KR20140023931A - 세포 면역요법용 방법 및 조성물 - Google Patents

세포 면역요법용 방법 및 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20140023931A
KR20140023931A KR1020137027313A KR20137027313A KR20140023931A KR 20140023931 A KR20140023931 A KR 20140023931A KR 1020137027313 A KR1020137027313 A KR 1020137027313A KR 20137027313 A KR20137027313 A KR 20137027313A KR 20140023931 A KR20140023931 A KR 20140023931A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cells
cell
car
ror1
tumor
Prior art date
Application number
KR1020137027313A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101976882B1 (ko
Inventor
스텐리 알. 리델
마이클 휴드섹
Original Assignee
프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=46208746&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=KR20140023931(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터 filed Critical 프레드 헛친슨 켄서 리서치 센터
Publication of KR20140023931A publication Critical patent/KR20140023931A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101976882B1 publication Critical patent/KR101976882B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/14—Blood; Artificial blood
    • A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
    • A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
    • A61K39/4631—Chimeric Antigen Receptors [CAR]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464411—Immunoglobulin superfamily
    • A61K39/464412—CD19 or B4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/4643—Vertebrate antigens
    • A61K39/4644—Cancer antigens
    • A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/464424—CD20
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/46—Cellular immunotherapy
    • A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
    • A61K39/464838—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/70503—Immunoglobulin superfamily
    • C07K14/7051—T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3061—Blood cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0636—T lymphocytes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/122—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells for inducing tolerance or supression of immune responses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/515—Animal cells
    • A61K2039/5156—Animal cells expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/572—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 cytotoxic response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/31—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterized by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2239/00—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46
    • A61K2239/46—Indexing codes associated with cellular immunotherapy of group A61K39/46 characterised by the cancer treated
    • A61K2239/48—Blood cells, e.g. leukemia or lymphoma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/50—Cell markers; Cell surface determinants
    • C12N2501/515—CD3, T-cell receptor complex
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2510/00—Genetically modified cells

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은, 예를 들면, 종양-특이적, 서브셋 특이적 유전적으로 변형된 CD4+ T 세포의 존재하에 유전적으로 변형된 종양 특이적 CD8+ T 세포를 양자 전달함으로써 세포 면역요법에 의해 매개된 면역 반응을 제공 및/또는 증가시키는 방법 및 조성물을 제공하고, 상기 CD4+ T 세포는 항-종양 반응성을 지속시키는 CD8+ T 세포의 능력을 제공 및/또는 증가시키고 목적하는 종양 특이적 CD8+ T 세포의 종양-특이적 증식을 증가 및/또는 최대화한다. 또한, 상기 방법에 의해 생성된 약제학적 제형 및 이를 사용하는 방법이 기재되어 있다.

Description

세포 면역요법용 방법 및 조성물{METHOD AND COMPOSITIONS FOR CELLULAR IMMUNOTHERAPY}
본 출원은, 미국을 제외한 모든 지정국에 대해 미국 법인인 프레드 허친슨 캔서 리써치 센터(Fred Hutchinson Cancer Research Center)의 출원인 명칭 및 지정국 미국 단독에 대해 스탠리 알. 리델(Stanley R. Riddell; 캐나다 국민) 및 미하엘 후데첵(Michael Hudecek; 독일 국민)의 출원인 명칭으로, 미국 특허출원 제61,466,552호(2011년 3월 23일자로 출원됨)를 우선권으로 주장하는 PCT 국제 특허원으로 2012년 3월 23일자로 출원되어 있으며, 이의 기술 내용은 본 명세서에 전부 참고로 인용된다.
본 발명은 생물의약 및 구체적으로는 암 치료에 유용한 방법의 분야에 관한 것이다. 특히, 본 발명의 실시양태는 세포 면역요법을 수행하는 방법 및 이를 위한 조성물에 관한 것이다.
연방 후원 연구에 관한 진술
본 발명은 미국 보건 사회 복지부의 승인 R01CA18029, 국립 보건 연구소 및 백혈병 및 림프종 협회 SCORE 승인의 형태로 정부 지원하에 이루어졌다. 미국 정부는 본 발명에 특정 권리를 갖는다.
설치류에서의 연구는 항원 특이적 T 세포에 의한 양자(adoptive) 면역요법이 암 및 감염에 효과적임을 증명하였고, 이러한 종류가 인간에서 치료 활성을 갖는다는 증거가 있다1 -8. 임상 적용의 경우, 감염되거나 형질전환된 세포를 표적화하는 수용체를 발현시키기 위해 목적하는 항원 특이성의 T 세포를 분리하거나 T 세포를 유전적으로 조작한 다음, 이들 세포를 배양물에서 증식할 필요가 있다9 -14. T 세포 클론의 전달은, 이것이 특이성 및 기능의 조절을 가능하게 하고 생체내 지속성, 독성 및 효능의 평가를 용이하게 하기 때문에 흥미를 끌고 있다. 추가로, 동종이계 줄기 세포 이식의 설정에 있어서, 변원체 또는 악성 세포를 표적화하는 공여체로부터 T 세포 클론의 수용체로의 투여는 선택되지 않은 공여체 T 세포의 주입으로 발생하는 이식-대-숙주 질환을 피할 수 있다3,4,15. 그러나, 배양된 T 세포, 특히 클로닝된 CD8+ T 세포의 효능은 양자 전달 후에 지속하지 못함으로써 빈번히 제한된다는 것이 임상 연구로부터 명백하다16,17.
양자 면역요법을 위한 T 세포가 유도될 수 있는 림프구 풀은 천연 및 장기간 생존하는, 항원 경험 기억 T 세포(TM)를 함유한다. TM은, 표현형, 회귀 특성 및 기능이 상이한 중추 기억(TCM) 및 효과기 기억(TEM) 세포의 서브셋으로 추가로 분화될 수 있다18. CD8+ TCM은 세포 표면에서 CD62L 및 CCR7을 발현하고, 이는 림프절 내로의 이동을 촉진시키며, 항원에 재노출되는 경우에 신속하게 증식한다. CD8+ TEM은 세포 표면 CD62L을 결여하고, 말초 조직으로 우선적으로 이동하며, 즉시 효과기 기능을 나타낸다19. 항원 자극에 반응하여, CD8+ TCM 및 TEM 둘 다는, 고도의 그랜자임 및 퍼포린을 발현하지만 단시간 생존하는 세포용해 효과기 T 세포(TE) 내로 분화한다20. 따라서, 임상 면역요법 시험에서 T 세포의 불량한 생존은, 시험관내 배양 동안, 사멸할 것으로 예정되는 TE로의 이들의 분화로부터 단순히 발생할 수 있다17,21,22.
생체내에서 양자 전달된 T 세포의 증가된 생존을 제공하는 세포 모집단 및 방법을 확인할 필요가 있다.
한 가지 실시양태에서, 본 발명은, 예를 들면, 종양-특이적, 서브셋 특이적 유전적으로 변형된 CD4+ T 세포를 양자 전달함으로써 세포 면역요법에 의해 매개된 면역 반응을 제공 및/또는 증가시키는 방법 및 조성물에 관한 것이고, 여기서 상기 CD4+ T 세포는 항-종양 반응성을 지속시키는 CD8+ T 세포의 능력을 제공 및/또는 증가시키고 목적하는 종양-특이적 증식을 증가 및/또는 최대화한다.
한 가지 실시양태에서, 본 발명은, 세포 면역 반응을 제공하는 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제를 대상체에게 투여함으로써 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 세포 면역요법을 수행하는 방법을 제공하고, 여기서 상기 세포독성 T 림프구 세포 제제는 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 또는 기타 수용체의 세포내 신호전달 도메인(예: 공자극 도메인)을 갖는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ T 세포를 포함하고, 기타 사이토킨을 생성할 뿐만 아니라 우성 Th1 표현형을 나타내는 유전적으로 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 직접 종양 인식을 유도하고 세포 면역 반응을 매개하는 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제의 능력을 증가시키며, 상기 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다. 상기 방법의 다양한 변형이 가능하다. 예를 들면, CD4+ T 세포 및 CD8+ 세포를 변형시키는 키메라 항원 수용체는 동일하거나 상이할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, T 세포는 재조합 T 세포 수용체(TCR)로 변형될 수 있다. TCR은 임의의 항원, 병원체 또는 종양에 특이적일 수 있다. 흑색종(예: MART1, gp100), 백혈병(예: WT1, 부조직적합성(minor histocompatibility) 항원), 유방암(예: her2, NY-BR1)에서 다수의 종양 항원에 대한 TCR이 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은, 세포 면역 반응을 유도하는 유전적으로 변형된 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 갖는 양자 세포 면역요법 조성물을 제공하고, 여기서 상기 세포독성 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 가변 도메인 항체 및 T 세포 또는 기타 수용체의 세포내 신호전달 도메인(예: 공자극 도메인)을 갖는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ T 세포를 포함하고, 기타 사이토킨을 생성할 뿐만 아니라 우성 Th1 표현형을 나타내는 유전적으로 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 직접 종양 인식을 유도하고 세포 면역 반응을 매개하는 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제의 능력을 증가시키며, 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은, 세포 면역 반응을 유도하는 키메라 항원 수용체 변형된 종양-특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 갖는 양자 세포 면역요법 조성물을 제공하고, 여기서 상기 세포독성 T 림프구 세포 제제는, CD45RO 음성, CD62L 양성 CD4 양성 T 세포로부터 유도된 항원-반응성 키메라 항원 수용체 변형된 천연 CD4+ T 헬퍼 세포 및 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합하여, 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 단쇄 항체 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ T 세포를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은, Th1 사이토킨 반응을 유도하고 병원체에 대한 CD8+ 면역 반응을 증가시키는 항원-반응성 키메라 항원 수용체 변형된 CD4+ T 헬퍼 세포와 함께 환자로부터 유도된 CD8+ T 세포를 포함하는, 세포 면역 반응을 유도하는 항원 특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 갖는 양자 세포 면역요법 조성물을 제공하고, 여기서 상기 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은, 직접 종양 인식을 유도하고 병원체에 대한 CD8+ 면역 반응을 증가시키는 항원-반응성 키메라 항원 수용체 변형된 CD4+ T 헬퍼 세포를 갖는 양자 세포 면역요법 조성물을 제공하고, 여기서 상기 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다.
또 다른 측면에서, 본 발명은, 세포 면역 반응을 유도하는 키메라 항원 수용체 변형된 종양-특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제 및 항원-반응성 키메라 항원 수용체를 수득하고 Th1 사이토킨 반응을 유도하는 변형된 천연 CD4+ T 헬퍼 세포를 수득함으로써 양자 면역요법 조성물을 제조하는 방법을 제공하고, 여기서 상기 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 모듈을 갖는 키메라 항원 수용체를 갖는 세포외 항체 가변 도메인을 포함하고, 상기 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ 세포를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은, Th1 사이토킨 반응을 유도하는 변형된 천연 CD4+ T 헬퍼 세포를 수득하고, 상기 변형된 천연 CD4+ T 헬퍼 세포를, 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 또는 기타 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 갖는 키메라 항원 수용체를 갖는 항원 특이적 중추 기억 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제와 배합함으로써 양자 면역요법 조성물을 제조하는 방법을 제공하고, 여기서 상기 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다.
한 가지 실시양태에서, 본 발명은, 유전적으로 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제를 대상체에게 투여함으로써 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 세포 면역요법을 수행하는 방법을 제공하고, 여기서 상기 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 모듈을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다.
본 발명의 이들 및 기타 실시양태는 첨부 명세서, 도면 및 특허청구범위에서 추가로 기재된다.
도 1은 ROR1-CAR로 형질도입된 CAR 코딩 렌티바이러스 및 대조군으로서 비형질도입된 CD8+ T 세포주에서 키메라 항원 수용체(CAR) 발현의 표현형 및 분석을 나타낸다. ROR1-CAR 카세트는 형질도입 마커로서 사용되고 항-EGFR 모노클로날 항체로 염색에 의해 검출될 수 있는 단축된 EGFR을 함유한다. 단축된 Fc-ROR1 융합 단백질은 ROR1-CAR의 항원-결합 도메인에 직접 연결되고, 형질도입된 ROR1-CAR을 선택적으로 염색시키지만 비형질도입된 대조군 T 세포주를 염색시키지 않는다. CD8+ T 세포의 세포 표면 상에서 ROR1-CAR의 발현은 ROR1-Fc 융합 단백질에 대한 결합으로 직접 측정되고, 벡터에서 2A 서열 하류에 코딩된 단축 EGFR의 발현에 의해 간접적으로 측정된다.
도 2는 51Cr 방출 분석에 있어서 인간 ROR1-양성 종양 세포주(K562) 및 원발성 종양 세포(B-CLL) 및 자가 정상 B-세포의 패널에 대해 ROR1-특이적 키메라 항원 수용체를 발현하는 CD8+ T 세포의 세포용해 활성을 나타낸다. 악성 B 세포 상에서는 ROR1의 균일한 발현과 일치하지만 성숙 정상 B 세포 상에서는 일치하지 않게, 유전적으로 변형된 CD8+ ROR1-CAR T 세포는 단지 ROR1+ 종양 세포를 용해시켰고 성숙 정상 B 세포를 용해시키지 않았다. CD8+ ROR1-CAR T 세포는 원발성 CLL를 포함하는 ROR1-양성 종양 세포에 대해 특이적 용해 활성을 나타내지만, 정상 B 세포에 대해서는 나타내지 않는다.
도 3은 형질도입된 ROR1-CAR 및 대조군으로서 비형질도입된 CD4+ T 세포주의 표현형 및 CAR 발현을 나타낸다. CD4+ T 세포의 세포 표면 상에서 ROR1-CAR의 발현은 ROR1-Fc 융합 단백질에 대한 특이적 결합에 의해 측정된다. Fc 단백질이 아닌 단축된 Fc ROR1 융합 단백질은 단독으로 ROR1-CAR에 직접 결합하고 형질전환된 ROR1-CAR을 선택적으로 염색시키지만 비형질전환된 대조군 CD4+ T 세포주를 염색시키지 않고, 이는 세포 표면 상에서 ROR1-CAR의 발현 및 ROR1-단백질에 대한 결합을 확인시켜 준다. CD4+ T 세포의 세포 표면 상에서 ROR1-CAR의 발현은 ROR1-Fc 융합 단백질에 대한 특이적 결합, 그러나 대조군 Fc 융합 단백질에 대한 비특이적 결합에 의해 측정된다.
도 4(즉, 총괄적으로 도 4a-4b)는 51Cr 방출 분석에서 CD4+ ROR1-CAR T 세포의 약하지만 특이적 세포용해 활성을 나타낸다. 원발성 CLL을 포함하는 ROR1-양성 종양 세포의 패널에 대해, 맨틀 세포 림프종 라인 jeko-1, K562 세포는 ROR1(K562/ROR1)으로 안정하게 형질감염되었지만, 천연 ROR1-음성 K562 세포는 형질감염되지 않았다. CD4+ ROR1-CAR T 세포는 ROR1-양성 종양 세포에 대해 약하지만 특이적 용해 활성을 나타낸다.
도 5(즉, 총괄적으로 도 5A-5B)는 INFγ ELISA(도 5a) 및 다중 사이토킨 분석(도 5b)으로부터의 결과를 나타낸다. CD4+ 및 CD8+ ROR1-CAR T 세포주의 사이토킨 분비. CD4+ ROR1-CAR 및 CD8 ROR1-CAR T 세포를 ROR1+ 종양 세포와 공배양하고, 인터페론 감마(INFg)의 수준을 ELISA(5a)로 측정하고, IFNg, TNFa, IL-2, IL-4, IL-10 및 IL-17을 루미넥스(Luminex) 분석(5b)으로 측정했다. CD4+ ROR1-CAR 변형된 T 세포는 ROR1-양성 종양 세포 및 종양 세포주를 특이적으로 인식하고, CD8+ ROR1-CAr 변형된 T 세포보다 높은 양의 Th1 사이토킨(IFN-γ, TNF-α 및 특히 IL-2 포함)을 생성한다. 이들 데이타는 CD4+ ROR1-CAR T 세포가 ROR1-CAR을 통해 자극 후에 헬퍼 효과기 기능을 나타내고, 직접 항-종양 반응성의 매개에 추가하여, 세포 면역 반응을 매개하는 CD8+ ROR1-CAR 변형된 T 세포의 능력을 증가시키기 위해 또한 사용될 수 있음을 입증한다.
도 6은, CD4+ ROR1-CAR T 세포가 ROR1-양성 종양 세포주 및 원발성 종양 세포(CFSE 분석)에 의한 자극 후에 증식하기 위해 유도되고, 증식하는 서브셋이 경험한 증식 세포의 비율 및 세포 분화의 수 둘 다는 CD8+ ROR1-CAR 변형된 T 세포에 대해 현저히 높게 비교됨을 나타내는 증식 결과를 도시한다. CD4+ ROR1-CAR T 세포는 CD8+ ROR1-CAR CTL과 비교하여 ROR1-양성 종양 세포(K562/ROR1, 원발성 CLL 및 Jeko MCL)로 자극 후에 보다 격렬하게 증식한다.
도 7은 폴리클로날 비선택된 CD4+ ROR1 CAR T 세포가 종양에 대한 반응으로 이들의 증식을 촉진시킴으로써 CD8+ ROR1-CAR CTL에 대한 도움을 제공함을 나타낸다. CD4+ ROR1-CAR T 세포(벌크 CD4+ T 세포로부터 유도됨)는 폴리클로날 비선택된 CD8+ ROR1-CAR CTL의 증식을 현저히 증가시켰다(개개 배양물에서 18% → CD4+ CAR T 세포와의 공-배양 후에 31.5%).
도 8(즉, 총괄적으로 도 8a-8d)은 유동 분류 정제된 CD4+ 천연, 중추 기억 및 효과기 기억 서브셋으로부터 CD4+ CAR T 세포주의 생성 및 T-세포 기능의 분석을 나타낸다. 사이토킨 프로파일 및 증식 능력은 천연 CD4+ T 세포로부터 유도된 CD4+ ROR1-CAR T 세포가 CD8+ CTL에 대한 도움을 제공하기 위해 가장 적합할 수 있음을 시사한다. 유사한 데이타는 CD19-특이적 CAR을 발현하는 CD4+ CAR T-세포주의 기능을 비교하여 실험에서 수득되었다. 도 8a는 CD45RA, CD45RO, CD62L의 발현에 기반한 천연, 중추 및 효과기 기억 CD4+ T 세포의 유동 분류 정제를 나타낸다. 도 8b는 분류 정제된 천연, 중추 및 효과기 기억 CD4+ T 세포(CFSE 분석)의 렌티바이러스 형질도입에 의해 유도된 ROR1-CAR T 세포주의 분석을 나타낸다. 도 8c는 분류 정제된 천연, 중추 및 효과기 기억 CD4+ T 세포으로부터 ROR1-CAR T 세포주의 사이토킨 분비의 분석을 나타낸다(루미넥스 분석). 도 8d는 분류 정제된 천연, 중추 및 효과기 기억 CD4+ T 세포로부터 CD19-CAR T-세포주의 사이토킨 분비의 분석을 나타낸다(루미넥스 분석). 다중 사이토킨 분석에 의해 수득한 사이토킨 프로파일(도 8b) 및 CFSE 염색에 의한 증식 성능(도 8c)은 천연 서브셋으로부터 유도된 CD4+ ROR1-CAR 변형된 T 세포가 최고 수준의 Th1 사이토킨을 생성했고 ROR1-양성 종양 세포에 의한 자극 후에 가장 격렬하게 증식했음을 나타내고, 이는 이들이 CD8+ ROR1-CAR CTL의 증가에 가장 적합할 수 있음을 시사한다. 분류-정제된 천연, 중추 및 효과기 기억 CD4+ T 세포로부터 CD19-CAR T 세포주의 사이토킨 분비의 분석(루미넥스 분석)은, CD4 T 세포 서브셋의 활성이 다수의 CAR로 일반화될 수 있음을 증명한다.
도 9는 CD8+ ROR1-CAR T 세포와 CD4+ ROR1-CAR 변형된 T 세포(그러나 비형질도입된 대조군 CD4+ T 세포는 아님)와의 공-배양을 나타낸다. CD8+ ROR1-CAR CTL 및 CD4+ ROR1-CAR T 세포주의 공-배양은 천연, 중추 및 효과기 기억 서브셋으로부터 유도되어, CD8+ ROR1-CAR CTL의 최대 증식을 허용할 수 있는 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 최적 조합을 규정한다. CD4 천연 ROR1-CAR T 세포주는 CD8 중추 기억 ROR1-CAR CTL의 최대 증식을 제공한다. 공 배양은 CD8+ 서브셋의 종양-특이적 증식의 증가를 유도하고, CD8+ 서브셋의 최대 증식은 천연 CD4+ T 세포로부터 유도된 CD4+ ROR1-CAR T 세포와의 공-배양 후에 관찰된다.
도 10은, CD19+ 맨틀 세포 림프종 라인 Jeko-1으로 자극시킨 CD8+ CD19-CAR CTL 및 CD4+ CD19-CAR T-세포주를 사용한 공배양 실험에서 중추 기억-유도된 CD8+ CAR CTL의 종양-특이적 증식을 증가시키는 천연 서브셋으로부터 유도된 CD4+ CAR T-세포주의 우수한 능력을 나타낸다. 중추 기억-유도된 CD8+ CAR CTL의 종양-특이적 증식을 증가시키는 천연 서브셋으로부터 유도된 CD4+ CAR T-세포주의 우수한 능력은 CD19+ 맨틀 세포 림프종 종양 라인 Jeko-1으로 자극시킨 CD8+ CD19-CAR CTL 및 CD4+ CD19-CAR T-세포주를 사용한 공배양 실험에서 확인되었다.
도 11은 CD8+ CAR T 세포 및 CD4+ CAR T 세포가 면역결핍 마우스(NOD/SCID-Raji)의 림프종 모델에서 직접 항-종양 효능을 제공함을 나타낸다. 마우스(n=3)의 그룹은 꼬리 정맥 주사를 통해 반딧불-루시퍼라제 발현 Raji 종양 세포로 접종하고, 10×106 T 세포의 단일 용량으로 처리했다. 마우스는 형질도입된 CD19-CAR 또는 대조군 모의-형질도입된 CD8+ 중추 기억-유도된 T 세포(a), 또는 형질도입된 CD19-CAR 또는 대조군 모의-형질도입된 CD4+ 천연-유도된 T 세포(b)를 제공했다. 종양 하중 및 분포는 연속 생물발광 영상화를 사용하는 분석했다.
도 12는 전신 맨틀 세포 림프종(NSG/Jeko-1-ffLuc)의 마우스 종양 모델에서 CD8+ ROR1-CAR CTL의 항-종양 효능에 대한 CD4+ ROR1-CAR 변형된 T 세포의 증가 및 상승작용 효과를 나타낸다. 전신 침략 맨틀 세포 림프종(NSG/Jeko-1)의 마우스 종양 모델에서 ROR1-CAR 변형된 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 항-종양 효능. CD8+ ROR1-CAR CTL, CD4+ ROR1-CAR T 세포 또는 CD8+ 및 CD4+ ROR1-CAR T 세포의 조합물의 양자 전달 후에 생물발광 영상화를 사용한 종양 하중의 분석. 모든 마우스는 동일한 전체 용량의 CAR T 세포를 제공했다.
도 13은 전신 림프종(NSG/Raji)의 마우스 모델에서 CD8+ 및 CD19-CAR T 세포의 상승작용을 나타낸다. NSG 마우스는 반딧불-루시퍼라제 형질도입된 Raji 종양 세포로 접종했다. Raji 종양의 접종은 종양 접종(처리 전)후 6일에 생물발광 영상화에 의해 확인시켜 준다(처리 개략도는 a에 제시되고, 생물발광에 의한 종양 접종은 b에 제시된다). 이어서, 마우스 그룹(n=5)은, CD8+ 및 CD4+ CD19-CAR T 세포 둘 다를 함유하는, CD8+ CD19-CAR 변형된 T 세포 또는 조합된 T-세포 생성물로 처리했다. 모든 마우스는 동일한 전체 용량의 T 세포(10×106)를 제공했다. 생물발광 영상화를 사용한 종양 하중의 분석은 CD8+ CD19-CAR T 세포로 처리한 마우스 코호트, 및 조합된 CD8+ 및 CD4 CD19-CAR T-세포 생성물로 처리한 마우스에서 Raji 종양의 완전한 소거를 나타냈다(처리 후 중간 흑색 및 회색 막대, b). 이어서, 마우스를 Raji 종양 세포의 2차 접종물로 자극시키고, 말초 혈액에서 CD4+ 및 CD8+ CAR T 세포의 빈도 및 종양 접종을 분석했다. 조합된 CD8+ 및 CD4+ CAR T-세포 생성물로 처리한 마우스에서, 종양 자극 후에 현저히 높은 수준의 CD8+ CAR T 세포(c 하부 패널) 및 Raji 접종물의 완전한 거부(종양 자극 후에 우측 회색 막대, b). 대조적으로, CD8+ CD19-CAR CTL 단독을 제공한 마우스에서, 본 발명자들은 종양 자극 후에 CAR T 세포의 증가를 검출하지 못했고(c), Raji 종양 세포는 접종할 수 있었다(종양 자극 후에 우측 흑색 막대, 패널 b).
본원에 사용된 "T 세포" 또는 "T 림프구"는 임의의 포유동물, 바람직하게는 영장류, 원숭이, 개 및 인간을 포함하는 종의 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, T 세포는 수용 대상체로서 동종이계(동일한 종이지만, 상이한 공여체)이고; 일부 양태에서 T 세포는 자가(공여체 및 수용체가 동일함)이고, 일부 양태에서 T 세포는 동계(공여체 및 수용체가 상이하지만, 일란성 쌍생아임)이다.
본원에 사용된 세포독성 T 림프구(CTL)는 이의 표면 상에서 CD8을 발현하는 T 림프구를 지칭한다(즉, CD8+ T 세포). 일부 실시양태에서, 이러한 세포는 바람직하게는 항원-경험을 한 "기억" T 세포(TM 세포)이다.
본원에 사용된 "중추 기억" T 세포(또는 "TCM")는 이의 표면 상에서 CD62L 및 CD45RO을 발현하고 천연 세포와 비교하여 CD45RA를 발현하지 않거나 발현 감소를 갖는 항원 경험한 CTL을 지칭한다. 실시양태에서, 중추 기억 세포는 CD62L, CCR7, CD28, CD127, CD45RO 및 CD95의 발현에 양성이고, 천연 세포와 비교하여 CD54RA의 발현 감소를 갖는다.
본원에 사용된 "효과기 기억" T 세포(또는 "TEM")는 중추 기억 세포와 비교하여 이의 표면 상에서 CD62L을 발현하지 않거나 발현 감소를 갖고 천연 세포와 비교하여 CD45RA를 발현하지 않거나 발현 감소를 갖는 항원 경험한 CTL을 지칭한다. 실시양태에서, 효과기 기억 세포는 CD62L, CCR7, CD28, CD45RA의 발현에 음성이고, 천연 세포 또는 중추 기억 세포와 비교하여 CD127에 양성이다.
본원에 사용된 "천연" T 세포는 CD62L 및 CD45RA를 발현하고 중추 기억 세포와 비교하여 CD45RO를 발현하지 않거나 발현 감소를 갖는 항원 비경험한 T 림프구를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 천연 CD8+ T 림프구는 CD62L, CCR7, CD28, CD3, CD127 및 CD45RA를 포함하는 천연 T 세포의 표현형 마커의 발현을 특징으로 한다.
본원에 사용된 "효과기", "TE" T 세포는 CD62L, CCR7, CD28을 발현하지 않거나 발현 감소를 갖고 중추 기억 세포와 비교하여 그랜자임 B 및 퍼포린에 양성인 항원 경험한 세포독성 림프구 세포를 지칭한다.
혼합물에서 세포 종류의 양을 기재하기 위해 본원에 사용된 "풍부한" 및 "고갈된"은 "농후한" 종류 수의 증가 및 "고갈된" 세포 수의 감소를 제공하는 공정 또는 단계로 세포 혼합물을 처리하는 것을 지칭한다. 따라서, 농후화 공정으로 처리된 세포의 본래 모집단의 공급원에 따라, 혼합물 또는 조성물은 60, 70, 80, 90, 95 또는 99% 이상(수 또는 계수)의 "농후한" 세포 및 40, 30, 20, 10, 5 또는 1% 이하(수 또는 계수)의 "고갈된" 세포를 함유할 수 있다.
인터류킨-15는 공지된 것이며, 예를 들면, 미국 특허 제6,344,192호에 기재되어 있다.
본원에 사용된 "CAR"은 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 항체의 세포외 가변 도메인 및 T 세포 또는 기타 수용체의 세포내 신호전달 도메인(예: 공자극 도메인)을 포함하는 키메라 항원 수용체를 지칭한다.
기재 방식
시험관내 배양 동안 CD4+ T 림프구는 시험관내 및 생체내에서 종양-특이적 CD8+ T 세포의 증식, 존속 및 항-종양 반응성을 현저히 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 천연 CD4+ T 세포는 중추 및 효과기 기억으로부터 유도된 CD4+ T 세포 또는 벌크 CD4+ T 세포와 비교하여 우수한 헬퍼 활성을 유도하는 고유 프로그래밍을 보유한다.
실시양태에서, 종양-반응성 CD4+ T 세포는 오펀 티로신 키나제 수용체 ROR1 또는 CD19 분자에 특이적인 단쇄 항체-유도된 키메라 항원 수용체(CAR)로 변형시킨다. ROR1은 만성 림프구성 백혈병(CLL) 맨들 세포 림프종(MCL) 상에서 균일하게 발현되고, 항-ROR1 모노클로날 항체(mAb)로부터의 ROR1-특이적 CAR은, CD8+ 세포독성 T 세포(CTL)에서 발현시키는 경우, 악성 B-세포의 특이적 인식을 제공하지만 성숙 정상 B-세포의 특이적 인식을 제공하지 않는다. 벌크 및 유동 분류 정제된 천연, 중추 및 효과기 기억 CD4+ T 세포로부터의 ROR1-CAR T 세포는 건강한 공여체 및 CLL 환자 둘 다의 말초 혈액으로부터 수득한다. CD4+ CAR T 세포는 ROR1으로 형질감염된 원발성 CLL, MCL 라인 Jeko-1 및 K562를 포함하는 ROR1+ 종양에 대해 특이적이지만 약한 세포용해 활성을 갖는다. 다중 사이토킨 분석은 CD8+ CAR CTL과 비교하여 현저히 높은 수준의 IFNγ, TNFa 및 특히 IL-2와 함께 Th1 사이토킨의 고도의 생성을 검출한다. CFSE 염색은 ROR1-양성 종양 세포에 의한 자극 후에 현저히 높은 증식을 나타내고, 증식이 유도된 세포 비율 및 증식 서브셋이 경험한 세포 분화 수는 CD8+ CAR CTL과 비교하여 현저히 높았다. 건강한 공여체 및 CLL 환자 둘 다로부터 수득한 CD4+ T 세포는 ROR1-특이적 CAR로 유전적으로 변형 후에 항-종양 반응성을 획득한다. 더욱이, 외인성 사이토킨의 부재하에 증식하고 고도의 Th1 사이토킨을 생성하는 능력은 CD4+ CAR T 세포가 CAR을 통한 자극 후에 전형적인 헬퍼 기능을 나타냄을 입증하고, 직접 항-종양 효과를 제공하는 것과 더불어, 종양-특이적 CD8+ CTL을 증가시키기 위해 사용될 수 있음을 시사한다.
유동 분류 정제된 CD4+ 천연, 중추 및 효과기 기억 서브셋으로부터 유도된 ROR1-CAR T 세포의 사이토킨 프로파일 및 증식 성능이 수득된다. 천연 CD45RA+ CD45RO- CD62L+ 서브셋으로부터 유도된 CD4+ CAR T 세포는 최고 수준의 Th1 사이토킨, 특히 IL-2를 생성하고, ROR1+ 종양 세포와 반응하여 증식한다. 실제로, 공-배양 실험에서, 비형질도입된 CD4+ T 세포가 아닌 형질도입된 CAR T 세포의 부가는 CD8+ CAR CTL의 종양-특이적 증식의 현저한 증가를 유도한다. 일부 실시양태에서, 중추 및 효과기 기억 서브셋 또는 벌크 CD4+ T 세포가 아닌 천연 서브셋으로부터 유도된 CAR-변형된 CD4+ T 세포는 CD8+ CAR CTL의 향상된 증식을 생성한다.
CD8+ 중추 기억 T 세포는 투여 후에 연장된 기간 동안 이들을 지속시키는 고유 프로그래밍을 갖고, 이는 이들을 면역요법을 위한 CD8+ T 세포의 바람직한 서브셋으로 되게 한다. 실시양태에서, 분류 정제된 CD8+ 중추 기억 T 세포로부터 ROR1-CAR 또는 CD19 CAR 변형된 CLT 및 CD4+ 천연 CAR-변형된 T 세포는 CD8+ T 세포 서브셋의 향상된 증식을 제공한다. 실시양태에서, 종양-특이적 CD4+ T 세포는 항-종양 활성을 나타내고, 시험관내 및 생체내에서 종양-특이적 CD8+ T 세포에 대한 도움을 제공한다. 특정 실시양태에서, 천연 서브셋으로부터의 종양-특이적 CD8+ T 세포가 사용된다.
또 다른 실시양태에서, CD8+ 및 CD4+ T 세포는 T 세포 수용체(TCF)로 변형시킬 수 있다. TCR은 임의의 항원, 병원체 또는 종양[흑색종(예: MART1, gp100), 백혈병(예: WT1, 부조직적합성 항원), 유방암(예: her2, NY-BR1)에서 다수의 종양 항원을 위한 TCR이 존재한다.]에 특이적일 수 있다.
상세한 설명
조성물
본 명세서는, 세포 면역 반응을 매개하는 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제의 능력을 증가시키는 유전적으로 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제를 포함하는 양자 세포 면역요법 조성물을 제공하고, 여기서 상기 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체 또는 기타 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다.
일부 실시양태에서, 양자 세포 면역요법 조성물은 세포 면역 반응을 유도하는 키메라 항원 수용체 변형된 종양-특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 추가로 포함하고, 여기서 상기 세포독성 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 단쇄 항체 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 실시양태에서, 양자 세포 면역요법 조성물은 세포 면역 반응을 유도하는 키메라 항원 수용체 변형된 종양-특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 포함하고, 여기서 상기 세포독성 T 림프구 세포 제제는, CD45RO 음성, CD62L 양성 CD4 양성 T 세포로부터 유도된 항원-반응성 키메라 항원 수용체 변형된 천연 CD4+ T 헬퍼 세포 및 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합하여, 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 단쇄 항체 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ T 세포를 포함한다.
다른 실시양태에서, 양자 세포 면역요법 조성물은, CD8+ 면역 반응을 증가시키는 항원-반응성 키메라 항원 수용체 변형된 천연 CD4+ T 헬퍼 세포와 조합된, 환자로부터 유도된 세포 면역 반응을 유도하는 항원 특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 포함하고, 여기서 상기 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다.
추가의 실시양태에서, 양자 세포 면역요법 조성물은 CD8+ 면역 반응을 증가시키는 항원-반응성 키메라 항원 수용체 변형된 천연 CD4+ T 헬퍼 세포를 포함하고, 여기서 상기 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다.
실시양태에서, CD4+ T 헬퍼 림프구 세포는 천연 CD4+ T 세포, 중추 기억 CD4+ T 세포, 효과기 기억 CD4+ T 세포 또는 벌크 CD4+ T 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, CD4+ 헬퍼 림프구 세포는 천연 CD4+ T 세포이고, 상기 천연 CD4+ T 세포는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+ CD4+ T 세포를 포함한다. 실시양태에서, CD8+ T 세포독성 림프구 세포는 천연 CD8+ T 세포, 중추 기억 CD8+ T 세포, 효과기 기억 CD8+ T 세포 또는 벌크 CD8+ T 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, CD8+ 세포독성 T 림프구 세포는 중추 기억 T 세포이고, 당해 중추 기억 T 세포는 CD45RO+, CD62L+, CD8+ T 세포를 포함한다. 여전히 다른 실시양태에서, CD8+ 세포독성 T 림프구 세포는 중추 기억 T 세포이고, CD4+ 헬퍼 T 림프구 세포는 천연 CD4+ T 세포이다.
대체 실시양태에서, T 세포는 재조합체 T 세포 수용체로 변형시킬 수 있다. TCR은 임의의 항원, 병원체 또는 종양에 특이적일 수 있다. 흑색종(예: MART1, gp100), 백혈병(예: WT1, 부조직적합성 항원), 유방암(예: her2, NY-BR1)에서 다수의 종양 항원을 위한 TCR이 있다.
T 림프구 모집단의 선택 및 분류
본원에 기재된 조성물은 항원 반응성 CD4+ 및 CD8+ T 림프구를 제공한다.
T 림프구는 공지된 기술에 따라 수집될 수 있고, 유동 혈구계산 및/또는 면역자기 선택 등의 항체에 대한 친화성 결합과 같은 공지된 기술에 의해 풍부화 또는 고갈된다. 풍부화 및/또는 고갈 단계 후, 목적하는 T 림프구의 시험관내 증식은 공지된 기술(이로써 한정되는 것은 아니지만, 리델(Riddell) 등의 미국 특허 제6,040,177호에 기재된 것들을 포함) 또는 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 수 있는 이의 변형태에 따라 수행할 수 있다.
예를 들면, 목적하는 T 세포 모집단 또는 아집단은 시험관내에서 배양 배지에 1차 T 림프구 모집단을 부가한 다음, 배양 배지에 공급물 세포, 예를 들면, 미분화 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)(예를 들면, 생성된 세포 모집단이 증식되는 1차 모집단 중에 각 T 림프구에 대해 적어도 약 5, 10, 20 또는 40개 이상의 PBMC 공급물 세포를 함유하도록)를 부가하고, 배양물을 배양(예: T 세포 수를 증식시키기에 충분한 시간 동안)함으로써 증식시킬 수 있다. 비분화 공급물 세포는 감마선-조사된 PBMC 공급물 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, PBMC는 약 3000 내지 3600 rad 범위에서 감마선으로 조사된다. 배양 배지에 대한 T 세포 및 공급물 세포의 부가 순서는 필요에 따라 역전될 수 있다. 배양물은 T 림프구의 성장에 적합한 온도 등의 조건하에 통상 배양될 수 있다. 인간 T 림프구의 성장을 위해, 예를 들면, 온도는 일반적으로 적어도 약 25℃, 바람직하게는 적어도 약 30℃, 보다 바람직하게는 약 37℃일 수 있다.
증식된 T 림프구는 세포독성 T 림프구(CTL), 및 인간 종양 또는 병원체 상에 존재하는 항원에 특이적인 헬퍼 T 림프구를 포함한다.
임의로, 증식 방법은 공급물 세포로서 비-분화 EBV-형질전환된 림프아구성 세포(LCL)을 부가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 rad의 범위에서 감마선으로 조사될 수 있다. LCL 공급물 세포는 임의의 적합한 양, 예를 들면, 적어도 약 10:1의 LCL 공급물 세포 대 1차 T 림프구의 비율로 제공될 수 있다.
임의로, 증식 방법은 배양 배지에 항-CD3 모노클로날 항체를 부가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다(예: 적어도 약 0.5 ng/ml의 농도로). 임의로, 증식 방법은 배양 배지에 IL-2 및/또는 IL-15를 부가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다(예를 들면, 여기서 IL-2의 농도는 적어도 약 10 단위/ml이다).
T 림프구의 분리 후, 세포독성 및 헬퍼 T 림프구 둘 다는 팽창 전후에 천연, 기억 및 효과기 T 세포 아모집단으로 분류될 수 있다.
CD8+ 세포는 표준 방법을 사용하여 수득할 수 있다. 일부 실시양태에서, CD8+ 세포는 CD8+ 세포의 이들 유형 각각과 결합되는 세포 표면 항원을 동정함으로써 천연, 중추 기억 및 효과기 세포로 추가 분류된다. 실시양태에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L-서브셋 둘 다에 존재한다. PBMC는 항-CD8 및 항-CD62L 항체로 염색한 후에 CD62L-CD8+ 및 CD62L+ CD8+ 분획으로 분류된다. 일부 실시양태에서, 중추 기억 TCM의 표현형 마커의 발현은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 및 CD127을 포함하고, 그랜자임 B에 음성이다. 일부 실시양태에서, 중추 기억 T 세포는 CD45RO+, CD62L+, CD8+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 효과기 TE는 CD62L, CCR7, CD28 및 CD127에 음성이고, 그랜자임 B 및 퍼포린에 양성이다. 일부 실시양태에서, 천연 CD8+ T 림프구는 CD62L, CCR7, CD28, CD3, CD127 및 CD45RA를 포함하는 천연 T 세포의 표현형 마커의 발현을 특징으로 한다.
세포 또는 세포 모집단이 특정한 세포 표면 마커에 양성인지의 여부는 표면 마커에 대한 특이적 항체 및 이소형 매칭된 대조군 항체에 의한 염색을 사용하는 유동 혈구계산에 의해 측정할 수 있다. 마커에 대한 세포 모집단 음성은 이소형 대조군과 비교하여 특이적 항체를 갖는 세포 모집단의 현저한 염색의 부재를 지칭하고, 세포 모집단 양성은 이소형 대조군과 비교하여 세포 모집단의 균일한 염색을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 하나 또는 마커들의 발현 감소는 평균 형광 강도의 1 log10의 소실 및/또는, 참조 세포 모집단과 비교하는 경우, 세포 중 적어도 20%, 세포 중 적어도 30%, 세포 중 적어도 35%, 세포 중 적어도 40%, 세포 중 적어도 45%, 세포 중 적어도 50%, 세포 중 적어도 55%, 세포 중 적어도 60%, 세포 중 적어도 65%, 세포 중 적어도 70%, 세포 중 적어도 75%, 세포 중 적어도 80%, 세포 중 적어도 85%, 세포 중 적어도 90%, 세포 중 적어도 95% 및 세포 중 적어도 100%의 마커를 나타내는 세포 비율의 감소를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 하나 또는 마커에 대한 세포 모집단 양성은, 참조 세포 모집단과 비교하는 경우, 세포 중 적어도 50%, 세포 중 적어도 55%, 세포 중 적어도 60%, 세포 중 적어도 65%, 세포 중 적어도 70%, 세포 중 적어도 75%, 세포 중 적어도 80%, 세포 중 적어도 85%, 세포 중 적어도 90%, 세포 중 적어도 95% 및 세포 중 적어도 100% 및 50 내지 100%의 모든 %의 마커를 나타내는 세포 비율을 지칭한다.
CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 모집단을 동정함으로써 천연, 중추 기억 및 효과기 세포로 분류된다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 수득할 수 있다. 일부 실시양태에서, 천연 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+ CD4+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 중추 기억 CD4+ 세포는 CD62L 양성 및 CD45RO 양성이다. 일부 실시양태에서, 효과기 CD4+ 세포는 CD62L 및 CD45RO 음성이다.
항원 특이적인 CD4+ 및 CD8+의 모집단은 천연 또는 항원 특이적 T 림프구를 항원으로 자극시킴으로써 수득할 수 있다. 예를 들면, 항원 특이적 T 세포 클론은 감염된 대상체로부터 T 세포를 분리하고 당해 세포를 시험관내에서 동일한 항원으로 자극함으로써 사이토메갈로바이러스 항원으로 생성될 수 있다. 천연 T 세포가 또한 사용될 수 있다. 종양 세포, 암 세포 또는 감염성 제제로부터 임의 수의 항원을 사용할 수 있다. 이러한 항원의 예는 HIV 항원, HCV 항원, HBV 항원, CMV 항원, 기생충 항원 및 종양 항원, 예를 들면, 오펀 티로신 키나제 수용체 ROR1, tEGFR, Her2, L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린 및 CEA를 포함한다. 일부 실시양태에서, 양자 세포 면역요법 조성물은 고형 종양, 혈액암, 흑색종 또는 바이러스에 의한 감염을 포함하는 질환 또는 장애의 치료에 유용하다.
림프구 모집단의 변형
일부 실시양태에서, 본 명세서의 기재에 따라 면역요법에 사용되는 T 세포 내로 기능성 유전자를 도입하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들면, 도입된 유전자 또는 유전자들은 전달된 T세포의 생존능 및/또는 기능을 촉진시킴으로써 치료 효과를 개선시킬 수 있거나; 이들은 생체내 생존 또는 이동의 선택 및/또는 평가는 가능하게 하는 유전자 마커를 제공할 수 있거나; 이들은, 예를 들면, 우성 음성 선별가능한 마커와 음성 선별가능한 마커의 융합으로부터 유도된 이작용성 선별가능한 융합 유전자의 사용을 기재하는, 문헌[참조: Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); and Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992); 또한 공보 PCT/US91/08442 and PCT/US94/05601 by Lupton et al.]에 기재된 바와 같이 생체내에서 음성 선별에 감수성인 세포를 제조함으로써 면역요법의 안전성을 개선시키는 기능을 도입할 수 있다. 이는 공지된 기술(예를 들면, 미국 특허 제6,040,177호, Riddell et al., columns 14-17) 또는 본 명세서의 기재에 기초하여 당해 기술분야의 기술자에게 명백할 수 있는 이의 변형태에 따라 수행할 수 있다.
실시양태에서, T 세포는 키메라 항원 수용체(CAR)로 변형된다. 일부 실시양태에서, CAR은 T-세포 활성화 및 세포독성을 매개하는 TCR CD3+ 쇄에 연결된 모노클로날 항체(mAb)의 가변 중쇄(VH) 및 가변 경쇄(VL)로부터 유도되는 단쇄 항체 단편(scFv)을 포함한다. 공자극 신호는 또한 CD28 또는 4-1BB의 공자극 도메인을 CD3+ 쇄에 융합시킴으로써 CAR를 통해 제공될 수 있다. CAR은 HLA와 독립적인 세포 표면 분자에 특이적이고, 따라서 HLA-제한을 포함하는 TCR-인식 및 종양 세포에 대한 낮은 수준의 HLA-발현의 제한을 극복한다.
예를 들면, 항체 분자의 항원 결합 단편 또는 항체 가변 도메인을 사용하여 임의의 세포 표면 마커에 대한 특이성을 갖는 CAR이 작제될 수 있다. 항원 결합 분자는 하나 이상의 세포 신호전달 모듈에 연결될 수 있다. 실시양태에서, 세포 신호전달 모듈은 CD3 막관통 도메인, CD3 세포내 신호전달 도메인 및 CD28 막관통 도메인을 포함한다. 실시양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 CD3 세포내 도메인에 연결된 CD28 막관통 및 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, CAR은 또한 eTGFR 등의 형질도입 마커를 포함할 수 있다.
당해 실시양태에서, CD8+ 세포독성 T 세포의 세포내 신호전달 도메인은 CD4+ 헬퍼 T 세포의 세포내 신호전달 도메인과 동일하다. 다른 실시양태에서, CD8+ 세포독성 T 세포의 세포내 신호전달 도메인은 CD4+ 헬퍼 T 세포의 세포내 신호전달 도메인과 상이하다.
일부 실시양태에서, CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포는 모두 병원체-특이적 세포 표면 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중쇄 도메인으로 유전적으로 변형된다. 당해 실시양태에서, CAR은 병원체, 종양 또는 암 세포에 결합된 세포 표면 발현된 항원에 특이적이다. 일부 실시양태에서, CAR은 HIV 항원, HCV 항원, HBV 항원, CMV 항원, 기생충 항원 및 종양 항원, 예를 들면, 오펀 티로신 키나제 수용체 ROR1, tEGFR, Her2, L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린 및 CEA에 특이적이다. CAR을 생성하는 방법은 본원에 기재되어 있고, 또한 문헌[참조: 미국 특허 제6,410,319호(Forman) 및 WO 2002/077029, 제7,446,191호, 2010/065818, 2010/025177, 2007/059298, 및 7,514,537(Jensen et al.) 및 Berger C. et al., J. Clinical Investigation, 118:1 294-308 (2008), 이들은 본원에서 참조로서 인용됨]에서 발견할 수 있다.
실시양태에서, 동일하거나 상이한 CAR은 CD4+ 및 CD8+ T 림프구 각각 내로 도입될 수 있다. 실시양태에서, 이들 모집단 각각 내의 CAR은 동일한 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 분자를 갖는다. 세포 신호전달 분자는 상이할 수 있다. 실시양태에서, 각각의 CD4 또는 CD8 T 림프구는 형질도입 전에 천연, 중추 기억, 효과기 기억 또는 효과기 세포로 분류될 수 있다. 대체 실시양태에서, 각각의 CD4 또는 CD8 T 림프구는 형질도입 전에 천연, 중추 기억, 효과기 기억 또는 효과기 세포로 분류될 수 있다.
대체 실시양태에서, T 세포는 재조합체 T 세포 수용체로 변형시킬 수 있다. TCR은 임의의 항원, 병원체 또는 종양에 특이적일 수 있다. 흑색종(예: MART1, gp100), 백혈병(예: WT1, 부조직적합성 항원), 유방암(예: her2, NY-BR1)에서 다수의 종양 항원에 대한 TCR이 존재한다.
유전자 전달을 위해 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하는 다양한 감염 기술이 개발되었다. 이는 본 발명의 T 림프구의 형질도입에 대한 현재 바람직한 방법을 나타낸다. 이러한 방식으로 사용되어 왔던 바이러스 벡터는 시미안 바이러스 40, 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스(AAV), 렌티바이러스 벡터 및 레트로바이러스로부터 유도된 바이러스 벡터를 포함한다. 따라서, 유전자 전달 및 발현 방법은 다수가 있지만, 본질적으로 포유동물 세포에서 유전자 물질을 도입 및 발현하도록 기능한다. 인산칼슘 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공, 및 재조합 아데노바이러스, 아데노-관련 바이러스 및 레트로바이러스 벡터에 의한 감염을 포함하는 상기 기술 중의 몇몇을 사용하여, 조혈 세포 또는 임파 세포를 형질도입할 수 있다. 원발성 T 림프구는 전기천공 및 레트로바이러스 감염에 의해 공공적으로 형질도입되었다.
레트로바이러스 벡터는 진핵 세포 내로 유전자 전달을 위한 매우 효율적인 방법을 제공한다. 더욱이, 레트로바이러스 삽입은 조절된 방식으로 일어나고, 세포당 새로운 유전자 정보의 하나 또는 소수 카피의 안정한 삽입을 제공한다.
자극 인자(예: 림포카인 또는 사이토킨)의 과발현은 처리된 개체에게 독성일 수 있는 것으로 고려된다. 따라서, 본 발명의 T 세포가 생체내에서 음성 선택에 감수성이게 하는 유전자 세그먼트를 포함하는 것도 본 발명의 범위 내에 포함된다. "음성 선택"이란, 융합된 세포가 개체의 생체내 조건하에서 변화의 결과로서 제거될 수 있음을 의미한다. 음성 선별가능한 표현형은 투여된 제제(예: 화합물)에 민감성을 제공하는 유전자의 삽입으로부터 발생할 수 있다. 음성 선별가능한 유전자는 당해 기술분야에 공지되어 있고, 특히 하기를 포함한다: 간사이클로비르 민감성을 제공하는 헤르페스 심플렉스 바이러스 유형 I 티미딘 키나제(HSV-I TK) 유전자(Wigler et al., Cell 11:223, 1977); 세포 하이포크산틴 포스프리보실트랜스퍼라제(HPRT) 유전자, 세포 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제(APRT) 유전자, 박테리아 사이토신 데아미나제[참조: Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992)].
일부 실시양태에서, 시험관내에서 음성 선별가능한 표현형의 세포를 선별할 수 있는 양성 마커를 T 세포에 포함하는 것이 유용할 수 있다. 양성 선별가능한 마커는, 숙주 세포 내로 도입하면, 당해 유전자를 포함하는 세포의 양성 선별을 허용하는 우성 표현형을 발현하는 유전자일 수 있다. 이러한 유형의 유전자는 당해 기술분야에 공지되어 있고, 특히 하이드로마이신 B에 내성을 부여하는 하이드로마이신-B 포스포트랜스퍼라제 유전자(hph), 항생제 G418에 대한 내성을 코딩하는 Tn5로부터의 아미노 글리코시드 포스포트랜스퍼라제 유전자(neo 또는 aph), 디하이드로폴레이트 리덕타제(DHFR) 유전자, 아데노신 다미나제 유전자(ADA) 및 다중-약물 내성(MDR) 유전자를 포함한다.
바람직하게는, 양성 선별가능한 마커 및 음성 선별가능한 요소는 음성 선별가능한 요소의 소실이 필수적으로 양성 선별가능한 마커의 소실에 의해 또한 달성되도록 연결된다. 보다 더 바람직하게는, 양성 및 음성 선별가능한 마커는 하나의 소실이 또 다른 것의 소실을 강제적으로 유도하도록 융합된다. 발현 생성물로서 수득되는 융합된 폴리뉴클레오티드의 예는 상기한 목적하는 양성 및 음성 선별 특성 둘 다를 제공하는 폴리펩티드가 하이그로마이신 포스포트랜스퍼라제 티미딘 키나제 융합 유전자(HyTK)인 것이다. 이러한 유전자의 발현은 시험관내에서 양성 선별을 위한 하이드로마이신 B 내성, 및 생체내에서 음성 선별을 위한 간사이클로비르 민감성을 제공하는 폴리펩티드를 생성한다[참조: Lupton S. D., et al, Mol. and Cell. Biology 11:3374- 3378, 1991]. 또한, 바람직한 실시양태에서, 키메라 수용체를 코딩하는 본 발명의 폴리뉴클레오티드는 융합 유전자, 특히 시험관내에서 양성 선별을 위한 하이드로마이신 B 내성, 및 생체내에서 음성 선별을 위한 간사이클로비르 민감성을 부여하는 것들, 예를 들면, 문헌[참조: Lupton, S. D. et al. (1991), supra]에 기재된 HyTK 레트로바이러스 벡터에 존재한다. 또한, 우성 양성 선별가능한 마커와 음성 선별가능한 마커의 융합으로부터 유도된 이작용성 선별가능한 융합 유전자의 사용을 기재하는 공보[참조: PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601, S. D. Lupton]를 참조한다.
바람직한 양성 선별가능한 마커는 hph, nco 및 gpt로 이루어진 그룹으로부터 선택된 유전자로부터 유도되고, 바람직한 음성 선별가능한 마커는 사이토신 데아미나제, HSV-I TK, VZV TK, HPRT, APRT 및 gpt로 이루어진 그룹으로부터 선택된 유전자로부터 유도된다. 특히 바람직한 마커는 이작용성 선별가능한 융합 유전자이고, 여기서 양성 선별가능한 마커는 hph 또는 neo로부터 유도되고, 음성 선별가능한 마커는 사이토신 데아미나제 또는 TK 유전자 또는 선별가능한 마커로부터 유도된다.
당해 기술분야에 공지된 바와 같은 다양한 방법을 T 림프구의 형질도입에 사용할 수 있다. 예를 들면, 레트로바이러스 형질도입은 다음과 같이 수행할 수 있다: 본원에 기재된 바와 같은 REM을 사용하는 자극 후, 1일차에, 세포를 20-30 단위/ml IL-2와 함께 제공하고, 3일 차에, 매질의 절반을 표준 방법에 따라 제조한 레트로바이러스 상청으로 대체한 다음, 배양물을 5 ug/ml 폴리브렌 및 20-30 단위/ml IL-2로 보충하고; 4일차에, 세포를 세척하고, 이들을 20-30 단위/ml IL-2가 보충된 신선한 배양 배지에 넣고; 5일차에, 레트로바이러스에 노출을 반복하고; 6일차에, 세포를 30 단위/ml IL-2가 보충된 선별 배지(예를 들면, 레트로바이러스 벡터에 제공된 항생제 내성 유전자에 상응하는 항생제를 함유함)에 넣고; 13일차에, 피콜 하이패크 밀도 구배 분리를 사용하는 사멸 세포로부터 생존 세포를 분리한 다음, 생존 세포를 서브클로닝한다.
CD4+ 및 CD8+ 세포는 CAR을 코딩하는 발현 벡터로 변형시킬 수 있다. 실시양태에서, 이들 세포를, 이들 세포 모집단 각각에 특이적인 세포 표면 항원을 분류함으로써 상기한 바와 같은 천연, 중추 기억 및 효과기 세포의 아모집단으로 추가로 분류한다. 또한, CD4+ 또는 CD8+ 세포 모집단은 이들의 사이토킨 프로파일 또는 증식 활성에 의해 선별할 수 있다. 예를 들면, 항원으로 자극하는 경우, 모의 형질도입된 세포 또는 형질도입된 CD8+ 세포와 비교하여, IL-2, IL-4, IL-10, TNFα 및 IFNγ 등의 사이토킨의 증가된 생성을 갖는 CD4+ T 림프구를 선별할 수 있다. 다른 실시양태에서, IL-2 및/또는 TNFα의 증가된 생성을 갖는 천연 CD4+ T 세포가 선별된다. 마찬가지로, 증가된 IFNγ 생성을 갖는 CD8+ 세포가 모의 형질도입된 CD8+ 세포와 비교하여 선별된다.
실시양태에서, 항원과 반응하여 증식하는 CD4+ 및 CD8+ 세포가 선별된다. 예를 들면, 항원으로 자극하는 경우, 모의 형질도입된 세포 또는 CD8+ 형질도입된 세포와 비교하여, 격렬하게 증식하는 CD4+ 세포가 선별된다.
일부 실시양태에서, 항원 함유 세포에 대해 세포독성인 CD4+ 및 CD8+ 세포가 선별된다. 실시양태에서, CD4+는 CD8+ 세포와 비교하여 약하게 세포독성인 것으로 예상된다.
당해 개시는 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 조합물이 당해 조성물에 사용될 수 있음을 고려한다. 한 가지 실시양태에서, CAR 형질도입된 CD4+ 세포의 조합물은 CAR과 동일한 항원성 특이성까지 CD8+ 항원 반응성 세포와 조합될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, CAR 변형된 CD4+ 및 CD8+ 세포가 조합된다.
본원에 기재된 바와 같이, 당해 개시는 CD4+ 및 CD8+ 세포가 아모집단, 예를 들면, 천연, 중추 기억 및 효과기 세포 모집단으로 추가로 분리될 수 있음을 고려한다. 본원에 기재된 바와 같이, 일부 실시양태에서, 천연 CD4+ 세포는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+ CD4+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 중추 기억 CD4+ 세포는 CD62L 양성 및 CD45RO 양성이다. 일부 실시양태에서, 효과기 CD4+ 세포는 CD62L 음성 및 CD45RO 양성이다. 각각의 이들 모집단은 독립적으로 CAR로 변형시킬 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이, 실시양태에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브셋 둘 다에 존재한다. PBMC는 항-CD8 및 항-CD62L 항체로 염색 후에 CD62L-CD8+ 및 CD62L+CD8+ 분획으로 분류된다. 일부 실시양태에서, 중추 기억 TCM의 표현형 마커의 발현은 CD62L, CCR7, CD28, CD3 및 CD127을 포함하고, 그랜자임에 대해 음성이다. 일부 실시양태에서, 중추 기억 T 세포는 CD45RO+, CD62L+, CD8+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 효과기 TE는 CD62L, CCR7, CD28 및 CD127에 대해 음성이고, 그랜자임 B 및 퍼포린에 대해 양성이다. 일부 실시양태에서, 천연 CD8+ T 림프구는 CD8+, CD62L+, CD45RO+, CCR7+, CD28+ CD127+ 및 CD45RO+를 특징으로 한다. 이들 모집단 각각은 독립적으로 CAR로 독립적으로 변형시킬 수 있다.
CD4+ 및 CD8+ 세포의 아모집단 각각은 서로 조합될 수 있다. 특정 실시양태에서, 변형된 천연 CD4+ 세포는 변형된 중추 기억 CD8+ T 세포와 조합되어, 종양 세포 등의 항원 함유 세포에 대해 상승작용 세포독성 효과를 제공한다.
방법
본 명세서는 양자 면역요법 조성물을 제조하는 방법 및 질환 또는 장애를 갖는 환자에서 세포 면역요법을 수행하기 위한 이들 조성물의 용도 또는 사용 방법을 제공한다.
실시양태에서, 당해 조성물을 제조하는 방법은 변형된 천연 CD4+ T 헬퍼 세포를 수득하는 것을 포함하고, 여기서 상기 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다.
다른 실시양태에서, 당해 방법은 변형된 CD8+ 세포독성 T 세포를 수득하는 것을 추가로 포함하고, 여기서 상기 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ 세포를 포함한다.
다른 실시양태에서, 당해 방법은 변형된 CD8+ 세포독성 T 세포를 수득하는 것을 포함하고 변형된 CD8+ 세포독성 T 세포를 항원 특이적 CD4+ 헬퍼 세포 림프구 세포 제제와 조합하는 것을 추가로 포함하며, 여기서 상기 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ T 세포를 포함한다.
CAR로 변형시킨 CD4+ 및 CD8+ 세포의 제조는 실시예 뿐만 아니라 상기 기재되어 있다. 항원 특이적 T 림프구는 당해 질환 또는 장애를 갖는 환자로부터 수득할 수 있거나, 항원의 존재하에 T 림프구의 시험관내 자극에 의해 제조할 수 있다. CD4+ 및 CD8+ T 림프구의 아모집단은 또한 본원에 기재된 바와 같이 분리될 수 있고 제조 방법과 조합될 수 있다.
본 명세서는 또한, 청구항 제1항 내지 제19항 중의 어느 한 항의 조성물을 투여함을 포함하는, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 세포 면역요법을 수행하는 방법을 제공한다. 다른 실시양태에서, 당해 방법은 세포 면역 반응을 제공하는 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제, 및 직접 종양 인식을 유도하고 세포 면역 반응을 매개하는 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제의 능력을 증가시키는 유전적으로 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 세포독성 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 질환과 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 또는 기타 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ T 세포를 포함하고, 상기 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 세포 면역요법을 수행하는 방법은 유전적으로 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 상기 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 모듈을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함한다. 한 가지 실시양태에서, 당해 방법은 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하고, 여기서 상기 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제는 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 모듈을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8 양성 세포를 포함한다.
또 다른 실시양태는, 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원의 존재에 대해 대상체의 생물학적 샘플을 분석하고 본원에 기재된 양자 면역요법 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 세포 면역요법을 수행하는 방법을 기재하며, 여기서 상기 키메라 항원 수용체는 상기 항원에 특이적으로 결합한다.
CAR이 생성되며, 이는 고형 종양, 암, 바이러스 감염 및 기생충에 의한 감염 등의 질환 또는 상태와 관련된 항원에 대한 특이적 결합을 제공하는 성분을 갖는다. 한 가지 실시양태에서, 키메라 항원 수용체의 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 모듈은 막관통 도메인, CD28 신호전달 도메인, 및 CD3 세포내 신호전달 도메인, 또는 T 세포 공자극 분자의 기타 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포내 신호전달 분자는 CD3 세포내 도메인, CD28 도메인, CD3 세포내 도메인에 연결된 CD28 막관통 및 신호전달 도메인, 또는 T 세포 공자극 분자의 기타 도메인을 포함한다.
대체 실시양태에서, T 세포는 재조합체 T 세포 수용체로 변형시킬 수 있다. TCR은 임의의 항원, 병원체 또는 종양에 특이적일 수 있다. 흑색종(예: MART1, gp100), 백혈병(예: WT1, 부조직적합성 항원), 유방암(예: her2, NY-BR1)에서 다수 종양 항원을 위한 TCR이 존재한다.
일부 실시양태에서, CD4+ T 헬퍼 림프구 세포는 천연 CD4+ T 세포, 중추 기억 CD4+ T 세포, 효과기 기억 CD4+ T 세포 또는 벌크 CD4+ T 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, CD4+ 헬퍼 림프구 세포는 천연 CD4+ T 세포이고, 여기서 상기 천연 CD4+ T 세포는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+ CD4+ T 세포를 포함한다. 다른 실시양태에서, CD8+ T 세포독성 림프구 세포는 천연 CD8+ T 세포, 중추 기억 CD8+ T 세포, 효과기 기억 CD8+ T 세포 또는 벌크 CD8+ T 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, CD8+ 세포독성 T 림프구 세포는 중추 기억 T 세포이고, 여기서 상기 중추 기억 T 세포는 CD45RO+, CD62L+, CD8+ T 세포를 포함한다. 특정한 실시양태에서, CD8+ 세포독성 T 림프구 세포는 중추 기억 T 세포이고, CD4+ 헬퍼 T 림프구 세포는 천연 CD4+ T 세포이다.
실시양태에서, CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포는 병원체 또는 종양-특이적 세포 표면 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중쇄 도메인을 포함하는 CAR로 둘 다 유전적으로 변형된다. 다른 실시양태에서, CD8 세포독성 T 세포의 세포내 신호전달 도메인은 CD4 헬퍼 T 세포의 세포내 신호전달 도메인과 동일하다. 다른 실시양태에서, CD8 세포독성 T 세포의 세포내 신호전달 도메인은 CD4 헬퍼 T 세포의 세포내 신호전달 도메인과 상이하다.
본 발명에 의해 치료될 수 있는 대상체는, 일반적으로 인간 및 기타 영장류 대상체, 예를 들면 가축 의료 목적을 위한 원숭이 및 유인원이다. 이러한 대상체는 수컷 또는 암컷일 수 있고, 유아, 아동, 청년, 성인 및 노인 대상체를 포함하는 임의의 적합한 연령일 수 있다.
본 발명의 방법은, 예를 들면, 고형 종양, 혈액암, 흑색종, 또는 바이러스 또는 기타 병원체에 의한 감염의 치료에 유용하다. 병원체에 의한 감염은 HIV, HCV, HBV, CMV 및 기생충 질환을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 당해 질환 또는 장애와 관련된 항원은 오펀 티로신 키나제 수용체 ROR1, tEGFR, Her2, L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA 및 B형 간염 표면 항원으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
치료될 수 있는 대상체는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 결장, 폐, 간, 유방, 전립선, 난소, 피부(흑색종 포함), 골 및 뇌 암 등을 포함하는 암이 발병된 대상체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원과 관련된 종양, 예를 들면, 흑색종, 유방암, 편평 상피암, 결장암, 백혈병, 골수종, 전립선암 등은 공지되어 있다(이들 양태에서, 기억 T 세포는 T 세포 수용체 유전자를 도입함으로써 분리되거나 유전적으로 조작될 수 있다). 다른 실시양태에서, 종양 관련된 단백질은 유전적으로 조작된 면역수용체를 발현하는 유전적으로 변형된 T 세포로 표적화시킬 수 있다. 이의 예에는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, B 세포 림프종, 유방암, 유방암, 전립선암 및 백혈병이 포함된다.
치료될 수 있는 대상체는 또한, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 바이러스, 레트로바이러스, 박테리아 및 원생동물 감염 등을 포함하는 감염성 질환이 발병되거나 발병 위험이 있는 대상체를 포함한다. 치료될 수 있는 대상체는, 이로써 한정되는 것은 아니지만, 이식 환자에서 사이토메갈로바이러스(CMV), 엡스테인-바르 바이러스(EBV), 아데노바이러스, BK 폴리오마바이러스 감염 등을 포함하는 방러스 감염이 발병된 면역결핍 환자를 포함한다.
상기한 바와 같이 제조한 세포는, 공지된 기술, 또는 본 명세서에 기반하여 당해 기술분야의 통상의 기술자에게 명백한 이의 변형태에 따라 양자 면역요법을 위한 방법 및 조성물에 사용될 수 있다[참조: 미국 특허 출원 공개 번호 제2003/0170238호(Gruenberg et al); 미국 특허 제4,690,915호(Rosenberg)].
일부 실시양태에서, 세포는 이들을 먼저 이들의 배양 배지로부터 수거하고, 세척한 다음, 세포를 투여에 적합한 매질 및 용기 시스템("약제학적으로 허용가능한" 담체)에서 치료 유효량으로 농축시킴으로써 제형화된다. 적합한 주입 매질은 임의의 등장성 매질 제형, 통상적으로 표준 염수, 노르모솔 R(Abbott) 또는 플라스마-라이트(Plasma-Lyte) A(Baxter)일 수 있고, 또한 수중 5% 덱스트로즈 또는 링거 락테이트가 사용될 수 있다. 주입 매질은 인간 혈청 알부민으로 보충될 수 있다.
당해 조성물 중의 치료 유효량의 세포는 적어도 2개 세포(예: 1개의 CD8+ 중추 기억 T 세포 및 1개의 CD4+ 헬퍼 T 세포 서브셋)이거나, 보다 통상적으로 102개 초과의 세포, 및 106개 이하, 및 108개 또는 109개 이하의 세포이고, 1010개 이상의 세포일 수 있다. 세포의 수는 당해 조성물이 의도되는 최종 용도 및 그 속에 포함되는 세포의 종류에 따라 달라질 수 있다. 예를 들면, 특정 항원에 특이적인 세포가 요구되는 경우, 당해 모집단은 70% 초과, 일반적으로 80% 초과, 85% 및 90 내지 95%의 이러한 세포를 함유할 것이다. 본원에 제공된 용도를 위해, 당해 세포는 일반적으로 1리터 이하의 용적으로 존재하며, 500ml 이하, 심지어 250ml 또는 100ml 이하일 수 있다. 따라서, 목적하는 세포의 밀도는 통상 106개 세포/ml 초과이고, 일반적으로 107개 세포/ml 초과, 일반적으로 108개 세포/ml 초과이다. 임상적 관련된 면역 세포 수는 109, 1010 또는 1011 세포를 점차 초과하는 복수 주입으로 분배할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 림프구는 면역성을 개체에 제공하기 위해 사용될 수 있다. "면역성"이란, 병원체에 의한 감염 또는, 림프구 반응이 지시되는 종양에 대한 반응과 관련된 하나 이상의 물리적 증상의 감소를 의미한다. 투여된 세포의 양은 통상적으로 병원체에 대한 면역성을 갖는 표준 개체에 존재하는 범위로 존재한다. 따라서,당해 세포는 주입에 의해 통상 투여되며, 각각의 주입은 2개 세포로부터, 적어도 106개 내지 1010개 세포/m2 이하, 바람직하게는 적어도 107개 내지 109개 세포/m2의 범위이다. 클론은 단일 주입 또는 소정 시간에 걸치 복수 주입에 의해 투여될 수 있다. 그러나, 상이한 개체는 반응성이 상이할 것으로 예상되기 때문에, 주입된 세포의 종류 및 양 뿐만 아니라 복수 주입이 제공되는 주입 수 및 시간 범위는 주치의에 의해 결정되며, 통상의 검사에 의해 결정될 수 있다. 충분한 수준의 T 림프구(세포독성 T 림프구 및/또는 헬퍼 T 림프구를 포함함)의 생성은, 본원에 예시된 바와 같이, 본 발명의 신속한 증식 방법을 사용하여 용이하게 달성될 수 있다[참조: 미국 특허 제6,040,177호(Riddell et al), column 17].
본 발명은 하기 기재된 실시예에서 추가로 설명된다.
실험
실시예 1 - T 세포 형질도입 및 CAR 발현의 분석
ROR1-특이적 CAR은 인간 CD8+ T 세포에서 발현시킬 수 있고, 성숙 정상 B 세포가 아닌 ROR1+ B-세포의 특이적 인식을 제공한다. 본 발명자들은, 건강한 공여체 또는 CLL 환자로부터의 T 세포에서 발현시키는 경우, 원발성 B-CLL 및 맨틀 세포 림프종의 특이적 인식을 제공하는 ROR1-특이적 키메라 항원 수용체를 작제했다.
재료 및 방법
세포주
엡스타인-바르 바이러스 형질전환된 B 세포(EBV-LCL)는 기재된 바와 같이 생성했다(25). 종양 세포주 Jeko-1 및 BALL-1은 올리버 프레스 및 제랄드 래디취 박사(Drs Oliver Press and Jerald Radich)(Fred Hutchinson Cancer Research Center)에 의해 제공되었다. 모든 세포주는 RPMI, 10% 소태아 혈청, 0.8 mM L-글루타민 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(LCL 매질)에서 유지시켰다. K562 세포는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection)으로부터 입수했다.
ROR1을 사용한 K562 세포의 형질감염
ROR1-유전자의 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)-증폭을 위해, 전체 RNA를 B-CLL 세포(RNeasyPlusKit; QIAGEN)로부터 수득하고, M-MLVReverse 트랜스크립타제(Invitrogen)에 의해 cDNA로 역전사시켰다. PCR은 헤르쿨라제-II dNA 폴리머라제(Stratagene)를 사용하여 특정 프라이머
(ROR1-F: 5-XhoIAGAGGAGGAATGCACCGGCC-3 및
ROR1-R: 5-XhoI-CACAGAAGGTACTTGTTGCGATGT-3)에 의해 수행했다. PCR 생성물을 MIGR-1 레트로바이러스 벡터(23) 내로 클로닝시키고, 서열 분석했다. 이펙텐(Effectene) 형질감염 시약(QIAGEN)을 사용하여 플라티눔-A 세포(Cell Biolabs)를 MIGR-1/ROR1로 형질감염시키고, ROR1-코딩 레트로바이러스를 생성한다. K562 세포는 32℃에서 60분 동안 2500rpm으로 원심분리에 의해 레트로바이러스에 형질도입하고, 증식시키고, ROR1-양성 서브셋을 분류-정제했다.
실시간 정량 PCR
B-CLL, 정상 휴지 및 활성화 B 세포 및 EBV-LCL의 제1-가닥 cDNA는 상기 문단에 기재된 바와 같이 제조했다. 정상 조직으로부터의 제1-가닥 cDNA(Human Tissue panels I/II, Blood Fractions)은 클론테크(Clontech)로부터 수득했다. ROR1 mRNA의 발현은 이중으로 분석하고, GAPDH에 대해 표준화시켰다. 증폭은 25μL 파워(Power) SYBR 그린(Green) PCR 마스터 믹스(Master Mix)(Applied Biosystems), 2.5 ng의 cDNA 및 300nM 유전자-특이적 전방 및 역방 프라이머로 이루어진 50μL 반응물에서 ABI 프리즘 7900(Applied Biosystems) 상에서 수행했다:
ROR1-F 5-AGCGTGCGATTCAAAGGATT-3,
ROR1-R 5-GACTGGTGCCGACGATGACT-3,
GAPDH-F 5-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3,
및 GAPDH-R 5-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3.
사이클 역치(Ct)는 SDS 소프트웨어 v2.2.2(Applied Biosystems)를 사용하여 측정했고, 유전자 발현 수준은 비교용 Ct 방법(2-(△△Ct))를 사용하여 계산했다.
벡터 작제 및 렌티바이러스의 생성
CD20-CAR(CD20R-epHIV7) 및 그린 형광 단백질(GFP)-코딩 렌티바이러스 벡터(GFP-epHIV7)는 이미 기재되어 있다(24). ROR1-CAR를 동일한 벡터에 코딩시켰다. 원발성 B-CLL 및 MCL 종양 라인 상에서 발현된 인간 ROR1에 대한 특이적 결합을 입증하는 마우스 mAB(클론 2A2)를 생성하고, 클로닝시키고, 사전 연구로 특성화시켰다. mAb 2A2의 VL 및 VH 쇄를 함유하는 scFv를 코딩하는 코돈-최적화된 뉴클레오티드 서열을 합성하고(GENEART), NheI 및 RsrII 제한 부위를 사용하여 CD20R-epHIV7 내로 클로닝시켜 CD20-특이적 scFv를 대체했다. 렌티바이러스는 이펙턴(Qiagen)을 사용하여 렌티바이러스 벡터 및 팩키징 벡터 pCHGP-2, pCMVRev2 및 pCMV-G로 공형질감염된 293T 세포에서 생성되었다. 매질은 형질감염 16시간 후에 변경하였고, 렌티바이러스는 48시간 후에 수집했다.
렌티바이러스 형질도입 및 CAR-형질도입된 T 세포 클론의 분리
건강한 공여체 및 B-CLL 환자로부터의 PBMC, 및 분류-정제된 CD8+ CD45RO+ CD62L+ 중추 기억 T 세포(TCM)는 항-CD3 mAb(30 ng/mL)로 활성화시키고(25), 32℃에서 60분 동안 2500rpm에서 원심분리하여 활성화 후 2일 및 3일차에 1 ㎍/mL 폴리브렌(Sigma-Aldrich) 및 50 IU/mL 재조합체 인간 인터류킨-2(IL-2)가 보충된 렌티바이러스 상청액에서 형질도입시켰다. T 세포는 10% 인간 혈청, 2 mM L-글루타민 및 1% 페니실린 스트렙토마이신(CTL 매질)을 함유하는 RPMI에서 증식시켰다(25). 증식 후, 각 형질도입된 T-세포주의 분획을 비오틴-접합된 항-EGFR(상피 성장 인자 수용체) mAb, 스트렙트아비딘-PE 및 항-CD8 mAb로 염색시켰다. EGFR+ CD8+ T 세포는 분류 정제하고, 제한 희석(0.5 세포/웰)에 의해 클로닝시켰다(25). ROR1-CAR 형질도입된 T 세포는 비오티닐화 재조합체 Fc-ROR1 세포외 도메인 융합 단백질 및 스트렙트아비딘-PE로 염색하여 동정했다. 재조합체 ROR1-단백질은 일시적으로 형질감염된 293F 세포(Invitrogen)에서 생성되었고, 기재된 바와 같이 정제하고(26), 비오틴 태그 키트(Sigma)를 사용하여 비오티닐화시켰다. GFP-형질도입된 CD8+ T 세포는 유동 혈구계산에 의해 동정하고, 분류-정제하고, 유사한 방식으로 클로닝시켰다.
크롬 방출 및 사이토킨 분비 분석
표적 세포는 밤새 51Cr(PerkinElmer)로 표지하고, 세척하고, 다양한 효과기 대 표적(E:T) 비율에서 효과기 T 세포로 1-2 ×103 세포/웰로 삼중으로 배양했다. 상청액은 배양 4시간 후에 γ 계수를 위해 수거하고, 특정한 용해는 표준 화학식을 사용하여 계산했다(25).
결과
형질도입된 CD8+ T 세포는 비오티닐화된 항-EGFR mAb 및 스트렙트아비딘 접합된 염료를 사용하여 분류-정제했다. 분류-정제된 T 세포의 표면 상에서 ROR1-CAR 발현은 당해 세포를, ROR1-CAR의 scFv에 직접 결합하는 비오티닐화된 재조합체 Fc-ROR1 세포외 도메인 융합 단백질로 염색하고 스트렙트아비딘-접합체를 함유시킴으로써 평가했다. Fc-ROR1-단백질은 ROR1-CAR 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 CD8+ T 세포를 특이적으로 염색시켰지만, GFP를 코딩하는 대조군 렌티바이러스 벡터로 형질도입된 CD8+ T 세포를 염색시키지 않았다(도 1).
본 발명자들은 제한 희석에 의해 ROR1-CAR 형질도입된(n=10) 및 대조군 GFP-형질도입된 CD8+ T-세포 클론(n=4)을 확립했고, 복수회의 시험관내 증식 후에 CAR의 안정한 표면 발현을 확인했다. 비형질도입된 또는 GFP-형질도입된 T-세포 클론과 비교하여 ROR1-CAR 형질도입된 클론의 성장은 명백한 차이가 없었다(데이타는 도시하지 않음).
ROR1-CAR 형질도입된 T-세포 클론은 ROR1-유전자로 안정하게 형질감염된 원발성 B-CLL 및 K562를 효율적으로 용해시켰지만, 천연 ROR1-음성 K562 세포를 용해시키지 않았으며, 이는 ROR1의 특이적 인식을 입증한다(도 2).
논의
CAR-변형된 T 세포를 사용하는 양자 면역요법은 B-세포 악성종양에 대한 임상 시험에서 연구되고 있다. 표적화되는 표면 분자는 B-세포 계열-특이적이고, B-세포 단계 전으로부터 혈장 세포까지 정상 B-계통 세포 상에서 발현되는 CD19, 및 B-세포 단계 전으로부터 기억 B 세포까지 정상 B 세포 상에서 발현되는 CD20을 포함한다. 따라서, 이들 분자를 표적화하는 효과적인 요법의 예상된 결과는 정상 B 세포 및 B-세포 전구체의 고갈이다. 유전자 발현 프로파일 연구는 악성 세포에 의해 우선적으로 또는 배타적으로 발현되지만 정상 B 세포에 의해 발현되지 않는 유전자를 동정했고, ROR1은 2개의 독립적인 분석(28, 28)에서 CLL 표시 유전자로서 나타났다. ROR1에 대한 특이적 항체는, CD154를 발현시키기 위해 변형시킨 자가 종양 세포를 사용한 백신접종, 및 정상 조직에 대한 명백한 독성 없이 렌알리도미드에 의한 처리 후에 CLL 환자에서 발달했고, 이는 당해 종양 항원이 면역요법에 적합한 표적일 수 있음을 시사한다(29, 30).
본 발명자들의 연구는 ROR1-CAR을 발현하는 유전적으로 조작된 T 세포로 ROR1-양성 악성 세포를 표적화하는 가능성을 설명한다. CD8+ ROR1-CAR T 세포는 벌크 PBMC 또는 분류-정제된 TCM의 렌티바이러스 형질도입 후에 정상 공여체 및 CLL 환자 둘 다로부터 유도될 수 있고, 이는 동물 모델에서 양자 전달 후에 연장된 기간 동안 지속한다(31). ROR1-CAR 형질도입된 T 세포는 원발성 B-CLL을 효율적으로 용해시켰지만, 정상 휴지 또는 활성화 B-세포를 용해시키지 않았다. 이들 T 세포는 INF-α, IFNγ 및 IL-2를 포함하는 효과기 사이토킨을 생성했고, ROR1-발현 종양 세포에 반응하여 증식할 수 있다.
실시예 2 - CD4 + CAR T 세포주의 생성 및 효과기 기능의 분석
CD4+ ROR1-CAR T 세포는 건강한 공여체/CLL-환자의 PBMC로부터 생성될 수 있다. ROR1-특이적 CAR은 인간 CD4+ T 세포에서 발현될 수 있고, 성숙한 정상 B 세포가 아니라 ROR1+ B-세포 종양의 특이적 인식을 제공한다.
재료 및 방법
세포주
엡스타인-바르(Epstein-Barr) 바이러스 형질전환된 B 세포(EBV-LCL)를 기재된 바와 같이 생성했다(25). 종양 세포주 Jeko-1, 및 BALL-1은 올리버 프레스(Oliver Press) 및 제랄드 래디치(Jerald Radich) 박사(Fred Hutchinson Cancer Research Center)로부터 제공되었다. 모든 세포주는 RPMI, 10% 소태아 혈청, 0.8mM L-글루타민 및 1% 페니실린-스트렙토마이신(LCL 배지)에서 유지시켰다. K562 및 293T 세포를 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션으로부터 수득하여 지시된 바와 같이 배양했다.
ROR1에 의한 K562 세포의 형질감염
ROR1-유전자의 폴리머라제 연쇄 반응(PCR)-증폭을 위해, 전체 RNA는 B-CLL 세포(RNeasyPlusKit; QIAGEN)로부터 수득했고, M-MLVReverse 트랜스크립타제(Invitrogen)를 사용하여 cDNA로 역전사시켰다. PCR은 헤르쿨라제-II DNA 폴리머라제(Stratagene)를 사용하여 특이적 프라이머
(ROR1-F: 5-XhoIAGAGGAGGAATGCACCGGCC-3 및
ROR1-R: 5-XhoI-CACAGAAGGTACTTGTTGCGATGT-3)로 수행했다. PCR 생성물을 MIGR-1 레트로바이러스 벡터(23)로 클로닝하고, 서열을 확인했다. 이펙텐 형질감염 시약(QIAGEN)을 사용하여 백금-A 세포(Cell Biolabs)를 MIGR-1/ROR1로 형질감염시키고, ROR1-코딩 레트로바이러스를 생성했다. K562 세포를 32℃에서 60분 동안 2500rpm에서 원심분리에 의해 레트로바이러스에 형질도입하고, 증식시키고, ROR1-양성 서브셋을 분류 정제시켰다.
벡터 작제 및 렌티바이러스의 생성
CD20-CAR(CD20R-epHIV7) 및 그린 형광 단백질(GFP)-코딩 렌티바이러스 벡터(GFP-epHIV7)는 이미 기재되었다(24). ROR1-CAR를 동일한 벡터로 코딩시켰다. 인간 ROR1에 대한 특이적 결합이 입증된 마우스 mAb(클론 2A2)는 원발성 B-CLL 상에서 발현시키고, MCL 종양 라인을 생성하였고, 클로닝하여 이전 연구에서 특성화했다. mAb 2A2의 VL 및 VH 쇄를 함유하는 scFv를 코딩하는 코돈 최적화 뉴클레오티드 서열을 합성하였고(GENEART), NheI 및 RsrII 제한 부위를 사용하여 CD20R-epHIV7로 클로닝하여 CD20-특이적 scFv를 대체시켰다. 렌티바이러스는 이펙텐(Qiagen)을 사용하여 렌티바이러스 벡터 및 팩키징 벡터 pCHGP-2, pCMVRev2 및 pCMV-G로 공형질감염된 293T 세포에서 생성시켰다. 배지를 형질감염후 16시간에 변화시켰고, 렌티바이러스를 48시간 후에 수집했다.
렌티바이러스 형질도입 및 CD4+ ROR1-CAR T 세포주의 분리
CD4+ T 세포를 건강한 공여체의 PBMC로부터 분리하고, 항-CD3 mAb(30 ng/mL)로 활성화시키고(25), 32℃에서 60분 동안 2500rpm에서 원심분리로 활성화후, 2일 및 3일차에 1㎍/mL 폴리브렌(Sigma-Aldrich) 및 50 IU/mL 재조합 인간 인터류킨-2(IL-2)로 보충된 렌티바이러스 상청액에 형질도입했다. T 세포를 10% 인간 혈청, 2mM L-글루타민 및 1% 페니실린 스트렙토마이신(CTL 배지)를 함유하는 RPMI에서 증식시켰다(25). 증식 후, 각 형질도입된 T-세포주의 분획을 비오틴-접합된 항-EGFR(상피 성장 인자 수용체) mAb, 스트렙트아비딘-PE 및 항-CD4 mAb로 염색했다. EGFR+ CD4+ T 세포를 분류 정제시키고 증식시켰다. ROR1-CAR 형질도입된 T 세포를 비오티닐화 재조합 Fc-ROR1 세포외 도메인 융합 단백질 및 스트렙트아비딘-PE로 염색시켜 동정했다. 재조합 ROR1-단백질은 일시적으로 형질감염된 293 세포(Invitrogen)에서 생성하였고, 기술된 바와 같이 정제시켰고(26), 비오틴태그 키트(BiotinTag kit)(Sigma)를 사용하여 비오티닐화했다. GFP-형질도입된 CD4+ T 세포를 유동 혈구계산으로 동정하였고, 분류 정제시키고, 유사한 방식으로 클로닝했다.
크롬 방출 및 사이토킨 분비 분석
표적 세포를 밤새 51Cr(PerkinElmer)로 표지하고, 세척하고, 각종 효과기 대 표적(E:T) 비율에서 효과기 T 세포로 1-2 × 103 세포/웰에서 삼중 배양했다. 상청액을 4시간 배양 후 γ 계수를 위해 수거했고, 특이적 용해를 표준식을 사용하여 계산했다(25). 사이토킨 분비의 분석을 위해, 표적 및 효과기 세포를 E/T 비 2:1에서 삼중 웰 중에서 플레이팅하였고, 인터페론 INFγ, 종양 괴사 인자(TNF-α) 및 IL-2를, 24시간 배양 후 제거된 상청액에서 다중 사이토킨 면역분석(Luminex)에 의해 측정했다.
CFSE 증식 분석
T 세포를 0.2μM 카복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE; Invitrogen)로 표지하고, 세척하고, 10U/mL 재조합 인간 IL-2를 함유하는 CTL 배지 중에서 자극 세포로 2:1 비로 플레이팅했다. 72시간 배양 후, 세포를 항-CD4 mAb 및 요오드화프로피듐(PI)으로 표지하여 분석으로부터 사멸 세포를 제외시켰다. 샘플을 유동 혈구계산으로 분석하였고, 살아있는 CD4+ T 세포의 세포 분열을 CFSE 희석으로 평가했다.
공-배양 분석
ROR1-CAR 형질도입된 CD4+ T 세포 및 ROR1-CAR 형질도입된 CD8+ 세포독성 T 림프구를 CFSE로 표지하였고, 2:1, 1:1 및 1:2 비에서 공-배양시켰다. 이어서, 공-배양물을 K562/ROR1 세포 및 대조군 K562 세포로 자극하였고, 세포 증식을 배양 5일 후에 CFSE 염료 희석 분석으로 측정했다. 유동 분석을 위해, 샘플을 접합된 항-CD8 및 항-CD4 mAb로 염색시켜 CD8+ 및 CD4+ 서브셋을 구별했다.
결과
건강한 공여체 및 CLL 환자의 PBMC로부터 CD4 + ROR1-CAR T 세포의 생성
본 발명자들은, 암태아성 티로신 키나제 수용체 ROR1가 CLL 및 MCL 상에서 균일하게 발현되고, CD8+ T 세포에서 발현될 때 성숙한 정상 B 세포가 아니라 악성 B 세포의 특이적 인식을 제공하는 항-ROR1 mAb로부터 ROR1-CAR를 발달시켰음을 나타냈다. 여기서, 본 발명자들은 직접 종양 인식 및 CD8+ ROR1-CAR CTL을 증가시키는 이들의 능력을 분석하기 위해 CD4+ ROR1-CAR T 세포를 생성했다. CAR-변형된 CD4+ T 세포는 ROR1-CAR 코딩 렌티바이러스 벡터를 사용하여 건강한 공여체(n=4) 및 CLL 환자(n=4)의 벌크 말초 CD4+ T 세포로부터 용이하게 생성될 수 있었다. 이 벡터에서, 본 발명자들은 둘 다 형질도입 마커로서 작용하고 항-EGFR mAb를 갖는 전이유전자 발현 T 세포의 풍부화를 위한 ROR1-CAR 및 자체 분리가능한 2A 요소의 하류에 단축된 EGFR(상피 성장 인자 수용체, tEGFR) 도메인을 코딩했다(도 3). 본 발명자들은 tEGFR 마커를 사용하여 ROR1-CAR 코딩 렌티바이러스(MOI=3)으로 단일 형질도입 후 dl2차에 CAR-변형된 T 세포의 빈도를 측정했고, 동일 개체로부터 수득된 CD8+ CAR T 세포주와 비교하여 CD4+에서 일관되게 높은 형질도입 효율을 밝혀냈다. CD4+ T 세포의 표면 상에서 ROR1-CAR의 발현을 확인하기 위해, 본 발명자들은 ROR1-CAR의 scFv에 직접 결합하는 비오티닐화 재조합 Fc-ROR1 세포외 도메인 융합 단백질을 사용했고, 형질도입되지 않은 대조군 CD4+ T 세포가 아니라 ROR1-CAR 렌티바이러스로 형질도입된 CD4+ T 세포를 특이적으로 염색했다(도 3). 본 발명자들은 tEGFR 마커를 사용하여 전이유전자 발현 CD4+ T 세포를 풍부화하고, 항-CD3 mAb로 자극시켜 CAR-양성 T 세포 서브셋을 증식했다. CD4+ CAR T 세포의 3-log 이상의 증식은 14-일 자극 사이클의 말기에 달성될 수 있었고, 이는 CD8+ CAR CTL에서 관찰된 증폭과 동등하다. 증식 후, 본 발명자들은 CD4+ CAR T 세포의 세포 표면에서 ROR1-CAR의 안정한 발현(데이터는 도시되지 않음)을 확인했고, ROR1-양성 종양 세포의 인식을 분석했다.
CD4 + ROR1 - CAR T 세포는 ROR1 -양성 종양을 특이적으로 인식한다.
본 발명자들은 ROR1-양성 원발성 종양 세포 및 종양 세포주에 대한 CD4+ ROR1-CAR T 세포의 효과기 기능을 분석했다. 본 발명자들은 크롬 방출 분석(CRA)에 의해 직접 세포독성을 제공하는 CD4+ CAR T 세포의 능력을 분석하고, 표준 4-시간 배양의 말기에 ROR1-양성 표적 세포의 약하지만 특이적 용해를 검출했다(도 4). 본 발명자들은 CRA를 10시간으로 연장시키고, 특이적 용해의 추가의 증가를 관찰했지만, CD4+ CAR T 세포의 전체 세포용해 활성은 여전히 CD8+ ROR1-CAR CTL 미만이었다(도 2, 4). 건강한 공여체 및 CLL 환자 둘 다로부터 CD4+ ROR1-CAR T 세포는 원발성 CLL 세포, ROR1-양성 종양 세포주 Jeko-1(MCL) 및 BALL-1(B-ALL), 및 IFN-γ ELISA에 의해 천연 ROR1-음성 K562 세포가 아니라 ROR1-유전자(K562/ROR1)로 안정하게 형질감염된 K562 세포를 특이적으로 인식하고, 이는 표적 세포의 세포 표면 상에서 ROR1의 특이적 인식을 입증했다(도 5a). 다중 사이토킨 분석은 CD8+ CAR CTL과 비교하여 현저히 높은 수준에서 기타 Th1 사이토킨, 예를 들면, TNF-α 및 IL-2의 생성, 및 IL-4, IL-10 및 IL-17의 생성을 나타냈다(도 5b).
이어서, 본 발명자들은 CFSE 염색에 의해 ROR1-양성 종양 세포에 의한 자극 후 CD4+ CAR T 세포의 증식을 평가하고, 임의의 잠재적인 비특이적 자극을 제거하기 위해 외인성 사이토킨의 첨가 없이 엄격한 배양 조건을 사용했다. CD4+ CAR T 세포는 ROR1-양성 종양 세포에 반응하여 현저한 및 특이적 증식을 나타냈다. 증식하도록 유도된 T 세포의 비율 및 서브셋의 증식이 수행된 세포 분열의 수는 CD8+ CAR T 세포와 비교하여 CD4+에서 현저히 높았다(도 6). 총괄하여, 본 발명자들의 데이터는 건강한 공여체 및 CLL 환자 둘 다로부터 수득된 CD4+ T 세포가 ROR1-특이적 CAR에 의한 유전적으로 변형 후 항-종양 반응성을 획득한다는 것을 입증한다. 또한, 외인성 사이토킨의 부재하에 증식하고 고수준의 Th1 사이토킨을 생성하는 능력은, CD4+ CAR T 세포가 CAR을 통해 자극 후에 통상적인 헬퍼 기능을 나타내고, 직접 항-종양 효과를 부여하는 것 이외에, 또한 CD8+ CAR CTL을 증가시키기 위해 사용될 수 있다.
비형질도입된 CD4 + T 세포가 아닌 CAR -변형된 T 세포는 CD8 + CAR CTL 에 도움을 제공한다.
CD4+ CAR T 세포가 CD8+ CAR CTL에 도움을 제공할 수 있는지의 여부를 분석하기 위해, 본 발명자들은, 본 발명자들이 건강한 공여체 및 CLL 환자로부터 확립한 CAR-형질도입된 및 대조군 비형질도입된 폴리클로날 CD4+ 및 CD8+ T 세포주로 공배양 실험을 수행했다. 도움 제공의 판독으로서, 본 발명자들은 단독으로 배양된 CD8+ T 세포와 비교하여 CD4+ T 세포의 존재하에 종양 특이적 CD8+ 효과기 기능의 개선을 규정했다. 본 발명자들은 CAR-형질도입되거나 비형질도입된 대조군 CD4+ T 세포를 별개의 CD4:CD8 비(2:1, 1:1, 1:2)로 CD8+ CAR CTL과 배합하고, 이들을 ROR1-양성 종양 세포로 자극하고, CFSE 염료 희석에 의해 증식을 측정했다. 본 발명자들은, 비형질도입된 CD4+ T 세포가 아니라 CAR-형질도입된 CD4+ T 세포를 CD8+ CAR CTL에 첨가하면 CD8+ CAR CTL 단독과 비교하여 CD8+ 서브셋의 특이적 증식이 현저히 증가된다는 것을 밝혀냈다(도 7). 증식의 증가는, 적어도 등가량의 CD4+ CAR T 세포(CD4:CD8 비 2:1 또는 1:1)가 공배양물에 첨가될 때, 가장 현저했다. 비형질도입된 CD4+와 비형질도입된 CD8+ T 세포의 배합은 추가의 대조군으로서 사용하고, CD8+ 서브셋에서 비특이적 증식을 유도하지 않았다(데이터는 도시되지 않음).
논의
유전자 발현 프로파일링 연구는 2개의 독립적인 분석(27,28)에서 CLL 특징 유전자로서 출현된 정상 B 세포 및 ROR1에 의해서가 아니라 악성 B 세포로서 우선적으로 또는 배타적으로 발현된 유전자를 동정했다. 본 연구는 ROR1-CAR을 발현시키는 유전적으로 조작된 T 세포로 ROR1-양성 악성 세포를 표적화하는 가능성을 설명한다. CD8 및 CD4+ ROR1-CAR T 세포는 벌크 PBMC 또는 분류 정제된 T 세포의 렌티바이러스 형질도입 후 정상 공여체로부터 유도될 수 있다. CD8+ ROR1-CAR 형질도입된 T 세포는 정상 휴지성 또는 활성화된 B-세포가 아닌 원발성 B-CLL을 효율적으로 용해시켰다. CD4+ ROR1-CAR 형질도입된 T 세포는 정상 휴지성 또는 활성화된 B-세포가 아닌 원발성 B-CLL을 약하게 용해시켰다. 이러한 T 세포는 TNF-α, IFNγ, IL-2, IL-4 및 IL-10을 포함하는 효과기 사이토킨을 생성했다. CAR-형질도입된 CD4+ T 세포는 형질도입된 CD8+ 세포보다 현저히 높은 양의 사이토킨을 생성했다. 두 세포 종류는 ROR1-발현 종양 세포에 반응하여 증식할 수 있었다. 또한, CD4+ ROR1-CAR T 세포는 CD8+ ROR1-CAR CTL보다 2-3배 더 높게 증식했다. 이러한 결과들은 형질도입된 CD4+ 헬퍼 T 세포가 통상적인 헬퍼 기능을 나타내고, 이는 CD8+ CAR CTL을 증가시키기 위해 사용될 수 있음을 제시한다.
실시예 3 - 천연, 중추 및 효과기 기억 서브셋으로부터 유도된 CD4 + ROR1 -CAR T 세포의 효과기 기능
천연, 중추 및 효과기 기억 서브셋으로부터 유도된 다음, ROR1 CAR로 변형된 CD4 T 세포의 효과기 기능을 비교했다.
재료 및 방법
천연, 중추 및 효과기 기억 CD4 세포의 분류 정제
CD4+ T 세포를, 순수한 CD4+ T 세포를 제공하는 음성 자기 비드 선별(Miltenyi CD4 분리 키트)을 사용하여 건강한 공여체의 PBMC로부터 분리했다. CD4+ 분획을 접합된 항-CD45RA, 항-CD45RO 및 항-CD62L mAb로 표지하고, FACS 아리아 유동 분리장치(BD Biosciences)를 사용하여 유동 분류 정제하고, 천연(CD45RA+ CD45RO- CD62L+), 중추 기억(CD45RA- CD45RO+ CD62L+) 및 효과기 기억(CD45RA- CD45RO+ CD62L-) CD4+ T 세포를 이러한 규정된 마커의 발현에 기반하여 정제했다.
CFSE 증식 분석
T 세포를 0.2μM 카복시플루오레세인 석신이미딜 에스테르(CFSE; Invitrogen)로 표지하고, 세척하고, 10U/mL 재조합 인간 IL-2를 함유하는 CTL 배지 중에서 자극 세포로 2:1 비로 플레이팅했다. 72시간 배양 후, 세포를 항-CD8 또는 CD4 mAb 및 요오드화프로피듐(PI)으로 표지하여 분석으로부터 사멸 세포를 제외시켰다. 샘플을 유동 혈구계산으로 분석하였고, 살아있는 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 세포 분열을 CFSE 희석으로 평가했다.
사이토킨 분석
사이토킨 분비의 분석을 위해, 표적 및 효과기 세포를 E/T 비 2:1에서 삼중 웰 중에서 플레이팅하였고, 인터페론 INFγ, 종양 괴사 인자(TNF-α) 및 IL-2를 24시간 배양 후 제거된 상청액에서 다중 사이토킨 면역분석(Luminex)에 의해 측정했다.
결과
본 발명자들은 CD45RA, CD45RO 및 CD62L의 발현에 기반하여 3명의 건강한 공여체의 말초 혈액으로부터 CD4+ N, 중추(CM) 및 효과기 기억(EM) CD4+ T 세포를 유동 분류 정제시키고(도 8a), ROR1-CAR로 변형 후 이들의 효과기 기능을 비교했다. 본 발명자들은 3개의 서브셋 각각으로부터 유도된 CAR T 세포주에서 유사하게 높은 형질도입 효율을 달성했다. 이식유전자 발현 T 세포의 풍부화 후 다중파라미터 유동 혈구계산은, 렌티바이러스 형질도입 후 활성화된 표현형과 일치하는, CD4+ N CAR T 세포주에서 CD45RO의 발현 및 CD45RA의 소실을 나타냈다. CD4+ N, CM 및 EM CAR T 세포주는 CD62L의 차등 발현을 유지시키고, 이는 초기 유동 분류 정제가 고순도로 수행되었음을 확인시켜 준다.
이어서, 본 발명자들은 N, CM 및 EM 서브셋으로부터 유도된 CD4+ CAR T 세포의 종양 인식, 사이토킨 분비 및 증식을 분석하고, 이들을 벌크 CD+ T 세포로부터 생성된 CAR T 세포주와 비교했다. 본 발명자들은 세포주 각각에서 IFN-γ ELISA에 의해 ROR1-양성 종양 세포의 특이적 인식을 관찰했다. 다중 사이토킨 분석은, N 서브셋으로부터 유도된 CD4+ CAR T 세포가 지금까지 최고 수준의 Th1 사이토킨, 특히 IL-2를 생성했음을 나타냈고(도 8c), CFSE 염료 희석은, 이들이 ROR1-양성 종양 세포에 의한 자극에 반응하여 가장 격렬하게 증식했다는 것을 나타냈다(도 8b).
논의
본 연구는 ROR1-CAR을 발현시키는 유전적으로 조작된 T 세포로 ROR1-양성 악성 세포를 표적화하는 가능성을 설명한다. CD8 및 CD4+ ROR1-CAR T 세포는 규정된 천연 또는 기억 T 세포 서브셋으로부터의 벌크 PBMC 및 분류 정제된 T 세포의 렌티바이러스 형질도입 후에 두 정상 공여체로부터 유도될 수 있다. CD4+ 천연, 중추 기억 및 효과기 T 세포는 TNF-α, IFNγ, IL-2, IL-4 및 IL-10을 포함하는 효과기 사이토킨을 생성했다. 천연 서브셋으로부터 유도된 CAR-형질도입된 CD4+ 세포는 CAR을 통해 신호전달 후에 중추 및 효과기 기억 유도된 CD4+ CAR T 세포보다 현저히 높은 양의 TNFα 및 IL-2를 생성했다. 모든 CD4 세포 종류는 ROR1/K562에 반응하여 증식시킬 수 있었지만, 천연 서브셋으로부터 유도된 CAR-형질도입된 CD4+ 세포에서, 증식하도록 유도된 T 세포 비율 및 서브셋 증식이 수행된 세포 분열의 수가 현저히 높았다. 두 사이토킨 프로파일 및 증식 능력은 천연 CD4+ ROR1-CAR T 세포가 CD8+ ROR1-CAR CTL을 증가시키는데 가장 적합할 수 있음을 기술한다.
실시예 4 - 천연 CD4+ T 세포가 기억 CD4+ T 세포보다 우수한 헬퍼이다.
천연, 중추 기억 및 효과기 형질도입된 CD4+ 세포를 형질도입된 CD+8 세포독성 림프구로 공배양시켰고, 세포의 증식 반응을 K562/ROR1 세포로의 자극에 반응하여 측정했다.
재료 및 방법
공동-배양
천연, 중추 및 효과기 기억 유도된 ROR1-CAR 형질도입된 CD4+ T 세포 및 천연 및 중추 기억 CD8+ 세포로부터 유도된 ROR1-CAR 형질도입된 CD8+ 세포독성 T 림프구를 CFSE로 표지하고, CD4+ 및 CD8+ CAR T 세포주를 1:1 비로 공동배양시켰다. 이어서, 공동배양물을 K562/ROR1 세포 및 대조군 K562 세포로 자극시켰고, 세포 증식을, 배양 5일 후, CFSE 염료 희석 분석에 의해 측정했다. 유동 분석을 위해, 샘플을 접합된 항-CD8 및 항-CD4 mAb로 염색시켜 CD8+ 및 CD4+ 서브셋을 구별했다.
결과
CD4 + 천연 CAR T 세포는 CD8 + CAR CTL 의 효과기 기능을 증가시키는 우수한 능력을 갖는다.
본 발명자들은 CD4+ N CAR T 세포의 우수한 사이토킨 프로파일 및 증식 가능성이 또한 CD8+ CAR CTL에 대한 가장 강력한 헬퍼 효과로 해석될 수 있는지를 측정하기 위해 CD4+ N, CM 및 EM CAR T 세포주의 헬퍼 기능을 비교했다. 사전 연구는 양자 면역요법에 대한 이들의 잠재적인 유용성에 영향을 미치는 N, CM 및 EM CD8+ T 세포 사이에 고유한 차이가 존재함을 입증했다. 본 그룹은 최근에, EM이 아니라 CM 유도된 CD8+ T 세포가 이들이 면역요법(33,34)에 대해 CD8+ T 세포의 바람직한 서브셋이도록 하는 양자 전달 후에 연장된 기간 동안 지속될 수 있음을 나타냈다. 기타 그룹은, CD8+ N T 세포가 또한 T 세포 치료(35,36)에 사용하기 위한 양호한 특성을 포함할 수 있다고 제안했다. 따라서, 본 발명자들은 CD8+ 및 CD4+ CAR T 세포 서브셋의 최적 배합을 측정하기 위해 분류 정제된 N 및 CM T 세포로부터 CD8+ CAR CTL을 생성했다. 렌티바이러스 형질도입 및 tEGFR 마커를 사용하여 CAR-형질도입된 CD8+ T 세포의 풍부화에 이어서, 본 발명자들은 CD8+ N, 및 CM CAR CTL의 종양 반응성을 확인하였고(데이터는 도시되지 않음), 이전과 같이 CD4+ N CAR T 세포를 사용하여 공배양 실험을 수행했다. 예상한 바와 같이, CD4+ N CAR T 세포를 사용하는 CD8+ N, 및 CM CAR CTL의 공배양은, CD4+ CM 또는 EM CAR T 세포, 또는 CD8+ CAR CTL 단독에 의한 공배양과 비교하여, CD8+ 서브셋의 현저히 더 높은 종양 특이적 증식을 유도한다(도 9). 모든 배합으로부터, ROR1-양성 종양 세포에 의한 자극에 반응하여 CD8+ CAR CTL의 최대 증식은 CD8+ CM CAR CTL에 의한 CD4+ N CAR T 세포의 공배양 후에 관찰되었다(도 9). 총괄하여, 본 데이터는, CD4+ N T 세포에서 IL-2의 높은 생성 및 우수한 증식과 함께, 이들의 사이토킨 프로파일 및 증식 가능성에 있어서 N, CM 및 EM CD4+ T 세포 사이에 고유한 차이가 존재함을 입증한다. 본 데이터는, CM, EM 또는 벌크 CD4+ T 세포보다 분류 정제된 N, CD4+ T 세포가 CD8+ CTL의 효과기 기능을 증가시키는데 가장 적합할 수 있음을 시사하고, CM 유도된 CD8+ T 세포가 양자 면역요법에 사용하기 위한 양호한 특성을 포함한다는 CD8+ T 세포에서의 선행 연구를 보충한다.
논의
총괄적으로, 이들 데이타는 ROR1-CAR 변형된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 양자 전달이 침략적 전신 림프종의 생체내 모델에서 강력한 항-종양 반응을 제공하고, CD8+ CAR CTL의 항-종양 효능에 대한 CD4+ CAR T 세포의 유리한 및 상승작용 효과에 대한 증거를 제공함을 입증한다. 본 발명자들의 데이타는 세포-고유 품질의 분석이 암 면역요법의 결과를 향상시키기 위해 종양-특이적 CD8+ 및 CD4+ T 세포 둘 다를 함유하는 세포 생성물의 합리적 설계를 어떻게 알려줄 수 있는지를 설명한다.
실시예 5 - 전신 맨틀 세포 림프종(NSG/Jeko-1-ffLuc)의 마우스 종양 모델
본 발명자들은 침략적 전신 맨틀 세포 림프종의 생체내 모델에서 ROR1-CAR 변형된 CD8+ CTL의 항-종양 효능에 대한 CD4 도움을 제공하는 효과를 검사했다.
재료 및 방법
치사량에 가깝게 조사된 NOD/SCID/감마-/-(NSG) 마우스는, 생물발광 영상화를 사용하여 종양 하중 및 분포의 평가를 가능하게 하도록 반딧불 루시퍼라제(Jeko-/ffLuc)로 안정하게 형질감염시킨 5×105 Jeko-1 세포를 사용한 꼬리 정맥내 주사에 의해 접종시켰다. 본 발명자들은 이들 조건하에 NSG 마우스에서 신속하게 단계적 산재된 림프종의 일정한 접종(흡수 속도 = 100%) 및 발달을 확인했다. 종양 접종 후, 3마리 마우스 그룹은 꼬리 정맥 주사에 의해 CD8+ CAR CTL(그룹 1), CD4+ CAR T 세포(그룹 2), CD8+와 CD4+ ROR1-CAR 형질도입된 T 세포의 조합(그룹 3), 비형질도입된 대조군 T 세포(그룹 4, 5, 6)을 제공하거나 무처리했다(그룹 7). 전달된 T 세포의 전체 수는 모든 경우에 10×106개였다. 본 발명자들은 양자 전달 2일 후에 마우스로부터 눈 출혈을 수득했고, 말초 혈액에서 ROR1-CAR 형질도입된 또는 비형질도입된 T 세포의 존재를 확인했다.
결과
T-세포 전달 6일 차에, 본 발명자들은 종양 하중을 평가하기 위해 생물발광 영상화를 수행했다. 가장 강력한 항-종양 효과는, 대조군 그룹과 비교하여 생물발광 신호의 > 2 log 감소와 함께, CD8+ 및 CD4+ ROR1-CAR T 세포의 조합물을 제공한 마우스에서 관찰되었다(도 10). 본 발명자들은 또한, 대조군과 비교하여 생물발광 신호의 > 1 log 감소와 함께, CD8+ 또는 CD4+ ROR1-CAR 변형된 T 세포를 제공한 마우스에서 강력한 항-종양 효과를 관찰했다(도 10). 중요하게는, CD8+/CD4+ CAR T 세포 조합물의 투여 후에 종양 하중의 감소는 조합된 CD8+ CAR CTL 및 CD4+ CAR T 세포 그룹의 것보다 크고, 이는 CD4+ CAR T 세포 및 CD8+ CAR CTL은 상승작용적으로 작용함을 시사한다.
논의
총괄적으로, 이들 데이타는 ROR1-CAR 변형된 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 양자 전달이 침략적 전시 림프종의 생체내 모델에서 잠재적 항-종양 반응을 제공하고 CD8+ CAR CTL의 항-종양 효능에 대한 CD4+ CAR T 세포의 유리한 및 상승작용 효과에 대한 증거를 제공함을 입증한다. 본 발명자들의 데이타는 세포-고유 품질의 분석이 암 면역요법의 결과를 향상시키기 위해 종양-특이적 CD8+ 및 CD4+ T 세포 둘 다를 함유하는 세포 생성물의 합리적 설계를 어떻게 알려줄 수 있는지를 설명한다.
실시예 6 - CD19 CAR T 세포는 동일한 상승작용을 나타낸다.
본 발명자들은, 침략적 전신 맨틀 세포 림프종의 시험관내 및 생체내 모델에서 공배양시에 CD19 변형된 CD8+ CTL의 항-종양 효능에 대한 CD4 도움을 제공하는 효과를 검사했다.
재료 및 방법
CD19 CAR T 세포는, 참조로서 본원에서 도입되는 미국 특허원 제US 2008/0131415호에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다.
공배양 분석
CD19-CAR 형질도입된 CD4+ T 세포 및 CD19-CAR 형질도입된 CD8+ 세포독성 T 림프구를 CFSE로 표지하고, 2:1, 1:1 및 1:2 비율로 공배양시켰다. 이어서, 공-배양물을 K562/ROR1 세포 및 대조군 K562 세포로 자극시키고, 세포 증식을 배양 5일 후에 DFSE 염료 희석 분석에 의해 측정했다. 유동 분석을 위해, 샘플을 접합된 항-CD8 및 항-CD4 mAb로 염색하여 CD8+ 및 CD4+ 서브셋을 구별했다.
생체내 모델
치사에 가깝게 조사된 NOD/SCID/감마-/-(NSG) 마우스는, 생물발광 영상화를 사용하여 종양 하중 및 분포의 평가를 가능하게 하도록 반딧불 루시퍼라제(Jeko-/ffLuc)로 안정하게 형질감염시킨 5×105 Jeko-1 세포를 사용한 꼬리 정맥내 주사에 의해 접종시켰다. 본 발명자들은 이들 조건하에 NSG 마우스에서 신속하게 단계적 산재된 림프종의 일정한 접종(흡수 속도 = 100%) 및 발달을 확인했다. 종양 접종 후, 3마리 마우스 그룹은 꼬리 정맥 주사에 의해 CD8+ CD19 CAR CTL(그룹 1), CD4+ CD19 CAR T 세포(그룹 2), CD8+와 CD4+ CD19 CAR 형질도입된 T 세포의 조합(그룹 3), 비형질도입된 대조군 T 세포(그룹 4, 5, 6)을 제공하거나 무처리했다(그룹 7). 전달된 T 세포의 전체 수는 모든 경우에 10×106개였다. 본 발명자들은 양자 전달 2일 후에 마우스로부터 눈 출혈을 수득했다.
결과
도 10은 CD19+ 맨틀 세포 림프종 종양 라인 Jeko-1으로 자극시킨 CD8+ CD19-CAR CTL 및 CD4+ CD19-CAR T-세포주를 사용한 공배양 실험에서 중추 기억-유도된 CD8+ CD19-CAR의 종양-특이적 증식을 증가시키기 위해 천연 서브셋으로부터 유도된 CD4+ CAR T-세포주의 우수한 능력을 나타낸다. 중추 또는 효과기 기억 서브셋으로부터 유도된 CD4+ CAR T-세포주는 중추 기억-유도된 CD8+ CAR CTL의 종양-특이적 증식을 매우 적은 정도까지 증가시킨다.
도 11은 CD8+ CAR T 세포 및 CD4+ CAR T 세포가 면역결핍 마우스(NOD/SCID-Raji)에서 직접 항-종양 효능을 독립적으로 제공함을 나타낸다. 마우스는 CD19-CAR 형질도입된 또는 대조군 모의-형질도입된 CD8+ 중추 기억-유도된(a), 또는 CD19-CAR 형질도입된 또는 대조군 모의-형질도입된 CD4+ 천연-유도된 T 세포(b)를 제공했다.
도 12는 전신 맨틀 세포 림프종(NSG/Jeko-1-ffLuc)의 마우스 종양 모델에서 CD8+ ROR1-CAR CTL의 항-종양 효능에 대한 CD4+ ROR1-CAR 변형된 T 세포의 증가 및 상승작용 효과를 나타낸다. 전신 침략적 맨틀 세포 림프종(NSG/Jeko-1)의 마우스 종양 모델에서 ROR1-CAR 변형된 CD8+ 및 CD4+ T 세포의 항-종양 효능은 세포 모집단 단독과 비교하여 또는 비형질도입된 세포와 비교하여 증가했다.
도 13은 전신 림프종(NSG/Raji)의 마우스 모델에서 CD8+ 및 CD4+ CD19-CAR T 세포의 상승작용을 나타낸다. Raji 종양의 접종은 종양 접종 6일 후(처리 전)에 생물발광 영상화에 의해 확인되었다(처리 개략도는 a에 제시되고, 생물발광에 의한 종양 접종은 b에 제시됨). 생물발광 영상화를 사용한 종양 하중의 분석은 CD8+ CD19-CAR T 세포로 처리한 마우스의 코호트에서 및 조합된 CD8+ 및 CD4+ CD19-CAR T-세포 생성물로 처리한 마우스에서 Raji 종양의 완전한 소거를 나타냈다(처리후 중간 흑색 및 회색 막대, b). 이어서, 마우스는 Raji 종양 세포의 2차 접종으로 자극시키고, 말초 혈액에서 CD4+ 및 CD8+ CAR T 세포의 빈도 및 종양 접종을 분석했다. 조합된 CD8+ 및 CD4+ CAR T-세포 생성물로 처리한 마우스에서는, 종양 자극 후에 현저히 높은 수준의 CD8+ CAR 세포(c 하부 패널) 및 Raji 접종의 완전한 거부(종양 자극후 우측 회색 막대, b)를 나타냈다. 대조적으로, CD8+ CD19-CAR CTL 단독을 제공한 마우스에서, 본 발명자들은 종양 자극 후에 CAR T 세포의 증가를 검출하지 못했고(c), Raji 종양 세포는 접종할 수 있었다(종양 자극후 우측 흑색 막대, 패널 b).
논의
총괄적으로, 이들 데이타는 당해 세포를 또 다른 CAR 작제물, CD19, CD19-CAR 변형된 CD4+ 및 CD8+ T 세포로 형질도입시키는 것이 침략적 전신 림프종의 생체내 모델에서 강력한 항-종양 반응을 제공하고 CD8+ CAR CTL의 항-종양 효능에 대한 CD4+ CAR T 세포의 유리한 및 상승작용 효과에 대한 증거를 제공함을 증명한다.
상기는 본 발명의 설명하는 것이며, 본 발명의 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본 발명은 하기 특허청구범위에 의해 한정되며, 당해 특허청구범위의 등가물은 본원에 포함된다. 본원에서 언급된 모든 참조 및 문헌은 이에 의해 참조로서 도입된다.
참조문헌
1. Cheever, M. A., et al., Specificity of adoptive chemoimmunotherapy of established syngeneic tumors. J. Immunol. 125, 711-714 (1980).
2. Pahl-Seibert, M.-F. et al. Highly protective in vivo function of cytomegalovirus IE1 epitope-specific memory CD8 T cells purified by T-cell receptor-based cell sorting. J. Virol. 79, 5400-5413 (2005).
3. Riddell, S R. et al . Restoration of viral immunity in immunodeficient humans by the adoptive transfer of T cell clones. Science 257, 238-241 (1992).
4. Walter, E. A. et al. Reconstitution of cellular immunity against cytomegalovirus in recipients of allogeneic bone marrow by transfer of T-cell clones from the donor. N. Engl. J. Med. 333, 1038-1044 (1995).
5. Rooney, C. M. et al. Infusion of cytotoxic T cells for the prevention and treatment of Epstein-Barr virus-induced lymphoma in allogeneic transplant recipients. Blood 92, 1549-1555 (1998).
6. Dudley, M. E. et al. Cancer regression and autoimmunity in patients after clonal repopulation with antitumor lymphocytes. Science 298, 850-854 (2002)/
7. Bollard, C. M. et al. Cytotoxic T lymphocyte therapy for Epstein-Barr virus+ Hodgkin's disease. J. Exp. Med. 200, 1623-1633 (2004).
8. Dudley, M. E. et al. Adoptive cell transfer therapy following nonmyeloablative but lymphodepleting chemotherapy for the treatment of patients with refractory metastatic melanoma. J. Clin. Oncol. 23, 2346-2357 (2005).
9. Gattinoni, L., Powell Jr, D. J., Rosenberg, S. A., & Restifo, N. P. Adoptive immunotherapy for cancer: building on success. Nat. Rev. Immunol. 6, 383-393 (2006).
10. Blattman, J. N. & Greenberg, P. D. Cancer Immunotherapy: A treatment for the masses. Science 305, 200-205 (2004).
11. Kessels, H. W. H. G. et al. Immunotherapy through TCR gene transfer. Nat. Immuno!. 2, 957-961 (2001).
12. Stanislawski, T. et al. Circumventing tolerance to a human MDM2-derived tumor antigen by TCR gene transfer. Nat. Immunol. 2, 962-970 (2001).
13. Brentjens, R. J. et al. Eradication of systemic B-cell tumors by genetically targeted human T lymphocytes co-stimulated by CD80 and interleukin-15. Nat. Med. 9, 279-286 (2003).
14. Morgan, R. A. et al. Cancer regression in patients after transfer of genetically engineered lymphocytes. Science advance online publication Aug. 31, (2006). DOI: 10.1126/science.1129003
15. Bleakley, M. & Riddell, S. R. Molecules and mechanisms of the graft versus- leukemia effect. Nat. Rev. Cancer 4, 371-380 (2004).
16. Dudley, M. E. et al. Adoptive transfer of cloned melanoma-reactive T lymphocytes for the treatment of patients with metastatic melanoma. J. Immunother. 24, 363-373 (2001).
17. Yee, C. et al. Adoptive T cell therapy using antigen-specific CD8+ T cell clones for the treatment of patients with metastatic melanoma: In vivo persistence, migration, and antitumor effect of transferred cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99, 16168-16173 (2002).
18. Sallusto, F. et al., Central memory and effector memory T cell subsets: function, generation, and maintenance. Annu. Rev. Immunol. 22, 745-763 (2004).
19. Butcher, E. C. & Picker, L. J. Lymphocyte homing and homeostasis. Science 272, 60-66 (1996).
21. Dudley, M. E. et al. A phase I study of nonmyeloablative chemotherapy and adoptive transfer of autologous tumor antigen-specific T lymphocytes in patients with metastatic melanoma. J. Immunother. 25, 243-251 (2002).
22. Gattinorti, L. et al. Acquisition of full effector function in vitro paradoxically impairs the in vivo antitumor efficacy of adoptively transferred CD8+ T cells. J. Clin. Invest. 115, 1616-1626 (2005).
23. Schmitt TM, Ciofani M, Petrie HT,Zuniga-Plucker JC. Maintenance of T cell specification and differentiation requires recurrent notch receptor-ligand interactions. J Exp Med. 2004;200(4):469-479.
24. Wang J, Press OW, Lindgren CG, et al. Cellular immunotherapy for follicular lymphoma using genetically modified CD20-specific CD8+ cytotoxic T lymphocytes. Mol Ther. 2004;9(4): 577-586.
25. Riddell SR, Greenberg PD. The use of anti-CD3 and anti-CD28 monoclonal antibodies to clone and expand human antigen-specific T cells. J Immunol Methods. 1990;128(2):189-201.
26. Baskar S, Kwong KY, Hofer T, et al. Unique cell surface expression of receptor tyrosine kinase ROR1 in human B-cell chronic lymphocytic leukemia. Clin Cancer Res. 2008;14(2):396-404.
27. Klein U, Tu Y, Stolovitzky GA, et al. Gene expression profiling of B cell chronic lymphocytic leukemia reveals a homogeneous phenotype related to memory B cells. J Exp Med. 2001;194(11):1625- 1638.
28. Rosenwald A, Alizadeh AA, Widhopf G, et al. Relation of gene expression phenotype to immunoglobulin mutation genotype in B cell chronic lymphocytic leukemia. J Exp Med. 2001;
29. Fukuda T, Chen L, Endo T, et al. Antisera induced by infusions of autologous Ad-CD154-leukemia B cells identify ROR1 as an oncofetal antigen and receptor for Wnt5a. Proc Natl Acad Sci U S A. 2008;105(8):3047-3052.
30. Lapalombella R, Andritsos L, Liu Q, et al. Lenalidomide treatment promotes CD154 expression on CLL cells and enhances production of antibodies by normal B cells through a PI3-kinase-dependent pathway. Blood. 2010; 115(13):2619-2629.
31. Berger C, Jensen MC, Lansdorp PM, Gough M, Elliott C, Riddell SR. Adoptive transfer of effector CD8+ T cells derived from central memory cells establishes persistent T cell memory in primates. J Clin Invest . 2008;118(1):294-305.

Claims (38)

  1. a) 직접 종양 인식을 유도하고 병원체에 대한 CD8+ 면역 반응을 증가시키는 항원-반응성 키메라 항원 수용체 변형된 CD4+ T 헬퍼 세포,
    여기서, 상기 헬퍼 T 림프구 세포 제제는, 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함함; 및
    b) 생리학적으로 허용가능한 부형제를 포함하는, 양자(adoptive) 세포 면역요법 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    c) 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ T 세포를 포함하는 유전적으로 변형된 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 추가로 포함하는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    c) 환자로부터 유도된 CD8+ T 세포를 포함하는 세포 면역 반응을 유도하는 항원 특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제를 추가로 포함하는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  4. 제1항 내지 제3항 중의 어느 한 항에 있어서, 항원-반응성 키메라 항원 수용체 변형된 CD4+ T 헬퍼 세포가 CD45RO 음성, CD62L 양성 CD4 양성 T 세포로부터 유도되는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중의 어느 한 항에 있어서, CD4+ T 헬퍼 림프구 세포가 천연() CD4+ T 세포, 중추 기억 CD4+ T 세포, 효과기 기억 CD4+ T 세포 또는 벌크 CD4+ T 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  6. 제5항에 있어서, CD4+ 헬퍼 림프구 세포가 천연 CD4+ T 세포이고, 상기 천연 CD4+ T 세포가 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+ CD4+ T 세포를 포함하는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  7. 제1항 내지 제6항 중의 어느 한 항에 있어서, CD8+ T 세포독성 림프구 세포가 천연 CD8+ T 세포, 중추 기억 CD8+ T 세포, 효과기 기억 CD8+ T 세포 및 벌크 CD8+ T 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  8. 제7항에 있어서, CD8+ 세포독성 T 림프구 세포가 중추 기억 T 세포이고, 상기 중추 기억 T 세포가 CD45RO+, CD62L+, CD8+ T 세포를 포함하는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 있어서, CD8+ 세포독성 T 림프구 세포가 중추 기억 T 세포이고, CD4+ 헬퍼 T 림프구 세포가 천연 CD4+ T 세포인, 양자 세포 면역요법 조성물.
  10. 제1항 내지 제9항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애가 고형 종양, 혈액암, 흑색종 또는 바이러스 감염인, 양자 세포 면역요법 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원이 종양 관련된 세포 표면 항원인, 양자 세포 면역요법 조성물.
  12. 제1항 내지 제10항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원이 오펀(orphan) 티로신 키나제 수용체 ROR1, tEGFR, Her2, L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA 및 B형 간염 표면 항원으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중의 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체가 단쇄 항체-유도된 키메라 항원 수용체를 포함하는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  14. 제1항 내지 제13항 중의 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체의 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 모듈이 막관통 도메인, CD28 신호전달 도메인 및 CD3 세포내 신호전달 도메인, 또는 T 세포 공자극 분자의 기타 도메인을 포함하는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 세포내 신호전달 도메인이 CD3 세포내 도메인에 연결된 CD28 막관통 및 신호전달 도메인을 포함하는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중의 어느 한 항에 있어서, CD8+ 세포독성 T 세포의 세포내 신호전달 도메인이 CD4+ 헬퍼 T 세포의 세포내 신호전달 도메인과 동일한, 양자 세포 면역요법 조성물.
  17. 제1항 내지 제15항 중의 어느 한 항에 있어서, CD8+ 세포독성 T 세포의 세포내 신호전달 도메인이 CD4+ 헬퍼 T 세포의 세포내 신호전달 도메인과 상이한, 양자 세포 면역요법 조성물.
  18. 제2항 내지 제17항 중의 어느 한 항에 있어서, CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포가 모두 병원체-특이적 세포 표면 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중쇄 도메인으로 유전적으로 변형되는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  19. 제18항에 있어서, 상기 질환 또는 장애와 관련된 병원체 특이적 세포 표면 항원이 HIV 항원, HCV 항원, HBV 항원, CMV 항원 및 기생 항원으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 양자 세포 면역요법 조성물.
  20. 암의 치료에서 제1항 내지 제19항 중의 어느 한 항의 양자 면역요법 조성물의 용도.
  21. 제20항에 있어서, 암이 고형 종양, 혈액암 또는 흑색종으로부터 선택되는, 용도.
  22. 감염성 질환의 치료에서 제1항 내지 제19항 중의 어느 한 항의 양자 면역요법 조성물의 용도.
  23. 제22항에 있어서, 감염성 질환이 바이러스 감염인, 양자 면역요법 조성물의 용도.
  24. 제23항에 있어서, 바이러스 감염이 헤르페스 바이러스, 레트로바이러스 및 플라비바이러스에 의한 감염으로부터 선택되는, 양자 면역요법 조성물의 용도.
  25. 제24항에 있어서, 바이러스 감염이 간염 바이러스에 의한 감염인, 양자 면역요법 조성물의 용도.
  26. 제1항 내지 제19항 중의 어느 한 항의 양자 면역요법 조성물을 제조하는 방법으로서,
    Th1 사이토킨 반응을 유도하는 변형된 천연 CD4+ T 헬퍼 세포를 수득하는 것을 포함하고,
    상기 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제가 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4 양성 세포를 포함하는, 방법.
  27. 제26항에 있어서, 세포 면역 반응을 유도하는 키메라 항원 수용체 변형된 종양-특이적 CD8+ 세포독성 T 림프구 세포 제제 및 항원-반응성 키메라 항원 수용체를 수득하는 것을 추가로 포함하고,
    상기 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제가 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 모듈을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ 세포를 포함하는, 방법.
  28. 제1항 내지 제19항 중의 어느 한 항의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 세포 면역요법을 수행하는 방법.
  29. 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 세포 면역요법을 수행하는 방법으로서,
    상기 질환 또는 장애와 관련된 항원의 존재에 대해 상기 대상체의 생물학적 샘플을 분석하고, 제1항 내지 제19항 중의 어느 한 항의 조성물을 투여하는 것을 포함하고,
    상기 키메라 항원 수용체가 상기 항원에 특이적으로 결합하는, 방법.
  30. 질환 또는 장애를 갖는 대상체에서 세포 면역요법을 수행하는 방법으로서,
    유전적으로 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고,
    상기 변형된 헬퍼 T 림프구 세포 제제가 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 모듈을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD4+ T 세포를 포함하는, 방법.
  31. 제30항에 있어서, 유전적으로 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제를 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하고,
    상기 변형된 세포독성 T 림프구 세포 제제가 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원에 특이적인 세포외 항체 가변 도메인 및 T 세포 수용체의 세포내 신호전달 모듈을 포함하는 키메라 항원 수용체를 갖는 CD8+ T 세포를 포함하는, 방법.
  32. 제26항 내지 제31항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원이 종양 관련된 세포 표면 항원인, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원이 오펀 티로신 키나제 수용체 ROR1, tEGFR, Her2, L1-CAM, CD19 및 CD20으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  34. 제26항 내지 제31항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 질환 또는 장애와 관련된 항원이 HIV, HCV, HBV, CMV 및 기생 항원으로 이루어진 그룹으로부터 선택된 병원체 특이적 세포 표면 항원인, 방법.
  35. 제34항에 있어서, CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포가 모두 병원체 특이적 세포 표면 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중쇄 도메인으로 유전적으로 변형되는, 방법.
  36. 제26항 내지 제35항 중의 어느 한 항에 있어서, Th1 표현형을 갖는 키메라 항원 수용체 변형된 CD4+ T 헬퍼 림프구 세포 제제가 증가된 증식 반응을 유도하고, 종양 세포의 존재하에 존속성을 전달하거나 항-종양 반응성 반응을 증가시키는, 방법.
  37. 제26항 내지 제36항 중의 어느 한 항에 있어서, CD4+ T 헬퍼 림프구 세포가 천연 CD4+ T 세포, 중추 기억 CD4+ T 세포, 효과기 기억 CD4+ T 세포 및 벌크 CD4+ T 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 방법.
  38. 제37항에 있어서, CD4+ T 헬퍼 림프구 세포가 천연 CD4+ T인, 방법.
KR1020137027313A 2011-03-23 2012-03-23 세포 면역요법용 방법 및 조성물 KR101976882B1 (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161466552P 2011-03-23 2011-03-23
US61/466,552 2011-03-23
PCT/US2012/030388 WO2012129514A1 (en) 2011-03-23 2012-03-23 Method and compositions for cellular immunotherapy

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140023931A true KR20140023931A (ko) 2014-02-27
KR101976882B1 KR101976882B1 (ko) 2019-05-09

Family

ID=46208746

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020137027313A KR101976882B1 (ko) 2011-03-23 2012-03-23 세포 면역요법용 방법 및 조성물

Country Status (16)

Country Link
US (2) US9987308B2 (ko)
EP (1) EP2689010B1 (ko)
JP (5) JP6203705B2 (ko)
KR (1) KR101976882B1 (ko)
CN (3) CN103502438A (ko)
AU (3) AU2012230780B2 (ko)
BR (1) BR112013024395B1 (ko)
CA (1) CA2830953C (ko)
ES (1) ES2841983T3 (ko)
IL (1) IL228603B (ko)
MX (2) MX359513B (ko)
NZ (1) NZ743310A (ko)
RU (1) RU2688185C2 (ko)
SG (2) SG10201602253SA (ko)
WO (1) WO2012129514A1 (ko)
ZA (1) ZA201901167B (ko)

Families Citing this family (354)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2365823B1 (en) 2008-10-30 2016-11-30 Yeda Research And Development Company Ltd. Anti third party central memory t cells, methods of producing same and use of same in transplantation and disease treatment
NZ743310A (en) * 2011-03-23 2022-11-25 Fred Hutchinson Cancer Center Method and compositions for cellular immunotherapy
MX351226B (es) 2011-09-08 2017-10-05 Yeda Res & Dev Celulas t con memoria central anti tercera parte, metodos para producirlas y uso de las mismas en transplante y tratamiento de enfermedades.
DK2855667T3 (da) 2012-05-25 2023-10-30 Cellectis Fremgangsmåder til manipulation af allogeniske og immunosuppressiv-resistante T-celler til immunterapi
JP6574381B2 (ja) * 2012-08-20 2019-09-11 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター 細胞免疫療法のための方法および組成物
US10241113B2 (en) 2012-10-10 2019-03-26 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. CD28 expression during lenalidomide immune modulation
AU2013204922B2 (en) 2012-12-20 2015-05-14 Celgene Corporation Chimeric antigen receptors
TW201446794A (zh) 2013-02-20 2014-12-16 Novartis Ag 利用抗－ｃｄ１２３嵌合抗原受體工程化ｔ細胞之初級人類白血病有效靶向
ES2760023T3 (es) 2013-02-20 2020-05-12 Univ Pennsylvania Tratamiento del cáncer utilizando receptor de antígeno quimérico anti-EGFRvIII humanizado
CN105874061B (zh) * 2013-02-26 2021-08-10 纪念斯隆-凯特琳癌症中心 用于免疫疗法的组合物和方法
US10238690B2 (en) 2013-03-15 2019-03-26 Celgene Corporation Modified T lymphocytes comprising an inducible caspase and methods of apoptosis
EP3623380A1 (en) 2013-03-15 2020-03-18 Michael C. Milone Targeting cytotoxic cells with chimeric receptors for adoptive immunotherapy
UY35468A (es) 2013-03-16 2014-10-31 Novartis Ag Tratamiento de cáncer utilizando un receptor quimérico de antígeno anti-cd19
BR112015026122A8 (pt) 2013-04-18 2020-01-21 Armo Biosciences Inc agente de polietileno glicol-il-10 (peg-il-10), seu uso, composição farmacêutica, contentor estéril e kit
US11077144B2 (en) 2013-05-13 2021-08-03 Cellectis CD19 specific chimeric antigen receptor and uses thereof
LT3546572T (lt) * 2013-05-13 2024-05-27 Cellectis Cd19 specifinis chimerinis antigeno receptorius ir jo panaudojimas
US9823255B2 (en) 2013-06-17 2017-11-21 Armo Biosciences, Inc. Method for assessing protein identity and stability
JP6516740B2 (ja) 2013-08-02 2019-05-22 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア 幹細胞及びキメラ抗原受容体を介した抗腫瘍性ｔ細胞免疫の改変
AU2014311432A1 (en) 2013-08-30 2016-03-03 Armo Biosciences, Inc. Methods of using interleukin-10 for treating diseases and disorders
BR112016010166A2 (pt) 2013-11-11 2017-12-05 Armo Biosciences Inc métodos para usar interleucina-10 para tratar doenças e distúrbios
CN104745596B (zh) * 2013-11-15 2020-02-11 中国医学科学院基础医学研究所 靶向肝癌细胞的细胞制备物
MX2016008076A (es) 2013-12-19 2016-08-12 Novartis Ag Receptores quimericos de antigeno de mesotelina humana y uso de los mismos.
US10287354B2 (en) 2013-12-20 2019-05-14 Novartis Ag Regulatable chimeric antigen receptor
EP3097117B1 (en) 2014-01-21 2023-10-04 Novartis Ag Enhanced antigen presenting ability of car t cells by co-introduction of costimulatory molecules
US10532088B2 (en) 2014-02-27 2020-01-14 Lycera Corporation Adoptive cellular therapy using an agonist of retinoic acid receptor-related orphan receptor gamma and related therapeutic methods
CN111514283A (zh) 2014-04-07 2020-08-11 诺华股份有限公司 使用抗cd19嵌合抗原受体治疗癌症
KR20230038310A (ko) 2014-04-10 2023-03-17 시애틀 칠드런즈 호스피탈 디/비/에이 시애틀 칠드런즈 리서치 인스티튜트 세포 면역요법을 위한 방법 및 조성물
CN111961647A (zh) 2014-04-16 2020-11-20 朱诺治疗有限公司 用于扩增细胞群的方法、试剂盒及装置
ES2759260T3 (es) * 2014-04-23 2020-05-08 Juno Therapeutics Inc Métodos para aislar, cultivar y modificar genéticametne poblaciones de células inmunes para la terapia adoptiva
EP3998278A1 (en) 2014-04-25 2022-05-18 2seventy bio, Inc. Mnd promoter chimeric antigen receptors
JP6523337B2 (ja) 2014-05-05 2019-05-29 リセラ・コーポレイションＬｙｃｅｒａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ＲＯＲγのアゴニストとしての使用及び疾患治療のためのベンゼンスルホンアミド及び関連化合物
WO2015171610A2 (en) 2014-05-05 2015-11-12 Lycera Corporation Tetrahydroquinoline sulfonamide and related compounds for use as agonists of rory and the treatment of disease
WO2015187295A2 (en) 2014-06-02 2015-12-10 Armo Biosciences, Inc. Methods of lowering serum cholesterol
SG10202108458XA (en) 2014-06-06 2021-09-29 2Seventy Bio Inc Improved t cell compositions
WO2016011210A2 (en) * 2014-07-15 2016-01-21 Juno Therapeutics, Inc. Engineered cells for adoptive cell therapy
SG11201700418VA (en) 2014-07-21 2017-02-27 Novartis Ag Treatment of cancer using a cll-1 chimeric antigen receptor
BR112017001242A2 (pt) 2014-07-21 2017-12-05 Novartis Ag tratamento de câncer usando um receptor antigênico quimérico a cd33
MX2017001011A (es) 2014-07-21 2018-05-28 Novartis Ag Tratamiento de cancer de usando un receptor quimerico de antigeno anti-bcma.
JP2017528433A (ja) * 2014-07-21 2017-09-28 ノバルティス アーゲー 低い免疫増強用量のｍＴＯＲ阻害剤とＣＡＲの組み合わせ
US11542488B2 (en) 2014-07-21 2023-01-03 Novartis Ag Sortase synthesized chimeric antigen receptors
EP3172231B1 (en) 2014-07-24 2021-05-05 Bluebird Bio, Inc. Bcma chimeric antigen receptors
MX367787B (es) 2014-07-29 2019-09-06 Cellectis Receptores de antígenos quimericos ror1 (ntrkr1) específicos para inmunoterapia del cáncer.
WO2016016343A1 (en) 2014-07-31 2016-02-04 Cellectis Ror1 specific multi-chain chimeric antigen receptor
BR112017003104A2 (pt) 2014-08-19 2017-12-05 Novartis Ag tratamento de câncer usando um receptor antigênico quimérico anti-cd123
TWI805109B (zh) 2014-08-28 2023-06-11 美商奇諾治療有限公司 對cd19具專一性之抗體及嵌合抗原受體
ES2777305T3 (es) 2014-09-04 2020-08-04 Cellectis Receptores de antígeno quiméricos específicos de la glicoproteína trofoblástica (5T4, TPBG) para inmunoterapia contra el cáncer
CN114621969A (zh) 2014-09-17 2022-06-14 诺华股份有限公司 用于过继免疫疗法的具有嵌合受体的靶向细胞毒性细胞
JP6657195B2 (ja) 2014-09-19 2020-03-04 シティ・オブ・ホープＣｉｔｙ ｏｆ Ｈｏｐｅ Ｌ１３Ｒα２を標的とする共刺激性キメラ抗原レセプターＴ細胞
CN106973568B (zh) * 2014-10-08 2021-07-23 诺华股份有限公司 预测针对嵌合抗原受体疗法的治疗应答性的生物标志及其用途
ES2879612T3 (es) 2014-10-20 2021-11-22 Juno Therapeutics Inc Métodos y composiciones para dosificación en terapia celular adoptiva
CN107106655A (zh) 2014-10-22 2017-08-29 阿尔莫生物科技股份有限公司 使用白细胞介素‑10治疗疾病和病症的方法
CN107106611B (zh) * 2014-10-27 2021-11-23 弗雷德哈钦森癌症研究中心 用于提高过继细胞免疫疗法效力的组合物和方法
CA2966538A1 (en) 2014-11-05 2016-05-12 Juno Therapeutics, Inc. Methods for transduction and cell processing
AU2015358400B2 (en) 2014-12-03 2020-09-10 Juno Therapeutics, Inc. Methods and compositions for adoptive cell therapy
LT3230321T (lt) 2014-12-12 2019-12-10 Bluebird Bio Inc Bcma chimeriniai antigeno receptoriai
EP3240803B1 (en) 2014-12-29 2021-11-24 Novartis AG Methods of making chimeric antigen receptor-expressing cells
CN105802975B (zh) * 2014-12-31 2020-04-14 浙江大学 靶向her2阳性肿瘤的细胞制备物及其用途
CN105802909B (zh) * 2014-12-31 2021-01-01 中国医学科学院基础医学研究所 具有her2特异性tcr的t细胞制备物及其用途
MA41346A (fr) 2015-01-12 2017-11-21 Juno Therapeutics Inc Eléments régulateurs post-transcriptionnels d'hépatite modifiée
EP3760644A1 (en) 2015-01-16 2021-01-06 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for ror1
WO2016115482A1 (en) 2015-01-16 2016-07-21 Novartis Pharma Ag Phosphoglycerate kinase 1 (pgk) promoters and methods of use for expressing chimeric antigen receptor
DK3250606T3 (da) * 2015-01-26 2021-01-04 Cellectis ANTI-CLL1-specifikke enkeltkædede kimære antigenreceptorer (SCCARS) til cancerimmunterapi
CA2973884A1 (en) 2015-01-30 2016-08-04 The Regents Of The University Of California Protein delivery in primary hematopoietic cells
WO2016126608A1 (en) 2015-02-02 2016-08-11 Novartis Ag Car-expressing cells against multiple tumor antigens and uses thereof
CN107531805A (zh) * 2015-03-05 2018-01-02 弗雷德哈钦森癌症研究中心 免疫调节融合蛋白及其用途
CN114958764A (zh) 2015-04-08 2022-08-30 诺华股份有限公司 Cd20疗法、cd22疗法和与cd19嵌合抗原受体（car）表达细胞的联合疗法
MX2017013247A (es) * 2015-04-15 2018-08-15 Prospect Chartercare Rwmc Llc D/B/A Roger Williams Medical Center Infusion arterial hepatica de linfocitos t car.
WO2016166568A1 (en) 2015-04-16 2016-10-20 Juno Therapeutics Gmbh Methods, kits and apparatus for expanding a population of cells
JP7114457B2 (ja) 2015-04-17 2022-08-08 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア キメラ抗原受容体発現細胞の有効性および増殖を改善するための方法
WO2016179343A1 (en) 2015-05-05 2016-11-10 Lycera Corporation DIHYDRO-2H-BENZO[b][1,4]OXAZINE SULFONAMIDE AND RELATED COMPOUNDS FOR USE AS AGONISTS OF RORy AND THE TREATMENT OF DISEASE
AU2016263513A1 (en) 2015-05-20 2017-11-23 Cellectis Anti-GD3 specific chimeric antigen receptors for cancer immunotherapy
KR20180020141A (ko) 2015-05-28 2018-02-27 아르모 바이오사이언시스 인코포레이티드 암 치료에 사용되는 peg화된 인터류킨-10
CA2986060A1 (en) 2015-05-29 2016-12-08 Valerie Odegard Composition and methods for regulating inhibitory interactions in genetically engineered cells
MX2017016134A (es) 2015-06-11 2018-08-15 Lycera Corp Aril dihidro-2h-benzo[b][1,4]oxazina sulfonamida y compuestos relacionados para uso como agonistas de rory y el tratamiento de enfermedad.
MA42895A (fr) 2015-07-15 2018-05-23 Juno Therapeutics Inc Cellules modifiées pour thérapie cellulaire adoptive
CN114457039A (zh) * 2015-07-16 2022-05-10 耶达研究及发展有限公司 基因修饰的抗第三方中央型记忆t细胞及其在免疫疗法中的用途
GB201512733D0 (en) * 2015-07-20 2015-08-26 Genagon Therapeutics Ab Therapeutic agents for treating conditions associated with elevated GDF15
US20190175648A1 (en) * 2015-07-21 2019-06-13 City Of Hope T cells for expression of chimeric antigen receptors and other receptors
CA2992551A1 (en) 2015-07-21 2017-01-26 Novartis Ag Methods for improving the efficacy and expansion of immune cells
JP7409773B2 (ja) 2015-07-31 2024-01-09 リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ 改変された細胞および治療の方法
GB201513540D0 (en) 2015-07-31 2015-09-16 King S College London Therapeutic agents
WO2017027291A1 (en) 2015-08-07 2017-02-16 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Bispecific car t-cells for solid tumor targeting
US11667691B2 (en) 2015-08-07 2023-06-06 Novartis Ag Treatment of cancer using chimeric CD3 receptor proteins
WO2017035232A1 (en) 2015-08-25 2017-03-02 Armo Biosciences, Inc. Methods of using interleukin-10 for treating diseases and disorders
JP6905163B2 (ja) 2015-09-03 2021-07-21 ザ トラスティーズ オブ ザ ユニバーシティ オブ ペンシルバニア サイトカイン放出症候群を予測するバイオマーカー
EP3347026A4 (en) * 2015-09-09 2019-05-08 Seattle Children's Hospital (DBA Seattle Children's Research Institute) GENEMANIPULATION OF MACROPHAGES FOR IMMUNOTHERAPY
US11142565B2 (en) * 2015-09-24 2021-10-12 Abvitro Llc Broadly neutralizing anti-HIV-1 antibodies that bind to an N-glycan epitope on the envelope
MX2018003534A (es) 2015-09-25 2019-04-25 Abvitro Llc Proceso de alto rendimiento para identificacion de blanco de receptor de celula t de secuencias de receptor de celula t apareadas de manera natural.
MA45489A (fr) 2015-10-22 2018-08-29 Juno Therapeutics Gmbh Procédés de culture de cellules, kits et appareil associés
MA45488A (fr) 2015-10-22 2018-08-29 Juno Therapeutics Gmbh Procédés, kits et appareil de culture de cellules
WO2017068419A2 (en) 2015-10-22 2017-04-27 Juno Therapeutics Gmbh Methods, kits, agents and apparatuses for transduction
ES2909973T3 (es) * 2015-11-04 2022-05-10 Hope City Receptores quiméricos para el antígeno que se dirigen a HER2
WO2017079703A1 (en) 2015-11-05 2017-05-11 Juno Therapeutics, Inc. Vectors and genetically engineered immune cells expressing metabolic pathway modulators and uses in adoptive cell therapy
MA44314A (fr) 2015-11-05 2018-09-12 Juno Therapeutics Inc Récepteurs chimériques contenant des domaines induisant traf, et compositions et méthodes associées
EP4212547A1 (en) 2015-12-03 2023-07-19 Juno Therapeutics, Inc. Modified chimeric receptors and related compositions and methods
MA43378A (fr) 2015-12-03 2018-10-10 Juno Therapeutics Inc Compositions et méthodes pour la reduction de la réponse immunitaire contre récepteurs d'antigène chimériques
EP3384294B1 (en) 2015-12-04 2021-10-13 Juno Therapeutics, Inc. Methods and compositions related to toxicity associated with cell therapy
US11479755B2 (en) 2015-12-07 2022-10-25 2Seventy Bio, Inc. T cell compositions
EP3393504A1 (en) 2015-12-22 2018-10-31 Novartis AG Mesothelin chimeric antigen receptor (car) and antibody against pd-l1 inhibitor for combined use in anticancer therapy
GB201600328D0 (en) 2016-01-08 2016-02-24 Univ Oslo Hf Anti-CD37 chimeric antigen receptors and immune cells expressing them
CN108697776A (zh) 2016-01-11 2018-10-23 阿尔莫生物科技股份有限公司 在产生抗原特异性cd8+t细胞中的白介素-10及其使用方法
CN106978442B (zh) * 2016-01-18 2020-06-19 爱康得生物医学技术（苏州）有限公司 一种嵌合抗原受体t细胞的制备方法
CN108699149B (zh) 2016-02-02 2023-01-06 弗雷德哈钦森癌症中心 抗-ror1抗体及其用途
EA201891717A1 (ru) 2016-02-23 2019-02-28 Иммьюн Дизайн Корп. Препараты мультигеномных ретровирусных векторов и способы и системы для их получения и применения
MA43759A (fr) 2016-03-16 2018-11-28 Jason Connor Procédés de conception adaptative d'un régime de traitement et traitements associés
WO2017161208A1 (en) 2016-03-16 2017-09-21 Juno Therapeutics, Inc. Methods for determining dosing of a therapeutic agent and related treatments
MX2018010415A (es) 2016-03-18 2018-11-29 Hutchinson Fred Cancer Res Composiciones y metodos para inmunoterapia de grupo de diferenciacion 20 (cd20).
US11518814B2 (en) 2016-03-22 2022-12-06 Seattle Children's Hospital Early intervention methods to prevent or ameliorate toxicity
EP3432924A1 (en) 2016-03-23 2019-01-30 Novartis AG Cell secreted minibodies and uses thereof
ES2930058T3 (es) 2016-04-01 2022-12-05 Kite Pharma Inc Receptores quiméricos y métodos de uso de los mismos
BR112018070073A2 (pt) 2016-04-01 2019-02-12 Kite Pharma, Inc. receptores de antígeno quimérico e célula t e métodos de uso
JP2019516352A (ja) 2016-04-01 2019-06-20 アムジエン・インコーポレーテツド Ｆｌｔ３に対するキメラ受容体及びその使用方法
EP3436036A4 (en) 2016-04-01 2020-03-18 Kite Pharma, Inc. BCMA-BINDING MOLECULES AND METHOD FOR USE THEREOF
CN108884459B (zh) * 2016-04-26 2024-04-02 科济生物医药（上海）有限公司 一种改善免疫应答细胞功能的方法
WO2017192924A1 (en) 2016-05-04 2017-11-09 Fred Hutchinson Cancer Research Center Cell-based neoantigen vaccines and uses thereof
MX2018013445A (es) 2016-05-06 2019-09-09 Juno Therapeutics Inc Celulas diseñadas geneticamente y metodos para obtener las mismas.
MX2018013963A (es) * 2016-05-25 2019-08-22 Council Queensland Inst Medical Res Metodos de inmunoterapia.
CA3025523A1 (en) 2016-05-27 2017-11-30 Aadigen, Llc Peptides and nanoparticles for intracellular delivery of genome-editing molecules
US20210177896A1 (en) 2016-06-02 2021-06-17 Novartis Ag Therapeutic regimens for chimeric antigen receptor (car)- expressing cells
WO2017210689A1 (en) 2016-06-03 2017-12-07 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Adoptive cell therapies as early treatment options
MA45341A (fr) 2016-06-06 2019-04-10 Hutchinson Fred Cancer Res Procédés de traitement de malignités de lymphocytes b au moyen d'une thérapie cellulaire adoptive
KR20190039085A (ko) * 2016-06-17 2019-04-10 마젠타 테라퓨틱스 인코포레이티드 세포의 고갈을 위한 조성물 및 방법
MA45491A (fr) 2016-06-27 2019-05-01 Juno Therapeutics Inc Épitopes à restriction cmh-e, molécules de liaison et procédés et utilisations associés
WO2018005559A1 (en) 2016-06-27 2018-01-04 Juno Therapeutics, Inc. Method of identifying peptide epitopes, molecules that bind such epitopes and related uses
KR20230107408A (ko) 2016-07-29 2023-07-14 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 항-cd19 항체에 대한 항-이디오타입 항체
ES2951552T3 (es) 2016-07-29 2023-10-23 Juno Therapeutics Inc Polipéptidos inmunomoduladores y composiciones y métodos relacionados
AU2017301881A1 (en) 2016-07-29 2019-02-07 Juno Therapeutics, Inc. Methods for assessing the presence or absence of replication competent virus
CN106279432B (zh) 2016-08-10 2019-09-20 深圳市再生之城生物医药技术有限公司 一种vc-car分子及在清除hiv-1感染细胞中的应用
RU2755725C2 (ru) 2016-09-12 2021-09-20 Джуно Терапьютикс, Инк. Сборочные узлы перфузионных биореакторных мешков
WO2018052828A1 (en) 2016-09-14 2018-03-22 Janssen Biotech, Inc. Chimeric antigen receptors comprising bcma-specific fibronectin type iii domains and uses thereof
CN110087657A (zh) 2016-09-28 2019-08-02 阿托莎遗传股份有限公司 过继细胞治疗的方法
US11072660B2 (en) 2016-10-03 2021-07-27 Juno Therapeutics, Inc. HPV-specific binding molecules
MX2019003886A (es) 2016-10-07 2019-08-05 Novartis Ag Receptores de antigenos quimericos para el tratamiento del cancer.
US11896615B2 (en) 2016-10-13 2024-02-13 Juno Therapeutics, Inc. Immunotherapy methods and compositions involving tryptophan metabolic pathway modulators
GB2605883B (en) 2016-10-18 2023-03-15 Univ Minnesota Tumor infiltrating lymphocytes and methods of therapy
JP7100028B2 (ja) 2016-10-20 2022-07-12 セルジーン コーポレイション セレブロン系のヘテロ二量体化可能なキメラ抗原受容体
CA3040914A1 (en) 2016-11-03 2018-05-24 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a cell based therapy and a microglia inhibitor
WO2018085731A2 (en) 2016-11-03 2018-05-11 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a t cell therapy and a btk inhibitor
CA3045339A1 (en) 2016-12-03 2018-06-07 Juno Therapeutics, Inc. Methods and compositions for use of therapeutic t cells in combination with kinase inhibitors
BR112019011025A2 (pt) 2016-12-03 2019-10-08 Juno Therapeutics Inc métodos para modulação de células t car
ES2961666T3 (es) 2016-12-03 2024-03-13 Juno Therapeutics Inc Métodos para determinar la dosificación de células CAR-T
WO2018106732A1 (en) 2016-12-05 2018-06-14 Juno Therapeutics, Inc. Production of engineered cells for adoptive cell therapy
WO2018111763A1 (en) 2016-12-12 2018-06-21 Seattle Children's Hospital (dba Seattle Children's Research Institute) Chimeric transcription factor variants with augmented sensitivity to drug ligand induction of transgene expression in mammalian cells
EP3568414A1 (en) 2017-01-10 2019-11-20 Juno Therapeutics, Inc. Epigenetic analysis of cell therapy and related methods
GB201700567D0 (en) 2017-01-12 2017-03-01 Genagon Therapeutics Ab Therapeutic agents
GB201700553D0 (en) 2017-01-12 2017-03-01 Genagon Therapeutics Ab Therapeutic agents
CN110392736A (zh) 2017-01-18 2019-10-29 耶达研究及发展有限公司 遗传修饰的反抑细胞及其在免疫治疗中的用途
US10751368B2 (en) 2017-01-18 2020-08-25 Yeda Research And Development Co. Ltd. Methods of transplantation and disease treatment
CN110461876B (zh) 2017-01-20 2024-05-17 海德堡医药研究有限责任公司 用于耗尽cd137+细胞的组合物和方法
MX2019008538A (es) 2017-01-20 2019-11-05 Juno Therapeutics Gmbh Conjugados de superficie celular y composiciones y métodos celulares relacionados.
US11535662B2 (en) 2017-01-26 2022-12-27 Novartis Ag CD28 compositions and methods for chimeric antigen receptor therapy
CN116712458A (zh) * 2017-02-07 2023-09-08 学校法人埼玉医科大学 用于预测癌症免疫疗法临床效果的免疫学生物标志物
WO2018148180A2 (en) 2017-02-07 2018-08-16 Immune Design Corp. Materials and methods for identifying and treating cancer patients
EP4008728A1 (en) 2017-02-14 2022-06-08 Kite Pharma, Inc. Cd70 binding molecules and methods of use thereof
US11845803B2 (en) 2017-02-17 2023-12-19 Fred Hutchinson Cancer Center Combination therapies for treatment of BCMA-related cancers and autoimmune disorders
BR112019017767A2 (pt) 2017-02-27 2020-04-07 Juno Therapeutics Inc composições, artigos de fabricação e métodos relacionados à dosagem em terapia celular
JP7178355B2 (ja) 2017-02-28 2022-11-25 エンドサイト・インコーポレイテッド Ｃａｒ ｔ細胞療法のための組成物および方法
US20180280437A1 (en) 2017-03-13 2018-10-04 Kite Pharma, Inc. Chimeric antigen receptors for melanoma and uses thereof
SG11201908271WA (en) 2017-03-14 2019-10-30 Juno Therapeutics Inc Methods for cryogenic storage
JP2020511136A (ja) 2017-03-17 2020-04-16 フレッド ハッチンソン キャンサー リサーチ センター 免疫調節性融合タンパク質およびその使用
RU2019133280A (ru) 2017-03-22 2021-04-22 Новартис Аг Композиции и способы для иммуноонкологии
CN107082811B (zh) * 2017-03-28 2021-01-15 中山大学 一种嵌合抗原受体并融合诱导性凋亡酶的复合蛋白
AR111360A1 (es) 2017-04-03 2019-07-03 Kite Pharma Inc Tratamiento usando células t de receptor quimérico incorporando células t polifuncionales optimizadas
CA3056261A1 (en) 2017-04-07 2018-10-11 Juno Therapeutics, Inc. Engineered cells expressing prostate-specific membrane antigen (psma) or a modified form thereof and related methods
MX2019012189A (es) 2017-04-14 2020-12-10 Juno Therapeutics Inc Metodos para valorar la glucosilacion de la superficie celular.
ES2912383T3 (es) 2017-04-18 2022-05-25 Fujifilm Cellular Dynamics Inc Células efectoras inmunitarias específicas de antígeno
WO2018195339A1 (en) 2017-04-19 2018-10-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immune cells expressing engineered antigen receptors
JOP20180042A1 (ar) 2017-04-24 2019-01-30 Kite Pharma Inc نطاقات ربط مولد ضد متوافقة مع البشر وطرق الاستخدام
KR20230164219A (ko) 2017-04-27 2023-12-01 주노 테라퓨틱스 게엠베하 올리고머 입자 시약 및 이의 사용 방법
PT3618842T (pt) 2017-05-01 2024-01-12 Juno Therapeutics Inc Combinação de uma terapia celular e de um composto imunomodulador
CA3064018A1 (en) 2017-05-26 2018-11-29 Kite Pharma, Inc. Methods of making and using embryonic mesenchymal progenitor cells
KR20200054160A (ko) 2017-06-02 2020-05-19 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 입양 세포 요법을 사용한 치료를 위한 물품 제조 및 방법
AU2018275891A1 (en) 2017-06-02 2019-12-12 Juno Therapeutics, Inc. Articles of manufacture and methods related to toxicity associated with cell therapy
CN110997902B (zh) 2017-06-20 2021-11-30 居里研究所 Suv39h1缺陷的免疫细胞
EP3641789A4 (en) 2017-06-22 2021-08-11 Board Of Regents, The University Of Texas System REGULATORY IMMUNE CELL PRODUCTION PROCESSES AND THEIR USES
KR20200022467A (ko) 2017-06-28 2020-03-03 리제너론 파아마슈티컬스, 인크. 항-인간 유두종 바이러스 (hpv) 항원-결합 단백질 및 그의 사용 방법
CA3067602A1 (en) 2017-06-29 2019-01-03 Juno Therapeutics, Inc. Mouse model for assessing toxicities associated with immunotherapies
WO2019006418A2 (en) 2017-06-30 2019-01-03 Intima Bioscience, Inc. ADENO-ASSOCIATED VIRAL VECTORS FOR GENE THERAPY
MA49652A (fr) 2017-07-17 2020-05-27 Janssen Biotech Inc Régions de liaison à un antigène dirigées contre les domaines de la fibronectine de type iii et leurs procédés d'utilisation
MX2020000900A (es) 2017-07-29 2021-01-08 Juno Therapeutics Inc Reactivos para expandir celulas que expresan receptores recombinantes.
WO2019028051A1 (en) 2017-07-31 2019-02-07 Lentigen Technology, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR TREATING CANCER BY ANTI-CD19 / CD20 IMMUNOTHERAPY
MX2020001491A (es) 2017-08-09 2020-08-06 Juno Therapeutics Inc Metodos y composiciones para preparar celulas geneticamente modificadas.
US11851678B2 (en) * 2017-08-09 2023-12-26 Juno Therapeutics, Inc. Methods for producing genetically engineered cell compositions and related compositions
WO2019046832A1 (en) 2017-09-01 2019-03-07 Juno Therapeutics, Inc. GENE EXPRESSION AND EVALUATION OF RISK OF DEVELOPMENT OF TOXICITY FOLLOWING CELL THERAPY
US20200292526A1 (en) 2017-09-07 2020-09-17 Juno Therapeutics, Inc. Methods of identifying cellular attributes related to outcomes associated with cell therapy
KR20200055037A (ko) 2017-09-19 2020-05-20 메사추세츠 인스티튜트 오브 테크놀로지 키메라 항원 수용체 t 세포 요법을 위한 조성물 및 그의 용도
CN109517820B (zh) 2017-09-20 2021-09-24 北京宇繁生物科技有限公司 一种靶向HPK1的gRNA以及HPK1基因编辑方法
US11952408B2 (en) 2017-10-03 2024-04-09 Juno Therapeutics, Inc. HPV-specific binding molecules
CN111479613A (zh) 2017-10-18 2020-07-31 凯德药业股份有限公司 施用嵌合抗原受体免疫疗法的方法
US20210198359A1 (en) 2017-10-25 2021-07-01 Actinium Pharmaceuticals, Inc. Anti-cd45-based lymphodepletion methods and uses thereof in conjction with act-based cancer therapies
AU2018360801A1 (en) 2017-11-01 2020-05-14 Celgene Corporation Process for producing a T cell composition
WO2019089848A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods associated with tumor burden for assessing response to a cell therapy
WO2019089982A1 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Method of assessing activity of recombinant antigen receptors
WO2019089884A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Editas Medicine, Inc. Methods, compositions and components for crispr-cas9 editing of tgfbr2 in t cells for immunotherapy
BR112020008323A2 (pt) 2017-11-01 2020-11-03 Juno Therapeutics Inc anticorpos e receptores de antígenos quiméricos específicos para antígeno de maturação de células b
BR112020008638A2 (pt) 2017-11-01 2020-10-20 Juno Therapeutics Inc receptores de antígenos quiméricos específicos para antígenos de maturação de células b (bcma)
MX2020004240A (es) 2017-11-01 2020-09-25 Juno Therapeutics Inc Proceso para generar composiciones terapeuticas de celulas modificadas.
WO2019089858A2 (en) 2017-11-01 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods of assessing or monitoring a response to a cell therapy
CN111556893A (zh) 2017-11-06 2020-08-18 爱迪塔斯医药股份有限公司 免疫疗法t细胞中cblb的crispr-cas9编辑的方法、组合物和组分
WO2019090364A1 (en) 2017-11-06 2019-05-09 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a cell therapy and a gamma secretase inhibitor
US20200330983A1 (en) 2017-11-10 2020-10-22 Juno Therapeutics, Inc. Closed-system cryogenic vessels
EP3710471A1 (en) 2017-11-16 2020-09-23 Kite Pharma, Inc. Modified chimeric antigen receptors and methods of use
KR20200116081A (ko) 2017-12-01 2020-10-08 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 유전자 조작된 세포의 투약 및 조절 방법
WO2019113556A1 (en) 2017-12-08 2019-06-13 Juno Therapeutics, Inc. Serum-free media formulation for culturing cells and methods of use thereof
AU2018379092A1 (en) 2017-12-08 2020-06-25 Juno Therapeutics, Inc. Process for producing a composition of engineered T cells
BR112020011223A2 (pt) 2017-12-08 2020-11-17 Juno Therapeutics Inc marcadores fenotípicos para terapia celular e mé-todos relacionados
JP2021506260A (ja) 2017-12-15 2021-02-22 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 抗ｃｃｔ５結合分子およびその使用方法
US11919937B2 (en) 2018-01-09 2024-03-05 Board Of Regents, The University Of Texas System T cell receptors for immunotherapy
MX2020007543A (es) 2018-01-15 2020-09-09 Pfizer Metodos para administrar inmunoterapia de receptor de antigeno quimerico en combinacion con agonista 4-1bb.
EP3743082A4 (en) 2018-01-22 2021-11-03 Seattle Children's Hospital (DBA Seattle Children's Research Institute) METHOD OF USE FOR CAR-T CELLS
WO2019152743A1 (en) 2018-01-31 2019-08-08 Celgene Corporation Combination therapy using adoptive cell therapy and checkpoint inhibitor
EP3746569A1 (en) 2018-01-31 2020-12-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods and reagents for assessing the presence or absence of replication competent virus
SG11202007441TA (en) * 2018-02-06 2020-09-29 Seattle Childrens Hospital Dba Seattle Childrens Res Inst Closed-system manufacturing process for car-t cells
CN112534044A (zh) 2018-02-16 2021-03-19 凯德药业股份有限公司 经修饰的多能干细胞及制备和使用方法
EP3762012A1 (en) 2018-03-09 2021-01-13 Ospedale San Raffaele S.r.l. Il-1 antagonist and toxicity induced by cell therapy
WO2019195492A1 (en) 2018-04-05 2019-10-10 Juno Therapeutics, Inc. Methods of producing cells expressing a recombinant receptor and related compositions
PE20201345A1 (es) 2018-04-05 2020-11-25 Juno Therapeutics Inc Receptores de celulas t, y celulas disenadas que expresan los mismos
JOP20200259A1 (ar) 2018-04-10 2020-10-11 Kite Pharma Inc مستقبلات خيمرية لـ dll3 وطرق استخدامها
SG11202009881WA (en) 2018-04-12 2020-11-27 Kite Pharma Inc Chimeric receptor t cell treatment using characteristics of the tumor microenvironment
EP3787751A1 (en) 2018-05-03 2021-03-10 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a chimeric antigen receptor (car) t cell therapy and a kinase inhibitor
CA3100724A1 (en) 2018-06-13 2019-12-19 Novartis Ag B-cell maturation antigen protein (bcma) chimeric antigen receptors and uses thereof
US20210155941A1 (en) 2018-06-22 2021-05-27 Kite Pharma Eu B.V. Compositions and methods for making engineered t cells
AU2019301126A1 (en) 2018-07-11 2021-02-04 Celgene Corporation Uses of anti-BCMA chimeric antigen receptors
US20210277148A1 (en) 2018-07-18 2021-09-09 Amgen Inc. Chimeric receptors to steap1 and methods of use thereof
JP7404335B2 (ja) 2018-07-19 2023-12-25 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド Ｂｃｍａ特異性を有するキメラ抗原受容体およびその使用
WO2020021114A1 (en) * 2018-07-27 2020-01-30 Nordwest Polybiocept Bioscience Gmbh Method for the treatment of a tumor patient with adoptive t cell immunotherapy
KR20210038922A (ko) 2018-08-02 2021-04-08 카이트 파마 인코포레이티드 키메라 항원 수용체 요법 t 세포 확장 동역학 및 그의 용도
MX2021001519A (es) 2018-08-09 2021-05-27 Juno Therapeutics Inc Metodos para valorar acidos nucleicos integrados.
CA3108657A1 (en) 2018-08-09 2020-02-13 Juno Therapeutics, Inc. Processes for generating engineered cells and compositions thereof
CN110819589B (zh) * 2018-08-13 2022-10-11 上海科技大学 一种增强免疫效应细胞功能的方法
EP3850366A1 (en) 2018-09-11 2021-07-21 Juno Therapeutics, Inc. Methods for mass spectrometry analysis of engineered cell compositions
CN112771071A (zh) 2018-09-28 2021-05-07 麻省理工学院 胶原蛋白定位的免疫调节分子及其方法
US20210347851A1 (en) 2018-09-28 2021-11-11 Novartis Ag Cd19 chimeric antigen receptor (car) and cd22 car combination therapies
WO2020069405A1 (en) 2018-09-28 2020-04-02 Novartis Ag Cd22 chimeric antigen receptor (car) therapies
JP2022512789A (ja) * 2018-10-31 2022-02-07 ベリカム ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 自殺スイッチを有するｔ細胞
CA3117568A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Juno Therapeutics Gmbh Methods for selection and stimulation of cells and apparatus for same
US20210393690A1 (en) 2018-11-01 2021-12-23 Juno Therapeutics, Inc. Methods for treatment using chimeric antigen receptors specific for b-cell maturation antigen
ES2968737T3 (es) 2018-11-06 2024-05-13 Juno Therapeutics Inc Proceso para producir células T manipuladas genéticamente
KR20210111247A (ko) 2018-11-08 2021-09-10 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 치료 및 ｔ 세포 조절을 위한 방법 및 조합
SG11202105084VA (en) 2018-11-16 2021-06-29 Juno Therapeutics Inc Methods of dosing engineered t cells for the treatment of b cell malignancies
EP3883955A1 (en) 2018-11-19 2021-09-29 Board of Regents, The University of Texas System A modular, polycistronic vector for car and tcr transduction
CN113272427A (zh) 2018-11-28 2021-08-17 得克萨斯大学体系董事会 免疫细胞的多重基因组编辑以增强功能性和对抑制环境的抵抗力
AU2019386830A1 (en) 2018-11-29 2021-06-24 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for ex vivo expansion of natural killer cells and use thereof
FI3886894T3 (fi) 2018-11-30 2024-05-24 Juno Therapeutics Inc Menetelmiä annosteluun ja b-solumaligniteettien hoitoon adoptiivisessa soluterapiassa
CA3120869A1 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Juno Therapeutics, Inc. Methods for treatment using adoptive cell therapy
WO2020109953A1 (en) 2018-11-30 2020-06-04 Janssen Biotech, Inc. Gamma delta t cells and uses thereof
BR112021011063A2 (pt) 2018-12-10 2021-08-31 Amgen Inc. Transposase piggybac mutada
JP7386382B2 (ja) 2018-12-12 2023-11-27 カイト ファーマ インコーポレイテッド キメラ抗原受容体及びｔ細胞受容体並びに使用方法
AR119683A1 (es) 2019-01-29 2022-01-05 Juno Therapeutics Inc Anticuerpos y receptores de antígeno quimérico específicos para receptor huérfano 1 similar a receptor de tirosina quinasa (ror1)
MX2021010441A (es) 2019-03-01 2021-09-21 Allogene Therapeutics Inc Receptores antigenicos quimericos y agentes de union dirigidos a dll3.
BR112021021178A2 (pt) 2019-04-26 2022-03-15 Allogene Therapeutics Inc Receptores de antígeno quimérico resistentes ao rituximabe e usos destes
CN113748201A (zh) 2019-04-26 2021-12-03 艾洛基治疗公司 制备同种异体car t细胞的方法
WO2020223571A1 (en) 2019-05-01 2020-11-05 Juno Therapeutics, Inc. Cells expressing a chimeric receptor from a modified cd247 locus, related polynucleotides and methods
SG11202111360YA (en) 2019-05-01 2021-11-29 Juno Therapeutics Inc Cells expressing a recombinant receptor from a modified tgfbr2 locus, related polynucleotides and methods
KR20220005075A (ko) 2019-05-03 2022-01-12 카이트 파마 인코포레이티드 키메라 항원 수용체 면역요법의 투여 방법
BR112021024404A2 (pt) 2019-06-07 2022-04-19 Juno Therapeutics Inc Cultura de célula t automatizada
SG11202113356XA (en) 2019-06-12 2021-12-30 Juno Therapeutics Inc Combination therapy of a cell-mediated cytotoxic therapy and an inhibitor of a prosurvival bcl2 family protein
EP3990491A1 (en) 2019-06-26 2022-05-04 Massachusetts Institute of Technology Immunomodulatory fusion protein-metal hydroxide complexes and methods thereof
CA3146895A1 (en) 2019-07-23 2021-01-28 Mnemo Therapeutics Immune cells defective for suv39h1
BR112022001194A2 (pt) 2019-07-24 2022-06-07 Regeneron Pharma Receptores de antígeno quimérico com especificidade de mage a4 e usos dos mesmos
WO2021035194A1 (en) 2019-08-22 2021-02-25 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a t cell therapy and an enhancer of zeste homolog 2 (ezh2) inhibitor and related methods
BR112022003471A2 (pt) 2019-08-27 2022-05-24 Janssen Biotech Inc Sistema receptor de antígeno quimérico e usos do mesmo
JP2022546396A (ja) 2019-08-30 2022-11-04 ジュノー セラピューティクス インコーポレイテッド 細胞を分類するための機械学習方法
BR112022003790A2 (pt) 2019-09-02 2022-05-31 Inst Nat Sante Rech Med Método para selecionar um peptídeo neoantigênico tumoral, peptídeos neoantigênicos tumorais, peptídeo neoantigênico tumoral isolado, população de células dendríticas autólogas, vacina ou composição imunogênica, anticorpos, método de produção de um anticorpo, receptor de células t, polinucleotídeo, vetor, célula imune, célula t, peptídeo neoantigênico e população de células imunes
EP4025597A2 (en) * 2019-09-06 2022-07-13 Avectas Limited Engineering of immune cells for ex vivo cell therapy applications
CN114729368A (zh) 2019-09-09 2022-07-08 斯克里贝治疗公司 用于免疫疗法的组合物和方法
WO2021061648A1 (en) 2019-09-23 2021-04-01 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions for stimulation of endogenous t cell responses
US20220401539A1 (en) 2019-10-22 2022-12-22 Institut Curie Immunotherapy Targeting Tumor Neoantigenic Peptides
BR112022008023A2 (pt) 2019-10-30 2022-07-12 Juno Therapeutics Gmbh Dispositivos de seleção e/ou estimulação de células e métodos de uso
IL292566A (en) 2019-11-05 2022-06-01 Celgene Corp Uses of anti-bcma chimeric antigen receptors
CN114980918A (zh) 2019-11-07 2022-08-30 朱诺治疗学股份有限公司 T细胞疗法与(s)-3-[4-(4-吗啉-4-基甲基-苄氧基)-1-氧代-1,3-二氢-异吲哚-2-基]-哌啶-2,6-二酮的组合
AR120563A1 (es) 2019-11-26 2022-02-23 Novartis Ag Receptores de antígeno quimérico cd19 y cd22 y sus usos
KR20220122653A (ko) 2019-12-06 2022-09-02 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Ｂｃｍａ-표적 결합 도메인에 대한 항-이디오타입 항체 및 관련 조성물 및 방법
CN115335399A (zh) 2019-12-06 2022-11-11 朱诺治疗学股份有限公司 针对gprc5d靶结合结构域的抗独特型抗体以及相关组合物和方法
AU2020395318A1 (en) 2019-12-06 2022-06-09 Juno Therapeutics, Inc. Methods related to toxicity and response associated with cell therapy for treating B cell malignancies
AU2021209940A1 (en) 2020-01-24 2022-08-04 Juno Therapeutics, Inc. Methods for dosing and treatment of follicular lymphoma and marginal zone lymphoma in adoptive cell therapy
CN115427550A (zh) 2020-01-28 2022-12-02 朱诺治疗学股份有限公司 T细胞转导方法
KR20220152220A (ko) 2020-02-12 2022-11-15 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 Ｃｄ19-지시된 키메라 항원 수용체 ｔ 세포 조성물 및 이의 방법 및 용도
MX2022009830A (es) 2020-02-12 2022-10-28 Juno Therapeutics Inc Composiciones de celulas t que expresan receptores de antigenos quimericos dirigidos a bcma y metodos y usos de las mismas.
US20230106973A1 (en) 2020-02-17 2023-04-06 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods for expansion of tumor infiltrating lymphocytes and use thereof
BR112022017419A2 (pt) 2020-03-03 2022-10-18 Janssen Biotech Inc Células t gama-delta e usos das mesmas
AU2021232853A1 (en) 2020-03-10 2022-09-22 Massachusetts Institute Of Technology Compositions and methods for immunotherapy of NPM1c-positive cancer
AU2021236145A1 (en) 2020-03-10 2022-09-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods for generating engineered memory-like NK cells and compositions thereof
US20230149462A1 (en) 2020-04-10 2023-05-18 Juno Therapeutics, Inc. Methods and uses related to cell therapy engineered with a chimeric antigen receptor targeting b-cell maturation antigen
US20210338833A1 (en) 2020-05-01 2021-11-04 Massachusetts Institute Of Technology Chimeric antigen receptor-targeting ligands and uses thereof
WO2021221783A1 (en) 2020-05-01 2021-11-04 Massachusetts Institute Of Technology Methods for identifying chimeric antigen receptor-targeting ligands and uses thereof
US11826386B2 (en) 2020-05-05 2023-11-28 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating cancer
EP4149952A1 (en) 2020-05-12 2023-03-22 Institut Curie Neoantigenic epitopes associated with sf3b1 mutations
US20230178239A1 (en) 2020-05-13 2023-06-08 Juno Therapeutics, Inc. Methods of identifying features associated with clinical response and uses thereof
WO2021231661A2 (en) 2020-05-13 2021-11-18 Juno Therapeutics, Inc. Process for producing donor-batched cells expressing a recombinant receptor
EP4153301A2 (en) 2020-05-21 2023-03-29 Board of Regents, The University of Texas System T cell receptors with vgll1 specificity and uses thereof
WO2021260186A1 (en) 2020-06-26 2021-12-30 Juno Therapeutics Gmbh Engineered t cells conditionally expressing a recombinant receptor, related polynucleotides and methods
EP4188395A1 (en) 2020-07-30 2023-06-07 Institut Curie Immune cells defective for socs1
US20230324408A1 (en) 2020-08-05 2023-10-12 Juno Therapeutics, Inc. Anti-idiotypic antibodies to ror1-targeted binding domains and related compositions and methods
JP2023538012A (ja) 2020-08-14 2023-09-06 カイト ファーマ インコーポレイテッド 免疫細胞機能の改善
KR20230113755A (ko) 2020-11-04 2023-08-01 셀진 코포레이션 선행 항암 알킬화제 요법을 받은 환자에서의 car t 세포 요법
EP4243839A1 (en) 2020-11-13 2023-09-20 Catamaran Bio, Inc. Genetically modified natural killer cells and methods of use thereof
KR20230117383A (ko) 2020-12-04 2023-08-08 셀진 코포레이션 염증-관련 가용성 인자의 억제제와 조합된 키메라 항원수용체 (car) t-세포 요법의 용도
WO2022133030A1 (en) 2020-12-16 2022-06-23 Juno Therapeutics, Inc. Combination therapy of a cell therapy and a bcl2 inhibitor
CN116917737A (zh) 2021-01-10 2023-10-20 凯德药业股份有限公司 T细胞疗法
WO2022150731A1 (en) 2021-01-11 2022-07-14 Sana Biotechnology, Inc. Use of cd8-targeted viral vectors
WO2022165133A1 (en) 2021-01-28 2022-08-04 Allogene Therapeutics, Inc. Methods for transducing immune cells
EP4284512A1 (en) 2021-01-28 2023-12-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for treating cytokine release syndrome
WO2022178243A1 (en) 2021-02-20 2022-08-25 Kite Pharma, Inc. Gene markers for sellecting immunotherapies
EP4301755A1 (en) 2021-03-03 2024-01-10 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and a dgk inhibitor
JP2024510217A (ja) 2021-03-11 2024-03-06 アンスティテュ・クリー 膜貫通ネオ抗原ペプチド
EP4305053A1 (en) 2021-03-11 2024-01-17 Kite Pharma, Inc. Improving immune cell function
KR20230172047A (ko) 2021-03-11 2023-12-21 므네모 테라퓨틱스 종양 신생항원 펩타이드 및 이의 용도
AU2022233019A1 (en) 2021-03-11 2023-09-28 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Tumor neoantigenic peptides
KR20230159851A (ko) 2021-03-22 2023-11-22 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 치료 세포 조성물의 효력을 결정하는 방법
EP4314280A1 (en) 2021-03-22 2024-02-07 Juno Therapeutics, Inc. Method to assess potency of viral vector particles
KR20240005700A (ko) 2021-03-29 2024-01-12 주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드 체크포인트 억제제 요법 및 car t 세포 요법의 조합을 사용한 투여 및 치료 방법
IL307257A (en) 2021-03-29 2023-11-01 Juno Therapeutics Inc A combination of car cell therapy and an immunomodulatory compound for the treatment of lymphoma
IL307598A (en) 2021-04-16 2023-12-01 Juno Therapeutics Inc T-cell therapy in patients who have had a previous stem cell transplant
CA3217914A1 (en) 2021-05-04 2022-11-10 Kevin BRAY Chimeric antigen receptors with mage-a4 specificity and uses thereof
WO2022234009A2 (en) 2021-05-06 2022-11-10 Juno Therapeutics Gmbh Methods for stimulating and transducing t cells
JP2024517956A (ja) 2021-05-14 2024-04-23 カイト ファーマ インコーポレイテッド キメラ抗原受容体ｔ細胞療法
WO2023015217A1 (en) 2021-08-04 2023-02-09 Sana Biotechnology, Inc. Use of cd4-targeted viral vectors
AU2022324040A1 (en) 2021-08-04 2024-02-22 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Lat activating chimeric antigen receptor t cells and methods of use thereof
CN118043450A (zh) 2021-08-24 2024-05-14 洛桑联邦理工学院 用于增强癌症免疫疗法的表达il-10的细胞
WO2023081715A1 (en) 2021-11-03 2023-05-11 Viracta Therapeutics, Inc. Combination of car t-cell therapy with btk inhibitors and methods of use thereof
WO2023105000A1 (en) 2021-12-09 2023-06-15 Zygosity Limited Vector
TW202342757A (zh) 2021-12-17 2023-11-01 美商薩那生物科技公司 經修飾副黏液病毒科附著醣蛋白
TW202342498A (zh) 2021-12-17 2023-11-01 美商薩那生物科技公司 經修飾副黏液病毒科融合醣蛋白
WO2023126458A1 (en) 2021-12-28 2023-07-06 Mnemo Therapeutics Immune cells with inactivated suv39h1 and modified tcr
WO2023139269A1 (en) 2022-01-21 2023-07-27 Mnemo Therapeutics Modulation of suv39h1 expression by rnas
WO2023147515A1 (en) 2022-01-28 2023-08-03 Juno Therapeutics, Inc. Methods of manufacturing cellular compositions
WO2023150181A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 President And Fellows Of Harvard College Methods and compositions for treating cancer
WO2023150518A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Sana Biotechnology, Inc. Cd3-targeted lentiviral vectors and uses thereof
WO2023159001A1 (en) 2022-02-15 2023-08-24 Kite Pharma, Inc. Predicting adverse events from immunotherapy
WO2023170606A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Alentis Therapeutics Ag Use of anti-claudin-1 antibodies to increase t cell availability
WO2023178348A1 (en) 2022-03-18 2023-09-21 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Genetically engineered t-cell co-receptors and methods of use thereof
WO2023180552A1 (en) 2022-03-24 2023-09-28 Institut Curie Immunotherapy targeting tumor transposable element derived neoantigenic peptides in glioblastoma
WO2023193015A1 (en) 2022-04-01 2023-10-05 Sana Biotechnology, Inc. Cytokine receptor agonist and viral vector combination therapies
WO2023196921A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Granzyme expressing t cells and methods of use
WO2023196933A1 (en) 2022-04-06 2023-10-12 The Regents Of The University Of Colorado, A Body Corporate Chimeric antigen receptor t cells and methods of use thereof
WO2023211972A1 (en) 2022-04-28 2023-11-02 Medical University Of South Carolina Chimeric antigen receptor modified regulatory t cells for treating cancer
WO2023213969A1 (en) 2022-05-05 2023-11-09 Juno Therapeutics Gmbh Viral-binding protein and related reagents, articles, and methods of use
WO2023220655A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Celgene Corporation Methods to overcome drug resistance by re-sensitizing cancer cells to treatment with a prior therapy via treatment with a t cell therapy
WO2023220641A2 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Juno Therapeutics, Inc. Methods and uses related to t cell therapy and production of same
EP4279085A1 (en) 2022-05-20 2023-11-22 Mnemo Therapeutics Compositions and methods for treating a refractory or relapsed cancer or a chronic infectious disease
WO2023230581A1 (en) 2022-05-25 2023-11-30 Celgene Corporation Methods of manufacturing t cell therapies
WO2023250400A1 (en) 2022-06-22 2023-12-28 Juno Therapeutics, Inc. Treatment methods for second line therapy of cd19-targeted car t cells
WO2024006960A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Juno Therapeutics, Inc. Lipid nanoparticles for delivery of nucleic acids
WO2024030441A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 National University Corporation Hokkaido University Methods of improving cellular therapy with organelle complexes
US20240091261A1 (en) 2022-08-26 2024-03-21 Kite Pharma, Inc. Immune cell function
WO2024044779A2 (en) 2022-08-26 2024-02-29 Juno Therapeutics, Inc. Antibodies and chimeric antigen receptors specific for delta-like ligand 3 (dll3)
WO2024054944A1 (en) 2022-09-08 2024-03-14 Juno Therapeutics, Inc. Combination of a t cell therapy and continuous or intermittent dgk inhibitor dosing
WO2024062138A1 (en) 2022-09-23 2024-03-28 Mnemo Therapeutics Immune cells comprising a modified suv39h1 gene
WO2024081820A1 (en) 2022-10-13 2024-04-18 Sana Biotechnology, Inc. Viral particles targeting hematopoietic stem cells
US20240165160A1 (en) 2022-10-28 2024-05-23 Kite Pharma, Inc. Efficacy and durable response of immunotherapy
US20240158869A1 (en) 2022-10-28 2024-05-16 Kite Pharma, Inc. Factors for optimizing immunotherapy
WO2024091669A1 (en) 2022-10-28 2024-05-02 Ginkgo Bioworks, Inc. Chimeric antigen receptors comprising an intracellular domain pair
WO2024100604A1 (en) 2022-11-09 2024-05-16 Juno Therapeutics Gmbh Methods for manufacturing engineered immune cells

Family Cites Families (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4690915A (en) 1985-08-08 1987-09-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Adoptive immunotherapy as a treatment modality in humans
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
ZA981478B (en) 1997-02-21 1998-08-24 Vlaams Interuniv Inst Biotech Use of interleukin-15
US6410319B1 (en) 1998-10-20 2002-06-25 City Of Hope CD20-specific redirected T cells and their use in cellular immunotherapy of CD20+ malignancies
EP1334188B1 (en) 2000-11-07 2006-08-30 City of Hope Cd19-specific redirected immune cells
US7070995B2 (en) 2001-04-11 2006-07-04 City Of Hope CE7-specific redirected immune cells
US20090257994A1 (en) 2001-04-30 2009-10-15 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human cancers
US7514537B2 (en) 2001-04-30 2009-04-07 City Of Hope Chimeric immunoreceptor useful in treating human gliomas
US7553494B2 (en) * 2001-08-24 2009-06-30 Corixa Corporation WT1 fusion proteins
US20030134415A1 (en) 2001-09-19 2003-07-17 Gruenberg Micheal L. Th1 cell adoptive immunotherapy
US20030170238A1 (en) 2002-03-07 2003-09-11 Gruenberg Micheal L. Re-activated T-cells for adoptive immunotherapy
ES2766123T3 (es) * 2004-12-10 2020-06-11 Peter Maccallum Cancer Inst Métodos y composiciones para inmunoterapia adoptiva
SI1806358T1 (sl) * 2005-09-05 2010-06-30 Immatics Biotechnologies Gmbh S tumorjem povezani peptidi ki se promiskuitetnovežejo na molekule humanega levkocitnega antigena HLA razreda II
EP1795599A1 (en) * 2005-12-09 2007-06-13 Schuler, Gerold, Prof. Dr. Methods for generating antigen-specific effector T cells
US20080131415A1 (en) 2006-11-30 2008-06-05 Riddell Stanley R Adoptive transfer of cd8 + t cell clones derived from central memory cells
TW200848431A (en) * 2007-06-12 2008-12-16 Trubion Pharmaceuticals Inc Single-chain multivalent binding proteins with effector function
CA2735456C (en) 2008-08-26 2021-11-16 City Of Hope Method and compositions for enhanced anti-tumor effector functioning of t cells
NZ743310A (en) * 2011-03-23 2022-11-25 Fred Hutchinson Cancer Center Method and compositions for cellular immunotherapy
JP5372297B1 (ja) 2012-12-20 2013-12-18 三菱電機株式会社 車載装置及びプログラム
US9108442B2 (en) 2013-08-20 2015-08-18 Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BLOOD, Vol 106, Pages 2995-3003(2005)* *
J. Clin. Invest., Vol 118, Pages 294-305(2008)* *

Also Published As

Publication number Publication date
SG10201602253SA (en) 2016-05-30
BR112013024395A2 (pt) 2016-09-20
NZ726162A (en) 2020-02-28
CN103502438A (zh) 2014-01-08
AU2016238963B2 (en) 2018-05-17
US20180296602A1 (en) 2018-10-18
SG193591A1 (en) 2013-10-30
JP2016183194A (ja) 2016-10-20
ZA201901167B (en) 2020-10-28
JP6203705B2 (ja) 2017-09-27
AU2016238963A1 (en) 2016-11-03
CN106074601A (zh) 2016-11-09
JP2021046453A (ja) 2021-03-25
IL228603A0 (en) 2013-12-31
RU2013147157A (ru) 2015-04-27
MX2013010793A (es) 2014-03-21
AU2018204208B2 (en) 2020-07-30
JP2023038386A (ja) 2023-03-16
NZ743310A (en) 2022-11-25
US20140314795A1 (en) 2014-10-23
MX2018011917A (es) 2021-11-11
JP2014510108A (ja) 2014-04-24
KR101976882B1 (ko) 2019-05-09
BR112013024395B1 (pt) 2021-10-26
EP2689010B1 (en) 2020-11-18
MX359513B (es) 2018-10-01
RU2688185C2 (ru) 2019-05-21
AU2012230780B2 (en) 2016-10-27
CA2830953A1 (en) 2012-09-27
US11065278B2 (en) 2021-07-20
EP2689010A1 (en) 2014-01-29
JP2019108403A (ja) 2019-07-04
CN110200997A (zh) 2019-09-06
US9987308B2 (en) 2018-06-05
JP6877905B2 (ja) 2021-05-26
CA2830953C (en) 2023-02-28
ES2841983T3 (es) 2021-07-12
WO2012129514A1 (en) 2012-09-27
AU2012230780A1 (en) 2013-05-02
AU2018204208A1 (en) 2018-07-05
IL228603B (en) 2021-03-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2018204208B2 (en) Method and compositions for cellular immunotherapy
JP7062720B2 (ja) 細胞免疫療法のための方法および組成物
US10968431B2 (en) Adoptive transfer of CD8+ T cell clones derived from central memory cells
US20210137983A1 (en) Nk cell expansion and uses thereof
JP2020527036A (ja) 癌免疫療法用ｍｒ１制限ｔ細胞受容体
US20230201258A1 (en) Polyspecific Binding Molecules and their use in Cell Therapy
TW202140790A (zh) 病毒載體轉導細胞的方法
WO2022098750A1 (en) Hla class ii-restricted tcrs against the kras g12>v activating mutation
US20230019849A1 (en) Method for Preparing CD7-Negative, CD3-Positive T Cells
NZ714574B2 (en) Method and compositions for cellular immunotherapy
NZ714574A (en) Method and compositions for cellular immunotherapy
NZ726162B2 (en) Method and compositions for cellular immunotherapy
JP2024502170A (ja) 癌のための改良された養子細胞移植療法
AU2021203981A1 (en) Altering gene expression in CART cells and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant