KR20230117383A - 염증-관련 가용성 인자의 억제제와 조합된 키메라 항원수용체 (car) t-세포 요법의 용도 - Google Patents

염증-관련 가용성 인자의 억제제와 조합된 키메라 항원수용체 (car) t-세포 요법의 용도 Download PDF

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KR20230117383A
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에단 그린 톰슨
샤리 엠. 카이저
나단 토마스 마틴
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셀진 코포레이션
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Abstract

암 (예컨대 B 세포 관련 암, 예를 들어, 다발성 골수종)을 치료하기 위한 키메라 항원 수용체 (CAR)의 용도가 본원에 제공된다.

Description

염증-관련 가용성 인자의 억제제와 조합된 키메라 항원 수용체 (CAR) T-세포 요법의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 12월 4일에 출원된 미국 출원 번호 63/121,716의 이익을 주장하며, 그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 ASCII 텍스트 파일로서 본 출원과 함께 제출된, 2021년 11월 23일에 생성된 표제 14247-617-228_SEQ_LISTING.txt의, 33,941 바이트의 크기를 갖는 서열 목록을 참조로 포함한다.
1. 기술분야
본원에 제시된 개시내용은 암 (예컨대 B 세포 관련 암, 예를 들어, 다발성 골수종)을 치료하는 방법에 관한 것이다. 보다 특히, 본 개시내용은 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하고, 결정에 기초하여 항체 또는 그의 항원 결합 단편 (예를 들어, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편)을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR), 및 이들 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 면역 이펙터 세포 (예를 들어, T 세포)를 투여하는 것을 포함하는, CAR을 사용하여 암 (예컨대 B 세포 관련 암, 예를 들어 다발성 골수종)을 치료하는 개선된 방법에 관한 것이다.
2. 배경기술
2.1. 배경기술
예를 들어, 전통적인 화학요법 접근법뿐만 아니라 면역요법 예컨대 키메라 항원 수용체 CAR T 세포 요법을 포함하여, 암의 치료에 접근하기 위한 많은 옵션이 현재 이용가능하다. 특정 경우에, 환자의 혈청 중의 특정 인자 (예를 들어, 단백질 또는 바이오마커)의 수준은 CAR-T 요법을 투여할지 결정하는 것과 관련될 수 있다. 따라서, CAR-T 요법을 투여할지 결정하는 것과 관련될 수 있는 환자의 혈청 중의 특정 인자 (예를 들어, 단백질 또는 바이오마커)에 대한 필요가 있다.
3. 간단한 요약
본 개시내용은 일반적으로 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하고, 결정에 기초하여 항체 또는 그의 항원 결합 단편 (예를 들어, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편)을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR), 및 이들 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 면역 이펙터 세포 (예를 들어, T 세포)를 투여하는 것을 포함하는, CAR을 사용하여 암 (예컨대 B 세포 관련 암, 예를 들어 다발성 골수종)을 치료하는 개선된 방법을 제공한다.
한 측면에서, (i) 인간으로부터의 혈청 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 단계; 및 (ii) (i)의 1종 이상의 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 중 수준과 유사한 경우에, 인간에게 치료 유효 용량의 CAR T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 인간에서의 암이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성일지 예측하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
한 측면에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 제공하는 것인, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 것이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
한 측면에서, a. 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사하다는 것을 결정하는 단계; b. 단계 a에서의 결정에 기초하여, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
한 측면에서, 암으로 진단된 인간 환자에게 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 투여 전 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정된 것인, 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
한 측면에서, 암으로 진단된 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 환자는 CAR T 세포에 대한 후보인, 암으로 진단된 환자에게 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여할지 결정하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
한 측면에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포, 및 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된 염증-관련 가용성 인자의 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 인간에서의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자에서의 염증-관련 가용성 인자의 수준으로 감소시키기 위한 치료 유효량으로 인간에게 투여된다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다.
특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여 전에 투여된다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 전에 투여된다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1주, 2주, 3주 또는 4주 전에 투여된다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 전에 투여된다.
4. 도면의 간단한 설명
도 1은 9개월째의 비반응의 O-링크 IO 분석물 검정 상관관계를 보여준다. AUC, 곡선하 면적; DCN, 데코린; FDR, 오류 발견율; IL-10, 인터류킨-10; IL-12, 인터류킨-12; IO, 면역-종양학; M, 개월; NCR1, 자연 세포독성 촉발 수용체 1; NR, 비반응자; PD, 진행성 질환; PDCD1, 프로그램화된 세포 사멸 1; PGF, 태반 성장 인자; R, 반응자; TNFRSF, 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원. AUC > 0.5는 NR에서 보다 높은 검정을 나타내고; FDR < 0.1을 갖는 O-링크 IO 패널 분석물이 제시된다. bAUC > 0.5는 NR에서 보다 높은 검정을 나타내고; FDR < 0.1을 갖는 O-링크 IO 패널 분석물이 제시된다. cM9 PD는 M9 전에 진행된 반응자를 나타낸다. dM9 R은 ≥ M9에 여전히 반응 중인 반응자를 나타낸다. eFDR 보정은 벤자미니-호크베르크 방법에 의해 결정되었다.
도 2는 T 세포 이펙터 기능을 음성적으로 조정할 수 있는 염증-관련 가용성 인자가 준최적 반응과 연관되었음을 보여준다. 도 2 상단 좌측 그래프는 ide-cel 주입 3개월 후의 비-반응자 (M3 NR) 및 반응자 (M3 R)에서의 CD83 로그 배수 변화를 보여준다. 도 2 상단 우측 그래프는 ide-cel 주입 3개월 후의 비-반응자 (M3 NR) 및 반응자 (M3 R)에서의 TNFRSF9 (sCD137) 로그 배수 변화를 보여준다. 도 2 하단 좌측 그래프는 ide-cel 주입 9개월 후의 비-반응자 (M9 NR) 및 반응자 (M9 R)에서의 PGF 로그 배수 변화를 보여준다. 도 2 하단 우측 그래프는 ide-cel 주입 9개월 후의 비-반응자 (M9 NR) 및 반응자 (M9 R)에서의 CD70 로그 배수 변화를 보여준다.
5. 서열 식별자의 간단한 설명
서열식별번호: 1-3은 본원에서 고려되는 BCMA CAR에 대한 예시적인 경쇄 CDR 서열의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 4-6은 본원에서 고려되는 BCMA CAR에 대한 예시적인 중쇄 CDR 서열의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 7은 본원에서 고려되는 BCMA CAR에 대한 예시적인 경쇄 서열의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 8은 본원에서 고려되는 BCMA CAR에 대한 예시적인 중쇄 서열의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 9는 신호 펩티드 (아미노산 1-22)를 갖는, 본원에서 고려되는 예시적인 BCMA CAR의 아미노산 서열을 제시한다. BCMA02의 성숙 형태의 아미노산 서열은 서열식별번호: 37에 제시된다.
서열식별번호: 10은 본원에서 고려되는 예시적인 BCMA CAR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 제시한다.
서열식별번호: 11은 인간 BCMA의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 12-22는 다양한 링커의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 23-35는 프로테아제 절단 부위 및 자기-절단 폴리펩티드 절단 부위의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 36은 예시적인 BCMA CAR을 코딩하는 벡터의 폴리뉴클레오티드 서열을 제시한다. 표 1을 참조한다.
서열식별번호: 37은 본원에서 고려되는 (즉, 신호 서열이 없는) 예시적인 성숙 BCMA CAR의 아미노산 서열을 제시한다.
서열식별번호: 38은 BCMA02 scFv의 아미노산 서열을 제시한다.
표 1: 서열의 목록:
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
6. 상세한 설명
6.1. 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 사용하여 암을 치료하는 방법
본원에 제시된 개시내용은 일반적으로 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하고, 결정에 기초하여 항체 또는 그의 항원 결합 단편 (예를 들어, 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편)을 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR), 및 이들 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 면역 이펙터 세포 (예를 들어, T 세포)를 투여하는 것을 포함하는, CAR을 사용하여 암 (예컨대 B 세포 관련 암, 예를 들어 다발성 골수종)을 치료하는 개선된 방법에 관한 것이다.
한 측면에서, (i) 인간으로부터의 혈청 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 단계; 및 (ii) (i)의 1종 이상의 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 중 수준과 유사한 경우에, 인간에게 치료 유효 용량의 CAR T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 인간에서의 암이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성일지 예측하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD83의 수준은 대조군에 비해 약 3.25 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD83의 수준은 대조군에 비해 약 3.25 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 TNFRSF9 (sCD137)의 수준은 대조군에 비해 약 6.3 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 TNFRSF9 (sCD137)의 수준은 대조군에 비해 약 6.3 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 PGF의 수준은 대조군에 비해 약 8.6 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 PGF의 수준은 대조군에 비해 약 8.6 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD70의 수준은 대조군에 비해 약 5.0 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD70의 수준은 대조군에 비해 약 5.0 로그 배수 변화 이하이다.
한 측면에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 제공하는 것인, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 것이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD83의 수준은 대조군에 비해 약 3.25 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD83의 수준은 대조군에 비해 약 3.25 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 TNFRSF9 (sCD137)의 수준은 대조군에 비해 약 6.3 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 TNFRSF9 (sCD137)의 수준은 대조군에 비해 약 6.3 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 PGF의 수준은 대조군에 비해 약 8.6 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 PGF의 수준은 대조군에 비해 약 8.6 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD70의 수준은 대조군에 비해 약 5.0 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD70의 수준은 대조군에 비해 약 5.0 로그 배수 변화 이하이다.
한 측면에서, a. 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사하다는 것을 결정하는 단계; b. 단계 a에서의 결정에 기초하여, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD83의 수준은 대조군에 비해 약 3.25 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD83의 수준은 대조군에 비해 약 3.25 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 TNFRSF9 (sCD137)의 수준은 대조군에 비해 약 6.3 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 TNFRSF9 (sCD137)의 수준은 대조군에 비해 약 6.3 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 PGF의 수준은 대조군에 비해 약 8.6 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 PGF의 수준은 대조군에 비해 약 8.6 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD70의 수준은 대조군에 비해 약 5.0 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간으로부터의 혈청 샘플 중 CD70의 수준은 대조군에 비해 약 5.0 로그 배수 변화 이하이다.
한 측면에서, 암으로 진단된 인간 환자에게 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 투여 전 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정된 것인, 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 CD83의 수준은 대조군에 비해 약 3.25 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 CD83의 수준은 대조군에 비해 약 3.25 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 TNFRSF9 (sCD137)의 수준은 대조군에 비해 약 6.3 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 TNFRSF9 (sCD137)의 수준은 대조군에 비해 약 6.3 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 PGF의 수준은 대조군에 비해 약 8.6 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 PGF의 수준은 대조군에 비해 약 8.6 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 CD70의 수준은 대조군에 비해 약 5.0 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 CD70의 수준은 대조군에 비해 약 5.0 로그 배수 변화 이하이다.
한 측면에서, 암으로 진단된 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 환자는 CAR T 세포에 대한 후보인, 암으로 진단된 환자에게 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여할지 결정하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 환자로부터의 혈청 샘플 중 CD83의 수준은 대조군에 비해 약 3.25 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 환자로부터의 혈청 샘플 중 CD83의 수준은 대조군에 비해 약 3.25 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 환자로부터의 혈청 샘플 중 TNFRSF9 (sCD137)의 수준은 대조군에 비해 약 6.3 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 환자로부터의 혈청 샘플 중 TNFRSF9 (sCD137)의 수준은 대조군에 비해 약 6.3 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 환자로부터의 혈청 샘플 중 PGF의 수준은 대조군에 비해 약 8.6 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 환자로부터의 혈청 샘플 중 PGF의 수준은 대조군에 비해 약 8.6 로그 배수 변화 이하이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 환자로부터의 혈청 샘플 중 CD70의 수준은 대조군에 비해 약 5.0 로그 배수 변화이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 환자로부터의 혈청 샘플 중 CD70의 수준은 대조군에 비해 약 5.0 로그 배수 변화 이하이다.
한 측면에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 제공하는 것인, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
한 측면에서, a. 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사하다는 것을 결정하는 단계; b. 단계 a에서의 결정에 기초하여, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
특정한 실시양태에서, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 그를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계는 단계 a에서의 결정의 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일 후에 수행된다.
특정한 실시양태에서, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 그를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계는 단계 a에서의 결정의 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 수행된다. 특정한 실시양태에서, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 그를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계는 단계 a에서의 결정의 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 수행된다.
한 측면에서, 암으로 진단된 인간 환자에게 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 투여 전 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정된 것인, 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 상기 투여의 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 전에 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되었다. 특정한 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 상기 투여의 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 전에 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되었다. 특정한 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 상기 투여의 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 전에 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되었다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
한 측면에서, 암으로 진단된 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 환자는 CAR T 세포에 대한 후보인, 암으로 진단된 환자에게 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여할지 결정하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
한 측면에서, (i) 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 단계; 및 (ii) (i)의 1종 이상의 가용성 인자의 수준이 건강한 인간에서의 수준과 유사한 경우에, 인간에게 치료 유효 용량의 CAR T 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 인간에서의 암이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성일지 예측하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다.
특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정된다.
한 측면에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포, 및 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된 염증-관련 가용성 인자의 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 인간에서의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 건강한 인간에서의 염증-관련 가용성 인자의 수준으로 감소시키기 위한 치료 유효량으로 인간에게 투여된다.
특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 인간에서의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자에서의 염증-관련 가용성 인자의 수준으로 감소시키기 위한 치료 유효량으로 인간에게 투여된다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다.
특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여 전에 투여된다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 전에 투여된다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1주, 2주, 3주 또는 4주 전에 투여된다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 전에 투여된다.
한 측면에서, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포, 및 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된 염증-관련 가용성 인자의 억제제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 인간에서의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 건강한 인간에서의 염증-관련 가용성 인자의 수준으로 감소시키기 위한 치료 유효량으로 인간에게 투여된다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다.
특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여 전에 투여된다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 전에 투여된다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1주, 2주, 3주 또는 4주 전에 투여된다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 전에 투여된다.
한 측면에서, a. 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제1 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준보다 더 높다는 것을 결정하는 단계; b. 단계 a에서의 결정에 기초하여, 후속적으로 치료 유효 용량의 염증-관련 가용성 인자의 길항제를 인간에게 제공하는 단계; c. 단계 b 후에, 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준을 결정하는 단계를 포함하며, 여기서 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 제공하는 것인, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
한 측면에서, a. 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준보다 더 높다는 것을 결정하는 단계; b. 단계 a에서의 결정에 기초하여, 후속적으로 치료 유효 용량의 염증-관련 가용성 인자의 길항제를 인간에게 제공하는 단계; c. 단계 b 후에, 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사하다는 것을 결정하는 단계; d. 단계 c에서의 결정에 기초하여, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 그를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계는 단계 c에서의 결정의 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 수행된다. 특정한 실시양태에서, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 그를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계는 단계 c에서의 결정의 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 수행된다.
한 측면에서, 암으로 진단된 인간 환자에게 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 이전에 치료 유효 용량의 염증-관련 가용성 인자의 길항제를 투여받았고, 여기서 상기 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여 전 환자로부터의 혈청 샘플은 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정된 것인, 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 상기 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 전에 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되었다. 특정한 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 상기 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 전에 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되었다. 특정한 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 상기 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 전에 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되었다.
한 측면에서, 암으로 진단된 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 이전에 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 길항제를 투여받았고, 여기서 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 환자는 CAR T 세포에 대한 후보인, 암으로 진단된 환자에게 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여할지 결정하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
한 측면에서, a. 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제1 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준보다 더 높다는 것을 결정하는 단계; b. 단계 a에서의 결정에 기초하여, 후속적으로 치료 유효 용량의 염증-관련 가용성 인자의 억제제를 인간에게 제공하는 단계; c. 단계 b 후에, 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준을 결정하는 단계를 포함하며, 여기서 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 제공하는 것인, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다. 특정한 실시양태에서, 그를 필요로 하는 인간에게 후속적으로, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포가 제공된다.
한 측면에서, a. 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준보다 더 높다는 것을 결정하는 단계; b. 단계 a에서의 결정에 기초하여, 후속적으로 치료 유효 용량의 염증-관련 가용성 인자의 억제제를 인간에게 제공하는 단계; c. 단계 b 후에, 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 제2 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사하다는 것을 결정하는 단계; d. 단계 c에서의 결정에 기초하여, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 그를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계는 단계 c에서의 결정의 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 수행된다. 특정한 실시양태에서, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 그를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계는 단계 c에서의 결정의 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 수행된다.
한 측면에서, 암으로 진단된 인간 환자에게 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 이전에 치료 유효 용량의 염증-관련 가용성 인자의 억제제를 투여받았고, 여기서 상기 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여 전 환자로부터의 혈청 샘플은 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정된 것인, 암을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
특정한 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 상기 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 전에 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되었다. 특정한 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 상기 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 전에 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되었다. 특정한 실시양태에서, 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 상기 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 전에 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되었다.
한 측면에서, 암으로 진단된 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 환자는 이전에 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 억제제를 투여받았고, 여기서 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 건강한 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 환자는 CAR T 세포에 대한 후보인, 암으로 진단된 환자에게 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여할지 결정하는 방법이 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1 중 1종 이상이다. 특정한 실시양태에서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자는 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83 중 1종 이상이다.
특정한 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포이다. 특정한 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포 범위의 용량으로 투여된다.
본원에 제시된 방법에서, 결정은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 표준 기술을 사용하여 수행될 수 있다. 또한, 결정 단계는 염증-관련 가용성 인자 (예를 들어, PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1)의 수준을 결정하기 위해 표준 기술, 예컨대 혈청 시험 또는 혈장 시험 또는 혈액 시험을 이용하는 것에 의해 수행될 수 있다. 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포 (예를 들어, BCMA CAR T 세포, 예컨대 ide-cel)에 반응성인 환자 또는 건강한 인간으로부터의 혈액 샘플 (예를 들어, 말초 혈액 샘플) 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 표준 기술, 예컨대 혈청 시험, 혈액 시험, 또는 혈장 시험, 예컨대 실시예에 사용된 검정을 사용하여 결정될 수 있다. 건강한 인간은, 예를 들어 질환을 갖는 것으로 진단되지 않은 인간 (예를 들어, 암을 갖지 않는 인간)일 수 있다.
구체적 실시양태에서, 종양 또는 암은 림프종, 폐암, 유방암, 전립선암, 부신피질 암종, 갑상선 암종, 비인두 암종, 흑색종, 피부 암종, 결장직장 암종, 데스모이드 종양, 결합조직형성 소원형 세포 종양, 내분비 종양, 유잉 육종, 말초 원시 신경외배엽 종양, 고형 배세포 종양, 간모세포종, 신경모세포종, 비-횡문근육종 연부 조직 육종, 골육종, 망막모세포종, 횡문근육종, 윌름스 종양, 교모세포종, 점액종, 섬유종, 지방종 만성 림프구성 백혈병 (소림프구성 림프종), B-세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 비장 변연부 림프종, 형질 세포 골수종, 형질세포종, 결절외 변연부 B 세포 림프종, MALT 림프종, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종, 종격 (흉선) 대 B 세포 림프종, 혈관내 대 B 세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 버킷 림프종, T 림프구 전림프구성 백혈병, T 림프구 거대 과립 림프구성 백혈병, 공격성 NK 세포 백혈병, 성인 T 림프구 백혈병/림프종, 결절외 NK/T 림프구 림프종, 비강 유형, 장병증-유형 T 림프구 림프종, 간비장 T 림프구 림프종, 모구성 NK 세포 림프종, 균상 식육종, 세자리 증후군, 원발성 피부 역형성 대세포 림프종, 림프종성 구진증, 혈관면역모세포성 T 림프구 림프종, 말초 T 림프구 림프종 (명시되지 않음), 역형성 대세포 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 또는 다발성 골수종이다.
구체적 실시양태에서, 암은 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병 또는 비-호지킨 림프종이다. 구체적 실시양태에서, 암은 비-호지킨 림프종이고, 비-호지킨 림프종은 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병/소림프구성 림프종 (CLL/SLL), 미만성 대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 면역모세포성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 또는 외투 세포 림프종이다. 구체적 실시양태에서, 암은 다발성 골수종이다. 구체적 실시양태에서, 다발성 골수종은 고위험 다발성 골수종 또는 재발성 및 불응성 다발성 골수종이다. 구체적 실시양태에서, 다발성 골수종은 고위험 다발성 골수종이고, 고위험 다발성 골수종은 R-ISS III기 질환 및/또는 조기 재발을 특징으로 하는 질환이다. 특정한 실시양태에서, 다발성 골수종은 R-ISS III기 질환이 아니다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 암은 뇌암, 교모세포종, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 흑색종, 폐암, 자궁암, 난소암, 결장직장암, 항문암, 간암, 간세포성 암종, 위암, 고환암, 자궁내막암, 자궁경부암, 호지킨병, 비-호지킨 림프종, 식도암, 장암, 갑상선암, 부신암, 방광암, 신장암, 유방암, 다발성 골수종, 육종, 항문암 또는 편평 세포암이다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자는 태반 성장 인자 (PGF), CD70, 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 4 (TNFRSF4), 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리 구성원 9 (TNFRSF9 또는 sCD137 또는 s4-1BB), 데코린 (DCN), 분화 클러스터 83 (CD83), 인터류킨 10 (IL-10), 프로그램화된 세포 사멸 1 (PDCD1), 인터류킨 12 (IL-12), 및 천연 세포독성 촉발 수용체 1 (NCR1) 중 1종 이상이다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 또는 NCR1의 억제제 또는 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 PGF의 억제제 또는 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 CD70의 억제제 또는 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 TNFRSF4의 억제제 또는 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB)의 억제제 또는 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 DCN의 억제제 또는 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 CD83의 억제제 또는 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 IL10의 억제제 또는 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 PDCD1의 억제제 또는 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 IL12의 억제제 또는 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 NCR1의 억제제 또는 길항제이다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 또는 NCR1의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된 염증-관련 가용성 인자의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 PGF의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 CD70의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 TNFRSF4의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB)의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 DCN의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 CD83의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 IL10의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 PDCD1의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 IL12의 억제제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제는 NCR1의 억제제이다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 또는 NCR1의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된 염증-관련 가용성 인자의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 PGF의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 CD70의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 TNFRSF4의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB)의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 DCN의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 CD83의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 IL10의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 PDCD1의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 IL12의 길항제이다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 NCR1의 길항제이다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 억제제 또는 길항제는 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 또는 NCR1에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된 염증-관련 가용성 인자에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 PGF에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 CD70에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 TNFRSF4에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB)에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 DCN에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 CD83에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 IL10에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 PDCD1에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 IL12에 대한 항체이다. 특정한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 NCR1에 대한 항체이다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, IL-12의 길항제는 스텔라라(STELARA)® (우스테키누맙)이다. 특정한 실시양태에서, 스텔라라® (우스테키누맙)는 체중이 100 kg 이하인 성인 인간에게 약 45 mg의 용량으로 투여되고, 처음에 및 4주 후에는 피하로 투여되고, 이어서 45 mg으로 12주마다 피하로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 스텔라라® (우스테키누맙)는 체중이 100 kg 초과인 성인 인간에게 약 90 mg의 용량으로 투여되고, 처음에 및 4주 후에는 피하로 투여되고, 이어서 90 mg으로 12주마다 피하로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 스텔라라® (우스테키누맙)는 체중이 60 kg 미만인 소아 인간 환자에게 약 0.75 mg/kg의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 스텔라라® (우스테키누맙)는 체중이 60 kg 내지 100 kg인 소아 인간 환자에게 약 45 mg의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 스텔라라® (우스테키누맙)는 체중이 100 kg 초과인 소아 인간 환자에게 약 90 mg의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 스텔라라® (우스테키누맙)는 체중이 최대 55 kg인 성인 인간에게 약 260 mg의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 스텔라라® (우스테키누맙)는 체중이 55 kg 초과 내지 85 kg인 성인 인간에게 약 390 mg의 용량으로 투여된다. 특정한 실시양태에서, 스텔라라® (우스테키누맙)는 체중이 85 kg 초과인 성인 인간에게 약 520 mg의 용량으로 투여된다.
인자 (예를 들어, 단백질)의 억제제 또는 길항제는 단백질 트랩일 수 있다. 단백질 트랩은, 예를 들어 수용체의 처음 3개의 Ig 도메인 (즉, 리간드 결합 요소)을 인간 IgG1의 불변 영역 (Fc)에 융합시킴으로써 제조될 수 있다. 문헌 [Holash et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2002 Aug 20; 99(17):11393-11398]을 참조한다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 단백질 트랩이다. 특정한 실시양태에서, 단백질 트랩은 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된 염증-관련 가용성 인자에 결합한다. 특정한 실시양태에서, 단백질 트랩은 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 또는 NCR1에 결합한다. 특정한 실시양태에서, 단백질 트랩은 PGF, CD70, TNFRSF9, 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된 염증-관련 가용성 인자에 결합한다. 특정한 실시양태에서, 단백질 트랩은 PGF, CD70, TNFRSF9 또는 CD83에 결합한다.
예를 들어 본원에 기재된 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준 또는 활성을 감소시키기 위해 CAR T 요법 전에 투여되는, CAR T 요법과 조합될 수 있는 예시적인 가용성 인자의 길항제는 하기: IL-12에 대한 우스테키누맙 및 CD137에 대한 우렐루맙 및 우토밀루맙을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 대상체는 대상체에의 투여 전에 CAR T 세포의 제조를 위해 PBMC를 수집하는 백혈구분리반출술 절차를 거친다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 정맥내 주입에 의해 투여된다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 특정한 실시양태에서, 대상체는 인간 (예를 들어, 인간 환자)이다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA02, ABECMAⓒ, JCARH125, JNJ-68284528 (LCAR-B38M; 10,934,363의 서열식별번호: 265 또는 WO 2018/028647의 서열식별번호: 300을 포함하는 단백질, 신호 펩티드의 존재 또는 부재 하의 어느 하나) (얀센(Janssen)/레전드(Legend)), P-BCMA-101 (포세이다(Poseida)), PBCAR269A (포세이다), P-BCMA-Allo1 (포세이다), Allo-715 (화이자(Pfizer)/알로진(Allogene)), CT053 (카르스겐(Carsgen)), 데스카르테스-08 (카르테시안(Cartesian)), PHE885 (노파르티스(Novartis)), CTX120 (CRISPR 테라퓨틱스(CRISPR Therapeutics)); CD19 CAR T 요법, 예를 들어, 예스카르타(Yescarta), 킴리아(Kymriah), 테카르투스(Tecartus), 리소캅타진 마랄류셀 (liso-cel), 또는 임의의 다른 세포 표면 마커를 표적화하는 CAR T 요법이다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 특정한 실시양태에서, CAR T 세포 요법은 BCMA02, ABECMAⓒ, JCARH125, JNJ-68284528 (LCAR-B38M; 10,934,363의 서열식별번호: 265 또는 WO 2018/028647의 서열식별번호: 300을 포함하는 단백질, 신호 펩티드의 존재 또는 부재 하의 어느 하나) (얀센/레전드), P-BCMA-101 (포세이다), PBCAR269A (포세이다), P-BCMA-Allo1 (포세이다), Allo-715 (화이자/알로진), CT053 (카르스겐), 데스카르테스-08 (카르테시안), PHE885 (노파르티스), CTX120 (CRISPR 테라퓨틱스); CD19 CAR T 요법, 예를 들어, 예스카르타, 킴리아, 테카르투스, 리소캅타진 마랄류셀 (liso-cel), 또는 임의의 다른 세포 표면 마커를 표적화하는 CAR T 요법이다.
특정한 실시양태에서, CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포 (BCMA CAR T 세포)인 CAR T 세포이다. BCMA는 종양 괴사 인자 수용체 슈퍼패밀리의 구성원이다 (예를 들어, 문헌 [Thompson et al., J. Exp. Medicine, 192(1): 129-135, 2000, 및 Mackay et al., Annu. Rev. Immunol, 21: 231-264, 2003] 참조). BCMA는 B-세포 활성화 인자 (BAFF) 및 증식 유도 리간드 (APRIL)에 결합한다 (예를 들어, 문헌 [Mackay et al., 2003 및 Kalled et al., Immunological Reviews, 204: 43-54, 2005] 참조). 비악성 세포 중에서, BCMA는 대부분 형질 세포 및 성숙 B-세포의 하위세트에서 발현되는 것으로 보고되었다 (예를 들어, 문헌 [Laabi et al., EMBO J., 77(1 ): 3897-3904, 1992; Laabi et al., Nucleic Acids Res., 22(7): 1147-1154,, 1994; Kalled et al., 2005; O'Connor et al., J. Exp. Medicine, 199(1): 91-97, 2004; 및 Ng et al., J. Immunol., 73(2): 807-817, 2004] 참조). BCMA가 결핍된 마우스는 건강하고, 정상 수의 B 세포를 갖지만, 장기-생존형 형질 세포의 생존은 손상된다 (예를 들어, 문헌 [O'Connor et al., 2004; Xu et al., Mol. Cell. Biol., 21(12): 4067-4074, 2001; 및 Schiemann et al., Science, 293(5537): 2 111-21 14, 2001] 참조). BCMA RNA는 다발성 골수종 세포 및 다른 림프종에서 보편적으로 검출되었고, BCMA 단백질은 여러 조사자에 의해 다발성 골수종 환자로부터의 형질 세포의 표면 상에서 검출되었다 (예를 들어, 문헌 [Novak et al., Blood, 103(2): 689-694, 2004; Neri et al., Clinical Cancer Research, 73(19): 5903-5909, 2007; Bellucci et al., Blood, 105(10): 3945-3950, 2005; 및 Moreaux et al., Blood, 703(8): 3148-3157, 2004] 참조).
특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR을 포함하며, 여기서 BCMA에 대해 지시된 CAR은 BCMA를 표적화하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR을 포함하며, 여기서 BCMA에 대해 지시된 CAR은 단일 쇄 Fv 항체 또는 항체 단편 (scFv)을 포함한다. 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR을 포함하며, 여기서 BCMA에 대해 지시된 CAR은 BCMA02 scFv, 예를 들어 서열식별번호: 38을 포함한다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR을 포함한다. 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR은 BCMA를 표적화하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR을 포함하며, 여기서 BCMA에 대해 지시된 CAR은 단일 쇄 Fv 항체 또는 항체 단편 (scFv)을 포함한다. 상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR을 포함하며, 여기서 BCMA에 대해 지시된 CAR은 서열식별번호: 37을 포함한다. 상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 BCMA에 대해 지시된 CAR을 포함하며, 여기서 BCMA에 대해 지시된 CAR은 BCMA02 scFv, 예를 들어, 서열식별번호: 38을 포함한다. 특정 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR은 서열식별번호: 10에 의해 코딩된다. 특정 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 BCMA CAR T, 예를 들어 서열식별번호: 9, 서열식별번호: 37, 또는 서열식별번호: 38의 아미노산 22-493 또는 1-493을 포함하는 BCMA CAR T를 코딩하는 핵산, 예를 들어 벡터를 포함하거나, 또는 서열식별번호: 10을 포함하는 핵산, 예를 들어 벡터를 포함한다. 상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 특정한 실시양태에서, BCMA CAR T 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포이다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 CAR T 세포 요법 (예를 들어, BCMA에 대해 지시된 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 면역 세포 (BCMA CAR T 세포), 예를 들어, 이데캅타진 비클류셀 (ide-cel) 세포)은 CAR T-세포, 예를 들어, CD4 CAR T-세포 (CD3+/CD4+/CAR+/CD57+)의 10%, 5%, 3%, 2% 또는 1% 노쇠 집단을 포함하는 세포의 집단을 포함한다. 상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 조직 샘플은 혈액, 혈장 또는 혈청이다. 상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 또 다른 구체적 실시양태에서, BCMA-발현 세포에 의해 유발된 상기 질환은 다발성 골수종, 만성 림프구성 백혈병, 또는 비-호지킨 림프종 (예를 들어, 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병/소림프구성 림프종 (CLL/SLL), 미만성 대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 면역모세포성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 및 외투 세포 림프종)이다. 구체적 실시양태에서, 질환은 다발성 골수종, 예를 들어 고위험 다발성 골수종 또는 재발성 및 불응성 다발성 골수종이다. 다른 구체적 실시양태에서, 고위험 다발성 골수종은 R-ISS III기 질환 및/또는 조기 재발을 특징으로 하는 질환 (예를 들어, 마지막 치료 요법, 예컨대 프로테아솜 억제제, 면역조정제 및/또는 덱사메타손에 의한 마지막 치료 요법일 후 12개월 내의 진행성 질환)이다. 특정한 실시양태에서, 다발성 골수종은 R-ISS III기 질환이 아니다. 구체적 실시양태에서, BCMA-발현 세포에 의해 유발된 상기 질환은 비-호지킨 림프종이고, 여기서 비-호지킨 림프종은 버킷 림프종, 만성 림프구성 백혈병/소림프구성 림프종 (CLL/SLL), 미만성 대 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 면역모세포성 대세포 림프종, 전구체 B-림프모구성 림프종, 및 외투 세포 림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, B 세포 성숙 항원 (BCMA)에 대해 지시된 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포 (BCMA CAR T 세포)의 투여 전에, 종양을 갖는 대상체는 종양에 의한 BCMA의 발현에 대해 평가되었다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포, 예를 들어 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 세포독성 T 림프구 (CTL), T 킬러 세포 또는 자연 킬러 (NK) 세포이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 면역 세포는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 면역 세포 (예를 들어, CAR T 세포, 예컨대 BCMA CAR T 세포)는 150 x 106개 세포 내지 450 x 106개 세포, 300 x 106개 세포 내지 600 x 106개 세포, 350 x 106개 세포 내지 600 x 106개 세포, 350 x 106개 세포 내지 550 x 106개 세포, 400 x 106개 세포 내지 600 x 106개 세포, 150 x 106개 세포 내지 300 x 106개 세포, 또는 400 x 106개 세포 내지 500 x 106개 세포의 범위의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 면역 세포는 약 150 x 106개 세포, 약 200 x 106개 세포, 약 250 x 106개 세포, 약 300 x 106개 세포, 약 350 x 106개 세포, 약 400 x 106개 세포, 약 450 x 106개 세포, 약 500 x 106개 세포, 또는 약 550 x 106개 세포의 용량으로 투여된다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 약 450 x 106개 세포의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 면역 세포 (예를 들어, CAR T 세포)의 1회 주입이 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포의 투여는 반복된다 (예를 들어, 면역 세포의 제2 용량이 대상체에게 투여됨). 일부 실시양태에서, B 세포 성숙 항원 (BCMA)에 대해 지시된 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 면역 세포의 1회 주입이 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포의 투여는 반복된다 (예를 들어, 면역 세포의 제2 용량이 대상체에게 투여됨).
본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포 (예를 들어, CAR T 세포)는 약 150 x 106개 세포 내지 약 300 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 350 x 106개 세포 내지 약 550 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 400 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 150 x 106개 세포 내지 약 250 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 300 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 350 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 300 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 300 x 106개 세포 내지 약 600 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 350 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 400 x 106개 세포 내지 약 600 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 400 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 200 x 106개 세포 내지 약 400 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 200 x 106개 세포 내지 약 350 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 200 x 106개 세포 내지 약 300 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 450 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 400 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 350 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포 (예를 들어, 자가 T 세포)이다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 치료될 대상체는 대상체에게 투여하기 전에 CAR을 발현하는 면역 세포의 제조를 위해 자가 면역 세포를 수집하기 위한 백혈구분리반출술 절차를 거친다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 면역 세포 (예를 들어, T 세포)는 정맥내 주입에 의해 투여된다.
본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포 (예를 들어, CAR T 세포)는 약 150 x 106개 세포 내지 약 300 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 350 x 106개 세포 내지 약 550 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 400 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 150 x 106개 세포 내지 약 250 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 300 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 350 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 300 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 300 x 106개 세포 내지 약 600 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 350 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 400 x 106개 세포 내지 약 600 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 400 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 200 x 106개 세포 내지 약 400 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 200 x 106개 세포 내지 약 350 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 200 x 106개 세포 내지 약 300 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 450 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 400 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 350 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포는 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포 (예를 들어, 자가 T 세포)이다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 치료될 대상체는 대상체에게 투여하기 전에 CAR을 발현하는 면역 세포의 제조를 위해 자가 면역 세포를 수집하기 위한 백혈구분리반출술 절차를 거친다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 면역 세포 (예를 들어, T 세포)는 정맥내 주입에 의해 투여된다.
본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포 (BCMA CAR T 세포)는 약 150 x 106개 세포 내지 약 300 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 350 x 106개 세포 내지 약 550 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 400 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 150 x 106개 세포 내지 약 250 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 300 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 350 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 300 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 300 x 106개 세포 내지 약 600 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 350 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 400 x 106개 세포 내지 약 600 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 400 x 106개 세포 내지 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 200 x 106개 세포 내지 약 400 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 200 x 106개 세포 내지 약 350 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 200 x 106개 세포 내지 약 300 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 450 x 106개 세포 내지 약 500 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 400 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 250 x 106개 세포 내지 약 350 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포는 약 450 x 106개 세포의 투여량으로 투여된다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 면역 세포는 T 세포 (예를 들어, 자가 T 세포)이다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 치료될 대상체는 대상체에게 투여하기 전에 BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포의 제조를 위해 자가 면역 세포를 수집하기 위한 백혈구분리반출술 절차를 거친다. 본원에 기재된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 면역 세포 (예를 들어, T 세포)는 정맥내 주입에 의해 투여된다.
본원에 개시된 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR을 발현하는 면역 세포 (예를 들어, CAR T 세포)의 투여 전에, 치료될 대상체에게 림프구고갈 (LD) 화학요법이 투여된다. 구체적 실시양태에서, LD 화학요법은 플루다라빈 및/또는 시클로포스파미드를 포함한다. 구체적 실시양태에서, LD 화학요법은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일 (예를 들어, 3일)의 지속기간 동안 플루다라빈 (예를 들어, 정맥내 투여의 경우 약 30 mg/m2) 및 시클로포스파미드 (예를 들어, 정맥내 투여의 경우 약 300 mg/m2)를 포함한다. 다른 구체적 실시양태에서, LD 화학요법은 섹션 5.9에 기재된 화학요법제 중 임의의 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, LD 화학요법의 투여의 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일 후에 (예를 들어, LD 화학요법의 투여의 2 또는 3일 후에) 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 면역 세포가 대상체에게 투여된다. 구체적 실시양태에서, 대상체는 LD 화학요법의 개시 전에 적어도 1주 또는 그 초과, 적어도 2주 또는 그 초과 (적어도 14일 또는 그 초과), 적어도 3주 또는 그 초과, 적어도 4주 또는 그 초과, 적어도 5주 또는 그 초과, 또는 적어도 6주 또는 그 초과 동안 어떠한 요법도 제공받지 않았다. 본원에 개시된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 면역 세포의 투여 전에, 치료될 대상체는 단지 단일 선행 치료 요법만을 제공받았다.
본원에 개시된 임의의 측면 또는 실시양태의 구체적 실시양태에서, BCMA에 대해 지시된 CAR을 발현하는 면역 세포 (예를 들어, BCMA CAR T 세포)의 투여 전에, 치료될 대상체에게 림프구고갈 (LD) 화학요법이 투여된다. 구체적 실시양태에서, LD 화학요법은 플루다라빈 및/또는 시클로포스파미드를 포함한다. 구체적 실시양태에서, LD 화학요법은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일 (예를 들어, 3일)의 지속기간 동안 플루다라빈 (예를 들어, 정맥내 투여의 경우 약 30 mg/m2) 및 시클로포스파미드 (예를 들어, 정맥내 투여의 경우 약 300 mg/m2)를 포함한다. 다른 구체적 실시양태에서, LD 화학요법은 섹션 5.9에 기재된 화학요법제 중 임의의 것을 포함한다. 구체적 실시양태에서, LD 화학요법의 투여의 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7일 후에 (예를 들어, LD 화학요법의 투여의 2 또는 3일 후에) B 세포 성숙 항원 (BCMA)에 대해 지시된 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 면역 세포가 대상체에게 투여된다. 구체적 실시양태에서, 대상체는 LD 화학요법의 개시 전에 적어도 1주 또는 그 초과, 적어도 2주 또는 그 초과 (적어도 14일 또는 그 초과), 적어도 3주 또는 그 초과, 적어도 4주 또는 그 초과, 적어도 5주 또는 그 초과, 또는 적어도 6주 또는 그 초과 동안 어떠한 요법도 제공받지 않았다. 본원에 개시된 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, B 세포 성숙 항원 (BCMA)에 대해 지시된 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 면역 세포의 투여 전에, 치료될 대상체는 단지 단일 선행 치료 요법만을 제공받았다.
상기 실시양태 중 임의의 것의 경우, 대상체는 상기 면역 세포, 예를 들어 T 세포를 수집하고 단리하기 위해 분리반출술을 거친다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 대상체는 상기 분리반출술 시점에: M-단백질 (혈청 단백질 전기영동 [sPEP] 또는 소변 단백질 전기영동 [uPEP]): sPEP ≥ 0.5 g/dL 또는 uPEP ≥ 200 mg/24시간; 혈청 또는 소변 중 측정가능한 질환의 부재 하에 경쇄 다발성 골수종, 혈청 이뮤노글로불린 유리 경쇄 ≥ 10 mg/dL 및 비정상 혈청 이뮤노글로불린 카파 람다 유리 경쇄 비; 및/또는 동부 협동 종양학 그룹 (ECOG) 수행 상태 ≤ 1을 나타낸다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 대상체는 분리반출술 시점에 추가적으로: 프로테아솜 억제제, 면역조정제 (레날리도미드 또는 포말리도미드) 및 항-CD38 항체를 사용한 선행 치료를 포함한 적어도 3종의 상기 선행 치료 차수를 제공받았고/거나; 진행성 질환이 치료 차수에 대해 최상의 반응이 아닌 한, 상기 적어도 3종의 선행 치료 차수 각각에 대해 적어도 2회의 연속 치료 주기를 거쳤고/거나; 가장 최근의 선행 치료 차수의 60일째에 또는 그 내에 진행성 질환의 증거를 갖고/거나; 상기 선행 치료 차수 중 적어도 1종에 대해 반응 (최소 반응 또는 보다 양호한 반응)을 달성하였다. 상기 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 대상체는 상기 투여 시점에: M-단백질 (혈청 단백질 전기영동 [sPEP] 또는 소변 단백질 전기영동 [uPEP]): sPEP ≥ 0.5 g/dL 또는 uPEP ≥ 200 mg/24시간; 혈청 또는 소변 중 측정가능한 질환의 부재 하에 경쇄 다발성 골수종, 혈청 이뮤노글로불린 유리 경쇄 ≥ 10 mg/dL 및 비정상 혈청 이뮤노글로불린 카파 람다 유리 경쇄 비; 및/또는 동부 협동 종양학 그룹 (ECOG) 수행 상태 ≤ 1을 나타낸다. 또 다른 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 대상체는 추가적으로 오직 1종의 선행 항골수종 치료 요법을 제공받았고; 하기 고위험 인자: R-ISS III기, 및 (i) 대상체가 유도 플러스 줄기 세포 이식을 거친 경우, 제1 이식일 후 12개월 미만의 진행성 질환 (PD); 또는 (ii) 대상체가 유도만 제공받은 경우, 최소의 프로테아솜 억제제, 면역조정제 및 덱사메타손을 함유해야 하는 마지막 치료 요법일 후 < 12개월의 PD로서 정의되는, 조기 재발을 갖는다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 CAR은 BCMA를 표적화하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 CAR은 단일 쇄 Fv 항체 단편 (scFv)을 포함한다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 CAR은 BCMA02 scFv, 예를 들어 서열식별번호: 38을 포함한다. 상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 면역 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포이다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 BCMA, 예를 들어 BCMA를 표적화하는 뮤린 단일 쇄 Fv 항체 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv, CD8α 폴리펩티드를 포함하는 힌지 도메인, CD8α 막횡단 도메인, CD137 (4-1BB) 세포내 공동-자극 신호전달 도메인, 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 BCMA, 예를 들어 BCMA를 표적화하는 뮤린 scFv를 포함하며, 여기서 scFV는 서열식별번호: 9의 항-BCMA02 CAR의 것이다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 37이거나 또는 이를 포함한다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 서열식별번호: 9이거나 또는 이를 포함한다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 서열식별번호: 37이거나 또는 이를 포함한다. 본원의 임의의 실시양태의 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 면역 세포는 이데캅타진 비클류셀 (ide-cel) 세포이다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 BCMA, 예를 들어 BCMA를 표적화하는 뮤린 단일 쇄 Fv 항체 단편을 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어 BCMA에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv, CD8α 폴리펩티드를 포함하는 힌지 도메인, CD8α 막횡단 도메인, CD137 (4-1BB) 세포내 공동-자극 신호전달 도메인, 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 37이거나 또는 이를 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 서열식별번호: 9이거나 또는 이를 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 서열식별번호: 37이거나 또는 이를 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다.
다른 실시양태에서, 본원에서 고려되는 유전자 변형된 면역 이펙터 세포는 B 세포 관련 상태, 예를 들어 B 세포 악성종양을 갖는 환자에게 투여된다.
CAR T 세포 요법, 예를 들어, 항-BCMA CAR T 세포 요법의 투여 후 가용성 (즉, 비-막-결합된) BCMA (sBCMA)의 양은 대상체가 CAR T 세포 요법에 적절하게 반응할 것으로 예상될 수 있는지, 또는 대상체가 상이한 항암 요법을 투여받아야 하는지를 결정하는 데 사용될 수 있다. CAR T 세포 요법의 투여 후 조직 샘플 (예를 들어, 혈청, 혈장, 림프 또는 혈액)에서 sBCMA 수준의 보다 큰 하락은 보다 임상적으로 유익한 결과 (예를 들어, 매우 우수한 부분 반응, 완전 반응 또는 엄격한 완전 반응)와 상관된다. 한 측면에서, 예를 들어, B 세포 성숙 작용제 (BCMA) 발현 세포에 의해 유발된 질환의 치료를 필요로 하는 대상체로부터의 조직 샘플 중 가용성 BCMA (sBCMA)의 제1 수준을 결정하는 단계; 대상체에게 BCMA에 대해 지시된 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 면역 세포 (BCMA CAR T 세포)를 포함하는 제1 BCMA-기반 치료 양식을 투여하는 단계, 및 이어서 대상체로부터의 조직 샘플 중 가용성 BCMA의 제2 수준을 결정하는 단계를 포함하며; 여기서 상기 sBCMA의 제2 수준이 상기 sBCMA의 제1 수준의 약 30% 초과인 경우에, 대상체에게 상기 질환을 치료하기 위한 제2 BCMA-기반 치료 양식이 후속적으로 제공되고; 여기서 제1 BCMA-기반 치료 양식 및 제2 BCMA-기반 치료 양식은 상이한 BCMA-기반 치료 양식인, 상기 대상체에서 BCMA 발현 세포에 의해 유발된 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 특정한 실시양태에서, 면역 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포이다. 특정 실시양태에서, 제2 BCMA-기반 치료 양식은 이데캅타진 비클류셀 세포가 아니다. 특정 실시양태에서, 제2 BCMA-기반 치료 양식은 이데캅타진 비클류셀 세포를 포함하지 않는다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 CAR T 세포 요법 (예를 들어, BCMA에 대해 지시된 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 면역 세포 (BCMA CAR T 세포), 예를 들어, 이데캅타진 비클류셀 (ide-cel) 세포)은 약 10%, 5%, 3%, 2% 또는 1% 활성화된 CAR T-세포, 예를 들어, 활성화된 CD8 CAR T-세포 (CD3+/CD8+/CAR+/CD25+)를 포함하는 세포의 집단을 포함한다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 CAR은 관심 항원을 표적화하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 관심 항원은 임의의 관심 항원일 수 있고, 예를 들어 종양 세포 상의 항원일 수 있다. 종양 세포는, 예를 들어 고형 종양 내의 세포, 또는 혈액암의 세포일 수 있다. 항원은 임의의 종양 또는 암 유형의 세포, 예를 들어 림프종, 폐암, 유방암, 전립선암, 부신피질 암종, 갑상선 암종, 비인두 암종, 흑색종, 예를 들어 악성 흑색종, 피부 암종, 결장직장 암종, 데스모이드 종양, 결합조직형성 소원형 세포 종양, 내분비 종양, 유잉 육종, 말초 원시 신경외배엽 종양, 고형 배세포 종양, 간모세포종, 신경모세포종, 비-횡문근육종 연부 조직 육종, 골육종, 망막모세포종, 횡문근육종, 윌름스 종양, 교모세포종, 점액종, 섬유종, 지방종 등의 세포 상에서 발현되는 임의의 항원일 수 있다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 림프종은 만성 림프구성 백혈병 (소림프구성 림프종), B-세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 비장 변연부 림프종, 형질 세포 골수종, 형질세포종, 결절외 변연부 B 세포 림프종, MALT 림프종, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종, 종격 (흉선) 대 B 세포 림프종, 혈관내 대 B 세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 버킷 림프종, T 림프구 전림프구성 백혈병, T 림프구 거대 과립 림프구성 백혈병, 공격성 NK 세포 백혈병, 성인 T 림프구 백혈병/림프종, 결절외 NK/T 림프구 림프종, 비강 유형, 장병증-유형 T 림프구 림프종, 간비장 T 림프구 림프종, 모구성 NK 세포 림프종, 균상 식육종, 세자리 증후군, 원발성 피부 역형성 대세포 림프종, 림프종성 구진증, 혈관면역모세포성 T 림프구 림프종, 말초 T 림프구 림프종 (명시되지 않음), 역형성 대세포 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 또는 다발성 골수종일 수 있다.
특정 실시양태에서, 항원은 종양-연관 항원 (TAA) 또는 종양-특이적 항원 (TSA)이다. 다양한 구체적 실시양태에서, 비제한적으로, 종양-연관 항원 또는 종양-특이적 항원은 Her2, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 알파-태아단백질 (AFP), 암배아성 항원 (CEA), 암 항원-125 (CA-125), CA19-9, 칼레티닌, MUC-1, 상피막 단백질 (EMA), 상피 종양 항원 (ETA), 티로시나제, 흑색종-연관 항원 (MAGE), CD19, CD20, CD34, CD45, CD99, CD117, 크로모그라닌, 시토케라틴, 데스민, 신경교세포 원섬유성 산성 단백질 (GFAP), 총 낭성 질환 유체 단백질 (GCDFP-15), HMB-45 항원, 고분자량 흑색종-연관 항원 (HMW-MAA), 단백질 멜란-A (MART-1), myo-D1, 근육-특이적 액틴 (MSA), 신경필라멘트, 뉴런-특이적 엔올라제 (NSE), 태반 알칼리성 포스파타제, 시냅토피신, 티로글로불린, 갑상선 전사 인자-1, 피루베이트 키나제 동종효소 유형 M2의 이량체 형태 (종양 M2-PK), 비정상적 ras 단백질, 또는 비정상적 p53 단백질이다.
특정 실시양태에서, TAA 또는 TSA는 암/고환 (CT) 항원, 예를 들어 BAGE, CAGE, CTAGE, FATE, GAGE, HCA661, HOM-TES-85, MAGEA, MAGEB, MAGEC, NA88, NY-ESO-1, NY-SAR-35, OY-TES-1, SPANXB1, SPA17, SSX, SYCP1, 또는 TPTE이다.
특정의 다른 실시양태에서, TAA 또는 TSA는 탄수화물 또는 강글리오시드, 예를 들어 fuc-GM1, GM2 (종양태아성 항원-면역원성-1; OFA-I-1); GD2 (OFA-I-2), GM3, GD3 등이다.
특정의 다른 실시양태에서, TAA 또는 TSA는 알파-액티닌-4, Bage-1, BCR-ABL, Bcr-Abl 융합 단백질, 베타-카테닌, CA 125, CA 15-3 (CA 27.29/BCAA), CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, Casp-8, cdc27, cdk4, cdkn2a, CEA, coa-1, dek-can 융합 단백질, EBNA, EF2, 엡스타인 바르 바이러스 항원, ETV6-AML1 융합 단백질, HLA-A2, HLA-A11, hsp70-2, KIAAO205, Mart2, Mum-1, 2, 및 3, neo-PAP, 미오신 부류 I, OS-9, pml-RARα 융합 단백질, PTPRK, K-ras, N-ras, 트리오스포스페이트 이소머라제, Gage 3,4,5,6,7, GnTV, Herv-K-mel, Lage-1, NA-88, NY-Eso-1/Lage-2, SP17, SSX-2, TRP2-Int2, gp100 (Pmel 17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2, MAGE-1, MAGE-3, RAGE, GAGE-1, GAGE-2, p15(58), RAGE, SCP-1, Hom/Mel-40, PRAME, p53, H-Ras, HER-2/neu, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, 인간 유두종바이러스 (HPV) 항원 E6 및 E7, TSP-180, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, nm-23H1, PSA, TAG-72-4, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, 13-카테닌, Mum-1, p16, TAGE, PSMA, CT7, 텔로머라제, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 13HCG, BCA225, BTAA, CD68\KP1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB\70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90, TAAL6, TAG72, TLP, TPS, CD19, CD22, CD27, CD30, CD70, GD2 (강글리오시드 G2), EGFRvIII (표피 성장 인자 변이체 III), 정자 단백질 17 (Sp17), 메소텔린, PAP (전립선 산 포스파타제), 프로스테인, TARP (T 세포 수용체 감마 대안적 리딩 프레임 단백질), Trp-p8, STEAP1 (전립선의 6-막횡단 상피 항원 1), 비정상적 ras 단백질, 또는 비정상적 p53 단백질이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 종양-연관 항원 또는 종양-특이적 항원은 인테그린 αvβ3 (CD61), 갈락틴, K-Ras (V-Ki-ras2 키르스텐 래트 육종 바이러스 종양유전자) 또는 Ral-B이다.
구체적 실시양태에서, TAA 또는 TSA는 CD20, CD123, CLL-1, CD38, CS-1, CD138, ROR1, FAP, MUC1, PSCA, EGFRvIII, EPHA2 또는 GD2이다. 추가의 구체적 실시양태에서, TAA 또는 TSA는 CD123, CLL-1, CD38 또는 CS-1이다. 구체적 실시양태에서, CAR의 세포외 도메인은 CS-1에 결합한다. 추가의 구체적 실시양태에서, 세포외 도메인은 엘로투주맙의 단일-쇄 버전 및/또는 엘로투주맙의 항원-결합 단편을 포함한다. 구체적 실시양태에서, CAR의 세포외 도메인은 CD20에 결합한다. 보다 구체적인 실시양태에서, CAR의 세포외 도메인은 CD20에 결합하는 scFv 또는 그의 항원-결합 단편이다.
다른 종양-연관 및 종양-특이적 항원은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
TSA 및 TAA에 결합하는 항체 및 scFv는 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 이를 코딩하는 뉴클레오티드 서열도 마찬가지이다.
특정의 구체적 실시양태에서, 항원은 TSA 또는 TAA인 것으로 간주되지 않지만, 그럼에도 불구하고 종양 세포, 또는 종양에 의해 유발된 손상과 연관된 항원이다. 구체적 실시양태에서, 항원은 종양 미세환경-연관 항원 (TMAA)이다. 특정 실시양태에서, 예를 들어 TMAA는, 예를 들어 성장 인자, 시토카인 또는 인터류킨, 예를 들어 혈관신생 또는 혈관생성과 연관된 성장 인자, 시토카인, 또는 인터류킨이다. 이러한 성장 인자, 시토카인 또는 인터류킨은, 예를 들어 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 염기성 섬유모세포 성장 인자 (bFGF), 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 인슐린-유사 성장 인자 (IGF) 또는 인터류킨-8 (IL-8)을 포함할 수 있다. 종양은 또한 종양에 국부적인 저산소 환경을 생성할 수 있다. 따라서, 다른 구체적 실시양태에서, TMAA는 저산소증-연관 인자, 예를 들어 HIF-1α, HIF-1β, HIF-2α, HIF-2β, HIF-3α 또는 HIF-3β이다. 종양은 또한 정상 조직에 국재화된 손상을 유발하여, 손상 연관 분자 패턴 분자 (DAMP; 또한 알라르민으로도 공지됨)로 공지된 분자의 방출을 유발할 수 있다. 따라서, 특정의 다른 구체적 실시양태에서, TMAA는 DAMP, 예를 들어, 열 쇼크 단백질, 염색질-연관 단백질 고 이동성 그룹 박스 1 (HMGB1), S100A8 (MRP8, 칼그라눌린 A), S100A9 (MRP14, 칼그라눌린 B), 혈청 아밀로이드 A (SAA)이거나, 또는 데옥시리보핵산, 아데노신 트리포스페이트, 요산, 또는 헤파린 술페이트일 수 있다. 구체적 실시양태에서, TMAA는 VEGF-A, EGF, PDGF, IGF, 또는 bFGF이다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 CAR은 관심 항원을 표적화하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 CAR은 단일 쇄 Fv 항체 단편 (scFv)을 포함한다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 관심 항원, 예를 들어 종양 세포 상의 항원에 결합하는 scFv, CD8α 폴리펩티드를 포함하는 힌지 도메인, CD8α 막횡단 도메인, CD137 (4-1BB) 세포내 공동-자극 신호전달 도메인, 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다. 종양 세포는, 예를 들어 고형 종양 내의 세포, 또는 혈액암의 세포일 수 있다. 항원은 임의의 종양 또는 암 유형의 세포 상에서 발현되는 임의의 항원일 수 있다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 관심 항원을 표적화하는 단일 쇄 Fv 항체 단편을 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 관심 항원에 결합하는 scFv, CD8α 폴리펩티드를 포함하는 힌지 도메인, CD8α 막횡단 도메인, CD137 (4-1BB) 세포내 공동-자극 신호전달 도메인, 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 CAR은 BCMA를 표적화하는 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 CAR은 단일 쇄 Fv 항체 단편 (scFv)을 포함한다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 CAR은 BCMA02 scFv, 예를 들어 서열식별번호: 38을 포함한다. 상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, 상기 면역 세포는 이데캅타진 비클류셀 세포이다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 BCMA, 예를 들어 BCMA를 표적화하는 뮤린 단일 쇄 Fv 항체 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv, CD8α 폴리펩티드를 포함하는 힌지 도메인, CD8α 막횡단 도메인, CD137 (4-1BB) 세포내 공동-자극 신호전달 도메인, 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 BCMA, 예를 들어 BCMA를 표적화하는 뮤린 scFv를 포함하며, 여기서 scFV는 서열식별번호: 9 또는 서열식별번호: 37의 항-BCMA02 CAR의 것이다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 서열식별번호: 9이거나 또는 이를 포함한다. 한 실시양태에서, 키메라 항원 수용체는 서열식별번호: 37이거나 또는 이를 포함한다. 본원의 임의의 실시양태의 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 면역 세포는 이데캅타진 비클류셀 (ide-cel) 세포이다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 BCMA, 예를 들어 BCMA를 표적화하는 뮤린 단일 쇄 Fv 항체 단편을 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어 BCMA에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv, CD8α 폴리펩티드를 포함하는 힌지 도메인, CD8α 막횡단 도메인, CD137 (4-1BB) 세포내 공동-자극 신호전달 도메인, 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 서열식별번호: 9이거나 또는 이를 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다. 한 실시양태에서, 면역 세포는 서열식별번호: 37이거나 또는 이를 포함하는 키메라 항원 수용체를 포함한다.
다른 실시양태에서, 본원에서 고려되는 유전자 변형된 면역 이펙터 세포는 B 세포 관련 상태, 예를 들어 B 세포와 연관된 자가면역 질환 또는 B 세포 악성종양을 갖는 환자에게 투여된다.
본원에 제시된 대상의 실시는, 달리 구체적으로 나타내지 않는 한, 관련 기술분야의 기술 내에 있는 화학, 생화학, 유기 화학, 분자 생물학, 미생물학, 재조합 DNA 기술, 유전학, 면역학 및 세포 생물학의 통상적인 방법을 사용하며, 이들 중 다수는 예시의 목적을 위해 하기 기재된다. 이러한 기술은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd Edition, 2001); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Edition, 1989); Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1982); Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, updated July 2008); Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience; Glover, DNA Cloning: A Practical Approach, vol. I & II (IRL Press, Oxford, 1985); Anand, Techniques for the Analysis of Complex Genomes, (Academic Press, New York, 1992); Transcription and Translation (B. Hames & S. Higgins, Eds., 1984); Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning (1984); Harlow and Lane, Antibodies, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1998) Current Protocols in Immunology Q. E. Coligan, A. M. Kruisbeek, D. H. Margulies, E. M. Shevach and W. Strober, eds., 1991); Annual Review of Immunology]; 뿐만 아니라 저널에서의 연구논문, 예컨대 [Advances in Immunology]를 참조한다.
6.2. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 기재된 것과 유사하거나 동등한 임의의 방법 및 물질이 본 개시내용의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 조성물, 방법 및 물질의 바람직한 실시양태가 본원에 기재된다. 본 개시내용의 목적을 위해, 하기 용어가 하기에 정의된다.
단수 표현은 문법적 대상의 하나 또는 하나 초과 (즉, 적어도 하나, 또는 하나 이상)를 지칭하기 위해 본원에 사용된다. 예로서, "요소"는 하나의 요소 또는 하나 이상의 요소를 의미한다.
대안 (예를 들어, "또는")의 사용은 대안 중 하나, 둘 다, 또는 그의 임의의 조합을 의미하는 것으로 이해되어야 한다.
용어 "및/또는"은 대안 중 하나 또는 둘 다를 의미하는 것으로 이해되어야 한다.
본원에 사용된 용어 "약" 또는 "대략"은 참조 분량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2% 또는 1%만큼 달라지는 분량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이를 지칭한다. 한 실시양태에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 참조 분량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이에 대해 ± 15%, ± 10%, ± 9%, ± 8%, ± 7%, ± 6%, ± 5%, ± 4%, ± 3%, ± 2%, 또는 ± 1%인 분량, 수준, 값, 수, 빈도, 백분율, 치수, 크기, 양, 중량 또는 길이의 범위를 지칭한다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 문맥상 달리 요구되지 않는 한, 단어 "포함하다", "포함한다" 및 "포함하는"은 언급된 단계 또는 요소, 또는 단계 또는 요소의 군의 포함을 의미하지만, 임의의 다른 단계 또는 요소, 또는 단계 또는 요소의 군의 배제를 의미하지는 않는 것으로 이해될 것이다. "로 이루어진"은 어구 "로 이루어진"에 이어지는 모든 것을 포함하고 이에 제한되는 것을 의미한다. 따라서, 어구 "로 이루어진"은 열거된 요소가 요구되거나 필수적이고, 다른 요소가 존재하지 않을 수 있음을 나타낸다. "로 본질적으로 이루어진"은 어구 뒤에 열거된 임의의 요소를 포함하고, 열거된 요소에 대한 개시내용에 명시된 활성 또는 작용을 방해하거나 그에 기여하지 않는 다른 요소로 제한되는 것을 의미한다. 따라서, 어구 "로 본질적으로 이루어진"은 열거된 요소가 요구되거나 필수적이지만, 열거된 요소의 활성 또는 작용에 실질적으로 영향을 미치는 다른 요소는 존재하지 않는다는 것을 나타낸다.
본 명세서 전반에 걸쳐 "한 실시양태", "실시양태", "특정한 실시양태", "관련 실시양태", "특정 실시양태", "추가의 실시양태" 또는 "추가 실시양태" 또는 그의 조합에 대한 언급은 실시양태와 관련하여 기재된 특정한 특색, 구조 또는 특징이 본원에 제시된 개시내용의 적어도 하나의 실시양태에 포함됨을 의미한다. 따라서, 본 명세서 전반에 걸쳐 다양한 위치에서의 상기 어구의 출현은 반드시 모두 동일한 실시양태를 지칭하는 것은 아니다. 또한, 특정한 특색, 구조 또는 특징은 하나 이상의 실시양태에서 임의의 적합한 방식으로 조합될 수 있다. 또한, 한 실시양태에서 특색의 긍정적인 언급은 특정한 실시양태에서 특색을 배제하기 위한 기초로서의 역할을 하는 것으로 이해된다.
6.3. 투여 방식
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제 (예를 들어, PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1의 길항제)는 대상체의 혈청 중 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 중 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정된 수준이 되도록 하기에 적절하게 대상체에게 동시에 (즉, 동시 투여) 및/또는 순차적으로 (즉, 순차적 투여) 투여될 수 있다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제 (예를 들어, PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1의 길항제)는 동시에 투여된다. 본원에 사용된 용어 "동시 투여"는 CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제가 약 15분 이하, 예컨대 약 10, 5 또는 1분 중 임의의 것 이하의 시간 간격으로 투여되는 것을 의미한다. CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제가 동시에 투여되는 경우에, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 동일한 조성물 (예를 들어, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제 둘 다를 포함하는 조성물) 내에 또는 개별 조성물 (예를 들어, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제가 또 다른 조성물 내에 함유됨) 내에 함유될 수 있다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제 (예를 들어, PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1의 길항제)는 순차적으로 투여된다. 본원에 사용된 용어 "순차적 투여"는 CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제가 약 15분 초과, 예컨대 약 20, 30, 40, 50, 60분 또는 그 초과 중 임의의 것 초과의 시간 간격으로 투여되는 것을 의미한다. CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제 중 어느 하나가 먼저 투여될 수 있다. CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 개별 조성물 내에 함유되고, 이는 동일한 또는 상이한 패키지 내에 함유될 수 있다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제의 투여는 공동 투여이고, 즉, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제의 투여 기간은 서로 중첩된다.
일부 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 CAR T 세포의 투여 전에 적어도 1주기 (예를 들어, 적어도 2, 3, 또는 4주기 중 임의의 것) 동안 투여된다. 특정한 실시양태에서, CAR T 세포의 투여 기간은 이러한 길항제 투여에 후속하여, 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 중 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일 후에 시작된다. 특정한 실시양태에서, CAR T 세포의 투여 기간은 이러한 길항제 투여에 후속하여, 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 중 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1주, 2주, 3주, 또는 4주 후에 시작된다. 특정한 실시양태에서, CAR T 세포의 투여 기간은 이러한 길항제 투여에 후속하여, 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 중 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되고 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 또는 6개월 후에 시작된다.
일부 실시양태에서, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제의 투여는 거의 동일한 시간에 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일 중 어느 하나 내에) 개시된다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제의 투여는 거의 동일한 시간에 (예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일 중 어느 하나 내에) 종결된다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포의 투여는 염증-관련 가용성 인자의 길항제 투여의 종결 후에 (예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월 중 어느 하나 동안) 계속된다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포의 투여는 염증-관련 가용성 인자의 길항제의 투여의 개시 후에 (예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월 중 어느 하나 후에) 개시된다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제의 투여는 거의 동일한 시간에 개시 및 종결된다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제의 투여는 거의 동일한 시간에 정지되고, CAR T 세포의 투여는 염증-관련 가용성 인자의 길항제의 투여의 개시 후에 (예를 들어 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12개월 중 어느 하나 후에) 개시된다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것의 구체적 실시양태에서, CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제의 투여는 비-공동 투여이다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제의 투여는 CAR T 세포가 투여되기 전에 종결된다. 일부 실시양태에서, CAR T 세포의 투여는 염증-관련 가용성 인자의 길항제가 투여되기 전에 종결된다. 이들 2가지 비-공동 투여 사이의 기간은 약 2 내지 8주, 예컨대 약 4주의 범위일 수 있다.
본원에 기재된 CAR T 세포 및 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 개체 (예컨대 인간, 예를 들어 인간 환자)에게 예를 들어 정맥내, 동맥내, 복강내, 폐내, 경구, 흡입, 소포내, 근육내, 기관내, 피하, 안내, 척수강내, 경점막 및 경피를 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 조성물의 지속 연속 방출 제제가 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제는 경구로, 근육내로, 경피로, 정맥내로, 흡입기 또는 다른 공기 매개 전달 시스템을 통하는 것 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 허용되는 경로에 의해 투여될 수 있다.
6.4. 키메라 항원 수용체
다양한 실시양태에서, B 세포에 대한 면역 이펙터 세포의 세포독성을 재지시하는 유전자 조작된 수용체가 제공된다. 이들 유전자 조작된 수용체는 본원에서 키메라 항원 수용체 (CAR)로 지칭된다. CAR은 목적하는 항원 (예를 들어, BCMA)에 대한 항체-기반 특이성을 T 세포 수용체-활성화 세포내 도메인과 조합하여 특이적 항-BCMA 세포 면역 활성을 나타내는 키메라 단백질을 생성하는 분자이다. 본원에 사용된 용어 "키메라"는 상이한 기원으로부터의 상이한 단백질 또는 DNA의 부분으로 구성된 것을 기재한다.
본원에 기재된 실시양태가 적용되는 CAR T 세포 요법은 임의의 CAR T 요법, 예컨대 BCMA CAR T 세포 요법, 예컨대 BCMA02, ABECMAⓒ, JCARH125, JNJ-68284528 (LCAR-B38M; 10,934,363의 서열식별번호: 265 또는 WO 2018/028647의 서열식별번호: 300을 포함하는 단백질, 신호 펩티드의 존재 또는 부재 하의 어느 하나) (얀센/레전드), P-BCMA-101 (포세이다), PBCAR269A (포세이다), P-BCMA-Allo1 (포세이다), Allo-715 (화이자/알로진), CT053 (카르스겐), 데스카르테스-08 (카르테시안), PHE885 (노파르티스), CTX120 (CRISPR 테라퓨틱스); CD19 CAR T 요법, 예를 들어, 예스카르타, 킴리아, 테카르투스, 리소캅타진 마랄류셀 (liso-cel), 및 임의의 다른 세포 표면 마커를 표적화하는 CAR T 요법을 포함한다.
폴리펩티드의 세포외 도메인 (또한 결합 도메인 또는 항원-특이적 결합 도메인으로도 지칭됨)은 관심 항원에 결합한다. 특정 실시양태에서, 세포외 도메인은 상기 항원에 결합하는 수용체 또는 수용체의 부분을 포함한다. 세포외 도메인은 상기 항원에 결합하는, 예를 들어 수용체 또는 수용체의 부분일 수 있다. 특정 실시양태에서, 세포외 도메인은 항체 또는 그의 항원-결합 부분을 포함하거나 또는 항체 또는 그의 항원-결합 부분이다. 구체적 실시양태에서, 세포외 도메인은 단일-쇄 Fv 도메인을 포함하거나 또는 단일-쇄 Fv 도메인이다. 단일-쇄 Fv 도메인은, 예를 들어 가요성 링커에 의해 VH에 연결된 VL을 포함할 수 있으며, 여기서 상기 VL 및 VH는 상기 항원에 결합하는 항체로부터의 것이다.
폴리펩티드의 세포외 도메인이 결합하는 항원은 임의의 관심 항원일 수 있고, 예를 들어 종양 세포 상의 항원일 수 있다. 종양 세포는, 예를 들어 고형 종양 내의 세포, 또는 혈액암의 세포일 수 있다. 항원은 임의의 종양 또는 암 유형의 세포, 예를 들어 림프종, 폐암, 유방암, 전립선암, 부신피질 암종, 갑상선 암종, 비인두 암종, 흑색종, 예를 들어 악성 흑색종, 피부 암종, 결장직장 암종, 데스모이드 종양, 결합조직형성 소원형 세포 종양, 내분비 종양, 유잉 육종, 말초 원시 신경외배엽 종양, 고형 배세포 종양, 간모세포종, 신경모세포종, 비-횡문근육종 연부 조직 육종, 골육종, 망막모세포종, 횡문근육종, 윌름스 종양, 교모세포종, 점액종, 섬유종, 지방종 등의 세포 상에서 발현되는 임의의 항원일 수 있다. 보다 구체적인 실시양태에서, 상기 림프종은 만성 림프구성 백혈병 (소림프구성 림프종), B-세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 비장 변연부 림프종, 형질 세포 골수종, 형질세포종, 결절외 변연부 B 세포 림프종, MALT 림프종, 결절성 변연부 B 세포 림프종, 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 미만성 대 B 세포 림프종, 종격 (흉선) 대 B 세포 림프종, 혈관내 대 B 세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 버킷 림프종, T 림프구 전림프구성 백혈병, T 림프구 거대 과립 림프구성 백혈병, 공격성 NK 세포 백혈병, 성인 T 림프구 백혈병/림프종, 결절외 NK/T 림프구 림프종, 비강 유형, 장병증-유형 T 림프구 림프종, 간비장 T 림프구 림프종, 모구성 NK 세포 림프종, 균상 식육종, 세자리 증후군, 원발성 피부 역형성 대세포 림프종, 림프종성 구진증, 혈관면역모세포성 T 림프구 림프종, 말초 T 림프구 림프종 (명시되지 않음), 역형성 대세포 림프종, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종 또는 다발성 골수종일 수 있다.
특정 실시양태에서, 항원은 종양-연관 항원 (TAA) 또는 종양-특이적 항원 (TSA)이다. 다양한 구체적 실시양태에서, 비제한적으로, 종양-연관 항원 또는 종양-특이적 항원은 Her2, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 알파-태아단백질 (AFP), 암배아성 항원 (CEA), 암 항원-125 (CA-125), CA19-9, 칼레티닌, MUC-1, 상피막 단백질 (EMA), 상피 종양 항원 (ETA), 티로시나제, 흑색종-연관 항원 (MAGE), CD19, CD20, CD34, CD45, CD99, CD117, 크로모그라닌, 시토케라틴, 데스민, 신경교세포 원섬유성 산성 단백질 (GFAP), 총 낭성 질환 유체 단백질 (GCDFP-15), HMB-45 항원, 고분자량 흑색종-연관 항원 (HMW-MAA), 단백질 멜란-A (MART-1), myo-D1, 근육-특이적 액틴 (MSA), 신경필라멘트, 뉴런-특이적 엔올라제 (NSE), 태반 알칼리성 포스파타제, 시냅토피신, 티로글로불린, 갑상선 전사 인자-1, 피루베이트 키나제 동종효소 유형 M2의 이량체 형태 (종양 M2-PK), 비정상적 ras 단백질, 또는 비정상적 p53 단백질이다.
특정 실시양태에서, TAA 또는 TSA는 암/고환 (CT) 항원, 예를 들어 BAGE, CAGE, CTAGE, FATE, GAGE, HCA661, HOM-TES-85, MAGEA, MAGEB, MAGEC, NA88, NY-ESO-1, NY-SAR-35, OY-TES-1, SPANXB1, SPA17, SSX, SYCP1, 또는 TPTE이다.
특정의 다른 실시양태에서, TAA 또는 TSA는 탄수화물 또는 강글리오시드, 예를 들어 fuc-GM1, GM2 (종양태아성 항원-면역원성-1; OFA-I-1); GD2 (OFA-I-2), GM3, GD3 등이다.
특정의 다른 실시양태에서, TAA 또는 TSA는 알파-액티닌-4, Bage-1, BCR-ABL, Bcr-Abl 융합 단백질, 베타-카테닌, CA 125, CA 15-3 (CA 27.29/BCAA), CA 195, CA 242, CA-50, CAM43, Casp-8, cdc27, cdk4, cdkn2a, CEA, coa-1, dek-can 융합 단백질, EBNA, EF2, 엡스타인 바르 바이러스 항원, ETV6-AML1 융합 단백질, HLA-A2, HLA-A11, hsp70-2, KIAAO205, Mart2, Mum-1, 2, 및 3, neo-PAP, 미오신 부류 I, OS-9, pml-RARα 융합 단백질, PTPRK, K-ras, N-ras, 트리오스포스페이트 이소머라제, Gage 3,4,5,6,7, GnTV, Herv-K-mel, Lage-1, NA-88, NY-Eso-1/Lage-2, SP17, SSX-2, TRP2-Int2, gp100 (Pmel 17), 티로시나제, TRP-1, TRP-2, MAGE-1, MAGE-3, RAGE, GAGE-1, GAGE-2, p15(58), RAGE, SCP-1, Hom/Mel-40, PRAME, p53, H-Ras, HER-2/neu, E2A-PRL, H4-RET, IGH-IGK, MYL-RAR, 인간 유두종바이러스 (HPV) 항원 E6 및 E7, TSP-180, MAGE-4, MAGE-5, MAGE-6, p185erbB2, p180erbB-3, c-met, nm-23H1, PSA, TAG-72-4, CA 19-9, CA 72-4, CAM 17.1, NuMa, K-ras, 13-카테닌, Mum-1, p16, TAGE, PSMA, CT7, 텔로머라제, 43-9F, 5T4, 791Tgp72, 13HCG, BCA225, BTAA, CD68\KP1, CO-029, FGF-5, G250, Ga733 (EpCAM), HTgp-175, M344, MA-50, MG7-Ag, MOV18, NB\70K, NY-CO-1, RCAS1, SDCCAG16, TA-90, TAAL6, TAG72, TLP, TPS, CD19, CD22, CD27, CD30, CD70, GD2 (강글리오시드 G2), EGFRvIII (표피 성장 인자 변이체 III), 정자 단백질 17 (Sp17), 메소텔린, PAP (전립선 산 포스파타제), 프로스테인, TARP (T 세포 수용체 감마 대안적 리딩 프레임 단백질), Trp-p8, STEAP1 (전립선의 6-막횡단 상피 항원 1), 비정상적 ras 단백질, 또는 비정상적 p53 단백질이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 상기 종양-연관 항원 또는 종양-특이적 항원은 인테그린 αvβ3 (CD61), 갈락틴, K-Ras (V-Ki-ras2 키르스텐 래트 육종 바이러스 종양유전자) 또는 Ral-B이다.
구체적 실시양태에서, TAA 또는 TSA는 CD20, CD123, CLL-1, CD38, CS-1, CD138, ROR1, FAP, MUC1, PSCA, EGFRvIII, EPHA2 또는 GD2이다. 추가의 구체적 실시양태에서, TAA 또는 TSA는 CD123, CLL-1, CD38 또는 CS-1이다. 구체적 실시양태에서, CAR의 세포외 도메인은 CS-1에 결합한다. 추가의 구체적 실시양태에서, 세포외 도메인은 엘로투주맙의 단일-쇄 버전 및/또는 엘로투주맙의 항원-결합 단편을 포함한다. 구체적 실시양태에서, CAR의 세포외 도메인은 CD20에 결합한다. 보다 구체적인 실시양태에서, CAR의 세포외 도메인은 CD20에 결합하는 scFv 또는 그의 항원-결합 단편이다.
다른 종양-연관 및 종양-특이적 항원은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다.
TSA 및 TAA에 결합하는 항체 및 scFv는 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 이를 코딩하는 뉴클레오티드 서열도 마찬가지이다.
특정의 구체적 실시양태에서, 항원은 TSA 또는 TAA인 것으로 간주되지 않지만, 그럼에도 불구하고 종양 세포, 또는 종양에 의해 유발된 손상과 연관된 항원이다. 구체적 실시양태에서, 항원은 종양 미세환경-연관 항원 (TMAA)이다. 특정 실시양태에서, 예를 들어 TMAA는, 예를 들어 성장 인자, 시토카인 또는 인터류킨, 예를 들어 혈관신생 또는 혈관생성과 연관된 성장 인자, 시토카인, 또는 인터류킨이다. 이러한 성장 인자, 시토카인 또는 인터류킨은, 예를 들어 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 염기성 섬유모세포 성장 인자 (bFGF), 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 간세포 성장 인자 (HGF), 인슐린-유사 성장 인자 (IGF) 또는 인터류킨-8 (IL-8)을 포함할 수 있다. 종양은 또한 종양에 국부적인 저산소 환경을 생성할 수 있다. 따라서, 다른 구체적 실시양태에서, TMAA는 저산소증-연관 인자, 예를 들어 HIF-1α, HIF-1β, HIF-2α, HIF-2β, HIF-3α 또는 HIF-3β이다. 종양은 또한 정상 조직에 국재화된 손상을 유발하여, 손상 연관 분자 패턴 분자 (DAMP; 또한 알라르민으로도 공지됨)로 공지된 분자의 방출을 유발할 수 있다. 따라서, 특정의 다른 구체적 실시양태에서, TMAA는 DAMP, 예를 들어, 열 쇼크 단백질, 염색질-연관 단백질 고 이동성 그룹 박스 1 (HMGB1), S100A8 (MRP8, 칼그라눌린 A), S100A9 (MRP14, 칼그라눌린 B), 혈청 아밀로이드 A (SAA)이거나, 또는 데옥시리보핵산, 아데노신 트리포스페이트, 요산, 또는 헤파린 술페이트일 수 있다. 구체적 실시양태에서, TMAA는 VEGF-A, EGF, PDGF, IGF, 또는 bFGF이다.
특정 실시양태에서, 세포외 도메인은 링커, 스페이서 또는 힌지 폴리펩티드 서열, 예를 들어 CD28로부터의 서열에 의해 상기 막횡단 도메인에 연결된다.
특정 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 BCMA에 결합하는 세포외 도메인, 막횡단 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 표적 세포의 표면 상의 BCMA와 CAR의 항-BCMA 항원 결합 도메인의 결속은 CAR의 클러스터링을 발생시키고, CAR-함유 세포에 활성화 자극을 전달한다. CAR의 주요 특징은 면역 이펙터 세포 특이성을 재지시하는 그의 능력이며, 그에 의해 증식, 시토카인 생산, 식세포작용 또는 표적 항원 발현 세포의 세포 사멸을 주요 조직적합성 (MHC) 비의존성 방식으로 매개할 수 있는 분자의 생산을 촉발하고, 이는 모노클로날 항체, 가용성 리간드 또는 세포 특이적 보조-수용체의 세포 특이적 표적화 능력을 이용한다.
다양한 실시양태에서, CAR은 뮤린 항-BCMA (예를 들어, 인간 BCMA)-특이적 결합 도메인을 포함하는 세포외 결합 도메인; 막횡단 도메인; 1개 이상의 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
특정한 실시양태에서, CAR은 뮤린 항-BCMA (예를 들어, 인간 BCMA) 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 세포외 결합 도메인; 1개 이상의 힌지 도메인 또는 스페이서 도메인; 1개 이상의 세포내 공동-자극 신호전달 도메인을 포함하는 막횡단 도메인; 및 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
6.4.1. 결합 도메인
특정한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 B 세포 상에 발현된 인간 BCMA 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는 뮤린 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 세포외 결합 도메인을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "결합 도메인", "세포외 도메인", "세포외 결합 도메인", "항원-특이적 결합 도메인" 및 "세포외 항원 특이적 결합 도메인"은 상호교환가능하게 사용되고, 관심 표적 항원, 예를 들어 BCMA에 특이적으로 결합하는 능력을 갖는 CAR을 제공한다. 결합 도메인은 천연, 합성, 반합성 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "특이적 결합 친화도" 또는 "특이적으로 결합한다" 또는 "특이적으로 결합된" 또는 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 표적화한다"는 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편 (또는 그를 포함하는 CAR)이 BCMA에 배경 결합보다 더 큰 결합 친화도로 결합하는 것을 기재한다. 결합 도메인 (또는 결합 도메인을 포함하는 CAR 또는 결합 도메인을 함유하는 융합 단백질)은 그것이 예를 들어 약 105 M-1 이상의 친화도 또는 Ka (즉, 1/M의 단위를 갖는 특정한 결합 상호작용의 평형 회합 상수)로 BCMA에 결합하거나 또는 그와 회합하는 경우에 BCMA에 "특이적으로 결합한다". 특정 실시양태에서, 결합 도메인 (또는 그의 융합 단백질)은 약 106 M-1, 107 M-1, 108 M-1, 109 M-1, 1010 M-1, 1011 M-1, 1012 M-1, 또는 1013 M-1 이상의 Ka로 표적에 결합한다. "고친화도" 결합 도메인 (또는 그의 단일 쇄 융합 단백질)은 Ka가 적어도 적어도 107 M-1, 적어도 108 M-1, 적어도 109 M-1, 적어도 1010 M-1, 적어도 1011 M-1, 적어도 1012 M-1, 적어도 1013 M-1, 또는 그 초과인 결합 도메인을 지칭한다.
대안적으로, 친화도는 M의 단위를 갖는 특정한 결합 상호작용의 평형 해리 상수 (Kd) (예를 들어, 10-5 M 내지 10-13 M, 또는 그 미만)로서 정의될 수 있다. 본 개시내용에 따른 결합 도메인 폴리펩티드 및 CAR 단백질의 친화도는 통상적인 기술을 사용하여, 예를 들어, 경쟁적 ELISA (효소-연결 면역흡착 검정)에 의해, 또는 표지된 리간드를 사용하거나 또는 표면-플라즈몬 공명 장치 예컨대 뉴저지주 피스카타웨이 소재의 비아코어, 인크.(Biacore, Inc.)로부터 입수가능한 비아코어 T100, 또는 광학 바이오센서 기술 예컨대 각각 코닝(Corning) 및 퍼킨 엘머(Perkin Elmer)로부터 입수가능한 에픽(EPIC) 시스템 또는 엔스파이어(EnSpire)를 사용하여 결합 회합 또는 대체 검정에 의해 용이하게 결정될 수 있다 (또한, 예를 들어, 문헌 [Scatchard et al., (1949) Ann. N.Y. Acad. Sci. 51:660]; 및 미국 특허 번호 5,283,173; 5,468,614 또는 등가물 참조).
한 실시양태에서, 특이적 결합의 친화도는 배경 결합보다 약 2배 더 크거나, 배경 결합보다 약 5배 더 크거나, 배경 결합보다 약 10배 더 크거나, 배경 결합보다 약 20배 더 크거나, 배경 결합보다 약 50배 더 크거나, 배경 결합보다 약 100배 더 크거나, 또는 배경 결합보다 약 1000배 더 크거나 또는 그 초과이다.
특정한 실시양태에서, CAR의 세포외 결합 도메인은 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. "항체"는 항원 결정기, 예컨대 면역 세포에 의해 인식되는 것을 함유하는 항원의 에피토프, 예컨대 펩티드, 지질, 폴리사카라이드, 또는 핵산을 특이적으로 인식하고 결합하는 적어도 경쇄 또는 중쇄 이뮤노글로불린 가변 영역을 포함하는 폴리펩티드인 결합제를 지칭한다.
"항원 (Ag)"은 동물 내로 주사 또는 흡수되는 조성물 (예컨대 암-특이적 단백질을 포함하는 것)을 포함하여, 동물에서 항체의 생산 또는 T 세포 반응을 자극할 수 있는 화합물, 조성물 또는 물질을 지칭한다. 항원은 이종 항원, 예컨대 개시된 항원에 의해 유도된 것을 포함하여, 특이적 체액성 또는 세포성 면역의 생성물과 반응한다. 특정한 실시양태에서, 표적 항원은 BCMA 폴리펩티드의 에피토프이다.
"에피토프" 또는 "항원 결정기"는 결합제가 결합하는 항원의 영역을 지칭한다. 에피토프는 인접 아미노산 또는 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치되는 비인접 아미노산 둘 다로부터 형성될 수 있다. 인접한 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 대한 노출 시 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매로의 처리 시 상실된다. 에피토프는 전형적으로 고유한 공간 입체형태로 적어도 3개, 보다 통상적으로 적어도 5, 약 9 또는 약 8-10개의 아미노산을 포함한다.
항체는 그의 항원 결합 단편, 예컨대 낙타 Ig, Ig NAR, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab)'2 단편, F(ab)'3 단편, Fv, 단일 쇄 Fv 단백질 ("scFv"), 비스-scFv, (scFv)2, 미니바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 디술피드 안정화된 Fv 단백질 ("dsFv"), 및 단일-도메인 항체 (sdAb, 나노바디) 및 항원 결합을 담당하는 전장 항체의 부분을 포함한다. 상기 용어는 또한 유전자 조작된 형태, 예컨대 키메라 항체 (예를 들어, 인간화 뮤린 항체), 이종접합체 항체 (예컨대, 이중특이적 항체) 및 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 또한, 문헌 [Pierce Catalog and Handbook, 1994-1995 (Pierce Chemical Co., Rockford, IL); Kuby, J., Immunology, 3rd Ed., W. H. Freeman & Co., New York, 1997]을 참조한다.
통상의 기술자에 의해 이해되고 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같이, 완전 항체는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함한다. 각각의 중쇄는 가변 영역 및 제1, 제2 및 제3 불변 영역으로 이루어지는 한편, 각각의 경쇄는 가변 영역 및 불변 영역으로 이루어진다. 포유동물 중쇄는 α, δ, ε, γ, 및 μ로 분류된다. 포유동물 경쇄는 λ 또는 κ로 분류된다. α, δ, ε, γ, 및 μ 중쇄를 포함하는 이뮤노글로불린은 이뮤노글로불린 (Ig)A, IgD, IgE, IgG 및 IgM으로 분류된다. 완전한 항체는 "Y" 형상을 형성한다. Y의 줄기는 함께 결합된 2개의 중쇄의 제2 및 제3 불변 영역 (및 IgE 및 IgM의 경우, 제4 불변 영역)으로 이루어지고, 디술피드 결합 (쇄간)이 힌지 내에 형성된다. 중쇄 γ, α 및 δ는 3개의 탠덤 (일렬) Ig 도메인으로 구성된 불변 영역, 및 부가된 가요성을 위한 힌지 영역을 갖고; 중쇄 μ 및 ε는 4개의 이뮤노글로불린 도메인으로 구성된 불변 영역을 갖는다. 제2 및 제3 불변 영역은 각각 "CH2 도메인" 및 "CH3 도메인"으로 지칭된다. Y의 각각의 아암은 단일 경쇄의 가변 및 불변 영역에 결합된 단일 중쇄의 가변 영역 및 제1 불변 영역을 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은 항원 결합을 담당한다.
경쇄 및 중쇄 가변 영역은 "상보성-결정 영역" 또는 "CDR"로도 불리는 3개의 초가변 영역이 개재된 "프레임워크" 영역을 함유한다. CDR은 통상적인 방법에 의해, 예컨대 문헌 [Kabat et al., (Wu, TT and Kabat, E. A., J Exp Med. 132(2):211-50, (1970); Borden, P. and Kabat E. A., PNAS, 84: 2440-2443 (1987)]에 따른 서열에 의해; (문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Department of Health and Human Services, 1991] 참조, 이는 본원에 참조로 포함됨), 또는 문헌 [Chothia et al., (Chothia, C. and Lesk, A.M., J Mol. Biol., 196(4): 901-917 (1987), Chothia, C. et al., Nature, 342: 877 - 883 (1989))]에 따른 구조에 의해 정의 또는 확인될 수 있다.
상이한 경쇄 또는 중쇄의 프레임워크 영역의 서열은 종, 예컨대 인간 내에서 비교적 보존된다. 항체의 프레임워크 영역, 즉 구성성분 경쇄 및 중쇄의 조합된 프레임워크 영역은 CDR을 3차원 공간에 위치시키고 정렬시키는 역할을 한다. CDR은 주로 항원의 에피토프에의 결합을 담당한다. 각각의 쇄의 CDR은 전형적으로 N-말단으로부터 출발하여 순차적으로 넘버링된 CDR1, CDR2, 및 CDR3으로 지칭되고, 이는 또한 전형적으로 특정한 CDR이 위치하는 쇄에 의해 확인된다. 따라서, 항체의 중쇄의 가변 도메인에 위치한 CDR은 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3으로 지칭되는 반면, 항체의 경쇄의 가변 도메인에 위치한 CDR은 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3으로 지칭된다. 상이한 특이성 (즉, 상이한 항원에 대한 상이한 결합 부위)을 갖는 항체는 상이한 CDR을 갖는다. 항체마다 CDR이 상이하지만, CDR 내의 제한된 수의 아미노산 위치만이 항원 결합에 직접 수반된다. CDR 내의 이들 위치는 특이성 결정 잔기 (SDR)로 불린다. 본원에서 고려되는 인간화 BCMA CAR을 구축하는 데 적합한 경쇄 CDR의 예시적인 예는 서열식별번호: 1-3에 제시된 CDR 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 고려되는 인간화 BCMA CAR을 구축하는 데 적합한 중쇄 CDR의 예시적인 예는 서열식별번호: 4-6에 제시된 CDR 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
"VH" 또는 "VH"에 대한 언급은 항체, Fv, scFv, dsFv, Fab, 또는 본원에 개시된 바와 같은 다른 항체 단편의 것을 포함한, 이뮤노글로불린 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. "VL" 또는 "VL"에 대한 언급은 항체, Fv, scFv, dsFv, Fab, 또는 본원에 개시된 바와 같은 다른 항체 단편의 것을 포함한, 이뮤노글로불린 경쇄의 가변 영역을 지칭한다.
"모노클로날 항체"는 B 림프구의 단일 클론에 의해 또는 단일 항체의 경쇄 및 중쇄 유전자가 형질감염된 세포에 의해 생산된 항체이다. 모노클로날 항체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해, 예를 들어 골수종 세포와 면역 비장 세포의 융합체로부터 하이브리드 항체-형성 세포를 제조하는 것에 의해 생산된다. 모노클로날 항체는 인간화 모노클로날 항체를 포함한다.
"키메라 항체"는 하나의 종, 예컨대 인간으로부터의 프레임워크 잔기, 및 또 다른 종, 예컨대 마우스로부터의 CDR (일반적으로 항원 결합을 부여함)을 갖는다. 특정한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 키메라 항체 또는 그의 항원 결합 단편인 항원-특이적 결합 도메인을 포함한다.
"인간화" 항체는 인간 프레임워크 영역 및 비-인간 (예를 들어 마우스, 래트 또는 합성)이뮤노글로불린으로부터의 1개 이상의 CDR을 포함하는 이뮤노글로불린이다. CDR을 제공하는 비-인간 이뮤노글로불린은 "공여자"로 명명되고, 프레임워크를 제공하는 인간 이뮤노글로불린은 "수용자"로 명명된다.
특정한 실시양태에서, 뮤린 항-BCMA (예를 들어, 인간 BCMA) 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 낙타 Ig (낙타류 항체 (VHH)), Ig NAR, Fab 단편, Fab' 단편, F(ab)'2 단편, F(ab)'3 단편, Fv, 단일 쇄 Fv 항체 ("scFv"), 비스-scFv, (scFv)2, 미니바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, 디술피드 안정화된 Fv 단백질 ("dsFv"), 및 단일-도메인 항체 (sdAb, 나노바디)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 "낙타 Ig" 또는 "낙타류 VHH"는 중쇄 항체의 가장 작은 공지된 항원-결합 단위를 지칭한다 (Koch-Nolte, et al., FASEB J., 21: 3490-3498 (2007)). "중쇄 항체" 또는 "낙타류 항체"는 2개의 VH 도메인을 함유하고 경쇄는 함유하지 않는 항체를 지칭한다 (Riechmann L. et al., J. Immunol. Methods 231:25-38 (1999); WO94/04678; WO94/25591; 미국 특허 번호 6,005,079).
"이뮤노글로불린 신규 항원 수용체"의 "IgNAR"은 1개의 가변 신규 항원 수용체 (VNAR) 도메인 및 5개의 불변 신규 항원 수용체 (CNAR) 도메인의 동종이량체로 이루어진 상어 면역 레퍼토리로부터의 항체의 부류를 지칭한다. IgNAR은 가장 작은 공지된 이뮤노글로불린-기반 단백질 스캐폴드 중 일부를 나타내고, 고도로 안정하며, 효율적인 결합 특징을 보유한다. 고유한 안정성은 (i) 뮤린 항체에서 발견되는 통상적인 항체 VH 및 VL 도메인과 비교하여 상당한 수의 하전된 및 친수성 표면 노출된 잔기를 제시하는 기저 Ig 스캐폴드; 및 (ii) 루프간 디술피드 가교, 및 루프내 수소 결합의 패턴을 포함한 상보성 결정 영역 (CDR) 루프에서의 안정화 구조적 특색 둘 다에 기인할 수 있다.
항체의 파파인 소화는 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는 "Fab" 단편으로 불리는 2개의 동일한 항원-결합 단편, 및 그의 명칭이 용이하게 결정화되는 그의 능력을 반영한 것인 나머지 "Fc" 단편을 생산한다. 펩신 처리는 2개의 항원-결합 부위를 갖고 여전히 항원에 가교할 수 있는 F(ab')2 단편을 생성한다.
"Fv"는 완전한 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 한 실시양태에서, 2-쇄 Fv 종은 단단하게 비-공유 회합된 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진다. 단일-쇄 Fv (scFv) 종에서, 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄 가변 도메인은 경쇄 및 중쇄가 2-쇄 Fv 종에서의 것과 유사한 "이량체" 구조로 회합할 수 있도록 가요성 펩티드 링커에 의해 공유 연결될 수 있다. 이러한 배위에서 각각의 가변 도메인의 3개의 초가변 영역 (HVR)은 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상의 항원-결합 부위를 규정한다. 집합적으로, 6개의 HVR은 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 심지어 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)도, 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도이기는 하지만, 항원을 인식하고 그에 결합하는 능력을 갖는다.
Fab 단편은 중쇄 및 경쇄 가변 도메인을 함유하고, 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 1개 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인의 카르복시 말단에 수개의 잔기가 부가된다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 유리 티올 기를 보유하는 Fab'에 대한 본원의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래, 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편의 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
용어 "디아바디"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 항체 단편을 지칭하며, 여기서 단편은 동일한 폴리펩티드 쇄 (VH-VL)로 경쇄 가변 도메인 (VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (VH)을 포함한다. 동일한 쇄 상의 2개의 도메인 사이의 쌍형성을 허용하기에는 너무 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인은 또 다른 쇄의 상보적 도메인과 쌍형성하여 2개의 항원-결합 부위를 생성하도록 강제된다. 디아바디는 2가 또는 이중특이적일 수 있다. 디아바디는 예를 들어 EP 404,097; WO 1993/01161; [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003); 및 Hollinger et al., PNAS USA 90: 6444-6448 (1993)]에 보다 상세하게 기재되어 있다. 트리아바디 및 테트라바디는 또한 문헌 [Hudson et al., Nat. Med. 9:129-134 (2003)]에 기재되어 있다.
"단일 도메인 항체" 또는 "sdAb" 또는 "나노바디"는 항체 중쇄의 가변 영역 (VH 도메인) 또는 항체 경쇄의 가변 영역 (VL 도메인)으로 이루어진 항체 단편을 지칭한다 (Holt, L., et al., 2003, Trends in Biotechnology, 21(11): 484-490).
"단일-쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 쇄로 어느 하나의 배향으로 존재한다 (예를 들어, VL-VH 또는 VH-VL). 일반적으로, scFv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 목적하는 구조를 형성할 수 있도록 하는, VH 및 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 검토를 위해, 예를 들어 문헌 [Pluckthuen, in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., (Springer-Verlag, New York, 1994), pp. 269-315]을 참조한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 뮤린 scFv인 항원-특이적 결합 도메인을 포함한다. 단일 쇄 항체는 목적하는 표적에 특이적인 하이브리도마의 V 영역 유전자로부터 클로닝될 수 있다. 이러한 하이브리도마의 생산은 상용화되었다. 가변 영역 중쇄 (VH) 및 가변 영역 경쇄 (VL)를 클로닝하는 데 사용될 수 있는 기술은, 예를 들어 문헌 [Orlandi et al., PNAS, 1989; 86: 3833-3837]에 기재되어 있다.
특정한 실시양태에서, 항원-특이적 결합 도메인은 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 scFv이다. 본원에서 고려되는 BCMA CAR을 구축하는 데 적합한 가변 중쇄의 예시적인 예는 서열식별번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 고려되는 BCMA CAR을 구축하는 데 적합한 가변 경쇄의 예시적인 예는 서열식별번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 제공된 BCMA-특이적 결합 도메인은 또한 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 포함한다. 이러한 CDR은 경쇄의 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3 및 중쇄의 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3으로부터 선택된 비인간 CDR 또는 변경된 비인간 CDR일 수 있다. 특정 실시양태에서, BCMA-특이적 결합 도메인은 (a) 경쇄 CDRL1, 경쇄 CDRL2 및 경쇄 CDRL3을 포함하는 경쇄 가변 영역, 및 (b) 중쇄 CDRH1, 중쇄 CDRH2 및 중쇄 CDRH3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
6.4.2. 링커
특정 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은, 예를 들어 분자의 적절한 간격 및 입체형태를 위해 부가된, 다양한 도메인 사이의 링커 잔기를 포함할 수 있다. 특정한 실시양태에서, 링커는 가변 영역 연결 서열이다. "가변 영역 연결 서열"은 VH 및 VL 도메인을 연결하고, 생성된 폴리펩티드가 동일한 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 동일한 표적 분자에 대한 특이적 결합 친화도를 보유하도록 2개의 하위-결합 도메인의 상호작용과 상용성인 스페이서 기능을 제공하는 아미노산 서열이다. 본원에서 고려되는 CAR은 1, 2, 3, 4, 또는 5개 또는 그 초과의 링커를 포함할 수 있다. 특정한 실시양태에서, 링커의 길이는 약 1 내지 약 25개 아미노산, 약 5 내지 약 20개 아미노산, 또는 약 10 내지 약 20개 아미노산, 또는 아미노산의 임의의 개재 길이이다. 일부 실시양태에서, 링커는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25개 또는 그 초과의 아미노산 길이이다.
링커의 예시적인 예는 글리신 중합체 (G)n; 글리신-세린 중합체 (G1-5S1-5)n (여기서 n은 적어도 1, 2, 3, 4 또는 5의 정수임); 글리신-알라닌 중합체; 알라닌-세린 중합체; 및 관련 기술분야에 공지된 다른 가요성 링커를 포함한다. 글리신 및 글리신-세린 중합체는 비교적 비구조화되고, 따라서 본원에 기재된 CAR과 같은 융합 단백질의 도메인 사이의 중성 테더로서의 역할을 할 수 있다. 글리신은 심지어 알라닌보다 유의하게 더 많은 phi-psi 공간에 접근하고, 보다 긴 측쇄를 갖는 잔기보다 훨씬 덜 제한적이다 (문헌 [Scheraga, Rev. Computational Chem. 11173-142 (1992)] 참조). 통상의 기술자는 특정한 실시양태에서 CAR의 설계가 모두 또는 부분적으로 가요성인 링커를 포함할 수 있어서, 링커가 가요성 링커뿐만 아니라 목적하는 CAR 구조를 제공하기 위해 덜 가요성인 구조를 부여하는 1개 이상의 부분을 포함할 수 있다는 것을 인식할 것이다.
다른 예시적인 링커는 하기 아미노산 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다: GGG; DGGGS (서열식별번호: 12); TGEKP (서열식별번호: 13) (예를 들어, 문헌 [Liu et al., PNAS 5525-5530 (1997)] 참조); GGRR (서열식별번호: 14) (Pomerantz et al., 1995, 상기 문헌); (GGGGS)n 여기서 n = 1, 2, 3, 4 또는 5이고, 여기서 GGGGS는 서열식별번호: 15로서 확인됨 (Kim et al., PNAS 93, 1156-1160 (1996.); EGKSSGSGSESKVD (서열식별번호: 16) (Chaudhary et al., 1990, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 87:1066-1070); KESGSVSSEQLAQFRSLD (서열식별번호: 17) (Bird et al., 1988, Science 242:423-426), GGRRGGGS (서열식별번호: 18); LRQRDGERP (서열식별번호: 19); LRQKDGGGSERP (서열식별번호: 20); LRQKd(GGGS)2 ERP (서열식별번호: 21). 대안적으로, 가요성 링커는 DNA-결합 부위 및 펩티드 자체 둘 다를 모델링할 수 있는 컴퓨터 프로그램을 사용하여 (Desjarlais & Berg, PNAS 90:2256-2260 (1993), PNAS 91:11099-11103 (1994) 또는 파지 디스플레이 방법에 의해 합리적으로 설계될 수 있다. 한 실시양태에서, 링커는 하기 아미노산 서열을 포함한다: GSTSGSGKPGSGEGSTKG (서열식별번호: 22) (Cooper et al., Blood, 101(4): 1637-1644 (2003)).
6.4.3. 스페이서 도메인
특정한 실시양태에서, CAR의 결합 도메인에 1개 이상의 "스페이서 도메인"이 이어지며, 이는 항원 결합 도메인을 이펙터 세포 표면으로부터 멀리 이동시켜 적절한 세포/세포 접촉, 항원 결합 및 활성화를 가능하게 하는 영역을 지칭한다 (Patel et al., Gene Therapy, 1999; 6: 412-419). 스페이서 도메인은 천연, 합성, 반합성 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 스페이서 도메인은 1개 이상의 중쇄 불변 영역, 예를 들어 CH2 및 CH3을 포함하나 이에 제한되지는 않는 이뮤노글로불린의 부분이다. 스페이서 도메인은 자연 발생 이뮤노글로불린 힌지 영역 또는 변경된 이뮤노글로불린 힌지 영역의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 스페이서 도메인은 IgG1 또는 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다.
6.4.4. 힌지 도메인
CAR의 결합 도메인에 일반적으로 1개 이상의 "힌지 도메인"이 이어지며, 이는 항원 결합 도메인을 이펙터 세포 표면으로부터 멀리 위치시켜 적절한 세포/세포 접촉, 항원 결합 및 활성화를 가능하게 하는 역할을 한다. CAR은 일반적으로 결합 도메인과 막횡단 도메인 (TM) 사이에 1개 이상의 힌지 도메인을 포함한다. 힌지 도메인은 천연, 합성, 반합성 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. 힌지 도메인은 자연 발생 이뮤노글로불린 힌지 영역 또는 변경된 이뮤노글로불린 힌지 영역의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
"변경된 힌지 영역"은 (a) 최대 30%의 아미노산 변화 (예를 들어, 최대 25%, 20%, 15%, 10%, 또는 5%의 아미노산 치환 또는 결실)를 갖는 자연 발생 힌지 영역, (b) 최대 30%의 아미노산 변화 (예를 들어, 최대 25%, 20%, 15%, 10%, 또는 5%의 아미노산 치환 또는 결실)를 갖는 적어도 10개의 아미노산 (예를 들어, 적어도 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산) 길이인 자연 발생 힌지 영역의 부분, 또는 (c) 코어 힌지 영역 (이는 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개, 또는 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 아미노산 길이일 수 있음)을 포함하는 자연 발생 힌지 영역의 부분을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 자연 발생 이뮤노글로불린 힌지 영역 내의 1개 이상의 시스테인 잔기는 1개 이상의 다른 아미노산 잔기 (예를 들어, 1개 이상의 세린 잔기)에 의해 치환될 수 있다. 변경된 이뮤노글로불린 힌지 영역은 대안적으로 또는 추가적으로 야생형 이뮤노글로불린 힌지 영역의 프롤린 잔기가 또 다른 아미노산 잔기 (예를 들어, 세린 잔기)에 의해 치환될 수 있다.
본원에 기재된 CAR에 사용하기에 적합한 다른 예시적인 힌지 도메인은 유형 1 막 단백질, 예컨대 CD8α, CD4, CD28 및 CD7의 세포외 영역으로부터 유래된 힌지 영역을 포함하며, 이는 이들 분자로부터의 야생형 힌지 영역일 수 있거나 또는 변경된 것일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 힌지 도메인은 CD8α 힌지 영역을 포함한다.
6.4.5. 막횡단 도메인
막횡단 (TM) 도메인은 세포외 결합 부분 및 세포내 신호전달 도메인을 융합시키고 CAR을 면역 이펙터 세포의 형질 막에 고정시키는 CAR의 부분이다. TM 도메인은 천연, 합성, 반합성 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. TM 도메인은 T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD3ε, CD3ζ, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD152, CD154, 및 PD-1로부터 유래될 수 있다 (즉, 적어도 그의 막횡단 영역(들)을 포함할 수 있음). 특정한 실시양태에서, TM 도메인은 합성이고, 소수성 잔기, 예컨대 류신 및 발린을 우세하게 포함한다.
한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 CD8α로부터 유래된 TM 도메인을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 CD8α로부터 유래된 TM 도메인, 및 TM 도메인 및 CAR의 세포내 신호전달 도메인을 연결하는, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 길이의, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커를 포함한다. 글리신-세린 기반 링커가 특히 적합한 링커를 제공한다.
6.4.6. 세포내 신호전달 도메인
특정한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. "세포내 신호전달 도메인"은 인간 BCMA 폴리펩티드에 대한 효과적인 BCMA CAR 결합의 메시지를 면역 이펙터 세포의 내부로 전달하여 CAR-결합된 표적 세포에 대한 세포독성 인자의 방출, 또는 세포외 CAR 도메인에 대한 항원 결합에 의해 도출되는 다른 세포 반응을 포함한, 이펙터 세포 기능, 예를 들어 활성화, 시토카인 생산, 증식 및 세포독성 활성을 도출하는 데 참여하는 CAR의 부분을 지칭한다.
용어 "이펙터 기능"은 면역 이펙터 세포의 특화된 기능을 지칭한다. T 세포의 이펙터 기능은, 예를 들어 시토카인의 분비를 포함한 세포용해 활성 또는 헬퍼 활성일 수 있다. 따라서, 용어 "세포내 신호전달 도메인"은 이펙터 기능 신호를 전달하고 세포가 특화된 기능을 수행하도록 지시하는 단백질의 부분을 지칭한다. 통상적으로 전체 세포내 신호전달 도메인이 사용될 수 있지만, 많은 경우에 전체 도메인을 사용할 필요는 없다. 세포내 신호전달 도메인의 말단절단된 부분이 사용되는 정도로, 이러한 말단절단된 부분은 이펙터 기능 신호를 전달하는 한, 전체 도메인 대신 사용될 수 있다. 용어 세포내 신호전달 도메인은 이펙터 기능 신호를 전달하기에 충분한 세포내 신호전달 도메인의 임의의 말단절단된 부분을 포함하는 것으로 의도된다.
TCR 단독을 통해 생성된 신호는 T 세포의 완전한 활성화에 불충분하고, 2차 또는 공동-자극 신호가 또한 요구된다는 것이 공지되어 있다. 따라서, T 세포 활성화는 2가지의 별개의 부류의 세포내 신호전달 도메인: TCR을 통해 항원-의존성 1차 활성화를 개시하는 1차 신호전달 도메인 (예를 들어, TCR/CD3 복합체) 및 항원-비의존성 방식으로 작용하여 2차 또는 공동-자극 신호를 제공하는 공동-자극 신호전달 도메인에 의해 매개되는 것으로 언급될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 1개 이상의 "공동-자극 신호전달 도메인" 및 "1차 신호전달 도메인"을 포함하는 세포내 신호전달 도메인을 포함한다.
1차 신호전달 도메인은 자극 방식으로 또는 억제 방식으로 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 신호전달 도메인은 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 공지된 신호전달 모티프를 함유할 수 있다.
본원에 제시된 대상에 특히 유용한 ITAM 함유 1차 신호전달 도메인의 예시적인 예는 TCRζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD3ζ, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로부터 유래된 것을 포함한다. 특정한 실시양태에서, CAR은 CD3ζ 1차 신호전달 도메인 및 1개 이상의 공동-자극 신호전달 도메인을 포함한다. 세포내 1차 신호전달 및 공동-자극 신호전달 도메인은 막횡단 도메인의 카르복실 말단에 탠덤으로 임의의 순서로 연결될 수 있다.
본원에서 고려되는 CAR은 CAR 수용체를 발현하는 T 세포의 효능 및 확장을 증진시키는 1개 이상의 공동-자극 신호전달 도메인을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "공동-자극 신호전달 도메인" 또는 "공동-자극 도메인"은 공동-자극 분자의 세포내 신호전달 도메인을 지칭한다. 공동-자극 분자는 항원에 결합 시 T 림프구의 효율적인 활성화 및 기능에 요구되는 제2 신호를 제공하는, 항원 수용체 또는 Fc 수용체 이외의 세포 표면 분자이다. 이러한 공동-자극 분자의 예시적인 예는 CARD11, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CD54 (ICAM), CD83, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG3), CD270 (HVEM), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1), CD278 (ICOS), DAP10, LAT, NKD2C SLP76, TRIM, 및 ZAP70을 포함한다. 한 실시양태에서, CAR은 CD28, CD137, 및 CD134로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 공동-자극 신호전달 도메인, 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, CAR은 CD28 및 CD137 공동-자극 신호전달 도메인 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, CAR은 CD28 및 CD134 공동-자극 신호전달 도메인 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
한 실시양태에서, CAR은 CD137 및 CD134 공동-자극 신호전달 도메인 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 B 세포 상에 발현된 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 B 세포 상에 발현된 인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 인간 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 B 세포 상에 발현된 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 B 세포 상에 발현된 인간 BCMA에 특이적으로 결합하는 뮤린 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
한 실시양태에서, CAR은 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv; T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD3ε, CD3ζ, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD 16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137, CD152, CD 154, 및 PD1로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드로부터 유래된 막횡단 도메인; 및 CARD11, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CD54 (ICAM), CD83, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG3), CD270 (HVEM), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1), CD278 (ICOS), DAP10, LAT, NKD2C SLP76, TRIM, 및 ZAP70으로 이루어진 군으로부터 선택된 공동-자극 분자로부터의 1개 이상의 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 TCRζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD3ζ, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로부터의 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
한 실시양태에서, CAR은 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv; T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD3ε, CD3ζ, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD 16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137, CD152, CD 154, 및 PD1로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드로부터 유래된 막횡단 도메인; 및 CARD11, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CD54 (ICAM), CD83, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG3), CD270 (HVEM), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1), CD278 (ICOS), DAP10, LAT, NKD2C SLP76, TRIM, 및 ZAP70으로 이루어진 군으로부터 선택된 공동-자극 분자로부터의 1개 이상의 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 TCRζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD3ζ, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드로부터의 1개 이상의 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
한 실시양태에서, CAR은 BCMA 폴리펩티드;, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv, IgG1 힌지/CH2/CH3, IgG4 힌지/CH2/CH3, 및 CD8α 힌지로 이루어진 군으로부터 선택된 힌지 도메인; T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD3ε, CD3ζ, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD 16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137, CD152, CD 154, 및 PD1로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드로부터 유래된 막횡단 도메인; 및 CARD11, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CD54 (ICAM), CD83, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG3), CD270 (HVEM), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1), CD278 (ICOS), DAP10, LAT, NKD2C SLP76, TRIM, 및 ZAP70으로 이루어진 군으로부터 선택된 공동-자극 분자로부터의 1개 이상의 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 TCRζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD3ζ, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로부터의 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
한 실시양태에서, CAR은 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv; IgG1 힌지/CH2/CH3, IgG4 힌지/CH2/CH3, 및 CD8α 힌지로 이루어진 군으로부터 선택된 힌지 도메인; T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD3ε, CD3ζ, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD 16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137, CD152, CD 154, 및 PD1로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드로부터 유래된 막횡단 도메인; 및 CARD11, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CD54 (ICAM), CD83, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG3), CD270 (HVEM), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1), CD278 (ICOS), DAP10, LAT, NKD2C SLP76, TRIM, 및 ZAP70으로 이루어진 군으로부터 선택된 공동-자극 분자로부터의 1개 이상의 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 TCRζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD3ζ, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드로부터의 1개 이상의 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
한 실시양태에서, CAR은 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv; IgG1 힌지/CH2/CH3, IgG4 힌지/CH2/CH3, 및 CD8α 힌지로 이루어진 군으로부터 선택된 힌지 도메인; T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD3ε, CD3ζ, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD 16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137, CD152, CD 154, 및 PD1로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드로부터 유래된 막횡단 도메인; TM 도메인을 CAR의 세포내 신호전달 도메인에 연결하는, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 길이의, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커; 및 CARD11, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CD54 (ICAM), CD83, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG3), CD270 (HVEM), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1), CD278 (ICOS), DAP10, LAT, NKD2C SLP76, TRIM, 및 ZAP70으로 이루어진 군으로부터 선택된 공동-자극 분자로부터의 1개 이상의 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 TCRζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD3ζ, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로부터의 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
한 실시양태에서, CAR은 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv; IgG1 힌지/CH2/CH3, IgG4 힌지/CH2/CH3, 및 CD8α 힌지로 이루어진 군으로부터 선택된 힌지 도메인; T-세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD3ε, CD3ζ, CD4, CD5, CD8α, CD9, CD 16, CD22, CD27, CD28, CD33, CD37, CD45, CD64, CD80, CD86, CD 134, CD137, CD152, CD 154, 및 PD1로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드로부터 유래된 막횡단 도메인; TM 도메인을 CAR의 세포내 신호전달 도메인에 연결하는, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 아미노산 길이의, 짧은 올리고- 또는 폴리펩티드 링커; 및 CARD11, CD2, CD7, CD27, CD28, CD30, CD40, CD54 (ICAM), CD83, CD134 (OX40), CD137 (4-1BB), CD150 (SLAMF1), CD152 (CTLA4), CD223 (LAG3), CD270 (HVEM), CD273 (PD-L2), CD274 (PD-L1), CD278 (ICOS), DAP10, LAT, NKD2C SLP76, TRIM, 및 ZAP70으로 이루어진 군으로부터 선택된 공동-자극 분자로부터의 1개 이상의 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 TCRζ, FcRγ, FcRβ, CD3γ, CD3δ, CD3ε, CD3ζ, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리펩티드로부터의 1개 이상의 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
특정한 실시양태에서, CAR은 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv; IgG1 힌지/CH2/CH3 폴리펩티드 및 CD8α 폴리펩티드를 포함하는 힌지 도메인; 약 3 내지 약 10개의 아미노산의 폴리펩티드 링커를 포함하는 CD8α 막횡단 도메인; CD137 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
특정한 실시양태에서, CAR은 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv; CD8α 폴리펩티드를 포함하는 힌지 도메인; 약 3 내지 약 10개의 아미노산의 폴리펩티드 링커를 포함하는 CD8α 막횡단 도메인; CD134 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
특정한 실시양태에서, CAR은 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv; CD8α 폴리펩티드를 포함하는 힌지 도메인; 약 3 내지 약 10개의 아미노산의 폴리펩티드 링커를 포함하는 CD8α 막횡단 도메인; CD28 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
특정한 실시양태에서, CAR은 BCMA 폴리펩티드, 예를 들어, 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA scFv; CD8α 폴리펩티드를 포함하는 힌지 도메인; CD8α 막횡단 도메인; CD137 (4-1BB) 세포내 공동-자극 신호전달 도메인; 및 CD3ζ 1차 신호전달 도메인을 포함한다.
또한, 본원에서 고려되는 CAR의 설계는 비-변형된 T 세포 또는 다른 CAR을 발현하도록 변형된 T 세포와 비교하여 CAR을 발현하는 T 세포에서 개선된 확장, 장기 지속성, 및 허용되는 세포독성 특성을 가능하게 한다.
6.5. 폴리펩티드
본 개시내용은 부분적으로 CAR 폴리펩티드 및 그의 단편, 그를 포함하는 세포 및 조성물, 및 폴리펩티드를 발현하는 벡터를 고려한다. 특정한 실시양태에서, 서열식별번호: 9에 제시된 바와 같은 1개 이상의 CAR을 포함하는 폴리펩티드가 제공된다.
"폴리펩티드", "폴리펩티드 단편", "펩티드" 및 "단백질"은 달리 명시되지 않는 한, 통상적인 의미에 따라, 즉 아미노산의 서열로서 상호교환가능하게 사용된다. 폴리펩티드는 특정 길이로 제한되지 않고, 예를 들어 전장 단백질 서열 또는 전장 단백질의 단편을 포함할 수 있으며, 폴리펩티드의 번역후 변형, 예를 들어 글리코실화, 아세틸화, 인산화 등, 뿐만 아니라 자연 발생 및 비-자연 발생 둘 다의 관련 기술분야에 공지된 다른 변형을 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR 폴리펩티드는 단백질의 N-말단 단부에 신호 (또는 리더) 서열을 포함하며, 이는 공동-번역되어 또는 번역후 단백질의 전달을 지시한다. 본원에 개시된 CAR에 유용한 적합한 신호 서열의 예시적인 예는 IgG1 중쇄 신호 서열 및 CD8α 신호 서열을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 성숙 단백질인, 즉 신호 펩티드를 함유하지 않는 단백질이 본원에 제공된다. 예를 들어, CAR은 성숙 CAR일 수 있다. 폴리펩티드는 임의의 다양한 널리 공지된 재조합 및/또는 합성 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 본원에서 고려되는 폴리펩티드는 구체적으로 본 개시내용의 CAR, 또는 본원에 개시된 바와 같은 CAR의 적어도 1개의 아미노산으로부터의 결실, 그에 대한 부가, 및/또는 그의 치환을 갖는 서열을 포괄한다.
본원에 사용된 "단리된 펩티드" 또는 "단리된 폴리펩티드" 등은 세포 환경으로부터의, 및 세포의 다른 성분과의 회합으로부터의 펩티드 또는 폴리펩티드 분자의 시험관내 단리 및/또는 정제를 지칭하며, 즉 이는 생체내 물질과 유의하게 회합되지 않는다. 유사하게, "단리된 세포"는 생체내 조직 또는 기관으로부터 수득되었고 세포외 매트릭스가 실질적으로 없는 세포를 지칭한다.
폴리펩티드는 "폴리펩티드 변이체"를 포함한다. 폴리펩티드 변이체는 1개 이상의 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입에서 자연 발생 폴리펩티드와 상이할 수 있다. 이러한 변이체는 자연 발생일 수 있거나, 또는 예를 들어 상기 폴리펩티드 서열 중 1개 이상을 변형시킴으로써 합성적으로 생성될 수 있다. 예를 들어, 특정한 실시양태에서, 1개 이상의 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입을 CAR 폴리펩티드의 결합 도메인, 힌지, TM 도메인, 공동-자극 신호전달 도메인 또는 1차 신호전달 도메인 내로 도입함으로써 CAR의 결합 친화도 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 특정 실시양태에서, 이러한 폴리펩티드는 그에 대해 적어도 약 65%, 70%, 75%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 아미노산 동일성을 갖는 폴리펩티드를 포함한다.
폴리펩티드는 "폴리펩티드 단편"을 포함한다. 폴리펩티드 단편은 자연 발생 또는 재조합적으로 생산된 폴리펩티드의 아미노-말단 결실, 카르복실-말단 결실, 및/또는 내부 결실 또는 치환을 갖는, 단량체 또는 다량체일 수 있는 폴리펩티드를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 폴리펩티드 단편은 적어도 5 내지 약 500개 아미노산 길이의 아미노산 쇄를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 단편은 적어도 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400 또는 450개 아미노산 길이인 것으로 인지될 것이다. 특히 유용한 폴리펩티드 단편은 항체의 항원-결합 도메인 또는 단편을 포함하여 기능적 도메인을 포함한다. 뮤린 항-BCMA (예를 들어, 인간 BCMA) 항체의 경우에, 유용한 단편은 CDR 영역, 중쇄 또는 경쇄의 CDR3 영역; 중쇄 또는 경쇄의 가변 영역; 항체 쇄의 부분 또는 2개의 CDR을 포함하는 가변 영역 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
폴리펩티드는 또한 폴리펩티드의 합성, 정제 또는 확인의 용이성을 위해 (예를 들어, 폴리-His), 또는 고체 지지체에 대한 폴리펩티드의 결합을 증진시키기 위해 링커 또는 다른 서열에 인-프레임으로 융합되거나 또는 접합될 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, 본 개시내용의 폴리펩티드는 아미노산 치환, 결실, 말단절단 및 삽입을 비롯한 다양한 방식으로 변경될 수 있다. 이러한 조작 방법은 일반적으로 관련 기술분야에 공지되어 있다. 예를 들어, 참조 폴리펩티드의 아미노산 서열 변이체는 DNA에서의 돌연변이에 의해 제조될 수 있다. 돌연변이유발 및 뉴클레오티드 서열 변경을 위한 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Kunkel (1985, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82: 488-492), Kunkel et al., (1987, Methods in Enzymol, 154: 367-382)], 미국 특허 번호 4,873,192, [Watson, J. D. et al., (Molecular Biology of the Gene, Fourth Edition, Benjamin/Cummings, Menlo Park, Calif., 1987)] 및 그에 인용된 참고문헌을 참조한다. 관심 단백질의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는 적절한 아미노산 치환에 관한 지침은 문헌 [Dayhoff et al., (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.)]의 모델에서 찾아볼 수 있다.
특정 실시양태에서, 변이체는 보존적 치환을 함유할 것이다. "보존적 치환"은 펩티드 화학 관련 기술분야의 통상의 기술자가 폴리펩티드의 2차 구조 및 소수친수성 성질이 실질적으로 변하지 않을 것으로 예상하게 하는, 아미노산이 유사한 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 치환된 것이다. 변형은 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드의 구조에서 이루어질 수 있고, 여전히 바람직한 특징을 갖는 변이체 또는 유도체 폴리펩티드를 코딩하는 기능적 분자를 수득할 수 있다. 등가물 또는 심지어 개선된 변이체 폴리펩티드를 생성하기 위해 폴리펩티드의 아미노산 서열을 변경시키는 것이 바람직한 경우에, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 예를 들어 표 2에 따른 코딩 DNA 서열의 코돈 중 1개 이상을 예를 들어 변화시킬 수 있다.
표 2- 아미노산 코돈
Figure pct00009
생물학적 활성을 무효화하지 않으면서 어느 아미노산 잔기가 치환, 삽입 또는 결실될 수 있는지를 결정하는 데 있어서의 지침은 관련 기술분야에 널리 공지된 컴퓨터 프로그램, 예컨대 디엔에이스타(DNASTAR)™ 소프트웨어를 사용하여 찾아볼 수 있다. 바람직하게는, 본원에 개시된 단백질 변이체에서의 아미노산 변화는 보존적 아미노산 변화, 즉 유사하게 하전된 또는 비하전된 아미노산의 치환이다. 보존적 아미노산 변화는 그의 측쇄에서 관련이 있는 아미노산의 패밀리 중 하나의 치환을 수반한다. 자연 발생 아미노산은 일반적으로 4개의 패밀리로 나뉜다: 산성 (아스파르테이트, 글루타메이트), 염기성 (리신, 아르기닌, 히스티딘), 비-극성 (알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 및 비하전 극성 (글리신, 아스파라긴, 글루타민, 시스테인, 세린, 트레오닌, 티로신) 아미노산. 페닐알라닌, 트립토판 및 티로신은 때때로 함께 방향족 아미노산으로 분류된다. 펩티드 또는 단백질에서, 아미노산의 적합한 보존적 치환은 통상의 기술자에게 공지되어 있고, 일반적으로 생성된 분자의 생물학적 활성을 변경시키지 않으면서 이루어질 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 일반적으로 폴리펩티드의 비-필수 영역에서의 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변경시키지 않는다는 것을 인식한다 (예를 들어, 문헌 [Watson et al., Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p.224] 참조). 예시적인 보존적 치환은 미국 특허 가출원 번호 61/241,647에 기재되어 있으며, 그의 개시내용은 본원에 참조로 포함된다.
이러한 변화를 만들 때, 아미노산의 소수친수성 지수가 고려될 수 있다. 단백질에 상호작용 생물학적 기능을 부여하는 데 있어서 소수친수성 아미노산 지수의 중요성이 일반적으로 관련 기술분야에서 이해된다 (Kyte and Doolittle, 1982, 본원에 참조로 포함됨). 각각의 아미노산은 그의 소수성 및 전하 특징에 기초하여 소수친수성 지수로 배정되었다 (Kyte and Doolittle, 1982). 이들 값은 이소류신 (+4.5); 발린 (+4.2); 류신 (+3.8); 페닐알라닌 (+2.8); 시스테인/시스테인 (+2.5); 메티오닌 (+1.9); 알라닌 (+1.8); 글리신 (-0.4); 트레오닌 (-0.7); 세린 (-0.8); 트립토판 (-0.9); 티로신 (-1.3); 프롤린 (-1.6); 히스티딘 (-3.2); 글루타메이트 (-3.5); 글루타민 (-3.5); 아스파르테이트 (-3.5); 아스파라긴 (-3.5); 리신 (-3.9); 및 아르기닌 (-4.5)이다.
특정 아미노산은 유사한 소수친수성 지수 또는 점수를 갖는 다른 아미노산에 의해 치환될 수 있고, 여전히 유사한 생물학적 활성을 갖는 단백질을 생성하며, 즉, 여전히 생물학적으로 기능적으로 등가인 단백질을 수득할 수 있다는 것이 관련 기술분야에 공지되어 있다. 이러한 변화를 만들 때, 소수친수성 지수가 ±2 내에 있는 아미노산의 치환이 바람직하고, ±1 내에 있는 것이 특히 바람직하고, ±0.5 내에 있는 것이 보다 더 특히 바람직하다. 또한, 유사 아미노산의 치환은 친수성에 기초하여 효과적으로 이루어질 수 있다는 것이 관련 기술분야에서 이해된다.
미국 특허 번호 4,554,101에 상술된 바와 같이, 하기 친수성 값이 아미노산 잔기에 배정되었다: 아르기닌 (+3.0); 리신 (+3.0); 아스파르테이트 (+3.0 ± 1); 글루타메이트 (+3.0 ± 1); 세린 (+0.3); 아스파라긴 (+0.2); 글루타민 (+0.2); 글리신 (0); 트레오닌 (-0.4); 프롤린 (-0.5 ± 1); 알라닌 (-0.5); 히스티딘 (-0.5); 시스테인 (-1.0); 메티오닌 (-1.3); 발린 (-1.5); 류신 (-1.8); 이소류신 (-1.8); 티로신 (-2.3); 페닐알라닌 (-2.5); 트립토판 (-3.4). 아미노산은 유사한 친수성 값을 갖는 또 다른 아미노산으로 치환될 수 있고, 여전히 생물학적으로 등가인, 특히 면역학적으로 등가인 단백질을 수득할 수 있는 것으로 이해된다. 이러한 변화에서, 친수성 값이 ±2 내에 있는 아미노산의 치환이 바람직하고, ±1 내에 있는 것이 특히 바람직하고, ±0.5 내에 있는 것이 보다 더 특히 바람직하다.
상기 약술된 바와 같이, 아미노산 치환은 아미노산 측쇄 치환기의 상대적 유사성, 예를 들어, 그의 소수성, 친수성, 전하, 크기 등에 기초할 수 있다.
폴리펩티드 변이체는 글리코실화 형태, 다른 분자와의 응집 접합체, 및 비관련 화학적 모이어티와의 공유 접합체 (예를 들어, PEG화 분자)를 추가로 포함한다. 공유 변이체는 관련 기술분야에 공지된 바와 같이, 아미노산 쇄 내에서 또는 N- 또는 C-말단 잔기에서 발견되는 기에 관능기를 연결하는 것에 의해 제조될 수 있다. 변이체는 또한 대립유전자 변이체, 종 변이체, 및 뮤테인을 포함한다. 단백질의 기능적 활성에 영향을 미치지 않는 영역의 말단절단 또는 결실이 또한 변이체이다.
한 실시양태에서, 2개 이상의 폴리펩티드의 발현이 요구되는 경우에, 이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같이 IRES 서열에 의해 분리될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 2개 이상의 폴리펩티드는 1개 이상의 자기-절단 폴리펩티드 서열을 포함하는 융합 단백질로서 발현될 수 있다.
본원에 개시된 폴리펩티드는 융합 폴리펩티드를 포함한다. 특정 실시양태에서, 융합 폴리펩티드 및 융합 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 CAR이 제공된다. 융합 폴리펩티드 및 융합 단백질은 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개 또는 그 초과의 폴리펩티드 절편을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다. 융합 폴리펩티드는 전형적으로 C-말단에서 N-말단으로 연결되지만, 이는 또한 C-말단에서 C-말단으로, N-말단에서 N-말단으로, 또는 N-말단에서 C-말단으로 연결될 수도 있다. 융합 단백질의 폴리펩티드는 임의의 순서 또는 명시된 순서일 수 있다. 융합 폴리펩티드 또는 융합 단백질은 또한, 융합 폴리펩티드의 목적하는 전사 활성이 보존되는 한, 보존적으로 변형된 변이체, 다형성 변이체, 대립유전자, 돌연변이체, 하위서열, 및 종간 상동체를 포함할 수 있다. 융합 폴리펩티드는 화학적 합성 방법에 의해 또는 2개의 모이어티 사이의 화학적 연결에 의해 생산될 수 있거나, 또는 일반적으로 다른 표준 기술을 사용하여 제조될 수 있다. 융합 폴리펩티드를 포함하는 라이게이션된 DNA 서열은 본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같이 적합한 전사 또는 번역 제어 요소에 작동가능하게 연결된다.
한 실시양태에서, 융합 파트너는 천연 재조합 단백질보다 더 높은 수율로 단백질의 발현을 돕는 서열 (발현 인핸서)을 포함한다. 다른 융합 파트너는 단백질의 용해도를 증가시키거나 또는 단백질이 목적하는 세포내 구획에 표적화될 수 있게 하거나 또는 융합 단백질의 세포막을 통한 수송을 용이하게 하도록 선택될 수 있다.
융합 폴리펩티드는 본원에 기재된 각각의 폴리펩티드 도메인 사이에 폴리펩티드 절단 신호를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 폴리펩티드 부위는 임의의 링커 펩티드 서열 내에 놓일 수 있다. 예시적인 폴리펩티드 절단 신호는 폴리펩티드 절단 인식 부위, 예컨대 프로테아제 절단 부위, 뉴클레아제 절단 부위 (예를 들어, 희귀 제한 효소 인식 부위, 자기-절단 리보자임 인식 부위), 및 자기-절단 바이러스 올리고펩티드를 포함한다 (문헌 [deFelipe and Ryan, 2004. Traffic, 5(8); 616-26] 참조).
적합한 프로테아제 절단 부위 및 자기-절단 펩티드는 통상의 기술자에게 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Ryan et al., 1997. J. Gener. Virol. 78, 699-722; Scymczak et al., (2004) Nature Biotech. 5, 589-594] 참조). 예시적인 프로테아제 절단 부위는 포티바이러스 NIa 프로테아제 (예를 들어, 담배 식각 바이러스 프로테아제), 포티바이러스 HC 프로테아제, 포티바이러스 P1 (P35) 프로테아제, 비오바이러스 NIa 프로테아제, 비오바이러스 RNA-2-코딩 프로테아제, 아프토바이러스 L 프로테아제, 엔테로바이러스 2A 프로테아제, 리노바이러스 2A 프로테아제, 피코르나 3C 프로테아제, 코모바이러스 24K 프로테아제, 네포바이러스 24K 프로테아제, RTSV (벼 툰그로 구형 바이러스) 3C-유사 프로테아제, PYVF (파스닙 황색 반점 바이러스) 3C-유사 프로테아제, 헤파린, 트롬빈, 인자 Xa 및 엔테로키나제의 절단 부위를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 그의 높은 절단 엄격도로 인해, TEV (담배 식각 바이러스) 프로테아제 절단 부위, 예를 들어 EXXYXQ(G/S) (서열식별번호: 23), 예를 들어, ENLYFQG (서열식별번호: 24) 및 ENLYFQS (서열식별번호: 25)가 한 실시양태에서 바람직하고, 여기서 X는 임의의 아미노산을 나타낸다 (TEV에 의한 절단은 Q와 G 또는 Q와 S 사이에서 일어남).
특정한 실시양태에서, 자기-절단 펩티드는 포티바이러스 및 카르디오바이러스 2A 펩티드, FMDV (구제역 바이러스), 말 비염 A 바이러스, 토세아 아시그나(Thosea asigna) 바이러스 및 돼지 테스코바이러스로부터 수득된 폴리펩티드 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 자기-절단 폴리펩티드 부위는 2A 또는 2A-유사 부위, 서열 또는 도메인을 포함한다 (Donnelly et al., 2001. J. Gen. Virol. 82:1027-1041).
표 3: 예시적인 2A 부위는 하기 서열을 포함한다:
Figure pct00010
특정 실시양태에서, 본원에서 고려되는 폴리펩티드는 CAR 폴리펩티드를 포함한다.
6.6. 폴리뉴클레오티드
특정 실시양태에서, 1종 이상의 CAR 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가, 예를 들어 서열식별번호: 10에 제공된다. 본원에 사용된 용어 "폴리뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 메신저 RNA (mRNA), RNA, 게놈 RNA (gRNA), 플러스 가닥 RNA (RNA(+)), 마이너스 가닥 RNA (RNA(-)), 게놈 DNA (gDNA), 상보적 DNA (cDNA) 또는 재조합 DNA를 지칭한다. 폴리뉴클레오티드는 단일 및 이중 가닥 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 바람직하게는, 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 참조 서열 (예를 들어, 서열 목록 참조) 중 임의의 것에 대해 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 폴리뉴클레오티드 또는 변이체를 포함하며, 전형적으로 여기서 변이체는 참조 서열의 적어도 1종의 생물학적 활성을 유지한다. 다양한 예시적 실시양태에서, 본 개시내용은 부분적으로 발현 벡터, 바이러스 벡터 및 전달 플라스미드를 포함하는 폴리뉴클레오티드, 및 그를 포함하는 조성물 및 세포를 고려한다.
특정한 실시양태에서, 폴리펩티드의 적어도 약 5, 10, 25, 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 500, 1000, 1250, 1500, 1750, 또는 2000개 또는 그 초과의 인접 아미노산 잔기, 뿐만 아니라 모든 중간 길이를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 본 개시내용에 의해 제공된다. 이와 관련하여, "중간 길이"는 인용된 값 사이의 임의의 길이, 예컨대 6, 7, 8, 9 등, 101, 102, 103 등; 151, 152, 153 등; 201, 202, 203 등을 의미하는 것으로 용이하게 이해될 것이다.
본원에 사용된 용어 "폴리뉴클레오티드 변이체" 및 "변이체" 등은 참조 폴리뉴클레오티드 서열과 실질적인 서열 동일성을 나타내는 폴리뉴클레오티드 또는 하기 정의된 엄격한 조건 하에 참조 서열과 혼성화하는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 이들 용어는 참조 폴리뉴클레오티드와 비교하여 1개 이상의 뉴클레오티드가 부가 또는 결실되거나 또는 상이한 뉴클레오티드로 대체된 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 이와 관련하여, 돌연변이, 부가, 결실 및 치환을 포함한 특정 변경이 참조 폴리뉴클레오티드에 대해 이루어질 수 있으며, 이에 의해 변경된 폴리뉴클레오티드는 참조 폴리뉴클레오티드의 생물학적 기능 또는 활성을 보유한다는 것이 관련 기술분야에서 널리 이해된다.
본원에 사용된 바와 같은 "서열 동일성" 또는, 예를 들어, "에 대해 50% 동일한 서열"을 포함하는 언급은 비교 윈도우에 걸쳐 뉴클레오티드-대-뉴클레오티드 기준으로 또는 아미노산-대-아미노산 기준으로 서열이 동일한 정도를 지칭한다. 따라서, "서열 동일성의 백분율"은 2개의 최적으로 정렬된 서열을 비교 윈도우에 걸쳐 비교하고, 동일한 핵산 염기 (예를 들어, A, T, C, G, I) 또는 동일한 아미노산 잔기 (예를 들어, Ala, Pro, Ser, Thr, Gly, Val, Leu, Ile, Phe, Tyr, Trp, Lys, Arg, His, Asp, Glu, Asn, Gln, Cys 및 Met)가 둘 다의 서열에서 발생한 위치의 수를 결정하여 매칭된 위치의 수를 산출하고, 매칭된 위치의 수를 비교 윈도우 내의 위치의 총수 (즉, 윈도우 크기)로 나누고, 결과에 100을 곱하여 서열 동일성의 백분율을 산출함으로써 계산될 수 있다. 본원에 기재된 참조 서열 중 임의의 것에 대해 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 서열 동일성을 갖는 뉴클레오티드 및 폴리펩티드가 포함되며, 전형적으로 여기서 폴리펩티드 변이체는 참조 폴리펩티드의 적어도 1종의 생물학적 활성을 유지한다.
2개 이상의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 사이의 서열 관계를 기재하는 데 사용된 용어는 "참조 서열", "비교 윈도우", "서열 동일성", "서열 동일성의 백분율" 및 "실질적 동일성"을 포함한다. "참조 서열"은 적어도 12개, 그러나 빈번하게는 15 내지 18개, 및 종종 적어도 25개의 단량체 단위 길이이며, 뉴클레오티드 및 아미노산 잔기를 포함한다. 2개의 폴리뉴클레오티드는 각각 (1) 2개의 폴리뉴클레오티드 사이에 유사한 서열 (즉, 완전한 폴리뉴클레오티드 서열의 단지 일부), 및 (2) 2개의 폴리뉴클레오티드 사이에서 불일치하는 서열을 포함할 수 있기 때문에, 2개 (또는 그 초과)의 폴리뉴클레오티드 사이의 서열 비교는 전형적으로 2개의 폴리뉴클레오티드의 서열을 "비교 윈도우"에 걸쳐 비교하여 서열 유사성의 국부 영역을 확인하고 비교함으로써 수행된다. "비교 윈도우"는 2개의 서열이 최적으로 정렬된 후에 서열이 인접 위치의 동일한 수의 참조 서열과 비교되는, 적어도 6개의 인접 위치, 통상적으로 약 50 내지 약 100, 보다 통상적으로 약 100 내지 약 150개의 인접 위치의 개념적 절편을 지칭한다. 비교 윈도우는 2개의 서열의 최적 정렬을 위해 참조 서열 (부가 또는 결실을 포함하지 않음)과 비교하여 약 20% 이하의 부가 또는 결실 (즉, 갭)을 포함할 수 있다. 비교 윈도우를 정렬하기 위한 서열의 최적 정렬은 알고리즘의 컴퓨터 구현 (미국 위스콘신주 매디슨 사이언스 드라이브 575 소재의 제네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group)의 위스콘신 제네틱스 소프트웨어 패키지 릴리즈 7.0 내의 GAP, BESTFIT, FASTA, 및 TFASTA)에 의해 또는 선택된 다양한 방법 중 임의의 것에 의해 생성된 검사 및 최상의 정렬 (즉, 비교 윈도우에 걸쳐 최고의 백분율 상동성을 생성함)에 의해 수행될 수 있다. 또한, 예를 들어 문헌 [Altschul et al., 1997, Nucl. Acids Res. 25:3389]에 개시된 바와 같은 BLAST 패밀리의 프로그램을 참조할 수 있다. 서열 분석의 상세한 논의는 문헌 [Unit 19.3 of Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons Inc, 1994-1998, Chapter 15]에서 찾아볼 수 있다.
본원에 사용된 "단리된 폴리뉴클레오티드"는 자연-발생 상태에서 그에 플랭킹된 서열로부터 정제된 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 정상적으로는 단편에 인접해 있는 서열로부터 제거된 DNA 단편을 지칭한다. "단리된 폴리뉴클레오티드"는 또한 자연에 존재하지 않고 인간의 손에 의해 제조된 상보적 DNA (cDNA), 재조합 DNA, 또는 다른 폴리뉴클레오티드를 지칭한다.
폴리뉴클레오티드의 배향을 기재하는 용어는: 5' (정상적으로는 유리 포스페이트 기를 갖는 폴리뉴클레오티드의 단부) 및 3' (정상적으로는 유리 히드록실 (OH) 기를 갖는 폴리뉴클레오티드의 단부)를 포함한다. 폴리뉴클레오티드 서열은 5'에서 3' 배향 또는 3'에서 5' 배향으로 주석이 달릴 수 있다. DNA 및 mRNA의 경우에, 5'에서 3' 가닥은 그의 서열이 프리메신저 (premRNA)의 서열과 동일하기 때문에 [DNA 내의 티민 (T) 대신 RNA 내의 우라실 (U)을 제외함] "센스", "플러스" 또는 "코딩" 가닥으로 지정된다. DNA 및 mRNA의 경우에, RNA 폴리머라제에 의해 전사되는 가닥인 상보적 3'에서 5' 가닥은 "주형", "안티센스", "마이너스" 또는 "비-코딩" 가닥으로 지정된다. 본원에 사용된 용어 "역배향"은 3'에서 5' 배향으로 쓰여진 5'에서 3' 서열 또는 5'에서 3' 배향으로 쓰여진 3'에서 5' 서열을 지칭한다.
용어 "상보적" 및 "상보성"은 염기-쌍형성 규칙에 의해 관련된 폴리뉴클레오티드 (즉, 뉴클레오티드의 서열)를 지칭한다. 예를 들어, DNA 서열 5' A G T C A T G 3'의 상보적 가닥은 3' T C A G T A C 5'이다. 후자의 서열은 종종 좌측에 5' 단부 및 우측에 3' 단부, 5' C A T G A C T 3'를 갖는 역 상보체로서 쓰여진다. 그의 역 상보체와 동일한 서열은 회문식 서열인 것으로 언급된다. 상보성은 "부분적"일 수 있으며, 여기서 핵산의 염기 중 일부만이 염기 쌍형성 규칙에 따라 매칭된다. 또는, 핵산 사이에 "완전한" 또는 "전체" 상보성이 존재할 수 있다.
또한, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 유전자 코드의 축중성의 결과로서, 본원에 기재된 바와 같은 폴리펩티드 또는 그의 변이체의 단편을 코딩하는 많은 뉴클레오티드 서열이 존재한다는 것을 인지할 것이다. 이들 폴리뉴클레오티드 중 일부는 임의의 천연 유전자의 뉴클레오티드 서열에 대해 최소의 상동성을 보유한다. 그럼에도 불구하고, 코돈 용법에서의 차이로 인해 달라지는 폴리뉴클레오티드, 예를 들어 인간 및/또는 영장류 코돈 선택을 위해 최적화된 폴리뉴클레오티드가 본 개시내용에 의해 구체적으로 고려된다. 추가로, 본원에 제공된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 유전자의 대립유전자가 또한 사용될 수 있다. 대립유전자는 뉴클레오티드의 1개 이상의 돌연변이, 예컨대 결실, 부가 및/또는 치환의 결과로서 변경된 내인성 유전자이다.
본원에 사용된 용어 "핵산 카세트"는 RNA, 및 후속적으로 단백질을 발현할 수 있는 벡터 내의 유전자 서열을 지칭한다. 핵산 카세트는 관심 유전자, 예를 들어 CAR을 함유한다. 핵산 카세트는 카세트 내의 핵산이 RNA로 전사되고, 필요한 경우에 단백질 또는 폴리펩티드로 번역되고, 형질전환된 세포에서의 활성에 요구되는 적절한 번역후 변형을 거치고, 적절한 세포내 구획으로의 표적화 또는 세포외 구획으로의 분비에 의해 생물학적 활성을 위한 적절한 구획으로 전위될 수 있도록 벡터 내에서 위치적으로 및 순차적으로 배향된다. 바람직하게는, 카세트는 벡터 내로의 용이한 삽입을 위해 적합화된 그의 3' 및 5' 단부를 갖고, 예를 들어 이는 각각의 단부에 제한 엔도뉴클레아제 부위를 갖는다. 한 실시양태에서, 핵산 카세트는 종양 또는 암을 치료하는 데 사용되는 키메라 항원 수용체의 서열을 함유한다. 한 실시양태에서, 핵산 카세트는 B 세포 악성종양을 치료하는 데 사용되는 키메라 항원 수용체의 서열을 함유한다. 카세트는 제거되어 플라스미드 또는 바이러스 벡터 내로 단일 단위로서 삽입될 수 있다.
특정한 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 적어도 1개의 관심 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "관심 폴리뉴클레오티드"는 발현될 것을 목적으로 발현 벡터 내로 삽입된, 폴리펩티드 (즉, 관심 폴리펩티드)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 지칭한다. 벡터는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개의 관심 폴리뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 관심 폴리뉴클레오티드는 질환 또는 장애의 치료 또는 예방에서 치료 효과를 제공하는 폴리펩티드를 코딩한다. 관심 폴리뉴클레오티드, 및 그로부터 코딩된 폴리펩티드는 야생형 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 뿐만 아니라 그의 기능적 변이체 및 단편 둘 다를 포함한다. 특정한 실시양태에서, 기능적 변이체는 상응하는 야생형 참조 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성을 갖는다. 특정 실시양태에서, 기능적 변이체 또는 단편은 상응하는 야생형 폴리펩티드의 생물학적 활성의 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 또는 적어도 90%를 갖는다.
한 실시양태에서, 관심 폴리뉴클레오티드는 폴리펩티드를 코딩하지 않지만, miRNA, siRNA, 또는 shRNA, 리보자임, 또는 다른 억제 RNA를 전사하기 위한 주형으로서의 역할을 한다. 다양한 다른 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 CAR을 코딩하는 관심 폴리뉴클레오티드, 및 siRNA, miRNA, shRNA 및 리보자임을 포함하나 이에 제한되지는 않는 억제 핵산 서열을 포함하나 이에 제한되지는 않는 1개 이상의 추가의 관심 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "siRNA" 또는 "짧은 간섭 RNA"는 동물에서 서열-특이적 전사후 유전자 침묵, 번역 억제, 전사 억제 또는 후성적 RNAi의 과정을 매개하는 짧은 폴리뉴클레오티드 서열을 지칭한다 (Zamore et al., 2000, Cell, 101, 25-33; Fire et al., 1998, Nature, 391, 806; Hamilton et al., 1999, Science, 286, 950-951; Lin et al., 1999, Nature, 402, 128-129; Sharp, 1999, Genes & Dev., 13, 139-141; 및 Strauss, 1999, Science, 286, 886). 특정 실시양태에서, siRNA는 동일한 수의 뉴클레오시드를 갖는 제1 가닥 및 제2 가닥을 포함하지만; 제1 및 제2 가닥은 제1 및 제2 가닥 상의 2개의 말단 뉴클레오시드가 상보적 가닥 상의 잔기와 쌍형성되지 않도록 오프셋된다. 특정 경우에, 쌍형성되지 않는 2개의 뉴클레오시드는 티미딘 잔기이다. siRNA는 siRNA 또는 그의 단편이 표적 유전자의 하향 조절을 매개할 수 있도록 표적 유전자에 대한 충분한 상동성의 영역을 포함해야 하고, 뉴클레오티드의 면에서 충분한 길이여야 한다. 따라서, siRNA는 표적 RNA에 적어도 부분적으로 상보적인 영역을 포함한다. siRNA와 표적 사이에 완전한 상보성이 존재할 필요는 없지만, 상응성은 siRNA 또는 그의 절단 생성물이, 예컨대 표적 RNA의 RNAi 절단에 의해 서열 특이적 침묵을 지시할 수 있도록 하기에 충분해야 한다. 표적 가닥과의 상보성, 또는 상동성의 정도는 안티센스 가닥에서 가장 중요하다. 특히 안티센스 가닥에서 완전한 상보성이 종종 바람직하지만, 일부 실시양태는 표적 RNA에 대한 1개 이상, 그러나 바람직하게는 10, 8, 6, 5, 4, 3, 2개 이하의 미스매치를 포함한다. 미스매치는 말단 영역에서 가장 잘 허용되고, 존재하는 경우에 바람직하게는 말단 영역 또는 영역들에서, 예를 들어 5' 및/또는 3' 말단의 6, 5, 4, 또는 3개의 뉴클레오티드 내에 존재한다. 센스 가닥은 단지 분자의 전체 이중-가닥 특징을 유지하기 위해 안티센스 가닥과 충분히 상보적일 필요가 있다.
또한, siRNA는 변형될 수 있거나 또는 뉴클레오시드 유사체를 포함할 수 있다. siRNA의 단일 가닥 영역은 변형될 수 있거나 또는 뉴클레오시드 유사체를 포함할 수 있으며, 예를 들어 헤어핀 구조의 쌍형성되지 않은 영역 또는 영역들, 예를 들어 2개의 상보적 영역을 연결하는 영역은 변형 또는 뉴클레오시드 유사체를 가질 수 있다. 예를 들어 엑소뉴클레아제에 대해 siRNA의 1개 이상의 3'- 또는 5'-말단을 안정화시키거나, 또는 안티센스 siRNA 작용제가 RISC에 진입하는 것을 유리하게 하는 변형이 또한 유용하다. 변형은 C3 (또는 C6, C7, C12) 아미노 링커, 티올 링커, 카르복실 링커, 비-뉴클레오티드 스페이서 (C3, C6, C9, C12, 무염기성, 트리에틸렌 글리콜, 헥사에틸렌 글리콜), 포스포르아미다이트로서 제공되고 또 다른 DMT-보호된 히드록실 기를 갖는 특수 비오틴 또는 플루오레세인 시약을 포함할 수 있으며, 이는 RNA 합성 동안 다중 커플링을 가능하게 한다. siRNA의 각각의 가닥은 30, 25, 24, 23, 22, 21, 또는 20개 이하의 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 가닥은 바람직하게는 적어도 19개의 뉴클레오티드 길이이다. 예를 들어, 각각의 가닥은 21 내지 25개의 뉴클레오티드 길이일 수 있다. 바람직한 siRNA는 17, 18, 19, 29, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 뉴클레오티드 쌍의 듀플렉스 영역, 및 2-3개의 뉴클레오티드의 1개 이상의 오버행, 바람직하게는 2-3개의 뉴클레오티드의 1 또는 2개의 3' 오버행을 갖는다.
본원에 사용된 용어 "miRNA" 또는 "마이크로RNA"는 전형적으로 프리-miRNA로 공지된 ~70개의 뉴클레오티드 폴드-백 RNA 전구체 구조로부터 절제된, 20-22개의 뉴클레오티드의 소형 비-코딩 RNA를 지칭한다. miRNA는 miRNA와 표적 사이의 상보성의 정도에 따라 2가지 방식 중 1가지로 그의 표적을 음성적으로 조절한다. 첫째로, 단백질-코딩 mRNA 서열에 완전한 또는 거의 완전한 상보성으로 결합하는 miRNA는 RNA-매개된 간섭 (RNAi) 경로를 유도한다. 그의 mRNA 표적의 3' 비번역 영역 (UTR) 내의 불완전한 상보적 부위에 결합함으로써 그의 조절 효과를 발휘하는 miRNA는 RNAi 경로에 사용되는 것과 유사하거나 또는 아마도 동일한 RISC 복합체를 통해 전사후 표적-유전자 발현을 명백하게 번역 수준에서 억제한다. 번역 제어와 일치하게, 이러한 메카니즘을 사용하는 miRNA는 그의 표적 유전자의 단백질 수준을 감소시키지만, 이들 유전자의 mRNA 수준은 단지 최소로 영향을 받는다. miRNA는 자연 발생 miRNA뿐만 아니라 임의의 mRNA 서열을 특이적으로 표적화할 수 있는 인공적으로 설계된 miRNA 둘 다를 포괄한다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 통상의 기술자는 인간 miRNA (예를 들어, miR-30 또는 miR-21) 1차 전사체로서 발현되는 짧은 헤어핀 RNA 구축물을 설계할 수 있다. 이러한 설계는 헤어핀 구축물에 드로샤 프로세싱 부위를 부가하고, 녹다운 효율을 크게 증가시키는 것으로 밝혀졌다 (Pusch et al., 2004). 헤어핀 줄기는 22-nt의 dsRNA (예를 들어, 안티센스는 목적하는 표적에 대해 완전한 상보성을 가짐) 및 인간 miR로부터의 15-19-nt 루프로 이루어진다. 헤어핀의 한쪽 또는 양쪽에 miR 루프 및 miR30 플랭킹 서열을 부가하는 것은, 마이크로RNA가 없는 통상적인 shRNA 설계와 비교할 경우, 발현된 헤어핀의 드로샤 및 다이서 프로세싱에서 10-배 초과의 증가를 발생시킨다. 증가된 드로샤 및 다이서 프로세싱은 보다 많은 siRNA/miRNA 생산 및 발현된 헤어핀에 대한 보다 큰 효력으로 해석된다.
본원에 사용된 용어 "shRNA" 또는 "짧은 헤어핀 RNA"는 단일 자기-상보적 RNA 가닥에 의해 형성된 이중-가닥 구조를 지칭한다. 표적 유전자의 코딩 또는 비-코딩 서열의 일부와 동일한 뉴클레오티드 서열을 함유하는 shRNA 구축물이 억제에 바람직하다. 표적 서열에 비해 삽입, 결실 및 단일 점 돌연변이를 갖는 RNA 서열이 또한 억제에 효과적인 것으로 밝혀졌다. 억제 RNA와 표적 유전자의 부분 사이에 90% 초과의 서열 동일성, 또는 심지어 100% 서열 동일성이 바람직하다. 특정의 바람직한 실시양태에서, shRNA의 듀플렉스-형성 부분의 길이는, 예를 들어 다이서-의존성 절단에 의해 생산된 RNA 생성물에 크기상 상응하는, 적어도 20, 21 또는 22개의 뉴클레오티드 길이이다. 특정 실시양태에서, shRNA 구축물은 적어도 25, 50, 100, 200, 300 또는 400개 염기 길이이다. 특정 실시양태에서, shRNA 구축물은 400-800개 염기 길이이다. shRNA 구축물은 루프 서열 및 루프 크기에서의 변이에 대해 고도로 내성이다.
본원에 사용된 용어 "리보자임"은 표적 mRNA를 부위-특이적으로 절단할 수 있는 촉매 활성 RNA 분자를 지칭한다. 여러 하위유형, 예를 들어 해머헤드 및 헤어핀 리보자임이 기재되어 있다. 리보자임 촉매 활성 및 안정성은 비촉매 염기에서 리보뉴클레오티드를 데옥시리보뉴클레오티드로 치환하는 것에 의해 개선될 수 있다. 부위-특이적 인식 서열에서 mRNA를 절단하는 리보자임이 특정한 mRNA를 파괴하는 데 사용될 수 있지만, 해머헤드 리보자임의 사용이 바람직하다. 해머헤드 리보자임은 표적 mRNA와 상보적인 염기 쌍을 형성하는 플랭킹 영역에 의해 지시되는 위치에서 mRNA를 절단한다. 유일한 요건은 표적 mRNA가 하기 2개의 염기 서열: 5'-UG-3'를 갖는 것이다. 해머헤드 리보자임의 구축 및 생산은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다.
특정 실시양태에서, 가용성 인자의 길항제는 siRNA, miRNA, shRNA 또는 리보자임이다.
특정 실시양태에서, siRNA, miRNA, shRNA 또는 리보자임을 포함하는 관심 폴리뉴클레오티드의 전달 방법은 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 1개 이상의 조절 서열, 예컨대 예를 들어 강한 구성적 pol III, 예를 들어 인간 U6 snRNA 프로모터, 마우스 U6 snRNA 프로모터, 인간 및 마우스 H1 RNA 프로모터 및 인간 tRNA-val 프로모터, 또는 강한 구성적 pol II 프로모터를 포함한다.
본원에 개시된 폴리뉴클레오티드는, 코딩 서열 자체의 길이에 관계 없이, 다른 DNA 서열, 예컨대 본원의 다른 곳에 개시된 바와 같은 또는 관련 기술분야에 공지된 바와 같은 프로모터 및/또는 인핸서, 비번역 영역 (UTR), 신호 서열, 코작 서열, 폴리아데닐화 신호, 추가의 제한 효소 부위, 다중 클로닝 부위, 내부 리보솜 진입 부위 (IRES), 레콤비나제 인식 부위 (예를 들어, LoxP, FRT 및 Att 부위), 종결 코돈, 전사 종결 신호, 및 자기-절단 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 에피토프 태그와 조합될 수 있고, 이에 그의 전체 길이가 상당히 달라질 수 있다. 따라서, 거의 모든 길이의 폴리뉴클레오티드 단편이 사용될 수 있는 것으로 고려되며, 총 길이는 바람직하게는 의도된 재조합 DNA 프로토콜에서의 제조 및 사용의 용이성에 의해 제한된다.
폴리뉴클레오티드는 관련 기술분야에 공지되고 이용가능한 다양한 널리 확립된 기술 중 임의의 것을 사용하여 제조, 조작 및/또는 발현될 수 있다. 목적하는 폴리펩티드를 발현시키기 위해, 폴리펩티드를 코딩하는 뉴클레오티드 서열이 적절한 벡터 내로 삽입될 수 있다. 벡터의 예는 플라스미드, 자율 복제 서열, 및 전위가능 요소이다. 추가의 예시적인 벡터는 비제한적으로 플라스미드, 파지미드, 코스미드, 인공 염색체, 예컨대 효모 인공 염색체 (YAC), 박테리아 인공 염색체 (BAC), 또는 P1-유래 인공 염색체 (PAC), 박테리오파지, 예컨대 람다 파지 또는 M13 파지, 및 동물 바이러스를 포함한다. 벡터로서 유용한 동물 바이러스의 카테고리의 예는 비제한적으로 레트로바이러스 (렌티바이러스 포함), 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 헤르페스바이러스 (예를 들어, 단순 헤르페스 바이러스), 폭스바이러스, 바큘로바이러스, 유두종바이러스 및 파포바바이러스 (예를 들어, SV40)를 포함한다. 발현 벡터의 예는 포유동물 세포에서의 발현을 위한 pClneo 벡터 (프로메가(Promega)); 포유동물 세포에서의 렌티바이러스-매개된 유전자 전달 및 발현을 위한 pLenti4/V5-DEST™, pLenti6/V5-DEST™, 및 pLenti6.2/V5-GW/lacZ (인비트로젠(Invitrogen))이다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 키메라 단백질의 코딩 서열은 포유동물 세포에서의 키메라 단백질의 발현을 위해 이러한 발현 벡터 내로 라이게이션될 수 있다.
한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR을 코딩하는 벡터는 서열식별번호: 36에 제시된 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 벡터는 에피솜 벡터 또는 염색체외에서 유지되는 벡터이다. 본원에 사용된 용어 "에피솜"은 숙주의 염색체 DNA 내로의 통합 없이 및 분열 숙주 세포로부터의 점진적 손실 없이 복제될 수 있는 벡터를 지칭하며, 이는 또한 상기 벡터가 염색체외로 또는 에피솜으로 복제된다는 것을 의미한다. 벡터는 림프향성 헤르페스 바이러스 또는 감마 헤르페스바이러스, 아데노바이러스, SV40, 소 유두종 바이러스, 또는 효모로부터의 DNA 복제 기점 또는 "ori", 특히 EBV의 oriP에 상응하는 림프향성 헤르페스 바이러스 또는 감마 헤르페스바이러스의 복제 기점을 코딩하는 서열을 보유하도록 조작된다. 특정한 측면에서, 림프향성 헤르페스 바이러스는 엡스타인 바르 바이러스 (EBV), 카포시 육종 헤르페스 바이러스 (KSHV), 헤르페스 바이러스 사이미리 (HS), 또는 마렉병 바이러스 (MDV)일 수 있다. 엡스타인 바르 바이러스 (EBV) 및 카포시 육종 헤르페스 바이러스 (KSHV)는 또한 감마 헤르페스바이러스의 예이다. 전형적으로, 숙주 세포는 복제를 활성화시키는 바이러스 복제 전사활성인자 단백질을 포함한다.
발현 벡터에 존재하는 "제어 요소" 또는 "조절 서열"은 벡터-복제 기점, 선택 카세트, 프로모터, 인핸서, 번역 개시 신호 (샤인 달가노(Shine Dalgarno) 서열 또는 코작(Kozak) 서열) 인트론, 폴리아데닐화 서열, 5' 및 3' 비번역 영역 (이는 숙주 세포 단백질과 상호작용하여 전사 및 번역을 수행함)의 그러한 비-번역 영역이다. 이러한 요소는 그의 강도 및 특이성이 다를 수 있다. 이용되는 벡터 시스템 및 숙주에 따라, 편재성 프로모터 및 유도성 프로모터를 비롯한 임의의 수의 적합한 전사 및 번역 요소가 사용될 수 있다.
특정한 실시양태에서, 본원에 사용하기 위한 벡터는 발현 벡터 및 바이러스 벡터를 포함하나 이에 제한되지는 않고, 외인성, 내인성 또는 이종 제어 서열, 예컨대 프로모터 및/또는 인핸서를 포함할 것이다. "내인성" 제어 서열은 게놈 내의 주어진 유전자와 천연적으로 연결된 것이다. "외인성" 제어 서열은 유전자의 전사가 연결된 인핸서/프로모터에 의해 지시되도록 유전자 조작 (즉, 분자 생물학 기술)에 의해 유전자에 병렬배치된 것이다. "이종" 제어 서열은 유전자 조작되는 세포와 상이한 종으로부터의 외인성 서열이다.
본원에 사용된 용어 "프로모터"는 RNA 폴리머라제가 결합하는 폴리뉴클레오티드 (DNA 또는 RNA)의 인식 부위를 지칭한다. RNA 폴리머라제는 프로모터에 작동가능하게 연결된 폴리뉴클레오티드를 개시하고 전사한다. 특정한 실시양태에서, 포유동물 세포에서 작동가능한 프로모터는 전사가 개시되는 부위로부터 대략 25 내지 30개 염기 상류에 위치한 AT-풍부 영역 및/또는 전사의 시작으로부터 70 내지 80개 염기 상류에서 발견되는 또 다른 서열, CNCAAT 영역 (여기서 N은 임의의 뉴클레오티드일 수 있음)을 포함한다.
용어 "인핸서"는 증진된 전사를 제공할 수 있는 서열을 함유하고, 일부 경우에 또 다른 제어 서열에 비해 그의 배향과 독립적으로 기능할 수 있는 DNA의 절편을 지칭한다. 인핸서는 프로모터 및/또는 다른 인핸서 요소와 협동적으로 또는 상가적으로 기능할 수 있다. 용어 "프로모터/인핸서"는 프로모터 및 인핸서 기능 둘 다를 제공할 수 있는 서열을 함유하는 DNA의 절편을 지칭한다.
용어 "작동가능하게 연결된"은 기재된 성분이 그의 의도된 방식으로 기능하도록 허용하는 관계에 있는 병렬배치를 지칭한다. 한 실시양태에서, 상기 용어는 핵산 발현 제어 서열 (예컨대 프로모터 및/또는 인핸서)과 제2 폴리뉴클레오티드 서열, 예를 들어 관심 폴리뉴클레오티드 사이의 기능적 연결을 지칭하며, 여기서 발현 제어 서열은 제2 서열에 상응하는 핵산의 전사를 지시한다.
본원에 사용된 용어 "구성적 발현 제어 서열"은 작동가능하게 연결된 서열의 전사를 계속해서 또는 연속적으로 가능하게 하는 프로모터, 인핸서, 또는 프로모터/인핸서를 지칭한다. 구성적 발현 제어 서열은 매우 다양한 세포 및 조직 유형에서의 발현을 가능하게 하는 "편재성" 프로모터, 인핸서 또는 프로모터/인핸서, 또는 각각 제한된 다양한 세포 및 조직 유형에서의 발현을 가능하게 하는 "세포 특이적", "세포 유형 특이적", "세포 계통 특이적" 또는 "조직 특이적" 프로모터, 인핸서 또는 프로모터/인핸서일 수 있다.
본원에 제시된 특정한 실시양태에서 사용하기에 적합한 예시적인 편재성 발현 제어 서열은 시토메갈로바이러스 (CMV) 극초기 프로모터, 바이러스 원숭이 바이러스 40 (SV40) (예를 들어, 초기 또는 후기), 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스 (MoMLV) LTR 프로모터, 라우스 육종 바이러스 (RSV) LTR, 단순 헤르페스 바이러스 (HSV) (티미딘 키나제) 프로모터, 백시니아 바이러스로부터의 H5, P7.5 및 P11 프로모터, 신장 인자 1-알파 (EF1a) 프로모터, 초기 성장 반응 1 (EGR1), 페리틴 H (FerH), 페리틴 L (FerL), 글리세르알데히드 3-포스페이트 데히드로게나제 (GAPDH), 진핵 번역 개시 인자 4A1 (EIF4A1), 열 쇼크 70kDa 단백질 5 (HSPA5), 열 쇼크 단백질 90kDa 베타, 구성원 1 (HSP90B1), 열 쇼크 단백질 70kDa (HSP70), β-키네신 (β-KIN), 인간 ROSA 26 유전자좌 (Irions et al., Nature Biotechnology 25, 1477 - 1482 (2007)), 유비퀴틴 C 프로모터 (UBC), 포스포글리세레이트 키나제-1 (PGK) 프로모터, 시토메갈로바이러스 인핸서/닭 β-액틴 (CAG) 프로모터, β-액틴 프로모터 및 골수증식성 육종 바이러스 인핸서, 결실된 음성 제어 영역, dl587rev 프라이머-결합 부위 치환된 (MND) 프로모터 (Challita et al., J Virol. 69(2):748-55 (1995))를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 벡터는 MND 프로모터를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 벡터는 인간 EF1a 유전자의 제1 인트론을 포함하는 EF1a 프로모터를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용의 벡터는 인간 EF1a 유전자의 제1 인트론이 결여된 EF1a 프로모터를 포함한다.
특정한 실시양태에서, T 세포 특이적 프로모터로부터 CAR을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 발현시키는 것이 바람직할 수 있다.
본원에 사용된 "조건부 발현"은 유도성 발현; 억제성 발현; 특정한 생리학적, 생물학적 또는 질환 상태를 갖는 세포 또는 조직에서의 발현 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는 임의의 유형의 조건부 발현을 지칭할 수 있다. 이러한 정의는 세포 유형 또는 조직 특이적 발현을 배제하는 것으로 의도되지 않는다. 특정 실시양태는 관심 폴리뉴클레오티드의 조건부 발현을 제공하며, 예를 들어 발현은 폴리뉴클레오티드가 발현되도록 하거나 또는 관심 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 폴리뉴클레오티드의 발현의 증가 또는 감소를 유발하는 처리 또는 조건에 세포, 조직, 유기체 등을 적용하는 것에 의해 제어된다.
유도성 프로모터/시스템의 예시적인 예는 스테로이드-유도성 프로모터, 예컨대 글루코코르티코이드 또는 에스트로겐 수용체를 코딩하는 유전자에 대한 프로모터 (상응하는 호르몬으로의 처리에 의해 유도가능함), 메탈로티오닌 프로모터 (다양한 중금속으로의 처리에 의해 유도가능함), MX-1 프로모터 (인터페론에 의해 유도가능함), "진스위치" 미페프리스톤-조절가능한 시스템 (Sirin et al., 2003, Gene, 323:67), 쿠메이트 유도성 유전자 스위치 (WO 2002/088346), 테트라시클린-의존성 조절 시스템 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
조건부 발현은 또한 부위 특이적 DNA 레콤비나제를 사용하는 것에 의해 달성될 수 있다. 특정 실시양태에 따르면, 벡터는 부위 특이적 레콤비나제에 의해 매개되는 재조합을 위한 적어도 1개의 (전형적으로 2개의) 부위(들)를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "레콤비나제" 또는 "부위 특이적 레콤비나제"는 야생형 단백질 (문헌 [Landy, Current Opinion in Biotechnology 3:699-707 (1993)] 참조), 또는 그의 돌연변이체, 유도체 (예를 들어, 재조합 단백질 서열 또는 그의 단편을 함유하는 융합 단백질), 단편 및 변이체일 수 있는 1개 이상의 재조합 부위 (예를 들어, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 12, 15, 20, 30, 50개 등)를 수반하는 재조합 반응에 수반되는 절제 또는 통합 단백질, 효소, 보조-인자 또는 연관 단백질을 포함한다. 본원에서 사용하기에 적합한 레콤비나제의 예시적인 예는 Cre, Int, IHF, Xis, Flp, Fis, Hin, Gin, ΦC31, Cin, Tn3 레솔바제, TndX, XerC, XerD, TnpX, Hjc, Gin, SpCCE1, 및 ParA를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
벡터는 매우 다양한 부위 특이적 레콤비나제 중 임의의 것에 대한 1개 이상의 재조합 부위를 포함할 수 있다. 부위 특이적 레콤비나제에 대한 표적 부위는 벡터, 예를 들어 레트로바이러스 벡터 또는 렌티바이러스 벡터의 통합에 필요한 임의의 부위(들)에 부가적인 것으로 이해되어야 한다. 본원에 사용된 용어 "재조합 서열", "재조합 부위" 또는 "부위 특이적 재조합 부위"는 레콤비나제가 인식하고 결합하는 특정한 핵산 서열을 지칭한다.
예를 들어, Cre 레콤비나제에 대한 하나의 재조합 부위는 8개 염기 쌍 코어 서열에 플랭킹된 2개의 13개 염기 쌍 역전된 반복부 (레콤비나제 결합 부위로서의 역할을 함)를 포함하는 34개 염기 쌍 서열인 loxP이다 (문헌 [Sauer, B., Current Opinion in Biotechnology 5:521-527 (1994)]의 도 1 참조). 다른 예시적인 loxP 부위는 lox511 (Hoess et al., 1996; Bethke and Sauer, 1997), lox5171 (Lee and Saito, 1998), lox2272 (Lee and Saito, 1998), m2 (Langer et al., 2002), lox71 (Albert et al., 1995), 및 lox66 (Albert et al., 1995)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
FLP 레콤비나제에 적합한 인식 부위는 FRT (McLeod, et al., 1996), F1, F2, F3 (Schlake and Bode, 1994), F4, F5 (Schlake and Bode, 1994), FRT(LE) (Senecoff et al., 1988), FRT(RE) (Senecoff et al., 1988)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
인식 서열의 다른 예는 레콤비나제 효소 λ 인테그라제, 예를 들어 phi-c31에 의해 인식되는 attB, attP, attL 및 attR 서열이다. φC31 SSR은 단지 이형 부위 attB (34 bp 길이)와 attP (39 bp 길이) 사이의 재조합만을 매개한다 (Groth et al., 2000). 각각 박테리아 및 파지 게놈 상의 파지 인테그라제에 대한 부착 부위에 대해 명명된 attB 및 attP는 둘 다 φC31 동종이량체에 의해 결합될 가능성이 있는 불완전한 역전된 반복부를 함유한다 (Groth et al., 2000). 생성물 부위, attL 및 attR은 추가의 φC31-매개된 재조합에 대해 효과적으로 불활성이며 (Belteki et al., 2003), 이는 반응을 비가역적으로 만든다. 삽입을 촉매하는 경우, attB-보유 DNA는, attP 부위가 게놈 attB 부위 내로 삽입되는 것보다 더 용이하게 게놈 attP 부위 내로 삽입되는 것으로 밝혀졌다 (Thyagarajan et al., 2001; Belteki et al., 2003). 따라서, 전형적인 전략은 상동 재조합에 의해 attP-보유 "도킹 부위"를 규정된 유전자좌 내로 위치시키며, 이는 이어서 삽입을 위해 attB-보유 유입 서열과 파트너화된다.
본원에 사용된 "내부 리보솜 진입 부위" 또는 "IRES"는 시스트론 (단백질 코딩 영역)의 개시 코돈, 예컨대 ATG로의 직접적인 내부 리보솜 진입을 촉진함으로써 유전자의 캡-비의존적 번역을 발생시키는 요소를 지칭한다. 예를 들어, 문헌 [Jackson et al., 1990. Trends Biochem Sci 15(12):477-83) 및 Jackson and Kaminski. 1995. RNA 1(10):985-1000]을 참조한다. 특정한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 벡터는 1개 이상의 폴리펩티드를 코딩하는 1개 이상의 관심 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 특정한 실시양태에서, 복수의 폴리펩티드 각각의 효율적인 번역을 달성하기 위해, 폴리뉴클레오티드 서열은 1개 이상의 IRES 서열 또는 자기-절단 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 분리될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "코작 서열"은 리보솜의 소형 서브유닛에 대한 mRNA의 초기 결합을 매우 용이하게 하고 번역을 증가시키는 짧은 뉴클레오티드 서열을 지칭한다. 컨센서스 코작 서열은 (GCC)RCCATGG이고, 여기서 R은 퓨린 (A 또는 G)이다 (Kozak, 1986. Cell. 44(2):283-92, 및 Kozak, 1987. Nucleic Acids Res. 15(20):8125-48). 특정한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 벡터는 컨센서스 코작 서열을 갖고 목적하는 폴리펩티드, 예를 들어 CAR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드를 보유하는 세포는 직접 독성 및/또는 비제어된 증식의 위험을 감소시키기 위해 유도성 자살 유전자를 포함한 자살 유전자를 이용한다. 구체적 측면에서, 자살 유전자는 폴리뉴클레오티드 또는 세포를 보유하는 숙주에 대해 면역원성이 아니다. 사용될 수 있는 자살 유전자의 특정 예는 카스파제-9 또는 카스파제-8 또는 시토신 데아미나제이다. 카스파제-9는 특정 이량체화 화학적 유도인자 (CID)를 사용하여 활성화될 수 있다.
특정 실시양태에서, 벡터는 본 개시내용의 면역 이펙터 세포, 예를 들어 T 세포가 생체내 음성 선택에 대해 감수성이도록 하는 유전자 절편을 포함한다. "음성 선택"은 주입된 세포가 개체의 생체내 조건의 변화의 결과로서 제거될 수 있는 것을 의미한다. 음성 선택 표현형은 투여된 작용제, 예를 들어 화합물에 대한 감수성을 부여하는 유전자의 삽입으로부터 생성될 수 있다. 음성 선택 유전자는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 특히 하기를 포함한다: 간시클로비르 감수성을 부여하는 단순 헤르페스 바이러스 유형 I 티미딘 키나제 (HSV-I TK) 유전자 (Wigler et al., Cell 11:223, 1977); 세포 하이포크산틴 포스포리보실트랜스퍼라제 (HPRT) 유전자, 세포 아데닌 포스포리보실트랜스퍼라제 (APRT) 유전자, 및 박테리아 시토신 데아미나제 (Mullen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 89:33 (1992)).
일부 실시양태에서, 유전자 변형된 면역 이펙터 세포, 예컨대 T 세포는 시험관내 음성 선택 표현형의 세포의 선택을 가능하게 하는 양성 마커를 추가로 포함하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 양성 선택 마커는 숙주 세포 내로의 도입 시 유전자를 보유하는 세포의 양성 선택을 허용하는 우성 표현형을 발현하는 유전자일 수 있다. 이러한 유형의 유전자는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 특히 히그로마이신 B에 대한 저항성을 부여하는 히그로마이신-B 포스포트랜스퍼라제 유전자 (hph), 항생제 G418에 대한 저항성을 코딩하는 Tn5로부터의 아미노 글리코시드 포스포트랜스퍼라제 유전자 (neo 또는 aph), 디히드로폴레이트 리덕타제 (DHFR) 유전자, 아데노신 데아미나제 유전자 (ADA), 및 다중-약물 저항성 (MDR) 유전자를 포함한다.
바람직하게는, 양성 선택 마커 및 음성 선택 요소는 음성 선택 요소의 상실이 반드시 또한 양성 선택 마커의 상실을 동반하도록 연결된다. 보다 더 바람직하게는, 양성 및 음성 선택 마커는 하나의 상실이 의무적으로 다른 것의 상실로 이어지도록 융합된다. 발현 생성물로서 상기 기재된 목적하는 양성 및 음성 선택 특색 둘 다를 부여하는 폴리펩티드를 생성하는 융합된 폴리뉴클레오티드의 예는 히그로마이신 포스포트랜스퍼라제 티미딘 키나제 융합 유전자 (HyTK)이다. 이러한 유전자의 발현은 시험관내 양성 선택을 위한 히그로마이신 B 저항성, 및 생체내 음성 선택을 위한 간시클로비르 감수성을 부여하는 폴리펩티드를 생성한다. 문헌 [Lupton S. D., et al., Mol. and Cell. Biology 1 1:3374- 3378, 1991]을 참조한다. 또한, 특정 실시양태에서, 키메라 수용체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 융합된 유전자를 함유하는 레트로바이러스 벡터, 특히 시험관내 양성 선택을 위한 히그로마이신 B 저항성, 및 생체내 음성 선택을 위한 간시클로비르 감수성을 부여하는 것, 예를 들어 상기 문헌 [Lupton, S. D. et al., (1991)]에 기재된 HyTK 레트로바이러스 벡터 내에 존재한다. 또한, 우성 양성 선택 마커를 음성 선택 마커와 융합시키는 것으로부터 유래된 이중기능적 선택 융합 유전자의 사용을 기재한, PCT US91/08442 및 PCT/US94/05601 (S. D. Lupton) 공보를 참조한다.
양성 선택 마커는, 예를 들어 hph, nco 및 gpt로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자로부터 유래될 수 있고, 음성 선택 마커는, 예를 들어 시토신 데아미나제, HSV-I TK, VZV TK, HPRT, APRT 및 gpt로 이루어진 군으로부터 선택된 유전자로부터 유래될 수 있다. 구체적 실시양태에서, 마커는 양성 선택 마커가 hph 또는 neo로부터 유래되고 음성 선택 마커가 시토신 데아미나제 또는 TK 유전자 또는 선택 마커로부터 유래된 것인 이중기능적 선택 융합 유전자이다.
바이러스 벡터
특정한 실시양태에서, 세포 (예를 들어, 면역 이펙터 세포)는 CAR을 코딩하는 레트로바이러스 벡터, 예를 들어 렌티바이러스 벡터로 형질도입된다. 예를 들어, 면역 이펙터 세포는 CD3ζ, CD28, 4-1BB, Ox40, 또는 그의 임의의 조합의 세포내 신호전달 도메인을 갖는, BCMA 폴리펩티드, 예를 들어 인간 BCMA 폴리펩티드에 결합하는 뮤린 항-BCMA 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 CAR을 코딩하는 벡터로 형질도입된다. 대안적으로, 면역 이펙터 세포는 CD3ζ, CD28, 4-1BB, Ox40, 또는 그의 임의의 조합의 세포내 신호전달 도메인을 갖는, 세포외 항원, 예를 들어 종양 항원에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 CAR을 코딩하는 벡터로 형질도입된다. 따라서, 이들 형질도입된 세포는 CAR-매개된 세포독성 반응을 도출할 수 있다.
레트로바이러스는 유전자 전달을 위한 통상적인 도구이다 (Miller, 2000, Nature. 357: 455-460). 특정한 실시양태에서, 레트로바이러스는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 세포에 전달하는 데 사용된다. 본원에 사용된 용어 "레트로바이러스"는 그의 게놈 RNA를 선형 이중-가닥 DNA 카피로 역전사시키고, 후속적으로 그의 게놈 DNA를 숙주 게놈 내로 공유적으로 통합시키는 RNA 바이러스를 지칭한다. 일단 바이러스가 숙주 게놈 내로 통합되면, 이는 "프로바이러스"로 지칭된다. 프로바이러스는 RNA 폴리머라제 II에 대한 주형으로서의 역할을 하고, 새로운 바이러스 입자를 생산하는 데 필요한 구조 단백질 및 효소를 코딩하는 RNA 분자의 발현을 지시한다.
특정한 실시양태에서 사용하기에 적합한 예시적인 레트로바이러스는 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스 (MMuLV), 몰로니 뮤린 육종 바이러스 (MoMSV), 하비 뮤린 육종 바이러스 (HaMuSV), 뮤린 유방 종양 바이러스 (MuMTV), 긴팔원숭이 유인원 백혈병 바이러스 (GaLV), 고양이 백혈병 바이러스 (FLV), 스푸마바이러스, 프렌드 뮤린 백혈병 바이러스, 뮤린 줄기 세포 바이러스 (MSCV) 및 라우스 육종 바이러스 (RSV)) 및 렌티바이러스를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에 사용된 용어 "렌티바이러스"는 복합 레트로바이러스의 군 (또는 속)을 지칭한다. 예시적인 렌티바이러스는 HIV (인간 면역결핍 바이러스; HIV 유형 1, 및 HIV 유형 2 포함); 비스나-매디 바이러스 (VMV) 바이러스; 염소 관절염-뇌염 바이러스 (CAEV); 말 감염성 빈혈 바이러스 (EIAV); 고양이 면역결핍 바이러스 (FIV); 소 면역 결핍 바이러스 (BIV); 및 원숭이 면역결핍 바이러스 (SIV)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 한 실시양태에서, HIV 기반 벡터 백본 (즉, HIV 시스-작용 서열 요소)이 이용된다. 특정한 실시양태에서, 렌티바이러스는 CAR을 포함하는 폴리뉴클레오티드를 세포에 전달하는 데 사용된다.
레트로바이러스 벡터 및 보다 특히 렌티바이러스 벡터는 본원에 개시된 특정한 실시양태를 실시하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 본원에 사용된 용어 "레트로바이러스" 또는 "레트로바이러스 벡터"는 각각 "렌티바이러스" 및 "렌티바이러스 벡터"를 포함하는 것으로 의도된다.
용어 "벡터"는 또 다른 핵산 분자를 전달 또는 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭하는 것으로 본원에 사용된다. 전달된 핵산은 일반적으로 벡터 핵산 분자에 연결, 예를 들어 삽입된다. 벡터는 세포에서 자율 복제를 지시하는 서열을 포함할 수 있거나, 또는 숙주 세포 DNA 내로의 통합을 가능하게 하기에 충분한 서열을 포함할 수 있다. 유용한 벡터는 예를 들어 플라스미드 (예를 들어, DNA 플라스미드 또는 RNA 플라스미드), 트랜스포손, 코스미드, 박테리아 인공 염색체, 및 바이러스 벡터를 포함한다. 유용한 바이러스 벡터는 예를 들어 복제 결함 레트로바이러스 및 렌티바이러스를 포함한다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 바와 같이, 용어 "바이러스 벡터"는 전형적으로 핵산 분자의 전달 또는 세포 게놈 내로의 통합을 용이하게 하는 바이러스-유래 핵산 요소를 포함하는 핵산 분자 (예를 들어, 전달 플라스미드) 또는 핵산 전달을 매개하는 바이러스 입자를 지칭하는 것으로 널리 사용된다. 바이러스 입자는 전형적으로 핵산(들)에 더하여 다양한 바이러스 성분 및 때때로 또한 숙주 세포 성분을 포함할 것이다.
용어 바이러스 벡터는 핵산을 세포 내로 전달할 수 있는 바이러스 또는 바이러스 입자 또는 전달된 핵산 자체를 지칭할 수 있다. 바이러스 벡터 및 전달 플라스미드는 주로 바이러스로부터 유래된 구조적 및/또는 기능적 유전 요소를 함유한다. 용어 "레트로바이러스 벡터"는 주로 레트로바이러스로부터 유래된 구조적 및 기능적 유전적 요소 또는 그의 부분을 함유하는 바이러스 벡터 또는 플라스미드를 지칭한다. 용어 "렌티바이러스 벡터"는 주로 렌티바이러스로부터 유래된 LTR을 비롯한 구조적 및 기능적 유전 요소 또는 그의 부분을 함유하는 바이러스 벡터 또는 플라스미드를 지칭한다. 용어 "하이브리드 벡터"는 레트로바이러스, 예를 들어 렌티바이러스 서열 및 비-렌티바이러스 바이러스 서열 둘 다를 함유하는 벡터, LTR 또는 다른 핵산을 지칭한다. 한 실시양태에서, 하이브리드 벡터는 역전사, 복제, 통합 및/또는 패키징을 위한 레트로바이러스, 예를 들어 렌티바이러스 서열을 포함하는 벡터 또는 전달 플라스미드를 지칭한다.
특정한 실시양태에서, 용어 "렌티바이러스 벡터" 및 "렌티바이러스 발현 벡터"는 렌티바이러스 전달 플라스미드 및/또는 감염성 렌티바이러스 입자를 지칭하는 데 사용될 수 있다. 본원에서 요소, 예컨대 클로닝 부위, 프로모터, 조절 요소, 이종 핵산 등이 언급되는 경우에, 이들 요소의 서열은 본 개시내용의 렌티바이러스 입자에서 RNA 형태로 존재하고, 본 개시내용의 DNA 플라스미드에서 DNA 형태로 존재하는 것으로 이해되어야 한다.
프로바이러스의 각 단부에는 "긴 말단 반복부" 또는 "LTR"로 불리는 구조가 있다. 용어 "긴 말단 반복부 (LTR)"는 그의 천연 서열 맥락에서 직접 반복부이고 U3, R 및 U5 영역을 함유하는, 레트로바이러스 DNA의 단부에 위치하는 염기 쌍의 도메인을 지칭한다. LTR은 일반적으로 레트로바이러스 유전자의 발현 (예를 들어, 유전자 전사체의 촉진, 개시 및 폴리아데닐화) 및 바이러스 복제에 기본적인 기능을 제공한다. LTR은 전사 제어 요소, 폴리아데닐화 신호 및 바이러스 게놈의 복제 및 통합에 필요한 서열을 비롯한 수많은 조절 신호를 함유한다. 바이러스 LTR은 U3, R 및 U5로 불리는 3개의 영역으로 나뉜다. U3 영역은 인핸서 및 프로모터 요소를 함유한다. U5 영역은 프라이머 결합 부위와 R 영역 사이의 서열이고, 폴리아데닐화 서열을 함유한다. R (반복부) 영역은 U3 및 U5 영역에 플랭킹된다. LTR은 U3, R 및 U5 영역으로 구성되고, 바이러스 게놈의 5' 및 3' 단부 둘 다에서 나타난다. 5' LTR에 인접한 것은 게놈의 역전사에 필요한 서열 (tRNA 프라이머 결합 부위) 및 바이러스 RNA의 입자로의 효율적인 패키징에 필요한 서열 (Psi 부위)이다.
본원에 사용된 용어 "패키징 신호" 또는 "패키징 서열"은 바이러스 캡시드 또는 입자 내로의 바이러스 RNA의 삽입에 요구되는 레트로바이러스 게놈 내에 위치한 서열을 지칭한다 (예를 들어, 문헌 [Clever et al., 1995. J. of Virology, Vol. 69, No. 4; pp. 2101-2109] 참조). 여러 레트로바이러스 벡터는 바이러스 게놈의 캡시드화에 필요한 최소 패키징 신호 (또한 psi [Ψ] 서열로도 지칭됨)를 사용한다. 따라서, 본원에 사용된 용어 "패키징 서열", "패키징 신호", "psi" 및 "Ψ"는 바이러스 입자 형성 동안 레트로바이러스 RNA 가닥의 캡시드화에 요구되는 비-코딩 서열과 관련하여 사용된다.
다양한 실시양태에서, 벡터는 변형된 5' LTR 및/또는 3' LTR을 포함한다. LTR 중 어느 하나 또는 둘 다는 1개 이상의 결실, 삽입 또는 치환을 포함하나 이에 제한되지는 않는 1개 이상의 변형을 포함할 수 있다. 3' LTR의 변형은 종종 바이러스를 복제-결함으로 만듦으로써 렌티바이러스 또는 레트로바이러스 시스템의 안전성을 개선시키기 위해 이루어진다. 본원에 사용된 용어 "복제-결함"은 감염성 비리온이 생산되지 않도록 완전하고 효과적인 복제가 가능하지 않은 바이러스를 지칭한다 (예를 들어, 복제-결함 렌티바이러스 자손). 용어 "복제-적격"은 바이러스의 바이러스 복제가 감염성 비리온 (예를 들어, 복제-적격 렌티바이러스 자손)을 생산할 수 있도록 복제가 가능한 야생형 바이러스 또는 돌연변이체 바이러스를 지칭한다.
"자기-불활성화" (SIN) 벡터는 U3 영역으로 공지된 우측 (3') LTR 인핸서-프로모터 영역이 제1 라운드의 바이러스 복제를 넘어 바이러스 전사를 방지하도록 (예를 들어, 결실 또는 치환에 의해) 변형된 복제-결함 벡터, 예를 들어 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터를 지칭한다. 이는 우측 (3') LTR U3 영역이 바이러스 복제 동안 좌측 (5') LTR U3 영역에 대한 주형으로서 사용되고, 따라서 바이러스 전사체가 U3 인핸서-프로모터 없이는 만들어질 수 없기 때문이다. 추가 실시양태에서, 3' LTR은 U5 영역이 예를 들어 이상적인 폴리(A) 서열로 대체되도록 변형된다. LTR에 대한 변형, 예컨대 3' LTR, 5' LTR, 또는 3' 및 5' LTR 둘 다에 대한 변형이 또한 본원에 포함된다는 것을 주목해야 한다.
5' LTR의 U3 영역을 이종 프로모터로 대체하여 바이러스 입자의 생산 동안 바이러스 게놈의 전사를 구동함으로써 추가의 안전성 증진이 제공된다. 사용될 수 있는 이종 프로모터의 예는, 예를 들어 바이러스 원숭이 바이러스 40 (SV40) (예를 들어, 초기 또는 후기), 시토메갈로바이러스 (CMV) (예를 들어, 극초기), 몰로니 뮤린 백혈병 바이러스 (MoMLV), 라우스 육종 바이러스 (RSV), 및 단순 헤르페스 바이러스 (HSV) (티미딘 키나제) 프로모터를 포함한다. 전형적인 프로모터는 Tat-비의존성 방식으로 높은 수준의 전사를 구동할 수 있다. 이러한 대체는 바이러스 생산 시스템에 완전한 U3 서열이 존재하지 않기 때문에 복제-적격 바이러스를 생성하는 재조합의 가능성을 감소시킨다. 특정 실시양태에서, 이종 프로모터는 바이러스 게놈이 전사되는 방식을 제어하는 데 추가의 이점을 갖는다. 예를 들어, 바이러스 게놈의 전부 또는 일부의 전사가 유도 인자가 존재하는 경우에만 발생하도록 이종 프로모터가 유도성일 수 있다. 유도 인자는 1종 이상의 화학적 화합물 또는 생리학적 조건, 예컨대 숙주 세포가 배양되는 온도 또는 pH를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, 바이러스 벡터는 TAR 요소를 포함한다. 용어 "TAR"은 렌티바이러스 (예를 들어, HIV) LTR의 R 영역에 위치한 "트랜스-활성화 반응" 유전 요소를 지칭한다. 이 요소는 렌티바이러스 트랜스-활성화제 (tat) 유전 요소와 상호작용하여 바이러스 복제를 증진시킨다. 그러나, 이 요소는 5' LTR의 U3 영역이 이종 프로모터에 의해 대체되는 실시양태에서는 요구되지 않는다.
"R 영역"은 캡핑 기의 시작 (즉, 전사의 시작)에서 출발하여 폴리 A 트랙의 시작 직전에 끝나는 레트로바이러스 LTR 내의 영역을 지칭한다. R 영역은 또한 U3 및 U5 영역에 플랭킹되는 것으로 정의된다. R 영역은 역전사 동안 게놈의 한 단부로부터 다른 단부로의 신생 DNA의 전달을 허용하는 역할을 한다.
본원에 사용된 용어 "FLAP 요소"는 그의 서열이 레트로바이러스, 예를 들어 HIV-1 또는 HIV-2의 중심 폴리퓨린 트랙 및 중심 종결 서열 (cPPT 및 CTS)을 포함하는 핵산을 지칭한다. 적합한 FLAP 요소는 미국 특허 번호 6,682,907 및 문헌 [Zennou, et al., 2000, Cell, 101:173]에 기재되어 있다. HIV-1 역전사 동안, 중심 폴리퓨린 트랙 (cPPT)에서의 플러스-가닥 DNA의 중심 개시 및 중심 종결 서열 (CTS)에서의 중심 종결은 3-가닥 DNA 구조: HIV-1 중심 DNA 플랩의 형성으로 이어진다. 어떠한 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, DNA 플랩은 렌티바이러스 게놈 핵 유입의 시스-활성 결정인자로서 작용할 수 있고/거나 바이러스의 역가를 증가시킬 수 있다. 특정한 실시양태에서, 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터 백본은 벡터 내의 관심 이종 유전자의 상류 또는 하류에 1개 이상의 FLAP 요소를 포함한다. 예를 들어, 특정한 실시양태에서, 전달 플라스미드는 FLAP 요소를 포함한다. 한 실시양태에서, 벡터는 HIV-1로부터 단리된 FLAP 요소를 포함한다.
한 실시양태에서, 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 전달 벡터는 1개 이상의 유출 요소를 포함한다. 용어 "유출 요소"는 RNA 전사체의 핵으로부터 세포의 세포질로의 수송을 조절하는 시스-작용 전사후 조절 요소를 지칭한다. RNA 유출 요소의 예는 인간 면역결핍 바이러스 (HIV) rev 반응 요소 (RRE) (예를 들어, 문헌 [Cullen et al., 1991. J. Virol. 65: 1053; 및 Cullen et al., 1991. Cell 58: 423] 참조), 및 B형 간염 바이러스 전사후 조절 요소 (HPRE)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일반적으로, RNA 유출 요소는 유전자의 3' UTR 내에 위치하고, 1개 또는 다중 카피로서 삽입될 수 있다.
특정한 실시양태에서, 바이러스 벡터 내의 이종 서열의 발현은 전사후 조절 요소, 효율적인 폴리아데닐화 부위, 및 임의로 전사 종결 신호를 벡터 내로 혼입시키는 것에 의해 증가된다. 다양한 전사후 조절 요소, 예를 들어 우드척 간염 바이러스 전사후 조절 요소 (WPRE; Zufferey et al., 1999, J. Virol., 73:2886); B형 간염 바이러스에 존재하는 전사후 조절 요소 (HPRE) (Huang et al., Mol. Cell. Biol., 5:3864); 등 (Liu et al., 1995, Genes Dev., 9:1766)은 단백질에서 이종 핵산의 발현을 증가시킬 수 있다. 특정한 실시양태에서, 벡터는 전사후 조절 요소, 예컨대 WPRE 또는 HPRE를 포함할 수 있다.
특정한 실시양태에서, 벡터는 전사후 조절 요소 (PTE), 예컨대 WPRE 또는 HPRE가 결여되어 있거나 포함하지 않으며, 이는 일부 경우에 이들 요소가 세포 형질전환의 위험을 증가시키고/거나 mRNA 전사체의 양을 실질적으로 또는 유의하게 증가시키지 않거나 mRNA 안정성을 증가시키지 않기 때문이다. 따라서, 일부 실시양태에서, 벡터는 PTE가 결여되어 있거나 포함하지 않는다. 다른 실시양태에서, 벡터는 추가된 안전 조치로서 WPRE 또는 HPRE가 결여되어 있거나 포함하지 않는다.
이종 핵산 전사체의 효율적인 종결 및 폴리아데닐화를 지시하는 요소는 이종 유전자 발현을 증가시킨다. 전사 종결 신호는 일반적으로 폴리아데닐화 신호의 하류에서 발견된다. 특정한 실시양태에서, 벡터는 발현될 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 3'에 폴리아데닐화 서열을 포함한다. 본원에 사용된 용어 "폴리A 부위" 또는 "폴리A 서열"은 RNA 폴리머라제 II에 의한 신생 RNA 전사체의 종결 및 폴리아데닐화 둘 다를 지시하는 DNA 서열을 나타낸다. 폴리아데닐화 서열은 코딩 서열의 3' 단부에 폴리A 테일을 부가함으로써 mRNA 안정성을 촉진시킬 수 있고, 따라서 증가된 번역 효율에 기여할 수 있다. 폴리 A 테일이 결여된 전사체는 불안정하고 신속하게 분해되기 때문에 재조합 전사체의 효율적인 폴리아데닐화가 바람직하다. 본원의 벡터에 사용될 수 있는 폴리A 신호의 예시적인 예는 이상적인 폴리A 서열 (예를 들어, AATAAA, ATTAAA, AGTAAA), 소 성장 호르몬 폴리A 서열 (BGHpA), 토끼 β-글로빈 폴리A 서열 (rβgpA), 또는 관련 기술분야에 공지된 또 다른 적합한 이종 또는 내인성 폴리A 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터는 1개 이상의 인슐레이터 요소를 추가로 포함한다. 인슐레이터 요소는 게놈 DNA에 존재하는 시스-작용 요소에 의해 매개되어 전달된 서열의 탈조절된 발현으로 이어질 수 있는 통합 부위 효과 (즉, 위치 효과; 예를 들어, 문헌 [Burgess-Beusse et al., 2002, Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 99:16433; 및 Zhan et al., 2001, Hum. Genet., 109:471] 참조)로부터 렌티바이러스-발현된 서열, 예를 들어 치료 폴리펩티드를 보호하는 데 기여할 수 있다. 일부 실시양태에서, 전달 벡터는 3' LTR에 1개 이상의 인슐레이터 요소를 포함하고, 프로바이러스가 숙주 게놈 내로 통합되면, 프로바이러스는 3' LTR을 복제함으로써 둘 다의 5' LTR 또는 3' LTR에 1개 이상의 인슐레이터를 포함한다. 본원에서 사용하기에 적합한 인슐레이터는 닭 β-글로빈 인슐레이터를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다 (문헌 [Chung et al., 1993. Cell 74:505; Chung et al., 1997. PNAS 94:575; 및 Bell et al., 1999. Cell 98:387] 참조, 이는 본원에 참조로 포함됨). 인슐레이터 요소의 예는 β-글로빈 유전자좌로부터의 인슐레이터, 예컨대 닭 HS4를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정의 구체적 실시양태에 따르면, 바이러스 벡터 백본 서열의 대부분 또는 모두는 렌티바이러스, 예를 들어 HIV-1로부터 유래된다. 그러나, 레트로바이러스 및/또는 렌티바이러스 서열의 많은 상이한 공급원이 사용되거나 또는 조합될 수 있고, 특정 렌티바이러스 서열에서의 수많은 치환 및 변경이 본원에 기재된 기능을 수행하는 전달 벡터의 능력을 손상시키지 않으면서 수용될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 다양한 렌티바이러스 벡터가 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 문헌 [Naldini et al., (1996a, 1996b, and 1998); Zufferey et al., (1997); Dull et al., 1998], 미국 특허 번호 6,013,516; 및 5,994,136을 참조하고, 이들 중 다수는 본 개시내용의 바이러스 벡터 또는 전달 플라스미드를 생산하도록 적합화될 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본원에 기재된 벡터는 CAR 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 프로모터를 포함할 수 있다. 벡터는 1개 이상의 LTR을 가질 수 있으며, 여기서 어느 하나의 LTR은 1개 이상의 변형, 예컨대 1개 이상의 뉴클레오티드 치환, 부가 또는 결실을 포함한다. 벡터는 형질도입 효율을 증가시키는 1개 이상의 보조 요소 (예를 들어, cPPT/FLAP), 바이러스 패키징 (예를 들어, Psi (Ψ) 패키징 신호, RRE), 및/또는 치료 유전자 발현을 증가시키는 다른 요소 (예를 들어, 폴리 (A) 서열)를 추가로 포함할 수 있고, WPRE 또는 HPRE를 임의로 포함할 수 있다.
특정한 실시양태에서, 전달 벡터는 좌측 (5') 레트로바이러스 LTR; 중심 폴리퓨린 트랙/DNA 플랩 (cPPT/FLAP); 레트로바이러스 유출 요소; 본원에서 고려되는 CAR 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된, T 세포에서 활성인 프로모터; 및 우측 (3') 레트로바이러스 LTR; 및 임의로 WPRE 또는 HPRE를 포함한다.
특정한 실시양태에서, 전달 벡터는 좌측 (5') 레트로바이러스 LTR; 레트로바이러스 유출 요소; 본원에서 고려되는 CAR 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된, T 세포에서 활성인 프로모터; 우측 (3') 레트로바이러스 LTR; 및 폴리 (A) 서열; 및 임의로 WPRE 또는 HPRE를 포함한다. 또 다른 특정한 실시양태에서, 좌측 (5') LTR; cPPT/FLAP; RRE; 본원에서 고려되는 CAR 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된, T 세포에서 활성인 프로모터; 우측 (3') LTR; 및 폴리아데닐화 서열; 및 임의로 WPRE 또는 HPRE를 포함하는 렌티바이러스 벡터가 본원에 제공된다.
특정 실시양태에서, 좌측 (5') HIV-1 LTR; Psi (Ψ) 패키징 신호; cPPT/FLAP; RRE; 본원에서 고려되는 CAR 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된, T 세포에서 활성인 프로모터; 우측 (3') 자기-불활성화 (SIN) HIV-1 LTR; 및 토끼 β-글로빈 폴리아데닐화 서열; 및 임의로 WPRE 또는 HPRE를 포함하는 렌티바이러스 벡터가 본원에 제공된다.
또 다른 실시양태에서, 적어도 1개의 LTR; 중심 폴리퓨린 트랙/DNA 플랩 (cPPT/FLAP); 레트로바이러스 유출 요소; 및 본원에서 고려되는 CAR 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된, T 세포에서 활성인 프로모터; 및 임의로 WPRE 또는 HPRE를 포함하는 벡터가 본원에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 적어도 1개의 LTR; cPPT/FLAP; RRE; 본원에서 고려되는 CAR 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된, T 세포에서 활성인 프로모터; 및 폴리아데닐화 서열; 및 임의로 WPRE 또는 HPRE를 포함하는 벡터가 본원에 제공된다.
특정 실시양태에서, 적어도 1개의 SIN HIV-1 LTR; Psi (Ψ) 패키징 신호; cPPT/FLAP; RRE; 본원에서 고려되는 CAR 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된, T 세포에서 활성인 프로모터; 및 토끼 β-글로빈 폴리아데닐화 서열; 및 임의로 WPRE 또는 HPRE가 본원에 제공된다.
다양한 실시양태에서, 벡터는 통합 바이러스 벡터이다.
다양한 다른 실시양태에서, 벡터는 에피솜 또는 비-통합 바이러스 벡터이다.
다양한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 벡터는 비-통합 또는 통합 결함 레트로바이러스를 포함한다. 한 실시양태에서, "통합 결함" 레트로바이러스 또는 렌티바이러스는 바이러스 게놈을 숙주 세포의 게놈 내로 통합시키는 능력이 결여된 인테그라제를 갖는 레트로바이러스 또는 렌티바이러스를 지칭한다. 다양한 실시양태에서, 인테그라제 단백질은 그의 인테그라제 활성을 특이적으로 감소시키도록 돌연변이된다. 통합-부적격 렌티바이러스 벡터는 인테그라제 단백질을 코딩하는 pol 유전자를 변형시켜 통합 결핍 인테그라제를 코딩하는 돌연변이된 pol 유전자를 생성함으로써 수득된다. 이러한 통합-부적격 바이러스 벡터는 특허 출원 WO 2006/010834에 기재되어 있으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
인테그라제 활성을 감소시키는 데 적합한 HIV-1 pol 유전자에서의 예시적인 돌연변이는 H12N, H12C, H16C, H16V, S81 R, D41A, K42A, H51A, Q53C, D55V, D64E, D64V, E69A, K71A, E85A, E87A, D116N, D1161, D116A, N120G, N1201, N120E, E152G, E152A, D35E, K156E, K156A, E157A, K159E, K159A, K160A, R166A, D167A, E170A, H171A, K173A, K186Q, K186T, K188T, E198A, R199c, R199T, R199A, D202A, K211A, Q214L, Q216L, Q221 L, W235F, W235E, K236S, K236A, K246A, G247W, D253A, R262A, R263A 및 K264H를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
인테그라제 활성을 감소시키는 데 적합한 HIV-1 pol 유전자에서의 예시적인 돌연변이는 D64E, D64V, E92K, D116N, D1161, D116A, N120G, N1201, N120E, E152G, E152A, D35E, K156E, K156A, E157A, K159E, K159A, W235F, 및 W235E를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정한 실시양태에서, 인테그라제는 아미노산, D64, D116 또는 E152 중 1개 이상에서 돌연변이를 포함한다. 한 실시양태에서, 인테그라제는 아미노산, D64, D116 및 E152에서 돌연변이를 포함한다. 특정한 실시양태에서, 결함있는 HIV-1 인테그라제는 D64V 돌연변이를 포함한다.
"숙주 세포"는 본원에 개시된 재조합 벡터 또는 폴리뉴클레오티드로 생체내, 생체외 또는 시험관내 전기천공, 형질감염, 감염 또는 형질도입되는 세포를 포함한다. 숙주 세포는 패키징 세포, 생산자 세포, 및 바이러스 벡터로 감염된 세포를 포함할 수 있다. 특정한 실시양태에서, 본원에 개시된 바이러스 벡터로 감염된 숙주 세포는 요법을 필요로 하는 대상체에게 투여된다. 특정 실시양태에서, 용어 "표적 세포"는 숙주 세포와 상호교환가능하게 사용되고, 목적하는 세포 유형의 형질감염, 감염 또는 형질도입된 세포를 지칭한다. 특정한 실시양태에서, 표적 세포는 T 세포이다.
대규모 바이러스 입자 생산은 종종 합리적인 바이러스 역가를 달성하기 위해 필요하다. 바이러스 입자는 바이러스 구조 및/또는 보조 유전자, 예를 들어 gag, pol, env, tat, rev, vif, vpr, vpu, vpx, 또는 nef 유전자 또는 다른 레트로바이러스 유전자를 포함하는 패키징 세포주를 전달 벡터로 형질감염시키는 것에 의해 생산된다.
본원에 사용된 용어 "패키징 벡터"는 패키징 신호가 결여되고 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 바이러스 구조 및/또는 보조 유전자를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터 또는 바이러스 벡터를 지칭한다. 전형적으로, 패키징 벡터는 패키징 세포에 포함되고, 형질감염, 형질도입 또는 감염을 통해 세포 내로 도입된다. 형질감염, 형질도입 또는 감염을 위한 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다. 본원에 개시된 레트로바이러스/렌티바이러스 전달 벡터는 형질감염, 형질도입 또는 감염을 통해 패키징 세포주 내로 도입되어 생산자 세포 또는 세포주를 생성할 수 있다. 본원에 개시된 패키징 벡터는, 예를 들어 인산칼슘 형질감염, 리포펙션 또는 전기천공을 포함한 표준 방법에 의해 인간 세포 또는 세포주 내로 도입될 수 있다. 일부 실시양태에서, 패키징 벡터는 우성 선택 마커, 예컨대 네오마이신, 히그로마이신, 퓨로마이신, 블라스토시딘, 제오신, 티미딘 키나제, DHFR, Gln 신테타제 또는 ADA와 함께 세포 내로 도입되고, 이어서 적절한 약물의 존재 하에 선택되고 클론이 단리된다. 선택 마커 유전자는 패키징 벡터에 의한 코딩 유전자에 물리적으로, 예를 들어 IRES 또는 자기-절단 바이러스 펩티드에 의해 연결될 수 있다.
바이러스 외피 단백질 (env)은 세포주로부터 생성된 재조합 레트로바이러스에 의해 궁극적으로 감염 및 형질전환될 수 있는 숙주 세포의 범위를 결정한다. 렌티바이러스, 예컨대 HIV-1, HIV-2, SIV, FIV 및 EIV의 경우에, env 단백질은 gp41 및 gp120을 포함한다. 바람직하게는, 본원에 개시된 패키징 세포에 의해 발현되는 바이러스 env 단백질은 이전에 기재된 바와 같이 바이러스 gag 및 pol 유전자로부터의 개별 벡터 상에 코딩된다.
본원에서 사용될 수 있는 레트로바이러스-유래 env 유전자의 예시적인 예는 MLV 외피, 10A1 외피, BAEV, FeLV-B, RD114, SSAV, 에볼라, 센다이, FPV (가금류 흑사병 바이러스), 및 인플루엔자 바이러스 외피를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 유사하게, RNA 바이러스 (예를 들어, 피코르나비리다에(Picornaviridae), 칼리시비리다에(Caliciviridae), 아스트로비리다에(Astroviridae), 토가비리다에(Togaviridae), 플라비비리다에(Flaviviridae), 코로나비리다에(Coronaviridae), 파라믹소비리다에(Paramyxoviridae), 랍도비리다에(Rhabdoviridae), 필로비리다에(Filoviridae), 오르토믹소비리다에(Orthomyxoviridae), 분야비리다에(Bunyaviridae), 아레나비리다에(Arenaviridae), 레오비리다에(Reoviridae), 비르나비리다에(Birnaviridae), 레트로비리다에(Retroviridae)의 RNA 바이러스 패밀리) 뿐만 아니라 DNA 바이러스 (헤파드나비리다에(Hepadnaviridae), 서코비리다에(Circoviridae), 파르보비리다에(Parvoviridae), 파포바비리다에(Papovaviridae), 아데노비리다에(Adenoviridae), 헤르페스비리다에(Herpesviridae), 폭스비리다에(Poxviridae), 및 이리도비리다에(Iridoviridae) 패밀리)로부터의 외피를 코딩하는 유전자가 이용될 수 있다. 대표적인 예는 FeLV, VEE, HFVW, WDSV, SFV, 광견병, ALV, BIV, BLV, EBV, CAEV, SNV, ChTLV, STLV, MPMV, SMRV, RAV, FuSV, MH2, AEV, AMV, CT10, 및 EIAV를 포함한다.
다른 실시양태에서, 본 개시내용과 관련하여 바이러스를 유사형화하기 위한 외피 단백질은 하기 바이러스로부터의 임의의 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 인플루엔자 A 예컨대 H1N1, H1N2, H3N2 및 H5N1 (조류 플루), 인플루엔자 B, 인플루엔자 C 바이러스, A형 간염 바이러스, B형 간염 바이러스, C형 간염 바이러스, D형 간염 바이러스, E형 간염 바이러스, 로타바이러스, 노워크 바이러스 군의 임의의 바이러스, 장 아데노바이러스, 파르보바이러스, 뎅기열 바이러스, 원숭이 폭스, 모노네가비랄레스, 리사바이러스 예컨대 광견병 바이러스, 라고스 박쥐 바이러스, 모콜라 바이러스, 두벤하게 바이러스, 유럽 박쥐 바이러스 1 & 2 및 오스트레일리안 박쥐 바이러스, 에페메로바이러스, 수포성바이러스, 수포성 구내염 바이러스 (VSV), 헤르페스바이러스 예컨대 단순 헤르페스 바이러스 유형 1 및 2, 수두 대상포진, 시토메갈로바이러스, 엡스타인-바르 바이러스 (EBV), 인간 헤르페스바이러스 (HHV), 인간 헤르페스바이러스 유형 6 및 8, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), 유두종 바이러스, 뮤린 감마헤르페스바이러스, 아레나바이러스 예컨대 아르헨티나 출혈열 바이러스, 볼리비아 출혈열 바이러스, 사비아-연관 출혈열 바이러스, 베네수엘라 출혈열 바이러스, 라사 열 바이러스, 마추포 바이러스, 림프구성 맥락수막염 바이러스 (LCMV), 분야비리다에 예컨대 크림-콩고 출혈열 바이러스, 한타바이러스, 신장 증후군 동반 출혈열 유발 바이러스, 리프트 밸리 열 바이러스, 필로비리다에 (필로바이러스) 예컨대 에볼라 출혈열 및 마르부르크 출혈열, 플라비비리다에 예컨대 키아사누르 삼림병 바이러스, 옴스크 출혈열 바이러스, 진드기-매개 뇌염 유발 바이러스 및 파라믹소비리다에 예컨대 헨드라 바이러스 및 니파 바이러스, 대두창 및 소두창 (천연두), 알파바이러스 예컨대 베네수엘라 말 뇌염 바이러스, 동부 말 뇌염 바이러스, 서부 말 뇌염 바이러스, SARS-연관 코로나바이러스 (SARS-CoV), 웨스트 나일 바이러스, 및 임의의 뇌염 유발 바이러스.
한 실시양태에서, VSV-G 당단백질로 유사형화된 재조합 레트로바이러스, 예를 들어, 렌티바이러스를 생산하는 패키징 세포가 본원에 제공된다.
본원에 사용된 용어 "유사형" 또는 "유사형화"는 바이러스 외피 단백질이 바람직한 특징을 보유하는 또 다른 바이러스의 것으로 치환된 바이러스를 지칭한다. 예를 들어, HIV는 HIV 외피 단백질 (env 유전자에 의해 코딩됨)이 정상적으로는 바이러스를 CD4+ 제시 세포로 표적화하기 때문에, HIV가 보다 광범위한 세포를 감염시키는 것을 가능하게 하는, 수포성 구내염 바이러스 G-단백질 (VSV-G) 외피 단백질로 유사형화될 수 있다. 한 실시양태에서, 렌티바이러스 외피 단백질은 VSV-G로 유사형화된다. 한 실시양태에서, VSV-G 외피 당단백질로 유사형화된 재조합 레트로바이러스, 예를 들어, 렌티바이러스를 생산하는 패키징 세포가 본원에 제공된다.
본원에 사용된 용어 "패키징 세포주"는 패키징 신호를 함유하지 않지만, 바이러스 입자의 정확한 패키징에 필요한 바이러스 구조 단백질 및 복제 효소 (예를 들어, gag, pol 및 env)를 안정하게 또는 일시적으로 발현하는 세포주를 언급하는 데 사용된다. 임의의 적합한 세포주가 본 개시내용과 관련하여 패키징 세포를 제조하는 데 사용될 수 있다. 일반적으로, 세포는 포유동물 세포이다. 특정한 실시양태에서, 패키징 세포주를 생산하는 데 사용되는 세포는 인간 세포이다. 사용될 수 있는 적합한 세포주는, 예를 들어 CHO 세포, BHK 세포, MDCK 세포, C3H 10T1/2 세포, FLY 세포, Psi-2 세포, BOSC 23 세포, PA317 세포, WEHI 세포, COS 세포, BSC 1 세포, BSC 40 세포, BMT 10 세포, VERO 세포, W138 세포, MRC5 세포, A549 세포, HT1080 세포, 293 세포, 293T 세포, B-50 세포, 3T3 세포, NIH3T3 세포, HepG2 세포, Saos-2 세포, Huh7 세포, HeLa 세포, W163 세포, 211 세포, 및 211A 세포를 포함한다. 구체적 실시양태에서, 패키징 세포는 293 세포, 293T 세포, 또는 A549 세포이다. 또 다른 구체적 실시양태에서, 세포는 A549 세포이다.
본원에 사용된 용어 "생산자 세포주"는 패키징 세포주 및 패키징 신호를 포함하는 전달 벡터 구축물을 포함하는, 재조합 레트로바이러스 입자를 생산할 수 있는 세포주를 지칭한다. 감염성 바이러스 입자 및 바이러스 원액의 생산은 통상적인 기술을 사용하여 수행할 수 있다. 바이러스 원액의 제조 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들어 문헌 [Y. Soneoka et al., (1995) Nucl. Acids Res. 23:628-633, 및 N. R. Landau et al., (1992) J. Virol. 66:5110-5113]에 예시되어 있다. 감염성 바이러스 입자는 통상적인 기술을 사용하여 패키징 세포로부터 수집될 수 있다. 예를 들어, 감염성 입자는 관련 기술분야에 공지된 바와 같이 세포 용해, 또는 세포 배양물의 상청액의 수집에 의해 수집될 수 있다. 임의로, 수집된 바이러스 입자는 원하는 경우에 정제될 수 있다. 적합한 정제 기술은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있다.
형질감염에 의하는 것보다는 바이러스 감염에 의한, 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터를 사용한 유전자(들) 또는 다른 폴리뉴클레오티드 서열의 전달은 "형질도입"으로 지칭된다. 한 실시양태에서, 레트로바이러스 벡터는 감염 및 프로바이러스 통합을 통해 세포 내로 형질도입된다. 특정 실시양태에서, 표적 세포, 예를 들어 T 세포는 바이러스 또는 레트로바이러스 벡터를 사용한 감염에 의해 세포에 전달된 유전자 또는 다른 폴리뉴클레오티드 서열을 포함하는 경우에 "형질도입된다". 특정한 실시양태에서, 형질도입된 세포는 그의 세포 게놈 내에 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터에 의해 전달된 1종 이상의 유전자 또는 다른 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다.
특정한 실시양태에서, 1종 이상의 폴리펩티드를 발현하는 본원에 개시된 바와 같은 바이러스 벡터로 형질도입된 숙주 세포는 B 세포 악성종양을 치료 및/또는 예방하기 위해 대상체에게 투여된다. 본원의 특정 실시양태에 따라 이용될 수 있는, 유전자 요법에서의 바이러스 벡터의 사용에 관한 다른 방법은, 예를 들어 문헌 [Kay, M. A. (1997) Chest 111(6 Supp.):138S-142S; Ferry, N. and Heard, J. M. (1998) Hum. Gene Ther. 9:1975-81; Shiratory, Y. et al., (1999) Liver 19:265-74; Oka, K. et al., (2000) Curr. Opin. Lipidol. 11:179-86; Thule, P. M. and Liu, J. M. (2000) Gene Ther. 7:1744-52; Yang, N. S. (1992) Crit. Rev. Biotechnol. 12:335-56; Alt, M. (1995) J. Hepatol. 23:746-58; Brody, S. L. and Crystal, R. G. (1994) Ann. N.Y. Acad. Sci. 716:90-101; Strayer, D. S. (1999) Expert Opin. Investig. Drugs 8:2159-2172; Smith-Arica, J. R. and Bartlett, J. S. (2001) Curr. Cardiol. Rep. 3:43-49; 및 Lee, H. C. et al., (2000) Nature 408:483-8]에서 찾아볼 수 있다.
6.7. 유전자 변형된 세포
특정한 실시양태에서, 종양 또는 암의 치료에 사용하기 위한, 본원에서 고려되는 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 세포가 본원에 개시된다. 특정한 실시양태에서, B 세포 관련 상태의 치료에 사용하기 위한, 본원에서 고려되는 CAR을 발현하도록 유전자 변형된 세포가 본원에 개시된다. 본원에 사용된 용어 "유전자 조작된" 또는 "유전자 변형된"은 세포 내의 총 유전 물질 내로의 DNA 또는 RNA 형태의 여분의 유전 물질의 부가를 지칭한다. 용어 "유전자 변형된 세포", "변형된 세포" 및 "재지시된 세포"는 상호교환가능하게 사용된다. 본원에 사용된 용어 "유전자 요법"은 유전자의 발현을 복원, 교정 또는 변형시키는, 또는 치료 폴리펩티드, 예를 들어 CAR을 발현시키기 위한 목적으로의, 세포 내의 총 유전 물질 내로의 DNA 또는 RNA 형태의 여분의 유전 물질의 도입을 지칭한다.
특정한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR은 특이성을 관심 표적 항원, 예를 들어 BCMA 폴리펩티드로 재지시하도록 면역 이펙터 세포에 도입되고 면역 이펙터 세포에서 발현된다. "면역 이펙터 세포"는 1종 이상의 이펙터 기능 (예를 들어, 세포독성 세포 사멸 활성, 시토카인 분비, ADCC 및/또는 CDC 유도)을 갖는 면역계의 임의의 세포이다.
본 개시내용의 면역 이펙터 세포는 자가/자발 ("자기") 또는 비-자가 ("비-자기", 예를 들어 동종, 동계 또는 이종)일 수 있다.
본원에 사용된 "자가"는 동일한 대상체로부터의 세포를 지칭한다.
본원에 사용된 "동종"은 비교 시 세포와 유전적으로 상이한, 동일한 종의 세포를 지칭한다.
본원에 사용된 "동계"는 비교 시 세포와 유전적으로 동일한, 상이한 대상체의 세포를 지칭한다.
본원에 사용된 "이종"은 비교 시 세포에 대해 상이한 종의 세포를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 본 개시내용의 세포는 동종이다.
본원에서 고려되는 CAR과 함께 사용되는 예시적인 면역 이펙터 세포는 T 림프구를 포함한다. 용어 "T 세포" 또는 "T 림프구"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 흉선세포, 미성숙 T 림프구, 성숙 T 림프구, 휴지 T 림프구, 또는 활성화된 T 림프구를 포함하는 것으로 의도된다. T 세포는 T 헬퍼 (Th) 세포, 예를 들어 T 헬퍼 1 (Th1) 또는 T 헬퍼 2 (Th2) 세포일 수 있다. T 세포는 헬퍼 T 세포 (HTL; CD4+ T 세포), CD4+ T 세포, 세포독성 T 세포 (CTL; CD8+ T 세포), CD4+CD8+ T 세포, CD4-CD8- T 세포, 또는 T 세포의 임의의 다른 하위세트일 수 있다. 특정한 실시양태에서 사용하기에 적합한 T 세포의 다른 예시적인 집단은 나이브 T 세포 및 기억 T 세포를 포함한다.
통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 다른 세포가 또한 본원에 기재된 바와 같은 CAR을 갖는 면역 이펙터 세포로서 사용될 수 있다. 특히, 면역 이펙터 세포는 또한 NK 세포, NKT 세포, 호중구 및 대식세포를 포함한다. 면역 이펙터 세포는 또한 이펙터 세포의 전구세포를 포함하며, 여기서 이러한 전구 세포는 생체내 또는 시험관내에서 면역 이펙터 세포로 분화되도록 유도될 수 있다. 따라서, 특정한 실시양태에서, 면역 이펙터 세포는 대상체에서 투여 시 성숙한 면역 이펙터 세포로 분화하거나 또는 시험관내에서 성숙한 면역 이펙터 세포로 분화하도록 유도될 수 있는, 제대혈, 골수 또는 가동화된 말초 혈액으로부터 유래된 CD34+ 세포 집단 내에 함유된 면역 이펙터 세포, 예컨대 조혈 줄기 세포 (HSC)의 전구세포를 포함한다.
본원에 사용된 BCMA-특이적 CAR을 함유하도록 유전자 조작된 면역 이펙터 세포는 "BCMA-특이적 재지시된 면역 이펙터 세포"로 지칭될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "CD34+ 세포"는 그의 세포 표면 상에 CD34 단백질을 발현하는 세포를 지칭한다. 본원에 사용된 "CD34"는 종종 세포-세포 부착 인자로서 작용하고 림프절 내로의 T 세포 진입에 수반되는 세포 표면 당단백질 (예를 들어, 시알로뮤신 단백질)을 지칭한다. CD34+ 세포 집단은 조혈 줄기 세포 (HSC)를 함유하며, 이는 환자에게 투여 시 분화하고, T 세포, NK 세포, NKT 세포, 호중구 및 단핵구/대식세포 계통의 세포를 비롯한 모든 조혈 계통에 기여한다.
특정 실시양태에서, 본원에서 고려되는 CAR을 발현하는 면역 이펙터 세포를 제조하는 방법이 본원에 제공된다. 한 실시양태에서, 방법은 면역 이펙터 세포가 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 CAR을 발현하도록 개체로부터 단리된 면역 이펙터 세포를 형질감염 또는 형질도입하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 면역 이펙터 세포는 개체로부터 단리되고, 시험관내에서 추가의 조작 없이 유전자 변형된다. 이어서, 이러한 세포는 개체 내로 직접 재투여될 수 있다. 추가 실시양태에서, 면역 이펙터 세포는 CAR을 발현하도록 유전자 변형되기 전에 시험관내에서 증식하도록 먼저 활성화되고 자극된다. 이와 관련하여, 면역 이펙터 세포는 유전자 변형 (즉, 본원에서 고려되는 CAR을 발현하도록 형질도입 또는 형질감염)되기 전 및/또는 후에 배양될 수 있다.
특정한 실시양태에서, 본원에 기재된 면역 이펙터 세포의 시험관내 조작 또는 유전자 변형 전에, 세포의 공급원은 대상체로부터 수득된다. 특정한 실시양태에서, CAR-변형된 면역 이펙터 세포는 T 세포를 포함한다. T 세포는 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직 및 종양을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 공급원으로부터 수득될 수 있다. 특정 실시양태에서, T 세포는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 수의 기술, 예컨대 침강, 예를 들어 피콜(FICOLL)™ 분리를 사용하여 대상체로부터 수집된 단위 혈액으로부터 수득될 수 있다. 한 실시양태에서, 개체의 순환 혈액으로부터의 세포는 분리반출술에 의해 수득된다. 분리반출술 생성물은 전형적으로 림프구, 예컨대 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 다른 유핵 백혈구, 적혈구 및 혈소판을 함유한다. 한 실시양태에서, 분리반출술에 의해 수집된 세포를 세척하여 혈장 분획을 제거하고, 후속 프로세싱을 위해 세포를 적절한 완충제 또는 배지에 넣을 수 있다. 세포는 PBS, 또는 칼슘, 마그네슘, 및 전부는 아니지만 대부분의 2가 양이온이 결여된 또 다른 적합한 용액으로 세척될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, 세척 단계는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해, 예컨대 반자동화 관통형 원심분리를 사용하는 것에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 코브(Cobe) 2991 세포 프로세서, 백스터 시토메이트(Baxter CytoMate) 등. 세척 후에, 세포는 다양한 생체적합성 완충제, 또는 완충제의 존재 또는 부재 하의 다른 염수 용액 중에 재현탁될 수 있다. 특정 실시양태에서, 분리반출술 샘플의 바람직하지 않은 성분은 직접적으로 재현탁된 세포 배양 배지에서 제거될 수 있다.
특정 실시양태에서, T 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)로부터 적혈구를 용해시키고, 예를 들어 퍼콜(PERCOLL)™ 구배를 통한 원심분리에 의해 단핵구를 고갈시킴으로써 단리된다. 하기 마커: CD3, CD28, CD4, CD8, CD45RA, 및 CD45RO 중 1종 이상을 발현하는 T 세포의 특이적 하위집단은 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리될 수 있다. 한 실시양태에서, CD3, CD28, CD4, CD8, CD45RA, 및 CD45RO를 발현하는 T 세포의 특이적 하위집단은 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리된다. 예를 들어, 음성 선택에 의한 T 세포 집단의 풍부화는 음성 선택된 세포에 고유한 표면 마커에 대해 지시된 항체의 조합을 사용하여 달성될 수 있다. 본원에서 사용하기 위한 한 방법은 음성 선택된 세포 상에 존재하는 세포 표면 마커에 대해 지시된 모노클로날 항체의 칵테일을 사용하는 음성 자기 면역부착 또는 유동 세포측정법을 통한 세포 분류 및/또는 선택이다. 예를 들어, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포를 풍부화하기 위해, 모노클로날 항체 칵테일은 전형적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 유동 세포측정법 및 세포 분류는 또한 본 개시내용에 따라 사용하기 위한 관심 세포 집단을 단리하는 데 사용될 수 있다.
PBMC는 본원에서 고려되는 방법을 사용하여 CAR을 발현하도록 직접적으로 유전자 변형될 수 있다. 특정 실시양태에서, PBMC의 단리 후에, T 림프구가 추가로 단리되고, 특정 실시양태에서, 세포독성 및 헬퍼 T 림프구 둘 다는 유전자 변형 및/또는 확장 전 또는 후에 나이브, 기억 및 이펙터 T 세포 하위집단으로 분류될 수 있다.
CD8+ 세포는 표준 방법을 사용하여 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, CD8+ 세포는 CD8+ 세포의 각각의 유형과 연관된 세포 표면 항원을 확인하는 것에 의해 나이브, 중심 기억 및 이펙터 세포로 추가로 분류된다.
특정 실시양태에서, 나이브 CD8+ T 림프구는 CD62L, CCR7, CD28, CD3, CD127 및 CD45RA를 비롯한 나이브 T 세포의 표현형 마커의 발현을 특징으로 한다.
특정한 실시양태에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 하위세트 둘 다에 존재한다. PBMC는 항-CD8 및 항-CD62L 항체로의 염색 후에 CD62L-CD8+ 및 CD62L+CD8+ 분획으로 분류된다. 일부 실시양태에서, 중심 기억 T 세포의 표현형 마커의 발현은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3, 및 CD127을 포함하고, 그랜자임 B에 대해 음성이다. 일부 실시양태에서, 중심 기억 T 세포는 CD45RO+, CD62L+, CD8+ T 세포이다.
일부 실시양태에서, 이펙터 T 세포는 CD62L, CCR7, CD28 및 CD127에 대해 음성이고, 그랜자임 B 및 퍼포린에 대해 양성이다.
특정 실시양태에서, CD4+ T 세포는 하위집단으로 추가로 분류된다. 예를 들어, CD4+ T 헬퍼 세포는 세포 표면 항원을 갖는 세포 집단을 확인하는 것에 의해 나이브, 중심 기억, 및 이펙터 세포로 분류될 수 있다. CD4+ 림프구는 표준 방법에 의해 수득될 수 있다. 일부 실시양태에서, 나이브 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+ CD4+ T 세포이다. 일부 실시양태에서, 중심 기억 CD4+ 세포는 CD62L 양성 및 CD45RO 양성이다. 일부 실시양태에서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD62L 및 CD45RO 음성이다.
면역 이펙터 세포, 예컨대 T 세포는 공지된 방법을 사용한 단리 후에 유전자 변형될 수 있거나, 또는 면역 이펙터 세포는 유전자 변형되기 전에 시험관내에서 활성화 및 확장 (또는 전구세포의 경우에 분화)될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 면역 이펙터 세포, 예컨대 T 세포는 본원에서 고려되는 키메라 항원 수용체로 유전자 변형되고 (예를 들어, CAR을 코딩하는 핵산을 포함하는 바이러스 벡터로 형질도입됨), 이어서 시험관내 활성화 및 확장된다. 다양한 실시양태에서, T 세포는 CAR을 발현하는 유전자 변형 전 또는 후에, 예를 들어 미국 특허 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 6,867,041; 및 미국 특허 출원 공개 번호 20060121005에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 활성화 및 확장될 수 있다.
일반적으로, T 세포는 CD3 TCR 복합체 연관 신호를 자극하는 작용제 및 T 세포의 표면 상의 공동-자극 분자를 자극하는 리간드가 부착된 표면과의 접촉에 의해 확장된다. T 세포 집단은 표면 상에 고정된 항-CD3 항체 또는 그의 항원-결합 단편 또는 항-CD2 항체와의 접촉에 의해, 또는 칼슘 이오노포어와 함께 단백질 키나제 C 활성화제 (예를 들어, 브리오스타틴)와의 접촉에 의해 자극될 수 있다. T 세포의 표면 상의 보조 분자의 공동-자극이 또한 고려된다.
특정한 실시양태에서, PBMC 또는 단리된 T 세포는 적절한 시토카인, 예컨대 IL-2, IL-7, 및/또는 IL-15가 존재하는 배양 배지에서, 일반적으로 비드 또는 다른 표면에 부착된 자극제 및 공동자극제, 예컨대 항-CD3 및 항-CD28 항체와 접촉된다. CD4+ T 세포 또는 CD8+ T 세포의 증식을 자극하기 위해, 항-CD3 항체 및 항-CD28 항체. 항-CD28 항체의 예는 9.3, B-T3, XR-CD28 (디아시온(Diacione), 프랑스 베산콘)을 포함하고, 관련 기술분야에 통상적으로 공지된 다른 방법이 사용될 수 있다 (Berg et al., Transplant Proc. 30(8):3975-3977, 1998; Haanen et al., J. Exp. Med. 190(9): 13191328, 1999; Garland et al., J. Immunol Meth. 227(1 -2):53-63, 1999). 동일한 비드에 부착된 항-CD3 및 항-CD28 항체는 "대용물" 항원 제시 세포 (APC)로서의 역할을 한다. 다른 실시양태에서, T 세포는 US6040177; US5827642; 및 WO2012129514에 기재된 것과 같은 방법을 사용하여 피더 세포 및 적절한 항체 및 시토카인으로 활성화되고, 증식하도록 자극될 수 있다.
다른 실시양태에서, 인공 APC (aAPC)는 다양한 공동-자극 분자 및 시토카인의 안정한 발현 및 분비를 지시하도록 K562, U937, 721.221, T2, 및 C1R 세포를 조작하는 것에 의해 제조된다. 특정한 실시양태에서, AAPC 세포 표면 상에 1종 이상의 항체-기반 자극 분자의 디스플레이를 지시하는 데 K32 또는 U32 aAPC가 사용된다. aAPC 상에서의 유전자의 다양한 조합의 발현은 인간 T-세포 활성화 요건의 정확한 결정을 가능하게 하여, aAPC가 특이적 성장 요건 및 별개의 기능을 갖는 T-세포 하위세트의 최적 증식을 위해 조정될 수 있게 한다. aAPC는 천연 APC의 사용과 대조적으로, 외인성 시토카인의 첨가를 필요로 하지 않으면서 기능적 인간 CD8 T 세포의 생체외 성장 및 장기간 확장을 지지한다. T 세포의 집단은 CD137L (4-1BBL), CD134L (OX40L), 및/또는 CD80 또는 CD86을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 공동자극 분자를 발현하는 aAPC에 의해 확장될 수 있다. 마지막으로, aAPC는 유전자 변형된 T 세포를 확장시키고 CD8 T 세포 상에서 CD28 발현을 유지시키기 위한 효율적인 플랫폼을 제공한다. WO 03/057171 및 US2003/0147869에 제공된 aAPC는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
한 실시양태에서, CD34+ 세포는 본 개시내용에 따른 핵산 구축물로 형질도입된다. 특정 실시양태에서, 형질도입된 CD34+ 세포는 대상체, 일반적으로 세포가 원래 단리된 대상체 내로의 투여 후에 생체내에서 성숙 면역 이펙터 세포로 분화한다. 또 다른 실시양태에서, CD34+ 세포는 본원에 기재된 바와 같은 CAR에의 노출 전 또는 CAR로의 유전자 변형 후에, 이전에 기재된 방법 (Asheuer et al., 2004, PNAS 101(10):3557-3562; Imren, et al., 2004)에 따라 하기 시토카인: Flt-3 리간드 (FLT3), 줄기 세포 인자 (SCF), 거핵구 성장 및 분화 인자 (TPO), IL-3 및 IL-6 중 1종 이상으로 시험관내 자극될 수 있다.
특정 실시양태에서, 종양 또는 암의 치료를 위한 변형된 면역 이펙터 세포의 집단이 본원에 제공되며, 변형된 면역 이펙터 세포는 본원에 개시된 바와 같은 CAR을 포함한다. 예를 들어, 변형된 면역 이펙터 세포의 집단은 본원에 기재된 B 세포 악성종양으로 진단된 환자 (자가 공여자)로부터 수득된 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)로부터 제조된다. PBMC는 CD4+, CD8+, 또는 CD4+ 및 CD8+일 수 있는 T 림프구의 이종 집단을 형성한다.
PBMC는 또한 다른 세포독성 림프구, 예컨대 NK 세포 또는 NKT 세포를 포함할 수 있다. 본원에서 고려되는 CAR의 코딩 서열을 보유하는 발현 벡터는 인간 공여자 T 세포, NK 세포 또는 NKT 세포의 집단 내로 도입될 수 있다. 발현 벡터를 보유하는 성공적으로 형질도입된 T 세포는 CD3 양성 T 세포를 단리하기 위해 유동 세포측정법을 사용하여 분류될 수 있고, 이어서 항-CD3 항체 및 또는 항-CD28 항체 및 IL-2 또는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 방법을 사용한 세포 활성화에 더하여 이들 CAR 단백질 발현 T 세포의 수를 증가시키기 위해 추가로 증식될 수 있다. 인간 대상체에서의 사용을 위한 저장 및/또는 제조를 위해 CAR 단백질 T 세포를 발현하는 T 세포를 동결보존하기 위해 표준 절차가 사용된다. 한 실시양태에서, T 세포의 시험관내 형질도입, 배양 및/또는 확장은 비-인간 동물 유래 생성물, 예컨대 태아 소 혈청 및 소 태아 혈청의 부재 하에 수행된다. PBMC의 불균질 집단이 유전자 변형되기 때문에, 생성된 형질도입된 세포는 본원에서 고려되는 바와 같은 CAR (예를 들어, BCMA 표적화 CAR)을 포함하는 변형된 세포의 불균질 집단이다.
추가 실시양태에서, 예를 들어 1, 2, 3, 4, 5종 또는 그 초과의 상이한 발현 벡터의 혼합물이 면역 이펙터 세포의 공여자 집단을 유전자 변형시키는 데 사용될 수 있으며, 여기서 각각의 벡터는 본원에서 고려되는 바와 같은 상이한 키메라 항원 수용체 단백질을 코딩한다. 생성된 변형된 면역 이펙터 세포는 변형된 세포의 혼합 집단을 형성하며, 변형된 세포 중 소정 비율은 1종 초과의 상이한 CAR 단백질을 발현한다.
한 실시양태에서, BCMA 단백질을 표적화하는 유전자 변형된 뮤린, 인간 또는 인간화 CAR 단백질 발현 면역 이펙터 세포를 저장하는 방법이 본원에 제공되며, 이는 세포가 해동 시 생존가능하게 유지되도록 면역 이펙터 세포를 동결보존하는 것을 포함한다. CAR 단백질을 발현하는 면역 이펙터 세포의 분획은 종양 또는 암 또는 B 세포 관련 상태를 앓는 환자의 향후 치료를 위한 이러한 세포의 영구적 공급원을 제공하기 위해 관련 기술분야에 공지된 방법에 의해 동결보존될 수 있다. 필요한 경우에, 동결보존된 형질전환된 면역 이펙터 세포는 보다 많은 이러한 세포를 위해 해동, 성장, 및 확장될 수 있다.
본원에 사용된 "동결보존"은 영하 온도, 예컨대 (전형적으로) 77 K 또는 -196℃ (액체 질소의 비점)로 냉각시킴으로써 세포를 보존하는 것을 지칭한다. 동결보호제는 종종 보존하고자 하는 세포가 저온에서의 동결 또는 실온으로의 가온으로 인해 손상되는 것을 방지하기 위해 영하의 온도에서 사용된다. 동결보존제 및 최적의 냉각 속도는 세포 손상으로부터 보호할 수 있다. 사용될 수 있는 동결보호제는 디메틸 술폭시드 (DMSO) (Lovelock and Bishop, Nature, 1959; 183: 1394-1395; Ashwood-Smith, Nature, 1961; 190: 1204-1205), 글리세롤, 폴리비닐피롤리돈 (Rinfret, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1960; 85: 576), 및 폴리에틸렌 글리콜 (Sloviter and Ravdin, Nature, 1962; 196: 48)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 냉각 속도는 1℃/분 내지 3℃/분이다. 적어도 2시간 후에, T 세포는 -80℃의 온도에 도달하며, 예컨대 장기 극저온 저장 용기에서의 영구 저장을 위해 액체 질소 (-196℃) 내에 직접 넣을 수 있다.
6.8. T 세포 제조 공정
본원에서 고려되는 방법에 의해 제조된 T 세포는 개선된 입양 면역요법 조성물을 제공한다. 어떠한 특정한 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 본원에서 고려되는 방법에 의해 제조된 T 세포 조성물은 증가된 생존, 분화의 상대적 부재 하의 확장, 및 생체내 지속성을 포함한 우수한 특성을 갖는 것으로 여겨진다. 한 실시양태에서, T 세포를 제조하는 방법은 세포를 PI3K 세포 신호전달 경로를 조정하는 1종 이상의 작용제와 접촉시키는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, T 세포를 제조하는 방법은 세포를 PI3K/Akt/mTOR 세포 신호전달 경로를 조정하는 1종 이상의 작용제와 접촉시키는 것을 포함한다. 다양한 실시양태에서, T 세포는 임의의 공급원으로부터 수득될 수 있고, 제조 공정의 활성화 및/또는 확장 단계 동안 작용제와 접촉될 수 있다. 생성된 T 세포 조성물은, 증식 및 하기 바이오마커: CD62L, CCR7, CD28, CD27, CD122, CD127, CD197 및 CD38 중 1종 이상의 발현 능력을 갖는 발생상 강력한 T 세포로 풍부화된다. 한 실시양태에서, 1종 이상의 PI3K 억제제로 처리된 T 세포를 포함하는 세포의 집단은 하기 바이오마커: CD62L, CD127, CD197 및 CD38 중 1종 이상 또는 모두를 공동-발현하는 CD8+ T 세포의 집단에 대해 풍부화된다.
한 실시양태에서, 유지되는 수준의 증식 및 감소된 분화를 포함하는 변형된 T 세포가 제조된다. 특정한 실시양태에서, T 세포는 1종 이상의 자극 신호 및 PI3K 세포 신호전달 경로의 억제제인 작용제의 존재 하에 T 세포를 활성화되고 증식되도록 자극하는 것에 의해 제조된다.
이어서, T 세포는 CAR (예를 들어, BCMA 표적화 CAR)을 발현하도록 변형될 수 있다. 한 실시양태에서, T 세포는 T 세포를 본원에서 고려되는 CAR (예를 들어, 항-BCMA CAR)을 포함하는 바이러스 벡터로 형질도입하는 것에 의해 변형된다. 특정 실시양태에서, T 세포는 PI3K 세포 신호전달 경로의 억제제의 존재 하에 자극 및 활성화 전에 변형된다. 또 다른 실시양태에서, T 세포는 PI3K 세포 신호전달 경로의 억제제의 존재 하에 자극 및 활성화 후에 변형된다. 특정한 실시양태에서, T 세포는 PI3K 세포 신호전달 경로의 억제제의 존재 하에 자극 및 활성화의 12시간, 24시간, 36시간 또는 48시간 내에 변형된다.
T 세포가 활성화된 후, 세포는 증식되도록 배양된다. T 세포는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일, 적어도 2주, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개월 또는 그 초과 동안 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10회 또는 그 초과의 라운드의 확장으로 배양될 수 있다.
다양한 실시양태에서, T 세포 조성물은 PI3K 경로의 1종 이상의 억제제의 존재 하에 제조된다. 억제제는 경로에서의 1종 이상의 활성 또는 단일 활성을 표적화할 수 있다. 어떠한 특정한 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 제조 공정의 자극, 활성화 및/또는 확장 단계 동안 T 세포를 PI3K 경로의 1종 이상의 억제제로 처리하거나 또는 그와 접촉시키는 것은 어린 T 세포를 우선적으로 증가시켜, 이에 의해 우수한 치료 T 세포 조성물이 생산되는 것으로 고려된다.
특정한 실시양태에서, 조작된 T 세포 수용체를 발현하는 T 세포의 증식을 증가시키는 방법이 제공된다. 이러한 방법은, 예를 들어 대상체로부터 T 세포의 공급원을 수거하고, T 세포를 PI3K 경로의 1종 이상의 억제제의 존재 하에 자극 및 활성화시키고, T 세포가 CAR (예를 들어, 항-BCMA CAR, 보다 특히 항-BCMA02 CAR)을 발현하도록 변형시키고, 배양물에서 T 세포를 확장시키는 것을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 하기 바이오마커: CD62L, CCR7, CD28, CD27, CD122, CD127, CD197 및 CD38 중 1종 이상의 발현에 대해 풍부화된 T 세포의 집단을 생산하는 방법. 한 실시양태에서, 어린 T 세포는 하기 생물학적 마커: CD62L, CD127, CD197 및 CD38 중 1종 이상 또는 모두를 포함한다. 한 실시양태에서, CD57, CD244, CD160, PD-1, CTLA4, TIM3, 및 LAG3의 발현이 결여된 어린 T 세포가 제공된다. 본원의 다른 곳에서 논의된 바와 같이, 어린 T 세포 바이오마커의 발현 수준은 보다 분화된 T 세포 또는 면역 이펙터 세포 집단에서의 이러한 마커의 발현 수준에 대해 상대적이다.
한 실시양태에서, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)는 본원에서 고려되는 T 세포 제조 방법에서 T 세포의 공급원으로서 사용된다. PBMC는 CD4+, CD8+, 또는 CD4+ 및 CD8+일 수 있고 다른 단핵 세포, 예컨대 단핵구, B 세포, NK 세포 및 NKT 세포를 포함할 수 있는 T 림프구의 이종 집단을 형성한다. 본원에서 고려되는 조작된 TCR 또는 CAR을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현 벡터는 인간 공여자 T 세포, NK 세포 또는 NKT 세포의 집단 내로 도입될 수 있다. 발현 벡터를 보유하는 성공적으로 형질도입된 T 세포는 CD3 양성 T 세포를 단리하기 위해 유동 세포측정법을 사용하여 분류될 수 있고, 이어서 항-CD3 항체 및 또는 항-CD28 항체 및 IL-2, IL-7, 및/또는 IL-15 또는 본원의 다른 곳에 기재된 바와 같은 관련 기술분야에 공지된 임의의 다른 방법을 사용한 세포 활성화에 더하여 변형된 T 세포의 수를 증가시키기 위해 추가로 증식될 수 있다.
본원에서 고려되는 제조 방법은 인간 대상체에서 사용하기 위한 저장 및/또는 제조를 위한 변형된 T 세포의 동결보존을 추가로 포함할 수 있다. T 세포는 세포가 해동 시에 생존가능하게 유지되도록 동결보존된다. 필요한 경우에, 동결보존된 형질전환된 면역 이펙터 세포는 보다 많은 이러한 세포를 위해 해동, 성장, 및 확장될 수 있다. 본원에 사용된 "동결보존"은 영하 온도, 예컨대 (전형적으로) 77 K 또는 -196℃ (액체 질소의 비점)로 냉각시킴으로써 세포를 보존하는 것을 지칭한다. 동결보호제는 종종 보존하고자 하는 세포가 저온에서의 동결 또는 실온으로의 가온으로 인해 손상되는 것을 방지하기 위해 영하의 온도에서 사용된다. 동결보존제 및 최적의 냉각 속도는 세포 손상으로부터 보호할 수 있다. 사용될 수 있는 동결보호제는 디메틸 술폭시드 (DMSO) (Lovelock and Bishop, Nature, 1959; 183: 1394-1395; Ashwood-Smith, Nature, 1961; 190: 1204-1205), 글리세롤, 폴리비닐피롤리돈 (Rinfret, Ann. N.Y. Acad. Sci., 1960; 85: 576), 및 폴리에틸렌 글리콜 (Sloviter and Ravdin, Nature, 1962; 196: 48)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 냉각 속도는 1℃/분 내지 3℃/분이다. 적어도 2시간 후에, T 세포는 -80℃의 온도에 도달하며, 예컨대 장기 극저온 저장 용기에서의 영구 저장을 위해 액체 질소 (-196℃) 내에 직접 넣을 수 있다.
6.9. T 세포
본 개시내용은 개선된 CAR T 세포 조성물의 제조를 고려한다. CAR T 세포 생산에 사용되는 T 세포는 자가/자발 ("자기") 또는 비-자가 ("비-자기", 예를 들어 동종, 동계 또는 이종)일 수 있다. 특정 실시양태에서, T 세포는 포유동물 대상체로부터 수득된다. 보다 구체적인 실시양태에서, T 세포는 영장류 대상체로부터 수득된다. 바람직한 실시양태에서, T 세포는 인간 대상체로부터 수득된다.
T 세포는 말초 혈액 단핵 세포, 골수, 림프절 조직, 제대혈, 흉선 조직, 감염 부위로부터의 조직, 복수, 흉막 삼출, 비장 조직 및 종양을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다수의 공급원으로부터 수득될 수 있다. 특정 실시양태에서, T 세포는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 수의 기술, 예컨대 침강, 예를 들어 피콜™ 분리를 사용하여 대상체로부터 수집된 단위 혈액으로부터 수득될 수 있다. 한 실시양태에서, 개체의 순환 혈액으로부터의 세포는 분리반출술에 의해 수득된다. 분리반출술 생성물은 전형적으로 림프구, 예컨대 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 다른 유핵 백혈구, 적혈구 및 혈소판을 함유한다. 한 실시양태에서, 분리반출술에 의해 수집된 세포를 세척하여 혈장 분획을 제거하고, 후속 프로세싱을 위해 세포를 적절한 완충제 또는 배지에 넣을 수 있다. 세포는 PBS, 또는 칼슘, 마그네슘, 및 전부는 아니지만 대부분의 2가 양이온이 결여된 또 다른 적합한 용액으로 세척될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, 세척 단계는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해, 예컨대 반자동화 관통형 원심분리를 사용하는 것에 의해 달성될 수 있다. 예를 들어, 코브(Cobe) 2991 세포 프로세서, 백스터 시토메이트 등. 세척 후에, 세포는 다양한 생체적합성 완충제, 또는 완충제의 존재 또는 부재 하의 다른 염수 용액 중에 재현탁될 수 있다. 특정 실시양태에서, 분리반출술 샘플의 바람직하지 않은 성분은 직접적으로 재현탁된 세포 배양 배지에서 제거될 수 있다.
특정한 실시양태에서, T 세포를 포함하는 세포의 집단, 예를 들어 PBMC가 본원에서 고려되는 제조 방법에 사용된다. 다른 실시양태에서, 단리된 또는 정제된 T 세포 집단이 본원에서 고려되는 제조 방법에 사용된다. 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)로부터 적혈구를 용해시키고, 예를 들어 퍼콜™ 구배를 통한 원심분리에 의해 단핵구를 고갈시킴으로써 단리될 수 있다. 일부 실시양태에서, PBMC의 단리 후에, 세포독성 및 헬퍼 T 림프구 둘 다는 활성화, 확장 및/또는 유전자 변형 전 또는 후에 나이브, 기억 및 이펙터 T 세포 하위집단으로 분류될 수 있다.
하기 마커: CD3, CD4, CD8, CD28, CD45RA, CD45RO, CD62, CD127, 및 HLA-DR 중 1종 이상을 발현하는 T 세포의 특이적 하위집단은 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리될 수 있다. 한 실시양태에서, (i) CD62L, CCR7, CD28, CD27, CD122, CD127, CD197; 또는 (ii) CD38 또는 CD62L, CD127, CD197 및 CD38로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 중 1종 이상을 발현하는 T 세포의 특이적 하위집단은 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리된다. 다양한 실시양태에서, 제조된 T 세포 조성물은 하기 마커: CD57, CD244, CD160, PD-1, CTLA4, TIM3, 및 LAG3 중 1종 이상을 발현하지 않거나 또는 실질적으로 발현하지 않는다.
한 실시양태에서, CD62L, CD127, CD197 및 CD38로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 중 1종 이상의 발현은 PI3K 억제제의 부재 하에 활성화되고 확장된 T 세포의 집단과 비교하여 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 25배 또는 그 초과로 증가된다.
한 실시양태에서, CD57, CD244, CD160, PD-1, CTLA4, TIM3, 및 LAG3으로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 중 1종 이상의 발현은 PI3K 억제제의 존재 하에 활성화되고 확장된 T 세포의 집단과 비교하여 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 25배 또는 그 초과로 감소된다.
한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 제조 방법은 나이브 또는 발생상 강력한 T 세포의 1종 이상의 마커를 포함하는 CAR T 세포의 수를 증가시킨다. 어떠한 특정한 이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 본 발명자들은 T 세포를 포함하는 세포의 집단을 1종 이상의 PI3K 억제제로 처리하는 것이 발생상 강력한 T 세포의 확장을 증가시키고, 기존 CAR T 세포 요법과 비교하여 보다 강건하고 효과적인 입양 CAR T 세포 면역요법을 제공한다고 믿는다.
본원에서 고려되는 방법을 사용하여 제조된 T 세포에서 증가된 나이브 또는 발생상 강력한 T 세포의 마커의 예시적인 예는 CD62L, CD127, CD197 및 CD38을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 특정한 실시양태에서, 나이브 T 세포는 하기 마커: CD57, CD244, CD160, PD-1, BTLA, CD45RA, CTLA4, TIM3, 및 LAG3 중 1종 이상을 발현하지 않거나 또는 실질적으로 발현하지 않는다.
T 세포와 관련하여, 본원에서 고려되는 다양한 확장 방법론으로부터 생성된 T 세포 집단은 사용되는 조건에 따라 다양한 특이적 표현형 특성을 가질 수 있다. 다양한 실시양태에서, 확장된 T 세포 집단은 하기 표현형 마커: CD62L, CD127, CD197, CD38 및 HLA-DR 중 1종 이상을 포함한다.
한 실시양태에서, 이러한 표현형 마커는 CD62L, CD127, CD197 및 CD38 중 1종 이상 또는 모두의 증진된 발현을 포함한다. 특정한 실시양태에서, CD62L, CD127, CD197 및 CD38을 비롯한 나이브 T 세포의 표현형 마커의 발현을 특징으로 하는 CD8+ T 림프구가 확장된다.
특정한 실시양태에서, CD45RO, CD62L, CD127, CD197 및 CD38을 포함하고 그랜자임 B에 대해 음성인 중심 기억 T 세포의 표현형 마커의 발현을 특징으로 하는 T 세포가 확장된다. 일부 실시양태에서, 중심 기억 T 세포는 CD45RO+, CD62L+, CD8+ T 세포이다.
특정 실시양태에서, CD62L을 비롯한 나이브 CD4+ 세포의 표현형 마커의 발현을 특징으로 하고 CD45RA 및/또는 CD45RO의 발현에 대해 음성인 CD4+ T 림프구가 확장된다. 일부 실시양태에서, CD4+ 세포는 CD62L 및 CD45RO 양성을 포함한 중심 기억 CD4+ 세포의 표현형 마커의 발현을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD62L 양성 및 CD45RO 음성이다.
특정 실시양태에서, T 세포는 개체로부터 단리되고, 활성화되고, CAR (예를 들어, 항-BCMA CAR)을 발현하도록 유전자 변형되기 전에 시험관내에서 증식하도록 자극된다. 이와 관련하여, T 세포는 유전자 변형 (즉, CAR, 예를 들어 본원에서 고려되는 항-BCMA CAR을 발현하도록 형질도입 또는 형질감염)되기 전 및/또는 후에 배양될 수 있다.
6.9.1. 활성화 및 확장
T 세포 조성물의 충분한 치료 용량을 달성하기 위해, T 세포는 종종 1회 이상의 라운드의 자극, 활성화 및/또는 확장에 적용된다. T 세포는 일반적으로, 예를 들어 미국 특허 6,352,694; 6,534,055; 6,905,680; 6,692,964; 5,858,358; 6,887,466; 6,905,681; 7,144,575; 7,067,318; 7,172,869; 7,232,566; 7,175,843; 5,883,223; 6,905,874; 6,797,514; 및 6,867,041에 기재된 바와 같은 방법을 사용하여 활성화 및 확장될 수 있으며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. CAR (예를 들어, 항-BCMA CAR)을 발현하도록 변형된 T 세포는 T 세포가 변형되기 전 및/또는 후에 활성화 및 확장될 수 있다. 또한, T 세포는 활성화 및/또는 확장 전, 동안 및/또는 후에 PI3K 세포 신호전달 경로를 조정하는 1종 이상의 작용제와 접촉될 수 있다. 한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 방법에 의해 제조된 T 세포는 1, 2, 3, 4, 또는 5회 또는 그 초과의 라운드의 활성화 및 확장을 거치고, 이들 각각은 PI3K 세포 신호전달 경로를 조정하는 1종 이상의 작용제를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 공동자극 리간드는 T 세포 상의 동족 공동자극 분자에 특이적으로 결합하는 항원 제시 세포 (예를 들어, aAPC, 수지상 세포, B 세포 등) 상에 제시되고, 그에 의해, 예를 들어 TCR/CD3 복합체의 결합에 의해 제공되는 1차 신호에 더하여, 목적하는 T 세포 반응을 매개하는 신호가 제공된다. 적합한 공동자극 리간드는 CD7, B7-1 (CD80), B7-2 (CD86), PD-L 1, PD-L2, 4-1BBL, OX40L, 유도성 공동자극 리간드 (ICOS-L), 세포간 부착 분자 (ICAM), CD30L, CD40, CD70, CD83, HLA-G, MICA, MICB, HVEM, 림프독소 베타 수용체, ILT3, ILT4, 톨 리간드 수용체에 결합하는 효능제 또는 항체, 및 B7-H3과 특이적으로 결합하는 리간드를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정한 실시양태에서, 공동자극 리간드는 CD27, CD28, 4- IBB, OX40, CD30, CD40, PD-1, 1COS, 림프구 기능-연관 항원 1 (LFA-1), CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83과 특이적으로 결합하는 리간드를 포함하나 이에 제한되지는 않는, T 세포 상에 존재하는 공동자극 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
적합한 공동자극 리간드는 추가로, 가용성 형태로 제공될 수 있거나 또는 변형된 T 세포 상에서 발현된 조작된 TCR 또는 CAR에 결합하는 APC 또는 aAPC 상에서 발현될 수 있는 표적 항원을 추가로 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 T 세포를 제조하는 방법은 T 세포를 포함하는 세포의 집단을 활성화시키는 단계 및 T 세포의 집단을 확장시키는 단계를 포함한다. T 세포 활성화는 T 세포 TCR/CD3 복합체를 통하거나 또는 CD2 표면 단백질의 자극을 통해 1차 자극 신호를 제공하고, 보조 분자, 예를 들어 CD28을 통해 2차 공동자극 신호를 제공함으로써 달성될 수 있다.
TCR/CD3 복합체는 T 세포를 적합한 CD3 결합제, 예를 들어 CD3 리간드 또는 항-CD3 모노클로날 항체와 접촉시킴으로써 자극될 수 있다. CD3 항체의 예시적인 예는 OKT3, G19-4, BC3, 및 64.1을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
또 다른 실시양태에서, CD2 결합제는 T 세포에 1차 자극 신호를 제공하는 데 사용될 수 있다. CD2 결합제의 예시적인 예는 CD2 리간드 및 항-CD2 항체, 예를 들어 T11.1 또는 T11.2 항체와 조합된 T11.3 항체 (Meuer, S. C. et al., (1984) Cell 36:897-906) 및 9-1 항체와 조합된 9.6 항체 (TI 1.1과 동일한 에피토프를 인식함) (Yang, S. Y. et al., (1986) J. Immunol. 137:1097-1100)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 상기 기재된 항체 중 임의의 것과 동일한 에피토프에 결합하는 다른 항체가 또한 사용될 수 있다. 추가의 항체, 또는 항체의 조합은 본원의 다른 곳에 개시된 바와 같은 표준 기술에 의해 제조 및 확인될 수 있다.
TCR/CD3 복합체를 통해, 또는 CD2를 통해 제공되는 1차 자극 신호에 더하여, T 세포 반응의 유도는 제2의 공동자극 신호를 필요로 한다. 특정한 실시양태에서, CD28 결합제는 공동자극 신호를 제공하는 데 사용될 수 있다. CD28 결합제의 예시적인 예는 천연 CD28 리간드, 예를 들어 CD28에 대한 천연 리간드 (예를 들어, 단백질의 B7 패밀리의 구성원, 예컨대 B7-1 (CD80) 및 B7-2 (CD86); 및 CD28 분자를 가교할 수 있는 항-CD28 모노클로날 항체 또는 그의 단편, 예를 들어 모노클로날 항체 9.3, B-T3, XR-CD28, KOLT-2, 15E8, 248.23.2 및 EX5.3D10을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
한 실시양태에서, 1차 자극 신호를 제공하는 분자, 예를 들어 TCR/CD3 복합체 또는 CD2를 통해 자극을 제공하는 분자, 및 공동자극 분자는 동일한 표면에 커플링된다.
특정 실시양태에서, 자극 및 공동자극 신호를 제공하는 결합제는 세포의 표면 상에 국재화된다. 이는 세포를 세포 표면 상에서의 발현에 적합한 형태의 결합제를 코딩하는 핵산으로 형질감염 또는 형질도입시킴으로써 또는 대안적으로 결합제를 세포 표면에 커플링시킴으로써 달성될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 1차 자극 신호를 제공하는 분자, 예를 들어 TCR/CD3 복합체 또는 CD2를 통해 자극을 제공하는 분자, 및 공동자극 분자는 항원 제시 세포 상에 디스플레이된다.
한 실시양태에서, 1차 자극 신호를 제공하는 분자, 예를 들어 TCR/CD3 복합체 또는 CD2를 통해 자극을 제공하는 분자, 및 공동자극 분자는 별개의 표면 상에 제공된다.
특정 실시양태에서, 자극 및 공동자극 신호를 제공하는 결합제 중 하나는 가용성이고 (용액으로 제공됨), 다른 작용제(들)는 하나 이상의 표면 상에 제공된다.
특정한 실시양태에서, 자극 및 공동자극 신호를 제공하는 결합제는 둘 다 가용성 형태로 제공된다 (용액으로 제공됨).
다양한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 T 세포를 제조하는 방법은 T 세포를 항-CD3 및 항-CD28 항체로 활성화시키는 것을 포함한다.
본원에서 고려되는 방법에 의해 제조된 T 세포 조성물은 PI3K 세포 신호전달 경로를 억제하는 1종 이상의 작용제의 존재 하에 활성화되고/거나 확장된 T 세포를 포함한다. CAR (예를 들어, 항-BCMA CAR)을 발현하도록 변형된 T 세포는 T 세포가 변형되기 전 및/또는 후에 활성화 및 확장될 수 있다. 특정한 실시양태에서, T 세포의 집단은 활성화되고, CAR (예를 들어, 항-BCMA CAR)을 발현하도록 변형된 다음, 확장을 위해 배양된다.
한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 방법에 의해 제조된 T 세포는 높은 증식 잠재력 및 자기-재생 능력을 나타내는 마커는 발현하지만 T 세포 분화의 검출불가능한 마커는 발현하지 않거나 실질적으로 발현하지 않는 증가된 수의 T 세포를 포함한다. 이들 T 세포는 강건한 방식으로 반복적으로 활성화 및 확장될 수 있고, 이에 의해 개선된 치료 T 세포 조성물을 제공한다.
한 실시양태에서, PI3K 세포 신호전달 경로를 억제하는 1종 이상의 작용제의 존재 하에 활성화되고 확장된 T 세포의 집단은 PI3K 억제제의 부재 하에 활성화되고 확장된 T 세포의 집단과 비교하여 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 25배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 250배, 적어도 500배, 적어도 1000배, 또는 그 초과로 확장된다.
한 실시양태에서, PI3K 세포 신호전달 경로를 억제하는 1종 이상의 작용제의 존재 하에 활성화되고 확장된 마커 어린 T 세포의 발현을 특징으로 하는 T 세포의 집단은 PI3K 억제제의 부재 하에 활성화되고 확장된 T 세포의 집단과 비교하여 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 25배, 적어도 50배, 적어도 100배, 적어도 250배, 적어도 500배, 적어도 1000배, 또는 그 초과로 확장된다.
한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 방법에 의해 활성화된 T 세포를 확장시키는 것은 T 세포를 포함하는 세포의 집단을 수시간 (약 3시간) 내지 약 7일 내지 약 28일 또는 그 사이의 임의의 시간상 정수 값 동안 배양하는 것을 추가로 포함한다. 또 다른 실시양태에서, T 세포 조성물은 14일 동안 배양될 수 있다. 특정한 실시양태에서, T 세포는 약 21일 동안 배양된다. 또 다른 실시양태에서, T 세포 조성물은 약 2-3일 동안 배양된다. T 세포의 배양 시간이 60일 이상일 수 있도록 자극/활성화/확장의 여러 주기가 또한 바람직할 수 있다.
특정한 실시양태에서, T 세포 배양에 적절한 조건은 적절한 배지 (예를 들어, 최소 필수 배지 또는 RPMI 배지 1640 또는, 엑스-비보(X-vivo) 15 (론자(Lonza))), 및 혈청 (예를 들어, 태아 소 또는 인간 혈청), 인터류킨-2 (IL-2), 인슐린, IFN-γ, IL-4, IL-7, IL-21, GM-CSF, IL-10, IL-12, IL-15, TGFβ 및 TNF-α 또는 통상의 기술자에게 공지된 세포의 성장에 적합한 임의의 다른 첨가제를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 증식 및 생존에 필요한 1종 이상의 인자를 포함한다.
세포 배양 배지의 추가의 예시적인 예는 혈청-무함유이거나 또는 적절한 양의 혈청 (또는 혈장) 또는 규정된 호르몬 세트, 및/또는 T 세포의 성장 및 확장에 충분한 양의 시토카인(들)으로 보충된, 아미노산, 피루브산나트륨 및 비타민이 첨가된, RPMI 1640, 클릭스(Clicks), AIM-V, DMEM, MEM, a-MEM, F-12, 엑스-비보 15, 및 엑스-비보 20, 옵티마이저를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
T 세포 확장을 위한 다른 첨가제의 예시적인 예는 계면활성제, 플라스마네이트, pH 완충제, 예컨대 HEPES, 및 환원제, 예컨대 N-아세틸-시스테인 및 2-메르캅토에탄올을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
항생제, 예를 들어 페니실린 및 스트렙토마이신은 대상체 내로 주입될 세포의 배양물이 아닌, 실험 배양물에만 포함된다. 표적 세포는 성장을 지지하는 데 필요한 조건, 예를 들어 적절한 온도 (예를 들어, 37℃) 및 분위기 (예를 들어, 공기 + 5% CO2) 하에 유지된다.
특정한 실시양태에서, PBMC 또는 단리된 T 세포는 적절한 시토카인, 예컨대 IL-2, IL-7, 및/또는 IL-15가 존재하는 배양 배지에서, 일반적으로 비드 또는 다른 표면에 부착된 자극제 및 공동자극제, 예컨대 항-CD3 및 항-CD28 항체와 접촉된다.
다른 실시양태에서, 인공 APC (aAPC)는 다양한 공동자극 분자 및 시토카인의 안정한 발현 및 분비를 지시하도록 K562, U937, 721.221, T2, 및 C1R 세포를 조작하는 것에 의해 제조될 수 있다. 특정한 실시양태에서, AAPC 세포 표면 상에 1종 이상의 항체-기반 자극 분자의 디스플레이를 지시하는 데 K32 또는 U32 aAPC가 사용된다. T 세포의 집단은 CD137L (4-1BBL), CD134L (OX40L), 및/또는 CD80 또는 CD86을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다양한 공동자극 분자를 발현하는 aAPC에 의해 확장될 수 있다. 마지막으로, aAPC는 유전자 변형된 T 세포를 확장시키고 CD8 T 세포 상에서 CD28 발현을 유지시키기 위한 효율적인 플랫폼을 제공한다. WO 03/057171 및 US2003/0147869에 제공된 aAPC는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
6.9.2. 작용제
다양한 실시양태에서, T 세포를 세포에서 PI3K 경로를 조정하는 작용제와 접촉시키는 것을 포함하는, 미분화된 또는 발생상 강력한 T 세포를 확장시키는 T 세포를 제조하는 방법이 제공된다. 다양한 실시양태에서, T 세포를 세포에서 PI3K/AKT/mTOR 경로를 조정하는 작용제와 접촉시키는 것을 포함하는, 미분화된 또는 발생상 강력한 T 세포를 확장시키는 T 세포를 제조하는 방법이 제공된다. 세포는 활성화 및 확장 전, 동안 및/또는 후에 접촉될 수 있다. T 세포 조성물은 분화의 실질적인 증가 없이 다중 라운드의 확장을 거칠 수 있도록 충분한 T 세포 효력을 보유한다.
본원에 사용된 용어 "조정하다", "조정제" 또는 "조정 작용제" 또는 대등한 용어는 세포 신호전달 경로에서 변화를 도출하는 작용제의 능력을 지칭한다. 조정제는 경로 성분의 양, 활성을 증가 또는 감소시키거나, 또는 세포 신호전달 경로의 목적하는 효과 또는 출력을 증가 또는 감소시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 조정제는 억제제이다. 또 다른 실시양태에서, 조절제는 활성화제이다.
"작용제"는 PI3K/AKT/mTOR 경로의 조정에 사용되는 화합물, 소분자, 예를 들어 유기 소분자, 핵산, 폴리펩티드, 또는 그의 단편, 이소형, 변이체, 유사체 또는 유도체를 지칭한다.
"소분자"는 분자량이 약 5 kD 미만, 약 4 kD 미만, 약 3 kD 미만, 약 2 kD 미만, 약 1 kD 미만, 또는 약.5kD 미만인 조성물을 지칭한다. 소분자는 핵산, 펩티드, 폴리펩티드, 펩티드모방체, 펩토이드, 탄수화물, 지질, 그의 성분 또는 다른 유기 또는 무기 분자를 포함할 수 있다. 화학적 및/또는 생물학적 혼합물, 예컨대 진균, 박테리아 또는 조류 추출물의 라이브러리는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 본 개시내용의 검정 중 임의의 것에 의해 스크리닝될 수 있다. 분자 라이브러리의 합성 방법은 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, 문헌 [Carell et al., 1994a; Carell et al., 1994b; Cho et al., 1993; DeWitt et al., 1993; Gallop et al., 1994; Zuckermann et al., 1994] 참조).
"유사체"는 본 개시내용의 목적하는 활성을 갖는 화합물, 뉴클레오티드, 단백질 또는 폴리펩티드 또는 화합물과 유사하거나 동일한 활성 또는 기능(들)을 보유하지만, 바람직한 실시양태의 서열 또는 구조와 유사하거나 동일한 서열 또는 구조를 반드시 포함할 필요는 없는 소형 유기 화합물, 뉴클레오티드, 단백질 또는 폴리펩티드를 지칭한다.
"유도체"는 아미노산 잔기 치환, 결실 또는 부가의 도입에 의해 변경된 모 단백질 또는 폴리펩티드의 아미노산 서열을 포함하는 화합물, 단백질 또는 폴리펩티드, 또는 뉴클레오티드 치환 또는 결실, 부가 또는 돌연변이의 도입에 의해 변형된 핵산 또는 뉴클레오티드를 지칭한다. 유도체 핵산, 뉴클레오티드, 단백질 또는 폴리펩티드는 모 폴리펩티드와 유사하거나 동일한 기능을 보유한다.
다양한 실시양태에서, PI3K 경로를 조절하는 작용제는 경로의 성분을 활성화시킨다. "활성화제" 또는 "효능제"는 PI3K의 1종 이상의 활성을 억제하는 분자를 포함하나 이에 제한되지는 않는, PI3K/AKT/mTOR 경로의 분자의 1종 이상의 활성을 촉진시키거나, 증가시키거나 또는 유도하는 작용제를 지칭한다.
다양한 실시양태에서, PI3K 경로를 조정하는 작용제는 경로의 성분을 억제한다. "억제제" 또는 "길항제"는 PI3K를 포함하나 이에 제한되지는 않는 PI3K 경로의 분자의 1종 이상의 활성을 억제, 감소 또는 저하시키는 작용제를 지칭한다. 한 실시양태에서, 억제제는 이중 분자 억제제이다. 특정한 실시양태에서, 억제제는 동일하거나 실질적으로 유사한 활성을 갖는 분자의 부류를 억제할 수 있거나 (범-억제제) 또는 분자의 활성을 특이적으로 억제할 수 있다 (선택적 또는 특이적 억제제). 억제는 또한 비가역적 또는 가역적일 수 있다.
한 실시양태에서, 억제제는 적어도 1nM, 적어도 2nM, 적어도 5nM, 적어도 10nM, 적어도 50nM, 적어도 100nM, 적어도 200nM, 적어도 500nM, 적어도 1μM, 적어도 10μM, 적어도 50μM, 또는 적어도 100μM의 IC50을 갖는다. IC50 결정은 관련 기술분야에 공지된 임의의 통상적인 기술을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, IC50은 연구 중인 억제제의 농도 범위의 존재 하에 주어진 효소의 활성을 측정함으로써 결정될 수 있다. 이어서, 실험적으로 수득된 효소 활성의 값을 사용된 억제제 농도에 대해 플롯팅한다. (임의의 억제제의 부재 하의 활성과 비교하여) 50% 효소 활성을 나타내는 억제제의 농도를 "IC50" 값으로 취한다. 유사하게, 다른 억제 농도는 활성의 적절한 결정을 통해 규정될 수 있다.
다양한 실시양태에서, T 세포는 PI3K 경로의 1종 이상의 조정제와 적어도 1nM, 적어도 2nM, 적어도 5nM, 적어도 10nM, 적어도 50nM, 적어도 100nM, 적어도 200nM, 적어도 500nM, 적어도 1μM, 적어도 10μM, 적어도 50μM, 적어도 100μM, 또는 적어도 1 M의 농도에서 접촉되거나 또는 처리되거나 또는 배양된다.
특정한 실시양태에서, T 세포는 PI3K 경로의 1종 이상의 조정제와 적어도 12시간, 18시간, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일, 적어도 2주, 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개월 또는 그 초과 동안 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10회 또는 그 초과의 라운드의 확장으로 접촉되거나 또는 처리되거나 또는 배양될 수 있다.
6.9.3. PI3K/Akt/mTOR 경로
라파마이신 경로의 포스파티딜-이노시톨-3 키나제/Akt/포유동물 표적은 성장 인자 신호전달을 세포 증식, 분화, 대사 및 생존과 통합시키는 도관으로서의 역할을 한다. PI3K는 고도로 보존된 세포내 지질 키나제의 패밀리이다. 부류 IA PI3K는 성장 인자 수용체 티로신 키나제 (RTK)에 의해 직접적으로 또는 어댑터 분자의 인슐린 수용체 기질 패밀리와의 상호작용을 통해 활성화된다. 이러한 활성은 세린/트레오닌 키나제 Akt의 조절제인 포스파티딜-이노시톨-3,4,5-트리스포스페이트 (PIP3)의 생산을 발생시킨다. mTOR은 각각 별개의 활성을 부여하는 상이한 결합 파트너를 특징으로 하는 2가지의 별개의 복합체를 통한 정규 PI3K 경로를 통해 작용한다. mTORC1 (PRAS40, 랩터 및 mLST8/GbL과 복합체화된 mTOR)은 성장 인자 신호를 단백질 번역, 세포 성장, 증식 및 생존과 연결하는 PI3K/Akt 신호전달의 하류 이펙터로서 작용한다. mTORC2 (릭터, mSIN1, 프로토, 및 mLST8과 복합체화된 mTOR)는 Akt의 상류 활성화제로서 작용한다.
PI3K의 성장 인자 수용체-매개된 활성화 시에, Akt는 그의 플렉스트린 상동성 도메인과 PIP3의 상호작용을 통해 막으로 동원되고, 이에 따라 그의 활성화 루프가 노출되고, 구성적으로 활성인 포스포이노시티드-의존성 단백질 키나제 1 (PDK1)에 의해 트레오닌 308 (Thr308)에서 인산화가 가능하게 된다. 최대 활성화를 위해, Akt는 또한 그의 C-말단 소수성 모티프의 세린 473 (Ser473)에서 mTORC2에 의해 인산화된다. DNA-PK 및 HSP는 또한 Akt 활성의 조절에 중요한 것으로 밝혀졌다. Akt는 TSC2의 억제 인산화를 통해 mTORC1을 활성화시키고, 이는 TSC1과 함께 mTORC1의 양성 조절제인 Rheb GTPase를 억제함으로써 mTORC1을 음성적으로 조절한다. mTORC1은 2종의 널리-규정된 기질, p70S6K (이하에서 S6K1로 지칭됨) 및 4E-BP1을 가지며, 이들 둘 다는 단백질 합성을 결정적으로 조절한다. 따라서, mTORC1은 성장 인자 신호전달을 단백질 번역 및 세포 증식과 연결하는 PI3K의 중요한 하류 이펙터이다.
6.9.4. PI3K 억제제
본원에 사용된 용어 "PI3K 억제제"는 PI3K에 결합하여 그의 적어도 1종의 활성을 억제하는 핵산, 펩티드, 화합물 또는 유기 소분자를 지칭한다. PI3K 단백질은 3종의 부류, 부류 1 PI3K, 부류 2 PI3K 및 부류 3 PI3K로 나뉠 수 있다. 부류 1 PI3K는 4종의 p110 촉매 서브유닛 (p110α, p110β, p110δ 및 p110γ) 중 1종 및 2종의 조절 서브유닛 패밀리 중 1종으로 이루어진 이종이량체로서 존재한다. 특정한 실시양태에서, 본 개시내용의 PI3K 억제제는 부류 1 PI3K 억제제를 표적화한다. 한 실시양태에서, PI3K 억제제는 부류 1 PI3K 억제제 중 1종 이상의 이소형에 대한 선택성 (즉, p110α, p110β, p110δ 및 p110γ, 또는 p110α, p110β, p110δ 및 p110γ 중 1종 이상에 대한 선택성)을 나타낼 것이다. 또 다른 측면에서, PI3K 억제제는 이소형 선택성을 나타내지 않을 것이고, "범-PI3K 억제제"로 간주될 것이다. 한 실시양태에서, PI3K 억제제는 PI3K 촉매 도메인에 대해 ATP와 결합에 대해 경쟁할 것이다.
특정 실시양태에서, PI3K 억제제는, 예를 들어 PI3K뿐만 아니라 PI3K-AKT-mTOR 경로의 추가의 단백질을 표적화할 수 있다. 특정한 실시양태에서, mTOR 및 PI3K 둘 다를 표적화하는 PI3K 억제제는 mTOR 억제제 또는 PI3K 억제제로 지칭될 수 있다. 단지 PI3K만을 표적화하는 PI3K 억제제는 선택적 PI3K 억제제로 지칭될 수 있다. 한 실시양태에서, 선택적 PI3K 억제제는 mTOR 및/또는 경로의 다른 단백질에 대한 억제제의 IC50보다 적어도 10-배, 적어도 20-배, 적어도 30-배, 적어도 50-배, 적어도 100-배, 적어도 1000-배, 또는 그 초과로 더 낮은 PI3K에 대한 50% 억제 농도를 나타내는 작용제를 지칭하는 것으로 이해될 수 있다.
특정한 실시양태에서, 예시적인 PI3K 억제제는 PI3K를 약 200 nM 이하, 바람직하게는 약 100 nm 이하, 보다 더 바람직하게는 약 60 nM 이하, 약 25 nM, 약 10 nM, 약 5 nM, 약 1 nM, 100 μM, 50 μM, 25 μM, 10 μM, 1 μM, 또는 그 미만의 IC50 (활성의 50%를 억제하는 농도)으로 억제한다. 한 실시양태에서, PI3K 억제제는 PI3K를 약 2 nM 내지 약 100 nm, 보다 바람직하게는 약 2 nM 내지 약 50 nM, 보다 더 바람직하게는 약 2 nM 내지 약 15 nM의 IC50으로 억제한다.
본원에서 고려되는 T 세포 제조 방법에 사용하기에 적합한 PI3K 억제제의 예시적인 예는 BKM120 (부류 1 PI3K 억제제, 노파르티스), XL147 (부류 1 PI3K 억제제, 엑셀릭시스(Exelixis)), (범-PI3K 억제제, 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)), 및 PX-866 (부류 1 PI3K 억제제; p110α, p110β, 및 p110γ 이소형, 온코티레온(Oncothyreon))을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
선택적 PI3K 억제제의 다른 예시적인 예는 BYL719, GSK2636771, TGX-221, AS25242, CAL-101, ZSTK474 및 IPI-145를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
범-PI3K 억제제의 추가의 예시적인 예는 BEZ235, LY294002, GSK1059615, TG100713, 및 GDC-0941을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
6.9.5. AKT 억제제
본원에 사용된 용어 "AKT 억제제"는 AKT의 적어도 1종의 활성을 억제하는 핵산, 펩티드, 화합물 또는 유기 소분자를 지칭한다. AKT 억제제는 지질-기반 억제제 (예를 들어, AKT가 형질 막에 국재화되는 것을 방지하는 AKT의 플렉스트린 상동성 도메인을 표적화하는 억제제), ATP-경쟁적 억제제 및 알로스테릭 억제제를 포함한 여러 부류로 그룹화될 수 있다. 한 실시양태에서, AKT 억제제는 AKT 촉매 부위에 결합함으로써 작용한다. 특정한 실시양태에서, Akt 억제제는 하류 AKT 표적, 예컨대 mTOR의 인산화를 억제함으로써 작용한다. 또 다른 실시양태에서, AKT 활성은, 예를 들어 AKT의 DNA-PK 활성화, AKT의 PDK-1 활성화 및/또는 Akt의 mTORC2 활성화를 억제함으로써 Akt를 활성화하기 위한 입력 신호를 억제하는 것에 의해 억제된다.
AKT 억제제는 모든 3종의 AKT 이소형, AKT1, AKT2, AKT3을 표적화할 수 있거나, 또는 이소형 선택적일 수 있고, AKT 이소형 중 1종 또는 2종만을 표적화할 수 있다. 한 실시양태에서, AKT 억제제는 AKT뿐만 아니라 PI3K-AKT-mTOR 경로의 추가의 단백질을 표적화할 수 있다. AKT만을 표적화하는 AKT 억제제는 선택적 AKT 억제제로 지칭될 수 있다. 한 실시양태에서, 선택적 AKT 억제제는 경로의 다른 단백질에 대한 억제제의 IC50보다 적어도 10-배, 적어도 20-배, 적어도 30-배, 적어도 50-배, 적어도 100-배, 적어도 1000-배, 또는 그 초과로 더 낮은 AKT에 대한 50% 억제 농도를 나타내는 작용제를 지칭하는 것으로 이해될 수 있다.
특정한 실시양태에서, 예시적인 AKT 억제제는 AKT를 약 200 nM 이하, 바람직하게는 약 100 nm 이하, 보다 더 바람직하게는 약 60 nM 이하, 약 25 nM, 약 10 nM, 약 5 nM, 약 1 nM, 100 μM, 50 μM, 25 μM, 10 μM, 1 μM, 또는 그 미만의 IC50 (활성의 50%를 억제하는 농도)으로 억제한다. 한 실시양태에서, AKT는 AKT를 약 2 nM 내지 약 100 nm, 보다 바람직하게는 약 2 nM 내지 약 50 nM, 보다 더 바람직하게는 약 2 nM 내지 약 15 nM의 IC50으로 억제한다.
아우리스타틴 기반 항체-약물 접합체와 조합하여 사용하기 위한 AKT 억제제의 예시적인 예는, 예를 들어 페리포신 (케릭스(Keryx)), MK2206 (머크(Merck)), VQD-002 (비오퀘스트(VioQuest)), XL418 (엑셀릭시스), GSK690693, GDC-0068 및 PX316 (프롤엑스 파마슈티칼스(PROLX Pharmaceuticals))을 포함한다.
선택적 Akt1 억제제의 예시적인 비제한적 예는 A-674563이다.
선택적 Akt2 억제제의 예시적인 비제한적 예는 CCT128930이다.
특정한 실시양태에서, Akt 억제제 Akt의 DNA-PK 활성화, Akt의 PDK-1 활성화, Akt의 mTORC2 활성화, 또는 Akt의 HSP 활성화.
DNA-PK 억제제의 예시적인 예는 NU7441, PI-103, NU7026, PIK-75, 및 PP-121을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
6.9.6. mTOR 억제제
용어 "mTOR 억제제" 또는 "mTOR을 억제하는 작용제"는 mTOR 단백질의 적어도 1종의 활성, 예컨대, 예를 들어, 그의 기질 (예를 들어, p70S6 키나제 1, 4E-BP1, AKT/PKB 및 eEF2) 중 적어도 1종에 대한 세린/트레오닌 단백질 키나제 활성을 억제하는 핵산, 펩티드, 화합물 또는 유기 소분자를 지칭한다. mTOR 억제제는 mTORC1, mTORC2, 또는 mTORC1 및 mTORC2 둘 다에 직접 결합하여 이를 억제할 수 있다.
mTORC1 및/또는 mTORC2 활성의 억제는 PI3K/Akt/mTOR 경로의 신호 전달의 감소에 의해 결정될 수 있다. 매우 다양한 판독이 이러한 신호전달 경로의 출력의 감소를 확립하는 데 이용될 수 있다. 일부 비제한적 예시적인 판독은 (1) 5473 및 T308을 포함하나 이에 제한되지는 않는 잔기에서의 Akt의 인산화의 감소; (2) 예를 들어 Fox01/O3a T24/32, GSK3a/β; S21/9, 및 TSC2 T1462를 포함하나 이에 제한되지는 않는 Akt 기질의 인산화의 감소에 의해 입증되는 바와 같은 Akt의 활성화의 감소; (3) 리보솜 S6 S240/244, 70S6K T389, 및 4EBP1 T37/46을 포함하나 이에 제한되지는 않는 mTOR의 하류의 신호전달 분자의 인산화의 감소; 및 (4) 암성 세포의 증식의 억제를 포함한다.
한 실시양태에서, mTOR 억제제는 활성 부위 억제제이다. 이들은 mTOR의 ATP 결합 부위 (또한 ATP 결합 포켓으로도 지칭됨)에 결합하고 mTORC1 및 mTORC2 둘 다의 촉매 활성을 억제하는 mTOR 억제제이다. 본원에서 고려되는 T 세포 제조 방법에 사용하기에 적합한 활성 부위 억제제의 한 부류는 PI3K 및 mTOR 둘 다를 표적화하고 직접 억제하는 이중 특이성 억제제이다. 이중 특이성 억제제는 mTOR 및 PI3K의 ATP 결합 부위 둘 다에 결합한다. 이러한 억제제의 예시적인 예는 이미다조퀴나졸린, 워트만닌, LY294002, PI-103 (케이만 케미칼(Cayman Chemical)), SF1126 (세마포어(Semafore)), BGT226 (노파르티스), XL765 (엑셀릭시스) 및 NVP-BEZ235 (노파르티스)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 고려되는 방법에 사용하기에 적합한 또 다른 부류의 mTOR 활성 부위 억제제는 1종 이상의 유형 I 포스파티딜이노시톨 3-키나제, 예를 들어 PI3 키나제 α, β, γ 또는 δ에 비해 mTORC1 및 mTORC2 활성을 선택적으로 억제한다. 이들 활성 부위 억제제는 mTOR의 활성 부위에는 결합하지만 PI3K에는 결합하지 않는다. 이러한 억제제의 예시적인 예는 피라졸로피리미딘, 토린1 (게르틴(Guertin) 및 사바티니(Sabatini)), PP242 (2-(4-아미노-1-이소프로필-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-3-일)-1H-인돌-5-올), PP30, Ku-0063794, WAY-600 (와이어쓰(Wyeth)), WAY-687 (와이어쓰), WAY-354 (와이어쓰) 및 AZD8055 (Liu et al., Nature Review, 8, 627-644, 2009)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
한 실시양태에서, 선택적 mTOR 억제제는 1, 2, 3종 또는 그 초과의 유형 I PI3-키나제 또는 모든 유형 I PI3-키나제에 대한 억제제의 IC50보다 적어도 10-배, 적어도 20-배, 적어도 50-배, 적어도 100-배, 적어도 1000-배 또는 그 초과로 더 낮은 mTORC1 및/또는 mTORC2에 대한 50% 억제 농도 (IC50)를 나타내는 작용제를 지칭한다.
본 개시내용에 사용하기 위한 mTOR 억제제의 또 다른 부류는 본원에서 "라파로그"로 지칭된다. 본원에 사용된 용어 "라파로그"는 mTOR FRB 도메인 (FKBP 라파마이신 결합 도메인)에 특이적으로 결합하고, 라파마이신과 구조적으로 관련되고, mTOR 억제 특성을 보유하는 화합물을 지칭한다. 용어 라파로그는 라파마이신을 배제한다. 라파로그는 라파마이신의 에스테르, 에테르, 옥심, 히드라존 및 히드록실아민, 뿐만 아니라 라파마이신 코어 구조 상의 관능기가 예를 들어 환원 또는 산화에 의해 변형된 화합물을 포함한다. 이러한 화합물의 제약상 허용되는 염도 또한 라파마이신 유도체인 것으로 간주된다. 본원에서 고려되는 방법에 사용하기에 적합한 라파로그의 예시적인 예는 비제한적으로 템시롤리무스 (CC1779), 에베롤리무스 (RAD001), 데포롤리무스 (AP23573), AZD8055 (아스트라제네카) 및 OSI-027 (OSI)을 포함한다.
한 실시양태에서, 작용제는 mTOR 억제제 라파마이신 (시롤리무스)이다.
특정한 실시양태에서, 본원에 사용하기 위한 예시적인 mTOR 억제제는 mTORC1, mTORC2 또는 mTORC1 및 mTORC2 둘 다를 약 200 nM 이하, 바람직하게는 약 100 nm 이하, 보다 더 바람직하게는 약 60 nM 이하, 약 25 nM, 약 10 nM, 약 5 nM, 약 1 nM, 100 μM, 50 μM, 25 μM, 10 μM, 1 μM, 또는 그 미만의 IC50 (활성의 50%를 억제하는 농도)으로 억제한다. 한 측면에서, 본원에 사용하기 위한 mTOR 억제제는 mTORC1, mTORC2 또는 mTORC1 및 mTORC2 둘 다를 약 2 nM 내지 약 100 nm, 보다 바람직하게는 약 2 nM 내지 약 50 nM, 보다 더 바람직하게는 약 2 nM 내지 약 15 nM의 IC50으로 억제한다.
한 실시양태에서, 예시적인 mTOR 억제제는 PI3K 및 mTORC1 또는 mTORC2, 또는 mTORC1 및 mTORC2 둘 다 및 PI3K를 약 200 nM 이하, 바람직하게는 약 100 nm 이하, 보다 더 바람직하게는 약 60 nM 이하, 약 25 nM, 약 10 nM, 약 5 nM, 약 1 nM, 100 μM, 50 μM, 25 μM, 10 μM, 1 μM, 또는 그 미만의 IC50 (활성의 50%를 억제하는 농도)으로 억제한다. 한 측면에서, 본원에 사용하기 위한 mTOR 억제제는 PI3K 및 mTORC1 또는 mTORC2 또는 mTORC1 및 mTORC2 둘 다 및 PI3K를 약 2 nM 내지 약 100 nm, 보다 바람직하게는 약 2 nM 내지 약 50 nM, 보다 더 바람직하게는 약 2 nM 내지 약 15 nM의 IC50으로 억제한다.
본원에서 고려되는 특정한 실시양태에 사용하기에 적합한 mTOR 억제제의 추가의 예시적인 예는 AZD8055, INK128, 라파마이신, PF-04691502 및 에베롤리무스를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
mTOR은 웨스턴 블롯팅에서 인-특이적 항체에 의해 측정된 바와 같이 생리학적 기질 단백질, p70 S6 리보솜 단백질 키나제 I (p70S6K1) 및 eIF4E 결합 단백질 1 (4EBP1)에 대한 강건하고 특이적인 촉매 활성을 입증하는 것으로 밝혀졌다.
한 실시양태에서, PI3K/AKT/mTOR 경로의 억제제는 BI-D1870, H89, PF-4708671, FMK 및 AT7867로 이루어진 군으로부터 선택된 s6 키나제 억제제이다.
6.10. 조성물 및 제제
본원에서 고려되는 조성물은 본원에서 고려되는 바와 같은 1종 이상의 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드, 그를 포함하는 벡터, 유전자 변형된 면역 이펙터 세포 등을 포함할 수 있다. 조성물은 제약 조성물을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. "제약 조성물"은 단독으로 또는 요법의 1종 이상의 다른 양식과 조합하여 세포 또는 동물에게 투여하기 위한 제약상 허용되는 또는 생리학상 허용되는 용액으로 제제화된 조성물을 지칭한다. 또한, 원하는 경우에, 본 개시내용의 조성물은 다른 작용제, 예컨대, 예를 들어, 시토카인, 성장 인자, 호르몬, 소분자, 화학요법제, 전구약물, 약물, 항체, 또는 다른 다양한 제약 활성제와 조합되어 투여될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 추가의 작용제가 의도된 요법을 전달하는 조성물의 능력에 불리한 영향을 미치지 않는 한, 조성물에 또한 포함될 수 있는 다른 성분에는 사실상 제한이 없다.
어구 "제약상 허용되는"은 타당한 의학적 판단의 범주 내에서, 합리적인 이익/위험 비에 상응하는, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 그러한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭하는 것으로 본원에 사용된다.
본원에 사용된 "제약상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제"는 미국 식품 의약품국에 의해 인간 또는 가축에서의 사용에 허용되는 것으로 승인된 임의의 아주반트, 담체, 부형제, 활택제, 감미제, 희석제, 보존제, 염료/착색제, 향미 증진제, 계면활성제, 습윤제, 분산제, 현탁화제, 안정화제, 등장화제, 용매, 계면활성제 또는 유화제를 비제한적으로 포함한다. 예시적인 제약상 허용되는 담체는 당, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; 셀룰로스, 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 트라가칸트; 맥아; 젤라틴; 활석; 코코아 버터, 왁스, 동물성 및 식물성 지방, 파라핀, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 산화아연; 오일, 예컨대 땅콩 오일, 목화씨 오일, 홍화 오일, 참깨 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 대두 오일; 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; 한천; 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; 알긴산; 발열원-무함유 물; 등장성 염수; 링거액; 에틸 알콜; 포스페이트 완충제 용액; 및 제약 제제에 사용되는 임의의 다른 상용성 물질을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
특정한 실시양태에서, 본원에 제시된 조성물은 본원에서 고려되는 소정량의 CAR-발현 면역 이펙터 세포를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "양"은 임상 결과를 비롯하여 유익하거나 목적하는 예방적 또는 치료적 결과를 달성하기 위한 유전자 변형된 치료 세포, 예를 들어 T 세포의 "효과적인 양" 또는 "유효량"을 지칭한다.
"예방 유효량"은 목적하는 예방 결과를 달성하는 데 효과적인 유전자 변형된 치료 세포의 양을 지칭한다. 반드시는 아니지만 전형적으로, 예방 용량은 질환의 초기 병기 전에 또는 초기 병기에서 대상체에서 사용되기 때문에, 예방 유효량은 치료 유효량보다 더 적다.
유전자 변형된 치료 세포의 "치료 유효량"은 개체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중, 및 개체에서 목적하는 반응을 도출할 수 있는 줄기 및 전구 세포의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 치료 유효량은 또한 바이러스 또는 형질도입된 치료 세포의 임의의 독성 또는 유해 효과를 치료상 유익한 효과가 능가하는 양이다. 용어 "치료 유효량"은 대상체 (예를 들어, 환자)를 "치료"하는 데 효과적인 양을 포함한다. 치료량이 표시된 경우에, 투여될 본 개시내용의 조성물의 정확한 양은 연령, 체중, 종양 크기, 감염 또는 전이의 정도, 및 환자 (대상체)의 상태에서의 개별 차이를 고려하여 의사에 의해 결정될 수 있다. 일반적으로 본원에 기재된 T 세포를 포함하는 제약 조성물은 102 내지 1010개 세포/kg 체중, 바람직하게는 105 내지 106개 세포/kg 체중으로, 그러한 범위 내의 모든 정수 값을 포함하는 투여량으로 투여될 수 있는 것으로 언급될 수 있다. 세포의 수는 조성물에 포함된 세포의 유형과 같이 조성물이 의도되는 궁극적인 용도에 좌우될 것이다. 본원에 제공된 용도를 위해, 세포는 일반적으로 1 리터 이하의 부피이고, 500 mL 이하, 심지어 250 mL 또는 100 mL 또는 그 미만일 수 있다. 따라서, 목적하는 세포의 밀도는 전형적으로 106개 세포/ml 초과이고, 일반적으로 107개 세포/ml 초과, 일반적으로 108개 세포/ml 이상이다. 임상적으로 관련된 면역 세포의 수는 누적해서 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011, 또는 1012개 세포와 동등하거나 또는 이를 초과하는 다중 주입으로 배분될 수 있다. 일부 측면에서, 특히 모든 주입된 세포가 특정한 표적 항원 (예를 들어, κ 또는 λ 경쇄)으로 재지시될 것이기 때문에, 106개/킬로그램 (환자당 106-1011개) 범위의 보다 적은 수의 세포가 투여될 수 있다. CAR 발현 세포 조성물은 이들 범위 내의 투여량으로 다수회 투여될 수 있다. 세포는 요법을 받는 환자에 대해 동종, 동계, 이종 또는 자가일 수 있다. 원하는 경우에, 치료는 또한 면역 반응의 유도를 증진시키기 위해 본원에 기재된 바와 같은 미토겐 (예를 들어, PHA) 또는 림포카인, 시토카인 및/또는 케모카인 (예를 들어, IFN-γ, IL-2, IL-12, TNF-알파, IL-18, 및 TNF-베타, GM-CSF, IL-4, IL-13, Flt3-L, RANTES, MIP1α 등)의 투여를 포함할 수 있다.
일반적으로, 본원에 기재된 바와 같이 활성화되고 확장된 세포를 포함하는 조성물은 면역손상된 개체에서 발생하는 질환의 치료 및 예방에 이용될 수 있다. 특히, 본원에서 고려되는 CAR-변형된 T 세포를 포함하는 조성물은 종양 또는 암의 치료, 또는 B 세포 악성종양의 치료에 사용된다. 본 개시내용의 CAR-변형된 T 세포는 단독으로, 또는 담체, 희석제, 부형제, 및/또는 다른 성분 예컨대 IL-2 또는 다른 시토카인 또는 세포 집단과 조합된 제약 조성물로서 투여될 수 있다. 특정한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 제약 조성물은 소정량의 유전자 변형된 T 세포를 1종 이상의 제약상 또는 생리학상 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 조합하여 포함한다.
CAR-발현 면역 이펙터 세포 집단, 예컨대 T 세포를 포함하는 본 개시내용의 제약 조성물은 완충제, 예컨대 중성 완충 염수, 포스페이트 완충 염수 등; 탄수화물, 예컨대 글루코스, 만노스, 수크로스 또는 덱스트란, 만니톨; 단백질; 폴리펩티드 또는 아미노산, 예컨대 글리신; 항산화제; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA 또는 글루타티온; 아주반트 (예를 들어, 수산화알루미늄); 및 보존제를 포함할 수 있다. 특정 측면에서, 본 개시내용의 조성물은 비경구 투여, 예를 들어 혈관내 (정맥내 또는 동맥내), 복강내 또는 근육내 투여를 위해 제제화된다.
액체 제약 조성물은, 용액이든, 현탁액이든, 또는 다른 유사 형태이든, 하기 중 1종 이상을 포함할 수 있다: 멸균 희석제 예컨대 주사용수, 염수 용액, 바람직하게는 생리 염수, 링거액, 등장성 염화나트륨, 용매 또는 현탁 매질로서의 역할을 할 수 있는 합성 모노 또는 디글리세리드와 같은 고정 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 용매; 항박테리아제 예컨대 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제 예컨대 아스코르브산 또는 중아황산나트륨; 킬레이트화제 예컨대 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충제 예컨대 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 장성 조정제 예컨대 염화나트륨 또는 덱스트로스. 비경구 제제는 유리 또는 플라스틱으로 제조된 앰플, 일회용 시린지 또는 다중 용량 바이알에 봉입될 수 있다. 주사가능한 제약 조성물은 바람직하게는 멸균이다.
1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중의 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정되면, CAR T 세포 (예를 들어, BCMA CAR T 세포)의 투여는 제2 작용제를 투여하는 것 (예를 들어, CAR T 세포 (예를 들어, BCMA CAR T 세포) 및 제2 작용제를 조합 요법으로서 투여하는 것)을 수반할 수 있다.
특정한 실시양태에서, 본원에서 고려되는 조성물은 유효량의 CAR-발현 면역 이펙터 세포를 단독으로 또는 1종 이상의 치료제와 조합하여 포함한다. 따라서, CAR-발현 면역 이펙터 세포 조성물은 단독으로 또는 다른 공지된 암 치료, 예컨대 방사선 요법, 화학요법, 이식, 면역요법, 호르몬 요법, 광역학 요법 등과 조합되어 투여될 수 있다. 조성물은 또한 항생제와 조합되어 투여될 수 있다. 이러한 치료제는 본원에 기재된 바와 같은 특정한 질환 상태, 예컨대 특정한 암에 대한 표준 치료로서 관련 기술분야에서 허용될 수 있다. 고려되는 예시적인 치료제는 시토카인, 성장 인자, 스테로이드, NSAID, DMARD, 항염증제, 화학요법제, 방사선요법제, 치료 항체, 또는 다른 활성제 및 보조제를 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 CAR-발현 면역 이펙터 세포를 포함하는 조성물은 임의의 수의 화학요법제, 예를 들어 항암제와 함께 대상체에게 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화학요법제, 예를 들어 항암제는 CAR T 세포 요법, 예를 들어 BCMA CAR T 세포 요법의 투여 후에 대상체에게 투여되며, 본원의 다른 곳에 기재된 특정 상태가 발생하는 경우에, 이는 CAR T 세포 요법이 대상체에게 치료상 유익하지 않을 것임을 나타낸다. 화학요법제의 예시적인 예는 알킬화제 예컨대 티오테파 및 시클로포스파미드 (시톡산(CYTOXAN)™); 알킬 술포네이트 예컨대 부술판, 임프로술판 및 피포술판; 아지리딘 예컨대 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 에틸렌이민 및 메틸라멜라민, 예컨대 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸올로멜라민 레주메; 질소 머스타드 예컨대 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란 (예를 들어, 멜팔란 히드로클로라이드), 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아 예컨대 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴; 항생제 예컨대 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼리케아미신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사물 예컨대 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 폴산 유사체 예컨대 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체 예컨대 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체 예컨대 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 5-FU; 안드로겐 예컨대 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤; 항부신제 예컨대 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 폴산 보충제 예컨대 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에토글루시드; 질산갈륨; 히드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK®; 라족산; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산 산; 트리아지쿠온; 2, 2',2"-트리클로로트리에틸아민; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀 (탁솔(TAXOL)®, 브리스톨-마이어스 스큅 온콜로지(Bristol-Myers Squibb Oncology), 뉴저지주 프린스턴) 및 도세탁셀 (탁소테레(TAXOTERE)®, 롱-프랑 로러(Rhone-Poulenc Rohrer), 프랑스 안토니); 클로람부실; 겜시타빈; 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체 예컨대 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴; 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포시드; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RFS 2000; 디플루오로메틸로미틴 (DMFO); 레티노산 유도체 예컨대 탈그레틴(Targretin)™ (벡사로텐), 판레틴(Panretin)™ (알리트레티노인); 온탁(ONTAK)™ (데니류킨 디프티톡스); 에스페라미신; 카페시타빈; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함한다. 또한, 이러한 정의에는 암에 대한 호르몬 작용을 조절 또는 억제하는 작용을 하는 항호르몬제, 예컨대 항에스트로겐, 예컨대 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타제 억제 4(5)-이미다졸, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 토레미펜 (파레스톤); 및 항안드로겐, 예컨대 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린; 및 상기 중 임의의 것의 제약상 허용되는 염, 산 또는 유도체가 포함된다.
다양한 다른 치료제가 본원에 기재된 조성물과 함께 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, CAR-발현 면역 이펙터 세포를 포함하는 조성물은 항염증제와 함께 투여된다. 항염증제 또는 약물은 스테로이드 및 글루코코르티코이드 (베타메타손, 부데소니드, 덱사메타손, 히드로코르티손 아세테이트, 히드로코르티손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손, 트리암시놀론 포함), 비스테로이드성 항염증 약물 (NSAID) 예컨대 아스피린, 이부프로펜, 나프록센, 메토트렉세이트, 술파살라진, 레플루노미드, 항-TNF 의약, 시클로포스파미드 및 미코페놀레이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
다른 예시적인 NSAID는 이부프로펜, 나프록센, 나프록센 소듐, Cox-2 억제제, 예컨대 비옥스(VIOXX)® (로페콕시브) 및 셀레브렉스(CELEBREX)® (셀레콕시브), 및 시알릴레이트로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예시적인 진통제는 아세트아미노펜, 옥시코돈, 트라마돌 및 프로폭시펜 히드로클로라이드로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예시적인 글루코코르티코이드는 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 및 프레드니손으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 예시적인 생물학적 반응 조절제는 세포 표면 마커 (예를 들어, CD4, CD5 등)에 대해 지시된 분자, 시토카인 억제제, 예컨대 TNF 길항제 (예를 들어, 에타네르셉트 (엔브렐(ENBREL)®), 아달리무맙 (휴미라(HUMIRA)®) 및 인플릭시맙 (레미케이드(REMICADE)®), 케모카인 억제제 및 부착 분자 억제제를 포함한다. 생물학적 반응 조절제는 모노클로날 항체뿐만 아니라 분자의 재조합 형태를 포함한다. 예시적인 DMARD는 아자티오프린, 시클로포스파미드, 시클로스포린, 메토트렉세이트, 페니실라민, 레플루노미드, 술파살라진, 히드록시클로로퀸, 금 (경구 (아우라노핀) 및 근육내) 및 미노시클린을 포함한다.
본원에서 고려되는 CAR 변형된 T 세포와의 조합에 적합한 치료 항체의 예시적인 예는 바비툭시맙, 베바시주맙 (아바스틴), 비바투주맙, 블리나투모맙, 코나투무맙, 다라투무맙, 둘리고투맙, 다세투주맙, 달로투주맙, 엘로투주맙 (HuLuc63), 겜투주맙, 이브리투모맙, 인다툭시맙, 이노투주맙, 로르보투주맙, 루카투무맙, 밀라투주맙, 목세투모맙, 오카라투주맙, 오파투무맙, 리툭시맙, 실툭시맙, 테프로투무맙, 및 우블리툭시맙을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
PD-1 또는, PD-L1 및/또는 CTLA-4에 대한 항체는 본원에 개시된 CAR T 세포, 예를 들어 BCMA CAR T 세포, 예를 들어 BCMA-2 단일 쇄 Fv 단편을 포함하는 키메라 항원 수용체를 발현하는 CAR T 세포, 예를 들어 이데캅타진 비클류셀 세포와 조합되어 사용될 수 있다. 특정한 실시양태에서, PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙 및 피딜리주맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, PD-L1 항체는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 두르발루맙 및 BMS-986559로 이루어진 군으로부터 선택된다. 특정한 실시양태에서, CTLA-4 항체는 이필리무맙 및 트레멜리무맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 시토카인과 함께 투여된다. 본원에 사용된 "시토카인"은 세포간 매개체로서 또 다른 세포에 대해 작용하는, 하나의 세포 집단에 의해 방출된 단백질에 대한 일반적 용어를 의미한다. 이러한 시토카인의 예는 림포카인, 모노카인 및 전통적인 폴리펩티드 호르몬이다. 시토카인에는 성장 호르몬 예컨대 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 당단백질 호르몬 예컨대 여포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH), 및 황체형성 호르몬 (LH); 간 성장 인자; 섬유모세포 성장 인자; 프로락틴; 태반 락토겐; 종양 괴사 인자-알파 및 -베타; 뮐러-억제 물질; 마우스 고나도트로핀-연관 펩티드; 인히빈; 액티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린; 트롬보포이에틴 (TPO); 신경 성장 인자 예컨대 NGF-베타; 혈소판-성장 인자; 형질전환 성장 인자 (TGF) 예컨대 TGF-알파 및 TGF-베타; 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO); 골유도 인자; 인터페론 예컨대 인터페론-알파, 베타, 및 -감마; 콜로니 자극 인자 (CSF) 예컨대 대식세포-CSF (M-CSF); 과립구-대식세포-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF); 인터류킨 (IL) 예컨대 IL-1, IL-1알파, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12; IL-15, IL-21, 종양 괴사 인자 예컨대 TNF-알파 또는 TNF-베타; 및 다른 폴리펩티드 인자, 예컨대 LIF 및 키트 리간드 (KL)가 포함된다. 본원에 사용된 용어 시토카인은 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 천연 서열 시토카인의 생물학적 활성 등가물을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 시토카인 방출 증후군 (CRS)을 치료하기 위한 요법과 함께 투여된다. CRS는 특정 생물학적 치료제, 예를 들어 키메라 항원 수용체-발현 T 세포 또는 NK 세포 (CAR T 세포 또는 CAR NK 세포), 예를 들어 BCMA CAR T 세포의 투여 후에 발생할 수 있는 전신 염증 면역 반응이다. CRS는 하기와 같이 유사한 임상 표현형 및 바이오마커 서명을 갖는 상태인 시토카인 폭풍과 구별될 수 있다. CRS에서, T 세포는 종양 항원의 인식 시 활성화되는 반면, 시토카인 폭풍에서, 면역계는 종양 표적화와 독립적으로 활성화되고; CRS에서, IL-6이 주요 매개체이고, 따라서 증상은 항-IL-6 또는 항-IL-6 수용체 (IL-6R) 억제제를 사용하여 완화될 수 있는 반면, 시토카인 폭풍에서, 종양 괴사 인자 알파 (TNFα) 및 인터페론 감마 (IFNγ)가 주요 매개체이고, 증상은 항염증 요법, 예를 들어 코르티코스테로이드를 사용하여 완화될 수 있다. 항-IL-6 수용체 (IL-6R) 항체, 예컨대 토실리주맙은 CRS를 관리하는 데, 임의로 지지적 관리와 함께 사용될 수 있다. 항-IL-6 항체, 예컨대 실툭시맙은 추가적으로 또는 대안적으로 CRS를 관리하는 데, 임의로 지지적 관리와 함께 사용될 수 있다. IL-6차단 (예를 들어, 항-IL-6R 항체 또는 항-IL-6 항체를 사용함)은 CAR T 세포 또는 CAR NK 세포가 주입된 환자가 1등급, 2등급, 3등급 또는 4등급 CRS 중 임의의 것을 나타내지만, 전형적으로 보다 중증 등급 (예를 들어, 3등급 또는 4등급)이 예비되는 경우에 사용될 수 있다. 코르티코스테로이드는 CRS를 동반하거나 그에 의해 유발되는 신경독성을 관리하기 위해, 또는 IL-6 차단으로 치료된 환자에게 투여될 수 있지만, 일반적으로 CRS에 대한 1차 치료로서는 사용되지 않는다. CRS의 관리를 위한 다른 양식은, 예를 들어 문헌 [Shimabukuro-Vornhagen et al., "Cytokine Release Syndrome," J. Immunother. Cancer 6:56 (2018)]에 기재되어 있다.
표 4: CRS는 펜(Penn) 등급화 척도를 사용하여 등급화될 수 있다:
Figure pct00011
표 5: CRS는 또한 CTCAE (국립 암 연구소 유해 사건에 대한 통상 용어 기준) v4.0에 의해 등급화될 수 있다:
Figure pct00012
표 6: CRS는 또한 문헌 [Lee et al., ("Current concepts in the diagnosis and management of cytokine release syndrome," Blood, 2014, 124:188-195)]의 시스템에 의해 등급화될 수 있다:
Figure pct00013
특정한 실시양태에서, 조성물은 본원에 개시된 바와 같은 PI3K 억제제의 존재 하에 배양되고 하기 마커: CD3, CD4, CD8, CD28, CD45RA, CD45RO, CD62, CD127 중 1종 이상을 발현하는 본원에서 고려되는 CAR T 세포를 포함하며, HLA-DR은 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리될 수 있다. 한 실시양태에서, 조성물은 CD62L, CCR7, CD28, CD27, CD122, CD127, CD197; 및 CD38 또는 CD62L, CD127, CD197, 및 CD38로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 중 1종 이상을 발현하는 T 세포의 특이적 하위집단을 포함하고, 이는 양성 또는 음성 선택 기술에 의해 추가로 단리된다. 다양한 실시양태에서, 조성물은 하기 마커: CD57, CD244, CD160, PD-1, CTLA4, TIM3, 및 LAG3 중 1종 이상을 발현하지 않거나 또는 실질적으로 발현하지 않는다.
한 실시양태에서, CD62L, CD127, CD197 및 CD38로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 중 1종 이상의 발현은 PI3K 억제제의 부재 하에 활성화되고 확장된 T 세포의 집단과 비교하여 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 25배 또는 그 초과로 증가된다.
한 실시양태에서, CD57, CD244, CD160, PD-1, CTLA4, TIM3, 및 LAG3으로 이루어진 군으로부터 선택된 마커 중 1종 이상의 발현은 PI3K 억제제의 존재 하에 활성화되고 확장된 T 세포의 집단과 비교하여 적어도 1.5배, 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배, 적어도 10배, 적어도 25배 또는 그 초과로 감소된다.
6.11. 치료 방법
본원에서 고려되는 유전자 변형된 면역 이펙터 세포는 종양 또는 암의 치료, 또는 면역조절 상태 및 혈액 악성종양을 포함하나 이에 제한되지는 않는 B 세포 관련 상태의 치료에 사용하기 위한 개선된 입양 면역요법 방법을 제공한다.
본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 출원, 및 허여된 특허는 각각의 개별 간행물, 특허 출원, 또는 허여된 특허가 구체적으로 및 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 표시된 것처럼 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
상기 발명은 이해의 명료함을 위해 예시 및 예로서 일부 상세히 기재되었지만, 본 발명의 교시에 비추어 첨부된 청구범위의 취지 또는 범주로부터 벗어나지 않으면서 그에 대해 특정 변화 및 변형이 이루어질 수 있다는 것이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 명백할 것이다. 하기 실시예는 단지 예시로서 제한 없이 제공된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본질적으로 유사한 결과를 생성하도록 변화 또는 변형될 수 있는 다양한 비결정적인 파라미터를 용이하게 인식할 것이다.
7. 실시예
7.1. 실시예 1: 예시적인 BCMA CAR의 구축
항-BCMA scFv 항체를 함유하는 CAR을, 항-BMCA scFv에 작동가능하게 연결된 MND 프로모터, CD8α로부터의 힌지 및 막횡단 도메인 및 CD137 공동-자극 도메인에 이어서 CD3ζ 쇄의 세포내 신호전달 도메인을 함유하도록 설계하였다. 국제 공개 번호 WO 2016/094304를 참조하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함되고, 특히 BCMA CAR 및 그의 특징화의 개시내용이 포함된다. 국제 공개 번호 WO 2016/094304의 도 1에 제시된 BCMA CAR은 면역 이펙터 세포 상의 표면 발현을 위한 CD8α 신호 펩티드 (SP) 서열을 포함한다. 예시적인 BCMA CAR의 폴리뉴클레오티드 서열이 서열식별번호: 10 (항-BCMA02 CAR의 폴리뉴클레오티드 서열)에 제시되고; BCMA CAR의 예시적인 폴리펩티드 서열은 서열식별번호: 9 (항-BCMA02 CAR의 폴리펩티드 서열)에 제시되고; 예시적인 CAR 구축물의 벡터 맵은 국제 공개 번호 WO 2016/094304의 도 1에 제시된다. 표 9는 국제 공개 번호 WO 2016/094304의 도 1에 제시된 바와 같은 BCMA CAR 구축물을 포함하는 BCMA CAR 렌티바이러스 벡터의 다양한 뉴클레오티드 절편에 대한 아이덴티티, 진뱅크 참조 (적용가능한 경우), 공급원 명칭 및 인용을 보여준다.
표 9.
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
7.2 실시예 2: T 세포 이펙터 기능을 음성적으로 조정할 수 있는 염증-관련 가용성 인자는 ide-cel 처리에 대한 준최적 반응과 연관되었다
본 실시예는 ide-cel 처리 전의 다발성 골수종 환자에서의 특정 가용성 인자의 높은 수준과 처리에 대한 준최적 반응 사이의 상관관계의 발견을 기재한다.
방법: PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9, DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1을 포함한 여러 가용성 인자의 처리전 수준을 KarMMA 시험에서 ide-cel로 처리되고 (NCT03361748) ide-cel 주입 3 또는 9개월 후에 반응성 또는 비-반응성인 다발성 골수종 환자로부터 후향적으로 수득하였다. 인자의 수준을 스크리닝 기간 동안 측정하였고, 여기서 스크리닝 절차는 백혈구분리반출술 전 28일 내에 완료하였다.
가용성 인자의 수준을 측정한 혈청 샘플은 하기와 같이 수득하였다. ide-cel 주입의 3 또는 9개월 후에 반응성 또는 비-반응성인 대략 128명의 환자의 말초 혈액으로부터 혈청을 단리하고, 혈청 중 가용성 인자의 수준을 O-링크 IO 분석물 검정 (https://www.olink.com/products/immuno-oncology/)을 사용하여 측정하였다. O-링크 기술은 표적 분석물에 결합된 항체를 검출하기 위해 PCR을 사용하고, 결과는 로그 2 배수-변화 단위로 나타내어진다. 2개의 군 사이의 값을 패키지 R 내에서 윌콕슨 검정을 사용하여 비교하였다.
도 1은 9개월째의 비반응의 O-링크 IO 분석물 검정 상관관계를 보여준다. 제2 및 제3 열은 2개의 환자군 각각에 얼마나 많은 샘플이 존재하는지 명시한다. '윌콕스 AUC' 열은 0 내지 1 범위의 윌콕슨 통계 버전을 제공한다. 이는 하기와 같이 해석될 수 있다: 2개의 군 사이의 모든 가능한 쌍별 비교를 취하는 경우에 (따라서 표의 예에서 43 * 40 = 1720 비교 쌍), 윌콕스 AUC는 제1 군으로부터의 샘플이 제2 군으로부터의 샘플보다 더 높은 값을 갖는 비교의 백분율이다. 따라서, AUC 1은 모든 M9 PD가 모든 M9 반응자보다 더 높은 값을 가졌음을 의미한다. 마지막 2개의 열은 이러한 통계와 연관된 p-값 (R에 의해 제공된 바와 같음) 및 다중 분석물이 시험되었다는 사실에 대해 보정된 p-값 (모든 분석물에 대한 벤자미니-호크베르크 보정)이다.
이어서, 가용성 인자의 수준을 ide-cel 요법 후 3개월 또는 9개월째의 반응자 또는 비-반응자의 함수로서 여러 다이어그램에 플롯팅하였고, 이를 도 2에 제시한다. 이들 결과는 면역조정 인자의 처리전 수준이 준최적 반응을 갖는 환자의 혈청에서 상승되었음을 보여준다. T 세포 이펙터 기능을 음성적으로 조정할 수 있는 염증-관련 가용성 인자는 ide-cel에 대한 준최적 반응과 연관된다.
일반적으로, 하기 청구범위에서, 사용된 용어는 청구범위를 명세서 및 청구범위에 개시된 구체적 실시양태로 제한하는 것으로 해석되어서는 안되며, 이러한 청구범위가 부여하는 등가물의 전체 범주와 함께 모든 가능한 실시양태를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, 청구범위는 본 개시내용에 의해 제한되지 않는다. 본원에 인용된 모든 참고문헌은, 특허이든 비-특허이든, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> BRISTOL-MYERS SQUIBB COMPANY CELGENE CORPORATION <120> USES OF CHIMERIC ANTIGEN RECEPTOR (CAR) T-CELL THERAPIES IN COMBINATION WITH INHIBITORS OF INFLAMMATION-RELATED SOLUBLE FACTORS <130> 14247-617-228 <140> <141> <150> US 63/121,716 <151> 2020-12-04 <160> 38 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 15 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 1 Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile His 1 5 10 15 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> mus musculus <400> 2 Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> mus musculus <400> 3 Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr 1 5 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 4 Asp Tyr Ser Ile Asn 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 5 Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe Arg 1 5 10 15 Gly <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 6 Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 <210> 7 <211> 111 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 7 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro 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atcagcaggg tcagaatcag 1200 ctctacaatg aattgaatct cggcaggcga gaagagtacg atgttctgga caagagacgg 1260 ggcagggatc ccgagatggg gggaaagccc cggagaaaaa atcctcagga ggggttgtac 1320 aatgagctgc agaaggacaa gatggctgaa gcctatagcg agatcggaat gaaaggcgaa 1380 agacgcagag gcaaggggca tgacggtctg taccagggtc tctctacagc caccaaggac 1440 acttatgatg cgttgcatat gcaagccttg ccaccccgct aatga 1485 <210> 11 <211> 184 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser 1 5 10 15 Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr 20 25 30 Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser 35 40 45 Val Lys Gly Thr Asn Ala Ile Leu Trp Thr Cys Leu Gly Leu Ser Leu 50 55 60 Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile 65 70 75 80 Asn Ser Glu Pro Leu Lys Asp Glu Phe Lys Asn Thr Gly Ser Gly Leu 85 90 95 Leu Gly Met Ala Asn Ile Asp Leu Glu Lys Ser Arg Thr Gly Asp Glu 100 105 110 Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr 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ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa 300 tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt 360 tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta 420 aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt 480 caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc 540 tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca 600 gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat 660 tgacgtcaat gggagtttgt tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa 720 caactccgcc ccattgacgc aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag 780 cagagctcgt ttagtgaacc gggtctctct ggttagacca gatctgagcc tgggagctct 840 ctggctaact agggaaccca ctgcttaagc ctcaataaag cttgccttga gtgctcaaag 900 tagtgtgtgc ccgtctgttg tgtgactctg gtaactagag atccctcaga cccttttagt 960 cagtgtggaa aatctctagc agtggcgccc gaacagggac ttgaaagcga aagtaaagcc 1020 agaggagatc tctcgacgca ggactcggct tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg 1080 gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt gactagcgga ggctagaagg agagagtagg 1140 gtgcgagagc gtcggtatta agcgggggag aattagataa atgggaaaaa attcggttaa 1200 ggccaggggg aaagaaacaa tataaactaa aacatatagt tagggcaagc agggagctag 1260 aacgattcgc agttaatcct ggccttttag agacatcaga aggctgtaga caaatactgg 1320 gacagctaca accatccctt cagacaggat cagaagaact tagatcatta tataatacaa 1380 tagcagtcct ctattgtgtg catcaaagga tagatgtaaa agacaccaag gaagccttag 1440 ataagataga ggaagagcaa aacaaaagta agaaaaaggc acagcaagca gcagctgaca 1500 caggaaacaa cagccaggtc agccaaaatt accctatagt gcagaacctc caggggcaaa 1560 tggtacatca ggccatatca cctagaactt taaattaaga cagcagtaca aatggcagta 1620 ttcatccaca attttaaaag aaaagggggg attggggggt acagtgcagg ggaaagaata 1680 gtagacataa tagcaacaga catacaaact aaagaattac aaaaacaaat tacaaaaatt 1740 caaaattttc gggtttatta cagggacagc agagatccag tttggaaagg accagcaaag 1800 ctcctctgga aaggtgaagg ggcagtagta atacaagata atagtgacat aaaagtagtg 1860 ccaagaagaa aagcaaagat catcagggat tatggaaaac agatggcagg tgatgattgt 1920 gtggcaagta gacaggatga ggattaacac atggaaaaga ttagtaaaac accatagctc 1980 tagagcgatc ccgatcttca gacctggagg aggagatatg agggacaatt ggagaagtga 2040 attatataaa tataaagtag taaaaattga accattagga gtagcaccca ccaaggcaaa 2100 gagaagagtg gtgcagagag aaaaaagagc agtgggaata ggagctttgt tccttgggtt 2160 cttgggagca gcaggaagca ctatgggcgc agcgtcaatg acgctgacgg tacaggccag 2220 acaattattg tctggtatag tgcagcagca gaacaatttg ctgagggcta ttgaggcgca 2280 acagcatctg ttgcaactca cagtctgggg catcaagcag ctccaggcaa gaatcctggc 2340 tgtggaaaga tacctaaagg atcaacagct cctggggatt tggggttgct ctggaaaact 2400 catttgcacc actgctgtgc cttggaatgc tagttggagt aataaatctc tggaacagat 2460 ttggaatcac acgacctgga tggagtggga cagagaaatt aacaattaca caagcttggt 2520 aggtttaaga atagtttttg ctgtactttc tatagtgaat agagttaggc agggatattc 2580 accattatcg tttcagaccc acctcccaac cccgagggga cccgacaggc ccgaaggaat 2640 agaagaagaa ggtggagaga gagacagaga cagatccatt cgattagtga acggatccat 2700 ctcgacggaa tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc taggatcaag gttaggaaca 2760 gagagacagc agaatatggg ccaaacagga tatctgtggt 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aaagcatctg gctatacctt 3660 caccgactac agcataaatt gggtgaaacg ggcccctgga aagggcctca aatggatggg 3720 ttggatcaat accgaaacta gggagcctgc ttatgcatat gacttccgcg ggagattcgc 3780 cttttcactc gagacatctg cctctactgc ttacctccaa ataaacaacc tcaagtatga 3840 agatacagcc acttactttt gcgccctcga ctatagttac gccatggact actggggaca 3900 gggaacctcc gttaccgtca gttccgcggc cgcaaccaca acacctgctc caaggccccc 3960 cacacccgct ccaactatag ccagccaacc attgagcctc agacctgaag cttgcaggcc 4020 cgcagcagga ggcgccgtcc atacgcgagg cctggacttc gcgtgtgata tttatatttg 4080 ggcccctttg gccggaacat gtggggtgtt gcttctctcc cttgtgatca ctctgtattg 4140 taagcgcggg agaaagaagc tcctgtacat cttcaagcag ccttttatgc gacctgtgca 4200 aaccactcag gaagaagatg ggtgttcatg ccgcttcccc gaggaggaag aaggagggtg 4260 tgaactgagg gtgaaatttt ctagaagcgc cgatgctccc gcatatcagc agggtcagaa 4320 tcagctctac aatgaattga atctcggcag gcgagaagag tacgatgttc tggacaagag 4380 acggggcagg gatcccgaga tggggggaaa gccccggaga aaaaatcctc aggaggggtt 4440 gtacaatgag ctgcagaagg acaagatggc tgaagcctat agcgagatcg gaatgaaagg 4500 cgaaagacgc agaggcaagg ggcatgacgg tctgtaccag ggtctctcta cagccaccaa 4560 ggacacttat gatgcgttgc atatgcaagc cttgccaccc cgctaatgac aggtaccttt 4620 aagaccaatg acttacaagg cagctgtaga tcttagccac tttttaaaag aaaagggggg 4680 actggaaggg ctaattcact cccaaagaag acaagatctg ctttttgcct gtactgggtc 4740 tctctggtta gaccagatct gagcctggga gctctctggc taactaggga acccactgct 4800 taagcctcaa taaagcttgc cttgagtgct tcaatgtgtg tgttggtttt ttgtgtgtcg 4860 aaattctagc gattctagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg 4920 ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg 4980 tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc 5040 gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt 5100 gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct 5160 gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga 5220 taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc 5280 cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg 5340 ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg 5400 aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt 5460 tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt 5520 gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg 5580 cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact 5640 ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt 5700 cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct 5760 gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac 5820 cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc 5880 tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg 5940 ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta 6000 aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca 6060 atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc 6120 ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc 6180 tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc 6240 agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat 6300 taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt 6360 tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc 6420 cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag 6480 ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt 6540 tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac 6600 tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg 6660 cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat 6720 tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc 6780 gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc 6840 tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa 6900 atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg 6960 tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg 7020 cacatttccc cgaaaagtgc cacctgggac tagctttttg caaaagccta ggcctccaaa 7080 aaagcctcct cactacttct ggaatagctc agaggccgag gcggcctcgg cctctgcata 7140 aataaaaaaa attagtcagc catggggcgg agaatgggcg gaactgggcg gagttagggg 7200 cgggatgggc ggagttaggg gcgggactat ggttgctgac taattgagat gagcttgcat 7260 gccgacattg attattgact agtccctaag aaaccattct tatcatgaca ttaacctata 7320 aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc 7350 <210> 37 <211> 472 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> exemplary mature BCMA CAR contemplated herein (i.e., without the signal sequence) <400> 37 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly 1 5 10 15 Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu 20 25 30 Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp 65 70 75 80 Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg 85 90 95 Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly 100 105 110 Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly 130 135 140 Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp 145 150 155 160 Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp 165 170 175 Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp 180 185 190 Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala 195 200 205 Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe 210 215 220 Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 225 230 235 240 Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg 245 250 255 Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg 260 265 270 Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly 275 280 285 Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr 290 295 300 Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg 305 310 315 320 Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro 325 330 335 Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu 340 345 350 Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala 355 360 365 Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu 370 375 380 Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly 385 390 395 400 Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu 405 410 415 Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser 420 425 430 Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly 435 440 445 Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu 450 455 460 His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg 465 470 <210> 38 <211> 246 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> amino acid sequence of BCMA02 scFv <400> 38 Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly 1 5 10 15 Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu 20 25 30 Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro 35 40 45 Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp 65 70 75 80 Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg 85 90 95 Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly 100 105 110 Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly 130 135 140 Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp 145 150 155 160 Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp 165 170 175 Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp 180 185 190 Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala 195 200 205 Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe 210 215 220 Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 225 230 235 240 Ser Val Thr Val Ser Ser 245

Claims (23)

  1. (i) 인간으로부터의 혈청 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 단계; 및
    (ii) (i)의 1종 이상의 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 중 수준과 유사한 경우에, 인간에게 치료 유효 용량의 CAR T 세포를 투여하는 단계
    를 포함하는, 인간에서의 암이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성일지 예측하는 방법.
  2. 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 제공하는 것인, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법.
  3. a. 암의 치료를 필요로 하는 인간으로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사하다는 것을 결정하는 단계;
    b. 단계 a에서의 결정에 기초하여, 후속적으로 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 제공하는 단계
    를 포함하는, 암의 치료를 필요로 하는 인간에서 암을 치료하는 방법.
  4. 암으로 진단된 인간 환자에게 치료 유효 용량의 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 투여 전 인간 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준은 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 것으로 결정된 것인, 암을 치료하는 방법.
  5. 암으로 진단된 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자로부터의 혈청 샘플 중 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준과 유사한 경우에, 환자는 CAR T 세포에 대한 후보인, 암으로 진단된 환자에게 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포를 투여할지 결정하는 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자가 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9 (sCD137 또는 s4-1BB), DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자가 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 다발성 골수종인 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, CAR T 세포가 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포인 방법.
  10. 제9항에 있어서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포가 BCMA02, ABECMAⓒ, JCARH125, JNJ-68284528 (LCAR-B38M; 10,934,363의 서열식별번호: 265 또는 WO 2018/028647의 서열식별번호: 300을 포함하는 단백질, 신호 펩티드의 존재 또는 부재 하의 어느 하나) (얀센/레전드), P-BCMA-101 (포세이다), PBCAR269A (포세이다), P-BCMA-Allo1 (포세이다), Allo-715 (화이자/알로진), CT053 (카르스겐), 데스카르테스-08 (카르테시안), PHE885 (노파르티스), 및 CTX120 (CRISPR 테라퓨틱스)을 포함하는 군으로부터 선택된 것인 방법.
  11. 제10항에 있어서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포가 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)인 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 1종 이상의 염증-관련 가용성 인자의 수준이 O-링크 IO 분석물 검정에 의해 결정되는 것인 방법.
  13. 암의 치료를 필요로 하는 인간에게 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포, 및 PGF, CD70, TNFRSF4, TNFRSF9, DCN, CD83, IL10, PDCD1, IL12, 및 NCR1로 이루어진 군으로부터 선택된 염증-관련 가용성 인자의 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 인간에서 암을 치료하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 염증-관련 가용성 인자가 PGF, CD70, TNFRSF9 및 CD83으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 방법.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제가 인간에서의 염증-관련 가용성 인자의 수준을 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포에 반응성인 환자에서의 염증-관련 가용성 인자의 수준으로 감소시키기 위한 치료 유효량으로 인간에게 투여되는 것인 방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 암이 다발성 골수종인 방법.
  17. 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, CAR T 세포가 BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포인 방법.
  18. 제17항에 있어서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포가 BCMA02, ABECMAⓒ, JCARH125, JNJ-68284528 (LCAR-B38M; 10,934,363의 서열식별번호: 265 또는 WO 2018/028647의 서열식별번호: 300을 포함하는 단백질, 신호 펩티드의 존재 또는 부재 하의 어느 하나) (얀센/레전드), P-BCMA-101 (포세이다), PBCAR269A (포세이다), P-BCMA-Allo1 (포세이다), Allo-715 (화이자/알로진), CT053 (카르스겐), 데스카르테스-08 (카르테시안), PHE885 (노파르티스), 및 CTX120 (CRISPR 테라퓨틱스)을 포함하는 군으로부터 선택된 것인 방법.
  19. 제18항에 있어서, BCMA에 대해 지시된 CAR T 세포가 이데캅타진 비클류셀 세포 (ide-cel)인 방법.
  20. 제13항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제가 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여 전에 투여되는 것인 방법.
  21. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제가 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일 또는 7일 전에 투여되는 것인 방법.
  22. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제가 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1주, 2주, 3주 또는 4주 전에 투여되는 것인 방법.
  23. 제13항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 염증-관련 가용성 인자의 길항제가 상기 인간 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포의 투여의 약 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월 또는 6개월 전에 투여되는 것인 방법.
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Family Cites Families (33)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
US4873192A (en) 1987-02-17 1989-10-10 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Process for site specific mutagenesis without phenotypic selection
US6534055B1 (en) 1988-11-23 2003-03-18 Genetics Institute, Inc. Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
US5858358A (en) 1992-04-07 1999-01-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US6905680B2 (en) 1988-11-23 2005-06-14 Genetics Institute, Inc. Methods of treating HIV infected subjects
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5283173A (en) 1990-01-24 1994-02-01 The Research Foundation Of State University Of New York System to detect protein-protein interactions
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
US6005079A (en) 1992-08-21 1999-12-21 Vrije Universiteit Brussels Immunoglobulins devoid of light chains
PT1498427E (pt) 1992-08-21 2010-03-22 Univ Bruxelles Imunoglobulinas desprovidas de cadeias leves
DK0698097T3 (da) 1993-04-29 2001-10-08 Unilever Nv Produktion af antistoffer eller (funktionaliserede) fragmenter deraf afledt af Camelidae-immunoglobuliner med tung kæde
US7175843B2 (en) 1994-06-03 2007-02-13 Genetics Institute, Llc Methods for selectively stimulating proliferation of T cells
US5827642A (en) 1994-08-31 1998-10-27 Fred Hutchinson Cancer Research Center Rapid expansion method ("REM") for in vitro propagation of T lymphocytes
US7067318B2 (en) 1995-06-07 2006-06-27 The Regents Of The University Of Michigan Methods for transfecting T cells
US6692964B1 (en) 1995-05-04 2004-02-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy Methods for transfecting T cells
US6013516A (en) 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
US5994136A (en) 1997-12-12 1999-11-30 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
FR2777909B1 (fr) 1998-04-24 2002-08-02 Pasteur Institut Utilisation de sequences d'adn de structure triplex pour le tranfert de sequences de nucleotides dans des cellules, vecteurs recombinants contenant ces sequences triplex
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US7572631B2 (en) 2000-02-24 2009-08-11 Invitrogen Corporation Activation and expansion of T cells
KR20030032922A (ko) 2000-02-24 2003-04-26 싸이트 테라피스 인코포레이티드 세포의 동시 자극 및 농축
CA2446110C (en) 2001-05-01 2013-06-25 National Research Council Of Canada A system for inducible expression in eukaryotic cells
WO2003057171A2 (en) 2002-01-03 2003-07-17 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Activation and expansion of t-cells using an engineered multivalent signaling platform
FR2872170B1 (fr) 2004-06-25 2006-11-10 Centre Nat Rech Scient Cnrse Lentivirus non interactif et non replicatif, preparation et utilisations
BR112013024395B1 (pt) 2011-03-23 2021-10-26 Fred Hutchinson Cancer Research Center Composições adotivas de imunoterapia celular e método para fabricação da dita composição
WO2014097442A1 (ja) 2012-12-20 2014-06-26 三菱電機株式会社 車載装置及びプログラム
US9108442B2 (en) 2013-08-20 2015-08-18 Ricoh Company, Ltd. Image forming apparatus
KR102584938B1 (ko) 2014-12-12 2023-10-05 2세븐티 바이오, 인코포레이티드 Bcma 키메릭 항원 수용체
SG10201913620QA (en) * 2015-05-28 2020-03-30 Kite Pharma Inc Diagnostic methods for t cell therapy
CN105384825B (zh) 2015-08-11 2018-06-01 南京传奇生物科技有限公司 一种基于单域抗体的双特异性嵌合抗原受体及其应用
US9916433B2 (en) 2016-02-10 2018-03-13 ContinUse Biometrics Ltd. Condition authentication based upon temporal-spatial analysis of vibrational responsivity

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