CN116802743A - 曾经历先前抗癌烷化剂疗法的患者中的car t细胞疗法 - Google Patents
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Landscapes
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本文提供了嵌合抗原受体(CAR)用于治疗肿瘤或癌症(如B细胞相关癌症，例如多发性骨髓瘤)的用途。此外，可以通过接收多名受试者中每名受试者的先前治疗历史数据来确定用于在先前暴露之后开始进行治疗受试者病症的疗法的最佳清除期。然后可以从每名受试者的先前治疗历史数据导出左删失数据，所述左删失数据包括清除期和事件或删失。然后将所述左删失治疗数据的时间尺度反转以产生右删失治疗数据。然后将右删失治疗数据应用于时间‑事件(TTE)模型，所述模型将一个或多个感兴趣的变量与自暴露于先前暴露起的时间相关联。针对所述一个或多个感兴趣的变量内的连续变量，计算在预定义百分位数范围内的多个截止值上的最大选择对数秩统计量。然后针对所述连续变量，鉴定具有低于第一预定义阈值的最大选择对数秩统计量的一个或多个变量及相关截止值。然后针对所述一个或多个感兴趣的变量内的顺序变量或分类变量，计算每个(n‑1)层相对于参考层的检验统计量。鉴定相对于所述参考层具有低于第二预定义阈值的检验统计量的一个或多个顺序变量或分类变量及相关层。然后基于具有低于所述预定义阈值的最低值的截止值并且相对于低于所述预定义阈值的受试值中值和高于所述预定义阈值的受试值中值，确定所述疗法的最佳清除期。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年11月4日提交的美国申请号63/109,804、2020年12月1日提交的美国申请号63/120,166和2020年12月4日提交的美国申请号63/121,658的权益，其各自的公开内容通过引用以其整体并入本文。
对电子递交的序列表的引用
本申请通过引用并入以ASCII文本文件的形式与本申请一起提交的序列表，其名称为“14247-619-228_SEQ_LISTING_CRF.txt”，创建于2021年11月2日，且大小为33,964字节。
1.技术领域
本文呈现的公开文本涉及治疗肿瘤或癌症(如B细胞相关癌症，例如多发性骨髓瘤)的方法。更具体地，本公开文本涉及使用包含抗体或其抗原结合片段(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)的嵌合抗原受体(CAR)以及经基因修饰以表达这些CAR的免疫效应细胞(例如，T细胞)治疗肿瘤或癌症(如B细胞相关癌症，例如多发性骨髓瘤)的改进方法。本公开文本还涉及制造用于治疗肿瘤或癌症(如B细胞相关癌症，例如多发性骨髓瘤)的包含抗体或其抗原结合片段(例如，抗BCMA抗体或其抗原结合片段)的CAR的方法。本主题还涉及使用时间-事件模型来确定先前治疗方案的最佳暴露清除期的技术。
2.背景技术
2.1.背景技术
目前有许多选择可用于治疗癌症，包括例如传统的化学治疗方法以及免疫疗法，如嵌合抗原受体(CAR)T细胞疗法。在某些情况下，使用一种疗法可能使得第二次治疗的施用不太理想。因此，当将癌症疗法(例如，CAR-T疗法)施用至患者时，例如当依序施用时，存在优化此类疗法的施用的需要。
此外，在许多情形下，患者可能会更换护理人员和/或改变与诸如癌症等疾病的治疗相关的暴露方案。患者通常有广泛且多变的先前治疗史，并且这些先前暴露可影响他们目前的状态，进而可影响他们对现在暴露的反应。
3.发明内容
本公开文本总体上提供了治疗肿瘤或癌症(如B细胞相关癌症，例如多发性骨髓瘤)的改进方法。
在一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者施用烷基化剂；(b)在步骤(a)后至少约六(6)个月，从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(c)确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；(d)基于步骤(c)的确定，随后从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及(e)向所述受试者施用所述CAR T细胞。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是修订的国际分期系统(R-ISS)III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及(c)向所述受试者施用所述CAR T细胞，其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约六(6)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及(c)向所述受试者施用所述CAR T细胞，其中所述受试者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂；其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。在特定实施方案中，步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括：(a)确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；(b)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(c)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及(d)向所述受试者施用所述CAR T细胞。在特定实施方案中，在步骤(a)中，在所述确定步骤之前少于约七(7)个月、少于约八(8)个月、少于约九(9)个月、少于约十(10)个月、少于约十一(11)个月、少于约十二(12)个月、少于约十三(13)个月、或少于约十四(14)个月，所述受试者尚未被施用所述烷基化剂。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及(c)向所述受试者施用所述CART细胞，其中，在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。在特定实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括向所述受试者施用从分离自所述患者的外周血单个核细胞PBMC制造的表达嵌合抗原受体的T细胞(CAR T细胞)，其中，在分离所述PBMC时，所述受试者在分离所述PBMC时之前至少约六(6)个月最后一次接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在分离所述PBMC时之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者已最后一次接受所述烷基化剂。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括向所述受试者施用从分离自所述患者的外周血单个核细胞PBMC制造的表达嵌合抗原受体的T细胞(CAR T细胞)，其中，在分离所述PBMC时，所述PBMC包括至少约20％的T细胞。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者施用烷基化剂；(b)在步骤(a)后至少约六个月，从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(c)确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；(d)基于步骤(c)的确定，随后从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)；以及(e)向所述受试者施用所述CAR T细胞。在特定实施方案中，步骤(b)是在向所述受试者施用烷基化剂的步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)；以及(c)向所述受试者施用所述CAR T细胞，其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(b)从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)；(c)向所述受试者施用所述BCMA CAR T细胞，其中所述患者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂，并且其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。在特定实施方案中，步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗癌症的烷基化剂，所述方法包括：(a)确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；(b)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，其中所述分离是在已经向所述受试者施用所述烷基化剂后至少六(6)个月进行的；(c)从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)；以及(d)向所述受试者施用所述BCMA CAR T细胞。在特定实施方案中，在步骤(a)中，在所述确定步骤之前少于约七(7)个月、少于约八(8)个月、少于约九(9)个月、少于约十(10)个月、少于约十一(11)个月、少于约十二(12)个月、少于约十三(13)个月、或少于约十四(14)个月，所述受试者尚未被施用所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(b)从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)；以及(c)向所述受试者施用所述BCMA CAR T细胞，其中，在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。在特定实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括向所述受试者施用从分离自所述患者的外周血单个核细胞PBMC制造的针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)，其中，在分离所述PBMC时，所述受试者在分离所述PBMC时之前至少约六(6)个月最后一次接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在分离所述PBMC时之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者已最后一次接受所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，并且例如，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括向所述受试者施用从分离自所述患者的外周血单个核细胞PBMC制造的针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)，其中，在分离所述PBMC时，所述PBMC包含至少约20％的T细胞。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者施用用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂；(b)在步骤(a)后至少约六个月从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及(c)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；以及(b)基于步骤(b)中的确定，随后从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；和(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；其中所述受试者先前已接受用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂；其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。在特定实施方案中，步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂，所述方法包括：a.确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；b.从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及c.从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，在步骤(a)中，在所述确定步骤之前少于约七(7)个月、少于约八(8)个月、少于约九(9)个月、少于约十(10)个月、少于约十一(11)个月、少于约十二(12)个月、少于约十三(13)个月、或少于约十四(14)个月，所述受试者尚未被施用所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；其中，在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。在特定实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；以及(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造所述CAR T细胞；其中所述受试者先前已接受用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者施用用于治疗癌症的烷基化剂；(b)在步骤(a)后至少约六个月从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及(c)从所述PBMC制造BCMA CAR T细胞。在特定实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；以及(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造BCMA CAR T细胞；其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗癌症的烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；和(b)从所述PBMC制造BCMA CAR T细胞；其中所述受试者先前已接受用于治疗癌症的烷基化剂；其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。在特定实施方案中，步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗癌症的烷基化剂，所述方法包括：a.确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；b.从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及c.从所述PBMC制造BCMA CAR T细胞。在特定实施方案中，步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA(c)的嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗癌症的烷基化剂，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及(b)从所述PBMC制造BCMA T细胞；其中，在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。在特定实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；以及(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造所述BCMA CAR T细胞；其中所述受试者先前已接受用于治疗由BCMA表达细胞引起的癌症的烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种确定患有癌症的受试者是否可以用CAR T疗法治疗的方法，所述方法包括确定所述受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比，其中，(i)如果所述受试者具有相对于PBMC数量少于约20％的CD3+T细胞，则不向所述受试者施用所述CAR T疗法，以及(ii)如果所述受试者具有相对于PBMC数量超过约20％的CD3+T细胞，则向所述受试者施用所述CAR T疗法。在特定实施方案中，所述CD3+T细胞是CD45+/CD3+T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括已确定所述受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比高于约20％，并向所述受试者施用CAR T疗法。在特定实施方案中，所述CD3+T细胞是CD45+/CD3+T细胞。
通常，本文所述的TTE模型告知事件与先前事件之间的时间，如疗法与先前暴露(例如，先前疗法)之间的时间(即清除时间)，条件是与事件和先前事件有关的时序数据可用。
在相互关联的方面，可以通过接收多名受试者中每名受试者的先前治疗历史数据来确定用于在先前暴露之后开始进行治疗受试者病症的疗法的最佳清除期。然后可以从每名受试者的先前治疗历史数据导出左删失数据，所述左删失数据包括清除期和事件或删失。然后将所述左删失治疗数据的时间尺度反转以产生右删失治疗数据。然后将右删失治疗数据应用于时间-事件(TTE)模型，所述模型将一个或多个感兴趣的变量与自暴露于先前暴露起的时间相关联。针对所述一个或多个感兴趣的变量内的连续变量，计算在预定义百分位数范围内的多个截止值上的最大选择对数秩统计量。然后针对所述连续变量，鉴定具有低于第一预定义阈值的最大选择对数秩统计量的一个或多个变量及相关截止值。然后针对所述一个或多个感兴趣的变量内的顺序变量或分类变量，计算每个(n-1)层相对于参考层的检验统计量(例如，Cox比例危险统计量等)。鉴定相对于所述参考层具有低于第二预定义阈值的检验统计量(例如，Cox比例危险统计量等)的一个或多个顺序变量或分类变量及相关层。然后基于具有低于所述预定义阈值的最低值的截止值并且相对于低于所述预定义阈值的受试值中值和高于所述预定义阈值的受试值中值，确定所述疗法的最佳清除期。
可以提供所确定的清除期。在这方面，所提供的可包括以下一者或多者：使所确定的最佳清除期显示在电子视觉显示器中，物理上持久地存储所确定的最佳清除期，将所确定的最佳清除期加载到存储器中，或通过网络将所确定的最佳清除期传输到远程计算设备。
TTE模型可以是比例危险模型，如Cox比例危险模型。
可以由形成至少一个计算设备的一部分的至少一个数据处理器执行所述接收、导出、反转、应用、第一或第二计算、第一或第二鉴定以及确定中的一者或多者。
所述先前暴露可以是先前疗法。
所述先前暴露和所述疗法可以是不同类型的疗法。
所述先前暴露可以用于治疗与用所述疗法治疗的病症不同的病症。
所述先前暴露可以用于治疗与用所述疗法治疗的病症相同的病症。
所述先前暴露和所述疗法可以用于治疗相同的病症并且是相同类型的疗法。
所述疗法可以是二线疗法或更靠后(例如，三线、四线、五线、六线、七线或更靠后)的治疗线，并且所述先前暴露是更靠前的治疗线。
由TTE模型提供的信息可以告知(i)受试者在已经历先前暴露后应接受所述疗法的时间或(ii)临床试验中的排除标准。
所述疗法和/或所述先前暴露可以是放射疗法、化学疗法、免疫疗法、手术、移植、基因疗法或细胞疗法。
所述病症可以是癌症、免疫疾病(例如自身免疫性疾病)、心血管疾病、纤维化、感染性疾病或神经系统病症。
所述病症可以是可以通过刺激免疫系统来治疗的病症，例如癌症和感染性疾病，并且所述疗法是刺激或增强免疫系统的疗法，例如免疫疗法和细胞疗法。
所述病症可以是癌症，并且所述疗法可以是细胞疗法，例如CAR T。
所述先前暴露可以是先前疗法，并且所述先前疗法可以是先前癌症治疗。
所述癌症可以是多发性骨髓瘤，所述治疗可以是BCMA CAR T(例如，包含SEQ IDNO:37的CAR或编码SEQ ID NO:9或37的CAR的核酸)，并且所述先前治疗可以是针对多发性骨髓瘤的先前癌症治疗。
所述先前暴露可以是烷化剂疗法。
在一些变型中，所述先前暴露不是先前疗法。
所述先前暴露可以是可对所述疗法产生负面影响的事件。
所述先前暴露可以是先前病症。
所述先前暴露可以是炎性病症或感染性疾病(例如，病毒感染，如COVID-19感染)。
在相互关联的方面，可以通过向受试者施用用于治疗病症的疗法来治疗受试者的病症，其中在先前暴露后施用所述疗法，并且其中使用如本文提供的方法计算在所述先前暴露后到施用所述疗法所用的时间(即，所述清除期)。
在另外的相互关联的方面，可以通过在使用如本文提供的方法确定的在先前暴露后的时间向受试者施用用于治疗病症的疗法来治疗所述受试者的病症，其中在所述先前暴露后施用所述疗法。
在再另外的相互关联的方面，一种系统可以包括至少一个数据处理器和存储指令的存储器，所述指令在由所述至少一个数字处理器执行时实现如本文提供的方法。
在又另外的相互关联的方面，非暂时性计算机程序产品可以存储指令，所述指令在由至少一个计算设备执行时实现如本文提供的方法。
通常，本文所述的TTE模型告知事件与先前事件之间的时间，如疗法与先前暴露(例如，先前疗法)之间的时间(即清除时间)，条件是与事件和先前事件有关的时序数据可用。
当前主题的方面可以体现在存储指令的非暂时性计算机程序产品(即，物理体现的计算机程序产品)中，所述指令在由一个或多个计算系统的一个或多个数据处理器执行时使得至少一个数据处理器执行本文的操作。类似地，当前主题可以体现在计算机系统中，所述计算机系统包括一个或多个数据处理器和联接到所述一个或多个数据处理器的存储器。存储器可以暂时或永久存储指令，所述指令使至少一个处理器执行本文所述的一个或多个操作。此外，方法可以由单个计算系统内或分布于两个或更多个计算系统中的一个或多个数据处理器实现。此类计算系统经由一个或多个连接(包括但不限于通过网络(例如，互联网、无线广域网、局域网、广域网、有线网络等)的连接)、经由所述多个计算系统中的一个或多个之间的直接连接等，可以进行连接并可以交换数据和/或命令或其他指令等。
4.附图说明
图1显示了B细胞成熟抗原(BCMA)CAR构建体(抗BCMA02 CAR)的示意图。
图2A和图2B示出了烷化剂清除与外周血单个核细胞(PBMC)材料中的CD3+细胞之间的相关性。图2A示出了新颖的左删失时间-事件模型，其中时间被反转(即第零天(0)是单采术那天；曲线从右向左读；从单采术那天(即第零天(0))向右移动，时间呈现为向后移动到过去)。提供“受试者数量”的表格列出了每个时间间隔暴露于烷基化剂的患者数量。“未暴露的分数”(在Y轴上)是指在x轴上指示的时间尚未暴露于烷基化剂的患者的比例。“之上”是指从单采术材料分离(并用作CAR T制造的输入)的PBMC中T细胞含量≥20％的患者子集；类似地，“之下”是指PBMC中T细胞含量<20％的患者子集。20％截止值是通过统计程序鉴定的，使自最后一次暴露起的时间曲线之间的差异最大化，并且调整p值以解释在优化期间对多个截止值的检验。图2B示出了使用所编码的清除的斯皮尔曼系数。自最后一次暴露起的时间转换为1/log(-1*自最后一次暴露起的天数)，提供了从0到-1的连续性(-1表示最近完全暴露，0表示从未暴露)。
图3描绘了如下一般方案：制造ide-cel CAR T细胞并将其输注到复发性和难治性多发性骨髓瘤(RRMM)患者中，随后评估所述患者对ide-cel疗法的反应(Cy，环磷酰胺；Flu，氟达拉滨；RRMM，复发性和难治性多发性骨髓瘤；PD，疾病进展；IMiD，免疫调节药物；PI，蛋白酶体抑制剂；IMWG，国际骨髓瘤工作组；MM，多发性髓瘤；a定义为在先前抗骨髓瘤方案最后一次给药期间或先前抗骨髓瘤方案最后一次给药起60天内记录的疾病进展；b要求患者在输注后住院14天，并允许在疾病进展时进行ide-cel再治疗，以获得至少为疾病稳定的最佳反应)。
图4A和图4B示出了对接受CAR T细胞疗法的患者的先前烷基化剂暴露的分析结果。图4A示出了患者百分比相对于先前抗骨髓瘤方案数量(上图)和患者百分比相对于平均每年先前方案数量(先前疗法数量/自诊断出起的时间)(下图)。图4B示出了患者百分比相对于自最后一次烷基化剂暴露起的时间，其中时间以月指示。
图5描绘了在单采术之前对患者进行43个变量的筛选的通用方案，其中从患者分离PBMC，以用于制造CAR T细胞药物产品(LDC，淋巴细胞清除化学疗法；PBMC，外周血单个核细胞)。
图6示出了新颖的时间-事件模型，以用于估计先前疗法暴露的影响(HR，危险比)。
图7A和图7B示出了与烷基化剂暴露相关的患者特征的分析结果。图7A示出了关于sBCMA(ng/mL)、铁蛋白(ng/mL)、BMI(kg/m2)和年龄(岁)的自最后一次暴露起的时间模型(即烷基化剂暴露)(来自血液的可溶性因子：sBCMA(可溶性B细胞成熟抗原)；血液化学：铁蛋白；患者：BMI(身体质量指数)，年龄；HR，危险比)。图7B示出了与先前方案的相关性；特别是基线时的铁蛋白(ng/mL)相对于平均每年先前方案数量(上图)和基线时的BMI(kg/m2)相对于平均每年先前方案数量(下图)。
图8A和图8B示出了与烷基化剂暴露相关的免疫因子的分析结果。图8A示出了关于颗粒酶B、IL-7和CD3+细胞的自最后一次暴露起的时间模型(即烷基化剂暴露)(来自血液的可溶性因子：颗粒酶B，IL-7；来自单采术的PBMC：CD3+；HR，危险比；IL，白细胞介素；PBMC，外周血单个核细胞)。图8B示出了在最近暴露的患者亚群中针对低T细胞含量的富集(a20％阈值是由最大统计算法确定的最佳分界点)。
图9A和图9B示出了在最后一次暴露于烷基化剂后≥6个月，可检测到T细胞耗尽。图9A示出了按暴露箱的CD45+/CD3+T细胞含量(PBMC，外周血单个核细胞)。图9B示出了PBMC中T细胞含量与先前方案的相关性(即，CD45+/CD3+PBMC％相对于平均每年先前方案数量)。
图10A和图10B示出了与烷基化剂暴露相关的T细胞记忆表型。图10A示出了CD8+中间型、CD8+TEMRA和CD8+TEM细胞的自最后一次暴露起的时间模型(即烷基化剂暴露)。图10B示出了与先前方案的相关性；特别是CD8+的TEMRA PBMC％相对于平均每年先前方案数量(上图)以及CD8+的TEM PBMC％相对于平均每年先前方案数量(下图)(来自单采术的PBMC：CD8+TEM、TEMRA和中间型(CD28+/CD27-)，CD8+中间型：CD3+/CD8+/CD28+/CD27-；HR，危险比；PBMC，外周血单个核细胞；TEM，效应记忆T细胞；TEMRA，效应记忆RA T细胞)。
图11是展示出使用时间-事件模型确定治疗方案的流程图。
图12是展示出用于实现当前主题各方面的计算设备的图表。
5.序列标识符的简要说明
SEQ ID NO:1-3示出了本文所设想的BCMA CAR的示例性轻链CDR序列的氨基酸序列。
SEQ ID NO:4-6示出了本文所设想的BCMA CAR的示例性重链CDR序列的氨基酸序列。
SEQ ID NO:7示出了本文所设想的BCMA CAR的示例性轻链序列的氨基酸序列。
SEQ ID NO:8示出了本文所设想的BCMA CAR的示例性重链序列的氨基酸序列。
SEQ ID NO:9示出了具有信号肽(氨基酸1-22)的本文所设想的示例性BCMA CAR的氨基酸序列。成熟形式的BCMA02的氨基酸序列示于SEQ ID NO:37中。
SEQ ID NO:10示出了编码本文所设想的示例性BCMA CAR的多核苷酸序列。
SEQ ID NO:11示出了人BCMA的氨基酸序列。
SEQ ID NO:12-22示出了各种接头的氨基酸序列。
SEQ ID NO:23-35示出了蛋白酶切割位点和自切割多肽切割位点的氨基酸序列。
SEQ ID NO:36示出了编码示例性BCMA CAR的载体的多核苷酸序列。参见表1。
SEQ ID NO:37示出了本文所设想的示例性成熟BCMA CAR的氨基酸序列(即，没有信号序列)。
SEQ ID NO:38示出了BCMA02 scFv的氨基酸序列。
表1：序列表：
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6.具体实施方式
6.1.使用嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗肿瘤或癌症的方法和制造CAR T细胞的方法
本文呈现的公开文本总体上涉及治疗肿瘤或癌症(例如，B细胞相关疾病或癌症，包括多发性骨髓瘤)的改进方法。本文呈现的公开文本还涉及制造CAR T细胞(例如，针对BCMA的CAR T细胞(BCMA CAR T细胞))的方法。如本文所用，术语“B细胞相关病症”涉及与不适当的B细胞活性和B细胞恶性肿瘤有关的病症。
本文呈现的特定实施方案涉及使用经基因修饰的免疫效应细胞对疾病(例如，肿瘤或癌症或B细胞相关疾病或癌症，包括多发性骨髓瘤)的改进的过继细胞疗法。基因方法提供了一种增强对癌细胞的免疫识别和消除的潜在手段。一个有希望的策略是将免疫效应细胞基因工程化以表达嵌合抗原受体(CAR)，其将细胞毒性重定向至癌细胞。
施用CAR T细胞疗法以用于在被施用本文公开的CAR T细胞疗法之前已被施用烷基化剂(例如，用于化学疗法)的受试者(例如患者)中的改进方法包括其中在已向受试者施用烷基化剂后一段时间(即“清除”期)后进行从受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)的步骤的方法。施用CAR T细胞疗法以用于在被施用本文公开的CAR T细胞疗法之前已被施用烷基化剂(例如，用于化学疗法)的受试者中的改进方法可以与以下细胞一起使用：可以容易地扩增、在体内展现出长期持久性的经基因修饰的免疫效应细胞(例如，CAR T细胞)，以及例如，通过靶向表达B细胞成熟抗原(BCMA，也称为CD269或肿瘤坏死因子受体超家族成员17；TNFRSF17)的B细胞来减少体液免疫损伤的经基因修饰的免疫效应细胞(例如，CAR T细胞)。本文还公开了从已被施用烷基化剂(例如，用于化学疗法)的患者分离的PBMC制造CART细胞(例如，BCMA CAR T细胞)的改进方法。
BCMA是肿瘤坏死因子受体超家族的成员(参见例如，Thompson等人,J.Exp.Medicine,192(1):129-135,2000，和Mackay等人,Annu.Rev.Immunol,21:231-264,2003。BCMA结合B细胞激活因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)(参见例如，Mackay等人,2003以及Kalled等人,Immunological Reviews,204:43-54,2005)。在非恶性细胞中，BCMA已被报道为主要在浆细胞和成熟B细胞的子集中表达(参见例如，Laabi等人,EMBO J.,77(1):3897-3904,1992；Laabi等人,Nucleic Acids Res.,22(7):1147-1154,1994；Kalled等人,2005；O'Connor等人,J.Exp.Medicine,199(1):91-97,2004；以及Ng等人,J.Immunol.,73(2):807-817,2004)。缺乏BCMA的小鼠是健康的并且具有正常数量的B细胞，但长寿的浆细胞的存活受损(参见例如，O'Connor等人,2004；Xu等人,Mol.Cell.Biol.,21(12):4067-4074,2001；以及Schiemann等人,Science,293(5537):2 111-21 14,2001)。多个研究人员已在多发性骨髓瘤细胞和其他淋巴瘤中普遍检测到BCMA RNA，并且已在来自多发性骨髓瘤患者的浆细胞的表面上检测到BCMA蛋白(参见例如，Novak等人,Blood,103(2):689-694,2004；Neri等人,Clinical Cancer Research,73(19):5903-5909,2007；Bellucci等人,Blood,105(10):3945-3950,2005；以及Moreaux等人,Blood,703(8):3148-3157,2004)。
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者施用烷基化剂；(b)在步骤(a)后至少约六(6)个月，从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(c)确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；(d)基于步骤(c)的确定，随后从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及(e)向所述受试者施用所述CAR T细胞。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十(10)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约九(9)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在步骤(a)后至少约六(6)个月至约七(7)个月进行的。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在步骤(a)后至少约十三(13)个月至约十四(14)个月进行的。
在另一个具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月进行的。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及(c)向所述受试者施用所述CAR T细胞，其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约六(6)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约七(7)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在步骤(a)之前至少约十三(13)个月至约十四(14)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在另一个具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及(c)向所述受试者施用所述CAR T细胞，其中所述受试者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂；其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。在特定实施方案中，步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。在具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十(10)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约九(9)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约七(7)个月发生。在具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约十三(13)个月至约十四(14)个月发生。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在另一个具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月发生。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括：(a)确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；(b)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(c)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及(d)向所述受试者施用所述CAR T细胞。在特定实施方案中，在步骤(a)中，在所述确定步骤之前少于约七(7)个月、少于约八(8)个月、少于约九(9)个月、少于约十(10)个月、少于约十一(11)个月、少于约十二(12)个月、少于约十三(13)个月、或少于约十四(14)个月，所述受试者尚未被施用所述烷基化剂。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及(c)向所述受试者施用所述CART细胞，其中，在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。在特定实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。在具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月至约十四(14)个月前、至少约六(6)个月至约十三(13)个月前、至少约六(6)个月至约十二(12)个月前、至少约六(6)个月至约十一(11)个月前、至少约六(6)个月至约十(10)个月前、至少约六(6)个月至约九(9)个月前、至少约六(6)个月至约八(8)个月、或至少约六(6)个月至约七(7)个月前被施用烷基化剂。在具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月至约十四(14)个月前、在至少约八(8)个月至约十四(14)个月前、在至少约九(9)个月至约十四(14)个月前、在至少约十(10)个月至约十四(14)个月前、在至少约十一(11)个月至约十四(14)个月前、在至少约十二(12)个月至约十四(14)个月前、或在至少约十三(13)个月至约十四(14)个月前被施用烷基化剂。
在另一个具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月前、或在至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月前被施用烷基化剂。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括向所述受试者施用从分离自所述患者的外周血单个核细胞PBMC制造的表达嵌合抗原受体的T细胞(CAR T细胞)，其中，在分离所述PBMC时，所述受试者在分离所述PBMC时之前至少约六(6)个月最后一次接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在分离所述PBMC时之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者已最后一次接受所述烷基化剂。
在另一个具体实施方案中，在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月，所述受试者已最后一次接受烷基化剂。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括向所述受试者施用从分离自所述患者的外周血单个核细胞PBMC制造的表达嵌合抗原受体的T细胞(CAR T细胞)，其中，在分离所述PBMC时，所述PBMC包括至少约20％的T细胞。
在具体实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在具体实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在具体实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在具体实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在具体实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者施用烷基化剂；(b)在步骤(a)后至少约六个月，从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(c)确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；(d)基于步骤(c)的确定，随后从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)；以及(e)向所述受试者施用所述CAR T细胞。在特定实施方案中，步骤(b)是在向所述受试者施用烷基化剂的步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十(10)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约九(9)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在步骤(a)后至少约六(6)个月至约七(7)个月进行的。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在步骤(a)后至少约十三(13)个月至约十四(14)个月进行的。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在另一个具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月进行的。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)；以及(c)向所述受试者施用所述CAR T细胞，其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约七(7)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)之前至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在步骤(a)之前至少约十三(13)个月至约十四(14)个月进行的。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRA T细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在另一个具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(b)从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)；(c)向所述受试者施用所述BCMA CAR T细胞，其中所述患者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂，并且其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。在特定实施方案中，步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。在具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十(10)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约九(9)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约七(7)个月发生。在具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约十三(13)个月至约十四(14)个月发生。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在另一个具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月发生。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗癌症的烷基化剂，所述方法包括：(a)确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；(b)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，其中所述分离是在已经向所述受试者施用所述烷基化剂后至少六(6)个月进行的；(c)从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)；以及(d)向所述受试者施用所述BCMA CAR T细胞。在特定实施方案中，在步骤(a)中，在所述确定步骤之前少于约七(7)个月、少于约八(8)个月、少于约九(9)个月、少于约十(10)个月、少于约十一(11)个月、少于约十二(12)个月、少于约十三(13)个月、或少于约十四(14)个月，所述受试者尚未被施用所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；(b)从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)；以及(c)向所述受试者施用所述BCMA CAR T细胞，其中，在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。在特定实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。在具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月至约十四(14)个月前、至少约六(6)个月至约十三(13)个月前、至少约六(6)个月至约十二(12)个月前、至少约六(6)个月至约十一(11)个月前、至少约六(6)个月至约十(10)个月前、至少约六(6)个月至约九(9)个月前、至少约六(6)个月至约八(8)个月、或至少约六(6)个月至约七(7)个月前被施用烷基化剂。在具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月至约十四(14)个月前、在至少约八(8)个月至约十四(14)个月前、在至少约九(9)个月至约十四(14)个月前、在至少约十(10)个月至约十四(14)个月前、在至少约十一(11)个月至约十四(14)个月前、在至少约十二(12)个月至约十四(14)个月前、或在至少约十三(13)个月至约十四(14)个月前被施用烷基化剂。
在另一个具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月前、或在至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月前被施用烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括向所述受试者施用从分离自所述患者的外周血单个核细胞PBMC制造的针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)，其中，在分离所述PBMC时，所述受试者在分离所述PBMC时之前至少约六(6)个月最后一次接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在分离所述PBMC时之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者已最后一次接受所述烷基化剂。
在另一个具体实施方案中，在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在分离PBMC时之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月，所述受试者已最后一次接受烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括向所述受试者施用从分离自所述患者的外周血单个核细胞PBMC制造的针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)，其中，在分离所述PBMC时，所述PBMC包含至少约20％的T细胞。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在特定实施方案中，在将所述BCMA CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
在特定实施方案中，通过静脉内输注施用所述BCMA CAR T细胞。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者施用用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂；(b)在步骤(a)后至少约六个月从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及(c)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十(10)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约九(9)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在步骤(a)后至少约六(6)个月至约七(7)个月进行的。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在步骤(a)后至少约十三(13)个月至约十四(14)个月进行的。
在另一个具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月进行的。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；以及(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约七(7)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在步骤(a)之前至少约十三(13)个月至约十四(14)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在另一个具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；和(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；其中所述受试者先前已接受用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂；其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。在特定实施方案中，步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。在具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十(10)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约九(9)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约七(7)个月发生。在具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约十三(13)个月至约十四(14)个月发生。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在另一个具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月发生。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂，所述方法包括：a.确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；b.从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及c.从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，在步骤(a)中，在所述确定步骤之前少于约七(7)个月、少于约八(8)个月、少于约九(9)个月、少于约十(10)个月、少于约十一(11)个月、少于约十二(12)个月、少于约十三(13)个月、或少于约十四(14)个月，所述受试者尚未被施用所述烷基化剂。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；其中，在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。在特定实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。在具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月至约十四(14)个月前、至少约六(6)个月至约十三(13)个月前、至少约六(6)个月至约十二(12)个月前、至少约六(6)个月至约十一(11)个月前、至少约六(6)个月至约十(10)个月前、至少约六(6)个月至约九(9)个月前、至少约六(6)个月至约八(8)个月、或至少约六(6)个月至约七(7)个月前被施用烷基化剂。在具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月至约十四(14)个月前、在至少约八(8)个月至约十四(14)个月前、在至少约九(9)个月至约十四(14)个月前、在至少约十(10)个月至约十四(14)个月前、在至少约十一(11)个月至约十四(14)个月前、在至少约十二(12)个月至约十四(14)个月前、或在至少约十三(13)个月至约十四(14)个月前被施用烷基化剂。
在另一个具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月前、或在至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月前被施用烷基化剂。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；以及(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造所述CAR T细胞；其中所述受试者先前已接受用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约七(7)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)之前至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在步骤(a)之前至少约十三(13)个月至约十四(14)个月进行的。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在另一个具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。
在特定实施方案中，所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)的方法，所述方法包括：(a)向所述受试者施用用于治疗癌症的烷基化剂；(b)在步骤(a)后至少约六个月从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及(c)从所述PBMC制造BCMA CAR T细胞。在特定实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约十(10)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约九(9)个月、在步骤(a)后至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在步骤(a)后至少约六(6)个月至约七(7)个月进行的。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在步骤(a)后至少约十三(13)个月至约十四(14)个月进行的。
在另一个具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在步骤(a)后至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月进行的。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；以及(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造BCMA CAR T细胞；其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗癌症的烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约七(7)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)之前至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在步骤(a)之前至少约十三(13)个月至约十四(14)个月进行的。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在另一个具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)的方法，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；和(b)从所述PBMC制造BCMA CAR T细胞；其中所述受试者先前已接受用于治疗癌症的烷基化剂；其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。在特定实施方案中，步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。在特定实施方案中，步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。在具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约十(10)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约九(9)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约六(6)个月至约七(7)个月发生。在具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约十三(13)个月至约十四(14)个月发生。
在另一个具体实施方案中，步骤(a)在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在受试者接受烷基化剂后至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月发生。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗癌症的烷基化剂，所述方法包括：a.确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；b.从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及c.从所述PBMC制造BCMA CAR T细胞。在特定实施方案中，步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA(c)的嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗癌症的烷基化剂，所述方法包括：(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及(b)从所述PBMC制造BCMA T细胞；其中，在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。在特定实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。在具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月至约十四(14)个月前、至少约六(6)个月至约十三(13)个月前、至少约六(6)个月至约十二(12)个月前、至少约六(6)个月至约十一(11)个月前、至少约六(6)个月至约十(10)个月前、至少约六(6)个月至约九(9)个月前、至少约六(6)个月至约八(8)个月、或至少约六(6)个月至约七(7)个月前被施用烷基化剂。在具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约七(7)个月至约十四(14)个月前、在至少约八(8)个月至约十四(14)个月前、在至少约九(9)个月至约十四(14)个月前、在至少约十(10)个月至约十四(14)个月前、在至少约十一(11)个月至约十四(14)个月前、在至少约十二(12)个月至约十四(14)个月前、或在至少约十三(13)个月至约十四(14)个月前被施用烷基化剂。
在另一个具体实施方案中，已确定所述受试者已在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月前、在至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月前、或在至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月前被施用烷基化剂。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在另一个方面，本文提供了一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)的方法，所述方法包括：(a).从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；并确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；以及b.基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造所述BCMA CAR T细胞；其中所述受试者先前已接受用于治疗由BCMA表达细胞引起的癌症的烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在特定实施方案中，在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。在具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约八(8)个月、或在步骤(a)之前至少约六(6)个月至约七(7)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。在具体实施方案中，步骤(b)是在步骤(a)之前至少约七(7)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约八(8)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约九(9)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十(10)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十一(11)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约十二(12)个月至约十四(14)个月、或在步骤(a)之前至少约十三(13)个月至约十四(14)个月进行的。
在另一个具体实施方案中，在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十四(14)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十三(13)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十二(12)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十一(11)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约十(10)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约九(9)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约八(8)个月、在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约七(7)个月、或在步骤(a)之前至少约四(4)个月或五(5)个月至约六(6)个月，所述受试者先前已接受烷基化剂。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。在特定实施方案中，所述癌症是多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。
在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。在特定实施方案中，所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。在特定实施方案中，所述烷基化剂是环磷酰胺。
在特定实施方案中，所述受试者是人。
在另一个方面，本文提供了一种确定患有癌症的受试者是否可以用CAR T疗法治疗的方法，所述方法包括确定所述受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比，其中，(i)如果所述受试者具有相对于PBMC数量少于约20％的CD3+T细胞，则不向所述受试者施用所述CAR T疗法，以及(ii)如果所述受试者具有相对于PBMC数量超过约20％的CD3+T细胞，则向所述受试者施用所述CAR T疗法。在特定实施方案中，所述CD3+T细胞是CD45+/CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述方法包括确定受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比，其中所述受试者具有相对于PBMC数量小于约10％、约11％、约12％、约13％、约14％、约15％、约16％、约17％、约18％、或约19％、或约20％的CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比，其中所述受试者具有相对于PBMC数量约15％至约19％、约16％至约19％、约17％至约19％、约18％至约19％的CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比，其中所述受试者具有相对于PBMC数量约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、或约15％至约19％的CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述方法包括确定受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比，其中所述受试者具有相对于PBMC数量大于约20％、约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％、约30％、约31％、约32％、约33％、约34％、约35％、约36％、约37％、约38％、约39％、约40％、约41％、约42％、约43％、约44％、约45％、约46％、约47％、约48％、约49％或约50％的CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。
在特定实施方案中，CAR T细胞疗法是BCMA02、JCARH125、JNJ-68284528(LCAR-B38M)(Janssen/Legend)、P-BCMA-101(Poseida)、PBCAR269A(Poseida)、P-BCMA-Allo1(Poseida)、Allo-715(Pfizer/Allogene)、CT053(Carsgen)、Descartes-08(Cartesian)、PHE885(Novartis)、CTX120(CRISPR Therapeutics)；CD19 CAR T疗法，例如Yescarta、Kymriah、Tecartus、lisocabtagene maraleucel(liso-cel)，或靶向任何其他细胞表面标记物的CAR T疗法。
在另一个方面，本文提供了一种治疗受试者的癌症的方法，其包括已确定所述受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比高于约20％，并向所述受试者施用CAR T疗法。在特定实施方案中，所述CD3+T细胞是CD45+/CD3+T细胞。
在特定实施方案中，受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比为约21％、约22％、约23％、约24％、约25％、约26％、约27％、约28％、约29％、约30％、约31％、约32％、约33％、约34％、约35％、约36％、约37％、约38％、约39％、约40％、约41％、约42％、约43％、约44％、约45％、约46％、约47％、约48％、约49％或约50％。在特定实施方案中，受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比为约20％至约30％、约25％至约35％、约30％至约40％、约45％至约55％、约50％至约60％、约55％至约65％、约60％至约70％或约65％至约75％。
在特定实施方案中，CAR T细胞疗法是BCMA02、JCARH125、JNJ-68284528(LCAR-B38M)(Janssen/Legend)、P-BCMA-101(Poseida)、PBCAR269A(Poseida)、P-BCMA-Allo1(Poseida)、Allo-715(Pfizer/Allogene)、CT053(Carsgen)、Descartes-08(Cartesian)、PHE885(Novartis)、CTX120(CRISPR Therapeutics)；CD19 CAR T疗法，例如Yescarta、Kymriah、Tecartus、lisocabtagene maraleucel(liso-cel)，或靶向任何其他细胞表面标记物的CAR T疗法。
在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述癌症是脑癌、胶质母细胞瘤、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈部癌、黑色素瘤、肺癌、子宫癌、卵巢癌、结直肠癌、肛门癌、肝癌、肝细胞癌、胃癌、睾丸癌、子宫内膜癌、宫颈癌、霍奇金病、非霍奇金淋巴瘤、食管癌、肠癌、甲状腺癌、肾上腺癌、膀胱癌、肾癌、乳腺癌、多发性骨髓瘤、肉瘤、肛门癌或鳞状细胞癌。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是T细胞。
在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述T细胞包括CD3+细胞。在特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是T CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是CD3+T细胞，例如CD45+/CD3+T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是CD3+T细胞。
在特定实施方案中，所述T细胞是CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞。在本文呈现的方法的特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％是TEMRAT细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约20％、16％至约20％、17％至约20％、18％至约20％、19％至约20％、20％至约20％、21％至约20％、22％至约20％、23％至约20％、24％至约20％、25％至约20％、26％至约20％、27％至约20％、28％至约20％、29％至约20％、或30％至约20％是TEMRA T细胞。在特定实施方案中，所述方法包括确定所述PBMC的至少约15％至约16％、15％至约17％、15％至约18％、15％至约19％、15％至约20％、15％至约21％、15％至约22％、15％至约23％、15％至约24％、15％至约25％、15％至约26％、15％至约27％、15％至约28％、15％至约29％、或15％至约30％是TEMRAT细胞。在此类方法的特定实施方案中，所述T细胞是CD3+细胞。
在本文呈现的方法中，可以使用相关领域技术人员熟知的标准技术来进行所述确定。例如，在本文呈现的方法中，所述确定步骤可以通过利用如实施例2中使用的技术(例如，针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物，通过多色流式细胞术对PBMC进行免疫表型分型)来进行。
在具体实施方案中，从PBMC分离的用于制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞(例如，BCMACAR T细胞)的T细胞的数量为约至少1x 106至1x 107、1x 107至1x 108、1x108至1x 109或1x109至1x 1010。在具体实施方案中，从PBMC分离的用于制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞(例如，BCMA CAR T细胞)的T细胞的数量为约至少1x 106至1x 1010、1x 107至1x 1010、1x 108至1x1010或1x 109至1x 1010。在具体实施方案中，从PBMC分离的用于制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞(例如，BCMA CAR T细胞)的T细胞的数量为约至少1x 106至1x 107、1x 106至1x 108、1x106至1x 109或1x 106至1x 1010。在具体实施方案中，从PBMC分离的用于制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞(例如，BCMA CAR T细胞)的T细胞的数量为约至少1x 107至1x 108、1x 107至1x109、1x 107至1x 1010或1x108至1x 1010。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是氮芥、亚硝基脲、烷基磺酸盐、三嗪或乙烯亚胺。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂选自氮芥、亚硝基脲、烷基磺酸盐、三嗪或乙烯亚胺。在特定实施方案中，烷基化剂是氮芥。在特定实施方案中，氮芥是二氯甲基二乙胺、异环磷酰胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、苯丁酸氮芥或环磷酰胺。在特定实施方案中，氮芥选自由二氯甲基二乙胺、异环磷酰胺、美法仑(例如，盐酸美法仑)、苯丁酸氮芥或环磷酰胺。在特定实施方案中，氮芥是二氯甲基二乙胺。在特定实施方案中，氮芥是异环磷酰胺。在特定实施方案中，氮芥是美法仑(例如，盐酸美法仑)。在特定实施方案中，氮芥是苯丁酸氮芥。在特定实施方案中，氮芥是环磷酰胺。在特定实施方案中，烷基化剂是亚硝基脲。在特定实施方案中，亚硝基脲是链脲霉素、卡莫司汀或洛莫司汀。在特定实施方案中，亚硝基脲选自链脲霉素、卡莫司汀或洛莫司汀。在特定实施方案中，亚硝基脲是链脲霉素。在特定实施方案中，亚硝基脲是卡莫司汀。在特定实施方案中，亚硝基脲是洛莫司汀。在特定实施方案中，烷基化剂是烷基磺酸盐。在特定实施方案中，烷基磺酸盐是白消安。在特定实施方案中，烷基化剂是三嗪。在特定实施方案中，三嗪是达卡巴嗪或替莫唑胺。在特定实施方案中，三嗪是达卡巴嗪。在特定实施方案中，三嗪是替莫唑胺。在特定实施方案中，烷基化剂是乙烯亚胺。在特定实施方案中，乙烯亚胺是噻替哌或六甲蜜胺。在特定实施方案中，乙烯亚胺是噻替哌。在特定实施方案中，乙烯亚胺是六甲蜜胺。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是六甲蜜胺。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是苯达莫司汀。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是白消安。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是卡铂。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是卡莫司汀。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是苯丁酸氮芥。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是顺铂。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是环磷酰胺。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是达卡巴嗪。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是依磷酰胺。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是异环磷酰胺。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是洛莫司汀。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是二氯甲基二乙胺。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是美法仑(例如，盐酸美法仑)。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是奥沙利铂。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是铂。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是丙卡巴肼。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是链脲霉素。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是替莫唑胺。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是噻替哌。
总体上，本文中烷基化剂的公开内容不包括使用烷基化剂作为CAR T细胞疗法的一部分。例如，烷基化剂不包括在向受试者施用CAR T细胞(例如，BCMA CAR T细胞，如ide-cel)之前约一(1)周的时间段内(例如，在第0天施用CAR T细胞(例如，BCMA CAR T细胞，如ide-cel)之前第-6、-5、-4、-3、-2或-1天)使用烷基化剂(例如，环磷酰胺和/或氟达拉滨)。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是六甲蜜胺，其中将六甲蜜胺以约260mg/m2/天的剂量施用至受试者，持续5天。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是苯达莫司汀，其中将苯达莫司汀在28天周期的第1天和第2天经30分钟以静脉内输注的约100mg/m2的剂量施用至受试者，长达6个周期。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是苯达莫司汀，其中将苯达莫司汀在21天周期的第1天和第2天经60分钟以静脉内输注的约120mg/m2的剂量施用至受试者，长达8个周期。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是白消安，其中将白消安以每六小时以两小时输注方式经由中心静脉导管在静脉内施用的约0.8mg/kg理想体重或实际体重的剂量(以较低者为准)施用至受试者，连续四天，共计16剂。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是马利兰(myleran)，其中将马利兰以每天约4至8mg的剂量(总剂量)施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是马利兰(myleran)，其中将马利兰以每天约60mcg/kg体重或1.8mg/m2体表面积的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是卡铂，其中将卡铂每4周在第1天以约360mg/m2 IV的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是卡铂，其中将卡铂每4周在第1天以约300mg/m2 IV的剂量施用至受试者，持续6个周期，并且每四周在第1天以约600mg/m2 IV的剂量施用环磷酰胺，持续六个周期。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是卡莫司汀，其中将卡莫司汀每6周以约150至200mg/m2 BiCNU的剂量以单一剂量静脉内施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是卡莫司汀，其中将卡莫司汀连续两天以约75至100mg/m2的剂量以每日注射方式施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是苯丁酸氮芥，其中将苯丁酸氮芥以每天约0.1至0.2mg/kg体重的剂量施用至受试者，按需持续3至6周。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是苯丁酸氮芥，其中将苯丁酸氮芥以每天约4至10mg的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是苯丁酸氮芥，其中将苯丁酸氮芥以每天约0.2mg/kg的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是苯丁酸氮芥，其中将苯丁酸氮芥以每天约0.1mg/kg的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是顺铂，其中将顺铂以每天约20mg/m2 IV的剂量施用至受试者，每个周期持续5天。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是顺铂，其中将顺铂每4周一次(第1天)以每个周期约75至100mg/m2 IV的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是顺铂，其中将顺铂每4周一次(第1天)以约600mg/m2IV的剂量与PLATINOL组合施用至受试者，其中将PLATINOL每4周一次以每个周期约100mg/m2 IV的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是顺铂，其中将顺铂每3至4周一次以每个周期约50至70mg/m2 IV的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是顺铂，其中将顺铂每4周重复以每个周期约50mg/m2的初始剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是环磷酰胺，其中将环磷酰胺以约40mg/kg至50mg/kg的剂量以分开的剂量经2至5天施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是环磷酰胺，其中将环磷酰胺以每7至10天给予的约10mg/kg至15mg/kg的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是环磷酰胺，其中将环磷酰胺以约3mg/kg至5mg/kg的剂量每周两次施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是环磷酰胺，其中将环磷酰胺以每天约2mg/kg的剂量施用至受试者，持续8至12周。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是异环磷酰胺，其中将异环磷酰胺以每天约1.2g/m2的剂量施用至受试者，持续连续5天。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是洛莫司汀，其中洛莫司汀每6周以约130mg/m2的剂量被受试者口服施用。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是二氯甲基二乙胺，其中将二氯甲基二乙胺以约0.4mg/kg体重的剂量以单一剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是二氯甲基二乙胺，其中将二氯甲基二乙胺以每天约0.1至0.2mg/kg的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是美法仑(例如，盐酸美法仑)，其中将美法仑(例如，盐酸美法仑)以约16mg/m2的剂量通过IV施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是美法仑(例如，盐酸美法仑)，其中将美法仑(例如，盐酸美法仑)以约16mg/m2的剂量通过IV以单一输注方式经15至20分钟施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是美法仑(例如，盐酸美法仑)，其中将美法仑(例如，盐酸美法仑)以约16mg/m2的剂量通过IV以单一输注方式经15至20分钟以2周间隔施用至受试者，共4剂，然后在从毒性充分恢复后以4周间隔施用。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是奥沙利铂，其中将奥沙利铂每2周与5-氟尿嘧啶/甲酰四氢叶酸组合施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是奥沙利铂，其中将奥沙利铂每2周与5-氟尿嘧啶/甲酰四氢叶酸组合施用至受试者，其中在第1天，将奥沙利铂以在250-500mL 5％葡萄糖注射液中约85mg/m2静脉内输注液的剂量(USP)施用至受试者，并且将甲酰四氢叶酸以在5％葡萄糖注射液中约200mg/m2静脉内输注液的剂量(USP)施用至受试者，其中将奥沙利铂和甲酰四氢叶酸使用Y型管线以分开的袋经120分钟同时施用至受试者，随后将5-氟尿嘧啶以经2-4分钟施用的约400mg/m2静脉内团注的剂量施用至受试者，随后将5-氟尿嘧啶以在500mL 5％葡萄糖注射液中约600mg/m2静脉内输注液的剂量(USP，推荐)以22小时连续输注方式施用至受试者，并且其中在第2天，将甲酰四氢叶酸以约200mg/m2静脉内输注液的剂量经120分钟施用至受试者，随后将5-氟尿嘧啶以经2-4分钟给予的约400mg/m2 IV团注的剂量施用至受试者，随后将5-氟尿嘧啶以在500mL 5％葡萄糖注射液中约600mg/m2静脉内输注液的剂量(USP，推荐)以22小时连续输注方式施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是丙卡巴肼，其中将丙卡巴肼以每天约100mg/m2的剂量施用至受试者，持续14天。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是丙卡巴肼，其中将丙卡巴肼在第一周内以约2至4mg/kg/天的剂量以单一剂量或分开的剂量施用至受试者，随后将丙卡巴肼以约4至6mg/kg/天的剂量施用至受试者，直到获得最大反应或直到白细胞计数降至低于4000/cmm或血小板降至低于100,000/cmm，其中当获得最大反应时，将丙卡巴肼以约1至2mg/kg/天的剂量施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是链脲霉素，其中每六周将链脲霉素每天以约500mg/m体表面积的剂量静脉内施用至受试者，持续连续五天。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是链脲霉素，其中在前两个疗程(周)内将链脲霉素每周以约1000mg/m体表面积的剂量以周间隔静脉内施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是替莫唑胺，其中将替莫唑胺以约75mg/m2的剂量施用至受试者持续42天，伴随病灶放射疗法，随后在28天周期的第1-5天内每天一次150mg/m2的初始维持剂量，持续6个周期。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是替莫唑胺，其中每个28天治疗周期将替莫唑胺每天一次以约150mg/m2的初始剂量施用至受试者，持续连续五天。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是替莫唑胺，其中将替莫唑胺经90分钟静脉内施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是噻替哌，其中将噻替哌以静脉内给予的约5mg/kg的剂量施用至受试者，其在同种异体HSCT之前第-6天大约间隔12小时并结合高剂量的白消安和环磷酰胺施用。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是噻替哌，其中将噻替哌以约0.3至0.4mg/kg的剂量静脉内施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是噻替哌，其中将噻替哌以约0.6至0.8mg/kg的剂量腔内施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是噻替哌，其中将噻替哌如下施用至受试者：以在30至60mL氯化钠注射液中约60mg的剂量通过导管注射至受试者膀胱。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是曲贝替定，其中将曲贝替定每3周以约1.5mg/m2体表面积的剂量通过中央静脉管线以24小时静脉内输注方式施用至受试者。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是曲贝替定，其中将曲贝替定每3周以约0.9mg/m2体表面积的剂量通过中央静脉管线以24小时静脉内输注方式施用至受试者，其中所述受试者具有中度肝损伤。
在上述任何方面或实施方案的特定实施方案中，受试者是人(例如，人患者)。在上述任何方面或实施方案的特定实施方案中，受试者是哺乳动物。在特定实施方案中，哺乳动物是宠物、实验室研究动物或农场动物。在一些实施方案中，宠物、研究动物或农场动物是狗、猫、马、猴子、兔子、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、猪或牛。
在上述任何方面或实施方案的特定实施方案中，BCMA CAR T细胞包括针对BCMA的CAR。在具体实施方案中，针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在上述任何方面或实施方案的特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。在上述任何方面或实施方案的特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含SEQ ID NO:37。在上述任何方面或实施方案的特定实施方案中，所述BCMA CAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。在某些实施方案中，针对BCMA的CAR由SEQ ID NO:10编码。在某些实施方案中，BCMA CAR T细胞包含编码BCMA CART(例如，包含SEQ ID NO:9的氨基酸22-493或1-493、SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:38的BCMACAR T)的核酸(例如，载体)，或包含含有SEQ ID NO:10的核酸(例如，载体)。在上述任何方面或实施方案的特定实施方案中，BCMA CAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在施用CAR T细胞疗法(例如，抗BCMA CAR T细胞疗法)之后可溶性(即非膜结合的)BCMA(sBCMA)的量可以用于确定受试者是否可以被预期为对CAR T细胞疗法有适当反应，或者是否应向受试者施用不同的抗癌疗法。在施用CAR T细胞疗法之后在组织样品(例如，血清、血浆、淋巴或血液)中sBCMA水平的更大下降与临床上更有益的结局(例如，非常好的部分反应、完全反应或严格的完全反应)相关。在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；向所述受试者施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，然后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平，其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的约30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非CAR T细胞疗法。本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)；(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平大于所述第一水平的约30％，并且基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供非CAR T细胞疗法。在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sBCMA的所述第二水平大于所述第一水平的40％，则向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非CAR T细胞疗法。在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sBCMA的所述第二水平大于所述第一水平的20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％，则向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非CAR T细胞疗法。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后25-35天测定sBCMA的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后23-35、24-35、25-36、25-37、23-35或25-37天测定sBCMA的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或37天测定sBCMA的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后28-31天测定sBCMA的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后26-31、27-31、28-32、28-33、26-31或27-33天测定sBCMA的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后26、27、28、29、30、31、32或33天测定sBCMA的所述第二水平。在更具体的实施方案中，在所述测定sBCMA的第二水平之后三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供非CAR T细胞疗法。
在另一个方面，本文提供了一种治疗由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用非CAR T细胞疗法，其中所述患者先前已经被施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有大于在所述施用之前从所述受试者获得的组织样品中发现的可溶性BCMA(sBCMA)水平的30％的sBCMA水平。
在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)治疗之后被施用非CAR T细胞疗法的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的水平，其中所述患者先前已被施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，并且其中如果所述组织样品中的sBCMA水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sBCMA水平的30％，则所述患者是对于所述非CAR T细胞疗法的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述非CAR T细胞疗法的候选者施用所述非CAR T细胞治疗。
组织样品(例如，血浆、血清、淋巴或血液)中sBCMA的绝对水平也可以用于确定被施用了CAR T细胞疗法(例如，BCMA CAR T细胞疗法)的人是否将适当地受益于该疗法，或是否应被施用不同的抗癌疗法。因此，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，以及测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的水平；其中如果sBCMA的所述水平大于4000ng/L，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非CAR T细胞疗法。在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sBCMA的所述水平大于约3000ng/L、3500ng/L、4000ng/L、4500ng/L或5000ng/L，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非CAR T细胞疗法。在具体实施方案中，在所述施用之后50-70天测定sBCMA的所述第一水平。在具体实施方案中，在所述施用之后45-70、46-70、47-70、48-70、49-70、50-70、50-71、50-72、50-73或50-75天测定sBCMA的所述第一水平。在具体实施方案中，在所述施用之后50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70天测定sBCMA的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后55-65天测定sBCMA的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后50-65、51-65、52-65、53-65、54-65、55-64、55-63、55-62或55-61天测定sBCMA的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65天测定sBCMA的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后58-62天测定sBCMA的所述水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后53-62、54-62、55-62、56-62、57-62、58-68、58-67、58-66、58-65、58-64或58-63天测定sBCMA的所述水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后58、59、60、61或62天测定sBCMA的所述水平。在前述实施方案的具体实施方案中，在所述测定sBCMA的第一水平之后三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供所述非CAR T细胞疗法。
某些细胞因子(例如，白细胞介素-6(IL-6)和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))的水平也可以用于确定施用了CAR T细胞疗法(例如，BCMA CAR T细胞疗法)的人是否将适当地受益于该疗法，或者是否应被施用不同的抗癌疗法。因此，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第一水平；向所述受试者施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，随后测定来自所述受试者的组织样品中IL-6、TNFα或二者的第二水平；其中如果IL-6、TNFα或二者的所述第二水平分别不大于IL-6、TNFα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非CAR T细胞疗法。在具体实施方案中，在所述向所述受试者施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞的当天测定所述第一水平，并且在所述施用之后1-4天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后一天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后两天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后三天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后四天测定所述第二水平。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，以及测定来自所述受试者的组织样品中铁蛋白的水平；其中如果铁蛋白的所述水平大于1500皮摩尔/升，则随后向所述受试者提供用于治疗细胞因子释放综合征(CRS)的疗法。在某些实施方案中，所述测定是在所述施用之前0-4天内进行的。在具体实施方案中，所述测定是在所述施用的同一天进行的。在另一个具体实施方案中，用于治疗CRS的所述疗法是在所述施用之后0-5天首次向所述受试者提供。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平和/或白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sBCMA的第二水平和/或白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第二水平，其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的30％和/或如果所述IL-6、TNFα或二者的所述第二水平不大于IL-6、TNFα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的非CAR T细胞疗法。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平和/或白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sBCMA的第二水平大于sBCMA的所述第一水平的30％和/或IL-6、TNFα或二者的第二水平不大于IL-6、TNFα或二者的所述第一水平；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供非CAR T细胞疗法。
在另一个方面，本文提供了一种治疗由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用非CAR T细胞疗法，其中所述患者先前已经被施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有(i)大于在所述施用之前从所述受试者获得的组织样品中发现的可溶性BCMA(sBCMA)水平的30％的sBCMA水平和/或(ii)不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的IL-6、TNFα或二者的水平的IL-6、TNFα或二者的水平。
在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)治疗之后被施用非CAR T细胞疗法的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的水平和/或IL-6、TNFα或二者的水平，其中所述患者先前已被施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，并且其中如果(i)所述组织样品中的sBCMA水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sBCMA水平的30％，和/或(ii)IL-6、TNFα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的IL-6、TNFα或二者的水平，则所述患者是对于所述非CAR T细胞疗法的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述非CAR T细胞疗法的候选者施用所述非CAR T细胞治疗。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，烷基化剂是氮芥、亚硝基脲、烷基磺酸盐、三嗪或乙烯亚胺。在具体实施方案中，烷基化剂是氮芥。在具体实施方案中，烷基化剂是亚硝基脲。在具体实施方案中，烷基化剂是烷基磺酸盐。在具体实施方案中，烷基化剂是三嗪。在具体实施方案中，烷基化剂是乙烯亚胺。在具体实施方案中，氮芥是二氯甲基二乙胺(Mustargen、氮芥(Nitrogen Mustard)、莫司汀(Mustine)、氯氮芥(Chlormethine))。在具体实施方案中，氮芥是异环磷酰胺(Ifex)。在具体实施方案中，氮芥是美法仑(例如，盐酸美法仑、爱克兰(Alkeran))。在具体实施方案中，氮芥是苯丁酸氮芥(瘤可宁(Leukeran))。在具体实施方案中，氮芥是环磷酰胺(Cytoxan、Neosar)。在具体实施方案中，亚硝基脲是链脲霉素(Zanosar)。在具体实施方案中，亚硝基脲是卡莫司汀(BCNU、Gliadel、Carmubris)。在具体实施方案中，亚硝基脲是洛莫司汀(Gleostine、CeeNU、CCNU)。在具体实施方案中，烷基磺酸盐是白消安(Myleran、Busulfex)。在具体实施方案中，三嗪是达卡巴嗪(咪唑甲酰胺、DTIC-Dome)。在具体实施方案中，三嗪是替莫唑胺(Temodar)。在具体实施方案中，乙烯亚胺是噻替哌(Thioplex)。
在具体实施方案中，乙烯亚胺是六甲蜜胺(Hexalen)。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述CAR T细胞疗法(例如，表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，例如idecabtagene vicleucel细胞)包括细胞群体，所述细胞群体包含约10％、5％、3％、2％或1％激活的CAR T细胞，例如激活的CD8 CAR T细胞(CD3+/CD8+/CAR+/CD25+)。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述CAR T细胞疗法(例如，表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，例如idecabtagenevicleucel细胞)包括细胞群体，所述细胞群体包含10％、5％、3％、2％或1％的CAR T细胞(例如，CD4 CAR T细胞(CD3+/CD4+/CAR+/CD57+))的衰老群体。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述组织样品是血液、血浆或血清。在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，由BCMA表达细胞引起的所述疾病是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)。在具体实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在其他具体实施方案中，所述高风险多发性骨髓瘤是R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病(例如，自最后一个治疗方案(如使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和/或地塞米松的最后一个治疗方案)之日起12个月内的疾病进展)。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。在具体实施方案中，由BCMA表达细胞引起的所述疾病是非霍奇金淋巴瘤，并且其中所述非霍奇金淋巴瘤选自：伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。
在一个实施方案中，在施用表达针对B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞之前，已针对通过肿瘤的BCMA表达评估了患有肿瘤的受试者。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是T细胞，例如CD4+T细胞、CD8+T细胞或细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、T杀伤细胞或自然杀伤(NK)细胞。在另一个具体实施方案中，以从150x 106个细胞至450x 106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非CAR T细胞疗法包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗CD38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(DPd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(DVd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(IRd)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(RVd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(BCd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(CRd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(VTD-PACE)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松；或下文第5.9节所列的其他治疗剂中的任一种。在更具体的实施方案中，所述患者在施用CAR T细胞之前未接受过所述非CAR T细胞疗法。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非CAR T细胞疗法包括来那度胺。在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，将所述来那度胺作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量将所述来那度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-28天以每日一次约10mg的剂量连续施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约10mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每隔一天约15mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约20mg的剂量口服施用所述来那度胺，持续多达12个周期。在某些实施方案中，建议所有患者使用来那度胺维持疗法。在某些实施方案中，来那度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非CAR T细胞疗法包括泊马度胺。在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，将所述泊马度胺作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量口服施用所述泊马度胺，直到疾病进展。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量将所述泊马度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)，直到疾病进展。在某些实施方案中，建议所有患者使用泊马度胺维持疗法。在某些实施方案中，泊马度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非CAR T细胞疗法包括CC-220(伊贝度胺(iberdomide)；参见例如，Bjorkland,C.C.等人,2019,Leukemia,doi:10.1038/s41375-019-0620-8；美国专利号9,828,361)。在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，将所述CC-220作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以口服施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述CC-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述CC-220施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)。在某些实施方案中，建议所有患者使用CC-220维持疗法。在某些实施方案中，所述CC-220维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非CAR T细胞疗法包括CC-220(伊贝度胺)和地塞米松。在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，将所述CC-220和地塞米松作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述CC-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述CC-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述CC-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约40mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以口服施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述CC-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以口服施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约20-60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述CC-220，并且根据需要重复28天周期，并且可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述CC-220和地塞米松施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)。在某些实施方案中，建议所有患者使用CC-220和地塞米松维持疗法。在某些实施方案中，所述CC-220和地塞米松维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受三个或更多个先前疗法线或一个或多个先前疗法线。在更具体的实施方案中，所述先前疗法线包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗CD38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(DPd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(DVd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(IRd)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(RVd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(BCd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(CRd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(VTD-PACE)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松。在各种更具体的实施方案中，所述受试者已接受二、三、四、五、六、七或更多个所述先前疗法线；不多于三个所述先前疗法线；不多于两个所述先前疗法线；或不多于一个所述先前疗法线。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，以如下范围内的剂量施用所述免疫细胞：150x 106个细胞至450x 106个细胞、300x 106个细胞至600x 106个细胞、350x106个细胞至600x 106个细胞、350x 106个细胞至550x 106个细胞、400x 106个细胞至600x106个细胞、150x 106个细胞至300x 106个细胞或400x 106个细胞至500x 106个细胞。在一个实施方案中，以如下剂量施用所述免疫细胞：150x 106个细胞、约200x 106个细胞、约250x 106个细胞、约300x 106个细胞、约350x 106个细胞、约400x 106个细胞、约450x 106个细胞、约500x106个细胞或约550x 106个细胞。在一个实施方案中，以约450x 106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。在一些实施方案中，向所述受试者施用一次表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞的输注液。在一些实施方案中，重复施用表达CAR的免疫细胞(例如，向所述受试者施用第二个剂量的免疫细胞)。在一些实施方案中，向所述受试者施用一次表达针对B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞的输注液。在一些实施方案中，重复施用表达针对BCMA的CAR的免疫细胞(例如，向所述受试者施用第二个剂量的免疫细胞)。
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x 106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约550x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x 106个细胞至约250x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约600x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约600x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约350x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约300x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约450x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约400x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约350x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是T细胞(例如，自体T细胞)。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，正在治疗的受试者经受白细胞单采术程序以收集自体免疫细胞，以用于在其施用至所述受试者之前制造所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，通过静脉内输注施用免疫细胞(例如，T细胞)。
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x 106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约550x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x 106个细胞至约250x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约600x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约600x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约350x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约300x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约450x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约400x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约350x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是T细胞(例如，自体T细胞)。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，正在治疗的受试者经受白细胞单采术程序以收集自体免疫细胞，以用于在其施用至所述受试者之前制造所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，通过静脉内输注施用免疫细胞(例如，T细胞)。
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x 106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约550x 106个细胞的剂量施用表达针对BCMA的CAR的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用表达针对BCMA的CAR的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x 106个细胞至约250x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用表达针对BCMA的CAR的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约600x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x 106个细胞至约600x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约400x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约350x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约300x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约450x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约400x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约350x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是T细胞(例如，自体T细胞)。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，正在治疗的受试者经受白细胞单采术程序以收集自体免疫细胞，以用于在其施用至所述受试者之前制造所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，通过静脉内输注施用免疫细胞(例如，T细胞)。
在本文公开的任何方面或实施方案的具体实施方案中，在施用表达CAR的免疫细胞之前，向正在治疗的受试者施用淋巴细胞清除(LD)化学疗法。在具体实施方案中，LD化学疗法包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。在具体实施方案中，LD化学疗法包括氟达拉滨(例如，约30mg/m2用于静脉内施用)和环磷酰胺(例如，约300mg/m2用于静脉内施用)，持续时间为1、2、3、4、5、6或7天(例如，3天)。在其他具体实施方案中，LD化学疗法包括第5.9节中所述的任何化学治疗剂。在具体实施方案中，在施用所述LD化学疗法之后1、2、3、4、5、6或7天(例如，在施用所述LD化学疗法之后2或3天)，向所述受试者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞。在具体实施方案中，在所述LD化学疗法开始之前未接受过任何疗法持续至少或超过1周、至少或超过2周(至少或超过14天)、至少或超过3周、至少或超过4周、至少或超过5周或至少或超过6周。在本文公开的任何实施方案的具体实施方案中，在施用表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞之前，正在治疗的受试者仅接受过单一先前治疗方案。
在本文公开的任何方面或实施方案的具体实施方案中，在施用表达针对BCMA的CAR的免疫细胞之前，向正在治疗的受试者施用淋巴细胞清除(LD)化学疗法。在具体实施方案中，LD化学疗法包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。在具体实施方案中，LD化学疗法包括氟达拉滨(例如，约30mg/m2用于静脉内施用)和环磷酰胺(例如，约300mg/m2用于静脉内施用)，持续时间为1、2、3、4、5、6或7天(例如，3天)。在其他具体实施方案中，LD化学疗法包括第5.9节中所述的任何化学治疗剂。在具体实施方案中，在施用所述LD化学疗法之后1、2、3、4、5、6或7天(例如，在施用所述LD化学疗法之后2或3天)，向所述受试者施用表达针对B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞。在具体实施方案中，在所述LD化学疗法开始之前未接受过任何疗法持续至少或超过1周、至少或超过2周(至少或超过14天)、至少或超过3周、至少或超过4周、至少或超过5周或至少或超过6周。在本文公开的任何实施方案的具体实施方案中，在施用表达针对B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞之前，正在治疗的受试者仅接受过单一先前治疗方案。
对于上述任何实施方案，所述受试者经受单采术以收集和分离所述免疫细胞，例如T细胞。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述受试者在所述单采术时展现出：M蛋白(血清蛋白电泳[sPEP]或尿蛋白电泳[uPEP])：sPEP≥0.5g/dL或uPEP≥200mg/24小时；轻链多发性骨髓瘤，其中血清或尿液中无可测量疾病，且血清无免疫球蛋白轻链≥10mg/dL和异常的血清免疫球蛋白κλ游离轻链比率；和/或东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态≤1。在更具体的实施方案中，所述受试者在单采术时另外地：接受过至少三个所述先前治疗线，包括使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂(来那度胺或泊马度胺)和抗CD38抗体的先前治疗；除非疾病进展是对治疗线的最佳反应，否则经受过对于所述三个先前治疗线中的每一个的至少2个连续治疗周期；在最近一个先前治疗线的60天时或60天内具有疾病进展的迹象；和/或已实现对至少一个所述先前治疗线的反应(最小反应或更好)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述受试者在所述施用时展现出：M蛋白(血清蛋白电泳[sPEP]或尿蛋白电泳[uPEP])：sPEP≥0.5g/dL或uPEP≥200mg/24小时；轻链多发性骨髓瘤，其中血清或尿液中无可测量疾病，且血清无免疫球蛋白轻链≥10mg/dL和异常的血清免疫球蛋白κλ游离轻链比率；和/或东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态≤1。在另一个更具体的实施方案中，所述受试者另外地：仅接受过一个先前抗骨髓瘤治疗方案；具有以下高风险因素：R-ISS III期和早期复发，其定义为(i)如果所述受试者经受过诱导加干细胞移植，则自首次移植之日起不到12个月的疾病进展(PD)；或(ii)如果所述受试者仅接受过诱导，则自最后一个治疗方案之日起<12个月的PD，所述最后一个治疗方案必须至少包括蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和地塞米松。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在更具体的实施方案中，所述CAR包含单链Fv抗体片段(scFv)。在更具体的实施方案中，所述CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向BCMA例如BCMA的鼠单链Fv抗体片段。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)的鼠抗BCMA scFv、含有CD8α多肽的铰链结构域、CD8α跨膜结构域、CD137(4-1BB)细胞内共刺激信号传导结构域和CD3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向BCMA(例如，BCMA)的鼠scFv，其中所述scFv是SEQ ID NO:9的抗BCMA02 CAR的scFv。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体是或包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:37。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体是或包含SEQ IDNO:9。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体是或包含SEQ ID NO:37。在本文任何实施方案的更具体的实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有靶向BCMA(例如，BCMA)的鼠单链Fv抗体片段。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有结合BCMA多肽(例如，BCMA)的鼠抗BCMA scFv、包含CD8α多肽的铰链结构域、CD8α跨膜结构域、CD137(4-1BB)细胞内共刺激信号传导结构域和CD3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体是或包含SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:37。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体是或包含SEQ ID NO:9。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体是或包含SEQ ID NO:37。
在其他实施方案中，将本文所设想的经基因修饰的免疫效应细胞施用至患有B细胞相关病症(例如B细胞恶性肿瘤)的患者。
在施用CAR T细胞疗法(例如，抗BCMA CAR T细胞疗法)之后可溶性(即非膜结合的)BCMA(sBCMA)的量可以用于确定受试者是否可以被预期为对CAR T细胞疗法有适当反应，或者是否应向受试者施用不同的抗癌疗法。在施用CAR T细胞疗法之后在组织样品(例如，血清、血浆、淋巴或血液)中sBCMA水平的更大下降与临床上更有益的结局(例如，非常好的部分反应、完全反应或严格的完全反应)相关。在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；向所述受试者施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平；其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的约30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式；并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平；其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的约30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式；并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；向所述受试者施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平；其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的约20％、25％或30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式；并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtageneVicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagenevicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagenevicleucel细胞。
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平；其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的约20％、25％或30％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式；并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；向所述受试者施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平；其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的约30％、35％、40％、45％或50％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式；并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；向所述受试者施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平；其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的约30％、35％、40％、45％或50％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式；并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在一个方面，例如，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平；其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的约30％、35％、40％、45％或50％，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式；并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平大于所述第一水平的约30％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于BCMA的治疗方式；其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平大于所述第一水平的约30％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于BCMA的治疗方式；其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagenevicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagenevicleucel细胞。
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平大于所述第一水平的约20％、25％或30％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于BCMA的治疗方式；其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平大于所述第一水平的约20％、25％或30％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于BCMA的治疗方式；其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平大于所述第一水平的约30％、35％、40％、45％或50％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于BCMA的治疗方式；其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
本文还提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平；(b)向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式；以及(c)确定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA的第二水平大于所述第一水平的约30％、35％、40％、45％或50％；以及基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于BCMA的治疗方式；其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sBCMA的所述第二水平大于所述第一水平的40％，则向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式。
在上述任一实施方案的实施方案中，在所述施用之后25-35天测定sBCMA的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后23-35、24-35、25-36、25-37、23-35或25-37天测定sBCMA的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36或37天测定sBCMA的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后28-31天测定sBCMA的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后26-31、27-31、28-32、28-33、26-31或27-33天测定sBCMA的所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后26、27、28、29、30、31、32或33天测定sBCMA的所述第二水平。在更具体的实施方案中，在所述测定sBCMA的第二水平之后的三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供第二基于BCMA的治疗方式。
在另一个方面，本文提供了一种治疗由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用第二基于BCMA的治疗方式，其中所述患者先前已经被施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMACAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式，其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性BCMA(sBCMA)水平的30％的sBCMA水平。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtageneVicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagenevicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagenevicleucel细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用第二基于BCMA的治疗方式，其中所述患者先前已经被施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式，其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性BCMA(sBCMA)水平的30％的sBCMA水平。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在另一个方面，本文提供了一种确定被诊断患有由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式的治疗之后被施用第二基于BCMA的治疗方式的方法，其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式，所述方法包括确定来自所述患者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的水平，其中所述患者先前已被施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式，并且其中如果所述组织样品中的sBCMA水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sBCMA水平的30％，则所述患者是对于所述第二基于BCMA的治疗方式的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于BCMA的治疗方式的候选者施用所述第二基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在另一个方面，本文提供了一种确定被诊断患有由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式的治疗之后被施用第二基于BCMA的治疗方式的方法，其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式，所述方法包括确定来自所述患者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的水平，其中所述患者先前已被施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式，并且其中如果所述组织样品中的sBCMA水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sBCMA水平的30％，则所述患者是对于所述第二基于BCMA的治疗方式的候选者。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于BCMA的治疗方式的候选者施用所述第二基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
组织样品(例如，血浆、血清、淋巴或血液)中sBCMA的绝对水平也可以用于确定被施用了CAR T细胞疗法(例如，BCMA CAR T细胞疗法)的人是否将适当地受益于该疗法，或是否应被施用不同的抗癌疗法。因此，本文提供了一种治疗由有需要的受试者中表达B细胞成熟因子(BCMA)的细胞引起的疾病的方法，该方法包括：向受试者施用第一种基于BCMA的治疗模式，该治疗模式包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，以及测定来自受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的水平；其中，如果所述sBCMA水平大于4000ng/L，则随后向所述受试者提供第二种基于BCMA的治疗模式以治疗所述疾病，并且其中所述第一种基于BCMA-的治疗模式和所述第二种以BCMA-为基础的治疗模式是不同的基于BCMA-的治疗模式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用包括idecabtagenevicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式，以及测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的水平；其中如果sBCMA的所述水平大于4000ng/L，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式，并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在上述任一实施方案的具体实施方案中，如果sBCMA的所述水平大于约3000ng/L、3500ng/L、4000ng/L、4500ng/L或5000ng/L，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的基于BCMA的治疗方式。在具体实施方案中，在所述施用之后50-70天测定sBCMA的所述第一水平。在具体实施方案中，在所述施用之后45-70、46-70、47-70、48-70、49-70、50-70、50-71、50-72、50-73或50-75天测定sBCMA的所述第一水平。在具体实施方案中，在所述施用之后50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69或70天测定sBCMA的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后55-65天测定sBCMA的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后50-65、51-65、52-65、53-65、54-65、55-64、55-63、55-62或55-61天测定sBCMA的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后55、56、57、58、59、60、61、62、63、64或65天测定sBCMA的所述第一水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后58-62天测定sBCMA的所述水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后53-62、54-62、55-62、56-62、57-62、58-68、58-67、58-66、58-65、58-64或58-63天测定sBCMA的所述水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后58、59、60、61或62天测定sBCMA的所述水平。在前述实施方案的具体实施方案中，在所述测定sBCMA的第一水平之后三个月、两个月或一个月内向所述受试者提供所述第二基于BCMA的治疗方式。
某些细胞因子(例如，白细胞介素-6(IL-6)和/或肿瘤坏死因子α(TNFα))的水平也可以用于确定施用了CAR T细胞疗法(例如，BCMA CAR T细胞疗法)的人是否将适当地受益于该疗法，或者是否应被施用不同的抗癌疗法。因此，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第一水平；向所述受试者施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中IL-6、TNFα或二者的第二水平；其中如果IL-6、TNFα或二者的所述第二水平分别不大于IL-6、TNFα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式，并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：测定来自所述受试者的组织样品中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第一水平；向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式；以及随后测定来自所述受试者的组织样品中IL-6、TNFα或二者的第二水平；其中如果IL-6、TNFα或二者的所述第二水平分别不大于IL-6、TNFα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式，并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在某些实施方案中，在所述向所述受试者施用包括表达针对BCMA的CAR的免疫细胞的所述第一基于BCMA的治疗方式的当天测定所述第一水平，并且在所述施用之后1-4天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后一天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后两天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后三天测定所述第二水平。在另一个具体实施方案中，在所述施用之后四天测定所述第二水平。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：向所述受试者施用表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，以及测定来自所述受试者的组织样品中铁蛋白的水平；其中如果铁蛋白的所述水平大于1500皮摩尔/升，则随后向所述受试者提供用于治疗细胞因子释放综合征(CRS)的疗法。在某些实施方案中，所述测定是在所述施用之前0-4天内进行的。在具体实施方案中，所述测定是在所述施用的同一天进行的。在另一个具体实施方案中，用于治疗CRS的所述疗法是在所述施用之后0-5天首次向所述受试者提供。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平和/或白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMACAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sBCMA的第二水平和/或白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第二水平，其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的30％和/或如果所述IL-6、TNFα或二者的所述第二水平不大于IL-6、TNFα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式，并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平和/或白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式；以及(c)测定来自所述受试者的组织样品中sBCMA的第二水平和/或白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第二水平，其中如果sBCMA的所述第二水平大于sBCMA的所述第一水平的30％和/或如果所述IL-6、TNFα或二者的所述第二水平不大于IL-6、TNFα或二者的所述第一水平，则随后向所述受试者提供用于治疗所述疾病的第二基于BCMA的治疗方式，并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagenevicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagenevicleucel细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平和/或白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMACAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sBCMA的第二水平大于sBCMA的所述第一水平的30％和/或IL-6、TNFα或二者的第二水平不大于IL-6、TNFα或二者的所述第一水平；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于BCMA的治疗方式，其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtageneVicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagenevicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagenevicleucel细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括：(a)测定来自所述受试者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的第一水平和/或白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNFα)或二者的第一水平；(b)向所述受试者施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式；(c)确定来自所述受试者的组织样品中sBCMA的第二水平大于sBCMA的所述第一水平的30％和/或IL-6、TNFα或二者的第二水平不大于IL-6、TNFα或二者的所述第一水平；以及(d)基于步骤c中的所述确定，随后向所述受试者提供第二基于BCMA的治疗方式，其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用第二基于BCMA的治疗方式，其中所述患者先前已经被施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMACAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式，其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有(i)大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性BCMA(sBCMA)水平的30％的sBCMA水平和/或(ii)不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的IL-6、TNFα或二者的水平的IL-6、TNFα或二者的水平。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在另一个方面，本文提供了一种治疗由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的方法，所述方法包括向被诊断患有所述疾病的患者施用第二基于BCMA的治疗方式，其中所述患者先前已经被施用包括idecabtagene vicleucel细胞的第一基于BCMA的治疗方式，其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式，并且其中在所述施用之后来自所述患者的组织样品含有(i)大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的可溶性BCMA(sBCMA)水平的30％的sBCMA水平和/或(ii)不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的IL-6、TNFα或二者的水平的IL-6、TNFα或二者的水平。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式的治疗之后被施用第二基于BCMA的治疗方式的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的水平和/或IL-6、TNFα或二者的水平，其中所述患者先前已被施用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式，其中如果(i)所述组织样品中的sBCMA水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sBCMA水平的30％，和/或(ii)IL-6、TNFα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的IL-6、TNFα或二者的水平，则所述患者是对于所述第二基于BCMA的治疗方式的候选者，并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于BCMA的治疗方式的候选者施用所述第二基于BCMA的治疗方式。在特定实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene Vicluel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在另一个方面中，本文提供了一种确定被诊断患有由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的疾病的患者是否应在使用包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的第一基于BCMA的治疗方式的治疗之后被施用第二基于BCMA的治疗方式的方法，所述方法包括测定来自所述患者的组织样品中可溶性BCMA(sBCMA)的水平和/或IL-6、TNFα或二者的水平，其中所述患者先前已被施用包括idecabtagene vicleucel细胞的所述第一基于BCMA的治疗方式，其中如果(i)所述组织样品中的sBCMA水平大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的sBCMA水平的30％，和/或(ii)IL-6、TNFα或二者的水平不大于在所述施用之前从所述患者获得的组织样品中发现的IL-6、TNFα或二者的水平，则所述患者是对于所述第二基于BCMA的治疗方式的候选者，并且其中所述第一基于BCMA的治疗方式和所述第二基于BCMA的治疗方式是不同的基于BCMA的治疗方式。在具体实施方案中，所述方法进一步包括向对于所述第二基于BCMA的治疗方式的候选者施用所述第二基于BCMA的治疗方式。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述CAR T细胞疗法(例如，表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，例如idecabtagenevicleucel细胞)包括细胞群体，所述细胞群体包含约10％、5％、3％、2％或1％激活的CAR T细胞，例如激活的CD8 CAR T细胞(CD3+/CD8+/CAR+/CD25+)。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述CAR T细胞疗法(例如，表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，例如idecabtagenevicleucel细胞)包括细胞群体，所述细胞群体包含10％、5％、3％、2％或1％的CAR T细胞(例如，CD4 CAR T细胞(CD3+/CD4+/CAR+/CD57+))的衰老群体。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述组织样品是血液、血浆或血清。在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，由BCMA表达细胞引起的所述疾病是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤(例如，伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤)。在具体实施方案中，所述疾病是多发性骨髓瘤，例如高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。在其他具体实施方案中，所述高风险多发性骨髓瘤是R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病(例如，自最后一个治疗方案(如使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和/或地塞米松的最后一个治疗方案)之日起12个月内的疾病进展)。在特定实施方案中，所述多发性骨髓瘤不是R-ISS III期疾病。在具体实施方案中，由BCMA表达细胞引起的所述疾病是非霍奇金淋巴瘤，并且其中所述非霍奇金淋巴瘤选自：伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。
在一个实施方案中，在施用表达针对B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)的T细胞之前，已针对通过肿瘤的BCMA表达评估了患有肿瘤的受试者。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是T细胞，例如CD4+T细胞、CD8+T细胞或细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、T杀伤细胞或自然杀伤(NK)细胞。在另一个具体实施方案中，以从150x 106个细胞至450x 106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。
通常，基于BCMA的治疗方式是指靶向BCMA和/或BCMA表达细胞(例如，在细胞表面上BCMA表达细胞)的治疗方式。例如，所述基于BCMA的治疗方式(例如，所述第一基于BCMA的治疗方式或所述第二基于BCMA的治疗方式)可以是BCMA抗体-药物结合物(ADC)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)或表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式包括BCMA抗体-药物结合物(ADC)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)或表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式包括BCMA抗体-药物缀合物(ADC)、双特异性T细胞衔接器(BiTE)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)或表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，其中所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)与包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式不同。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式是BCMA抗体-药物结合物(ADC)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)或表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式选自BCMA抗体-药物结合物(ADC)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)和表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式是BCMA抗体-药物缀合物(ADC)、双特异性T细胞衔接器(BiTE)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)或表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，其中所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMACAR T细胞)与包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式不同。在某些实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式选自BCMA抗体-药物缀合物(ADC)、双特异性T细胞衔接器(BiTE)、靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)和表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMACAR T细胞)，其中所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)与包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式不同。在更具体的实施方案中，在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之前，所述患者未接受过所述第二基于BCMA的治疗方式。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式包括CC99712、GSK2857916(贝兰他单抗-莫福汀)、CC-93269、AMG 420、JNJ-64007957、AMG 701、PF-06863135、REGN5458、REGN5459、TNB-383B、DF3001、AFM26、CTX-4419、CTX-8573、JCARH125、KITE-585、P-BCMA-101、LCAR-B38M、CT053、anti-CD19/BCMA CAR-T细胞(HrainBiotechnology)或CTX120。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式是CC99712、GSK2857916(贝兰他单抗-莫福汀)、CC-93269、AMG 420、JNJ-64007957、AMG 701、PF-06863135、REGN5458、REGN5459、TNB-383B、DF3001、AFM26、CTX-4419、CTX-8573、JCARH125、KITE-585、P-BCMA-101、LCAR-B38M、CT053、anti-CD19/BCMACAR-T细胞(Hrain Biotechnology)或CTX120。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式由以下组成：CC99712、GSK2857916(贝兰他单抗-莫福汀)、CC-93269、AMG 420、JNJ-64007957、AMG 701、PF-06863135、REGN5458、REGN5459、TNB-383B、DF3001、AFM26、CTX-4419、CTX-8573、JCARH125、KITE-585、P-BCMA-101、LCAR-B38M、CT053、anti-CD19/BCMA CAR-T细胞(Hrain Biotechnology)或CTX120。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式选自CC99712、GSK2857916(贝兰他单抗-莫福汀)、CC-93269、AMG 420、JNJ-64007957、AMG 701、PF-06863135、REGN5458、REGN5459、TNB-383B、DF3001、AFM26、CTX-4419、CTX-8573、JCARH125、KITE-585、P-BCMA-101、LCAR-B38M、CT053、anti-CD19/BCMA CAR-T细胞(Hrain Biotechnology)和CTX120。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式包括BCMA抗体-药物缀合物(ADC)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式是BCMA抗体-药物缀合物(ADC)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式由BCMA抗体-药物缀合物(ADC)组成。在某些实施方案中，所述BCMA抗体-药物缀合物(ADC)包括CC99712或GSK2857916(贝兰他单抗-莫福汀)。在某些实施方案中，所述BCMA抗体-药物缀合物(ADC)是CC99712或GSK2857916(贝兰他单抗-莫福汀)。在某些实施方案中，所述BCMA抗体-药物缀合物(ADC)由CC99712或GSK2857916(贝兰他单抗-莫福汀)组成。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后立即施用所述BCMA抗体-药物缀合物(ADC)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后1周、2周、3周或4周施用所述BCMA抗体-药物缀合物(ADC)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述BCMA抗体-药物缀合物(ADC)。在某些实施方案中，所述BCMA抗体-药物缀合物(ADC)应在充分的骨髓恢复时或从施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后90天(例如，在施用ide-cel之后90天)开始，以较晚者为准。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式包括靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式是靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式由靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)组成。在某些实施方案中，靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)包括CC-93269、AMG 420、JNJ-64007957、AMG701、PF-06863135、REGN5458、REGN5459或TNB-383B。在某些实施方案中，靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)是CC-93269、AMG 420、JNJ-64007957、AMG 701、PF-06863135、REGN5458、REGN5459或TNB-383B。在某些实施方案中，靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)由CC-93269、AMG 420、JNJ-64007957、AMG 701、PF-06863135、REGN5458、REGN5459或TNB-383B组成。在某些实施方案中，靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的双特异性T细胞衔接器(BiTE)选自CC-93269、AMG 420、JNJ-64007957、AMG 701、PF-06863135、REGN5458、REGN5459和TNB-383B。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后立即施用所述双特异性T细胞衔接器(BiTE)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后1周、2周、3周或4周施用所述双特异性T细胞衔接器(BiTE)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述双特异性T细胞衔接器(BiTE)。在某些实施方案中，所述双特异性T细胞衔接器(BiTE)应在充分的骨髓恢复时或从施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后90天(例如，在施用ide-cel之后90天)开始，以较晚者为准。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式包括靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式是靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式由靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)组成。在某些实施方案中，靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)包括DF3001、AFM26、CTX-4419或CTX-8573。在某些实施方案中，靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)是DF3001、AFM26、CTX-4419或CTX-8573。在某些实施方案中，靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)由DF3001、AFM26、CTX-4419或CTX-8573组成。在某些实施方案中，靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)选自DF3001、AFM26、CTX-4419和CTX-8573。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后立即施用靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后1周、2周、3周或4周施用靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)。在某些实施方案中，靶向B细胞成熟抗原(BCMA)的自然杀伤(NK)细胞衔接器(NKCE)应在充分的骨髓恢复时或在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后90天(例如，在施用ide-cel之后90天)开始，以较晚者为准。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，其中所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)与包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式不同。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式是表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式是表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，其中所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)与包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式不同。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式由表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)组成。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式由表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)组成，其中所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)与包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式不同。在某些实施方案中，表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMACAR T细胞)包括JCARH125、KITE-585、P-BCMA-101、LCAR-B38M、CT053、抗CD19/BCMA CAR-T细胞(Hrain Biotechnology)和CTX120。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后立即施用所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CART细胞)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后1周、2周、3周或4周施用所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)。在某些实施方案中，所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)应在充分的骨髓恢复时或在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后90天(例如，在施用ide-cel之后90天)开始，以较晚者为准。
在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后立即施用所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，其中所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)与包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式不同。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后1周、2周、3周或4周施用所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，其中所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)与包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式不同。在某些实施方案中，可以在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，其中所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)与包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMACAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式不同。在特定实施方案中，所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)应在充分的骨髓恢复时或在施用所述第一基于BCMA的治疗方式之后90天(例如，在施用ide-cel之后90天)开始，以较晚者为准，其中所述表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)与包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式不同。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，包括表达针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)的所述第一基于BCMA的治疗方式中的免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不包括idecabtagene vicleucel细胞。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述第二基于BCMA的治疗方式不是idecabtagene vicleucel细胞。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是T细胞，例如CD4+T细胞、CD8+T细胞或细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、T杀伤细胞或自然杀伤(NK)细胞。在另一个具体实施方案中，以从150x 106个细胞至450x 106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非CAR T细胞疗法包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗CD38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(DPd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(DVd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(IRd)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(RVd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(BCd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(CRd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(VTD-PACE)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松；或下文第5.9节所列的其他治疗剂中的任一种。在更具体的实施方案中，所述患者在施用CAR T细胞之前未接受过所述非CAR T细胞疗法。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非CAR T细胞疗法包括来那度胺。在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，将所述来那度胺作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量将所述来那度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-28天以每日一次约10mg的剂量连续施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约10mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每隔一天约15mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约20mg的剂量口服施用所述来那度胺，持续多达12个周期。在某些实施方案中，建议所有患者使用来那度胺维持疗法。在某些实施方案中，来那度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非CAR T细胞疗法包括泊马度胺。在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，将所述泊马度胺作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量口服施用所述泊马度胺，直到疾病进展。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量将所述泊马度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)，直到疾病进展。在某些实施方案中，建议所有患者使用泊马度胺维持疗法。在某些实施方案中，泊马度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非CAR T细胞疗法包括CC-220(伊贝度胺(iberdomide)；参见例如，Bjorkland,C.C.等人,2019,Leukemia,doi:10.1038/s41375-019-0620-8；美国专利号9,828,361)。在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，将所述CC-220作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以口服施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述CC-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述CC-220施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)。在某些实施方案中，建议所有患者使用CC-220维持疗法。在某些实施方案中，所述CC-220维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述非CAR T细胞疗法包括CC-220(伊贝度胺)和地塞米松。在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，将所述CC-220和地塞米松作为维持疗法施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述CC-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述CC-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述CC-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约40mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以口服施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述CC-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以口服施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约20-60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述CC-220，并且根据需要重复28天周期，并且可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述CC-220和地塞米松施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)。在某些实施方案中，建议所有患者使用CC-220和地塞米松维持疗法。在某些实施方案中，所述CC-220和地塞米松维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在上述任何方面或实施方案的另一个具体实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受三个或更多个先前疗法线或一个或多个先前疗法线。在更具体的实施方案中，所述先前疗法线包括蛋白酶体抑制剂、来那度胺、泊马度胺、沙利度胺、硼替佐米、地塞米松、环磷酰胺、多柔比星、卡非佐米、伊沙佐米、顺铂、多柔比星、依托泊苷、抗CD38抗体帕比司他或埃罗妥珠单抗。在更具体的实施方案中，在所述施用之前，所述受试者已接受一个或多个先前疗法线，包括：达雷木单抗、泊马度胺和地塞米松(DPd)；达雷木单抗、硼替佐米和地塞米松(DVd)；伊沙佐米、来那度胺和地塞米松(IRd)；达雷木单抗、来那度胺和地塞米松；硼替佐米、来那度胺和地塞米松(RVd)；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松(BCd)；硼替佐米、多柔比星和地塞米松；卡非佐米、来那度胺和地塞米松(CRd)；硼替佐米和地塞米松；硼替佐米、沙利度胺和地塞米松；来那度胺和地塞米松；地塞米松、沙利度胺、顺铂、多柔比星、环磷酰胺、依托泊苷和硼替佐米(VTD-PACE)；来那度胺和小剂量地塞米松；硼替佐米、环磷酰胺和地塞米松；卡非佐米和地塞米松；单独的来那度胺；单独的硼替佐米；单独的达雷木单抗；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、来那度胺和地塞米松；苯达莫司汀、硼替佐米和地塞米松；苯达莫司汀、来那度胺和地塞米松；泊马度胺和地塞米松；泊马度胺、硼替佐米和地塞米松；泊马度胺、卡非佐米和地塞米松；硼替佐米和脂质体多柔比星；环磷酰胺、来那度胺和地塞米松；埃罗妥珠单抗、硼替佐米和地塞米松；伊沙佐米和地塞米松；帕比司他、硼替佐米和地塞米松；帕比司他和卡非佐米；或泊马度胺、环磷酰胺和地塞米松。在各种更具体的实施方案中，所述受试者已接受二、三、四、五、六、七或更多个所述先前疗法线；不多于三个所述先前疗法线；不多于两个所述先前疗法线；或不多于一个所述先前疗法线。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，以如下范围内的剂量施用所述免疫细胞：150x 106个细胞至450x 106个细胞、300x 106个细胞至600x 106个细胞、350x106个细胞至600x 106个细胞、350x 106个细胞至550x 106个细胞、400x 106个细胞至600x106个细胞、150x 106个细胞至300x 106个细胞或400x 106个细胞至500x 106个细胞。在一个实施方案中，以如下剂量施用所述免疫细胞：150x 106个细胞、约200x 106个细胞、约250x 106个细胞、约300x 106个细胞、约350x 106个细胞、约400x 106个细胞、约450x 106个细胞、约500x106个细胞或约550x 106个细胞。在一个实施方案中，以约450x 106个细胞的剂量施用所述免疫细胞。在一些实施方案中，向所述受试者施用一次表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞的输注液。在一些实施方案中，重复施用表达CAR的免疫细胞(例如，向所述受试者施用第二个剂量的免疫细胞)。在一些实施方案中，向所述受试者施用一次表达针对B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞的输注液。在一些实施方案中，重复施用表达针对BCMA的CAR的免疫细胞(例如，向所述受试者施用第二个剂量的免疫细胞)。
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x 106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约550x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x 106个细胞至约250x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约600x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约600x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约400x106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约350x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约300x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约450x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x106个细胞至约400x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约350x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是T细胞(例如，自体T细胞)。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，正在治疗的受试者经受白细胞单采术程序以收集自体免疫细胞，以用于在其施用至所述受试者之前制造所述表达CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，通过静脉内输注施用免疫细胞(例如，T细胞)。
在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x 106个细胞至约300x106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约550x 106个细胞的剂量施用表达针对BCMA的CAR的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用表达针对BCMA的CAR的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约150x 106个细胞至约250x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约500x106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用表达针对BCMA的CAR的所述免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约300x 106个细胞至约600x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约350x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x 106个细胞至约600x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约400x106个细胞至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约400x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约350x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约200x 106个细胞至约300x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约450x 106个细胞至约500x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约400x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约250x 106个细胞至约350x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，以约至约450x 106个细胞的剂量施用所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是T细胞(例如，自体T细胞)。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，正在治疗的受试者经受白细胞单采术程序以收集自体免疫细胞，以用于在其施用至所述受试者之前制造所述表达针对BCMA的CAR的免疫细胞。在本文所述任何实施方案的具体实施方案中，通过静脉内输注施用免疫细胞(例如，T细胞)。
在本文公开的任何方面或实施方案的具体实施方案中，在施用表达CAR的免疫细胞之前，向正在治疗的受试者施用淋巴细胞清除(LD)化学疗法。在具体实施方案中，LD化学疗法包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。在具体实施方案中，LD化学疗法包括氟达拉滨(例如，约30mg/m2用于静脉内施用)和环磷酰胺(例如，约300mg/m2用于静脉内施用)，持续时间为1、2、3、4、5、6或7天(例如，3天)。在其他具体实施方案中，LD化学疗法包括第5.9节中所述的任何化学治疗剂。在具体实施方案中，在施用所述LD化学疗法之后1、2、3、4、5、6或7天(例如，在施用所述LD化学疗法之后2或3天)，向所述受试者施用表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞。在具体实施方案中，在所述LD化学疗法开始之前未接受过任何疗法持续至少或超过1周、至少或超过2周(至少或超过14天)、至少或超过3周、至少或超过4周、至少或超过5周或至少或超过6周。在本文公开的任何实施方案的具体实施方案中，在施用表达嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞之前，正在治疗的受试者仅接受过单一先前治疗方案。
在本文公开的任何方面或实施方案的具体实施方案中，在施用表达针对BCMA的CAR的免疫细胞之前，向正在治疗的受试者施用淋巴细胞清除(LD)化学疗法。在具体实施方案中，LD化学疗法包括氟达拉滨和/或环磷酰胺。在具体实施方案中，LD化学疗法包括氟达拉滨(例如，约30mg/m2用于静脉内施用)和环磷酰胺(例如，约300mg/m2用于静脉内施用)，持续时间为1、2、3、4、5、6或7天(例如，3天)。在其他具体实施方案中，LD化学疗法包括第5.9节中所述的任何化学治疗剂。在具体实施方案中，在施用所述LD化学疗法之后1、2、3、4、5、6或7天(例如，在施用所述LD化学疗法之后2或3天)，向所述受试者施用表达针对B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞。在具体实施方案中，在所述LD化学疗法开始之前未接受过任何疗法持续至少或超过1周、至少或超过2周(至少或超过14天)、至少或超过3周、至少或超过4周、至少或超过5周或至少或超过6周。在本文公开的任何实施方案的具体实施方案中，在施用表达针对B细胞成熟抗原(BCMA)的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞之前，正在治疗的受试者仅接受过单一先前治疗方案。
对于上述任何实施方案，所述受试者经受单采术以收集和分离所述免疫细胞，例如T细胞。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述受试者在所述单采术时展现出：M蛋白(血清蛋白电泳[sPEP]或尿蛋白电泳[uPEP])：sPEP≥0.5g/dL或uPEP≥200mg/24小时；轻链多发性骨髓瘤，其中血清或尿液中无可测量疾病，且血清无免疫球蛋白轻链≥10mg/dL和异常的血清免疫球蛋白κλ游离轻链比率；和/或东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态≤1。在更具体的实施方案中，所述受试者在单采术时另外地：接受过至少三个所述先前治疗线，包括使用蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂(来那度胺或泊马度胺)和抗CD38抗体的先前治疗；除非疾病进展是对治疗线的最佳反应，否则经受过对于所述三个先前治疗线中的每一个的至少2个连续治疗周期；在最近一个先前治疗线的60天时或60天内具有疾病进展的迹象；和/或已实现对至少一个所述先前治疗线的反应(最小反应或更好)。在上述任何实施方案的具体实施方案中，所述受试者在所述施用时展现出：M蛋白(血清蛋白电泳[sPEP]或尿蛋白电泳[uPEP])：sPEP≥0.5g/dL或uPEP≥200mg/24小时；轻链多发性骨髓瘤，其中血清或尿液中无可测量疾病，且血清无免疫球蛋白轻链≥10mg/dL和异常的血清免疫球蛋白κλ游离轻链比率；和/或东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态≤1。在另一个更具体的实施方案中，所述受试者另外地：仅接受过一个先前抗骨髓瘤治疗方案；具有以下高风险因素：R-ISS III期和早期复发，其定义为(i)如果所述受试者经受过诱导加干细胞移植，则自首次移植之日起不到12个月的疾病进展(PD)；或(ii)如果所述受试者仅接受过诱导，则自最后一个治疗方案之日起<12个月的PD，所述最后一个治疗方案必须至少包括蛋白酶体抑制剂、免疫调节剂和地塞米松。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述CAR包含靶向目的抗原的抗体或抗体片段。目的抗原可以是任何目的抗原，例如，可以是肿瘤细胞上的抗原。肿瘤细胞可以是，例如，实体肿瘤中的细胞，或血液癌症的细胞。抗原可以是在任何肿瘤或癌症类型的细胞上表达的任何抗原，例如淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤(例如，恶性黑色素瘤)、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞癌、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤等的细胞。在更具体的实施方案中，所述淋巴瘤可以是慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
在某些实施方案中，抗原是肿瘤相关抗原(TAA)或肿瘤特异性抗原(TSA)。在各种具体实施方案中，肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原是但不限于Her2、前列腺干细胞抗原(PSCA)、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原-125(CA-125)、CA19-9、钙网膜蛋白、MUC-1、上皮膜蛋白(EMA)、上皮肿瘤抗原(ETA)、酪氨酸酶、黑色素瘤相关抗原(MAGE)、CD19、CD20、CD34、CD45、CD99、CD117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、大囊病液体蛋白(GCDFP-15)、HMB-45抗原、高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、蛋白melan-A(MART-1)、myo-D1、肌肉特异性肌动蛋白(MSA)、神经丝、神经元特异性烯醇酶(NSE)、胎盘碱性磷酸酶、突触素(synaptophysis)、甲状腺球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶同工酶M2型的二聚体形式(肿瘤M2-PK)、异常ras蛋白或异常p53蛋白。
在某些实施方案中，TAA或TSA是癌症/睾丸(CT)抗原，例如BAGE、CAGE、CTAGE、FATE、GAGE、HCA661、HOM-TES-85、MAGEA、MAGEB、MAGEC、NA88、NY-ESO-1、NY-SAR-35、OY-TES-1、SPANXB1、SPA17、SSX、SYCP1或TPTE。
在某些其他实施方案中，TAA或TSA是碳水化合物或神经节苷脂，例如fuc-GM1、GM2(癌胚胎抗原免疫原-1；OFA-I-1)；GD2(OFA-I-2)、GM3、GD3等。
在某些其他实施方案中，TAA或TSA是α-肌动蛋白-4，Bage-1，BCR-ABL，Bcr-Abl融合蛋白，β-连环蛋白，CA 125，CA 15-3(CA 27.29\BCAA)，CA 195，CA 242，CA-50，CAM43，Casp-8，cdc27，cdk4，cdkn2a，CEA，coa-1，dek-can融合蛋白，EBNA，EF2，爱泼斯坦-巴尔病毒抗原，ETV6-AML1融合蛋白，HLA-A2，HLA-A11，hsp70-2，KIAAO205，Mart2，Mum-1、2和3，neo-PAP，肌球蛋白I类，OS-9，pml-RARα融合蛋白，PTPRK，K-ras，N-ras，磷酸丙糖异构酶，Gage3、4、5、6、7，GnTV，Herv-K-mel，Lage-1，NA-88，NY-Eso-1/Lage-2，SP17，SSX-2，TRP2-Int2，gp100(Pmel 17)，酪氨酸酶，TRP-1，TRP-2，MAGE-1，MAGE-3，RAGE，GAGE-1，GAGE-2，p15(58)，RAGE，SCP-1，Hom/Mel-40，PRAME，p53，H-Ras，HER-2/neu，E2A-PRL，H4-RET，IGH-IGK，MYL-RAR，人乳头状瘤病毒(HPV)抗原E6和E7，TSP-180，MAGE-4，MAGE-5，MAGE-6，p185erbB2，p180erbB-3，c-met，nm-23H1，PSA，TAG-72-4，CA 19-9，CA 72-4，CAM 17.1，NuMa，K-ras，13-连环素，Mum-1，p16，TAGE，PSMA，CT7，端粒酶，43-9F，5T4，791Tgp72，13HCG，BCA225，BTAA，CD68\KP1，CO-029，FGF-5，G250，Ga733(EpCAM)，HTgp-175，M344，MA-50，MG7-Ag，MOV18，NB\70K，NY-CO-1，RCAS1，SDCCAG16，TA-90，TAAL6，TAG72，TLP，TPS，CD19，CD22，CD27，CD30，CD70，GD2(神经节苷脂G2)，EGFRvIII(表皮生长因子变体III)，精子蛋白17(Sp17)，间皮素，PAP(前列腺酸性磷酸酶)，prostein，TARP(T细胞受体γ交替阅读框蛋白)，Trp-p8，STEAP1(前列腺六次跨膜上皮抗原1)，异常ras蛋白，或异常p53蛋白。在另一个具体实施方案中，所述肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原是整合素αvβ3(CD61)、半乳糖凝集素、K-Ras(V-Ki-ras2Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)或Ral-B。
在具体实施方案中，TAA或TSA是CD20、CD123、CLL-1、CD38、CS-1、CD138、ROR1、FAP、MUC1、PSCA、EGFRvIII、EPHA2或GD2。在另外的具体实施方案中，TAA或TSA是CD123、CLL-1、CD38或CS-1。在具体实施方案中，CAR的细胞外结构域结合CS-1。在另外的具体实施方案中，细胞外结构域包含埃罗妥珠单抗的单链形式和/或埃罗妥珠单抗的抗原结合片段。在具体实施方案中，CAR的细胞外结构域结合CD20。在更具体的实施方案中，CAR的细胞外结构域是结合CD20的scFv或其抗原结合片段。
其他肿瘤相关抗原和肿瘤特异性抗原是本领域技术人员已知的。
与TSA和TAA结合的抗体和scFv是本领域已知的，编码它们的核苷酸序列也是已知的。
在某些具体实施方案中，抗原是不被视为TSA或TAA的抗原，但其仍然与肿瘤细胞或由肿瘤引起的损伤相关。在具体实施方案中，抗原是肿瘤微环境相关抗原(TMAA)。在某些实施方案中，例如，TMAA是例如生长因子、细胞因子或白细胞介素，例如与血管生成或血管发生相关的生长因子、细胞因子或白细胞介素。此类生长因子、细胞因子或白细胞介素可以包括例如血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子(IGF)或白细胞介素8(IL-8)。肿瘤还可以在肿瘤局部产生低氧环境。因此，在其他具体实施方案中，TMAA是缺氧相关因子，例如HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、HIF-2β、HIF-3α或HIF-3β。肿瘤还可以对正常组织造成局部损伤，导致释放称为损伤相关分子模式分子(DAMP；也称为警报素)的分子。因此，在某些其他具体实施方案中，TMAA是DAMP，例如热休克蛋白、染色质相关蛋白高迁移率族蛋白1(HMGB1)、S100A8(MRP8、钙粒蛋白A)、S100A9(MRP14、钙粒蛋白B)、血清淀粉样蛋白A(SAA)，或者可以是脱氧核糖核酸、三磷酸腺苷、尿酸或硫酸肝素。在具体实施方案中，TMAA是VEGF-A、EGF、PDGF、IGF或bFGF。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述CAR包含靶向目的抗原的抗体或抗体片段。在更具体的实施方案中，所述CAR包含单链Fv抗体片段(scFv)。在一个实施方案中，嵌合抗原受体包含结合目的抗原(例如肿瘤细胞上的抗原)的scFv、包含CD8α多肽的铰链结构域、CD8α跨膜结构域、CD137(4-1BB)细胞内共刺激信号传导结构域和CD3ζ初级信号传导结构域。肿瘤细胞可以是，例如，实体肿瘤中的细胞，或血液癌症的细胞。抗原可以是在任何肿瘤或癌症类型的细胞上表达的任何抗原。在一个实施方案中，免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含靶向目的抗原的单链Fv抗体片段。在一个实施方案中，免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体包含结合目的抗原的scFv、包含CD8α多肽的铰链结构域、CD8α跨膜结构域、CD137(4-1BB)细胞内共刺激信号传导结构域和CD3ζ初级信号传导结构域。
在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。在更具体的实施方案中，所述CAR包含单链Fv抗体片段(scFv)。在更具体的实施方案中，所述CAR包含BCMA02 scFv，例如SEQ ID NO:38。在上述任何方面或实施方案的具体实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagene vicleucel细胞。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向BCMA例如BCMA的鼠单链Fv抗体片段。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)的鼠抗BCMA scFv、含有CD8α多肽的铰链结构域、CD8α跨膜结构域、CD137(4-1BB)细胞内共刺激信号传导结构域和CD3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含靶向BCMA(例如，BCMA)的鼠scFv，其中所述scFv是SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:37的抗BCMA02 CAR的scFv。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体是或包含SEQ ID NO:9。在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体是或包含SEQ IDNO:37。在本文任何实施方案的更具体的实施方案中，所述免疫细胞是idecabtagenevicleucel(ide-cel)细胞。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有靶向BCMA(例如，BCMA)的鼠单链Fv抗体片段。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体含有结合BCMA多肽(例如，BCMA)的鼠抗BCMAscFv、包含CD8α多肽的铰链结构域、CD8α跨膜结构域、CD137(4-1BB)细胞内共刺激信号传导结构域和CD3ζ初级信号传导结构域。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体是或包含SEQ ID NO:9。在一个实施方案中，所述免疫细胞包含嵌合抗原受体，所述嵌合抗原受体是或包含SEQ ID NO:37。
在其他实施方案中，将本文所设想的经基因修饰的免疫效应细胞施用至患有B细胞相关病症(例如与B细胞相关的自身免疫性疾病或B细胞恶性肿瘤)的患者。
除非特别指出相反的情况，否则本文提供的主题的实践采用本领域技术范围内的化学、生物化学、有机化学、分子生物学、微生物学、重组DNA技术、遗传学、免疫学和细胞生物学的常规方法，为了说明的目的在下文中描述了其中许多方法。此类技术在文献中有充分的解释。参见例如，Sambrook,等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版,2001)；Sambrook,等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第2版,1989)；Maniatis等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(1982)；Ausubel等人,CurrentProtocols in Molecular Biology(John Wiley和Sons，2008年7月更新)；ShortProtocols in Molecular Biology:A Compendium of Methods from Current Protocolsin Molecular Biology,Greene Pub.Associates and Wiley-Interscience；Glover,DNACloning:A Practical Approach,第I和II卷(IRL Press,Oxford,1985)；Anand,Techniques for the Analysis of Complex Genomes,(Academic Press,New York,1992)；Transcription and Translation(B.Hames和S.Higgins编,1984)；Perbal,APractical Guide to Molecular Cloning(1984)；Harlow和Lane,Antibodies,(ColdSpring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.,1998)Current Protocolsin Immunology Q.E.Coligan,A.M.Kruisbeek,D.H.Margulies,E.M.Shevach andW.Strober,编,1991)；Annual Review of Immunology；以及在如Advances in Immunology的期刊中的专著。
6.2.定义
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语具有与本公开文本所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。虽然在本公开文本的实践或测试中可以使用与本文所述的那些方法和材料类似或等效的任何方法和材料，但本文描述了组合物、方法和材料的优选实施方案。出于本公开文本的目的，以下术语定义如下。
冠词“一个/一种(a)”、“一个/一种(an)”和“所述”在本文中用于指代所述冠词的一个或超过一个(即，至少一个/一种或一个/一种或多个/多种)语法对象。举例来说，“一个/一种要素”意指一个/一种要素或一个/一种或多个/多种要素。
替代方案(例如，“或”)的使用应当理解为意指替代方案之一、两者或其任何组合。
术语“和/或”应理解为意指替代方案中的任一个或两个。
如本文所用，术语“约”或“大约”是指与参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度相比，变化多达15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％或1％的数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度。在一个实施方案中，术语“约”或“近似”是指在参考数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度周围±15％、±10％、±9％、±8％、±7％、±6％、±5％、±4％、±3％、±2％或±1％的数量、水平、值、数目、频率、百分比、尺寸、大小、量、重量或长度范围。
在整个本说明书中，除非上下文另有要求，否则词语“包含(comprise)”、“包含(comprises)”和“包含(comprising)”将被理解为暗示包括所述的步骤或要素或者步骤或要素的组，但不排除任何其他步骤或要素或者步骤或要素的组。“由……组成”意味着包括并限于在词组“由……组成”之后的任何内容。因此，词组“由……组成”指示，所列出的要素是必需的或强制性的，并且不可以存在任何其他要素。“基本上由……组成”意味着包括所述词组后所列出的任何要素，并且限于不会干扰或促进本公开文本针对所列出的要素详细说明的活性或作用的其他要素。因此，词组“基本上由……组成”表示所列要素是必需的或强制性的，但不存在对所列要素的活动或行动有重大影响的其他要素。
在整个本说明书中对“一个实施方案”、“实施方案”、“特定实施方案”、“相关实施方案”、“特定实施方案”、“另外的实施方案”或“其他实施方案”或其组合的提及意指结合实施方案描述的特定特征、结构或特征被包括在本文提供的公开文本的至少一个实施方案中。因此，在整个本说明书中各处出现的上述词组不一定都指的是相同的实施方案。此外，特定特征、结构或特性可以在一个或多个实施方案中以任何合适的方式组合。还应理解，在一个实施方案中对特征的肯定的叙述充当在特定实施方案中排除所述特征的基础。
6.3.嵌合抗原受体
在各种实施方案中，提供了将免疫效应细胞的细胞毒性重定向至B细胞的基因工程化受体。这些基因工程化受体在本文中称为嵌合抗原受体(CAR)。CAR是这样的分子，其将基于抗体的对所需抗原(例如，BCMA)的特异性与T细胞受体激活细胞内结构域组合在一起以生成展现出特异性抗BCMA细胞免疫活性的嵌合蛋白。如本文所用，术语“嵌合的”形容由来自不同来源的不同蛋白质或DNA的部分组成。
本文所述的实施方案所适用的CAR T细胞疗法包括任何CAR T疗法，如BCMA CAR T细胞疗法，如BCMA02、JCARH125、JNJ-68284528(LCAR-B38M)(Janssen/Legend)、P-BCMA-101(Poseida)、PBCAR269A(Poseida)、P-BCMA-Allo1(Poseida)、Allo-715(Pfizer/Allogene)、CT053(Carsgen)、Descartes-08(Cartesian)、PHE885(Novartis)、CTX120(CRISPRTherapeutics)；CD19 CAR T疗法(例如，Yescarta、Kymriah、Tecartus、lisocabtagenemaraleucel(liso-cel))，以及靶向任何其他细胞表面标记物的CAR T疗法。
多肽的细胞外结构域(也称为结合结构域或抗原特异性结合结构域)与目的抗原结合。在某些实施方案中，细胞外结构域包含与所述抗原结合的受体或受体的一部分。细胞外结构域可以是例如与所述抗原结合的受体或受体的一部分。在某些实施方案中，细胞外结构域包含或者是抗体或其抗原结合部分。在具体实施方案中，细胞外结构域包含或者是单链Fv结构域。单链Fv结构域可以包含例如通过柔性接头与VH连接的VL，其中所述VL和VH来自结合所述抗原的抗体。
多肽的细胞外结构域结合的抗原可以是任何目的抗原，例如，可以是肿瘤细胞上的抗原。肿瘤细胞可以是，例如，实体肿瘤中的细胞，或血液癌症的细胞。抗原可以是在任何肿瘤或癌症类型的细胞上表达的任何抗原，例如淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤(例如，恶性黑色素瘤)、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞癌、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤等的细胞。在更具体的实施方案中，所述淋巴瘤可以是慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
在某些实施方案中，抗原是肿瘤相关抗原(TAA)或肿瘤特异性抗原(TSA)。在各种具体实施方案中，肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原是但不限于Her2、前列腺干细胞抗原(PSCA)、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、癌抗原-125(CA-125)、CA19-9、钙网膜蛋白、MUC-1、上皮膜蛋白(EMA)、上皮肿瘤抗原(ETA)、酪氨酸酶、黑色素瘤相关抗原(MAGE)、CD19、CD20、CD34、CD45、CD99、CD117、嗜铬粒蛋白、细胞角蛋白、肌间线蛋白、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、大囊病液体蛋白(GCDFP-15)、HMB-45抗原、高分子量黑色素瘤相关抗原(HMW-MAA)、蛋白melan-A(MART-1)、myo-D1、肌肉特异性肌动蛋白(MSA)、神经丝、神经元特异性烯醇酶(NSE)、胎盘碱性磷酸酶、突触素(synaptophysis)、甲状腺球蛋白、甲状腺转录因子-1、丙酮酸激酶同工酶M2型的二聚体形式(肿瘤M2-PK)、异常ras蛋白或异常p53蛋白。
在某些实施方案中，TAA或TSA是癌症/睾丸(CT)抗原，例如BAGE、CAGE、CTAGE、FATE、GAGE、HCA661、HOM-TES-85、MAGEA、MAGEB、MAGEC、NA88、NY-ESO-1、NY-SAR-35、OY-TES-1、SPANXB1、SPA17、SSX、SYCP1或TPTE。
在某些其他实施方案中，TAA或TSA是碳水化合物或神经节苷脂，例如fuc-GM1、GM2(癌胚胎抗原免疫原-1；OFA-I-1)；GD2(OFA-I-2)、GM3、GD3等。
在某些其他实施方案中，TAA或TSA是α-肌动蛋白-4，Bage-1，BCR-ABL，Bcr-Abl融合蛋白，β-连环蛋白，CA 125，CA 15-3(CA 27.29\BCAA)，CA 195，CA 242，CA-50，CAM43，Casp-8，cdc27，cdk4，cdkn2a，CEA，coa-1，dek-can融合蛋白，EBNA，EF2，爱泼斯坦-巴尔病毒抗原，ETV6-AML1融合蛋白，HLA-A2，HLA-A11，hsp70-2，KIAAO205，Mart2，Mum-1、2和3，neo-PAP，肌球蛋白I类，OS-9，pml-RARα融合蛋白，PTPRK，K-ras，N-ras，磷酸丙糖异构酶，Gage3、4、5、6、7，GnTV，Herv-K-mel，Lage-1，NA-88，NY-Eso-1/Lage-2，SP17，SSX-2，TRP2-Int2，gp100(Pmel 17)，酪氨酸酶，TRP-1，TRP-2，MAGE-1，MAGE-3，RAGE，GAGE-1，GAGE-2，p15(58)，RAGE，SCP-1，Hom/Mel-40，PRAME，p53，H-Ras，HER-2/neu，E2A-PRL，H4-RET，IGH-IGK，MYL-RAR，人乳头状瘤病毒(HPV)抗原E6和E7，TSP-180，MAGE-4，MAGE-5，MAGE-6，p185erbB2，p180erbB-3，c-met，nm-23H1，PSA，TAG-72-4，CA 19-9，CA 72-4，CAM 17.1，NuMa，K-ras，13-连环素，Mum-1，p16，TAGE，PSMA，CT7，端粒酶，43-9F，5T4，791Tgp72，13HCG，BCA225，BTAA，CD68\KP1，CO-029，FGF-5，G250，Ga733(EpCAM)，HTgp-175，M344，MA-50，MG7-Ag，MOV18，NB\70K，NY-CO-1，RCAS1，SDCCAG16，TA-90，TAAL6，TAG72，TLP，TPS，CD19，CD22，CD27，CD30，CD70，GD2(神经节苷脂G2)，EGFRvIII(表皮生长因子变体III)，精子蛋白17(Sp17)，间皮素，PAP(前列腺酸性磷酸酶)，prostein，TARP(T细胞受体γ交替阅读框蛋白)，Trp-p8，STEAP1(前列腺六次跨膜上皮抗原1)，异常ras蛋白，或异常p53蛋白。在另一个具体实施方案中，所述肿瘤相关抗原或肿瘤特异性抗原是整合素αvβ3(CD61)、半乳糖凝集素、K-Ras(V-Ki-ras2Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因)或Ral-B。
在具体实施方案中，TAA或TSA是CD20、CD123、CLL-1、CD38、CS-1、CD138、ROR1、FAP、MUC1、PSCA、EGFRvIII、EPHA2或GD2。在另外的具体实施方案中，TAA或TSA是CD123、CLL-1、CD38或CS-1。在具体实施方案中，CAR的细胞外结构域结合CS-1。在另外的具体实施方案中，细胞外结构域包含埃罗妥珠单抗的单链形式和/或埃罗妥珠单抗的抗原结合片段。在具体实施方案中，CAR的细胞外结构域结合CD20。在更具体的实施方案中，CAR的细胞外结构域是结合CD20的scFv或其抗原结合片段。
其他肿瘤相关抗原和肿瘤特异性抗原是本领域技术人员已知的。
与TSA和TAA结合的抗体和scFv是本领域已知的，编码它们的核苷酸序列也是已知的。
在某些具体实施方案中，抗原是不被视为TSA或TAA的抗原，但其仍然与肿瘤细胞或由肿瘤引起的损伤相关。在具体实施方案中，抗原是肿瘤微环境相关抗原(TMAA)。在某些实施方案中，例如，TMAA是例如生长因子、细胞因子或白细胞介素，例如与血管生成或血管发生相关的生长因子、细胞因子或白细胞介素。此类生长因子、细胞因子或白细胞介素可以包括例如血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子(IGF)或白细胞介素8(IL-8)。肿瘤还可以在肿瘤局部产生低氧环境。因此，在其他具体实施方案中，TMAA是缺氧相关因子，例如HIF-1α、HIF-1β、HIF-2α、HIF-2β、HIF-3α或HIF-3β。肿瘤还可以对正常组织造成局部损伤，导致释放称为损伤相关分子模式分子(DAMP；也称为警报素)的分子。因此，在某些其他具体实施方案中，TMAA是DAMP，例如热休克蛋白、染色质相关蛋白高迁移率族蛋白1(HMGB1)、S100A8(MRP8、钙粒蛋白A)、S100A9(MRP14、钙粒蛋白B)、血清淀粉样蛋白A(SAA)，或者可以是脱氧核糖核酸、三磷酸腺苷、尿酸或硫酸肝素。在具体实施方案中，TMAA是VEGF-A、EGF、PDGF、IGF或bFGF。
在某些实施方案中，细胞外结构域通过接头、间隔子或铰链多肽序列(例如来自CD28的序列)连接到所述跨膜结构域。
在某些实施方案中，本文所设想的CAR包含结合BCMA的细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域。CAR的抗BCMA抗原结合结构域与靶细胞表面上的BCMA接合导致CAR的聚集，并向含CAR的细胞递送激活刺激。CAR的主要特征是其重定向免疫效应细胞特异性从而触发增殖、细胞因子产生、吞噬或分子产生的能力，所述分子可以利用单克隆抗体、可溶性配体或细胞特异性共受体的细胞特异性靶向能力以非主要组织相容性(MHC)依赖性方式介导靶抗原表达细胞的细胞死亡。
在各种实施方案中，CAR包含含有鼠抗BCMA(例如，人BCMA)特异性结合结构域的细胞外结合结构域；跨膜结构域；一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域；和初级信号传导结构域。
在特定实施方案中，CAR包含含有鼠抗BCMA(例如，人BCMA)抗体或其抗原结合片段的细胞外结合结构域；一个或多个铰链结构域或间隔子结构域；跨膜结构域；一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域；和初级信号传导结构域。
6.3.1.结合结构域
在特定实施方案中，本文所设想的CAR包含细胞外结合结构域，所述细胞外结合结构域含有与在B细胞上表达的人BCMA多肽特异性结合的鼠抗BCMA抗体或其抗原结合片段。如本文所用，术语“结合结构域”、“细胞外结构域”、“细胞外结合结构域”、“抗原特异性结合结构域”和“细胞外抗原特异性结合结构域”可互换使用，并且提供了CAR与目的靶抗原例如BCMA特异性结合的能力。所述结合结构域可以源自天然、合成、半合成或重组来源。
如本文所用的术语“特异性结合亲和力”或“特异性地结合”或“特异性结合的”或“特异性结合”或“特异性地靶向”描述了抗BCMA抗体或其抗原结合片段(或包含所述抗体或其抗原结合片段的CAR)以比背景结合更大的结合亲和力与BCMA结合。结合结构域(或包含结合结构域的CAR或含有结合结构域的融合蛋白)与BCMA“特异性地结合”，条件是其以例如大于或等于约105M-1的亲和力或Ka(即特定结合相互作用的平衡缔合常数，单位为1/M)与BCMA结合或缔合。在某些实施方案中，结合结构域(或其融合蛋白)以如下Ka与靶标结合：大于或等于约106M-1、107M-1、108M-1、109M-1、1010M-1、1011M-1、1012M-1或1013M-1。“高亲和力”结合结构域(或其单链融合蛋白)是指具有如下Ka的那些结合结构域：至少107M-1、至少108M-1、至少109M-1、至少1010M-1、至少1011M-1、至少1012M-1、至少1013M-1或更大。
可替代地，亲和力可以被定义为特定结合相互作用的平衡解离常数(Kd)，单位为M(例如，10-5M至10-13M或更小)。根据本公开文本的结合结构域多肽和CAR蛋白的亲和力可以使用常规技术容易地测定，例如通过竞争ELISA(酶联免疫吸附测定)、或通过结合缔合、或使用标记配体的置换测定、或使用表面等离子体共振设备(如可从新泽西州皮斯卡塔韦的Biacore，Inc.获得的Biacore T100)或光学生物传感器技术(如可分别从Corning和PerkinElmer获得的EPIC系统或EnSpire)(也参见例如，Scatchard等人(1949)Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660；和美国专利号5,283,173；5,468,614或等同物)。
在一个实施方案中，特异性结合的亲和力是背景结合的约2倍、背景结合的约5倍、背景结合的约10倍、背景结合的约20倍、背景结合的约50倍、背景结合的约100倍、或背景结合的约1000倍或更大。
在特定实施方案中，CAR的细胞外结合结构域包含抗体或其抗原结合片段。“抗体”是指结合剂，其是至少包含轻链或重链免疫球蛋白可变区的多肽，其特异性地识别并结合抗原(如肽、脂质、多糖或含有抗原决定簇(如由免疫细胞识别的那些)的核酸)的表位。
“抗原(Ag)”是指可以刺激动物中的抗体产生或T细胞应答的化合物、组合物或物质，包括注射或吸收至动物体内的组合物(如包含癌症特异性蛋白质的组合物)。抗原与特异性体液或细胞免疫的产物反应，所述产物包括由异源抗原(如所公开的抗原)诱导的那些。在特定实施方案中，靶抗原是BCMA多肽的表位。
“表位”或“抗原决定簇”是指抗原中与结合剂结合的区域。表位既可以由连续氨基酸形成，也可以由通过蛋白质三级折叠而并列的非连续氨基酸形成。由连续氨基酸形成的表位典型地在暴露于变性溶剂时得以保持而通过三级折叠形成的表位典型地在用变性溶剂处理时丧失。表位通常包括独特空间构象中的至少3个，并且更通常至少5、约9或约8-10个氨基酸。
抗体包括其抗原结合片段，如骆驼Ig、Ig NAR、Fab片段、Fab'片段、F(ab)'2片段、F(ab)'3片段、Fv、单链Fv蛋白(“scFv”)、双scFv、(scFv)2、微型抗体、双抗体、三抗体、四抗体、二硫键稳定化Fv蛋白(“dsFv”)以及单结构域抗体(sdAb，纳米抗体)和全长抗体中负责抗原结合的部分。所述术语还包括基因工程化形式，如嵌合抗体(例如，人源化鼠抗体)、异缀合抗体(如双特异性抗体)及其抗原结合片段。还参见Pierce Catalog和Handbook,1994-1995(Pierce Chemical Co.,Rockford,IL)；Kuby,J.,Immunology,第3版,W.H.Freeman&Co.,New York,1997。
如技术人员所理解并如本文其他地方所述，完整抗体包括两条重链和两条轻链。每条重链由一个可变区和第一、第二和第三恒定区组成，而每个轻链由一个可变区和一个恒定区组成。哺乳动物的重链被分类为α、δ、ε、γ和μ。哺乳动物的轻链被分类为λ或κ。包含α、δ、ε、γ和μ重链的免疫球蛋白被分类为免疫球蛋白(Ig)A、IgD、IgE、IgG和IgM。完整抗体形成“Y”形。Y的茎由结合在一起的两条重链的第二恒定区和第三恒定区(以及对于IgE和IgM，第四恒定区)组成，并且在铰链中形成二硫键(链间)。重链γ、α和δ具有由三个串联(在一条线中)Ig结构域构成的恒定区，和用于增加柔性的铰链区；重链μ和ε具有由四个免疫球蛋白结构域构成的恒定区。第二恒定区和第三恒定区分别称为“CH2结构域”和“结构CH3域”。Y的每个臂包括与单个轻链的可变区和恒定区结合的单个重链的可变区和第一恒定区。轻链和重链的可变区负责抗原结合。
轻链可变区和重链可变区含有被三个高变区(也称为“互补决定区”或“CDR”)打断的“框架”区。CDR可以通过常规方法定义或鉴定，例如通过根据Kabat等人(Wu,TT和Kabat,E.A.,J Exp Med.132(2):211-50,(1970)；Borden,P.和Kabat E.A.,PNAS,84:2440-2443(1987)；(参见Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,U.S.Department of Health and Human Services,1991，将其特此通过引用并入))的序列或通过根据Chothia等人(Chothia,C.和Lesk,A.M.,J Mol.Biol.,196(4):901-917(1987)，Chothia,C.等人,Nature,342:877-883(1989))的结构来定义或鉴定。
不同轻链或重链的框架区的序列在物种(如人)内相对保守。抗体的框架区(即组成性轻链和重链的组合框架区)用于在三维空间中定位和对齐CDR。CDR主要负责与抗原表位的结合。每条链的CDR通常称为CDR1、CDR2和CDR3，从N末端开始依次编号，并且通常还由特定CDR所在的链来鉴定。因此，位于抗体的重链的可变结构域中的CDR被称为CDRH1、CDRH2和CDRH3，而位于抗体的轻链可变结构域中的CDR被称为CDRL1、CDRL2和CDRL3。具有不同特异性(即对于不同抗原的不同结合位点)的抗体具有不同的CDR。尽管不同的抗体之间CDR不同，但CDR内仅有限数量的氨基酸位置直接参与抗原结合。CDR内的这些位置称为特异性决定残基(SDR)。适用于构建本文所设想的人源化BCMA CAR的轻链CDR的说明性例子包括但不限于SEQ ID NO:1-3中所述的CDR序列。适用于构建本文所设想的人源化BCMA CAR的重链CDR的说明性例子包括但不限于SEQ ID NO:4-6中所述的CDR序列。
对“VH”的提及或“VH”是指免疫球蛋白重链的可变区，包括抗体的可变区、Fv、scFv、dsFv、Fab或如本文所公开的其他抗体片段。对“VL”的提及或“VL”是指免疫球蛋白轻链的可变区，包括抗体的可变区、Fv、scFv、dsFv、Fab或如本文所公开的其他抗体片段。
“单克隆抗体”是由B淋巴细胞的单个克隆或由已转染了单抗体的轻链和重链基因的细胞产生的抗体。单克隆抗体通过本领域技术人员已知的方法产生，例如通过由骨髓瘤细胞与免疫脾细胞的融合物制备杂交抗体形成细胞产生的。单克隆抗体包括人源化单克隆抗体。
“嵌合抗体”具有来自一个物种(如人)的框架残基以及来自另一个物种(如小鼠)的CDR(其通常赋予抗原结合)。在特定实施方案中，本文所设想的CAR包含作为嵌合抗体或其抗原结合片段的抗原特异性结合结构域。
“人源化”抗体是免疫球蛋白，其包含人框架区和来自非人(例如小鼠、大鼠或合成)免疫球蛋白的一个或多个CDR。提供CDR的非人免疫球蛋白被称为“供体”，并且提供框架的人免疫球蛋白被称为“受体”。
在特定实施方案中，鼠抗BCMA(例如，人BCMA)抗体或其抗原结合片段包括但不限于骆驼Ig(骆驼抗体(VHH))、Ig NAR、Fab片段、Fab'片段、F(ab)'2片段、F(ab)'3片段、Fv、单链Fv抗体(“scFv”)、双scFv、(scFv)2、微型抗体、双抗体、三抗体、四抗体、二硫键稳定化Fv蛋白(“dsFv”)和单结构域抗体(sdAb，纳米抗体)。
如本文所用的“骆驼Ig”或“骆驼VHH”是指重链抗体的最小已知抗原结合单元(Koch-Nolte等人,FASEB J.,21:3490-3498(2007))。“重链抗体”或“骆驼抗体”是指含有两个VH结构域且无轻链的抗体(Riechmann L.等人,J.Immunol.Methods 231:25–38(1999)；WO 94/04678；WO 94/25591；美国专利号6,005,079)。
“免疫球蛋白新抗原受体”的“IgNAR”是指来自鲨鱼免疫组库的一类抗体，其由一个可变新抗原受体(VNAR)结构域和五个恒定新抗原受体(CNAR)结构域的同二聚体组成。IgNAR代表最小的已知基于免疫球蛋白的蛋白质支架中的一些，并且是高度稳定的并具有高效结合特征。固有稳定性可以归因于(i)潜在的Ig支架，与在小鼠抗体中发现的常规抗体VH和VL结构域相比，其呈现大量带电的且亲水性的表面暴露残基；和(ii)在互补决定区(CDR)环中的稳定结构特征，包括环间二硫桥和环内氢键的模式。
对抗体的木瓜蛋白酶消化产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，其各自具有单一抗原结合位点；和残余“Fc”片段，其名称反映其易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生F(ab')2片段，所述F(ab')2片段具有两个抗原组合位点并且仍然能够交联抗原。
“Fv”是含有完整抗原结合位点的最小抗体片段。在一个实施方案中，双链Fv种类由紧密非共价缔合的一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域的二聚体组成。在单链Fv(scFv)种类中，一个重链可变结构域和一个轻链可变结构域可以通过柔性肽接头共价连接，使得轻链和重链可以以类似于双链Fv种类中的“二聚体”结构缔合。在这种构型中，每个可变结构域的三个高变区(HVR)相互作用以定义VH-VL二聚体的表面上的抗原结合位点。这六个HVR共同赋予抗体的抗原结合特异性。然而，甚至单个可变结构域(或仅包含三个对抗原具有特异性的HVR的一半Fv)也具有识别和结合抗原的能力，但其亲和力低于整个结合位点。
Fab片段含有重链和轻链可变结构域，并且还含有轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH1)。Fab′片段与Fab片段的不同之处在于重链CH1结构域的羧基末端处添加几个残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab'-SH是本文中Fab'的名称，其中恒定结构域的一个或多个半胱氨酸残基带有游离巯基。F(ab')2抗体片段最初是作为Fab'片段对产生的，它们之间具有铰链半胱氨酸。抗体片段的其他化学偶联也是已知的。
术语“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的抗体片段，所述片段包含在同一多肽链中连接至轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)(VH-VL)。通过使用过短而不允许在同一条链上的两个结构域之间配对的接头，迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。双抗体可以是二价的或双特异性的。双抗体更全面地描述于例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等人,PNAS USA 90:6444-6448(1993)中。Hudson等人,Nat.Med.9:129-134(2003)中还描述了三抗体和四抗体。
“单结构域抗体”或“sdAb”或“纳米抗体”是指由抗体重链可变区(VH结构域)或抗体轻链可变区(VL结构域)组成的抗体片段(Holt,L.等人,2003,Trends inBiotechnology,21(11):484-490)。
“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单个多肽链中并且以任一取向存在(例如，VL-VH或VH-VL)。通常，scFv多肽进一步包含VH与VL结构域之间的多肽接头，其使得scFv能形成抗原结合的所需结构。关于scFv的综述，参见例如，Pluckthün,在The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编,(Springer-Verlag,New York,1994),第269-315页中。
在某些实施方案中，本文所设想的CAR包含作为鼠scFv的抗原特异性结合结构域。单链抗体可以从对于所需靶标具有特异性的杂交瘤的V区基因克隆。此类交瘤的产生已成为常规。可用于克隆可变区重链(VH)和可变区轻链(VL)的技术已描述于例如Orlandi等人,PNAS,1989；86:3833-3837中。
在特定实施方案中，所述抗原特异性结合结构域是结合人BCMA多肽的鼠scFv。适用于构建本文所设想的BCMA CAR的可变重链的说明性例子包括但不限于SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列。适用于构建本文所设想的BCMA CAR的可变轻链的说明性例子包括但不限于SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列。
本文提供的BCMA特异性结合结构域还包含一、二、三、四、五或六个CDR。此类CDR可以是非人CDR或从轻链的CDRL1、CDRL2和CDRL3以及重链的CDRH1、CDRH2和CDRH3中选择的改变的非人CDR。在某些实施方案中，BCMA特异性结合结构域包含(a)含有轻链CDRL1、轻链CDRL2和轻链CDRL3的轻链可变区，以及(b)含有重链CDRH 1、重链CDRH 2和重链CDRH 3的重链可变区。
6.3.2.接头
在某些实施方案中，本文所设想的CAR可以包含各种结构域之间的接头残基，例如为了分子的适当间距和构象而添加的接头残基。在特定实施方案中，所述接头是可变区连接序列。“可变区连接序列”是连接VH和VL结构域的氨基酸序列，并且提供与两个子结合结构域的相互作用相容的间隔子功能，使得所得的多肽保持对于与包含相同轻链和重链可变区的抗体的靶分子相同的靶分子的特异性结合亲和力。本文所设想的CAR可以包含一、二、三、四或五个或更多个接头。在特定实施方案中，接头的长度是约1至约25个氨基酸、约5至约20个氨基酸或约10至约20个氨基酸或任何介于中间长度的氨基酸。在一些实施方案中，所述接头的长度是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个或更多个氨基酸。
接头的说明性例子包括甘氨酸聚合物(G)n；甘氨酸-丝氨酸聚合物(G1-5S1-5)n，其中n是至少一、二、三、四或五的整数；甘氨酸-丙氨酸聚合物；丙氨酸-丝氨酸聚合物；以及本领域已知的其他柔性接头。甘氨酸和甘氨酸-丝氨酸聚合物是相对非结构化的，因此可以充当融合蛋白(如本文所述的CAR)的结构域之间的中性系链。甘氨酸接近的空间甚至比丙氨酸显著大，并且比侧链较长的残基受到的限制小得多(参见Scheraga,Rev.ComputationalChem.11173-142(1992))。普通熟练技术人员将认识到，在特定实施方案中CAR的设计可以包括全部或部分柔性的接头，使得所述接头可以包括柔性接头以及赋予较低柔性结构以提供所需CAR结构的一个或多个部分。
其他示例性接头包括但不限于以下氨基酸序列：GGG；DGGGS(SEQ ID NO:12)；TGEKP(SEQ ID NO:13)(参见，例如，Liu等人,PNAS 5525-5530(1997))；GGRR(SEQ ID NO:14)(Pomerantz等人1995,同上)；(GGGGS)n，其中n＝1、2、3、4或5，并且其中GGGGS被鉴定为SEQ ID NO:15(Kim等人,PNAS 93,1156-1160(1996.)；EGKSSGSGSESKVD(SEQ ID NO:16)(Chaudhary等人,1990,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.87:1066-1070)；KESGSVSSEQLAQFRSLD(SEQ ID NO:17)(Bird等人,1988,Science242:423-426)，GGRRGGGS(SEQ ID NO:18)；LRQRDGERP(SEQ ID NO:19)；LRQKDGGGSERP(SEQ ID NO:20)；LRQKd(GGGS)2ERP(SEQ ID NO:21)。可替代地，可以使用能够对DNA结合位点和肽本身二者进行建模的计算机程序(Desjarlais和Berg,PNAS 90:2256-2260(1993),PNAS 91:11099-11103(1994))或通过噬菌体展示方法合理地设计柔性接头。在一个实施方案中，所述接头包含以下氨基酸序列：GSTSGSGKPGSGEGSTKG(SEQ ID NO:22)(Cooper等人,Blood,101(4):1637-1644(2003))。
6.3.3.间隔子结构域
在特定实施方案中，在CAR的结合结构域之后是一个或多个“间隔子结构域”，其是指这样的区域，所述区域使抗原结合结构域远离效应细胞表面以实现适当的细胞/细胞接触、抗原结合和激活(Patel等人,Gene Therapy,1999；6:412-419)。间隔子结构域可以源自天然、合成、半合成或重组来源。在某些实施方案中，间隔子结构域是免疫球蛋白的一部分，包括但不限于一个或多个重链恒定区，例如，CH2和CH3。所述间隔子结构域可以包含天然存在的免疫球蛋白铰链区或改变的免疫球蛋白铰链区的氨基酸序列。
在一个实施方案中，间隔子结构域包含IgG1或IgG4的CH2和CH3结构域。
6.3.4.铰链结构域
在CAR的结合结构域之后通常是一个或多个“铰链结构域”，其在将抗原结合结构域远离效应细胞表面定位以实现适当的细胞/细胞接触、抗原结合和激活中起作用。CAR通常在结合结构域与跨膜结构域(TM)之间包含一个或多个铰链结构域。所述铰链结构域可以源自天然、合成、半合成或重组来源。所述铰链结构域可以包含天然存在的免疫球蛋白铰链区或改变的免疫球蛋白铰链区的氨基酸序列。
“改变的铰链区”是指(a)具有高达30％氨基酸变化的天然存在的铰链区(例如，高达25％、20％、15％、10％或5％的氨基酸取代或缺失)，(b)具有高达30％氨基酸变化(例如，高达25％、20％、15％、10％或5％氨基酸取代或缺失)的长度为至少10个氨基酸(例如，至少12、13、14或15个氨基酸)的天然存在的铰链区的一部分，或(c)包含核心铰链区的天然存在的铰链区的一部分(其长度可以是4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个，或至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸)。在某些实施方案中，天然存在的免疫球蛋白铰链区中的一个或多个半胱氨酸残基可以被一个或多个其他氨基酸残基(例如，一个或多个丝氨酸残基)取代。改变的免疫球蛋白铰链区可以可替代地或另外地由另一个氨基酸残基(例如，丝氨酸残基)取代野生型免疫球蛋白铰链区的脯氨酸残基。
适用于本文所述的CAR的其他说明性铰链结构域包括源自1型膜蛋白(如CD8α、CD4、CD28和CD7)的细胞外区域的铰链区，其可能是来自这些分子的野生型铰链区或可以是经改变的。在另一个实施方案中，所述铰链结构域包含CD8α铰链区。
6.3.5.跨膜结构域
跨膜(TM)结构域是CAR的一部分，其融合了细胞外结合部分和细胞内信号传导结构域，并将CAR锚定到免疫效应细胞的质膜上。所述TM结构域可以源自天然、合成、半合成或重组来源。所述TM结构域可以源自以下项(即，包含以下项的至少一个或多个跨膜区)：T细胞受体的α、β或ζ链、CD3ε、CD3ζ、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD27、CD28、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD152、CD154和PD-1。在特定实施方案中，所述TM结构域是合成的并且主要包含疏水性残基，如亮氨酸和缬氨酸。
在一个实施方案中，本文所设想的CAR包含源自CD8α的TM结构域。在另一个实施方案中，本文所设想的CAR包含源自CD8α的TM结构域以及连接TM结构域和CAR的细胞内信号传导结构域的短寡肽或多肽接头，优选地其长度在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸之间。基于甘氨酸-丝氨酸的接头提供了特别合适的接头。
6.3.6.细胞内信号传导结构域
在特定实施方案中，本文所设想的CAR包含细胞内信号传导结构域。“细胞内信号传导结构域”是指CAR的一部分，其参与将有效BCMA CAR与人BCMA多肽结合的信息转导至免疫效应细胞内部，以引发效应细胞功能，例如激活、细胞因子产生、增殖和细胞毒性活性，包括向CAR结合的靶细胞释放细胞毒性因子或使用抗原与细胞外CAR结构域结合引发的其他细胞应答。
术语“效应子功能”是指免疫效应细胞的特化功能。T细胞的效应子功能例如可以是溶细胞活性或辅助活性，包括细胞因子的分泌。因此，术语“细胞内信号传导结构域”是指蛋白质中转导效应子功能信号并引导细胞执行特化功能的部分。虽然通常可以采用完整的细胞内信号传导结构域，但是在多种情况下不需要使用整个结构域。就使用细胞内信号传导结构域的截短部分而言，这样的截短部分可以用于代替整个结构域，只要它转导效应子功能信号即可。术语细胞内信号传导结构域意在包括细胞内信号传导结构域中足以转导效应子功能信号的任何截短部分。
已知仅通过TCR产生的信号不足以完全激活T细胞，并且还需要次级或共刺激信号。因此，T细胞激活可以说是由两类不同的细胞内信号传导结构域介导的：通过TCR(例如，TCR/CD3复合物)启动抗原依赖性初级激活的初级信号传导结构域和以非抗原依赖性方式作用以提供次级或共刺激信号的共刺激信号传导结构域。在某些实施方案中，本文所设想的CAR包含细胞内信号传导结构域，其含有一个或多个“共刺激信号传导结构域”和“初级信号传导结构域”
初级信号传导结构域以刺激方式或以抑制方式调节TCR复合物的初级激活。以刺激方式起作用的初级信号传导结构域可以含有信号传导基序(其被称为免疫受体酪氨酸激活基序或ITAM)。
本文所提供的主题中特别使用的含有ITAM的初级信号传导结构域的例子包括源自TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的那些。在特定实施方案中，CAR包含CD3ζ初级信号传导结构域和一个或多个共刺激信号传导结构域。所述细胞内初级信号传导结构域和共刺激信号传导结构域可以以任何顺序串联连接至跨膜结构域的羧基末端。
本文所设想的CAR包含一个或多个共刺激信号传导结构域，以增强表达CAR受体的T细胞的功效和扩增。如本文所用，术语“共刺激信号传导结构域”或“共刺激结构域”是指共刺激分子的细胞内信号传导结构域。共刺激分子是除了抗原受体或Fc受体之外的细胞表面分子，其在结合抗原时提供T淋巴细胞的有效激活和功能所需的第二信号。此类共刺激分子的说明性例子包括CARD11、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54(ICAM)、CD83、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD150(SLAMF1)、CD152(CTLA4)、CD223(LAG3)、CD270(HVEM)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)、CD278(ICOS)、DAP10、LAT、NKD2C SLP76、TRIM和ZAP70。在一个实施方案中，CAR包含选自CD28、CD137和CD134的一个或多个共刺激信号传导结构域以及CD3ζ初级信号传导结构域。
在另一个实施方案中，CAR包含CD28和CD137共刺激信号传导结构域和CD3ζ初级信号传导结构域。
在又另一个实施方案中，CAR包含CD28和CD134共刺激信号传导结构域和CD3ζ初级信号传导结构域。
在一个实施方案中，CAR包含CD137和CD134共刺激信号传导结构域和CD3ζ初级信号传导结构域。
在特定实施方案中，本文所设想的CAR包含与在B细胞上表达的BCMA多肽(例如，在人B细胞上表达的人BCMA)特异性结合的人抗BCMA抗体或其抗原结合片段。
在特定实施方案中，本文所设想的CAR包含与在B细胞上表达的BCMA多肽(例如，在人B细胞上表达的人BCMA)特异性结合的鼠抗BCMA抗体或其抗原结合片段。
在一个实施方案中，CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)鼠抗BCMA scFv；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：T细胞受体的α、β或ζ链、CD3ε、CD3ζ、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD 16、CD22、CD27、CD28、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD152、CD 154和PD1；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：CARD11、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54(ICAM)、CD83、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD150(SLAMF1)、CD152(CTLA4)、CD223(LAG3)、CD270(HVEM)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)、CD278(ICOS)、DAP10、LAT、NKD2C SLP76、TRIM和ZAP70；以及来自TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的初级信号传导结构域。
在一个实施方案中，CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)鼠抗BCMA scFv；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：T细胞受体的α、β或ζ链、CD3ε、CD3ζ、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD 16、CD22、CD27、CD28、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD152、CD 154和PD1；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：CARD11、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54(ICAM)、CD83、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD150(SLAMF1)、CD152(CTLA4)、CD223(LAG3)、CD270(HVEM)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)、CD278(ICOS)、DAP10、LAT、NKD2C SLP76、TRIM和ZAP70；以及来自选自以下的多肽的一个或多个初级信号传导结构域：TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。
在一个实施方案中，CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)鼠抗BCMA scFv；选自以下的铰链结构域：IgG1铰链/CH2/CH3、IgG4铰链/CH2/CH3和CD8α铰链；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：T细胞受体的α、β或ζ链、CD3ε、CD3ζ、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD 16、CD22、CD27、CD28、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD152、CD 154和PD1；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：CARD11、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54(ICAM)、CD83、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD150(SLAMF1)、CD152(CTLA4)、CD223(LAG3)、CD270(HVEM)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)、CD278(ICOS)、DAP10、LAT、NKD2C SLP76、TRIM和ZAP70；以及来自TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的初级信号传导结构域。
在一个实施方案中，CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)鼠抗BCMA scFv；选自以下的铰链结构域：IgG1铰链/CH2/CH3、IgG4铰链/CH2/CH3和CD8α铰链；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：T细胞受体的α、β或ζ链、CD3ε、CD3ζ、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD 16、CD22、CD27、CD28、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD152、CD 154和PD1；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：CARD11、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54(ICAM)、CD83、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD150(SLAMF1)、CD152(CTLA4)、CD223(LAG3)、CD270(HVEM)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)、CD278(ICOS)、DAP10、LAT、NKD2C SLP76、TRIM和ZAP70；以及来自选自以下的多肽的一个或多个初级信号传导结构域：TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。
在一个实施方案中，CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)鼠抗BCMA scFv；选自以下的铰链结构域：IgG1铰链/CH2/CH3、IgG4铰链/CH2/CH3和CD8α铰链；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：T细胞受体的α、β或ζ链、CD3ε、CD3ζ、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD 16、CD22、CD27、CD28、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD152、CD 154和PD1；将TM结构域连接至CAR的细胞内信号传导结构域的短寡肽或多肽接头，优选地长度在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸之间；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：CARD11、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54(ICAM)、CD83、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD150(SLAMF1)、CD152(CTLA4)、CD223(LAG3)、CD270(HVEM)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)、CD278(ICOS)、DAP10、LAT、NKD2C SLP76、TRIM和ZAP70；以及来自TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d的初级信号传导结构域。
在一个实施方案中，CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)鼠抗BCMA scFv；选自以下的铰链结构域：IgG1铰链/CH2/CH3、IgG4铰链/CH2/CH3和CD8α铰链；源自选自以下的多肽的跨膜结构域：T细胞受体的α、β或ζ链、CD3ε、CD3ζ、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD 16、CD22、CD27、CD28、CD33、CD37、CD45、CD64、CD80、CD86、CD 134、CD137、CD152、CD 154和PD1；将TM结构域连接至CAR的细胞内信号传导结构域的短寡肽或多肽接头，优选地长度在1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸之间；以及来自选自以下的共刺激分子的一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域：CARD11、CD2、CD7、CD27、CD28、CD30、CD40、CD54(ICAM)、CD83、CD134(OX40)、CD137(4-1BB)、CD150(SLAMF1)、CD152(CTLA4)、CD223(LAG3)、CD270(HVEM)、CD273(PD-L2)、CD274(PD-L1)、CD278(ICOS)、DAP10、LAT、NKD2C SLP76、TRIM和ZAP70；以及来自选自以下的多肽的一个或多个初级信号传导结构域：TCRζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。
在特定实施方案中，CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)的鼠抗BCMA scFv；含有IgG1铰链/CH2/CH3多肽和CD8α多肽的铰链结构域；含有约3至约10个氨基酸的多肽接头的CD8α跨膜结构域；CD137细胞内共刺激信号传导结构域；以及CD3ζ初级信号传导结构域。
在特定实施方案中，CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)的鼠抗BCMA scFv；含有CD8α多肽的铰链结构域；含有约3至约10个氨基酸的多肽接头的CD8α跨膜结构域；CD134细胞内共刺激信号传导结构域；以及CD3ζ初级信号传导结构域。
在特定实施方案中，CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)的鼠抗BCMA scFv；含有CD8α多肽的铰链结构域；含有约3至约10个氨基酸的多肽接头的CD8α跨膜结构域；CD28细胞内共刺激信号传导结构域；以及CD3ζ初级信号传导结构域。
在特定实施方案中，CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)的鼠抗BCMA scFv；含有CD8α多肽的铰链结构域；CD8α跨膜结构域；CD137(4-1BB)细胞内共刺激信号传导结构域；以及CD3ζ初级信号传导结构域。
此外，与未修饰的T细胞或经修饰以表达其他CAR的T细胞相比，本文所设想的CAR的设计使得表达所述CAR的T细胞具有更好的扩增、长期持久性和可耐受的细胞毒性特性。
6.4.多肽
本公开文本部分地设想了CAR多肽及其片段、包含所述多肽及其片段的细胞和组合物以及表达多肽的载体。在特定实施方案中，提供了一种包含如SEQ ID NO:9中所示的一个或多个CAR的多肽。
除非有相反规定，否则“多肽”、“多肽片段”、“肽”和“蛋白质”可以互换使用，并且根据即作为氨基酸序列的常规意义来使用。多肽不限于特定长度，例如，它们可以包含全长蛋白质序列或全长蛋白质的片段，并且可以包括所述多肽的翻译后修饰(例如糖基化、乙酰化、磷酸化等)以及本领域已知的其他修饰(天然存在的和非天然存在的修饰)。在各种实施方案中，本文所设想的CAR多肽包含蛋白质的N末端的信号(或先导)序列，其在共翻译或翻译后指导蛋白质的转移。本文所公开的CAR中有用的合适的信号序列的说明性例子包括但不限于IgG1重链信号序列和CD8α信号序列。多肽可以使用各种熟知的重组和/或合成技术中的任一种来制备。本文所设想的多肽特别地涵盖本公开文本的CAR，或具有如本文所公开的CAR的一个或多个氨基酸的缺失、添加和/或取代的序列。
如本文所使用的“分离的肽”或“分离的多肽”等是指在体外从细胞环境以及从与细胞的其他组分的缔合中分离和/或纯化肽或多肽分子，即其与体内物质无显著缔合。类似地，“分离的细胞”是指已从体内组织或器官获得的且基本上不含细胞外基质的细胞。
多肽包括“多肽变体”。多肽变体可以在一个或多个取代、缺失、添加和/或插入方面不同于天然存在的多肽。此类变体可以是天然存在的或者可以是合成产生的，例如通过修饰上述一个或多个多肽序列产生。例如，在特定实施方案中，可以期望通过将一个或多个取代、缺失、添加和/或插入引入至CAR多肽的结合结构域、铰链、TM结构域、共刺激信号传导结构域或初级信号传导结构域中来改进CAR的结合亲和力和/或其他生物特性。在某些实施方案中，此类多肽包括与其具有至少约65％、70％、75％、85％、90％、95％、98％或99％氨基酸同一性的多肽。
多肽包括“多肽片段”。多肽片段是指具有天然存在的或重组产生的多肽的氨基末端缺失、羧基末端缺失和/或内部缺失或取代的多肽，其可以是单体或多聚体。在某些实施方案中，多肽片段可以包含长度为至少5至约500个氨基酸的氨基酸链。应理解，在某些实施方案中，片段是至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、150、200、250、300、350、400或450个氨基酸。特别有用的多肽片段包括功能结构域，包括抗原结合结构域或抗体片段。在鼠抗BCMA(例如，人BCMA)抗体的情况下，有用的片段包括但不限于：重链或轻链的CDR区、CDR3区；重链或轻链的可变区；抗体链或可变区的一部分，其包含两个CDR；等等。
所述多肽也可以在框内融合或者为了方便合成、纯化或鉴定所述多肽或为了增强所述多肽与固体支持物的结合而与接头或其他序列(例如，聚His)缀合。
如上所述，本公开文本的多肽可以以多种方式改变，包括氨基酸取代、缺失、截短和插入。用于此类操作的方法在本领域中是熟知的。例如，参考多肽的氨基酸序列变体可以通过DNA中的突变来制备。用于诱变和核苷酸序列改变的方法在本领域是熟知的。参见，例如，Kunkel(1985,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.82:488-492)、Kunkel等人,(1987,Methods inEnzymol,154:367-382)、美国专利号4,873,192、Watson,J.D.等人,(Molecular Biologyof the Gene,第四版,Benjamin/Cummings,Menlo Park,Calif.,1987)和其中引用的参考文献。关于不影响目的蛋白质的生物活性的适当氨基酸取代的指导可以在Dayhoff等人,(1978)Atlas of Protein Sequence and Structure(Natl.Biomed.Res.Found.,Washington,D.C.)的模型中找到。
在某些实施方案中，变体将含有保守取代。“保守取代”是这样的取代，其中氨基酸被具有类似特性的另一种氨基酸取代，使得肽化学领域的技术人员可以期望所述多肽的二级结构和亲水性质基本不变。可以对本公开文本的多核苷酸和多肽的结构进行修饰，并且仍然获得编码具有所需特征的变体或衍生多肽的功能分子。当需要改变多肽的氨基酸序列以产生等效的或甚至改进的变体多肽时，例如，本领域技术人员可以改变编码DNA序列的一个或多个密码子(例如，根据表2)。
表2-氨基酸密码子
使用本领域熟知的计算机程序(如DNASTARTM软件)，可以找到确定在不消除生物活性的情况下哪些氨基酸残基可以被取代、插入或缺失的指导。优选地，本文所公开的蛋白质变体中的氨基酸变化是保守氨基酸变化，即类似带电或不带电氨基酸的取代。保守氨基酸变化涉及与其侧链相关的氨基酸家族中的一个氨基酸的取代。天然存在的氨基酸通常分为四个家族：酸性(天冬氨酸、谷氨酸)、碱性(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、非极性(丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)和不带电的极性(甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)氨基酸。苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸有时被共同分类为芳族氨基酸。在肽或蛋白质中，氨基酸的合适保守取代是本领域技术人员已知的，并且通常可以在不改变所得分子的生物活性的情况下进行。本领域技术人员认识到，一般而言，多肽的非必需区域中的单个氨基酸取代不会显著改变生物活性(参见例如，Watson等人Molecular Biology of the Gene,第4版,1987,The Benjamin/CummingsPub.Co.,第224页)。示例性保守取代描述于美国临时专利申请号61/241,647中，将其公开内容通过引用并入本文。
在进行此类改变时，可以考虑氨基酸的亲水性指数。本领域通常理解亲水性氨基酸指数在赋予蛋白质的交互生物功能方面的重要性(Kyte和Doolittle，1982，通过引用并入本文)。每种氨基酸都根据其疏水性和电荷特征被分配亲水性指数(Kyte和Doolittle，1982)。这些值是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/半胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)；以及精氨酸(-4.5)。
本领域已知某些氨基酸可以被具有相似亲水性指数或得分的其他氨基酸取代，并且仍导致具有相似生物活性的蛋白质，即仍获得生物学功能上等同的蛋白质。在进行此类改变时，优选亲水性指数在±2内的氨基酸、特别优选在±1内的氨基酸、以及甚至更特别优选在±0.5内的氨基酸的取代。在本领域中还应理解，可以基于亲水性有效地进行类似氨基酸的取代。
如在美国专利号4,554,101中详述的，已将以下亲水性值分配给氨基酸残基：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0±1)；谷氨酸(+3.0±1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5±1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)；色氨酸(-3.4)。应理解，氨基酸可以被另一种具有类似亲水性值的氨基酸取代，并且仍然获得生物等效的、特别是免疫等效的蛋白质。在此类改变中，优选亲水性值在±2内的氨基酸、特别优选在±1内的氨基酸、以及甚至更特别优选在±0.5内的氨基酸的取代。
如上所述，氨基酸取代可以基于氨基酸侧链取代基的相对相似性，例如，它们的疏水性、亲水性、电荷、大小等。
多肽变体进一步包括糖基化形式、与其他分子的聚集缀合物以及与不相关化学部分的共价缀合物(例如，聚乙二醇化分子)。如本领域所知，共价变体可以通过将功能性连接至在氨基酸链中或在N或C末端残基处发现的基团来制备。变体还包括等位基因变体、物种变体和突变蛋白。不影响蛋白质的功能活性的区域的截短或缺失也是变体。
在一个实施方案中，当需要表达两个或更多个多肽时，编码它们的多核苷酸序列可以通过如本文别处所讨论的IRES序列隔开。在另一个实施方案中，两个或更多个多肽可以表达为包含一个或多个自切割多肽序列的融合蛋白。
本文所公开的多肽包括融合多肽。在某些实施方案中，提供了融合多肽(例如，CAR)和编码融合多肽的多核苷酸。融合多肽和融合蛋白是指具有至少两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个或更多个多肽区段的多肽。融合多肽通常从C末端连接至N末端，但它们也可以从C末端连接至C末端、从N末端连接至N末端或从N末端连接至C末端。所述融合蛋白的多肽可以是任何顺序或指定顺序。融合多肽或融合蛋白还可以包含经保守修饰的变体、多态性变体、等位基因、突变体、子序列和种间同源物，只要保留所述融合多肽的所需转录活性即可。融合多肽可以通过化学合成方法或通过两个部分之间的化学连接产生，或者通常可以使用其他标准技术制备。如本文其他地方所讨论的，构成融合多肽的连接的DNA序列可操作地连接至合适的转录或翻译控制元件。
在一个实施方案中，融合配偶体包含有助于以高于天然重组蛋白的产量表达所述蛋白质的序列(表达增强子)。可以选择其他融合配偶体以增加蛋白质的溶解性或使所述蛋白质能够被靶向至所需的细胞内隔室或促进融合蛋白通过细胞膜的运输。
融合多肽可以进一步包含本文所述的多肽结构域的每一个之间的多肽切割信号。此外，多肽位点可以被置于任何接头肽序列中。示例性多肽切割信号包括多肽切割识别位点，如蛋白酶切割位点、核酸酶切割位点(例如，罕见的限制酶识别位点、自切割核酶识别位点)和自切割病毒寡肽(参见deFelipe和Ryan,2004.Traffic,5(8)；616-26)。
合适的蛋白酶切割位点和自切割肽是技术人员已知的(参见例如Ryan等人,1997.J.Gener.Virol.78,699-722；Scymczak等人(2004)Nature Biotech.5,589-594)。示例性蛋白酶切割位点包括但不限于马铃薯Y病毒属NIa蛋白酶(例如，烟草蚀刻病毒蛋白酶)、马铃薯Y病毒属HC蛋白酶、马铃薯Y病毒属P1(P35)蛋白酶、byovirus NIa蛋白酶、byovirus RNA-2编码的蛋白酶、口蹄疫病毒L蛋白酶、肠道病毒2A蛋白酶、鼻病毒2A蛋白酶、小RNA病毒3C蛋白酶、豇豆花叶病毒组24K蛋白酶、线虫传多面体病毒属24K蛋白酶、RTSV(东格鲁球状病毒)3C样蛋白酶、PYVF(欧洲防风草变黄斑点病毒)3C样蛋白酶、肝素、凝血酶、因子Xa和肠激酶的切割位点。在一个实施方案中，由于其高切割严格性，TEV(烟草蚀刻病毒)蛋白酶切割位点是优选的，例如EXXYXQ(G/S)(SEQ ID NO:23)，例如ENLYFQG(SEQ ID NO:24)和ENLYFQS(SEQ ID NO:25)，其中X表示任何氨基酸(通过TEV的切割发生在Q与G或Q与S之间)。
在特定实施方案中，自切割肽包括从马铃薯Y病毒属和心病毒属2A肽、FMDV(口蹄疫病病毒)、马鼻炎A病毒、Thosea asigna病毒和猪捷申病毒获得的那些多肽序列。
在某些实施方案中，自切割多肽位点包含2A或2A样位点、序列或结构域(Donnelly等人,2001.J.Gen.Virol.82:1027-1041)。
表3：示例性2A位点包括以下序列：
| SEQ ID NO:26 | LLNFDLLKLAGDVESNPGP |
| SEQ ID NO:27 | TLNFDLLKLAGDVESNPGP |
| SEQ ID NO:28 | LLKLAGDVESNPGP |
| SEQ ID NO:29 | NFDLLKLAGDVESNPGP |
| SEQ ID NO:30 | QLLNFDLLKLAGDVESNPGP |
| SEQ ID NO:31 | APVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP |
| SEQ ID NO:32 | VTELLYRMKRAETYCPRPLLAIHPTEARHKQKIVAPVKQT |
| SEQ ID NO:33 | LNFDLLKLAGDVESNPGP |
| SEQ ID NO:34 | LLAIHPTEARHKQKIVAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP |
| SEQ ID NO:35 | EARHKQKIVAPVKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP |
在某些实施方案中，本文所设想的多肽包括CAR多肽。
6.5.多核苷酸
在某些实施方案中，提供了编码一个或多个CAR多肽的多核苷酸，例如SEQ ID NO:10。如本文所用，术语“多核苷酸”或“核酸”是指信使RNA(mRNA)、RNA、基因组RNA(gRNA)、正链RNA(RNA(+))、负链RNA(RNA(-))、基因组DNA(gDNA)、互补DNA(cDNA)或重组DNA。多核苷酸包括单链和双链多核苷酸。优选地，本文所公开的多核苷酸包括与本文所述的任何参考序列具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的多核苷酸或变体(参见例如，序列表)，典型地其中所述变体保持所述参考序列的至少一种生物活性。在各种说明性实施方案中，本公开文本部分地设想了包含表达载体、病毒载体和转移质粒的多核苷酸以及包含其的组合物和细胞。
在特定实施方案中，本公开文本提供了如下多核苷酸，其编码多肽的至少约5、10、25、50、100、150、200、250、300、350、400、500、1000、1250、1500、1750或2000个或更多个连续氨基酸残基以及所有中间长度。可以容易地理解，“中间长度”在本文中意指引用值之间的任何长度，如6、7、8、9等；101、102、103等；151、152、153等；201、202、203等。
如本文所使用的，术语“多核苷酸变体”和“变体”等是指展示出与参考多核苷酸序列的基本序列同一性的多核苷酸，或在下文定义的严格条件下与参考序列杂交的多核苷酸。这些术语包括如下多核苷酸，其中已经添加或缺失一个或多个核苷酸，或一个或多个核苷酸被与参考多核苷酸相比不同的核苷酸替代。在这一方面，在本领域中很好地理解，可以对参考多核苷酸进行包括突变、添加、缺失和取代的某些改变，由此改变的多核苷酸保留参考多核苷酸的生物功能或活性。
如本文所用的陈述“序列同一性”或例如包括“与……50％相同的序列”是指在比较窗口内序列在核苷酸对核苷酸的基础上或在氨基酸对氨基酸的基础上相同的程度。因此，可以通过以下方法计算“序列同一性的分比”：在比较窗口内比较两个最佳比对的序列，确定两个序列中出现相同的核酸碱基(例如，A、T、C、g、I)或相同的氨基酸残基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Cys和Met)的位置的数量以得出匹配的位置的数量，使匹配的位置的数量除以比较窗口中的位置总数(即窗口大小)，并且将结果乘以100以得出序列同一性的百分比。包括核苷酸和多肽，其与本文所述的任何参考序列具有至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性，典型地其中所述多肽变体保持所述参考多肽的至少一种生物活性。
用于描述两个或更多个多核苷酸或多肽之间序列关系的术语包括“参考序列”、“比较窗口”、“序列同一性”、“序列同一性的百分比”和“基本同一性”。“参考序列”的长度是至少12，但通常15至18个，并且通常至少25个单体单元，包括核苷酸和氨基酸残基。因为两个多核苷酸可以各自包含(1)这两个核苷酸之间相似的序列(即，仅完整多核苷酸序列的一部分)，以及(2)这两个多核苷酸之间不同的序列，两个(或更多个)多核苷酸之间的序列比较通常通过在“比较窗口”内比较这两个多核苷酸的序列来进行以鉴定和比较具有序列相似性的局部区域。“比较窗口”是指至少6个(通常约50至约100、更通常约100至约150个)连续位置的概念区段，其中在两个序列最佳比对之后将序列与相同数量的连续位置的参考序列进行比较。比较窗口可以包含与参考序列(不包括添加或缺失)相比约20％或更少的添加或缺失(即空位)，以进行两个序列的最佳比对。可以通过以下方式进行序列的最佳比对以比对比较窗口：算法的计算机化实现(美国威斯康星州麦迪逊科学大道575号的GeneticsComputer Group，威斯康星州遗传学软件包7.0版中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)或检查和由所选择的各种方法中的任一种产生的最佳比对(即，在比较窗口内产生最高同源性百分比)。还可以参考BLAST程序家族，例如像Altschul等人,1997,Nucl.Acids Res.25:3389所披露的。序列分析的详细讨论可以在Ausubel等人,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons Inc,1994-1998,第15章第19.3单元中找到。
如本文所用，“分离的多核苷酸”是指已经从天然存在的状态中其两侧的序列纯化的多核苷酸，例如已从序列移取的DNA片段，所述序列通常与所述片段相邻。“分离的多核苷酸”也指互补DNA(cDNA)、重组DNA或自然界中不存在的且已经由人手工制备的其他多核苷酸。
描述多核苷酸方向的术语包括：5’(通常多核苷酸的末端具有游离磷酸基团)和3’(通常多核苷酸的末端具有游离羟基(OH)基团)。多核苷酸序列可以在5’至3’方向或3’至5’方向上进行注释。对于DNA和mRNA，5’至3’链被称为“有义”、“正”或“编码”链，因为其序列与前信使(前mRNA)的序列相同[但RNA中的尿嘧啶(U)代替DNA中的胸腺嘧啶(T)]。对于DNA和mRNA，由RNA聚合酶转录的互补3’至5’链被称为“模板”、“反义”、“负”或“非编码”链。如本文所用，术语“反向”是指以3’至5’方向书写的5’至3’序列或以5’至3’方向书写的3’至5’序列。
术语“互补的”和“互补性”是指与碱基配对规则相关的多核苷酸(即核苷酸序列)。例如，DNA序列5'A G T C A T G 3’的互补链是3'T C A G T A C 5’。后一个序列通常被写成5’端在左边且3’端在右边的反向互补体：5’C A T G A C T 3’。与其反向互补体相等的序列称为回文序列。互补性可以是“部分的”，即根据碱基配对规则，只有一部分核酸的碱基是匹配的。或者，核酸之间可以存在“完整”或“完全”互补性。
此外，本领域普通技术人员将理解，由于遗传密码的简并性，因此存在许多编码一个多肽或其变体片段的核苷酸序列，如本文所述。其中一些多核苷酸与任何天然基因的核苷酸序列具有最小的同源性。尽管如此，由于密码子使用的差异而变化的多核苷酸是本公开文本特别考虑的，例如被优化用于人和/或灵长类密码子选择的多核苷酸。此外，还可以使用包含本文提供的多核苷酸序列的基因的等位基因。等位基因是内源基因，其由于一个或多个突变(如核苷酸的缺失、添加和/或取代)而改变。
如本文所用的术语“核酸盒”是指载体内的基因序列，其可以表达RNA，随后表达蛋白质。所述核酸盒包含目的基因，例如CAR。所述核酸盒在载体内在位置和顺序上的取向使得所述盒中的核酸可以转录成RNA，并且在必要时翻译成蛋白质或多肽，进行对于在转化的细胞中的活性所需的适当翻译后修饰，并通过靶向至适当的细胞内隔室或分泌至细胞外隔室中而转运至用于生物活性的适当隔室。优选地，所述盒使其3’和5’端适合于准备插入载体中，例如，其在两端具有限制性内切核酸酶位点。在一个实施方案中，所述核酸盒含有用于治疗肿瘤或癌症的嵌合抗原受体的序列。在一个实施方案中，所述核酸盒含有用于治疗B细胞恶性肿瘤的嵌合抗原受体的序列。所述盒可以被移取并作为单个单元插入质粒或病毒载体中。
在特定实施方案中，多核苷酸包含至少一个目的多核苷酸。如本文所用，术语“目的多核苷酸”是指插入期望表达的表达载体中的编码多肽(即，目的多肽)的多核苷酸。载体可以包含1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个目的多核苷酸。在某些实施方案中，所述目的多核苷酸编码在治疗或预防疾病或障碍中提供治疗效果的多肽。目的多核苷酸和由其编码的多肽包括编码野生型多肽及其功能变体和片段的多核苷酸。在特定实施方案中，功能变体与相应野生型参考多核苷酸或多肽序列具有至少80％、至少90％、至少95％或至少99％同一性。在某些实施方案中，功能变体或片段具有相应野生型多肽的生物活性的至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。
在一个实施方案中，所述目的多核苷酸不编码多肽，而是充当转录miRNA、siRNA或shRNA、核酶或其他抑制性RNA的模板。在各种其他实施方案中，多核苷酸包含编码CAR的目的多核苷酸和一个或多个另外的目的多核苷酸，包括但不限于抑制性核酸序列，其包括但不限于：siRNA、miRNA、shRNA和核酶。
如本文所用，术语“siRNA”或“短干扰RNA”是指短多核苷酸序列，其介导动物中的序列特异性转录后基因沉默、翻译抑制、转录抑制或表观遗传RNAi的过程(Zamore等人,2000,Cell,101,25-33；Fire等人,1998,Nature,391,806；Hamilton等人,1999,Science,286,950-951；Lin等人,1999,Nature,402,128-129；Sharp,1999,Genes&Dev.,13,139-141；以及Strauss,1999,Science,286,886)。在某些实施方案中，siRNA包含具有相同数量的核苷的第一链和第二链；然而，所述第一链和所述第二链是偏离的，使得第一链和第二链上的两个末端核苷不与互补链上的残基配对。在某些情况下，未配对的两个核苷是胸苷残基。siRNA应包含与靶基因具有足够同源性的区域，并且就核苷酸而言具有足够的长度，使得siRNA或其片段能够介导靶基因的下调。因此，siRNA包含至少部分与靶RNA互补的区域。在siRNA与靶标之间不一定存在完全互补性，但对应关系必须足以使siRNA或其切割产物能够指导序列特异性沉默，如通过RNAi切割靶RNA。在反义链中，与靶标链的互补性或同源性程度是最关键的。虽然特别是在反义链中通常需要完全互补性，但一些实施方案包括一个或多个，但优选10、8、6、5、4、3、2个或更少的关于靶RNA的错配。错配在末端区域中最耐受，并且如果存在错配，则优选在一个或多个末端区域中，例如在5'和/或3'端的6、5、4或3个核苷酸内。有义链只需与反义链充分互补即可维持分子的整体双链特征。
此外，siRNA可以进行修饰或者包含核苷类似物。siRNA的单链区域可以进行修饰或者包含核苷类似物，例如发夹结构的一个或多个未配对区域(例如连接两个互补区域的区域)可以具有修饰或核苷类似物。用于例如针对外切核酸酶稳定siRNA的一个或多个3’端或5’端或者有利于反义siRNA药剂进入RISC中的修饰也是有用的。修饰可以包括C3(或C6、C7、C12)氨基接头、硫醇接头、羧基接头、非核苷酸间隔子(C3、C6、C9、C12、无碱基(abasic)、三甘醇、六乙二醇)、特殊生物素或者呈亚磷酰胺形式且具有另一个DMT保护的羟基基团的荧光素试剂，以允许在RNA合成过程中进行多重偶联。siRNA的每条链的长度可以等于或小于30、25、24、23、22、21或20个核苷酸。所述链的长度优选至少19个核苷酸。例如，每条链的长度可以在21与25个核苷酸之间。优选的siRNA具有17、18、19、29、21、22、23、24或25个核苷酸对的双链区域，以及2-3个核苷酸的一个或多个突出端，优选具有2-3个核苷酸的一个或两个3’突出端。
如本文所用，术语“miRNA”或“微小RNA”是指20-22个核苷酸的小非编码RNA，通常是从约70个核苷酸的折回RNA前体结构(称为前miRNA)切除的。根据miRNA与靶标之间的互补性程度，miRNA以两种方式之一负调节其靶标。首先，与蛋白质编码mRNA序列完全或接近完全互补的miRNA诱导RNA介导的干扰(RNAi)途径。miRNA通过与其mRNA靶标的3’非翻译区(UTR)内的不完全互补位点结合来发挥其调节作用，通过与用于RNAi途径的复合物类似或可能相同的RISC复合物明显地在翻译水平上抑制靶基因转录后表达。与翻译控制一致，使用这种机制的miRNA降低了其靶基因的蛋白质水平，但这些基因的mRNA水平仅受到最小程度的影响。miRNA包括天然存在的miRNA以及能够特异性靶向任何mRNA序列的人工设计的miRNA。例如，在一个实施方案中，技术人员可以设计表达为人miRNA(例如，miR-30或miR-21)初级转录物的短发夹RNA构建体。这种设计在发夹构建体中添加了Drosha加工位点，并且已被证明极大地提高敲低效率(Pusch等人，2004)。发夹茎由22nt的dsRNA(例如，反义与所需靶标具有完全互补性)和来自人miR的15-19nt环组成。当与不含微小RNA的常规shRNA设计相比时，在发夹的一侧或两侧添加miR环和miR30侧接序列导致表达的发夹的Drosha和Dicer加工的大于10倍增加。增加的Drosha和Dicer加工转化为更大的siRNA/miRNA产生和更大的表达的发夹的效力。
如本文所用，术语“shRNA”或“短发夹RNA”是指由单个自互补RNA链形成的双链结构。含有与靶基因的编码或非编码序列的一部分相同的核苷酸序列的shRNA构建物优先用于抑制。具有相对于靶序列的插入、缺失和单点突变的RNA序列也被发现对抑制有效。在抑制性RNA与靶基因的部分之间大于90％序列同一性或甚至100％序列同一性是优选的。在某些优选实施方案中，shRNA的双链体形成部分的长度是至少20、21或22个核苷酸，例如，大小对应于由Dicer依赖性切割产生的RNA产物。在某些实施方案中，shRNA构建体的长度是至少25、50、100、200、300或400个碱基。在某些实施方案中，shRNA构建体的长度是400-800个碱基。shRNA构建体对环序列和环大小的变化具有高度耐受性。
如本文所用，术语“核酶”是指能够位点特异性切割靶mRNA的催化活性RNA分子。已经描述了若干种亚型，例如锤头状和发夹状核酶。通过在非催化碱基处用脱氧核糖核苷酸取代核糖核苷酸可以提高核酶的催化活性和稳定性。虽然在位点特异性识别序列处切割mRNA的核酶可以用于破坏特定的mRNA，但优选使用锤头状核酶。锤头状核酶在与靶mRNA形成互补碱基对的侧接区域所决定的位置处切割mRNA。唯一的要求是靶mRNA具有以下两个碱基的序列：5′-UG-3′。锤头状核酶的构建和产生是本领域中熟知的。
在某些实施方案中，包含siRNA、miRNA、shRNA或核酶的目的多核苷酸的递送方法包括一个或多个调节序列，例如像强组成型pol III，例如人U6 snRNA启动子、小鼠U6snRNA启动子、人和小鼠H1 RNA启动子以及人tRNA val启动子、或如本文其他地方所述的强组成型pol II启动子。
本文所公开的多核苷酸，无论编码序列本身的长度如何，都可以与如本文其他地方所公开或本领域已知的其他DNA序列组合，如启动子和/或增强子、非翻译区(UTR)、信号序列、Kozak序列、聚腺苷酸化信号、另外的限制酶位点、多克隆位点、内部核糖体进入位点(IRES)、重组酶识别位点(例如，LoxP、FRT和Att位点)、终止密码子、转录终止信号和编码自切割多肽、表位标签的多核苷酸，使得其总长度可以相当大地变化。因此设想可以使用几乎任何长度的多核苷酸片段，且总长度优选地受到在预期重组DNA方案中制备和使用的容易程度的限制。
可以使用本领域已知和可用的各种完善技术中的任一种来制备、操纵和/或表达多核苷酸。为了表达所需的多肽，可以将编码所述多肽的核苷酸序列插入适当的载体中。载体的例子是质粒、自主复制序列和转座因子。另外的示例性载体包括但不限于质粒、噬菌体、粘粒、人工染色体(如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1衍生人工染色体(PAC))、噬菌体(如λ噬菌体或M13噬菌体)和动物病毒。可用作载体的动物病毒类别的例子包括但不限于逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(例如，单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒和乳多空病毒(例如，SV40)。表达载体的例子是用于在哺乳动物细胞中表达的pClneo载体(Promega)；用于慢病毒在哺乳动物细胞中介导的基因转移和表达的pLenti4/V5-DESTTM、pLenti6/V5-DESTTM和pLenti6.2/V5-GW/lacZ(Invitrogen)。在特定实施方案中，本文公开的嵌合蛋白的编码序列可以连接至此类表达载体中，以在哺乳动物细胞中表达嵌合蛋白。
在一个实施方案中，本文所设想的编码CAR的载体包含SEQ ID NO:36中所示的多核苷酸序列。
在特定实施方案中，所述载体是附加型载体或维持在染色体外的载体。如本文所用，术语“附加型”是指能够复制而不整合到宿主的染色体DNA中且不从分裂的宿主细胞逐渐丢失的载体，也意味着所述载体在染色体外或附加地复制。所述载体被工程化为含有从淋巴营养性疱疹病毒或γ疱疹病毒、腺病毒、SV40、牛乳头瘤病毒或酵母的DNA复制起点或“ori”，特别是对应于EBV的oriP的淋巴营养性疱疹病毒或γ疱疹病毒的复制起点的编码序列。在特定方面，所述淋巴营养性疱疹病毒可以是爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、卡波西氏肉瘤疱疹病毒(KSHV)、松鼠猴属疱疹病毒(HS)或马立克氏病病毒(MDV)。爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)和卡波西氏肉瘤疱疹病毒(KSHV)也是γ疱疹病毒的例子。通常，宿主细胞包含激活复制的病毒复制反式激活蛋白。
表达载体中存在的“控制元件”或“调节序列”是指载体的那些非翻译区—复制起点、选择盒、启动子、增强子、翻译起始信号(Shine-Dalgarno序列或Kozak序列)内含子、聚腺苷酸化序列、5’和3'非翻译区—与宿主细胞蛋白质相互作用以进行转录和翻译。此类元件的强度和特异性可以变化。根据所使用的载体系统和宿主，可以使用任何数量的合适的转录和翻译元件，包括遍在启动子和诱导型启动子。
在特定实施方案中，用于本文使用的载体包括但不限于表达载体和病毒载体，将包括外源、内源或异源控制序列，如启动子和/或增强子。“内源”控制序列是在基因组中与给定基因天然连接的序列。“外源”控制序列是指如下序列，其通过遗传操纵(即分子生物学技术)与基因并置，使得该基因的转录由连接的增强子/启动子指导。“异源”控制序列是来自不同物种而不是经基因操纵的细胞的外源序列。
如本文所用的术语“启动子”是指RNA聚合酶所结合的多核苷酸(DNA或RNA)的识别位点。RNA聚合酶启动并转录与启动子可操作地连接的多核苷酸。在特定实施方案中，在哺乳动物细胞中起作用的启动子包括位于转录起始位点上游约25至30个碱基处富含AT的区域和/或在转录起点上游70至80个碱基处发现的另一个序列，即其中N可以是任何核苷酸的CNCAAT区域。
术语“增强子”是指DNA区段，其含有能够提供增强的转录的序列并且在一些情况下可以独立于其相对于另一控制序列的方向发挥功能。增强子可以与启动子和/或其他增强子元件协同或累加地发挥功能。术语“启动子/增强子”是指含有能够既提供启动子功能又提供增强子功能的序列的DNA区段。
术语“可操作地连接”是指一种并置，其中所述组分处于允许它们以其预期方式发挥功能的关系中。在一个实施方案中，所述术语是指核酸表达控制序列(如启动子和/或增强子)与第二多核苷酸序列(例如，目的多核苷酸)之间的功能连接，其中表达控制序列指导对应于所述第二序列的核酸的转录。
如本文所用，术语“组成性表达控制序列”是指持续或连续允许转录可操作连接的序列的启动子、增强子或启动子/增强子。组成性表达控制序列可以是允许在各种细胞和组织类型中表达的“遍在”启动子、增强子或启动子/增强子，或允许在有限的多种细胞和组织类型中表达的分别为“细胞特异性”、“细胞类型特异性”、“细胞谱系特异性”或“组织特异性”的启动子、增强子或启动子/增强子。
适于在本文提供的特定实施方案中使用的说明性遍在表达控制序列包括但不限于巨细胞病毒(CMV)即刻早期启动子、病毒猿猴病毒40(SV40)(例如，早期或晚期)、莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)LTR启动子、劳斯肉瘤病毒(RSV)LTR、单纯疱疹病毒(HSV)(胸苷激酶)启动子、来自牛痘病毒的H5、P7.5和P11启动子、延长因子1-α(EF1a)启动子、早期生长应答因子1(EGR1)、铁蛋白H(FerH)、铁蛋白L(FerL)、甘油醛3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、真核翻译起始因子4A1(EIF4A1)、热休克70kDa蛋白5(HSPA5)、热休克蛋白90kDaβ成员1(HSP90B1)、热休克蛋白70kDa(HSP70)、β-驱动蛋白(β-KIN)、人ROSA 26基因座(Irions等人,NatureBiotechnology 25,1477-1482(2007))、泛素C启动子(UBC)、磷酸甘油酸激酶-1(PGK)启动子、巨细胞病毒增强子/鸡β-肌动蛋白(CAG)启动子、β-肌动蛋白启动子以及骨髓增生性肉瘤病毒增强子、阴性对照区缺失的、dl587rev引物结合位点取代的(MND)启动子(Challita等人,J Virol.69(2):748-55(1995))。
在一个实施方案中，本公开文本的载体包含MND启动子。
在一个实施方案中，本公开文本的载体包含含有人EF1a基因的第一内含子的EF1a启动子。
在一个实施方案中，本公开文本的载体包含缺乏人EF1a基因的第一内含子的EF1a启动子。
在特定实施方案中，可能需要从T细胞特异性启动子表达包含CAR的多核苷酸。
如本文所用，“条件性表达”可以指任何类型的条件性表达，包括但不限于诱导性表达；抑制性表达；在具有特定生理、生物或疾病状态等的细胞或组织中的表达。此定义并不旨在排除细胞类型或组织特异性表达。某些实施方案提供目的多核苷酸的条件性表达，例如通过以下方法控制表达：使细胞、组织、生物体等经受引起所述多核苷酸表达或引起由目的多核苷酸编码的多核苷酸的表达增加或减少的处理或条件。
诱导型启动子/系统的例子包括但不限于类固醇诱导型启动子(如编码糖皮质激素或雌激素受体的基因的启动子(可通过相应的激素处理诱导))、金属硫蛋白(metallothionine)启动子(可通过各种重金属处理诱导)、MX-1启动子(可通过干扰素诱导)、“GeneSwitch”米非司酮可调节系统(Sirin等人,2003,Gene,323:67)、cumate诱导型基因开关(WO 2002/088346)、四环素依赖性调节系统等。
条件性表达也可以通过使用位点特异性DNA重组酶来实现。根据某些实施方案，所述载体包含用于由位点特异性重组酶介导的重组的至少一个(通常两个)位点。如本文所用，术语“重组酶”或“位点特异性重组酶”包括参与涉及一个或多个(例如，二、三、四、五、七、十、十二、十五、二十、三十、五十等)重组位点的重组反应的分割或整合蛋白质、酶、辅因子或相关蛋白质，它们可以是野生型蛋白质(参见Landy,Current Opinion inBiotechnology 3:699-707(1993))或其突变体、衍生物(例如，含有重组蛋白序列或其片段的融合蛋白)、片段和变体。适于在本文中使用的重组酶的说明性例子包括但不限于：Cre、Int、IHF、Xis、Flp、Fis、Hin、Gin、ΦC31、Cin、Tn3解离酶、TndX、XerC、XerD、TnpX、Hjc、Gin、SpCCE1和ParA。
所述载体可以包含用于各种位点特异性重组酶中的任一种的一个或多个重组位点。应理解，用于位点特异性重组酶的靶位点是除整合载体(例如逆转录病毒载体或慢病毒载体)所需的任何位点之外的。如本文所用，术语“重组序列”、“重组位点”或“位点特异性重组位点”是指重组酶识别并结合的特定核酸序列。
例如，Cre重组酶的一个重组位点是包含34个碱基对的序列的loxP，所述序列包含位于8个碱基对的核心序列的两侧的两个13个碱基对的反向重复序列(充当重组酶结合位点)(参见Sauer,B.,Current Opinion in Biotechnology 5:521-527(1994)的图1)。其他示例性loxP位点包括但不限于：lox511(Hoess等人,1996；Bethke和Sauer,1997)、lox5171(Lee和Saito,1998)、lox2272(Lee和Saito,1998)、m2(Langer等人,2002)、lox71(Albert等人,1995)和lox66(Albert等人,1995)。
用于FLP重组酶的合适识别位点包括但不限于：FRT(McLeod等人,1996)、F1,F2,F3(Schlake和Bode,1994)、F4,F5(Schlake和Bode,1994)、FRT(LE)(Senecoff等人,1988)、FRT(RE)(Senecoff等人,1988)。
识别序列的其他例子是attB、attP、attL和attR序列，它们由重组酶λ整合酶(例如，phi-c31)识别。SSR仅介导异型位点attB(长度34bp)与attP(长度39bp)之间的重组(Groth等人,2000)。分别针对噬菌体整合酶在细菌基因组和噬菌体基因组上的附接位点命名的attB和attP二者均含有可能被/>同二聚体结合的不完全反向重复序列(Groth等人，2000)。产物位点attL和attR对进一步/>介导的重组有效地呈惰性(Belteki等人，2003)，从而使反应不可逆。对于催化插入，已发现携带attB的DNA插入基因组attP位点比attP位点插入基因组attB位点更容易(Thyagarajan等人,2001；Belteki等人,2003)。因此，典型的策略通过同源重组将携带attP的“对接位点”定位到定义的基因座，然后其与携带attB的传入序列搭档用于插入。
如本文所用，“内部核糖体进入位点”或“IRES”是指促进内部核糖体直接进入顺反子(蛋白质编码区)的起始密码子(如ATG)从而导致基因的非帽依赖性翻译的元件。参见，例如，Jackson等人,1990.Trends Biochem Sci 15(12):477-83)以及Jackson和Kaminski.1995.RNA 1(10):985-1000。在特定实施方案中，本文所设想的载体包括编码一个或多个多肽的一个或多个目的多核苷酸。在特定实施方案中，为了实现多个多肽中的每一个的有效翻译，所述多核苷酸序列可以由一个或多个IRES序列或编码自切割多肽的多核苷酸序列隔开。
如本文所用，术语“Kozak序列”是指短核苷酸序列，其极大地促进mRNA与核糖体的小亚单位的初始结合并增加翻译。共有Kozak序列是(GCC)RCCATGG，其中R是嘌呤(A或G)(Kozak,1986.Cell.44(2):283-92，以及Kozak,1987.Nucleic Acids Res.15(20):8125-48)。在特定实施方案中，本文所设想的载体包含具有共有Kozak序列且编码所需多肽(例如，CAR)的多核苷酸。
在一些实施方案中，多核苷酸或含有所述多核苷酸的细胞利用自杀基因(包括诱导型自杀基因)以降低直接毒性和/或不受控制的增殖的风险。在具体的方面，所述自杀基因对含有所述多核苷酸或细胞的宿主没有免疫原性。可以使用的自杀基因的特定例子是胱天蛋白酶-9或胱天蛋白酶-8或胞嘧啶脱氨酶。胱天蛋白酶-9可以使用特异性二聚化学诱导物(CID)激活。
在某些实施方案中，载体包含导致本公开文本的免疫效应细胞(例如，T细胞)在体内易于被阴性选择的基因片段。“阴性选择”意指输注的细胞可以由于个体体内条件的改变而被消除。阴性选择性表型可以由赋予对所施用的药剂(例如，化合物)的敏感性的基因的插入而产生。阴性可选择基因是本领域已知的并且尤其包括以下：单纯疱疹病毒I型胸苷激酶(HSV-I TK)基因(Wigler等人,Cell 11:223,1977)，其赋予更昔洛韦敏感性；细胞次黄嘌呤磷酸核糖基转移酶(HPRT)基因；细胞腺嘌呤磷酸核糖基转移酶(APRT)基因；以及细菌胞嘧啶脱氨酶(Mullen等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89:33(1992))。
在一些实施方案中，经基因修饰的免疫效应细胞(如T细胞)包含进一步含有阳性标记物的多核苷酸，所述阳性标记物使得能够在体外选择具有阴性可选择表型的细胞。所述阳性可选择标记物可以是基因，其在被引入宿主细胞中后表达显性表型，从而允许对携带所述基因的细胞进行阳性选择。这种类型的基因是本领域中已知的，并且尤其包括赋予对潮霉素B耐药性的潮霉素B磷酸转移酶基因(hph)、来自Tn5的编码对抗生素G418耐药性的氨基糖苷磷酸转移酶基因(neo或aph)、二氢叶酸还原酶(DHFR)基因、腺苷脱氨酶基因(ADA)和多药耐药性(MDR)基因。
优选地，所述阳性可选择标记物和所述阴性可选择元件被连接，使得阴性可选择元件的丢失一定也伴随阳性可选择标记物的丢失。甚至更优选地，所述阳性可选择标记物和所述阴性可选择标记物被融合，使得一个标记物的丢失导致另一个标记物的丢失。融合多核苷酸的例子是潮霉素磷酸转移酶-胸苷激酶融合基因(HyTK)，所述融合多核苷酸产生多肽作为表达产物，所述多肽赋予上述所需的阳性选择和阴性选择特征。该基因的表达产生多肽，其赋予对于体外阳性选择的潮霉素B耐药性以及对于体内阴性选择的更昔洛韦敏感性。参见Lupton S.D.等人,Mol.and Cell.Biology 1 1:3374-3378,1991。此外，在某些实施方案中，编码嵌合受体的多核苷酸位于含有融合基因的逆转录病毒载体中，特别是赋予对于体外阳性选择的潮霉素B耐药性以及对于体内阴性选择的更昔洛韦敏感性的那些，例如在Lupton,S.D.等人(1991),同上中所述的HyTK逆转录病毒载体。还参见S.D.Lupton的PCT US91/08442和PCT/US94/05601出版物，其描述了通过融合显性阳性可选择标记物与阴性可选择标记物获得的双功能性可选择融合基因的使用。
阳性可选择标记物可以例如源自选自hph、nco和gpt的基因获得，并且可阴性选择标记物可以例如源自选自胞嘧啶脱氨酶、HSV-I TK、VZV TK、HPRT、APRT和gpt的基因。在具体实施方案中，标记物是双功能性可选择融合基因，其中阳性可选择标记物源自hph或neo，并且阴性可选择标记物源自胞嘧啶脱氨酶或TK基因或可选择标记物。
病毒载体
在特定实施方案中，将细胞(例如，免疫效应细胞)用编码CAR的逆转录病毒载体(例如，慢病毒载体)转导。例如，用编码CAR的载体转导免疫效应细胞，所述CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)的鼠抗BCMA抗体或其抗原结合片段，以及CD3ζ、CD28、4-1BB、Ox40的细胞内信号传导结构域或其任何组合。可替代地，用编码CAR的载体转导免疫效应细胞，所述CAR包含结合细胞外抗原(例如，肿瘤抗原)的抗体或其抗原结合片段，以及CD3ζ、CD28、4-1BB、Ox40的细胞内信号传导结构域或其任何组合。因此，这些转导的细胞可以引发CAR介导的细胞毒性应答。
逆转录病毒是用于基因递送的常用工具(Miller,2000,Nature.357:455-460)。在特定实施方案中，逆转录病毒用于将编码嵌合抗原受体(CAR)的多核苷酸递送至细胞。如本文所用，术语“逆转录病毒”是指将其基因组RNA逆转录成线性双链DNA拷贝并随后将其基因组DNA共价整合至宿主基因组中的RNA病毒。在病毒被整合至宿主基因组中后，将其称为“前病毒”。前病毒充当RNA聚合酶II的模板，并且指导RNA分子的表达，所述RNA分子编码产生新病毒颗粒所需的结构蛋白和酶。
适于在特定实施方案中使用的说明性逆转录病毒包括但不限于：莫洛尼鼠白血病病毒(MMuLV)、莫洛尼鼠肉瘤病毒(MoMSV)、哈维鼠肉瘤病毒(HaMuSV)、鼠乳腺肿瘤病毒(MuMTV)、长臂猿白血病病毒(GaLV)、猫白血病病毒(FLV)、泡沫病毒属、弗云德鼠白血病病毒、鼠干细胞病毒(MSCV)和劳斯肉瘤病毒(RSV)以及慢病毒。
如本文所用，术语“慢病毒”是指复杂的逆转录病毒的组(或属)。说明性慢病毒包括但不限于：HIV(人类免疫缺陷病毒；包括HIV 1型和HIV 2型)；梅迪维斯纳病毒(VMV)病毒；山羊关节炎脑炎病毒(CAEV)；马传染性贫血病毒(EIAV)；猫免疫缺陷病毒(FIV)；牛免疫缺陷病毒(BIV)；和猿猴免疫缺陷病毒(SIV)。在一个实施方案中，利用基于HIV的载体骨架(即，HIV顺式作用序列元件)。在特定实施方案中，慢病毒用于将包含CAR的多核苷酸递送至细胞。
逆转录病毒载体和更特别地慢病毒载体可以用于实施本文公开的特定实施方案。因此，如本文所用的术语“逆转录病毒”或“逆转录病毒载体”意在分别包括“慢病毒”和“慢病毒载体”。
术语“载体”在本文中用于指能够转移或转运另一种核酸分子的核酸分子。转移的核酸通常与载体核酸分子连接，例如插入所述载体核酸分子中。载体可以包含引导细胞中自主复制的序列，或者可以包括足以允许整合到宿主细胞DNA中的序列。有用的载体包括例如质粒(例如，DNA质粒或RNA质粒)、转座子、粘粒、细菌人工染色体和病毒载体。有用的病毒载体包括例如复制缺陷型逆转录病毒和慢病毒。
如本领域技术人员将清楚，术语“病毒载体”广泛用于指代包括典型地促进核酸分子的转移或整合至细胞的基因组中的病毒来源的核酸元件的核酸分子(例如，转移质粒)，或者指代介导核酸转移的病毒颗粒。病毒颗粒将典型地包括各种病毒组分，并且有时还包括除了一种或多种核酸以外的宿主细胞组分。
术语病毒载体可以指能够将核酸转移到细胞中的病毒或病毒颗粒，或者指转移的核酸本身。病毒载体和转移质粒含有主要源自病毒的结构性和/或功能性遗传元件。术语“逆转录病毒载体”是指含有主要源自逆转录病毒的结构性和功能性遗传元件或其部分的病毒载体或质粒。术语“慢病毒载体”是指含有主要源自慢病毒的结构性和功能性遗传元件或其部分(包括LTR)的病毒载体或质粒。术语“杂交载体”是指同时含有逆转录病毒(例如，慢病毒)序列和非慢病毒序列的载体、LTR或其他核酸。在一个实施方案中，杂交载体是指包含用于逆转录、复制、整合和/或包装的逆转录病毒(例如，慢病毒)序列的载体或转移质粒。
在特定实施方案中，术语“慢病毒载体”和“慢病毒表达载体”可以用于指慢病毒转移质粒和/或感染性慢病毒颗粒。在本文提及元件如克隆位点、启动子、调节元件、异源核酸等的情况下，应理解，这些元件的序列以RNA形式存在于本公开文本的慢病毒颗粒中，并且以DNA形式存在于本公开文本的DNA质粒中。
在前病毒的每一端都是称为“长末端重复序列”或“LTR”的结构。术语“长末端重复序列(LTR)”是指位于逆转录病毒DNA两端的碱基对的结构域，在其自然序列的上下文中，其是同向重复序列并且含有U3、R和U5区域。LTR通常为逆转录病毒基因的表达(如基因转录物的促进、启动和聚腺苷酸化)和病毒复制提供功能基础。LTR含有许多调节信号，包括转录控制元件、聚腺苷酸化信号以及病毒基因组复制和整合所需的序列。病毒LTR分为称为U3、R和U5的三个区域。U3区域含有增强子和启动子元件。U5区域是引物结合位点与R区域之间的序列，并且含有聚腺苷酸化序列。R(重复)区域两侧是U3和U5区域。LTR由U3、R和U5区域构成，并且同时出现在病毒基因组的5'和3'端。与5'LTR相邻的是基因组逆转录所需的序列(tRNA引物结合位点)和将病毒RNA有效包装至颗粒中所需的序列(Psi位点)。
如本文所用，术语“包装信号”或“包装序列”是指位于逆转录病毒基因组内的序列，所述序列是将病毒RNA插入病毒衣壳或颗粒中所需的，参见例如，Clever等人,1995.J.of Virology,第69卷,第4期；第2101-2109页。一些逆转录病毒载体使用对于病毒基因组衣壳化所需的最小包装信号(也称为psi[ψ]序列)。因此，如本文所用，术语“包装序列”、“包装信号”、“psi”和符号“ψ”是在提及在病毒颗粒形成期间对于逆转录病毒RNA链的衣壳化所需的非编码序列时使用的。
在各个实施方案中，载体包含经修饰的5’LTR和/或3’LTR。LTR中的一个或两个可以包含一个或多个修饰，包括但不限于一个或多个缺失、插入或取代。通常对3’LTR进行修饰以通过赋予病毒复制缺陷来提高慢病毒或逆转录病毒系统的安全性。如本文所用，术语“复制缺陷”是指不能完全、有效复制从而不产生感染性病毒体的病毒(例如，复制缺陷慢病毒子代)。术语“具有复制能力”是指能够复制使得病毒的病毒复制能够产生感染性病毒体的野生型病毒或突变体病毒(例如，具有复制能力的慢病毒子代)。
“自失活”(SIN)载体是指复制缺陷型载体，例如逆转录病毒或慢病毒载体，其中右(3’)LTR增强子启动子区域即U3区域已被修饰(例如，通过缺失或取代)为防止病毒在第一轮病毒复制后转录。这是因为在病毒复制过程中，右(3’)LTR U3区域被用作左(5’)LTR U3区域的模板，因此，在没有U3增强子启动子的情况下无法产生病毒转录物。在另一个实施方案中，修饰3’LTR使得例如用理想的聚(A)序列替代U5区域。应注意，本文还包括对LTR的修饰，如对3’LTR、5’LTR或3’和5’LTR的修饰。
通过用异源启动子替代5’LTR的U3区域来驱动在产生病毒颗粒期间病毒基因组的转录，从而提供另外的安全性增强。可以使用的异源启动子的例子包括例如病毒猿猴病毒40(SV40)(例如，早期或晚期)、巨细胞病毒(CMV)(例如，即刻早期)、莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、罗斯肉瘤病毒(RSV)和单纯疱疹病毒(HSV)(胸苷激酶)启动子。典型的启动子能够以非Tat依赖性方式驱动高水平的转录。由于病毒产生系统中没有完整的U3序列，因此这种替代降低了重组产生具有复制能力的病毒的可能性。在某些实施方案中，所述异源启动子在控制病毒基因组转录方式方面具有另外的优点。例如，所述异源启动子可以是诱导型的，使得只有当存在诱导因子时，才会发生病毒基因组的全部或部分转录。诱导因子包括但不限于一种或多种化合物或培养宿主细胞的生理条件(如温度或pH值)。
在一些实施方案中，病毒载体包含TAR元件。术语“TAR”是指位于慢病毒(例如，HIV)LTR的R区域中的“反式激活应答”基因元件。该元件与慢病毒反式激活剂(tat)基因元件相互作用以增强病毒复制。然而，在其中5’LTR的U3区域被异源启动子替代的实施方案中不需要该元件。
“R区域”是指逆转录病毒LTR内的区域，其从加帽基团的起点(即转录的起点)开始并紧接在聚A束的起点之前结束。R区域也被定义为在两侧侧接U3和U5区域。R区域在逆转录过程中发挥作用，允许将新生DNA从基因组的一端转移到另一端。
如本文所用，术语“FLAP元件”是指如下核酸，所述核酸的序列包含逆转录病毒(例如，HIV-1或HIV-2)的中央聚嘌呤束和中央终止序列(cPPT和CTS)。合适的FLAP元件描述于美国专利号6,682,907和Zennou,等人,2000,Cell,101:173。在HIV-1逆转录过程中，正链DNA在中央聚嘌呤束(cPPT)处的中央起始和在中央终止序列(CTS)处的中央终止导致三链DNA结构的形成：HIV-1中央DNA flap。在不希望受到任何理论的约束的情况下，DNA flap可以用作慢病毒基因组核输入的顺式活性决定子，和/或可以增加病毒的滴度。在特定实方案中，逆转录病毒或慢病毒载体骨架包含在载体中目的异源基因的上游或下游的一个或多个FLAP元件。例如，在特定实施方案中，转移质粒包含FLAP元件。在一个实施方案中，载体包含从HIV-1分离的FLAP元件。
在一个实施方案中，逆转录病毒或慢病毒转移载体包含一个或多个输出元件。术语“输出元件”是指顺式作用的转录后调节元件，其调节RNA转录物从细胞核到细胞的细胞质的转运。RNA输出元件的例子包括但不限于人类免疫缺陷病毒(HIV)rev应答元件(RRE)(参见，例如，Cullen等人,1991.J.Virol.65:1053；和Cullen等人,1991.Cell58:423)以及乙肝病毒转录后调节元件(HPRE)。通常，RNA输出元件位于基因的3’UTR内，并且可以作为一个或多个拷贝插入。
在特定实施方案中，通过将转录后调节元件、有效的聚腺苷酸化位点和任选地转录终止信号掺入载体中来增加病毒载体中异源序列的表达。多种转录后调节元件可以增加在蛋白质水平下的异源核酸表达，例如，土拨鼠肝炎病毒转录后调节元件(WPRE；Zufferey等人,1999,J.Virol.,73:2886)；乙型肝炎病毒(HPRE)中存在的转录后调节元件(Huang等人,Mol.Cell.Biol.,5:3864)；等等(Liu等人,1995,Genes Dev.,9:1766)。在特定实施方案中，载体可以包含转录后调节元件，如WPRE或HPRE。
在特定实施方案中，载体缺乏或不包含转录后调节元件(PTE)，如WPRE或HPRE，因为在一些情况下这些元件增加细胞转化的风险和/或不会明显或显著地增加mRNA转录物的量或增加mRNA稳定性。因此，在一些实施方案中，载体缺乏或不包含PTE。在其他实施方案中，由于附加的安全性衡量，载体缺乏或不包含WPRE或HPRE。
指导异源核酸转录物的有效终止和聚腺苷酸化的元件增加异源基因表达。转录终止信号通常被发现于聚腺苷酸化信号的下游。在特定实施方案中，载体包含编码待表达的多肽的多核苷酸的3′端的聚腺苷酸化序列。如本文所用的术语“聚A位点”或“聚A序列”表示指导通过RNA聚合酶II得到的新生RNA转录物的终止和聚腺苷酸化的DNA序列。聚腺苷酸化序列可以通过在编码序列的3′端添加聚A尾来促进mRNA稳定性，从而有助于提高翻译效率。由于缺乏聚A尾的转录物不稳定且可快速降解，因此需要对重组转录物进行有效的聚腺苷酸化。可以在本文中的载体中使用的聚A信号的说明性例子包括理想的聚A序列(例如，AATAAA、ATTAAA、AGTAAA)、牛生长激素聚A序列(BGHpA)、兔β-珠蛋白聚A序列(rβgpA)或本领域已知的另一合适的异源或内源聚A序列。
在某些实施方案中，逆转录病毒或慢病毒载体进一步包含一个或多个绝缘子元件。绝缘子元件可以有助于保护慢病毒表达的序列(例如治疗性多肽)免受整合位点效应的影响，所述整合位点效应可能是由基因组DNA中存在的顺式作用元件介导的并导致转移序列的解除调节的表达(即位置效应；参见例如，Burgess-Beusse等人,2002,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,99:16433；以及Zhan等人,2001,Hum.Genet.,109:471)。在一些实施方案中，转移载体包含在3′LTR处的一个或多个绝缘子元件，并且在前病毒整合到宿主基因组中后，通过复制3′LTR，前病毒在5′LTR或3′LTR处均包含一个或多个绝缘子。用于本文的合适的绝缘子包括但不限于鸡β-珠蛋白绝缘子(参见Chung等人,1993.Cell 74:505；Chung等人,1997.PNAS 94:575；以及Bell等人,1999.Cell 98:387，通过引用并入本文)。绝缘子元件的例子包括但不限于来自β-珠蛋白基因座的绝缘子，如鸡HS4。
根据某些特定实施方案，大多数或所有病毒载体骨架序列源自慢病毒，例如HIV-1。然而，应理解，可以使用许多不同来源的逆转录病毒和/或慢病毒序列，或者可以在不损害转移载体执行本文所述功能的能力的情况下容纳某些慢病毒序列中的组合的且大量的取代和改变。此外，各种慢病毒载体是本领域已知的，参见Naldini等人,(1996a、1996b和1998)；Zufferey等人,(1997)；Dull等人,1998，美国专利号6,013,516；以及5,994,136，其中许多可以适于产生本公开文本的病毒载体或转移质粒。
在各种实施方案中，本文所述的载体可以包含可操作地连接至编码CAR多肽的多核苷酸的启动子。所述载体可以具有一个或多个LTR，其中任一LTR包含一个或多个修饰，如一个或多个核苷酸取代、添加或缺失。所述载体可以进一步包含用于提高转导效率(例如，cPPT/FLAP)、病毒包装(例如，Psi(ψ)包装信号，RRE)的一个或多个辅助元件和/或增加治疗性基因表达的其他元件(例如，聚(A)序列)，并且可以任选地包含WPRE或HPRE。
在特定实施方案中，所述转移载体包含左(5’)逆转录病毒LTR；中央聚嘌呤束/DNAflap(cPPT/FLAP)；逆转录病毒输出元件；在T细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的CAR多肽的多核苷酸；和右(3’)逆转录病毒LTR；以及任选地WPRE或HPRE。
在特定实施方案中，所述转移载体包含左(5’)逆转录病毒LTR；逆转录病毒输出元件；在T细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的CAR多肽的多核苷酸；右(3’)逆转录病毒LTR；和聚(A)序列；以及任选地WPRE或HPRE。在另一个特定实施方案中，本文提供了一种慢病毒载体，其包含：左(5’)LTR；cPPT/FLAP；RRE；在T细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的CAR多肽的多核苷酸；右(3’)LTR；和聚腺苷酸化序列；以及任选地WPRE或HPRE。
在特定实施方案中，本文提供了一种慢病毒载体，其包含：左(5’)HIV-1LTR；Psi(ψ)包装信号；cPPT/FLAP；RRE；在T细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的CAR多肽的多核苷酸；右(3’)自失活(SIN)HIV-1LTR；和兔β-珠蛋白聚腺苷酸化序列；以及任选地WPRE或HPRE。
在另一个实施方案中，本文提供了一种载体，其包含：至少一个LTR；中央聚嘌呤束/DNA flap(cPPT/FLAP)；逆转录病毒输出元件；和在T细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的CAR多肽的多核苷酸；以及任选地WPRE或HPRE。
在特定实施方案中，本文提供了一种载体，其包含至少一个LTR；cPPT/FLAP；RRE；在T细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的CAR多肽的多核苷酸；和聚腺苷酸化序列；以及任选地WPRE或HPRE。
在特定实施方案中，本文提供了至少一个SIN HIV-1LTR；Psi(ψ)包装信号；cPPT/FLAP；RRE；在T细胞中有活性的启动子，其可操作地连接至编码本文所设想的CAR多肽的多核苷酸；和兔β-珠蛋白聚腺苷酸化序列；以及任选地WPRE或HPRE。
在各种实施方案中，所述载体是整合病毒载体。
在各种其他实施方案中，所述载体是附加型或非整合病毒载体。
在各种实施方案中，本文所设想的载体包含非整合或整合缺陷型逆转录病毒。在一个实施方案中，“整合缺陷型”逆转录病毒或慢病毒是指具有缺乏将病毒基因组整合到宿主细胞基因组中的能力的整合酶的逆转录病毒或慢病毒。在各种实施方案中，所述整合酶蛋白发生突变以特异性地降低其整合酶活性。无整合能力的慢病毒载体是通过修饰编码整合酶蛋白的pol基因从而产生编码整合缺陷型整合酶的突变pol基因而获得的。此类无整合能力的病毒载体描述于专利申请WO 2006/010834中，将其通过引用以其整体并入本文。
适于降低整合酶活性的HIV-1pol基因中的说明性突变包括但不限于：H12N、H12C、H16C、H16V、S81 R、D41A、K42A、H51A、Q53C、D55V、D64E、D64V、E69A、K71A、E85A、E87A、D116N、D1161、D116A、N120G、N1201、N120E、E152G、E152A、D35E、K156E、K156A、E157A、K159E、K159A、K160A、R166A、D167A、E170A、H171A、K173A、K186Q、K186T、K188T、E198A、R199c、R199T、R199A、D202A、K211A、Q214L、Q216L、Q221 L、W235F、W235E、K236S、K236A、K246A、G247W、D253A、R262A、R263A和K264H。
适于降低整合酶活性的HIV-1pol基因中的说明性突变包括但不限于：D64E、D64V、E92K、D116N、D1161、D116A、N120G、N1201、N120E、E152G、E152A、D35E、K156E、K156A、E157A、K159E、K159A、W235F和W235E。
在特定实施方案中，整合酶包含D64、D116或E152中一个或多个氨基酸的突变。在一个实施方案中，整合酶包含氨基酸D64、D116和E152中的突变。在特定实施方案中，缺陷型HIV-1整合酶包含D64V突变。
“宿主细胞”包括在体内、离体或体外用本文公开的重组载体或多核苷酸电穿孔、转染、感染或转导的细胞。宿主细胞可以包括包装细胞、生产细胞和用病毒载体感染的细胞。在特定实施方案中，向需要疗法的受试者施用感染了本文所公开的病毒载体的宿主细胞。在某些实施方案中，术语“靶细胞”与宿主细胞可互换使用，并且是指所需细胞类型的转染、感染或转导的细胞。在特定实施方案中，所述靶细胞是T细胞。
为了获得合理的病毒滴度，通常需要大规模生产病毒颗粒。病毒颗粒是通过将转移载体转染至包含病毒结构和/或辅助基因(例如gag、pol、env、tat、rev、vif、vpr、vpu、vpx或nef基因或其他逆转录病毒基因)的包装细胞系中而产生的。
如本文所用，术语“包装载体”是指缺乏包装信号且包含编码一、二、三、四或更多个病毒结构和/或辅助基因的多核苷酸的表达载体或病毒载体。通常，所述包装载体被包含在包装细胞中，并经由转染、转导或感染被引入细胞中。用于转染、转导或感染的方法是本领域技术人员熟知的。本文公开的逆转录病毒/慢病毒转移载体可以经由转染、转导或感染被引入包装细胞系中，以产生生产细胞或细胞系。本文公开的包装载体可以通过标准方法(包括例如磷酸钙转染、脂质转染或电穿孔)被引入人细胞或细胞系中。在一些实施方案中，所述包装载体与显性可选择标记物(如新霉素、潮霉素、嘌呤霉素、杀稻瘟菌素(blastocidin)、博来霉素(zeocin)、胸苷激酶、DHFR、Gln合成酶或ADA)一起被引入细胞中，然后在适当药物的存在下进行选择并分离克隆。可选择标记基因可以与由包装载体编码的基因例如通过IRES或自切割病毒肽物理连接。
病毒包膜蛋白(env)决定了最终可被由所述细胞系产生的重组逆转录病毒感染并转化的宿主细胞的范围。在慢病毒(如HIV-1、HIV-2、SIV、FIV和EIV)的情况下，env蛋白包括gp41和gp120。优选地，如前所述，本文所公开的包装细胞表达的病毒env蛋白在来自病毒gag和pol基因的单独载体上编码。
本文可以采用的逆转录病毒来源的env基因的例子包括但不限于：MLV包膜、10A1包膜、BAEV、FeLV-B、RD114、SSAV、埃博拉病毒、仙台病毒、FPV(鸡瘟病毒)和流感病毒包膜。同样地，可以使用编码来自以下病毒的包膜的基因：RNA病毒(例如，小RNA病毒科、杯状病毒科、星状病毒科、披膜病毒科、黄病毒科、冠状病毒科、副粘病毒科、弹状病毒科、丝状病毒科、正粘病毒科、布尼亚病毒科、沙粒病毒科、呼肠孤病毒科、双RNA病毒科、逆转录病毒科的RNA病毒家族)以及DNA病毒(嗜肝DNA病毒科、圆环病毒科、细小病毒科、乳多空病毒科、腺病毒科、疱疹病毒科、痘病毒科(Poxyiridae)和虹彩病毒科的家族)。代表性的例子包括FeLV、VEE、HFVW、WDSV、SFV、狂犬病病毒、ALV、BIV、BLV、EBV、CAEV、SNV、ChTLV、STLV、MPMV、SMRV、RAV、FuSV、MH2、AEV、AMV、CT10和EIAV。
在其他实施方案中，用于假型化与本公开文本相关的病毒的包膜蛋白包括但不限于来自以下病毒的任一种：甲型流感(如H1N1、H1N2、H3N2和H5N1(禽流感))、乙型流感、丙型流感病毒、甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、丁型肝炎病毒、戊型肝炎病毒、轮状病毒、诺沃克病毒组的任何病毒、肠道腺病毒、细小病毒、登革热病毒、猴痘、单股负链病毒(Mononegavirale)、狂犬病病毒属如狂犬病病毒、拉各斯蝙蝠病毒、莫科拉病毒、杜文黑基病毒(Duvenhage virus)、欧洲蝙蝠病毒1和2以及澳大利亚蝙蝠病毒、暂时热病毒、水泡病毒属、水泡性口炎病毒(VSV)、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒1型和2型、水痘带状疱疹、巨细胞病毒、爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)、人疱疹病毒(HHV)、人疱疹病毒6型和8型)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、乳头瘤病毒、鼠γ疱疹病毒、沙粒病毒(如阿根廷出血热病毒、玻利维亚出血热病毒、萨比亚相关出血热病毒、委内瑞拉出血热病毒、拉沙热病毒、马丘波病毒、淋巴细胞性脉络丛膜脑膜炎病毒(LCMV))、布尼亚病毒科(如克里米亚-刚果出血热病毒、汉坦病毒、引起出血热伴随肾综合征的病毒、里夫特裂谷热病毒)、丝状病毒科(丝状病毒)(包括埃博拉出血热和马尔堡出血热)、黄病毒科(包括Kaysanur Forest病病毒、鄂木斯克出血热病毒、引起蜱传脑炎的病毒)和副粘病毒科(如亨德拉病毒和尼帕病毒)、大天花和小天花(天花)、甲病毒属(如委内瑞拉马脑炎病毒、东部马脑炎病毒、西部马脑炎病毒、SARS相关冠状病毒(SARS CoV)、西尼罗河病毒和任何引起脑炎的病毒)。
在一个实施方案中，本文提供了产生用VSV-G糖蛋白假型化的重组逆转录病毒(例如慢病毒)的包装细胞。
如本文所用的术语“假型”或“假型化”是指这样的病毒，其病毒包膜蛋白已被具有优选特征的另一种病毒的病毒包膜蛋白取代。例如，HIV可以用水泡性口炎病毒G蛋白(VSV-G)包膜蛋白假型化，这允许HIV感染更广泛范围的细胞，因为HIV包膜蛋白(由env基因编码)通常将病毒靶向至CD4+呈递细胞。在一个实施方案中，慢病毒包膜蛋白用VSV-G假型化。在一个实施方案中，本文提供了产生用VSV-G包膜糖蛋白假型化的重组逆转录病毒(例如，慢病毒)的包装细胞。
如本文所用，术语“包装细胞系”是在提及不含有包装信号但稳定或瞬时表达对于正确包装病毒颗粒所需的病毒结构蛋白和复制酶(例如，gag、pol和env)的细胞系时使用的。可以使用任何合适的细胞系来制备与本公开文本相关的包装细胞。通常，所述细胞是哺乳动物细胞。在特定实施方案中，用于产生包装细胞系的细胞是人细胞。可使用的合适细胞系包括例如CHO细胞、BHK细胞、MDCK细胞、C3H 10T1/2细胞、FLY细胞、Psi-2细胞、BOSC 23细胞、PA317细胞、WEHI细胞、COS细胞、BSC 1细胞、BSC 40细胞、BMT 10细胞、VERO细胞、W138细胞、MRC5细胞、A549细胞、HT1080细胞、293细胞、293T细胞、B-50细胞、3T3细胞、NIH3T3细胞、HepG2细胞、Saos-2细胞、Huh7细胞、HeLa细胞、W163细胞、211细胞和211A细胞。在具体实施方案中，所述包装细胞是293细胞、293T细胞或A549细胞。在另一个具体实施方案中，所述细胞是A549细胞。
如本文所用，术语“生产细胞系”是指能够产生重组逆转录病毒颗粒的细胞系，其包含包装细胞系和含有包装信号的转移载体构建体。可以使用常规技术进行感染性病毒颗粒和病毒原液的生产。制备病毒原液的方法是本领域已知的，并且由Y.Soneoka等人(1995)Nucl.Acids Res.23:628-633和N.R.Landau等人(1992)J.Virol.66:5110-5113说明。可以使用常规技术从包装细胞收集感染性病毒颗粒。例如，如本领域中所知，可以通过细胞裂解或收集细胞培养物的上清液来收集感染性颗粒。任选地，如果需要，可以纯化收集的病毒颗粒。合适的纯化技术是本领域技术人员熟知的。
使用逆转录病毒或慢病毒载体通过病毒感染而非转染递送一个或多个基因或其他多核苷酸序列被称为“转导”。在一个实施方案中，通过感染和前病毒整合将逆转录病毒载体转导至细胞中。在某些实施方案中，如果靶细胞(例如，T细胞)包含使用病毒或逆转录病毒载体通过感染递送至所述细胞的基因或其他多核苷酸序列，则所述靶细胞被“转导”。在特定实施方案中，转导的细胞包含在其细胞基因组中通过逆转录病毒或慢病毒载体递送的一个或多个基因或其他多核苷酸序列。
在特定实施方案中，向受试者施用用如本文所公开的表达一个或多个多肽的病毒载体转导的宿主细胞，以治疗和/或预防B细胞恶性肿瘤。可根据本文的某些实施方案采用的涉及在基因疗法中使用病毒载体的其他方法可发现于例如以下中：Kay,M.A.(1997)Chest 111(增刊6):138S-142S；Ferry,N.和Heard,J.M.(1998)Hum.Gene Ther.9:1975-81；Shiratory,Y.等人(1999)Liver 19:265-74；Oka,K.等人(2000)Curr.Opin.Lipidol.11:179-86；Thule,P.M.和Liu,J.M.(2000)Gene Ther.7:1744-52；Yang,N.S.(1992)Crit.Rev.Biotechnol.12:335-56；Alt,M.(1995)J.Hepatol.23:746-58；Brody,S.L.和Crystal,R.G.(1994)Ann.N.Y.Acad.Sci.716:90-101；Strayer,D.S.(1999)ExpertOpin.Investig.Drugs 8:2159-2172；Smith-Arica,J.R.和Bartlett,J.S.(2001)Curr.Cardiol.Rep.3:43-49；以及Lee,H.C.等人(2000)Nature 408:483-8。
6.6.经基因修饰的细胞
在特定实施方案中，本文公开了经基因修饰以表达本文所设想的CAR的细胞，其用于治疗肿瘤或癌症。在特定实施方案中，本文公开了经基因修饰以表达本文所设想的CAR的细胞，其用于治疗B细胞相关病症。如本文所用，术语“基因工程化”或“基因修饰”是指向细胞中的总遗传物质中添加呈DNA或RNA的形式的额外的遗传物质。术语“经基因修饰的细胞”、“经修饰的细胞”和“重定向细胞”可互换使用。如本文所用，术语“基因疗法”是指将呈DNA或RNA形式的额外遗传物质引入细胞中的总遗传物质中，所述额外遗传物质恢复、纠正或修饰基因的表达或者是为了表达治疗性多肽，例如CAR。
在特定实施方案中，本文所设想的CAR被引入免疫效应细胞中并在其中表达，以将其特异性重定向至目的靶抗原，例如BCMA多肽。“免疫效应细胞”是免疫系统中具有一个或多个效应子功能(例如，细胞毒性细胞杀伤活性、细胞因子的分泌、ADCC和/或CDC的诱导)的任何细胞。
本公开文本的免疫效应细胞可以是自体(autologous/autogeneic)(“自身”)或非自体(“非自身”，例如同种异体、同基因或异基因)。
如本文所用的“自体”是指来自同一受试者的细胞。
如本文所用的“同种异体”是指同一物种的细胞，其与所比较的细胞在基因上不同。
如本文所用的“同基因”是指不同受试者的细胞，其与所比较的细胞在基因上相同。
如本文所用的“异基因”是指与所比较的细胞属于不同物种的细胞。在某些实施方案中，本公开文本的细胞是同种异体的。
与本文所设想的CAR一起使用的说明性免疫效应细胞包括T淋巴细胞。术语“T细胞”或“T淋巴细胞”是本领域公认的并且旨在包括胸腺细胞、未成熟T淋巴细胞、成熟T淋巴细胞、静息T淋巴细胞或激活的T淋巴细胞。T细胞可以是辅助性T(Th)细胞，例如辅助性T1(Th1)细胞或辅助性T2(Th2)细胞。所述T细胞可以是辅助性T细胞(HTL；CD4+T细胞)CD4+T细胞、细胞毒性T细胞(CTL；CD8+T细胞)、CD4+CD8+T细胞、CD4-CD8-T细胞或T细胞的任何其他子集。适合于在特定实施方案中使用的其他说明性T细胞群体包括幼稚T细胞和记忆T细胞。
如本领域技术人员所理解的，其他细胞也可以用作具有如本文所述CAR的免疫效应细胞。特别地，免疫效应细胞还包括NK细胞、NKT细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞。免疫效应细胞还包括效应细胞的祖细胞，其中此类祖细胞可以在体内或体外被诱导分化为免疫效应细胞。因此，在特定实施方案中，免疫效应细胞包括免疫效应细胞的祖细胞，如源自脐血、骨髓或动员的外周血的CD34+细胞群体内含有的造血干细胞(HSC)，其在受试者中施用后分化为成熟免疫效应细胞或可以在体外被诱导分化为成熟免疫效应细胞。
如本文所用，经基因工程化以含有BCMA特异性CAR的免疫效应细胞可以被称为“BCMA特异性重定向免疫效应细胞”
如本文所用的术语“CD34+细胞”是指在其细胞表面上表达CD34蛋白的细胞。如本文所用的“CD34”是指通常充当细胞间粘附因子并参与T细胞进入淋巴结的细胞表面糖蛋白(例如，唾液粘蛋白)。CD34+细胞群体含有造血干细胞(HSC)，其在施用至患者后分化并有助于所有造血谱系，包括T细胞、NK细胞、NKT细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞/巨噬细胞谱系的细胞。
在某些实施方案中，本文提供了用于制备表达本文所设想的CAR的免疫效应细胞的方法。在一个实施方案中，所述方法包括转染或转导从个体分离的免疫效应细胞，使得所述免疫效应细胞表达一个或多个如本文所述的CAR。在某些实施方案中，所述免疫效应细胞从个体分离并且是经基因修饰的，而无需在体外进一步操纵。然后，此类细胞可以直接重新施用至所述个体。在其他实施方案中，首先在体外激活并刺激所述免疫效应细胞以增殖，然后进行基因修饰以表达CAR。在这一方面，所述免疫效应细胞可以在被基因修饰(即，被转导或转染以表达本文所设想的CAR)之前和/或之后进行培养。
在特定实施方案中，在体外操纵或基因修饰本文所述的免疫效应细胞之前，从受试者获得细胞来源。在特定实施方案中，经CAR修饰的免疫效应细胞包含T细胞。T细胞可以从多种来源获得，包括但不限于外周血单个核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。在某些实施方案中，可以使用本领域技术人员已知的任何数量的技术(如沉淀，例如FICOLLTM分离)从在受试者中收集的血液单位获得T细胞。在一个实施方案中，来自个体的循环血液的细胞是通过单采术获得的。单采术产物通常含有淋巴细胞，包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞和血小板。在一个实施方案中，可以洗涤通过单采术收集的细胞以去除血浆级分并将细胞置于适当的缓冲液或培养基中用于后续处理。可以用PBS或用缺乏钙、镁和大多数(如果不是全部的话)二价阳离子的另一种合适的溶液洗涤细胞。如本领域普通技术人员所理解的，洗涤步骤可以通过本领域技术人员已知的方法完成，如通过使用半自动化流通式离心机完成。例如，Cobe 2991细胞处理器、Baxter CytoMate等。在洗涤后，可以将细胞重悬于各种生物相容性缓冲液或其他含有或不含缓冲液的盐水溶液中。在某些实施方案中，可以在细胞直接重悬培养基中去除单采术样品的不希望的组分。
在某些实施方案中，通过裂解红细胞并耗尽单核细胞(例如通过PERCOLLTM梯度离心)，从外周血单个核细胞(PBMC)分离T细胞。可以通过阳性或阴性选择技术进一步分离表达以下一种或多种标记物的特定T细胞亚群：CD3、CD28、CD4、CD8、CD45RA和CD45RO。在一个实施方案中，通过阳性或阴性选择技术进一步分离表达CD3、CD28、CD4、CD8、CD45RA和CD45RO的特定T细胞亚群。例如，可以使用针对对于阴性选择细胞而言独特的表面标记物的抗体组合实现通过阴性选择对T细胞群的富集。本文使用的一种方法是经由使用针对阴性选择的细胞上存在的细胞表面标记物的单克隆抗体混合物(cocktail)的阴性磁性免疫粘附或流式细胞术进行细胞分选和/或选择。例如，为了通过阴性选择富集CD4+细胞，单克隆抗体混合物通常包括针对CD14、CD20、CD11b、CD16、HLA-DR和CD8的抗体。流式细胞术和细胞分选也可以用于分离目的细胞群体，以用于根据本公开文本使用。
PBMC可以使用本文所设想的方法直接进行基因修饰以表达CAR。在某些实施方案中，在分离PBMC后，进一步分离T淋巴细胞，并且在某些实施方案中，细胞毒性和辅助性T淋巴细胞二者可以在基因修饰和/或扩增之前或之后被分选为幼稚、记忆和效应T细胞亚群。
可以通过使用标准方法获得CD8+细胞。在一些实施方案中，通过鉴定与每种类型CD8+细胞相关的细胞表面抗原，CD8+细胞被进一步分选为幼稚、中央记忆和效应细胞。
在某些实施方案中，幼稚CD8+T淋巴细胞的特征在于幼稚T细胞的表型标记物(包括CD62L、CCR7、CD28、CD3、CD 127和CD45RA)的表达。
在特定实施方案中，记忆T细胞存在于CD8+外周血淋巴细胞的CD62L+和CD62L-两个子集中。在用抗CD8和抗CD62L抗体染色后，将PBMC分选为CD62L-CD8+和CD62L+CD8+级分。在一些实施方案中，中央记忆T细胞的表型标记物的表达包括CD45RO、CD62L、CCR7、CD28、CD3和CD127，并且对颗粒酶B呈阴性。在一些实施方案中，中央记忆T细胞是CD45RO+、CD62L+、CD8+T细胞。
在一些实施方案中，效应T细胞对CD62L、CCR7、CD28和CD127呈阴性，并且对颗粒酶B和穿孔素呈阳性。
在某些实施方案中，CD4+T细胞被进一步分选为亚群。例如，可以通过鉴定具有细胞表面抗原的细胞群将CD4+T辅助细胞分选为幼稚、中枢记忆和效应细胞。CD4+淋巴细胞可以通过标准方法获得。在一些实施方案中，幼稚CD4+T淋巴细胞是CD45RO-、CD45RA+、CD62L+、CD4+T细胞。在一些实施方案中，中央记忆CD4+细胞呈CD62L阳性且CD45RO阳性。在一些实施方案中，效应CD4+细胞呈CD62L和CD45RO阴性。
所述免疫效应细胞(如T细胞)可以在使用已知方法分离后进行基因修饰，或者所述免疫效应细胞可以在进行基因修饰之前在体外激活和扩增(或在祖细胞的情况下分化)。在特定实施方案中，所述免疫效应细胞(如T细胞)用本文所设想的嵌合抗原受体进行基因修饰(例如，用包含编码CAR的核酸的病毒载体转导)，然后在体外激活并扩增。在各种实施方案中，可以使用例如以下文献中所述的方法，在基因修饰以表达CAR之前或之后激活和扩增T细胞：美国专利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；6,867,041；以及美国专利申请公开号20060121005。
通常，所述T细胞通过与表面接触来扩增，所述表面附接有刺激CD3 TCR复合物相关信号的药剂和刺激T细胞表面上的共刺激分子的配体。可以刺激T细胞群体，通过与固定在表面上的抗CD3抗体或其抗原结合片段或抗CD2抗体接触，或者通过与蛋白激酶C激活剂(例如，苔藓抑素)结合钙离子载体接触。还设想了在T细胞表面上辅助分子的共刺激。
在特定实施方案中，在含有适当细胞因子(如IL-2、IL-7和/或IL-15)的培养基中，使PBMC或分离的T细胞与通常附接至珠粒或其他表面的刺激剂和共刺激剂(如抗CD3和抗CD28抗体)接触。为了刺激CD4+T细胞或CD8+T细胞的增殖，抗CD3抗体和抗CD28抗体。抗CD28抗体的例子包括9.3、B-T3、XR-CD28(Diacione，贝桑松，法国)，可以用作可以本领域中一般已知的其他方法(Berg等人,Transplant Proc.30(8):3975-3977,1998；Haanen等人,J.Exp.Med.190(9):13191328,1999；Garland等人,J.Immunol Meth.227(1 -2):53-63,1999)。附接至同一珠粒上的抗CD3抗体和抗CD28抗体充当“替代”抗原呈递细胞(APC)。在其他实施方案中，可以使用诸如US 6040177、US 5827642和WO 2012129514中所述的那些的方法激活和刺激所述T细胞以与饲养细胞以及合适的抗体和细胞因子一起增殖。
在其他实施方案中，通过以下方法制备人工APC(aAPC)：将K562、U937、721.221、T2和C1R细胞工程化以指导多种共刺激分子和细胞因子的稳定表达和分泌。在特定实施方案中，K32或U32 aAPC用于指导一个或多个基于抗体的刺激分子在AAPC细胞表面上的展示。aAPC上各种基因组合的表达能够精确确定人T细胞激活需求，使得aAPC可以针对具有特定生长需求和不同功能的T细胞亚群的最佳繁殖来定制。与使用天然APC形成对照，aAPC支持功能性人CD8 T细胞的离体生长和长期扩增，而无需添加外源细胞因子。可以通过表达多种共刺激分子的aAPC来扩增T细胞群体，所述共刺激分子包括但不限于CD137L(4-1BBL)、CD134L(OX40L)和/或CD80或CD86。最后，aAPC为扩增经基因修饰的T细胞和维持CD8 T细胞上的CD28表达提供了有效的平台。将提供于WO 03/057171和US 2003/0147869中的aAPC通过引用以其整体并入于此。
在一个实施方案中，用根据本公开文本的核酸构建体转导CD34+细胞。在某些实施方案中，在向受试者(通常为最初从中分离所述细胞的受试者)施用之后，所述转导的CD34+细胞在体内分化为成熟免疫效应细胞。在另一个实施方案中，在暴露于如本文所述的CAR之前或用如本文所述的CAR进行基因修饰之后，可以根据先前所述的方法(Asheuer等人,2004,PNAS 101(10):3557-3562；Imren等人,2004)在体外用以下一种或多种细胞因子刺激CD34+细胞：Flt-3配体(FLT3)、干细胞因子(SCF)、巨核细胞生长和分化因子(TPO)、IL-3和IL-6。
在某些实施方案中，本文提供了一种用于治疗肿瘤或癌症的经修饰的免疫效应细胞群体，所述经修饰的免疫效应细胞包含如本文所公开的CAR。例如，经修饰的免疫效应细胞群体是从获得自被诊断患有本文所述的B细胞恶性肿瘤的患者(自体供体)的外周血单个核细胞(PBMC)制备的。PBMC形成异质性T淋巴细胞群体，其可以是CD4+、CD8+或CD4+和CD8+。
PBMC还可以包括其他细胞毒性淋巴细胞，如NK细胞或NKT细胞。携带本文所设想的CAR编码序列的表达载体可以被引入人供体T细胞、NK细胞或NKT细胞群体中。携带表达载体的成功转导的T细胞可以使用流式细胞术进行分选以分离CD3阳性T细胞，并且随后进一步繁殖以增加这些表达CAR蛋白的T细胞的数量，以及使用抗CD3抗体和或抗CD28抗体和IL-2或如本文其他地方所述的本领域中已知的任何其他方法进行细胞激活。使用标准程序低温保存表达CAR蛋白的T细胞以供储存和/或准备用于人受试者。在一个实施方案中，T细胞的体外转导、培养和/或扩增是在不存在非人动物衍生产品(如胎牛血清和牛胎儿血清)的情况下进行的。由于异质性PBMC群体是经基因修饰的，因此所得的转导的细胞是包含本文所设想的CAR(例如，靶向BCMA的CAR)的异质性经修饰的细胞的群体。
在其他实施方案中，可以使用一、二、三、四、五或更多个不同表达载体的混合物对免疫效应细胞的供体群体进行基因修饰，其中每个载体编码如本文所设想的不同嵌合抗原受体蛋白。所得的经修饰的免疫效应细胞形成经修饰的细胞的混合群体，其中一部分经修饰的细胞表达多于一种不同的CAR蛋白。
在一个实施方案中，本文提供了一种储存靶向BCMA蛋白的表达经基因修饰的鼠、人或人源化CAR蛋白表达免疫效应细胞的方法，所述方法包括低温保存所述免疫效应细胞，使得细胞在解冻后保持活力。表达CAR蛋白的免疫效应细胞的级分可以通过本领域已知的方法进行低温保存，以提供此类细胞的长期来源以用于未来治疗患有肿瘤或癌症或B细胞相关病症的患者。当需要时，低温保存的转化的免疫效应细胞可以解冻、生长和扩增，以获得更多此类细胞。
如本文所用，“低温保存”是指通过冷却至零下温度如(通常)77K或-196℃(液氮的沸点)来低温保存细胞。低温保护剂通常在零下温度下使用，以防止细胞因低温冷冻或升温至室温而受损。低温保护剂和最佳冷却速度可以保护免于细胞损伤。可使用的低温保护剂包括但不限于二甲基亚砜(DMSO)(Lovelock和Bishop,Nature,1959；183:1394-1395；Ashwood-Smith,Nature,1961；190:1204-1205)、甘油、聚乙烯吡咯烷酮(Rinfret,Ann.N.Y.Acad.Sci.,1960；85:576)和聚乙二醇(Sloviter和Ravdin,Nature,1962；196:48)。优选的冷却速度是1℃至3℃/分钟。在至少两小时后，T细胞已达到-80℃的温度，并且可以直接放入液氮中(-196℃)中以用于长期储存，如在长期低温储存容器中长期储存。
6.7.T细胞制造过程
通过本文所设想的方法制造的T细胞提供改进的过继免疫疗法组合物。在不希望受任何特定理论约束的情况下，认为通过本文所设想的方法制造的T细胞组合物具有优异的特性，包括增加的存活率、在相对无分化的情况下的扩增以及体内持久性。在一个实施方案中，制造T细胞的方法包括使细胞与调节PI3K细胞信号传导途径的一种或多种药剂接触。在一个实施方案中，制造T细胞的方法包括使细胞与调节PI3K/Akt/mTOR细胞信号传导途径的一种或多种药剂接触。在各种实施方案中，所述T细胞可以从任何来源获得，并且在制造过程的激活和/或扩增阶段与药剂接触。所得的T细胞组合物富含发育有效的T细胞，所述T细胞具有增殖的能力并且表达以下一种或多种生物标记物：CD62L、CCR7、CD28、CD27、CD122、CD127、CD197和CD38。在一个实施方案中，已用一种或多种PI3K抑制剂处理的包含T细胞的细胞群体针对共表达一种或多种或全部以下生物标记物的CD8+T细胞群体进行富集：CD62L、CD127、CD197和CD38。
在一个实施方案中，制造了包含维持的增殖水平和减少的分化的经修饰的T细胞。在特定实施方案中，通过在一个或多个刺激信号和作为PI3K细胞信号传导途径的抑制剂的药剂的存在下刺激T细胞激活和增殖来制造T细胞。
然后可以修饰T细胞以表达CAR(例如，靶向BCMA的CAR)。在一个实施方案中，通过用包含本文所设想的CAR(例如，抗BCMA CAR)的病毒载体转导所述T细胞来修饰所述T细胞。在特定实施方案中，在存在PI3K细胞信号传导途径的抑制剂的情况下刺激和激活之前修饰所述T细胞。在另一个实施方案中，在存在PI3K细胞信号传导途径的抑制剂的情况下刺激和激活T细胞之后修饰所述T细胞。在特定实施方案中，在存在PI3K细胞信号传导途径的抑制剂的情况下刺激和激活的12小时、24小时、36小时或48小时内修饰所述T细胞。
在T细胞被激活之后，培养所述细胞以增殖。T细胞可以培养至少1、2、3、4、5、6或7天，至少2周，至少1、2、3、4、5或6个月或更长时间，并进行1、2、3、4、5、6、7、8、9或10轮或更多轮扩增。
在各种实施方案中，在PI3K途径的一种或多种抑制剂的存在下制造T细胞组合物。所述抑制剂可以靶向所述途径中的一种或多种活性或单一活性。在不希望受任何特定理论约束的情况下，可以设想在制造过程的刺激、激活和/或扩增阶段中用一种或多种PI3K途径抑制剂处理T细胞或使之与T细胞接触优先地增加年轻T细胞，从而产生优异的治疗性T细胞组合物。
在特定实施方案中，提供了一种用于增加表达工程化T细胞受体的T细胞的增殖的方法。此类方法可以包括例如从受试者收获T细胞来源、在PI3K途径的一种或多种抑制剂的存在下刺激和激活T细胞、修饰所述T细胞以表达CAR(例如，抗BCMA CAR，更特别地为抗BCMA02 CAR)以及在培养物中扩增所述T细胞。
在特定实施方案中，一种用于产生针对以下一种或多种生物标记物的表达进行富集的T细胞群体的方法：CD62L、CCR7、CD28、CD27、CD122、CD127、CD197和CD38。在一个实施方案中，年轻T细胞包含以下一种或多种或全部生物标记物：CD62L、CD127、CD197和CD38。在一个实施方案中，提供了缺乏CD57、CD244、CD160、PD-1、CTLA4、TIM3和LAG3的表达的年轻T细胞。如本文其他地方所讨论的，年轻T细胞生物标记物的表达水平与分化程度更高的T细胞或免疫效应细胞群体中此类标记物的表达水平相关。
在一个实施方案中，外周血单个核细胞(PBMC)用作本文所设想的T细胞制造方法中T细胞的来源。PBMC形成异质性T淋巴细胞群体，其可以是CD4+、CD8+、或CD4+和CD8+，并且可以包括其他单个核细胞，如单核细胞、B细胞、NK细胞和NKT细胞。包含编码本文所设想的工程化TCR或CAR的多核苷酸的表达载体可以被引入人供体T细胞、NK细胞或NKT细胞群体中。携带表达载体的成功转导的T细胞可以使用流式细胞术进行分选以分离CD3阳性T细胞，并且随后进一步繁殖以增加经修饰的T细胞的数量，以及使用抗CD3抗体和或抗CD28抗体和IL-2、IL-7和/或IL-15或如本文其他地方所述的本领域中已知的任何其他方法进行细胞激活。
本文所设想的制造方法可以进一步包括低温保存经修饰的T细胞，以用于储存和/或制备以供在人受试者中使用。低温保存T细胞，使得所述细胞在解冻后保持活力。当需要时，低温保存的转化的免疫效应细胞可以解冻、生长和扩增，以获得更多此类细胞。如本文所用，“低温保存”是指通过冷却至零下温度如(通常)77K或-196℃(液氮的沸点)来低温保存细胞。低温保护剂通常在零下温度下使用，以防止细胞因低温冷冻或升温至室温而受损。低温保护剂和最佳冷却速度可以保护免于细胞损伤。可使用的低温保护剂包括但不限于二甲基亚砜(DMSO)(Lovelock和Bishop,Nature,1959；183:1394-1395；Ashwood-Smith,Nature,1961；190:1204-1205)、甘油、聚乙烯吡咯烷酮(Rinfret,Ann.N.Y.Acad.Sci.,1960；85:576)和聚乙二醇(Sloviter和Ravdin,Nature,1962；196:48)。优选的冷却速度是1℃至3℃/分钟。在至少两小时后，T细胞已达到-80℃的温度，并且可以直接放入液氮中(-196℃)中以用于长期储存，如在长期低温储存容器中长期储存。
6.8.T细胞
本公开文本设想了改进的CAR T细胞组合物的制造。用于CAR T细胞产生的T细胞可以是自体(autologous/autogeneic)(“自身”)或非自体(“非自身”，例如同种异体、同基因或异基因)。在某些实施方案中，所述T细胞是从哺乳动物受试者获得的。在更具体的实施方案中，所述T细胞是从灵长类受试者获得的。在优选的实施方案中，所述T细胞是从人受试者获得的。
T细胞可以从多种来源获得，包括但不限于外周血单个核细胞、骨髓、淋巴结组织、脐带血、胸腺组织、来自感染部位的组织、腹水、胸腔积液、脾组织和肿瘤。在某些实施方案中，可以使用本领域技术人员已知的任何数量的技术(如沉淀，例如FICOLLTM分离)从在受试者中收集的血液单位获得T细胞。在一个实施方案中，来自个体的循环血液的细胞是通过单采术获得的。单采术产物通常含有淋巴细胞，包括T细胞、单核细胞、粒细胞、B细胞、其他有核白细胞、红细胞和血小板。在一个实施方案中，可以洗涤通过单采术收集的细胞以去除血浆级分并将细胞置于适当的缓冲液或培养基中用于后续处理。可以用PBS或用缺乏钙、镁和大多数(如果不是全部的话)二价阳离子的另一种合适的溶液洗涤细胞。如本领域普通技术人员所理解的，洗涤步骤可以通过本领域技术人员已知的方法完成，如通过使用半自动化流通式离心机完成。例如，Cobe 2991细胞处理器、Baxter CytoMate等。在洗涤后，可以将细胞重悬于各种生物相容性缓冲液或其他含有或不含缓冲液的盐水溶液中。在某些实施方案中，可以在细胞直接重悬培养基中去除单采术样品的不希望的组分。
在特定实施方案中，在本文所设想的制造方法中使用包含T细胞的细胞群体，例如PBMC。在其他实施方案中，在本文所设想的制造方法中使用分离或纯化的T细胞群体。可以通过裂解红细胞并耗尽单核细胞(例如通过PERCOLLTM梯度离心)，从外周血单个核细胞(PBMC)分离细胞。在一些实施方案中，在分离PBMC后，细胞毒性和辅助性T淋巴细胞二者可以在激活、扩增和/或基因修饰之前或之后被分选为幼稚、记忆和效应T细胞亚群。
可以通过阳性或阴性选择技术进一步分离表达以下一种或多种标记物的特定T细胞亚群：CD3、CD4、CD8、CD28、CD45RA、CD45RO、CD62、CD127和HLA-DR。在一个实施方案中，通过阳性或阴性选择技术进一步分离表达选自以下的一种或多种标记物的特定T细胞亚群：(i)CD62L、CCR7、CD28、CD27、CD122、CD127、CD197；或(ii)CD38或CD62L、CD127、CD197和CD38。在各种实施方案中，制造的T细胞组合物不表达或基本上不表达以下一种或多种标记物：CD57、CD244、CD160、PD-1、CTLA4、TIM3和LAG3。
在一个实施方案中，与未使用PI3K抑制剂的情况下激活和扩增的T细胞群体相比，选自CD62L、CD127、CD197和CD38的一种或多种标记物的表达增加至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍或更多倍。
在一个实施方案中，与在使用PI3K抑制剂的情况下激活和扩增的T细胞群体相比，选自CD57、CD244、CD160、PD-1、CTLA4、TIM3和LAG3的一种或多种标记物的表达降低至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍或更多倍。
在一个实施方案中，本文所设想的制造方法增加包含幼稚或发育有效的T细胞的一种或多种标记物的CAR T细胞的数量。不希望受任何特定理论的约束，本发明者认为用一种或多种PI3K抑制剂处理包含T细胞的细胞群体导致发育有效的T细胞的扩增的增加，并且提供了与现有的CAR T细胞疗法相比更稳健且有效的过继CAR T细胞免疫疗法。
使用本文所设想的方法制造的T细胞中增加的幼稚或发育有效的T细胞的标记物的例子包括但不限于CD62L、CD127、CD197和CD38。在特定实施方案中，幼稚T细胞不表达或基本上不表达以下一种或多种标记物：CD57、CD244、CD160、PD-1、BTLA、CD45RA、CTLA4、TIM3和LAG3。
关于T细胞，根据所采用的条件，由本文所设想的各种扩增方法产生的T细胞群体可以具有多种特定表型特性。在各种实施方案中，扩增的T细胞群体包含以下一种或多种表型标记物：CD62L、CD127、CD197、CD38和HLA-DR。
在一个实施方案中，此类表型标记物包括CD62L、CD127、CD197和CD38中的一种或多种或全部的增强的表达。在特定实施方案中，对特征在于幼稚T细胞的表型标记物(包括CD62L、CD127、CD197和CD38)的表达的CD8+T淋巴细胞进行扩增。
在特定实施方案中，对特征在于中央记忆T细胞的表型标记物(包括CD45RO、CD62L、CD127、CD197和CD38)的表达且对颗粒酶B呈阴性的T细胞进行扩增。在一些实施方案中，所述中央记忆T细胞是CD45RO+、CD62L+、CD8+T细胞。
在某些实施方案中，对特征在于幼稚CD4+细胞的表型标记物(包括CD62L)的表达且对CD45RA和/或CD45RO的表达呈阴性的CD4+T淋巴细胞进行扩增。在一些实施方案中，CD4+细胞的特征在于中央记忆CD4+细胞的表型标记物的表达，包括CD62L和CD45RO阳性。在一些实施方案中，效应CD4+细胞呈CD62L阳性且CD45RO阴性。
在某些实施方案中，从个体分离T细胞，并且在体外激活并刺激所述T细胞以增殖，然后进行基因修饰以表达CAR(例如，抗BCMA CAR)。在这一方面，可以将所述T细胞在经基因修饰(即，被转导或转染以表达本文所设想的CAR，例如抗BCMA CAR)之前和/或之后进行培养。
6.8.1.激活和扩增
为了获得足够治疗剂量的T细胞组合物，T细胞通常经受一轮或多轮刺激、激活和/或扩增。通常可以使用如以下专利中所述的方法激活和扩增T细胞：例如，美国专利6,352,694；6,534,055；6,905,680；6,692,964；5,858,358；6,887,466；6,905,681；7,144,575；7,067,318；7,172,869；7,232,566；7,175,843；5,883,223；6,905,874；6,797,514；和6,867,041，将其每一个都通过引用以其整体并入本文。可以将经修饰以表达CAR(例如，抗BCMACAR)的T细胞在修饰所述T细胞之前和/或之后激活和扩增。此外，T细胞可以在激活和/或扩增之前、期间和/或之后与调节PI3K细胞信号传导途径的一种或多种药剂接触。在一个实施方案中，通过本文所设想的方法制造的T细胞经历一轮、两轮、三轮、四轮或五轮或更多轮激活和扩增，其中每轮激活和扩增可以包括调节PI3K细胞信号传导途径的一种或多种药剂。
在一个实施方案中，共刺激配体呈现在抗原呈递细胞(例如，aAPC、树突状细胞、B细胞等)上，所述共刺激配体特异性地结合T细胞上的同源共刺激分子从而提供信号，所述信号以及由例如TCR/CD3复合物的结合所提供的初级信号介导所需的T细胞应答。合适的共刺激配体包括但不限于CD7、B7-1(CD80)、B7-2(CD86)、PD-L1、PD-L2、4-1BBL、OX40L、诱导型共刺激配体(ICOS-L)、细胞间粘附分子(ICAM)、CD30L、CD40、CD70、CD83、HLA-G、MICA、MICB、HVEM、淋巴毒素β受体、ILT3、ILT4、结合Toll配体受体的激动剂或抗体以及与B7-H3特异性地结合的配体。
在特定实施方案中，共刺激配体包括与T细胞上存在的共刺激分子特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述共刺激分子包括但不限于CD27、CD28、4-IBB、OX40、CD30、CD40、PD-1、1COS、淋巴细胞功能相关抗原1(LFA-1)、CD7、LIGHT、NKG2C、B7-H3和与CD83特异性结合的配体。
合适的共刺激配体进一步包括靶抗原，其可以以可溶性形式提供或在APC或aAPC上表达，且结合在经修饰的T细胞上表达的工程化TCR或CAR。
在各种实施方案中，本文所设想的用于制造T细胞的方法包括激活包含T细胞的细胞群体并扩增T细胞群体。T细胞激活可以通过以下方法实现：提供通过T细胞TCR/CD3复合物或经由CD2表面蛋白的初级刺激信号，并且提供通过辅助分子例如CD28的次级共刺激信号。
可以通过使T细胞与合适的CD3结合剂(例如，CD3配体或抗CD3单克隆抗体)接触来刺激TCR/CD3复合物。CD3抗体的说明性例子包括但不限于OKT3、G19-4、BC3和64.1。
在另一个实施方案中，CD2结合剂可以用于向T细胞提供初级刺激信号。CD2结合剂的说明性例子包括但不限于CD2配体和抗CD2抗体，例如，T11.3抗体与T11.1或T11.2抗体的组合(Meuer,S.C.et al.(1984)Cell 36:897-906)以及9.6抗体(其与TI 1.1识别相同的表位)与9-1抗体的组合(Yang,S.Y.等人(1986)J.Immunol.137:1097-1100)。也可以使用与上述任何抗体结合相同表位的其他抗体。可以通过本文其他地方所公开的标准技术制备和鉴定另外的抗体或抗体的组合。
除了通过TCR/CD3复合物或经由CD2提供的初级刺激信号外，诱导T细胞应答还需要次级共刺激信号。在特定实施方案中，CD28结合剂可以用于提供共刺激信号。CD28结合剂的说明性例子包括但不限于：天然CD28配体，例如对于CD28的天然配体(例如，B7蛋白质家族的成员，如B7-1(CD80)和B7-2(CD86))；以及能够交联CD28分子的抗CD28单克隆抗体或其片段，例如单克隆抗体9.3、B-T3、XR-CD28、KOLT-2、15E8、248.23.2和EX5.3D10。
在一个实施方案中，提供初级刺激信号的分子(例如通过TCR/CD3复合物或CD2提供刺激的分子)以及共刺激分子与同一表面偶联。
在某些实施方案中，提供刺激和共刺激信号的结合剂定位在细胞的表面。这可以通过以下方法实现：用编码呈适合于其在细胞表面表达的形式的所述结合剂的核酸转导细胞，或可替代地将结合剂偶联至细胞表面。
在另一个实施方案中，提供初级刺激信号的分子(例如，通过TCR/CD3复合物或CD2提供刺激的分子)以及共刺激分子展示在抗原呈递细胞上。
在一个实施方案中，提供初级刺激信号的分子(例如通过TCR/CD3复合物或CD2提供刺激的分子)以及共刺激分子提供于单独的表面。
在特定实施方案中，提供刺激和共刺激信号的结合剂中的一种是可溶的(在溶液中提供)，而另一种药剂提供在一个或多个表面上。
在特定实施方案中，提供刺激和共刺激信号的结合剂均以可溶性形式提供(在溶液中提供)。
在各种实施方案中，本文所设想的用于制造T细胞的方法包括用抗CD3抗体和抗CD28抗体激活T细胞。
通过本文所设想的方法制造的T细胞组合物包含在抑制PI3K细胞信号传导途径的一种或多种药剂的存在下激活和/或扩增的T细胞。可以将经修饰以表达CAR(例如，抗BCMACAR)的T细胞在修饰所述T细胞之前和/或之后激活和扩增。在特定实施方案中，激活T细胞群体，对其进行修饰以表达CAR(例如，抗BCMA CAR)，然后培养以进行扩增。
在一个实施方案中，通过本文所设想的方法制造的T细胞包括增加数量的T细胞，所述T细胞表达指示高增殖潜能和自我更新能力的标记物，但不表达或基本上不表达检测不到的T细胞分化标记物。这些T细胞可以以稳健的方式被反复激活和扩增，从而提供改进的治疗性T细胞组合物。
在一个实施方案中，与未使用PI3K抑制剂的情况下激活和扩增的T细胞群体相比，在抑制PI3K细胞信号传导途径的一种或多种药剂的存在下激活和扩增的T细胞群体被扩增至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍、至少50倍、至少100倍、至少250倍、至少500倍、至少1000倍或更多倍。
在一个实施方案中，与未使用PI3K抑制剂的情况下激活和扩增的T细胞群体相比，在抑制PI3K细胞信号传导途径的一种或多种药剂的存在下激活和扩增的特征在于年轻T细胞的标记物的表达的T细胞群体被扩增至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍、至少50倍、至少100倍、至少250倍、至少500倍、至少1000倍或更多倍。
在一个实施方案中，扩增通过本文所设想的方法激活的T细胞进一步包括将包含T细胞的细胞群体培养若干个小时(约3小时)至约7天至约28天或其间的任何小时整数值。在另一个实施方案中，可以将T细胞组合物培养14天。在特定实施方案中，将T细胞培养约21天。在另一个实施方案中，将T细胞组合物培养约2-3天。还可能需要几个循环的刺激/激活/扩增，使得T细胞的培养时间可以是60天或更多天。
在特定实施方案中，适合于T细胞培养的条件包括合适的培养基(例如，最低基础培养基或RPMI培养基1640或X-vivo 15(Lonza))以及对于增殖和活力所需的一种或多种因子，包括但不限于血清(例如，胎牛或人血清)、白细胞介素-2(IL-2)、胰岛素、IFN-γ、IL-4、IL-7、IL-21、GM-CSF、IL-10、IL-12、IL-15、TGFβ和TNF-α或本领域技术人员已知的适合于细胞生长的任何其他添加剂。
细胞培养基的其他说明性例子包括但不限于RPMI 1640、Click、AIM-V、DMEM、MEM、a-MEM、F-12、X-Vivo 15和X-Vivo 20、Optimizer，其添加有氨基酸、丙酮酸钠和维生素，无血清或补充有适当量的血清(或血浆)或一组限定的激素和/或足够用于T细胞生长和扩增的量的一种或多种细胞因子。
用于T细胞扩增的其他添加剂的说明性例子包括但不限于表面活性剂、血浆制品(piasmanate)、pH缓冲液(如HEPES)和还原剂(如N-乙酰半胱氨酸和2-巯基乙醇)。
抗生素(例如，青霉素和链霉素)仅包括在实验培养物中，而不在待输注至受试者体内的细胞培养物中。将靶细胞维持在支持生长所必需的条件(例如，适当的温度(例如，37℃)和大气(例如，空气加5％ C02))下。
在特定实施方案中，在含有适当细胞因子(如IL-2、IL-7和/或IL-15)的培养基中，使PBMC或分离的T细胞与通常附接至珠粒或其他表面的刺激剂和共刺激剂(如抗CD3和抗CD28抗体)接触。
在其他实施方案中，可以通过以下方法制备人工APC(aAPC)：将K562、U937、721.221、T2和C1R细胞工程化以指导多种共刺激分子和细胞因子的稳定表达和分泌。在特定实施方案中，K32或U32 aAPC用于指导一个或多个基于抗体的刺激分子在AAPC细胞表面上的展示。可以通过表达多种共刺激分子的aAPC来扩增T细胞群体，所述共刺激分子包括但不限于CD137L(4-1BBL)、CD134L(OX40L)和/或CD80或CD86。最后，aAPC为扩增经基因修饰的T细胞和维持CD8 T细胞上的CD28表达提供了有效的平台。将提供于WO 03/057171和US2003/0147869中的aAPC通过引用以其整体并入于此。
6.8.2.药剂
在各种实施方案中，提供了一种制造T细胞的方法，所述方法扩增未分化或发育有效的T细胞，其包括使T细胞与调节细胞中PI3K途径的药剂接触。在各种实施方案中，提供了一种制造T细胞的方法，所述方法扩增未分化或发育有效的T细胞，其包括使T细胞与调节细胞中PI3K/AKT/mTOR途径的药剂接触。可以在激活和扩增之前、期间和/或之后接触所述细胞。所述T细胞组合物保持足够的T细胞效力，使得它们可以经历多轮扩增而不会显著增加分化。
如本文所用，术语“调节”、“调节物”或“调节剂”或类似术语是指药剂引发细胞信号传导途径的变化的能力。调节物可以增加或减少途径组分的量、活性，或者增加或减少细胞信号传导途径的所需效果或输出。在一个实施方案中，所述调节物是抑制剂。在另一个实施方案中，所述调节物是激活剂。
“药剂”是指用于调节PI3K/AKT/mTOR途径的化合物、小分子，例如有机小分子、核酸、多肽、或其片段、异构体、变体、类似物或衍生物。
“小分子”是指分子量小于约5kD、小于约4kD、小于约3kD、小于约2kD、小于约1kD或小于约.5kD的组合物。小分子可以包括核酸、肽、多肽、拟肽、类肽、碳水化合物、脂质、其组分或其他有机或无机分子。化学和/或生物混合物(如真菌、细菌或藻类提取物)的文库在本领域中是已知的，并且可以用本公开文本的任何测定进行筛选。用于合成分子文库的方法是本领域中已知的(参见例如，Carell等人,1994a；Carell等人,1994b；Cho等人,1993；DeWitt等人,1993；Gallop等人,1994；Zuckermann等人,1994)。
“类似物”是指与具有本公开文本的所需活性的化合物、核苷酸、蛋白质或多肽或化合物具有一种或多种类似或相同的活性或功能但不必一定包含与优选实施方案的序列或结构类似或相同的序列或结构的小有机化合物、核苷酸、蛋白质或多肽。
“衍生物”是指化合物、蛋白质或多肽，其包含已通过引入氨基酸残基取代、缺失或添加而改变的亲本蛋白质或多肽的氨基酸序列，或已通过引入核苷酸取代或缺失、添加或突变而修饰的核酸或核苷酸。衍生核酸、核苷酸、蛋白质或多肽与亲本多肽具有类似或相同的功能。
在各种实施方案中，调节PI3K途径的药剂激活所述途径的组分。“激活剂”或“激动剂”是指促进、增加或诱导PI3K/AKT/mTOR途径中分子(包括但不限于抑制PI3K的一种或多种活性的分子)的一种或多种活性的药剂。
在各种实施方案中，调节PI3K途径的药剂抑制所述途径的组分。“抑制剂”或“拮抗剂”是指抑制、减少或降低PI3K途径中分子(包括但不限于PI3K)的一种或多种活性的药剂。在一个实施方案中，所述抑制剂是双分子抑制剂。在特定实施方案中，所述抑制剂可以抑制具有相同或基本上类似活性的一类分子(泛抑制剂)，或可以特异性地抑制分子的活性(选择性或特异性抑制剂)。抑制也可以是不可逆的或可逆的。
在一个实施方案中，所述抑制剂具有至少1nM、至少2nM、至少5nM、至少10nM、至少50nM、至少100nM、至少200nM、至少500nM、至少1μM、至少10μM、至少50μM或至少100μM的IC50。IC50测定可以使用本领域已知的任何常规技术来实现。例如，IC50可以通过在所研究的一系列浓度的抑制剂的存在下测量给定酶的活性来确定。然后将实验获得的酶活性值针对所使用的抑制剂浓度来绘图。将显示出50％酶活性的抑制剂浓度(与不存在任何抑制剂的情况下的活性相比)作为“IC50”值。类似地，其他抑制浓度可以通过活性的适当确定来定义。
在各种实施方案中，用以下浓度的一种或多种PI3K途径调节物接触或处理或培养T细胞：至少1nM、至少2nM、至少5nM、至少10nM、至少50nM、至少100nM、至少200nM、至少500nM、至少1μM、至少10μM、至少50μM、至少100μM或至少1M。
在特定实施方案中，用一种或多种PI3K途径调节物接触或处理或培养T细胞，持续至少12小时、18小时，至少1、2、3、4、5、6或7天，至少2周，至少1、2、3、4、5或6个月或更长时间，并进行1、2、3、4、5、6、7、8、9或10轮或更多轮扩增。
6.8.3.PI3K/Akt/mTOR途径
磷脂酰肌醇-3激酶/Akt/哺乳动物雷帕霉素靶标途径充当将生长因子信号传导与细胞增殖、分化、代谢和存活整合在一起的通道。PI3K是高度保守的细胞内脂质激酶家族。IA类PI3K被生长因子受体酪氨酸激酶(RTK)直接激活或通过与衔接分子的胰岛素受体底物家族相互作用激活。这种活性导致丝氨酸/苏氨酸激酶Akt的调节剂即磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸酯(PIP3)的产生。mTOR经由2个不同的复合物通过典型的PI3K途径发挥作用，每个复合物的特征在于赋予不同活性的不同结合配偶体。mTORC1(mTOR与PRAS40、raptor和mLST8/GbL复合)充当PI3K/Akt信号传导的下游效应物，将生长因子信号与蛋白质翻译、细胞生长、增殖和存活联系起来。mTORC2(mTOR与rictor、mSIN1、protor和mLST8复合)充当Akt的上游激活剂。
在生长因子受体介导的PI3K激活后，Akt通过其普列克底物蛋白同源结构域与PIP3的相互作用被招募到膜上，从而暴露其激活环并通过组成性活性磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)实现在苏氨酸308(Thr308)处的磷酸化。为了最大程度的激活，Akt也在其C末端疏水性基序的丝氨酸473(Ser473)处被mTORC2磷酸化。DNA-PK和HSP也已显示出在Akt活性的调节中是重要的。Akt通过TSC2的抑制性磷酸化激活mTORC1，所述TSC2与TSC1一起通过抑制mTORC1的正调节剂Rheb GTP酶来负调节mTORC1。mTORC1具有2种明确的底物，p70S6K(以下称为S6K1)和4E-BP1，这两种底物都极为重要地调节蛋白质合成。因此，mTORC1是PI3K的重要下游效应物，这将生长因子信号传导与蛋白质翻译和细胞增殖联系起来。
6.8.4.PI3K抑制剂
如本文所用，术语“PI3K抑制剂”是指结合并抑制PI3K的至少一种活性的核酸、肽、化合物或有机小分子。PI3K蛋白可以分为三类，1类PI3K、2类PI3K和3类PI3K。1类PI3K作为由四个p110催化亚基(p110α、p110β、p110δ和p110γ)之一和两个调节亚基家族之一组成的异二聚体存在。在特定实施方案中，本公开文本的PI3K抑制剂靶向1类PI3K抑制剂。在一个实施方案中，PI3K抑制剂将显示出对于1类PI3K抑制剂的一个或多个同种型的选择性(即，对于p110α、p110β、p110δ和p110γ或者p110α、p110β、p110δ和p110γ中的一个或多个的选择性)。在另一个方面，PI3K抑制剂将不会显示出同种型选择性，并且被视为“泛PI3K抑制剂”。在一个实施方案中，PI3K抑制剂将与ATP竞争结合PI3K催化结构域。
在某些实施方案中，PI3K抑制剂可以例如靶向PI3K以及PI3K-AKT-mTOR途径中的另外的蛋白质。在特定实施方案中，同时靶向mTOR和PI3K的PI3K抑制剂可以被称为mTOR抑制剂或PI3K抑制剂。仅靶向PI3K的PI3K抑制剂可以被称为选择性PI3K抑制剂。在一个实施方案中，选择性PI3K抑制剂可以被理解为是指这样的药剂，其对PI3K展现出的50％抑制浓度比所述抑制剂对mTOR和/或所述途径中的其他蛋白质的IC50低至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少50倍、至少100倍、至少1000倍或更多倍。
在特定实施方案中，示例性PI3K抑制剂抑制PI3K，其中IC50(抑制所述活性的50％时的浓度)为约200nM或更低，优选约100nm或更低，甚至更优选约60nM或更低，约25nM、约10nM、约5nM、约1nM、100μM、50μM、25μM、10μM、1μM或更低。在一个实施方案中，PI3K抑制剂抑制PI3K，其中IC50为从约2nM至约100nM、更优选从约2nM至约50nM、甚至更优选从约2nM至约15nM。
适合于在本文所设想的T细胞制造方法中使用的PI3K抑制剂的说明性例子包括但不限于BKM120(1类PI3K抑制剂，Novartis)、XL147(1类PI3K抑制剂，Exelixis)、(泛PI3K抑制剂，GlaxoSmithKline)和PX-866(1类PI3K抑制剂；p110α、p110β和p110γ同种型，Oncothyreon)。
选择性PI3K抑制剂的其他说明性例子包括但不限于BYL719、GSK2636771、TGX-221、AS25242、CAL-101、ZSTK474和IPI-145。
泛PI3K抑制剂的其他说明性例子包括但不限于BEZ235、LY294002、GSK1059615、TG100713和GDC-0941。
6.8.5.AKT抑制剂
如本文所用，术语“AKT抑制剂”是指抑制AKT的至少一种活性的核酸、肽、化合物或有机小分子。AKT抑制剂可以分为若干类，包括基于脂质的抑制剂(例如，靶向AKT的普列克底物蛋白同源结构域的抑制剂，其阻止AKT定位于质膜)、ATP竞争性抑制剂和变构抑制剂。在一个实施方案中，AKT抑制剂通过与AKT催化位点结合而起作用。在特定实施方案中，Akt抑制剂通过抑制下游AKT靶标(如mTOR)的磷酸化而起作用。在另一个实施方案中，通过抑制例如AKT的DNA-PK激活、AKT的PDK-1激活和/或Akt的mTORC2激活，从而抑制输入信号激活Akt，最终抑制AKT活性。
AKT抑制剂可以靶向所有三种AKT同种型，即AKT1、AKT2、AKT3，或者可以是同种型选择性的，并且仅靶向一种或两种AKT同种型。在一个实施方案中，AKT抑制剂可以靶向AKT以及PI3K-AKT-mTOR途径中的另外的蛋白质。仅靶向AKT的AKT抑制剂可以被称为选择性AKT抑制剂。在一个实施方案中，选择性AKT抑制剂可以被理解为是指这样的药剂，其对AKT展现出的50％抑制浓度比所述抑制剂对所述途径中的其他蛋白质的IC50低至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少50倍、至少100倍、至少1000倍或更多倍。
在特定实施方案中，示例性AKT抑制剂抑制AKT，其中IC50(抑制所述活性的50％时的浓度)为约200nM或更低，优选约100nm或更低，甚至更优选约60nM或更低，约25nM、约10nM、约5nM、约1nM、100μM、50μM、25μM、10μM、1μM或更低。在一个实施方案中，AKT抑制剂抑制AKT，其中IC50为从约2nM至约100nM、更优选从约2nM至约50nM、甚至更优选从约2nM至约15nM。
用于与基于奥瑞他汀(auristatin)的抗体-药物缀合物组合使用的AKT抑制剂的说明性例子包括例如哌立福新(Keryx)、MK2206(Merck)、VQD-002(VioQuest)、XL418(Exelixis)、GSK690693、GDC-0068和PX316(PROLX Pharmaceuticals)。
选择性Akt1抑制剂的说明性非限制性例子是A-674563。
选择性Akt2抑制剂的说明性非限制性例子是CCT128930。
在特定实施方案中，Akt抑制剂抑制Akt的DNA-PK激活、Akt的PDK-1激活、Akt的mTORC2激活或Akt的HSP激活。
DNA-PK抑制剂的说明性例子包括但不限于NU7441、PI-103、NU7026、PIK-75和PP-121。
6.8.6.mTOR抑制剂
术语“mTOR抑制剂”或“抑制mTOR的药剂”是指抑制mTOR蛋白的至少一种活性(例如像其至少一种底物(例如，p70S6激酶1、4E-BP1、AKT/PKB和eEF2)上的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶活性)的核酸、肽、化合物或有机小分子。mTOR抑制剂能够直接结合并抑制mTORC1、mTORC2或同时结合并抑制mTORC1和mTORC2。
mTORC1和/或mTORC2活性的抑制可以通过PI3K/Akt/mTOR途径的信号转导的降低来测定。可以利用多种读出来建立这种信号传导途径的输出的减少。一些非限制性示例性读出包括(1)Akt在包括但不限于5473和T308的残基处的磷酸化的减少；(2)Akt的激活的减少，如例如通过包括但不限于Fox01/O3a T24/32、GSK3a/β；S21/9和TSC2T1462的Akt底物的磷酸化的降低所证明；(3)mTOR下游的包括但不限于核糖体S6S240/244、70S6K T389和4EBP1 T37/46的信号传导分子的磷酸化的减少；以及(4)对癌细胞增殖的抑制。
在一个实施方案中，所述mTOR抑制剂是活性位点抑制剂。这些是与mTOR的ATP结合位点(也称为ATP结合袋)结合并同时抑制mTORC1和mTORC2的催化活性的mTOR抑制剂。适合于在本文所设想的T细胞制造方法中使用的一类活性位点抑制剂是同时靶向并直接抑制PI3K和mTOR的双特异性抑制剂。双特异性抑制剂同时结合mTOR的ATP结合位点和PI3K。此类抑制剂的说明性例子包括但不限于：咪唑并喹唑啉、渥曼青霉素、LY294002、PI-103(CaymanChemical)、SF1126(Semafore)、BGT226(Novartis)、XL765(Exelixis)和NVP-BEZ235(Novartis)。
适合于在本文所设想的方法中使用的另一类mTOR活性位点抑制剂相对于一种或多种I型磷脂酰肌醇3-激酶(例如，PI3激酶α、β、γ或δ)选择性地抑制mTORC1和mTORC2活性。这些活性位点抑制剂与mTOR的活性位点结合，但不与PI3K结合。此类抑制剂的说明性例子包括但不限于：吡唑并嘧啶、Torin1(Guertin和Sabatini)、PP242(2-(4-氨基-1-异丙基-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-3-基)-1H-吲哚-5-醇)、PP30、Ku-0063794、WAY-600(Wyeth)、WAY-687(Wyeth)、WAY-354(Wyeth)和AZD8055(Liu等人,Nature Review,8,627-644,2009)。
在一个实施方案中，选择性mTOR抑制剂是指这样的药剂，其对mTORC1和/或mTORC2展现出的50％抑制浓度(IC50)比所述抑制剂对一种、两种、三种或更多种I型PI3激酶或所有I型PI3激酶的IC50低至少10倍、至少20倍、至少50倍、至少100倍、至少1000倍或更多倍。
用于在本公开文本中使用的另一类mTOR抑制剂在本文中称为“雷帕霉素类似物(rapalogs)”。如本文所用，术语“雷帕霉素类似物”是指与mTOR FRB结构域(FKBP雷帕霉素结合结构域)特异性结合、在结构上与雷帕霉素相关且保留mTOR抑制特性的化合物。术语雷帕霉素类似物不包括雷帕霉素。雷帕霉素类似物包括雷帕霉素的酯、醚、肟、腙和羟胺，以及其中雷帕霉素核心结构上的官能团已通过例如还原或氧化进行修饰的化合物。此类化合物的药学上可接受的盐也被认为是雷帕霉素衍生物。适合于在本文所设想的方法中使用的雷帕霉素类似物的例示性例子包括但不限于替西罗莫司(CC1779)、依维莫司(RAD001)、地弗莫司(AP23573)、AZD8055(AstraZeneca)和OSI-027(OSI)。
在一个实施方案中，所述药剂是mTOR抑制剂雷帕霉素(西罗莫司)。
在特定实施方案中，用于在本文中使用的示例性mTOR抑制剂抑制mTORC1、mTORC2或同时抑制mTORC1和mTORC2，其中IC50(抑制所述活性的50％时的浓度)为约200nM或更低，优选约100nm或更低，甚至更优选约60nM或更低，约25nM、约10nM、约5nM、约1nM、100μM、50μM、25μM、10μM、1μM或更低。在一个方面，用于在本文中使用的mTOR抑制剂抑制mTORC1、mTORC2或同时抑制mTORC1和mTORC2，其中IC50为从约2nM至约100nM、更优选从约2nM至约50nM、甚至更优选从约2nM至约15nM。
在一个实施方案中，示例性mTOR抑制剂抑制PI3K和mTORC1或mTORC2或同时抑制mTORC1和mTORC2以及PI3K，其中IC50(抑制所述活性的50％时的浓度)为约200nM或更低，优选约100nm或更低，甚至更优选约60nM或更低，约25nM、约10nM、约5nM、约1nM、100μM、50μM、25μM、10μM、1μM或更低。在一个方面，用于在本文中使用的mTOR抑制剂抑制PI3K和mTORC1或mTORC2或同时抑制mTORC1和mTORC2以及PI3K，其中IC50为从约2nM至约100nM、更优选从约2nM至约50nM、甚至更优选从约2nM至约15nM。
适合于在本文所设想的特定实施方案中使用的mTOR抑制剂的其他说明性例子包括但不限于AZD8055、INK128、雷帕霉素、PF-04691502和依维莫司。
mTOR已显示出对生理底物蛋白质p70 S6核糖体蛋白激酶I(p70S6K1)和eIF4E结合蛋白1(4EBP1)具有稳健且特异性的催化活性，如在蛋白质印迹中通过磷酸化特异性抗体测定的。
在一个实施方案中，PI3K/AKT/mTOR途径的抑制剂是选自以下的s6激酶抑制剂：BI-D1870、H89、PF-4708671、FMK和AT7867。
6.9.组合物和配制品
本文所设想的组合物可以包含如本文所设想的一个或多个多肽、多核苷酸、包含其的载体、经基因修饰的免疫效应细胞等。组合物包括但不限于药物组合物。“药物组合物”是指在药学上可接受或生理上可接受的溶液中配制的组合物，其单独地或与一种或多种其他治疗方式组合施用至细胞或动物。还应理解，如果需要，本公开文本的组合物也可以与其他药剂组合施用，所述其他药剂例如像细胞因子、生长因子、激素、小分子、化疗剂、前药、药物、抗体或其他各种药物活性剂。实际上对也可包含在所述组合物中的其他组分没有限制，前提是另外的药剂不会对所述组合物递送预期疗法的能力产生不利影响。
本文中采用的短语“药学上可接受的”是指在合理的医学判断的范围，适用于与人类和动物的组织接触而不产生过度毒性、刺激、过敏反应、或其他问题或并发症，同时具有相称的合理益处/风险比率的那些化合物、材料、组合物、和/或剂型。
如本文所用，“药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”包括但不限于由美国食品药品管理局批准为用于人类或家畜是可接受的任何佐剂、载体、赋形剂、助流剂、甜味剂、稀释剂、防腐剂、染料/着色剂、增味剂、表面活性剂、润湿剂、分散剂、助悬剂、稳定剂、等渗剂、溶剂、表面活性剂或乳化剂。示例性药学上可接受的载体包括但不限于糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素；黄芪胶；麦芽；明胶；滑石；可可脂、蜡类、动物和植物脂肪、石蜡、聚硅酮、皂土、硅酸、氧化锌；油，如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇如丙二醇；多元醇如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯类，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；无热原水；等渗生理盐水；林格氏溶液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及在药物配制品中使用的任何其他相容物质。
在特定实施方案中，本文呈现的组合物不包含本文所设想的表达CAR的免疫效应细胞的量。如本文所用，术语“量”是指用于实现有益或所需的预防或治疗结果(包括临床结果)的经基因修饰的治疗性细胞(例如，T细胞)的“有效的量”或“有效量”。
“预防有效量”是指有效地实现所需预防结果的经基因修饰的治疗性细胞的量。通常但不是必须的，因为预防剂量是在疾病之前或早期在受试者体内使用的，所以预防有效量小于治疗有效量。
经基因修饰的治疗性细胞的“治疗有效量”可以根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及干细胞和祖细胞在个体中引发所需应答的能力等因素而变化。治疗有效量还是治疗有益作用超过所述病毒或转导的治疗性细胞的任何毒性或有害作用的量。术语“治疗有效量”包括有效地“治疗”受试者(例如，患者)的量。当指示治疗量时，可以由医生在考虑患者(受试者)在年龄、体重、肿瘤大小、感染或转移程度和病症方面的个体差异的情况下来决定要施用的本公开文本的组合物的精确量。可概括地说，包含本文所述的T细胞的药物组合物可以以102至1010个细胞/kg体重、优选105至106个细胞/kg体重的剂量施用，包括那些范围内的所有整数值。细胞的数量将取决于所述组合物的所预期的最终用途以及其中包含的细胞类型。对于本文提供的用途，细胞的体积通常为1升或更少，可以是500mL或更少、甚至250mL或100mL或更少。因此，所需细胞的密度通常大于106个细胞/ml，并且通常大于107个细胞/ml、通常108个细胞/ml或更大。临床相关的免疫细胞数量可以被分配成多次输注，其累积等于或超过105、106、107、108、109、1010、1011或1012个细胞。在一些方面，特别是由于所有输注的细胞将被重定向至特定的靶抗原(例如，κ或λ轻链)，因此可以施用106/千克(106-1011/患者)范围内的较低数量的细胞。CAR表达细胞组合物可以以在这些范围内的剂量多次施用。对于接受疗法的患者，这些细胞可以是同种异体、同基因、异基因或自体的。如果需要，所述治疗还可以包括施用如本文所述的有丝分裂原(例如，PHA)或淋巴因子、细胞因子和/或趋化因子(例如，IFN-γ、IL-2、IL-12、TNF-α、IL-18和TNF-β、GM-CSF、IL-4、IL-13、Flt3-L、RANTES、MIP1α等)以增强免疫应答的诱导。
通常，包含如本文所述激活和扩增的细胞的组合物可以用于治疗和预防免疫功能低下的个体中出现的疾病。特别地，包含本文所设想的经CAR修饰的T细胞的组合物用于治疗肿瘤或癌症或用于治疗B细胞恶性肿瘤。本公开文本的经CAR修饰的T细胞可以单独施用，或作为与载体、稀释剂、赋形剂和/或其他组分(如IL-2或其他细胞因子或细胞群体)组合的药物组合物施用。在特定实施方案中，本文所设想的药物组合物包含与一种或多种药学上或生理学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂组合的一定量的经基因修饰的T细胞。
包含表达CAR的免疫效应细胞群体(如T细胞)的本公开文本的药物组合物可以包含缓冲液，如中性缓冲盐水、磷酸盐缓冲盐水等；碳水化合物，如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖、甘露醇；蛋白质；多肽或氨基酸，如甘氨酸；抗氧化剂；螯合剂，如EDTA或谷胱甘肽；助剂(例如，氢氧化铝)；和防腐剂。在某些方面，本公开文本的组合物被配制用于肠胃外施用，例如血管内(静脉内或动脉内)、腹膜内或肌肉内施用。
液体药物组合物，无论它们是溶液、悬浮液还是其他类似形式，均可包括以下中的一种或多种：无菌稀释剂(例如注射用水、盐水溶液，优选生理盐水、林格氏溶液、等渗氯化钠)，固定油(例如可用作溶剂或悬浮介质的合成甘油单酯或甘油二酯)，聚乙二醇，甘油，丙二醇或其他溶剂；抗细菌剂，例如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸；缓冲液，例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及用于调节张力的药剂，例如氯化钠或右旋糖。可以将肠胃外制剂封装在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。可注射药物组合物优选是无菌的。
在特定实施方案中，本文所设想的组合物包含单独的或与一种或多种治疗剂组合的有效量的表达CAR的免疫效应细胞。因此，表达CAR的免疫效应细胞组合物可以单独地施用或与其他已知癌症治疗(如放射疗法、化学疗法、移植、免疫疗法、激素疗法、光动力疗法等)组合施用。所述组合物也可以与抗生素组合施用。此类治疗剂可以在本领域中作为用于如本文所述的特定疾病状态(如特定癌症)的标准治疗被接受。所设想的示例性治疗剂包括细胞因子、生长因子、类固醇、NSAID、DMARD、抗炎药、化学治疗剂、放射治疗剂、治疗性抗体或其他活性剂和辅助剂。
在某些实施方案中，本文所公开的包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物可以与任何数量的化学治疗剂(例如，抗癌剂)组合施用至受试者。在某些实施方案中，在施用CART细胞疗法(例如，BCMA CAR T细胞疗法)之后将化学治疗剂(例如，抗癌剂)施用至受试者，条件是出现了在本文其他地方所述的表明CAR T细胞疗法对受试者没有治疗益处的某些情况。化学治疗剂的说明性例子包括烷基化剂，如噻替哌和环磷酰胺(CYTOXANTM)；烷基磺酸盐，如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶，如苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌、美妥替哌和乌瑞替哌；乙烯亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、曲他胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲蜜胺恢复；氮芥，如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、二氯甲基二乙胺(mechlorethamine)、盐酸氧化氮芥、美法仑(例如，盐酸美法仑)、新恩比兴、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、乌拉莫司汀；硝基脲，如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司汀；抗生素，如阿克拉霉素、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素(cactinomycin)、卡奇霉素、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、更生霉素、道诺霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星、链黑菌素、链脲霉素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星；抗代谢物，如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物，如二甲叶酸、甲氨喋呤、喋罗呤、三甲曲沙；嘌呤类似物，如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、脱氧氟尿苷、伊诺他滨、氟尿苷、5-FU；雄激素，如卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯；抗肾上腺素，如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦；叶酸补充剂，如亚叶酸；醋葡醛内酯；醛磷酰胺糖苷；氨基乙酰丙酸；安吖啶；阿莫司汀(bestrabucil)；比生群；伊达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺；地美可辛；亚丝醌；依氟鸟氨酸；依利醋铵；依托格鲁；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖；氯尼达明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌达醇；硝基可润；喷司他丁；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙酰肼；丙卡巴肼；雷佐生；西索菲兰；锗螺胺；细交链孢菌酮酸；三亚胺醌；2,2',2”-三氯三乙胺；乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴卫矛醇；哌泊溴烷；加胞嘧啶(gacytosine)；阿拉伯糖苷(“阿糖胞苷”)；环磷酰胺；噻替哌；紫杉烷，例如紫杉醇(Bristol-Myers Squibb Oncology，新泽西州普林斯顿)和多烯紫杉醇(Rhone-Poulenc Rohrer，法国安东尼)；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，如顺铂和卡铂；长春花碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；诺维苯；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤；希罗达；伊班膦酸盐；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸衍生物，如TargretinTM(蓓萨罗丁)、PanretinTM(阿利维A酸)；ONTAKTM(地尼白介素)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；卡培他滨；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。该定义中还包括用于调节或抑制对癌症的激素作用的抗激素剂，诸如抗雌激素，包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制芳香酶的4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、凯奥昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬(Fareston)；和抗雄激素，如氟他米特、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，可以将如本文所公开的包含表达CAR的免疫效应细胞(例如，表达靶向BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，例如idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞)的组合物与作为维持疗法的来那度胺组合施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg、5mg、10mg、15mg、20mg或25mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量将所述来那度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-28天以每日一次约10mg的剂量连续施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约2.5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约5mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约10mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以以每隔一天约15mg的剂量施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约25mg的剂量口服施用所述来那度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每日一次约20mg的剂量口服施用所述来那度胺，持续多达12个周期。在某些实施方案中，建议所有患者使用来那度胺维持疗法。在某些实施方案中，来那度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，可以将如本文所公开的包含表达CAR的免疫效应细胞(例如，表达靶向BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，例如idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞)的组合物与作为维持疗法的泊马度胺组合施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以以每日一次约1mg、2mg、3mg或4mg的剂量施用所述泊马度胺。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量口服施用所述泊马度胺，直到疾病进展。在某些实施方案中，可以在重复的28天周期的第1-21天以每天约4mg的剂量将所述泊马度胺口服施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)，直到疾病进展。在某些实施方案中，建议所有患者使用泊马度胺维持疗法。在某些实施方案中，泊马度胺维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，可以将如本文所公开的包含表达CAR的免疫效应细胞(例如，表达靶向BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，例如idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞)的组合物与作为维持疗法的CC-220(伊贝度胺)组合施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以口服施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述CC-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述CC-220施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)。在某些实施方案中，建议所有患者使用CC-220维持疗法。在某些实施方案中，所述CC-220维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
在某些实施方案中，在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后，可以将如本文所公开的包含表达CAR的免疫效应细胞(例如，表达靶向BCMA的嵌合抗原受体(CAR)的免疫细胞(BCMA CAR T细胞)，例如idecabtagene vicleucel(ide-cel)细胞)的组合物与作为维持疗法的CC-220(伊贝度胺)和地塞米松组合施用至受试者。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述CC-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后立即施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述CC-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1周、2周、3周或4周施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述CC-220和地塞米松。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在施用包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物之后1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月或12个月施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约0.15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约40mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以口服施用所述CC-220。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述CC-220，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以口服施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以以约20-60mg的剂量施用所述地塞米松。在某些实施方案中，可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以在28天周期的21天内(例如在28天周期的第1-21天每日)以每日约15mg、0.3mg、0.45mg、0.6mg、0.75mg、0.9mg、1.0mg、1.1mg或1.2mg的剂量口服施用所述CC-220，并且根据需要重复28天周期，并且可以在28天周期的第1、8、15和22天以约20mg、25mg、30mg、35mg、40mg、45mg、50mg、55mg或60mg的剂量口服施用所述地塞米松，并且根据需要重复28天周期。在某些实施方案中，可以将所述CC-220和地塞米松施用至受试者以治疗多发性骨髓瘤(MM)。在某些实施方案中，建议所有患者使用CC-220和地塞米松维持疗法。在某些实施方案中，所述CC-220和地塞米松维持疗法应在充分的骨髓恢复时或从ide-cel输注后90天开始，以较晚者为准。
多种其他治疗剂可以与本文所述的组合物组合使用。在一个实施方案中，将包含表达CAR的免疫效应细胞的组合物与抗炎剂一起施用。抗炎剂或抗炎药包括但不限于类固醇和糖皮质激素(包括倍他米松、布地奈德、地塞米松、醋酸氢化可的松、氢化可的松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙、泼尼松、曲安奈德)、非甾体抗炎药(NSAID)(包括阿司匹林、布洛芬、萘普生、甲氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、来氟米特)、抗TNF药物、环磷酰胺和霉酚酸酯。
其他示例性NSAID选自布洛芬、萘普生、萘普生钠、Cox-2抑制剂(如(罗非昔布)和/>(塞来昔布))以及唾液酸盐。示例性镇痛剂选自对乙酰氨基酚、羟考酮、曲马多和盐酸丙氧芬。示例性糖皮质激素选自可的松、地塞米松、氢化可的松、甲基泼尼松龙、泼尼松龙和泼尼松。示例性生物反应调节剂包括针对细胞表面标记物(例如，CD4、CD5等)的分子、细胞因子抑制剂(如TNF拮抗剂(例如，依那西普(/>)、阿达木单抗()和英夫利昔单抗(/>))、趋化因子抑制剂和粘附分子抑制剂。所述生物反应调节剂包括单克隆抗体和重组形式的分子。示例性DMARD包括硫唑嘌呤、环磷酰胺、环孢霉素、甲氨蝶呤、青霉胺、来氟米特、柳氮磺胺吡啶、羟基氯喹、Gold(口服(金诺芬)和肌肉内)和米诺环素。
适合于与本文所设想的经CAR修饰的T细胞组合的治疗性抗体的说明性例子包括但不限于巴维昔单抗、贝伐单抗(安维汀)、比伐珠单抗、博纳吐单抗、可那木单抗、达雷木单抗、度戈妥珠单抗、达西组单抗、达雷妥尤单抗、埃罗妥珠单抗(HuLuc63)、吉妥珠单抗、替伊莫单抗、雷英妥昔单抗、奥英妥珠单抗、洛沃妥珠单抗、卢卡木单抗、米拉组单抗、帕克莫单抗、奥卡妥珠单抗、奥法木单抗、利妥昔单抗、司妥昔单抗、替妥木单抗和乌妥昔单抗。
针对PD-1或PD-L1和/或CTLA-4的抗体可以与本文所公开的CAR T细胞(例如，BCMACAR T细胞，例如表达包含BCMA-2单链Fv片段的嵌合抗原受体的CAR T细胞，例如idecabtagene vicluel细胞)组合使用。在特定实施方案中，所述PD-1抗体选自：纳武单抗、派姆单抗和匹地利珠单抗。在特定实施方案中，所述PD-L1抗体选自：阿特朱单抗、阿维鲁单抗、度伐单抗和BMS-986559。在特定实施方案中，所述CTLA-4抗体选自伊匹单抗和曲美木单抗。
在某些实施方案中，将本文所述的组合物与细胞因子组合施用。如本文所用的“细胞因子”意指由一个细胞群释放的作为细胞间介体作用于另一种细胞的蛋白质的通用术语。此类细胞因子的例子是淋巴因子、单核因子和传统的多肽激素。细胞因子包括生长激素，如人生长激素、N-甲硫氨酰基人生长激素和牛生长激素；甲状旁腺激素；甲状腺素；胰岛素；胰岛素原；松弛素；松弛素原；糖蛋白激素，如卵泡刺激素(FSH)、甲状腺刺激素(TSH)和黄体化激素(LH)；肝生长因子；成纤维细胞生长因子；泌乳素；胎盘催乳素；肿瘤坏死因子-α和-β；缪勒抑制物质；小鼠促性腺激素相关肽；抑制素；激活素；血管内皮生长因子；整合素；血小板生成素(TPO)；神经生长因子，如NGF-β；血小板生长因子；转化生长因子(TGF)，如TGF-α和TGF-β；胰岛素样生长因子-I和-II；促红细胞生成素(EPO)；骨诱导因子；干扰素，如干扰素-α、-β和-γ；集落刺激因子(CSF)，如巨噬细胞-CSF(M-CSF)；粒细胞-巨噬细胞-CSF(GM-CSF)；和粒细胞-CSF(G-CSF)；白细胞介素(IL)，如IL-1、IL-1α、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-15、IL-21；肿瘤坏死因子，如TNF-α或TNF-β；以及其他多肽因子，包括LIF和kit配体(KL)。如本文所用，术语细胞因子包括来自天然来源或来自重组细胞培养物的蛋白质，以及天然序列细胞因子的生物活性等同物。
在某些实施方案中，将本文所述的组合物与用于治疗细胞因子释放综合征(CRS)的疗法组合施用。CRS是可能在施用某些生物治疗剂(例如表达嵌合抗原受体的T细胞或NK细胞(CAR T细胞或CAR NK细胞)，例如BCMA CAR T细胞)后发生的全身性炎性免疫应答。如下所示，CRS可以与细胞因子风暴区别开，细胞因子风暴是具有类似临床表型和生物标记物特征的病症。在CRS中T细胞在识别肿瘤抗原时被激活，而在细胞因子风暴中免疫系统的激活与肿瘤靶向无关；在CRS中IL-6是关键介导物，因此可以使用抗IL-6或抗IL-6受体(IL-6R)抑制剂缓解症状，而在细胞因子风暴中肿瘤坏死因子α(TNFα)和干扰素γ(IFNγ)是关键介导物，并且可以施用抗炎疗法(例如，皮质类固醇)缓解症状。抗IL-6受体(IL-6R)抗体(如托珠单抗)可以用于管理CRS，任选地使用支持性护理。抗IL-6抗体(如司妥昔单抗)可以另外地或可替代地用于管理CRS，任选地使用支持性护理。如果输注了CAR T细胞或CAR NK细胞的患者显示出1级、2级、3级或4级CRS中的任一种，但通常保留更高分级(例如3级或4级)，则可以使用IL-6阻断(例如，使用抗IL-6R抗体或抗IL-6抗体)。可以施用皮质类固醇以管理伴随CRS或由CRS引起的神经毒性，或将皮质类固醇施用至用IL-6阻断治疗的患者，但通常不用作CRS的一线治疗。用于管理CRS的其他方式描述于例如Shimabukuro-Vornhagen等人,“Cytokine Release Syndrome,”J.Immunother.Cancer 6:56(2018)中。
表4：可以使用Penn分级量表对CRS分级：
表5：也可以通过CTCAE(美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准)v4.0对CRS分级：
表6：CRS也可通过Lee等人的系统(“Current concepts in the diagnosis andmanagement of cytokine release syndrome,”Blood,2014,124:188–195)进行分级
在特定实施方案中，组合物包含本文所设想的在如本文所公开的PI3K抑制剂的存在下培养并表达以下一种或多种标记物的CAR T细胞：CD3、CD4、CD8、CD28、CD45RA、CD45RO、CD62、CD127和HLA-DR，其可以通过阳性或阴性选择技术进一步分离。在一个实施方案中，组合物包含表达选自以下的一种或多种标记物的特定T细胞亚群：CD62L、CCR7、CD28、CD27、CD122、CD127、CD197；和CD38或CD62L、CD127、CD197和CD38，其通过阳性或阴性选择技术进一步分离。在各种实施方案中，组合物不表达或基本上不表达以下一种或多种标记物：CD57、CD244、CD160、PD-1、CTLA4、TIM3和LAG3。
在一个实施方案中，与未使用PI3K抑制剂的情况下激活和扩增的T细胞群体相比，选自CD62L、CD127、CD197和CD38的一种或多种标记物的表达增加至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍或更多倍。
在一个实施方案中，与在使用PI3K抑制剂的情况下激活和扩增的T细胞群体相比，选自CD57、CD244、CD160、PD-1、CTLA4、TIM3和LAG3的一种或多种标记物的表达降低至少1.5倍、至少2倍、至少3倍、至少4倍、至少5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、至少10倍、至少25倍或更多倍。
6.10.治疗方法
本文所设想的经基因修饰的免疫效应细胞提供了用于治疗肿瘤或癌症或用于治疗B细胞相关病症的过继免疫疗法的改进方法，所述B细胞相关病症包括但不限于免疫调节病症和血液恶性肿瘤。
6.10.1.一般实施方案
在特定实施方案中，通过用本文所设想的CAR对初级免疫效应细胞进行基因修饰，将初级免疫效应细胞的特异性重定向至肿瘤或癌症。在各种实施方案中，使用病毒载体用编码CAR的特定多核苷酸对免疫效应细胞进行基因修饰，所述CAR包含结合抗原(例如，肿瘤抗原)的结构域；铰链结构域；跨膜(TM)结构域；短的寡肽或多肽接头，其将TM结构域与CAR的细胞内信号传导结构域连接；和一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域；以及初级信号传导结构域。
在特定实施方案中，通过用本文所设想的CAR对初级免疫效应细胞进行基因修饰，将初级免疫效应细胞的特异性重定向至B细胞。在各种实施方案中，使用病毒载体用编码CAR的特定多核苷酸对免疫效应细胞进行基因修饰，所述CAR包含结合BCMA多肽(例如，人BCMA多肽)的鼠抗BCMA抗原结合结构域；铰链结构域；跨膜(TM)结构域；短的寡肽或多肽接头，其将TM结构域与CAR的细胞内信号传导结构域连接；和一个或多个细胞内共刺激信号传导结构域；以及初级信号传导结构域。
在一个实施方案中，包括一种类型的细胞疗法，其中T细胞经基因修饰以表达靶向肿瘤或癌细胞的CAR。在另一个实施方案中，在IL-2和PI3K抑制剂的存在下培养CAR T细胞，以增加CAR T细胞的治疗特性和持久性。然后将所述CAR T细胞输注至有需要的接受者。输注的细胞能够杀伤接受者中的致病肿瘤或癌细胞。与抗体疗法不同，CAR T细胞能够在体内复制，从而产生长期持久性，从而导致持续的癌症疗法。
在一个实施方案中，包括一种类型的细胞疗法，其中T细胞经基因修饰以表达靶向表达BCMA的B细胞的CAR。在另一个实施方案中，在IL-2和PI3K抑制剂的存在下培养所述抗BCMA CAR T细胞，以增加CAR T细胞的治疗特性和持久性。然后将所述CAR T细胞输注至有需要的接受者。输注的细胞能够杀伤所述接受者中的致病B细胞。与抗体疗法不同，CAR T细胞能够在体内复制，从而产生长期持久性，从而导致持续的癌症疗法。
在一个实施方案中，所述CAR T细胞可以在体内经历稳健的T细胞扩增，并且可以持续延长的时间。在另一个实施方案中，所述CAR T细胞进化为特异性记忆T细胞，其可以被重新激活以抑制任何另外的肿瘤形成或生长。
在特定实施方案中，包含含有本文所设想的CAR的免疫效应细胞的组合物用于治疗肿瘤或癌症。
在特定实施方案中，包含含有本文所设想的CAR的免疫效应细胞的组合物用于治疗与异常B细胞活性相关的病症。
可以使用包含本文所设想的CAR的免疫效应细胞来治疗、预防或改善的病症的说明性例子包括但不限于：系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、重症肌无力、自身免疫性溶血性贫血、特发性血小板减少性紫癜、抗磷脂综合征、恰加斯病、格雷夫病、韦格纳肉芽肿、结节性多动脉炎、舍格伦综合征、寻常天疱疮、硬皮病、多发性硬化、抗磷脂综合征、ANCA相关性血管炎、古德帕斯丘病(Goodpasture's disease)、川崎病和快速进展性肾小球性肾炎。
经修饰的免疫效应细胞也可以用于浆细胞障碍，如重链疾病、原发性或免疫细胞相关淀粉样变性和意义未明的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)。
如本文所用，“B细胞恶性肿瘤”是指在如下文讨论的B细胞(一种免疫系统细胞类型)中形成的一种类型的癌症。
在特定实施方案中，包含本文所设想的经CAR修饰的T细胞的组合物用于治疗血液恶性肿瘤，包括但不限于B细胞恶性肿瘤，例如像多发性骨髓瘤(MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)。
多发性骨髓瘤是成熟浆细胞形态的B细胞恶性肿瘤，其特征在于这些细胞类型的单个克隆的致瘤性转化。这些浆细胞在骨髓(BM)中增殖，并且可能侵袭邻近的骨骼切有时甚至侵袭血液。多发性骨髓瘤的变体形式包括显性多发性骨髓瘤、冒烟型多发性骨髓瘤、浆细胞白血病、非分泌性骨髓瘤、IgD骨髓瘤、骨硬化性骨髓瘤、骨孤立性浆细胞瘤和髓外浆细胞瘤(参见例如，Braunwald等人(编辑),Harrison’s Principles of Internal Medicine,第15版(McGraw-Hill 2001))。
多发性骨髓瘤的分期如下：
表7：Durie-Salmon MM分期标准
表8：国际分期系统MM分期标准
非霍奇金淋巴瘤包括一大类淋巴细胞(白细胞)的癌症。非霍奇金淋巴瘤可以发生在任何年龄，并且通常以淋巴结比正常值大、发热和体重减轻为特征。有许多不同类型的非霍奇金淋巴瘤。例如，非霍奇金淋巴瘤可以分为侵袭性(快速生长)和惰性(缓慢生长)类型。尽管非霍奇金淋巴瘤可以源自B细胞和T细胞，如本文所用，术语“非霍奇金淋巴瘤”和“B细胞非霍奇金淋巴瘤”可以互换使用。B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)包括伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤和套细胞淋巴瘤。在骨髓或干细胞移植之后发生的淋巴瘤通常是B细胞非霍奇金淋巴瘤。
慢性淋巴细胞白血病(CLL)是惰性(缓慢生长)癌症，其导致称为B淋巴细胞或B细胞的不成熟白细胞的缓慢增加。癌细胞通过血液和骨髓传播，并且影响淋巴结或其他器官，如肝脏和脾脏。CLL最终导致骨髓衰竭。有时，在所述疾病的后期，所述疾病被称为小淋巴细胞淋巴瘤。
在特定实施方案中，提供了包括向有需要的患者单独地或与一种或多种治疗剂组合施用治疗有效量的本文所设想的表达CAR的免疫效应细胞或包含其的组合物的方法。在某些实施方案中，本公开文本的细胞用于治疗有风险患上肿瘤或癌症的患者。因此，在某些实施方案中，本文提供了用于治疗或预防肿瘤或癌症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所设想的经CAR修饰的细胞。在某些其他实施方案中，本公开文本的细胞用于治疗有风险患上与异常B细胞活性或B细胞恶性肿瘤相关的病症的患者。因此，在某些其他实施方案中，本文提供了用于治疗或预防与异常B细胞活性或B细胞恶性肿瘤相关的病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所设想的经CAR修饰的细胞。
如本文所用，术语“个体”和“受试者”通常可互换使用并且是指展现出可使用本文其他地方所公开的基因疗法载体、基于细胞的治疗剂和方法治疗的疾病、障碍或病症的症状的任何动物。在具体实施方案中，受试者包括展现出可使用本文其他地方所公开的基因疗法载体、基于细胞的治疗剂和方法治疗的肿瘤或癌症的症状的任何动物。在具体实施方案中，受试者包括展现出可使用本文其他地方所公开的基因疗法载体、基于细胞的治疗剂和方法治疗的造血系统的疾病、障碍或病症(例如，B细胞恶性肿瘤)的症状的任何动物。合适的受试者(例如，患者)包括实验动物(如小鼠、大鼠、兔子或豚鼠)、农场动物和家养动物或宠物(如猫或狗)。包括非人灵长类动物并且优选人患者。典型的受试者包括患有肿瘤或癌症、被诊断患有肿瘤或癌症、或有风险患上肿瘤或癌症的人患者。典型的受试者还包括患有B细胞恶性肿瘤、被诊断患有B细胞恶性肿瘤、或有风险患上B细胞恶性肿瘤的人患者。
如本文所用，术语“患者”是指已被诊断患有可使用本文其他地方所公开的基因疗法载体、基于细胞的治疗剂和方法治疗的特定疾病、障碍或病症的症状的受试者。
如本文所用，“治疗”(“treatment”或“treating”)包括对疾病或病理状态的症状或病理学的任何有益或期望的作用，并且甚至可以包括正在治疗的疾病或病症的一种或多种可测量标记物的最小降低。治疗可以任选地包括降低或改善所述疾病或病症的症状，或者延迟所述疾病或病症的进展。“治疗”不一定指示所述疾病或病症或其相关症状的完全根除或治愈。
如本文所用，“预防”和类似词语如“预防”(“prevented”、“preventing”)等表示用于预防、抑制疾病或病症的发生或复发或者降低所述疾病或病症的发生或复发的可能性的方法。其还指延迟疾病或病症的发作或复发，或者延迟疾病或病症的症状的发生或复发。如本文所用，“预防”和类似词语还包括在所述疾病或病症的发作或复发之前降低疾病或病症的强度、影响、症状和/或负荷。
“增强”或“促进”或“增加”或“扩增”通常是指本文所设想的组合物(例如，编码CAR的经基因修饰的T细胞或载体)产生、引发或引起与由媒介物或对照分子/组合物引起的反应相比更大的生理反应(即下游效应)。可测量的生理反应可以包括T细胞扩增、激活、持久性的增加和/或癌细胞杀伤能力的增加，以及从本领域的理解和本文的描述中看出的。“增加”或“增强”的量通常是“统计学上显著的”量，并且可以包括由媒介物或对照组合物产生的反应的1.1、1.2、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30倍或更多倍(例如，500、1000倍)(包括其间和高于1的所有整数和小数点，例如，1.5、1.6、1.7、1.8等)的增加。
“减少”或“降低”或“减轻”或“减小”或“减弱”通常是指本文所设想的组合物产生、引发或引起与由媒介物或对照分子/组合物引起的反应相比较小的生理反应(即下游效应)的能力。“减少”或“减小”的量通常是“统计学上显著的”量，并且可以包括由媒介物、对照组合物产生的反应或在特定细胞谱系中的反应的1.1、1.2、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、30倍或更多倍(例如，500、1000倍)(包括其间和高于1的所有整数和小数点，例如，1.5、1.6、1.7、1.8等)的减少。
“维持(maintain)”或“保持”或“维持(maintenance)”或“无变化”或“基本不变”或“基本不减少”通常是指本文所设想的组合物在细胞中产生、引发或引起与由媒介物、对照分子/组合物引起的反应或在特定细胞谱系中的反应相比基本相似的生理反应(即下游效应)的能力。可比较的反应是与参考反应没有显著差异或可测量的差异的反应。
在一个实施方案中，治疗有需要的受试者中的肿瘤或癌症的方法包括施用有效量(例如，治疗有效量)的包含本文所设想的经基因修饰的免疫效应细胞的组合物。施用的量和频率将根据诸如以下的因素来确定：患者的状况，以及患者疾病的类型和严重程度，但适当剂量可通过临床试验来确定。
在一个实施方案中，治疗有需要的受试者中的B细胞相关病症的方法包括施用有效量(例如，治疗有效量)的包含本文所设想的经基因修饰的免疫效应细胞的组合物。施用的量和频率将根据诸如以下的因素来确定：患者的状况，以及患者疾病的类型和严重程度，但适当剂量可通过临床试验来确定。
在一个实施方案中，施用至受试者的组合物中T细胞的量是至少0.1x 105个细胞、至少0.5x 105个细胞、至少1x 105个细胞、至少5x 105个细胞、至少1x 106个细胞、至少0.5x107个细胞、至少1x 107个细胞、至少0.5x 108个细胞、至少1x 108个细胞、至少0.5x 109个细胞、至少1x 109个细胞、至少2x 109个细胞、至少3x 109个细胞、至少4x 109个细胞、至少5x 109个细胞或至少1x 1010个细胞。在特定实施方案中，向受试者施用约1x 107个CAR T细胞至约1x 109个CAR T细胞、约2x 107个CAR T细胞至约0.9x 109个CAR T细胞、约3x 107个CAR T细胞至约0.8x 109个CAR T细胞、约4x 107个CAR T细胞至约0.7x 109个CAR T细胞、约5x 107个CAR T细胞至约0.6x 109个CAR T细胞或约5x 107个CAR T细胞至约0.5x 109个CAR T细胞。
在一个实施方案中，施用至受试者的组合物中T细胞的量是至少0.1x 104个细胞/kg体重、至少0.5x 104个细胞/kg体重、至少1x 104个细胞/kg体重、至少5x 104个细胞/kg体重、至少1x 105个细胞/kg体重、至少0.5x 106个细胞/kg体重、至少1x 106个细胞/kg体重、至少0.5x 107个细胞/kg体重、至少1x 107个细胞/kg体重、至少0.5x 108个细胞/kg体重、至少1x108个细胞/kg体重、至少2x 108个细胞/kg体重、至少3x 108个细胞/kg体重、至少4x 108个细胞/kg体重、至少5x 108个细胞/kg体重或至少1x 109个细胞/kg体重。在特定实施方案中，向受试者施用约1x 106个CAR T细胞/kg体重至约1x 108个CAR T细胞/kg体重、约2x 106个CAR T细胞/kg体重至约0.9x 108个CAR T细胞/kg体重、约3x 106个CAR T细胞/kg体重至约0.8x 108个CAR T细胞/kg体重、约4x 106个CAR T细胞/kg体重至约0.7x108个CAR T细胞/kg体重、约5x 106个CAR T细胞/kg体重至约0.6x 108个CAR T细胞/kg体重或约5x 106个CAR T细胞/kg体重至约0.5x 108个CAR T细胞/kg体重。
本领域普通技术人员将认识到，可能需要多次施用本公开文本的组合物以实现所需的疗法。例如，组合物可以在1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、1年、2年、5年、10年或更长时间的时间跨度内施用1、2、3、4、5、6、7、8、9或10次或更多次。
在某些实施方案中，可能需要向受试者施用激活的免疫效应细胞，然后重新抽取血液(或进行单采术)，根据本公开文本激活来自所述血液的免疫效应细胞，并向所述患者再输注这些激活和扩增的免疫效应细胞。此过程可以每几周进行多次。在某些实施方案中，可以从10cc至400cc的抽取血液激活免疫效应细胞。在某些实施方案中，从20cc、30cc、40cc、50cc、60cc、70cc、80cc、90cc、100cc、150cc、200cc、250cc、300cc、350cc或400cc或更多的抽取血液激活免疫效应细胞。不受理论限制，使用这种多次抽血/多次再输注方案可以有助于筛选出特定免疫效应细胞群体。
本文所设想的组合物的施用可以任何便捷方式来实施，包括通过气溶胶吸入、注射、摄入、输液、植入或移植来实施。在一个实施方案中，通过肠胃外施用组合物。如本文所用的短语“肠胃外的施用”和“肠胃外地施用”是指除肠内和局部施用以外的施用方式，通常通过注射并且包括但不限于血管内、静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、肿瘤内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、以及胸骨内注射和输注。在一个实施方案中，通过直接注射至肿瘤、淋巴结或感染部位向受试者施用本文所设想的组合物。
在一个实施方案中，向有需要的受试者施用有效量的组合物以增加所述受试者中对肿瘤或癌症的细胞免疫应答。所述免疫应答可以包括由能够杀伤感染的细胞的细胞毒性T细胞介导的细胞免疫应答、调节性T细胞和辅助性T细胞应答。也可以诱导体液免疫应答，其主要由能够激活B细胞从而导致抗体产生的辅助性T细胞介导。多种技术可以用于分析由本公开文本的组合物诱导的免疫应答的类型，所述技术在本领域中有充分描述；例如Current Protocols in Immunology,由John E.Coligan,Ada M.Kruisbeek,DavidH.Margulies,Ethan M.Shevach,Warren Strober编(2001)John Wiley&Sons,NY,N.Y.。
在一个实施方案中，向有需要的受试者施用有效量的组合物以增加所述受试者中对B细胞相关病症的细胞免疫应答。所述免疫应答可以包括由能够杀伤感染的细胞的细胞毒性T细胞介导的细胞免疫应答、调节性T细胞和辅助性T细胞应答。也可以诱导体液免疫应答，其主要由能够激活B细胞从而导致抗体产生的辅助性T细胞介导。多种技术可以用于分析由本公开文本的组合物诱导的免疫应答的类型，所述技术在本领域中有充分描述；例如Current Protocols in Immunology,由John E.Coligan,Ada M.Kruisbeek,DavidH.Margulies,Ethan M.Shevach,Warren Strober编(2001)John Wiley&Sons,NY,N.Y.。
在T细胞介导的杀伤的情况下，CAR配体结合启动了向所述T细胞的CAR信号传导，从而激活多种T细胞信号传导途径，其诱导T细胞产生或释放能够通过多种机制诱导靶细胞凋亡的蛋白质。这些T细胞介导的机制包括(但不限于)细胞内细胞毒性颗粒从所述T细胞转移到靶细胞、T细胞分泌可直接地(或经由招募其他杀伤效应细胞间接地)诱导靶细胞杀伤的促炎性细胞因子、以及T细胞表面的死亡受体配体(例如FasL)的上调，所述死亡受体配体在与靶细胞上其同源死亡受体(例如Fas)结合后诱导靶细胞凋亡。
在一个实施方案中，本文提供了一种治疗被诊断患有肿瘤或癌症的受试者的方法，所述方法包括从被诊断患有肿瘤或癌症的受试者移取免疫效应细胞、用包含编码如本文所设想的CAR的核酸的载体对所述免疫效应细胞进行基因修饰从而产生经修饰的免疫效应细胞群体、以及将所述经修饰的免疫效应细胞群体施用至同一受试者。在特定实施方案中，所述免疫效应细胞包括T细胞。
在一个实施方案中，本文提供了一种治疗被诊断患有B细胞相关病症的受试者的方法，所述方法包括从被诊断患有表达BCMA的B细胞相关病症的受试者移取免疫效应细胞、用包含编码如本文所设想的CAR的核酸的载体对所述免疫效应细胞进行基因修饰从而产生经修饰的免疫效应细胞群体、以及将所述经修饰的免疫效应细胞群体施用至同一受试者。在特定实施方案中，所述免疫效应细胞包括T细胞。
在某些实施方案中，本文还提供了用于在受试者中刺激免疫效应细胞介导的对靶细胞群体的免疫调节剂反应的方法，所述方法包括向所述受试者施用表达编码CAR分子的核酸构建体的免疫效应细胞群体的步骤。
用于施用本文所述的细胞组合物的方法包括如下任何方法，所述方法有效地导致离体再引入直接在所述受试者中表达本公开文本的CAR的经基因修饰的免疫效应细胞，或者再引入免疫效应细胞的经基因修饰的祖细胞，其在引入受试者中后分化为表达CAR的成熟免疫效应细胞。一种方法包括用根据本公开文本的核酸构建体离体转导外周血T细胞，并将转导的细胞返回至所述受试者中。
将本说明书中引用的所有出版物、专利申请和已发布的专利通过引用以其整体并入于此，其程度如同特别且单独地指出通过引用并入每个单独的出版物、专利申请或已发布的专利。
尽管出于清楚理解的目的已经通过说明和实施例详细地描述了前述发明，但是根据本发明的传授内容，本领域普通技术人员将容易清楚的是，可以在不脱离所附权利要求的精神或范围的情况下对其进行某些改变和修改。仅通过说明的方式而不是通过限制的方式，提供以下实施例。本领域技术人员将容易认识到多种非关键参数，可以改变或修改这些参数以产生本质上相似的结果。
7.实施例
7.1.实施例1：示例性BCMA CAR的构建
含有抗BCMA scFv抗体的CAR被设计为含有与抗BMCA scFv可操作地连接的MND启动子、来自CD8α的铰链和跨膜结构域以及CD137共刺激结构域、然后是CD3ζ链的细胞内信号传导结构域。参见例如图1。还参见国际专利号WO 2016/094304，将其通过引用以其整体并入本文，特别地并入了BCMA CAR及其特征的公开内容。图1所示的BCMA CAR包含用于在免疫效应细胞上表面表达的CD8α信号肽(SP)序列。示例性BCMA CAR的多核苷酸序列如SEQ IDNO:10(抗BCMA02 CAR的多核苷酸序列)中所示；BCMA CAR的示例性多肽序列如SEQ ID NO:9(抗BCMA02-CAR的多肽序列)中所示；并且示例性CAR构建体的载体位置示于图1。表9显示了如图1所示的包含BCMA CAR构建体的BCMA CAR慢病毒载体的各种核苷酸区段的身份、GenBank参考(在适用的情况下)、来源名称和引用。
表9.
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7.2实施例2：先前烷基化疗法对后期线的多发性骨髓瘤中CAR T细胞产物制造起始材料和输注前患者特征的影响
在后期线的多发性骨髓瘤中研究抗BCMA CAR T细胞疗法idecabtagenevicleucel(bb2121)的2期关键KarMMa试验(NCT03361748)中，80％的患者具有在干细胞移植方案之外使用≥1种烷基化剂进行先前抗癌治疗的病史。在这项2期KarMMa试验(NCT03361748)的回顾性分析中，鉴定了从最后一剂一种或多种烷基化剂到单采用于CAR T细胞制造的PBMC的时间相关的患者和PBMC特征。
方法：从患者单采术材料中分离的PBMC作为CAR T细胞制造的起始材料，对其针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物通过多色流式细胞术进行免疫表型分型。收集来自相关预先指定的临床和探索终点的数据，并且使用左删失时间-事件分析的新颖实现方式(Biometrics,1976,32:459-463)鉴定先前烷化剂(涵盖苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌)暴露后清除时间与患者和PBMC变量之间的统计学显著关系。与干细胞移植相关的烷基化剂暴露被排除在该分析之外。由于患者病史注释较少，未考虑先前烷化剂的剂量。为每个变量鉴定了最佳分界点，使分界点之上和之下的患者之间接受烷化剂的比例危险最大化，并调整P值以检验多个分界点。通过非参数相关性验证了这些关系，其中烷化剂清除被编码为1/log(-清除)。
结果：图2A示出了新颖的反转时间-事件模型，该模型广泛适用于捕获目的变量与药物暴露之间的关系，并鉴定了所述患者和PBMC变量与自2期KarMMa试验入组前最后一次暴露于烷基化剂起的时间相关。表格列出了每个时间间隔暴露于烷基化剂的患者数量。在y轴上“未暴露的分数”是指在x轴上指示的时间尚未暴露于烷基化剂的患者的比例。由于时间是反转的，x轴应该从右向左读，例如，从第0天移动到第180天在时间上是向后移动的。在单采术前365天(图2A右侧)，<20％ PBMC的70％受试者尚未暴露于烷基化剂，而≥20％PBMC的大约35％-40％受试者尚未暴露于烷基化剂。随着单采术日的临近(即向左)，更多数量的受试者将暴露于烷基化剂，并且这些百分比继续下降。在单采术当天，假定所有受试者都已暴露，因此曲线在第0天(单采术)收敛为零。标记为“之下：CD3+<20％的PBMC”的曲线高于标记为“之上：CD3+≥20％的PBMC”的曲线，表明“之下：CD3+<20％的PBMC”曲线中的受试者更最近地先前暴露于烷基化剂。换言之，在标记为“之下：CD3+<20％的PBMC”的曲线中的受试者已暴露于烷基化剂的可能性是标记为“之上：CD3+≥20％的PBMC”的曲线中的患者的2.28倍。
更最近暴露于烷基化剂(诊断后但单采术前)与患者每年接受更多的先前疗法以管理其疾病(危险比[HR]＝2.63，ρ＝-0.54，P<0.0001)、身体质量指数更低(HR＝0.93，ρ＝0.27，P＝0.0021)、以及基线时铁蛋白水平更高(log标度的HR＝1.33，ρ＝-0.31，P＝0.0004)相关。另外具有更最近烷化剂暴露的患者其PBMC材料中具有更少的T细胞(HR＝2.28，ρ＝0.24，P＝0.0068；图2A和图2B)，以及具有更多的CD8+效应记忆(TEM)(CCR7-/CD45RA-)和更少的CD8+效应记忆RA(TEMRA)(CCR7-/CD45RA+)T细胞(对应地，HR＝1.02和0.98，ρ＝-0.2和0.21，P＝0.023和0.016)。图2B提供了使用所编码的清除的斯皮尔曼系数，表明更最近的烷化剂暴露与更少的CD3+细胞相关。PBMC中T细胞<20％的患者已先前暴露于烷化剂的可能性为2.3倍。相对于从未接受过烷化剂的患者，在最后一剂此类药物后长达9个月，可检测到患者PBMC的CD3+T细胞占比中值减少50％。在评价PBMC中T细胞分数与每年疗法数量和烷化剂清除期之间相关性的多变量模型中，与仅包括烷化剂清除的零模型相比，每年的疗法数量并没有显著改善模型性能。
结论：患者特征与烷化剂清除之间的相关性表明，更最近接受烷基化剂以管理其骨髓瘤的患者的病程更具侵袭性，在整个先前方案中进展更快，并且总体健康状况更差(体重更低，全身炎症加剧)。尽管这些因素表明患者的概况欠佳，但烷化剂疗法对T细胞的耗尽可能对自体CAR T细胞疗法尤其不利(Mol.Ther.Oncolytics,2016,3:16015；Biol BloodMarrow Transplant.,2018,24:1135-1141)。我们的分析发现，在CAR T细胞疗法之前在患者中使用烷化剂展现出在最后一次给药后长达6-9个月对患者单采术PBMC材料的有害影响。这些结果表明，在患者已被施用烷基化剂后的某个时间(例如6-9个月)分离PBMC，使得患者PBMC中T细胞的数量或百分比足以制造用于施用CAR T细胞疗法的目标数量的CAR T细胞(例如，至少1x 107至1x 108个CAR T细胞)。例如，结果表明在患者已被施用一种或多种烷基化剂后至少6-9个月(或更长时间)获得患者单采术材料的益处，其中所述单采术材料被用作从中分离PBMC的起始材料并且随后被用作制造CAR T细胞(例如，抗BCMA-CAR T细胞idecabtagene vicleucel(bb2121))的T细胞制造方法中的T细胞来源。
7.3实施例3：先前烷基化疗法对后期线的多发性骨髓瘤中CAR T细胞产物制造起始材料和输注前患者特征的影响
了解患者的治疗史如何影响其临床和免疫概况是优化自体细胞疗法的重要组成部分。鉴定影响患者或其PBMC材料的先前疗法暴露可有助于优化CAR T细胞疗法的结局。在这项2期KarMMa试验(NCT03361748)的回顾性分析中，鉴定了从最后一剂一种或多种烷基化剂到单采用于CAR T细胞制造的PBMC的时间相关的患者和PBMC特征。
方法：图3描绘了如下一般方案：制造ide-cel CAR T细胞并将其输注到复发性和难治性多发性骨髓瘤(RRMM)患者中，随后评估所述患者对ide-cel疗法的反应。从患者单采术材料中分离的PBMC作为CAR T细胞制造的起始材料，对其针对与T细胞分化、记忆、衰老和耗竭相关的标记物通过多色流式细胞术进行免疫表型分型。收集来自相关预先指定的临床和探索终点的数据，并且使用左删失时间-事件分析的新颖实现方式(Biometrics,1976,32:459-463)鉴定先前烷化剂(涵盖苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌，它们与干细胞移植不相关)暴露后清除时间与患者和PBMC变量之间的统计学显著关系。对先前无烷化剂暴露的患者在其最早的先前疗法日期进行删失；新颖的时间-事件模型假定所有患者在过去的某个时间点都暴露于烷基化剂。Benjamini Hochberg校正应用于P值，以说明用于确定分离回归曲线的最佳分界点的多重检验。由于患者病史注释较少，未考虑先前烷化剂的剂量。为每个变量鉴定了最佳分界点，使分界点之上和之下的患者之间接受烷化剂的比例危险最大化，并调整P值以检验多个分界点。通过非参数相关性验证了这些关系，其中烷化剂清除被编码为1/log(-清除)。
结果：在随后施用的自体细胞疗法的情境中，患者暴露于先前疗法是一个关键的上游变量。该回顾性分析显示，80％的经历CAR T细胞疗法的RRMM患者先前曾暴露于烷基化剂(图4A)。自诊断为RRMM起，患者具有中值为6个的先前方案，平均比率为每年0.94个方案(图4A)。每年先前方案的数量与先前方案总数相关(ρ＝0.31，P＝0.0004)。大约三分之一的患者在单采术6个月内暴露于烷基化剂(图4B)。共分析了87个变量，包括43个患者变量(例如，人口统计学、血液化学、全血细胞计数(CBC)、
可溶性血液因子)和44个PBMC变量(例如，CD4/CD8记忆、激活和耗竭)，以确定与自最后一次暴露于烷基化剂起的时间的关联性。图5描绘了一般的输注前临床时间线，并对先前的疗法清除期、CAR T制造的平行时间线以及分析中包括的筛选和单采术变量的数据收集时间/地点进行了注释。
图6示出了新颖的反转时间-事件模型，该模型广泛适用于捕获目的变量和药物暴露之间的关系。图下方的表格列出了每个时间间隔暴露于>6或≤6种烷基化剂的患者数量。相对于先前方案≤6个(中值1214天)的患者，先前方案>6个的患者更最近暴露于先前烷基化剂(中值＝233天)(参见图6；HR≤6(相比于>6)＝0.47，调整后的P＝0.002)。
分析了与烷基化剂暴露相关的患者特征。更高的淋巴细胞清除化疗(LDC)前基线铁蛋白、更低的BMI和患者更小的年龄与更最近暴露于烷基化剂非依赖性地相关，
而更低的肿瘤负荷(在筛选时通过sBCMA得出)在多重检验校正后并不显著(参见图7A)。更高的铁蛋白和更低的BMI还与每年更多的治疗方案中度相关(参见图7B)。还分析了与烷基化剂暴露相关的免疫因子。从单采术中分离的CD3+PBMC≤20％的患者自最后一次暴露起的时间中值为6个月，而CD3+细胞>20％的患者为2年(参见图8A，HR≤20％与>20％；调整后的P＝0.031)。患者更最近暴露于烷基化剂与筛选时更少的T细胞和更高水平的可溶性颗粒酶B(HR≤0(相对于>0)，调整后的P＝0.026)和IL-7(HR≤3(相对于>3)，调整后的P＝0.024)相关，表明免疫概况与(肿瘤)细胞杀伤和朝稳态恢复一致(参见图8A)。单采术12个月内烷基化剂暴露存在于具有≤20％ CD3+PBMC的>75％患者中，以及具有20％ CD3+PBMC的60％患者中(参见图8B)。此外，在最后一次烷基化剂暴露后≥6个月，可检测到T细胞耗尽(参见图9)。相对于超过9个月前暴露或无暴露史的患者，在过去9个月内暴露于烷基化剂的患者的CD3+T细胞百分比中值低20％至40％(参见图9A)。每年更多数量的治疗方案也与PBMC中的T细胞含量呈负相关(即，来自用于CAR T细胞制造的单采术材料的PBMC)(参见图9B)。然而，在包括每年先前方案的线性模型(P＝0.39)中，自烷基化剂暴露起的时间与PBMC中CD3+T细胞含量之间的相关性仍然非依赖性地显著(P＝0.02)。图10示出了与烷基化剂暴露相关的T细胞记忆表型。特别地，更最近暴露于烷基化剂与在从单采术材料获得的PBMC中更少的TEMRA细胞和更多数量的TEM/中间型CD8+T细胞相关(参见图10A)。没有观察到在烷化剂暴露与CD4+T细胞记忆群体之间的相关性。此外，每年更多数量的治疗方案也与患者PBMC中更少的TEMRA和更多数量的TEM CD8+T细胞相关(参见图10B)。
结论：患者先前暴露于用于治疗骨髓瘤的烷基化剂疗法，会降低这些患者可采集T细胞的数量或质量，这可对随后的自体T细胞疗法不利。在2期研究队列中，三分之一的患者在单采术(用于CAR T细胞制造)6个月内具有与移植无关的烷基化剂暴露。发现最近的暴露与欠佳的患者和PBMC特征相关。
在一些变型中，时间-事件(TTE)建模可用于确定针对疾病的特定疗法(例如上述疗法)的最佳清除期。这种时间-事件建模可以基于如下受试者的群体，这些受试者在加入特定研究之前可能已经接受过这种疾病的先前治疗。这种时间-事件建模的结果可以用于各种应用，包括：何时对特定个体或群体子集施用疗法，特定个体或群体子集是否适合入组特定临床试验或其他项目，和/或是否应向特定个体或群体子集给予所述疗法与一种或多种其他疗法/治疗的组合。当前的时间-事件建模技术也可以用于，例如，提供对与特定疗法(如CAR-T细胞疗法等)相关的时间设定和其他策略的见解(例如，用于采购CAR-T制造材料的单采术日期)。
如本文所提供，在时间-事件建模的情境下，患者治疗史或先前抗癌暴露(即疗法、治疗等)包括左删失数据。对于当前的主题，可以反转时间以将左删失数据转换为右删失数据。然后可以使用时间-事件模型来分析右删失数据，该模型进而可以包括一个或多个回归模型。这种回归模型的一个例子是Cox比例危险模型。
本文提供的TTE模型可以应用于任何药物或药物类别，以鉴定与自最后一次暴露起的时间相关的变量。一个例子是应用于最后一次暴露于烷基化剂用于抗骨髓瘤方案(不包括在干细胞移植情况中使用)的情况。在这种情况下，事件是最后一次已知暴露于烷基化剂的日期；如果患者先前没有烷基化剂暴露史，那么无论药物类别如何，他们在最早已知的抗骨髓瘤治疗暴露时都会被删失。自最后一次暴露起的时间可以计算为从他们先前方案中发生暴露的最后一天到采购CAR T制造材料的单采术日期的间隔。
然后，可以通过计算X变量的20％和80％分位数之间的分界点的最大选择对数秩统计量(最强p值)来分析感兴趣的连续变量X与自上次烷基化剂暴露起的时间之间的关系(R library：maxstat)。如果该程序的最小p值(在调整用于多重检验后)为≒0.05，则变量X被标记为与自最后一次暴露起的时间相关。类似地，感兴趣的顺序变量或分类变量Y与自最后一次烷基化剂暴露起的时间之间的关系可以通过计算Y中每个(n-1)层相对于参考层的Cox比例危险统计量来分析。如果相对于参考层，任何层的p值≒0.05，则变量Y被标记为与自最后一次暴露起的时间相关。
图11是过程流程图1000，其中，可以通过在1110接收多名受试者中每名受试者的先前治疗历史数据来确定用于在先前暴露之后开始进行治疗受试者病症的疗法的最佳清除期。然后可以在1120从每名受试者的先前治疗历史数据中导出左删失数据，所述左删失数据包括清除期和事件或删失。然后在1130将所述左删失治疗数据的时间尺度反转以产生右删失治疗数据。然后在1140将右删失治疗数据应用于时间-事件(TTE)模型，所述模型将一个或多个感兴趣的变量与自暴露于先前暴露起的时间相关联。在1150，针对所述一个或多个感兴趣的变量内的连续变量，计算在预定义百分位数范围内的多个截止值上的最大选择对数秩统计量。然后在1160，针对所述连续变量，鉴定具有低于第一预定义阈值的最大选择对数秩统计量的一个或多个变量及相关截止值。然后在1170，针对所述一个或多个感兴趣的变量内的顺序变量或分类变量，计算每个(n-1)层相对于参考层的检验统计量。然后在1180鉴定相对于所述参考层具有低于第二预定义阈值的检验统计量的一个或多个顺序变量或分类变量及相关层。然后在1190，基于具有低于所述预定义阈值的最低值的截止值并且相对于低于所述预定义阈值的受试值中值和高于所述预定义阈值的受试值中值，确定所述疗法的最佳清除期。
图12是示出用于实现本文所述的各个方面的示例计算设备架构的图1200。总线1204可以用作互连硬件的其他所示部件的信息高速公路。标记为CPU(中央处理单元)的处理系统1208(例如，在一个给定计算机或在多个计算机处的一个或多个计算机处理器/数据处理器)可以进行执行程序所需的计算和逻辑操作。诸如只读存储器(ROM)1212和随机存取存储器(RAM)1216的非暂时性处理器可读存储介质可以与处理系统1208通信，并且可以包括用于此处指定的操作的一个或多个编程指令。任选地，程序指令可以存储在非暂时性计算机可读存储介质(如磁盘、光盘、可记录存储设备、闪存或其他物理存储介质)上。
在一个例子中，磁盘控制器1248可以与一个或多个任选的磁盘驱动器连接到系统总线1204。这些磁盘驱动器可以是外部或内部软盘驱动器(如1260)，外部或内部CD-ROM、CD-R、CD-RW或DVD或者固态驱动器(如1252)，或者外部或内部硬盘驱动器1256。如前所指示，这些各种磁盘驱动器1252、1256、1260和磁盘控制器是任选的设备。系统总线1204还可以包括至少一个通信端口1220，以允许与物理连接到计算系统或通过有线或无线网络从外部可用的外部设备进行通信。在一些情况下，至少一个通信端口1220包括或以其他方式包括网络接口。
为了提供与用户的交互，本文所述的主题可以在计算设备上实现，所述计算设备具有用于经由显示器接口1214向用户显示从总线1204获得的信息的显示设备1240(例如，CRT(阴极射线管)或LCD(液晶显示器)监视器)，以及用户可以向计算机提供输入的输入设备1232，如键盘和/或点击设备(例如，鼠标或跟踪球)和/或触摸屏。其他种类的输入设备1232也可以用于提供与用户的交互；例如，提供给用户的反馈可以是任何形式的感觉反馈(例如，视觉反馈、通过麦克风1236的听觉反馈或触觉反馈)；并且可以以任何形式接收来自用户的输入，包括声学、语音或触觉输入。输入设备1232和麦克风1236可以通过输入设备接口1228耦合到总线1204并经由所述总线传送信息。其他计算设备，如专用服务器，可以省略显示器1240和显示器接口1214、输入设备1232、麦克风1236和输入设备接口1228中的一个或多个。
本文所述的主题的一个或多个方面或特征可以在数字电子电路、集成电路、专门设计的专用集成电路(ASIC)、现场可编程门阵列(FPGA)计算机硬件、固件、软件和/或其组合中实现。这些不同的方面或特征可以包括在包含至少一个可编程处理器、至少一个输入设备和至少一个输出设备的可编程系统上在可执行和/或可判读的一个或多个计算机程序中实施，所述可编程处理器可以是专用或通用的，耦合它以接收来自存储系统的数据和指令并且将数据和指令传输至存储系统。可编程系统或计算系统可以包括客户端和服务器。客户端和服务器通常彼此远离，并且通常通过通信网络进行交互。客户端与服务器之间的关系是由于在各自的计算机上运行并且彼此具有客户端-服务器关系的计算机程序而产生的。
这些计算机程序(也称作程序、软件、软件应用、应用、部件或代码)包括用于可编程处理器的机器指令，并且可以用高级程序语言、面向对象的编程语言、功能编程语言、逻辑编程语言、和/或汇编/机器语言实施。如本文所用，术语“机器可读介质”是指任何计算机程序产品、装置和/或设备(例如，磁盘、光盘、存储器和可编程逻辑设备(PLD))，用于提供机器指令和/或数据到可编程处理器，包括接收机器指令作为机器可读信号的机器可读介质。术语“机器可读信号”是指用于向可编程处理器提供机器指令和/或数据的任何信号。机器可读介质可以非暂时性地存储此类机器指令，例如非暂时性固态存储器或磁硬盘驱动器或任何等效存储介质。机器可读介质可以可替代地或附加地以暂时性方式存储此类机器指令，例如与一个或多个物理处理器核相关联的处理器高速缓存或其他随机存取存储器。
在以上说明书和权利要求中，诸如“的至少一个/种”或“的一个/种或多个/种”之类的短语可以出现在要素或特征的结合列表之后。术语“和/或”也可出现在两个或更多个要素或特征的列表中。除非与使用该短语的上下文另有隐含或明确的矛盾，否则该短语旨在指单独列出的任何要素或特征，或与任何其他列举的要素或特征组合的任何列举的要素和特征。例如，短语“A和B中的至少一个”、“A和B中的一个或多个”以及“A和/或B”各自旨在表示“仅A、仅B、或A和B一起”。类似的解释也适用于包括三个或更多个项的列表。例如，短语“A、B和C中的至少一个”；“A、B和C中的一个或多个”；以及“A、B和/或C”各自旨在表示“仅A、仅B、仅C、A和B一起、A和C一起、B和C一起、或A和B和C一起”。此外，上文和权利要求中使用的术语“基于”旨在表示“至少部分基于”，使得未列举的特征或要素也是允许的。
本文描述的主题可以根据所需配置在系统、装置、方法、和/或物品中体现。前述说明书中所阐述的实现方式并不代表与本文所述的主题一致的所有实现方式。而它们仅仅是与所述的主题相关的方面一致的一些示例。尽管上文已经详细描述了一些变型，但是其他修改或添加也是可能的。特别地，除了本文所阐述的那些之外，还可以提供另外的特征和/或变型。例如，上文所述的实现方式可以针对所公开特征的各种组合和子组合和/或上文公开的若干其他特征的组合和子结合。此外，附图中描绘的和/或本文所述的逻辑流程不一定需要所示的特定次序或先后次序来实现期望的结果。其他实现方式可以在以下权利要求的范围内。
总体上，在以下权利要求中，所使用的术语不应解读为将权利要求限制为说明书和权利要求中公开的具体实施方案，而应解读为包括所有可能的实施方案连同这些权利要求所享有的等效权利的全部范围。因此，权利要求不受本公开文本的限制。本文引用的所有参考文献，无论是专利文献还是非专利文献，均通过引用以其整体并入本文。
SEQUENCE LISTING
<110> 细胞基因公司
朱诺治疗学股份有限公司
<120> 曾经历先前抗癌烷化剂疗法的患者中的CAR T细胞疗法
<130> 14247-619-228
<140>
<141>
<150> US 63/121,658
<151> 2020-12-04
<150> US 63/120,166
<151> 2020-12-01
<150> US 63/109,804
<151> 2020-11-04
<160> 38
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> Mus musculus
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Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile His
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<212> PRT
<213> mus musculus
<400> 2
Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr
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<212> PRT
<213> mus musculus
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Leu Gln Ser Arg Thr Ile Pro Arg Thr
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<212> PRT
<213> Mus musculus
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Asp Tyr Ser Ile Asn
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<212> PRT
<213> Mus musculus
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Gly
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<212> PRT
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<212> PRT
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<212> PRT
<213> Mus musculus
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Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly Glu
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Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp Phe
50 55 60
Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
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Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
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Met Ala Leu Pro Val Thr Ala Leu Leu Leu Pro Leu Ala Leu Leu Leu
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His Ala Ala Arg Pro Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu
20 25 30
Ala Met Ser Leu Gly Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu
35 40 45
Ser Val Thr Ile Leu Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys
50 55 60
Pro Gly Gln Pro Pro Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln
65 70 75 80
Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr
100 105 110
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Leu Lys Lys Pro Gly Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly
165 170 175
Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly
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Lys Gly Leu Lys Trp Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro
195 200 205
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Ser Ala Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp
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Thr Ala Thr Tyr Phe Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr
260 265 270
Thr Pro Ala Pro Arg Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln
275 280 285
Pro Leu Ser Leu Arg Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala
290 295 300
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305 310 315 320
Pro Leu Ala Gly Thr Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr
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Leu Tyr Cys Lys Arg Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln
340 345 350
Pro Phe Met Arg Pro Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser
355 360 365
Cys Arg Phe Pro Glu Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys
370 375 380
Phe Ser Arg Ser Ala Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln
385 390 395 400
Leu Tyr Asn Glu Leu Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu
405 410 415
Asp Lys Arg Arg Gly Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg
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Lys Asn Pro Gln Glu Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met
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Ala Glu Ala Tyr Ser Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly
450 455 460
Lys Gly His Asp Gly Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp
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<211> 1485
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BCMA02 CAR
<400> 10
atggcactcc ccgtcaccgc ccttctcttg cccctcgccc tgctgctgca tgctgccagg 60
cccgacattg tgctcactca gtcacctccc agcctggcca tgagcctggg aaaaagggcc 120
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tatcagcaga agcccgggca gcctccaacc cttcttattc agctcgcgtc aaacgtccag 240
acgggtgtac ctgccagatt ttctggtagc gggtcccgca ctgattttac actgaccata 300
gatccagtgg aagaagacga tgtggccgtg tattattgtc tgcagagcag aacgattcct 360
cgcacatttg gtgggggtac taagctggag attaagggaa gcacgtccgg ctcagggaag 420
ccgggctccg gcgagggaag cacgaagggg caaattcagc tggtccagag cggacctgag 480
ctgaaaaaac ccggcgagac tgttaagatc agttgtaaag catctggcta taccttcacc 540
gactacagca taaattgggt gaaacgggcc cctggaaagg gcctcaaatg gatgggttgg 600
atcaataccg aaactaggga gcctgcttat gcatatgact tccgcgggag attcgccttt 660
tcactcgaga catctgcctc tactgcttac ctccaaataa acaacctcaa gtatgaagat 720
acagccactt acttttgcgc cctcgactat agttacgcca tggactactg gggacaggga 780
acctccgtta ccgtcagttc cgcggccgca accacaacac ctgctccaag gccccccaca 840
cccgctccaa ctatagccag ccaaccattg agcctcagac ctgaagcttg caggcccgca 900
gcaggaggcg ccgtccatac gcgaggcctg gacttcgcgt gtgatattta tatttgggcc 960
cctttggccg gaacatgtgg ggtgttgctt ctctcccttg tgatcactct gtattgtaag 1020
cgcgggagaa agaagctcct gtacatcttc aagcagcctt ttatgcgacc tgtgcaaacc 1080
actcaggaag aagatgggtg ttcatgccgc ttccccgagg aggaagaagg agggtgtgaa 1140
ctgagggtga aattttctag aagcgccgat gctcccgcat atcagcaggg tcagaatcag 1200
ctctacaatg aattgaatct cggcaggcga gaagagtacg atgttctgga caagagacgg 1260
ggcagggatc ccgagatggg gggaaagccc cggagaaaaa atcctcagga ggggttgtac 1320
aatgagctgc agaaggacaa gatggctgaa gcctatagcg agatcggaat gaaaggcgaa 1380
agacgcagag gcaaggggca tgacggtctg taccagggtc tctctacagc caccaaggac 1440
acttatgatg cgttgcatat gcaagccttg ccaccccgct aatga 1485
<210> 11
<211> 184
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 11
Met Leu Gln Met Ala Gly Gln Cys Ser Gln Asn Glu Tyr Phe Asp Ser
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Leu Leu His Ala Cys Ile Pro Cys Gln Leu Arg Cys Ser Ser Asn Thr
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Pro Pro Leu Thr Cys Gln Arg Tyr Cys Asn Ala Ser Val Thr Asn Ser
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50 55 60
Ile Ile Ser Leu Ala Val Phe Val Leu Met Phe Leu Leu Arg Lys Ile
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Ile Ile Leu Pro Arg Gly Leu Glu Tyr Thr Val Glu Glu Cys Thr Cys
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Glu Asp Cys Ile Lys Ser Lys Pro Lys Val Asp Ser Asp His Cys Phe
130 135 140
Pro Leu Pro Ala Met Glu Glu Gly Ala Thr Ile Leu Val Thr Thr Lys
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<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 12
Asp Gly Gly Gly Ser
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<210> 13
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 13
Thr Gly Glu Lys Pro
1 5
<210> 14
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 14
Gly Gly Arg Arg
1
<210> 15
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 15
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 16
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 16
Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Val Asp
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<210> 17
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 17
Lys Glu Ser Gly Ser Val Ser Ser Glu Gln Leu Ala Gln Phe Arg Ser
1 5 10 15
Leu Asp
<210> 18
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 18
Gly Gly Arg Arg Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 19
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 19
Leu Arg Gln Arg Asp Gly Glu Arg Pro
1 5
<210> 20
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 20
Leu Arg Gln Lys Asp Gly Gly Gly Ser Glu Arg Pro
1 5 10
<210> 21
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 21
Leu Arg Gln Lys Asp Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Arg Pro
1 5 10 15
<210> 22
<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Flexible peptide linker
<400> 22
Gly Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (2)..(3)
<223> Xaa = Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (5)..(5)
<223> Xaa = Any amino acid
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (7)..(7)
<223> Xaa is Gly or Ser
<400> 23
Glu Xaa Xaa Tyr Xaa Gln Xaa
1 5
<210> 24
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 24
Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly
1 5
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 25
Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Ser
1 5
<210> 26
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 26
Leu Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 27
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 27
Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn
1 5 10 15
Pro Gly Pro
<210> 28
<211> 14
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 28
Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
1 5 10
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<211> 17
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 29
Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly
1 5 10 15
Pro
<210> 30
<211> 20
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 30
Gln Leu Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser
1 5 10 15
Asn Pro Gly Pro
20
<210> 31
<211> 24
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 31
Ala Pro Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly
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<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 32
Val Thr Glu Leu Leu Tyr Arg Met Lys Arg Ala Glu Thr Tyr Cys Pro
1 5 10 15
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<211> 18
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 33
Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro
1 5 10 15
Gly Pro
<210> 34
<211> 40
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 34
Leu Leu Ala Ile His Pro Thr Glu Ala Arg His Lys Gln Lys Ile Val
1 5 10 15
Ala Pro Val Lys Gln Thr Leu Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly
20 25 30
Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly Pro
35 40
<210> 35
<211> 33
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> protease cleavage site
<400> 35
Glu Ala Arg His Lys Gln Lys Ile Val Ala Pro Val Lys Gln Thr Leu
1 5 10 15
Asn Phe Asp Leu Leu Lys Leu Ala Gly Asp Val Glu Ser Asn Pro Gly
20 25 30
Pro
<210> 36
<211> 7350
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> anti-BCMA02 CAR vector
<400> 36
tcgcgcgttt cggtgatgac ggtgaaaacc tctgacacat gcagctcccg gagacggtca 60
cagcttgtct gtaagcggat gccgggagca gacaagcccg tcagggcgcg tcagcgggtg 120
ttggcgggtg tcggggctgg cttaactatg cggcatcaga gcagattgta ctgagagtgc 180
accatcatat gccagcctat ggtgacattg attattgact agttattaat agtaatcaat 240
tacggggtca ttagttcata gcccatatat ggagttccgc gttacataac ttacggtaaa 300
tggcccgcct ggctgaccgc ccaacgaccc ccgcccattg acgtcaataa tgacgtatgt 360
tcccatagta acgccaatag ggactttcca ttgacgtcaa tgggtggagt atttacggta 420
aactgcccac ttggcagtac atcaagtgta tcatatgcca agtacgcccc ctattgacgt 480
caatgacggt aaatggcccg cctggcatta tgcccagtac atgaccttat gggactttcc 540
tacttggcag tacatctacg tattagtcat cgctattacc atggtgatgc ggttttggca 600
gtacatcaat gggcgtggat agcggtttga ctcacgggga tttccaagtc tccaccccat 660
tgacgtcaat gggagtttgt tttggcacca aaatcaacgg gactttccaa aatgtcgtaa 720
caactccgcc ccattgacgc aaatgggcgg taggcgtgta cggtgggagg tctatataag 780
cagagctcgt ttagtgaacc gggtctctct ggttagacca gatctgagcc tgggagctct 840
ctggctaact agggaaccca ctgcttaagc ctcaataaag cttgccttga gtgctcaaag 900
tagtgtgtgc ccgtctgttg tgtgactctg gtaactagag atccctcaga cccttttagt 960
cagtgtggaa aatctctagc agtggcgccc gaacagggac ttgaaagcga aagtaaagcc 1020
agaggagatc tctcgacgca ggactcggct tgctgaagcg cgcacggcaa gaggcgaggg 1080
gcggcgactg gtgagtacgc caaaaatttt gactagcgga ggctagaagg agagagtagg 1140
gtgcgagagc gtcggtatta agcgggggag aattagataa atgggaaaaa attcggttaa 1200
ggccaggggg aaagaaacaa tataaactaa aacatatagt tagggcaagc agggagctag 1260
aacgattcgc agttaatcct ggccttttag agacatcaga aggctgtaga caaatactgg 1320
gacagctaca accatccctt cagacaggat cagaagaact tagatcatta tataatacaa 1380
tagcagtcct ctattgtgtg catcaaagga tagatgtaaa agacaccaag gaagccttag 1440
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ttcatccaca attttaaaag aaaagggggg attggggggt acagtgcagg ggaaagaata 1680
gtagacataa tagcaacaga catacaaact aaagaattac aaaaacaaat tacaaaaatt 1740
caaaattttc gggtttatta cagggacagc agagatccag tttggaaagg accagcaaag 1800
ctcctctgga aaggtgaagg ggcagtagta atacaagata atagtgacat aaaagtagtg 1860
ccaagaagaa aagcaaagat catcagggat tatggaaaac agatggcagg tgatgattgt 1920
gtggcaagta gacaggatga ggattaacac atggaaaaga ttagtaaaac accatagctc 1980
tagagcgatc ccgatcttca gacctggagg aggagatatg agggacaatt ggagaagtga 2040
attatataaa tataaagtag taaaaattga accattagga gtagcaccca ccaaggcaaa 2100
gagaagagtg gtgcagagag aaaaaagagc agtgggaata ggagctttgt tccttgggtt 2160
cttgggagca gcaggaagca ctatgggcgc agcgtcaatg acgctgacgg tacaggccag 2220
acaattattg tctggtatag tgcagcagca gaacaatttg ctgagggcta ttgaggcgca 2280
acagcatctg ttgcaactca cagtctgggg catcaagcag ctccaggcaa gaatcctggc 2340
tgtggaaaga tacctaaagg atcaacagct cctggggatt tggggttgct ctggaaaact 2400
catttgcacc actgctgtgc cttggaatgc tagttggagt aataaatctc tggaacagat 2460
ttggaatcac acgacctgga tggagtggga cagagaaatt aacaattaca caagcttggt 2520
aggtttaaga atagtttttg ctgtactttc tatagtgaat agagttaggc agggatattc 2580
accattatcg tttcagaccc acctcccaac cccgagggga cccgacaggc ccgaaggaat 2640
agaagaagaa ggtggagaga gagacagaga cagatccatt cgattagtga acggatccat 2700
ctcgacggaa tgaaagaccc cacctgtagg tttggcaagc taggatcaag gttaggaaca 2760
gagagacagc agaatatggg ccaaacagga tatctgtggt aagcagttcc tgccccggct 2820
cagggccaag aacagttgga acagcagaat atgggccaaa caggatatct gtggtaagca 2880
gttcctgccc cggctcaggg ccaagaacag atggtcccca gatgcggtcc cgccctcagc 2940
agtttctaga gaaccatcag atgtttccag ggtgccccaa ggacctgaaa tgaccctgtg 3000
ccttatttga actaaccaat cagttcgctt ctcgcttctg ttcgcgcgct tctgctcccc 3060
gagctcaata aaagagccca caacccctca ctcggcgcga ttcacctgac gcgtctacgc 3120
caccatggca ctccccgtca ccgcccttct cttgcccctc gccctgctgc tgcatgctgc 3180
caggcccgac attgtgctca ctcagtcacc tcccagcctg gccatgagcc tgggaaaaag 3240
ggccaccatc tcctgtagag ccagtgagtc cgtcacaatc ttggggagcc atcttattca 3300
ctggtatcag cagaagcccg ggcagcctcc aacccttctt attcagctcg cgtcaaacgt 3360
ccagacgggt gtacctgcca gattttctgg tagcgggtcc cgcactgatt ttacactgac 3420
catagatcca gtggaagaag acgatgtggc cgtgtattat tgtctgcaga gcagaacgat 3480
tcctcgcaca tttggtgggg gtactaagct ggagattaag ggaagcacgt ccggctcagg 3540
gaagccgggc tccggcgagg gaagcacgaa ggggcaaatt cagctggtcc agagcggacc 3600
tgagctgaaa aaacccggcg agactgttaa gatcagttgt aaagcatctg gctatacctt 3660
caccgactac agcataaatt gggtgaaacg ggcccctgga aagggcctca aatggatggg 3720
ttggatcaat accgaaacta gggagcctgc ttatgcatat gacttccgcg ggagattcgc 3780
cttttcactc gagacatctg cctctactgc ttacctccaa ataaacaacc tcaagtatga 3840
agatacagcc acttactttt gcgccctcga ctatagttac gccatggact actggggaca 3900
gggaacctcc gttaccgtca gttccgcggc cgcaaccaca acacctgctc caaggccccc 3960
cacacccgct ccaactatag ccagccaacc attgagcctc agacctgaag cttgcaggcc 4020
cgcagcagga ggcgccgtcc atacgcgagg cctggacttc gcgtgtgata tttatatttg 4080
ggcccctttg gccggaacat gtggggtgtt gcttctctcc cttgtgatca ctctgtattg 4140
taagcgcggg agaaagaagc tcctgtacat cttcaagcag ccttttatgc gacctgtgca 4200
aaccactcag gaagaagatg ggtgttcatg ccgcttcccc gaggaggaag aaggagggtg 4260
tgaactgagg gtgaaatttt ctagaagcgc cgatgctccc gcatatcagc agggtcagaa 4320
tcagctctac aatgaattga atctcggcag gcgagaagag tacgatgttc tggacaagag 4380
acggggcagg gatcccgaga tggggggaaa gccccggaga aaaaatcctc aggaggggtt 4440
gtacaatgag ctgcagaagg acaagatggc tgaagcctat agcgagatcg gaatgaaagg 4500
cgaaagacgc agaggcaagg ggcatgacgg tctgtaccag ggtctctcta cagccaccaa 4560
ggacacttat gatgcgttgc atatgcaagc cttgccaccc cgctaatgac aggtaccttt 4620
aagaccaatg acttacaagg cagctgtaga tcttagccac tttttaaaag aaaagggggg 4680
actggaaggg ctaattcact cccaaagaag acaagatctg ctttttgcct gtactgggtc 4740
tctctggtta gaccagatct gagcctggga gctctctggc taactaggga acccactgct 4800
taagcctcaa taaagcttgc cttgagtgct tcaatgtgtg tgttggtttt ttgtgtgtcg 4860
aaattctagc gattctagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg 4920
ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg 4980
tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc 5040
gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt 5100
gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct 5160
gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga 5220
taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc 5280
cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg 5340
ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg 5400
aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt 5460
tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt 5520
gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg 5580
cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact 5640
ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt 5700
cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct 5760
gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac 5820
cgctggtagc ggtggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt acgcgcagaa aaaaaggatc 5880
tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct cagtggaacg aaaactcacg 5940
ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc acctagatcc ttttaaatta 6000
aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa acttggtctg acagttacca 6060
atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta tttcgttcat ccatagttgc 6120
ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc ttaccatctg gccccagtgc 6180
tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat ttatcagcaa taaaccagcc 6240
agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta tccgcctcca tccagtctat 6300
taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt aatagtttgc gcaacgttgt 6360
tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt ggtatggctt cattcagctc 6420
cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg ttgtgcaaaa aagcggttag 6480
ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc gcagtgttat cactcatggt 6540
tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc gtaagatgct tttctgtgac 6600
tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg cggcgaccga gttgctcttg 6660
cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga actttaaaag tgctcatcat 6720
tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta ccgctgttga gatccagttc 6780
gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct tttactttca ccagcgtttc 6840
tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag ggaataaggg cgacacggaa 6900
atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga agcatttatc agggttattg 6960
tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat aaacaaatag gggttccgcg 7020
cacatttccc cgaaaagtgc cacctgggac tagctttttg caaaagccta ggcctccaaa 7080
aaagcctcct cactacttct ggaatagctc agaggccgag gcggcctcgg cctctgcata 7140
aataaaaaaa attagtcagc catggggcgg agaatgggcg gaactgggcg gagttagggg 7200
cgggatgggc ggagttaggg gcgggactat ggttgctgac taattgagat gagcttgcat 7260
gccgacattg attattgact agtccctaag aaaccattct tatcatgaca ttaacctata 7320
aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc 7350
<210> 37
<211> 472
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> exemplary mature BCMA CAR contemplated herein (i.e., without the
signal sequence)
<400> 37
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
20 25 30
Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
85 90 95
Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly
130 135 140
Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp
145 150 155 160
Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp
165 170 175
Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp
180 185 190
Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala
195 200 205
Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
210 215 220
Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ala Ala Thr Thr Thr Pro Ala Pro Arg
245 250 255
Pro Pro Thr Pro Ala Pro Thr Ile Ala Ser Gln Pro Leu Ser Leu Arg
260 265 270
Pro Glu Ala Cys Arg Pro Ala Ala Gly Gly Ala Val His Thr Arg Gly
275 280 285
Leu Asp Phe Ala Cys Asp Ile Tyr Ile Trp Ala Pro Leu Ala Gly Thr
290 295 300
Cys Gly Val Leu Leu Leu Ser Leu Val Ile Thr Leu Tyr Cys Lys Arg
305 310 315 320
Gly Arg Lys Lys Leu Leu Tyr Ile Phe Lys Gln Pro Phe Met Arg Pro
325 330 335
Val Gln Thr Thr Gln Glu Glu Asp Gly Cys Ser Cys Arg Phe Pro Glu
340 345 350
Glu Glu Glu Gly Gly Cys Glu Leu Arg Val Lys Phe Ser Arg Ser Ala
355 360 365
Asp Ala Pro Ala Tyr Gln Gln Gly Gln Asn Gln Leu Tyr Asn Glu Leu
370 375 380
Asn Leu Gly Arg Arg Glu Glu Tyr Asp Val Leu Asp Lys Arg Arg Gly
385 390 395 400
Arg Asp Pro Glu Met Gly Gly Lys Pro Arg Arg Lys Asn Pro Gln Glu
405 410 415
Gly Leu Tyr Asn Glu Leu Gln Lys Asp Lys Met Ala Glu Ala Tyr Ser
420 425 430
Glu Ile Gly Met Lys Gly Glu Arg Arg Arg Gly Lys Gly His Asp Gly
435 440 445
Leu Tyr Gln Gly Leu Ser Thr Ala Thr Lys Asp Thr Tyr Asp Ala Leu
450 455 460
His Met Gln Ala Leu Pro Pro Arg
465 470
<210> 38
<211> 246
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid sequence of BCMA02 scFv
<400> 38
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Pro Ser Leu Ala Met Ser Leu Gly
1 5 10 15
Lys Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Thr Ile Leu
20 25 30
Gly Ser His Leu Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Thr Leu Leu Ile Gln Leu Ala Ser Asn Val Gln Thr Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Ser Arg
85 90 95
Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Gly
100 105 110
Ser Thr Ser Gly Ser Gly Lys Pro Gly Ser Gly Glu Gly Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Gln Ile Gln Leu Val Gln Ser Gly Pro Glu Leu Lys Lys Pro Gly
130 135 140
Glu Thr Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp
145 150 155 160
Tyr Ser Ile Asn Trp Val Lys Arg Ala Pro Gly Lys Gly Leu Lys Trp
165 170 175
Met Gly Trp Ile Asn Thr Glu Thr Arg Glu Pro Ala Tyr Ala Tyr Asp
180 185 190
Phe Arg Gly Arg Phe Ala Phe Ser Leu Glu Thr Ser Ala Ser Thr Ala
195 200 205
Tyr Leu Gln Ile Asn Asn Leu Lys Tyr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe
210 215 220
Cys Ala Leu Asp Tyr Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
225 230 235 240
Ser Val Thr Val Ser Ser
245
Claims (126)
1.一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其包括：
(a)向所述受试者施用烷基化剂；
(b)在步骤(a)后至少约六(6)个月，从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；
(c)确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；
(d)基于步骤(c)的确定，随后从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及
(e)向所述受试者施用所述CAR T细胞。
2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。
3.一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，以及确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；
(b)基于步骤(a)的确定，随后从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及
(c)向所述受试者施用所述CAR T细胞，其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂。
4.根据权利要求3所述的方法，其中在步骤(a)之前至少约六(6)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
5.根据权利要求3或权利要求4所述的方法，其中在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
6.一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；
(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及
(c)向所述受试者施用所述CAR T细胞，其中所述受试者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂；
其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。
7.根据权利要求6所述的方法，其中步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。
8.根据权利要求6或权利要求7所述的方法，其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
9.一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括：
(a)确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；
(b)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；
(c)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及
(d)向所述受试者施用所述CAR T细胞。
10.根据权利要求9所述的方法，其中在步骤(a)中，在所述确定步骤之前少于约七(7)个月、少于约八(8)个月、少于约九(9)个月、少于约十(10)个月、少于约十一(11)个月、少于约十二(12)个月、少于约十三(13)个月、或少于约十四(14)个月，所述受试者尚未被施用所述烷基化剂。
11.一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；
(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；以及
(c)向所述受试者施用所述CAR T细胞，其中在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。
12.根据权利要求11所述的方法，其中已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。
13.一种治疗有需要的受试者的肿瘤或癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括向所述受试者施用从分离自所述患者的外周血单个核细胞PBMC制造的表达嵌合抗原受体的T细胞(CAR T细胞)，其中，在分离所述PBMC时，所述受试者在分离所述PBMC时之前至少约六(6)个月最后一次接受所述烷基化剂。
14.根据权利要求13所述的方法，其中在分离所述PBMC时之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者已最后一次接受所述烷基化剂。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISSIII期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。
23.根据权利要求1-22中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是环磷酰胺。
24.一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，所述方法包括：
(a)向所述受试者施用烷基化剂；
(b)在步骤(a)后至少约六个月，从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；
(c)确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；
(d)基于步骤(c)中的确定，随后从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMACAR T细胞)；以及
(e)向所述受试者施用所述CAR T细胞。
25.根据权利要求24所述的方法，其中步骤(b)是在向所述受试者施用烷基化剂的步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。
26.一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，所述方法包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，以及确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；
(b)基于步骤(a)中的确定，随后从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMACAR T细胞)；以及
(c)向所述受试者施用所述CAR T细胞，其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂。
27.根据权利要求26所述的方法，其中在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
28.根据权利要求26或权利要求27所述的方法，其中在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
29.一种治疗有需要的受试者中由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，所述方法包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；
(b)从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMACAR T细胞)；
(c)向所述受试者施用所述BCMACAR T细胞，其中所述受试者先前已接受用于治疗所述癌症的烷基化剂，并且
其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。
30.根据权利要求29所述的方法，其中步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。
31.根据权利要求29或权利要求30所述的方法，其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
32.一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗癌症的烷基化剂，所述方法包括：
(a)确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；
(b)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，其中所述分离是在已经向所述受试者施用所述烷基化剂后至少六(6)个月进行的；
(c)从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMACAR T细胞)；以及
(d)向所述受试者施用所述BCMACAR T细胞。
33.根据权利要求32所述的方法，其中在步骤(a)中，在所述确定步骤之前少于约七(7)个月、少于约八(8)个月、少于约九(9)个月、少于约十(10)个月、少于约十一(11)个月、少于约十二(12)个月、少于约十三(13)个月、或少于约十四(14)个月，所述受试者尚未被施用所述烷基化剂。
34.一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；
(b)从所述PBMC制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMACAR T细胞)；以及
(c)向所述受试者施用所述BCMACAR T细胞，其中在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。
35.根据权利要求34所述的方法，其中已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。
36.一种治疗有需要的受试者的由B细胞成熟因子(BCMA)表达细胞引起的癌症的方法，其中所述受试者已被施用烷基化剂，所述方法包括向所述受试者施用从分离自所述患者的外周血单个核细胞PBMC制造的针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMA CAR T细胞)，其中，在分离所述PBMC时，所述受试者在分离所述PBMC时之前至少约六(6)个月最后一次接受所述烷基化剂。
37.根据权利要求36所述的方法，其中在分离所述PBMC时之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者已最后一次接受所述烷基化剂。
38.根据权利要求24-37中任一项所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。
39.根据权利要求38所述的方法，其中所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。
40.根据权利要求38所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。
42.根据权利要求40所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISSIII期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。
43.根据权利要求24-42中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。
44.根据权利要求24-43中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。
45.根据权利要求24-44中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是环磷酰胺。
46.一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：
(a)向所述受试者施用用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂；
(b)在步骤(a)后至少约六个月，从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及
(c)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。
47.根据权利要求46所述的方法，其中步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。
48.一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，以及确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；以及
(b)基于步骤(b)的确定，随后从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；
其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂。
49.根据权利要求48所述的方法，其中在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
50.根据权利要求48或权利要求49所述的方法，其中在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
51.一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，所述方法包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及
(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；
其中所述受试者先前已接受用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂；
其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。
52.根据权利要求51所述的方法，其中步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。
53.根据权利要求51或权利要求52所述的方法，其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
54.一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂，所述方法包括：
a.确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；
b.从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及
c.从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。
55.根据权利要求54所述的方法，其中在步骤(a)中，在所述确定步骤之前少于约七(7)个月、少于约八(8)个月、少于约九(9)个月、少于约十(10)个月、少于约十一(11)个月、少于约十二(12)个月、少于约十三(13)个月、或少于约十四(14)个月，所述受试者尚未被施用所述烷基化剂。
56.一种从受试者制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗肿瘤或癌症的烷基化剂，所述方法包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及
(b)从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞；
其中在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。
57.根据权利要求56所述的方法，其中已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。
58.根据权利要求46-57中任一项所述的方法，其中所述肿瘤或癌症是淋巴瘤、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、肾上腺皮质癌、甲状腺癌、鼻咽癌、黑色素瘤、皮肤癌、结直肠癌、硬纤维瘤、结缔组织增生性小圆细胞肿瘤、内分泌肿瘤、尤因肉瘤、外周原始神经外胚叶肿瘤、实体生殖细胞瘤、肝母细胞瘤、神经母细胞瘤、非横纹肌肉瘤软组织肉瘤、骨肉瘤、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、肾母细胞瘤、胶质母细胞瘤、粘液瘤、纤维瘤、脂肪瘤慢性淋巴细胞白血病(小淋巴细胞淋巴瘤)、B细胞幼淋巴细胞白血病、淋巴浆细胞性淋巴瘤、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、脾边缘区淋巴瘤、浆细胞性骨髓瘤、浆细胞瘤、结外边缘区B细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、结内边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤、纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤、血管内大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、T淋巴细胞幼淋巴细胞白血病、T淋巴细胞大颗粒淋巴细胞白血病、侵袭性NK细胞白血病、成人T淋巴细胞白血病/淋巴瘤、结外NK/T淋巴细胞淋巴瘤鼻型、肠病型T淋巴细胞淋巴瘤、肝脾T淋巴细胞淋巴瘤、母细胞性NK细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿、塞扎里综合征、原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、血管免疫母细胞性T淋巴细胞淋巴瘤、外周T淋巴细胞淋巴瘤(未指明)、间变性大细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤或多发性骨髓瘤。
59.根据权利要求58所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。
60.根据权利要求59所述的方法，其中所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。
61.根据权利要求59所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。
62.根据权利要求61所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。
63.根据权利要求61所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISSIII期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。
64.根据权利要求46-63中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。
65.根据权利要求46-64中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。
66.根据权利要求46-64中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是环磷酰胺。
67.一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMACAR T细胞)的方法，所述方法包括：
(a)向所述受试者施用用于治疗癌症的烷基化剂；
(b)在步骤(a)后至少约六个月，从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及
(c)从所述PBMC制造BCMACAR T细胞。
68.根据权利要求67所述的方法，其中步骤(b)是在步骤(a)后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月进行。
69.一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMACAR T细胞)的方法，所述方法包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)，以及确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；以及
(b)基于步骤(a)的确定，随后从所述PBMC制造BCMACAR T细胞；
其中，在步骤(a)之前，所述受试者先前已接受用于治疗癌症的烷基化剂。
70.根据权利要求69所述的方法，其中在步骤(a)之前至少约六个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
71.根据权利要求69或权利要求70所述的方法，其中在步骤(a)之前至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月，所述受试者先前已接受所述烷基化剂。
72.一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMACAR T细胞)的方法，所述方法包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及
(b)从所述PBMC制造BCMACAR T细胞；
其中所述受试者先前已接受用于治疗癌症的烷基化剂；
其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约六个月发生。
73.根据权利要求72所述的方法，其中步骤(a)进一步包括确定所述PBMC的至少约20％是T细胞；并且其中步骤(b)进一步包括随后基于步骤(a)中的确定从所述PBMC制造嵌合抗原受体(CAR)T细胞。
74.根据权利要求72或权利要求73所述的方法，其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
75.一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMACAR T细胞)的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗癌症的烷基化剂，所述方法包括：
a.确定所述受试者在该确定步骤之前少于约六(6)个月尚未被施用所述烷基化剂；
b.从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及
c.从所述PBMC制造BCMACAR T细胞。
76.根据权利要求75所述的方法，其中步骤(a)在所述受试者接受所述烷基化剂后至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月发生。
77.一种从受试者制造针对BCMA的嵌合抗原受体(CAR)T细胞(BCMACAR T细胞)的方法，其中所述受试者已被施用用于治疗癌症的烷基化剂，所述方法包括：
(a)从所述受试者分离外周血单个核细胞(PBMC)；以及
(b)从所述PBMC制造BCMACAR T细胞；
其中在所述分离时，已确定所述受试者已在至少约六(6)个月前被施用所述烷基化剂。
78.根据权利要求77所述的方法，其中已确定所述受试者已在至少约七(7)个月、至少约八(8)个月、至少约九(9)个月、至少约十(10)个月、至少约十一(11)个月、至少约十二(12)个月、至少约十三(13)个月或至少约十四(14)个月前被施用所述烷基化剂。
79.根据权利要求67-78中任一项所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病或非霍奇金淋巴瘤。
80.根据权利要求79所述的方法，其中所述癌症是非霍奇金淋巴瘤，并且所述非霍奇金淋巴瘤是伯基特淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤或套细胞淋巴瘤。
81.根据权利要求79所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤。
82.根据权利要求81所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤或复发性和难治性多发性骨髓瘤。
83.根据权利要求81所述的方法，其中所述多发性骨髓瘤是高风险多发性骨髓瘤，并且所述高风险多发性骨髓瘤为R-ISS III期疾病和/或以早期复发为特征的疾病。
84.根据权利要求67-83中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是以下中的一种或多种：六甲蜜胺、苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、依磷酰胺、异环磷酰胺、洛莫司汀、二氯甲基二乙胺、美法仑、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼、链脲霉素、替莫唑胺、噻替哌和曲贝替定。
85.根据权利要求67-84中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是以下中的一种或多种：苯达莫司汀、白消安、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、依磷酰胺、异环磷酰胺、奥沙利铂、铂、丙卡巴肼和噻替哌。
86.根据权利要求67-85中任一项所述的方法，其中所述烷基化剂是环磷酰胺。
87.根据权利要求1-86中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
88.根据权利要求24-45或67-87中任一项所述的方法，其中所述BCMACAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含靶向BCMA的抗体或抗体片段。
89.根据权利要求24-45或67-87中任一项所述的方法，其中所述BCMACAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含单链Fv抗体或抗体片段(scFv)。
90.根据权利要求24-45或67-87中任一项所述的方法，其中所述BCMACAR T细胞包含针对BCMA的CAR，其中所述针对BCMA的CAR包含BCMA02 scFv。
91.根据权利要求24-45或67-87中任一项所述的方法，其中所述BCMACAR T细胞是idecabtagene vicleucel细胞。
92.根据权利要求1-23或46-66中任一项所述的方法，其中在将所述CAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述CAR T细胞的PBMC。
93.根据权利要求24-45或67-87中任一项所述的方法，其中在将所述BCMACAR T细胞施用至所述受试者之前，所述受试者经历白细胞单采术程序以收集用于制造所述BCMA CAR T细胞的PBMC。
94.根据权利要求1-23或92中任一项所述的方法，其中通过静脉内输注施用所述CAR T细胞。
95.根据权利要求24-45或93中任一项所述的方法，其中通过静脉内输注施用所述BCMACAR T细胞。
96.一种确定患有癌症的受试者是否可以用CAR T疗法治疗的方法，所述方法包括确定所述受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比，其中，(i)如果所述受试者具有相对于PBMC数量少于约20％的CD3+T细胞，则不向所述受试者施用所述CAR T疗法，以及(ii)如果所述受试者具有相对于PBMC数量超过约20％的CD3+T细胞，则向所述受试者施用所述CAR T疗法。
97.一种治疗受试者的癌症的方法，其包括已确定所述受试者中CD3+T细胞相对于PMBC数量的百分比高于约20％，并向所述受试者施用CAR T疗法。
98.根据权利要求96或97所述的方法，其中所述CD3+T细胞是CD45+/CD3+T细胞。
99.一种确定用于在先前暴露后开始治疗受试者的病症的最佳清除期的方法，所述方法包括：
接收多名受试者中每名受试者的先前治疗历史数据；
从所述先前治疗历史数据导出每名所述受试者的左删失治疗数据，所述左删失治疗数据包括清除期和事件或删失；
将所述左删失治疗数据的时间尺度反转以产生右删失治疗数据；
将所述右删失治疗数据应用于时间-事件(TTE)模型，所述模型将一个或多个感兴趣的变量与自暴露于先前暴露起的时间相关联；
针对所述一个或多个感兴趣的变量内的连续变量，计算在预定义百分位数范围内的多个截止值上的最大选择对数秩统计量；
针对所述一个或多个感兴趣的变量内的连续变量，鉴定具有低于第一预定义阈值的最大选择对数秩统计量的一个或多个变量及相关截止值；
针对所述一个或多个感兴趣的变量内的顺序变量或分类变量，计算每个(n-1)层相对于参考层的检验统计量；
针对所述一个或多个感兴趣的变量内的顺序变量或分类变量，鉴定相对于所述参考层具有低于第二预定义阈值的检验统计量的一个或多个变量及相关层；以及
基于具有低于所述预定义阈值的最低值的截止值并且相对于低于所述预定义阈值的受试值中值和高于所述预定义阈值的受试值中值，确定所述疗法的最佳清除期。
100.根据权利要求99所述的方法，其进一步包括：
提供所确定的最佳清除期。
101.根据权利要求100所述的方法，其中提供所确定的最佳清除期包括以下一者或多者：使所确定的最佳清除期显示在电子视觉显示器中，物理上持久地存储所确定的最佳清除期，将所确定的最佳清除期加载到存储器中，或通过网络将所确定的最佳清除期传输到远程计算设备。
102.根据权利要求99至101中任一项所述的方法，其中所述TTE模型是比例危险模型。
103.根据权利要求99至102中任一项所述的方法，其中所述TTE模型是Cox比例危险模型。
104.根据权利要求99至103中任一项所述的方法，其中由形成至少一个计算设备的一部分的至少一个数据处理器执行所述接收、导出、反转、应用、第一或第二计算、第一或第二鉴定以及确定中的一者或多者。
105.根据权利要求99至103中任一项所述的方法，其中所述先前暴露是先前疗法。
106.根据权利要求105所述的方法，其中所述先前暴露和所述疗法是不同类型的疗法。
107.根据权利要求106所述的方法，其中所述先前暴露用于治疗与用所述疗法治疗的病症不同的病症。
108.根据权利要求106所述的方法，其中所述先前暴露用于治疗与用所述疗法治疗的病症相同的病症。
109.根据权利要求108所述的方法，其中所述先前暴露和所述疗法用于治疗相同的病症并且是相同类型的疗法。
110.根据权利要求108所述的方法，其中所述疗法是二线疗法或更靠后(例如，三线、四线、五线、六线、七线或更靠后)的治疗线，并且所述先前暴露是更靠前的治疗线。
111.根据权利要求99至110中任一项所述的方法，所述方法告知(i)受试者在已经历先前暴露后应接受所述疗法的时间或(ii)临床试验中的排除标准。
112.根据权利要求99至111中任一项所述的方法，其中所述疗法和/或所述先前暴露是放射疗法、化学疗法、免疫疗法、手术、移植、基因疗法或细胞疗法。
113.根据权利要求99至112中任一项所述的方法，其中所述病症是癌症、免疫疾病(例如自身免疫性疾病)、心血管疾病、纤维化、感染性疾病或神经系统病症。
114.根据权利要求99至113中任一项所述的方法，其中所述病症是可以通过刺激免疫系统来治疗的病症，例如癌症和感染性疾病，并且所述疗法是刺激或增强免疫系统的疗法，例如免疫疗法和细胞疗法。
115.根据权利要求99至114中任一项所述的方法，其中所述病症是癌症，并且所述疗法是细胞疗法，例如CAR T。
116.根据权利要求115所述的方法，其中所述先前暴露是先前疗法，并且所述先前疗法是先前癌症治疗。
117.根据权利要求116所述的方法，其中所述癌症是多发性骨髓瘤，所述治疗是BCMACAR T(例如，包含SEQ ID NO:37的CAR或编码SEQ ID NO:9或37的CAR的核酸)，并且所述先前治疗是针对多发性骨髓瘤的先前癌症治疗。
118.根据权利要求117所述的方法，其中所述先前暴露是烷化剂疗法。
119.根据权利要求99至118中任一项所述的方法，其中所述先前暴露不是先前疗法。
120.根据权利要求119所述的方法，其中所述先前暴露是可对所述疗法产生负面影响的事件。
121.根据权利要求120所述的方法，其中所述先前暴露是先前病症。
122.根据权利要求121所述的方法，其中所述先前暴露是炎性病症或感染性疾病(例如，病毒感染，如COVID-19感染)。
123.一种治疗受试者的病症的方法，其包括：
向所述受试者施用用于治疗所述病症的疗法，其中在先前暴露后施用所述疗法，并且其中使用根据权利要求99至122中任一项所述的方法计算在所述先前暴露后到施用所述疗法所用的时间(即，所述清除期)。
124.一种治疗受试者的病症的方法，其包括：
在使用根据权利要求99至122中任一项所述的方法确定的在先前暴露后的时间，向所述受试者施用用于治疗所述病症的疗法，其中在所述先前暴露后施用所述疗法。
125.一种系统，其包含：
至少一个数据处理器；和
存储指令的存储器，所述指令在由所述至少一个数据处理器执行时实现根据权利要求99至122中任一项所述的方法。
126.一种存储指令的非暂时性计算机程序产品，所述指令在由至少一个计算设备执行时实现根据权利要求99至122中任一项所述的方法。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US63/109,804 | 2020-11-04 | ||
| US63/120,166 | 2020-12-01 | ||
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| US63/121,658 | 2020-12-04 | ||
| PCT/US2021/057805 WO2022098685A2 (en) | 2020-11-04 | 2021-11-03 | Car t cell therapy in patients who have had prior anti-cancer alkylator therapy |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116802743A true CN116802743A (zh) | 2023-09-22 |
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202180088285.7A Pending CN116802743A (zh) | 2020-11-04 | 2021-11-03 | 曾经历先前抗癌烷化剂疗法的患者中的car t细胞疗法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
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| CN (1) | CN116802743A (zh) |
-
2021
- 2021-11-03 CN CN202180088285.7A patent/CN116802743A/zh active Pending
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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