA-4 항체 또는 이의 단편(예를 들어, 경쇄, 중쇄, VH 도메인 또는 VL 도메인)을 암호화하는 최적화된 핵산을 생성하는 방법은, 예를 들어, 미국 특허 제5,965,726호; 제6,174,666호; 제6,291,664호; 제6,414,132호; 및 제6,794,498호에 기재된 최적화 방법을 적용함으로써 수행될 수 있고, 따라서, 이들 모두는 그들의 전문이 본 명세서에 참고로 편입된다. 예를 들어, RNA 내의 잠재적 스플라이스 부위 및 불안정 요소(예를 들어, A/T 또는 A/U 풍부 요소)는 재조합 발현을 위해 RNA의 안정성을 증가시키기 위해 핵산 서열에 의해 암호화된 아미노산을 변경하는 일 없이 돌연변이될 수 있다. 변경은, 예를 들어, 동일한 아미노산에 대해 대안의 코돈을 이용하여, 유전자 암호의 축퇴를 이용한다. 일부 실시형태에서, 보존적 돌연변이, 예를 들어, 본래의 아미노산과 유사한 화학적 구조 및 특성 및/또는 기능을 갖는 유사한 아미노산을 암호화하기 위해 하나 이상의 코돈을 변경하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 방법은 최적화되지 않은 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 항-CTLA-4 항체의 발현에 비해 적어도 1배, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배, 30배, 40배, 50배, 60배, 70배, 80배, 90배 또는 100배 이상만큼 항-CTLA-4 항체 또는 이의 단편의 발현을 증가시킬 수 있다.
소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 단편(예를 들어, VL 도메인 및/또는 VH 도메인)을 암호화하는 최적화된 폴리뉴클레오타이드 서열은 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 단편(예를 들어, VL 도메인 및/또는 VH 도메인)을 암호화하는 비최적화된 폴리뉴클레오타이드 서열의 안티센스(예를 들서, 상보성) 폴리뉴클레오타이드에 혼성화할 수 있다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 단편을 암호화하는 최적화된 뉴클레오타이드 서열은 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 비최적화된 폴리뉴클레오타이드 서열의 안티센스 폴리뉴클레오타이드에 대해 높은 엄중 조건 하에 혼성화한다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 최적화된 뉴클레오타이드 서열은 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 비최적화된 뉴클레오타이드 서열의 안티센스 폴리뉴클레오타이드에 대해 높은 엄중, 중간 또는 낮은 엄중 혼성화 조건 하에 혼성화한다. 혼성화 조건에 관한 정보는 기재되어 있으며, 예를 들어, 본 명세서에 참고로 편입된 미국 특허 출원 공개 제2005/0048549호(예를 들어, 단락 72 내지 73)를 참고한다.
폴리뉴클레오타이드가 얻어질 수 있으며, 폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열은 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해 결정된다. 본 명세서에 기재된 항체, 예를 들어, 표 1에 기재된 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 및 이들 항체의 변형된 형태는 당업계에 잘 공지된 방법을 이용하여 결정될 수 있으며, 즉, 특정 아미노산을 암호화하는 것으로 알려진 뉴클레오타이드 코돈은 항체를 암호화하는 핵산을 생성하기 위해 이러한 방법으로 조립된다. 항체를 암호화하는 이러한 폴리뉴클레오타이드는 화학적으로 합성된 올리고뉴클레오타이드로부터 조립될 수 있으며(예를 들어, 전문이 참고로 편입된 문헌[Kutmeier G et al., (1994), BioTechniques 17: 242-6]에 기재된 바와 같음), 이는 간략하게, 항체를 암호화하는 서열의 부분을 함유하는 중복 올리고뉴클레오타이드의 합성, 해당 올리고뉴클레오타이드의 어닐링 및 결찰, 및 이어서, 결찰된 올리고뉴클레오타이드의 PCR에 의한 증폭을 수반한다.
대안적으로, 본 명세서에 기재된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 당업계에 잘 공지된 방법(예를 들어, PCR 및 기타 분자 클로닝 방법)을 이용하여 적합한 공급원(예를 들어, 하이브리도마)로부터의 핵산으로부터 생성될 수 있다. 예를 들어, 공지된 서열의 3' 및 5' 말단에 혼성화 가능한 합성 프라이머를 이용하는 PCR 증폭은 관심 대상의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포로부터 얻어진 게놈 DNA를 이용하여 수행될 수 있다. 이러한 PCR 증폭 방법은 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 암호화하는 서열을 포함하는 핵산을 얻기 위해 사용될 수 있다. 이러한 PCR 증폭 방법은 항체의 가변 경쇄 영역 및/또는 가변 중쇄 영역을 암호화하는 서열을 포함하는 핵산을 얻기 위해 사용될 수 있다. 증폭된 핵산은 숙주 세포에서의 발현을 위해 그리고 추가적인 클로닝을 위해, 예를 들어 키메라 및 인간화된 항체를 생성하기 위해 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
특정 항체를 암호화하는 핵산을 함유하는 클론이 이용 가능하지 않지만, 항체 분자의 서열이 공지되어 있다면, 면역글로불린을 암호화하는 핵산은 서열의 3' 및 5' 말단에 혼성화 가능한 합성 프라이머를 이용하는 PCR 증폭에 의해 또는, 예를 들어, 항체를 암호화하는 cDNA 라이브러리로부터의 cDNA 클론을 동정하기 위해 특정 유전자 서열에 특이적인 올리고뉴클레오타이드 프로브를 클로닝함으로써, 적합한 공급원(예를 들어, 항체 cDNA 라이브러리, 또는 항체를 발현시키는 임의의 조직 또는 세포, 예컨대 본 명세서에 기재된 항체를 발현시키도록 선택된 하이브리도마 세포로부터 생성된 cDNA 라이브러리 또는 이들로부터 단리된 핵산, 바람직하게는 폴리 A+ RNA)으로부터 화학적으로 합성되거나 또는 얻어질 수 있다. 이어서, PCR에 의해 생성된 증폭된 핵산은 당업계에 잘 공지된 임의의 방법을 이용하여 복제 가능한 클로닝 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체를 암호화하는 DNA는 통상적인 절차를 이용하여(예를 들어, 항-CTLA-4 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 이용함으로써) 용이하게 단리되고 서열분석될 수 있다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 공급원으로서 작용할 수 있다. 일단 단리되면, DNA는 그 다음에 재조합 숙주 세포에서 항-CTLA-4 항체의 합성을 얻기 위해 숙주 세포, 예컨대 이콜라이 세포, 유인원 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포(예를 들어, CHO GS 시스템(CHO GS System)(상표명)(론자(Lonza))으로부터의 CHO 세포) 또는 면역글로불린 단백질을 달리 생산하지 않는 골수종 세포 내로 형질감염되는, 발현 벡터 내로 위치될 수 있다.
전체 항체를 생성하기 위해, VH 또는 VL 뉴클레오타이드 서열, 제한 부위 및 제한 부위를 보호하는 측접 서열을 포함하는 PCR 프라이머는 scFv 클론 내 VH 또는 VL 서열을 증폭시키기 위해 사용될 수 있다. 당업자에게 공지된 클로닝 기법을 이용하여, PCR 증폭된 VH 도메인은 중쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 감마 4 불변 영역을 발현시키는 벡터 내로 클로닝될 수 있고, PCR 증폭된 VL 도메인은 경쇄 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 또는 람다 불변 영역을 발현시키는 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 소정의 실시형태에서, VH 또는 VL 도메인을 발현시키기 위한 벡터는 EF-1α 프로모터, 분비 신호, 가변 영역에 대한 클로닝 부위, 불변 도메인, 및 선택 마커, 예컨대 네오마이신을 포함한다. VH 및 VL 도메인은은 필수 불변 영역을 발현시키는 하나의 벡터는 필수 불변 영역을 발현시키는 하나의 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 이어서, 중쇄 전환 벡터 및 경쇄 전환 벡터는 당업자에게 공지된 방법을 이용하여 전장 항체, 예를 들어, IgG를 발현시키는 안정한 또는 일시적 세포주를 생성하도록 세포주내로 공동형질감염된다.
DNA는 또한, 예를 들어, 뮤린 서열 대신에 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 암호 서열을 치환함으로써, 또는 비-면역글로불린 펩타이드에 대한 암호 서열의 모두 또는 일부를 면역글로불린 암호 서열에 공유결합시킴으로써 변형될 수 있다.
또한 본 명세서에 기재된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 대해 높은 엄중, 중간 또는 낮은 엄중 혼성화 조건 하에 혼성화하는 폴리뉴클레오타이드가 제공된다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 폴리뉴클레오타이드는 본 명세서에 제공된 VH 도메인 및/또는 VL 도메인을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 대해 높은 엄중, 중간 또는 낮은 엄중 혼성화 조건 하에 혼성화한다.
혼성화 조건은 당업계에 기재되었고, 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 엄중 조건 하의 혼성화는 약 45℃에서 6x 염화나트륨/시트르산나트륨(SSC) 중의 필터-결합된 DNA에 대한 혼성화 다음에 약 50 내지 65℃에서 0.2xSSC/0.1% SDS 중에서 1회 이상의 세척을 수반할 수 있으며; 고도로 엄중 조건 하의 혼성화는 약 45℃에서 6xSSC 중의 필터-결합된 핵산에 대한 혼성화 다음에 약 68℃에서 0.1xSSC/0.2% SDS 중의 1회 이상의 세척을 수반할 수 있다. 다른 엄중 혼성화 조건 하의 혼성화는 당업자에게 공지되어 있고, 기재되어 있으며, 예를 들어, 전문이 참고로 편입된 문헌[Ausubel FM et al., eds., (1989) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. 및 John Wiley & Sons, Inc., New York, 페이지 6.3.1-6.3.6 및 2.10.3]을 참조한다.
소정의 양상에서, 본 명세서에서 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4), 및 관련된 폴리뉴클레오타이드 및 발현 벡터에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체(또는 이의 항원-결합 단편)를 (예를 들어, 재조합적으로) 발현시키는 세포(예를 들어, 숙주 세포)가 제공된다. 본 명세서에서 숙주 세포에서, 바람직하게는 포유류 세포에서 재조합 발현을 위해 항-CTLA-4 항체 또는 단편을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터(예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 또한 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체(예를 들어, 인간 또는 인간화된 항체)를 재조합적으로 발현시키기 위해 이러한 벡터를 포함하는 숙주 세포가 본 명세서에서 제공된다. 특정 양상에서, 본 명세서에서 숙주 세포로부터 이러한 항체를 발현시키는 단계를 포함하는 본 명세서에 기재된 항체를 생산하는 방법이 제공된다.
CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체(예를 들어, 전장 항체, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 또는 단일쇄 본 명세서에 기재된 항체)의 재조합 발현은 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 발현 벡터의 작제를 수반한다. 일단 본 명세서에 기재된 항체 분자, 항체의 중쇄 및/또는 경쇄, 또는 이의 단편(예를 들어, 중쇄 및/또는 경쇄 가변 영역)을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드가 얻어졌다면, 항체 분자의 생산을 위한 벡터는 당업계에 잘 공지된 기법을 이용하여 재조합 DNA 기법에 의해 생산될 수 있다. 따라서, 뉴클레오타이드 서열을 암호화하는 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 경쇄 또는 중쇄)을 함유하는 폴리뉴클레오타이드를 발현시킴으로써 단백질을 제조하는 방법이 본 명세서에 기재된다. 당업자에게 잘 공지된 방법은 항체 또는 항체 단편(예를 들어, 경쇄 또는 중쇄) 암호 서열 및 적절한 전사 및 번역 제어 신호를 함유하는 발현 벡터를 작제하는데 사용될 수 있다. 이들 방법은, 예를 들어, 시험관내 재조합 DNA 기법, 합성 기법 및 생체내 유전자 재조합을 포함한다. 또한 프로모터에 작동 가능하게 연결된 본 명세서에 기재된 항체 분자, 항체의 중쇄 또는 경쇄, 항체 또는 이의 단편의 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 또는 중쇄 또는 경쇄 CDR을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 복제 가능한 벡터가 제공된다. 이러한 벡터는, 예를 들어, 항체 분자의 불변 영역을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있고(예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 국제 특허 출원 공개 WO 86/05807 및 WO 89/01036; 및 미국 특허 제5,122,464호 참조) 항체의 가변 영역은 전체 중쇄, 전체 경쇄, 또는 전체 중쇄와 경쇄 둘 다의 발현을 위해 이러한 벡터 내로 클로닝될 수 있다.
발현 벡터는 통상적인 기법에 의해 세포(예를 들어, 숙주 세포)에 전달될 수 있고, 이어서, 얻어진 세포는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 단편을 생산하기 위해 통상적인 기법에 의해 배양될 수 있다. 따라서, 본 명세서에서 숙주 세포에서 이러한 서열의 발현을 위해 프로모터에 작동 가능하게 연결된 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 단편, 또는 이의 중쇄 또는 경쇄, 또는 이들의 단편, 또는 단일쇄 본 명세서에 기재된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 함유하는 숙주 세포가 제공된다. 소정의 실시형태에서, 이중쇄 항체의 발현을 위해, 중쇄와 경쇄를 둘 다 암호화하는 벡터는 개별적으로 이하에 상술하는 바와 같이 전체 면역글로불린 분자의 발현을 위해 숙주 세포에서 공동발현될 수 있다. 소정의 실시형태에서, 숙주 세포는 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄와 경쇄를 둘 다 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 단편을 포함하는 벡터를 함유한다. 구체적 실시형태에서, 숙주 세포는 두 상이한 벡터, 즉, 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 또는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 단편을 포함하는 제1 벡터, 및 본 명세서에 기재된 항체의 경쇄 또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 단편을 포함하는 제2 벡터를 함유한다. 다른 실시형태에서, 제1 숙주 세포는 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄 또는 중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 단편을 포함하는 제1 벡터를 포함하고, 제2 숙주 세포는 본 명세서에 기재된 항체의 경쇄 또는 경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 단편을 포함하는 제2 벡터를 포함한다. 구체적 실시형태에서, 중쇄/중쇄 가변 영역은 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 형성하기 위해 제2 세포의 경쇄/경쇄 가변 영역과 회합된 제1 세포에 의해 발현된다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에서 이러한 제1 숙주 세포 및 이러한 제2 숙주 세포를 포함하는 숙주 세포의 집단이 제공된다.
특정 실시형태에서, 본 명세서에서 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체의 경쇄/경쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 제1 벡터, 및 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체의 중쇄/중쇄 가변 영역을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 제2 벡터를 포함하는 벡터 집단이 제공된다.
다양한 숙주-발현 벡터 시스템은 본 명세서에 기재된 항체 분자를 발현시키는 데 이용될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,807,715호 참조). 이러한 숙주-발현 시스템은 관심 대상의 암호 서열이 생산되고, 후속적으로 정제될 수 있는 비히클을 나타내지만, 또한 적절한 뉴클레오타이드 암호 서열로 형질전환 또는 형질감염될 때, 인시추로 본 명세서에 기재된 항체 분자를 발현시킬 수 있는 세포를 나타낸다. 이들은 항체 암호 서열을 함유하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 미생물, 예컨대 박테리아(예를 들어, 이콜라이 및 바실러스 서브틸리스(B. subtilis)); 항체 암호 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모(예를 들어, 사카로마이세스 피키아(Saccharomyces Pichia)); 항체 암호 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 바큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 콜리플라워 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 감염된 또는 항체 암호 서열을 함유하는 재조합 플라스미드 발현 벡터(예를 들어, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템(예를 들어, 녹조류, 예컨대 클라미도모나스 레인하르티(Chlamydomonas reinhardtii)); 또는 포유류 세포의 게놈으로부터 유래된 프로모터(예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유류 바이러스로부터 유래된 프로모터(예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터; 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터)를 함유하는 재조합 발현 작제물을 보유하는 포유류 세포 시스템(예를 들어, COS(예를 들어, COS1 또는 COS), CHO, BHK, MDCK, HEK 293, NS0, PER.C6, VERO, CRL7O3O, HsS78Bst, HeLa, 및 NIH 3T3, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20 및 BMT10 세포)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키기 위한 세포는 CHO 세포, 예를 들어, CHO GS 시스템(상표명)(론자)로부터의 CHO 세포이다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체를 발현시키는 세포는 인간 세포, 예를 들어, 인간 세포주이다. 구체적 실시형태에서, 포유류 발현 벡터는 pOptiVEC(상표명) 또는 pcDNA3.3이다. 특정 실시형태에서, 특히 전체 재조합 항체 분자의 발현을 위한 박테리아 세포, 예컨대 에스케리키아 콜라이 또는 진핵 세포(예를 들어, 포유류 세포)는 재조합 항체 분자의 발현을 위해 사용된다. 예를 들어, 인간 거대세포바이러스로부터의 주요 급초기 유전자 프로모터 요소와 같은 벡터와 함께 포유류 세포, 예컨대 중국 햄스터 난소(CHO) 세포는 항체에 대한 효과적인 발현 시스템이다(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Foecking MK & Hofstetter H (1986) Gene 45: 101-5; 및 Cockett MI et al., (1990) Biotechnology 8(7): 662-7]). 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 CHO 세포 또는 NS0 세포에 의해 생산된다. 구체적 실시형태에서, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 본 명세서에 기재된 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 발현은 구성적 프로모터, 유도성 프로모터 또는 조직 특이적 프로모터에 의해 조절된다.
박테리아 시스템에서, 다수의 발현 벡터는 발현 중인 항체 분자에 대해 의도되는 용도에 따라 유리하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 다량의 이러한 항체가 생산될 때에, 항체 분자의 약제학적 조성물의 생성을 위해, 용이하게 정제되는 고수준의 융합 단백질 산물의 발현을 지시하는 벡터가 바람직할 수 있다. 이러한 벡터는 이콜라이 발현 벡터 pUR278(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Ruether U & Mueller-Hill B (1983) EMBO J 2: 1791-1794])(이때 항체 암호 서열은 융합 단백질이 생산되도록 lac Z 암호 영역과 틀 내에서 벡터 내로 개개로 결찰될 수 있음); pIN 벡터(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Inouye S & Inouye M (1985) Nuc Acids Res 13: 3101-3109; Van Heeke G & Schuster SM (1989) J Biol Chem 24: 5503-5509]); 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 예를 들어, pGEX 벡터는 또한 글루타티온 5-트랜스퍼라제(GST)와의 융합 단백질로서 외래 폴리펩타이드를 발현시키기 위해 사용될 수 있다. 일반적으로, 이러한 융합 단백질은 가용성이고, 매트릭스 글루타티온 아가로스 비드에 대한 흡착 및 결합 다음에 유리 글루타티온 존재 하의 용리에 의해 용해된 세포로부터 용이하게 정제될 수 있다. 클로닝된 표적 유전자 산물이 GST 모이어티로부터 방출될 수 있도록 pGEX 벡터는 트롬빈 또는 인자 Xa 프로테아제 절단 부위를 포함하도록 설계된다.
곤충 시스템에서, 아우토그라파 칼리포니카 핵 다면체 형성 바이러스(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus: AcNPV)는, 예를 들어, 외래 유전자를 발현시키기 위한 벡터로서 사용될 수 있다. 바이러스는 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포에서 성장한다. 항체 암호 서열은 바이러스의 비-필수 영역(예를 들어, 폴리헤드린 유전자)에 개개로 클로닝될 수 있고, AcNPV 프로모터(예를 들어, 폴리헤드린 프로모터)의 제어 하에 위치된다.
포유류 숙주 세포에서, 다수의 바이러스-기반 발현 시스템이 이용될 수 있다. 아데노바이러스가 발현 벡터로서 사용되는 경우에, 관심 대상의 항체 암호 서열은 아데노바이러스 전사/번역 제어 복합체, 예를 들어, 후기 프로모터 및 삼중 리더 서열에 결찰될 수 있다. 이어서, 이 키메라 유전자는 시험관내 또는 생체내 재조합에 의해 아데노바이러스 게놈 내에 삽입될 수 있다. 바이러스 게놈의 비-필수 영역(예를 들어, 영역 El 또는 E3) 내 삽입은 살아있는 그리고 감염된 숙주 내 항체 분자를 발현시킬 수 있는 재조합 바이러스를 초래할 것이다(예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Logan J & Shenk T (1984) PNAS 81(12): 3655-9] 참조). 특정 개시 신호는 또한 삽입된 항체 암호 서열의 효율적인 번역에 필요할 수 있다. 이들 신호는 ATG 개시 코돈 및 인접한 서열을 포함한다. 더 나아가, 개시 코돈은 전체 삽입의 번역을 보장하기 위해 목적으로 하는 암호 서열의 리딩 프레임과 동상(in phase)이어야 한다. 이들 외인성 번역 제어 신호 및 개시 코돈은 다양한 유래(천연과 합성 둘 다)를 가질 수 있다. 발현의 효율은 적절한 전사 인핸서 요소, 전사 종결자 등의 포함에 의해 향상될 수 있다(예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Bitter G et al., (1987) Methods Enzymol. 153: 516-544] 참조.
추가로, 삽입된 서열의 발현을 조절하거나, 또는 요망되는 특정 방식으로 유전자 산물을 가공하는 숙주 세포 균주가 선택될 수 있다. 단백질 산물의 이러한 변형(예를 들어, 글리코실화) 및 가공(예를 들어, 절단)은 단백질의 기능에 중요할 수 있다. 상이한 숙주 세포는 단백질 및 유전자 산물의 번역후 가공 및 변형을 위한 특징 및 구체적 메커니즘을 가진다. 발현되는 외래 단백질의 정확한 변형 및 가공을 보장하기 위해 적절한 세포주 또는 숙주 시스템이 선택될 수 있다. 이를 위하여, 유전자 산물의 1차 전사체, 글리코실화 및 인산화의 적절한 가공을 위한 세포 기작을 갖는 진핵 숙주 세포가 사용될 수 있다. 이러한 포유류 숙주 세포는 CHO, VERO, BHK, Hela, MDCK, HEK 293, NIH 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O 및 T47D, NS0(임의의 면역글로불린 쇄를 내인성으로 생산하지 않는 뮤린 골수종 세포주), CRL7O3O, COS(예를 들어, COS1 또는 COS), PER.C6, VERO, HsS78Bst, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20, BMT10 및 HsS78Bst 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 소정의 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체는 포유류 세포, 예컨대 CHO 세포에서 생산된다.
구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 푸코스 함량이 감소되었거나 또는 푸코스 함량이 없다. 이러한 항체는 당업자에게 공지된 기법을 이용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 항체는 푸코실화하는 능력이 결여되거나 또는 없는 세포에서 발현될 수 있다. 구체적 예에서, α1,6-푸코실트랜스퍼라제의 대립유전자 둘 다의 넉아웃이 있는 세포주를 사용하여 푸코실 함량이 감소된 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 생산될 수 있다. 포텔리전트(Potelligent)(등록상표) 시스템(론자)은 푸코스 함량이 감소된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하기 위해 사용될 수 있는 이러한 시스템의 예이다.
재조합 단백질의 장기간, 고수율의 생산을 위해, 안정한 발현 세포가 생성될 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 안정하게 발현시키는 세포주가 조작될 수 있다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 세포는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 형성하도록 회합되는 경쇄/경쇄 가변 영역 및 중쇄/중쇄 가변 영역을 안정하게 발현시킨다.
소정의 양상에서, 바이러스 복제 기점을 함유하는 발현 벡터를 이용하기 보다는, 숙주 세포는 적절한 발현 제어 요소(예를 들어, 프로모터, 인핸서, 서열, 전사 종결자, 폴리아데닐화 부위 등) 및 선택 가능한 마커에 의해 제어되는 DNA로 형질전환될 수 있다. 외래 DNA/폴리뉴클레오타이드의 도입 후에, 조작된 세포는 농축 배제에서 1 내지 2일 동안 성장시킬 수 있고, 이어서, 선택 배지로 교환된다. 재조합 플라스미드 내 선택 가능한 마커는 선택에 대한 내성을 부여하며, 세포가 플라스미드를 그들의 염색체 내로 안정하게 통합시키도록 하며, 결국 세포주에 클로닝되고 확장될 수 있는 병소를 형성하도록 성장한다. 이 방법은 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체 또는 이의 단편을 발현시키는 세포주를 조작하도록 유리하게 사용될 수 있다. 이러한 조작된 세포주는 항체 분자와 직접적으로 또는 간접적으로 상호작용하는 조성물의 선별 및 평가에서 특히 유용할 수 있다.
tk-, hgprt- 또는 aprt-세포에서 각각 단순포진 바이러스 티미딘 키나제(Wigler M et al., (1977) Cell 11(1): 223-32), 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실트랜스퍼라제(본 명세서에 참고로 편입된 문헌[Szybalska EH & Szybalski W (1962) PNAS 48(12): 2026-2034]) 및 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Lowy I et al., (1980) Cell 22(3): 817-23]) 유전자를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 다수의 선택 시스템이 사용될 수 있다. 또한, 대사길항물질 내성은 다음의 유전자에 대한 선택 기초로서 사용될 수 있다: 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여하는 dhfr(Wigler M et al., (1980) PNAS 77(6): 3567-70; O'Hare K et al., (1981) PNAS 78: 1527-31); 마이코페놀산에 대한 내성을 부여하는 gpt(Mulligan RC & Berg P (1981) PNAS 78(4): 2072-6); 아미노글리코사이드 G-418에 대한 내성을 부여하는 neo(Wu GY & Wu CH (1991) Biotherapy 3: 87-95; Tolstoshev P (1993) Ann Rev Pharmacol Toxicol 32: 573-596; Mulligan RC (1993) Science 260: 926-932; 및 Morgan RA & Anderson WF (1993) Ann Rev Biochem 62: 191-217; Nabel GJ & Felgner PL (1993) Trends Biotechnol 11(5): 211-5); 및 하이그로마이신에 대한 내성을 부여하는 hygro(Santerre RF et al., (1984) Gene 30(1-3): 147-56)(이들 모두는 본 명세서에 전문이 참고로 편입됨). 재조합 DNA 기법 분야에 통상적으로 공지된 방법은 목적으로 하는 재조합 클론을 선택하도록 일상적으로 적용될 수 있고, 예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Ausubel FM et al., (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler M, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); 및 Chapters 12 및 13, Dracopoli NC et al., (eds.), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994);
Figure pat00015
-Garapin F et al., (1981) J Mol Biol 150: 1-14]에 기재되어 있다.
항체 분자의 발현 수준은 벡터 증폭에 의해 증가될 수 있다(검토를 위해, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Bebbington CR & Hentschel CCG, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol. 3 (Academic Press, New York, 1987)] 참조). 항체를 발현시키는 벡터 시스템에서 마커가 증폭 가능할 때, 숙주 세포의 배양물에 존재하는 저해제 수준의 증가는 마커 유전자의 복제물 수를 증가시킬 것이다. 증폭된 영역이 항체 유전자와 관련되기 때무에, 항체의 생성은 또한 증가될 것이다(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Crouse GF et al., (1983) Mol Cell Biol 3: 257-66]).
숙주 세포는 본 명세서에 기재된 둘 이상의 발현 벡터, 즉, 중쇄 유래 폴리펩타이드를 암호화하는 제1 벡터 및 경쇄 유래 폴리펩타이드를 암호화하는 제2 벡터로 공동 형질감염될 수 있다. 두 벡터는 중쇄 및 경쇄 폴리펩타이드의 동일한 발현을 가능하게 하는 동일한 선택 가능한 마커를 함유할 수 있다. 숙주 세포는 상이한 양의 둘 이상의 발현 벡터로 공동 형질감염될 수 있다. 예를 들어, 숙주 세포는 제1 발현 벡터 및 제2 발현 벡터의 다음의 비 중 어느 하나로 형질감염될 수 있다: 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:12, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40, 1:45 또는 1:50.
대안적으로, 중쇄와 경쇄 폴리펩타이드를 둘 다 암호화하고, 이를 발현시킬 수 있는 단일 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 상황에서, 경쇄는 과량의 독성 유리 중쇄를 피하기 위해 중쇄 앞에 놓여야 한다(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Proudfoot NJ (1986) Nature 322: 562-565; 및
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(1980) PNAS 77: 2197-2199]). 중쇄 및 경쇄에 대한 암호 서열은 cDNA 또는 게놈 DNA를 포함할 수 있다. 발현 벡터는 단시트론성 또는 다시트론성일 수 있다. 다시트론성 핵산 작제물은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상, 또는 2-5, 5-10 또는 10-20개의 유전자/뉴클레오타이드 서열의 범위에서 암호화할 수 있다. 예를 들어, 2시트론성 핵산 작제물은 다음의 순서로 프로모터, 제1 유전자(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항체의 중쇄), 및 제2 유전자(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항체의 경쇄)를 포함할 수 있다. 이러한 발현 벡터에서, 유전자 둘 다의 전사는 프로모터에 의해 유도될 수 있는 반면, 제1 유전자로부터의 mRNA의 번역은 캡-의존적 스캐닝 메커니즘에 의할 수 있고, 제2 유전자로부터의 mRNA의 번역은 캡-독립적 메커니즘에 의해, 예를 들어, IRES에 의할 수 있다.
일단 본 명세서에 기재된 항체 분자가 재조합 발현에 의해 생산되었다면, 면역글로불린 분자의 정제를 위해 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 크로마토그래피에 의해(예를 들어, 이온 교환, 친화도, 특히 단백질 A 후에 특정 항원에 대한 친화도, 및 크기 칼럼 크로마토그래피에 의해), 원심분리, 차별적 용해도에 의해, 또는 단백질 정제를 위한 임의의 다른 표준 기법에 의해 정제될 수 있다. 추가로, 본 명세서에 기재된 항체는 본 명세서에 기재된 이종성 폴리펩타이드 서열 또는 정제를 용이하게 하기 위해 당업계에 공지된 다른 것에 융합될 수 있다.
구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단리되거나 또는 정제된다. 일반적으로, 단리된 항체는 단리된 항체와 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 것이다. 예를 들어, 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체의 제제는 세포 물질 및/또는 화학물질 전구체가 실질적으로 없다. 언어 "세포 물질이 실질적으로 없는"은 항체가 단리 또는 재조합적으로 생산되는 세포의 세포 성분으로부터 분리된 항체의 제제를 포함한다. 따라서, 세포 물질이 실질적으로 없는 항체는 약 30%, 20%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만의 (건조 중량으로) 이종성 단백질(또한 본 명세서에서 "오염 단백질"로서 지칭됨) 및/또는 항체의 변이체, 예를 들어, 항체의 상이한 번역 후 변형 형태 또는 항체의 상이한 형태(예를 들어, 항체 단편)를 갖는 항체의 제제를 포함한다. 항체가 재조합적으로 생산될 때, 이는 또한 일반적으로 배양물 배지가 실질적으로 없으며, 즉, 배양물 배지는 단백질 제제 용적의 약 20%, 10%, 2%, 1%, 0.5% 또는 0.1% 미만을 나타낸다. 항체가 화학적 합성에 의해 생산될 때, 이는 일반적으로 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없으며, 즉, 이는 단백질의 합성에 수반된 화학물질 전구체 또는 다른 화학물질로부터 분리된다. 따라서, 항체의 이러한 제제는 약 30%, 20%, 10% 또는 5% 미만의 (건조 중량으로) 관심 대상의 항체 이외의 화학물질 전구체 또는 화합물을 가진다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 단리되거나 또는 정제된다.
CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편은 항체의 합성을 위해 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어, 화학적 합성에 의해 또는 재조합 발현 기법에 의해 생산될 수 있다. 본 명세서에 기재된 방법은 달리 표시되지 않는 한, 분자 생물학, 미생물학, 유전자 분석, 재조합 DNA, 유기 화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오타이드 합성 및 변형, 핵산 혼성화 및 당업계의 기술 내의 관련 분야에서 통상적인 기법을 사용한다. 이들 기법은, 예를 들어, 본 명세서에 인용된 참고문헌에 기재되어 있으며, 문헌에서 완전하게 설명된다. 예를 들어, 문헌[Maniatis T et al., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 및 매년의 업데이트); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 및 매년의 업데이트) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press]을 참조하며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문일 참고로 편입된다.
구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체는 생성을 수반하는 임의의 수단에 의해, 예를 들어, DNA 서열의 합성, 유전자 조작을 통해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나 또는 단리된 항체(예를 들어, 재조합 항체)이다. 소정의 실시형태에서, 이러한 항체는 생체내 동물 또는 포유류(예를 들어, 인간)의 항체 생체계열 레퍼토리 내에서 자연적으로 존재하지 않는 서열(예를 들어, DNA 서열 또는 아미노산 서열)을 포함한다.
일 양상에서, 본 명세서에서 본 명세서에 기재된 세포 또는 숙주 세포를 배양시키는 단계를 포함하는 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 제조 방법이 제공된다. 소정의 양상에서, 본 명세서에서 본 명세서에 기재된 세포 또는 숙주 세포(예를 들어, 본 명세서에 기재된 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 세포 또는 숙주 세포)를 이용하여 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 발현시키는(예를 들어, 재조합적으로 발현시키는) 단계를 포함하는, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 제조 방법이 제공된다. 특정 실시형태에서, 세포는 단리된 세포이다. 특정 실시형태에서, 외인성 폴리뉴클레오타이드 세포 내로 도입되었다. 특정 실시형태에서, 상기 방법은 세포 또는 숙주 세포로부터 얻어진 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 정제하는 단계를 추가로 포함한다. 바람직하게는, 상기 방법은 시험관내에서 수행된다.
다클론성 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Chapter 11: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., eds., John Wiley and Sons, New York]).
단클론성 항체는 하이브리도마, 재조합 및 파지 디스플레이 기법, 또는 이들의 조합의 사용을 포함하는, 매우 다양한 당업계에 공지된 기법을 이용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 단클론성 항체는 당업계에 공지되고, 예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Harlow E & Lane D, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling GJ et al., in: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563 681 (Elsevier, N.Y., 1981)]에 교시된 것을 포함하는 하이브리도마 기법을 이용하여 생산될 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "단클론성 항체"는 하이브리도마 기법을 통해 생산된 항체이지만, 이것으로 제한되지 않는다. 예를 들어, 단클론성 항체는 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 단편, 예를 들어, 이러한 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 외인성으로 발현시키는 숙주 세포로부터 재조합적으로 생산될 수 있다.
구체적 실시형태에서, 본 명세서에 사용된 바와 같은 "단클론성 항체"는 단일 세포(예를 들어, 재조합 항체를 생산하는 하이브리도마 또는 숙주 세포)에 의해 생산된 항체이되, 항체는, 예를 들어, ELISA 또는 다른 항원-결합 또는 당업계에 공지된 경쟁적 결합 분석에 의해 또는 본 명세서에 제공된 예에서 결정된 바와 같은 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합한다. 특정 실시형태에서, 단클론성 항체는 키메라 항체 또는 인간화된 항체일 수 있다. 소정의 실시형태에서, 단클론성 항체는 1가 항체 또는 다가(예를 들어, 2가) 항체이다. 특정 실시형태에서, 단클론성 항체는 단일특이성 또는 다중특이성 항체(예를 들어, 이중특이성 항체)이다. 본 명세서에 기재된 단클론성 항체는, 예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Kohler G & Milstein C (1975) Nature 256: 495]에 기재된 바와 같은 하이브리도마 방법에 의해 생성될 수 있거나, 또는, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 바와 같은 기법을 이용하여 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 이에 의해 발현된 클론 세포주의 그리고 단클론성 항체의 제조를 위한 다른 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다(예를 들어, 문헌[Chapter 11 in: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5th Ed., Ausubel FM et al., 상기 참조] 참조).
하이브리도마 기법을 이용하여 특정 항체에 대해 생산 및 선별하는 방법은 일상적이며, 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 하이브리도마 방법에서, 면역화를 위해 사용되는 단백질(예를 들어, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4))에 특이적으로 결합하는 항체를 생산하거나 또는 생산할 수 있는 림프구를 유발하기 위해 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예컨대, 양, 염소, 토끼, 래트, 햄스터 또는 마카크 원숭이가 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관내에서 면역화될 수 있다. 이어서, 림프구는 적합한 융합제, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 골수종 세포와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]). 추가적으로, RIMMS(반복 면역화 다중 부위) 기법은 동물을 면역화하기 위해 사용될 수 있다(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Kilpatrick KE et al., (1997) Hybridoma 16:381-9] 참조).
일부 실시형태에서, 마우스(또는 다른 동물, 예컨대 래트, 원숭이, 당나귀, 돼지, 양, 햄스터 또는 개)는 항원(예를 들어, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4))으로 면역화될 수 있고, 일단 면역 반응이 검출되면, 예를 들어, 항원에 특이적인 항체는 마우스 혈청에서 검출되고, 마우스 비장이 채취되며, 비장세포는 단리된다. 이어서, 비장세포는 임의의 적합한 골수종 세포, 예를 들어, 미국 미생물 보존센터(American Type Culture Collection: ATCC(등록상표))(버지니아주 매너서스에 소재)로부터 입수 가능한 세포주 SP20으로부터의 세포에 잘 공지된 기법에 의해 융합되어 하이브리도마를 형성한다. 하이브리도마가 선택되며, 제한된 희석에 의해 클로닝된다. 소정의 실시형태에서, 면역화된 마우스의 림프절이 채취되고, NS0 골수종 세포와 융합된다.
이렇게 제조된 하이브리도마 세포는 파종되고, 비융합, 비경구 골수종 세포의 성장 또는 생존을 저해하는 바람직하게는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 성장된다. 예를 들어, 모 골수종 세포가 효소 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)를 결여한다면, 하이브리도마에 대한 배양 배지는 전형적으로 하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘(HAT 배지)을 포함하며, 이들 물질은 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지한다.
구체적 실시형태는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생산 세포에 의해 안정한 고수준의 항체 생산을 뒷받침하며, HAT 배지와 같은 배지에 대해 민감성인, 골수종 세포를 사용한다. 이들 골수종 세포주 중에 뮤린 골수종 계통, 예컨대 NS0 세포주 또는 미국 캘리포니아주 샌디에이고에 소재한 소크 인스티튜트 세포 배포 센터(Salk Institute Cell Distribution Center)로부터 입수 가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것, 및 미국 매릴랜드주 락빌에 소재한 미국 미생물 보존센터로부터 입수 가능한 SP-2 또는 X63-Ag8.653 세포가 있다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이형골수종세포주는 또한 인간 단클론성 항체의 생산에 대해 기재되었다(본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Kozbor D (1984) J Immunol 133: 3001-5; Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)] 참조).
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지는 단클론성 항체 지향 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)의 생산에 대해 분석된다. 하이브리도마 세포에 의해 생산된 단클론성 항체의 결합 특이성은 당업계에 공지된 방법, 예를 들어, 면역침전에 의해 또는 시험관내 결합 분석, 예컨대 방사면역측정법(RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA)에 의해 결정된다.
목적으로 하는 특이성, 친화도 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포가 동정된 후에, 클론은 희석 절차를 제한함으로써 서브클로닝되고 표준 방법에 의해 성장될 수 있다(Goding JW (Ed), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, 상기 참조). 이 목적을 위한 적합한 배양 배지는, 예를 들어, D-MEM 또는 RPMI 1640 배지를 포함한다. 추가로, 하이브리도마 세포는 동물에서 복수종양으로서 생체내에서 성장될 수 있다.
서브클론에 의해 분비된 단클론성 항체는, 예를 들어, 단백질 A-세파로스, 수산화인회석 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화도 크로마토그래피와 같은 통상적인 면역글로불린 정제 절차에 의해 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.
본 명세서에 기재된 항체는 특정 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)를 인식하는 항체 단편을 포함하고, 당업자에게 공지된 임의의 기법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 효소, 예컨대 파파인(Fab 단편을 생성) 또는 펩신(F(ab')2 단편을 생성)을 이용하는 면역글로불린 분자의 단백질 분해 절단에 의해 본 명세서에 기재된 Fab 및 F(ab')2 단편이 생산될 수 있다. Fab 단편은 항체 분자의 두 동일한 아암(arm) 중 하나에 대응하고, 중쇄의 VH 및 CH1 도메인과 짝지어진 완전한 경쇄를 함유한다. F(ab')2 단편은 힌지 영역 내 이황화 결합에 의해 연결된 항체 분자의 두 항원-결합 아암을 함유한다.
추가로, 본 명세서에 기재된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 또한 당업계에 공지된 다양한 파지 디스플레이 방법을 이용하여 생성될 수 있다. 파지 디스플레이 방법에서, 기능성 항체 도메인은 이를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 운반하는 파지 입자의 표면 상에 나타난다. 특히, VH 및 VL 도메인을 암호화하는 DNA 서열은 동물 cDNA 라이브러리(예를 들어, 영향받은 조직의 인간 또는 뮤린 cDNA 라이브러리)로부터 증폭된다. VH 및 VL 도메인을 암호화하는 DNA는 PCR에 의해 scFv 링커와 함께 재조합되고, 파지미드 벡터 내로 클로닝된다. 벡터는 이콜라이에서 전기천공되고, 이콜라이는 헬퍼 파지로 감염된다. 이들 방법에서 사용되는 파지는 전형적으로 fd 및 M13을 포함하는 사상파지이고, VH 및 VL 도메인은 보통 파지 유전자 III 또는 유전자 VIII 중 하나에 재조합적으로 융합된다. 특정 항원에 결합하는 항원 결합 도메인을 발현시키는 파지는 항원으로, 예를 들어, 표지된 항원 또는 고체 표면 또는 비드에 결합 또는 포획된 항원을 이용하여 선택되거나 또는 동정될 수 있다. 본 명세서에 기재된 항체를 제조하기 위해 사용될 수 있는 파지 디스플레이 방법의 예는 문헌[Brinkman U et al., (1995) J Immunol Methods 182: 41-50; Ames RS et al., (1995) J Immunol Methods 184: 177-186; Kettleborough CA et al., (1994) Eur J Immunol 24: 952-958; Persic L et al., (1997) Gene 187: 9-18; Burton DR & Barbas CF (1994) Advan Immunol 57: 191-280; 국제 특허 출원 PCT/GB91/001134; 국제 특허 출원 공개 WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/1 1236, WO 95/15982, WO 95/20401, 및 WO 97/13844; 및 미국 특허 제5,698,426호, 제5,223,409호, 제5,403,484호, 제5,580,717호, 제5,427,908호, 제5,750,753호, 제5,821,047호, 제5,571,698, 제5,427,908호, 제5,516,637호, 제5,780,225호, 제5,658,727호, 제5,733,743호 및 제 5,969,108호에 개시된 것을 포함하며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된다.
상기 참고문헌에 기재된 바와 같이, 파지 선택 후에, 파지로부터의 항체 암호 영역은 단리되고, 인간 항체를 포함하는 전체 항체, 또는 임의의 다른 목적으로 하는 항원 결합 단편을 생성하는데 사용될 수 있으며, 예를 들어, 이하에 기재하는 바와 같이, 포유류 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 효모 및 박테리아를 포함하는 임의의 목적으로 하는 숙주에서 발현된다. 항체 단편, 예컨대 Fab, Fab' 및 F(ab')2 단편을 재조합적으로 생산하는 기법은 또한 당업계에 공지된 방법, 예컨대 국제 특허 출원 공개 WO 92/22324; 문헌[Mullinax RL et al., (1992) BioTechniques 12(6): 864-9; Sawai H et al., (1995) Am J Reprod Immunol 34: 26-34; 및 Better M et al., (1988) Science 240: 1041-1043]에 개시된 것을 이용하여 사용될 수 있으며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된다.
소정의 실시형태에서, 전체 항체를 생성하기 위해, VH 또는 VL 뉴클레오타이드 서열, 제한 부위 및 제한 부위를 보호하기 위한 측접 서열을 포함하는 PCR 프라이머는 주형, 예를 들어, scFv 클론으로부터의 VH 또는 VL 서열을 증폭시키는 데 사용될 수 있다. 당업자에게 공지된 클로닝 기법을 이용하여, PCR 증폭된 VH 도메인은 VH 불변 영역을 발현시키는 벡터 내로 클로닝될 수 있고, PCR 증폭된 VL 도메인은 VL 불변 영역, 예를 들어, 인간 카파 또는 람다 불변 영역을 발현시키는 벡터 내로 클로닝될 수 있다. VH 및 VL 도메인은 또한 필수 불변 영역을 발현시키는 하나의 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 이어서, 중쇄 전환 벡터 및 경쇄 전환 벡터는 당업자에게 공지된 기법을 이용하여 전장 항체, 예를 들어, IgG를 발현시키는 안정한 또는 일시적 세포주를 생성하기 위해 세포주 내로 공동 형질감염된다.
키메라 항체는 항체의 상이한 부분이 상이한 면역글로불린 분자로부터 유래된 분자이다. 예를 들어, 키메라 항체는 인간 항체의 불변 영여게 융합된 마우스 또는 래트 단클론성 항체의 가변 영역을 함유할 수 있다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Morrison SL (1985) Science 229: 1202-7; Oi VT & Morrison SL (1986) BioTechniques 4: 214-221; Gillies SD et al., (1989) J Immunol Methods 125: 191-202]; 및 미국 특허 제5,807,715호, 제4,816,567호, 제4,816,397호 및 제6,331,415호를 참조하며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된다.
인간화된 항체는 인간 면역글로불린의 아미노산 서열을 실질적으로 갖는 프레임워크 영역 및 비-인간 면역글로불린(예를 들어, 뮤린 면역글로불린)의 아미노산 서열을 실질적으로 갖는 CDR을 포함하는 사전결정된 항원에 결합할 수 있다. 특정 실시형태에서, 인간화된 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린 불변 영역의 적어도 일부를 포함한다. 항체는 또한 중쇄의 CH1, 힌지, CH2, CH3, 및 CH4 영역을 포함할 수 있다. 인간화된 항체는 IgM, IgG, IgD, IgA 및 IgE, 및 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 비롯한 임의의 아이소타입을 포함하는, 면역글로불린의 임의의 부류로부터 선택될 수 있다. 인간화된 항체는 CDR-접합(유럽 특허 제239400호; 국제 특허 출원 공개 WO 91/09967; 및 미국 특허 제5,225,539호, 제5,530,101호 및 제5,585,089호), 베니어링(veneering) 또는 리서페이싱(resurfacing)(유럽 특허 제592106호 및 제519596호; 문헌[Padlan EA (1991) Mol Immunol 28(4/5): 489-498; Studnicka GM et al., (1994) Prot Engineering 7(6): 805-814; 및 Roguska MA et al., (1994) PNAS 91: 969-973]), 쇄 셔플링(chain shuffling)(미국 특허 제5,565,332호), 및, 예를 들어, 모두가 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된 미국 특허 제6,407,213호, 미국 특허 제5,766,886호, 국제 특허 출원 공개 WO 93/17105; 문헌[Tan P et al., (2002) J Immunol 169: 1119-25; Caldas C et al., (2000) Protein Eng. 13(5): 353-60; Morea V et al., (2000) Methods 20(3): 267-79; Baca M et al., (1997) J Biol Chem 272(16): 10678-84; Roguska MA et al., (1996) Protein Eng 9(10): 895 904; Couto JR et al., (1995) Cancer Res. 55 (23 Supp): 5973s-5977s; Couto JR et al., (1995) Cancer Res 55(8): 1717-22; Sandhu JS (1994) Gene 150(2): 409-10 및 Pedersen JT et al., (1994) J Mol Biol 235(3): 959-73]에 개시된 기법을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 당업계에 공지된 다양한 기법을 이용하여 생산될 수 있다. 또한 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 미국 특허 출원 공개 제2005/0042664 A1호(2005년 2월 24일)를 참조한다.
다중특이성(예를 들어, 이중특이성 항체)를 제조하는 방법은 기재되어 있고, 예를 들어, 미국 특허 제7,951,917호; 제7,183,076호; 제8,227,577호; 제5,837,242호; 제5,989,830호; 제5,869,620호; 제6,132,992호 및 제8,586,713호를 참조하며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된다.
단일 도메인 항체, 예를 들어, 경쇄가 결여된 항체는 당업계에 잘 공지된 방법에 의해 생산될 수 있다. 문헌[Riechmann L & Muyldermans S (1999) J Immunol 231: 25-38; Nuttall SD et al., (2000) Curr Pharm Biotechnol 1(3): 253-263; Muyldermans S, (2001) J Biotechnol 74(4): 277-302]; 미국 특허 제6,005,079호; 및 국제 특허 출원 공개 WO 94/04678, WO 94/25591 및 WO 01/44301을 참조하며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된다.
추가로, CTLA-4 항원에 특이적으로 결합된 항체는 결국 당업자에게 잘 공지된 기법을 이용하여 항원을 "모방하는" 항-이디오타입(anti-idiotype) 항체를 생성하는 데 이용될 수 있다. (예를 들어, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Greenspan NS & Bona CA (1989) FASEB J 7(5): 437-444; 및 Nissinoff A (1991) J Immunol 147(8): 2429-2438]을 참조).
특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항-CTLA-4 항체와 동일한 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)의 에피토프에 결합하는 본 명세서에 기재된 항체는 인간 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 특정 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 항체 중 임의의 하나를 CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 대한 결합으로부터 경쟁적으로 차단시키는(예를 들어, 용량 의존적 방식으로) 본 명세서에 기재된 항체는 인간 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 인간 항체는 당업계에 공지된 임의의 방법을 이용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 기능성 내인성 면역글로불린을 발현시킬 수 없지만, 인간 면역글로불린 유전자를 발현시킬 수 있는 유전자이식 마우스가 사용될 수 있다. 특히, 인간 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자 복합체는 무작위로 또는 상동성 재조합에 의해 마우스 배아 줄기 세포 내로 도입될 수 있다. 대안적으로, 인간 가변 영역, 불변 영역, 및 다양성 영역은 인간 중쇄 및 경쇄 유전자에 추가로 마우스 배아 줄기 세포 내로 도입될 수 있다. 마우스 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자는 상동성 재조합에 의해 인간 면역글로불린 좌위의 도입과 별개로 또는 동시에 비기능성으로 제공될 수 있다. 특히, JH 영역의 동형접합적 결실은 내인성 항체 생산을 방지한다. 변형된 배아 줄기 세포는 확장되고, 키메라 마우스를 생산하기 위해 배반포 내로 마이크로주사된다. 이어서, 키메라 마우스는 인간 항체를 발현시키는 동형접합 자손을 생산하도록 사육된다. 유전자이식 마우스는 선택된 항원, 예를 들어, 항원(예를 들어, CTLA-4)의 모두 또는 일부로 정상적 방식으로 면역화된다. 항원으로 향하는 단클론성 항체는 통상적인 하이브리도마 기법을 이용하여 면역화된, 유전자이식 마우스로부터 얻을 수 있다. 유전자이식 마우스에 의해 보유된 인간 면역글로불린 이식유전자는 B 세포 분화 동안 재배열하며, 후속적으로 종류 변환(class switching) 및 체세포 돌연변이를 겪는다. 따라서, 이러한 기법을 이용하여, 치료적으로 유용한 IgG, IgA, IgM 및 IgE 항체를 생성할 수 있다. 인간 항체를 생산하기 위한 기법의 검토를 위해, 본 명세서에 전문이 참고로 편입된 문헌[Lonberg N & Huszar D (1995) Int Rev Immunol 13:65-93]을 참조한다. 인간 항체 및 인간 단클론성 항체를 생산하기 위한 이러한 기법 및 이러한 항체를 생산하기 위한 프로토콜의 상세한 논의를 위해, 예를 들어, 국제 특허 출원 공개 WO 98/24893, WO 96/34096 및 WO 96/33735; 및 미국 특허 제5,413,923호, 5,625,126호, 5,633,425호, 제5,569,825호, 5,661,016호, 제5,545,806호, 5,814,318호 및 5,939,598호를 참조한다. 인간 항체를 생산할 수 있는 마우스의 예는 제노마우스(Xenomouse)(상표명)(압지닉스 인코포레이티드; 미국 특허 제6,075,181호 및 제6,150,184호), HuAb-마우스(상표명)(메데렉스 인코포레이티드(Mederex, Inc.)/젠 팜(Gen Pharm); 미국 특허 제5,545,806호 및 제5,569, 825호), 트랜스 크로모 마우스(Trans Chromo Mouse)(상표명)(기린(Kirin)) 및 KM 마우스(상표명)(메다렉스/기린)를 포함하며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된다.
CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4)에 특이적으로 결합하는 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체 라이브러리를 이용하여 상기 기재된 파지 디스플레이 방법을 포함하는 다양한 당업계에 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다. 또한 미국 특허 제4,444,887호, 제4,716,111호 및 제5,885,793호; 및 국제 특허 출원 공개 WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 및 WO 91/10741을 참조하며, 이들 모두는 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 편입된다.
일부 실시형태에서, 인간 항체는 마우스-인간 하이브리도마를 이용하여 생산될 수 있다. 예를 들어, 엡스타인-바 바이러스(EBV)로 형질전환된 인간 말초 혈액 림프구는 인간 단클론성 항체를 분비하는 마우스-인간 하이브리도마를 생산하기 위해 마우스 골수종 세포와 융합될 수 있고, 이들 마우스-인간 하이브리도마는 표적 항원(예를 들어, CTLA-4(예를 들어, 인간 CTLA-4))에 특이적으로 결합하는 인간 단클론성 항체를 분비하는 것을 결정하도록 선별될 수 있다. 이러한 방법은 공지되어 있으며, 당업계에 기재되어 있고, 예를 들어, 전문이 본 명세서에 참고로 편입된 문헌[Shinmoto H et al., (2004) Cytotechnology 46: 19-23; Naganawa Y et al., (2005) Human Antibodies 14: 27-31]을 참조한다.
6.6 키트
또한 본 명세서에 기재된 하나 이상의 항체 또는 이의 약제학적 조성물 또는 접합물을 포함하는 키트가 제공된다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에서 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물, 예컨대 본 명세서에 제공된 하나 이상의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 성분 중 하나 이상으로 채워진 하나 이상의 용기를 포함하는 약제학적 팩 또는 키트가 제공된다. 일부 실시형태에서, 상기 키트는 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물 및 임의의 예방적 또는 치료적 제제, 예컨대 본 명세서에 기재된 것을 함유한다. 소정의 실시형태에서, 키트는 T-세포 미토겐, 예를 들어, 피토헤마글루티닌(PHA) 및/또는 포볼 미리스테이트 아세테이트(PMA), 또는 TCR 복합체 자극 항체, 예컨대 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체를 함유할 수 있다. 선택적으로 약제 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 지시된 형태의 주의사항이 이러한 용기(들)에 부착될 수 있으며, 이러한 주의사항은 인간 투여를 위한 제조, 사용 또는 판매의 기관에 의한 승인을 반영한다.
또한 상기 방법에서 사용될 수 있는 키트가 제공된다. 일 실시형태에서, 키트는 하나 이상의 용기에서 본 명세서에 기재된 항체, 바람직하게는 정제된 항체를 포함한다. 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 키트는 대조군으로서 실질적으로 단리된 CTLA-4 항원(예를 들어, 인간 CTLA-4)을 함유한다. 다른 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 키트는 추가로 CTLA-4 항원과 반응하지 않는 대조군 항체를 포함한다. 다른 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 키트는 CTLA-4 항원에 대한 항체의 결합을 검출하기 위한 하나 이상의 요소를 수용한다(예를 들어, 항체는 검출 가능한 기질, 예컨대 형광 화합물, 효소 기질, 방사성 화합물 또는 발광 화합물에 접합될 수 있거나 또는 제1 항체를 인식하는 제2 항체는 검출 가능한 기질에 접합될 수 있다). 구체적 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 키트는 재조합적으로 생산되거나 또는 화학적으로 합성된 CTLA-4 항원을 포함할 수 있다. 키트에 제공된 CTLA-4 항원은 또한 고체 지지체에 부착될 수 있다. 더 구체적인 실시형태에서, 상기 기재된 키트의 검출 수단은 CTLA-4 항원이 부착된 고체 지지체를 포함한다. 이러한 키트는 또한 비-부착 리포터-표지된 항-인간 항체 또는 항-마우스/래트 항체를 포함할 수 있다. 이 실시형태에서, CTLA-4 항원에 대한 항체의 결합은 상기 리포터-표지 항체의 결합에 의해 검출될 수 있다.
일 실시형태에서, 본 발명은 생물학적 샘플 중의 인간 CTLA-4의 시험관내 분석 및/또는 검출을 위한 본 발명의 키트의 용도에 관한 것이다.
7. 실시예
본 부문의 실시예(즉, 부문 6)은 예시로 제공되며, 제한에 의하지 않는다.
7.1 실시예 1: 신규한 항-CTLA-4 항체의 특성규명
본 실시예는 인간 CTLA-4에 결합하는 항체의 특성규명을 기재한다. 특히, 본 실시예는 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하고 CTLA-4의 작용을 저해하는 항체의 특성규명을 기재한다. 이들 항체의 가변 영역의 서열 정보는 표 4에 제공된다. 모든 항체는 IgG1 항체로서 발현되고, 이하에 기재되는 분석에서 분석된다.
7.1.1 CTLA-4-발현 세포에 대한 항-CTLA-4 항체의 결합
인간 CTLA-4(프로메가(Promega))를 구성적으로 발현시키도록 조작된 Jurkat 세포를 사용하여 항-CTLA-4 항체의 결합을 분석하였다. 간략하게, 세포를 96-웰 플레이트에서 30분 동안 4℃에서 2㎍/㎖의 항체를 이용하여 5x105개의 세포/웰로 염색하였다. 세포를 2회 세척하고 나서, 20분 동안 4℃에서 항-인간 IgG 2차 항체(써모 사이언티픽(Thermo Scientific), 카탈로그 번호 31529)와 함께 인큐베이션시켰다. 세포를 세척하고 나서, PBS 중에서 준비한 50㎕의 2% 파라폼알데하이드(알파 에이사(Alfa Aesar), 카탈로그 번호 43368) 중에서 현탁시켰다. BD FACS Canto II를 이용하여 데이터를 수집하였다.
도 1A 내지 도 1G에 나타낸 바와 같이, 시험한 모든 항-CTLA-4 항체는 CTLA-4-발현 세포에 결합되었다.
7.1.2 스타필로코커스 엔테로톡신 A(SEA) 후 인간 PBMC에 대한 항-CTLA-4 항체의 효과
스타필로코커스 엔테로톡신 A(SEA) 자극 후 1차 인간 PBMC에 대한 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1)의 기능적 활성을 평가하였다. 간략하게, 동결보존된 PBMC를 5일 동안 37℃ 및 5% CO2에서 10㎍/㎖의 항-CTLA-4 항체 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG1)의 부재 또는 존재 하에 100ng/㎖의 SEA 초항원(톡신 테크놀로지즈(Toxin Technologies), 카탈로그 번호 at101red)로 자극하였다. 배양물 상청액 중의 IL-2 농도를 AlphaLISA(퍼킨 엘머(Perkin Elmer), 카탈로그 번호 AL221F)에 의해 분석하였다.
항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1)은 SEA 초항원으로 자극된 인간 PBMC에서 IL-2 생산을 증가시켰다(도 2).
7.1.3 IL-2-루시퍼라제 리포터 세포주에 대항-CTLA-4 항체의 효과
다음에, IL-2-루시퍼라제 리포터 분석을 이용하여 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1)의 기능적 활성을 추가로 분석하였다. 간략하게, CD3 및 CD28을 내인성으로 발현시킨 인간 T 세포주(Jurkat)를 조작하여 IL-2 프로모터에 의해 유도된 세포 표면 CTLA-4 및 루시퍼라제 리포터 유전자를 구성적으로 발현시켰다. Jurkat 리포터 세포주를 CD80 및 CD86을 내인성으로 발현시킨 항원 제시 세포주(Raji)와 함께 공동 배양시키고 나서, 등록상표 T 세포 활성체(T cell activator)(프로메가)를 발현시키도록 조작하였다. T 세포 수용체(TCR) 촉발(신호 1)을 T 세포 활성체에 의해 달성하였고; 그리고 공자극 신호전달(신호 2)을 Raji 세포 상에서 발현된 CD80 및 CD86에 의해 도중에 제공하였다. Jurkat T 세포주 촉발된 IL-2 발현에서 TCR 신호전달은 T 세포 활성화에 대한 대리 마커인 루시퍼라제 생산을 야기한다. 이들 두 세포주의 공동 배양물은 저해 공동 수용체 CTLA-4(Jurkat 세포 상에서 발현)와 그의 천연 리간드 CD80 및 CD86(Raji 세포 상에서 발현)의 맞물림을 초래하여 T 세포 활성화를 저해하였는데, 이는 루시퍼라제 발현의 결여에 의해 입증되었다. 이 저해는 증가된 농도의 항-CTLA-4 차단 항체의 첨가 시 완화되었다. Bio-Glo(상표명) 시약을 이용하여 루시퍼라제 발현을 정량화하였고, 얻어진 데이터를 사용하여 반응 배수 값을 결정하였다(AGEN1884.H3(IgG1)의 증가 배수를 아이소타입 대조군 항체(IgG1)와 비교함).
도 3에 나타내는 바와 같이, 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1)은 이런 IL-2-루시퍼라제 리포터 분석에서 T 세포의 CTLA-4 매개된 저해를 용량 의존적으로 방출하였다.
7.1.4 Fc 감마 수용체 IIIA 리포터 세포주에 대한 항-CTLA-4 항체의 효과
Fc 감마 수용체 IIIA(FcγRIIIA)(프로메가)를 발현시키는 리포터 세포주를 이용하여 Fc 감마 수용체 활성화를 통해 CTLA-4 및 신호와 공동으로 맞물리는 항-CTLA-4 항체의 능력을 평가하였다. 간략하게, Jurkat 세포를 조작하여 세포 표면 상에서 인간 CTLA-4를 구성적으로 발현시켰다. 반딧불이 루시퍼라제의 발현을 유도하는 NFAT 반응 요소(response element: RE) 상류의 FcγRIIIA(V158 변이체)를 발현시키도록 조작된 효과기 세포주(Jurkat)와 함께 이들 표적 세포를 공동 배양시켰다. AGEN1884.H3(IgG1) 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG1)의 적정된 용량을 공동 배양물에 첨가하고 나서, 37℃에서 밤새 인큐베이션시켰다. 표적 세포주(Fab 영역에 의한 CTLA-4에 대한 결합) 및 효과기 세포주(Fc 영역에 의한 FcγRIIIA에 대한 결합)에 의한 AGEN1884.H3의 동시 맞물림은 NFAT RE 리포터 유전자 활성화 및 루시퍼라제 발현을 촉발시킨다. 다음날, Bio-Glo 시약(프로메가)을 공동 배양물에 첨가하였고, 엔비전 멀티모드 플레이트 판독기(EnVison Multimode Plate Reader)(퍼킨 엘머)에 의해 발광을 측정하고 나서, 상대적 광 단위(relative light unit: RLU)를 기록하여 반응 배수 값을 계산하였다(AGEN1884.H3(IgG1)에 의한 증가 배수를 아이소타입 대조군 항체(IgG1)와 비교함).
세포 표면 상에서 인간 CTLA-4를 발현시키는 표적 세포에 결합될 때, IgG1 항체 AGEN1884.H3은 효과기 세포에서 FcγRIIIA 신호전달을 활성화시켰다(도 4).
7.2 실시예 2: 상이한 Fc 영역을 갖는 항-CTLA-4 항체의 특성규명
본 실시예는 항-CTLA-4 항체의 기능성 활성에 대한 Fc/Fc 수용체 상호작용의 영향을 분석한다. AGEN1884.H3은 IgG1 Fc 영역이 EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S239D/I332E, S239D/A330L/I332E 또는 L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L 돌연변이를 포함하고, 이하에 기재하는 기능성 분석에서 시험하는 항체로서 발현되었다. 항체 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/I332E)은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 항체 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E)는 서열번호 25의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 항체 AGEN1884.H3(IgG1 L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L)은 서열번호 26의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 서열번호 27의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 비교를 위해, AGEN1884는 또한 야생형 IgG1 항체, EU 넘버링 시스템에 따라 넘버링된 S239D/I332E 또는 S239D/A330L/I332E 돌연변이 또는 비푸코실화된 IgG1 항체를 포함하는 IgG1 항체로서 발현되었고, 일부 기능성 분석에서 시험하였다.
7.2.1 CTLA-4-발현 세포에 대한 항-CTLA-4 항체의 결합
CTLA-4-발현 세포에 대한 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/I332E), AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 및 AGEN1884.H3(IgG1 L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L)의 결합을 상기 기재한 것과 유사하게 특성규명하였다. 간략하게, 인간 CTLA-4(프로메가)를 발현시키도록 조작된 Jurkat 세포를 5㎍/㎖의 항-CTLA-4 항체 또는 아이소타입 대조군 항체로 처음 염색하고, 이어서, 항-인간 IgG 2차 항체(써모 사이언티픽, 카탈로그 번호 31529)로 염색하였다. BD FACS Canto II를 이용하여 세포를 분석하였다.
도 5A 내지 도 5D에 나타낸 바와 같이, 상이한 Fc 영역을 갖는 AGEN1884.H3 항체는 모두 인간 CTLA-4를 발현시키는 세포에 결합되엇다.
7.2.2 인간 CTLA-4에 대한 리간드 결합에 대한 항-CTLA-4 항체의 효과
본 실시예에서, 인간 CTLA-4와 그의 리간드인 CD80 및 CD86 사이의 결합을 차단하는 Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1-S239D/A330E/I332E)의 능력을 시험하였다.
간략하게, 재조합 CD80-Fc 및 CD86-Fc 단백질을 형광색소 알렉사 플루오르(Alexa Fluor) 647(인비트로젠(Invitrogen), A20186)에 접합시켰다. 문헌[Nakaseko et al. (J Exp Med. 1999 Sep 20; 190(6): 765-774)]에 기재된 바와 같이, Jurkat 세포를 EF1α 프로모터의 제어 하에 trCTLA4(절단된 세포내 도메인)로 형질도입하고, 따라서 세포 표면 상에서 인간 CTLA-4 를 구성적으로 발현시킨 세포주를 생산하였다. CTLA-4-발현 세포를 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1-S239D/A330E/I332E), 기준 항-CTLA-4 항체 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG1)의 용량 적정과 함께 인큐베이션시켰다. 이어서, 세포를 형광 표지된 CD80-Fc 또는 CD86-Fc 단백질로 염색하였다. 염색 후에, LSRFortessa 유세포 분석기(BD 바이오사이언시즈(BD Biosciences))를 이용하여 형광을 분석하였다. FACS DIVA 및 WEHI Weasel 소프트웨어의 조합을 이용하여 FACS 플롯을 분석하였다. 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism) 소프트웨어를 이용하여 값을 플롯팅하였다.
도 6A에 나타낸 바와 같이, AGEN1884.H3(IgG1-S239D/A330E/I332E) 및 기준 항-CTLA-4 항체는 각각 용량 의존적 방식으로 인간 CTLA-4와 CD80 사이의 결합을 차단한 반면, 아이소타입 대조군 항체(IgG1)는 효과가 없었다. 도 6B에 나타낸 바와 같이, AGEN1884.H3(IgG1-S239D/A330E/I332E) 및 기준 항-CTLA-4 항체는 각각 용량 의존적 방식으로 인간 CTLA-4와 CD86 사이의 결합을 차단한 반면, 아이소타입 대조군 항체(IgG1)는 효과가 없었다. 이들 데이터는 AGEN1884.H3(IgG1-S239D/A330E/I332E)이 CTLA-4에 대한 리간드-차단 항체로서 작용한다는 것을 나타낸다.
7.2.3 스타필로코커스 엔테로톡신 A(SEA) 자극 후 인간 PBMC에 대한 항-CTLA-4 항체의 효과
본 실시예에서, 상기 기재한 SEA 자극 분석을 이용하여 항-CTLA-4 항체의 기능성 활성에 대한 Fc 영역의 영향을 분석하였다. 간략하게, 인간 PBMC를 상이한 Fc 영역을 갖는 항-CTLA-4 항체 또는 아이소타입 대조군 항체의 부재 또는 존재 하에 100ng/㎖의 SEA 펩타이드(톡신 테크놀로지즈, 카탈로그 번호 at101red)와 함께 시험관내에서 배양시켰다. 5일 후에, T 세포 활성화의 마커인 배양물 상청액 중의 IL-2 농도를 AlphaLISA(퍼킨 엘머, 카탈로그 번호 AL221F)를 이용하여 측정하였다.
도 7a에 나타낸 바와 같이, IgG1 Fc 영역 내 돌연변이를 함유하는 3개의 AGEN1884.H3 항체(이들 모두 FcγRIIIA에 대한 결합이 향상됨)는 야생형 IgG1 Fc 영역을 갖는 AGEN1884.H3보다 더 IL-2 분비를 자극하였다.
유사한 연구에서, 상이한 Fc 영역을 갖는 AGEN1884.H3 또는 AGEN1884 항체를 SEA 자극 분석에서 시험하엿다. IgG1 Fc 영역에서 S239D/I332E, S239D/A330L/I332E 또는 L235V/F243L/R292P/Y300L/P396L 치환을 도입하는 것은 AGEN1884.H3의 기능성 활성을 상당히 향상시켰다(도 7b). 유사하게, AGEN1884(IgG1 S239D/I332E), AGEN1884(IgG1 S239D/A330L/I332E) 및 비푸코실화된 AGEN1884(IgG1)는 야생형 IgG1 Fc 영역을 갖는 AGEN1884에 비해 실질적으로 더 낮은 농도로 IL-2 생산을 향상시켰다(도 7c).
7.2.4 ZAP70 인산화에 대한 항-CTLA-4 항체의 효과
본 실시예에서, TCR 맞물림 후 TCR에 보충된 단백질 타이로신 키나제 ZAP70(이는 인산화되고 하류의 신호전달 사건을 용이하게 함)의 인산화 정도를 측정하는 분석을 이용하여 T 세포-항원 제시 세포(APC) 시냅스에서 항-CTLA-4 항체의 기능성 활성에 대한 Fc 영역의 영향을 분석하였다.
간략하게, 인간 PBMC를 차선 농도의 SEA 펩타이드 및 10㎍/㎖의 아이소타입 대조군 항체(IgG1) 또는 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1), AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), 또는 AGEN1884.H3(IgG1 N297A)과 함께 인큐베이션시켰다. 이어서, 세포를 37℃에서 0(사전) 1, 5, 10, 30 또는 60분 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션의 마지막에, 세포를 포스파타제/프로테아제 저해제 칵테일(셀 시그널링 테크놀로지즈(Cell Signaling Technologies))로 보충한 차가운 1ХRIPA 완충제로 용해시켰다. 상청액 정제 후에, 바이신코닉산(BCA) 분석(피어스 바이오테크놀로지(Pierce Biotechnology))를 이용하여 단백질 농도를 정량화시켰다. 희석된 Bolt LDS 샘플 완충제 중에서 세포 용해물(20㎍/레인)을 제조하고 나서, 4 내지 12% 볼트 비스 트리스 겔(Bolt Bis Tris gel)(노벡스(Novex)) 상에 장입하기 전에 70℃에서 10분 동안 가열하였다. 1x Bolt MOPS-완충제(써모피셔(ThermoFisher)) 중에서 단백질을 분리시키고, 이어서, PVDF 막 상에 블롯팅하였다. 5% 소 혈청 알부민(BSA, 1시간)으로 차단 후에, 샘플을 밤새 4℃에서 차단 완충제 중에서 1차 항-인간 토끼 포스포-ZAP70(Tyr493)/Syk (Tyr526) 항체(셀 시그널링 테크놀로지즈(Cell Signaling Technologies))와 함께 인큐베이션시켰다. 염소 항-토끼 2차 HRP-접합물로 막을 프로빙하고 나서, 시그널파이어 ECL 시약(셀 시그널링 테크놀로지)로 시각화하였다. 케미도 이미징 시스템(Chemidoc imaging system)(바이오래드(BioRad))를 이용하여 영상을 캡처하였다. 대조군으로서, 레스토어(Restore)(상표명) 플러스 웨스턴 블롯 스트리핑 완충제(PLUS Western Blot Stripping Buffer)를 이용하는 막 스트리핑 후에 총 ZAP70 단백질을 평가하였다. Image J(웨인 라스밴드(Wayne Rasband); 미국 매릴랜드주 베데스다에 소재한 국립정신보건 연구소(National Institute of Mental Health))를 이용하여 총 ZAP70에 대해 정규화된 포스포-ZAP70의 농도계측 분석을 수행하였고 1분 동안 인큐베이션시킨 아이소타입 대조군 처리 샘플에 비해 변화 배수로서 표현하였다.
도 8A 내지 도 8B에 나타낸 바와 같이, 아이소타입 대조군 항체 샘플에서, 자극 후 10분 내에 ZAP70 인산화는 일시적으로 증가되었고, 15분 후에 검출 가능한 수준이 없게 빠르게 감소되었다. 대조적으로, 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1) 또는 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E)의 첨가는 검출 가능한 ZAP70 활성화를 30분으로 연장시켰고, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E)에 의해 가장 확연한 활성 및 상대적 존재비가 관찰되었다.
7.2.5 마우스 모델에서 종양 성장 및 종양내 조절 T 세포 고갈에 대한 뮤린 항-CTLA-4 항체의 효과
본 실시예에서, 결장암에 대한 마우스 모델(CT26 종양-보유 마우스)를 이용하여 항-CTLA-4 항체의 항종양 및 종양내 조절 T 세포(Treg) 고갈 활성에 대한 Fc 영역의 영향을 분석하였다.
간략하게, 5x104개의 CT26 종양 세포를 100 ml PBS 중에서 현탁시키고 나서, 6 내지 8주령 암컷 BALB/cJ 마우스(잭슨 래버러토리즈(Jackson Laboratories)) 내로 피하로 주사하였다. 50 내지 80㎣의 종양 용적에 대한 생착 후에, 마우스를 단일 100㎍ 용량의 뮤린 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a), 항-CTLA-4 항체 9D9의 Fc-침묵 변이체(mIgG2a-N297A), 항-CTLA-4 항체 9D9의 Fc 변이체(mIgG2a-S239D/A330L/I332E) 또는 아이소타입 대조군 항체(mIgG2a)로 처리하였다. 시험한 뮤린 항체에 대한 아미노산 서열을 표 7에 나타낸다.
[표 7]
Figure pat00017
Figure pat00018
제1 실험에서, 이어서, 항체로 처리한 마우스를 종양 성장에 대해 2주마다 측정하였다. 도 9a에 나타낸 바와 같이, 항-CTLA-4 항체 9D9의 Fc 변이체(mIgG2a-S239D/A330L/I332E로서 나타냄)는 모든 CT26 종양-보유 마우스(시험한 8마리 마우스 중의 8마리)에서 완전한 퇴행을 유도하였다. 대조적으로, 항체 9D9의 다른 변이체는 동일한 효능을 유발하지 못하였다: 항체 9D9(mIgG2a) 그 자체는 시험한 9마리의 마우스 중 3마리에서 완전한 퇴행을 유도하였고, 항체 9D9의 Fc-침묵 변이체(mIgG2a-N297A)는 시험한 임의의 9마리 마우스에서 퇴행을 유도하지 못하였다.
제2 실험에서, CT26 종양-보유 마우스는 상기 기재한 바와 같이 처리하였고, 이어서, 종양 조직, 종양 배수 림프절 및 비장의 수집을 위해 처리 후 0, 24, 72 또는 240 시간에 희생시켰다. 수집한 조직을 유세포분석에 의해 FoxP3+ Treg 확장에 대해 평가하였다. 기계적 해리 후에 여과(70μM 셀 스트레이너(cell strainer))에 의해 단일 세포 현탁액을 얻었다. 비특이적 결합을 감소시키기 위해, FACS 완충제(PBS, 2mM EDTA, 0.5% BSA, pH 7.2) 중에서 15분 동안 주위 온도에서 세포를 FcgR 차단 항체(바이오레전드(Biolegend))와 함께 인큐베이션시켰다. 이어서, 세포를 FACS 완충제 중에서 2회 세척하고 나서, CD3, CD4, CD8 및 CD25뿐만 아니라 고정 가능한 생/사 마커의 계통 패널에 대해, 30분 동안 4℃에서 염색하였다. Treg 묘사를 위해, 그 다음에 샘플을 2회 세척하고 나서, 고정 후, 침투시키고, 이어서, 항-FoxP3 항체(FJK-16s)와 함께 30분 동안 4℃에서 인큐베이션시켰다. LSRFortessa 유세포 분류기(BD 바이오사이언시즈)를 이용하여 샘플을 분석하였다. FACS DIVA 및 WEHI 위즐(Weasel) 소프트웨어의 조합을 이용하여 FACS 플롯을 분석하였다. 도 9b에 나타낸 바와 같이, 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a) 및 Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a-S239D/A330L/I332E)는 각각 아이소타입 대조군 항체에 비해 종양내 FoxP3+ Treg의 양을 감소시켰고, Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a-S239D/A330L/I332E)는 종양내 FoxP3+ Treg의 양을 가장 유의하게 감소시켰다. 항-CTLA-4 항체 9D9의 Fc-침묵 변이체(mIgG2a-N297A)는 아이소타입 대조군 항체에 비해 종양내 FoxP3+ Treg의 양을 실질적으로 감소시키지 않았다. 처리군 중 어떤 것도 종양내 CD45+ 백혈구 또는 CD4+ 비-Treg 양의 실질적인 변화를 나타내지 않았다. Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a-S239D/A330L/I332E)는 시간에 따른 종양내 CD8/Treg 비의 가장 큰 증가를 유도하였고, 그 다음에 항체 9D9(mIgG2a), 및 Fc-침묵 변이체 항체 9D9(mIgG2a-N297A) 및 아이소타입 대조군 항체(mIgG2a)로 이어졌다.
도 9C에 나타낸 바와 같이, 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a), Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a-S239D/A330L/I332E) 및 항-CTLA-4 항체 9D9의 Fc-침묵 변이체(mIgG2a-N297A)는 아이소타입 대조군 항체에 비해 종양 배수 림프절(TDLN) FoxP3+ Treg의 양에 대해 실질적인 효과가 없었다. 유사하게, 도 9D에 나타낸 바와 같이, 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a), Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a-S239D/A330L/I332E) 및 항-CTLA-4 항체 9D9의 Fc-침묵 변이체(mIgG2a-N297A)는 아이소타입 대조군 항체에 비해 비장 FoxP3+ Treg 양에 대한 실질적인 효과가 없었다.
7.2.6 종양 성장에 대해 종양 백신과 조합한 뮤린 항-CTLA-4 항체의 효과
본 실시예에서, 뮤린 항-CTLA-4 항체 및 HPV 종양 백신의 조합물의 종양 성장에 대한 효과를 HPV+ TC-1 상승작용 종양 마우스 모델에서 시험하였다.
TC-1 세포주는 문헌[Lin et al. (1996, Cancer Res. 56(1): 21-26)]에 기재된 바와 같이 c-Ha-ras 및 HPV-16(E6/E7) 종양 유전자와 함께 1차 폐 상피 세포(C57BL/6)의 공동 형질전환에 의해 개발하였다. 종양 이식을 위해, 2x105개의 TC-1 세포를 6 내지 8주령의 암컷 C57BL/6 마우스(잭슨 래버러토리즈) 내에 피하로 주사하였다. 종양 이식 후 제5일, 제10일 및 제15일의 각각의 날에, 마우스에 HPV 백신(HPV+ 종양, 바이러스 항원 E6/E7)의 용량과 조합하여 또는 추가적인 처리 없이 100㎍의 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a), Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a-S239D/A330L/I332E), 또는 아이소타입 대조군 항체(mIgG2a)를 투여하였다. HPV 백신의 각각의 용량은 HPV 풀 펩타이드(1.2nM)와 복합체화된 30㎍의 HSP 단백질(0.4 nM)을 함유하였고, 10㎍ QS-21 스티물론(Stimulon)(등록상표) 애주번트로 보충하였다. 처리 후, 마우스를 종양 성장에 대해 2주마다 평가하였고, 종양이 2000㎣에 도달되었을 때 또는 궤양형성 시 희생시켰다.
도 10에 나타내는 바와 같이, 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a) 및 Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a-S239D/A330L/I332E)의 항종양 효능은 각각 HPV 종양 백신과 조합하여 투여하였을 때 개선을 나타내었다. 이 효과는 Fc 변이체 항-CTLA-4 항체(mIgG2a-S239D/A330L/I332E)에 대해 더 컸다. 특히, Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 9D9(mIgG2a-S239D/A330L/I332E)는 항체가 단일 제제로서 투여되었을 때에 비해 HPV 종양 백신과 조합되었을 때 TC-1 종양 성장에서의 주목할 만한 추가적인 감소를 유도하였다. 종양 성장의 이런 추가적인 감소는 항체 9D9(mIgG2a) 또는 아이소타입 대조군 항체(mIgG2a)의 HPV 종양 백신과의 조합물에 대해 관찰된 것보다 더 컸다.
7.2.7 확장 및 활성화된 T 세포 집단의 특성규명
본 실시예에서, 확장 및 활성화된 T 세포 집단을 유전자 발현 및 CpG 메틸화에 대해 특성규명하였다. 간략하게, 천연 CD4+ CD25+ FOXP3+ 조절 T 세포 또는 CD4+ CD25+/- FOXP3- 비-조절 T 세포를 건강한 인간 공여자의 말초 혈액으로부터 단리시키고, 확장 및 활성화시켰다. 이어서, T 세포를 유세포 분석기에 의해 FOXP3 및 CTLA-4의 발현에 대해 특성규명하였고, FOXP3 CTLA4 좌위 내의 CpG 영역에서 DNA CpG 메틸화를 시험함으로써 계통 안정성에 대해 평가하였다. 당업계에 공지된 바와 같이, 이들 CpG 좌위에서의 저메틸화를 사용하여 조절 T 세포 계통에 대한 효과기를 정확하게 묘사할 수 있다(Waight et al., 2015, J. Immunol. 194(3): 878-882).
건강한 공여자 백혈구 연층(리서치 블러드 컴포넌트, 엘엘씨(Research Blood Components, LLC))로부터 피콜(Ficoll) 구배를 통해 PBMC를 단리시키고, 이어서, 자기 비드 단리(MACS, 밀테니(Miltenyi))를 이용하여 효과기 T 세포(Teff) 또는 천연 조절 T 세포(Treg)에 대해 농축시켰다. 농축된 Teff 또는 Treg를 FBS 37℃ 및 5% CO2에서 10% 열-비활성화된 FBS로 보충한 RPMI 배지에서 7일 동안 CD3-CD28 마이크로비드(1:1 비드:세포비; 인비트로젠)로 그리고 재조합 인간 IL-2로 활성화시켰다. 자극 후에, 유세포 분석을 통해 세포를 FOXP3 및 CTLA-4 발현에 대해 평가하였다. 비-특이적 결합을 감소시키기 위해, 세포를 FACS 완충제(PBS, 2mM EDTA, 0.5% BSA, pH 7.2)에서 15분 동안 주위 온도에서 FcgR 차단 항체(바이오레전드)와 함께 사전인큐베이션시켰다. 이어서, 샘플을 FACS 완충제 중에서 2회 세척하고 나서, CD3, CD4, CD8, CD25뿐만 아니라 고정 가능한 세포사 마커의 계통 패널로, 30분 동안 4℃에서 염색하였다. 막 CTLA-4 발현을 평가하기 위해, 37℃에서 CTLA-4 염색을 수행하였다. 세포내 FOXP3 및 CTLA-4 염색을 위해, 샘플을 2회 세척하고 나서, 고정 후, 침투시키고, 각각 항-FOXP3 항체(PCH101) 및 항-CTLA-4 항체(BNI3)와 함께, 30분 동안 4℃에서 인큐베이션시켰다. 이어서, 샘플을 2회 세척하고 나서, LSRFortessa 유세포 분석기(BD 바이오사이언시즈)를 이용하여 분석하였다. FACS DIVA와 WEHI 위즐 소프트웨어의 조합을 이용하여 FACS 플롯을 분석하였다. CpG 메틸화 분석을 위해, 대략 1x105개의 미경험 CD4+ T 세포로부터 총 DNA를 단리시키고, Teff를 활성화시키거나, 또는 Treg를 활성화시키고, 파이로시퀀싱(pyrosequencing)을 실시하였다.
도 11a에 나타낸 바와 같이, 활성화된 Treg에 대한 고수준의 FOXP3 발현뿐만 아니라 고수준의 세포내 그리고 막 CTLA-4 발현을 검출하였다. 대조적으로, 활성화된 Teff는 활성화된 Treg에 비해 감소된 수준의 FOXP3, 세포내 CTLA-4, 및 막 CTLA-4를 나타내었다. 특히, 활성화된 Teff에 대해 활성화된 Treg에 비해 실질적으로 더 적은 막 CTLA-4 발현이 관찰되었다. 도 11b는 추가로 활성화된 Treg가 또한 동일한 공여자로부터의 미경험 및 활성화된 Teff에 비해 저메틸화된 FOXP3CTLA4 CpG 영역을 나타내었다는 것을 보여준다.
7.2.8 CTLA-4-발현 인간 T 세포의 항체 의존적 세포의 세포독성에 대한 항-CTLA-4 항체의 효과
본 실시예에서, ADCC 활성을 정량화하기 위해 카스파제 3/7 활성화의 고해상도 현미경을 이용하여 인간 CTLA-4-발현 T 세포의 항체 의존적 세포의 세포독성(ADCC)에 대한 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1) 또는 이의 Fc 변이체의 효과를 평가하였다.
간략하게, 이하에 기재하는 바와 같이 10㎍/㎖의 항-CTLA-4 항체 또는 이의 Fc 변이체로 옵소닌 작용 후에 FcγRIIIA를 발현시키는 NK-92 세포와 함께 CTLA-4-발현 표적 세포를 공동배양시켰다. 제1 실험에서, 세포-표면 인간 CTLA-4를 구성적으로 발현시키도록 조작된 Jurkat 세포를 표적 세포로서 사용하였다. 문헌[Nakaseko et al. (1999, J. Exp. Med. 190(6): 765-774)]에 기재된 바와 같이 EF1α 프로모터의 제어 하에 trCTLA4(세포내 도메인을 제거함)와 함께 Jurkat 세포주를 형질도입함으로써 CTLA-4-발현 Jurkat 세포를 생성하였다. 제2 실험에서, 1차 인간 활성화된 효과기 및 조절 T 세포를 표적 세포로서 사용하였다. CTLA-4-발현 표적 세포 및 FcγRIIIA-158V-발현 NK-92 세포를 적색 및 청색 생세포 추적자(써모 피셔)를 이용하여 상이하게 염색하고 나서, 1:1 세포비(384-웰 플레이트에서 1.5x103개의 세포/웰)로 공동 배양시켰다. 샘플을 10㎍/㎖의 AGEN1884.H3(IgG1), AGEN1884.H3(IgG1 N297A), AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E), AGEN1884.H3(IgG1 S267E/L328F), 비푸코실화된 AGEN1884.H3(IgG1), 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG1)로 처리하였다. 이어서, 샘플을 활성화된 카스파제에 의한 절단 후 형광을 내는 카스파제 3/7 기질의 생 공초점 영상화에 의해 시간에 따른 세포자멸사의 유도에 대해 평가하였다. 6시간 동안 20분마다 샘플 이미지를 획득하였다. 각각의 조건 하에 총 세포수에 비해 세포자멸사 세포 수로서 ADCC 활성%를 측정하였다.
도 12A에 나타낸 바와 같이, Fc 변이체 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 항체, 비푸코실화된 AGEN1884.H3 항체 및 AGEN1884.H3(IgG1) 항체는 각각 AGEN1884.H3(IgG1 N297A) 변이체, AGEN1884.H3(IgG1 S267E/L328F) 변이체 및 아이소타입 대조군 항체(IgG1)에 비해 세포 표면 CTLA-4를 발현시키도록 조작된 Jurkat 세포에서의 실질적으로 더 큰 ADCC 활성을 유도하였다. AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) Fc 변이체 항체 및 비푸코실화된 AGEN1884.H3 항체는 AGEN1884.H3(IgG1) 항체에 비해 ADCC 활성에서 더 큰 증가를 유도하였다. 도 12B에서 나타낸 바와 같이, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) Fc 변이체 항체는 1차 인간 활성화된 효과기 T 세포(좌측 패널)와 1차 인간 활성화된 조절 T 세포(우측 패널) 둘 다에서서 가장 고수준의 ADCC를 유도하였고, 다음에 비푸코실화된 AGEN1884.H3 항체가 이어졌다. AGEN1884.H3(IgG1) 항체는 또한 대조군에 비해 약간 더 높은 수준의 ADCC를 유도하였다. 시험한 남아있는 항체는 효과기 또는 조절 T 세포 중 하나에서 ADCC 활성을 거의 또는 전혀 유도하지 않았다. 특히, AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) Fc 변이체 항체 및 비푸코실화된 AGEN1884.H3 항체는 각각 효과기 T 세포에 비해 조절 T 세포에서 실질적으로 더 큰 ADCC를 유도하였다.
7.2.9 T 세포 기능성에 대해 항-PD-1 항체와 조합한 항-CTLA-4 항체의 효과
본 실시예에서, 1차 인간 T 세포 기능에 대해 항-PD-1 항체와 조합한 항-CTLA-4 항체의 효과를 시험하였다.
간략하게, 2명의 인간 공여자의 건강한 공여자 백혈구 연층으로부터의 피콜 구배(리서치 블러드 컴포넌츠, 엘엘씨)를 통해 PBMC를 단리시켰다. 공여자 당 총 2개의 복제물에 대해 각각의 공여자로부터 수집한 PBMC 상에서 이 실험을 2회 수행하였다. 각각의 복제물에 대해, 단리된 PBMC를 기준 항-PD-1 길항제 항체 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG4)의 고정된 투약량(5㎍/㎖)과 조합하여 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1), Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E) 또는 아이소타입 대조군 항체(IgG1)의 투약량 적정과 함께 자극 배양 조건 하에 4일 동안 인큐베이션시켰다. 자극 배양물 조건을 37℃ 및 5% CO2에서 100ng/㎖ SEA 초항원(시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)), 10% 열-비활성화시킨 FBS로 보충한 RPMI 배지에서 현탁시킨 세포로서 정하였다. 인큐베이션 후에, AlphaLISA 면역분석(퍼킨-엘머)을 이용하여 IL-2 생산에 대해 무세포 상청액을 분석하였다. 엔비전(EnVision)(등록상표) 다중표지 플레이트 판독기(퍼킨-엘머)를 이용하여 데이터를 수집하였고, IL-2 표준 곡선을 이용하여 IL-2의 농도를 결정하였다. 값을 보간하고 나서, 그래프패드 프리즘 소프트웨어를 이용하여 플롯팅하였다.
도 13A 내지 도 13D에 나타낸 바와 같이, 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1) 및 Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E)은 각각 아이소타입 대조군 또는 기준 항-PD-1 항체 단독에 비해 증가된 IL-2 생산을 유도하였다. AGEN1884.H3 또는 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E)을 기준 항-PD-1 항체와 조합하였을 때 IL-2 생산은 추가로 향상되었다. 아이소타입 대조군 항체와 함께 투여되든 또는 항-PD-1 기준 항체와 조합하여 투여되든, Fc 변이체 항-CTLA-4 항체 AGEN1884.H3(IgG1 S239D/A330L/I332E)는 AGEN1884.H3(IgG1)에 비해 IL-2 생산의 더 큰 증가를 유도하였다. 이 효과는 제1 공여자(도 13A 및 도 13B) 및 제2 공여자(도 13C 및 도 13D)에 대한 복제물과 일치되었다.
7.3 실시예 3: 항-CTLA-4 항체의 에피토프 맵핑
인간 CTLA-4의 세포외 도메인과 AGEN1884(AGEN1884-Fab)의 Fab 단편의 상호작용은 수소-중수소 교환(HDX) 질량분석법에 의해 연구하였다. pH 7.4의 인산염 완충 식염수 용액 중에서 CTLA-4 세포외 도메인 단독으로 또는 AGEN1884-Fab와 조합하여 산화중수소 표지 완충제의 10배 용적으로 희석시키고, 실온에서 다양한 기간의 시간(0, 60, 300, 1800 및 7200초) 동안 인큐베이션시켰다. 1 용적의 4M 구아니딘염산, 0.85M TCEP(트리스(2-카복시에틸)포스핀) 완충제를 첨가함으로써 수소에 대한 중수소 교환을 퀀칭시키고, 최종 pH는 2.5였다. 이어서, 샘플에 칼럼 상의 펩신/프로테아제 XIII형 분해 및 LC-MS 분석을 실시하였다. MS 단독 방식으로 질량 스펙트럼을 기록하였다. 중수소 혼입의 계산을 위해, 주어진 펩타이드에 대한 질량 스펙트럼을 추출된 이온 크로마토그램 피크에 걸쳐 합하고 나서, 가중치 부여된 평균 m/z를 계산하였다. 천연 펩타이드(0분)로부터 가중치 부여된 평균 질량까지의 질량 증가는 중수소 혼입 수준에 대응한다. 모든 펩타이드에 대해 교환 시간에 따른 중수소 축적 곡선을 추가 분석에 대해 플롯팅하였고, HDExaminer 소프트웨어로 비교하였다.
대부분의 CTLA-4 펩타이드는 존재하는 항-인간 CTLA-4 Fab와 함께 그리고 이것 없이 동일 또는 유사한 중수소 수준을 나타내었다. 그러나 몇몇 펩타이드 세그먼트는 Fab 결합 시 상당히 감소된 중수소 혼입을 갖는 것으로 발견되었다. 이 단락에서 모든 잔기는 서열번호 33에 따라 넘버링한다. 2개의 영역, 즉, 잔기 80 내지 82(QVT, 서열번호 39) 및 잔기 135 내지 149(YPPPYYLGIGNGTQI, 서열번호 37)은 인간 CTLA-4가 Fab에 결합될 때 강한 중수소 보호를 경험하였다. 중수소 흡수의 가장 강한 감소가 잔기 140 내지 141(YL)에서 관찰되었는데, 따라서 이는 CTLA-4에 대한 AGEN1884의 에피토프의 주된 특징인 것으로 나타났다. 인간 및 사이노몰거스 원숭이 CTLA-4의 서열 검사(둘 다 AGEN1884와 강하게 결합함(데이터 미제시))는 위치 141에서 메티오닌의 류신으로의 치환을 제외하고 상기 기재한 두 영역에서 거의 완전한 서열 동일성을 나타낸다(도 14a). 대조적으로, AGEN1884는 마우스 또는 래트 CTLA-4(데이터 미제시) 중 하나와 임의의 상당한 정도로 결합하지 않았는데, 이는 4개 위치 중 3개에서의 잔기 140 내지 143(YLGI, 서열번호 34)에서 인간 CTLA-4와 상이하다(도 14a). 추가적인 선택성 데이터는 AGEN1884가 인간 및 사이노몰거스 원숭이 CTLA-4에 대해 그리고 CD28, ICOS, BTLA 및 PD-1를 포함하는 다른 관련된 CD28 패밀리에 대해 높은 특이성으로 결합한다는 것을 나타낸다(데이터 미제시). 이들 관련된 단백질 중에서 서열 비교는 비-CTLA-4 단백질이 모두 잔기 140 내지 143(YLGI, 서열번호 34)에서 상이하다는 것을 나타내는데(도 14b), 이는 AGEN1884의 결합에 대한 이 에피토프의 중요성을 뒷받침한다.
***
본 발명은 본 명세서에 기재된 특정 실시형태에 의해 범주가 제한되어서는 안 된다. 사실, 기재된 것에 추가로 본 발명의 다양한 변형은 앞서 언급한 설명 및 수반하는 도면으로부터 당업자에게 명백할 것이다. 이러한 변형은 첨부하는 청구범위의 범주 내에 속하는 것으로 의도된다.
본 명세서에 인용된 모든 참고문헌(예를 들어, 간행물 또는 특허 또는 특허 출원)은 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 그리고 각각의 개개 참고문헌(예를 들어, 간행물 또는 특허 또는 특허 출원)이 모든 목적을 위해 그의 전문이 참고로 편입되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시되는 것과 동일한 정도로 편입된다.
다른 실시형태는 다음의 청구범위 내이다.
SEQUENCE LISTING <110> AGENUS INC. LUDWIG INSTITUTE FOR CANCER RESEARCH LTD. MEMORIAL SLOAN KETTERING CANCER CENTER <120> ANTI-CTLA-4 ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF <130> IPA190674-US-D1 <150> US 62/431,272 <151> 2016-12-07 <160> 46 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 1 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Val Gly Leu Met Gly Pro Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Met Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial 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Claims (1)

  1. 인간 CTLA-4에 특이적으로 결합하는 단리된 항체로서, 상보성 결정 영역 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 상보성 결정 영역 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하되,
    (a) CDRH1은 SYSMN의 아미노산 서열(서열번호 10)을 포함하고;
    (b) CDRH2는 SISSSSSYIYYAXSVKG의 아미노산 서열(서열번호 18)을 포함하되, X는 E 또는 D이며;
    (c) CDRH3은 VGLXGPFDI의 아미노산 서열(서열번호 19)이되, X는 F 또는 M이고;
    (d) CDRL1은 RASQSVSRYLG의 아미노산 서열(서열번호 15)을 포함하며;
    (e) CDRL2는 GASTRAT의 아미노산 서열(서열번호 16)을 포함하고; 그리고
    (f) CDRL3은 QQYGSSPWT의 아미노산 서열(서열번호 17)을 포함하며,
    상기 항체의 상기 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 서열은 각각 서열번호 10, 11 및 13이 아닌, 단리된 항체.
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