KR20200116081A - 유전자 조작된 세포의 투약 및 조절 방법 - Google Patents

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KR20200116081A
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cells
subject
car
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genetically engineered
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KR1020207018924A
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티나 알버슨
마크 디. 하이펠
히 리
클레어 엘. 서덜랜드
마크 제이. 길버트
니콜라스 세바스찬 트레디
제이콥 랜돌프 가르시아
젠스 하스칼
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주노 쎄러퓨티크스 인코퍼레이티드
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Abstract

재조합 수용체, 예컨대 T 세포 수용체 (TCR) 또는 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 세포와 같은 세포 요법의 투여 및/또는 투약 결정을 포함하는 방법과 같은 치료 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 세포 요법 또는 조작된 세포의 투여 이후, 예를 들어, 독성 발생 위험에 기초하여, 및 이의 징후 또는 증상, 또는 이의 정도 또는 지속성의 치료, 감소 또는 개선과 같은 치료 결과 또는 반응의 추정 확률에 기초하여, 투약에 대한 치료적 범위 및/또는 윈도우를 결정하는 것을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 조작된 세포를 조절할 수 있는 시제(agent)를 투여하는 것을 포함한다. 또한 독성을 개선 및/또는 치료하는 방법이 제공된다.

Description

유전자 조작된 세포의 투약 및 조절 방법
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2017년 12월 1일 자, 발명의 명칭이 “METHODS FOR DOSING AND FOR MODULATION OF GENETICALLY ENGINEERED CELLS”인 미국 가특허출원 제62/593,878호, 2017년 12월 8일자, 발명의 명칭이 “METHODS FOR DOSING AND FOR MODULATION OF GENETICALLY ENGINEERED CELLS”인 미국 가특허출원 제62/596,773호, 2018년 2월 21일자, 발명의 명칭이 “METHODS FOR DOSING AND FOR MODULATION OF GENETICALLY ENGINEERED CELLS”인 미국 가특허출원 제62/633,599호, 2018년 6월 1일자, 발명의 명칭이 “METHODS FOR DOSING AND FOR MODULATION OF GENETICALLY ENGINEERED CELLS”인 미국 가특허출원 제62/679,763호, 및 2018년 6월 1일자, 발명의 명칭이 “METHODS FOR DOSING AND FOR MODULATION OF GENETICALLY ENGINEERED CELLS”인 미국 가특허출원 제62/679,764호의 우선권을 주장하며, 상기 특허는 그 전체가 본 명세서에 참조 문헌으로 포함된다.
서열 목록의 참조에 의한 포함
본 출원은 전자 형식의 서열 목록과 함께 출원된다. 서열 목록은 2018년 11월 30일에 생성된, 34 Kb 크기의 파일명 735042015240SeqList.txt으로 제공된다. 전자 형식의 서열 목록에 있는 정보는 본 출원에 그 전체가 참조로 포함된다.
기술분야
본 발명은, 일부 양태에서, 재조합 수용체, 예컨대 T 세포 수용체 (TCR) 또는 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 세포와 같은 세포 요법의 투여 및/또는 투약 결정을 포함하는 방법과 같은 치료 방법에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 상기 방법은, 세포 요법 또는 조작된 세포의 투여 이후, 예를 들어, 독성 발생 위험에 기초하여, 및 이의 징후 또는 증상, 또는 이의 정도 또는 지속성의 치료, 감소 또는 개선과 같은 치료 결과 또는 반응의 추정 확률에 기초하여, 투약에 대한 치료적 범위 및/또는 윈도우를 결정하는 것을 포함한다. 일부 양태에서, 상기 방법은 조작된 세포를 조절할 수 있는 시제(agent)를 투여하는 것을 포함한다. 또한 독성을 개선 및/또는 치료하는 방법이 제공된다.
T 세포, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 유전자 조작된 항원 수용체를 발현하는 T 세포를 투여하는 것을 포함하는 입양 세포 요법 방법에 대한 다양한 접근법이 이용 가능하다. 일부 양태에서, 이용가능한 방법은 완전히 만족스럽지 않을 수 있다. 면역요법 및 입양 세포 요법의 추가적인 전략, 예컨대, 투여된 세포의 지속성, 활성 및/또는 증식을 향상시키기 위한 전략 및 T 세포 표현형, 활성 및/또는 팽창을 조절하기 위한 반응 및 전략이 필요하다. 일부 구현예에서는 이러한 요구를 해결하기 위한 방법, 세포, 조성물, 제조 물품, 및 시스템이 제공된다.
본 명세서에는 대상체에게 투약 또는 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 일부 양태에서 대상체에게 조작된 세포, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 세포의 투여량을 투여하는 것, 및/또는 이러한 조작된 세포가 투여된 대상체에게 추가의 시제(들)을 평가 및/또는 투여하는 것을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 투여되는 용량은 치료적 범위 및/또는 윈도우 이내에 있고, 및/또는 선택적으로 투여 이후 특정 기간 이내 또는 기간에 걸쳐, 특정 범위 이내, 예컨대 특정 또는 결정된 치료적 범위 이내에서, 대상체의 샘플 또는 조직 또는 체액, 예컨대 대상체의 혈액에서 조작된 세포, 예컨대, CAR+ 세포의 전체 또는 피크 양 또는 개수를 달성하기에 충분하다. 일부 양태에서, 치료적 범위는 추정 확률과 같은 확률, 예컨대, 반응 확률 및/또는 중증 및/또는 3등급 이상 독성과 같은 독성, 예컨대 신경독성 (NT), 예컨대, 3등급 이상 독성의 징후 또는 증상이 발생하는 확률 또는 위험에 기초하여 결정되거나, 이와 관련된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 이러한 임의의 일부 구현예에서, 투여는 차선의 또는 감소된 또는 저용량의 세포를 투여하는 것을 포함하며, 이는 일부 양태에서 치료적 범위 및/또는 윈도우 이내에 있고, 및/또는 선택적으로 투여 이후 특정 기간 이내 또는 기간에 걸쳐, 특정 범위 이내, 예컨대 특정 또는 결정된 치료적 범위 이내에서, 대상체의 샘플 또는 조직 또는 체액, 예컨대 대상체의 혈액에서 조작된 세포, 예컨대, CAR+ 세포의 전체 또는 피크 양 또는 개수를 달성하기에는 불충분하다. 일부 양태에서, 예컨대 이러한 구현예의 양태에서, 제공된 방법은 조작된 세포가 아닌 또는 이외의 화합물을 대상체에게 추가로 투여하는 것을 포함한다. 일부 양태에서, 이러한 시제로는 조작된 세포, 예컨대 CAR+ 세포에 대해 대상체가 팽창, 지속성 및/또는 노출할 가능성, 정도, 신속성, 또는 수준을 향상 또는 증가시킬 수 있는 것으로 공지되어 있거나 추정되는 시제일 수 있다. 일부 양태에서, 시제(들)은 세포 생체 내 세포 팽창을 증가 또는 촉진시키거나, 및/또는 대상체의 세포, 예컨대 CAR+ 세포의 팽창, 피크 수준, AUC, 또는 다른 측정치의 수준, 정도 또는 신속성을 야기할 수 있고, 팽창은 치료적 범위 및/또는 윈도우 내에 있다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 치료적 범위는 일부 양태에서 추정 확률과 같은 확률, 예컨대, 반응 확률 및/또는 중증 및/또는 3등급 이상 독성과 같은 독성, 예컨대 신경독성 (NT), 예컨대, 3등급 이상 독성의 징후 또는 증상이 발생하는 확률 또는 위험에 기초하여 결정되거나, 이와 관련된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 상기 방법은, 예컨대, 대상체에게 세포 요법 또는 조작된 세포를 투여한 이후; 혈액 또는 혈액-유래 샘플 (예컨대 혈액 내 피크 CAR 세포)와 같은 대상체의 샘플에서 조작된 또는 다른 세포의 수준을, 선택적으로 시간에 걸쳐 모니터링하여, 예를 들어, 세포가 치료적 범위 및/또는 윈도우 내에 있는지 여부를 평가하는 것을 포함한다. 일부 양태에서, 세포가 치료적 범위 또는 윈도우 내에 있지 않은 경우, 제공된 방법은, 예컨대 조작된 세포의 팽창 또는 노출을 향상시키기 위해, 예컨대 생체 내 CAR+ 세포 팽창을 향상시키기 위해, 예컨대, 피크 CAR+ 팽창 및/또는 수준 및/또는 노출 및/또는 AUC가 치료적 또는 원하는 범위 이내에 있도록, 대상체에게 화합물을 투여하는 것을 포함한다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 샘플 내 조작된, 예컨대, CAR+, 세포의 수준은 샘플의 마이크로리터 당 세포, 예컨대, CAR+ 세포의 개수로서 결정되고; 이러한 임의의 일부 구현예에서, 피크 수준은 선택적으로 특정 기간에 걸쳐, 대상체에게 세포 또는 세포 요법을 투여한 후 가장 높은 측정치이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 치료적 범위는 중증 독성 및/또는 신경독성 (NT) 또는 CRS와 같은 독성 또는 독성 결과 또는 이의 징후 또는 증상의 추정 확률이 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만 또는 5% 미만인 범위이며; 일부 양태에서, 확률은 확률 곡선에 기초하고, 예컨대, 세포 요법 및/또는 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포로 치료되거나 투여된 대상체의 결과에 기초한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 치료 반응, 효과, 개선 또는 치료를 달성하는 추정 확률은 20%, 25%, 30%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상을 초과한다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 독성은 신경독성이고 및/또는 중증 독성이고 및/또는 3-5 등급 신경독성이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 반응 또는 반응 지표는 골수 반응 또는 대상체의 골수에서 측정된 결과이다. 일부 경우에, 골수 반응의 존재 또는 부재는 유세포 분석 및/또는 IgH 시퀀싱이거나 이에 의해 결정되며 및/또는 대상체의 샘플, 선택적으로 대상체의 장기, 조직 또는 체액, 예컨대 림프절, 골수, 종양 부위, 혈액 또는 대상체의 다른 샘플 내 질병 또는 병태의 세포의 감소 또는 제거를 나타내거나, 이러한 감소 또는 제거다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 암이다. 일부 양태에서, 암은 육종, 암종, 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, CLL, ALL, AML 및 골수종으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 경우에, 암은 췌장암, 방광암, 대장암, 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포 암, 폐암, 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경 내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암 또는 연조직 육종이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인, 및 ITAM를 포함하는 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 양태에서, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 도메인을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 공동자극 신호전달 영역을 추가로 포함한다. 일부 경우에, 공동자극 신호전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 예시에서, 공동자극 도메인은 CD28의 도메인이다. 일부 예시에서, 공동자극 도메인은 4-1BB의 도메인이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, CAR은 다음으로부터 발현된 항원 중에서 선택된 항원을 특이적으로 인식하거나 이에 결합한다: B 세포, ROR1, B 세포 돌연변이 항원 (BCMA), Her2, L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, EPHa2, ErbB2, 3, 또는 4, erbB 이합체, EGFR vIII, FBP, FCRL5, FCRH5, GPRC5D, 태아 아세틸콜린 e 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경쇄, Lewis Y, L1-세포 접합 분자, (L1-CAM), 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 우선적으로 발현되는 흑색종 항원 (PRAME), 서바이빈, EGP2, EGP40, TAG72, B7-H6, IL-13 수용체 a2 (IL-13Ra2), CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, G250/CAIX, HLA-AI MAGE Al, HLA-A2 NY-ESO-1, PSCA, 엽산 수용체-a, CD44v6, CD44v7/8, avb6 인테그린, 8H9, NCAM, VEGF 수용체, 5T4, 태아 AchR, NKG2D 리간드, CD44v6, 이중 항원, 및 보편적인 표지와 연관된 항원, 암-고환 항원, 메소텔린, MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양태아성 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암배아 항원 (CEA), 전립선 특이적 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린B2, CD123, c-Met, GD-2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), CE7, Wilms 종양 1 (WT-1), 사이클린, 사이클린 A2, CCL-1, CD138, 및 병원체-특이적 항원.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 상기 세포는 T 세포이다. 일부 경우에, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+이다.
또한 세포를 포함하는 것과 같은 제조 물품 및 조성물, 및 임의의 구현예의 방법 및 용도에 따른 투여 설명서가 제공된다.
본 명세서에는 치료 방법이 제공되며, 상기 치료 방법은 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 질병 또는 병태를 치료하기 위해 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 단계와, 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가하기 위해 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계로서, 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않지 경우, 대상체에서 CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 초과하고, 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만과 연관된 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포의 범위; 또는 (iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포에 기초하여, (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포의 범위.
본 명세서에는 치료 방법이 제공되며, 상기 치료 방법은 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가하기 위해, 대상체의 혈액에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 존재를 모니터링하는 단계로서, 여기서 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있으며; 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%를 초과하고, 추정 독성 확률이 (약) 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 미만인 것과 연관된 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 (iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최저 개수 미만인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 증가시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여된다. 일부 경우에, 시제는 CAR-특이적 팽창이 가능하다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최고 개수 초과인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여된다. 일부 예시에서, 시제는 스테로이드이다. 일부 경우에, 스테로이드는 코르티코스테로이드(corticosteroid)이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone) 또는 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 10 mg 내지 약 80 mg, (약) 10 mg 내지 약 60 mg, (약) 10 mg 내지 약 40 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 1일 또는 24 시간 당 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 혈액 내 CAR+ T 세포에 대해 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에 모니터링 된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 혈액 내 CAR+ T 세포에 대해 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에 모니터링된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일을 초과한 시점에 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에 투여된다.
본 명세서에는 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 대상체로부터의 샘플 내 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 이상인 대상체를 선별하는 단계로서, 여기서 샘플은 유전자 조작 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하지 않고 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 투여를 받기 이전에 대상체로부터 수득되는 것인 단계; 선별된 대상체에게 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 투여하는 단계를 포함한다.
대상체에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법이 제공되며, 여기서 대상체는 대상체로부터의 샘플 내 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도는 임계 수준 이상인 대상체이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 샘플은 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 포함하지 않고, 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 투여를 받기 전에 대상체로부터 수득된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포를 비롯한 유전자 조작된 세포의 용량의 투여를 개시하기 전에 또는 이와 동시에 투여된다. 일부 경우에, 상기 방법은 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 추가로 포함한다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체는 질병 또는 병태를 가지며, 유전자 조작된 세포는 이러한 질병 또는 병태를 치료하기 위한 것이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제를 투여하기 이전에, 선별된 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 이후 독성이 발생할 위험에 있다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제의 투여는 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선별된 대부분의 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선별된 대상체의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상에서 치료적 범위 내에 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분하다.
일부 양태에서, 치료적 범위는 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%를 초과하고, 추정 독성 확률이 (약) 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 미만인 것과 연관된 범위; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포, (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 개수 또는 수준에 기초하여, (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 CD8+CAR+ T 세포의 개수 또는 수준에 기초하여, (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 종양 부담의 부피 측정치가 측정되며, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 부피, 괴사 부피, 괴사-종양 비율 (NTR), 종양주변 부종 (PTE), 및 부종-종양 비율 (ETR)이다. 일부 경우에, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD)이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 부피 측정치는 대상체의 컴퓨터 단층촬영 (CT), 양전자 방출 단층촬영 (PET), 및/또는 자기 공명 영상 (MRI)을 사용하여 측정된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체로부터의 샘플 내 염증성 마커가 측정되고, 이러한 염증성 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린 (β2-M), 락테이트 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인이다. 일부 경우에, 염증성 마커는 LDH이다. 일부 예시에서, 염증성 마커는 IL-7, IL15, MIP-1알파 또는 TNF-알파인 사이토카인 또는 케모카인이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 사이토카인 또는 케모카인은 대식세포 또는 단핵구 활성과 연관이 있다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플, 또는 혈청 샘플이거나, 이를 포함한다. 일부 경우에, 염증성 마커는 비색 분석 또는 면역분석을 사용하여 평가된다. 일부 경우에, 염증성 마커는 면역분석을 사용하여 평가되며, 면역분석은 효소-결합 면역흡착 분석 (ELISA), 효소 면역분석 (EIA), 방사 면역분석 (RIA), 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 웨스턴 블롯, 측면 흐름 분석, 면역조직화학, 단백질 분석 또는 면역-PCR (iPCR)으로부터 선택된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 임계값은 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값보다 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내의 높은 값이고 및/또는 복수의 대조군 대상체 내 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 초과하는 표준 편자 이내의 값; 복수의 대조군 대상체 중 적어도 하나의 대상체에서 측정된, 이러한 최고 배수 변화 초과의 선택적으로 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내의, 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값 초과의 값; 및/또는 복수의 대조군 대상체로부터의 대상체의 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 98% 초과에서 측정된, 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값 초과인 값이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 복수의 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받기 이전의 대상체 그룹이고, 이러한 그룹 중 대조군 대상체 각각은 치료적 범위 내에서 가장 높은 피크 CAR+ T 세포를 초과하는 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고; 그룹 중 대조군 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위한 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후, 독성, 선택적으로 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 2등급 또는 3등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 CRS를 나타내었으며; 그룹 중 대조군 대상체 각각은, 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는 그룹 중 대조군 대상체 각각은, 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후, 선택적으로 (약) 3개월 이상 또는 (약) 6개월 이상 동안, 지속적 반응을 나타내지 않았다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 부피 측정치는 SPD이고, 임계값은 (약) 30 cm2, (약) 40 cm2, (약) 50 cm2, (약) 60 cm2, 또는 (약) 70 cm2이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 염증성 마커는 LDH이고, 임계값은 (약) 리터 당 300 유닛, (약) 리터 당 400 유닛, (약) 리터 당 500 유닛 또는 (약) 리터 당 600 유닛이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 스테로이드이다. 일부 예시에서, 스테로이드는 코르티코스테로이드(corticosteroid)이다. 일부 예시에서, 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone) 또는 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 10 mg 내지 약 80 mg, (약) 10 mg 내지 약 60 mg, (약) 10 mg 내지 약 40 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 1일 또는 24 시간 당 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 부피 측정치 또는 염증성 마커는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이전 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 6 일, 8 일, 12 일, 16 일, 20 일, 24 일, 28 일 초과 이내에 대상체에서 측정된다.
대상체의 투약 방법이 제공되며, 상기 방법은 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 투여량은 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 대상체의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상에서 결정된 치료적 범위 내에 혈액 내 피크 CAR+ 세포를 달성하기에 충분한 유전자 조작된 세포의 개수를 포함하고, 여기서 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%를 초과하고, 추정 독성 확률이 (약) 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 미만인 것과 연관된 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 (iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은 (약) 1 x 105 내지 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, 5 x 106 내지 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, 1 x 107 내지 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, 5 x 107 내지 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포를 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 유전자 조작 세포의 복용량은 적어도 (약) 1 x 105 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 108 개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5 x 108 개의 CAR-발현 세포를 포함한다.
대상체의 투약 방법이 제공되며, 상기 방법은 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 차선의 용량을 투여하는 단계로서, 여기서 용량은 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 대상체의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상에서, 결정된 치료적 범위 내에 혈액 내 피크 CAR+ 세포를 달성하기에 불충분한 유전자 조작된 세포의 개수를 포함하는 단계; 유전자 조작된 세포를 투여한 이후, 대상체에서 CAR+ 세포 팽창 또는 증식을 향상시켜 치료적 범위 내에서 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 달성하기 위해, 시제를 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%를 초과하고 추정 독성 확률이 (약) 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 미만인 것과 연관된 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 (iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 상기 방법은 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니링하는 것을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제를 투여한 후, 상기 방법은 시제를 투여하지 않지만 동일한 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하는 방법과 비교하여, 대상체에서 결정된 치료적 범위 내에서 혈액 내 피크 CAR+ 세포; 또는 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 대상체의 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상에서 결정된 치료적 범위 내에서 혈액 내 피크 CAR+ 세포의 빈도 증가를 달성한다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은 (약) 1 x 107 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 5 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 1 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 5 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 1 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 CAR+ T 세포의 팽창, 선택적으로 CAR-특이적 팽창을 증가시킬 수 있다. 일부 경우에, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 치료되는 복수의 대상체 중, 상기 방법은 시제를 투여하는 것을 포함하지 않는 방법과 비교하여, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한, 지속적 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)을 달성하는 대상체의 백분율 증가를 달성한다. 일부 예시에서, 증가는 (약) 1.2 배, 1.5 배, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 10 배 또는 그 이상의 초과이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한 완전한 반응 (CR)을 달성하고; 및/또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한 객관적 반응 (OR)을 달성한다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50% 초과, (약) 60% 초과, (약) 70% 초과, 또는 (약) 80% 초과는 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 나타내지 않고 및/또는 2등급 이상의 또는 3등급 이상의 신경독성을 나타내지 않거나; 또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 40% 초과, (약) 50% 초과 또는 (약) 55% 초과는 임의의 신경독성 또는 CRS를 나타내지 않는다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 피크 CAR+ T 세포는 대상체의 혈액 내 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 개수로서 결정된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 치료적 범위는 추정된 독성 확률이 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만 또는 5% 미만이고, 추정된 반응 달성 확률이 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상을 초과하는 범위이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 독성 확률은 임의의 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS); 중증 독성 또는 3등급 이상의 독성; 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는 중증 신경독성, 2등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성으로부터 선택된 독성에 기초한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 독성 확률은 중증 독성 또는 3등급 이상의 독성 확률에 기초한다. 일부 경우에, 중증 독성은 3-5 등급 신경독성이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 반응 가능성은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 반응에 기초하며, 선택적으로 이러한 반응은 지속 가능하며, 선택적으로 적어도 3 개월 또는 적어도 6 개월 동안 지속 가능하다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 이러한 반응은 대상체의 골수에서 악성 면역글로불린 중쇄 유전자좌 (IGH) 및/또는 인덱스 클론의 존재의 평가에 기초하여 결정된 골수 반응이다. 일부 경우에, 악성 IGH 및/또는 인덱스 클론은 유세포 분석 또는 IgH 시퀀싱에 의해 평가된다.
지속적 반응의 가능성을 평가하는 방법이 제공되며, 상기 방법은, 대상체로부터의 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 피크 수준을 검출하는 단계로서, 여기서 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및 임계값에 대해 피크 수준을 개별적으로 비교하여, 대상체가 유전자 조작된 세포의 투여에 대해 지속적 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계를 포함한다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 미만인 경우 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 초과인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없거나; 또는 유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료적 범위 내에 있는 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값 미만이거나 또는 상한 임계값 초과인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체가 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 판단되는 경우, 치료제로, 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료로 치료하기 위한 대상체를 선별하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 대상체가 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 판단되는 경우, 치료제 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료를 투여하는 단계를 포함한다.
제공되는 치료 방법은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포를 투여받은 대상체를 선별하는 단계를 포함하며, 이러한 대상체로부터의 샘플에서 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준은 임계값 초과이고; 및/또는 대상체로부터의 샘플에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함한 T 세포의 피크 수준은 하한 임계값 미만 또는 상한 임계값 초과인 단계; 및 치료제 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료를 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 반응은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)이다. 일부 경우에, 반응은 3개월, 4 개월, 5 개월, 또는 6 개월 이상 동안 지속 가능하다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에, 피크 수준이 평가되고 및/또는 대상체로부터 샘플이 획득된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에, 피크 수준이 평가되고 및/또는 대상체로부터 샘플이 획득된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 피크 수준은 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이며, 이러한 염증성 마커는 C 반응성 단백질 (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-알파, MIP-1알파, MIP-1베타, MCP-1, CXCL10 또는 CCL13으로부터 선택된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 평가되며, 임계값은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 또는 5% 이내이고, 및/또는 유전자 조작된 세포를 투여받은 대조군 대상체의 그룹 중에서 결정된 염증성 마커의 피크 수준의 중앙값 또는 평균값의 표준 편차 이내이고, 여기서 그룹 중 대상체 각각은 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 선택적으로 3개월 이상 또는 6 개월 동안, 지속적 반응, 선택적으로 CR 및/또는 PR을 달성하지 않았다. 일부 예시에서, 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 선택적으로 유전자 조작된 세포의 투여 3개월 이상 또는 6 개월 이후 안정한 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD)을 나타냈다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 피크 수준은 CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+ T 세포 서브세트의 피크 수준이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 하한 임계값 및 상한 임계값은, 각각, 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 치료적 범위인, 추정 반응 확률이 (약) 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%를 초과하고 추정 독성 확률이 (약) 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 미만인 것과 연관된 범위의 상한 및 하한이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 치료적 범위는 추정된 독성 확률이 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만 또는 5% 미만이고, 추정된 반응 달성 확률이 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상을 초과하는 범위이다. 일부 경우에, 독성 확률은 임의의 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS); 중증 독성 또는 3등급 이상의 독성; 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는 중증 신경독성, 2등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성으로부터 선택된 독성에 기초한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 반응 가능성은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 반응에 기초하며, 선택적으로 이러한 반응은 지속 가능하며, 선택적으로 적어도 3 개월 또는 적어도 6 개월 동안 지속 가능하다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 피크 CAR+ T 세포는 대상체의 혈액 내 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 개수로서 결정된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 상한 임계값은 (약) 300 개의 세포 내지 마이크로리터 당 1000 개의 세포 또는 마이크로리터 당 400 개의 세포 내지 마이크로리터 당 600 개의 세포이거나, 또는 약 300 개의 세포, 마이크로리터 당 400 개의 세포, 마이크로리터 당 500 개의 세포, 마이크로리터 당 600 개의 세포, 마이크로리터 당 700 개의 세포, 마이크로리터 당 800 개의 세포, 마이크로리터 당 900 개의 세포 또는 마이크로리터 당 1000 개의 세포이고; 또는 하한 임계값은 (약) 마이크로리터 당 10 세포, 마이크로리터 당 9 개의 세포, 마이크로리터 당 8 개의 세포, 마이크로리터 당 7 개의 세포, 마이크로리터 당 6 개의 세포, 마이크로리터 당 5 개의 세포, 마이크로리터 당 4 개의 세포, 마이크로리터 당 3 개의 세포, 마이크로리터 당 2 세포 또는 마이크로리터 당 1 개의 세포 미만이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 샘플은 혈액 샘플 또는 혈장 샘플이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 방법은 생체 외에서 수행된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준은 상한 임계값 초과이고, 치료제는 CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, CAR+ T 세포의 피크 수준은 하한 임계값 미만이고, 치료제는 CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제이다. 일부 경우에, 시제는 스테로이드이다. 일부 경우에, 스테로이드는 코르티코스테로이드(corticosteroid)이다. 일부 예시에서, 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone) 또는 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 10 mg 내지 약 80 mg, (약) 10 mg 내지 약 60 mg, (약) 10 mg 내지 약 40 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 1일 또는 24 시간 당 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, CAR+ T 세포의 피크 수준은 상한 임계값 초과이고, 치료제는 CAR+ T 세포의 팽창, 선택적으로 CAR-특이적 팽창을 증가시킬 수 있는 시제이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 암이다. 일부 경우에, 암은 B 세포 악성 종양이다. 일부 예시에서, 암은 육종, 암종, 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, CLL, ALL, AML 및 골수종으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 예시에서, 암은 췌장암, 방광암, 대장암, 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포 암, 폐암, 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경 내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암 또는 연조직 육종이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체는 인간이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 항원은 다음으로부터 선택된다: αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2으로도 알려짐), 암배아 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; 또한 Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100 (gp100), G 단백질 연결 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이합체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Ra), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접합 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 풍부 반복 서열 8 패밀리 구성원 A 함유 (LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐과 거대세포바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 살해 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접합 분자 (NCAM), 종양 태아 항원, 종양에서 우선적으로 발현되는 흑색종 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 고아 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백 (TPBG 또한 5T4로도 알려짐), 종양-관련 당단백 72 (TAG72), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이 항원 또는 보편적인 표지(tag)와 관련된 항원, 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자.
이러한 임의의 일부 구현예에서, CAR은 질병 또는 병태와 연관된 및/또는 질병 또는 병태와 연관된 세포에서 발현된 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 예시에서, 항원은 다음으로부터 선택된다: 5T4, 8H9, avb6 인테그린, B7-H6, B 세포 성숙화 항원 (BCMA), CA9, 암-고환 항원, 탄산 무수화효소 9 (CAIX), CCL-1, CD19, CD20, CD22, CEA, B형 간염 표면 항원, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 암배아 항원 (CEA), CE7, 사이클린, 사이클린 A2, c-Met, 이중 항원, EGFR, 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), EPHa2, 에프린B2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 이합체, EGFR vIII, 에스트로겐 수용체, Fetal AchR, 엽산 수용체 알파, 엽산 결합 단백질 (FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, G250/CAIX, GD2, GD3, gp100, Her2/neu (수용체 타이로신 키나제 erbB2), HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, Lewis Y, L1-세포 접합 분자 (L1-CAM), 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MART-1, 메소텔린, 쥐과 CMV, 뮤신 1 (MUC1), MUC16, NCAM, NKG2D, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 종양태아 항원, 우선적으로 발현되는 흑색종의 항원 (PRAME), PSCA, 프로게스테론 수용체, 서바이빈, ROR1, TAG72, VEGF 수용체, VEGF-R2, Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인, 및 ITAM를 포함하는 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 경우에, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 도메인을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 공동자극 신호전달 영역을 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 공동자극 신호전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의 신호전달 도메인을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 공동자극 도메인은 4-1BB의 도메인이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 상기 세포는 T 세포이다. 일부 경우에, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+이다. 일부 예시에서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 자가조직이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 세포는 대상체에 대해 동종이계이다.
또한, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포를 함유하는 조성물, 및 피크 CAR+ T 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가한 결과에 따라 또는 이에 기초하여 대상체에게 세포의 용량을 투여하기 위한 설명서를 포함하는 키트가 제공되며, 여기서 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65%를 초과하고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 (iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 설명서는 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서 CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 것을 명시한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 키트는 시제를 추가로 포함한다.
대상체에서, CAR+ T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 팽창 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제, 및 대상체에게 시제를 투여하기 위한 설명서를 포함하는 키트가 제공되며, 상기 대상체는 피크 CAR+ T 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가한 결과에 기초하여, 유전자 조작된 세포를 투여받은 적이 있으며, 여기서 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 (iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 설명서는 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최저 개수 미만인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 증가시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여되는 것을 명시한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 CAR-특이적 팽창이 가능하다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최고 개수 초과인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여된다.
대상체에서 CAR+ T 세포를 비롯한 유전자 조작된 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제, 및 대상체로부터의 샘플 내 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도를 평가하고, 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 이상인 경우 대상체에게 시제를 투여하기 위한 설명서를 포함하는 키트가 제공되며, 여기서 샘플은 유전자 조작 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 함유하지 않고 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 투여받기 이전에 대상체로부터 수득된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 부피, 괴사 부피, 괴사-종양 비율 (NTR), 종양주변 부종 (PTE), 및 부종-종양 비율 (ETR)이다. 일부 경우에, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD)이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 염증성 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2 마이크로글로불린 (β2-M), 락테이트 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인이다. 일부 예시에서, 염증성 마커는 LDH이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 스테로이드이다. 일부 경우에, 스테로이드는 코르티코스테로이드(corticosteroid)이다. 일부 예시에서, 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone) 또는 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여하기 위해 제제화된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, CAR은 질병 또는 병태와 연관된 및/또는 질병 또는 병태와 연관된 세포에서 발현된 항원에 특이적으로 결합한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포는 T 세포, 선택적으로 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 포함한다.
본 명세서에 제공된 임의의 키트를 포함하는 제조 물품이 또한 제공된다.
일부 양태에서 독성을 개선시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성을 치료하기 위해 치료 처방을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 여기서 치료 처방은 다음으로부터 선택된다: (a) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72, 96 또는 120 시간 이내에, 발열 및/또는 독성, 선택적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상, 및/또는 1등급 CRS과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) 인터루킨-6 수용체 (IL-6R)에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여); (b) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 2등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여); (c) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 3등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 12 시간 마다 투여); 또는 (d) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 4등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여).본 명세서에 기재된 방법 중 이러한 임의의 일부 구현예에서, 최대 2회 용량의 시제가 투여된다.
또한, 일부 양태에서, 독성을 개선시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성을 치료하기 위한 치료 처방을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 여기서 치료 처방은 다음을 포함한다: (a) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72, 96 또는 120 시간 이내에, 발열 및/또는 독성, 선택적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상, 및/또는 1등급 CRS과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) 인터루킨-6 수용체 (IL-6R)에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여); (b) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 2등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여); (c) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 3등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 12 시간 마다 투여); 및 (d) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 3등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여).
다른 양태에서, 독성을 개선시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성을 치료하기 위한 치료 처방을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 여기서 치료 처방은, 유전자 조작의 용량을 투여받은 이후 72, 96 또는 120 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성, 선택적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상, 및/또는 1등급 CRS과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여하는 것이다: (i) 인터루킨-6 수용체 (IL-6R)에 결합할 수 있는 시제 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량. 이러한 임의의 일부 구현예에서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제는 하나 이상의 용량으로 투여된다.
또한, 본 명세서에는 독성을 개선시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 하나 이상의 물리적 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 감소 및/또는 개선시킬 수 있는 하나 이상의 시제를 투여하는 단계를 포함하고, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 여기서 하나 이상의 시제는 다음을 포함하는 치료 처방으로 투여된다: (a) (i) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이상에, 대상체가 발열을 나타내며, 독성, 선택적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내고, 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내거나; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열을 나타내고 및/또는 2등급 이상의 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여함; (b) (a)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하며, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여됨; (c) (b)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하며, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여됨; 및 (d) (c)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하며, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a), (b) 또는 (c)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a), (b) 또는 (c)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여됨.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 하나 이상의 시제는 인터루킨-6 수용체 (IL-6R) 또는 하나 이상의 스테로이드에, 선택적으로 하나 이상의 스테로이드의 하나 이상의 용량에 결합할 수 있는 시제로부터 선택된다.
또한, 본 명세서에 독성을 개선시키는 방법이 제공되며, 상기 방ㅂ법은 하나 이상의 물리적 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 감소 및/또는 개선시킬 수 있는 하나 이상의 시제를 투여하는 단계를 포함하고, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 여기서 하나 이상의 시제는 다음을 포함하는 치료 처방으로 투여된다: (a) (i) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이상에, 대상체가 독성, 선택적으로 신경독성 (NT)과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내거나; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여함; (b) (a)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하며, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여됨; 및 (c) (b)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하며, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여됨. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 하나 이상의 시제는 하나 이상의 스테로이드, 선택적으로 하나 이상의 스테로이드의 하나 이상의 용량이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 최대 2회 용량의 시제가 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제의 용량 및 스테로이드의 용량은 동시에 투여되거나, 또는 스테로이드의 용량이 IL-6R에 결합할 수 있는 시제의 용량의 약 1, 2, 3 또는 4 시간 이내에 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 그 이상의 시간 마다 1회 이하로 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 최대 2회 용량의 시제가 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 36 또는 48 시간 마다, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위로 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 코르티코스테로이드이거나, 이를 포함하며, 이는 선택적으로 글루코코르티코이드(glucocorticoid)이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 코르티손, 덱사메타손, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 및 프레드니손으로부터 선택된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 덱사메타손, 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론이거나, 이를 포함한다. 특정 구체예에서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 25.0 mg, 또는 (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 등가 복용량으로 투여하기 위한 것이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 (약) 0.5 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg 또는 5 mg/kg 메틸프레드니솔론 또는 이의 등가물의 등가 복용량으로 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 다중 용량의 스테로이드가 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5일 이상 동안 투여된다. 다른 구체예에서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당, (약) 10 mg 내지 약 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 등가 복용량으로, 또는 1일 또는 24 시간 당, 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물로 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 또는 그 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5일 이상 동안 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당, (약) 1.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 10 mg 내지 약 80 mg, (약) 10 mg 내지 약 60 mg, (약) 10 mg 내지 약 40 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 등가 복용량으로, 또는 1일 또는 24 시간 당, (약) 10 mg 내지 약 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 1일 또는 24 시간 당, 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물로 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 다중 용량은 약 1 내지 약 3 mg/kg의 초기 용량의 스테로이드, 예컨대 2 mg/kg의 메틸프레드니솔론 또는 이의 등가물, 이에 이어서 하루에 걸쳐 또는 24 시간에 걸쳐 1, 2, 3, 4 또는 5회로 분할된, 약 1 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg 또는 5 mg/kg의 후속 용량의 메틸프레드니솔론 또는 이의 등가물을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 고용량의 스테로이드은 (약) 10 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 전술한 값 중 임의의 값에 의해 정의되는 범위의 복용량의 덱사메타손이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 정맥내 또는 경구 투여를 위해 제제화된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제는 재조합 항-IL-6 수용체 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이거나, 토실리주맙 또는 사릴루맙 또는 이의 항원-결합 단편으로부터 선택된 시제이거나, 이를 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 재조합 항-IL-6R 항체는 토실리주맙 또는 이의 항원-결합 단편이거나, 이를 포함한다. ㅈ이러한 임의의 일부 구현예에서, 항-IL-6R 항체는 (약) 1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 2 mg/kg 내지 19 mg/kg, 4 mg/kg 내지 16 mg/kg, 6 mg/kg 내지 14 mg/kg 또는 8 mg/kg 내지 12 mg/kg의 복용량으로 투여되기 위한 것이거나, 또는 항-IL-6R 항체는 (적어도 약) 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg, 12 mg/kg, 14 mg/kg, 16 mg/kg, 18 mg/kg, 20 mg/kg의 복용량으로 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 항-IL-6R 항체는 단일 용량 투여를 위해 (약) 30 mg 내지 약 5000 mg, 약 50 mg 내지 약 1000 mg, 약 50 mg 내지 약 500 mg, 약 50 mg 내지 약 200 mg, 약 50 mg 내지 약 100 mg, 약 100 mg 내지 약 1000 mg, 약 100 mg 내지 약 500 mg, 약 100 mg 내지 약 200 mg, 약 200 mg 내지 약 1000 mg, 약 200 mg 내지 약 500 mg, 또는 약 500 mg 내지 약 1000 mg의 양으로 제제화된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 항-IL-6R 항체는 정맥내 투여를 위해 제제화된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 상기 방법은 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 72 시간 이내에 독성, 선택적으로 CRS와 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 독성, 선택적으로 CRS과 연관된 물리적 징후 또는 증상이 개선되지 않는 경우, 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상이 중증 또는 공격형인 경우 및/또는 독성의 등급, 선택적으로 CRS이 더욱 심해지는 경우, 추가 용량의 스테로이드를, 선택적으로 고용량으로 투여하는 것을 추가로 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 고용량의 스테로이드는 약 1 내지 약 4 mg/kg의 초기 용량에 이어, 하루에, 또는 이의 등가에 2, 3, 4, 5 또는 6 회로 분할된, 약 1 내지 약 4 mg mg/kg/일의 메틸프레드니솔론이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 상기 방법은 치료 처방을 투여하기 이전에, 질병 또는 병태를 치료하기 위해, 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나, 또는 이를 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 병, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 연관된, 이에 특이적인, 및/또는 이에 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 질병, 장애 또는 병태는 감염성 질병 또는 장애, 자가면역 질병, 염증성 질병, 또는 종양 또는 암이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 표적 항원은 종양 항원이다. 특정 구현예에서, 표적 항원은 다음으로부터 선택된다: αvβ6 인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2으로도 알려짐), 암배아 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; 또한 Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100 (gp100), G 단백질 연결 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이합체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Ra), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접합 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 풍부 반복 서열 8 패밀리 구성원 A 함유 (LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐과 거대세포바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 살해 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접합 분자 (NCAM), 종양 태아 항원, 종양에서 우선적으로 발현되는 흑색종 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 고아 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백 (TPBG 또한 5T4로도 알려짐), 종양-관련 당단백 72 (TAG72), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이 항원 또는 보편적인 표지(tag)와 관련된 항원, 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 기능적 비-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나, 또는 이를 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 항원-결합 도메인은 항체 또는 이의 항체 단편이거나, 또는 이를 포함하고, 상기 단편은 선택적으로 단일 사슬 단편이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 단편은 유연한 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 단편은 scFv를 포함한다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 세포 내 신호전달 영역을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 1차 신호전달 도메인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 요소의 신호전달 도메인 및/또는 면역수용체 타이로신계 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호전달 도메인이거나 이를 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 신호전달 도메인, 또는 이의 신호전달 부분이거나, 또는 이를 포함한다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호전달 영역 사이에 배치된 막관통 도메인을 추가로 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 공동자극 신호전달 도메인을 추가로 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 공동자극 신호전달 도메인은 T 세포 공동자극 분자의 세포 내 신호전달 도메인 또는 이의 신호전달 부분을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 공동자극 신호전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호전달 도메인 또는 이의 신호전달 부분을 포함한다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 공동자극 신호전달 도메인은 막관통 도메인과 세포 내 신호전달 도메인 사이에 있다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 상기 세포는 T 세포이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 자가조직이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 세포는 대상체에 대해 동종이계이다.
또한 다음의 단계를 포함하는 치료 방법이 제공된다: (a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 질병 또는 병태를 치료하기 위해 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 단계; (b) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니터링하여 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가하는 단계, 및 (c) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계, 여기서 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
또한 치료 방법이 제공되며, 상기 방법은 다음의 단계를 포함한다: (a) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있는지를 평가하기 위해, 대상체의 혈액에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 존재를 모니터링하는 단계로서, 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및 (b) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계, 여기서 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최저 개수 미만인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 증가시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 CAR-특이적 팽창을 증가시킬 수 있다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ 항체 또는 항-TGFβR 항체 또는 사이토카인이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최고 개수 초과인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여된다.
본 명세서에 제공되는 치료 방법은 다음의 단계를 포함한다: (a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 질병 또는 병태를 치료하기 위해 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 단계; (b) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계, 및 (c) 대상체에서 CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계로서, 다음의 경우에 투여하는 단계: (i) 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 양이, 유전자 조작된 세포의 투여 이후, (약) 마이크로리터 당 500 개의 세포 초과인 경우; 또는 (ii) 혈액 내 CD8+CAR+ T 세포의 양이, 유전자 조작된 세포의 투여 이후, (약) 마이크로리터 당 200 개의 세포 초과인 경우.
본 명세서에 제공되는 치료 방법은 다음의 단계를 포함한다: (a) 대상체의 혈액에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 존재를 모니터링하는 단계로서, 여기서 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및 (b) 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계로서, 다음의 경우에 투여하는 단계: (i) 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 양이, 유전자 조작된 세포의 투여 이후, (약) 마이크로리터 당 500 개의 세포 초과인 경우; 또는 (ii) 혈액 내 CD8+CAR+ T 세포의 양이, 유전자 조작된 세포의 투여 이후, (약) 마이크로리터 당 200 개의 세포 초과인 경우.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 하나 이상의 스테로이드이다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 덱사메타손(dexamethasone) 또는 메틸프레드니솔론(methylprednisolone)이다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여된다. 이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양, 또는 1일 또는 24 시간 당, 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에, 혈액 내 CAR+ T 세포에 대해 모니터링된다.
이러한 임의의 일부 구현예에서, 시제는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일 초과인 시점에; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 (약) 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에 투여된다.
도 1은 혈액 내 CD4+/절단된 수용체 또는 CD8+/절단된 수용체 CAR-T 세포의 개수에 기초하여 구성된 반응 추정 확률 및 3-5 등급 신경독성 발생 추정 확률의 곡선을 도시한다.
도 2A는 최상의 전체 반응에 의해 그룹화된 대상체에 대해 주입 후 특정 시점에 측정된 말초 혈액 내 CD3+/CAR+ T 세포의 개수를 도시한다.
도 2B-2D는 3개월에서의 지속된 반응에 의해 그룹화된, 반응을 달성한 대상체에 대해 주입 후 특정 시점에 측정된 말초 혈액 내 CD3+/CAR+ T 세포, CD4+/CAR+ T 세포, 및 CD8+/CAR+ T 세포 수준을 도시한다.
도 3은 실험실 이상 및 치료 후 발생한 유해 사례를 경험한 대상체의 백분율을 나타내며, 이는 대상체의 ≥20%에서 발생하였다. * : 1명의 5 등급 AE인 다발성 장기 부전은 연구 치료와 관련이 없으며 림프종의 진행에 기인함; †: 1명의 5 등급 AE인 미만성 폐포 손상에 대해, 조사자는 성장 인자 및 광범위한 항생제 및 항진균제에 대해 호중구감소증이 있는 동안 진행성 호흡 부전으로 기계적 인공호흡을 거부한 대상체에서 플루다라빈, 사이클로포스파미드, 및 CAR T 세포 요법에 관련되어 제23일에 발생한 것으로 평가.
도 4는 CRS 및 신경독성의 발병까지 관찰된 시간을 나타내는 카플란 마이어 곡선이다.
도 5A 및 도 5B는 대상체의 전체 (도 5A) 및 코어 (도 5B) 코호트 중 치료된 대상체의 하위그룹 중에서 3 개월의 전체 반응률 (M3 ORR)을 도시한다.
도 6A 및 도 6B는 대상체의 전체 (도 6A) 및 코어 (도 6B) 코호트에서 반응 지속기간 (CR/PR, CR 또는 PR) 및 전체 생존을 도시한다.
도 7A는 상이한 용량 수준에서 치료-후 다양한 시점에서 말초 혈액 내 CAR+ T 세포의 약동학을 도시한다. 도 7B는 3 개월에서의 반응자 (CR + PR)와 비반응자 (PD) 사이에 치료-후 다양한 시점에서 말초 혈액 네 CAR+ T 세포의 약동학을 도시한다. 도 7C는 임의의 신경독성이 발생한 또는 발생하지 않은 대상체에서 치료-후 다양한 시점에서 말초 혈액 내 CAR+ T 세포의 약동학을 도시한다.
도 8은 CAR+ T 세포의 투여 이전에 대상체의 혈청에서 측정된 분석물의 수준과 신경독성 발생에 대한 상관관계를 도시한다.
도 9는 CAR-T-발현 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 함유하는 항-CD19 세포 요법으로 치려된 NHL 대상체의 전체 코호트 및 코어 코호트 내의 개별 대상체에서 시간에 따라 관찰된 무진행 시간 (개월)을 플롯팅하고 최상의 전체 반응 및 반응 지속성을 나타내는 그래프, 및 개별적인 임상 결과를 도시한다. a : 달리 언급되지 않는 경우를 제외하고, 환자는 1개월에 BOR 달성; b :2명의 환자에서 관찰된 림프종에 의한 CNS 침범의 완전한 소산; c : 1명의 환자는 질병 진행 시 생검 후 재팽창.
도 10A는 절단된 수용체 (CD3, 원형; N=87)에 대해 특이적인 항체를 사용하여 유세포 분석에 의해 평가된 CAR-발현 CD3+ 세포/μL 혈액의 중앙값 (±사분위수) 개수; 또는 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 87명의 대상체로부터의 혈액 샘플에서 CAR (qPCR, 사각형; N=85)를 인코딩하는 벡터 내 존재하는 우드척 간염 바이러스 전사-후 조절 요소 (WPRE)에 대해 특이적인 프라이머를 사용하여 정량적 중합효소 연쇄 반응 (qPCR)에 의해 평가된, 카피 통합된 CAR 형질도입 유전자/μg 게놈 DNA의 중앙값 (±사분위수) 개수를 도시한다. 유세포 분석에서 CAR+ 세포 검출에 대한 컷오프는 CAR+ 게이트에서 ≥ 25 사례로 설정하였고, qPCR에 대한 검출 한계는 게놈 DNA의 μg 당 ≥ 12.5의 CAR 형질도입 유전자의 카피였다. 도 10B는 제11일 ± 3 일에, 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 67명의 대상체로부터의 혈액 및 골수 샘플에서, CD4+ 및 CD8+CAR-발현 세포/μL의 상대적인 개수를 도시한다. 선은 단일 선을 나타내며 회귀선이 아니다.
도 11A 및 11B는 DL1으로 CAR-발현 T 세포를 투여받고, 신생 또는 지연성 림프종으로부터 형질전환된 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL, NOS; N=27), 여포 림프종으로부터 형질전환된 림프종 (tFL; N=10), 변연부 림프종 또는 만성 림프구성 백혈병으로부터 형질전환된 DLBCL (tMZL/tCLL; N=4), 또는 외투 세포 림프종 (MCL; N-5)을 가지는 대상체 하위그룹에서, 제0일과 제28일 사이 곡선 아래 면적의 중앙값 (±사분위수) (AUC0-28; 도 11A)과, CD4+ 및 CD8+ CAR+ 세포의 최대 혈청 농도 (Cmax; CAR+ 세포/μL 혈액; 도 11B)를 도시한다.
도 12A 및 12B는 DL1 또는 DL2으로 CAR+ 세포를 투여받은 대상체에서 제0일과 제28일 사이 곡선 아래 면적의 중앙값 (±사분위수) (AUC0-28; 도 12A) 및 CD3+, CD4+ 및 CD8+ CAR+ 세포의 최대 혈청 농도 (Cmax; CAR+ 세포/μL 혈액; 도 12B)를 도시한다.
도 13A-13D는 CRS가 발생하지 않은 대상체 (CRS 없음)와 비교하여 사이토카인 방출 증후군이 발생한 대상체 (임의의 CRS)에서 (CD4+: 도 13A; CD8+: 도 13B) 또는 NT가 발생하지 않은 대상체 (NT 없음)와 비교하여 신경독성이 발생하지 않은 대상체 (임의의 NT)에서 (CD4+: 도 13C; CD8+: 도 13D) 시간에 따른 CAR-발현 CD4+ 및 CD8+ CAR+ 세포/μL 혈액의 중앙값 (±사분위수) 개수를 도시한다.
도 14A 및 14B는 CR, PR 또는 PD의 최상의 전체 반응 (BOR) 또는 CR, PR 또는 PD의 3-개월 (M3) 지속적 반응을 가지는 대상체에 의해 그룹화된 대상체에서 피크 CD3+ CAR+ 세포/μL의 개수 (CD3+ Cmax)를 도시한다.
도 15A는 높은 CAR+ 세포 팽창 (CD3+ Cmax > 500)을 나타낸 대상체 및 낮은 CAR+ 세포 팽창 (CD3+ Cmax < 500)을 나타낸 대상체로부터의 샘플에서 혈청 내 전-림프구 고갈 혈액 분석물 수준을 도시한다. 도 15B는 높은 CAR+ 세포 팽창 (CD3+ Cmax > 500)을 나타낸 대상체 및 낮은 CAR+ 세포 팽창 (CD3+ Cmax < 500)을 나타낸 대상체로부터의 샘플에서 혈청 내 피크 혈액 분석물 수준을 도시한다.
도 16은 DL1 또는 DL2의 CAR+ 세포를 투여받은 개별적인 대상체에 대해 CD3+ CAR+ 세포의 AUC0-28 (세포*일/μL)에 대해 전-림프구 고갈 직경의 곱의 합 (SPD; cm2)을 플롯팅한 플롯을 도시한다.
도 17A 및 17B는 CRS가 발생하지 않은 대상체 (CRS 0 등급)와 비교하여 사이토카인 방출 증후군이 발생한 대상체 (CRS 1-4 등급)로로부터의 샘플에서(도 17A) 또는 in NT가 발생하지 않은 대상체 (NT 1-4 등급)와 비교하여 신경독성이 발생하지 않은 대상체 (NT 0 등급)(도 17B) 로부터의 샘플에서 혈청 내 전-림프구 고갈 혈액 분석물 수준을 도시한다. 단위는 다음과 같다: 페리틴 및 D-이합체 (μg/L); CRP (mg/L) 및 사이토카인 (pg/mL).
도 18은 CRS가 발생하지 않은 대상체 (CRS 없음)와 비교하여 사이토카인 방출 증후군이 발생한 대상체 (임의의 CRS)에서 또는 NT가 발생하지 않은 대상체 (NT 없음)와 비교하여 신경독성이 발생하지 않은 대상체 (임의의 NT)에서, 종양 부담을 나타내는 전-림프구 고갈 환자 파라미터 직경의 곱의 합 (SPD; cm2), 및 락테이트 탈수소효소 (LDH; U/L) 수준의 평가를 도시한다.
도 19A는 신경독성이 발생한 개체 (1-4 등급 NT) 또는 NT가 발생하지 않은 개체 (0 등급 NT) (좌측 패널), 및 CRS가 발생한 개체 (1-4 등급 CRS) 또는 CRS가 발생하지 않은 개체 (0 등급 CRS) (우측 패널)에서 전-림프구 고갈 LDH (U/L) 수준에 대한 전-림프구 고갈 SPD (cm2)을 도시하는 플롯이다. 점선은 CRS 또는 NT의 보다 높은 비율과 연관된 SPD (50 cm2 이상) 또는 LDH (500 U/L 이상)의 수준을 나타낸다. 도 19B는 SPD (50 cm2 이상) 또는 LDH (500 U/L 이상)의 수준에 기초하여, CRS 또는 NT 발생에 대해 승산비 추정치를 도시한다 (95% 신뢰 구간 (CI)). 도 19C는 SPD 또는 LDH의 수준에 기초하여, 임계값보다 낮은 승산비 추정치를 포함하여, CRS 또는 NT 발생에 대한 승산비 추정치를 도시한다 (95% 신뢰 구간 (CI)).
도 20은 3개월에서의 반응을 가지지 않는 대상체에 대하여 지속적 3개월에서의 반응을 가지는 대상체의 전-림프구 고갈 종양 부담 파라미터 (SPD) 및 혈액 분석물 수준을 도시한다. 단위는 다음과 같다: 페리틴 및 D-이합체 (μg/L); CRP (mg/L) 및 SAA-1 (mg/L) 및 사이토카인 (pg/mL).
도 21A 및 21B는 CRS가 발생하지 않은 대상체 (CRS 없음)와 비교하여 사이토카인 방출 증후군이 발생한 대상체 (임의의 CRS) (도 21A) 또는 NT가 발생하지 않은 대상체 (NT 없음)와 비교하여 신경독성이 발생하지 않은 대상체 (임의의 NT) (도 21B)로부터의 샘플에서 혈청 내 피크 혈액 분석물 수준을 도시한다. 단위는 다음과 같다: CRP (mg/L), SAA-1 (mg/L) 및 사이토카인 (pg/mL).
도 22A는 안정성 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD)을 가진 대상체 (N=17)에서 수준과 비교하여 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)의 최상의 전체 반응 (BOR)을 가진 대상체 (N=57)로부터의 혈청 샘플에서 키프 혈액 분석물 수준을 도시한다. 도 22B는 3-개월에 CR/PR 반응을 가진 대상체 (N=35)와 비교하여 3-개월에 SD/PD 반응을 가진 대상체 (N=31)로부터의 혈청 샘플에서 피크 혈액 분석물 수준을 도시한다. 단위는 다음과 같다: CRP (mg/L), SAA-1 (mg/L) 및 사이토카인 (pg/mL).
도 23A-23C는 CD3+ (도 23A), CD4+ (도 23B) 또는 CD8+ (도 23C) CAR-발현 세포의 최대 혈청 농도 (Cmax; 세포/μL 혈액)에 기초하여 반응, 독성 및 지속적 반응 결과의 추정 확률 곡선을 도시한다. 전체 반응률 (ORR; 완전한 반응 (CR) 및 부분적 반응 (PR)인 대상체 포함), 3-개월 반응 (M3 반응; 투여 후 3개월에 CR 및 PR 포함), 임의의 NT, 임의의 CRS, 3-4 등급 NT, 3-5 등급 NT 또는 2-5 등급 CRS에 대한 추정 확률 곡선.
도 24는 치료되는 대상체의 하위그룹에서 3 개월 객관적 반응률 (ORR)을 도시한다.
도 25A 및 25B는 전체 코호트 (도 25A) 및 코어 코호트 (도 25B)에 대한 반응 지속기간 (DOR)을 도시하고, 도 25C 및 25D는 CR, PR을 달성한 대상체, 반응을 나타낸 모든 대상체, 비-반응자, 및 치료되는 모든 대상체에 대해 전체 코호트 (도 25C) 및 코어 코호트 (도 25D)에 대한 전체 생존률을 도시한다. 반응 기간 동안 F/U 중앙값은 6.3 개월이었다.
도 26은 ≥20% 환자에서 발생한 전체 DLBCL 코호트에서, 치료 후 발생한 유해 사례 (TEAE)를 경험한 대상체의 백분율을 도시한다. 적어도 28 일의 후속 조치로 DL1의 적합한 생성물로 치료된 5명의 MCL 환자에 대한 데이터는 포함되지 않는다. b : 1명의 5 등급 AE인 폐혈성 쇼크는 CAR+ T 세포 투여와 무관. †: 1명의 5 등급 AE인 미만성 폐포 손상에 대해, 조사자는 성장 인자 및 광범위한 항생제 및 항진균제에 대해 호중구감소증이 있는 동안 진행성 호흡 부전으로 기계적 인공호흡을 거부한 환자에서 플루다라빈, 사이클로포스파미드, 및 CAR+ T 세포에 관련되어 제23일에 발생한 것으로 평가. d : 실험실 이상반응.
도 27은 전체 코호트에서 시간에 따라 CRS 또는 신경독성이 발생한 대상체의 백분율을 도시한다.
도 28은 실시예 6에 기재된 연구 시점에 ≥20% 대상체에서 발생한 전체 DLBCL 코호트에서, 치료 후 발생한 유해 사례 (TEAE)를 경험한 대상체의 백분율을 도시한다. 적어도 28 일의 후속 조치로 DL1의 적합한 생성물로 치료된 6명의 MCL 환자에 대한 데이터는 포함되지 않는다. b : 1명의 5 등급 AE인 폐혈성 쇼크는 CAR+ T 세포 투여와 무관하고 질병 진행의 환경에서 발생. c : 1명의 5 등급 AE인 미만성 폐포 손상에 대해, 조사자는 성장 인자 및 광범위한 항생제 및 항진균제에 대해 호중구감소증이 있는 동안 진행성 호흡 부전으로 기계적 인공호흡을 거부한 환자에서 플루다라빈, 사이클로포스파미드, 및 CAR+ T 세포에 관련되어 제23일에 발생한 것으로 평가. d : 실험실 이상반응.
도 29는 치료되는 대상체의 하위그룹에서 6 개월 객관적 반응률 (ORR)을 도시한다 (95% 신뢰 구간). a 코어 코호트에서 모든 용량 수준으로 치료된 모든 DLBCL 대상체 포함.
도 30A 및 30B는 전체 코호트 (도 30A) 및 코어 코호트 (도 30B)에 대한 반응 지속기간 (DOR)을 도시하고, 도 30C 및 30D는 CR, PR을 달성한 대상체, 반응을 나타낸 모든 대상체, 비-반응자, 및 치료되는 모든 대상체에 대해 전체 코호트 (도 30C) 및 코어 코호트 (도 30D)에 대한 전체 생존률을 도시한다. NE, 추정 불가.
도 31은 자가 조작된 CAR+ T 세포의 2회 용량을 투여받은 대상체에서, 제2 용량의 투여 이후, 다양한 시점에, CAR+ T 세포 농도 (세포/μL; 좌측 축) 및 1일 덱사메타손 투여 용량(1일 IV 용량, mg; 우측 축)을 도시한다.
I. 치료적 복용량 범위의 결정 방법
본 명세서에 제공된 구현예에는, 질병 또는 병태를 가지거나 가지는 것으로 추정되는 대상체에게 조작된 세포, 예컨대 요법의 세포에 의해 특이적으로 인식되는 세포 및/또는 세포에 의해 특이적으로 결합 또는 인식되는 항원을 발현하는 세포를 포함한 요법과 같은 세포 요법의 투여하는 것을 포함하며 이와 관련된 방법, 용도, 조성물 및 제조 물품이 있다. 일부 양태에서 제공되는 구현예는 대상체를 투여하는 것, 예를 들어, 대상체에게 특정 용량의 세포 요법을 투여하는 것, 예컨대 치료적 복용량 범위 및/또는 윈도우 내에 있거나, 있는 것으로 추정되는 용량을 투여하는 것과 관련되며, 이러한 범위 및/또는 윈도우는 일반적으로 대상체의 샘플, 체액, 조직, 장기 또는 위치에서 조작된 세포의 원하는 수준을 달성하거나, 달성할 가능성이 있는 범위 및/또는 윈도우이다. 또한 독성을 개선 및/또는 치료하기 위한 방법이 제공된다. 또한 세포 요법에 사용되는 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법이 제공된다. 일부 양태에서, 또한 지속적 반응과 같은 반응 가능성을 평가하는 방법이 제공된다. 일부 양태에서, 또한 관련 용도, 그리고 제공된 방법과 관련된 키트, 및 제조 물품이 제공된다.
입양 세포 요법 (관심 질병 또는 장애에 특이적인 재조합 및/또는 키메라 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR) 및/또는 다른 재조합 항원 수용체를 발현하는 세포의 투여를 포함하는 요법, 뿐만 아니라 다른 입양 면역 세포 및 입양 T 세포 요법)은 암 그리고 다른 질병 및 장애의 치료에 효과적일 수 있다.　특정 상황에서, 입양 세포 요법에 대한 이용 가능한 접근법이 항상 완전히 만족스럽지는 않을 수 있다. 일부 상황에서, 요법에 대한 최적의 반응은 투여되는 세포가 표적, 예를 들어, 표적 항원을 인식하고 이에 결합하여, 대상체, 종양, 및 이의 환경 내의 적절한 부위로 수송, 국소화 및 성공적으로 진입하여, 활성화되고, 팽창하여, 세포독성 살해 및 사이토카인과 같은 다양한 인자의 분비를 포함한 다양한 이펙터 기능을 발휘하고, 장기간을 포함하여, 특정 표현형 상태 (예컨대 이펙터, 수명이 긴 기억, 덜 분화된, 및 이펙터 상태)로 재프로그래밍에 분화, 전이 또는 개재하여, 표적 리간드 또는 항원에 대한 제거 및 재노출 이후 효과적이고 강력한 리콜 반응을 제공하고, 피로, 아너지(anergy), 말단 분화, 및/또는 억제 상태로의 분화를 피하거나 감소시키는 능력에 의존한다.　
일부 양태에서, 입양 세포 요법의 치료적 효과는 이러한 세포가 투여되는 대상체에서의 독성 발생에 의해 제한될 수 있으며, 일부 경우에 이러한 독성은 투여되는 세포의 특정 용량 또는 노출에서 심할 수 있다. 일부 경우에, 이러한 세포의 보다 높은 용량이 치료적 효과를 증가시킬 수 있지만, 예를 들어, 팽창 및/또는 지속성을 증진시키는 것과 같이, 세포에 대한 노출을 증가시킴으로써, 독성 또는 보다 중증의 독성을 발생시킬 위험이 더 클 수 있다. 일부 양태에서, 투여되는 세포 일부는 빠르게 팽창 또는 증식하는 세포를 함유할 수 있으며, 이는 또한 독성 또는 보다 중증의 독성을 발생시킬 위험에 기여할 수 있다. 또한, 일부 경우에, 질병 부담이 보다 높은 대상체도 또한 독성 또는 보다 중증의 독성을 발생시킬 위험이 더 클 수 있다. 대상체에게 세포 요법을 투여하는 특정한 이용 가능한 방법이 항상 완전히 만족스럽지는 않을 수 있다. 대상체에서 세포 용량을 증가시키거나 또는 투여되는 세포의 팽창 또는 증식을 촉진시키면 높은 반응률과 관련될 수 있지만, 독성의 발생 증가와 또한 관련될 수 있다.
제공되는 방법은 세포 요법의 용량을 결정할 때 이용 가능한 접근법에 비해 이점을 제공한다. 제공되는 방법은 치료적 복용량 범위 및/또는 윈도우 내에 있거나, 또는 있는 것으로 추정되는 용량을 대상체에게 투여하는 것을 허용하며, 이는 일반적으로 대상체에서 원하는 수준의 조작된 세포를 달성하거나 또는 달성할 가능성이 있는 범위 및/또는 윈도우이다. 제공되는 방법은 높은 또는 지정된 원하는 정도의 치료 결과, 예컨대 유리한 결과 또는 반응 및/또는 지속적 반응 또는 결과의 가능성을 달성할 수 있거나, 이와 연관될 수 있고, 또한 대상체에게 세포 요법의 투여 이후, 상대적으로 낮은 또는 최소한의 또는 원하는 정도의 독성 결과 또는 독성의 발생 위험과 연관될 수 있는 세포의 투여를 허용한다.
제공되는 방법은 또한 대상체가 반응 및/또는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 결정된 경우 세포 요법에서 세포의 활성, 기능, 증식 및/또는 팽창의 조절, 변형 및/또는 변경을 허용하여 반응 실질적으로 독성의 위험을 증가시키지 않으면서 반응을 최적화함으로써 이용 가능한 접근법에 비해 이점을 제공한다. 일부 구현예에서, 약동학적 파라미터, 환자 속성, 종양 부담 및/또는 염증성 마커와 같은 바이오마커의 발현은 반응 가능성 및/또는 요법의 조절, 변형 또는 변경에 대한 임의의 필요성을 결정하여, 실질적으로 독성의 위험을 증가시키지 않으면서 더 큰 반응 또는 더욱 지속적인 반응을 달성하기 위해 사용될 수 있다.
또한 세포 요법의 투여와 관련될 수 있는 독성 치료 및/또는 개선 방법이 제공된다. 일부 양태에서, 방법은 독성을 치료 및/또는 개선하는 치료 처방을 투여하는 것을 포함한다. 제공되는 방법은 면역요법 및/또는 입양 세포 요법과 연관될 수 있는 독성의 체계적인 관리를 허용하는 이점을 제공한다.
일부 구현예에서, 치료적 복용량 범위 및/또는 윈도우는 조작된 세포, 예를 들어, CAR T 세포의 원하는 수준, 즉, 일부 양태에서, 피크 수준을 달성하거나, 또는 달성할 가능성이 있으며, 이러한 수준은 일반적으로 치료 이후 또는 치료 이후 특정 기간 내에 관련 샘플, 체액, 조직, 장기 또는 다른 위치에서 관찰 또는 측정되는 세포의 최대 개수, 농도 또는 백분율을 지칭한다. 일부 양태에서, 이러한 수준은 주어진 시간에 또는 기간에 걸쳐 세포에 대한 대상체 또는 조직 또는 장기 또는 체액 또는 위치의 개수, 농도 또는 백분율 (예컨대 중량 또는 부피 또는 면적 당 세포의 개수, 또는 전체 세포 개수) 또는 노출일 수 있다. 일부 양태에서, 이러한 수준은 치료 또는 세포 투여 또는 이의 개시 이후 주어진 시간에 걸쳐, 조직 또는 샘플 또는 체액 또는 장기 또는 다른 위치에서 관련 세포의 개수 또는 백분율 또는 다른 판독치의 플롯에 대한 곡선 아래 면적 (AUC)이다.
일부 예시에서, 이러한 수준은 치료 이후, 혈액 내 CAR+ 세포 농도 (예를 들어, CAR+ 세포//마이크로리터 (μl)), 기간에 따른 CAR+ 세포/부피 (예를 들어, CAR+ 세포/마이크로리터)의 곡선의 AUC, 혈액 내 최대 또는 피크 CAR+ 세포/부피 (예를 들어, CAR+ 세포/마이크로리터), 또는 치료 후 또는 이의 개시 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일에, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 주 경과시 혈액의 CAR+ 세포/마이크로리터로 표현된다. 일부 구현예에서, 원하는 수준은 결정된 치료적 범위 이내에 있거나, 결정된 치료적 범위 내의 수준이다. 일부 예시에서, 수준은 DNA의 질량 당, CAR을 인코딩하는 핵산 서열 (예를 들어, 형질도입 유전자 서열) 또는 CAR-인코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 핵산 서열의 카피 (예를 들어, 카피/μg); 시간에 따른 DNA의 카피/μg, 치료 후 DNA의 최대 또는 피크 카피/μg, 또는 치료 후 또는 이의 개시 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 주 이상에, DNA의 카피/μg의 곡선의 AUC로서 표현된다. 일부 구현예에서, 원하는 수준은 결정된 치료적 범위 이내에 있거나, 결정된 치료적 범위 내의 수준이다.
일부 구현예에서, 치료적 범위는 높은 또는 지정된 원하는 정도의 치료 결과, 예컨대 유리한 결과 또는 반응 및/또는 지속적 반응 또는 결과의 가능성을 달성할 수 있거나, 이와 연관될 수 있고, 또한 대상체에게 세포 요법, 예를 들어, 조작된 세포의 투여한 후, 상대적으로 낮은 또는 최소한의 또는 원하는 정도의 독성 결과 또는 독성의 발생 위험과 연관된 치료적 범위 및/또는 윈도우이다. 일부 양태에서, 독성 또는 독성 결과는 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경독성 (NT)이다. 일부 양태에서, 독성 또는 독성 결과는 임의의 CRS 또는 1등급 이상의 CRS 또는 임의의 신경독성 또는 1등급 이상의 신경독성이다. 일부 양태에서, 독성 또는 독성 결과는 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS 또는 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성이다. 일부 경우에, 독성 위험은 질병 부담, 세포 용량, 세포 팽창, 및 세포의 약동학 (PK), 예를 들어, 세포 노출 또는 피크 세포 농도와 관계가 있다. 그러나, 한편 반응을 최대화하기 위해, 일부 경우에는 보다 동일한 또는 더 많은 세포 용량, 세포 노출 또는 세포의 피크 농도가 요구된다. 그러나, 일부 양태에서, 지속적 반응, 예를 들어, 요법의 개시로부터 일정 시간 이후 지속되는 반응의 가능성은, 보다 높은 또는 많은 세포 용량, 세포 노출 또는 세포의 피크 농도와 함께, 특정 용량, 노출 또는 농도까지 증가할 수 있고; 이후 감소할 수 있는 것이 본 명세서에서 밝혀졌다. CAR+ T 세포로 치료된 대상체 집단으로부터 생성된 독성 (예를 들어 CRS 또는 신경독성, 중증 CRS 또는 중증 신경독성) 및 반응 (예를 들어 골수 반응) 및/또는 지속적 반응에 대한 확률 곡선으로부터, 치료적 범위 및/또는 윈도우, 예를 들어 곡선 사이의 가장 넓은 범위가 존재하며, 이러한 경우 추정 반응 확률 또는 지속적 반응을 최대화하고, 추정 독성 위험을 최소화하기 위해 용량이 결정될 수 있는 것이 본 명세서에서 밝혀졌다. 일부 구현예에서, 이러한 확률 곡선은 대상체에게 투여하는 세포의 용량을 선택 또는 결정하는 방법에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 확률 곡선은 예를 들어, 세포 팽창, 활성 및/또는 기능에 영향을 미치는 시제 및/또는 중재(intervention)를 투여함으로써, 세포 용량을 변형 및/또는 세포의 팽창 및/또는 활성을 조절하는 방법에 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 제공되는 방법은 대상체에게 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 세포 용량을 투여하는 것을 포함하며, 이러한 용량은 결정된 치료적 범위 이내의 피크 CAR+ 세포/μl 및/또는 결정된 치료적 범위 이내의 노출 (예를 들어, AUC)을 달성하기에 충분하고, 치료적 범위는 반응 결과 (예를 들어 골수 반응) 및/또는 지속적 반응, 예를 들어, 3개월에서의 반응의 추정 확률, 및 독성 결과 (예를 들어 3-5 등급 신경독성)의 추정 확률에 기초하여 결정된다.
일부 구현예에서, 추정 확률은 대상체 집단, 예컨대 적어도 10, 25, 50, 100, 150, 300, 400, 500명 이상 대상체로부터의 결과 또는 결과에 기초하여 생성된 확률 곡선으로부터 결정된다. 일부 구현예에서, 대상체 집단은 질병에 걸린 대상체, 예컨대 종양 또는 암과 같은 질병 또는 병태를 가지는 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체 집단은 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포, 예를 들어 CAR-T 세포로 치료를 받을 가능성이 있거나, 또는 치료받은 적이 있거나, 또는 이러한 후보자인 대상체이거나, 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체는 육종, 암종 또는 림프종, 선택적으로 비-호지킨 림프종 (NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 급성 골수성 백혈병 (AML) 및 골수종을 가진다. 일부 구현예에서, 대상체는 CLL을 가진다. 일부 구현예에서, 제1 확률 곡선은 독성 결과 (예를 들어, CRS 또는 신경독성, 예컨대 3-5 등급 신경독성)의 위험에 대한 생성되고, 제2 확률 곡선은 반응 결과 (예를 들어 골수 반응)에 대해 생성된다. 일부 구현예에서, 제1 확률 곡선은 독성 결과 (예를 들어, CRS 또는 신경독성, 예컨대 3-5 등급 신경독성)의 위험에 대한 생성되고, 제2 확률 곡선은 지속적 반응 결과에 대해 생성된다. 일부 구현예에서, 확률 곡선은 S자형 곡선으로서 변환 또는 제공된다.
일부 구현예에서, 독성 (예를 들어 CRS 또는 신경독성, 예컨대 3-5 등급 CRS 또는 신경독성)의 추정 확률 및/또는 반응 (예를 들어 골수 반응) 또는 지속적 반응 (예를 들어, 3개월에서의 반응)의 추정 확률은 생물학적 샘플 내, 예컨대 혈액 내 피크 CAR+ 세포 농도 (세포/μl)와 관련이 있다. 일부 구현예에서, CAR+ 세포는 T 세포이거나, 또는 이를 포함하고, 예를 들어, CD3+ T 세포이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 투여되는 조성물은 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포를 포함하고, 확률 곡선은 CD4+ 세포에 대해 및 CD8+ 세포에 대해 및/또는 CD3+ 세포에 대해 별도로 생성된다.
일부 구현예에서, 제공되는 방법은 항원 수용체, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체로 조작된 세포의 용량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 대상체 투여 방법을 포함하며, 이러한 용량은 결정된 치료적 범위 내의 피크 CAR+ 세포/μl를 달성하기에 충분하고, 치료적 범위는 반응 결과 (예를 들어 골수 반응) 및/또는 지속적 반응 (예를 들어, 3개월에서의 반응)의 추정 확률 및 독성 결과 (예를 들어 CRS 또는 신경독성, 예컨대 3-5 등급 신경독성)의 추정 확률에 기초하여 결정된다. 일부 구현예에서, 독성을 유발할 것으로 추정되는 확률은 독성 확률 곡선에서 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만 또는 5% 미만이다. 일부 구현예에서, 반응을 달성할 것으로 추정되는 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상이다. 일부 구현예에서, 지속적 반응, 예를 들어, 3개월에서의 반응을 달성할 것으로 추정되는 확률은 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 이상이다. 일부 구현예에서, 독성은 임의의 CRS와 같은 CRS, 예컨대 1등급 이상의 CRS, 또는 임의의 신경독성과 같은 신경독성, 예컨대 1등급 이상의 신경독성이다. 일부 구현예에서, 중증 독성은 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS 또는 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성이다. 일부 경우에, 반응은 골수 반응이다. 일부 구현예에서, 반응은 IgH 딥 시퀀싱을 사용하여 평가된다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성, 예컨대 3-5 등급 신경독성이다.
또한, 질병 또는 병태 (예를 들어 종양 또는 암)를 가지는 대상체에게, 세포 용량을 투여하고, 주입 후 피크 CAR+ 세포/μl에 대해서 대상체를 모니터링, 예컨대 세포 요법으로의 주입 이후 하나 이상의 다양한 시점, 예를 들어 (약) 3 일, 7 일, 14 일, 28 일, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 1 년, 2 년 경과에, 세포 요법으로의 주입 이후 시간에 따른 AUC, 예컨대 투여 이후 최대 하나 이상의 시점, 예를 들어, (최대) 약 3 일, 7 일, 14 일, 28 일, 2 개월, 3 개월, 4 개월, 5 개월, 6 개월, 1 년, 2 년 경과에 모니터링 함으로써 투여하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 예컨대 독성 확률 곡선 및/또는 반응 확률 곡선 및/또는 지속적 반응 확률 곡선으로부터 결정된, 피크 CAR+ 세포/μl이 치료적 범위 내에 있을 확률을 결정 또는 평가하는 단계를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 피크 CAR+ 세포/μl 또는 AUC가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 방법은 예컨대 제공되는 방법에 의해 결정된 바와 같이 피크 CAR+ 팽창이 치료적 범위내에 있도록 생체 내 CAR+ 세포 팽창을 향상 또는 증가시키거나, 및/또는 CAR+ T 세포 활성 및/또는 팽창을 감소, 억제, 예방 및/또는 지연시키는 화합물 또는 시제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
또한, 질병 또는 병태 (예를 들어 종양 또는 암)을 가지는 대상체에게, 차선 용량의 세포를 투여함으로써, 대상체에게 투여하는 방법이 제공되며, 이러한 용량은 결정된 치료적 범위 내에 피크 CAR+ 세포/μl를 달성하기에 불충분하다. 일부 구현예에서, 방법은 예컨대 제공되는 방법에 의해 결정된 바와 같이 피크 CAR+ 팽창이 치료적 범위내에 있도록 생체 내 CAR+ 세포 팽창을 향상 또는 증가시키는 화합물 또는 시제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 피크 CD3+, CD4+ 및/또는 CD8+ CAR+T 세포 농도 (세포/μl) 및/또는 AUC, 예를 들어, 피크 CD8+ CAR+ T 세포 농도에 대한 반응 및 독성 확률 곡선에 기초하여 제2 용량의 세포를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 피크 CD3+, CD4+ 및/또는 CD8+ CAR+T 세포 농도 (세포/μl) 및/또는 AUC, 예를 들어, 피크 CD8+ CAR+ T 세포 농도에 대한 반응 및 독성 확률 곡선에 기초하여 종양 미세환경 (TME) 표적화제를 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 방법은 더욱 지속적인 반응 및/또는 차도를 달성하는 투여 범위의 선택을 허용한다. 또한 약동학적 파라미터, 예컨대 대상체 내 투여되는 세포의 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax) 및 곡선 아래 면적 (즉, 시간에 대해 치료제 CAR+ T 세포의 혈장 농도를 플로팅함으로써 생성된 곡선 아래 면적; AUC)를 평가, 결정 또는 모니터링하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 이러한 평가는 투여되는 세포가 치료적 범위 또는 윈도우 내에 있는지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 평가는, 예를 들어, 투여되는 CAR+ T 세포의 팽창, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 시제를 투여함으로써, 추가의 및/또는 변형된 용량을 투여함으로써, 및/또는 대안의 요법을 투여함으로써 요법을 조절, 변경 및/또는 변형하기 위한 지표로써 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이에 따라 치료제를 투여하는 방법이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 이러한 평가는 요법의 진행을 모니터링 및/또는 조절된 요법의 효과를 평가하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 측정은 반응 또는 지속적 반응의 가능성을 평가하는데 사용될 수 있다.
또한 환자 속성, 종양 부담 및/또는 염증성 마커와 같은 바이오마커의 발현과 같은 다른 파라미터를 평가, 결정 또는 모니터링하는 단계를 포함하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 평가는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시 이전에 획득된 대상체로부터의 샘플을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 평가는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시 이후에 획득된 대상체로부터의 샘플을 사용하여 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 평가는 투여되는 세포가 치료적 범위 또는 윈도우 내에 있을 가능성이 있는지, 또는 치료적 범위 또는 윈도우 내에 있는 것과 상관되거나, 연관되는지 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 평가는, 예를 들어, 투여되는 CAR+ T 세포의 팽창, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 시제를 투여함으로써, 추가의 및/또는 변형된 용량을 투여함으로써, 및/또는 대안의 요법을 투여함으로써 요법을 조절, 변경 및/또는 변형하기 위한 지표로써 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이에 따라 치료제를 투여하는 방법이 또한 제공된다. 일부 구현예에서, 이러한 평가는 요법의 진행을 모니터링 및/또는 조절된 요법의 효과를 평가하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 측정은 반응 또는 지속적 반응의 가능성을 평가하는데 사용될 수 있다.
II. 독성 및 반응 확률 곡선
A. 독성 결과
일부 구현예에서, 치료제 (예를 들어 CAR T-세포)에 대한 대상체에서 독성 결과가 평가 또는 모니터링될 수 있다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 독성 사례의 존재, 예컨대 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 중증 CRS (sCRS), 대식세포 활성 증후군, 종양 용해 증후군, 3일 이상 적어도 (약) 섭씨 38도의 발열 및 적어도 (약) 20 mg/dL의 C-반응성 단백질 (CRP)의 혈장 수준, 신경독성 (NT) 및/또는 중증 신경독성 (sNT)이거나, 또는 이와 연관된다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 존재 또는 부재가 대상체에서 독성의 특정 정도, 중증도 또는 수준을 특정할 수 있는 징후, 또는 증상, 특정 징후, 및 증상 및/또는 이의 양 또는 정도이다. 치료제 (예를 들어 CAR- T 세포)의 원하지 않는 독성 결과오 관련된 특정 징후, 증상 및/또는 이의 양 또는 정도를 특정 또는 결정하는 것은 숙련된 당업자의 수준 내에 있다.
일부 구현예에서, 독성 결과는 독성 사례와 연관된 지표이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는하나 이상의 바이오마커의 존재 또는 부재이거나, 또는 하나 이상의 바이오마커의 수준의 존재 또는 부재이다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 사이토카인-방출 증후군 (CRS), 중증 CRS 또는 CRS-관련 결과를 나타내는 혈청 또는 다른 체액 또는 조직에 존재하는 분자이다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 신경독성 또는 중증 신경독성을 나타내는 혈청 또는 다른 체액 또는 조직에 존재하는 분자이다.
일부 구현예에서, 독성 사례, 예컨대 CRS-관련 결과, 예를 들어 CRS의 지표 또는 독성의 다른 생화학적 지표의 혈청 수준이, 제1 용량의 치료제 투여 직전 지표의 혈청 수준과 같은 베이스라인 또는 전처리 수준을 (약) 10 배 초과, (약) 15 배 초과, (약) 20 배 초과, (약) 25 배 초과, (약) 50 배 초과, (약) 75 배 초과, (약) 100 배 초과, (약) 125 배 초과, (약) 150 배 초과, (약) 200 배 초과, 또는 (약) 250 배 초과인 경우, 대상체는 독성 또는 독성 결과를 나타낸다.
일부 양태에서, 독성 결과는 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 중증 CRS (sCRS)와 연관이 있거나, 또는 이를 나타낸다. CRS, 예를 들어, sCRS는, 일부 경우에 입양 T 세포 요법 및 다른 생화학적 생성물을 대상체에게 투여한 이후 발생할 수 있다. [Davila et al., Sci Transl Med 6, 224ra25 (2014); Brentjens et al., Sci. Transl. Med. 5, 177ra38 (2013); Grupp et al., N. Engl. J. Med. 368, 1509-1518 (2013); 및 Kochenderfer et al., Blood 119, 2709-2720 (2012); Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78]를 참조한다.
일반적으로, CRS는, 예를 들어, T 세포, B 세포, NK 세포, 단핵구, 및/또는 대식세포에 의해 매개되는 과장된 전신 면역반응에 의해 야기된다. 이러한 세포는 사이토카인 및 케모카인과 같은 대량의 염증성 매개체를 방출할 수 있다. 사이토카인 급성 염증성 반응을 유발할 수 있고 및/또는 내피 장기 손상을 유도할 수 있어, 미세혈관 누출, 심부전, 또는 사망을 야기할 수 있다. 중증의, 생명을 위협하는 CRS는 폐 침윤 및 폐 손상, 신부전, 또는 파종성 혈관 내 응고를 유발할 수 있다. 다른 중증의, 생명을 위협하는 독성에는 심장 독성, 호흡 곤란, 신경학적 독성 및/또는 간부전을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 발열, 특히 높은 발열 (≥ 38.5 ℃ 또는 ≥ 101.3 °F)이 CRS과 연관이 있다. 일부 경우에, CRS의 특징 또는 증상은 감염을 모방한다. 일부 구현예에서, 감염은 또한 CRS 증상을 나타내고, 배양물에 의해 모니터링하고, 경험적 항생제 요법이 투여될 수 있는 대상체에서 고려될 수 있다. CRS와 연관된 다른 증상으로는 심장 기능 장애, 성인 호흡 곤란 증후군, 신부전 및/또는 간부전, 응고증, 파종성 혈관 내 응고, 및 모세혈관 누출 증후군을 포함할 수 있다.
CAR-발현 세포를 투여하는 맥락에서, CRS는 일반적으로 CAR를 발현하는 세포의 주입 이후 6-20 일에 발생한다. [Xu et al., Cancer Letters 343 (2014) 172-78]을 참조한다. 일부 경우에, CRS는 CAR T 세포 주입 이후 6 일 미만 또는 20 일 경과시 발생한다. CRS의 발생 및 시기는 주입 시점에 베이스라인 사이토카인 수준 또는 종양 부담과 관련될 수 있다. 일반적으로, CRS는 인터페론 (IFN)-γ, 종양 괴사 인자 (TNF)-α, 및/또는 인터루킨 (IL)-2의 상승된 혈청 수준을 포함한다. CRS에서 빠르게 유도될 수 있는 다른 사이토카인은 IL-1β, IL-6, IL-8, 및 IL-10이다.
CRS와 연관된 예시적인 징후 또는 증상으로는 발열, 경직, 오한, 저혈압, 호흡곤란, 급성 호흡 곤란 증후군 (ARDS), 뇌병증, 아스파테이트 트랜스아미나제 (AST)/알라닌 트랜스아미나제 (ALT) 상승, 신부전, 심장 장애, 저산소증, 신경학적 질환, 및 사망을 포함한다. 신경학적 합병증으로는 섬망, 발작-유사 활동, 착란, 단어-찾기 장애, 실어증, 및/또는 둔화를 포함한다. 다른 CRS-관련 징후 또는 결과로는 피로, 오심, 두통, 발작, 빈맥, 근육통, 발진, 급성 혈관 누출 증후군, 간 기능 장애, 및 신부전을 포함한다. 일부 양태에서, CRS는 혈청-페리틴, d-이합체, 아미노트랜스퍼라제, 락테이트 탈수소효소 및 트리글리세리드와 같은 하나 이상의 요인의 증가와 연관이 있거나, 저섬유소원혈증 또는 간비장비대와 연관이 있다. CRS와 연관된 다른 예시적인 징후 또는 증상으로는 혈역학적 불안정, 호중구 감소증, 혈청 C-반응성 단백질 (CRP) 증가, 응고 파라미터 (예를 들어, 국제 표준 비율 (INR), 프로트롬빈 시간 (PTI) 및/또는 피브리노겐)의 변화, 심장 및 다른 장기의 기능, 및/또는 절대 호중구 수 (ANC)의 변화를 포함한다.
일부 구현예에서, CRS와 연관된 징후 또는 증상은 다음 중 하나 이상을 포함한다: 지속적인 발열, 예를 들어, 2일 이상, 예를 들어, 3일 이상, 예를 들어, 4일 이상 동안, 또는 적어도 연속적인 3일 동안, 특정 온도, 예를 들어, (약) 섭씨 38도 초과의 발열; (약) 섭씨 38도 초과의 발열; 사이토카인 (예를 들어 IFNγ 또는 IL-6)의 상승; 및/또는 적어도 하나의 독성의 임상적 징후, 예컨대 저혈압 (예를 들어, 적어도 하나의 정맥내 혈관활성 승압기에 의해 측정); 저산소증 (예를 들어, (약) 90% 미만의 혈장 산소 (PO2) 수준); 및/또는 하나 이상의 신경학적 장애 (정신 상태 변화, 둔화, 및 발작 포함). 일부 구현예에서, 신경독성 (NT)은 CRS와 동시에 관찰될 수 있다.
예시적인 CRS-관련 결과는 사이토카인 및 케모카인을 포함하는 하나 이상의 요인 및 CRS와 연관된 다른 요인의 증가 또는 높은 혈청 수준을 포함한다. 예시적인 결과는 이러한 요인 중 하나 이상의 합성 또는 분비의 증가를 추가로 포함한다. 이러한 합성 또는 분비는 T 세포 또는 T 세포와 상호작용하는 세포, 예컨대 선천성 면역 세포 또는 B 세포에 의한 것일 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 염증성 마커, 예를 들어, 사이토카인 또는 케모카인은 CAR 처리 이전, 처리 동안, 또는 처리 이후 모니터링된다. 일부 양태에서, 하나 이상의 사이토카인 또는 케모카인은 IFN-γ, TNF-α, IL-2, IL-1β, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, sIL-2Rα, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 또는 대식세포 염증성 단백질 (MIP)을 포함한다. 일부 구현예에서, IFN-γ, TNF-α, 및 IL-6이 모니터링된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커의 존재는 독성 사례, 예컨대 CRS 또는 신경독성의 등급, 중증도 또는 정도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 독성 사례의 특정 등급, 중증도 또는 정도, 예컨대 CRS 또는 신경독성의 특정 등급, 중증도 또는 정도이다. 일부 구현예에서, 특정 등급, 중증도 또는 정도에 관한 독성 사례의 존재는 용량-제한 독성일 수 있다. 일부 구현예에서, 독성 사례의 부재, 또는 특정 등급, 중증도 또는 정도 미만의 독성 사례의 존재는 용량-제한 독성의 부재를 나타낼 수 있다.
어떤 환자가 sCRS를 발병할 위험이 더 높을지를 예측하기 위해 CRS의 발병과 상관 관계가 있는 것으로 보이는 CRS 기준이 개발되었다 (Davilla et al. Science translational medicine. 2014;6(224):224ra25 참조). 요인으로는 발열, 저산소증, 저혈압, 신경학적 변화, 염증성 사이토카인의 혈청 수준 상승을 포함하며, 이의 치료로 유도된 상승이 치료 전 종양 부담 및 sCRS 증상 모두와 매우 상관관계가 있다. CRS의 진단 및 관리에 대한 기타 지침이 공지되어 있다 (예를 들어, Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95를 참조). 일부 구현예에서, CRS 등급을 반영하는 기준이 하기 표 1에 상세히 기재된다.
Figure pct00001
일부 구현예에서, CRS 등급을 반영하는 기준이 하기 표 2에 상세히 기재된다.
Figure pct00002
일부 구현예에서, 고용량 혈관수축제 요법은 하기 표 3에 기재된 요법을 포함한다.
Figure pct00003
일부 구현예에서, 독성 결과는 중증 CRS이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 중증 CRS의 부재 (예를 들어 보통 또는 가벼운 CRS)이다. 일부 구현예에서, 중증 CRS는 표 1 및 표 2에 제시된 바와 같이 3 등급 이상의 CRS를 포함한다. 일부 구현예에서, 중증 CRS는 2 등급 이상의 CRS, 예컨대 2, 3, 4 또는 5 등급 CRS를 포함한다.
일부 구현예에서, 독성 결과, 예를 들어 CRS-관련 결과의 수준, 예를 들어 CRS의 지표의 혈청 수준은 ELISA에 의해 측정된다. 일부 구현예에서, 발열 및/또는 C-반응성 단백질 (CRP)의 수준이 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 발열 및 CRP ≥ 15 mg/dL의 대상체는 중증 CRS를 발생시키는 위험이 높은 것으로 간주될 수 있다. 일부 구현예에서, CRS-연관 혈청 인자 또는 CRS-관련 결과로는, Flt-3L, 프랙탈카인, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 인터루킨-1 베타 (IL-1βIL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, 인터페론 감마 (IFN-γ대식세포 염증성 단백질 (MIP)-1, MIP-1, sIL-2Rα, 또는 종양 괴사 인자 알파 (TNFα)를 포함하는 염증성 사이토카인 및/또는 케모카인의 수준 및/또는 농도의 증가를 포함한다. 일부 구현예에서, 인자 또는 결과로는 C 반응성 단백질 (CRP)을 포함한다. CRS의 조기에 쉽게 측정할 수 있는 위험 인자일 뿐만 아니라, CRP는 세포 팽장의 지표이기도 하다. 일부 구현예에서, ≥ 15 mg/dL의 높은 CRP 수준을 가지는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 가진다. 일부 구현예에서, 높은 CRP 수준을 가지지 않는 것으로 측정된 대상체는 CRS를 가지지 않는다. 일부 구현예에서, CRS의 척도는 CRP의 척도 및 CRS를 나타내는 또 다른 인자를 포함한다.
일부 양태에서, 독성 결과는 신경독성이거나, 또는 이와 연관이 있다. 일부 구현예에서, 신경독성의 임상적 위험과 연관된 징후 또는 증상으로는 착란, 섬망, 실어증, 표현형 실어증, 둔화, 근간대증, 혼수, 정신 상태 변경, 경련, 발작-유사 활동, 발작 (선택적으로 뇌전도 (EEG)에 의해 확인), 베타 아밀로이드 (Aβ수준 상승, 글루타메이트 수준 상승, 및 산소 라디칼 수준 상승을 포함한다. 일부 구현예에서, 신경독성은 중증도에 기조차여 등급화된다 (예를 들어, 1-5 등급을 사용 (예를 들어, Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010); 미국 국립 암 연구소―일반 독성 기준(Common Toxicity Criteria) 버전 4.03 (NCI-CTCAE v4.03) 참조. 일부 구현예에서, 투여 이후, 대상체가 증상 중 자가 관리 (예를 들어 목욕, 착의 및 탈의, 섭식, 화장실 사용, 의약품 복용)을 제한하는 증상을 나타내는 경우, 대상체는 세포 요법 또는 이의 세포 용량의 투여에 대해 반응하거나 이에 부차적인 “중증 신경독성”을 발생시키는 것으로 간주되며, 이러한 증상은 다음과 같다: 1) 말초 운동 신경병증의 증상, 예를 들어 말초 운동 신경의 염증 또는 퇴행; 2) 말초 감각 신경병증의 증상, 예를 들어 말초 감각 신경의 염증 또는 퇴행, 감각 지각의 왜곡과 같은 감각 이상, 비정상 및 불쾌한 감각 생성, 신경 또는 신경군에 따른 심한 통증 감각과 같은 신경통, 및/또는 자극의 부재에서 따끔거림, 마비, 압력, 차가움 및 따뜻함의 비정상적인 피부 감각을 야기하는 감각 뉴런의 기능적 장애와 같은 지각 이상. 일부 구현예에서, 중증 신경독성은 표 4에 제시된 바와 같이 3 등급 이상의 신경독성을 포함한다. 일부 구현예에서, 중증 신경독성은 2 등급 이상의 신경독성, 예컨대 2, 3, 4 또는 5 등급 신경독성을 포함한다.
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일부 구현예에서, 독성 결과는 용량-제한 독성이다. 일부 구현예에서, 독성 결과는 용량-제한 독성의 부재이다. 일부 구현예에서, 용량-제한 독성 (DLT)은 특정 독성을 평가하는 상기 기재된 임의의 지침 및 미국 국립 암 연구소 (NCI) 유해 사례에 대한 표준 용어 기준 (Common Terminology Criteria for Adverse Events, CTCAE) 버전 4.0를 비롯한 임의의 공지된 또는 공개된 지침에 의해 평가된 임의의 3등급 이상의 독성으로서 정의된다.
B. 반응 결과
일부 구현예에서, 치료제에 대한 대상체에서 반응 결과가 모니터링 또는 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 무반응이다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 부분적 반응 (PR)이다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 완전한 반응 (CR)이다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 대상체에서 질병 부담을 모니터링함으로써 평가된다. 일부 구현예에서, 무반응, 부분적 반응 또는 임상적 또는 완전한 반응의 존재가 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 부분적 반응 (PR) 또는 완전한 반응 (CR)은, 치료제가 대상체에서 질병 또는 병태의 팽창 또는 부담을 감소 또는 예방하는 것이다. 예를 들어, 질병 또는 병태가 종양일 때, 종양 크기, 벌크, 전이, 골수에서 모세포의 백분율 또는 분자적으로 검출가능한 암의 감소 및/또는 치료제 (예를 들어 CAR T 세포)로의 치료 이전과 비교하여 종양 부담과 연관된 개선 예후 또는 생존 또는 다른 증상이 있는 경우, 감소된 질병 부담이 존재 또는 존재한다.
일부 구현예에서, 투여는 대상체가 다른 요법에 내성이 있음에도 불구하고 대상체를 효과적으로 치료한다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%가 완전한 반응 (CR)을 달성하고; 및/또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%가 객관적 반응률 (ORR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 적어도 50%, 대상체의 (약) 적어도 60%, 대상체의 (약) 적어도 70%, 대상체의 (약) 적어도 80% 또는 대상체의 (약) 적어도 90%는 CR을 달성 및/또는 객관적 반응 (OR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 효과적인 치료에 대해 평가되는 기준은 전체 반응률 또는 객관적 반응률 (ORR), 완전한 반응 (CR), 반응 지속기간 (DOR), 무진행 생존 (PFS), 및/또는 전체 생존 (OS)을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 40% 또는 적어도 50%는 완전한 차도 (CR)를 달성하고, (약) 3 개월, 6 개월 또는 12 개월 이상 또는 13 개월 이상 또는 대략 14 개월의 무진행 생존 (PFS) 및/또는 전체 생존 (OS)을 나타내고; 평균적으로, 상기 방법에 따라 치료된 대상체는 (약) 6 개월, 12 개월, 또는 18 개월 이상 중앙값 PFS 또는 OS를 나타내고; 및/또는 대상체는 적어도 (약) 6, 12, 18 개월 이상 동안의 요법 이후 PFS 또는 OS를 나타낸다.
일부 양태에서, 대상체, 예컨대 NHL을 가지는 대상체에서의 반응률은 Lugano 기준에 기초한다. (Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5). 일부 양태에서, 반응 평가는 임의의 임상적, 혈액학적, 및/또는 분자 방법을 사용한다. 일부 양태에서, Lugano 기준을 사용하여 평가된 반응은 적절한 양전자 방출 단층촬영 (PET)-컴퓨터 단층촬영 (CT) 및/또는 CT 사용을 포함한다. PET-CT 평가는 FDG-결합(avid) 림프종에 대한 플루오로데옥시글루코스 (FDG)의 사용을 추가로 포함할 수 있다. 일부 양태에서, PET-CT가 FDG-결합 조직학에서 반응을 평가하기 위해 사용되는 경우, 5 점 척도가 사용될 수 있다. 어느점에서는, 5 점 척도는 다음의 기준을 포함한다: 1, 백그라운드 이상의 흡수 없음; 2, 흡수 ≤ 종격(mediastinum); 3, 흡수 > 종격, 그러나 흡수 ≤ 간; 4, 적당한 흡수 > 간; 5, 간보다 현저히 높은 흡수 및/또는 새로운 병변; X, 림프종과 관련이 없을 것 같은 새로운 영역의 흡수.
일부 양태에서, Lugano 기준을 사용하여 기재된 바와 같은 완전한 반응은 다양한 측정가능한 부위에서 완전한 대사 반응 및 완전한 방사선 반응을 포함한다. 일부 양태에서, 이러한 부위는 림프절 및 림프절 외 부위를 포함하며, CR은 PET-CT가 사용되는 경우에 5 점 척도에서의 잔류 덩어리(residual mass) 존재 여부와 상관 없이 1, 2, 또는 3점으로서 기술된다. 일부 양태에서, 높은 생리학적 흡수를 가지거나 또는 비장 또는 골수 내에서 활성화를 가지는 (예를 들어, 화학요법 또는 골수성 콜로니-자극 인자를 가지는) 발데이어 편도고리(Waldeyer's ring) 또는 림프절 외 부위에서, 흡수는 정상적인 종격 및/또는 간을 초과할 수 있다. 이러한 상황에서, 조직이 높은 생리학적 흡수를 가지는 경우라도, 초기 관여 부위에서의 흡수가 주변 정상 조직보다 크지 않은 경우에는 완전한 대사 반응이 추론될 수 있다. 일부 양태에서, 반응은 림프절에서 CT를 사용하여 평가되며, CR은 질병의 림프절 외 부위가 없으며 표적 결절/결절 덩어리는 병변의 가장 긴 횡직경 (LDi)이 ≤ 1.5 cm로 회귀해야 한다. 추가적인 평가 부위로는 골수를 포함하며, PET-CT-기반의 평가는 골수에서의 FDG-결합 질병의 증거 부족을 나타내야 하며, CT-기반의 평가는 정상적인 형태(morphology)를 나타내야 하고, 불명확한 경우, IHC 음성이어야 한다. 추가적인 부위로는 장기 확대 평가를 포함할 수 있으며, 이는 정상으로 회귀해야 한다. 일부 양태에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가되며, CR의 경우는 부재해야 한다 (Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5).
일부 양태에서, Lugano 기준을 사용하여 기재된 바와 같은 부분적 반응은 다양한 측정가능한 부위에서 부분적 대사 반응 및/또는 방사선 반응을 포함한다. 일부 양태에서, 이러한 부위로는 림프절 및 림프절 외 부위를 포함하며, PR은 PET-CT가 사용되는 경우 베이스라인 및 임의의 크기의 잔류 덩어리(들)과 비교하여 감소된 흡수를 가지는 4 또는 5 점으로 기술된다. 중간에, 이러한 발견은 반응하는 질병을 나타낼 수 있다. 치료가 끝나면 이러한 발견은 잔류 질병을 나타낼 수 있다. 일부 양태에서, 반응은 림프절에서 CT를 사용하여 평가되며, PR은 최대 6개의 표적 측정가능한 결절 및 림프절 외 부위의 직경의 곱의 합 (SPD)에서 ≥50% 감소로서 기술된다. 병변이 CT로 측정하기에 매우 작은 경우, 5 mm × 5 mm가 기본값으로 할당되고; 병변이 더 이상 보이지 않는 경우, 기본값은 0 mm × 0 mm이며; 정상보다 작지만 >5 mm × 5 mm인 결절에 대해서, 실제 측정치가 계산에 사용된다. 추가적인 평가 부위는 골수를 포함하며, PET-CT-기반 평는 정상적인 골수에서의 흡수보다 더 높지반, 베이스라인과 비교하여 감소된 잔류 흡수를 나타내야 한다 (화학요법으로부터 반응성 변화와 호환되는 확산 흡수 허용). 일부 양태에서, 결절 반응과 관련하여 골수에서의 지속적인 초점 변화가 있는 경우, MRI 또는 생검, 또는 간격 스캔을 통한 추가적인 평가를 고려해야 한다. 일부 양태에서, 추가적인 부위는 장기 확대 평가를 포함할 수 있으며, 비장은 정상을 초과하여 >50% 길이로 회귀해야 한다. 일부 양태에서, 측정되지 않은 병변 및 새로운 병변이 평가될 수 있으며, PR의 경우는 부재/정상, 회귀해야 하지만, 증가하지 않아야 한다. 무반응/안정성 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD)이 또한 PET-CT 및/또는 CT 기반 평가를 사용하여 측정될 수 있다. (Cheson et al., (2014) JCO 32(27):3059-3067; Johnson et al., (2015) Radiology 2:323-338; Cheson, B.D. (2015) Chin Clin Oncol 4(1):5).
어느 측면에서, 무진행 생존 (PFS)은 암과 같은 질병의 치료 동안 및 이후에, 대상체가 질병과 함께 생존하지만 악화되지 않는 시간의 길이로 기술된다. 일부 양태에서, 객관적 반응 (OR)은 측정가능한 반응으로서 기술된다. 일부 양태에서, 객관적 반응률 (ORR)은 CR 또는 PR을 달성한 환자의 비율로서 기술된다. 일부 양태에서, 전체 생존 (OS)은 질병으로 진단된 대상체가 여전히 생존해있는 진단 날짜, 또는 암과 같은 질병의 치료 시작으로부터의 시간의 길이로 기술된다. 일부 양태에서, 무사례 생존 (EFS)은 대상체는 치료가 예방 또는 지연시키기 위한 것인 특정 합병증 또는 사례가 없는 상태로 지속되어, 암 치료 후 이후 시간의 길이가 종료된 것으로 기술된다. 이러한 사례에는 암으로의 재발 또는 뼈로 전이된 암으로 인한 뼈 통증 또는 사망과 같은 특정 증상의 발병을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 반응 지속 시간 (DOR)의 측정은 종양 반응의 기록부터 질병 진행까지의 시간을 포함한다. 일부 구현예에서, 반응을 평가하기 위한 파라미터는 지속적 반응, 예를 들어, 요법의 개시로부터 일정 기간 이후 지속되는 반응 및/또는 요법에 대해 장기간 양성 반응을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 지속적 반응은 요법의 개시 이후 대략 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18 또는 24 개월에서의 반응률로 나타난다. 일부 구현예에서, 반응은 3 개월 초과 또는 6 개월 초과 동안 지속된다. 일부 구현예에서, 지속적 반응은 요법 투여 후 3 개월 째에 측정된 반응, 예를 들어 3 개월 반응이다. 일부 구현예에서, 지속적 반응은 요법 투여 후 6 개월 째에 측정된 반응, 예를 들어 6 개월 반응이다.
일부 양태에서, RECIST 기준이 객관적인 종양 반응; 일부 양태에서는, 고체 종양에서의 반응을 결정하는데 사용된다. (Eisenhauer et al., European Journal of Cancer 45 (2009) 228-247.) 일부 양태에서, RECIST 기준은 표적 병변에 대한 객관적인 종양 반응을 결정하는데 사용된다. 어느 측면에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 완전한 반응은 모든 표적 병변의 소멸 및 임의의 (표적 또는 비표적의) 병리적 림프절이 짧은 축으로 <10 mm로 감소되어야 하는 것으로 기술된다. 다른 양태에서, RECIST 기준을 사용하여 결정된 부분적 반응은 베이스라인 합 직경을 기준으로 하여 표적 병변 직경의 합에서 적어도 30 % 감소한 것으로 기술된다. 다른 양태에서, 진행성 질병 (PD)은 연구에서 가장 작은 합을 기준으로 하여 (이는 연구에서 가장 작은 경우 기준 합계를 포함) 표적 병변 직경의 합이 적어도 20% 증가한 것으로 기술된다. 20%의 상대적 증가에 더하여, 합은 또한 5mm 이상의 절대 증가를 입증해야 한다 (일부 양태에서 하나 이상의 새로운 병변의 출현도 진행으로 간주). 다른 양태에서, 안정성 질환 (SD)은 연구 중에 가장 작은 총 직경을 기준으로 하여 PR에 적합한 충분한 수축 또는 PD에 적합한 충분한 증가로 기술되지 않는다.
일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 종양이며, 질병 부담의 감소는 종양 크기의 감소이다. 일부 구현예에서, 질병 부담 감소는 대상체 또는 이의 체액 또는 장기 또는 조직에서 질병 세포의 부하 또는 개수, 종양의 질량 또는 부피, 또는 전이의 정도 또는 범위와 같은 하나 이상의 요인의 감소에 의해 나타난다. 일부 구현예에서, 질병 부담, 예를 들어 종양 부담은 형태학적 질병 및/또는 최소 잔류하는 질병의 정도에 대해 평가 또는 모니터링될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체에서의 질병 또는 병태의 부담은 검출, 평가 및 측정된다. 일부 양태에서 질병 부담은 대상체에서, 또는 대상체의 장기, 조직, 또는 체액, 예컨대 혈액 또는 혈청에서, 질병 또는 질병-연관 세포, 예를 들어, 종양 세포의 전체 개수를 검출함으로써 검출될 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 부담, 예를 들어 종양 부담은 고체 종양의 질량 및/또는 전이의 개수 또는 범위를 측정함으로써 평가된다. 일부 양태에서, 대상체의 생존, 특정 기간 이내의 생존, 생존의 정도, 무사례 또는 무증상 생존의 존재 또는 지속기간, 또는 무재발 생존이 평가된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태의 임의의 증상이 평가된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태 부담의 척도가 명시된다.
일부 구현예에서, 질병 부담은 대상체에서 또는 대상체의 장기, 조직, 또는 체액에서, 예컨대 종양의 장기 또는 조직 또는 예를 들어 전이를 나타낼 수 있는 또 다른 위치에서, 질병 세포의 전체 개수를 포함할 수 있다. 예를 들어, 종양 세포는 특정 혈액학적 악성 종양의 맥락에서 혈액 또는 골수에서 검출 및/또는 정량화될 수 있다. 질병 부담은, 일부 구현예에서, 종양의 질량, 전이 개수 또는 정도 및/또는 골수에 존재하는 모세포 백분율을 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 백혈병을 가진다. 질병 부담의 정도는 혈액 또는 골수에 잔류하는 백혈병을 평가하여 결정될 수 있다.
일부 양태에서, 대상체, 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 가지는 대상체에서의 반응률은, 만성 림프구성 백혈병 반응 기준에 대한 국제 워크샵 (IWCLL)에 기초한다 (Hallek, et al., Blood 2008, Jun 15; 111(12): 5446-5456). 일부 양태에서, 이러한 기준은 다음과 같이 기재되어 있다: 완전한 차도 (CR)는, 일부 양태에서 면역표현형에 의한 말초 혈액 클론 림프구의 부재, 림프절비대(lymphadenopathy)의 부재, 간비대 또는 비장비대의 부재, 전신 증상의 부재 및 만족스러운 혈액 개수를 요구한다; 불완전한 골수 회수 (CRi)를 가지는 완전한 차도는, 일부 양태에서 상기 CR으로 설명되지만, 정상 혈액수가 아니다; 부분적 차도 (PR)는 일부 양태에서 말초 혈액 수의 개선과 함께 림프구 수의 ≥ 50% 감소, ≥ 림프절비대의 50% 감소 또는 간 또는 비장의 ≥ 50% 감소로 기재된다; 진행성 질병 (PD), which 일부 양태에서 is described as in 림프구 수가 to > 5 x109/L으로 ≥ 50% 증가, 림프절비대의 ≥ 50% 증가, 간 또는 비장 크기의 ≥ 50% 증가, Richter 증후군(Richter's transformation, 또는 CLL로 인한 새로운 혈구감소증으로 기재된다; 안정성 질병은 일부 양태에서 CR, CRi, PR 또는 PD의 기준에 부합하지 않는 것으로 기재된다.
일부 구현예에서, 대상체는 세포 용량 투여 1 개월 이내에 대상체의 림프절 크기가 (약) 20 mm 미만, 크기가 (약) 10 mm 미만, 또는 크기가 (약) 10 mm 미만인 경우에 CR 또는 OR을 나타낸다.
일부 구현예에서, CLL의 인덱스 클론은 대상체의 골수에서 (또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상의 골수에서) 검출되지 않는다. 일부 구현예에서, CLL의 인덱스 클론은 IgH 딥 시퀀싱에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, 인덱스 클론은 세포 투여 이후 (약) 또는 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24 개월의 시점에 검출되지 않는다.
일부 구현예에서, 치료제로 치료하기 전에 골수에서 모세포 백분율과 비교하여 골수에서 모세포 백분율이 감소하는 경우 반응 결과가 존재한다. 일부 구현예에서, 질병 부담의 감소는, 치료하기 전 골수 내 모세포의 개수 또는 퍼센트와 비교하여, 골수 내 모세포의 개수 또는 백분율이 적어도 (약) 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 이상 감소하는 경우에 존재한다.
일부 구현예에서, 대상체 대상체가 형태학적 질병을 나타내지 않거나 (비형태학적 질병) 또는 실질적인 형태학적 질병을 나타내지 않는 경우에 반응을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 예를 들어, 광학 현미경에 의해 검출된 골수 내 5% 이상의 모세포가 존재하는 경우 형태학적 질병을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 골수 내 5% 미만의 모세포가 존재하는 경우 완전한 또는 임상적 차도를 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체는 백혈병을 가진다. 질병 부담의 정도는 혈액 또는 골수에 잔류하는 백혈병을 평가하여 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 대상체는, 예를 들어, 광학 현미경에 의해 검출된 바와 같이, 골수 내 5% 이상의 모세포, 예컨대 골수 내 10% 이상의 모세포, 골수 내 20% 이상의 모세포, 골수 내 30% 이상의 모세포, 골수 내 40% 이상의 모세포 또는 골수 내 50% 이상의 모세포가 존재하는 경우, 형태학적 질병을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 골수 내 5% 미만의 모세포가 존재하는 경우 완전한 또는 임상적 차도를 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체는 치료 이전에 형태학적 질병을 나타냈고, 치료 이후 분자 질병 (예를 들어, 분자적으로 검출 가능한 최소 잔류 질병 (MRD), 예를 들어, 유세포 분석 또는 정량적 PCR에 의해 검출)의 보유 여부와 관계없이 완전한 차도 (예를 들어, 골수 내 5% 미만의 모세포)를 나타내는 경우, 감소된 질병 부담을 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체는 치료 이전에 분자 질병을 나타내고 치료 이후 분자 질병을 나타내지 않는 경우, 감소 또는 축소된 질병 부담을 나타낸다.
일부 구현예에서, 대상체는 완전한 차도를 나타낼 수 있지만, 형태학적으로 (광학 현미경 기법에 의해) 검출할 수 없는 소량의 잔류하는 백혈병 세포가 존재한다. 대상체가 골수 내 5% 미만의 모세포를 나타내고 분자적으로 검출 가능한 암을 나타내는 경우에, 대상체는 최소 잔류 질병 (MRD)을 나타내는 것으로 여겨진다. 일부 구현예에서, 분자적으로 검출 가능한 암은 적은 수의 세포를 민감하게 검출하게 하는 임의의 다양한 분자 기법을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 양태에서, 이러한 기법으로는 염색체 전위에 의해 생성된 독특한 Ig/T-세포 수용체 유전자 재배열 또는 융합 전사체를 결정할 수 있는 PCR 분석을 포함한다. 일부 구현예에서, 유세포 분석은 백혈병-특이적 면역표현형에 기초하여 암 세포를 식별??록 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 암의 분자 검출은 100,000 정상 세포 중 1개의 백혈병 또는 모세포 또는 10,000 정상 세포 중 1개의 백혈병 또는 모세포로서 검출할 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 예컨대 PCR 또는 유세포 분석에 의해 100,000 개의 세포 중 1개 이상의 백혈병 세포가 검출되는 경우, 분자적으로 검출 가능한 MRD를 나타낸다. 일부 구현예에서, 대상체의 질병 부담은 분자적으로 검출할 수 없는 또는 MRD-이므로, 일부 경우에, PCR 또는 유세포 분석 기법을 사용하여 대상체에서 백혈병 세포가 검출될 수 없다.
일부 구현예에서, 백혈병, 예를 들어 CLL의 인덱스 클론은, 대상체 (또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 골수 내 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 이상의) 골수에서 검출되지 않는다. 일부 구현예에서, 백혈병, 예를 들어 CLL의 인덱스 클론은, IGH 딥 시퀀싱에 의해 평가된다. 일부 구현예에서, 인덱스 클론은 세포 투여 이후 (약) 또는 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18 또는 24 개월의 시점에 검출되지 않는다.
일부 양태에서 MRD는 유세포 분석에 의해 검출된다. 유세포 분석은 암 세포에 대해 골수 및 말초 혈액 샘플을 모니터링하도록 사용될 수 있다. 특히 양태, 유세포 분석은 골수 내 암 세포의 존재를 검출 또는 모니터링하도록 사용된다. 일부 양태에서, 유세포 분석에 의한다중 파라미터 면역학적 검출이 암 세포를 검출하기 위해 사용된다 (예를 들어, Coustan-Smith et al., (1998) Lancet 351:550-554 참조). 일부 양태에서, 질량 세포 측정법에 의한 다중 파라미터 면역학적 검출이 암 세포를 검출하는데 사용된다. 일부 예시에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50개의 파라미터가 암 세포를 검출하는데 사용될 수 있다. 검출에 사용되는 항원은 검출되는 암에 기초하여 선택된다 (Foon and Todd (1986) Blood 68: 1-31).
일부 예시에서, 골수는 골수 흡인물 또는 골수 생검에 의해 수확되고, 림프구는 분석을 위해 단리된다. 플루오로크롬에 접합된 단클론성 및/또는 다클론성 항체 (예를 들어, 플루오세인 아이소티오시아네이트 (FITC), 피코에트린, 페리디닌 클로로필 단백질, 또는 비오틴)가 단리된 림프구 상의 에피토프, 예컨대 말단 데옥시뉴클리오티딜 으랜스퍼라제 (TdT), CD3, CD10, CD11c, CD13, CD14, CD33, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD34, CD45, CD56, CD79b, IgM, 및/또는 KORSA3544를 검출하도록 사용될 수 있다. 이어서, 표지된 세포는 다중 에피토프를 검출하기 위해 다중 파라미터 유동 세포 분석법 또는 질량 세포 분석법과 같은 유동 세포 분석법을 사용하여 검출될 수 있다.
림프성 세포는 광산란 도트 플롯을 기초로 식별 및 게이팅된 다음 관심 면역 표현형 특징을 발현하는 세포 집단을 식별하기 위해 2 차로 게이팅될 수 있다. 예시적인 에피토프가 하기 표 5에 제시되어 있다. 백혈병 및 림프종의 다른 면역학적 분류는 [Foon and Todd (Blood (1986) 68 (1): 1-31)]에 의해 제공된다. 일부 양태에서, MRD의 유세포 분석 평가는 하나 이상의 CLL 면역표현형 (예를 들어, 낮은 정방향/측면 산란; CD3neg; CD5+; CD14neg; CD19+; CD23+; CD45+; CD56neg)을 가지는 살아있는 림프구를 정량화함으로써 달성될 수 있다.
Figure pct00005
Figure pct00006
일부 양태에서, 수확된 B 세포의 면역글로불린 중쇄 (IGH) 유전자좌의 딥 시퀀싱은 최소 잔류 질병 (MRD)을 검출하는데 사용될 수 있다. 특정 IgG 재배열의 클론 존재는 CLL 또는 NHL과 같은 B 세포 악성 종양의 존재 및/또는 이의 악성 세포의 잔류 존재를 검출하기 위한 마커를 제공할 수 있다. 일부 양태에서, B 세포를 함유하거나 함유하는 것으로 추정되는 집단과 같은 세포가 수확되고 혈액으로부터 단리된다. 일부 양태에서, 세포는 골수, 예를 들어 골수 흡인물 또는 골수 생검 및/또는 다른 생물학적 샘플로부터 수확되고 단리된다. 일부 양태에서, 상보성 결정 영역 3 (CDR3)의 중합효소 연쇄 반응 (PCR) 증폭은 유전자 유전자좌의 V 및 J 영역 내에서 고도로 보존된 서열로 프라이머를 사용하여 달성되며, 이는 최소 잔류 질병을 평가하기 위해 세포의 클론 집단을 식별하는데 사용될 수 있다. 특정 계통의 세포 개수에 관한 정보를 제공하고 및/또는 특정 가변성 사슬 예컨대 가변성 중쇄 또는 이의 결합 부위, 예컨대 클론 집단을 발현하는 방법을 비롯한, 클론 집단을 검출하기 위한 다른 방법, 예컨대 단일 세포 시퀀싱 접근법이 사용될 수 있다. 일부 양태에서, IGH DNA는 축퇴성 프라이머 또는 상이한 세포 클론 사이에서 공유되는 가변성 사슬 영역을 인식하는, 예컨대 컨센서스 V 및 IGH 서열의 축퇴성 컨센서스 J 영역을 인식하는 프라이머를 사용하여 증폭된다. V 영역의 예시적인 서열은 ACACGGCCTCGTGTATTACTGT (서열 번호: 57)이다. J 영역의 예시적인 축퇴성 컨센서스 서열은 ACCTGAGGAGACGGTGACC (서열 번호:58)이다.
일부 양태에서 PCR 생성물 또는 시퀀싱 결과는 재배열된 대립 유전자에 대해 특이적이며 MRD 검출을 위한 클론성 마커로서 작용한다. CDR3 영역의 PCR 증폭 이후, PCR 생성물이 시퀀싱되어, CAR-T 세포 요법, 예를 들어 CD19 CAR- T 세포 요법으로 B-세포 악성 종양을 치료한 후 MRD의 민감한 검출을 위한 대립 유전자-특이적 PCR을 위한 프로브로서 구성된 환자-특이적 올리고뉴클레오타이드를 산출할 수 있다. PCR 생성물이 컨센서스 프라이머를 사용하여 생성되지 않은 예시에서, 프레임워크 영역 1에 대한 V 영역 패밀리-특이적 프라이머가 대신 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 치료 후 악성 또는 클론성 IGH 서열에 해당하는 검출 가능한 IGH 서열과 같은 PCR-검출 가능한 종양 세포, 예컨대 NHL 또는 CLL와 같은 B 세포 악성 종양의 세포의 지속성은, 재발의 위험 증가와 연관이 있다. 일부 양태에서, 치료 후 악성 IGH 서열에 대해 음성인 환자는 (일부 양태에서, 진행성 질병 또는 오직 부분적 반응, 예컨대 확대된 림프절의 지속을 나타내는 다른 기준 맥락에서, 또는 질병 또는 완전한 반응의 부재와 연관될 수 있는 다른 기준의 맥락에서도) 지속적인 악성 IGH 서열을 가지는 환자와 비교하여 PFS의 가능성이 증가하거나, CR 또는 지속적인 CR 또는 연장된 생존으로 진입하는 것으로 간주될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 예후 및 병기 결정은 예를 들어, 림프절 크기와 같은 다른 임상적 증상 또는 다른 병기 기준의 소산과 비교하여, 요법의 투여 후 짧은 시간 내에 악성 세포의 제거가 관찰되는 치료와 특히 관련이 있다. 예를 들어, 이러한 일부 양태에서, 골수와 같은 샘플에서 검출 가능한 IGH 또는 최소 잔류 질병의 부재는 다른 이용가능한 병기 또는 예후 접근법과 비교하여 반응 또는 반응 가능성 또는 이의 지속성에 대한 바람직한 판독값일 수 있다. 일부 양태에서, MRD로부터의 결과, 예를 들어, IGH 딥 시퀀싱 정보는 추가적인 개입 또는 이의 부족을 알려줄 수 있다. 예를 들어, 일부 맥락에서 방법 및 다른 제공되는 구현예는 악성 IGH에 대해 음성인 것으로 간주되는 대상체가 일부 양태에서 추가적으로 치료될 수 없거나 또는 제공되는 요법의 용량을 추가적으로 투여받을 수 없거나, 또는 대상체가 낮은 또는 감소된 용량을 투여받는 것을 제공한다. 반대로, IGH 딥 시퀀싱을 통해 MRD를 나타내는 대상체는, 예를 들어, 초기에 유사한 또는 보다 높은 용량으로 투여된 요법으로 또는 추가의 요법으로 추가적으로 치료되도록 제공되거나 특정될 수 있다.
일부 구현예에서 반응 결과는 대상체가 최소 잔류 질병 또는 분자 검출가능한 질병 상태를 달성 또는 나타내는, CR의 부재 또는 완전한 반응의 존재이다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 분자적으로 검출 가능한 질병을 가지는 CR의 존재 또는 분자적으로 검출 가능한 질병이 없는 CR의 존재이다. 일부 구현예에서, 대상체는 본 명세서에 기재된 방법, 예컨대 유세포 분석 또는 qPCR 방법에 의해 골수 내 모세포 또는 분자 질병을 평가하는 방법을 사용하여 질병 부담에 대해 평가된다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 반응은 완전한 차도 또는 완전한 반응 (CR) 및/또는 객관적 반응 (OR)에 의해 평가되고; 및/또는 대상체는 세포 용량 투여 1 개월 이내에 CR, 또는, (약) 20 mm 미만 크기의 림프절을 나타내고; 및/또는 질병 또는 병태, 예컨대 CLL 또는 NHL의 인덱스 클론은 선택적으로 세포 용량 투여 이후 (약) 또는 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 12, 18, 또는 24 개월의 시점에, 선택적으로 IgH 딥 시퀀싱에 의해 평가된 바와 같이 대상체의 골수에서 (또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 50% 초과의 골수에서) 검출되지 않는다.
C. 조작된 세포의 약동학, 예를 들어 피크 세포 수준의 결정 (PK)
일부 구현예에서, 방법은 T 세포, 예를 들어, T 세포 기반의 요법을 위해 투여되는 T 세포의 노출, 개수, 농도, 지속성 및 증식의 평가를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 조작된 T 세포, 예를 들어, T 세포 기반의 요법을 위해 투여되는 T 세포, 또는 이의 서브세트, 예컨대 CD3+ 세포, CD4+ 세포, CD8+ 세포, CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 또는 CD8+ CAR+ 세포의 노출, 개수 또는 수준의 평가를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 제공되는 방법에서, 세포의 노출, 또는 연장된 팽창 및/또는 지속성, 및/또는 세포 표현형의 변화 또는 세포, 예를 들어, 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여되는 세포의 기능적 활성은 시험관 내 또는 생체 외에서 T 세포의 특성을 평가함으로써 측정될 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 분석은 본 명세서에 제공된 세포 요법을 투여하기 이전, 또는 이후, 면역요법, 예를 들어 T 세포 요법에 사용되기 위한 T 세포의 기능을 결정 또는 확인하기 위해 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 노출, 개수, 농도, 지속성 및 증식은 약동학적 파라미터와 관련이 있다. 일부 경우에, 약동학은 투여 이후 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생하는 시간; Tmax), 최소 혈장 농도 (즉, 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 용량 사이 최저 혈장 농도; Cmin), 제거 반감기 (T1/2) 및 곡선 아래 면적 (즉, 시간 대 치료제 CAR+ T 세포의 혈장 농도; AUC를 플로팅하여 생성된 곡선 아래 면적)으로 이러한 파라미터를 측정함으로써 평가될 수 있다. 투여 이후 혈장 내 특정 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 농도는 혈액 중 샘플에서 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 농도를 평가하는데 적합한, 당업계에 공지된 임의의 방법, 또는 본 명세서에 기재된 임의의 방법을 사용하여 평가될 수 있다. 예를 들어, 핵산-기반 방법, 예컨대 정량적 PCR (qPCR) 또는 유세포 분석-기반 방법, 또는 다른 분석, 예컨대 면역분석, ELISA, 또는 크로마토그래피/질량 분석법-기반 분석이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 투여되는 세포, 예를 들어, CAR+ T 세포 조성물의 약동학 (PK)은, 투여되는 세포의 이용 가능성, 예를 들어, 생체 이용률을 평가하도록 결정된다. 일부 구현예에서, 투여되는 세포의 결정된 약동학적 파라미터는 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 예컨대 CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및 또는 CD8+ CAR+ T 세포의 Cmax; Cmax가 달성되는 시점 (Tmax), 예컨대 CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및 또는 CD8+ CAR+ T 세포의 Tmax, 및 또는 곡선 아래 면적 (AUC), 예컨대 CD3+ CAR+ 세포, CD4+ CAR+ 세포 및 또는 CD8+ CAR+ T 세포의 AUC0-28를 포함한다. 일부 구현예에서, 약동학적 파라미터는 피크 CD3+ CAR+ T 세포 농도 (Cmax CD3+ CAR+ T 세포), 또는 CD8+ CAR+ T 세포 농도 (Cmax CD8+ CAR+ T 세포)이다. 일부 구현예에서, 약동학적 파라미터는 CD3+ CAR+ T 세포의 AUC0-28, (AUC0-28 CD3+ CAR+ T 세포), 또는 CD8+ CAR+ T 세포의 AUC0-28, (AUC0-28 CD8+ CAR+ T 세포)이다.
일부 구현예에서, “노출”은 특정 기간에 걸친 치료제의 투여 이후, 치료제의 신체 노출, 예를 들어, 혈장 (혈액 또는 혈청)에서의 CAR+ T 세포를 지칭할 수 있다. 일부 구현예에서 노출은 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 용량 투여 이후 약동학적 분석에 의해 결정된, 치료제 농도-시간 곡선 (AUC) 아래의 면적으로 제시될 수 있다. 일부 경우에, AUC는 세포 요법으로 투여된 세포에 대해 세포*일/μL으로, 또는 상응하는 이의 단위로 표현된다. 일부 구현예에서, AUC는 환자 집단에서, 예컨대 샘플 환자 집단에서의 평균 AUC, 예를 들어, 하나 이상의 환자(들)로부터의 평균 AUC로서 측정된다. 일부 구현예에서, 전신 노출은 특정 기간, 예를 들어, 0일 내지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28일 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 주 이상, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 개월 이상의 특정 기간 이내의 곡선 아래 면적 (AUC)을 지칭한다. 일부 구현예에서, AUC는 측정된 모든 데이터 및 측정된 약동학적 (PK) 파라미터로부터 추정된 데이터를 포함하여 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 투여 이후 0 일 내지 28 일의 AUC (AUC0-28), 예컨대 샘플 환자 집단과 같은 환자 집단으로부터의 평균 AUC로서 측정된다. 일부 구현예에서, 시간에 따른 노출, 예를 들어, 특정 기간에 대한 AUC, 예컨대 AUC0-28을 결정하기 위해, 시간에 걸친 파라미터, 예를 들어, 세포 농도의 다중 측정 또는 평가를 사용하여, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21 또는 28 일 또는 그 이상 마다 측정되어, 치료제 농도-시간 곡선이 생성된다.
일부 구현예에서, T 세포의 투여 이후 대상체에서 재조합 수용체를 발현하는 세포 (예를 들어, T 세포 기반의 요법을 위해 투여되는 CAR-발현 세포)의 존재 및/또는 양은 이러한 요법의 투여 이전, 동안 및/또는 이후에 검출된다. 일부 양태에서, 핵산-기반 방법, 예컨대 정량적 PCR (qPCR)는, 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 장기 또는 조직 샘플 (예를 들어, 질병 부위, 예를 들어, 종양 샘플)에서 재조합 수용체를 발현하는 세포 (예를 들어, T 세포 기반의 요법을 위해 투여되는 CAR-발현 세포)의 정량을 평가하기 위해 사용된다. 일부 양태에서, 지속성은 DNA의 마이크로그램 당 수용체, 예를 들어, CAR를 인코딩하는 DNA 또는 플라스미드의 카피, 또는 샘플, 예를 들어, 혈액 또는 혈청의 마이크로리터 당, 또는 샘플 마이크로리터 당 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 또는 백혈구 세포 또는 T 세포의 전체 개수 당 수용체-발현 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포 개수로서 정량화된다. 일부 구현예에서, qPCR 또는 다른 핵산-기반 방법에 사용되는 프라이머 또는 프로브는 핵산 인코딩 재조합 수용체, 및/또는 플라스미드 및/또는 벡터의 다른 성분 또는 요소, 예로서 조절 요소, 예를 들어, 프로모터, 전사 및/또는 전사-후 조절 요소 또는 반응 요소, 또는 마커, 예를 들어, 대리 마커에 대한 결합, 인식 및/또는 증폭에 특이적이다. 일부 구현예에서, 프라이머는 조절 요소, 예컨대 우드척 간염 바이러스 전사-후 조절 요소 (WPRE)에 특이적일 수 있다. 일부 예시에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 존재 및/또는 양은 DNA의 질량 당 CAR을 인코딩하는 핵산 서열 (예를 들어, 형질도입 유전자 서열) 또는 CAR-인코딩 서열에 작동 가능하게 연결된 핵산 서열의 카피 (예를 들어, 카피/μg); 시간에 따른 DNA의 카피/μg, 치료 후 DNA의 최대 또는 피크 카피/μg, 또는 치료 후 또는 이의 개시 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 21일, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 주 이상에, DNA의 카피/μg의 곡선의 AUC로서 표현된다.
일부 구현예에서, 세포는 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 이후 적어도 4, 14, 15, 27, 또는 28 일에 대상체에서 검출된다. 일부 양태에서, 세포는 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 이후 적어도 2, 4, 또는 6 주 후, 또는 3, 6, 또는 12, 18, 또는 24, 또는 30 또는 36 개월, 또는 1, 2, 3, 4, 5 년 이상에 검출된다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에, 피크 수준 및/또는 AUC가 평가되고 및/또는 대상체로부터 샘플이 획득된다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에, 피크 수준 및/또는 AUC가 평가되고 및/또는 대상체로부터 샘플이 획득된다.
팽창 및/또는 지속성을 나타내는 노출, 예를 들어 T 세포 요법을 위해 투여되는 T 세포의 노출, 예를 들어, 개수 또는 농도는 대상체가 노출되는 세포의 최대 개수 또는 농도, 검출 가능한 세포 또는 특정 개수 또는 백분율 이상의 세포의 지속 기간, 시간에 따른 세포의 개수 또는 농도에 대한 곡선 아래 면적 (AUC), 및/또는 이의 조합 및 이의 지표의 관점에서 언급될 수 있다. 이러한 결과는 공지된 방법, 예컨대 특정 샘플, 예를 들어, 혈액, 혈청, 혈장 또는 조직, 예컨대 종양 샘플에서 핵산 또는 DNA의 전체 양과 비교하여 핵산 인코딩 재조합 수용체의 카피 개수를 검출하는 qPCR, 및/또는 일반적으로 수용체에 대해 특이적인 항체를 사용하여 수용체를 발현하는 세포를 검출하는 유세포 분석을 사용하여 평가될 수 있다. 세포-기반 분석은 또한 기능성 세포, 예컨대 질병 또는 병태 또는 수용체에 의해 인식되는 항원을 발현하는 세포에 결합 및 또는 중화 또는 이에 대한 반응, 예를 들어, 세포독성 반응을 유도할 수 있는 세포의 개수 또는 백분율 또는 농도를 검출하는데 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 세포에 대한 대상체의 노출 증가는 세포의 팽창 증가를 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체 발현 세포, 예를 들어 CAR-발현 세포는 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 이후 대상체에서 팽창한다.
일부 구현예에서, 수용체를 발현하는 세포는, 예를 들어, 특정 방법, 예컨대 qPCR 또는 유세포 분석-기반 검출 방법에 의해, 적어도 (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 주 이상 동안의 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 이후, T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 이후 적어도 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 또는 60 일 이상 이후에 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직, 예를 들어, 대상체의 종양 샘플에서 검출 가능하다.
일부 양태에서, 적어도 (약) 1 x 102, 적어도 (약) 1 x 103, 적어도 (약) 1 x 104, 적어도 (약) 1 x 105, 또는 적어도 (약) 1 x 106 또는 적어도 (약) 5 x 106 또는 적어도 (약) 1 x 107 또는 적어도 (약) 5 x 107 또는 적어도 (약) 1 x 108 개의 재조합 수용체-발현, 예를 들어, CAR-발현 세포, 및/또는 마이크로리터 당 적어도 10, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 또는 500, 또는 1000 개의 수용체-발현 세포, 예를 들어, 마이크로리터 당 적어도 10개가 대상체 또는 이의 체액, 혈장, 혈청, 조직, 또는 구획에, 예컨대 이의 혈액, 예를 들어, 말초 혈액, 또는 질병 부위, 예를 들어, 종양에서 검출 가능하거나, 또는 존재한다. 일부 구현예에서, 세포의 이러한 개수 또는 농도는 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 이후 적어도 (약) 20 일, 적어도 (약) 40 일, 또는 적어도 (약) 60 일, 또는 적어도 (약) 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 개월, 또는 적어도 2 또는 3 년 동안 대상체에서 검출 가능하다. 이러한 세포 개수는 유세포 분석-기반 또는 정량적 PCR-기반 방법 및 공지된 방법을 사용하는 전체 개수에 대한 추정에 의해 검출될 수 있다. 예를 들어, [rentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177), Park et al, Molecular Therapy 15(4):825-833 (2007), Savoldo et al., JCI 121(5):1822-1826 (2011), Davila et al., (2013) PLoS ONE 8(4):e61338, Davila et al., Oncoimmunology 1(9):1577-1583 (2012), Lamers, Blood 2011 117:72-82, Jensen et al., Biol Blood Marrow Transplant 2010 September; 16(9): 1245-1256, Brentjens et al., Blood 2011 118(18):4817-4828]를 참조한다.
일부 양태에서, 예를 들어 말초 혈액 또는 골수 또는 다른 구획에서, 면역조직화학, PCR, 및/또는 유세포 분석에 의해 측정된 바와 같은, 100 개의 세포 당, 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산의 카피 개수, 예를 들어, 벡터 카피 개수는, 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 이후, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 5 주, 또는 적어도 약 6 주, 또는 적어도 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8. 9, 10, 11, 또는 12 개월 또는 적어도 2 또는 3 년에, 적어도 0.01, 적어도 0.1, 적어도 1, 또는 적어도 10개 이다. 일부 구현예에서, 게놈 DNA의 마이크로그램 당 수용체, 예를 들어 CAR를 발현하는 벡터의 카피 개수는, T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 이후 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 또는 적어도 약 4 주의 시점에, 또는 이러한 투여 이후 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12 개월 또는 적어도 2 또는 3 년의 시점에, 적어도 100, 적어도 1000, 적어도 5000, 또는 적어도 10,000, 또는 적어도 15,000 또는 적어도 20,000개 이다.
일부 양태에서, 세포에 의해 발현되는 수용체, 예를 들어 CAR은, 세포 투여 이후, 예를 들어, T 세포 투여 개시 이후 적어도 (약) 3 개월, 적어도 (약) 6 개월, 적어도 (약) 12 개월, 적어도 (약) 1 년, 적어도 (약) 2 년, 적어도 (약) 3 년, 또는 3 년 이상의 시점에, 대상체, 혈장, 혈청, 혈액, 조직 및/또는 이의 질병 부위, 예를 들어, 종양 부위에서, 정량적 PCR (qPCR)에 의해 또는 유세포 분석에 의해 검출 가능하다. 일부 구현예에서, 시간에 따른 대상체의 체액, 혈장, 혈청, 혈액, 조직, 장기 및/또는 질병 부위, 예를 들어 종양 부위, T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 이후, 수용체- (예를 들어, CAR-) 발현 세포의 농도에 대한 곡선 아래 면적 (AUC)이 측정된다.
또한 반응 또는 지속적 반응의 가능성을 평가하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 피크 수준을 검출하는 단계를 포함하며, 이러한 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 방법은 임계값에 대해 피크 수준을 개별적으로 비교하여, 대상체가 유전자 조작된 세포의 투여에 대한 지속적인 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 미만인 경우 반응 또는 지속적 반응을 달성할 가느성이 있고, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 초과인 경우 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료적 범위 내에 있는 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값 미만이거나 또는 상한 임계값 초과인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없다.
III. 치료 방법
일부 구현예에서, 치료 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 면역요법 및/또는 세포 요법을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 유전자 조작된 세포, 예를 들어, 재조합 수용체 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하도록 조작된 세포의 투여를 포함한다. 일부 양태에서, 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물 중 임의의 것을 대상체, 예컨대 질병 또는 장애를 가지는 대상체에게 투여하는 방법이 또한 제공된다. 일부 양태에서, 질병 또는 장애의 치료를 위한 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물의 용도가 또한 제공된다. 일부 양태에서, 질병 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조를 위한 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물의 용도가 또한 제공된다. 일부 양태에서, 질병 또는 장애의 치료에 사용하기 위한, 또는 질병 또는 장애를 가지는 대상체에게 투여하기 위한 조작된 세포 또는 조작된 세포를 함유하는 조성물이 또한 제공된다.
키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포, 또는 이를 포함하는 조성물은 다양한 치료적, 진단적 및 예방적 조치에 유용하다. 예를 들어, 조작된 세포 또는 조작된 세포를 포함하는 조성물은 대상체에서 다양한 질병 및 장애를 치료하는데 유용하다. 이러한 방법 및 용도는, 예를 들어, 조작된 세포, 또는 이를 함유하는 조성물을, 질병, 조건, 또는 장애, 예컨대 종양 또는 암을 가지는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 치료적 방법 및 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 조작된 세포 또는 이를 포함하는 조성물은 질병 또는 장애의 치료에 영향을 미치는 유효량으로 투여된다. 용도는 이러한 방법 및 치료에서 조작된 세포 또는 조성물의 용도, 및 이러한 치료적 방법을 수행하기 위해 약제의 제조에서의 용도를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 질병 또는 병태를 가지거나, 가지는 것으로 추정되는 대상체에게, 조작된 세포, 또는 이를 포함하는 조성물을 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 이에 따라 방법은 대상체에서 질병 또는 병태 또는 장애를 치료한다.
일부 구현예에서, 방법은 세포, 예를 들어, CAR+ 발현 세포의 용량을, 대상체 대상체에게 투여하여 세포가 표적 치료적 범위 또는 윈도우 내에 있도록 하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체의 세포가 표적 치료적 범위 또는 윈도우 내에 있는지의 여부는 파라미터, 예를 들어, 약동학적 파라미터, 예컨대 피크 세포 농도 (Cmax)를 모니터링함으로써 결정 또는 평가될 수 있다. 일부 양태에서, 제공되는 방법은 또한 파라미터의 평가, 예를 들어, 약동학적 파라미터, 예컨대 피크 세포 농도 (Cmax), 환자 속성 및/또는 바이오마커의 평가에 기초하여, 대상체의 용량을 결정하는 방법, 또는 대상체를 투여하는 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포의 용량은 암을 비롯한 질병, 조건, 및 장애를 치료 또는 예방하기 위해 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 세포, 집단 및 조성물은 치료될 특정 질환 또는 병태를 가지는 대상체 또는 환자에게, 예컨대 입양 T 세포 요법 등의 입양 세포 요법을 통해 투여된다. 일부 구현예에서, 배양 단계 및/또는 기타 처리 단계 이후 조작된 조성물 및 최종 생산 조성물과 같은 세포 및 조성물은 질환 또는 병태를 가지거나 가질 위험이 있는 대상체 등의 대상체에게 투여된다. 일부 양태에서, 이로써 방법은, 예컨대 조작된 T 세포에 의해 인식되는 항원을 발현하는 암에서의 종양 부담을 줄임으로써, 질환 또는 병태 중 하나 이상의 증상을 치료, 예컨대 개선시킨다.
입양 세포 요법를 위한 세포의 투여 방법은 공지되어 있으며, 제공된 방법 및 조성물과 관련되어 사용될 수 있다. 예를 들어, 입양 T 세포 요법은 예컨대, Gruenberg 등의 미국 특허 출원 공보 2003/0170238; Rosenberg의 미국 특허 4,690,915; 문헌 Rosenberg (2011) Nat Rev Clin Oncol. 8(10):577-85)에 기재되어 있다. 예를 들어, 문헌 Themeli et al. (2013) Nat Biotechnol. 31(10): 928-933; Tsukahara et al. (2013) Biochem Biophys Res Commun 438(1): 84-9; Davila et al. (2013) PLoS ONE 8(4): e61338를 참조한다.
치료되는 질병 또는 병태는, 항원의 발현이 질병 병태 또는 장애의 병인에 연관이 있는 및/또는 관여하는, 예컨대 그러한 질환, 병태 또는 장애를 유발하거나, 악화시키거나 또는 그렇지 않으면 이에 관여하는 임의의 것일 수 있다. 예시적인 질환 및 병태는 세포의 악성 또는 형질 전환 (예컨대, 암), 자가 면역 또는 염증성 질환, 또는 예컨대 박테리아, 바이러스 또는 기타 병원체에 의해 야기된 감염성 질환과 관련된 질환 또는 병태를 포함할 수 있다. 치료될 수 있는 다양한 질환 및 병태와 관련된 항원을 비롯한 예시적 항원들은 전술하였다. 구체적인 구현예에서, 키메라 항원 수용체 또는 형질전환 TCR은 질병 또는 병태와 연관된 항원에 특이적으로 결합한다.
질병, 병태, 및 장애 중에는, 고형 종양, 혈액 악성 종양, 및 흑색종을 비롯한 종양, 및 국소적 및 전이성 종양을 비롯한 종양, 감염성 질병, 예컨대 바이러스 또는 다른 병원체에 의한 감염, 예를 들어, HIV, HCV, HBV, CMV, 및 기생충 질병, 및 자가면역 및 염증성 질병이 있다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 종양, 암, 악성종양, 신생종(neoplasm), 또는 다른 증식성 질병 또는 장애이다. 이러한 질병으로는 백혈병, 림프종, 예를 들어, 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 비-호치킨 림프종, 급성 골수성 백혈병, 다발성 골수종, 불응성 여포성 림프종, 외투 세포 림프종, 지연성 B 세포 림프종, B 세포 악성 종양, 결장, 폐, 간, 유방, 전립선, 난소, 피부, 흑색종, 뼈의 암, 및 뇌암, 난소암, 상피암, 신장 세포 암종, 췌장 선암종, 호지킨 림프종, 자궁경부 암종, 대장암, 교모세포종, 신경아세포종, 유잉 육종, 수모세포종, 골육종, 활막 육종, 및/또는 악성중피종을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 대상체는 급성-림프구성 백혈병 (ALL)을 가진다. 일부 구현예에서, 대상체는 B-세포 악성 종양을 가진다. 일부 구현예에서, 대상체는 비-호지킨 림프종을 가진다.
일부 구현예에서, 질병 또는 질병 상태는 감염성 질병 또는 질병 상태, 예컨대, 바이러스, 레트로바이러스, 박테리아, 및 원충 감염, 면역결핍, 사이토메갈로바이러스 (CMV), 엡스타인-바르 바이러스 (Epstein-Barr virus)(EBV), 아데노바이러스, BK 폴리오마바이러스 (polyomavirus)이나, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 질병 또는 질병 상태는 자가면역 또는 염증성 질병 또는 질병 상태, 예컨대 관절염, 예를 들어 류머티즘성 관절염 (RA), I형 당뇨병, 전신 홍반성 낭창 (SLE), 염증성 장 질병, 건선, 경피증, 자가면역 갑상선 질병, 그레이브스병 (Grave's disease), 크론병 (Crohn's disease) 다발성 경화증, 천식, 및/또는 이식 관련 질병 또는 질병 상태이다.
일부 구현예에서, 질병 또는 장애와 연관된 항원은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다: αvβ인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 공지), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2으로도 공지), 암배아 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4 (CSPG4), 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; 또한 Fc 수용체 동족체 5 또는 FCRH5로도 공지), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100 (gp100), 글리피칸-3 (GPC3), G 단백질 연결 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 타이로신 키나제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이합체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파 (IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접합 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 풍부 반복 함유 8 패밀리 구성원 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐과 거대세포바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 살해 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접합 분자 (NCAM), 종양태아 항원, 우선적으로 발현되는 흑색종의 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이적 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), 수용체 타이로신 키나제 유사 고아 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백 (TPBG 또한 5T4로도 공지), 종양-연관된 당단백 72 (TAG72), 타이로시나제 관련 단백질 1 (TRP1, 또한 TYRP1 또는 gp75로도 공지), 타이로시나제 관련 단백질 2 (TRP2, 또한 도파크롬 토토머라제, 도파크롬 델타-아이소머라제 또는 DCT로도 공지), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현된 항원, 또는 보편적인 표지와 연관된 항원, 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자.
일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 B 세포 악성종양과 관련된 항원을 포함하는데, 예컨대 다수의 공지된 B 세포 마커 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 항원은 병원체-특이적 또는 병원체-발현된 항원이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 바이러스 항원 (예컨대, HIV, HCV, HBV 등으로부터의 바이러스 항원), 박테리아 항원 및/또는 기생충 항원이다.
일부 구현예에서, 질병 또는 장애와 연관된 항원은 다음으로 구성된 군으로부터 선택된다: 고아 티로신 키나아제 수용체 ROR1, Her2, L1-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, 0EPHa2, ErbB2, 3, 또는 4, FBP, 태아 아세틸콜린 e 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경쇄, 루이스 Y, L1-세포 접합 분자, MAGE-A1, 메소텔린, MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암배아 항원 (CEA), 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린 B2, CD123, CS-1, c-Met, GD-2, 및 MAGE A3, CE7, Wilms 종양 1 (WT-1), 사이클린, 예컨대 사이클린 A1 (CCNA1), 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예컨대 입양 T 세포 요법은 자가 전달에 의해 수행되며, 여기서 세포는 세포 요법을 받을 대상체 또는 그러한 대상체로부터 유래된 샘플로부터 단리되고 및/또는 그렇지 않으면 이로부터 제조된다. 이에 따라, 일부 양태에서, 세포는 치료가 필요한 대상체, 예컨대 환자로부터 유래되고, 단리 및 가공 후의 세포는 동일한 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 세포 요법, 예컨대 입양 T 세포 요법은 동종이계 전달에 의해 수행되며, 여기서 세포는 세포 요법을 받거나 또는 궁극적으로 받는 대상체 이외의 대상체, 예컨대 제1 대상체로부터 단리되고 및/또는 그렇지 않으면 이로부터 제조된다. 이러한 구현예에서, 이후 세포는 동일한 종의 상이한 대상체, 예컨대 제2 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 동일하다. 일부 구현예에서, 제1 및 제2 대상체는 유전적으로 유사하다. 일부 구현예에서, 제2 대상체는 제1 대상체와 동일한 HLA 클래스 또는 수퍼타입을 나타낸다.
세포는 임의의 적합한 수단에 의해, 예를 들어, 볼루스 주입에 의해, 주사에 의해, 예를 들어, 정맥 내 또는 피하 주사, 안구 내 주사, 안구주위 주사, 망막 내 주사, 망막 하 주사, 유리 체내 주사, 중격경유 주사, 복강 내 주사, 맥락 막내 주사, 삽관 내 주사, 피하 주사 주사, 결막 하 주사, 안각건 하(sub-Tenon's) 주사, 구후(retrobulbar) 주사, 구주위(peribulbar) 주사 또는 뒤공막옆 전달(posterior juxtascleral delivery)로 투여될 수 있다 일부 구현예에서, 세포는 비경구, 폐 내, 및 비강 내, 그리고, 국소적 치료가 바람직한 경우, 병소 내 투여로 투여된다. 장관외 주입은 근육내, 정맥, 동맥내, 복막내, 또는 피부아래 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 주어진 용량은 세포의 단일 볼루스 투여에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 3 일 이하의 기간 동안 세포의 다수의 볼루스 투여에 의해, 또는 세포의 연속 주입 투여에 의해 투여된다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 경과, 세포가 예방적 또는 치료적 목적으로 투여되는지 여부, 이전의 치료, 대상체의 임상 기록 및 세포에 대한 반응, 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 및 세포는 한 번에 또는 일련의 치료를 통해 적절하게 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 세포는 항체 또는 조작된 세포 또는 수용체 또는 시제 (예컨대, 세포 독성제 또는 치료제) 등의 또 다른 치료적 개입과 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로, 조합 치료의 일부로서 투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가적인 치료제와 함께, 또는 또 다른 치료적 개입과 관련하여 동시에 또는 임의의 순서로 순차적으로 병용 투여된다. 일부 상황에서, 세포 집단이 하나 이상의 추가적인 치료제의 효과를 증강시키도록 또는 그 반대의 경우를 위하여, 세포는 또 다른 요법과 시간적으로 충분히 가까이 병용 투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가적인 치료제에 선행하여 투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 추가적인 치료제 후에 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가적인 시제는 예컨대 지속성을 증강시키기 위한, IL-2와 같은 사이토카인을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 화학요법제의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 화학요법제, 예를 들어, 투여 이전에 종량 부담을 감소시키기 위한 예를 들어, 조건화 화학요법제의 투여를 포함한다.
일부 양태에서 면역고갈 (예를 들어, 림프구 고갈) 요법을 가지는 사전조건화 (preconditioning) 대상은 입양 세포 요법 (ACT)의 효과를 개선할 수 있다.
이에 따라, 일부 구현예에서, 상기 방법은 세포 요법의 개시 전에 대상체에게 사전조건화 시제를 투여하는 것을 포함하는데, 예컨대 림프고갈제 또는 화학요법제, 예컨대 사이클로포스파마이드, 플루다라빈 또는 이의 조합이다. 예를 들어, 상기 대상체는 세포 요법의 개시보다 적어도 2 일 전에, 예를 들어 적어도 3, 4, 5, 6, 또는 7 일 이전에 사전조건화 제제를 투여받는다. 일부 구현예에서, 상기 대상체는 세포 요법의 개시보다 최대 7 일 전에, 예를 들어 최대 6, 5, 4, 3 또는 2 일 이전에 사전조건화 제제를 투여받는다.
일부 구현예에서, 대상체는 (약) 20 mg/kg 내지 (약) 100mg/kg, 또는 (약) 40 mg/kg 내지 (약) 80 mg/kg의 투여량으로 사이클로포스파마이드를 이용하여 사전조건화된다. 일부 측면에서, 상기 대상체는 (약) 60 mg/kg의 사이클로포스파마이드로 사전조건화된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파마이드는 단일 투여로 투여되거나 또는 복수 회 투여로, 예컨대 매일, 격일로 또는 매 3일에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파마이드는 하루 또는 이틀간 1 일 1 회 투여된다.
일부 구현예에서, 림프구고갈제가 플루다라빈을 포함하는 경우, 대상체는 플루다라빈이 (약) 1 mg/m2 내지 100 mg/m2, 예컨대 (약) 10 mg/m2 내지 (약) 75 mg/m2, (약) 15 mg/m2 내지 (약) 50 mg/m2, (약) 20 mg/m2 내지 (약) 30 mg/m2, 또는 (약) 24 mg/m2 내지 (약) 26 mg/m2의 용량으로 투여된다. 일부 예시에서, 대상체는 25 mg/m2의 플루다라빈이 투여된다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 단일 투여로 투여되거나 또는 복수 회 투여로, 예컨대 매일, 격일로 또는 매 3일에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 플루다라빈은 예컨대 1-5 일간, 예컨대 3 내지 5 일간 매일 투여된다.
일부 구현예에있서, 림프고갈 제제는 제제들의 조합, 예컨대 사이클로포스파마이드 및 플루다라빈의 조합을 포함한다. 따라서, 상기 제제의 조합물은 임의의 투여량 또는 투여 스케쥴로 사이클로포스파마이드를 포함할 수 있는데, 예컨대 전술한 바와 같고, 상기 조합물은 임의의 투여량 또는 투여 스케쥴로 플루다라빈을 포함할 수 있는데, 예컨대 전술한 바와 같다. 예를 들어, 일부 측면에서, 제1 투여 또는 후속 투여 전에 60 mg/kg (~ 2 g/m2)의 사이클로포스파마이드 및 3 내지 5 투여량의 25 mg/m2 플루다라빈을 투여받는다.
세포의 투여 이후, 일부 구현예에서, 조작된 세포 집단의 생물학적 활성은 예컨대 다수의 공지된 방법 중 임의의 방법에 의해 측정된다. 생체 내, 예컨대 이미징에 의해 또는 생체 외, 예컨대 ELISA 또는 유동 세포 측정 분석에 의해 평가할 파라미터는, 항원에 대한 조작된 T 세포 또는 천연 T 세포 또는 기타 면역 세포의 특이적 결합을 포함한다. 특정 구현예에서, 조작된 세포가 표적 세포를 붕괴시키는 능력은, 예를 들어 문헌 [Kochenderfer et al., J. Immunotherapy, 32(7): 689-702 (2009)], 및 [Herman et al. J. Immunological Methods, 285(1): 25-40 (2004)]에 기재된 세포독성 분석과 같이, 기술 분야 내 공지된 임의의 적절한 방법을 사용하여 측정할 수 있다. 특정 구현예에서, 세포의 생물학적 활성은 CD107a, IFNγ및 TNF와 같은 하나 이상의 사이토카인의 발현 및/또는 분비를 분석함으로써 측정된다. 일부 양태에서, 생물학적 활성은 종양 부담 또는 부하 감소와 같은 임상 결과를 평가함으로써 측정된다.
특정 구현예에서, 조작된 세포는 임의의 여러 방식을 통해 추가로 변형되어, 치료적 또는 예방적 효능이 증가된다. 예를 들어, 집단에 의해 발현된, 조작된 CAR 또는 TCR은 직접적으로 또는 링커를 통해 간접적으로 표적 부분에 컨쥬게이션될 수 있다. 화합물, 예컨대 CAR 또는 TCR을 표적 부분에 컨쥬게이션시키는 관행은 해당 기술 분야에 공지되어 있다. 예컨대, 문헌 [Wadwa et al., J. Drug Targeting 3: 1 1 1 (1995)] 및 미국 특허 5,087,616를 참조한다.
A. 투약
일부 구현예에서, 대상체는 CAR+ T 세포의 치료적 범위 및/또는 윈도우를 달성하거나 달성할 가능성이 있는 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 방법은 피크 CAR+ 세포 개수가 독성을 유발할 것으로 추정되는 특정 확률 미만인 범위 내에서 혈액 내 피크 CAR+ 세포 개수를 달성하거나, 또는 달성할 가능성이 있는 양의 세포 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 피크 CAR+ 세포 개수가 반응 또는 지속적 반응을 유발할 것으로 추정되는 특정 확률 초과인 범위 내에서 혈액 내 피크 CAR+ 세포 개수를 달성하거나, 또는 달성할 가능성이 있는 양의 세포 용량을 투여하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 세포의 양은 질병 또는 병태를 치료하기에 효과적인 양, 예컨대 치료적으로 효과적인 또는 예방적으로 효과적인 양이다. 일부 경우에, 반응을 달성할 것으로 추정되는 확률은 (약) 65% 초과, (약) 70% 초과, (약) 75% 초과, (약) 80% 초과, (약) 85% 초과, (약) 90% 초과, (약) 95% 초과이다. 일부 경우에, 독성을 유발할 것으로 추정되는 확률은 독성 확률 곡선에서 (약) 35% 미만, (약) 30% 미만, (약) 25% 미만, (약) 20% 미만, (약) 15% 미만, (약) 10% 미만 또는 (약) 5% 미만이다. 일부 구현예에서, 세포 용량은 원하는 반응 달성 추정 확률 이상 및 원하는 독성 유발 추정 확률 이하이다.
일부 구현예에서, 투여되는 세포의 양 또는 용량은 파라미터, 예를 들어, 약동학적 파라미터의 평가, 및 예를 들어, 섹션 II에 기재된 바와 같은 반응 및/또는 독성 추정 확률에 기초한다.
일부 구현예에서, 방법은 결정된 표적 치료적 범위 또는 윈도우 이내이고, 대상체에서 피크 CAR+ 세포 농도를 달성하기에 충분한 개수 또는 용량의 세포를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 결정된 표적 치료적 범위 또는 윈도우 이내이고, 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서, 또는 방법에 의해 치료된 대상체의 (약) 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 초과, 예컨대 75% 초과에서, 피크 CAR+ 세포 농도를 달성하기에 충분한 개수 또는 용량의 세포를 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 치료적 윈도우 또는 범위는 예를 들어, 섹션 II에 기재된 바와 같이 결정된다. 일부 구현예에서, 치료적 범위는 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 초과하고, 추정 독성 확률이 (약) 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 미만인 것인 것과 연관된 범위이다.
일부 구현예에서, 치료적 윈도우 또는 범위는 세포, 예를 들어, CD3+, CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 개수 및/또는 농도의 특정 범위에 기초하여 결정된다. 일부 구현예에서, 치료적 윈도우를 달성할 수 있는 혈액 내 예시적인 피크 CD3+CAR+ T 세포 농도는 혈액 내 마이크로리터 당 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 20, 30, 40, 50 개의 CD3+ CAR+ T 세포 내지 혈액 내 마이크로리터 당 대략 200, 300, 400, 500, 600, 700 또는 750 개의 CD3+ CAR+ T 세포이거나, 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료적 윈도우를 달성할 수 있는 혈액 내 예시적인 피크 CD8+CAR+ T 세포 농도는 혈액 내 마이크로리터 당 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 20, 30, 40, 50 개의 CD8+ CAR+ T 세포 내지 혈액 내 마이크로리터 당 대략 200, 300, 400, 500, 600, 700 또는 750 개의 CD8+ CAR+ T 세포이거나, 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 표적 치료적 범위 또는 윈도우는 투여 이후 (약) 혈액 내 마이크로리터 당 10 세포 내지 (약) 마이크로리터 당 500 개의 세포의 피크 CD3+CAR+ T 세포 농도이다. 일부 구현예에서, 표적 치료적 범위 또는 윈도우는 투여 이후 (약) 혈액 내 마이크로리터 당 2 세포 내지 (약) 마이크로리터 당 200 개의 세포의 피크 CD8+CAR+ T 세포 농도이다.
일부 구현예에서, 대상체의 투약 방법이 제공되며, 상기 방법은 다음의 단계를 포함한다: 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 단계로서, 이러한 용량은 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 대상체의 75% 초과에서 결정된 치료적 범위 내에 혈액 내 피크 CAR+ 세포를 달성하기에 충분한 유전자 조작된 세포의 개수를 포함하고, 여기서 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률은 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 개의 세포 내지 (약) 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 (iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가, (약) 마이크로리터 당 2 개의 세포 내지 (약) 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
일부 구현예에서, 대상체의 투약 방법에 제공되며, 상기 방법은 다음의 단계를 포함한다: (a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 차선의 용량을 투여하는 단계로서, 이러한 용량은 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 대상체의 75% 초과에서, 결정된 치료적 범위 내에 혈액 내 피크 CAR+ 세포를 달성하기에 불충분한 유전자 조작된 세포의 개수를 포함하는 것인 단계; 및 (b) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 대상체에서 CAR+ 세포 팽창 또는 증식을 향상시켜, 치료적 범위 이내의 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 달성시키는 시제를 투여하는 단계, 여기서 치료적 범위는 다음과 같다: (i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는 (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 개의 세포 내지 (약) 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 (iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포, (약) 마이크로리터 당 2 개의 세포 내지 (약) 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.일부 구현예에서, 대상체는 표적 치료적 범위 또는 윈도우를 달성할 수 있는 용량이 투여된다. 일부 구현예에서, 용량은 (약) 1 x 107 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 5 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 1 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 5 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 1 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포이다.
입양 세포 요법의 맥락에서, 주어진 “용량”의 투여는 주어진 양 또는 개수의 세포의 단일 조성물 및/또는 단일 비중단 투여로서, 예를 들어, 단일 주입 또는 연속 주입으로서의 투여를 포함하며, 또한 주어진 양 또는 개수의 세포의 분할 용량으로서의 투여를 3 일을 초과하지 않는, 특정 기간에 걸쳐 다수의 개별 조성물 또는 주입으로의 투여를 포함한다. 이에 따라, 일부 상황에서, 용량은 단일 시점에서 주어지거나 개시되는, 세포의 특정 개수의 단일 또는 연속 투여이다. 그러나, 일부 맥락에서, 용량은 3일을 초과하지 않는 기간에 걸친 다중 주입 또는 주입, 예컨대 3일 또는 2일 동안 하루에 한번으로, 또는 하루의 기간에 걸친 다중 투입에 의해 투여된다.
이에 따라, 일부 양태에서, 용량의 세포는 단일 약제학적 조성물로 투여된다. 일부 구현예에서, 용량의 세포는 제1 용량의 세포를 총괄적으로 함유하는 복수의 조성물로 투여된다
용어 “분할 용량”은 1 일 초과에 걸쳐 투여되도록 분할된 용량을 지칭한다. 이러한 유형의 투여는 본 방법에 의해 포함되며 단일 용량으로 간주된다.
이에 따라, 일부 양태에서 용량은 분할 용량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 용량은 2 일에 걸쳐 또는 3 일에 걸쳐 대상체에 투여될 수 있다. 예시적인 분할 투여 방법은 제1일에 용량의 25%를 투여하고, 제2일에 용량의 나머지 75%를 투여하는 것을 포함한다. 다른 구체예에서, 제1 용량의 33%는 제1일에 투여되고 나머지 67%는 제2일에 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 용량의 10%는 제1일에 투여되고, 용량의 30%는 제2일에 투여되고, 용량의 60%는 제3일에 투여된다. 일부 구현예에서, 분할 용량은 3 일을 초과하여 분산되지 않는다.
일부 구현예에서, 용량의 세포는, 각각 용량의 일부 세포를 함유하는, 예컨대 제1 및 제2, 선택적으로는 그 이상의, 복수의 조성물 또는 용액의 투여에 의해 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 상이한 집단 및/또는 서브-유형의 세포를 함유하는 복수의 조성물은, 선택적으로 특정 기간 이내에, 개별적으로 또는 독립적으로 투여된다. 예를 들어, 집단 또는 서브-유형의 세포는 각각 CD8+ 및 CD4+ T 세포, 및/또는 각각 CD8+- 및 CD4+-풍부 집단, 예를 들어, 각각 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포를 개별적으로 포함하는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 용량의 투여는 CD8+ T 세포 용량 또는 CD4+ T 세포 용량을 포함하는 제1 조성물의 투여 및 다른 용량의 CD4+ T 세포의 및 CD8+ T 세포를 포함하는 제2 조성물의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 조성물 또는 용량의 투여, 예를 들어, 복수의 세포 조성물의 투여는, 세포 조성물의 개별 투여를 포함한다. 일부 양태에서, 개별 투여는 임의의 순서로 동시에 또는 순차적으로 수행된다. 일부 구현예에서, 용량은 제1 조성물 및 제2 조성물을 포함하며, 제1 조성물 및 제2 조성물은 0 내지 12 시간 간격, 0 내지 6 시간 간격 또는 0 내지 2 시간 간격으로 투여된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물의 투여 개시 및 제2 조성물의 투여 개시는 2 시간 이하, 1 시간 이하, 또는 30 분 이하 간격, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 수행된다. 일부 구현예에서, 제1 조성물의 투여 개시 및/또는 완료 및 제2 조성물의 투여 개시 및/또는 완료는 2 시간 이하, 1 시간 이하, 또는 30 분 이하 간격, 15 분 이하, 10 분 이하 또는 5 분 이하 간격으로 수행된다.
일부 조성물에서, 제1 조성물, 예를 들어, 용량의 제1 조성물은, CD4+ T 세포를 포함한다. 일부 조성물에서, 제1 조성물, 예를 들어, 용량의 제1 조성물은, CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 조성물은 제2 조성물 이전에 투여된다.
일부 구현예에서, 세포의 용량 또는 조성물은 재조합 수용체를 발현하는 CD4+ 세포 대 재조합 수용체를 발현하는 CD8+ 세포 및/또는 CD4+ 세포 대 CD8+ 세포의 정의된 또는 표적 비율을 포함하고, 이러한 비율은 선택적으로 대략 1:1 또는 대략 1:3 내지 대략 3:1, 예컨대 대략 1:1이다. 일부 양태에서, 상이한 세포 집단을 표적 또는 원하는 비율 (예컨대 CD4+:CD8+ 비율 또는 CAR+CD4+:CAR+CD8+ 비율, 예를 들어, 1:1)로 가지는 조성물 또는 용량의 투여는 하나의 집단을 함유하는 세포 조성물을 투여한 후, 다른 집단을 포함하는 별도의 세포 조성물을 투여하는 것을 포함하며, 이러한 투여는 (대략) 표적 또는 원하는 비율이다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 연속 또는 후속 세포 용량이 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 연속 또는 후속 세포 용량은 제1 세포 용량의 투여 개시 이후 (약) 7 일, 14 일, 21 일, 28 일 또는 35 일 경과 후 투여된다. 연속 또는 후속 세포 용량은 제1 용량을 초과하거나, 거의 동일하거나 또는 미만일 수 있다. 일부 구현예에서, T 세포 요법의 투여, 예컨대 제1 및/또는 제2 용량의 세포 투여는 반복될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포 용량은 제공되는 방법에 따라 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 용량의 크기 및 시기는 대상체에서 특정 질병 또는 병태의 함수로서 결정된다. 특정 질병에 대한 용량의 크기 또는 시기를 경험적으로 결정하는 것은 숙련된 기술자의 수준 내에 있다. 투여량은 질병 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 다른 치료에 대한 특정 속성에 따라 달라질 수 있다.
일부 양태에서, 제1 용량의 투여와 연속 용량의 투여 사이의 시간은 (약) 9 내지 (약) 35 일, (약) 14 내지 (약) 28 일, 또는 (약) 15 내지 (약) 27 일이다. 일부 구현예에서, 연속 용량의 투여는 제1 용량의 투여 이후 (약) 14 일 초과 및 (약) 28 일 미만의 시점이다. 일부 양태에서, 제1 용량과 연속 용량 사이의 시간은 (약) 21 일이다. 일부 구현예에서, 추가의 용량 또는 용량, 예를 들어 연속 용량은, 연속 용량의 투여 이후 투여된다. 일부 양태에서, 추가의 연속 용량 또는 용량들은 이전 용량 투여 이후 적어도 (약) 14 초과 및 (약) 28 일 미만에 투여된다. 일부 구현예에서, 추가의 용량은 이전 용량 후 (약) 14 일 미만에, 예를 들어, 이전 용량 이후 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 또는 13 일에 투여된다. 일부 구현예에서, 이전 용량 이후 (약) 14 일 미만에 용량은 투여되지 않고 및/또는 이전 용량 이후 (약) 28 일 경과 후에 용량은 투여되지 않는다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어, 재조합 수용체-발현 세포의 용량은, 제1 용량의 T 세포 및 연속 용량의 T 세포를 포함하는, 2가지 용량 (예를 들어, 이중 용량)을 포함하며, 제1 용량 및 제2 용량 중 하나 또는 둘 모두는 T 세포의 분할 용량의 투여를 포함한다.
특정 구체예에서, 세포, 또는 서브-유형의 세포의 개별적인 집단은, 대상체에게, (약) 10 만 내지 (약) 1000 억 세포의 범위 및/또는 대상체의 체중 킬로그램 당 세포의 양으로, 예컨대, 예를 들어, 10 만 내지 (약) 500 억 세포 (예를 들어, (약) 500 만 세포, (약) 2500 만 세포, (약) 50000 만 세포, (약) 10 억 세포, (약) 50 억 세포, (약) 200 억 세포, (약) 300 억 세포, (약) 400 억 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위), 100 만 내지 (약) 500 억 세포 (예를 들어, (약) 500 만 세포, (약) 2500 만 세포, (약) 50000 만 세포, (약) 10 억 세포, (약) 50 억 세포, (약) 200 억 세포, (약) 300 억 세포, (약) 400 억 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위), 예컨대 (약) 1000 만 내지 (약) 1000 억 세포 (예를 들어, (약) 2000 만 세포, (약) 3000 만 세포, (약) 4000 만 세포, (약) 6000 만 세포, (약) 7000 만 세포, (약) 8000 만 세포, (약) 9000 만 세포, (약) 100 억 세포, (약) 250 억 세포, (약) 500 억 세포, (약) 750 억 세포, (약) 900 억 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위), 및 일부 경우에 (약) 10000 만 세포 to (약) 500 억 세포 (예를 들어, (약) 12000 만 세포, (약) 25000 만 세포, (약) 35000 만 세포, (약) 45000 만 세포, (약) 65000 만 세포, (약) 80000 만 세포, (약) 90000 만 세포, (약) 30 억 세포, (약) 300 억 세포, (약) 450 억 세포) 또는 상기 범위 및/또는 대상체의 체중 킬로그램 당 임의의 값으로 투여된다. 투여량은 질병 또는 장애 및/또는 환자 및/또는 다른 치료에 대한 특정 속성에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 이러한 값은 재조합 수용체-발현 세포의 개수를 지칭하고; 다른 구현예에서, 투여되는 T 세포 또는 PBMC 또는 전체 세포의 개수를 지칭한다.
일부 구현예에서, 세포 요법은 (적어도 약) 0.1 x 106 세포/kg 대상체의 체중, 0.2 x 106 세포/kg, 0.3 x 106 세포/kg, 0.4 x 106 세포/kg, 0.5 x 106 세포/kg, 1 x 106 세포/kg, 2.0 x 106 세포/kg, 3 x 106 세포/kg 또는 5 x 106 세포/kg의 세포 개수를 포함하는 용량의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포 요법은 (약) 0.1 x 106 세포/kg 대상체의 체중 내지 (약) 1.0 x 107 세포/kg, (약) 0.5 x 106 개의 세포/kg 내지 (약) 5 x 106 세포/kg, (약) 0.5 x 106 개의 세포/kg 내지 (약) 3 x 106 세포/kg, (약) 0.5 x 106 개의 세포/kg 내지 (약) 2 x 106 세포/kg, (약) 0.5 x 106 개의 세포/kg 내지 (약) 1 x 106 세포/kg, (약) 1.0 x 106 세포/kg 대상체의 체중 내지 (약) 5 x 106 세포/kg, (약) 1.0 x 106 개의 세포/kg 내지 (약) 3 x 106 세포/kg, (약) 1.0 x 106 개의 세포/kg 내지 (약) 2 x 106 세포/kg, (약) 2.0 x 106 세포/kg 대상체의 체중 내지 (약) 5 x 106 세포/kg, (약) 2.0 x 106 개의 세포/kg 내지 (약) 3 x 106 세포/kg, 또는 (약) 3.0 x 106 세포/kg 대상체의 체중 내지 (약) 5 x 106 세포/kg의 세포 개수를 포함하는 용량의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포의 용량은 (약) 2 x 105 개의 세포/kg 내지 (약) 2 x 106 개의 세포/kg, 예컨대 (약) 4 x 105 개의 세포/kg 내지 (약) 1 x 106 개의 세포/kg 또는 (약) 6 x 105 개의 세포/kg 내지 (약) 8 x 105 개의 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 용량은 대상체의 킬로그램 체중 당 2 x 105 개 이하의 세포 (예를 들어, 항원-발현 세포, 예컨대 CAR-발현 세포) (세포/kg), 예컨대 (약) 3 x 105 개 이하의 세포/kg, (약) 4 x 105 개 이하의 세포/kg, (약) 5 x 105 개 이하의 세포/kg, (약) 6 x 105 개 이하의 세포/kg, (약) 7 x 105 개 이하의 세포/kg, (약) 8 x 105 세포/kg, (약) 9 x 105 개 이하의 세포/kg, (약) 1 x 106 개 이하의 세포/kg, 또는 (약) 2 x 106 개 이하의 세포/kg를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 용량은 적어도 (약) 또는 (약) 대상체의 체중의 킬로그램 당 2 x 105 개의 세포 (예를 들어 항원-발현, 예컨대 CAR-발현 세포) (세포/kg), 예컨대 적어도 (약) 또는 (약) 3 x 105 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 4 x 105 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 5 x 105 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 6 x 105 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 7 x 105 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 8 x 105 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 9 x 105 세포/kg, 적어도 (약) 또는 (약) 1 x 106 세포/kg, 또는 적어도 (약) 또는 (약) 2 x 106 세포/kg를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포는 원하는 투여량으로 투여되는데, 이는 일부 측면에서 원하는 용량 또는 개수의 세포 또는 세포 유형(들) 및/또는 원하는 비율의 세포 유형을 포함한다. 따라서, 일부 구현예에서, 상기 세포의 투여량은 전체 세포 개수 (또는 체중 kg당 세포 개수) 및 개개의 서브-유형 집단의 원하는 비율, 예컨대 CD4+ 대 CD8+ 비율에 기초한다. 일부 구현예에서, 세포의 투여량은 개별 집단 또는 개별 세포 유형에서 세포의 원하는 전체 개수 (또는 체중 kg 당 개수)에 기초한다. 일부 구현예에서, 투여량은 개별 집단에서 원하는 전체 세포 개수, 원하는 비율 및 원하는 전체 세포 개수와 같은 이러한 특징의 조합에 기초한다.
일부 구현예에서, CD8+ 및 CD4+ T 세포와 같은 세포 집단 또는 서브 유형은 원하는 전체 용량, 예컨대 원하는 T 세포 용량의 허용된 차이 또는 그 이내로 투여된다. 일부 양태에서, 원하는 용량은 원하는 개수의 세포 또는, 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위 당 원하는 개수의 세포, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 양태에서, 원하는 용량은 체중 단위 당 최소 세포 개수 또는 최소 세포 개수 이상이다. 일부 측면에서, 원하는 투여량으로 투여된 전체 세포 중에서, 각 집단 또는 서브-유형은 원하는 결과 비율로 (예컨대 CD4+ 대 CD8+ 비율), 또는 그 근처에 존재하는데, 예컨대 그러한 비율의 특정 용인 차이 내이거나 오류 내이다.
일부 구현예에서, 세포는 하나 이상의 각 세포 집단 또는 서브-유형의 원하는 투여량, 예컨대 CD4+ 세포의 원하는 투여량 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 투여량의 용인되는 차이로 또는 그 이내로 투여된다. 일부 양태에서, 원하는 용량은 서브-유형 또는 집단의 원하는 개수의 세포 또는, 이러한 세포가 투여되는 대상체의 체중 단위 당 원하는 개수의 세포, 예를 들어 세포/kg이다. 일부 양태에서, 원하는 용량은 체중 단위 당 서브 -유형의 집단의 최소 세포 개수 또는 서브 -유형의 집단의 최소 세포 개수 이상이다.
이에 따라, 일부 구현예에서, 투여량은 원하는 고정 용량의 전체 세포 및 원하는 비율에 기초하고, 및/또는 하나 이상의, 예를 들어 각각의 개별 하위 유형 또는 하위-집단의 원하는 고정 용량에 기초한다. 이에 따라, 일부 구현예에서, 투여량은 T 세포의 원하는 고정 또는 최소 용량 및 원하는 CD4+ 대 CD8+ 세포의 비율에 기초하고, 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ 세포의 원하는 고정 또는 최소 용량에 기초한다.
일부 구현예에서, 세포는 다수의 세포 집단 또는 서브-유형, 예컨대 CD4+ 및 CD8+ 세포 또는 서브 유형의 원하는 결과 비의 용인 범위에서 또는 그 이내에서 투여된다. 일부 양태에서, 원하는 비율은 특정 비율일 수 있거나 비율의 범위일 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 원하는 비율 (예컨대, CD4+ 대 CD8+ 세포의 비율)은 (약) 5:1 내지 (약) 5:1 (또는 약 1:5 초과 및 약 5:1 미만), 또는 (약) 1:3 내지 (약) 3:1 (또는 약 1:3 초과 및 약 3:1 미만), 예컨대 (약) 2:1 내지 (약) 1:5 (또는 약 1:5 초과 및 약 2:1 미만, 예컨대 (약) 5:1, 4.5:1, 4:1, 3.5:1, 3:1, 2.5:1, 2:1, 1.9:1, 1.8:1, 1.7:1, 1.6:1, 1.5:1, 1.4:1, 1.3:1, 1.2:1, 1.1:1, 1:1, 1:1.1, 1:1.2, 1:1.3, 1:1.4, 1:1.5, 1:1.6, 1:1.7, 1:1.8, 1:1.9: 1:2, 1:2.5, 1:3, 1:3.5, 1:4, 1:4.5, 또는 1:5)이다. 일부 양태에서, 허용되는 차이는 원하는 비율의 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4% 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50% 이내를 비롯하여, 상기 범위 이내의 임의의 값을 포함한다.
구체적인 구현예에서, 세포의 개수 및/또는 농도는 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포의 개수를 지칭한다. 다른 구체예에서, 세포의 개수 및/또는 농도는 투여되는 모든 세포, T 세포, 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 개수 또는 농도를 지칭한다.
일부 구현예에서, 예를 들어,대상체가 인간인 경우, 용량은 약 5 x 108 미만의 전체 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 말초 혈액 단핵구 세포 (PBMC), 예를 들어, (약) 1 x 106 내지 (약) 5 x 108개 범위의 이러한 세포, 예컨대 (약) 2 x 106, 5 x 106, 1 x 107, 5 x 107, 5 x 108, 또는 5 x 108 개의 이러한 전체 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 둘 사이의 범위를 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어,대상체가 인간인 경우, 용량은 (약) 1 x 106 개 초과의 전체 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 (약) 2 x 109 개 미만의 전체 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 세포, T 세포, 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 예를 들어, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 1.2 x 109 개의 이러한 세포의 범위, 예컨대 (약) 2.5 x 107, 5 x 107, 1 x 108, 1.5 x 108, 3 x 108, 4.5 x 108, 8 x 108,또는 1.2 x 109 전체 이러한 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 둘 사이의 범위를 포함한다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 2.5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 106 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 2.5 x 106 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 105 내지 (약) 1 x 106 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 2.5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 5 x 106 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 2.5 x 106 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 2.5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 106 내지 (약) 5 x 106 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 2.5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 2.5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 107 내지 (약) 5 x 107 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 107 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 107 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 107 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 108 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 108 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 2.5 x 108 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은 적어도 (약) 1 x 105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1.5 x 108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 3 x 108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 4.5 x 108 개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5 x 108 개의 CAR-발현 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포 요법은 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 재조합 수용체-발현 세포, 전체 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵구 세포 (PBMC) 개수, (약) 5 x 105 내지 (약) 1 x 107 개의 전체 재조합 수용체-발현 세포, 전체 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵구 세포 (PBMC) 개수, 또는 (약) 1 x 106 내지 (약) 1 x 107 개의 전체 재조합 수용체-발현 세포, 전체 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵구 세포 (PBMC) 개수를 포함하는 투여량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법은 적어도 (약) 1 x 105개의 전체 재조합 수용체-발현 세포, 전체 T 세포, 또는 전체 말초 혈액 단핵구 세포 (PBMC) 개수를 포함하는 세포 투여량의 투여를 포함하는데, 예컨대 적어도 (약) 1 x 106 개, 적어도 (약) 1 x 107 개, 적어도 (약) 1 x 108 개의 이러한 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 개수는 CD3+ 또는 CD8+의 전체 개수에 관한 것이며, 일부 경우, 재조합 수용체-발현 (예컨대, CAR+) 세포에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 (약) 1 x 105 내지 5 x 108 CD3+ 또는 CD8+ 전체 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체-발현 세포, (약) 5 x 105 내지 1 x 107 CD3+ 또는 CD8+ 전체 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+ 재조합 수용체-발현 세포, 또는 (약) 1 x 106 내지 1 x 107 CD3+ 또는 CD8+ 전체 T 세포 또는 CD3+ 또는 CD8+재조합 수용체-발현 세포의 세포 개수를 포함하는 용량의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 요법은, (약) 1 x 105 내지 5 x 108 개의 전체 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포, (약) 5 x 105 내지 1 x 107 개의 전체 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포, 또는 (약) 1 x 106 내지 1 x 107 개의 전체 CD3+/CAR+ 또는 CD8+/CAR+ 세포 개수를 포함하는 투여량의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 용량의 T 세포는 CD4+ T 세포, CD8+ T 세포 또는 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 대상체가 인간인 경우, CD4+ 및 CD8+ T 세포를 포함하는 복용량을 포함하는, 복용량의 CD8+ T 세포는, (약) 1 x 106 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 재조합 수용체 (예를 들어, CAR)-발현 CD8+세포, 예를 들어, (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 108 개의 이러한 세포의 범위를 포함하고, 이러한 세포는 1 x 107, 2.5 x 107, 5 x 107, 7.5 x 107, 1 x 108, 1.5 x 108, 3 x 108, 4.5 x 108, 또는 5 x 108 개의 전체 이러한 세포, 또는 전술한 값 중 임의의 둘 사이의 범위를 포함한다. 일부 구현예에서, 환자는 다회 용량을 투여받고, 용량 각각 또는 전체 용량은 전술한 수치들 중 어느 하나 이내일 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 용량은 (약) 1 x 107 내지 (약) 0.75 x 108 개의 전체 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 5 x 107 개의 전체 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 0.25 x 108 개의 전체 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 용량은 (약) 1 x 107, 2.5 x 107, 5 x 107, 7.5 x 107, 1 x 108, 1.5 x 108, 2.5 x 108, 3 x 108, 4.5 x 108, 또는 5 x 108 개의 전체 재조합 수용체-발현 CD8+ T 세포의 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 세포, 예를 들어, 재조합 수용체-발현 T 세포의 복용량은, 단일 용량으로서 대상체에게 투여되거나, 또는 2 주, 1 개월, 3 개월, 6 개월, 1 년 이상의 기간 내에 한 번만 투여된다.
일부 양태에서, 용량 크기는 하나 이상의 기준, 예컨대 이전 치료, 예를 들어 화학요법에 대한 대상체의 반응, 대상체 내 질병 부담, 예컨대 종양 부하, 벌크, 크기, 또는 정도, 전이 범위 또는 유형, 병기, 및/또는 대상체가 독성 결과, 예를 들어, CRS, 대식세포 활성 증후군, 종양 용해 증후군, 신경독성을 발생시키는 가능성 또는 발생률, 및/또는 투여되는 세포 및/또는 재조합 수용체에 대한 숙주 면역 반응에 기초하여 결정된다.
IV. 요법의 모니터링, 평가 및 조절 방법
일부 구현예에서, 치료 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 면역요법 및/또는 세포 요법을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 유전자 조작된 세포, 예를 들어, 재조합 수용체 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하도록 조작된 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 세포, 예를 들어, CAR+ 발현 세포의 용량을, 대상체 대상체에게 투여하여 세포가 표적 치료적 범위 또는 윈도우 내에 있도록 하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 또한 대상체의 세포가 치료적 범위 또는 윈도우 내에 있는지 여부를 결정하기 위해, 개수 또는 수준과 같은 파라미터, 예를 들어, 약동학적 파라미터, 예컨대 피크 세포 농도 (Cmax)를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포가 치료적 범위 또는 윈도우 내에 속하지 않는 경우, 예를 들어, 추가 용량을 투여함으로써, 후속 또는 추가 용량을 변경함으로써, 및/또는 CAR+ T 세포 팽창, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 시제를 투여함으로써, 치료는 변형될 수 있다. 일부 양태에서, 제공되는 방법은 또한 파라미터, 예컨대 개수 또는 수준의 평가, 예를 들어, 약동학적 파라미터, 예컨대 피크 세포 농도 (Cmax), 환자 속성 및/또는 바이오마커의 평가에 기초하여, 대상체의 용량을 결정하는 방법, 또는 대상체를 투여하는 방법을 포함한다.
일부 양태에서, 요법, 예를 들어, 재조합 수용체-발현 세포를 사용한 T 세포 요법과 같은 세포 요법을 조절하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 세포 요법은, 세포 요법을 투여받은 대상체에게, CAR+ T 세포 팽창, 증식, 팽창, 생존, 활성 및/또는 기능을 조절할 수 있는, 예를 들어, CAR+ T 세포 팽창, 증식, 생존 및/또는 활성을 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 투여함으로써 조절된다.
일부 구현예에서, 이러한 시제는 약동학적 파라미터, 예를 들어, 개수, 수준 또는 피크 CAR+ T 세포 농도, 노출 (예를 들어, AUC) 및/또는 세포 수준 또는 농도의 평가 후 투여된다. 일부 구현예에서, 이러한 시제는 약동학적 파라미터, 반응, 지속적 반응 및/또는 독성 발생과 연관이 있는 및/또는 상관관계가 있는 다른 파라미터, 예컨대 환자 속성, 인자, 특성 및/또는 바이오마커의 발현의 평가 이후 투여된다.
일부 구현예에서, 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 세포가 치료적 범위 또는 윈도우 내에 있는지 평가하기 위해 대상체의 혈액 내 약동학적 파라미터, 예를 들어, CAR+ T 세포를 모니터링 하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우 대상체에서 CAR+ T 세포 팽창, 증식 및/또는 활성을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를, 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 또한 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가하기 위해 대상체의 혈액 내 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 존재를 모니터링 하는 것을 포함하며, 이러한 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 것을 포함하는 치료 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우 대상체에서 CAR+ T 세포 팽창, 증식 및/또는 활성을 조절, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 투여하는 것을 또한 포함한다.
일부 양태에서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 개수, 수준 또는 피크 개수가 치료적 범위 내 CAR+ T 세포의 최저 개수, 수준 또는 피크 개수 미만인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 증가시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여된다. 일부 양태에서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 개수, 수준 또는 피크 개수가 치료적 범위 내 CAR+ T 세포의 최고 개수, 수준 또는 피크 개수 초과인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 또한 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체로부터의 샘플에서 파라미터, 예컨대 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 이상인지 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 샘플은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 포함하지 않고, 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 투여를 받기 전에 대상체로부터 수득된다. 일부 구현예에서, 대상체는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제의 투여를 위해 선별된다. 일부 구현예에서, CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 또한 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 대상체에서 유전자 조작 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 이러한 대상체는 대상체로부터의 샘플에서 파라미터, 예컨대, 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 이상인 대상체이다.
일부 구현예에서, 제공되는 방법은 유전자 조작된 세포, 예를 들어, CAR과 같은 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 T 세포의 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, CAR+ T 세포 팽창, 증식 및/또는 활성을 조절시킬 수 있는, 예를 들어, 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제는, 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량 개시 이전에 또는 이와 동시에 투여된다. 일부 양태에서, 시제를 투여하기 이전에, 선별된 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 이후 독성이 발생할 위험에 있다. 일부 구현예에서, 시제의 투여는 대상체에서 치료적 범위 또는 윈도우 내 개수, 수준 또는 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분하다. 일부 구현예에서, 시제의 투여는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 혈액 내 개수, 수준 또는 피크 CAR+ T 세포 농도를 달성하기에 충분하거나, 또는 상기 방법에 의해 치료된 (약) 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 초과의 대상체, 예컨대 (약) 75% 초과의 대상체에서, 결정된 표적 치료적 범위 또는 윈도우 내에 있다.
일부 구현예에서, 또한 대상체를 투여하는 방법이 포함된다. 일부 구현예에서, 방법은 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 차선의 용량을 투여하는 것을 포함하며, 이러한 용량은 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 대상체의 75% 초과에서 결정된 치료적 범위 내에 혈액 내 개수, 수준 또는 피크 CAR+ 세포를 달성하기에 불충분한 유전자 조작된 세포의 개수를 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 유전자 조작된 세포를 투여한 이후, 치료적 범위 또는 윈도우 내에 개수, 수준 또는 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 달성하기 위해, 대상체에서 CAR+ 세포 팽창 또는 증식을 향상시키는 시제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 용량은 (약) 1 x 107 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 5 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 1 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 5 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 1 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포이다.
일부 구현예에서, 시제를 투여한 후, 상기 방법은 시제를 투여하지 않지만 동일한 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하는 방법과 비교하여, 대상체에서 결정된 치료적 범위 내에서 혈액 내 개수, 수준 또는 피크 CAR+ 세포; 또는 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 대상체의 75% 이상에서 결정된 치료적 범위 내에서 혈액 내 개수, 수준 또는 피크 CAR+ 세포의 빈도 증가를 달성한다.
일부 구현예에서, 치료적 범위 또는 윈도우는 본 명세서에 기재된, 예를 들어, 섹션 II 또는 그 이외에 기재된 바와 같이 결정된다. 일부 구현예에서, 치료적 범위는 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 개수, 수준 또는 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 초과하고, 추정 독성 확률이 (약) 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5% 미만인 것인 것과 연관된 범위이다.
일부 구현예에서, 치료적 윈도우 또는 범위는 세포, 예를 들어, CD3+, CD4+ 또는 CD8+ T 세포의 개수 및/또는 농도의 특정 범위에 기초하여 결정된다. 일부 구현예에서, 치료적 윈도우를 달성할 수 있는 혈액 내 예시적인 개수, 수준 또는 피크 CD3+CAR+ T 세포 농도는 혈액 내 마이크로리터 당 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 20, 30, 40, 50 개의 CD3+ CAR+ T 세포 내지 혈액 내 마이크로리터 당 대략 200, 300, 400, 500, 600, 700 또는 750 개의 CD3+ CAR+ T 세포이거나, 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료적 윈도우를 달성할 수 있는 혈액 내 예시적인 개수, 수준 또는 피크 CD8+CAR+ T 세포 농도는 혈액 내 마이크로리터 당 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 20, 30, 40, 50 개의 CD8+ CAR+ T 세포 내지 혈액 내 마이크로리터 당 대략 200, 300, 400, 500, 600, 700 또는 750 개의 CD8+ CAR+ T 세포이거나, 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 방법은 또한 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니터링하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 혈액 내 CAR+ T 세포에 대해 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에 모니터링 된다. 일부 구현예에서, 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 혈액 내 CAR+ T 세포에 대해 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에 모니터링된다.
또한 반응 또는 지속적 반응 가능성을 평가하는 방법, 및 이에 따라 치료제를 투여하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 피크 수준을 검출하는 단계를 포함하며, 이러한 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있다. 일부 구현예에서, 방법은 임계값에 대해 피크 수준을 개별적으로 비교하여, 대상체가 유전자 조작된 세포의 투여에 대한 지속적인 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체는 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 미만인 경우 반응 또는 지속적 반응을 달성할 가느성이 있고, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 초과인 경우 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료적 범위 내에 있는 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값 미만이거나 또는 상한 임계값 초과인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없다.
일부 구현예에서, 임계값은 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내로 초과하는 값 및/또는 복수의 대조군 대상체에서 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 초과하는 표준 편차 이내의 값이다. 일부 구현예에서, 임계값은 복수의 대조군 대상체 중 적어도 하나의 대상체에서 측정된, 이러한 가장 높은 배수 변화 초과의, 선택적으로 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내의, 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값을 초과하는 값이다. 일부 구현예에서, 임계값은 복수의 대조군 대상체로부터 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%, 또는 98% 초과의 대상체에서 측정된 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값을 초과하는 값이다. 7일부 구현예에서, 복수의 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받기 이전의 대상체 그룹이고, 이러한 그룹 중 대조군 대상체 각각은 치료적 범위 내에서 가장 높은 피크 CAR+ T 세포를 초과하는 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고; 그룹 중 대조군 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위한 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후, 독성, 선택적으로 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 2등급 또는 3등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 CRS를 나타내었으며; 그룹 중 대조군 대상체 각각은, 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는 그룹 중 대조군 대상체 각각은, 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후, 선택적으로 (약) 3개월 이상 또는 (약) 6개월 이상 동안, 지속적 반응을 나타내지 않았다.
일부 구현예에서, 방법은 또한 반응 또는 지속적 반응을 달성할 가능성 평가에 기초하여, 시제 또는 대안의 요법을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체가 반응 또는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 결정되는 경우, 대상체는 치료제로 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료로 치료하기 위해 선별된다. 일부 구현예에서, 대상체가 반응 또는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 결정되는 경우, 치료제 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료가 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 또한 치료제 및/또는 대안의 치료학적 치료의 투여를 위해 대상체를 선별하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포를 투여받은 대상체를 선별하는 것을 포함하며, 여기서 대상체로부터의 샘플 내 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준은 임계값 초과이고; 및/또는 대상체로부터의 샘플 내 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함하는 T 세포의 피크 수준은 하한 임계값 미만 또는 상한 임계값 초과이다.
일부 구현예에서, 반응은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)이다. 일부 구현예에서, 반응은 3개월, 4 개월, 5 개월, 또는 6 개월 이상 동안 지속 가능하다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에, 피크 수준이 평가되고 및/또는 대상체로부터 샘플이 획득된다. 일부 구현예에서, 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에, 피크 수준이 평가되고 및/또는 대상체로부터 샘플이 획득된다.
일부 구현예에서, 피크 수준은, 하나 이상의 염증성 마커, 예를 들어, C 반응성 단백질 (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-알파, MIP-1알파, MIP-1베타, MCP-1, CXCL10 또는 CCL13의 피크 수준이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 평가되며, 임계값은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 또는 5% 이내이고, 및/또는 유전자 조작된 세포를 투여받은 대조군 대상체의 그룹 중에서 결정된 염증성 마커의 피크 수준의 중앙값 또는 평균값의 표준 편차 이내이고, 여기서 그룹 중 대상체 각각은 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 선택적으로 3개월 이상 또는 6 개월 동안, 지속적 반응, 선택적으로 CR 및/또는 PR을 달성하지 않았다. 일부 구현예에서, 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 선택적으로 유전자 조작된 세포의 투여 3개월 이상 또는 6 개월 이후 안정한 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD)을 나타냈다. 일부 구현예에서, 피크 수준은 CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+ T 세포 서브세트의 피크 수준이다.
일부 구현예에서, 하한 임계값 및 상한 임계값은, 각각, 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 치료적 범위인, 추정 반응 확률이 (약) 65%를 초과하고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위의 상한 및 하한이다. 일부 구현예에서, 치료적 범위는, 독성 추정 확률이 (약) 20% 미만, (약) 15% 미만, (약) 10% 미만 또는 (약) 5% 미만이고, 반응을 달성할 것으로 추정되는 확률이 (약) 65% 초과, (약) 70% 초과, (약) 75% 초과, (약) 80% 초과, (약) 85% 초과, (약) 90% 초과, (약) 95% 초과인 범위이다.
일부 구현예에서, 반응 가능성은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 반응에 기초하며, 선택적으로 이러한 반응은 지속 가능하며, 선택적으로 적어도 3 개월 또는 적어도 6 개월 동안 지속 가능하다.
일부 구현예에서, 개수, 수준 또는 피크 CAR+ T 세포는 대상체의 혈액 내 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 개수로서 결정된다. 일부 구현예에서, 상한 임계값은 (약) 300 개의 세포 내지 마이크로리터 당 (약) 1000 개의 세포 또는 마이크로리터 당 (약) 400 개의 세포 내지 마이크로리터 당 (약) 600 개의 세포이거나, 또는 (약) 300 개의 세포, 마이크로리터 당 400 개의 세포, 마이크로리터 당 500 개의 세포, 마이크로리터 당 600 개의 세포, 마이크로리터 당 700 개의 세포, 마이크로리터 당 800 개의 세포, 마이크로리터 당 900 개의 세포 또는 마이크로리터 당 1000 개의 세포이고; 또는 하한 임계값은 (약) 마이크로리터 당 10 세포, 마이크로리터 당 9 개의 세포, 마이크로리터 당 8 개의 세포, 마이크로리터 당 7 개의 세포, 마이크로리터 당 6 개의 세포, 마이크로리터 당 5 개의 세포, 마이크로리터 당 4 개의 세포, 마이크로리터 당 3 개의 세포, 마이크로리터 당 2 세포 또는 마이크로리터 당 1 개의 세포 미만이다.
본 명세서에 제공된 방법의 일부 구현예에서, 치료되는 복수의 대상체 중, 상기 방법은 시제를 투여하는 것을 포함하지 않는 방법과 비교하여, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한, 지속적 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)을 달성하는 대상체의 백분율 증가를 달성한다. 일부 구현예에서, 증가는 (약) 1.2 배, 1.5 배, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 10 배 또는 그 이상의 초과이다.
일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한 완전한 반응 (CR)을 달성하고; 및/또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한 객관적 반응 (OR)을 달성한다. 일부 구현예에서, 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50% 초과, (약) 60% 초과, (약) 70% 초과, 또는 (약) 80% 초과는 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 나타내지 않고 및/또는 2등급 이상의 또는 3등급 이상의 신경독성을 나타내지 않거나; 또는 상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 40% 초과, (약) 50% 초과 또는 (약) 55% 초과는 임의의 신경독성 또는 CRS를 나타내지 않는다.
일부 구현예에서, 파라미터, 예컨대 환자의 속성, 요인, 특성 및/또는 질병 또는 병태, 및/또는 바이오마커의 발현은, 요법, 예를 들어, 세포 요법의 투여 이전에 평가된다. 일부 구현예에서, 파라미터, 예컨대 환자의 속성, 요인, 특성 및/또는 질병 또는 병태, 및/또는 바이오마커의 발현은, 요법, 예를 들어, 세포 요법의 투여 이후에 평가된다. 일부 구현예에서, 파라미터는 요법, 예를 들어, 세포 요법의 투여 이후 평가될 수 있는 수준 또는 측정치, 예를 들어, 환자의 속성, 요인, 특성 및/또는 질병 또는 병태, 및/또는 바이오마커의 발현의 피크 수준을 포함한다.
일부 구현예에서, 파라미터는 종양 부담과 연관된 파라미터, 예를 들어, 종양 부담의 측정치이다. 일부 양태에서, 방법은 또한 바이오마커의 존재 또는 부재 평가 및/또는 바이오마커의 기준값 또는 임계 수준에 대한 바이오마커의 비교에 의해 결정된 독성 위험에 기초하여, 가능한 독성 증상에 대해 대상체를 모니터링하는 것을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 파라미터는 SPD이고, 일부 경우에, 독성, 예를 들어, CRS 또는 NT의 발생은, 임계값 초과의 SPD 값과 상관 관계가 있다. 일부 구현예에서, 부피 측정치는 SPD이고, 임계값은 (약) 30 cm2, (약) 40 cm2, (약) 50 cm2, (약) 60 cm2, 또는 (약) 70 cm2이다. 일부 구현예에서, 부피 측정치는 SPD이고, 임계값은 (약) 30 cm2, (약) 40 cm2, (약) 50 cm2, (약) 60 cm2, 또는 (약) 70 cm2이다.
일부 구현예에서, 파라미터는 LDH이고, 일부 경우에, 독성, 예를 들어, CRS 또는 NT의 발생은, 임계값 초과의 LDH 값과 상관 관계가 있다. 일부 구현예에서, 염증성 마커는 LDH이고, 임계값은 (약) 리터 당 300 유닛, (약) 리터 당 400 유닛, (약) 리터 당 500 유닛 또는 (약) 리터 당 600 유닛이다.
A. 약동학적 파라미터
일부 경우에, 제공되는 구현예는 약동학적 (PK) 파라미터의 평가에 기초하여, 대상체에게, CAR+ T 세포 팽창, 증식, 및/또는 활성을 조절할 수 있는 시제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 약동학적 파라미터로는 본 명세서, 예를 들어, 섹션 II.C에 기재된 임의의 파라미터를 포함한다. 일부 구현예에서, 약동학적 파라미터는, 투여 이후, 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생하는 시간; Tmax), 최소 혈장 농도 (즉, 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 용량 사이 최저 혈장 농도; Cmin), 제거 반감기 (T1/2) 및 곡선 아래 면적 (즉, 시간 대 치료제 CAR+ T 세포의 혈장 농도; AUC를 플로팅하여 생성된 곡선 아래 면적)을 포함한다.
일부 구현예에서, 평가된 약동학적 파라미터가 투여된 세포 용량이 치료적 범위 및/또는 윈도우 이내에 있지 않거나 벗어남을 나타내는 경우, 대상체는 CAR+ T 세포 팽창, 증식, 및/또는 활성을 조절할 수 있는 시제가 대상체에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 치료적 범위 및/또는 윈도우는 본 명세서에 기재된 임의의 것이고 및/또는 본 명세서에 기재된 임의의 약동학적 파라미터와 연관이 있다.
일부 구현예에서, 약동학적 파라미터, 예를 들어, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가, 치료적 범위에서 약동학적 파라미터, 예를 들어, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수의 최소 개수 미만인 경우, CAR+ T 세포 팽창, 증식, 및/또는 활성을 증가시키는 시제가 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 약동학적 파라미터, 예를 들어, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가, 치료적 범위에서 약동학적 파라미터, 예를 들어, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수의 최고 개수 초과인 경우, CAR+ T 세포 팽창, 증식, 및/또는 활성을 감소시키는 시제가 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 이러한 시제는 약동학적 파라미터, 예를 들어, 피크 CAR+ T 세포 농도, 노출 (예를 들어, AUC) 및/또는 세포 수준 또는 농도의 평가 후 투여된다.
일부 양태에서, 제공되는 구현예는 약동학적 파라미터, 예를 들어, 혈액 내 CAR+ T 세포의 개수 또는 농도를 평가 및/또는 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 세포가 치료적 범위 및/또는 윈도우 내에 있는지 평가하기 위해 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포 개수 및/또는 농도를 모니터링하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창을 조절할 수 있는, 선택적으로 CAR+ T 세포 팽창을 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 치료적 범위 및/또는 윈도우는 임의의 기준에 기초하여, 또는 본 명세서에 기재된 파라미터의 평가에 기초하여 평가된다. 일부 구현예에서, 치료적 범위 및/또는 윈도우는 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 (약) 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포, (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 (약) 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위이다.
B. 환자 속성 및 바이오마커
일부 경우에, 제공되는 구현예는 파라미터, 예컨대 환자의 속성, 요인, 특성 및/또는 질병 또는 병태, 및/또는 바이오마커의 발현을 평가하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 평가되는 파라미터는 약동학적 파라미터, 반응, 지속적 반응 및/또는 독성 발생과 연관이 있고 및/또는 상관 관계가 있다. 일부 구현예에서, 파라미터는 환자 요인 또는 환자 속성을 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 질병 또는 병태의 속성, 요인 특성을 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 치료 이전에, 예를 들어, 세포 요법의 투여 이전에 평가된다. 일부 구현예에서, 파라미터는 치료 이후, 예를 들어, 세포 요법의 하나 이상의 용량 투여 이후 평가된다
일부 구현예에서, 파라미터는, 투여 이후, 예를 들어 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생하는 시간; Tmax), 최소 혈장 농도 (즉, 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 용량 사이 최저 혈장 농도; Cmin), 제거 반감기 (T1/2) 및 곡선 아래 면적 (즉, 시간 대 치료제 CAR+ T 세포의 혈장 농도; AUC를 플로팅하여 생성된 곡선 아래 면적)이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 파라미터는 환자 및/또는 환자의 질병 또는 병태의 상태를 나타내는 하나 이상의 인자이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 종양 부담을 나타낸다. 일부 구현예에서, 종양 부담을 나타내는 인자는 종양(들)의 부피 측정치이다. 일부 구현예에서, 부피 측정치는 병변(들)의 측정치, 예컨대 종양 크기, 종양 직경, 종양 부피, 종양 질량, 종양 부하 또는 벌크, 종양-관련 부종, 종양-관련 괴사, 및/또는 전이 개수 또는 정도이다. 일부 구현예에서, 종양의 부피 측정치는 이차원적 측정치이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 병변(들)의 면적은 측정가능한 모든 종양의 가장 긴 직경 및 가장 긴 수직 직경의 곱으로서 계산된다. 일부 경우에, 종양의 부피 측정치는 일차원적 측정치이다. 일부 경우에, 측정가능한 병변의 길이는 가장 긴 직경으로 평가된다. 일부 구현예에서, 직경의 곱의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 괴사, 종양 부피, 괴사 부피, 괴사-종양 비율 (NTR), 종양주변 부종 (PTE), 및 부종-종양 비율 (ETR)이 측정된다.
종양 부담을 측정 및 평가하는 예시적인 방법은 예를 들어, [Carceller et al., Pediatr Blood Cancer. (2016) 63(8):1400-1406 및 Eisenhauer et al., Eur J Cancer. (2009) 45(2):228-247]에 기재된 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 부피 측정치는 측정가능한 모든 종양의 가장 큰 수직 직경의 곱의 합을 결정함으로써 측정된 직경의 곱의 합 (SPD이다. 일부 양태에서, 종양 또는 병변은 측정 가능한 모든 병변의 가장 긴 직경 (LD) 및/또는 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD)을 결정함으로써 일차원으로 측정된다. 일부 구현예에서, 종양의 부피 측정치는 종양 괴사의 부피 정량화, 예컨대 괴사 부피 및/또는 괴사-종양 비율 (NTR)이며, [Monsky et al., Anticancer Res. (2012) 32(11): 4951-4961]를 참조한다. 일부 양태에서, 종양의 부피 측정치는 종양-관련 부종의 부피 정량화, 예컨대 종양주변 부종 (PTE) 및/또는 부종-종양 비율 (ETR)이다. 일부 구현예에서, 측정은 영상 기법 예컨대 대상체의 컴퓨터 단층촬영 (CT), 양전자 방출 단층촬영 (PET), 및/또는 자기 공명 영상 (MRI)을 사용하여 수행될 수 있다.
일부 구현예에서, 부피 측정치는 SPD이고, 일부 경우에, 독성, 예를 들어, CRS 또는 NT의 발생은, 임계값 초과의 SPD 값과 상관 관계가 있다. 일부 구현예에서, 부피 측정치는 SPD이고, 임계값은 (약) 30 cm2, (약) 40 cm2, (약) 50 cm2, (약) 60 cm2, 또는 (약) 70 cm2이다. 일부 구현예에서, 부피 측정치는 SPD이고, 임계값은 (약) 30 cm2, (약) 40 cm2, (약) 50 cm2, (약) 60 cm2, 또는 (약) 70 cm2이다.
일부 구현예에서, 종양의 부피 측정은 대상체의 상태 또는 질환을 확인 및/또는 식별하기 위한 일상적인 평가 또는 혈액 채취와 같은 스크리닝 세션에서 결정된다.
일부 양태에서, 파라미터, 예를 들어, 종양 부담의 측정치는 약동학적 파라미터와 상관관계가 있고 및/또는 이와 연관된다. 일부 구현예에서, 약동학적 파라미터를 비롯한 파라미터는, 반응 및/또는 지속적 반응, 및/또는 독성, 예를 들어, CRS 또는 신경독성 (NT) 발생 위험과 연관이 있다.
일부 구현예에서, 파라미터는 적어도 하나의 바이오 마커 또는 바이오마커 패널이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 바이오마커의 발현 및/또는 존재는 약동학적 파라미터, 반응, 지속적 반응 및/또는 독성 발생과 연관이 있고 및/또는 상관 관계가 있다. 일부 구현예에서, 파라미터는 특정 기준값, 예를 들어, 반응 및/또는 지속적 반응, 및/또는 독성, 예를 들어, CRS 또는 신경독성 (NT) 발생 위험과 연관된 값과 비교된다. 일부 구현예에서, 방법은 또한 환자 인자 및/또는 바이오마커의 평가에 기초하여, 대상체에게 CAR+ T 세포 팽창, 증식, 및/또는 활성을 조절할 수 있는 시제를 투여하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 하나의 바이오마커 또는 바이오마커 패널의 존재 또는 부재 및/또는 하나의 바이오마커 또는 바이오마커 패널과 연관된 농도, 양, 수준 또는 활성이 평가될 수 있다. 일부 경우에, 파라미터는 임계 수준과 같은 특정 기준값, 예를 들어, 독성 발생 위혐과 연관된 값 또는 특정 반응, 또는, 예컨대 CR 또는 PR, 또는 초기 반응 이후 3 개월, 6 개월, 9 개월 12 개월 이상 지속적인 반응과 같은 지속적 반응과 연관된 값에 대해 비교될 수 있다. 구현예에서, 방법은 또한 바이오마커의 존재 또는 부재의 평가 및/또는 바이오마커의 기준값 또는 임계 수준에 대한 바이오마커의 비교에 기초하여, 세포 요법으로의 치료에 대한 대상체를 선별하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 또한 예를 들어, 바이오마커의 존재 또는 부재의 평가 및/또는 바이오마커의 기준값 또는 임계 수준에 대한 바이오마커의 비교에 기초하여, 독성 발생을 치료, 예방, 지연 및/또는 약화시킬 수 있는 시제 또는 요법을 투여하는 것을 포함한다.
일부 양태에서, 구현예는 파라미터를 검출 및/또는 파라미터 검출의 존재를 평가하기 위해 생물학적 샘플을 획득하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 일반적으로 세포 요법, 또는 이의 제1 투여 또는 용량의 투여, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후, 4 시간 내지 12 개월 이내에, 예컨대 세포 요법의 투여, 또는 제1 투여 또는 이의 용량 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후 일반적으로 (약) 이내에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28, 30, 60 또는 90 일 이상 경과 후, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 주 이상 경과 후, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 개월 이상 경과 후에 수득된다. 일부 구현예에서, 파라미터는, 세포 요법의 투여 이전에 또는 세포 요법, 또는 이의 제1 투여 또는 용량의 투여 직후, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후, 예컨대 일반적으로 세포 요법, 또는 이의 제1 투여 또는 용량의 투여 4 시간 내지 3 일 이내에, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후, 예컨대 세포 요법, 또는 이의 제1 투여 또는 용량의 투여, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후 일반적으로 (약) 1 일, 2 일 또는 3 일 이내에, 대상체에서 평가 및 측정된다. 일부 구현예에서, 파라미터는 평가 또는 측정된다 일부 구현예에서, 파라미터는 일반적으로 세포 요법, 또는 이의 제1 투여 또는 용량의 투여, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후, 4 시간 내지 12 개월 이내에, 예컨대 세포 요법의 투여, 또는 제1 투여 또는 이의 용량 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후 일반적으로 (약) 이내에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28, 30, 60 또는 90 일 이상 경과 후, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 주 이상 경과 후, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 개월 이상 경과 후에 평가된다.
일부 양태에서, 파라미터, 예를 들어, 환자 인자 및/또는 바이오마커는 약동학적 파라미터와 상관관계가 있고 및/또는 이와 연관된다. 일부 구현예에서, 약동학적 파라미터를 비롯한 파라미터는, 반응 및/또는 지속적 반응, 및/또는 독성, 예를 들어, CRS 또는 신경독성 (NT) 발생 위험과 연관이 있다.
일부 구현예에서, 파라미터는 바이오마커이다. 일부 구현예에서, 파라미터는 바이오마커의 발현 및/또는 특정 바이오마커를 발현하는 세포의 개수, 농도, 및/또는 백분율이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 복수의 바이오마커를 포함하는 패널 내 바이오마커 또는 각각의 바이오마커를 포함한다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 사이토카인 및/또는 다른 혈청 또는 혈액 인자, 예컨대 본 명세서에 기재된 임의의 인자이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 바이오마커 또는 패널 내 각각의 바이오마커는 사이토카인이며, 일부 경우에, 케모카인일 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오마커 또는 패널 내 각각의 바이오마커는 가용성 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 바이오마커 또는 패널 내 각각의 바이오마커는 가용성 혈청 단백질을 포함한다. 예시적인 바이오마커 또는 바이오마커 패널은 본 명세서에 기재되어 있다.
일부 양태에서, 대상체로부터의 생물학적 샘플, 예를 들어, 혈액 샘플 또는 조직 샘플은, 바이오마커의 존재 또는 부재를 검출하기 위해, 예컨대 바이오마커의 파라미터 (예를 들어 농도, 양, 수준 또는 활성)을 검출 또는 측정하기 위해 및/또는 특정 결과 및/또는 독성의 분석, 상관관계 및/또는 검출을 위해 바이오마커를 평가하기 위해 획득될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오마커의 발현을 비롯한 바이오마커와 연관된 특정 생리학적 또는 생물학적 파라미터 및/또는 임상 및 실험실용 파라미터는, 세포 요법의 투여 이전 또는 이후에 생물학적 샘플로부터, 예를 들어, 대상체로부터의 혈액으로부터 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오마커의 발현 및/또는 임상 및 실험실용 파라미터는, 세포 요법의 투여 이전에 (치료 전) 생물학적 샘플로부터, 예를 들어, 대상체의 혈액으로부터 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오마커 또는 분석물의 발현 및/또는 임상 및 실험실용 파라미터는, 세포 요법의 투여 이후 (치료 후) 생물학적 샘플로부터, 예를 들어, 대상체의 혈액으로부터 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오마커 및/또는 임상 및 실험실용 파라미터의 농도, 양, 수준 또는 활성은 세포 요법의 투여 이전 또는 이후 하나 이상의 시점에 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 지정된 기간 동안의 바이오마커 및/또는 임상 및 실험실용 파라미터의 피크 농도, 양, 수준 또는 활성이 또한 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 바이오마커 또는 분석물과 연관된 파라미터를 비롯한 바이오마커 (일부 경우에, 또한 분석물로도 불림)는, 생물학적 공정, 치료적 결과, 세포 표현형 또는 질병 상태와 같이 특정 상태 또는 현상을 나타내거나 이와 연관될 수 있는 세포를 포함하는 생물학적 샘플에 의해 또는 이러한 샘플에서 발현되는, 객관적으로 측정가능한 특성 또는 분자이다. 일부 양태에서, 바이오마커 또는 바이오마커와 연관된 파라미터가 평가 또는 검출될 수 있다. 예를 들어, 바이오마커 발현의 존재 또는 부재가 검출될 수 있다. 일부 양태에서, 바이오마커의 농도, 양, 수준 또는 활성과 같은 파라미터가 측정 또는 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 바이오마커의 존재, 부재, 발현, 농도, 양, 수준 및/또는 활성은 특정 상태, 예컨대 특정 치료 결과 또는 대상체의 상태와 연관이 있을 수 있고, 이와 상관관계가 있을 수 있고, 이를 나타낼 수 있고 및/또는 이를 예측할 수 있다. 일부 양태에서, 바이오마커, 예컨대 본 명세서에 기재된 임의의 바이오마커의 존재, 부재, 발현, 농도, 양, 수준 및/또는 활성은, 특정 결과 또는 상태, 예컨대 반응 결과 또는 독성 결과를 비롯한 특정 치료 결과의 가능성을 평가하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 예시적인 바이오마커는 사이토카인, 세포 표면 분자, 케모카인, 수용체, 가용성 수용체, 가용성 혈청 단백질 및/또는 분해 생성물을 포함한다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 또한 특정 환자의 속성, 요인, 특성 및/또는 환자의 상태를 나타내는 질병 또는 병태 또는 인자 및/또는 환자의 질병 또는 병태 (질병 부담 포함), 및/또는 임상 또는 실험실용 파라미터를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 파라미터는 혈액 분석물의 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 염증성 마커의 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 인터루킨-7 (IL-7), IL-15, 대식세포 염증성 단백질 (MIP-1α)의 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 IL-6, IL-10, IL-16, 인터페론 감마 (IFN-γ종양 괴사 인자 알파 (TNF-α), MIP-1α, MIP-1β단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1), 및 C-X-C 모티프 케모카인 10 (CXCL10)의 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), D-이합체 (피브린 분해 생성물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, MIP-1α, 및 MIP-1β의 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 LDH, 페리틴, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN- α2, MCP-1 및/또는 MIP-1β의 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 CRP, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-α, MIP-1α, MIP-1βMCP-1, CXCL10 및 C-C 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13)의 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 혈액 분석물 및/또는 염증성 마커는 LDH, 페리틴, CRP, D-이합체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γ및/또는 MIP-1α의 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 염증성 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β2-M), 또는 락테이트 탈수소효소 (LDH)의 수준 또는 존재가 검출 및 평가되는 것이거나, 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 염증성 마커는 면역 분석을 사용하여 평가된다. 예를 들어, 효소-결합 면역흡착 분석 (ELISA), 효소 면역분석 (EIA), 방사 면역분석 (RIA), 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 웨스턴 블롯, 측면 흐름 분석, 면역조직화학, 단백질 분석 또는 면역-PCR (iPCR)이 염증성 마커를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 제조물품의 사용은 종양 부담을 나타내는 염증성 마커를 검출하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 염증성 마커의 분석 또는 평가는 유세포 분석을 사용한다. 일부 경우에, 시약은 염증성 마커에 결합하는 가용성 단백질이다. 일부 예시에서, 시약은 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β2-M) 또는 락테이트 탈수소효소 (LDH)에 결합하는 단백질이다.
일부 구현예에서, 바이오마커, 예를 들어, 염증성 마커는 C-반응성 단백질 (CRP)이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, CRP는 혈청, 혈장, 또는 혈액과 같은 샘플로부터 인간 CRP의 정량적 측정을 수득하기 위해 시험관 내 효소-결합 면역흡착 분석을 사용하여 평가된다. 일부 예시에서, CRP는 인간 효소-연결 면역흡착 분석 (ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 바이오마커, 예를 들어, 염증성 마커는 적혈구 침강 속도 (ESR)이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, ESR은 적혈구가 수직 피펫 또는 튜브에서 혈장으로부터 분리된 후 떨어진 거리 (시간 당 밀리미터)를 측정함으로써 평가된다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 알부민이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 양태에서, 알부민은 비색 시험 또는 시험관 내 효소-결합 면역흡착 분석을 사용하여 평가된다. 일부 예시에서, 알부민은 인간 효소-연결 면역흡착 분석 (ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 바이오마커, 예를 들어, 염증성 마커는 페리틴 또는 β2마이크로글로불린이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 페리틴 또는 β2마이크로글로불린은 면역분석을 사용하여 평가되거나 또는 ELISA를 사용하여 검출된다. 일부 양태에서, 바이오마커, 예를 들어, 염증성 마커는 락테이트 탈수소효소 (LDH)이거나, 또는 이를 포함하고, LDH는 비색 시험 또는 시험관 내 효소-결합 면역흡착 분석을 사용하여 평가된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커는 둘 이상의 바이오마커, 예컨대, 사이토카인, 예컨대 염증성 사이토카인, 및/또는 환자 속성, 예컨대, 종양 부담 및/또는 염증성 마커의 발현을 포함한다. 일부 양태에서, 둘 이상의 바이오마커는 동일한 샘플로부터 동시에 측정된다. 다른 양태에서, 둘 이상의 바이오마커는 대상체와 동일한 샘플 또는 상이한 샘플로부터 측정되거나 순차적으로 측정된다.
일부 구현예에서, 바이오마커 또는 바이오마커의 패널의 수준, 양, 농도 또는 다른 파라미터는 세포의 약동학적 파라미터, 투여 이후, 예를 들어 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax)가 발생하는 시간; Tmax), 최소 혈장 농도 (즉, 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포의 용량 사이 최저 혈장 농도; Cmin), 제거 반감기 (T1/2) 및 곡선 아래 면적 (즉, 시간 대 치료제 CAR+ T 세포의 혈장 농도; AUC를 플로팅하여 생성된 곡선 아래 면적)을 나타낸다. 일부 구현예에서, 바이오마커 또는 바이오마커 패널의 수준, 양, 농도는 독성, 예를 들어, 신경독성, 예컨대 중증 신경독성 및/또는 CRS, 예컨대 sCRS의 발생 위험을 나타낸다. 일부 구현예에서, 바이오마커 또는 바이오마커 패널의 수준, 양, 농도는 반응, 예를 들어, 객관적 반응 (OR), 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR), 또는 지속적 반응, 예를 들어, 3-개월 반응의 가능성 및/또는 확률을 나타내고, 이와 상관관계가 있고 및/또는 이와 연관이 있다.
일부 구현예에서, 파라미터는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β2-M), 락테이트 탈수소효소 (LDH)의 수준, 농도 및/또는 개수이거나, 또는 이를 포함하고 및/또는 염증성 사이토카인이다. 일부 구현예에서, 염증성 마커는 LDH이다. 일부 구현예에서, LDH의 수준, 농도 및/또는 개수는 질병 부담에 대한, 예를 들어, 종양 또는 암에 대한 대체물이며, 잠재적인 신경독성 위험 평가 및/또는 특정 대상체 치료에 대한 위험-조정 투약 또는 조정에 유용할 수 있다. 일부 양태에서, LDH 수준은 단독으로 및/또는 또 다른 치료-전 파라미터와 조합으로, 예컨대 질병 부담의 또 다른 측정치 또는 지표, 예컨대 직경의 곱의 합 (SPD)과 같은 부피 종양 측정치 또는 임의의 본 명세서에 기재된 바와 같은 질병 부담의 다른 CT-기반 또는 MRI-기반 부피 측정치와 조합으로 평가될 수 있다. 일부 양태에서, 질병 부담을 나타내는 하나 이상의 파라미터가 평가되며, 일부 맥락에서 T 세포 요법 이후 신경 독성 발생 위험의 존재, 부재 또는 정도를 나타낼 수 있다. 일부 양태에서, 하나 이상의 파라미터는 LDH 및/또는 부피 종양 측정치를 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는 SPD 및/또는 LDH이다.
일부 구현예에서, 파라미터는 환자 속성, 요인 및/또는 특성이다. 일부 구현예에서, 파라미터는 치료-전 측정, 예를 들어, 베이스라인 측정, 주입-전 측정 및/또는 림프구 고갈-전 측정이다. 일부 구현예에서, 파라미터는 치료 이전에, 예를 들어, 세포 요법, 또는 이의 제1 투여 또는 용량의 투여, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후 및/또는 세포 요법 이전의 림프구 고갈 이전에 평가된다. 일부 구현예에서, 파라미터는 림프구 고갈 이전에 평가된다. 일부 구현예에서, 파라미터는 세포 요법의 투여 이전 (예를 들어, 주입-전)에 평가되고, 예를 들어, 조작된 세포의 투여 개시 이전 최대 2 일, 최대 7 일, 최대 14 일, 최대 21 일, 최대 28 일, 최대 35 일 또는 최대 40 일에 수득된다. 일부 구현예에서, 시약은 진단 목적을 위해 세포 요법의 투여 이전 또는 세포 요법의 투여 이후, 파라미터 예컨대 환자 속성, 인자 및/또는 특성을 평가하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 치료-전 측정은 C-반응성 단백질 (CRP), D-이합체 (피브린 분해 생성물), 페리틴, IFN-α2, IFN-γIL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, 락테이트 탈수소효소 (LDH), 대식세포 염증성 단백질 (MIP-1α), MIP-1βMCP-1, SAA-1 및/또는 TNF-α의 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터의 보다 높거나 낮은 치료-전 측정치는 보다 높거나 낮은 약동학적 파라미터, 예를 들어, CAR+ T 세포의 Cmax 또는 AUC 및/또는 독성, 예를 들어, CRS 또는 NT, 예컨대 중증 CRS 또는 중증 NT의 보다 높거나 낮은 비율 및/또는 발생률과 관계가 있고 및/또는 이와 연관이 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터의 보다 높거나 낮은 치료-전 측정치는 보다 높거나 낮은 반응, 예를 들어, CR 및 PR을 비롯한 ORR, 및/또는 보다 높거나 낮은 반응 지속성, 예를 들어, 3-개월 반응 지속성과 상관관계가 있고 및/또는 이와 연관이 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터의 보다 높은 치료-전 측정치는 보다 높은 약동학적 파라미터, 예를 들어, CAR+ T 세포의 Cmax 또는 AUC 및/또는 독성, 예를 들어, CRS 또는 NT, 예컨대 중증 CRS 또는 중증 NT의 보다 높은 비율 및/또는 발생률과 관계가 있고 및/또는 이와 연관이 있다.
일부 구현예에서, 파라미터는 치료-후 측정치, 예를 들어, 요법, 예를 들어, 세포 요법의 투여 이후 피크 또는 최대 측정치, 및/또는 요법, 또는 이의 제1 투여 또는 용량의 투여 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후 주입 후 측정치 및/또는 측정치이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 피크 측정은 세포 요법의 투여 및/또는 이의 개시 이후, 예컨대 세포 요법, 또는 이의 제1 투여 또는 용량의 투여 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후 (약) 이내에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 21, 28, 30, 60 또는 90 이상 일, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 주 이상 경과 후, 또는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 48 개월 이상 경과 후, 특정 시간 후의 기간 내의 피크 또는 최대값이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 파라미터는 사이토카인 또는 케모카인을 포함하는 염증성 마커의 피크 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터의 보다 낮은 피크 측정치는 보다 높은 약동학적 파라미터, 예를 들어, CAR+ T 세포의 Cmax 또는 AUC 및/또는 독성, 예를 들어, CRS 또는 NT, 예컨대 중증 CRS 또는 중증 NT의 보다 높거나 낮은 비율 및/또는 발생률과 관계가 있고 및/또는 이와 연관이 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터의 보다 낮은 치료-전 측정치는 보다 낮은 반응, 예를 들어, CR 및 PR을 비롯한 ORR, 및/또는 보다 낮은 반응 지속성, 예를 들어, 3-개월 반응 지속성과 상관관계가 있고 및/또는 이와 연관이 있다.
일부 구현예에서, 파라미터는 사이토카인 또는 케모카인을 포함하는 염증성 마커의 피크 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터는, C-C 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13), C-반응성 단백질 (CRP), C-X-C 모티프 케모카인 10 (CXCL10), IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, 인터페론 감마 (IFN-γ림프독소-알파 (LT-α), 단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1), 대식세포 염증성 단백질 1 알파 (MIP-1α), MIP-1β혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), 형질전환 성장 인자 베타 (TGF-β및 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α)를 포함하는 바이오마커의 피크 수준 및/또는 농도이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터의 보다 높은 피크 수준 및/또는 농도는 독성, 예를 들어, CRS 또는 NT, 예컨대 중증 CRS 또는 중증 NT의 보다 높은 비율 및/또는 발생률과 상관관계가 있고 및/또는 이와 연관이 있다. 일부 구현예에서, 보다 낮은 피크 수준 및/또는 농도는 보다 높은 반응, 예를 들어, CR 및 PR을 비롯한 ORR, 및/또는 보다 높은 반응 지속성, 예를 들어, 3-개월 반응과 상관관계가 있고 및/또는 이와 연관이 있다.
일부 구현예에서, 바이오마커 (예를 들어, 분석물)은, 세포의 증가된 약동학적 (PK) 파라미터, 예를 들어, 세포의 증가된 최대 혈청 농도 (Cmax) 또는 증가된 노출 (예를 들어, 곡선 아래 면적 (AUC))과 연관된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 이의 파라미터를 비롯한 바이오마커 (예를 들어 분석물)은 IL-7, IL-15, MIP-1α 및 TNF-α를 포함한다.
일부 구현예에서, 바이오마커 (예를 들어, 분석물)은 반응 결과, 및/또는 지속적 반응과 연관된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 이의 파라미터를 비롯한 바이오마커 (예를 들어 분석물)은, LDH, 페리틴, CRP, D-이합체, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γMIP-1α 및 C-X-C 모티프 케모카인 10 (CXCL10)을 포함한다.
일부 구현예에서, 임계값은 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내로 초과하는 값 및/또는 복수의 대조군 대상체에서 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 초과하는 표준 편차 이내의 값이다. 일부 구현예에서, 임계값은 복수의 대조군 대상체 중 적어도 하나의 대상체에서 측정된, 이러한 가장 높은 배수 변화 초과의, 선택적으로 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내의, 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값을 초과하는 값이다. 일부 구현예에서, 임계값은 복수의 대조군 대상체로부터 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%, 또는 98% 초과의 대상체에서 측정된 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값을 초과하는 값이다. 7일부 구현예에서, 복수의 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받기 이전의 대상체 그룹이고, 이러한 그룹 중 대조군 대상체 각각은 치료적 범위 내에서 가장 높은 피크 CAR+ T 세포를 초과하는 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고; 그룹 중 대조군 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위한 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후, 독성, 선택적으로 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 2등급 또는 3등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 CRS를 나타내었으며; 그룹 중 대조군 대상체 각각은, 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는 그룹 중 대조군 대상체 각각은, 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후, 선택적으로 (약) 3개월 이상 또는 (약) 6개월 이상 동안, 지속적 반응을 나타내지 않았다.
일부 구현예에서, 파라미터, 예컨대 환자의 속성, 요인, 특성 및/또는 질병 또는 병태, 및/또는 바이오마커의 발현은 특정 대상체 또는 특히 샘플에 대해 평가될 수 있으며, 임계값 (일부 경우에 임계 수준으로도 지칭)에 대해 비교될 수 있다. 일부 양태에서, 이러한 비교는 세포 요법과 같은 요법에 대한 반응 또는 독성 위험의 가능성을 계산 또는 평가하도록 사용될 수 있다. 일부 양태에서, 특정 임계값 초과 또는 미만인 파라미터, 예컨대 환자의 속성, 요인, 특성 및/또는 질병 또는 병태, 및/또는 바이오마커의 발현은, 반응 결과 또는 독성 결과와 같은, 요법의 특정 결과와 관련이 있거나, 상관관계가 있거나, 이를 예측 가능하거나, 또는 나타낼 수있다. 일부 구현예에서, 예시적인 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체의 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 바이오마커의 수준, 양 또는 농도의 평균 또는 중앙값 및 평균 또는 중앙값의 범위 또는 표준 편차 이내에 기초하여 결정될 수 있고, 이러한 그룹 내 대상체 각각은 반응을 나타내거나 반응을 나타내지 않는 것; 또는 독성이 발생하거나 독성이 발생하지 않는 것을 포함하여, 특정 결과, 예컨대 특정 치료적 결과를 나타냈다.
1. 반응 결과와 연관된 예시적인 바이오마커
일부 구현예에서, 바이오마커는 특정 결과, 예컨대 특정 반응 결과, 예를 들어 객관적 반응 (OR), 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR), 또는 지속적 반응, 예컨대 3, 6, 9 개월 이상 지속되는 OR 또는 CR 또는 PR과 연관이 있고, 상관관계가 있고, 이를 나타내고 및/또는 예측가능하다. 일부 구현예에서, 예컨대 기준값 또는 임계값과 비교하여, 하나 이상의 이러한 바이오마커 (예컨대, 바이오마커)의 보다 낮은 또는 감소된 수준 또는 증가된 수준은, 반응, 예컨대 OR, CR 또는 PR, 또는 본 명세서에 기재된, 예를 들어, 섹션 II.B에 기재된 임의의 반응 결과, 선택적으로 지속적 반응, 예컨대 적어도 3 개월, 6 개월 이상 지속가능한 반응과 연관될 수 있다.
일부 구현예에서, 바이오마커는, 예컨대 유전자 조작된 세포를 함유하는 조성물으로 세포 요법이 투여된 대상체에서 특정 결과, 예컨대 특정 반응 또는 지속적 반응 결과와 연관이 있고, 상관관계가 있고, 이를 나타내고 및/또는 예측가능하다. 일부 구현예에서, 세포 요법 투여 이전에 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플 내 하나 이상의 바이오마커의 존재, 발현, 수준, 양 또는 농도는, 특정 결과, 예컨대 특정 반응 또는 지속적 반응 결과와 연관이 있고, 상관관계가 있고, 이를 나타내고 및/또는 예측가능하다. 일부 구현예에서, 특정 바이오마커의 존재, 발현, 수준, 양 또는 농도는 특정 반응 또는 지속적 반응 결과와 상관관계가 있다. 일부 구현예에서, 반응 결과는 본 명세서에 기재된, 예를 들어, 섹션 II.B에 기재된 임의의 반응 결과일 수 있다.
일부 구현예에서, 방법은 샘플 내 바이오마커의 수준, 양 또는 농도를 임계값에 대해 개별적으로 비교하여, 대상체가 세포 요법에 대한 반응을 달성할 가능성을 결정하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 샘플 내 바이오마커의 수준, 양 또는 농도를 임계값에 대해 개별적으로 비교함으로써 대상체가 세포 요법에 대한 반응을 달성할 가능성 결정하는 결과에 기초하여, 치료에 대해 반응할 가능성이 있는 대상체를 선별하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 또한 치료를 위해 선별된 대상체에게 세포 요법을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 대상체가 반응 또는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 결정된 경우, 대상체에게 추가의 치료제를 투여하는 것을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 바이오마커는 반응 결과, 및/또는 지속적 반응과 연관된 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 이의 파라미터를 비롯한 바이오마커는, LDH, 페리틴, CRP, D-이합체, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γMIP-1α 및 C-X-C 모티프 케모카인 10 (CXCL10)을 포함한다.
일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이후 반응 가능성의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 바이오마커 또는 바이오마커로는 페리틴, LDH, CXCL10, G-CSF, 및 IL-10으로부터 선택된 하나 이상의 바이오바커를 포함한다. 일부 구현예에서, 임의의 전술한 바이오마커 또는 바이오마커에 대하여, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 미만일 경우, 대상체는 반응을 달성할 가능성이 있고, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 초과인 경우, 대상체는 반응을 달성할 가능성이 없다. 일부 구현예에서, 반응은 객관적 반응이거나 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 객관적 반응은 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)이거나 또는 이를 포함한다. 일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이전 (치료-전) 획득된 대상체로부터의 생물학적 샘플 내 페리틴, LDH, CXCL10, G-CSF, 및 IL-10의 수준 감소는, 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)을 비롯한 객관적 반응을 달성하는 것과 연관이 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 페리틴, LDH, CXCL10, G-CSF, 또는 IL-10의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여한 후 반응을 달성하였다. 일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 페리틴, LDH, CXCL10, G-CSF, 또는 IL-10의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여한 후 안정성 질병 (SD) 및/또는 진행성 질병 (PD)을 나타냈다.
일부 양태에서, 세포 요법을 투여한 후 지속적 반응 가능성의 평가에 대해 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 바이오마커 또는 바이오마커로는 LDH, 페리틴, CRP, D-이합체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γMIP-1α, CXCL-10, IL-8, MCP-1 및 MIP-1β으로부터 선택된 하나 이상의 바이오마커를 포함한다. 일부 구현예에서, 임의의 전술한 바이오마커 또는 바이오마커에 대하여, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 미만일 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 초과인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없다. 일부 구현예에서, 지속적 반응은 3개월, 4 개월, 5 개월, 또는 6 개월 이상 동안 지속 가능한 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)이거나, 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 지속적 반응은 적어도 3 개월 동안 지속가능한 CR 또는 PR이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이전 (치료-전) 수득된 대상체로부터의 생물학적 샘플 내, LDH, 페리틴, CRP, D-이합체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γMIP-1α, CXCL-10, IL-8, MCP-1 및 MIP-1β의 수준 감소는, 지속적 반응, 예컨대 적어도 3 개월 동안 지속 가능한 CR 또는 PR을 달성하는 것과 연관이 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 LDH, 페리틴, CRP, D-이합체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γMIP-1α, CXCL-10, IL-8, MCP-1 또는 MIP-1β의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체 발현 치료적 세포 조성물을 투여한 후 지속적 반응을 달성하였다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 LDH, 페리틴, CRP, D-이합체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γMIP-1α, CXCL-10, IL-8, MCP-1 또는 MIP-1β의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체 발현 치료적 세포 조성물을 투여한 후 지속적 반응을 달성하지 않았다.
일부 구현예에서, 반응은 지속적 반응, 예컨대 적어도 3 개월 동안 지속 가능한 CR 또는 PR이다.
일부 구현예에서, LDH에 대한 임계값은 (약) 약 600 U/L, 500 U/L, 400 U/L, 300 U/L 또는 200 U/L (미만)이다.
일부 구현예에서, 페리틴에 대한 예시적인 임계값은 (약) 1000 μg/L, 900 μg/L, 800 μg/L, 700 μg/L, 600 μg/L, 500 μg/L, 400 μg/L, 300 μg/L 또는 200 μg/L (미만)이다.
일부 구현예에서, CRP에 대한 예시적인 임계값은 (약) 20 mg/L, 19 mg/L, 18 mg/L, 17 mg/L, 16 mg/L, 15 mg/L, 14 mg/L, 13 mg/L, 12 mg/L, 11 mg/L, 10 mg/L, 9 mg/L, 8 mg/L, 7 mg/L, 6 mg/L 또는 5 mg/L (미만)이다.
일부 구현예에서, D-이합체에 대한 예시적인 임계값은 (약) 1000 μg/L, 900 μg/L, 800 μg/L, 700 μg/L, 600 μg/L, 500 μg/L, 400 μg/L, 300 μg/L 또는 200 μg/L (미만)이다.
일부 구현예에서, SAA-1에 대한 예시적인 임계값은 (약) 100 mg/L, 90 mg/L, 80 mg/L, 70 mg/L, 60 mg/L, 50 mg/L, 40 mg/L, 30 mg/L 또는 20 mg/L (미만)이다.
일부 구현예에서, IL-6에 대한 예시적인 임계값은 (약) 6 pg/mL, 5 pg/mL, 4 pg/mL, 3 pg/mL 또는 2 pg/mL (미만)이다.
일부 구현예에서, IL-10에 대한 예시적인 임계값은 (약) 2 pg/mL, 1 pg/mL, 0.9 pg/mL, 0.8 pg/mL, 0.7 pg/mL, 0.6 pg/mL 또는 0.5 pg/mL (미만)이다.
일부 구현예에서, IL-15에 대한 예시적인 임계값은 (약) 7 pg/mL, 6 pg/mL, 5 pg/mL, 4 pg/mL 또는 3 pg/mL (미만)이다.
일부 구현예에서, IL-16에 대한 예시적인 임계값은 (약) 1000 pg/mL, 900 pg/mL, 800 pg/mL, 700 pg/mL 또는 600 pg/mL (미만)이다.
일부 구현예에서, TNF-α에 대한 예시적인 임계값은 (약) 10 pg/mL, 9 pg/mL, 8 pg/mL, 7 pg/mL 또는 6 pg/mL (미만)이다.
일부 구현예에서, IFN-γ에 대한 예시적인 임계값은 (약) 30 pg/mL, 20 pg/mL, 10 pg/mL, 9 pg/mL, 8 pg/mL 또는 7 pg/mL;
일부 구현예에서, MIP-1α에 대한 예시적인 임계값은 (약) 40 pg/mL, 30 pg/mL 또는 20 pg/mL (미만)이고; 및/또는
일부 구현예에서, CXCL-10에 대한 예시적인 임계값은 (약) 1500 pg/mL, 1000 pg/mL, 900 pg/mL, 800 pg/mL, 700 pg/mL, 600 pg/mL 또는 500 pg/mL (미만)이다.
일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이후 지속적 반응 가능성의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 바이오마커 또는 바이오마커로는 페리틴, CRP, LDH, CXCL10, IL-8, IL-10, IL-15, MCP-1, MIP-1β및 TNF-α으로부터 선택된 하나 이상의 바이오바커를 포함한다. 일부 구현예에서, 임의의 전술한 바이오마커 또는 바이오마커에 대하여, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 미만일 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 초과인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없다. 일부 구현예에서, 지속적 반응은 3개월, 4 개월, 5 개월, 또는 6 개월 이상 동안 지속 가능한 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)이거나, 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 지속적 반응은 적어도 3 개월 동안 지속가능한 CR 또는 PR이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이전 (치료-전) 수득된 대상체로부터의 생물학적 샘플 내, 페리틴, CRP, LDH, CXCL10, IL-8, IL-10, IL-15, MCP-1, MIP-1β 및 TNF-α의 수준 감소는, 지속적 반응, 예컨대 적어도 3 개월 동안 지속 가능한 CR 또는 PR을 달성하는 것과 연관이 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 페리틴, CRP, LDH, CXCL10, IL-8, IL-10, IL-15, MCP-1, MIP-1β또는 TNF-α의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체 발현 치료적 세포 조성물을 투여한 후 지속적 반응을 달성하였다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 페리틴, CRP, LDH, CXCL10, IL-8, IL-10, IL-15, MCP-1, MIP-1β또는 TNF-α의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체 발현 치료적 세포 조성물을 투여한 후 지속적 반응을 달성하지 않았다.
일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이후 지속적 반응 가능성의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 바이오마커 또는 바이오마커로는 헤모글로빈 및 알부민으로부터 선택된 하나 이상의 바이오바커를 포함한다. 일부 구현예에서, 임의의 전술한 바이오마커 또는 바이오마커에 대하여, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 초과인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 미만인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없다. 일부 구현예에서, 지속적 반응은 3개월, 4 개월, 5 개월, 또는 6 개월 이상 동안 지속 가능한 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)이거나, 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 지속적 반응은 적어도 3 개월 동안 지속가능한 CR 또는 PR이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이전 (치료-전) 수득된 대상체로부터의 생물학적 샘플 내, 헤모글로빈 및 알부민의 수준 증가는, 지속적 반응, 예컨대 적어도 3 개월 동안 지속 가능한 CR 또는 PR을 달성하는 것과 연관이 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 헤모글로빈 및 알부민의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여한 후 지속적 반응을 달성하였다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 헤모글로빈 및 알부민의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여한 후 지속적 반응을 달성하지 않았다.
2. 독성 결과와 연관된 예시적인 바이오마커
일부 구현예에서, 바이오마커는, 예컨대 유전자 조작된 세포를 함유하는 조성물으로 세포 요법이 투여된 대상체에서 특정 결과, 예컨대 독성 발생과 연관이 있고, 상관관계가 있고, 이를 나타내고 및/또는 예측가능하다. 일부 구현예에서, 세포 요법 투여 이전에 대상체로부터 수득된 생물학적 샘플 내 하나 이상의 바이오마커의 존재, 발현, 수준, 양 또는 농도는, 특정 결과, 예컨대 독성 발생, 예컨대 본 명세서에 기재된, 예를 들어, in 섹션 II.A에 기재된 임의의 독성 결과와 연관이 있고, 상관관계가 있고, 이를 나타내고 및/또는 예측가능하다. 일부 구현예에서, 특정 바이오마커의 존재, 발현, 수준, 양 또는 농도는 특정 결과 또는 독성, 예를 들어, NT 또는 CRS의 발생과 상관 관계가 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 독성은 세포 요법과 잠재적으로 연관된 독성, 예컨대 본 명세서에 기재된, 예를 들어, 섹션 II.A에 기재된 임의의 독성이다. 일부 구현예에서, 독성은 신경독성 (NT) 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS)이다. 일부 구현예에서, 독성은 중증 NT 또는 중증 CRS이다. 일부 구현예에서, 독성은 2등급 이상의 NT 또는 2등급 이상의 CRS이다. 일부 구현예에서, 독성은 3등급 이상의 NT 또는 3등급 이상의 CRS이다.
일부 구현예에서, 방법은 샘플 내 바이오마커의 수준, 양 또는 농도를 임계값에 대해 개별적으로 비교하여, 세포 요법의 투여 이후 독성 발생 위험을 결정하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 샘플 내 바이오마커의 수준, 양 또는 농도를 임계값에 대해 개별적으로 비교하여, 세포 요법의 투여 이후 독성 발생 위험을 가지는 대상체를 식별하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 또한 평가 결과를 따르거나 이에 기초하여, 세포 요법, 및, 선택적으로, 독성 발생 또는 발생 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 시제 또는 다른 치료제를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 방법은 또한 대상체가 세포 요법이 투여되고 독성 발생 위험을 가지는 것으로 식별되는 경우, 독성 증상에 대해 대상체를 모니터링하는 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 대상체가 독성 발생 위험을 가지는 것으로 식별되는 경우에, 다음의 단계 중 하나 이상의 단계가 수행되어, 대상체에게 투여될 수 있다: (a) (1) 독성 발생 또는 발생 위험을 치료, 예방, 지연, 감소 또는 약화시킬 수 있는 시제 또는 다른 치료제 및 (2) 세포 요법을 투여하는 단계로서, 이러한 시제의 투여는 대상체에게 세포 요법 투여의 개시 (i) 이전에, (ii) 1, 2, 또는 3일 이내, (iii) 동시에 및/또는 (iv) 제1 발열 후, 투여되는 단계; 및/또는 (b) 감소된 용량으로 또는 독성 또는 중증 독성 발생 위험과 연관되지 않는 용량, 또는 대상체의 대부분에서, 및/또는 대상체가 세포 요법의 투여 이후 질병 또는 병태를 가지거나, 가지는 것으로 추정되는 대상체의 대부분에서, 독성 또는 중증 독성 발생 위험과 연관되지 않는 용량으로, 세포 요법을 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는 (c) 입원 환자 환경에서 및/또는 1일 이상 병원에 입원하여, 대상체에게 세포 요법을 투여하는 단계로서, 선택적으로 세포 요법은 외래 환자 기준으로 또는 1일 이상 병원에 입원하지 않고 대상체에게 투여되는단계.
일부 구현예에서, 평가될 수 있는, 바이오마커 또는 이의 파라미터를 비롯한 바이오마커로는 락테이트 탈수소효소 (LDH), 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), 인터루킨-6 (IL-6), IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α), 인터페론 알파 2 (IFN-α2), 단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1), 대식세포 염증성 단백질 1 알파 (MIP-1α), 대식세포 염증성 단백질 1 베타 (MIP-1β이오탁신(Eotaxin), 과립구-콜로니 자극 인자 (G-CSF), IL-1 수용체 알파 (IL-1Rα), IL-1βIFN-γ단백질 10 (IP-10), 퍼포린, 및 D-이합체 (피브린 분해 생성물)을 포함한다. 일부 구현예에서, 이의 파라미터를 비롯한 바이오마커는 LDH, 페리틴, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β를 포함한다. 일부 구현예에서, 이의 파라미터를 비롯한 바이오마커는 페리틴, CRP, D-이합체, IL-6, IL-15, TNF-α 및 MIP-1α를 포함한다. 일부 구현예에서, 이의 파라미터를 비롯한 바이오마커는 페리틴, CRP, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, 또는 MIP-1β를 포함한다. 일부 구현예에서, 예컨대 기준값 또는 임계값과 비교하여, 하나 이상의 이러한 바이오마커 (예컨대, 바이오마커)의 수준 상승 또는 수준 증가는, 신경독성, 예를 들어 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 또는 4 등급 또는 5 신경독성의 발생과 연관이 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 예컨대 기준값 또는 임계값과 비교하여, 하나 이상의 이러한 바이오마커 (예컨대, 바이오마커)의 수준 상승 또는 수준 증가는, 신경독성, 예를 들어 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 또는 4 등급 또는 5 신경독성의 발생과 연관이 있을 수 있다.
일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이후 독성 발생 위험의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 바이오마커 또는 바이오마커로는 LDH, 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β으로부터 선택된 하나 이상의 바이오마커를 포함한다. 일부 구현예에서, 임의의 전술한 바이오마커 또는 바이오마커에 대하여, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 초과인 경우, 대상체는 독성 발생의 위험을 가지고, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 미만인 경우, 대상체는 독성 발생의 위험을 가지지 않는다. 일부 구현예에서, 독성은 신경독성이다. 일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이전 (치료-전) 수득된 대상체로부터의 생물학적 샘플 내 LDH, 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β의 수준 증가는 신경 독성의 보다 높은 발병 위험과 연관이 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 LDH, 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 또는 MIP-1β의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 30% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여받은 후 임의의 독성을 발생시키지 않았다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 LDH, 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 또는 MIP-1β의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 30% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여받은 후 독성을 발생시켰다.
일부 구현예에서, 독성은 신경독성이다.
일부 구현예에서, LDH에 대한 예시적인 임계값은 (약) 300 U/L, 400 U/L, 500 U/L, 600 U/L 또는 700 U/L (초과)이다.
일부 구현예에서, 페리틴에 대한 예시적인 임계값은 (약) 500 ng/mL, 600 ng/mL, 700 ng/mL, 800 ng/mL, 900 ng/mL, 1000 ng/mL 또는 1500 ng/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, CRP에 대한 예시적인 임계값은 (약) 20 mg/L, 30 mg/L, 40 mg/L, 50 mg/L, 60 mg/L, 70 mg/L 또는 80 mg/L (초과)이다.
일부 구현예에서, IL-6에 대한 예시적인 임계값은 (약) 5 pg/mL, 6 pg/mL, 7 pg/mL, 8 pg/mL, 9 pg/mL, 10 pg/mL, 20 pg/mL 또는 30 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, IL-8에 대한 예시적인 임계값은 (약) 8 pg/mL, 9 pg/mL, 10 pg/mL, 20 pg/mL 또는 30 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, IL-10에 대한 예시적인 임계값은 (약) 20 pg/mL, 30 pg/mL, 40 pg/mL, 50 pg/mL, 60 pg/mL 또는 70 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, TNF-α에 대한 예시적인 임계값은 (약) 20 pg/mL 또는 30 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, IFN-α2에 대한 예시적인 임계값은 (약) 40 pg/mL, 50 pg/mL, 60 pg/mL, 70 pg/mL 또는 80 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, MCP-1; 및/또는에 대한 예시적인 임계값은 (약) 200 pg/mL 또는 300 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, MIP-1β에 대한 예시적인 임계값은 (약) 40 pg/mL, 50 pg/mL, 60 pg/mL, 70 pg/mL 또는 80 pg/mL (초과)이다.
일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이후 독성 발생 위험의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 바이오마커 또는 바이오마커로는 IL-8, IL-10 및 CXCL10으로부터 선택된 하나 이상의 바이오마커를 포함한다. 일부 구현예에서, 임의의 전술한 바이오마커 또는 바이오마커에 대하여, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 초과인 경우, 대상체는 독성 발생의 위험을 가지고, 하나 이상의 바이오마커의 수준, 양 또는 농도가 임계값 미만인 경우, 대상체는 독성 발생의 위험을 가지지 않는다. 일부 구현예에서, 독성은 신경독성이다. 일부 구현예에서, 독성은 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성이다. 일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이전 (치료-전) 수득된 대상체로부터의 생물학적 샘플 내 IL-8, IL-10 및 CXCL10의 수준 증가는, 보다 높은 신경독성, 또는 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성의 발생 위험과 연관이 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 IL-8, IL-10 또는 CXCL10 의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 30% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여받은 후 임의의 독성을 발생시키지 않았다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내 IL-8, IL-10 또는 CXCL10 의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 30% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여받은 후 독성을 발생시켰다.
일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이후 독성 발생 위험의 평가와 관련하여 평가 또는 분석될 수 있는 예시적인 바이오마커 또는 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정치로는 직경의 곱의 합 (SPD), LDH, 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), D-이합체 (피브린 분해 생성물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16 TNF-α, MIP-1α 및 MIP-1β으로부터 선택된 하나 이상의 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정치를 포함한다. 일부 구현예에서, 임의의 전술한 바이오마커 또는 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정치에 대하여, 하나 이상의 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정치의 수준, 양 또는 농도가 임계값 초과인 경우, 대상체는 독성 발생의 위험을 가지고, 하나 이상의 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정치의 수준, 양 또는 농도가 임계값 미만인 경우, 대상체는 독성 발생의 위험을 가지지 않는다. 일부 구현예에서, 독성은 신경독성이다. 일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이전 (치료-전) 수득된 대상체로부터의 생물학적 샘플 내, 직경의 곱의 합 (SPD), LDH, 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), D-이합체 (피브린 분해 생성물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16 TNF-α, MIP-1α 및 MIP-1β의 수준 또는 측정치 증가는, 보다 높은 신경독성 (NT) 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 발생 위험과 연관이 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정치는 LDH, SPD, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α 및 MIP-1β으로부터 선택된되고, 독성은 신경독성이다 일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커 또는 종양 부담의 부피 측정치는 LDH, SPD, CRP, d-이합체, IL-6, IL-15, TNF-α 및 MIP-1α으로부터 선택되고, 독성은 CRS이다. 일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이전 (치료-전) 수득된 대상체로부터의 생물학적 샘플 내 LDH, SPD, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α 및 MIP-1β의 수준 또는 측정치 증가는 신경 독성의 보다 높은 발병 위험과 연관이 있을 수 있다. 일부 양태에서, 세포 요법의 투여 이전 (치료-전) 수득된 대상체로부터의 생물학적 샘플 내, LDH, SPD, CRP, d-이합체, IL-6, IL-15, TNF-α 및 MIP-1α의 수준 또는 측정치 증가는, 사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 보다 높은 발병 위험과 연관이 있을 수 있다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내, LDH, 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), D-이합체 (피브린 분해 생성물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16 TNF-α, MIP-1α 또는 MIP-1β의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도, 또는 직경의 곱의 합 (SPD)의 중앙값 또는 평균 종양 부담의 부피 측정치의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 32% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 초과의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여받은 후 임의의 독성을 발생시키지 않았다.
일부 구현예에서, 임계값은 세포 요법을 투여받기 이전에 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플 내, LDH, 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), D-이합체 (피브린 분해 생성물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16 TNF-α, MIP-1α 또는 MIP-1β의 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도, 또는 직경의 곱의 합 (SPD)의 중앙값 또는 평균 종양 부담의 부피 측정치의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 32% 이내 또는 5% 이내 및/또는 중앙 또는 평균 수준, 양 또는 농도 미만의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여받은 후 독성을 발생시켰다.
일부 구현예에서, 독성은 신경독성이고, LDH에 대한 예시적인 임계값은 (약) 300 U/L, 400 U/L, 500 U/L 또는 600 U/L (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 신경독성이고, SPD에 대한 예시적인 임계값은 (약) 30 cm2, 40 cm2, 50 cm2, 60 cm2, 70 cm2, 80 cm2 또는 90cm2 (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 신경독성이고, IL-10에 대한 예시적인 임계값은 (약) 0.8 pg/mL, 0.9 pg/mL, 1 pg/mL, 2 pg/mL, 3 pg/mL 또는 4 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 신경독성이고, IL-15에 대한 예시적인 임계값은 (약) 3 pg/mL, 4 pg/mL, 5 pg/mL, 6 pg/mL 또는 7 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 신경독성이고, IL-16에 대한 예시적인 임계값은 (약) 600 pg/mL, 700 pg/mL, 800 pg/mL, 900 pg/mL 또는 1000 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 신경독성이고, TNF-α에 대한 예시적인 임계값은 (약) 6 pg/mL, 7 pg/mL, 8 pg/mL, 9 pg/mL 또는 10 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 신경독성이고, MIP-1β에 대한 예시적인 임계값은 (약) 70 pg/mL, 80 pg/mL, 90 pg/mL 또는 100 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 CRS이고, LDH에 대한 예시적인 임계값은 (약) 300 U/L, 400 U/L, 500 U/L 또는 600 U/L (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 CRS이고, SPD에 대한 예시적인 임계값은 (약) 20 cm2, 30 cm2, 40 cm2 또는 50 cm2 (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 CRS이고, 페리틴에 대한 예시적인 임계값은 (약) 300 ng/mL, 400 ng/mL, 500 ng/mL, 600 ng/mL, 700 ng/mL, 800 ng/mL, 900 ng/mL 또는 1000 ng/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 CRS이고, CRP에 대한 예시적인 임계값은 (약) 20 mg/L, 30 mg/L 또는 40 mg/L (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 CRS이고, d-이합체에 대한 예시적인 임계값은 (약) 300 pg/mL, 400 pg/mL, 500 pg/mL, 600 pg/mL, 700 pg/mL, 800 pg/mL, 900 pg/mL 또는 1000 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 CRS이고, IL-6에 대한 예시적인 임계값은 (약) 2 pg/mL, 3 pg/mL, 4 pg/mL, 5 pg/mL, 6 pg/mL, 7 pg/mL, 8 pg/mL 또는 9 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 CRS이고, IL-15에 대한 예시적인 임계값은 (약) 3 pg/mL, 4 pg/mL, 5 pg/mL, 6 pg/mL, 7 pg/mL, 8 pg/mL, 9 pg/mL 또는 10 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 CRS이고, TNF-α에 대한 예시적인 임계값은 (약) 7 pg/mL, 8 pg/mL, 9 pg/mL, 10 pg/mL 또는 15 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 독성은 CRS이고, MIP-1α에 대한 예시적인 임계값은 (약) 20 pg/mL, 30 pg/mL 또는 40 pg/mL (초과)이다.
일부 구현예에서, 파라미터는 LDH이고, 일부 경우에, 독성, 예를 들어, CRS 또는 NT의 발생은, 임계값 초과의 LDH 값과 상관 관계가 있다. 일부 구현예에서, 염증성 마커는 LDH이고, 임계값은 (약) 리터 당 300 유닛, (약) 리터 당 400 유닛, (약) 리터 당 500 유닛 또는 (약) 리터 당 600 유닛이다.
일부 구현예에서, 파라미터 또는 바이오마커는 LDH이다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 LDH이고 임계값은 (약) 500 U/L 이상이다. 일부 구현예에서, 파라미터 또는 바이오마커는 SPD이다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 SPD이고, 임계값은 (약) 50 cm2 이상이다. 일부 구현예에서, 바이오마커 또는 파라미터는 SPD 및 LDH이고, 임계값은 (약) 50 cm2 이상의 SPD, 및 (약) 500 U/L 이상의 LDH이다. 일부 구현예에서, 바이오마커 또는 파라미터는 증가된 CRS 또는 NT 발생 위험과 연관이 있다.
일부 구현예에서, 임계값 초과의 파라미터 또는 마커의 측정치, 예를 들어, (약) 50 cm2 이상의 SPD 및 (약) 500 U/L 이상의 LDH는, 대략 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10 배 이상 증가된 CRS 또는 NT, 예컨대 임의의 등급의 CRS 또는 NT의 발생 위험과 연관이 있다. 일부 구현예에서, 임계값 미만의 파라미터 또는 마커의 측정치, 예를 들어, (약) 500 cm2 이하의 SPD 및 (약) 500 U/L 이하의 LDH는, 대략 2-, 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 10 배 이상 감소된 CRS 또는 NT, 예컨대 임의의 등급의 CRS 또는 NT의 발생 위험과 연관이 있다.
일부 구현예에서, 부피 측정은 SPD이고, 임계 수준은 (약) 30 cm2, (약) 40 cm2, (약) 50 cm2, (약) 60 cm2, 또는 (약) 70 cm2이다. 일부 구현예에서, 부피 측정은 SPD이고, 임계 수준 (약) 50 cm2이다.
일부 구현예에서, 바이오마커는 LDH이고, 임계 수준은 리터 당 (약) 300 유닛 (U/L), (약) 400 U/L, (약) 500 U/L 또는 (약) 600 U/L이다. 일부 구현예에서, 바이오마커는 LDH이고, 임계 수준 (약) 500 U/L이다.
제공되는 방법의 일부 양태에서, 대상체는 바이오마커 (예를 들어 분석물) 또는, 개별적으로, 바이오마커 각각의 파라미터 (예를 들어 농도, 양, 수준 또는 활성)을, 바이오마커 또는 각 바이오마커에 대한 상응하는 파라미터의 기준값, 예컨대 임계 수준에 대해 비교함으로써, 독성 (예를 들어 신경독성, 예컨대 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성, 예를 들어 4 등급 또는 5 신경독성 및/또는 CRS, 예컨대 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS)의 발생 위험에 있는 것으로 결정된다. 일부 구현예에서, 이러한 비교는 대상체가 독성, 예를 들어, 신경독성 예컨대 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성, 예를 들어 4 등급 또는 5 신경독성 및/또는 CRS, 예컨대 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS의 발생 위험에 있는지의 여부를 나타내고, 및/또는 상기 독성 발생 위험의 정도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 기준값은 이러한 독성이 단독으로 또는 패널 내 하나 이상의 바이오마커와 조합으로 발생할 것이거나, 발생할 것으로 예상되는 양호한 예측값 (예를 들어 정확성, 민감성 및/또는 특이성)이 있는 임계 수준 또는 컷-오프(cut-off)인 값이다. 일부 경우에, 이러한 기준값, 예를 들어 임계 수준은, 세포 요법으로 미리 치료되고, 바이오마커 또는, 개별적으로, 패널 내 바이오마커 각각의 파라미터를 독성 결과의 존재 (예를 들어 신경독성의 존재, 예컨대 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성, 예를 들어 4 등급 또는 5 신경독성 및/또는 CRS, 예컨대 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS의 존재)에 대해 상관 관계가 평가된 복수의 대상체로부터 상기 방법을 수행하기 전에, 사전에 결정되거나 또는 공지될 수 있다.
일부 구현예에서, 상응하는 파라미터의 기준값, 예를 들어 임계 수준 이상 또는 초과인, 바이오마커 (예를 들어 LDH, 페리틴, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β의 파라미터는 독성 위험 (단독으로 또는 패널 내 다른 바이오마커의 평가와 관련하여) 양성 예측과 연관이 있다. 일부 구현예에서, 상응하는 파라미터의 기준값, 예를 들어 임계 수준 이하인, 바이오마커의 파라미터는 독성 위험 (단독으로 또는 패널 내 다른 바이오마커의 평가와 관련하여) 음성 예측과 연관이 있다.
일부 구현예에서, 임계 수준은 바이오마커에 대해 양성인 샘플에서 바이오마커 (예를 들어 분석물)의 수준, 양, 농도 또는 다른 측정치에 기초하여 결정된다. 일부 양태에서, 임계 수준은 재조합 수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여받기 이전 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플에서 바이오마커 또는 파라미터의 평균 수준, 양 또는 농도 또는 측정치의의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내, 및/또는 평균 수준, 양 또는 농도 또는 측정치의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여받은 후 독성, 예를 들어 신경독성 예컨대 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성, 예를 들어 4 등급 또는 5 신경독성 및/또는 CRS, 예컨대 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS를 발생시켰다.
제공되는 임의의 방법의 일부 구현예에서, 바이오마커 (예를 들어 분석물)은 중증 신경독성, 예컨대 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성, 예를 들어 4 등급 또는 5 신경독성 및/또는 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS의 발생 위험과 상관 관계가 있고 및/또는 이를 예측할 수 있다. 일부 구현예에서, 임계 수준은 재조합 수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여받기 이전 대상체 그룹으로부터 수득된 생물학적 샘플에서 바이오마커 또는 파라미터의 평균 수준, 양 또는 농도 또는 측정치의의 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내 또는 5% 이내, 및/또는 평균 수준, 양 또는 농도 또는 측정치의 표준 편차 이내이고, 이러한 그룹의 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위해 재조합-수용체-발현 치료적 세포 조성물을 투여받은 후, 중증 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성, 예를 들어 4 등급 또는 5 신경독성 및/또는 중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS를 발생시켰다.
일부 구현예에서, 림프구 고갈이 시작되기 이전에 높은 치료-전 종양 부담 (수직 직경의 곱의 합에 의해 측정된 (SPD; ≥ 500 cm2) 또는 높은 혈청 락테이트 탈수소효소 (LDH; ≥ 500 U/L)을 가지는 NHL을 가지는 대상체는 또한 보다 높은 CRS 및/또는 신경독성의 발생 위험을 가질 수 있다. 일부 구현예에서, 염증성 마커, 예컨대 페리틴 및 C-반응성 단백질 (CRP)의 높은 투여-전 수준이 또한 CRS와 연관이 있을 수 있다. 일부 구현예에서, IL-6, IFN-γ페리틴, 및 CRP의 피크 수준은 임의의 등급 또는 3등급 이상의 신경독성과 연관이 있을 수 있다. 일부 구현예에서, B-세포 급성 림프구성 백혈병 (ALL) 및 높은 질병 부담을 가지는 대상체는 CRS이 발생할 위험이 높을 수 있다. 일부 구현예에서, 중증 신경독성은 입양 세포 요법 시 높은 질병 부담과 연관이 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 뇌척수액 (CSF)의 단백질 수준은 베이스라인 측정과 비교하여 신경독성 환자에서 상승 될 수 있다. 일부 양태에서, 저산소혈증 및 감염뿐만 아니라, 다른 장기 기능 장애 (간 및 신장)가 또한 뇌병증에 기여할 수 있다. 일부 양태에서, 사이토카인-매개 혈관내피 활성화는 응고 병증, 모세관 누출 및 혈액-뇌 장벽 파괴와 관련되어, CSF 내로 고농도의 전신 사이토카인의 통과를 허용한다.
C. 측정용 시약
일부 구현예에서, 파라미터, 예를 들어, 환자 인자, 바이오마커, 염증성 마커 및/또는 사이토카인은, 파라미터를 검출할 수 있는 또는 이에 특이적인 하나 이상의 시약(들)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 또한 파라미터를 검출 또는 평가하고 및/또는 요법, 예를 들어, 세포 요법을 조절하는, 키트 및 제조 물품이 제공된다.
일부 구현예에서, 치료, 선택적으로 세포 요법으로의 치료에 대한 후보인 대상체로부터 생물학적 샘플을 평가하기 위해 시약을 사용하기 위한 설명서가 또한 제공되며, 상기 세포 요법은 선택적으로 재조합 수용체를 발현하는 유전자 조작된 세포의 용량 또는 조성물을 포함한다. 제조 물품을 사용하는 일부 구현예에서, C-C 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13), C-반응성 단백질 (CRP), C-X-C 모티프 케모카인 10 (CXCL10), D-이합체 (피브린 분해 생성물), 페리틴, IFN-α2, 인터루킨-2 (IL-2), IL-10, IL-15, IL-16, IL-6, IL-7, IL-8, 인터페론 감마 (IFN-γ락테이트 탈수소효소 (LDH), 대식세포 염증성 단백질 (MIP-1α), MIP-1β 단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1), SAA-1, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α)의 수준 또는 존재가 검출 및 평가된다. 제조 물품을 사용하는 일부 구현예에서, C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β또는 락테이트 탈수소효소 (LDH)의 수준 또는 존재가 검출 및 평가된다. 또한 종양 부담을 나타내는 하나 이상의 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커를 검출 및 평가하는 방법이 제공된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터, 예를 들어, 바이오마커의 값 측정은, 분석물을 직접적으로 또는 간접적으로 검출할 수 있는 시약을 생물학적 샘플과 접촉시키고, 분석물을 생물학적 샘플 내 분석물의 존재 또는 부재, 수준, 양 또는 농도를 결정하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터, 예를 들어, 바이오마커는 C-C 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13), C-반응성 단백질 (CRP), C-X-C 모티프 케모카인 10 (CXCL10), D-이합체 (피브린 분해 생성물), 페리틴, IFN-α2, 인터루킨-2 (IL-2), IL-10, IL-15, IL-16, IL-6, IL-7, IL-8, 인터페론 감마 (IFN-γ락테이트 탈수소효소 (LDH), 대식세포 염증성 단백질 (MIP-1α), MIP-1β단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1), SAA-1, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α)이고, 이는 검출 및 평가된다. 제조 물품을 사용하는 일부 구현예에서, C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β또는 락테이트 탈수소효소 (LDH)의 수준 또는 존재. 일부 구현예에서, 하나 이상의 파라미터, 예를 들어, 바이오마커는 LDH이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 양태에서, 시약은 바이오마커에 특이적으로 결합하는 결합 분자이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 시약은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, 시약은 바이오마커의 기질 또는 결합 파트너이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서, LDH의 존재, 부재 또는 수준, 양, 농도 및/또는 다른 측정치가 샘플에서 검출 또는 결정된다. LDH를 검출 또는 결정하는 다양한 방법이 공지되어 있다. 예를 들어, 샘플에서 LDH를 검출하기 위해 NADH로의 NAD+ 환원을 통한 락테이트의 피루베이트로의 LDH 전환을 측정하는 분석이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 샘플은 조효소 NAD의 존재하에 락테이트와 접촉되며, 이는 샘플 내 LDH의 측정치로서 NADH를 생성하고, 이후 전자 전달제의 존재하에 산화된다. 일부 구현예에서, NADH는 가시광선 범위에서 흡수를 측정함으로써 검출 가능한 프로브 또는 염료 전구체와 상호작용한다. 일부 예시에서, 디아포라제는 NADH를 사용하여 테트라졸륨염 (INT)을 적색 포마잔 생성물로 환원시키고 생성물을 측정한다. 그러므로, 일부 구현예에서, 형성된 착색 생성물의 양은 샘플 내 LDH 활성에 직접적으로 정비례한다.
일부 구현예에서, 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커는 면역 분석을 사용하여 평가된다. 예를 들어, 효소-결합 면역흡착 분석 (ELISA), 효소 면역분석 (EIA), 방사 면역분석 (RIA), 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 웨스턴 블롯, 측면 흐름 분석, 면역조직화학, 단백질 분석 또는 면역-PCR (iPCR)이 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 제조물품의 사용은 종양 부담을 나타내는 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커를 검출하는 것을 포함한다. 일부 경우에, 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커의 분석 또는 평가는 유세포 분석을 사용한다. 일부 경우에, 시약은 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커에 결합하는 가용성 단백질이다. 일부 예시에서, 시약은 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β또는 락테이트 탈수소효소 (LDH)에 결합하는 단백질이다.
일부 구현예에서, C-반응성 단백질 (CRP)는 혈청, 혈장, 또는 혈액과 같은 샘플로부터 인간 CRP의 정량적 측정을 수득하기 위해 시험관 내 효소-결합 면역흡착 분석을 사용하여 평가된다. 일부 예시에서, CRP는 인간 효소-연결 면역흡착 분석 (ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 적혈구 침강 속도 (ESR)는 적혈구가 수직 피펫 또는 튜브에서 혈장으로부터 분리된 후 떨어진 거리 (시간 당 밀리미터)를 측정함으로써 평가된다. 일부 양태에서, 알부민은 비색 시험 또는 시험관 내 효소-결합 면역흡착 분석을 사용하여 평가된다. 일부 예시에서, 알부민은 인간 효소-연결 면역흡착 분석 (ELISA)을 사용하여 검출된다. 일부 구현예에서, 페리틴 또는 β2마이크로글로불린은 면역분석을 사용하여 평가되거나 또는 ELISA를 사용하여 검출된다. 일부 양태에서, 락테이트 탈수소효소 (LDH)는 비색 시험 또는 시험관 내 효소-결합 면역흡착 분석을 사용하여 평가된다.
본 명세서에서 용어 “항체”는 가장 넓은 의미로 사용되며 다클론성 및 단클론성 항체를 비롯한, 온전한 항체 및 기능성 (항원-결합) 항체 단편을 를 포함하고, 단편 항원 결합 (Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG (rIgG) 단편, 단일 사슬 항체 단편을 비롯한, 단일 사슬 가변 단편 (scFv), 및 단일 도메인 항체 (예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디) 단편을 포함한다. 이러한 용어는 면역글로불린의 유전자 조작된 및/또는 개질된 형태, 예컨대 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 전장 인간 항체, 인간화 항체, 및 이종컨쥬게이트 항체, 아중특이성, 예를 들어, 이중특이성, 항체, 다이아바디, 트라이아바디, 및 테트라바디, 탠덤 다이-scFv, 탠덤 tri-scFv를 포함한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어 “항체”는 이의 기능적 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 온전한 또는 전장의 항체를 비롯한, 임의의 클래스 또는 하위클래스의 항체를 포함하며, IgG 및 이의 하위클래스, IgM, IgE, IgA, 및 IgD를 포함한다.
제공된 항체 중에는 항체 단편이 있다. "항체 단편(antibody fragment)"은 손상되지 않은(intact) 항체가 결합하는 항원에 결합하는 손상되지 않은 항체의 부분을 포함하는 손상되지 않은 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예로는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 다이아바디; 선형 항체; 단일-사슬 항체 분자 (예를 들어, scFv); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 구체적인 구현예에서, 항체는 가변 중쇄 영역 및/또는 가변 경쇄 영역을 포함하는, 예컨대 scFv와 같은 단일-사슬 항체 단편이다.
단일-도메인 항체는 이 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부분 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부분이 포함된 항체 분절들이다. 특정 구현예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다.
항체 단편은 다양한 기법에 의해 제조될 수 있으며, 이러한 기법으로는 온전한 항체의 단백질분해 소화, 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포에 의한 제조를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 재조합으로 제조된 단편, 예컨대 자연적으로 발생하지 않는 배열, 예컨대 합성 링커, 예를 들어, 펩타이드 링커에 의해 연결된 둘 이상의 이상 항체 영역 또는 사슬을 가지는 배열을 포함하는 단편, 및/또는 자연적으로 발생하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 제조될 수 없는 단편이다. 일부 양태에서, 항체 단편은 scFv이다.
“인간화” 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비-인간 CDR으로부터 유래하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR으로부터 유래한 항체이다. 인간화 항체는 선택적으로 인간 항체로부터 유래한 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비-인간 항체의 “인간화 형태”는, 일반적으로 모체의 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거치는, 비-인간 항체의 변이체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 인간화 항체 내 일부 FR은 비-인간 항체(예를 들어, CDR 잔기가 유래하는 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환되어, 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선한다.
제공된 항체 중에는 인간 항체가 있다. “인간 항체”는 인간 또는 인간 세포에 의해 제조된, 또는 인간 항체 라이브러리를 포함하여 인간 항체 레퍼토리 또는 다른 인간 항체-인코딩 서열을 활용하는 비-인간 공급원에 의해 제조된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 가지는 항체이다. 이러한 용어는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR이 비-인간인 것과 같은 비-인간 항원 결합 영역을 포함하는 인간화된 형태의 비-인간 항체를 배제한다.
인간 항체는 항원 챌린지에 반응하여 온전한 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 가지는 온전한 항체를 생성하도록 변형된 형질전환 동물에 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 이러한 동물은 이반적으로 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 함유하며, 이는 내인성 면역글로불린 유전자좌를 대체하거나, 또는 동물의 염색체 외에 존재하거나 염색체에 무작위로 통합된다. 이러한 형질전환 동물에서, 내인성 면역글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화되어 있다. 인간 항체는 또한 인간 레퍼토리로부터 유래된 항체-인코딩 서열을 함유하는 파지 디스플레이 및 무세포 라이브러리를 포함하는 인간 항체 라이브러리로부터 유래될 수 있다.
제공된 항체 중에는 단일클론 항체 단편을 포함하는 단일클론 항체가 있다. 본 명세서에서 사용 시 용어 “단일클론 항체”는 실질적으로 균일한 항체의 집단으로부터 또는 집단 내에서 수득된 항체를 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 개별적인 항체는, 천연 발생 돌연변이를 포함하거나, 단일클론 항체 제조물의 제조 동안 발생하는 가능한 변이체를 제외하고는 동일하며, 이러한 변이체는 일반적으로 소량으로 존재한다. 일반적으로 상이한 에피토프에 대해 지시된 상이한 항체를 포함하는 다중클론 항체 제조물과는 대조적으로, 단일클론 항체 제조물의 각각의 단일클론 항체는 항원의 단일 에피토프에 대해 지시된다. 용어가 임의의 특정 방법의 항체 제조를 필요로 하는 것으로 해석되지 않아야 한다. 단일클론 항체는 다양한 기법에 의해 제조될 수 있으며, 이러한 기법으로는 하이브리도마로부터의 생성, 재조합 DNA 방법, 파지-디스플레이 및 다른 항체 디스플레이 방법을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.　
또한 간접적으로 또는 직접적으로, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있는 표지에 부착된 바이오마커에 대한 항체를 포함하는 항체 면역접합체가 제공된다. 이러한 항체 면역접합체는 연구 또는 진단적 용도에 사용될 수 있다. 표지는 바람직하게 직접적으로 또는 간접적으로, 검출 가능한 신호를 생성할 수 있다. 예를 들어, 표지는 방사선-불투과성이거나 또는 방사선 동위원소, 예컨대 3H, 14C, 32P, 35S, 123I, 125I, 131I; 형광 (형광단) 또는 화학발광 (발색단) 화합물, 예컨대 플루오세인 아이소싸이오시아네이트, 로다민 또는 루시페린; 효소, 예컨대 알칼리성 포스파타제,β갈락토시다제 또는 홀스래디쉬 퍼옥시아제; 영상화제; 또는 금속 이온일 수 있다. 일부 구현예에서, 표지는 섬광계수법 연구(scintigraphic study)를 위한 방사선 원자, 예를 들어 99Tc 또는 123I이거나, 또는 핵 자기 공명 (NMR) 영상 (또한 자기 공명 영상으로도 공지, MRI)을 위한 스핀 표지, 예컨대 지르코늄-89, 아이오딘-123, 아이오딘-131, 인듐-111, 플루오린-19, 탄소-13, 질소-15, 산소-17, 가돌리늄, 망간 또는 철이다. 지르코늄-89는 다양한 금속 킬레이트제에 착화되고, 예를 들어 PET 영상화를 위해 항체에 접합 될 수 있다 (WO 2011/056983).
일부 구현예에서, 항체 면역접합체는 간접적으로 검출 가능하다. 예를 들어, 골수 세포 면역접합체 집단에서 발현된 마커에 대한 항체에 특이적이고 검출 가능한 표지를 함유하는 2차 항체가 항체 면역접합체를 검출하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 제공된 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커를 검출할 수 있거나, 또는 이에 특이적인 항체는 다양한 공지된 분석에 의해 이의 물리적/화학적 성질 및/또는 생물학적 활성에 대해 식별, 스크리닝, 또는 특성화될 수 있다. 하나의 양태에서, 항체는, 예를 들어, 면역분석, ELISA, 웨스턴 블롯팅, 및/또는 세포-기반 결합 분석을 비롯한 유세포 분석과 같은 공지된 방법에 의해, 항원 결합 활성에 대해 시험된다.
D. 샘플
일부 구현예에서, 하나 이상의 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커는 생물학적 샘플으로부터 평가된다. 일부 양태에서, 생물학적 샘플은 체액 또는 조직이다. 이러한 일부 구현예에서, 생물학적 샘플, 예를 들어, 체액은, 전혈, 혈청 또는 혈장이거나, 또는 이를 포함한다.
구체적인 구현예에서, 둘 이상의 샘플이 요법의 투여 이전에 대상체로부터 수득, 수집 또는 채취된다. 특정 구체예에서, 샘플은 생물학적 샘플이다. 특정 구체예에서, 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플, 또는 혈청 샘플이다. 특정 구체예에서, 샘플은 조직 샘플이다. 일부 구현예에서, 샘플은 생검이다. 일부 구현예에서, 샘플은 대상체의 상태 또는 질환을 확인 및/또는 식별하기 위한 일상적인 평가 또는 혈액 채취와 같은 스크리닝 세션에서 대상체로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 성분채집술 또는 백혈구성분채집술 샘플이다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 바이오마커의 파라미터의 존재 및/또는 부재가 평가되거나, 또는 생물학적 샘플은 세포 요법의 투여 이후 수득된다. 일부 구현예에서, 시약은 진단 목표를 위해 세포 요법의 투여 이전 또는 세포 요법의 투여 이후에, 대상체를 식별하고 및/또는 치료 결과 및/또는 독성을 평가하기 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 대상체로부터 세포 요법의 투여 이전 (예를 들어, 주입-전)에 평가되고, 예를 들어, 조작된 세포의 투여 개시 이전 최대 2 일, 최대 7 일, 최대 14 일, 최대 21 일, 최대 28 일, 최대 35 일 또는 최대 40 일에 수득된다.
특정 구체예에서, 하나 이상의 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커는 질병 부담을 나타내는 인자의 배수 변화를 결정하기 위해 둘 이상의 시점에 수득된 하나 이상의 샘플에서 측정, 평가, 및/또는 결정된다. 구체적인 구현예에서, 샘플은 대상체로부터 채취, 수집 및/또는 수득된 생물학적 샘플이다. 특정 구체예에서, 대상체는 질병 또는 병태를 가지거나 및/또는 질병 또는 병태를 가지는 것으로 추정된다. 일부 구현예에서, 대상체는 요법을 투여받았거나, 받을 것이거나, 받는 후보이다. 일부 구현예에서, 요법은 세포 요법의 투여이다. 구체적인 구현예에서, 요법은 면역요법이다. 특정 구체예에서, 세포 요법은 질병 또는 병태를 치료하고 및/또는 치료할 수 있다. 일부 구현예에서, 요법은 하나 이상의 조작된 세포를 함유하는 세포 요법이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포는 재조합 수용체를 발현한다. 구체적인 구현예에서, 재조합 수용체는 CAR이다. 구체적인 구현예에서, 샘플은 요법이 투여된 적이 있거나, 투여될 것이거나, 투여되기 위한 후보인 대상체로부터 채취, 수집, 및/또는 수득된다. 구체적인 구현예에서, 샘플은 요법, 예를 들어, 세포 요법으로의 치료 또는 투여 이전에 채취, 수집, 및/또는 수득된다.
일부 구현예에서, 샘플은 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 포함하지 않고, 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 투여를 받기 전에 대상체로부터 수득된다.
구체적인 구현예에서, 샘플은 요법이 투여된 적이 있거나, 투여될 것이거나, 투여되기 위한 후보인 대상체로부터 채취, 수집, 및/또는 수득된다. 구체적인 구현예에서, 샘플은 요법, 예를 들어, 세포 요법으로의 치료 또는 투여 이전에 채취, 수집, 및/또는 수득된다. 본 명세서에 기재된 방법, 키트 및 제조 물품에 따라, 샘플은 독성 또는 독성 위험과 연관이 있고 및/또는 상관관계가 있는 하나 이상의 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커에 대해 평가될 수 있다. 면역요법을 투여받기 이전에 대상체로부터 수집 또는 수득된 샘플에서 검출될 수 있는 독성 발생 위험 및/또는 반응과 연관이 있는 및/또는 상관관계가 있는 예시적인 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커로는, C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β또는 락테이트 탈수소효소 (LDH)를 포함한다. 일부 구현예에서, 면역요법을 투여받기 이전 또는 이후에 대상체로부터 수집 또는 수득된 샘플에서 검출될 수 있는 독성 발생 위험 및/또는 반응과 연관이 있는 및/또는 상관관계가 있는 예시적인 환자 속성, 인자 및/또는 바이오마커로는, C-C 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13), C-반응성 단백질 (CRP), C-X-C 모티프 케모카인 10 (CXCL10), D-이합체 (피브린 분해 생성물), 페리틴, IFN-α2, 인터루킨-2 (IL-2), IL-10, IL-15, IL-16, IL-6, IL-7, IL-8, 인터페론 감마 (IFN-γ락테이트 탈수소효소 (LDH), 대식세포 염증성 단백질 (MIP-1α), MIP-1β단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1), SAA-1, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α)를 포함한다. 그러므로, 일부 양태에서, 제공되는 방법은 면역요법, 예컨대 세포 요법 (예를 들어 CAR-T 세포)를 투여받기 이전에, 치료적 윈도우 또는 범위 내에서 약동학적 파라미터를 달성할 수 있는 대상체를 식별하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공되는 방법은, 면역요법 또는 세포 요법을 투여받기 이전 또는 이후에, 면역요법 또는 세포 요법을 조절하기 위해, 예를 들어, CAR+ T 세포 팽창, 증식, 및/또는 활성을 조절할 수 있는, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여함으로써, 대상체를 식별하는 것을 포함한다. 본 명세서의 다른 곳에 기재된 바와 같이, 방법은 대상체가 면역요법의 투여 이후 면밀히 모니터링되어야 하는지, 외래 환자 요법의 후보인지 또는 병원 환경에서 요법의 치료를 받아야 하는지 및/또는 CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 조절할 수 있는 시제 및/또는 독성 위험을 예방, 치료 또는 개선하는 개입을 투여받기 위한 후보인지를 결정하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 샘플은 병태 또는 질병을 가지거나, 또는 가지는 것으로 추정되는 대상체로부터 채취, 수집, 및/또는 수득된다. 일부 구현예에서, 대상체는 암 또는 증식성 질병을 가지거나, 또는 가지는 것으로 추정된다. 구체적인 구현예에서, 대상체는 항원과 연관된 및/또는 항원을 발현하는 질병 세포와 연관된 질병 또는 병태를 가지거나, 또는 질병 또는 병태를 가지는 것으로 추정된다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태, 예를 들어, 암 또는 증식성 장애는 다음의 항원과 연관이 있다: αvβ인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 공지), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2으로도 공지), 암배아 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4 (CSPG4), 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; 또한 Fc 수용체 동족체 5 또는 FCRH5로도 공지), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100 (gp100), 글리피칸-3 (GPC3), G 단백질 연결 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 타이로신 키나제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이합체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파 (IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접합 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 풍부 반복 함유 8 패밀리 구성원 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐과 거대세포바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 살해 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접합 분자 (NCAM), 종양태아 항원, 우선적으로 발현되는 흑색종의 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이적 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), 수용체 타이로신 키나제 유사 고아 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백 (TPBG 또한 5T4로도 공지), 종양-연관된 당단백 72 (TAG72), 타이로시나제 관련 단백질 1 (TRP1, 또한 TYRP1 또는 gp75로도 공지), 타이로시나제 관련 단백질 2 (TRP2, 또한 도파크롬 토토머라제, 도파크롬 델타-아이소머라제 또는 DCT로도 공지), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현된 항원, 또는 보편적인 표지와 연관된 항원, 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 B 세포 악성종양과 관련된 항원을 포함하는데, 예컨대 다수의 공지된 B 세포 마커 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나, 또는 이를 포함한다. 특정 구현예에서, 대상체는 CD19와 연관된 및/또는 CD19를 발현하는 질병 세포와 연관된 질병 또는 병태를 가지거나, 또는 질병 또는 병태를 가지는 것으로 추정된다.
일부 구현예에서, 샘플은 B 세포 악성 종양 또는 혈액학적악성 종양인 암 또는 증식성 질병을 가지거나, 또는 가지는 것으로 추정되는 대상체로부터 채취, 수집, 및/또는 수득된다. 일부 구현예에서, 암 또는 증식성 질병은 골수종, 예를 들어, 다발성 골수종 (MM), 림프종 또는 백혈병, 림프구성 백혈병 (ALL), 비-호지킨 림프종 (NHL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL), 및/또는 급성 골수성 백혈병 (AML)이다. 일부 구현예에서, 암 또는 증식성 장애는 ALL이다. 일부 구현예에서, 대상체는 ALL를 가지거나, 또는 가지는 것으로 추정된다. 일부 구현예에서, ALL은 성인 ALL이다. 구체적인 구현예에서, ALL은 소아 ALL이다.
E. 세포 팽창 및 활성 조절제
일부 양태에서, 투여되는 세포, 예를 들어, CAR+ T 세포의 팽창, 증식 및/또는 활성을, 파라미터, 예를 들어, 약동학적 파라미터 및/또는 다른 파라미터 예컨대 환자 속성 및/또는 바이오마커의 발현의 평가 및/또는 결정에 기초하여 조절하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 파라미터의 결정에 의존하여 투여되는 세포, 예를 들어, CAR+ T 세포의 팽창, 증식 및/또는 활성을 조절하는, 예컨대 증가 또는 감소시키는 시제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 파라미터, 예를 들어, 약동학적 파라미터의 평가, 예컨대 최대 또는 피크 CAR+ 세포 농도에 기초하여 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우 시제가 투여된다. 일부 구현예에서, 이러한 시제는 CAR+ T 세포의 증식 및/또는 팽창을 증가, 증강 또는 증진시키는 시제이다. 일부 구현예에서, 이러한 시제는 CAR+ T 세포의 증식 및/또는 팽창을 감소, 축소, 및/또는 약화시키는 시제이다.
일부 구현예에서, 시제는 요법과 동일한 조성물, 예컨대 입양 세포 요법을 위한 세포로 순차적으로, 간헐적으로, 또는 동시에, 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시제는 세포, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR를 발현하는 세포의 투여 이전에, 투여와 동시에, 간헐적으로, 투여하는 동안, 투여 과정 중에, 또는 투여 이후에 투여된다. 일부 구현예에서, 이러한 시제로는 투여되는 세포, 예를 들어, 면역 세포, 예컨대 T 세포의 세포 팽창 및/또는 활성을 조절하는 시제를 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 시제로는 투여되는 세포, 예를 들어, 면역 세포, 예컨대 T 세포의 세포 팽창 및/또는 활성의 팽창 및/또는 증식을 축소 또는 감소시키는 시제를 포함한다.
일부 구현예에서, 시제는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일을 초과한 시점에 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 본 명세서에 기재된 시점에, 제공되는 방법에 따라, 및/또는 제공되는 제조 물품 또는 조성물에 따라 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 면역요법 및/또는 세포 요법의 개시 이후, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 일 이내, 예컨대 이전의 시점에 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 면역요법 및/또는 세포 요법의 투여 개시 이후 (약) 1 일, 2 일 또는 3 일 이내에 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 면역요법 및/또는 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법을 위한 세포, 또는 이의 개시와 동일한 조성물로 순차적으로, 간헐적으로, 또는 동시에 투여될 수 있다. 본 명세서에 제공된 임의의 방법의 일부 구현예에서, 시제는 세포 요법의 투여의 개시 이전에, 동시에, 동안 및/또는 이후, 및/또는 세포 요법의 과정 동안 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 T 세포 요법의 개시 이전 (약) 0 내지 96 시간, 0 내지 72 시간, 0 내지 48 시간, 0 내지 24 시간, 0 내지 12 시간 또는 0 내지 6 시간 또는 0 내지 2 시간에 투여되거나; 또는 시제는 T 세포 요법의 개시 이전 96 시간, 72 시간, 48 시간, 24 시간, 12 시간, 6 시간, 2 시간 또는 1 시간 이하에 투여된다. 일부 구현예에서, 방법은 세포 요법, 예를 들어, 입양 세포 요법을 투여하기 이전의 시점에 치료학적 유효량의 시제를 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 시제는 세포 요법을 위한 세포를 투여하기 약 24 시간 이하에 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 세포의 투여 또는 이의 개시 이전에 약 24, 22, 20, 18, 16, 14, 12, 10, 8, 6, 4 또는 2 시간 이하에 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 세포 요법 또는 이의 개시와 동시에 또는 거의 동시에, 예를 들어, 세포 요법의 개시와 약 1, 2, 3 또는 4 시간에 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시 이후 (약) 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간, 9 시간, 10 시간, 11 시간, 12 시간, 18 시간, 24 시간, 36 시간, 2 일, 3 일, 4 일, 5 일, 6 일, 7 일, 8 일, 9 일 또는 10 일 이상 경과 후 투여될 수 있다. 이러한 일부 구현예에서, 시제는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시 이후 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간, 9 시간, 10 시간, 11 시간, 12 시간, 18 시간, 24 시간, 36 시간, 2 일, 3 일, 4 일, 또는 5 일 이상 경과 전에 투여될 수 있다.
일부 양태에서, 시제는 세포 요법의 투여 이후 (약) 1 시간 내지 (약) 5 일 또는 (약) 4 시간 내지 (약) 5 일에, 예컨대 세포 요법 또는 이의 개시 이후 (약) 1 시간 내지 (약) 5 일, (약) 4 시간 내지 (약) 4 일, (약) 8 시간 내지 (약) 3 일, (약) 1 일 내지 (약) 3 일, (약) 2 일 내지 (약) 3 일, 또는 (약) 1 일 내지 (약) 2 일에 투여될 수 있다. 이러한 일부 경우에, 시제는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시 이후 (약) 1 일, (약) 2 일, 또는 (약) 3 일에 투여된다. 일부 예시에서, 대상체는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시 이후 3 일 이내, 2 일 이내 또는 1 일 이내에 시제로 치료된다. 일부 구현예에서, 시제는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시 이후 (약) 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간, 9 시간, 10 시간, 11 시간, 12 시간, 18 시간, 24 시간, 36 시간, 2 일, 3 일, 4 일, 또는 5 일 이상 경과 후 투여될 수 있다. 이러한 일부 구현예에서, 시제는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시 이후 (약) 1 시간, 2 시간, 3 시간, 4 시간, 5 시간, 6 시간, 7 시간, 8 시간, 9 시간, 10 시간, 11 시간, 12 시간, 18 시간, 24 시간, 36 시간, 2 일, 3 일, 4 일, 또는 5 일 이상 경과 전에 투여될 수 있다.
일부 경우에, 시제 또는 요법 또는 개입은 단독으로 투여되거나 또는 조성물 또는 제형의 일부, 예컨대 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물 또는 제형의 일부로서 투여된다. 이에 따라, 시제는 단독으로 또는 약제학적 조성물의 일부로서 임의의 다른 허용가능한 공지된 투여 경로 또는 본 명세서에 기재된 투여 경로에 의해 정맥 내로 또는 경구로 투여될 수 있다.
1. 세포 팽창의 증강제 또는 향상제
일부 구현예에서, 방법은 투여되는 세포, 예를 들어, 재조합 수용체 발현 세포의 팽창, 증식, 생존, 역가 및/또는 효능을 증강, 증대 또는 향상시킬 수 있는 약물 또는 시제와의 병용 투여, 예를 들어 동시 또는 순차적 투여를 포함하는 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 시제는 치료적 범위에서 피크 CAR+ T 세포 팽창을 달성하도록 투여된다. 일부 구현예에서, 투여되는 세포의 용량은 차선의 용량이며, 시제의 병용 투여는 치료적 범위에서 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 달성하도록 팽창을 증대 또는 증강시킨다. 일부 구현예에서, 방법은 세포 용량을 투여하고, 치료적 범위가 유지되거나 달성되도록 보장하기 위해 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 모니터링 하고, 보장되지 않는 경우, 치료적 용량을 증대 또는 증강시키기 위한 시제 또는 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 낮은 또는 제한된 세포 팽창, 예를 들어, 낮은 약동학적 파라미터 예컨대 낮은 최대 CAR+ T 세포 농도 (Cmax)에서, 종양 억제 효과는 제한될 수 있다.
일부 구현예에서, 시제는 세포, 예를 들어, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR를 발현하는 세포의 투여 이전에, 투여하는 동안, 투여 과정 중에, 또는 투여 이후에 투여된다. 일부 구현예에서, 이러한 시제로는 형질도입, 예를 들어, 재조합 수용체를 인코딩하는 형질도입 유전자를 특이적으로 조절함으로써 조작된 세포의 팽창, 증식, 생존, 역가 및/또는 효능을 특이적으로 증강, 증대 또는 향상시키는 시제를 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 시제로는 투여되는 세포, 예를 들어, 면역 세포, 예컨대 T 세포의 세포 팽창 및/또는 활성을 조절하는 시제를 포함한다.
일부 구현예에서, 투여되는 세포, 예를 들어, 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포는, 투여되는 세포의 팽창, 증식, 생존, 역가 및/또는 효능을 증강, 증대 또는 향상시키도록 변형된다. 일부 구현예에서, 투여되는 세포, 예를 들어, 재조합 수용체를 발현하도록 조작된 세포는 조작된 세포의 팽창, 증식, 생존, 역가 및/또는 효능이, 예컨대 시제를 투여함으로써, 조절 및/또는 제어될 수 있도록 변형된다. 일부 구현예에서, 시제는 조작된 세포의 생체 내 증식, 팽창 및/또는 생존을 억제하는 억제 인자의 효과를 최소화시킨다.
일부 구현예에서, 추가의 시제는 소분자, 펩타이드, 폴리펩타이드, 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항체 모방체, 압타머 또는 핵산 분자 (예를 들어 siRNA), 지질, 다당류 또는 임의의 이의 조합이다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 특정 인자, 분자, 수용체, 기능 및/또는 효소의 억제제 또는 활성화제이다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 특정 인자, 분자, 수용체, 기능 및/또는 효소의 작용제 또는 길항제이다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 하나 이상의 요인 및/또는 대사물질의 유사체 또는 유도체이다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 단백질 또는 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 세포, 예를 들어, 조작된 세포, 예컨대 투여되었던 동일한 조작된 세포 및/또는 상이한 조작된 세포의 추가의 용량이다.
일부 구현예에서, 시제는 형질도입 유전자(transgene)-특이적 팽창이 가능하다. 일부 구현예에서, 형질도입 유전자-특이적 팽창을 위한 예시적인 방법 또는 시제로는 내인성 항원 노출, 백신접종, 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및/또는 조절가능한 재조합 수용체를 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 형질도입 유전자-특이적 팽창 방법은 백신접종 방법을 포함한다. 일부 구현예에서, 시제는 펩타이드 백신 또는 세포-기반 백신, 예를 들어, 재조합 수용체에 의해 인식되는 특정 항원을 발현하도록 조작된 세포이다 (예를 들어, WO 2016/069647, WO 2011/066048, US 2016/0304624, 미국 특허 출원 9,476,028 및 Hailemichael and Overwijk, Int J Biochem Cell Biol. (2014) 53: 46-50 참조). 일부 구현예에서, 형질도입 유전자-특이적 팽창 방법은 항-이디오타입 항체를 투여하는 것을 포함한다. 항원-결합 단편을 비롯한 항-이디오타입 항체는, 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 이디오토프, 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR)와 같은 재조합 수용체의 항원-결합 도메인을 특이적으로 인식하고, 이에 특이적으로 표적화되고, 및/또는 이에 특이적으로 결합한다. 이디오토프는 항체의 가변 부분 내의 임의의 단일 항원 결정기 또는 에피토프이다. 일부 구현예에서, 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 작용제이고 및/또는 접합체를 비롯한 특정 항체 또는 상기 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한 재조합 수용체를 발현하는 세포를 자극하는 특이적 활성을 나타낸다 (예를 들어, U.S. Pat. Publication Nos. US 2016/0096902; US 2016/0068601; US 2014/0322183; US 2015/0175711; US 2015/283178; 미국 특허 9,102,760; Jena et al. PloS one (2013) 8(3):e57838; Long et al., Nature Medicine (2015) 21(6):581-590; Lee et al., The Lancet (2015) 385(9967):517-528; Zhao et al., PloS One (2014) 9(5):e96697; Leung et al., MAbs. (2015) 7(1):66-76 참조).
일부 구현예에서, 방법은, 예를 들어, 투여되는 세포, 예를 들어, 조작된 면역 세포의 증식, 팽창 및/또는 활성화의 음성 조절자를 억제함으로써, 조작된 세포의 팽창을 조절하는 것을 포함한다. 대상체의 특정 체내 환경에서, 재조합 수용체를 발현하는 투여되는 세포는 세포의 성장, 증식, 팽창 및/또는 생존을 억압 또는 억제하는 환경, 예를 들어 면역억제 환경에 처할 수 있다. 예를 들어, 면역억제 환경은 면역억제 사이토카인, 조절 조절제 및 공동-억제 수용체를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는, 예를 들어 억제 환경을 극복하여 투여된 세포의 팽창을 조절하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 추가의 시제로는 면역조절제, 면역 체크포인트 억제제, 대사경로 조절제, 아데노신 경로 또는 아데노신 수용체 길항제 또는 작용제 및 신호전달의 조절제, 예를 들어, 키나제 억제제를 포함한다.
일부 구현예에서, 추가의 시제는 면역조절제, 예컨대 면역 체크포인트 억제제이다. 일부 예시에서, 추가의 시제는 투여되는 세포의 팽창 및/또는 증식을 증가, 향상 또는 증강시켜, 면역 체크포인트 단백질 (즉, 면역 체크포인트 억제제)를 차단함으로써 면역 반응을 증가, 향상 또는 증강시킨다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 조작된 세포, 예를 들어, 재조합 수용체-발현 세포의 활성을 향상시키는 시제이고, 면역 억제 분자 또는 면역 체크포인트 분자를 억제하는 분자이다. 면역 억제 분자의 예로는 PD-1, PD-L1, CTLA4, TEVI3, CEACAM (예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5), LAG3, VISTA, BTLA, TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4 및 TGFβ을 포함한다. 일부 구현예에서, 면역 체크포인트 억제제는 면역 체크포인트 단백질에 대한 항체, 예컨대 세포독성 T-림프구 항원 4 (CTLA4 또는 CD152), 프로그래밍된 세포 사멸 단백질 1 (PD-1), 또는 프로그래밍된 세포 사멸 단백질 1 리간드 1 (PD-L1)에 대한 항체일 수 있다 (예를 들어 [Pardoll, Nat Rev Cancer. 2012 Mar. 22; 12(4):252-264] 참조).
면역 체크포인트 억제제는 통계적으로 유의한 방식으로 면역계의 억제 경로를 차단 또는 억제하는 임의의 시제를 포함한다. 이러한 억제제는 소분자 억제제를 포함할 수 있거나, 또는 면역 체크포인트 수용체, 리간드 및/또는 수용체-리간드 상호 작용에 결합하여 차단 또는 억제하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 수용체의 조절, 향상 및/또는 자극은 면역 체크포인트 경로 성분을 극복할 수 있다. 차단, 억제, 조절, 향상 및/또는 자극에 대해 표적화될 수 있는 예시적인 면역 체크포인트 분자로는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: PD-1 (CD279), PD-L1 (CD274, B7-H1), PDL2 (CD273, B7-DC), CTLA-4, LAG-3 (CD223), TIM-3, 4-1BB (CD137), 4-1BBL (CD137L), GITR (TNFRSF18, AITR), CD40, OX40 (CD134, TNFRSF4), CXCR2, 종양 관련 항원 (TAA), B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, B7H3, B7H4, VISTA, KIR, 2B4 (CD2 분자 패밀리에 속하며, 모든 NK, γδ및 기억 CD8+ (αβT 세포에서 발현), CD160 (또한 BY55로도 지칭), CGEN-15049, CEACAM (예를 들어, CEACAM-1, CEACAM-3 및/또는 CEACAM-5), TIGIT, LAIR1, CD160, 2B4, CD80, CD86, B7-H3 (CD276), B7-H4 (VTCN1), HVEM (TNFRSF14 또는 CD270), KIR, A2aR, MHC 클래스 I, MHC 클래스 II, GAL9, 아데노신, 및 형질전환 성장 인자 수용체 (TGFR; 예를 들어, TGFR 베타). 면역 체크포인트 억제제는 상기 분자 중 임의의 하나 이상의 활성에 결합하고 차단하거나 억제 및/또는 향상 또는 자극하는 항체, 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 다른 결합 단백질을 포함한다.
예시적인 면역 체크포인트 억제제로는 트레멜리무맙 (CTLA-4 차단 항체, 또한 티실리무맙으로도 공지, CP-675,206), 항-OX40, PD-L1 단일클론 항체 (항-B7-H1; MEDI4736), MK-3475 (PD-1 차단제), 니볼루맙 (항-PD-1 항체), CT-011 (항-PD-1 항체), BY55 단일클론 항체, AMP224 (항-PD-L1 항체), BMS-936559 (항-PD-L1 항체), MPLDL3280A (항-PD-L1 항체), MSB0010718C (항-PD-L1 항체) 및 이필리무맙 (항-CTLA-4 항체, 또한 Yervoy®MDX-010 및 MDX-101으로도 공지)을 포함한다. 예시적인 면역조절 항체로는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: 다클리주맙 (Zenapax), 베바시주맙 (Avastin ®), 바실릭시맙, 이필리무맙, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, MPDL3280A, 피딜리주맙 (CT-011), MK-3475, BMS-936559, MPDL3280A (Atezolizumab), 트레멜리무맙, IMP321, BMS-986016, LAG525, 우렐루맙, PF-05082566, TRX518, MK-4166, 다세투주맙 (SGN-40), 루카투무밥 (HCD122), SEA-CD40, CP-870, CP-893, MEDI6469, MEDI6383, MOXR0916, AMP-224, MSB0010718C (Avelumab), MEDI4736, PDR001, rHIgM12B7, 울로쿠플루맙, BKT140, 바를리루맙 (CDX-1127), ARGX-110, MGA271, 리릴루맙 (BMS-986015, IPH2101), IPH2201, ARGX-115, 에막투주맙, CC-90002 및 MNRP1685A 또는 이의 항체-결합 단편. 다른 예시적인 면역조절제로는, 예를 들어, 오파투무맙 (Roche®페그필그라스팀 (Neulasta®레날리도마이드 (CC-5013, Revlimid®); 탈리도마이드 (Thalomid®액티미드 (CC4047); 및 IRX-2 (인터루킨 1, 인터루킨 2, 및 인터페론 감마를 포함하는 인간 사이토카인의 혼합물, CAS 951209-71-5, IRX Therapeutics)을 포함한다.
일부 구현예에서, 시제는 조절 T 세포 (Treg) 집단을 감소시키는 분자를 포함한다. Treg 세포의 수를 감소 (예를 들어, 고갈)시키는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 CD25 고갈, 사이클로포스파미드 투여, 및 글루코코르티코이드-유도된 TNFR 패밀리 관련 유전자 (GITR) 기능의 조절을 포함한다. GITR은 면역계를 강화시키는 활성화된 T 세포에서 상향 조절되는 TNFR 수퍼 패밀리의 구성원이다. 성분채집 이전에 또는 조작된 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포의 투여 이전에 대상체에서의 Treg 세포 개수를 감소시키면, 종양 미세환경에서 원하지 않는 면역 세포 (예를 들어, Tregs)의 개수를 감소시키고 대상체의 재발 위험을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 시제는 GITR를 표적화하는 및/또는 GITR 기능을 조절하는 분자, 예컨대 조절 T 세포 (Tregs)를 고갈시키는 GITR 작용제 및/또는 GITR 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 시제는 사이클로포스파미드를 포함한다. 일부 구현예에서, GITR 결합 분자 및/또는 GITR 기능을 조절하는 분자 (예를 들어, GITR 작용제 및/또는 Treg 고갈 GITR 항체)는 조작된 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포 이전에 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, GITR 작용제는 세포의 성분채집 이전에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드는 조작된 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포의 투여 (예를 들어, 주입 또는 재주입) 이전에 또는 세포의 성분채집술 이전에 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 사이클로포스파미드 및 항-GITR 항체는 조작된 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포의 투여 (예를 들어, 주입 또는 재주입) 이전에 또는 세포의 성분채집술 이전에 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 GITR 작용제이다. 예시적인 GITR 작용제로는, 예를 들어, GITR 융합 단백질 및 항-GITR 항체 (예를 들어, 이가 항-GITR 항체) 예컨대, 예를 들어, 미국 특허 6,111,090, 유럽 특허 090505B 1, 미국 특허 8,586,023, PCT 공개번호 WO 2010/003118 및 2011/090754에 기재된 GITR 융합 단백질, 또는 예를 들어, 미국 특허 7,025,962, 유럽 특허 1947183B 1, 미국 특허 7,812,135, 미국 특허 8,388,967, 미국 특허 8,591,886, 유럽 특허 EP 1866339, PCT 공개번호 WO 2011/028683, PCT 공개번호 WO 2013/039954, PCT 공개번호 WO2005/007190, PCT 공개번호 WO 2007/133822, PCT 공개번호 WO2005/055808, PCT 공개번호 WO 99/40196, PCT 공개번호 WO 2001/03720, PCT 공개번호 WO99/20758, PCT 공개번호 WO2006/083289, PCT 공개번호 WO 2005/115451, 미국 특허 7,618,632, 및 PCT 공개번호 WO 2011/051726에 기재된 항-GITR 항체를 포함한다. 예시적인 항-GITR 항체는 TRX518이다.
일부 구현예에서, 시제는 탈리도마이드의 구조적 또는 기능적 유사체 또는 유도체 및/또는 E3 유비퀴틴 리가제의 억제제이다. 일부 구현예에서, 면역조절제는 세렐론 (CRBN)에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역조절제는 CRBN E3 유비퀴틴-리가제 복합체에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역조절제는 CRBN 및 CRBN E3 유비퀴틴-리가제 복합체에 결합한다. 일부 구현예에서, 면역조절제는 CRBN의 단백질 또는 유전자 발현을 상향 조절한다. 일부 양태에서, CRBN는 CRL4CRBN E3 유비퀴틴 리가제에 대한 기질 어댑터이며, 효소의 특이성을 조절한다. 일부 구현예에서, CRB 또는 CRBN E3 유비퀴틴 리가제 복합체에 대한 결합은 E3 유비퀴틴 리가제 활성을 억제한다. 일부 구현예에서, 면역조절제는 KZF1 (Ikaros) 및 IKZF3 (Aiolos)의 유비키틴화를 유도하고 및/또는 IKZF1 (Ikaros) 및 IKZF3 (Aiolos)의 분해를 유도한다. 일부 구현예에서, 면역조절제는 CRL4CRBN E3 유비퀴틴 리가제에 의한 카제인 키나제 1A1 (CK1α)의 유비퀴틴화를 유도한다. 일부 구현예에서, CK1α의 유비퀴틴화는 CK1α 분해를 초래한다.
일부 구현예에서, 시제는 Ikaros (IKZF1) 전사 인자의 억제제이다. 일부 구현예에서, 시제는 Ikaros의 유비퀴틴화를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 시제는 Ikaros의 분해를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 시제는 Ikaros의 단백질 또는 유전자 발현을 하향 조절한다. 일부 구현예에서, 시제의 투여는 Ikaros 단백질 수준의 감소를 야기한다.
일부 구현예에서, 시제는 Aiolos (IKZF3) 전사 인자의 억제제이다. 일부 구현예에서, 시제는 Aiolos의 유비퀴틴화를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 시제는 Aiolos의 분해를 향상시킨다. 일부 구현예에서, 시제는 Aiolos의 단백질 또는 유전자 발현을 하향 조절한다. 일부 구현예에서, 시제의 투여는 Aiolos 단백질 수준의 감소를 야기한다.
일부 구현예에서, 시제는 탈리도마이드 (2-(2,6-다이옥소디페리딘-3-일)-1H-아이소인돌- 1,3(2H)-다이온) 또는 탈리도마이드의 유사체 또는 유도체이다. 특정 구체예에서, 탈리도마이드 유도체는 유사한 생물학적 활성을 가지는 탈리도마이드의 구조적 변이체를 포함한다. 예시적인 탈리도마이드 유도체로는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: 레날리도마이드 (REVLIMMUNOMODULATORY COMPOUND™Celgene Corporation), 포말리도마이드 (또한 ACTIMMUNOMODULATORY COMPOUND™또는 POMALYST™(Celgene Corporation)로도 공지), CC-1088, CDC-501, 및 CDC- 801, 및 미국 특허 5,712,291; 7,320,991; 및 8,716,315; 미국 특허 출원 2016/0313300; 및 PCT 공개번호 WO 2002/068414 및 WO 2008/154252에 개시된 화합물.
일부 구현예에서, 시제는 미국 특허 5,635,517에 기재된 바와 같이, 벤조산 고리 내 아미노로 치환된 1-옥소- 및 1,3 다이옥소-2-(2,6-다이옥소피페리딘-3-일) 아이소인돌린이며, 상기 문헌은 본 명세서에 참조 문헌으로 포함된다.
일부 구현예에서, 시제는 미국 특허 7,091,353, 미국 특허 공개번호 2003/0045552, 및 국제 출원 번호PCT/USOI/50401 (국제 공개번호 WO02/059106)에 개시된 아이소인돌-면역조절 화합물의 클래스에 속하는 화합물이며, 상기 문헌 각각은 본 명세서에 참조 문헌으로 포함된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 시제는 [2-(2,6-다이옥소-피페리딘-3-일)-1,3-다이옥소-2,3-다이하이드로-1H-아이소인돌-4-일메틸]-아마이드; (2-(2,6-다이옥소-피페리딘-3-일)-1,3-다이옥소-2,3-다이하이드로-1H-아이소인돌-4-일메틸)-카밤산 tert-뷰틸 에스터; 4-(아미노메틸)-2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-아이소인돌린-1,3-다이온; N-(2-(2,6-다이옥소-피페리딘-3-일)-1,3-다이옥소-2,3-다이하이드로-1H-아이소인돌-4-일메틸)-아세트아마이드; N-{(2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜)-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일)메틸}사이클로프로필-카복스아마이드; 2-클로로-N-{(2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일)메틸}아세트아마이드; N-(2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일)-3-피리딜카복스아마이드; 3-{1-옥소-4-(벤질아미노)아이소인돌린-2-일}피페리딘-2,6-다이온; 2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-4-(벤질아미노)아이소인돌린-1,3-다이온; N-{(2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일)메틸}프로판아마이드; N-{(2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일)메틸}-3-피리딜카복스아마이드; N-{(2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일)메틸}헵탄아마이드; N-{(2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일)메틸}-2-furyl카복스아마이드; {N-(2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일)카바모일}메틸 아세테이트; N-(2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일)펜탄아마이드; N-(2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일)-2-싸이엔일카복스아마이드; N-{[2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일]메틸}(뷰틸아미노)카복스아마이드; N-{[2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일]메틸}(옥틸아미노)카복스아마이드; 또는 N-{[2-(2,6-다이옥소(3-피페리딜))-1,3-다이옥소아이소인돌린-4-일]메틸}(벤질아미노)카복스아마이드이다.
일부 구현예에서, 시제는 레날리도마이드, 포말리도마이드, 아바도마이드, 레날리도마이드의 입체 이성질체, 포말리도마이드, 아바도미드 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정, 클라트레이트 또는 다형체이다. 일부 실시 양태에서, 면역조절 화합물은 레날리도마이드, 레날리도마이드의 입체 이성질체 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염, 용매화물, 수화물, 공-결정, 클라트레이트 또는 다형체이다. 일부 구현예에서, 면역조절 화합물은 레날리도마이드, 또는 ((RS)-3-(4-아미노-1-옥소-1,3-다이하이드로-2H-아이소인돌-2-일)피페리딘-2,6-다이온)이다.
일부 구현예에서, 방법은 세포 재조합 수용체를 발현하는 세포를, 억제 세포 표면 수용체, 예를 들어, 형질전환 성장 인자 베타 수용체 (TGFβ을 억제하는 시제와 접촉시키는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여되는 세포, 예를 들어, 재조합 수용체 발현 세포는 이의 이펙터 기능을 억제할 수 있는 면역억제 사이토카인이 효과에 저항하도록 조작될 수 있다 (예를 들어, Foster et al., J Immunother. (2008) 31:500-505; Bollard et al., Molecular Therapy. (2012) 20:S22; Bendle et al., J. Immunol. (2013) 191(6):3232-3239 참조). 일부 구현예에서, 추가의 시제는 항-TGFβ항체 또는 항-TGFβ항체이다 (예를 들어, WO 2011/109789 참조).
일부 구현예에서, 추가의 시제는 면역억제 인자, 예를 들어, 아데노신의 대사, 신호 전달 및/또는 수송을 조절한다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 세포 외 아데노신 또는 아데노신 수용체의 억제제, 또는 세포 외 아데노신 수준의 축소 또는 감소를 야기하는 시제, 예컨대 세포 외 아데노신의 형성 방지, 분해, 불활성화 유도 및/또는 감소시키는 시제이다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 아데노신 수용체 길항제 예컨대 A2a, A2b 및/또는 A3 수용체이다. 일부 구현예에서, 길항제는 아데노신 수용체에 결합하지만 G1 단백질 의존성 세포 내 경로를 유발하지 않는 펩타이드 또는 모방펩타이드(pepidomimetic)이다. 예시적인 아데노신 수용체 길항제는 미국 특허 5,565,566; 5,545,627, 5,981,524; 5,861,405; 6,066,642; 6,326,390; 5,670,501; 6,117,998; 6,232,297; 5,786,360; 5,424,297; 6,313,131, 5,504,090; 및 6,322,771; 및 Jacobson and Gao, Nat Rev Drug Discov. (2006) 5(3): 247-264에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 시제는 A2 수용체 (A2R) 길항제, 예컨대 A2a 길항제이다. 예시적인 A2R 길항제로는 KW6002 (istradefyline), SCH58261, 카페인, 파라잔틴, 3,7-다이메틸-1-프로파길잔틴 (DMPX), 8-(m-클로로스티릴) 카페인(CSC), MSX-2, MSX-3, MSX-4, CGS-15943, ZM-241385, SCH-442416, 프렐라데넌트(preladenant), 비파데넌트(vipadenant) (BII014), V2006, ST-1535, SYN-115, PSB-1115, ZM241365, FSPTP, 및 A2R 발현 표적화 억제 핵산, 예를 들어, siRNA 또는 shRNA, 또는 A2R를 표적화하는 임의의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 시제는 A2R 길항제, 예를 들어, Ohta et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2006) 103:13132-13137; Jin et al., Cancer Res. (2010) 70(6):2245-2255; Leone et al., Computational and Structural Biotechnology Journal (2015) 13:265-272; Beavis et al., Proc Natl Acad Sci U S A (2013) 110:14711-14716; 및 Pinna, A., Expert Opin Investig Drugs (2009) 18:1619-1631; Sitkovsky et al., Cancer Immunol Res (2014) 2(7):598-605; US 8,080,554; US 8,716,301; US 20140056922; WO2008/147482; US 8,883,500; US 20140377240; WO02/055083; US 7,141,575; US 7,405,219; US 8,883,500; US 8,450,329 및 US 8,987,279)에 기재된 A2R 길항제이다.
일부 구현예에서, 방법은 면역자극성인 추가의 시제를 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 일반적으로 면역 세포의 증식, 팽창, 생존, 역가 및/또는 효능을 촉진할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 투여되는 세포, 예를 들어, 재조합 수용체-발현 세포를 특이적으로 촉진할 수 있다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 사이토카인이다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 리간드이다.
일부 구현예에서, 추가의 시제는 면역자극 리간드, 예를 들어, CD40L이다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 사이토카인, 예를 들어, IL-2, IL-3, IL-6, IL-11, IL-7, IL-12, IL-15, IL-21, 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자 (GM-CSF), 알파, 베타 또는 감마 인터페론 (IFN) 및 에리트로포이에틴 (EPO)이다. 일부 구현예에서, 시제는 사이토카인이다. 일부 구현예에서, 면역조절제는 사이토카인 또는 종양 미세환경에서 사이토카인의 증가된 발현을 유도하는 시제이다. 사이토카인은 T 세포 팽창, 분화, 생존 및 항상성과 관련된 중요한 기능을 가진다. 본 명세서에 기재된 세포 및/또는 조성물을 투여받는 대상체에게 투여될 수 있는 사이토카인 IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15, IL-18, 및 IL-21 중 하나 이상을 포함한다. 일부 구현예에서, 투여되는 사이토카인은 IL-7, IL-15, 또는 IL-21, 또는 이의 조합이다. 일부 구현예에서, 조작된 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포의 투여에 대해 차선의 반응을 가지는 대상체에 사이토카인을 투여하면 투여되는 세포, 예를 들어, CAR-발현 세포의 역가 및/또는 효능 및/또는 항-종양 활성을 개선한다.
일부 구현예에서, 시제는 저산소증 유도성 인자 1 알파 (HIF-1α) 신호전달의 억제제이다. 예시적인 HIF-1α의 억제제는 디곡신, 아크리플라빈, 시르투인-7 및 가네테스핍를 포함한다.
일부 구현예에서, 시제는 단백질 타이로신 포스파타제 억제제, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 단백질 타이로신 포스파타제 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 단백질 타이로신 포스파타제 억제제는 SHP-1 억제제, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 SHP-1 억제제, 예를 들어, 소듐 스티보글루코네이트이다. 일부 구현예에서, 단백질 타이로신 포스파타제 억제제는 SHP-2 억제제, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 SHP-2 억제제이다.
일부 양태에서, 방법은 대상체의 혈청, 혈장, 혈액 또는 조직에서, 예를 들어, 종양 샘플에서, DNA의 마이크로그램 당 핵산 인코딩 재조합 수용체, 예를 들어, CAR의 카피에서, 예를 들어, 적어도 2 배, 적어도 4 배, 적어도 10 배, 또는 적어도 20 배 증가를 초래한다. (이전 섹션에서, 조절 섹션 방법으로 이동)
일부 양태에서, 상기 방법은, 예를 들어, 유세포 분석법에 의해 측정된 바와 같이, 투여되는 세포의 생체 내 증식을 높인다. 일부 양태에서, 세포의 높은 피크 비율이 검출된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 대상체의 혈액 또는 질병-부위 또는 이의 백혈구 세포 분획, 예를 들어, PBMC 분획 또는 T 세포 분획에서, T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포의 투여 이후 피크 또는 최대 수준 또는 농도에서, 세포의 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%는 재조합 수용체, 예를 들어, CAR를 발현한다.
일부 구현예에서, 방법은 최대 농도, 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 다른 체액 또는 장기 또는 조직에서, DNA의 마이크로그램 당 적어도 100, 500, 1000, 1500, 2000, 5000, 10,000 또는 15,000 카피의 또는 수용체, 예를 들어, CAR를 인코딩하는 핵산을 야기하거나, 또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 전체 개수 당, 단핵 세포의 전체 개수 당, T 세포의 전체 개수 당, 또는 대상체의 혈액 또는 혈청 또는 다른 체액 또는 장기 또는 조직의 마이크로리터의 의 전체 개수 당 적어도 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 또는 0.9 수용체-발현, 예를 들어, CAR-발현 세포를 야기한다. 일부 구현예에서, 수용체를 발현하는 세포는 대상체의 혈액 내 전체 PBMC의 적어도 10, 20, 30, 40, 50, 또는 60%로서, 및/또는 T 세포, 예를 들어, CAR-발현 T 세포 투여 이후 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 24, 36, 48, 또는 52 주 동안 또는 이러한 투여 이후 1, 2, 3, 4, 또는 5년 이상 동안 이러한 수준으로 검출된다.
2. 세포 팽창 감소제
일부 구현예에서, 제공되는 방법 및 제조 물품은 T 세포 팽창, 증식, 및/또는 활성을 조절할 수 있는, 예를 들어, 증가 또는 감소시킬 수 있는 하나 이상의 시제 또는 치료제와 함께 사용될 수 있거나, 이를 수반 또는 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 시제는 CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소, 및/또는 약화시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 임계값 초과의 CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식, 또는 염증성 마커와 같은 특정 바이오마커의 높은 발현은, 감소된 반응 및/또는 감소된 지속적 반응과 연관이 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체에서 투여되는 세포가 매우 높은 또는 과도한 팽창을 가지는 경우, 또는 대상체가 매우 높은 팽창 또는 과도한 팽창과 연관된 바이오마커를 발현하는 것으로 결정되는 경우, 대상체는 반응 및/또는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 매우 높은 팽창 또는 과도한 팽창은 또한 높은 종양 부담 및 염증성 사이토카인 제조와 연관이 있다. 일부 구현예에서, CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소 및/또는 약화시킬 수 있는 시제가 이러한 대상체에게 투여될 수 있다.
일부 상황에서, 일부 맥락에서, 투여되는 세포 요법, 예를 들어, CAR+ T 세포 요법의 최적의 효능은, 투여되는 세포가 활성화되고, 팽창하여, 다양한 이펙터 기능을 발휘하고, 장기간을 포함하여, 특정 표현형 상태 (예컨대 수명이 긴 기억, 덜 분화된, 및 이펙터 상태)로 재프로그래밍에 분화, 전이 또는 개재하고, 질병의 국소 미세환경에서 면역억제 조건을 회피 또는 감소시켜, 표적 리간드 또는 항원에 대한 제거 및 재노출 이후 효과적이고 강력한 리콜 반응을 제공하고, 피로, 아너지(anergy), 말초 내성, 말단 분화, 및/또는 억제 상태로의 분화를 피하거나 감소시키는 능력에 의존할 수 있다. 일부 양태에서, 투여되는 T 세포의 과도한 또는 매우 높은 팽창 또는 증식은 피로, 아너지, 말초 내성, 말단 분화, 및/또는 억제 상태로의 분화를 야기할 수 있다. 일부 양태에서, CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소 및/또는 약화시킬 수 있는 시제는 이러한 소진 또는 분화를 예방 또는 축소할 수 있다.
일부 구현예에서, 시제의 투여는 CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소, 및/또는 약화시킬 수 있고, 예컨대 스테로이드는, 투여되는 CAR+ T 세포의 팽창을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 시제의 투여는 파라미터의 변화를 야기할 수 있으며, 예를 들어, SPD의 부피 측정치, 또는 염증성 마커, 예를 들어, LDH의 발현의 감소를 야기할 수 있다.
일부 구현예에서, CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소, 및/또는 약화시킬 수 있는 시제는 스테로이드이고, 사이토카인 수용체, 예컨대 IL-6 수용체, CD122 수용체 (IL-2R베타 수용체), 또는 CCR2의 길항제 또는 억제제이고, 또는 사이토카인, 예컨대 IL-6, MCP-1, IL-10, IFN-γIL-8, 또는 IL-18의 억제제이다. 일부 구현예에서, 시제는 사이토카인 수용체 및/또는 사이토카인, 예컨대 TGF-β의 작용제이다. 일부 구현예에서, 시제, 예를 들어, 작용제, 길항제 또는 억제제는 항체 또는 항원-결합 단편, 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소, 및/또는 약화시킬 수 있는 시제는 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드이다. 코르티코스테로이드는 일반적으로 글루코코르티코이드 및 미네랄코르티코이드를 포함한다.
임의의 코르티코스테로이드, 예를 들어, 글루코코르티코이드는 본 명세서에 제공된 방법에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 글루코코르티코이드는 합성 및 비-합성 글루코코르티코이드를 포함한다. 예시적인 글루코코르티코이드로는 다음을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다: 알클로메타손, 알게스톤, 베클로메타손 (예를 들어 베클로메타손 디프로피오네이트), 베타메타손 (예를 들어 베타메타손 17-발레레이트, 베타메타손 소듐 아세테이트, 베타메타손 소듐 포스페이트, 베타메타손 발레레이트), 부데소니드, 클로베타솔 (예를 들어 클로베타솔 프로피오네이트), 클로베타손, 클로코르톨론 (예를 들어 클로코르톨론 피발레이트), 클로프레드놀, 코르티코스테론, 코르티손 및 하이드로코르티손 (예를 들어 하이드로코르티손 아세테이트), 코르티바졸, 디플라자코트, 데소니드, 덱소시메타손, 덱사메타손 (예를 들어 덱사메타손 21-포스페이트, 덱사메타손 아세테이트, 덱사메타손 소듐 포스페이트), 디플로라손 (예를 들어 디플로라손 디아세테이트), 디프루코르톨론, 디플루프레드네이트, 에녹솔론, 플루아자코트, 플루클로로니드, 플루드로코르티손 (예를 들어, 플루드로코르티손 아세테이트), 플루메타손 (예를 들어 플루메타손 피발레이트), 플루니솔리드, 플루오시놀론 (예를 들어 플루오시놀론 아세토나이드), 플루오시오니드, 플루오코르틴, 플루오코르톨론, 플루오로메톨론 (예를 들어 플루오로메톨론 아세테이트), 플루페롤론 (예를 들어, 플루페롤론 아세테이트), 플루프리니덴, 플루프레드니솔론, 플루란데레놀리드, 플루티카손 (예를 들어 플루티카손 프로피오네이트), 포모코르탈, 할시노니드, 할로베타솔, 할로메타손, 할로프레돈, 하이드로코르타메이트, 하이드로코르티손 (예를 들어 하이드로코르티손 21-부티레이트, 하이드로코르티손 아세포네이트, 하이드로코르티손 아세테이트, 하이드로코르티손 부테프레이트, 하이드로코르티손 부티레이트, 하이드로코르티손 시피오네이트, 하이드로코르티손 헤미석시네이트, 하이드로코르티손 프로부테이트, 하이드로코르티손 소듐 포스페이트, 하이드로코르티손 소듐 석시네이트, 하이드로코르티손 발레레이트), 로테프레드놀 에타보네이트, 마지프레돈, 메드리손, 메프레드니손, 메틸프레드니솔론 (메틸프레드니솔론 아세포네이트, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 메틸프레드니솔론 헤미석시네이트, 메틸프레드니솔론 소듐 석시네이트), 모메타손 (예를 들어, 모메타손 푸로에이트), 파라메타손 (예를 들어, 파라메타손 아세테이트), 프레디카르베이트, 프레드니솔론 (예를 들어 프레드니솔론 25-디에틸아미노아세테이트, 프레드니솔론 소듐 포스페이트, 프레드니솔론 21-헤미석시네이트, 프레드니솔론 아세테이트; 프레드니솔론 파르네실레이트, 프레드니솔론 헤미석시네이트, 프레드니솔론-21 (베타-D-글루쿠로니드), 프레드니솔론 메타설포벤조에이트, 프레드니솔론 스티글레이트, 프레드니솔론 테부테이트, 프레드니솔론 테트라하이드로프탈레이트), 프레드니손, 프레드니발, 프레드닐리덴, 리멕솔론, 틱소코톨, 트리암시놀론 (예를 들어 트리암시놀론 아세토나이드, 트리암시놀론 베네토니드, 트리암시놀론 헥사아세토나이드, 트리암시놀론 아세토나이드 21-팔미테이트, 트리암시놀론 디아세테이트). 이러한 글루코코르티코이드 및 이의 염은 예를 들어, [Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, ed., Mack Pub. Co., Easton, Pa. (16th ed. 1980)]에서 상세히 논의된다.
일부 구현예에서, 스테로이드는 면역요법 및/또는 세포 요법, 예컨대 본 명세서에 기재된 조작된 세포 조성물을 가지는 세포 요법의 투여 이전에, 이와 동시에 및/또는 투여 이후에 투여된다. 일부 구현예에서, 스테로이드는 면역요법 및/또는 세포 요법, 또는 제1 투여 또는 이의 용량 투여 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후에 투여된다. 일부 구현예에서, 스테로이드는 면역요법 및/또는 세포 요법, 또는 제1 투여 또는 이의 용량 투여 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후 (약) 12, 18, 24, 36 또는 48 시간, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 주 이상 이내에 투여된다. 일부 구현예에서, 스테로이드는 면역요법 및/또는 세포 요법, 또는 제1 투여 또는 이의 용량 투여 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후 (약) 12, 24, 36 또는 48 시간 이내, 또는 이내 (약) 2, 3, 또는 4 일 이내에 투여된다.
일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드는, 일정 기간에 걸쳐 다중 용량으로 투여된다. 일부 양태에서, 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드는, (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상, (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 주 이상의 일정 기간에 걸쳐, 또는 (약) 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 이내로 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드는, (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40 일 이상의 일정 기간에 걸쳐, 또는 (약) 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 이내로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드는, 약 6, 12, 18, 24 시간 이상, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 주 이상의 전체 기간에 걸쳐, 또는 (약) 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 이내로 다중 또는 반복 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드는 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36, 48 시간 마다, 또는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 마다, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 주 이상 마다, 또는 (약) 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 이내로 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 스테로이드, 예를 들어, 글루코코르티코이드는 (약) 1 일 이상의 기간에 걸쳐, 예컨대 2 일에 걸쳐, 3 일에 걸쳐, 또는 4 일 이상에 걸쳐, 다중 또는 반복 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드는, 6, 12, 18, 24 시간 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 일 이상의 전체 기간에 걸쳐, 또는 (약) 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 이내로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 코르티코스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1 일 3회 또는 4회 이상 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 코르티코스테로이드는 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36, 48 시간 이상 마다, 또는 (약) 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 이내로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 스테로이드는 덱사메타손이고, 덱사메타손은 일정 기간에 걸쳐 다중 용량으로 투여된다. 일부 양태에서, 덱사메타손은 (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상, (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 주 이상의 일정 기간에 걸쳐, 또는 (약) 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 이내로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은, 약 6, 12, 18, 24 시간 이상, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 주 이상의 전체 기간에 걸쳐, 또는 (약) 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 이내로 다중 또는 반복 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 매일, 최대 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40 일 이상 동안, 또는 (약) 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 이내로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은 면역요법 및/또는 세포 요법의 개시 이후 먼저 투여되고, 이어서 일정 기간에 걸쳐 다중 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손의 초기 투여는, 면역요법 및/또는 세포 요법, 또는 제1 투여 또는 이의 용량 투여 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후 (약) 12, 18, 24, 36 또는 48 시간, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 주 이상 이내이다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은 면역요법 및/또는 세포 요법, 또는 제1 투여 또는 이의 용량 투여 이후, 또는 상기 임의의 것의 개시 이후 (약) 12, 24, 36 또는 48 시간 이내, 또는 이내 (약) 2, 3, 또는 4 일 이내에 투여된다. 스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손의 투여는, 순차적으로 (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상, (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 주 이상의 일정 기간에 걸쳐, 또는 (약) 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 이내로 투여된다. 예를 들어, 스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은 세포 요법의 초기 투여 이후 (약) 12, 24, 36 또는 48 시간 이내에, 또는 (약) 2, 3, 또는 4 일 이내에 시작하여 투여되거나, 세포 요법의 초기 투여 이후 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 주 이상 까지 다중 또는 반복 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은 투여 기간 동안 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상, 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은 세포 요법의 초기 투여 이후 1, 2, 3, 4, 또는 5 일에 시작하고, 세포 요법의 초기 투여 이후 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 또는 2, 3 또는 4 주에 종료하도록 투여될 수 있다.
일부 예시에서, 글루코코르티코이드는 코르티손, 덱사메타손, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 및 프레드니손으로부터 선택된다. 특정 예시에서, 글루코코르티코이드는 덱사메타손이다.
일부 구현예에서, 시제는 코르티코스테로이드이며, CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소 및/또는 약화시키는데 치료적으로 효과적인 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 개선 또는 성공적인 치료에 대한 지표로는 약동학적 파라미터, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 임의의 파라미터, 예컨대 피크 CAR+ T 세포 농도 및/또는 AUC의 결정을 포함한다.
일부 양태에서, 코르티코스테로이드는 치료적으로 효과적인 용량으로 제공된다. 치료적으로 효과적인 농도는 공지된 시험관 내 또는 생체 내 (예를 들어, 동물 모델) 시스템에서 시험함으로써 경험적으로 결정될 수 있다. 또한 동물 모델을 사용하여, 최적의 복용량 범위를 식별할 수 있다. 실험적으로 결정될 수 있는 정확한 복용량은 특정 치료 제제, 처방 및 투여 스케줄, 투여 경로 및 질병의 심각성에 따라 달라질 수 있다.
코르티코스테로이드는 CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소 및/또는 약화시키는데 효과적인 임의의 양으로 투여될 수 있다. 코르티코스테로이드, 예를 들어, 글루코코르티코이드는, 예를 들어, 70 kg의 성인 인간 대상체에게 용량 당 (약) 0.1 내지 (약) 100 mg, (약) 0.1 내지 (약) 80 mg, (약) 0.1 내지 (약) 60 mg, (약) 0.1 내지 (약) 40 mg, (약) 0.1 내지 (약) 30 mg, (약) 0.1 내지 (약) 20 mg, (약) 0.1 내지 (약) 15 mg, (약) 0.1 내지 (약) 10 mg, (약) 0.1 내지 (약) 5 mg, (약) 0.2 내지 (약) 40 mg, (약) 0.2 내지 (약) 30 mg, (약) 0.2 내지 (약) 20 mg, (약) 0.2 내지 (약) 15 mg, (약) 0.2 내지 (약) 10 mg, (약) 0.2 내지 (약) 5 mg, (약) 0.4 내지 (약) 40 mg, (약) 0.4 내지 (약) 30 mg, (약) 0.4 내지 (약) 20 mg, (약) 0.4 내지 (약) 15 mg, (약) 0.4 내지 (약) 10 mg, (약) 0.4 내지 (약) 5 mg, (약) 0.4 내지 (약) 4 mg, (약) 1 내지 (약) 20 mg, (약) 1 내지 (약) 15 mg 또는 1 내지 (약) 10 mg의 양으로 투여될 수 있다. 일반적으로, 코르티코스테로이드, 예컨대 글루코코르티코이드는 평균 성인 인간 대상체에게, 용량 당 (약) 0.4 내지 (약) 20 mg, 예를 들어, (약) 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.75 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg 또는 20 mg의 양 (또는 이의 등가량)으로 투여된다. 일부 구현예에서, 코르티코스테로이드, 예컨대 글루코코르티코이드는 평균 성인 인간 대상체에게, 용량 당 (약) 10 내지 (약) 80 mg, 예를 들어, (약) 10 내지 (약) 80 mg, 예를 들어, (약) 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg 또는 80 mg의 양 (또는 이의 등가량)으로 투여된다.
일부 구현예에서, 코르티코스테로이드, 예를 들어, 글루코코르티코이드는, 평균 성인 인간 대상체에게, 예를 들어, 1일 (약) 0.1 내지 (약) 100 mg, 1일 (약) 0.1 내지 (약) 80 mg, 1일 (약) 0.1 내지 (약) 60 mg, 1일 (약) 0.1 내지 (약) 40 mg, 1일 (약) 0.1 내지 (약) 30 mg, 1일 (약) 0.1 내지 (약) 20 mg, 1일 (약) 0.1 내지 (약) 15 mg, 1일 (약) 0.1 내지 (약) 10 mg, 1일 (약) 0.1 내지 (약) 5 mg, 1일 (약) 0.2 내지 (약) 80 mg, 1일 (약) 0.2 내지 (약) 60 mg, 1일 (약) 0.2 내지 (약) 40 mg, 1일 (약) 0.2 내지 (약) 30 mg, 1일 (약) 0.2 내지 (약) 20 mg, 1일 (약) 0.2 내지 (약) 15 mg, 1일 (약) 0.2 내지 (약) 10 mg, 1일 (약) 0.2 내지 (약) 5 mg, 1일 (약) 0.4 내지 (약) 40 mg, 1일 (약) 0.4 내지 (약) 30 mg, 1일 (약) 0.4 내지 (약) 20 mg, 1일 (약) 0.4 내지 (약) 15 mg, 1일 (약) 0.4 내지 (약) 10 mg, 1일 (약) 0.4 내지 (약) 5 mg, 1일 (약) 0.4 내지 (약) 4 mg, 1일 (약) 1 내지 (약) 20 mg, 1일 (약) 1 내지 (약) 15 mg 또는 1일 (약) 1 내지 (약) 10 mg의 양 (또는 이의 등가량)으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 코르티코스테로이드, 예컨대 글루코코르티코이드는, 평균 성인 인간 대상체에게, 1일 (약) 0.4 내지 (약) 20 mg, 예를 들어, 1일 (약) 0.4 mg, 1일 0.5 mg, 1일 0.6 mg, 1일 0.7 mg, 1일 0.75 mg, 1일 0.8 mg, 1일 0.9 mg, 1일 1 mg, 1일 2 mg, 1일 3 mg, 1일 4 mg, 1일 5 mg, 1일 6 mg, 1일 7 mg, 1일 8 mg, 1일 9 mg, 1일 10 mg, 1일 11 mg, 1일 12 mg, 1일 13 mg, 1일 14 mg, 1일 15 mg, 1일 16 mg, 1일 17 mg, 1일 18 mg, 1일 19 mg 또는 1일 20 mg의 양 (또는 이의 등가량)으로 투여된다. 일부 구현예에서, 코르티코스테로이드, 예컨대 글루코코르티코이드는, 평균 성인 인간 대상체에게, 1일 (약) 10 내지 (약) 80 mg, 예를 들어, 1일 (약) 10 mg, 1일 15 mg, 1일 20 mg, 1일 25 mg, 1일 30 mg, 1일 35 mg, 1일 40 mg, 1일 45 mg, 1일 50 mg, 1일 55 mg, 1일 60 mg, 1일 65 mg, 1일 70 mg, 1일 75 mg 또는 1일 80 mg의 양 (또는 이의 등가량)으로 투여된다.
일부 구현예에서, 코르티코스테로이드는 덱사메타손이다. 투여될 수 있는 덱사메타손의 예시적인 용량은 70 kg 성인 인간 대상체에게 용량 당 (약) 0.1 내지 (약) 100 mg, 0.1 내지 80 mg, 0.1 내지 60 mg, 0.1 내지 40 mg, 0.1 내지 30 mg, 0.1 내지 20 mg, 0.1 내지 15 mg, 0.1 내지 10 mg, 0.1 내지 5 mg, 0.2 내지 40 mg, 0.2 내지 30 mg, 0.2 내지 20 mg, 0.2 내지 15 mg, 0.2 내지 10 mg, 0.2 내지 5 mg, 0.4 내지 40 mg, 0.4 내지 30 mg, 0.4 내지 20 mg, 0.4 내지 15 mg, 0.4 내지 10 mg, 0.4 내지 5 mg, 0.4 내지 4 mg, 1 내지 20 mg, 1 내지 15 mg 또는 1 내지 10 mg의 양을 포함한다. 일반적으로, 덱사메타손은 평균 성인 인간 대상체에게, 용량 당 (약) 0.4 내지 (약) 20 mg, 예를 들어, (약) 0.4 mg, 0.5 mg, 0.6 mg, 0.7 mg, 0.75 mg, 0.8 mg, 0.9 mg, 1 mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg, 6 mg, 7 mg, 8 mg, 9 mg, 10 mg, 11 mg, 12 mg, 13 mg, 14 mg, 15 mg, 16 mg, 17 mg, 18 mg, 19 mg 또는 20 mg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 평균 성인 인간 대상체에게 용량 당 (약) 10 내지 (약) 40 mg, 예를 들어, (약) 10 mg, 15 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg 또는 40 mg의 양으로 투여된다.
일부 구현예에서, 덱사메타손은 성인 인간 대상체에게, 예를 들어, 1일 (약) 0.1 내지 (약) 100 mg, 1일 0.1 내지 80 mg, 1일 0.1 내지 60 mg, 1일 0.1 내지 40 mg, 1일 0.1 내지 30 mg, 1일 0.1 내지 20 mg, 1일 0.1 내지 15 mg, 1일 0.1 내지 10 mg, 1일 0.1 내지 5 mg, 1일 0.2 내지 80 mg, 1일 0.2 내지 60 mg, 1일 0.2 내지 40 mg, 1일 0.2 내지 30 mg, 1일 0.2 내지 20 mg, 1일 0.2 내지 15 mg, 1일 0.2 내지 10 mg, 1일 0.2 내지 5 mg, 1일 0.4 내지 40 mg, 1일 0.4 내지 30 mg, 1일 0.4 내지 20 mg, 1일 0.4 내지 15 mg, 1일 0.4 내지 10 mg, 1일 0.4 내지 5 mg, 1일 0.4 내지 4 mg, 1일 1 내지 20 mg, 1일 1 내지 15 mg 또는 1일 1 내지 10 mg의 양으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은, 평균 성인 인간 대상체에게, 1일 (약) 0.4 내지 (약) 20 mg, 예를 들어, 1일 (약) 0.4 mg, 1일 0.5 mg, 1일 0.6 mg, 1일 0.7 mg, 1일 0.75 mg, 1일 0.8 mg, 1일 0.9 mg, 1일 1 mg, 1일 2 mg, 1일 3 mg, 1일 4 mg, 1일 5 mg, 1일 6 mg, 1일 7 mg, 1일 8 mg, 1일 9 mg, 1일 10 mg, 1일 11 mg, 1일 12 mg, 1일 13 mg, 1일 14 mg, 1일 15 mg, 1일 16 mg, 1일 17 mg, 1일 18 mg, 1일 19 mg 또는 1일 20 mg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 덱사메타손은 평균 성인 인간 대상체에게 고용량으로, 예컨대 1일 (약) 10 내지 (약) 40 mg, 1일 예를 들어, (약) 10 mg, 1일 15 mg, 1일 20 mg, 1일 25 mg, 1일 30 mg, 1일 35 mg 또는 1일 40 mg의 양으로 투여된다. 일부 구현예에서, 고용량의 덱사메타손이 투여될 수 있다. 예시적인 고용량의 덱사메타손은 평균 성인 인간 대상체에게 (약) 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가량, 또는 전술한 값 중 임의의 값에 의해 정의되는 범위의 복용량을 포함한다. 예시적인 고용량의 덱사메타손은 평균 성인 인간 대상체에게 1일 20 mg, 1일 25 mg, 1일 30 mg, 1일 35 mg, 1일 40 mg, 1일 45 mg, 1일 50 mg, 1일 55 mg, 1일 60 mg, 1일 65 mg, 1일 70 mg, 1일 75 mg 또는 1일 80 mg, 1일 또는 전술한 값 중 임의의 값에 의해 정의되는 범위의 용량을 포함한다.
일부 구현예에서, 코르티코스테로이드는 체중이 일반적으로 약 70 kg 내지 75 kg인 평균 성인 인간 대상체에게, 예를 들어, (약) 0.001 mg/kg (대상체 체중), 0.002 mg/kg, 0.003 mg/kg, 0.004 mg/kg, 0.005 mg/kg, 0.006 mg/kg, 0.007 mg/kg, 0.008 mg/kg, 0.009 mg/kg, 0.01 mg/kg, 0.015 mg/kg, 0.02 mg/kg, 0.025 mg/kg, 0.03 mg/kg, 0.035 mg/kg, 0.04 mg/kg, 0.045 mg/kg, 0.05 mg/kg, 0.055 mg/kg, 0.06 mg/kg, 0.065 mg/kg, 0.07 mg/kg, 0.075 mg/kg, 0.08 mg/kg, 0.085 mg/kg, 0.09 mg/kg, 0.095 mg/kg, 0.1 mg/kg, 0.15 mg/kg, 0.2 mg/kg, 0.25 mg/kg, 0.30 mg/kg, 0.35 mg/kg, 0.40 mg/kg, 0.45 mg/kg, 0.50 mg/kg, 0.55 mg/kg, 0.60 mg/kg, 0.65 mg/kg, 0.70 mg/kg, 0.75 mg/kg, 0.80 mg/kg, 0.85 mg/kg, 0.90 mg/kg, 0.95 mg/kg, 1 mg/kg, 1.05 mg/kg, 1.1 mg/kg, 1.15 mg/kg, 1.20 mg/kg, 1.25 mg/kg, 1.3 mg/kg, 1.35 mg/kg 또는 1.4 mg/kg의 복용량으로 투여될 수 있다.
코르티코스테로이드, 또는 글루코코르티코이드, 예를 들어 덱사메타손은, 경구 (정제, 액체 또는 액체 농축물), PO, 정맥 내로 (IV), 근육 내로 또는 임의의 다른 공지된 경로 또는 본 명세서에 기재된 경로 (예를 들어, 약제학적 제형과 관련된 경로)에 의해 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 코르티코스테로이드는 볼루스로서 투여되고, 다른 양태에서 일정 기간에 걸쳐 투여될 수 있다. 일부 양태에서, 코르티코스테로이드는 볼루스로서 투여되고, 다른 양태에서 일정 기간에 걸쳐, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 120, 180, 240, 360, 480 또는 720 분 이상, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위에 걸쳐 투여될 수 있다.
일부 양태에서, 글루코코르티코이드는 1 일 이상의 기간에 걸쳐, 예컨대 2 일에 걸쳐, 3 일에 걸쳐, 또는 4 일 이상에 걸쳐, 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 코르티코스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1 일 3회 이상 투여될 수 있다. 예를 들어, 코르티코스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은 may 일부 예시에서 3 일 동안 하루에 2회 10 mg (또는 등가량)으로 IV 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드는 하루에 주어진 용량으로, 예를 들어, 하루에 특정 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 예시적인 1일 용량은 1일 (약) 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 mg/kg, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위 및 이의 등가량을 포함한다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드는 (약) 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 7.0, 8.0, 9.0, 10.0, 11.0, 12.0, 13.0, 14.0, 15.0, 16.0, 17.0, 18.0, 19.0, 20.0, 25.0, 50.0 또는 100.0 mg/kg/일, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위 및 이의 등가량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 예시적인 1일 용량은 1일 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 또는 200 mg, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위 및 이의 등가량을 포함한다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예를 들어, 코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드는 (약) 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150 또는 200 mg/일, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위 및 이의 등가량으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 스테로이드, 예컨대 코르티코스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은, 일부 예시에서 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40 일의 기간 동안, 1일 1회, 2회, 3회 또는 4회의 빈도로, (약) 5 mg 내지 약 40 mg으로, 예컨대 약 10 mg 내지 약 20 mg (또는 등가량)으로 IV 투여될 수 있거나, 또는 약 20 mg 내지 약 40 mg (또는 등가량)으로 IV 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 스테로이드, 예컨대 코르티코스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은, 일부 예시에서 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39 또는 40 일의 기간 동안, 1일 1회, 2회, 3회 또는 4회의 빈도로, (약) 5 mg 내지 약 40 mg으로, 예컨대 약 10 mg 내지 약 20 mg (또는 등가량)으로 IV 투여될 수 있거나, 또는 약 20 mg 내지 약 40 mg (또는 등가량)으로 IV 투여될 수 있다. 코르티코스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은, 일부 예시에서 1일 4회 (약) 40 mg (또는 등가량) IV, 1일 3회 (약) 40 mg (또는 등가량) IV, 1일 2회 (약) 40 mg (또는 등가량) IV, 또는 1일 1회 약 40 mg (또는 등가량) IV, 1일 4회 20 mg (또는 등가량) IV, 1일 3회 (약) 20 mg (또는 등가량) IV, 1일 2회 (약) 20 mg (또는 등가량) IV, 또는 1일 1회 약 20 mg (또는 등가량) IV, 또는 1일 4회 약 10 mg (또는 등가량) IV, 1일 3회 (약) 10 mg (또는 등가량) IV, 1일 2회 (약) 10 mg (또는 등가량) IV, 또는 1일 1회 (약) 10 mg (또는 등가량) IV로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 스테로이드, 예컨대 글루코코르티코이드 예를 들어, 메틸프레드니솔론은 일부 예시에서 (약) 0.5 mg/kg 내지 (약) 5 mg/kg, 예컨대 (약) 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg 또는 5 mg/kg (또는 등가량)으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 글루코코르티코이드 예를 들어, 메틸프레드니솔론은, 2, 3, 4 또는 5 일 동안 1일 1회, 2회, 3회 또는 4회 투여된다. 일부 구현예에서, 글루코코르티코이드 예를 들어, 메틸프레드니솔론은, 로딩 용량 및 후속 용량을 포함하는 다중 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 글루코코르티코이드 예를 들어, 메틸프레드니솔론은, 약 1 내지 약 3 mg/kg, 예컨대 2 mg/kg (또는 등가량)의 로딩 용량, 이어서 (약) 1 내지 (약) 3 mg/kg, 예컨대 2 mg/kg (또는 등가량)의 후속 용량으로 투여되고, 이러한 용량은 하루에 걸쳐 1, 2, 3, 4 또는 5 회로 나누어 투여된다.
일부 구현예에서, 코르티코스테로이드, 예를 들어, 글루코코르티코이드의 복용량은, 치료 당 연속적으로 낮은 복용량으로 투여된다. 따라서, 일부 이러한 치료 요법에서, 코르티코스테로이드의 용량은 점점 줄어들며, 예를 들어 시간이 지남에 따라 점차 감소된다. 예를 들어, 코르티코스테로이드는 4 mg의 초기 용량 (또는 등가 용량, 예컨대 덱사메타손에 대한 용량)으로 투여될 수 있고, 각각의 연속 투여 시에, 다음 투여에 대한 용량이 3 mg, 다음 투여에 대한 용량이 2 mg, 및 다음 투여에 대한 용량이 1 mg가 되도록, 용량은 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 코르티코스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은 1일 4 mg의 초기 용량 (또는 등가 용량, 예컨대 덱사메타손에 대한 용량)으로 투여될 수 있고, 일부 연속 투여 시, 용량이 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 예시적인 감소된 용량은 일부 후속 투여에 대한 3 mg, 일부 후속 투여에 대한 2 mg, 및 일부 후속 투여에 대한 1 mg을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 코르티코스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손은 1일 (약) 40 mg의 초기 용량 (또는 등가 용량, 예컨대 덱사메타손에 대한 용량)으로 투여될 수 있고, 일부 연속 투여 시, 용량이 감소될 수 있다. 일부 구현예에서, 예시적인 감소된 용량은 일부 후속 투여에 대한 (약) 30 mg, 일부 후속 투여에 대한 (약) 20 mg, 및 일부 후속 투여에 대한 10 mg을 포함할 수 있다.
일반적으로, 투여되는 코르티코스테로이드 용량은 상이한 코르티코스테로이드 사이 역가의 차이로서 특정 코르티코스테로이드에 의존적이다. 약물은 역가가 다양하므로, 일반적으로 동등한 효과를 얻기 위해 용량은 달라질 수 있는 것으로 이해된다. 표 6은 다양한 글루코코르티코이드 및 투여 경로에 대한 역가 측면에서 동등성을 나타낸다. 임상 투약에서의 동등한 역가가 공지되어 있다. 등가 스테로이드 투약과 관련한 정보는 (비-음열 치료 방식으로) 1999 년 3 월 영국 국립 처방집 (BNF) 37에서 확인할 수 있다.
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그러므로, 일부 구현예에서, 스테로이드는 1일 (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손, 예컨대 1일 (약) 1.0 mg 내지 (약) 15 mg 덱사메타손, 1일 (약) 1.0 mg 내지 (약) 10 mg 덱사메타손, 1일 (약) 2.0 mg 내지 (약) 8 mg 덱사메타손, 또는 1일 (약) 2.0 mg 내지 (약) 6.0 mg 덱사메타손의 등가 복용량으로 투여된다. 일부 경우에, 스테로이드는 1일 (약) 4 mg 또는 (약) 8 mg 덱사메타손의 등가 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 스테로이드는 토실리주맙으로 치료한 후 발열이 지속되는 경우에 투여된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 덱사메타손은, 지속되는 발열이 있을 경우, 최대 6-12 시간 마다 5-10 mg의 복용량으로 경구 또는 정맥 내로 투여된다. 일부 구현예에서, 토실리주맙은 산소 보충과 동시에 또는 후속하여 투여된다.
일부 구현예에서, CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소, 및/또는 약화시킬 수 있는 시제는 미세아교 세포 활성의 억제제이다. 일부 구현예에서, 억제제의 투여는 미세아교 세포의 활성을 조절한다. 일부 구현예에서, 억제제는 미세아교 세포에서 신호전달 경로의 활서을 억제하는 길항제이다. 일부 구현예에서, 미세아교 세포 억제제는 미세아교 항상성, 생존, 및/또는 증식에 영향을 미친다. 일부 구현예에서, 억제제는 CSF1R 신호전달 경로를 표적화한다. 일부 구현예에서, 억제제는 CSF1R의 억제제이다. 일부 구현예에서, 억제제는 소분자이다. 일부 경우에, 억제제는 항체이다.
일부 양태에서, 억제제의 투여는 미세아교 항상성 및 생존력의 변경, 미세아교 세포 증식의 감소 또는 봉쇄, 미세아교 세포의 감소 또는 제거, 미세아교 세포의 활성 감소, 미세아교 세포의 산화질소 생성 감소, 미세아교 세포 내 산화 질소 합성 활성의 감소, 또는 미세아교 세포 활성에 의해 영향을 받는 운동 뉴런의 보호로부터 선택되는 하나 이상의 효과를 야기한다. 일부 구현예에서, 시제는 억제제의 투여 개시 직전의 시점과 비교하여 CSF1R 억제의 혈청 또는 혈액 바이오마커의 수준을 변경시키거나, 또는 요로 콜라겐 유형 1 가교 N-텔로펩타이드 (NTX)의 수준 감소시킨다. 일부 구현예에서, 시제의 투여는 미세아교 세포 활성을 일시적으로 억제하고 및/또는 미세아교 세포 활성의 억제는 영구적이지 않다. 일부 구현예에서, 시제의 투여는 CSF1R 활성을 일시적으로 억제하고 및/또는 CSF1R 활성의 억제는 영구적이지 않다.
일부 구현예에서, CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소, 및/또는 약화시킬 수 있는 시제는 항-염증제, NADPH 옥시다제 (NOX2)의 억제제, 칼슘 채널 차단제, 소듐 채널 차단제로부터 선택되며, GM-CSF를 억제하고, CSF1R를 억제하고, CSF-1에 특이적으로 결합하고, IL-34에 특이적으로 결합하고, 핵 인자 카파 B (NF-κ의 활성을 억제하고, CB2 수용체를 활성화시키고 및/또는 CB2 작용제이고, 포스포디에스터라제 억제제이고, microRNA-155 (miR-155)를 억제하고, microRNA-124 (miR-124)를 상향조절하고, 미세아교 세포에서 산화 질소 제조를 억제하고, 산화 질소 합성을 억제하거나, 또는 전사 인자 NRF2 (또한 핵 인자 (적혈구-유도 2)-유사 2, 또는 NFE2L2로도 불림)를 활성화한다.
일부 구현예에서, CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소, 및/또는 약화시킬 수 있는 시제는 사이토카인을 표적화하는 시제, 예를 들어, 형질전환 성장 인자 베타 (TGF-베타), 인터루킨 6 (IL-6), 인터루킨 10 (IL-10), IL-2, MIP1β(CCL4), TNF 알파, IL-1, 인터페론 감마 (IFN-감마), 또는 단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1)과 같은 사이토카인의 길항제 또는 억제제이다. 일부 구현예에서, CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소, 및/또는 약화시킬 수 있는 시제는 사이토카인 수용체, 예컨대 IL-6 수용체 (IL-6R), IL-2 수용체 (IL-2R/CD25), MCP-1 (CCL2) 수용체 (CCR2 또는 CCR4), TGF-베타 수용체 (TGF-베타 I, II, 또는 III), IFN-감마 수용체 (IFNGR), MIP1β수용체 (예를 들어, CCR5), TNF 알파 수용체 (예를 들어, TNFR1), IL-1 수용체 (IL1-Rα/IL-1Rβ또는 IL-10 수용체 (IL-10R)를 표적화하는 (예를 들어, 이를 억제하거나, 이의 길항제인) 시제이다.
CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소, 및/또는 약화시킬 수 있는 선택된 시제의 양은 표준 임상적 기법에 의해 결정될 수 있다. 예시적인 유해 사례로는, 알라닌 아미노트랜스퍼라제의 증가, 아스파테이드 아미노트랜스퍼라제의 증가, 오한, 호중구 감소증, 두통, 저혈압, 좌심실 기능 장애, 뇌병증, 뇌수종, 발작, 및/또는 진전을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 시제는 (약) 30 mg 내지 (약) 5000 mg, such as (약) 50 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 500 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 100 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 500 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 500 mg 또는 (약) 500 mg 내지 (약) 1000 mg의 복용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 (약) 0.5 mg/kg 내지 (약) 100 mg/kg, 예컨대 (약) 1 mg/kg 내지 (약) 50 mg/kg, (약) 1 mg/kg 내지 (약) 25 mg/kg, (약) 1 mg/kg 내지 (약) 10 mg/kg, (약) 1 mg/kg 내지 (약) 5 mg/kg, (약) 5 mg/kg 내지 (약) 100 mg/kg, (약) 5 mg/kg 내지 (약) 50 mg/kg, (약) 5 mg/kg 내지 (약) 25 mg/kg, (약) 5 mg/kg 내지 (약) 10 mg/kg, (약) 10 mg/kg 내지 (약) 100 mg/kg, (약) 10 mg/kg 내지 (약) 50 mg/kg, (약) 10 mg/kg 내지 (약) 25 mg/kg, (약) 25 mg/kg 내지 (약) 100 mg/kg, (약) 25 mg/kg 내지 (약) 50 mg/kg 내지 (약) 50 mg/kg 내지 (약) 100 mg/kg으로 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 (약) 1 mg/kg 내지 (약) 10 mg/kg, (약) 2 mg/kg 내지 (약) 8 mg/kg, (약) 2 mg/kg 내지 (약) 6 mg/kg, (약) 2 mg/kg 내지 (약) 4 mg/kg 또는 6 mg/kg 내지 (약) 8 mg/kg의 복용량으로 투여된다. 일부 양태에서, 시제는 (적어도 약) 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg 이상의 복용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는4 mg/kg 또는 8 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 (약) 1 mg/kg 내지 (약) 20 mg/kg, (약) 2 mg/kg 내지 (약) 19 mg/kg, (약) 4 mg/kg 내지 (약) 16 mg/kg, (약) 6 mg/kg 내지 (약) 14 mg/kg 또는 (약) 8 mg/kg 내지 (약) 12 mg/kg의 복용량으로 투여된다. 일부 양태에서, 시제는 (적어도 약) 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg, 12 mg/kg, 14 mg/kg, 16 mg/kg, 18 mg/kg, 20 mg/kg 이상의 복용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 약 8 mg/kg 내지 (약) 12 mg/kg, 예컨대 (약) 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg 또는 12 mg/kg의 복용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 1일 전체 용량이 (약) 30 mg/일 내지 (약) 5000 mg/일으로, 예컨대 (약) 50 mg/일 내지 (약) 1000 mg/일, (약) 50 mg/일 내지 (약) 500 mg/일, (약) 50 mg/일 내지 (약) 200 mg/일, (약) 50 mg/일 내지 (약) 100 mg/일, (약) 100 mg/일 내지 (약) 1000 mg/일, (약) 100 mg/일 내지 (약) 500 mg/일, (약) 100 mg/일 내지 (약) 200 mg/일, (약) 200 mg/일 내지 (약) 1000 mg/일, (약) 200 mg/일 내지 (약) 500 mg/일 또는 500 mg/일 내지 (약) 1000 mg/일로 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 1일 전체 용량이 (약) 1 mg/kg/일 내지 (약) 20 mg/kg/일, (약) 2 mg/kg/일 내지 (약) 19 mg/kg/일, (약) 4 mg/kg/일 내지 (약) 16 mg/kg/일, (약) 6 mg/kg/일 내지 (약) 14 mg/kg/일 또는 (약) 8 mg/kg/일 내지 (약) 12 mg/kg/일로 투여된다. 일부 양태에서, 시제는 (적어도 약) 1 mg/kg/일, 2 mg/kg/일, 4 mg/kg/일, 6 mg/kg/일, 8 mg/kg/일, 10 mg/kg/일, 12 mg/kg/일, 14 mg/kg/일, 16 mg/kg/일, 18 mg/kg/일, 20 mg/kg/일 이상의 복용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 (약) 8 mg/kg/일 내지 (약) 12 mg/kg/일, 예컨대 (약) 8 mg/kg/일, 9 mg/kg/일, 10 mg/kg/일, 11 mg/kg/일 또는 12 mg/kg/일의 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는, 예를 들어, 볼루스 주입에 의해, 주사에 의해, 예를 들어, 정맥 내 또는 피하 주사, 안구 내 주사, 안구주위 주사, 망막 내 주사, 망막 하 주사, 유리 체내 주사, 중격경유 주사, 복강 내 주사, 맥락 막내 주사, 삽관 내 주사, 피하 주사 주사, 결막 하 주사, 안각건 하(sub-Tenon's) 주사, 구후(retrobulbar) 주사, 구주위(peribulbar) 주사 또는 뒤공막옆 전달(posterior juxtascleral delivery)로 투여된다. 일부 구현예에서, 세포는 비경구, 폐 내, 및 비강 내, 그리고, 국소적 치료가 바람직한 경우, 병소 내 투여로 투여된다. 장관외 주입은 근육내, 정맥, 동맥내, 복막내, 또는 피부아래 투여를 포함한다.
일부 구현예에서, 시제는 정맥 내 전달을 통해 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 정맥 내 전달을 통해 일정 기간에 걸쳐, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 120, 180, 240, 360, 480 또는 720 분 이상, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위에 걸쳐 투여된다.
일부 구현예에서, 시제의 양은 약 또는 대략 하루에 2회, 매일, 격일로, 주 3회, 주마다, 격주로 또는 1 개월에 한 번 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 다중 또는 반복 용량으로, 예를 들어, 1회 초과 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 원하는 팽창이 관찰되거나, 관찰될 가능성이 있고 및/또는 독성의 억제 또는 독성과 연관된 증상이 발생하고 및/또는 독성의 발생 위험이 사라질 때까지 반복 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10회 이상 전체 용량으로 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 일정 기간에 걸쳐 다중 용량으로 투여된다. 일부 양태에서, 시제는 (약) 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 주 이상의 기간에 걸쳐 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시제는 약 6, 12, 18, 24 시간 이상, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 주 이상의 전체 기간에 걸쳐 다중 또는 반복 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시제는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시제는 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36, 48 시간 마다, 또는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 마다, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 주 이상 마다 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, 시제는 조성물 또는 제형의 일부, 예컨대 하기 기재된 약제학적 조성물 또는 제형의 일부로서 투여된다. 그러므로, 일부 경우에, 시제를 포함하는 조성물이 하기와 같이 투여된다. 다른 양태에서, 시제는 단독으로 투여되며, 임의의 공지된 허용되는 투여 경로에 의해 또는 본 명세서에 기재된 경로에 의해, 예컨대 조성물 및 약제학적 제형과 관련된 경로에 의해 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 시제는 소분자, 펩타이드, 단백질, 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 항체 모방체, 압타머, 또는 핵산 분자이다. 일부 구현예에서, 방법은 미세아교 세포 활성의 억제제 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 시제는 미세아교 세포에서 신호전달 경로의 활성을 억제하는 길항제이다. 일부 구현예에서, 시제는 미세아교 항상성, 생존, 및/또는 증식에 영향을 미친다.
일부 구현예에서, CAR+ T 세포 팽창 및/또는 증식을 축소, 감소, 및/또는 약화시킬 수 있는 시제는 항체 또는 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 시제는 토실리주맙, 실툭시맙, 사릴루맙, 올로키주맙 (CDP6038), 엘실리모맙, ALD518/BMS-945429, 시루쿠맙 (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301 또는 FM101이다.
일부 구현예에서, 시제는 IL-6 또는 IL-6 수용체 (IL-6R)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 양태에서, 시제는 IL-6 활성을 중화시키는 항체, 예컨대 IL-6 또는 IL-6R에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 시제는 토실리주맙 (아틀리주맙) 또는 사릴루맙, 항-IL-6R 항체이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 시제는 미국 특허 8,562,991에 기재된 항-IL-6R 항체이다. 일부 경우에, IL-6을 표적화하는 시제는 항-IL-6 항체, 예컨대 실툭시맙, 엘실리모맙, ALD518 / BMS-945429, 시루 쿠맙 (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301, FM101, 또는 올로키주맙 (CDP6038)이다. 일부 양태에서, 시제는 리간드-수용체 상호작용을 억제함으로써 IL-6 활성을 중화시킬 수 있다. 이러한 일반적인 유형의 접근법의 타당성은 인터루킨-1에 대한 천연 발생 수용체 길항제로 입증되었다. [Harmurn, C. H. et al., Nature (1990) 343:336-340]를 참조한다. 일부 양태에서, IL-6/IL-6R 길항제 또는 억제제는 IL-6 뮤테인, 예컨대 미국 특허 5591827에 기재된 뮤테인이다. 일부 구현예에서, IL-6/IL-6R의 길항제 또는 억제제인 시제는 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 시제는 토실리주맙이다. 일부 구현예에서, 토실리주맙은 제공되는 방법에 따라, 및/또는 제공되는 제조 물품 또는 조성물과 함께, 조기 개입으로서, (약) 1 mg/kg 내지 (약) mg/kg, 예컨대 (약) 4 mg/kg, 8 mg/kg, 또는 10 mg/kg의 복용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 토실리주맙은 정맥내 주입에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 토실리주맙은 아세트아미노펜에 반응하지 않고 10 시간 동안 39 ℃를 초과하는 지속적인 발열에 대해 투여된다. 일부 구현예에서, 토실리주맙의 제2 투여는 초기 용량의 48 시간 이후 증상이 재발하는 경우 제공된다. 일부 구현예에서, 토실리주맙은 제공되는 방법에 따라 (약) 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 예컨대 (약) 8 mg/kg 내지 (약) 12 mg/kg의 복용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 토실리주맙은 정맥 내 주입에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 토실리주맙은 대략 4-12 mg/kg, 예를 들어, (약) 8 mg/kg의 용량 또는 복용량으로, 대략 1 시간에 걸쳐, 정맥 내 주입에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 토실리주맙은 예를 들어, 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36, 48 시간 마다, 또는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 마다, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 주 이상 마다, 다중 또는 반복 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 용량의 토실리주맙이 투여된다. 일부 구현예에서, 토실리주맙은 8, 10, 12, 14, 16, 18, 24 또는 36 시간 이상 마다, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상 마다, 또는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 11, 12 주 이상 마다 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 IL-6, 예를 들어, 항-IL-6 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 결합하는 시제, 예컨대 실툭시맙, 엘실리모맙, ALD518 / BMS-945429, 시루 쿠맙 (CNTO 136), CPSI-2634, ARGX-109, FE301, FM101, 또는 올로키주맙 (CDP6038) 또는 이의 항원 결합 단편이다. 일부 양태에서, 시제는 리간드-수용체 상호작용을 억제함으로써 IL-6 활성을 중화시킬 수 있다. 이러한 일반적인 유형의 접근법의 타당성은 인터루킨-1에 대한 천연 발생 수용체 길항제로 입증되었다. [Harmurn, C. H. et al., Nature (1990) 343:336-340]를 참조한다. 일부 양태에서, IL-6/IL-6R 길항제 또는 억제제는 IL-6 뮤테인 또는 개질된 IL-6 단백질 또는 이의 부분, 예컨대 미국 특허 5591827에 기재된 뮤테인이다. 일부 구현예에서, IL-6/IL-6R의 길항제 또는 억제제인 시제는 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다. 일부 구현예에서, 시제는 시툭시맙이다.
일부 구현예에서, 시툭시맙은 제공되는 방법에 따라 (약) 1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 예컨대 (약) 8 mg/kg 내지 (약) 12 mg/kg의 복용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 시툭시맙은 정맥 내 주입에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 시툭시맙은 대략 11 mg/kg의 용량으로 대략 1 시간에 걸쳐 정맥 내 주입에 의해 투여된다. 일부 구현예에서, 시툭시맙은, 예를 들어, 적어도 (약) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 18, 24, 36, 48 시간 마다, 또는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 마다, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 주 마다, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위 마다 다중 또는 반복 용량으로 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 용량의 시툭시맙이 투여된다. 일부 구현예에서, 시툭시맙은 8, 10, 12, 14, 16, 18, 24 또는 36 시간 이상 마다, 또는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상 마다, 또는 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 11, 12 주 이상 마다 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위마다 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 TGF-β또는 TGF-β수용체 (예를 들어, TGF-β수용체 I, II, 또는 III)의 작용제 또는 자극제이다. 일부 양태에서, 시제는 TGF-β활성을 증가시키는 항체, 예컨대 TGF-β또는 이의 수용체 중 하나에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, TGF-β및/또는 이의 수용체의 작용제 또는 자극제인 시제는 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 시제는 MCP-1 (CCL2) 또는 MCP-1 수용체 (예를 들어, MCP-1 수용체 CCR2 또는 CCR4)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 양태에서, 시제는 MCP-1 활성을 중화시키는 항체, 예컨대 MCP-1 또는 이의 수용체 중 하나 (CCR2 또는 CCR4)에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 구현예에서, MCP-1 길항제 또는 억제제는 [Gong et al. J Exp Med. 1997 Jul 7; 186(1): 131-137 또는 Shahrara et al. J Immunol 2008; 180:3447-3456]에 기재된 임의의 시제이다. 일부 구현예에서, MCP-1 및/또는 이의 수용체 (CCR2 또는 CCR4)의 길항제 또는 억제제인 시제는 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 시제는 IFN-γ또는 IFN-γ수용체 (IFNGR)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 양태에서, 시제는 IFN-γ활성을 중화시키는 항체, 예컨대 IFN-γ또는 이의 수용체 (IFNGR)에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 양태에서, IFN-감마 중화 neutralizing 항체는 [Dobber et al. Cell Immunol. 1995 Feb;160(2):185-92 또는 Ozmen et al. J Immunol. 1993 Apr 1;150(7):2698-705]에 기재된 임의의 항체이다. 일부 구현예에서, IFN-γ의 길항제 또는 억제제인 시제는 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 시제는 IL-10 또는 IL-10 수용체 (IL-10R)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 양태에서, 시제는 IL-10 활성을 중화시키는 항체, 예컨대 IL-10 또는 IL-10R에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 양태에서, IL-10 중화 항체는 [Dobber et al. Cell Immunol. 1995 Feb;160(2):185-92 또는 Hunter et al. J Immunol. 2005 Jun 1;174(11):7368-75]에 기재된 임의의 항체이다. 일부 구현예에서, IL-10/IL-10R의 길항제 또는 억제제인 시제는 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 시제는 IL-1 또는 IL-1 수용체 (IL-1R)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 양태에서, 시제는 IL-1 수용체 길항제이며, IL-1R의 개질된 형태, 예컨대 아나킨라(anakinra)이다 (예를 들어, [Fleischmann et al., (2006) Annals of the rheumatic diseases. 65(8):1006-12] 참조). 일부 양태에서, 시제는 IL-1 활성을 중화시키는 항체, 예컨대 IL-1 또는 IL-1R에 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편, 예컨대 카나키누맙(canakinumab)이다 (또한 EP 2277543 참조). 일부 구현예에서, IL-1/IL-1R의 길항제 또는 억제제인 시제는 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 시제는 종양 괴사 인자 (TNF) 또는 종양 괴사 인자 수용체 (TNFR)의 길항제 또는 억제제이다. 일부 양태에서, 시제는 TNF 활성을 차단하는 항체, 예컨대 TNF, such as TNFα, 또는 이의 수용체 (TNFR, 예를 들어, TNFRp55 또는 TNFRp75)에 항체 또는 항원-결합 단편이다. 일부 양태에서, 시제는 인플릭시맙, 아달리무맙, 세르톨리주맙 페골, 골리무맙 및 에타네르셉트 중에서 선택된다. 일부 구현예에서, TNF/TNFR의 길항제 또는 억제제인 시제는 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 시제는 야누스 키나제 (JAN) 및 2 개의 신호 변환기 및 전사 활성화제 (STAT) 신호 캐스케이드를 통한 신호 전달의 길항제 또는 억제제이다. JAK/STAT 단백질은 사이토카인 및 사이토카인 수용체 신호전달의 공통 성분이다. 일부 구현예에서, JAK/STAT의 길항제 또는 억제제인 시제는, 예컨대, 룩솔리티닙 (예를 들어, [Mesa et al. (2012) Nature Reviews Drug Discovery. 11(2):103-104] 참조), 토파시티닙 (또한 Xeljanz, Jakvinus 타소시티닙 및 CP-690550으로 공지), 바리시티닙 (LY-3009104, INCB-28050으로도 공지), 필고티닙 (G-146034, GLPG-0634), 간도티닙 (LY-2784544), 레스타우르티닙 (CEP-701), 모멜로티닙 (GS-0387, CYT-387), 파크리티닙 (SB1518) 및 우파다시티닙 (ABT-494). 일부 구현예에서, 시제는 소분자, 단백질 또는 펩타이드, 또는 핵산이다.
일부 구현예에서, 시제는 키나제 억제제이다. 키나제 억제제, 예컨대 CDK4 키나제 억제제, BTK 키나제 억제제, MNK 키나제 억제제, 또는 DGK 키나제 억제제는, 종양 세포에 존재하는 활성 생존 경로를 구성적으로 조절하고 및/또는 면역 세포의 기능을 조절할 수 있다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 브루톤 타이로신 키나제 (BTK) 억제제, 예를 들어, 이브루티닙이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 포스파티딜이노시톨-4,5-비스포스페이트 3-키나제 (PI3K) 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 CDK4 억제제, 예를 들어, CDK4/6 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 mTOR 억제제, 예컨대, 예를 들어,라파마이신, 라파마이신 유사체, OSI-027이다. mTOR 억제제는, 예를 들어, mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제, 예를 들어, mTORC1 억제제 및/또는 mTORC2 억제제일 수 있다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 MNK 억제제, 또는 이중 PI3K/mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 다른 예시적인 키나제 억제제는 AKT 억제제 페리포신, mTOR 억제제 템시로리무스, Src 키나제 억제제 다사티닙 및 포스타마티닙, JAK2 억제제 파크리티닙 및 룩소리티닙, PKCβ억제제 엔자스타우린 및 브리오스타틴, 및 AAK 억제제 알리세르팁을 포함한다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제는 이브루티닙 (PCI- 32765); GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13으로부터 선택된 BTK 억제제이다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 인터루킨-2-유도성 키나제 (ITK)의 키나제 활성을 감소시키거나 억제하지 않으며, GDC-0834; RN-486; CGI-560; CGI-1764; HM-71224; CC-292; ONO-4059; CNX-774; 및 LFM-A13으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어, 이브루티닙 (1-[(3R)-3-[4-아미노-3-(4-페녹시페닐)-1H-피라졸로[3,4-d]피리미딘-1-일]피페리딘-1-일]프로프-2-엔-1-온; 또한 PCI-32765로도 공지)이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 BTK 억제제, 예를 들어, 이브루티닙 (PCI-32765)이다. 일부 구현예에서, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 이상 주기의 이브루티닙이 투여된다. 일부 구현예에서, BTK 억제제는 국제 출원 WO 2015/079417에 기재된 BTK 억제제이다.
일부 구현예에서, 키나제 억제제는 PI3K 억제제이다. PI3K는 세포 주기 조절 및 림프종 생존과 관련된 PI3K/Akt/mTOR 경로의 중심이다. 예시적인 PI3K 억제제는 이델라리십 (PI3Kδ억제제)을 포함한다. 일부 구현예에서, 시제는 이델라리십 및 리툭시맙이다.
일부 구현예에서, 시제는 라파마이신 (mTOR)의 포유동물 표적의 억제제이다. 일부 구현예에서, 키나제 억제제는 템시롤리무스; 리다포롤리 무스 (AP23573 및 MK8669로도 공지); 에버롤리무스 (RAD001); 라파마이신 (AY22989); 시마피모드; AZD8055; PF04691502; SF1126; 및 XL765으로부터 선택된 mTOR 억제제이다. 일부 구현예에서, 작용제는 베무라페닙, 다브라페닙 및 트라메티닙과 같은 미토겐-활성화 단백질 키나제 (MAPK)의 억제제이다.
일부 구현예에서, 혈액 또는 혈장 여과를 가지는 흡수성 수지 기술과 같은 장치를 사용하여 사이토카인 수준을 감소시킬 수 있다. 일부 구현예에서, 사이토카인 수준을 감소시키기 위해 사용되는 장치는 체외 사이토카인 흡수제와 같은 물리적 사이토카인 흡수제이다. 일부 구현예에서, 물리적 사이토카인 흡수제는 생체 외, 체외 적 방식으로 혈류로부터 사이토카인을 제거하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 시제는 다공성 중합체이다. 일부 구현예에서, 시제는 CytoSorb이다 (예를 들어, [Basu et al. Indian J Crit Care Med. (2014) 18(12): 822-824] 참조).
V. 독성 증강의 치료 또는 개선 방법
일부 구현예에서, 세포 요법과 연관된 독성을 치료, 개선 또는 감소시키는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 또한 예를 들어, 독성의 징후 또는 증상을 개선 또는 치료할 수 있는 시제의 평가, 투여 및/또는 투여 시기를 포함하는 치료 처방이 제공된다. 일부 구현예에서, 방법은 독성 발생을 치료, 예방, 지연, 또는 약화시키기 위한 하나 이상의 시제 또는 치료의 투여를 포함한다. 일부 예시에서, 독성 발생을 치료, 지연, 또는 약화시킬 수 있는 시제 또는 다른 치료제는 유전자 조작된 세포를 포함하는 치료적 세포 조성물의 투여 이전에 및/또는 이와 동시에 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 스테로이드이다. 일부 구현예에서, 시제는 인터루킨-6 수용체 (IL-6R)에 결합할 수 있는 시제이다. 일부 구현예에서, 시제는 인터루킨-6 (IL-6)에 결합할 수 있는 시제이다. 일부 구현예에서, 시제는 상기 섹션 IV.E에 기재된 임의의 투여 용량, 빈도, 전달 경로 및/또는 시기에 따라 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시제는 세포 요법의 팽창 및/또는 활성을 조절할 수 있는 임의의 시제, 예컨대 상기 섹션 IV.E에 기재된 임의의 시제이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 시제, 예를 들어, 세포 팽창 또는 활성의 조절 및/또는 독성의 치료, 개선 또는 감소에 사용하기 위한 본 명세서에 기재된 임의의 시제가 병용 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 임의의 시제의 하나 이상의 용량, 예컨대 다중 용량이 본 명세서에 제공된 방법에 따라 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시제의 하나 이상의 용량의 용량, 빈도, 전달 경로 및/또는 투여 시기는 본 명세서에 기재된 임의의 것을 포함한다.
일부 구현예에서, 시제는 세포 팽창 또는 활성을 조절 및/또는 독성을 치료, 개선 또는 감소시키기 위한 하나 이상의 추가의 시제(들), 예컨대 스테로이드 및/또는 항-IL-6 수용체 (IL-6R) 항체와 병용 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 방법은 세포 팽창 또는 활성을 조절할 수 있는 및/또는 독성 발생을 치료, 예방, 지연, 또는 약화시킬 수 있는 하나 이상의 추가의 또는 추가적인 시제(들), 개입(들) 및/또는 치료(들)을 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 시제의 다중 용량 또는 반복 용량이 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 하나 이상의 추가의 시제와 동시에 또는 거의 동시에, 예컨대 시제 투여의 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8 시간 이내에 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 하나 이상의 추가의 시제를 투여하기 전 및/또는 이후 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 세포 팽창 또는 지속성을 조절하기 위해 및/또는 세포 요법의 독성의 증상을 치료, 예방 및/또는 개선하기 위해 1차 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 시제가 2차, 3차 또는 4차 또는 후속 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 시제 및 추가의 시제(들)의 병용이 1차 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 시제가 1차 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 시제가 2차, 3차 또는 4차 또는 후속 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 시제 및/또는 하나 이상의 추가의 시제는 다중 용량으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시제 및/또는 하나 이상의 추가의 시제 각각은, 독성 또는 잠재적 독성, 예를 들어, CRS 또는 신경독성 증상의 등급, 진행 및/또는 징후에 따라, 및/또는 바이오마커의 평가, 예를 들어 본 명세서에 기재된 임의의 평가에 기초하여 및/또는 예시적인 방법 및/또는 본 명세서에 기재된 절차에 따라, 다중 또는 반복 용량으로 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 시제는 독성을 치료, 개선 또는 감소시키기 위한 1차 요법으로서, 추가의 시제의 투여 여부와 관계 없이 투여된다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 독성을 치료, 개선 또는 감소시키기 위한 1차 요법으로서, 시제 및/또는 상이한 추가의 시제, 예를 들어, 스테로이드의 투여 여부와 관계 없이 투여된다. 일부 구현예에서, 시제의 제1 용량은 면역요법 및/또는 세포 요법의 투여 (약) 24, 36, 48, 72, 96 또는 120 시간 이내에 투여된다. 일부 구현예에서, 시제의 추가 용량은 시제의 제1 또는 초기 용량, 또는 이전 용량의 (약) 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, 96 또는 120 시간 이내에 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 시제(들)의 하나 이상의 용량은 시제의 제1 용량과 동시에 및/또는 후속적으로 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 시제(들)의 하나 이상의 용량은 시제의 제1 또는 초기 용량, 또는 이전 용량 (약) 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, 96 또는 120 시간 이내에 또는 추가의 시제의 제1 또는 초기 용량, 또는 이전 용량의 (약) 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, 96 또는 120 시간 이내에 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 독성의 징후 및/또는 증상이 해결 또는 개선되지 않는 경우, 상이한 추가의 시제, 예를 들어, 상이한 스테로이드가, 2차, 3차 또는 4차 또는 후속 요법으로서 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 추가의 시제, 예를 들어, 항-IL-6R 항체 및/또는 스테로이드는, 시제 및/또는 상이한 추가의 시제의 동시 투여 여부와 관계 없이, 독성을 치료, 개선 또는 감소시키기 위한 1차 요법으로서 투여된다. 일부 구현예에서, 추가의 시제의 추가 용량은 추가의 시제의 제1 또는 초기 용량, 또는 이전 용량의 (약) 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, 96 또는 120 시간 이내에 투여된다. 일부 구현예에서, 시제 또는 상이한 추가의 시제의 하나 이상의 용량은, 추가의 시제, 예를 들어, 항-IL-6R 항체 및/또는 스테로이드의 제1 또는 초기 용량, 또는 이전 용량의 (약) 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, 96 또는 120 시간 이내에, 또는 시제의 제1 또는 초기 용량, 또는 이전 용량의 (약) 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, 96 또는 120 시간 이내에 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 독성의 징후 및/또는 증상이 해결 또는 개선되지 않는 경우, 시제는 2차, 3차 또는 4차 또는 후속 요법으로서 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 시제 및/또는 추가의 시제(들)의 하나 이상의 용량은 면역요법 또는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시 이전에 투여된다. 일부 구현예에서, 시제 및/또는 추가의 시제(들)의 하나 이상의 용량은 면역요법 또는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시 이후에 투여된다. 일부 구현예에서, 시제 및/또는 추가의 시제(들)의 하나 이상의 용량은 면역요법 또는 세포 요법의 투여 또는 이의 개시와 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 시제 및 추가의 시제 중 하나 또는 둘 모두의 추가 용량이 면역요법 또는 세포 요법의 투여 이후 투여된다. 일부 경우에, 하나 이상의 추가의 시제(들)은 단독으로 투여되거나, 또는 조성물 또는 제형, 예컨대 본 명세서에 기재된 약제학적 조성물 또는 제형의 일부로서 투여된다.
또한 독성, 예를 들어, 사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 독성을 개선하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 하나 이상의 물리적 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 감소 및/또는 개선할 수 있는 하나 이상의 시제(들)을 투여하는 것을 포함하며, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었다. 일부 양태에서, 하나 이상의 시제(들)은 치료 처방으로 투여된다.
일부 양태에서, 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 이후, 대상체는 하나 이상의 물리적 독성, 예를 들어, CRS의 징후 또는 증상의 징후에 대해 모니터링된다. 일부 양태에서, 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 이후, 대상체는 발열 발생에 대해 모니터링된다. 일부 구현예에서, 발열은 38 ℃ 또는 100.4 °F 이상의 발열이다. 일부 구현예에서, 대상체는 1등급, 2등급, 3 등급 또는 4 등급 이상의 CRS의 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 징후 또는 증상에 대해 모니터링된다. 일부 구현예에서, 대상체는 면역요법 또는 세포 요법의 투여 동안 및/또는 이후 CRS의 징후 또는 증상에 대해 모니터링된다. 일부 구현예에서, 대상체는 면역요법 또는 세포 요법의 투여 이후 72 시간 이상 동안 38 ℃ 또는 100.4 °F 이상의 발열이 발생한 경우 모니터링된다. 이러한 구현예에서, 모니터링되는 대상체는, 대상체가 CRS의 임상적 진행이 나타나고 및/또는 38 ℃ 또는 100.4 °F 이상의 발열이 발생한 후 급격하게 악화되는 경우, 제1 요법 또는 후속 차수 요법으로 이동될 수 있다.일부 구현예에서, 치료 처방은 다음의 경우에 하나 이상의 시제(들)을 투여하는 것을 포함한다: (a) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이상에, 대상체가 발열을 나타내며, 독성, 예를 들어, 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내고, CRS의 임상적 진행을 나타내고, 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우; 또는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열을 나타내고 및/또는 2등급 이상의 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우. 일부 구현예에서, 하나 이상의 시제(들)이 독성을 개선하기 위해 1차 요법 또는 1차 치료로서 투여된다.
일부 구현예에서, 치료 처방은 다음의 경우에 하나 이상의 시제(들)을 투여하는 것을 포함한다: 상기 임의의 하나 이상의 시제(들), 예를 들어, 1차 요법의 투여 이후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않고 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내지 않는 경우; 여기서 하나 이상의 시제(들)은 선택적으로 상기 투여되는 임의의 하나 이상의 시제(들)과 상이하고 및/또는 상기 투여되는 임의의 하나 이상의 시제(들), 예를 들어, 1차 요법과 동일한 또는 더 많은 용량 및/또는 빈도로 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 시제(들)이 독성을 개선하기 위해 2차 요법 또는 2차 치료로서 투여된다.
일부 구현예에서, 치료 처방은 다음의 경우에 하나 이상의 시제(들)을 투여하는 것을 포함한다: 상기 임의의 하나 이상의 시제(들), 예를 들어, 2차 요법의 투여 이후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않고 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내지 않는 경우; 여기서 하나 이상의 시제(들)은 선택적으로 상기 투여되는 임의의 하나 이상의 시제(들)과 상이하고 및/또는 상기 투여되는 임의의 하나 이상의 시제(들), 예를 들어, 1차 또는 2차 요법과 동일한 또는 더 많은 용량 및/또는 빈도로 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 시제(들)이 독성을 개선하기 위해 3차 요법 또는 3차 치료로서 투여된다.
일부 구현예에서, 치료 처방은 다음의 경우에 하나 이상의 시제(들)을 투여하는 것을 포함한다: 상기 임의의 하나 이상의 시제(들), 예를 들어, 3차 요법의 투여 이후, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 경우; 여기서 하나 이상의 시제(들)은 선택적으로 상기 투여되는 임의의 하나 이상의 시제(들)과 상이하고 및/또는 상기 투여되는 임의의 하나 이상의 시제(들), 예를 들어, 2차 또는 3차 요법과 동일한 또는 더 많은 용량 및/또는 빈도로 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 시제(들)이 독성을 개선하기 위해 4차 요법 또는 4차 치료로서 투여된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 시제(들)은 인터루킨-6 수용체 (IL-6R) 또는 하나 이상의 스테로이드에, 선택적으로 하나 이상의 스테로이드의 하나 이상의 용량에 결합할 수 있는 시제로부터 선택된다.
또한 독성, 예를 들어, 선택적으로 신경독성 (NT)을 개선하는 방법이 제공되며, 상기 방법은, 하나 이상의 물리적 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 감소 및/또는 개선시킬 수 있는 하나 이상의 시제(들)을 투여하는 것을 포함하며, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 일부 양태에서, 하나 이상의 시제(들)은 치료 처방으로 투여된다.
일부 양태에서, 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 이후, 대상체는 하나 이상의 물리적 독성, 예를 들어, NT의 징후 또는 증상의 징후에 대해 모니터링된다. 일부 구현예에서, 대상체는 1등급, 2등급, 3 등급 또는 4 등급 이상의 NT의 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 징후 또는 증상에 대해 모니터링된다.
일부 구현예에서, 치료 처방은 다음의 경우에 하나 이상의 시제(들)을 투여하는 것을 포함한다: 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이상에, 대상체가 독성, 선택적으로 신경독성 (NT)과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우; 또는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 (약) 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우. 일부 구현예에서, 하나 이상의 시제(들)이 독성을 개선하기 위해 1차 요법 또는 1차 치료로서 투여된다.
일부 구현예에서, 치료 처방은 다음의 경우에 하나 이상의 시제(들)을 투여하는 것을 포함한다: 상기 임의의 하나 이상의 시제(들), 예를 들어, 1차 요법의 투여 이후 (약) 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않고 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 진행을 나타내지 않는 경우; 여기서 하나 이상의 시제(들)은 선택적으로 상기 투여되는 임의의 하나 이상의 시제(들)과 상이하고 및/또는 상기 투여되는 임의의 하나 이상의 시제(들), 예를 들어, 1차 요법과 동일한 또는 더 많은 용량 및/또는 빈도로 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 시제(들)이 독성을 개선하기 위해 2차 요법 또는 2차 치료로서 투여된다.
일부 구현예에서, 치료 처방은 다음의 경우에 하나 이상의 시제(들)을 투여하는 것을 포함한다: 상기 임의의 하나 이상의 시제(들)의 투여 이후 (약) 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않고 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내지 않는 경우; 여기서 하나 이상의 시제(들)은 선택적으로 상기 투여되는 임의의 하나 이상의 시제(들)과 상이하고 및/또는 상기 투여되는 임의의 하나 이상의 시제(들), 예를 들어, 1차 또는 2차 요법과 동일한 또는 더 많은 용량 및/또는 빈도로 투여된다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 시제(들)이 독성을 개선하기 위해 3차 요법 또는 3차 치료로서 투여된다.
일부 구현예에서, 하나 이상의 시제(들)은 하나 이상의 스테로이드, 선택적으로 하나 이상의 스테로이드의 하나 이상의 용량이다.
일부 구현예에서, 1차 요법에 사용되는 시제는 스테로이드이다. 일부 구현예에서, 1차 요법에 사용되는 시제는 IL-6 수용체, 예를 들어, 항-IL-6R 항체에 결합할 수 있는 시제이다. 일부 구현예에서, 1차 요법에 사용되는 시제는 스테로이드 및 항-IL-6R 항체의 조합이다.
일부 구현예에서, 2차 요법에 사용되는 시제는 스테로이드이다. 일부 구현예에서, 2차 요법에 사용되는 시제는 IL-6 수용체, 예를 들어, 항-IL-6R 항체에 결합할 수 있는 시제이다. 일부 구현예에서, 2차 요법에 사용되는 시제는 스테로이드 및 항-IL-6R 항체의 조합이다. 일부 구현예에서, 2차 요법에 사용되는 시제는 1차 요법에 사용되는 시제와 상이하다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 시제가 2차 요법에 사용된다. 일부 구현예에서, 2차 요법에 사용되는 시제는 1차 요법에 사용되는 시제와 동일하다. 일부 구현예에서, 2차 요법을 위한 시제(들)은 1차 요법과 동일한 또는 더 많은 용량 및/또는 빈도로 투여된다.
일부 구현예에서, 3차 요법에 사용되는 시제는 스테로이드이다. 일부 구현예에서, 3차 요법에 사용되는 시제는 IL-6 수용체, 예를 들어, 항-IL-6R 항체에 결합할 수 있는 시제이다. 일부 구현예에서, 3차 요법에 사용되는 시제는 스테로이드 및 항-IL-6R 항체의 조합이다. 일부 구현예에서, 3차 요법에 사용되는 시제는 1차 또는 2차 요법에 사용되는 시제와 상이하다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 시제가 3차 요법에 사용된다. 일부 구현예에서, 3차 요법에 사용되는 시제는 1차 또는 2차 요법에 사용되는 시제와 동일하다. 일부 구현예에서, 3차 요법을 위한 시제(들)은 1차 또는 2차 요법과 동일한 또는 더 많은 용량 및/또는 빈도로 투여된다.
일부 구현예에서, 4차 요법에 사용되는 시제는 스테로이드이다. 일부 구현예에서, 4차 요법 또는 후속 요법에 사용되는 시제는 IL-6 수용체, 예를 들어, 항-IL-6R 항체에 결합할 수 있는 시제이다. 일부 구현예에서, 4차 요법 또는 후속 요법에 사용되는 시제는 스테로이드 및 항-IL-6R 항체의 조합이다. 일부 구현예에서, 4차 요법 또는 후속 요법에 사용되는 시제는 1차, 2차 또는 3차 요법에 사용되는 시제와 상이하다. 일부 구현예에서, 하나 이상의 추가의 시제가 4차 요법 또는 후속 요법에 사용된다. 일부 구현예에서, 4차 요법 또는 후속 요법을 위한 시제(들)은 1차, 2차 또는 3차 요법과 동일한 또는 더 많은 용량 및/또는 빈도로 투여된다.
일부 구현예에서, 섹션 IV.E.2에 기재된 임의의 하나 이상의 시제(들), 또는 이의 조합, 예컨대 하나 이상의 스테로이드 및/또는 항-IL-6R 항체 및/또는 항-IL-6 항체는, 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 감소 및/또는 개선시킬 수 있는 하나 이상의 시제(들)로서 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 투여 용량 및/또는 빈도는 섹션 IV.E.2에 기재된 시제 각각에 대한 용량 및/또는 빈도와 동일하다.
일부 구현예에서, 시제는 스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론이다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 항-IL-6R 항체, 예를 들어, 토실리주맙이다. 일부 구현예에서, 시제는 항-IL-6R 항체, 예를 들어, 토실리주맙이다. 일부 구현예에서, 추가의 시제는 스테로이드, 예를 들어, 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론이다.
일부 구현예에서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론이다. 일부 구현예에서, 스테로이드는 덱사메타손이다. 일부 구현예에서, 스테로이드는 덱사메타손이며, 덱사메타손은 항-IL-6 항체의 투여 이후 투여된다. 일부 구현예에서, 스테로이드는 덱사메타손이며, 덱사메타손은 항-IL-6 항체의 투여 이전에 투여된다.
일부 구현예에서, 시제는 면역요법 및/또는 세포 요법의 투여 개시 이후 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 대상체가 독성, 예를 들어, 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경독성 (NT)의 징후 또는 증상을 나타내기 이전 또는 이후에 투여된다. 일부 구현예에서, 시제는 또한 독성을 치료 또는 개선할 수 있는 시제이다.
일부 구현예에서, 시제는 특정 절차 또는 지침에 기초하거나 이에 따라, 예를 들어, 독성 및/또는 반응 결과와 같은 결과의 평가 및 모니터링, 및/또는 파라미터 또는 바이오마커의 모니터링, 예를 들어, 약동학적 파라미터, 환자 속성 또는 인자 및/또는 바이오마커의 발현, 예컨대 본 명세서에 기재된 임의의 것의 모니터링에 기초하여 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 시제는 치료 또는 개선을 위해 예시적인 절차 또는 지침, 예컨대 하기 표 7에 기재된 절차 또는 지침에 따라 투여된다.
Figure pct00008
Figure pct00009
시제 또는 요법 또는 개입의 다른 비제한적 예시가 표 8에 기재된다. 일부 구현예에서, 개입은 토실리주맙 또는 기재된 다른 시제를 포함하며, 대상체에서 약 38 ℃ 이상 또는 (약) 39 ℃ 이상의 지속적인 발열이 지속될 때 개입이 있을 수 있다. 일부 구현예에서, 발열은 개입 이전에 10 시간 초과, 12 시간 초과, 16 시간 초과, 24 시간 초과 동안 대상체에서 지속된다.
Figure pct00010
시제 또는 요법 또는 개입의 다른 비제한적 예시가 하기 표 9에 기재된다.
Figure pct00011
a Grading per Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95.
시제 또는 요법 또는 개입의 다른 비제한적 예시가 하기 표 10 (CRS) 및 표 11 (NT) 에 기재된다.
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
일부 구현예에서, 바이오마커 예컨대 CRP, 페리틴, 및 혈청 사이토카인 수준 (예를 들어, 본 명세서 섹션 IV.B.에 기재된 것들) 더욱 높은 CRS 발생 위험과 연관이 있을 수 있지만, CRS 증상의 관리는, 일부 경우에, 대상체의 면밀한 관찰에 기초하여 CRS를 치료 또는 관리를 위해 항상 고려된다.
일부 구현예에서, 시제 또는 요법 또는 개입은 체액 볼루스 또는 혈액 또는 혈장 여과와 함께 흡수성 수지 기술의 사용이다. 일부 경우에, 개입은 투석, 혈장 분리법 또는 이와 유사한 기술을 포함한다. 일부 구현예에서, 혈압상승제 또는 아세트아미노펜이 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 임의의 본 명세서, 예를 들어 섹션 II.A에 기재된 바를 비롯한 독성, CRS 또는 신경독성과 연관된 임의의 징후, 증상, 요인 또는 파라미터는, 일부 경우에, 입원 환경 또는 외래 환경에서 평가 또는 모니터링될 수 있다. 일부 경우에, 해열제, 진통제 및/또는 항생제의 투여를 포함한 CRS에 대한 증상적 지원이 제공될 수 있다. 일부 양태에서, 발작 예방제 (예를 들어, 레비티라세탐)이 신경독성의 발생 위험이 높은 대상체에 대해 투여될 수 있다.
VI. 조작된 세포
일부 구현예에서, 제공되는 방법은 예컨대 다양한 종양을 비롯한 질병 또는 병태의 치료를 위한 세포 요법의 투여와 연관이 있다. 일부 구현예에서, 제공되는 방법에 따라 사용하기 위한 T 세포 요법은 질병 또는 병태와 연관된 분자를 인식 및/또는 특이적으로 결합하여 이러한 분자에 대해 결합할 때 이러한 분자에 대한 반응, 예컨대 면역 반응을 야기하도록 설계된 재조합 수용체를 발현하는 조작된 세포를 투여하는 것을 포함한다. 수용체로는 키메라 수용체, 예를 들어, 키메라 항원 수용체 (CAR), 및 다른 형질전환 항원 수용체, 예컨대 형질전환 T 세포 수용체 (TCR) 또는 키메라 자가항체 수용체 (CAAR)를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 조작된 수용체, 예를 들어, 조작된 항원 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR), 또는 T 세포 수용체 (TCR)를 포함하거나, 이를 포함하도록 조작된다. 또한 이러한 세포의 집단, 이러한 세포를 포함 및/또는 이러한 세포가 풍부한 조성물, 예컨대 T 세포, 또는 CD8+ 또는 CD4+ T 세포와 같은 특정 유형의 세포가 농축 또는 선택된 조성물이 제공된다. 조성물 중에는 입양 세포 요법과 같은 투여용 약제학적 조성물 및 제형이 있다. 또한, 대상체, 예컨대 환자에게 세포 및 조성물을 투여하는 치료 방법이 제공된다.
이에 따라, 일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작을 통해 도입되는 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이에 의해 그러한 핵산의 재조합 또는 유전적으로 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구현예에서, 유전자 전달은 우선 세포를 자극시킴으로써, 예컨대, 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정되는 바 증식, 생존 및/또는 활성화와 같은 반응을 유도하는 자극과 세포를 조합시킨 후, 활성화된 세포를 형질도입시키고, 임상 적용에 충분한 수로 배양 증식시킴으로써 달성된다.
A. 재조합 수용체
1. 키메라 항원 수용체 (CAR)
일부 구현예에서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 특정 항원 (또는 마커 또는 리간드), 예컨대 특정 세포 유형의 표면 상에서 발현되는 항원에 특이적이다. 일부 구현예에서, 항원은 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 항원은 정상 세포 또는 비-표적화된 세포 또는 조직과 비교하여, 질환 또는 증상 세포, 예컨대 종양 또는 병원성 세포에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 구현예에서, 항원은 정상 세포상에서 발현되고 및/또는 조작된 세포상에서 발현된다.
구체적인 구현예에서, 재조합 수용체, 예컨대 키메라 수용체는 세포 내 신호전달 영역을 포함하며, 이러한 신호전달 영역은 세포질 신호전달 도메인 (세포 내 신호전달 도메인로도 불림), 예컨대 T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 세포질 (세포 내) 영역, 예를 들어, T 세포 수용체 (TCR) 성분의 세포질 신호전달 도메인 (예컨대 CD3-제타 (CD3ζ)) 사슬 또는 기능적 변형체의 세포질 신호전달 도메인 또는 이의 신호전달 부분)을 포함하고 및/또는 면역수용체 타이로신계 활성화 모티프 (ITAM)를 포함한다.
일부 구현예에서, 키메라 수용체는 항원 (또는 리간드)에 특이적으로 결합하는 세포 외 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 수용체는 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인을 포함하는 CAR이다. 일부 구현예에서, 항원 (또는 리간드)는 세포의 표면 상에 발현되는 단백질이다. 일부 구현예에서, CAR는 TCR-유사 CAR이고, 항원은 펩타이드 항원, 예컨대 세포 내 단백질의 펩타이드 항원으로 가공되며, 이는 TCR와 같이, 주조직 적합성 복합체 (MHC) 분자의 맥락에서 세포 표면에서 인식된다.
CAR을 비롯한 예시적 항원 수용체, 및 이러한 수용체를 조작하고 세포 내로 도입시키는 방법으로는, 예를 들어, 국제 특허 출원 공보 WO200014257, WO2013126726, WO2012/129514, WO2014031687, WO2013/166321, WO2013/071154, WO2013/123061 미국 특허 출원 US2002131960, US2013287748, US20130149337, 미국 특허 6,451,995, 7,446,190, 8,252,592,, 8,339,645, 8,398,282, 7,446,179, 6,410,319, 7,070,995, 7,265,209, 7,354,762, 7,446,191, 8,324,353, 및 8,479,118, 및 유럽 특허 출원 EP2537416에 기재된 수용체 및 방법, 및/또는 Sadelain et al., Cancer Discov. 2013 April; 3(4): 388-398 (2013); Davila et al. PLoS ONE 8(4): e61338 (2013); Turtle et al., Curr. Opin. Immunol., 2012 October; 24(5): 633-39 (2012); Wu et al., Cancer, 2012 March 18(2): 160-75 (2013)에 개시된 항원 수용체 및 방법을 포함한다. 일부 양태에서, 항원 수용체로는 미국 특허 7,446,190에 개시된 CAR, 및 국제 특허 출원 공보 WO/2014055668 A1에 개시된 수용체를 포함한다. CAR의 예로는 전술한 공보, 예컨대 WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국 특허 7,446,190, 미국 특허 8,389,282, Kochenderfer et al., 2013, Nature Reviews Clinical Oncology, 10, 267-276 (2013); Wang et al. J. Immunother. 35(9): 689-701 (2012); 및 Brentjens et al., Sci Transl Med. 2013 5(177) (2013) 중 어느 하나에 개시된 CAR를 포함한다. 또한 WO2014031687, US 8,339,645, US 7,446,179, US 2013/0149337, 미국 특허 7,446,190, 및 미국 특허 8,389,282를 참조한다. 키메라 수용체, 예컨대 CAR는, 일반적으로 세포 외 항원 결합 도메인, 예컨대 항체 분자의 일부분, 일반적으로 항체의 가변 중쇄 (VH) 영역 및/또는 가변 경쇄 (VL) 영역, 예를 들어, scFv 항체 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 항원은 정상 세포 또는 비-표적화된 세포 또는 조직과 비교하여, 질환 또는 증상 세포, 예컨대 종양 또는 병원성 세포에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다. 다른 구현예에서, 항원은 정상 세포상에서 발현되고 및/또는 조작된 세포상에서 발현된다.
일부 구현예에서, CAR은 특정 항원 (또는 마커 또는 리간드), 예컨대 입양 요법에 의해 표적화되는 특정 세포 유형에서 발현되는 항원, 예컨대, 암 마커, 및/또는 완충 반응을 유도하기 위한 항원, 예컨대 정상 또는 비-병증 세포 유형에서 발현된 항원에 대한 특이성으로 구성된다. 이에 따라, CAR은 일반적으로 세포 외 부분에, 하나 이상의 항원 결합 분자, 예컨대 하나 이상의 항원-결합 단편, 도메인, 또는 부분, 또는 하나 이상의 항체 가변 도메인, 및/또는 항체 분자를 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 항원-결합 부분 또는 항체 분자의 부분, 예컨대 단클론성 항체 (mAb)의 가변 중쇄 (VH) 및 가변 경쇄 (VL)로부터 유도된 단일-사슬 항체 단편 (scFv)을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 재조합 수용체, 예컨대 항원 수용체의 일부로서 세포에서 발현된다. 항원 수용체 가운데 기능적 비-TCR 항원 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR)가 존재한다. 일반적으로, 펩타이드-MHC 복합체에 대한 TCR-유사 특이성을 나타내는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 CAR이 또한 TCR-유사 CAR로 지칭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR-유사 CAR의 MHC-펩타이드 복합체에 대해 특이적인 세포 외 항원 결합 도메인은 하나 이상의 세포 내 신호전달 성분에 연결되며, 일부 양태에서 링커 및/또는 막관통 도메인(들)을 통해 연결된다. 일부 구현예에서, 이러한 분자는 일반적으로 TCR와 같은 천연 항원 수용체를 통한 신호, 및, 선택적으로, 공동자극 수용체와의 조합된 이러한 수용체를 통한 신호를 모방하거나 유사하게 할 수 있다.
일부 구현예에서, 키메라 수용체 (예컨대 CAR)와 같은 재조합 수용체는 항원 (또는 리간드)에 대해 결합, 예컨대 특이적으로 결합하는 리간드-결합 도메인을 포함한다. 키메라 수용체에 의해 표적화되는 항원 가운데 입양 세포 요법을 통해 표적화되는 질병, 조건, 또는 세포 유형의 맥락에서 발현되는 항원이 존재한다. 질병 및 병태 중에는 암과 종양을 비롯한 증식성, 신생물성, 및 악성 질병 및 장애가 있으며, 혈액암, 면역계 암, 예컨대 림프종, 백혈병, 및/또는 골수종, 예컨대 B, T, 및 골수성 백혈병, 림프종, 및 다발성 골수종을 포함한다.
일부 구현예에서, 항원 (또는 리간드)은 폴리펩타이드이다. 일부 구현예에서, 탄수화물 또는 다른 분자이다. 일부 구현예에서, 항원 (또는 리간드)는 정상 세포 또는 비-표적화된 세포 또는 조직과 비교하여, 질환 또는 증상 세포, 예컨대 종양 또는 병원성 세포에서 선택적으로 발현되거나 과발현된다.
일부 구현예에서, CAR은 항원, 예컨대 세포 표면에서 발현된 손상되지 않은 항원을 특이적으로 인식하는 항체 또는 항원-결합 단편 (예컨대 scFv)을 포함한다.
일부 구현예에서 수용체에 의해 표적화되는 항원은 다음 중 하나이거나 다음을 포함한다: αvβ인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 공지), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2으로도 공지), 암배아 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD133, CD138, CD171, 콘드로이틴 설페이트 프로테오글리칸 4 (CSPG4), 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; 또한 Fc 수용체 동족체 5 또는 FCRH5로도 공지), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100 (gp100), 글리피칸-3 (GPC3), G 단백질 연결 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 타이로신 키나제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이합체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파 (IL-22Rα), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Rα2), 키나제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접합 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 풍부 반복 함유 8 패밀리 구성원 A (LRRC8A), Lewis Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MAGE-A10, 메소텔린 (MSLN), c-Met, 쥐과 거대세포바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 살해 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접합 분자 (NCAM), 종양태아 항원, 우선적으로 발현되는 흑색종의 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이적 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), 수용체 타이로신 키나제 유사 고아 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백 (TPBG 또한 5T4로도 공지), 종양-연관된 당단백 72 (TAG72), 타이로시나제 관련 단백질 1 (TRP1, 또한 TYRP1 또는 gp75로도 공지), 타이로시나제 관련 단백질 2 (TRP2, 또한 도파크롬 토토머라제, 도파크롬 델타-아이소머라제 또는 DCT로도 공지), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 또는 병원체-발현된 항원, 또는 보편적인 표지와 연관된 항원, 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자. 일부 구현예에서, 수용체에 의해 표적화된 항원은 B 세포 악성종양과 관련된 항원을 포함하는데, 예컨대 다수의 공지된 B 세포 마커 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 항원은 CD20, CD19, CD22, ROR1, CD45, CD21, CD5, CD33, Ig카파, Ig람다, CD79a, CD79b 또는 CD30이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서 수용체에 의해 표적화되는 항원은 다음 중 하나이거나 다음을 포함한다: 고아 티로신 키나아제 수용체 ROR1, tEGFR, Her2, Ll-CAM, CD19, CD20, CD22, 메소텔린, CEA, 및 B형 간염 표면 항원, 항-엽산 수용체, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, EGFR, EGP-2, EGP-4, 0EPHa2, ErbB2, 3, 또는 4, FBP, 태아 아세틸콜린 e 수용체, GD2, GD3, HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13R-알파2, kdr, 카파 경쇄, 루이스 Y, L1-세포 접합 분자, MAGE-A1, 메소텔린, MUC1, MUC16, PSCA, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, MART-1, gp100, 종양 태아 항원, ROR1, TAG72, VEGF-R2, 암배아 항원 (CEA), 전립선 특이 항원, PSMA, Her2/neu, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 에프린 B2, CD123, c-Met, GD-2, 및 MAGE A3, CE7, Wilms 종양 1 (wt-1), 사이클린, 예컨대 사이클린 A1 (CCNA1), 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자. 일부 구현예에서, CAR는 병원체-특이적 또는 병원체-발현 항원에 결합한다. 일부 구현예에서, CAR은 바이러스성 항원 (예컨대, HIV, HCV, HBV 등), 박테리아 항원 및/또는 기생 항원에 특이적이다.
일부 구현예에서, CAR은 MHC-펩타이드 복합체로서 세포 표면에 제시되는 종양-관련 항원과 같은 세포 내 항원을 특이적으로 인식하는 TCR-유사 항체, 예컨대 항체 또는 항원-결합 단편 (예컨대 scFv)을 포함한다. 일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체를 인식하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 재조합 수용체, 예컨대 항원 수용체의 일부로서 세포에서 발현될 수 있다. 항원 수용체 가운데 기능적 비-TCR 항원 수용체, 예컨대 키메라 항원 수용체 (CAR)가 존재한다. 일반적으로, 펩타이드-MHC 복합체에 대한 TCR-유사 특이성을 나타내는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 CAR이 또한 TCR-유사 CAR로 지칭될 수 있다.
“주조직 적합성 복합체” (MHC)는 다형성 펩타이드 결합 부위 또는 결합 그루브를 포함하는 단백질, 일반적으로 당단백질을 지칭하며, 이는 일부 경우에, 폴리펩타이드의 세포 기구에 의해 처리된 펩타이드 항원을 포함하여 폴리펩타이드의 펩타이드 항원과 복합체를 형성할 수 있다. 일부 경우에, MHC 분자는, TCR 또는 TCR-유사 항체와 같은 T 세포 상의 항원 수용체에 의해 인식될 수 있는 입체 구조로 항원을 제시하기 위해 펩타이드와의 복합체를 비롯하여, 즉 MHC-펩타이드 복합체로서, 세포 표면상에 표시 또는 발현될 수 있다. 일반적으로, MHC 클래스 I 분자는, 일부 경우에는 3개의 α 도메인과 함께, 막 관통 α 사슬, 및 비-공유 연결된 β2마이크로글로불린을 가지는 이종이합체(heterodimer)이다. 일반적으로, MHC 클래스 II 분자는 2가지 막관통 당단백질, α 및 β로 구성되며, 둘 모두는 일반적으로 막에 걸쳐있다. MHC 분자는 항원 결합 부위 또는 펩타이드에 결합하기 위한 부위를 포함하는 효과적인 MHC 부분 및 적절한 항원 수용체에 의한 인식에 필요한 서열을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 분자는 세포기질로부터 유래하는 펩타이드를 세포 표면으로 전달하며, MHC-펩타이드 복합체는 일반적으로 CD8+ T 세포이지만, 일부 경우에 CD4+ T 세포와 같은 T 세포에 의해 인식된다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 II 분자는 소포 시스템에서 유래하는 펩타이드를 세포 표면으로 전달하며, 일반적으로 CD4+ T 세포에 의해 인식된다. 일반적으로, MHC 분자는 마우스에서의 H-2 및 인간에서 인간 백혈구 항원 (HLA)으로 총칭되는, 연결된 유전자좌 그룹에 의해 인코딩된다. 그러므로, 일반적으로 인간 MHC는 또한 인간 백혈구 항원 (HLA)으로서 지칭될 수 있다.
용어 “펩타이드 복합체” 또는 “펩타이드-MHC 복합체” 또는 이의 변형체는 일반적으로, MHC 분자의 결합 그루브 또는 틈에서 펩타이드의 비공유 상호작용에 의한 펩타이드 항원 및 MHC 분자의 복합체 또는 회합을 지칭한다. 일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체는 세포의 표면에 존재하거나 또는 표시된다. 일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체는 항원 수용체, 예컨대 TCR, TCR-유하 CAR 또는 이의 항원-결합 부분에 의해 특이적으로 인식될 수 있다.
일부 구현예에서, 폴리펩타이드의 펩타이드, 예컨대 펩타이드 항원 또는 에피토프는 예컨대 항원 수용체에 의한 인식을 위해 MHC 분자와 회합할 수 있다. 일반적으로, 펩타이드는 더 긴 생물학적 분자의 단편, 예컨대 폴리펩타이드 또는 단백질로부터 유래하거나, 또는 이를 기초로 한다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 길이가 일반적으로 약 8 내지 약 24 개의 아미노산이다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 MHC 클래스 II 복합체에서 인식하기 위해 길이가 (약) 9 내지 22 개의 아미노산이다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 MHC 클래스 I 복합체에서 인식하기 위해 길이가 (약) 8 내지 13 개의 아미노산이다. 일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체와 같은 MHC 분자의 맥락에서, 펩타이드의 인식 시, TCR 또는 TCR-유사 CAR와 같은 항원 수용체는 T 세포 반응, 예컨대 T 세포 증식, 사이토카인 제조, 세포독성 T 세포 반응 또는 다른 반응을 유도하는, T 세포에 대한 활성화 신호를 제조 또는 유발한다.
일부 구현예에서, TCR-유사 항체 또는 항원-결합 부분이 공지되어 있거나, 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다 (예를 들어, 공개된 미국 특허 출원 US 2002/0150914; US 2003/0223994; US 2004/0191260; US 2006/0034850; US 2007/00992530; US20090226474; US20090304679; 및 국제 PCT 공개 출원 WO 03/068201을 참조한다).
일부 구현예에서, 펩타이드 복합체에 대해 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 특이적 MHC-펩타이드 복합체를 함유하는 면역원의 유효량으로 숙주를 면역화함으로써 제조될 수 있다. 일부 경우에, MHC-펩타이드 복합체의 펩타이드는 MHC에 결합할 수 있는 항원의 에피토프, 예컨대 종양 항원, 예를 들어 보편적인 종양 항원, 골수종 항원 또는 하기 기재되는 다른 항원의 에피토프이다. 일부 구현예에서, 면역원의 유효량이 이후 면역 반응을 유발하기 위해 숙주에 투여되며, 여기서 면역원은 MHC 분자의 결합 그루브에서 펩타이드의 3차원 존재에 대하여 면역 반응을 일으키기에 충분한 일정 기간 동안 이의 3차원 형태를 유지한다. 이어서, 숙주로부터 수집된 혈청을 분석하여 MHC 분자의 결합 그루브에서 펩타이드의 3차원 존재를 인식하는 원하는 항체가 제조되는지를 결정한다. 일부 구현예에서, 제조된 항체는 이러한 항체가 MHC-펩타이드 복합체를 MHC 분자 단독, 관심 펩타이드 단독, 및 MHC 및 관련이 없는 펩타이드의 복합체와 구별할 수 있음을 확인하기 위해 평가될 수 있다. 원하는 항체는 이후 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, MHC-펩타이드 복합체에 대해 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 항체 라이브러리 디스플레이 방법, 에컨대 파지 항체 라이브러리를 사용하여 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 돌연변이 Fab, scFv 또는 다른 항체 형태의 파지 디스플레이 라이브러리가 생성될 수 있으며, 예를 들어, 라이브러리의 일원은 CDR 또는 CDRs의 하나 이상의 잔기에서 돌연변이된다. 예를 들어, 미국 공개 특허출원 US20020150914, US2014/0294841; 및 문헌 [Cohen CJ. et al. (2003) J Mol. Recogn. 16:324-332]을 참조한다.
본 명세서에서 용어 “항체”는 가장 넓은 의미로 사용되며 다클론성 및 단클론성 항체를 비롯한, 온전한 항체 및 기능성 (항원-결합) 항체 단편을 를 포함하고, 단편 항원 결합 (Fab) 단편, F(ab')2 단편, Fab' 단편, Fv 단편, 재조합 IgG (rIgG) 단편, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 가변 중쇄 (VH) 영역, 단일 사슬 항체 단편을 비롯한, 단일 사슬 가변 단편 (scFv), 및 단일 도메인 항체 (예를 들어, sdAb, sdFv, 나노바디) 단편을 포함한다. 이러한 용어는 면역글로불린의 유전자 조작된 및/또는 개질된 형태, 예컨대 인트라바디, 펩티바디, 키메라 항체, 전장 인간 항체, 인간화 항체, 및 이종컨쥬게이트 항체, 아중특이성, 예를 들어, 이중특이성, 항체, 다이아바디, 트라이아바디, 및 테트라바디, 탠덤 다이-scFv, 탠덤 tri-scFv를 포함한다. 달리 언급되지 않는 한, 용어 “항체”는 이의 기능적 항체 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 상기 용어는 또한 온전한 또는 전장의 항체를 비롯한, 임의의 클래스 또는 하위클래스의 항체를 포함하며, IgG 및 이의 하위클래스, IgM, IgE, IgA, 및 IgD를 포함한다.
일부 구현예에서, 항원-결합 단백질, 항체 및 이의 항원 결합 단편은 전장 항체의 항원을 특이적으로 인식한다. 일부 구현예에서, 항체의 중쇄 및 경쇄는 전장일 수 있거나, 또는 항원-결합 부분 (Fab, F(ab')2, Fv 또는 단일 사슬 Fv 단편 (scFv))일 수 있다. 다른 구현예에서, 항체 중쇄 불변 영역은, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE으로부터 선택되며, 구체적으로는, 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4으로부터, 더욱 구체적으로, IgG1 (예를 들어, 인간 IgG1)으로부터 선택된다. 또 다른 구현예에서, 항체 경쇄 불변 영역은, 예를 들어, 카파 또는 람다, 구체적으로 카파로부터 선택된다.
제공된 항체 중에는 항체 단편이 있다. "항체 단편(antibody fragment)"은 손상되지 않은(intact) 항체가 결합하는 항원에 결합하는 손상되지 않은 항체의 부분을 포함하는 손상되지 않은 항체 이외의 분자를 지칭한다. 항체 단편의 예로는 Fv, Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2; 다이아바디; 선형 항체; 가변 중쇄 (VH) 영역, 단일-사슬 항체 분자 예컨대 scFv 및 단일-도메인 VH 단일 항체; 및 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 구체적인 구현예에서, 항체는 가변 중쇄 영역 및/또는 가변 경쇄 영역을 포함하는, 예컨대 scFv와 같은 단일-사슬 항체 단편이다.
용어 “상보성 결정 영역,” 및“CDR”은, “초가변 영역” 또는 “HVR”과 동의어이며, 일부 경우에, 항원 특이성 및/또는 결합 친화성을 부여하는 항체 가변 영역 내에서 아미노산 비-인접(non-contiguous) 서열을 지칭하는 것으로 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 중쇄 가변 영역에 3개의 CDR (CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)이 존재하며 각각의 경쇄 가변 영역에 3개의 CDR (CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3)이 존재한다. “프레임워크 영역” 및 “FR”은, 일부 경우에, 중쇄 및 경쇄의 가변 영역의 비-CDR 부분을 지칭하는 것으로 공지되어 있다. 일반적으로, 각각의 전장 중쇄 가변 영역에 4개의 FR (FR-H1, FR-H2, FR-H3, 및 FR-H4)이 존재하며, 각각의 전장 경쇄 가변 영역에 4개의 FR (FR-L1, FR-L2, FR-L3, 및 FR-L4)이 존재한다.
주어진 CDR 또는 FR의 정확한 아미노산 서열 경계는 하기 문헌에 설명된 공지의 방법을 이용함으로써 쉽게 결정가능하다: Kabat et al. (1991), “Sequences of Proteins of Immunological Interest,” 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (“Kabat” 넘버링 방식); Al-Lazikani et al., (1997) JMB 273,927-948 (“Chothia” 넘버링 방식); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996), “Antibody-antigen interactions: Contact analysis and binding site topography,” J. Mol. Biol. 262, 732-745.” (“Contact” 넘버링 방식); Lefranc MP et al., “IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains,” Dev Comp Immunol, 2003 Jan;27(1):55-77 (“IMGT” 넘버링 방식); Honegger A and Pl
Figure pct00016
ckthun A, “Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool,” J Mol Biol, 2001 Jun 8;309(3):657-70, (“Aho” 넘버링 방식); 및 Martin et al., “Modeling antibody hypervariable loops: a combined algorithm,” PNAS, 1989, 86(23):9268-9272, (“AbM” 넘버링 방식).
주어진 CDR 또는 FR의 경계는 서열을 식별하는데 사용된 방식에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, Kabat 방식은 구조 정렬에 기반하는 반면, Chothia 방식은 구조 정보에 기반한다. Kabat 방식과 Chothia 방식 양자 모두의 넘버링은 가장 흔한 항체 영역 서열 길이에 기반하되, 예컨대 "30a"과 같은 삽입 문자 및 몇몇 항체에 나타나는 결실을 표시한다. 이러한 2 가지 방식은 상이한 위치에 삽입 및 결실("indel")을 나타내므로, 결과적으로 상이한 넘버링이 생성된다. Contact 방식은 복잡한 결정 구조 분석에 기반하며 여러 측면에서 Chothia 넘버링 방식과 유사하다. AbM 방식은 Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에서 사용된 방식에 기초한 Kabat과 Chothia 정의 사이의 절충안이다.
하기 표 12는 각각 Kabat, Chothia, AbM, 및 Contact 방식에 의해 식별된 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3 및 CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3의 예시적인 경계 위치를 나열한 것이다. CDR-H1의 경우, 잔기 넘버링은 Kabat 및 Chothia 넘버링 방식 모두를 사용하여 나열된다. FR은 CDR 사이에 위치하며, 예를 들어, FR-L1은 CDR-L1 앞에 위치하고, FR-L2는 CDR-L1와 CDR-L2 사이에 위치하고, FR-L3는 CDR-L2와 CDR-L3 사이에 위치한다. 나타낸 Kabat 넘버링 방식은 H35A 및 H35B에서 삽입을 나타내므로, 나타낸 Kabat 넘버링 변환을 이용하여 넘버링할 경우, Chothia CDR-H1 루프의 말단은, 루프 길이에 따라, H32와 H34 사이에서 변한다.
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따라서, 달리 명시되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예를 들면 그의 가변 영역의 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역," 또는 개별적으로 명시된 CDR (예를 들어 "CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3)은 임의의 전술한 방식에 의해 정의되는 상보성 결정 영역(또는 특이적인 상보성 결정 영역)을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 예를 들어, 특정 CDR (예를 들어, CDR-H3)이 주어진 VH 또는 VL 영역에서 아미노산 서열에서 대응하는 CDR의 아미노산을 함유한다고 언급되는 경우, 이러한 CDR은 임의의 전술한 방식으로 정의되는 바와 같이, 가변 영역 내 대응하는 CDR (예를 들어, CDRH3)의 서열을 갖는 것으로 이해된다. 일부 구현예에서, 명시된 CDR 서열이 명시된다. 제공되는 항체의 예시적인 CDR 서열이 다양한 넘버링 방식을 사용하여 기재되지만, 제공되는 항체는 다른 임의의 전술한 넘버링 방식 또는 숙련된 당업자에게 공지된 다른 넘버링 방식에 따라 기재되는 CDR을 포함할 수 있는 것으로 이해된다.
마찬가지로, 달리 언급되지 않는 한, 주어진 항체 또는 이의 영역, 예를 들면 그의 가변 영역의 FR 또는 개별적인 특정된 FR(들) (예를 들어, FR-H1, FR-H2, FR-H3, FR-H4)은 상기 여하한 공지 방식에 의해 정의되는 골격(또는 특정 골격) 영역을 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 예시에서, 특정 CDR, FR의 식별을 위한 방식이 명시된다. 예를 들면 CDR은 Kabat, Chothia, AbM 또는 Contact 방법으로 명시된다. 다른 경우에, CDR 또는 FR의 특정 아미노산 서열이 주어진다.
용어 “가변 영역(variable region)”또는 “가변 도메인(variable domain)”은 항체가 항원에 결합하는데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄 도메인을 말한다. 고유 항체의 중쇄와 경쇄 (차례로 VH 및 VL)의 가변 도메인은 일반적으로 유사한 구조를 가지며, 각 도메인은 4개의 보존된 프레임워크 영역 (FRs)과 3개의 CDR을 포함한다. (예를 들어, Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., page 91 (2007). 참조) 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원-결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 더욱이, 특정 항원에 결합하는 항체는 상보성 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크린하기 위하여 항원에 결합하는 항체의 VH 또는 VL 도메인을 이용하여 단리될 수 있다. 예를 들어, Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993); Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)를 참조한다.
단일-도메인 항체는 이 항체의 중쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부분 또는 경쇄 가변 도메인의 전부 또는 일부분이 포함된 항체 분절들이다. 특정 구현예에서, 단일-도메인 항체는 인간 단일-도메인 항체이다. 일부 구현예에서, CAR은 항원, 예컨대 암 마커 또는 종양 세포 또는 암 세포와 같은 표적화된 세포 또는 질병의 세포 표면 항원, 예컨대 본 명세서에 기재 또는 공지되어 있는 임의의 표적 항원에 특이적으로 결합하는 항체 중쇄 도메인을 포함한다.
항체 단편은 다양한 기법에 의해 제조될 수 있으며, 이러한 기법으로는 온전한 항체의 단백질분해 소화, 뿐만 아니라 재조합 숙주 세포에 의한 제조를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 항체는 재조합으로 제조된 단편, 예컨대 자연적으로 발생하지 않는 배열, 예컨대 합성 링커, 예를 들어, 펩타이드 링커에 의해 연결된 둘 이상의 이상 항체 영역 또는 사슬을 가지는 배열을 포함하는 단편, 및/또는 자연적으로 발생하는 온전한 항체의 효소 소화에 의해 제조될 수 없는 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 scFv이다.
“인간화” 항체는 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 아미노산 잔기가 비-인간 CDR으로부터 유래하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 아미노산 잔기가 인간 FR으로부터 유래한 항체이다. 인간화 항체는 선택적으로 인간 항체로부터 유래한 항체 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 비-인간 항체의 “인간화 형태”는, 일반적으로 모체의 비-인간 항체의 특이성 및 친화성을 유지하면서 인간에 대한 면역원성을 감소시키기 위해 인간화를 거치는, 비-인간 항체의 변이체를 지칭한다. 일부 구현예에서, 인간화 항체 내 일부 FR은 비-인간 항체(예를 들어, CDR 잔기가 유래하는 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환되어, 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선한다.
이에 따라, 일부 구현예에서, TCR-유사 CAR를 비롯한 키메라 항원 수용체는 항체 또는 항체 단편을 포함하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 단편은 scFv를 포함한다. 일부 양태에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편 및 세포 내 신호 전달 영역을 포함하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 1차 신호전달 도메인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 요소의 신호전달 도메인 및/또는 면역수용체 타이로신-계 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호전달 도메인이거나 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어, CAR의 항체 부분을 비롯하여 재조합 수용체, 예컨대 CAR은 면역 글로불린 불변 영역, 예컨대 힌지 영역 (예컨대, IgG4 힌지 영역) 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 영역의 적어도 일부를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, CAR와 같은 재조합 수용체, 예컨대 이의 항체 일부는 스페이서를 추가로 포함할 수 있으며, 이러한 스페이서는 면역글로불린 불변 영역 또는 변형체 또는 이의 개질된 버전의 적어도 일부, 예컨대 힌지 영역, 예컨대, IgG4 힌지 영역, 및/또는 CH1/CL 및/또는 Fc 영역일 수 있거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 스페이서 및/또는 힌지 영역을 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 일부분은, 인간 IgG, 예컨대 IgG4 또는 IgG1이다. 일부 양태에서, 불변 영역의 일부는 항원-인식 성분, 예컨대 scFv와 막관통 도메인 사이의 스페이서 영역으로서 작용한다. 스페이서는 스페이서가 없는 경우와 비교하여, 항원 결합 후 세포의 증가된 반응성을 제공하는 길이의 것일 수 있다. 예시적 스페이서, 예컨대 힌지 영역은 국제 특허 출원 공보 WO2014031687에 기술된 힌지 영역을 포함한다. 일부 예시에서, 스페이서는 길이가 약 12개의 아미노산이거나 그 이하이다. 예시적 스페이서는 적어도 약 10 내지 229개의 아미노산, 약 10 내지 200개의 아미노산, 약 10 내지 175개의 아미노산, 약 10내지 150개의 아미노산, 약 10 내지 125개의 아미노산, 약 10 내지 100개의 아미노산, 약 10 내지 75개의 아미노산, 약 10 내지 50개의 아미노산, 약 10 내지 40개의 아미노산, 약 10 내지 30개의 아미노산, 약 10 내지 20개의 아미노산 또는 약 10 내지 15개의 아미노산을 가지는 것들, 및 나열된 범위 중 임의의 종점들 사이의 임의의 정수를 포함하는 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, 스페이서 영역은 약 12 개 또는 그 이하의 아미노산, 약 119개 또는 그 이하의 아미노산, 또는 약 229개 또는 그 이하의 아미노산을 가진다. 예시적 스페이서는 IgG4 힌지 단독, CH2 및 CH3 도메인에 연결된 IgG4 힌지, 또는 CH3 도메인에 연결된 IgG4 힌지를 포함한다. 예시적인 스페이서로는, 문헌 Hudecek et al. Clin. Cancer Res., 19:3153 (2013), 또는 국제 특허 출원 공보 WO2014031687, 미국 특허 8,822,647 또는 공개 특허 US2014/0271635에 기재된 스페이서를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 불변 영역 또는 일부분은, 인간 IgG, 예컨대 IgG4 또는 IgG1이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 (서열 번호 1에 기재된) 서열 ESKYGPPCPPCP을 가지며, 서열 번호 2에 기재된 서열에 의해 인코딩된다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호 3에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호 4에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 불변 영역 또는 일부분은 IgD의 것이다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호 5에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호 1, 3, 4 및 5 중 임의의 서열에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 가진다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호 26-34에 기재된 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 스페이서는 서열 번호 26-34 중 임의의 서열에 대해 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 가진다.
이러한 항원 인식 도메인은 일반적으로 하나 이상의 세포 내 신호 전달 성분, 예컨대 CAR의 경우 TCR 복합체 등의 항원 수용체 복합체 및/또는 다른 세포 표면 수용체를 통한 신호를 통한 활성화를 모방하는 신호 전달 성분에 연결된다. 이에 따라, 일부 구현예에서, 항원-결합 성분 (예컨대, 항체)은 하나 이상의 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역에 연결된다. 일부 구현예에서, 막관통 도메인은 세포 외 도메인에 융합된다. 한 구현예에서, 수용체 (예컨대, CAR)의 도메인 중 하나에 자연적으로 결합된 막관통 도메인이 사용된다. 일부 경우에서, 막관통 도메인은 동일하거나 상이한 표면 막 단백질들의 막경유 도메인들에 이들 도메인들이 결합하지 않도록 하여, 해당 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하기 위해 선택되거나 아미노산 치환하여 변형된다.
일부 구현예에서 막관통 도메인은 천연 또는 합성 공급원으로부터 유도될 수 있다. 천연 공급원인 경우, 도메인은 일부 양태에서 임의의 멤브레인-결합된 또는 막관통 단백질로부터 유도될 수 있다. 막관통 영역은 (즉, 적어도 막관통 영역(들)을 포함하는) T-세포 수용체, CD28, CD3 입실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154의 알파, 베타 또는 제타 사슬로부터 유도된 영역을 포함한다. 택일적으로 막관통 도메인은 일부 구현예에서 합성이다. 일부 양태에서, 합성 막관통 도메인은 주로 소수성 잔기, 예컨대 류신 및 발린을 포함한다. 일부 양태에서, 삼중의 페닐알라닌, 트립토판 및 발린은 합성 막관통 도메인의 각 말단에서 발견될 것이다. 일부 구현예에서, 결합은 링커, 스페이서 및/또는 막관통 도메인(들)에 의한 것이다.
세포 내 신호전달 도메인 또는 영역 중에는 천연 항원 수용체를 통한 신호, 공동 자극 수용체와 조합하여 그러한 수용체를 통한 신호 및/또는 공동 자극 수용체만을 통한 신호를 모방하거나 이와 비슷한 것들이 있다. 일부 구현예에서, 짧은 올리고- 또는 폴리펩타이드 링커, 예컨대 글리신 및 세린 (예컨대, 이중 글리신-세린)을 포함하는 것과 같은 길이가 2 내지 10개 사이의 아미노산인 링커가 존재하며, 이는 막관통 도메인과 CAR의 세포질 신호전달 도메인 또는 영역 사이의 결합을 형성한다.
수용체, 예를 들어, CAR는 일반적으로 적어도 하나의 세포 내 신호 전달 성분 또는 성분들을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체는 TCR 복합체의 세포 내 성분, 예컨대 T 세포 활성화 및 세포 독성을 매개하는 TCR CD3 사슬, 예를 들어, CD3 제타 사슬을 포함한다. 이에 따라, 일부 양태에서, 항원-결합 부분은 하나 이상의 세포 신호 전달 모듈에 연결된다. 일부 구현예에서, 세포 신호 전달 모듈은 CD3 막관통 도메인, CD3 세포 내 신호 전달 도메인 및/또는 기타 CD 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 수용체, 예를 들어, CAR는 Fc 수용체 γCD4, CD25 또는 CD16과 같은 하나 이상의 추가적인 분자의 일부를 추가로 포함한다. 예를 들어, 일부 양태에서, CAR 또는 기타 키메라 수용체는 CD3-제타 (CD3-ζ또는 Fc 수용체 γ및 CD8, CD4, CD25 또는 CD16 사이의 키메라 분자를 포함한다.
일부 구현예에서, CAR 또는 기타 키메라 수용체의 연결시, 수용체의 세포질 도메인 또는 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역은 정상 이펙터 기능 또는 면역 세포, 예를 들어 CAR을 발현하도록 조작된 T 세포의 반응 중 적어도 하나를 활성화시킨다. 예를 들어, 일부 상황에서, CAR은 세포 용해 작용 또는 보조 T 작용, 예컨대 사이토카인 또는 기타 인자의 분비와 같은 T 세포의 기능을 유도한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체 성분 또는 공동 자극 분자의 세포 내 신호 전달 도메인 또는 영역의 절두된 부분은, 예컨대 이펙터 기능 신호를 전달하는 경우에 손상되지 않은 면역 자극 사슬 대신에 사용된다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 세포 내 도메인 또는 도메인들 또는 영역은 T 세포 수용체 (TCR)의 세포질 서열, 일부 양태에서 또한 자연적인 상황에서 항원 수용체 결합 후 신호 형질전환을 개시하기 위해 이러한 수용체와 협력하여 작용하는 공동-수용체의 서열, 및/또는 이러한 분자의 임의의 유도체 또는 변형체, 및/또는 동일한 기능적 능력을 가지는 임의의 합성 서열을 포함한다.
천연 TCR의 맥락에서, 완전한 활성화는 일반적으로 TCR을 통한 신호 전달뿐만 아니라 공동 자극 신호도 필요로 한다. 이에 따라, 일부 구현예에서, 완전한 활성화를 촉진시키기 위하여, 2차 또는 공동 자극 신호를 발생시키는 성분이 또한 CAR에 포함된다. 다른 구현예에서, CAR은 공동 자극 신호를 생성하기 위한 성분을 포함하지 않는다. 일부 양태에서, 추가적인 CAR은 동일한 세포에서 발현되며, 2차 또는 공동 자극 신호를 생성하기 위한 성분을 제공한다.
T 세포 활성화는 일부 양태에서 다음의 두 종류의 세포질 신호 전달 서열에 의해 매개되는 것으로 설명된다: TCR을 통해 항원-의존적 1차 활성화를 개시하는 서열 (1차 세포질 신호 전달 서열), 및 2차 또는 공동 자극 신호를 제공하기 위해 항원-독립적인 방식으로 작용하는 서열 (2차 세포질 신호 전달 서열). 일부 양태에서, CAR은 이러한 신호 전달 성분들 중 하나 또는 둘 모두를 포함한다.
일부 양태에서, CAR은 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절하는 1차 세포질 신호 전달 서열을 포함한다. 자극하는 방식으로 작용하는 1차 세포질 신호 전달 서열은 면역 수용체 타이로신-기반 활성 모티프 또는 ITAM으로 알려진 신호 전달 모티프를 포함할 수 있다. 1차 세포질 신호 전달 서열을 포함하는 ITAM의 예시로는 TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 입실론, CD8, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d로부터 유래된 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR의 세포질 신호 전달 분자(들)은 세포질 신호 전달 도메인 또는 영역, 이의 일부분, 또는 CD3 제타로부터 유래된 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 CD28, 4-1BB, OX40, DAP10 및 ICOS와 같은 공동자극 수용체의 신호 전달 도메인 또는 영역 및/또는 막관통 부분을 포함한다. 일부 양태에서, 동일한 CAR은 활성화 및 공동자극 성분을 모두 포함한다.
일부 구현예에서, 활성화 도메인은 하나의 CAR 내에 포함되는 반면, 공동자극 성분은 또 다른 항원을 인식하는 또 다른 CAR에 의해 제공된다. 일부 구현예에서, CAR은 활성화 또는 자극 CAR, 공동자극 CAR을 포함하며, 모두 동일한 세포상에 발현된다 (WO2014/055668 참조). 일부 양태에서, 세포는 하나 이상의 자극 또는 활성화 CAR 및/또는 공동자극 CAR을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 억제 CAR (iCAR, 문헌 Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013) 참조), 예컨대 질환-표적화 CAR을 통해 전달된 활성화 신호가 예컨대 오프-표적화 효과를 감소시키기 위해 억제 CAR이 이의 리간드에 결합함으로써 감소하거나 억제되는, 질환 또는 증상과 관련되고 및/또는 질환 또는 증상에 특이적 것 외의 항원을 인식하는 CAR을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체를 발현하는 세포는 억제 CAR (iCAR, 문헌 Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013) 참조), 예컨대 질환-표적화 CAR을 통해 전달된 활성화 신호가 예컨대 오프-표적화 효과를 감소시키기 위해 억제 CAR이 이의 리간드에 결합함으로써 감소하거나 억제되는, 질환 또는 증상과 관련되고 및/또는 질환 또는 증상에 특이적 것 외의 항원을 인식하는 CAR을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 두 수용체는 각각 세포에 대한 활성화 및 억제 신호를 유도하여, 수용체 중 하나에 의한 이의 항원에 대한 결찰은 세포를 활성화시키거나 반응을 유도하지만, 두 번째 억제 수용체에 의한 이의 항원에 대한 결찰은 반응을 억제하거나 감쇠시키는 신호를 유도한다. 예시로는 활성화 CAR과 억제 CAR (iCAR)의 조합이 있다. 이러한 전략은, 예를 들어, 오프-표적화 효과의 가능성을 감소시키기 위해, 활성화 CAR은 질환 또는 증상에서 발현되지만 정상 세포에서도 발현되는 항원과 결합하고, 억제 수용체는 정상 세포에서 발현되지만 질환 또는 증상의 세포에서는 발현되지 않는 별도의 항원과 결합하는데 사용될 수 있다.
일부 양태에서, 키메라 수용체는 억제 CAR (예를 들어 iCAR)이거나, 또는 이를 포함하고, 세포에서 면역 반응, 예컨대 ITAM- 및/또는 공동 자극-촉진 반응을 약화시키거나 억제하는 세포 내 성분을 포함한다. 이러한 예시적인 세포 내 신호전달 성분은 면역 체크포인트 분자에서 발견되는 성분, 예컨대 PD-1, CTLA4, LAG3, BTLA, OX2R, TIM-3, TIGIT, LAIR-1, PGE2 수용체, EP2/4 아데노신 수용체, 예컨대 A2AR이다. 일부 양태에서, 조작된 세포는 이러한 억제 분자의 신호전달 도메인 또는 억제 분자로부터 유도된 신호전달 도메인을 포함하여 억제 CAR를 포함하여, 예를 들어, CAR 활성화 및/또는 공동자극에 의해 유도되는 세포의 반응을 약화시키는 역할을 한다.
특정 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3 (예컨대, CD3- 제타) 세포 내 도메인에 연결된 CD28 막관통 도메인 및 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3 제타 세포 내 도메인에 연결된, 키메라 CD28 및 CD137 (4-1BB, TNFRSF9) 공동자극 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR은 하나 이상의, 예컨대 2개 이상의 공동자극 도메인 및 활성화 도메인, 예컨대 1차 활성화 도메인을 세포질 부분에 포함한다. 예시적인 CAR은 CD3-제타, CD28 및 4-1BB의 세포 내 성분을 포함한다.
일부 구현예에서, CAR 또는 기타 항원 수용체는 세포 표면 수용체의 절두된 버전, 예컨대 절두된 EGFR (tEGFR)과 같은 수용체를 발현하기 위한 세포의 형질 도입 또는 조작을 확인하는데 사용될 수 있는, 세포 표면 마커 등의 마커를 추가로 포함한다. 일부 양태에서, 마커는 CD34, NGFR 또는 상피 성장 인자 수용체 (예컨대, tEGFR)의 전부 또는 일부 (예컨대, 절두된 형태)를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 형질도입 마커 또는 대리 마커이다. 형질도입 마커 또는 대리 마커는 폴리뉴클레오타이드, 예를 들어, 재조합 수용체를 인코딩하는 폴리뉴클레오타이드가 함께 도입된 세포를 검출하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 형질도입 마커는 세포의 변형을 나타내거나 확인할 수 있다. 일부 구현예에서, 대리 마커는 재조합 수용체, 예를 들어 CAR와 함께 세포 표면 상에서 공동 발현되도록 제조된 단백질이다. 구체적인 구현예에서, 이러한 대리 마커는 활성이 거의 없거나 전혀 없도록 변형된 표면 단백질이다. 특정 구체예에서, 대리 마커는 재조합 수용체를 인코딩하는 동일한 폴리뉴클레오타이드에서 인코딩된다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체를 인코딩하는 핵산 서열은 선택적으로 내부 리보솜 도입 부위 (IRES)에 의해 분리된, 마커를 인코딩하는 핵산 서열, 또는 자가-절단 펩타이드 또는 리보솜 스키핑을 유도하는 펩타이드, 예컨대 2A 서열, 예컨대 T2A, P2A, E2A 또는 F2A를 인코딩하는 서열에 작동 가능하게 연결된다. 외인성 마커 유전자는 경우에 따라 조작된 세포와 관련하여 활용되어 세포의 검출 또는 선택을 허용하며, 일부 경우에는, 세포 자살을 촉진할 수도 있다.
예시적인 대리 마커는 세포 표면 폴리펩타이드의 절두된 형태, 예컨대 비-기능적이며, 신호 또는 세포 표면 폴리펩타이드의 전장 형태에 의해 통상적으로 형질도입되는 신호를 형질전환하지 않거나 또는 형질전환할 수 없고, 및/또는 내재화하지 않거나 내재화가 불가능한 절두된 형태를 포함할 수 있다. 예시적인 절두된 세포 표면 폴리펩타이드로는 성장 인자 또는 다른 수용체의 절두된 형태, 예컨대 절두된 인간 상피 성장 인자 수용체 2 (tHER2), 절두된 상피 성장 인자 수용체 (tEGFR, 서열 번호 7 또는 16에 기재된 예시적인 tEGFR 서열) 또는 전립선-특이적 막항원 (PSMA) 또는 이의 개질된 형태를 포함한다. tEGFR은 항체 세툭시맙 (Erbitux®) 또는 다른 치료용 항-EGFL 항체 또는 결합 분자에 의해 인식되는 에피토프를 포함할 수 있는데, 이는 tEGFR 작제물 및 인코딩된 외인성 단백질, 예를 들어 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 세포를 동정하거나 선택, 및/또는 인코딩된 외인성 단백질을 발현하는 세포를 제거하거나 분리시키는데 사용될 수 있다. 미국 특허 8,802,374 및 [Liu et al., Nature Biotech. 2016 April; 34(4): 430-434]를 참조한다. 일부 양태에서, 마커, 예를 들어, 대리 마커는, CD34, NGFR, CD19의 전체 또는 일부 (예를 들어, 절두된 형태) 또는 절두된 CD19, 예를 들어, 절두된 비-인간 CD19, 또는 상피 성장 인자 수용체 (예를 들어, tEGFR)를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커는 형광 단백질, 예컨대 녹색 형광 단백질 (GFP), 향상된 녹색 형광 단백질 (EGFP), 예컨대 슈퍼-폴드 GFP (sfGFP), 적색 형광 단백질 (RFP), 예컨대 tdTomato, mCherry, mStrawberry, AsRed2, DsRed 또는 DsRed2, 시안 형광 단백질 (CFP), 청록색 형광 단백질 (BFP), 강화된 청색 형광 단백질 (EBFP), 및 황색 형광 단백질 (YFP), 및 이의 변형체, 예를 들어 종 변형체, 단량체 변형체, 및 이러한 형광 단백질의 코돈-최적화 및/또는 향상된 변형체이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 마커는 효소, 예컨대 루시퍼라제, E. coli의 lacZ 유전자, 알칼리성 포스파타제, 분비된 배아 알칼리성 포스파타제 (SEAP), 클로람페니콜 아세틸렌 트랜스퍼라제 (CAT)이거나, 또는 이를 포함한다. 예시적인 발광 리포터 유전자로는 루시퍼라제 (luc), β갈락토시다제, 클로람페니콜 아세틸 트랜스퍼라제 (CAT), β글루쿠로니다제 (GUS) 또는 이의 변형체를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 선별 마커이다. 일부 구현예에서, 선별 마커는 외인성 시제 또는 약물에 대한 내성을 부여하는 폴리펩타이드이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 선별 마커는 항생제 내성 유전자이다. 일부 구현예에서, 선별 마커는 포유동물 세포에 대한 항생제 내성을 부여하는 항생제 내성 유전자이다. 일부 구현예에서, 선별 마커는 퓨로마이신 내성 유전자, 하이그로마이신 내성 유전자, 블라스티신 내성 유전자, 네오마이신 내성 유전자, 제네티신 내성 유전자 또는 지오신 내성 유전자 또는 이의 변형된 형태이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 마커를 코딩하는 핵산은 절단 가능한 링커 서열, 예컨대 T2A와 같은 링커 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드에 작동 가능하도록 연결된다. 예를 들어, 마커, 및 선택적으로 링커 서열은, 국제 공개 특허 WO2014031687에 기재된 임의의 마커일 수 있다. 예를 들어, 상기 마커는 필요에 따라 T2A 절단 가능 링커 서열과 같은 링커 서열에 연결된, 절단된 EGFR (tEGFR)일 수 있다. 절단형 EGFR (예를 들어 tEGFR)에 대한 예시적인 폴리펩타이드는 서열 번호 7 또는 16에 기재된 tEGFR 서열, 또는 서열 번호 7 또는 16과 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. 예시적인 T2A 링커 서열은 서열 번호 6 또는 17에 기재된 아미노산 서열, 또는 서열 번호 6 또는 17과 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 마커는 T 세포상에서 자연적으로 발견되지 않거나 T 세포의 표면상에서 자연적으로 발견되지 않는 분자, 예컨대 세포 표면 단백질 또는 이의 일부이다. 일부 구현예에서, 분자는 비-자체 분자, 예컨대 비-자체 단백질이며, 즉 세포가 입양 전달될 숙주의 면역 시스템에 의해 "자체"로 인식되지 않는다.
일부 구현예에서, 마커는 치료 기능을 제공하지 않으며 및/또는 예컨대, 성공적으로 조작된 세포를 선택하기 위한 유전자 조작용 마커로서 사용되는 것 이외의 효과를 발생시키지 않는다. 기타 구현예에서, 마커는 치료용 분자, 또는 그렇지 않으면 입양 전달 및 리간드와의 접촉시 세포의 반응을 증강 및/또는 감쇠시키기 위한 공동자극 또는 면역 체크포인트 분자와 같은, 생체 내에서 접촉하게 될 세포에 대한 리간드 등의 원하는 효과를 발휘하는 분자일 수 있다.
일부 경우에서, CAR은 제1, 제2 및/또는 제3 세대 CAR로 지칭된다. 일부 양태에서, 제1 세대 CAR은 항원 결합시 단독으로 CD3-사슬 유도 신호를 제공하는 것이고; 일부 양태에서, 제2 세대 CAR은 CD28 또는 CD137 등의 공동자극 수용체로부터의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 것과 같은, 신호 및 공동자극 신호를 제공하는 것이며; 일부 양태에서, 제3 세대 CAR은 상이한 공동자극 수용체의 여러 공동자극 도메인을 포함하는 것이다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 항체 단편을 포함하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 양태에서, 키메라 항원 수용체는 항체 또는 단편 및 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하는 세포 외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 단편은 scFv를 포함하고, 세포 내 도메인은 ITAM을 포함한다. 일부 양태에서, 세포 내 신호 전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 제타 사슬의 신호 전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 세포 외 도메인 및 세포 내 신호 전달 도메인을 연결하는 막관통 도메인을 포함한다. 일부 양태에서, 막관통 도메인은 CD28의 막관통 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 공동자극 분자의 세포 내 도메인을 포함한다. 세포 외 도메인과 막관통 도메인은 직접적으로 또는 간접적으로 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포 외 도메인과 막관통 도메인은 스페이서, 예컨대 본 명세서에 기재된 임의의 스페이서에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 수용체는 막관통 도메인으로부터 유래하는 분자의 세포 외 부분, 예컨대 CD28 세포 외 부분을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는, 예컨대 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 도메인 사이에, T 세포 공동자극 분자로부터 유래되는 세포 내 도메인 또는 이의 기능적 변이체를 함유한다. 일부 양태에서, T 세포 공동자극 분자는 CD28 또는 4-1BB이다.
일부 구현예에서, 항원 또는 항원 결합 도메인은 CD19이다. 일부 구현예에서, scFv는 CD19에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유도된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD19에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 마우스 유래 항체 예컨대 FMC63 및 SJ25C1이다. 일부 구현예에서, 항체 또는 항체 단편은 인간 항체, 예컨대, US 2016/0152723에 기재된 항체이다.
일부 구현예에서, scFv는 FMC63으로부터 유래한다. FMC63은 일반적으로 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 만들어진 마우스 단일클론 IgG1 항체를 지칭한다 (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). 일부 구현예에서, FMC63 항체는 각각 서열 번호 38 및 39로 제시된 CDR-H1 및 CDR-H2, 및 서열 번호 40 또는 54로 제시된 CDR-H3; 및 서열 번호 35로 제시된 CDR-L1 및 서열 번호 36 또는 55로 제시된 CDR-L2 및 서열 번호 37 또는 34로 제시된 CDR-L3을 포함한다. 일부 구현예에서, FMC63 항체는 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다.
일부 구현예에서, svFv는 서열 번호 35의 CDR-L1 서열, 서열 번호 36의 CDR-L2 서열, 및 서열 번호 37의 CDR-L3 서열을 포함하는 가변 경쇄 및/또는 서열 번호 38의 CDR-H1 서열, 서열 번호 39의 CDR-H2 서열 및 서열 번호 40의 CDR-H3 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호 41에 기재된 가변 중쇄 영역 및 서열 번호 42에 기재된 가변 경쇄 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 링커는 서열 번호 56에 기재된다. 일부 구현예에서, scFv는, 순서대로, VH, 링커, 및 VL를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는, 순서대로, VL, 링커, 및 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, svFv는 서열 번호 57에 기재된 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 번호 57와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 나타내는 서열에 의해 코딩된다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호 43에 기재된 아미노산 서열 또는 서열 번호 43와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scFv는 SJ25C1로부터 유래한다. SJ25C1은 인간 기원의 CD19를 발현하는 Nalm-1 및 -16 세포에 대하여 만들어진 마우스 단일클론 IgG1 항체이다 (Ling, N. R., et al. (1987). Leucocyte typing III. 302). 일부 구현예에서, SJ25C1 항체는 각각 서열 번호 47-49로 제시된 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3, 각각 서열 번호 44-46으로 제시된 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3를 포함한다. 일부 구현예에서, SJ25C1 항체는 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 (VH) 및 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 (VL)을 포함한다.
일부 구현예에서, svFv는 서열 번호 44의 CDR-L1 서열, 서열 번호 45의 CDR-L2 서열, 및 서열 번호 46의 CDR-L3 서열을 포함하는 가변 경쇄 및/또는 서열 번호 47의 CDR-H1 서열, 서열 번호 48의 CDR-H2 서열 및 서열 번호 49의 CDR-H3 서열을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호 50에 기재된 가변 중쇄 영역 및 서열 번호 51에 기재된 가변 경쇄 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 가변 중쇄 및 가변 경쇄는 링커에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 링커는 서열 번호 52에 기재된다. 일부 구현예에서, scFv는, 순서대로, VH, 링커, 및 VL를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는, 순서대로, VL, 링커, 및 VH를 포함한다. 일부 구현예에서, scFv는 서열 번호 53에 기재된 아미노산 서열 또는 서열 번호 53와 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 서열 동일성을 나타내는 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항원은 CD20이다. 일부 구현예에서, scFv는 CD20에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유도된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD20에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 리툭시맙이거나, 이로부터 유도된 항체, 예컨대 리툭시맙 scFv이다.
일부 구현예에서, 항원은 CD22이다. 일부 구현예에서, scFv는 CD22에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유도된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, CD22에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 m971 이거나, 이로부터 유도된 항체, 예컨대 m971 scFv이다.
일부 구현예에서, 항원 또는 항원 결합 도메인은 BCMA이다. 일부 구현예에서, scFv는 BCMA에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유도된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, BCMA에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 국제 출원 공개 번호 WO 2016/090327 및 WO 2016/090320에 기재된 항체 또는 항체 단편으로부터의 VH 및 VL이거나, 또는 이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항원 또는 항원 결합 도메인은 GPRC5D이다. 일부 구현예에서, scFv는 GPRC5D에 특이적인 항체 또는 항체 단편으로부터 유도된 VH 및 VL을 포함한다. 일부 구현예에서, GPRC5D에 결합하는 항체 또는 항체 단편은 국제 출원 공개 번호 WO 2016/090329 및 WO 2016/090312에 기재된 항체 또는 항체 단편으로부터의 VH 및 VL이거나, 또는 이를 포함한다.
예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막관통 부분이거나 이를 함유하는 막관통 도메인, 및 CD28의 신호전달 부분 또는 이의 기능적 변이체 및 CD3 제타의 신호전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포 내 신호전달 도메인을 함유한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예를 들어, 항체 단편, CD28 또는 이의 기능적 변이체의 막관통 부분이거나 이를 함유하는 막관통 도메인, 및 4-1BB의 신호전달 부분 또는 이의 기능적 변이체 및 CD3 제타의 신호전달 부분 또는 이의 기능적 변이체를 함유하는 세포 내 신호전달 도메인을 함유한다. 이러한 일부 구현예에서, 수용체는 인간 Ig 분자와 같은 Ig 분자의 일부분, 예를 들어 Ig 힌지, 예컨대 IgG4 힌지를 함유하는 스페이서를 더 포함하고, 예컨대 힌지-온리 (hinge-only) 스페이서이다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어, CAR의 막관통 도메인은 인간 CD28의 막관통 도메인 또는 이의 변이체, 예컨대 인간 CD28의 27-아미노산 막관통 도메인 (예를 들어, 수탁 번호: P01747.1), 또는 서열 번호 8에 기재된 아미노산 서열 또는 서열 번호 8과 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 서열 동일성을 나타내는 아미노산 서열을 포함하는 막관통 도메인이거나, 또는 이를 포함하고; 일부 구현예에서, 재조합 수용체의 일부를 포함하는 막관통-도메인은 서열 번호 9에 기재된 아미노산 서열 또는 이와 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 서열 동일성을 가지는 아미노산 서열 또는 예컨대 인간 CD28의 27-아미노산 막관통 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 키메라 항원 수용체는 T 세포 공동자극 분자의 세포 내 도메인을 포함한다. 일부 양태에서, T 세포 공동자극 분자는 CD28 또는 4-1BB이다.
일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 세포 내 신호전달 도메인, 영역 또는 구성성분(들)은, 인간 CD28의 세포 내 공동자극 신호전달 도메인 또는 이의 기능적 변이체 또는 일부, 예컨대 천연 CD28 단백질의 186-187 위치에서 LL이 GG으로 치환된 도메인을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역은 서열 번호 10 또는 11에 기재된 아미노산 서열, 또는 서열 번호 10 또는 11과 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 도메인 또는 영역은 4-1BB (예를 들어, 수탁 번호 Q07011.1)의 세포 내 공동자극 신호전달 도메인 또는 영역 또는 이의 기능적 변형체 또는 일부, 예컨대 서열 번호 12에 기재된 서열 또는 서열 번호 12와 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열 또는 예컨대 인간 4-1BB의 42-아미노산 세포질 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 재조합 수용체, 예를 들어 CAR의 세포 외 신호전달 영역은, 인간 CD3 사슬, 선택적으로 CD3 제타 자극 신호전달 도메인 또는 영역 또는 이의 기능적 변형체, 예컨대 인간 CD3ζ의 동형 3의 112 AA 세포질 도메인 (수탁 번호: P20963.2) 또는 미국 특허 7,446,190 또는 미국 특허 8,911,993에 기재된 CD3 제타 신호전달 도메인 또는 영역을 포함한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역은 서열 번호 13, 14 또는 15에 기재된 아미노산 서열, 또는 서열 번호 13, 14 또는 15와 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 측면에서, 스페이서는 오로지 IgG의 힌지 영역만을 함유하는데, 예컨대 IgG4 또는 IgG1의 힌지 영역만, 예컨대 서열 번호 1에 기재된 힌지 온리 스페이서이다. 다른 구체예에서, 스페이서는 Ig 힌지, 예를 들어, IgG4-유도된 힌지, 선택적으로 CH2 및/또는 CH3 도메인에 연결된 힌지이거나, 또는 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 Ig 힌지인데, 예컨대, 서열 번호 4에 기재된 것과 같은 CH2 및 CH3 도메인과 연결된 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 Ig 힌지인데, 예컨대 서열 번호 3에 기재된 것과 같은 CH3 도메인과만 연결된 IgG4 힌지이다. 일부 구현예에서, 상기 스페이서는 글리신-세린 풍부 서열 또는 유연 링커로 알려진 것과 같은 기타 유연 링커이거나 이를 포함한다.
예를 들어, 일부 구현예에서, CAR은 항체, 예컨대 항체 단편, 예컨대 scFv, 스페이서, 예컨대 면역글로불린 분자의 일부분을 함유하는 스페이서, 예컨대 힌지 영역 및/또는 중쇄 분자의 하나 이상의 불변 영역, 예컨대 Ig-힌지 함유 스페이서, CD28-유래 막관통 도메인의 전부 또는 일부분을 함유하는 막관통 도메인, CD28-유래 세포 내 신호전달 도메인 및 CD3 제타 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, CAR은 항체 또는 단편, 예컨대 scFv, 스페이서, 예컨대 Ig-힌지 함유 스페이서 중 어느 하나, CD28-유래 막관통 도메인, 4-1BB-유래 세포 내 신호전달 도메인, 및 CD3 제타-유래 신호전달 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 그러한 CAR 작제물을 인코딩하는 핵산 분자는 T2A 리보좀 스킵 요소를 인코딩하는 서열 및/또는 tEGFR 서열, 예를 들어 CAR을 인코딩하는 서열의 다운스트림 서열을 더 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 서열은 서열 번호 6 또는 17로 제시되는 T2A 리보좀 스킵 요소 또는 서열 번호 6 또는 17과 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 인코딩한다. 일부 구현예에서, 항원 수용체를 발현하는 T 세포 (예컨대, CAR)는 또한 비-면역원성 선별 에피토프로서 절단된 EGFR (EGFRt)를 발현하도록 생성될 수 있는데 (예를 들어, 동일한 컨스트럭트로부터 2 가지 단백질을 발현하기 위하여 T2A 리보좀 스위치에 의하여 분리되는 CAR 및 EGFRt를 인코딩하는 컨스트럭트를 도입함으로써), 이는 그 후 그러한 세포를 검출하는 마커로서 사용될 수 있다 (예를 들어, 미국 특허 8,802,374 참조). 일부 구현예에서, 상기 서열은 서열 번호 7 또는 16으로 제시되는 tEGFR 서열, 또는 서열 번호 7 또는 16과 적어도 (약) 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 이상의 서열 상동성을 나타내는 아미노산 서열을 인코딩한다.
대상체에 투여된 세포에 의해 발현되는 CAR과 같은 재조합 수용체는 일반적으로, 치료되는 질병 또는 질병 상태 또는 그의 세포에서 발현되고, 그와 관련되고, 및/또는 그에 특이적인 분자를 인식하거나 또는 그에 특이적으로 결합한다. 분자, 예를 들어 항원에 특이적으로 결합하면, 수용체는 일반적으로 ITAM-도입 신호와 같은 면역자극 신호를 세포 내로 전달하여, 그로 인하여 질병 또는 질병 상태를 표적하는 면역 반응을 촉진시킨다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 상기 세포는 질병 또는 질병 상태의, 또는 질병 또는 질병 상태와 관련된 세포 또는 조직에 의해 발현되는 항원에 특이적으로 결합하는 CAR을 발현한다.
2. T 세포 수용체 (TCR)
일부 구현예에서, 조작된 세포, 예컨대 T 세포는 표적 폴리펩타이드, 예컨대 종양, 바이러스 또는 자가면역 단백질의 항원의 펩타이드 에피토프 또는 T 세포 에피토프를 인식하는 T 세포 수용체 (TCR) 또는 이의 항원-결합 일부를 발현하는 세포가 제공된다.
일부 구현예에 있어서, "T 세포 수용체" 또는 "TCR"은 가변 α 및 β쇄 (각각, TCRα 및 TCRβ로도 알려짐) 또는 가변 γ및 δ쇄 (또한, 각각 TCRα 및 TCRβ로도 알려짐), 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하고, MHC 분자에 결합된 펩타이드에 특이적으로 결합할 수 있는 분자이다. 일부 구현예에서, TCR은 αβ형태이다. 통상, αβ와 γδ형태로 존재하는 TCR은 일반적으로 구조적으로 유사하지만, 이들을 발현하는 T 세포는 별개의 해부학적 위치 또는 기능을 가질 수 있다. TCR은 세포 표면상에서 또는 가용성 형태로 발견된다. 일반적으로, TCR은, 일반적으로 주조직 적합성 복합체 (MHC) 분자에 결합된 항원을 인식하는 역할을 하는 T 세포 (또는 T 림프구)의 표면에서 발견된다.
달리 언급하지 않는 한, 용어 "TCR"은 완전 TCR 뿐만 아니라 그의 항원-결합 부분 또는 항원-결합 단편을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 구현예에서, TCR은 온전한 또는 전장 TCR이고, 예컨대 αβ형태 또는 γδ형태의 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 전장 TCR 보다 짧지만 MHC 분자에서 결합된 특정 펩타이드에 결합하는 항원-결합 부분이고, 예컨대 MHC-펩타이드 복합체에 결합한다. 일부 경우, TCR의 항원-결합 부분 또는 단편은 전장 또는 온전한 TCR의 구조적 도메인의 일부분만을 함유하지만, 여전히 상기 전장 TCR이 결합하는 MHC-펩타이드 복합체와 같은 펩타이드 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 경우, 항원-결합 부분은 특정 MHC-펩타이드 복합체에 결합하기 위한 결합 위치를 형성하기에 충분한, TCR의 가변 도메인, 예컨대 가변 α 사슬 및 가변 β사슬를 포함한다. 일반적으로, TCR의 가변 사슬들은 펩타이드, MHC 및/또는 MHC-펩타이드 복합체의 인식에 관여하는 상보성 결정 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, TCR의 가변 도메인은 초가변 루프 또는 상보성 결정 영역 (CDR)을 함유하는데, 이것이 일반적으로 항원 인식 및 결합 능력 및 특이성에 주로 기여한다. 일부 구현예에서, TCR의 CDR 또는 그들의 조합은 주어진 TCR 분자의 항원-결합 위치의 전부 또는 실질적으로 전부를 형성한다. TCR 사슬의 가변 영역 내 다양한 CDR은 일반적으로 구조 영역 (FR)에 의해 분리되는데, 이는 CDR과 비교하여 TCR 분자 중에서 일반적으로 가변성이 덜 나타난다 (예를 들어, [Jores et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. U.S.A. 87:9138, 1990]; [Chothia et al., EMBO J. 7:3745, 1988] 참조; 또한 [Lefranc et al., Dev. Comp. Immunol. 27:55, 2003] 참조). 일부 구현예에서, CDR3이 항원 결합 또는 특이성을 책임지는 주 CDR이거나, 또는 항원 인식을 위해 및/또는 펩타이드-MHC 복합체의 가공된 펩타이드 부분과 상호 작용하기 위하여 주어진 TCR 가변 영역상의 3 개의 CDR 중에서 가장 중요하다. 일부 상황에서, 알파 사슬의 CDR1은 특정 항원 펩타이드의 N-말단 부분과 상호 작용할 수 있다. 일부 상황에서, 베타 사슬의 CDR1은 펩타이드의 C-말단 부분과 상호 작용할 수 있다. 일부 상황에서, CDR2는 MHC-펩타이드 복합체의 MHC 부분과의 상호 작용 또는 그의 인식을 책임지는 주 CDR에 가장 크게 기여하거나 그러한 CDR이다. 일부 구현예에서, β사슬의 가변 영역은 추가적인 초변이 영역을 함유할 수 있는데 (CDR4 또는 HVR4), 이는 일반적으로 항원 인식이 아닌 초항원 (superantigen) 결합과 관련된다 (Kotb (1995) Clinical Microbiology Reviews, 8:411-426).
일부 구현예에서, TCR은 또한 불변 도메인, 막관통 도메인 및/또는 짧은 세포질 꼬리를 함유할 수 있다 (예컨대, [Janeway et al., Immunobiology: The Immune System in Health and Disease, 3rd Ed., Current Biology Publications, p. 4:33, 1997] 참조). 일부 측면에서, TCR의 각 사슬은 하나의 N-말단 면역글로불린 가변 도메인, 하나의 면역글로불린 불변 도메인, 막관통 영역 및 C-말단에서 짧은 세포질 꼬리를 가질 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 신호 전달을 매개하는 것과 관련된 CD3 복합체의 불변 단백질들과 관련된다.
일부 구현예에서, TCR 사슬은 하나 이상의 불변 도메인을 포함한다. 예를 들어, 주어진 TCR 사슬 (예컨대, α-사슬 또는 β사슬)의 세포 외 부분은 세포 막에 인접하여 2 개의 면역글로불린-유사 도메인을 함유할 수 있는데, 예컨대 가변 도메인 (예컨대, Vα 또는 Vβ통상 Kabat 넘버링에 기초하여 아미노산 1 내지 116, [Kabat et al., "Sequences of Proteins of Immunological Interest, US Dept. Health and Human Services, Public Health Service National Institutes of Health, 1991, 5th ed.]) 및 불변 도메인 (예컨대, α-사슬 불변 도메인 또는 Cα, 통상 Kavat 넘버링에 기초하여 사슬 중 117 내지 259 위치 또는 β사슬 불변 도메인 또는 Cβ통상적으로 Kabat에 기초하여 사슬 중 117 내지 295 위치)이다. 예를 들어, 일부 경우, 2 개의 사슬에 의해 형성된 TCR의 세포 외 부분은 2 개의 막-근위 불변 도메인 및 2 개의 막-말단 가변 도메인을 포함하는데, 가변 도메인 각각은 CDR을 포함한다. TCR의 불변 도메인은, 시스테인 잔기가 이황화 결합을 형성하여 이에 의해 TCR의 두 사슬를 연결하는 짧은 연결 서열을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 α 및 β사슬 각각에 추가의 시스테인 잔기를 가질 수 있어서, TCR은 불변 도메인에서 2 개의 이황화 결합을 포함한다.
일부 구현예에서, TCR 사슬은 막관통 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서 막관통 도메인은 양전하를 띤다. 일부 경우에는, TCR 사슬은 세포질 꼬리를 포함한다. 일부 경우, 상기 구조는 TCR이 CD3 및 그의 서브 유닛과 같은 다른 분자와 결합하는 것을 허용한다. 예를 들어, 막관통 영역을 갖는 불변 도메인을 함유하는 TCR은 세포막 내의 단백질을 고정시키고 CD3 신호전달 장치 또는 복합체의 불변 서브 유닛과 결합할 수 있다. CD3 신호전달 서브 유닛 (예를 들어, CD3γ, CD3δ, CD3ε 및 CD3ζ 사슬)의 세포 내 꼬리는 TCR 복합체의 신호전달 능력에 관계된 하나 이상의 면역수용체 타이로신-계 활성화 모티프 또는 ITAM을 포함한다.
일부 구현예에서, TCR은 2 개의 사슬 α 및 β(또는 필요에 따라, γ및 δ의 이종이량체이거나 단일 사슬 TCR 컨스트럭트일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 이황화 결합 또는 이황화 결합들에 의해 연결된 2 개의 분리된 사슬 (α 및 β 사슬 또는 γ및 δ 사슬)를 함유하는 이종이량체이다.
일부 구현예에서, TCR은 Vα, β 사슬의 서열과 같은 공지된 TCR 서열(들)로부터 생성될 수 있는데, 이들에 대하여 실질적으로 전장 코딩 서열이 용이하게 이용 가능하다. 세포 공급원으로부터 V 사슬 서열을 포함하는 전장 TCR 서열을 얻는 방법은 잘 알려져 있다. 일부 구현예에서, TCR을 인코딩하는 핵산은 다양한 원으로부터 얻어질 수 있는데, 예컨대 주어진 세포 또는 세포들 내에서 또는 그로부터 분리된 TCR-인코딩 핵산의 중합 효소 연사슬 반응 (PCR) 증폭에 의하여 또는 공개적으로 입수 가능한 TCR DAN 서열을 합성함에 의하여 얻어질 수 있다.
일부 구현예에서, TCR은 생물학적 원으로부터 얻어지는데, 예컨대 세포로부터, 예컨대 T 세포 (예를 들어, 세포 독성 T 세포), T 세포 하이브리도마 또는 다른 공개적으로 입수 가능한 원으로부터 얻어진다. 일부 구현예에서, T 세포는 생체 내 분리된 세포로부터 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 흉선학적으로 (thymically) 선택된 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 신에피토프-제한 (neoepitope-restricted) TCR이다. 일부 구현예에서, T-세포는 배양된 T-세포 하이브리도마 또는 클론일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 또는 이의 항원-결합 단편은 TCR의 서열의 지식으로부터 합성으로 생성될 수 있다.
일부 구현예에서, TCR은 표적 폴리펩타이드 항원 또는 그의 표적 T 세포 에피토프에 대한 후보 TCR 라이브러리의 스크리닝하는 것으로부터 선택되거나 또는 동정된 TCR로부터 생성된다. TCR 라이브러리는 PBMC, 비장 또는 다른 림프 장기에 존재하는 세포를 포함하여 대상체로부터 분리된 T 세포로부터 Vα 및 Vβ레파토리를 증폭함으로써 생성될 수 있다. 일부 경우에, T 세포는 종양-침윤 림프구 (TIL)로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 라이브러리는 CD4+ 또는 CD8+ 세포로부터 생성될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 건강한 대상체의 정상 T 세포원, 즉 정상 TCR 라이브러리로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 질병이 있는 대상체의 T 세포원, 즉 질병이 있는 TCR 라이브러리로부터 증폭될 수 있다. 일부 구현예에서, 축퇴 (degenerate) 프라이머는 인간으로부터 수득된 T 세포와 같은 샘플에서 예컨대 RT-PCR에 의하여 Vα 및 Vβ의 유전자 레퍼토리를 증폭시키는데 사용된다. 일부 구현예에서, scTv 라이브러리는 증폭된 산물이 클로닝되거나 어셈블리 되어 링커에 의해 분리되는 나이브 Vα 및 Vβ라이브러리로부터 어셈블리 될 수 있다. 대상체 및 세포의 공급원에 따라 라이브러리는 HLA 대립형질-특이적일 수 있다. 택일적으로, 일부 구현예에서, TCR 라이브러리는 모체 또는 스캐폴드 TCR 분자의 돌연변이화 또는 다양화에 의해 생성될 수 있다. 일부 양태에서, TCR은 예를 들어 α 또는 β사슬의 돌연변이화에 의하여 설명된 진화 (directed evolution)의 대상이 된다. 일부 구현예에서, TCR의 CDR 내의 특정 잔기가 변경된다. 일부 구현예에서, 선택된 TCR은 친화적 성숙에 의해 변형될 수 있다. 일부 구현예에서, 항원 특이적 T 세포는, 예컨대 펩타이드에 대한 CTL 활성을 평가하기 위한 스크리닝에 의하여 선택될 수 있다. 일부 측면에서, TCR, 예를 들어 항원-특이적 T 세포 상에서 존재하는 TCR은, 예컨대 결합 활성에 의하여, 예컨대 상기 항원에 대한 특정 친화도 또는 결합력 (avidity)에 의하여 선택될 수 있다.
일부 구현예에서, 유전자 조작된 항원 수용체는 재조합 T 세포 수용체 (TCR) 및/또는 자연 발생 T 세포로부터 클로닝된 TCR을 포함한다. 일부 구현예에서, 표적 항원 (예컨대, 암 항원)에 대한 고-친화성 T 세포 클론은 동정되고, 환자로부터 단리되며, 세포 내로 도입된다. 일부 구현예에서, 표적 항원에 대한 TCR 클론은 인간 면역 시스템 유전자 (예컨대, 인간 백혈구 항원 시스템, 즉 HLA)로 조작된 형질전환 마우스에서 생성되었다. 예를 들어, 종양 항원은 (예를 들어, Parkhurst et al. (2009) Clin Cancer Res. 15:169-180 및 Cohen et al. (2005) J Immunol. 175:5799-5808을 참조한다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 파지 디스플레이는 표적 항원에 대한 TCR을 단리하는데 사용된다 (예를 들어, Varela-Rohena et al. (2008) Nat Med. 14:1390-1395 and Li (2005) Nat Biotechnol. 23:349-354 참조).
일부 구현예에서, TCR 또는 그의 항원-결합 부분은 변형되거나 조작된 것이다. 일부 구현예에서, 설명된 진화 방법이 이용되어, 특정 MHC-펩타이드 복합체에 대한 보다 높은 친화성을 갖는 것과 같은 변화된 특성을 갖는 TCR을 생성시킨다. 일부 구현예에서, 설명된 진화는 디스플레이 방법, 예컨대 비한정적인 예로서 효모 디스플레이 (Holler et al. (2003) Nat Immunol, 4, 55-62; Holler et al. (2000) Proc Natl Acad Sci U S A, 97, 5387-92), 파지 디스플레이 (Li et al. (2005) Nat Biotechnol, 23, 349-54) 또는 T 세포 디스플레이 (Chervin et al. (2008) J Immunol 방법, 339, 175-84)에 의하여 달성된다. 일부 구현예에서, 디스플레이 접근법은 공지된, 모체 또는 레퍼런스 TCR을 조작하는것 또는 변형하는 것을 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에, 야생형 TCR은, 그 TCR에서 CDR의 하나 이상의 잔기가 돌연변이되는 돌연변이화된 TCR을 생성하기 위한 주형으로서 사용될 수 있고, 원하는 변경된 성질을 갖는 돌연변이체, 예를 들어 원하는 표적 항원에 대한 보다 높은 친화도의 돌연변이체가 선택된다.
일부 구현예에서, 대상 TCR을 생산하거나 생성시키는 데 사용하기 위한 표적 폴리펩타이드의 펩타이드는 공지되어 있거나 숙련된 당업자에 의하여 쉽게 확인될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR 또는 항원-결합 부분을 생성시키는 데 사용하기에 적합한 펩타이드는 대상 표적 폴리펩타이드, 예를 들어 하기 기술되는 표적 폴리펩타이드에서 HLA-제한 모티프의 존재에 기초하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, 펩타이드는 당업자에게 공지된 컴퓨터 예측 모델을 사용하여 식별된다. 일부 구현예에서, MHC 클래스 I 결합 위치를 예측하기 위한 모델로서, ProPred1 (Singh and Raghava (2001) Bioinformatics 17(12):1236-1237), 및 SYFPEITHI ([Schuler et al. (2007) Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, 409(1): 75-93 2007] 참조)를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 일부 구현예에서, MHC-제한된 에피토프는 HLA-A0201인데, 이는 전체 코카시언의 대략 39-46%에서 발현되며, 따라서 TCR 또는 기타 MHC-펩타이드 결합 분자를 제조하는데 사용하기 위한 MHC 항원의 적절한 선택을 대표한다.
컴퓨터 예측 모델을 이용하여 HLA-A0201-결합 모티프 및 프로테아좀 및 면역-프로테아좀의 절단 위치는 숙련된 당업자에게 공지되어 있다. MHC 클래스 I 결합 위치를 예측하기 위한 그러한 모델은 ProPred1 ([Singh and Raghava, ProPred: prediction of HLA-DR binding sites. BIOINFORMATICS 17(12):1236-1237 2001]에 보다 자세히 기술됨), 및 SYFPEITHI ([Schuler et al. SYFPEITHI, Database for Searching and T-Cell Epitope Prediction. in Immunoinformatics Methods in Molecular Biology, vol 409(1): 75-93 2007] 참조)를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
일부 구현예에서, TCR 또는 그의 항원 결합 부분은 결합 특성과 같은 하나 이상의 특성이 변경된, 재조합적으로 생산된 천연 단백질 또는 그들의 돌연변이된 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 인간, 마우스, 래트 또는 다른 포유 동물과 같은 다양한 동물 종 중 하나로부터 유래될 수 있다. TCR은 세포-결합된 것 또는 가용성 형태일 수 있다. 일부 구현예에서, 제공되는 방법의 목적상, TCR은 세포 표면 상에 발현된 세포-결합된 형태이다.
일부 구현예에서, TCR은 전장 TCR이다. 일부 구현예에서, TCR은 항원-결합 부분이다. 일부 구현예에서, TCR은 이량체 TCR (dTCR)이다. 일부 구현예에서, TCR은 단일-사슬 TCR (sc-TCR)이다. 일부 구현예에서, dTCR 또는 scTCR은 WO 03/020763, WO 04/033685, WO2011/044186에 기재된 바와 같은 구조를 갖는다.
일부 구현예에서, TCR은 막관통 서열에 상응하는 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, TCR은 세포질 서열에 상응하는 서열을 함유한다. 일부 구현예에서, TCR은 CD3과 함께 TCR 복합체를 형성할 수 있다. 일부 구현예에서, dTCR 또는 scTCR을 포함하는 임의의 TCR은 T 세포의 표면 상에 활성 TCR을 생성하는 신호전달 도메인에 연결될 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 세포 표면에서 발현된다.
일부 구현예에서, dTCR은, TCR α 사슬 가변 영역 서열에 상응하는 서열이 TCR α 사슬 불변 영역 세포 외 서열에 상응하는 서열의 N 말단에 융합된 제1 폴리펩타이드, 및 TCR β사슬 가변 영역 서열에 상응하는 서열이 TCR β사슬 분변 영역 세포 외 서열에 상응하는 서열의 N 말단에 융합된 제2 폴리펩타이드를 함유하는데, 상기 제1 및 제2 폴리펩타이드는 이황화 결합에 의해 연결된다. 일부 구현예에서, 상기 결합은 본래의 이량체 αβTCR에 존재하는 본래의 내부-사슬 이황화 결합에 해당할 수 있다. 일부 구현예에서, 사슬간 이황화 결합은 천연 TCR에는 존재하지 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, dTCR 폴리펩타이드 쌍의 불변 영역 세포 외 서열에 하나 이상의 시스테인이 혼입될 수 있다. 일부 경우에, 천연 및 비-천연 이황화 결합 양자 모두가 바람직할 수 있다. 일부 구현예에서, TCR은 막에 결착하기 위해 막관통 서열을 함유한다.
일부 구현예에서, dTCR은, 가변 α 도메인, 불변 α 도메인 및 상기 불변 α 도메인의 C-말단에 부착된 제1 이합체화 모티프를 함유하는 TCR α 사슬, 및 가변 β도메인, 불변 β도메인 및 상기 불변 β도메인의 C-말단에 부착된 제2 이합체화 모티프를 포함하는 TCR β사슬를 함유하고, 상기 제1 및 제2 이합체화 모티프는 쉽게 상호 작용하여 상기 제1 이합체화 모티프의 아미노산과 상기 제2 이합체화 모티프의 아미노산 간 공유 결합을 형성하여, TCR α 사슬와 TCR β사슬를 함께 연결한다.
일부 구현예에서, TCR은 scTCR이다. 통상적으로, scTCR은 당업자에게 공지된 방법을 사용하여 생성될 수 있다 (예를 들어, [Soo Hoo, W. F. et al. PNAS (USA) 89, 4759 (1992)]; [Wulfing, C. and Pluckthun, A., J. Mol. Biol. 242, 655 (1994)]; [Kurucz, I. et al. PNAS (USA) 90 3830 (1993)]; 국제 공개 PCT WO 96/13593, WO 96/18105, WO99/60120, WO99/18129, WO 03/020763, WO2011/044186; 및 [Schlueter, C. J. et al. J. Mol. Biol. 256, 859 (1996)] 참조). 일부 구현예에서, scTCR은 도입된 비-천연 (비-나이브) 이황화 사슬간 결합을 함유하여 TCR 사슬들의 결합을 촉진시킨다 (예를 들어, 국제 공개 PCT WO 03/020763 참조). 일부 구현예에서, scTCR은, 그의 C-말단에 융합된 이종의 류신 지퍼가 사슬 결합을 용이하게 하는 비-이황화 결합된 절단된 TCR이다 (예를 들어, 국제 공개 PCT WO 99/60120 참조). 일부 구현예에서, scTCR은 펩타이드 링커를 통해 TCRβ가변 도메인에 공유 결합된 TCRα 가변 도메인을 함유한다 (국제 공개 PCT No. WO99/18129 참조).
일부 구현예에서, scTCR은, TCR α 사슬 가변 영역에 상응하는 아미노산 서열로 구성되는 제1 분절, TCR β사슬 불변 도메인 세포 외 서열에 상응하는 아미노산 서열의 N 말단에 융합된 TCR β사슬 가변 영역 서열에 상응하는 아미노산 서열로 구성되는 제2 분절, 및 상기 제1 분절의 C 말단을 상기 제2 분절의 N 말단에 연결하는 링커 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scTCR은, α 사슬 세포 외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 α 사슬 가변 영역 서열로 구성되는 제1 분절, 및 β사슬 세포 외 불변 서열의 N 말단에 융합된 β사슬 가변 영역 서열 및 막관통 서열로 구성되는 제2 분절, 및, 필요에 따라 상기 제1 분절의 C 말단을 상기 제2 분절의 N 말단에 연결하는 링커 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, scTCR은, β사슬 세포 외 불변 도메인 서열의 N 말단에 융합된 TCR β사슬 가변 영역 서열로 구성되는 제1 분절, 및 α 사슬 세포 외 불변 서열의 N 말단에 융합된 α 사슬 가변 영역 서열 및 막관통 서열로 구성되는 제2 분절, 및, 필요에 따라 상기 제1 분절의 C 말단을 상기 제2 분절의 N 말단에 연결하는 링커 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 및 제2 TCR 분절을 연결시키는 scTCR의 링커는 TCR 결합 특이성을 유지하면서 단일 폴리펩타이드 가닥을 형성할 수 있는 임의의 링커일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커 서열은 예를 들어 식 -P-AA-P-를 가질 수 있는데, 여기서 P는 프롤린이고 AA는 그 아미노산이 글리신 및 세린 인 아미노산 서열을 나타낸다. 일부 구현예에서, 상기 제1 및 제2 분절은 그들의 가변 영역 서열이 그러한 결합을 위해 배향되도록 쌍을 이룬다. 따라서 일부 경우에, 상기 링커는 상기 제1 분절의 C 말단과 상기 제2 분절의 N 말단 간의 거리를 아우르는 충분한 길이를 가지거나 그 역도 마찬가지이지만, scTCR의 그 표적 리간드로의 결합을 차단하거나 감소시킬 만큼 너무 길지는 않다. 일부 구현예에서,상기 링커는 10 내지 45 개 아미노산, 예컨대 10 내지 30 개 아미노산, 또는 26 내지 41 개 아미노산 잔기, 예컨대 29, 30, 31 또는 32 개의 아미노산, 또는 약 그 정도의 아미노산을 함유할 수있다. 일부 구현예에서, 상기 링커는 식 -PGGG-(SGGGG)5-P-를 갖는데, 여기서 P는 프롤린, G는 글리신 및 S는 세린이다 (서열 번호 22). 일부 구현예에서, 상기 링커는 서열 GSADDAKKDAAKKDGKS (서열 번호 23)을 갖는다.
일부 구현예에서, scTCR은 α 사슬의 불변 도메인의 면역글로불린 영역의 잔기를, β사슬의 불변 도메인의 면역글로불린 영역의 잔기에 연결하는 공유 이황화 결합을 포함한다. 일부 구현예에서, 천연 TCR에서 사슬간 (interchain) 이황화 결합은 존재하지 않는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, scTCR 폴리펩타이드의 제1 및 제2 분절의 불변 영역 세포 외 서열 내로 하나 이상의 시스테인이 혼입될 수 있다. 일부 경우에, 천연 및 비-천연 이황화 결합 양자 모두가 바람직할 수 있다.
도입된 사슬간 이황화 결합을 함유하는 dTCR 또는 scTCR의 일부 구현예에서, 천연의 이황화 결합은 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 천연의 사슬간 이황화 결합을 형성하는 하나 이상의 천연 시스테인은 세린 또는 알라닌과 같은 다른 잔기로 치환된다. 일부 구현예에서, 도입된 이황화 결합은 상기 제1 및 제2 분절 상의 비-시스테인 잔기를 시스테인으로 돌연변이 시킴으로써 형성될 수 있다. TCR의 예시적인 비-천연 이황화 결합은 국제 공개 PCT 번호 WO2006/000830에 기술되어 있다.
일부 구현예에서, TCR 또는 이의 항원-결합 단편은, 10-5 내지 10-12 M과 그 안의 모든 개별 값 및 범위 또는 약 그 정도의 표적 항원에 대한 평형 결합 상수를 갖는 친화도를 나타낸다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 MHC-펩타이드 복합체 또는 리간드이다.
일부 구현예에서, α 사슬 및 β사슬와 같은 TCR을 인코딩하는 핵산 또는 핵산들은 PCR, 클로닝 또는 다른 적절한 수단에 의해 증폭될 수 있고, 적합한 발현 벡터 또는 벡터들 내에 클로닝 될 수 있다. 발현 벡터는 임의의 적합한 재조합 발현 벡터일 수 있으며, 임의의 적합한 숙주를 형질 전환 또는 형질 감염 시키는데 사용될 수 있다. 적합한 벡터는 전파 및 증식을 위해 또는 발현을 위해, 또는 양자 모두를 위해 설계된 것들을 포함하며, 예컨대 플라스미드 및 바이러스이다.
일부 구현예에서, 벡터는 pUC 시리즈 (Fermentas Life Sciences), pBluescript 시리즈 (Stratagene, 미국 캘리포니아주 라호야 소재), pET 시리즈 (Novagen, 미국 위스콘신주 매디슨 소재), pGEX 시리즈 (Pharmacia Biotech, 스웨덴 웁살라 소재), 또는 pEX 시리즈 (Clontech, 미국 캘리포니아주 팔로앨토 소재)의 벡터일 수 있다. 일부 경우에서, 박테리오파지 벡터, 예컨대 λλλ(Stratagene), λ및 λ가 또한 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 식물 발현 벡터가 사용될 수 있으며, 이는 pBI01, pBI101.2, pBI101.3, pBI121 및 pBIN19 (Clontech)를 포함한다. 일부 구현예에서, 동물 발현 벡터는 pEUK-Cl, pMAM 및 pMAMneo (Clontech)를 포함한다. 일부 구현예에서, 바이러스 벡터, 예컨대 레트로바이러스 벡터가 사용된다.
일부 구현예에서, 재조합 발현 벡터는 표준 재조합 DNA 기법을 사용하여 제조할 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는, 벡터가 DNA- 또는 RNA-기반인지를 고려하여, 적절한 경우, 벡터가 도입될 숙주의 유형 (예를 들어, 박테리아, 균류, 식물 또는 동물)에 특이적인 조절 서열, 예컨대 전사 및 번역 개시 및 종결 코돈을 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는 TCR 또는 항원-결합 부분 (또는 기타 MHC-펩타이드 결합 분자)를 인코딩하는 뉴클레오타이드 서열에 작동 가능하게 연결된 비천연 프로모터를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, 프로모터는 비-바이러스 프로모터 또는 바이러스 프로모터, 예컨대 사이토메갈로바이러스 (CMV) 프로모터, SV40 프로모터, RSV 프로모터, 및 뮤린 줄기세포 바이러스의 긴 말단 반복부에서 발견되는 프로모터일 수 있다. 당업자에게 공지된 다른 프로모터가 또한 고려된다.
일부 구현예에서, T-세포 클론이 수득된 후, TCR 알파 및 베타 사슬은 단리되고 유전자 발현 벡터로 클로닝된다. 일부 구현예에서, TCR 알파 및 베타 유전자는 피코로나바이러스 2A 리보솜 스킵 펩타이드를 통해 연결되어 두 사슬이 발현된다. 일부 구현예에서, TCR의 유전적 전달은 레트로바이러스 또는 렌티바이러스 벡터를 통해 또는 트랜스포존을 통해 수행된다 (예를 들어, [Baum et al. (2006) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 13:1050-1063; Frecha et al. (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:1748-1757; 및 Hackett et al. (2010) Molecular Therapy: The Journal of the American Society of Gene Therapy. 18:674-683] 참조.
일부 구현예에서, TCR을 인코딩하는 벡터를 생성하기 위해, 대상 TCR을 발현하는 T 세포 클론으로부터 단리된 전체 cDNA로부터 α 및 β사슬를 PCR 증폭하고 발현 벡터에 클로닝한다. 일부 구현예에서, α 및 β사슬은 동일한 벡터 내로 클로닝된다. 일부 구현예에서, α 및 β사슬은 상이한 벡터로 클로닝된다. 일부 구현예에서, 생성된 α 및 β사슬은 레트로바이러스 벡터, 예를 들어, 렌티바이러스 벡터 내로 혼입된다.
3. 키메라 자가-항체 수용체 (CAAR)
일부 구현예에서, 재조합 수용체는 키메라 자가 항체 수용체 (CAAR)이다. 일부 구현예에서, CAAR은 자가항체에 특이적이다. 일부 구현예에서, CAAR를 발현하는 세포, 예컨대 CARR을 발현하도록 조작된 T 세포는 자가항체-발현 세포에 특이적으로 결합하고 이를 죽이는데 사용될 수 있지만, 정상 항체 발현 세포에는 사용될 수 없다. 일부 구현예에서, CAAR-발현 세포는 자가면역 질병과 같은 자기-항원의 발현과 관련된 자가면역 질병을 치료하는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR-발현 세포는 궁극적으로 자가항체를 생산하고 그의 세포 표면 상에 자가항체를 표시하는 B 세포를 표적화할 수 있고, 이들 B 세포를 치료적 중재를 위한 질병-특이적 표적으로 표시할 수 있다. 일부 구현예에서, CAAR-발현 세포는 항원-특이적 키메라 자가항체 수용체를 사용하여 질병-유발 B 세포를 표적화함으로써 자가면역 질병에서 병원성 B 세포를 효율적으로 표적화하고 사멸시키는데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 재조합 수용체는 CAAR, 예컨대 미국 특허 출원 공보 2017/0051035에 개시된 임의의 수용체이다.
일부 구현예에서, CAAR은 자가항체 결합 도메인, 막관통 도메인 및 세포 내 신호전달 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 1차 신호전달 도메인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 요소의 신호전달 도메인 및/또는 면역수용체 타이로신-계 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호전달 도메인이거나 이를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포 내 신호전달 영역은 2차 또는 공동자극 신호전달 영역 (2차 세포 내 신호전달 영역)을 포함한다.
일부 구현예에서, 자가항체 결합 도메인은 자가항원 또는 그의 단편을 포함한다. 자가항원의 선택은 표적화 될 자가항체의 유형에 달려 있다. 예를 들어, 자가항원은, 그것이 특정 질병 상태, 예컨대 자기면역 질병, 예컨대 자가항체-매개 자가면역 질병과 관련된, B 세포와 같은 표적 세포상의 자가항체를 인식하기 때문에 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 자가면역 질병은 심상성 천포창 (pemphigus vulgaris, PV)을 포함한다. 예시적인 자가항원은 데스모글레인 1 (Dsg1) 및 Dsg3을 포함한다.
4. 다중-표적화
일부 구현예에서, 세포 및 방법은 다중-표적화 전략, 예컨대 둘 이상의 유전자 조작된 수용체의 발현을 포함하며, 이는 각각은 상이한 항원의 동일한 것을 인식하고 전형적으로 각각은 상이한 세포 내 신호 전달 성분을 포함한다. 이러한 다중 표적화 전략은 예컨대, 국제 특허 출원 공보 WO 2014055668 A1 (예컨대, 오프-표적 (예컨대, 정상 세포)상에 개별적으로 존재하지만 치료하고자 하는 질환 또는 증상 세포에서만 함께 존재하는, 2개의 상이한 항원을 표적으로 하는 활성화 및 공동자극 CAR의 조합을 기술함) 및 문헌 Fedorov et al., Sci. Transl. Medicine, 5(215) (2013) (활성화 및 억제 CAR을 발현하는 세포들, 예컨대 활성화 CAR은 정상 또는 비-질환성 세포 및 치료될 질환 또는 증상 세포 모두에서 발현되는 하나의 항원에 결합하고, 억제 CAR은 정상 세포 또는 치료를 원하지 않는 세포상에서만 발현되는 또 다른 항원에 결합하는 것인 세포들을 기술함)에 기술되어 있다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 세포는 일반적으로 제1 수용체에 의해 인식되는 항원 (예컨대, 제1 항원)에 특이적으로 결합시, 세포에 활성화 또는 자극 신호를 유도할 수 있는 제1 유전자 조작된 항원 수용체 (예컨대, CAR 또는 TCR)를 발현하는 수용체를 포함한다. 일부 구현예에서, 세포는 일반적으로 제2 수용체에 의하여 인식되는 제2 항원에 특이적 결합시, 면역 세포에 대한 공동자극 신호를 유도할 수 있는, 유전적으로 조작된 제2 항원 수용체 (예컨대 CAR 또는 TCR), 예컨대 키메라 공동자극 수용체를 더 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 항원 및 제2 항원은 동일하다 일부 구현예에서, 제1 항원 및 제2 항원은 상이하다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 유전자 조작된 항원 수용체 (예컨대, CAR 또는 TCR)는 세포에 활성화 신호를 유도할 수 있다. 일부 구현예에서, 수용체는 ITAM 또는 ITAM-유사 모티프를 포함하는 세포 내 신호 전달 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 수용체에 의해 유도된 활성화는 신호 전달 또는 세포에서 단백질 발현의 변화를 수반하는데, 그 결과 면역 반응의 개시, 예컨대 ITAM 인산화 및/또는 ITAM-매개 신호 전달 캐스케이드의 개시, 면역학적 시냅스의 형성 및/또는 결합된 수용체 근처에서 분자들의 클러스터링 (예컨대, CD4 또는 CD8 등), 하나 이상의 전사 인자의 활성화, 예컨대 NF-κ및/또는 AP-1, 및/또는 예컨대 사이토카인과 같은 인자들의 유전자 발현, 증식, 및/또는 생존의 유도가 일어난다.
일부 구현예에서, 상기 제1 및/또는 제2 수용체는 CD28, CD137 (4-1BB), OX40 및/또는 ICOS와 같은 공동자극 수용체의 세포 내 신호전달 도메인 또는 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 제1 및 제2 수용체는 상이한 공동자극 수용체의 세포 내 신호전달 도메인을 포함한다. 하나의 구현예에 있어서, 상기 제1 수용체는 CD28 공동자극 신호전달 영역을 함유하고, 제2 수용체는 4-1BB 공-자극 신호전달 영역을 함유하며, 또는 그 역도 마찬가지이다.
일부 구현예에서, 제1 및/또는 제2 수용체는 ITAM 또는 ITAM-유사 모티프를 포함하는 세포 내 신호 전달 도메인 및 공동자극 수용체의 세포 내 신호 전달 도메인을 모두 포함한다.
일부 구현예에서, 제1 수용체는 ITAM 또는 ITAM-유사 모티프를 포함하는 세포 내 신호 전달 도메인을 포함하고, 제2 수용체는 공동자극 수용체의 세포 내 신호 전달 도메인을 포함한다. 동일한 세포에서 유도된 활성화 신호와 조합하여 공동자극 신호는 면역 반응, 예컨대 증가된 유전자 발현, 사이토카인 및 기타 인자들의 분비 및 세포 살해와 같은 T 세포 매개 이펙터 기능 등의 강력하고 지속적인 면역 반응을 야기하는 신호이다.
일부 구현예에서, 제1 수용체의 결찰 단독으로 또는 제2 수용체의 결찰 단독으로는 모두 강력한 면역 반응을 유도하지 않는다. 일부 양태에서, 오직 하나의 수용체만이 결찰된다면, 세포는 항원에 내성을 가지거나 무반응성이 되거나 억제되고, 및/또는 인자를 증식 또는 분비하거나 이펙터 기능을 수행하도록 유도되지 않는다. 그러나, 일부 그러한 구현예에서, 제1 및 제2 항원을 발현하는 세포의 만남과 같이 다수의 수용체가 결찰될 때, 예컨대 하나 이상의 사이토카인의 분비, 증식, 지속 및/또는 표적 세포의 세포 독성 살해와 같은 면역 이펙터 기능의 수행에 의해 지시되는 바와 같이, 완전 면역 활성화 또는 자극 등의 원하는 반응이 달성된다.
일부 구현예에서, 두 수용체는 각각 세포에 대한 활성화 및 억제 신호를 유도하여, 수용체 중 하나에 의한 이의 항원에 대한 결합은 세포를 활성화시키거나 반응을 유도하지만, 두 번째 억제 수용체에 의한 이의 항원에 대한 결합은 반응을 억제하거나 감쇠시키는 신호를 유도한다. 예시로는 활성화 CAR과 억제 CAR, 즉 iCAR의 조합이 있다. 이러한 전략은 예컨대, 활성화 CAR은 질환 또는 증상에서 발현되지만 정상 세포에서도 발현되는 항원과 결합하고, 억제 수용체는 정상 세포에서 발현되지만 질환 또는 증상의 세포에서는 발현되지 않는 별도의 항원과 결합하는데 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 다중 표적화 전략은 특정 질환 또는 증상과 관련된 항원이 비-질환 세포상에서 발현되는 경우 및/또는 일시적으로 (예컨대, 유전자 조작과 관련된 자극시) 또는 영구적으로 조작된 세포 자체에서 발현되는 경우 사용된다. 이러한 경우, 2개의 분리된 개별 항원 수용체의 결찰을 필요로 함으로써, 특이성, 선택성 및/또는 효능이 개선될 수 있다.
일부 구현예에서, 다수의 항원, 예컨대 제1 및 제2 항원은 세포, 조직, 또는 암세포와 같이 표적화되는 질병 또는 증상 세포상에서 발현된다. 일부 양태에서, 세포, 조직, 질병 또는 증상 세포는 다발성 골수종 또는 다발성 골수종 세포이다. 일부 구현예에서, 다수의 항원 중 하나 이상은 일반적으로 정상 또는 비-질환 세포 또는 조직, 및/또는 조작된 세포 자체와 같은 세포 요법으로 표적화하는 것이 바람직하지 않은 세포상에서 또한 발현된다. 이러한 구현예에서, 세포의 반응을 달성하기 위해 다수의 수용체의 결찰을 필요로 함으로써, 특이성 및/또는 효능이 달성된다.
B. 유전자 조작을 위한 벡터 및 방법
유전자 조작된 성분, 예컨대 재조합 수용체 (예컨대, CAR 또는 TCR)의 도입을 위한 다양한 방법이 공지되어 있으며, 제공된 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있다. 예시적 방법에는 바이러스, 예컨대 레트로바이러스 또는 렌티바이러스, 형질 도입, 트랜스포존 및 전기천공법 등을 통한 수용체를 코딩하는 핵산의 전달 방법들이 있다.
일부 구현예에서, 유전자 도입은 예컨대 사이토카인 또는 활성화 마커의 발현에 의해 측정된 증식, 생존 및/또는 활성화 등의 반응을 유도하는 자극과 결합하여, 세포를 먼저 자극함으로써, 뒤이어 활성화된 세포의 형질 도입 및 임상적 적용에 충분한 수의 배양으로의 팽창에 의해 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산은, 예를 들어 유인원 바이러스 40 (SV40), 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스 (AAV)로부터 유래한 벡터와 같은 재조합 감염성 바이러스 입자를 사용하여, 세포 내로 전달된다. 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 재조합 렌티바이러스 벡터 또는 레트로바이러스 벡터, 예컨대 감마-레트로바이러스 벡터를 사용하여, T 세포 내로 전달된다 (예를 들어, 문헌 [Koste et al. Gene Therapy 2014 Apr 3. doi: 10.1038/gt.2014.25 (2014)]; [Carlens et al. Exp Hematol 28(10): 1137-46 (2000)]; [Alonso-Camino et al. Mol Ther Nucl Acids 2, e93 (2013)]; [Park et al, Trends Biotechnol. November 29(11): 550-557 (2011)] 참조).
일부 구현예에서, 레트로바이러스 벡터는 몰로니 쥐과 백혈병 바이러스 (MoMLV), 골수 증식 육종 바이러스 (MPSV), 쥐과 배아 줄기 세포 바이러스 (MESV), 쥐과 줄기 세포 바이러스 (MSCV), 또는 비장 병소 형성 바이러스 (SFFV)로부터 유래된 레트로바이러스 벡터와 같은 긴 말단 반복 서열 (LTR)을 가진다. 대부분의 레트로바이러스 벡터는 쥐과의 레트로바이러스로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 레트로바이러스는 조류 또는 포유류 세포 공급원으로부터 유래된 것들을 포함한다. 레트로바이러스는 전형적으로 양친매성이며, 이는 인간을 비롯한 여러 종의 숙주 세포를 감염시킬 수 있음을 의미한다. 한 구현예에서, 발현될 유전자는 레트로바이러스 gag, pol 및/또는 env 서열을 대체한다. 다수의 구체적인 레트로바이러스 시스템은 기술되어 있다 (예를 들어, 미국 특허 5,219,740; 6,207,453; 5,219,740; [Miller and Rosman BioTechniques, 7:980-990 (1989); Miller, A. D. Human Gene Therapy, 1:5-14 (1990); Scarpa et al. Virology, 180:849-852 (1991); Burns et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:8033-8037 (1993); 및 Boris-Lawrie and Temin Cur. Opin. Genet. Develop., 3:102-109 (1993)] 참조.
렌티바이러스 형질 도입 방법은 공지되어 있다. 예시적인 방법은, 예를 들어, [Wang et al., J. Immunother., 35(9): 689-701 (2012); Cooper et al. Blood. 101:1637-1644 (2003); Verhoeyen et al., Methods Mol Biol., 506: 97-114 (2009); and Cavalieri et al., Blood., 102(2): 497-505 (2003)]에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전기천공법을 통해 T 세포에 전달된다 (예를 들어, [Chicaybam et al, PLoS ONE 8(3): e60298 (2013) 및 Van Tedeloo et al. Gene Therapy 7(16): 1431-1437 (2000)] 참조). 일부 구현예에서, 재조합 핵산은 전위를 통해 T 세포에 전달된다 (예를 들어, [Manuri et al. Hum Gene Ther 21(4): 427-437 (2010); Sharma et al. Molec Ther Nucl Acids 2, e74 (2013); 및 Huang et al. Methods Mol Biol 506: 115-126 (2009)] 참조). 면역 세포에서 유전 물질을 도입하고 발현시키는 기타 방법들은 칼슘 포스페이트 트랜스펙션 (예컨대, 문헌 Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, New York. N.Y.에 기재된 트렌스펙션), 원형질 융합, 양이온성 리포좀 매개 트랜스펙션; 텅스텐 입자-촉진 미세 입자 충격 (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); 및 스트론튬 포스페이트 DNA 공동 침전 (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987))을 포함한다.
재조합 산물을 코딩하는 핵산의 전달을 위한 기타 접근법 및 벡터는, 예를 들어, 국제 특허 출원 공보 WO2014055668, 및 미국 특허 7,446,190에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 세포, 예컨대 T 세포는 팽창 도중 또는 팽창 후에 T 세포 수용체 (TCR) 또는 키메라 항원 수용체 (CAR)로 트랜스펙션될 수 있다. 원하는 수용체 유전자의 도입을 위한 이러한 트랜스펙션은, 예컨대 임의의 적합한 레트로바이러스 벡터로 수행될 수 있다. 유전자 조작된 세포 집단은 초기 자극 (예를 들어, CD3/CD28 자극)으로부터 유리된 후, 이어서 제2 유형의 자극, 예컨대 새로 (de novo) 도입된 수용체를 통한 자극으로 자극될 수 있다. 이러한 제2 유형의 자극은 펩타이드/MHC 분자, 유전적으로 도입된 수용체의 동족 (교차 결합) 리간드 (예컨대, CAR의 천연 리간드) 또는 새로운 수용체의 골격 내에서 (예컨대, 수용체 내의 불변 영역을 인식함으로써) 직접 결합하는 임의의 리간드 (예컨대, 항체) 형태의 항원 자극을 포함할 수 있다. 예를 들어, [Cheadle et al, Methods Mol Biol. 907:645-66 (2012);or Barrett et al., Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer Annual Review of Medicine, Vol. 65: 333-347 (2014)]를 참조한다.
일부 경우에서, 세포, 예컨대 T 세포가 활성화될 것을 필요로 하지 않는 벡터가 사용될 수 있다. 이러한 일부 경우에서, 세포는 활성화 전에 선택 및/또는 형질 도입될 수 있다. 이에 따라, 세포는 본 명세서에 기술된 바와 같은 세포의 배양 단계에 선행하여, 또는 배양 단계 후에, 경우에 따라 배양 단계와 동시에 또는 배양 단계의 적어도 일부 기간 동안에 조작될 수 있다.
일부 양태에서, 세포는 사이토카인 또는 기타 인자의 발현을 촉진하도록 추가로 조작된다. 추가적인 핵산, 예컨대 도입 유전자 중에는 전달된 세포의 생존력 및/또는 기능을 촉진시킴으로써 치료의 효능을 개선시키는 것; 생체 내 생존 또는 국소화를 평가하는 것과 같은 세포의 선택 및/또는 평가를 위한 유전자 마커를 제공하는 유전자; 문헌 Lupton S. D. et al., Mol. and Cell Biol., 11:6 (1991); 및 Riddell et al., Human Gene Therapy 3:319-338 (1992)에 기재된 바와 같이 세포가 생체 내 음성 선별에 민감성을 갖도록 함으로써 안정성을 개선시키는 유전자가 있으며, 예컨대 우성 양성 선택 마커와 음성 선별 마커를 융합시킴으로써 유래된 이작용성 선택 융합 유전자의 용도를 기술하고 있는 Lupton 등의 공보 PCT/US91/08442 및 PCT/US94/05601도 참조한다. 예를 들어, Riddell et al의 미국 특허 6,040,177의 14-17 열을 참조한다.
일부 구현예에서, 단일 프로모터는, 단일 개방 판독 프레임 (ORF)에서, 자가-절단 펩타이드 또는 프로테아제 인식 부위 (예를 들어, 퓨린)를 인코딩하는 서열 (예를 들어, 2A 서열)에 의해 서로 분리된 2개 또는 3개의 유전자 (예를 들어 대사 경로를 조절하고 재조합 수용체를 인코딩하는데 관여하는 분자를 인코딩)를 포함하는 RNA의 발현을 지시할 수 있다. 이에 따라, ORF는 단일 폴리펩타이드를 인코딩하는데, 이는 번역 중에 (2A의 경우) 또는 번역 이후, 개별 단백질 내로 진행된다. 일부 경우에, T2A와 같은 펩타이드는 리보좀으로 하여금 2A 요소의 C-말단에서 펩타이드 결합의 스킵 (리보좀 스킵핑)를 일으켜, 2A 서열의 말단과 다음 펩타이드 하류 사이의 분리를 유도할 수 있다 (예를 들어, [de Felipe. Genetic Vaccines and Ther. 2:13 (2004)] 및 [de Felipe et al.Traffic 5:616-626 (2004)] 참조). 다수의 2A 요소가 알려져 있다. 본 발명에 개시되는 방법 및 핵산에 사용될 수 있는 2A 서열의 예시는, 제한없이, 미국 특허 공개 번호 20070116690에 기재된 것과 같은 구제역 바이러스 (F2A, 예를 들어, 서열 번호 21), 마(馬) 비염 A 바이러스 (equine rhinitis A virus)(E2A, 예컨대 서열 번호 20), 토시아 어시그나 바이러스 (Thosea asigna virus)(T2A, 예컨대 서열 번호 6 또는 17) 및 돼지 테스코 바이러스-1 (P2A, 예를 들어 서열 번호 18 또는 19) 이다.
C. 유전자 조작을 위한 세포 및 세포의 제조
수용체를 발현하고 제공된 방법에 의해 투여되는 세포 중에는 조작된 세포가 존재한다. 유전자 조작은 일반적으로 예컨대 레트로바이러스 형질 도입, 형질 감염 또는 형질 전환에 의해 세포를 포함하는 조성물 내로 재조합 또는 조작된 요소를 인코딩하는 핵산을 도입하는 것을 수반한다.
일부 구현예에서, 핵산은 이종성이며, 즉 통상적으로 세포 또는 세포로부터 수득한 샘플, 예컨대 조작된 세포 및/또는 그러한 세포가 유래된 유기체에서 일반적으로 발견되지 않는 기타 유기체 또는 세포로부터 수득한 샘플에 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 자연적으로 발생하지 않으며, 예컨대 자연에서 발견되지 않는 핵산은 여러 상이한 세포 유형으로부터의 다양한 도메인을 코딩하는 핵산의 키메라 조합물을 포함한다.
세포는 일반적으로 진핵 세포, 예컨대 포유동물 세포이고, 일반적으로 인간 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 혈액, 골수, 림프 또는 림프성 기관으로부터 유래된 것으로, 면역계, 예컨대 선천성 면역 또는 적응 면역의 세포들이고, 예를 들어 골수 또는 림프성 세포, 예컨대 림프구, 통상 T 세포 및/또는 NK 세포이다. 다른 예시적인 세포는 줄기 세포, 예컨대 다분화능 (multipotent) 및 유도 만능 줄기 세포 (iPSC)를 비롯한 및 만능 (pluripotent) 줄기 세포를 포함한다. 세포는 전형적으로 1차 세포, 예컨대 대상체로부터 직접 단리된 세포 및/또는 대상체로부터 단리되어 냉동된 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 예컨대 기능, 활성화 상태, 성숙도, 분화 능력, 팽창, 재순환, 부위, 및/또는 지속 능력, 항원 특이성, 항원 수용체의 유형, 특정 장기 또는 구획에서의 존재, 마커 또는 사이토카인 분비 프로파일 및/또는 분화 정도에 의해 정의된 것과 같은, T 세포 또는 전체 T 세포 집단, CD3+, CD4+ 세포, CD8+ 세포 및 이러한의 서브 집단과 같은 기타 세포 유형의 하나 이상의 서브세트를 포함한다. 치료되는 대상체와 관련하여, 세포는 동종이계 및/또는 자가일 수 있다. 상기 방법들 중에는 기성 방법을 포함한다. 기성 기법과 같은 일부 양태에서, 세포는 만능(pluripotent) 및/또는 다분화능(multipotent), 예컨대 줄기 세포, 유도 만능 줄기 세포 (iPSC). 일부 구현예에서, 상기 방법은 동결 보존 이전 또는 이후, 대상체로부터 세포의 단리, 세포의 제조, 가공, 배양, 및/또는 조작, 및 상기 동일한 대상체에게 세포의 재도입을 포함한다.
T 세포 및/또는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포의 서브 유형 및 서브 집단 중에는 나이브 T (TN) 세포, 이펙터 T 세포 (TEFF), 기억 T 세포 및 이러한의 서브 유형, 예컨대 줄기 세포 기억 T (TSCM), 중심 기억 T (TCM), 이펙터 기억 T (TEM) 또는 최종 분화된 이펙터 기억 T 세포, 종양-침윤성 림프구 (TIL), 미성숙 T 세포, 성숙 T 세포, 헬퍼 T 세포, 세포 독성 T 세포, 점막 관련 불변 T (MAIT) 세포, 자연 발생 및 적응 조절 T (Treg) 세포, TH1 세포, TH2 세포, TH3 세포, TH17 세포, TH9 세포, TH22 세포 등의 T 보조 세포, 여포성 헬퍼 T 세포, 알파/베타 T 세포 및 델타/감마 T 세포가 포함된다.
일부 구현예에서, 세포는 자연 살해 (NK) 세포이다. 일부 구현예에서, 세포는 세포는 단핵구 또는 과립구, 예컨대 골수 세포, 대식세포, 호중구, 수지상 세포, 비만 세포, 호산구 및/또는 호염기구이다.
일부 구현예에서, 세포는 유전 공학을 통해 도입되는 하나 이상의 핵산을 포함하고, 이에 의해 그러한 핵산의 재조합 또는 유전적으로 조작된 생성물을 발현한다. 일부 구현예에서, 핵산은 이종성이며, 즉 통상적으로 세포 또는 세포로부터 수득한 샘플, 예컨대 조작된 세포 및/또는 그러한 세포가 유래된 유기체에서 일반적으로 발견되지 않는 기타 유기체 또는 세포로부터 수득한 샘플에 존재하지 않는다. 일부 구현예에서, 핵산은 자연적으로 발생하지 않으며, 예컨대 자연에서 발견되지 않는 핵산은 여러 상이한 세포 유형으로부터의 다양한 도메인을 코딩하는 핵산의 키메라 조합물을 포함한다.
일부 구현예에서, 조작된 세포의 제조는 하나 이상의 배양 단계 및/또는 제조 단계를 포함한다. 형질전환 수용체 예컨대 CAR를 인코딩하는 핵산의 형질도입을 위한 세포는 샘플, 예컨대 대상체로부터 수득되거나 대상체로부터 유래된 생물학적 샘플로부터 단리될 수 있다. 일부 구현예에서, 세포가 단리된 대상체는 세포 요법을 필요로 하는 질병 또는 질병 상태를 지니거나 또는 세포 요법이 가해질 대상체이다. 일부 구현예에서, 대상체는 특정 치료적 개입, 예컨대 세포가 단리, 가공 및/또는 조작되는 입양 세포 요법을 필요로 하는 인간이다.
따라서, 일부 구현예에서 세포는 1차 세포, 예컨대 1차 인간 세포이다. 샘플은 조직, 유체 및 상기 대상으로부터 직접 채취한 기타 샘플뿐만 아니라 하나 이상의 가공 단계, 예컨대 분리, 원심 분리, 유전자 조작 (예컨대, 바이러스 벡터를 이용한 형질 도입), 세척 및/또는 배양 단계에서 초래된 샘플을 포함한다. 생물학적 샘플은 생물학적 공급원 또는 가공된 샘플에서 직접 수득한 샘플일 수 있다. 생물학적 샘플은 혈액, 혈장, 혈청, 뇌척수액, 활액, 소변 및 땀 등의 체액, 이로부터 유래된 가공 샘플을 비롯한 조직 및 장기 샘플을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.
일부 양태에서, 세포가 유래되거나 단리되는 샘플은 혈액 또는 혈액 유래 샘플이거나, 또는 성분채집술 (apheresis) 또는 백혈구성분채집술 (leukapheresis)로부터 유래된다. 예시적인 샘플은 전혈, 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 백혈구, 골수, 흉선, 조직 생검, 종양, 백혈병, 림프종, 림프절, 장 관련 림프 조직, 점막 관련 림프 조직, 비장, 기타 림프 조직, 간, 폐, 위, 장, 결장, 신장, 췌장, 유방, 뼈, 전립선, 자궁 경부, 고환, 난소, 편도선 또는 기타 장기 및/또는 이로부터 유래된 세포를 포함한다. 샘플은 세포 요법, 예컨대, 입양 세포 요법의 맥락에서, 자가 및 동종이계 공급원으로부터 유래된 샘플을 포함한다.
일부 구현예에서, 세포는 세포주 (예컨대, T 세포주)로부터 유래된다. 일부 구현예에서, 세포는 이종 공급원, 예컨대 마우스, 래트, 비인간 영장류 및 돼지로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 세포의 단리는 하나 이상의 제조 및/또는 비친화성에 기초한 세포 분리 단계를 포함한다. 일부 예시에서, 세포는 세척되고, 원심 분리되며 및/또는 하나 이상의 시약 존재하에서, 예컨대 원치 않는 성분을 제거하고 원하는 성분을 풍부하게 하고, 특정 시약에 민감한 세포를 용해 또는 제거하기 위하여 인큐베이션된다. 일부 예시에서, 세포는 하나 이상의 성질, 예컨대 밀도, 부착 성질, 크기, 민감성 및/또는 특정 성분에 대한 내성에 기초하여 분리된다.
일부 예시에서, 환자의 순환 혈액의 세포는, 예컨대 성분채집술 또는 백혈구성분채집술에 의해 수득된다. 일부 양태에서, 샘플은 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 기타 유핵 백혈구, 적혈구 및/또는 혈소판을 비롯한 림프구를 포함하고, 일부 양태에서 적혈구 및 혈소판 이외의 세포를 함유한다.
일부 구현예에서, 상기 대상체로부터 채취된 혈액 세포는, 예컨대 혈장 부분을 제거하고 세포를 후속 공정 단계를 위해 적절한 완충액 또는 배지에 위치시키기 위하여 세척된다. 일부 구현예에서, 세포는 인산 완충 식염수 (PBS)로 세척된다. 일부 구현예에서, 상기 세척 용액은 칼슘 및/또는 마그네슘 및/또는 다수의 또는 모든 2가 양이온을 가지지 않는다. 일부 양태에서, 세척 단계는 반-자동 "플로우-스루" 원심 분리기 (예컨대, Cobe 2991 세포 프로세서, Baxter)를 제조사의 지침에 따라 수행된다. 일부 양태에서, 세척 단계는 상기 제조사의 지침에 따른 접선 유동 여과 (tangential flow filtration; TFF)에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 세포는 세척 후 다양한 생체 적합성 완충액, 예를 들어 Ca++/Mg++ 없는 PBS에 재현탁된다. 특정 구현예에서, 혈액 세포 샘플의 성분은 제거되고 세포는 배양 배지에 직접 재현탁된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 적혈구를 용해시켜 퍼콜 (Percoll) 또는 피콜 (Ficoll) 구배를 통해 원심 분리하여 말초 혈액으로부터 백혈구를 제조하는 것과 같은 밀도-기반 세포 분리 방법을 포함한다.
일부 구현예에서, 단리 방법은 표면 마커, 예컨대 표면 단백질, 세포 내 마커 또는 핵산과 같은 하나 이상의 특정 분자의 세포에서의 발현 또는 존재에 기초한 상이한 세포 유형의 분리를 포함한다. 일부 구현예에서, 이러한 마커에 기초한 임의의 공지된 분리 방법이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 분리는 친화성- 또는 면역친화성- 기반 분리이다. 예를 들어, 일부 양태에서, 상기 단리는 세포의 발현 또는 하나 이상의 마커, 전형적으로 세포 표면 마커의 발현 수준에 기초한 세포 및 세포 집단의 분리를 포함하며, 예컨대 상기 분리는 이러한 마커에 특이적으로 결합하는 항체 또는 결합 파트너와의 배양에 의해 이루어지고, 뒤이어 일반적으로 세척 단계 및 상기 항체 또는 결합 파트너에 결합된 세포를 상기 항체 또는 결합 파트너에 결합되지 않은 세포로부터 분리하는 단계를 거친다.
이러한 분리 단계는 시약에 결합된 세포가 추가적인 사용을 위해 유지된 양성 선별, 및/또는 항체 또는 결합 파트너에 결합되지 않은 세포가 유지된 음성 선별에 기초할 수 있다. 일부 예시에서, 두 분획은 모두 추가적인 사용을 위해 유지된다. 일부 양태에서, 음성 선택은 이종 집단에서 세포 유형을 특이적으로 식별하는 이용 가능한 항체가 없는 경우에 특히 유용하여, 분리는 원하는 집단 이외의 세포에 의해 발현되는 마커에 기초하여 수행되는 것이 가장 바람직하다.
분리는 특정 마커를 발현하는 특정 세포 집단 또는 세포의 100% 농축 또는 제거를 초래할 필요는 없다. 예를 들어, 마커를 발현하는 세포와 같은 특정 유형의 세포에 대한 양성 선별 또는 농축은, 이러한 세포의 개수 또는 퍼센트를 증가시키는 것을 의미하지만, 마커를 발현하지 않는 세포의 완전한 부재를 초래할 필요는 없다. 마찬가지로, 마커를 발현하는 세포와 같은 특정 유형의 세포의 음성 선별, 제거 또는 고갈은, 이러한 세포의 개수 또는 퍼센트를 감소시키는 것을 의미하지만, 이러한 모든 세포의 완전한 제거를 초래할 필요는 없다.
일부 예시에서, 하나의 단계로부터 양성 또는 음성으로 선택된 분획이 연속된 양성 선별 또는 음성선택과 같은 또 다른 분리 단계를 거치는 분리 단계의 다중 라운드가 수행된다. 일부 예시에서, 단일 분리 단계는 예컨대 세포를 다수의 항체 또는 결합 파트너와 함께 배양함으로써 다중 마커를 동시에 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있으며, 각각은 음성선택에 대해 표적화된 마커에 특이적이다. 마찬가지로, 여러 세포 유형은, 세포를 다양한 세포 유형에서 발현되는 다수의 항체 또는 결합 파트너와 함께 배양함으로써 동시에 양성 선별될 수 있다.
예를 들어, 일부 양태에서, 하나 이상의 표면 마커, 예를 들어, CD28+, CD62L+, CCR7+, CD27+, CD127+, CD4+, CD8+, CD45RA+, 및/또는 CD45RO+ T 세포의 높은 수준을 발현하는 세포 또는 양성 세포와 같은 T 세포의 특정 서브 집단은 양성 선별 또는 음성선택 기술에 의해 단리된다.
예를 들어, CD3+, CD28+ T 세포는 CD3/CD28 컨쥬게이션 자성 비드 (예를 들어, DYNABEADS®M-450 CD3/CD28 T Cell Expander)를 사용하여 양성 선별될 수 있다.
일부 구현예에서, 단리는 양성 선별에 의한 특정 세포 집단의 농축, 또는 음성선택에 의한 특정 세포 집단의 고갈에 의해 수행된다. 일부 구현예에서, 양성 또는 음성 선별은, 세포를 각각 양성 또는 음성으로 선택된 세포 상에 발현된 (marker+) 또는 상대적으로 높은 수준으로 발현된 (markerhigh) 하나 이상의 표면 마커와 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항체 또는 기타 결합제와 함께 인큐베이션함으로써 수행된다.
일부 구현예에서, T 세포는 비-T 세포, 예컨대 B 세포, 단핵구 또는 CD14 등의 기타 백혈구에서 발현된 마커의 음성선택에 의해 PBMC 샘플로부터 분리된다. 일부 양태에서, CD4+ 또는 CD8+ 선별 단계는 CD4+ 헬퍼 및 CD8+ 세포독성 T 세포를 분리하도록 사용된다. 이러한 CD4+ 및 CD8+ 집단은 하나 이상의 나이브, 기억 및/또는 이펙터 T 세포 서브 집단에서 발현 또는 상대적으로 높은 정도로 발현된 마커에 대한 양성 선별 또는 음성선택에 의해 서브 집단으로 추가로 분류될 수 있다.
일부 구현예에서, 세포는 예컨대 상기 각각의 서브 집단과 관련된 표면 항원에 기초한 양성 선별 또는 음성 선택에 의하여, 나이브, 중심 기억, 이펙터 기억 및/또는 중추 기억 줄기 세포가 더욱 풍부해지거나 고갈된다. 일부 구현예에서, 중심 기억 T (TCM) 세포의 농축은 예컨대 투여 이후의 장기 생존, 팽창 및/또는 생착을 개선시키 위한 효능을 증가시키기 위해 수행되며, 이는 일부 양태에서 이러한 서브 집단에서 특히 강력하다. [Terakuraet al. Blood.1:72-82 (2012); Wang et al. J Immunother. 35(9):689-701 (2012)]를 참조한다. 일부 구현예에서, TCM-농축 CD8+ T 세포 및 CD4+ T 세포의 결합은 효능을 더욱 증강시킨다.
구현예에서, 기억 T 세포는 CD8+ 말초 혈액 림프구의 CD62L+ 및 CD62L- 서브세트 모두에 존재한다. PBMC는 예컨대 항-CD8 및 항-CD62L 항체를 사용하여, CD62L-CD8+ 및/또는 CD62L+CD8+가 풍부해지거나 고갈될 수 있다.
일부 구현예에서, 중심 기억 T (TCM) 세포의 농축은 CD45RO, CD62L, CCR7, CD28, CD3 및/또는 CD127의 양성 또는 높은 표면 발현에 기초하고; 일부 양태에서, 이는 CD45RA 및/또는 그랜자임 B를 발현 또는 고도로 발현하는 세포에 대한 음성 선별에 기초한다. 일부 양태에서, TCM 세포가 풍부한 CD8+ 집단의 단리는 CD4, CD14, CD45RA를 발현하는 세포의 고갈에 의해, 및 CD62L을 발현하는 세포에 대한 양성 선별 또는 농축에 의해 수행된다. 하나의 양태에서, CD14 및 CD45RA의 발현에 기초한 음성 선별 및 CD62L에 기초한 양성 선별을 받는, CD4 발현에 기초하여 선택된 세포의 음성 분획으로 시작하여 중심 기억 T (TCM) 세포의 농축이 수행된다. 이러한 선별은, 일부 양태에서는 동시에 수행되며, 또 다른 양태에서는 어떠한 순서로든 순차적으로 수행된다. 일부 양태에서, CD8+ 세포 집단 또는 부분 집단을 제조하는데 사용된 동일한 CD4 발현-기반의 선택 단계는 또한 CD4+ 세포 집단 또는 서브 집단을 생성하는데에도 사용되어, CD4-기반 분리로부터의 양성 및 음성 분획은 모두 경우에 따라 하나 이상의 추가적인 양성 또는 음성 선별 단계에 이어서, 상기 방법의 후속 단계에서 유지되고 사용된다.
특정 예시에서, PBMC 샘플 또는 다른 백혈구 샘플에는 CD4+ 세포의 선택이 이루어지는데, 여기서는 음성 및 양성 분획 모두가 보유된다. 그런 다음, 음성 분획은 CD14 및 CD45RA 또는 CD19의 발현에 기초하여 음성 선별을 수행하고, CD62L 또는 CCR7과 같은 중추 기억 T 세포의 마커 특성에 기초하여 양성 선별을 수행하며, 여기서 양성 및 음성 선별은 임의의 순서로 수행된다.
CD4+ 보조 T 세포는 세포 표면 항원을 가지는 세포 집단을 동정함으로써 나이브, 중심 기억 및 이펙터 세포로 분류된다. CD4+ 림프구는 표준 방법으로 수득될 수 있다. 일부 구현예에서, 나이브 CD4+ T 림프구는 CD45RO-, CD45RA+, CD62L+, CD4+ T 세포이다. 일부 구현예에서, 중심 기억 CD4+ 세포는 CD62L+ 및 CD45RO+이다. 일부 구현예에서, 이펙터 CD4+ 세포는 CD62L- 및 CD45RO-이다.
하나의 실시예에서, 음성 선택에 의해 CD4+ 세포들을 농축시키기 위하여, 단일클론성 항체 칵테일은 통상적으로 CD14, CD20, CD11b, CD16, HLA-DR, 및 CD8에 대한 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 자성 비드 또는 상자성 비드와 같은 고체 지지체 또는 매트릭스에 결합되어 양성 및/또는 음성 선별을 위한 세포의 분리를 허용한다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 및 세포 집단은 면역 자기성 (또는 친화성 자기성) 분리 기법 (reviewed in Methods in Molecular Medicine, vol. 58: Metastasis Research Protocols, Vol. 2: Cell Behavior In Vitro and In Vivo, p 17-25 Edited by: S. A. Brooks and U. Schumacher ⓒHumana Press Inc., Totowa, NJ에서 검토됨)을 사용하여 분리 또는 단리된다.
일부 양태에서, 분리될 세포의 샘플 또는 조성물은 상자성 비드 (예컨대, Dynalbeads 또는 MACS 비드)와 같은 자기적 반응 입자 또는 미세 입자 등의 작고 자화가능하거나 자기적 반응 물질과 함께 배양된다. 자기적 반응 물질, 예컨대 입자는 일반적으로 세포, 세포들 또는 세포 집단상에 존재하는 분자, 예컨대 표면 마커에 특이적으로 결합하는 결합 파트너, 예컨대 항체에 직접적으로 또는 간접적으로 부착되고, 이는 분리, 예컨대 음성적으로 또는 양성적으로 선택하는 것이 바람직하다.
일부 구현예에서, 자성 입자 또는 비드는 특이적 결합 구성원, 예컨대 항체 또는 기타 결합 파트너에 결합된 자기적 반응 물질을 포함한다. 자성 분리 방법에서 사용되는 공지된 자기적 반응 물질들이 많이 있다. 적합한 자성 입자는 Molday의 미국 특허 4,452,773, 및 유럽 특허 EP 452342B에 기술된 입자를 포함하며, 상기 특허는 본 명세서에 참조로 포함된다. Owen의 미국 특허 4,795,698 및 Liberti et al.의 미국 특허 5,200,084에 기술된 입자와 같은 콜로이드 크기의 입자가 기타 예시이다.
인큐베이션 단계는 일반적으로, 항체 또는 결합 파트너, 또는 자성 입자 또는 비드에 부착된 그러한 항체 또는 결합 파트너에 특이적으로 결합하는 2차 항체 또는 기타 시약 등의 분자가, 샘플 내 세포에 존재한다면 세포 표면 분자에 특이적으로 결합하는 조건하에서 수행된다.
일부 양태에서, 샘플은 자기장 내에 배치되고, 자기적 반응 또는 자화 가능 입자들이 부착된 세포는 자석에 끌려서 표지되지 않은 세포들부터 분리될 것이다. 양성 선별의 경우, 자석에 끌리는 세포들이 유지되고; 음성 선별의 경우, 끌리지 않는 세포들 (표지되지 않은 세포)이 유지된다. 일부 양태에서, 양성 선별 및 음성 선별의 조합은 양성 및 음성 분획이 유지되고 추가로 가공되거나 추가적인 분리 단계에 종속되는 동일한 선택 단계 중에 수행된다.
특정 구현예에서, 자기적 반응 입자들은 1차 항체 또는 기타 결합 파트너, 2차 항체, 렉틴, 효소 또는 스트렙타비딘에서 코팅된다. 특정 구현예에서, 자성 입자들은 하나 이상의 마커에 특이적인 1차 항체의 코팅을 통해 세포들에 부착된다. 특정 구현예에서, 비드보다는 세포가 1차 항체 또는 결합 파트너로 표지되고, 이어서 세포-유형 특이적 2차 항체- 또는 기타 결합 파트너 (예컨대, 스트렙타비딘)-코팅된 자성 입자가 첨가된다. 특정 구현예에서, 스트렙타비딘-코팅된 자성 입자는 비오틴화된 1차 또는 2차 항체와 함께 사용된다.
일부 구현예에서, 자기적 반응 입자들은 후속적으로 배양 및/또는 조작되는 세포들에 부착된 채로 남고; 일부 양태에서, 입자들은 환자에게 투여되기 위해 세포에 부착된 채로 남는다. 일부 구현예에서, 자화 가능 또는 자기적 반응 입자들은 세포들로부터 제거된다. 세포로부터 자화 가능한 입자들을 제거하는 방법은 공지되어 있으며, 예컨대 경쟁적 비표지된 항체, 및 자화 가능한 입자 또는 절단 가능한 링커에 컨쥬게이션된 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 일부 구현예에서, 자화 가능한 입자들은 생분해성이다.
일부 구현예에서, 친화성-기반의 선별은 자성-활성화된 세포 분류 (MACS) (Miltenyi Biotech, Auburn, CA)를 통해 이루어진다. Magnetic Activated Cell Sorting (MACS) 시스템은 자성 입자가 부착된 세포들을 고순도로 선별할 수 있다. 특정 구현예에서, MACS는 비-표적 종 및 표적 종이 외부 자기장의 적용 이후 순차적으로 용출되는 모드로 작동한다. 즉, 자화된 입자들에 부착된 세포들은 부착되지 않은 종들이 용출되는 동안 제 위치에 유지된다. 이어서, 이 제1 용출 단계가 완료된 이후, 자기장에 포획되어 용출되는 것이 방지된 종은 용출 및 회수할 수 있는 어떤 방법으로 유리된다. 특정 구현예에서, 비-표적 세포는 표지되고 세포의 이종 집단으로부터 고갈된다.
특정 구현예에서, 단리 또는 분리는 단리, 세포 제조, 분리, 가공, 인큐베이션, 배양 및/또는 제형 단계 중 하나 이상을 수행하는 시스템, 기구 또는 장치를 사용하여 수행된다. 일부 양태에서, 시스템은 밀폐되거나 멸균 환경에서 이러한 각 단계를 수행하기 위해, 예컨대 에러, 사용자 처리 및/또는 오염을 최소화하기 위해 사용된다. 한 예시에서, 한 예에서, 시스템은 국제 특허 출원 WO2009/072003 또는 US 20110003380 A1에 기술된 시스템이다.
일부 구현예에서, 시스템 또는 장치는 통합 또는 자체 내장 시스템에서, 및/또는 자동화되거나 프로그램 가능한 방식으로, 예컨대 모든 분리, 가공, 조작 및 제형 단계 중 하나 이상을 수행한다. 일부 양태에서, 시스템 또는 장치는 사용자가 가공, 단리, 조작 및 제형화 단계의 결과를 프로그램, 제어, 평가하고, 및/또는 다양한 양상들을 조정할 수 있도록 하는 시스템 또는 장치와 통신하는 컴퓨터 및/또는 컴퓨터 프로그램을 포함한다.
일부 양태에서, 분리 및/또는 기타 단계는 CliniMACS 시스템 (Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행되고, 예컨대 닫힌 무균 시스템에서 임상 규모 수준의 세포의 자동 분리를 위해 수행된다. 구성 요소들은 통합 마이크로컴퓨터, 자기 분리 유닛, 연동 펌프 및 다양한 핀치 밸브을 포함할 수 있다. 통합 컴퓨터는 일부 양태에서 기구의 모든 구성 요소를 제어하고, 표준화된 순서로 반복적인 절차를 수행하도록 시스템에 지시한다. 자기 분리 유닛은 일부 양태에서 이동 가능한 영구 자석 및 선택 칼럼을 위한 홀더를 포함한다. 연동 펌프는 튜빙 세트 전체의 유속을 제어하며, 핀치 밸브와 함께 시스템을 통한 완충액의 제어된 흐름 및 세포의 지속적인 서스펜션을 보장한다.
CliniMACS 시스템은 일부 양태에서 멸균된 비-발열성 용액으로 공급되는 항체 결합 자화 가능 입자를 사용한다. 일부 구현예에서, 자성 입자로 세포를 표지한 이후 세포를 세척하여 과량의 입자를 제거한다. 세포 제조 백은 이후 튜빙 세트에 연결되고, 완충액과 세포 채취 백에 차례로 연결된다. 튜빙 세트는 예비-칼럼과 분리 칼럼을 포함하여 미리 조립된 무균 튜빙으로 구성되어 있으며 일회용으로만 사용된다. 분리 프로그램의 개시 후, 시스템은 자동으로 세포 샘플을 분리 칼럼에 도포시킨다. 표지된 세포들은 칼럼 내에 유지되는 반면, 표지되지 않은 세포들은 일련의 세척 단계에 의해 제거된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되지 않고 칼럼에 유지되지 않는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 표지되고 칼럼에 유지된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 방법과 함께 사용하기 위한 세포 집단은 자기장의 제거 이후 칼럼으로부터 용출되어 세포 채취 백 내에 수집된다.
특정 구현예에서, 분리 및/또는 기타 단계는 CliniMACS Prodigy 시스템 (Miltenyi Biotec)을 사용하여 수행된다. CliniMACS Prodigy 시스템은 일부 양태에서 원심 분리에 의한 세포의 자동화된 세척 및 분류를 가능하게 하는 세포 처리 일체로 장착되어 있다. CliniMACS Prodigy 시스템은 또한 공급원 세포 생성물의 육안으로 보이는 층을 식별함으로써 최적의 세포 분획 종점을 결정하는 내장 카메라 및 이미지 인식 소프트웨어를 포함할 수 있다. 예를 들어, 말초 혈액은 적혈구, 백혈구 및 혈장 층으로 자동 분리된다. CliniMACS Prodigy 시스템은 또한, 예컨대 세포 분화 및 팽창, 항원 로딩 및 수명이 긴 세포 배양 등의 세포 배양 프로토콜을 수행하는 통합 세포 배양 챔버를 포함할 수 있다. 입력 포트는 멸균 제거 및 배지의 보충을 허용할 수 있으며 통합 현미경을 사용하여 세포를 모니터할 수 있다. 예를 들어, Klebanoff et al. J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al. Blood.1:72-82 (2012), 및 Wang et al. J Immunother. 35(9):689-701 (2012)를 참조한다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 세포 집단은 유동 세포 분석법을 통해 채취 및 농축 (또는 고갈)되고, 여기서 여러 세포 표면 마커에 대해 염색된 세포는 유체 줄기로 운반된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 기재된 세포 집단은 예비 크기 (FACS) 분리를 통해 채취 및 농축 (또는 고갈)된다. 특정 구현예에서, 본 명세서에 기재된 세포 집단은 FACS-기반 검출 시스템과 함께 마이크로 전기 기계 시스템 (MEMS) 칩의 사용에 의해 채취 및 농축 (또는 고갈)된다 (예컨대, 문헌 WO 2010/033140, Cho et al. Lab Chip 10, 1567-1573 (2010); 및 Godin et al. J Biophoton. 1(5):355-376 (2008) 참조). 두 경우 모두 세포를 여러 마커로 표지할 수 있어 명확한 T 세포는 고순도로 단리된다.
일부 구현예에서, 항체 또는 결합 파트너는 하나 이상의 검출 가능한 마커로 표지되어, 양성 및/또는 음성 선별을 위한 분리를 용이하게 한다. 예를 들어, 분리는 형광 표지된 항체와의 결합에 기초할 수 있다. 일부 예시에서, 하나 이상의 세포 표면 마커에 특이적인 항체 또는 기타 결합 파트너의 결합에 기초한 세포의 분리는 유체 줄기에서, 예컨대 예비 크기 (FACS) 및/또는 마이크로 전기 기계 시스템 (MEMS) 칩을 포함하는 형광 활성화 세포 분류 (FACS)를, 유동 세포 검출 시스템과 함께 조합하여 수행될 수 있다. 이러한 방법은 동시에 여러 마커에 기초한 양성 선별 및 음성 선별을 허용한다.
일부 구현예에서, 제조 방법은 단리, 인큐베이션, 배양 및/또는 조작 전 또는 후에, 세포를 동결, 예컨대 동결 보존하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 동결 및 후속 해동 단계는 과립구 및 어느 정도는 세포 집단 내의 단핵구를 제거한다. 일부 구현예에서, 예컨대, 혈장 및 혈소판을 제거하기 위한 세척 단계 후에, 세포는 동결 용액에서 현탁된다. 임의의 다양한 공지된 동결 용액 및 파라미터가 경우에 따라 사용될 수 있다. 한 예시로는 20% DMSO 및 8% 인간 혈청 알부민 (HSA) 또는 기타 적합한 세포 동결 배지를 포함하는 PBS를 사용하는 것을 포함한다. 그런 다음 DMSO와 HSA의 최종 농도가 각각 10%와 4%가 되도록 배지와 1:1로 희석된다. 이어서, 세포는 일반적으로 분당 1°의 속도에서 -80 ℃로 동결되고 액체 질소 저장 탱크의 증기상에 저장된다.
일부 구현예에서, 세포는 유전자 조작에 선행하여 또는 이와 관련하여 인큐베이션 및/또는 배양된다. 인큐베이션 단계는 배양, 구축, 자극, 활성화 및/또는 증식을 포함할 수 있다. 배양 및/또는 조작은, 배양물 또는 배양 세포용의 배양 용기, 예컨대 유닛, 챔버, 웰, 컬럼, 튜브, 튜브 세트, 밸브, 바이알, 배양 디쉬, 백 또는 기타 컨테이너에서 수행될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물 또는 세포는 자극 조건 또는 자극제의 존재하에서 인큐베이션된다. 이러한 조건은 집단에서 세포의 증식, 팽창, 활성화 및/또는 생존을 유도하고, 항원 노출을 모방하며, 및/또는 재조합 항원 수용체의 도입과 같은 유전자 조작을 위해 세포를 준비하도록 고안된 것들을 포함한다.
조건은 하나 이상의 특정 배지, 온도, 산소 함량, 이산화탄소 함량, 시간, 시제 (예컨대, 영양제, 아미노산, 항생제, 이온 및/또는 자극 인자 (예컨대, 사이토카인, 케모카인, 항원, 결합 파트너, 융합 단백질, 재조합 가용성 수용체 및 세포를 활성화하도록 고안된 임의의 기타 시제))를 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 자극 조건 또는 시제는 TCR 복합체의 세포 내 신호 전달 도메인을 자극 또는 활성화시킬 수 있는 하나 이상의 시제, 예컨대 리간드를 포함한다. 일부 양태에서, 시제는 T 세포에서 TCR/CD3 세포 내 신호 전달 캐스케이드를 작동시키거나 개시한다. 이러한 시제는 항체, 예컨대 TCR에 대하여 특이적인 항체, 예컨대, 항-CD3를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 조건은 공동자극 수용체를 자극할 수 있는 하나 이상의 약제, 예를 들어 리간드를 포함하며, 예컨대 항-CD28이다. 일부 구현예에서, 이러한 제제 및/또는 리간드는 고체 지지체에 결합될 수 있는데, 예컨대 비드이고 및/또는 하나 이상의 사이토카인에 결합 될 수 있다. 선택적으로, 팽창 방법은 항-CD3 및/또는 항-CD28 항체를 배양 배지에 (예컨대, 적어도 약 0.5 ng/ml의 농도로) 첨가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 자극 시제는 IL-2, IL-15 및/또는 IL-7을 포함한다. 일부 양태에서, IL-2 농도는 적어도 약 10 units/mL이다.
일부 양태에서, 인큐베이션 단계는 Riddell et al의 미국 특허 6,040,177, Klebanoff et al. J Immunother. 35(9): 651-660 (2012), Terakura et al. Blood.1:72-82 (2012), 및/또는 Wang et al. J Immunother. 35(9):689-701 (2012)에 기재된 기법에 따라 수행된다.
일부 구현예에서, T-세포는, 배양-개시 조성물에 피더 세포, 예컨대 비-분할 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 첨가하고 (예컨대 그로써 결과물인 세포 집단은 증식될 최초 집단에서의 각 T 림프구에 대하여 약 5, 10, 20, 또는 40 또는 그 이상의 PBMC 피더 세포를 함유한다); 배양물을 배양함으로써 (예컨대, T t세포의 수가 증식하기에 충분한 시간 동안) 증식된다. 일부 양태에서, 비-분할 피더 세포는 감마선 조사된 PBMC 피더 세포를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, PBMC는 세포 분열을 방지하기 위해 약 3000 내지 3600 rads 범위의 감마선으로 조사된다. 일부 양태에서, 피더 세포는 T 세포 집단의 첨가에 선행하여 배양 배지에 첨가된다.
일부 구현예에서, 자극 조건은 인간 T 림프구의 성장에 적합한 온도, 예컨대, 적어도 약 25 ℃, 일반적으로 약 30 ℃, 및 일반적으로 약 37 ℃를 포함한다. 선택적으로, 인큐베이션 단계는 피더 세포로서 비-분할 EBV-형질 전환 림프아구 세포 (LCL)를 첨가하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. LCL은 약 6000 내지 10,000 rads 범위의 감마선으로 조사될 수 있다. LCL 피더 세포는 일부 양태에서 임의의 적합한 양으로, 예컨대 초기 T 림프구에 대한 LCL 피더 세포의 비율이 적어도 약 10:1인 양으로 제공된다.
구현예에서, 항원 특이적 T 세포, 예컨대 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포는 나이브 또는 항원 특이적 T 림프구를 항원으로 자극함으로써 수득된다. 예를 들어, 항원 특이적 T 세포주 또는 클론은 T 세포를 감염된 대상체로부터 단리하고 시험관 내에서 동일한 항원으로 세포를 자극함으로써, 사이토메갈로바이러스 항원에 생성될 수 있다.
VII. 조성물 및 제형
일부 구현예에서, 세포 요법은 조성물 또는 제형, 예컨대 약제학적 조성물 또는 제형으로서 제공된다. 이러한 조성물은 예컨대 질병, 병태, 및 장애의 예방 또는 치료에 제공되는 방법에 따라, 또는 검출, 진단적, 및 예후 방법에 따라 사용될 수 있다.
용어 “약제학적 제형(pharmaceutical formulation)”이란 이러한 조성물 안에 포함된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과가 있도록 하기 위한 형태의 조제물을 지칭하며, 제형이 투여되는 대상에게 수용 불가능한 독성을 주는 추가 성분은 포함하지 않는다.
“약제학적 수용가능한 담체(pharmaceutically acceptable carrier)”란, 대상에게 비독성이며, 활성 성분 이외의 약제학적 제형에 포함된 성분을 지칭한다. 약제학적으로 수용가능한 담체는 완충액, 부형제, 안정화제, 또는 보존제를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, T 세포 요법, 예컨대 조작된 T 세포 (예를 들어, CAR T 세포)는 약제학적으로 허용되는 담체와 함께 제제화된다. 일부 양태에서, 담체의 선택은 부분적으로 특정 세포 및/또는 투여 방법에 의해 결정된다. 따라서, 다양한 적합한 제형이 존재한다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 보존제를 포함할 수 있다. 적합한 보존제로는, 예를 들어, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 벤조산나트륨 및 벤즈알코늄 클로라이드를 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 둘 이상의 보존제의 혼합물이 사용된다. 보존제 또는 이의 혼합물은 전형적으로 총 조성물 중량의 약 0.0001% 내지 약 2%의 양으로 존재한다. 담체는 예를 들어, 문헌 Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)에 기재되어 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 일반적으로 사용된 복용량 및 농도에서 수용자에게 무독성이며, 다음을 포함하지만 이에 제한되지 않는다: 포스페이트, 시트르산 및 기타 유기산과 같은 완충제; 아스코르빈산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 보존제 (예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜, 메틸 또는 프로필 파라벤 등의 알킬 파라벤; 카테콜; 레조르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저 분자량의 (약 10개 잔기 미만) 폴리펩타이드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역 글로불린 등의 단백질; 폴리비닐피롤리돈 등의 친수성 폴리머; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신 등의 아미노산; 단당류, 이당류 및 포도당, 만노오스 또는 덱스트린을 비롯한 기타 탄수화물; EDTA 등의 킬레이트화제; 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨 등의 슈가; 나트륨 등의 염-형성 반대 이온; 금속 복합체 (예컨대, Zn-단백질 복합체); 및/또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 등의 비이온성 계면 활성제.
일부 양태에서 완충제가 조성물에 포함된다. 적합한 완충제로는 예를 들어, 시트르산, 시트르산 나트륨, 인산, 인산 칼륨 및 다양한 기타 산 및 염을 포함한다. 일부 양태에서, 둘 이상의 완충제의 혼합물이 사용된다. 완충제 또는 이의 혼합물은 전형적으로 총 조성물 중량의 약 0.001% 내지 약 4%의 양으로 존재한다. 투여 가능한 약제학적 조성물의 제조 방법은 공지되어 있다. 예시적인 방법은 예컨대, 문헌 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott Williams & Wilkins; 21st ed. (May 1, 2005)에 더욱 상세히 기재되어 있다.
이러한 제형은 수용액을 포함할 수 있다. 제형 또는 조성물은 또한 세포로 예방 또는 치료되는 특정 징후, 질병, 또는 병태에 유용한 하나 이상의 활성 성분을 포함할 수 있으며, 여기서 활성은 세포에 상보적이고 및/또는 각각의 활성은 서로 악영향을 미치지 않는 하나 이상의 활성 성분을 포함한다. 이러한 활성 성분은 의도된 목적에 유효한 양으로 조합하여 적절하게 존재한다. 따라서, 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 기타 약제학적으로 활성인 시제 또는 약물, 예컨대 화학요법 시제, 예컨대 아스파라기나제, 부술판, 카보플라틴, 시스플라틴, 다우노루비신, 독소루비신, 플루오로우라실, 겜시타빈, 히드록시유레아, 메토트렉세이트, 파클리탁셀, 리툭시맵, 빈블라스틴 등을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 질환 또는 증상을 치료 또는 예방하기에 효과적인 양, 예컨대 치료적 유효량 또는 예방적 유효량의 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 치료적 또는 예방적 효능은 치료된 대상체의 주기적인 평가에 의해 모니터링된다. 조건에 따른 며칠 또는 며칠 이상에 걸친 반복된 투여의 경우, 치료는 질병 증상이 바람직하게 억제될 때까지 반복된다. 그러나, 기타 복용량 요법이 유용할 수 있으며 결정될 수 있다. 원하는 복용량은 조성물의 단일 볼루스 투여, 조성물의 다중 볼루스 투여 또는 조성물의 지속 주입 투여에 의해 전달될 수 있다.
세포는 표준 투여 기법, 제형 및/또는 장치를 사용하여 투여될 수 있다. 조성물의 저장 및 투여를 위한 주사기 및 바이알과 같은 제형 및 장치가 제공된다. 세포와 관련하여, 투여는 자가 또는 이종성일 수 있다. 예를 들어, 면역 반응 세포 또는 전구 세포는 한 대상체로부터 수득될 수 있으며, 동일한 대상체 또는 상이한, 호환이 되는 대상체에 투여될 수 있다. 말초 혈액 유래의 면역 반응 세포 또는 그 후대 (예컨대, 생체 내, 생체 외 또는 시험관 내에서 유래됨)은 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥 내 주사 또는 비경구 투여를 비롯한 국소 주사를 통해 투여될 수 있다. 치료적 조성물 (예컨대, 유전자 조작된 면역 반응 세포를 포함하는 약제학적 조성물)을 투여하는 경우, 이는 일반적으로 단위 복용량 주사 가능한 형태 (용액, 현탁액, 에멀젼)로 제형화될 것이다.
제형은 경구, 정맥 내, 복강 내, 피하, 폐, 경피, 근육 내, 비강 내, 협측, 설하 또는 좌약 투여를 위한 것들을 포함한다. 일부 구현예에서, 시제 또는 세포 집단은 비경구적으로 투여된다. 용어 “비경구”는, 본 명세서에서 사용 시, 정맥 내, 근육 내, 피하, 직장, 질 및 복강 내 투여를 포함한다. 일부 구현예에서, 시제 또는 세포 집단은 정맥 내, 복강 내 또는 피하 주사에 의한 말초 전신 전달을 사용하여 대상체에게 투여된다.
일부 구현예에서 조성물은, 일부 양태에서 선택된 pH로 완충될 수 있는 멸균 액체 제조물, 예컨대 등장성 수용액, 현탁액, 에멀젼, 분산액 또는 점성 조성물로서 제공된다. 액체 제조물은 일반적으로 겔, 기타 점성 조성물 및 고체 조성물보다 제조하기 용이하다. 또한, 액체 제조물은 특히 주사에 의해 투여하기에 더욱 편리하다. 한편, 점성 조성물은 특정 조직과의 연장된 접촉 시간을 제공하기 위해 적합한 점도 범위 내에서 제제화될 수 있다. 액체 또는 점성 조성물은 예컨대 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 폴리올 (예컨대, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 액체 폴리에틸렌 글리콜) 및 이의 적합한 혼합물을 포함하는 용매 또는 분산 매질일 수 있는 담체를 포함할 수 있다.
멸균 주사 가능한 용액은 세포를 적합한 담체, 희석제, 또는 멸균수, 생리식염수, 글루코스, 덱스트로스 등과 같은 부형제와 혼합한 것과 같은 용매에 포함시킴으로써 제조될 수 있다. 조성물은 또한 동결 건조될 수 있다. 조성물은 원하는 투여 및 제조 경로에 따라 습윤제, 분산제 또는 에멀젼화제 (예컨대, 메틸셀룰로오스), pH 완충제, 겔화 또는 점도 증강 첨가제, 보존제, 향료제, 착색제 등과 같은 보조 물질을 포함할 수 있다. 일부 양태에서, 적합한 제조물을 제조하기 위하여 표준 텍스트를 참고할 수 있다.
항균 보존제, 항산화제, 킬레이트화제 및 완충제를 비롯하여, 조성물의 안정성 및 무균성을 향상시키는 다양한 첨가제가 첨가될 수 있다. 미생물 작용의 예방은 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산 등 다양한 항균제 및 항진균제에 의해 보장될 수 있다. 주사 가능한 제약 형태의 흡수는, 흡수를 지연시키는 시제, 예컨대 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴의 사용에 의해 연장될 수 있다.
생체내 투여에 사용되는 제형은 일반적으로 무균이다. 무균성은, 예컨대 무균성 여과막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
질병의 예방 또는 치료를 위해, 적절한 투여량은 치료될 질병의 유형, 시제의 유형, 세포 또는 재조합 수용체의 유형, 질병의 중증도 및 경과, 세포가 예방적 또는 치료적 목적으로 투여되는지 여부, 이전의 치료, 대상체의 임상 기록 및 시제 또는 세포에 대한 반응, 주치의의 재량에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 한 번에 또는 일련의 치료를 통해 적절하게 대상체에게 투여된다.
VIII. 키트 및 제조 물품
제조 물품 또는 키트가 또한 제공되며, 이러한 제조 물품 또는 키트는 제공되는 유전자 조작된 세포, 및 조작된 세포의 팽창, 증식 및/또는 활성을 조절하기 위한 하나 이상의 시제, 및/또는 추가의 치료제 및/또는 이를 포함하는 조성물, 선택적으로 하나 이상의 파라미터, 예를 들어, 약동학적 파라미터 및/또는 환자 속성 및/또는 바이오마커의 발현을 평가 및/또는 측정하는 시약, 및 선택적으로 사용 설명서, 예를 들어, 제공되는 방법에 따른 투여 및/또는 평가 설명서를 포함한다. 제조 물품은 용기 및 용기 상에 또는 용기와 관련된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 용기로는, 예를 들어 병, 바이알, 주사기, 시험관, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 다양한 재료, 예컨대 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 일부 실시 양태에서, 용기는 멸균 접근 포트를 가진다. 예시적인 용기로는 주사용 바늘이 뚫을 수 있고 스탑퍼를 가지는 백을 포함하여, 정맥 내 수액 백, 바이알을 포함한다.
본 명세서에 제공되는 제조 물품은 포장 재료를 포함한다. 제공된 재료를 포장하는데 사용하기 위한 포장 재료는 당업자에게 잘 알려져 있다. 예를 들어, 미국 특허 5,323,907, 5,052,558 및 5,033,252를 참조하며, 상기 특허 각각은 그 전체가 본 명세서에 포함된다. 포장 재료의 예는 블리스터 팩, 병, 튜브, 흡입기, 펌프, 백, 바이알, 용기, 주사기, 일회용 실험실 용품, 예를 들어 피펫 팁 및/또는 플라스틱 팁, 또는 병을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 제조 물품 또는 키트는 재료의 분배를 용이하게 하거나, 예를 들어 로봇 장비에서의 사용을 용이하게 하기 위해 높은 처리량 또는 대규모 방식으로 사용을 용이하게하기 위한 장치를 포함할 수 있다. 일반적으로, 포장은 그 안에 함유된 조성물과 비-반응성이다.
제조 물품 또는 키트는 조성물이 본 명세서에 기재된 병태 (예를 들어, 다발성 골수종)과 같은 특정 병태를 치료하는데 사용될 수 있음을 나타내는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 택일적으로, 또는 추가적으로, 제조 물품 또는 키트는 약제학적으로-허용되는 완충액을 포함하는 또 다른 또는 동일한 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 물질, 예컨대 다른 완충액, 희석제, 필터, 바늘, 및/또는 실린지를 추가로 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 제조 물품 또는 키트는 하나 이상의 용기, 일반적으로 복수의 용기, 패키징 재료, 및 용기 또는 용기 및/또는 패키징와 연관된 또는 용기 상의 라벨 또는 패키지 삽입물, 일반적으로 사용 설명서를 포함하여, 예를 들어, 조립된 핵산 분자 또는 핵산 분자의 세트를 세포 내로 핵산 조립 및/또는 도입하기 위한 설명서, 예컨대 제공되는 방법에 사용되는 세포, 예컨대 T 세포, T 세포주 및/또는 T 세포 조성물의 형질감염 또는 형질도입을 위한 설명서를 포함한다.
일부 구현예에서, 용기는 조성물 그 자체로, 또는 조작된 세포, 예컨대 본 명세서에 기재된 임의의 세포의 팽창, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 하나 이상의 시제(들) 을 함유하는 또 다른 조성물과 조합된 조성물을 보유한다. 제조 물품 또는 키트는 내부에 함유된 조성물을 가지는 하나 이상의 용기를 포함할 수 있고, 상기 조성물은 조작된 세포의 팽창, 증식 및/또는 활성을 조절할 수 있는 하나 이상의 시제(들), 예컨대 임의의 본 명세서에 기재된 시제를 포함하고; 상기 조성물은 선택적으로 추가의 치료제를 포함하며, 상기 물품 또는 키트는 대상체를 유효량으로 치료하기 위해 라벨 또는 패키지 삽입물에 대한 설명서를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 추가로 림프구고갈 요법에 대한 시제를 포함하며, 선택적으로 림프구고갈 요법을 투여하기 위한 설명서를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 설명서는 투여용 조성물을 수반하는 라벨 또는 패키지 삽입물로서 포함될 수 있다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 생물학적 샘플, 예를 들어, 투여에 대한 후보인 대상체 또는 요법이 투여된 적이 있는 대상체로부터의 생물학적 샘플을 분석하기 위한 하나 이상의 시약, 및 선택적으로 시약 또는 분석, 예를 들어, 하나 이상의 파라미터, 예를 들어, 약동학적 파라미터 및/또는 환자 속성 및/또는 바이오마커의 발현의 평가에 사용하기 위한 설명서, 및 선택적으로 사용 설명서, 예를 들어, 투여 및/또는 평가에 대한 설명서를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈장 또는 혈청 샘플이거나, 이로부터 수득된다.
일부 구현예에서, 시약은 세포 요법의 투여 이전 또는 세포 요법의 투여 이후에 사용될 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 제조 물품 /또는 키트는 특정 약동학적 파라미터, 반응 결과와 연관된, 특정 환자 속성 및/또는 염증성 마커의 수준을 측정하기 위한 시약, 및/또는 독성 및 측정을 위한 설명서를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 시약은 파라미터, 예컨대 면역분석, 압타머-기반 분석, 조직학적 또는 세포학적 분석, 또는 mRNA 발현 수준 분석을 측정하는 시험관 내 분석을 수행하기 위한 성분을 포함한다. 일부 구현예에서, 시험관 내 분석은 효소-결합 면역흡착 분석 (ELISA), 면역 블로팅, 면역 침전법, 방사 면역 분석법 (RIA), 면역 염색법, 유동 세포 측정 분석법, 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 화학발광 분석, 측면 흐름 면역분석, 억제 분석 및 열성 분석으로부터 선택된다. 일부 양태에서, 시약은 바이오마커에 특이적으로 결합하는 결합 시약이다. 일부 경우에, 결합 시약은 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 압타머 또는 핵산 프로브이다. 일부 구현예에서, 제조 물품은 파라미터를 평가하기 위해 본 명세서에 기재된 임의의 시약을 포함한다.
일부 구현예에서, 제조 물품 및/또는 키트는 하나 이상의 파라미터, 예를 들어, 약동학적 파라미터 및/또는 환자 속성 및/또는 바이오마커의 발현을 검출할 수 있는 하나 이상의 시약, 예를 들어, 투여 및/또는 평가에 대한 설명서, 및 치료에 대한 후보인 대상체로부터 생물학적 샘플을 분석하기 위한 시약을 사용하는 설명서를 포함하며, 여기서 하나 이상의 파라미터는 다음으로부터 선택된다: CAR+ 세포, 예를 들어, CD3+, CD4+ 및/또는 CD8+ CAR+ 세포의 개수 또는 수준, CAR+ 세포, 예를 들어, CD3+, CD4+ 및/또는 CD8+ CAR+ 세포의 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax), 피크 시간 (즉, 최대 혈장 농도 (Cmax) 발생 시간; Tmax), 최소 혈장 농도 (즉, 치료제, 예를 들어, CAR+ T 세포 용량 사이의 최소 혈장 농도; Cmin), 제거 반ㄱ마기 (T1/2) 및 곡선 아래 면적 (즉, 시간에 대해 치료제 CAR+ T 세포의 혈장 농도를 플롯팅함으로써 생성된 곡선 아래 면적; AUC), 종양의 부피 측정치, 예를 들어, 직경의 곱의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 괴사, 종양 부피, 괴사 부피, 괴사-종양 비율 (NTR), 종양주변 부종 (PTE), 및 부종-종양 비율 (ETR), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, β2마이크로글로불린 (βC-C 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13), C-반응성 단백질 (CRP), C-X-C 모티프 케모카인 10 (CXCL10), IL-2, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-15, IL-16, 인터페론 감마 (IFN-γ림프독소-알파 (LT-α), 단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1), 대식세포 염증성 단백질 1 알파 (MIP-1α), MIP-1β혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), 형질전환 성장 인자 베타 (TGF-β및 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α). 일부 구현예에서, 대상체에서의 파라미터 존재 또는 부재, 수준, 양, 또는 농도를 분석물 및/또는 파라미터의 임계 수준과 비교하여 분석하는 설명서가 또한 포함된다.
IX. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술 용어, 표기법 및 기타 기술 및 과학 용어 또는 전문 용어는, 청구되는 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 바와 같은 동일한 의미를 가진다. 일부 경우에, 일반적으로 이해되는 의미를 가지는 용어는 명확성 및/또는 즉답형 참조를 위해 본 발명에 정의되며, 본 명세서에 이러한 정의를 포함한다고 해서 해당 기술 분야에서 일반적으로 이해되는 바와 실질적인 차이를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.
본 명세서에서 사용 시, "대상체"는 인간 또는 기타 동물과 같은 포유류이며, 일반적으로는 인간이다. 일부 구현예에서, 면역조절성 폴리펩타이드, 조작된 세포 또는 조성물이 투여되는 대상체, 예컨대 환자는 포유류, 전형적으로는 인간과 같은 영장류이다. 일부 구현예에서, 영장류는 원숭이 또는 유인원이다. 대상체는 남성 또는 여성일 수 있으며, 유아, 어린이, 청소년, 성인 및 노인 대상체를 포함하여 임의의 적합한 연령일 수 있다. 일부 구현예에서, 대상체는 설치류와 같은 영장류가 아닌 포유류이다.
본 명세서에서 사용 시, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "치료" (및 "치료하다" 또는 "치료의"와 같은 문법적인 변형)는 질환 또는 병태 또는 장애, 또는 증상, 부작용 또는 결과, 또는 이러한과 관련된 표현형의 완전한 또는 부분적인 개선 또는 감소를 의미한다. 치료의 바람직한 효과에는 질환의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 상기 질환의 임의의 직접 또는 간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질환 진행 속도 감소, 상기 질환 상태의 개선 또는 경감, 그리고 차도 또는 개선된 예후가 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 용어는 질환의 완치, 또는 모든 증상이나 결과에 대한 임의의 증상 또는 효과(들)의 완전한 제거를 의미하지는 않는다.
본 명세서에서 사용 시, "질환 발생 지연"은 질병 (예컨대, 암)의 발생을 연기, 저해, 둔화, 지체, 안정화, 억제 및/또는 미루는 것을 의미한다. 지연은 치료될 질환 및/또는 개인의 병력에 좌우하여 다양한 길이의 시간이 될 수 있다. 통상의 기술자에게 명백한 바와 같이, 충분한 또는 현저한 지연은 사실상 개인이 질환을 발생시키지 않는다는 점에서 예방을 포함할 수 있다. 예를 들어, 말기 암, 예컨대 전이의 발생은 지연될 수 있다.
본 명세서에서 사용 시, "예방"은 질환에 걸리기 쉽지만 아직 질환을 진단받지 않은 대상체에서, 질환의 발병 또는 재발과 관련된 예방을 제공하는 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 제공된 세포 및 조성물은 질환의 발생을 지연시키거나 질환의 진행을 둔화시키는데 사용된다.
본 명세서에서 사용 시, 기능 또는 활성을 "억제"하는 것은 관심있는 조건 또는 파라미터를 제외한 다른 동일한 조건과 비교하였을 때, 또는 또 다른 조건과 비교하여, 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 세포는, 세포가 없는 경우에서의 종양의 성장 속도와 비교하여 종양의 성장 속도를 감소시킨다.
투여의 맥락에서, 약학 제형, 세포 또는 조성물의 "유효량"은, 필요한 시간 동안 복용량/투여량으로 치료적 또는 예방적 결과 등의 원하는 결과를 효과적으로 달성하기 위한 양을 의미한다.
시제, 예를 들어 약제학적 제형 또는 조작된 세포의 "치료적 유효량"은, 필요한 시간 동안 복용량으로 원하는 치료적 결과, 예컨대 질환, 병태 또는 장애의 치료, 및/또는 치료의 약동학 또는 약역학 효과를 효과적으로 달성하기 위한 양을 의미한다. 치료적 유효량은 대상체의 질환 상태, 연령, 성별 및 체중과 투여되는 면역조절성 폴리펩타이드 또는 조작된 세포 등의 인자에 따라 달라질 수 있다. 일부 구현예에서, 제공된 방법은 면역조절성 폴리펩타이드 또는 조작된 세포, 또는 조성물을 유효량으로, 예컨대 치료적 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다.
"예방적 유효량"은, 필요한 시간 동안 복용량으로 원하는 예방적 결과를 효과적으로 달성하기 위한 양을 의미한다. 그러나, 전형적으로 반드시 그런 것은 아니지만, 예방적 투여량은 질환 전 또는 초기 단계에 이용되기 때문에, 예방적 유효량은 치료적 유효량보다 적을 것이다.
용어 “약제학적 제형(pharmaceutical formulation)”이란 이러한 조성물 안에 포함된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과가 있도록 하기 위한 형태의 조제물을 지칭하며, 제형이 투여되는 대상에게 수용 불가능한 독성을 주는 추가 성분은 포함하지 않는다.
“약제학적 수용가능한 담체(pharmaceutically acceptable carrier)”란, 대상에게 비독성이며, 활성 성분 이외의 약제학적 제형에 포함된 성분을 지칭한다. 약제학적으로 수용가능한 담체는 완충액, 부형제, 안정화제, 또는 보존제를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용 시, 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치가 서열 목록에 기재된 것과 같은 개시된 서열에서 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치에 "상응한다"는 설명은, 표준 정렬 알고리즘, 예컨대 GAP 알고리즘을 사용하여 동일성을 최대화하기 위해 개시된 서열과의 정렬 시에 식별되는 뉴클레오타이드 또는 아미노산 위치를 지칭한다. 서열을 정렬시킴으로써, 예를 들어, 보존된 동일한 아미노산 잔기를 가이드로서 사용하여 상응하는 잔기를 식별할 수 있다. 일반적으로, 상응하는 위치를 식별하기 위해, 아미노산 서열은 가장 높은 순서로 일치하게 되도록 정렬된다 (예컨대, 다음의 문헌을 참조한다: Computational Molecular Biology, Lesk, A.M., ed., Oxford University Press, New York, 1988; Biocomputing: Informatics and Genome Projects, Smith, D.W., ed., Academic Press, New York, 1993; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., and Griffin, H.G., eds., Humana Press, New Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; and Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, New York, 1991; Carrillo et al. (1988) SIAM J Applied Math 48: 1073).
본 발명에 사용되는바, 용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 전파시킬 수 있는 핵산 분자를 말한다. 상기 용어는 그것이 도입된 숙주 세포의 게놈에 혼입된 벡터뿐만 아니라 자기 복제 핵산 구조로서의 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 그들이 작동적으로 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터를 본 명세서에서 “발현 벡터(expression vectors)”라고 한다. 벡터 중에는 바이러스 벡터, 예컨대 레트로바이러스, 예를 들어 감마레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터가 있다.
용어 "숙주 세포(host cell)", "숙주 세포 계통(cell line)", 및 "숙주 세포 배양물(culture)"은 호환 이용되며, 외생 핵산이 도입된, 세포 및 이러한 세포들의 후대가 포함된 세포들을 지칭한다. 숙주 세포들은 "형질변환체(transformant)"와 "형질변환된(transformed) 세포들"이 포함되는데, 이들은 계대의 수와 무관하게, 1차 형질변환된 세포와 이로부터 유도된 후대를 포함한다. 후대는 핵산 함량에 있어서 부모계 세포와 완벽하게 동일하지는 않고, 돌연변이를 포함할 수 있다. 원래 형질변환된 세포에 대하여 선별된 또는 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 보유한 돌연변이 후대가 본 명세서에 포함된다.
본 명세서에 사용 시, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "양성"이라는 설명은, 특정 마커, 전형적으로 표면 마커가 세포 상의 또는 세포 내의 검출 가능하도록 존재하는 것을 의미한다. 표면 마커를 지칭할 때, 용어는 예컨대, 마커에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 항체를 검출함으로써, 유동 세포 측정 분석에 의해 검출된 표면 발현의 존재를 지칭하며, 여기서 염색은 동일한 조건하에서 이소타입-매치된 대조군을 사용한 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 높은 수준에서, 및/또는 마커에 대해 양성인 것으로 알려진 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서, 및/또는 마커에 대해 음성인 것으로 알려진 세포보다 실질적으로 높은 수준에서 유동 세포 측정 분석에 의해 검출 가능하다.
본 명세서에 사용 시, 세포 또는 세포 집단이 특정 마커에 대해 "음성"이라는 설명은, 특정 마커, 전형적으로 표면 마커의 세포 상의 또는 세포 내의 실질적으로 검출 가능한 존재가 없다는 것을 의미한다. 표면 마커를 지칭할 때, 용어는 예컨대, 마커에 특이적으로 결합하는 항체로 염색하고 항체를 검출함으로써, 유동 세포 측정 분석에 의해 검출되는 표면 발현이 없음을 의미하며, 여기서 염색은 동일한 조건하에서 이소타입-매치된 대조군을 사용한 동일한 절차를 수행하여 검출된 염색보다 실질적으로 높은 수준에서, 및/또는 마커에 대해 양성인 것으로 알려진 세포보다 현저히 낮은 수준에서, 및/또는 마커에 대해 음성인 것으로 알려진 세포에 대한 것과 실질적으로 유사한 수준에서 유동 세포 측정 분석에 의해 검출되지 않는다.
본 명세서에서 사용 시, “퍼센트 (%) 아미노산 서열 상동성” 및 “퍼센트 상동성”은 아미노산 서열 (기준 폴리펩타이드 서열)에 대해 사용될 때, 서열 상동성의 일부로서 임의의 보존적 치환은 고려하지 않고, 최대 퍼센트 서열 상동성을 달성하기 위해 서열을 정렬하고, 필요한 경우, 갭을 도입한 이후, 기준 폴리펩타이드 서열 내 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 (예를 들어, 대상체 항체 또는 단편)에서 아미노산 잔기의 백분율로서 정의된다. 퍼센트 아미노산 서열 상동성을 결정하기 위한 정렬은, 당업자 내에서, 예를 들어, 공개적으로 사용가능한 컴퓨터 소프트웨어, 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN 또는 Megalign (DNASTAR) 소프트웨어를 사용하여 다양하게 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 전장 길이에 걸쳐 최대 정렬을 달성하는데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여 서열을 정렬하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다.
본 명세서에서 사용 시, 단수 용어(“a”“an,” 및 “the”는 문맥이 명백하게 지시하지 않는 한 복수의 지시 대상을 포함한다. 예를 들어, 단수 용어(“a”또는 “an”는 "적어도 하나" 또는 "하나 이상"을 의미한다. 본 명세서에 기술된 양태 및 변형은, 양태 및 변형으로 "구성하는" 및/또는 "본질적으로 구성된"을 포함하는 것으로 이해된다.
본 명세서 전반에 걸쳐, 청구되는 발명의 다양한 양태가 범위 포맷으로 제공될 수 있다. 범위 포맷의 설명은 단지 편의 및 간결화를 위한 것이며, 청구되는 발명의 범위에 대한 변경할 수 없는 제한으로 해석되어서는 안됨을 이해해야 한다. 따라서, 범위의 기재는 그러한 범위에 속하는 개별적인 수치, 뿐만 아니라 모든 가능한 하위범위가 명시적으로 개시된 것으로 고려되어야 한다. 예를 들어, 값의 범위가 제공되는 경우, 그 범위의 상한과 하한 사이의 각각의 개재된 값 및 언급된 범위 내의 임의의 기타 언급되거나 개재된 값이 청구된 발명 내에 포함되는 것으로 이해된다. 이러한 더 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 더 작은 범위 내에 포함될 수 있으며, 또한 언급된 범위에서 임의의 특별히 배제된 한계값에 따라 청구된 발명 범위에 포함될 수도 있다. 언급된 범위가 한계값의 하나 또는 둘 모두를 포함하는 경우, 포함된 하나 또는 두 한계값을 제외한 범위 또한 청구된 발명 범위에 포함된다. 이는 범위의 폭에 관계없이 적용된다.
본 명세서에 사용된 용어 "약(about)"은 이 기술 분야의 당업자에게 잘 공지된 바와 같이, 각각의 값에 대한 통상적인 오차 범위를 나타낸다. 본 명세서의 값 또는 매개변수에 대한 "약(about)"의 언급은 그 값 또는 매개변수 그 자체(per se)를 나타내는 구현예를 포함 (및 설명)한다. 예를 들어, "약 X"을 언급하는 설명은 "X"의 설명을 포함한다.
본 명세서에서 사용 시, 조성물은 세포를 포함하는 둘 이상의 산물, 물질 또는 화합물의 임의의 혼합물을 의미한다. 이는 용액, 현탁액, 액체, 분말, 페이스트, 수성, 비수성 또는 이러한의 임의의 조합일 수 있다.
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 예를 들어 특허 문서, 과학 논문 및 데이터베이스는 각각의 개별 간행물이 개별적으로 참조 문헌으로서 포함된 것과 마찬가지로, 동일하게 그 전체가 모든 목적을 위해 참조로 포함된다. 본 명세서에 기재된 정의가 본 명세서에 참조 문헌으로 포함된 특허, 출원, 공개된 출원 및 다른 출원에 기재된 정의와 상반되거나 일치하지 않는 경우, 본 명세서에 기재된 정의는 본 명세서에 참조 문헌으로 포함된 정의보다 우선한다.
본 출원에서 사용되는 구획 제목은 단지 구조화를 위한 것이며 기재된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다.
X. 예시적인 구현예
본 명세서에는 다음의 구현예가 제공된다:
1. 다음의 단계를 포함하는, 치료 방법:
(a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 질병 또는 병태를 치료하기 위해 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 단계;
(b) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가하기 위해 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계, 및
(c) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절할 수 있는, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계,
여기서 치료적 범위는:
(i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
(iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
2. 다음의 단계를 포함하는, 치료 방법:
(a) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 평가하기 위해, 대상체의 혈액에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 존재를 모니터링하는 단계로서, 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및
(c) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절할 수 있는, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계,
여기서 치료적 범위는:
(i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
(iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
3. 구현예 1 또는 구현예 2에 있어서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최저 개수 미만인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 증가시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여되는 방법.
4. 구현예 3에 있어서, 시제는 CAR-특이적 팽창이 가능한 방법.
5. 구현예 4에 있어서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ항체 또는 항-TGFβ항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
6. 구현예 1 또는 구현예 2에 있어서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최고 개수 초과인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여되는 것인 방법.
7. 구현예 6에 있어서, 시제는 스테로이드인 것인 방법.
8. 구현예 7에 있어서, 스테로이드는 코르티코스테로이드인 것인 방법.
9. 구현예 7 또는 구현예 8에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
10. 구현예 7-9 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
11. 구현예 7-10 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
12. 구현예 7-11 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
13. 구현예 7-12 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 10 mg 내지 약 80 mg, (약) 10 mg 내지 약 60 mg, (약) 10 mg 내지 약 40 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 1일 또는 24 시간 당 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
14. 구현예 1-13 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 혈액 내 CAR+ T 세포에 대해 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에 모니터링 되는 것인 방법.
15. 구현예 1-14 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 혈액 내 CAR+ T 세포에 대해 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에 모니터링되는 것인 방법.
16. 구현예 1-15 중 어느 하나에 있어서, 시제는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일을 초과한 시점에 투여되는 것인 방법.
17. 구현예 1-16 중 어느 하나에 있어서, 시제는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에 투여되는 것인 방법.
18. 다음의 단계를 포함하는, 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법:
(a) 대상체로부터의 샘플 내 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 이상인 대상체를 선별하는 단계로서, 여기서 샘플은 유전자 조작 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하지 않고 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 투여를 받기 이전에 대상체로부터 수득되는 것인 단계; 및
(b) 선별된 대상체에게 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 투여하는 단계.
19. 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법으로서, 상기 방법은 대상체에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 대상체는 대상체로부터의 샘플 내 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도는 임계 수준 이상인 대상체인 것인 방법.
20. 구현예 18 또는 구현예 19에 있어서, 시제는 키메라 항원 수용체를 발현하는 T 세포를 비롯한 유전자 조작된 세포의 용량의 투여를 개시하기 전에 또는 이와 동시에 투여되는 것인 방법.
21. 구현예 20에 있어서, 상기 방법은 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
22. 구현예 18-21 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 질병 또는 병태를 가지며, 유전자 조작된 세포는 이러한 질병 또는 병태를 치료하기 위한 것인 방법.
23. 구현예 18-22 중 어느 하나에 있어서, 시제를 투여하기 이전에, 선별된 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 이후 독성이 발생할 위험에 있는 것인 방법.
24. 구현예 17-23 중 어느 하나에 있어서, 시제의 투여는 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선별된 대부분의 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선별된 대상체의 75%, 이상에서 치료적 범위 내에 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분한 것인 방법.
25. 구현예 24에 있어서, 치료적 범위는,
(i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
(iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
26. 구현예 18-25 중 어느 하나에 있어서, 종양 부담의 부피 측정치가 측정되며, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 부피, 괴사 부피, 괴사-종양 비율 (NTR), 종양주변 부종 (PTE), 및 부종-종양 비율 (ETR)인 것인 방법.
27. 구현예 18-26 중 어느 하나에 있어서, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD)인 것인 방법.
28. 구현예 18-27 중 어느 하나에 있어서, 부피 측정치는 대상체의 컴뷰터 단층촬영 (CT), 양전자 방출 단층촬영 (PET), 및/또는 자기 공명 영상 (MRI)을 사용하여 측정되는 것인 방법.
29. 구현예 18-25 중 어느 하나에 있어서, 대상체로부터의 샘플 내 염증성 마커가 측정되고, 이러한 염증성 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β2-M), 락테이트 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인인 것인 방법.
30. 구현예 18-25 및 29 중 어느 하나에 있어서, 염증성 마커는 LDH인 것인 방법.
31. 구현예 18-25 및 29 중 어느 하나에 있어서, 염증성 마커는 IL-7, IL15, MIP-1알파 또는 TNF-알파인 사이토카인 또는 케모카인인 것인 방법.
32. 구현예 18-25, 29 및 31 중 어느 하나에 있어서, 사이토카인 또는 케모카인은 대식세포 또는 단핵구 활성과 연관이 있는 것인 방법.
33. 구현예 18-25 및 29-32 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플, 또는 혈청 샘플이거나, 이를 포함하는 것인 방법.
34. 구현예 18-25 및 29-33 중 어느 하나에 있어서, 염증성 마커는 비색 분석 또는 면역분석을 사용하여 평가되는 것인 방법.
35. 구현예 34에 있어서, 염증성 마커는 면역분석을 사용하여 평가되며, 면역분석은 효소-결합 면역흡착 분석 (ELISA), 효소 면역분석 (EIA), 방사 면역분석 (RIA), 표면 플라즈몬 공명 (SPR), 웨스턴 블롯, 측면 흐름 분석, 면역조직화학, 단백질 분석 또는 면역-PCR (iPCR)으로부터 선택되는 것인 방법.
36. 구현예 18-35 중 어느 하나에 있어서, 임계값은:
i) 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내로 초과하는 값 및/또는 복수의 대조군 대상체에서 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 초과하는 표준 편차 이내의 값;
ii) 복수의 대조군 대상체 중 적어도 하나의 대상체에서 측정된, 이러한 가장 높은 배수 변화 초과의, 선택적으로 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내의, 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값을 초과하는 값; 및/또는
iii) 복수의 대조군 대상체로부터 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%, 또는 98% 초과의 대상체에서 측정된 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값을 초과하는 값인 것인 방법.
37. 구현예 36에 있어서, 복수의 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받기 이전의 대상체 그룹이며, 여기서:
이러한 그룹 중 대조군 대상체 각각은 치료적 범위 내에서 가장 높은 피크 CAR+ T 세포를 초과하는 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고;
그룹 중 대조군 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위한 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후, 독성, 선택적으로 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 2등급 또는 3등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 CRS를 나타내었으며;
그룹 중 대조군 대상체 각각은, 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는
그룹 중 대조군 대상체 각각은, 선택적으로 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후 (약) 3개월 이상 또는 (약) 6개월 이상 동안, 지속적 반응을 나타내지 않았던 것인 방법.
38. 구현예 18-37 중 어느 하나에 있어서, 부피 측정치는 SPD이고, 임계값은 (약) 30 cm2, (약) 40 cm2, (약) 50 cm2, (약) 60 cm2, 또는 (약) 70 cm2인 것인 방법.
39. 구현예 18-38 중 어느 하나에 있어서, 염증성 마커는 LDH이고, 임계값은 (약) 리터 당 300 유닛, (약) 리터 당 400 유닛, (약) 리터 당 500 유닛 또는 (약) 리터 당 600 유닛인 것인 방법.
40. 구현예 18-39 중 어느 하나에 있어서, 시제는 스테로이드인 것인 방법.
41. 구현예 40에 있어서, 스테로이드는 코르티코스테로이드인 것인 방법.
42. 구현예 40 또는 구현예 41에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
43. 구현예 40-42 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
44. 구현예 40-43 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
45. 구현예 40-44 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
46. 구현예 40-45 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 10 mg 내지 약 80 mg, (약) 10 mg 내지 약 60 mg, (약) 10 mg 내지 약 40 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 1일 또는 24 시간 당 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
47. 구현예 18-46 중 어느 하나에 있어서, 부피 측정치 또는 염증성 마커는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이전 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 6 일, 8 일, 12 일, 16 일, 20 일, 24 일, 28 일 초과 이내에 대상체에서 측정되는 것인 방법.
48. 대상체의 투약 방법으로서, 상기 방법은 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하며, 이러한 용량은 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 대상체의 75% 초과에서 결정된 치료적 범위 내에 혈액 내 피크 CAR+ 세포를 달성하기에 충분한 유전자 조작된 세포의 개수를 포함하고, 여기서 치료적 범위는 다음과 같은 방법:
(i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
(iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
49. 구현예 1-48 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포의 용량은 (약) 1 x 105 내지 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, 1 x 106 내지 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, 5 x 106 내지 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, 1 x 107 내지 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, 5 x 107 내지 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포를 포함하는 것인 방법.
50. 구현예 1-49 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작 세포의 복용량은 적어도 (약) 1 x 105 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 108 개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5 x 108 개의 CAR-발현 세포를 포함하는 것인 방법.
51. 다음의 단계를 포함하는, 대상체의 투약 방법:
(a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 키메라 항원 수용체 (CAR)로 조작된 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 차선의 용량을 투여하는 단계로서, 이러한 용량은 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 대상체의 75% 초과에서 결정된 치료적 범위 내에 혈액 내 피크 CAR+ 세포를 달성하기에 불충분한 유전자 조작된 세포의 개수를 포함하는 단계; 및
(b) 유전자 조작된 세포를 투여한 이후, 치료적 범위 내에서 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 달성하기 위해 대상체에서 CAR+ 세포 팽창 또는 증식을 향상시킬 수 있는 시제를 투여하는 단계,
여기서 치료적 범위는:
(i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
(iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
52. 구현예 51에 있어서, 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 상기 방법은 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계를 포함하는 것인 방법.
53. 구현예 51 또는 구현예 52에 있어서, 시제를 투여한 후, 방법은 다음을 달성하는 것인 방법:
시제를 투여하지 않지만 동일한 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 포함하는 방법과 비교하여, 대상체에서 결정된 치료적 범위 내에서 혈액 내 피크 CAR+ 세포; 또는
대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 대부분의 대상체에서 또는 상기 방법에 의해 치료된 대상체의 75% 초과에서 결정된 치료적 범위 내에 혈액 내 피크 CAR+ 세포.
54. 구현예 51-53 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포의 용량은 (약) 1 x 107 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 5 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 1 x 106 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 5 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 2.5 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포, (약) 1 x 105 개 미만의 CAR-발현 세포인 것인 방법.
55. 구현예 51-54 중 어느 하나에 있어서, 시제는 CAR+ T 세포의 팽창, 선택적으로 CAR-특이적 팽창을 증가시킬 수 있는 것인 방법.
56. 구현예 55에 있어서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ항체 또는 항-TGFβ항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
57. 구현예 1-56 중 어느 하나에 있어서, 치료되는 복수의 대상체 중, 상기 방법은 시제를 투여하는 것을 포함하지 않는 방법과 비교하여, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한, 지속적 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)을 달성하는 대상체의 백분율 증가를 달성하는 것인 방법.
58. 구현예 1-57 중 어느 하나에 있어서, 증가는 (약) 1.2 배, 1.5 배, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 10 배 또는 그 이상의 초과인 것인 방법.
59. 구현예 1-58 중 어느 하나에 있어서,
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한 완전한 반응 (CR)을 달성하고; 및/또는
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한 객관적 반응 (OR)을 달성하는 것인 방법.
60. 구현예 1-59 중 어느 하나에 있어서,
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50% 초과, (약) 60% 초과, (약) 70% 초과, 또는 (약) 80% 초과는 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 나타내지 않고 및/또는 2등급 이상의 또는 3등급 이상의 신경독성을 나타내지 않거나; 또는
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 40% 초과, (약) 50% 초과 또는 (약) 55% 초과는 임의의 신경독성 또는 CRS를 나타내지 않는 것인 방법.
61. 구현예 1-60 중 어느 하나에 있어서, 피크 CAR+ T 세포는 대상체의 혈액 내 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 개수로서 결정되는 것인 방법.
62. 구현예 1-61 중 어느 하나에 있어서, 치료적 범위는 추정된 독성 확률이 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만 또는 5% 미만이고, 추정된 반응 달성 확률이 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상을 초과하는 범위인 것인 방법.
63. 구현예 1-62 중 어느 하나에 있어서, 독성 확률은 다음으로부터 선택된 독성에 기초하는 것인 방법:
임의의 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS);
중증 독성 또는 3등급 이상의 독성;
중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는
중증 신경독성, 2등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성.
64. 구현예 1-63 중 어느 하나에 있어서, 독성 확률은 중증 독성 또는 3등급 이상의 독성 확률에 기초하는 것인 방법.
65. 구현예 63 또는 구현예 64에 있어서, 중증 독성은 3-5 등급 신경독성인 것인 방법.
66. 구현예 1-65 중 어느 하나에 있어서, 반응 가능성은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 반응에 기초하며, 선택적으로 이러한 반응은 지속 가능하며, 선택적으로 적어도 3 개월 또는 적어도 6 개월 동안 지속 가능한 것인 방법.
67. 구현예 1-66 중 어느 하나에 있어서, 이러한 반응은 대상체의 골수에서 악성 면역글로불린 중쇄 유전자좌 (IGH) 및/또는 인덱스 클론의 존재의 평가에 기초하여 결정된 골수 반응인 것인 방법.
68. 구현예 67에 있어서, 악성 IGH 및/또는 인덱스 클론은 유세포 분석 또는 IgH 시퀀싱에 의해 평가되는 것인 방법.
69. 다음의 단계를 포함하는, 지속적 반응의 가능성 평가 방법:
(a) 대상체로부터의 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 피크 수준을 검출하는 단계로서, 이러한 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및
(b) 임계값에 대해 피크 수준을 개별적으로 비교하여, 대상체가 유전자 조작된 세포의 투여에 대한 지속적인 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계.
70. 구현예 69에 있어서,
대상체는 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 미만인 경우 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 초과인 경우 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없고; 또는
유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료적 범위 내에 있는 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값 미만이거나 또는 상한 임계값 초과인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것인 방법.
71. 구현예 69 또는 구현예 70에 있어서, 대상체가 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 판단되는 경우, 치료제로, 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료로 치료하기 위한 대상체를 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
72. 구현예 69-71 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 판단되는 경우, 치료제 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료를 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
73. 다음을 포함하는, 치료 방법:
(a) 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 투여를 받은 적이 있는 대상체를 선별하는 단계로서, 여기서
대상체로부터의 샘플에서 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준은 임계값 초과이고; 및/또는
대상체로부터의 샘플 내 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함하는 T 세포의 피크 수준은 하한 임계값 미만 또는 상한 임계값 초과인 단계.
(b) 치료제 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료를 대상체에게 투여하는 단계.
74. 구현예 69-72 중 어느 하나에 있어서, 반응은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 것인 방법.
75. 구현예 69-72 및 74 중 어느 하나에 있어서, 반응은 3개월, 4 개월, 5 개월, 또는 6 개월 이상 동안 지속 가능한 것인 방법.
76. 구현예 69-75 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에, 피크 수준이 평가되고 및/또는 대상체로부터 샘플이 획득되는 것인 방법.
77. 구현예 69-76 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에, 피크 수준이 평가되고 및/또는 대상체로부터 샘플이 획득되는 것인 방법.
78. 구현예 69-77 중 어느 하나에 있어서, 피크 수준은 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이며, 이러한 염증성 마커는 C 반응성 단백질 (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-알파, MIP-1알파, MIP-1베타, MCP-1, CXCL10 또는 CCL13으로부터 선택되는 것인 방법.
79. 구현예 70-78 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 평가되며, 임계값은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 또는 5% 이내이고, 및/또는 유전자 조작된 세포를 투여받은 대조군 대상체의 그룹 중에서 결정된 염증성 마커의 피크 수준의 중앙값 또는 평균값의 표준 편차 이내이고, 여기서 그룹 중 대상체 각각은 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 선택적으로 3개월 이상 또는 6 개월 동안, 지속적 반응, 선택적으로 CR 및/또는 PR을 달성하지 않는 것인 방법.
80. 구현예 79에 있어서, 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 선택적으로 유전자 조작된 세포의 투여 3개월 이상 또는 6 개월 이후 안정한 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD)을 나타내었던 것인 방법.
81. 구현예 69-77 중 어느 하나에 있어서, 피크 수준은 CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+ T 세포 서브세트의 피크 수준인 것인 방법.
82. 구현예 70-77 및 81 중 어느 하나에 있어서, 하한 임계값 및 상한 임계값은, 각각, 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 치료적 범위인, 추정 반응 확률이 (약) 65%를 초과하고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위의 상한 및 하한인 것인 방법.
83. 구현예 70-77, 81 및 82 중 어느 하나에 있어서, 치료적 범위는 추정된 독성 확률이 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만 또는 5% 미만이고, 추정된 반응 달성 확률이 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상을 초과하는 범위인 것인 방법.
84. 구현예 82 또는 구현예 83에 있어서, 독성 확률은 다음으로부터 선택된 독성에 기초하는 것인 방법:
임의의 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS);
중증 독성 또는 3등급 이상의 독성;
중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는
중증 신경독성, 2등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성.
85. 구현예 82-84 중 어느 하나에 있어서, 반응 가능성은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 반응에 기초하며, 선택적으로 이러한 반응은 지속 가능하며, 선택적으로 적어도 3 개월 또는 적어도 6 개월 동안 지속 가능한 것인 방법.
86. 구현예 70-77, 및 81-85 중 어느 하나에 있어서, 피크 CAR+ T 세포는 대상체의 혈액 내 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 개수로서 결정되는 것인 방법.
87. 구현예 70-77 및 81-86 중 어느 하나에 있어서,
상한 임계값은 (약) 300 개의 세포 내지 마이크로리터 당 1000 개의 세포 또는 마이크로리터 당 400 개의 세포 내지 마이크로리터 당 600 개의 세포이거나, 또는 약 300 개의 세포, 마이크로리터 당 400 개의 세포, 마이크로리터 당 500 개의 세포, 마이크로리터 당 600 개의 세포, 마이크로리터 당 700 개의 세포, 마이크로리터 당 800 개의 세포, 마이크로리터 당 900 개의 세포 또는 마이크로리터 당 1000 개의 세포이고; 또는
하한 임계값은 (약) 마이크로리터 당 10 세포, 마이크로리터 당 9 개의 세포, 마이크로리터 당 8 개의 세포, 마이크로리터 당 7 개의 세포, 마이크로리터 당 6 개의 세포, 마이크로리터 당 5 개의 세포, 마이크로리터 당 4 개의 세포, 마이크로리터 당 3 개의 세포, 마이크로리터 당 2 세포 또는 마이크로리터 당 1 개의 세포 미만인 것인 방법.
88. 구현예 69-87 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 혈액 샘플 또는 혈장 샘플인 것인 방법.
89. 구현예 69-88 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 생체 외에서 수행되는 것인 방법.
90. 구현예 71-89 중 어느 하나에 있어서, CAR+ T 세포의 피크 수준은 하한 임계값 미만이고, 치료제는 CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제인 것인 방법.
91. 구현예 90에 있어서, 시제는 스테로이드인 것인 방법.
92. 구현예 91에 있어서, 스테로이드는 코르티코스테로이드인 것인 방법.
93. 구현예 91 또는 구현예 92에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
94. 구현예 91-93 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
95. 구현예 91-94 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
96. 구현예 91-95 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
97. 구현예 91-96 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 10 mg 내지 약 80 mg, (약) 10 mg 내지 약 60 mg, (약) 10 mg 내지 약 40 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 1일 또는 24 시간 당 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
98. 구현예 71-89 중 어느 하나에 있어서, CAR+ T 세포의 피크 수준은 상한 임계값 초과이고, 치료제는 CAR+ T 세포의 팽창, 선택적으로 CAR-특이적 팽창을 증가시킬 수 있는 시제인 것인 방법.
99. 구현예 98에 있어서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ항체 또는 항-TGFβ항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
100. 구현예 1-99 중 어느 하나에 있어서, 질병 또는 병태는 암인 것인 방법.
101. 구현예 100에 있어서, 암은 B 세포 악성 종양인 것인 방법.
102. 구현예 101에 있어서, 암은 육종, 암종, 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, CLL, ALL, AML 및 골수종으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
103. 구현예 102에 있어서, 암은 췌장암, 방광암, 대장암, 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포 암, 폐암, 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경 내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암 또는 연조직 육종인 것인 방법.
104. 구현예 1-103 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 인간인 것인 방법.
105. 구현예 1-104 중 어느 하나에 있어서, CAR은 질병 또는 병태와 연관된 및/또는 질병 또는 병태와 연관된 세포에서 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
106. 구현예 105에 있어서, 항원은 다음으로부터 선택되는 것인 방법: αvβ인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2으로도 알려짐), 암배아 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; 또한 Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100 (gp100), G 단백질 연결 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이합체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Ra), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접합 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 풍부 반복 서열 8 패밀리 구성원 A 함유 (LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐과 거대세포바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 살해 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접합 분자 (NCAM), 종양 태아 항원, 종양에서 우선적으로 발현되는 흑색종 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백 (TPBG 또한 5T4로도 알려짐), 종양-관련 당단백 72 (TAG72), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이 항원 또는 보편적인 표지(tag)와 관련된 항원, 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자.
107. 구현예 105 또는 106에 있어서, 항원은 다음으로부터 선택되는것인 방법: 5T4, 8H9, avb6 인테그린, B7-H6, B 세포 성숙화 항원 (BCMA), CA9, 암-고환 항원, 탄산 무수화효소 9 (CAIX), CCL-1, CD19, CD20, CD22, CEA, B형 간염 표면 항원, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 암배아 항원 (CEA), CE7, 사이클린, 사이클린 A2, c-Met, 이중 항원, EGFR, 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), EPHa2, 에프린B2, erb-B2, erb-B3, erb-B4, erbB 이합체, EGFR vIII, 에스트로겐 수용체, Fetal AchR, 엽산 수용체 알파, 엽산 결합 단백질 (FBP), FCRL5, FCRH5, 태아 아세틸콜린 수용체, G250/CAIX, GD2, GD3, gp100, Her2/neu (수용체 타이로신 키나제 erbB2), HMW-MAA, IL-22R-알파, IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, Lewis Y, L1-세포 접합 분자 (L1-CAM), 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, MART-1, 메소텔린, 쥐과 CMV, 뮤신 1 (MUC1), MUC16, NCAM, NKG2D, NKG2D 리간드, NY-ESO-1, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 종양태아 항원, 우선적으로 발현되는 흑색종의 항원 (PRAME), PSCA, 프로게스테론 수용체, 서바이빈, ROR1, TAG72, VEGF 수용체, VEGF-R2, Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이적 항원.
108. 구현예 1-107 중 어느 하나에 있어서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인, 및 ITAM를 포함하는 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
109. 구현예 108에 있어서, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 도메인을 포함하는 것인 방법.
110. 구현예 108 또는 구현예 109에 있어서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 공동자극 신호전달 영역을 추가로 포함하는 것인 방법.
111. 구현예 110에 있어서, 공동자극 신호전달 영역은 CD28 또는 4-1BB의 신호전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
112. 구현예 110 또는 구현예 111에 있어서, 공동자극 도메인은 4-1BB의 도메인인 것인 방법.
113. 구현예 1-112 중 어느 하나에 있어서, 세포는 T 세포인 것인 방법.
114. 구현예 113에 있어서, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+인 것인 방법.
115. 구현예 1-114 중 어느 하나에 있어서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포인 것인 방법.
116. 구현예 1-115 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 자가조직인 것인 방법.
117. 구현예 1-115 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 동종이계인 것인 방법.
118. 다음을 포함하는 키트: 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포를 포함하는 조성물, 및 피크 CAR+ T 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가한 이후 또는 이러한 평가에 기초하여, 대상체에게 상기 세포의 용량을 투여하기 위한 설명서, 여기서 치료적 범위는:
(i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
(iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
119. 구현예 118에 있어서, 설명서가 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절할 수 있는, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 것을 명시하는 키트.
120. 구현예 119에 있어서, 상기 키트는 시제를 추가로 포함하는 것인 키트.
121. 다음을 포함하는 키트: 대상체에서, CAR+ T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 팽창 또는 증식을 조절할 수 있는, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제, 및 대상체에게 시제를 투여하기 위한 설명서, 여기서 상기 대상체는 피크 CAR+ T 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가한 결과에 기초하여, 유전자 조작된 세포를 투여받은 적이 있으며, 여기서 치료적 범위는:
(i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
(iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
122. 구현예 119-121 중 어느 하나에 있어서, 설명서는 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최저 개수 미만인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 증가시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여되는 것을 명시하는 것인 키트.
123. 구현예 122에 있어서, 시제는 CAR-특이적 팽창이 가능한 것인 키트.
124. 구현예 122 또는 구현예 123에 있어서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ항체 또는 항-TGFβ항체 또는 사이토카인인 것인 키트.
125. 구현예 119-121 중 어느 하나에 있어서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최고 개수 초과인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여되는 것인 키트.
126. 다음을 포함하는 키트: 대상체에서 CAR+ T 세포를 비롯한 유전자 조작된 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제, 및 대상체로부터의 샘플 내 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도를 평가하고, 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 이상인 경우 대상체에게 시제를 투여하기 위한 설명서, 여기서 샘플은 유전자 조작 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 함유하지 않고 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 투여받기 이전에 대상체로부터 수득되는 것인 키트.
127. 구현예 126에 있어서, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 부피, 괴사 부피, 괴사-종양 비율 (NTR), 종양주변 부종 (PTE), 및 부종-종양 비율 (ETR)인 것인 키트.
128. 구현예 126 또는 구현예 127에 있어서, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD)인 것인 키트.
129. 구현예 126에 있어서, 염증성 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β2-M), 락테이트 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인인 것인 키트.
130. 구현예 129에 있어서, 염증성 마커는 LDH인 것인 키트.
131. 구현예 125-130 중 어느 하나에 있어서, 시제는 스테로이드인 것인 키트.
132. 구현예 131에 있어서, 스테로이드는 코르티코스테로이드인 것인 키트.
133. 구현예 131 또는 구현예 132에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 키트.
134. 구현예 131-133 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여를 위해 제형화되는 것인 키트.
135. 구현예 118-134 중 어느 하나에 있어서, CAR은 질병 또는 병태와 연관된 및/또는 질병 또는 병태와 연관된 세포에서 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 것인 키트.
136. 구현예 118-135 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포는 T 세포, 선택적으로 CD4+ 또는 CD8+ T 세포를 포함하는 것인 키트.
137. 구현예 118-136 중 어느 하나의 키트를 포함하는 것인 제조 물품.
138. 독성을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법은 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성을 치료하기 위한 치료 처방을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 치료 처방은 다음으로부터 선택되는 것인 방법:
(a) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72, 96 또는 120 시간 이내에, 발열 및/또는 독성, 선택적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상, 및/또는 1등급 CRS과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) 인터루킨-6 수용체 (IL-6R)에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여);
(b) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 2등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여);
(c) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 3등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 12 시간 마다 투여); 또는
(d) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 4등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여함: (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여).
139. 구현예 138에 있어서, 최대 2회 용량의 시제가 투여되는 것인 방법.
140. 독성을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법은 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성을 치료하기 위한 치료 처방을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 여기서 치료 처방은, 유전자 조작의 용량을 투여받은 이후 72, 96 또는 120 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성, 선택적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상, 및/또는 1등급 CRS과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여하는 방법: (i) 인터루킨-6 수용체 (IL-6R)에 결합할 수 있는 시제 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량.
141. 독성을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법은 하나 이상의 물리적 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 감소 및/또는 개선시킬 수 있는 하나 이상의 시제를 투여하는 것을 포함하며, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 여기서 하나 이상의 시제는 다음을 포함하는 치료 처방으로 투여되는 것인 방법:
(a) 다음의 경우 하나 이상의 시제를 투여하는 단계:
(i) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이상에, 대상체가 발열을 나타내며, 독성, 선택적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내고, 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열을 나타내고 및/또는 2등급 이상의 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우;
(b) (a)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계로서, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여되는 단계;
(c) (b)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계로서, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여되는 단계; 및
(d) (c)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계로서, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a), (b) 또는 (c)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a), (b) 또는 (c)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여되는 단계.
142. 구현예 141에 있어서, 하나 이상의 시제는 인터루킨-6 수용체 (IL-6R) 또는 하나 이상의 스테로이드에, 선택적으로 하나 이상의 스테로이드의 하나 이상의 용량에 결합할 수 있는 시제로부터 선택되는 것인 단계.
143. 독성을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법은 하나 이상의 물리적 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 감소 및/또는 개선시킬 수 있는 하나 이상의 시제를 투여하는 것을 포함하며, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 여기서 하나 이상의 시제는 다음을 포함하는 치료 처방으로 투여되는 것인 방법:
(a) 다음의 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계:
(i) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이상에, 대상체가 독성, 선택적으로 신경독성 (NT)과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우; 또는
(ii) (ii) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우;
(b) (a)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계로서, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여되는 단계; 및
(c) (b)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계로서, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여되는 단계.
144. 구현예 143에 있어서, 하나 이상의 시제는 하나 이상의 스테로이드, 선택적으로 하나 이상의 스테로이드의 하나 이상의 용량인 것인 방법.
145. 구현예 140 또는 142에 있어서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제는 하나 이상의 용량으로 투여되는 것인 방법.
146. 구현예 138-145에 있어서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제의 용량 및 스테로이드의 용량은 동시에 투여되거나, 또는 스테로이드의 용량이 IL-6R에 결합할 수 있는 시제의 용량의 약 1, 2, 3 또는 4 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
147. 구현예 138, 142, 145, 및 146 중 어느 하나에 있어서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 그 이상의 시간 마다 1회 이하로 투여되는 것인 방법.
148. 구현예 139-147 중 어느 하나에 있어서, 최대 2회 용량의 시제가 투여되는 것인 방법.
149. 구현예 138-148 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 36 또는 48 시간 마다, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위로 투여되는 것인 방법.
150. 구현예 138-149 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 코르티코스테로이드이거나, 이를 포함하며, 이는 선택적으로 글루코코르티코이드(glucocorticoid)인 것인 방법.
151. 구현예 138-150 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 코르티손, 덱사메타손, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 및 프레드니손으로부터 선택되는 것인 방법.
152. 구현예 151에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손, 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론이거나, 또는 이를 포함하는 것인 방법.
153. 구현예 138-152 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
154. 구현예 138-153 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 25.0 mg, 또는 (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 등가 복용량으로 투여하기 위한 것인 방법.
155. 구현예 138-154 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 (약) 0.5 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg 또는 5 mg/kg 메틸프레드니솔론 또는 이의 등가물의 등가 복용량으로 투여되는 것인 방법.
156. 구현예 138-155 중 어느 하나에 있어서, 다중 용량의 스테로이드가 투여되는 것인 방법.
157. 구현예 138-156 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
158. 구현예 138-157 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5일 이상 동안 투여되는 것인 방법.
159. 구현예 138-158 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
160. 구현예 138-159 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당, (약) 1.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 10 mg, (약) 10 mg 내지 약 80 mg, (약) 10 mg 내지 약 60 mg, (약) 10 mg 내지 약 40 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 등가 복용량으로, 또는 1일 또는 24 시간 당, (약) 10 mg 내지 약 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 1일 또는 24 시간 당, 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물로 투여되는 것인 방법.
161. 구현예 156-160 중 어느 하나에 있어서, 다중 용량은 약 1 내지 약 3 mg/kg의 초기 용량의 스테로이드, 예컨대 2 mg/kg의 메틸프레드니솔론 또는 이의 등가물, 이에 이어서 하루에 걸쳐 또는 24 시간에 걸쳐 1, 2, 3, 4 또는 5회로 분할된, 약 1 내지 약 5 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg 또는 5 mg/kg의 후속 용량의 메틸프레드니솔론 또는 이의 등가물을 포함하는 것인 방법.
162. 구현예 138-161 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 정맥 내 또는 경구 투여를 위해 제형화되는 것인 방법.
163. 구현예 162에 있어서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제는 재조합 항-IL-6 수용체 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이거나, 토실리주맙 또는 사릴루맙 또는 이의 항원-결합 단편으로부터 선택된 시제이거나, 이를 포함하는 것인 방법.
164. 구현예 163에 있어서, 재조합 항-IL-6R 항체는 토실리주맙 또는 이의 항원-결합 단편이거나, 또는 이를 포함하는 것인 방법.
165. 구현예 163 또는 구현예 164에 있어서, 항-IL-6R 항체는 (약) 1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 2 mg/kg 내지 19 mg/kg, 4 mg/kg 내지 16 mg/kg, 6 mg/kg 내지 14 mg/kg 또는 8 mg/kg 내지 12 mg/kg의 복용량으로 투여되기 위한 것이거나, 또는 항-IL-6R 항체는 (적어도 약) 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg, 12 mg/kg, 14 mg/kg, 16 mg/kg, 18 mg/kg, 20 mg/kg의 복용량으로 투여되는 것인 방법.
166. 구현예 163-165 중 어느 하나에 있어서, 항-IL-6R 항체는 단일 용량 투여를 위해 (약) 30 mg 내지 약 5000 mg, 약 50 mg 내지 약 1000 mg, 약 50 mg 내지 약 500 mg, 약 50 mg 내지 약 200 mg, 약 50 mg 내지 약 100 mg, 약 100 mg 내지 약 1000 mg, 약 100 mg 내지 약 500 mg, 약 100 mg 내지 약 200 mg, 약 200 mg 내지 약 1000 mg, 약 200 mg 내지 약 500 mg, 또는 약 500 mg 내지 약 1000 mg의 양으로 제형화되는 것인 방법.
167. 구현예 163-166 중 어느 하나에 있어서, 항-IL-6R 항체는 정맥 내 투여를 위해 제형화되는 것인 방법.
168. 구현예 138-167 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 72 시간 이내에 독성, 선택적으로 CRS와 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 독성, 선택적으로 CRS과 연관된 물리적 징후 또는 증상이 개선되지 않는 경우, 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상이 중증 또는 공격형인 경우 및/또는 독성의 등급, 선택적으로 CRS이 더욱 심해지는 경우, 추가 용량의 스테로이드를, 선택적으로 고용량으로 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
169. 구현예 168에 있어서, 고용량의 스테로이드는 약 1 내지 약 4 mg/kg의 초기 용량에 이어, 하루에, 또는 이의 등가에 2, 3, 4, 5 또는 6 회로 분할된, 약 1 내지 약 4 mg mg/kg/일의 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
170. 구현예 169 중 어느 하나에 있어서, 고용량의 스테로이드은 (약) 10 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 전술한 값 중 임의의 값에 의해 정의되는 범위의 복용량의 덱사메타손인 것인 방법.
171. 구현예 138-170 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 치료 처방을 투여하기 이전에, 질병 또는 병태를 치료하기 위해, 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 대상체에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
172. 구현예 1-171 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나, 이를 포함하는 것인 방법.
173. 구현예 1-172 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 질병, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련된, 이에 특이적인, 및/또는 이에 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있는 것인 방법.
174. 구현예 173에 있어서, 질병, 장애 또는 병태는 감염성 질병 또는 장애, 자가면역 질병, 염증성 질병, 또는 종양 또는 암인 것인 방법.
175. 구현예 173 또는 구현예 174에 있어서, 표적 항원은 종양 항원인 것인 방법.
176. 구현예 173-175 중 어느 하나에 있어서, 표적 항원은 다음으로부터 선택되는 것인 방법: αvβ인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2으로도 알려짐), 암배아 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; 또한 Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100 (gp100), G 단백질 연결 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이합체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Ra), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접합 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 풍부 반복 서열 8 패밀리 구성원 A 함유 (LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐과 거대세포바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 살해 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접합 분자 (NCAM), 종양 태아 항원, 종양에서 우선적으로 발현되는 흑색종 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백 (TPBG 또한 5T4로도 알려짐), 종양-관련 당단백 72 (TAG72), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이 항원 또는 보편적인 표지(tag)와 관련된 항원, 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자.
177. 구현예 173-176 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 기능적 비-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나, 또는 이를 포함하는 것인 방법.
178. 구현예 173-177 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)인 것인 방법.
179. 구현예 173-178 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인을 포함하는 것인 방법.
180. 구현예 179에 있어서, 항원-결합 도메인은 항체 또는 이의 항체 단편이거나, 또는 이를 포함하며, 선택적으로 단일 사슬 단편인 것인 방법.
181. 구현예 180에 있어서, 단편은 유연한 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
182. 구현예 180 또는 구현예 181 중 어느 하나에 있어서, 단편은 scFv를 포함하는 것인 방법.
183. 구현예 173-182 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 세포 내 신호전달 영역을 포함하는 것인 방법.
184. 구현예 183에 있어서, 세포 내 신호전달 영역은 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
185. 구현예 184에 있어서, 세포 내 신호전달 영역은 1차 신호전달 도메인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 요소의 신호전달 도메인 및/또는 면역수용체 타이로신-계 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호전달 도메인이거나, 또는 이를 포함하는 것인 방법.
186. 구현예 185에 있어서, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 신호전달 도메인, 또는 이의 신호전달 부분이거나, 또는 이를 포함하는 것인 방법.
187. 구현예 179-186 중 어느 하나에 있어서, 재조합 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호전달 영역 사이에 배치된 막관통 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
188. 구현예 173-187 중 어느 하나에 있어서, 세포 내 신호전달 영역은 공동자극 신호전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
189. 구현예 188에 있어서, 공동자극 신호전달 도메인은 T 세포 공동자극 분자의 세포 내 신호전달 도메인 또는 이의 신호전달 부분을 포함하는 것인 방법.
190. 구현예 188 또는 구현예 189에 있어서, 공동자극 신호전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호전달 도메인 또는 이의 신호전달 부분을 포함하는 것인 방법.
191. 구현예 188-190 중 어느 하나에 있어서, 공동자극 신호전달 도메인은 막관통 도메인과 세포 내 신호전달 도메인 사이에 있는 것인 방법.
192. 구현예 138-191 중 어느 하나에 있어서, 세포는 T 세포인 것인 방법.
193. 구현예 192에 있어서, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+인 것인 방법.
194. 구현예 138-193 중 어느 하나에 있어서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포인 것인 방법.
195. 구현예 138-194 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 자가조직인 것인 방법.
196. 구현예 138-194 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 동종이계인 것인 방법.
197. 다음의 단계를 포함하는, 치료 방법:
(a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 질병 또는 병태를 치료하기 위해 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 단계;
(b) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가하기 위해 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계, 및
(c) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절할 수 있는, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계,
여기서 치료적 범위는:
(i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
198. 다음의 단계를 포함하는, 치료 방법:
(a) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 평가하기 위해, 대상체의 혈액에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 존재를 모니터링하는 단계로서, 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및
(c) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절할 수 있는, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계,
여기서 치료적 범위는:
(i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
199. 구현예 197-198 중 어느 하나에 있어서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최저 개수 미만인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 증가시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여되는 것인 방법.
200. 구현예 199에 있어서, 시제는 CAR-특이적 팽창을 증가시킬 수 있는 것인 방법.
201. 구현예 199 또는 구현예 200에 있어서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ항체 또는 항-TGFβ항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
202. 구현예 197-198 중 어느 하나에 있어서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최고 개수 초과인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여되는 것인 방법.
203. 다음의 단계를 포함하는, 치료 방법:
(a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 질병 또는 병태를 치료하기 위해 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 단계;
(b) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계, 및
(c) 다음의 경우에, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계:
(i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 양이, (약) 마이크로리터 당 500 개의 세포 초과인 경우; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 양이, (약) 마이크로리터 당 200 개의 세포 초과인 경우.
204. 다음의 단계를 포함하는, 치료 방법:
(a) 대상체의 혈액에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 존재를 모니터링하는 단계로서, 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및
(b) 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계로서, 다음의 경우에 투여하는 단계: (i) 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 양이, 유전자 조작된 세포의 투여 이후, (약) 마이크로리터 당 500 개의 세포 초과인 경우; 또는 (ii) 혈액 내 CD8+CAR+ T 세포의 양이, 유전자 조작된 세포의 투여 이후, (약) 마이크로리터 당 200 개의 세포 초과인 경우.
205. 구현예 203-204 중 어느 하나에 있어서, 시제는 하나 이상의 스테로이드인 것인 방법.
206. 구현예 205에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
207. 구현예 205-206 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
208. 구현예 205-207 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
209. 구현예 205-208 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
210. 구현예 205-209 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양, 또는 1일 또는 24 시간 당, 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
211. 구현예 197-210 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에, 혈액 내 CAR+ T 세포에 대해 모니터링되는 것인 방법.
212. 구현예 197-211 중 어느 하나에 있어서, 시제는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일 초과인 시점에; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 (약) 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에 투여되는 것인 방법.
213. 다음의 단계를 포함하는, 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법:
(a) 대상체로부터의 샘플 내 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 이상인 대상체를 선별하는 단계로서, 여기서 샘플은 유전자 조작 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하지 않고 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 투여를 받기 이전에 대상체로부터 수득되는 것인 단계; 및
(b) 선별된 대상체에게 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 투여하는 단계.
214. 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법으로서, 상기 방법은 대상체에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 대상체는 대상체로부터의 샘플 내 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도는 임계 수준 이상인 대상체인 것인 방법.
215. 구현예 214에 있어서, 샘플은 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 포함하지 않고, 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 투여를 받기 전에 대상체로부터 수득되는 것인 방법.
216. 구현예 213-215 중 어느 하나에 있어서, 시제는 CAR를 발현하는 T 세포를 비롯한 유전자 조작된 세포의 용량의 투여를 개시하기 전에 또는 이와 동시에 투여되는 것인 방법.
217. 구현예 216에 있어서, 상기 방법은 CAR를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
218. 구현예 213-217 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 질병 또는 병태를 가지며, 유전자 조작된 세포는 이러한 질병 또는 병태를 치료하기 위한 것인 방법.
219. 구현예 213-218 중 어느 하나에 있어서, 시제를 투여하기 이전에, 선별된 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 이후 독성이 발생할 위험에 있는 것인 방법.
220. 구현예 213-219 중 어느 하나에 있어서, 시제의 투여는 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선별된 대부분의 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선별된 대상체의 75%, 이상에서 치료적 범위 내에 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분한 것인 방법.
221. 구현예 220에 있어서, 치료적 범위는 다음과 같은 방법:
(i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는
(ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
(iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 (약) 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
222. 구현예 220에 있어서, 치료적 범위는 다음과 같은 방법:
(i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 개수 또는 수준에 기초하여, (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포; 또는
(i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 CD8+CAR+ T 세포의 개수 또는 수준에 기초하여, (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포.
223. 구현예 213-222 중 어느 하나에 있어서, 종양 부담의 부피 측정치가 측정되며, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 부피, 괴사 부피, 괴사-종양 비율 (NTR), 종양주변 부종 (PTE), 및 부종-종양 비율 (ETR)인 것인 방법.
224. 구현예 213-223 중 어느 하나에 있어서, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD)인 것인 방법.
225. 구현예 213-224 중 어느 하나에 있어서, 부피 측정치는 대상체의 컴뷰터 단층촬영 (CT), 양전자 방출 단층촬영 (PET), 및/또는 자기 공명 영상 (MRI)을 사용하여 측정되는 것인 방법.
226. 구현예 213-221 중 어느 하나에 있어서, 대상체로부터의 샘플 내 염증성 마커가 측정되고, 이러한 염증성 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β2-M), 락테이트 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인인 것인 방법.
227. 구현예 213-221 및 226 중 어느 하나에 있어서, 염증성 마커는 LDH인 것인 방법.
228. 구현예 213-221 및 226 중 어느 하나에 있어서, 염증성 마커는 IL-7, IL15, MIP-1알파 또는 TNF-알파인 사이토카인 또는 케모카인인 것인 방법.
229. 구현예 213-221, 226 및 228 중 어느 하나에 있어서, 사이토카인 또는 케모카인은 대식세포 또는 단핵구 활성과 연관이 있는 것인 방법.
230. 구현예 213-221 및 226-229 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플, 또는 혈청 샘플이거나, 이를 포함하는 것인 방법.
231. 구현예 213-230 중 어느 하나에 있어서, 임계값은:
i) 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내로 초과하는 값 및/또는 복수의 대조군 대상체에서 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 초과하는 표준 편차 이내의 값;
ii) 복수의 대조군 대상체 중 적어도 하나의 대상체에서 측정된, 이러한 가장 높은 배수 변화 초과의, 선택적으로 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내의, 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값을 초과하는 값; 및/또는
iii) 복수의 대조군 대상체로부터 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%, 또는 98% 초과의 대상체에서 측정된 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값을 초과하는 값인 것인 방법.
232. 구현예 231에 있어서, 복수의 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받기 이전의 대상체 그룹이며, 여기서:
이러한 그룹 중 대조군 대상체 각각은 치료적 범위 내에서 가장 높은 피크 CAR+ T 세포를 초과하는 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고;
그룹 중 대조군 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위한 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후, 독성, 선택적으로 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 2등급 또는 3등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 CRS를 나타내었으며;
그룹 중 대조군 대상체 각각은, 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는
그룹 중 대조군 대상체 각각은, 선택적으로 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후 (약) 3개월 이상 또는 (약) 6개월 이상 동안, 지속적 반응을 나타내지 않았던 것인 방법.
233. 구현예 213-232 중 어느 하나에 있어서, 부피 측정치는 SPD이고, 임계값은 (약) 30 cm2, (약) 40 cm2, (약) 50 cm2, (약) 60 cm2, 또는 (약) 70 cm2인 것인 방법.
234. 구현예 213-233 중 어느 하나에 있어서, 염증성 마커는 LDH이고, 임계값은 (약) 리터 당 300 유닛, (약) 리터 당 400 유닛, (약) 리터 당 500 유닛 또는 (약) 리터 당 600 유닛인 것인 방법.
235. 구현예 213-234 중 어느 하나에 있어서, 시제는 스테로이드인 것인 방법.
236. 구현예 235에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
237. 구현예 235-236 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
238. 구현예 235-237 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
239. 구현예 235-238 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
240. 구현예 235-239 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양, 또는 1일 또는 24 시간 당, 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
241. 구현예 213-240 중 어느 하나에 있어서, 부피 측정치 또는 염증성 마커는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이전 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 6 일, 8 일, 12 일, 16 일, 20 일, 24 일, 28 일 초과 이내에 대상체에서 측정되는 것인 방법.
242. 구현예 197-241 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포의 용량은 적어도 (약) 1 x 105 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 105 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 105 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 106 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 106 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 106 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 107 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 107 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 107 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 108 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 108 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5 x 108 CAR-발현 세포 또는 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 107 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포를 포함하는 것인 방법.
243. 구현예 197-242 중 어느 하나에 있어서, 치료되는 복수의 대상체 중, 상기 방법은 시제를 투여하는 것을 포함하지 않는 방법과 비교하여, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한, 지속적 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)을 달성하는 대상체의 백분율 증가를 달성하는 것인 방법.
244. 구현예 243에 있어서, 증가는 (약) 1.2 배, 1.5 배, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 10 배 또는 그 이상의 초과인 것인 방법.
245. 구현예 197-244 중 어느 하나에 있어서,
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한 완전한 반응 (CR)을 달성하고; 및/또는
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한 객관적 반응 (OR)을 달성하는 것인 방법.
246. 구현예 197-245 중 어느 하나에 있어서,
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50% 초과, (약) 60% 초과, (약) 70% 초과, 또는 (약) 80% 초과는 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 나타내지 않고 및/또는 2등급 이상의 또는 3등급 이상의 신경독성을 나타내지 않거나; 또는
상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 40% 초과, (약) 50% 초과 또는 (약) 55% 초과는 임의의 신경독성 또는 CRS를 나타내지 않는 것인 방법.
247. 구현예 197-246 중 어느 하나에 있어서, 양 또는 피크 CAR+ T 세포는 대상체의 혈액 내 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 개수로서 결정되는 것인 방법.
248. 구현예 197-247 중 어느 하나에 있어서, 치료적 범위는 추정된 독성 확률이 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만 또는 5% 미만이고, 추정된 반응 확률이 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상을 초과하는 범위인 것인 방법.
249. 구현예 197-248 중 어느 하나에 있어서, 독성 확률은 다음으로부터 선택된 독성에 기초하는 것인 방법:
임의의 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS);
중증 독성 또는 3등급 이상의 독성;
중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는
중증 신경독성, 2등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성.
250. 구현예 197-249 중 어느 하나에 있어서, 독성 확률은 중증 독성 또는 3등급 이상의 독성 확률에 기초하는 것인 방법.
251. 구현예 249 또는 구현예 250에 있어서, 중증 독성은 3-5 등급 신경독성인 것인 방법.
252. 구현예 197-251 중 어느 하나에 있어서, 반응 가능성은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 반응에 기초하며, 선택적으로 이러한 반응은 지속 가능하며, 선택적으로 적어도 3 개월 또는 적어도 6 개월 동안 지속 가능한 것인 방법.
253. 구현예 197-252 중 어느 하나에 있어서, 이러한 반응은 대상체의 골수에서 악성 면역글로불린 중쇄 유전자좌 (IGH) 및/또는 인덱스 클론의 존재의 평가에 기초하여 결정된 골수 반응인 것인 방법.
254. 구현예 253에 있어서, 악성 IGH 및/또는 인덱스 클론은 유세포 분석 또는 IgH 시퀀싱에 의해 평가되는 것인 방법.
255. 다음의 단계를 포함하는, 지속적 반응의 가능성 평가 방법:
(a) 대상체로부터의 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 피크 수준을 검출하는 단계로서, 이러한 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및
(b) 임계값에 대해 피크 수준을 개별적으로 비교하여, 대상체가 유전자 조작된 세포의 투여에 대한 지속적인 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계.
256. 구현예 255에 있어서,
대상체는 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 미만인 경우 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 초과인 경우 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없고; 또는
유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료적 범위 내에 있는 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값 미만이거나 또는 상한 임계값 초과인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것인 방법.
257. 구현예 255 또는 구현예 256에 있어서, 대상체가 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 판단되는 경우, 치료제로, 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료로 치료하기 위한 대상체를 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
258. 구현예 255-257 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 판단되는 경우, 치료제 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료를 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
259. 다음을 포함하는, 치료 방법:
(a) 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 투여를 받은 적이 있는 대상체를 선별하는 단계로서, 여기서
대상체로부터의 샘플에서 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준은 임계값 초과이고; 및/또는
대상체로부터의 샘플 내 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함하는 T 세포의 피크 수준은 하한 임계값 미만 또는 상한 임계값 초과인 단계.
(b) 치료제 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료를 대상체에게 투여하는 단계.
260. 구현예 255-258 중 어느 하나에 있어서, 반응은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 것인 방법.
261. 구현예 255-258 및 260 중 어느 하나에 있어서, 반응은 3개월, 4 개월, 5 개월, 또는 6 개월 이상 동안 지속 가능한 것인 방법.
262. 구현예 255-261 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 (약) 22 일, (약) 12 내지 (약) 18 일 또는 (약) 14 내지 (약) 16 일의 시점에, 피크 수준이 평가되고 및/또는 샘플이 대상체로부터 획득되는 것인 방법.
263. 구현예 255-262 중 어느 하나에 있어서, 피크 수준은 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이며, 이러한 염증성 마커는 C 반응성 단백질 (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-알파, MIP-1알파, MIP-1베타, MCP-1, CXCL10 및 CCL13으로부터 선택되는 것인 방법.
264. 구현예 256-263 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 평가되며, 임계값은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 또는 5% 이내이고, 및/또는 유전자 조작된 세포를 투여받은 대조군 대상체의 그룹 중에서 결정된 염증성 마커의 피크 수준의 중앙값 또는 평균값의 표준 편차 이내이고, 여기서 그룹 중 대상체 각각은 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 선택적으로 3개월 이상 또는 6 개월 동안 지속적인, 지속적 반응, 선택적으로 CR 및/또는 PR을 달성하지 않는 것인 방법.
265. 구현예 264에 있어서, 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 선택적으로 유전자 조작된 세포의 투여 3개월 이상 또는 6 개월 이후 안정한 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD)을 나타내었던 것인 방법.
266. 구현예 255-262 중 어느 하나있어서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준은 피크 CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+ T 세포 서브세트인 것인 방법.
267. 구현예 256-262 및 266 중 어느 하나에 있어서, 하한 임계값 및 상한 임계값은, 각각, 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 치료적 범위인, 추정 반응 확률이 (약) 65%를 초과하고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위의 상한 및 하한인 것인 방법.
268. 구현예 256-262, 266 및 267 중 어느 하나에 있어서, 치료적 범위는 추정된 독성 확률이 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만 또는 5% 미만이고, 추정된 반응 확률이 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상을 초과하는 범위인 것인 방법.
269. 구현예 267 또는 구현예 268에 있어서, 독성 확률은 다음으로부터 선택된 독성에 기초하는 것인 방법:
임의의 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS);
중증 독성 또는 3등급 이상의 독성;
중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는
중증 신경독성, 2등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성.
270. 구현예 267-269 중 어느 하나에 있어서, 반응 가능성은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 반응에 기초하며, 선택적으로 이러한 반응은 지속 가능하며, 선택적으로 적어도 3 개월 또는 적어도 6 개월 동안 지속 가능한 것인 방법.
271. 구현예 255-262, 및 266-270 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준은 대상체의 혈액 내 마이크로리터 당 CAR+ T 세포 개수로서 결정되는 것인 방법.
272. 구현예 256-262 및 266-271 중 어느 하나에 있어서,
상한 임계값은 마이크로리터 당 (약) 300 개의 세포 내지 마이크로리터 당 (약) 1000 개의 세포 또는 마이크로리터 당 (약) 400 개의 세포 내지 마이크로리터 당 (약) 600 개의 세포, 마이크로리터 당이거나, 또는 마이크로리터 당 약 300 개의 세포, 마이크로리터 당 400 개의 세포, 마이크로리터 당 500 개의 세포, 마이크로리터 당 600 개의 세포, 마이크로리터 당 700 개의 세포, 마이크로리터 당 800 개의 세포, 마이크로리터 당 900 개의 세포 또는 마이크로리터 당 1000 개의 세포이고; 또는
하한 임계값은 (약) 마이크로리터 당 10 세포, 마이크로리터 당 9 개의 세포, 마이크로리터 당 8 개의 세포, 마이크로리터 당 7 개의 세포, 마이크로리터 당 6 개의 세포, 마이크로리터 당 5 개의 세포, 마이크로리터 당 4 개의 세포, 마이크로리터 당 3 개의 세포, 마이크로리터 당 2 세포 또는 마이크로리터 당 1 개의 세포 미만인 것인 방법.
273. 구현예 255-272 중 어느 하나에 있어서, 샘플은 혈액 샘플 또는 혈장 샘플인 것인 방법.
274. 구현예 255-273 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 생체 외에서 수행되는 것인 방법.
275. 구현예 257-274 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준은 상한 임계값 초과이고, 치료제는 CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제인 것인 방법.
276. 구현예 275에 있어서, 시제는 스테로이드인 것인 방법.
277. 구현예 276에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
278. 구현예 276-277 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
279. 구현예 276-278 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
280. 구현예 276-279 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
281. 구현예 276-280 중 어느 하나에 있어서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양, 또는 1일 또는 24 시간 당, 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
282. 구현예 257-274 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준은 하한 임계값 미만이고, 치료제는 CAR+ T 세포의 팽창 또는 증식, 선택적으로 CAR-특이적 팽창을 증가시킬 수 있는 시제인 것인 방법.
283. 구현예 282에 있어서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ항체 또는 항-TGFβ항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
284. 구현예 197-283 중 어느 하나에 있어서, 질병 또는 병태는 암인 것인 방법.
285. 구현예 284에 있어서, 암은 B 세포 악성 종양인 것인 방법.
286. 구현예 285에 있어서, 암은 육종, 암종, 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, CLL, ALL, AML 및 골수종으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
287. 구현예 286에 있어서, 암은 췌장암, 방광암, 대장암, 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포 암, 폐암, 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경 내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암 또는 연조직 육종인 것인 방법.
288. 구현예 197-287 중 어느 하나에 있어서, 대상체는 인간인 것인 방법.
289. 구현예 197-288 중 어느 하나에 있어서, CAR은 질병 또는 병태와 연관된 및/또는 질병 또는 병태와 연관된 세포에서 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
290. 구현예 289에 있어서, 항원은 다음으로부터 선택되는 것인 방법: αvβ인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2으로도 알려짐), 암배아 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; 또한 Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100 (gp100), G 단백질 연결 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이합체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Ra), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접합 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 풍부 반복 서열 8 패밀리 구성원 A 함유 (LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐과 거대세포바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 살해 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접합 분자 (NCAM), 종양 태아 항원, 종양에서 우선적으로 발현되는 흑색종 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백 (TPBG 또한 5T4로도 알려짐), 종양-관련 당단백 72 (TAG72), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이 항원 또는 보편적인 표지(tag)와 관련된 항원, 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자.
291. 구현예 197-290 중 어느 하나에 있어서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인, 및 ITAM를 포함하는 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
292. 구현예 291에 있어서, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 도메인을 포함하는 것인 방법.
293. 구현예 291 또는 구현예 292에 있어서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 공동자극 신호전달 영역을 추가로 포함하는 것인 방법.
294. 구현예 293에 있어서, 공동자극 도메인은 4-1BB의 신호전달 도메인인 것인 방법.
295. 구현예 197-294 중 어느 하나에 있어서, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+인 것인 방법.
296. 구현예 197-295 중 어느 하나에 있어서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포인 것인 방법.
297. 구현예 197-296 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 자가조직인 것인 방법.
298. 구현예 197-296 중 어느 하나에 있어서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 동종이계인 것인 방법.
XI. 실시예
다음의 실시예는 오직 설명의 목적으로 제공되는 것이며 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니다.
실시예 1: 고위험 CLL 환자에서 피크 CAR T 세포 확장 및 반응 및 신경독성에 기초한 골수 반응의 가능성
재발성 또는 불응성 (R/R) CD19+ 만성 림프구성 백혈병 (CLL)을 가지는 24명의 성인 인간 대상체에게 CD19에 대해 특이적인 키메라 항원-수용체 (CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 투여하고, 하기와 같이 평가하였다.
CAR은 CD19에 특이적인 scFv (VL-링커-VH 배향)와 함께, FMC63으로부터 유래된 가변 영역, IgG 힌지 영역, 막관통 영역, 및 인간 4-1BB 및 CD3제타으로부터 유래된 세포 내 신호전달 도메인을 포함하였다. 작제물은 CAR 발현에 대한 대리 마커로서 기능하는 절단된 EGFR (EGFRt)을 추가로 인코딩하였고; EGFRt-인코딩 영역은 T2A 스킵 서열에 의해 CAR 서열로부터 분리되었다. 세포를 투여하기 전에, 환자는 백혈구 성분채집술을 받았고; CD4 + 및 CD8 + 집단은 면역 친화성-기반 농축 방법에 의해 선택되었고, CAR 작제물을 가지는 바이러스 벡터로 형질도입되고, 15 일에 걸쳐 배양물에서 팽창하였다.
CAR+ T 세포 주입 전 적어도 48 시간 (및 최대 96 시간)에 시작하여, 대상체는 (a) 에토포시드를 사용하거나 사용하지 않고 사이클로포스파미드를 투여받거나 (Cy, 60 mg/kg) (2/13 대상체), 또는 (b) 플루다라빈과 병용하여 사이클로포스파미드를 투여받았다 (Cy, 60 mg/kg) (3-5 일 동안 매일 flu, 25 mg/m2 (cy/flu, 11/13 대상체).
투여를 위한 세포는 일반적으로 대략 1:1의 CAR+ CD4+ T 세포 대 CAR+ CD8+ T 세포 비율로 제형화되었다. 치료 조성물은 모든 대상체에 대해 성공적으로 제조되었다. 1/13 대상체에 대해, 표적 용량 미만의 세포(2 x 106/kg CAR+)가 생성되었다.
대략 1:1의 CD8+ CAR+ T 세포 대 CD4+ CAR-T 세포 비율을 가지는 조성물을, 3가지 용량 수준 (대상체의 체중 킬로그램 당 (kg) 2 x 105 (N=4), 2 x 106 (N=8) 또는 2 x 107 (N=1) CAR+ T 세포) 중 하나로, 대상체에게 주입하였다. 림프구 고갈 요법 및 T 세포 주입은 외래 환자 기준으로 투여하였다.
사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 발생 및 등급은 [Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95]에 따라 결정하였다. 치료 후, 대상체는 신경독성 (착란, 실어증, 발작, 경련, 혼수, 및/또는 정신 상태 변화의 증상을 포함하는 신경학적 합병증)에 대해 평가 및 모니터링하고, 1-5 등급 규모를 사용하는 중증도에 기초하여 등급화하였다 (예를 들어, [Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010] 참조). 3 등급 (중증 증상), 4 등급 (생명위협 증상) 또는 5 등급 (사망)은 중증 신경독성을 나타낸다.
혈액 내 CD4+/EGFRt+ 또는 CD8+/EGFRt+ CAR-T 세포 개수에 기초하여 반응 추정 확률 및 3-5 등급 신경독성 발생 추정 확률의 곡선을 구성하였다 (도 1). 일반적으로, CAR-T 세포의 개수가 증가함에 따라 반응 확률이 증가한 후 정체되는 반면, 3-5 등급 신경 독성이 발생할 가능성은 증가하였다.
실시예 1: 대상체에게 항-CD19 CAR-발현 세포 투여
재발성 또는 불응성 (R/R) 비-호지킨 림프종 (NHL)을 가지는 28명의 대상체에게 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 투여하였다. 대상체 인구 통계 및 베이스라인 특성이 표 13에 제시된다. CAR은 쥐과 항체로부터 유래된 항-CD19 scFv, 면역글로불린-유래 스페이서, CD28으로부터 유래된 막관통 도메인, 4-1BB으로부터 유래된 공동자극 영역, 및 CD3-제타 세포 내 신호전달 도메인을 포함하였다. 자가 CAR-발현 T 세포를 생성하기 위해, 개별 대상체로부터의 백혈구성분채집술 샘플로부터 면역친화성-기반 농축에 의해 T 세포를 단리하고, 항-CD19 CAR를 인코딩하는 바이러스 벡터로 활성화 및 형질도입한 후, 팽창하였다 (대략 1:1 비율의 CD4+ 대 CD8+ CAR+ T 세포의 표적 비율).
Figure pct00018
CAR-발현 T 세포의 투여 이전에, 대상체를 3 일 동안 매일 30 mg/m2 플루다라빈 및 3 일 동안 매일 300 mg/m2 사이클로포스파미드로 처리하였다. 동결보존된 세포 조성물을 정맥 내 투여 전에 해동시켰다. 치료적 T 세포 용량은 대략 1:1의 표적 비율로 투여되는 제형화된 CD4+ CAR+ 세포 집단 및 제형화된 CD8+ CAR+ 집단을 투여함으로써 정의된 세포 조성물로서 투여하였다. 제0일에, 대상체를 5 x 107 (DL1) 또는 1 x 108 (DL2) CAR-발현 T 세포의 단일-용량 또는 이중-용량 스케쥴로 정맥내 주입 (각각 CD4+ CAR-발현 T 세포 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 별도 주입을 통한 각각의 단일 용량)에 의해 처리하였다.
CAR-T 세포 요법의 다양한 용량 스케쥴로 처리된 대상체에서 다양한 치료 후 발생한 유해 사례의 존재 또는 부재를 평가하였다 (표 14 및 표 15). 표 15에 나타낸 바와 같이, 중증의사이토카인 방출 증후군 (sCRS) (3-5 등급)은 관찰되지 않았다; 사이토카인 방출 증후군 (CRS)은 대상체의 36% (10/28)에서 관찰되었다. 3-4 등급 신경독성은 대상체의 14% (4/28)에서 관찰되었고 대상체의 18% (5/28)는 임의의 등급의 신경독성을 나타냈다. 1명의 대상체는 토실리주맙으로 치료되었고, 4 명의 환자는 2 등급 CRS 또는 신경독성의 조기 발병에 대해 위해 덱사메타손을 투여받았다. 6명의 대상체는 예방적 항-간질제를 투여받았다.
Figure pct00019
Figure pct00020
단일 용량의 DL1의 마지막 CAR + T 세포 주입 후, 진행 중인 연구에서 특정 시점까지의 기간 동안 관찰된 그룹 전체의 대상체가 최상의 전체 반응에 대해 평가되었다. 전체 반응 결과를 표 16에 나타낸다. 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL) 코호트에서 단일-용량의 DL1으로 처리된 20명의 대상체 중, 80% (16/20)의 전체 반응률 (ORR)이 관찰되었고 60% (12/20)의 대상체가 완전한 차도 (CR)의 증거를 보였다. 대상체의 20% (4/20)는 부분적 반응 (PR)의 증거를 나타내고 대상체의 20% (4/20)는 진행성 질병 (PD)의 증거를 나타냈다. CAR + T 세포 투여 전에 화학불응성인 (마지막 화학-포함 요법 후 또는 안정한 진행성 질병을 보이거나 자가 SCT 후 12 개월 미만으로 재발한) 대상체 중, 전체 반응률은 83%이었다 (10명 ORR, 7명 CR, 3명 PR, 2명 PD, n = 12). 불응성인 (마지막 치료 후 완전한 완화율 미만을 보였으나 화학 불응성으로는 간주되지 않은) 대상체 중에서, 전체 반응률은 77%이었다 (13명 ORR, 9명 CR, 4명 PR, 4명 PD, n = 17).
Figure pct00021
평가 시점에 2 회 용량의 DL1로 처리된 3 명의 DLBCL 대상체 중, 2명은 부분적 반응 (PR)을 나타내고 1명은 진행성 질병 (PD)을 나타냈다. 평가 시점에 단일 용량의 DL2로 치료된 2 명의 DLBCL 대상체 중, 두 대상체 모두 CR을 달성하는 것으로 관찰되었다. 평가 시점에 단일 용량의 DL1로 치료된 전체 2 명의 DLBCL 대상체를 가지는 MCL 코호트 중에서, 1명의 PR 및 1명의 PD가 관찰되었다. 더블-히트(double-hit)를 가지는 2명의 대상체, 트리플-히트(triple-hit)를 가지는 3명의 대상체, 및 더블-발현체(double-expressor) DLBCL를 가지는 4명의 대상체를 치료하였고, 모두 반응을 달성하였다 (7명 CR, 2명 PR).
말초 혈액 내 CAR + T 세포의 수는 세포를 형질도입 유전자-특이적 시약과 함께 배양함으로써 치료-후 특정 시점에서 결정되었다. 주입 후 특정 시점에서 측정된 말초 혈액에서 CD3+/CAR+ T 세포의 개수는 도 2A에서 최상의 전체 반응에 의해 분류된 단일 용량의 DL1로 처리된 대상체에 대해 도시된다. PD 보다 반응자 (CR/PR)에서 보다 높은 피크 CD3+/CAR+ T 세포가 관찰되었다. 도 2B-2D는 반응을 달성하고, 3 개월에 지속적인 반응 (CR/PR) 또는 PD으로 그룹화된 대상체에서 CD3+/CAR+ T 세포, CD4+/CAR+ T, 및 CD8+/CAR+ T 세포 수준 (세포/μL 혈액; 평균 ± SEM)을 도시한다.
반응자 (CR/PR) 및 PD에 대한 Cmax (CAR+ 세포/μL 혈액) 및 곡선 아래 면적 (AUC)을 결정하고 표 17에 도시하였다. 결과는 시간이 지남에 따라 및 피크 팽창 시, 지속적 반응이 혈액 내 보다 높은 CD3+/CAR+ T 세포 수준과 상관 관계가 있다는 결론과 일치했다.
Figure pct00022
실시예 3: 재발성 및 불응성 비-호지킨 림프종 (NHL)을 가지는 대상체에 대한 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여
A. 대상체 및 치료
CD19에 특이적인 자가 키메라 항원-수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 함유하는 치료적 CAR+ T 세포 조성물을 B 세포 악성 종양을 가지는 대상체에게 투여하였다. 2차 요법의 실패 이후 재발성 또는 불응성 (R/R) 공격형 비-호지킨 림프종 (NHL), 예를 들어 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL), 신생 또는 무통성 림프종 (NOS)으로부터 형질전환 림프종, DLBCL 조직학으로 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열 (더블/트리플 히트)을 가지는 높은 등급의 B-세포 림프종, 만성 림프구성 백혈병 (CLL)으로부터 변형된 DLBCL 또는 변연부 림프종 (MZL), 원발 종격동성 거대 b-세포 림프종 (PMBCL), 및 여포 림프종 3b 등급 (FL3B)을 가지는 55 명의 성인 인간 대상체의 코호트 (전체 코호트)에 대해 진행중인 연구에서 특정 시점을 통안 평가를 위해 그 결과가 본 실시예에 기재된다. 치료된 대상체 중에는 미 동부 종양학 협동 그룹 (ECOG) 점수가 0 내지 2 (중도 추적 관찰 3.2 개월)인 대상체가 있었다. 외투 세포 림프종 (MCL)을 갖는 대상체는 55명의 대상체에 포함하지 않았다. 이전의 동종 줄기 세포 이식 (SCT)에 기초하여 대상체를 배제하지 않았으며, 성분채집술에 대한 최소 절대 림프구 수 (ALC)는 없었다.
이 시점에 55명의 대상체의 코어 서브세트에 대한 결과(불량한 기능 상태 (ECOG 2), 변연부 림프종 (MZL)으로부터 형질전환된 DLBCL 및/또는 만성 림프구성 백혈병 (CLL, Richter's)을 가지는 대상체 제외하는 서브세트, 및 원발 종격동성 거대 b-세포 림프종 (PMBCL), 및 여포 림프종 3b 등급 (FL3B)을 가지는 대상체 (코어 코호트)). 코어 코호트는 DLBCL, NOS 및 형질전환 여포 림프종 (tFL) 또는 높은 등급의 B-세포 림프종 (더블/트리플 히트) 또는 높은 등급 B-세포 림프종을 가지는 대상체를 포함하며, 미 동부 종양학 협동 그룹 기능 상태 (ECOG PS)가 0 또는 1인 대상체 (코어 코호트))를 개별적으로 평가하였다.
전체 코호트 및 코어 코호트의 인구 통계 및 베이스라인 특성이 표 18에 제시된다.
Figure pct00023
투여된 치료적 T 세포 조성물을 치료되는 개별 대상체로부터의 백혈구성분채집술 샘플로부터 CD4+ 및 CD8+ 세포의 면역친화성-기반 (예를 들어, 면역자성 선별) 농축을 포함하는 공정에 의해 생성하였다. 단리된 CD4+ 및 CD8+ T 세포를 개별적으로 활성화하고 항-CD19 CAR를 인코딩하는 바이러스 벡터 (예를 들어, 렌티바이러스 벡터)로 독립적으로 형질도입한 후, 소량으로 조작된 세포 집단을 개별적으로 팽창 및 동결보존하였다. CAR은 쥐과 항체로부터 유래된 항-CD19 scFv (FMC63으로부터 유래된 가변 영역, VL-링커-VH 배향), 면역글로불린-유래 스페이서, CD28으로부터 유래된 막관통 도메인, 4-1BB으로부터 유래된 공동자극 영역, 및 CD3-제타 세포 내 신호전달 도메인을 포함하였다. 바이러스 벡터는 CAR 발현에 대한 대리 마커로서 기능하는 절단된 수용체를 인코딩하는 서열을 추가로 포함하며; 이는 T2A 리보솜 스킵 서열에 의해 CAR 서열로부터 분리되었다.
동결보존된 세포 조성물을 정맥 내 투여 전에 해동시켰다. 치료적 T 세포 용량은 대략 1:1의 표적 비율로 투여되는 제형화된 CD4+ CAR+ 세포 집단 및 제형화된 CD8+ CAR+ 집단을 투여함으로써 정의된 세포 조성물로서 투여하였다. 다음과 같이, 단일 또는 이중 용량의 CAR-발현 T 세포 (각각 CD4+ CAR-발현 T 세포 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 개별적인 주입을 통한 각각의 단일 용량)을 대상체에게 투여하였다: 5 x 107 전체 CAR-발현 T 세포를 함유하는 단일 용량의 용량 수준 1 (DL1) (n=30), 이중 용량의 DL1으로서, 각각의 용량은 대략 14 일 간격으로 투여 (n=6 제1일 및 제14일에 투여, 부주의하게 투여 오류로 인해 2회-용량 스케쥴을 통한 2회 DL2 용량을 투여받은 대상체 포함), 또는 1 x 108 전체 CAR-발현 T 세포를 함유하는 단일 용량의 용량 수준 2 (DL-2) (n=18, 이 시점에 평가되는 대상체). 투여되는 조성물에 대한 T 세포 서브세트의 표적 용량 수준 및 개수가 표 19에 제시된다.
Figure pct00024
CAR+ T 세포 주입 전에 시작하여, 대상체는 3일 동안 플루다라빈 (flu, 30 mg/m2) 및 사이클로포스파미드 (Cy, 300 mg/m2)으로 림프구 고갈 화학요법을 투여받았다. 대상체는 림프구고갈 2-7 일 후에 CAR-발현 T 세포를 투여받았다.
B. 안전성
CAR-T 세포 요법의 치료 후 발생한 유해 사례 (TEAE)의 존재 또는 부재를 평가하였다. 도 3은 실험실 이상 및 TEAE를 경험한 것으로 관찰된 대상체의 백분율을 나타내며, 이는 대상체의 ≥20%에서 발생하였다. 도 3에 도시된 TEAE 이외에, ≥5%의 3-4 등급 환자에서 다음의 사례가 관찰되었다: 백혈구 수 감소 (13.6%), 뇌병증 (12%), 고혈압 (7%). 관찰된 독성의 정도는 용량 수준 1과 2 사이에서 일정했다.
대상체를 또한 신경독성 (착란, 실어증, 뇌병증, 근간대증 발작, 경련, 혼수, 및/또는 정신 상태 변화의 증상을 포함하는 신경학적 합병증)에 대해 평가 및 모니터링하고, 미국 국립 암 연구소―일반 독성 기준 (CTCAE) 등급, 버전 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)에 따라 1-5 등급으로 등급화하였다. 일반 독성 기준 (CTCAE) 규모, 버전 4.03 (NCI-CTCAE v4.03). 미국 보건 복지부 (Department of Health and Human Services)의 유해 사례에 대한 공통 용어 (CTCAE) 버전 4, 공개: 2009 년 5 월 28 일 (v4.03: June 14, 2010); Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010)를 참조한다. 사이토카인 방출 증후군 (CRS)도 또한 중증도에 따라 등급을 결정하고 모니터링하였다. [Lee et al, Blood. 2014;124(2):188-95]를 참조한다. 일부 경우에, CAR+ T 세포 투여 후 90 일까지 림프구고갈에서 유해 사례 데이터가 보고되고 수집되었다.
전체 코호트 대상체의 84 %에서, 중증 (3 등급 이상) 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 및 중증 신경독성은 관찰되지 않았다. 또한, 전체 코호트 대상체의 60 %는 어떠한 등급의 CRS 또는 신경독성도 발생하지 않는 것으로 관찰되었다. CRS, 신경독성 (NT), sCRS 또는 중증 신경독성 (sNT)의 발생률에서 용량 수준 사이에는 차이가 관찰되지 않았다. 표 20은 적어도 1 회 용량의 CAR-T 세포를 투여한 후 제28일에 환자에서 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 및 신경독성 유해 사례의 발생을 요약한다. 표 20에 나타낸 바와 같이, 단일 용량의 DL2 또는 이중 용량의 DL1을 투여받은 대상체에서 sCRS (3-4 등급)이 관찰되지 않았다. 주요 서브세트에서 대상체의 전체 코호트의 16% (9/55) 및 대상체의 18% (8/44)에서 중증 신경독성 또는 중증 CRS (3-4 등급)이 관찰되었다. 대상체의 11% (n=6)는 토실리주맙을 투여받았고, 대상체의 24% (n=13)는 덱사메타손을 투여받았다. 전체 코호트 내의 ECOG2 대상체 중에서, 관찰된 CRS 및 신경독성률은 각각 71% 및 29%였다.
Figure pct00025
도 4는 CRS 및/또는 신경독성의 발병까지 관찰된 시간을 나타내는 카플란 마이어 곡선을 도시한다. 도시된 바와 같이, 관찰된 CRS 발병 및 신경독성 발병의 중앙값 시간은 각각 5 일 및 11 일이었으며, 오직 환자의 11% 만이 세포 요법의 투여 개시 후 72 시간 미만에 CRS 발병을 경험하였다. CRS 및 1 등급 이상의 신경독성의 소산까지의 평균 시간은 각각 5 일 및 7 일이었다. CRS 및 신경독성의 소산을 완료하기 위한 평균 시간은 각각 5 일 및 11 일이었다. 결과는 대상체에서 임의의 CRS 또는 신경독성의 초기 발병률이 낮다는 결론과 일치하였다.
C. 치료에 대한 반응
CAR+ T 세포의 투여 이후 1, 3, 6, 7, 12, 18, 및 24 개월에 종양 부담을 평가하는 것을 포함하여, 반응에 대해 대상체를 모니터링하였다. 반응률은 표 21에 나열된다. 높은 지속적 반응률이 대상체 대상체에서 관찰되었고, 대상체 치료 경험이 많은(heavily pretreated), 불량한 예후를 가지는 및/또는 재발성 또는 불응성 질병을 가지는 대상체가 포함된다. 코어 (n=44) 코호트의 모든 용량에 걸친 대상체에 대해, 관찰된 전체 반응률 (ORR)은 86%이고, 관찰된 완전한 반응율 (CR)은 59%이었다. 코어 코호트에 대해 3 개월 째에, 전체 반응률 (ORR)은 66 %이었고; 3 개월 CR 비율은 코어 코호트 중 50 %이었다. 코어 코호트에서, 3 개월 ORR은 용량 수준 1에서 58% (11/19)이고 용량 수준 2에서 78%이었고; 3 개월 CR 비율은 용량 수준 1에 대해 42% (8/19)이고 용량 수준 2에 대해 56% (5/9)이었으며, 이는 치료 결과에 대해 제안된 용량 반응 효과와 일치하였다. 또한, 결과는 용량과 반응 지속성 사이의 관계와 일치하였다.
Figure pct00026
전체 코호트 및 코어 코호트에서 다양한 하위그룹의 대상체 간의 전체 반응률이 각각 도 5A 및 5B 에 도시되어 있다. 위험이 낮은 DLBCL 하위그룹에서는 일반적으로 반응 비율이 높았습니다. 1차 불응성 또는 화학불응성 DLBCL 또는 CR을 달성한 적이 없는 더블/트리플 히트 분자 서브유형을 가지는 환자에서 3 개월에 50% 초과의 ORR이 관찰되었다. 림프종에 의한 CNS 침범의 완전한 소산이 2 명의 환자에서 관찰되었다.
평가의 특정 시점 이전에 6 개월 이상 치료된 대상체 중에서 3 개월에 반응한 10 명의 환자 중 9 명 (90%)이 6 개월에 반응을 유지하였다. 평가 시점에서, 반응한 코어 서브세트의 대상체 중 97 %가 생존하였으며, 추적 관찰 기간은 평균 3.2 개월이었다.
반응 기간 및 전체 생존 (최상의 전체 반응으로 그룹화 (비-반응자, CR/PR, CR 및/또는 PR))에 대한 결과는 대상체의 전체 및 코어 코호트에 대해 도 6a 및 6b에 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, CR을 가진 대상체에서 반응의 지속성이 증가된 반응자에서 연장된 생존이 관찰되었다. 평가 시점에 3 개월 째 반응 한 모든 환자는 살아남았지만, 기능 상태가 좋지 않은 (ECOG 2) 5/6 명의 대상체는 사망하였다.
C. 혈액 내 CAR+ T 세포 평가
치료-후 다양한 시점에 말초 혈액에서 CAR+ T 세포의 수를 평가하기 위해 약동학적 분석을 수행하였다. 도 7A에 도시된 바와 같이, CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포는 로그 규모로 플롯팅된 세포/μL 혈액 (중앙값 ± 사분위수) 수에 의해 측정된 바와 같이, 두 가지 투여 용량 수준 모두에서 평가 과정 전반에 걸쳐 검출되었다.
관찰된 독성 증가 없이, 더 낮은 용량 수준과 비교하여 보다 높은 용량 수준으로 투여된 대상체 사이에서 곡선 아래의 증가된 중앙 면적 (AUC) (혈액 내 시간에 따른 CD8+ CAR+ 세포 개수)가 관찰되었다. 비-반응자(PD) 보다 반응자 (CR/PR)에서 더욱 높은 피크 CD8+/CAR+ T 세포 노출이 관찰되었으며; 3 개월 내지 6 개월을 포함하여 평가 시간에 걸친 세포의 지속성은 질병이 진행된 대상체에서도 관찰되었다 (도 7B). 결과는 치료가 반응이 좋지 않은 대상체에서도, 조작된 세포의 장기간 노출 및 지속성을 초래한다는 결론과 일치하였다. 일부 구현예에서, 예를 들어, 재발 또는 질병 진행 이후, 예를 들어, 말초 혈액 내 세포 수준에 의해 측정된, 조작된 세포가 대상체에서 지속되는 시간에, 예컨대 면역 체크포인트 조절제 또는 다른 면역 조절제의 투여와 같은 병용 접근법이 사용된다. 일부 양태에서, 다른 시제의 투여 또는 치료 후 연장된 기간 동안 지속된 세포는 재팽창 또는 활성화되고 및/또는 항-종양 기능을 나타낸다. 더욱 높은 중앙값의 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포 개수는 시간이 지남에 따라 신경독성이 발생한 대상체의 혈액에서 일반적으로 관찰되었다 (도 7C).
D. 혈액 분석물 및 경독성
CAR+ T 세포의 투여 이전에 대상체의 혈액에서 사이토카인을 비롯한 다양한 치료-전 혈액 분석물을 측정하였다. 통계학적 분석을 사용하여 신경독성 발생 위험에 대한 잠재적 상관 관계를 평가하였다. 도 8은 CAR+ T 세포 요법 투여 이후 신경독성을 발생시킨 대상체에 대해 신경독성을 발생시키지 않은 대상체에서 중앙값 단위로 평가된 분석물 (LDH, U/L; 페리틴, ng/mL; CRP, mg/L; 사이토카인, pg/mL)의 수준을 도시한다. LDH, 페리틴, CRP, IL-6, IL-8, IL-10, TNF-α, IFN-α2, MCP-1 및 MIP-1β를 포함한 특정 혈액 분석 물질의 수준은, 신경 독성의 발생 위험 수준과 관련이 있는 것으로 관찰되었다 (다중성 보정 없음, Wilcoxon p 값 <0.05). 특히, 결과는 LDH의 치료-전 수준이 일부 구현예에서는 질병 부담에 대한 대체물이며, 잠재적인 신경독성 위험 평가 및/또는 특정 대상체 치료에 대한 위험-조정 투약 또는 조정에 유용할 수 있다는 결과와 일치하였다. 또한, CAR-T 세포 조성물의 투여 이전에 측정된 종양 부담은 신경독성 발생 위험과 상관 관계가 있었다 (Spearman p 값 <0.05). 일부 양태에서, LDH 수준은 단독으로 및/또는 또 다른 치료-전 파라미터와 조합으로, 예컨대 질병 부담의 또 다른 측정치 또는 지표, 예컨대 직경의 곱의 합 (SPD)과 같은 부피 종양 측정치 또는 질병 부담의 다른 CT-기반 또는 MRI-기반 부피 측정치와 조합으로 평가될 수 있다. 일부 양태에서, 질병 부담을 나타내는 하나 이상의 파라미터가 평가되며, 일부 맥락에서 T 세포 요법 이후 신경 독성 발생 위험의 존재, 부재 또는 정도를 나타낼 수 있다. 일부 양태에서, 하나 이상의 파라미터는 LDH 및/또는 부피 종양 측정치를 포함한다.
도 9는 전체 코호트 및 코어 코호트 내의 개별 대상체에 대한 무진행 시간 (개월)을 나타내는 그래프를 도시한다. 각각의 막대는 단일 환자를 나타낸다. 음영은 최상의 전체 반응을 나타내고 (달리 명시되지 않는 한, 1 개월에 달성); 텍스쳐는 용량을 나타낸다 (단색= 용량 수준 1 (DL1), 단일 용량; 사선 부분, 용량 수준 2 (DL2), 단일 용량; 수직 부분 = 용량 수준 1 (DL1), 이중 용량). 가로 화살표는 진행중인 반응을 나타낸다. 특정 개별 대상체는 초기에 (예를 들어, 1 개월) 안정성 질병 (SD) 또는 부분적 반응 (PR)을 나타내는 것으로 평가되었고, 이후 PR (예를 들어, SD에서 PR 로의 전환) 또는 CR을 달성한 것으로 관찰되었다. 이러한 경우, 개별 환자 막대의 음영은 언급된 바와 같이 최상의 전체 반응을 나타내고, 점은 각각의 개별 대상체 막대에 따라 (반응에 대한 음영과 동일한 대응) 각각의 SD, PR 및/또는 CR이 대상체에서 발생한 것으로 나타난 시점을 나타낸다. 림프종에 의한 CNS 침범의 완전한 소산이 2 명의 환자에서 관찰되었다. 1명의 대상체에서 CAR+ 세포는 재발 후 생검 이후 팽창된 것으로 관찰되었다.
실시예 4: 외투 세포 림프종 (MCL)을 가지는 대상체에게 항-CD19 CAR-발현 세포 투여
실시예 2에 기재된 바와 같이 생성된 CD19에 대해 특이적인 자가 키메라 항원-수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 함유하는 치료적 CAR+ T 세포 조성물을 외투 세포 림프종 (MCL)을 가지는 4명의 인간 대상체에게 투여하였다. 동결보존된 세포 조성물을 정맥 내 투여 전에 해동시켰다. 대략 1:1의 표적 비율로 투여된 동일한 대상체로부터 유래된 CAR+ 조작된 T 세포의 제형화된 CD4+ 및 CD8+ 집단을 가지는 한정된 조성물 세포 생성물로서 치료적 T 세포 조성물을 투여하였다. 5 x 107 CAR-발현 T 세포를 함유하는 용량 수준 1 (DL1)의 단일 용량으로 CAR-발현 T 세포의 용량 (CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 T 세포의 분할 용량)을 대상체에게 투여하였다. CAR+ T 세포 주입 전 3일에 시작하여, 대상체는 플루다라빈 (flu, 30 mg/m2) 및 사이클로포스파미드 (Cy, 300 mg/m2)으로 림프구 고갈 화학요법을 투여받았다.
실시예 2에 기재된 바와 같이 반응 및 독성에 대해 대상체를 모니터링하였다. 어느 대상체에서도 CRS 또는 신경독성이 관찰되지 않았다. 치료된 4 명의 대상체 중, 2 명의 대상체는 PR을 달성하였고 (지속적이지 않음) 2 명의 환자는 진행성 질병을 가졌다.
실시예 5: 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여 후 재발성 및 불응성 비-호지킨 림프종 (NHL)을 가지는 대상체에서 반응, 안전성, 약동학, 약력학 및 혈액 분석물의 추가 평가
상기 실시예 2에 기재된 임상 연구의 후속 시점에서, 반응 결과, 안전성 결과, 약동학적 및 약력학적 파라미터, 및 혈액 분석물을 환자에서 평가하였다.
A. 대상체 및 치료
상기 실시예에 제시된 상기 시점에서의 분석은 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 전체 DLBCL 코호트의 전체 91명의 대상체 (반응에 대해 평가된 88명 (65명의 코어 코호트) 및 안전성에 대해 평가된 91명 (67명의 코어 코호트))의 평가에 기초한다. 전체 코호트는 DLBCL, 신생 또는 임의의 지연성 림프종으로부터 형질전환된 NOS, ECOG 0-2인 대상체를 포함하였고; 분석을 위한 코어 코호트는 DLBCL, NOS (신생 또는 여포 림프종 (tFL)으로부터 형질 전환) 또는 높은 등급의 B-세포 림프종 및 미 동부 종양학 협동 그룹 기능 상태 (ECOG PS)가 0 또는 1인 대상체를 포함하였다. 코어 코호트 내 치료된 환자의 대략 90%가 3-6 개월의 짧은 중앙값의 전체 생존 (OS)을 예측할 수 있는 적어도 1개의 위험이 낮은 질병 특징, 예컨대 더블/트리플 히트 발현체, 원발 불응성 질병, 2차 이상의 요법에 대한 불응성, CR를 달성하지 않음, 또는 자가 줄기 세포 이식(ASCT)을 받지 않음과 같은 특징을 가졌다. 일부 구현예에서, 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL)을 가지는 대상체의 코호트는, ECOG 점수가 2인 대상체 또는 사전 조혈 줄기 세포 이식 (HSCT)을 받은 대상체를 제외하고, 달리 명시되지 않는 한 (NOS; 신생 또는 여포성 림프종 tFL으로부터 형질전환 )) 또는 DLBCL 조직학으로 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 가지는 MYC 및 BCL2 및/또는 BCL6 재배열을 가지는 높은 등급의 B-세포 림프종을 가지는 대상체의 코호트이며, 이러한 코호트에 본 명세서에 개시된 CAR-T 조성물을 투여하였다. 일부 구현예에서, 단일 용량의 DL2 (1 x 108 전체 CAR-발현 T 세포)으로 항-CD19 CAR+ T 세포를 코어 코호트의 대상체에게 투여하였다.
이 시점에서 총 140 명의 대상체의 백혈구를 채집했으며, 그 중 10 명은 제조된 조성물을 기다리고 있었으며 2 명은 제조 전에 취소하였고, 2 명은 사용할 수 없었다. 생성물을 기다리고 있는 또 다른 18 명의 대상체 중 4 명은 치료를 기다리고 있었으며 4 명은 퇴원했으며 10 명은 진행성 질병이 발생하였거나, 사망했다. 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 적이 있는 전체 108 명의 대상체 중, 6 명은 평가할 수 없었고 11 명은 부적합한 항-CD19 CAR-발현 세포 (특정 사양을 반드시 충족하지 않지만 투여에는 안전한 것으로 간주되는 조성물)을 투여받았다. 대상체는 DL1 (n=45), 이중 용량의 DL1 (n=6) 또는 DL2 (n=40)을 투여받았다. 외투 세포 림프종 (MCL)을 가지는 6 명의 대상체에게 DL1으로 CAR+ 세포를 투여하였고 (5명은 적합한 생성물로 치료, 1명은 부적합한 생성물로 치료), 5명은 28일의 추적 관찰을 완료하였다. 1명의 MCL 대상체는 CRS가 발생하였고, 토실리주맙 또는 덱사메타손을 투여받지 않았다. 생성물은 DLBCL 코호트에서 채집된 대상체의 98% (126/128)가 사용할 수 있었다.
이 시점의 대상체는 외래 환자 환경에서 치료받은 5 명의 환자를 포함했다 (DL1로 치료된 4 명의 대상체, DL2로 치료된 1 명의 대상체를 포함하고; 이 중 4 명은 CORE 코호트에 포함). 외래 환자 환경에서 치료된 대상체의 경우, 평균 연령은 57 세이며 (26-61세 범위), 3 명은 DLBCL, NOS를 가지고, 1 명은 tFL를 가지고, 1 명은 PMBCL를 가졌다. 5 명의 대상체 모두 ECOG 점수가 0 또는 1이었다. 외래 환자 결과에 대한 데이터에는 외래 환자 환경에서 치료된 3 명의 추가 대상에 대한 결과가 포함되었으며 (총 8 명의 대상체), 이들의 데이터를 상기 실시예에서 분석 시점 이후에 사용할 수 있었다.
시점에서 전체 및 코어 코호트의 인구 통계 및 베이스라인 특성이 표 18에 제시된다.
Figure pct00027
B. 치료 후 안전성 및 반응 결과
표 23에 도시된다. 객관적 반응률 (ORR)은, 완전한 반응 (CR)을 나타낸 52% 대상체를 포함하여 74%이었다. 임의의 등급의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 발생률은 35%이었고, 1%는 중증 CRS이며; 임의의 등급의 신경독성 (NT)의 발생률은 19%이었고, 1%는 중증 NT이다.
Figure pct00028
표 24에 나타낸 바와 같이, 전체 DLBCL 집단에서 높은 반응률 및 낮은 중증 독성이 관찰되었다.
Figure pct00029
표 25에 나타낸 바와 같이, 대상체의 코어 코호트에서 높은 반응률 및 용량-의존적 반응이 관찰되었다.
Figure pct00030
코어 코호트 내 모든 용량 수준으로 치료된 모든 DLBCL 환자를 포함하는, 위험이 낮은 DLBCL 하위그룹 내 대상체의 다양한 하위그룹에서 3 개월 객관적 반응률 (ORR)이 도 24에 도시된다. 결과는 위험이 낮은 DLBCL 하위 그룹에서 높은 지속성의 ORR을 나타냈다.
대상체의 전체 코호트 및 코어 코호트에 대한 반응 지속기간 (DOR) 및 전체 생존 (최상의 전체 반응 (비-반응자, CR/PR, CR 및/또는 PR)으로 그룹화)의 결과가 도 25A-25D에 도시된다. 결과는 또한 3 개월에 CR인 대상체의 80% (16/20)가 6 개월에 CR을 유지하고, 6 개월에 반응 (CR 또는 PR)을 나타낸 대상체의 92% (11/12)가 더 긴 기간 동안 반응을 유지하는 것을 나타냈다.
도 26은 상기 시점에 실험실 이상 반응 및 치료 후 발생한 유해 사례 (TEAE)를 경험한 대상체의 백분율을 도시한다 (적어도 28 일의 후속 조치로 DL1의 적합한 생성물로 치료된 5명의 MCL 환자에 대한 데이터는 제외). 도 26에 도시된 TEAE 이외에, ≥5%의 3-4 등급 환자에서 다음의 사례가 관찰되었다: 뇌병증 (8%), 범혈구 감소증 (5%) 및 호중구 감소증 (7%). 8명의 환자 (9%)는 CAR+ 세포 투여와 관련된 투여 일에 AE로 정의되는 주입 독성을 가졌으며, 이러한 독성으로는 홍조, 두통, 발열, 열병, 오한, 경직, 구토, 발진, 두드러기, 가려움증, 저혈압, 천명, 기관지 경련, 호흡 곤란, 오심, 구토, 허리 통증, 기침, 및 주입-관련 반응을 포함한다. 사례로는 오한 (2), 열병 (5), 홍조 (1), 두통 (1),저혈압 (1), 주입 관련 반응 (1), 발진 (1), 가려움증 (1), 및 구토 (1)를 포함하며, 6명의 1등급 사례, 1 명의 2등급 (오한), 및 1명의 3 등급(저혈압) 사례를 포함한다. 코어 코호트에서의 TEAE는 전체 코호트에서의 TEAE와 실질적으로 다르지 않았다. 외래 환자 환경 그룹에서 치료된 대상에서 가장 흔한 관련 TEAE는 CRS, 저혈압, 구토, 빈혈 및 호흡 곤란이었다.
표 26은 DL1S 및 DL2S를 투여받은 대상체에 대해 전체 또는 코어 코호트에서 25% 이상의 대상체에서 발생한 TEAE 및 신경독성을 제시한다. DLBCL 집단에서 명백한 용량-독성 관계는 관찰되지 않았다.
Figure pct00031
도 27은 CAR+ 세포의 투여 이후 다양한 시점에 CRS 및/또는 NT를 가지는 것으로 관찰된 대상체의 수 및 백분율을 도시한다. 이러한 평가에서, CRS 또는 NT 사례가 처음 발생하는 시간 중앙값은 각각 5일 (1-14일 범위) 또는 10 일 (3-23일 범위)로 관찰되었다. CAR+ 세포 투여 후 처음 72 시간 내에, 1명의 환자가 NT (1등급)를 가졌고, 오직 14% (91명 중 13명)이 CRS (7명 1등급; 6명 2등급)를 가졌다. CRS 또는 NT의 지속기간의 중앙값 (Q1,Q3)은 각각 5일 (4, 8) 또는 10.5일 (7, 19)이었다. NT는 17개의 사례 중 12 건 (71 %)에서 CRS가 선행되었다. 1명의 1 등급 진전 및 2명의 환자가 진행중인 NT로 진행성 질병으로 사망한 것을 제외하고 모은 평가가능한 NT 사례는 분석 시점에 소산되었다 (상기 실시예에 기재된 분석 시점 이후 평가된 추가의 대상체를 포함하여 보고된 사례의 안전성 데이터베이스에 기초 ).
전체 코호트 (n = 91)에서, CRS 또는 NT의 발병이 있는 선별된 대상체에 다음과 같이 토실리 주맙 및/또는 덱사메타손을 사용한 항-사이토카인 요법이 투여되었다: 토실리주맙 단독, 4% (n = 4); 덱사메타손 단독, 9% (n = 8); 토실리주맙 및 덱사메타손, 8% (n = 7). 덱사메타손 용량의 중앙값 수는 6 (범위, 2-99); 토실리주맙 용량의 중앙값 수는 1 (범위, 1-3)이었다.
표 27은 DL1 또는 DL2으로 단일 용량을 투여받은 코어 코어트 내 대상체의 독성 결과를 보여준다. CRS 또는 NT에서 사망이 발생하지 않았다. CRS가 시작되는 시간의 중앙값은 5 일 (범위, 2 -14)이고 NT는 11.5 일 (범위, 5 -23)이다. 코어 코호트에서, 독성을 개선하기 위해 13% (n = 9)는 토실리주맙을, 18% (n = 12)는 덱사메타손을 투여받았다. 대상체의 18% (12/67)는 뇌병증 (13 %), 6% (67/67)는 실어증, 3% (2/67)는 뇌병증을 포함하여, 뇌병증과 일치하는 신경독성 항목을 나타냈다. 표 27에서, 지시된 독성 결과를 나타내는 대상체의 수 또는 전체 대상체 (괄호)의 %는 모든 용량 수준에서 또는 구체적으로 DL1 또는 DL2가 투여된 대상체에서 보여진다. 대괄호 안에는 상한 및 하한 95% 신뢰 구간이 표시된다.
Figure pct00032
부적합 생성물을 투여받은 12 명 (DL1으로 10 명, DL2으로 2 명) 중 모두 28 일 동안 추적 관찰을 하였다. CRS는 대상체의 33% (4/12)에서 관찰되었고, NT는 어떠한 대상체에서도 관찰되지 않았다. 2 명의 대상체는 토실리주맙을, 3 명의 대상체는 덱사메타손을 투여받았다. 독성 비율은 적합한 생성물을 투여한 대상체의 더 큰 코호트에서 관찰된 것과 유사하였다. 부적합 생성물을 투여받는 대상체에서, CRS/NT를 가지는 대상체, 높은 종양 부담 또는 LDH 수준을 가지는 대상체에서 약동학 (PK) 팽창이 더욱 높았다.
C. 외래 환자 투여의 평가
여러 임상적 부위에서 외래 환자 환경 (연령 중앙값이 58.5세 및 ECOG가 0 또는 1)으로 되는 이러한 시점에 전체 8 명의 대상체에 대한 데이터를 평가하였고, 이러한 데이터는 상기 실시예의 목적을 위해 분석된 시점 이후 사용 가능한 3 명의 대상체의 데이터를 포함한다. 입원의 평균 기간은 입원 환자 환경 (SD 9.6, n = 86)에서 치료 된 대상체의 경우 15.6 일이고, 외래 환자 환경 (SD 11.9, n = 8)에서 치료된 대상체의 경우 9.3 일이었다. 외래 환자 환경에서 치료를 받은 대상체의 입원 기간이 40% 감소했다. 외래 환자 CAR+ T 세포 투여 후 입원 전 중앙값 일수는 5 일이었다 (범위: 4-22). 외래 환자 투여 후 중환자실 (ICU) 입원은 필요하지 않았다.
투여 후 28 일 초과의 후속 조치로 외래 환자 환경에서 치료된 8 명의 대상자 중 1 명은 용량-제한 독성 기간 동안 외래 환자 상태로 유지되었다. 7 명의 환자가 열병으로 입원하였고 (제4 연구일에 1 명, 제5 연구일 이후 5명), 6 명의 환자는 CRS (1 등급 4명, 2 등급 2명) 및 1 등급 NT를 가진 2 명이 입원하였다. 중증 CRS 또는 NT를 경험하는 환자는 없었다. 1 명의 환자는 CRS에 대해 덱사메타손이 없이 토실리주맙으로 치료되었고 (2 등급), CRS 또는 NT에 대해 덱사메타손으로 치료된 환자는 없었다. 1 명의 환자는 CAR+ T 세포 투여 후 3일에 입원하였다.
입원 환자 및 외래 환자 환경에서 치료된 91명이 대상체 가운데, 11명의 대상체 (12%)는 독성 관리를 위해 ICU 입원이 필요했고; 8명의 대상체 (9%)는 CRS 또는 NT 관리를 위해 ICU 입원이 필요했고; 2명의 대상체 (2%)는 급성 호흡기 사례의 관리를 위해 ICU 입원이 필요하였다 (1 명은 CAR+ T 세포 투여와 관련, 1명은 관련 없음). 6명의 대상체 (6%)는 삽관되었고 (상기 실시예에 기재된 분석 시점 이후 분석된 추가의 대상체를 포함하여 보고된 사례의 안전성 데이터 베이스에 기초; n=94); 7명의 대상체 (7%)는 혈관수축제를 투여받았고 (보고된 사례의 안전성 데이터베이스에 기초, TEAE 평가에서 CAR+ T 세포 투여 이후 처음 28일에 저혈압을 나타는 것으로 정의); 2명의 대상체 (2%)는 혈액 여과를 하였다 (보고된 사례의 안전성 데이터베이스에 기초). 결과는 ICU 수준의 치료와 관련 절차가 필요한 환자가 거의 없음을 보여주었다. 결과는 외래 환자 환경에서의 적절한 독성 관리, 적절한 교육 및 외래 환자 모니터링을 통해 외래 환자 투여의 가능성을 뒷받침하였다.
외래 환자 투여의 평가는 안전한 외래 환자 투여의 가능성을 뒷받침하였다. 대상체의 30%가 재입원하지 않았다.
D. 약동학적 평가
평가가능한 PK를 가지는 DLBCL 코호트 내 87명의 대상체에서, 대리 마커로서 사용된 절단된 수용체에 대해 특이적인 항체를 사용하는 유세포 분석, 및 키메라 항원 수용체 (CAR)를 인코딩하는 벡터에 존재하는 우드척 간염 바이러스 전사-후 조절 요소 (WPRE)에 대해 특이적인 프라이머를 사용하는 정량적 중합효소 연쇄 반응 (qPCR)에 의해, 투여 이전 시점 (치료-전 또는 림프구 고갈 화학요법-전 (LDC)) 및 치료-후 다양한 시점 (투여일이 제1일)에서 말초 혈액 및 골수 내 CAR+ T 세포 개수를 평가하였다. 0일 내지 28일의 지시된 CAR+ 세포 집단에 대해 마이크로리터 당 개수를 플로팅한 곡선 아래 면적 (AUC0-28) 및 CAR+ 세포의 최대 또는 피크 혈액 농도 (Cmax; CAR+ 세포/μL 혈액)를 평가하였다. CD19로 염색함으로써 유세포 분석법에 의해 말초 혈액에서 B 세포 무형성증을 평가하였다. 다중 사이토카인 분석을 사용하여 사이토카인을 측정하였다. 안전성 분석을 위해, 상이한 용량 수준을 투여받는 모든 대상체로부터의 데이터를 수집하였다. 반응 분석을 위해, 용량 수준에 따라 데이터를 계층화하였다. 다중도 조정없이 양측 검정으로 통계 분석을 수행하였다.
도 10A는 qPCR 또는 유세포 분석에 의해 평가된 바와 같이, 다양한 지시된 시점에서 혈액 마이크로 리터 당 CAR T 세포의 검출된 개수를 나타낸다. 도 10B는 11+3 일에 골수의 마이크로리터 당 CAR + 세포에 대한 혈액 마이크로리터 당 세포를 나타낸다. 도 10A에 도시된 바와 같이, 대상체로부터의 샘플에서 CAR-발현 세포의 수준은 유세포 분석-기반 분석 및 qPCR-기반 분석 모두에 의해 관찰되었다. 도 10B에 도시된 바와 같이, PK 결과를 평가한 모든 대상체는 (유세포 분석 및 qPCR에 대해, 각각, n= 86 및 85, 사용가능한 유세포 분석 결과를 가지지 않는 1명의 환자 및 사용가능한 qPCR 결과를 가지지 않는 2명의 환자 제외), 혈액 및 골수에서 CAR-발현 세포의 검출 가능한 개수를 나타냈다. 결과는 골수 및 혈액에서 CAR+ T 세포가 유사하게 수송(traffick)된 관찰과 일치하였다.
시간에 따른 CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포의 수준 (AUC0-28 및 Cmax으로 평가)을 용량 수준 1 (DL1)으로 투여받은 상이한 환자 하위그룹: DL1으로 CAR-발현 T 세포를 투여받은 신생 미만성 거대 B-세포 림프종 (DLBCL, NOS) 또는 여포 림프종 (tFL)으로부터 형질전환된 림프종 (코어; N=32), 변연부 림프종으로부터 형질전환된 DLBCL 또는 만성 림프구성 백혈병 (tMZL/tCLL; N=4), 또는 외투 세포 림프종 (MCL; N=5)에서 비교하였다. 도 11A 및 11B에 도시된 바와 같이, AUC0-28 및 Cmax는 상이한 질병 하위그룹의 대상체에서 다양하였고, CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포의 팽창은 비-코어 서브세트에서 낮은 경향을 나타냈다. 환자 수가 제한되어 있으므로 PMBCL (n = 2) 및 FL3B (n = 1)는 도시되지 않는다. DL2를 투여받는 대상체에서의 팽창은 DL1을 투여받는 대상체와 유사하였다.
E. 용량 수준에 따른 약동학적 평가
코어 코호트 (DLBCL, NOS 또는 높은 등급의 B-세포 림프종 (더블/트리플 히트)를 가지는 대상체)에서 CD3+, CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포에 대한 AUC0-28 및 Cmax를 또한 용량 수준 1 (DL1)으로 투여받은 대상체 및 용량 수준 2 (DL2)으로 투여받은 대상체에 대해 비교하였다. 도 12A 및 12B 그리고 표 28에 도시된 바와 같이, DL1를 투여받은 대상체와 비교하여 DL2를 투여받은 대상체에서 CD3+, CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포에 대해 보다 높은 중앙값 AUC0-28이 관찰되었다. 유사하게, DL2를 투여받은 대상체에서 보다 높은 팽창 경향이 전체 DLBCL 코호트에서 관찰되었다. 독성의 증가 없이 DL1을 투여받은 대상체와 비교하여 DL2를 투여받은 대상체에서 3 개월에 보다 높은 반응 지속성 (DOR)이 관찰되었다. CD4+ 및 D8+ CAR+ 세포에 대한 Cmax (Tmax)까지의 시간 중앙값은 DL1 및 DL2를 투여받은 대상체 사이에서 유사하였다.
DL2 대상체에서 독성을 증가시키지 않으면서 반응의 지속성이 증가된 것에 상응하여, DL2 대 DL1에서 증가된 CAR + T 세포 노출이 관찰되었다.
Figure pct00033
Figure pct00034
F. 지속성
CAR+ T 세포를 투여받은 평가가능한 DLBCL 대상체에서, 검출 가능한 CD3+, CD4+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포 수준 및 혈액에서 검출되는 CD19+ B-세포의 수준에 기초하여, 다양한 시점에 CAR-발현 세포의 지속성 및 CD19+ B 세포 무형성증 (CD19+ B 세포의 낮은 개수 또는 부재)를 평가하였다. 결과가 표 29에 제시된다. 진행 시 평가되는 대상체에서 (BOR에 관계없이 진행 시간; n = 37), CD4+ CAR+ 세포/μL의 중앙값 0.17 (범위, 0-65.5 세포/μL) 및 CD8+ CAR+ 세포/μL의 중앙값 0.15 (범위, 0-131.8 세포/μL)가 관찰되었다. 재발 시 평가되는 대상체에서 (CR 달성 후 진행 시점에) (n = 12), 0.17 세포/μL의 중앙값 (범위, 0-35.1 세포/μL) CD4+ CAR-발현 세포 및 0.20 세포/μL의 중앙값 (범위, 0-131.8 세포/μL)이었다. CD8+ CAR-발현 세포는 재발에서 관찰되었다 CAR-발현 세포의 장기간 지속성은 12 개월에 DLBCL을 가지는 평가가능한 대상체의 75 %에서 관찰되었다. B 세포 무형성증의 장기간 지속성은 또한 12 개월에 대상체의 75%에서, 그리고 재발 상태에 관계없이 대상체에서 관찰되었다. 결과는 항-CD19 CAR-발현 세포가 대부분의 대상체에서 장기간 지속성을 나타내고, 재발된 환자에서도 진행중인, 낮은-수준의 질병 제어의 가능성을 시사한다는 결론과 일치한다.
재발한 대상체 중, 91.7% (11/12)는 재발 시 혈액에서 CAR-발현 세포를 검출할 수 있었다. 이러한 결과는 일부 구현예에서 병용 요법 또는 다른 중재가 소진 될 수 있는 것과 같이 CAR-발현 세포를 증강 및/또는 증대시키는데 사용될 수 있다는 결론과 일치한다.
Figure pct00035
G. 약동학적 평가 및 독성
CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포의 AUC0-28 및 Cmax을 임의의 등급 (상기 평가에서, 임의의 1-4 등급; 5 등급 CRS 또는 NT은 관찰되지 않음 observed)의 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경독성 (NT)을 가지는 코어 코호트 내 대상체에 대해 대상체 임의의 등급 CRS 또는 NT을 나타내는 것으로 평가되지 않은 대상체와 또한 비교하였다. CRS 없음 (0 등급; n=43)에 대한 중앙값 CD4+ CAR+ AUC0-28 (Q1, Q3)은 59 (18, 210)이고, 임의의 CRS (1-4 등급; n=20)에 대한 중앙값은 267 (91, 1510) (p = 0.001)이고; CRS 없음 (0 등급; n=43)에 대한 중앙값 CD8+ CAR+ AUC0-28 (Q1, Q3)은 310 (36, 900)이고, 임의의 CRS (1-4 등급; n=20)에 대한 중앙값은 605 (174, 5619) (p = 0.021)이고; NT 없음 (0 등급; n=50)에 대한 중앙값 CD4+ CAR+ AUC0-28 (Q1, Q3)은 71 (23, 244)이고, 임의의 NT (1-4 등급; n=13)에 대한 중앙값은 1269 (184, 3057) (p = 0.003)이고; for NT 없음 (0 등급; n=50)에 대한 중앙값 CD8+ CAR+ AUC0-28 (Q1, Q3)은 304 (43, 799)이고, 임의의 NT (1-4 등급; n=13)에 대한 중앙값은 2463 (607, 7691) (p = 0.004)이었다. 상기 기재되며 도 13A-13D에 도시된 바와 같이, 시간이 지남에 따라 더욱 높은 CD4+ 및 CD8+ CAR-발현 세포 수준은 CRS 및 NT와 관련되었다.
H. 약동학적 평가 및 반응
CR, PR 또는 PD의 최상의 전체 반응 (BOR) 또는 CR, PR 또는 PD의 3-개월 (M3) 지속적 반응을 가지는 대상체에서 시간에 따라 피크 CD3+ CAR+ 세포/μL의 개수 (CD3+ Cmax)를 평가하였다. 도 14A 및 14B에 도시된 바와 같이, 더욱 큰 팽창을 가지는 대상체에서 더 나은 BOR에 대한 경향이 관찰되었고, 대상체마다 달랐다.
I. 혈액 분석물 및 환자 파라미터에 의한 약동학적 평가
인터루킨-7 (IL-7), IL-15, 대식세포 염증성 단백질 (MIP-1α)을 비롯한, 전-CAR+ T 세포 치료 (전-림프구 고갈 화학요법) 혈장 사이토카인 수준을 CAR+CD3+ 혈액 Cmax < 500 CAR+ T 세포/μL (N=7)를 나타낸 대상체와 비교하여 CAR+CD3+ 혈액 Cmax > 500 CAR+ T 세포/μL (N=55)를 나타낸 대상체에서 평가하였다. 도 15A에 도시된 바와 같이, 전-CAR+ T 세포 치료 사이토카인 혈장 수준의 증가는 CAR+CD3+ Cmax > 500 CAR+ T 세포/μL와 연관된 것으로 관찰되었다 (Wilcoxon P 값 <.05 (다중성 보정 없음); IL-7에 대한 p = 0.07 제외).
다양한 혈장 사이토카인 (IL-6, IL-10, IL-16, 인터페론 감마 (IFN-γ종양 괴사 인자 알파 (TNF-α), MIP-1α, MIP-1β단핵구 화학유인물질 단백질-1 (MCP-1), 및 C-X-C 모티프 케모카인 10 (CXCL10))의 피크 수준을 또한 CAR+ CD3+ 혈액 Cmax < 500 CAR+ T 세포/μL; N=9)을 나타낸 대상체와 비교하여, CAR+ CD3+ 혈액 Cmax > 500 CAR+ T 세포/μL (N=68)을 나타낸 대상체에서 비교하였다. 도 15B에 도시된 바와 같이, 보다 높은 피크 사이토카인 수준은 CAR+CD3+ Cmax > 500 CAR+ T 세포/μL과 연관된 것으로 관찰되었다 (Wilcoxon P 값 < 0.05; 다중성 보정 없음).
종양 부담의 지표로서 전-CAR+ T 세포 치료 (전-림프구 고갈 화학요법 (LDC)) 부피 종양 측정 직경의 곱의 합 (SPD)과 시간에 따른 CAR+ T 노출을 나타내는 CD3+ CAR+ T 세포의 AUC0-28의 사이의 관계를 평가하였다. 도 16에 도시된 바와 같이, 베이스라인 SPD 및 CD3+ AUC0-28 사이에 양의 상관관계가 관찰되었으며 Spearman 상관관계는 0.32이고, p = 0.019이었다.
J. 치료-전 환자 파라미터 및 반응 및 독성 결과
사이토카인 및 염증성 마커 예컨대 페리틴, C-반응성 단백질 (CRP), D-이합체 (피브린 분해 생성물), IL-6, IL-10, IL-15, IL-16 TNF-α, MIP-1α, 및 MIP-1β를 포함하는 전-CAR+ T 세포 치료 (전-LDC) 분석물 수준을 임의의 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경독성 (NT) 가지지 않는 (0 등급) 대상체와 임의의 등급 (1-4 등급)의 CRS 또는 NT를 가지는 대상체에 대해 비교하였다. 상기 코호트에서 CRS 1-4 등급의 대상체 가운데, 하나의 CRS 사례를 제외한 모든 CRS 사례는 1 또는 2 등급으로 결정되었다. 도 17A (CRS) 및 도 17B (NT)에 도시된 바와 같이, 보다 높은 피크 혈장 사이토카인 수준 및 염증성 마커 수준은, 일변량 분석에 기초하여 (모든 분석물에 대해 Wilcoxon P 값 < 0.05, 단, CRS에 대한 페리틴 (p = 0.14) 및 CRS에 대한 CRP (p = 0.09) 제외) CRS 및 NT와 연관된 것으로 관찰되었다. CRS의 경우, 다변량 분석에서 종양 부담을 조정한 후, MIP-1βIL-10 및 TNF는 p < 0.05이었고; NT의 경우, IL-15, IL-6, MIP-1α, 및 TNF는 p < 0.05이었다.
치료-전 (전-LDC) 환자 파라미터, 예컨대 락테이트 탈수소효소 (LDH)의 수준 및 종양 부담의 지표로서, 부피 종양 측정치 예컨대 직경의 곱의 합 (SPD)을 대상체 CRS 또는 NT를 발생시킨 것으로 관찰되는 대상체에 대해 CRS 또는 신경독성을 발생시킨 것으로 관찰되지 않는 대상체 사이에서 비교하였다. 도 18에 도시된 바와 같이, CRS 또는 NT를 가지는 대상체는 치료-전 환자 파라미터의 보다 높은 수준 예컨대 보다 높은 SPD (cm2) 및 LDH (U/L) 수준을 나타냈고; 이러한 수준은 일변량 통계 분석을 통해 CRS 또는 NT와 상관관계가 있는 것으로 관찰되었다. CRS 및 NT와 연관된 것으로 관찰되는 다른 환자 파라미터는 진단 이후 더욱 짧은 시간을 포함한다 (CRS 및 NT의 경우, 각각 p=0.05 및 p=0.09). CRS 또는 NT와 연관되지 않은 것으로 과날되는 환자 파라미터는 연령 (각각, p=0.19 및 p=0.54) 및 선행 요법 횟수 (각각, p=0.67 및 p=0.59), 질병의 0-2 단계 대 3-4 단계 (p=0.79, p=0.51), 및 환자 체중 (p=0.35 및 p=0.44, 각각)를 포함하였다.
도 19A는 개별 환자 사이에 치료-전 SPD 및 LDH 수준을 나타낸다 (점; 개별 점의 음영은 개별 환자가 임의의 등급 신경독성을 나타내었는지에 대한 여부 (왼쪽 패널) 또는 임의의 등급의 CRS를 나타내었는지에 대한 여부 (오른쪽 패널)를 나타냄). 도 19A에서, y 및 x 축 상의 점선은 각각 SPD ≥50 cm2 및 LDH ≥500 U/L를 나타낸다. 도 19A에 도시된 바와 같이, 대략 50 cm2 이상의 SPD, 및/또는 대략 500 U/L 이상의 LDH는 NT 및 CRS의 위험과 연관된 것으로 관찰되었다. SPD 및 LDH 수준 이상 또는 이하의 대상체에서 CRS 또는 NT 발생에 대한 계산된 승산비(odds ratio) 추정치는 도 19A에 점선으로 표시되어 있으며, 95% 신뢰 구간 (CI)으로 도 19B 및 19C에 도시되어 있다. 1 이상의 승산비는 CRS 또는 NT을 발생시킬 확률 또는 가능성이 증가된 것을 나타낸다. 도시된 바와 같이, 50 cm2 이상의 SPD, 및 500 U/L 이상의 LDH는 CRS 또는 NT의 발생 위험 증가와 연관된 것으로 관찰된다. 50 cm2 이상의 SPD, 및 500 U/L 이상의 LDH는 임의의 등급의 CRS 또는 NT의 발생 위험이 대략 8배 증가한 것과 연관된 것으로 관찰되었고, 50 cm2 이하의 SPD 및 500 U/L 이하의 LDH는 임의의 등급 CRS 및 NT의 위험 감소를 나타냈다. 결과는 CAR+ T 세포 팽창 및 CRS 및 신경독성의 증가된 비율과 함께 높은 종양 부담 및 염증성 바이오마커를 포함하는 베이스라인 환자 파라미터의 연관성과 일치하였다.
종양 부담 (SPD)과 연관된 마커, 염증성 사이토카인 및 다른 혈액 분석물을 포함하는 다양한 치료-전 (전-LDC) 환자 파라미터, 예를 들어 LDH, 페리틴, CRP, D-이합체, SAA-1, IL-6, IL-10, IL-15, IL-16, TNF-α, IFN-γMIP-1α 및 CXCL10를 지속적 3개월에서의 반응 여부와 관계 없이 대상체에서 일변량 통계 분석으로 비교하였다. 도 20에 도시된 바와 같이, 종양 부담의 특정 마커, 염증 마커 또는 염증성 사이토카인은 지속적 반응을 나타내는 대상체에서 더욱 낮은것으로 발견되었다 (SPD (p = 0.1274) 제외한 모든 파라미터에서 p 값 < 0.05). 단독으로 분석할 때 DL2를 투여받는 대상체에서 유사한 결과가 관찰되었다. 높은 종양 부담 및 염증성 바이오 마커를 포함하는 베이스라인 환자 파라미터와 지속적인 반응은 역의 연관성이 관찰되었다. 일부 양태에서, 이러한 역의 관계는 CAR+ T 세포의 보다 높은 팽창 및 소진으로 인한 것일 수 있다.
일변량 비모수적 테스트에 기초한 통계 분석을 사용하여, 환자 인자, 임상적 상관 관계 및 혈액 분석물과 CRS 및 NT의 발생 정도의 관계를 평가하였다. 표 30은 일변량 분석의 결과를 나열한다. 이러한 평가에서, 40 세 미만이고 사전의 HSCT는 CRS 또는 NT의 발생과 상관 관계가 없었다. 40 세 미만의 대상체는 노인 환자보다 통계적으로 상이한 더욱 높은 종양 부담률을 가지는 것으로 관찰되지 않았다. ECOG 점수가 2 인 대상체는 ECOG 점수가 0-1 인 대상체와 비교하여 통계적으로 상이한 더욱 높은 종양 부담률을 가지지 않는다. 사전의 HSCT 또는 더블/트리플 히트 또는 더블 발현체가 없는 대상체는 CRS 또는 NT와 연관되지 않았다.
Figure pct00036
K. 피크 혈액 분석물, 반응 및 독성
사이토카인 및 염증성 마커 예컨대 CRP, 혈청 아밀로이드 A1 (SAA-1), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-α, MIP-1α, MIP-1βMCP-1, CXCL10 및 C-C 모티프 케모카인 리간드 13 (CCL13)을 포함하는 혈액 분석물의 피크 치료-후 혈장 수준을 임의의 CRS 또는 NT를 가지는 것으로 관찰되지 않은 대상체와 1-4 등급 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 또는 신경독성 (NT)를 가지는 대상체에 대해 비교하였다. 도 21A (CRS; CRS 0 등급, n=51; CRS 1-4 등급, n=28) 및 도 21B (NT; NT 0 등급, n=63; NT 1-4 등급, n=16)에 도시된 바와 같이, 보다 높은 피크 혈장 사이토카인 수준 및 염증성 마커 수준은 CRS 및 NT와 연관된 것으로 관찰되었다 (CRS 없음 대 임의의 CRS 및 NT 없음 대 임의의 NT에 대해 Wilcoxon P 값 < 0.001, 단 IL-15 제외 (각각, P= 0.05 및 0.006)).
사이토카인 및 염증성 마커 예컨대 CRP, SAA-1, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-15, 림프독소-알파 (LT-α), TNF-α, IFN-γMIP-1α, MIP-1βMCP-1, CXCL10, 및 형질전환 성장 인자 베타 (TGF-β를 포함하는 혈액 분석물의 피크 혈장 수준을, 안정성 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD) (N=17)을 나타낸 대상체에서의 수준에 대해 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR) (N=57)의 최상의 전체 반응 (BOR)을 나타낸 대상체를 평가; 또는 3-개월에 CR/PR을 나타낸 대상체 (N=35)와 3-개월 SD 또는 PD (SD/PD)를 나타내는 대상체 (N=31)를 비교하였다. 도 22A (최상의 전체 반응 (BOR)) 및 도 22B (3개월 반응)에 도시된 바와 같이, 보다 낮은 피크 혈장 사이토카인 수준 및 염증성 마커 수준은 더욱 나은 BOR 및 3 개월 반응과 연관된 것으로 관찰되었다 (Wilcoxon P 값 < 0.05 다중성 보정 없음).
상기 연구에서, 항-CD19 CAR+ 세포 조성물의 투여는 위험이 낮은 질병 특징을 가지는 재발성/불응성 공격형 비-호지킨 림프종 (NHL)을 가지는 대상체에게 투여하였다. 지속적 반응을 포함하는 반응은, DL2에서 81% ORR, 63% CR을 포함하여, 3 개월에 CR인 환자의 80%가 모든 용량 수준에서 6 개월에 CR을 유지하고, 모든 용량 수준에서 치료된 대상체의 DOR 중앙값이 9.2 개월이며, CR의 지속기간 중앙값은 상기 실시예의 분석 시점에 도달하지 않은 것으로 관찰되었다. 결과는 또한 관리가능한 독성 수준 및 일부 구현예에서 외래 환자 투여와 일치할 수 있는 유리한 안전성 프로파일과 일치하였다. 낮은 비율의 중증 CRS (1%) 및 중증 신경독성 (12%)이 관찰되었으며, 처음 72 시간 동안 거의 발생하지 않았다. 결과는 외래 환자 투여의 가능성과 일치했다.
약동학적 평가는 CAR+ T 세포의 더욱 높은 팽창이 일반적으로 증가된 CRS 및 NT 비율과 연관이 있음을 보여주었다. DL2를 투여받은 대상체는 DL2를 투여받은 대상체에 비해 CAR T 노출이 더 높았으며, 이는 일반적으로 독성 발생률을 증가시키지 않으면서 반응의 지속성을 증가시키는 것에 해당한다. 일부 양태에서, 치료-전, 예컨대 전-LDC는 항상성 및 염증성 사이토카인 및 종양 부담을 포함하는 환자 인자가 매우 높은 팽창 및 독성과 관련되고 및/또는 이를 유발하는 것으로 관찰되었다. 투여되는 CAR+ T 세포는 모든 환자의 혈액 및 골수에서 확장되는 것으로 나타났으며, 대상체 사이 및 질병 유형 사이에 가변성이 있다. 투여되는 CAR+ T 세포는 또한 12 개월에 CAR T 세포가 검출 가능한 75% (9/12)의 평가가능한 환자와 함께 장기간 지속성을 나타냈다. CAR T 세포 및 B 세포 무형성증은 재발 시에도 여전히 존재하는 것으로 관찰되었으며 (각각, 11/12 및 12/12 환자), 이는 종양이 CAR T 세포 작용을 회피할 수 있고, 병용 전략은 재발 또는 확대를 방지하고, 소진된 CAR T 세포를 증강, 증대 또는 향상시키는데 효과적일 수 있음을 뒷받침한다. 일반적으로, 보다 높은 팽창으로 더욱 높은 반응 경향이 가변적으로 대상체 사이에서 관찰되며, 이는 다른 환자 인자 및/또는 질병 특성, 예를 들어, 종양 부담이, 반응을 결정하는데 기여할 수 있음을 뒷받침한다.
실시예 6: 피크 CAR T 세포 개수에 기초한 반응, 지속적 반응 및 독성의 확률
상기 실시예 2-5에 기재된 임상 연구로부터, 항-CD19 CAR-발현 세포를 투여한 이후, 코어 DLBCL 집단 내 평가가능한 대상체에서 반응, 지속적 반응 및 독성 확률을 CAR+ 발현 세포의 피크 개수에 기초하여 계산하였다. 대상체는 실시예 5의 시점에서 분석된 대상체를 포함하였다.
반응의 추정 확률 곡선 (전체 반응률, ORR; 완전한 반응 (CR) 및 부분적 반응 (PR)인 대상체 포함), 3-개월 반응 (M3 반응; 투여 후 3개월에 CR 및 PR 포함), 임의의 NT, 임의의 CRS, 3-4 등급 NT, 3-5 등급 NT 또는 2-5 등급 CRS는, CD3+, CD4+ 또는 CD8+ CAR-발현 세포의 최대 혈액 농도 (Cmax; 세포/μL 혈액)에 기초하였다. 확률 곡선의 경우, 방형 모델 피트가 사용된 CD3+의 경우 3 개월에 CR/PR과 CD8+의 경우 3 개월에 CR/PR을 제외하고, 선형 로지스틱 회귀 모델 피트를 사용하였다.
도 23A (CD3+), 도 23B (CD8+) 및 도 23C (CD4+)에 도시된 바와 같이, 보다 높은 CD3+, CD8+ 및 CD4+ 팽창은 CRS, NT 및 반응 (ORR)의 비율 증가와 상관관계가 있는 것으로 관찰되었다. 보다 높은 CD3+ 및 CD8+ 팽창은, 높은 Cmax에서 지속적 반응 (3 개월에 CR/PR)의 확률 감소를 야기하는 것으로 관찰되었다.
결과는 높은 종양 부담 및 높은 수준의 염증성 바이오마커를 포함한 특정 치료-전 환자 특성이 증가된 CRS 및 신경독성 및 증가된 CAR T 세포 팽창과 연관이 있다는 결론과 일치한다. 지속성이 낮은 반응은 매우 높은 수준의 CAR + 세포 개수 또는 팽창과 관련이 있으며, 특정 높은 정도의 CAR 팽창은 고도로 팽창하는 CAR + 세포의 고갈을 초래할 수 있다는 관찰과 일치한다.
본 명세서에 제공되는 일부 구현예에서, CAR+ T 세포 노출 또는 피크 CAR+ T 세포 수준의 치료적 범위 또는 윈도우는 독성 위험을 최소화 및/또는 반응 가능성 및/또는 반응 지속성을 최대화 또는 최적화하거나, 또는 이와 같이 설계된 투여되는 방법 또는 조성물 또는 투여량에 의해 표적화 및/또는 달성된다. 일부 구현예에서, 팽창 또는 노출이 특정 수준 아래인 대상체는 예컨대 CAR-T 기능을 증대시키기 위해 하나 이상의 추가의 개입이 투여될 수 있고; 일부 구현예에서, 노출 또는 팽창이 높은 수준을 나타내는 대상체 (예컨대 독성 위험 및/또는 반응 지속성의 감소와 연관된 대상체)는 예컨대 하나 이상의 관찰된 파라미터에 기초하여, 예컨대 CAR+ T 세포 팽창을 감소 또는 제한하고 및/또는 독성을 축소하거나, 또는 반응 지속성을 개선하기 위한 목적으로, 예컨대 조기 또는 예방적 조치로, 하나 이상의 개입이 투여될 수 있다.
상기 연구 시점에, 증가된 DL2 대상체에서 독성을 증가시키지 않으면서, 반응의 지속성 (DOR)이 증가된 것에 상응하여, DL2 대 DL1에서 증가된 CAR + T 세포 노출 및 보다 높은 팽창 중앙값이 관찰되었다. 결과는, 있는 범위에 걸쳐 CAR+ 세포 팽창의 증가는 지속적 반응과 상관관계가 있지만, 매우 높은 정도의 팽창은 보다 높은 독성 위험 및/또는 보다 낮은 반응 지속성과 연관이 있을 수 있다는 결론과 일치한다. 일부 구현예에서, 특정 환자-특이적 인자 예컨대 베이스라인 환자 인자, 예컨대 항상성 및 염증성 사이토카인 수준 및 종양 부담을 나타내는 파라미터는, 보다 높은 정도의 팽창 및 독성 위험 증가와 연관이 있을 수 있다.
실시예 7: 독성 증상 관리
상기 기재된 임상 연구에서, 도 27은 CAR+ 세포의 투여 이후 다양한 시점에 사이토카인 방출 증후군 (CRS) 및/또는 신경독성 (NT)를 가지는 것으로 관찰된 대상체의 수 및 백분율을 도시한다. 상기 실시예 2-6에 기재된 임상 연구에 기재된 시점에 수행된 평가에서, 전체 코호트 (n=91)에서, CRS 또는 NT 사례가 처음 발생하는 시간 중앙값은 각각 5일 (1-14일 범위) 또는 10 일 (3-23일 범위)로 관찰되었다. CAR+ 세포 투여 후 처음 72 시간 내에, 1명의 환자가 NT (1등급)를 가졌고, 오직 14% (91명 중 13명)이 CRS (7명 1등급; 6명 2등급)를 가졌다. CRS 또는 NT의 지속기간의 중앙값 (Q1,Q3)은 각각 5일 (4, 8) 또는 10.5일 (7, 19)이었다. NT는 17개의 사례 중 12 건 (71 %)에서 CRS가 선행되었다. 1명의 1 등급 진전 및 2명의 환자가 진행중인 NT로 진행성 질병으로 사망한 것을 제외하고 모은 평가가능한 NT 사례는 분석 시점에 소산되었다 (상기 실시예 2-6에 기재된 분석 시점 이후 평가된 추가의 대상체를 포함하여 보고된 사례의 안전성 데이터베이스에 기초). 전체 코호트 (n = 91)에서, CRS 또는 NT의 발병이 있는 특정 대상체에 다음과 같이 토실리 주맙 및/또는 덱사메타손을 사용한 항-사이토카인 요법이 투여되었다: 토실리주맙 단독, 4% (n = 4); 덱사메타손 단독, 9% (n = 8); 토실리주맙 및 덱사메타손, 8% (n = 7). 덱사메타손 용량의 중앙값 수는 6 (범위, 2-99); 토실리주맙 용량의 중앙값 수는 1 (범위, 1-3)이었다.
코어 코호트 (n=67)에서, CRS가 시작되는 시간의 중앙값은 5 일 (범위, 2 -14)이고 NT는 11.5 일 (범위, 5 -23)이다. 독성을 개선하기 위해 13% (n = 9)는 토실리주맙을, 18% (n = 12)는 덱사메타손을 투여받았다. 대상체의 18% (12/67)는 뇌병증 (13 %), 6% (67/67)는 실어증, 3% (2/67)는 뇌병증을 포함하여, 뇌병증과 일치하는 신경독성 항목을 나타냈다.
일부 경우에, CRS 또는 NT의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체를 하기 표 31에 기재된 독성 관리 알고리즘에 따라 치료하였다.
Figure pct00037
Figure pct00038
실시예 8: 항-CD19 CAR-발현 세포의 투여 이후 재발성 및 불응성 비-호지킨 림프종 (NHL)을 가지는 대상체에서 반응 민 안전성 결과의 추가적인 평가
상기 실시예 2-6에 기재된 임상 연구의 후속 시점에서, 반응 및 안전성 결과를 환자에서 평가하였다.
A. 대상체 및 치료
상기 실시예에 제시된 상기 시점에서의 분석은 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 전체 코호트의 전체 102 명의 대상체 (73명의 코어 코호트)의 평가에 기초한다. 전체 코호트는 2차 요법 이후 DLBCL (DLBCL, NOS; 신생 또는 여포 림프종으로부터 형질전환); 높은 등급의 B-세포 림프종 (더블/트리플 히트); CLL 또는 MZL으로부터 형질전환된 DLBCL; PMBCL; 및 FL3B, ECOG 0-2를 가지는 대상체를 포함하였고; 분석을 위한 코터 코호트는 DLBCL, NOS (신생 또는 여포 림프종 (tFL)으로부터 형질전환) 또는 높은 등급의 B-세포 림프종 (더블/트리플 히트) 및 미 동부 종양학 협동 그룹 기능 상태 (ECOG PS)가 0 또는 1인 대상체를 포함하였다. 전체 및 코어 코호트 내 치료된 환자의 대략 90%가 3-6 개월의 짧은 중앙값의 전체 생존 (OS)을 예측할 수 있는 적어도 1개의 위험이 낮은 질병 특징 ([Crump et al., Blood (2017) 130:1800-1808 and Van de Neste et al., Bone Marrow Transplant. (2016) 51(1):51-7)]), 예컨대 더블/트리플 히트 발현체, 원발 불응성 질병, 2차 이상의 요법에 대해 불응성, CR을 달성하지 않음, 자가 줄기 세포 이식 (ASCT)을 받지 않음 또는 ECOG PS가 2인 특징을 가졌다.
이 시점에서 총 134 명의 대상체의 백혈구를 채집했으며, 이 중 2 명은 사용할 수 없었다. 생성물은 DLBCL 코호트에서 채집된 대상체의 99% (132/134)가 사용할 수 있었다. 생성물을 기다리고 있는 또 다른 18 명의 대상체 중 5 명은 치료를 기다리고 있었으며 13 명은 진행성 질병이 발생하였거나, 사망했다. 항-CD19 CAR-발현 세포가 투여된 적이 있는 전체 114 명의 대상체 중, 12 명은 부적합한 항-CD19 CAR-발현 세포 (특정 사양을 반드시 충족하지 않지만 투여에는 안전한 것으로 간주되는 조성물)을 투여받았다. 대상체는 DL1 (n=45), 이중 용량의 DL1 (n=6) 또는 DL2 (n=51)을 투여받았다. 외투 세포 림프종 (MCL)을 가지는 7 명의 대상체에게 DL1으로 CAR+ 세포를 투여하였다. 이러한 시점에서, 8 명의 대상체는 외래 환자 환경에서 치료되었다.
시점에서 전체 및 코어 코호트의 인구 통계 및 베이스라인 특성이 표 32에 제시된다.
Figure pct00039
B. 치료 후 안전성 및 반응 결과
표 33은 전체 및 코어 코호트의 안전성 결과를 나타낸다. 나타난 바와 같이, CRS 또는 NT에서 사망이 관찰되지 않았다. 전체 코호으테서, CRS가 시작되는 시간의 중앙값은 5 일 (범위, 2 -12)이고 NT는 10 일 (범위, 5 -23일)이었다. 전체 코호트에서, 독성 개입으로서 17% (n = 17)은 토실리주맙을 투여받았고 21% (n = 21)는 코르티코스테로이드를 투여받았다. 코어 코호트에서, DL1과 비교하여 DL2에서 CRS 또는 NT의 증가는 발견되지 않았다. 전체 코호트에서, 19명 (19%) 대상체는 1등급 CRS를 가졌고, 18명 (18%) 대상체는 2등급 CRS를 가졌고, 0명 (0%) 대상체는 3등급 CRS를 가졌고, 1명 (1%) 대상체는 4 등급 CRS를 가졌다.
Figure pct00040
도 28은 상기 시점에 실험실 이상 반응 및 치료 후 발생한 유해 사례 (TEAE)를 경험한 전체 코호트 내 대상체 (n = 102)의 백분율을 도시한다 (적어도 28 일의 후속 조치로 DL1의 적합한 생성물로 치료된 6명의 MCL 대상체에 대한 데이터는 제외; TEAE 및 실험실 이상 반응이 대상체의 20% 이상에서 발생함을 나타냄).
표 34에 나타난 바와 같이, 재발성 또는 불응성 (R/R) DLBCL을 가지는 대상체에서 높은 반응률이 관찰되었다. 이러한 결과는 치료 결과 코어 코호트에서 치료 결과에 대한 용량 반응의 효과 일치한다. 임계값 초과의 (부피 종양 측정치에 의해 표시된 직경의 곱의 합 (SPD)이 50 cm2 초과) 종양 부담을 가지는 대상체는 DL1 및 DL2을 투여받은 대상체 (각 그룹 대상체의 대략 1/3) 사이에 유사하게 분포되었다.
Figure pct00041
코어 코호트 내 모든 용량 수준으로 치료된 모든 DLBCL 환자를 포함하는, 위험이 낮은 DLBCL 하위그룹 내 대상체의 다양한 하위그룹에서 6 개월 객관적 반응률 (ORR)이 도 29에 도시된다. 결과는 항-CD19 CAR+ T 세포 투여에 대해 위험이 낮은 DLBCL 하위 그룹에서 높은 지속성의 ORR을 나타냈다.
대상체의 전체 코호트 및 코어 코호트에 대한 반응 지속기간 (DOR, 중앙값의 후속 조치 8 개월) 및 전체 생존 (최상의 전체 반응 (비-반응자, CR/PR, CR 및/또는 PR)으로 그룹화, 중앙값의 후속 조치 12 개월)의 결과가 도 30A-30D에 도시된다. 결과는, 코어 코호트에서, 3 개월에 CR인 대상체의 88%가 6 개월에 CR을 유지하고, 6 개월에 CR 을 나타낸 대상체의 93%가 더 긴 기간 동안 반응을 유지하는 것을 나타냈다.
정확하고 일정한 용량의 CD4+ 및 CD8+ CAR+ T 세포를 함유하는 항-CD19 CAR+ 세포 조성물의 투여가 불량한 예후 및/또는 치료 경험이 많은R/R 공격형 NHL을 가지는 대상체에서 지속적 반응을 초래한다는 관찰과 일치하였다. 결과는 코어 코호트에서 바람직한 지속적 반응률로, 6 개월에 49% ORR 및 46% CR 비율을 나타내고, (모든 용량 수준에서) 6 개월에 CR인 93%의 대상체는 이러한 시점에 반응을 유지함을 나타냈다. 결과는 또한 낮은 비율의 중증 CRS (1%) 및 중증 신경독성 (13%)을 포함하여 관리가능한 독성 및 바람직한 안전성 프로파일과 일치하였고, 이는, 일부 양태에서, 외래 환자 투여를 뒷받침한다.
실시예 9: 신경독성 관리를 위한 고용량 스테로이드의 조기 개입
성인 ALL의 치료를 위해 항-CD19 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 자가 T 세포를 함유하는 T 세포 조성물을 전체 38명의 대상체에게 투여하였다. 치료 시작 시, 38명의 대상체 중, 32명은 골수에서 질병의 형태학적 증거를 나타냈으며 (적어도 5% 모세포) 6명은 PCR에 의해 분자적으로 검출 가능한 질병을 나타냈다. 투여되는 치료적 T 세포 조성물을 개별 대상체로부터의 백혈구성분채집술 샘플로부터 T 세포 (CD4+ 및 CD8+ 세포 포함)의 면역친화성-기반 선별에 이어, 항-CD19 CAR을 인코딩하는 바이러스 벡터로 활성화 및 형질도입, 팽창 및 동결보존을 포함하는 공정에 의해 생성하였다. CAR은 쥐과 항체로부터 유래된 항-CD19 scFv, 세포 외 영역, 막관통 도메인 및 공동자극 영역을 비롯한 CD28 영역, 및 CD3-제타 세포 내 신호전달 도메인을 포함하였다. 동결보존된 세포 조성물을 정맥 내 투여 전에 베드사이드에서 해동시켰다.
대략 1.0 x 106 CD3+CAR+ 세포/kg (대상체 체중)의 제1 표적 용량, 이어서 대략 14-28 일 후 대략 3.0 x 106 CD3+CAR+ 세포/kg (대상체 체중)의 제2 용량의 세포를 투여하였다.
자가 CAR-발현 세포를 투여하기 전, 대상체에 사이클로포스파미드 (약 1-3 g/m2) 단독의 단일 용량 또는 사이클로포스파미드 (30-60 mg/kg) 및 플루다라빈 (25 mg/m2- 30 mg/m2, 3일에 걸쳐 매일 투여)를 포함하는 사전조건화 림프구 고갈 화학요법을 투여하였다.
골수, 말초 혈액 및 뇌척수액 (CSF)의 검사를 포함하여 반응 및 다른 결과에 대해 대상체를 모니터링 하였다. 대상체를 또한 신경독성 (착란, 실어증, 뇌병증, 근간대증 발작, 경련, 혼수, 및/또는 정신 상태 변화의 증상을 포함하는 신경학적 합병증)에 대해 평가 및 모니터링하고, 미국 국립 암 연구소―일반 독성 기준 (CTCAE) 등급, 버전 4.03 (NCI-CTCAE v4.03)에 따라 1-5 등급으로 등급화하였다. 일반 독성 기준 (CTCAE) 규모, 버전 4.03 (NCI-CTCAE v4.03). 미국 보건 복지부 (Department of Health and Human Services)의 유해 사례에 대한 공통 용어 (CTCAE) 버전 4, 공개: 2009 년 5 월 28 일 (v4.03: June 14, 2010); Guido Cavaletti & Paola Marmiroli Nature Reviews Neurology 6, 657-666 (December 2010)를 참조한다. 사이토카인 방출 증후군 (CRS)도 또한 중증도에 따라 등급을 결정하고 모니터링하였다.
각각의 용량 (1일) 및 제1 용량의 투여 이후 다양한 시점 (제1 용량 이후 2, 4, 7, 및 14일) 및 제2 용량의 투여 이후 다양한 시점에 (제2 용량 이후 21 및 28일, 및 2, 3, 6 및 12개월)에 획득된 대상체로부터의 혈액에서 유래하는 샘플을 혈액 내 CD3+ CAR-발현 세포 존재 및 개수, 최대 (피크) 혈장 농도 (Cmax) 및 CD3+CAR+ 세포의 Cmax 가 달성되는 시점 (Tmax)을 포함하는 약동학적 파라미터에 대해, 유세포 분석으로 분석하였다.
세포 투여 이후 전체 34명의 대상체는 검출 가능한 CD3+ 혈액 내 CAR+ T 세포를 가졌으며, 34명 중 29명의 대상체 제1 투여 이후 CD3+ CAR+ T 세포의 최대 세포 팽창 (Cmax)을 나타냈다. 제2 투여 후 최대 팽창을 보이는 5명 중 4명은 2 등급 보다 낮은 신경독성을 나타냈다.
제2 용량 후 최대 팽창을 가지는 대상체 중 1명은 제2 용량 후 중증 신경독성 (지연된 3 등급 신경독성, 10 일 이상 동안 관찰된 증상의 지속 시간에 의해 결정)을 나타냈다. CAR+ T 세포의 투여 전에, 이러한 대상체는 형태학적 질병을 나타냈으며, 2가지 선행 요법을 투여받았다. 대상체는 고용량의 플루다라빈/사이클로포스파미드 림프구 고갈 화학요법 및 제1 용량의 1.1 x 106 CD3+ 세포/kg를 투여받았다. 대상체는 제1 용량의 투여 이후 제14일에 종양 부담 (30% 모세포)에 의해 나타난 바와 같이 CAR+ T 세포 투여의 제1 용량에 반응하지 않았고, 이 때 대상체는 신경독성 또는 중증 사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 증상을 나타내지 않았다. 이어서 대상체는 플루다라빈/고용량 사이클로포스파미드 림프구 고갈 요법 및 제2 용량의 3.3 x 106 세포/kg를 투여받았다.
제2 용량의 투여 이후 제7일에, 대상체는 CAR+ T 세포 수준에서 급격한 증가를 나타냈고 (도 31 참고), 제1 용량의 CAR+ T 세포의 투여 이후 지연된 3 등급 및 5 등급 신경독성을 가지는 대상체에서 발견된 수준과 유사한 수준으로 증가하였다. 대상체는 제2 용량의 투여 2 일 후 2등급 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 나타냈고, 39 ℃의 발열을 나타냈다. 관찰된 다른 독성은 3 등급 착란 (기간: 11 일), 3 등급 표현형 실어증 (기간: 6 일) 및 3 등급 뇌병증 (기간: 4 일)을 포함하였다. 상기 대상체에 대한 CD3+CAR+의 Cmax는 75.3 세포/μL으로 관찰되었고, Tmax는 제2 용량의 투여 이후 제29일이었다.
사이토카인 방출 증후군 (CRS) 및 신경독성 (NT)의 증상을 관리하기 위한 조기 개입으로서, 도 31에 도시된 바와 같이 제2 용량의 투여 이후 다양한 날짜에, 덱사메타손을 10 mg 내지 40 mg 범위의 용량으로 매일 투여하였다. 고용량 (1일 최대 40 mg) 덱사메타손의 투여 및 제14일까지 덱사메타손의 투여 유지는 CAR+ T 세포의 팽창 후속 약화와 연관이 있다 (도 31 참고) 덱사메타손은 14 일 후에 점차 감소시켜 중단되었고, 덱사메타손을 점차 감소시킨 후 CAR + T 세포 팽창의 증가가 관찰되었다. 대상체의 중증 신경독성이 완전히 해결되었고 뇌부종이 발생하지 않았다.
이러한 결과는 고용량 덱사메타손의 조기 개입으로 투여 CAR+ T 세포의 과도한 확장을 감소시킬 수 있고 치명적인 뇌부종과 같은 특정 독성을 예방할 수 있다는 관찰과 일치한다.
실시예 10: 사이토카인 방출 증후군 및 신경독성을 포함하는 독성 증상의 관리
상기 실시예 8에 기재된 임상 연구에서, 일부 경우에 사이토카인 방출 증후군 (CRS)의 관리는 일반적으로 하기 표 35에 기재된 바와 같이 처리하였다.
Figure pct00042
일부 경우에, CRS 및 신경독성 (NT)의 관리는 일반적으로 하기 표 36 (CRS) 및 표 37 (NT)에 기재된 예시적인 독성 관리 알고리즘에 기초하여 처리하였다.
Figure pct00043
Figure pct00044
Figure pct00045
Figure pct00046
본 발명은 예를 들어 본 발명의 다양한 양태를 예시하기 위해 제공되는 특정 개시된 구현예로 범위가 제한되도록 의도된 것이 아니다. 기재된 조성물 및 방법에 대한 다양한 변형은 본 명세서의 설명 및 교시로부터 명백해질 것이다. 이러한 변형은 본 개시의 진정한 범위 및 사상을 벗어나지 않고 실시될 수 있으며 본 개시의 범위 내에 속하도록 의도된 것이다.
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
Figure pct00050
Figure pct00051
SEQUENCE LISTING <110> JUNO THERAPEUTICS, INC. LI, He ALBERTSON, Tina HEIPEL, Mark D. SUTHERLAND, Claire L. <120> METHODS FOR DOSING AND FOR MODULATION OF GENETICALLY ENGINEERED CELLS <130> 735042015240 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> 62/593,878 <151> 2017-12-01 <150> 62/596,773 <151> 2017-12-08 <150> 62/633,599 <151> 2018-02-21 <150> 62/679,763 <151> 2018-06-01 <150> 62/679,764 <151> 2018-06-01 <160> 58 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) <400> 1 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 2 <211> 36 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <223> Spacer (IgG4hinge) <400> 2 gaatctaagt acggaccgcc ctgcccccct tgccct 36 <210> 3 <211> 119 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> Hinge-CH3 spacer <400> 3 Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Gly Gln Pro Arg 1 5 10 15 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys 20 25 30 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 35 40 45 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro 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Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 130 135 140 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 145 150 155 160 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 165 170 175 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu 180 185 190 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 195 200 205 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Gly Lys 225 <210> 5 <211> 282 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> IgD-hinge-Fc <400> 5 Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala 1 5 10 15 Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala 20 25 30 Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys 35 40 45 Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro 50 55 60 Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala Val Gln 65 70 75 80 Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val Val Gly 85 90 95 Ser Asp Leu Lys Asp Ala 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Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala 1 5 10 <210> 45 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 <400> 45 Ser Ala Thr Tyr Arg Asn Ser 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 46 Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 47 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 <400> 47 Ser Tyr Trp Met Asn 1 5 <210> 48 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 <400> 48 Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 49 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 49 Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 50 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH <400> 50 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile 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Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser 1 5 10 15 <210> 53 <211> 245 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> scFv <400> 53 Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Gln Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Gln Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Ala Arg Lys Thr Ile Ser Ser Val Val Asp Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly 115 120 125 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser 130 135 140 Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly Asp Arg Val Ser Val Thr Cys 145 150 155 160 Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 165 170 175 Pro Gly Gln Ser Pro Lys Pro Leu Ile Tyr Ser Ala Thr Tyr Arg Asn 180 185 190 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 195 200 205 Thr Leu Thr Ile Thr Asn Val Gln Ser Lys Asp Leu Ala Asp Tyr Phe 210 215 220 Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr Thr Ser Gly Gly Gly Thr Lys 225 230 235 240 Leu Glu Ile Lys Arg 245 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 <400> 54 His Tyr Tyr Tyr Gly Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 <400> 55 His Thr Ser Arg Leu His Ser 1 5 <210> 56 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 <400> 56 Gln Gln Gly Asn Thr Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 57 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IGH primer <400> 57 acacggcctc gtgtattact gt 22 <210> 58 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IGH primer <400> 58 acctgaggag acggtgacc 19

Claims (173)

  1. 독성을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법은 하나 이상의 물리적 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 감소 및/또는 개선시킬 수 있는 하나 이상의 시제(agent)를 투여하는 것을 포함하며, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고,
    여기서 하나 이상의 시제는 다음을 포함하는 치료 처방(treatment regimen)으로 투여되는 것인 방법:
    (a) 다음의 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계:
    (i) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이상에, 대상체가 발열을 나타내며, 독성, 선택적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내고, 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우; 또는
    (ii) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열을 나타내고 및/또는 2등급 이상의 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우;
    (b) (a)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계로서, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여되는 단계;
    (c) (b)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계로서, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여되는 단계; 및
    (d) (c)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후, 대상체가 발열 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계로서, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a), (b) 또는 (c)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a), (b) 또는 (c)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여되는 단계.
  2. 청구항 1에 있어서, 하나 이상의 시제는 인터루킨-6 수용체 (IL-6R) 또는 하나 이상의 스테로이드에, 선택적으로 하나 이상의 스테로이드의 하나 이상의 용량에 결합할 수 있는 시제로부터 선택되는 것인 단계.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 단계 (a)에서, 치료 처방은 다음을 포함하는 것인 방법:
    (1) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 1등급 CRS와 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) 인터루킨-6 수용체 (IL-6R)에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 선택적으로 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 24 시간마다 1회 이하로 투여)하는 단계;
    (2) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 2등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 약 12 내지 24 시간 마다 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여); 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이상에, 대상체가 2등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 약 12 내지 24 시간 마다 투여), 및 선택적으로 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여)하는 단계;
    (3) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 3등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 적어두 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 12 시간 마다 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 12 시간 마다 투여)하는 단계; 및
    (4) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후, 4등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 적어도 1일 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여)하는 단계.
  4. 청구항 1-3 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (b)에서, 치료 처방은 IL-6R에 결합할 수 있는 시제의 추가 용량 및 스테로이드의 하나 이상의 추가 용량을 투여하는 것을 포함하고, 상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여되는 것인 방법.
  5. 청구항 1-4 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (c)에서, 치료 처방은 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이한 추가의 스테로이드를 투여하는 단계 및/또는 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이한 IL-6R 또는 IL-6에 결합할 수 있는 시제를 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  6. 청구항 1-5 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (d)에서, 치료 처방은 항-T 세포 요법, 선택적으로 사이클로포스파미드를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  7. 청구항 1-6 중 어느 한 항에 있어서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제는 하나 이상의 용량으로 투여되는 것인 방법.
  8. 독성을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법은 하나 이상의 물리적 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 감소 및/또는 개선시킬 수 있는 하나 이상의 시제를 투여하는 것을 포함하며, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고,
    여기서 하나 이상의 시제는 다음을 포함하는 치료 처방으로 투여되는 것인 방법:
    (a) 다음의 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계:
    (i) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이상에, 대상체가 독성, 선택적으로 신경독성 (NT)과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우; 또는
    (ii) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우;
    (b) (a)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계로서, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여되는 단계; 및
    (c) (b)에서 하나 이상의 시제를 투여한 후 24, 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상의 개선을 나타내지 않는 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우, 하나 이상의 시제를 투여하는 단계로서, 하나 이상의 시제는 선택적으로 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이하고 및/또는 (a) 또는 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 동일한 또는 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여되는 단계.
  9. 청구항 8에 있어서, 하나 이상의 시제는 하나 이상의 스테로이드, 선택적으로 하나 이상의 스테로이드의 하나 이상의 용량인 것인 방법.
  10. 청구항 8 또는 청구항 9에 있어서, 단계 (a)(i)에서, 치료 처방은 다음을 포함하는 것인 방법:
    (1) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 2등급 NT와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 선택적으로 스테로이드의 하나 이상의 용량이 투여되고, 상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여되는 단계;
    (2) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후, 3 등급 NT와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여하고, 상기 스테로이드는 약 8 내지 12 시간 마다 투여되고, 여기서 대상체가 실어증 또는 착란을 나타내는 경우, 보다 저용량 및/또는 저빈도의 스테로이드가 투여되고, 대상체가 우울한 의식 수준을 야기하는 사례를 나타내는 경우 보다 고용량 및/또는 고빈도의 스테로이드가 투여되는 단계; 및
    (3) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 4 등급 NT와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여, 상기 스테로이드는 약 6 내지 8 시간 마다 투여되고, 여기서 대상체가 호흡기 지원을 필요로 하는 사례 또는 발작을 나타내는 경우, 보다 고용량 및/또는 고빈도의 스테로이드가 투여되는 단계.
  11. 청구항 8-10 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (a)(ii)에서, 치료 처방은 다음을 포함하는 것인 방법:
    (1) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 1등급 NT와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 선택적으로 스테로이드의 하나 이상의 용량이 투여되고, 상기 스테로이드는 약 8 내지 12 시간 마다 투여되는 단계;
    (2) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 2등급 NT와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 스테로이드의 하나 이상의 용량이 투여되고, 상기 스테로이드는 약 8 내지 12 시간 마다 투여되는 단계;
    (3) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 3등급 NT와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 스테로이드의 하나 이상의 용량이 투여되고, 상기 스테로이드는 약 6 내지 8 시간 마다 투여되는 단계;
    (4) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 4 등급 NT와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여하고, 상기 스테로이드는 약 적어도 1일 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여되는 단계.
  12. 청구항 8-11 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (b)에서, 치료 처방은 (a)(i) 또는 (a)(ii)에서 투여된 스테로이드 용량과 비교하여 보다 높은 용량 및/또는 빈도의 스테로이드를 투여하고, 선택적으로 대상체가 호흡기 지원을 필요로 하는 사례 또는 발작을 나타내는 경우 (a)(i) 또는 (a)(ii)에 투여된 하나 이상의 시제와 상이한 추가의 스테로이드를 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  13. 청구항 8-12 중 어느 한 항에 있어서, 단계 (c)에서, 치료 처방은 (a) 또는 (b)에서 투여된 스테로이드 용량과 비교하여 보다 높은 용량 및/또는 빈도의 스테로이드를 투여하고, 선택적으로 (a) 및 (b)에 투여된 하나 이상의 시제와 상이한 추가의 스테로이드를 (b)에서 투여된 추가의 스테로이드의 보다 높은 용량 및/또는 빈도로 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  14. 청구항 8-13 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 뇌부종을 나타내는 경우, (a) 및 (b)에서 투여된 하나 이상의 시제와 상이한 추가의 스테로이드의 하나 이상의 용량을, 선택적으로 24 시간 마다, 투여하는 것인 방법.
  15. 독성을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법은 하나 이상의 물리적 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 감소 및/또는 개선시킬 수 있는 하나 이상의 시제를 투여하는 것을 포함하며, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고,
    여기서 하나 이상의 시제는 다음을 포함하는 치료 처방으로 투여되는 것인 방법:
    (a) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 1등급 CRS와 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) 인터루킨-6 수용체 (IL-6R)에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 선택적으로 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 24 시간마다 1회 이하로 투여)하는 단계;
    (b) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 48 또는 72 시간 이내에, 대상체가 2등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 약 12 내지 24 시간 마다 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여); 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이상에, 대상체가 2등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 약 12 내지 24 시간 마다 투여), 및 선택적으로 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 24 시간 마다 1회 이하로 투여)하는 단계;
    (c) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 3등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 적어두 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 12 시간 마다 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 12 시간 마다 투여)하는 단계; 및
    (d) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후, 4등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 적어도 1일 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여)하는 단계.
  16. 독성을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법은 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성을 치료하기 위한 치료 처방을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 치료 처방은 다음을 포함하는 것인 방법:
    (a) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72, 96 또는 120 시간 이내에, 발열 및/또는 독성, 선택적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상, 및/또는 1등급 CRS과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) 인터루킨-6 수용체 (IL-6R)에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여)하는 단계;
    (b) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 2등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여)하는 단계;
    (c) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 3등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 12 시간 마다 투여)하는 단계; 및
    (d) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 4등급 CRS와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, (i) IL-6R에 결합할 수 있는 시제 (상기 시제는 24 시간마다 1회 이하로 투여), 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여)하는 단계.
  17. 청구항 15 또는 청구항 16에 있어서, 최대 2회 용량의 시제가 투여되는 것인 방법.
  18. 독성을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법은 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성을 치료하기 위한 치료 처방을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고,
    여기서 치료 처방은, 유전자 조작의 용량을 투여받은 이후 72, 96 또는 120 시간 이내에, 대상체가 발열 및/또는 독성, 선택적으로 사이토카인 방출 증후군 (CRS)과 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상, 및/또는 1등급 CRS과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 다음을 투여하는 것인 방법:
    (i) 인터루킨-6 수용체 (IL-6R)에 결합할 수 있는 시제 및 (ii) 스테로이드의 하나 이상의 용량.
  19. 독성을 개선시키는 방법으로서, 상기 방법은 독성의 징후 또는 증상을 나타내는 대상체에게, 독성을 치료하기 위한 치료 처방을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 대상체는 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함한 유전자 조작된 세포의 용량이 투여되었고, 치료 처방은 다음을 포함하는 것인 방법:
    (a) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 2등급 신경독성 (NT)과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 대상체가 1등급 NT와 연관된 물리적 징후 또는 증상을 나타내거나, 또는 대상체가 1등급 NT와 연관된 임의의 물리적 징후 또는 증상을 나타낼 때까지, 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여하며 (상기 스테로이드는 약 12 내지 24 시간 마다 투여), 선택적으로 하나 이상의 감소된 용량의 스테로이드를 추가로 투여하는 단계;
    (b) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 3 등급 NT와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 대상체가 1등급 NT와 연관된 물리적 징후 또는 증상을 나타내거나, 또는 대상체가 신경독성과 연관된 임의의 물리적 징후 또는 증상을 나타내지 않을 때까지, 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여하며 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 12 시간 마다 투여), 하나 이상의 감소된 용량의 스테로이드를 추가로 투여하는 단계; 및
    (c) 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 4 등급 NT와 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 대상체가 1등급 NT와 연관된 물리적 징후 또는 증상을 나타내거나, 또는 대상체가 신경독성과 연관된 임의의 물리적 징후 또는 증상을 나타내지 않을 때까지, 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여하며 (상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여), 하나 이상의 감소된 용량의 스테로이드를 추가로 투여하는 단계.
  20. 청구항 16-19 중 어느 한 항에 있어서, 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후 72 시간 이내에, 대상체가 독성과 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우 및/또는 독성과 연관된 하나 이상의 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우 및/또는 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상의 급속한 진행을 나타내는 경우, 스테로이드의 하나 이상의 용량을 투여하며, 상기 스테로이드는 적어도 하루에 2회, 선택적으로 적어도 약 6 시간 마다 투여되는 것인 방법.
  21. 청구항 2-8, 16-18 및 20에 있어서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제의 용량과 스테로이드 또는 추가의 스테로이드의 용량이 동시에 투여되거나, 또는 스테로이드 또는 추가의 스테로이드의 의 용량이 IL-6R에 결합할 수 있는 시제의 용량의 약 1, 2, 3 또는 4 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
  22. 청구항 2-8, 16-18, 20 및 21 중 어느 한 항에 있어서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제는 4, 5, 6, 7, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 시간 이상 마다, 1회 이하로 투여되는 것인 방법.
  23. 청구항 1-22 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 시제의 최대 2회 용량이 투여되는 것인 방법.
  24. 청구항 2-8 및 10-23 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 (약) 3, 6, 9, 12, 15, 18, 21, 24, 36 또는 48 시간, 또는 전술한 값 중 임의의 두 값에 의해 정의되는 범위 마다 투여되는 것인 방법.
  25. 청구항 2-8 및 10-24 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 코르티코스테로이드이거나, 이를 포함하며, 선택적으로 글루코코르티코이드인 것인 방법.
  26. 청구항 2-8 및 10-25 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 코르티손, 덱사메타손, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론 및 프레드니손 중에서 선택되는 것인 방법.
  27. 청구항 26에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 덱사메타손, 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론이거나, 이를 포함하는 것인 방법.
  28. 청구항 2-8 및 10-27 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
  29. 청구항 2-8 및 10-28 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 25.0 mg, 또는 (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 등가 복용량으로 투여하기 위한 것인 방법.
  30. 청구항 2-8 내지 10-28 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 (약) 0.5 mg/kg 내지 (약) 5 mg/kg, 또는 (약) 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg 또는 5 mg/kg 메틸프레드니솔론 또는 이의 등가물의 등가 복용량으로 투여되는 것인 방법.
  31. 청구항 2-8 및 10-30 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드의 다중 용량이 투여되며, 선택적으로 스테로이드 또는 추가의 스테로이드의 적어도 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 이상 용량으로 투여되는 것인 방법.
  32. 청구항 2-8 및 10-31 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
  33. 청구항 2-8 및 10-32 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 2, 3, 4, 5 일 이상 투여되는 것인 방법.
  34. 청구항 2-8 및 10-33 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
  35. 청구항 2-8 내지 10-34 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 1일 또는 24 시간 당, (약) 10 mg 내지 (약) 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 1일 또는 24 시간 당 (약) 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 등가 복용량으로 투여되는 것인 방법.
  36. 청구항 31-35에 있어서, 다중 용량은 하루에 걸쳐 또는 24 시간에 걸쳐, 1, 2, 3, 4 또는 5 회로 나뉘어, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드의 초기 용량이 (약) 1 내지 (약) 3 mg/kg, 예컨대 (약) 2 mg/kg 메틸프레드니솔론 또는 이의 등가물이고, 이어서 후속 용량이 (약) 1 내지 (약) 5 mg/kg, 또는 (약) 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg 또는 5 mg/kg 메틸프레드니솔론 또는 이의 등가물인 것을 포함하는 것인 방법.
  37. 청구항 2-8 및 10-36 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 정맥 내 또는 경구 투여를 위해 제형화되는 것인 방법.
  38. 청구항 2-8,16-18 및 20-47에 있어서, IL-6R에 결합할 수 있는 시제는 재조합 항-IL-6 수용체 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이거나, 토실리주맙 또는 사릴루맙 또는 이의 항원-결합 단편으로부터 선택된 시제이거나, 이를 포함하는 것인 방법.
  39. 청구항 38에 있어서, 재조합 항-IL-6R 항체는 토실리주맙 또는 이의 항원-결합 단편이거나, 또는 이를 포함하는 것인 방법.
  40. 청구항 38 또는 청구항 39에 있어서, 항-IL-6R 항체는 (약) 1 mg/kg 내지 (약) 20 mg/kg, (약) 2 mg/kg 내지 (약) 19 mg/kg, (약) 4 mg/kg 내지 (약) 16 mg/kg, (약) 6 mg/kg 내지 (약) 14 mg/kg 또는 8 mg/kg 내지 (약) 12 mg/kg의 복용량으로 투여되기 위한 것이거나, 또는 항-IL-6R 항체는 (적어도 약) 1 mg/kg, 2 mg/kg, 4 mg/kg, 6 mg/kg, 8 mg/kg, 10 mg/kg, 12 mg/kg, 14 mg/kg, 16 mg/kg, 18 mg/kg, 20 mg/kg의 복용량으로 투여되는 것인 방법.
  41. 청구항 38-40 중 어느 한 항에 있어서, 항-IL-6R 항체는 단일 용량 투여를 위해 (약) 30 mg 내지 (약) 5000 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 500 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 50 mg 내지 (약) 100 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 500 mg, (약) 100 mg 내지 (약) 200 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 1000 mg, (약) 200 mg 내지 (약) 500 mg, 또는 (약) 500 mg 내지 (약) 1000 mg의 양으로 제형화되는 것인 방법.
  42. 청구항 38-41 중 어느 한 항에 있어서, 항-IL-6R 항체는 정맥 내 투여를 위해 제형화되는 것인 방법.
  43. 청구항 1-42 중 어느 하나에 있어서, 상기 방법은 대상체가 유전자 조작된 세포의 용량의 투여 72 시간 이내에 독성, 선택적으로 CRS와 연관된 하나 이상의 제1 물리적 징후 또는 증상을 나타내는 경우, 독성, 선택적으로 CRS과 연관된 물리적 징후 또는 증상이 개선되지 않는 경우, 독성과 연관된 물리적 징후 또는 증상이 중증 또는 공격형인 경우 및/또는 독성의 등급, 선택적으로 CRS이 더욱 심해지는 경우, 스테로이드의 추가 용량을, 선택적으로 높은 용량으로 및/또는 추가의 스테로이드의 용량을, 선택적으로 높은 용량으로 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
  44. 청구항 43에 있어서, 고용량의 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 (약) 1 내지 (약) 4 mg/kg 초기 용량, 이어서 하루에 2, 3, 4, 5 또는 6 회로 나누어, (약) 1 내지 (약) 4 mg mg/kg/일 또는 이의 등가량의 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
  45. 청구항 43 중 어느 한 항에 있어서, 고용량의 스테로이드 또는 추가의 스테로이드는 (약) 10 mg, 20 mg, 25 mg, 30 mg, 35 mg, 40 mg, 45 mg, 50 mg, 55 mg, 60 mg, 65 mg, 70 mg, 75 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물, 또는 전술한 값 중 임의의 값에 의해 정의되는 범위의 복용량의 덱사메타손인 것인 방법.
  46. 청구항 1-45 중 어느 한 항에 있어서, 치료 처방을 투여하기 이전에, 상기 방법은 대상체에게 질병 또는 병태를 치료하기 위한 재조합 수용체를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  47. 청구항 1-46 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 수용체는 키메라 수용체 및/또는 재조합 항원 수용체이거나, 이를 포함하는 것인 방법.
  48. 청구항 1-47 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 수용체는 질병, 장애 또는 병태의 세포 또는 조직과 관련된, 이에 특이적인, 및/또는 이에 발현되는 표적 항원에 결합할 수 있는 것인 방법.
  49. 청구항 48에 있어서, 질병, 장애 또는 병태는 감염성 질병 또는 장애, 자가면역 질병, 염증성 질병, 또는 종양 또는 암인 것인 방법.
  50. 청구항 48 또는 청구항 49에 있어서, 표적 항원은 종양 항원인 것인 방법.
  51. 청구항 48-50 중 어느 한 항에 있어서, 표적 항원은 다음으로부터 선택되는 것인 방법: αvβ인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2으로도 알려짐), 암배아 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; 또한 Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100 (gp100), G 단백질 연결 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이합체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Ra), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접합 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 풍부 반복 서열 8 패밀리 구성원 A 함유 (LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐과 거대세포바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 살해 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접합 분자 (NCAM), 종양 태아 항원, 종양에서 우선적으로 발현되는 흑색종 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백 (TPBG 또한 5T4로도 알려짐), 종양-관련 당단백 72 (TAG72), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이 항원 또는 보편적인 표지(tag)와 관련된 항원, 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자.
  52. 청구항 48-51 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 수용체는 기능적 비-TCR 항원 수용체 또는 TCR 또는 이의 항원-결합 단편이거나, 또는 이를 포함하는 것인 방법.
  53. 청구항 48-52 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 수용체는 키메라 항원 수용체 (CAR)인 것인 방법.
  54. 청구항 48-53 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 수용체는 항원-결합 도메인을 포함하는 세포 외 도메인을 포함하는 것인 방법.
  55. 청구항 54에 있어서, 항원-결합 도메인은 항체 또는 이의 항체 단편이거나, 또는 이를 포함하며, 선택적으로 단일 사슬 단편인 것인 방법.
  56. 청구항 55에 있어서, 단편은 유연한 링커에 의해 연결된 항체 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  57. 청구항 55 또는 56에 있어서, 단편은 scFv를 포함하는 것인 방법.
  58. 청구항 48-57 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 수용체는 세포 내 신호전달 영역을 포함하는 것인 방법.
  59. 청구항 58에 있어서, 세포 내 신호전달 영역은 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
  60. 청구항 59에 있어서, 세포 내 신호전달 영역은 1차 신호전달 도메인, T 세포에서 1차 활성화 신호를 유도할 수 있는 신호전달 도메인, T 세포 수용체 (TCR) 요소의 신호전달 도메인 및/또는 면역수용체 타이로신-계 활성화 모티프 (ITAM)를 포함하는 신호전달 도메인이거나, 또는 이를 포함하는 것인 방법.
  61. 청구항 60에 있어서, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3 사슬, 선택적으로 CD3-제타 (CD3ζ) 사슬의 세포 내 신호전달 도메인, 또는 이의 신호전달 부분이거나, 또는 이를 포함하는 것인 방법.
  62. 청구항 58-61 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 수용체는 세포 외 도메인과 세포 내 신호전달 영역 사이에 배치된 막관통 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
  63. 청구항 46-62 중 어느 한 항에 있어서, 세포 내 신호전달 영역은 공동자극 신호전달 도메인을 추가로 포함하는 것인 방법.
  64. 청구항 63에 있어서, 공동자극 신호전달 도메인은 T 세포 공동자극 분자의 세포 내 신호전달 도메인 또는 이의 신호전달 부분을 포함하는 것인 방법.
  65. 청구항 63 또는 청구항 64에 있어서, 공동자극 신호전달 도메인은 CD28, 4-1BB 또는 ICOS의 세포 내 신호전달 도메인 또는 이의 신호전달 부분을 포함하는 것인 방법.
  66. 청구항 63-65 중 어느 한 항에 있어서, 공동자극 신호전달 도메인은 막관통 도메인과 세포 내 신호전달 도메인 사이에 있는 것인 방법.
  67. 청구항 1-66 중 어느 한 항에 있어서, 세포는 T 세포인 것인 방법.
  68. 청구항 67에 있어서, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+인 것인 방법.
  69. 청구항 1-68 중 어느 한 항에 있어서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포인 것인 방법.
  70. 청구항 1-69 중 어느 한 항에 있어서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 자가조직인 것인 방법.
  71. 청구항 1-69 중 어느 한 항에 있어서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 동종이계인 것인 방법.
  72. 다음의 단계를 포함하는, 치료 방법:
    (a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 질병 또는 병태를 치료하기 위해 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 단계;
    (b) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 세포가 치료적 범위 내에 있는지 평가하기 위해 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계, 및
    (c) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절할 수 있는, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계,
    여기서 치료적 범위는:
    (i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
    (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
  73. 다음의 단계를 포함하는, 치료 방법:
    (a) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 평가하기 위해, 대상체의 혈액에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 존재를 모니터링하는 단계로서, 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및
    (c) 유전자 조작된 세포가 치료적 범위 내에 있지 않은 경우, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 조절할 수 있는, 선택적으로 증가 또는 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계,
    여기서 치료적 범위는:
    (i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
    (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위.
  74. 청구항 72-73 중 어느 한 항에 있어서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최저 개수 미만인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 증가시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여되는 것인 방법.
  75. 청구항 74에 있어서, 시제는 CAR-특이적 팽창을 증가시킬 수 있는 것인 방법.
  76. 청구항 74 또는 청구항 75에 있어서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ항체 또는 항-TGFβ항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
  77. 청구항 72-73 중 어느 한 항에 있어서, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포의 피크 개수가 치료적 범위 내 피크 CAR+ T 세포의 최고 개수 초과인 경우, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제가 대상체에게 투여되는 것인 방법.
  78. 다음의 단계를 포함하는, 치료 방법:
    (a) 질병 또는 병태를 가지는 대상체에게, 질병 또는 병태를 치료하기 위해 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 단계;
    (b) 유전자 조작된 세포의 용량을 투여한 후, 대상체의 혈액 내 CAR+ T 세포를 모니터링하는 단계, 및
    (c) 다음의 경우에, 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계:
    (i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 양이, (약) 마이크로리터 당 500 개의 세포 초과인 경우; 또는
    (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 양이, (약) 마이크로리터 당 200 개의 세포 초과인 경우.
  79. 다음의 단계를 포함하는, 치료 방법:
    (a) 대상체의 혈액에서, 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 존재를 모니터링하는 단계로서, 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및
    (b) 대상체에서, CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 단계로서, 다음의 경우에 투여하는 단계: (i) 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 양이, 유전자 조작된 세포의 투여 이후, (약) 마이크로리터 당 500 개의 세포 초과인 경우; 또는 (ii) 혈액 내 CD8+CAR+ T 세포의 양이, 유전자 조작된 세포의 투여 이후, (약) 마이크로리터 당 200 개의 세포 초과인 경우.
  80. 청구항 78-79 중 어느 한 항에 있어서, 시제는 하나 이상의 스테로이드인 것인 방법.
  81. 청구항 80에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
  82. 청구항 80-81 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
  83. 청구항 80-82 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
  84. 청구항 80-83 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
  85. 청구항 80-84 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양, 또는 1일 또는 24 시간 당 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
  86. 청구항 72-85 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에, 혈액 내 CAR+ T 세포에 대해 모니터링되는 것인 방법.
  87. 청구항 72-86 중 어느 한 항에 있어서, 시제는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일 초과인 시점에; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 (약) 22 일, 12 내지 18 일 또는 14 내지 16 일의 시점에 투여되는 것인 방법.
  88. 다음의 단계를 포함하는, 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법:
    (a) 대상체로부터의 샘플 내 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도가 임계 수준 이상인 대상체를 선별하는 단계로서, 여기서 샘플은 유전자 조작 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하지 않고 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 투여를 받기 이전에 대상체로부터 수득되는 것인 단계; 및
    (b) 선별된 대상체에게 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 투여하는 단계.
  89. 조작된 세포의 활성을 조절하는 방법으로서, 상기 방법은 대상체에서 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제를 대상체에게 투여하는 것을 포함하고, 여기서 대상체는 대상체로부터의 샘플 내 종양 부담의 부피 측정치 또는 염증성 마커의 수준, 양 또는 농도는 임계 수준 이상인 대상체인 것인 방법.
  90. 청구항 89에 있어서, 샘플은 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포를 포함하지 않고, 및/또는 CAR를 발현하는 유전자 조작된 T 세포의 투여를 받기 전에 대상체로부터 수득되는 것인 방법.
  91. 청구항 88-90 중 어느 한 항에 있어서, 시제는 CAR를 발현하는 T 세포를 비롯한 유전자 조작된 세포의 용량의 투여를 개시하기 전에 또는 이와 동시에 투여되는 것인 방법.
  92. 청구항 91에 있어서, 상기 방법은 CAR를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여하는 것을 추가로 포함하는 것인 방법.
  93. 청구항 88-92 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 질병 또는 병태를 가지며, 유전자 조작된 세포는 이러한 질병 또는 병태를 치료하기 위한 것인 방법.
  94. 청구항 88-93 중 어느 한 항에 있어서, 시제를 투여하기 이전에, 선별된 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 이후 독성이 발생할 위험에 있는 것인 방법.
  95. 청구항 88-94 중 어느 한 항에 있어서, 시제의 투여는 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선별된 대부분의 대상체에서, 또는 상기 방법에 의해 치료된 선별된 대상체의 75%, 이상에서 치료적 범위 내에 피크 CAR+ T 세포를 달성하기에 충분한 것인 방법.
  96. 청구항 95에 있어서, 치료적 범위는,
    (i) 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 범위에 기초하여, 추정 반응 확률이 (약) 65% 초과이고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위; 또는
    (ii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD3+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포인 범위; 또는
    (iii) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 피크 CD8+CAR+ T 세포가 (약) 마이크로리터 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 범위인 것인 방법.
  97. 청구항 95에 있어서, 치료적 범위는,
    (i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 CD3+CAR+ T 세포의 개수 또는 수준에 기초하여, (약) 마이크로리터 당 10 세포 내지 마이크로리터 당 500 개의 세포; 또는
    (i) 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 혈액 내 CD8+CAR+ T 세포의 개수 또는 수준에 기초하여, (약) 마이크로리터 당 2 세포 내지 마이크로리터 당 200 개의 세포인 것인 방법.
  98. 청구항 88-97 중 어느 한 항에 있어서, 종양 부담의 부피 측정치가 측정되며, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD), 가장 긴 종양 직경 (LD), 가장 긴 종양 직경의 합 (SLD), 종양 부피, 괴사 부피, 괴사-종양 비율 (NTR), 종양주변 부종 (PTE), 및 부종-종양 비율 (ETR)인 것인 방법.
  99. 청구항 88-98 중 어느 한 항에 있어서, 부피 측정치는 직경의 곱의 합 (SPD)인 것인 방법.
  100. 청구항 88-99 중 어느 한 항에 있어서, 부피 측정치는 대상체의 컴뷰터 단층촬영 (CT), 양전자 방출 단층촬영 (PET), 및/또는 자기 공명 영상 (MRI)을 사용하여 측정되는 것인 방법.
  101. 청구항 88-96 중 어느 한 항에 있어서, 대상체로부터의 샘플 내 염증성 마커가 측정되고, 이러한 염증성 마커는 C-반응성 단백질 (CRP), 적혈구 침강 속도 (ESR), 알부민, 페리틴, β2마이크로글로불린 (β2-M), 락테이트 탈수소효소 (LDH), 사이토카인 또는 케모카인인 것인 방법.
  102. 청구항 88-96 및 101 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 마커는 LDH인 것인 방법.
  103. 청구항 88-96 및 101 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 마커는 IL-7, IL15, MIP-1알파 또는 TNF-알파인 사이토카인 또는 케모카인인 것인 방법.
  104. 청구항 88-96, 101 및 103 중 어느 한 항에 있어서, 사이토카인 또는 케모카인은 대식세포 또는 단핵구 활성과 연관이 있는 것인 방법.
  105. 청구항 88-96 및 101-104 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 혈액 샘플, 혈장 샘플, 또는 혈청 샘플이거나, 이를 포함하는 것인 방법.
  106. 청구항 88-105 중 어느 한 항에 있어서, 임계값은:
    i) 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내로 초과하는 값 및/또는 복수의 대조군 대상체에서 부피 측정치 또는 염증성 마커의 평균값을 초과하는 표준 편차 이내의 값;
    ii) 복수의 대조군 대상체 중 적어도 하나의 대상체에서 측정된, 이러한 가장 높은 배수 변화 초과의, 선택적으로 50% 이내, 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10%이내, 또는 5% 이내의, 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값을 초과하는 값; 및/또는
    iii) 복수의 대조군 대상체로부터 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95%, 또는 98% 초과의 대상체에서 측정된 부피 측정치 또는 염증성 마커의 최고값을 초과하는 값인 것인 방법.
  107. 청구항 106에 있어서, 복수의 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 용량을 투여받기 이전의 대상체 그룹이며, 여기서:
    이러한 그룹 중 대조군 대상체 각각은 치료적 범위 내에서 가장 높은 피크 CAR+ T 세포를 초과하는 혈액 내 피크 CAR+ T 세포를 나타냈고;
    그룹 중 대조군 대상체 각각은 동일한 질병 또는 병태를 치료하기 위한 조작된 세포의 용량을 투여받은 이후, 독성, 선택적으로 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS), 2등급 또는 3등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 CRS를 나타내었으며;
    그룹 중 대조군 대상체 각각은, 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 부분적 반응 (PR)을 나타내지 않았고; 및/또는
    그룹 중 대조군 대상체 각각은, 선택적으로 유전자 조작된 세포의 용량 투여 이후 (약) 3개월 이상 또는 (약) 6개월 이상 동안, 지속적 반응을 나타내지 않았던 것인 방법.
  108. 청구항 88-107 중 어느 한 항에 있어서, 부피 측정치는 SPD이고, 임계값은 (약) 30 cm2, (약) 40 cm2, (약) 50 cm2, (약) 60 cm2, 또는 (약) 70 cm2인 것인 방법.
  109. 청구항 88-108 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 마커는 LDH이고, 임계값은 (약) 리터 당 300 유닛, (약) 리터 당 400 유닛, (약) 리터 당 500 유닛 또는 (약) 리터 당 600 유닛인 것인 방법.
  110. 청구항 88-109 중 어느 한 항에 있어서, 시제는 스테로이드인 것인 방법.
  111. 청구항 110에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
  112. 청구항 110-111 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 약 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 약 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 약 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 약 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
  113. 청구항 110-112 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
  114. 청구항 110-113 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
  115. 청구항 110-114 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양, 또는 1일 또는 24 시간 당, 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
  116. 청구항 88-115 중 어느 한 항에 있어서, 부피 측정치 또는 염증성 마커는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이전 1 일, 2 일, 3 일, 4 일, 6 일, 8 일, 12 일, 16 일, 20 일, 24 일, 28 일 초과 이내에 대상체에서 측정되는 것인 방법.
  117. 청구항 72-116 중 어느 한 항에 있어서, 유전자 조작된 세포의 용량은 적어도 (약) 1 x 105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 105 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 106 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 5 x 107 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 1 x 108 개의 CAR-발현 세포, 적어도 (약) 2.5 x 108 개의 CAR-발현 세포, 또는 적어도 (약) 5 x 108 개의 CAR-발현 세포 또는 (약) 1 x 105 내지 (약) 5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 106 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 106 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 1 x 107 내지 (약) 2.5 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포, (약) 5 x 107 내지 (약) 1 x 108 개의 전체 CAR-발현 T 세포를 포함하는 것인 방법.
  118. 청구항 72-117 중 어느 한 항에 있어서, 치료되는 복수의 대상체 중, 상기 방법은 시제를 투여하는 것을 포함하지 않는 방법과 비교하여, 선택적으로 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한, 지속적 반응, 선택적으로 완전한 반응 (CR) 또는 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)을 달성하는 대상체의 백분율 증가를 달성하는 것인 방법.
  119. 청구항 118에 있어서, 증가는 (약) 1.2 배, 1.5 배, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 10 배 또는 그 이상의 초과인 것인 방법.
  120. 청구항 72-119 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 35%, 적어도 40% 또는 적어도 50%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한 완전한 반응 (CR)을 달성하고; 및/또는
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 적어도 25%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60% 또는 적어도 70%는 3개월 이상 또는 6개월 이상 지속 가능한 객관적 반응 (OR)을 달성하는 것인 방법.
  121. 청구항 72-120 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 50% 초과, (약) 60% 초과, (약) 70% 초과, 또는 (약) 80% 초과는 3등급 이상의 사이토카인 방출 증후군 (CRS)을 나타내지 않고 및/또는 2등급 이상의 또는 3등급 이상의 신경독성을 나타내지 않거나; 또는
    상기 방법에 따라 치료된 대상체의 (약) 40% 초과, (약) 50% 초과 또는 (약) 55% 초과는 임의의 신경독성 또는 CRS를 나타내지 않는 것인 방법.
  122. 청구항 72-121 중 어느 하나에 있어서, 양 또는 피크 CAR+ T 세포는 대상체의 혈액 내 마이크로리터 당 CAR+ T 세포의 개수로서 결정되는 것인 방법.
  123. 청구항 72-122 중 어느 한 항에 있어서, 치료적 범위는 추정된 독성 확률이 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만 또는 5% 미만이고, 추정된 반응 확률이 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상을 초과하는 범위인 것인 방법.
  124. 청구항 72-123 중 어느 한 항에 있어서, 독성 확률은 다음으로부터 선택된 독성에 기초하는 것인 방법:
    임의의 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS);
    중증 독성 또는 3등급 이상의 독성;
    중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는
    중증 신경독성, 2등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성.
  125. 청구항 72-124 중 어느 한 항에 있어서, 독성 확률은 중증 독성 또는 3등급 이상의 독성 확률에 기초하는 것인 방법.
  126. 청구항 124 또는 청구항 125에 있어서, 중증 독성은 3-5 등급 신경독성인 것인 방법.
  127. 청구항 72-126 중 어느 한 항에 있어서, 반응 가능성은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 반응에 기초하며, 선택적으로 이러한 반응은 지속 가능하며, 선택적으로 적어도 3 개월 또는 적어도 6 개월 동안 지속 가능한 것인 방법.
  128. 청구항 72-127 중 어느 한 항에 있어서, 이러한 반응은 대상체의 골수에서 악성 면역글로불린 중쇄 유전자좌 (IGH) 및/또는 인덱스 클론의 존재의 평가에 기초하여 결정된 골수 반응인 것인 방법.
  129. 청구항 128에 있어서, 악성 IGH 및/또는 인덱스 클론은 유세포 분석 또는 IgH 시퀀싱에 의해 평가되는 것인 방법.
  130. 다음의 단계를 포함하는, 지속적 반응의 가능성 평가 방법:
    (a) 대상체로부터의 생물학적 샘플에서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준 및/또는 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 피크 수준을 검출하는 단계로서, 이러한 대상체는 질병 또는 병태를 치료하기 위해 유전자 조작된 세포의 용량을 이전에 투여받은 적이 있는 단계; 및
    (b) 임계값에 대해 피크 수준을 개별적으로 비교하여, 대상체가 유전자 조작된 세포의 투여에 대한 지속적인 반응을 달성할 가능성을 결정하는 단계.
  131. 청구항 130에 있어서,
    대상체는 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 미만인 경우 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 임계값 초과인 경우 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없고; 또는
    유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값과 상한 임계값 사이의 치료적 범위 내에 있는 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 있고, 유전자 조작된 세포의 피크 수준이 하한 임계값 미만이거나 또는 상한 임계값 초과인 경우, 대상체는 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것인 방법.
  132. 청구항 130 또는 청구항 131에 있어서, 대상체가 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 판단되는 경우, 치료제로, 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료로 치료하기 위한 대상체를 선별하는 단계를 추가로 포함하는 것인 방법.
  133. 청구항 130-132 중 어느 한 항에 있어서, 대상체가 지속적 반응을 달성할 가능성이 없는 것으로 판단되는 경우, 치료제 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료를 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.
  134. 다음을 포함하는, 치료 방법:
    (a) 키메라 항원 수용체 (CAR)를 발현하는 T 세포를 포함하는 유전자 조작된 세포의 투여를 받은 적이 있는 대상체를 선별하는 단계로서, 여기서
    대상체로부터의 샘플에서 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준은 임계값 초과이고; 및/또는
    대상체로부터의 샘플 내 키메라 항원 수용체 (CAR)를 포함하는 T 세포의 피크 수준은 하한 임계값 미만 또는 상한 임계값 초과인 단계.
    (b) 치료제 또는 유전자 조작된 세포 이외의 대안의 치료학적 치료를 대상체에게 투여하는 단계.
  135. 청구항 130-133 중 어느 한 항에 있어서, 반응은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 것인 방법.
  136. 청구항 130-133 및 135 중 어느 한 항에 있어서, 반응은 3개월, 4 개월, 5 개월, 또는 6 개월 이상 동안 지속 가능한 것인 방법.
  137. 청구항 130-136 중 어느 한 항에 있어서, 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 적어도 8 일, 9 일, 10 일, 11 일, 12 일, 13 일, 14 일, 15 일, 16 일, 17 일, 18 일, 19 일, 20 일 또는 21 일의 시점에; 또는 유전자 조작된 세포의 투여 개시 이후 (약) 11 내지 (약) 22 일, (약) 12 내지 (약) 18 일 또는 (약) 14 내지 (약) 16 일의 시점에, 피크 수준이 평가되고 및/또는 샘플이 대상체로부터 획득되는 것인 방법.
  138. 청구항 130-137 중 어느 한 항에 있어서, 피크 수준은 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이며, 이러한 염증성 마커는 C 반응성 단백질 (CRP), IL-2, IL-6, IL-10, IL-15, TNF-알파, MIP-1알파, MIP-1베타, MCP-1, CXCL10 및 CCL13으로부터 선택되는 것인 방법.
  139. 청구항 131-138 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 염증성 마커의 피크 수준이 평가되며, 임계값은 25% 이내, 20% 이내, 15% 이내, 10% 또는 5% 이내이고, 및/또는 유전자 조작된 세포를 투여받은 대조군 대상체의 그룹 중에서 결정된 염증성 마커의 피크 수준의 중앙값 또는 평균값의 표준 편차 이내이고, 여기서 그룹 중 대상체 각각은 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 선택적으로 3개월 이상 또는 6 개월 동안 지속적인, 지속적 반응, 선택적으로 CR 및/또는 PR을 달성하지 않는 것인 방법.
  140. 청구항 139에 있어서, 대조군 대상체는 유전자 조작된 세포의 투여 이후, 선택적으로 유전자 조작된 세포의 투여 3개월 이상 또는 6 개월 이후 안정한 질병 (SD) 또는 진행성 질병 (PD)을 나타내었던 것인 방법.
  141. 청구항 130-137 중 어느 하나있어서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준은 피크 CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+ T 세포 서브세트인 것인 방법.
  142. 청구항 131-137 및 141 중 어느 한 항에 있어서, 하한 임계값 및 상한 임계값은, 각각, 이전에 유전자 조작된 세포로 치료받은 하나 이상의 대상체 중 혈액 내 피크 CD3+ CAR+ T 세포, 또는 이의 CD8+CAR+ T 세포 서브세트의 치료적 범위인, 추정 반응 확률이 (약) 65%를 초과하고 추정 독성 확률이 (약) 30% 미만인 것과 연관된 범위의 상한 및 하한인 것인 방법.
  143. 청구항 131-137, 141 및 142 중 어느 한 항에 있어서, 치료적 범위는 추정된 독성 확률이 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만 또는 5% 미만이고, 추정된 반응 확률이 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 이상을 초과하는 범위인 것인 방법.
  144. 청구항 142 또는 청구항 143에 있어서, 독성 확률은 다음으로부터 선택된 독성에 기초하는 것인 방법:
    임의의 신경독성 또는 사이토카인 방출 증후군 (CRS);
    중증 독성 또는 3등급 이상의 독성;
    중증 CRS 또는 3등급 이상의 CRS; 또는
    중증 신경독성, 2등급 이상의 신경독성 또는 3등급 이상의 신경독성.
  145. 청구항 142-144 중 어느 한 항에 있어서, 반응 가능성은 완전한 반응 (CR), 객관적 반응 (OR) 또는 부분적 반응 (PR)인 반응에 기초하며, 선택적으로 이러한 반응은 지속 가능하며, 선택적으로 적어도 3 개월 또는 적어도 6 개월 동안 지속 가능한 것인 방법.
  146. 청구항 130-137, 및 141-145 중 어느 한 항에 있어서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준은 대상체의 혈액 내 마이크로리터 당 CAR+ T 세포 개수로서 결정되는 것인 방법.
  147. 청구항 131-137 및 141-146 중 어느 한 항에 있어서,
    상한 임계값은 마이크로리터 당 (약) 300 개의 세포 내지 마이크로리터 당 (약) 1000 개의 세포 또는 마이크로리터 당 (약) 400 개의 세포 내지 마이크로리터 당 (약) 600 개의 세포, 마이크로리터 당이거나, 또는 마이크로리터 당 약 300 개의 세포, 마이크로리터 당 400 개의 세포, 마이크로리터 당 500 개의 세포, 마이크로리터 당 600 개의 세포, 마이크로리터 당 700 개의 세포, 마이크로리터 당 800 개의 세포, 마이크로리터 당 900 개의 세포 또는 마이크로리터 당 1000 개의 세포이고; 또는
    하한 임계값은 (약) 마이크로리터 당 10 세포, 마이크로리터 당 9 개의 세포, 마이크로리터 당 8 개의 세포, 마이크로리터 당 7 개의 세포, 마이크로리터 당 6 개의 세포, 마이크로리터 당 5 개의 세포, 마이크로리터 당 4 개의 세포, 마이크로리터 당 3 개의 세포, 마이크로리터 당 2 세포 또는 마이크로리터 당 1 개의 세포 미만인 것인 방법.
  148. 청구항 130-147 중 어느 한 항에 있어서, 샘플은 혈액 샘플 또는 혈장 샘플인 것인 방법.
  149. 청구항 130-148 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 생체 외에서 수행되는 것인 방법.
  150. 청구항 132-149 중 어느 한 항에 있어서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준은 상한 임계값 초과이고, 치료제는 CAR+ T 세포 팽창 또는 증식을 감소시킬 수 있는 시제인 것인 방법.
  151. 청구항 150에 있어서, 시제는 스테로이드인 것인 방법.
  152. 청구항 151에 있어서, 스테로이드는 덱사메타손 또는 메틸프레드니솔론인 것인 방법.
  153. 청구항 151-152 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 25.0 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
  154. 청구항 151-153 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 일 이상의 기간에 걸쳐, 또는 상기 중 임의의 기간에 의해 정의된 범위 내에, 다중 용량으로 투여되는 것인 방법.
  155. 청구항 151-154 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 1일 1회, 1일 2회, 또는 1일 3회 이상 투여되는 것인 방법.
  156. 청구항 151-155 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드는 1일 또는 24 시간 당 (약) 1.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 1.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 2.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 20 mg, (약) 5.0 mg 내지 (약) 10 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 80 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 60 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 40 mg, (약) 10 mg 내지 (약) 20 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양, 또는 1일 또는 24 시간 당, 약 10 mg, 20 mg, 40 mg 또는 80 mg 덱사메타손 또는 이의 등가물의 양으로 투여되는 것인 방법.
  157. 청구항 132-149 중 어느 한 항에 있어서, 유전자 조작된 세포의 피크 수준은 하한 임계값 미만이고, 치료제는 CAR+ T 세포의 팽창 또는 증식, 선택적으로 CAR-특이적 팽창을 증가시킬 수 있는 시제인 것인 방법.
  158. 청구항 157에 있어서, 시제는 CAR에 특이적인 항-이디오타입 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 면역 체크포인트 억제제, 대사 경로의 조절제, 아데노신 수용체 길항제, 키나제 억제제, 항-TGFβ항체 또는 항-TGFβ항체 또는 사이토카인인 것인 방법.
  159. 청구항 72-158 중 어느 한 항에 있어서, 질병 또는 병태는 암인 것인 방법.
  160. 청구항 159에 있어서, 암은 B 세포 악성 종양인 것인 방법.
  161. 청구항 160에 있어서, 암은 육종, 암종, 림프종, 비-호지킨 림프종 (NHL), 미만성 거대 B 세포 림프종 (DLBCL), 백혈병, CLL, ALL, AML 및 골수종으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  162. 청구항 161에 있어서, 암은 췌장암, 방광암, 대장암, 유방암, 전립선암, 신장암, 간세포 암, 폐암, 난소암, 자궁 경부암, 췌장암, 직장암, 갑상선암, 자궁암, 위암, 식도암, 두경부암, 흑색종, 신경 내분비암, CNS 암, 뇌종양, 골암 또는 연조직 육종인 것인 방법.
  163. 청구항 72-162 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 인간인 것인 방법.
  164. 청구항 72-163 중 어느 한 항에 있어서, CAR은 질병 또는 병태와 연관된 및/또는 질병 또는 병태와 연관된 세포에서 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 것인 방법.
  165. 청구항 164에 있어서, 항원은 다음으로부터 선택되는 것인 방법: αvβ인테그린 (avb6 인테그린), B 세포 성숙화 항원 (BCMA), B7-H3, B7-H6, 탄산 무수화효소 9 (CA9, 또한 CAIX 또는 G250으로도 알려짐), 암-고환 항원, 암/고환 항원 1B (CTAG, 또한 NY-ESO-1 및 LAGE-2으로도 알려짐), 암배아 항원 (CEA), 사이클린, 사이클린 A2, C-C 모티프 케모카인 리간드 1 (CCL-1), CD19, CD20, CD22, CD23, CD24, CD30, CD33, CD38, CD44, CD44v6, CD44v7/8, CD123, CD138, CD171, 표피 성장 인자 단백질 (EGFR), III형 표피 성장 인자 수용체 돌연변이 (EGFR vIII), 상피 당단백 2 (EPG-2), 상피 당단백 40 (EPG-40), 에프린 B2, 에프린 수용체 A2 (EPHa2), 에스트로겐 수용체, Fc 수용체 유사 5 (FCRL5; 또한 Fc 수용체 상동체 5 또는 FCRH5로도 알려짐), 태아 아세틸콜린 수용체 (태아 AchR), 엽산 결합 단백질 (FBP), 엽산 수용체 알파, 강글리오사이드 GD2, O-아세틸화 GD2 (OGD2), 강글리오사이드 GD3, 당단백 100 (gp100), G 단백질 연결 수용체 5D (GPRC5D), Her2/neu (수용체 티로신 키나아제 erb-B2), Her3 (erb-B3), Her4 (erb-B4), erbB 이합체, 인간 고분자량-흑색종-관련 항원 (HMW-MAA), B형 간염 표면 항원, 인간 백혈구 항원 A1 (HLA-A1), 인간 백혈구 항원 A2 (HLA-A2), IL-22 수용체 알파(IL-22Ra), IL-13 수용체 알파 2 (IL-13Ra2), 키나아제 삽입 도메인 수용체 (kdr), 카파 경쇄, L1 세포 접합 분자 (L1-CAM), L1-CAM의 CE7 에피토프, 류신 풍부 반복 서열 8 패밀리 구성원 A 함유 (LRRC8A), 루이스 Y, 흑색종-관련 항원 (MAGE)-A1, MAGE-A3, MAGE-A6, 메소텔린, c-Met, 쥐과 거대세포바이러스 (CMV), 뮤신 1 (MUC1), MUC16, 자연 살해 그룹 2 구성원 D (NKG2D) 리간드, 멜란 A (MART-1), 신경 세포 접합 분자 (NCAM), 종양 태아 항원, 종양에서 우선적으로 발현되는 흑색종 항원 (PRAME), 프로게스테론 수용체, 전립선 특이 항원, 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA), 전립선 특이적 막 항원 (PSMA), 수용체 티로신 키나아제 유사 오펀 수용체 1 (ROR1), 서바이빈, 영양막 당단백 (TPBG 또한 5T4로도 알려짐), 종양-관련 당단백 72 (TAG72), 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR), 혈관 내피 성장 인자 수용체 2 (VEGFR2), Wilms 종양 1 (WT-1), 병원체-특이 항원 또는 보편적인 표지(tag)와 관련된 항원, 및/또는 비오틴화된 분자, 및/또는 HIV, HCV, HBV 또는 다른 병원체에 의해 발현되는 분자.
  166. 청구항 72-165 중 어느 한 항에 있어서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 항원에 특이적으로 결합하는 세포 외 항원-인식 도메인, 및 ITAM를 포함하는 세포 내 신호전달 도메인을 포함하는 것인 방법.
  167. 청구항 166에 있어서, 세포 내 신호전달 도메인은 CD3-제타 (CD3ζ사슬의 세포 내 도메인을 포함하는 것인 방법.
  168. 청구항 166 또는 청구항 167에 있어서, 키메라 항원 수용체 (CAR)는 공동자극 신호전달 영역을 추가로 포함하는 것인 방법.
  169. 청구항 168에 있어서, 공동자극 도메인은 4-1BB의 신호전달 도메인인 것인 방법.
  170. 청구항 72-169 중 어느 한 항에 있어서, T 세포는 CD4+ 또는 CD8+인 것인 방법.
  171. 청구항 72-170 중 어느 한 항에 있어서, T 세포는 대상체로부터 수득된 1차 T 세포인 것인 방법.
  172. 청구항 72-171 중 어느 한 항에 있어서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 자가조직인 것인 방법.
  173. 청구항 72-171 중 어느 한 항에 있어서, 유전자 조작된 세포는 대상체에 대해 동종이계인 것인 방법.
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