KR102075724B1 - 디아세레인을 유효성분으로 포함하는 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도 - Google Patents

디아세레인을 유효성분으로 포함하는 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR102075724B1
KR102075724B1 KR1020180110194A KR20180110194A KR102075724B1 KR 102075724 B1 KR102075724 B1 KR 102075724B1 KR 1020180110194 A KR1020180110194 A KR 1020180110194A KR 20180110194 A KR20180110194 A KR 20180110194A KR 102075724 B1 KR102075724 B1 KR 102075724B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
antibody
cancer
composition
tumor
diacerein
Prior art date
Application number
KR1020180110194A
Other languages
English (en)
Inventor
김진수
김현기
자히르 자베리아
유아람
이재준
Original Assignee
한국원자력의학원
재단법인 오송첨단의료산업진흥재단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국원자력의학원, 재단법인 오송첨단의료산업진흥재단 filed Critical 한국원자력의학원
Priority to KR1020180110194A priority Critical patent/KR102075724B1/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102075724B1 publication Critical patent/KR102075724B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

본 발명은 디아세레인을 유효성분으로 포함하는 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도에 관한 것으로, 본 발명에 따르면, 디아세레인은 항체의 종양 침투력을 증진시켜 방사면역치료 효과를 극대화시킬 뿐만 아니라, 방사선 동위원소로부터 정상 조직을 보호하는 바, 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물, 암 치료용 약제학적 조성물, 방사면역치료용 약제학적 조성물 등으로 유용하게 활용될 수 있다.

Description

디아세레인을 유효성분으로 포함하는 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도{Compositions for enhancing antibody penetration into a tumor comprising diacerein as an active ingredient and Uses thereof}
본 발명은 디아세레인을 유효성분으로 포함하는 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도에 관한 것이다.
방사면역치료(radioimmunotherapy, RIT)는 베타선을 방출하는 치료용 방사성 동위원소(I-131, Y-90, Lu-177 등)에 종양 에피토프에 특이적인 단일클론항체를 표지하여 항체가 가지는 항암 효과와 세포독성(cytotoxic)을 나타내는 방사선을 조합 사용함으로써 치료 효과를 극대화시킬 수 있는 치료법이다.
현재 임상에서 사용되고 있는 방사면역치료를 위한 의약품으로는, 혈액암 치료를 위하여 토시투모맙(tositumomab, Bexxar), 이브리투모맙 튜세탄(ibritumomab tiuxetan, Zevalin) 및 리툭시맙(rituximab, Rituxan)이 사용되고 있고, 고형암 치료를 위해서는 트라스투주맙(trastuzumab, Herceptin), 세툭시맙(cetuximab, Erbitux) 및 파니투무맙(panitumumab, Vectibix) 등이 사용되고 있다.
암의 치료는 방사선을 이용한 치료, 항암제를 이용한 화학요법 및 종양 특이적 항체와 치료용 방사성 동위원소를 결합한 방사면역치료법 등이 있는데, 방사면역치료법은 종양에 대한 표적 치료(targeted therapy), 방사선에 의한 암 치료 효과, 그리고 항체에 의한 암 치료 효과의 시너지 효과를 기대할 수 있다. 그러나, 정상 조직과 달리 종양 조직의 경우에는, 종양 주변에 형성된 콜라겐, 비정상적인 혈관 형성, 및 종양 내부의 증가된 세포와 조직 사이의 압력(interstitial pressure) 등으로 인하여 항체의 종양 내부로의 침투가 어려운 문제가 있다.
특히, 고형암의 경우에는 항체가 종양까지 도달하는데 물리적 장벽과 생리적 장벽이 존재하기 때문에 방사면역치료의 치료 효과가 저하되는 문제가 있다. 즉, 종양 주변에 형성된 콜라겐, 세포 사이의 밀착연접(tight junction), 및 종양 내 증가한 세포와 조직 사이의 압력으로 인하여 항체의 종양 침투가 제한적이어서 방사면역치료의 고형암 임상적용은 비용 대비 치료 효과가 떨어지고, 좋은 치료 성적을 보이지 못하고 있는 실정이다.
나아가, 치료용 방사선 동위원소로 사용하고 있는 Y-90, Lu-177 등의 경우 최대 방사선 조사 범위(maximum radiation range)가 각각 12.9 mm 및 2.1 mm이므로, 항체가 종양 중심부까지 침투하지 못한다면 주변의 정상조직이 피폭을 받게 되는 문제가 있다.
한편, 디아세레인은 관절염 치료제로 사용되는 약물의 한 종류로서, 염증반응에 관여하는 IL-1β를 차단하여 염증 반응을 완화시키는 것으로 알려져 있다. 그러나, 본 발명자들이 아는 한, 디아세레인의 항체의 종양 침투력 증진 효과는 현재까지 알려진 바가 없다.
대한민국 공개특허 제10-2017-0098957호 (2017.08.30 공개)
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명의 다른 목적은 암 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 데에 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 방사면역치료용 약제학적 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명은 디아세레인(diacerein)을 유효성분으로 포함하는 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 (ⅰ) 암을 타겟팅 하는 항체; 및 (ⅱ) 상기 조성물을 포함하는 암 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 (ⅰ) 방사성 동위원소로 표지된, 암을 타겟팅 하는 항체; 및 (ⅱ) 상기 항체의 종양 침투력 증진제로서 상기 조성물을 포함하는 방사면역치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면, 디아세레인은 항체의 종양 침투력을 증진시켜 방사면역치료 효과를 극대화시킬 뿐만 아니라, 방사선 동위원소로부터 정상 조직을 보호하는 바, 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물, 암 치료용 약제학적 조성물, 방사면역치료용 약제학적 조성물 등으로 유용하게 활용될 수 있다.
도 1은 림프종 세포(Raji)에서 디아세레인에 의한 암세포 사멸 효과를 나타낸 결과이다.
도 2는 림프종 종양 모델에서 I-131 리툭시맙(항-CD20 항체)이 디아세레인 투여에 의해 림프종 종양 조직 내부로 침투가 증진되는 효과를 나타낸 결과이다.
도 3은 림프종 종양 모델에서 디아세레인 투여에 의한 생존율 및 종양 성장 속도를 나타낸 결과이다.
도 4는 유방암 세포(JIMT-1)에서 디아세레인에 의한 암세포 사멸 효과를 나타낸 결과이다.
도 5는 폐암 세포(A549)에서 디아세레인에 의한 암세포 사멸 효과를 나타낸 결과이다.
도 6은 다양한 폐암 세포(A549, NCI-H460, NCI-H1299)에서 디아세레인에 의한 암세포 사멸 효과를 나타낸 결과이다.
도 7은 폐암 세포(NCI-H460)에서 트라스투주맙(항-HER2 항체)이 디아세레인과 병용 처리 시, 암세포의 사멸이 증진되는 효과를 나타낸 결과이다.
본 발명의 발명자들은 치료용 방사선 동위원소로 표지된 항체를 방사면역치료에 사용 시, 디아세레인이 항체를 종양 중심부로 침투시켜 종양 치료 효과를 극대화시킬 뿐만 아니라, 방사선 동위원소로부터 정상 조직을 보호하는 것을 확인하며 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명은 디아세레인을 유효성분으로 포함하는, 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 사용된 표현, "항체의 종양 침투력 증진"은 암을 타겟팅 하는 항체가 종양 주변에 존재하는 물리적 장벽 및/또는 생리적 장벽을 뚫고 종양 조직의 중심부로 보다 더 가까이 이동할 수 있음을 의미한다. 종양 조직의 경우에는, 종양 주변에 형성된 콜라겐, 비정상적인 혈관 형성, 및 종양 내부의 증가된 세포 및 조직 사이의 압력 등으로 인하여 항체의 종양 내부로의 침투가 어려운 문제가 있는데, 본 발명의 조성물은 이러한 문제를 개선하여 항체가 보다 더 종양의 내부로 침투할 수 있게 한다는 의미이다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 암 치료용 항체의 종양 침투력을 증진시키는 항암치료 보조용 약제학적 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 조성물은 방사면역치료 시, 암 치료용 항체와 병용 사용되어 상기 항체의 종양 침투력을 증진시키는 방사면역치료 보조용 약제학적 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 암은 혈액암으로 림프종 또는 림프구성 백혈병일 수 있으며, 상기 림프종은 여포성 림프종(follicular lymphoma), 미만성 B형 대세포 림프종(diffuse large B-cell lymphoma), 외투세포림프종(mantle cell lymphoma), B-CLL/SLL, 면역종(immunocytoma/Waldenstrom's), 말트 림프종(MALT-type/ monocytoid B cell lymphoma), 버킷 림프종(Burkitt'f s lymphoma), 소아 림프종(pediatric lymphoma) 및 역형성 대세포 림프종(anaplastic large cell lymphoma)과 같은 B 세포 림프종일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 암은 고형암으로 유방암 또는 폐암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
본 발명에서 사용된 용어, "암 치료용 항체"는 암화, 암의 진행, 발전 또는 사멸 등과 관련된 암 관련 항원에 결합하여 항암 활성을 나타내는 항체를 의미한다. 당해 기술 분야에는 이러한 암 관련 항원(예컨대, CD20, HER2, EGFR 등)과 이를 표적으로 하는 항체, 공지된 항원에 대한 항체의 제조방법이 잘 알려져 있다. 디아세레인은 이러한 암 치료용 항체와 병용 사용(동시 또는 순차적으로)되어 암의 종양 침투력을 증진시킨다.
상기 암 치료용 항체의 범위에는 완전한 항체 형태뿐만 아니라, 항체 분자의 항원 결합 단편(항체 단편)도 포함된다.
완전한 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 구조이며, 각각의 경쇄는 중쇄와 다이설파이드 결합으로 연결되어 있다. 중쇄 불변영역은 감마(γ), 뮤(μ), 알파(α), 델타(δ) 및 엡실론(ε) 타입을 가지고 서브클래스로 감마1(γ1), 감마2(γ2), 감마3(γ3), 감마4(γ4), 알파1(α1) 및 알파2(α2)를 가진다. 경쇄의 불변영역은 카파(κ) 및 람다(λ) 타입을 가진다.
항체의 항원 결합 단편 또는 항체 단편이란 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 의미하며, Fab, F(ab'), F(ab')2 및 Fv 등을 포함한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 항체는 단일클론항체일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 항체는 항-CD20 항체 또는 항-HER2 항체일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다. 상기 항-CD20 항체 및 항-HER2 항체는 각각 CD20 항원 및 HER2에 결합하여 이를 불활성화시킴으로써 이들 항원이 발현된 종양 세포(각각 림프종과 림프구성 백혈병 세포; 유방암과 폐암 세포)의 사멸을 유도한다.
상기 항-CD20 항체의 예로는 리툭시맙(rituximab), 이브리투모맙 튜세탄(ibritumomab tiuxetan) 및 토시투모맙(tositumomab) 등을 들 수 있으며, 상기 항-HER2 항체의 예로는 허셉틴(Herceptin)을 들 수 있다.
또한, 본 발명은 (ⅰ) 암을 타겟팅 하는 항체; 및 (ⅱ) 본 발명의 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물을 포함하는 암 치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 (ⅰ) 방사성 동위원소로 표지된, 암을 타겟팅 하는 항체; 및 (ⅱ) 상기 항체의 종양 침투력 증진제로서, 본 발명의 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물을 포함하는 방사면역치료용 약제학적 조성물을 제공한다.
디아세레인은 암 치료용 항체의 종양 침투력을 증진시키므로, 암을 타겟팅 하는 항체와 함께 암의 치료(예컨대, 방사면역치료)에 사용이 가능하다.
본 명세서에서 사용된 용어, "치료"는 암의 발전의 억제, 암의 경감 또는 암의 제거를 의미한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 암은 혈액암으로 림프종 또는 림프구성 백혈병일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 암은 고형암으로 유방암 또는 폐암일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 암을 타겟팅 하는 항체는 항-CD20 항체 또는 항-HER2 항체일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아님을 명시한다.
본 발명의 일 구현예에 따르면, 상기 방사성 동위원소는 177Lu, 211At, 213Bi, 212Bi, 212Pb, 225Ac, 227Th, 90Y, 186Re, 188Re, 199Au, 194Ir, 166Ho, 159Gd, 153Sm, 149Pm, 142Pr, 111Ag, 109Pd, 77As, 67Cu 및 47Sc로 구성된 군으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다.
본 발명의 조성물이 약학 조성물인 경우, 투여를 위하여, 상기 기재한 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 소르비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 상세하게는 제형화할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형 제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이러한 고형 제제는 상기 유효성분 외에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 과제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로솔, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 시간에 따라 다르지만, 당 업자에 의해 적절하게 선택될 수 있는 바, 상기 조성물의 일일 투여량은 바람직하게는 0.001 mg/kg 내지 50 mg/kg이며, 필요에 따라 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 혈액암에서 디아세레인의 항체의 종양 침투력 증진 효과
1.1 실험재료 및 실험방법
세포 배양
인 비트로(in vitro)에서 단일 세포 또는 작은 덩어리를 형성하며 자라는 인간 림프종 세포(Raji; ATCC)는 10% 열-불활성화 우태아혈청(heat-inactivated fetal bovine serum, FBS; GIBCO, Island) 및 항생제가 포함된 RPMI1640 배지(GIBCO, Island)에서 5% CO2, 37℃의 조건으로 3-4일 간격으로 계대 배양하였다.
암세포 사멸 분석
인간 림프종 세포(Raji; ATCC)는 무혈청(serum free) RPMI-1640 배지를 이용하여 1 X 106 세포/mL의 농도로 분주하였다. 디아세레인은 무혈청 배지(serum free)에 녹여 20 μM 농도로 제조하고, 림프종 세포에 48시간 동안 처리하였다. 48시간 이후에 alamarBlue(ThermoFisher, USA) 시약을 각각 200 μL씩 처리하여 36℃, 5% CO2에서 2시간 동안 반응시켰다. 이후 1200 rpm으로 5분간 원심분리한 다음 각 조건별로 상층액을 100 μL씩 얻어 검정색 96 웰 플레이트에 옮겨 담은 후, Spectramax i3X(Molecular Devices, USA) 장비를 이용하여 형광값을 측정하였으며(Ex: 560/Em: 590), 하기 식을 이용하여 세포 생존율을 분석하였다.
[계산식 1]
Figure 112018091651511-pat00001
Scontrol : 대조군에서의 형광값, Si : 각 실험군에서의 형광값, B : 배경 형광값.
실험 동물
NOD.SCID 마우스는 코아텍에서 구입하였다. 실험에 사용된 모든 마우스는 생후 6-8주령으로서 실험군과 대조군은 동성 마우스를 사용하였으며, 이들 동물에는 멸균한 역삼투 증류수와 방사선 멸균된 실험동물용 사료를 공급하였고, 항온(22℃), 항습 (50%), 항균 환경조절 제어장치 하에서 사육하였다.
시약 및 항체
디아세레인(diacerein)은 Sigma-Aldrich(USA)에서 구입하여 디메틸 설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO)에 녹여 사용하였다. CD20에 특이적인 항체인 리툭시맙은 Roche Pharma(Schweiz) AG에서 획득하였고, 항체에 I-131을 접합시켜 마우스 꼬리 혈관을 통해 주사하였다.
항체에 I-131 접합
I-131(원자력연구원 생산)은 별다른 정제 없이 100 μL의 용출버퍼(phosphate buffered saline, PBS)에 용해한 다음 500 μCi만큼 덜어내서 요오드화 튜브(iodination tube, Thermo fisher scientific)에 넣고 10분간 실온에서 반응시켰다. 10분 후 150 μg 리툭시맙을 추가적으로 넣어 준 다음 다시 10분간 실온에서 반응시킨 후 50 kDa 멤브레인 필터에서 용출버퍼를 사용하여 정제하였다.
암 이종이식 및 시험물질의 투여
CD20 양성인 Raji 세포(1 X 106)를 피하 주사를 통해 6-8주령의 NOD.SCID 마우스의 옆구리에 이식하였으며, 암세포의 크기가 적정 크기(200 mm3)에 도달했을 때, 마우스를 하기의 그룹으로 나누고(Day 0), 하기 표 1과 같이 각 시험물질을 투여하였다.
그룹 투여
대조군(n=3) PBS 200 μl 투여 (IP: Day 0-사망일)
디아세레인 투여군(n=3) 디아세레인 20 mg/kg/d 투여 (IP; Day 0-사망일)
I-131-리툭시맙 투여군(n=5) I-131-리툭시맙 150 μg 투여 (꼬리 혈관으로 IV: Day 0)
PBS 200 μl 투여 (IP: Day 0-5)
디아세레인/
I-131-리툭시맙
투여군(n=5)		 디아세레인 20 mg/kg/d 투여 (IP; Day 0-5)
I-131-리툭시맙 150 μg 투여 (꼬리 혈관으로 IV: Day 0)
* 정맥 내 주사(intravenous injection, IV), 복강 내 주사(intraperitoneal injection, IP)
I-131 SPECT 영상 획득
I-131-리툭시맙 투여군과 디아세레인/I-131-리툭시맙 투여군에 대하여 I-131 SPECT 영상을 확득하였다. I-131-리툭시맙 투여군과 디아세레인/I-131-리툭시맙 투여군은 투여일(Day 0)로부터 6일 후(Day 6)에 영상을 획득하였으며, 2.0% 이소플루란(isoflurane)으로 호흡 마취시킨 후 멀티 핀홀 콜리메이터(multi-pinhole collimator)를 이용하여 에너지피크 364.5 keV, 에너지창 328-400 keV의 조건에서 촬영을 수행하였다. 해부학적 이미지 획득을 위해 50 kVp, 720 μA 및 300 ms 노출 시간을 사용하여 마우스의 X-ray CT 영상을 촬영하였다.
표준섭취계수분석
SPECT 영상 재구성은 감쇠 보정을 적용하였으며, 영상정량 분석을 위하여 재구성된 영상에서 종양부위에 관심영역(ROI, Region Of Interest)을 설정한 후, 하기 식을 이용하여 표준섭취계수(SUV, standard uptake value)를 측정하였다.
[계산식 2]
Figure 112018091651511-pat00002
1.2. 실험 결과
디아세레인에 의한 암세포 사멸 효과
도 1에 나타난 바와 같이, 림프종 세포(Raji)에 디아세레인을 처리하였을 때, 디아세레인에 의해 림프종 세포가 사멸하는 것을 확인하였다.
림프종 종양 모델에서 디아세레인에 의한 항체의 종양 침투력 변화
도 2에 나타난 바와 같이, 림프종 종양 모델에서 I-131-리툭시맙 또는 디아세레인/I-131-리툭시맙을 병용 투여하였을 때, I-131 리툭시맙이 디아세레인에 의해 종양 내부에 더 깊이 침투하는 것을 확인하였다.
림프종 종양 모델에서 디아세레인에 의한 생존율 및 종양 크기 변화
림프종 종양 모델에서 PBS 투여군과 디아세레인 투여군 각각의 생존율 및 종양 크기 변화를 확인한 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 대조군에 비해 디아세레인 투여군에서 생존율이 증가하고, 종양 성장 속도가 감소되는 것을 확인할 수 있었다.
이러한 결과는, 혈액암의 방사면역치료에 있어서, 항체가 디아세레인에 의해 종양 중심부로의 침투력이 향상되어 항암 효과를 증진시킴을 보여준다.
실시예 2: 고형암에서 디아세레인의 항체의 종양 침투력 증진 효과
2.1. 실험재료 및 실험방법
세포 배양
HER2(human epidermal growth factor receptor 2)를 발현하는 인간 유방암 세포(JIMT-1; ATCC, USA), 폐암 세포(NCI-H460, A549, NCI-H1299, ATCC, USA)는 10% 열-불활성화 우태아혈청(heat-inactivated fetal bovine serum, FBS; GIBCO, Island) 및 항생제가 포함된 DMEM/RPMI1640 배지(GIBCO, Island)에서 5% CO2, 37℃의 조건으로 3-4일 간격으로 계대 배양하였다.
시약 및 항체
디아세레인(diacerein)은 Sigma-Aldrich(USA)에서 구입하여 DMSO에 녹여 사용하였다. 트라스투주맙은 Roche Pharma(Schweiz) AG에서 획득하였고, 용출버퍼(PBS, GIBCO)에 녹여 사용하였다.
유세포 분석기법을(Flow cytometry) 이용한 암세포 사멸 분석
인간 폐암 세포주(A549)는 1 X 107 세포/10 mL의 농도로 100 mm 원형 세포 배양 접시에 분주하였다. 24시간 이후 세포 배양액을 제거한 다음 하기 표 2와 같이, 디아세레인을 24~48시간 동안 처리하였다. 이후, EDTA-Trypsin을 이용하여 각 그룹의 세포를 FACS 투브에 수집하고, PI와 Annexin V로 4℃에서 15분간 염색하였다. BD-C6 Accuri Flow cytometry를 장비를 이용하여 PI 파장 채널과 FITC 파장 채널로 생존(alive)/사멸(apoptosis)/괴사(necrosis) 세포의 비율을 확인하였다.
그룹 처리
대조군 무혈청 배지(serum free)만을 처리함
디아세레인 처리군 무혈청 배지(serum free)에 DMSO에 용해되어 있는 다아세레인을 섞어
5~100 μM의 농도로 24/48시간 처리함
세포 생존율 분석
인간 폐암 세포주(A549, NCI-H460, NCI-H1299), 인간 유방암 세포주(JIMT-1)를 각각 6 웰 플레이트에 2 X 105 세포/2 mL의 농도로 분주하였다. 폐암 세포주의 경우 24시간 이후, 유방암 세포주의 경우 72시간 이후 세포 배양액을 모두 제거하고, 하기 표 3과 같이, 디아세레인(5~100 μM)과 트라스투주맙(5~20 μg/mL)을 각각 또는 조합으로 무혈청 배지(serum free) 2 mL에 넣어 처리하였다. 폐암 세포주의 경우 48시간 이후, 유방암 세포주의 경우 72시간 이후에 alamar blue(ThermoFisher, USA) 시약을 각각 200 μL씩 처리하여 36℃, 5% CO2에서 2시간 동안 반응시켰다. 각 조건별로 상층액을 100 μL씩 얻어 검정색 96 웰 플레이트에 옮겨 담은 후, Spectramax i3X(Molecular Devices, USA) 장비를 이용하여 형광값을 측정하였으며(Ex: 560/Em: 590), 하기 식을 이용하여 세포 생존율을 분석하였다.
그룹 처리
대조군 무혈청 배지(serum free)만을 처리함
디아세레인 처리군 무혈청 배지(serum free)에 DMSO에 용해되어 있는 다아세레인을 섞어
5~100 μM의 농도로 24/48시간 처리함
트라스투주맙 처리군 무혈청 배지(serum free)에 PBS에 용해되어 있는 트라스투주맙을 섞어
5~20 μg/mL의 농도로 세포에 24/48시간 처리함
디아세레인/
트라스투주맙 처리군		 무혈청 배지(serum free)에 다아세레인을 5~100 μM의 농도와
트라스투주맙 5~20 μg/mL의 농도로 섞어 세포에 24/48시간 처리함
[계산식 1]
Figure 112018091651511-pat00003
Scontrol : 대조군에서의 형광값, Si : 각 실험군에서의 형광값, B : 배경 형광값.
2.2. 실험결과
디아세레인에 의한 암세포 사멸 효과
도 4에 나타난 바와 같이, 유방암 세포주(JIMT-1)에 디아세레인을 처리하였을 때, 디아세레인에 의해 유방암 세포의 생존율이 감소하는 것을 확인하였다.
또한, 도 5에 나타난 바와 같이, 폐암 세포주(A549)에 디아세레인을 처리하였을 때, 사멸(apoptosis) 상태의 세포 비율이 24시간에서 5.6%, 48시간에서 33.2%로 대조군 대비 큰 폭으로 증가하는 것을 확인하였다. 이러한 결과는 폐암 세포주에서 디아세레인이 항암 효과를 나타냄을 보여준다.
또한, 도 6에 나타난 바와 같이, 폐암 세포주(A549, NCI-H460, NCI-H1299)에 디아세레인을 처리하였을 때, 48시간 이후 디아세레인 농도에 따라 대조군 대비 암세포의 생존율이 감소하는 것을 확인하였다. A549 세포의 경우, 디아세레인 10 μM 이상의 농도에서 대부분의 세포가 사멸된 것으로 관찰되었으며, NCI-H1299 및 NCI-H460 세포의 경우도 비슷한 경향이 관찰되었다.
다아세레인에 의한 항종양 효과 증진
도 7에 나타난 바와 같이, 폐암 세포주(NCI-H460)에 디아세레인 또는 트라스투주맙/디아세레인을 병용 처리하였을 때, 디아세레인 단독 처리보다 10 μM의 트라스투주맙을 병용 처리 시, 항종양 효과가 1.55배 증진되는 것을 확인하였다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술한 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
본 발명의 범위는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (9)

  1. 디아세레인(diacerein)을 유효성분으로 포함하는, 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 항암치료 보조용 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는, 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 방사면역치료(Radioimmunotherapy) 보조용 약제학적 조성물인 것을 특징으로 하는, 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 암은 혈액암 또는 고형암인 것을 특징으로 하는, 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 혈액암은 림프종 또는 림프구성 백혈병인 것을 특징으로 하는, 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물.
  6. 제 4항에 있어서, 상기 고형암은 유방암 또는 폐암인 것을 특징으로 하는, 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물.
  7. 제 1항에 있어서, 상기 항체는 항-CD20 항체 또는 항-HER2 항체인 것을 특징으로 하는, 암 치료용 항체의 종양 침투력 증진용 조성물.
  8. (ⅰ) 암을 타겟팅 하는 항체; 및
    (ⅱ) 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 암 치료용 약제학적 조성물.
  9. (ⅰ) 방사성 동위원소로 표지된, 암을 타겟팅 하는 항체; 및
    (ⅱ) 상기 항체의 종양 침투력 증진제로서 제 1항 내지 제 7항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 방사면역치료용 약제학적 조성물.
KR1020180110194A 2018-09-14 2018-09-14 디아세레인을 유효성분으로 포함하는 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도 KR102075724B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020180110194A KR102075724B1 (ko) 2018-09-14 2018-09-14 디아세레인을 유효성분으로 포함하는 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020180110194A KR102075724B1 (ko) 2018-09-14 2018-09-14 디아세레인을 유효성분으로 포함하는 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR102075724B1 true KR102075724B1 (ko) 2020-02-10

Family

ID=69627420

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020180110194A KR102075724B1 (ko) 2018-09-14 2018-09-14 디아세레인을 유효성분으로 포함하는 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102075724B1 (ko)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2349289B1 (en) * 2008-10-28 2016-07-13 TWI Biotechnology, Inc. Pharmaceutical compositions containing diacerein
KR20170098957A (ko) 2015-01-16 2017-08-30 시티 오브 호프 세포 침투성 항체
KR20180037261A (ko) * 2015-08-17 2018-04-11 티더블유아이 바이오테크놀로지 인코포레이티드 Asc의 발현, nlrp3의 발현, 및/또는 nlrp3 인플라마솜 복합체의 형성 저해용 디아세레인 또는 이의 유사체

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2349289B1 (en) * 2008-10-28 2016-07-13 TWI Biotechnology, Inc. Pharmaceutical compositions containing diacerein
KR20170098957A (ko) 2015-01-16 2017-08-30 시티 오브 호프 세포 침투성 항체
KR20180037261A (ko) * 2015-08-17 2018-04-11 티더블유아이 바이오테크놀로지 인코포레이티드 Asc의 발현, nlrp3의 발현, 및/또는 nlrp3 인플라마솜 복합체의 형성 저해용 디아세레인 또는 이의 유사체

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. Nstl. Cancer Inst., 96(10), 739-749, 2004. *
Oncogene, 1-11, 2015. *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11707448B2 (en) Combination therapies for the treatment of cancer
ES2563439T5 (es) Medios y métodos para tratar LDCBG
Ströhlein et al. Immunotherapy of peritoneal carcinomatosis with the antibody catumaxomab in colon, gastric, or pancreatic cancer: an open-label, multicenter, phase I/II trial
CN110337450B (zh) Her2阳性乳腺癌的辅助治疗
TW201834695A (zh) 共軛生物分子、醫藥組成物及方法
CN108473578A (zh) 治疗癌症的抗pd-1抗体和双特异性抗cd20/抗cd3抗体组合
CN109153723A (zh) 抗pd-1抗体与放射的组合治疗癌症
CN110536905A (zh) 用于治疗肺癌的抗pd-1抗体
WO2013189554A1 (en) Method for treating a gd2 positive cancer
CN110366562A (zh) 使用抗pd-l1抗体和抗雄激素治疗癌症的方法
WO2021182573A1 (ja) 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
EP2861251A1 (en) Method for treating a gd2 positive cancer
CN112218662A (zh) 抗cd37免疫缀合物给药方案
KR20200112904A (ko) 암을 치료하는 조성물 및 방법
KR102075724B1 (ko) 디아세레인을 유효성분으로 포함하는 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도
KR20200018785A (ko) 유방암 치료를 위한 ErbB-2/ErbB-3 이중특이적 항체와 내분비 치료의 조합
KR20220055412A (ko) 로자탄을 유효성분으로 포함하는 항암제의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도
JP2021504341A (ja) 他の薬物と組み合わせたｎｈｌに対する処置としての放射性免疫複合体
KR101637689B1 (ko) 아토르바스타틴을 유효성분으로 포함하는 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도
US20220105182A1 (en) Radiotherapy improvements
WO2021182571A1 (ja) 癌の治療及び／又は予防のための医薬品
KR20230111069A (ko) 제니핀을 포함하는 암의 방사면역치료 보조제
KR20230111071A (ko) 렌바티닙을 포함하는 암의 방사면역치료 보조제
KR20230111070A (ko) 라나토사이드 c를 포함하는 암의 방사면역치료 보조제
KR20160038523A (ko) 시클로포스파미드를 유효성분으로 포함하는 항체의 종양 침투력 증진용 조성물 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant