RS60792B1 - Anti-ctla-4 antitela i postupci za njihovu primenu - Google Patents

Anti-ctla-4 antitela i postupci za njihovu primenu

Info

Publication number
RS60792B1
RS60792B1 RS20200805A RSP20200805A RS60792B1 RS 60792 B1 RS60792 B1 RS 60792B1 RS 20200805 A RS20200805 A RS 20200805A RS P20200805 A RSP20200805 A RS P20200805A RS 60792 B1 RS60792 B1 RS 60792B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
ctla
human
amino acid
seq
Prior art date
Application number
RS20200805A
Other languages
English (en)
Inventor
Dijk Marc Van
Cornelia Anne Mundt
Gerd Ritter
David Schaer
Jedd David Wolchok
Taha Merghoub
David Adam Savitsky
Mark Arthur Findeis
Nicholas Stuart Wilson
Original Assignee
Agenus Inc
Ludwig Inst For Cancer Res Ltd
Memorial Sloan Kettering Cancer Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Agenus Inc, Ludwig Inst For Cancer Res Ltd, Memorial Sloan Kettering Cancer Center filed Critical Agenus Inc
Publication of RS60792B1 publication Critical patent/RS60792B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2818—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD28 or CD152
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0681—Cells of the genital tract; Non-germinal cells from gonads
    • C12N5/0682—Cells of the female genital tract, e.g. endometrium; Non-germinal cells from ovaries, e.g. ovarian follicle cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Opis
1. OBLAST PRONALASKA
[0001] Trenutna objava se odnosi na antitela koja se specifično vezuju za humani CTLA-4 i postupke za njihovu primenu.
2. OSNOVA PRONALASKA
[0002] T limfociti su ključni za adaptivni imunski odgovor na antigen. Potrebna su najmanje dva signala za kompletnu aktivaciju naivnih T ćelija (Bretscher 1999, Proc Natl Acad Sci USA 96:185-90). Prvi signal specifičan za antigen obezbeđen je interakcijom T ćelijskog receptora (TCR) sa kompleksom MHC/peptid na antigen-prezentujućoj ćeliji (APC). Drugi, kostimulišući signal obezbeđen je interakcijom između receptora na T ćeliji i njihovih liganada na antigen-prezentujućoj ćeliji (APC). Uključivanje TCR/MHC i kostimulišućih interakcija dovodi do aktivacije T ćelije preko više intracelularnih puteva, uključujući kalcijum-kalcineurinski i RAS mitogenom aktiviranu protein kinazu, i naknadne aktivacije transkripcionih faktora za više efektorskih jedinjenja, uključujući citokine kao što je IL-2. Ti događaji dovode do proliferacije T ćelija, stvaranja skupa CD4<+>pomoćnih T ćelija (T<H>) i ekspanzije aktiviranih CD8<+>citotoksičnih T ćelija. Ne samo što je kostimulacija ključna za kompletnu aktivaciju T ćelija, već njeno odsustvo tokom angažovanja TCR/MHC dovodi do anergije i/ili apoptoze.
[0003] U regulaciju T ćelija je uključeno više pozitivnih i negativnih kostimulišućih puteva, ali su najkritičniji oni između CD28 na T ćelijama i B7-1 (CD80) i B7-2 (CD86) na APC. CD28 podstiče diferencijaciju T ćelija u ćelije TH1 fenotipa i povećava proizvodnju antitela od strane B ćelija i aktivaciju T ćelija. B7-1 i B7-2, eksprimirani na APC kao što su dendritske ćelije (DC) i B ćelije, imaju preklapajuće ali različite funkcije. B7-2 je konstitutivno eksprimiran i brzo se ushodno reguliše na APC, što se podudara sa angažovanjem TCR/MHC (signal 1). Ekspresija B7-1 je veoma mala na ćeliji u mirovanju, ali se obično indukuje nakon produžene stimulacije T ćelija. Te razlike ukazuju da, dok je B7-2 važan za inicijalizaciju aktivacije T ćelija, B7-1 može igrati veću ulogu u nastavljanju imunskog odgovora.
[0004] Nakon aktivacije T ćelija, negativni regulativni receptor antigen cititoksičnih T limfocita 4 (CTLA-4) se ushodno reguliše na T ćelijama (Alegre i sar., 2001, Nat Rev Immunol 1:220-8). CTLA-4 je strukturno homolog sa CD28, ali se mnogo čvršće vezuje za B7-1 i B7-2 ligande. CTLA-4 inhibira imunski odgovor na nekoliko načina: takmiči se sa CD28 za B7 ligand i tako blokira kostimulaciju; negativno signalizira kako bi inhibirao aktivaciju T ćelija; i može da uhvati CD80 i CD86 sa suprotnih ćelija putem transendocitoze, što dovodi do oštećene kostimulacije putem CD28 (Krummel i Allison, 1995, J Exp Med 182:459-465; Walunas i sar., 1994, Immunity 1:405-413; Qureshi i sar., 2011, Science 332:600-603). WO 2009/100140 A1 otkriva monoklonska antitela koja se vezuju za CTLA-4.
[0005] Znajući za ključnu ulogu B7 kostimulatornog puta u podsticanju i održavanju imunskog odgovora, terapeutski agensi osmišljeni da se suprotstave ovom putu su perspektivni za lečenje autoimunskih bolesti i poremećaja.
3. REZIME
[0006] Trenutna objava obezbeđuje antitela koja se specifično vezuju za humani CTLA-4 i suprotstavljaju se funkciji CTLA-4, npr. imunosupresiji posredstvom CTLA-4. Takođe su obezbeđene farmaceutske kompozicije koje sadrže ta antitela, nukleinske kiseline koje kodiraju ta antitela, ekspresioni vektori i ćelije domaćini za dobijanje tih antitela, i postupci za lečenje ispitanika koristeći ta antitela. Ovde objavljena antitela su posebno korisna za povećanje aktivacije T ćelija kao odgovor na antigen (npr. antigen tumora) i/ili sniženje imunosupresije posredstvom Treg, pa time za lečenje raka kod ispitanika. Predmetni pronalazak se odnosi na izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca, naznačeno time što varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7, a varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8.
[0007] U jednom aspektu, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRH1, CDRH2 i CDRH3, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRL1, CDRL2 i CDRL3, naznačeno time što:
(a) CDRH1 sadrži aminokiselinsku sekvencu SYX1MX2(SEQ ID NO: 22), naznačeno time što X1je S ili A; i X2je N ili S;
(b) CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SISSSSSYIYYADSVKG (SEQ ID NO: 2); (c) CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu VGLMGPFXI (SEQ ID NO: 23), naznačeno time što X je D ili N;
(d) CDRL1 sadrži aminokiselinsku sekvencu RASQSVX1X2YLX3(SEQ ID NO: 24), naznačeno time što X1je S ili G; X2je R, S ili T; i X3je G ili A;
(e) CDRL2 sadrži aminokiselinsku sekvencu X1X2SX3RAT (SEQ ID NO: 25), naznačeno time što X1je G ili A; X2je A ili T; i X3je T, S, R ili N; i
(f) CDRL3 sadrži aminokiselinsku sekvencu QQYGX1SPX2T (SEQ ID NO: 26), naznačeno time što X1je S ili T; i X2je W ili F.
[0008] U nekim aspektima, CDRH1 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 1 i 27. U nekim aspektima, CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 3 i 28. U nekim aspektima, CDRL1 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 4, 29 i 30. U nekim aspektima, CDRL2 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 5 i 31–35. U nekim aspektima, CDRL3 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 6, 36 i 37. U nekim aspektima, CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sadrže aminokiselinske sekvence CDRH1, CDRH2 odnosno CDRH3, prikazane u SEQ ID NO: 1, 2 i 3; 27, 2 i 3; ili 27, 2 i 28. U nekim aspektima, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence CDRL1, CDRL2 odnosno CDRL3, prikazane u SEQ ID NO: 4, 5 i 6; 29, 32 i 36; 29, 33 i 37; 30, 31 i 6; 29, 34 i 6; ili 29, 35 i 37. U antitelu iz pronalaska CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CRL3 sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 odnosno 6.
[0009] U drugom aspektu, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRH1, CDRH2 i CDRH3, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRL1, CDRL2 i CDRL3, naznačeno time što:
(a) CDRH1 sadrži aminokiselinsku sekvencu SYX1MX2(SEQ ID NO: 22), naznačeno time što X1je S ili A; i X2je N ili S;
(b) CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SISSSSSYIYYADSVKG (SEQ ID NO: 2); (c) CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu VGLMGPFXI (SEQ ID NO: 23), naznačeno time što X je D ili N;
(d) CDRL1 sadrži aminokiselinsku sekvencu RASQSVX1X2YLX3(SEQ ID NO: 24), naznačeno time što X1je S ili G; X2je R, S ili T; i X3je G ili A;
(e) CDRL2 sadrži aminokiselinsku sekvencu X1X2SX3RAT (SEQ ID NO: 25), naznačeno time što X1je G ili A; X2je A ili T; i X3je T, S, R ili N; i
(f) CDRL3 sadrži aminokiselinsku sekvencu QQYGX1SPX2T (SEQ ID NO: 26), naznačeno time što X1je S ili T; i X2je W ili F.
[0010] U nekim aspektima, CDRH1 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 1 i 27. U nekim aspektima, CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 3 i 28. U nekim aspektima, CDRL1 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 4, 29 i 30. U nekim aspektima, CDRL2 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 5 i 31–35. U nekim aspektima, CDRL3 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 6, 36 i 37. U nekim aspektima, CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sadrže aminokiselinske sekvence CDRH1, CDRH2 odnosno CDRH3, prikazane u SEQ ID NO: 1, 2 i 3; 27, 2 i 3; ili 27, 2 i 28. U nekim aspektima, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence CDRL1, CDRL2 odnosno CDRL3, prikazane u SEQ ID NO: 4, 5 i 6; 29, 32 i 36; 29, 33 i 37; 30, 31 i 6; 29, 34 i 6; ili 29, 35 i 37.
[0011] U drugom aspektu, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRH1, CDRH2 i CDRH3, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRL1, CDRL2 i CDRL3, naznačeno time što CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CRL3 sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 odnosno 6.
[0012] U nekim aspektima, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 72. U nekim aspektima, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100% identična aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 7 i 38–42. U nekim aspektima, varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 7 i 38–42.
Varijabilni region teškog lanca antitela iz pronalaska sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12. U nekim aspektima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 93. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 94. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 76. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 97. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu dobijenu od sekvence humane germinativne linije IGHV3-21 (npr. IGHV3-21*01, npr. koja ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 9).
[0013] U nekim aspektima, antitelo sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 73. U nekim aspektima, antitelo sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100% identična aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 8 i 43–47. U nekim aspektima, antitelo sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 8 i 43–47. Antitelo iz pronalaska sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 15. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu dobijenu od sekvence humane germinativne linije IGKV3-20 (npr. IGKV3-20*01, npr. koja ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10) ili sekvence humane germinativne linije IGKV3-11 (npr. IGKV3-11*01, npr. koja ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11).
[0014] U drugom aspektu, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 7 i 38–42.
[0015] U drugom aspektu, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 8 i 43–47.
[0016] U drugom aspektu, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca, naznačeno time što varijabilni region teškog lanca, odnosno varijabilni region lakog lanca, sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 7 i 8; 7 i 44; 7 i 45; 38 i 8; 38 i 45; 39 i 43; 39 i 45; 39 i 46; 39 i 47; 40 i 43; 40 i 8; 40 i 44; 40 i 45; 41 i 8; 41 i 44; 41 i 45; 41 i 47; 42 i 43; ili 42 i 45. Antitelo iz pronalaska sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 93, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 94, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 76, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 97, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13.
[0017] U drugom aspektu, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu dobijenu od humane sekvence germinativne linije IGHV3-21 i varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu dobijenu od humane sekvence germinativne linije IGKV3-20 ili humane sekvence germinativne linije IGKV3-11.
[0018] U drugom aspektu, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se unakrsno takmiči u vezivanju za humani CTLA-4 protein sa antitelom koji sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog i lakog lanca prikazane u SEQ ID NO: 7 odnosno 8.
[0019] U drugom aspektu, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se vezuje za isti epitop na humanom CTLA-4 proteinu kao antitelo koji sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog i lakog lanca prikazane u SEQ ID NO: 7 odnosno 8.
[0020] U drugom aspektu, trenutna objava obezbeđuje antitelo koje se vezuje za epitop na humanom CTLA-4. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji sadrži, suštinski se sastoji od, ili se sastoji od ostataka 140–141 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji se sastoji od ostataka 140–141 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za najmanje jedan ostatak humanog CTLA-4 izabran iz grupe koja se sastoji od ostataka 140 i 141 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji sadrži, suštinski se sastoji od, ili se sastoji od ostataka 140–143 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji se sastoji od ostataka 140–143 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji sadrži, suštinski se sastoji od, ili se sastoji od ostataka 135–143 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji se sastoji od ostataka 135–143 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji sadrži, suštinski se sastoji od, ili se sastoji od ostataka 140–149 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji se sastoji od ostataka 140–149 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji sadrži, suštinski se sastoji od, ili se sastoji od ostataka 135–149 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji se sastoji od ostataka 135–149 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji sadrži, suštinski se sastoji od, ili se sastoji od ostataka 80–82 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, antitelo se vezuje za epitop humanog CTLA-4 koji se sastoji od ostataka 80–82 SEQ ID NO: 77.
[0021] U drugom aspektu, trenutna objava obezbeđuje antitelo za koje je, nakon vezivanja antitela za humani CTLA-4 protein praćenog adicijom deuterijuma, zamena vodonika u humanom CTLA-4 proteinu deuterijumom u regionu koji sadrži ostatke 140–141 SEQ ID NO: 77 znatno smanjena u odnosu na zamenu vodonika u humanom CTLA-4 proteinu deuterijumom u istom regionu u odsustvu antitela, kao što je određeno putem razmene vodonik/deuterijum. U nekim aspektima, region humanog CTLA-4 sadrži ostatke 140–143 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, region humanog CTLA-4 sadrži ostatke 135–143 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, region humanog CTLA-4 sadrži ostatke 140–149 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, region humanog CTLA-4 sadrži ostatke 135–149 SEQ ID NO: 77. U nekim aspektima, nakon vezivanja antitela za humani CTLA-4 protein praćenog adicijom deuterijuma, zamena vodonika u humanom CTLA-4 proteinu deuterijumom u regionu koji sadrži ostatke 80–82 SEQ ID NO: 77 znatno je smanjena u odnosu na zamenu vodonika u humanom CTLA-4 proteinu deuterijumom u istom regionu u odsustvu antitela, kao što je određeno putem razmene vodonik/deuterijum.
[0022] U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca odabran iz grupe koja se sastoji od humanog IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1i IgA2. U nekim otelotvorenjima, konstantni region teškog lanca je IgG1. U nekim otelotvorenjima, konstantni region teškog lanca je IgG2. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region lakog lanca odabran iz grupe koja se sastoji od humanog IgGκ i IgGλ.
[0023] U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca humanog IgG koji je varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG divljeg tipa, naznačeno time što varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG se vezuje za humane Fc gama receptore izabrane od grupe koja se sastoji od FcγRIIB i FcγRIIA sa većim afinitetom nego što se konstantni region teškog lanca humanog IgG divljeg tipa vezuje za humane Fc gama receptore. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca humanog IgG koji je varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG divljeg tipa, naznačeno time što varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG se vezuje za humani FcγRIIB sa većim afinitetom nego što se konstantni region teškog lanca humanog IgG divljeg tipa vezuje za humani FcγRIIB. U nekim otelotvorenjima, varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG je varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG1, humanog IgG2ili humanog IgG4. U nekim otelotvorenjima, varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG sadrži jednu ili više od sledećih mutacija aminokiselina, prema EU sistemu numeracije: G236D, P238D, S239D, S267E, L328F i L328E. U nekim otelotvorenjima, varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG sadrži skup mutacija aminokiselina izabran iz grupe koja se sastoji od: S267E i L328F; P238D i L328E; P238D i jedne ili više supstitucija izabranih iz grupe koja se sastoji od E233D, G237D, H268D, P271G, i A330R; P238D, E233D, G237D, H268D, P271G i A330R; G236D i S267E; S239D i S267E; V262E, S267E i L328F; i V264E, S267E i L328F, prema EU sistemu numeracije. U nekim otelotvorenjima, varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG dalje sadrži jednu ili više mutacija aminokiselina koje smanjuju afinitet IgG prema humanom FcγRIIIA, humanom FcγRIIA, ili humanom FcγRI. U nekim otelotvorenjima, FcγRIIB se eksprimira na ćeliji izabranoj iz grupe koja se sastoji od makrofaga, monocita, B ćelija, dendritskih ćelija, endotelnih ćelija i aktiviranih T ćelija.
[0024] U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca humanog IgG koji je varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG divljeg tipa, naznačeno time što varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG se vezuje za humane Fc gama receptore sa većim afinitetom nego što se konstantni region teškog lanca humanog IgG divljeg tipa vezuje za humane Fc gama receptore. U nekim otelotvorenjima, humani Fc gama receptor sadrži aktivacioni motiv imunoreceptora na bazi tirozina (IT AM). U nekim otelotvorenjima, humani Fc gama receptor je odabran iz grupe koja se sastoji od FcγRIIIA, FcγRIIA i FcγRI. U nekim otelotvorenjima, humani Fc gama receptor je FcγRIIIA. U nekim otelotvorenjima, varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG sadrži jednu ili više od sledećih mutacija aminokiselina, prema EU sistemu numeracije: G236A, S239D, F243L, T256A, K290A, R292P, S298A, Y300L, V305I, A330L, I332E, E333A, K334A, A339T i P396L. U nekim otelotvorenjima, varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG sadrži skup mutacija aminokiselina izabran iz grupe koja se sastoji od: S239D; T256A; K290A; S298A; I332E; E333A; K334A; A339T; S239D i I332E; S239D, A330L i I332E; S298A, E333A i K334A; G236A, S239D i I332E; i F243L, R292P, Y300L, V305I i P396L, prema EU sistemu numeracije. U nekim otelotvorenjima, varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG sadrži sledeće mutacije aminokiselina, prema EU sistemu numeracije: S239D, A330L i I332E. U nekim otelotvorenjima, varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG sadrži sledeće mutacije aminokiselina, prema EU sistemu numeracije: S239D i I332E. U nekim otelotvorenjima, varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG je varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG1koja sadrži sledeće mutacije aminokiselina, prema EU sistemu numeracije: S239D i I332E. U nekim
1
otelotvorenjima, antitelo sadrži afukozilovani Fc region. U nekim otelotvorenjima, antitelo je formulisano za intratumorsku isporuku. U nekim otelotvorenjima, antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje intratumorski. U nekim otelotvorenjima, antitelo je formulisano za isporuku u limfni čvor u koji se drenira tumor. U nekim otelotvorenjima, antitelo ili farmaceutska kompozicija se isporučuje u limfni čvor u koji se drenira tumor. U nekim otelotvorenjima, antitelo je formulisano za supkutanu isporuku. U nekim otelotvorenjima, antitelo ili farmaceutska kompozicija se isporučuje supkutano.
[0025] U nekim aspektima, humani Fc gama receptor je FcγRIIc. U nekim aspektima, humani Fc gama receptor je eksprimiran na ćeliji izabranoj iz grupe koja se sastoji od makrofaga, monocita, B ćelija i dendritskih ćelija. U nekim otelotvorenjima, antitelo je humano antitelo. U nekim otelotvorenjima, antitelo je antagonist CTLA-4. U nekim otelotvorenjima, antitelo inhibira vezivanje humanog CTLA-4 proteina za humani CD80 ili za humani CD86.
[0026] U određenim aspektima, antitelo je konjugovano sa citotoksičnim agensom, citostatskim agensom, toksinom, radionukleotidom ili sa oznakom koja se može detektovati.
[0027] U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak se odnosi na antitelo iz predmetnog pronalaska za korišćenje kao lek.
[0028] Ovde je otkrivena upotreba antitela iz predmetnog pronalaska za pripremu farmaceutskih kompozicija ili lekova za imunoterapiju. Poželjno, imunoterapija je za povećanje aktivacije T ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika, opciono za lečenje raka, ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti.
[0029] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na antitelo iz predmetnog pronalaska za upotrebu kao dijagnostičko sredstvo.
[0030] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na upotrebu antitela iz predmetnog pronalaska za in vitro detekciju humanog CTLA-4 u biološkom uzorku.
[0031] U drugom aspektu, trenutno otkriće pruža farmaceutsku kompoziciju koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo koje je ovde otkriveno, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens.
[0032] U drugom aspektu, trenutno otkriće pruža izolovani polinukleotid koji kodira teški i/ili laki lanac antitela koje je ovde otkriveno. U drugom aspektu, trenutno otkriće pruža vektor koji sadrži polinukleotid. U drugom aspektu, trenutno otkriće pruža rekombinantnu ćeliju domaćina koja sadrži polinukleotid ili vektor. U drugom aspektu, trenutno otkriće pruža postupak za proizvodnju antitela koje se vezuje za humani CTLA-4, i postupak obuhvata uzgajanje ćelije domaćina tako da se eksprimira polinukleotid i proizvodi se antitelo.
[0033] U drugom aspektu, trenutno otkriće pruža postupak za povećanje aktivacije T ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika, i postupak obuhvata primenu na ispitaniku delotvorne količine ovde otkrivenog anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutske kompozicije. U drugom aspektu, trenutno otkriće pruža postupak za lečenje raka kod ispitanika, i postupak obuhvata primenu na ispitaniku delotvorne količine ovde otkrivenog anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutske kompozicije. Predmetni pronalazak se odnosi na izolovano antitelo iz pronalaska ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska za primenu u postupku za: (a) lečenje raka; i/ili (b) lečenje infektivne bolesti. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuju se supkutano ili intravenski. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intravenski sa 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg ili 10 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intratumorski. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intratumorski sa 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg ili 3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intratumorski sa 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intratumorski u dozi koja je do 5-struko, 10-struko, 20-struko, 30-struko, 40-struko, 50-struko, 60-struko, 70-struko, 80-struko, 90-struko, 100-struko ili 200-struko manja od doze koja se daje putem sistemske primene. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intratumorski u dozi koja je do 10-struko manja od doze koja se daje putem sistemske primene. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intratumorski u dozi koja je do 100-struko manja od doze koja se daje putem sistemske primene. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intratumorski, i postupak dalje obuhvata primenu dodatnog terapeutskog agensa na ispitaniku. U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens se primenjuje sistemski. U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima solidni tumor i dodatni terapeutski agens je anti-PD-1 antitelo. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je pembrolizumab ili nivolumab. U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata i dodatni terapeutski agens je anti-EGFR antitelo. U određenim otelotvorenjima, anti-EGFR antitelo je cetuksimab. U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima HER2 pozitivan karcinom dojke i dodatni terapeutski agens je anti-HER2 antitelo. U određenim otelotvorenjima, anti-HER2 antitelo je trastuzumab. U određenim otelotvorenjima, ovi postupci dalje obuhvataju primenu hemioterapeutskog agensa na ispitaniku. U određenim otelotvorenjima, hemioterapeutski agens se primenjuje sistemski. U određenim otelotvorenjima, hemioterapeutski agens je gemcitabin. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intratumorski i ispitanik ima uznapredovali ili metastatski solidni tumor. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intratumorski i ispitanik ima rak glave i vrata (npr. relapsni/refraktorni karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata). U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija primenjuje se intratumorski i ispitanik ima karcinom dojke (npr. relapsni/refraktorni HER2+ karcinom dojke). U nekim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se isporučuje u limfni čvor u koji se drenira tumor. U nekim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se isporučuje putem lokalizovane primene (npr. supkutane primene). U nekim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se isporučuje putem lokalizovane primene (npr. supkutane primene) sa 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg ili 3 mg/kg. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija isporučuje se putem lokalizovane primene (npr. supkutane primene) u dozi koja je do 5-struko, 10-struko, 20-struko, 30-struko, 40-struko, 50-struko, 60-struko, 70-struko, 80-struko, 90-struko, 100-struko ili 200-struko manja od doze koja se daje putem sistemske primene. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija isporučuje se putem lokalizovane primene (npr. supkutane primene) u dozi koja je do 10-struko manja od doze koja se daje putem sistemske primene. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija isporučuje se putem lokalizovane primene (npr. supkutane
1
primene) u dozi koja je do 100-struko manja od doze koja se daje putem sistemske primene. U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija isporučuje se putem lokalizovane primene (npr. supkutane primene) i postupak dalje obuhvata primenu dodatnog terapeutskog agensa na ispitaniku. U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je vakcina. U određenim otelotvorenjima, vakcina sadrži peptidni kompleks proteina toplotnog šoka (heat shock protein peptide complex, HSPPC) koji sadrži protein toplotnog šoka kompleksiran sa antigenim peptidom. U jednom otelotvorenju, protein toplotnog šoka je protein gp96 i kompleksiran je sa antigenim peptidom povezanim sa tumorom, naznačeno time što je HSPPC dobijen iz tumora pribavljenog od ispitanika. U određenim otelotvorenjima, protein toplotnog šoka je izabran iz grupe koja se sastoji od hsc70, hsp70, hsp90, hsp110, grp170, gp96, kalretikulina, mutanta prethodno navedenog i kombinacije dva ili više od prethodno navedenog. U određenim otelotvorenjima, protein toplotnog šoka je hsc70. U određenim otelotvorenjima, protein toplotnog šoka je hsp70. U određenim otelotvorenjima, antigeni peptid je sintetički. U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima rak. U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima infektivnu bolest. U određenim otelotvorenjima, ovi postupci dalje obuhvataju primenu dodatnog terapeutskog agensa na ispitaniku. U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je hemioterapeutski agens ili agens koji cilja kontrolnu tačku. U određenim otelotvorenjima, agens koji cilja kontrolnu tačku je izabran iz grupe koja se sastoji od antagonista anti-PD-1 antitela, antagonista anti-PD-L1 antitela, antagonista anti-PD-L2 antitela, antagonista anti-CTLA-4 antitela, antagonista anti-TIM-3 antitela, antagonista anti-LAG-3 antitela, antagonista anti-CEACAM1 antitela, agonista anti-GITR antitela, agonista anti-OX40 antitela i agonista anti-CD137 antitela, agonista anti-DR3 antitela, agonista anti-TNFSF14 antitela i agonista anti-CD27 antitela. U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je radioterapija. U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor indolamin-2,3-dioksigenaze (IDO). Pogodni inhibitori IDO uključuju, bez ograničenja, epakadostat, F001287, indoksimod i NLG919. U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je vakcina. U određenim otelotvorenjima, vakcina sadrži peptidni kompleks proteina toplotnog šoka (heat shock protein peptide complex, HSPPC) koji sadrži protein toplotnog šoka kompleksiran sa antigenim peptidom. U jednom otelotvorenju, protein toplotnog šoka je protein gp96 i kompleksiran je sa antigenim peptidom povezanim sa tumorom, naznačeno time što je HSPPC dobijen iz tumora pribavljenog od ispitanika.
[0034] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na antitelo iz predmetnog pronalaska, polinukleotid iz pronalaska, vektor iz pronalaska i/ili rekombinantnu ćeliju domaćina iz pronalaska, za upotrebu kao lek.
[0035] U jednom aspektu, predmetno otkriće
se odnosi na antitelo iz predmetnog pronalaska, polinukleotid iz pronalaska, vektor iz pronalaska i/ili rekombinantnu ćeliju domaćina iz pronalaska, za upotrebu kao dijagnostičko sredstvo.
[0036] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na antitelo iz predmetnog pronalaska, polinukleotid iz pronalaska, vektor iz pronalaska i/ili rekombinantnu ćeliju domaćina iz pronalaska, za in vitro detektovanje humanog CTLA-4 u biološkom uzorku.
[0037] U jednom aspektu, ovde je data farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo koje je ovde otkriveno i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu kao lek.
[0038] U jednom aspektu, ovde je data farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo koje je ovde otkriveno i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu kao dijagnostičko sredstvo.
[0039] U jednom aspektu, ovde je data farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo koje je ovde otkriveno, polinukleotid iz pronalaska, vektor iz pronalaska i/ili rekombinantnu ćeliju domaćina iz pronalaska, i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens. U jednom aspektu, farmaceutska kompozicija je namenjena za primenu kao lek i/ili dijagnostičko sredstvo.
[0040] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za primenu u postupku za povećanje aktivacije T ćelija kao odgovor na antigen.
[0041] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za primenu u postupku za povećanje aktivacije T ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika.
1
[0042] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za primenu u postupku za povećanje aktivacije T ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika koji obuhvata primenu na ispitaniku delotvorne količine antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije domaćina i/ili farmaceutske kompozicije iz pronalaska.
[0043] U jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za primenu u postupku za lečenje raka.
[0044] U jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za primenu u postupku za lečenje raka kod ispitanika.
[0045] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za primenu u postupku za lečenje raka kod ispitanika koji obuhvata primenu na ispitaniku delotvorne količine antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije domaćina i/ili farmaceutske kompozicije iz pronalaska.
[0046] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens, poželjno anti-PD-1 antitelo, za primenu kao lek.
[0047] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens, poželjno anti-PD-1 antitelo, za primenu u postupku lečenja raka. U poželjnom otelotvorenju, rak je solidni tumor. U drugom poželjnom aspektu, antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija domaćin i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska primenjuje se intratumorski na ispitaniku, poželjno se primenjuje intratumorski na ispitaniku sa 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg ili 3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje.
1
[0048] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na farmaceutsku kompoziciju, komplet ili komplet delova koji sadrže (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens, poželjno anti-PD-1 antitelo.
[0049] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) anti-EGFR antitelo i opciono (c) hemioterapeutski agens, za primenu kao lek.
[0050] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) anti-EGFR antitelo i opciono (c) hemioterapeutski agens, za primenu u postupku za lečenje raka. U poželjnom otelotvorenju, rak je karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata. U drugom poželjnom otelotvorenju, antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija domaćin i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska primenjuje se intratumorski na ispitaniku, poželjno se primenjuje intratumorski na ispitaniku sa 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg ili 3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje.
[0051] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na farmaceutsku kompoziciju, komplet ili komplet delova koji sadrže (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) anti-EGFR antitelo i opciono (c) hemioterapeutski agens.
[0052] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) anti-HER2 antitelo i opciono (c) hemioterapeutski agens, za primenu kao lek.
[0053] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) anti-HER2 antitelo i opciono (c) hemioterapeutski agens, za primenu u postupku za lečenje HER2+ karcinoma dojke. U drugom poželjnom aspektu, antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija domaćin i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska primenjuje se intratumorski na ispitaniku, poželjno se primenjuje intratumorski na
1
ispitaniku sa 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg ili 3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje.
[0054] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na farmaceutsku kompoziciju, komplet ili komplet delova koji sadrže (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) anti-HER2 antitelo i opciono (c) hemioterapeutski agens.
[0055] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za upotrebu u postupku za lečenje raka, naznačeno time što se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija domaćin i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska primenjuje intratumorski na ispitaniku, poželjno se primenjuje intratumorski na ispitaniku sa 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg ili 3 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje.
[0056] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za upotrebu u postupku za lečenje raka, naznačeno time što se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija domaćin i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska primenjuje supkutano ili intravenski na ispitaniku, poželjno se primenjuje intravenski na ispitaniku sa 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg ili 10 mg/kg, opciono u intervalu jednom na svake tri nedelje.
[0057] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens, za primenu kao lek. U poželjnom otelotvorenju, dodatni terapeutski agens je hemioterapeutski agens ili agens koji cilja kontrolnu tačku ili inhibitor indolamin-2,3-dioksigenaze (IDO) ili vakcina.
[0058] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens, za primenu u postupku lečenja raka. U poželjnom
1
otelotvorenju, dodatni terapeutski agens je hemioterapeutski agens ili agens koji cilja kontrolnu tačku ili inhibitor indolamin-2,3-dioksigenaze (IDO) ili vakcina.
[0059] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na farmaceutsku kompoziciju, komplet ili komplet delova koji sadrže (a) antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska i (b) dodatni terapeutski agens. U poželjnom otelotvorenju, dodatni terapeutski agens je hemioterapeutski agens ili agens koji cilja kontrolnu tačku ili inhibitor indolamin-2,3-dioksigenaze (IDO) ili vakcina.
[0060] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantnu ćeliju domaćina i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za upotrebu u postupku za lečenje raka, naznačeno time što se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija domaćin i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska isporučuju u limfni čvor u koji se drenira tumor.
[0061] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na upotrebu antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije domaćina i/ili farmaceutske kompozicije iz predmetnog pronalaska u postupku za lečenje raka i/ili postupku za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika, naznačeno time što se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija domaćin i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska isporučuju u limfni čvor u koji se drenira tumor.
[0062] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na upotrebu antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije domaćina i/ili farmaceutske kompozicije iz predmetnog pronalaska za pripremanje lekova za imunoterapiju, na primer, za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika, lečenje raka, ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti.
[0063] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na upotrebu antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije domaćina i/ili farmaceutske kompozicije iz predmetnog pronalaska za pripremanje lekova za imunoterapiju, na primer, za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika, lečenje raka, ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti, naznačeno time što se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija
1
domaćin i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska isporučuje u limfni čvor u koji se drenira tumor.
[0064] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na upotrebu (a) antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije domaćina i/ili farmaceutske kompozicije iz predmetnog pronalaska i (b) anti-HER2 antitela i opciono (c) hemioterapeutskog agensa, za pripremanje lekova za imunoterapiju, na primer, za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika, lečenje raka, ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti.
[0065] U jednom aspektu, predmetno otkriće se odnosi na upotrebu (a) antitela, polinukleotida, vektora, rekombinantne ćelije domaćina i/ili farmaceutske kompozicije iz predmetnog pronalaska i (b) anti-HER2 antitela i opciono (c) hemioterapeutskog agensa, za pripremanje lekova za imunoterapiju, na primer, za povećanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika, lečenje raka, ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti, naznačeno time što se antitelo, polinukleotid, vektor, rekombinantna ćelija domaćin i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska isporučuje u limfni čvor u koji se drenira tumor.
4. KRATAK OPIS CRTEŽA
[0066]
Slika 1A je tabela koja prikazuje afinitete vezivanja (KD) anti-CTLA-4 antitela AGEN1884 i referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela za dimerne i monomerne rekombinantne humane, cinomolgusove, mišje i pacovske CTLA-4, izmereno površinskom plazmonskom rezonancom. Slika 1B je dijagram koji prikazuje vezivanje AGEN1884w, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i kontrole izotipa IgG1za ćelije koje eksprimiraju CTLA-4, mereno protočnom citometrijom. Srednji intenzitet fluorescencije (MFI) izračunat je i postavljen u odnosu na niz koncentracija antitela. Slike 1C i 1D prikazuju selektivnost AGEN1884 i referentnog anti-CTLA-4 IgG1 antitela koje se vezuje za rekombinantni humani (rh) i cinomolgusov (rc) CTLA-4, u poređenju sa povezanim članovima familije (rekombinantni humani CD28, ICOS, BTLA, i PD-1 i rekombinantni cinomolgusov PD-1), prikazanu u odnosu na kontrolu izotipa IgG1antitela. Vezivanje je mereno tehnologijom suspendovanih čipova, i srednji intenzitet fluorescencije (MFI) na tri različite koncentracije antitela (10, 100 i 1000 ng/ml) prikazan je na slici 1C. Slika 1D je zbirna tabela relativnog afiniteta vezivanja na osnovu podataka prikazanih na slici 1C.
2
Slika 2A prikazuje vezivanje AGEN1884w, anti-CTLA-4 referentnog antitela, i antitela IgG1za kontrolu izotipa za aktivirane primarne humane CD4+ T ćelije. Ukratko, sveže izolovane CD4+ T ćelije su stimulisane koristeći anti-CD3 i anti-CD28 antitela vezana za ploču tokom pet dana pre analize vezivanja antitela protočnom citometrijom. Srednji intenzitet fluorescencije (MFI) izračunat je za opseg koncentracija antitela. Slika 2B prikazuje intraćelijsko vezivanje AGEN1884 i anti-CTLA-4 referentnog antitela u poređenju sa antitelom IgG1za kontrolu izotipa u titrisanim koncentracijama koristeći aktivirane (anti-CD3 i anti-CD28 sa rekombinantnim IL-2 tokom tri dana) primarne CD8+ T ćelije cinomolgusa. Podaci su dobijeni protočnom citometrijom i prikazani su kao procenat CTLA-4+ T ćelija kao udeo od ukupne populacije CD8+ T ćelija. Slika 2C prikazuje rezultate analize protočne citometrije za ispitivanje vezivanja AGEN1884w i antitela IgG1za kontrolu izotipa za CD4+ T ćelije čoveka, cinomolgusa, pacova ili miša stimulisane fitohemaglutinom.
Slika 3A je šema testa blokiranja liganda koristeći tehnologiju suspendovanih čipova. Slike 3B i 3C prikazuju procenat vezivanja rekombinantnih proteina CD80-Fc (slika 3B) i CD86-Fc (slika 3C) za CTLA-4 konjugovane perlice u odsustvu (100%) ili prisustvu titracije doze AGEN1884, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, ili antitela za kontrolu izotipa (IgG1). Slika 3D prikazuje procenat vezivanja rekombinantnog CD80-Fc i CD86-Fc za T ćelije koje eksprimiraju CTLA-4 (Jurkatove) u prisustvu rastućih koncentracija AGEN1884w, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, ili antitela za kontrolu izotipa (IgG1). Slika 3E prikazuje rezultate testa u kome su T ćelije koje eksprimiraju CTLA-4 (Jurkatove) inkubirane sa titrisanom dozom CD80-Fc ili CD86-Fc pre dodavanja fiksne koncentracije direktno fluorohromom konjugovanog AGEN1884w ili referentnog anti-CTLA-4 antitela IgG1.
Srednji intenzitet fluorescencije (MFI) izračunat je i predstavljen u odnosu na opseg koncentracija CD80-Fc ili CD86-Fc.
Slika 4A predstavlja funkcionalnu aktivnost anti-CTLA-4 antitela na kulturama primarnih humanih PBMC nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA). Konkretno, slika 4A prikazuje koliko puta je promenjena proizvodnja IL-2 kao odgovor na dozni odgovor AGEN1884w i referentnog anti-CTLA-4 antitela IgG1, u poređenju sa kontrolom izotipa IgG1. Trake sa greškom predstavljaju standardno odstupanje od bunarčića u triplikatu. Slike 4B i 4C su rezultat iz testa sa IL-2-luciferaza reporterom koji pokazuje da blokiranje CTLA-4 dovodi do aktivacije T ćelija. Humana T ćelijska linija (Jurkat) koja koeksprimira CD3 i CD28, konstruisana da konstutivno eksprimira CTLA-4 ćelijske površine pored reporter gena luciferaze pod kontrolom IL-2 promotera, zajednički je uzgajana sa antigen prezentujućom ćelijskom linijom (Raji) koja eksprimira CD80 i CD86. Slika 4B predstavlja par histograma koji prikazuju ekspresiju CD80 i CD86 na Raji ćelijama, mereno protočnom citometrijom. TCR signalizacija je aktivirana koristeći anti-CD3 antitelo u prisustvu rastućih koncentracija AGEN1884w ili antitela IgG1za kontrolu izotipa. Slika 4C prikazuje koliko puta se povećala ekspresija luciferaze, surogat markera za aktivaciju IL-2 gena, kao odgovor na rastuće koncentracije AGEN1884w u odnosu na antitelo za kontrolu izotipa. Slike 4D i 4E su rezultat testa koji ispituje sposobnost anti-CTLA-4 antitela AGEN1884w da smanji proizvodnju IFNγ od primarnih CD8+ T ćelija u prisustvu visokih koncentracija anti-CD3 antitela. Primarne humane T ćelije su stimulisane pomoću anti-CD3 antitela (10 µg/ml) u prisustvu rastućih koncentracija bilo rastvorljivog (slika 4D) ili vezanog za ploču (slika 4E) AGEN1884w ili antitela IgG1za kontrolu izotipa. Procenat CD8+ IFNγ+ T ćelija je predstavljen u odnosu na ispitane koncentracije antitela. Tačkasta linija prikazuje učestalost CD8+ IFNγ+ T ćelija u odsustvu stimulacije anti-CD3 antitelom. Slika 4F je grafikon koji prikazuje funkcionalnu aktivnost anti-CTLA-4 antitela AGEN1884w, bilo samog ili u kombinaciji sa anti-LAG-3 antitelom AGEN1746, anti-PD-1 antitelom nivolumabom, ili anti-PD-1 antitelom pembrolizumabom, na kulturama primarnih humanih PBMC nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA). Prikazana je srednja vrednost i standardna devijacija koncentracije IL-2. IC označava kontrolu izotipa.
Slika 5A prikazuje afinitete vezivanja (KD) AGEN2041w, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i referentnog anti-CTLA-4 IgG2antitela za dimerne i monomerne rekombinantne CTLA-4 čoveka i cinomolgusa, izmereno površinskom plazmonskom rezonancom. Slika 5B je dijagram koji prikazuje vezivanje AGEN2041w, referentnog anti-CTLA-4 antitela IgG2, i kontrole izotipa IgG2za ćelije koje eksprimiraju CTLA-4, mereno protočnom citometrijom. Srednji intenzitet fluorescencije (MFI) izračunat je i postavljen u odnosu na različite koncentracija ispitivanih antitela. Slika 5C je dijagram koji prikazuje procenat vezivanja CD80 i CD86 za CTLA-4 u prisustvu rastućih koncentracija AGEN2041w ili referentnog anti-CTLA-4 IgG2antitela (12, 37, 111, 333, 1000, 3000 i 9000 ng/ml pre dodavanja perlica) mereno tehnologijom suspendovanih čipova. Slike 5D i 5E su tabele slične onima prikazanim na slikama 1C odnosno 1D, gde je selektivnost AGEN2041w i referentnog anti-CTLA-4 antitela IgG2koje se vezuje za rekombinantni humani (rh) i cinomolgusov (rc) CTLA-4, u poređenju sa povezanim članovima familije (rekombinantni humani CD28, ICOS, BTLA, i PD-1 i rekombinantni PD-1 cinomolgusa), ispitana u odnosu na kontrolu izotipa antitela IgG2. Slika 5D prikazuje MFI vrednosti merene tehnologijom suspendovanih čipova, a slika 5E je zbirna tabela na bazi podataka prikazanih na slici 5D.
Slika 6A predstavlja funkcionalnu aktivnost anti-CTLA-4 antitela na kulturama primarnih humanih PBMC nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA). Slika 6A prikazuje koliko puta se promenila proizvodnja IL-2 kao odgovor na dozni odgovor AGEN1884w i AGEN2041w, u poređenju sa antitelima IgG1i IgG2za kontrolu izotipa.
Trake sa greškom predstavljaju standardno odstupanje od bunarčića u triplikatu. Slika 6B je dijagram koji prikazuje rezultate testa sa IL-2-luciferaza reporterom koji ispituje AGEN2041w i antitelo IgG2za kontrolu izotipa. Koliko puta se povećala ekspresija luciferaze, surogat markera za aktivaciju IL-2 gena, prikazano je za rastuće doze AGEN2041w i antitela za kontrolu izotipa.
Slika 7A je dijagram koji prikazuje vezivanje AGEN1884w-105 (AGEN1884w koji proizvodi stabilni klon 105), referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i kontrole izotipa IgG1za ćelije koje eksprimiraju CTLA-4, mereno protočnom citometrijom. Srednji intenzitet fluorescencije (MFI) izračunat je i postavljen u odnosu na titraciju antitela. Slika 7B je rezultat testa koji ispituje proizvodnju IL-2 povećanu pomoću AGEN1884w-105, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i kontrole izotipa IgG1nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA). Na slici 7B, prikazano je šest bioloških replikata i srednje vrednosti (traka) umnoška promene IL-2.
Slike 8A, 8B i 8C su krive vezivanja titracije doza antitela za CHO ćelije koje eksprimiraju FcγRIIA<H131>(slika 8A), FcγRIIB (slika 8B) odnosno FcγRIIIA<V158>(slika 8C). Postavljen je srednji intenzitet fluorescencije (MFI) sekundarnog detekcionog antitela. Trake sa greškom predstavljaju standardno odstupanje dobijeno od triplikata. Testirana antitela su AGEN1884w-FortiCHO, AGEN1884w-PowerCHO, AGEN2041w, referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo, i antitelo IgG1za kontrolu izotipa.
Slike 9A i 9B su dijagrami koji prikazuju srednji odgovor (jedinice odgovora, RU) trostrukih uzoraka u opsegu koncentracija antitela AGEN1884w-FortiCHO, AGEN1884w-PowerCHO, AGEN2041w, i referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela vezanog za humani FcγRIIA (slika 9A) ili humani FcγRIIIA (slika 9B), određeno površinskom plazmonskom rezonancom.
Slika 10A je šematski prikaz testa reporter gena Fc gama receptora IIIA (FcγRIIIA). Slike 10B–10G su rezultati testa reportera gde je sposobnost AGEN1884w-105 ili AGEN1884w (AGEN1884w-105 na slikama 10B, 10C, 10F i 10G; AGEN1884w na slikama 10D i 10E) za aktiviranje reporterske ćelijske linije koja eksprimira FcγRIIIA V158 varijantu ili FcγRIIIA F158 varijantu upoređena sa sposobnošću referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela (slike 10B i 10C), AGEN2041w (slike 10D i 10E), i AGEN1884w varijante N297A (slike 10F i 10G). Relativne svetlosne jedinice (RLU) predstavljene su u odnosu na opseg koncentracija antitela.
2
Slika 11 je rezultat testa reportera u kome je ispitana sposobnost AGEN2041w, referentnog anti-CTLA-4 antitela IgG2i antitela IgG2za kontrolu izotipa, da aktiviraju reportersku ćelijsku liniju koja eksprimira FcγRIIA<H131>varijantu kada su antitela vezana za ciljne ćelije koje eksprimiraju CTLA-4. Relativne svetlosne jedinice (RLU) predstavljene su u odnosu na opseg koncentracija antitela.
Slika 12A je dijagram koji prikazuje vezivanje AGEN1884w-105, AGEN1884w varijante N297A, i kontrole izotipa IgG1za ćelije koje eksprimiraju CTLA-4, mereno protočnom citometrijom. Srednji intenzitet fluorescencije (MFI) izračunat je i postavljen u odnosu na različite koncentracija ispitivanih antitela. Slika 12B je rezultat testa koji ispituje proizvodnju IL-2 indukovanu pomoću AGEN1884w-105, AGEN1884w-N297A, i kontrole izotipa IgG1, nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA). Na slici 12B, prikazano je šest bioloških replikata i srednje vrednosti (traka) umnoška promene IL-2.
Slike 13A i 13B su rezultati testa za ispitivanje uticaja blokiranja angažovanja FcR na antagonističku aktivnost anti-CTLA-4 antitela. Na slici 13A prikazano je sedam bioloških replikata i srednje vrednosti (traka) umnoška promene IL-2. Na slici 13B, prikazano je sedam bioloških replikata proizvodnje IL-2 (pg/ml).
Slika 14 je dijagram koji prikazuje proizvodnju IL-2 kod humanih PBMC nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA) kao odgovor na 10 µg/ml AGEN1884w, AGEN1884w-N297A, AGEN1884w-S267E/L328F, AGEN1884w-S239D/A330L/I332E, AGEN2041w, antitela IgG1za kontrolu izotipa ili antitela IgG2za kontrolu izotipa. Srednje vrednosti (traka) proizvodnje IL-2 su prikazane za svako testirano antitelo.
Slika 15 je dijagram koji prikazuje procenat lize ciljnih ćelija u prisustvu efektorske ćelije zajedno sa titracijom doze AGEN1884w, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela ili antitela za kontrolu izotipa. Jurkatove ćelije konstruisane da konstitutivno eksprimiraju CTLA-4 na površini ćelije korišćene su kao ciljne ćelije, a NK92-FcγRIIIA ćelije su korišćene kao efektorske ćelije.
Slika 16 daje poređenje afiniteta vezivanja (KD) CD80-Fc-His, CD86-Fc-His, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i AGEN1884 za CTLA-4. Walker i Sansom Nat. Rev.
Immunology 2011 upućuje na Walker i Sansom Nat. Rev. Immunol. (2011) 11(12):852-63. Xu i sar., JI 2012 upućuje na Xu i sar., J Immunol. (2012) 189(9):4470-7.
Slika 17A je poravnavanje sekvence za humani CTLA-4 (SEQ ID NO: 77), CTLA-4 majmuna cinomolgusa (SEQ ID NO: 84), mišji CTLA-4 (SEQ ID NO: 85) i pacovski CTLA-4 (SEQ ID NO: 86). Tačkice predstavljaju ostatke identične odgovarajućim humanim ostacima. Zvezdica (*) označava pozicije koje imaju jedan, potpuno konzerviran ostatak. A : (dve tačke) označava konzervaciju između grupa veoma sličnih osobina. A . (tačka) označava konzervaciju između grupa blago sličnih osobina. Slike 17B i 17C su poravnavanja sekvence za humani CTLA-4 (SEQ ID NO: 77), CTLA-4 majmuna cinomolgusa (SEQ ID NO: 84), humani CD28 (SEQ ID NO: 87), humani ICOS (SEQ ID NO: 88), humani BTLA (SEQ ID NO: 89) i humani PD-1 (SEQ ID NO: 90). Dva regiona koji pokazuju veliko opadanje preuzimanja deuterijuma kada se humani CTLA-4 vezao za AGEN1884w-Fab podvučena su na slikama 17A–C: Q<80>VT<82>i Y<135>PPPYYLGIGNGTQI<149>. Slika 17D je kompozitni skup koordinata rendgenskog zračenja u datotekama Banke podataka o proteinima, 3osk i 1i81. Ova kompozitna strukturna analiza ukazuje na lančano grupisanje grupa CTLA-4 i B7-1. To obezbeđuje model humanog B7-1 dimera uz humani CTLA-4 dimer, za koji se smatra da je najjednostavniji oligomerni oblik signalizacije kompetentnog imunskog kompleksa. Mesto kontakta između CTLA-4 i B7-1 uključuje region M<134>YPPPYY<140>, ali nije ograničeno na taj konkretan motiv. Slika 17E je model vezivanja AGEN1884w-Fab za humani CTLA-4. Svi ostaci CTLA-4 navedeni u prethodnom opisu slika 17A–17E numerisani su prema SEQ ID NO: 77.
Slike 18A i 18B su rezultat studije antigenskog odgovora zavisnog od T ćelija (TDAR) na majmunima cinomolgus. AGEN1884w (10 mg/kg), referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo (3 mg/kg) (slika 18A), AGEN2041w (10 mg/kg) (slika 18B) ili kontrolni uzorak (slike 18A i 18B) dati su putem intravenske primene (spori bolus) zajedno sa HBsAg vakcinama (30 µg u zadnju nogu) 1. i 29. dana. Dupli uzorci su analizirani na titar anti-HBsAg (IgG) u serumu pomoću ELISA. Tačke sa podacima predstavljaju srednju vrednost ± SEM u svakoj tretiranoj grupi.
Slike 19A i 19B su poravnavanja sekvenci varijabilnih teških lanaca BADD411-2354 (SEQ ID NO: 7), BADD412-2356 (SEQ ID NO: 38), BADD412-2357 (SEQ ID NO: 39), BADD412-2358 (SEQ ID NO: 40), BADD412-2359 (SEQ ID NO: 41) i BADD412-2360 (SEQ ID NO: 42), odnosno varijabilnih lakih lanaca BADD412-2367 (SEQ ID NO: 43), BADD412-2376 (SEQ ID NO: 8), BADD412-2382 (SEQ ID NO: 44), BADD412-2384 (SEQ ID NO: 45), BADD412-2390 (SEQ ID NO: 46) i BADD412-2393 (SEQ ID NO: 47). Prikazani CDR-i teškog i lakog lanca su određeni prema Kabatu.
Slike 20A–20E su dijagrami koji prikazuju procenat vezivanja rekombinantnog CD80-PE ili CD86-PE za perlice povezane sa CTLA-4 uz titraciju doze 19 anti-CTLA-4 antitela (AGEN1884-AGEN1902), mereno tehnologijom suspendovanih čipova.
5. DETALJAN OPIS
2
[0067] Trenutna objava obezbeđuje antitela koja se specifično vezuju za humani CTLA-4 i suprotstavljaju se funkciji CTLA-4, npr. imunosupresiji posredstvom CTLA-4. Takođe su obezbeđene farmaceutske kompozicije koje sadrže ta antitela, nukleinske kiseline koje kodiraju ta antitela, ekspresioni vektori i ćelije domaćini za dobijanje tih antitela, i postupci za lečenje ispitanika koristeći ta antitela. Ovde objavljena antitela su posebno korisna za povećanje aktivacije T ćelija kao odgovor na antigen (npr. antigen tumora), pa time za lečenje raka, ili sprečavanje ili lečenje infektivnih bolesti kod ispitanika. Ovde objavljena antitela su takođe korisna za primenu u farmaceutskim kompozicijama, ili proizvodnji lekova za lečenje raka, ili sprečavanje ili lečenje infektivnih bolesti.
5.1 Definicije
[0068] Kako se ovde koriste, termini „oko“ i „približno“, kada se koriste da se modifikuje numerička vrednost ili numerički opseg, ukazuju na to da odstupanja od 5% do 10% iznad i 5% do 10% ispod vrednosti ili opsega ostaju obuhvaćena nameravanom navedenom vrednošću ili opsegom.
[0069] Kako se ovde koristi, termin „CTLA-4“ se odnosi na protein 4 povezan sa citotoksičnim T limfocitom. Nukleotidne i polipeptidne sekvence CTLA-4 su dobro poznate u struci. Primer amino sekvence humanog CTLA-4 je dat u unosu GenBank GI: 15778585 i primer amino sekvence mišjeg CTLA-4 je dat u unosu GenBank GI: 15778586.
[0070] Kako se ovde koriste, termini „antitelo“ i „antitela“ uključuju antitela kompletne dužine, antigen-vezujuće fragmente antitela i molekule koji sadrže CDR, VH regione i VL regione antitela. Primeri antitela uključuju monoklonska antitela, rekombinantno proizvedena antitela, monospecifična antitela, multispecifična antitela (uključujući bispecifična antitela), humana antitela, humanizovana antitela, himerna antitela, imunoglobuline, sintetička antitela, tetramerna antitela koja sadrže molekule dva teška lanca i dva laka lanca, monomer lakog lanca antitela, monomer teškog lanca antitela, dimer lakog lanca antitela, dimer teškog lanca antitela, par laki lanac antitela-teški lanac antitela, intratela, heterokonjugatna antitela, antitela sa jednim domenom, jednovalentna antitela, jednolančana antitela ili jednolančane Fv (scFv), kamelizovana antitela, afitela, Fab fragmente, F(ab')2fragmente, disulfidno povezane Fv (sdFv), anti-idiotipska (anti-Id) antitela (uključujući, npr. anti-anti-Id antitela), i antigen-
2
vezujuće fragmente bilo čega od gore navedenog. U određenim otelotvorenjima, ovde opisana antitela se odnose na populacije poliklonskih antitela. Antitela mogu biti bilo koje vrste (npr. IgG, IgE, IgM, IgD, IgA ili IgY), bilo koje klase (npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1ili IgA2), ili bilo koje potklase (npr. IgG2aili IgG2b) molekula imunoglobulina. U određenim otelotvorenjima, ovde opisana antitela su IgG antitela ili njihova klasa (npr. humani IgG1ili IgG4) ili potklasa. U specifičnom otelotvorenju, antitelo je humanizovano monoklonsko antitelo. U drugom specifičnom otelotvorenju, antitelo je humano monoklonsko antitelo. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano antitelo je IgG1ili IgG2antitelo.
[0071] Kako se ovde koriste, termini „VH region“ i „VL region“ odnose se na varijabilne regione teškog odnosno lakog lanca antitela, koji sadrže FR (regione okvira) 1, 2, 3 i 4 i CDR (regione koji određuju komplementarnost) 1, 2 i 3 (vidite Kabat i sar. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest. (NIH Publikacija br.91-3242, Bethesda).
[0072] Kako se ovde koristi, termin „CDR“ ili „region koji određuje
komplementarnost“ znači nesusedna mesta za kombinovanje antigena koja se mogu naći u varijabilnom regionu polipeptida teškog i lakog lanca. Ti konkretni regioni su opisani u Kabat i sar., J. Biol. Chem. 252, 6609-6616 (1977) i Kabat i sar., Sequences of protein of immunological interest. (1991) i Chothia i sar., J. Mol. Biol.196:901-917 (1987) i MacCallum i sar., J. Mol. Biol.262:732-745 (1996) gde definicije uključuju preklapanje ili podskupove aminokiselinskih ostataka kada se međusobno porede. Aminokiselinski ostaci koji obuhvataju CDR, kako su definisani svakom od prethodno navedenih referenci, dati su za poređenje. Poželjno, termin „CDR“ je CDR kako ga je definisao Kabat, na osnovu poređenja sekvenci. CDRH1, CDRH2 i CDRH3 označavaju CDR teškog lanca, a CDRL1, CDRL2 i CDRL3 označavaju CDR lakog lanca.
[0073] Kako se ovde koristi, termin „EU sistem za numeraciju“ odnosi se na EU konvenciju za numeraciju za konstantne regione antitela, kao što je opisano u Edelman, G.M. i sar., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969) i Kabat i sar. u „Sequences of Proteins of Immunological Interest“, U.S. Dept. Health and Human Services, 5. izdanje, 1991.
[0074] Kako se ovde koristi, termin „aminokiselinski ostaci okvira (FR)“ odnosi se na aminokiselinske ostatke u regionu okvira lanca imunoglobulina. Termin „region okvira“ ili
2
„FR region“, kako se ovde koristi, obuhvata aminokiselinske ostatke koji su deo varijabilnog regiona, ali nisu deo CDR (npr. koristeći Kabatovu definiciju CDR).
[0075] Kako se ovde koristi, termin „afukozilovanje“ ili „afukozilovano“ u kontekstu Fc odnosi se na značajan nedostatak fukoze koja je kovalentno povezana, direktno ili indirektno, sa ostatkom 297 Fc regiona humanog IgG1, numerisano u skladu sa EU indeksom (Kabat i sar., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. izd. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)), ili odgovarajućim ostatkom u ne-IgG1 ili nehumanim IgG1 imunoglobulinima. Tako, u kompoziciji koja sadrži više afukozilovanih antitela, najmanje 70% antitela neće biti fukozilovano, direktno ili indirektno (npr. putem intervenišućih šećera) na ostatku 297 Fc regiona antitela, a u nekim otelotvorenjima najmanje 80%, 85%, 90%, 95% ili 99% neće biti fukozilovano, direktno ili indirektno, na ostatku 297 Fc regiona.
[0076] Kako se ovde koristi, termin „specifično se vezuje za“ odnosi se na sposobnost antitela da se vezuje za antigen sa konstantom disocijacije (Kd) od najmanje oko 1 x 10<∼6>M, 1 x 10<-7>M, 1 x 10<-8>M, 1 x 10<-9>M, 1 x 10<-10>M, 1 x 10<-11>M, 1 x 10<-12>M, ili manje, i/ili se vezuje za antigen sa afinitetom koji je najmanje dva puta veći nego njegov afinitet prema nespecifičnom antigenu.
[0077] Kako se ovde koristi, „epitop“ je termin u struci, i odnosi se na lokalizovani region antigena za koji antitelo može specifično da se vezuje. Epitop mogu biti, na primer, susedne aminokiseline polipeptida (linearni ili susedni epitop) ili epitop može, na primer, da bude sastavljen od dva ili više nesusednih regiona jednog ili više polipeptida (konformacioni, nelinearni, diskontinualni ili nesusedni epitop). U određenim otelotvorenjima, epitop za koji se antitelo vezuje može biti određen pomoću, npr. NMR spektroskopije, studija rendgenske difrakcione kristalografije, ELISA testova, razmene vodonik/deuterijum povezane sa masenom spektrometrijom (npr. tečna hromatografija elektrosprej masena spektrometrija), oligo-peptidnih testova skeniranja zasnovanih na nizovima i/ili mapiranja mutageneze (npr. mapiranje mutageneze usmerene na mesto). Kod rendgenske kristalografije, kristalizacija se može postići koristeći bilo koji od postupaka poznatih u struci (npr. Giegé R i sar., (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Deo 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303). Kristali antitelo:antigen mogu da se proučavaju koristeći dobro
2
poznate tehnike rendgenske difrakcije, i mogu da se prečiste koristeći kompjuterski softver poput X-PLOR (Yale University, 1992, čiji je distributer Molecular Simulations, Inc.; vidite npr. Meth Enzymol (1985) tomovi 114 i 115, urednici Wyckoff HW i sar.; U.S.
2004/0014194), i BUSTER (Bricogne G (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Deo 1): 37-60; Bricogne G (1997) Meth Enzymol276A: 361-423, urednik Carter CW; Roversi P i sar., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Deo 10): 1316-1323). Studije mapiranja mutageneze mogu da se obave koristeći bilo koji postupak poznat stručnjaku. Vidite, npr. Champe M i sar., (1995) J Biol Chem 270: 1388-1394 i Cunningham BC & Wells JA (1989) Science 244: 1081-1085 za opis tehnika mutageneze, uključujući tehnike ciljane mutageneze sa alaninom. U specifičnom otelotvorenju, epitop antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta određuje se korišćenjem studija ciljane mutageneze sa alaninom.
[0078] Kako se ovde koriste, termini „lečiti“, „lečenje“ i „tretman“ odnose se na terapeutske ili preventivne mere koje su ovde opisane. Postupci „lečenja“ uključuju primenu antitela na ispitaniku koji ima bolest ili poremećaj, ili ima predispozicije za takvu bolest ili poremećaj, kako bi se sprečio, izlečio, odložio, ublažio ili poboljšao jedan ili više simptoma bolesti ili poremećaja ili rekurentne bolesti ili poremećaja, ili kako bi se produžilo preživljavanje ispitanika više nego što je očekivano u odsustvu takvog lečenja.
[0079] Kako se ovde koristi, termin „delotvorna količina“ u kontekstu primene terapije na ispitaniku odnosi se na količinu terapije koja postiže željeno profilaktičko ili terapeutsko dejstvo.
[0080] Kako se ovde koristi, termin „ispitanik“ uključuje bilo kog čoveka ili životinju koja nije čovek.
[0081] Razmena vodonik-deuterijum se određuje koristeći test koji obuhvata sledeće korake: (a) uzimanje rastvora samo CTLA-4 ili CTLA-4 u kombinaciji sa antitelom u vodenom puferu i razblaživanje ovog rastvora u oko 90% zapremina/zapremina viška pufera za označavanje deuterijum oksidom tokom, npr.0, 60, 300, 1800 i 7200 sekundi; (b) prekidanje zamene vodonika deuterijumom putem snižavanja pH; (c) podvrgavanje uzoraka digestiji proteazom i analizu masenom spektrometrijom; i (d) izračunavanje inkorporisanja deuterijuma u CTLA-4 proteolitičkim peptidima i poređenje inkorporisanja deuterijuma u prisustvu ili odsustvu antitela. Zamena vodonika deuterijumom u CTLA-4 proteolitičkom
2
peptidu je „smanjena“ ako je zamena vodonik/deuterijum u prisustvu anti-CTLA-4 antitela smanjena za najmanje 10% u odnosu na zamenu vodonik/deuterijum u odsustvu antitela, kako je procenjeno pomoću prethodnog testa.
5.2 Anti-CTLA-4 antitela
[0082] U jednom aspektu, trenutno otkriće pruža antitela koja se specifično vezuju za humani CTLA-4 i antagonizuju funkciju CTLA-4. Aminokiselinske sekvence za primere antitela su ovde date u tabelama 1–6.
Tabela 1. Sekvence varijabilnih regiona, CDR i okvira (FR) primera anti-CTLA-4 antitela
SEQ Opis Aminokiselinska sekvenca
1 SEQ Opis Aminokiselinska sekvenca
2
4
SEQ Opis Aminokiselinska sekvenca
4
Tabela 2. CDR sekvence teškog lanca primera anti-CTLA-4 antitela<1>
Tabela 3. CDR sekvence lakog lanca primera anti-CTLA-4 antitela<2>
4
Tabela 4. Sekvence okvira (FR) VH primera anti-CTLA-4 antitela<3>
4
<3>Regioni okvira VH opisani u tabeli 4 određeni su u okviru Kabatovog sistema numeracije za CDR. Drugim rečima, CDR VH su određeni prema Kabatu i regioni
4
Tabela 5. Sekvence okvira (FR) VL primera anti-CTLA-4 antitela<4>
4
4
Tabela 6. Sekvence VH i VL primera anti-CTLA-4 antitela
4
Tabela 7. Primeri sekvenci CTLA-4 i članova familije SEQ Opis Aminokiselinska sekvenca
1
SEQ Opis Aminokiselinska sekvenca
2
[0083] U određenim aspektima, trenutno otkriće pruža izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži:
(a) CDRH1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SYX1MX2(SEQ ID NO: 22), naznačeno time što X1je S ili A; i X2je N ili S; i/ili
(b) CDRH2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SISSSSSYIYYADSVKG (SEQ ID NO: 2); i/ili
(c) CDRH3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu VGLMGPFXI (SEQ ID NO: 23), naznačeno time što X je D ili N; i/ili
(d) CDRL1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu RASQSVX1X2YLX3(SEQ ID NO: 24), naznačeno time što X1je S ili G; X2je R, S ili T; i X3je G ili A; i/ili
(e) CDRL2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu X1X2SX3RAT (SEQ ID NO: 25), naznačeno time što X1je G ili A; X2je A ili T; i X3je T, S, R ili N; i/ili
(f) CDRL3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu QQYGX1SPX2T (SEQ ID NO: 26), naznačeno time što: X1je S ili T; i X2je W ili F.
[0084] U određenim aspektima, antitelo sadrži jedan, dva ili sva tri od prethodnih CDR VH. U određenim aspektima, antitelo sadrži CDRH1 jednog od antitela iz tabele 2. U određenim aspektima, antitelo sadrži CDRH2 jednog od antitela iz tabele 2. U određenim aspektima, antitelo sadrži CDRH3 jednog od antitela iz tabele 2. U određenim aspektima, antitelo sadrži jedan, dva ili sva tri CDR VH jednog od antitela iz tabele 2 (npr. CDR VH u jednom redu tabele 2, na primer, svi CDR VH su iz antitela AGEN1884w). U određenim aspektima, antitelo sadrži okvire VH koji su ovde opisani. U određenim aspektima, antitelo sadrži regione okvira VH antitela koje je dato u tabeli 4 (npr. jedan, dva, tri ili četiri regiona okvira u jednom redu tabele 4).
[0085] U određenim aspektima, antitelo sadrži jedan, dva ili sva tri od prethodnih CDR VL. U određenim aspektima, antitelo sadrži CDRL1 jednog od antitela iz tabele 3. U određenim aspektima, antitelo sadrži CDRL2 jednog od antitela iz tabele 3. U određenim aspektima, antitelo sadrži CDRL3 jednog od antitela iz tabele 3. U određenim aspektima, antitelo sadrži jedan, dva ili sva tri CDR VL jednog od antitela iz tabele 3 (npr. CDR VL u jednom redu tabele 3, na primer, svi CDR VL su iz antitela AGEN1884w). U određenim aspektima, antitelo sadrži regione okvira VL koji su ovde opisani. U određenim aspektima, antitelo sadrži regione okvira (FR) VL antitela koje je dato u tabeli 5 (npr. jedan, dva, tri ili četiri regiona okvira u jednom redu tabele 5).
[0086] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRH1, CDRH2 i CDRH3, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRL1, CDRL2 i CDRL3, naznačeno time što:
(a) CDRH1 sadrži aminokiselinsku sekvencu SYX1MX2(SEQ ID NO: 22), naznačeno time što X1je S ili A; i X2je N ili S;
(b) CDRH2 sadrži aminokiselinsku sekvencu SISSSSSYIYYADSVKG (SEQ ID NO: 2); (c) CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu VGLMGPFXI (SEQ ID NO: 23), naznačeno time što X je D ili N;
(d) CDRL1 sadrži aminokiselinsku sekvencu RASQSVX1X2YLX3(SEQ ID NO: 24), naznačeno time što X1je S ili G; X2je R, S ili T; i X3je G ili A;
(e) CDRL2 sadrži aminokiselinsku sekvencu X1X2SX3RAT (SEQ ID NO: 25), naznačeno time što X1je G ili A; X2je A ili T; i X3je T, S, R ili N; i
(f) CDRL3 sadrži aminokiselinsku sekvencu QQYGX1SPX2T (SEQ ID NO: 26), naznačeno time što X1je S ili T; i X2je W ili F.
[0087] U nekim aspektima, CDRH1 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 1 i 27. U nekim aspektima, CDRH3 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 3 i 28. U nekim aspektima,
4
CDRL1 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 4, 29 i 30. U nekim aspektima, CDRL2 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 5 i 31–35. U nekim aspektima, CDRL3 sadrži aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 6, 36 i 37. U određenim aspektima, CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sadrže aminokiselinske sekvence CDRH1, CDRH2 odnosno CDRH3 antitela iz tabele 2. U određenim aspektima, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence CDRL1, CDRL2 odnosno CDRL3 antitela iz tabele 3.
[0088] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRH1, CDRH2 i CDRH3, naznačeno time što CDRH1, CDRH2 i CDRH3 sadrže aminokiselinske sekvence CDRH1, CDRH2 odnosno CDRH3 prikazane u SEQ ID NO: 1, 2 i 3; 27, 2 i 3; ili 27, 2 i 28.
[0089] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRL1, CDRL2 i CDRL3, naznačeno time što CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence CDRL1, CDRL2 odnosno CDRL3 prikazane u SEQ ID NO: 4, 5 i 6; 29, 32 i 36; 29, 33 i 37; 30, 31 i 6; 29, 34 i 6; ili 29, 35 i 37.
[0090] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRH1, CDRH2 i CDRH3, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione koji određuju komplementarnost CDRL1, CDRL2 i CDRL3, naznačeno time što CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CRL3 sadrže aminokiselinske sekvence CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 odnosno CDRL3 prikazane u SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 i 6; 1, 2, 3, 29, 32 i 36; 1, 2, 3, 29, 33 i 37; 27, 2, 3, 4, 5 i 6; 27, 2, 3, 29, 33 i 37; 1, 2, 3, 30, 31 i 6; 1, 2, 3, 29, 34 i 6; 1, 2, 3, 29, 35 i 37; 27, 2, 28, 4, 5 i 6; 27, 2, 28, 29, 32 i 36; 27, 2, 28, 29, 33 i 37; odnosno, 27, 2, 28, 29, 35 i 37.
[0091] Predmetni pronalazak se odnosi na izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca, naznačeno time što varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7, a varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8. Antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione CDRH1, CDRH2 i CDRH3, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione CDRL1, CDRL2 i CDRL3, naznačeno time što regioni CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 odnosno 6.
[0092] U određenim aspektima, CDR antitela može da se odredi prema Čotijinoj šemi za numeraciju, koja se odnosi na lokaciju strukturnih petlji imunoglobulina (vidite npr. Chothia C i Lesk AM, (1987), J Mol Biol 196: 901-917; Al-Lazikani B i sar., (1997) J Mol Biol 273: 927-948; Chothia C i sar., (1992) J Mol Biol 227: 799-817; Tramontano A i sar., (1990) J Mol Biol 215(1): 175-82; i U.S. Patent br.7,709,226). Obično, kada se koristi Kabatova konvencija za numerisanje, Čotijina CDRH1 petlja je prisutna na aminokiselinama teškog lanca 26 do 32, 33 ili 34, Čotijina CDRH2 petlja je prisutna na aminokiselinama teškog lanca 52 do 56, i Čotijina CDRH3 petlja je prisutna na aminokiselinama teškog lanca 95 do 102, dok je Čotijina CDRL1 petlja prisutna na aminokiselinama lakog lanca 24 do 34, Čotijina CDRL2 petlja je prisutna na aminokiselinama lakog lanca 50 do 56, i Čotijina CDRL3 petlja je prisutna na aminokiselinama lakog lanca 89 do 97. Kraj Čotijine CDRH1 petlje kada se numeriše koristeći Kabatovu konvenciju za numerisanje varira između H32 i H34, u zavisnosti od dužine petlje (zato što Kabatova šema za numeraciju postavlja insercije na H35A i H35B; ako ni 35A ni 35B nisu prisutni, petlja se završava na 32; ako je prisutan samo 35A, petlja se završava na 33; ako su prisutni i 35A i 35B, petlja se završava na 34).
[0093] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, i antitelo sadrži Čotijine CDR-e VL iz VL antitela koje je ovde prikazano u tabeli 6 (npr. AGEN1884w ili AGEN2041w). U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, i antitelo sadrži Čotijine CDR-e VH antitela koje je ovde prikazano u tabeli 6 (npr. AGEN1884w ili AGEN2041w). U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, i antitelo sadrži Čotijine CDR-e VH i Čotijine CDR-e VL antitela koje je ovde prikazano u tabeli 6 (npr. AGEN1884w ili AGEN2041w). U određenim aspektima, antitela koja se specifično vezuju za humani CTLA-4 protein sadrže jedan ili više CDR, u kojima Čotijini i Kabatovi CDR imaju istu aminokiselinsku sekvencu. U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuju za humani CTLA-4 protein i sadrži kombinacije Kabatovih CDR i Čotijinih CDR.
[0094] U određenim aspektima, CDR-i antitela mogu da se odrede prema IMGT sistemu za numerisanje kao što je opisano u Lefranc M-P, (1999) The Immunologist 7: 132-136 i Lefranc M-P i sar., (1999) Nucleic Acids Res 27: 209-212. Prema IMGT šemi za numerisanje, CDRH1 je na pozicijama 26 do 35, CDRH2 je na pozicijama 51 do 57, CDRH3 je na pozicijama 93 do 102, CDRL1 je na pozicijama 27 do 32, CDRL2 je na pozicijama 50 do 52 i CDRL3 je na pozicijama 89 do 97. U konkretnom otelotvorenju, trenutna objava obezbeđuje antitela koja se specifično vezuju za humani CTLA-4 protein i sadrže CDR antitela koje je ovde otkriveno u tabeli 6 (npr. AGEN1884w ili AGEN2041w) kao što je određeno putem IMGT sistema za numerisanje, na primer, kako je opisano u Lefranc M-P (1999) supra i Lefranc M-P i sar. (1999) supra.
[0095] U određenim aspektima, CDR antitela mogu de se odrede prema MacCallum RM i sar., (1996) J Mol Biol 262: 732-745. Vidite takođe, npr. Martin A. „Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains“, u Antibody Engineering, Kontermann and Dübel, urednici, poglavlje 31, str.422–439, Springer-Verlag, Berlin (2001). U konkretnom otelotvorenju, trenutna objava obezbeđuje antitela koja se specifično vezuju za humani CTLA-4 protein i sadrže CDR antitela koje je ovde otkriveno u tabeli 6 (npr.
AGEN1884w ili AGEN2041w) kao što je određeno putem postupka iz MacCallum RM i sar.
[0096] U određenim aspektima, CDR-i antitela mogu da se odrede u skladu sa šemom za numerisanje AbM, koja se odnosi na hipervarijabilne regione AbM, koji predstavljaju kompromis između Kabatovih CDR i Čotijinih strukturnih petlji, i koristi ih softver za modelovanje AbM antitela kompanije Oxford Molecular (Oxford Molecular Group, Inc.). U konkretnom otelotvorenju, trenutna objava obezbeđuje antitela koja se specifično vezuju za humani CTLA-4 protein i sadrže CDR antitela koje je ovde otkriveno u tabeli 6 (npr.
AGEN1884w ili AGEN2041w) kako je određeno šemom za numerisanje AbM.
[0097] Shodno tome, u određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, naznačeno time što antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži CDRH1, CDRH2 i CDRH3 region aminokiselinskih sekvenci koje su prikazane u SEQ ID NO: 7 i CDRL1, CDRL2 i CDRL3 region aminokiselinskih sekvenci koje su prikazane u SEQ ID NO: 8, naznačeno time što je svaki CDR definisan prema Kabatovoj definiciji, Čotijinoj definiciji, kombinaciji Kabatove definicije i Čotijine definicije, IMGT sistemu za numerisanje, definiciji AbM ili kontaktnoj definiciji CDR.
[0098] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, i antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži regione CDRH1, CDRH2 i CDRH3, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži regione CDRL1, CDRL2 i CDRL3, naznačeno time što regioni CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 i CDRL3 sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20 odnosno 21.
[0099] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 72.
[0100] U određenim otelotvorenjima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca sa aminokiselinskom sekvencom izvedenom iz sekvence germinativne linije humanog IGHV3-21. Jedan ili više regiona odabranih od okvira 1, okvira 2, okvira 3, CDRH1 i CDRH2 (npr. dva, tri, četiri ili pet od ovih regiona) može se dobiti iz sekvence germinativne linije humanog IGHV3-21. U jednom otelotvorenju, okvir 1, okvir 2, okvir 3, CDRH1 i CDRH2 su dobijeni iz sekvence germinativne linije humanog IGHV3-21.
[0101] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 7 i 38–42. U određenim aspektima, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 7 i 38–42. Antitelo iz pronalaska sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 7. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 12. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 93. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 14. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 94. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 76. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 97.
[0102] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 73.
[0103] U određenim otelotvorenjima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu dobijenu iz sekvence germinativne linije humanog IGKV3-20 ili IGKV3-11. Jedan ili više regiona odabranih od okvira 1, okvira 2, okvira 3, CDRL1 i CDRL2 (npr. dva, tri, četiri ili pet od ovih regiona) može se dobiti iz sekvence germinativne linije humanog IGKV3-20 ili IGKV3-11. U jednom otelotvorenju, okvir 1, okvir 2, okvir 3, CDRL1 i CDRL2 su dobijeni iz sekvence germinativne linije humanog IGKV3-20 ili IGKV3-11.
[0104] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 8 i 43–47. U određenim aspektima, antitelo sadrži varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 8 i 43–47. Antitelo iz pronalaska sadrži varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 8. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži laki lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 13. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži laki lanac koji ima aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 15.
[0105] U određenim otelotvorenjima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu dobijenu iz sekvence germinativne linije humanog IGHV3-21, i varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu dobijenu iz sekvence germinativne linije humanog IGKV3-20 ili IGKV3-11. Jedan ili više regiona odabranih od okvira 1, okvira 2, okvira 3, CDRH1 i CDRH2 (npr. dva, tri, četiri ili pet od ovih regiona) može se dobiti iz sekvence germinativne linije humanog IGHV3-21. U jednom otelotvorenju, okvir 1, okvir 2, okvir 3, CDRH1 i CDRH2 su dobijeni iz sekvence germinativne linije humanog IGHV3-21. Jedan ili više regiona odabranih od okvira 1, okvira 2, okvira 3, CDRL1 i CDRL2 (npr. dva, tri, četiri ili pet od ovih regiona) može se dobiti iz sekvence germinativne linije humanog IGKV3-20 ili IGKV3-11. U jednom otelotvorenju, okvir 1, okvir 2, okvir 3, CDRL1 i CDRL2 su dobijeni iz sekvence germinativne linije humanog IGKV3-20 ili IGKV3-11.
[0106] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 7 i 38–42, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje 75%, 80%, 85%, 90%, 95% ili 100% (npr. najmanje 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 ili 99%) identična aminokiselinskoj sekvenci izabranoj iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 8 i 43– 47. U određenim aspektima, antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 7 i 38–42, i varijabilni region lakog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji od SEQ ID NO: 8 i 43–47. U određenim aspektima, antitelo sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog lanca i varijabilnog regiona lakog lanca koje su prikazane u SEQ ID NO: 7 i 8; 7 i 44; 7 i 45; 38 i 8; 38 i 45; 39 i 43; 39 i 45; 39 i 46; 39 i 47; 40 i 43; 40 i 8; 40 i 44; 40 i 45; 41 i 8; 41 i 44; 41 i 45; 41 i 47; 42 i 43; odnosno 42 i 45. Antitelo iz pronalaska sadrži varijabilni region teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7, i varijabilni region lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 93, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 94, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 76, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13. U nekim otelotvorenjima, antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 97, i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13.
[0107] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se unakrsno takmiči u vezivanju za humani CTLA-4 protein sa antitelom koje sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog i lakog lanca prikazane u SEQ ID NO: 7 odnosno 8.
[0108] U određenim aspektima, trenutna objava obezbeđuje izolovano antitelo koje se vezuje za isti epitop na humanom CTLA-4 proteinu kao i antitelo koje sadrži aminokiselinske sekvence varijabilnog regiona teškog i lakog lanca prikazane u SEQ ID NO: 7 odnosno 8.
[0109] Bilo koji konstantni region Ig može da se koristi u ovde otkrivenim antitelima. U određenim otelotvorenjima, region Ig je konstantni region teškog lanca humanog IgG1ili humanog IgG2.
[0110] U određenim otelotvorenjima, regioni Ig ovde opisanih antitela imaju povećan afinitet prema CD32B (poznat i kao FcγRIIB ili FCGR2B), npr. u poređenju sa antitelom sa Fc regionom divljeg tipa, npr. Fc IgG1. U određenim otelotvorenjima, ovde opisana antitela imaju selektivno povećan afinitet prema CD32B (FcγRIIB) u odnosu na CD32A (FcγRIIA) i CD16 (FcγRIIIA). Izmene sekvenci koje dovode do porasta afiniteta prema CD32B su poznate u struci, na primer, u Mimoto i sar., Protein Engineering, Design & Selection 10: 589-598 (2013), Chu i sar., Molecular Immunology 45: 3926-3933 (2008), i Strohl, Current Opinion in Biology 20: 685-691 (2009). U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1ili njegov fragment koji sadrži mutaciju izabranu iz grupe koja se sastoji od: G236D, P238D, S239D, S267E, L328F i
1
L328E, i njihovih kombinacija, numerisanu prema EU indeksu (Kabat i sar., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, Bethesda (1991)). U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži supstitucije S267E i L328F. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1ili njegov fragment koji sadrži supstitucije P238D i L328E. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1ili njegov fragment koji sadrži supstituciju P238D i supstituciju izabranu iz grupe koja se sastoji od E233D, G237D, H268D, P271G, A330R, i njihovih kombinacija. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1ili njegov fragment koji sadrži supstitucije P238D, E233D, G237D, H268D, P271G i A330R. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1ili njegov fragment koji sadrži G236D i S267E. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1ili njegov fragment koji sadrži S239D i S267E. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1ili njegov fragment koji sadrži V262E, S267E i L328F. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1ili njegov fragment koji sadrži V264E, S267E i L328F.
[0111] U određenim otelotvorenjima, regioni IgG antitela koja su ovde opisana imaju povećani afinitet prema FcγRIIIA, npr. u poređenju sa antitelom sa Fc regionom divljeg tipa, npr. Fc IgG1. Izmene sekvenci koje dovode do povećanog afiniteta prema FcγRIIIA su poznate u struci, na primer, u Kellner i sar., Methods 65: 105-113 (2014), Lazar i sar., Proc Natl Acad Sci 103: 4005-4010 (2006), Shields i sar., J Biol Chem.276(9):6591-6604 (2001). U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1ili njegov fragment koji sadrži mutaciju izabranu iz grupe koja se sastoji od: G236A, S239D, F243L, T256A, K290A, R292P, S298A, Y300L, V305I, A330L, I332E, E333A, K334A, A339T i P396L, i njihovih kombinacija, numerisanu prema EU indeksu (Kabat i sar., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, Bethesda (1991)). U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži S239D. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži T256A. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov
2
fragment koji sadrži K290A. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži S298A. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži I332E. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži E333A. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži K334A. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži A339T. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži S239D i I332E. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži S239D, A330L i I332E. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži S298A, E333A i K334A. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži G236A, S239D i I332E. U određenim otelotvorenjima, antitelo sadrži konstantni region teškog lanca, npr. konstantni region IgG1 ili njegov fragment koji sadrži F243L, R292P, Y300L, V305I i P396L.
[0112] U određenim otelotvorenjima, ovde opisana antitela ispoljavaju aktivnost ćelijske citotoksičnosti zavisne od antitela (ADCC). U određenim otelotvorenjima, ovde opisana antitela iniciraju ćelijsko iscrpljivanje posredstvom ćelija prirodnih ubica. U određenim otelotvorenjima, ovde opisana antitela se koriste za lečenje tumora infiltriranih sa ćelijama prirodnim ubicama. U određenim otelotvorenjima, ovde opisana antitela ispoljavaju aktivnost ćelijske fagocitoze zavisne od antitela (ADCP). U određenim otelotvorenjima, ovde opisana antitela iniciraju ćelijsko iscrpljivanje posredstvom makrofaga. U određenim otelotvorenjima, ovde opisana antitela su za lečenje tumora infiltriranih sa makrofagima. U određenim otelotvorenjima, ovde opisana antitela selektivno iscrpljuju intratumorske regulatorne T ćelije.
[0113] U određenim otelotvorenjima, ovde otkriveno antitelo je antitelo koje se može aktivirati i u aktiviranom stanju vezuje humani CTLA-4 protein. U određenim otelotvorenjima, antitelo koje može da se aktivira sadrži maskirajući ostatak koji inhibira vezivanje antitela u neotcepljenom stanju za humani CTLA-4 protein, i najmanje jedan otcepljivi ostatak povezan sa antitelom, npr. naznačeno time što je otcepljivi ostatak polipeptid koji deluje kao supstrat za proteazu koja je obogaćena u mikrookruženju tumora. Primeri antitela koja mogu da se aktiviraju su opisani npr. u američkim patentima U.S. Patent br. 8,513,390 i 8,518,404, i američkim publikacijama patentnih prijava U.S. Patent Application Publication br. US 2014/0255313, US 2014/0010810, US 2014/0023664. U određenim otelotvorenjima, antitelo koje može da se aktivira sadrži konstantni region teškog lanca humanog IgG koji je varijanta konstantnog regiona teškog lanca divljeg tipa humanog IgG, naznačeno time što se varijanta konstantnog regiona teškog lanca humanog IgG vezuje za humani FcγRIIIA sa većim afinitetom nego što se konstantni region teškog lanca divljeg tipa humanog IgG vezuje za humani FcγRIIIA.
5.3 Farmaceutske kompozicije
[0114] Ovde su takođe obezbeđene kompozicije koje sadrže ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo koje ima željeni stepen čistoće u fiziološki prihvatljivom nosaču, ekscipijensu ili stabilizatoru (Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA). Prihvatljivi nosači, ekscipijensi ili stabilizatori su netoksični po primaoce u korišćenim dozama i koncentracijama, i uključuju pufere, kao što su fosfatni, citratni i druge organske kiseline; antioksidanse, uključujući askorbinsku kiselinu i metionin; konzervanse (kao što su oktadecildimetilbenzil amonijum hlorid; heksametonijum hlorid; benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabeni, kao što su metil ili propil paraben; katehol; rezorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol; i m-krezol); polipeptide male molekulske mase (manje od oko 10 ostataka); proteine, kao što su serumski albumin, želatin ili imunoglobulini; hidrofilne polimere, kao što je polivinilpirolidon; aminokiseline, kao što su glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin ili lizin; monosaharide, disaharide i druge ugljene hidrate, uključujući glukozu, manozu ili dekstrine; helirajuće agense, kao što je EDTA; šećere, kao što je saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; kontrajone koji grade soli, kao što je natrijum; komplekse metala (npr. Zn-proteinske komplekse); i/ili nejonske surfaktante kao što je TWEEN™, PLURONICS™ ili polietilen glikol (PEG).
[0115] U specifičnom otelotvorenju, farmaceutske kompozicije sadrže ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo i opciono jedan ili više dodatnih profilaktičkih ili terapeutskih agenasa, u farmaceutski prihvatljivom nosaču. U specifičnom otelotvorenju, farmaceutske kompozicije sadrže delotvornu količinu antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji je ovde
4
opisan, i opciono jedan ili više dodatnih profilaktičkih ili terapeutskih agenasa, u farmaceutski prihvatljivom nosaču. U nekim otelotvorenjima, antitelo je jedini aktivan sastojak koji je uključen u farmaceutsku kompoziciju. Ovde opisane farmaceutske kompozicije mogu da budu korisne u inhibiranju aktivnosti CTLA-4 i lečenju stanja, kao što je rak ili infektivna bolest.
[0116] U jednom aspektu, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu kao lek.
[0117] U jednom aspektu, ovde je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu u postupku za lečenje raka.
[0118] Farmaceutski prihvatljivi nosači koji se koriste u parenteralnim preparatima uključuju vodene vehikulume, nevodene vehikulume, antimikrobne agense, izotonične agense, pufere, antioksidanse, lokalne anestetike, agense za suspendovanje i dispergovanje, emulgatore, sekvestrante ili helirajuće agense, i druge farmaceutski prihvatljive supstance. Primeri za vodene vehikulume uključuju injekciju natrijum hlorida, Ringerovu injekciju, injekciju izotonične dekstroze, injekciju sterilne vode, rastvor dekstroze u Ringerovom laktatnom rastvoru. Nevodeni parenteralni vehikulumi uključuju fiksirana ulja povrtnog porekla, pamučno ulje, kukuruzno ulje, susamovo ulje i ulje kikirikija. Antimikrobni agensi u bakteriostatskim ili fungistatskim koncentracijama mogu da se dodaju parenteralnim preparatima upakovanim u višedoznu ambalažu, i uključuju fenole ili krezole, živina jedinjenja, benzil alkohol, hlorbutanol, metil i propil estar p-hidroksibenzojeve kiseline, timerosal, benzalkonijum hlorid i benzetonijum hlorid. Izotonični agensi uključuju natrijum hlorid i dekstrozu. Puferi uključuju fosfatni i citratni. Antioksidansi uključuju natrijum bisulfat. Lokalni anestetici uključuju prokain hidrohlorid. Agensi za suspendovanje i raspršivanje uključuju natrijum karboksimetilcelulozu, hidroksipropil metilcelulozu i polivinilpirolidon. Emulgatori uključuju polisorbat 80 (TWEEN® 80). Sekvestrant ili helirajući agens metalnih jona uključuje EDTA. Farmaceutski nosači takođe uključuju etil alkohol, polietilen glikol i propilen glikol za vehikulume koji se mešaju sa vodom; i natrijum hidroksid, hlorovodoničnu kiselinu, limunsku kiselinu ili mlečnu kiselinu za podešavanje pH.
[0119] Farmaceutske kompozicije mogu biti formulisane za bilo koji vid primene na ispitaniku. Specifični primeri vidova primene uključuju intranazalnu, oralnu, pulmonarnu, transdermalnu, intradermalnu i parenteralnu. Ovde se takođe razmatra i parenteralna primena koja je okarakterisana kao supkutana, intramuskularna ili intravenska injekcija. Injektabilni agensi mogu da se pripreme u konvencionalnim oblicima, kao tečni rastvori ili suspenzije, čvrstim oblicima koji su pogodni za rastvor ili suspenziju u tečnosti pre injektovanja, ili kao emulzije. Injektabilni agensi, rastvori i emulzije takođe sadrže jedan ili više ekscipijenasa. Pogodni ekscipijensi su, na primer, voda, slani rastvor, dekstroza, glicerol ili etanol. Pored toga, ako je poželjno, farmaceutske kompozicije za primenu takođe mogu da sadrže male količine netoksičnih pomoćnih supstanci kao što su kvašljivci ili emulgatori, pH puferujući agensi, stabilizatori, pojačivači rastvorljivosti i drugi takvi agensi, kao što su, na primer, natrijum acetat, sorbitan monolaurat, trietanolamin oleat i citodekstrini.
[0120] Preparati za parenteralnu primenu antitela uključuju sterilne rastvore za injektovanje, sterilne suve rastvorljive proizvode, kao što su liofilizovani praškovi koji se kombinuju sa rastvaračem neposredno pre upotrebe, uključujući hipodermične tablete, sterilne suspenzije za injektovanje, sterilne suve nerastvorljive proizvode koji se kombinuju sa vehikulumom neposredno pre upotrebe i sterilne emulzije. Rastvori mogu biti vodeni i nevodeni.
[0121] Ako se primenjuju intravenski, pogodni nosači uključuju fiziološki slani rastvor ili fiziološki rastvor puferovan fosfatnim puferom (PBS) i rastvore koji sadrže agense za ugušćavanje ili solubilizaciju, kao što su glukoza, polietilen glikol i polipropilen glikol i njihove smeše.
[0122] Topikalne smeše koje sadrže antitelo pripremaju se kao što je opisano za lokalnu i sistemsku primenu. Dobijena smeša može da bude rastvor, suspenzija, emulzija ili slično, i može da bude formulisana kao kreme, gelovi, melemi, emulzije, rastvori, eliksiri, losioni, suspenzije, tinkture, paste, pene, aerosoli, irigatori, sprejevi, supozitorije, zavoji, dermalni flasteri, ili bilo koje druge formulacije pogodne za topikalnu primenu.
[0123] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo može da bude formulisano kao aerosol za topikalnu primenu, kao što je inhalacija (vidite npr. američke patente U.S. Patent br.
4,044,126, 4,414,209 i 4,364,923 koji opisuju aerosole za isporuku steroida koji su korisni za lečenje inflamatornih oboljenja, naročito astme). Te formulacije za primenu na respiratornom traktu mogu biti u obliku aerosola ili rastvora za nebulizator, ili kao mikrofini prašak za insuflaciju, samostalno ili u kombinaciji sa inertnim nosačem, kao što je laktoza. U tom slučaju, čestice u formulaciji će, u jednom otelotvorenju, imati prečnik manji od 50 mikrona, u jednom otelotvorenju manje od 10 mikrona.
[0124] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo može da se formuliše za lokalnu ili topikalnu primenu, kao što je topikalna primena na koži i sluzokoži, kao što je u oku, u obliku gelova, krema i losiona, i za primenu na oku ili za intracisternalnu ili intraspinalnu primenu.
Topikalna primena je razmatrana za transdermalnu isporuku i takođe za primenu na očima ili sluzokoži, ili za inhalacione terapije. Nazalni rastvori antitela samostalno ili u kombinaciji sa drugim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima takođe mogu da se primenjuju.
[0125] Transdermalni flasteri, uključujući jontoforetska i elektroforetska sredstva, dobro su poznati osobama sa znanjem u struci, i mogu se koristiti za primenu antitela. Na primer, takvi flasteri su objavljeni u američkim patentima U.S. Patent br.6,267,983, 6,261,595, 6,256,533, 6,167,301, 6,024,975, 6,010715, 5,985,317, 5,983,134, 5,948,433 i 5,860,957.
[0126] U određenim otelotvorenjima, ovde opisana farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment je liofilizovani prašak, koji može biti rekonstituisan za primenu kao rastvori, emulzije i druge smeše. Takođe može biti rekonstituisan i formulisan kao čvrste supstance ili gelovi. Liofilizovani prašak se priprema rastvaranjem ovde opisanog antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta, ili njegovog farmaceutski prihvatljivog derivata, u pogodnom rastvaraču. U nekim otelotvorenjima, liofilizovani prašak je sterilan. Rastvarač može da sadrži ekscipijens koji poboljšava stabilnost ili druge farmakološke komponente praška ili rekonstituisanog rastvora, pripremljene od praška. Ekscipijensi koji mogu da se koriste uključuju dekstrozu, sorbitol, fruktozu, kukuruzni sirup, ksilitol, glicerin, glukozu, saharozu ili druge pogodne agense. Rastvarač takođe može da sadrži pufer, kao što je citratni, natrijum ili kalijum fosfatni, ili druge takve pufere koji su poznati osobama sa znanjem u struci, u jednom otelotvorenju, na neutralnom pH. Dalja sterilna filtracija rastvora praćena liofilizacijom u uobičajenim uslovima koji su poznati osobama sa znanjem u struci daje željenu formulaciju. U jednom otelotvorenju, dobijeni rastvor biće razdeljen u bočice za liofilizaciju. Svaka bočica će sadržati jednu dozu ili više doza jedinjenja. Liofilizovani prašak može da se čuva u odgovarajućim uslovima, kao što je na oko 4 °C do sobne temperature. Rekonstituisanje ovog liofilizovanog praška sa vodom za injektovanje daje formulaciju za upotrebu u parenteralnoj primeni. Za rekonstituisanje, liofilizovani prašak se dodaje sterilnoj vodi ili drugom pogodnom nosaču. Precizna količina zavisi od izabranog jedinjenja. Takva količina može empirijski da se odredi.
[0127] Ovde opisana anti-CTLA-4 antitela i druge ovde obezbeđene kompozicije takođe mogu da se formulišu da ciljaju konkretno tkivo, receptor ili drugi deo tela ispitanika koji se leči. Mnoge takve metode ciljanja su dobro poznate osobama sa znanjem u struci. Sve takve metode ciljanja su ovde razmatrane za upotrebu u trenutnim kompozicijama. Za neograničavajuće primere metoda ciljanja, vidite npr. američke patente U.S. Patent br.
6,316,652, 6,274,552, 6,271,359, 6,253,872, 6,139,865, 6,131,570, 6,120,751, 6,071,495, 6,060,082, 6,048,736, 6,039,975, 6,004,534, 5,985,307, 5,972,366, 5,900,252, 5,840,674, 5,759,542 i 5,709,874. U specifičnom otelotvorenju, ovde opisano antitelo ili njegov antigenvezujući fragment ciljano je na tumor.
[0128] Kompozicije koje će se koristiti za in vivo primenu mogu da budu sterilne. To se lako postiže filtracijom, npr., kroz sterilne filtracione membrane.
5.4 Postupci primene
[0129] U drugom aspektu, trenutni pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje ispitanika koristeći ovde objavljena anti-CTLA-4 antitela. Svaka bolest ili poremećaj kod ispitanika koji bi imao koristi od inhibicije funkcije CTLA-4 se može lečiti koristeći ovde objavljena anti-CTLA-4 antitela. Ovde objavljena anti-CTLA-4 antitela su posebno korisna za inhibiranje tolerancije imunskog sistema na tumore, i prema tome mogu da se koriste kao imunoterapija za ispitanike sa rakom. Na primer, u nekim aspektima, trenutni pronalazak obezbeđuje postupak za povećanje aktivacije T ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika, i postupak obuhvata primenu na ispitaniku delotvorne količine anti-CTLA-4 antitela ili njegove farmaceutske kompozicije, kao što je ovde objavljeno. U nekim aspektima, trenutni pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje raka kod ispitanika, i postupak obuhvata primenu na ispitaniku delotvorne količine antitela ili njegove farmaceutske kompozicije, kao što je ovde objavljeno. Predmetni pronalazak se odnosi na izolovano antitelo iz pronalaska ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska za primenu u postupku za lečenje raka. U nekim otelotvorenjima, ispitanik je prethodno dobijao imunoterapiju. U nekim otelotvorenjima, ispitanik prethodno nije dobijao nikakvu imunoterapiju. U nekim otelotvorenjima, rak je uznapredovali ili metastatski rak. Maligni tumori koji mogu da se leče anti-CTLA-4 antitelima ili ovde objavljenim farmaceutskim kompozicijama uključuju, bez ograničenja, solidni maligni tumor (npr. relapsni ili refraktorni solidni maligni tumor, i uznapredovali ili metastatski solidni maligni tumor), karcinom, sarkom, melanom (npr. melanom III ili IV stadijuma), mikrocelularni karcinom pluća, nemikrocelularni karcinom pluća, urotelijalni karcinom, karcinom jajnika, karcinom prostate (npr. hormonski refraktorni karcinom prostate i progresivni metastatski karcinom prostate), karcinom pankreasa, karcinom dojke (npr.
HER2<+>karcinom dojke (npr. relapsni/refraktorni HER2<+>karcinom dojke)), rak glave i vrata (npr. relapsni/refraktorni karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata (HNSCC)), gliom, maligni gliom, glioblastom multiforme, metastazu na mozgu, karcinom Merkelovih ćelija, karcinom želuca, gastroezofagealni karcinom, karcinom bubrežnih ćelija, uvealni melanom, karcinom kolona, cervikalni karcinom, limfom (npr. relapsni ili refraktorni limfom), non-Hočkinov limfom, Hočkinov limfom, leukemiju i multipli mijelom. U nekim otelotvorenjima, rak se leči intratumorskom primenom ovde objavljenih anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutskih kompozicija. Maligni tumori koji mogu da se leče intratumorskom primenom ovde objavljenih anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutskih kompozicija uključuju, bez ograničenja, solidne tumore (npr. uznapredovale ili metastatske solidne tumore), rak glave i vrata (npr. relapsni/refraktorni karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata (HNSCC)), i karcinom dojke (npr. HER2<+>karcinom dojke (npr. relapsni/refraktorni HER2<+>karcinom dojke)).
[0130] Dodatni maligni tumori koji mogu da se leče ovde objavljenim anti-CTLA-4 antitelima ili farmaceutskim kompozicijama uključuju, bez ograničenja, limfome B ćelija (npr. hroničnu limfocitnu leukemiju B ćelija, non-Hočkinov limfom B ćelija, kutani limfom B ćelija, difuzni limfom velikih B ćelija), karcinom bazalnih ćelija, karcinom bešike, blastom, metastazu na mozgu, karcinom dojke, Burkitov limfom, karcinom (npr. adenokarcinom (npr. gastroezofagealnog spoja)), cervikalni karcinom, karcinom kolona, kolorektalni karcinom (karcinom kolona i rektalni karcinom), karcinom endometrijuma, karcinom jednjaka, Juingov sarkom, folikularni limfom, karcinom želuca, karcinom gastroezofagealnog spoja, gastrointestinalni karcinom, glioblastom (npr. glioblastom multiforme, npr. novodijagnostikovan ili rekurentni), gliom, rak glave i vrata (npr. karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata), metastazu na jetri, Hočkinov i non-Hočkinov limfom, karcinom bubrega (npr. karcinom renalnih ćelija i Vilmsove tumore), karcinom grkljana, leukemiju (npr. hroničnu mijelocitnu leukemiju, leukemiju vlasastih ćelija), karcinom jetre (npr. karcinom jetre i hepatom), karcinom pluća (npr. nemikrocelularni karcinom pluća i mikrocelularni karcinom pluća), limfblastični limfom, limfom, limfom ćelija plašta, metastatski tumor mozga, metastatski rak, mijelom (npr. multipli mijelom), neuroblastom, očni melanom, karcinom orofarinksa, osteosarkom, karcinom jajnika, karcinom pankreasa (npr. duktalni adenokarcinom pankreasa), karcinom prostate (npr. refraktoran na hormone (npr. rezistentan na kastraciju), metastatski, metastatski refraktoran na hormone (npr. rezistentan na kastraciju, nezavisan od androgena)), karcinom renalnih ćelija (npr. metastatski), karcinom pljuvačne žlezde, sarkom (npr. rabdomiosarkom), karcinom kože (npr. melanom (npr. metastatski melanom)), sarkom mekog tkiva, solidni tumor, karcinom skvamoznih ćelija, sinovijalni sarkom, karcinom testisa, tireoidni karcinom, karcinom tranzicionih ćelija (karcinom urotelijalnih ćelija), uvealni melanom (npr. metastatski), verukozni karcinom, karcinom vulve i Valdenstromovu makroglobulinemiju.
[0131] U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni je humani sarkom ili karcinom, npr. fibrosarkom, miksosarkom, liposarkom, hondrosarkom, osteogeni sarkom, hordom, angiosarkom, endoteliosarkom, limfangiosarkom, limfangioendoteliosarkom, sinoviom, mezoteliom, Juingov tumor, lejomiosarkom, rabdomiosarkom, karcinom kolona, karcinom pankreasa, karcinom dojke, karcinom jajnika, karcinom prostate, karcinom skvamoznih ćelija, karcinom bazalnih ćelija, adenokarcinom, karcinom znojnih žlezda, karcinom lojnih žlezda, papilarni karcinom, papilarni adenokarcinomi, cistadenokarcinom, medularni karcinom, bronhogeni karcinom, karcinom renalnih ćelija (npr. metastatski), hepatom, karcinom žučnih puteva, horiokarcinom, seminom, embrionalni karcinom, Vilmsov tumor, cervikalni karcinom, tumor testisa, karcinom pluća, mikrocelularni karcinom pluća, karcinom bešike, karcinom epitela, gliom, glioblastom multiforme, astrocitom, meduloblastom, kraniofaringiom, ependimom, pinealom, hemangioblastom, akustični neurom, oligodendrogliom, meningiom, melanom, neuroblastom ili retinoblastom. U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni je akutna limfocitna leukemija ili akutna mijelocitna leukemija (npr. mijeloblastna, promijelocitna, mijelomonocitna, monocitna i eritroleukemija); hronična leukemija (hronična mijelocitna (granulocitna) leukemija ili hronična limfocitna leukemija); Hočkinova bolest; non-Hočkinova bolest; akutna mijeloidna leukemija; limfom B ćelija; limfom T ćelija; anaplastični krupnoćelijski limfom; intraokularni limfom; folikularni limfom; limfom tankog creva; ili limfom marginalne zone slezine. U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni je multipli mijelom, Valdenstromova makroglobulinemija, bolest teških lanaca, gastrointestinalni stromalni tumori, rak glave i/ili vrata (npr. karcinom skvamoznih ćelija hipofarinksa, karcinom skvamoznih ćelija larinksa, ćelijski karcinom orofarinksa ili verukozni karcinom larinksa), endometrijalni stromalni sarkom, sarkom mastocita, sarkom mekog tkiva odraslih, sarkom uterusa, karcinom Merkelovih ćelija, urotelijalni karcinom, melanom sa metastazama na mozgu, uvealni melanom, uvealni melanom sa metastazama na jetri, nemikrocelularni karcinom pluća, rektalni karcinom ili mijelodisplastični sindrom. U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema primeni je metastatski.
[0132] U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni uključuje karcinom prostate, karcinom dojke, karcinom pluća, kolorektalni karcinom, melanom, bronhijalni karcinom, karcinom bešike, maligni tumor mozga ili centralnog nervnog sistema, maligni tumor perifernog nervnog sistema, karcinom uterusa ili endometrijuma, karcinom oralne šupljine ili grkljana, non-Hočkinov limfom, tireoidni karcinom, karcinom bubrega, maligni tumor bilijarnog trakta, karcinom tankog ili slepog creva, karcinom pljuvačnih žlezda, karcinom tireoidne žlezde, karcinom nadbubrežne žlezde, karcinom skvamoznih ćelija, mezoteliom, osteokarcinom, timom/karcinom timusa, glioblastom, mijelodisplastični sindrom, sarkom mekog tkiva, DIPG, adenokarcinom, osteosarkom, hondrosarkom, leukemiju ili karcinom pankreasa. U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni uključuje karcinom (npr. adenokarcinom), limfom, blastom, melanom, sarkom ili leukemiju. U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni uključuje karcinom skvamoznih ćelija, mikrocelularni karcinom pluća, nemikrocelularni karcinom pluća, gastrointestinalni karcinom, Hočkinov limfom, non-Hočkinov limfom, karcinom pankreasa, glioblastom, gliom, cervikalni karcinom, karcinom jajnika, karcinom jetre (npr. hepatični karcinom i hepatom), karcinom bešike, karcinom dojke, inflamatorni karcinom dojke, karcinom Merkelovih ćelija, karcinom kolona, kolorektalni karcinom, karcinom želuca, karcinom mokraćne bešike, karcinom endometrijuma, mijelom (npr. multipli mijelom), karcinom pljuvačnih žlezda, karcinom bubrega (npr. karcinom renalnih ćelija i Vilmsove tumore), karcinom bazalnih ćelija, melanom, karcinom prostate, karcinom vulve, tireoidni karcinom, karcinom testisa, karcinom jednjaka, serozni adenokarcinom ili različite vrste raka glave i vrata. U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni uključuje desmoplastični melanom, inflamatorni karcinom dojke, timom, rektalni karcinom, analni karcinom, ili operabilni ili neoperabilni gliom moždanog stabla. U specifičnom otelotvorenju, rak je solidni tumor. U drugom specifičnom otelotvorenju, rak je glioblastom multiforme. U nekim otelotvorenjima, glioblastom multiforme je rekurentni. U nekim
1
otelotvorenjima, glioblastom multiforme je novodijagnostikovani. U nekim otelotvorenjima, glioblastom multiforme je kod ispitanika koji ima nemetilovane MGMT promotere. U nekim otelotvorenjima, glioblastom multiforme je refraktoran na terapiju bevacizumabom. U nekim otelotvorenjima, glioblastom multiforme je kod ispitanika koji nije dobijao terapiju bevacizumabom.
[0133] U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni je metastatski melanom (npr. rezistentni metastatski melanom), metastatski karcinom jajnika ili metastatski karcinom renalnih ćelija. U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni je melanom rezistentan na ipilimumab. U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni je melanom rezistentan na nivolumab ili pembrolizumab. U nekim otelotvorenjima, rak lečen prema ovde opisanoj primeni je melanom rezistentan na ipilimumab i nivolumab ili pembrolizumab.
[0134] U nekim aspektima, trenutni pronalazak obezbeđuje postupak za sprečavanje ili lečenje infektivne bolesti kod ispitanika, i postupak obuhvata davanje ispitaniku delotvorne količine anti-CTLA-4 antitela ili njegove farmaceutske kompozicije, kako je ovde objavljena. U jednom aspektu, ovde su obezbeđeni postupci za sprečavanje i/ili lečenje infekcije (npr. virusne infekcije, bakterijske infekcije, gljivične infekcije, infekcije protozoama ili parazitima). Predmetni pronalazak se odnosi na izolovano antitelo iz pronalaska ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska za primenu u postupku za lečenje infektivne bolesti. Infekcija sprečena i/ili lečena u skladu sa primenom može biti izazvana ovde identifikovanim infektivnim agensom. U specifičnom otelotvorenju, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegova kompozicija je jedini aktivni agens dat ispitaniku. U nekim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegova kompozicija se koristi u kombinaciji sa antiinfektivnim intervencijama (npr. antivirusnim, antibakterijskim, antifungalnim ili anthelmintičnim sredstvom) za lečenje infektivnih bolesti.
[0135] Infektivne bolesti koje mogu biti lečene i/ili sprečene pomoću ovde opisanih anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutskih kompozicija izazvane su infektivnim agensima, uključujući bakterije, parazite, gljivice, protozoe i viruse. U specifičnom otelotvorenju, infektivna bolest lečena i/ili sprečena pomoću ovde opisanih anti-CTLA-4 antitela ili farmaceutskih kompozicija izazvana je virusom. Virusne bolesti ili virusne infekcije koje mogu biti sprečene i/ili lečene prema ovde opisanoj primeni uključuju one izazvane virusom
2
hepatitisa tip A, hepatitisa tip B, hepatitisa tip C, influence (npr. influenca A ili influenca B), varičele, adenovirusom, herpes simpleks virusom tip I (HSV-I), herpes simpleks virusom tip II (HSV-II), virusom goveđe kuge, rinovirusom, ehovirusom, rotavirusom, respiratornim sincicijalnim virusom, papiloma virusom, papova virusom, citomegalovirusom, ehinovirusom, arbovirusom, huntavirusom, koksaki virusom, virusom zauški, virusom morbila, virusom rubeola, polio virusom, virusom velikih boginja, Epštajn Barovim virusom, virusom humane imunodeficijencije tip I (HIV-I), virusom humane imunodeficijencije tip II (HIV-II), i agensima virusnih bolesti, kao što je virusni meningitis, encefalitis, denga ili velike boginje.
[0136] Bakterijske infekcije koje mogu biti sprečene i/ili lečene uključuju infekcije koje izaziva Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Proteus vulgaris, Staphylococcus viridans i Pseudomonas aeruginosa. Bakterijske bolesti izazvane bakterijama (npr. Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, Proteus vulgaris, Staphylococcus viridans i Pseudomonas aeruginosa) koje mogu biti sprečene i/ili lečene prema ovde opisanoj primeni uključuju Mycobacteria rickettsia, Mycoplasma, Neisseria, S. pneumonia, Borrelia burgdorferi (lajmska bolest), Bacillus antracis (antraks), tetanus, Streptococcus, Staphylococcus, mycobacterium, veliki kašalj, koleru, kugu, difteriju, chlamydia, S. aureus i legionella.
[0137] Protozoalne bolesti ili protozoalne infekcije izazvane protozoama koje mogu biti sprečene i/ili lečene prema ovde opisanoj primeni uključuju lišmanijazu, kokcidiozu, tripanosomozu, šistosomozu ili malariju. Parazitske bolesti ili parazitske infekcije izazvane parazitima koje mogu biti sprečene i/ili lečene prema ovde opisanoj primeni uključuju hlamidiju i rikeciju.
[0138] Gljivične bolesti ili gljivične infekcije koje mogu biti sprečene i/ili lečene prema ovde opisanoj primeni uključuju one koje su izazvane infekcijama gljivicom Candida, zigomikozu, mastitis koji izaziva Candida, progresivnu diseminiranu trihosporonozu sa latentnom trihosporonemijom, diseminiranu kandidijazu, plućnu parakokcidioidomikozu, plućnu aspergilozu, upalu pluća koju izaziva Pneumocystis carinii, kriptokokni meningitis, kokcidioidni meningoencefalitis i cerebrospinalni vaskulitis, infekciju gljivicom Aspergillus niger, fuzarijumski keratitis, mikoze paranazalnih sinusa, endokarditis koji izaziva Aspergillus fumigatus, tibijalnu dishondroplaziju, vaginitis koji izaziva Candida glabrata, orofaringealnu kandidijazu, X-vezanu hroničnu granulomatoznu bolest, atletsko stopalo, kutanu kandidijazu, mikotični placentitis, diseminiranu trihosporonozu, alergijsku bronhopulmonalnu aspergilozu, mikotični keratitis, infekciju koju izaziva Cryptococcus neoformans, gljivični peritonitis, infekciju koju izaziva Curvularia geniculata, stafilokokni endoftalmitis, sporotrihozu i dermatofitozu.
[0139] U nekim otelotvorenjima, infektivna bolest je akutna. U određenim otelotvorenjima, infektivna bolest je hronična. U određenim otelotvorenjima, infektivna bolest je izazvana flavivirusom, npr. virusom Zapadnog Nila, virusom Saint Louis encephalitis, virusom Povasan, virusom encefalitisa koji prenose krpelji, denga virusom, zika virusom, virusom šume Kjasanur, virusom žute groznice i virusom čikungunja. U određenim otelotvorenjima, infektivna bolest je izazvana Ebola virusom. U određenim otelotvorenjima, infektivna bolest je izazvana virusom gripa. U određenim otelotvorenjima, infektivna bolest je izazvana virusom humane imunodeficijencije (HIV), virusom hepatitisa B (HBV) ili virusom hepatitisa C (HCV). U određenim otelotvorenjima, anti-CTLA-4 antitelo ili njegova farmaceutska kompozicija, kako je ovde prikazano, promoviše kontrolu virusa. U određenim otelotvorenjima, anti-CTLA-4 antitelo ili njegova farmaceutska kompozicija, kako je ovde prikazano, eliminiše rezervoare virusa.
[0140] Predmetni pronalazak se u jednom aspektu odnosi na anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens za upotrebu kao lek.
[0141] Predmetna objava se odnosi, u jednom aspektu, na anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili njegovu upotrebu u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačima ili ekscipijensima, za pripremu farmaceutskih kompozicija ili lekova za imunoterapiju (npr. imunoterapiju za povećavanje aktivacije T-ćelija kao odgovor na antigen kod ispitanika, lečenje raka, ili lečenje ili prevenciju infektivnih bolesti).
[0142] Predmetni pronalazak se u jednom aspektu odnosi na anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu u postupku za lečenje raka.
4
[0143] Predmetna objava se u jednom aspektu odnosi na anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu u postupku za inhibiranje tolerancije imunskog sistema na tumore i/ili za imunoterapiju za ispitanike sa rakom.
[0144] Predmetni pronalazak se u jednom aspektu odnosi na anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens, za upotrebu u postupku za lečenje infektivne bolesti.
[0145] U određenim otelotvorenjima, ove upotrebe dalje obuhvataju primenu dodatnog terapeutskog agensa na ispitaniku. U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je hemioterapeutski agens ili agens koji cilja kontrolnu tačku. U određenim otelotvorenjima, agens koji cilja kontrolnu tačku je izabran iz grupe koja se sastoji od antagonista anti-PD-1 antitela, antagonista anti-PD-L1 antitela, antagonista anti-PD-L2 antitela, antagonista anti-CTLA-4 antitela, antagonista anti-TIM-3 antitela, antagonista anti-LAG-3 antitela, antagonista anti-CEACAM1 antitela, agonista anti-GITR antitela, agonista anti-OX40 antitela, agonista anti-CD 137 antitela, agonista anti-DR3 antitela, agonista anti-TNFSF14 antitela i agonista anti-CD27 antitela. U određenim otelotvorenjima, agens koji cilja kontrolnu tačku je antagonist anti-PD-1 antitela. U određenim otelotvorenjima, agens koji cilja kontrolnu tačku je antagonist anti-PD-L1 antitela. U određenim otelotvorenjima, agens koji cilja kontrolnu tačku je antagonist anti-LAG-3 antitela. U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je agonist člana superfamilije receptora faktora nekroze tumora ili član superfamilije faktora nekroze tumora.
[0146] U određenim otelotvorenjima, predmetni pronalazak se odnosi na (a) anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) dodatni terapeutski agens, za upotrebu kao lek. U poželjnom otelotvorenju, dodatni terapeutski agens je hemioterapeutski agens ili agens koji cilja kontrolnu tačku.
[0147] U određenim otelotvorenjima, predmetni pronalazak se odnosi na (a) anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) dodatni terapeutski agens za primenu u postupku za lečenje raka.
[0148] U određenim otelotvorenjima, predmetni pronalazak se odnosi na (a) anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) dodatni terapeutski agens, za primenu u postupku za lečenje infektivne bolesti.
[0149] U određenim otelotvorenjima, ovde objavljeno anti-CTLA-4 antitelo se primenjuje na ispitaniku u kombinaciji sa jedinjenjem koje cilja imunomodulatorne enzime kao što su IDO (indolamin-(2,3)-dioksigenaza) i/ili TDO (triptofan 2,3-dioksigenaza). U određenim otelotvorenju, takvo jedinjenje je izabrano iz grupe koja se sastoji od epakadostata (Incyte Corp; vidite npr. WO 2010/005958, F001287 (Flexus Biosciences), indoksimoda (NewLink Genetics) i NLG919 (NewLink Genetics). U jednom otelotvorenju, jedinjenje je epakadostat. U drugom otelotvorenju, jedinjenje je F001287. U drugom otelotvorenju, jedinjenje je indoksimod. U drugom otelotvorenju, jedinjenje je NLG919.
[0150] U određenim aspektima, predmetna objava se odnosi na (a) anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) jedinjenje koje cilja imunomodulatorni enzim, za primenu kao lek. U poželjnom otelotvorenju, jedinjenje cilja IDO i/ili TDO.
[0151] U određenim aspektima, predmetna objava se odnosi na (a) anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) jedinjenje koje cilja imunomodulatorni enzim, za primenu u postupku za lečenje raka. U poželjnom otelotvorenju, jedinjenje cilja IDO i/ili TDO.
[0152] U određenim otelotvorenjima, ovde objavljeno anti-CTLA-4 antitelo je za upotrebu u primeni na ispitaniku u kombinaciji sa vakcinom. U određenim otelotvorenjima, vakcina je tumorska vakcina zasnovana na proteinu toplotnog šoka ili patogena vakcina zasnovana na proteinu toplotnog šoka. U specifičnom otelotvorenju, ovde objavljeno anti-CTLA-4 antitelo primenjuje se na ispitaniku u kombinaciji sa tumorskom vakcinom zasnovanom na proteinu toplotnog šoka. Proteini toplotnog šoka (HSP) su familija visoko očuvanih proteina koji se sveprisutno mogu naći kod svih vrsta. Ekspresija se može snažno indukovati do mnogo većih nivoa usled toplotnog šoka ili drugih oblika stresa, uključujući izlaganje toksinima, oksidativnom stresu ili uskraćivanju glukoze. Pet familija je klasifikovano prema molekulskoj masi: HSP-110, -90, -70, -60 i -28. HSP isporučuju imunogene peptide pomoću puta unakrsne prezentacije u antigen prezentujućim ćelijama (APC) kao što su makrofagi i dendritske ćelije (DC), što dovodi do aktivacije T ćelija. HSP funkcionišu kao prateći nosači antigenih peptida povezanih sa tumorom koji formiraju komplekse sposobne da indukuju imunitet specifičan za tumor. Nakon otpuštanja iz umirućih ćelija tumora, kompleksi HSP-antigen preuzimaju se od strane antigen-prezentujućih ćelija (APC) naznačeno time što se antigeni obrađuju u peptide koji vezuju molekule MHC klase I i klase II, što dovodi do aktivacije anti-tumorskih CD8+ i CD4+ T ćelija. Imunitet izazvan putem HSP kompleksa dobijenih iz tumorskih preparata specifično je usmeren na jedinstveni repertoar antigenih peptida koji eksprimira maligni tumor svakog ispitanika.
[0153] Peptidni kompleks proteina toplotnog šoka (HSPPC) je peptidni kompleks proteina koji se sastoji od proteina toplotnog šoka koji je nekovalentno kompleksiran sa antigenim peptidima. HSPPC izazivaju urođene i adaptivne imunske odgovore. U specifičnom otelotvorenju, antigeni peptidi ispoljavaju antigenost za rak koji se leči. APC efikasno hvataju HSPPC putem membranskih receptora (uglavnom CD91) ili putem vezivanja za zvonaste receptore. Internalizacija HSPPC dovodi do funkcionalnog sazrevanja APC gde proizvodnja hemokina i citokina uzrokuje aktivaciju ćelija prirodnih ubica (NK), monocita i Th1 i Th-2-posredovanih imunskih odgovora. U određenim otelotvorenjima, HSPPC koji se koriste u ovde objavljenim postupcima sadrže jedan ili više proteina toplotnog šoka iz familije hsp60, hsp70, ili hsp90 proteina stresa kompleksiranih sa antigenim peptidima. U određenim otelotvorenjima, HSPPC sadrži hsc70, hsp70, hsp90, hsp110, grp170, gp96, kalretikulin, ili kombinaciju dva ili više od navedenog.
[0154] U specifičnom otelotvorenju, ovde objavljeno anti-CTLA-4 antitelo se primenjuje na ispitaniku u kombinaciji sa peptidnim kompleksom proteina toplotnog šoka (HSPPC), npr. peptidni kompleks proteina toplotnog šoka 96 (HSPPC-96), za lečenje raka. HSPPC-96 sadrži protein toplotnog šoka (Hsp) od 96 kDa, gp96, kompleksiran sa antigenim peptidima. HSPPC-96 je imunoterapija za rak proizvedena od ispitanikovog tumora i sadrži antigeni „otisak“ malignog tumora. U određenim otelotvorenjima, taj otisak sadrži jedinstvene antigene koji su prisutni samo u specifičnim ćelijama raka tog konkretnog ispitanika, i injektovanje vakcine treba da stimuliše imunski sistem ispitanika da prepoznaje i napada bilo koje ćelije sa specifičnim otiskom malignog tumora.
[0155] U određenim otelotvorenjima, HSPPC, npr. HSPPC-96, proizvodi se od tumorskog tkiva ispitanika. U specifičnom otelotvorenju, HSPPC (npr. HSPPC-96) se proizvodi od tumora vrste raka ili njegove metastaze koja se leči. U drugom specifičnom otelotvorenju, HSPPC (npr. HSPPC-96) je autolog za ispitanika koji se leči. U određenim otelotvorenjima, tumorsko tkivo je nenekrotično tumorsko tkivo. U određenim otelotvorenjima, najmanje 1 gram (npr. najmanje 1, najmanje 2, najmanje 3, najmanje 4, najmanje 5, najmanje 6, najmanje 7, najmanje 8, najmanje 9 ili najmanje 10 grama) nenekrotičnog tumorskog tkiva se koristi da se proizvede režim vakcine. U određenim otelotvorenjima, nakon hirurške resekcije, nenekrotično tumorsko tkivo je zamrznuto pre upotrebe za pripremu vakcine. U nekim otelotvorenjima, HSPPC, npr. HSPPC-96, je izolovan iz tumorskog tkiva pomoću tehnika prečišćavanja, filtriran i pripremljen za injektabilnu vakcinu. U određenim otelotvorenjima, ispitaniku se daje 6–12 doza HSPPC, npr. HSPCC-96. U takvim otelotvorenjima, doze HSPPC, npr. HSPPC-96, mogu se davati nedeljno za prve 4 doze, a zatim na dve nedelje za 2–8 dodatnih doza.
[0156] Dalji primeri HSPPC koji mogu da se koriste u skladu sa ovde opisanom primenom objavljeni su u sledećim patentima i patentnim prijavama: U.S. Patent br.6,391,306, 6,383,492, 6,403,095, 6,410,026, 6,436,404, 6,447,780, 6,447,781 i 6,610,659.
[0157] U određenim aspektima, predmetna objava se odnosi na (a) anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) vakcinu za primenu kao lek. U poželjnom otelotvorenju, vakcina je tumorska vakcina zasnovana na proteinu toplotnog šoka ili patogena vakcina zasnovana na proteinu toplotnog šoka. U poželjnom otelotvorenju, vakcina je virusna vakcina zasnovana na proteinu toplotnog šoka.
[0158] U određenim aspektima, predmetna objava se odnosi na (a) anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i/ili farmaceutsku kompoziciju iz pronalaska koja sadrži anti-CTLA-4 antitelo iz pronalaska i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens i (b) vakcinu, za primenu u postupku za lečenje raka. U poželjnom otelotvorenju, vakcina je tumorska vakcina zasnovana na proteinu toplotnog šoka.
[0159] Anti-CTLA-4 antitelo i dodatni terapeutski agens (npr. hemioterapeutski agens, agens koji cilja kontrolnu tačku, inhibitor IDO i/ili vakcina) mogu da se primene odvojeno, sekvencijalno ili istovremeno kao odvojeni dozni oblici. U jednom otelotvorenju, anti-CTLA-4 antitelo se primenjuje parenteralno, a inhibitor IDO se primenjuje oralno.
[0160] U određenim otelotvorenjima, ovde objavljeno anti-CTLA-4 antitelo se na ispitaniku primenjuje intratumorski. U određenim otelotvorenjima, ovde objavljeno anti-CTLA-4 antitelo se na ispitaniku primenjuje intratumorski u kombinaciji sa dodatnim terapeutskim agensom. U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens se primenjuje sistemski. U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima solidne tumore. U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata (HNSCC). U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima HER2<+>karcinom dojke. U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens koji se sistemski primenjuje je anti-PD-1 antitelo (npr. pembrolizumab ili nivolumab). U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens koji se sistemski primenjuje je anti-EGFR antitelo (npr. cetuksimab). U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens koji se sistemski primenjuje je anti-HER2 antitelo (npr. trastuzumab). U određenim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens koji se sistemski primenjuje je hemioterapeutski agens (npr. gemcitabin). U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima solidne tumore i dodatni terapeutski agens koji se sistemski primenjuje je anti-PD-1 antitelo (npr. pembrolizumab ili nivolumab). U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata (HNSCC) i dodatni terapeutski agens koji se sistemski primenjuje je anti-EGFR antitelo (npr. cetuksimab). U određenim otelotvorenjima, ispitanik ima HER2<+>karcinom dojke i dodatni terapeutski agens koji se sistemski primenjuje je anti-HER2 antitelo (npr. trastuzumab). U određenim otelotvorenjima, ispitanik je dodatno primio hemioterapeutski agens (npr. gemcitabin). U jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska, i opciono dodatni terapeutski agens, za primenu u postupku za lečenje raka, naznačeno time što se anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska primenjuju na ispitaniku intratumorski. U jednom poželjnom otelotvorenju, dodatni terapeutski agens se primenjuje na ispitaniku, poželjnije, dodatni terapeutski agens se sistemski primenjuje na ispitaniku.
[0161] U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo se koristi u ovde objavljenim primenama. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je nivolumab, poznat i kao BMS-936558 ili MDX1106, koji je razvila kompanija Bristol-Myers Squibb. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je pembrolizumab, poznat i kao lambrolizumab ili MK-3475, koji je razvila kompanija Merck & Co. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je pidilizumab, poznat i kao CT-011, koji je razvila kompanija CureTech. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je MEDI0680, poznat i kao AMP-514, koji je razvila kompanija Medimmune. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je PDR001, koji je razvila kompanija Novartis Pharmaceuticals. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je REGN2810, koji je razvila kompanija Regeneron Pharmaceuticals. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je PF-06801591, koji je razvila kompanija Pfizer. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je BGB-A317, koji je razvila kompanija BeiGene. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je TSR-042, koji su razvile kompanije AnaptysBio i Tesaro. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-1 antitelo je SHR-1210, koji je razvila kompanija Hengrui.
[0162] Dalji neograničavajući primeri anti-PD-1 antitela koja mogu da se koriste u ovde objavljenim postupcima lečenja su objavljeni u sledećim patentima i patentnim prijavama: U.S. Patent br.6,808,710; U.S. Patent br.7,332,582; U.S. Patent br.7,488,802; U.S. Patent br. 8,008,449; U.S. Patent br.8,114,845; U.S. Patent br.8,168,757; U.S. Patent br.8,354,509; U.S. Patent br.8,686,119; U.S. Patent br.8,735,553; U.S. Patent br.8,747,847; U.S. Patent br. 8,779,105; U.S. Patent br.8,927,697; U.S. Patent br.8,993,731; U.S. Patent br.9,102,727; U.S. Patent br.9,205,148; U.S. Publication (američka publikacija) br. US 2013/0202623 A1; U.S. Publication br. US 2013/0291136 A1; U.S. Publication br. US 2014/0044738 A1; U.S. Publication br. US 2014/0356363 A1; U.S. Publication br. US 2016/0075783 A1; i PCT Publication (PCT publikacija) br. WO 2013/033091 A1; PCT Publication br. WO 2015/036394 A1; PCT Publication br. WO 2014/179664 A2; PCT Publication br. WO 2014/209804 A1; PCT Publication br. WO 2014/206107 A1; PCT Publication br. WO 2015/058573 A1; PCT Publication br. WO 2015/085847 A1; PCT Publication br. WO 2015/200119 A1; PCT Publication br. WO 2016/015685 A1; i PCT Publication br. WO 2016/020856 A1.
[0163] U određenim otelotvorenjima, anti-PD-L1 antitelo se koristi u ovde objavljenim postupcima. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-L1 antitelo je atezolizumab, koji je razvila kompanija Genentech. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-L1 antitelo je durvalumab, koji su razvile kompanije AstraZeneca, Celgene i Medimmune. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-L1 antitelo je avelumab, poznat i kao MSB0010718C, koji su razvile kompanije Merck Serono i Pfizer. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-L1 antitelo je MDX-1105, koji je razvila kompanija Bristol-Myers Squibb. U određenim otelotvorenjima, anti-PD-L1 antitelo je AMP-224, koji su razvile kompanije Amplimmune i GSK.
[0164] Neograničavajući primeri anti-PD-L1 antitela koja mogu da se koriste u ovde objavljenim postupcima lečenja su objavljeni u sledećim patentima i patentnim prijavama: US Patent br.7,943,743; US Patent br.8,168,179; US Patent br.8,217,149; U.S. Patent br.
8,552,154; U.S. Patent br.8,779,108; U.S. Patent br.8,981,063; U.S. Patent br.9,175,082; U.S. Publication br. US 2010/0203056 A1; U.S. Publication br. US 2003/0232323 A1; U.S. Publication br. US 2013/0323249 A1; U.S. Publication br. US 2014/0341917 A1; U.S. Publication br. US 2014/0044738 A1; U.S. Publication br. US 2015/0203580 A1; U.S. Publication br. US 2015/0225483 A1; U.S. Publication br. US 2015/0346208 A1; U.S. Publication br. US 2015/0355184 A1; i PCT Publication br. WO 2014/100079 A1; PCT Publication br. WO 2014/022758 A1; PCT Publication br. WO 2014/055897 A2; PCT Publication br. WO 2015/061668 A1; PCT Publication br. WO 2015/109124 A1; PCT Publication br. WO 2015/195163 A1; PCT Publication br. WO 2016/000619 A1; i PCT Publication br. WO 2016/030350 A1.
[0165] U određenim otelotvorenjima, anti-LAG-3 antitelo se koristi u ovde objavljenim primenama. U određenim otelotvorenjima, anti-LAG-3 antitelo je BMS-986016, koji je razvila kompanija Bristol-Myers Squibb. U određenim otelotvorenjima, anti-LAG-3 antitelo je LAG525, koji je razvila kompanija Novartis. U određenim otelotvorenjima, anti-LAG-3 antitelo je GSK2831781, koji je razvila kompanija GSK.
[0166] Neograničavajući primeri anti-LAG-3 antitela koja mogu da se koriste u ovde objavljenim postupcima lečenja su objavljeni u sledećim patentima i patentnim prijavama: US Patent br.9,244,059; U.S. Publication br. US 2011/0150892 A1; U.S. Publication br. US 2014/0093511 A1; U.S. Publication br. US 2014/0286935 A1; U.S. Publication br. US
1
2015/0259420 A1; i PCT Publication br. WO 2015/042246 A1; PCT Publication br. WO 2015/116539 A1; PCT Publication br. WO 2015/200119 A1; i PCT Publication br. WO 2016/028672 A1.
[0167] U određenim otelotvorenjima, anti-EGFR antitelo se koristi u ovde objavljenim primenama. U određenim otelotvorenjima, anti-EGFR antitelo je cetuksimab, koji su razvile kompanije Bristol-Myers Squibb i ImClone, panitumumab, koji su razvile kompanije Abgenix i Amgen, nimotuzumab, koji su razvile kompanije CMI Cuba i YM BioSciences, necitumumab, koji je razvila kompanija ImClone, zalutumumab, koji je razvila kompanija Genmab, matuzumab, koji je razvila kompanija Takeda, Sym004, koji su razvile kompanije Merck Serono i Symphogen, imgatuzumab, koji su razvile kompanije Glycart i Roche, duligotumab, koji su razvile kompanije Genentech i Roche, depatuksizumab, koji je razvila kompanija Abbott, depatuksizumab mafodotin, koji je razvila kompanija Abbvie, MM-151, koji su razvile kompanije Adimab i Merrimack, GC1118, koji je razvila kompanija Green Cross, AMG 595, koji su razvile kompanije Amgen i ImmunoGen, CetuGEX, koji je razvila kompanija Glycotope, laprituksimab emtansin, koji je razvila kompanija ImmunoGen, JNJ-61186372, koji su razvile kompanije Genmab i Janssen Biotech, SCT200, koji je razvila kompanija Sinocelltech, LY3164530, koji je razvila kompanija Lilly, HLX07, koji je razvila kompanija Shanghai Henlius, ili SYN004, koji je razvila kompanija Synermore.
[0168] U određenim otelotvorenjima, anti-HER2 antitelo se koristi u ovde objavljenim primenama. U određenim otelotvorenjima, anti-HER2 antitelo je trastuzumab, koji su razvile kompanije Genentech i Roche, trastuzumab emtansin, koji su razvile kompanije Genentech i Roche, pertuzumab, koji je razvila kompanija Genentech, ertumaksomab, koji je razvila kompanija Fresenius, margetuksimab, koji je razvila kompanija MacroGenics, MM-111, koji je razvila kompanija Merrimack, CT-P06, koji je razvila kompanija Celltrion, PF-05280014, koji je razvila kompanija Pfizer, MM-302, koji je razvila kompanija Merrimack, SB3, koji je razvila kompanija Merck & Co, CMAB302, koji je razvila kompanija Shanghai CP Guojian, TrasGEX, koji je razvila kompanija Glycotope, ARX788, koji su razvile kompanije Ambrx i Zhejiang Medicine, SYD985, koji je razvila kompanija Synthon, FS102, koji su razvile kompanije Bristol-Myers Squibb i f-star, BCD-022, koji je razvila kompanija Biocad, ABP 980, koji je razvila kompanija Amgen, DS-8201a, koji je razvila kompanija Daiichi Sankyo, HLX02, koji je razvila kompanija Shanghai Henlius, ili CANMAb, koji su razvile kompanije Biocon i Mylan.
2
[0169] Ovde opisano antitelo ili farmaceutska kompozicija može biti isporučena ispitaniku različitim načinima primene. To uključuje parenteralnu, intranazalnu, intratrahealnu, oralnu, intradermalnu, topikalnu, intramuskularnu, intraperitonealnu, transdermalnu, intravensku, intratumorsku, konjunktivnu i supkutanu primenu. Pulmonarna primena se takođe može koristiti, npr. kod upotrebe inhalatora ili nebulizatora, i formulacija sa agensom za aerosolizaciju namenjenih za primenu u obliku spreja. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano antitelo ili farmaceutska kompozicija se isporučuje supkutano ili intravenski. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano antitelo ili farmaceutska kompozicija se isporučuje intratumorski. U nekim otelotvorenjima, ovde otkriveno anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se isporučuje u limfni čvor u koji se drenira tumor. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano antitelo ili farmaceutska kompozicija se isporučuje putem lokalizovane primene (npr. supkutane primene). U određenim otelotvorenjima, anti-CTLA-4 antitelo ili ovde opisana farmaceutska kompozicija se isporučuje sistemski. U određenim otelotvorenjima, anti-CTLA-4 antitelo ili ovde opisana farmaceutska kompozicija se isporučuje lokalno.
[0170] U jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska, i opciono dodatni terapeutski agens, za primenu u postupku za lečenje raka, naznačeno time što se anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska isporučuju ispitaniku intratumorski, isporučuju se u limfni čvor u koji se drenira tumor ispitanika, ili se isporučuju ispitaniku putem lokalizovane primene (npr. supkutane primene).
[0171] Količina antitela ili kompozicije koja će biti delotvorna u lečenju i/ili sprečavanju stanja zavisiće od prirode bolesti, i može se odrediti standardnim kliničkim tehnikama.
[0172] Precizna doza koja će se upotrebiti u kompoziciji takođe će zavisiti od načina primene, i ozbiljnosti infekcije ili njome izazvane bolesti, i treba da se odredi prema proceni lekara i stanja okolnosti vezanih za svakog ispitanika. Na primer, delotvorna doza može takođe da varira u zavisnosti od sredstva primene, ciljnog mesta, fiziološkog stanja pacijenta (uključujući starost, telesnu težinu i zdravlje), od toga da li je pacijent čovek ili životinja, od drugih primenjenih lekova, ili od toga da li je lečenje profilaktičko ili terapeutsko. Pacijent je obično čovek, ali se takođe mogu tretirati nehumani sisari, uključuju transgene sisare. Doze za lečenje se optimalno titrišu da bi bezbednost i efikasnost bila optimalna.
[0173] U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg, oko 0,1 mg/kg, oko 0,3 mg/kg, oko 1 mg/kg, oko 3 mg/kg, oko 6 mg/kg ili oko 10 mg/kg. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku (npr. putem intravenske injekcije) svake tri nedelje u gorenavedenim dozama.
[0174] U jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska, i opciono dodatni terapeutski agens, za primenu u postupku za lečenje raka, naznačeno time što se anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutska kompozicija iz predmetnog pronalaska primenjuje na ispitaniku u dozi od 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, 6 mg/kg, 10 mg/kg, oko 0,1 mg/kg, oko 0,3 mg/kg, oko 1 mg/kg, oko 3 mg/kg, oko 6 mg/kg ili oko 10 mg/kg, poželjnije svake tri nedelje.
[0175] U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 0,1 mg/kg ili oko 0,1 mg/kg svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 0,3 mg/kg ili oko 0,3 mg/kg svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 1 mg/kg ili oko 1 mg/kg svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 3 mg/kg ili oko 3 mg/kg svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 6 mg/kg ili oko 6 mg/kg svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku (npr. putem intravenske injekcije) u dozi od 10 mg/kg ili oko 10 mg/kg svake tri nedelje.
4
[0176] U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku putem intratumorske injekcije u dozi od 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, oko 0,01 mg/kg, oko 0,03 mg/kg, oko 0,1 mg/kg, oko 0,3 mg/kg, oko 1 mg/kg ili oko 3 mg/kg. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku putem intratumorske injekcije svake tri nedelje u gorenavedenim dozama.
[0177] U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku putem intratumorske injekcije u dozi od 0,01 mg/kg ili oko 0,01 mg/kg svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku putem intratumorske injekcije u dozi od 0,03 mg/kg ili oko 0,03 mg/kg svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku putem intratumorske injekcije u dozi od 0,1 mg/kg ili oko 0,1 mg/kg svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku putem intratumorske injekcije u dozi od 0,3 mg/kg ili oko 0,3 mg/kg svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku putem intratumorske injekcije u dozi od 1 mg/kg ili oko 1 mg/kg svake tri nedelje. U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku putem intratumorske injekcije u dozi od 3 mg/kg ili oko 3 mg/kg svake tri nedelje.
[0178] U određenim otelotvorenjima, ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili farmaceutska kompozicija se primenjuje na ispitaniku putem lokalizovane primene (npr. supkutane primene) u dozi od 0,01 mg/kg, 0,03 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,3 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, oko 0,01 mg/kg, oko 0,03 mg/kg, oko 0,1 mg/kg, oko 0,3 mg/kg, oko 1 mg/kg ili oko 3 mg/kg.
[0179] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo takođe može da se koristi za ispitivanje nivoa CTLA-4 proteina u biološkom uzorku koristeći klasične imunohistološke postupke poznate stručnjacima, uključujući imunotestove, kao što je test sa imunosorbentom vezanim za enzim (ELISA), imunotaloženje ili vestern blot. U struci su poznate pogodne oznake za test antitela, koje uključuju enzimske oznake, kao što je glukoza oksidaza, radioizotope, kao što je jod (<125>I,<121>I), ugljenik (<14>C), sumpor (<35>S), tricijum (<3>H), indijum (<121>In), i tehnecijum (<99>Tc); luminescentne oznake, kao što je luminol, i fluorescentne oznake, kao što je fluorescein i rodamin, i biotin. Takve oznake se mogu koristiti za označavanje ovde opisanog antitela ili njegovog antigen vezujućeg fragmenta. Alternativno, drugo antitelo koje prepoznaje ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen vezujući fragment može biti označeno i korišćeno u kombinaciji sa anti-CTLA-4 antitelom ili njegovim antigen vezujućim fragmentom za detekciju nivoa CTLA-4 proteina. U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak se odnosi na primenu anti-CTLA-4 antitela iz pronalaska, za testiranje i/ili detektovanja nivoa CTLA-4 proteina u biološkom uzorku in vitro.
[0180] Testiranje ekspresionog nivoa CTLA-4 proteina treba da obuhvati kvalitativno ili kvantitativno određivanje ili procenjivanje nivoa CTLA-4 proteina u prvom biološkom uzorku bilo direktno (npr. putem određivanja ili procenjivanja apsolutnog nivoa proteina) ili relativno (npr. poređenjem nivoa proteina vezanog za bolest u drugom biološkom uzorku). Ekspresioni nivo CTLA-4 polipeptida u prvom biološkom uzorku može biti određen ili procenjen i upoređen sa nivoom standarda CTLA-4 proteina, gde je standard uzet iz drugog biološkog uzorka dobijenog od pojedinca koji nema poremećaj, ili je određen uprosečavanjem nivoa iz populacije pojedinaca koji nemaju poremećaj. Kao što je poznato u struci, kada je poznat nivo „standarda“ CTLA-4 polipeptida, on se može ponovljeno koristiti kao poredbeni standard.
[0181] Kao što se ovde koristi, termin „biološki uzorak“ odnosi se na svaki biološki uzorak dobijen od ispitanika, ćelijske linije, tkiva, ili drugog izvora ćelija koje potencijalno eksprimiraju CTLA-4. Postupci za dobijanje biopsija tkiva i telesnih tečnosti od životinja (npr. ljudi) dobro su poznati u struci. Biološki uzorci uključuju mononuklearne ćelije periferne krvi.
[0182] Ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen vezujući fragment može da se koristi za prognostičku, dijagnostičku primenu, za praćenje i skrining, uključujući in vitro i in vivo primenu dobro poznatu standardno obučenom stručnjaku, na osnovu predmetnog opisa. Prognostički, dijagnostički, testovi za praćenje i skrining i kompleti za in vitro procenu i ocenjivanje statusa imunskog sistema i/ili imunskog odgovora mogu se koristiti za predviđanje, dijagnostikovanje i praćenje da se proceni pacijentov uzorak, uključujući one za koje se zna da imaju, ili se sumnja da imaju disfunkciju imunskog sistema, ili u pogledu očekivanog ii željenog odgovora imunskog sistema, antigenskog odgovora ili odgovora na vakcinu. Procena i ocenjivanje statusa imunskog sistema i/ili imunskog odgovora je takođe korisna kod određivanja podobnosti pacijenta za kliničko ispitivanje leka ili za primenu konkretnog hemioterapeutika ili antitela ili njegovog antigen vezujućeg fragmenta, uključujući njihove kombinacije, u odnosu na različiti agens ili antitelo ili njegov antigen vezujući fragment. Ova vrsta prognostičkog i dijagnostičkog praćenja i procene se već primenjuje koristeći antitela na HER2 protein kod karcinoma dojke (HercepTest™, Dako), gde se test takođe koristi za procenjivanje pacijenata za terapiju koristeći Herceptin®. In vivo primena uključuje usmerenu ćelijsku terapiju i modulaciju imunskog sistema i radiološko snimanje imunskog odgovora.
[0183] U jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za primenu kao dijagnostičko sredstvo.
[0184] U jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na anti-CTLA-4 antitelo i/ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska za primenu u postupku predviđanja, dijagnoze i/ili praćenja disfunkcije imunskog sistema i/ili raka.
[0185] U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak se odnosi na primenu anti-CTLA-4 antitela iz pronalaska, za predviđanje, dijagnostikovanje i/ili praćenje disfunkcije imunskog sistema i/ili raka kod ispitanika testiranjem i/ili detektovanjem nivoa CTLA-4 proteina u biološkom uzorku ispitanika in vitro.
[0186] U jednom otelotvorenju, anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen vezujući fragment može da se koristi za imunohistohemiju bioloških uzoraka. U drugom otelotvorenju, anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen vezujući fragment može da se koristi za detektovanje nivoa CTLA-4, ili nivoa ćelija koje sadrže CTLA-4 na površini membrane, i ti nivoi kasnije mogu da se povežu sa simptomima određene bolesti. Ovde opisana anti-CTLA-4 antitela ili njihovi antigen vezujući fragmenti mogu da nose oznaku koja može da se detektuje ili funkcionalnu oznaku. Kada se koriste fluorescentne oznake, trenutno dostupna mikroskopija i analiza za sortiranje ćelija aktiviranih fluorescencijom (FACS), ili kombinacija oba postupka poznata u struci, može da se koristi za identifikaciju i kvantifikaciju specifičnog vezivanja članova. Ovde opisana anti-CTLA-4 antitela ili njihovi antigen vezujući fragmenti mogu da nose fluorescentnu oznaku. Primeri za fluorescentnu oznaku uključuju, na primer, reaktivne i konjugovane probe, npr., aminokumarin, fluorescein i Teksas crveno, boje Alexa Fluor, boje Cy i DyLight. Anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen vezujući fragment može da nosi radioaktivnu oznaku, kao što su izotopi<3>H,<14>C,<32>P,<35>S,<36>Cl,<51>Cr,<57>Co,<58>Co,<59>Fe,<67>Cu,<90>Y,<99>Tc,<111>In,<117>Lu,<121>I,<124>I,<125>I,<131>I,<198>Au,<211>At,<213>Bi,<225>Ac i<186>Re. Kada se koriste radioaktivne oznake, trenutno dostupne procedure brojanja poznate u struci mogu da se koriste za identifikovanje i kvantifikaciju specifičnog vezivanja anti-CTLA-4 antitela ili njegovog antigen vezujućeg fragmenta za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4). U slučaju da je oznaka enzim, detekcija se može postići bilo kojom trenutno primenjivanom kolormetrijskom, spektrofotometrijskom, fluorospektrofotometrijskom, amperometrijskom ili gasometrijskom tehnikom poznatom u struci. To se može postići dovođenjem u kontakt uzorka ili kontrolnog uzorka sa anti-CTLA-4 antitelom ili njegovim antigen vezujućim fragmentom pod uslovima koji omogućavaju nastajanje kompleksa između antitela ili njegovog antigen vezujućeg fragmenta i CTLA-4. Svaki kompleks nastao između antitela ili njegovog antigen vezujućeg fragmenta i CTLA-4 se detektuje i poredi u uzorku i kontroli. S obzirom na specifično vezivanje ovde opisanih antitela za CTLA-4, antitela ili njihovi antigen vezujući fragmenti se mogu koristiti za specifičnu detekciju ekspresije CTLA-4 na površini ćelija. Ovde opisana antitela ili njihovi antigen vezujući fragmenti takođe mogu da se koriste za prečišćavanje CTLA-4 putem imunoafinitetnog prečišćavanja. Ovde je takođe uključen test koji se može pripremiti u obliku test kompleta za kvantitativnu analizu obima prisustva, na primer, CTLA-4 ili kompleksa CTLA-4/CTLA-4 ligand. Sistem ili test komplet može da sadrži označenu komponentu, npr. označeno antitelo, i jedan ili više dodatnih imunohemijskih reagenasa.
[0187] U jednom otelotvorenju, predmetni pronalazak se odnosi na in vitro postupak za ispitivanje i/ili detektovanje nivoa CTLA-4 proteina u biološkom uzorku koji obuhvata (1) dovođenje u kontakt uzorka i opciono kontrolnog uzorka sa anti-CTLA-4 antitelom ili njegovim antigen vezujućim fragmentom iz pronalaska pod uslovima koji omogućavaju nastajanje kompleksa između antitela ili njegovog antigen vezujućeg fragmenta i CTLA-4, i (2) detektovanje i poređenje kompleksa nastalih u uzorku i opciono kontrolnom uzorku.
5.5 Polinukleotidi, vektori i postupci proizvodnje anti-CTLA-4 antitela
[0188] U drugom aspektu, ovde su obezbeđeni polinukleotidi koji sadrže nukleotidnu sekvencu koja kodira ovde opisano antitelo ili njegov fragment (npr. varijabilni region lakog lanca i/ili varijabilni region teškog lanca) koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) antigen, i vektori, npr. vektori koji sadrže takve polinukleotide za rekombinantnu ekspresiju u ćelijama domaćinima (npr. E. coli i ćelije sisara). Ovde su obezbeđene sekvence polinukleotida koje sadrže nukleotidne sekvence koje kodiraju bilo koje ovde obezbeđeno antitelo, kao i vektori koji sadrže takve sekvence polinukleotida, npr. ekspresioni vektori za njihovu efikasnu ekspresiju u ćelijama domaćinima, npr. ćelijama sisara.
[0189] Kako se ovde koristi, „izolovani“ molekul polinukleotida ili nukleinske kiseline je onaj koji je razdvojen od drugih molekula nukleinske kiseline koji su prisutni u prirodnim izvorima (npr. u mišu ili čoveku) molekula nukleinske kiseline. Pored toga,
„izolovani“ molekul nukleinske kiseline, kao što je molekul cDNK, može biti suštinski bez drugog ćelijskog materijala, ili medijuma za uzgajanje kada se proizvodi rekombinantnim tehnikama, ili suštinski bez hemijskih prekursora ili drugih hemikalija kada se sintetiše hemijskim putem. Na primer, izraz „suštinski bez“ uključuje preparate molekula polinukleotida ili nukleinske kiseline koji imaju manje od oko 15%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0,5% ili 0,1% (konkretno, manje od oko 10%) drugog materijala, npr. ćelijskog materijala, medijuma za uzgajanje, drugih molekula nukleinskih kiselina, hemijskih prekursora i/ili drugih hemikalija. U specifičnom otelotvorenju, ovde opisan molekul (ili molekuli) nukleinskih kiselina koji kodira antitelo je izolovan ili prečišćen.
[0190] U posebnom aspektu, ovde su obezbeđeni polinukleotidi koji sadrže nukleotidne sekvence koje kodiraju antitela ili njihove antigen vezujuće fragmente, koji se specifično vezuju za CTLA-4 polipeptid (npr. humani CTLA-4) i sadrže aminokiselinsku sekvencu kako je ovde opisano, kao i antitela koja se takmiče sa takvim antitelima u vezivanju za CTLA-4 polipeptid (npr. na dozno zavisan način), ili koja se vezuju za isti epitop kao onaj takvih antitela.
[0191] U nekim aspektima, ovde su obezbeđeni polinukleotidi koji sadrže nukleotidnu sekvencu koja kodira laki lanac ili teški lanac ovde opisanog antitela. Polinukleotidi mogu da sadrže nukleotidne sekvence koje kodiraju laki lanac koji sadrži FR i CDR VL ovde opisanih antitela (vidite npr. tabelu 1). Predmetni pronalazak se odnosi na izolovani polinukleotid koji kodira varijabilni region teškog lanca antitela iz pronalaska i varijabilni region lakog lanca iz pronalaska; ili teški lanac antitela iz pronalaska i laki lanac antitela iz pronalaska.
[0192] Takođe su obezbeđeni polinukleotidi koji kodiraju anti-CTLA-4 antitelo koji su optimizovani npr. optimizacijom kodona/RNK sa heterologim signalnim sekvencama, i eliminacijom elemenata nestabilnosti iRNK. Postupci za stvaranje optimizovanih nukleinskih kiselina koje kodiraju anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment (npr. laki lanac, teški lanac, VH domen ili VL domen) za rekombinantnu ekspresiju uvođenjem izmena kodona i/ili eliminacijom inhibitornih regiona u iRNK mogu se izvesti odgovarajućim prilagođavanjem postupaka optimizacije opisanih, npr., u američkim patentima U.S. Patent br.5,965,726; 6,174,666; 6,291,664; 6,414,132; i 6,794,498. Na primer, potencijalna mesta splajsovanja i elementi nestabilnosti (npr. elementi bogati sadržajem A/T ili A/U) u RNK mogu da se mutiraju bez izmene aminokiselina kodiranih sekvencama nukleinskih kiselina da bi se povećala stabilnost RNK za rekombinantnu ekspresiju. U izmenama se koristi degeneracija genetskog koda, npr. koristeći alternativni kodon za identičnu aminokiselinu. U nekim aspektima, može biti poželjno da se izmeni jedan ili više kodona za kodiranje konzervativne mutacije, npr. slična aminokiselina sa sličnom hemijskom strukturom i svojstvima i/ili funkcijom kao originalna aminokiselina. Takvi postupci mogu da povećaju ekspresiju anti-CTLA-4 antitela ili njegovog fragmenta najmanje 1 put, 2 puta, 3 puta, 4 puta, 5 puta, 10 puta, 20 puta, 30 puta, 40 puta, 50 puta, 60 puta, 70 puta, 80 puta, 90 puta, ili 100 puta, ili više, u odnosu na ekspresiju anti-CTLA-4 antitela kodiranog polinukleotidima koji nisu optimizovani.
[0193] U nekim aspektima, optimizovana polinukleotidna sekvenca koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment (npr. VL domen i/ili VH domen) može da se hibridizuje do antisens (npr. komplementarnog) polinukleotida neoptimizovane polinukleotidne sekvence koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment (npr. VL domen i/ili VH domen). U specifičnim aspektima, optimizovana nukleotidna sekvenca koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment hibridizuje se pod vrlo striktnim uslovima u antisens polinukleotid neoptimizovane polinukleotidne sekvence koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment. U specifičnom aspektu, optimizovana nukleotidna sekvenca koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment hibridizuje se pod vrlo striktnim uslovima, srednje ili malo striktnim uslovima hibridizacije u antisens polinukleotid neoptimizovane nukleotidne sekvence koja kodira ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov fragment. Informacije vezane za uslove hibridizacije su opisane, vidite npr. američku publikaciju patentnih prijava U.S. Patent Application Publication br. US 2005/0048549 (npr. paragrafi 72–73).
[0194] Polinukleotidi se mogu dobiti, i nukleotidna sekvenca polinukleotida se može odrediti bilo kojim postupkom poznatim u struci. Nukleotidne sekvence koja kodiraju ovde opisana antitela, npr. antitela opisana u tabeli 1, i modifikovane verzije tih antitela, mogu se odrediti pomoću postupaka dobro poznatih u struci, tj. kodoni nukleotida za koje se zna da kodiraju konkretne aminokiseline sakupljeni su na takav način da daju nukleinsku kiselinu koja kodira antitelo. Takav polinukleotid koji kodira antitelo može se sakupiti iz hemijski sintetisanih oligonukleotida (npr. kao što opisuju Kutmeier G i sar., (1994), BioTechniques 17: 242-6), što, ukratko, uključuje sintezu preklapajućih oligonukleotida koji sadrže delove sekvence koja kodira antitelo, stapanje i ligiranje tih oligonukleotida, i zatim amplifikaciju ligiranih oligonukleotida putem PCR.
[0195] Alternativno, polinukleotid koji kodira ovde opisano antitelo se može generisati iz nukleinske kiseline iz pogodnog izvora (npr. hibridoma) koristeći postupke dobro poznate u struci (npr. PCR i druge postupke molekulskog kloniranja). Na primer, PCR amplifikacija koristeći sintetičke prajmere koji mogu da se hibridizuju na 3' i 5' kraju poznate sekvence može se izvesti korišćenjem genomske DNK dobijene iz ćelija hibridoma koje proizvode željeno antitelo. Takvi postupci PCR amplifikacije se mogu koristiti da se dobiju nukleinske kiseline koje sadrže sekvencu koja kodira laki lanac i/ili teški lanac antitela. Takvi postupci PCR amplifikacije se mogu koristiti da se dobiju nukleinske kiseline koje sadrže sekvencu koja kodira varijabilni region lakog lanca i/ili varijabilni region teškog lanca antitela.
Amplifikovane nukleinske kiseline se mogu klonirati u vektore za ekspresiju u ćeliji domaćinu i za dalje kloniranje, na primer, da se dobiju himerna i humanizovana antitela.
[0196] Ako klon koji sadrži nukleinsku kiselinu koja kodira konkretno antitelo nije dostupan, ali je poznata sekvenca molekula antitela, nukleinska kiselina koja kodira imunoglobulin može biti hemijski sintetisana ili dobijena iz pogodnog izvora (npr. biblioteke cDNK antitela ili biblioteke cDNK generisane od, ili nukleinske kiseline, poželjno poli A RNK, izolovane iz, svakog tkiva ili ćelije koji eksprimiraju antitelo, kao što su ćelije hibridoma izabrane da eksprimiraju ovde opisano antitelo) putem PCR amplifikacije koristeći sintetičke prajmere koji mogu da se hibridizuju na 3' i 5' kraju sekvence ili kloniranjem koristeći oligonukleotidnu sondu specifičnu za konkretnu gensku sekvencu da se identifikuje, npr. klon cDNK iz biblioteke cDNK koji kodira antitelo. Amplifikovane nukleinske kiseline generisane putem PCR onda mogu da se kloniraju u vektore za kloniranje koji mogu da se umnože, koristeći svaki postupak dobro poznat u struci.
1
[0197] Ovde opisana DNK koja kodira anti-CTLA-4 antitela može se lako izolovati i sekvencirati koristeći klasične postupke (npr. koristeći oligonukleotidne sonde koje mogu specifično da se vežu za gene koji kodiraju teške i lake lance anti-CTLA-4 antitela). Ćelije hibridoma mogu da budu izvor takve DNK. Kada se izoluje, DNK može da se ubaci u ekspresione vektore, koji se zatim transficiraju u ćelije domaćina kao što su, npr. ćelije E. coli, majmunske COS ćelije, ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO) (npr. CHO ćelije CHO GS System™ (Lonza)), ili ćelije mijeloma koje inače ne proizvode imunoglobulinski protein, kako bi se postigla sinteza anti-CTLA-4 antitela u rekombinantnim ćelijama domaćinima.
[0198] Da bi se dobila cela antitela, PCR prajmeri uključujući VH i VL nukleotidne sekvence, restrikciono mesto, i susednu sekvencu da se zaštiti restrikciono mesto, mogu se koristiti za amplifikaciju VH ili VL sekvenci u scFv klonovima. Korišćenjem tehnika kloniranja poznatih stručnjacima, VH domeni amplifikovani putem PCR se mogu klonirati u vektore koji eksprimiraju konstantni region teškog lanca, npr. humani gama 4 konstantni region, i VL domeni amplifikovani putem PCR se mogu klonirati u vektore koji eksprimiraju konstantni region lakog lanca, npr. humani kapa ili lambda konstantni regioni. U nekim otelotvorenjima, vektori za ekspresiju VH ili VL domena uključuju EF-1α promoter, sekrecioni signal, mesto kloniranja za varijabilni region, konstantne domene, i selekcioni marker, kao što je neomicin. VH i VL domeni takođe mogu da se kloniraju u jedan vektor koji eksprimira potrebne konstantne regione. Vektori za konverziju teškog lanca i vektori za konverziju lakog lanca su zatim kotransficirani u ćelijske linije kako bi se dobile stabilne ili tranzijentne ćelijske linije koje eksprimiraju antitela kompletne dužine, npr. IgG, koristeći tehnike poznate stručnjacima.
[0199] DNK takođe može biti modifikovana, na primer, supstitucijom kodirajuće sekvence za konstantne domene humanog teškog i lakog lanca umesto mišjih sekvenci, ili kovalentnim vezivanjem za kodirajuću sekvencu imunoglobulina celih, ili delova kodirajućih sekvenci za polipeptid koji nije imunoglobulin.
[0200] Takođe su obezbeđeni polinukleotidi koji se hibridizuju pod vrlo striktnim uslovima, srednje ili malo striktnim uslovima hibridizacije, u polinukleotide koji kodiraju ovde opisano antitelo. U specifičnim aspektima, ovde opisani polinukleotidi se hibridizuju pod vrlo
2
striktnim uslovima, srednje ili malo striktnim uslovima hibridizacije, u polinukleotide koji kodiraju ovde obezbeđen VH i/ili VL domen.
[0201] Uslovi hibridizacije su opisani u struci i poznati su stručnjacima. Na primer, hibridizacija pod striktnim uslovima može da uključi hibridizaciju za DNK vezanu za filter u 6x natrijum hloridu/natrijum citratu (SSC) na oko 45 °C, zatim jedno ili više ispiranja u 0,2xSSC/0,1% SDS na oko 50–65 °C; hibridizacija pod vrlo striktnim uslovima može da uključi hibridizaciju za nukleinsku kiselinu vezanu za filter u 6xSSC na oko 45 °C, zatim jedno ili više ispiranja u 0,1xSSC/0,2% SDS na oko 68 °C. Hibridizacija pod drugim striktnim uslovima hibridizacije poznata je stručnjacima, i opisana je, vidite, na primer, Ausubel FM i sar., urednici, (1989) Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, Green Publishing Associates, Inc. i John Wiley & Sons, Inc., New York na stranama 6.3.1–6.3.6 i 2.10.3.
[0202] U nekim aspektima, ovde su obezbeđene ćelije (npr. ćelije domaćini) koje eksprimiraju (npr. rekombinantno) ovde opisana antitela (ili njihov antigen-vezujući fragment) koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) i povezane polinukleotide i ekspresione vektore. Ovde su obezbeđeni vektori (npr. ekspresioni vektori) koji sadrže polinukleotide koji sadrže nukleotidne sekvence koje kodiraju anti-CTLA-4 antitela ili fragment za rekombinantnu ekspresiju u ćelijama domaćinima, poželjno u ćelijama sisara. Ovde su takođe obezbeđene ćelije domaćini koje sadrže takve vektore za rekombinantnu ekspresiju ovde opisanih anti-CTLA-4 antitela (npr. humana ili humanizovana antitela). U konkretnom aspektu, ovde su obezbeđeni postupci za proizvodnju ovde opisanog antitela, koji uključuju ekspresiju takvog antitela iz ćelije domaćina.
Predmetni pronalazak se odnosi na vektor koji sadrži polinukleotid iz pronalaska. Predmetni pronalazak se odnosi na rekombinantnu ćeliju domaćina koja sadrži polinukleotid iz pronalaska.
[0203] Rekombinantna ekspresija ovde opisanog antitela (npr. ovde opisanog antitela pune dužine, teškog i/ili lakog lanca antitela, ili jednolančanog antitela) koje se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) uključuje konstruisanje ekspresionog vektora koji sadrži polinukleotid koji kodira antitelo. Kada se dobije ovde opisani polinukleotid koji kodira molekul antitela, teški i/ili laki lanac antitela, ili njegov fragment (npr. varijabilni region teškog i/ili lakog lanca), vektor za proizvodnju molekula antitela se može proizvesti tehnologijom rekombinacije DNK koristeći tehnike dobro poznate u struci. Tako, ovde su opisani postupci za pripremu proteina ekspresijom polinukleotida koji sadrži antitelo ili fragment antitela (npr. laki lanac ili teški lanac) koji kodira nukleotidnu sekvencu. Postupci dobro poznati stručnjacima se mogu koristiti za konstruisanje ekspresionih vektora koji sadrže antitelo ili fragment antitela (npr. laki lanac ili teški lanac) koji kodira sekvence i odgovarajuće transkripcione i translacione kontrolne signale. Ti postupci uključuju, na primer, in vitro tehnike rekombinacije DNK, sintetičke tehnike i in vivo genetsku rekombinaciju. Takođe su obezbeđeni vektori koji mogu da se umnožavaju, koji sadrže nukleotidnu sekvencu koja kodira ovde opisani molekul antitela, teški ili laki lanac antitela, varijabilni region teškog ili lakog lanca antitela ili njegov fragment, ili CDR teškog ili lakog lanca, operabilno vezan za promoter. Takvi vektori mogu, na primer, da uključe nukleotidnu sekvencu koja kodira konstantni region molekula antitela (vidite npr. međunarodnu publikaciju International Publication br. WO 86/05807 i WO 89/01036; i američki patent U.S. Patent br.5,122,464) i varijabilni regioni antitela mogu biti klonirani u takav vektor za ekspresiju celog teškog, celog lakog lanca, ili celog teškog i celog lakog lanca.
[0204] Ekspresioni vektor može da se prenese u ćeliju (npr. ćeliju domaćina) klasičnim tehnikama, i dobijene ćelije mogu onda da se uzgajaju klasičnim tehnikama da bi se proizvelo ovde opisano antitelo ili njegov fragment. Tako, ovde su obezbeđene ćelije domaćini koje sadrže polinukleotid koji kodira ovde opisano antitelo ili njegove fragmente, ili njegov teški ili laki lanac ili njegove fragmente, ili ovde opisano jednolančano antitelo, operabilno vezano za promoter za ekspresiju takvih sekvenci u ćeliji domaćinu. U nekim otelotvorenjima, za ekspresiju dvolančanih antitela, vektori koji kodiraju i teški i laki lanac, pojedinačno, mogu biti koeksprimirani u ćeliji domaćinu za ekspresiju celog molekula imunoglobulina, kao što je detaljno opisano ispod. U nekim otelotvorenjima, ćelija domaćin sadrži vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira i teški lanac i laki lanac ovde opisanog antitela, ili njegov fragment. U posebnim otelotvorenjima, ćelija domaćin sadrži dva različita vektora, prvi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira teški lanac ili varijabilni region teškog lanca ovde opisanog antitela, ili njegov fragment, i drugi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira laki lanac ili varijabilni region lakog lanca ovde opisanog antitela, ili njegov fragment. U drugim otelotvorenjima, prva ćelija domaćin sadrži prvi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira teški lanac ili varijabilni region teškog lanca ovde opisanog antitela, ili njegov fragment, i druga ćelija domaćin sadrži drugi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira laki lanac ili varijabilni region lakog lanca ovde opisanog antitela, ili njegov fragment. U posebnim
4
otelotvorenjima, teški lanac/varijabilni region teškog lanca koji eksprimira prva ćelija povezuje se sa lakim lancem/varijabilnim regionom lakog lanca druge ćelije formirajući ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen vezujući fragment. U nekim otelotvorenjima, ovde je obezbeđena populacija ćelija domaćina koja sadrži takvu prvu ćeliju domaćina i takvu drugu ćeliju domaćina.
[0205] U konkretnom otelotvorenju, ovde je obezbeđena populacija vektora koja sadrži prvi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira laki lanac/varijabilni region lakog lanca ovde opisanog anti-CTLA-4 antitela, i drugi vektor koji sadrži polinukleotid koji kodira teški lanac/varijabilni region teškog lanca ovde opisanog anti-CTLA-4 antitela.
[0206] Mogu se koristiti raznovrsni sistemi ćelija-ekspresioni vektor da bi se eksprimirali ovde opisani molekuli antitela (vidite npr. U.S. Patent br.5,807,715). Takvi sistemi domaćinekspresioni vektor predstavljaju sredstva putem kojih se kodirajuće sekvence od interesa mogu proizvesti i nakon toga prečistiti, ali takođe predstavljaju ćelije koje mogu, kada se transformišu ili transficiraju odgovarajućim sekvencama za kodiranje nukleotida, da eksprimiraju ovde dato antitelo in situ. To uključuje mikroorganizme kao što su bakterije (npr. E. coli i B. subtilis) transformisane rekombinantnom DNK bakteriofaga, ekspresionim vektorima plazmidne DNK ili kozmidne DNK koji sadrže sekvence za kodiranje antitela; kvasac (npr. Saccharomyces Pichia) transformisan rekombinantnim ekspresionim vektorima kvasca koji sadrže sekvence za kodiranje antitela; ćelijske sisteme insekata inficirane rekombinantnim virusnim ekspresionim vektorima (npr. bakulovirus) koji sadrže sekvence za kodiranje antitela; ćelijske sisteme biljaka (npr. zelene alge kao što je Chlamydomonas reinhardtii) inficirane rekombinantnim virusnim ekspresionim vektorima (npr. virus mozaika karfiola, CaMV; virus mozaika duvana, TMV) ili transformisane rekombinantnim plazmidnim ekspresionim vektorima (npr. Ti plazmid) koji sadrže sekvence za kodiranje antitela; ili ćelijske sisteme sisara (npr. COS, (npr. COS1 ili COS), CHO, BHK, MDCK, HEK 293, NS0, PER.C6, VERO, CRL7O3O, HsS78Bst, HeLa, i NIH 3T3, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20 i BMT10 ćelije) koji nose rekombinantne ekspresione konstrukte koji sadrže promotere dobijene iz genoma ćelija sisara (npr. metalotioneinski promoter) ili iz virusa sisara (npr. kasni promoter adenovirusa, promoter vakcinija virusa 7,5K). U posebnom otelotvorenju, ćelije za ekspresiju ovde opisanih antitela ili njihovih antigen vezujućih fragmenata su CHO ćelije, na primer, CHO ćelije CHO GS System™ (Lonza). U konkretnom otelotvorenju, ćelije za ekspresiju ovde opisanih antitela su humane ćelije, npr. humane ćelijske linije. U posebnom otelotvorenju, ekspresioni vektor sisara je pOptiVEC™ ili pcDNA3.3. U konkretnom otelotvorenju, bakterijske ćelije, kao što je Escherichia coli, ili eukariotske ćelije (npr. ćelije sisara), posebno za ekspresiju celog molekula rekombinantnog antitela, koriste se za ekspresiju molekula rekombinantnog antitela. Na primer, ćelije sisara, kao što su ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO) u konjunkciji sa vektorom kao što je glavni intermedijerni element ranog promotera gena iz humanog citomegalovirusa mogu da budu efektivni ekspresioni sistem za antitela (Foecking MK i Hofstetter H (1986) Gene 45: 101-5; i Cockett MI i sar., (1990) Biotechnology 8(7): 662-7). U nekim otelotvorenjima, ovde opisana antitela su proizvedena od strane CHO ćelija ili NS0 ćelija. U posebnom otelotvorenju, ekspresija nukleotidnih sekvenci koje kodiraju ovde opisana antitela koja specifično vezuju CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) reguliše se konstitutivnim promoterom, inducibilnim promoterom ili promoterom specifičnim za tkivo.
[0207] U bakterijskim sistemima, više ekspresionih vektora može biti povoljno odabrano, u zavisnosti od nameravane primene molekula antitela koji se eksprimira. Na primer, kada treba da se proizvede velika količina takvog antitela, za generisanje farmaceutskih kompozicija molekula antitela mogu biti poželjni vektori koji usmeravaju ekspresiju velikih nivoa proizvoda fuzionih proteina koji se lako prečišćavaju. Takvi vektori uključuju ekspresioni vektor E. coli pUR278 (Ruether U i Mueller-Hill B (1983) EMBO J 2: 1791-1794), u kome sekvenca koja kodira antitelo može biti pojedinačno ligirana u vektor u okviru sa lac Z kodirajućim regionom tako da se proizvodi fuzioni protein, pIN vektori (Inouye S & Inouye M (1985) Nuc Acids Res 13: 3101-3109; Van Heeke G i Schuster SM (1989) J Biol Chem 24: 5503-5509); i slično. Na primer, PGEX vektori takođe mogu da se koriste za ekspresiju stranih polipeptida kao fuzionih proteina sa glutation 5-transferazom (GST). Uopšteno, takvi fuzioni proteini su rastvorljivi i mogu lako da se prečiste iz liziranih ćelija putem adsorpcije i vezivanja za matricu glutation-agaroznih perlica, a zatim eluiranja u prisustvu slobodnog glutationa. pGEX vektori su dizajnirani da uključuju trombin ili mesta cepanja faktora Xa proteaze tako da proizvod kloniranog ciljnog gena može da se otpusti iz ostatka GST.
[0208] U sistemu insekta, virus nuklearne poliedroze Autographa californica (AcNPV) koristi se, na primer, kao vektor za ekspresiju stranih gena. Virus raste u ćelijama Spodoptera frugiperda. Sekvenca za kodiranje antitela može da se klonira pojedinačno u neesencijalne regione virusa (na primer, polihedrinske gene) i stavlja se pod kontrolu promotera AcNPV (na primer, polihedrinskog promotera).
[0209] U ćelijama domaćinima sisara, mogu se koristiti brojni ekspresioni sistemi zasnovani na virusima. U slučajevima kada se adenovirus koristi kao ekspresioni vektor, sekvenca za kodiranje željenog antitela može da se ligira sa kontrolnim kompleksom adenovirusa za transkripciju/translaciju, npr. kasni promoter i trodelna vodeća sekvenca. Taj himerni gen zatim može da se ubaci u genom adenovirusa in vitro ili in vivo rekombinacijom. Ubacivanje neesencijalnog regiona virusnog genoma (npr. region E1 ili E3) može dati rekombinantni virus koji je vijabilan i sposoban za ekspresiju molekula antitela u inficiranim domaćinima (npr. vidite Logan J i Shenk T (1984) PNAS 81(12): 3655-9). Specifični signali za inicijaciju takođe mogu biti potrebni za efikasnu translaciju kodirajuće sekvence za ubačeno antitelo. Ti signali uključuju kodon za inicijaciju ATG i susedne sekvence. Nadalje, kodon za inicijaciju mora biti u fazi sa okvirom za čitanje željene kodirajuće sekvence kako bi se osigurala translacija celog inserta. Ti egzogeni translacioni kontrolni signali i kodoni za inicijaciju mogu imati različito poreklo, prirodno i sintetičko. Efikasnost ekspresije može da se poboljša uvođenjem odgovarajućih elemenata za pojačavanje transkripcije, terminatora transkripcije, itd. (vidite npr. Bitter G i sar., (1987) Methods Enzymol.153: 516-544).
[0210] Pored toga, može se odabrati soj ćelije domaćina koji moduliše ekspresiju umetnutih sekvenci, ili modifikuje i obrađuje genske proizvode na željeni specifičan način. Takve modifikacije (npr. glikozilacija) i obrađivanje (npr. cepanje) proteinskih proizvoda mogu biti važne za funkciju proteina. Različite ćelije domaćini imaju karakteristične i specifične mehanizme za posttranslacionu obradu i modifikaciju proteina i genskih proizvoda. Mogu se izabrati odgovarajuće ćelijske linije ili sistemi domaćina kako bi se osigurala ispravna modifikacija i obrada stranih proteina koji se eksprimiraju. U tu svrhu mogu da se koriste eukariotske ćelije domaćini koje imaju ćelijski mehanizam za odgovarajuću obradu primarnog transkripta, glikozilaciju i fosforilaciju genskog proizvoda. Takve ćelije domaćini sisara uključuju CHO, VERO, BHK, Hela, MDCK, HEK 293, NIH 3T3, W138, BT483, Hs578T, HTB2, BT2O i T47D, NS0 (ćelijska linija mišjeg mijeloma koja endogeno ne proizvodi nijedan lanac imunoglobulina), CRL7O3O, COS (npr. COS1 ili COS), PER.C6, VERO, HsS78Bst, HEK-293T, HepG2, SP210, R1.1, B-W, L-M, BSC1, BSC40, YB/20, BMT10 i HsS78Bst ćelije. U nekim otelotvorenjima, ovde opisana anti-CTLA-4 antitela se proizvode u ćelijama sisara, kao što su CHO ćelije.
[0211] U specifičnom otelotvorenju, ovde opisana antitela ili njihovi antigen vezujući fragmenti imaju smanjen sadržaj fukoze ili ne sadrže fukozu. Takva antitela se mogu proizvesti tehnikama poznatim stručnjaku. Na primer, antitela se mogu eksprimirati u ćelijama sa manjkom ili nedostatkom sposobnosti fukozilacije. U specifičnom primeru, ćelijske linije sa izbačena oba alela α1,6-fukoziltransferaze se mogu koristiti za proizvodnju antitela ili njihovih antigen vezujućih fragmenata sa smanjenim sadržajem fukoze. Sistem Potelligent® (Lonza) predstavlja primer takvog sistema koji se može koristiti za proizvodnju antitela ili njihovih antigen vezujućih fragmenata sa smanjenim sadržajem fukoze.
[0212] Kod dugoročne proizvodnje sa velikim prinosom rekombinantnih proteina, mogu se generisati ćelije sa stabilnom ekspresijom. Na primer, mogu se konstruisati ćelijske linije koje stabilno eksprimiraju ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen vezujući fragment. U posebnim otelotvorenjima, ovde obezbeđena ćelija stabilno eksprimira laki lanac/varijabilni region lakog lanca i teški lanac/varijabilni region teškog lanca koji se povezuju formirajući ovde opisano antitelo ili njegov antigen vezujući fragment.
[0213] U nekim aspektima, umesto da se koriste ekspresioni vektori koji sadrže virusno poreklo replikacije, ćelije domaćini mogu da se transformišu sa DNK koja je pod kontrolom odgovarajućih ekspresionih kontrolnih elemenata (npr. promoter, pojačivač, sekvence, terminatori transkripcije, mesta poliadenilacije, itd.) i selektabilnog markera. Nakon uvođenja strane DNK/polinukleotida, konstruisane ćelije mogu da se ostave da rastu tokom 1–2 dana u obogaćenom medijumu, a zatim se prebacuju u selektivni medijum. Selektabilni marker u rekombinantnom plazmidu daje otpornost na selekciju i omogućava ćelijama da stabilno integrišu plazmid u svoje hromozome i rastu, kako bi formirale fokuse koji se zauzvrat mogu klonirati i ekspandovati u ćelijske linije. Ovaj postupak može da se koristi za konstruisanje ćelijskih linija koje eksprimiraju ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo ili njegov antigen vezujući fragment. Tako konstruisane ćelijske linije mogu biti korisne za skrining i procenu kompozicija koje interaguju neposredno ili posredno sa molekulom antitela.
[0214] Može se koristiti više sistema selekcije, uključujući gen timidin kinaze virusa herpes simpleks (Wigler M i sar., (1977) Cell 11(1): 223-32), hipoksantin guanin fosforiboziltransferaze (Szybalska EH i Szybalski W (1962) PNAS 48(12): 2026-2034) i adenin fosforiboziltransferaze (Lowy I i sar., (1980) Cell 22(3): 817-23) u tk-, hgprt-, odnosno aprt-ćelijama. Takođe, otpornost na antimetabolite može da se koristi kao osnov za odabir za sledeće gene: dhfr, koji daje otpornost na metotreksat (Wigler M i sar., (1980) PNAS 77(6): 3567-70; O'Hare K i sar., (1981) PNAS 78: 1527-31); gpt,, koji daje otpornost na mikofenolnu kiselinu (Mulligan RC i Berg P (1981) PNAS 78(4): 2072-6); neo, koji daje otpornost na aminoglikozid G-418 (Wu GY i Wu CH (1991) Biotherapy 3: 87-95; Tolstoshev P (1993) Ann Rev Pharmacol Toxicol 32: 573-596; Mulligan RC (1993) Science 260: 926-932; i Morgan RA i Anderson WF (1993) Ann Rev Biochem 62: 191-217; Nabel GJ i Felgner PL (1993) Trends Biotechnol 11(5): 211-5); i hygro, koji daje otpornost na higromicin (Santerre RF i sar., (1984) Gene 30(1-3): 147-56). Opštepoznati postupci u oblasti tehnologije rekombinacije DNK mogu rutinski da se primene da bi se odabrao željeni rekombinantni klon, i takvi postupci su, na primer, opisani u Ausubel FM i sar., (urednici), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (1993); Kriegler M, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY (1990); i u poglavljima 12 i 13, Dracopoli NC i sar., (urednici), Current Protocols in Human Genetics, John Wiley & Sons, NY (1994); Colbère-Garapin F i sar., (1981) J Mol Biol 150: 1-14.
[0215] Ekspresioni nivoi proteina antitela mogu se povećati amplifikacijom vektora (pregled vidite u Bebbington CR i Hentschel CCG, The use of vectors based on gene amplification for the expression of cloned genes in mammalian cells in DNA cloning, Vol.3 (Academic Press, New York, 1987)). Kada marker u sistemu vektora koji eksprimira antitelo može da se amplifikuje, porast nivoa inhibitora prisutnog u kulturi ćelije domaćina može povećati broj kopija marker gena. Pošto je amplifikovani region povezan sa genom antitela, proizvodnja proteina antitela će takođe da se poveća (Crouse GF i sar., (1983) Mol Cell Biol 3: 257-66).
[0216] Ćelija domaćin takođe može biti kotransficirana sa dva ili više ovde opisanih ekspresionih vektora, pri čemu, prvi vektor kodira polipeptid izveden iz teškog lanca i drugi vektor kodira polipeptid izveden iz lakog lanca. Dva vektora mogu da sadrže identične selektabilne markere koji omogućavaju jednaku ekspresiju polipeptida teškog i lakog lanca. Ćelija domaćin može biti kotransficirana različitim količinama dva ili više ekspresionih vektora. Na primer, ćelija domaćin može biti kotransficirana sa bilo kojim odnosom prvog ekspresionog vektora i drugog ekspresionog vektora: 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6, 1:7, 1:8, 1:9, 1:10, 1:12, 1:15, 1:20, 1:25, 1:30, 1:35, 1:40, 1:45 ili 1:50.
[0217] Alternativno, može se koristiti jedan vektor koji kodira, i može da eksprimira, polipeptide i teškog i lakog lanca. U takvim situacijama, laki lanac treba da bude postavljen pre teškog lanca da bi se izbegao višak teškog lanca bez toksičnosti (Proudfoot NJ (1986) Nature 322: 562-565; i Köhler G (1980) PNAS 77: 2197-2199). Kodirajuće sekvence za teški i laki lanac mogu da sadrže cDNK ili genomsku DNK. Ekspresioni vektor može biti monocistronski ili multicistronski. Multicistronski konstrukt nukleinske kiseline može da kodira 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ili više, ili u opsegu od 2–5, 5–10 ili 10–20 gena/sekvencama nukleotida. Na primer, bicistronski konstrukt nukleinske kiseline može da sadrži po ovom redosledu promoter, prvi gen (npr. teški lanac ovde opisanog antitela), i drugi gen i (npr. laki lanac ovde opisanog antitela). U takvom ekspresionom vektoru, transkripcija oba gena može biti podstaknuta promoterom, dok translacija iRNK iz prvog gena može biti putem mehanizma skeniranja zavisnog od završetka, i translacija iRNK sa drugog gena može biti putem mehanizma nezavisnog od završetka, npr., putem IRES.
[0218] Kada je ovde opisani molekul antitela proizveden putem rekombinantne ekspresije, može biti prečišćen bilo kojim postupkom koji je poznat u struci za prečišćavanje molekula imunoglobulina, na primer, putem hromatografije (npr. jonoizmenjivačka, afinitetna, naročito po afinitetu prema specifičnom antigenu nakon proteina A, i gel hromatografija), centrifugiranja, diferencijalne rastvorljivosti, ili putem bilo koje druge standardne tehnike prečišćavanja proteina. Nadalje, ovde opisana antitela se mogu fuzionisati sa sekvencama heterologog polipeptida koje su ovde opisane ili su inače poznate u struci, kako bi se olakšalo prečišćavanje.
[0219] U specifičnom otelotvorenju, ovde opisano antitelo ili njegov antigen vezujući fragment su izolovani ili prečišćeni. Generalno, izolovano antitelo je ono koje je suštinski bez drugih antitela koja imaju antigenske specifičnosti različite od izolovanog antitela. Na primer, u konkretnom otelotvorenju, ovde opisani preparat antitela je suštinski bez ćelijskog materijala i/ili hemijskih prekursora. Izraz „suštinski bez ćelijskog materijala“ uključuje preparate antitela u kojima je antitelo razdvojeno od ćelijskih komponenti ćelija iz kojih je izolovano ili rekombinantno proizvedeno. Tako, antitelo koje je suštinski bez ćelijskog materijala uključuje preparate antitela koji imaju manje od oko 30%, 20%, 10%, 5%, 2%, 1%, 0,5% ili 0,1% (prema suvoj masi) heterologog proteina (koji se ovde zove i „kontaminirajući protein“) i/ili varijanti antitela, na primer, različitih modifikovanih posttranslacionih oblika antitela ili drugih različitih verzija antitela (npr. fragmenata antitela).
1
Kada je antitelo rekombinantno proizvedeno, ono je takođe generalno suštinski bez medijuma za uzgajanje, tj., medijum za uzgajanje predstavlja manje od oko 20%, 10%, 2%, 1%, 0,5% ili 0,1% zapremine proteinskog preparata. Kada je antitelo proizvedeno hemijskom sintezom, ono je generalno suštinski bez hemijskih prekursora ili drugih hemikalija, tj. ono je odvojeno od hemijskih prekursora ili drugih hemikalija koje su uključene u sintezu proteina. Prema tome, takvi preparati antitela imaju manje od oko 30%, 20%, 10% ili 5% (prema suvoj masi) hemijskog prekursora ili jedinjenja koja nisu željeno antitelo. U specifičnom otelotvorenju, ovde opisana antitela su izolovana ili prečišćena.
[0220] Antitela ili njihovi fragmenti koji se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) mogu se proizvesti bilo kojim postupkom poznatim u struci za sintezu antitela, na primer, tehnikama hemijske sinteze ili rekombinantne ekspresije. Ovde opisani postupci koriste, ako nije drugačije naznačeno, klasične tehnike u molekulskoj biologiji, mikrobiologiji, genetskoj analizi, rekombinaciji DNK, organskoj hemiji, biohemiji, PCR, sintezi i modifikaciji oligonukleotida, hibridizaciji nukleinskih kiselina, i povezanim oblastima u struci. Ove tehnike su, na primer, opisane u ovde navedenim referencama, i potpuno su objašnjene u literaturi. Vidite, npr., Maniatis T i sar., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J i sar., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, drugo izdanje, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J i sar., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM i sar., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987. i godišnja ažuriranja); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987. i godišnja ažuriranja) Gait (urednik) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (urednik) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B i sar., (urednici) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press.
[0221] U specifičnom otelotvorenju, ovde opisano antitelo je antitelo (npr. rekombinantno antitelo) pripremljeno, eksprimirano, stvoreno ili izolovano bilo kojim načinom koji uključuje stvaranje, npr. putem sinteze, genetskog inženjerstva sekvenci DNK. U nekim otelotvorenjima, takvo antitelo sadrži sekvence (npr. sekvence DNK ili sekvence aminokiselina) koje u prirodi ne postoje u repertoaru germinativne linije antitela životinje ili sisara (npr. čoveka) in vivo.
1 1
[0222] U jednom aspektu, ovde je obezbeđen postupak za pravljenje antitela ili njegovog antigen vezujućeg fragmenta koji se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) koji obuhvata uzgajanje ovde opisane ćelije ili ćelije domaćina. U nekim aspektima, ovde je obezbeđen postupak za pravljenje antitela ili njegovog antigen vezujućeg fragmenta koji se specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) koji obuhvata ekspresiju (npr. rekombinantnu ekspresiju) antitela ili njegovog antigen vezujućeg fragmenta koristeći ćeliju ili ovde opisanu ćeliju domaćina (npr. ćeliju ili ćeliju domaćina koja sadrži polinukleotide koji kodiraju ovde opisano antitelo). U konkretnom otelotvorenju, ćelija je izolovana ćelija. U konkretnom otelotvorenju, egzogeni polinukleotidi su uvedeni u ćeliju. U konkretnom otelotvorenju, postupak dalje uključuje korak prečišćavanja antitela ili njegovog antigen vezujućeg fragmenta dobijenog od ćelije ili ćelije domaćina. Poželjno, postupak se vrši in vitro.
[0223] Postupci za proizvodnju poliklonskih antitela su poznati u struci (vidite, na primer, poglavlje 11 u: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5. izd., Ausubel FM i sar., urednici, John Wiley and Sons, New York).
[0224] Monoklonska antitela mogu da se pripreme koristeći raznovrsne tehnike koje su poznate u struci, uključujući korišćenje tehnologije hibridoma, rekombinantne tehnologije i tehnologije displeja faga, ili njihovu kombinaciju. Na primer, monoklonska antitela mogu da se proizvedu koristeći tehnike hibridoma, uključujući one koje su poznate u struci i o kojima se govori, na primer, u Harlow E i Lane D, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2. izd. 1988); Hammerling GJ i sar., u: Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas 563681 (Elsevier, N.Y., 1981). Termin „monoklonsko antitelo“, kako se ovde koristi, nije ograničen na antitela proizvedena pomoću tehnologije hibridoma. Na primer, monoklonsko antitelo može biti proizvedeno rekombinacijom iz ćelija domaćina koje egzogeno eksprimiraju ovde opisano antitelo ili njegov fragment, na primer, laki lanac i/ili teški lanac takvog antitela.
[0225] U specifičnim otelotvorenjima, „monoklonsko antitelo“, kako se ovde koristi, je antitelo proizvedeno od strane jedne ćelije (npr. hibridoma ili ćelije domaćina koja proizvodi rekombinantno antitelo), naznačeno time što se antitelo specifično vezuje za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), kao što je određeno, npr. putem ELISA ili drugog testa vezivanja antigena ili kompetitivnog vezivanja poznatog u struci, ili u ovde datim primerima. U konkretnim
1 2
otelotvorenjima, monoklonsko antitelo može biti himerno antitelo ili humanizovano antitelo. U nekim otelotvorenjima, monoklonsko antitelo je jednovalentno antitelo ili viševalentno (npr. dvovalentno) antitelo. U konkretnim otelotvorenjima, monoklonsko antitelo je monospecifično ili multispecifično antitelo (npr. bispecifično antitelo). Ovde opisana monoklonska antitela mogu, na primer, biti napravljena postupkom hibridoma, kao što opisuju Kohler G & Milstein C (1975) Nature 256: 495, ili mogu, npr., biti izolovana iz biblioteka faga koristeći, na primer, ovde opisane tehnike. Drugi postupci za pripremu klonskih ćelijskih linija i pri tome eksprimiranih monoklonskih antitela dobro su poznati u struci (vidite, na primer, poglavlje 11 u: Short Protocols in Molecular Biology, (2002) 5. izd., Ausubel FM i sar., supra).
[0226] Postupci za proizvodnju i skrining specifičnih antitela koristeći tehnologiju hibridoma su rutinski, i dobro poznati u struci. Na primer, u postupku hibridoma, miš ili druga odgovarajuća životinja domaćin, kao što je ovca, koza, zec, pacov, hrčak ili makaki majmun, imunizovana je da se izazovu limfociti koji proizvode, ili su sposobni da proizvode, antitela koja će se specifično vezati za protein (npr. CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)) korišćen za imunizaciju. Alternativno, limfociti mogu biti imunizovani in vitro. Limfociti se onda spajaju sa ćelijama mijeloma koristeći odgovarajući agens za spajanje, kao što je polietilen glikol, formirajući ćelije hibridoma (Goding JW (urednik), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, str.59–103 (Academic Press, 1986)). Pored toga, tehnika RIMMS (ponovljena imunizacija više mesta) može da se koristi za imunizaciju životinje (Kilpatrick KE i sar., (1997) Hybridoma 16:381-9).
[0227] U nekim aspektima, miševi (ili druge životinje, kao što su pacovi, majmuni, magarci, prasići, ovce, hrčak ili psi) mogu biti imunizovani antigenom (npr. CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)), i kada se detektuje imunski odgovor, npr., antitela specifična za antigen se detektuju u mišjem serumu, mišja slezina se sakupi, i izoluju se splenociti. Splenociti se zatim spajaju pomoću poznatih tehnika sa bilo kojim odgovarajućim ćelijama mijeloma, na primer, iz ćelijske linije SP20 koja je dostupna kod organizacije American Type Culture Collection (ATCC®) (Manassas, VA), dajući mijelome. Hibridomi su izabrani i klonirani pomoću ograničenog razblaživanja. U nekim otelotvorenjima, limfni čvorovi imunizovanih miševa su sakupljeni i spojeni sa ćelijama mijeloma NS0.
1
[0228] Tako pripremljene ćelije hibridoma su zasejane i uzgajane u pogodnom medijumu za uzgajanje koji poželjno sadrži jednu ili više supstanci koje inhibiraju rast ili preživljavanje nespojenih, matičnih ćelija mijeloma. Na primer, ako matičnim ćelijama mijeloma nedostaje enzim hipoksantin guanin fosforibozil transferaza (HGPRT ili HPRT), medijum za uzgajanje hibridoma obično sadrži hipoksantin, aminopteri i timidin (HAT medijum), a te supstance sprečavaju rast HGPRT-deficijentnih ćelija.
[0229] U specifičnim aspektima se koriste ćelije mijeloma koje se efikasno spajaju, podržavaju stabilnu proizvodnju antitela u visokoj koncentraciji od strane odabranih ćelija koje proizvode antitelo, i osetljive su na medijum kao što je HAT medijum. Među tim ćelijskim linijama mijeloma su mišje linije mijeloma, kao što je ćelijska linija NS0 ili one dobijene od mišjih tumora MOPC-21 i MPC-11 dostupne kod Centra za distribuciju ćelija Salkovog instituta, San Dijego, CA, SAD, i ćelije SP-2 ili X63-Ag8.653 dostupne kod organizacije American Type Culture Collection, Rockville, MD, SAD. Ćelijske linije humanog mijeloma i mišje-humanog heteromijeloma su takođe opisane za proizvodnju humanih monoklonskih antitela (Kozbor D (1984) J Immunol 133: 3001-5; Brodeur i sar., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, str.51–63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
[0230] Medijum za uzgajanje u kome rastu ćelije hibridoma ispitan je na proizvodnju monoklonskih antitela usmerenih na CTLA-4 (npr. humani CTLA-4). Specifičnost vezivanja monoklonskih antitela proizvedenih ćelijama hibridoma određena je postupcima poznatim u struci, na primer, imunotaloženjem, ili in vitro testom vezivanja, kao što je radioimunotest (RIA) test i test sa enzimskim imunosorbentom (ELISA).
[0231] Pošto su identifikovane ćelije hibridoma koje proizvode antitela željene specifičnosti, afiniteta, klonovi mogu biti potklonirani postupcima ograničenog razblaženja i uzgajani standardnim postupcima (Goding JW (urednik), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, supra). Pogodni medijumi za uzgajanje za ovu namenu uključuju, na primer, D-MEM ili RPMI 1640 medijum. Pored toga, ćelije hibridoma mogu da se uzgajaju in vivo kao ascitni tumori u životinji.
[0232] Monoklonska antitela koja izlučuju potklonovi su na odgovarajući način odvojena iz medijuma za uzgajanje, ascitne tečnosti ili seruma pomoću klasičnih postupaka prečišćavanja
1 4
imunoglobulina, kao što je, na primer, protein A sefaroza, hidroksilapatitna hromatografija, gel elektroforeza, dijaliza, ili afinitetna hromatografija.
[0233] Ovde opisana antitela uključuju fragmente antitela koji prepoznaju specifični CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), i mogu se generisati bilo kojom tehnikom poznatom stručnjacima. Na primer, ovde opisani Fab i F(ab')2fragmenti se mogu proizvesti proteolitičkim cepanjem molekula imunoglobulina, koristeći enzime kao što je papain (da se proizvedu Fab fragmenti) ili pepsin (da se proizvedu F(ab')2fragmenti). Fab fragment odgovara jednom od dva identična kraka molekula antitela i sadrži kompletni laki lanac sparen sa VH i CH1 domenom teškog lanca. F(ab')2fragment sadrži dva antigen vezujuća kraka na molekulu antitela povezanom disulfidnim vezama u regionu šarke.
[0234] Nadalje, ovde opisana antitela ili njihovi antigen vezujući fragmenti takođe mogu da se generišu koristeći različite postupke displeja faga poznate u struci. Kod postupka displeja faga, funkcionalni domeni antitela se izlažu na površini čestica faga koje nose sekvence polinukleotida koje ih kodiraju. Konkretno, DNK sekvence koje kodiraju VH i VL domene su amplifikovane iz životinjskih biblioteka cDNK (npr. biblioteke humane ili mišje cDNK zahvaćenih tkiva). DNK koje kodiraju VH i VL domene su rekombinovane zajedno sa scFv linkerom putem PCR, i klonirane u fagemidni vektor. Vektor je elektroporisan u E. coli i E. coli je inficirana pomoćnim fagom. Fag koji je korišćen u ovim postupcima je obično filamentozni fag, uključujući fd i M13, i VH i VL domeni su obično rekombinantno spojeni sa genom faga III ili genom VIII. Fag koji eksprimira antigen vezujući domen koji se vezuje za željeni antigen može se odabrati ili identifikovati antigenom, npr. koristeći označeni antigen ili antigen vezan ili uhvaćen na čvrstoj površini ili perlici. Primeri postupaka displeja faga koji se mogu koristiti za pravljenje ovde opisanih antitela uključuju one koje su objavili Brinkman U i sar., (1995) J Immunol Methods 182: 41-50; Ames RS i sar., (1995) J Immunol Methods 184: 177-186; Kettleborough CA i sar., (1994) Eur J Immunol 24: 952-958; Persic L i sar., (1997) Gene 187: 9-18; Burton DR & Barbas CF (1994) Advan Immunol 57: 191-280; prijava PCT Application br. PCT/GB91/001134; međunarodna publikacija International Publication br. WO 90/02809, WO 91/10737, WO 92/01047, WO 92/18619, WO 93/11236, WO 95/15982, WO 95/20401, i WO 97/13844; i američki patent U.S. Patent br.5,698,426, 5,223,409, 5,403,484, 5,580,717, 5,427,908, 5,750,753, 5,821,047, 5,571,698, 5,427,908, 5,516,637, 5,780,225, 5,658,727, 5,733,743 i 5,969,108.
1
[0235] Kao što je opisano u gornjim referencama, nakon selekcije faga, regioni koji kodiraju antitelo iz faga se mogu izolovati i koristiti za generisanje celih antitela, uključujući humana antitela, ili bilo kog drugog antigen vezujućeg fragmenta, i eksprimirati u bilo kom željenom domaćinu, uključujući ćelije sisara, ćelije insekata, ćelije biljaka, kvasac i bakterije, npr., kao što je dole opisano. Tehnike za rekombinantnu proizvodnju fragmenata antitela, kao što su Fab, Fab' i F(ab')2fragmenti takođe mogu da se primene koristeći postupke poznate u struci, kao što su oni objavljeni u PCT publikaciji br. WO 92/22324; Mullinax RL i sar., (1992) BioTechniques 12(6): 864-9; Sawai H i sar., (1995) Am J Reprod Immunol 34: 26-34; i Better M i sar., (1988) Science 240: 1041-1043.
[0236] U nekim otelotvorenjima, da bi se dobila cela antitela, PCR prajmeri koji uključujući VH ili VL nukleotidne sekvence, mesto restrikcije i bočnu sekvencu za zaštitu mesta restrikcije mogu da se koriste za amplifikovanje sekvenci VH ili VL iz šablona, npr., scFv klona. Koristeći tehnike kloniranja koje su poznate u struci, PCR amplifikovani VH domeni mogu da se kloniraju u vektore koji eksprimiraju konstantni region VH, i PCR amplifikovani VL domeni mogu da se kloniraju u vektore koji eksprimiraju konstantni region VL, npr. humane kapa ili lambda konstantne regione. VH i VL domeni takođe mogu da se kloniraju u jedan vektor koji eksprimira potrebne konstantne regione. Vektori za konverziju teškog lanca i vektori za konverziju lakog lanca su zatim kotransficirani u ćelijske linije kako bi se dobile stabilne ili tranzijentne ćelijske linije koje eksprimiraju antitela kompletne dužine, npr. IgG, koristeći tehnike poznate stručnjacima.
[0237] Himerno antitelo je molekul u kome su različiti delovi antitela izvedeni iz različitih molekula imunoglobulina. Na primer, himerno antitelo može da sadrži varijabilni region mišjeg ili pacovskog antitela spojenog sa konstantnim regionom humanog antitela. Postupci za proizvodnju himernih antitela su poznati u struci. Vidite, npr., Morrison SL (1985) Science 229: 1202-7; Oi VT i Morrison SL (1986) BioTechniques 4: 214-221; Gillies SD i sar., (1989) J Immunol Methods 125: 191-202; i američki patent U.S. Patent br.5,807,715, 4,816,567, 4,816,397 i 6,331,415.
[0238] Humanizovano antitelo je u stanju da se veže za prethodno određeni antigen i koji sadrži region okvira koji suštinski ima aminokiselinsku sekvencu humanog imunoglobulina i CDR-e koji imaju suštinski aminokiselinsku sekvencu nehumanog imunoglobulina (npr. mišjeg imunoglobulina). U posebnim otelotvorenjima, humanizovano antitelo takođe sadrži
1
najmanje deo konstantnog regiona imunoglobulina (Fc), tipično humanog imunoglobulina. Antitelo takođe može da obuhvata CH1, region šarke, CH2, CH3 i CH4 region teškog lanca. Humanizovano antitelo može biti izabrano iz bilo koje klase imunoglobulina, uključujući IgM, IgG, IgD, IgA i IgE, i bilo kog izotipa, uključujući IgG1, IgG2, IgG3i IgG4.
Humanizovano antitelo može da se proizvede koristeći razne tehnike poznate u struci za CDR graftovanje (evropski patent European Patent br. EP 239400; međunarodna publikacija International Publication br. WO 91/09967; i američki patent U.S. Patent br.5,225,539, 5,530,101, i 5,585,089), glaziranje ili ponovno oblaganje (evropski patent European Patent br. EP 592106 i EP 519596; Padlan EA (1991) Mol Immunol 28(4/5): 489-498; Studnicka GM i sar., (1994) Prot Engineering 7(6): 805-814; i Roguska MA i sar., (1994) PNAS 91: 969-973), mešanje lanaca (američki patent U.S. Patent br.5,565,332), i tehnike objavljene, npr., u američkom patentu U.S. Pat. br.6,407,213, američkom patentu U.S. Pat. br.
5,766,886, međunarodnoj publikaciji International Publication br. WO 93/17105; Tan P i sar., (2002) J Immunol 169: 1119-25; Caldas C i sar., (2000) Protein Eng.13(5): 353-60; Morea V i sar., (2000) Methods 20(3): 267-79; Baca M i sar., (1997) J Biol Chem 272(16): 10678-84; Roguska MA i sar., (1996) Protein Eng 9(10): 895904; Couto JR i sar., (1995) Cancer Res.
55 (23 Supp): 5973s-5977s; Couto JR i sar., (1995) Cancer Res 55(8): 1717-22; Sandhu JS (1994) Gene 150(2): 409-10 i Pedersen JT i sar., (1994) J Mol Biol 235(3): 959-73. Vidite takođe američku publikaciju prijava U.S. Application Publication br. US 2005/0042664 A1 (24. feb.2005).
[0239] Postupci za pravljenje multispecifičnih (npr., bispecifičnih antitela) su opisani, vidite, na primer, američki patent U.S. Patent br.7,951,917; 7,183,076; 8,227,577; 5,837,242;
5,989,830; 5,869,620; 6,132,992 i 8,586,713.
[0240] Antitela sa jednim domenom, na primer, antitela sa nedostatkom lakog lanca, mogu se proizvesti postupcima dobro poznatim u struci. Vidite Riechmann L i Muyldermans S (1999) J Immunol 231: 25-38; Nuttall SD i sar., (2000) Curr Pharm Biotechnol 1(3): 253-263;
Muyldermans S, (2001) J Biotechnol 74(4): 277-302; američki patent U.S. Patent br.
6,005,079; i međunarodnu publikaciju International Publication br. WO 94/04678, WO 94/25591 i WO 01/44301.
[0241] Nadalje, antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 antigen mogu da se koriste za dobijanje anti-idiotipnih antitela koja „imitiraju“ antigen korišćenjem tehnika dobro poznatih
1
u struci. (Vidite, npr., Greenspan NS i Bona CA (1989) FASEB J 7(5): 437-444; i Nissinoff A (1991) J Immunol 147(8): 2429-2438).
[0242] U konkretnim aspektima, ovde opisano antitelo, koje se vezuje za isti epitop CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) kao ovde opisano anti-CTLA-4 antitelo, jeste humano antitelo ili njegov antigen vezujući fragment. U konkretnim aspektima, ovde opisano antitelo, koje kompetitivno blokira (npr. na dozno zavisan način) bilo koje od ovde opisanih antitela u vezivanju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4), jeste humano antitelo ili njegov antigen vezujući fragment. Takva antitela se mogu proizvesti bilo kojim postupkom poznatim stručnjaku. Na primer, mogu da se koriste transgeni miševi koji ne mogu da eksprimiraju funkcionalne endogene imunoglobuline, ali koji mogu da eksprimiraju gene humanog imunoglobulina. Konkretno, kompleksi gena teškog i lakog lanca humanog imunoglobulina se mogu uvesti nasumično, ili homologom rekombinacijom, u mišje embrionske matične ćelije. Alternativno, humani varijabilni region, konstantni region i region raznovrsnosti se mogu uvesti u mišje embrionske matične ćelije pored humanih gena teškog i lakog lanca. Geni teškog i lakog lanca mišjeg imunoglobulina se mogu načiniti nefunkcionalnim, posebno ili istovremeno sa uvođenjem lokusa humanog imunoglobulina putem homologe rekombinacije. Naročito, homozigotna delecija JHregiona sprečava endogenu proizvodnju antitela. Modifikovane embrionske matične ćelije su ekspandovane i mikroinjektovane u blastociste radi dobijanja himernih miševa. Himerni miševi su zatim uzgajani radi proizvodnje homozigotnog potomstva koje eksprimira humana antitela. Transgeni miševi su imunizovani na uobičajeni način odabranim antigenom, npr. celim antigenom ili delom antigena (npr. CTLA-4). Monoklonska antitela usmerena protiv antigena se mogu dobiti od imunizovanih, transgenih miševa koristeći klasičnu tehnologiju hibridoma. Transgeni humanog imunoglobulina koje nose transgeni miševi preuređeni su tokom diferencijacije B ćelija, a zatim podvrgnuti promeni klase i somatskoj mutaciji. Tako, koristeći takvu tehniku, moguće je da se proizvedu terapeutski korisna antitela IgG, IgA, IgM i IgE. Pregled ove tehnologije za proizvodnju humanih antitela vidite u Lonberg N i Huszar D (1995) Int Rev Immunol 13:65-93. Detaljnu diskusiju o ovoj tehnologiji za proizvodnju humanih antitela i humanih monoklonskih antitela i protokole za proizvodnju takvih antitela vidite, npr., u međunarodnoj publikaciji International Publication br. WO 98/24893, WO 96/34096 i WO 96/33735; i američkom patentu U.S. Patent br.5,413,923, 5,625,126, 5,633,425, 5,569,825, 5,661,016, 5,545,806, 5,814,318 i 5,939,598. Primeri za miševe koji mogu da proizvode humana antitela uključuju Xenomouse™ (Abgenix, Inc.; američki patent U.S. Patent br.
1
6,075,181 i 6,150,184), HuAb-Mouse™ (Mederex, Inc./Gen Pharm; američki patent U.S. Patent br.5,545,806 i 5,569, 825), Trans Chromo Mouse™ (Kirin) i KM Mouse™ (Medarex/Kirin).
[0243] Humana antitela koja se specifično vezuju za CTLA-4 (npr. humani CTLA-4) mogu se napraviti različitim postupcima poznatim u struci, uključujući goreopisane postupke displeja faga koristeći biblioteke antitela dobijene od sekvenci humanog imunoglobulina. Vidite takođe američki patent U.S. Patent br.4,444,887, 4,716,111, i 5,885,793; i međunarodnu publikaciju International Publication br. WO 98/46645, WO 98/50433, WO 98/24893, WO 98/16654, WO 96/34096, WO 96/33735 i WO 91/10741.
[0244] U nekim otelotvorenjima, humana antitela se mogu proizvesti koristeći mišje-humane hibridome. Na primer, limfociti ljudske periferne krvi transformisani Epštajn-Barovim virusom (EBV) mogu da se spoje sa ćelijama mišjeg mijeloma dajući mišje-humane hibridome koji luče humana monoklonska antitela, i mišje-humani hibridomi mogu biti pretraženi da se odrede oni koji luče humana monoklonska antitela koja se specifično vezuju za ciljni antigen (npr. CTLA-4 (npr. humani CTLA-4)). Takvi postupci su poznati i opisani u struci, vidite, npr., Shinmoto H i sar., (2004) Cytotechnology 46: 19-23; Naganawa Y i sar., (2005) Human Antibodies 14: 27-31.
5.6 Kompleti
[0245] Takođe su obezbeđeni kompleti koji sadrže jedno ili više ovde opisanih antitela, ili njihovu farmaceutsku kompoziciju ili konjugate. U specifičnom otelotvorenju, ovde je obezbeđeno farmaceutsko pakovanje ili komplet koji sadrži jednu ili više ambalaža napunjenih jednim ili sa više sastojaka ovde opisane farmaceutske kompozicije, kao što je jedno ili više ovde obezbeđenih antitela ili njihov antigen vezujući fragment. U nekim otelotvorenjima, kompleti sadrže ovde opisanu farmaceutsku kompoziciju i bilo koji profilaktički ili terapeutski agens, kao što su oni koji su ovde opisani. U nekim otelotvorenjima, kompleti mogu da sadrže mitogen T ćelija, kao što je, npr., fitohemaglutinin (PHA) i/ili forbol miristat acetat (PMA), ili TCR kompleks stimulišuće antitelo, kao anti-CD3 antitelo i anti-CD28 antitelo. Opciono povezano sa takvom ambalažom može biti obaveštenje u obliku koji propisuje vladina agencija koja reguliše proizvodnju, upotrebu ili prodaju farmaceutskih ili bioloških proizvoda, i to obaveštenje izražava odobrenje agencije koja reguliše proizvodnju, upotrebu ili prodaju za primenu na ljudima.
1
[0246] Takođe su obezbeđeni kompleti koji se mogu koristiti u gornjim postupcima. U jednom otelotvorenju, komplet sadrži ovde opisano antitelo, poželjno prečišćeno antitelo, u jednoj ili više ambalaža. U specifičnom otelotvorenju, ovde opisani kompleti sadrže suštinski izolovan CTLA-4 antigen (npr. humani CTLA-4) kao kontrolu. U drugom specifičnom otelotvorenju, ovde opisani kompleti dalje sadrže kontrolno antitelo koje ne reaguje sa CTLA-4 antigenom. U drugom specifičnom otelotvorenju, ovde opisani kompleti sadrže jedan ili više elemenata za detekciju vezivanja antitela za CTLA-4 antigen (npr. antitelo može biti konjugovano sa supstratom koji može da se detektuje, kao što je fluorescentno jedinjenje, enzimski supstrat, radioaktivno jedinjenje ili luminescentno jedinjenje, ili drugo antitelo koje prepoznaje prvo antitelo može biti konjugovano sa supstratom koji može da se detektuje). U specifičnim otelotvorenjima, ovde opisani komplet može da uključuje rekombinantno proizveden ili hemijski sintetisan CTLA-4 antigen. CTLA-4 antigen obezbeđen u kompletu takođe može biti vezan za čvrstu podlogu. U specifičnijem otelotvorenju, sredstvo za detekciju iz goreopisanog kompleta uključuje čvrstu podlogu za koju je vezan CTLA-4 antigen. Takav komplet takođe može da uključuje nepovezano antihumano antitelo ili antimišje/pacovsko antitelo označeno reporterom. U ovom otelotvorenju, vezivanje antitela za CTLA-4 antigen može da se detektuje vezivanjem pomenutog antitela označenog reporterom.
[0247] Obezbeđena je upotreba kompleta za in vitro testiranje i/ili detekciju humanog CTLA-4 u biološkom uzorku.
6. PRIMERI
[0248] Primeri u ovom odeljku (tj. odeljku 6) su ponuđeni kao ilustracija, a ne kao ograničenje.
6.1 Primer 1: Karakterizacija anti-CTLA-4 antitela
[0249] Ovaj primer opisuje karakterizaciju antitela koja se vezuju za humani CTLA-4.
Konkretno, antitelo označeno kao AGEN1884 okarakterisano je pomoću više testova koji su dole opisani. Anti-CTLA-4 antitelo AGEN1884 sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 93 i laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 15.
11
Antitelo AGEN1884 je humano IgG1antitelo koje sadrži supstituciju T109S (tj. supstituciju treonina serinom na poziciji 109 u odnosu na Fc sekvencu divljeg tipa), numerisano prema Kabatu, u konstantnom domenu lakog lanca, što olakšava kloniranje varijabilnog regiona okvira u konstantni region. Ta mutacija je konzervativna modifikacija koja ne utiče na vezivanje ili funkciju antitela. Parnjak divljeg tipa, nazvan AGEN1884w, koji sadrži treonin na poziciji 109, numerisan prema Kabatu, takođe je napravljen. Antitelo AGEN1884 je humano IgG1antitelo koje sadrži teški lanac SEQ ID NO: 93 i laki lanac SEQ ID NO: 13.
6.1.1 Kinetička analiza površinskom plazmonskom rezonancom
[0250] Površinska plazmonska rezonanca je korišćena da se odredi afinitet anti-CTLA-4 antitela AGEN1884 i referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela (BIAcore® sistem T100/T200 sa povećanom osetljivošću (GE Healthcare) i test hvatanja Fab). Sve interakcije su analizirane na 25 °C koristeći 1xDPBS (PAA, H15-002) plus P20 (0,05%, Pierce, 28320) kao radni pufer. Anti-CTLA-4 antitela (8 µg/ml u radnom puferu) hvatana su na površini CM5 senzorskog čipa (GE Healthcare, serija S CM5, BR-1005-30) putem imobilisanog antihumanog Fab antitela (GE Healthcare, komplet za hvatanje Fab, 28958325). Da bi se detektovale nespecifične interakcije CTLA-4 antigena, hvatanje antitela je vršeno samo u protočnoj ćeliji 2, dok je u protočnoj ćeliji 1 imobilisano samo antitelo za hvatanje. Nakon hvatanja anti-CTLA-4 antitela, CTLA-4 antigeni su propušteni kroz obe protočne ćelije u različitim količinama. Konkretno, rekombinantni humani CTLA-4-Fc (R&D Systems, br. 7268-CT), rekombinantni humani CTLA-4 (Sino Biological, br.11159-H08H), rekombinantni cinomolgusov CTLA-4-Fc (Sino Biological, br.90213-C02H), i rekombinantni cinomolgusov CTLA-4 (Sino Biological, br.90213-C08H) propušteni su pri 100 nM, 25 nM i 6,25 nM; a rekombinantni mišji CTLA-4-Fc (R&D, br.434-CT), rekombinantni pacovski CTLA-4-Fc (Sino Biological, br.81069-R02H), i rekombinantni pacovski CTLA-4 (Sino Biological, br.81069-R08H) propušteni su pri 400 nM, 100 nM i 25 nM. Blanko kriva (samo radni pufer) takođe je uključena uz svaki ciklus. Asocijacija je puštana tokom 90 sekundi, a disocijacija tokom 600 sekundi sa protokom od 10 µl/min. Posle svakog ciklusa, obavljan je korak regeneracije 10 mM glicinom pH 2,0 (GE Healthcare, BR-1003-55) tokom 60 sekundi na 30 µl/min. Krive vezivanja su procenjivane pomoću softvera za procenu BIAcore® T200 verzija 2.0.1 primenom Lengmirovog modela 1:1 sa globalnim uklapanjem Rmax. Iz tih vrednosti su izračunati afiniteti (KD) AGEN1884 i referentnog anti-CTLA-4 antitela za različite antigene, i prikazani na slici 1A. Rekombinantni monomerni cinomolgusov CTLA-4, mišji CTLA-4-Fc, i monomerni pacovski CTLA-4 korišćeni u ovoj studiji nisu prošli kontrolu kvaliteta. Vezivanje anti-CTLA-4 antitela za rekombinantni mišji CTLA-4-Fc protein, koje je pokazalo 50% agregacije, verovatno je posledica nespecifičnih interakcija. Analiza površinskom plazmonskom rezonancom je kasnije dva puta ponovljena koristeći rekombinantni mišji CTLA-4-Fc (Sino Biological, br.81069-R02H) koji je prošao kontrolu kvaliteta pri 360 nM, 120 nM, 40 nM i 13,3 nM za AGEN1884w. AGEN1884w nije pokazao vezivanje za mišji CTLA-4 koje može da se detektuje.
6.1.2 Vezivanje antitela za ćelije koje prekomerno eksprimiraju CTLA-4
[0251] Jurkatove ćelije koje prekomerno eksprimiraju humani CTLA-4 (Promega) održavane su u RPMI1640 (Life Technologies) koji sadrži 10% FBS (Gemini Bio Products), 100 µg/ml higromicina B (Gibco) i 500 µg/ml G418 (Promega). Pre bojenja antitelima, ćelije su jednom isprane u FACS puferu (PBS sa 2% FBS). Serijska razblaženja AGEN1884w, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i kontrole izotipa IgG1počevši od 10 µg/ml dodata su u duple bunarčiće na pločama sa 96 bunarčića sa okruglim dnom u zapremini od 100 µl i inkubirana 30 minuta na 4 °C. Ćelije su tri puta isprane sa 150 µl FACS pufera i obojene sa 100 µl FACS pufera sa 0,25 µl PE konjugovanog mišjeg anti-humanog kapa antitela (Invitrogen) tokom 30 minuta na 4 °C. Ćelije su zatim dva puta isprane i ponovo suspendovane u 100 µl FACS pufera. Uzorci su pripremljeni na LSRFortessa (BD Biosciences). Srednji intenziteti fluorescencije (MFI) analizirani su pomoću softvera FlowJo (FlowJo, LLC) i prikazani pomoću Prism 6 (softver GraphPad). Kako je prikazano na slici 1B, antitelo AGEN1884w se vezalo za humani CTLA-4 eksprimiran na površini Jurkatovih ćelija.
6.1.3 Test selektivnosti CTLA-4 antitela
[0252] Selektivnost AGEN1884 za CTLA-4 procenjena je u odnosu na druge članove superfamilije imunoglobulina koristeći tehnologiju suspendovanih čipova kao višestruki test. Više članova superfamilije imunoglobulina je hemijski kuplovano sa Luminex® mikrosferama koristeći standardnu hemiju NHS estra. Prečišćeni materijal AGEN1884, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i kontrole izotipa IgG1razblažen je u test puferu (Roche 11112589001) na 10 ng/ml, 100 ng/ml i 1000 ng/ml. Ukratko, 25 µl svakog razblaženja je inkubirano u mraku (20 °C, 650 o/min) sa 1500 Luminex® mikrosfera u 5 µl test pufera tokom 1 sata na pločama sa 96 bunarčića upola manje površine (Millipore, MABVN1250). Luminex® mikrosfere su povezane sa rekombinantnim humanim CTLA-4-Fc (R&D Systems, br.7268-CT), rekombinantnim cinomolgusovim CTLA-4-Fc (Sino Biological, br.90213-C02H), rhCD28-Fc (R&D, br.342-CD-200), rhICOS-Fc (R&D, br. 169-CS-050), rhBTLA-Fc (Sino Biological, br.11896-H02H), rhPD-1-Fc (R&D Systems, br.
1086-PD), ili rekombinantnim cinomolgusovim PD-1-Fc (interna proizvodnja) putem kuplovanja amina sa COOH površine perlice. Standardne krive su napravljene koristeći duplikate od 25 µl standarda humanog IgG1(Sigma, 15154) sa serijama razblaženja 1:3 (0,08–540 ng/ml). Detekcija je izvršena koristeći 60 µl kozjeg anti-humanog IgG F(ab)2označenog pomoću R-PE (2,5 µg/ml; JIR 109-116-098, AbDSerotec Rapid RPE komplet za konjugaciju antitela, LNK022RPE) i još sat vremena inkubacije (20 °C, 650 o/min). Ploče su analizirane pomoću sistema Luminex® 200 (Millipore). Izbrojano je ukupno 100 perlica po bunarčiću u zapremini uzorka od 48 µl. Vrednosti MFI za PE su korišćene da se odredi specifično ili nespecifično vezivanje za gorepomenute rekombinantne proteine.
[0253] Kao što je prikazano na slikama 1C i 1D, antitelo AGEN1884 je pokazalo specifično vezivanje za humani i cinomolgusov CTLA-4. Pri testiranim koncentracijama nije primećeno značajno vezivanje drugih navedenih članova superfamilije imunoglobulina.
6.1.4 Vezivanje antitela za CTLA-4 eksprimiran aktiviranim T ćelijama
[0254] Zatim je ispitano vezivanje AGEN1884w za CTLA-4 eksprimiran na površini aktiviranih humanih T ćelija. Humane PBMC izolovane putem separacije po gustini sa gradijentom fikola iz sloja istaloženih leukocita i trombocita (Research Blood Components, LLC) obogaćene su netaknutim CD4+ T ćelijama koristeći magnetne perlice (Stemcell Technologies). Obogaćena populacija CD4+ T ćelija je zatim ponovo suspendovana u RPMI1640 medijumu obogaćenom sa 10% humanog AB seruma (Sigma) pri 1 x 10<6>/ml.1 x 10<5>ćelija u 100 µl zasejano je u svaki bunarčić ploča sa 96 bunarčića sa ravnim dnom prethodno obložen anti-CD3 antitelom (3 µg/ml, BD Biosciences) i anti-CD28 antitelom (10 µg/ml, BD Biosciences) i uzgajano na 37 °C i 5% CO2. Ćelije su 5. dana objedinjene i prebrojane koristeći ćelijski analizator Muse (EMD Millipore).50.000 ćelija je obojeno sa 100 µl AGEN1884w, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i kontrole izotipa IgG1serijski razblaženih počevši od 10 µg/ml na pločama sa 96 bunarčića sa okruglim dnom tokom 30 minuta na 4 °C. Ćelije su tri puta isprane sa 150 µl FACS pufera i obojene sa 100 µl FACS pufera sa 0,25 µl PE obeleženog mišjeg anti-humanog kapa antitela (Invitrogen) i 1 µl APC-
11
CD4 (BD Bioscience) tokom 30 minuta na 4 °C. Ćelije su zatim dva puta isprane i ponovo suspendovane u 100 µl FACS pufera. Uzorci su pripremljeni na sistemu FACSCanto II (BD Biosciences). Srednji intenzitet fluorescencije (MFI) PE na CD4+ T ćelijama analiziran je korišćenjem softvera FlowJo (FlowJo, LLC). Kao što je prikazano na slici 2A, AGEN1884w se vezivao za CTLA-4 eksprimiran na površini aktiviranih humanih CD4+ T ćelija.
[0255] Karakteristike vezivanja antitela AGEN1884 za CTLA-4 cinomolgusa (Macaca fascicularis) analizirane su protočnom citometrijom. PBMC cinomolgusa (Biomedical Primate Research Centre, Holandija) izolovane preko gradijenta fikola aktivirane su koristeći 8 µg/ml anti-CD3 (BD, 557052) i 0,1 µg/ml anti-CD28 antitela vezanog za ploču (eBioscience, kat.16-0289-85) u prisustvu 50 U/ml IL-2 (BioLegend, 589106) tokom 3 dana u RPMI-1640 medijumu uz dodatak 10% seruma goveđeg fetusa, 10 mM HEPES i IX pen/strep-glutamina na 37 °C i 5% CO2. Nakon aktivacije, ćelije su inkubirane sa anti-CD8a antitelom (eBioscience, 9043-0087-120) razblaženim 1:100 u FACS puferu (PBS sa 2% FBS) tokom 30 minuta na 4 °C. Ćelije su zatim dva puta isprane FACS puferom i nanete po proceduri Cytofix/Cytoperm kompleta BD Bioscience (51-2090KZ) prema protokolu proizvođača. Serijska razblaženja 1:3 od 9 do 0,037 µg/ml AGEN1884, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i kontrole izotipa IgG1naneta su na ćelije. Uzorci su suspendovani u 200 µl FACS pufera i analizirani koristeći protočni citometar FACS Diva (BD Biosciences). Kada je korišćeno za intracelularno bojenje, anti-CTLA-4 antitelo AGEN1884 je pokazalo vezivanje za aktivirane CD8+ T ćelije cinomolgusa (slika 2B).
[0256] Nadalje, mononuklearne ćelije periferne krvi (PBMC) čoveka, majmuna cinomolgusa (indokineski), pacova ili miša prenete su kao alikvoti u bunarčiće ploče za kulturu ćelija sa 96 bunarčića okruglog dna (1 x 10<5>ćelija/bunarčiću) i stimulisane tokom 4 dana u RPMI-1640 obogaćenog sa 10% seruma goveđeg fetusa, 15 mM HEPES, 100 i.j./ml penicilina, 100 mg/ml streptomicina, 2 mM L-glutamina, 100 IU/ml IL-2 (Peprotech), i 1 µg/ml fitohemaglutinina (PHA) (Roche) na 37 °C i 5% CO2. Nakon stimulacije, ćelije su isprane, i dodat je 5% toplotno inaktivirani humani AB serum (Sigma-Aldrich) da se blokiraju Fc receptori i da se spreči nespecifično vezivanje antitela. Ćelije su ponovo isprane, i ponovo suspendovane u 100 µl razblaženog APC-konjugovanog anti-CD4 antitela (klon OKT4, GK15, ili W3/25; Biolegend). Nakon inkubacije tokom 45 min u mraku, ćelije su isprane tri puta i permebializovane koristeći FoxP3/komplet pufera za bojenje transkripcionog faktora (eBioscience) prema uputstvu proizvođača. Nakon permeabilizacije, ćelije su inkubirane sa serijskim razblaženjima fluorescentno označenog (Pacific Blue™) AGEN1884w ili antitela za kontrolu izotipa u opsegu od 0,00003 µg/ml do 10 µg/ml tokom 45 minuta na 4 °C u mraku. Ćelije su tri puta isprane pre analize protočnom citometrijom koristeći Becton Dickinson LSRFortessa™. Podaci su analizirani koristeći softver FlowJo (verzija 10). Kako je prikazano na slici 2C, antitelo AGEN1884w se vezalo za PHA-stimulisane CD4+ humane ćelije i T ćelije cinomolgusa, ali ne za pacovske ili mišje T ćelije.
6.1.5 Aktivnost blokiranja liganda
[0257] Da bi se odredilo da li anti-CTLA-4 antitela blokiraju vezivanje liganda CD80 i CD86, izveden je test rangiranja koristeći tehnologiju suspendovanih čipova (šematski prikazano na slici 3A). 1200 Luminex® perlica u 5 µl test pufera (Luminex Corp, br.14 LC10014-01) dodato je u svaki bunarčić ploča sa 96 bunarčića sa polovinom površine (Corning, Inc., 3884). Perlice su povezane sa CTLA-4 antigenom (rhCTLA-4-Fc, R&D, br.
7268-CT) putem kuplovanja amina sa COOH površine perlice. Reakcija kuplovanja je izvedena koristeći 50 µg/ml CTLA-4 antigena i 1 x 10<7>Luminex perlica po ml. Standardna hemija NHS estara korišćena je za formiranje karbodiimidnih veza između primarnih amino grupa antigena i karboksilnih grupa na površini perlice (Luminex Xmap kuvar poglavlje 3).
[0258] Kuplovanje antigena za proteine je jednostavna dvostepena karbodiimidna procedura tokom koje se karboksi grupe mikrosfera prve aktiviraju reagensom EDC (1-etil-3-[3-dimetilaminopropil]karbodiimid hidrohlorid) u prisustvu sulfo-NHS (N-hidroksisulfosukcinimida) tako da formiraju intermedijerni sulfo-NHS estar. Reaktivni intermedijer je zatim zamenjen reakcijom sa primarnim aminom ciljnog molekula (antitelo, protein ili peptid) tako da formira kovalentnu amidnu vezu. Povezane perlice su inkubirane sa različitim koncentracijama anti-CTLA-4 antitela (koncentracije od 9000 ng/ml do 12 ng/ml u 25 µl test pufera po bunarčiću pre dodavanja perlica) tokom 1 sata na 20 °C i 650 o/min. Testirana anti-CTLA-4 antitela su AGEN1884, referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo, i antitelo IgG1za kontrolu izotipa. Posle je dodato po 30 µl R-PE označenog CD80 (R&D Systems, br. 140-B1) ili CD86 (R&D Systems, br.141-B2) u koncentraciji od 1 nm u svaki bunarčić, do ukupne zapremine u bunarčiću od 60 µl (1200 perlica po bunarčiću i krajnje koncentracije od 0,5 nM označenog CD80 ili CD86). Označavanje liganda je urađeno interno koristeći komplete za R-PE označavanje (AbDSerotec, LYNX Rapid RPE komplet za konjugaciju antitela, LNK023RPE) prema protokolu proizvođača. Ploče su analizirane
11
pomoću sistema Luminex® 200 (Millipore). Izbrojano je 100 perlica po bunarčiću u zapremini uzorka od 50 µl. Potencijal blokiranja liganda je izračunat koristeći MFI vrednosti nekonkurentskog signala (100% vezivanja) samo kontrole liganda. PE signal koji je mogao da se detektuje ukazivao je na vezivanje liganda za antigen. AGEN1884 je inhibirao vezivanje CD80 (slika 3B) i CD86 (slika 3C) za CTLA-4 sa procenjenom vrednošću IC50od 56 ng/ml.
[0259] Zatim je ispitana sposobnost anti-CTLA-4 antitela da blokiraju vezivanje rekombinantnog CD80-Fc i CD86-Fc na CTLA-4 eksprimiran na ćelijskoj površini. Ukratko, T ćelije koje eksprimiraju CTLA-4 (Jurkatove) inkubirane su sa rastućim koncentracijama AGEN1884w, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, ili antitela IgG1za kontrolu izotipa (0, 0,001, 0,004, 0,012, 0,037, 0,11, 0,33, 0,99, i 2,96 µg/ml), praćeno fiksnim koncentracijama (0,625 µg/ml) fluorescentno označenog CD80-Fc ili CD86-Fc. Procenat ćelija vezanih od strane CD80-Fc ili CD86-Fc određen je protočnom citometrijom. Kao što je prikazano na slici 3D, AGEN1884w i referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo inhibirali su vezivanje CD80-Fc i CD86-Fc za Jurkatove ćelije koje eksprimiraju CTLA-4.
[0260] Nadalje, anti-CTLA-4 antitelo AGEN1884w je ispitano na sposobnost da raskine prethodno formirane komplekse CTLA-4 eksprimiranog na ćelijskoj površini i rekombinantnog CD80 ili CD86. Ukratko, Jurkatove ćelije konstruisane da konstutivno eksprimiraju CTLA-4 na ćelijskoj površini inkubirane su sa serijskim razblaženjem CD80-Fc ili CD86-Fc (R&D Systems) (10 do 0,0002 µg/ml) tokom 30 minuta na 4 °C na ploči sa 96 bunarčića sa okruglim dnom. Nakon ispiranja, dodata je fiksna koncentracija (67 nM) fluorescentno označenog (PerCP-CY5.5) AGEN1884w ili referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i ploča je inkubirana tokom 30 minuta na 4 °C. Ploča je ponovo isprana, i ćelije su ponovo suspendovane sa 100 µl 1% paraformaldehida (Alfa Aear) u PBS-u. Uzorci su analizirani koristeći protočni citometar Becton Dickinson FACSCanto™, i podaci su analizirani koristeći softver FlowJo (verzija 10). Antitelo AGEN1884w je raskidalo formirane komplekse CTLA-4 i CD80 ili CD86 na dozno zavisan način (slika 3E).
6.1.6 Efekat anti-CTLA-4 antitela na humane T ćelije nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA)
11
[0261] Funkcionalna aktivnost anti-CTLA-4 antitela na primarne humane T ćelije procenjena je nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA). Krioprezervirane PBMC (10<5>ćelija/bunarčiću) u RPMI1640 obogaćenom penicilinom, streptomicinom, i 10% FBS (Hyclone) dodate su na delta površinske ploče NUNCLON sa 96 bunarčića (NUNC™). Ćelije su uzgajane u prisustvu rastućih koncentracija antitela od 3, 2, 16, 80, 400, 2000, 10.000, i 50.000 ng/ml i 100 ng/ml SEA (Toxin Technologies) tokom 5 dana na 37 °C, 5% CO2, i 97% vlažnosti. Testirana antitela su AGEN1884w, referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo, i antitelo IgG1za kontrolu izotipa. Izbistreni supernatant je sakupljen i čuvan na -80 °C do analize. Titri IL-2 su generisani elektrohemiluminescencijom (MSD).
[0262] Kao što je prikazano na slici 4A, AGEN1884w je povećao proizvodnju IL-2 od strane T ćelija u prisustvu SEA stimulacije.
6.1.7 Efekat anti-CTLA-4 antitela na IL-2-luciferaza reportersku ćelijsku liniju
[0263] Funkcionalna aktivnost CTLA-4 antitela AGEN1884w je dalje analizirana koristeći test IL-2-luciferaza reportera. Ukratko, humana T ćelijska linija (Jurkat) koja endogeno eksprimira CD28 konstruisana je da konstutivno eksprimira CTLA-4 ćelijske površine i reporter gen luciferaze podstaknut IL-2 promoterom. Konstruisane Jurkatove ćelije su zajednički uzgajane sa antigen prezentujućom ćelijskom linijom (Raji) koja eksprimira CD80 i CD86. Aktiviranje (signal 1) T ćelijskog receptora (TCR) postignuto je sa mišjim antihumanim CD3 antitelom i kozjim anti-mišjim IgG (H+L) antitelom; i kostimulatorna signalizacija (signal 2) je obezbeđena kao trans od strane CD80 i CD86 eksprimiranih na Raji ćelijama. Ekspresija CD80 i CD86 na Raji ćelijama je potvrđena protočnom citometrijom (slika 4B). Biokonjugacija TCR na Jurkatovoj T ćelijskoj liniji aktivirala je ekspresiju IL-2, što je dovelo do proizvodnje luciferaze, surogat markera za aktivaciju T ćelija. Kokultura ove dve ćelijske linije dovela je do angažovanja inhibitornog koreceptora CTLA-4 (eksprimiran na Jurkatovim ćelijama) sa njegovim prirodnim ligandima CD80 i CD86 (eksprimirani na Raji ćelijama) koji inhibiraju aktivaciju T ćelija, pokazanu nedostatkom ekspresije luciferaze. Ova inhibicija je oslabljena nakon dodavanja rastućih koncentracija AGEN1884w (0 do 300 µg/ml) usled toga što AGEN1884w blokira interakciju CTLA-4 sa njegovim ligandima CD80 i CD86 i pomera interakciju tih liganada sa kostimulatornim koreceptorom CD28 T ćelija. Ekspresija luciferaze je kvantifikovana koristeći reagens Bio-Glo™, i dobijeni podaci su
11
korišćeni da se odredi koliko je najviše puta uvećana vrednost odgovora (umnožak povećanja sa AGEN1884w u poređenju sa antitelom IgG1za kontrolu izotipa).
[0264] Kao što je prikazano na slici 4C, anti-CTLA-4 antitelo AGEN1884w je dozno zavisno oslobađalo CTLA-4 posredovanu inhibiciju T ćelija u ovom testu IL-2-luciferaza reportera.
6.1.8 Nedostatak agonističke aktivnosti anti-CTLA-4 antitela
[0265] Ocenjen je potencijal AGEN1884w da posreduje CTLA-4 direktnu signalizaciju. Primarne humane T ćelije koje eksprimiraju CD3 su izolovane iz mononuklearnih ćelija periferne krvi koristeći Miltenyi Pan komplet sa mikroperlicama za T ćelije, i uzgajane sa anti-CD3 antitelom vezanim za ploču (klon SP34, 10 µg/ml) da se aktivira TCR signalizacija. AGEN1884w ili antitelo IgG1za kontrolu izotipa bilo je uključeno u kontekst aktivacije TCR, bilo u rastvornom stanju ili vezano za ploču (0,003 do 50 µg/ml). Nakon četiri dana u kulturi i finalnih 6 sati inkubacije sa Brefeldin A (BD GolgiPlug™), ćelije su obojene antitelima konjugovanim sa fuorohromom na površinske markere porekla, uključujući anti-CD3 antitelo (APC Cy7, klon SP34), anti-CD8 antitelo (PE Cy7, klon SKI), i anti-CD4 antitelo (PercP Cy5.5, klon L200), što je praćeno permeabilizacijom ćelija sa Cytofix-Cytoperm™ (Beckton Dickinson). Radi procene intracelularne proizvodnje citokina, ćelije su obojene anti-IFNy antitelom (Alexa fluor 647, klon B27) i anti-TNFa antitelom (PE, klon Mab11). Ćelije su pripremljene za protočnu citometriju koristeći FACSCanto II, i analiza podataka je obavljena sa Flowjo verzija 10.
[0266] Rastuće koncentracije bilo rastvorljivog (slika 4D) ili vezanog za ploču (slika 4E) AGEN1884w nisu imale uticaja na procenat CD8+ IFNγ+ T ćelija, u poređenju sa antitelom IgG1za kontrolu izotipa. Pri visokim koncentracijama od 50 µg/ml, AGEN1884w nije delovao kao CTLA-4 agonističko antitelo.
6.1.9 Kombinacija sa anti-LAG-3 antitelom ili anti-PD-1 antitelom
[0267] Kao sledeće, anti-CTLA-4 antitelo AGEN1884w je ispitano na sinergiju sa anti-LAG-3 antagonističkim antitelom ili anti-PD-1 antagonističkim antitelima koristeći PBMC suboptimalno stimulisane stafilokoknim enterotoksinom A (SEA). Ukratko, krioprezervirane humane PBMC (Research Blood Components) nanete su pri 10<5>ćelija/bunarčiću u
11
RPMI1640 obogaćen dodatkom Normocin™ (Invivogen br. ant-br) i 10% toplotno inaktiviranog FBS (Gibco, Invitrogen Corporation) na delta površinske ploče NUNCLON sa 96 bunarčića (NUNC™). Ćelije su uzgajane sa 100 ng/ml SEA (Toxin Technologies) u prisustvu 10 µg/ml rastvornog AGEN1884w ili IgG1kontrole izotipa zajedno sa 5 µg/ml anti-LAG-3 IgG1antitela AGEN1746, nivolumabom (serija AAB5719, Myoderm), pembrolizumabom (serija 7002688300, Myoderm), IgG1kontrolom izotipa, ili IgG4kontrolom izotipa tokom 5 dana na 37 °C, 5% CO2, i 97% vlažnosti. Testirana antitela i njihove odgovarajuće koncentracije su prikazane na slici 4F. Anti-LAG-3 antitelo AGEN1746 korišćeno u ovom testu generisano je na bazi varijabilnih regiona antitela 25F7 datih u američkoj publikaciji prijava US Application Publication br. US 2011/0150892.
AGEN1746 sadrži laki lanac aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 91 i laki lanac aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 92 (tabela 8). Izbistreni supernatanti su sakupljeni i čuvani na -80 °C do analize. L-2 citokin je detektovan koristeći AlphaLISA (Perkin Elmer). Izračunata je srednja i standardna devijacija koncentracije IL-2.
Tabela 8. Sekvence anti-LAG-3 antitela AGEN1746
11
SEQ Opis Aminokiselinska sekvenca
[0268] Kao što je prikazano na slici 4F, kombinacija anti-CTLA-4 antitela AGEN1884w sa anti-LAG-3 antitelom AGEN1746, anti-PD-1 antitelom nivolumabom, ili anti-PD-1 antitelom pembrolizumabom povećala je proizvodnju IL-2 iz PBMC suboptimalno stimulisanih SEA superantigenom u odnosu na tretman jednim agensom.
6.2 Primer 2: Poređenje anti-CTLA-4 antitela sa konstantnim regionom IgG1 ili IgG2
[0269] U ovom primeru, AGEN1884w, koji je humano IgG1antitelo, konvertovan je u humano IgG2antitelo, AGEN2041w. Antitelo AGEN2041w deli isti varijabilni region teškog lanca i isti varijabilni region lakog lanca kao AGEN1884w ali sadrži konstantni region humanog IgG2. Antitelo AGEN2041w sadrži sekvencu teškog lanca SEQ ID NO: 94 i sekvencu lakog lanca SEQ ID NO: 13.
[0270] Pored toga, više AGEN1884w sa mutiranim Fc regionima takođe su testirani da se ispita uticaj interakcije FcyR na antagonističku aktivnost anti-CTLA-4 antitela.
AGEN1884w-N297A sadrži sekvencu teškog lanca SEQ ID NO: 95 i sekvencu lakog lanca SEQ ID NO: 13. AGEN1884w-S267E/L328F sadrži sekvencu teškog lanca SEQ ID NO: 96 i sekvencu lakog lanca SEQ ID NO: 13. AGEN1884w-S239D/A330L/I332E sadrži sekvencu teškog lanca SEQ ID NO: 97 i sekvencu lakog lanca SEQ ID NO: 13. Svi ostaci su numerisani prema EU sistemu numeracije.
6.2.1 Analiza vezivanja, blokiranja liganda i selektivnosti anti-CTLA-4 antitela sa konstantnim regionom IgG2
[0271] Afinitet anti-CTLA-4 antitela AGEN2041w, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, i referentnog anti-CTLA-4 IgG2antitela analiziran je površinskom plazmonskom rezonancom, kao što je opisano u odeljku 6.1.1. Testirani CTLA-4 antigeni su bili rekombinantni humani
12
CTLA-4-Fc (R&D Systems, br.7268-CT), rekombinantni humani CTLA-4 (Sino Biological, br. 11159-H08H), rekombinantni cinomolgusov CTLA-4-Fc (Sino Biological, br.90213-C02H), i rekombinantni cinomolgusov CTLA-4 (Sino Biological, br.90213-C08H).
Vrednosti afiniteta su navedene na slici 5A.
[0272] Nadalje, vezivanje AGEN2041w za Jurkatove ćelije koje prekomerno eksprimiraju humani CTLA-4 analizirano je testom protočne citometrije slično testu opisanom u odeljku 6.1.2. Ukratko, Jurkatove ćelije koje prekomerno eksprimiraju humani CTLA-4 (Promega) prvo su obojene serijskim razblaženjima AGEN2041w, referentnog anti-CTLA-4 IgG2antitela, ili kontrolom izotipa IgG2, i zatim APC-konjugovanim mišjim anti-humanim kapa antitelom (Invitrogen). Uzorci su pripremljeni na FACSCanto II (BD Biosciences) i srednji intenzitet fluorescencije (MFI) je analiziran koristeći softver FlowJo (FlowJo, LLC).
AGEN2041w se vezivao za Jurkatove ćelije koje prekomerno eksprimiraju humani CTLA-4 (slika 5B).
[0273] Aktivnost blokiranja liganda AGEN2041w, referentnog anti-CTLA-4 IgG2antitela, i kontrole izotipa IgG2je ispitana koristeći tehnologiju suspendovanih čipova, kao što je opisano u odeljku 6.1.5. Kao što je prikazano na slici 5C, AGEN2041w je inhibirao vezivanje CD80 i CD86 za CTLA-4.
[0274] Selektivnost AGEN2041w i referentnog anti-CTLA-4 IgG2antitela je upoređena sa antitelom za kontrolu izotipa IgG2koristeći tehnologiju suspendovanih čipova, kao što je opisano u odeljku 6.1.3. Kao što je prikazano na slikama 5D i 5E, AGEN2041w se specifično vezuje za humani i cinomolgusov CTLA-4. Nije bilo značajnog vezivanja za povezane članove familije (rekombinantni humani CD28, ICOS, BTLA, i PD-1; i rekombinantni PD-1 cinomolgusa).
6.2.2 Efekat anti-CTLA-4 antitela sa konstantnim regionom IgG1 ili IgG2 na humane T ćelije nakon stimulacije stafilokoknim enterotoksinom A (SEA)
[0275] Funkcionalna aktivnost CTLA-4 antitela AGEN1884w i AGEN2041 je ispitana na testu sa primarnim humanim PBMC za indukciju IL-2. Test je izveden kao što je opisano u odeljku 6.1.6. Ukratko, humane PBMC su uzgajane u prisustvu rastućih koncentracija antitela od 0,016, 0,08, 0,4, 2,0, 10, 50, i 250 µg/ml i 100 ng/ml SEA (Toxin Technologies) tokom 5 dana. Testirana antitela su bila anti-CTLA-4 antitela AGEN1884w i AGEN2041w, kontrola izotipa IgG1, i kontrola izotipa IgG2. Titar IL-2 je određen elektrohemiluminescencijom (MSD).
[0276] Kao što je prikazano na slici 6A, i AGEN1884w i AGEN2041w su stimulisali proizvodnju IL-2 nakon SEA stimulacije.
6.2.3 Efekat anti-CTLA-4 antitela sa konstantnim regionom IgG2 na IL-2-luciferaza reportersku ćelijsku liniju
[0277] Nadalje, funkcionalna aktivnost anti-CTLA-4 antitela AGEN2041w je ocenjena koristeći test IL-2-luciferaza reportera sličan goreopisanom. Ukratko, T ćelije (Jurkatove) genetski konstruisane da eksprimiraju površinski CTLA-4 i reporter gen luciferaze nishodno od IL-2 promotera dodate su u bunarčiće koji sadrže rastuće koncentracije AGEN2041w ili kontrole izotipa IgG2. Zatim su Raji ćelije koje endogeno eksprimiraju CD80 i CD86, i genetski su konstruisane da eksprimiraju „aktivator T ćelije“, dodate u ćelijsku kulturu.
„Aktivator T ćelije“ je vlasnički receptor ćelijske površine koji vezuje T ćelijske receptore (TCR) na način nezavisan od antigena, dovodeći do aktivacije T ćelije. Stimulacija TCR na genetski konstruisanim Jurkatovim ćelijskim linijama aktivira ekspresiju IL-2 dovodeći do proizvodnje luciferaze. Dodavanje AGEN2041w u ovaj test blokira angažovanje CTLA-4 (eksprimiran na Jurkatovim ćelijama) sa njegovim prirodnim ligandima CD80 i CD86 (eksprimirani na Raji ćelijama) povećavajući proizvodnju luciferaze. Koncentracija luciferaze je kvantifikovana koristeći reagens Bio-Glo™, i dobijeni podaci su korišćeni da se odredi koliko je najviše puta uvećana vrednost odgovora (umnožak povećanja sa AGEN2041w u poređenju sa osnovnom aktivnošću luciferaze bez antitela).
[0278] Kao što je prikazano na slici 6B, rastuće koncentracije AGEN2041w dovele su do povećane aktivacije T ćelija na dozno zavisan način. Nasuprot tome, kontrola izotipa IgG2nije povećala ekspresiju luciferaze čak ni pri najvećim testiranim koncentracijama.
6.2.4 Karakterizacija AGEN1884w proizvedenog putem stabilnog klona
[0279] U ovom primeru, AGEN1884w proizveden putem stabilnog klona 105 (AGEN1884w-105) ispitan je na vezivanje za CTLA-4 eksprimiran na ćelijskoj površini i funkcionalnu aktivnost u testu sa primarnim humanim PBMC.
[0280] Vezivanje AGEN1884w-105 za Jurkatove ćelije koje prekomerno eksprimiraju humani CTLA-4 analizirano je testom protočne citometrije slično testu opisanom u odeljku 6.1.2. Ukratko, Jurkatove ćelije koje prekomerno eksprimiraju humani CTLA-4 (Promega) prvo su obojene serijskim razblaženjima AGEN1884w-105, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, ili kontrolom izotipa IgG1, i zatim PE-konjugovanim mišjim anti-humanim kapa antitelom (Invitrogen). Uzorci su pripremljeni na FACSCanto II (BD Biosciences) i srednji intenzitet fluorescencije (MFI) je analiziran koristeći softver FlowJo (FlowJo, LLC).
AGEN1884w-105 se vezivao za Jurkatove ćelije koje prekomerno eksprimiraju humani CTLA-4 (slika 7A).
[0281] Sposobnost AGEN1884w-105 da indukuje proizvodnju IL-2 ispitana je u testu sličnom onom opisanom u odeljku 6.1.6. Ukratko, humane PBMC su uzgajane 5 dana u prisustvu 100 ng/ml SEA (Toxin Technologies) i 20 µg/ml AGEN1884w-105, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, ili kontrole izotipa IgG1. Titar IL-2 je određen elektrohemiluminescencijom (MSD). Kao što je prikazano na slici 7B, AGEN1884w-105 je indukovao proizvodnju IL-2 nakon SEA stimulacije.
6.2.5 Vezivanje anti-CTLA-4 antitela za površinski eksprimirane Fc gama receptore
[0282] Vezivanje anti-CTLA-4 antitela za humani FcγRIIA, FcγRIIB, i FcγRIIIA eksprimiran na površini CHO ćelije izmereno je protočnom citometrijom. Ukratko, CHO ćelije su transficirane pomoću cDNK koja kodira humani FcγRIIA<H131>, FcγRIIB ili FcγRIIIA<V158>, i dobijene su sledeće CHO ćelijske linije: rCHO-huFcγRIIA<+>, rCHO-huFcγRIIB<+>i rCHO-huFcγRIIIA<+>. Izvršeno je vezivanje titracije doze antitela u opsegu od 0,0056–1000 µg/ml, i primarna antitela su detektovana anti-humanim F(ab') sekundarnim antitelom konjugovanim sa fikoeritrinom (PE) (Jackson Immune Research). Uzorci su testirani protočnom citometrijom, i vrednosti srednjeg intenziteta fluorescencije (MFI) PE su analizirane i korišćene da se dobiju krive vezivanja. Testirana antitela su AGEN1884w, AGEN2041w, referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo, i antitelo IgG1za kontrolu izotipa. U ovoj studiji je korišćen AGEN1884w proizveden u dva različita medijuma: medijum CD
12
FortiCHO™ kompanije Life Technologies Inc./Thermo (AGEN1884w-FortiCHO) i medijum PowerCHO™ 2 kompanije Lonza (AGEN1884w-PowerCHO). Referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo sadrži različit IgG1alotip od onog u AGEN1884w. Antitelo IgG1za kontrolu izotipa ispitano je samo na 1000 µg/ml.
[0283] Kao što je prikazano na slici 8A, AGEN1884w-FortiCHO, AGEN1884w-PowerCHO i AGEN2041w pokazuju povećano vezivanje za FcγRIIA<H131>-eksprimirajuće ćelije u odnosu na referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo. Slično, vezivanje AGEN1884w-PowerCHO i AGEN1884w-FortiCHO za FcγRIIB-eksprimirajuće ćelije bilo je jače nego kod referentnih anti-CTLA-4 IgG1antitela (slika 8B). Sva IgG1antitela, AGEN1884w-FortiCHO, AGEN1884w-PowerCHO i referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo, slično su se vezala za FcγRIIIA<V158>eksprimiran na ćelijskoj površini (slika 8C). AGEN2041w je pokazao slabije vezivanje za FcγRIIB (slika 8B) i FcγRIIIA<V158>(slika 8C) nego IgG1antitela.
6.2.6 Vezivanje anti-CTLA-4 antitela za rekombinantne Fc gama receptore
[0284] Vezivanje anti-CTLA-4 antitela, AGEN1884w-FortiCHO, AGEN1884w-PowerCHO, AGEN2041w i referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, za humani FcγRIIA i FcγRIIIA mereno je površinskom plazmonskom rezonancom (BIAcore® 3000).
[0285] Kod vezivanja FcγRIIA, postupak direktne mobilizacije za CM5 čip primenjen je korišćenjem standardne hemije amina. Rekombinantni humani FcγRIIA-His protein je razblažen u rastvoru natrijum acetata, pH 4,0, do koncentracije od 10 µg/ml i imobilisan na protočnu ćeliju 2 i 4 koristeći injektovanje od 8 minuta pri protoku od 5 µl/min. Protočne ćelije 1 i 3, korišćene kao referentne ćelije, lažno su kuplovane, tj. reagensi za kuplovanje amina su propušteni kroz protočne ćelije kao kroz protočnu ćeliju 2 i 4 bez FcγRIIA. Učinak imobilisanih FcγRIIA površina testiran je korišćenjem 1 mg/ml trastuzumaba u radnom puferu HBS-EP Biacore kroz svaku protočnu ćeliju za injektovanje od 0,5 minuta pri protoku od 100 µl/min.
[0286] Kod vezivanja FcγRIIIA, postupak hvatanja je izveden preko imobilizacije anti-tetra His antitela na CM5 čip. Mišje anti-His antitelo je razblaženo u rastvoru natrijum acetata, pH 5,0, do koncentracije od 10 µg/ml i imobilisano na sve četiri protočne ćelije koristeći 5-minutno injektovanje pri protoku od 10 µl/min putem standardne hemije amina.
Rekombinantni humani FcγRIIIA-His protein je uhvaćen na površinu čipa injektovanjem rastvora FcγRIIIA-His u koncentraciji od 1 µg/ml tokom 2 minuta pri protoku od 5 µl/min.
[0287] Svim test antitelima je pufer zamenjen u radni pufer Biacore pre analize.
Koncentracije proteina uzoraka sa zamenjenim puferom i intermedijernih osnovnih rastvora određene su merenjem apsorbance na 280 nm koristeći spektrofotometar Nanodrop 1000.
[0288] Svaki uzorak je analiziran u serijama koncentracija od 8 tačaka polazeći od 1000 µg/ml sa 2-strukim razblaženjima. Podaci su prikupljeni i obrađeni koristeći kontrolni softver Biacore verzija 4.1 i softver BIAevaluation verzija 4.1. Krive doznog odgovora su podešene na model logistike sa pet parametra (5PL). Podrazumevani korišćeni faktori ponderisane krive su:
[0289] Podaci vezivanja su takođe analizirani koristeći StatLIA verzija 3.2. Paralelnost je procenjena hi-kvadratnim testom (P < 0,01) u StatLIA.
[0290] Srednji odgovori (rezonantna jedinica) AGEN1884w-FortiCHO, AGEN1884w-PowerCHO, AGEN2041w i referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela za humani FcγRIIA i humani FcγRIIIA prikazani su na slikama 9A odnosno 9B.
6.2.7 Efekat anti-CTLA-4 antitela na Fc gama receptor IIIA reportersku ćelijsku liniju
[0291] Sposobnost AGEN1884w da zajedno angažuje CTLA-4 i signal putem aktivacije Fc gama receptora ocenjena je korišćenjem reporterske ćelijske linije koja eksprimira Fc gama receptor IIIA (FcγRIIIA) (Promega) zajedno sa ciljnim ćelijama (test je šematski prikazan na slici 10A). Na tom testu, Jurkatove ćelije koje eksprimiraju humani CTLA-4 su korišćene kao ciljne ćelije. Konstruisane Jurkatove ćelije koje stabilno eksprimiraju FcγRIIIA, bilo V158 varijantu (veliki afinitet) ili F158 varijantu (mali afinitet), i NFAT element odgovora koji pokreće ekspresiju luciferaze svica korišćene su kao efektorske ćelije. Test je izveden prema uputstvu proizvođača. Ukratko, 25 µl ciljnih ćelija (25.000 ćelija) koje eksprimiraju CTLA-4 pomešano je sa 25 µl serijski razblaženih antitela polazeći od 4 µg/ml na belim pločama sa 96 bunarčića ravnog dna. Zatim je u bunarčić dodato 150.000 efektorskih ćelija u 25 µl, i ploče
12
su inkubirane na 37 °C preko noći. Vezivanje kompleksa antitelo/antigen, naznačeno time što se antigen nalazi na površini ciljne ćelije, za FcγRIIIA signalizira konstruktu promoter/reporter efektorskih ćelija i dovodi do transkripcije gena luciferaze. Sledećeg dana, ploče su izvađene iz inkubatora i ostavljene da se ohlade tokom 30 minuta. 75 µl Bio-Glo reagensa (Promega) sobne temperature dodato je u svaki bunarčić, luminescencija je merena pomoću čitača ploča EnVison Multimode (Perkin Elmer), i evidentirane su relativne svetlosne jedinice (RLU). Testirana antitela su bila AGEN1884w-105 ili AGEN 1884w (AGEN1884w-105 za slike 10B, 10C, 10F i 10G, i AGEN1884w za slike 10D i 10E);
AGEN1884w-N297A (slike 10F i 10G); AGEN2041w (slike 10D i 10E); referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo (slike 10B i 10C); i antitelo IgG1za kontrolu izotipa (slike 10B–10G).
[0292] Kada se vezalo za ćelije koje eksprimiraju CTLA-4, IgG1antitelo AGEN1884w-105 je aktiviralo i FcγRIIIA V158 varijantu (slika 10B) i FcγRIIIA F158 varijantu (slika 10C). Kao što je očekivano, IgG2antitelo AGEN2041w ne signalizira putem FcγRIIIA (slike 10D i 10E). Da bi se potvrdila specifičnost ovog testa reportera, utišana varijanta Fc receptora (FcR) AGEN1884w (AGEN1884w-N297A) testirana je u istom testu, i taj mutant takođe nije signalizirao putem FcγRIIIA (slike 10F i 10G).
6.2.8 Efekat anti-CTLA-4 antitela na Fc gama receptor IIA reportersku ćelijsku liniju
[0293] Nadalje, sposobnost AGEN2041w da zajednički angažuje CTLA-4 i signalizira putem FcγRIIA procenjena je koristeći reportersku ćelijsku liniju koja eksprimira FcγRIIA (Promega) zajedno sa ciljnim ćelijama (Jurkatove ćelije koje eksprimiraju humani CTLA-4). Jurkatove ćelije koje eksprimiraju FcγRIIA sa velikim afinitetom 131 H/H polimorfizma i NFAT element odgovora koji pokreće ekspresiju luciferaze svica korišćene su kao efektorske ćelije. Ukratko, 25 µl ciljnih ćelija (6 x 10<6>ćelija/ml) pomešano je sa 25 µl serijski razblaženih antitela polazeći od 0,1 µg/ml u duplim bunarčićima belih test ploča sa 96 bunarčića. Testirana antitela su bila AGEN2041w, referentno anti-CTLA-4 IgG2antitelo, i antitelo IgG2za kontrolu izotipa. Zatim je 25 µl efektorskih ćelija (6 x 10<6>ćelija/ml) dodato u svaki bunarčić, dajući odnos efektora prema cilju 1:1. Ploče su inkubirane tokom 20 sati na 37 °C i 5% CO2. Posle te inkubacije, test reagens Bio-Glo luciferaza (Promega) otopljen je na sobnoj temperaturi, i 75 µl je dodato u svaki bunarčić. U roku od 5–10 minuta, luminescencija je merena koristeći višeznačni čitač ploča EnVision (PerkinElmer). Početna
12
luminescencija je oduzeta od očitavanja svakog uzorka, i evidentirane su prilagođene relativne svetlosne jedinice (RLU).
[0294] Kao što je prikazano na slici 11, kada se vezalo za ćelije koje eksprimiraju CTLA-4, IgG2antitelo AGEN2041w je aktiviralo FcγRIIA<H131>.
6.2.9 Efekat vezivanja Fc gama receptora na antagonističku aktivnost anti-CTLA-4 antitela
[0295] U ovom primeru, ispitan je efekat vezivanja FcγR na antagonističku aktivnost anti-CTLA-4 antitela.
[0296] Prvo je vezivanje AGEN1884w-105 i AGEN1884w-N297A za CTLA-4 eksprimiran na ćelijskoj površini upoređeno testom protočne citometrije slično testu opisanom u odeljku 6.1.2. Ukratko, Jurkatove ćelije koje prekomerno eksprimiraju humani CTLA-4 (Promega) prvo su obojene serijskim razblaženjima AGEN1884w-105, AGEN1884w-N297A, ili kontrolom izotipa IgG1a zatim PE-konjugovanim mišjim anti-humanim kapa antitelom (Invitrogen). Uzorci su pripremljeni na FACSCanto II (BD Biosciences) i srednji intenzitet fluorescencije (MFI) je analiziran koristeći softver FlowJo (FlowJo, LLC). AGEN1884w-105 i AGEN1884w-N297A su pokazali slično vezivanje za Jurkatove ćelije koje prekomerno eksprimiraju humani CTLA-4 (slika 12A).
[0297] Nadalje, zavisnost od angažovanja Fc receptora (FcR) za in vitro funkcionalnu aktivnost je procenjena u testu sličnom testu opisanom u odeljku 6.1.6. Ukratko, humane PBMC su uzgajane tokom 5 dana u prisustvu 100 ng/ml SEA (Toxin Technologies) i 20 µg/ml AGEN1884w-105, AGEN1884w-N297A, ili kontrole izotipa IgG1. Titar IL-2 je određen elektrohemiluminescencijom (MSD).
[0298] Uprkos sličnom vezivanju za CTLA-4 eksprimiran na ćelijskoj površini (slika 12A), AGEN1884w-N297A je pokazao smanjeno potenciranje sekrecije IL-2 u poređenju sa AGEN1884w-105 u testu sa primarnim humanim PBMC (slika 12B).
12
[0299] Kao dodatni dokaz potrebe angažovanja FcR za funkcionalne aktivnosti, anti-CTLA-4 antitela su testirana na sposobnost da indukuju sekreciju IL-2 u prisustvu ili odsustvu FcR blokatora.
[0300] Krioprezervirane PBMC (10<5>ćelija/bunarčiću) u RPMI1640 uz dodatak penicilina, streptomicina i 10% FBS (Hyclone) dodate su na delta površinske ploče NUNCLON sa 96 bunarčića (NUNC™). Ćelije su uzgajane sa 100 ng/ml SEA (Toxin Technologies) i 10 µg/ml anti-CTLA-4 antitela IgG1ili kontrole izotipa humanog IgG1, u prisustvu ili odsustvu FcR blokatora tokom 5 dana na 37 °C, 5% CO2, i 97% vlažnosti. Testirana anti-CTLA-4 antitela su bila referentno IgG1antitelo (slika 13A) i AGEN1884w-105 (slika 13B). FcR blokatori su bili anti-CD16 (Biolegend br.302013), anti-CD32 (R&D br. AF1330), i anti-CD64 (R&D br. AF1257) antitela (svako 10 µg/ml) (slika 13A) ili samo anti-CD32 antitelo (eBiosciences br.
16-0329-81) (slika 13B). U kontrolnim grupama na slici 13B, AGEN1884w-105 i kontrola izotipa humanog IgG1su takođe inkubirani sa kontrolom izotipa mišjeg IgG1(Biolegend br.
400124) kao što je naznačeno na slici. Izbistreni supernatant je sakupljen i čuvan na -80 °C do analize. Titri IL-2 su generisani elektrohemiluminescencijom (MSD).
[0301] Blokada FcR, koristeći antitela na CD16, CD32 i CD64 (slika 13A) ili koristeći antitelo na CD32 (slika 13B) smanjila je sposobnost anti-CTLA-4 antitela da indukuju sekreciju IL-2 na testu sa primarnim humanim PBMC.
[0302] Nadalje, funkcionalna aktivnost više anti-CTLA-4 antitela sa mutiranim Fc regionima testirana je pomoću PBMC. Ukratko, krioprezervirane humane PBMC (Research Blood Components) nanete su pri 10<5>ćelija/bunarčiću na RPMI1640 uz dodatak Normocin™ (Invivogen) i 10% toplotno inaktiviranog FBS (Gibco, Invitrogen Corporation) na delta površinske ploče NUNCLON sa 96 bunarčića (NUNC™). Ćelije su uzgajane tokom 5 dana na 37 °C, 5% CO2, i 97% vlažnosti u prisustvu 142 ng/ml SEA (Toxin Technologies) i 10 µg/ml AGEN1884w, AGEN1884w-N297A, AGEN1884w-S267E/L328F, AGEN1884w-S239D/A330L/I332E, AGEN2041w, antitela IgG1za kontrolu izotipa, ili antitela IgG2za kontrolu izotipa. Izbistreni supernatant je sakupljen i čuvan na -80 °C do analize.
Koncentracije IL-2 su merene ELISA testom.
12
[0303] AGEN1884w sa trostrukom mutacijom S239D/A330L/I332E u Fc regionu, koja je povećala vezivanje za FcγRIIIA, stimulisao je više sekrecije IL-2 nego AGEN1884w sa Fc regionom IgG1divljeg tipa (slika 14).
6.2.10 Fc posredovani potencijal efektorske ćelije
[0304] U ovom primeru, antitelo AGEN1884w je analizirano u pogledu sposobnosti da posreduje citotoksičnost NK ćelija. Ukratko, Jurkatove ćelije konstruisane da konstutivno eksprimiraju CTLA-4 na ćelijskoj površini (ciljne ćelije) uzgajane su pri 1 x 10<4>ćelija/bunarčiću na pločama sa 96 bunarčića sa okruglim dnom. U ciljne ćelije su dodate rastuće koncentracije AGEN1884w, referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, ili antitelo za kontrolu izotipa (svako od 0 do 10 µg/ml), i 5 x 10<4>NK92-FcγRIIIA ćelija (efektorske ćelije). Nakon inkubacije tokom 6 sati na 37 °C i 5% CO2, liza ciljnih ćelija je procenjena fotometrijskom kvantifikacijom laktat dehidrogenaze (LDH) oslobođene u supernatant, pomoću kompleta za detekciju citotoksičnosti (LDH) (Roche) prema uputstvu proizvođača. Podaci su sakupljeni pomoću softvera za prikupljanje i analizu mikropločica SoftMax® Pro. Sve koncentracije antitela su ispitane u triplikatu.
[0305] Kao što je prikazano na slici 15, antitelo AGEN1884w je efikasno posredovalo lizu CTLA-4 eksprimirajućih ciljnih ćelija u prisustvu efektorskih ćelija.
6.2.11 Mapiranje epitopa anti-CTLA-4 antitela
[0306] Interakcija Fab fragmenta AGEN1884w (AGEN1884w-Fab) sa ekstracelularnim domenom humanog CTLA-4 je ispitana masenom spektrometrijom sa zamenom vodonikdeuterijum (HDX). Ekstracelularni domen CTLA-4, sam ili u kombinaciji sa AGEN1884w-Fab, u fiziološkom rastvoru sa fosfatnim puferom na pH 7,4, razblažen je desetostrukom zapreminom pufera za obeležavanje sa deuterijum oksidom, i inkubiran u različitim periodima (0, 60, 300, 1800 i 7200 sekundi) na sobnoj temperaturi. Zamena vodonika deuterijumom je prekinuta dodatkom jedne zapremine 4 M guanidin hidrohlorida, 0,85 M TCEP (tris(2-karboksietil)fosfin) pufera, i finalni pH je bio 2,5. Uzorci su onda podvrgnuti digestiji na koloni pepsin/proteaza tipa XIII, i LC-MS analizi. Maseni spektri su snimljeni u režimu „samo MS“. Radi izračunavanja inkorporacije deuterijuma, maseni spektri za dati peptid su kombinovani sa izdvojenim hromatografskim jonskim pikom, i izračunat je
12
ponderisani prosek m/z. Povećanje mase od mase nativnog peptida (0 minuta) do ponderisane prosečne mase odgovaralo je nivou inkorporacije deuterijuma. Krive ugradnje deuterijuma tokom vremena izmene za sve peptide prikazane su radi dalje analize, i upoređene pomoću softvera HDExaminer.
[0307] Većina CTLA-4 peptida prikazala je identične ili slične nivoe deuterijuma uz prisustvo anti-humanog CTLA-4 Fab ili bez njega. Međutim, nađeno je da nekoliko peptidnih segmenata ima značajno smanjenu inkorporaciju deuterijuma nakon vezivanja Fab. Svi ostaci u ovom paragrafu su numerisani prema SEQ ID NO: 77. Dva regiona, Q<80>VT<82>(SEQ ID NO: 78) i Y<135>PPPYYLGIGNGTQI<149>(SEQ ID NO: 79), pokazala su jaku deuterijumsku protekciju kada se humani CTLA-4 vezao za Fab. Najjače smanjenje preuzimanja deuterijuma je primećeno kod Y<140>L<141>koji je izgleda glavna karakteristika epitopa AGEN1884w na CTLA-4. Pregledanjem sekvenci CTLA-4 čoveka i majmuna cinomolgus, čiji AGEN1884w se snažno vezuje, otkrivena je skoro potpuna identičnost dva regiona opisana iznad, osim supstitucije metionina leucionom na poziciji 141 (slika 17A). Nasuprot tome, AGEN1884w se ne vezuje u značajnoj meri za CTLA-4 miša ili pacova (podaci nisu prikazani) koji se razlikuje od humanog CTLA-4 na Y<140>LGI<143>(SEQ ID NO: 80) na tri od četiri pozicije (slika 17A). Dodatni podaci selektivnosti pokazuju da se AGEN1884w sa velikom specifičnošću vezuje za CTLA-4 čoveka i majmuna cinomolgus, a ne za druge povezane članove familije CD28, uključujući CD28, ICOS, BTLA i PD-1 (podaci nisu prikazani). Poređenje sekvenci tih povezanih proteina pokazuje da se svi proteini koji nisu CTLA-4 razlikuju po Y<140>LGI<143>(SEQ ID NO: 80) (slika 17B), što dalje potkrepljuje značaj ovog epitopa za vezivanje AGEN1884w.
6.2.12 Studija T-zavisnog odgovora antitela (TDAR) kod majmuna cinomolgus
[0308] Studija TDAR od osam nedelja izvedena je na majmunima cinomolgus da se ispita sposobnost AGEN1884w i AGEN2041w da potenciraju odgovor antitela zavisan od T ćelija na vakcinu protiv hepatitisa B (ENERIX-G®) (HBsAg). Vakcina HBsAg je primenjena putem tri supkutane injekcije pri 10 µg po injekciji (ukupno 30 µg) u zadnju nogu 1. dana (osnovna) i 29. dana (pojačanje). AGEN1884w (N=6) ili AGEN2041w (N=6) dati su dva puta injekcijom intravenskim bolusom (10 mg/kg) 1. dana i 29. dana, zajedno sa antigenima vakcine. Koristeći istu šemu doziranja, jednoj kontrolnoj grupi životinja (N=3) data je vakcina HBsAg u kombinaciji sa 3 mg/kg referentnog anti-CTLA-4 IgG1antitela, a druga
1
kontrolna grupa životinja (N=6) primila je HBsAg sa kontrolnim uzorkom: 20 mM tris hidrohlorid, 100 mM NaCl, 1% manitol, 0,10 mM DTPA, 0,01% polisorbat 80, pH 7,0, bez anti-CTLA-4 antitela. Tokom osmonedeljne studije, analize anti-HBsAg (IgG) vršene su na uzorcima seruma prikupljenim u odabranim terminima tokom studije (-20, -7. dan, 15, 29, 43, 59. i 69. dan). Titar seruma je meren kolorimetrijskim ELISA testom.
[0309] Životinje koje su primile AGEN1884w, AGEN2041w, referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo ili kontrolni uzorak imale su normalan anamnestički odgovor sa merljivim titrom antitela nakon druge doze vakcine, koji je imao pik uz kasnije opadanje (slike 18A i 18B). Međutim, pokazalo se da AGEN1884w, AGEN2041w, i referentno anti-CTLA-4 IgG1antitelo povećavaju anti-HBsAg odgovor IgG u odnosu na kontrolni uzorak dat bez anti-CTLA-4 antitela.
6.3 Primer 3: Karakterizacija anti-CTLA-4 antitela
[0310] U ovom primeru, sledećih 19 anti-CTLA-4 antitela je okarakterisano na vezivanje i blokiranje liganda: AGEN1884, AGEN1885, AGEN1886, AGEN1887, AGEN1888, AGEN1889, AGEN1890, AGEN1891, AGEN1892, AGEN1893, AGEN1894, AGEN1895, AGEN1896, AGEN1897, AGEN1898, AGEN1899, AGEN1900, AGEN1901 i AGEN1902. Varijabilne sekvence teškog lanca i varijabilne sekvence lakog lanca ovih antitela objavljene su u tabeli 6. Slike 19A i 19B prikazuju poravnavanje sekvence varijabilnih teških lanaca, odnosno varijabilnih lakih lanaca.
6.3.1 Analiza vezivanja i blokiranja liganda anti-CTLA-4 antitela
[0311] Afinitet 19 anti-CTLA-4 antitela opisan iznad analiziran je površinskom plazmonskom rezonancom u testu sličnom onom opisanom u odeljku 6.1.1. Ispitani CTLA-4 antigen je bio rekombinantni humani CTLA-4-Fc (R&D Systems, br.7268-CT). Anti-CTLA-4 antitela (6 µg/ml u radnom puferu) hvatana su na površini CM5 senzorskog čipa.19 antitela se vezivalo za rekombinantni humani CTLA-4 sa afinitetom nM (podaci nisu prikazani).
[0312] Aktivnost blokiranja liganda 19 anti-CTLA-4 antitela ispitana je koristeći tehnologiju suspendovanih čipova, u testu sličnom onom opisanom u odeljku 6.1.5. Blokiranje liganda je ispitano u prisustvu različitih koncentracija anti-CTLA-4 antitela (3000 ng/ml do 12 ng/ml
1 1
pre dodavanja perlica). Kao što je prikazano na slikama 20A–20E, svih 19 anti-CTLA-4 antitela je blokiralo vezivanje CTLA-4 za CD80 i CD86.
1 2
1
14
1
1
�
1
1
��
14
14
14
14
14
14
1
11
12
1
14
1
1
1
1
1
�
11
��
1
��
1
1
1
1
1
1
11
12
1
14
1
�
1
1
�
1
11
12
�
14
1
�

Claims (14)

Patentni zahtevi
1. Izolovano antitelo koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, koje sadrži varijabilni region teškog lanca i varijabilni region lakog lanca, naznačeno time što varijabilni region teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu: 7, a varijabilni region lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8.
2. Izolovano antitelo iz zahteva 1, naznačeno time što antitelo sadrži varijabilni region teškog lanca izabran iz grupe koja se sastoji od konstantnog regiona humanog IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1i IgA2.
3. Izolovano antitelo iz zahteva 1 ili 2, naznačeno time što antitelo sadrži varijabilni region lakog lanca izabran iz grupe koja se sastoji od konstantnog regiona humanog IgGκ i IgGλ.
4. Izolovano antitelo iz bilo kog od zahteva 1–3, naznačeno time što antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 93 i/ili sadrži laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13.
5. Izolovano antitelo iz bilo kog od zahteva 1–3, naznačeno time što antitelo sadrži teški lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12 i/ili sadrži laki lanac koji sadrži aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13.
6. Izolovano antitelo iz bilo kog od zahteva 1–3, naznačeno time što antitelo sadrži teški lanac i laki lanac, naznačeno time što aminokiselinska sekvenca teškog lanca se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 93, i naznačeno time što aminokiselinska sekvenca lakog lanca se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 13.
7. Izolovano antitelo iz bilo kog od zahteva 1–3, naznačeno time što antitelo sadrži teški lanac i laki lanac, naznačeno time što aminokiselinska sekvenca teškog lanca se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 12, i naznačeno time što aminokiselinska sekvenca lakog lanca se sastoji od aminokiselinske sekvence SEQ ID NO: 13.
8. Izolovano antitelo iz bilo kog od prethodnih zahteva, naznačeno time što antitelo je bispecifično.
9. Farmaceutska kompozicija koja sadrži antitelo iz bilo kog od zahteva 1–8 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens.
10. Izolovani polinukleotid koji kodira:
- varijabilni region teškog lanca antitela iz bilo kog od zahteva 1–8 i varijabilni region lakog lanca antitela iz bilo kog od zahteva 1–8, ili
- teški lanac antitela iz bilo kog od zahteva 1–8 i laki lanac antitela iz bilo kog od zahteva 1– 8.
11. Vektor koji sadrži polinukleotid iz zahteva 10.
12. Rekombinantna ćelija domaćin koja sadrži polinukleotid iz zahteva 10 ili vektor iz zahteva 11.
13. Postupak za proizvodnju antitela koje se specifično vezuje za humani CTLA-4 protein, pri čemu postupak sadrži uzgajanje ćelije domaćina iz zahteva 12 tako da se eksprimira polinukleotid i proizvodi se antitelo.
14. Izolovano antitelo iz bilo kog od zahteva 1–8 ili farmaceutska kompozicija iz zahteva 9 za primenu u postupku za:
(a) lečenje raka; i/ili
(b) lečenje infektivne bolesti.
1
RS20200805A 2015-05-29 2016-05-27 Anti-ctla-4 antitela i postupci za njihovu primenu RS60792B1 (sr)

Applications Claiming Priority (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562168391P 2015-05-29 2015-05-29
US201562182363P 2015-06-19 2015-06-19
US201562190653P 2015-07-09 2015-07-09
US201562257202P 2015-11-18 2015-11-18
US201662280263P 2016-01-19 2016-01-19
US201662292500P 2016-02-08 2016-02-08
US201662294558P 2016-02-12 2016-02-12
US201662323226P 2016-04-15 2016-04-15
EP16728509.7A EP3303394B1 (en) 2015-05-29 2016-05-27 Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
PCT/US2016/034508 WO2016196237A1 (en) 2015-05-29 2016-05-27 Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS60792B1 true RS60792B1 (sr) 2020-10-30

Family

ID=56118035

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20200805A RS60792B1 (sr) 2015-05-29 2016-05-27 Anti-ctla-4 antitela i postupci za njihovu primenu

Country Status (25)

Country Link
US (4) US10144779B2 (sr)
EP (2) EP3303394B1 (sr)
JP (2) JP6900323B2 (sr)
KR (2) KR102492532B1 (sr)
CN (2) CN107849144B (sr)
AU (3) AU2016271591A1 (sr)
BR (1) BR112017025564B8 (sr)
CA (1) CA2986765A1 (sr)
CL (1) CL2017003023A1 (sr)
CO (1) CO2017013398A2 (sr)
DK (1) DK3303394T3 (sr)
ES (1) ES2803655T3 (sr)
HR (1) HRP20201031T1 (sr)
HU (1) HUE050750T2 (sr)
IL (2) IL255468B (sr)
LT (1) LT3303394T (sr)
MA (2) MA53355A (sr)
MX (2) MX2017015046A (sr)
PE (1) PE20180672A1 (sr)
PL (1) PL3303394T3 (sr)
PT (1) PT3303394T (sr)
RS (1) RS60792B1 (sr)
SG (1) SG10201913500TA (sr)
SI (1) SI3303394T1 (sr)
WO (1) WO2016196237A1 (sr)

Families Citing this family (133)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9890218B2 (en) 2011-06-30 2018-02-13 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Heterodimerized polypeptide
SI3303394T1 (sl) 2015-05-29 2020-10-30 Agenus Inc. Protitelesa proti-CTLA-4 in postopki njihove uporabe
CN114605548A (zh) 2015-09-01 2022-06-10 艾吉纳斯公司 抗-pd-1抗体及其使用方法
CR20180279A (es) 2015-11-18 2018-08-24 Merck Sharp & Dohme Enlazadores de ctla4
US20170199961A1 (en) 2015-12-16 2017-07-13 Gritstone Oncology, Inc. Neoantigen Identification, Manufacture, and Use
US11542332B2 (en) 2016-03-26 2023-01-03 Bioatla, Inc. Anti-CTLA4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
TWI640536B (zh) 2016-06-20 2018-11-11 克馬伯有限公司 抗體
WO2018041121A1 (en) 2016-08-31 2018-03-08 Beijing Biocytogen Co., Ltd Genetically modified non-human animal with human or chimeric ctla-4
CN107815467B (zh) 2016-08-31 2021-03-16 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 人源化基因改造动物模型的制备方法及应用
CN107815468B (zh) 2016-08-31 2021-03-16 百奥赛图(北京)医药科技股份有限公司 人源化基因改造动物模型的制备方法及应用
KR20240019398A (ko) 2016-10-28 2024-02-14 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 항-pd-1 항체를 사용하여 요로상피 암종을 치료하는 방법
US11013802B2 (en) 2016-12-07 2021-05-25 Agenus Inc. Anti-CTLA-4 antibodies and methods of use thereof
CN118634323A (zh) 2016-12-07 2024-09-13 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法
EP4491234A3 (en) 2017-02-08 2025-04-09 Dragonfly Therapeutics, Inc. Multi-specific binding proteins for activation of natural killer cells and therapeutic uses thereof to treat cancer
TWI674261B (zh) 2017-02-17 2019-10-11 美商英能腫瘤免疫股份有限公司 Nlrp3 調節劑
BR112019017197A2 (pt) 2017-02-20 2020-04-14 Dragonfly Therapeutics, Inc. proteínas que se ligam a her2, nkg2d e cd16
CN110545844A (zh) * 2017-02-21 2019-12-06 瑞美德生物医药科技有限公司 使用结合细胞毒性t淋巴细胞抗原-4(ctla-4)的抗体的癌症治疗
CN116440257A (zh) * 2017-02-28 2023-07-18 百时美施贵宝公司 具有增强的adcc的抗ctla-4抗体增强对疫苗的免疫应答的用途
IL269026B2 (en) 2017-03-31 2024-12-01 Bristol Myers Squibb Co Anti-pd-1 antibodies for treating tumors in high tumor mutational burden (tmb) patients
TWI788340B (zh) 2017-04-07 2023-01-01 美商必治妥美雅史谷比公司 抗icos促效劑抗體及其用途
JP7173993B2 (ja) * 2017-05-19 2022-11-17 ウーシー バイオロジクス（シャンハイ）カンパニー リミテッド 細胞傷害性ｔリンパ球関連タンパク質４（ｃｔｌａ－４）に対する新規モノクローナル抗体
CN116478289A (zh) * 2017-05-19 2023-07-25 上海药明生物技术有限公司 一种新的ctla-4单克隆抗体
US20210340250A1 (en) 2017-05-30 2021-11-04 Bristol-Myers Squibb Company Compositions comprising a combination of an anti-lag-3 antibody, a pd-1 pathway inhibitor, and an immunotherapeutic agent
CN111793060B (zh) 2017-07-14 2023-06-06 先天肿瘤免疫公司 Nlrp3调节剂
TWI799432B (zh) * 2017-07-27 2023-04-21 美商再生元醫藥公司 抗ctla-4抗體及其用途
US10363272B2 (en) * 2017-08-31 2019-07-30 Io Therapeutics, Inc. RAR selective agonists in combination with immune modulators for cancer immunotherapy
WO2019056281A1 (en) * 2017-09-21 2019-03-28 Eucure (Beijing) Biopharma Co., Ltd ANTI-CTLA4 ANTIBODIES AND USES THEREOF
WO2019067913A1 (en) 2017-09-29 2019-04-04 Bristol-Myers Squibb Company COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATING CANCER
ES3029080T3 (en) 2017-10-10 2025-06-23 Seattle Project Corp Neoantigen identification using hotspots
KR20200064132A (ko) 2017-10-15 2020-06-05 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
EP3710057A1 (en) 2017-11-14 2020-09-23 Pfizer Inc Ezh2 inhibitor combination therapies
US11885815B2 (en) 2017-11-22 2024-01-30 Gritstone Bio, Inc. Reducing junction epitope presentation for neoantigens
CN111629731A (zh) 2018-01-22 2020-09-04 百时美施贵宝公司 治疗癌症的组合物和方法
PE20220278A1 (es) 2018-02-08 2022-02-25 Dragonfly Therapeutics Inc Dominios variables de anticuerpos que se dirigen al receptor nkg2d
AU2019218125B2 (en) 2018-02-08 2025-03-13 Dragonfly Therapeutics, Inc. Combination therapy of cancer involving multi-specific binding proteins that activate natural killer cells
TW201942134A (zh) 2018-02-20 2019-11-01 美商蜻蜓醫療公司 結合cd33、nkg2d及cd16之多特異性結合蛋白及使用方法
CN110272490B (zh) * 2018-03-14 2021-05-14 上海开拓者生物医药有限公司 靶向ctla-4抗体、其制备方法和用途
CN112218892B (zh) * 2018-03-19 2023-04-25 上海药明生物技术有限公司 新型抗ctla-4抗体多肽
JP2021518603A (ja) * 2018-03-20 2021-08-02 シートムエックス セラピューティクス，インコーポレイテッド 哺乳動物対象における活性化可能抗体種の定量薬理学モデリングのためのシステムおよび方法
BR112020018539A2 (pt) 2018-03-23 2020-12-29 Bristol-Myers Squibb Company Anticorpos contra mica e/ou micb e usos dos mesmos
KR20200139724A (ko) 2018-03-30 2020-12-14 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 종양을 치료하는 방법
JP7351850B2 (ja) 2018-04-25 2023-09-27 イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッド Ｎｌｒｐ３修飾因子
EA202091888A1 (ru) 2018-08-08 2020-10-23 Драгонфлай Терапьютикс, Инк. Вариабельные домены антител, нацеленные на рецептор nkg2d
KR20250112921A (ko) 2018-08-08 2025-07-24 드래곤플라이 쎄라퓨틱스, 인크. Nkg2d, cd16 및 종양 관련 항원에 결합하는 단백질
EA202190468A1 (ru) 2018-08-08 2021-07-06 Драгонфлай Терапьютикс, Инк. Мультиспецифические связывающие белки, которые связывают bcma, nkg2d и cd16, и способы их применения
WO2020037094A1 (en) 2018-08-16 2020-02-20 Innate Tumor Immunity, Inc. Substitued 4-amino-1h-imidazo[4,5-c]quinoline compounds and improved methods for their preparation
WO2020037091A1 (en) 2018-08-16 2020-02-20 Innate Tumor Immunity, Inc. Imidazo[4,5-c]quinoline derived nlrp3-modulators
KR102817037B1 (ko) 2018-08-16 2025-06-04 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 이미다조[4,5-c]퀴놀린 유래 NLRP3-조정제
WO2020058762A1 (en) * 2018-09-20 2020-03-26 Tikcro Technologies Ltd Antibodies specific to ctla-4 and uses thereof
US12479917B2 (en) 2018-10-23 2025-11-25 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating NSCLC comprising administering platinum doublet chemotherapy followed by an anti-PD-1 antibody and an anti-CTLA-4 antibody
NZ775959A (en) * 2018-10-31 2022-08-26 Bioatla Inc Anti-ctla4 antibodies, antibody fragments, their immunoconjugates and uses thereof
MY205758A (en) 2018-11-16 2024-11-12 Bristol Myers Squibb Co Anti-nkg2a antibodies and uses thereof
US20220008515A1 (en) 2018-11-16 2022-01-13 Neoimmunetech, Inc. Method of treating a tumor with a combination of il-7 protein and an immune checkpoint inhibitor
EP3898677A1 (en) 2018-12-21 2021-10-27 OSE Immunotherapeutics Bifunctional anti-pd-1/il-7 molecule
KR20210141447A (ko) 2018-12-26 2021-11-23 실리오 디벨럽먼트, 인크. 항-ctla4 항체 및 이의 사용 방법
IL316757A (en) * 2018-12-27 2025-01-01 Gigagen Inc Anti-CTLA-4 binding proteins and methods of using them
SG11202106898VA (en) 2018-12-28 2021-07-29 Transgene Sa M2-defective poxvirus
CN113301962A (zh) 2019-01-14 2021-08-24 先天肿瘤免疫公司 用于治疗癌症的杂环nlrp3调节剂
JP7506080B2 (ja) 2019-01-14 2024-06-25 イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッド Ｎｌｒｐ３モジュレーター
JP7373571B2 (ja) 2019-01-14 2023-11-02 イネイト・テューマー・イミュニティ・インコーポレイテッド がん治療に用いるためのｎｌｒｐ３モジュレーターとしての置換キナゾリン
KR102865929B1 (ko) 2019-01-14 2025-09-29 인네이트 튜머 이뮤니티, 인코포레이티드 Nlrp3 조정제
WO2020165374A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecule comprising il-15ra
CN113631189A (zh) 2019-03-13 2021-11-09 默沙东公司 包含ctla-4和pd-1封闭剂的抗癌联合治疗
CN113891748A (zh) 2019-03-28 2022-01-04 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
CN113677402A (zh) 2019-03-28 2021-11-19 百时美施贵宝公司 治疗肿瘤的方法
PE20220763A1 (es) 2019-05-08 2022-05-16 Janssen Biotech Inc Materiales y metodos para modular la inmunidad mediada por celulas t
WO2020243568A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject suitable for an immuno-oncology (i-o) therapy
CN114174537A (zh) 2019-05-30 2022-03-11 百时美施贵宝公司 细胞定位特征和组合疗法
WO2020243563A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures for suitability to immuno-oncology therapy
WO2021041954A2 (en) * 2019-08-28 2021-03-04 The Research Foundation For The State University Of New York Targeted delivery of tumor matrix modifying enzymes
WO2021055994A1 (en) 2019-09-22 2021-03-25 Bristol-Myers Squibb Company Quantitative spatial profiling for lag-3 antagonist therapy
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
WO2021092220A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
CN115942973A (zh) 2019-11-08 2023-04-07 百时美施贵宝公司 用于黑色素瘤的lag-3拮抗剂疗法
WO2021122866A1 (en) 2019-12-17 2021-06-24 Ose Immunotherapeutics Bifunctional molecules comprising an il-7 variant
JP2023510108A (ja) 2019-12-19 2023-03-13 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー Ｄｇｋ阻害剤およびチェックポイントアンタゴニストの組み合わせ
EP4082570B1 (en) 2019-12-27 2026-02-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-ctla-4 antibody and use thereof
EP4087842A1 (en) 2020-01-10 2022-11-16 Innate Tumor Immunity, Inc. Nlrp3 modulators
EP4100426A1 (en) 2020-02-06 2022-12-14 Bristol-Myers Squibb Company Il-10 and uses thereof
JP2023524639A (ja) 2020-04-22 2023-06-13 アイオバンス バイオセラピューティクス，インコーポレイテッド 患者特異的免疫療法用細胞の製造調整システム及び調整方法
EP4146271A4 (en) 2020-05-06 2024-09-04 Dragonfly Therapeutics, Inc. PROTEINS THAT BIND NKG2D, CD16 AND CLEC12A
AU2021299338A1 (en) * 2020-07-02 2023-02-23 Gigagen, Inc. Anti-CTLA-4 binding proteins and methods of use thereof
EP4204095A1 (en) 2020-08-28 2023-07-05 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for hepatocellular carcinoma
IL300916A (en) 2020-08-31 2023-04-01 Bristol Myers Squibb Co Cell localization signature and immunotherapy
US20230372397A1 (en) 2020-10-06 2023-11-23 Iovance Biotherapeutics, Inc. Treatment of nsclc patients with tumor infiltrating lymphocyte therapies
AU2021364837A1 (en) 2020-10-23 2023-05-25 Bristol-Myers Squibb Company Lag-3 antagonist therapy for lung cancer
EP4237003A4 (en) 2020-10-28 2025-07-09 Janssen Biotech Inc COMPOSITIONS AND METHODS FOR MODULATING GAMMA DELTA CHAIN-MEDIATED IMMUNITY
WO2022112198A1 (en) 2020-11-24 2022-06-02 Worldwide Innovative Network Method to select the optimal immune checkpoint therapies
WO2022120179A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Bristol-Myers Squibb Company Multi-tumor gene signatures and uses thereof
MX2023007650A (es) 2020-12-28 2023-09-11 Bristol Myers Squibb Co Metodos de tratamiento de tumores.
WO2022146947A1 (en) 2020-12-28 2022-07-07 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
US12377144B2 (en) 2021-03-03 2025-08-05 Dragonfly Therapeutics, Inc. Methods of treating cancer using multi-specific binding proteins that bind NKG2D, CD16 and a tumor-associated antigen
KR20240032711A (ko) 2021-03-25 2024-03-12 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. T-세포 공배양 효능 검정 및 세포 치료제와 함께 사용하기 위한 방법 및 조성물
JP2024514530A (ja) 2021-04-02 2024-04-02 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 切断型ｃｄｃｐ１に対する抗体およびその使用
WO2022214652A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 Ose Immunotherapeutics Scaffold for bifunctioanl molecules comprising pd-1 or cd28 and sirp binding domains
CA3213917A1 (en) 2021-04-09 2022-10-13 Nicolas Poirier New scaffold for bifunctional molecules with improved properties
CN117545779B (zh) 2021-06-25 2025-04-04 中外制药株式会社 抗ctla-4抗体的用途
US12448451B2 (en) 2021-06-25 2025-10-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Anti-CTLA-4 antibody and use thereof
CN117616123B (zh) 2021-06-25 2024-11-08 中外制药株式会社 抗ctla-4抗体
IL312027A (en) 2021-10-28 2024-06-01 Lyell Immunopharma Inc Methods for culturing immune cells
CN118176214A (zh) 2021-10-29 2024-06-11 百时美施贵宝公司 血液癌症的lag-3拮抗剂疗法
CN119836296A (zh) 2021-12-30 2025-04-15 新免疫技术有限公司 用il-7蛋白和vegf拮抗剂的组合治疗肿瘤的方法
CN114437220B (zh) * 2022-01-24 2023-04-14 广东医科大学 一种抗ctla-4的纳米抗体、编码基因、重组纳米抗体、重组载体、重组菌及其应用
MX2024008831A (es) 2022-01-26 2024-07-25 Bristol Myers Squibb Co Terapia combinada para carcinoma hepatocelular.
MX2024010310A (es) 2022-02-25 2024-08-28 Bristol Myers Squibb Co Terapia de combinacion para carcinoma colorrectal.
WO2023168404A1 (en) 2022-03-04 2023-09-07 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating a tumor
CA3254481A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag USE OF ANTI-CLAUDIN-1 ANTIBODIES TO INCREASE T LYMPHOCYTE AVAILABILITY
JP2025509749A (ja) 2022-03-18 2025-04-11 ブリストル－マイヤーズ スクイブ カンパニー ポリペプチドの単離方法
US20260042840A1 (en) 2022-04-07 2026-02-12 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treating tumor
CA3248034A1 (en) 2022-04-15 2023-10-19 Iovance Biotherapeutics, Inc. METHODS FOR EXPANSION OF TIL CELLS BY MEANS OF SPECIFIC CYTOKINE COMBINATIONS AND/OR AKT INHIBITOR TREATMENT
WO2023213763A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Transgene Poxvirus encoding a binding agent comprising an anti- pd-l1 sdab
WO2023213764A1 (en) 2022-05-02 2023-11-09 Transgene Fusion polypeptide comprising an anti-pd-l1 sdab and a member of the tnfsf
EP4531916A1 (en) 2022-06-02 2025-04-09 Bristol-Myers Squibb Company Antibody compositions and methods of use thereof
US20260015405A1 (en) 2022-07-01 2026-01-15 Transgene Fusion protein comprising a surfactant-protein-d and a member of the tnfsf
CN115845039A (zh) * 2022-07-01 2023-03-28 可蓝赛生物医药(上海)有限公司 一种广谱多肽肿瘤疫苗组成
WO2024003360A1 (en) 2022-07-01 2024-01-04 Institut Curie Biomarkers and uses thereof for the treatment of neuroblastoma
JP2025525886A (ja) 2022-08-02 2025-08-07 オーエスイー・イミュノセラピューティクス Ｃｄ２８に対する多機能性分子
AU2023368748A1 (en) * 2022-10-28 2025-05-08 Genor Biopharma Co., Ltd. Novel anti-ctla4 antibody
WO2024102722A1 (en) 2022-11-07 2024-05-16 Neoimmunetech, Inc. Methods of treating a tumor with an unmethylated mgmt promoter
KR20250122544A (ko) 2022-11-21 2025-08-13 이오반스 바이오테라퓨틱스, 인크. 종양 침윤 림프구의 확장을 위한 2차원 공정 및 이를 통한 요법
IL321575A (en) 2022-12-21 2025-08-01 Bristol Myers Squibb Co Combination therapy for lung cancer
WO2024196952A1 (en) 2023-03-20 2024-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Tumor subtype assessment for cancer therapy
EP4687990A1 (en) 2023-03-30 2026-02-11 Ose Immunotherapeutics Method of synthesis of targeted lipid nanoparticle and uses thereof
WO2024200823A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Ose Immunotherapeutics Lipid-based nanoparticle targeted at activated immune cells for the expression of immune cell enhancing molecule and use thereof
WO2025006811A1 (en) 2023-06-27 2025-01-02 Lyell Immunopharma, Inc. Methods for culturing immune cells
CN121712571A (zh) 2023-08-15 2026-03-20 百时美施贵宝公司 陶瓷羟基磷灰石色谱流通法
US20250215087A1 (en) 2023-12-29 2025-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Combination therapy of kras inhibitor and treg depleting agent
WO2025184208A1 (en) 2024-02-27 2025-09-04 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ceacam5 antibodies and uses thereof
US12521446B2 (en) 2024-02-27 2026-01-13 Bristol-Myers Squibb Company Anti-CEACAM5 antibody drug conjugates
WO2025202222A1 (en) 2024-03-25 2025-10-02 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Therapeutic use of sting and tlrs agonists to induce p16 expression in immune cells
WO2025242835A1 (en) 2024-05-22 2025-11-27 Ose Immunotherapeutics Molecules comprising masking linkers and uses thereof for the treatment of cancer
WO2025245489A1 (en) 2024-05-24 2025-11-27 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of tumors in subjects having fgl-1 positive samples
WO2026006604A1 (en) 2024-06-26 2026-01-02 Lyell Immunopharma, Inc. Feeder cell replacement

Family Cites Families (278)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4044126A (en) 1972-04-20 1977-08-23 Allen & Hanburys Limited Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof
GB1429184A (en) 1972-04-20 1976-03-24 Allen & Hanburys Ltd Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
DE3668186D1 (de) 1985-04-01 1990-02-15 Celltech Ltd Transformierte myeloma-zell-linie und dieselbe verwendendes verfahren zur expression eines gens, das ein eukaryontisches polypeptid kodiert.
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
GB8607679D0 (en) 1986-03-27 1986-04-30 Winter G P Recombinant dna product
US5869620A (en) 1986-09-02 1999-02-09 Enzon, Inc. Multivalent antigen-binding proteins
GB8717430D0 (en) 1987-07-23 1987-08-26 Celltech Ltd Recombinant dna product
EP1541682A3 (en) 1988-09-02 2005-07-06 Dyax Corp. Generation and selection of recombinant varied binding proteins
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5413923A (en) 1989-07-25 1995-05-09 Cell Genesys, Inc. Homologous recombination for universal donor cells and chimeric mammalian hosts
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
WO1991010737A1 (en) 1990-01-11 1991-07-25 Molecular Affinities Corporation Production of antibodies using gene libraries
US5780225A (en) 1990-01-12 1998-07-14 Stratagene Method for generating libaries of antibody genes comprising amplification of diverse antibody DNAs and methods for using these libraries for the production of diverse antigen combining molecules
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
ES2087997T3 (es) 1990-01-12 1996-08-01 Cell Genesys Inc Generacion de anticuerpos xenogenicos.
IT1246382B (it) 1990-04-17 1994-11-18 Eurand Int Metodo per la cessione mirata e controllata di farmaci nell'intestino e particolarmente nel colon
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
GB9015198D0 (en) 1990-07-10 1990-08-29 Brien Caroline J O Binding substance
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
ES2108048T3 (es) 1990-08-29 1997-12-16 Genpharm Int Produccion y utilizacion de animales inferiores transgenicos capaces de producir anticuerpos heterologos.
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5698426A (en) 1990-09-28 1997-12-16 Ixsys, Incorporated Surface expression libraries of heteromeric receptors
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
ATE414768T1 (de) 1991-04-10 2008-12-15 Scripps Research Inst Bibliotheken heterodimerer rezeptoren mittels phagemiden
DE69233482T2 (de) 1991-05-17 2006-01-12 Merck & Co., Inc. Verfahren zur Verminderung der Immunogenität der variablen Antikörperdomänen
CA2110799A1 (en) 1991-06-14 1992-12-23 Arnold H. Horwitz Microbially-produced antibody fragments and their conjugates
EP0940468A1 (en) 1991-06-14 1999-09-08 Genentech, Inc. Humanized antibody variable domain
US5851795A (en) 1991-06-27 1998-12-22 Bristol-Myers Squibb Company Soluble CTLA4 molecules and uses thereof
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
ES2136092T3 (es) 1991-09-23 1999-11-16 Medical Res Council Procedimientos para la produccion de anticuerpos humanizados.
ATE463573T1 (de) 1991-12-02 2010-04-15 Medimmune Ltd Herstellung von autoantikörpern auf phagenoberflächen ausgehend von antikörpersegmentbibliotheken
EP1291360A1 (en) 1991-12-13 2003-03-12 Xoma Corporation Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof
GB9203459D0 (en) 1992-02-19 1992-04-08 Scotgen Ltd Antibodies with germ-line variable regions
US5733743A (en) 1992-03-24 1998-03-31 Cambridge Antibody Technology Limited Methods for producing members of specific binding pairs
US6174666B1 (en) 1992-03-27 2001-01-16 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method of eliminating inhibitory/instability regions from mRNA
US6010715A (en) 1992-04-01 2000-01-04 Bertek, Inc. Transdermal patch incorporating a polymer film incorporated with an active agent
US6024975A (en) 1992-04-08 2000-02-15 Americare International Diagnostics, Inc. Method of transdermally administering high molecular weight drugs with a polymer skin enhancer
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
EP1498427B1 (en) 1992-08-21 2009-12-16 Vrije Universiteit Brussel Immunoglobulins devoid of light chains
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
DK0672142T3 (da) 1992-12-04 2001-06-18 Medical Res Council Multivalente og multispecifikke bindingsproteiner samt fremstilling og anvendelse af disse
US6274552B1 (en) 1993-03-18 2001-08-14 Cytimmune Sciences, Inc. Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5523092A (en) 1993-04-14 1996-06-04 Emory University Device for local drug delivery and methods for using the same
US5985307A (en) 1993-04-14 1999-11-16 Emory University Device and method for non-occlusive localized drug delivery
DK0698097T3 (da) 1993-04-29 2001-10-08 Unilever Nv Produktion af antistoffer eller (funktionaliserede) fragmenter deraf afledt af Camelidae-immunoglobuliner med tung kæde
US6004534A (en) 1993-07-23 1999-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery
WO1995015982A2 (en) 1993-12-08 1995-06-15 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
US5997873A (en) 1994-01-13 1999-12-07 Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York Method of preparation of heat shock protein 70-peptide complexes
DE69531148T2 (de) 1994-01-31 2004-04-29 Trustees Of Boston University, Boston Bibliotheken aus polyklonalen antikörpern
US6719972B1 (en) 1994-06-03 2004-04-13 Repligen Corporation Methods of inhibiting T cell proliferation or IL-2 accumulation with CTLA4- specific antibodies
US5516637A (en) 1994-06-10 1996-05-14 Dade International Inc. Method involving display of protein binding pairs on the surface of bacterial pili and bacteriophage
US5759542A (en) 1994-08-05 1998-06-02 New England Deaconess Hospital Corporation Compositions and methods for the delivery of drugs by platelets for the treatment of cardiovascular and other diseases
US5660854A (en) 1994-11-28 1997-08-26 Haynes; Duncan H Drug releasing surgical implant or dressing material
US5983134A (en) 1995-04-23 1999-11-09 Electromagnetic Bracing Systems Inc. Electrophoretic cuff apparatus drug delivery system
EP0822830B1 (en) 1995-04-27 2008-04-02 Amgen Fremont Inc. Human anti-IL-8 antibodies, derived from immunized xenomice
CA2219486A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6316652B1 (en) 1995-06-06 2001-11-13 Kosta Steliou Drug mitochondrial targeting agents
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US6167301A (en) 1995-08-29 2000-12-26 Flower; Ronald J. Iontophoretic drug delivery device having high-efficiency DC-to-DC energy conversion circuit
US5935576A (en) 1995-09-13 1999-08-10 Fordham University Compositions and methods for the treatment and prevention of neoplastic diseases using heat shock proteins complexed with exogenous antigens
GB9601081D0 (en) 1995-10-06 1996-03-20 Cambridge Antibody Tech Specific binding members for human transforming growth factor beta;materials and methods
US5989830A (en) 1995-10-16 1999-11-23 Unilever Patent Holdings Bv Bifunctional or bivalent antibody fragment analogue
US6039975A (en) 1995-10-17 2000-03-21 Hoffman-La Roche Inc. Colon targeted delivery system
JP2978435B2 (ja) 1996-01-24 1999-11-15 チッソ株式会社 アクリロキシプロピルシランの製造方法
TW345603B (en) 1996-05-29 1998-11-21 Gmundner Fertigteile Gmbh A noise control device for tracks
US6027947A (en) 1996-08-20 2000-02-22 Ramtron International Corporation Partially or completely encapsulated top electrode of a ferroelectric capacitor
US5985317A (en) 1996-09-06 1999-11-16 Theratech, Inc. Pressure sensitive adhesive matrix patches for transdermal delivery of salts of pharmaceutical agents
AU722289B2 (en) 1996-10-01 2000-07-27 Aptalis Pharmatech, Inc. Taste-masked microcapsule compositions and methods of manufacture
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
US6131570A (en) 1998-06-30 2000-10-17 Aradigm Corporation Temperature controlling device for aerosol drug delivery
EP2305027B1 (en) 1996-12-03 2014-07-02 Amgen Fremont Inc. Transgenic mammals having human Ig loci including plural VH and Vkappa regions and antibodies produced therefrom
US20060034844A1 (en) 1996-12-04 2006-02-16 The Regents Of The University Of California Stimulation of T cells against self antigens using CTLA-4 blocking agents
US5860957A (en) 1997-02-07 1999-01-19 Sarcos, Inc. Multipathway electronically-controlled drug delivery system
US6017540A (en) 1997-02-07 2000-01-25 Fordham University Prevention and treatment of primary and metastatic neoplastic diseases and infectious diseases with heat shock/stress protein-peptide complexes
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
JP2001523958A (ja) 1997-03-21 2001-11-27 ブライハム アンド ウィミンズ ホスピタル，インコーポレイテッド 免疫療法のｃｔｌａ−４結合ペプチド
SI0970126T1 (en) 1997-04-14 2001-08-31 Micromet Ag Novel method for the production of antihuman antigen receptors and uses thereof
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US20020062010A1 (en) 1997-05-02 2002-05-23 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US7951917B1 (en) 1997-05-02 2011-05-31 Genentech, Inc. Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
US5948433A (en) 1997-08-21 1999-09-07 Bertek, Inc. Transdermal patch
CN1152673C (zh) 1997-10-28 2004-06-09 坂东化学株式会社 皮肤贴附药片及其基片的制造方法
US5948646A (en) 1997-12-11 1999-09-07 Fordham University Methods for preparation of vaccines against cancer comprising heat shock protein-peptide complexes
CA2323746A1 (en) 1998-03-19 1999-09-23 Heska Corporation T cell costimulatory proteins, sequences and uses thereof
US6048736A (en) 1998-04-29 2000-04-11 Kosak; Kenneth M. Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs
JP5341287B2 (ja) 1998-12-03 2013-11-13 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア Ｃｔｌａ−４遮断薬を用いる自己抗原に対するｔ細胞の刺激
EE05627B1 (et) 1998-12-23 2013-02-15 Pfizer Inc. CTLA-4 vastased inimese monoklonaalsed antikehad
US6271359B1 (en) 1999-04-14 2001-08-07 Musc Foundation For Research Development Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes
US6256533B1 (en) 1999-06-09 2001-07-03 The Procter & Gamble Company Apparatus and method for using an intracutaneous microneedle array
WO2001014557A1 (en) 1999-08-23 2001-03-01 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Pd-1, a receptor for b7-4, and uses therefor
NZ517202A (en) 1999-08-24 2004-05-28 Medarex Inc Human CTLA-4 antibodies and their uses
US7605238B2 (en) 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
DK1233987T3 (da) 1999-11-29 2009-09-28 Bac Ip B V Immobiliserede enkelt-domæne antigenbindende molekyler
EP3225632B1 (en) 1999-11-30 2020-05-06 Mayo Foundation for Medical Education and Research Antibodies binding to b7-h1, a novel immunoregulatory molecule
EP1261376A1 (en) 2000-01-27 2002-12-04 Genetics Institute, LLC Antibodies against ctla4(cd152), conjugates comprising same, and uses thereof
US6261595B1 (en) 2000-02-29 2001-07-17 Zars, Inc. Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device
EP1274733A1 (en) 2000-04-12 2003-01-15 Genetics Institute, Inc. Surface-bound antigen binding portions of antibodies that bind to ctla-4 and cd28 and uses therefor
JP3523245B1 (ja) 2000-11-30 2004-04-26 メダレックス，インコーポレーテッド ヒト抗体作製用トランスジェニック染色体導入齧歯動物
IL149701A0 (en) * 2001-05-23 2002-11-10 Pfizer Prod Inc Use of anti-ctla-4 antibodies
IL166244A0 (en) 2001-07-12 2006-01-15 Jefferson Foote Super humanized antibodies
CA2466279A1 (en) 2001-11-13 2003-05-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Agents that modulate immune cell activation and methods of use thereof
AUPS054702A0 (en) 2002-02-14 2002-03-07 Immunaid Pty Ltd Cancer therapy
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
US20040014194A1 (en) 2002-03-27 2004-01-22 Schering Corporation Beta-secretase crystals and methods for preparing and using the same
IL164287A0 (en) 2002-04-12 2005-12-18 Medarex Inc Methods of treatment using ctla-4 antibodies
JP2005533015A (ja) 2002-05-02 2005-11-04 ユニバーシティー オブ コネティカット ヘルス センター 抗体療法の有効性を増強するための熱ショックタンパク質の使用
IL149820A0 (en) 2002-05-23 2002-11-10 Curetech Ltd Humanized immunomodulatory monoclonal antibodies for the treatment of neoplastic disease or immunodeficiency
EP2206517B1 (en) 2002-07-03 2023-08-02 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Immunopotentiating compositions comprising anti-PD-L1 antibodies
AU2003260871A1 (en) 2002-09-30 2004-04-19 Pfizer Products Inc. Hybridomas producing high levels of human sequence antibody
CN1753912B (zh) 2002-12-23 2011-11-02 惠氏公司 抗pd-1抗体及其用途
US9068234B2 (en) 2003-01-21 2015-06-30 Ptc Therapeutics, Inc. Methods and agents for screening for compounds capable of modulating gene expression
US8388955B2 (en) 2003-03-03 2013-03-05 Xencor, Inc. Fc variants
US7465446B2 (en) 2003-05-30 2008-12-16 Medarex, Inc. Surrogate therapeutic endpoint for anti-CTLA4-based immunotherapy of disease
WO2005035575A2 (en) 2003-08-22 2005-04-21 Medimmune, Inc. Humanization of antibodies
CA2560919A1 (en) 2004-03-26 2005-10-06 Pfizer Products Inc. Uses of anti-ctla-4 antibodies
US7494779B2 (en) 2004-06-14 2009-02-24 Li-Te Chin Method for producing human antibodies to human CD152 with properties of agonist, antagonist, or inverse agonist
US20060057626A1 (en) 2004-09-03 2006-03-16 Nichol Geoffrey M Assessment of CTLA-4 polymorphisms in CTLA-4 blockade therapy
EP1793858A4 (en) 2004-09-08 2008-12-10 Univ Ohio State Res Found HUMAN MONOCLONAL ANTI-CTLA4 ANTIBODIES FOR CANCER TREATMENT
DE102004063494A1 (de) 2004-12-23 2006-07-13 Tegenero Ag Antikörper
WO2006096461A2 (en) 2005-03-08 2006-09-14 Pharmacia & Upjohn Company Llc Composition comprising an antibody against macrophage colony-stimulating factor (m-csf) and a chelating agent
US20060240006A1 (en) * 2005-04-20 2006-10-26 Chishih Chu Novel antibody structures derived from human germline sequences
ES2720160T3 (es) 2005-05-09 2019-07-18 Ono Pharmaceutical Co Anticuerpos monoclonales humanos contra muerte programada 1(PD-1) y métodos para tratar el cáncer usando anticuerpos dirigidos contra PD-1 solos o junto con otras sustancias inmunoterapéuticas
JP2006327937A (ja) 2005-05-23 2006-12-07 Ritsutoku Kin ヒト胚細胞系遺伝子構造を具えたヒト抗体構造及びその誘導フラグメント
CN104436190A (zh) 2005-06-08 2015-03-25 达纳-法伯癌症研究院公司 通过抑制程序性细胞死亡1(pd-1)途经治疗持续性感染和癌症的方法及组合物
EA019344B1 (ru) 2005-07-01 2014-03-31 МЕДАРЕКС, Эл.Эл.Си. Человеческие моноклональные антитела против лиганда-1 запрограммированной гибели клеток (pd-l1) и их применения
US20070243184A1 (en) 2005-11-08 2007-10-18 Steven Fischkoff Prophylaxis and treatment of enterocolitis associated with anti-ctla-4 antibody therapy
AU2006321593B2 (en) 2005-12-07 2012-10-04 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. CTLA-4 antibody dosage escalation regimens
TW200738261A (en) 2005-12-20 2007-10-16 Bristol Myers Squibb Co Stable protein formulations
EP2013348A4 (en) 2006-03-30 2009-09-02 Univ California METHOD AND COMPOSITIONS FOR LOCALIZED SECRETION OF ANTI-CTLA-4 ANTIBODIES
US7919079B2 (en) 2006-03-31 2011-04-05 Biosante Pharmaceuticals, Inc. Cancer immunotherapy compositions and methods of use
CA2647282A1 (en) 2006-04-05 2007-10-11 Pfizer Products Inc. Ctla4 antibody combination therapy
CN101074264B (zh) 2006-05-17 2011-08-17 上海抗体药物国家工程研究中心有限公司 一种重组抗ctla4单克隆抗体及其制备方法和用途
US8907065B2 (en) 2006-12-15 2014-12-09 Ablynx N.V. Polypeptides that modulate the interaction between cells of the immune system
US20100055111A1 (en) * 2007-02-14 2010-03-04 Med. College Of Georgia Research Institute, Inc. Indoleamine 2,3-dioxygenase, pd-1/pd-l pathways, and ctla4 pathways in the activation of regulatory t cells
US9244059B2 (en) 2007-04-30 2016-01-26 Immutep Parc Club Orsay Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
JP5191537B2 (ja) 2007-06-18 2013-05-08 エム・エス・ディー・オス・ベー・フェー ヒトのプログラムされたデスレセプターｐｄ−１に対する抗体
CA2693677C (en) 2007-07-12 2018-02-13 Tolerx, Inc. Combination therapies employing gitr binding molecules
PE20140196A1 (es) 2007-08-09 2014-03-19 Boehringer Ingelheim Int Anticuerpos anti-cd37
CA3128656A1 (en) 2007-08-22 2009-02-26 The Regents Of The University Of California Activatable binding polypeptides and methods of identification and use thereof
US7968300B2 (en) 2007-11-21 2011-06-28 Li-Te Chin Method of isolating regulatory T cells from human samples
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
ES2558568T3 (es) 2008-01-08 2016-02-05 Bristol-Myers Squibb Company Combinación de anticuerpo anti-CTLA4 con agentes moduladores de la tubulina para el tratamiento de enfermedades proliferativas
EP2240204A1 (en) 2008-02-04 2010-10-20 Medarex, Inc. Anti-clta-4 antibodies with reduced blocking of binding of ctla-4 to b7 and uses thereof
EP2242773B1 (en) 2008-02-11 2017-06-14 Cure Tech Ltd. Monoclonal antibodies for tumor treatment
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
PL2315756T3 (pl) 2008-07-08 2015-02-27 Incyte Holdings Corp 1,2,5-oksadiazole jako inhibitory 2,3-dioksygenazy indoloaminy
US8119129B2 (en) 2008-08-01 2012-02-21 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-CTLA4 antibody with dasatinib for the treatment of proliferative diseases
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
RS54233B1 (sr) 2008-08-25 2015-12-31 Amplimmune Inc. Kompozicije pd-1 antagonista i postupci za njihovu primenu
US8927697B2 (en) 2008-09-12 2015-01-06 Isis Innovation Limited PD-1 specific antibodies and uses thereof
BRPI0919377A2 (pt) 2008-09-26 2016-09-27 Dana Farber Cancer Inst Inc anticorpo isolado ou um fragmento ligante de antígeno do memso, ácido nucleico isolado, vetor, célula hospedeira, composição farmacêutica, método de produzir o referido anticorpo ou fragmento, uso dos mesmos, e composição compreendendo o referido anticorpo ou fragmento
HUE065752T2 (hu) 2008-12-09 2024-06-28 Hoffmann La Roche Anti-PD-L1 antitestek és felhasználásuk T-sejt funkció elõsegítésére
EP3543256A1 (en) 2009-01-12 2019-09-25 Cytomx Therapeutics Inc. Modified antibody compositions, methods of making and using thereof
GB0903325D0 (en) 2009-02-26 2009-04-08 Univ Aberdeen Antibody molecules
KR101747103B1 (ko) 2009-06-26 2017-06-14 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 천연 면역글로불린 포맷을 가지는 용이하게 분리된 이중특이성 항체
LT2769737T (lt) * 2009-07-20 2017-06-26 Bristol-Myers Squibb Company Anti-ctla4 antikūno derinys su etopozidu, skirtas sinerginiam proliferacinių ligų gydymui
US8840889B2 (en) 2009-08-13 2014-09-23 The Johns Hopkins University Methods of modulating immune function
US8435516B2 (en) 2009-10-12 2013-05-07 Pfizer Inc. Cancer treatment
GB0920258D0 (en) 2009-11-19 2010-01-06 Alligator Bioscience Ab New medical agents and use thereof
PT2504364T (pt) 2009-11-24 2017-11-14 Medimmune Ltd Agentes de ligação direcionados contra b7-h1
CN102134276A (zh) 2010-01-22 2011-07-27 上海抗体药物国家工程研究中心有限公司 一种抗ctla-4嵌合抗体
US20130202623A1 (en) 2010-02-16 2013-08-08 Nicolas Chomont Pd-1 modulation and uses thereof for modulating hiv replication
CA2791930A1 (en) 2010-03-11 2011-09-15 Kerry Louise Tyson Pd-1 antibody
MX341925B (es) 2010-03-29 2016-09-07 Zymeworks Inc Anticuerpos con funcion efectora suprimida o mejorada.
GB201103955D0 (en) * 2011-03-09 2011-04-20 Antitope Ltd Antibodies
JP6072771B2 (ja) 2011-04-20 2017-02-01 メディミューン，エルエルシー Ｂ７−ｈ１およびｐｄ−１に結合する抗体およびその他の分子
WO2012162277A1 (en) * 2011-05-25 2012-11-29 Merck Sharp & Dohme Corp. METHOD FOR PREPARING Fc-CONTAINING POLYPEPTIDES HAVING IMPROVED PROPERTIES
AU2012273182A1 (en) 2011-06-21 2014-01-16 The Johns Hopkins University Focused radiation for augmenting immune-based therapies against neoplasms
JP6240600B2 (ja) 2011-07-24 2017-11-29 キュアテク リミテッド ヒト化免疫モノクローナル抗体の変異体
EP3939613A1 (en) 2011-08-11 2022-01-19 ONO Pharmaceutical Co., Ltd. Therapeutic agent for autoimmune diseases comprising pd-1 agonist
US8920075B2 (en) 2011-09-01 2014-12-30 Halo Maritime Defense Systems, Inc. Marine barrier and gate
US20130071403A1 (en) 2011-09-20 2013-03-21 Vical Incorporated Synergistic anti-tumor efficacy using alloantigen combination immunotherapy
KR101981873B1 (ko) 2011-11-28 2019-05-23 메르크 파텐트 게엠베하 항-ｐｄ-ｌ1 항체 및 그의 용도
EP2817619B1 (en) 2012-02-23 2018-07-25 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Prediction of responsiveness to treatment with immunomodulatory therapeutics and method of monitoring abscopal effects during such treatment
WO2013142796A2 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bristol-Myers Squibb Company Methods of treatments using ctla4 antibodies
CA2871711A1 (en) 2012-05-04 2013-11-07 Pfizer Inc. Prostate-associated antigens and vaccine-based immunotherapy regimens
US9863935B2 (en) 2012-05-08 2018-01-09 H. Lee Moffitt Cancer And Research Institute, Inc. Predictive biomarkers for CTLA-4 blockade therapy and for PD-1 blockade therapy
US9212224B2 (en) 2012-05-15 2015-12-15 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies that bind PD-L1 and uses thereof
CN104736168B (zh) 2012-05-31 2018-09-21 索伦托治疗有限公司 与pd-l1结合的抗原结合蛋白
WO2013192550A2 (en) 2012-06-22 2013-12-27 Cytomx Therapeutics, Inc. Anti-jagged 1/jagged 2 cross-reactive antibodies, activatable anti-jagged antibodies and methods of use thereof
US9856314B2 (en) 2012-06-22 2018-01-02 Cytomx Therapeutics, Inc. Activatable antibodies having non-binding steric moieties and methods of using the same
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
CN104936982B (zh) 2012-08-03 2020-04-24 丹娜法伯癌症研究院 抗-pd-l1和pd-l2双结合抗体单一试剂及其使用方法
CA2886433C (en) 2012-10-04 2022-01-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Human monoclonal anti-pd-l1 antibodies and methods of use
US9789182B2 (en) 2012-10-23 2017-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Combination of anti-KIR and anti-CTLA-4 antibodies to treat cancer
EP2911669B1 (en) 2012-10-26 2024-04-10 The University of Chicago Synergistic combination of immunologic inhibitors for the treatment of cancer
AR093984A1 (es) 2012-12-21 2015-07-01 Merck Sharp & Dohme Anticuerpos que se unen a ligando 1 de muerte programada (pd-l1) humano
CN105008918A (zh) 2013-01-04 2015-10-28 西托姆克斯治疗公司 用于检测生物系统中的蛋白酶活性的组合物和方法
HRP20201113T1 (hr) 2013-03-15 2020-10-30 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Vežući proteini protiv lag-3
CA2904528C (en) * 2013-03-15 2021-01-19 Abbvie Biotherapeutics Inc. Fc variants
EP2992086B1 (en) 2013-04-30 2020-09-30 La Jolla Institute for Allergy and Immunology Modulation of regulatory t cell function via protein kinase c-eta
KR102243062B1 (ko) 2013-05-02 2021-04-21 아납티스바이오, 아이엔씨. 예정된 사멸-1에 대한 항체
US9676853B2 (en) 2013-05-31 2017-06-13 Sorrento Therapeutics, Inc. Antigen binding proteins that bind PD-1
WO2014209804A1 (en) 2013-06-24 2014-12-31 Biomed Valley Discoveries, Inc. Bispecific antibodies
CN104250302B (zh) 2013-06-26 2017-11-14 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd‑1抗体及其应用
AU2014290069B2 (en) 2013-07-16 2019-01-03 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using PD-1 axis binding antagonists and TIGIT inhibitors
CN105682683A (zh) 2013-08-02 2016-06-15 阿杜罗生物科技控股有限公司 结合cd27激动剂以及免疫检查点抑制以用于免疫刺激
CN105636983A (zh) 2013-08-22 2016-06-01 昆士兰医学研究所理事会 用于治疗癌症和病毒感染的免疫受体调节
WO2015035112A1 (en) 2013-09-05 2015-03-12 The Johns Hopkins University Cancer therapy via a combination of epigenetic modulation and immune modulation
US10077305B2 (en) 2013-09-10 2018-09-18 Medimmune Limited Antibodies against PD-1 and uses thereof
JP6623353B2 (ja) 2013-09-13 2019-12-25 ベイジーン スウィッツァーランド ゲーエムベーハー 抗ｐｄ−１抗体並びにその治療及び診断のための使用
SI3508502T1 (sl) 2013-09-20 2023-07-31 Bristol-Myers Squibb Company Kombinacija anti-lag-3 protiteles in anti-pd-1 protiteles za zdravljenje tumorjev
US10570204B2 (en) 2013-09-26 2020-02-25 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Methods for treating hematologic cancers
CN105636986B (zh) 2013-10-18 2020-05-12 瑞泽恩制药公司 包含vegf拮抗剂和抗-ctla-4抗体的组合的方法和组合物
WO2015061668A1 (en) 2013-10-25 2015-04-30 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Anti-pd-l1 monoclonal antibodies and fragments thereof
CN104558177B (zh) 2013-10-25 2020-02-18 苏州思坦维生物技术股份有限公司 拮抗抑制程序性死亡受体pd-1与其配体结合的单克隆抗体及其编码序列与用途
US20150273033A1 (en) 2013-11-05 2015-10-01 Cognate Bioservices, Inc. Combinations of checkpoint inhibitors and therapeutics to treat cancer
ES2746805T3 (es) 2013-12-12 2020-03-06 Shanghai hengrui pharmaceutical co ltd Anticuerpo de PD-1, fragmento de unión a antígeno del mismo y aplicación médica del mismo
EP4079321A1 (en) 2014-01-15 2022-10-26 Kadmon Corporation, LLC Immunomodulatory agents
TWI680138B (zh) 2014-01-23 2019-12-21 美商再生元醫藥公司 抗ｐｄ-ｌ１之人類抗體
KR20160106762A (ko) 2014-01-28 2016-09-12 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 혈액 악성종양을 치료하기 위한 항-lag-3 항체
MX381141B (es) 2014-02-10 2025-03-12 Merck Patent Gmbh INHIBICIÓN DIRIGIDA DEL FACTOR DE CRECIMIENTO TRANSFORMADOR ß (TGF ß).
EP3114144A1 (en) 2014-03-05 2017-01-11 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cancer using a combination of an anti-pd-1 antibody and another anti-cancer agent
TWI777174B (zh) 2014-03-14 2022-09-11 瑞士商諾華公司 針對lag-3之抗體分子及其用途
WO2015153820A1 (en) 2014-04-02 2015-10-08 Felder Mitchell S Ctla-4 blockade with metronomic chemotherapy for the treatment of cancer
JP2017515859A (ja) 2014-05-15 2017-06-15 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 抗ｐｄ−１抗体と他の抗癌剤の組み合わせを使用する肺癌の処置
ES2753360T3 (es) 2014-05-29 2020-04-08 Spring Bioscience Corp Anticuerpos contra PD-L1 y usos de los mismos
WO2015195163A1 (en) 2014-06-20 2015-12-23 R-Pharm Overseas, Inc. Pd-l1 antagonist fully human antibody
TWI693232B (zh) 2014-06-26 2020-05-11 美商宏觀基因股份有限公司 與pd-1和lag-3具有免疫反應性的共價結合的雙抗體和其使用方法
KR102003754B1 (ko) 2014-07-03 2019-07-25 베이진 엘티디 Pd-l1 항체와 이를 이용한 치료 및 진단
DK3552615T3 (da) 2014-07-16 2022-02-14 Transgene Onkolytisk virus til ekspression af immun-checkpoint-modulatorer
CN105330740B (zh) 2014-07-30 2018-08-17 珠海市丽珠单抗生物技术有限公司 抗pd-1抗体及其应用
CN105296433B (zh) 2014-08-01 2018-02-09 中山康方生物医药有限公司 一种ctla4抗体、其药物组合物及其用途
US9982053B2 (en) 2014-08-05 2018-05-29 MabQuest, SA Immunological reagents
JO3663B1 (ar) 2014-08-19 2020-08-27 Merck Sharp & Dohme الأجسام المضادة لمضاد lag3 وأجزاء ربط الأنتيجين
WO2016030455A1 (en) 2014-08-28 2016-03-03 Medimmune Limited Anti-b7-h1 and anti-ctla-4 antibodies for treating non-small lung cancer
WO2016030350A1 (en) 2014-08-29 2016-03-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Combination therapy of tumor-targeted il-2 variant immunocytokines and antibodies against human pd-l1
EP3191126B1 (en) 2014-09-13 2020-05-13 Novartis AG Combination therapies of alk inhibitors
EP3662903A3 (en) 2014-10-03 2020-10-14 Novartis AG Combination therapies
UY36351A (es) 2014-10-14 2016-06-01 Novartis Ag Moléculas de anticuerpo que se unen a pd-l1 y usos de las mismas
JP2018500384A (ja) 2014-11-11 2018-01-11 メディミューン リミテッド 腫瘍形成を治療するための治療の組合せ
US20170313775A1 (en) 2014-11-13 2017-11-02 The Johns Hopkins University Checkpoint Blockade and Microsatellite Instability
JP2018500332A (ja) 2014-12-16 2018-01-11 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ 中枢神経系新生物における免疫チェックポイント阻害剤の使用
EP3233918A1 (en) 2014-12-19 2017-10-25 Novartis AG Combination therapies
HK1246180A1 (zh) 2014-12-31 2018-09-07 Celgene Corporation 使用自然杀伤细胞治疗血液病症、实体瘤或感染性疾病的方法
CA2976446A1 (en) 2015-02-13 2016-08-18 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody therapeutics that bind ctla4
WO2016149387A1 (en) 2015-03-18 2016-09-22 The Johns Hopkins University Androgen deprivation with immune checkpoint blockade delays the development of castration resistant prostate cancer
WO2016168809A1 (en) 2015-04-17 2016-10-20 Krishnan Nandabalan Compositions and methods for preventing tumor growth and treating cancer by targeting lectin galactoside-binding soluble 3 binding protein
WO2016179576A1 (en) 2015-05-07 2016-11-10 Bioxcel Corporation Novel immunomodulatory therapeutic strategies targeting tumors in cancer
WO2016183469A1 (en) 2015-05-13 2016-11-17 Robert Kirken Anti-ctla-4 blockade
US20160347848A1 (en) 2015-05-28 2016-12-01 Medimmune Limited Therapeutic combinations and methods for treating neoplasia
SI3303394T1 (sl) * 2015-05-29 2020-10-30 Agenus Inc. Protitelesa proti-CTLA-4 in postopki njihove uporabe
WO2016196389A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Bristol-Myers Squibb Company Treatment of renal cell carcinoma
CN106714836A (zh) 2015-06-05 2017-05-24 H·李·莫菲特癌症中心研究有限公司 Gm‑csf/cd40l疫苗和检查点抑制剂联合治疗
DK3858859T3 (da) 2015-07-14 2025-12-15 Bristol Myers Squibb Co Fremgangsmåde til behandling af kræft under anvendelse af en immun checkpointinhibitor; antistof som binder til programmeret død-1 receptor (pd-1) eller programmeret død ligand 1 (pd-l1)
EP3331917A1 (en) 2015-08-04 2018-06-13 GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Limited Combination treatments and uses and methods thereof
US20180230431A1 (en) 2015-08-07 2018-08-16 Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited Combination Therapy
WO2017062615A2 (en) 2015-10-08 2017-04-13 Macrogenics, Inc. Combination therapy for the treatment of cancer
WO2017079303A1 (en) 2015-11-02 2017-05-11 The Cleveland Clinic Foundation Sequentially orchestrated immune checkpoint therapy for the treatment and prevention of cancer
US10618960B2 (en) 2015-12-15 2020-04-14 Oncoimmune, Inc. Chimeric and humanized anti-human CTLA4 monoclonal antibodies and uses thereof
TWI808934B (zh) 2015-12-31 2023-07-21 美商伯克利之光生命科技公司 經工程化以表現促發炎多肽之腫瘤浸潤細胞
EP3400023A1 (en) 2016-01-10 2018-11-14 ModernaTX, Inc. Therapeutic mrnas encoding anti ctla-4 antibodies
US10918737B2 (en) 2016-01-28 2021-02-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for the treatment of cancer
US20170233476A1 (en) 2016-02-12 2017-08-17 Sorrento Therapeutics, Inc. Antibody Therapeutics That Bind CTLA4
EP3213768A1 (en) 2016-03-01 2017-09-06 LODOCO CLINICAL Kft Combination of low dose immune checkpoint blockade with high dose il-2 for treating metastatic cancer
JP2019507180A (ja) 2016-03-04 2019-03-14 アイオー バイオテック エーピーエスＩＯ Ｂｉｏｔｅｃｈ ＡｐＳ がんに対する組合せ療法
EP3426271B1 (en) 2016-03-10 2025-08-27 CG Oncology, Inc. Methods of treating solid tumors by combination therapy
WO2017160717A2 (en) 2016-03-15 2017-09-21 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Method of treating diseases using kinase modulators
SG10201603721TA (en) 2016-05-10 2017-12-28 Agency Science Tech & Res Anti-CTLA-4 Antibodies
CN107400166A (zh) 2016-05-19 2017-11-28 苏州康宁杰瑞生物科技有限公司 针对ctla4的单域抗体及其衍生蛋白
LT3458053T (lt) 2016-05-20 2022-02-25 Biohaven Pharmaceutical Holding Company Ltd. Riluzolo, rilizolo provaistų arba riluzolo analogų panaudojimas kartu su imunoterapijomis vėžio formų gydymui
CA3026151A1 (en) 2016-06-14 2017-12-21 Xencor, Inc. Bispecific checkpoint inhibitor antibodies
US10793632B2 (en) 2016-08-30 2020-10-06 Xencor, Inc. Bispecific immunomodulatory antibodies that bind costimulatory and checkpoint receptors
US11013802B2 (en) 2016-12-07 2021-05-25 Agenus Inc. Anti-CTLA-4 antibodies and methods of use thereof
CN118634323A (zh) * 2016-12-07 2024-09-13 艾吉纳斯公司 抗体和其使用方法

Also Published As

Publication number Publication date
JP2021137034A (ja) 2021-09-16
BR112017025564A2 (en) 2018-08-07
PL3303394T3 (pl) 2020-11-16
BR112017025564B8 (pt) 2022-01-04
MX2023000818A (es) 2023-02-14
CN107849144A (zh) 2018-03-27
SI3303394T1 (sl) 2020-10-30
KR20230028478A (ko) 2023-02-28
ES2803655T3 (es) 2021-01-28
US20190135919A1 (en) 2019-05-09
US20160368989A1 (en) 2016-12-22
LT3303394T (lt) 2020-10-12
IL255468A (en) 2018-01-31
AU2019204586C1 (en) 2021-08-26
PE20180672A1 (es) 2018-04-19
HK1253250A1 (en) 2019-06-14
US10479833B2 (en) 2019-11-19
MA44594B1 (fr) 2020-09-30
MA53355A (fr) 2022-03-16
JP7456976B2 (ja) 2024-03-27
EP3736290A1 (en) 2020-11-11
BR112017025564B1 (pt) 2021-12-21
CN107849144B (zh) 2021-09-17
AU2021211991A1 (en) 2021-08-26
CA2986765A1 (en) 2016-12-08
US12492257B2 (en) 2025-12-09
US11267889B2 (en) 2022-03-08
JP6900323B2 (ja) 2021-07-07
CO2017013398A2 (es) 2018-03-20
EP3303394B1 (en) 2020-04-08
CL2017003023A1 (es) 2018-06-08
DK3303394T3 (da) 2020-07-06
IL255468B (en) 2022-05-01
US20220267443A1 (en) 2022-08-25
IL291711A (en) 2022-05-01
MX2017015046A (es) 2018-05-17
US10144779B2 (en) 2018-12-04
WO2016196237A1 (en) 2016-12-08
SG10201913500TA (en) 2020-03-30
US20200354455A1 (en) 2020-11-12
KR102492532B1 (ko) 2023-01-30
HRP20201031T1 (hr) 2020-10-16
HUE050750T2 (hu) 2021-01-28
AU2019204586A1 (en) 2019-07-18
AU2016271591A1 (en) 2017-12-21
KR20180037924A (ko) 2018-04-13
CN113603784A (zh) 2021-11-05
EP3303394A1 (en) 2018-04-11
PT3303394T (pt) 2020-07-01
AU2019204586B2 (en) 2021-05-27
JP2018521638A (ja) 2018-08-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12492257B2 (en) Anti-CTLA-4 antibodies and methods of use thereof
JP7395554B2 (ja) 抗ｃｔｌａ－４抗体およびそれらの使用方法
US20250109201A1 (en) Anti-ilt2 antibodies and uses thereof
HK40040579A (en) Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
HK40059260A (en) Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
HK1253250B (en) Anti-ctla-4 antibodies and methods of use thereof
EA039322B1 (ru) Антитела против ctla-4 и способы их применения