KR20190039085A - 세포의 고갈을 위한 조성물 및 방법 - Google Patents

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앤드류 닉슨
드와이트 모로우
아담 하티간
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마젠타 테라퓨틱스 인코포레이티드
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Abstract

본 발명은 세포, 예를 들어, CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 및/또는 CD110+ 세포의 고갈을 위해 및 다른 것들 중에서 다양한 조혈 질병, 대사 장애, 암 및 자가면역 질병의 치료를 위해 유용한 조성물 및 방법을 제공한다. 본원에는 예를 들어, 환자, 예를 들어, 인간에서 CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 세포의 집단을 고갈시킴으로써, 이러한 질환의 치료를 달성하기 위해 적용될 수 있는 항체, 항원-결합 단편, 리간드, 및 이의 컨쥬게이트가 기술된다. 본원에 기술된 조성물 및 방법은 예를 들어, CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 암 세포 또는 자가면역 세포의 집단을 고갈시킴으로써 장애를 직접적으로 치료하기 위해 사용될 수 있다. 본원에 기술된 조성물 및 방법은 또한, 이식편 절차 이전에 내인성 조혈 줄기 세포를 선택적으로 고갈시킴으로써 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위해 환자를 준비시키고 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 개선시키기 위해 사용될 수 있다.

Description

세포의 고갈을 위한 조성물 및 방법
본 발명은 조혈 줄기 세포와 같은, 조혈 세포에 의해 발현되는 항원과 결합할 수 있는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드의 투여에 의해, 다른 것들 중에서, 혈액 질병, 대사 장애, 암, 및 자가면역 질병과 같은 다양한 병인으로 고통받는 환자의 치료에 관한 것이다.
의약 분야의 발전에도 불구하고, 다른 것들 중에서, 조혈계의 병리, 예를 들어, 특정 혈액 세포의 질병, 대사 장애, 암, 및 자가면역 질환을 치료하는 것에 대한 요구가 존재한다. 조혈 줄기 세포가 상당한 치료 가능성을 가지지만, 임상에서 이의 사용을 방해하는 한계는 숙주에서 조혈 줄기 세포 이식편의 생착(engraftment)을 보장하는 것과 관련된 어려움이다. 현재, 이러한 세포의 다능성 및 조혈 기능성이 이식 후에 보존되도록 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 증진시키기 위한 조성물 및 방법이 요구되고 있다.
본 발명은 다른 것들 중에서, 조혈계의 다양한 장애, 대사 장애, 암, 및 자가면역 질병의 직접 치료를 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 본 발명은 추가적으로, 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 증진시키기 위해 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 받기 전에, 인간 환자와 같은 환자를 컨디셔닝하는 방법을 특징으로 한다. 환자는 하나 이상의 혈액 장애, 예를 들어, 이상혈색소증 또는 다른 조혈 병리(hematopoietic pathology)로 고통받는 환자일 수 있고, 이에 따라, 조혈 줄기 세포 이식을 필요로 한다. 본원에 기술된 바와 같이, 조혈 줄기 세포는 조혈 계통(hematopoietic lineage)에서 여러 세포 타입으로 분화할 수 있고, 환자에서 결여된 세포 타입을 증식시키거나 재-증식하기 위하여 환자에 투여될 수 있다. 본 발명은 (i) CD45, CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110을 발현시키는 세포의 집단, 예를 들어, 이상 혈액 세포, 암세포, 또는 자가면역 세포를 선택적으로 고갈시킴으로써, 본원에 기술된 다른 것들 중에서, 혈액 장애, 대사 질병, 암, 또는 자가면역 질병과 같은 질병을 직접적으로 치료하고/거나 (ii) 환자 내에서 내인성 조혈 줄기 세포의 집단을 고갈시키기 위해, 환자를, 세포-표면 조혈 세포 항원과 같은, 조혈 세포에 의해 발현된 단백질과 결합할 수 있는 항체, 항체 단편, 리간드, 약물-항체 컨쥬게이트, 및 약물-리간드 컨쥬게이트로 치료하는 방법을 특징으로 한다. 전자의 활성은, CD45, CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110이 다른 세포 타입들 중에서, 암성 세포, 예를 들어, 백혈병 세포, 자가면역 림프구, 예를 들어, 자가 항원과 상호 반응하는 T-세포 수용체를 발현시키는 T-세포에 의해 발현될 수 있기 때문에, 조혈 계통의 세포와 관련된 광범위한 장애의 직접 치료를 가능하게 한다. 후자 활성, 즉, 조혈 줄기 세포의 선택적 고갈은 또한, 후속하여 외인성(예를 들어, 자가, 동종이계, 또는 동계) 조혈 줄기 세포 이식편의 이식에 의해 채워질 수 있는 공백(vacancy)을 생성시킨다. 이에 따라, 본 발명은 다양한 조혈 질환, 예를 들어, 다른 것들 중에서, 겸상 적혈구 빈혈, 지중해 빈혈, 판코니 빈혈, 비스코트-올드리치 증후군, 아데노신 데아미나아제 결핍증-중증 복합형 면역결핍증, 이염색백색질장애, 다이아몬드-블랙판 빈혈 및 슈바크만-다이아몬드 증후군, 인간 면역결핍 바이러스 감염증, 및 후천성 면역결핍 증후군, 뿐만 아니라 암 및 자가면역 질병을 치료하는 방법을 제공한다.
제1 양태에서, 본 발명은 유효량의, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD135와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써, 인간 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 조혈 줄기 세포를 함유한 이식편을 수용하기 전에, 유효량의, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD135와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 함유한 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법으로서, 환자가 이전에, 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD135와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 투여된 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD135와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을, 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여 환자에게 조혈 줄기 세포를 함유한 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
4가지 상기 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 상보적 결정 영역(CDR)을 함유한다:
아미노산 서열 SYYMH(SEQ ID NO: 1)를 갖는 CDR-H1;
아미노산 서열 IINPSGGSTSYAQKFQG(SEQ ID NO: 2)를 갖는 CDR-H2;
아미노산 서열 GVGAHDAFDI(SEQ ID NO: 3) 또는 VVAAAVADY(SEQ ID NO: 4)를 갖는 CDR-H3;
아미노산 서열 RSSQSLLHSNGNNYLD(SEQ ID NO: 5) 또는 RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQ ID NO: 6)를 갖는 CDR-L1;
아미노산 서열 LGSNRAS(SEQ ID NO: 7)를 갖는 CDR-L2; 및
아미노산 서열 MQGTHPAIS(SEQ ID NO: 8) 또는 MQSLQTPFT(SEQ ID NO: 9)를 갖는 CDR-L3.
4가지 상기 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 CDR을 함유한다:
아미노산 서열 SYAIS(SEQ ID NO: 10)를 갖는 CDR-H1;
아미노산 서열 GIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO: 11)를 갖는 CDR-H2;
아미노산 서열 FALFGFREQAFDI(SEQ ID NO: 12)을 갖는 CDR-H3;
아미노산 서열 RASQSISSYLN(SEQ ID NO: 13)을 갖는 CDR-L1;
아미노산 서열 AASSLQS(SEQ ID NO: 14)를 갖는 CDR-L2; 및
아미노산 서열 QQSYSTPFT(SEQ ID NO: 15)를 갖는 CDR-L3.
다른 양태에서, 본 발명은 환자에게, 유효량의, CD135와 결합할 수 있는 인간 Flt3 리간드, 또는 이의 단편을 투여함으로써, 인간 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 조혈 줄기 세포를 함유한 이식편을 수용하기 전에, 환자에게, 유효량의, CD135와 결합할 수 있는 인간 Flt3 리간드, 또는 이의 단편을 투여함으로써, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 함유한 이식편을 투여하는 것을 포함하여, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법으로서, 환자가 이전에, 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로, CD135와 결합할 수 있는 인간 Flt3 리간드, 또는 이의 단편이 투여된, 방법을 특징으로 한다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 환자에게, CD135와 결합할 수 있는 인간 Flt3 리간드, 또는 이의 단편을, 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여 환자에게 조혈 줄기 세포를 함유한 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
상기 4가지 양태 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편은 인간 항체로부터 단리된(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소타입 인간 항체로부터 단리된) 다이머 Fc 도메인과 같은 Fc 도메인에 공유 결합된다. 일부 구체예에서, Fc 도메인은 단일 폴리펩티드 가닥을 함유한 모노머 Fc 도메인이다. 일부 구체예에서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 N-말단은 Fc 도메인에 결합된다. 일부 구체예에서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 C-말단은 Fc 도메인에 결합된다. Fc 도메인은 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 하나 이상의 복사체에 컨쥬게이션될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있는 컨쥬게이트는 Fc 도메인의 각 폴리펩티드 가닥이 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편에 컨쥬게이션된 다이머 Fc 도메인을 포함한다. Fc 도메인은 또한, 세포 독소, 예를 들어, 본원에 기술된 세포 독소(예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 및 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체)에 컨쥬게이션될 수 있다.
상기 4가지 양태 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편은 세포 독소, 예를 들어, 본원에 기술된 세포 독소(예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 및 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체)에 공유 결합된다. 일부 구체예에서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 N-말단은 세포 독소에 결합된다. 일부 구체예에서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 C-말단은 세포 독소에 결합된다. 세포 독소는 또한, Fc 도메인에 컨쥬게이션될 수 있다.
상기 4가지 양태 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편은 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편 상의 하나의 부위(예를 들어, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 N- 또는 C-말단)에서 세포 독소에 공유 결합되고, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편 상의 다른 부위(예를 들어, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 다른 말단)에서 세포 독소에 공유 결합된다.
상기 4가지 양태 중 어느 하나의 일부 구체예에서, Fc 도메인은 인간 IgG1 아이소타입 Fc 도메인이다. 일부 구체예에서, Fc 도메인은 인간 IgG2 아이소타입 Fc 도메인이다. 일부 구체예에서, Fc 도메인은 인간 IgG3 아이소타입 Fc 도메인이다. 일부 구체예에서, Fc 도메인은 인간 IgG4 아이소타입 Fc 도메인이다.
다른 양태에서, 본 발명은 유효량의, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD34와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써 인간 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 유효량의, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD34와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법으로서, 환자가 이전에, 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD34와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 투여된, 방법을 제공한다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 환자에게, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD34와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을, 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 유효량의, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD90과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써, 인간 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 유효량의, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD90과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법으로서, 환자에게 이전에, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD90과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여된 방법을 제공한다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 환자에게 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD90과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을, 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 유효량의, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD110과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써, 인간 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 유효량의, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD110과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하며, 환자에게 이전에, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD110과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여되는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 환자에게 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD110과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
상기 양태 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드에 컨쥬게이션되는 세포 독소는 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체이다.
다른 양태에서, 본 발명은 유효량의, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD45와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써 인간 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다. 세포 독소는 예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체일 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 유효량의, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD45와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다. 세포 독소는 예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체일 수 있다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법으로서, 환자에 이전에, 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD45와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여된, 방법을 특징으로 한다. 세포 독소는 예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체일 수 있다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체와 같은 세포 독소에 컨쥬게이션된 CD45와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을, 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여, 환자에게, 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
상기 4가지의 양태의 일부 구체예에서, CD45는 CD45RO이다.
다른 양태에서, 본 발명은 유효량의, CD45RO와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써, 인간 환자에서 CD45RO+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 조혈 줄기 세포를 함유한 이식편을 수용하기 전에, 유효량의, CD45RO와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여함으로써, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD45RO+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법으로서, 환자에 이전에, CD45RO와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이, 환자에서 CD45RO+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여된, 방법을 특징으로 한다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 환자에게, CD45RO와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을, 환자에서 CD45RO+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
본 발명의 상기 4가지 양태 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 세포 독소에 컨쥬게이션된다.
다른 양태에서, 본 발명은 유효량의, CD45와 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을 투여함으로써 인간 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 유효량의, CD45와 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을 투여함으로써, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법으로서, 환자에 이전에, CD45와 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편이, 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여된, 방법을 특징으로 한다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게, CD45와 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을, 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 유효량의, CD34와 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을 투여함으로써, 인간 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 유효량의, CD34와 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을 투여함으로써, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하고, 환자에 이전에, CD34와 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편이 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여된, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게, CD34와 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을, 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 유효량의, CD90과 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을 투여함으로써, 인간 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 유효량의, CD90과 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을 투여함으로써, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하고, 환자에 이전에 CD90과 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편이 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여된, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게 CD90과 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을, 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
다른 양태에서, 본 발명은 유효량의, CD110과 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을 투여함으로써, 인간 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 유효량의, CD110과 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을 투여함으로써, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게, 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하고, 환자에 이전에, CD110와 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편이 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여된, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
추가적인 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 인간 환자에게, CD110와 결합할 수 있는 리간드 또는 이의 단편을, 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하고, 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자를 치료하는 방법을 특징으로 한다.
상기 양태의 일부 구체예에서, CD45(예를 들어, CD45RO), CD34, CD90, 및 CD110 중 하나 이상과 결합하는 리간드 또는 이의 단편은 Fc 도메인, 예를 들어, 인간 항체로부터 단리된(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소타입 인간 항체로부터 단리된) 다이머 Fc 도메인에 공유 결합된다. 일부 구체예에서, Fc 도메인은 단일 폴리펩티드 가닥을 함유한 모노머 Fc 도메인이다. 일부 구체예에서, 리간드 또는 이의 단편의 N-말단은 Fc 도메인에 결합된다. 일부 구체예에서, 리간드 또는 이의 단편의 C-말단은 Fc 도메인에 결합된다. Fc 도메인은 리간드 또는 이의 단편의 하나 이상의 복사체에 컨쥬게이션될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있는 컨쥬게이트는 Fc 도메인의 각 폴리펩티드 가닥이 리간드 또는 이의 단편에 컨쥬게이션된 다이머 Fc 도메인을 포함한다. Fc 도메인은 또한, 세포 독소, 예를 들어, 본원에 기술된 세포 독소(예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 및 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체)에 컨쥬게이션될 수 있다.
상기 양태 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 리간드 또는 이의 단편은 세포 독소, 예를 들어, 본원에 기술된 세포 독소(예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 및 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체)에 공유 결합된다. 일부 구체예에서, 리간드 또는 이의 단편의 N-말단은 세포 독소에 결합된다. 일부 구체예에서, 리간드 또는 이의 단편의 C-말단은 세포 독소에 결합된다. 세포 독소는 또한, Fc 도메인에 컨쥬게이션될 수 있다.
상기 양태 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 리간드 또는 이의 단편은 리간드 또는 이의 단편 상의 하나의 부위(예를 들어, 리간드 또는 이의 단편의 N- 또는 C-말단)에서 세포 독소에 공유 결합되고, 리간드 또는 이의 단편 상의 다른 부위(예를 들어, 리간드 또는 이의 단편의 반대 말단)에서 Fc 도메인에 공유 결합된다.
상기 양태 중 어느 하나의 일부 구체예에서, Fc 도메인은 인간 IgG1 아이소타입 Fc 도메인이다. 일부 구체예에서, Fc 도메인은 인간 IgG2 아이소타입 Fc 도메인이다. 일부 구체예에서, Fc 도메인은 인간 IgG3 아이소타입 Fc 도메인이다. 일부 구체예에서, Fc 도메인은 인간 IgG4 아이소타입 Fc 도메인이다.
상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 세포 독소는 아마톡신 또는 이의 유도체, 예를 들어, α-아마니틴, β-아마니틴, γ-아마니틴, ε-아마니틴, 아마닌, 아마닌아미드, 아마눌린, 아마눌린산, 및 프로아마눌린이다. 상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 세포 독소는 아마톡신이며, 세포 독소에 컨쥬게이션된 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드는 화학식 Ab-Am으로 표현되며, 여기서, Ab는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드이며, Am은 아마톡신이다. 일부 구체예에서, Am은 하기 화학식 (I)로 표현된다:
Figure pct00001
상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H, RC, 또는 RD이며;
R4는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RC는 -L-Z이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
L은 링커, 예를 들어, 임의적으로 치환된 알킬렌(예를 들어, C1-C6 알킬렌), 임의적으로 치환된 헤테로알킬렌(C1-C6 헤테로알킬렌), 임의적으로 치환된 알케닐렌(예를 들어, C2-C6 알케닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐렌), 임의적으로 치환된 알키닐렌(예를 들어, C2-C6 알키닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐렌), 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110과 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
일부 구체예에서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 함유한다.
일부 구체예에서, Am은 하기 화학식 (IA)로 표현되며, 여기서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 함유한다:
Figure pct00002
상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H, RC, 또는 RD이며;
R4는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RC는 -L-Z이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
L은 링커, 예를 들어, 임의적으로 치환된 알킬렌(예를 들어, C1-C6 알킬렌), 임의적으로 치환된 헤테로알킬렌(C1-C6 헤테로알킬렌), 임의적으로 치환된 알케닐렌(예를 들어, C2-C6 알케닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐렌), 임의적으로 치환된 알키닐렌(예를 들어, C2-C6 알키닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐렌), 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110와 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
일부 구체예에서, Am은 하기 화학식 (IB)로 표현되며, 여기서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 함유한다:
Figure pct00003
상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H, RC, 또는 RD이며;
R4는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RC는 -L-Z이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
L은 링커, 예를 들어, 임의적으로 치환된 알킬렌(예를 들어, C1-C6 알킬렌), 임의적으로 치환된 헤테로알킬렌(C1-C6 헤테로알킬렌), 임의적으로 치환된 알케닐렌(예를 들어, C2-C6 알케닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐렌), 임의적으로 치환된 알키닐렌(예를 들어, C2-C6 알키닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐렌), 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110과 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
일부 구체예에서, RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
Figure pct00004
을 형성하며,
여기서, Y는 O, S, NRE, 및 CRERE'로부터 선택되며,
RE 및 RE'는 각각 독립적으로, 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌-RC, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 아릴렌-RC, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌-RC이다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
Figure pct00005
을 형성하며;
R3은 H 또는 RC이며;
R4는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, 또는 NHRC이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC 및 RD는 각각 상기에서 규정된 바와 같다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
Figure pct00006
를 형성하며;
R3은 H 또는 RC이며;
R4 및 R5는 각각 독립적으로, H, OH, ORC, RC, 또는 ORD이며;
R6 및 R7은 각각 H이며;
R8은 OH, NH2, ORC, 또는 NHRC이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC는 상기에서 규정된 바와 같다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1은 H, OH, 또는 ORA이며;
R2는 H, OH, 또는 ORB이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
Figure pct00007
를 형성하며;
R3, R4, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R5는 ORC이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC는 상기에서 규정된 바와 같다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3은 RC이며;
R4, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R5는 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC는 상기에서 규정된 바와 같다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R4 및 R5는 각각 독립적으로, H, OH, ORC, 또는 RC이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC는 상기에서 규정된 바와 같다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R4 및 R5는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R8은 OH, NH2, ORC, 또는 NHRC이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC는 상기에서 규정된 바와 같다.
일부 구체예에서, Am은 하기 화학식 (II)로 표현된다:
Figure pct00008
상기 식에서, X는 S, SO, 또는 SO2이며; R1은 H, 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 공유 결합된 링커이며; R2는 H 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 공유 결합된 링커이며; 여기서, R1이 H일 때, R2는 링커이며, R2가 H일 때, R1은 링커이다.
상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 세포 독소는 DM1 및 DM4로 이루어진 군으로부터 선택된 메이탄시노이드이다. 일부 구체예에서, 세포 독소는 모노메틸 아우리스타틴 E 및 모노메틸 아우리스타틴 F로 이루어진 군으로부터 선택된 아우리스타틴이다. 일부 구체예에서, 세포 독소는 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 및 이다루비신으로 이루어진 군으로부터 선택된 안트라사이클린이다.
상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중-가변 면역글로불린 도메인, 단쇄 Fv 분자(scFv), 이중체, 삼중체, 나노체, 항체-유사 단백질 스캐폴드, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 분자, 및 텐뎀 디-scFv로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 항체는 IgG, IgA, IgM, IgD, 및 IgE로 이루어진 군으로부터 선택된 아이소타입을 갖는다.
상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드는 환자에 투여 후 조혈 세포, 예를 들어, 조혈 줄기 세포, 암세포, 또는 자가면역 세포에 의해 내재화된다. 예를 들어, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드는 수용체 매개 엔도시토시스에 의해(예를 들어, 세포-표면 CD45, CD135, CD34, CD90, 또는 CD110에 결합 시에) 조혈 줄기 세포, 암세포, 또는 자가면역 세포에 의해 내재화될 수 있다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 공유 결합된 세포 독소는 화학적 분할에 의해(예를 들어, 본원에 기술된 링커의 효소적 또는 비-특이적 분할에 의해) 세포 내로 방출될 수 있다. 세포 독소는 이후에, 다른 것들 중에서 이식 치료법 전의 내인성 조혈 줄기 세포, 내인성 암세포, 또는 내인성 자가면역 세포와 같은, 내인성 조혈 세포의 죽음을 증진시키기 위해 이의 세포내 타겟(다른 것들 중에서, 예를 들어, 유사분열 방추 장치(mitotic spindle apparatus), 핵 DNA, 리보솜 RNA, 또는 토포이소머라아제)에 접근할 수 있다.
상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드는 조혈 줄기 세포의 괴사를 증진시킬 수 있다. 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 환자에 투여 시에 조혈 줄기 세포에 하나 이상의 보체 단백질, 자연살(NK) 세포, 대식세포, 호중구, 및/또는 산호성백혈구를 동원함으로써 이식 치료법 이전에 내인성 조혈 줄기 세포의 사망을 증진시킬 수 있다.
일부 구체예에서, 조혈 줄기 세포를 함유한 이식편은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 농도가 환자의 혈액으로부터 실질적으로 제거된 후에 환자에게 투여된다.
일부 구체예에서, 조혈 줄기 세포 또는 이의 자손은 환자 내에 조혈 줄기 세포의 이식하고 2일 이상(예를 들어, 약 2 내지 약 5일, 약 2 내지 약 7일, 약 2 내지 약 20일, 약 2 내지 약 30일, 예를 들어, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일, 14일, 15일, 16일, 17일, 18일, 19일, 20일, 21일, 22일, 23일, 24일, 25일, 26일, 27일, 28일, 29일, 30일, 또는 그 초과) 후까지 조혈 줄기 세포 기능적 잠재력을 유지시킨다.
일부 구체예에서, 조혈 줄기 세포 또는 이의 자손은 환자 내에 조혈 줄기 세포의 이식 후에 골수와 같은 조혈 조직에 국소화되고/거나 조혈을 재혈성할 수 있다.
일부 구체예에서, 환자 내에 이식 시에, 조혈 줄기 세포는 거대핵세포, 혈전구(thrombocytes), 혈소판(platelet), 적혈구, 비만 세포, 근육모세포(골수아세포), 호염구, 호중구, 산호성백혈구, 소교세포, 과립구, 단핵구, 파골세포, 항원-제공 세포, 대식세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 및 B-림프구로 이루어진 군으로부터 선택된 세포의 집단의 회수를 일으킨다.
상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 본 방법은 이식된 조혈 줄기 세포가 안착할 수 있는 적합한 환경(니치)을 제공하기 위해, 예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 전에 환자에서 조혈 줄기 세포의 집단을 고갈시킴으로써, 하나 이상의 장애를 치료하기 위해 사용된다. 이식 후에, 조혈 줄기 세포는 환자에서의 결여 세포 타입 또는 예를 들어, 화학치료 방법에 의해 능동적으로 사망 중에 있거나 사망된 세포 타입을 보충하기 위해, 생산적 조혈을 확립할 수 있다. 예를 들어, 환자는 줄기 세포 장애로 고통을 받는 환자일 수 있다. 일부 구체예에서, 환자는 이상혈색소증 장애, 예를 들어, 겸상 적혈구 빈혈, 지중해 빈혈, 판코니 빈혈, 무형성 빈혈, 및 비스코트-올드리치 증후군으로 고통을 받는다. 환자는 면역결핍 장애, 예를 들어, 선천성 면역결핍 장애 또는 후천성 면역결핍 장애(예를 들어, 인간 면역결핍 바이러스 또는 후천성 면역결핍 증후군)로 고통을 받을 수 있다. 일부 구체예에서, 환자는 대사 장애, 예를 들어, 글리코겐 축적 질병, 뮤코다당증, 고오시에씨 병, 후를러 질병, 스핑고지질증, 및 이염색백색질장애로 고통을 받는다. 일부 구체예에서, 환자는 아데노신 데아미나아제 결핍증 및 중증 복합형 면역결핍증, 고면역글로불린 M 증후군, 체디악-히가시 질병, 유전성 림프조직구증, 골석화증, 골형성부전증, 축적증, 중증성 지중해 빈혈, 전신 경화증, 전신 홍반성 루푸스, 및 소아 류머티스성 관절염으로 이루어진 군으로부터 선택된 장애로 고통을 받는다. 일부 구체예에서, 환자는 자가면역 질병, 예를 들어, 경피증, 다발성 경화증, 궤양성 대장염, 크론병, 및 제1형 당뇨병으로 고통을 받는다. 일부 구체예에서, 환자는 암 또는 골수증식 질병, 예를 들어, 혈액암으로 고통을 받는다. 일부 구체예에서, 환자는 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 광범위 큰 B-세포 림프종, 또는 비호지킨 림프종으로 고통을 받는다. 일부 구체예에서, 환자는 골수 형성이상 질병, 예를 들어, 골수 형성이상 증후군으로 고통을 받는다.
상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 본 방법은 환자에서 CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 암 세포의 집단을 고갈시키는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드의 투여에 의해 및/또는 조혈 줄기 세포 이식 이전에 내인성 조혈 줄기 세포의 집단을 고갈시키기 위한 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드의 투여에 의해 CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 세포에 의해 특징되는 암(예를 들어, CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 세포에 의해 특징되는 백혈병)과 같은 암을 직접적으로 치료하기 위해 사용된다. 후자의 경우에, 이식은 또한, 예를 들어, 암세포를 박멸시키는 공정 동안 감소된 세포의 집단을 재-구성할 수 있다. 암은 혈액암, 예를 들어, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 광범위 큰 B-세포 림프종, 또는 비호지킨 림프종일 수 있다.
상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 본 방법은 예를 들어, CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 자가면역 세포의 집단을 고갈시키기 위한 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드의 투여에 의해, 및/또는 조혈 줄기 세포 이식 이전에 내인성 조혈 줄기 세포의 집단을 고갈시키기 위한 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드의 투여에 의해 자가면역 질병을 치료하기 위해 사용된다. 후자의 경우에, 이식은 또한, 예를 들어, 자가면역 세포를 박멸시키는 공정 동안에 감소된 세포의 집단을 재구성할 수 있다. 자가면역 질병은 예를 들어, 경피증, 다발성 경화증(MS), 인간 전신 루푸스(SLE), 류머티스성 관절염(RA), 염증성 장질환(IBD), 치료중 건선(treating psoriasis), 제1형 진성 당뇨병(제1형 당뇨병), 갑성 산재성 뇌척수염(ADEM), 애디슨병, 전신 탈모증, 상직성 척수염, 항인지질 항체 증후군(APS), 무형성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이질환 (AIED), 자가면역 림프구증식 증후군(ALPS), 자가면역 난소염, 발로병, 베체트병, 수포성류천포창, 심근증, 샤가스병, 만성 피로 면역부전 증후군(CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경증, 크론병, 반흔성 유사천포창, 복강 스프루-포진성 피부염, 저온 응집병, CREST 증후군, 데고스 병, 원판성 루푸스, 자율신경장애, 자궁 내막증, 필수 혼합 저온글로불린혈증, 섬유조직염-섬유근염, 굿파스튜어 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군(GBS), 하시모토 갑상선염, 화농성한선염, 특발성 및/또는 급성 혈소판감소성 자반병, 특발성 폐섬유증, IgA 신경증, 간질성 방광염, 연소성 관절염, 가와사키병, 편평태선, 라임병, 메니에르병, 혼합 결합조직병(MCTD), 중증 근무력증, 신경근긴장증, 언구간대경련 근간대경련 증후군(OMS), 시신경염, 오드 갑상선염, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 다발 연골염, 다발성 근염 및 피부근염, 원발성 담즙 간경변, 결절성 다발성 동맥염, 다분비선 증후군, 류머티스성 다발근통, 원발성 무감마글로불린혈증, 레이노 현상, 라이터 증후군, 류머티스성 염, 사르코이도시스, 경피증, 쇼그렌 증후군, 강직 인간 증후군, 타까야수 동맥염, 측두 동맥염(또한 "거대세포성 동맥염"으로서 알려짐), 궤양성 대장염, 포도막염, 맥관염, 백반증, 외음부통("외음부 전정염"), 및 베게너 육아종증일 수 있다.
이에 따라, 상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 본 발명은 이상혈색소증 장애, 예를 들어, 겸상 적혈구 빈혈, 지중해 빈혈, 판코니 빈혈, 무형성 빈혈, 및 비스코트-올드리치 증후군을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 면역결핍 장애, 예를 들어, 선천성 면역결핍 장애 또는 후천성 면역결핍 장애(예를 들어, 인간 면역결핍 바이러스 또는 후천성 면역결핍 증후군)를 치료하는 방법을 특징으로 한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 대사 장애, 예를 들어, 글리코겐 축적 질병, 뮤코다당증, 고오시에씨 병, 후를러 질병, 스핑고지질증, 및 이염색백색질장애를 치료하는 방법을 특징으로 한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 아데노신 데아미나아제 결핍증 및 중증 복합형 면역결핍증, 고면역글로불린 M 증후군, 체디악-히가시 질병, 유전성 림프조직구증, 골석화증, 골형성부전증, 축적증, 중증성 지중해 빈혈, 전신 경화증, 전신 홍반성 루푸스, 및 소아 류머티스성 관절염으로 이루어진 군으로부터 선택된 장애를 치료하는 방법을 특징으로 한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 자가면역 질병, 예를 들어, 경피증, 다발성 경화증, 궤양성 대장염, 크론병, 및 제1형 당뇨병을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 암 또는 골수증식 질병, 예를 들어, 혈액암을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 일부 구체예에서, 본 발명은 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 광범위 큰 B-세포 림프종, 또는 비호지킨 림프종을 치료하는 방법을 특징으로 한다. 일부 구체예에서, 환자는 골수형성이상 질병, 예를 들어, 골수 형성이상 증후군으로 고통을 받는다. 이러한 구체예에서, 본 방법은 본 발명의 상술된 양태 및 구체예 중 어느 하나의 방법에 따라 CD45, CD135, CD34, CD90, 또는 CD110 및/또는 조혈 줄기 세포 이식편과 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드를 투여하는 단계를 포함할 수 있다.
유사하게, 상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 본 발명은 암, 예를 들어, CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 세포에 의해 특징되는 암(예를 들어, CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 세포에 의해 특징되는 백혈병)을 직접적으로 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 구체예에서, 본 방법은 CD45, CD135, CD34, CD90, 또는 CD110와 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드를 투여하는 것을 포함한다. 암은 혈액암, 예를 들어, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 광범위 큰 B-세포 림프종, 또는 비호지킨 림프종일 수 있다.
추가적으로, 상기 양태들 중 어느 하나의 일부 구체예에서, 본 발명은 자가면역 질병, 예를 들어, 다발성 경화증(MS), 인간 전신 루푸스(SLE), 류머티스성 관절염(RA), 염증성 장질환(IBD)을 치료하는, 건선, 제1형 진성 당뇨병(제1형 당뇨병), 갑성 산재성 뇌척수염(ADEM), 애디슨병, 전신 탈모증, 상직성 척수염, 항인지질 항체 증후군(APS), 무형성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이질환(AIED), 자가면역 림프구증식 증후군(ALPS), 자가면역 난소염, 발로병, 베체트병, 수포성류천포창, 심근증, 샤가스병, 만성 피로 면역부전 증후군(CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경증, 크론병, 반흔성 유사천포창, 복강 스프루-포진성 피부염, 저온 응집병, CREST 증후군, 데고스 병, 원판성 루푸스, 자율신경장애, 자궁 내막증, 필수 혼합 저온글로불린혈증, 섬유조직염-섬유근염, 굿파스튜어 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군(GBS), 하시모토 갑상선염, 화농성한선염, 특발성 및/또는 급성 혈소판감소성 자반병, 특발성 폐섬유증, IgA 신경증, 간질성 방광염, 연소성 관절염, 가와사키병, 편평태선, 라임병, 메니에르병, 혼합 결합조직병(MCTD), 중증 근무력증, 신경근긴장증, 언구간대경련 근간대경련 증후군(OMS), 시신경염, 오드 갑상선염, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 다발 연골염, 다발성 근염 및 피부근염, 원발성 담즙 간경변, 결절성 다발성 동맥염, 다분비선 증후군, 류머티스성 다발근통, 원발성 무감마글로불린혈증, 레이노 현상, 라이터 증후군, 류머티스성 염, 사르코이도시스, 경피증, 쇼그렌 증후군, 강직 인간 증후군, 타까야수 동맥염, 측두 동맥염(또한, "거대세포성 동맥염"으로 알려짐), 궤양성 대장염, 포도막염, 맥관염, 백반증, 외음부통("외음부 전정염"), 및 베게너 육아종증을 치료하는 방법을 제공한다. 이러한 구체예에서, 본 방법은 CD45, CD135, CD34, CD90, 또는 CD110과 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드를 투여하는 것을 포함한다.
다른 양태에서, 본 발명은 집단을 유효량의, 화학식 Ab-Am으로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Am이 아마톡신인 컨쥬게이트와 접촉시킴으로써 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 특징으로 한다. Am은 하기 화학식 (IA)로 표현될 수 있으며, 여기서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 함유한다:
Figure pct00009
상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H, RC, 또는 RD이며;
R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RC는 -L-Z이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
L은 링커, 예를 들어, 임의적으로 치환된 알킬렌(예를 들어, C1-C6 알킬렌), 임의적으로 치환된 헤테로알킬렌(C1-C6 헤테로알킬렌), 임의적으로 치환된 알케닐렌(예를 들어, C2-C6 알케닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐렌), 임의적으로 치환된 알키닐렌(예를 들어, C2-C6 알키닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐렌), 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와, 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
일부 구체예에서, Am은 하기 화학식 (IB)로 표현되며, 여기서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 함유한다:
Figure pct00010
상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H, RC, 또는 RD이며;
R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RC는 -L-Z이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
L은 링커, 예를 들어, 임의적으로 치환된 알킬렌(예를 들어, C1-C6 알킬렌), 임의적으로 치환된 헤테로알킬렌(C1-C6 헤테로알킬렌), 임의적으로 치환된 알케닐렌(예를 들어, C2-C6 알케닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐렌), 임의적으로 치환된 알키닐렌(예를 들어, C2-C6 알키닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐렌), 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와, 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
다른 양태에서, 본 발명은 화학식 Ab-Am으로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Am이 아마톡신인 컨쥬게이트를 특징으로 한다. 일부 구체예에서, Am은 상기 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)로 표현된다.
상기 2가지 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서 시스테인 잔기에 의해 아마톡신에 컨쥬게이션된다. 일부 구체예에서, 시스테인 잔기는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서 돌연변이에 의해 도입된다. 예를 들어, 시스테인 잔기는 Cys118, Cys239, 및 Cys265로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 시스테인 잔기는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서 자연적으로 발생한다. 예를 들어, Fc 도메인은 IgG Fc 도메인, 예를 들어, 인간 IgG1 Fc 도메인일 수 있으며, 시스테인 잔기는 Cys261, Csy321, Cys367, 및 Cys425로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, R1은 H, OH, 또는 ORA이며;
R2는 H, OH, 또는 ORB이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
Figure pct00011
를 형성하며;
R3, R4, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R5는 ORC이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이다.
일부 구체예에서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3은 RC이며;
R4, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R5는 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이다.
일부 구체예에서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R4는 ORC, 또는 RC이며;
R5는 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이다.
일부 구체예에서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R4 및 R5는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R8은 ORC 또는 NHRC이며;
R9는 H 또는 OH이다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CD45+ 세포에 의해 내재화된다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1 μΜ 미만, 750 nM 미만, 500 nM 미만, 250 nM 미만, 200 nM 미만, 150 nM 미만, 100 nM 미만, 75 nM 미만, 50 nM 미만, 10 nM 미만, 1 nM 미만, 0.1 nM 미만, 10 pM 미만, 1 pM 미만, 또는 0.1 pM 미만의 Kd로 CD45와 결합한다. 일부 구체예에서, Kd는 약 0.1 pM 내지 약 1 μM이다. 일부 구체예에서, Kd는 약 357 pM이며, kon은 약 2.56×105 M-1 s-1이고/거나 koff는 약 9.14×10-5 s-1이다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 9×10-2 M-1 s-1 내지 약 1×102 M-1 s-1의 kon으로 CD45와 결합한다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CD45의 결합을 경쟁적으로 억제하며, 여기서, 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 상보적 결정 영역(CDR)을 갖는다:
a. 아미노산 서열 SYAMS(SEQ ID NO: 16)를 갖는 CDR-H1;
b. 아미노산 서열 AISGSGGSTFYADSVRG(SEQ ID NO: 17)를 갖는 CDR-H2;
c. 아미노산 서열 EVMGPIFFDY(SEQ ID NO: 18)를 갖는 CDR-H3;
d. 아미노산 서열 RASQSIISSALA(SEQ ID NO: 19)를 갖는 CDR-L1;
e. 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO: 20)를 갖는 CDR-L2; 및
f. 아미노산 서열 QQYGSTPLT(SEQ ID NO: 21)를 갖는 CDR-L3.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 랫트 YTH24.5 또는 이의 인간화된 변이체이다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CD45의 결합을 경쟁적으로 억제하며, 여기서, 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 랫트 YTH24.5 또는 이의 인간화된 변이체이다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중-가변 면역글로불린 도메인, 단쇄 Fv 분자(scFv), 이중체, 삼중체, 나노체, 항체-유사 단백질 스캐폴드, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 분자, 및 텐뎀 디-scFV로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 양태에서, 본 발명은 CD135+ 세포의 집단을, 유효량의, 화학식 Ab-Am으로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고, Am이 아마톡신인 컨쥬게이트와 접촉시킴으로써 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법을 특징으로 한다. Am은 화학식 (IA)로 표현될 수 있으며, 여기서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 함유한다:
Figure pct00012
상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H, RC, 또는 RD이며;
R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RC는 -L-Z이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
L은 링커, 예를 들어, 임의적으로 치환된 알킬렌(예를 들어, C1-C6 알킬렌), 임의적으로 치환된 헤테로알킬렌(C1-C6 헤테로알킬렌), 임의적으로 치환된 알케닐렌(예를 들어, C2-C6 알케닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐렌), 임의적으로 치환된 알키닐렌(예를 들어, C2-C6 알키닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐렌), 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와, 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IB)로 표현되며, 여기서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 함유한다:
Figure pct00013
상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H, RC, 또는 RD이며;
R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RC는 -L-Z이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
L은 링커, 예를 들어, 임의적으로 치환된 알킬렌(예를 들어, C1-C6 알킬렌), 임의적으로 치환된 헤테로알킬렌(C1-C6 헤테로알킬렌), 임의적으로 치환된 알케닐렌(예를 들어, C2-C6 알케닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐렌), 임의적으로 치환된 알키닐렌(예를 들어, C2-C6 알키닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐렌), 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와, 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
다른 양태에서, 본 발명은 화학식 Ab-Am으로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Am이 아마톡신인 컨쥬게이트를 특징으로 한다. 일부 구체예에서, Am은 상기 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)로 표현된다.
상기 2가지 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서의 시스테인 잔기에 의해 아마톡신에 컨쥬게이션된다. 일부 구체예에서, 시스테인 잔기는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서의 돌연변이에 의해 도입된다. 예를 들어, 시스테인 잔기는 Cys118, Cys239, 및 Cys265로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 시스테인 잔기는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서에서 자연적으로 발생한다. 예를 들어, Fc 도메인은 IgG Fc 도메인, 예를 들어, 인간 IgG1 Fc 도메인일 수 있으며, 시스테인 잔기는 Cys261, Csy321, Cys367, 및 Cys425로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, R1은 H, OH, 또는 ORA이며;
R2는 H, OH, 또는 ORB이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
Figure pct00014
를 형성하며;
R3, R4, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R5는 ORC이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이다.
일부 구체예에서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3은 RC이며;
R4, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R5는 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이다.
일부 구체예에서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R4는 ORC, 또는 RC이며;
R5는 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이다.
일부 구체예에서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R4 및 R5는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R8은 ORC 또는 NHRC이며;
R9는 H 또는 OH이다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 CD135+ 세포에 의해 내재화된다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1 μΜ 미만, 750 nM 미만, 500 nM 미만, 250 nM 미만, 200 nM 미만, 150 nM 미만, 100 nM 미만, 75 nM 미만, 50 nM 미만, 10 nM 미만, 1 nM 미만, 0.1 nM 미만, 10 pM 미만, 1 pM 미만, 또는 0.1 pM 미만의 Kd로 CD135와 결합한다. 일부 구체예에서, Kd는 약 0.1 pM 내지 약 1 μM이다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 9×10-2 M-1 s-1 내지 약 1×102 M-1 s-1의 kon으로 CD135와 결합한다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 CDR을 갖는다:
a. 아미노산 서열 SYYMH(SEQ ID NO: 1)를 갖는 CDR-H1;
b. 아미노산 서열 IINPSGGSTSYAQKFQG(SEQ ID NO: 2)를 갖는 CDR-H2;
c. 아미노산 서열 GVGAHDAFDI(SEQ ID NO: 3) 또는 VVAAAVADY(SEQ ID NO: 4)를 갖는 CDR-H3;
d. 아미노산 서열 RSSQSLLHSNGNNYLD(SEQ ID NO: 5) 또는 RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQ ID NO: 6)를 갖는 CDR-L1;
e. 아미노산 서열 LGSNRAS(SEQ ID NO: 7)를 갖는 CDR-L2; 및
f. 아미노산 서열 MQGTHPAIS(SEQ ID NO: 8) 또는 MQSLQTPFT(SEQ ID NO: 9)를 갖는 CDR-L3.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 CDR을 갖는다:
a. 아미노산 서열 SYAIS(SEQ ID NO: 10)를 갖는 CDR-H1;
b. 아미노산 서열 GIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO: 11)를 갖는 CDR-H2;
c. 아미노산 서열 FALFGFREQAFDI(SEQ ID NO: 12)을 갖는 CDR-H3;
d. 아미노산 서열 RASQSISSYLN(SEQ ID NO: 13)을 갖는 CDR-L1;
e. 아미노산 서열 AASSLQS(SEQ ID NO: 14)를 갖는 CDR-L2; 및
f. 아미노산 서열 QQSYSTPFT(SEQ ID NO: 15)를 갖는 CDR-L3.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CD135의 결합을 경쟁적으로 억제하며, 여기에서, 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 CDR을 갖는다:
a. 아미노산 서열 SYYMH(SEQ ID NO: 1)를 갖는 CDR-H1;
b. 아미노산 서열 IINPSGGSTSYAQKFQG(SEQ ID NO: 2)를 갖는 CDR-H2;
c. 아미노산 서열 GVGAHDAFDI(SEQ ID NO: 3) 또는 VVAAAVADY(SEQ ID NO: 4)를 갖는 CDR-H3;
d. 아미노산 서열 RSSQSLLHSNGNNYLD(SEQ ID NO: 5) 또는 RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQ ID NO: 6)를 갖는 CDR-L1;
e. 아미노산 서열 LGSNRAS(SEQ ID NO: 7)를 갖는 CDR-L2; 및
f. 아미노산 서열 MQGTHPAIS(SEQ ID NO: 8) 또는 MQSLQTPFT(SEQ ID NO: 9)를 갖는 CDR-L3.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CD135의 결합을 경쟁적으로 억제하며, 여기에서, 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기 CDR을 갖는다:
a. 아미노산 서열 SYAIS(SEQ ID NO: 10)를 갖는 CDR-H1;
b. 아미노산 서열 GIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO: 11)를 갖는 CDR-H2;
c. 아미노산 서열 FALFGFREQAFDI(SEQ ID NO: 12)을 갖는 CDR-H3;
d. 아미노산 서열 RASQSISSYLN(SEQ ID NO: 13)을 갖는 CDR-L1;
e. 아미노산 서열 AASSLQS(SEQ ID NO: 14)를 갖는 CDR-L2; 및
f. 아미노산 서열 QQSYSTPFT(SEQ ID NO: 15)를 갖는 CDR-L3.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중-가변 면역글로불린 도메인, 단쇄 Fv 분자(scFv), 이중체, 삼중체, 나노체, 항체-유사 단백질 스캐폴드, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 분자, 및 텐뎀 디-scFV로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 양태에서, 본 발명은 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45(예를 들어, CD45RO)와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 세포 독소인 컨쥬게이트를 특징으로 한다. 이러한 양태의 일부 구체예에서, 세포 독소는 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 상기 세포 독소들 중 어느 하나의 변이체이다.
다른 양태에서, 본 발명은 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 세포 독소인 컨쥬게이트를 특징으로 한다. 이러한 양태의 일부 구체예에서, 세포 독소는 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 상기 세포 독소들 중 어느 하나의 변이체이다.
다른 양태에서, 본 발명은 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 세포 독소인 컨쥬게이트를 특징으로 한다. 이러한 양태의 일부 구체예에서, 세포 독소는 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 상기 세포 독소들 중 어느 하나의 변이체이다.
다른 양태에서, 본 발명은 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 세포 독소인 컨쥬게이트를 특징으로 한다. 이러한 양태의 일부 구체예에서, 세포 독소는 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 상기 세포 독소들 중 어느 하나의 변이체이다.
다른 양태에서, 본 발명은 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 세포 독소인 컨쥬게이트를 특징으로 한다. 이러한 양태의 일부 구체예에서, 세포 독소는 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 상기 세포 독소들 중 어느 하나의 변이체이다.
상기 5가지 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 조혈 세포, 예를 들어, 조혈 줄기 세포(예를 들어, CD45+(예를 들어, CD45RO+), CD135+, CD34+, CD90+, 및/또는 CD110+ 세포)에 의해 내재화된다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 1 μΜ 미만, 750 nM 미만, 500 nM 미만, 250 nM 미만, 200 nM 미만, 150 nM 미만, 100 nM 미만, 75 nM 미만, 50 nM 미만, 10 nM 미만, 1 nM 미만, 0.1 nM 미만, 10 pM 미만, 1 pM 미만, 또는 0.1 pM 미만의 Kd로 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 또는 CD110와 결합한다. 일부 구체예에서, Kd는 약 0.1 pM 내지 약 1 μM이다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 약 9×10-2 M-1 s-1 내지 약 1×102 M-1 s-1의 kon으로 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 또는 CD110과 결합한다.
이러한 양태의 일부 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중-가변 면역글로불린 도메인, 단쇄 Fv 분자(scFv), 이중체, 삼중체, 나노체, 항체-유사 단백질 스캐폴드, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 분자, 및 텐뎀 디-scFv로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 항체는 IgG, IgA, IgM, IgD, 및 IgE로 이루어진 군으로부터 선택된 아이소타입을 갖는다.
도 1은 시험관 내에서 Reh 세포의 생존력에 대한, 사포린-컨쥬게이션된 Fab 단편에 의해 사포린에 각각 결합된, 다양한 농도의 항-CD45 모노클로날 항체 Ab1, Ab2, 및 Ab3, 또는 아이소타입-매칭된 음성 대조군의 효과를 나타낸 그래프이다. 세포 생존력은 하기 실시예 8에 기술된 바와 같은 CellTiter-GloTM 검정 키트를 이용하여 평가되었다.
도 2는 시험관 내에서 인간 CD34+ 세포의 생존력에 대한, 사포린-컨쥬게이션된 Fab 단편에 의해 사포린에 각각 결합된, 다양한 농도의 항-CD45 모노클로날 항체 또는 아이소타입-매칭된 음성 대조군의 효과를 나타낸 그래프이다. 세포 생존력은 하기 실시예 8에 기술된 바와 같은 CellTiter-GloTM 검정 키트를 이용하여 평가되었다.
본 발명은 다른 것들 중에서, 조혈 계통에서의 세포 타입의 질병, 자가면역 질병, 대사 장애, 및 줄기 세포 장애와 같은, 다양한 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 본원에 기술된 조성물 및 방법은 (i) 병리를 일으키는 세포의 집단, 예를 들어, 암 세포(예를 들어, 백혈병 세포) 및 자가면역 세포(예를 들어, 자가반응 T-세포)의 집단을 직접적으로 감소시킬 수 있고/거나 (ii) 이식된 세포가 안착될 수 있는 니치를 제공함으로써 이식된 조혈 줄기 세포의 생착을 증진시키기 위해 내인성 조혈 줄기 세포의 집단을 고갈시킬 수 있다. 상기 활성은 내인성 질병-야기 세포 또는 조혈 줄기 세포에 의해 발현된 항원을 결합할 수 있는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드의 투여에 의해 달성될 수 있다. 질병의 직접 치료의 경우에, 이러한 투여는 고려되는 병리를 일으키는 세포의 양의 감소를 야기시킬 수 있다. 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위해 환자를 준비하는 경우에, 이러한 투여는 내인성 조혈 줄기 세포의 집단의 선택적 감소를 야기시킬 수 있고, 이에 의해, 후속하여 이식된, 외인성 조혈 줄기 세포에 의해 채워질 수 있는, 골수와 같은, 조혈 조직에서의 빈자리(vacancy)를 생성시킬 수 있다. 본 발명은 부분적으로, CD45, CD135, CD34, CD90, 또는 CD110과 결합할 수 있는 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드가 상기 활성 둘 모두를 달성하기 위해 환자에게 투여될 수 있다는 발견을 기초로 한 것이다. CD45, CD135, CD34, CD90, 또는 CD110과 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드는 암성 세포 또는 자가면역 세포의 집단을 직접적으로 감소시키기 위해 암 또는 자가 면역 질병으로 고통 받는 환자에게 투여될 수 있고, 또한, 이식된 조혈 줄기 세포의 생존 및 생착 가능성을 증진시키기 위해 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다.
항-CD45, 항-CD135, 항-CD34, 항-CD90, 또는 항-CD110 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드의 투여로 인한 조혈 줄기 세포 이식편의 생착은 다양한 경험적 측정에서 분명해질 수 있다. 예를 들어, 이식된 조혈 줄기 세포의 생착은 CD45, CD135, CD34, CD90, 또는 CD110와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 투여 및 조혈 줄기 세포 이식편의 후속 투여 후에 환자의 골수 내에 존재하는 경쟁적 재생 단위(경쟁적 재증식 단위: CRU)의 양을 평가함으로써 평가될 수 있다. 추가적으로, 당업자는 공여자 조혈 줄기 세포가 이식된 벡터 내에, 형광, 발색단, 또는 발광 산물을 산출하는 화학적 반응을 촉매화하는 효소와 같은, 리포터 유전자를 도입하고 후속하여, 골수와 같은, 조혈 줄기 세포가 안착된 조직에서 상응하는 신호를 모니터링함으로써 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 관찰할 수 있다. 당업자는 또한, 예를 들어, 당해 분야에 공지된 형광 활성화된 세포 분류(FACS) 분석 방법에 의해 결정된 바와 같이, 조혈 줄기 및 전구 세포의 양 및 생존을 평가함으로써 조혈 줄기 세포 생착을 관찰할 수 있다. 생착은 또한, 이식후 기간 동안 말초 혈액에서 백혈구 수를 측정함으로써 및/또는 골수 흡인 샘플에서 공여자 세포에 의한 골수 세포의 회수를 측정함으로써 결정될 수 있다.
하기 섹션은 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 증가시키기 위해, 환자, 예를 들어, 암 또는 자가면역 질병으로 고통 받는 환자, 또는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에 투여될 수 있는 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드뿐만 아니라, (예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식 이전에) 환자에게 이러한 치료제를 투여하는 방법의 설명을 제공한다.
정의
본원에서 사용되는 용어 "약"은 기술되는 값보다 10% 높거나 낮은 것 내에 있는 값을 지칭한다. 예를 들어, 용어 "약 5 nM"은 4.5 nM 내지 5.5 nM 범위를 지시한다.
본원에서 사용되는 용어 "아마톡신"은 아마니타 팔로이데스 버섯에 의해 형성된 펩티드의 아마톡신 패밀리, 또는 이의 변이체 또는 유도체, 예를 들어, RNA 폴리머라아제 II 활성을 억제할 수 있는 이의 변이체 또는 유도체의 일원을 지칭한다. 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 유용한 아마톡신은 하기 화학식 (III)에 따른 화합물, 예를 들어, α-아마니틴, β-아마니틴, γ-아마니틴, ε-아마니틴, 아마닌, 아마닌아미드, 아마눌린, 아마눌린산, 및 프로아마눌린을 포함한다. 화학식 (III)은 하기와 같다:
Figure pct00015
상기 식에서, R1은 H, OH, 또는 ORA이며;
R2는 H, OH, 또는 ORB이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H 또는 RD이며;
R4는 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, 또는 ORD이며;
R9는 H, OH, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이다.
예를 들어, 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 유용한 아마톡신은 하기 화학식 (IIIA)에 따른 화합물을 포함한다:
Figure pct00016
상기 식에서, R1은 H, OH, 또는 ORA이며;
R2는 H, OH, 또는 ORB이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H 또는 RD이며;
R4는 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, 또는 ORD이며;
R9는 H, OH, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이다.
본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 유용한 아마톡신은 또한, 하기 화학식 (IIIB)에 따른 화합물을 포함한다:
Figure pct00017
상기 식에서, R1은 H, OH, 또는 ORA이며;
R2는 H, OH, 또는 ORB이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H 또는 RD이며;
R4는 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORD, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, 또는 ORD이며;
R9는 H, OH, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이다.
본원에 기술된 바와 같이, 아마톡신은 예를 들어, 링커 모이어티에 의해, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드에 컨쥬게이션될 수 있다. 아마톡신 컨쥬게이션의 예시적인 방법 및 이러한 공정을 위해 유용한 링커는 "화학적 컨쥬게이션을 위한 링커"로 명명되는 섹션뿐만 아니라, 하기 표 2에 기술된다. 본원에 기술된 조성물 및 방법에 따른 항체, 항원-결합 단편, 또는 리간드에 대한 컨쥬게이션을 위해 유용한 예시적인 링커-함유 아마톡신은 본원에서 인용된 구조식 (I), (IA), (IB) 및 (II)에 나타나 있다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 특정 항원에 특이적으로 결합하거나 특정 항원과 면역학적으로 반응성인 면역글로불린 분자를 지칭하고, 키메라 항체, 인간화된 항체, 헤테로컨쥬게이트 항체(예를 들어, 이중-, 삼중- 및 사중-특이적 항체, 이중체, 삼중체, 및 사중체)를 포함하지만 이로 제한되지 않는 폴리클로날, 모노클로날, 유전적으로 조작되고 그밖에 개질된 형태의 항체, 및 예를 들어, Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rlgG, 및 scFv 단편을 포함하는 항체의 항원 결합 단편을 포함한다. 달리 명시하지 않는 한, 용어 "모노클로날 항체"(mAb)는 타겟 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 항체 단편(예를 들어, Fab 및 F(ab')2 단편을 포함함)뿐만 아니라 온전한 분자 둘 모두를 포함함을 의미한다. 본원에서 사용되는 Fab 및 F(ab')2 단편은 온전한 항체의 Fc 단편이 결여된 항체 단편을 지칭한다. 이러한 항체 단편의 예는 본원에 기술된다.
본원에서 사용되는 용어 "항원-결합 단편"은 타겟 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편을 지칭한다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다. 항체 단편은 예를 들어, Fab, F(ab')2, scFv, 이중체, 삼중체, 어피바디(affibody), 나노체, 아프타머(aptamer), 또는 도메인 항체일 수 있다. 용어 항체의 "항원-결합 단편"을 포함하는 결합 단편의 예는 (i) Fab 단편, VL, VH, CL, 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편; (ii) F(ab')2 단편, 힌지 영역에서 디설파이드 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 함유한 2가 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 이루어진 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편, (v) VH 및 VL 도메인을 포함하는 dAb; (vi) VH 도메인으로 이루어진 dAb 단편(예를 들어, 문헌[Ward et al., Nature 341:544-546, 1989] 참조); (vii) VH 또는 VL 도메인으로 이루어진 dAb; (viii) 단리된 상보성 결정 영역(CDR); 및 (ix) 합성 링커에 의해 임의적으로 연결될 수 있는 둘 이상(예를 들어, 2, 3, 4, 5 또는 6개)의 단리된 CDR의 조합을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 또한, Fv 단편의 2가지 도메인, 즉, VL 및 VH가 별도의 유전자에 의해 코딩되지만, 이러한 것들은, 재조합 방법에 의해, VL 및 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자(단쇄 Fv(scFv)로서 알려짐)를 형성하는 단일 단백질 사슬로서 이루어질 수 있게 하는 링커에 의해 연결될 수 있다(예를 들어, 문헌[Bird et al., Science 242:423-426, 1988 및 Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988] 참조). 이러한 항체 단편은 당업자에게 공지된 보편적인 기술을 이용하여 얻어질 수 있으며, 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 사용하기 위해 스크리닝될 수 있다. 항원-결합 단편은 재조합 DNA 기술, 온전한 면역글로불린의 효소적 또는 화학적 분할에 의해, 또는 특정 경우에, 당해 분야에 공지된 화학적 펩티드 합성 절차에 의해 형성될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "항-CD45 항체"는 면역글로불린 분자의 적어도 일부, 예를 들어, 비제한적으로, CD45(예를 들어, CD45RO)에 특이적으로 결합할 수 있는, 중쇄 또는 경쇄의 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 이의 리간드 결합 부분, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역, 프레임워크 영역, 또는 이의 임의의 부분을 포함하는, 단백질 또는 펩티드-함유 분자를 지칭한다. 항-CD45 항체는 또한, 항체-유사 단백질 스캐폴드, 예를 들어, 제10 피브로넥틴 타입 III 도메인(10Fn3)을 포함하며, 이는 항체 CDR에 대한 구조 및 용매 접근성에서 유사한 BC, DE, 및 FG 구조적 루프를 함유한다. 10Fn3 도메인의 삼원 구조는 IgG 중쇄의 가변 영역과 유사하며, 당업자는 예를 들어, 10Fn3의 BC, DE 및 FG 루프의 잔기를 항-CD45 모노클로날 항체의 CDRH-1, CDRH-2, 또는 CDRH-3 영역으로부터의 잔기로 대체함으로써 피브로넥틴 스캐폴드 상에 항-CD45 모노클로날 항체의 CDR을 이식할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "항-CD135 항체"는 CD135와 특이적으로 결합할 수 있는, 중쇄 또는 경쇄의 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 이의 리간드 결합 부분, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역, 프레임워크 영역, 또는 이의 임의의 부분과 같은 (그러나 이로 제한되지 않음) 면역글로불린 분자의 적어도 일부분을 포함하는 단백질 또는 펩티드-함유 분자를 지칭한다. 항-CD135 항체는 또한, 항체-유사 단백질 스캐폴드, 예를 들어, 제10 피브로넥틴 타입 III 도메인(10Fn3)을 포함하는데, 이는 항체 CDR에 대한 구조 및 용매 접근성에서 유사한 BC, DE 및 FG 구조적 루프를 함유한다. 10Fn3 도메인의 3차 구조는 IgG 중쇄의 가변 영역과 유사하며, 당업자는 예를 들어, 10Fn3의 BC, DE, 및 FG 루프의 잔기를 항-CD135 모노클로날 항체의 CDRH-1, CDRH-2, 또는 CDRH-3 영역으로부터의 잔기로 대체함으로써 피브로넥틴 스캐폴드 상에 항-CD135 모노클로날 항체의 CDR을 이식할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "항-CD34 항체"는 CD34와 특이적으로 결합할 수 있는, 중쇄 또는 경쇄의 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 이의 리간드 결합 부분, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역, 프레임워크 영역, 또는 이의 임의의 부분과 같은 (그러나 이로 제한되지 않음) 면역글로불린 분자의 적어도 일부분을 포함하는 단백질 또는 펩티드-함유 분자를 지칭한다. 항-CD34 항체는 또한, 항체-유사 단백질 스캐폴드, 예를 들어, 제10 피브로넥틴 타입 III 도메인(10Fn3)을 포함하는데, 이는 항체 CDR에 대한 구조 및 용매 접근성에서 유사한 BC, DE 및 FG 구조적 루프를 함유한다. 10Fn3 도메인의 3차 구조는 IgG 중쇄의 가변 영역과 유사하며, 당업자는 예를 들어, 10Fn3의 BC, DE, 및 FG 루프의 잔기를 항-CD34 모노클로날 항체의 CDRH-1, CDRH-2, 또는 CDRH-3 영역으로부터의 잔기로 대체함으로써 피브로넥틴 스캐폴드 상에 항-CD34 모노클로날 항체의 CDR을 이식할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "항-CD90 항체"는 CD90과 특이적으로 결합할 수 있는, 중쇄 또는 경쇄의 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 이의 리간드 결합 부분, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역, 프레임워크 영역, 또는 이의 임의의 부분과 같은 (그러나 이로 제한되지 않음) 면역글로불린 분자의 적어도 일부분을 포함하는 단백질 또는 펩티드-함유 분자를 지칭한다. 항-CD90 항체는 또한, 항체-유사 단백질 스캐폴드, 예를 들어, 제10 피브로넥틴 타입 III 도메인(10Fn3)을 포함하는데, 이는 항체 CDR에 대한 구조 및 용매 접근성에서 유사한 BC, DE 및 FG 구조적 루프를 함유한다. 10Fn3 도메인의 3차 구조는 IgG 중쇄의 가변 영역과 유사하며, 당업자는 예를 들어, 10Fn3의 BC, DE, 및 FG 루프의 잔기를 항-CD90 모노클로날 항체의 CDRH-1, CDRH-2, 또는 CDRH-3 영역으로부터의 잔기로 대체함으로써 피브로넥틴 스캐폴드 상에 항-CD90 모노클로날 항체의 CDR을 이식할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "항-CD110 항체"는 CD110과 특이적으로 결합할 수 있는, 중쇄 또는 경쇄의 적어도 하나의 상보성 결정 영역(CDR) 또는 이의 리간드 결합 부분, 중쇄 또는 경쇄 가변 영역, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역, 프레임워크 영역, 또는 이의 임의의 부분과 같은 (그러나 이로 제한되지 않음) 면역글로불린 분자의 적어도 일부분을 포함하는 단백질 또는 펩티드-함유 분자를 지칭한다. 항-CD110 항체는 또한, 항체-유사 단백질 스캐폴드, 예를 들어, 제10 피브로넥틴 타입 III 도메인(10Fn3)을 포함하는데, 이는 항체 CDR에 대한 구조 및 용매 접근성에서 유사한 BC, DE 및 FG 구조적 루프를 함유한다. 10Fn3 도메인의 3차 구조는 IgG 중쇄의 가변 영역과 유사하며, 당업자는 예를 들어, 10Fn3의 BC, DE, 및 FG 루프의 잔기를 항-CD110 모노클로날 항체의 CDRH-1, CDRH-2, 또는 CDRH-3 영역으로부터의 잔기로 대체함으로써 피브로넥틴 스캐폴드 상에 항-CD110 모노클로날 항체의 CDR을 이식할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "이중특이적 항체"는 예를 들어, 적어도 2개의 상이한 항원과 결합할 수 있는 모노클로날, 종종, 인간 또는 인간화된 항체를 지칭한다. 예를 들어, 결합 특이성들 중 하나는 조혈 줄기 세포 표면 항원, 예를 들어, CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 또는 CD110에 관한 것일 수 있으며, 다른 하나는 상이한 조혈 줄기 세포 표면 항원 또는 다른 세포 표면 단백질, 예를 들어, 다른 것들 중에서, 세포 성장을 강화시키는 신호 전달 경로에 관여된 수용체 또는 수용체 하위단위에 대한 것일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "상보성 결정 영역"(CDR)은 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 모두에서 발견된 초가변 영역을 지칭한다. 가변 도메인의 더욱 고도로 보존된 부분은 프레임워크 영역(FR)으로서 지칭된다. 항체의 초가변 영역을 나타내는 아미노산 위치는 문맥(context) 및 당해 분야에 공지된 다양한 정의에 따라 달라질 수 있다. 가변 도메인 내의 일부 위치는, 이러한 위치가 상이한 세트의 기준 하에서 초가변 영역 외측에 존재하는 것으로 간주되는 반면 하나의 세트의 기준 하에서 초가변 영역 내에 존재하는 것으로 간주될 수 있는, 하이브리드 초가변 위치로서 보여질 수 있다. 이러한 위치들 중 하나 이상은 또한, 연장된 초가변 영역에서 발견될 수 있다. 본원에 기술된 항체는 이러한 하이브리드 초가변 위치에 변형(modification)을 함유할 수 있다. 고유 중쇄 및 경쇄 각각의 가변 도메인은 β-시트 구조를 연결시키고 일부 경우에 이의 일부를 형성하는 루프를 형성하는, 3개의 CDR에 의해 연결된, β-시트 구성을 주로 채택하는 4개의 프레임워크 영역을 함유한다. 각 사슬에서 CDR은 순서 FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4로 프레임워크 영역에 의해 매우 근접하게 함께 결합되고, 다른 항체 사슬로부터의 CDR과 함께, 항체의 타겟 결합 사이트의 형성에 기여한다(문헌[Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, MD., 1987] 참조). 본원에서 사용되는 바와 같이, 면역글로불린 아미노산 잔기의 넘버링(numbering)은 달리 명시하지 않는 한, 코베이트 등(Kabat et al.)의 면역글로불린 아미노산 잔기 넘버링 시스템에 따라 수행된다.
본원에서 사용되는 용어 "컨디션(condition)" 및 "컨디셔닝(conditioning)"은 환자가 조혈 줄기 세포를 함유한 이식편의 수용을 위해 준비되는 과정을 지칭한다. 이러한 절차는 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 증진시킨다(예를 들어, 컨디셔닝 절차 및 후속 조혈 줄기 세포 이식 후에 환자로부터 단리된 혈액 샘플 내의 생존 가능한 조혈 줄기 세포의 양의 지속적인 증가로부터 유추됨). 본원에 기술된 방법에 따르면, 환자는 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 또는 CD110과 같은, 조혈 줄기 세포에 의해 발현된 항원과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 환자에 대한 투여에 의해 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위해 컨디셔닝될 수 있다. 본원에 기술된 바와 같이, 항체는 약물-항체 컨쥬게이트를 형성하기 위해 세포 독소에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에게 상기 항원들 중 하나 이상과 결합할 수 있는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트의 투여는 예를 들어, 내인성 조혈 줄기 세포를 선택적으로 감소시킴으로써, 조혈 줄기 세포의 생착을 증진시킬 수 있고, 이에 의해, 외인성 조혈 줄기 세포 이식편에 의해 채워지는 빈 공간을 생성시킬 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "컨쥬게이트"는 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 같은, 하나의 분자의 반응성 작용기와, 본원에 기술된 세포 독소와 같은, 다른 분자의 적절한 반응성 작용기의 화학적 졀합에 의해 형성된 화합물을 지칭한다. 컨쥬게이트는 서로 결합된 2개의 분자들 사이에 링커를 포함할 수 있다. 컨쥬게이트의 형성을 위해 사용될 수 있는 링커의 예는 펩티드-함유 링커, 예를 들어, 자연 발생 또는 비-자연 발생 아미노산, 예를 들어, D-아미노산을 함유하는 링커를 포함한다. 링커는 본원에 기술되고 당해 분야에 공지된 다양한 전략을 이용하여 제조될 수 있다. 링커에서의 반응성 성분에 따라, 링커는 예를 들어, 효소적 가수분해, 광분해, 산성 조건 하에서의 가수분해, 염기성 조건 하에서의 가수분해, 산화, 디설파이드 환원, 친핵성 분할, 또는 유기금속성 분할에 의해 분할될 수 있다(예를 들어, 문헌[Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571-582, 2012] 참조).
본원에서 사용되는 용어 "커플링 반응"은 서로 반응하기에 적합한 둘 이상의 치환체가 각 치환체에 결합된 분자 단편을 (예를 들어, 공유적으로) 연결시키는 화학적 모이어티를 형성하기 위해 반응하는 화학적 반응을 지칭한다. 커플링 반응은 당해 분야에 공지되거나 본원에 기술된 세포 독소와 같은, 세포 독소인 단편에 결합된 반응성 치환체가 당해 분야에 공지되거나 본원에 기술된 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110에 대해 특이적인 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드와 같은 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드인 단편에 결합된 적합한 반응성 치환체와 반응하는 것을 포함한다. 적합한 반응성 치환체의 예는 친핵체/친전자체 쌍(다른 것들 중에서, 예를 들어, 티올/할로알킬 쌍, 아민/카보닐 쌍, 또는 티올/α,β-불포화된 카보닐 쌍), 디엔/친디엔체 쌍(다른 것들 중에서, 예를 들어, 아지드/알킨 쌍), 등을 포함한다. 커플링 반응은 비제한적으로, 티올 알킬화, 하이드록실 알킬화, 아민 알킬화, 아민 축합, 아미드화, 에스테르화, 디설파이드 형성, 고리화첨가(다른 것들 중에서, 예를 들어, [4+2] 디엘스-앨더 고리화첨가, [3+2] 후이스겐 고리화첨가), 친핵체 방향족 치환, 친전자체 방향족 치환, 및 당해 분야에 공지되거나 본원에 기술된 다른 반응성 양상(modality)을 포함한다.
본원에서 사용되는 "CRU(경쟁적 재증식 단위(competitive repopulating unit))"는 생체내 이식 후 검출될 수 있는, 장기 이식 줄기 세포의 측정 단위를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "공여자"는 수용자 내에 세포, 또는 이의 자손의 투여 전에 하나 이상의 세포가 단리된 인간 또는 동물을 지칭한다. 하나 이상의 세포는 예를 들어, 조혈 줄기 세포의 집단일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "이중체"는 각 폴리펩티드 사슬이 동일한 펩티드 사슬 상에서 VH 및 VL 도메인의 분자내 회합을 허용하기 위해 너무 짧은 링커(예를 들어, 5개의 아미노산으로 이루어진 링커)에 의해 연결된 VH 및 VL 도메인을 포함하는, 2개의 폴리펩티드 사슬을 함유한 2가 항체를 지칭한다. 이러한 구성은 호모다이머 구조를 형성하기 위해 각 도메인이 다른 폴리펩티드 사슬 상에 상보적인 도메인과 쌍을 이루게 한다. 이에 따라, 용어 "삼중체"는 3개의 펩티드 사슬을 함유한 3가 항체를 지칭하는데, 이들 각각은 동일한 펩티드 사슬 내에서 VH 및 VL 도메인의 분자내 회합을 허용하기 위해 극도로 짧은 링커(예를 들어, 1 내지 2개의 아미노산으로 이루어진 링커)에 의해 연결된 하나의 VH 도메인 및 하나의 VL 도메인을 함유한다. 이의 고유 구조로 접히기 위하여, 이러한 방식으로 구성된 펩티드는 통상적으로, 서로 공간적으로 근위에 있는 이웃하는 펩티드 사슬들의 VH 및 VL 도메인을 정위시키기 위해 트라이머화된다(예를 들어, 문헌[Holliger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-48, 1993] 참조).
본원에서 사용되는, "이중 가변 도메인 면역글로불린"("DVD-Ig")은 4가의 이중-타겟화 단일 제제를 생성시키기 위해 링커를 통해 2개의 모노클로날 항체의 타겟-결합 가변 도메인을 결합시키는 항체를 지칭한다(예를 들어, 문헌[Gu et al., Meth. Enzymol., 502:25-41, 2012] 참조).
본원에서 사용되는 용어 "내인성"은 인간 환자와 같은 특정 유기체에서 자연적으로 발견되는, 분자, 세포, 조직, 또는 장기(예를 들어, 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포, 예를 들어, 거핵구, 혈전구, 혈소판, 적혈구, 비만 세포, 골수아세포, 호염구, 호중구, 호산성구, 소교 세포, 과립구, 단핵구, 파골 세포, 항원-제공 세포, 대식 세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 또는 B-림프구)와 같은 물질을 기술한다.
본원에서 사용되는 용어 "생착 가능성(engraftment potential)"은 이러한 세포가 자연적으로 순환하거나 이식에 의해 제공되는 지의 여부에 따라, 조직을 재증시키는 조혈 줄기 및 전구 세포의 능력을 지칭하기 위해 사용된다. 이러한 용어는 세포의 조직 안착 및 고려되는 조직 내에 세포의 콜로니화와 같은, 생착 주변, 또는 생착까지 이르게 되는 모든 사건을 포함한다. 생착 효율 또는 생착율은 당업자에게 공지된 바와 같은 임의의 임상적으로 허용되는 파라미터를 이용하여 평가되거나 정량화될 수 있고, 예를 들어, 경쟁적 재증식 단위(CRU)의 평가, 줄기 세포가 안착되거나, 콜로니화되거나 이식된 조직(들)에서 마커의 혼입 또는 발현; 또는 질병 진행, 조혈 줄기 및 전구 세포의 생존, 또는 수용자의 생존을 통한 대상체의 진행의 평가를 포함할 수 있다. 생착은 또한, 이식후 기간 동안 말초 혈액에서 백혈구 카운트를 측정함으로써 결정될 수 있다. 생착은 또한, 골수 흡인 샘플에서 공여자 세포에 의한 골수 세포의 회수를 측정함으로써 평가될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "외인성"은 인간 환자와 같은, 특정 유기체에서 자연적으로 발견되지 않는, 분자, 세포, 조직, 또는 장기(예를 들어, 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포, 예를 들어, 거핵구, 혈전구, 혈소판, 적혈구, 비만 세포, 골수아세포, 호염구, 호중구, 호산성구, 소교 세포, 과립구, 단핵구, 파골 세포, 항원-제공 세포, 대식 세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 또는 B-림프구)와 같은 물질을 기술한다. 외인성 물질은 외부 공급원으로부터 유기체에 또는 이로부터 추출된 배양된 물질에 제공되는 것을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "프레임워크 영역" 또는 "FW 영역"은 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 CDR에 인접한 아미노산 잔기를 포함한다. FW 영역 잔기는 다른 것들 중에서, 예를 들어, 인간 항체, 인간화된 항체, 모노클로날 항체, 항체 단편, Fab 단편, 단쇄 항체 단편, scFv 단편, 항체 도메인, 및 이중특이적 항체에 존재할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "조혈 줄기 세포"("HSC")는 자기-재생하고, 과립구(예를 들어, 전골수세포, 호중구, 산호성백혈구, 호염구), 적혈구(예를 들어, 망상 적혈구, 적혈구), 혈소판(예를 들어, 거핵아구, 혈소판 형성 거대핵세포, 혈소판), 단핵구(예를 들어, 단핵구, 대식세포), 수지상 세포, 소교세포, 파골세포, 및 림프구(예를 들어, NK 세포, B-세포 및 T-세포)를 포함하지만, 이로 제한되지 않는, 다양한 계통을 함유한 성숙 혈액 세포로 분화하는 능력을 갖는 미성숙 혈액 세포를 지칭한다. 이러한 세포는 CD34+ 세포를 포함할 수 있다. CD34+ 세포는 CD34 세포 표면 마커를 발현시키는 미성숙 세포이다. 인간에서, CD34+ 세포는 상기에서 규정된 줄기 세포 성질을 갖는 세포의 하위집단을 포함하는 것으로 여겨지며, 마우스에서, HSC는 CD34-이다. 또한, HSC는 또한, 장기 재증식 HSC(LT-HSC) 및 단기 재증식 HSC(ST-HSC)를 지칭한다. LT-HSC 및 ST-HSC는 기능적 잠재력 및 세포 표면 마커 발현을 기초로 하여, 분화된다. 예를 들어, 인간 HSC는 CD34+, CD38-, CD45RA-, CD90+, CD49F+, 및 lin-(CD2, CD3, CD4, CD7, CD8, CD10, CD11B, CD19, CD20, CD56, CD235A를 포함하는 성숙한 계통 마커에 대해 음성임)이다. 마우스에서, 골수 LT-HSC는 CD34-, SCA-1+, C-kit+, CD135-, Slamfl/CD150+, CD48-, 및 lin-(Ter119, CD11b, Gr1, CD3, CD4, CD8, B220, IL7ra를 포함하는 성숙한 계통 마커에 대해 음성임)이며, ST-HSC는 CD34+, SCA-1+, C-kit+, CD135-, Slamfl/CD150+, 및 lin-(Ter119, CD11b, Gr1, CD3, CD4, CD8, B220, IL7ra를 포함하는 성숙한 계통 마커에 대해 음성임)이다. 또한, ST-HSC는 항상성 조건 하에서 LT-HSC보다 덜 중단되고 더욱 증식성을 나타낸다. 그러나, LT-HSC는 더 큰 자가 재생 가능성을 가지며(즉, 이러한 것은 성인기 동안 생존하고, 연속 수용자들을 통해 연속적으로 이식될 수 있으며), ST-HSC는 제한된 자가 재생을 갖는다(즉, 이러한 것은 단지 제한된 시간 동안 생존하고, 연속 이식 가능성을 지니지 않는다). 이러한 HSC들 중 어느 하나는 본원에 기술된 방법에서 사용될 수 있다. ST-HSC는, 이러한 것이 고도로 증식성이고 이에 따라 분화된 자손을 더욱 빠르게 생성시킬 수 있기 때문에 특히 유용하다.
본원에서 사용되는 용어 "조혈 줄기 세포 기능적 잠재력"은 1) 다중-분화능(과립구(예를 들어, 전골수세포, 호중구, 산호성백혈구, 호염구), 적혈구(예를 들어, 망상 적혈구, 적혈구), 혈소판(예를 들어, 거핵아구, 혈소판 생성 거대핵세포, 혈소판), 단핵구(예를 들어, 단핵구, 대식세포), 수지상 세포, 소교세포, 파골세포, 및 림프구(예를 들어, NK 세포, B-세포 및 T-세포를 포함하지만, 이로 제한되지 않는 다수의 상이한 혈액 계통으로 분화하는 능력을 지칭함), 2) 자가-재생(모 세포로서 균등한 가능성을 갖는 딸 세포를 생성시키는 조혈 줄기 세포의 능력을 지칭하는 것으로서, 추가로 이러한 능력이 고갈 없이 개체의 수명 전반에 걸쳐 반복적으로 일어날 수 있음), 및 3) 조혈 줄기 세포 니치에 안착하고 생산적 및 지속적 조혈을 재형성하는 이식편 수용자 내로 재도입되는 조혈 줄기 세포 또는 이의 자손의 능력을 포함하는 조혈 줄기 세포의 기능적 성질을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 단백질의 실질적으로 모든 부분(예를 들어, 모든 CDR, 프레임워크 영역, CL, CH 도메인(예를 들어, CH1, CH2, CH3), 힌지, 및 VL 및 VH 도메인)이 인간에서 실질적으로 비-면역원성이고 단지 최소 서열 변경 또는 변경을 갖는, 항체를 지칭한다. 인간 항체는 인간 세포에서(예를 들어, 재조합 발현에 의해) 또는 기능적으로 재배열된 인간 면역글로불린(예를 들어, 중쇄 및/또는 경쇄) 유전자를 발현시킬 수 있는 비-인간 동물 또는 원핵 또는 진핵 세포에 의해 생성될 수 있다. 인간 항체가 단쇄 항체일 때, 이는 천연 인간 항체에서 발견되지 않는 링커 펩티드를 포함할 수 있다. 예를 들어, Fv는 링커 펩티드, 예를 들어, 2 내지 약 8개의 글리신 또는 다른 아미노산 잔기를 함유할 수 있으며, 이는 중쇄의 가변 영역 및 경쇄의 가변 영역을 연결시킨다. 이러한 링커 펩티드는 인간 기원인 것으로 여겨진다. 인간 항체는 인간 면역글로불린 서열로부터 유래된 항체 라이브러리를 이용하는 파지 디스플레이 방법을 포함하는 당해 분야에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 항체는 또한, 기능적 내인성 면역글로불린을 발현시킬 수 없지만, 인간 면역글로불린 유전자를 발현시킬 수 있는 형질전환 마우스를 사용하여 생성될 수 있다(예를 들어, PCT 공개번호 WO 1998/24893호; WO 1992/01047호; WO 1996/34096호; WO 1996/33735호; 미국특허번호 제5,413,923호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 제5,569,825호; 제5,661,016호; 제5,545,806호; 제5,814,318호; 제5,885,793호; 제5,916,771호; 및 제5,939,598호 참조).
본원에서 사용되는 용어 "인간화된(humanized)" 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유한 비-인간 항체를 지칭한다. 일반적으로, 인간화된 항체는 실질적으로 모든 적어도 하나, 및 통상적으로 두 개의 가변 도메인을 함유하며, 여기에서, 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 것과 일치한다. 모든 또는 실질적으로 모든 FW 영역은 또한, 인간 면역글로불린 서열의 것일 수 있다. 인간화된 항체는 또한, 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부분, 통상적으로 인간 면역글로불린 공통 서열의 것을 함유할 수 있다. 항체 인간화 방법은 당해 분야에 공지되어 있고, 예를 들어, 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323-7, 1988]; 미국특허번호 제5,530,101호; 제5,585,089호; 제5,693,761호; 제5,693,762호; 및 제6,180,370호에 기술되어 있다.
본원에서 사용되는, 조혈 줄기 세포 이식편을 "필요로 하는" 환자는 하나 이상의 혈액 세포 타입의 결함 또는 결핍을 나타내는 환자뿐만 아니라 줄기 세포 장애, 자가면역 질병, 암, 또는 본원에 기술된 다른 병리를 갖는 환자를 포함한다. 조혈 줄기 세포는 일반적으로, 1) 이에 따라, 과립구(예를 들어, 전골수세포, 호중구, 산호성백혈구, 호염구), 적혈구(예를 들어, 망상 적혈구, 적혈구), 혈소판(예를 들어, 거핵아구, 혈소판 생성 거대핵세포, 혈소판), 단핵구(예를 들어, 단핵구, 대식세포), 수지상 세포, 소교세포, 파골세포, 및 림프구(예를 들어, NK 세포, B-세포 및 T-세포)를 포함하지만, 이로 제한되지 않는, 다수의 상이한 혈액 계통으로 분화할 수 있는, 다중-분화능, 2) 이에 따라, 모 세포와 균등한 가능성을 갖는 탈 세포를 일으킬 수 있는 자가-재생, 및 3) 조혈 줄기 세포 니치에 안착하고 생산적 및 지속적 조혈을 재확립시키는 이식편 수용자 내에 재도입하는 능력을 나타낸다. 조혈 줄기 세포는 이에 따라, 생체 내에서 세포의 결함성 또는 부족한 집단을 재구성하기 위해 조혈 계통의 하나 이상의 세포 타입에 결함이 있거나 부족한 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들어, 환자는 암으로 고통을 받을 수 있으며, 결핍은 암성 세포 집단을 선택적으로 또는 비-선택적으로 감소시키는 화학치료제 또는 다른 약제의 투여에 의해 야기될 수 있다. 추가적으로, 또는 대안적으로, 환자는 이상혈색소증(예를 들어, 비-악성 이상혈색소증), 예를 들어, 겸상 적혈구 빈혈, 지중해 빈혈, 판코니 빈혈, 무형성 빈혈, 및 비스코트-올드리치 증후군으로 고통을 받을 수 있다. 대상체는 아데노신 데아미나아제 중증 복합형 면역결핍증(ADA SCID), HIV/AIDS, 이염색백색질장애, 다이아몬드-블랙판 빈혈, 및 슈바크만-다이아몬드 증후군으로 고통을 받는 대상체일 수 있다. 대상체는 유전된 혈액 장애(예를 들어, 겸상 적혈구 빈혈) 또는 자가면역 장애를 갖거나 이에 의해 영향을 받을 수 있다. 추가적으로, 또는 대안적으로, 대상체는 악성 종양, 예를 들어, 신경아세포종 또는 혈액암을 가질 수 있거나, 이에 의해 영향을 받을 수 있다. 예를 들어, 대상체는 백혈병, 림프종, 또는 골수종을 가질 수 있다. 일부 구체예에서, 대상체는 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 광범위 큰 B-세포 림프종, 또는 비호지킨 림프종을 갖는다. 일부 구체예에서, 대상체는 골수 형성이상 증후군을 갖는다. 일부 구체예에서, 대상체는 자가면역 질병, 예를 들어, 경피증, 다발성 경화증, 궤양성 대장염, 크론병, 제1형 당뇨병, 또는 본원에 기술된 다른 자가면역 병리를 갖는다. 일부 구체예에서, 대상체는 키메라 항원 수용체 T-세포(CART) 치료법을 필요로 한다. 일부 구체예에서, 대상체는 대사 저장 장애를 갖거나 그밖에 이러한 대사 저장 장애에 의해 영향을 받는다. 대상체는 글리코겐 축적 질병, 뮤코다당증, 고오시에씨 병, 후를러 질병, 스핑고지질증, 이염색백색질장애, 또는 본원에 개시되고 비제한적으로, 중증 복합형 면역결핍증, 위스콧-알드리치 증후군, 하이퍼 면역글로불린 M(IgM) 증후군, 체디악-히가시 질병, 유전성 림프조직구증, 골석화증, 골형성부전증, 축적증, 중증성 지중해 빈혈, 겸상 세포 질병, 전신 경화증, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 소아 류머티스성 관절염을 포함하는 치료 및 치료법으로부터 유익할 수 있는 임의의 다른 질병 또는 장애 및 문헌["Bone Marrow for Non-Malignant Disease," ASH Education Book, 1:319-338 (2000)]에 기술된 그러한 질병 또는 장애로 이루어진 군으로부터 선택된 대사 장애에 걸리거나 그렇지 않으면 발병될 수 있으며, 본 문헌의 개시내용은 조혈 줄기 세포 이식편 치료법의 투여에 의해 치료될 수 있는 병인과 관련하여 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다. 추가적으로, 또는 대안적으로, 조혈 줄기 세포 이식편을 "필요로 하는" 환자는 상기 병인들 중 하나로부터 고통을 받거나 받지 않을 수 있지만, 그럼에도 불구하고, 조혈 계통 내의 하나 이상의 내인성 세포 타입, 예를 들어, 거대핵세포, 혈전구, 혈소판, 적혈구, 비만 세포, 근육모세포, 호염구, 호중구, 산호성백혈구, 소교세포, 과립구, 단핵구, 파골세포, 항원-제공 세포, 대식세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 및 B-림프구의 감소된 수준(예를 들어, 다른 건강한 대상체의 수준과 비교함)을 나타내는 환자일 수 있다. 당업자는 상기 세포 타입, 또는 다른 혈액 세포 타입 중 하나 이상의 수준이 당해 분야에 공지된 다른 절차들 중에서, 예를 들어, 유세포 분석법 및 형광 활성화된 세포 분류(FACS) 방법에 의해, 다른 건강한 대상체에 비해 감소되는 지의 여부를 용이하게 결정한다.
본원에서 사용되는 용어 "모노클로날 항체"는 임의의 진핵, 원핵, 또는 파지 클론을 포함하는 단일 클론으로부터 유래되고, 이러한 것이 생성되는 방법으로부터 유래된 것은 아닌 항체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "수용자"는 조혈 줄기 세포의 집단을 함유한 이식편과 같은, 이식체(transplant)를 수용하는 환자를 지칭한다. 수용자에게 투여된 이식된 세포는 예를 들어, 자가, 동계, 또는 동종이계 세포일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "샘플"은 대상체로부터 취해진 시편(예를 들어, 혈액, 혈액 성분(예를 들어, 혈청 또는 혈장), 소변, 타액, 양수, 뇌척수액, 조직(예를 들어, 태반 또는 피부), 췌장 유체, 융모막 융모 샘플, 및 세포)을 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "scFv"는 항체로부터의 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인이 하나의 사슬을 형성하기 위해 연결된 단쇄 Fv 항체를 지칭한다. scFv 단편은 링커에 의해 분리된 항체 경쇄의 가변 영역(VL)(예를 들어, CDR-L1, CDR-L2, 및/또는 CDR-L3) 및 항체 중쇄의 가변 영역(VH)(예를 들어, CDR-H1, CDR-H2, 및/또는 CDR-H3)을 포함하는 단일 폴리펩티드를 함유한다. scFv 단편의 VL 및 VH 영역을 연결시키는 링커는 단백질성 아미노산으로 이루어진 폅티드 링커일 수 있다. 대안적인 링커는 단백질 분해 감소에 대한 scFv 단편의 내성을 증가시키기 위해(예를 들어, D-아미노산을 함유한 링커), scFv 단편의 용해도를 증가시키기 위해(예를 들어, 친수성 링커, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜-함유 링커 또는 반복하는 글리신 및 세린 잔기를 함유한 폴리펩티드), 분자의 생체물리학적 안정성을 개선시키기 위해(예를 들어, 분자내 또는 분자간 디설파이드 결합을 형성하는 시스테인 잔기를 함유한 링커), 또는 scFv 단편의 면역원성을 약화시키기 위해(예를 들어, 글리코실화 부위를 함유한 링커) 사용될 수 있다. 또한, 당업자에 의해, 본원에 기술된 scFv 분자의 가변 영역이 이로부터 유래되는 항체 분자로부터 아미노산 서열을 변경시키도록 변형될 수 있는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 아미노산 잔기에서 보존적 치환 또는 변경을 야기시키는 뉴클레오티드 또는 아미노산 치환은 상응하는 항체에 의해 인식된 항원에 결합하는 scFv의 능력을 보존하거나 향상시키기 위해 제조될 수 있다(예를 들어, CDR 및/또는 프레임워크 잔기에서).
본원에서 사용되는 용어 "대상체" 및 "환자"는 본원에 기술된 특정의 질병 또는 질환을 위한 치료를 수용하는, 인간과 같은 유기체를 지칭한다. 예를 들어, 환자, 예를 들어, 인간 환자는 외인성 조혈 줄기 세포의 생착을 증진시키기 위해, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 전에 치료를 수용할 수 있다.
본원에서 사용되는 구 "혈액으로부터 실질적으로 제거된"은 환자로부터 단리된 혈액 샘플 중의 치료제의 농도가 치료제가 보편적인 수단에 의해 검출 가능하지 않게 할 때(예를 들어, 치료제가 치료제를 검출하기 위해 사용되는 디바이스 또는 검정의 노이즈 문턱값보다 높게 검출 가능하지 않게 할 때) 환자에게 치료제(예를 들어, 항-CD45, 항-CD135, 항-CD34, 항-CD90, 또는 항-CD110 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드)의 투여 후 소정 시점을 지칭한다. 항체, 항체 단편, 및 단백질 리간드를 검출하기 위하여, 당해 분야에 공지된 다양한 기술, 예를 들어, 당해 분야에 공지되거나 본원에 기술된 ELISA-기반 검출 검정이 사용될 수 있다. 항체, 항체 단편, 및 단백질 리간드를 검출하기 위해 사용될 수 있는 추가적인 검정은 당해 분야에 공지된 다른 것들 중에서, 면역침전 기술 및 면역블롯 검정을 포함한다.
본원에서 사용되는 구 "줄기 세포 장애"는 광범위하게, 대상체의 타겟 조직을 컨디셔닝함으로써, 및/또는 타겟 조직에서 내인성 줄기 세포 집단을 제거함으로써(예를 들어, 대상체의 골수 조직으로부터 내인성 조혈 줄기 또는 전구 세포 집단을 제거함으로써), 및/또는 대상체의 타겟 조직에서 줄기 세포를 이식(생착시키거나(engrafting) 또는 이식시킴(transplanting))함으로써 치료 또는 치유될 수 있는 임의의 질병, 장애, 또는 질환을 지칭한다. 예를 들어, 제I형 당뇨병은 조혈 줄기 세포 이식편에 의해 치유되는 것으로 나타났고, 본원에 기술된 조성물 및 방법에 따라 컨디셔닝으로부터 유익할 수 있다. 본원에 기술된 조성물 및 방법을 사용하여 치료될 수 있는 추가적인 장애는 비제한적으로, 겸상 적혈구 빈혈, 지중해 빈혈s, 판코니 빈혈, 무형성 빈혈, 비스코트-올드리치 증후군, ADA SCID, HIV/AIDS, 이염색백색질장애, 다이아몬드-블랙판 빈혈, 및 슈바크만-다이아몬드 증후군을 포함한다. 본원에 기술된 환자 컨디셔닝 및/또는 조혈 줄기 세포 이식편 방법을 이용하여 치료될 수 있는 추가적인 질병은 유전된 혈액 장애(예를 들어, 겸상 적혈구 빈혈) 및 자가면역 장애, 예를 들어, 경피증, 다발성 경화증, 궤양성 대장염, 및 크론병을 포함한다. 본원에 기술된 컨디셔닝 및/또는 이식 방법을 이용하여 치료될 수 있는 추가적인 질병은 악성 종양, 예를 들어, 신경아세포종 또는 혈액암, 예를 들어, 백혈병, 림프종, 및 골수종을 포함한다. 예를 들어, 암은 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 광범위 큰 B-세포 림프종, 또는 비호지킨 림프종일 수 있다. 본원에 기술된 컨디셔닝 및/또는 이식 방법을 이용하여 치료 가능한 추가적인 질병은 골수 형성이상 증후군을 포함한다. 일부 구체예에서, 대상체는 대사 저장 장애를 갖거나 그밖에 이에 의해 영향을 받는다. 예를 들어, 대상체는 글리코겐 축적 질병, 뮤코다당증, 고오시에씨 병, 후를러 질병, 스핑고지질증, 이염색백색질장애로 이루어진 군으로부터 선택된 대사 장애, 또는 본원에 개시된 치료 및 치료법으로부터 유익할 수 있고 비제한적으로, 중증 복합형 면역결핍증, 위스콧-알드리치 증후군, 하이퍼 면역글로불린 M(IgM) 증후군, 체디악-히가시 질병, 유전성 림프조직구증, 골석화증, 골형성부전증, 축적증, 중증성 지중해 빈혈, 겸상 세포 질병, 전신 경화증, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 소아 류머티스성 관절염을 포함하는 임의의 다른 질병 또는 장애, 및 문헌["Bone Marrow for Non-Malignant Disease," ASH Education Book, 1:319-338 (2000)]에 기술된 그러한 질병 또는 장애로 고통을 받거나 이에 의해 영향을 받을 수 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 조혈 줄기 세포 이식편 치료법의 투여에 의해 치료될 수 있는 병인과 관련하여 이의 전문이 본원에 참고로 포함된다.
본원에서 사용되는 용어 "치료하다" 또는 "치료"는 목적이 요망되지 않는 생리학적 변화 또는 장애를 예방하거나 늦추거나(줄이거나) 치료되는 환자에서 유익한 표현형을 증진시키는 것인 치료학적 치료를 지칭한다. 유익한 또는 요망되는 임상 결과는, 본원에 기술된 바와 같은 항체 컨디셔닝 치료법 및 후속 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이후에, 환자에서 외인성 조혈 세포의 생착을 증착시키는 것을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 추가적인 유익한 결과는 컨디셔닝 치료법 및 환자에게 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 후속 투여 이후에, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 환자에서 조혈 줄기 세포의 세포 카운트 또는 관련 농도의 증가를 포함한다. 본원에 기술된 치료법의 유익한 결과는 또한, 컨디셔닝 치료법 및 후속 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이후에, 조혈 계통의 하나 이상의 세포, 예를 들어, 거핵구, 혈전구, 혈소판, 적혈구, 비만 세포, 골수아세포, 호염구, 호중구, 호산성구, 소교 세포, 과립구, 단핵구, 파골 세포, 항원-제공 세포, 대식 세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 또는 B-림프구의 세포 카운트 또는 관련 농도의 증가를 포함할 수 있다. 추가적인 유익한 결과는 질병-야기 세포 집단, 예를 들어, 암 세포(예를 들어, CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 백혈병 세포) 또는 자가면역 세포(예를 들어, CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 자가면역 림프구, 예를 들어, 자가 항원과 교차-반응하는 T-세포 수용체를 발현시키는 CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ T-세포)의 집단의 양의 감소를 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "변이체(variant)" 및 "유도체(derivative)"는 서로 교환하여 사용되고, 본원에 기술된 화합물, 펩티드, 단백질, 및 다른 물질의 천연-발생, 합성, 및 반-합성 유사체를 지칭한다. 본원에 기술된 화합물, 펩티드, 단백질, 또는 다른 물질의 변이체 또는 유도체는 본래 물질의 생물학적 활성을 보유하거나 개선시킬 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "벡터(Vector)"는 핵산 벡터, 예를 들어, 플라스미드, DNA 벡터, 플라스미드, RNA 벡터, 바이러스, 또는 다른 적합한 레플리콘을 포함한다. 본원에 기술된 발현 벡터는 폴리뉴클레오티드 서열뿐만 아니라, 예를 들어, 단백질의 발현 및/또는 이러한 폴리뉴클레오티드 서열의 포유류 세포의 게놈내에 혼입을 위해 사용되는 추가적인 서열 구성요소를 함유할 수 있다. 본 발명의 항체 및 항체 단편의 발현을 위해 사용될 수 있는 특정의 벡터는 유전자 전사를 유도하는, 프로모터 및 인헨서 영역과 같은 조절 서열을 함유하는 플라스미드를 포함한다. 항체 및 항체 단편의 발현을 위한 다른 유용한 벡터는 이러한 유전자의 번역 속도를 향상시키거나 유전자 전사로부터 형성된 mRNA의 안정성 또는 핵 방출(nuclear export)을 개선시키는 폴리뉴클레오티드 서열을 함유한다. 이러한 서열 구성요소는 발현 벡터 상에 지닌 유전자의 효율적인 전사를 유도하기 위해 예를 들어, 5' 및 3' 비번역된 영역 및 폴리아데닐화 신호 부위를 포함할 수 있다. 본원에 기술된 발현 벡터는 또한, 이러한 벡터를 함유하는 세포의 선택을 위한 마커를 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유할 수 있다. 적합한 마커의 예는 항생제, 예를 들어, 암피실린, 클로람페니콜, 카나마이신, 및 노우르세오트리신에 대한 내성을 엔코딩하는 유전자를 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "알킬"은 예를 들어, 사슬에 1 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 지칭한다. 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 2차-부틸, 3차-부틸, 펜틸, 이소펜틸, 3차-펜틸, 헥실, 이소헥실, 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "알킬렌"은 직쇄 또는 분지쇄 2가 알킬 기를 지칭한다. 2가 위치는 알킬 사슬 내의 동일한 또는 상이한 원자 상에 존재할 수 있다. 알킬렌의 예는 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 이소프로필렌, 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로알킬"은 사슬에서 예를 들어, 1 내지 20개의 탄소 원자를 가지고 추가로 사슬에서 하나 이상의 헤테로원자(다른 것들 중에서, 예를 들어, 산소, 질소, 또는 황)를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 알킬 기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로알킬렌"은 직쇄 또는 분지쇄 2가 헤테로알킬 기를 지칭한다. 2가 위치는 헤테로알킬 사슬 내의 동일하거나 상이한 원자 상에 존재할 수 있다. 2가 위치는 하나 이상의 헤테로원자일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "알케닐"은 사슬에서 예를 들어, 2 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알케닐 기를 지칭한다. 알케닐 기의 예는 비닐, 프로페닐, 이소프로페닐, 부테닐, 3차-부틸레닐, 헥세닐, 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "알케닐렌"은 직쇄 또는 분지쇄 2가 알케닐 기를 지칭한다. 2가 위치는 알케닐 사슬 내의 동일하거나 상이한 원자 상에 존재할 수 있다. 알케닐렌의 예는 에테닐렌, 프로페닐렌, 이소프로페닐렌, 부테닐렌, 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로알케닐"은 사슬에서 예를 들어, 2 내지 20개의 탄소 원자를 가지고, 추가로, 사슬에서 하나 이상의 헤테로원자(다른 것들 중에서, 예를 들어, 산소, 질소, 또는 황)를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 알케닐 기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로알케닐렌"은 직쇄 또는 분지쇄 2가 헤테로알케닐 기를 지칭한다. 2가 위치는 헤테로알케닐 사슬 내의 동일하거나 상이한 원자 상에 존재할 수 있다. 2가 위치는 하나 이상의 헤테로원자일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "알키닐"은 사슬에서 예를 들어, 2 내지 20개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 알키닐 기를 지칭한다. 알키닐 기의 예는 프로파르길, 부티닐, 펜티닐, 헥시닐, 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "알키닐렌"은 직쇄 또는 분지쇄 2가 알키닐 기를 지칭한다. 2가 위치는 알키닐 사슬 내의 동일한 또는 상이한 원자 상에 존재할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로알키닐"은 예를 들어, 사슬에서 2 내지 20개의 탄소 원자를 가지고 추가로 사슬에서 하나 이상의 헤테로원자(다른 것들 중에서, 예를 들어, 산소, 질소, 또는 황)를 함유하는 직쇄 또는 분지쇄 알키닐 기를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로알키닐렌"은 직쇄 또는 분지쇄 2가 헤테로알키닐 기를 지칭한다. 2가 위치는 헤테로알키닐 사슬 내의 동일하거나 상이한 원자 상에 존재할 수 있다. 2가 위치는 하나 이상의 헤테로원자일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "사이클로알킬"은 포화되고, 예를 들어, 3 내지 12개의 탄소 고리 원자를 갖는 모노시클릭, 또는 융합된, 브릿징된 또는 스피로 폴리시클릭 고리 구조를 지칭한다. 사이클로알킬 기의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 사이클로옥틸, 바이사이클로[3.1.0]헥산, 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "사이클로알킬렌"은 2가 사이클로알킬 기를 지칭한다. 2가 위치는 고리 구조 내의 동일하거나 상이한 원자 상에 존재할 수 있다. 사이클로알킬렌의 예는 사이클로프로필렌, 사이클로부틸렌, 사이클로펜틸렌, 사이클로헥실렌, 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로사이클로알킬"은 포화되거나 예를 들어, 탄소 원자 및 다른 것들 중에서, 예를 들어, 질소, 산소, 및 황으로부터 선택된 헤테로원자로부터 선택된 고리 구조 당 3 내지 12개의 고리 원자를 갖는 모노시클릭, 또는 융합된, 브릿징된, 또는 스피로 폴리시클릭 고리 구조를 지칭한다. 고리 구조는 예를 들어, 탄소, 질소, 또는 황 고리원 상에 하나 이상의 옥소 기를 함유할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로사이클로알킬렌"은 2가 헤테로사이클로알킬 기를 지칭한다. 2가 위치는 고리 구조 내의 동일하거나 상이한 원자 상에 존재할 수 있다. 2가 위치는 하나 이상의 헤테로원자일 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "아릴"은 예를 들어, 6 내지 19개의 탄소 원자를 함유한 모노시클릭 또는 다중시클릭 방향족 고리 시스템을 지칭한다. 아릴 기는 페닐, 플루오레닐, 나프틸, 등을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 "아릴렌"은 2가 아릴 기를 지칭한다. 2가 위치는 동일하거나 상이한 원자 상에 존재할 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로아릴"은 모노시클릭 헤테로방향족, 또는 바이시클릭 또는 트리시클릭 융합된-고리 헤테로방향족 기를 지칭한다. 헤테로아릴 기는 피리딜, 피롤릴, 푸릴, 티에닐, 이미다졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아졸릴, 이소티아졸릴, 피라졸릴, 1,2,3-트리아졸릴, 1,2,4-트리아졸릴, 1,2,3-옥사디아졸릴, 1,2,4-옥사디아졸릴, 1,2,5-옥사디아졸릴, 1,3,4-옥사디아졸릴, 1,3,4-트리아지닐, 1,2,3-트리아지닐, 벤조푸릴, [2,3-디하이드로]벤조푸릴, 이소벤조푸릴, 벤조티에닐, 벤조트리아졸릴, 이소벤조티에닐, 인돌릴, 이소인돌릴, 3H-인돌릴, 벤즈이미다졸릴, 이미다조[1,2-a]피리딜, 벤조티아졸릴, 벤족사졸릴, 퀴놀리지닐, 퀴나졸리닐, 프탈라지닐, 퀴녹살리닐, 신놀리닐, 나프티리디닐, 피리도[3,4-b]피리딜, 피리도[3,2-b]피리딜, 피리도[4,3-b]피리딜, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 테트라졸릴, 5,6,7,8-테트라하이드로퀴놀릴, 5,6,7,8-테트라하이드로이소퀴놀릴, 푸리닐, 프테리디닐, 카바졸릴, 잔테닐, 벤조퀴놀릴, 등을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "헤테로아릴렌"은 2가 헤테로아릴 기를 지칭한다. 2가 위치는 동일하거나 상이한 원자 상에 존재할 수 있다. 2가 위치는 하나 이상의 헤테로원자일 수 있다.
개개 치환체의 정의에 의해 달리 제한되지 않는 한, 상기 화학적 모이어티, 예를 들어, "알킬", "알킬렌", "헤테로알킬", "헤테로알킬렌", "알케닐", "알케닐렌", "헤테로알케닐", "헤테로알케닐렌", "알키닐", "알키닐렌", "헤테로알키닐", "헤테로알키닐렌", "사이클로알킬", "사이클로알킬렌", "헤테로사이클로알킬", 헤테로사이클로알킬렌", "아릴," "아릴렌", "헤테로아릴", 및 "헤테로아릴렌" 기는 예를 들어, 1 내지 5개의, 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 알킬 아릴, 알킬 헤테로아릴, 알킬 사이클로알킬, 알킬 헤테로사이클로알킬, 아미노, 암모늄, 아실, 아실옥시, 아실아미노, 아미노카보닐, 알콕시카보닐, 우레이도, 카바메이트, 아릴, 헤테로아릴, 설피닐, 설포닐, 알콕시, 설파닐, 할로겐, 카복시, 트리할로메틸, 시아노, 하이드록시, 머캅토, 니트로, 등으로 이루어진 군으로부터 선택된 치환체로 임의적으로 치환될 수 있다. 치환은 예를 들어, 보호 기를 제공하기 위해 고리 폐쇄에 의해 형성된, 예를 들어, 락탐, 락톤, 환형 언하이드라이드, 아세탈, 헤미아세탈, 티오아세탈, 아미날, 및 헤미아미날을 형성하기 위해 이웃하는 치환체가 고리 폐쇄, 예를 들어, 인접한 작용성 치환체의 고리 폐쇄를 일으키는 상황을 포함할 수 있다.
조혈 세포 항원을 인식하는 항체
본 발명은 부분적으로, CD45, CD135, CD34, CD90, 또는 CD110과 결합할 수 있는 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드가 (i) 이러한 항원들 중 하나 이상을 발현시키는 세포에 의해 특징되는 암 및 자가면역 질병을 직접적으로 치료하고 (ii) 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에서 이식된 조혈 줄기 세포의 생착을 증진시키기 위한 치료제로서 사용될 수 있다는 발견을 기초로 한 것이다. 이러한 치료 활성은 예를 들어, 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포와 같은, 세포의 표면 상에서 발현된 상기 항원들 중 하나 이상에 대한 항체, 이의 항원-결합 단편, 및/또는 리간드를 결합하고 후속하여 세포 죽음을 유도함으로써 야기될 수 있다. 내인성 조혈 줄기 세포의 감소는 이식된 조혈 줄기 세포가 안착하고 후속하여 생산적 조혈을 확립할 수 있는 니치를 제공할 수 있다. 이러한 방식으로, 이식된 조혈 줄기 세포는 환자, 예를 들어, 본원에 기술된 줄기 세포 장애로 고통받는 인간 환자에서 성공적으로 이식할 수 있다. 하기 섹션은 이러한 항원 각각뿐만 아니라, 이러한 타겟과 결합할 수 있는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 기술한다.
항-CD45 항체
아이소폼 CD45RO와 결합할 수 있는 것을 포함하는, 인간 CD45(mRNA NCBI Reference Sequence: NM_080921.3, Protein NCBI Reference Sequence: NP_563578.2)와 결합할 수 있는 항체 및 항원-결합 단편은 예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에서 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 증진시키기 위해, 본원에 개시된 조성물 및 방법과 함께 사용할 수 있다. CD45의 다수의 아이소폼은 1차 전사체에서 34개의 엑손의 대안적인 스플라이싱으로부터 발생한다. 엑손 4, 5, 6, 및 잠재적으로 7의 스플라이싱은 다수의 CD45 변형을 발생시킨다. 선택적 엑손 발현은 하기 표 1에 기술된 CD45 아이소폼에서 관찰된다.
표 1. 다양한 CD45 아이소폼에서의 엑손 발현
Figure pct00018
대안적인 스플라이싱은 CD45 단백질의 다양한 아이소폼(예를 들어, CD45RA, CD45RAB, CD45RABC)에서 발현된 개별 엑손 또는 엑손들의 조합을 야기시킬 수 있다. 상반되게, CD45RO은 엑손 4 내지 6의 발현이 부족하고, 엑손 1 내지 3 및 7 내지 34의 조합으로부터 발생된다. 엑손 7이 또한, 단백질로부터 배제되어, 엑손 1 내지 3 및 8 내지 34를 함께 스플라이싱한다는 증거가 존재한다. E3-8로 명시된 이러한 단백질은 mRNA 수준에서 검출되었지만, 유세포 분석법에 의해 현재 동정되지 않았다.
CD45RO는 조혈 줄기 세포 상에서 발현된 현재 유일하게 공지된 CD45 아이소폼이다. CD45RA 및 CD45RABC는 검출되지 않았거나 조혈 줄기 세포의 표현형으로부터 배제되지 않는다. 마우스에서 수행된 연구로부터, CD45RB가 태아 조혈 줄기 세포 상에서 발현되지만, 성인 골수 조혈 줄기 세포 상에 존재하지 않는다는 증거가 존재한다. 특히, CD45RC는 아시아 집단 내에서 발견된 엑손 6에서 높은 다형성 비율을 갖는다(CD45RC의 엑손 6에서의 다형성은 일본 집단의 대략 25%에서 확인됨). 이러한 다형성은 CD45RO의 높은 발현 및 CD45RA, CD45RB, 및 CD45RC의 감소된 수준을 야기시킨다. 추가적으로, CD45RA 변이체(예를 들어, CD45RAB 및 CD45RAC)는 자가면역 질병과 관련된 엑손 4에서 다형성을 나타낸다.
조혈 줄기 세포 상의 CD45RO의 존재 및 다른 면역 세포(예를 들어, T 및 B 림프구 서브세트 및 다양한 골수 세포) 상에서 이의 경제적으로 제한된 발현은 CD45RO에, 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 환자에 대한 컨디셔닝 치료법을 위한 특히 잘 맞는 타겟으로 제공한다. CD45RO가 단지 엑손 4, 5 및 6의 발현을 부족하기 때문에, 면역원으로서 이의 사용이 팬(pan) CD45 Ab 및 CD45RO-특이적 항체의 스크리닝을 가능하게 한다.
본원에 기술된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 항-CD45 항체는 예를 들어, BIOLEGEND®(San Diego, CA)로부터 상업적으로 입수 가능한, 항-CD45 항체 클론 HI30뿐만 아니라, 이의 인간화된 변이체를 포함한다. 항체의 인간화는 비-인간 항체의 프레임워크 잔기 및 불변 영역 잔기를 당햐 분야에 공지된 절차(예를 들어, 하기 실시예 7에 기술된 바와 같음)에 따라 생식계열 인간 항체의 것으로 대체함으로써 수행될 수 있다. 본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD45 항체는 항-CD45 항체 ab10558, EP322Y, MEM-28, ab10559, 0.N.125, F10-89-4, HIe-1, 2B11, YTH24.5, PD7/26/16, F10-89-4, 1B7, ab154885, B-A11, 인광체 S1007, ab170444, EP350, Y321, GA90, D3/9, X1 6/99, 및 ABCAM®(Cambridge, MA)으로부터 상업적으로 입수 가능한 LT45뿐만 아니라, 이의 인간화된 변이체를 포함한다. 본원에 기술된 환자 컨디셔닝 절차와 함께 사용될 수 있는 추가 항-CD45 항체는 SIGMA-ALDRICH®(St. Louis, MO)로부터 상업적으로 입수 가능한 항-CD45 항체 HPA000440, 및 이의 인간화된 변이체를 포함한다. 본원에 기술된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD45 항체는 뮤린 모노클로날 항체 BC8을 포함하며, 이는 예를 들어, 문헌[Matthews et al., Blood 78:1864-1874, 1991]에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD45 항체뿐만 아니라, 이의 인간화된 변이체와 관련한 경우에, 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있는 추가 항-CD45 항체는 모노클로날 항체 YAML568을 포함하며, 이는 예를 들어, 문헌[Glatting et al., J. Nucl. Med. 8:1335-1341, 2006]에 기술되며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD45 항체뿐만 아니라 이의 인간화된 변이체에 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD45 항체는 모노클로날 항체 YTH54.12 및 YTH25.4를 포함하며, 이는 예를 들어, 문헌[Brenner et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 996:80-88, 2003]에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD45 항체뿐만 아니라 이의 인간화된 변이체에 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD45 항체는 UCHL1, 2H4, SN130, MD4.3, MBI, 및 MT2를 포함하며, 이는 예를 들어, 문헌[Brown et al., Immunology 64:331-336, 1998]에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD45 항체뿐만 아니라 이의 인간화된 변이체에 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD45 항체는 미국 세포주 은행(American Type Culture Collection: ATCC) 수탁번호. RA3-6132, RA3-2C2, 및 TIB122뿐만 아니라, 모노클로날 항체 C363.16A, 및 13/2로부터 생성되고 방출되는 것을 포함하며, 이는 예를 들어, 문헌[Johnson et al., J. Exp. Med. 169:1179-1184, 1989]에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD45 항체뿐만 아니라 이의 인간화된 변이체에 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있는 추가 항-CD45 항체는 모노클로날 항체 AHN-12.1, AHN-12, AHN-12.2, AHN-12.3, AHN-12.4, HLe-1, 및 KC56(T200)을 포함하며, 이는 예를 들어, 문헌[Harvath et al., J. Immunol. 146:949-957, 1991]에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD45 항체뿐만 아니라 이의 인간화된 변이체에 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다.
본원에 기술된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD45 항체는 예를 들어, 미국특허번호 제7,265,212호(다른 클론들 중에서, 예를 들어, 항-CD45 항체 39E11, 16C9, 및 1G10을 기술함); 제7,160,987호(예를 들어, ATCC 수탁번호. HB-11873에 의해 생성되고 방출된 항-CD45 항체, 예를 들어, 모노클로날 항체 6G3을 기술함); 및 제6,099,838호(예를 들어, 항-CD45 항체 MT3뿐만 아니라, ATCC 수탁번호. HB220(또한 MB23G2 명시됨) 및 HB223에 의해 생성되고 방출된 항체를 기술함)뿐만 아니라, US 2004/0096901호 및 US 2008/0003224호(예를 들어, 모노클로날 항체 17.1과 같은, ATCC 수탁번호. PTA-7339에 의해 생성되고 방출된 항-CD45 항체를 기술함)에 기술된 것을 포함하며, 이러한 문헌 각각의 개시내용은 이러한 것이 항-CD45 항체와 관련된 경우에 본원에 참고로 포함된다.
본원에 기술된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가 항-CD45 항체는 ATCC 수탁번호. MB4B4, MB23G2, 14.8, GAP 8.3, 74-9-3, I/24.D6, 9.4, 4B2, M1/9.3.4.HL.2로부터 생성되고 방출된 항체뿐만 아니라 이의 인간화된 및/또는 친화력-성숙 변이체를 포함한다. 친화력 성숙은 예를 들어, 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 시험관내 디스플레이 기술, 예를 들어, 하기 실시예 6에 기술된 바와 같은, 파지 디스플레이를 이용하여 수행될 수 있다.
본원에 기술된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD45 항체는 항-CD45 항체 T29/33을 포함하며, 이는 예를 들어, 문헌[Morikawa et al., Int. J. Hematol. 54:495-504, 1991]에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD45 항체와 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다.
상기 공개문 각각의 개시내용은 이러한 것이 항-CD45 항체와 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 항체 및 항원-결합 단편은 상술된 항체 및 이의 항원-결합 단편뿐만 아니라, 상술된 그러한 비-인간 항체 및 항원-결합 단편의 인간화된 변이체 및 예를 들어, 경쟁적 CD45 결합 검정에 의해 평가된 바와 같은, 상술된 것과 동일한 에피토프와 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다.
항-CD135 항체
본 발명은 부분적으로, CD135과 결합할 수 있는 항체 및 이의 항원-결합 단편(또한 Flk2 및 Flt3으로서 지칭됨)이 암 및 자가면역 질병을 직접적으로 치료하기 위해뿐만 아니라, 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에서 이식된 조혈 줄기 세포의 생착을 증진시키기 위한 치료제로서 사용될 수 있다는 발견을 기초로 한 것이다. 추가적으로, 인간 Flt3 리간드와 같은, CD135와 결합하는 리간드가 암 및 자가면역 질병을 직접적으로 치료하기 위해뿐만 아니라, 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에서 이식된 조혈 줄기 세포의 생착을 증진시키기 위한 치료제로서 사용될 수 있다는 것이 발견되었다. 이러한 리간드, 예를 들어, 인간 Flt3 리간드는 예를 들어, 항체-의존 세포-매개 세포독성(ADCC)을 증진시키기 위해, Fc 도메인과 같은 이펙터 도메인에 공유 결합될 수 있다.
조혈 줄기 세포는 CD135를 발현시키는 것으로 나타났는데, 왜냐하면, 이러한 항원이 또한 조혈 전반에 걸쳐 세포 생존을 조절하는, Mcl-1의 상향-조절을 증진시키는 것으로 보고된 수용체 티로신 키나아제이기 때문이다(예를 들어, 문헌[Kikushige et al., J. Immunol. 180:7358-7367, 2008] 참조, 이러한 문헌의 개시내용은 조혈 줄기 세포에 의한 CD135의 발현과 관련된 경우 본원에 참고로 포함됨). 세포-표면 항원과 결합할 수 있는 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드는 당해 분야에 공지되고 본원에 기술된 기술을 이용하여, 예를 들어, 면역화, 전산 모델링 기술, 및 시험관내 선택 방법, 예를 들어, 하기에 기술된 파지 디스플레이 및 세포-기반 디스플레이 플랫폼에 의해 동정될 수 있다.
본원에 개시된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD135 항체는 하기 CDR들 중 하나 이상, 또는 모두를 갖는 것을 포함한다:
a. 아미노산 서열 SYYMH(SEQ ID NO: 1)를 갖는 CDR-H1;
b. 아미노산 서열 IINPSGGSTSYAQKFQG(SEQ ID NO: 2)를 갖는 CDR-H2;
c. 아미노산 서열 GVGAHDAFDI(SEQ ID NO: 3) 또는 VVAAAVADY(SEQ ID NO: 4)를 갖는 CDR-H3;
d. 아미노산 서열 RSSQSLLHSNGNNYLD(SEQ ID NO: 5) 또는 RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQ ID NO: 6)를 갖는 CDR-L1;
e. 아미노산 서열 LGSNRAS(SEQ ID NO: 7)를 갖는 CDR-L2; 및
f. 아미노산 서열 MQGTHPAIS(SEQ ID NO: 8) 또는 MQSLQTPFT(SEQ ID NO: 9)를 갖는 CDR-L3.
본원에 개시된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD135 항체는 하기 CDR들 중 하나 이상, 또는 모두를 갖는 것을 포함한다:
a. 아미노산 서열 SYAIS(SEQ ID NO: 10)를 갖는 CDR-H1;
b. 아미노산 서열 GIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO: 11)를 갖는 CDR-H2;
c. 아미노산 서열 FALFGFREQAFDI(SEQ ID NO: 12)을 갖는 CDR-H3;
d. 아미노산 서열 RASQSISSYLN(SEQ ID NO: 13)을 갖는 CDR-L1;
e. 아미노산 서열 AASSLQS(SEQ ID NO: 14)를 갖는 CDR-L2; 및
f. 아미노산 서열 QQSYSTPFT(SEQ ID NO: 15)를 갖는 CDR-L3.
상기 항체는 예를 들어, 미국특허번호 제8,071,099호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은, 항-CD135 항체 및 이의 항원-결합 단편과 관련하여 본원에 참고로 포함된다. 미국특허번호 제8,071,099호에 개시된 항체 및 이의 단편, 예를 들어, IMC-EB10 및 IMC-NC7은 본원에 개시된 방법과 함께 사용될 수 있다.
상기에 더하여, 본원에 개시된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD135 항체는 하기 CDR들 중 하나 이상, 또는 모두를 갖는 것을 포함한다:
a. 아미노산 서열 SYWMH(SEQ ID NO: 22)를 갖는 CDR-H1;
b. 아미노산 서열 EIDPSDSYKDYNQKFK(SEQ ID NO: 23)를 갖는 CDR-H2;
c. 아미노산 서열 AITTTPFDF(SEQ ID NO: 24)를 갖는 CDR-H3;
d. 아미노산 서열 RASQSISNNLH(SEQ ID NO: 25)를 갖는 CDR-L1;
e. 아미노산 서열 YASQSIS(SEQ ID NO: 26)를 갖는 CDR-L2; 및
f. 아미노산 서열 QQSNTWPYT(SEQ ID NO: 27)를 갖는 CDR-L3.
본원에 개시된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD135 항체는 하기 CDR들 중 하나 이상, 또는 모두를 갖는 것을 포함한다:
a. 아미노산 서열 NYGLH(SEQ ID NO: 28)를 갖는 CDR-H1;
b. 아미노산 서열 VIWSGGSTDYNAAFIS(SEQ ID NO: 29)를 갖는 CDR-H2;
c. 아미노산 서열 KGGIYYANHYYAMDY(SEQ ID NO: 30)를 갖는 CDR-H3;
d. 아미노산 서열 KSSQSLLNSGNQKNYM(SEQ ID NO: 31)을 갖는 CDR-L1;
e. 아미노산 서열 GASTRES(SEQ ID NO: 32)를 갖는 CDR-L2; 및
f. 아미노산 서열 QNDHSYPLT(SEQ ID NO: 33)를 갖는 CDR-L3.
상기 항체는 미국특허번호 제9,023,996호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD135 항체 및 이의 항원-결합 단편과 관련한 경우에, 본원에 참고로 포함된다. 미국특허번호 제9,023,996호에 개시된 항체 및 이의 단편, 예를 들어, 클론 4G8 및 BV10은 본원에 개시된 방법과 함께 사용될 수 있다.
본원에 기술된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 다른 항-CD135 항체는 예를 들어, 미국 세포주 은행(ATCC) 수탁번호. ATCC HB 11,557에 의해 생성되고 방출되는 항체를 포함하며, 이는 예를 들어, 미국특허번호 제5,635,388호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD135 항체와 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD135 항체는 예를 들어, 국제 기탁 기관(International Depositary Authority)(DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH Mascheroder Weg 1b, D-38124 Braunschweig, Germany)에 1995년 12월 19일에 부다페스트 조약(Budapest Treaty)에 따라 번호 DSM ACC2249호로서 기탁되고 4G8B4B 12로 명명된 하이브리도마 세포에 의해 생성되고 방출된 항체를 포함하며, 이는 예를 들어, 미국특허번호 제6,156,882호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD135 항체와 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD135 항체는 예를 들어, 1995년 12월 19일에, 부다페스트 조약에 따라 독일 미생물 및 세포 배양 수집소(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures Ltd)에 번호 DSM ACC2248호로 기탁되고 BV10A4H2로 명명된 하이브리도마 세포에 의해 생성되고 방출된 항체를 포함하며, 예를 들어, 미국특허번호 제5,777,084호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD135 항체와 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 추가적인 항-CD135 항체는 예를 들어, ATCC 수탁번호. FTA-4089에 의해 생성되고 방출된 항체를 포함하며, 이는 예를 들어, 미국특허번호 제7,183,385호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD135 항체와 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 추가적인 항-CD135 항체는 미국특허번호 제5,548,065호(예를 들어, ATCC 수탁번호. CRL 10907, CRL 10935, CRL 10936, 및 CRL 11005에 의해 생성되고 방출된 항-CD135 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드를 포함함), 및 제9,109,227호뿐만 아니라, US 2009/0054358호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌 각가의 개시내용은 항-CD135 항체와 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 방법과 함께 사용하기 위한 다른 항-CD135 항체는 예를 들어, US 2010/0093008호에 기술된 바와 같은, 토끼 하이브리도마 세포주 C24D9, 및 이의 인간화된 변이체에 의해 생성된 항체를 포함하며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD135 항체와 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다.
상기한 것에 더하여, CD135와 결합할 수 있는 항체 및 이의 항원-결합 단편은 WO 1995/007348호에 기술된 것을 포함하며, 이러한 문헌의 개시내용은 항-CD135 항체와 관련한 경우에 본원에 참고로 포함된다. 예를 들어, ATCC 수탁번호. HB 11442에 의해 생성되고 방출된 랫트 항체 19A의 인간화된 변이체, ATCC 수탁번호. HB 11443에 의해 생성되고 방출된 랫트 항체 23H의 인간화된 변이체, ATCC 수탁번호. HB 11444에 의해 생성되고 방출된 랫트 항체 2A13의 인간화된 변이체, ATCC 수탁번호. HB 11445에 의해 생성되고 방출된 뮤린 항체 6J11의 인간화된 변이체, 및 WO 1995/007348호에 기술된 바와 같이, 랫트 항체 7 IE의 인간화된 변이체는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에 환자를 컨디셔닝하기 위해 본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있다.
항체 및 항원-결합 단편에 추가하여, CD135 리간드, 예를 들어, 인간 Flt3 리간드는 예를 들어, 암 또는 자가면역 장애를 치료하거나 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에 환자를 컨디셔닝하기 위해 본원에 기술된 방법에 따라 환자에게 투여될 수 있다. 예를 들어, CD135 리간드, 예를 들어, 인간 Flt3 리간드는 세포 독소(예를 들어, 하기 기술되거나 당해 분야에 공지된 방법에 따름) 또는 다른 이펙터 분자, 예를 들어, Fc 도메인에 컨쥬게이션될 수 있다. 본원에 기술된 방법과 함께 사용하기 위한 CD135 리간드는 예를 들어, 인간 Flt3 리간드-IgG1 Fc 컨쥬게이트, 인간 Flt3 리간드-IgG2 Fc 컨쥬게이트, 인간 Flt3 리간드-IgG3 Fc 컨쥬게이트, 및 인간 Flt3 리간드-IgG4 Fc 컨쥬게이트, 예를 들어, ADIPOGEN®(San Diego, CA)에 의해 생성된 것, 제품 번호 AG-40B-0119를 포함한다.
상기 공개문 각각의 개시내용은 항-CD135 항체와 관련된 바와 같이 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 항체 및 항원-결합 단편은 상술된 항체 및 이의 항원-결합 단편뿐만 아니라, 상술된 그러한 비-인간 항체 및 항원-결합 단편 및 예를 들어, 경쟁적 CD135 결합 검정에 의해 평가되는 바와 같이, 상술된 것과 동일한 에피토프를 결합시키는 항체 또는 항원-결합 단편의 이간화된 변이체를 포함한다.
항-CD34 항체
인간 CD34와 결합할 수 있는 항체 및 항원-결합 단편(mRNA NCBI Reference Sequence: NM_001025109.1, 단백질 NCBI Reference Sequence: NP_001020280.1)은 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있다. 집단의 상당한 백분율에 CD34의 코딩 영역 또는 세포외 도메인에 영향을 미치는 다형성의 이해는 아직까지 확립되지 않았다. 세포질 테일의 길이가 상이한(긴 및 짧음) 2개의 CD34의 아이소폼이 존재한다. 최근에, 긴 아이소폼은 면역원으로서 사용될 수 있는 CD34를 발현시키는 안정한 세포주를 생성시키기 위해 사용되었다(예를 들어, 문헌[Adv. Pharm. Bull. 5:69-75, 2015] 참조). CD34, 예를 들어, CD34의 긴 아이소폼은 CD34와 결합하고, 예를 들어, 암 및 자가면역 질병의 치료뿐만 아니라 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에 컨디셔닝제로서 사용하기에 적합한 항체 및 이의 항원-결합 단편을 동정하기 위한 면역원으로서 사용될 수 있다.
본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있는 CD34 항체는 비제한적으로, 예를 들어, 미국특허번호 제5,843,633호에 기술된 바와 같이, ATCC 수탁번호. AC133.1 및 HB 12346로부터 생성되고 방출되는 항체를 포함한다.
상기 공개문의 개시내용은 항-CD34 항체와 관련하여 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 항체 및 항원-결합 단편은 상술된 항체 및 이의 항원-결합 단편뿐만 아니라, 상술된 그러한 비-인간 항체 및 항원-결합 단편의 인간화된 변이체 및 예를 들어, 경쟁적 CD34 결합 검정에 의해 평가되는 바와 같이, 상술된 것과 동일한 에피토프와 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다.
항-CD90 항체
인간 CD90과 결합할 수 있는 항체 및 이의 항원-결합 단편은 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있다. 조혈 줄기 세포는, 인간 제대형의 Lin-CD34+CD38-CD90+CD45RA- 분획이 풍부한 것이 조혈 줄기 세포를 함유한 것으로 보고되었기 때문에, CD90을 발현시키는 것으로 나타났다(예를 들어, 문헌[Majeti et al., Cell Stem Cell 1:635-645, 2007] 참조, 이러한 문헌의 개시내용은 조혈 줄기 세포에 의한 CD90의 발현과 관련하여 본원에서 참고로 포함됨). 이러한 세포-표면 항원과 결합할 수 있는 항체 및 항원-결합 단편은 당해 분야에 공지되고 본원에 기술된 바와 같은 기술을 이용하여, 예를 들어, 면역화 및 하기에 기술된 파지 디스플레이 및 세포-기반 디스플레이 플랫폼을 포함하는 시험관내 선택 기술에 의해 얻어질 수 있다.
본원에 기술된 방법과 함께 사용될 수 있는 항-CD90 항체는 비제한적으로, EPR3132, EPR3133, AF-9, 5E10, F15-42-1, 7E1B11, ab189367, aTHy-1A1, ab106934, 및 ABCAM®(Cambridge, MA)로부터 상업적으로 입수 가능한 Ab110477뿐만 아니라, 이의 인간화된 변이체를 포함한다.
본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 항체 및 항원-결합 단편은 상술된 항체 및 이의 항원-결합 단편뿐만 아니라, 상술된 그러한 비-인간 항체 및 이의 항원-결합 단편의 인간화된 변이체, 및 예를 들어, 경쟁적 CD90 결합 검정에 의해 평가되는 바와 같이, 상술된 것과 동일한 에피토프와 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다.
항-CD110 항체
인간 CD110과 결합할 수 있는 항체 및 이의 항원-결합 단편(또한 c-mpl 및 트롬보포이에틴성 수용체(thrombopoietic receptor: TPO)로서 지칭됨)은 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있다. 조혈 줄기 세포는 CD110을 발현시키는 것으로 나타났으며, CD110의 발현은 조혈 줄기 세포 기능적 잠재력과 상관관계가 있고 조혈 줄기 세포가 분화하고 조혈 계통을 통해 진행함에 따라 감소한다(예를 들어, 문헌[Ninos et al., J. Transl. Med. 4:9, 2006] 참조, 이러한 문헌의 개시내용은 조혈 줄기 세포에 의한 CD110의 발현과 관련하여 본원에 참고로 포함됨). 이러한 세포-표면 항원과 결합할 수 있는 항체 및 항원-결합 단편은 당해 분야에 공지되거나 본원에 기술된 기술을 이용하여, 예를 들어, 면역화 및 하기에 기술되는 파지 디스플레이 및 세포-기반 디스플레이 플랫폼을 포함하는 시험관내 선택 기술에 의해 얻어질 수 있다.
본원에 기술된 방법, 예를 들어, 암 치료 방법, 자가면역 질병 치료 방법, 및 본원에 기술된 환자 컨디셔닝 방법과 함께 사용될 수 있는 항-CD110 항체는 예를 들어, 문헌[De Gobbi et al., Epigenetics Chromatin 4:9, 2011; Erickson-Miller et al., BMC Cancer 12:405, 2012; 및 Petit Cocault et al., Exp. Hematol. 44:297-302, 2016]에 기술된 바와 같이, 클론 BAH-1, 1.78.1, 및 1.6.1을 포함하며, 이러한 문헌 각각의 개시내용은 항-CD110 항체와 관련하여 본원에 참고로 포함된다.
상기 공개문 각각의 개시내용은 항-CD110 항체와 관련하여 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 항체 및 항원-결합 단편은 상술된 항체 및 이의 항원-결합 단편뿐만 아니라, 상술된 그러한 비-인간 항체 및 항원-결합 단편의 인간화된 변이체 및 예를 들어, 경쟁적 CD110 결합 검정에 의해 평가되는 바와 같이, 상술된 것과 동일한 에피토프와 결합하는 항체 또는 항원-결합 단편을 포함한다.
추가적인 항체 및 이의 항원-결합 단편
본원에 기술된 방법과 함께 사용하기 위한 항체 및 리간드는 상술된 그러한 항체의 변이체, 예를 들어, Fc 도메인을 함유하거나 결여된 항체 단편뿐만 아니라, 본원에 기술된 비-인간 항체의 인간화된 변이체 및 본원에 기술된 항체, 항체 단편, 또는 리간드의 CDR 또는 이의 균등한 영역 중 하나 이상 또는 모두를 함유한 항체-유사 단백질 스캐폴드(예를 들어, 10Fn3 도메인)를 포함한다. 상기 항체의 예시적인 항원-결합 단편은 다른 것들 중에서, 이중-가변 면역글로불린 도메인, 단쇄 Fv 분자(scFv), 이중체, 삼중체, 나노체, 항체-유사 단백질 스캐폴드, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 분자, 및 텐뎀 디-scFv를 포함한다.
병용 치료 방법
본원에 기술된 방법을 이용하여, 당업자는 본원에 기술된 하나 이상의 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드를 투여함으로써 암 또는 자가면역 질병에 대해 환자를 치료할 수 있거나, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에 환자를 컨디셔닝시킬 수 있다. 예를 들어, 의사는 CD45(예를 들어, CD45RO)를 인식하고 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드를 단독으로, 또는 CD135를 인식하고 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드, CD34를 인식하고 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드, CD90을 인식하고 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드 및/또는 CD110을 인식하고 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드와 함께 투여함으로써 암 또는 자가면역 질병을 치료하거나 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위해 환자를 컨디셔닝시킬 수 있다. 병용 치료법을 위한 투여량 요법은 제1 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드가 환자에게 명시된 시점에 투여되고, 예를 들어, 조합된 치료 투여량의 약동학적 프로파일을 최적화하기 위해, 제2 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드가 후속하여 환자에게 후속 시점에 투여되도록, 상기 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드 중 둘 이상의 순차적 투여를 포함할 수 있다. 각각이 본원에 기술된 조혈 줄기 세포 항원들 중 하나 이상과 결합하는 둘 이상의 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드는 환자(예를 들어, 인간 환자)에게 동시에 투여될 수 있거나, 단일 약제 조성물에 서로 혼합될 수 있거나, 상이한 시간에(예를 들어, 서로 1 내지 24시간 내에, 예를 들어, 서로 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 또는 그 이상 내에) 투여될 수 있다.
항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드는 단일 항체를 사용하여 다수의 조혈 줄기 세포 항원을 인식하고 결합하기 위하여 환자에게 투여될 수 있다. 이는 예를 들어, 이중-특이적 및 다중-특이적 항체를 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, CD45(예를 들어, CD45RO)와 선택적으로 결합하는 항원-결합 단편 및 CD135와 선택적으로 결합하는 다른 항원-결합 단편을 함유한 이중-특이적 항체는 CD45+ CD135+ 세포를 감소시켜 외인성 조혈 줄기 세포 이식편에 의해 채워질 수 있는 조혈 조직(예를 들어, 골수)에 빈 공간을 생성시키기 위해 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 유사하게, CD45(예를 들어, CD45RO) 및 CD34와 선택적으로 결합하는 항원-결합 단편을 함유한 이중-특이적 항체는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에 CD34+ CD45+ 세포를 감소시키기 위해 환자에게 투여될 수 있다. CD45(예를 들어, CD45RO) 및 CD90과 선택적으로 결합하는 항원-결합 단편을 함유한 이중-특이적 항체는 환자, 예를 들어, 암 또는 자가면역 질병으로 고통을 받는 환자 또는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에 CD45+ CD90+ 세포를 감소시키기 위한 환자에게 유사하게 투여된다. 추가적으로, CD45(예를 들어, CD45RO) 및 CD110과 선택적으로 결합하는 항원-결합 단편을 함유한 이중-특이적 항체는 예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식 이전에 CD45+ CD110+ 세포를 감소시키기 위해, 환자에게 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, CD135와 선택적으로 결합하는 항원-결합 단편 및 CD34와 선택적으로 결합하는 다른 항원-결합 단편을 함유한 이중-특이적 항체는 환자, 예를 들어, 암, 자가면역 질병으로 고통을 받거나, CD34+ CD135+ 세포를 감소시켜 외인성 조혈 줄기 세포 이식편에 의해 채워질 수 있는 조혈 조직(예를 들어, 골수)에 빈 공간을 생성시키기 위해 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 유사하게, CD135 및 CD90과 선택적으로 결합하는 항원-결합 단편을 함유한 이중-특이적 항체는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에 CD90+ CD135+ 세포를 감소시키기 위해 환자에게 투여될 수 있다. CD135 및 CD110과 선택적으로 결합하는 항원-결합 단편을 함유한 이중-특이적 항체는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에 CD110+ CD135+ 세포를 감소시키기 위해 환자에게 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, CD34와 선택적으로 결합하는 항원-결합 단편 및 CD90과 선택적으로 결합하는 다른 항원-결합 단편을 함유하는 이중-특이적 항체는 CD34+ CD90+ 세포를 감소시켜 외인성 조혈 줄기 세포 이식편에 의해 채워질 수 있는 조혈 조직(예를 들어, 골수)에 빈 공간을 생성시키기 위해 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다. 유사하게, CD34 및 CD110과 선택적으로 결합하는 항원-결합 단편을 함유하는 이중-특이적 항체는 예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에 CD34+ CD110+ 세포를 감소시키기 위해 환자에게 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, CD90과 선택적으로 결합하는 항원-결합 단편 및 CD110과 선택적으로 결합하는 다른 항원-결합 단편을 함유하는 이중-특이적 항체는 암, 자가면역 질병으로 고통을 받거나, CD90+ CD110+ 세포를 감소시켜 외인성 조혈 줄기 세포 이식편에 의해 채워질 수 있는 조혈 조직(예를 들어, 골수)에 빈 공간을 생성시키기 위해 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에게 투여될 수 있다.
항체 및 리간드를 동정하는 방법
CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및 CD110과 결합할 수 있는 분자에 대한 항체, 항체 단편, 및 리간드 라이브러리를 높은 처리량으로 스크리닝하는 방법은 암, 자가면역 질병을 치료하고 본원에 기술된 바와 같은 조혈 줄기 세포 치료법을 필요로 하는 환자(예를 들어, 인간 환자)를 컨디셔닝하기에 유용한 성숙한 항체를 동정하고 친화력을 나타내기 위해 사용될 수 있다. 이러한 방법은 당해 분야에 공지된 시험관내 디스플레이 기술, 예를 들어, 다른 것들 중에서, 파지 디스플레이, 박테리아 디스플레이, 효모 디스플레이, 포유류 세포 디스플레이, 리보솜 디스플레이, mRNA 디스플레이, 및 CDNA 디스플레이를 포함한다. 생물학적으로 관련된 분자와 결합하는 리간드를 단리시키기 위한 파지 디스플레이의 사용은 예를 들어, 문헌[Felici et al., Biotechnol. Annual Rev. 1:149-183, 1995; Katz, Annual Rev. Biophys. Biomol. Struct. 26:27-45, 1997; 및 Hoogenboom et al., Immunotechnology 4:1-20, 1998]에서 검토되었으며, 이러한 문헌 각각의 개시내용은 시험관내 디스플레이 기술과 관련하여 본원에 참고로 포함된다. 무작위화된 조합 펩티드 라이브러리는 문헌[Kay, Perspect. Drug Discovery Des. 2:251-268, 1995 및 Kay et al., Mol. Divers. 1:139-140, 1996]에 기술된 바와 같은 세포 표면 항원과 결합하는 폴리펩티드를 선택하기 위해 구성되었으며, 이러한 문헌 각각의 개시내용은 항원-결합 분자의 발견과 관련하여 본원에 참고로 포함된다. 단백질, 예를 들어, 멀티머 단백질은 기능성 분자로서 성공적으로 파지-디스플레이되었다(예를 들어, EP 0349578; EP 4527839; 및 EP 0589877, 및 문헌[Chiswell and McCafferty, Trends Biotechnol. 10:80-84 1992] 참조, 이러한 문헌 각각의 개시내용은 항원-결합 분자의 발견을 위한 시험관내 디스플레이 기술의 사용과 관련하여 본원에 참고로 포함됨). 또한, 기능성 항체 단편, 예를 들어, Fab 및 scFv 단편은 시험관내 디스플레이 포맷에서 발현되었다(예를 들어, 문헌[McCafferty et al., Nature 348:552- 554, 1990; Barbas et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88:7978-7982, 1991; 및 Clackson et al., Nature 352:624-628, 1991] 참조, 이러한 문헌 각각의 개시내용은 항원-결합 분자의 발견을 위한 시험관내 디스플레이 플랫폼과 관련하여 본원에 참고로 포함됨). 다른 것들 중에서, 이러한 기술들은 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자(예를 들어, 인간 환자)에서 내인성 조혈 줄기 세포를 감소시키기 위해 또한 사용될 수 있는 조혈 줄기 세포 항원(예를 들어, CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및 CD110)과 결합하는 항체의 친화력을 동정하고 개선시키기 위해 이용될 수 있다.
시험관내 디스플레이 기술 이외에, CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 또는 CD110과 결합하는 실리코에서의 항체, 항체 단편, 및 리간드를 설계하고 동정하기 위해 전산 모델링 기술이 이용될 수 있다. 예를 들어, 전산 모델링 기술을 이용하여, 당업자는 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및 CD110 상의 특이적 에피토프, 예를 들어, 이러한 항원의 세포외 에피토프와 결합할 수 있는 분자에 대해 실리코에서 항체, 항체 단편, 및 리간드의 라이브러리를 스크리닝할 수 있다. 이러한 전산 기술에 의해 동정된 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드는 본원에 기술된 치료 방법, 예를 들어, 본원에 기술된 암 및 자가면역 질병 치료 및 본원에 기술된 환자 컨디셔닝 절차와 함께 이용될 수 있다.
추가적인 기술은 세포(예를 들어, 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포)의 표면 상에 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110과 결합하고 세포에 의해, 예를 들어, 수용체-매개 엔도시토시스에 의해 내재화된 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드를 동정하기 위해 이용될 수 있다. 예를 들어, 상술된 시험관내 디스플레이 기술은 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포의 표면 상에 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110과 결합하고 후속하여 내재화되는 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드에 대해 스크리닝하도록 구성될 수 있다. 파지 디스플레이는 이러한 스크리닝 패러다임과 함께 사용될 수 있는 하나의 이러한 기술을 나타낸다. 상기 타겟들 중 하나 이상과 결합하고 후속하여 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포에 의해 내제화되는 항체, 이의 단편, 및 리간드를 동정하기 위해, 당업자는 예를 들어, 문헌[Williams et al., Leukemia 19:1432-1438, 2005]에 기술된 파지 디스플레이 기술을 구성할 수 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 전문이 본원에 참고로 포함된다. 예를 들어, 당해 분야에 공지된 돌연변이유발 방법을 이용하여, 항체, 항체 단편, 예를 들어, 다른 것들 중에서, scFv 단편, Fab 단편, 이중체, 삼중체, 및 10Fn3 도메인, 또는 (예를 들어, CDR 또는 이의 균등한 영역 중 하나 이상, 또는 모두, 또는 항체 또는 항체 단편에서) 무작위화된 아미노산 카세트를 함유한 리간드를 엔코딩하는 재조합 파지 라이브러리가 생성될 수 있다. 항체 또는 항체 단편의 프레임워크 영역, 힌지, Fc 도메인, 및 다른 영역은, 이러한 것이 인간에서, 예를 들어, 인간 생식계열 항체 서열 또는 인간 생식계열 항체에 대해 단지 최소 변형을 나타내는 서열에 의해 비-면역원성이도록 설계될 수 있다.
본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 파지 디스플레이 기술을 이용하여, 파지 입자에 공유 결합된 무작위화된 항체, 항체 단편, 또는 리간드를 함유한 파지 라이브러리는 예를 들어, 먼저, 비-특이적 단백질을 나타내는 항체, 이의 단편, 또는 리간드를 엔코딩하는 파지 및 Fc 도메인과 결합하는 항체 또는 이의 단편을 엔코딩하는 파지를 제거하기 위해 파지 라이브러리를 블로킹제(예를 들어, 우유 단백질, 소혈청 알부민, 및/또는 IgG)와 함께 인큐베이션하고 이후에 파지 라이브러리를 조혈 줄기 세포의 집단과 함께 인큐베이션시킴으로써 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110 항원과 함께 인큐베이션될 수 있다. 파지 라이브러리는, 예를 들어, CD45-특이적, CD135-특이적, CD34-특이적, CD90-특이적, 및/또는 CD110-특이적 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드를 세포-표면 항원과 결합시키고 후속하여 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포에 의해 내재화시키기에 충분한 시간(예를 들어, 4℃에서 30분 내지 6시간, 예를 들어, 4℃에서 1시간) 동안, 타겟 세포, 예를 들어, 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포와 함께 인큐베이션되었다. 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포에 대한 결합 및 이에 의한 내재화를 가능하게 하기 위해 이러한 항원들 중 하나 이상에 대한 충분한 친화력을 나타내지 않는 항체, 이의 단편, 또는 리간드를 함유한 파지는 후속하여, 세포를 예를 들어, pH 2.8에서의 냉각된(4℃) 0.1 M 글리신 완충제로 세척함으로써 제거될 수 있다. 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포에 의해 내재화된 항체, 이의 단편, 또는 리간드에 결합된 파지는 예를 들어, 세포를 용해시키고 세포 배양 배지로부터 내재화된 파지를 회수함으로써 동정될 수 있다. 파지는 이후에, 예를 들어, 당해 분야에 공지된 방법을 이용하여 2xYT 배지 중에서 회수된 파지와 함께 박테리아 세포를 인큐베이션시킴으로써, 박테리아 세포에서 증폭될 수 있다. 이러한 배지로부터 회수된 파지는 이후에, 예를 들어, 파지 게놈 내에 삽입된 항체, 이의 단편, 또는 리간드를 엔코딩하는 유전자(들)의 핵산 서열을 결정함으로써 특징될 수 있다. 엔코딩된 항체, 이의 단편, 또는 리간드는 후속하여, (예를 들어, 항체 단편, 예를 들어, scFv 단편, 또는 리간드의) 화학적 합성에 의해, 또는 (예를 들어, 전장 항체의) 재조합 발현에 의해 새로이 제조될 수 있다.
제조된 항체, 이의 단편, 또는 리간드의 내재화 용량은 예를 들어, 당해 분야에 공지된 방사성 핵종 내재화 검정을 이용하여 평가될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 시험관내 디스플레이 기술을 이용하여 확인된 항체, 이의 단편, 또는 리간드는 방사성 동위원소, 예를 들어, 18F, 75Br, 77Br, 122I, 123I, 124I, 125I, 129I, 131I, 211At, 67Ga, 111In, 99Tc, 169Yb, 186Re, 64Cu, 67Cu, 177Lu, 77As, 72As, 86Y, 90Y, 89Zr, 212Bi, 213Bi, 또는 225Ac의 혼입에 의해 작용화될 수 있다. 예를 들어, 방사성 할로겐, 예를 들어, 18F, 75Br, 77Br, 122I, 123I, 124I, 125I, 129I, 131I, 211At는 친전자체 할로겐 시약을 함유한 폴리스티렌 비드와 같은 비드(예를 들어, 요오드화 비드, Thermo Fisher Scientific, Inc.(Cambridge, MA))를 사용하여 항체, 이의 단편, 또는 리간드내에 혼입될 수 있다. 방사성 표지된 항체, 이의 단편, 또는 리간드는 내재화를 허용하기에 충분한 시간 동안(예를 들어, 4℃에서 30분 내지 6시간, 예를 들어, 4℃에서 1시간) 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포와 함께 인큐베이션될 수 있다. 세포는 이후에, 비-내재화된 항체, 이의 단편, 또는 리간드를 제거하기 위해 세척될 수 있다(예를 들어, pH 2.8에서 차가운(4℃) 0.1 M 글리신 완충제를 사용함). 내재화된 항체, 이의 단편, 또는 리간드는 회수된 세척 완충액의 방출된 방사선(예를 들어, γ-방사선)과 비교하여, 얻어진 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포의 방출된 방사선(예를 들어, γ-방사선)을 검출함으로써 확인될 수 있다.
약물-항체 컨쥬게이트 및 약물-리간드 컨쥬게이트
세포 독소
본원에 기술된 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드(예를 들어, CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110)를 인지하고 결합하는 항체, 항원-결합 단편, 및 리간드)는 예를 들어, 본원에 기술된 암 또는 자가면역 질병을 치료하거나 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자(예를 들어, 인간 환자)에 투여 시에 내인성 조혈 줄기 세포의 감소를 증진시키기 위해, 세포 독소, 예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 및 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체, 또는 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 다른 세포독성 화합물에 컨쥬게이션될 수 있다. 일부 구체예에서, 세포독성 분자는 내재화 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드에 컨쥬게이션되며, 이에 따라, 항체, 항원-결합 단편, 또는 리간드의 세포 흡수 후에, 세포 독소가 이의 세포내 타겟을 접근하고 내인성 조혈 세포 죽음을 매개할 수 있게 한다. 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용하기에 적합한 세포 독소는 당해 분야에 공지된 다른 것들 중에서, DNA-인터칼레이팅제(예를 들어, 안트라사이클린), 유사분열 방추 장치를 파괴할 수 있는 제제(예를 들어, 빈카 알칼로이드, 메이탄신, 메이탄시노이드, 및 이의 유도체), RNA 폴리머라아제 억제제(예를 들어, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴 및 이의 유도체), 단백질 생합성을 파괴할 수 있는 제제(예를 들어, rRNA N-글리코시다아제 활성을 나타내는 제제, 예를 들어, 사포린 및 리신 A-사슬)를 포함한다.
일부 구체예에서, 세포 독소는 아마톡신 또는 이의 유도체, 예를 들어, α-아마니틴, β-아마니틴, γ-아마니틴, ε-아마니틴, 아마닌, 아마닌아미드, 아마눌린, 아마눌린산, 및 프로아마눌린이다. 예를 들어, 본원에 기술된 항체, 항원-결합 단편, 및 리간드는 화학식 Ab-Am으로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드이고 Am이 아마톡신인 컨쥬게이트를 형성하기 위해 아마톡신에 결합될 수 있다. 일부 구체예에서, Am은 하기 화학식 (I)로 표현된다:
Figure pct00019
상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H, RC, 또는 RD이며;
R4는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RC는 -L-Z이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
L은 링커, 예를 들어, 임의적으로 치환된 알킬렌(예를 들어, C1-C6 알킬렌), 임의적으로 치환된 헤테로알킬렌(C1-C6 헤테로알킬렌), 임의적으로 치환된 알케닐렌(예를 들어, C2-C6 알케닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐렌), 임의적으로 치환된 알키닐렌(예를 들어, C2-C6 알키닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐렌), 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110과 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
일부 구체예에서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 함유한다.
일부 구체예에서, Am은 하기 화학식 (IA)로 표현되며, 여기서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 함유한다:
Figure pct00020
상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H, RC, 또는 RD이며;
R4는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RC는 -L-Z이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
L은 링커, 예를 들어, 임의적으로 치환된 알킬렌(예를 들어, C1-C6 알킬렌), 임의적으로 치환된 헤테로알킬렌(C1-C6 헤테로알킬렌), 임의적으로 치환된 알케닐렌(예를 들어, C2-C6 알케닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐렌), 임의적으로 치환된 알키닐렌(예를 들어, C2-C6 알키닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐렌), 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110와 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
일부 구체예에서, Am은 하기 화학식 (IB)로 표현되며, 여기서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 함유한다:
상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
R3은 H, RC, 또는 RD이며;
R4는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
RC는 -L-Z이며;
RD는 임의적으로 치환된 알킬(예를 들어, C1-C6 알킬), 임의적으로 치환된 헤테로알킬(예를 들어, C1-C6 헤테로알킬), 임의적으로 치환된 알케닐(예를 들어, C2-C6 알케닐), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐), 임의적으로 치환된 알키닐(예를 들어, C2-C6 알키닐), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐), 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
L은 링커, 예를 들어, 임의적으로 치환된 알킬렌(예를 들어, C1-C6 알킬렌), 임의적으로 치환된 헤테로알킬렌(C1-C6 헤테로알킬렌), 임의적으로 치환된 알케닐렌(예를 들어, C2-C6 알케닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알케닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알케닐렌), 임의적으로 치환된 알키닐렌(예를 들어, C2-C6 알키닐렌), 임의적으로 치환된 헤테로알키닐렌(예를 들어, C2-C6 헤테로알키닐렌), 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110과 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
일부 구체예에서, RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
Figure pct00022
을 형성하며,
여기서, Y는 O, S, NRE, 및 CRERE'로부터 선택되며,
RE 및 RE'는 각각 독립적으로, 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌-RC, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 아릴렌-RC, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌-RC이다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
Figure pct00023
을 형성하며;
R3은 H 또는 RC이며;
R4는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R5는 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R6은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R7은 H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
R8은 OH, NH2, ORC, 또는 NHRC이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC 및 RD는 각각 상기에서 규정된 바와 같다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
Figure pct00024
를 형성하며;
R3은 H 또는 RC이며;
R4 및 R5는 각각 독립적으로, H, OH, ORC, RC, 또는 ORD이며;
R6 및 R7은 각각 H이며;
R8은 OH, NH2, ORC, 또는 NHRC이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC는 상기에서 규정된 바와 같다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1은 H, OH, 또는 ORA이며;
R2는 H, OH, 또는 ORB이며;
RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
Figure pct00025
를 형성하며;
R3, R4, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R5는 ORC이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC는 상기에서 규정된 바와 같다. 이러한 아마톡신 컨쥬게이트는 예를 들어, 미국특허출원공개번호 제2016/0002298호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3은 RC이며;
R4, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R5는 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC는 상기에서 규정된 바와 같다. 이러한 아마톡신 컨쥬게이트는 예를 들어, 미국특허출원공개번호 제2014/0294865호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R4 및 R5는 각각 독립적으로, H, OH, ORC, 또는 RC이며;
R8은 OH 또는 NH2이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC는 상기에서 규정된 바와 같다. 이러한 아마톡신 컨쥬게이트는 예를 들어, 미국특허출원공개번호 제2015/0218220호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 구체예에서, Am은 화학식 (IA) 또는 화학식 (IB)에 의해 표현되는 것으로서,
여기서, R1 및 R2는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R3, R6, 및 R7은 각각 H이며;
R4 및 R5는 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
R8은 OH, NH2, ORC, 또는 NHRC이며;
R9는 H 또는 OH이며;
여기서, RC는 상기에서 규정된 바와 같다. 이러한 아마톡신 컨쥬게이트는 예를 들어, 미국특허번호 제9,233,173호 및 제9,399,681호뿐만 아니라, US 2016/0089450호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌 각각의 개시내용은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
본원에 기술된 조성물 및 방법에 따라 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드에 컨쥬게이션하기 위해 사용될 수 있는 추가적인 아마톡신은 예를 들어, WO 2016/142049호; WO 2016/071856호; 및 WO 2017/046658호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌 각각의 개시내용은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
일부 구체예에서, Am은 하기 화학식 (II)로 표현된다:
Figure pct00026
상기 식에서, X는 S, SO, 또는 SO2이며;
R1은 H, 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 공유 결합된 링커이며;
R2는 H 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 공유 결합된 링커이며;
여기서, R1이 H일 때, R2는 링커이며, R2가 H일 때, R1은 링커이다.
본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용하기 위한 항체, 항원-결합 단편, 및 리간드는 당해 분야에 공지되거나 본원에 기술된 컨쥬게이션 기술을 이용하여, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴 또는 이의 변이체에 컨쥬게이션될 수 있다. 예를 들어, CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110을 인식하고 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드는 US 2015/0218220호에 기술된 바와 같이, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴 또는 이의 변이체에 컨쥬게이션될 수 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 예를 들어, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴 및 이의 변형체뿐만 아니라, 공유 컨쥬게이션을 위해 사용될 수 있는 공유 링커에 관한 한 본원에 참고로 포함된다.
본원에 기술된 방법과 함께 유용한 예시적인 항체-약물 및 리간드-약물 컨쥬게이트는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드와, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드 상의 반응성 잔기와 반응하기에 적합한 치환체를 함유한 링커에 컨쥬게이션된 아마톡신의 반응에 의해 형성될 수 있다. 본원에 기술된 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드 상의 반응성 잔기와의 반응을 위해 적합한 치환체를 함유한 링커에 컨쥬게이션된 아마톡신은 비제한적으로, 7'C-(4-(6-(말레이미도)헥사노일)피페라진-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(6-(말레이미도)헥산아미도)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(6-(6-(말레이미도)헥산아미도)헥사노일)피페라진-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카보닐)피페라진-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥사노일)피페라진-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(6-(말레이미도)헥산아미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(6-(6-(말레이미도)헥산아미도)헥산아미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(3-카복시프로판아미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(2-브로모아세트아미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(3-(피리딘-2-일디설파닐)프로판아미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(4-(말레이미도)부탄아미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(말레이미도)아세틸)피페라진-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(3-(말레이미도)프로파노일)피페라진-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(4-(말레이미도)부타노일)피페라진-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(3-((6-(말레이미도)헥산아미도)메틸)피롤리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(3-((6-(6-(말레이미도)헥산아미도)헥산아미도)메틸)피롤리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(3-((4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)메틸)피롤리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(3-((6-((4-(말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)메틸)피롤리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(6-(2-(아미노옥시)아세트아미도)헥산아미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(4-(2-(아미노옥시)아세트아미도)부탄아미도)에틸)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(4-(2-(아미노옥시)아세트아미도)부타노일)피페라진-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(6-(2-(아미노옥시)아세트아미도)헥사노일)피페라진-1-일)-아마톡신; 7'C-((4-(6-(말레이미도)헥산아미도)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(6-(말레이미도)헥산아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(6-(말레이미도)헥사노일)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; (R)-7'C-((3-((6-(말레이미도)헥산아미도)메틸)피롤리딘-1-일)메틸)-아마톡신; (S)-7'C-((3-((6-(말레이미도)헥산아미도)메틸)피롤리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(6-(6-(말레이미도)헥산아미도)헥산아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(6-(말레이미도)헥산아미도)에틸)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(6-(6-(말레이미도)헥산아미도)헥산아미도)에틸)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)에틸)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)에틸)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-((6-(6-(말레이미도)헥산아미도)헥산아미도)-S-메틸)피롤리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-((6-(6-(말레이미도)헥산아미도)헥산아미도)-R-메틸)피롤리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-((4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)-S-메틸)피롤리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-((4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)-R-메틸)피롤리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-((6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)메틸)피롤리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(3-카복시프로판아미도)에틸)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(6-(6-(말레이미도)헥산아미도)헥사노일)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥사노일)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(말레이미도)아세틸)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(3-(말레이미도)프로파노일)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(4-(말레이미도)부타노일)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(2-(말레이미도)아세트아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(4-(말레이미도)부탄아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-((6-(말레이미도)헥산아미도)메틸)아제티딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-(2-(6-(말레이미도)헥산아미도)에틸)아제티딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-((4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)메틸)아제티딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-(2-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)에틸)아제티딘-1yl)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-(2-(6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)에틸)아제티딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-(((2-(6-(말레이미도)-N-메틸헥산아미도)에틸)(메틸)아미노)메틸)-아마톡신; 7'C-(((4-(6-(말레이미도)-N-메틸헥산아미도)부틸(메틸)아미노)메틸)-아마톡신; 7'C-((2-(2-(6-(말레이미도)헥산아미도)에틸)아지리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((2-(2-(6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)에틸)아지리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(6-(6-(2-(아미노옥시)아세트아미도)헥산아미도)헥사노일)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(1-(아미노옥시)-2-옥소-6,9,12,15-테트라옥사-3-아자헵타데칸-17-오일)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(2-(아미노옥시)아세트아미도)아세틸)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(3-(2-(아미노옥시)아세트아미도)프로파노일)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(4-(2-(아미노옥시)아세트아미도)부타노일)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(6-(2-(아미노옥시)아세트아미도)헥산아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(2-(2-(아미노옥시)아세트아미도)아세트아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(4-(2-(아미노옥시)아세트아미도)부탄아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(20-(아미노옥시)-4,19-디옥소-6,9,12,15-테트라옥사-3,18-디아자이코실)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-(((2-(6-(2-(아미노옥시)아세트아미도)-N-메틸헥산아미도)에틸)(메틸)아미노)메틸)-아마톡신; 7'C-(((4-(6-(2-(아미노옥시)아세트아미도)-N-메틸헥산아미도)부틸)(메틸)아미노)메틸)-아마톡신; 7'C-((3-((6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)메틸)피롤리딘-1-일)-S-메틸)-아마톡신; 7'C-((3-((6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥산아미도)-R-메틸)피롤리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(2-브로모아세트아미도)에틸)피페라진-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(2-브로모아세트아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 7'C-((4-(2-(3-(피리딘-2-일디설파닐)프로판아미도)에틸)피페리딘-1-일)메틸)-아마톡신; 6'O-(6-(6-(말레이미도)헥산아미도)헥실)-아마톡신; 6'O-(5-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)펜틸)-아마톡신; 6'O-(2-((6-(말레이미도)헥실)옥시)-2-옥소에틸)-아마톡신; 6'O-((6-(말레이미도)헥실)카바모일)-아마톡신; 6'O-((6-(4-((말레이미도)메틸)사이클로헥산카복사미도)헥실)카바모일)-아마톡신; 6'O-(6-(2-브로모아세트아미도)헥실)-아마톡신; 7'C-(4-(6-(아지도)헥산아미도)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(헥스-5-이노일아미노)피페리딘-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(6-(말레이미도)헥산아미도)에틸)피페라진-1-일)-아마톡신; 7'C-(4-(2-(6-(6-(말레이미도)헥산아미도)헥산아미도)에틸)피페라진-1-일)-아마톡신; 6'O-(6-(6-(11,12-디데하이드로-5,6-디하이드로-디벤즈[b,f]아조신-5-일)-6-옥소헥산아미도)헥실)-아마톡신; 6'O-(6-(헥스-5-이노일아미노)헥실)-아마톡신; 6'O-(6-(2-(아미노옥시)아세틸아미도)헥실)-아마톡신; 6'O-((6-아미노옥시)헥실)-아마톡신; 및 6'O-(6-(2-요오도아세트아미도)헥실)-아마톡신을 포함한다. 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 유용한 다른 것들 중에서, 상기 링커는 예를 들어, 미국특허출원공개번호 제2015/0218220호에 기술되어 있으며, 이러한 문헌의 개시내용은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
암, 자가면역 질환을 직접적으로 치료하는 데 사용하기 위해 또는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 준비에서 환자(예를 들어, 인간 환자)를 컨디셔닝하기 위해 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110을 인식하고 결합시키는 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드에 컨쥬게이션될 수 있는 추가적인 세포 독소는 비제한적으로, 다른 것들 중에서, 5-에티닐우라실, 아비라테론, 아실풀벤, 아데시페놀, 아도젤레신, 알데스류킨, 알트레타민, 암바무스틴, 아미독스, 아미포스틴, 아미노레불린산, 암루비신, 암사크린, 아나그렐리드, 아나스트로졸, 안드로그라폴리드, 혈관신생 억제제, 안타렐릭스, 항-등쪽화 결정 형성 단백질-1, 항안드로겐, 전립선 암종, 항에스트로겐, 항네오플라스톤, 안티센스 올리고뉴클레오티드, 아피디콜린 글리시네이트, 아폽토시스 유전자 조절제, 아폽토시스 조절제, 아푸린산, 아술라크린, 아타메스탄, 아트리무스틴, 악시나스타틴 1, 악시나스타틴 2, 악시나스타틴 3, 아자세트론, 아자톡신, 아자티로신, 박카틴 III 유도체, 발라놀, 바티마스타트, BCR/ABL 길항제, 벤조클로린, 벤조일스타우로스포린, 베타 락탐 유도체, 베타-알레틴, 베타클라마이신 B, 베툴린산, bFGF 억제제, 비칼루타미드, 비산트렌, 비스아지리디닐스페르민, 비스나피드, 비스트라텐 A, 비젤레신, 브레플레이트, 블레오마이신 A2, 블레오마이신 B2, 브로피리민, 부도티탄, 부티오닌 설폭시민, 칼시포트리올, 칼포스틴 C, 캄포테신 유도체(예를 들어, 10-하이드록시-캄프토테신), 카페시타빈, 카복사미드-아미노-트리아졸, 카복사미도트리아졸, 카르젤레신, 카제인 키나아제 억제제, 카스타노스페르민, 세크로핀 B, 세트로렐릭스, 클로린, 클로로퀴녹살린 설폰아미드, 시카프로스트, 시스-포르피린, 클라드리빈, 클로미펜 및 이의 유도체, 클로트리마졸, 콜리스마이신 A, 콜리스마이신 B, 콤브레타스타틴 A4, 콤브레타스타틴 유사체, 코나게닌, 크람베스시딘 816, 크리스나톨, 크립토피신 8, 크립토피신 A 유도체, 쿠라신 A, 사이클로펜트안트라퀴논, 사이클로플라탐, 시페마이신, 시타라빈 옥포스페이트, 세포용해 인자, 시토스타틴, 다클릭시맙, 데시타빈, 데하이드로디뎀닌 B, 2'데옥시코포르마이신(DCF), 데슬로렐린, 덱시포스파미드, 덱스라족산, 덱스베라파밀, 디아지쿠온, 디데민 B, 디독스, 디에틸노르스페르민, 디하이드로-5-아자시티딘, 디하이드로탁솔, 디옥사마이신, 디페닐 스피로무스틴, 디스코데르몰리드, 도코사놀, 돌라세트론, 독시플루리딘, 드롤록시펜, 드로나비놀, 듀오카마이신 SA, 엡셀렌, 에코무스틴, 에델포신, 에드레콜로맙, 에플로르니틴, 엘레멘, 에미테푸르, 에포틸론, 에피틸론, 에프리스테리드, 에스트라무스틴 및 이의 유사체, 에토포시드, 에포토시드 4'-포스페이트(또한, 에토포포스로 지칭됨), 엑세메스탄, 파드로졸, 파자라빈, 펜레티니드, 필그라스팀, 피나스테리드, 플라보피리돌, 플레젤라스틴, 플루아스테론, 플루다라빈, 플루오로다우노루니신 하이드로클로라이드, 포르페니멕스, 포르메스탄, 포스트리에신, 포테무스틴, 가돌리늄 텍사피린, 갈륨 니트레이트, 갈록시타빈, 가니렐릭스, 겔라티나제 억제제, 겜시타빈, 글루타티온 억제제, 헵설팜, 호모해링토닌(HHT), 히퍼리신, 이반드론산, 이독시펜, 이드라만톤, 일모포신, 일로마스타트, 이미다조아크리돈, 이미퀴모드, 면연자극제 펩티드, 이오벤구안, 요오도독소루비신, 이포메아놀, 이리노테칸, 이로플락트, 이르소글라딘, 이소벤가졸, 자스플라키놀리드, 카할랄리드 F, 라멜라린-N 트리아세테이트, 란레오티드, 레이나마이신, 레노그라스팀, 렌티난 설페이트, 렙톨스타틴, 레로졸, 친지성 백금 화합물, 리소클린아미드 7, 로바플라틴, 로메트렉솔, 로니다민, 로속산트론, 로록소리빈, 루르토테칸, 루테튬 텍사피린, 리소필린, 마소프로콜, 마스핀, 기질 금속단백질분해호소, 메노가릴, 르네르바론, 메테렐린, 메티오니나아제, 메토클로프라미드, MIF 억제제, 이페프리스톤, 밀테포신, 미리모스팀, 미트라신, 미토구아존, 미톨락톨, 미토마이신 및 이의 유사체, 미토나피드, 미톡산트론, 모파로텐, 몰그라모스팀, 미토카퍼옥사이드 B, 미리아포론, N-아세틸디날린, N-치환된 벤즈아미드, 나파렐린, 나그레스팁, 나파빈, 나프테르핀, 나르토그라스팀, 네다플라틴, 네모루비신, 네리드론산, 닐루타미드, 니사마이신, 니트룰린, 옥트레오티드, 오키세논, 오나프리스톤, 온단세트론, 오라신, 오르마플라틴, 옥살리플라틴, 옥사우노마이신, 파클리탁셀 및 이의 유사체, 팔라우라민, 팔미토일리족신, 파미드론산, 파낙시트리올, 파노미펜, 파라박틴, 파젤리프틴, 페가스파르가제, 펠데신, 펜토산 폴리설페이트 소듐, 펜토스타틴, 펜트로졸, 퍼플루브론, 퍼포스파미드, 페나지노마이신, 피시바닐, 피라루비신, 피리트렉심, 포도필로톡신, 포르피로마이신, 푸린 뉴클레오시드 포스포릴라아제 억제제, 랄티트렉세드, 리족신, 로글레티미드, 로히투킨, 루비기논 B1, 루복실, 사핀골, 사인토핀, 사르코피톨 A, 사르그라모스팀, 소부족산, 소네르민, 스파르포스산, 스피카마이신 D, 스피로무스틴, 스티피아미드, 설피노신, 톨리무스틴, 테가푸르, 테모졸로미드, 테니포시드, 탈리블라스틴, 티오코랄린, 티라파자민, 토포테칸, 토프센틴, 트리시리빈, 트리메트렉세이트, 베라민, 비노렐빈, 빈크살틴, 보로졸, 제니플라틴, 및 질라스코르브를 포함한다.
화학적 컨쥬게이션을 위한 링커
다양한 링커는 본원에 기술된 항체, 항원-결합 단편, 및 리간드(예를 들어, CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110를 인식하고 이와 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드)를 세포독성 분자와 컨쥬게이션하기 위해 사용될 수 있다. 링커는 예를 들어, 효소 가수분해, 광분해, 산성 조건 하에서의 가수분해, 염기성 조건 하에서의 가수분해, 산화, 디설파이드 환원, 친핵성 분할, 또는 유기금속성 분할에 의해 분할될 수 있는 것을 포함한다(예를 들어, 문헌[Leriche et al., Bioorg. Med. Chem., 20:571-582, 2012] 참조, 이러한 문헌의 개시내용은 공유 컨쥬게이션을 위해 적합한 링커과 관련하여 본원에 참고로 포함됨). 약물-항체 컨쥬게이트 및 약물-리간드 컨쥬게이트의 합성을 위해 유용한 링커의 예는 다른 것들 중에서, 아민 및 티올 모이어티와 같은, 항체 또는 항원-결합 단편 내에 존재하는 친핵성 치환체와의 반응을 위해 적합한, 친전자체를 함유한 것, 예를 들어, 마이클 수용체(예를 들어, 말레이미드), 활성화된 에스테르, 전자-결핍 카보닐 화합물, 및 알데하이드를 함유하는 것을 포함한다. ㄴ예를 들어, 약물-항체 컨쥬게이트 및 약물-리간드 컨쥬게이트의 합성을 위해 적합한 링커는 비제한적으로, 예를 들어, 문헌[ Liu et al., 18:690-697, 1979]에 기술된 다른 것들 중에서, 숙신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)-사이클로헥산-L-카복실레이트(SMCC), N-숙신이미딜 요오도아세테이트(SIA), 설포-SMCC, m-말레이미도벤조일-N-하이드록시숙신이미딜 에스테르(MBS), 설포-MBS, 및 숙신이미딜 요오도아세테이트를 포함하며, 이러한 문헌의 개시내용은 화학적 컨쥬게이션을 위한 링커와 관련하여 본원에 참고로 포함된다. 추가적인 링커는 비-분할 가능한 말레이미도카프로일 링커를 포함하며, 이는 문헌[Doronina et al., Bioconjugate Chem. 17:14-24, 2006]에 기술된 바와 같이, 아우리스타틴과 같은 미소관-분열 작용제의 컨쥬게이션을 위해 특이 유용한 것이며, 이러한 문헌은 화학적 컨쥬게이션을 위한 링커와 관련하여 본원에 참고로 포함된다. 본원에 기술된 바와 같은 약물-항체 컨쥬게이트 및 약물-리간드 컨쥬게이트의 합성을 위해 적합한 추가적인 링커는 1,6-제거 공정에 의해 세포 독소를 배출시킬 수 있는 것, 예를 들어, p-아미노벤질 알코올(PABC), 6-말레이미도헥산산, pH-민감성 카보네이트, 및 문헌[Jain et al., Pharm. Res. 32:3526-3540, 2015]에 기술된 다른 시약들을 포함하며, 이러한 문헌의 개시내용은 전문이 본원에 참고로 포함된다.
세포독성제에 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드를 컨쥬게이션시키기 위해 사용될 수 있는 링커는 링커의 하나의 단부 상에서 세포독성제에 공유 결합되고 링커의 다른 단부 상에, CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110과 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드 내에 존재하는 반응성 치환체와 링커 상에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티를 함유하는 것을 포함한다. CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 및/또는 CD110과 결합하는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드 내에 존재할 수 있는 반응성 치환체는 비제한적으로, 세린, 트레오닌, 및 티로신 잔기의 하이드록실 모이어티; 라이신 잔기의 아미노 모이어티; 아스파르트산 및 글루탐산 잔기의 카복실 모이어티; 및 시스테인 잔기의 티올 모이어티뿐만 아니라, 비-천연 발생 아미노산의 프로파르길, 아지도, 할로아릴(예를 들어, 플루오로아릴), 할로헤테로아릴(예를 들어, 플루오로헤테로아릴), 할로알킬, 및 할로헤테로알킬 모이어티를 포함한다. 본원에 기술된 항체-약물 및 리간드-약물 컨쥬게이트와의 컨쥬게이션에서 유용한 링커는 비제한적으로, 하기 표 2에 도시된 바와 같은 커플링 반응에 의해 형성된 화학적 모이어티를 함유한 링커를 포함한다. 곡선은 각각 항체, 항원-결합 단편, 또는 리간드 및 세포독성 분자의 부착점을 명시하는 것이다.
표 2. 항체-약물 및 리간드-약물 컨쥬게이트의 형성에서 커플링 반응에 의해 형성된 예시적인 화학적 모이어티
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
치료 방법
본원에 기술된 바와 같이, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법은 하나 이상의 혈액 세포 타입을 이주시키거나 재증식시키기 위한 치료를 필요로 하는 대상체에 투여될 수 있다. 조혈 줄기 세포는 일반적으로, 다중-분화능을 나타내고, 이에 따라, 과립구(예를 들어, 전골수세포, 호중구, 산호성백혈구, 호염구), 적혈구(예를 들어, 망상 적혈구, 적혈구), 혈소판(예를 들어, 거핵아구, 혈소판 생성 거대핵세포, 혈소판), 단핵구(예를 들어, 단핵구, 대식세포), 수지상 세포, 소교세포, 파골세포, 및 림프구(예를 들어, NK 세포, B-세포 및 T-세포)를 포함하지만, 이로 제한되지 않는, 다수의 상이한 혈액 계통으로 분화할 수 있다. 조혈 줄기 세포는 추가적으로, 자가-재생 가능하고, 이에 따라, 모 세포와 균등한 가능성을 갖는 딸 세포를 형성시키고, 또한, 조혈 줄기 세포 니치에 안착하고 생상적 및 지속적인 조혈을 다시-확립시킬 시에 이식편 수용자 내에 재도입되는 능력을 특징으로 할 수 있다.
이에 따라, 조혈 줄기 세포는 생체내 세포의 결함성 또는 결핍성 집단을 재증식시켜, 내인성 혈액 세포 집단의 결함 또는 결핍과 관련된 병인을 치료하기 위하여, 조혈 계통의 하나 이상의 세포 타입에 있어서 결함 또는 결핍을 나타내는 환자에게 투여될 수 있다. 본원에 기술된 조성물 및 방법은 이에 따라, 비-악성 이상혈색소증(예를 들어, 겸상 적혈구 빈혈, 지중해 빈혈, 판코니 빈혈, 무형성 빈혈, 및 비스코트-올드리치 증후군으로 이루어진 군으로부터 선택된 이상혈색소증)을 치료하기 위해 이용될 수 있다. 추가적으로, 또는 대안적으로, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 면역결핍, 예를 들어, 선천성 면역결핍을 치료하기 위해 이용될 수 있다.. 추가적으로, 또는 대안적으로, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 후천성 면역결핍(예를 들어, HIV 및 AIDS로 이루어진 군으로부터 선택된 후천성 면역결핍)을 치료하기 위해 이용될 수 있다. 본원에 기술된 조성물 및 방법은 대사 장애(예를 들어, 글리코겐 축적 질병, 뮤코다당증, 고오시에씨 병, 후를러 질병, 스핑고지질증, 및 이염색백색질장애로 이루어진 군으로부터 선택된 대사 장애)를 치료하기 위해 이용될 수 있다.
추가적으로, 또는 대안적으로, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 악성 종양 또는 증식 장애, 예를 들어, 혈액암, 골수증식 질병을 치료하기 위해 이용될 수 있다. 암 치료의 경우에, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 조혈 줄기 세포 이식 치료법 이전에 내인성 조혈 줄기 세포의 집단을 고갈시키기 위해 환자에게 투여될 수 있으며, 이러한 경우에, 이식된 세포는 내인성 세포 감소 단계에 의해 니치에 안착하고 생산적 조혈을 확립할 수 있다. 이는 또한, 암 세포 박멸 동안, 예를 들어, 전신 화학요법 동안 감소된 세포의 집단을 재구성할 수 있다. 본원에 기술된 조성물 및 방법을 이용하여 치료될 수 있는 예시적인 혈액암은 비제한적으로, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 광범위 큰 B-세포 림프종, 및 비호지킨 림프종뿐만 아니라, 신경아세포종을 포함하는 다른 암성 질환을 포함한다.
본원에 기술된 조성물 및 방법으로 치료될 수 있는 추가적인 질병은 비제한적으로, 아데노신 데아미나아제 결핍증 및 중증 복합형 면역결핍증, 고면역글로불린 M 증후군, 체디악-히가시 질병, 유전성 림프조직구증, 골석화증, 골형성부전증, 축적증, 중증성 지중해 빈혈, 전신 경화증, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 및 소아 류머티스성 관절염을 포함한다.
본원에 기술된 항체, 이의 항원-결합 단편, 리간드, 및 컨쥬게이트는 고형 장기 이식 내성을 유도하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 타겟 조직으로부터 세포의 집단을 고갈시키거나 제거하기 위해(예를 들어, 골수 줄기 세포 니치로부터 조혈 줄기 세포를 감소시키기 위해) 사용될 수 있다. 타겟 조직으로부터 세포의 이러한 감소 이후에, 장기 공여자로부터의 줄기 또는 전구 세포의 집단(예를 들어, 장기 공여자로부터의 조혈 줄기 세포)은 이식편 수용자에 투여될 수 있으며, 이러한 줄기 또는 전구 세포의 생착 후에, 임시 또는 안정한 혼합된 키메리즘(chimerism)이 달성될 수 있으며, 이에 의해 추가 면역억제제에 대한 필요 없이 장기 이식편 장기 내성을 가능하게 할 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 고형 장기 이식편 수용자(다른 것들 중에서, 예를 들어, 신장 이식, 폐 이식, 간 이식, 및 심장 이식)에서 이식 내성을 유도하기 위해 사용될 수 있다. 본원에 기술된 조성물 및 방법은 예를 들어, 낮은 백분율의 임시 또는 안정한 공여자 생착이 이식된 장기의 장기 내성을 유도하기에 충분하기 때문에, 고형 장기 이식 내성의 유도와 관련하여 사용하기에 매우 적합하다.
또한, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+인 세포에 의해 특징되는 암과 같은, 암을 직접적으로 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 특히, CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 백혈병 세포를 나타내는 환자에서 백혈병을 치료하기 위해 사용될 수 있다. CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 암성 세포, 예를 들어, 백혈병 세포를 감소시킴으로써, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 다양한 암을 직접적으로 치료하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 방식으로 치료될 수 있는 예시적인 암은 혈액암, 예를 들어, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 광범위 큰 B-세포 림프종, 및 비호지킨 림프종을 포함한다.
또한, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 자가면역 장애를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드는 CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 면역 세포를 사멸시키기 위해, 자가면역 장애로 고통 받는 인간 환자와 같은 대상체에 투여될 수 있다. CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 면역 세포는 자가반응 림프구, 예를 들어, 자가 항원과 특이적으로 결합하고 자가 항원에 대한 면역 반응을 마운팅하는 T-세포 수용체를 발현시키는 T-세포일 수 있다. 자가-반응성의 CD45+, CD135+, CD34+, CD90+, 또는 CD110+ 세포를 감소시킴으로써, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 하기에 기술된 것과 같은 자가면역 병인을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 추가적으로, 또는 대안적으로, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 조혈 줄기 세포 이식 치료법 이전에 내인성 조혈 줄기 세포의 집단을 고갈시킴으로써 자가면역 질병을 치료하기 위해 사용될 수 있으며, 이러한 경우에, 이식된 세포는 내인성 세포 감소 단계에 의해 생성된 니치에 안착하고 생산적 조혈을 확립할 수 있다. 이는 또한, 자가면역 세포 박멸 동안 감소된 세포의 집단을 재구성할 수 있다.
본원에 기술된 조성물 및 방법을 사용하여 치료될 수 있는 자가면역 질병은 비제한적으로, 건선, 건선성 관절염, 제1형 진성 당뇨병(제1형 당뇨병), 류머티스성 관절염(RA), 인간 전신 루푸스(SLE), 다발성 경화증(MS), 염증성 장질환(IBD), 림프구성 장염, 갑성 산재성 뇌척수염(ADEM), 애디슨병, 전신 탈모증, 상직성 척수염, 항인지질 항체 증후군(APS), 무형성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이질환 (AIED), 자가면역 림프구증식 증후군(ALPS), 자가면역 난소염, 발로병, 베체트병, 수포성류천포창, 심근증, 샤가스병, 만성 피로 면역부전 증후군(CFIDS), 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경증, 크론병, 반흔성 유사천포창, 복강 스프루-포진성 피부염, 저온 응집병, CREST 증후군, 데고스 병, 원판성 루푸스, 자율신경장애, 자궁 내막증, 필수 혼합 저온글로불린혈증, 섬유조직염-섬유근염, 굿파스튜어 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군(GBS), 하시모토 갑상선염, 화농성한선염, 특발성 및/또는 급성 혈소판감소성 자반병, 특발성 폐섬유증, IgA 신경증, 간질성 방광염, 연소성 관절염, 가와사키병, 편평태선, 라임병, 메니에르병, 혼합 결합조직병(MCTD), 중증 근무력증, 신경근긴장증, 언구간대경련 근간대경련 증후군(OMS), 시신경염, 오드 갑상선염, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 다발 연골염, 다발성 근염 및 피부근염, 원발성 담즙 간경변, 결절성 다발성 동맥염, 다분비선 증후군, 류머티스성 다발근통, 원발성 무감마글로불린혈증, 레이노 현상, 라이터 증후군, 류머티스성 염, 사르코이도시스, 경피증, 쇼그렌 증후군, 강직 인간 증후군, 타까야수 동맥염, 측두 동맥염(또한 "거대세포성 동맥염"으로서 알려짐), 궤양성 대장염, 콜라겐성 결장염, 포도막염, 맥관염, 백반증, 외음부통("외음부 전정염"), 및 베게너 육아종증을 포함한다.
투여 경로 및 투여량
본원에 기술된 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드는 환자(예를 들어, 암, 자가면역 질병으로 고통 받거나 조혈 줄기 세포 이식편 치료법를 필요로 하는 인간환자)에게 다양한 투여 형태로 투여될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기술된 항체, 이의 항원-결합 단편, 및 리간드는 암, 자가면역 질병으로 고통 받거나 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 환자에게 수용액, 예를 들어, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 함유한 수용액 형태로 투여될 수 있다. 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용하기 위한 약제학적으로 허용되는 부형제는 점도-개질제를 포함한다. 수용액은 당해 분야에 공지된 기술을 이용하여 멸균될 수 있다.
본원에 기술된 항체, 항원-결합 단편, 및 리간드는 다양한 경로에 의해, 예를 들어, 경구, 경피로, 피하로, 비강내로, 정맥내로, 근육내로, 안구내로, 또는 비경구로 투여될 수 있다. 임의의 제공된 경우에 가장 적합한 투여를 위한 경로는 투여되는 특정 항체, 항원-결합 단편, 또는 리간드, 환자, 약제학적 제형 방법, 투여 방법(예를 들어, 투여 시간 및 투여 경로), 환자의 연령, 체중, 성별, 치료되는 질병의 중증도, 환자의 식사, 및 환자의 배출율에 따를 것이다.
본원에 기술된 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드의 유효 용량은 예를 들어, 단일(예를 들어, 볼루스) 투여, 다중 투여, 또는 연속 투여 당, 또는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드의 최적의 혈청 농도(예를 들어, 0.0001 내지 5000 ㎍/㎖의 혈청 농도)를 달성하기 위해 약 0.001 내지 약 100 mg/kg 체중의 범위일 수 있다. 용량은 암, 자가면역 질병으로 고통 받거나 조혈 줄기 세포 이식편의 수용을 위한 준비에서 컨디셔닝 요법을 받은 대상체(예를 들어, 인간)에게 하루, 1주, 또는 1개월 당 1회 이상(예를 들어, 2 내지 10회) 투여될 수 있다. 조혈 줄기 세포 이식 이전의 컨디셔닝 절차의 경우에, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드는 환자에게 외인성 조혈 줄기 세포의 생착을 최적으로 증진시키는 시간, 예를 들어, 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 전 1시간 내지 1주(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일) 또는 그 이상의 시간에 투여될 수 있다.
실시예
하기 실시예는 본원에 기술된 조성물 및 방법이 어떻게 사용되고, 제조되고, 평가되는 지의 설명을 당업자에게 제공하기 위해 기술된 것으로서, 이는 오로지 본 발명의 예시인 것으로 의도되고, 본 발명자들이 이의 발명으로서 여겨지는 범위를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예 1. 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 준비에서 인간 환자에 항-CD45 항체의 투여
본원에 개시된 방법에 따르면, 당업자는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 증진시키기 위해 인간 환자와 같은 환자를 컨디셔닝시킬 수 있다. 이를 위하여, 당업자는 인간에게 조혈 줄기 세포에 의해 발현된 항원과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예를 들어, CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, CD45RO와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편)을 투여할 수 있다. 항체는 독소, 예를 들어, 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 세포독성 분자에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 예를 들어, 항-CD45 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 항-CD45RO 항체 또는 이의 항원-결합 단편)은 세포 독소, 예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 이러한 컨쥬게이션은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 공유 결합-형성 기술을 이용하여 수행될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 후속하여, 환자에게 외인성 조혈 줄기 세포(예를 들어, 자가, 동계, 또는 동종이계 조혈 줄기 세포)의 이식 이전에, 환자에게, 예를 들어, 정맥내 투여에 의해 투여될 수 있다.
항-CD45(예를 들어, 항-CD45RO) 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에, 내인성 조혈 줄기 세포의 양을 예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 그 이상 감소시키기에 충분한 양으로 투여될 수 있다. 조혈 줄기 세포 카운트의 감소는 당해 분야에 공지된 보편적인 기술을 이용하여, 예를 들어, 환자로부터 배출된 혈액 샘플에서의 특징적인 조혈 줄기 세포 표면 항원을 발현시키는 세포의 FACS 분석에 의해 컨디셔닝 치료법 동안 다양한 간격으로 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 당업자는 컨디셔닝 치료법 동안 다양한 시점에서 환자로부터 혈액 샘플을 배출시키고, 조혈 줄기 세포 마커 항원에 결합하는 항체를 사용하여 샘플 중의 조혈 줄기 세포의 상대적인 농도를 설명하기 위해 FACS 분석을 수행함으로써 내인성 조혈 줄기 세포 감소의 크기를 결정할 수 있다. 일부 구체예에 따르면, 조혈 줄기 세포의 농도가 항-CD45(예를 들어, 항-CD45RO) 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트로의 컨디셔닝 치료법에 대한 반응으로 최소값에 도달하였을 때, 의사는 컨디셔닝 치료법을 마칠 수 있고, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 환자의 준비를 개시할 수 있다.
항-CD45(예를 들어, 항-CD45RO) 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제, 예를 들어, 점도-개질제를 함유한 수용액으로 환자에게 투여될 수 있다. 수용액은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 기술을 이용하여 멸균될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 환자에게 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 전에 예를 들어, 0.001 mg/kg 내지 100 mg/kg의 투여량으로 환자에게 투여될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 외인성 조혈 줄기 세포의 생착을 최적으로 증진시키는 시간에, 예를 들어, 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 전에 1시간 내지 1주(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일) 또는 그 이상의 시간에 환자에게 투여될 수 있다.
컨디셔닝 치료법의 종료 이후에, 환자는 이후에, 예를 들어, 컨디셔닝 치료법을 수행한 동일한 의사로부터 또는 상이한 의사로부터, 외인성 조혈 줄기 세포의 주입(예를 들어, 정맥내 주입)을 수용할 수 있다. 의사는 환자에게 자가, 동계, 또는 동종이계 조혈 줄기 세포의 주입을, 예를 들어, 1×103 내지 1×109개의 조혈 줄기 세포/kg의 투여량으로 투여할 수 있다. 의사는 예를 들어, 환자로부터 혈액 샘플을 채취하고 이식편의 투여 후에 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포(예를 들어, 거대핵세포, 혈전구, 혈소판, 적혈구, 비만 세포, 근육모세포, 호염구, 호중구, 산호성백혈구, 소교세포, 과립구, 단핵구, 파골세포, 항원-제공 세포, 대식세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 및 B-림프구)의 농도 증가를 결정함으로써 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 모니터링할 수 있다. 이러한 분석은 예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 후 1시간 내지 6개월, 또는 그 이상(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 15주, 16주, 17주, 18주, 19주, 20주, 21주, 22주, 23주, 24주, 또는 그 이상) 수행될 수 있다. 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포의 농도가 이식편 치료법 이전에 상응하는 세포 타입의 농도에 비해 이식편 치료법 이후 (예를 들어, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 500%, 또는 그 이상) 증가되었다는 발견은, 항-CD45(예를 들어, 항-CD45RO) 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트로의 치료가 이식된 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 성공적으로 증진하였다는 하나의 표시를 제공한다.
실시예 2. 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 준비에서 인간 환자에 항-CD135 항체의 투여
본원에 개시된 방법을 이용하여, 당업자는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 인간 환자에게 조혈 줄기 세포에 의해 발현된 항원과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예를 들어, CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여할 수 있다. 이러한 방식으로, 내인성 조혈 줄기 세포의 집단은 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 증진시키기 위해 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 전에 고갈될 수 있다. 항체는 독소, 예를 들어, 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 세포독성 분자에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 예를 들어, 항-CD135 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 세포 독소, 예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 이러한 컨쥬게이션은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 공규 결합-형성 기술을 이용하여 수행될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 후속하여, 환자에게 외인성 조혈 줄기 세포(예를 들어, 자가, 동계, 또는 동종이계 조혈 줄기 세포)의 이식 이전에, 환자에게, 예를 들어, 정맥내 투여에 의해 투여될 수 있다.
항-CD135 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에, 내인성 조혈 줄기 세포의 양을 예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 그 이상 감소시키기에 충분한 양으로 투여될 수 있다. 조혈 줄기 세포 카운트의 감소는 당해 분야에 공지된 보편적인 기술을 이용하여, 예를 들어, 환자로부터 채취된 혈액 샘플에서 특징적인 조혈 줄기 세포 표면 항원을 발현시키는 세포의 FACS 분석에 의해 컨디셔닝 치료법 동안 다양한 간격으로 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 당업자는, 컨디셔닝 치료법 동안 다양한 시점에서 환자로부터 혈액 샘플을 채취하고, 조혈 줄기 세포 마커 항원에 결합하는 항체를 사용하여 샘플에서 조혈 줄기 세포의 상대적인 농도를 설명하기 위해 FACS 분석을 수행함으로써 내인성 조혈 줄기 세포 감소의 크기를 결정할 수 있다. 일부 구체예에 따르면, 조혈 줄기 세포의 농도가 항-CD135 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트로의 컨디셔닝 치료법에 반응하여 최소값에 도달하였을 때, 의사는 컨디셔닝 치료법을 종료할 수 있고, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 환자의 준비를 개시할 수 있다.
항-CD135 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 환자에게, 점도-개질제와 같은, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 함유한 수용액으로 투여될 수 있다. 수용액은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 기술을 이용하여 멸균될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 환자에게 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 이전에, 환자에게, 예를 들어, 0.001 mg/kg 내지 100 mg/kg의 투여량으로 투여될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 외인성 조혈 줄기 세포의 생착을 최적으로 증진시키는 시간에, 예를 들어, 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 이전에 1시간 내지 1주(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일) 또는 그 이상의 시간에 환자에게 투여될 수 있다.
컨디셔닝 치료법의 종료 이후에, 환자는 이후에, 예를 들어, 컨디셔닝 치료법을 수행한 동일한 의사로부터 또는 상이한 의사로부터, 외인성 조혈 줄기 세포의 주입(예를 들어, 정맥내 주입)을 수용할 수 있다. 의사는 환자에게 자가, 동계, 또는 동종이계 조혈 줄기 세포의 주입을, 예를 들어, 1×103 내지 1×109개의 조혈 줄기 세포/kg의 투여량으로 투여할 수 있다. 의사는 예를 들어, 환자로부터 혈액 샘플을 채취하고 이식편의 투여 후에 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포(예를 들어, 거대핵세포, 혈전구, 혈소판, 적혈구, 비만 세포, 근육모세포, 호염구, 호중구, 산호성백혈구, 소교세포, 과립구, 단핵구, 파골세포, 항원-제공 세포, 대식세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 및 B-림프구)의 농도 증가를 결정함으로써 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 모니터링할 수 있다. 이러한 분석은 예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 후 1시간 내지 6개월, 또는 그 이상(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 15주, 16주, 17주, 18주, 19주, 20주, 21주, 22주, 23주, 24주, 또는 그 이상) 수행될 수 있다. 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포의 농도가 이식편 치료법 이전에 상응하는 세포 타입의 농도에 비해 이식편 치료법 이후 (예를 들어, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 500%, 또는 그 이상) 증가되었다는 발견은 항-CD135 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트로의 치료가 이식된 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 성공적으로 증진하였다는 하나의 표시를 제공한다.
실시예 3. 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 준비에서 인간 환자에 항-CD34 항체의 투여
본원에 개시된 방법에 따르면, 당업자는 인간에게 조혈 줄기 세포에 의해 발현된 항원과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예를 들어, CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여할 수 있다. 이러한 방식으로, 내인성 조혈 줄기 세포의 집단은 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 증진시키기 위해 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 전에 고갈될 수 있다. 항체는 독소, 예를 들어, 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 세포독성 분자에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 예를 들어, 항-CD34 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 세포 독소, 예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 이러한 컨쥬게이션은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 공규 결합-형성 기술을 이용하여 수행될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 후속하여, 환자에게 외인성 조혈 줄기 세포(예를 들어, 자가, 동계, 또는 동종이계 조혈 줄기 세포)의 이식 이전에, 환자에게, 예를 들어, 정맥내 투여에 의해 투여될 수 있다.
항-CD34 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에, 내인성 조혈 줄기 세포의 양을 예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 그 이상 감소시키기에 충분한 양으로 투여될 수 있다. 조혈 줄기 세포 카운트의 감소는 당해 분야에 공지된 보편적인 기술을 이용하여, 예를 들어, 환자로부터 채취된 혈액 샘플에서 특징적인 조혈 줄기 세포 표면 항원을 발현시키는 세포의 FACS 분석에 의해 컨디셔닝 치료법 동안 다양한 간격으로 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 당업자는, 컨디셔닝 치료법 동안 다양한 시점에서 환자로부터 혈액 샘플을 채취하고, 조혈 줄기 세포 마커 항원에 결합하는 항체를 사용하여 샘플에서 조혈 줄기 세포의 상대적인 농도를 설명하기 위해 FACS 분석을 수행함으로써 내인성 조혈 줄기 세포 감소의 크기를 결정할 수 있다. 일부 구체예에 따르면, 조혈 줄기 세포의 농도가 항-CD34 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트로의 컨디셔닝 치료법에 반응하여 최소값에 도달하였을 때, 의사는 컨디셔닝 치료법을 종료할 수 있고, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 환자의 준비를 개시할 수 있다.
항-CD34 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 환자에게, 점도-개질제와 같은, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 함유한 수용액으로 투여될 수 있다. 수용액은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 기술을 이용하여 멸균될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 환자에게 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 이전에, 환자에게, 예를 들어, 0.001 mg/kg 내지 100 mg/kg의 투여량으로 투여될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 외인성 조혈 줄기 세포의 생착을 최적으로 증진시키는 시간에, 예를 들어, 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 이전에 1시간 내지 1주(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일) 또는 그 이상의 시간에 환자에게 투여될 수 있다.
컨디셔닝 치료법의 종료 이후에, 환자는 이후에, 예를 들어, 컨디셔닝 치료법을 수행한 동일한 의사로부터 또는 상이한 의사로부터, 외인성 조혈 줄기 세포의 주입(예를 들어, 정맥내 주입)을 수용할 수 있다. 의사는 환자에게 자가, 동계, 또는 동종이계 조혈 줄기 세포의 주입을, 예를 들어, 1×103 내지 1×109개의 조혈 줄기 세포/kg의 투여량으로 투여할 수 있다. 의사는 예를 들어, 환자로부터 혈액 샘플을 채취하고 이식편의 투여 후에 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포(예를 들어, 거대핵세포, 혈전구, 혈소판, 적혈구, 비만 세포, 근육모세포, 호염구, 호중구, 산호성백혈구, 소교세포, 과립구, 단핵구, 파골세포, 항원-제공 세포, 대식세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 및 B-림프구)의 농도 증가를 결정함으로써 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 모니터링할 수 있다. 이러한 분석은 예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 후 1시간 내지 6개월, 또는 그 이상(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 15주, 16주, 17주, 18주, 19주, 20주, 21주, 22주, 23주, 24주, 또는 그 이상) 수행될 수 있다. 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포의 농도가 이식편 치료법 이전에 상응하는 세포 타입의 농도에 비해 이식편 치료법 이후 (예를 들어, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 500%, 또는 그 이상) 증가되었다는 발견은 항-CD34 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트로의 치료가 이식된 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 성공적으로 증진하였다는 하나의 표시를 제공한다.
실시예 4. 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 준비에서 인간 환자에 항-CD90 항체의 투여
본원에 개시된 방법을 이용하여, 당업자는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 인간 환자에게 조혈 줄기 세포에 의해 발현된 항원과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예를 들어, CD90와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여할 수 있다. 이러한 방식으로, 내인성 조혈 줄기 세포의 집단은 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 증진시키기 위해 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 전에 고갈될 수 있다. 항체는 독소, 예를 들어, 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 세포독성 분자에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 예를 들어, 항-CD90 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예를 들어, 항-GNNK+ CD90 항체 또는 이의 항원-결합 단편)은 세포 독소, 예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 이러한 컨쥬게이션은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 공규 결합-형성 기술을 이용하여 수행될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 후속하여, 환자에게 외인성 조혈 줄기 세포(예를 들어, 자가, 동계, 또는 동종이계 조혈 줄기 세포)의 이식 이전에, 환자에게, 예를 들어, 정맥내 투여에 의해 투여될 수 있다.
항-CD90 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에, 내인성 조혈 줄기 세포의 양을 예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 그 이상 감소시키기에 충분한 양으로 투여될 수 있다. 조혈 줄기 세포 카운트의 감소는 당해 분야에 공지된 보편적인 기술을 이용하여, 예를 들어, 환자로부터 채취된 혈액 샘플에서 특징적인 조혈 줄기 세포 표면 항원을 발현시키는 세포의 FACS 분석에 의해 컨디셔닝 치료법 동안 다양한 간격으로 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 당업자는, 컨디셔닝 치료법 동안 다양한 시점에서 환자로부터 혈액 샘플을 채취하고, 조혈 줄기 세포 마커 항원에 결합하는 항체를 사용하여 샘플에서 조혈 줄기 세포의 상대적인 농도를 설명하기 위해 FACS 분석을 수행함으로써 내인성 조혈 줄기 세포 감소의 크기를 결정할 수 있다. 일부 구체예에 따르면, 조혈 줄기 세포의 농도가 항-CD90 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트로의 컨디셔닝 치료법에 반응하여 최소값에 도달하였을 때, 의사는 컨디셔닝 치료법을 종료할 수 있고, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 환자의 준비를 개시할 수 있다.
항-CD90 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 환자에게, 점도-개질제와 같은, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 함유한 수용액으로 투여될 수 있다. 수용액은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 기술을 이용하여 멸균될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 환자에게 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 이전에, 환자에게, 예를 들어, 0.001 mg/kg 내지 100 mg/kg의 투여량으로 투여될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 외인성 조혈 줄기 세포의 생착을 최적으로 증진시키는 시간에, 예를 들어, 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 이전에 1시간 내지 1주(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일) 또는 그 이상의 시간에 환자에게 투여될 수 있다.
컨디셔닝 치료법의 종료 이후에, 환자는 이후에, 예를 들어, 컨디셔닝 치료법을 수행한 동일한 의사로부터 또는 상이한 의사로부터, 외인성 조혈 줄기 세포의 주입(예를 들어, 정맥내 주입)을 수용할 수 있다. 의사는 환자에게 자가, 동계, 또는 동종이계 조혈 줄기 세포의 주입을, 예를 들어, 1×103 내지 1×109개의 조혈 줄기 세포/kg의 투여량으로 투여할 수 있다. 의사는 예를 들어, 환자로부터 혈액 샘플을 채취하고 이식편의 투여 후에 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포(예를 들어, 거대핵세포, 혈전구, 혈소판, 적혈구, 비만 세포, 근육모세포, 호염구, 호중구, 산호성백혈구, 소교세포, 과립구, 단핵구, 파골세포, 항원-제공 세포, 대식세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 및 B-림프구)의 농도 증가를 결정함으로써 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 모니터링할 수 있다. 이러한 분석은 예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 후 1시간 내지 6개월, 또는 그 이상(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 15주, 16주, 17주, 18주, 19주, 20주, 21주, 22주, 23주, 24주, 또는 그 이상) 수행될 수 있다. 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포의 농도가 이식편 치료법 이전에 상응하는 세포 타입의 농도에 비해 이식편 치료법 이후 (예를 들어, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 500%, 또는 그 이상) 증가되었다는 발견은 항-CD90 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트로의 치료가 이식된 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 성공적으로 증진하였다는 하나의 표시를 제공한다.
실시예 5. 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 준비에서 인간 환자에 항-CD110 항체의 투여
본원에 개시된 방법을 이용하여, 당업자는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 필요로 하는 인간 환자에게 조혈 줄기 세포에 의해 발현된 항원과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 예를 들어, CD110와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여할 수 있다. 이러한 방식으로, 내인성 조혈 줄기 세포의 집단은 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 증진시키기 위해 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 전에 고갈될 수 있다. 항체는 독소, 예를 들어, 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 세포독성 분자에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 예를 들어, 항-CD110 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 세포 독소, 예를 들어, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 아마톡신, 예를 들어, α-아마니틴, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체에 공유적으로 컨쥬게이션될 수 있다. 이러한 컨쥬게이션은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 공규 결합-형성 기술을 이용하여 수행될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 후속하여, 환자에게 외인성 조혈 줄기 세포(예를 들어, 자가, 동계, 또는 동종이계 조혈 줄기 세포)의 이식 이전에, 환자에게, 예를 들어, 정맥내 투여에 의해 투여될 수 있다.
항-CD110 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 이전에, 내인성 조혈 줄기 세포의 양을 예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 그 이상 감소시키기에 충분한 양으로 투여될 수 있다. 조혈 줄기 세포 카운트의 감소는 당해 분야에 공지된 보편적인 기술을 이용하여, 예를 들어, 환자로부터 채취된 혈액 샘플에서 특징적인 조혈 줄기 세포 표면 항원을 발현시키는 세포의 FACS 분석에 의해 컨디셔닝 치료법 동안 다양한 간격으로 모니터링될 수 있다. 예를 들어, 당업자는, 컨디셔닝 치료법 동안 다양한 시점에서 환자로부터 혈액 샘플을 채취하고, 조혈 줄기 세포 마커 항원에 결합하는 항체를 사용하여 샘플에서 조혈 줄기 세포의 상대적인 농도를 설명하기 위해 FACS 분석을 수행함으로써 내인성 조혈 줄기 세포 감소의 크기를 결정할 수 있다. 일부 구체예에 따르면, 조혈 줄기 세포의 농도가 항-CD135 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트로의 컨디셔닝 치료법에 반응하여 최소값에 도달하였을 때, 의사는 컨디셔닝 치료법을 종료할 수 있고, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법을 위한 환자의 준비를 개시할 수 있다.
항-CD110 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 환자에게, 점도-개질제와 같은, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 함유한 수용액으로 투여될 수 있다. 수용액은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 기술을 이용하여 멸균될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 환자에게 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 이전에, 환자에게, 예를 들어, 0.001 mg/kg 내지 100 mg/kg의 투여량으로 투여될 수 있다. 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트는 외인성 조혈 줄기 세포의 생착을 최적으로 증진시키는 시간에, 예를 들어, 외인성 조혈 줄기 세포 이식편의 투여 이전에 1시간 내지 1주(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 또는 7일) 또는 그 이상의 시간에 환자에게 투여될 수 있다.
컨디셔닝 치료법의 종료 이후에, 환자는 이후에, 예를 들어, 컨디셔닝 치료법을 수행한 동일한 의사로부터 또는 상이한 의사로부터, 외인성 조혈 줄기 세포의 주입(예를 들어, 정맥내 주입)을 수용할 수 있다. 의사는 환자에게 자가, 동계, 또는 동종이계 조혈 줄기 세포의 주입을, 예를 들어, 1×103 내지 1×109개의 조혈 줄기 세포/kg의 투여량으로 투여할 수 있다. 의사는 예를 들어, 환자로부터 혈액 샘플을 채취하고 이식편의 투여 후에 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포(예를 들어, 거대핵세포, 혈전구, 혈소판, 적혈구, 비만 세포, 근육모세포, 호염구, 호중구, 산호성백혈구, 소교세포, 과립구, 단핵구, 파골세포, 항원-제공 세포, 대식세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 및 B-림프구)의 농도 증가를 결정함으로써 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 모니터링할 수 있다. 이러한 분석은 예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법 후 1시간 내지 6개월, 또는 그 이상(예를 들어, 1시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 15주, 16주, 17주, 18주, 19주, 20주, 21주, 22주, 23주, 24주, 또는 그 이상) 수행될 수 있다. 조혈 줄기 세포 또는 조혈 계통의 세포의 농도가 이식편 치료법 이전에 상응하는 세포 타입의 농도에 비해 이식편 치료법 이후 (예를 들어, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 500%, 또는 그 이상) 증가되었다는 발견은 항-CD110 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 약물-항체 컨쥬게이트로의 치료가 이식된 조혈 줄기 세포 이식편의 생착을 성공적으로 증진하였다는 하나의 표시를 제공한다.
실시예 6. 파지 디스플레이에 의해 조혈 줄기 세포와 결합할 수 있는 항체 생성
본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용하기 위한 항-CD45(예를 들어, 항-CD45RO), 항-CD135, 항-CD34, 항-CD90, 또는 항-CD110 항체의 시험관내 진화를 위한 예시적인 방법은 파지 디스플레이이다. 파지 디스플레이 라이브러리는 항체의 CDR 또는 항체-유사 스캐폴드(예를 들어, 10Fn3 도메인의 BC, CD, 및 DE 루프)의 유사한 영역의 코딩 서열 내에 설계된 시리즈의 돌연변이 또는 변이체를 제조함으로써 생성될 수 있다. 이러한 돌연변이가 도입된 주형 항체-엔코딩 서열은 예를 들어, 나이브 인간 생식계열 서열일 수 있다. 이러한 돌연변이는 당해 분야에 공지된 표준 돌연변이유발 기술을 이용하여 수행될 수 있다. 각 돌연변이체 서열은 이에 따라, 하나 이상의 아미노산 변이체에 대한 주형 저장에 해당하는 항체를 엔코딩한다. 레트로바이러스 및 파지 디스플레이 벡터는 당해 분야에 공지된 표준 벡터 작제 기술을 이용하여 조작될 수 있다. 양립성 단백질 발현 벡터와 함께 P3 파지 디스플레이 벡터는 항체 다양화를 위한 파지 디스플레이 벡터를 생성시키기 위해 사용될 수 있다.
돌연변이된 DNA는 서열 다양성을 제공하며, 각각의 형질전환체 파지는 DNA에 의해 엔코딩된 초기 주형 아미노산 서열의 하나의 변이체를 나타내어, 다수의 상이하지만 구조적으로 관련된 아미노산 서열을 나타내는 파지 집단(라이브러리)을 야기시킨다. 항체 초가변 영역의 잘-규정된 구조로 인하여, 파지 디스플레이 스크린에 도입된 아미노산 변형은 이의 전체 분자 구조를 현저하게 변경시키지 않으면서 결합 펩티드 또는 도메인의 결합 성질을 변경시킬 것으로 예상된다.
통상적인 스크린에서, 파지 라이브러리는 외래 항원들 중 하나 또는 이의 에피토프와 접촉되고 이와 결합할 수 있다. 결합제 및 비-결합제의 분리를 용이하게 하기 위하여, 고체 지지체 상에 타겟을 고정시키는 것이 편리하다. CD45-, CD135-, CD34-, CD90-, 또는 CD110-결합 모이어티를 지닌 파지는 고체 지지체 상에서 타겟과 복합물을 형성할 수 있는 반면, 비-결합 파지는 용액 중에 잔류하고, 과량의 완충제로 세척될 수 있다. 결합된 파지는 이후에, 완충제를 극한의 pH(pH 2 또는 pH 10)로 변경시키고, 완충제의 이온 강도를 변화시키고, 변성제(denaturant)를 첨가하거나 다른 공지된 수단에 의해 타겟으로부터 유리될 수 있다.
회수된 파지는 이후에, 박테리아 세포의 감염을 통해 증폭될 수 있으며, 스크리닝 과정은 비-결합 항체에서 고갈되어 있고 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 또는 CD110와 결합하는 항체에 대해 풍부한 새로운 풀로 반복될 수 있다. 심지어 수 개의 결합 파지의 회수는 후속 스크리닝의 반복을 위해 파지를 증폭시키는데 충분하다. 수 개의 선택 라운드 후에, 결합 풀에서 선택된 파지 클론으로부터 유래된 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 엔코딩하는 유전자 서열은 보편적인 방법에 의해 결정되며, 이에 따라, 타겟에 파지의 결합 친화력을 부여하는 펩티드 서열을 나타낸다. 패닝 공정(panning process) 동안, 집단의 서열 다양성은, 요망 가능한 펩티드-결합 항체가 잔류할 때까지 각 선택 라운드에서 감소한다. 서열은 적은 수의 관련된 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 모일 수 있다. 선택의 각 라운드에서 회수된 파지의 수의 증가는 라이브러리의 수렴이 스크린에서 일어났다는 표시이다.
실시예 7. 조혈 줄기 세포 항원과 결합하는 인간화된 항체 생성
CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 또는 CD110과 결합하는 비-인간 항체는 예를 들어, 하기 절차에 따라 인간화될 수 있다. 공통 인간 항체 중쇄 및 경쇄 서열은 당해 분야에 공지되어 있다(예를 들어, 문헌["VBASE" human germline sequence database; Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91 -3242, 1991; Tomlinson et al., J. Mol. Biol. 227:776-798, 1992; 및 Cox et al.. Eur. J. Immunol. 24:827- 836, 1994] 참조, 이러한 문헌 각각의 개시내용은 공통 인간 항체 중쇄 및 경쇄 서열과 관련하여 본원에 참고로 포함됨). 확립된 절차를 이용하여, 당업자는 (서열 정렬에 의해) 공통 항체 서열의 CDR 및 가변 도메인 프레임워크 잔기를 동정할 수 있다. 당업자는 공통 인간 항체의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인의 하나 이상의 CDR을, 인간화된 항체를 생성하기 위해 순서대로 기술된 바와 같이 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 또는 CD110과 결합하는 비-인간 항체의 하나 이상의 상응하는 CDR로 치환시킬 수 있다. 이러한 CDR 교환은 본원에 기술되거나 당해 분야에 공지된 유전자 편집 기술을 이용하여 수행될 수 있다.
공통 인간 항체의 가변 도메인의 일 예는 미국특허번호 제6,054,297호에서 동정된, 중쇄 가변 도메인 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDYAMSWVRQAPGKGLEWVAVISENGSDTYYADSVKGRFTISRDDSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDRGGAVSYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO: 34) 및 경쇄 가변 도메인 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSSYLAWYQQKPGKAPKLLIYAASSLESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYNSLPYTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO: 35)를 함유하며, 이러한 문헌의 개시내용은 인간 항체 공통 서열과 관련하여 본원에 참고로 포함된다. 상기 서열에서 CDR은 진하게 나타내었다.
인간화된 항체를 생성하기 위하여, 당업자는 하나 이상의 가변 영역 CDR이 CD45(예를 들어, CD45RO), CD135, CD34, CD90, 또는 CD110과 결합하는 비-인간 항체의 하나 이상의 가변 영역 CDR 서열로 대체된 상기 공통 서열을 엔코딩하는 폴리뉴클레오티드를 재조합으로 발현할 수 있다. 조혈 줄기 세포 항원에 대한 항체의 친화력이 주로 CDR 서열에 의해 결정되기 때문에, 얻어진 인간화된 항체는 인간화된 항체가 유도된 비-인간 항체와 대략적으로 동일한 조혈 줄기 세포 항원에 대한 친화력을 나타낼 것으로 에상된다. 타겟 항원에 대한 항체의 친화력을 결정하는 방법은 예를 들어, 본원에 기술되고 당해 분야에 공지된 ELISA-기반 기술뿐만 아니라, 다른 것들 중에서, 표면 플라즈몬 공명, 형광 이방성, 및 등온선 적정 열량법을 포함한다.
실시예 8. CD45+ 세포의 집단을 고갈시키는 항-CD45 항체-약물 컨쥬게이트의 능력
CD45+ Reh 세포를 사멸시키는 항-CD45 항체-약물 컨쥬게이트의 능력을 조사하기 위하여, 다양한 아이소타입, Ab1, Ab2, 및 Ab3의 일련의 항-CD45 모노클로날 항체를 사포린-컨쥬게이션된 Fab 단편에 결합하고, 후속하여 CD45+ Reh 세포와 함께 3일 동안 인큐베이션하였다. 음성 대조군으로서, 아이소타입-매칭된 항체-사포린 컨쥬게이트를 Ab1, Ab2, 및 Ab3 각각에 대해 생성하고, 이러한 것을 CD45+ Reh 세포와 함께 동일한 3일 기간 동안 인큐베이션하였다. 이후에, 세포 생존력을 CellTiter-GloTM 검정을 이용하여 평가하였다. 도 1에 도시된 바와 같이, 다양한 항체-사포린 컨쥬게이트는 상이한 효능으로 CD45+ Reh 세포를 사멸시킬 수 있으며, 각각은 용량-의존 방식으로 CD45+ Reh 세포주를 감소시킬 수 있다.
시험관내에서 인간 CD34+ 조혈 줄기 세포를 감소시키는 항-CD45 모노클로날 항체-사포린 컨쥬게이트의 능력을 조사하기 위하여, 인간 IgG1 항-CD45 모노클로날 항체-사포린 컨쥬게이트 또는 아이소타입-매칭된 대조군을 다양한 농도로 CD34+ 세포와 함께 인큐베이션하였다. 후속하여, 세포 생존력을 유세포 분석법을 이용하여 6일 인큐베이션 기간 후에 평가하였다. 이러한 실험의 결과는 도 2에 보고되어 있다. 여기에 도시된 바와 같이, 항-CD45 항체-사포린 컨쥬게이트는 용량-의존 방식으로 인간 CD34+ 조혈 줄기 세포를 감소시킬 수 있다는 것으로 확인되었다.
종합하면, 이러한 결과는, 사포린에 컨쥬게이션된 항-CD45 항체가 조혈 줄기 세포가 안착할 수 있는 니치를 제공하기 위해, 예를 들어, 조혈 줄기 세포 이식편 치료법의 준비에서, 대상체에서 조혈 줄기 세포의 집단을 고갈시키기 위해 사용될 수 있음을 나타낸다.
다른 구체예들
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허, 및 특허 출원은 각 독립적인 간행물 또는 특허 출원이 상세하게 그리고 개별적으로 참고로 포함되는 것으로 명시되는 것과 동일한 정도로 본원에 참고로 포함된다.
본 발명이 이의 특정 구체예와 함께 기술되었지만, 이는 추가 변경을 가능하게 하고, 이러한 출원이 일반적으로, 본 발명의 원리에 따라, 그리고, 본 발명이 관련된 분야 내의 공지되거나 통상적인 실무 내에 속하는 본 발명으로부터의 이러한 이탈을 포함하는, 본 발명의 임의의 변형, 용도, 또는 개조를 포함하는 것으로 의되고 상기에 기술된 필수 특성에 적용될 수 있고, 청구범위에 속하는 것으로 이해될 것이다.
다른 구체예는 청구항들 내에 속한다.
SEQUENCE LISTING <110> Magenta Therapeutics, Inc. <120> 51125-021WO1 <130> COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE DEPLETION OF CELLS <150> US 62/448,782 <151> 2017-01-20 <150> US 62/448,768 <151> 2017-01-20 <150> US 62/437,756 <151> 2016-12-22 <150> US 62/437,729 <151> 2016-12-22 <150> US 62/351,778 <151> 2016-06-17 <150> US 62/351,725 <151> 2016-06-17 <160> 35 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 2 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Gly Val Gly Ala His Asp Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Val Val Ala Ala Ala Val Ala Asp Tyr 1 5 <210> 5 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 6 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 1 5 10 15 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Gln Gly Thr His Pro Ala Ile Ser 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Met Gln Ser Leu Gln Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 10 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Ser Tyr Ala Ile Ser 1 5 <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 12 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Phe Ala Leu Phe Gly Phe Arg Glu Gln Ala Phe Asp Ile 1 5 10 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 16 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Ser Tyr Ala Met Ser 1 5 <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Phe Tyr Ala Asp Ser Val Arg 1 5 10 15 Gly <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Glu Val Met Gly Pro Ile Phe Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 19 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ile Ser Ser Ala Leu Ala 1 5 10 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Gln Gln Tyr Gly Ser Thr Pro Leu Thr 1 5 <210> 22 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 22 Ser Tyr Trp Met His 1 5 <210> 23 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 23 Glu Ile Asp Pro Ser Asp Ser Tyr Lys Asp Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 24 Ala Ile Thr Thr Thr Pro Phe Asp Phe 1 5 <210> 25 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 25 Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn Leu His 1 5 10 <210> 26 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 26 Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser 1 5 <210> 27 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 27 Gln Gln Ser Asn Thr Trp Pro Tyr Thr 1 5 <210> 28 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 28 Asn Tyr Gly Leu His 1 5 <210> 29 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 29 Val Ile Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile Ser 1 5 10 15 <210> 30 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 30 Lys Gly Gly Ile Tyr Tyr Ala Asn His Tyr Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 15 <210> 31 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 31 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Gly Asn Gln Lys Asn Tyr Met 1 5 10 15 <210> 32 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 32 Gly Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic construct <400> 33 Gln Asn Asp His Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 34 <211> 120 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Val Ile Ser Glu Asn Gly Ser Asp Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Arg Gly Gly Ala Val Ser Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 35 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Leu Pro Tyr 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr 100 105

Claims (231)

  1. 인간 환자에서 CD45RO+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자에게 유효량의, CD45RO와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  2. 조혈 줄기 세포 이식편(hematopoietic stem cell transplant)을 필요로 하는 인간 환자에서 CD45RO+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 환자에게 유효량의, CD45RO와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  3. 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는 방법으로서, 사전에 환자에게, CD45RO와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 환자에서 CD45RO+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여된 것인 방법.
  4. (a) 환자에서 CD45RO+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로, CD45RO와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인간 환자에게 투여하는 단계; 및
    (b) 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소(cytotoxin)에 컨쥬게이션된 방법.
  6. 인간 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자에게 유효량의, CD135와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  7. 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 환자에게 유효량의, CD135와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  8. 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는 방법으로서, 사전에 환자에게, CD135와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여되었으며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  9. a. 인간 환자에게 CD135와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하는 단계; 및
    b. 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 단계를 포함하며,
    항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  10. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기 상보적 결정 영역(CDR)을 포함하는 방법:
    a. 아미노산 서열 SYYMH(SEQ ID NO: 1)를 갖는 CDR-H1;
    b. 아미노산 서열 IINPSGGSTSYAQKFQG(SEQ ID NO: 2)를 갖는 CDR-H2;
    c. 아미노산 서열 GVGAHDAFDI(SEQ ID NO: 3) 또는 VVAAAVADY(SEQ ID NO: 4)를 갖는 CDR-H3;
    d. 아미노산 서열 RSSQSLLHSNGNNYLD(SEQ ID NO: 5) 또는 RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQ ID NO: 6)를 갖는 CDR-L1;
    e. 아미노산 서열 LGSNRAS(SEQ ID NO: 7)를 갖는 CDR-L2; 및
    f. 아미노산 서열 MQGTHPAIS(SEQ ID NO: 8) 또는 MQSLQTPFT(SEQ ID NO: 9)를 갖는 CDR-L3.
  11. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기 CDR를 포함하는 방법:
    a. 아미노산 서열 SYAIS(SEQ ID NO: 10)를 갖는 CDR-H1;
    b. 아미노산 서열 GIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO: 11)를 갖는 CDR-H2;
    c. 아미노산 서열 FALFGFREQAFDI(SEQ ID NO: 12)을 갖는 CDR-H3;
    d. 아미노산 서열 RASQSISSYLN(SEQ ID NO: 13)을 갖는 CDR-L1;
    e. 아미노산 서열 AASSLQS(SEQ ID NO: 14)를 갖는 CDR-L2; 및
    f. 아미노산 서열 QQSYSTPFT(SEQ ID NO: 15)를 갖는 CDR-L3.
  12. 인간 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자에게, 유효량의, CD135와 결합할 수 있는 인간 Flt3 리간드, 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  13. 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 환자에게, 유효량의, CD135와 결합할 수 있는 인간 Flt3 리간드, 또는 이의 단편을 투여하는 것을 포함하는 방법.
  14. 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 인간 환자에게 투여하는 것을 포함하는 방법으로서, 사전에 환자에게, CD135와 결합할 수 있는 인간 Flt3 리간드, 또는 이의 단편이 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하는, 방법.
  15. a. 인간 환자에게, CD135와 결합할 수 있는 인간 Flt3 리간드, 또는 이의 단편을, 환자에서 CD135+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하는 단계; 및
    b. 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편이 Fc 도메인에 공유 결합되는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 N-말단이 Fc 도메인에 공유 결합되는 방법.
  18. 제16항에 있어서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 C-말단이 Fc 도메인에 공유 결합되는 방법.
  19. 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, Fc 도메인이 세포 독소에 공유 결합되는 방법.
  20. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편이 세포 독소에 공유 결합되는 방법.
  21. 제20항에 있어서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 N-말단이 세포 독소에 공유 결합되는 방법.
  22. 제20항에 있어서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편의 C-말단이 세포 독소에 공유 결합되는 방법.
  23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 독소가 Fc 도메인에 공유 결합되는 방법.
  24. 제20항에 있어서, 인간 Flt3 리간드 또는 이의 단편이 하나의 사이트에서 세포 독소에 공유 결합되고, 다른 사이트에서 Fc 도메인에 공유 결합되는 방법.
  25. 제16항 내지 제19항, 제23항 및 제24항 중 어느 한 항에 있어서, Fc 도메인이 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아이소타입 Fc 도메인인 방법.
  26. 인간 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자에게, 유효량의, CD34와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  27. 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 환자에게, 유효량의, CD34와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  28. 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는방법으로서, 사전에 환자에게, CD34와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 환자에서 CD34+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여되며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  29. a. 인간 환자에게 CD34와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을, 환자에서 CD3+의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하는 단계; 및
    b. 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 단계를 포함하며,
    항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  30. 인간 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자에게, 유효량의, CD90과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  31. 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 환자에게 유효량의, CD90과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  32. 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는 방법으로서, 사전에 환자에게, CD90과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여되며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  33. a. 인간 환자에게 CD90과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을, 환자에서 CD90+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하는 단계; 및
    b. 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 단계를 포함하며,
    항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  34. 인간 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자에게, 유효량의, CD110과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하며,
  35. 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 환자에게, 유효량의, CD110과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  36. 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는 방법으로서, 사전에 환자에게, CD110과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여되었으며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  37. a. 인간 환자에게, CD110과 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 환자에서 CD110+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하는 단계; 및
    b. 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 단계를 포함하며,
    항체 또는 이의 항원-결합 단편이 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  38. 제5항 내지 제11항 및 제19항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 독소가 아마톡신, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 및 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  39. 인간 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자에게, 유효량의, CD45와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 아마톡신, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 및 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체로 이루어진 군으로부터 선택된 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  40. 조혈 줄기 세포 이식편을 필요로 하는 인간 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 환자가 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 수용하기 전에, 환자에게, 유효량의, CD45와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 투여하는 것을 포함하며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 아마톡신, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 및 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체로 이루어진 군으로부터 선택된 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  41. 인간 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 것을 포함하는 방법으로서, 사전에 환자에게, CD45와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여되며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 아마톡신, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 및 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체로 이루어진 군으로부터 선택된 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  42. a. 인간 환자에게, CD45와 결합할 수 있는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 환자에서 CD45+ 세포의 집단을 고갈시키기에 충분한 양으로 투여하는 단계; 및
    b. 후속하여, 환자에게 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편을 투여하는 단계를 포함하며,
    항체 또는 이의 항원-결합 단편이 아마톡신, 슈도모나스 외독소 A, 데보가닌, 디프테리아 독소, 사포린, 메이탄신, 메이탄시노이드, 아우리스타틴, 안트라사이클린, 칼리키아미신, 이리노테칸, SN-38, 듀오카마이신, 피롤로벤조디아제핀, 피롤로벤조디아제핀 다이머, 인돌리노벤조디아제핀, 및 인돌리노벤조디아제핀 다이머, 또는 이의 변형체로 이루어진 군으로부터 선택된 세포 독소에 컨쥬게이션된 방법.
  43. 제5항 내지 제11항 및 제19항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 독소에 컨쥬게이션된 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드가 화학식 Ab-Am으로 표현되며, 여기서, Ab는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드이며, Am은 하기 화학식 (I)로 표현되는 아마톡신인 방법:
    Figure pct00032

    상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
    R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
    RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
    R3은 H, RC, 또는 RD이며;
    R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
    R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
    R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
    X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
    RC는 -L-Z이며;
    RD는 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
    L은 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
    Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이며,
    여기서, Am은 정확하게 하나의 RC 치환체를 포함한다.
  44. 제43항에 있어서, Am이 하기 화학식 (IA)로 표현되는 아마톡신인 방법:
    Figure pct00033
  45. 제43항에 있어서, Am이 하기 화학식 (IB)로 표현되는 아마톡신인 방법:
    Figure pct00034
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, RA 및 RB가, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
    Figure pct00035
    를 형성하며;
    여기서, Y는 O, S, NRE, 및 CRERE'로부터 선택되며,
    RE 및 RE'는 각각 독립적으로, 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌-RC, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌-RC, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌-RC, 임의적으로 치환된 아릴렌-RC, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌-RC인 방법.
  47. 제46항에 있어서, RA 및 RB가, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
    Figure pct00036
    을 형성하는 방법.
  48. 제44항 또는 제45항에 있어서, R1이 H, OH, 또는 ORA이며;
    R2는 H, OH, 또는 ORB이며;
    RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
    Figure pct00037
    을 형성하며;
    R3, R4, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R5가 ORC이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  49. 제44항 또는 제45항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3이 RC이며;
    R4, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R5가 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  50. 제44항 또는 제45항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R4 및 R5가 각각 독립적으로, H, OH, ORC, 또는 RC이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  51. 제44항 또는 제45항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R4 및 R5가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R8이 ORC 또는 NHRC이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  52. 제5항 내지 제11항 및 제19항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 독소에 컨쥬게이션된 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드가 화학식 Ab-Am으로 표혐되며, 여기서, Ab는 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드이며, Am은 하기 화학식 (II)로 표현되는 아마톡신인 방법:
    Figure pct00038

    상기 식에서, X는 S, SO, 또는 SO2이며;
    R1은 H, 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 공유 결합된 링커이며;
    R2는 H 또는 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 공유 결합된 링커이며;
    여기서, R1이 H일 때, R2는 링커이며, R2가 H일 때, R1은 링커이다.
  53. 제5항 내지 제11항 및 제19항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 독소가 DM1 및 DM4로 이루어진 군으로부터 선택된 메이탄시노이드인 방법.
  54. 제5항 내지 제11항 및 제19항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 독소가 모노메틸 아우리스타틴 E 및 모노메틸 아우리스타틴 F로 이루어진 군으로부터 선택된 아우리스타틴인 방법.
  55. 제5항 내지 제11항 및 제19항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 세포 독소가 다우노루비신, 독소루비신, 에피루비신, 및 이다루비신으로 이루어진 군으로부터 선택된 안트라사이클린인 방법.
  56. 제1항 내지 제11항 및 제26항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중-가변 면역글로불린 도메인, 단쇄 Fv 분자(scFv), 이중체, 삼중체, 나노체, 항체-유사 단백질 스캐폴드, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 분자, 및 텐뎀 디-scFv로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  57. 제1항 내지 제11항 및 제26항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 IgG, IgA, IgM, IgD, 및 IgE로 이루어진 군으로부터 선택된 아이소타입을 갖는 방법.
  58. 제1항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드가 환자에게 투여 후 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포에 의해 내재화되는 방법.
  59. 제1항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드가 암세포, 자가면역 세포, 또는 조혈 줄기 세포의 괴사를 증진시킬 수 있는 방법.
  60. 제2항 내지 제5항, 제7항 내지 제11항, 제13항 내지 제25항, 제27항 내지 제29항, 제31항 내지 제33항, 제35항 내지 제38항 및 제40항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드가 환자에게 투여 시에 하나 이상의 보체 단백질을 조혈 줄기 세포에 동원할 수 있는 방법.
  61. 제2항 내지 제5항, 제7항 내지 제11항, 제13항 내지 제25항, 제27항 내지 제29항, 제31항 내지 제33항, 제35항 내지 제38항 및 제40항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 리간드의 농도가 환자의 혈액으로부터 실질적으로 제거된 후에, 조혈 줄기 세포를 포함하는 이식편이 환자에게 투여되는 방법.
  62. 제2항 내지 제5항, 제7항 내지 제11항, 제13항 내지 제25항, 제27항 내지 제29항, 제31항 내지 제33항, 제35항 내지 제38항 및 제40항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 조혈 줄기 세포 또는 이의 자손이, 환자 내에 조혈 줄기 세포의 이식 후 2일 이상 후에 조혈 줄기 세포 기능적 잠재력(functional potential)을 유지시키는 방법.
  63. 제2항 내지 제5항, 제7항 내지 제11항, 제13항 내지 제25항, 제27항 내지 제29항, 제31항 내지 제33항, 제35항 내지 제38항 및 제40항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 조혈 줄기 세포 또는 이의 자손이 환자 내에 조혈 줄기 세포의 이식 후에 조혈 조직을 국소화시키고/거나 조혈을 재건할 수 있는 방법.
  64. 제2항 내지 제5항, 제7항 내지 제11항, 제13항 내지 제25항, 제27항 내지 제29항, 제31항 내지 제33항, 제35항 내지 제38항, 및 제40항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 환자내에 이식 시에, 조혈 줄기 세포가 거대핵세포, 혈전구, 혈소판, 적혈구, 비만 세포, 근육모세포, 호염구, 호중구, 산호성백혈구, 소교세포, 과립구, 단핵구, 파골세포, 항원-제공 세포, 대식세포, 수지상 세포, 자연살 세포, T-림프구, 및 B-림프구로 이루어진 군으로부터 선택된 세포의 집단의 회복을 일으키는 방법.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 줄기 세포 장애로 고통받는 방법.
  66. 제1항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 이상혈색소증 장애로 고통 받는 방법.
  67. 제66항에 있어서, 이상혈색소증 장애가 겸상 적혈구 빈혈, 지중해 빈혈, 판코니 빈혈, 무형성 빈혈, 및 비스코트-올드리치 증후군으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  68. 제66항에 있어서, 이상혈색소증 장애가 판코니 빈혈인 방법.
  69. 제66항에 있어서, 이상혈색소증 장애가 무형성 빈혈인 방법.
  70. 제66항에 있어서, 이상혈색소증 장애가 겸상 적혈구 빈혈인 방법.
  71. 제66항에 있어서, 이상혈색소증 장애가 지중해 빈혈인 방법.
  72. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 골수 형성이상 장애로 고통받는 방법.
  73. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 면역결핍 장애로 고통받는 방법.
  74. 제73항에 있어서, 면역결핍 장애가 선천성 면역결핍인 방법.
  75. 제73항에 있어서, 면역결핍 장애가 후천성 면역결핍인 방법.
  76. 제75항에 있어서, 후천성 면역결핍이 인간 면역결핍 바이러스 또는 후천성 면역결핍 증후군인 방법.
  77. 제1항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 대사 장애로 고통받는 방법.
  78. 제77항에 있어서, 대사 장애가 글리코겐 축적 질병, 뮤코다당증, 고오시에씨 병, 후를러 질병, 스핑고지질증, 및 이염색백색질장애로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  79. 제1항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 암으로 고통받는 방법.
  80. 제79항에 있어서, 암이 백혈병, 림프종, 다발성 골수종, 및 신경아세포종으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  81. 제79항에 있어서, 암이 혈액암인 방법.
  82. 제79항에 있어서, 암이 급성 골수성 백혈병인 방법.
  83. 제79항에 있어서, 암이 급성 림프구성 백혈병인 방법.
  84. 제79항에 있어서, 암이 만성 골수성 백혈병인 방법.
  85. 제79항에 있어서, 암이 만성 림프구성 백혈병인 방법.
  86. 제79항에 있어서, 암이 광범위 큰 B-세포 림프종인 방법.
  87. 제79항에 있어서, 암이 비호지킨 림프종인 방법.
  88. 제1항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 아데노신 데아미나아제 결핍증 및 중증 복합형 면역결핍증, 고면역글로불린 M 증후군, 체디악-히가시 질병, 유전성 림프조직구증, 골석화증, 골형성부전증, 축적증, 중증성 지중해 빈혈, 전신 경화증, 전신 홍반성 루푸스, 다발성 경화증, 및 소아 류머티스성 관절염으로 이루어진 군으로부터 선택된 장애로 고통받는 방법.
  89. 제1항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 환자가 자가면역 장애로 고통받는 방법.
  90. 제89항에 있어서, 자가면역 장애가 다발성 경화증, 인간 전신 루푸스, 류머티스성 관절염, 염증성 장질환, 치료중인 건선(treating psoriasis), 제1형 진성 당뇨병, 갑성 산재성 뇌척수염, 애디슨병, 전신 탈모증, 상직성 척수염, 항인지질 항체 증후군, 무형성 빈혈, 자가면역 용혈성 빈혈, 자가면역 간염, 자가면역 내이질환, 자가면역 림프구증식 증후군, 자가면역 난소염, 발로병, 베체트병, 수포성류천포창, 심근증, 샤가스병, 만성 피로 면역부전 증후군, 만성 염증성 탈수초성 다발성 신경증, 크론병, 반흔성 유사천포창, 복강 스프루-포진성 피부염, 저온 응집병, CREST 증후군, 데고스 병, 원판성 루푸스, 자율신경장애, 자궁 내막증, 필수 혼합 저온글로불린혈증, 섬유조직염-섬유근염, 굿파스튜어 증후군, 그레이브스병, 길랑-바레 증후군, 하시모토 갑상선염, 화농성한선염, 특발성 및/또는 급성 혈소판감소성 자반병, 특발성 폐섬유증, IgA 신경증, 간질성 방광염, 연소성 관절염, 가와사키병, 편평태선, 라임병, 메니에르병, 혼합 결합조직병, 중증 근무력증, 신경근긴장증, 언구간대경련 근간대경련 증후군, 시신경염, 오드 갑상선염, 심상성 천포창, 악성 빈혈, 다발 연골염, 다발성 근염 및 피부근염, 원발성 담즙 간경변, 결절성 다발성 동맥염, 다분비선 증후군, 류머티스성 다발근통, 원발성 무감마글로불린혈증, 레이노 현상, 라이터 증후군, 류머티스성 염, 사르코이도시스, 경피증, 쇼그렌 증후군, 강직 인간 증후군, 타까야수 동맥염, 측두 동맥염, 궤양성 대장염, 포도막염, 맥관염, 백반증, 외음부통, 및 베게너 육아종증으로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  91. 제89항에 있어서, 자가면역 장애가 경피증인 방법.
  92. 제89항에 있어서, 자가면역 장애가 다발성 경화증인 방법.
  93. 제89항에 있어서, 자가면역 장애가 궤양성 대장염인 방법.
  94. 제89항에 있어서, 자가면역 장애가 크론병인 방법.
  95. 제89항에 있어서, 자가면역 장애가 제1형 당뇨병인 방법.
  96. 제65항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 장애 또는 암을 치료하는 방법.
  97. CD45+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 집단을, 유효량의, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고 Am이 아마톡신인 화학식 Ab-Am으로 표현되는 컨쥬게이트와 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
  98. 제97항에 있어서, Am이 하기 화학식 (IA)로 표현되며, Am이 정확하게 하나의 RC 치환체를 포함하는 방법:
    Figure pct00039

    상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
    R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
    RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
    R3은 H, RC, 또는 RD이며;
    R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
    R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
    R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
    X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
    RC는 -L-Z이며;
    RD는 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
    L은 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
    Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
  99. 제97항에 있어서, Am이 하기 화학식 (IB)로 표현되며, Am이 정확하게 하나의 RC 치환체를 포함하는 방법:
    Figure pct00040

    상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
    R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
    RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
    R3은 H, RC, 또는 RD이며;
    R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
    R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
    R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
    X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
    RC는 -L-Z이며;
    RD는 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
    L은 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
    Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
  100. 제97항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서의 시스테인 잔기에 의해 아미톡신에 컨쥬게이션된 방법.
  101. 제100항에 있어서, 시스테인 잔기가 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서의 돌연변이에 의해 도입된 방법.
  102. 제101항에 있어서, 시스테인 잔기가 Cys118, Cys239, 및 Cys265로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  103. 제100항에 있어서, 시스테인 잔기가 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서 자연적으로 발생하는 방법.
  104. 제103항에 있어서, Fc 도메인이 IgG Fc 도메인이며, 시스테인 잔기가 Cys261, Csy321, Cys367, 및 Cys425로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  105. 제98항 또는 제99항에 있어서, R1이 H, OH, 또는 ORA이며;
    R2가 H, OH, 또는 ORB이며;
    RA 및 RB가, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
    Figure pct00041
    를 형성하며;
    R3, R4, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R5가 ORC이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  106. 제98항 또는 제99항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3이 RC이며;
    R4, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R5가 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  107. 제98항 또는 제99항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R4가 ORC, 또는 RC이며;
    R5가 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  108. 제98항 또는 제99항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R4 및 R5가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R8이 ORC 또는 NHRC이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  109. 제97항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD45+ 세포에 의해 내재화되는 방법.
  110. 제97항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 0.1 pM 내지 약 1 μM의 Kd로 CD45와 결합하는 방법.
  111. 제97항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 9×10-2 M-1 s-1 내지 약 1×102 M-1 s-1의 kon으로 CD45와 결합하는 방법.
  112. 제97항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CD45의 결합을 경쟁적으로 억제하며, 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기 상보적 결정 영역(CDR)을 포함하는 방법:
    a. 아미노산 서열 SYAMS(SEQ ID NO: 16)를 갖는 CDR-H1;
    b. 아미노산 서열 AISGSGGSTFYADSVRG(SEQ ID NO: 17)를 갖는 CDR-H2;
    c. 아미노산 서열 EVMGPIFFDY(SEQ ID NO: 18)를 갖는 CDR-H3;
    d. 아미노산 서열 RASQSIISSALA(SEQ ID NO: 19)를 갖는 CDR-L1;
    e. 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO: 20)를 갖는 CDR-L2; 및
    f. 아미노산 서열 QQYGSTPLT(SEQ ID NO: 21)를 갖는 CDR-L3.
  113. 제97항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중-가변 면역글로불린 도메인, 단쇄 Fv 분자(scFv), 이중체, 삼중체, 나노체, 항체-유사 단백질 스캐폴드, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 분자, 및 텐뎀 디-scFV로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  114. 화학식 Ab-Am으로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Am이 아마톡신인 컨쥬게이트.
  115. 제114항에 있어서, Am이 하기 화학식 (IA)로 표현되며, Am이 정확하게 하나의 RC 치환체를 포함하는 컨쥬게이트:
    Figure pct00042

    상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
    R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
    RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
    R3은 H, RC, 또는 RD이며;
    R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
    R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
    R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
    X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
    RC는 -L-Z이며;
    RD는 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
    L은 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
    Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
  116. 제114항에 있어서, Am이 하기 화학식 (IB)로 표현되며, Am이 정확하게 하나의 RC 치환체를 포함하는 컨쥬게이트:
    Figure pct00043

    상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
    R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
    RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
    R3은 H, RC, 또는 RD이며;
    R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
    R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
    R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
    X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
    RC는 -L-Z이며;
    RD는 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
    L은 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
    Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
  117. 제114항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서의 시스테인 잔기에 의해 아미톡신에 컨쥬게이션된 컨쥬게이트.
  118. 제117항에 있어서, 시스테인 잔기가 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서의 돌연변이에 의해 도입된 컨쥬게이트.
  119. 제118항에 있어서, 시스테인 잔기가 Cys118, Cys239, 및 Cys265로 이루어진 군으로부터 선택되는 컨쥬게이트.
  120. 제117항에 있어서, 시스테인 잔기가 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서 자연적으로 발생하는 컨쥬게이트.
  121. 제120항에 있어서, Fc 도메인이 IgG Fc 도메인이며, 시스테인 잔기가 Cys261, Csy321, Cys367, 및 Cys425로 이루어진 군으로부터 선택되는 컨쥬게이트.
  122. 제115항 또는 제116항에 있어서, R1이 H, OH, 또는 ORA이며;
    R2가 H, OH, 또는 ORB이며;
    RA 및 RB가, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
    Figure pct00044
    를 형성하며;
    R3, R4, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R5가 ORC이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 컨쥬게이트.
  123. 제115항 또는 제116항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3이 RC이며;
    R4, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R5가 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 컨쥬게이트.
  124. 제115항 또는 제116항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R4가 ORC, 또는 RC이며;
    R5가 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 컨쥬게이트.
  125. 제115항 또는 제116항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R4 및 R5가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R8이 ORC 또는 NHRC이며;
    R9가 H 또는 OH인 컨쥬게이트.
  126. 제114항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD45+ 세포에 의해 내재화되는 컨쥬게이트.
  127. 제114항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 0.1 pM 내지 약 1 μM의 Kd로 CD45와 결합하는 컨쥬게이트.
  128. 제114항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 9×10-2 M-1 s-1 내지 약 1×102 M-1 s-1의 kon으로 CD45와 결합하는 컨쥬게이트.
  129. 제114항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CD45의 결합을 경쟁적으로 억제하며, 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기 상보적 결정 영역(CDR)을 포함하는 컨쥬게이트:
    a. 아미노산 서열 SYAMS(SEQ ID NO: 16)를 갖는 CDR-H1;
    b. 아미노산 서열 AISGSGGSTFYADSVRG(SEQ ID NO: 17)를 갖는 CDR-H2;
    c. 아미노산 서열 EVMGPIFFDY(SEQ ID NO: 18)를 갖는 CDR-H3;
    d. 아미노산 서열 RASQSIISSALA(SEQ ID NO: 19)를 갖는 CDR-L1;
    e. 아미노산 서열 GASSRAT(SEQ ID NO: 20)를 갖는 CDR-L2; 및
    f. 아미노산 서열 QQYGSTPLT(SEQ ID NO: 21)를 갖는 CDR-L3.
  130. 제114항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중-가변 면역글로불린 도메인, 단쇄 Fv 분자(scFv), 이중체, 삼중체, 나노체, 항체-유사 단백질 스캐폴드, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 분자, 및 텐뎀 디-scFV로 이루어진 군으로부터 선택되는 컨쥬게이트.
  131. CD135+ 세포의 집단을 고갈시키는 방법으로서, 집단을, 유효량의, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고 Am이 아마톡신인 화학식 Ab-Am으로 표현되는 컨쥬게이트와 접촉시키는 것을 포함하는 방법.
  132. 제131항에 있어서, Am이 하기 화학식 (IA)로 표현되며, Am이 정확하게 하나의 RC 치환체를 포함하는 방법:
    Figure pct00045

    상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
    R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
    RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
    R3은 H, RC, 또는 RD이며;
    R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
    R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
    R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
    X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
    RC는 -L-Z이며;
    RD는 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
    L은 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
    Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
  133. 제131항에 있어서, Am이 하기 화학식 (IB)로 표현되며, Am이 정확하게 하나의 RC 치환체를 포함하는 방법:
    Figure pct00046

    상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
    R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
    RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
    R3은 H, RC, 또는 RD이며;
    R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
    R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
    R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
    X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
    RC는 -L-Z이며;
    RD는 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
    L은 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
    Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
  134. 제131항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서의 시스테인 잔기에 의해 아마톡신에 컨쥬게이션된 방법.
  135. 제134항에 있어서, 시스테인 잔기가 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서의 돌연변이에 의해 도입된 방법.
  136. 제135항에 있어서, 시스테인 잔기가 Cys118, Cys239, 및 Cys265로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  137. 제134항에 있어서, 시스테인 잔기가 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서 자연적으로 발생하는 방법.
  138. 제137항에 있어서, Fc 도메인이 IgG Fc 도메인이며, 시스테인 잔기가 Cys261, Csy321, Cys367, 및 Cys425로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  139. 제132항 또는 제133항에 있어서, R1이 H, OH, 또는 ORA이며;
    R2가 H, OH, 또는 ORB이며;
    RA 및 RB가, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
    Figure pct00047
    를 형성하며;
    R3, R4, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R5가 ORC이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  140. 제132항 또는 제133항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3이 RC이며;
    R4, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R5가 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  141. 제132항 또는 제133항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R4가 ORC, 또는 RC이며;
    R5가 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  142. 제132항 또는 제133항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R4 및 R5가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R8이 ORC 또는 NHRC이며;
    R9가 H 또는 OH인 방법.
  143. 제131항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD135+ 세포에 의해 내재화되는 방법.
  144. 제131항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 0.1 pM 내지 약 1 μM의 Kd로 CD135와 결합하는 방법.
  145. 제131항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 9×10-2 M-1 s-1 내지 약 1×102 M-1 s-1의 kon으로 CD135와 결합하는 방법.
  146. 제131항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CD135의 결합을 경쟁적으로 억제하며, 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기 상보적 결정 영역(CDR)을 포함하는 방법:
    a. 아미노산 서열 SYYMH(SEQ ID NO: 1)를 갖는 CDR-H1;
    b. 아미노산 서열 IINPSGGSTSYAQKFQG(SEQ ID NO: 2)를 갖는 CDR-H2;
    c. 아미노산 서열 GVGAHDAFDI(SEQ ID NO: 3) 또는 VVAAAVADY(SEQ ID NO: 4)를 갖는 CDR-H3;
    d. 아미노산 서열 RSSQSLLHSNGNNYLD(SEQ ID NO: 5) 또는 RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQ ID NO: 6)를 갖는 CDR-L1;
    e. 아미노산 서열 LGSNRAS(SEQ ID NO: 7)를 갖는 CDR-L2; 및
    f. 아미노산 서열 MQGTHPAIS(SEQ ID NO: 8) 또는 MQSLQTPFT(SEQ ID NO: 9)를 갖는 CDR-L3.
  147. 제131항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CD135의 결합을 경쟁적으로 억제하며, 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기 상보적 결정 영역(CDR)을 포함하는 컨쥬게이트:
    a. 아미노산 서열 SYAIS(SEQ ID NO: 10)를 갖는 CDR-H1;
    b. 아미노산 서열 GIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO: 11)를 갖는 CDR-H2;
    c. 아미노산 서열 FALFGFREQAFDI(SEQ ID NO: 12)을 갖는 CDR-H3;
    d. 아미노산 서열 RASQSISSYLN(SEQ ID NO: 13)을 갖는 CDR-L1;
    e. 아미노산 서열 AASSLQS(SEQ ID NO: 14)를 갖는 CDR-L2; 및
    f. 아미노산 서열 QQSYSTPFT(SEQ ID NO: 15)를 갖는 CDR-L3.
  148. 제131항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중-가변 면역글로불린 도메인, 단쇄 Fv 분자(scFv), 이중체, 삼중체, 나노체, 항체-유사 단백질 스캐폴드, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 분자, 및 텐뎀 디-scFV로 이루어진 군으로부터 선택되는 방법.
  149. Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이고 Am이 아마톡신인 화학식 Ab-Am으로 표현되는 컨쥬게이트.
  150. 제149항에 있어서, Am이 하기 화학식 (IA)로 표현되며, Am이 정확하게 하나의 RC 치환체를 포함하는 컨쥬게이트:
    Figure pct00048

    상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
    R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
    RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
    R3은 H, RC, 또는 RD이며;
    R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
    R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
    R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
    X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
    RC는 -L-Z이며;
    RD는 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
    L은 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
    Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
  151. 제149항에 있어서, Am이 하기 화학식 (IB)로 표현되며, Am이 정확하게 하나의 RC 치환체를 포함하는 컨쥬게이트:
    Figure pct00049

    상기 식에서, R1은 H, OH, ORA, 또는 ORC이며;
    R2는 H, OH, ORB, 또는 ORC이며;
    RA 및 RB는, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여 임의적으로 치환된 5원 헤테로사이클로알킬 기를 형성하며;
    R3은 H, RC, 또는 RD이며;
    R4, R5, R6, 및 R7은 각각 독립적으로, H, OH, ORC, ORD, RC, 또는 RD이며;
    R8은 OH, NH2, ORC, ORD, NHRC, 또는 NRCRD이며;
    R9는 H, OH, ORC, 또는 ORD이며;
    X는 -S-, -S(O)-, 또는 -SO2-이며;
    RC는 -L-Z이며;
    RD는 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐, 임의적으로 치환된 사이클로알킬, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬, 임의적으로 치환된 아릴, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴이며;
    L은 임의적으로 치환된 C1-C6 알킬렌, 임의적으로 치환된 C1-C6 헤테로알킬렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알케닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 알키닐렌, 임의적으로 치환된 C2-C6 헤테로알키닐렌, 임의적으로 치환된 사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 헤테로사이클로알킬렌, 임의적으로 치환된 아릴렌, 또는 임의적으로 치환된 헤테로아릴렌이며;
    Z는 L 상에 존재하는 반응성 치환체와 항체 또는 이의 항원-결합 단편 내에 존재하는 반응성 치환체 간의 커플링 반응으로부터 형성된 화학적 모이어티이다.
  152. 제149항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서의 시스테인 잔기에 의해 아미톡신에 컨쥬게이션된 컨쥬게이트.
  153. 제152항에 있어서, 시스테인 잔기가 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서의 돌연변이에 의해 도입된 컨쥬게이트.
  154. 제153항에 있어서, 시스테인 잔기가 Cys118, Cys239, 및 Cys265로 이루어진 군으로부터 선택되는 컨쥬게이트.
  155. 제152항에 있어서, 시스테인 잔기가 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 Fc 도메인에서 자연적으로 발생하는 컨쥬게이트.
  156. 제155항에 있어서, Fc 도메인이 IgG Fc 도메인이며, 시스테인 잔기가 Cys261, Csy321, Cys367, 및 Cys425로 이루어진 군으로부터 선택되는 컨쥬게이트.
  157. 제150항 또는 제151항에 있어서, R1이 H, OH, 또는 ORA이며;
    R2가 H, OH, 또는 ORB이며;
    RA 및 RB가, 여기에 결합되는 산소 원자와 함께, 결합하여
    Figure pct00050
    를 형성하며;
    R3, R4, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R5가 ORC이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 컨쥬게이트.
  158. 제150항 또는 제151항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3이 RC이며;
    R4, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R5가 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 컨쥬게이트.
  159. 제150항 또는 제151항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R4가 ORC, 또는 RC이며;
    R5가 H, OH, 또는 OC1-C6 알킬이며;
    R8이 OH 또는 NH2이며;
    R9가 H 또는 OH인 컨쥬게이트.
  160. 제150항 또는 제151항에 있어서, R1 및 R2가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R3, R6, 및 R7이 각각 H이며;
    R4 및 R5가 각각 독립적으로, H 또는 OH이며;
    R8이 ORC 또는 NHRC이며;
    R9가 H 또는 OH인 컨쥬게이트.
  161. 제149항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 CD135+ 세포에 의해 내재화되는 컨쥬게이트.
  162. 제149항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 0.1 pM 내지 약 1 μM의 Kd로 CD135와 결합하는 컨쥬게이트.
  163. 제149항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 약 9×10-2 M-1 s-1 내지 약 1×102 M-1 s-1의 kon으로 CD135와 결합하는 컨쥬게이트.
  164. 제149항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CD135의 결합을 경쟁적으로 억제하며, 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기 상보적 결정 영역(CDR)을 포함하는 컨쥬게이트:
    a. 아미노산 서열 SYYMH(SEQ ID NO: 1)를 갖는 CDR-H1;
    b. 아미노산 서열 IINPSGGSTSYAQKFQG(SEQ ID NO: 2)를 갖는 CDR-H2;
    c. 아미노산 서열 GVGAHDAFDI(SEQ ID NO: 3) 또는 VVAAAVADY(SEQ ID NO: 4)를 갖는 CDR-H3;
    d. 아미노산 서열 RSSQSLLHSNGNNYLD(SEQ ID NO: 5) 또는 RSSQSLLHSNGYNYLD(SEQ ID NO: 6)를 갖는 CDR-L1;
    e. 아미노산 서열 LGSNRAS(SEQ ID NO: 7)를 갖는 CDR-L2; 및
    f. 아미노산 서열 MQGTHPAIS(SEQ ID NO: 8) 또는 MQSLQTPFT(SEQ ID NO: 9)를 갖는 CDR-L3.
  165. 제149항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제2 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 대한 CD135의 결합을 경쟁적으로 억제하며, 제2 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기 상보적 결정 영역(CDR)을 포함하는 컨쥬게이트:
    a. 아미노산 서열 SYAIS(SEQ ID NO: 10)를 갖는 CDR-H1;
    b. 아미노산 서열 GIIPIFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO: 11)를 갖는 CDR-H2;
    c. 아미노산 서열 FALFGFREQAFDI(SEQ ID NO: 12)을 갖는 CDR-H3;
    d. 아미노산 서열 RASQSISSYLN(SEQ ID NO: 13)을 갖는 CDR-L1;
    e. 아미노산 서열 AASSLQS(SEQ ID NO: 14)를 갖는 CDR-L2; 및
    f. 아미노산 서열 QQSYSTPFT(SEQ ID NO: 15)를 갖는 CDR-L3.
  166. 제149항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 모노클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 폴리클로날 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 인간화된 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중특이성 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이중-가변 면역글로불린 도메인, 단쇄 Fv 분자(scFv), 이중체, 삼중체, 나노체, 항체-유사 단백질 스캐폴드, Fv 단편, Fab 단편, F(ab')2 분자, 및 텐뎀 디-scFV로 이루어진 군으로부터 선택되는 컨쥬게이트.
  167. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 슈도모나스 외독소 A인 컨쥬게이트.
  168. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 데보가닌인 컨쥬게이트.
  169. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 디프테리아 독소인 컨쥬게이트.
  170. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 사포린인 컨쥬게이트.
  171. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 메이탄신 또는 메이탄시노이드인 컨쥬게이트.
  172. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 아우리스타틴인 컨쥬게이트.
  173. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 안트라사이클린인 컨쥬게이트.
  174. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 칼리키아미신인 컨쥬게이트.
  175. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 이리노테칸인 컨쥬게이트.
  176. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 SN-38인 컨쥬게이트.
  177. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 듀오카마이신인 컨쥬게이트.
  178. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 피롤로벤조디아제핀 또는 피롤로벤조디아제핀 다이머인 컨쥬게이트.
  179. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD45와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 인돌리노벤조디아제핀 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머인 컨쥬게이트.
  180. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 슈도모나스 외독소 A인 컨쥬게이트.
  181. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 데보가닌인 컨쥬게이트.
  182. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 디프테리아 독소인 컨쥬게이트.
  183. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 사포린인 컨쥬게이트.
  184. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 메이탄신 또는 메이탄시노이드인 컨쥬게이트.
  185. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 아우리스타틴인 컨쥬게이트.
  186. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 안트라사이클린인 컨쥬게이트.
  187. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 칼리키아미신인 컨쥬게이트.
  188. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 이리노테칸인 컨쥬게이트.
  189. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 SN-38인 컨쥬게이트.
  190. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 듀오카마이신인 컨쥬게이트.
  191. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 피롤로벤조디아제핀 또는 피롤로벤조디아제핀 다이머인 컨쥬게이트.
  192. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD135와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 인돌리노벤조디아제핀 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머인 컨쥬게이트.
  193. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 슈도모나스 외독소 A인 컨쥬게이트.
  194. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 데보가닌인 컨쥬게이트.
  195. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 디프테리아 독소인 컨쥬게이트.
  196. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 사포린인 컨쥬게이트.
  197. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 메이탄신 또는 메이탄시노이드인 컨쥬게이트.
  198. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 아우리스타틴인 컨쥬게이트.
  199. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 안트라사이클린인 컨쥬게이트.
  200. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 칼리키아미신인 컨쥬게이트.
  201. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 이리노테칸인 컨쥬게이트.
  202. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 SN-38인 컨쥬게이트.
  203. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 듀오카마이신인 컨쥬게이트.
  204. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 피롤로벤조디아제핀 또는 피롤로벤조디아제핀 다이머인 컨쥬게이트.
  205. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD34와 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 인돌리노벤조디아제핀 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머인 컨쥬게이트.
  206. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 슈도모나스 외독소 A인 컨쥬게이트.
  207. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 데보가닌인 컨쥬게이트.
  208. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 디프테리아 독소인 컨쥬게이트.
  209. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 사포린인 컨쥬게이트.
  210. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 메이탄신 또는 메이탄시노이드인 컨쥬게이트.
  211. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 아우리스타틴인 컨쥬게이트.
  212. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 안트라사이클린인 컨쥬게이트.
  213. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 칼리키아미신인 컨쥬게이트.
  214. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 이리노테칸인 컨쥬게이트.
  215. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 SN-38인 컨쥬게이트.
  216. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 듀오카마이신인 컨쥬게이트.
  217. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 피롤로벤조디아제핀 또는 피롤로벤조디아제핀 다이머인 컨쥬게이트.
  218. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD90과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 인돌리노벤조디아제핀 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머인 컨쥬게이트.
  219. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 슈도모나스 외독소 A인 컨쥬게이트.
  220. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 데보가닌인 컨쥬게이트.
  221. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 디프테리아 독소인 컨쥬게이트.
  222. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 사포린인 컨쥬게이트.
  223. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 메이탄신 또는 메이탄시노이드인 컨쥬게이트.
  224. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 아우리스타틴인 컨쥬게이트.
  225. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 안트라사이클린인 컨쥬게이트.
  226. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 칼리키아미신인 컨쥬게이트.
  227. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 이리노테칸인 컨쥬게이트.
  228. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 SN-38인 컨쥬게이트.
  229. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 듀오카마이신인 컨쥬게이트.
  230. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 피롤로벤조디아제핀 또는 피롤로벤조디아제핀 다이머인 컨쥬게이트.
  231. 화학식 Ab-Cy로 표현되는 컨쥬게이트로서, Ab가 CD110과 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며, Cy가 인돌리노벤조디아제핀 또는 인돌리노벤조디아제핀 다이머인 컨쥬게이트.
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